EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr
Eksplorasi Bakteri Pendegradasi Minyak dari Perairan Pelabuhan Tanjung Mas, Semarang

## Ita Puspitasari*, Agus Trianto, Jusup Suprijanto
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. H. Soedarto S.H, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail : itapusspitasari@gmail.com
ABSTRAK: Tanjung Mas merupakan salah satu kawasan pelabuhan di Jawa Tengah yang terus mengalami  peningkatan  jumlah  kapal  setiap  tahunnya.  Hal  ini  berimbas  pada  semakin meningkatnya tumpahan minyak solar yang masuk ke perairan. Upaya yang bisa dilakukan untuk mengurangi  jumlah  tumpahan  minyak  solar  di  Pelabuhan  Tanjung  Mas  yaitu  dengan  melakukan penelitian  bioremediasi  menggunakan  bakteri  indigenouse.  Tujuan  penelitian  ini  dilakukan  yaitu mendapatkan  isolat  bakteri  air  laut  asal  Pelabuhan  Tanjung  Mas,  Semarang  yang  mampu mendegradasi  minyak  solar  dan  mengetahui  kemampuan  masing-masing  isolat  untuk mendegradasi  minyak  solar.  Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Juli  sampai  Oktober  2019 dengan  pengambilan  sample  air  laut  menggunakan  metode  purpossive  sampling,  metode  isolasi menggunakan  pour  plate,  metode  uji  minyak  secara  gravimetri  dan  pertumbuhan  bakteri menggunakan Standart Plate Count (SPC). Hasil isolasi yaitu didapatkan 2 isolat unggul yaitu bakteri Alcanivorax  nanhaiticus dan Halomonas  meridiana .  Bakteri Alcanivorax  nanhaiticus mampu mendegradasi  54%  minyak  solar  dan Halomonas  meridiana mampu  mendegradasi  72%  minyak solar. Kedua bakteri merupakan bakteri hidrokarbonoklastik atau bakteri yang memiliki kemampuan mendegradasi  minyak  solar  (hidrokarbon)  karena  mengandung  enzim  monooksigenase.  Dari penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  di  Pelabuhan  Tanjung  Mas  terdapat  bakteri  yang mampu mendegradasi minyak solar yaitu Alcanivorax nanhaiticus dan Halomonas meridiana . Kedua isolat mampu mendegradasi lebih dari 50% minyak solar yang diujikan.
Kata kunci: isolasi; bakteri; biodegradasi; minyak solar; Pelabuhan Tanjung Mas
Exploration of Oil Degradation Bacteria from Tanjung Mas Port Waters, Semarang ABSTRACT: Tanjung Mas is one of the port areas in Central Java that continues to experience an  increase  in  the  number  of  ships  each  year.  This  has  an  impact  on the  increasing  amount  of diesel fuel spills  that enter  the waters. Efforts that can  be made to  reduce the  number  of diesel fuel  spills  in  the  Port  of  Tanjung  Mas  is  to  conduct  bioremediation  research  using  indigenous bacteria.  The  purpose  of  this  study  was  to  obtain  seawater  bacterial  isolates  from  the  Port  of Tanjung  Mas, Semarang  that  can degrade diesel  fuel  and determine  the ability  of   each  isolate to degrade diesel fuel. This research was conducted in July to October 2019 by taking seawater samples  using  a  purposive  sampling  method,  isolation  method  using  pour  plates,  gravimetric fuel  test  methods  and  bacterial  growth  using  Standard  Plate  Count  (SPC).  The  results  of  the isolation  were  obtained  2  superior  isolates  namely  Alcanivorax  nanhaiticus  and  Halomonas meridiana.  Alcanivorax  nanhaiticus  can  degrade  54%  of  diesel  fuel  and  Halomonas  meridiana can degrade  72% of diesel fuel. Both bacteria  are hydrocarbonoclastic  bacteria  or bacteria that can degrade diesel oil (hydrocarbons) because they contain  the enzyme monooxsigenase. From this  study,  it  can  be  concluded  that  at  Tanjung  Mas  Port  there  are  bacteria  that  can  degrade diesel  fuel,  namely  Alcanivorax  nanhaiticus  and  Halomonas  meridiana.  Both  isolates  were  able to degrade more than 50% of the tested diesel  fuel.
