## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAN FRAKSI KARANG
LUNAK Lobophytum sp. TERHADAP BAKTERI
Escherichia coli

## DAN Staphylococcus aureus
Queen Novika Hermina Loing 1) . Defny Silvia Wewengkang 1) , Jemmy Abidjulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
Indonesia is a tropical country which is have so many abundant biodiversity, and one of them is soft  coral.  This  research  aims  to  test  the  antibacterial  activity  of  soft  coral  Lobophytum  sp. fractions  against  the  Escherichia  coli  and  Staphylococcus  aureus.  Extraction  was  done  by maceration and fractionation using n-hexane, chloroform, methanol and water as a solvent. The test  of  antibacterial  activity  was  done  by  using  agar  diffusion  method.  The  result  shows  that extract  and  fractions  have  an  antibacterial  activity.  The  results  conclude  that  the  extract  and fractions of Lobophytum sp. effectively inhibit the Escherichia coli and Staphylococcus aureus, in medium and strong category. The Strong inhibitory capacity showed by chloroform fraction.
Key  words :  Lobophytum  sp,  antibacterial  activity,  Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus, fractionation, agar diffusion.

## ABSTRAK
Indonesia merupakan negara tropis, yang mempunyai keanekaragaman hayati berlimpah salah satunya  ialah  karang  lunak. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  antibakteri  fraksi karang  lunak Lobophytum  sp. terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Stapylococcus  aureus . Ekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  dan  fraksinasi  menggunakan pelarut n-heksan, kloroform, metanol dan air. Pengujian antibakteri mengunakan metode difusi agar. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak dan fraksi uji memiliki aktivitas sebagai antibakteri. Berdasarkan  hasil  penelitian,  disimpulkan  bahwa  ekstrak  dan  fraksi  karang  lunak Lobophytum sp efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli serta bakteri Staphylococus aureus dengan  kategori  sedang  dan  kuat.  Daya  hambat  terbesar  ditunjukkan  oleh  fraksi kloroform.
Kata kunci : Lobophytum sp, antibakteri, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, fraksinasi, difusi agar.
.

