## Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan
EFEK EKSTRAK ETANOL DAUN SALAM ( Syzygium polyanthum ) TERHADAP HEPAR MENCIT ( Mus musculus ) GALUR DDY PADA UJI TOKSISITAS AKUT ( THE EFFECT OF BAY LEAF (Syzygium polyanthum) ETHANOL EXTRACT ON THE LIVER OF MICE (Mus musculus) DDY STRAIGHT IN ACUTE TOXICITY TEST)
Ris Kristiana 1 , Astri Pradini 2 , Milani Indah Kusumaningsih 3
1 Bagian Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
2 Bagian Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
3 Program Studi Kedokteran Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
Email Korespondensi: kristiana1980@gmail.com

## ABSTRAK
Daun  salam (Syzygium  polyanthum  (Wight)  Walp) merupakan  salah  satu  tanaman  yang digunakan  sebagai  obat  herbal  di  Indonesia.  Senyawa  aktif  pada  daun  salam  salah  satunya berperan  sebagai  antioksidan.  Obat  merupakan  zat  yang  dapat  berpotensi  menyebabkan hepatotoksik. Penelitian sebelumnya menyimpulkan bahwa ekstrak etanol daun salam (EEDS) termasuk  kategori  praktis  tidak  toksik,  tetapi  belum  ada  keterangan  pengaruhnya  terhadap histopatologi  hepar.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  perubahan  gambaran histopatologi hepar mencit pada kelompok pemberian akut EEDS dosis bertingkat. Penelitian ini merupakan studi observasional terhadap histopatologi hepar mencit ( Mus musculus ) putih jantan  dan  betina  galur  DDY.  Sediaan  berjumlah  55  buah,  terdiri  dari  4  kelompok,  yaitu kelompok kontrol  negatif (K), kelompok  yang diberikan EEDS  dengan dosis 1250  mg/kgbb (P1),  2500  mg/kgbb  (P2),  dan  5000  mg/kgbb  (P3).  Organ  hepar  dibuat  menjadi  sediaan mikroskopis  dengan  pewarnaan  H&E,  lalu  dilakukan  penilaian  histopatologi  hepar menggunakan skoring Manja Roenigk. Hasil penelitian berdasarkan uji statistik menunjukkan terdapat perbedaan yang signifikan pada rerata skor perubahan hepatosit (p<0,05). Perbedaan signifikan pada mencit jantan K-P2 dan K-P3 (p=0,032), sedangkan pada mencit betina K-P1, K-P2,  dan  K-P3  (p=0,002).  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  terjadi  perubahan histopatologi  hepar  pada  mencit  jantan  dan  betina  berupa  peradangan,  degenerasi parenkimatosa,  degenerasi  hidropik,  dan  nekrosis  pada  mencit  jantan  dengan  pemberian EEDS dosis 2500 dan 5000 mg/kgbb, sedangkan pada mencit betina sudah terjadi perubahan histopatologi hepar pada pemberian EEDS dosis 1250 mg/kgbb. Pemberian akut EEDS dosis bertingkat  memiliki  efek  toksik  akibat  aktivitas  prooksidan  dan  peningkatan  stres  oksidatif pada pemberian antioksidan dosis tinggi.
DOI DOI

## ARTIKEL PENELITIAN
Kata kunci : daun salam, hepatotoksisitas, histopatologi hepar, skoring Manja Roenigk, stres oksidatif

## ABSTRACT
Bay leaf (Syzygium polyanthum (Wight)Walp) is one of the plants used as herbal medicine in Indonesia.  The  active  compounds  in  bay  leaves  acts  as  an  antioxidant.  Medicine  can potentially  cause  hepatotoxicity.  Previous  studies  concluded  that  the  ethanol  extract  of  bay leaf(EEDS) was categorized as practically non-toxic, but there was no information regarding its effect on liver histopathology. This study aims to determine the histopathological changes in  the  mice’s  liver  that  occur  in  the  acute  dose  stratified EEDS  group.  This  research  is  an observational  study  on  the  liver  histopathology  of  white  male  and  female  DDY  mice.  There were 55 preparations divided to 4 groups, its negative control group (K), the group with dose of EEDS  1250  mg/kgbb(P1),  2500  mg/kgbw(P2),  and  5000  mg/kgbw((P3).  The  liver  organs were  made  into  microscopic  preparations  and  observed  using  the  Manja  Roenigk  scoring. The results based on the statistical test showed that there was a significant difference at mean score of hepatocyte’s changes(p<0.05). There was a significant difference in male mice K-P2 and K-P3(p=0.032), whereas in female mice K-P1, K-P2, and K-P3(p=0.002). The results of this  study  indicated  that  there  were  histopathological  changes  include  inflammation, parenchymal  degeneration,  hydropic  degeneration,  and  necrosis  on  male  mice’s  liver  by EEDS at doses of 2500 mg/kg and 5000 mg/kg, while on female mice there had been changes in  hepatic  histopathology  when  consumption  EEDS  at  dose  of  1250  mg/kgbw.  The  acute consumption  of  stratified  doses  EEDS  has  a  toxic  effect  due  to  prooxidant  activity  and increased oxidative stress on high dosing.
Keywords: bay leaves, hepatotoxicity, liver histopathology, Manja Roenigk scoring, oxidative stress

