* Corresponding Author: email: elsafitria@mipa.unsri.ac.id
https://doi.org/10.56064/jps.v25i2.798 Naskah diusulkan: 02 April 2023;  Naskah disetujui: 14 Juni 2023
p-ISSN: 1410-7058 e-ISSN: 2597-7059 © 2023 JPS MIPA UNSRI

## Jurnal Penelitian Sains
Journal Home Page: http://ejurnal.mipa.unsri.ac.id/index.php/jps/index
Uji aktivitas antibakteri secara in-vitro gel submikro partikel pembawa ekstrak etanol daun pegagan ( Centella Asiatica (L.) Urban) terhadap

## Propionibacterium acnes

## Viva Starlista, Elsa Fitria Apriani*, Budi Untari, dan Adi Setyawan
Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Sumatera Selatan 30862, In- donesia
Kata kunci: daun pegagan, antibakteri, diameter zona hambat, gel,
Propionibacterium acnes
ABSTRAK: Daun pegagan ( Centella asiatica (L.) Urban) memiliki kandungan flavonoid yang tinggi  bertindak sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan memformulasikan submikro par- tikel  bentuk  sediaan  gel  dan  mengetahui  kemampuan antibakteri  nya  dibandingkan  dengan ekstrak etanol daun pegagan yang tidak dibentuk dalam submikro partikel. Gel submikro ek- strak etanol daun pegagan dibuat dalam formula F1, F2, F3 dan F4 serta terdapat formula 5 yang dibuat dengan konsentrasi gelling agent terbaik & zat aktifnya tidak dibentuk submikro partikel. Hasil evaluasi sifat fisik menurut analisis desain faktorial dan stabilitas gel formula op- timum menunjukkan bahwa formula terbaik adalah F3 dengan rata-rata karakteristik pH, daya sebar,  daya  lekat  dan  viskositas  secara  berturut  turut  adalah  4,79;  6,9  cm;  169,67  detik; 3149,967 cPs. Hasil uji stabilitas secara sentrifugasi dan cycling test menunjukkan tidak terjadi perubahan  organoleptis,  tidak  terjadi  pemisahan  fase  dan  pH  yang  berbeda  signifikan.  Uji aktivitas  menunjukkan  bahwa  gel  submikro  partikel  ekstrak  etanol  daun  pegagan  dapat menghambat  bakteri Propionibacterium  acnes .  Zona  hambat  yang  ditimbulkan  oleh  sediaan gel dalam perlakuan formula uji sebesar 11,20 ± 0,020 mm pada hari ke-2 dan 12,89 ± 0,020 mm pada hari ke-5 dengan kriteria zona hambat  kuat namun untuk pelepasan zat aktif masih dinilai kurang dibandingkan dengan gel ekstrak etanol daun pegagan (tanpa submikro parti- kel).
Keywords:
pegagan leaf, antibacterial, inhibitory zone diame- ters,
gel,
Propionibacterium acnes
ABSTRACT: Pegagan ( Centella asiatica (L.) Urban) leaves have high flavonoid content which can act as antibacterial. This study aims to formulate submicroparticles gel dosage form and determine  it’s  antibacterial  ability  when  compared  ethanol  extract  of  pegagan  leaf  which  is not formed in the form of submicroparticles. The submicro gel of pegagan leaf ethanol extract was made in formulas F1, F2, F3 and F4 and there was formula 5 made with the best concen- tration  of  gelling  agent  and  the  active  substance  was  not  formed  in  submicroparticles.  The results of evaluation physical properties according factorial design analysis and stability of op- timum gel formula showed that best formula was F3 with characteristic average of pH, disper- sion, adhesion and viscosity, respectively, which were 4.79; 6.9 cm; 169.67 seconds; 3149.967 cPs.  The  results  of  stability  test  by  centrifugation  and  cycling  test  showed  no  organoleptic changes,  no  phase  separation  and  significantly  different  pH.  The  activity  test  showed  that submicro  particle  gel  of    ethanol  extract  of  pegagan  leaves  could  inhibit  Propionibacterium acnes bacteria. The inhibition zone caused by the gel preparation in the test control treatment was 11.20 ± 0.020 mm on the 2nd day and 12.89 ± 0.020 mm on the 5th day with the inhibi- tion zone criteria being strong however, the release of the active substance is still considered less than that of the pegagan leaf ethanol extract gel (without submicroparticles).