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara tropis, yang  mempunyai  keanekaragaman  hayati berlimpah  salah  satunya  ialah  karang lunak.  Hampir  seluruh  perairan  Indonesia memiliki  karang  lunak  dengan  tingkat keanekaragaman  yang  berbeda  (Mahaza, 2003).
Berbagai  penelitian  menunjukkan bahwa  organisme  laut  memiliki  potensi sangat besar, dalam menghasilkan senyawa-senyawa  bioaktif  yang  dapat digunakan  sebagai  bahan  baku  obat- obatan.  Beberapa  organisme  laut  yang diketahui  dapat  menghasilkan  senyawa bioaktif  antara  lain  ialah  spons,  moluska, bryozoa,  tunikata,  dan  karang  lunak (Thakur dan Muller, 2004).
Diantara
berbagai
macam organisme  laut,  karang  lunak  termasuk dalam  organisme  penghasil  senyawa bioaktif  terbesar.  Dalam  dekade  terakhir, telah  dilaporkan  bahwa  sebanyak  50  % senyawa bioaktif ditemukan dalam beberapa hewan invertebrate (tidak bertulang belakang) laut tersebut (Radhika, 2006).  Senyawa  bioaktif  yang  telah dihasilkan  oleh  beberapa  jenis  karang lunak diketahui bersifat sebagai antibiotika,  antitumor,  antijamur,  dan antikanker  (Manuputty,  2002). Salah  satu jenis karang lunak yang diketahui memiliki senyawa bioaktif
bersifat sebagai antibakteri yaitu Lobophytum  sp .  Berdasarkan  penelitian yang  telah  dilakukan  oleh  Paulus et  al
(2012), simbiosis bakteri dari Lobophytum sp. efektif melawan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli .  Penelitian yang  dilakukan  oleh  Rezy  (2014),  pada Lobophytum  sp. yang  diperoleh  di  teluk
lombok  mengandung  senyawa  bioaktif yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap  bakteri Escherichia  coli dan bakteri Staphylococcus
aureus.
Karakteristik senyawa bioaktif pada organisme  laut  seperti  karang  lunak disetiap  pulau  berbeda-beda.  Berdasarkan hal tersebut sebagai salah satu upaya untuk mengoptimalkan  pemanfaatan  senyawa bioaktif dari organisme laut sebagai bahan baku  obat-obatan,  terutama  pada  karang lunak Lobophytum  sp .  di  teluk  manado peneliti  melakukan  pengujian  aktivitas antibakteri ekstrak dan fraksi karang lunak Lobophytum sp . terhadap bakteri
Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  antara  lain  yaitu  fins, masker, shorkel, tabung oksigen, cool box, alat  fotografi,  pisau,  botol  plastik,  botol kaca  steril,  timbangan  analitik,  gelas  ukur 100  mL  dan  250  mL,  pipet  tetes,  corong gelas,  corong  pisah,  kertas  saring,  gelas beaker  1800  mL,  rotary  evaporator, isonicater,  vortex,  cawan  petri,  spatula, kertas  label,  lemari  pendingin,  erlenmeyer 250  mL,  autoklaf,  pinset,  magnetic  stirer, batang  pengaduk,  mikropipet,  tabung reaksi,  kertas  aluminium,  rak  tabung reaksi,  inkubator,  laminar  air  flow,  oven, masker,  sarung  tangan,  kapas,  tissue, mistar berskala.
Bahan-bahan yang digunakan dalam  penelitian  ini  antara  lain  yaitu karang  lunak,  bakteri  uji Staphylococcus aureus  dan  Escherichia  coli ,  ekstrak daging  ( beef  extract ),  aquades,  etanol, kloroform,  metanol,  n-heksan,  kapsul
kloramfenikol  250  mg, nutrient  agar, pepton,  natrium  klorida,  kertas  cakram ukuran 6 mm.

## Preparasi Sampel
Pada  penelitian  ini  sampel  karang lunak  dikoleksi  dari  perairan  pantai Malalayang Kota Manado, dengan mengunakan  alat  bantu  (masker,  fins,  dan shorkel).  Sampel  yang  telah  diperoleh dimasukkan  ke  dalam  kantong  plastik tahan  panas,  selanjutnya  ditempatkan dalam cool box kemudian langsung dibawa ke laboratorium
Fitokimia dan
Farmakognosi  Program  Studi  Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.  Sebelumnya  sampel  difoto, kemudian  dibersihkan  dari  pengotor, selanjutnya sampel dipotong kecil-kecil di timbang dan diberi label serta nomor pada sampel.

## Ekstraksi  Sampel
Ekstraksi  karang  menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol 96%.  Pertama-tama  karang  lunak  yang telah dipotong kecil-kecil ditimbang sampel  sekitar  326,8  g  dimasukan  ke dalam  botol  kaca,  setelah  itu  sampel direndam  ke  dalam  larutan  etanol  96  % sebanyak  654  mL  dengan  perbandingan 1:2  (b/v)  ditutup  dengan aluminium  foil selama  selang  waktu  24  jam  pada  suhu kamar. Kemudian karang lunak yang telah direndam  disaring  menggunakan  kertas saring dan corong gelas sehingga menghasilkan filtrat 1 dan debris 1. Debris pertama  (1)  ditambahkan  dengan  larutan etanol  dengan  perbandingan  yang  sama yaitu  1:2  (b/v)  ditutup  dengan aluminium foil dan dibiarkan selama selang waktu 24 jam.  Kemudian  karang  lunak  tersebut disaring  sehingga  menghasilkan  filtrat kedua  (2)  dan  debris  kedua  (2).  Debris
kedua  ditambahkan  dengan  larutan  etanol dengan perbandingan  yang sama  yaitu 1:2 (b/v),  ditutup  dengan aluminium  foil dan dibiarkan  selama  24  jam  selanjutnya karang lunak tersebut disaring menghasilkan filtrat 3 dan debris 3. Filtrat 1,  2,  dan  3  dicampurkan  menjadi  satu kemudian disaring dan selanjutnya diuapkan  menggunakan rotary  evaporator pada  temperatur  suhu  40 0 C  sampai  etanol menguap. Selanjutnya ekstrak dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  sehingga diperoleh  ekstrak  kasar  dan  ditimbang mengunakan timbangan analitik, ditempatkan  dalam  botol  kecil  kemudian disimpan  dalam  lemari  pendingin  untuk selanjutnya di uji aktivitas antibakterinya ( Khopkar, 2003).

