Hasil Penelitian                                                 Jurnal. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XIX  No. 1 Th. 2008

## AKTIVITAS ANTIBAKTERI  EKSTRAK SIRIH  HIJAU ( Piper betle L) TERHADAP BAKTERI  PATOGEN  PANGAN
[Antibacterial  Activity of Green Sirih ( Piper betle L) Extract  towards Food Pathogens ]
Suliantari 1) , B. S.L. Jenie 2) , M. T. Suhartono 2) dan A. Apriyantono 2)
1) Mahasiswa  Pasca Sarjana, IPB – Bogor
2) Staf Pengajar Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fateta – IPB.  Bogor
Diterima  7 Februari  2007 / Disetujui  13 Juni  2008

## ABSTRACT
Green sirih (Piper betle L ) extract were prepared using water, ethanol and ethyl acetate extraction of the dried  materials. The extracts  were  tested  for  their  antibacterial  activities  against  Escherichia  coli,  Salmonella  Typhimurium,  Pseudomonas  aeruginosa, Staphylococcus  aureus,  Bacillus  cereus  and  Listeria  monocytogenes.  At  concentrations  10-50%  the  extracts  effectively  inhibited  the growth of all tested bacteria as shown by the clear zones which varied  from 7 to 24 mm, while the minimum inhibitory concentration (MIC) varied from 0.1 to 1 %.  E. coli, S. Typhimurium and S. aureus were more resistance to the green sirih extracts than other tested bacteria. The results showed that in general, ethanol extraction produced the best extract with strong antibacterial activities against E. coli and S. aureus. Analysis of the  extract components  with GC-MS  revealed that  sirih extract contained phenol, chavicol, eugenol, caryophylene, cylene, chalarene and others.
Key words :  Green Sirih (Piper betle L), bioactive compound, antibacterial.