## 1 PENDAHULUAN
erawat  merupakan  penyakit  kulit  yang  terjadi karena  adanya  peradangan  yang  disertai  pe- nyumbatan pada saluran kelenjar minyak dalam ku- lit.  Penyebab  terjadinya  jerawat  dapat  disebabkan
oleh adanya bakteri seperti Propionibacterium acnes . Obat jerawat di pasaran banyak terbuat dari bahan kimia.  Sediaan  bahan  alam  dianggap  lebih  aman untuk  digunakan  dan  memilliki  dampak-dampak negatif  lebih  sedikit  dibandingkan  dengan  penggu- naan  bahan  kimia  salah  satunya  dengan  penggu- naan ekstrak daun pegagan sebagai sediaan gel ber-
J
Viva Starlista, dkk. / Uji aktivitas antibakteri secara in-vitro ...
basis bahan alam [1]. Salah satu tanaman obat untuk meningkatkan  aktivitas  antioksidan,  antiinflamasi, neuroprotektif, prokolinergik, dan antikolinergik yai- tu Pegagan ( Centella asiatica (L.) Urb) [2]. Berdasar- kan  penelitian  sebelumnya  [3]  bahwa  tanaman  Pe- gagan mengandung senyawa flavonoid total 0,556% b/b dan kandungan total fenol sebesar 0,825% serta nilai  IC 50 kuat  sebesar  20,43  ppm  [4]  yang  mampu memberikan  efek  antioksidan.  Senyawa antioksidan dalam  daun  pegagan  akan  menghambat  aktivitas radikal bebas dalam tubuh secara memotong reaksi oksidasi  berantai  radikal  bebas  [5].  Bentuk  sediaan gel  mulai  dikembangkan,  terutama  dalam  produk kosmetika  dan  produk  farmasi.  Sediaan  gel  lebih baik  digunakan  pada  pengobatan  jerawat  daripada krim  karena  gel  dengan  pelarut  yang  polar  lebih mudah  dibersihkan  dari  permukaan  kulit  setelah pemakaian dan tidak mengandung minyak yang da- pat meningkatkan keparahan jerawat. Gel juga me- miliki kelebihan seperti tampilan yang jernih, adanya efek  dingin  saat  digunakan,  daya  lekat  tinggi,  tidak menyumbat  pori  dan  mencegah  iritasi  pada  kulit. Kombinasi  pemakaian gelling  agent Karbopol  940 dan  HPMC  dapat  menjadikan  sediaan  gel  dengan sifat  fisika-kimia  gel  yang  lebih  baik  dibandingkan dengan pemakaian salah satu gelling agent saja. Pe- makaian  kombinasi gelling  agent ini  dapat  mengu- rangi  nilai  kekurangan  yang  ada  pada  masing- masing gelling  agent tersebut  seperti  pemakaian Karbopol 940 yang terlalu tinggi konsentrasi nya da- pat  menyebabkan  pH  yang  terlalu  asam  sehingga dapat  mengiritasi  kulit  dan  pemakaian  HPMC  yang terlalu  tinggi  konsentrasi  nya  dapat  menyebabkan gel  menjadi  kaku  serta  permeasi  obat  menjadi  sulit menembus  lapisan  kulit  [6].  Oleh  karena  itu,  pada penelitian  ini  dilakukan  formulasi  gel  submikro partikel  ekstrak  daun  pegagan  dengan  variasi konsentrasi Karbopol 940 dan HPMC sebagai gelling agent .  Sediaan  gel  yang  dihasilkan  kemudian dilakukan  evaluasi  berupa  uji  evaluasi  sediaan  gel, penetapan  formula  gel  submikro  partikel  optimum, uji stabilitas fisik sediaan, dan uji aktivitas antibakteri terhadap P. acnes secara in vitro. Pengujian aktivitas antibakteri  dilakukan  secara in  vitro yang  terbagi menjadi  4  kelompok  perlakuan  dengan  pengujian aktivitas  antibakteri  berupa  pengukuran  diameter zona hambat dengan metode sumuran.

## 2 BAHAN DAN METODE

## 2.1  Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilakukan  mulai  dari  bulan  Januari 2022  sampai  dengan  April  2022.  Penelitian  ini  dila- kukan  di  Laboratorium  Biologi  Farmasi,  Laborato- rium Teknologi Farmasi, Laboratorium Farmasetika,
Laboratorium  Farmakologi  dan  Laboratorium  Mi- krobiologi  Jurusan  Farmasi  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sriwijaya Inderalaya, Sumatera Selatan.

## 2.2  Alat dan Bahan

## Alat
Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini anta- ra lain viskometer (Grace Instrument M3400), Rotary Evaporator (IKA ® HB 10), timbangan analitik keteli- tian  0,0001  g  (Sartorius ® ),  pH  meter  (Lutron ® pH Electrode  PE-03),  blender  (Philips ® ), kulkas  alat-alat gelas  (Pyrex ® ),  autoklaf  (Equitron ® ),  Inkubator  (In- SciencePro®  Xlab  04),  lemari  pendingin  (Dragon- Lab ® ), kaca preparat, oven (IMU55L), magnetic stir- er  (IKA ® C-MAG),  hot  plate  (Tuff  HPS-5507D), spin bar , pH meter (Thermo Scientific Eutech pH 5+®), pipet  mikro  (DragonLab ® ),  dan  Sonikator  (Bio- base®).

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  submikro  parti- kel  partikel  partikel Poly-(Lactic-Co-Glycolic  Acid) pembawa ekstrak etanol daun pegagan, HPMC (Bra- tachem ® ),  Karbopol  940  (CV.  Total  Equipment Pharmacy ® ),  propilen  glikol  (Bratachem ® )  metil  pa- raben  (Bratachem ® ),  propil  paraben  (Bratachem ® ), etanol 96% (Dira Sonita ® ), etil asetat (Dira Sonita ® ), aquadest  (Dira  Sonita ® ),  indukan  bakteri Propioni- bacterium  acnes (Biomeriux ® ),  Klindamisin  HCl (PT.Dexa  Medica ® ),  Nutrient  Agar  (Merck ® ),  Nu- trient  Broth  (Merck ® ),  Larutan  Mc.Farland,  Larutan gentian  violet,  Cairan  lugol  (Nauli  Alkes  Store®), Safranin (Nitra Kimia®), NaCl 0,9%.

## 2.3  Prosedur Penelitian

## Preparasi Ekstrak
Daun pegagan ditimbang sebanyak 1 kg dan dilaku- kan  sortasi basah.  Sampel  kemudian  dicuci dengan menggunakan air mengalir. Daun pegagan dikering- kan dengan  menggunakan  oven dengan  suhu 50°C sampai kering. Simplisia kering kemudian dihaluskan dengan  menggunakan  blender  hingga  menjadi  ser- buk [7]. Simplisia daun pegagan diekstraksi dengan metode  maserasi.  Serbuk  simplisia  daun  pegagan sebanyak 500 g dimasukkan ke dalam suatu wadah, pelarut menggunakan etanol 96% sebanyak 3,5 liter, didiamkan  selama 24  jam, diaduk  agar  penyerapan zat aktif daun pegagan lebih maksimal. Hasil ekstrak-
Viva Starlista, dkk. / Uji aktivitas antibakteri secara in-vitro ...
si  setelah  24  jam  disaring  menggunakan  kertas  sar- ing, selanjutnya dilanjutkan karakteristik ekstrak.

