Vol.15, No.1, JUNI 2018, Hal. 45-50 ISSN: 1693 - 7899

## AKTIVITAS ANTIDIARE FRAKSI AIR EKSTRAK ETANOL
DAUN SALAM ( Syzygium polyanthum (Wight.) Walp.) PADA MENCIT
Kiki Damayanti 1)* , Risha Fillah Fithria 1 , Rokhila Kamala Sari 1 , Dewi Ratna Ningsih 1 1 Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim, Semarang
* kiki_damayanti@yahoo.com

## INTISARI
Beberapa penelitian membuktikan ekstrak dan infus daun salam sebagai antidiare. Fraksinasi dapat  menyederhanakan  senyawa  dalam  ekstrak.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  fraksi  air  ekstrak  etanol  daun  salam  (FAEEDS)  sebagai  protektor  diare  yang  diinduksi castor  oil ,  antimotilitas  usus,  dan  mengetahui  keberadaan  flavonoid  dan  tanin  didalamnya. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental menggunakan randomized matched posttest only control  group  design .  FAEEDS  dosis  1,  2,  dan  3  g/kgBB  diberikan  pada  mencit  secara  per  oral. Kelompok  kontrol  positif  yang  digunakan  adalah  loperamid  HCl  0,5  mg/kgBB  dan  PGA  3%  25 ml/kgBB  diberikan  pada  kelompok  kontrol  negatif.  Satu  jam  kemudian,  mencit  diberi castor  oil secara  per  oral.  Banyaknya  feses  cair  dan  tidak  terbentuk  yang  terbentuk  selama  4  jam  diamati. Pengujian aktivitas antimotilitas dilakukan dengan memberikan suspensi norit 10% 10 ml/kgBB 45 menit setelah pemberian castor oil . Satu jam  kemudian dilakukan pengukuran panjang usus yang dilalui  marker  norit  dan  panjang  usus  seluruhnya.  Data  banyaknya  feses  yang  cair  dan  tidak berbentuk  serta  data  rasio  panjang  usus  yang  dilalui  norit  diuji  perbedaannya  dengan  uji  Mann- Whitney  dengan  taraf  kepercayaan  95%.  Keberadaan  flavonoid  dan  tanin  diketahui  melalui kromatografi  lapis  tipis.  Hasil  penelitian  menunjukkan  FAEEDS  beraktivitas  sebagai  protektor diare dan antimotilitas usus pada semua dosis. Flavonoid dan tanin terkandung dalam FAEEDS.
Kata kunci: fraksi air, daun salam, protektor diare, antimotilitas, castor oil , loperamid HCl

## ABSTRACT
Some  research  proves  extracts  and  infusion  of  salam  leaf  as  antidiarrheal.  Fractination  can simplify the compounds in the extract. The aim of this research is to know the diarrhea protector activity of water fraction of ethanol extract of salam leaf (WFEESL), the antimotility activity, and to verify the persence of flavonoids and tannins in the fraction. The research was an experimental study  using  randomized  matched  posttest  only  control  group  design.  WFEESL  doses  1,  2,  and  3 g/kgBW  were  given  to  mice  orally.  The  positive  control  group  was  given  loperamide  HCl  0.5 mg/kgBW.  One  hour  later,  each  mouse  was  given  1  ml  of  castor  oil  orally.  Observations  were made on the weight of liquid and unformed stools that formed during 4 hours of observation. Ten percent of carbo adsorbent suspensian 10 ml/kgBW was given orally as marker to the mice in the group  of  antimotilily  activity  45  minutes  after  castor  oil.  The  parameter  which  measure  was  the length  of  intestinal  which  passed  by  carbo  adsorbent  compared  with  the  whole  intestinal  length. The  data  analyzed  by  Kruskal  Wallis  test,  continued  with  Mann  Withney  test,  with  95%  of confidence level. The presence of flavonoids and tannins are known by thin layer chromatography. The results showed that WFEESL exhibits protective diarrhea and antimotility activity at all doses. Flavonoids and tannins are contained in WFEESL.
Keywords: water fraction, salam leaves, diarrhea protector, antimotility, castor oil, loperamide HCl
46
Corresponding author: Kiki Damayanti Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim Jl. Menoreh Tengah X/22 Sampangan Semarang kiki_damayanti@yahoo.com

