## UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS
Phyllospongia lamellosa DARI PERAIRAN TUMBAK,

## MINAHASA TENGGARA TERHADAP PERTUMBUHAN MIKROBA
Escherichia coli, Staphylococcus aureus DAN Candida albicans
Kartini Ratu 1) , Herny E.I Simbala 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Sponges are a component of coral reef biota. These sea animals are known to contain compounds that have the potential to be developed in the field of medicine, including as an antimicrobial. This study  aims  to  determine  the  antimicrobial  activity  of  Phyllospongia  lamellosa  sponge  against  the growth of Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans collected in the waters of Tumbak, Posumaen District, Southeast Minahasa. The antimicrobial activity test was carried out by agar diffusion method. The results showed that the extract and fraction of Phyllospongia lamellose had antimicrobial activity seen in the inhibition zone formed around the paper disk against the test microbes. Ethanol extrack and fraction from Phyllospongia lamellosa sponge showed the greatest antimicrobial  activity  against  Candida  albicans  with  an  average  value  of  13,33  mm  was categorized  as  strong  ,  than  in  Staphylococcus  aureus  with  an  average  value  of  13  mm  is categorized as strong and on Escherichia coli 11 mm categorized as strong.
Keywords :Phyllospongia  lamellosa,  antimicrobial  activity,  Escherichia  coli,  Staphylococcus aureus, Candida albicans

## ABSTRAK
Spons merupakan salah satu komponen biota penyusun terumbu karang.  Hewan laut ini diketahui mengandung  senyawa-  senyawa  yang  berpotensi  untuk  dikembangkan  dalam  bidang  pengobatan, diantaranya  sebagai  antimikroba. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antimikroba spons Phyllospongia Lamellosa terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus , Escherichia coli dan Candida albicans yang diambil pada perairan Tumbak Kecamatan Posumaen, Minahasa Tenggara. Uji  aktifitas  antimikroba  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa ekstrak dan fraksi spons Phyllospongia lamellose memiliki aktifitas antimikroba dilihat zona hambat yang terbentuk disekitar cakram kertas terhadap mikroba uji. Ekstrak etanol dan fraksi dari Spons Phyllospongia  lamellosa menunjukkan  aktivitas  antimikroba  paling  kuat  terhadap candida albicans dengan  nilai  rata-rata  13,33  mm dikategorikan  kuat,  kemudian  pada Staphylococcus aureus dengan  nilai  rata-rata  13  mm  dikategorikan  kuat,  dan  pada Escherichia  coli 11  mm dikategorikan kuat.
Kata Kunci : Phyllospongia  lamellosa, aktivitas  antimikroba, Escherichia  coli,  Staphylococcus aureus, Candida albicans

## PENDAHULUAN
Keanakeragaman  hayati  perairan  laut Indonesia
memberi peluang untuk memanfaatkan  biota  laut  untuk  pencarian senyawa  bioaktif  yang  baru,  salah  satunya adalah  spons.  Berbagai  penelitian  yang  telah dilakukan  terhadap  spons  menghasilkan senyawa-senyawa  baru  dengan  struktur  yang unik  dan  memiliki  aktivitas  farmakologis. Spons  diketahui  menghasilkan  senyawa bioaktif  yang  bermanfaat  sebagai  antibiotik, anti  jamur,  anti  kanker,  anti  inflamasi  dan antioksidan  yang  selama  ini  masih  terus dieksplorasi
Spons merupakan salah satu komponen  biota  penyusun  terumbu  karang yang  penyebarannya  cukup  luas.  Terdapat 15.000  spesies  spons  di  seluruh  dunia  dan sekitar 45% senyawa bioaktif ditemukan pada spons.  Kandungan  metabolit  sekunder  dari spons  diketahui  mampu  menangkal  dan menghambat bakteri patogen pengganggunya. Hal  ini  membuat  spons  menjadi  salah  satu hewan  laut  yang  menarik  untuk  diteliti karena  berpotensi  besar  untuk  dikembangkan dalam bidang pengobatan sebagai antimikroba (Amir 1996.).
Spons merupakan salah satu biota laut yang  sangat  prospektif  sebagai  sumber senyawa  bahan-bahan  alami  antara  lain alkaloid, terpenoid, steroid, asetogenin, halida siklik,  peptida,  dan  senyawa  nitrogen. Senyawa-senyawa  ini  memiliki  aktivitas farmakologis seperti antitumor, anti- inflamasi, antivirus, antibakteri, dan antimalaria  (Bara,  2007;  Rompas,  2011; Rahman et al., 2014; Blunt et al., 2015).
Antimikorba  adalah  zat-zat  kimia yang  dihasilkan  oleh  fungi  dan  bakteri,  zat tersebut  memiliki  khasiat  atau  kemampuan untuk  mematikan/menghambat  pertumbuhan kuman sedangkan toksisitas terhadap manusia relative kecil ( Waluyo, 2004 ).

