## ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF LAMELLODYSIDEA HERBACEA SPONGE EXTRACT FROM THE WATERS OF POOPOH VILLAGE, MINAHASA REGENCY

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK SPONS Lamellodysidea herbacea DARI PERAIRAN DESA POOPOH KABUPATEN MINAHASA
Widya Fransiska Rompas 1)* , Defny Silvia Wewengkang 1) , Deby Afriani Mpila 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA Universitas Samratulangi *rompaswidya4@gmail.com

## ABSTRACT
Infectious disease is one of the diseases that is currently became a health problem in the community. Along with  the  increase  in  cases  of  infection,  there  is  also  an  increase  in  cases  of  resistance  to  antibiotics.  The biodiversity of Indonesia exhibit a potential at anti-bacterial which could be develop to become antibioctics candidate. This study aims to determine the antibacterial activity of Lamellodysidea herbacea sponge obtained from  the  waters  of  Poopoh  village,  Minahasa  Regency  against  the  growth  of  Staphylococcus  aureus  and Pseudomonas aeruginosa bacteria. Extraction was carried by maceration out using 95% ethanol solvent. Anti- bacterial testing using agar diffusion method (Disc diffusion Kirby and Bauer). The results showed that the ethanol extracts of Lamellodysidea herbacea sponge had the largest inhibition zone on Staphylococcus aureus bacteria at a concentration of 250 μL/disc of 7.5 mm and Pseudomonas aeruginosa bacteria at a concentration of 250 μL/disc of 7.33 mm, both inhibition zones were in the medium category. Based on this study, it can be concluded that the largest inhibition zone is found in Staphylococcus aureus bacteria.
Keywords: Lamellodysidea herbacea, antibacterial, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa.

## ABSTRAK
Penyakit infeksi merupakan salah satu penyakit yang sampai saat ini menjadi masalah kesehatan di kalangan masyarakat. Seiring dengan peningkatan kasus infeksi maka semakin meningkat juga kasus resistensi terhadap antibiotik.  Indonesia  adalah  negara  yang  dikenal  memiliki  keanekaragaman  hayati  yang  berpotensi  dapat dijadikan  sebagai  bahan  antibakteri  yang  dapat  dikembangkan  menjadi  kandidat  antibiotik.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  dari    spons Lamellodysidea  herbacea yang  diperoleh  dari Perairan  desa  Poopoh  Kabupaten  Minahasa  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas    aeruginosa .  Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan  pelarut  etanol  95%.  Pengujian antibakteri menggunakan metode difusi agar ( Disc diffusion Kirby and Bauer ). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol spons Lamellodysidea herbacea memiliki zona hambat yang paling besar pada bakteri Staphylococcus  aureus konsentrasi  250 𝜇 L/ disc sebesar  7,5  mm  dan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa konsentrasi  250 𝜇 L/ disc sebesar  7,33  mm,  kedua  zona  hambat  tersebut  masuk  pada  kategori  sedang. Berdasarkan  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  zona  hambat  yang  paling  besar  terdapat  pada  bakteri Staphylococcus aureus .
Kata kunci: Lamellodysidea herbacea , antibakteri, Staphylococcus aureus , Pseudomonas aeruginosa .

## PENDAHULUAN
Negara
Indonesia merupakan negara kepulauan yang sebagian besar wilayahnya adalah laut.  Indonesia  memiliki  gelar  sebagai  negara maritim  dan  dikenal  juga  sebagai  negara  yang memiliki  keanekaragaman  hayati  yang  melimpah karena  berada  pada  letak  yang  strategis  di  daerah tropis.  Lautan  yang  luas  menjadi  peluang  bagi masyarakat  Indonesia  untuk  memanfaatkan  dan mengembangkan sumber daya perairan (Mahsunah et al ., 2020). Biota laut dapat dimanfaatkan bukan hanya  untuk  dikonsumsi  tetapi  juga  dapat diarahkan pada penelitian yang lebih maju, seperti ditemukannya obat-obatan dari biota laut (Albuntana et al ., 2011).
