## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## Toxicity Test of The Extratcs of Yellow Frangipani Flower (Plumeria alba L.) Using Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Bunga Kamboja Kuning (Plumeria alba L. ) dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
I Putu Andika Arianta 1)* , Fatimawali 1) ,  Olvie Syeni Datu 3)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado(Times New Roman10pt, bold) *putuandikaarianta@gmail.com

## ABSTRACT
Indonesia has a very abundant diversity of plants so that many people use plants as traditional medicine, one of which is the frangipani plant. This study aimed to determine the phytochemical content and cytotoxic activity of the ethanolic extract  of the yellow frangipani flower  (Plumeria alba  L.)  against  Artemia salina  Leach  shrimp larvae. Performed extractions process using ethanol as a solvent and tested qualitatively for alkaloids, flavonoids, tannins,  saponins  and  steroids/triterpenoids.  Cytotoxicity  test  using  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT)  as  the method with concentration of test solution are 1000 µg/mL, 500 µg/mL, 250 µg/mL, 125 µg/mL, 62,5 µg/mL and 31,25 µg/mL. The result of phytochemical test show that the sample is containing alcaloids, flavonoids, saponins, tannins and triterpenoids and does not contain steroids compound. The result of cytotoxicity test show that the sample have  the  toxicity  activity  with  LC 50 score  301,38  µg/mL.  Can  be  concluded  that  the  sample  contains  alcaloids compounds,  flavonoids,  saponins,  tannins  and  is  toxic  to  shrimp  larvae  Artemia  Salina  Leach  so  that  it  can  be developed as an anticancer drug.
Keywords : Yellow Frangipani Flower (Plumeria alba L.), Phytochemical Compound,  Cytotoxicity, BSLT, LC 50.

## ABSTRAK
Indonesia  memiliki  keanekaragaman  tanaman  yang  sangat  berlimpah  sehingga  banyak  masyarakat menggunakan  tanaman  sebagai  pengobatan  trasdisional,  yaitu  salah  satunya  tanaman  kamboja.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui kandungan fitokimia dan aktivitas sitotoksik dari ekstrak etanol bunga kamboja kuning (Plumeria alba L. ) terhadap larva udang Artemia salina Leach. Proses ekstraksi menggunakan pelarut etanol dan diuji  secara  kualitatif  terhadap  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin  dan  steroid/triterpenoid.  Uji  sitotoksik menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan konsentrasi larutan uji 1000 µg/mL, 500 µg/mL, 250 µg/mL, 125 µg/mL, 62,5 µg/mL dan 31,25 µg/mL. Hasil uji fitokima menunjukkan bahwa sampel mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, tanin maupun triterpenoid dan tidak mengandung senyawa steroid. Hasil uji sitotoksik menunjukkan bahwa sampel bersifat toksik dengan nilai LC 50 301,38 µg/mL. Dapat disimpulkan bahwa sampel mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, tanin dan triterpenoid dan bersifat toksik terhadap larva udang Artemia Salina Leach sehingga dapat dikembangkan sebagai obat antikanker.
Kata kunci : Bunga Kamboja Kuning (Plumeria alba L. ), Senyawa Fitokimia, Sitotoksik, BSLT, LC 50

