## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN ALGA Halimeda opuntia DENGAN METODE
DPPH [1,1- difenil -2- pikrilhidrazil ]
Alfredo Yeheskel Kaligis 1) , Adithya Yudistira 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Macroalgae genus Halimeda has potential as an antioxidant. Halimeda Opuntia is one type of green algae that is quite dominant in the waters of Lembeh Strait, Bitung. The research aims to analyse the antioxidant activity of Halimeda Opuntia. This research is an experimental laboratory with testing the ethanol extract of the Halimeda algae with the DPPH method [1,1- difenil -2- pikrilhidrazil ] to analyse antioxidant  activity  by  using  Spectrophotometer.  The  research  shows  the  antioxidant  levels  of Halimeda  Opuntia  algae  in  the  waters  of  Lembeh  Strait  has  antioxidant  activity  and  the  higher  the concentration  higher  also  the  antioxidant  levels  are  produced.  The  highest  antioxidant  levels  are found  in  the  Halimeda  opuntia  with  a  concentration  of  100mg/L.  This  results  show  that  extract  of Halimeda  opuntia  possesses  a  vital  potency  as  an  antioxidant  that  give  value  added  in  pharmacy industries.
Keywords: Activity, Antioxidants, DPPH, Halimeda opuntia .

## ABSTRAK
Makroalga genus Halimeda terdapat potensi sebagai antioksidan. Halimeda opuntia merupakan salah satu jenis alga hijau yang cukup dominan di perairan Selat Lembeh, Bitung. Penelitian ini bertujuan untuk  menganalisis  aktivitas  antioksidan  dari Halimeda  opuntia .  Penelitian  ini  merupakan eksperimental  laboratorium  dengan  pengujian  terhadap  ektrak  etanol  alga Halimeda  opuntia dengan metode  DPPH  [1,1- difenil -2- pikrilhidrazil ] untuk  menganalisis  aktivitas  antioksidan  dengan menggunakan  spektrofotometer.  Hasil  penelitian  ini  memperlihatkan  kadar  antioksidan  dari  alga Halimeda  opuntia di  perairan  Selat  lembeh  mempunyai  aktivitas  antioksidan  dan  semakin  tinggi konsentrasi  semakin  tinggi  pula  kadar  antioksidan  yang  dihasilkan.  Kadar  antioksidan  yang  paling besar terdapat pada alga Halimeda opuntia dengan konsentrasi 100mg/L. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak Halimeda opuntia memiliki potensi vital sebagai antioksidan yang memberikan nilai tambah dalam industri farmasi.
Kata kunci : Aktivitas, Antioksidan, DPPH, Halimeda opuntia .