Keywords: isolation; bacteria; biodegradation; diesel fuel; Tanjung Mas Port

## PENDAHULUAN
Secara  alami,  mikroba  di  alam  ditemukan  dalam  populasi  campuran.  Metode  yang  bisa dilakukan  untuk  mendapatkan  biakan  murni  disebut  isolasi.  Menurut  Mikdarullah  dan  Nugraha
(2017),  prinsip  dari  isolasi  mikroba  adalah  memisahkan  atau memindahkan  mikroba tertentu  dari lingkungannya  di  alam  dan  menumbuhkannya  di  media  buatan  sehingga  diperoleh  kultur  murni atau biakan murni. Menurut Cappuccino dan Sherman (2002), isolasi dapat dilakukan dengan cara sebar  ( spread-plate ),  tuang  ( pour-plate )  atau  gores  ( streak-plate ).  Isolasi  dan  seleksi  awal  akan menentukan bakteri mana yang sesungguhnya berperan dan berpotensi untuk dikembangkan dan dimanfaatkan  secara khusus  dalam  penanganan  pencemaran  minyak  atau  lemak  (Susanti et  al. , 2007).
Menurut Arisandi (2017), bakteri merupakan mikroorganisme bersel tunggal dengan ukuran panjang  0,5-10µ  dan  memiliki  lebar  0,5-2,5µ.  Bakteri  adalah  suatu  struktur  sel  yang  tidak mempunyai  inti  sejati  (inti  yang  tidak  dikelilingi  membran  inti),  sedangkan  komponen  genetiknya terdapat  di  dalam  molekul  DNA  tunggal  yang  letaknya  bebas  di  dalam  sitoplasma  (Ali,  2005). Bakteri  yang  mampu  mendegradasi  senyawa  yang  terdapat  di  dalam  hidrokarbon  minyak  bumi disebut  bakteri  hidrokarbonoklastik  (Lasari,  2010).  Bakteri  ini  mampu  mendegradasi  senyawa hidrokarbon  dengan  memanfaatkan  senyawa  tersebut  sebagai  sumber  karbon  dan  energi  yang diperlukan bagi pertumbuhannya.
Minyak  solar  adalah  senyawa  hidrokarbon  jenuh  yang  pada  formulasi blending menggunakan  biodiesel  yang  semakin  banyak  akan  mengakibatkan  bilangan  iod  dari  biosolar yang dihasilkan semakin besar (Haryono dan Marliani, 2014). Bakteri hidrokarbonoklastik mampu mendegradasi  minyak  solar  karena  bantuan  enzim  monooksigenase  dan  enzim  dioksigenase. Enzim  monooksigenase  dan  enzim  dioksigenase  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  mampu  membuka ikatan karbon  pada cincin  aromatik  dan  menghasilkan  alkohol  primer  (Hasyimuddin et  al. ,  2016). Melalui pemberian satu molekul oksigen maka enzim monooksigenase juga dapat mendegradasi PAH dan membentuk arene oksida, selanjutnya molekul-molekul ini akan digunakan oleh mikroba sebagai sumber nutrisi untuk pertumbuhan dan energi.
Tanjung  Mas  merupakan  salah  satu  pelabuhan  strategis  di  Indonesia  yang  mengalami kenaikan  arus  kedatangan  kapal  setiap  tahunnya  (Aji et  al. ,  2013).  Aktivitas  manusia  di  sekitar Pelabuhan Tanjung Mas menyebabkan jumlah pencemaran minyak di air laut Pelabuhan Tanjung Mas terus meningkat. Menurut Suyasa (2006), pada lingkungan yang telah tercemar serta kolam pengolahan limbah dimungkinkan terdapat bakteri pendegradasi minyak tersebut secara alamiah, bersaing,  maupun  berkonsorsia  dengan  mikroorganisme  lainnya.  Oleh  karena  itu,  perlu dilakukannya  penelitian  ini  dengan  tujuan mendapatkan  isolat  bakteri  pendegradasi  minyak  solar dan mengetahui kemampuan setiap isolat untuk mendegradasi minyak solar.

## MATERI DAN METODE
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  yaitu  metode  deskriptif  eksploratif.  Metode  ini bertujuan  menggambarkan  keadaan  suatu  fenomena.  Data  yang  diperoleh  dianalisis  secara deskriptif yang dilaporkan dalam bentuk tabel dan grafik (Hasyimuddin et al. , 2016). Metode pengambilan sampel air laut yang digunakan adalah purposive sampling method di 3 stasiun yaitu stasiun 1 di dermaga dalam 2, stasiun 2 di dermaga dalam 1, dan stasiun 3 di sebelah barat Semarang  Container  Terminal dengan  masing-masing  stasiun  3x  pengulangan.  Selain dilakukan pengambilan sampel air laut, parameter fisika kimia yang meliputi salinitas, DO, suhu dan pH diukur.