## Preparasi Bahan Pembuat Submikro Partikel
Preparasi  bahan  pembuat  submikro  partikel  pada kegiatannya  meliputi  preparasi  PLGA,  preparasi PVA, preparasi dispersi ekstrak etanol daun pegagan dan  pembuatan  submikro  partikel  ekstrak  etanol daun pegagan .

## Pembuatan Gel Submikro Partikel Ekstrak Daun Pegagan

## Formulasi Gel
Formula gel yang digunakan pada penelitian ini se- banyak  4  formula  yang  didapatkan  melalui  design faktorial  2 2 dengan  penggunaan  dua  faktor  yaitu Karbopol 940 dan HPMC 60-SH pada dua level ren- dah  dan  tinggi  dan  1  formula  pembanding  [8].  Se- lanjutnya dilakukan evaluasi sediaan gel dan uji sta- bilitas fisik sediaan.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  Aktivitas  Antibakteri  meliputi  sterilisasi  alat  dan bahan, pembuatan medium, pembuatan larutan 0,5 MC  Farland,  pembuatan  stok  bakteri Propionibacte- rium acnes , pembuatan suspensi bakteri Propionibac- terium acnes , dan percobaan uji aktivitas antibakteri dimana pada uji ini perlakuan dibagi menjadi 4 ke- lompok ditunjukkan pada Tabel 2.
Perlakuan  kontrol  negatif  dilakukan  dengan membuat  sediaan  gel  plasebo.  Perlakuan  kontrol positif  dibuat  dengan  cara  membuat  sediaan  gel pembawa  Klindamisin  dengan  konsentrasi  yang  su- dah  ditetapkan.  Cawan  petri  pertama  dibuat  3  lu- bang  sumuran  untuk  perlakuan kontrol  negatif.  Ke- mudian  cawan  petri  kedua  diperlakukan  sama  se- perti  cawan  petri 1  untuk  perlakuan kontrol  positif. Cawan  petri  3  kemudian  dibuat  masing  masing  3 sumuran untuk perlakuan uji masing- masing formu- la. Cawan petri 4 dilakukan sama seperti cawan petri pertama  untuk  kontrol  pembanding.  Sumuran  di- buat  untuk  melihat diameter zona  hambat  yang di- hasilkan masing masing perlakuan. Sumuran dibuat dengan cara menusukkan ujung pangkal pipet tetes yang  telah  disterilkan  pada  media  agar  bakteri  ke- mudian diangkat sehingga terciptanya lubang sumu- ran seukuran 6 mm kemudian 50 mg gel dimasukan ke  dalam  sumuran  yang  telah  dibuat.  Setelah  itu masing-masing  perlakuan  di  inkubasi  pada  suhu 37°C  selama  48  jam.  Masing  masing  perlakuan  di- buat 3 sumuran  untuk  melihat diameter zona  ham- bat yang dihasilkan masing masing perlakuan [9].

## 2.4  Analisis Data
Analisis  data  terhadap  evaluasi  sediaan  gel dilakukan  dengan  perhitungan  desain  faktorial menggunakan  Program Design  Expert 12 ®. Analisis data  dilakukan  dengan  menghitung  nilai  koefisien masing-masing  faktor  yaitu  karbopol  dan  HPMC hingga  didapatkan  persamaan  hubungan  antara faktor dan respon. Berdasarkan persamaan tersebut akan  dapat diamati  pengaruh  masing-masing  faktor dan kombinasi  kedua  faktor terhadap  hasil  evaluasi sediaan  gel.  Program Design  Expert 12 ® juga digunakan  untuk  analisis  data  terhadap  pengaruh konsentrasi Karbopol 940 dan HPMC terhadap hasil dari evaluasi sediaan gel untuk menetapkan efektifi- tasnya. Analisis data terhadap diameter zona hambat dengan  menggunakan  aplikasi SPSS ® adalah  uji normalitas data yang dilakukan dengan Shapiro wilk untuk  melihat  normalitas  distribusi  data.  Apabila data  terdistribusi  normal,  maka  pengujian  selanjut- nya dilanjutkan dengan ANOVA One Way . Dari pen- gujian  tersebut,  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji Post Hoc Test apabila nilai p value <0,05.

## 3 HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1  Ekstraksi
Ekstraksi  daun  pegagan  menggunakan  pelarut  eta- nol 96%. Hal ini dikarenakan pelarut etanol 96% ber- sifat  selektif,  tidak  beracun,  dan  bersifat  universal yang cocok untuk mengekstrak semua golongan se- nyawa  metabolit  sekunder,  mempermudah  dalam proses  penguapan.  Setelah  didapatkan  filtrat  hasil maserasi kemudian dilakukan  teknik  evaporasi  atau penguapan  dengan  menggunakan  rotary  evapora- tor.  Hal  ini  bertujuan  untuk  mempermudah  proses penguapan  dengan  memperkecil  tekanan  dengan vakum sehingga saat temperatur di bawah titik didih etanol  96%  maka  etanol  96%  dapat  menguap  dan memperoleh  senyawa  yang  diinginkan.  Suhu  yang digunakan  dalam  proses  ini  adalah  70 o C  dengan tujuan  agar  tidak  merusak  senyawa  bioaktif  yang terdapat  pada  filtrat  apabila  menggunakan  suhu yang tinggi. Hasil dari evaporasi didapatkan ekstrak berwarna  hijau  pekat  dan  kental  dengan  bobot 45,78  g  dan  didapatkan  persentase  rendemen  ek- strak sebesar 9,156%.