## PENDAHULUAN
Hepar  merupakan  organ  terbesar dengan  unit  fungsional  berupa  lobulus hepar  yang  tersusun  atas  hepatosit, pembuluh  darah,  sistem  aliran  limfe, sistem  biliaris,  dan  ruang-ruang  limfe  3 interlobularis  dengan  fungsi  yang  saling terkait  satu  sama  lain,  juga  paling  sering mengalami kelainan karena fungsinya yang terganggu  secara  bersamaan.  Salah  satu fungsinya ialah sebagai tempat metabolisme  dari  hormon  serta  zat-zat kimia asing, seperti obat-obatan. 1
Kerusakan hepar dapat dipicu oleh paparan
obat  karena  berpotensi  menyebabkan hepatotoksisitas. 2
Gambaran  mikroskopis  yang  terjadi pada hepar akibat paparan dari zat-zat yang masuk  ke  dalam  tubuh  sering  ditandai dengan  adanya  peradangan  pada  jaringan hepar  dan  perubahan  struktur  hepatosit. 3
Derajat peradangan dapat dibedakan menjadi kategori ringan dan berat, sedangkan  perubahan  gambaran  hepatosit dapat  ditentukan  dengan  skoring  tingkat kerusakan hepatosit dengan metode skoring  Manja  Roenigk. 4-6 Gambaran kerusakan  hepar  ini  memiliki  korelasi dengan  banyaknya cedera sel  yang terjadi,
mekanisme  pertahanan  detoksifikasi  dan karena adanya stres oksidatif. 5,7
Dalam  penelitian  ini  digunakan bahan uji berupa ekstrak etanol daun salam (EEDS). Daun salam (Syzygium polyanthum  (Wight)  Walp.) merupakan tanaman obat yang dikenal oleh masyarakat  Indonesia  karena  berperan dalam  kesehatan  terkait  kandungan  yang dimilikinya. Penggunaannya dalam  bidang kesehatan  digunakan  untuk  mengobati berbagai  jenis  penyakit,  seperti  diabetes melitus  (DM),  hipertensi,  gastritis,  diare, penyakit  kulit,  dan  infeksi.  Daun  salam mengandung karbohidrat, alkaloid, flavonoid, fenolik, tannin, terpenoid, steroid, dan saponin. Selain itu, daun salam mengandung  riboflavin  (vitamin  B2), niacin  (vitamin  B3)  dan ascorbic  acid (vitamin  C),  vitamin  C  ini  juga  memiliki fungsi  sebagai  antioksidan. 11-13 Flavonoid merupakan senyawa utama yang terkandung  pada  daun  salam.  Flavonoid memiliki bagian bernama quercetin .
Quercetin ini  memiliki  peran  sebagai antioksidan  yang  eksogenus. 13-16 Zat  ini utamanya  mengalami  metabolisme  di hepar  dan  usus  halus. 14,18 Di  dalam  tubuh, reaksi  oksidasi  yang  merusak  berupa adanya reactive  oxygen  spesies (ROS) dapat dibantu ditangani oleh antioksidan. 3,19 Apabila keseimbangan antara produksi ROS serta pembuangannya terganggu, maka akan terjadi stres
oksidatif  yang  menyebabkan  perubahan gambaran histopatologi hepar. Pada penggunaan  yang  berlebihan,  flavonoid- quercetin dapat  berpotensi  menyebabkan terjadinya  aktivitas  prooksidan  dan  malah dapat menimbulkan stres oksidatif. 19
Penggunaan  daun  salam  memiliki  efek samping  sistemik  berupa  hipoglikemik sehingga terdapat kemungkinan bisa mempengaruhi dari gambaran histopatologi sel yang terpapar. 17

