(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2

## PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ISOFLAVON TEMPE TERHADAP
TINGKAT STRESS OKSIDATIF PADA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR (Rattus novergicus) SETELAH DIINDUKSI DENGAN DOSIS TOKSIK

## PARASETAMOL

## THE EFFECT OF ISOFLAVON TEMPE EXTRACT ON OXIDATIVE STRESS LEVELS IN WISTAR STRAIN MALE RATS (Rattus novergicus) AFTER INDUCED WITH TOXIC DOSAGES OF PARAACETAMOL
Muhamad Taswin 1 , Ratnaningsih Dewi Astuti 2 , Dewi Marlina 3 , Ocktariyana 4 , Ade Agustianingsih 5 1,2,3,4,5 Poltekkes Kemenkes Palembang, Sumatera Selatan, Indonesia (e-mail penulis korespondensi : ratna@poltekkespalembang.ac.id)

## ABSTRAK
Latar  Belakang :  Sebagai  negara  produsen  dan  sekaligus  konsumen  terbesar  tempe  di  dunia,  telah menjadikan Indonesia sebagai pasar kedelai terbesar di Asia. Sebanyak 50% dari konsumsi kedelai di Indonesia  dilakukan  dalam  bentuk  tempe.  Tempe  adalah  salah  satu  bahan  makanan  yang berpotensi sebagai  bahan  hepatoprotektor.  Kandungan  isoflavon  dalam  tempe  terbukti  dapat  melindungi  fungsi hati  tikus  dalam  kondisi  stres.  Isoflavon  yang  terkandung  dalam  tempe  memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan,  yang  dapat  mencegah  terjadinya  reaksi  oksidasi  dengan  bekerja  sebagai  reduktor  dan melindungi  membran  sel  dari  oksidasi,  serta  menangkal  radikal  bebas  dengan  menghentikan  reaksi berantai dan melindungi sel dari  aktivasi DNA sehingga dapat mengurangi terjadinya kerusakan sel. Keadaan  ini  telah  mendorong  penulis  untuk  meneliti  pengaruh  pemberian  ekstrak  isoflavon  tempe terhadap histokimia dan histopatologi hati tikus putih jantan galur wistar ( Rattus novergicus ) setelah diinduksi dosis toksik Parasetamol.
Metode :  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  menggunakan  rancangan  penelitian Randomized  Posttest  Only  Control  Group  Design  untuk  menentukan  tingkat  stress  oksidatif  pasca pemberian ekstrak isoflavon tempe terhadap tikus putih jantan galur wistar ( Rattus novergicus ) yang diinduksi dengan dosis toksik parasetamol.Tikus yang digunakan sebanyak 30 ekor yang dibagi dalam 5 kelompok, yaitu kelompok 1 diberi ekstrak tempe 160 mg/kgBB, kelompok 2 diberi ekstrak tempe 320  mg/kgBB,  kelompok  3  diberi  ekstrak  tempe  640  mg/kgBB,  kelompok  5  diberi  air  suling  dan kelompok 6 diberi larutan NaCMC 1%. Setiap tikus diberi perlakuan selama 14 hari. Pada hari ke-12, 13 dan 14 tikus diberi parasetamol dengan dosis 900 mg/kgBB dalam NaCMC 1%. Dan pada hari ke- 15, dilakukan pemeriksaan serum darah tikus terhadap kadar SGOT, SGPT dan MDA.
Hasil : Didapatkan bahwa tempe dengan dosis 640 mg/kgBB dapat menekan kadar SGOT, SGPT dan MDA secara signifikan (p<0,05) dibandingkan dengan dosis yang lain serta aquades dan NaCMC 1%. Kesimpulan : Sehingga dapat disimpulkan tempe dapat menjadi alternatif pilihan sumber antioksidan yang dapat melindungi sel-sel hati dari pengaruh zat-zat yang dapat merusak hati.