## 3.2  Karakteristik Ekstrak
Hasil karakterisasi ekstrak etanol daun pegagan ter- tera  pada  Tabel  3. Uji  organoleptis  ekstrak  etanol daun  pegagan  dilakukan  melalui  pengamatan  den- gan  panca  indra  secara  langsung  berwujud  kental, berwarna  hijau  kehitaman  pekat,  berbau  khas  me-
Viva Starlista, dkk. / Uji aktivitas antibakteri secara in-vitro ...
nyengat dan memiliki rasa pahit. Hasil kadar air se- besar 8 ± 1% dan susut pengeringan sebesar 8,71 ± 0,96%  pada  ekstrak  etanol  daun  pegagan  yang  me- nunjukkan  bahwa  kadar  air  dan  susut  pengeringan tersebut  memenuhi  standar  Depkes  RI.  Kadar  sari larut  etanol  ekstrak daun  pegagan  sebesar 83,33 ± 5,77% yang berarti memenuhi syarat kadar sari larut etanol tidak kurang dari 70,5%, sedangkan kadar sari larut air ekstrak etanol daun pegagan sebesar 43,33 ±  4,71%  yang  berarti  memenuhi  syarat  kadar  sari larut air tidak kurang dari 31%. Hasil kadar abu dari ekstrak  etanol daun  pegagan sebesar  2,83  ±  1,25% yang berarti memenuhi syarat kadar abu total yaitu tidak  lebih  dari  16,6%.  Hasil  kadar  abu  tidak  larut asam  ekstrak  etanol  daun  pegagan  sebesar  0,54  ± 0,24% yang berarti memenuhi syarat kadar abu tidak larut asam yaitu tidak lebih dari 0,7%.

## 3.3  Hasil Pembuatan Submikro Partikel Ekstrak Etanol Daun Pegagan
Ekstrak etanol daun pegagan dibuat menjadi bentuk submikro  partikel  yang  berukuran  200  –  500  nm dengan  tujuan  untuk  meningkatkan  kemampuan penetrasi zat aktif menuju ke stratum basalis. Submi- kro  partikel  ekstrak  daun  etanol  daun  pegagan  di- buat  dengan  menggunakan Poly-(Lactic-Co-Glycolic Acid) sebagai  polimer  dan Poly-Vinyl-Alkohol yang berfungsi sebagai stabilizer. Zat aktif submikro parti- kel  ekstrak  etanol  daun  pegagan  dibuat  dengan komposisi  yang  sama  dengan  formula  terbaik  dari penelitian  Destiana  [11]  dengan  %EE  sebesar 93,6809% ± 0,2694. 65 Submikro partikel ini dibuat dengan menggunakan metode emulsion solvent eva- poration dengan keuntungan yaitu tidak toxic , memi- liki laju reaksi yang cepat, dan menghasilkan ukuran partikel yang kecil [12].

## 3.4  Hasil Formulasi Gel Submikro Partikel Ekstrak Etanol Daun Pegagan
Sediaan  gel  submikro  partikel  ekstrak  etanol  daun pegagan  dibuat  terlebih  dahulu  dengan  pengem- bangan gelling  agent kombinasi  HPMC  60-SH  dan Karbopol 940. Kombinasi kedua gelling agent ini di- lakukan juga untuk menutupi kekurangan HPMC 60- SH yang dapat membuat gel menjadi kaku. Pengga- bungan metil paraben dan propil paraben bertujuan sebagai pengawet pada sediaan gel. Pelarut propilen glikol  dipilih  sebagai  humektan  karena  propilen  gli- kol  menjaga  kehilangan  air  pada  gel  sehingga  gel menjadi lebih stabil. Hal ini dapat terjadi karena ter- dapat ikatan hidrogen antara gugus –OH pada struk- tur  yang  berinteraksi  dengan  air  [13].  TEA  dipilih sebagai  pengalkali  yang  berfungsi  untuk  menetral- kan  keasaman dari  Karbopol  940.  Sediaan  gel  sub-
mikro  partikel  ekstrak  etanol  daun  pegagan  akan memiliki  dua  matriks  pelindung.  Matriks  pertama dimana zat aktif ekstrak pegagan akan dienkapsulasi oleh PLGA dengan stabilizer PVA di bagian luarnya. Submikro partikel ini kemudian terdispersi ke dalam matrik  kedua  yaitu  matriks  gel  yang  berisi carbopol yang  telah  menjerap  bagian  air  yang  banyak.  Sub- mikro  partikel  dapat  terdispersi  ke  dalam  matriks sediaan  gel  dikarenakan  bagian  terluar  dari  submi- kro partikel merupakan PVA yang sifatnya polar se- hingga  dapat  terdispersi  ke  dalam  matriks  gel  yang berisi air dengan sifat polar [13].

## 3.5  Evaluasi Sediaan Gel
Data hasil evaluasi sediaan gel tertera pada Tabel 4. Uji organoleptis ini sangat penting dilakukan karena keterkaitan  terhadap  pemakaian  sediaan  gel  yang telah  dibuat,  diketahui  bahwa  keempat  formula memiliki  warna,  bau  dan  tekstur  yang  baik.  Warna kuning  pucat  yang  terdapat  di  dalam  gel  tersebut didapatkan dari submikro partikel pembawa ekstrak etanol  daun  pegagan.  Hasil  uji  homogenitas  pada sediaan gel submikro pembawa partikel ekstrak eta- nol  daun  pegagan  pada  keempat  formula  menun- jukkan  tidak  memliki  butiran  kasar  ketika  dioleskan pada  kaca  objek  transparan.  Uji  pH  juga  penting karena  sangat  berkaitan dengan keamanan  sediaan ketika  diaplikasikan  ke  kulit  manusia.  Berdasarkan Tabel  4.  keempat  formula  menghasilkan  pH  sesuai dengan rentang pH kulit manusia yaitu 4,5-6,5 atau sesuai  dengan  pH  kulit  [14].  Hal  ini  menunjukkan bahwa  keempat  formula  memenuhi  syarat.  Pada daya sebar berdasarkan Tabel 4. formula 2 sampai 4 memiliki daya sebar yang termasuk kedalam rentang yaitu 5-7 cm namun formula 1 tidak memenuhi sya- rat rentang dari daya sebar. Hal ini dikarenakan nilai daya  sebar  berpengaruh  dari  konsentrasi  gelling agent yang digunakan. Uji daya lekat dilakukan den- gan  tujuan  untuk  menggambarkan  seberapa  besar sediaan  melekat  pada  kulit.  Uji  viskositas  dilakukan dengan  tujuan  untuk  melihat  kekentalan  dari  se- diaan. Semakin tinggi nilai viskositas, maka semakin tinggi tingkat kekentalan sediaan. Viskositas gel yang baik adalah yang memenuhi standar viskositas den- gan rentang 2000-4000 cP [15].