## METODE PENELITIAN

## Pembuatan Preparat
Pembuatan  preparat  terbagi  menjadi beberapa  proses,  yaitu  fiksasi  dengan menggunakan  Neutral  buffer  formalin 10%, trimming yaitu  proses  pemotongan jaringan dengan cara memilih bagian yang mewakili  sehingga  menjadi  bagian  kecil supaya  bisa  masuk  ke  dalam  kaset jaringan,  dehidrasi  dengan  menggunakan tissue  prosessor yang  dilakukan  untuk mengurangi  kadar  air  dalam  jaringan dengan  cara  merendam  dalam  alkohol  70- 96%,  toluen,  xilol  dan  parafin  cair. Kemudian  proses clearing (penjernihan), pengeblokan  dengan  cara  menyimpan jaringan  dalam  kaset  yang  diisi  dengan parafin  cair, cutting (pemotongan)  blok parafin menggunakan mikrotom, pengecatan  dengan  menggunakan  zat warna  Hematoxylin-Eosin,  dan  terakhir dilakukan  penutupan  preparat  dengan
cover  glass yang  ditempel  menggunakan entelan.

## Pembacaan Preparat
Pembacaan  preparat  dilakukan  di bawah mikroskop cahaya. Dengan pembesaran  100x  untuk  melihat  daerah sekitar  vena  porta  dan  vena  sentralis  dan 400x  dalam  5  lapang  pandang  untuk melihat  hepatosit.  Pada  saat  pembacaan preparat,  metode  yang  digunakan  ialah metode  semikuantitatif eyeballing dengan menggunakan  indra  penglihatan  peneliti untuk  melihat  sel  dan  diperkirakan  daerah yang terdapat perubahan histopatologi.

## Cara Pengukuran
Derajat  peradangan  hepar  ditentukan dengan  pengamatan  tanda  peradangan  di daerah  sekitar  vena  porta  hingga  vena sentralis.  Apabila  terdapat  infiltrat  sel radang  yang  terlokalisasi  di  sekitar  vena porta  hepar  mencit  menunjukkan  radang hepar  ringan,  sedangkan  apabila  merata dari  vena  porta  hingga  vena  sentralis menunjukkan  radang  hepar  berat. 4,6 Pada pengamatan  perubahan  histopatologi  sel hepar  ditentukan  menggunakan  modifikasi Skoring  Histopatologi  Manja  Roenigk, yaitu  dari  20  sel  yang  diamati  pada  setiap lapang  pandang,  jumlah  sel  normal  akan dikalikan  1,  jumlah  sel  dengan  gambaran
degenerasi  parenkimatosa  dikalikan  2,  sel dengan  degenerasi  hidropik/pelemakan dikalikan  3,  sel  dengan  nekrosis  dikalikan 4.  Kemudian  seluruh  skor  dijumlahkan hingga  5  lapang  pandang  dan  dijadikan sebagai nilai kerusakan hepar yang terjadi. Data tersebut dijumlahkan dan diakumulasikan untuk menghitung persentase kerusakan hepatosit.

## Analisis Statistik
Data  dari  penelitian  ini  dianalisis secara statistik menggunakan SPSS. Gambaran histopatologi hepar berdasarkan modifikasi  Skoring  Histopatologi  Manja Roenigk  pada  mencit  jantan  diuji  dengan Uji  Kruskal  Wallis  dan Post-Hoc Mann Whitney,  sedangkan  pada  mencit  betina diuji  dengan  Uji  One-Way  ANOVA  dan Post-Hoc Tuckey .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Gambaran Derajat Peradangan
Proses  peradangan  terjadi  saat adanya paparan suatu infeksi atau zat yang masuk dan berpotensi menyebabkan kerusakan  pada  hepatosit. 4,6,21 .  Gambaran yang  didapatkan  baik  pada  mencit  jantan dan  betina  ialah  ditemukannya  tanda peradangan  dengan  derajat  ringan  dan derajat berat yang ditunjukkan seperti pada Gambar 1.
Gambar 1 Gambaran peradangan hepar mencit, H&E pembesaran 100x. (A) Tidak ada peradangan; (B) Peradangan ringan (panah hitam : infiltrasi sel radang di sekitar porta); (C) peradangan berat (panah hitam : infiltrasi sel radang di sekitar porta meluas hingga stroma dan di antara sel hepatosit).
Secara histopatologi, setiap kelompok  perlakuan  pada  sediaan  hepar mencit  jantan  dan  betina  ditemukan gambaran peradangan seperti pada Gambar 1.  Data  hasil  pengelompokan  derajat peradangan untuk masing-masing
perlakuan  pada  mencit  jantan  disajikan pada  Tabel  1.  Pada  mencit  jantan  terjadi peradangan  ringan  paling  banyak  pada kelompok  kontrol,  sedangkan  peradangan berat paling banyak terjadi pada kelompok P2.