Satu  mL  air  laut  diambil  dan  ditumbuhkan  dalam  media  SMSSe  cair  steril.  Media  SMSSe berasal dari media SMSS yang ditambahkan ekstrak ragi. Media SMSS terdiri dari 5 gram CaCO3, 2,5 gram NH4NO3, 1 gram Na2HPO4.7H2O, 0,5 gram KH2PO4, 0,5 gram MgSO4.7H2O, dan 0,2 gram MnCl2.7H2O dan ekstrak ragi 0,01% (b/v) yang dilarutkan dalam satu liter air laut (Sharpley, 1966). Ekstrak ragi sebanyak 0,01% (b/v) ditambahkan ke dalam medium SMSS sebagai sumber nitrogen  tambahan.  Medium  tersebut  ditambahkan  minyak  solar  sebanyak  2%  (v/v)  sebagai sumber karbon. Sampel dihomogenkan dengan shaker selama 3 hari dengan kecepatan 120 rpm (rotasi per menit). Sampel diambil 1 mL dan diencerkan sampai 10 -5 dengan menggunakan NaCl fisiologis steril. Hasil pengenceran 10 -3 sampai dengan 10 -5 dibiakkan dalam media SMSSe padat dengan  metode pour  plate .  Hasil pour  plate diinkubasi  selama  2x24  jam  pada  suhu  37°C (Hasyimuddin et al. , 2016).
Lima  isolat  bakteri  yang  berbeda  dipurifikasi  kemudian  ditanam  ke  dalam  media  SMSSe
padat dengan 3 konsentrasi minyak solar yaitu 2%, 5% dan 10%. Inokulasi bakteri menggunakan metode streak . Cawan petri yang telah berisi bakteri kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 2x24  jam.  Isolat  yang  berhasil  tumbuh  pada  3  konsentrasi  kemudian  diamati  secara  morfologi. Pengamatan  morfologi  koloni  dilakukan  untuk  melihat  bentuk,  elevasi,  ukuran,  tepi,  dan  warna koloni.  Selain  menggunakan  pengamatan  morfologis,  uji  molekuler  juga  dilakukan  untuk mengetahui spesies bakteri.
Isolat yang berhasil diisolasi diuji secara gravimetri dan dihitung pertumbuhan bakteri. Masing- masing isolat bakteri yang telah dimurnikan sejumlah 10 −5 sel/ml diambil lalu ditambahkan ke dalam tabung reaksi berisi media SMSSe cair dan minyak solar sebanyak 2% (v/v), 5% (v/v), dan 10% (v/v) secara terpisah. Kultur dihomogenkan dengan shaker pada kecepatan 120 rpm (rotasi per menit). Analisis kadar minyak solar tersisa dan estimasi kepadatan bakteri dihitung pada hari ke 7 dan 14. Perlakuan yang sama juga dilakukan pada kontrol namun perlakuan ini tidak menggunakan isolat bakteri (Hasyimuddin et al. , 2016).
Analisis kadar minyak solar secara gravimetri dapat dilakukan dengan cara media SMSSe cair yang mengandung solar 2% (v/v) hasil perlakuan dimasukkan ke dalam corong pemisah. N-heksana dicampur dengan media SMSSe cair kemudian dihomogenkan selama ± 15 menit lalu didiamkan sampai  n-heksana  terpisah.  Terdapat  3  lapisan  yaitu  minyak  solar,  n-heksana,  dan  air.  Air dibuang,  lapisan  minyak  solar  dan  n-heksana  disaring  dengan  kertas  saring.  Proses  destilasi dimulai dengan memanaskan labu alas bulat pada suhu 60 0 C (sesuai dengan titik didih n-heksana) sampai  n-  heksana  habis  dan  yang  tersisa  hanya  minyak.  Gelas  kimia  tersebut  diangkat  dan didiamkan sampai dingin lalu ditimbang dan dicatat beratnya. Menurut Bhaktinagara et al. (2015), kadar  minyak  solar  dihitung  dengan  cara  sebagai  berikut  :  %TPH=  Berat  residu:  berat  sampel  x 100%
Metode lain yang digunakan untuk mengetahui kadar minyak tersisa hasil degradasi adalah menggunakan buret. Media yang berisi minyak solar dan isolat bakteri dimasukkan ke dalam buret kemudian diukur berdasar skala yang ada. Hasil yang didapat merupakan hasil pengukuran kotor. Kepadatan sel isolat bakteri masing-masing perlakuan dihitung dengan cara Standard Plate Count (SPC) dengan  menggunakan colony  counter pada  hari  ke  7  dan  14.  Metode  cawan  tuang  ( pour plate )  digunakan  untuk  inokulasi  bakteri.  Sampel  yang  ada  di  media  SMSSe  cair  dengan konsentrasi minyak solar 2%, 5% dan 10% diambil 1 mL dan dilakukan pengenceran kembali sampai 10 −5 menggunakan  NaCl  steril.  Selanjutnya  dilakukan pour  plate .  Menurut  Bhaktinagara et  al . (2015),  kultur  diinkubasi  selama  2  hari  pada  suhu  32 0 C  dan  dihitung  kepadatan  sel  bakterinya dengan  cara:  CFU/mL=Jumlah  koloni  per  cawan  x  faktor  pengenceran  :volume  inokulasi  (mL). Faktor pengenceran=1 :tingkat pengenceran
Uji molekuler digunakan untuk analisis mikroorganisme dari makanan atau material biologis lainnya (Babalola, 2003). Umumnya, uji molekuler digunakan untuk mengetahui spesies atau jenis dari  DNA  atau  protein.  Ada  4  tahapan  dari  uji  molekuler  yaitu  ekstraksi  DNA,  amplifikasi  dan visualisasi DNA, sekuensing DNA, dan analisis filogenetik.