Menurut  Liem et  al (2019),  salah  satu  jenis biota laut yang sering digunakan dalam penelitian yaitu  spons.  Laut  Indonesia  memiliki  sekitar  830 spesies  spons,  hal  tersebut  menjadikan  Indonesia sebagai salah satu pusat penyebaran spons terbesar di  dunia.  Spons  menjadi  salah  satu  bagian penyusun  terumbu  karang  yang  memiliki  potensi menghasilkan  senyawa  metabolit  sekunder  yang memiliki sifat bioaktif sebagai antijamur, antikanker  dan  antibakteri  yang  masih  belum banyak  dimanfaatkan  (Menggelea et  al .,  2015). Berdasarkan hal tersebut spons menjadi salah satu hewan  laut  yang  memiliki  potensi  besar  untuk dikembangkan  dalam  bidang  pengobatan  salah satunya sebagai antibiotik (Liem et al ., 2019).
Lamellodysidea  herbacea merupakan  salah satu spons yang hidup di perairan Indonesia. Spons ini  merupakan  salah  satu  spesies  yang  memiliki tubuh  berpori  serta  permukaannya  keras  seperti batu. Lamellodysidea  herbacea juga  dapat menyerap  oksigen  dan  air  melalui  proses  difusi (Hooper,  2012).  Penelitian  sebelumnya  terhadap Lamellodysidea herbacea yang diperoleh dari teluk Manado dilakukan pada tahun 2014 menunjukkan bahwa  spons  ini  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli (Dwijendra et al ., 2014).
Penyakit  infeksi  menjadi  salah  satu  penyakit yang sering  terjadi di kalangan masyarakat. Salah satu  jenis  obat  yang  sering  digunakan  adalah antimikroba antara lain antijamur, antibakteri/antibiotik,  antiprotozoa  dan  antivirus. Antibakteri/antibiotik  adalah  zat  yang  bisa menghambat pertumbuhan mikroorganime. Antibiotik yang  sensitif  terhadap  mikroorganisme dapat  menjadi  tidak  sensitif  disebut  resistensi antibiotik  (Utami,  2012).  Adanya  permasalahan resistensi  antibiotik  terhadap  beberapa  bakteri, sehingga  kebutuhan untuk  mendapatkan  alternatif
antibiotik lain semakin meningkat. Oleh sebab itu, saat  ini  sangat  diperlukan  penemuan  antibiotika baru  yang dapat  mengatasi  permasalahan  tersebut (Utomo et  al .,  2018).  Berdasarkan  uraian  di  atas, maka penelitian ini perlu dilakukan untuk menguji aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi  spons Lamellodysidea  herbacea yang  diperoleh  dari Perairan  Desa  Poopoh  Kabupaten  Minahasa terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa .

## METODE PENELITIAN Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  ini  berupa  penelitian eksperimental  di  laboratorium  dengan  cara menguji  komponen  yang  terekstrak  dari  spons Lamellodysidea  herbacea sebagai  bahan  alam antibakteri pada bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa .

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan November 2022 sampai Mei 2023 di Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia, Laboratorium Lanjutan  Program  Studi  Farmasi  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  dan Laboratorium Hama dan Penyakit pada Tumbuhan Fakultas Pertanian.

## Alat dan Bahan
a. Alat Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah scuba  diving (peralatan  selam),  gunting,  pisau, talenan,  plastik zipper  lock  bag ,  sarung  tangan, botol air kemasan 600 ml, kamera, cool box , spidol permanen, jas lab, masker, handscoon , kertas label, corong gelas, wadah kaca, gelas ukur (pyrex), gelas kimia  (pyrex),  erlenmeyer,  rak  tabung  reaksi, tabung  reaksi,  cawan  petri, microtube ,  spatula, pinset, mikropipet, jangka sorong, batang pengaduk, magnetic  stirrer ,  timbangan  analitik, kertas  cakram  ( blank  paper  disc ),  lampu  bunsen, incubator  incucell (N-Biotek), rotary  evaporator EYELA OSB-2100 ,  lemari  pendingin, laminary  air flow dan autoklaf ( autoklaf KT-30s).
b. Bahan
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah spons Lamellodysidea herbacea , bakteri uji S.  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa ,  etanol, metanol,  aquadest,  kertas  cakram  kloramfenikol ( cloramphenicol  paper  disc ),  pepton,  natrium klorida, ekstrak daging ( beef extract ), nutrient agar,
aluminium foil , tissue , kapas, kertas pH dan kertas saring.
