## 16 (1) (2021)
Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian
http://journals.usm.ac.id/index.php/jtphp
Potensi Ekstrak Daun Insulin ( Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) Terhadap Profil Kadar Glukosa Darah, Kadar Malondialdehid dan Histologi Islet Langerhans Pankreas Tikus Putih ( Rattus norvegicus L.) Hiperglikemik
Anisa Rachma Sari 1* , Tyas Rini Saraswati 2 , Enny Yusuf Wachidah Yuniwarti 2
1 Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Semarang, Indonesia
2 Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro, Indonesia *Email : anisarachmasari8@gmail.com
Info Artikel ___________________ Keywords: Tithonia diversifolia , blood glucose,
malondialdehid, pancreas . _______________________

## Abstrak
____________________________________________________________ Diabetes  mellitus  merupakan  salah  satu  penyakit  degeneratif  yang beresiko  tinggi.  Penyakit  ini  dapat  disebabkan  oleh  peningkatan radikal  bebas  di  dalam  tubuh.  Radikal  bebas  di  tubuh  dapat dideteksi  dengan  pengujian  kadar  malondialdehid.  Peningkatan radikal  bebas  dapat  menyebabkan  kerusakan islet Langerhans pankreas  sehingga  kemampuan  insulin  berkurang.  Berkurangnya kemampuan  insulin  menyebabkan  kondisi  hiperglikemik,  yang merupakan  gejala  awal  penyakit  DM.  Pemanfaatan  tanaman  obat banyak  digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  pengobatan  alternatif penyakit  ini.  Tanaman  daun  insulin  ( Tithonia  diversifolia )  secara empiris  digunakan  masyarakat  sebagai  obat  antihiperglikemik. Tujuan  penelitian  ini  untuk  menguji  kemampuan  ekstrak  daun insulin dan glibenklamid untuk mengurangi tingkat radikal bebas di dalam  kondisi  hiperglikemik  dan  mendeskripsikan  kemampuannya untuk  memperbaiki islet Langerhans  yang  rusak  akibat  zat  toksik sehingga  kadar  glukosa  darah  tikus  hiperglikemik  dapat  kembali normal. Tikus hiperglikemik diperoleh dengan menginjeksi aloksan monohidrat  dengan  dosis  150  mg/BB  tikus  ke Rattus  norvegicus jantan secara intraperitoneal. Penelitian ini menggunakan rancangan acak  lengkap  (RAL),  dengan  empat  perlakuan  dengan  masing- masing  terdapat  lima  ulangan,  yaitu  kelompok  P1  sebagai  tikus kontrol,  kelompok  P2  sebagai  tikus  hiperglikemik  yang  diberi glibenklamid dosis 10 mg/BB tikus/hari, kelompok P3 sebagai tikus hiperglikemik  yang  diberi  ekstrak  daun  insulin  dosis  150  mg/BB tikus/ hari dan kelompok P4 sebagai tikus hiperglikemik yang diberi ekstrak  daun  insulin  dosis  300  mg/BB  tikus/hari.  Hasil  penelitian menunjukkan  pemberian  ekstrak  daun  insulin  dosis  300  mg/BB
Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian 16 (1) (2021)
tikus/hari  mampu  untuk  menjadikan  kadar  glukosa  darah  berbeda nyata,  namun  untuk  kadar  malondialdehid  tidak  berbeda  nyata dibandingkan  tikus  kontrol.  Selain  itu,  pemberian  ekstrak  daun insulin  dosis  300  mg/BB  tikus/hari  pada  tikus  hiperglikemik  juga mampu  untuk  memperbaiki  kondisi islet Langerhans  pankreas menuju  kondisi  seperti  tikus  kontrol.  Perbaikan  kondisi islet Langerhans  pankreas  ditunjukkan  dengan  inti  sel  yang  terwarnai biru tua dengan bentuk teratur terlihat lebih banyak. Kata kunci : Tithonia diversifolia , glukosa darah, malondialdehid, pankreas.