Ekstraksi  DNA  merupakan  tahapan  awal  dari  uji  molekuler.  Sampel  yang  telah  diinkubasi selama 1x24 jam diambil sebanyak 1 goresan penuh kemudian diletakkan dalam microtube steril. 50 µL ddH2O dimasukan ke dalam microtube . 1 mL 0,5% saponin PBS 1x ditambahkan kemudian diletakkan  ke  dalam  freezer  selama  1x24  jam.  Sampel  kemudian  dihomogenkan  dengan  vortex berkecepatan  12.000  RPM  (Rotasi  Per  Menit)  selama  10  menit.  Natan  dan  supernatan dipisahkan.100  µL  ddH2O  dan  50  µL  20%  Chelex  100  dimasukan  ke  dalam microtube dan dihomogenisasi  secara  merata. Microtube dipanaskan  hingga  mendidih  selama  kurang  lebih  10 menit  dan  dihomogenkan  dengan  vortex  setiap  5  menit  sekali  dengan  kecepatan  12000  RPM (Rotasi Per Menit). Supernatan yang didapatkan kemudian dipindahkan ke dalam microtube baru. Suspensi  sel  dibekukan  pada  suhu  -20°C  dan  dicairkan  pada  suhu  90°C  selama  10  menit (Nursyirwani dan Amolle, 2007).
Proses  elektroforesis  dimulai  dengan  mencampurkan  45  mL  aquadest  dan  0,45  gram agarose  1%  (Nursyirwani  dan  Amolle,  2007).  Gel  dimasukkan  ke  dalam  cetakan  dalam  keadaan hangat.  Setelah  dicetak,  gel  dimasukkan  dalam  wadah  elektroforesis  dan  ditambahkan buffer . DdH2O  dimasukkan  pada  lubang  pertama  dilanjutkan  dengan  sampel  hasil  ekstraksi.  Proses elektroforesis  dimulai  selama  kurang  lebih  3  jam.  Gel  hasil  elektroforesis  dimasukkan  ke  dalam Biobase Gel System dan terlihat hasil band nya.
Journal of Marine Research Vol 9, No.3 Agustus 2020, pp. 281-288
Amplifikasi DNA dilakukan dengan PCR bersekuen 16S rDNA menggunakan mesin Thermal Cycler . Untuk proses PCR 16S bervolume 10µL, aquabidest 2µL, Primer 27F 1µL, Primer 1492R 1 µL,  DNA  template  1µL  dan  Megamix  Royal  5  µL  dimasukkan  ke  dalam  tabung  eppendorf (Nursyirwani dan Amolle, 2007). Mesin Thermal Cycler dijalankan dan diprogram berdasarkan suhu: proses denaturasi pada suhu 90°C selama 2 menit, proses annealing dengan suhu 50°C selama 40 detik,  suhu  72°C  selama  1  menit  dan  suhu  94°C  selama  40  detik.  Pada  proses  ekstensi  suhu diturunkan  suhu  42°C  selama  1  menit  dan  pada  suhu  72°C  selama  5  menit.  Ketiga  proses  ini dijalankan sebanyak 30 siklus selama satu jam.
Proses sekuensing dilakukan dengan mencampurkan bahan-bahan Aquabidest 3 µL, Primer 2 µL, BigDye V3.1 4 µL, dan Template 1µL. Total volume menjadi 10 µL. Semua bahan dicampur dengan menggunakan pipet. Program PCR 16S universal dijalankan dengan perlakuan suhu 96°C selama 2 menit, suhu 96°C selama 10 detik, suhu 55°C selama 5 detik dan suhu 60°C selama 4 menit (Nursyirwani dan Amolle, 2007).