Kata Kunci : Tempe, SGOT, SGPT, MDA

## ABSTRACT
Background: As a producing country and at the same time the largest consumer of tempeh in the world, Indonesia has become the largest soybean market in Asia. As much as 50% of soybean consumption in Indonesia is done in the form of tempeh. Tempe is a potential food ingredient as a hepatoprotector. The content of isoflavones in tempeh has been shown to protect rat liver function under stress conditions. Isoflavones contained in tempeh have activity as antioxidants, which can prevent oxidation reactions from occurring by working as reducing agents and protecting cell membranes from oxidation, as well
Info artikel      Diterima: 21 Agustus 2022      Direvisi: 30 November 2022       Disetujui: 28 Desember 2022
(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2
as counteracting free radicals by stopping chain reactions and protecting cells from DNA activation so as  to  reduce  cell  damage.  This  situation  has  prompted  the  authors  to  investigate  the  effect  of  the isoflavone extract of tempeh on the histochemistry and histopathology of the livers of male white Wistar rats (Rattus novergicus) after being induced by toxic doses of Paracetamol.
Methods: This study was an experimental study using the Randomized Posttest Only Control Group Design to determine the level of oxidative stress after administration of tempeh isoflavone extract to male white rats (Rattus novergicus) induced with a toxic dose of paracetamol. 5 groups, namely group 1 was given tempe extract 160 mg/kgBB, group 2 was given tempe extract 320 mg/kgBB, group 3 was given tempe extract 640 mg/kgBB, group 5 was given distilled water and group 6 was given 1% NaCMC solution. Each rat was treated for 14 days. On day 12, 13 and 14 rats were given paracetamol at a dose of  900  mg/kg  BW  in  1%  NaCMC.  And  on  the  15th  day,  rat  blood  serum  was  examined  for  levels  of SGOT, SGPT and MDA.
Results: It was found that tempeh at a dose of 640 mg/kgBW could significantly reduce SGOT, SGPT and MDA levels (p<0.05) compared to other doses as well as distilled water and 1% NaCMC. Conclusion: So it can be concluded that tempeh can be an alternative source of antioxidants that can protect liver cells from the effects of substances that can damage the liver.
Keywords: Tempe, SGOT, SGPT, MDA

## PENDAHULUAN
Hati  adalah  organ  yang  memiliki  peran dominan  dalam  tubuh,  proses  metabolik, sekretorik  dan  immunologik  (Robbin  dan Kumar,1995).  Organ  ini  mempunyai  peran yang  penting  karena  merupakan  regulator dari semua metabolisme karbohidrat, protein, lemak dan  substansi  lain  termasuk  obat.  Proses metabolisme obat  terjadi di hati, secara normal bertujuan untuk mendetoksifikasi dan merubah obat menjadi metabolit yang larut air sehingga dapat  dieliminasikan.  Selain  itu  hati  dapat melindungi tubuh terhadap terjadinya penumpukan  zat-zat  berbahaya  misalnya  obat, sehingga bahaya kemungkinan  kerusakan hati dapat  terjadi.  Namun  beberapa  obat    dapat dimetabolisme  menjadi  metabolit  yang  lebih toksis dari bahan awalnya sehingga menimbulkan  masalah  klinis  yang  sangat berbahaya seperti hepatoksisitas. Hati mempunyai  kemampuan  mengganti  jaringan mati  dengan  yang  baru  (regenerasi),  oleh karena  itu  penggantian  sebagian  jaringan  hati yang  rusak  akibat  penyakit  akan  cepat digantikan  dengan  jaringan  baru  (Dalimartha, 2006).  Sel  hati  tergolong  sel  yang  stabil  yaitu mampu  membelah  dengan  kecepatan  rendah dalam  kondisi  fisiologis  tapi  bila  mengalami cedera  sel  terpacu  untuk  replikasi/regenerasi (Junquiera,  Carneiro  and  Kelley,1998).  Hati mempunyai  kapasitas  pertumbuhan  kembali yang luar biasa.
