## IDENTIFIKASI DAN PERBANDINGAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN KELOR PADA VARIASI PELARUT DENGAN METODE DPPH
Tutik 1 , I Nyoman Agus Dwipayana 1 , Vida Elsyana 1

## ABSTRACT
Indonesia is a country that has biodiversity that can be processed into various drugs.  One  of  the  biodiversity  that  has  the  potential  to  be  developed  as  a traditional medicine is Moringa leaves. Moringa (Moringa oleifera L.) is a plant that  has  many  benefits.  One  of  the  most  prominent  of  the  Moringa  plant contents  is  antioxidants,  especially  on  the  leaves.  The  purpose  of  this  study was  to  identify  secondary  metabolites  and  their  derivatives,  as  well  as determine  the  value  of  antioxidant  activity  in  Moringa  leaf  extract  in  n- hexane,  ethyl  acetate  and  ethanol  solvents.  Antioxidant  activity  test  was carried  out  by  DPPH  (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)  method  which  was  then measured  by  UV-Vis  spectrophotometer.  The  results  showed  that  Moringa oleifera  L.  leaf  extract  had  antioxidant  activity,  with  IC50  values  of  n-hexan extract, ethyl acetate, and ethanol were 448.17 μg / mL, 169.90 and 103.98 μg  /  mL.  Moringa  leaf  (Moringa  oleifera  L.)  extract  which  has  the  greatest antioxidant  activity  is  ethanol  with  IC50  value  of  103.98  μg  /  mL  which contains alkaloids, flavonoids, tannins, steroids and saponins.
Keywords: Moringa  Oleifera  L.,  secondary  metabolites,  antioxidant  activity, DPPH (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl)

## ABSTRAK
Indonesia  merupakan  negara  yang  memiliki  keanekaragaman  hayati  yang dapat  diolah  menjadi  berbagai  macam  obat.  Salah  satu  keanekaragaman hayati  yang  berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai  obat  tradisional  adalah kelor. Tanaman kelor (Moringa oleifera L.) merupakan tanaman yang memiliki banyak  manfaat.  Salah  satu  yang  paling  menonjol  dari  kandungan  tanaman kelor  adalah  antioksidan,  terutama  pada  daunnya.  Tujuan  dilakukannya penelitian  ini  adalah  untuk  mengidentifikasi  metabolit  sekunder  dan turunannya, serta mengetahui nilai aktivitas antioksidan dalam ekstrak daun kelor  pada  pelarut  n-heksan,  etil  asetat  dan  etanol.  Uji  aktivitas  antioksidan dilakukan  dengan  metode  DPPH  ( 1,1-difenil-2-  pikrilhidrazil )  yang  kemudian serapannya  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  penelitian menunjukkan  ekstrak  daun  kelor  ( Moringa  oleifera L.)  memiliki  aktivitas antioksidan,  dengan  nilai  IC 50 dari  ekstrak  n-hexan,  etil  asetat,  dan  etanol berturut-turut adalah 448,17 μg/mL, 169,90 dan 103,98 μg/mL. Ekstrak daun kelor  ( Moringa  oleifera L.)  yang  memiliki  aktivitas  antioksidan  terbesar  yaitu etanol  dengan  nilai  IC 50 sebesar  103,98  μg/mL  yang  mengandung  senyawa golongan alkaloid, flavonoid, tanin, steroid dan saponin.
Kata Kunci :   Daun Kelor ( Moringa Oleifera L.), metabolit sekunder, Aktivitas antioksidan, DPPH ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil )

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara yang  memiliki  keanekaragaman hayati  yang  dapat  diolah  menjadi berbagai macam obat. Sejak ribuan tahun  yang  lalu,  penggunaan  obat- obatan  tradisional  telah  banyak dipraktikkan dan menjadi budaya di Indonesia  dalam  bentuk  ramuan jamu-jamuan.  Menurut  penelitian obat-obatan
tersebut banyak digunakan  karena  keberadaannya yang mudah didapat dan ekonomis. dan  memiliki  efek  samping  relatif rendah.  Adanya  kandungan  yang berbeda  dalam  tanaman  tersebut, menjadikan  efek  saling  mendukung yang  secara  sinergis  (Dwipayana, 2012).