## Tabel 1 Data derajat peradangan hepar mencit jantan
Kelompok Perlakuan Derajat Peradangan Hepar Total Ringan Berat Kontrol 7 0 7 P1 (EEDS dosis 1250 mg/kgbb) 4 3 7 P2 (EEDS dosis 2500 mg/kgbb) 3 4 7 P3 (EEDS dosis 5000 mg/kgbb) 3 3 6 Total 27 Data  hasil  pengelompokan  derajat peradangan untuk masing-masing
perlakuan  mencit  betina  disajikan  pada
Tabel  2.  Pada  mencit  betina  terjadi peradangan ringan paling banyak
pada kelompok kontrol, sedangkan
peradangan  berat  paling  banyak  terjadi
pada kelompok P3.
Tabel 2 Data derajat peradangan hepar mencit betina
Kelompok Perlakuan Derajat Peradangan Hepar Total Ringan Berat Kontrol 5 2 7 P1 (EEDS dosis 1250 mg/kgbb) 4 3 7 P2 (EEDS dosis 2500 mg/kgbb) 3 4 7 P3 (EEDS dosis 5000 mg/kgbb) 2 5 7 Total 28

## Gambaran Perubahan Histopatologi
Perubahan yang terjadi dapat bersifat reversible berupa adanya degenerasi  bengkak  keruh/parenkimatosa, degenerasi  hidropik,  dan  pelemakan,  atau yang bersifat irreversible berupa gambaran sel  yang  nekrosis. 3 Hepatosit  yang  normal seharusnya  memiliki  struktur  sel-sel  yang membentuk lempeng tersusun secara radier dari  vena  sentralis.  Hepatosit  memliki bentuk  polihedral  dengan  sitoplasma  yang asidofilik,  bulat,  nukleus  sel  besar,  dan vesikuler dengan nukleolus yang
menonjol. 22-24 Adanya
perubahan histopatologi  hepar  pada  penelitian  ini memberikan gambaran seperti pada Gambar 2.
Degenerasi  parenkimatosa  ditandai dengan  adanya  sel-sel  yang  membengkak serta  sitoplasma  yang  bergranula  sehingga jaringan tampak keruh. 3,25,26
Pada degenerasi  hidropik,  selnya  memiliki  ciri- ciri berupa sel tampak membesar,
sitoplasmanya  pucat,  dan  mengalami vakuolisasi yang terjadi karena peningkatan  pemasukan  air  ke  dalam  sel dan  kemudian  air  memasuki  vakuola- vakuola  tersebut. 3,27 Secara  umum,  zat-zat yang  bersifat  toksik  dapat  menyebabkan degenerasi hidropik karena adanya gangguan  pompa  natrium-kalium  pada membran  sel  akibat  peroksidasi  lipid membran sehingga terjadi kondisi hipernatremia di dalam sel yang menyebabkan  masuknya  air  ke  dalam  sel dan  terjadi  degenerasi  hidropik. 3,26 Bentuk gambaran lainnya ialah nekrosis.
Mekanisme  nekrosis  dapat  terjadi  ketika jaringan/sel  mengalami  hipoksia  atau masuknya  zat  asing  yang  bersifat  toksik, maka  mitokondria  akan  mengalami  luka sehingga  mengakibatkan  lisosom  pecah, mengeluarkan enzim hidrolitik dan melarutkan sel. 3,26,28
Gambar 2 Gambaran  histopatologi hepatosit mencit, H&E pembesaran 400x. (A) Normal; (B)degenerasi parenkimatosa/bengkak keruh; (C) degenerasi hidropik; (D) nekrosis.
Hasil gambaran sediaan
histopatologi  hepar  mencit  menunjukkan bahwa pada gambaran mikroskopis, kelompok kontrol negatif memiliki gambaran  yang  lebih  baik  dibanding kelompok  P1,  P2,  dan  P3  dilihat  dari gambaran  perubahan  sel  yang  ditemukan dan  derajat  peradangan  yang  terjadi.  Pada kelompok  kontrol  masih  ditemukan  lebih
banyak  sel  normal  dan  peradangan  ringan dibandingkan  dengan  kelompok  P1,  P2, dan P3.