## METODOLOGI PENELITIAN
Jenis penelitian ini merupakan penelitian  eksperimental  laboratorik  dengan menguji  aktivitas  antimikroba  ekstrak  dan fraksi  Spons Phyllospongia  lamellosa yang dikoleksi  dari  perairan  Tumbak,  Minahasa Tenggara.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret 2019 –  September  2019  di Laboratorium  Penelitian  Farmasi  Lanjut Program  Studi  Farmasi  dan  Laboratorium Biologi  Dasar  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi Manado.
Alat dan Bahan
a. Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu scuba  diving (Peralatan Selam),  ziplok,  gunting,  sarung  tangan,  botol air  kemasan  600  mL,  pisau,  telenan,  corong pisah, corong  gelas, wadah kaca, erlenmeyer, gelas  ukur  (Pyrex),  gelas  kimia  (Pyrex), tabung reaksi, rak tabung reaksi, micro tubes , cawan  petri,  timbangan  analitik, vortex (Benchmark),  spatula,  oven,  pinset,  batang pengaduk,  pembakar  spritus,  pipet  tetes, jarum  ose,  vial,  lemari  pendingin, incubator incucell (N-Biotek), laminary air flow (Clean
Bench), autoklaf (autoklaf KT-30 S ), mikropipet, jangka sorong, digital caliper , jas laboratorium dan kamera.

## b. Bahan
Bahan-  bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  spons  Phyllospongia Lamellosa , Staphylococcus aureus, Escherichia  coli,  Candida  albicans,  aquades, etanol, n-heksan, kloroform, metanol, pepton, ekstrak  daging  (meat  extract),  natrium
klorida,  nutrient  agar,  kloramfenikol  (paper disc),  kertas  label,  spidol  permanen,  kertas saring, kapas, aluminium foil dan tissue.

## Prosedur Penelitian

## Ekstraksi
Ekstrak Spons Phyllospongia
Lamellosa  dibuat  dengan  cara  maserasi sebanyak 3 kali. Sampel yang sudah dipotong kecil-kecil  dimasukan  kedalam  botol  lalu direndam  dengan  larutan  etanol  96%    selama 1x24  jam.  Kemudian  sampel  disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  1  dan  debris  1.  Debris  1  kemudian ditambah  dengan  larutan  etanol  lalu  ditutup dengan  aluminium  foil  dan  dibiarkan  selama 1x24 jam, sampel tersebut disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2  kemudian ditambah  dengan  larutan  etanol  lalu  ditutup dengan  aluminium  foil  selama  1x24  jam, sampel tersebut  disaring menggunakan kertas saring  menghasilkan  filtrat  3  dan  debris  3. Filtrat  1,  2,  dan  3  dicampur  menjadi  satu kemudian disaring, lalu diuapkan menggunakan  oven  hingga  diperoleh  ekstrak kental etanol.