Prosedur Penelitian

## Pengambilan Sampel
Sampel  spons Lamellodysidea  herbacea yang diambil  dari  Perairan  Desa  Poopoh  Kabupaten Minahasa  dengan  menggunakan  peralatan  selam ( scuba diving ) hingga kedalaman 5 meter di bawah permukaan  air.  Sampel  yang  sudah  didapatkan dimasukkan ke dalam plastik zipper lock bag yang sudah  diberi  penomoran  kemudian  difoto  dan diletakkan di dalam cool box yang sudah berisi es batu.  Sampel  tersebut  selanjutnya  dibawa  ke Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi. Kemudian dilakukan determinasi.

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak sampel spons Lamellodysidea herbacea dilakukan  dengan  metode  maserasi menggunakan  etanol  95%.  Kemudian  dilakukan sortasi basah, dipotong kecil-kecil dan dimasukkan ke dalam botol 600 mL. Sampel tersebut direndam selama 24 jam dengan menggunakan pelarut etanol hingga  semua bagian  sampel  terendam  sempurna. Setelah  dilakukan  perendaman  selama  24  jam, sampel  disaring  hingga  didapatkan  filtrat  1  dan debris  1.  Debris  1  diremaserasi  selama  24  jam dengan menggunakan pelarut etanol hingga semua bagian  sampel  terendam  sempurna,  selanjutnya sampel  disaring  hingga  didapatkan  filtrat  2  dan debris  2.  Debris  2  kemudian diremaserasi  dengan pelarut  etanol  hingga  semua  sampel  terendam sempurna  dan  dibiarkan  selama  24  jam,  sampel tersebut disaring dan didapatkan filtrat 3 dan debris 3. Hasil filtrat 1, 2 dan 3 yang sudah diperoleh dari metode maserasi digabung menjadi satu kemudian disaring kembali. Setelah disaring, filtrat dibawa ke Laboratorium Hama dan Penyakit pada Tumbuhan Fakultas  Pertanian  untuk  dilakukan  evaporasi dengan  menggunakan  alat rotary  evaporator EYELA OSB-2100 pada suhu 40 ° C sampai didapatkan ekstrak  kering  (ekstrak  kasar)  dan  kemudian ditimbang dengan menggunakan timbangan analitik.  Selanjutnya  ekstrak  kasar  yang  didapat dari  spons Lamellodysidea  herbacea dibawa kembali  ke  Laboratorium  Farmakognosi  dan Fitokimia (Silap et al ., 2020).

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian  uji aktivitas antibakteri ini disterilkan terlebih dahulu. Pinset disterilisasi dengan cara dibakar di atas api langsung.  Alat-alat  gelas  dan  media  disterilkan
pada  suhu  121 ° C  selama  15  menit  dengan menggunakan autoklaf (Putri et al ., 2020).

## Pembuatan Media Cair
Pembuatan  media  cair  dilakukan  dengan  cara mencampurkan  ekstrak  daging  ( beef  extract ) sebanyak 0,3 g, aquadest sebanyak 100 mL, 0,3 g natrium klorida dan 0,5 pepton dengan menggunakan magnetic  stirrer sampai  homogen selanjutnya  disterilkan  dengan  menggunakan autoklaf  pada  suhu  121 ° C  selama  15  menit. Kemudian  diukur  pH  media  cair  menggunakan kertas pH. 1 mL media cair dimasukkan ke dalam tabung  reaksi  dan  ditutup  dengan aluminium  foil . Media  cair  siap  digunakan  sebagai  media  kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Media cair yang sudah disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  bersama  masing- masing  bakteri  yang  sudah  dikultur  ( P. aeruginosa dan S.  aureus )  kemudian  pipet sebanyak 100 µL ke dalam tabung reaksi yang berbeda.  Tiap  tabung  reaksi  ditutup  dengan aluminium  foil dan  dimasukkan  ke  dalam inkubator  selama  1x24  jam  pada  suhu  37 ° C (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif
Pada pembuatan kontrol positif digunakan kertas cakram kloramfenikol ( cloramphenicol paper  disc )  dan  untuk  kontrol  negatif digunakan  pelarut  metanol  dengan  cara membuat  larutan  metanol  dengan  mengambil sebanyak 100 µL metanol kemudian ditotolkan pada kertas cakram ( blank paper disc ) (Josua et al ., 2021).

## Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan  larutan  uji  dengan  cara ditimbang ekstrak kasar dari spons Lamellodysidea  herbacea sebanyak  2  mg, kemudian  dilarutkan  dalam  400  µL  metanol hingga  menghasilkan  konsentrasi  250  µg/50 µL (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar
Dicampurkan  1,5  g nutrient  agar ,  0,5  g pepton,  0,3  g  natrium  klorida,  0,3  g  ekstrak daging  ( beef  extract )  dan  100  mL  aquades kemudian dicampur sampai merata selanjutnya dihomogenkan dengan menggunakan
magnetic  stirrer lalu  diautoklaf  pada  suhu 121 ° C  selama  15  menit.  Media  agar  siap digunakan  untuk  uji  aktivitas  antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode yang digunakan pada penelitian ini yaitu metode difusi agar ( disc diffusion Kirby and Bauer ). Pada pengujian aktivitas antibakteri  ini,  cakram  ( paper  disc )  yang digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap 50  µL  tiap  cakram.  Sampel  yang  telah ditentukan  konsentrasinya  250  µg/50  µL ditotolkan pada masing-masing cakram dengan  menggunakan  mikropipet.  Untuk media agar yang sudah di autoklaf pada suhu 121˚C  selama  15  menit,  kemudian  di dinginkan sampai suhu 40˚C. Tuangkan media agar  yang  sudah  dicampurkan  ke cawan petri dan  ditunggu  sampai  media  agar  mengeras. Masing-masing  cawan  petri  diberi  label  dan nomor  sampel  yang  sesuai.  Letakkan  kertas cakram yang telah ditotolkan sampel uji spons Lamellodysidea  herbacea dengan  pinset  ke dalam cawan petri lalu diinkubasi selama 1x24 jam pada suhu 37˚C (Ortez, 2005).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter  Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam  masa inkubasi. Daerah pada sekitaran cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau  bahan  antibakteri  yang  digunakan  sebagai bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan  diameter  zona hambat.  Diameter  zona  hambatnya  diukur menggunakan  mistar  berskala  dengan  cara  diukur diameter zona hambatnya. Davis and Stout (1971), menyatakan  diameter  ≤  5  mm memiliki  kekuatan daya hambat lemah, 6-10 mm daya hambat sedang, 11-20  mm  daya  hambat  kuat  dan  ≥  21  mm  daya hambat sangat kuat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi  spons Lamellodysidea  herbacea yang  diperoleh  dari  Perairan  Desa  Poopoh Kabupaten  Minahasa  dilakukan  determinasi  di Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Program Studi Farmasi, Universitas Sam Ratulangi.  Hasil  determinasi  menunjukkan bahwa jenis  spons  yang  diteliti  ialah Lamellodysidea herbacea . Determinasi dilakukan untuk
memastikan  sampel  yang  digunakan  sesuai  dan tidak terjadi kesalahan dalam pengambilan sampel yang akan digunakan pada uji aktivitas antibakteri. Ekstraksi Sampel  spons Lamellodysidea  herbacea yang diperoleh  dari  perairan  desa  Poopoh  Kabupaten Minahasa,  di  ekstraksi  dengan  menggunakan metode  maserasi.  Pemilihan  metode  maserasi karena  peralatan  dan  cara  pengerjaannya  yang sederhana  dan  tidak  menggunakan  pemanasan yang tinggi karena dapat menyebabkan kerusakan pada metabolit sekunder (Chairunnisa et al ., 2019). Perendaman sampel pada metode maserasi ini akan memecah  dinding  membran  sel  karena  adanya perbedaan tekanan antara di dalam sel dan di luar sel, sehingga metabolit sekunder yang ada di dalam sel  dan  organ  sel  lainnya    akan  terlarut  dalam pelarut  organik  secara  sempurna  (Meigaria et  al ., 2016).