## Abstract
____________________________________________________________ Diabetes  mellitus  is  a  degenerative  disease  with  high  risk.  This disease  can  be  caused  by  an  increase  in  free  radicals  in  the  body. Free  radicals  in  the  body  can  be  detected  by  testing malondialdehyde  levels.  The  increase  in  free  radicals  can  cause damage to the pancreatic islet Langerhans so that insulin ability is reduced.  The  reduced  ability  of  insulin  causes  hyperglycemic conditions,  which  are  the  first  symptoms  of  DM.  The  use  of medicinal plants is widely used by the community as an alternative treatment  for  this  disease.  The  insulin  leaf  plant  ( Tithonia diversifolia )  is  empirically  used  by  the  public  as  an antihyperglycemic drug. The aim of this study was to examine the ability of insulin and glibenclamide leaf extracts to reduce the level of  free  radicals  in  hyperglycemic  conditions  and  to  describe  their ability to repair Langerhans islets damaged by toxic substances so that the blood glucose levels of hyperglycemic rats could return to normal.  Hyperglycemic  rats  were  obtained  by  injecting  alloxan monohydrate  at  a  dose  of  150  mg/  BW  of  rats  into  male Rattus norvegicus intraperitoneally.  This  study  used  a  completely randomized  design  (CRD),  with  four  treatments  with  five replications  each,  namely  group  P1  as  control  mice,  group  P2  as hyperglycemic  rats  given  10  mg/  BW  dose  of  glibenclamide/day, group P3 as hyperglycemic rats. who were given insulin leaf extract at a dose of 150 mg/ BW rats /day and group P4 as hyperglycemic rats who were given insulin leaf extract at a dose of 300 mg/ BW rats /day. The results showed that the administration of insulin leaf extract  at  a  dose  of  300  mg/  BW  for  rats/day  was  able  to  make blood glucose levels significantly different, but the malondialdehyde levels were not significantly different than control rats. In addition, administration of insulin leaf extract at a dose of 300  mg/  BW  rats/day  to  hyperglycemic  rats  was  also  able  to improve  the  condition  of  the  Langerhans  pancreatic  islet  towards conditions  like  control  rats.  The  improvement  in  the  condition  of Langerhans  pancreatic  islet  is  indicated  by  the  cell  nucleus  that  is colored dark blue with more regular shapes. Keywords : Tithonia diversifolia , blood glucose, malondialdehid, pancreas.

## Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian 16 (1) (2021)

## Pendahuluan
Diabetes  mellitus  (DM) merupakan  suatu  penyakit  pada  kelainan  sistem endokrin,  yang  banyak  dialami  orang  di  seluruh  dunia.  Orang  yang  mengalami diabetes, diawali dengan suatu kondisi meningkatnya kadar gula di dalam darah yang tinggi  (kondisi  hiperglikemik).  Hiperglikemik  memacu  terciptanya  kondisi  stress oksidatif  yang  ditandai  dengan  peningkatan  produksi  radikal  bebas  di  dalam  tubuh seperti: superoksida, radikal hidroksil dan hidroperoksil melalui proses rantai transport elektron  di  mitokondria.  Malondialdehid  (MDA)  merupakan  salah  satu  produk  yang dihasilkan  selama  proses  peroksidasi  lipid.  Peroksidasi  lipid  merupakan  reaksi fosfolipid  berantai  pada  fosfolipid  rantai  tak  jenuh  ganda,  sehingga  menyebabkan kerusakan  fungsi  membran  (Ayala et  al .,  2014).  Penentuan  MDA  dari  plasma  darah atau  jaringan  merupakan  salah  satu  metode  yang  banyak  digunakan  untuk menunjukkan tingkat radikal bebas di dalam tubuh (Singh et al .,2014). Kondisi stress oksidatif  dapat  mengakibatkan  gangguan  pada  metabolisme  karbohidrat,  lipid  atau protein.  Gangguan  metabolisme  ini  dapat  disebabkan  oleh  adanya  kegagalan  dalam sekresi  insulin  atau  kerja  insulin  yang  tidak  efektif.  Adanya  gangguan  sekresi  pada insulin  dan  atau  kerja  insulin  mengakibatkan  penurunan  kemampuan  tubuh  dalam pengaturan  homeostatis  glukosa  darah,  sehingga  menyebabkan  kadar  glukosa  darah tinggi (hiperglikemik) (Sari et al ., 2018).
Paparan zat toksik ke dalam tubuh dapat meningkatkan produksi radikal bebas dan menurunkan antioksidan tubuh (Thongsom et al ., 2013; Nasri et al ., 2015). Salah satu  jenis  zat  toksik  yang  menyebabkan  gangguan  sekresi  insulin  adalah  aloksan. Aloksan  hanya  spesifik  merusak  sel  beta islet Langerhans  pankreas  sebagai  sel penghasil insulin (Medjoub et al ., 2013). Secara histologi, kerusakan islet Langerhans ditandai  dengan  nekrosis,  degenerasi  sitoplasma  dan  pecahnya  membran  plasma (Veeranjaneyulu dan Subrahmanyam, 2016).
Pengobatan  penyakit  diabetes  biasanya  menggunakan  salah  satu  obat  dari golongan  sulphonylureas  yaitu  glibenklamid.  Glibenklamid  merupakan  obat  yang berfungsi  untuk  merangsang  sekresi  insulin  dari  sel  β  pankreas  (Rai et  al .,  2012). Penelitian tentang pengobatan alternatif yang berasal dari tanaman herbal terus digali. Daun  Insulin  ( Tithonia diversifolia)  secara  empiris  telah  digunakan  oleh  masyarakat sebagai obat DM. Secara umum senyawa kimia yang terdapat di daun insulin berperan sebagai antioksidan sehingga mampu untuk mengikat radikal bebas yang berlebihan di dalam  tubuh.  Sasmita  dkk.  (2017)  menjelaskan  bahwa  daun  insulin  memiliki  dua komponen  utama  yang  memiliki  peran  sebagai  antidiabetes  yaitu  flavonoid  dan seskuiterpen  lakton.  Hasil  analisis  senyawa  kimia  yang  terdapat  pada  ekstrak  daun insulin  menggunakan  akuades  berupa  komponen  fenolik  seperti  flavonoid  dan diterpenoid,  alkaloid,  tanin,  saponin,  fenol  serta  seskuiterpen  lakton  (Passoni et  al .,
2013 ; Olayinka et al .,2015 ; Ajao dan Moteetee, 2017). Mengacu pada hasil penelitian Sari et al . (2018) menyatakan bahwa pemberian ekstrak daun insulin dengan dosis 150 mg/BB tikus/hari memiliki kemampuan untuk menurunkan kadar glukosa darah sama seperti  obat  DM  jenis  glibenklamid.  Berdasarkan  temuan  tersebut,  penulis  ingin menguji kemampuan ekstrak daun insulin dan glibenklamid untuk mengurangi tingkat radikal  bebas  di  dalam  kondisi  hiperglikemik  dan  mendeskripsikan  kemampuannya
Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian 16 (1) (2021)
untuk  memperbaiki islet Langerhans  yang  rusak  akibat  zat  toksik  sehingga  kadar glukosa darah tikus hiperglikemik dapat kembali normal.