## Fraksinasi
Ekstrak kental etanol spons Phyllospongia lamellosa dimasukkan  dalam Erlenmeyer,  dilarutkan  dengan  campuran metanol  :  air    (MeOH  :  H 2 O)  (80:20) sebanyak  100  mL.  Setelah  sampel  larut, dimasukkan  kedalam  corong  pisah  lalu ditambahkan pelarut  n-heksan dengan jumlah yang  sama,  setelah  itu  dikocok  berulangkali sampai  homogen.  Dibiarkan  sampel  sampai terbentuk  lapisan  metanol  :  air    (MeOH  : H 2 O) dan n- heksan. Masing – masing lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  n-  heksan  dievaporasi  menggunakan Oven hingga  kering,  lalu  ditimbang  dengan
timbangan  analitik  dan  diperoleh  fraksi  n- heksan 0,15g.
Lapisan  MeOH  :  H 2 O  ditambahkan akuades  sebanyak  100  mL  dipartisi  dengan pelarut  kloroform  dengan  perbandingan  1:1 v/v  dalam  corong  pisah,  lalu  dikocok berulangkali  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai  terbentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan MeOH  dan  kloroform.  Masing  –  masing lapisan  ditampung  dalam  wadah  yang berbeda.  Lapisan  kloroform  dievaporasi menggunakan Oven hingga  kering  lalu ditimbang  dan  diperoleh  fraksi  kloroform 0,53 g.  Lapisan MeOH  yang ditampung pada wadah  yang  lain  dievaporasi  menggunakan Oven hingga  kering  lalu  ditimbang  berat sampel, dan diperoleh fraksi MeOH 0,29 g.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  dan  media    yang  digunakan dalam  penelitian  aktivitas  antimikroba  ini distrerilkan terlebih dahulu dengan menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121  ºC selama  15  menit.  Pinset  disterilkan  dengan membakar  ujung  pinset  diatas  api  langsung (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair B1
Ditimbang  Pepton  0,5  g,  ekstrak daging 0,3 g ( meat extract ) , Natrium klorida 0,3 g dilarutkan dalam akuades sebanyak 100 mL  menggunakan  Erlenmeyer,  dikocok sampai homogen. Media yang telah homogen kemudian  disterilkan  dengan  menggunakan autoklaf  pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit. Dipipet  1  mL  media  cair  B1,  kemudian masukkan  dalam  tabung  reaksi  dan  tutup dengan aluminium  foil .    Media  cair  B1  siap digunakan  sebagai  media  kultur  mikroba (Ortez, 2005).

## Kultur Mikroba
Mikroba yang sudah dikultur ( Escherichia coli , Staphylococcus aureus dan Candida albicans ) ditambahkan media cair B yang disiapkan sebelumnya sebanyak 100 µL kedalam  tabung  reaksi  yang  berbeda  –  beda. Masing  –  masing  tabung  reaksi  ditutup dengan  aluminium  foil  dan  dimasukkan kedalam  incubator  selama  1x24  jam  dengan suhu 37 ºC.

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  2,0  g,  ekstrak  daging  ( meat extract ) 1,2 g, natrium klorida 1,2 g, agar 6,0 g dan dilarutkan dalam akuades sebanyak 100 mL  menggunakan  Erlenmeyer,  dikocok sampai homogen.  Media yang telah homogen kemudian  disterilkan  dengan  menggunakan autoklaf  pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit. Media  agar  B1  siap  digunakan  untuk  uji aktivitas antimikroba.
Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontol Negatif
Kontrol positif dalam pengujian antimikroba  ini  menggunakan kloramfenikol paper  disc. Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan pelarut  methanol,  dengan  cara  membuat larutan  stok  metanol  dengan  mengambil sebanyak 100 µL metanol kemudian ditotolkan pada kertas cakram.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara
melarutkan
ekstrak etanol spons Phyllospongia lamellosa sebanyak  1  mg kedalam 200 µL metanol sehingga menghasilkan konsentrasi larutan uji sebanyak 250 µg/50 µL. Perlakuan yang sama dilakukan  untuk  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform dan fraksi metanol (Ortez, 2005).
Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion Kirby and Bauer ). Aktivitas ini diuji pada  mikroorganisme Escherichia  coli, Staphylococcus aureus dan Candida albicans. Pada pengujian aktivitas antibakteri ini, kertas cakram ( paper disc ) yang digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap 50μL tiap cakram.  Kosentrasi  yang  digunakan  pada pengujian  ini  hanya  satu  kosentrasi  yaitu 250μg/50μL  pada  setiap  sampel  yang  terdiri dari  ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform,  fraksi  metanol-air,  kontrol  positif dan  kontrol  negatif.  Sampel  yang  telah ditentukan kosentrasinya 250μg/50μL ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan mikropipet.
Untuk  media  agar  NA  yang  sudah diautoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit, dinginkan  sampai  suhu  40  ºC.  Ambil sebanyak 100μL mikroba yang telah di kultur dalam  tabung  reaksi,  dipipet  dan  diinokulasi pada  media  agar  dan  tunggu  sampai  media agar  mengeras.  Masing-masing  cawan  petri diberi  label  dan  nomor  sampel  yang  sesuai. Letakkan kertas cakram yang telah ditotolkan sampel  uji  spons phyllospongia  lamellosa. Cawan petri lalu diinkubasi  selama 1x24 jam pada suhu 37 ºC (Ortez, 2005)