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Kanker merupakan salah satu penyakit paling  mematikan  di  dunia,  begitu  pula  di Indonesia.  Data  WHO  pada  akhir  2018 mengungkapkan  bahwa 10 juta jiwa penduduk dunia, menderita kanker dan berakhir meninggal  dunia.  Sebelumnya  di  tahun  2014, WHO  menyampaikan  data  yang  menerangkan bahwa  kanker  serviks  menempati  peringkat kedua  sebagai  penyebab  kematian  tertinggi  di dunia. National  Center  for  Biotechnology Information (NCBI)  pada  2014  bahkan menempatkan kanker sebagai penyakit pertama yang  paling  mematikan  di  Indonesia  (Jokow, 2020).
Kanker  merupakan  penyakit  yang disebabkan oleh tidak terkontrolnya
pertumbuhan  sel  dalam  tubuh.  Deteksi  yang terlambat  dapat  menyebabkan  penyebaran kanker ke bagian tubuh lain hingga menyebabkan  kematian.  Pencegahan  kanker harus dilakukan  sedini  mungkin,  sayangnya  di Indonesia, sarana dan prasarana untuk menindak  diagnosis  dan  perawatan  masih sangat  terbatas.  Data  kanker  dan  sistem  yang lengkap mengenai kanker juga masih belum ada hingga saat ini (Jokow, 2020).
Indonesia  memiliki  kekayaan  alam yang  sangat  berlimpah  terutama  tanaman sehingga banyak masyarakat yang memanfaatkannya sebagai bahan obat. Pemanfaatan tanaman sebagai bahan obat sudah banyak digunakan sejak dahulu. Obat tradisional  adalah  bahan  atau  ramuan  bahan yang  berupa  bahan  tanaman,  bahan  hewan, bahan  mineral,  sediaan  sarian  (galenik),  atau campuran  dari  bahan  tersebut  yang  secara turun-temurun telah digunakan untuk pengobatan dan dapat diterapkan sesuai dengan norma yang berlaku di masyarakat (Permenkes RI, 2016).
Salah  satu  tanaman  yang  telah  banyak dikenal  dan  digunakan  secara  luas  oleh masyarakat Indonesia
adalah kamboja (Plumeria  alba L. ). Kamboja  merupakan tumbuhan  yang  berasal  dari  Amerika  tropis yang  biasanya  ditanam  sebagai  tanaman  hias pekarangan, taman, kuburan atau tumbuhan liar (Rolliana,  dkk  2010).  Tanaman  kamboja memiliki  banyak  manfaat,  mulai  dari  akar, getah,  daun,  kulit  batang  dan  bunganya.  Akar kamboja  digunakan  untuk  mengobati  kencing nanah,  getah  kamboja  bermanfaat  sebagai
pengurang  rasa  sakit  akibat  gigi  berlubang, mengobati gusi bengkak serta dapat mematangkan  bisul,  daunnya  dapat  mengobati bisul bernanah, kulit batang untuk menyembuhkan  tumit  pecah-pecah  (Wrasiati, dkk  2011).  Kulit  batang  kamboja  juga digunakan  sebagai  ramuan  tradisional  untuk pengobatan  kanker,  kegunaan  yang  lain  juga berkhasiat seperti sembelit, busung air, beri-beri dan  sifilis.  Kulit  batang  kamboja  dalam pengobatan kanker diduga mengandung senyawa aktif yang bersifat sitotoksik (Rolliana, 2010).  Sedangkan  pada  air  rebusan  bunga kamboja  kering  berkhasiat  untuk  menurunkan demam,  sebagai  obat  batuk  dan  membantu melancarkan pencernaan, selain itu air rebusan bunga  kamboja  juga  dapat  digunakan  untuk mengobati kudis dan sakit kulit (Wrasiati, dkk 2011).
Uji  sitotoksik  adalah  uji  toksisitas secara  in  vitro  menggunakan  kultur  sel digunakan  untuk  mendeteksi  adanya  aktivitas antikanker  dari  suatu  senyawa.  Kanker  ialah suatu  penyakit  sel  dengan  ciri  gangguan  atau kegagalan  mekanisme  pengatur  multiplikasi dan fungsi homeostatis lainnya pada organisme multiseluler (Freshney, 1987).
Metode yang sering digunakan pada uji sitotoksik  yaitu Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Uji  ini  menggambarkan  tingkat ketoksikan  ekstrak  terhadap  larva Artemia salina . Uji ini merupakan  uji tahap awal untuk menentukan  aktivitas  sitotoksik  karena  uji  ini lebih  mudah  dan  sederhana.  Penggunaan metode ini untuk mengetahui bioaktivitas secara umum dalam ekstrak tumbuhan mulai diperkenalkan pada tahun 1982, kemudian pada tahun 1991 dimodifikasi sebagai uji pendahuluan untuk aktivitas sitotoksik. Penelitian  terdahulu  menunjukkan  adanya korelasi  positif  antara  toksisitas brine  shrimp dengan sitotoksisitas 9KB (karsinoma nasofaring  pada  manusia).  Kelebihan  metode BSLT ialah cepat, rendah biaya dan sederhana (Anum Syarie, 2010).
Penelitiaan  yang  telah  dilakukan  oleh Ercila  Rizky  Roliliana  dan  Suhardjono  pada tahun 2010, tentang uji sitotoksik ekstrak daun kamboja  terhadap  larva  udang Artemia  Salina Leach dengan  metode Brine  Shrimp  Lethality Test (BSLT),  disimpulkan  bahwa  pemberian ekstrak  daun  kamboja  pada  penelitian  ini, menunjukkan  potensi  sitotoksik  terhadap larva Artemia salina Leach . Hal tersebut ditunjukkan

