EVALUASI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SPONS Aplysina sp.

## DIPESISIR PANTAI LEMBEH KOTA BITUNG

## EVALUATION OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT SPONGE Aplysina sp. ON THE COAST OF LEMBEH, BITUNG CITY.
Hendra 1) , Adithya Yudistira 1) , Surya Sumantri 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *hendra05052@gmail.com

## ABSTRACT
Aplysina sp., is one of the marine biota, which forms the coral reefs that contain active compounds, whose percentage  of  activity  is  greater  than  the  compounds  produced  by  terrestrial  plants.  This  study  aims  to analyze  the  antioxidant  activity  of  the  sponge  Aplysina  sp.  Sponge  sample  Aplysina  sp.,  obtained  from  the waters  of  the  Lembeh  Strait,  Bitung.  This  research  is  an  experimental  laboratory  by  testing  the  ethanol extract of sponge Aplysina sp., with the DPPH method [1,1-diphenyl-2-picrilhidrazil] to analyze antioxidant activity using a spectrophotometer UV-Vis. The results of this study showed that the ethanolic extract of the sponge Aplysina sp. Lembeh straits waters have antioxidant activity in each concentration test. The highest concentration has an antidote to free radical activity by reaching a percentage of 24,83%.

## Keywords : Aplysina sp., Antioxidants, Ethanol, DPPH

## ABSTRAK
Spons Aplysina sp.  merupakan  salah  satu  biota  laut  penyusun  terumbu  karang  yang  mengandung  senyawa aktif yang presentase keaktifannya lebih besar dibandingkan dengan senyawa-senyawa yang dihasilkan oleh tumbuhan  darat.Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  aktivitas  antioksidan  dari  spons Aplysina sp. Sampel  spons Aplysina sp.  di  peroleh  dari  perairan  Selat  Lembeh,  Bitung.  Penelitian  ini  merupakan eksperimental  laboratorium  dengan  pengujian  terhadap  ektrak  etanol  spons Aplysina sp.dengan  metode DPPH  [1,1- difenil -2- pikrilhidrazil ]  untuk  menganalisis  aktivitas  antioksidan  dengan  menggunakan sprektrofotometer UV-Vis. Hasil penelitian ini memperlihatkan ekstrak etanol spons Aplysina sp.di perairan selat  lembeh  mempunyai  aktivitas  antioksidan  disetiap  konsentrasi  pengujiannya.  Konsetrasi  tertinggi memliki aktivitas penangkal radikal bebas dengan mencapai presentase 24,83%.
Kata kunci : Aplysina sp . , Antioksidan, Etanol, DPPH

## PENDAHULUAN
Selat Lembeh merupakan wilayah
perairan sempit dan memanjang yang memisahkan  daratan  utama  Pulau  Sulawesi dengan  Pulau  Lembeh.  Secara  geografis  terletak diantara  1 0 33’  LU  dan  125 0 7’  –  125 0 17  BT  dan secara  administratif  masuk  dalam  wilayah  kota Bitung, Sulawesi Utara. Karena letaknya di daerah Indo-Pasifik tropis, maka kawasan pesisir dan laut di  perairan  ini  memiliki  keanekaragaman  hayati (biodiversity) yang sangat tinggi (Patty, 2015).
Salah satunya adalah spons, Spons adalah organisme laut yang memiliki potensi cukup besar dalam menghasilkan senyawa aktif.Spons diketahui  menghasilkan  senyawa  bioaktif  yang bermanfaat  sebagai  antibiotik,  anti  jamur,  anti kanker,  anti  inflamasi,  anti  oksidan  yang  selama ini masih terus dieksplorasi (Abdul, 2003).
Untuk  menjaga  kelangsungan  hidup  dan pertahanan  mengandung  senyawa  aktif  yang presentase  keaktifannya  lebih  besar  dibandingkan dengan  senyawa-senyawa  yang  dihasilkan  oleh tumbuhan darat (Muniarsih et al. , 1999).
Tubuh  memiliki  sistem  pertahanan  alami untuk  menetralisir  radikal  bebas  agar  tidak berkembang  dan  menjadi  berbahaya  bagi  tubuh. Pengaruh lingkungan dan kebiasaan buruk seperti radiasi ultraviolet, polusi, kebiasaan mengonsumsi ‘ junk food” dan  merokok,  dapat  membuat  sistem pertahanan  tubuh  tidak  mampu  menghadapi radikal  bebas  yang  berjumlah  besar  (Silalahi, 2006).
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang dapat  menetralkan  atau  meredam  radikal  bebas, serta  menghambat  terjadinya  oksidasi  pada  sel tubuh, sehingga dapat mencegah atau mengurangi terjadinya  kerusakan  sel.  Penggunaan  senyawa antioksidan berkembang dengan pesat, baik untuk makanan  maupun  pengobatan.Penggunaannya sebagai obat semakin meningkat dengan bertambahnyaa  pengetahuan  tentang  aktivitas radikal bebas terhadap beberapa penyakit degeneratif  seperti  penyakit  jantung,  diabetes, kanker,  inflamasi  jaringan,  kelainan  imunitas  dan penuaian dini (Ardiansyah, 2007).
Metode  uji  yang  sering  dipakai  dalam menguji aktivitas antioksidan yaitu metode DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) secara spektrofotometri.  Metode  DPPH  dipilih  karena sederhana,  mudah,  cepat,  dan  peka  serta  hanya memerlukan sedikit sampel (Zou et al , 2004).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Pengambilan sampel dilakukan di perairan Selat Lembeh, Kota Bitung. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Oktober 2018 –Juli 2020 di  Laboratorium  Farmakognosi,  Laboratorium Fitokimia,  dan  Laboratorium  Analisis  Farmasi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Bentuk penelitian ini merupakan penelitian yang menggunakan metode eksperimental  laboratorium  yang  akan  menguji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode  DPPH  ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil )  dari ekstrak spons Aplysina sp.