Kerusakan hati karena obat seperti hepatoksisitas  mungkin  jarang  terjadi,  namun
bisa berakibat fatal karena mengganggu proses metabolisme  di  hati.  Penanganan  kasus hepatotoksisitas  karena  obat  masih  banyak menemui  kendala.  Karena  tidak  adanya antidotum  yang  spesifik  untuk  mengatasi  hal tersebut.  Penanganan  hepatotoksisitas  hati, sering kali hanya dilakukan sebatas penghentian  pemakaian  obat  untuk  mencegah kerusakan lebih lanjut. Satu contoh penggunaan obat  yang  dapat  menyebabkan  kerusakan  hati adalah obat anti inflamasi non steroid (OAINS) seperti Parasetamol. Obat ini digunakan secara bebas  oleh  masyarakat  tanpa  resep  dokter sebagai  obat  analgesik  dan  antipiretik.  Akan tetapi  bila dipakai pada dosis yang berlebihan atau  dosis  terapi  dalam  jangka  waktu  yang lama, Parasetamol dapat menyebabkan nekrosis  hati  (Laurence,  Bennet and Brown, 1997).
Parasetamol  atau  N-asetil- p -aminofenol merupakan  derivat  para  amino  fenol  yang berkhasiat  sebagai  analgesik-antipiretik.  Di dalam  hati,  sebagian  Parasetamol  atau  80  % akan terkonjugasi dengan asam glukuronat dan sulfat dan sebagian kecil dioksidasi oleh sistem sitokrom  P-450  MFO  hati  menjadi  menjadi metabolit  reaktif  N-asetil- p -benzoquinonimina ( NAPBQI ) (Gibson dan Skett,1991; Dollery,1991;  Vandebarghe,1996).  Dengan berbagai  fakta  di  atas    tersebut  menimbulkan kesadaran  dan  keharusan  akan  perlunya dilakukan  penelitian  tentang  zat  aktif  pada tanaman ataupun makanan serta obat-obat baru yang  ditujukan  dalam  rangka  menangani hepatoksisitas karena obat.
(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2
Salah  satu  bahan makanan yang  berpotensi sebagai  bahan  hepatoprotektor  adalah  tempe. Seperti halnya kedelai, tempe juga mengandung  antioksidan  isoflavon  seperti daidzein , glisitein dan genistein dengan konsentrasi  antara  1-3  mg/g  (wang  dan Murphy,  1994).  Tetapi  pada  saat  terjadinya proses  fermentasi  kedelai  menjadi  tempe  oleh bakteri Micrococcus  luteus dan Coreyne bacterium , disintesa antioksidan lain yang lebih kuat  dari  antioksidan  sebelumnya  yaitu  6,7,4- trihidroksi  isoflavon  (Anonim,2012).  Hal  ini menunjukkan tempe merupakan sumber antioksidan  yang  lebih  baik  dari  kedelai. Senyawa  isoflavanoid  yang  terkandung  pada tempe  berpotensi  mencegah  kerusakan  sel-sel tubuh diantaranya sel hati (Crawford, 1995). Isoflavon merupakan bagian dari flavanoid. Isoflavon  yang  telah  dikenal  lebih  dari  200 senyawa,  merupakan  isomer  yang  cincin benzen  terikat  pada  karbon  tiga  struktur heterolisis.  Secara  in  vitro,  isoflavonoid  dapat menghambat  pertumbuhan  sel  kanker  prostat (Tim  Praktikum  Biokimia  Pangan  UGM, 2001).  Flavanoid  dilaporkan  mengeliminasi kelebihan    ROS  (Reaktif  Oxygen  species), penangkal  Radikal  bebas.  dan  menaikkan cadangan glutation hati yang bermanfaat untuk mengurangi efek buruk radikal bebas termasuk yang  dihasilkan  oleh  Parasetamol.  Lebih  jauh dijelaskan bahwa flavanoid bersifat antioksidan karena memiliki gugus hidroksi fenolik dalam struktur  molekulnya  yang  memiliki  daya tangkap  radikal  bebas  dan  sebagai  pengkhelat logam.  Dengan  adanya  energi,  flavanoid  akan melepaskan  hidrogen  dan  membangkitkan radikal  baru  yang  lebih  relatif  stabil  dan  tidak reaktif  karena  adanya  efek  resonansi  inti aromatis.  Jumlah  gugus  OH  pada  flavanoid sangat mempengaruhi antioksidan. (Langseth,1995)