## PENDAHULUAN
Laut  menjanjikan  potensi  komersial yang  sangat  besar  bagi  bangsa  Indonesia. Namun  potensi  tersebut  akan  tak  berarti bila kita tidak menyadari betapa pentingnya  keterlibatan  teknologi  untuk mengeksplorasi  potensi  serta  sumber  daya tersebut.  Indonesia  merupakan  negara kepulauan  terbesar  di  dunia  yang  terdiri dari 2/3 bagiannya adalah lautan. Lautan di indonesia  memiliki  panjang  garis  pantai mencapai  95.000  km  persegi.  Ditambah lagi dengan luas hamparan terumbu karang sebesar  24,5  juta  Ha.  Selain  dari  panjang garis  pantai  dan  luas  terumbu  karang, negeri  Indonesia  juga  masih  menyimpan potensi  kelautan  lainnya  (Departemen Eksplorasi  Laut  dan  Perikanan,  2002). Selain kelompok hewan yang hidup di laut terdapat  pula  kelompok  tumbuhan  yang disebut  tumbuhan  laut  yang  juga  banyak memiliki  nilai  gizi  dan  ekonomi.  Salah satu  produk  produk  yang  sudah  diketahui manfaatnya  adalah  makro-algae  laut  yang dikenal  dalam  dunia  perdagangan  dengan sebutan  rumput  laut.  Rumput  laut  atau lebih  dikenal  dengan  sebutan  seaweed merupakan  salah  satu  sumber  daya  hayati yang sangat melimpah di perairan Indonesia  yaitu  sekitar  8,6%  dari  total biota  di  laut.    Luas  wilayah  yang  menjadi habitat  rumput  laut di  Indonesia mencapai 1,2  juta  hektar  atau  terbesar  di  dunia. Potensi  rumput  laut  perlu  terus  digali, mengingat tingginya keanekaragaman rumput laut di perairan Indonesia (Departemen Eksplorasi Laut dan Perikanan, 2002).
Van  Bosse  (melalui  ekspedisi  Laut Siboga pada tahun 1899-1900) melaporkan bahwa  Indonesia  memiliki  kurang  lebih 555  jenis  dari  8.642  spesies  rumput  laut yang  terdapat  di  dunia.  Dengan  kata  lain, perairan  Indonesia  sebagai  wilayah  tropis
memiliki sumberdaya plasma nutfah rumput  laut  sebesar  6,42%  dari  total biodiversitas  rumput  laut  dunia.  Rumput laut dari kelas alga merah (Rhodophyceae) menempati  urutan  terbanyak  dari  jumlah jenis  yang  tumbuh  di  perairan  laut Indonesia  yaitu  sekitar  452  jenis,  setelah itu alga hijau ( Chlorophyceae ) sekitar 196 jenis  dan  alga  coklat  ( Phaeophyceae ) sekitar  134.  Dibalik  peran  ekologis  dan biologisnya  dalam  menjaga  kestabilan ekosistem  laut  serta  sebagai  tempat  hidup sekaligus  perlindungan  bagi  biota  lain, golongan  makroalga  ini  memiliki  potensi ekonomis yaitu sebagai bahan baku dalam industri  dan  kesehatan.  Dari  hasil  analisa terhadap  sembilan  jenis  rumput  laut menunjukkan bahwa kandungannya meliputi  karbohidrat  berkisar  antara  39% sampai  51%,  protein  antara  17,2%- 27,15%,  lemak  berkisar  antara  0,08%- 1,9%, vitamin A, B1, B2, B6, B12, dan C, serta  meneral  kalium,  phospor,  natrium, ferrum,  dan  iodium.  Masyarakat  wilayah pantai  terutama  di  negara-negara  Asia Pasifik  telah  terbiasa  menjadikan  rumput laut  sebagai  makanan.  Di  Jepang,  lebih dari  sekitar  100  jenis  rumput  laut  telah dimanfaatkan  secara  tradisional  sebagai makanan (Suhartono, 2000).
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang dapat  menetralkan  atau  meredam  radikal bebas, serta menghambat terjadinya oksidasi  pada  sel  tubuh,  sehingga  dapat mencegah  atau  mengurangi  terjadinya kerusakan sel (Abdul, 2003). Sebagai salah satu upaya untuk mengoptimalkan pemanfaatan  bahan  alam  laut  Indonesia, dilakukan  penelitian  dengan  tujuan  awal menguji aktivitas antioksidan dan mengidentifikasi senyawa berkhasiat sebagai antioksidan (Hanani et al., 2005). Radikal  bebas  merupakan  atom atau molekul yang memiliki satu atau lebih
elektron  yang  tidak  berpasangan  yang dapat  menarik  elektron  dari  senyawa  lain sehingga  terbentuk  radikal  bebas  antara lain  dapat  merusak  molekul  makro pembentuk  sel  yaitu  protein,  karbohidrat lemak  dan deoxyribo  nucleic  acid (DNA) (Abdul, 2003).
Metode uji antioksidan yang digunakan pada penelitian ini adalah metode peredaman  radikal  bebas  DPPH  (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil).
Metode ini memerlukan  sedikit  sampel,  sederhana, mudah, cepat, dan peka untuk mengevaluasi  aktivitas  antioksidan  dari senyawa bahan alam (Hanani et al ., 2005).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Oktober 2018- Desember 2019 di
Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Bentuk  dari  penelitian  ini  adalah eksperimental  laboratorium  yang  akan menguji  aktivitas  antioksidan  dengan menggunakan  metode  DPPH  [1,1- difenil - 2- pikrilhidrazil ] dari ekstrak alga Halimeda  opuntia dari  perairan  Selat Lembeh.
Alat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini ialah scuba diving, labu ukur 10 mL ( pyrex ), erlenmeyer 200 mL, cawan petri,  wadah  botol,  spatula,  gelas  arloji, timbangan digital (AE ADAM), spektrofotometer  UV-Vis, aluminium  foil , corong,  mikro  pipet,  tabung  reaksi,  dan vacum .

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini  yaitu  kertas  saring,  etanol  96%,  DPPH [1,1- difenil -2- pikrilhidrazil ], ekstrak etanol  dari  alga Halimeda  opuntia dan serbuk vitamin C p.a sebagai pembanding.