## Alat dan Bahan Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini  yaitu  masker,  snorkel,  fins,  tabung  oksigen, kamera,  gunting,  pisau,  wadah  botol  air,  cawan porselin, ziplok, sarung tangan, telenan, labu ukur 10 mL (pyrex), Erlenmeyer 200 mL, cawan petri, corong, pipet tetes, mikro pipet, timbangan digital (AE  ADAM),  spatula, aluminium  foil ,oven, vortek, spektrofotometer UV-Vis.
Bahan Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  Spons Aplysina sp.,  etanol 96%,  kertas  saring,  tissue,  aluminium  foil,  kertas label,  serbuk  Vitamin  C  p.a  dan  DPPH  ( 1,1- difenil-2-pikrilhidrazil ).

## Prosedur Penlitian Pengambilan Sampel
Sampel spons Aplysina sp. diperoleh dari perairan  selat  Lembeh,  Kota  Bitung.  Sempel diambil dengan menggunakan alat bantu (masker, snorkel,  fins,  tabung,  oksigen,  ziplok,  pisau), kemudian dimasukkan dalam ziplok dan diberikan lebel. Kantong sampel dimasukkan kedalam kotak pendingin  yang  berisi  es  batu  dan  tidak  terkena sinar matahari langsung. Lalu sampel dibawah ke Laboratorium Farmakognosi Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi.

## Preparasi Sampel
Sampel  yang  didapat  langsung  dicuci kembali  dan  dipotong  kecil  lalu  dimasukkan  ke dalam  wadah  botol  dengan  menggunakan  pelarut etanol 96% sebanyak 200 mL.

## Ekstraksi Sampel
Sampel  yang  diperoleh  sebanyak  430 gram  dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  96% sebany  ak  200  mL  dengan  3  kali  pengulangan selama  24  jam  dengan  sesekali  dikocok.  Hasil ekstraksi kemudian di saring menggunakan kertas saring  16  x  16  cm,  kemudian  diambil  filtratnya dan  residu  dibuang.  Filtrat  tersebut  dipekatkan dengan  menggunakan  oven  pemanas  untuk mendapatkan ekstrak kasar dari sampel.

## Pembuatan Larutan Stok
Sebanyak  100mg  ekstrak  etanol  spons Aplysina sp. dilarutkan dalam 100 mL etanol 96% (1000  ppm).  Dihitung  dengan  menggunakan rumus pengenceran, yaitu :
Selanjutnya  larutan  stok  dibuat  jadi beberapa  konsentrasi  yaitu  25,  50,  75,  dan  100 mg/L  dengan  menggunakan  mikropipet  dan ditambahkan  etanol  96%  hingga  mencapai  tanda batas  (10  mL),  kemudian  dipindahkan  ke  dalam tabung  reaksi  dan  ditutup  dengan  menggunakan aluminium  foil untuk  digunakan  pada  perlakuan selanjutnya.