## PENDAHULUAN
Dengan  pertimbangan  kesehatan,  konsumen cenderung  menghendaki  penggunaan  bahan-bahan alami  makanan  seperti  penggunaan  bahan  pengawet, pewarna, flavor dan aditif lainnya   maupun pengobatan. Penelitian pemanfaatan bahan-bahan alami dari tumbuh- tumbuhan  sebagai  bahan  antimikroba  telah  banyak dilakukan  diantaranya  penelitian  daun  dan  biji  lada (Suteja dan Agustina, 1994); ekstrak dan fraksi rimpang lengkuas ( Rahaju, 1999); kecombrang ( Naufalin et al., 2005); andaliman  ( Parhusip et al., 2005)); sirih (Jenie et al.,  2001;  Sugiastuti,  2002)  dan  daun  beluntas (Ardiansyah, 2003).
Salah  satu  tanaman  herbal  yaitu  sirih  ( Piper betle L) telah lama diketahui dan digunakan secara turun temurun  untuk  pengobatan  obat  batuk,  sakit  gigi, penyegar  dan  sebagainya.  Bagian-bagian  dari  tanaman sirih  seperti  akar,  biji  dan  daun  berpotensi  untuk pengobatan tetapi yang paling sering dimanfaatkan untuk pengobatan adalah bagian daunnya.
Menurut  Heyne  (1987),  tanaman  sirih  ada beberapa jenis, diantaranya adalah sirih Jawa atau sirih hijau  berdaun    hijau  tua,  rasanya  tajam  dan  banyak ditanam  di  Jawa  Tengah  dan  Jawa  Timur;  sirih  banda; sirih cengke: sirih kuning  dan sirih hitam.
Pemanfaatan  sirih  dalam  pengobatan tradisional  ini  disebabkan  adanya  sejumlah  zat  kimia atau  bahan  alami  yang  mempunyai  aktivitas  sebagai senyawa antimikroba. Komponen aktif dari sirih terdapat dalam minyak atsiri dan  kandungannya dipengaruhi oleh
umur  dan  jenis  daun.    Menurut  Jenn  dan  Chou  (1997), dalam  daun  sirih  terdapat  eugenol  dan  hidroksikavikol yang  mempunyai  aktivitas  antimikroba  sedangkan menurut  Duke  (2002),  dalam  daun  sirih  ditemukan adanya  bahan  kimia  yang  mempunyai  aktivitas antibakteri  yaitu:  kavikol,  kavibetol,  tanin,  eugenol, karvakrol,  kariofilen  dan  asam  askorbat.  Selain hidroksikavikol,  ekstrak  daun  sirih  mengandung  dan asam-  asam  lemak  seperti  asam  stearat  dan  palmitat yang  mempunyai  aktivitas  antimikroba  terhadap  bakteri S. mutans . Pada penelitian-penelitian tersebut digunakan daun  sirih  secara  umum  tanpa  disebutkan  spesifikasi jenis  daunnya.    Sementara  itu  penelitian  Sukarminah (1997)  menunjukkan  adanya  indikasi  bahwa  jenis  daun mempengaruhi tingkat aktivitas antimikroba.  Sirih hitam diketahui  memiliki  aktivitas  antimikroba  paling  kuat, kemudian  diikuti  oleh  sirih  hijau,  sirih  kuning  dan  sirih merah.
Selain  jenis  daun,  beberapa  penelitian menunjukkan  bahwa  penggunaan  jenis  pelarut  yang berbeda  untuk  mengekstrak  komponen  aktif  dari  sirih dapat  memberikan  hasil  aktivitas  antimikroba  yang berbeda pula. Chou dan Yu (1984) menggunakan pelarut kloroform, etanol dan air baik secara sendiri-sendiri atau campuran    untuk  menguji  pengaruh  ekstrak  daun  sirih terhadap  pertumbuhan  dan  produksi  aflatoksin A. parasiticus dan  ternyata  ekstrak  kloroform  dan  etanol mempunyai  aktivtas  antimikotik  yang  lebih  baik. Sukarminah (1997) menggunakan cara destilasi uap dan pelarut    etanol  untuk  memperoleh  komponen  aktif  dari daun sirih baik yang volatil, non volatil maupun campuran
keduanya. Sugiastuti (2002) menggunakan pelarut etanol untuk memperoleh minyak atsiri daun sirih kuning. Shitut et  al.,  (1999),  ekstrak  sirih  menggunakan  pelarut  etil setat  dan  etanol  mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri V . cholerae  Ogawa,  S.  aureus, Diplococcus pneumoniae dan Klebsiella aerogenes yang lebih kuat dari pada ekstrak sirih dengan   pelarut benzen dan heksan .
Tujuan  dari  penelitian  adalah  untuk mempelajari  jenis  pelarut  ekstraksi  yang  dapat menghasilkan  ekstrak  sirih  hijau  dengan  aktivitas antibakteri  yang  kuat,  terhadap  enam  jenis  bakteri patogen pangan. Pada penelitian ini digunakan sirih hijau karena  selain  banyak  dan  lebih  mudah  diperoleh dibandingkan  sirih  hitam.    Selain  itu  penelitian  ini  juga bertujuan  untuk    menetapkan  nilai  MIC  ( minimum inhibitory  concentration )  ekstrak  sirih    hijau  dan mengidentifikasi  komponen penyusun ekstrak sirih hijau.

## METODOLOGI

## Bahan dan kultur bakteri
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  daun  sirih  hijau  yang  diperoleh  dari  Yogyakarta. Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah Bacilus  cereus (FNCC  057), Staphylococcus  aureus, (FNCC  047) Listeria  monocytogenes (FNCC  0156 ),  Pseudomonas aeruginosa (FNCC  063)  dan Salmonella Typhimurium (FNCC 0734) yang diperoleh dari Pusat Antar Universitas Pangan  dan  Gizi  UGM; Escherichia  coli (ATCC) yang diperoleh dari  Laboratorium Mikrobiologi Seafast ( South East  Asia  Food  and  Agricultural  Science  and Technology) Center IPB.

## Metode

## Persiapan daun sirih kering
Daun sirih hijau disortasi, dipisahkan daun dan tangkainya kemudian  dicuci bersih dengan air kemudian dikeringkan  dengan  pengering  vakum  pada  suhu  50 0 C selama  12  jam  sampai  diperoleh  kadar  air  10  %.  Daun sirih  yang  telah  kering  tersebut  selanjutnya  dihaluskan sampai diperoleh bubuk halus dan siap diekstrak dengan air ataupun  pelarut organik.