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening
Pengamatan dilakukan dengan mengukur diameter zona hambat  yang terjadi pada  media  dengan  menggunakan  jangka sorong  beralaskan  kertas  berwarna  gelap. Diameter  zona  hambat  yang  diukur  yaitu daerah  jernih  yang  terbentuk  disekitar disk/cakram  (tidak  ada  pertumbuhan  bakteri) diukur  dari  ujung  yang  satu  ke  ujung  yang lain  melalui  tengah-tengah  disk/cakram  atau diukur  diameter  vertikal  dan  horizontalnya (Soemarno,2000).
Daerah jernih disekitar cakram menunjukkan  kepekaan  bakteri  terhadap antibiotik  atau  bahan  antibakteri  yang digunakan sebagai bahan uji yang dinyatakan dengan diameter zona hambat. Diameter zona hambat diukur dalam satuan millimeter (mm) menggunakkan  mistar  berskala  (Davis  and Stoud,  1971)  dengan  sedikit  modifikasi. Klasifikasi  zona  Hambat  menurut  Davis  dan Stout (1971) dapat lihat pada Tabel 1
.

## Tabel 1. Klasifikasi zona Hambat menurut
Davis dan Stout (1971) Diameter Zona Hambat Respon Hambat Pertumbuhan > 20 mm Sangat kuat 11-20 mm Kuat 5-10 mm Sedang <5 mm Kurang

## Teknik Pengolahan Data dan Analisis Data
Teknik  pengolahan  data  dilakukan dengan  model  penyajian  dalam  bentuk  tabel dan  gambar,  grafik  dan  analisis  secara deskriptif.  Aktivitas  antimikroba  diukur menggunakan penggaris besi skala millimeter berdasarkan zona hambatan yang terbentuk.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Ekstraksi merupakan proses
pemisahan  bahan  dari  campurannya  dengan menggunakan  pelarut yang  sesuai.  Salah  satu metode  ekstraksi  yaitu  metode  maserasi.. Maserasi merupakan metode ekstraksi sederhana
yang sering digunakan (Mukhriani,  2014).  Proses  maserasi  ini dilakukan  dengan  cara  merendam  sampel Spons  ( Phyllospongia  lamellosa )  sebanyak 3x24 jam dengan menggunakan larutan etanol 96%.  Sebelum maserasi  dilakukan, sampel di bersihkan  dari  kotoran  dan  dipotong-potong dadu.  Pemotongan  sampel  dilakukan  untuk
memperluas permukaan sentuh sampel, karena  luas  permukaan  berpengaruh  terhadap hasil  yang  optimal  dari  proses  maserasi. Semakin  kecil  ukuran  sampel  maka  semakin besar luas permukaannya sehingga memudahkan  senyawa  aktif  yang  ada  pada spons Phyllospongia lamellosa dapat  larut  ke dalam  pelarut  yang  digunakan.  Pelarut  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  pelarut etanol  96%.  Menurut  Trifani  (2012),  etanol digunakan  sebagai  pelarut  karena  bersifat universal,  polar  dan  mudah  didapat.  Proses ekstraksi  lainnya  yang  digunakan    yaitu penyaringan  dan  penguapan  menggunakan alat  oven.  Penyaringan  dilakukan  dengan menggunakan kertas saring untuk memisahkan  sampel  Spons  ( Phyllospongia lamellosa )  dengan  pelarut  etanol  yang mengandung  senyawa  bioaktif.  Penguapan pelarut dengan oven dilakukan untuk mempermudah pemisahan pelarut yang digunakan dengan ekstrak sehingga diperoleh ekstrak kental.