## Pembuatan Larutan DPPH
Sebanyak  4  mg  DPPH  ditimbang  dan dilarutkan  dalam  etanol  96%  sebanyak  100  mL. Lalu  diukur  dalam  spektrofotometri  untuk mendapatkan  absorbansi  dan  panjang  gelombang maksimun  dari  larutan  DPPH.  Kemudian  larutan stok  DPPH  dipipet  menggunakan  mikropipet sebanyak  2  mL  dan  ditambahkan  pada  masing- masing  konsentrasi  yang  sudah  dibuat  dalam konsentrasi    sampel  spons Aplysina sp.  dan Vitamin  C  p.a  yaitu  25,  50,  75,  dan  100  mg/L. Lalu  campuran  larutan  tadi  divortex  selama  3 detik. Sampel dibuat sebanyak 3 kali pengulangan.

## Pembuatan Larutan Vitamin C (p.a)
Vitamin C p.a ditimbang sebanyak 10 mg. Kemudian, vitamin C p.a dilarutkan dalam etanol 96%  sebanyak  10  mL.  Selanjutnya  larutan  stok vitamin C p.a dibuat  dalam beberapa konsentrasi yaitu  25,  50,  75,  dan  100  mg/L  menggunakan mikropipet  dan  ditambahkan  etanol  96%  hingga mencapai  tanda  batas  (10  mL).  Kemudian dipindahkan  kedalam  tabung  reaksi  dan  ditutup menggunakan alumunium  foil untuk  digunakan
pada perlakuan selanjutnya.
Pengujian Larutan  Kontrol DPPH dan Aktivias Antioksidan dengan Metode DPPH
Larutan kontrol DPPH dan ekstrak etanol spons Aplysina sp.  yang  sudah  dibuat,  diuji  pada spetrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm. Sampel diinkubasi selama 30 menit  pada  suhu  37 0 C.  Untuk  mengetahui aktivitas  dari  penangkal  radikal  bebas  tersebut, diuji  pada  spektrofotometer.  Berubahnya  warna ungu  menjadi  warna  kuning  menunjukkan efisiensi  penangkal  radikal  bebas.  Kemudian diamati  perbandingannya  dengan  vitamin  C  p.a sebagai  standar.  Aktivitas  penangkapan  radikal bebas (persen inhibisi) dihitung sebagai persentase  berkurangnya  warna  DPPH  dengan menggunakan rumus :