## Ekstraksi sirih
Bubuk  sirih  diekstraksi    menggunakan  tiga jenis  pelarut  yaitu  masing-masing  dengan    air,    etanol dan etil asetat (1: 4) dengan cara dihomogenisasi dalam shaker    selama  24  jam    dengan  kecepatan  rotasi  150 rpm.  Filtrat-filtrat  tersebut  kemudian  diuapkan  dalam rotavapor  pada  suhu  50 0 C  dan    filtrat  (etanol    dan  etil asetat)  kemudian  dihilangkan  sisa  pelarutnya    dengan gas  nitrogen.  Ekstrak-ekstrak    tersebut  kemudian  diuji kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan E. coli dan S.  aureus dengan  metode  difusi  sumur.  Ekstrak
yang  menunjukkan  aktivitas  penghambatan  terkuat akan dipilih untuk penelitian selanjutnya.

## Pengujian aktivitas antibakteri (Yin dan Cheng 1997)
Kemampuan  aktivitas  antibakteri  diuji  lebih lanjut  terhadap enam jenis bakteri meliputi Gram positif dan Gram negatif seperti Bacillus cereus, Staphylococcus  aureus,  Listeria  monocytogenes, Escherichia  coli,  Salmonella Typhimurium dan Pseudomonas aeruginosa. Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan  dengan  menggunakan  metode  difusi  sumur (modifikasi  Yin  dan  Cheng  1997)  dengan  mengukur diameter  penghambatan  dari  ekstrak  tersebut  terhadap masing-masing  bakteri    uji.  Media  nutrien  agar  (25  ml) yang  mengandung  bakteri  uji    sebanyak  10 7 CFU/ml dituangkan  ke  dalam  cawan  petri  steril  dan  dibiarkan membeku.  Setelah  membeku,    kemudian  pada  media tersebut  dibuat  lubang-lubang  atau  sumur  dengan diameter 6 mm.  Ke dalam lubang tersebut dimasukkan 60µl  ekstrak  dengan  berbagai  konsentrasi  (10-50  % (v/v)). Selanjutnya cawan diinkubasi dalam inkubator dan suhu  37 0 C  selama  24  –  48  jam  kecuali  untuk L. monocytogenes inkubasi dilakukan pada  suhu kamar.

## Penentuan MIC
Penentuan  MIC  dilakukan  dengan  modifikasi metode  Kubo  (1995).  Ekstrak    sirih  hijau  dengan beberapa    konsentrasi    dikontakkan  dengan    ke  enam bakteri  uji  selama  24  jam  dalam  inkubator  bergoyang (150 rpm) dan dihitung jumlah mikrobanya pada berbagai pengenceran.  Konsentrasi  ekstrak  sirih  hijau  yang digunakan    dalam  penelitian  ini  bervariasi  mulai    dari 0.01 % (v/v) sampai 2.5 % (v/V).

## Identifikasi  komponen  ekstrak  secara  kualitatif (Harbone, 1996)
Identifikasi  dilakukan    terhadap  ekstrak  sirih hijau  terpilih  yang  mempunyai  aktivitas  penghambatan kuat.  Pengujian  dilakukan  secara  kualitatif  untuk mengetahui  golongan  komponen  yang  terdapat  dalam ekstrak  sirih  hijau.  Selain  itu  terhadap  ekstrak  terpilih juga  dilakukan  identifikasi  komponen  penyusun  dengan GC-MS (Gas Chromatography Mass Spectrophotometry)