Salah  satu  keanekaragaman
hayati yang berpotensi untuk dikembangkan sebagai obat tradisional adalah kelor. Pohon kelor
( Moringa  oleifera L . )  adalah  salah satu tanaman yang paling luar biasa yang  pernah  ditemukan.  Kelor dikenal  sebagai The  Miracle  Tree atau  pohon  ajaib.  Hal  ini  mungkin terdengar sensasional, namun faktanya  memang  kelor  terbukti secara  ilmiah  merupakan  sumber gizi berkhasiat obat yang kandungannya  di  luar  kebiasaan kandungan tanaman pada
umumnya (Toripah et al ., 2014).
Tanaman  ini  telah  dikenal selama berabad-abad sebagai salah
satu
tanaman sayuran yang multiguna  padat  nutrisi.  Hampir semua  bagian  dari  tanaman  kelor ini dapat dijadikan sumber makanan karena  mengandung  senyawa  aktif dan  gizi  lengkap.  Manfaat  daun kelor salah satunya yaitu daun kelor ( Moringa
oleifera
L.) mampu meningkatkan  kadar  hemoglobin dalam  darah,  baik  secara  uji praklinis  maupun  klinis,  hal  ini disebabkan daun kelor mengandung tinggi  zat  besi,  protein  dan  vitamin C. Oleh karena itu, daun kelor dapat digunakan sebagai alternatif penanganan  anemia  pada  wanita usia  reproduktif  (Handayani  dan Arifin, 2017).
Berdasarkan  penelitian  Anwar et  al .  (2014),  diketahui  potensi daun  kelor  sebagai  tanaman  herbal yang mempunyai kemampuan sebagai  antipestisida,  antibakteri dan  antikanker.  Senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam ekstrak akuades panas (70 o C) daun kelor antara lain alkaloid, flavonoid, tanin  dan  triterpenoid.  Ekstrak terbaik dalam
penelitian ini ditunjukkan  berdasarkan  nilai  LC 50 yang  lebih  kecil  dari  pada  1000 ppm,  yaitu  pada  ekstrak  akuades panas  (70 o C)  sebesar  163,979 ppm.  Ekstrak  daun  kelor  ( Moringa oleifera
L.) memiliki aktivitas
antibakteri
terhadap bakteri
Escherichia  coli dan Staphylococcus
aureus (Dima et  al .,  2016).  Salah satu  yang  paling  menonjol  dari kandungan  tanaman  kelor  adalah antioksidan, terutama pada daunnya
yang mengandung antioksidan  yang  tinggi  (Sreelatha dan Padma, 2009).
Antioksidan  merupakan  suatu
senyawa yang membantu melindungi  tubuh  dari  kerusakan sel-sel  oleh  radikal  bebas.  Radikal bebas merupakan salah satu bentuk senyawa  reaktif,  yang  memiliki elektron  yang  tidak  berpasangan  di kulit  terluarnya  (Winarsi,  2007). Radikal  bebas  dapat  berasal  dari polusi,  debu  maupun  diproduksi secara kontinyu sebagai
konsekuensi
dari metabolisme
normal  yang  dapat  berdampak buruk  bagi  tubuh  (Zuhra et  al .,
2008).  Selain  itu,  antioksidan  juga berperan  memperlambat  proses penuaan dengan membantu menggantikan  sel-sel  tubuh  pada tingkat  yang  lebih  cepat  dari usianya.  Antioksidan  merupakan nutrisi alami yang ditemukan dalam buah-buahan  dan  sayuran  tertentu, dan telah terbukti dapat melindungi sel-sel  manusia  dari  kerusakan oksidatif.  Antioksidan  pada  produk pangan
berperan untuk
mempertahankan
mutu
dalam berbagai kerusakan. Kerusakan oksidatif  yang  ditimbulkan  seperti ketengikan,  perubahan  nilai  gizi,
perubahan  warna  dan  aroma,  serta kerusakan  fisik  lain  pada  produk pangan (Lulail, 2009).
Salah satu pengukuran aktivitas  antioksidan  yang  paling umum  digunakan  adalah  melalui penangkapan  radikal  bebas  ( free radical  scavenging )  menggunakan radikal 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil
(DPPH).  Metode  ini  dipilih  karena memiliki beberapa kelebihan seperti aktivitas  penangkap  radikal  bebas yang  tinggi  dalam  pelarut  organik pada suhu kamar, metode
sederhana,  mudah,  menggunakan sampel  dalam  jumlah  yang  sedikit dalam  waktu  yang  singkat  dan hanya membutuhkan spektrofotometer  UV-Vis  (Hanani et al ., 2005).