Pada proses maserasi digunakan pelarut etanol 95% sebagai larutan penyari karena memiliki sifat selektif,  tidak  toksik  dan  bersifat  universal sehingga  cocok  digunakan  untuk  mengekstrak berbagai senyawa metabolit sekunder (Watupungoh  dkk.,  2019).  Proses  maserasi dilakukan  sebanyak  tiga  kali  pengulangan  atau remaserasi 3 × 24 jam dengan tujuan agar semakin banyak  zat  aktif  yang  terekstrak  sehingga memperoleh  ekstrak  kental  yang  lebih  banyak. Menurut  Wahyuni  dan  Widjanarko  (2015), semakin  lama  waktu  remaserasi  yang  dilakukan maka  semakin  lama  kontak  antara  pelarut  dengan bahan yang akan memperbanyak jumlah membran sel yang pecah dan semakin banyak zat aktif yang terlarut.
Filtrat  yang  didapat  selanjutnya  disaring dengan  menggunakan  kertas  saring  kemudian diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator pada  suhu  40˚C.  Prinsip  kerja  dari  alat rotary evaporator yaitu  dengan  menggunakan  prinsip vakum  destilasi,  dimana  dengan  adanya  tekanan, pelarut yang digunakan dapat menguap pada suhu di  bawah  titik  didihnya,  sehingga  kandungan senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  di dalam  pelarut  tidak  mengalami  kerusakan  oleh suhu  yang  tinggi  (Hermansah et  al .,  2015).  Hasil penguapan  tersebut  memperoleh  massa  total ekstrak  kering  sebanyak  1,5g,  dari  massa  awal 73,5g. Ekstrak kasar etanol ini digunakan sebagai sampel untuk pengujian antibakteri.
Tabel 1. Rendemen ekstrak spons Lamellodysidea herbacea Pelarut Berat Ekstrak (g) Persentase (%) Warna Pelarut Ekstrak etanol 1,5 2,04% Hijau pekat Pengujian Aktivitas Antibakteri Spons

## Lamellodysidea herbacea
Metode  yang  digunakan  pada  pengujian aktivitas  antibakteri  adalah  metode  difusi  agar ( Disc  diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Alasan  dari pemilihan  metode  difusi  agar  karena  pada  proses pengujiannya  yang  lebih  mudah,  cepat  dan sederhana dalam proses pengerjaannya. Pengujian ini  menggunakan  kertas  cakram  yang  berisi kloramfenikol 250 𝜇 g dalam 50 𝜇 L sebagai kontrol positif.  Kontrol  positif  memiliki  fungsi  sebagai kontrol  zat  uji  dengan  membandingkan  diameter zona  hambat  yang  terbentuk,  sedangkan  kontrol negatif  yang  digunakan  yaitu  metanol.  Kontrol negatif  berfungsi  untuk  mengetahui  ada  tidaknya pengaruh  dari  pelarut  terhadap  pertumbuhan bakteri S. aureus dan P. aeruginosa .
Bakteri  yang  digunakan  pada  pengujian  ini yaitu S.  aureus sebagai  bakteri  yang  mewakili Gram-positif dan P.  aeruginosa sebagai  bakteri yang mewakili Gram-negatif. Bakteri S. aureus dan P.  aeruginosa digunakan  dengan  tujuan  untuk melihat  spektrum  dari  senyawa  antibakteri  yang terdapat  pada  ekstrak  etanol,  di  mana  dinyatakan berspektrum  luas  apabila  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram-positif  dan  Gram- negatif, sedangkan dinyatakan berspektrum sempit apabila hanya menghambat pertumbuhan dari salah satu  bakteri  Gram-positif  atau  Gram-negatif (WHO, 2014).
Media uji yang berisikan paper disc diinkubasi pada  suhu  37˚C  dalam  waktu  24  jam  yang dilakukan 3 kali pengulangan pada masing-masing bakteri,  tujuan  dari  dilakukannya  pengulangan sebanyak  3  kali  untuk  mendapatkan  hasil  yang lebih akurat. Setelah dilakukan inkubasi terbentuklah  daerah  hambat  di  sekitar paper  disc yang berbentuk lingkaran. Diameter daerah hambat yang  terbentuk  merupakan  daerah  inhibisi  dari ekstrak  sampel  terhadap  bakteri  uji,  hasil pengamatan  zona  hambat  dapat  dilihat  pada gambar 4.