## Pengambilan Sampel
Sampel  ini  diambil  di  perairan  Selat Lembeh,  Kota  Bitung  Provinsi  Sulawesi Utara  menggunakan  alat  bantu scuba diving .  Sebelum  diambil  sampel  di  foto menggunakan  kamera  bawah  laut,  setelah diambil di masukan dalam kantong plastik jepit  yang sudah di siapkan dan di simpan dalam  kotak  pendingin  lalu  di  bawah  ke Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam Ratulangi.

## Preparasi Sampel
Alga Halimeda  opuntia yang  di  sudah di  ambil  di  cuci  kembali  dan  di  potong- potong  kecil  lalu  di  masukan  kedalam wadah  botol,  sampel  yang  di  dalam  botol di  isi  dengan  etanol  96%  sebanyak  200 mL.

## Ekstraksi Sampel
Sampel alga Halimeda opuntia sebanyak 140 g dimaserasi dengan pelarut etanol  96%  sebanyak  200  mL  dengan  3 kali  pengulangan  selama  24  jam.  Sampel kemudian  disaring  untuk  mendapatkan filtrat.  Hasil  yang  didapatkan  kemudian diuapkan  menggunakan  oven sehingga menghasilkan  ekstrak  kental,  dari  sampel yang  didapatkan  disaring  kembali  untuk menghilangkan  sisa  garam  pada  ekstrak kental dengan cara ekstrak kental dilarutkan  dalam  etanol  sebanyak  25  mL, lalu  kemudian  ekrak  kembali  dimasukan
ke dalam oven untuk mendapatkan ekstrak kasar dari sampel alga Halimeda opuntia.

## Pembuatan Larutan Stok
Sebanyak 100 mg ekstrak alga Halimeda  opuntia dilarutkan  dalam  100 mL  etanol  96%.  Dengan  masing-masing konsentrasi  25,  50,  75  dan  100  mg/L, dihitung  dengan  menggunakan  rumus pengenceran, yaitu:
V 1 .M 1 = V 2 .M 2 Dari masing-masing hasil yang didapatkan  dari  hasil  V 1 dipipet  dan ditambahkan etanol 96% hingga mencapai tanda batas (10 mL), kemudian dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditutup  dengan  menggunakan aluminium foil untuk  digunakan  pada  perlakuan selanjutnya.

## Pembuatan Larutan DPPH
Sebanyak  4  mg  DPPH  ditimbang  dan dilarutkan dalam etanol 96% sebanyak 100 mL,  diencerkan  menggunakan  rumus pengenceran  dan  diuji  menggunakan spektrofotometer  sampai mendapatkan nilai absorbansiya.
Selanjutnya  larutan  yang  di  buat  untuk uji  aktivitas  antioksidan  yaitu  ekstrak etanol  alga Halimeda  opuntia di  pipet sebanyak 2 mL dimasukan kedalam tabung reaksi  dengan  masing-masing  konsentrasi 25, 50, 75 dan 100 mg/L dan di tambahkan 2  mL  larutan  DPPH  kedalam  masing- masing  kosentrasi  dan  divortex  selama  5 detik sebanyak 3 kali pengulangan.

## Pembuatan Larutan Vitamin C
Vitamin  C  p.a  ditimbang  sebanyak  10 mg  dan  dilarutkan  dalam  etanol  96% sebanyak  10  mL,  kemudian  buat  larutan stok  untuk  konsentrasi  25, 50, 75 dan 100 mg/L  dengan  ditambahkan  entanol  96% sampai  tanda  batas  (10  mL)  pada  masing-
masing larutan sebanyak 3 kali pengulangan.  Sampel  vitamin  C  p.a  di pipet  sebanyak  2  mL  dimasukan  kedalam tabung  reaksi  dengan  masing-masing konsentrasi  25,  50,  75  dan  100  mg/L  dan di tambahkan 2 mL larutan DPPH kedalam masing-masing  kosentrasi  dan  divortex selama 5 detik sebanyak 3 kali pengulangan.  diuji  pada  spektrofotometer UV-Vis  dengan  panjang  gelombang  517 nm.