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengaruh  jenis pelarut ekstrak sirih hijau
Pemilihan  jenis  pelarut  dengan  menggunakan metode  difusi  sumur  terhadap  bakteri  uji E.  coli dan S. aureus menunjukkan  bahwa    ekstrak  sirih  hijau  yang diperoleh  dengan  ketiga  jenis  pelarut    yaitu  air,  etanol dan  etil  asetat  secara  umum  mempunyai  kemampuan menghambat bakteri uji yang beragam ( 10-24 mm) dan berpengaruh nyata pada selang kepercayaan 95 %. Dari ketiga jenis pelarut yang digunakan, ekstrak dengan  air mempunyai  kemampuan  menghambat  bakteri  uji terendah  disusul kemudian pelarut etil asetat dan etanol.
Hasil Penelitian                                                   Jurnal. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XIX No. 1 Th. 2008
Ekstrak  air  mempunyai  kemampuan  penghambatan terhadap E. coli dengan diameter penghambatan 10 mm dan 11.5 mm untuk S. aureus . Ekstrak etil asetat mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  diameter penghambatan  yang  lebih  tinggi  dari  pada  ekstrak  air yaitu  12.7 mm untuk E. coli dan 16 mm untuk S. aureus . Dari hasil penelitian ini (Gambar 1), S. aureus lebih peka terhadap ekstrak etanol bila dibandingkan dengan E. coli . Ekstrak  etanol  sirih  hijau  mempunyai  kemampuan menghambat tertinggi terhadap S. aureus (24 mm) dan terhadap E.  coli (14  mm). Hasil  penelitian  ini  sesuai dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Sukarminah (1997),  dimana S.  aureus lebih  dihambat  dari  pada bakteri  uji  yang  lainnya  seperti P.  aeruginosa,  S. Typhimurium, E. coli dan L. monocytogenes . Dengan  analisis  statistik  lebih  lanjut  (uji Duncan), pelarut etanol berbeda nyata terhadap air dan pelarut  etil  asetat  (p  ≤  0.05).      Hasil  ini  sesuai  dengan penelitian dari Chou dan Yu (1985) dimana pelarut etanol memberikan  aktivitas  antimikotik  ekstrak  sirih  yang  baik dan  pelarut  air  mempunyai  aktivitas  yang  lebih  rendah terhadap beberapa jenis bakteri (Yang dan Chou, 1997). Dari  hasil  uji  statistik  penelitian  pada  tahap  ini,    pelarut etanol  memberikan  perbedaan  yang  nyata  bila dibandingkan  dengan    pelarut  air  dan  etil  asetat,  maka untuk  penelitian  selanjutnya  dipilih  ekstrak  etanol  untuk diteliti lebih lanjut.

## Pengujian aktivitas antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap  enam jenis    bakteri  uji  dilakukan  terhadap  ekstrak  sirih  hijau terpilih dengan daya hambat terkuat yaitu ekstrak etanol
dengan  berbagai  konsentrasi.  Pada  Gambar  2  terlihat bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  sirih  hijau maka  aktivitas  penghambatannya  semakin  kuat. Ekstrak  sirih  hijau  efektif  menghambat  bakteri  Gram positif dan Gram negatif dengan diameter penghambatan bervariasi antara  7 mm sampai  24  mm (Gambar 2).
Secara  umum,  bakteri    yang  paling  efektif dihambat  dari  bakteri  Gram  negatif  adalah S . Typhimurium dengan  diameter  penghambatan    20  –  24 mm  dan  yang  paling  tahan  adalah  bakteri E.  coli yaitu dengan  diameter  penghambatan  bervariasi  antara  7  – 12.3  mm.    Terhadap    bakteri  uji  yang  lainnya,  ekstrak etanol  sirih  hijau  berturut-turut  mampu  menghambat bakteri P.  aeruginosa dengan  diameter  penghambatan antara 14.6 – 19.7 mm ; S. aureus ( 11 mm - 17.5 mm);
L. monocytogenes (10 sampai 17.6 mm) dan B. cereus bervariasi  antara  9.7  sampai  15.4  mm.    Penelitian  dari Naufalin  et  al.,  (2005),    menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  kecombrang  mampu  menghambat    pertumbuhan bakteri L.  monocytogenes , B. cereus,  E.  coli,  S . Typhimurium  dan P.  aeruginosa dengan  diameter penghambatan berkisar antara 11- 15.4 mm. Menurut      Elgayar  et  al.,  (2000)    ekstrak tumbuh-tumbuhan  dapat  dikelompokkan  berdasarkan diameter  penghambatan  yang  dihasilkan  menjadi  tiga kategori yaitu tinggi ( > 11 mm), sedang ( > 6 - < 11 mm ) dan rendah  (< 6 mm).  Dari hasil yang diperoleh maka ekstrak  sirih  hijau  dapat  digolongkan  ke  dalam  bahan yang  mempunyai  kemampuan  menghambat  sedang sampai  tinggi  tergantung  dari  konsentrasi  yang digunakan.
0 5 10 15 20 25 30 air etanol etil asetat Jenis pelarut D ia me te r p e n g h a mb a ta n (mm) :
Gambar 1.  Pengaruh jenis pelarut terhadap aktivitas penghambatan pertumbuhan bakteri E . coli dan S. aureus .
E. coli S. aureus
0 5 10 15 20 25 E. co li S. au reu s S. Ty ph im uri um L. mo no cy tog en es B. ce reu s P. ae rug ino sa Jenis bakteri D ia m e te r p e n g h a m b a ta n ( m m )
Gambar 2.  Pengaruh konsentrasi ekstrak sirih hijau terhadap aktivitas penghambatan bakteri uji
Dari  Gambar  2  terlihat,  konsentrasi  ekstrak sirih  hijau  dengan  kemampuan  menghambat  tinggi adalah pada konsentrasi 40 % sehingga dalam penelitian selanjutnya  digunakan  konsentrasi  ekstrak  sirih  40  %. Kemampuan  menghambat  dari  ekstrak  etanol  pada konsentrasi  40  %    memberikan  pengaruh  yang  nyata pada semua bakteri uji  (p≤0.05).  Hasil analisis statistik lebih  lanjut  (uji    Duncan)  diketahui  bahwa  aktivitas antibakteri ekstrak terhadap B. cereus , L. Monocytogenes dan S.  aureus tidak  berbeda  nyata. Aktivitas  antibakteri  ekstrak  terhadap S.  Typhimurium adalah  tertinggi  dan  berbeda  nyata  terhadap  bakteri  uji lainnya  (p≤0.05).