Hasil  pengukuran  zona  hambat  ekstrak  spons Lamellodysidea  herbacea menunjukkan  adanya aktivitas  terhadap  pertumbuhan  bakteri S.  aureus sebagai  bakteri  Gram-positif dan P.  aeruginosa sebagai bakteri Gram-negatif melalui terbentuknya
zona  hambat  di  sekitar  kertas  cakram,  sehingga diketahui  bahwa  ekstrak  spons Lamellodysidea herbacea memiliki  spektrum  yang  luas.  Ukuran zona  hambat  yang  paling  besar  yaitu  pada pengujian  terhadap  bakteri S.  aureus (mewakili Gram-positif) ekstrak etanol yaitu sebesar 7,5 mm konsentrasi  250 𝜇 L/ disc ,  sedangkan  terhadap bakteri P.  aeruginosa (mewakili  Gram-negatif) ekstrak  etanol  yaitu  sebesar  7,33  mm  konsentrasi 250 𝜇 L/ disc .  Menurut  Davis and Stout  (1971), menyatakan  apabila  zona  hambat  yang  terbentuk pada hasil uji difusi agar berukuran ≤5 mm maka memiliki  kekuatan  penghambatan  yang  lemah,  6- 10  mm  memiliki  kekuatan  penghambatan  yang sedang, 11-20 mm memiliki kekuatan penghambatan  yang  kuat  dan  ≥21  mm  memiliki kekuatan  penghambatan  yang  sangat  kuat. Berdasarkan hasil tersebut diperoleh ekstrak etanol spons Lamellodysidea herbacea terhadap bakteri S. aureus dan P.  aeruginosa menunjukkan kekuatan penghambatan pertumbuhan bakteri pada kategori sedang.
Gambar 1. Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol spons Lamellodysidea herbacea terhadap bakteri P. aeruginosa (A), S. aureus (B), (-) Kontrol negatif, (+) Kontrol positif, (U1) Ulangan satu ekstrak etanol, (U2) Ulangan dua ekstrak etanol, (U3) Ulangan tiga ekstrak etanol
Tabel 1. Hasil rata-rata pengujian aktivitas antibakteri Bakteri Ulangan Rata-rata  diameter zona hambat (mm) EtOH C+ C- S.a I 7 26,5 0 II 7,5 III 8 ∑ 22,5 26,5 0 𝒙 ̅ 7,5 P.a I 8
24 II 7 III 7 ∑ 22 24 0 𝒙 ̅ 7,33
Keterangan: ( S.a ) Staphylococcus aureus , ( P.a ) Pseudomonas aeruginosa , (C-) Kontrol negatif, (C+)
A B A
Kontrol positif, (EtOH) Ekstrak etanol, (∑) Total zona hambat, ( 𝑥̅ ) Rata-rata zona hambat
Diameter zona hambat yang ditunjukkan pada ekstrak  etanol terhadap  bakteri S.  aureus lebih besar  dari  pada  ekstrak  etanol  terhadap bakteri P. aeruginosa hal ini mungkin dikarenakan perbedaan struktur dinding sel. Diketahui secara umum bahwa dinding sel dari bakteri Gram-positif tersusun atas peptidoglikan  sehingga  menyebabkan  dinding selnya  kaku  dan  pada  bagian  luar  peptidoglikan terdapat  senyawa  yang  disebut  asam  teikhoat Sedangkan  pada  bakteri  Gram-negatif  memiliki kandungan  peptidoglikan  yang  jauh  lebih  sedikit, akan tetapi pada bagian luar peptidoglikan terdapat membran  luar  yang  tersusun  atas  lipoprotein  dan fosfolipid  serta  mengandung  lipopolisakarida. Bakteri P.  aeruginosa yang  merupakan  bakteri gram negatif memproduksi eksopolisakarida (EPS) yang berupa alginat berbentuk gel kental di sekitar bakteri.  Alginat  memungkinkan  bakteri  untuk membentuk biofilm, yaitu sekumpulan koloni sel- sel bakteri yang menempel pada suatu permukaan. Kecenderungan  berkolonisasi  ini  dalam  bentuk biofilm  membuat  bakteri P.  aeruginosa tahan terhadap  antibiotik  atau  bahan  antibakteri  lain (Mayasari,  2006).  Karena  adanya  perbedaan susunan  dinding  sel,  bakteri  Gram-positif  dan Gram-negatif mempunyai ketahanan yang berbeda.