## PENDAHULUAN
Malik  dan  Ahmad  (2013)  telah  melakukan  kajian  ilmiah  penggunaan  daun  salam  sebagai antidiare.  Ekstrak  etanol  daun  salam  dalam  bentuk  suspensi  kadar  30  %  yang  diberikan  pada mencit  sebanyak  1  ml/100  gBB  diketahui  mempunyai  efek  antimotilitas  pada  mencit  yang diinduksi  diare  dengan castor  oil ,  yang  sebanding  dengan  loperamid  HCl.  Kesetaraan  efek antimotilitas ekstrak etanol daun salam dengan loperamid HCl mendorong dilakukannya penelitian lanjutan.
Ekstrak  etanol  daun  salam  yang  digunakan  dalam  penelitian  tersebut  kemungkinan  masih mengandung  senyawa-senyawa  lain  yang  mungkin  dapat  menganggu  kerja  senyawa  yang bertanggung  jawab  terhadap  efek  antimotilitas.  Diperlukan  teknik  ekstraksi  lebih  lanjut  untuk menyederhanakan  kandungan  senyawa  dalam  ekstrak,  salah  satunya  dengan  cara  fraksinasi. Peningkatan  potensi  ekstrak  etanol  daun  salam  diharapkan  dapat  terjadi  setelah  dilakukan fraksinasi.
Bentuk  penelitian  lanjutan  adalah  pengujian  efek  antimotilitas  dengan  metode  transit intestinal  dan  proteksi  diare  yang  diinduksi castor  oil pada  FAEEDS.  Penelitian  ini  diharapkan dapat mengungkapkan mekanisme daun salam dalam bentuk fraksi air.

## METODE PENELITIAN

## Desain Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental,  menggunakan randomized  matched posttest only control group design

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah rotary evaporator (Heidolph) dan timbangan (Ohaus). Hewan uji yang  digunakan adalah mencit jantan galur Balb-C sehat dengan berat badan 20 – 30 g, umur 2 – 3 bulan. Daun salam diperoleh dari Gunung Pati, Semarang. Etanol 70%, dan n-heksan (Brataco) digunakan untuk menyiapkan FAEEDS. KLT menggunakan fase diam selulosa dan fase gerak berupa butanol, asam asetat, dan aquadest. Penampak bercak flavonoid adalah uap amonia dan FeCl 3 untuk tanin. Rutin dan asam galat digunakan sebagai pembanding. Uji aktivitas antidiare menggunakan castor oil (Sigma-Aldrich), loperamid HCl (PT. Nufarindo), dan suspensi norit 10% dalam PGA.

## Jalannya Penelitian
1. Pembuatan FAEEDS
Ekstrak  etanol  daun  salam dibuat  dengan  metode  maserasi.  FAEEDS diperoleh melalui fraksinasi  langsung  campuran  ekstrak  etanol  daun  salam  dan  air  dengan  n-heksan.  Fraksinat yang diperoleh diuapkan dalam rotary evaporator .