## Fraksinasi Sampel
Ekstrak kasar karang lunak sebanyak  1  g  dimasukan  ke  dalam  corong pemisah,  kemudian  dilarutkan  dalam metanol  :  air  sebanyak  100  mL  dengan perbandingan 8:2 (v/v) selanjutnya ditambahkan  dengan  n-heksan  100  mL. kemudian  dikocok  berulangkali  sampai homogen,  dan  dibiarkan  hingga  terbentuk lapisan  metanol-air  dan  lapisan  n-heksan. masing-masing  lapisan  ditampung  ke dalam  wadah  erlenmeyer    yang  berbeda. Lapisan  n-heksan  selanjutnya  diuapkan menggunakan rotary  evaporator sampai lapisan  mengering  dan  menghasilkan fraksi  heksan  kemudian  hasil  tersebut ditimbang. selanjutnya lapisan metanol-air ditambahkan air sebanyak 100 mL dengan perbandingan  1:1  (v/v)  kemudian  dipartisi dengan  pelarut  kloroform  sebanyak  200 mL.  Setelah  itu  dikocok  berulang  kali sampai homogen, dibiarkan hingga terbentuk  lapisan  metanol-air  dan  lapisan kloroform. Lapisan masing-masing ditampung  ke  dalam  wadah  erlenmeyer
yang berbeda.
Lapisan kloroform kemudian  diuapkan  menggunakan rotary evaporator hingga  lapisan  mengering  dan menghasilkan  fraksi  kloroform  lalu  fraksi tersebut  ditimbang.  Selanjutnya  lapisan metanol-air  lalu  ditampung  pada  wadah erlenmeyer  yang  berbeda.  Kemudian diuapkan dengan rotary evaporator hingga kering  dan  menghasilkan  fraksi  metanol- air,  kemudian  ditimbang.  ketiga  fraksi tersebut  selanjutnya  ditempatkan  dalam botol  kecil  dan  disimpan  dalam  lemari pendingin  untuk  selanjutnya  digunakan pada  pengujian  antibakteri  (Harborne, 1987).

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian aktivitas antibakteri ini distrerilkan terlebih dahulu. Alat-alat gelas disterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu 121 0 C  selama  15  menit,  pinset  dibakar dengan  pembakaran  diatas  api  langsung dan media disterilkan diautoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit (Mpila, 2012).