Pohon  filogenetik  dilakukan  dengan  membandingkan  sekuen  DNA  isolat  bakteri hidrokarbonoklastik  dibandingkan  dengan  sekuen  DNA  pada  basis  data  ( database )  DNA. Penelusuran dilakukan dengan menggunakan internet melalui program pelacakan database Basic Local  Alignment  Search  Tool (BLAST).  Pembuatan  pohon  filogenetik  menggunakan  software Mega  A6  dan  data  sekunder  dari Basic  Local  Alignment  Tool (BLAST)  pada  situs  NCBI.  Pada pembuatan  pohon  filogenetik,  pilihan  opsi  model Tamamura-Nei dipilih  dan  metode neighbor joining  tree digunakan. Tamamura-Nei  method adalah  model  yang  paling  umum  dipilih  untuk membuat  pohon  filogenetik.  Pada  pembuatan  pohon  filogenetik  ini  diuji  secara  statistik menggunakan metode bootstrap replications sebanyak 1000 kali pengulangan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Keberadaan  stasiun  1  yaitu  pada  koordinat  06°56'59,92"  S  110°25'08,19"  E.  Stasiun  1 berlokasi  di  dekat  dermaga  pelabuhan  dalam  2  dan  alur  pelayaran  dari  dan  menuju  kolam pelabuhan. Di Pelabuhan Tanjung Mas,  stasiun 1 digunakan sebagai tempat bongkar muat kayu dan 9 bahan pokok. Kolam pelabuhan ini adalah tempat kapal berlabuh, berolah gerak, melakukan aktivitas bongkar muat, dan mengisi perbekalan. Stasiun 2 berada pada koordinat 06°56'50,88" S 110°25'15,85" E. Lokasi stasiun 2 yaitu di antara dermaga dalam 1 dan dermaga nusantara. Menurut Peraturan  Menteri  Perhubungan  nomor  18  tahun  2013,  dermaga  nusantara  digunakan  untuk kegiatan kapal-kapal penumpang dan turis, untuk kegiatan kapal-kapal cargo/ curah, dan kegiatan kapal-kapal curah cair atau GC. Stasiun 3 berada pada titik koordinat 06°56'27,86" S 110°25'16,30" E. Lokasi sampling ini berada di sebelah barat Semarang Container Terminal . Kegiatan yang umum dilakukan di Semarang Container Terminal adalah bongkar muat barang.

## Journal of Marine Research Vol 9, No.3 Agustus 2020, pp. 281-288
Sampel air diambil di permukaan laut pada kedalaman 0-15 cm. Pada kedalaman ini jumlah bakteri sangat banyak karena nutrisi dan oksigen yang melimpah. Minyak solar umumnya digunakan sebagai  sumber  karbon  untuk  bakteri  hidrokarbonoklastik.  Selain  mengambil  sampel  air  laut dilakukan  pengukuran  parameter  fisika  kimia  yang  meliputi  suhu,  salinitas,  pH  dan  DO.  Suhu  di stasiun 1, 2 dan 3 sama yaitu 30±0,58°C. Suhu ini merupakan suhu normal perairan. Pada suhu tersebut bakteri yang tumbuh dengan baik adalah bakteri mesofilik. Salinitas yang ada di stasiun 1, 2 dan 3 sama yaitu 30 ppt. Pada salinitas ini, bakteri yang umum tumbuh adalah bakteri halofilik ringan. Menurut Arisandi et al. (2017), bakteri halofilik ringan berada pada pertumbuhan optimum yang bervariasi antara 20-50 ppt.
Tingkat keasaman (pH) di lokasi sampling berkisar 7,99-8,09. Angka ini menunjukkan bahwa lokasi sampling dalam keadaan basa. PH optimum untuk proses biodegradasi hidrokarbon antara 6,0-8,0.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  perairan  Pelabuhan  Tanjung  Mas  mampu  mendegradasi hidrokarbon. Oksigen terlarut (DO) dibutuhkan oleh semua jasad hidup untuk pernapasan, proses metabolisme  atau  pertukaran  zat  yang  kemudian  menghasilkan  energi  untuk  pertumbuhan  dan pembiakan (Salmin, 2005). Di lokasi sampling, oksigen terlarut berkisar antara 5,83 sampai 6,83.
Ada  5  isolat  yang  diisolasi  dari  sampel  air  laut  Pelabuhan  Tanjung  Mas.  Kelima  isolat diseleksi menggunakan media SMSSe padat dengan 3 konsentrasi minyak solar yaitu 2%, 5% dan 10%. Hasil seleksi didapatkan 2 isolat unggul yang dapat tumbuh pada ketiga konsentrasi minyak solar.  Isolat-  isolat  unggul  diamati  secara  mikroskopik,  makroskopik  dan  uji  molekuler.  Hasil pengamatan kedua isolat divisualisasikan dalam Tabel 1.