## Metode

## Ekstraksi Tanaman
Daun  insulin  pada  bagian  pucuk  berusia  sekitar  3-4  bulan  diperoleh  dari Semarang. Daun dicuci, dikeringkan menggunakan oven pada suhu 60℃ selama 1-2 hari selanjutnya dihaluskan menggunakan blender. Bubuk daun insulin sebanyak 100 g dimaserasi menggunakan akuades sebanyak 1.000 mL selama 24 jam pada suhu ruang, kemudian  dilakukan  penyaringan.  Filtrat  dari  proses  maserasi  dievaporasi menggunakan rotari evaporator pada suhu 80-90℃, dan dihasilkan pasta. Ekstrak daun insulin dengan dosis 150 mg dibuat dengan cara melarutkan 150 mg pasta ekstrak daun insulin  ke  dalam  3  mL  akuades,  sedangkan  pembuatan  ekstrak  daun  insulin  dengan dosis 300 mg dengan cara melarutkan 300 mg pasta ekstrak daun insulin ke dalam 3 mL akuades (Sari et al ., 2018).

## Hewan Uji Coba
Hewan  uji  coba  pada  penelitian  ini  menggunakan  20 tikus  putih  jantan  strain R.  norvegicus yang  berusia  3  bulan  dengan  bobot  badan  200  g.  Tikus  diperoleh  dari Laboratorium  Biologi  Universitas  Semarang  (UNNES).  Sebelum  digunakan  untuk penelitian,  tikus  diaklimatisasi  selama  7  hari  pada  suhu  ruang  dengan  kelembapan yang terkontrol (60-80%) dan mendapatkan siklus gelap terang selama 12 jam. Pakan dengan  komposisi  3,05%  lipid  kasar,  19,44%  serat  kasar  dan  19,99%  protein  kasar dalam sampel kering serta minum diberikan secara ad libitum.
Desain Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL).  Dua  puluh  ekor tikus putih ( R. norvegicus) jantan dibagi ke dalam empat kelompok perlakuan, masing- masing  kelompok  perlakuan  terdiri  dari  lima  ulangan.  Jenis  dari  perlakuan  yang diberikan sebagai berikut :
P0 : tikus nonhiperglikemik karena tidak diinjeksi aloksan sebagai tikus kontrol P1 : tikus hiperglikemik yang diberi glibenklamid dosis 10 mg/BB tikus/hari P2 : tikus hiperglikemik yang diberi ekstrak daun insulin dosis 150 mg/BB tikus/hari P3 : tikus hiperglikemik yang diberi ekstrak daun insulin dosis 300 mg/BB tikus/hari Perlakuan dilakukan selama 28 hari secara oral. Tikus hiperglikemik diperoleh dengan  menginjeksi  aloksan  monohidrat  dengan  dosis  150  mg/BB  tikus  secara intraperitoneal (Yuniwarti dkk ., 2018). Tikus dengan kadar glukosa darah > 140 mg/dL merupakan kondisi hiperglikemik dan dipilih untuk penelitian lebih lanjut (Waspadji, 2007).