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
dengan nilai LC 50 <1000 μg/ml.
Sampai  saat  ini  belum  ada  penelitian tentang  aktivitas  antikanker  dari  bunga  kamboja kuning (Plumeria  alba L. ), oleh  karena  itu  pada penelitian ini akan dilakukan identifikasi kandungan  senyawa  fitokimia  dan  dilakukan pengujian  sitotoksisitas  bunga  kamboja  kuning (Plumeria  alba L. ) terhadap  larva  udang Artemia Salina Leach sebagai  uji  pendahuluan  untuk penemuan  senyawa  antikanker.  Berdasarkan informasi  di  atas  dan  untuk  menunjang  serta melengkapi  informasi  yang  bermanfaat  bagi masyarakat  umum  mengenai  tanaman  obat kamboja  ini,  maka  dilakukan  penelitian  yang berhubungan dengan tanaman kamboja ini.

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  ini  berupa  penelitian eksperimental  di  laboratorium  yang  dilakukan dengan cara menguji senyawa pada ekstrak bunga kamboja  kuning  ( Plumeria  alba L. ) yang  bersifat toksik terhadap larva udang Artemia salina Leach.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Januari  2022  –  Februari  2022  di  Laboratorium Penelitian  Program  Studi  Farmasi  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi Manado.
Alat dan Bahan a. Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah tabung  reaksi,  rak  tabung reasi,  alat-alat  gelas  laboratorium,  blender, kertas saring, ayakan, timbangan analitik, oven, aquarium/wadah  penetesan  telur  udang,  lampu neon dan pipet.
b. Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian
ini  adalah  bunga  kamboja  kuning (Plumeria alba L. ) , etanol 96%, garam laut, aquadestilata, kloroform,  air  panas,  amonia,  asam  sulfat, reagen  mayer,  wagner,  dragendorff,  serbuk magnesium, asam klorida pekat dan menggunakan besi (III) klorida.

## Prosedur Penelitian

## Pengambilan Sampel
Bunga  kamboja  kuning  yang  diambil  di desa Werdhi Agung, Kecamatan Dumoga Tengah,
Kabupaten Bolaang Mongondow, Provinsi
Sulawesi  Utara  dicuci  bersih  menggunakan  air yang  mengalir  setelah  itu  bunga  kamboja  kuning dikeringkan  menggunakan  oven  pada  suhu  50˚C sampai  kering.  Setelah  kering,  bunga  kamboja kuning  dihaluskan  menggunakan  blender  dan diayak  untuk  memisahkan  bagian  yang  masih kasar.

## Ekstraksi Sampel
Serbuk  bunga  kamboja  kuning (Plumeria alba L. ) ditimbang 200 gr untuk diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Sampel  dimasukan  kedalam  bejana  maserasi kemudian direndam dengan etanol 96% sebanyak 1000  ml.  Wadah  maserasi  disimpan  selama  5×24 jam  di  tempat  yang  terlindungi  sinar  matahari langsung,  selanjutnya  disaring,  dipisahkan  antara ampas  dan  filtrat.  Ampas  diekstraksi  kembali dengan etanol 96% yang baru dengan jumlah yang sama,  dilakukan  pengulangan  sampai  hasil rendaman tidak terlalu pekat. Ekstrak etanol yang diperoleh  kemudian  diuapkan  pelarut  etanolnya menggunakan  oven  dengan  suhu  50˚C  hingga diperoleh ekstrak kental.

## Uji Fitokimia
1. Uji Alkaloid
Sebanyak  1  gr  ekstrak  bunga  kamboja kuning (Plumeria  alba L. ) dimasukkan  ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 10 mL kloroform, selanjutnya ditambahkan 10 mL amoniak. Larutan kemudian disaring ke dalam tabung  reaksi  dan  filtrat  ditambahkan  10  tetes H2SO4 2N. Campuran dikocok dengan teratur, dibiarkan  beberapa  menit  sampai  terbentuk  2 lapisan. Lapisan atas dipindahkan ke dalam tiga tabung  reaksi  masing-masing  sebanyak  1  mL, kemudian  masing-masing  tabung  tersebut ditambahkan  beberapa  tetes  pereaksi  Mayer, Wagner  dan  Dragendorff.  Apabila  terbentuk endapan  menunjukan  bahwa  sampel  tersebut mengandung  alkaloid,  dengan  pereaksi  Mayer memberikan  endapan  putih,  dengan  pereaksi Wagner  memberikan  endapan  berwarna  coklat dan pereaksi Dragendorff  memberikan endapan berwarna jingga.
2. Uji Flavonoid Sebanyak  1  gr  ekstrak  bunga  kamboja kuning  (Plumeria  alba  L.)  ditambahkan  5  mL etanol  dan  dipanaskan  selama  lima  menit  di dalam  tabung  reaksi,  kemudian  ditambah beberapa tetes HCL pekat. Kemudian ditambahkan  0,2  g  bubuk  Mg.  Hasil  positif ditunjukkan dengan timbulnya warna merah tua