## Pembuatan Media Cair B1
Pepton  sebanyak  0,5  g  daging ekstrak ( beef extract ) 0,3 g natrium klorida 0,3  g  dan  air  sebanyak  100  mL  diambil kemudian  dicampurkan  dalam  erlenmeyer lalu  diaduk  sampai  merata  menggunakan magnetic  stirer selanjutnya  di  autoklaf pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit, kemudian  didinginkan.  Setelah  dingin dipipet 1 mL media cair B1 dimasukkan ke dalam  tabung  reaksi  dan  ditutup  dengan aluminium  foil, dan  media  cair  B1  siap digunakan  sebagai  media  kultur  bakteri (Ortez, 2005).
Kultur Bakteri
Media cair B1 yang sudah disiapkan sebelumnya ditambahkan dengan  bakteri-bakteri  yang  akan  dikultur dalam hal ini bakteri yang akan
dikulturkan  yaitu Staphylococcus  aureus dan  Escherichia  coli sebanyak  100  µL  ke dalam  wadah  tabung  reaksi  yang  berbeda. Kemudian ditutup dengan kertas aluminium  di  tiap  tabung  reaksi  diberikan label  dan  dimasukan  ke  dalam  inkubator selama  24  jam  pada  suhu  37 0 C  (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam penelitian ini yaitu dengan menggunakan metanol, dengan cara membuat  larutan  stok  metanol  dengan mengambil  sebanyak  5  mL  metanol kemudian  dimasukkan  kedalam  wadah, ditutup  dengan  kertas  aluminium.  Kontrol negatif  digunakan  sebagai  pembanding dan  pelarut  untuk  pembuatan  larutan kontrol positif dan pembuatan larutan uji.

## Pembuatan Kontrol Positif
Kontrol  positif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  dibuat  dari sediaan obat kapsul kloramfenikol 250 mg. Satu kapsul kloramfenikol dibuka cangkang  kapsulnya  kemudian  ditimbang serbuk  dalam  kapsul  sebanyak  25  mg.
Kemudian  serbuk  dimasukan  kedalam wadah  botol  kaca  dan  dilarutkan  dengan metanol sebanyak 5 mL untuk memperoleh  larutan  stok  kloramfenikol dengan konsentrasi 250µg/50µL.
Pembuatan Larutan Stock Uji
Pembuatan larutan uji hasil ekstraksi  dan  fraksinasi  karang  lunak dengan  kosentrasi  250  µg/50µL  yaitu dengan membuat larutan stok, dengan cara sebagai berikut ditimbang 0,0250 g ekstrak kasar  etanol,  fraksi  metanol-air,  fraksi kloroform  dan  fraksi  heksan,  kemudian dilarutkan dalam 5 mL metanol.

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  sebanyak  0,5  g,  daging ekstrak  ( meat  extract )  0,3  g,  natrium
klorida 0,3 mg, nutrient agar 1,5 g dan air sebanyak  100  mL  diambil  kemudian dicampurkan lalu diaduk sampai merata di dalam  wadah  erlenmeyer  selanjutnya diautoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15 menit,  dan  didinginkan.  Setelah  dingin ditutup  dengan kertas  aluminium,  dan media  agar  B1  siap  digunakan  untuk pengujian  aktivitas  antibakteri  (Ortez, 2005).

## Pengujian aktivitas antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar (disc  diffusion  Kirby  and  Bauer).  Pada pengujian  aktivitas  antibakteri  ini,  kertas cakram  (paper  disc)  yang  digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap 50 µL tiap  cakram.  Konsentrasi  yang  digunakan pada  pengujian  ini  hanya  satu  konsentrasi yaitu  250  µg/50  µL  pada  setiap  sampel yang  terdiri  dari  ekstrak  kasar,  fraksi heksan,  fraksi  kloroform,  fraksi  Metanol- air,  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif. Sampel yang telah ditentukan konsentrasinya  (250  µg/50µL)  ditotolkan pada masing-masing kertas cakram dengan menggunakan  mikropipet.  Untuk  media agar  B1  yang  sudah  diautoklaf  pada  suhu 121 0 C  selama  15  menit,  kemudian didinginkan sampai suhu 40 0 C. dituangkan media  agar  B1  ke  dalam  cawan  petri, diambil  sebanyak  100  µL  bakteri  yang telah di kultur dalam tabung reaksi, dipipet dan  diinokulasi  pada  media  agar  B1  dan ditunggu sampai media agar B1 mengeras. diletakkan  kertas  cakram  yang  telah ditotolkan  sampel  uji  dengan  pinset
kemudian  masing-masing  cawan  petri diberi label dan nomor sampel yang sesuai selanjutnya  cawan  petri  lalu  diinkubasi selama 1x24 jam (Ortez,2005).