## Variabel Penelitian
Pengukuran  kadar  glukosa  darah  dilakukan  sebelum  dan  setelah  pemberian perlakuan  pada  masing-masing  kelompok  menggunakan  glukometer  merek  “Easy Touch  GCU”  melalui  intravena  ekor.  Pengukuran  glukosa  darah  sebelum  pemberian perlakuan pada masing-masing kelompok dilakukan pada waktu hari keempat setelah injeksi  aloksan,  sedangkan  pengukuran  glukosa  darah  setelah  pemberian  perlakuan pada masing-masing kelompok dilakukan pada hari ke-28 setelah pemberian perlakuan
Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian 16 (1) (2021)
pada  masing-masing  kelompok.  Pengukuran  kadar  MDA  menggunakan  serum  darah yang  diperoleh  pada  hari  ke-28  setelah  pemberian  perlakuan  pada  masing-masing perlakuan  menggunakan  metode  zat  reaktif  asam  thiobarbituric.  Pembuatan  histologi pankreas  dilakukan  setelah  proses  pembedahan  pada  akhir  perlakuan  dengan menggunakan metode pewarnaan hematoksilin-eosin.

## Analisis Data
Data  kadar  glukosa  darah,  dan  kadar  MDA  dianalisis  secara  statistik  menggunakan Anova    dan  jika  terdapat  perbedaan  dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  dengan  tingkat kepercayaan  95%,  sedangkan  data  histologi islet Langerhans  pankreas  dijelaskan melalui deskripsi.

## Hasil dan Pembahasan
Tabel  1.  Analisis  rerata  kadar  glukosa  darah  setelah  injeksi  aloksan,  kadar  glukosa darah sesudah perlakuan, dan kadar MDA berbagai perlakuan
Perlakuan Parameter (rerata ± standar error) Kadar glukosa darah setelah injeksi aloksan hari ke-0 (mg/dL) Kadar glukosa darah sesudah perlakuan hari ke-28 (mg/dL) Kadar malondialdehid (MDA) hari ke-28 (nmol/mL) P0 91,50 a ±3,93 107,00 c ±3,46 14,90 ab ±0,38 P1 141,00 b ±4,71 103,50 bc ±2,53 15,48 b ±0,36 P2 144,00 b ±4,74 96,00 ab ±3,94 14,67 ab ±0,66 P3 142,75 b ±3,40 89,75 a ±2,62 13,92 a ±0,32
Keterangan : P0 = tikus nonhiperglikemik (kontrol), P1 = tikus hiperglikemik yang diberi glibenklamid dosis  10  mg/BB  tikus/hari,  P2  =  tikus  hiperglikemik  yang  diberi  ekstrak  daun  insulin dosis  150  mg/BB  tikus/hari,  P3  =  tikus  hiperglikemik  yang  diberi  ekstrak  daun  insulin dosis 300 mg/BB tikus/hari. Huruf dengan superskrip yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata (P > 0,05 ).
Kadar  glukosa  darah  pada  tikus  setelah  injeksi  aloksan  mempunyai  nilai glukosa darah yang berbeda nyata antara tikus tanpa injeksi aloksan (P0) dengan tikus yang  diinjeksi  aloksan  (P1,  P2  dan  P3).  Peningkatan  kadar  glukosa  darah  setelah injeksi  aloksan  dapat  terjadi  karena  sifat  kimia  aloksan  yang  hidrofilik  dan  reaktif sehingga  menyebabkan  aloksan  dapat  melintasi  lapisan  fosfilipid  bilayer  pada membran  sel  beta  pankreas  ke  dalam  sitosol  melalui  proses  difusi  terfasilitasi  oleh transporter  glukosa  GLUT  2  (Lenzen,  2005).  Peningkatan  kadar  glukosa  darah  pada tikus > 140 mg/dL merupakan kondisi hiperglikemik, yaitu kadar glukosa darah di atas normal  (Waspadji,  2007),  sedangkan  tikus  yang  mempunyai  kadar  glukosa  darah normal berkisar antara 85-132 mg/dL (Pritchett dan Corning, 2004).

## Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian 16 (1) (2021)
Hasil analisis statistik pada kadar glukosa darah sesudah perlakuan (Tabel 1.) menunjukkan  hasil  yang  berbeda  nyata  (P  <  0.05).  Hasil  analisis  uji  lanjut menggunakan uji Duncan menunjukkan terdapat perbedaan nyata antara tikus kontrol dengan tikus hiperglikemik yang diberi ekstrak daun insulin (baik dosis 150 maupun 300  mg/BB  tikus/hari),  namun  tidak  berbeda  nyata  dengan  tikus  hiperglikemik  yang diberi glibenklamid . Senyawa flavonoid dan fenol yang terdapat di daun insulin diduga mampu  menghambat  reaksi  berantai  dari  ROS  melalui  pelepasan  gugus  hidrogen (OH), selanjutnya atom hidrogen (H + ) berperan untuk mengikat ROS yang ada. Hal ini sesuai dengan pendapat Wang dan Wang (2017) menyatakan bahwa senyawa fenolik mampu  menghambat  reaksi  berantai  dari  radikal  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  pada  sel beta Langerhans pankreas, sedangkan flavonoid mampu mengikat radikal peroksi dan superoksida melalui kemampuannya untuk mendonorkan atom hidrogen (Umesh et al ., 2018).
Tikus  hiperglikemik  yang  diberi  glibenklamid  memiliki  kadar  glukosa  darah sebesar  103,50  mg/dL  menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  tikus kontrol.  Sen et  al .  (2016)  menyatakan  bahwa  glibenklamid  memacu  penghambatan ATP- sensitive potassium channels (kATP), yang selanjutnya akan memacu terbukanya saluran  Ca 2+ dan  meningkatkan  Ca 2+ intraseluler.  Peningkatan  Ca 2+ intraseluler menyebabkan  rangsangan  pengeluaran  insulin,  insulin  yang  tersekresi  selanjutnya membantu  glukosa  dapat  terabsoprsi  ke  dalam  sel  sehingga  kadar  glukosa  darah menurun.
Hasil  analisis  statistik  pada  kadar  MDA  (Tabel  1.)  menunjukkan  hasil  yang berbeda  nyata  (P  <  0,05).  Hasil  analisis  uji  lanjut  menggunakan  uji  Duncan menunjukkan  terdapat  perbedaan  nyata  antara  tikus  hiperglikemik  yang  diberi glibenklamid  dengan  tikus  hiperglikemik  yang  diberi  ekstrak  daun  insulin  dosis  300 mg/BB  tikus/hari,  namun  tidak  berbeda  nyata  dengan  tikus  kontrol  maupun  dengan tikus hiperglikemik yang diberi ekstrak daun insulin dosis 150 mg/BB tikus/hari. Tikus hiperglikemik  yang  diberi  glibenklamid  memiliki  kadar  MDA  15,48  nmol/mL menunjukkan hasil yang berbeda nyata dengan kadar MDA 13,92 nmol/mL pada tikus hiperglikemik  yang  diberi  ekstrak  daun  insulin  dosis  300  mg/BB  tikus/hari.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  kemampuan  glibenklamid  untuk  membuat  kadar  MDA  normal tidak  sebaik  apabila  menggunakan  ekstrak  daun  insulin.  Hal  ini  diduga  karena glibenklamid tidak mengandung antioksidan sehingga tidak dapat mencegah terjadinya peroksidasi  lipid  akibat  radikal  bebas.  Sesuai  dengan  pendapat  Obi et  al .  (2016) menyatakan  bahwa  glibenklamid  merupakan  obat  yang  mampu  menurunkan  kadar glukosa darah, namun tidak mampu untuk menurunkan tingkat peroksidasi lipid karena tidak mengandung antioksidan.
Pemberian ekstrak daun insulin ke tikus hiperglikemik baik dosis 150 mg/BB tikus/hari  maupun  dosis  300  mg/BB  tikus/hari  mampu  membuat  kadar  MDA  tidak berbeda nyata dengan tikus kontrol. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak daun insulin mengandung  flavonoid  yang  berperan  sebagai  antioksidan  sehingga  menurunkan radikal bebas yang berupa MDA. Umesh et al . (2018) menyatakan bahwa struktur 3', 4'-catechol  pada  flavonoid  meningkatkan  penghambatan  peroksidasi  lipid  melalui pengikatan reactive oxygen species khusunya radikal hidroksil.

## Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian 16 (1) (2021)
Histologi islet Langerhans pankreas dari tikus kontrol (P0), tikus hiperglikemik yang  diberi  glibenklamid  (P1),  tikus  hiperglikemik  yang  diberi  ekstrak  daun  insulin dosis  150  mg/BB  tikus/hari  (P2),  serta  tikus  hiperglikemik  yang  diberi  ekstrak  daun insulin  dosis  300  mg/BB  tikus/hari  (P3)  melalui  pewarnaan  hematoksilin  dan  eosin secara berturut-turut ditunjukkan melalui Gambar 1, 2, 3, dan 4 dibawah ini.
Histologi islet Langerhans  pankreas  pada  tikus  kontrol  (Gambar  1.) menunjukkan  bahwa islet berbentuk  teratur  dengan  batas  antarsel  yang  terlihat  jelas, sel  berbentuk  bulat  serta  inti  sel  juga  berbentuk  bulat.  Hasil  pengamatan  tersebut sesuai dengan Qadori (2011) menyatakan bahwa jaringan pankreas pada tikus normal menunjukkan islet berbentuk  teratur  dengan  batas  antarsel  yang  terlihat  jelas  serta memiliki  sel  dan  inti  sel  berbentuk  oval  atau  bulat.  Sel-sel  pada islet tikus  kontrol
Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian 16 (1) (2021)
normal  terdistribusi  merata  di  seluruh  bagian islet Langerhans  pankreas.  Hasil pengamatan islet Langerhans tikus kontrol menggunakan pewarnaan hematoksilin dan eosin terlihat adanya bagian yang terwarnai biru tua adalah inti sel, dan bagian yang terwarnai  merah  adalah  sitoplasma.  Young et  al .  (2010)  menyatakan  bahwa  inti  sel yang  terwarnai  dengan  jelas  menunjukkan  sel  yang  tidak  mengalami  nekrosis. Berdasarkan  Gambar  1.  terlihat  banyak  inti  sel  yang  terwarnai,  hal  ini  menunjukkan pada islet Langerhans tikus kontrol tidak mengalami nekrosis.
Gambar  2.  menunjukkan islet Langerhans  pankreas  pada  tikus  hiperglikemik yang  diberi  glibenklamid  berbentuk  tidak  teratur,  batas  antarsel  tidak  terlihat  jelas namun ada yang terlihat samar-samar, sel ada yang tidak beraturan bentuknya namun ada  yang  berbentuk  bulat  tapi  terlihat  samar-samar  serta  inti  sel  tidak  terlihat  jelas. Margaret et  al .  (2013)  menyatakan  bahwa  tikus  diabetes  yang  diberi  glibenklamid menunjukkan bentuk islet menjadi tidak beraturan karena bentuk sel tidak beraturan, batas  antarsel  tidak  dapat  dibedakan  serta  inti  sel  tidak  terlihat.  Glibenklamid merupakan  obat  yang  berperan  untuk  meningkatkan  sekresi  insulin,  namun  tidak berfungsi untuk memperbaiki islet Langerhans pankreas (Michael dan Uzoma, 2013). Histologi islet Langerhans  pankreas  pada  tikus  hiperglikemik  yang  diberi ekstrak daun insulin baik dosis 150 mg/BB tikus/hari (Gambar 3.) ataupun dosis 300 mg/BB tikus/hari  (Gambar 2.) menunjukkan islet teratur, batas antarsel mulai terlihat jelas,  sel  dan  inti  sel  terlihat  berbentuk  bulat,  serta  inti  sel  yang  terwarnai  biru  tua meningkat  dibandingkan  perlakuan  tikus  hiperglikemik  yang  diberi  glibenklamid. Selain jumlah inti sel yang meningkat, juga terlihat adanya sel yang sedang mengalami pembelahan  sel  yang  ditandai  dengan  terdapat  dua  inti  dalam  satu  sel.  Kondisi  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  insulin  mampu  memperbaiki  kondisi islet Langerhans  pankreas.  Sheweita et  al .  (2016)  menyatakan  bahwa  pemberian  ekstrak daun  insulin pada  tikus  diabetes  menunjukkan  adanya  regenerasi islet Langerhans pankreas  yang  ditandai  dengan  jumlah  inti  sel  yang  terwarnai  biru  tua  dengan pewarnaan hematoksilin lebih banyak, adanya regenerasi pada sel islet mengakibatkan bentuk inti sel menjadi terlihat jelas dan batas antarsel juga terlihat.
Pemberian  ekstrak  daun  insulin  dosis  300  mg/BB  tikus/hari  memiliki kemampuan  yang  lebih  besar  untuk  memperbaiki  kondisi islet Langerhans  pankreas pada  tikus  hiperglikemik.  Hal  ini  dibuktikan  dengan  inti  sel  yang  terwarnai  biru  tua dengan bentuk teratur terlihat lebih banyak pada Gambar 4. lebih banyak dibandingkan Gambar 3. Kemampuan ekstrak daun insulin untuk memperbaiki kondisi islet diduga karena  adanya  senyawa  flavonoid  yang  berperan  sebagai  antioksidan,  antioksidan inilah  yang  menghambat  kerusakan islet karena  dapat  mengikat  radikal  bebas  yang dihasilkan aloksan. Eliakim-Ikechukwu dan Obri (2009) menyatakan bahwa flavonoid mampu  menghentikan  penghancuran  sel  beta  dengan  mengikat ROS  yang  dihasilkan oleh  aloksan  dan  menginduksi  sel  beta  untuk  melakukan  proliferasi  supaya menggantikan sel yang rusak akibat nekrosis.