## Konsentrasi minimum penghambatan (MIC)
Konsentrasi  minimum  penghambatan    (MIC) dari ekstrak sirih hijau  terhadap  ke enam jenis bakteri uji  yang  digunakan  bervariasi  antara  0.1  sampai  1  % seperti  terlihat  pada  Gambar  3.    Dari  hasil  penelitian yang diperoleh ternyata untuk menghambat pertumbuhan  bakteri  uji  Gram  positif  dan  gram  negatif dibutuhkan  ekstrak  etanol  daun  sirih  hijau  dengan konsentrasi  minimum  penghambatan  (MIC)  bervariasi.
Dari  Gambar  3    terlihat  bahwa  bakteri    Gram positif  yang paling  tahan  adalah S. aureus dengan nilai MIC  konsentrasi  penghambatan    0.5  %;    dari  bakteri Gram negatif adalah S. Typhimurium dengan konsentrasi untuk  penghambatan    adalah  minimum  0.7  %    dan E. coli . 1 %. Pertumbuhan dari bakteri uji yang lainnya  yaitu B.  cereus dan L.  monocytogenes dapat  dihambat pertumbuhannya pada konsentrasi minimum  pengham- batan yang sama yaitu pada konsentrasi 0.1  %  sedang bakteri P.  aeruginosa dapat  dihambat  pada  dosis  MIC 0.09
Menurut  Sukarminah  (1997),  ekstrak    sirih yang  diperoleh  dengan  menggunakan    pelarut  etanol mempunyai  efek  bakterisidal  terhadap  bakteri P. aeruginosa,  S.  aureus dan S . Typhimurium pada konsentrasi 0.025 %  sampai  0.1 %  (v/v).  Sedangkan penelitian  dari  Sugiastuti  (2002),  ekstrak  etanol  sirih kuning mempunyai konsentrasi minimum penghambatan (MIC)  2  mg/ml  (b/v)    terhadap E.  coli , S . Typhimurium dan P.  aeruginosa dan  3  mg/ml  terhadap  bakteri S. aureus.
Konsentrasi 10 % Konsentrasi 20 % Konsentrasi 30 % Konsentrasi 40 % Konsentrasi 50 %
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 E. co li S. T yphi m uri um S. a ure u s
B. ce reus L. m o noc ytog ene s P. a eru g inos a Jenis  bakteri MI C (% )
Gambar  3.  Konsentrasi minimum penghambatan (MIC) ekstrak sirih hijau terhadap bakteri uji
Hasil  yang diperoleh dari penelitian ini sesuai dengan hasil penelitian  yang dilakukan oleh Dorman dan Dean  (2000)  dan    Nalina  dan  Rahim  (2007).  Dari penelitian  yang  dilakukan  Dorman  dan  Dean  (2000), diperoleh  hasil  bahwa  minyak  atsiri O.  vulgare  ssp hirtum , P . nigrum,  S.  aromaticum dan M.  fragrans ternyata memberikan efek penghambatan  yang  sama antara  bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif.  Dari beberapa  ekstrak  misalnya  minyak  atsiri  dari  pala ( Myristica  fragrans )  tidak  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram  negatif Enterobacter aerogenes dan Pseudomonas  aeruginosa .    Penelitian dari Nalina dan Rahim (2007) menunjukkan hasil bahwa ekstrak  sirih  efektif  menghambat  pertumbuhan  bakteri gram positif Streptococcus mutans .