## Pengamatan dan Pengukuran
Pengamatan dapat dilakukan setelah  1x24  jam    masa  inkubasi.  Daerah pada  sekitaran  cakram  menunjukkan kepekaan  bakteri  terhadap  antibiotik  atau bahan  antibakteri  yang  digunakan  sebagai bahan uji yang dinyatakan dengan diameter  zona  hambat.  Diameter  zona hambat  diukur  dalam  satuan  millimeter (mm) menggunakan mistar berskala dengan  cara  diukur  diameter  total  zona bening  cakram.  Kemudian  diameter  zona hambat  tersebut  dikategorikan  kekuatan daya antibakterinya berdasarkan penggolongan (Davis and Stoud, 1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi  Sampel
Pada  penelitian  ini,  sampel  segar dipotong  kecil-kecil  sehingga  didapati kehalusan  yang  sesuai.  hal  ini  bertujuan untuk memperluas permukaan yang berinteraksi  dengan pelarut sehingga lebih banyak  senyawa  yang  dapat  terekstrak. Sampel  yang  telah  dihaluskan  kemudian diekstraksi. Proses ekstraksi dalam penelitian ini menggunakan metode maserasi.  Untuk  pelarut  ekstraksi  sendiri digunakan  pelarut  etanol.  Pelarut  etanol merupakan pelarut yang tidak beracun, dan bersifat  universal  yang  cocok  untuk mengekstrak  semua  golongan  senyawa metabolit  sekunder  (Kristanti et  al ,  2008).
Hasil  ekstraksi  menggunakan  pelarut etanol  96  %  didapati  filtrat  berwarna coklat  pekat  dengan  berat  326,8  g,  filtrat menggunakan rotary tersebut  kemudian
disaring kembali untuk memisahkan garam dari  ekstrak  dengan  tujuan,  agar  dalam pengujian antibakteri garam tidak mengganggu  penghambatan  bakteri.  filtrat selanjutnya  diuapkan evaporator untuk memisahkan  pelarut  dan  ekstrak  sehingga
didapati  ekstrak  kasar  etanol  berwana cokelat  kehitaman  dengan  berat  2,9  g  dan rendemen  berkisar  0,88  %.  hal  ini disebabkan  oleh  karena  ukuran  sampel mempengaruhi  suatu  rendemen.  Bahan yang  memiliki  luas  permukaan  semakin kecil  akan  memperluas  kontak  dan meningkatkan  interaksi  dengan  pelarut sehingga  diperoleh  jumlah  ekstrak  yang optimum.

## Fraksinasi Sampel
Pada  penelitian  ini  Fraksinasi dilakukan  dengan  metode  ECC  (Ekstraksi
Cair-Cair) dengan pelarut n-heksan, kloroform  dan  metanol  secara  sinambung dengan  sifat  kepolaran  pelarut  yang berbeda-beda.
Ekstraksi cair-cair menggunakan  corong  pisah  ini  bertujuan untuk memisahkan senyawa yang memiliki kepolaran berbeda yang
terkandung  dalam  ekstrak  kasar.  hasil fraksinasi dan rendemen fraksi Lobophytum  sp. dapat    dilihat  pada  tabel 1.Rendemen fraksi menandakan
banyaknya  senyawa  polar,  semi  polar  dan non polar yang tertarik.
Tabel 1. Hasil Fraksinasi dan rendemen fraksi .
Keterangan :  FH = Fraksi Heksan
FK = Fraksi Kloroform
FMA = Fraksi Metanol Air.
Berdasarkan tabel diatas, Partisi menggunakan  pelarut  n-heksan,  didapati fraksi  n-heksan  berwana  hijau  dengan berat  0,10  g  dan  rendemen  berkisar  10%, untuk  pelarut  kloroform  didapati  fraksi berwarna  cokelat  kehitaman  dengan  berat 0,53  g  dan  rendemen  berkisar  53%  dan metanol  didapati  fraksi  berwarna  coklat
dengan  berat  0,30  g,  serta  rendemen berkisar 30%.
Ketiga rendemen menunjukan  perbedaan  yang  nyata  seperti rendemen  yang  dihasilkan  oleh  fraksi kloroform  lebih  besar  dibanding  dengan rendemen metanol-air dan n-heksan hal ini disebabkan  oleh  karena  adanya  perbedaan kelarutan komponen dalam sampel
Sampel Berat Fraksi (g) Rendemen (%) Warna
FH 0,10 10 Hijau FK 0,53 53 Coklat Kehitaman FMA 0,30 30 Cokelat