## Kesimpulan
Pemberian ekstrak daun insulin dosis 300 mg/BB tikus/hari mampu untuk menjadikan kadar glukosa darah berbeda nyata, namun untuk kadar malondialdehid tidak berbeda
Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian 16 (1) (2021)
nyata dibandingkan tikus kontrol. Selain itu, pemberian ekstrak daun insulin dosis 300 mg/BB  tikus/hari  pada  tikus  hiperglikemik  juga  mampu  untuk  memperbaiki  kondisi islet Langerhans pankreas menuju kondisi seperti tikus kontrol.
.

## Daftar Pustaka
Ajao,  A.  A.  and  A.  N.  Moteetee.  2017. Tithonia  diversifolia (Hemsl)  A.  Gray. (Asteraceae : Heliantheae), an Invasive Plant of Significant Ethnopharmacological Importance : A Review. South Africa Journal of Botany . 113 : 396-403 Ayala,  A.,  Munoz,  M.  F.  and  S.  Arguelles.  2014.  Lipid  Peroxidation  :  Production, Metabolism  and  Signaling  Mechanisms  of  Malondialdehyde  and  4-Hydroxy-2- Nonenal. Oxidative Medicine and Cellular Longevity . 10  : 1-32. Eliakim-Ikechukwu, C. F. and A. I. Obri. 2009. Histological Changes in the Pancreas Following  Administration  of  Ethanolic  Extract  of Alchornea  cordifolia Leaf  in Alloxan-Induced  Diabetic  Wistar  Rats. Nigerian  Journal  of  Physiological Sciences . 24 (2) : 153-155.
Lenzen,  S.  2005.  Alloxan  and  Streptozotocin  Diabetes. Biomedical  Chemical Pharmacology . 20 : 119-138.
Margaret,  A.  O.,  Stephen,  A.,  Meshack,  I.  O.,  Sunday,  A.  and  O.  Abidemi.  2013. Histological  Studies  of  Pancreatic  B-Cells  of  Streptozotocin-Induced  Diabetic Wistar  Rats  Treated  With  Methanolic  Extract  of Sphenocentrum  jollyanum . Journal of Pharmaceutical and Scientific Innovation . 2 (2) : 8-12.
Medjoub, H., Selles, C. and B. Tabti. 2013. Medicinal Plants : A Methodology For Studying  Their  Anti-Diabetic  Activity. International  Journal  of  Medicine  and Pharmaceutical Sciences . 3 (4) : 169-178.
Michael,  O.  M.  and  A.  I.  Uzoma.  2013.  Histological  Changes  and  Antidiabetic Activities  of Icacina  trichantha tuber  Extract  in  Beta-Cells  of  Alloxan  Induced Diabetic Rats. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 3 (8) : 628-633.
Nasri, H., Shirzad, H., Baradaran, A. and M. Rafieian. 2015. Antioxidant Plants and Diabetes Mellitus. Journal of Research in Medical Sciences . 491-502. Obi,  B.  C.,  Okoye,  T.  C.,  Okpashi,  V.  E.,  Igwe,  C.  N.  and  Alumanah,  E.  O.  2016. Comparative Study of the Antioxidant Effects of Metformin, Glibenclamide, and Repaglinide in Alloxan-Induced Diabetic Rats. Journal of Diabetes Research . 1-5. Olayinka,  B.  U.,  Raiyemo,  D.  A  and  E.  E.  Obukohwo.  2015.  Phytochemical  and Proximate  Composition  of Tithonia  diversifolia (Hemsl.)  A.  Gray. Annals.  Food Science and Technology . 16 (1) : 195-200.
Passoni, F. D., Oliveira, R. B., Paula, D. A., Neto, L. B., and F. B. Da Costa. 2013. Repeated-dose Toxicology Studies of Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray and Identification of the Toxic Compounds. Journal of Ethnopharmacology . 147 : 389- 394.
Pritchett, K. R. and B. F. Corning. 2004. Biology and Medicine of The Rat. Harvard University, USA.
Qadori,  Y.  T.  2011.  Histological  Studies  on  Pancreatic  Tissue  in  Diabetic  Rats  by Using Wild Cherry. The Iraqi Postgraduate Medical Journal . 10 (3) : 421-426.

## Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian 16 (1) (2021)
Rai, A., Eapen, C. and V. G. Prasanth. 2012. Interaction of Herb and Glibenclamide :
A Review. International Scholarly Research Network . 1-5.
Sari, A. R., Saraswati, T. R. and E. Yusuf W. Y. 2018. Antihyperglycemic Activity of Aqueous Extract of Insulin Leaves ( Tithonia diversifolia ) on Hyperglycemic Rats ( Rattus norvegicus ). Biosaintifika . 10 (3) : 636-641.
Sasmita, F. W., Susetyarini, E. dan Y. Pantiwati. 2017. Efek Ekstrak Daun Kembang Bulan  ( Tithonia  diversifolia )  Terhadap  Kadar  Glukosa  Darah  Tikus  Wistar ( Rattus norvegicus ) yang Diinduksi Alloxan. Biosfera . 34 (1) : 22-31.
Sen,  S.  R.,  Kumar,  D.,  Easwari,  TS.,  and  S.  Gohri.  2016.  Theraupetic  Aspects  of Sulfonylures : a Brief Review. Journal of Chemical and Pharmaceutical Research . 8 (12) : 121-130.
Sheweita, S. A., Mashaly, S., Newairy, A. A., Abdou, H. M., and S. M. Eweda. 2016. Changes in Oxidative Stress and Antioxidant Enzyme Activities In Streptozotocin- Induced  Diabetes  Mellitus  In  Rats  :  Role  of Tithonia  diversifolia Extracts.
Oxidative Medicine and Cellular Longevity . 1-8.
Singh, Z. Karthigestu, I. P., Singh, P. and R. Kaur. 2014. Use of Malondialdehyde as a  Biomarker  for  Assecing  Oxidative  Stress  in  Different  Disease  Pathologies  :  a Review. Iranian Journal Public Health . 43 (3) : 7-16.
Thongsom,  M.,  Chunglok,  W.,  Kuanchuea,  R.  and  J.  Tangpong.  2013.  Antioxidant and  Hypoglycemic  Effects  of Tithonia  diversifolia Aqueous  Leaves  Extract  in Alloxan-Induced Diabetic Mice. Advances in Environmental Biology . 7 (9) : 2116- 2125.
Umesh, C. V., Jamsheer, A. M. and M. A. Prassad. 2018. The Role of Flavonoids in Drug  Discovery-Review  On  Potential  Applications. Research  Journal  of  Life Sciences, Bioinformatic, Pharmaceutical and Chemical Sciences . 4 (1) : 70-77. Veeranjaneyulu,  C.  and  G.  Subrahmanyam.  2016.  Rediscovery  The  Induction  of Diabetogenic Agents in The Experimental Animal Model : Review. International Journal of Applied Biology and Pharmaceutical Technology . 7 (3) : 95-104.
Wang, J., and H. Wang. 2017. Review Article : Oxidative  Stress in Pancreatic Beta Cell Regeneration. Hindawi Oxidative Medicine and Cellular Longevity . 1-10. Waspadji, S. 2007.  Penatalaksanaan DM Terpadu. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta.
Young, B., Stewart, W., O’Dowd, G. and P. R. Wheather. 2010. Basic Pathology : a Text,  Atlas  and  Review  of  Histopathology.  Edinburg,  Churchill  Livingstone Company.
Yuniwarti, E. Y. W., Saraswati, T. R. & Kusdiyantini, E. (2018). Respon Penurunan Kadar Glukosa Darah Tikus ( Rattus norvegicus ) Hiperglikemik Setelah Pemberian Berbagai Minyak Konsumsi. Buletin Anatomi dan Fisiologi . 3 (2) : 1-6.