## Pengujian  Larutan  Kontrol  DPPH  dan Aktivitas  Atioksidan  dengan  Metode DPPH
Larutan  kontrol  DPPH  diuji  pada spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang  517  nm  sebagai  absorbansi kontrol  dalam  pengujian  ini.  Sampel diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu 37 0 C.  Untuk  mengetahui  aktivitas  dari penangkal  radikal  bebas  tersebut,  di  uji pada  spektrofotometer.  Berubahnya  warna ungu  menjadi  warna  kuning  menunjukkan efisiensi  penangkal  radikal  bebas.  Diukur absorbansi  pada  spektrofotometer  UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm setelah diinkubasi  selama  30  menit  berubahnya warna  menjadi  kuning  menunjukkan bahwa, masing-masing konsentrasi menunjukkan  efisiensi  penangkal  radikal bebas di  uji dengan spektrofotometer UV- Vis dengan panjang gelombang 517 nm. Kemudian  diamati  perbandingannya dengan  vitamin  C  p.a  sebagai  standar. Aktivitas  penangkapan  radikal  bebas (persen inhibisi) dihitung sebagai
persentase  berkurangnya  warna  DPPH dengan menggunakan rumus:

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas dari penangkal radikal bebas, di uji pada spektrofotometer. Hasil pengujian disajikan pada tabel dibawah ini:
Tabel  1 .  Hasil  perbandingan  pengujian Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Alga Halimeda  opuntia dengan Vitamin C p.a

## Pembahasan
Pemanfaatan alga dalam bidang farmasi selama ini masih terbatas, sedangkan  potensi  alga  laut  di  Indonesia lebih  khusus  di  Sulawesi  Utara  sangat besar.  Potensi  alga  laut  Indonesia  sangat besar  untuk  dikembangkan  sebagai  bahan baku  obat  karena  mengandung  senyawa bioaktif  yang  memiliki  banyak  manfaat. Salah satu contoh alga laut ialah Halimeda opuntia (Purnama  et  al., 2011;  Widiastuti,
2003).
Penelitian  ini  menggunakan  metode DPPH  [1,1- difenil -2- pikrilhidrazil ].  Ini adalah  bubuk  kristal  berwarna  gelap  yang terdiri  dari  molekul  radikal  bebas  yang stabil.  Pengukuran  antioksidan  dengan
metode  DPPH  pada  prinsipnya  adalah mengukur  terjadinya  pemudaran  warna dari radikal DPPH akibat adanya antioksidan yang dapat menetralkan molekul radikal bebas. Jadi, radikal DPPH yang sebelumnya berwarna akan kehilangan warnanya jika ada antioksidan, karena  antioksidan  akan  menyumbang elektronnya kepada radikal DPPH, sehingga  radikal  yang  sebelumnya  tidak stabil  (akibat  adanya  elektron  yang  tidak berpasangan) menjadi stabil (elektron pada radikal bebas  menjadi  berpasangan karena mendapat sumbangan elektron dari antioksidan).  Pada  dasarnya,  karakteristik antioksidan adalah mudah untuk menyumbangkan elektron, semakin mudah memberikan elektron maka sifat antioksidannya semakin kuat.
Sebelum  melakukan  pengujian  DPPH dilakukan  pembuatan  larutan  stok  dimana larutan stok adalah larutan yang konsentrasinya dipekatkan atau ditinggikan dari konsentrasi media. Biasanya  dinyatakan  dalam  kelipatan konsentrasi media dalam penelitian dilakukan  pengujian  dengan  konsentrasi
25, 50, 75, dan 100 mg/L.
Tujuan  dari  pembuatan  larutan  stok sendiri ialah untuk menghindari penimbangan  yang  berulang-ulang  setiap kali  membuat  media.  Dengan  adanya larutan stok, pembuatan media selanjutnya tinggal  mengencerkan  larutan  stok  saja. Larutan stok dibuat hanya untuk satu jenis bahan.  Langkah  ini  bertujuan  untuk menghindari pengendapan larutan.
Sebelum larutan sampel alga
Halimeda  opuntia dan  larutan  sampel vitamin C p.a diuji pada alat spektrofotometer  UV-Vis,  kedua  sampel diinkubasi  terlebih  dahulu  dengan  cara menutup  sampel  dengan aluminium  foil selama 30 menit.
Konsentrasi Pengulangan Rata- rata
I II III
25 % Ekstrak 27,80 % 24,20 % 25,30 % 25,70 % Vitamin C 93,90 % 94 % 93,90 % 93,90 % 50 % Ekstrak 28,10 % 25,20 % 25,10 % 26,10 % Vitamin C 92,90 % 93,60 % 93,60 % 93,30 % 75 % Ekstrak 28,80 % 27,30 % 29,30 % 28,40 % Vitamin C 93,80 % 93,30 % 93,80 % 93,60 % 100 % Ekstrak 30,20 % 29 % 30,20 % 29,80 % Vitamin C 93,90 % 93,90 % 93,60 % 93,80 %
Pengertian dari inkubasi adalah proses penjagaan  atau  perawatan  sesuatu  hal dengan  kondisi  tertentu  agar  sesuatu  hal tersebut  dapat  berkembang  dengan  baik. Jadi,  dalam  penelitian  ini,  proses  inkubasi sampel  dimaksudkan  untuk  menjaga  agar suhu  pada  sampel  tetap  terjaga  dengan baik selama proses pengujian.
Dalam  penelitian  ini  dibuat  3  kali pengulangan  pada  setiap  konsentrasi  yang bertujuan  untuk  mengetahui  hasil  dari masing-masing konsentrasi kemudian hasil yang  didapatkan  akan  dihitung  rata- ratanya,  sehingga  dari  hasil  rata-rata tersebut  dapat  dilihat  seberapa  besar aktivitas  antioksidan  dalam  sampel  alga Halimeda  opuntia dibandingkan  kontrol positif dari sampel vitamin C.
Hasil  pengukuran  aktivitas  antioksidan pada  larutan  sampel  alga Halimeda opuntia dengan konsentrasi 25, 50, 75 dan
100  mg/L  menunjukkan  Alga Halimeda opuntia memiliki  aktivitas  antioksidan dapat  dilihat pada tabel  1 dengan rata-rata 25,80 % di  konsentrasi  25 mg/L, 26,20 % di  konsentrasi  50  mg/L,  28,60  %  di konsentrasi  75  mg/L  dan  konsentrasi  100 mg/L  yaitu  sebesar  29,80  %.  Pada  jurnal Uji  Aktivitas  Antioksidan  Dari  Ekstrak Total  Alga  Hijau Halimeda  opuntia Linnaeus dan Halimeda macroloba
Decaisne Dari  Perairan  Teluk  Totok.
Meskipun  alga  tersebut  hidup  didaerah yang  relatif  tercemar,  alga  tersebut  dapat berkembang  dan  mempunyai  kandungan aktivitas  antioksidan  yang  sangat  tinggi. Dari hasil pengujian kedua ekstrak sampel Halimeda macroloba dan Halimeda opuntia memiliki  kandungan  antioksidan. Karena presentase nilai inhibisi dari kedua ekstrak  umumnya  sangat  tinggi  karena semakin  kecil  nilai  absorban  maka semakin  tinggi  nilai  inhibisi  dimana
aktivitas antioksidan pada ekstrak semakin tinggi (Regina, 2016).