ISL  1A  dan  ISL  2A  diuji  kemampuan  dalam  mendegradasi  minyak  solar  pada  konsentrasi 2%, 5% dan 10%. Hasil minyak solar terdegradasi di ketiga konsentrasi pada hari ke 7 dan ke 14 disajikan dalam Tabel 2.
Perbedaan  nyata  jumlah  minyak  solar  tersisa  di  media  yang  berisi  bakteri  dengan  media tanpa penambahan isolat bakteri (kontrol) menunjukkan bahwa bakteri ISL 1A dan ISL 2A dapat memanfaatkan  minyak  sebagai  sumber  karbon  dan  mensintesis  enzim-enzim  yang  digunakan dalam  mendegradasi  senyawa-senyawa  yang  terkandung  di  dalamnya.  Proses  pendegradasian terus mengalami peningkatan sampai dengan hari ke 14. Kadar minyak terdegradasi pada ISL 1A dan ISL 2A bersifat fluktuatif. ISL 1A mampu mendegradasi 54% minyak solar sedangkan ISL 2A mampu mendegradasi 72% minyak solar.
Kemampuan  bakteri  mendegradasikan  minyak  solar  disebabkan  karena  bakteri menghasilkan enzim yang mampu memecah senyawa organik kompleks menjadi senyawa yang lebih  sederhana  (Hasyimuddin et  al .,  2013).  Produksi  enzim  yang  tinggi  berhubungan  dengan semakin  tinggi  kemampuan  bakteri  hidrokarbonoklastik  dalam  menguraikan  senyawa hidrokarbon.  Enzim yang dimiliki oleh bakteri pendegradasi minyak adalah oksigenase. Menurut Harayama et  al. (1999),  enzim  tersebut  berperan  dalam  reaksi  masuknya  oksigen  ke  dalam senyawa  kimia  melalui  proses  oksidasi.  Enzim  oksigenase  dibagi  menjadi  2  yaitu monooksigenase dan dioksigenase. Menurut Hasyimuddin et al. (2013), enzim monooksigenase dan enzim dioksigenase yang dihasilkan oleh bakteri mampu membuka ikatan karbon pada cincin aromatik  dan  menghasilkan  alkohol  primer.  Enzim  dioksigenase  yang  dihasilkan  oleh  bakteri mendegradasi PAH dan membentuk cis- dihidrodiol. Molekul-molekul yang ada selanjutnya akan digunakan oleh mikroba sebagai sumber nutrisi untuk pertumbuhan dan energi.
Pertumbuhan bakteri ISL 1A dan ISL 2A diamati selama 14 hari. Hasil pertumbuhan isolat bakteri disajikan dalam Tabel 3. Konsentrasi bakteri pada hari ke 7 dan ke 14 cenderung fluktuatif. Bakteri  ISL  1A  dan  ISL  2A  mampu  tumbuh  pada  3  konsentrasi  minyak  solar.  Kemampuan degradasi suatu jenis mikroba terbatas hanya pada kisaran senyawa hidrokarbon tertentu, namun beberapa  jenis  mikroba  akan  bekerja  secara  bersamaan  dalam  mendegradasi  minyak  bumi sesuai spesifisitas substrat yang dimiliki (Harayama et al. , 1999).
Jumlah bakteri paling banyak pada hari ke 7 dan kemudian mengalami penurunan pada hari ke  14.  Hal  ini  disebabkan  karena  jumlah  nutrisi  di  dalam  media  menjadi  lebih  sedikit.  Menurut Umroh  (2011),  penurunan  sel  bakteri  disebabkan  oleh  faktor  kematian  yang  diduga  karena berkurangnya  kandungan  nutrien  N  dan  P  di  dalam  sampel.  Nitrogen  merupakan  unsur  pokok protein  yang  berperan  dalam  pertumbuhan,  perbanyakan  sel  dan  pembentukan  dinding  sel. Phospor  merupakan  komponen  utama  asam  nukleat  dan  lemak  sel  membran  yang  berperan dalam proses pemindahan energi secara biologi dan pembentukan asam amino.