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
selama 3 menit.
3. Uji Tanin
Sebanyak  1  gr  ekstrak  bunga  kamboja kuning (Plumeria alba L.) ditambah etanol sampai sampel terendam semuanya, kemudian ditambahkan  2-3  tetes  larutan  FeCl3  1%.  Hasil positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna hitam kebiruan atau hijau.
4. Uji Saponin
Sebanyak  1  gr  ekstrak  bunga  kamboja kuning (Plumeria alba L.) dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan akuades hingga  seluruh  sampel  terendam,  dididihkan selama 2-3 menit, dan selanjutnya didinginkan, kemudian  dikocok.  Hasil  positif  ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil.
5. Uji Steroid dan Triterpenoid Sebanyak  1  gr  ekstrak  bunga  kamboja
kuning  (Plumeria  alba  L.)  ditambahkan  asam asetat  glasial  sampai  semua  sampel  terendam, dibiarkan  selama  15  menit  kemudian  6  tetes larutan dipindahkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan  2-3  tetes  asam  sulfat  pekat. Adanya triterpenoid ditunjukkan dengan terjadinya  warna  merah,  jingga  atau  ungu, sedangkan steroida ditunjukkan dengan terbentuknya warna biru.

## Uji Toksisitas
1. Penetasan Larva Udang Penetasan  telur Artemia  salina Leach dilakukan dengan cara merendam sebanyak 50 mg  telur  Artemia  salina  Leach  dalam  wadah yang berisi air laut atau bisa juga air tawar yang ditambahkan  dengan  garam  ikan    dibawah cahaya  lampu  25  watt.  Telur Artemia  salina Leach akan menetas dan menjadi larva setelah 24 jam. Larva Artemia salina Leach yang baik digunakan untuk uji BSLT yaitu yang berumur 48  jam  sebab  jika  lebih  dari  48  jam dikhawatirkan  kematian Artemia  salina Leach bukan  disebabkan  toksisitas  melainkan  oleh terbatasnya persediaan makanan.
2. Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Konsentrasi  larutan  uji  untuk  BSLT adalah  1000  μg/mL,  500  μg/mL,  250  μg/mL, 125  μg/mL,  62,5  μg/mL,  31,25  μg/mL  dan larutan kontrol. Untuk pembuatan larutan stok, ekstrak kental etanol 96% ditimbang sebanyak 1000 mg, kemudian dilarutkan dengan menambahkan  air  laut  hingga  1  L,  hingga diperoleh konsentrasi larutan stok 1000 μg/mL.
3. Uji Toksisitas Metode BSLT Uji toksisitas masing-masing konsentrasi  dilakukan  3  duplikasi  dengan  tiap kelompok  sebanyak  10  ekor  larva Artemia salina Leach. Disiapkan wadah untuk pengujian,  untuk  masing  -  masing  konsentrasi ekstrak  sampel  membutuhkan  3  wadah  dan  3 wadah  sebagai  kontrol  untuk  masing  -  masing duplikasi,  selanjutnya  pada  tiap  konsentrasi larutan dimasukan 10 ekor larva Artemia salina Leach.  Pengamatan  dilakukan  selama  24  jam terhadap  kematian  larva Artemia  salina Leach dimana setiap konsentrasi dilakukan 3 duplikasi dan  dibandingkan  dengan  kontrol.  Kriteria standar untuk menilai kematian Artemia salina Leach  yaitu  bila  larva Artemia  salina Leach tidak menunjukkan pergerakkan selama beberapa detik observasi. Selanjutnya dihitung persentase kematian dan dianalisa menggunakan analisis probit.
4. Analisis Data Data  yang  dikumpulkan  adalah  data primer yang didapatkan dari jumlah larva udang yang  mati 24 jam setelah perlakuan pada tiap- tiap konsentrasi ekstrak bunga kamboja kuning (Plumeria alba L. ) . Data hasil penelitian dari uji toksisitas akan dianalisis dengan analisis probit menggunakan Microsoft Excel untuk menentukan  nilai  LC 50 ,  serta  disajikan  dalam bentuk tabel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Preparasi Sampel
Bunga kamboja kuning (Plumeria alba L. ) yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari desa Werdhi Agung, Kecamatan Dumoga Tengah, Kabupaten Bolaang Mongondow, Sulawesi Utara. Bunga  kamboja  kuning (Plumeria  alba L .) yang diperoleh  dilakukan  sortasi,  pencucian  dan pengeringan. Sortasi dan pencucian yang dilakukan pada  bunga  kamboja  kuning (Plumeria  alba L. ) bertujuan  untuk  membersihkan  dari  kotoran- kotoran yang melekat ataupun bagian dari tanaman lain yang tidak akan digunakan yang terbawa saat pengumpulan  bunga,  pencucian  bunga  kamboja kuning (Plumeria alba L. ) menggunakan air bersih yang mengalir.
Pengeringan bertujuan untuk menghilangkan  air  yang  terdapat  dalam  sampel yang  dapat  menyebabkan  terjadinya  reaksi enzimatis  yang  mengakibatkan  rusaknya  sampel karena susunan senyawa yang terdapat dalam daun tersebut telah berubah (Ningsih et al, 2016).
Bunga kamboja kuning (Plumeria alba L. )