Penelitian  tentang  aktivitas antioksidan  pada  daun  kelor  telah ada  sebelumnya  yaitu  ekstrak etanol daun kelor dengan menggunakan  metode  maserasi memiliki  daya  antioksidan  dengan nilai  IC 50 sebesar  22,1818  ppm, sedangkan  ekstrak  air  daun  kelor dengan menggunakan
metode
dekok memiliki IC 50
sebesar 57,5439  ppm  (Rizkayanti et  al ., 2008). Berdasarkan penelitian Martiningsih  dan  Santiasa  (2015), aktivitas  antioksidan  pada  fraksi semipolar  yaitu  etil  asetat  (IC 50 = 192,05  ppm)  lebih  besar  dari  pada fraksi  nonpolar  yaitu  n-heksana (IC 50 =  459,75  ppm).  Selain  itu
menurut  Meigaria et  al .  (2008),
Ekstrak  aseton  dari  daun  kelor
( Moringa  oleifera L.)  memiliki aktivitas  sebagai  antioksidan  untuk meredam  radikal  bebas.  Kekuatan antioksidan  dari  ekstrak  aseton daun  kelor  ( Moringa  oleifera L.) adalah  IC 50 =  427,49  µg/mL,  serta senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  daun  kelor
( Moringa oleifera L.) adalah golongan  Alkaloid,  Flavonoid,  Tanin dan Steroid. Berdasarkan hal tersebut maka  perlu  diteliti  lebih  lanjut kandungan senyawa metabolit
sekunder  dan  turunannya,  serta aktivitas  antioksidan  daun  kelor ( Moringa  oleifera L.).  Penelitian  ini akan  dilakukan  identifikasi  ekstrak daun  kelor  pada  pelarut  n-heksan, etil  asetat  dan  etanol,  dilanjutkan dengan  uji  aktivitas  antioksidan dengan metode DPPH untuk melihat perbandingan  aktivitas  antioksidan pada  pelarut  dengan  kepolaran yang berbeda.

## METODE PENELITIAN
Alat dan bahan
Alat-alat
yang digunakan untuk  penelitian  adalah  timbangan,
kertas  saring,  blender, rotary evaporator,  mikropippet,  inkubator,
neraca analitik,
vortex, spektrofotometer UV-Vis.
Bahan  penelitian  ini  adalah daun  kelor,  pelarut  n-heksan,  etil asetat,  etanol,  metanol  teknis  yang
telah  didestilasi;  natrium  klorida; natrium hidroksida; amonium hidroksida;  asam  sulfat;  asam klorida;  asam  asetat;  besi  (III) klorida;  kalium  hidroksida;  serbuk magnesium;  pereaksi  Dragendorff;
pereaksi Mayer; pereaksi Liebermann-Bouchard; asam askorbat  (Prolabo)  dan  DPPH  ( 1,1- difenil-2 pikrilhidrazil ) (Sigma
Aldrich).
Cara kerja Sampel daun kelor dibersihkan, dipisahkan dari batangnya dan dicuci sampai bersih, kemudian ditiriskan.
Selanjutnya  dikeringkan  dengan diangin-anginkan  pada  suhu  ruang, pengeringan  pada  suhu  ruang selama  ±  3  hari.  Setelah  sampel kering,  dilakukan  penghancuran menggunakan  blender  kering  untuk mendapatkan bubuk sampel (Rahmat,  2009).  Sebanyak  900 gram  serbuk  simplisia  daun  kelor dimaserasi  menggunakan  pelarut dengan  kepolaran  yang  berbeda yaitu  n-heksan,  etil  asetat  dan etanol. Setiap pelarut menggunakan masing-masing  300  gram  sampel dan  kemudian  ditambahkan  pelarut sampai 300 gram sampel terendam. Campuran  daun  kelor  yang  sudah didiamkan  selama  24  jam  disaring dengan  penyaring  dan  corong  steril untuk  memisahkan  filtrat  dari endapan/ampas.  Sisa  ampas  daun kelor  dimaserasi  kembali  dengan
pelarut yang masih baru. Penggantian pelarut
dilakukan sebanyak  tiga  kali  dan  dievaporasi dengan rotary  evaporator (pada suhu  50 o C)  sehingga  diperoleh ekstrak pekat.