## Fraksinasi
Fraksinasi  adalah  proses  penarikan suatu senyawa dengan menggunakan beberapa pelarut yang tidak saling bercampur. Senyawa-senyawa  yang  bersifat  non  polar akan  larut    dalam  pelarut  yang  nonpolar sedangkan  senyawa-senyawa  yang  bersifat polar  akan  larut  dalam  pelarut  yang  bersifat polar (Sari, 2012).
Pelarut yang digunakan untuk fraksinasi  yaitu    n-heksan,  kloroform,  dan metanol.  Pelarut  n-heksan  digunakan  untuk menarik  senyawa  yang  bersifat  non  polar, pelarut  kloroform  digunakan  untuk  menarik senyawa  yang  bersifat  semi  polar  sedangkan pelarut  metanol  digunakan  untuk  menarik senyawa-senyawa yang bersifat polar
(Harborne,
1998). Hasil perhitungan
rendemen ekstrak dan fraksi spons
Phyllospongia  lamellosa dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel  2.  Rendemen  ekstrak  dan  fraksi
Spons Phyllosongia lamellose No Sampel Rendemen (%) Warna Sampel 1 Ekstrak Etanol 3,43% Coklat kemerahan 2 Fraksi n- Heksan 6,28% Coklat muda 3 Fraksi Kloroform 11,7% Coklat Pekat 4 Fraksi Metanol 21,3% Putih
Ekstrak  etanol  yang  diperoleh  10,3  g dari  hasil  maserasi  sebanyak  300  g,  sehingga didapatkan  rendemen    3,43%  dengan  warna coklat  kemerahan.  Kemudian  ekstrak  etanol sebanyak  5  g  difraksinasi  menggunakan pelarut  n-heksan,  kloroform  dan  metanol. Pada  pelarut  n-heksan  diperoleh  berat  fraksi sebanyak 0,157 g sehingga diperoleh rendemen  6,28%  dengan  warna  coklat  muda. Pelarut  kloroform  didapatkan  berat  fraksi 0,294  g  sehingga  diperoleh  rendemen sebanyak  11,7%  yang  berwarna coklat  Pekat. Pada  pelarut  metanol  diperoleh  berat  fraksi 0,534  g,  sehingga  didapatkan  rendemen sebanyak 21,3% dengan warna putih.
Menurut  Nuhayati et  al. ,  (2009)
bahwa nilai rendemen yang tinggi menunjukan  banyaknya  komponen  bioaktif yang terkandung didalamnya. Perbedaan nilai rendemen ini disebabkan oleh perbedaan jenis pelarut yang digunakan. Dimana, pelarut yang berbeda  akan  melarutkan  senyawa-senyawa yang  berbeda,  sehingga  jumlah  fraksi  yang dihasilkan pun juga berbeda, (mujipradhana et al, 2018).  Nilai rendemen yang paling tinggi adalah  rendemen  yang  menggunakan  pelarut metanol  sehingga  memungkinkan  bahwa senyawa  bioaktif  yang  terkandung  dalam
spons Phylosongia  lamellosa lebih  bersifat polar.  Hal  tersebut  dapat  terjadi  karena metanol memiliki gugus polar yang lebih kuat daripada gugus non-polar, hal ini dapa dilihat dari struktur kimia metanol yang mengandung gugus hidroksil (polar)