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
yang  sudah  kering,  dilakukan  proses  penghalusan menggunakan blender, kemudian diayak menggunakan ayakan yang tersedia di laboratorium.  Sampel  yang  diperoleh  dari  hasil pengayakan  berupa  serbuk  bertujuan  untuk memperluas permukaan sampel sehingga interaksi pelarut  dengan  senyawa  yang  akan  diambil  lebih efektif  dan  senyawa  dapat  terekstrak  sempurna. Ukuran bahan yang digunakan bila semakin kecil akan  memperluas  bidang  kontak  antara  bahan dengan  pelarut.  Kondisi  ini  akan  menyebabkan kecepatan  untuk  mencapai  kesetimbangan  sistem menjadi lebih besar. Jaringan bahan atau simplisia dapat mempengaruhi efektivitas ekstraksi. Ukuran bahan  yang  sesuai  akan  menjadikan  proses ekstraksi  berlangsung  dengan  baik  dan  tidak memakan waktu yang lama (Ningsih et al, 2016).

## Ekstraksi
Serbuk  kering  bunga  kamboja  kuning (Plumeria  alba L. ) diekstraksi  dengan  metode maserasi.  Bunga  kamboja  kuning (Plumeria  alba L. ) yang digunakan sebesar 200 g dan diekstraksi dengan  pelarut  etanol  96%  sebanyak  1000  mL selama  5  hari.  Setelah  5  hari,  dilakukan  lagi remaserasi  1  kali  selama  3  hari  dengan ditambahkan  pelarut  etanol  96%  1000  mL.  Hasil filtrat  yang  dihasilkan  dari  maserasi  1  dan remaserasi kemudian diuapkan menggunakan oven dengan  suhu  50˚C  sampai  menghasilkan  ekstrak kental.  Hasil  ekstrak  kental  yang  didapatkan sebanyak 17 gr.
Pemilihan  metode  maserasi  dikarenakan pelaksanaanya lebih mudah dan tidak memerlukan peralatan  yang  spesifik.  Selain  itu,  metode maserasi  dapat  digunakan  untuk  jenis  senyawa yang tahan panas maupun yang tidak tahan panas dan  dapat  digunakan  untuk  jenis  senyawa  yang belum diidentifikasi (Herawati et al, 2012). Proses ini  sangat  menguntungkan  dalam  isolasi  senyawa bahan  alam,  karena  selama  perendaman  terjadi peristiwa  plasmolisis  yang  menyebabkan  terjadi pemecahan  dinding  sel  akibat  perbedaan  tekanan didalam dan diluar sel, sehingga senyawa yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dan proses ekstraksi senyawa akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman yang diinginkan (Ningsih et al, 2016). Uji Fitokimia Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Bunga Kamboja Kuning (Plumeria alba L. )
Uji Fitokima Pustaka Hasil Kesimp ulan Alkaloid Terbentu k endapan Terbentu k endapan (+)
warna Jingga (preaksi Dragendr of) berwarn a Jingga Terbentu k endapan Putih (Preaksi Meyer) Terbentu k endapan berwarn a Putih (+) Terbentu k endapan Cokelat (Preaksi Wagner) Terdapat sedikit endapan berwarn a Cokelat (+) Flavonoid Warna Merah Tua Terbentu k warna merah kecokela tan (++) Saponin Membent uk buih Terbentu k buih (+) Tanin Warna Hitam Kebiruan atau Hijau Terbentu k warna hijau kehitama n (+) Steroid/Trite rpenoid warna merah, jingga atau ungu (Triterpe noid), terbentuk nya warna biru (Steroid) Terbentu knya Warna Merah kecokela tan *(+) Triterpe noid *(-) Steroid
*Keterangan:
- Tanda (++): terkandung lebih banyak/warna pekat - Tanda (+): terkandung senyawa/warna muda - Tanda (-): tidak terkandung senyawa Pengujian fitokimia tersebut
menunjukkan  bahwa  ekstrak  bunga  kamboja kuning (Plumeria  alba L. ) positif  memiliki senyawa  metabolit  sekunder  yakni  alkaloid, triterpenoid,  flavonoid,  tanin  dan  saponin. Sedangkan  untuk  metabolit  sekunder  steroid menunjukkan  hasil  negatif.  Keberadaan  metabolit sekunder  tersebut  menunjukkan  bahwa  bunga kamboja  kuning (Plumeria  alba L. ) mempunyai efek farmakologis dan berpotensi untuk dijadikan