Pada  masing-masing  ekstrak etanol,  etil  asetat,  dan  n-heksana
dari  daun  kelor  diidentifikasi  serta diuji  aktivitas  antioksidan  dengan metode  Blois  (1958).  Nilai  IC 50 dihitung  masing-masing  dengan menggunakan  rumus  persamaan regresi Blois.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Rendemen ekstrak daun kelor ( Moringa oleifera L.) dengan pelarut n-heksan, etil asetat dan etanol
Serbuk  kering  daun  kelor ( Moringa  oleifera L.)  sebanyak  900 gram  dimaserasi  dengan  pelarut dengan kepolaran yang berbeda 2 L n-heksan,  2  L  etil  asetat  dan selanjutnya  2  L  etanol  dengan setiap pelarut masing-masing mengunakan  300  gram.  Maserasi dilakukan  selama  3  hari  dilakukan
sebanyak  3  kali  untuk  memperoleh filtrat. Filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan evaporator pada suhu  lebih  kurang  50 0 C  kemudian diuapkan  diatas  waterbath  pada suhu  <  50 0 C  sehingga  diperoleh ekstrak kental n-heksan, etil asetat, dan  etanol  berturut-turut  yaitu 14,27,  26,20  dan  38,07  gram.
Tabel 2.
Hasil penapisan fitokimia daun kelor ( Moringa oleifera L.). NO Jenis Uji Ekstrak n-heksan etil asetat etanol 1 Alkaloid + + + 2 Flavonoid - + + 3 Tanin - - + 4 Steroid + + + 5 Triterpenoid - - - 6 Saponin + + + No. Nama Bahan bobot simplisia (gram) Bobot Ekstrak (gram) Rendemen (%) 1 Ekstrak n-heksan 300 14,27 4,76 2 Ekstrak etil asetat 300 26,20 8,73 3 Ekstrak etanol 300 38,07 12,69
Dari  hasil  uji  fitokimia ekstrak
terlihat  bahwa  ekstrak  yang  paling banyak mengandung
metabolit sekunder  adalah  ekstrak  etanol diikuti  oleh  ekstrak  etil  asetat  dan n-heksan. Ekstrak etanol daun kelor ( Moringa  oleifera L.)  mengandung lebih  banyak  metabolit  sekunder yang  bersifat  sebagai  antioksidan.
Dikarenakan pelarut etanol mengekstraksi senyawa polar seperti  steroid,  flavanoid  dan  fenol
yang banyak
terdapat  pada  tumbuh-tumbuhan. Pelarut n-heksan yang bersifat non- polar melarutkan lemak dan mengekstraksi senyawa-senyawa yang  bersifat  non-polar  seperti asam  lemak,  sterol,  kumarin,  dan beberapa  terpenoid.  Etil  asetat dengan tingkat kepolaran menengah digunakan untuk mengekstraksi  senyawa  dengan polaritas menengah seperti
flavonoid,  tanin  dan  beberapa alkaloid.
Gambar 1. Perbandingan dengan IC 50 ekstrak n-heksan, etil asetat, etanol dan vitamin C Hasil pengujian potensi ekstrak daun kelor ( Moringa
oleifera L.)  dengan  pelarut  n-
heksan,  etil  asetat,  etanol  sebagai antioksidan dengan metode peredaman  DPPH  menunjukkan bahwa, ekstrak daun kelor ( Moringa oleifera L.) dengan
pelarut n-heksan memiliki aktivitas antioksidan  sangat  lemah  dengan nilai IC 50 448,17 µg/mL, etil asetat memiliki aktivitas antioksidan lemah  dengan  nilai  IC 50 169,90 µg/mL,  etanol  memiliki  aktivitas antioksidan  kuat  dengan  nilai  IC 50 103,98  µg/mL.  Ekstrak  etanol
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 n heksan etil asetat etanol vitamin C 448.17 169.9 103.98 8.11 IC 50 (µ g/ m L)
memiliki  aktivitas  antioksidan lebih kuat  dibanding  ekstrak  etil  asetat dan  n-heksan  hal  ini  dikarenakan ekstrak  etanol  mengandung  lebih banyak senyawa
metabolit sekunder  turunan  fenol  seperti tanin, steroid dan flavonoid. Secara spesifik suatu senyawa dikatakan sebagai
antioksidan  sangat  kuat  jika  nilai IC 50 <  50  µg/mL,  kuat  untuk  nilai IC 50 50-100  µg/mL,  sedang  jika nilai  IC 50 100-150  µg/mL,  lemah jika  nilai  IC 50 151-200  µg/mL  dan sangat  lemah  jika  nilai  IC 50 >  200 µg/mL  (Molyneux,  2004)  sehingga dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak daun  kelor  ( Moringa  oleifera L.) dengan  pelarut  n-heksan  memiliki aktivitas antioksidan sanggat lemah, etil asetat memiliki aktivitas antioksidan  lemah,  etanol  memiliki aktivitas antioksidan sedang.