## Skoring Perubahan Histopatologi Hepar Mencit Jantan
Total  hasil  skoring  yang  telah dilakukan  pada  setiap  perlakuan  dalam penelitian ini disajikan pada Tabel 3.

## Tabel 3 Analisis deskriptif skoring manja roenigk pada hepar mencit jantan
No Kelompok Descriptive Statistics Minimum Maksimum Mean Std dev 1. Kontrol 105 184 135,86 26.972 2. EEDS 1250 mg/kgbb 115 163 147,43 15.704 3. EEDS 2500 mg/kgbb 133 176 163,29 15.283 4. EEDS 5000 mg/kgbb 146 185 167,50 14.460
Data  hasil  skoring  Manja  Roenigk menunjukkan  bahwa  gambaran  perubahan hepatosit  terjadi  paling  sedikit  pada kelompok  kontrol  (K)  dengan  skor  rerata 136  dan  paling  banyak  terjadi  pada kelompok  perlakuan  dengan  pemberian ekstrak  etanol  daun  salam  (EEDS)  dosis 5000  mg/kgbb  (P3)  dengan  skor  rerata 168.
Pada hasil uji normalitas
menunjukkan  bahwa  data  skoring  Manja Roenigk  mencit  jantan  tidak  semuanya
memiliki  distribusi  normal  karena  nilai p<0,05 sehingga uji statistik yang digunakan adalah uji non-parametrik, yaitu Kruskal Wallis Test ,  hasil uji dapat dilihat pada  Tabel  4.  Hasil  uji  Kruskal  Wallis menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan yang  bermakna  dengan  nilai  signifikansi p=0,032 atau nilai p<0,05.
Hasil  uji Post-Hoc  Mann  Whitney pada Tabel 5 menunjukkan bahwa kerusakan  mulai  terjadi  pada  pemberian EEDS dosis 2500 mg/kgbb dan dosis 5000 mg/kgbb.
Tabel 4 Hasil uji kruskal wallis skoring manja roenigk mencit jantan
Perlakuan Mean Skoring Manja Roenigk Hepar ± SD Uji Kruskal Wallis Nilai p * Kontrol 135.86 ± 26.972 8.789 0,032 EDS 1250mg/kgbb 147.43 ± 15.704 EDS 2500mg/kgbb 163.29 ± 15.283 EDS 5000mg/kgbb 167.50 ± 14.460
Keterangan *) p<0, 05 (Terdapat perbedaan yang bermakna)
Tabel 5 Uji post-hoc mann whitney skoring manja roenigk hepar mencit
Kelompok Kontrol EEDS 1250 mg/kgbb EEDS 2500 mg/kgbb EEDS 5000 mg/kgbb Kontrol 0,276 *0,047 *0.045 EEDS 1250mg/kgbb 0,276 *0,047 *0,038 EEDS 2500mg/kgbb *0,047 *0,047 0,568 EEDS 5000mg/kgbb *0,045 *0,038 0.568 Keterangan: *Hasil uji Post-Hoc Mann Whitney : p<0,05 (terdapat perbedaan bermakna)