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kasar etanol,  fraksi  n-heksan,  Fraksi  Metanol- air,  dan  fraksi  kloroform  karang  lunak dilakukan  dengan  metode  difusi  agar. Prinsip    dari  metode    difusi  agar  Kirby  - Bauer  adalah ekstrak kasar etanol, fraksi n-heksan,  fraksi  metanol-air,  dan  fraksi kloroform  karang  lunak  yang    diteteskan pada    kertas  cakram    dapat    berdifusi dengan    baik    pada    permukaan    media padat yang sebelumnya  telah  diinokulasi bakteri  uji  pada  permukaannya. Pada uji aktivitas  antibakteri  ini,  hasil  diperoleh melalui  pengamatan  yang  dilakukan selama 1x24 jam masa inkubasi dengan 3 kali  pengulangan  untuk  masing-masing bakteri. Hasil uji aktivitas antibakteri dan hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat ekstrak  kasar  etanol,  fraksi  metanol-air, fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan  karang lunak Lobophytum  sp .  terhadap  bakteri Escherichia  coli,  dan  Staphylococcus aureus dapat  dilihat  pada  gambar  A, gambar B, tabel 2 dan 3.
Gambar  A.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri karang  lunak Lobophytum  sp. 1.ekstrak kasar etanol ulangan 1(a)2(b)3(c)
2.fraksi metanol-air ulangan 1(a)2(b)3(c),
3.fraksi  kloroform  ulangan  1(a)2(b)3(c),
4.kontrol positif (kloramfenikol),
5.kontrol negatif (metanol), dan
6.fraksi  n-  heksan  ulangan  1(a)2(b)3(c), terhadap bakteri Escherichia coli .
Tabel  2. Hasil pengukuran diameter zona hambat  ekstrak  Kasar  Etanol,  Fraksi Metanol-air,  fraksi  kloroform  dan  fraksi n-heksan  karang  lunak Lobophytum  sp.
terhadap bakteri Escherichia coli. Tabel 2. Diameter Zona Hambat (mm) terhadap bakteri uji Escherichia coli Ulangan Ekstrak kasar etanol Fraksi metanol air Fraksi kloroform Fraksi n- heksan Kontrol positif (+) Kontrol negatif (-) 1 10 8 12 7 25 0 2 12 8 14,5 7 25 0 3 10,5 9 14 7 27 0 Rata-rata 10,38 8,33 13,5 7 25,6 0 c b a c b a c b a c b a
Gambar  B.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri karang  lunak Lobophytum  sp. 1.ekstrak kasar etanol ulangan 1(a)2(b)3(c)
2.fraksi metanol-air ulangan 1(a)2(b)3(c),
3.fraksi  kloroform  ulangan  1(a)2(b)3(c),
4.kontrol positif (kloramfenikol),
5.kontrol negatif (metanol), dan
6.fraksi  n-  heksan  ulangan  1(a)2(b)3(c),
terhadap bakteri Staphyloccocus aureus .
Tabel  3. Hasil pengukuran diameter zona hambat  ekstrak  kasar  etanol,  fraksi metanol--air,  fraksi  kloroform  dan  fraksi
n-heksan.  karang  lunak Lobophytum  sp. terhadap  bakteri Staphylococcus aureus.
Tabel 3. Diameter Zona Hambat (mm) terhadap bakteri uji Staphylococcus aureus Ulangan Ekstrak kasar etanol Fraksi metanol air Fraksi kloroform Fraksi n- heksan Kontrol positif (+) Kontrol negatif (-) 1 16 8,5 14 8 20 0 2 16 9 16 7 24 0 3 13 10 18 8 24 0 Rata-rata 15 9,16 16 7,66 22,6 0
Davis dan Stout (1971), menyatakan bahwa  apabila  zona  daya  hambat  yang terbentuk  pada  uji  difusi  agar  berukuran kurang  dari  5  mm,  maka  aktivitas penghambatannya  dikategorikan  lemah. Apabila  zona  daya  hambat  berukuran  5- 10  mm  dikategorikan  sedang,  10-19  mm dikategorikan kuat  dan 20 mm  atau lebih