## 2. Uji Aktivitas Proteksi Diare
Mencit  kelompok  1  merupakan  kelompok  kontrol  negatif  yang  diberi  PGA  3%  25 ml/kgBB.  Mencit  kelompok  2  diberi  loperamid  HCl  dosis  0,5  mg/kgBB  sebagai  kelompok kontrol positif. Kelompok  3, 4 , dan 5 diberi perlakuan fraksi air ekstrak etanol dengan dosis berturut-turut 1, 2, dan 3 g/kgBB. Pemberian senyawa uji dilakukan secara per oral. Setelah 60
47
menit, semua mencit diberi castor oil sebanyak 1 ml secara per oral. Banyaknya feses cair dan tidak berbentuk selama 4 jam ditimbang.
3. Uji Aktivitas Antimotilitas Uji aktivitas antimotilitas hampir sama dengan uji aktivitas  proteksi diare. Empat puluh lima  menit  setelah  pemberian castor  oil ,  mencit  diberi  suspensi  norit.  Satu  jam  sesudahnya, mencit  dikorbankan.  Panjang  usus  yang  dilalui  norit  dan  panjang  usus  seluruhnya  diukur panjangnya.  Jarak  usus  yang  dilalui  norit  dibagi  panjang  usus  seluruhnya  dihitung  untuk menetapkan rasionya.
4. Pengujian Keberadaan Flavonoid dan Tanin
FAEEDS ditimbang sebanyak 100 mg dilarutkan dalam etanol 96% 5 – 10 tetes. Larutan FAEEDS,  rutin,  dan  asam  ga;at  ditotolkan  pada  lempeng  selulosa,  kemudian  dielusi  dengan fase  gerak.  Fase  gerak  untuk  elusi  FAEEDS  dan  rutin  adalah  asam  asetat  15%,  sedangkan untuk  elusi  FAEEDS  dan  asam  tanat  adalah  campuran  butanol,  asam  asetat,  dan  akuades (3:1:1). Lempeng selulosa dikenai penampak bercak setelah elusi selesai. FAEEDS dinyatakan mengandung  flavonoid  bila  bercak  FAEEDS  warnanya  menguat  setelah  diuapi  amonia (Harborne,  1987).  Keberadaan  tanin  dalam  FAEEDS  dinyatakan  apabila  bercak  FAEEDS berwarna kebiruan setelah disemprot FeCl 3 (Evans dan Trease, 2002).
5. Analisis Hasil
Data  berupa  banyaknya  feses  cair  dan  tidak  berbentuk  dan  rasio  panjang  usus  yang dilalui  norit  dengan  panjang  usus  seluruhnya  disajikan  sebagai  rata-rata  standart  error  of mean  (SE).  Perbedaanyadata  diuji  dengan  uji  Kruskal  Wallis,  dilanjutkan  dengan  uji  Mann- Whitney  dengan  taraf  kepercayaan  95%.  FAEEDS  dinyatakan  mempunyai  aktivitas  protektor bila  banyaknya  feses  cair  dan  tidak  berbentuk  pada  mencit  yang  diberi  FAEEDS  lebih  kecil secara bermakna dibanding kelompok kontrol negatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun salam termasuk tanaman Indonesia yang banyak dieksplorasi dan diketahui mempunyai aktivitas  sebagai  antidiare  dalam  bentuk  ekstrak  dan  infus  Malik  dan  Ahmad,  2013;  Sundari  dan Masruhen,  2010).  Penelitian  ini  menggunakan  daun  salam  dalam  bentuk  fraksi  air  dengan  tujuan mengeksplorasi kandungan daun salam yang bersifat polar. Penelitian ini diharapkan dapat menjadi penelitian  perintis  dalam  rangka  penemuan  senyawa  dalam  daun  salam  yang  berperan  terhadap aktivitasnya sebagai antidiare.
Beberapa  metode  dapat  digunakan  untuk  menginduksi  diare  pada  tikus  dan  mencit. Mikroorganisme berupa Vibrio cholerae dan Escherichia coli dapat digunakan untuk menginduksi diare pada hewan uji (Law et al ., 2013 dan Sawasvirojwong et al ., 2013). Jenis diare yang terjadi akibat  paparan  mikroorganisme  tersebut  adalah  diare  eksudatif.  Pemberian  magnesium  sulfat  dan castor  oil dapat  digunakan  untuk  menginduksi  diare.  Salah  satu  mekanisme  yang  mendasari terjadinya  diare  akibat  pemberian  kedua  zat  tersebut  adalah  kemampuannya  meningkatkan peristaltik usus. Castor oil lebih unggul dibandingkan magnesium sulfat karena durasi diare yang ditimbulkannya  lebih  lama  dibandingkan  zat  peningkat  motilitas  yang  lain  (Oh  dan  Ryu,  2011). Keunggulannya  menjadi  pertimbangan  pemilihan castor  oil sebagai  penginduksi  diare  pada penelitian ini.
Mencit dibuat diare dengan pemberian castor oil . Lipase dalam usus akan mengubah castor oil menjadi  asam  risinoleat  yang  akan  melepaskan  nitrit  oksida,  sehingga  meningkatkan permeabilitas  membran  gastrointestinal  terhadap  kalsium.  Asam  risinoleat  juga  menstimulasi sintesis  prostaglandin,  kemudian  menyebabkan  peningkatan  cairan  dan  elektrolit  ke  dalam  lumen usus. Peningkatan peristaltik usus dapat dipicu oleh asam risinoleat (Kaur et al ., 2014). Rangkuman
48
data  rata-rata  berat  feses  cair  dan  tidak  terbentuk  pada  semua  kelompok  perlakuan  terdapat  pada gambar 1.
Rata-rata berat feses yang cair dan tidak terbentuk pada kelompok mencit yang diberi PGA 3% sebesar 0,64 gram, sedangkan pada kelompok mencit yang diberi loperamid HCl hanya sebesar 0,24  gram.  Secara  statistik  terdapat  perbedaan  berat  feses  cair  dan  tidak  berbentuk  pada  kedua kelompok tersebut (p < 0,05). Rata-rata berat feses cair dan tidak terbentuk pada kelompok mencit yang  diberi  fraksi  air  ekstrak  etanol  daun  salam  dosis  1,  2,  dan  3  g/kgBB  berturut-turut  sebesar 0,38;  0,32;  dan  0,28  gram,  lebih  kecil  secara  bermakna  dibandingkan  dengan  kelompok  mencit yang hanya diberi PGA 3%. Hal ini menunjukkan bahwa FAEEDS mempunyai efek memproteksi diare  pada  dosis  1,  2,  dan  3  g/kgBB.  Berdasarkan  hasil  analisa  statistik,  diketahui  pula  bahwa FAEEDS dosis 2 dan 3 g/kgBB mempunyai efek proteksi diare yang setara dengan loperamid HCl.
Rasio  panjang  usus  yang  dilalui  norit  dibandingkan  panjang  usus  mencit  seluruhnya  pada kelompok  kontrol  negatif  lebih  besar  dibandingkan  kelompok  lainnya.  Rangkuman  hasil  uji aktivitas  antimotilitas  terdapat  pada  tabel  I. Rasio  panjang  usus  yang  dilalui  norit  dibandingkan panjang  usus  mencit  seluruhnya  (R)  pada  kelompok  yang  diberi  loperamid  HCl  nilainya  paling kecil.  R  pada  kelompok  mencit  yang  diberi  FAEEDS  semakin  menurun  seiring  dengan penambahan dosis. Hasil analisa statistik menunjukkan bahwa R kelompok yang diberi FAEEDS dosis 1, 2, dan 3 g/kgBB lebih kecil secara signifikan dibandingkan kelompok yang hanya diberi suspensi gom arab. Hasil analisa statistik tersebut menunjukkan bahwa FAEEDS pada semua dosis mempunyai  aktivitas  antimotilitas.  Penelaahan  lebih  lanjut  mengenai  aktivitas  antimotilitas FAEEDS dibandingkan loperamid HCl, diketahui bahwa FAEEDS aktivitas antimotilitasnya tidak sekuat loperamid HCl.
Keterangan: K1 : kelompok yang diberi gom arab 3% 25 ml/kgBB K2 : kelompok yang diberi loperamid HCl 0,5 mg/kgBB K3 : kelompok yang diberi FAEEDS 1 g/kgBB K4 : kelompok yang diberi FAEEDS 2 g/kgBB K5 : kelompok yang diberi FAEEDS 3 g/kgBB *    : berbeda bermakna dibandingkan K1 (p < 0,05)
Gambar 1. Rata-rata berat feses cair dan tidak berbentuk berbagai kelompok perlakuan