## Uji Aktivitas antimikroba
Pengujian aktivitas antimikroba dilakukan  dengan  menggunakan  metode difusi  agar  (Difusi  Kirby-Bauer).  Metode  ini dipilih  karena  dapat  melihat  sensitivitas berbagai  jenis  mikroba  terhadap  antimikroba pada  konsentrasi  tertentu  (akhyar,  2010). Mikroba  uji  yang  digunakan    adalah Staphylococcus aureus mewakili gram positif, Escherichia  coli mewakili  bakteri  gram negatif,  dan Candida    albican mewakili golongan  jamur.  Ketiga  mikroba  uji  ini  ada dalam tubuh manusia. Staphylococcus aureus umumnya ditemukan  pada kulit, Escherichia coli umumnya  ditemukan  pada  usus,  dan Candida  albicans umumnya  ditemukan  pada mulut dan area kelamin.
Diameter  zona  hambat  yang  diukur yaitu  daerah  jernih  yang  terbentuk  disekitar disk/cakram  (tidak  ada  pertumbuhan  bakteri) diukur  dari  ujung  yang  satu  ke  ujung  yang lain  melalui  tengah-tengah  disk/cakram  atau diukur  diameter  vertikal  dan  horizontalnya (Soemarno,2000). Zona hambat yang terbentuk diukur diameternya dengan menggunakan  jangka  sorong  dengan  satuan milimeter (mm).
Hasil  uji  aktivitas  antimikroba  dan hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat ekstrak kasar, fraksi metanol, fraksi Kloroform  dan  fraksi  n–heksan  spons Phyllospongia  lamellosa terhadap  bakteri Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus dan Candida albicans . Konsentrasi yang digunakan 250 μg, dengan daya serap masing- masing paper disc 50 μL.
Tabel  3.  Hasil  Pengukuran  Rata-Rata
Diameter Daya Antimikroba
Dalam pengujian ini digunakan kontrol positif dan negatif sebagai pembanding.  Kontrol  posotif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  kloramfenikol,  hal ini  dikarenakan  kloramfenikol  memiliki spectrum kerja  yang luas (Rahmawati, 2015). Kontrol  negatif  berfungsi  untuk  mengetahui ada  tidaknya  pengaruh  pelarut  terhadap pertumbuhan  mikroba  uji.  Kontrol  negatif yang  digunakan  adalah  metanol.  Dari  hasil menunjukan  diameter  zona  hambat  dari kontrol  positif  pada  bakteri Escherichia  coli sebesar  22  mm  termasuk  dalam  kategorikan sangat    kuat, Staphylococcus  aureus 18  mm termasuk  dalam  kategori    kuat,  dan  untuk jamur Candida  albicans 18  mm  termasuk dalam  kategori  kuat.  Zona  hambat  yang dihasilkan Escherichia  coli lebih  besar dibandingkan  dengan Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans .  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan Katzung (2004)  yang menyatakan bahwa  pada  kebanyakan  gram  negative, kloramfenikol hanya membutuhkan konsentrasi  0,2-5µg/mL,  sedangkan  pada kebanyakan  bakteri  gram  positif,  bakteri dihambat  pada  konsentrasi  1-10µg/mL. Hal
ini menunjukkan  bahwa bakteri gram negatif lebih peka terhadap kloramfenikol dibandingkan  dengan  bakteri  gram  positif. Kontrol negative yang digunakan menunjukkan  tidak  adanya  aktivitas  pada pengujian  terhadap  bakteri Escherichia  coli, Sthaphylococcus aureus dan Candida
albicans. kontrol  yang  digunakan  tidak berpengaruh  pada  uji  antimikroba,  sehingga daya hambat yang terbentuk tidak dipengaruhi oleh  pelarut  melainkan  karena  aktivitas senyawa  yang  ada  pada  spons Phyllospongia lamrllosa. Penggunaan  metanol  sebagai kontrol  negatif  diperkuat  dengan  penelitian Ginting oleh Spons (2010). Yang menyatakan bahwa  kontrol  metanol  pada  uji  antimikroba tidak  menunjukan  adanya  aktivitas  sehingga dapat  dipastikan  bahwa  metanol  tidak berpengaruh terhadap aktivitas yang terbentuk.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang dilakukan terhadap mikroba Escherichia coli, Staphylococcus aureus dan Candida  albicans masing-masing dilakukan tiga kali pengulangan  memperlihatkan  adanya  zona hambat yang terbentuk disekitar disk/cakram.
Hasil  pengukuran  rata-rata  diameter zona  hambat  ekstrak  dan  fraksi  spons Phylospongia  lamellose terhadap Escherichia coli yang  paling  besar  dihasilkan  oleh  fraksi metanol yaitu 33 mm dengan nilai rata-rata 11 mm  masuk  dalam  kategori  kuat,  kemudian pada  fraksi  kloroform  yaitu  30  mm  dengan nilai  rata-rata  10  mm  dikategorikan  sedang, fraksi  n-heksan  25  mm  dengan  nilai  rata-rata 8,33  mm  dikategorikan  sedang  dan  pada ekstrak etanol 21 mm dengan nilai rata-rata 7 mm  dikategirikan  sedang.  Begitu  juga  pada bakteri Staphylococcus  aureus dimana  pada fraksi methanol zona hambat yang ditimbulkan sebesar 39 mm dengan nilai rata- rata  13  mm  dikategorikan  kuat,  kemudian fraksi  kloroform  dengan  nilai  rata-rata  yang didapat  10  mm  dikategorikan  sedang,  pada