## Skoring Perubahan Histopatologi Hepar Mencit Betina
Total  hasil  skoring  yang  telah dihitung  pada  setiap  kelompok  perlakuan
dalam    penelitian  ini  disajikan  pada  Tabel
6.
Tabel 6 Analisis deskriptif skoring manja roenigk pada hepar mencit betina
No. Kelompok Descriptive Statistics Minimum Maksimum Mean Std dev 1. Kontrol 124 200 171.29 25.124 2. EEDS 1250 mg/kgbb 166 227 203.43 21.946 3. EEDS 2500 mg/kgbb 196 230 214.29 12.893 4. EEDS 5000 mg/kgbb 190 235 209.14 15.225
Data  hasil  skoring  Manja  Roenigk menunjukkan  bahwa  gambaran  perubahan hepatosit  terjadi  paling  sedikit  pada kelompok  kontrol  (K)  dengan  skor  rerata 171  dan  paling  banyak  terjadi  pada kelompok  perlakuan  dengan  pemberian ekstrak  etanol  daun  salam  (EEDS)  dosis 2500  mg/kgbb  (P2)  dengan  skor  rerata
214. Pada hasil uji normalitas menunjukkan  bahwa  data  skoring  Manja Roenigk mencit memiliki distribusi normal (p>0,05)  sehingga  uji  statistik  yang digunakan  adalah  uji  parametrik,  yaitu One-Way  ANOVA.  Hasil  uji  One-Way ANOVA dapat dilihat pada Tabel 7.
Tabel 7 Hasil Uji ANOVA skoring manja roenigk hepar mencit betina
Perlakuan Mean Skoring Manja Roenigk ± SD F(Anova) Nilai p * Kontrol 171.29 ± 25.124 6.938 0,002 EEDS 1250mg/kgbb 203.43 ± 21.946 EEDS 2500mg/kgbb 214.29 ± 12.893 EEDS 5000mg/kgbb 209.14 ± 15.225
Keterangan: *) p<0, 05 (terdapat perbedaan yang bermakna)
Hasil  uji  One-Way  ANOVA  pada Tabel  7  menunjukkan  bahwa  terdapat perbedaan  yang  bermakna  dengan  nilai signifikansi p=0,002 atau nilai p<0,05. Uji statistik  dilanjutkan  dengan  menggunakan
Post-Hoc  Tukey  HSD untuk  menguji kelompok yang memiliki perbedaan bermakna  tersebut  dan  hasil  dapat  dilihat pada Tabel 8.
Tabel 8 Uji post-hoc tukey skoring manja roenigk hepar mencit betina Kelompok Kontrol EEDS 1250 mg/kgbb EEDS 2500 mg/kgbb EEDS 5000 mg/kgbb Kontrol *0,024 *0,002 *0.007 EEDS 1250mg/kgbb *0,024 0,725 0,946 EEDS 2500mg/kgbb *0,002 0,725 0,959 EEDS 5000mg/kgbb *0,007 0,946 0,959 Keterangan: *Hasil uji Post-Hoc Tukey : p<0,05 (terdapat perbedaan bermakna)
Ini menunjukkan bahwa secara statistik,  perbedaan  yang  bermakna  terjadi pada semua kelompok perlakuan pemberian  EEDS.  Maka  berdasarkan  hasil statistik  tersebut,  pemberian  EEDS  dosis 1250  mg/kgbb  pada  mencit  betina  sudah menimbulkan  kerusakan  pada  hepatosit. Hasil ini berbeda dengan pemberian EEDS pada  mencit  jantan  yang  baru  mulai menimbulkan kerusakan hepar pada pemberian  EEDS  dosis  2500  mg/kgbb. Pada  penelitian  ini  digunakan  ekstrak etanol  daun  salam  (EEDS)  sebagai  bahan yang  diberikan  terhadap  hewan  uji. Senyawa aktif dalam EEDS  yang berperan ialah  flavonoid  dan  zat-zat  fenolik  lain yang  memiliki  peran  sebagai  antioksidan eksogenus. 29,30
Kerusakan jaringan hepar dapat terjadi ketika senyawa flavonoid ini
dimetabolisme di hepar melalui reaksi fase I  dan  II.  Enzim cytochrome P-450  sangat beperan  penting  pada  fase  I.  Obat-obatan dapat menghambat kerja
enzim cytochrome P-450.  Kerusakan  jaringan
hepar  dapat  terjadi  akibat  dari  proses oksidasi yang tidak maksimal pada tahap I dan menyebabkan ketidakseimbangan metabolisme  pada  fase  II  sehingga  terjadi akumulasi metabolit obat. 31 Mekanisme ini juga  terjadi  karena  semakin  banyaknya antioksidan yang ditambahkan, maka dapat berpengaruh  pada  laju  oksidasi.  Pada keadaan jumlah dan posisi gugus hidroksil bebas dalam molekul mengalami perubahan,  juga  dapat  mempengaruhi fungsi molekul sebagai antioksidan menjadi  prooksidan.  Prooksidan  dapat terbentuk  pada  konsentrasi  tertentu  atau pada  pemberian  antioksidan  dosis  tinggi, maka akan terbentuk radikal hidroksil yang menyebabkan ketidakseimbangan produksi dan  detoksifikasi  dari  ROS. Reactive oxygen  species yang  semakin  meningkat menimbulkan  stres  oksidatif  dan  memicu perubahan histopatologi sel hepar. 3,18