## Identifikasi komponen ekstrak
Secara kualitatif ekstrak etanol sirih hijau positif mengandung  komponen  aktif  seperti    alkaloid,    tanin, fenolik dan steroid ( Tabel 1).  Dari hasil analisis secara kualitatif  (Tabel  1),  didalam  ekstrak  sirih  hijau  terdapat komponen  yang  positif  kuat  yaitu  fenolik  dan    senyawa ini  diduga  berperan  sebagai  senyawa  antimikroba. Menurut  Harapini  et  al.,  (1996)  senyawa  yang terkandung  dalam  ekstrak  sirih  yang  diduga  berperan sebagai  antimikroba    adalah  senyawa  fenolik.    Selain fenolik,  dari  ekstrak  sirih  senyawa-senyawa    yang  lain seperti  alkaloid,  tanin  dan  steroid  juga  dapat  berfungsi sebagai bahan antibakteri ( Cowan, 1999).
Hasil analisis ekstrak etanol sirih hijau dengan GC-MS  menunjukkan    bahwa      di  dalam  ekstrak    sirih hijau  terdapat  kavikol,  eugenol,  karyofilen  (α  &  ß),    2  – metoksi-4- (1-propenil) fenol,  α – Kopaen, silen (α & ß – silen)  dan  kaleren.  Komponen  yang  terdapat  dalam ekstrak  sirih  hijau    umumnya  adalah  termasuk  dalam komponen fenolik dan hasil ini ada beberapa komponen
yang    sesuai  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Harapini  et  al.,  (1996).  Dengan  cara  destilasi  terhadap daun sirih hijau Harapini et al., (1996) memperoleh hasil bahwa  dalam  ekstrak  sirih  hijau      tersebut    ditemukan adanya  komponen-komponen  seperti  ß  linalool,  α- alilfenol,    2-metoksi  -4-(1-propenil)  fenol,  metil  eugenol, isokaryofilen, α-karyofilen, kopana, bisiklo-7,2, ο -undek- 4-en-4-11-11-trimetil-8-metil-en, elemen dan α -farnesen. Dari penelitian Nalina dan Rahim (2007) diketahui bahwa ekstrak  sirih  mengandung  hidroksikavibetol  yang mempunyai aktivitas menghambat pertumbuhan bakteri. Selain itu ditemukan juga adanya   asam seperti  asam stearat,  palmitat  yang  juga  dapat  menghambat pertumbuhan  mikroba.  Dalam  daun  sirih  terdapat komponen aktif  hidroksikavikol spektrum penghambatan yang  luas  terhadap  bakteri  patogen  seperti Raistonia, Xanthomonas dan Erwinia (FFTC,  2003).  Suriyaphan (2003),  dengan  cara  destilasi  dengan  menggunakan pelarut kloroform didalam ekstrak sirih ditemukan adanya kavibetol dan linalol.
Tabel 1.  Hasil analisis komponen aktif  ekstrak etanol sirih
Komponen Hasil Alkaloid ++ Tanin ++ Flavonoid - Fenolik +++ Triterpenoid - Steroid +
Keterangan :  - : negatif                   + : positif  lemah + + : positif           +++ : positif kuat
Fenol    adalah  substansi  yang    mempunyai cincin  aromatik    dengan  satu  atau  lebih  gugus  hidroksil dan  dapat dibedakan dalam fenol sederhana   dan asam
fenol.Yang  termasuk  dalam  golongan  fenol    dan mempunyai  kemampuan  sebagai  bahan  antimikroba diantaranya  adalah  katekol,  pirogalol,  quinon,  eugenol, flavon dan flavonoid, tanin, kumarin dan lainnya.  Fenol dapat  berperan  sebagai  racun    bagi  mikroba  yaitu dengan  menghambat  aktivitas enzim, berikatan dengan gugus  sulfhidril  dan  protein.    Flavonoid  dapat  berfungsi sebagai bahan antimikroba  dengan   membentuk  ikatan komplek    dengan  dinding  sel  dan  merusak  membran. Flavonoid  dari  daun Pelargonium  radula mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  aureus ATCC 6538 P, E. coli 923 MFBF dan Bacillus sp  ( Pepeljnjak et al., 2005).
Tanin      adalah  polimer  fenolik  yang  biasanya digunakan  sebagai  bahan  penyegar,    mempunyai  sifat antimikroba dan bersifat racun  terhadap khamir, bakteri dan  kapang.    Kemampuan  tanin  sebagai  bahan antimikroba  diduga karena tanin akan  berikatan dengan dinding  sel    bakteri  sehingga  akan  menginaktifkan kemampuan menempel bakteri, menghambat pertumbuhan,  aktivitas  enzim  protease  dan  dapat membentuk ikatan komplek dengan polisakarida (Cowan, 1999).  Alkaloid  mempunyai  pengaruh  sebagai  bahan antimikroba  terhadap Entamoeba sp  (penyebab  diare) dan  mekanisme  penghambatannya  adalah  dengan mengkelat DNA.