dikategorikan  sangat  kuat.  Dari  hasil pengamatan  yang  dilakukan  didapati bahwa  ekstrak  kasar  etanol  mampu menghambat  bakteri  gram  positif  dan bakteri gram negatif lebih besar dibanding  dengan  fraksi  metanol  dan fraksi n-heksan. hal ini terjadi oleh karena ekstrak  yang  diujikan  masih  berupa
c b a c b a c b a c b a
ekstrak  kasar.  Fraksi  kloroform  juga menunjukan perbedaan yang sangat nyata yaitu  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Escherichia coli
dan Staphylococcus aureus lebih besar dibanding  dengan  ekstrak  kasar  etanol, fraksi  metanol-  air    dan  fraksi  n-heksan. Hal ini sesuai dengan penelitian Elok et al (2013), menyatakan  bahwa  karang  lunak Geodia  sp. yang  diekstraksi  oleh  pelarut kloroform  efektif  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli . Fraksi metanol-air juga mampu menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococus aureus .  Hal  ini  disebabkan  oleh  karena kedua bakteri uji cenderung peka terhadap  senyawa  antibakteri  bersifat polar  yang  terkandung  dalam  fraksi metanol-air.  Sedangkan  untuk  fraksi  n- heksan  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan Staphylococus aureus didapati  perbedaan  sangat  nyata dengan  fraksi  yang  lainnya.  hal  ini mungkin disebabkan oleh karena terjadinya  penguraian  senyawa  bioaktif pada saat penguapan pelarutnya, sehingga
senyawa  bioaktif  yang  terkandung  di dalam  fraksi  n-heksan  hanya  sedikit, sehingga  daya  hambat  antibakteri  yang ditimbulkan  cenderung  lebih  sedikit disbanding fraksi lainnya. Kontrol negatif yang digunakan yaitu metanol, menunjukkan  tidak  adanya  zona  hambat pada  pengujian  terhadap  bakteri  gram positif Escherichia  coli maupun  gram negatif Staphylococcus  aureus .  Hal  ini mengindikasikan  bahwa  kontrol  yang digunakan  tidak  berpengaruh  pada  uji aktivitas antibakteri, sehingga daya hambat  yang  terbentuk  tidak  dipengaruhi oleh  pelarut  melainkan  karena  aktivitas senyawa  yang  ada  pada  Karang  lunak tersebut.  Kontrol  positif  menunjukkan perbedaan yang nyata, karena menghasilkan  aktivitas  antibakteri  yang paling besar terhadap bakteri uji dibanding kontrol negatif, ekstrak ataupun fraksi bahan uji. Untuk pengujian ini, kontrol positif berupa antibiotik  yang digunakan  yaitu  kloramfenikol.  Menurut Katzung (2004),kloramfenikol merupakan antibiotik bakteriostatik berspektrum luas.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak dan fraksi karang lunak Lobophytum sp. efektif dalam menghambat  pertumbuhan  dari  bakteri Escherichia coli serta dari bakteri Staphylococus  aureus dengan  kategori sedang  dan  kuat  oleh  kriteria  Davis  dan Stoud.Hasil penelitian juga menyimpulkan bahwa  daya  hambat  terbesar  ditunjukan oleh  fraksi  kloroform.  Selain  itu  dapat diketahui bahwa ekstrak dan fraksi karang lunak Lobophytum  sp. memiliki  senyawa bioaktif dengan spektrum yang luas dapat
menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram positif dan gram negatif.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  serta pembahasannya  maka  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengetahui kosentrasi  hambat  minimum  maupun kosentrasi  bunuh  minimum  pada  fraksi Kloroform, senyawa bioaktif yang terkandung  dalam  fraksi  kloroform  yang mampu  menghambat  bakteri Escherichia coli maupun Staphylococcus  aureus .