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat disimpulkan  bahwa  terdapat  gambaran
histopatologi berupa degenerasi parenkimatosa/bengkak  keruh,  degenerasi hidropik, dan nekrosis pada mencit mencit jantan dan mencit betina setelah pemberian EEDS  dosis  1250  mg/kgbb,  dosis  2500 mg/kgbb, dan 5000 kg/kgbb.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Dengan  ini  kami  menyatakan  bahwa tidak  terdapat  konflik  kepentingan  dalam artikel ilmiah yang kami tulis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  profesional  yang  telah  membantu penelitian  dan  penyusunan  naskah,  yaitu Staf Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas  Kedokteran  Universitas  Jenderal Achmad Yani.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Hall JE. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Keduabelas. Ermita Isfandiary,  Dr.  dr.  MA,  Dkk.,  editors. Singapura: Elsevier Ltd; 2014. 907 p.
2. Björnsson  ES.  Hepatotoxicity  by  drugs: The  most  common  implicated  agents. Int J Mol Sci. 2016;17(2).
3. Aster KA. Buku Ajar Patologi Robbins. 9th  ed.  I  Made  Nasar  SC,  editor. Elsevier  Saunders;  2014.  2–20,  595– 604, 616 p.
4. Crespo  R,  Garner  MM,  Hopkins  SG, Shah  DH.  Outbreak  of  Listeria
monocytogenes  in  an  urban  poultry flock. 2013.
5. Sutrisna  Eman,  Fitriani  Annisa  A  , Setiawati, Salim Islimsyaf A ,
Maskoen  Ani  M,  Sujatno  Muchtan SHS.  Efek  Hepatoprotektif  Ekstrak Etanol  Daun  Sendok  (Plantago  Major L)  Pada  Tikus  Model  Hepatotoksik  : Tinjauan  Anatomi  Dan  Histopatologi. Pharmacy. 2013;10 No. 01:1–14.
6. Insani  A,  Suri  S,  Berata  I.  Gambaran Histopatologi  Hati  Tikus  Putih  Yang Diberikan Deksametason Dan Vitamin
E. Indones Med Veterinus. 2015;4(3):228–37.
7. Jarrar  BM,  Taib  NT.  Histological  and histochemical  alterations  in  the  liver induced by lead chronic toxicity. Saudi
J  Biol  Sci  [Internet].  2012;19(2):203– 10. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.sjbs.2011.1 2.005
8. Krishna M. Microscopic Anatomy of the Liver  Functional  Units  :  Acinus  and Lobule  Space  of  Disse  The  space  of Disse  is  a  compartment  between endothelial. 2013;2(March):4–7.
9. Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan Republik  Indonesia.  Peraturan  Kepala Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan Republik  Indonesia  Nomor  7  Tahun 2014  tentang  Pedoman  Uji  Toksisitas Nonklinik  secara  in  vivo.  BPOM [Internet].  2014;39(1):1–24.  Available
from: http://dx.doi.org/10.1016/j.biochi.2015
.03.025%0
10. Ismail A, Wan Ahmad WAN.
Syzygium  polyanthum  (Wight)  Walp:
A potential
phytomedicine.
Pharmacogn J. 2019;11(2):429–38.
11. Dewijanti  ID,  Mangunwardoyo  W,
Artanti  N,  Hanafi  M.  Bioactivities  of
Salam  leaf  (Syzygium  polyanthum (Wight)  Walp).  AIP  Conf  Proc.
2019;2168(November).
12. Kusuma IW, Kuspradini H, Arung ET,
Aryani  F,  Min  YH,  Kim  JS,  et  al. Biological Activity and Phytochemical Analysis of Three
Indonesian Medicinal  Plants,  Murraya  koenigii,
Syzygium  polyanthum  and  Zingiber purpurea.  JAMS  J  Acupunct  Meridian Stud [Internet]. 2011;4(1):75–9. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/S2005- 2901(11)60010-1
13. Birt DF, Jeffery E. Nutrient Information  of  Flavonoids.  Adv  Nutr. 2013;(1):576–7.