## 3.6  Optimasi Formula Sediaan Gel Menggu- nakan Desain Faktorial
Optimasi dan analisis data evaluasi formula sediaan gel  submikro  partikel  ekstrak  etanol  daun  pegagan menggunakan  metode  desain  faktorial  melalui  per- modelan Design  Expert  12 ® .  Permodelan  tersebut digunakan  untuk  memprediksi  penentuan  formula optimum  sediaan  gel  submikro  partikel  ekstrak  eta-
Viva Starlista, dkk. / Uji aktivitas antibakteri secara in-vitro ...
nol daun pegagan dengan pendekatan DoE ( Design of  Experiment ).  Kriteria  respon  yang  ingin  dicapai ialah  sediaan  gel  submikro  partikel  ekstrak  etanol daun pegagan mencapai semua nilai ambang batas kriteria  (pH,  daya  sebar,  daya  lekat  dan  viskositas). Nilai desirability yang didapatkan dari Design Expert 12 ® ini sebesar 0,985. Menurut Raissi & Farsani [16], jika desirability semakin  mendekati  nilai  1,  maka program  untuk  menghasilkan  formula  yang diingin- kan  semakin  sempurna.  Optimasi numerical dilaku- kan  untuk  dapat  menggambarkan  hasil  optimasi. Data numerical menunjukkan  hasil  optimum  pada formula  dengan  konsentrasi  Karbopol  940  sebesar 0,5%  dan  HPMC  60-SH  sebesar  1%,  dapat  dilihat ditabel 5 dan 6.

## 3.7  Uji Stabilitas Sediaan
Uji  Stabilitas  Sediaan  dilakukan  untuk  mengetahui kemampuan  gel  dalam  mempertahankan  sifat  fisik- nya  sehingga  selama  penyimpanan  sifat  fisik  diha- rapkan tidak berubah atau masih dalam batas yang dapat  diterima.  Pengujian  stabilitas  sediaan  gel  kali ini menggunakan uji sentrifugasi dan cycling test .

## Uji Sentrifugasi
Pengujian stabilitas sediaan bertujuan untuk menge- tahui ada tidaknya perubahan sifak fisik sediaan gel. Uji  sentrifugasi  dilakukan  untuk  melihat  apakah  se- diaan  gel  terjadi  pemisahan  fase  atau  tidak.  Hasil dari  uji  sentrifugasi  tersebut  terhadap  sediaan  gel formula  optimum  didapatkan  bahwa  sediaan  gel tidak  mengalami  pemisahan  fase.  Hal  tersebut  dis- ebabkan dari sifat HPMC 60-SH yang hidrofilik poli- mer memiliki kemampuan penyerapan air yang san- gat  baik  sehingga  HPMC  60-SH  tersebut  bisa  men- gembang.  Sedangkan  Karbopol  940  mempunyai kemampuan untuk menjerap air sehingga tidak ter- jadi  penurunan  daya  ikat  antara  basis  air  dan  se- diaan gel submikro partikel.

## Cycling Test
Metode cycling  test memiliki  2  tahap,  yakni  heating dan  cooling  yang  dilakukan  selama  6  siklus.  Hasil pengujian  dengan  metode  ini  menunjukkan  bahwa sediaan memiliki sifat fisik yang mendekati sama pa- da saat awal dan akhir pengujian. Tidak terjadi sine- resis,  perubahan  warna,  aroma,  bentuk  serta  nilai pH  yang  tidak  terjadi  kenaikan  signifikan  selama pengujian 12 hari (6 siklus).
Sineresis merupakan peristiwa terbentuknya dua fase  pada  sediaan  yang  timbul  akibat  keluarnya  air dalam struktur gel. Cairan yang keluar akan berada diatas  permukaan  gel.  Sineresis  tidak  terjadi  pada
formula  optimum  sediaan  gel,  hal  ini  disebabkan karena  penggunaan  gelling  agent  yang  digunakan mampu  untuk  mempertahankan  kekuatan  ikatan matriks gel sehingga pelarut yang terdapat didalam- nya  tidak  keluar  ke  permukaan  gel.  Secara  pengu- jian  cycling  test,  organoleptis  yang  teramati  seperti pada Tabel 7. tidak mengalami perubahan pada se- diaan gel saat sebelum pengujian dan sesudah pen- gujian. Nilai pH dari formula optimum berdasarkan hasil  analisis  statistik  menunjukkan  adanya  perbe- daan  yang  bermakna  (p<0,05).  Perubahan  pH  aki- bat terjadinya penurunan dan kenaikan suhu selama pengujian.  pH  setelah  pengujian  mengalami  kenai- kan namun kenaikan yang terjadi tidak terlalu signi- fikan sehingga tidak dapat memicu terjadinya sinere- sis. Kenaikan pH yang terjadi juga masih dalam ren- tang pH kulit sehingga masih aman untuk diaplikasi- kan  ke  permukaan  kulit.  Kenaikan  pH  yang  terjadi besar kemungkinan disebabkan oleh adanya penye- rapan  kelembaban  dari  lingkungan  sekitar  gel.  Pe- nyerapan kelembaban yang sifatnya lebih basa dapat mempengaruhi pH sediaan gel menjadi lebih basa.