## Tabel I. Aktivitas Antimotilitas FAEEDS
Perlakuan Rata-Rata R  SE Suspensi gom arab 3% 25 ml/kgBB 0,554  0,009 Loperamid HCl 0,5 mg/kgBB 0,284  0,006* FAEEDS 1 g/kgBB 0,507  0,011* FAEEDS 2 g/kgBB 0,404  0,002* FAEEDS 3 g/kgBB 0,347  0,004*
R: rasio panjang usus yang dilalui norit dibandingkan panjang usus mencit seluruhnya
* : berbeda bermakna dibandingkan kelompok kontrol negatif (p<0,05)
Melalui  KLT,  keberadaan  flavonoid  dan  tanin  dalam  FAEEDS  dinyatakan  positif.  Warna bercak FAEEDS yang terpisah setelah dielusi menguat warnanya setelah diuapi amonia, demikian juga  dengan  bercak  rutin.  Bercak  FAEEDS  dan  asam  galat  yang  terelusi  dengan  fase  gerak campuran butanol, asam asetat, dan akuades menjadi kecoklatan setelah disemprot dengan FeCl 3 . Aktivitas  antidire  FAEEDS  dengan  mekanisme  proteksi  diare  dan  sifatnya  sabagai antimotilitas  diduga  dikarenakan  kandungan  metabolit  sekundernya  yaitu  flavonoid  dan  tanin. Flavonoid berperan sebagai antidiare dengan cara meningkatkan reabsorbsi air dan elektrolit dalam usus serta menghambat motilitas usus (Palombo, 2006). Tanin berkontribusi terhadap efek antidiare karena  kemampuannya  memperbaiki  sel  epitel  usus,  penghambatsekresi  cairan  dalam  usus,  dan aktivitas  antioksidannya  yang  tinggi  (Ren et  al .,  2011).  Asam  tanat  yang  dibuat  komplek  dengan gelatin  terbukti  mengurangi  efek  gastroenteritis  akut  pada  pasien  dewasa  pada  48  jam  pertama setelah pemberian (Ruszcynski et al ., 2014).