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
sebagai  bahan  obat-obatan.  Pada  penelitian sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Ercila  Rizky Rolliana  dan  Suhardjono  pada  tahun  2010 menjelaskan bahwa tanaman kamboja mengandung senyawa flavonoid, terpenoid, glycoside dan alkaloid. Berdasarkan atas penejelasan  tersebut  dapat  menunjang  serta melengkapi  informasi  yang  bermanfaat  bagi masyarakat tentang tanaman obat tradisional yaitu tanaman kamboja.

## Pengujian Toksisitas
Pengujian  toksisitas  dilakukan  dengan metode  BSLT (Brine  Shrimp  Lethality  Test) menggunakan  larva Artemia  salina Leach. Kemampuan  toksisitas  dari  ekstrak  etanol  bunga kamboja  kuning (Plumeria  alba L. ) dalam mematikan  larva  udang  yang  telah  diberikan perlakuan dengan konsentrasi 1000, 500, 250, 125, 62,5 dan 31,25 μg/mL beserta larutan kontrol yang hanya  berisi  air  laut  dapat  dilihat  dalam  Tabel  2. Penambahan  larutan  kontrol  dilakukan  untuk mengetahui  pengaruh  air  laut  maupun  faktor  lain terhadap  kematian larva,  sehingga  kematian  larva dapat  dipastikan  karena  efek  dari  ekstrak  yang ditambahkan.
Air laut yang digunakan merupakan air laut
sintetik yang dibuat dengan cara melarutkan garam non  iodium  sebanyak  20  g  dalam  1000  mL akuades.  Dapat  diketahui  bahwa  masing-masing konsentrasi  ekstrak  bunga  kamboja  kuning (Plumeria alba L. ) yang digunakan memperlihatkan  pengaruh  yang  berbeda.  Jumlah larva  tiap  uji  adalah  10  ekor  dan  tiap  konsentrasi dilakukan  hingga  3  kali  duplikasi.  Jumlah  total larva udang Artemia salina Leach yang digunakan adalah  sebanyak  210  ekor  larva.  Larva  udang Artemia salina Leach yang digunakan adalah larva udang yang berumur 48 jam dan aktif bergerak.
Berdasarkan Tabel 2. dapat dilihat bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  maka  semakin  besar juga  tingkat  kematian  larva  udang,  dimana diperoleh tingkat kematian tertinggi pada konsentrasi  1000  μg/mL  dan  kematian  terendah pada konsentrasi 31,25 μg/mL.
Berdasarkan Tabel  4 .  tingkat  toksisitas dari ekstrak bunga kamboja kuning (Plumeria alba L. ) terdapat pada tingkat toksik karena LC 50 yang diperoleh  adalah  berada  pada  rentang  250-500 µg/ml.  Tingkat  toksisitas  ini  menunjukkan kepotensialan  suatu  bahan  sebagai  sumber senyawa  antikanker.  Semakin  toksik  nilai  LC 50 maka  semakin  potensial  juga  suatu  bahan  untuk digunakan  sebagai  sumber  senyawa  antikanker (Andreson, 1991).
Tabel 2. Presentase Jumlah Kematian Larva Udang
Pengujian Larutan Kontrol Jumlah Kematian Setiap Konsentrasi 31,25 μg/mL 62,5 μg/mL 125 μg/mL 250 μg/mL 500 μg/mL 1000 μg/mL 1 0 2 3 4 5 6 10 2 0 2 3 3 4 6 10 3 0 2 2 3 5 6 10 Total Kematian Larva 0 6 8 10 14 18 30 Rata-rata 0 2 2,67 3,33 4,67 6 10 Presentase Kematian 0 % 20% 26,67% 33,33% 46,67% 60% 100%
Tabel 3. Perhitungan LC 50 Mengunakan Microsoft Excel Konsentrasi Uji μg/mL Log Konsentrasi Jumlah Larva Uji Jumlah Larva mati Persen Kematian (%) Nilai probit 1 2 3 Rata- rata 500 2,7 10 6 6 6 6 60 5,25 250 2,4 10 5 4 5 5 47 4,92 125 2,1 10 4 3 3 3 33 4,56 62,5 1,8 10 3 3 2 3 27 4,39 31,25 1,5 10 2 2 2 2 20 4,16 LC 50 = 301,38 μg/mL
Tabel 4. Tingkat nilai toksisitas LC 50 (Andreson, 1991).
No Nilai LC 50 (μg/mL) Tingkat Toksisitas 1 0-250 Sangat Toksik 2 250-500 Toksik 3 500-750 Sedang 4 750-1000 Rendah