## KESIMPULAN
Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  etanol  Alga Halimeda opuntia yang  diambil  dari  perairan  Selat Lembeh  Kota  Bitung  Provinsi  Sulawesi Utara  memiliki  aktivitas  antioksidan  dan yang paling besar di konsentrasi 100 mg/L.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang  alga Halimeda  opuntia dengan menggunakan metode lain dan
membandingkan hasilnya dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul,  M.  2003.  Peranan  radikal  bebas dan  antioksidan  dalam  kesehatan dan
penyakit. http://www.intisari.com/radikal.ht ml . Departemen Eksplorasi Laut dan Perikanan, Program dan Kegiatan:  Depatemen  Eksplorasi Laut  dan  Perikanan  Republik Indonesia tahun 2000-2004 . Jakarta:  Depatermen  Eksplorasi Laut dan Perikanan, 2002.
Hanani,  E.,  Mun’im,  A.,  Sekarini,  R.,
Wiryowidagdo,  S.  2006.  Uji aktivitas  antioksidant  beberapa spons  laut  dari  kepulauan  Seribu. Jurnal  Bahan  Alam  Indonesia . 5 (1).
Purnama,  R.,  Melki,  Wike,  A.  E.  P.,
Rozirwan.  2011.  Potensi  Ekstrak Rumput Laut Halimeda rencii dan Euchema cotonii sebagai Antibakteri  Vibrio  sp. Maspari
Journal . 2 : 82-88.
Regina, L. 2016. Uji Aktivitas Antioksidan Dari  Ekstrak  Total  Alga  Hijau
Halimeda  opuntia  Linnaeus Dan Halimeda  macroloba  Decaisne Dari Perairan TelukTotok,
Manado. Jurnal  Pesisir  dan  Laut
Tropis . 2 (1).
Suhartono. 2000. Bioteknologi Hasil Laut . PKSPL-IPB. Edisi I. P64-70.
Widiastuti,  H.  N.  2003.  Uji  Aktivitas
Metabolit  Sekunder  dari  Rumput
Laut  Halimeda macroloba sebagai
Senyawa Bioaktif Antijamur Candida  albicans  dan  Torula histolutica. Jurnal  Ilmu  Kelautan . 8(2) :114-1