Penelitian yang berbeda ditunjukkan dari hasil sebelumnya  dari  Dwijendra  (2014)  diambil  dari perairan  teluk  Manado  yang  sama  menggunakan ekstrak  Spons Lamellodysidea  herbacea pada pengujian aktivitas antibakteri. Pada  hasil pengujian menunjukkan adanya aktivitas antibakteri  dari  spons Lamellodysidea  herbacea dengan daya hambat bakteri Gram-positif 7,53 mm dan  Gram-negatif  6,70  mm.  Dari  hasil  tersebut menunjukkan bahwa spons Lamellodysidea herbacea masuk  pada  kategori  daya  hambat sedang.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  spons Lamellodysidea herbacea yang diperoleh dari Perairan  Desa  Poopoh  Kabupaten  Minahasa memiliki aktivitas antibakteri yang berspektrum luas karena adanya zona hambat pada sekitar kertas cakram dari bakteri Gram-
positif  maupun  bakteri  Gram-negatif.  Pada ekstrak etanol spons Lamellodysidea herbacea diperoleh diameter zona hambat pertumbuhan bakteri yang paling besar terdapat pada bakteri Staphylococcus  aureus (7,5  mm  konsentrasi 250 𝜇 L/ disc ) dengan kategori sedang.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  dan pembahasan  mengenai  aktivitas  antibakteri ekstrak spons Lamellodysidea herbacea , maka disarankan  untuk  melakukan  penelitian  lebih lanjut  berupa  fraksinasi  untuk  melihat  bahwa spons Lamellodysidea  herbacea memiliki aktivitas  antibakteri  pada  fraksi  polar,  non polar  atau  semi  polar  dan  dapat  juga melakukan  penelitian  lebih  lanjut  dengan menggunakan metode pengujian yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Albuntana,  Yasman,  dan  Wardhana,  2011.  Uji Toksisitas  Ekstrak  Empat  Jenis  Teripang Suku  Holothuridae. Jurnal  Ilmu  dan Teknologi Tropis . 3(1) : 65-72.
Chairunnisa, S., Wartini. N, M., Suhendra, L. 2019.
Pengaruh  Suhu  dan  Waktu  Maserasi terhadap Karakteristik Daun Bidara ( Ziziphus  mauritiana )  sebagai  sumber Saponin.  Jurnal  Rekayasa  dan  Manajemen Agroindustri 7(4) : 551-560.
Davis,  W.W.,  and  Stout,  T.R.,  1971.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Applied Microbiology , 22 (1): 659- 665.
Dwijendra, I, M., Wewengkang, D, S., Wehantou, F.  2014.  Aktivitas  A.ntibakteri  dan Karakterisasi  Senyawa  Fraksi  Spons Lamellodysidea  herbacea yang  Diperoleh dari  Teluk  Manado. Pharmacon  Jurnal Ilmiah Farmasi . 3(4) .
Hermansah,  A.  Harlia  dan  Titin,  A.  Z.  2015.
Skrining  Fitokimia  dan  Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Kulit  Batang  Laban (Vitex  Pubescens  Vahl).  Jurnal  Kimia Khatulistiwa 4(2) : 67-71. Hooper,  J.N.A.  2012.  QM0003 Lamellodysidea herbacea In:  Hall,  K.A.  &  Hooper,  J.N.A
.2014. SpongeMaps: an online community for taxonomy and identification of sponges.
Josua, E., Wewengkang, D. S., dan Suoth, E. 2021.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan Fraksi  Spons Liosina  paradoxa dari
Perairan Pulau Mantehage. PHARMACON.
10(3) : 933-939.