Journal of Marine Research Vol 9, No.3 Agustus 2020, pp. 281-288
Tabel 1. Karakterisasi Isolat Bakteri Pendegradasi Minyak Solar
Pengamatan Karakteristik Kode Isolat ISL 1A ISL 2A Makroskopik Ukuran Koloni Punctiform Small Bentuk Koloni Tepi Koloni Warna Koloni Elevasi Koloni Circular Entire Putih Convex Circular Entire Kuning Flat Mikroskopik Pewarnaan Gram Negatif Negatif Uji Molekuler Bentuk Sel Batang Alcanivorax nanhaiticus Batang Halomonas meridiana Keterangan: * Punctiform (titik), * Small (kecil), * Circular (bulat bertepi), * Entire (rata/utuh), * Convex (timbul melengkung), * Flat (datar)
Tabel 2. Persentase Minyak Solar yang Terdegradasi pada Hari ke 7 dan ke 14
Kode Isolat Kadar Minyak Terdegradasi Hari ke 7 (%) Kadar Minyak Terdegradasi Hari ke 14 (%) 2% 5% 10% 2% 5% 10% Kontrol 0 0 0 0 0 0 ISL 1A 25 36 10 40 54 44 ISL 2A 25 42 47 55 44 72
Tabel 3. Konsentrasi Bakteri pada Berbagai Konsentrasi Minyak Solar Hari ke 7 dan ke 14
Kode Isolat Konsentrasi Bakteri pada Hari ke 7 Konsentrasi Bakteri pada Hari ke 14 2% 5% 10% 2% 5% 10% Kontrol 0 0 0 0 0 0 ISL 1A 3. 10 5 1,1. 10 5 3,5. 10 5 0,3. 10 5 0,3. 10 5 0,9. 10 5 ISL 2A 5,8. 10 5 0,8. 10 5 0,3. 10 5 0,6. 10 5 0,5. 10 5 3. 10 5
Jumlah  sel  bakteri Alcanivorax  nanhaiticus dan Halomonas  meridiana mengalami peningkatan  seiring  bertambahnya  konsentrasi  minyak  solar.  Hal  ini  disebabkan  karena  karbon merupakan sumber nutrisi untuk pertumbuhan. Menurut Hasyimuddin et al. (2016), bakteri dapat mendegradasi minyak solar karena bakteri menghasilkan enzim yang mampu memecah senyawa organik  kompleks  menjadi  senyawa  yang  lebih  sederhana.  Bakteri  yang  memiliki  pertumbuhan tertinggi  juga  akan  menghasilkan  kadar  minyak  yang  terdegradasi  tinggi.  Hal  ini  menunjukkan telah  dimanfaatkannya  minyak  sebagai  sumber  karbon  untuk  menghasilkan  energi  dan pertumbuhan bakteri (Umroh, 2011).

## KESIMPULAN
Bakteri unggul yang berhasil diisolasi dari air laut Pelabuhan Tanjung Mas yaitu Alcanivorax nanhaiticus dan Halomonas  meridiana .  Kedua  isolat  merupakan  bakteri  yang  dapat mendegradasi  minyak  solar  pada  konsentrasi  2%,  5%  dan  10%  dalam  waktu  14  hari pengamatan. Alcanivorax  nanhaiticus mampu  mendegradasi  54%  minyak  solar  sedangkan Halomonas meridiana mampu mendegradasi 72% minyak solar.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Artikel  ini  merupakan  bagian  dari  skripsi  yang berjudul  “Isolasi  dan  Seleksi  Bakteri Pendegradasi  Minyak  Solar  dari  Perairan  Pelabuhan  Tanjung  Mas,  Semarang”  untuk memperoleh  gelar  Sarjana  Strata  Satu  Program  Studi  Ilmu  Kelautan,  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro.

## DAFTAR PUSTAKA
Aji,  A.P.,  Paramarta.,  B.,  Edhisono,  S.  &  Kurniani,  D.  2013.  Perencanaan  Pengembangan Pelabuhan Tanjung Emas, Semarang. Jurnal Karya Teknik Sipil , 2(4):218-227. Ali, A. 2005. Mikrobiologi Dasar. Universitas Negeri Makassar Press. Makassar. Arisandi,  A.,  Tamam,  B.  &  Yuliandari,  R.  2017.  Jumlah  Koloni  pada  Media  Kultur  Bakteri  yang Berasal dari Tallus dan Perairan Sentra Budidaya Kappaphycus alvarezii di Sumenep. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan , 9 (1):43-49. DOI: 10.20473/jipk.v9i1.7633. Babalola,  O.O.  2003.  Molecular  Techniques:  An  Overview  of  Methods  for  The  Detection  of Bacteria. African Journal of Biotechnology , 2 (12):710-713. DOI: 10.5897/AJB2003.000-1127 . Badan  Pusat  Statistik  Provinsi  Jawa  Tengah.  2018.  Jumlah  Perahu/Kapal  Menurut Kabupaten/Kota dan Jenis Kapal di Provinsi Jawa Tengah 2015.
Bhaktinagara,  R.A.,  Suprihadi,  A.  &  Raharjo,  B.  2015.  Biodegradasi  Senyawa  Hidrokarbon  oleh Strain Bacillus cereus (VIC) pada Kondisi Salinitas yang Berbeda. Jurnal Biologi ., 4(3):62-71. Buskey, E.J., White, H.K. & Esbaugh, A.J. 2016. Impacts of Oil Spills on Marine Life in the Gulf of Mexico: Effects on Plankton, Nekton, and Deep-Sea Benthos. Oceanography , 29(3):174-181. DOI: 10.5670/oceanog.2016.81.