14. Kumar  S,  AbhayK.  Review  Article Chemistry and Biological Activities of Flavonoids:  An  Overview  Shashank.
Pandey Dep. 2013;58(4):145–8.
15. Hartanti  L,  Yonas  SMK,  Mustamu  JJ,
Wijaya  S,  Setiawan  HK,  Soegianto  L. Influence of extraction methods of bay leaves  (Syzygium  polyanthum)  on
antioxidant  and  HMG-CoA  Reductase inhibitory  activity.  Heliyon  [Internet]. 2019;5(4):e01485.  Available  from: https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2019. e01485
16. Hidayati  MD,  Ersam  T,  Shimizu  K, Fatmawati  S.  Antioxidant  activity  of Syzygium polynthum extracts. Indones
J Chem. 2017;17(1):49–53.
17. Taylor P. Dietary  Flavonoid Quercetin and  Associated Health  Benefits  —  An Overview This article was downloaded by  :  [  Jan  ,  Arif  Tasleem  ]  Access details : Access Details : [ subscription number 922821804 ] Dietary
Flavonoid  Quercetin  and  Associated Health Benefits. 2012.
18. Rahal A, Kumar A, Singh V, Yadav B, Tiwari  R,  Chakraborty  S,  et  al. Oxidative  stress,  prooxidants,  and antioxidants:  The  interplay.  Biomed Res Int. 2014;2014.
19. Permana  BY.  Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak Etanol Daun Salam (Syzygium polyanthum)  terhadap  Mencit  (Mus musculus) Galur DDY. Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani. Jenderal Achmad Yani; 2019.
20. VP  E.  Atlas  Histologi  diFiore  dengan Korelasi  Fungsional.  12th  ed.  Suyono YJ,  Mulyadi  CK,  Rughwani  NR, Nitihardjo KC RR, editor. EGC; 2018. 367–376 p.
21. Kenhub.  Liver  histology_  Structure, cells and characteristics _. 2020.
22. Frank  H.  Netter  M.  Atlas  of  Human Anatomy  by  Netter.  3rd  ed.  Elsevier Inc.;2014. 278–282 p.
23. Krishna  M.  Microscopic  Anatomy  of the  Liver  Functional  Units  :  Acinus and  Lobule  Space  of  Disse  The  space of  Disse  is  a  compartment  between endothelial. 2013;2(March):4–7.
24. Chiang J. Liver Physiology : Metabolism and Detoxification [Internet].  Pathobiology  of  Human Disease.  Elsevier  Inc.;  2017.  1770– 1782 p. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12- 386456-7.04202-7
25. Karmakar RN. Forensic Medicine And
Toxicology.  Oral,  Practical  &  M.C.Q.
In: 1st ed. Kolkata: Academic Publishers Kolkata; 2006. p. 320.
26. Sari, Windi Novita. Pengaruh Pemberian  Butylated  Hydroxytoluene
(2,6- Di-Tert-Butyl-4-Methylphenol)
Per  Oral  Dosis  Bertingkat  Terhadap
Gambaran  Histopatologis  Hepar  Tikus
Wistar. 2018. Vol 7. Jurnal Kedokteran Diponegoro.  JKD,  Vol.  7,  No.  2,  Mei
2018 : 1344-1357. 27. Mescher AL.  Junqueira’s Basic Histology  Text  and  Atlas.  12th  ed. Frans  Dany  D,  editor.  McGraw-Hill Education; 2012. 281–290 p.
28. Al-Nuaimi  AAHD.  Extracts  of  Plants used  as  Traditional  Medicines  have Toxic Effect on the Liver and Kidney. MOJ Anat Physiol. 2018;5(2):32–41.
29. Dewijanti  ID,  Mangunwardoyo  W, Artanti  N,  Hanafi  M.  Bioactivities  of Salam  leaf  (Syzygium  polyanthum (Wight)  Walp).  AIP  Conf  Proc. 2019;2168(November).
30. McDonnell  AM,  Dang  CH.  Basic Review  of  the  Cytochrome  P450 System. ADPRO. 2013.
31. Simanjuntak,  K.  Peran  Antioksidan
Flavonoid dalam Meningkatkan Kesehatan. Volume 23 Nomor 3. April 2012. Universitas Pembangunan Nasional Veteran. Jakarta: Bina Widya. Hal: 135-140.