Liem,  J.,  Bara,  R.,  Sumilat,  D.,  Warouw,  V.,
Losung,  F.,  dan  Wantasen,  A.  2019. Bioprospeksi  Antibakteri  Beberapa  Jenis Spons Dari Perairan Pangalisang Bunaken. Jurnal Pesisir Dan Laut Tropis . 7(1) : 7-12. Mahsunah  O,.  Widagdo  S.,  Bintoro  R.  S.  2020.
Karakter  Silikon  Tropis  dan  Pengaruhnya terhadap  Tinggi  Gelombang  di  Perairan Pesisir Selatan Jawa. Jurnal Riset Kelautan Tropis  (Journal  of  Tropical  Marine Research) (JTropimar) , 1(2) : 45.
Mayasari,  E.  2006.  Pseudomonas  aeuginosa: Karakteristik, Infeksi dan Penanganan. USU Meigaria, K. M., Mudianta, I, W., Martiningsih, N,
W.  2016.  Skrining  Fitokimia  dan  Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Aseton Daun Kelor  ( Moringa  oleifera ).  Jurnal  Wahana Matematika dan Sains 10(2) : 1-11.
Menggelea, F. P., Posangi, J., Wowor, P. M.,Bara,
R.  2015.  Uji  Efek  Antibakteri  Jamur Endosimbion Spons Laut Callyspongia sp .
Terhadap Bakteri Pseudomonas
aeruginosa dan Eschericia  coli . Jurnal  e- Biomedik (eBm) 3(1): 376-80.
Ngantung,  Y,  E.,  Simbala,  H,  E.,  Rotinsulu,  H. 2019.  Uji  Aktivitas  Ekstrak  dan  Fraksi Tunikata Lissoclinum  patella Terhadap Pertumbuhan  Mikroba Escherichia  coli, Staphylococcus aureus , dan Candida albicans . PHARMACON 9(4) : 825-835 Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion testing in manual of  antimicrobial  susceptibility  testing . Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed).  American society for Microbiology. America.
Putri, R. A., Simbala, H. E., dan Mpila, D. A. 2020.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol
Bawang  Dayak  ( Eleutherine  americana Merr )  Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli dan Salmonella typhi . PHARMACON . 9(4) : 525-532. Rini, C, S., Rochman, J. 2020. Bakteriologi Dasar. UMSIDA Press. Sidoarjo
Silap,  G.  E.,  Wewengkang,  D.  S.,  Rotinsulu.  H.
2020.  Uji  Aktivitas  Antimikroba  Karang Lunak Dendronephtya Sp . yang Dikoleksi dari  Desa  Tumbak Kecamatan  Pusomaen, Kabupaten  Minahasa  Tenggara  terhadap Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus , dan
Candida albicans . Jurnal
PHARMACON UNSRAT . 9(1) : 64-65. Utami,  E.R.  2012.  Antibiotika,  Resistensi,  dan Rasionalitas Terapi. Sainstis . 1(1) .
Utomo,  S.  B.,  Fujiyanti,  M.,  Lestari,  W.  P.,  dan
Mulyani, S. 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Senyawa C-4 Metoksifenilkaliks Resorsinarena Termodifikasi Hexadecyltrimethylammonium-Bromide
Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli . Jurnal  Kimia  dan Pendidikan Kimia . 3(3) : 109-209.
Wahyuni,  D.T  dan  Widjanarko,  S.B.  2015.
Pengaruh  Jenis  Pelarut  dan  Lama Ekstraksi Terhadap  Ekstrak  Karotenoid  Labu  Kuning dengan  Metode  Gelombang  Ultrasonik. Jurusan  Teknologi  Hasil  Pertanian.  FTP Universitas  Brawijaya.  Malang.  Jurnal Pangan dan Agroindustri 3(2 ):390-401.
Watupungoh,  C.  C.  A.,  Defny  S.  Wewengkang,
Henki Rotinsulu. 2019. Aktivitas
Antimikroba  dari  Ekstrak  dan  Fraksi Organisme Laut Spons Stylissa carteri yang Dikoleksi  dari  Perairan  Selat  Lembeh  Kota Bitung. Jurnal  Pharmacon ,  Program  Studi Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam
Ratulangi, 3(8) : 664-666.
WHO.  2014. Antmicrobial  resistance:  global report  on  survaillance  2014 .  World  Health Organization. p 257.