## KESIMPULAN
FAEEDS  mempunyai  aktivitas  antidiare  dengan  mekanisme  sebagai  antimotilitas  dan sebagai proteksi diare. Aktivitas antidiare FAEEDS diduga berasal dari flavonoid dan tanin yang terkandung di dalamnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Evans,  W.C.  and Trease, G.E.,  2002, Trease  and  Evans  Pharmacognosy ,  15 th Edition,  Saunders,
Philadelphia
Harborne,  J.B.,  1987, Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan , diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro, Penerbit ITB, Bandung, 10  – 15
Kaur, M., Singh, A., and Kumar, B., 2014, Comparative Antidiarrheal and Antiulcer Effect of The Aqueous  and  Ethanolic  Stem  Bark  Extract  of Tinospora  cordifolia in  Rats, Journal  of Advanced Pharmaceutical Technology and Research , 5 (3) , 122 – 128
Law,  R.J.,  Gur-Arie,  L.,  Rosenshine,  I.,  and  Finlay,  B.B.,  2013,  In  Vitro  and  In  Vivo  Model Systems  for  Studying  Enteropathogenic Eschericia  coli Infections, Cold  Spring  Harbor Perspectives in Medicine , 3 (3) , 1 – 16
Malik,  A.  and  Ahmad,  A.R.,  2013,  Antidiarrheal  Activity  of  Ethanolic  Extract  of  Bay  Leaves ( Syzygium polyanthum (Wight.) Walp.), International Research Journal of Pharmacy , 4 (4) , 106 – 108
Oh, S. and Ryu, B., 2011, Experimental Studies on The Antidiarrheal Effects of Anjang-san, The Journal of Korean Oriental Medicine , 32 (6) , 54 – 66
50
Palombo, E.A., 2006, Phytochemicals from Traditional Medicinal Plants Used in The Treatment of Diarrhoea: Modes of Action and Effects on Intestinal Function, Phytotherapy Research , 20
(9) , 717 – 724
Ren,  A.,  Zhang,  W.,  Thomas,  H.G.,  Barish,  A.,  Berry,  S.,  Kiel,  J.S.,  and  Naren,  A.P.,  2011,  A Tannic  Acid-Base  Medical  Food,  Casinex ® ,  Exhibits  Broad-Spectrum  Antidiarrheal Properties: A Mechanistic and Clinical Study, Digestive Disease and Sciences , 57 (1) , 99 – 108
Ruszczynski,  M.,  Urbanska,  M.,  and  Szajewska,  H.,  2014,  Gelatin  Tannate  fot  Treating  Acute Gastroenteritis: A Systematic Review, Annals of Gastroenterology , 27 (2) , 121 – 124
Sawasvirojwong,  S.,  Srimanote,  P.,  Chatsudthipong,  V.,  and  Muanprasat,  C.,  2013,  An  Adult Mouse  Model  of Vibrio  cholera -Induced  Diarrhea  for  Studying  Pathogenesis  Potential therapy of Cholera, PloS Neglected Tropical Disease , 7 (6) , 1 – 10
Sundari  dan  Masruhen,  2010,  Studi  Beberapa  Dosis  Infus  Daun  Salam  ( Syzygium  polyanthum Wight Walp) sebagai Antidiare pada Mencit ( Mus musculus ), Farmasains , 1 (1) , 1 – 7