## DAFTAR PUSTAKA
Elok,  N.  F.  Denok,  E.  Yuliana,  S.  S.
Herlin,  Q.  A.  2013.  Studi  Daya Antibakteri  Ekstrak  Karang  Lunak
(Geodia  Sp.)  Segar  Terhadap Bakteri  Escherechia  Coli  Dan Vibrio Parahaemolyticus Serta
Kandungan  Senyawa  Aktifnya.
Jurnal  Teknologi  Pertanian. 3  : 201-208.
Harborne,    J.  B.  1987. Metode  Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan . Edisi Ke-2.  Diterjemahkan  Oleh  K. Padmawinata Dan Iwang Soedira. ITB Press, Bandung. Katzung,  B.  G.  2004. Farmakologi  Dasar dan Klinik. Edisi ke-13. Farmakologi  Fakultas  kedokteran
Universitas Airlangga, Jakarta.
Khopkar,  S.  M.  2003. Konsep  Dasar Kimia Analitik. Ui-Press, Jakarta.
Kristanti,  A.  N.    Aminah,  N.  S.  Tanjung, M.  dan  Kurniadi,  B.  2008 .  Buku Ajar Fitokimia. Unair Press,
Surabaya.
Mahaza,  N.  H.  2003 .  Kajian  Kerusakan Ekosistem Terumbu Karang Akibat Penangkapan  Ikan  Hias  Dan
Pengambilan  Bunga  Karang  Di Kelurahan Pulau Panggang Kepulauan Seribu [Skripsi]. Departemen Teknologi Hasil
Perairan, Fakultas Perikanan  Dan
Ilmu Kelautan, IPB, Bogor.
Manuputty, A. E. W. 2002. Karang Lunak (Soft  Coral)  Perairan  Indonesia . Puslitbang  Oseanologi-Lipi    Press, Jakarta.
Mpila,  A  Deby.  2012. Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Mayana  (Coleusatro  Purpureus
Benth) Terhadap Escherichia Coli,
Staphylococcu Aureus Dan
Pseudomonas  Aeruginosa  Secara Invitro [Skripsi].  Farmasi  Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam,  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.
Ortez, J. H. 2005. Disk  Diffusion Testing.
In Manual Of Antimicrobial Susceptibility  Testing  Marine  B. Coyle Coord Ed . American Society For Microbiology . 6 : 39-52.
Radhika,  P.  2006.  Chemical  Constituens And  Biological  Activities  Of  The Soft   Coral   Of  Genus  Cladiella. Journal  Biochemical  Systematics And Ecological. 34 : 781-789.
Rezi,  Apri.  2014. Kandungan  Senyawa Bioaktif Dan Uji Fitokimia
Sinularia  Sp  Dan  Lobophytum  Sp Dari  Perairan  Pulau  Pongok Bangka  Selatan [Tesis]  Sekolah
Pascasarjana Institut Pertanian
Bogor, Bogor.
Thakur,  N.  L.  Muller,  N.  E.  G.  2004.
Biotechnological Potential Of
Marine  Sponges. Current  Science.
86 : 1506-1512.