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan dapat disimpulkan sebagai berikut: 1.  Ekstrak etanol bunga kamboja kuning (Plumeria  alba L. ) mengandung  senyawa metabolit sekunder yakni alkaloid, triterpenoid, flavonoid,  tanin  dan  saponin  yang  diantaranya berpotensi  sebagai  senyawa  kandidat  anti kanker.
2.  Ekstrak etanol bunga kamboja kuning (Plumeria alba L .) memiliki sifat toksik dengan nilai LC50¬ sebesar 301,38 μg/mL.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  yang  didapat  dalam penelitian  ini,  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  mengenai  kualitas  kandungan  senyawa metabolit sekunder ekstrak bunga kamboja kuning (Plumeria alba L.) sehingga dapat diketahui secara akurat  kadar  kandungan  serta  peranannya  untuk dikembangkan sebagai obat kanker di masa depan.

## DAFTAR PUSTAKA
Arum,  S.S.  2010.  Uji  Toksisitas  Daun Gracinia porrecta Wall Var Schizogyna Boerl dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test  (BSLT) dan  Identifikasi  Golongan  Senyawa  Kimia dari  Ekstrak  dan  yang  Aktif  [Skripsi].
Universitas Indonesia.
Asem, A. 1819. The Genus Artemia salina Leach,
(Crustaceae: Branchiopoda). True and False Taxonomical  Descriptions.  Iran: Lat.Am.  J Aquat Res 38 : 501-506.
Anderson,  J.E.  1991. A  Blind  Comparison  of Simple  Bench  Top  Bioassay  and  Human Tumor  Cell  Cytotoxicities  as  Antitumor Prescreens .  Natural  Product  Chemistry.
Phytochemical Analysis 2. Dwiyani, R. 2013. Mengenal Tanaman Pelindung di  Sekitar  Kita.  Bali. Udayana  University Press.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2016.
Peraturan  Mentri  Kesehatan  Republik