## 3.8  Aktivitas Antibakteri Sediaan Serum
Terhadap Bakteri Propionibacterium acnes secara In-Vitro
Uji daya hambat dilakukan untuk mengetahui besar- nya  pelepasan zat  aktif  dengan  mengukur  diameter zona  hambat  pertumbuhan  bakteri.  Pengujian  efek- tivitas  antibakteri  sediaan  gel  ekstrak  etanol  daun nangka  dilakukan  dengan  menggunakan  metode sumuran. Pemilihan metode sumuran dengan bebe- rapa kelebihan, diantaranya mudah dilakukan, pera- latan yang sederhana dan biaya yang relatif murah. Metode  sumuran  dilakukan  dengan  membuat  lu- bang  pada  media  yang  telah  memadat  dan  telah diinokulasi  bakteri.  Jumlah  dan  letak  lubang  dis- esuaikan dengan tujuan penelitian, selanjutnya dila- kukan  injeksi  sediaan  gel  yang  akan  diuji  kedalam lubang.  Setelah  dilakukan  inkubasi,  dilakukan  pen- gamatan  ada  tidaknya  daerah  hambat  di  sekeliling lubang.  Dalam  komponen  pengujian,  perlakuan yang  digunakan  terdiri  atas  4  kontrol  yaitu  kontrol positif, kontrol negatif, kontrol uji dan kontrol pem- banding.  Kontrol  positif  meenggunakan  Gel  Klinda- misin 1% dengan tujuan untuk membandingkan ak- tivitas  sediaan  uji  yang  mengandung  ekstrak  etanol daun pegagan dengan sediaan gel yang terdapat di pasaran.  Kontrol  negatif  menggunakan  basis  gel submikro  partikel  yang  tidak  ditambahkan  dengan ekstrak  dengan  tujuan  untuk  melihat  apakah  basis yang  digunakan  dalam  sediaan  memiliki  aktivitas antibakteri atau tidak. Kontrol uji dilakukan dengan menggunakan sediaan formula optimum gel submi- kro partikel ekstrak etanol daun pegagan sedangkan
Viva Starlista, dkk. / Uji aktivitas antibakteri secara in-vitro ...
untuk  kontrol  pembanding  sendiri  terdiri  atas  se- diaan gel ekstrak etanol daun pegagan tanpa submi- kro  partikel.  Penggunaan  kontrol  pembanding  me- miliki tujuan untuk membandingkan seberapa besar pengaruh sediaan gel submikro partikel ekstrak eta- nol  daun  pegagan  dengan  gel  ekstrak  etanol  daun pegagan  ketika dilakukan  uji  antibakteri.  Hasil  pen- gukuran  diameter  zona  hambat  sediaan  gel  dapat dilihat pada Tabel 8.
Berdasarkan Tabel 8. diatas, dapat dilihat bahwa sediaan  gel  pada  masing-masing  kontrol  memiliki sifat  antibakteri.  Kontrol  positif  yang  digunakan menghasilkan diameter hambat dengan kriteria kuat pada hari ke-2 dan sangat kuat pada hari ke-5 kare- na menghasilkan diameter hambat besar dari 19 mm dan 22 mm. Klindamisin digunakan sebagai kontrol positif  karena  klindamisin  adalah  salah  satu  antibi- otik yang digunakan sebagai obat antijerawat terha- dap  bakteri Propionibacterium  acnes yang  memiliki mekanisme  kerja  menghambat  sintesis  protein  bak- teri. Kontrol uji dan kontrol pembanding sama sama memliki  daya  antibakteri  kuat  pada  hari  ke-2  dan hari ke-5. Hal tersebut terjadi karena pengaruh dari struktur  dinding  sel  bakteri Propionibacterium  acnes dengan  gram  positif  mengandung  polisakarida  dan asam teikoat. Asam teikoat merupakan polimer fos- fat  yang  larut  dalam  air,  yang  berfungsi  sebagai transport  ion  positif  keluar  dan  masuk.  Karena sifat larut air ini menunjukkan bahwa dinding sel bakteri bersifat  lebih  polar.  Senyawa  flavonoid,  tanin  dan saponin merupakan senyawa yang bersifat polar se- hingga  lebih  mudah  menembus  lapisan  dinding  sel bakteri  yang  bersifat  polar  dengan  membentuk kompleks  dengan  asam  teikoat.  Flavonoid  bekerja sebagai  antibakteri  dengan  membentuk  senyawa kompleks dengan protein ekstraseluler sehingga da- pat merusak membran sel bakteri dan diikuti keluar- nya cairan intraseluler pada bakteri [17]. Data hasil pengujian  selanjutnya  dianalisis  dengan  mengguna- kan SPSS ® 25. Uji normalitas dengan metode Shapi- ro-Wilk diperoleh nilai signifikan >0,05. Hal ini me- nunjukkan bahwa hasil pengujian efektivitas antibak- teri  terdistribusi  normal.  Selanjutnya  pada  uji ANO- VA one way diperoleh nilai signifikan <0,05. Hal ini menunjukkan bahwa terdapat pengaruh yang signi- fikan  terhadap  penambahan  konsentrasi  ekstrak dengan  rata-rata  hasil  pengujian  efektivitas antibak- teri. Kemudian dilanjutkan dengan analisis Post-Hoc Duncan untuk  mengetahui  kelompok  perlakuan yang  memiliki  pengaruh  signifikan  terhadap  hasil perlakuan. Berdasarkan hasil analisis diperoleh nilai signifikan <0,05. Hal ini menunjukkan bahwa terda- pat  pengaruh  yang  signifikan  pada  hasil  pengujian diameter  hambat  sediaan  terhadap  penambahan konsentrasi ekstrak etanol daun pegagan.