fraksi  n-heksan  dengan  nilai  rata-rata  8,66 mm  dikategorikan  sedang  dan  pada  ekstrak etanol dengan nilai rata-rata 8 mm dikategorikan  sedang.  Pada candida  albicans fraksi  methanol  juga  memiliki  zona  hambat yang besar dimana dengan nilai rata-rata yang didapat  13,33  mm  dikategorikan  kuat,  pada fraksi  kloroform  dengan  nilai  rata-rata  9,66 mm  dikategorikan  sedang,  pada  fraksi  n- heksan  dengan  nilai rata-rata  9  mm dikategorikan sedang, kemudian pada ekstrak etanol dengan nilai rata-rata 7 mm dikategorikan sedang.
Dalam penelitian uji aktivitas antimikroba  diatas,  ini  menunjukkan  bahwa fraksi  metanol  memiliki  daya  hambat  yang lebih  peka  terhadap  jamur Candida  albicans dibandingkan  dengan  bakteri Staphylococcus aureus dan candida  albicans. Hal  ini disebabkan  senyawa  yang  terkandung  dalam fraksi  metanol  mempunyai  kemampuan  yang lebih  besar  untuk  menembus  dinding  sel  dari jamur candida albicans dibandingkan dengan ekstrak dan fraksi lainnya.
Selanjutnya peneliti melakukan pencarian  mengenai  penelitian  yang  serupa untuk  membandingkan  dengan  penelitian  ini, namun  tidak  ditemukan  adanya  penelitian tentang  antimikroba  tetapi  hanya  ditemukan penelitian  tentang  antibakteri  dan  antikanker. Penelitian  oleh  Undap  (2016)  dan  Dajo (2004)  menunjukkan  adanya  senyawa  aktif dari Phyllospongia  lamellosa yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri,  begitu juga  dengan  penelitian  oleh    Agus et  al.,
(2004) menunjukan adanya aktivitas
antikanker pada spons Phyllospongia lamellose.
Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat  digolongkan  berdasarkan  klasifikasi zona hambat menurut Davis and Stout (Tabel 1).    Diameter  zona  hambat  yang  ditunjukkan pada  fraksi  metanol  terhadap  ketiga  mikroba memiliki  zona  hambat  yang  paling  besar
dibandingkan  dengan  ekstrak  dan  fraksi lainnya  dalam  menghambat  pertumbuhan mikroba dan dikategorikan kuat.
Jadi  pada  penelitian  ini  ekstrak  kasar fraksimethanol  merupakan    ekstrak  yang efektif  untuk  menghambat  jamur candida albicans karena  fraksi  ini  memiliki  kategori kuat  untuk  menghambat candida  albicans. Ekstrak    etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform  dan  fraksi  metanol  merupakan ekstrak  dan  fraksi  yang  efektif  untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram positif (Staphylococcus aureus) dibandingkan bakteri gram negatif (Escherichia coli). Fraksi kloroform  dan  fraksi  metanol  merupakan ekstrak  yang  efektif  untuk  menghambat bakteri Staphylococcus  aureus. Umumnya kelompok  bakteri  gram  positif  lebih  peka terhadap  senyawa  yang  memiliki  aktivitas antimirobia di banding dengan gram negative. Selanjutnya  bakteri Escherichia  coli fraksi kloroform  dan  fraksi  metanol  adalah  yang paling  efektif  untuk  bakteri Escherichia  coli. Ini  sesuai  dengan  Renhoran  (2012)  yang menyatakan  bahwa  gram  negative  cenderung bersifat  sensitif  terhadap  antimikroba  yang bersifat polar.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  dan  fraksi  spons Phyllospongia lamellose memiliki  aktivitas  antimikroba terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus, Escherichia  coli dan Candida  albicans. Dimana  Ekstrak  kasar  etanol  dan  fraksi  dari Spons Phyllospongia lamellosa menunjukkan aktivitas  antimikroba  paling  besar  terhadap candida  albicans dengan nilai  rata-rata 13,33 mm dan dikategorikan kuat, pada Staphylococcus  aureus dengan  nilai  rata-rata 13 mm dikategorikan kuat, dan 11 mm untuk bakteri Escherichia  coli dikategorikan  kuat berdasarkan kriteria David dan Stout.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan aktivitas  antimikroba  ektrak  dan  fraksi  spons Phyllospongia  lamellosa ini  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengetahui senyawa  yang  terkandung  dalam  spons Phyllosongia lamellose.