Isoflavon  dalam  mekanisme  kerjanya sebagai antioksidan diduga mencegah terjadinya  reaksi  oksidasi  dengan  bekerja sebagai  reduktor  dan  mencegah  membran  sel dari  oksidasi  asam  lemak  tak  jenuh  menjadi lipid  peroksidasi,  serta  menangkal  radikal bebas dengan menghentikan reaksi berantai dan melindungi  sel  dari  aktivasi  DNA  sehingga dapat    mengurangi  terjadinya  kerusakan  sel (Tranggano,2003).  Isoflavon  yang  terdapat pada  tempe  mempunyai  aktivitas  antioksidan 7,5 - 12,18 mikromol/g yang equivalen dengan
antioksidan  sintetik  BHT  (hidroksi  toluen terbutilasi)  (Lee et  al ,  2004).  BHT  adalah adalah  suatu  zat  antioksidan  yang  sering digunakan  pada  kosmetik,  makanan  dan  obat- obatan. BHT digunakan dengan konsentrasi 0,5 %-1%  (Wade  A  dan  Weller  PJ,  1994).  Selain itu menurut Suarsana dkk (2006), ekstrak tempe dapat  melindungi  fungsi  hati  tikus  dalam kondisi  stres.  Terlihat  dari  penurunan  kadar enzim  SGOT dan  SGPT pada  tikus  stres  yang diberi ekstrak tempe. Yoghurt yang dibuat dari tempe juga terbukti dapat mencegah kerusakan hati (Purba, 2010). Enzim yang sering berkaitan dengan kerusakan hati adalah aminotransferase.  Aspartat  aminotransferase (AST/SGOT)  memerantai  reaksi  antara  asam aspartat  dan  asam  alfa  ketoglutamat.  Alanin aminotransferase  (ALT/SGPT)  memindahkan satu gugus amino antara alanin dan asam alfa- ketoglutamat.  Walaupun  SGOT  dan  SGPT sering  dipakai  sebagai  enzim  hati  karena tingginya konsentrasi keduanya dalam hepatosit,  namun  hanya  SGPT  yang  spesifik. SGOT  terdapat  di  miokardium,  otot  rangka, otak dan ginjal.(Sacher dan McPherson,2004). Sebagai  negara  produsen  dan  sekaligus konsumen  terbesar  tempe  di  dunia,  telah menjadikan  Indonesia  sebagai  pasar  kedelai terbesar di Asia. Sebanyak 50% dari konsumsi kedelai  di  Indonesia  dilakukan  dalam  bentuk tempe,  40%  tahu  dan  10%  dalam  bentuk  lain sepeti  tauco,  kecap  dan  lain-lain.  Dilain  pihak penggunaan Parasetamol sebagai obat penahan rasa  sakit  dan  penurun  demam  di  masyarakat mulai tidak terkontrol, dikarenakan Parasetamol dapat diperoleh tanpa menggunakan resep dokter. Sejak tahun 1970 di Amerika  jumlah  overdosis  dari  Parasetamol meningkat,  begitu  juga  di  Inggris  dan  Wales. Antara  tahun  1993-1997  di  Inggris  dan  Wales didapatkan  500  kematian  yang  berhubungan dengan  overdosis  Parasetamol  setiap  tahun (Cristhoper,  2002),  sedangkan  pada  tahun 2004,  terjadi  94  kematian  yang  dikarenakan overdosis Parasetamol. Di Indonesia walaupun belum ada data  yang pasti, tetapi patut di duga telah  terjadi  banyak  masyarakat    yang menderita kerusakan hati dan bahkan sampai ke kanker  hati.  Keadaan  ini  telah  mendorong penulis  untuk  meneliti  pengaruh  pemberian ekstrak  isoflavon  tempe  terhadap  histokimia dan  histopatologi  hati  tikus  putih  jantan  galur wistar    ( Rattus  novergicus )  setelah  diinduksi
(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2
dosis  toksik  Parasetamol.  Dengan  harapan tempe  dapat  menjadi  alternatif  pilihan  bagi masyarakat  Indonesia  selain  sebagai  sumber protein  yang  tinggi  juga  sumber  antioksidan yang  dapat  melindungi  sel-sel  hati  dari pengaruh zat-zat yang dapat merusak hati.