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji aktivitas suatu tanaman maupun biota laut  sangat  penting  dilakukan  untuk  mengetahui apakah  dari  tanaman  atau  biota  laut  tersebut terbukti  memiliki  aktivitas  pengikatan  terhadap radikal bebas. Pada penelitian ini, biota laut yang digunakan  yaitu  Spons Aplysina sp.  Sebagai parameter pengujian antioksidan dilakukan dengan  menggunakan  metode  uji  DPPH  ( 1,1- difenil-2-pikrihidrazil ).
Metode  DPPH  merupakan  metode  yang sederhana,  mudah,  cepat  dan  peka  serta  hanya memerlukan  sedikit  sampel  untuk  evaluasi antioksidan.  Prinsip  dari  metode  ini  adalah interaksi  antioksidan  dengan  DPPH  baik  secara transfer  elektron  pada  DPPH  akan  menetralkan karakter  radikal  bebas  dari  DPPH,  jika  semua elektron  pada  radikal  bebas  DPPH  menjadi berpasangan  maka  warna  larutan  berubah  dari ungu  tua  menjadi  kuning  terang.  Karena karakteristik  dari  antioksidan  sendiri  adalah mudah  memberikan  elektron,  semakin  mudah memberikan  elektron  maka  sifat  antioksidannya semakin kuat. Perubahan warna ini mengakibatkan perubahan absorbansi pada panjang gelombang maksimum DPPH menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  yang menjadi patokan.
Penentuan panjang gelombang maksimum larutan  DPPH  dilakukan  dengan  mengukur
V 1 .M 1 = V 2 .M 2
% inhibisi = 1- 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒔𝒊 𝒔𝒂𝒎𝒑𝒆𝒍 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒔𝒊 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 x 100%
absorbansi  larutan  pada  panjang  gelombang  400- 600 nm. Hasil yang didapatkan pada penelitian ini adalah  517  nm  dan  memiliki  absorbansi  control 0,772.
Sebelum  melakukan  pengujian  larutan DPPH dilakukan pembuatan larutan stok. Larutan stok adalah larutan yang konsentrasinya dipekatkan  atau  ditinggikan  dari  konsentrasi media. Pada umumnya dinyatakan dalam kelipatan konsentrasi media yaitu 10x, 20x, 100x, bahkan  1000x  konsentrasi media.  Pada  penelitian ini  dilakukan  pengujian  dengan  pengulangan konsentrasi 25, 50, 75, dan 100 mg/L. Tujuan dari pembuatan  larutan  stok  sendiri  adalah  untuk menghindari  penimbangan  yang  berulang-ulang setiap  kali  membuat  media.  Kondisi  simpan  juga perlu diperhatikan, larutan yang sudah mengalami pengendapan tidak dapat digunakan lagi.Pengendapan  biasanya  terjadi  bila  kepekatan larutan terlalu tinggi. Oleh karena itu pengendapan  larutan  dapat  dihindari  dengan membuat  larutan  yang  tidak  terlalu  pekat  atau tidak menggunakan bahan campuran yaitu dengan membuat satu larutan stok hanya untuk satu jenis bahan.
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dalam penelitian  ini  menggunakan  perbandingan  1  :  1 yang  artinya  2  mL  larutan  DPPH  dicampurkan dengan 2 mL larutan sampel (ekstrak etanol spons Aplysina sp. atau vitamin C) pada tiap konsentrasi
yang berbeda-beda. Campuran DPPH dan ekstrak dibantu  dengan  perlakuan vortex selama  3  detik. Berkurangnya  intensitas  warna  larutan  DPPH tersebut  dapat  menunjukkan  bahwa  terjadi  reaksi antara atom hidrogen yang dilepas oleh bahan uji dengan  molekul  radikal  DPPH  sehingga  terjadi perubahan warna dari ungu menjadi kuning.
Setelah  campuran  dihomogenkan  lalu diinkubasi dengan ditutup alumunium foil dengan suhu  37 0 C  selama  30  menit.  Hal  ini  dilakukan untuk menghindari kontaminasi dan mengoptimalkan  aktivitas  DPPH  agar  terjadi reaksi  antara  DPPH  dengan  sampel  uji.Setelah diinkubasi,  masing-masing  ekstrak  dilakukan pengukuran  absorbansi  dengan  menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang serapan  maksimum  DPPH  517  nm.  Tiap konsentrasi  dilakukan  pengulangan  sebanyak  3 kali pengulangan.
Pembanding  yang  digunakan  sebagai kontrol  postif  adalah  vitamin  C  p.a  karena berfungsi  sebagai  antioksidan  sekunder  yaitu menangkap  radikal  bebas,  mencegah  terjadinya reaksi  berantai,  aktivitas  antioksidannya  sangat tinggi, mudah diperoleh dan vitamin C lebih polar dari vitamin yang lain.
Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas dari penangkal radikal bebas, di uji pada spektrofotometer.  Hasil  pengujian  disajikan  pada tabel dibawah ini:
Tabel 1. Hasil Pengukuran Absorbansi Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Apysina Sp. Dipesisir Pantai Lembeh, Kota Bitung.