## 4 KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  ini,  dapat  disimpulkan  bah- wa  variasi  konsentrasi gelling  agent Karbopol  940 dan  HPMC  60-SH  berpengaruh  terhadap  aktivitas antibakteri  sediaan  gel  berdasarkan  analisis  Desain Faktorial.  Semakin  rendah  konsentrasi gelling agent yang digunakan menyebabkan flavonoid dari dalam gel lebih lambat berpenetrasi menembus membran. Variasi  konsentrasi gelling  agent Karbopol  940  dan HPMC  60-SH  dapat  mempengaruhi  sediaan  gel submikro  partikel  ekstrak  etanol  daun  pegagan  ter- hadap evaluasi sifat fisik sediaan gel yang terdiri atas organoleptis,  homogenitas,  pH,  daya  sebar,  daya lekat dan viskositas. Serta untuk stabilitas fisik formu- la  optimum  sediaan  sediaan  gel  submikro  partikel ekstrak etanol daun pegagan berdasarkan uji stabili- tas  sentifugasi  dan  cycling  test  tidak  terjadi  pemisa- han fase dan tidak adanya perbedaan yang bermak- na. Formula optimum sediaan gel submikro partikel ekstrak etanol daun  pegagan pada uji aktivitas anti- bakteri  menghasilkan  diameter  zona  hambat  opti- mum pada hari kedua dan hari kelima dengan kate- gori  daya  hambat  kuat  namun  untuk  pelepasan  zat aktifnya dinilai kurang dibandingkan dengan gel ek- strak  etanol  daun  pegagan  (tanpa  submikro  parti- kel).
REFERENSI ______________________________
[1] Tabrizi, H., Mortazavi, S. A. and Kamalinejad, M. 2003. An in vitro evaluation of various Rosa damascena flower extracts as a natural antisolar agent. Interna- tional Journal of Cosmetic Science, 25: 259–265.
[2] Joshi, H. and M. Parle. 2006. Brahmi Rasayana Im- proves Learning and Memory in mice. eCAM. 3(1):79- 85.
[3] Sutardi. 2008, Kandungan Bahan Aktif Tanaman Pega- gan dan Khasiatnya Untuk Meningkatkan Sistem Imun Tubuh, Litbang Pertanian, 35: 121-130.
[4] Widyani, M., Ulfa, M., Wirasisya, D.G. 2019, Efek Penghambatan Radikal Bebas Infusa dan Ekstrak Eta- nol Herba Pegagan (Centella Asiatica (L.) Urb) Dengan Metode DPPH, J. Pijar MIPA, vol(14): 100-106.
[5] Winarsi, H. 2007, Antioksidan Alami & Radikal Bebas; Potensi dan Aplikasinya dalam Kesehatan, Gramedia, Jakarta.
[6] Arikumalasari, J., I GNA, D., & NPAD, W. 2013, Opti- masi HPMC Sebagai Gelling Agent Dalam Formula Gel Ekstrak Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.). Jurnal Farmasi Udayana, 2(3).
[7] Rahmaniati M, A., Ulfah, M., & Mulangsari, D. A. K. 2018, Standarisasi Parameter Non Spesifik Ekstrak Eta- nol Daun Pegagan (Centella asiatica (L.)) di Dua Tem- pat Tumbuh, Jurnal Inovasi Teknik Kimia, 3(1); 67-71.
Viva Starlista, dkk. / Uji aktivitas antibakteri secara in-vitro ...
[8] Widyastuti. Farizal. 2014, Formulasi Gel Minyak Nilam dan Uji Daya Hambatnya Terhadap Bakteri Staphylo- coccus aureus, Scientia, 4(2): 60-65.
[9] Sikawin, Bryce Maria Brigitha, Paulina V.Y. Yamlean, Sri Sudewi. 2018, Formulasi sediaan gel antibakteri ek- strak etanol tanaman sereh (Cymbopogon citratus (DC). Stapf) dan uji aktivitas antibakteri (Staphylococ- cus aureus) secara in vitro, Pharmacon, 7 (3) : 302 – 310.
[10] Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2008, Farmakope Herbal Indonesia, Edisi I, Departemen Ke- sehatan Republik Indonesia, Jakarta, Indonesia.
[11] Destiana, Rika. 2022, “Preparasi dan Karakterisasi Submikro Partikel POLY- (LACTIC-CO-GLYCOLIC AC- ID) (PLGA) Pembawa Ekstrak Etanol Daun Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) dengan Variasi Konsen- trasi PLGA”, Skripsi, Jurusan Farmasi, Fakultas Mate- matika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwi- jaya, Inderalaya, Indonesia
[12] Hernández-Giottonini, K. Y., Rodríguez-Córdova, R. J., Gutiérrez-Valenzuela, C. A., Peñuñuri-Miranda, O., Zavala-Rivera, P., Guerrero-Germán, P., & Lucero- Acuña, A. 2020, PLGA Nanoparticle Preparations by Emulsification and Nanoprecipitation Yechniques: Ef-
fects of Formulation Parameters, RSC Advances, 10(8), 4218–4231.
[13] Rowe, R.C., Sheskey, P. J. & Quinn, M.E. 2009, Hand- book of Pharmaceutical Excipients, 6th edition, Phar- maceutical Press, London, UK.
[14] Naibaho, O. H., Yamelan, P. V. Y., & Wiyono, W. 2013, Pengaruh Basis Salep Terhadap Formulasi Se- diaan Salep Ekstrak Daun Kemangi (Ocimum sanctum L) pada Kulit Punggung Kelinci yang Dibuat Infeksi Staphylococcus aureus, Jurnal Ilmiah Farmasi, 2(2),
27-33.
[15] Kaur, L. P., Garg, R., & Gupta, G. D. 2010, Develop- ment and Evaluation of Topical Gel of Minoxidil from Different Polymer Bases in Application of Alopecia, In- ternational Journal of Pharmacy and Pharmaceuticak Sciences, 2(3), 43-47.
[16] Raissi, S. & Farsani,R. E. 2009, “Statistical Process Op- timization through MultiResponse Surface Methodolo- gy,” World Academy of Sciences, Engineering and Technology, Vol. 51, pp. 267-271.
[17] Nuria, M.C., Faizatun, A. & Sumantri. 2009, Uji Aktivi- tas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Jarak Pagar (Ja- tropha curcas L) terhadap Bakteri Staphylococcus au- reus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan Salmonella typhi ATCC 1408, Mediagro, 5(2): 26 – 37.