## KESIMPULAN
Beberapa  simpulan  yang  dapat  diambil  dari hasil  penelitian  adalah  bahwa  ekstrak  etanol  sirih  hijau mempunyai  aktivitas  sebagai  bahan  antibakteri    terbaik dibandingkan  ekstrak  air  dan  etil  asetat  baik  terhadap bakteri  Gram  positif  maupun  bakteri  Gram  negatif dengan  konsentrasi  minimum  penghambatan  (MIC) bervariasi  antara  0.1  sampai  1  %.    Bakteri  yang  paling peka terhadap ekstrak etanol sirih  berturut-turut adalah P.  aeruginosa, B.  cereus dan L.  monocytogenes  dan sedangkan  bakteri  yang  paling  tahan    berturut-turut adalah E.  coli, S .  Typhimurium  dan .  S.  aureus. Dalam ekstrak sirih hijau  dengan menggunakan GC MS ditemukan beberapa komponen yang diduga mempunyai aktivitas  sebagai  bahan  antimikroba  yaitu    kavikol, eugenol,  karyofilen  (α  &  ß),    2  –metoksi-4-  (1-propenil) fenol,  α – Kopaen, silen (α & ß – silen) dan kaleren.

## DAFTAR PUSTAKA
Ardiansyah.  2003 .  Kajian Aktivitas Antimikroba Ekstrak Daun  Beluntas  ( Plucea  indica L.).  Tesis  Program Pasca Sarjana IPB. Bogor
Chia    M.L.,  J.  K.  Preston  dan  C.  I.  Wei.    2000. Antibacterial Mechanism of Allyl Isothiocyanate.  J. of Food Protection 63 (6): 727 – 734.
Chou  C.C  dan  Yu  R.C.    1985. Effect  of Piper  betle L and  Its  Extracts  on  The  Growth  And  Aflatoxin
Production by Aspergillus parasiticus .  Proc. Natl Sci Coune  Repub  China  B.    1984  Jan;  8  (1):  30-35. http//w.w.w.  ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd- retieve&dbList_uids-6531413&dopt-Abstract.
Cowan  M.M.    1999. Plant  Product  as  Antimicrobial Agents.  J, Microbiology Reviews. 12 (4) : 564-582.
Duke’s.    2002. Phytochemical  and  Ethnobotanical Database.    http//www.dr.duke’s.phytochemical  and ethnobotanicaldatabase.com. 21/8/2002.
Elgayyar M.; F. A. Draughon , D. A. Golden dan J. R. Mount.  2000. Antimicrobial Activity of Essential Oils from  Plants  against  Selected  Pathogenic  and Saprophytic  Microorganisms.    J.  of  Food  Protection 64 (2): 1019-1024.
Harapini  M;    A.    Agusta    dan    R.  D.  Rahayu  (1996). Analisis  Komponen  Kimia  Minyak  Atsiri  Dari  Dua Macam  Sirih  (Daun  Kuning  dan  Hijau).    Prosiding Simposium  Nasional  I  Tumbuhan  Obat  dan Aromatika.  Bogor 10-12 Oktober 1995.
Harbone J.B.  1996. Metode Fitokimia.  Penuntun Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan.    Penerjemah Padmawinata K dan  Sudiro I.  ITB Bandung.