## DAFTAR PUSTAKA
Agus,  T.,  Ambariyanto.,  Retno,  M.  2004.
Skrining  bahan  anti  kanker  pada berbagai  jenis  spons  dan  gorgonian terhadap  L1210 cell  Line. Jurnal  ilmu kelautan. ( (3) : 120-124.
Akhyar, 2010, Uji Daya Hambat dan Analisis KLT  Bioautografi  Ektrak  Akar  dan Buah  Bakau  (Rhizophora  stylosa  griff). Terhadap  Vibrio  harveyi.  Skripsi  .
Fakultas Farmasi Universitas Hasanudin Makasar.
Amir,  I.  1996. Mengenal  Spons  Laut (Demospongiae )Secara umum. Oseana,
Vol 21 (2): 131-140.
Bara,  R.A.,  Kandou,  G,  Ola,  A.,  Posangi,  J.
2015.  Analisis  senyawa  antibiotic  dari jamur  simbion  yang  terdapat  dalam ascidiansdidemmun  molle  di  sekitar perairan    bunaken  Sulawesi  utara. Jurnal   LPPM  Bidang  Sains  dan Teknologi . VOL. 2(2).
Ginting,  E,  L.,  Warouw,  V.,  Suleman,  R.  W.
Aktivitas  Antibakteri  Dari  Ekstrak
Kasar Bakteri Yang Berasosiasi Dengan
Spons Acanthostrongylophora sp.
[Skripsi].  Fakultas  Perikana  dan  Ilmu Kelautan  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan . Penerbit : ITB. Bandung.
Muhkriani. 2014. Ekstraksi, Pemisahan
Senyawa  dan  Identifikasi  Senyawa Aktif.  Makassar: Jurnal  Kesehatan. 7 (2) : 361-7
Mujipradhana,  V.,  Defny,  W.,  Edi,  S. Aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak ascidian herdmania momus pada mikroba patogen manusia. Jurnal Ilmiah Farmasi 7(3).
Nurhayati, T, D. Aryanti, dan Nurjanah. 2009. Kajian  Awal  Potensi  Ekstrak  Spons Sebagai  Antioksidan.  Jurnal  Kelautan Nasional. 2(2):43-51.
Ortez,  J.H.  2005.  Disk Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed).
American society for Microbiology.
Sari,  Cahyo  IP.  2012.  Kualitas  Minuman
Serbuk Kersen ( Muntingia calabura L.) dengan Variasi Konsentrasi Maltodekstrin  dan  Ekstraksi  Kayu Secang ( Caesalpinia sappan L. ). SKRIPSI. Fakultas Teknobiologi
Universitas  Atma  Jaya  Yogyakarta, Yogyakarta.
Setiabudy,  Rianto.  2007. Farmakologi  dan Terapi  Edisi  V (  cetak  ulang  dengan perbaikan). Jakarta : Gaya Baru
Seputro,D.2015. Dasar-dasar  Mikrobiologi . EGC, Jakarta.
Soemarno.  2000. Depertemen  Kesehatan Republik Indonesia Isolasi Dan Identifikasi  Bakteri  Klinik .  Akademi Analisis Kesehatan Yogyakarta.. Yogyakarta
Undap,  N.  2016. Senyawa  antibakteri spons smenospongia  aurea,  strepsichordata sp;  Agelas  tabulate  dan  phyllospongia sp;  dari  perairan  pantai  malalayang manado  terhadap  pertumbuhan  strain bakteri .  Tesis.  Manado;  pasca  sarjana unsrat.
Waluyo  L.  2004. Mikrobiologi  Umum . Malang: Umm Press.