## ________________________________________________

## LAMPIRAN (TABEL)
Tabel 1. Formulasi gel submikro partikel Bahan Jumlah Bahan dalam Formulasi F1 F2 F3 F4 F5 Submikro partikel PLGA ekstrak etanol daun pegagan 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL - Ekstrak etanol daun pegagan - - - - * 158 mg Karbopol 940 0,5 % 0,75 % 0,5 % 0,75 % ** HPMC 60-SH 0,5 % 0,5 % 1 % 1% ** Trietanolamin 3 gtt 3 gtt 3 gtt 3 gtt 3 gtt Propilen glikol 15 mL 15 mL 15 mL 15 mL 15 mL Metil paraben 0,18 g 0,18 g 0,18 g 0,18 g 0,18 g Propil paraben 0,02 g 0,02 g 0,02 g 0,02 g 0,02 g Aquadest ad 100 mL ad 100 mL ad 100 mL ad 100 mL ad 100 mL Keterangan:
*Disesuaikan dengan hasil efisiensi penjerapan submikro partikel
**Diambil dari formulasi optimum diantara F1, F2, F3, F4 Tabel 2. Kelompok perlakuan No. Kelompok Perlakuan 1 Kontrol Negatif Gel pembawa submikro partikel placebo
2 Kontrol Positif
Gel pembawa klindamisin 1%
3 Kontrol Uji
Formula optimum gel submikro partikel pembawa ekstrak etanol daun pegagan
4 Kontrol Pembanding  Formula gel pembawa ekstrak etanol daun pegagan
Viva Starlista, dkk. / Uji aktivitas antibakteri secara in-vitro ...
Tabel 3. Hasil karakteristik ekstrak etanol daun pegagan Karakteristik Ekstrak Hasil Uji ± SD Syarat [10] Wujud Kental - Warna Hijau Kehitaman Pekat - Aroma Khas - Susut Pengeringan (%) 8,71 ± 0,96 <10 Kadar Air (%) 8 ± 1 <10 Kadar Sari Larut Etanol (%) 83,33 ± 5,77 >70,5 Kadar Sari Larut Air (%) 43,33 ± 4,71 >31 Kadar Abu Total (%) 2,83 ± 1,25 ≤16,6 Kadar Abu Tidak Larut Asam (%) 0,54 ± 0,24 ≤0,7 Tabel 4. Evaluasi sediaan gel Pengujian Formula I II III IV Organoleptis Warna: kuning pucat Bau: hampir tidak berbau Tekstur: kental Warna: kuning pucat Bau: hampir tidak berbau Tekstur: kental Warna: kuning pucat Bau: hampir tidak berbau Tekstur: kental Warna: kuning pucat Bau: hampir tidak berbau Tekstur: kental Homogenitas Homogen Homogen Homogen Homogen pH 4,48 ± 0,013 4,53 ± 0,029 4,79 ± 0,048 4,32 ± 0,037 Daya Sebar (cm) 4,87 ± 0,205 6,5 ± 0,216 6,9 ± 0,245 5,33 ± 0,125 Daya Lekat (detik) 108 ± 3,742 149,33 ± 3,682 169,67 ± 7,409 169,6667 ± 7,409 Viskositas (cPs) 2778,508 ± 91,593 2020,733 ± 127,817 3149,967 ± 75,763 2407,05 ± 109,186
Tabel 5. Kriteria Optimasi Name Goal Lower Limit  Upper Limit  Lower Weight  Upper Weight  Importance Karbopol 940 Is in range 0.5 0.75 1 1 3 HPMC Is in range 0.5 1 1 1 3 pH Is in range 4.5 6.5 1 1 3 Daya Sebar Is in range 5 7 1 1 3 Daya Lekat Maximize 104 180 0.1 1 3 Viskositas Is in range 2000 4000 1 1 3 Tabel 6. Pemilihan Formula Optimum berdasarkan Sistem No.  Karbopol 940  HPMC pH Daya Sebar  Daya Lekat  Viskositas  Desirability 1 0.500 1.000  4.793 6.900 169.667 3149.967 0.985 Selected 2 0.500 0.991 4.788 6.863 168.550 3143.239 0.984 3 0.507 1.000 4.779 6.853 168.279 3127.719 0.983 4 0.520 1.000 4.755 6.773 165.902 3089.603 0.980 5 0.500 0.935 4.753 6.635 161.639 3101.604 0.973 6 0.750 0.500 4.533 6.500 149.333 2020.733 0.950 7 0.750 0.503 4.532 6.494 149.197 2022.760 0.949 8 0.750 0.512 4.528 6.471 148.691 2030.278 0.948 Tabel 7. Hasil uji cycling test Formula Parameter Hasil Pengamatan Sebelum Sesudah Optimum Organoleptis  Kuning pucat, kental, bau khas ekstrak  Kuning pucat, kental, bau khas ekstrak Sineresis Tidak terjadi pemisahan Tidak terjadi pemisahan pH 5,677 ± 0,005 5,97 ± 0,014
Viva Starlista, dkk. / Uji aktivitas antibakteri secara in-vitro ...

## Tabel 8. Hasil Diameter Zona Hambat
Perlakuan Rata-rata Diameter Zona Hambat (mm) ± SD  Kriteria Kekuatan Antibakteri (Davis and Scout, 1971) Hari ke-2 Hari ke-5 Hari ke-2 Hari ke-5 Kontrol Negatif 0 ± 0 a 0 ± 0 a - - Kontrol Positif 19,88 ± 0,021 d 22,78 ± 0,021 d Kuat Sangat Kuat Kontrol Uji 11,20 ± 0,020 b 12,89 ± 0,020 b Kuat Kuat Kontrol Pembanding 16,56 ± 0,125 c 18,10 ± 0,020c Kuat Kuat