Jenie  B.  S.  L.  ,  N.  Andarwulan,  N.  L.  Puspitasari Nienaber  dan  L.  Nuraida.    2001. Antimicrobial Activity  of Piper  betle Linn  Extract  Towards Foodborne Pathogens and Spoilage Microorganisms. Http//ift.  Confex.com  //  ift  /  2001  /  technoprogram  / paper.9068. htm.
Kubo  I,  Muroi  H  dan  Kubo  A.    1995. Antibacterial Activity of Long-chain Alcohols Against Streptococcus mutans .  J. Agric. Food Chem 40 (6): 999- 1003.
Nalina    T  dan  Z.  H.  A  Rahim.  2007. The  Crude Aqueous  Extract  of Piper  betle L  .  and  its Antibacterial  Effect  Towards Streptococcus  mutans . American Journal of Biotechnology and Biochemistry 3 (1) : 10-15.
Naufalin  R,  B.S.L.  Jenie,  F.  Kusnandar,  M. Sudarwanto,  H.  Rukmini.    2005. Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Bunga  Kecombrang    Terhadap Bakteri  Patogen  dan  Perusak  Pangan.    Jurnal Teknol. Dan Industri Pangan, Vol. XV!. No 2. 2005.
Parhusip  A.J.N.  ,  B.S.L.  Jenie,  W.P.  Rahayu  dan Yasni  S.  2005. Pengaruh  ekstrak  andaliman ( Zanthoxylum    acanthopodium DC  )  terhadap permeabilitas  dan  hidrofobisitas Bacillus  cereus . Jurnal Teknol. Dan Industri Pangan, Vol. XV!. No 1. 2005.
Pepeljnjak    S.,  Z.  Kalodera  dan  M.  Zovko.    2005. Antimicrobial  activity  of  Flavonoid  from Pelargonium radula (Cav.  )  L’Herit.    Acta  Pharm  55  (2005)  431- 435.
Rahaju W.P.  1999. Kajian Aktivitas Antimikroba Ekstrak dan  Fraksi  Rimpang  Lengkuas  ( Alpinia  galangan L Swartz)  Terhadap  Mikroba  Patogen  dan  Perusak Makanan.    Disertasi.  Program  Pasca  Sarjana  IPB, Bogor.
Sugiastuti  S.    2002. Kajian  Aktivitas  Antibakteri  dan Antioksidan Ekstrak Daun Sirih ( Piper betle L) Pada Daging Sapi  Giling.  Tesis.  Program Pasca Sarjana. Institut Pertanian Bogor.
Sukarminah  .  1997 .    Kajian  Sifat  Antimikroba  Ekstrak Daun  Sirih    (Piper  betle,  Linn)  Terhadap Pertumbuhan  Mikroba  Perusak  Dan  Patogen Makanan.    Tesis.    Program  Pasca  Sarjana.    Institut Pertanian Bogor.
Suriyaphan    O.    2003. Identification  of  Key  Aroma Component of Piper betle L. Leaf. http://ift.confex.com/ift/2003/technoprogram/paper 18487.htm.  15 Juni 2007.
Suteja  L  dan    Agustina.    1994. Ekstraksi  dan Fraksinasi Komponen Bioaktif Antimikroba Dalam Biji dan  Daun  Lada.    JKTI,  Vol  4-  No.  2.    Desember. 1994.
Yang    J.N.  dan      C.C.  Chou.    1997. Antimicrobial Activity  of  Various  Solvent  Extracts  of  Betel  Quid Ingredients.  Food Science, Taiwan; 24 (5) : 497-505.
Yin  M.C.  dan    W.S.  Cheng.    1977. Inhibition  of Aspergillus  niger and Aspergillus  flavus by  Some Herbs and Spices.  J. of Protections 61 (1): 123-125
.