Cappuccino,  J.G.  &  N.  Sherman.  2002.  Microbiology:  A  Laboratory  Manual,  Sixth  Edition.
California: Benjamin/Cummings Science Publishing. 477 hlm.
Harayama,  S.,  Kishira,  H.,  Kasai,  Y.  &  Shutsubo,  K.  1999.  Petroleum  Biodegradation  in  Marine Environments. Journal of Molecular Microbiology and Biotechnology , 1(1):63-70. Haryono  &  Marliani.  2014.  Analisis  Mutu  Biosolar  pada  Variasi  Formulasi Blending Biodiesel  dari Minyak Biji Kapuk dengan Minyak Solar. Eksergi ., 11 (2): 24. DOI: 10.31315/e.v11i2.343. Hasyimuddin,  Djide,  M.N.  &  Samawi,  M.F.  2016.  Isolasi  Bakteri  Pendegradasi  Minyak  Solar  dari Perairan  Teluk  Pare-Pare. Biogenesis:  Jurnal  Ilmiah  Biologi ,  4(1):41-46.  DOI: 10.24252/ bio.v4i1.1119.
Lasari,  D.P.  2010.  Bakteri  Pengolah  Limbah  Minyak  Bumi  yang  Ramah  Lingkungan.  Kementrian Energi dan Sumber Daya Mineral. www.esdm.go.id. 09 Juni 2020.
Mikdarullah & Nugraha, A. 2017. Teknik Isolasi Bakteri Proteolitik dari Sumber Air Panas Ciwidey,
Bandung. Buletin  Teknik  Litkayasa  Akualkultur ,  15(1):11-14.  DOI:  10.15578/blta.15.1.2017. 11-14.
Nasikhin, R. & Shovitri, M. 2013. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Pendegradasi Solar dan Bensin dari  Perairan  Pelabuhan  Gresik. Jurnal  Sains  dan  Seni  Pomits ,  2(2):2337-3520. DOI: 10.12962/j23373520.v2i2.3626.
Nugroho,  A.  2007.  Dinamika  Populasi  Konsorsium  Bakteri  Hidrokarbonoklastik:  Studi  Kasus Biodegradasi Hidrokarbon Minyak Bumi Skala Laboratorium. Jurnal Ilmu Dasar , 8(1):13-23. Nursyirwani  &  Amolle,  K.C.  2007.  Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri  Hidrokarbonoklastik  dari Perairan  Dumai  dengan  Sekuen  16S  rDNA. Ilmu  Kelautan ,  12(1):12-17.  DOI:  10.14710/ ik.ijms.12.1.12-17.
Prasad, G. & Anuprakash, M.V.V.S.. 2016. Pollution Due to Oil Spills in Marine Environment And Control  Measures. IOSR  Journal  of  Environmental  Science,  Toxicology,  and  Food Technology , 10 (1):01-08. DOI: 10.9790/2402-1009010108.
Ristiati,  N.P.,  Sanusi,  M.  &  Putra,  I.M.G.  2016.  Uji  Kemampuan  Degradasi  Minyak  Solar  oleh Konsorsium  Bakteri  Hasil  Preservasi  dengan  Kombinasi  Metode  Liofilisasi  dan  Metode Gliserol. Dalam: Prosiding Seminar Nasional MIPA 2016. 258-267.
Salmin.  2005. Oksigen Terlarut (DO)  dan  Kebutuhan Oksigen  Biologi (BOD) sebagai Salah Satu Indikator untuk Menentukan Kualitas Perairan. Oseana , 30(3):21-26.
Sharpley, J.M. 1966. Elementary Petroleum Microbiology. Texas. Gulf Publishing Company. DOI:
10.1002/jobm.19670070421.
Susanti, I., Kusumaningtyas, R.W. & Illaningtyas, F. 2007. Uji Sifat Probiotik Asam Laktat sebagai Kandidat Bahan Pangan Fungsional. Jurnal Teknologi Industri Pangan , 18(2):89-95.
Suyasa,  I.W.B.  2006.  Isolasi  Bakteri  Pendegradasi  Minyak/Lemak  dari  Beberapa  Sedimen Perairan  Tercemar  dan  Bak  Penampungan  Limbah. Bumi  Lestari  Journal  of  Environment , 7(1):01-06.
Umroh. 2011. Bioremediasi Pencemaran Minyak di Sedimen Pantai Balongan, Indramayu dengan Menggunakan Bakteri Alcanivorax sp. TE-9 Skala Laboratorium. Akuatik Jurnal Sumberdaya Perairan , 5 (2):23-31.