## Indonesia  Nomor  6  Tahun  2016  Tentang
Formylarium Obat Herbal Asli Indonesia.
Desi,  E.Gusingi,  Wilmar,  M.  Hariyadi.,Nerni,  O.
Potalangi. 2020. Studi Aktivitas Antioksidan Dan Antikanker Payudara (MCF-7) Ekstrak Etanol Daun Benalu Langsat Dendrophthoe pentandra.
Istiqomah.  2013.  Perbandingan  Metode  Ekstraksi Maserasi  Dan  Sokletasi  Terhadap  Kadar Piperin Buah Cabe Jawa (Piperis Retrofracti Fructus) [Skripsi]. UIN, Jakarta.
Intan,  A,  Firdaus.  2016.  Identifikasi  Tanin  Pada
Fraksi  Air  Tanaman  Rumput  Bambu (Lophatherum  gracile  B.) dan  Uji  Aktivitas Antikanker  Isolat  Tanin  Terhadap  Sel Kanker Payudara T47D.
Jokow. 2020. Merajut Penelitian dalam Mewujudkan Penyelesaian Persoalan Kanker  di  Indonesia. Universitas  Gadjah Mada.
Kinho,J., Rini, D.I., Tabba, S., Kama,S., Kafiar,Y.,
Shabri.,  Karundeng,  M.  2011 .  Tumbuhan Obat Tradisional Di Sulawesi Utara Jilid I. Balai Penelitian Kehutanan, Manado.
Leba,  M.A.U.  2017. Ekstraksi  dan  Real Kromatografi. Edisi ke-1. Yogyakarta.
Marline.  2019. Penuntun  Praktikum  Fitokimia.
Universitas Sumatra Utara.
Meles,  D.K.  2010. Peran  Uji  Praklinik  Dalam
Bidang Farmakologi. Perpustakaan Universitas Airlangga.
Miroslav, V. 1971. Detection and Identification of Organic  Compound. New  York:  Planum Publishing Corporation and SNTC
Publishers of Technical Literatur.
Nadiyah,  N.  2020.  Pengaruh  Pemberian  Rebusan Kulit  Batang  Kamboja  Merah (Plumeria Rubra) Terhadap  Bakteri Stapylococcus Aureus [Skripsi].  Surabaya,  Universitas

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Miuhammadiyah Surabaya.
Perdana,  L.T.,  Vivi.Y.S.,  Mila.  M.  2013 .  Daya Rapelan  Minyak  Atsiri  Bunga  Kamboja Putih  (Plumeria  alba L. )  dalam  Sediaan Lotion  Terhadap  Nyamuk  Aedes  Aegypti. Laporan  Penelitian.  Semarang,  Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi.
Rolliana,  E.R.,  Suhardjono.  2010.  Uji  Toksisitas Akut  Ekstrak  Etanol  Daun  Kamboja (Plumeria alba L.) Terhadap Larva Artemia salina Leach  dengan Metode  Brine  Shrimp Lethality  Test (BSLT)  [Skripsi].  Semarang,
Universitas Diponegoro Semarang.
Reskianigsih, A. 2014. Uji Toksisitas Akut Ekstrak
Metanol Buah Phaleria macrocarpa (Scheff)
Boerl Terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) [Skripsi]. Jakarta, Universitas Islam Negri Syarif Hidayattulah Jakarta.
Ramdhini,  R.N.  2010.  Uji  Toksisitas  Terhadap
Artemia  salina Leach  dan  Toksisitas  akut Komponen Bioaktif Pandanu conoideus var.
Conoideus  Lam Sebagai    Kandidat Antikangker [Skripsi]. Surakarta, Universitas Sebelas Maret. Robinson, T. 1995. Kandungan Organik
Tumbuhan  Tinggi  Edisi  Kedua. ITB:
Bandung.
Setiawati, L. 2016. Uji Toksisitas Akut Pemberian
Kombinasi  Ekstrak  Etanol  Biji  Kedelai Detam  dan  Daun  Jati  Belanda  pada  Mencit Swiss Webster (Dosis Letal 50 dan Pengaruh Terhadap  Perilaku,  Berat  Badan,  Bobot Organ dan Indeks Organ) [Skripsi]. Bandung, Universitas Kristen Maranatha.
Sangi, M., M. R. J. Runtuwene., H. E. I. Simbala., dan  V.  M.  A.  Makang.  2008.  Analisis Fitokimia  Tumbuhan  Obat  di  Kabupaten Minahasa Utara. Chemistry Progress 1 : 47-
53.
Svehla,  G.  1990. Buku  Teks  Analisis  Anorganik Kualitatif Makro dan Semimikro. Edisi ke-5.
Terjemahan Setiono, L. dan A.H. Pudjaatmaka.  PT  Kalman  Media  Pusaka, Jakarta.
Wrasiati,  L.P.,  Amna  Hartati,  Dewa  Ayu  Anom
Yuriani. 2011. Kandungan Senyawa Bioaktif dan Karakteristik Sensoris Ekstrak Simplisia Bunga  Kamboja  (Plumeria  Sp.).  Jurusan Teknologi  Industri  Pertanian,  Fakultas Teknologi  Pertanian,  Universitas  Udayana.
Jurnal Biologi 2(15) : 39-40.
Widyasari,  A.  R.  2008.  Karakterisasi  dan  Uji
Antibakteri  Senyawa  Kimia  Fraksi  n- heksana  dari  Kulit  Batang  Pohon  Angsret (Spathodea  campanulata  Beauv)  [Skripsi]. Malang, Universitas Brawijaya