Konsentrasi Pengulangan I Ekstrak Vit. C Pengulangan II Ekstrak Vit. C Pengulangan III Ekstrak Vit. C 25 mg/L 0.616 0,004 0,616 0,043 0,613 0,044 50 mg/L 0,599 0,051 0,607 0,046 0,612 0,046 75 mg/L 0,586 0,045 0,599 0,048 0,590 0,045 100 mg/L 0,579 0,044 0,588 0,044 0,575 0,046
Tabel 2. Hasil Perbandingan Pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Apysina Sp. Dipesisir Pantai Lembeh, Kota Bitung.
Konsentrasi Penulangan I Ekstrak Vit. C Pengulangan II Ekstrak Vit. C Pengulangan III Ekstrak Vit. C Rata-rata ± SD 25 mg/L 20,30 % 93,90 % 20,30 % 94 % 20,60 % 93,90 % 20,40 % 93,90 % 50 mg/L 22,50 % 92,90 % 21,10 % 93,60 % 20,80 % 93,60 % 21,46 % 93,90 % 75 mg/L 24,10 % 93,80 % 22,50 % 93,30 % 23,60 % 93,80 % 23,40 % 93,60 % 100 mg/L 25 % 93,90 % 23,90 % 93,90 % 25,60 % 93,60 % 24,83 % 93,80 %
Pada  hasil  pengukuran  tadi  diperoleh absorbansi  yang  digunakan  untuk  menghitung persen  inhibisinya  atau  persen  perendaman senyawa  antioksidan ekstrak etanol spons Aplysina sp.  dan  vitamin  C  p.a  sebagai pembanding  terhadap  DPPH.  Data  dari  hasil persen  inhibisi  ekstrak  etanol  spons Aplysina sp. dan  vitamin  C  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Hasil menunjukkan bahwa spons Aplysina sp. memiliki aktivitas  antioksidan  dengan  rata-rata  20,40% pada  konsentrasi  25  mg/L,  21,46%  pada konsentrasi 50 mg/L, 23,40% pada konsentrasi 75 mg/L, dan 24,83% pada konsentrasi 100 mg/L.
Manumpil (2019) mengungkapkan bahwa hasil  pengujian  perbandingan  ekstrak  spons Apysina sp.  dan  vitamin  C  menunjukkan  bahwa aktivitas antioksidan ekstrak etanol spons Apysina sp.  lebih  rendah  dibandingkan  vitamin  C,  dengan rata-rata  43,66%  pada  konsentrasi  25  mg/L, 44,23%  pada  konsentrasi  50  mg/L,  45,36%  pada konsentrasi 75 mg/L, dan 46,13% pada konsentrasi  100  mg/L.  Rendahnya  aktivitas antioksidan  ini  kemungkinan  disebabkan  oleh berbagai  faktor,  diantaranya  karena  metode ekstraksi  yang  digunakan  kemungkinan  tidak cukup  menarik  komponen  kimia  yang  bersifat antioksidan  dalam  spons Aplysina sp.  selain  itu karena  vitamin  C  merupakan  senyawa  murni sedangkan ekstrak etanol spons Apysina sp. masih merupakan  senyawa  campuran  dan  belum diketahui  kandungan  senyawanya  yang  bersifat antioksidan,  dimana  adanya  senyawa  yang  tidak bersifat antioksidan kemungkinan bisa mempengaruhi  aktivitas  antioksidan  ekstrak etanol  spons Apysina sp.  itu  sendiri.  Perbedaan kandungan  antioksidan  dengan  jurnal  tersebut diduga  karena  jumlah  individu  pada  setiap kedalaman  dan  kondisi  fisik  kimia  pada  perairan diantaranya kecepatan arus, suhu, dan kecerahan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol spons Aplysina sp. yang diambil dari Perairan Selat Lembeh, Kota Bitung  memiliki  aktivitas  antioksidan.  Aktivitas tertinggi  terlihat  pada  konsentrasi  100  mg/L dengan nilai presentase 24,83%.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk mengetahui senyawa aktif yang terkandung dalam  spons Aplysina sp.  dan  pengujian  aktivitas antioksidan dengan metode lain dan membandingkan hasilnya dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul.,  M.  2003.  Peranan  radikal  bebas  dan antioksidan dalam kesehatan dan penyakit. Http://www.intisari.com/radika l.html. Diakses 28 November 2019
Manumpil,  A.  2019.  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Etanol  Spons  Aplysina  sp.  Dari Perairan  Selat  Lembeh  Kota  Bitung. [Skripsi]. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam UNSRAT, Manado.
Ardiansyah.  2007.  Antioksidan  dan  Peranannya
Bagi Kesehatan. Http: //www. Beritaiptek.com .  Diakses  07  Januari 2020.
Muniarsih,  T,  dan  Rachmaniar,  R.  1999.  Isolasi Substansi  Bioaktif  Antimikroba  dari Spons  Asal  Pulau  Pari  Kepulauan Seribu.  Prosiding  Seminar  Bioteknologi Kelautan  Indonesia  I  ’98.  Jakarta  14  – 15  Oktober  1998: Lembaga  Ilmu Pengetahuan Indonesia, Jakarta.
Silalahi, J.  2006. Makanan  Fungsional. Kanisius, Jogjakarta.
Simon  I.  Patty,  2015.  Karakteristik  Fosfat,  Nitrat dan  Oksigen  Terlarut  diperairan  Selat Lembeh,  Sulawesi  Utara. Jurnal  Pesisir dan Laut Tropis, 5 : 1-2.
Zou,  Y.,  Lu,  Y.  dan  Wei,  D.  2004. Antioxidant activity  of  Flavonoid-rich  extract  of Hypericum  perforatum, L in  vitro. Journal  of    Agriculture  and  Food Chemistry, 52 :5032-50.