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  kelor  ( Moringa oleifera L.)  memiliki  aktivitas antioksidan,  dengan  nilai  IC 50 dari ekstrak  n-hexan,  etil  asetat,  dan etanol berturut-turut adalah 448,17  μg/mL,  169,90  dan  103,98 μg/mL.
Ekstrak  daun  kelor  ( Moringa oleifera L.)  yang  memiliki  aktivitas antioksidan  terbesar  yaitu  etanol dengan  nilai  IC 50 sebesar  103,98 μg/mL  yang  mengandung  senyawa
golongan alkaloid, flavonoid, tanin, steroid dan saponin.

## DAFTAR PUSTAKA
Anwar,  S.,  Yulianti,W.,  Hakim,  A., Fasya,  G.,  Fauziyah,  B.,  dan
Muti’ah. R., 2014. Uji Toksisitas  Ekstrak  Akuades (Suhu  Kamar)  Dan  Akuades
Panas  (70 o C)  Daun  Kelor ( Moringa oleifera Lamk.) Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach. Jurusan
Kimia,  Fakultas  Sains  dan Teknologi, UIN Maulana Blois,  M.S  1958.  Antioksidant determinations  by  the  use  of stable  free  radical,  Nature, 181: 1199-1200 Dwipayana,  I,  N,  A,.  2012.  Uji
Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak Daun Cocor Bebek ( Kalanchoe pinnata ) Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus FNCC 0047. Karya  Tulis  Ilmiah .
Akademi  analis  Farmasi  Dan Makanan. Universitas Malahayati. Bandar Lampung. Hanani  E.,  M  Abdul,  S  Ryany. 2005.  Identifikasi  Senyawa Antioksidan dalam Spons Callyspongia sp . dari
Kepulauan  Seribu.  Majalah Ilmu Kefarmasian. Universitas Indonesia  Depok.  2(3):127-
133.
Handayani, S., dan Arifin, Z., 2017.
Pengaruh Daun Kelor ( Moringa  oleifera )  Terhadap Peningkatan Kadar Hemoglobin    Pada  Wanita Usia Reproduktif Yang
Mengalami  Anemia.  Seminar Nasional  Kebidanan.  Vol.1, No. 1
Lulail,  J.  2009.  Kajian  Hasil  Riset Potensi  Antioksidan  Di  Pusat Informasi Teknologi Pertanian Fateta  IPB  Serta  Aplikasi Ekstrak  Bawang  Putih,  Lada
Dan Daun Sirih Pada Dendeng Sapi. Skripsi .
Institut Pertanian Bogor. Bogor. Martiningsih,  N,  W.,  dan  Santiasa, I,  P,  A.,  2015.  Uji  Aktivitas Antioksidan Ekstrak N- Heksana dan Etil Asetat Daun Kelor  ( Moringa  oleifera Lam . ) Dengan  Metode  Peredaman Radikal Bebas DPPH. Seminar
Nasional  Riset  Inovatif  III .
Jurusan  Analis  Kimia  dan Pendidikan  Biologi  Fakultas MIPA  Universitas  Pendidikan Ganesha, Singaraja, Bali. Rizkayanti,  Anang  Wahid.  M.  Diah dan Minarni Rama Jura. 2017.
Uji aktivitas antioksidan ekstrak air dan ekstrak Etanol daun  kelor  ( Moringa  Oleifera LAM).  Pendidikan  Kimia/FKIP -  University  of  Tadulako, Palu-Indonesia.  Vol.6  No.2  : 125-131. ISSN 2302-6030 Sreelatha,  S.,  Padma,  P.R.  2009. Antioxidant Activity And Total
Phenolic  Of  Moringa  Oleifera Leaves  In  Two  Stage  Of Maturity.  Plant  Foods  Hum Nutr. 64, 303-311. Toripah,  S,  S.,  Abidjulu,  J.,  dan Wehantouw, F., 2014. Aktivitas Antioksidan dan Kandungan Total Fenolik Ekstrak  Daun  Kelor  ( Moringa oleifera
Lamk). Program Studi Farmasi FMIPA Winarsi,  Hery.  2007. Antioksidan Alami  dan  Radikal  Bebas  : Potensi  dan    Aplikasinya dalam  Kesehatan .  Kanisius. Yogyakarta.
Zuhra,  C,  F.,  Tarigan,  J,  B.,  dan
Sihotang,  H.,  2008.  Aktivitas Antioksidan Senyawa
Flavonoid  dari  Daun  Katuk ( Sauropus  androgunus (L) Merr.). Jurnal Biologi Sumatera . ISSN : 1907−5537; 3(1): 7–10.