## METODE
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental menggunakan rancangan penelitian Randomized  Posttest  Only  Control Group  Design untuk  menentukan  efek hepatoprotektif  dari  ekstrak  isoflavon  tempe terhadap tikus putih jantan galur wistar ( Rattus novergicus ) yang diinduksi dengan dosis toksik parasetamol Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah  tikus  putih  jantan  galur  wistar  dewasa dengan berat badan 150-200 gram berjumlah 30 ekor.  Hewan  ini  diperoleh  dari  Laboratorium Biologi  Fakultas  MIPA  Institut  Teknologi Bandung.  Pada  penelitian  ini  terdapat  5 kelompok  perlakuan  maka  jumlah  ulangan minimal  adalah  6. Sehingga digunakan  6  ekor tikus per kelompok dan total hewan coba adalah 30 ekor tikus.
Kriteria Inklusi dari hewan coba adalah t ikus putih galur wistar ( Rattus novergicus ), umur 2- 3 bulan, jenis kelamin jantan, berat badan 150- 200g, kondisi fisik sehat tidak cacat anatomi. Alat yang dibutuhkan adalah k andang tikus, kapas, jarum oral, spuit, gelas ukur, erlenmeyer, beaker gelas, corong gelas, kertas saring, pisau, sekam,  gunting  bedah,  botol  minum  tikus, sarung tangan, timbangan, mortir dan stamper, tabung darah,                         fotometer Biosystems Pointe-360, spuit injeksi 1ml, pipa kapiler. Bahan  yang  diperlukan  adalah t empe, alcohol  96%,  90%,  80%,  70%,  Na  CMC  1%, aquadest,  pellet,  isolasi  kit  RNA,  Kit  MDA, sediaan  uji  berupa  ekstrak  isoflavon  tempe Reagen  untuk  pengukuran  aktivitas  enzim SGOT dan SGPT.
1. Pembuatan Ekstrak Tempe
Sebanyak  500  gram  tempe  yang  dibeli  di Pasar  Cinde  kota  Palembang,  kemudian
direndam  dengan  500  ml  n-heksana  (untuk menghilangkan  lemak)  dihancurkan  dengan menggunakan blender. Larutan dimaserasi dua kali  selama  dua  hari  sampai  larutan  tidak berwarna. Tahap selanjutnya adalah penyaringan dengan kain kassa. Endapan yang diperoleh kemudian dimaserasi kembali dengan metanol  selama  dua  hari.  Supernatan  yang diperoleh disaring dengan kain flanel, kemudian  disaring  kembali  dengan  kertas saring Whatman 42.  Pelarut metanol diuapkan menggunakan  destilasi  vakum  hingga  pelarut menguap  dan  diperoleh  ekstrak  kental. Kemudian hitung rendemen yang didapat. % Rendemen = Bobot Ekstrak Kental  x 100% Bobot Tempe
2. Pembuatan Sediaan Uji
Baik  ekstrak  tempe  maupun  parasetamol tablet, semuanya disuspensikan dengan larutan NaCMC  1%  dalam  air.  Sediaan  uji  adalah ekstrak  tempe  dan  bahan  induksi  adalah parasetamol.
3. Dosis dan Kelompok Hewan Coba
Hewan  coba  berjumlah  30  ekor  tikus  putih jantan  galur  wistar  yang  dibagi  secara  acak menjadi 5 kelompok. Sehingga setiap kelompok terdapat 6 ekor hewan. Kelompok 1 diberi  ekstrak  tempe  dengan  dosis  160 mg/kgBB,  kelompok  2  diberi  ekstrak  tempe dengan dosis 320 mg/kgBB, kelompo 3 diberi ekstrak  tempe  dengan  kadar  640  mg/kgBB, kelompok 4 diberia air suling dan kelompok 5 diberi larutan NaCMC 1%.
4. Jenis dan Lama Perlakuan
Hewan coba diberi perlakuan selama 14 hari dengan  ekstrak  tempe,  air  suling  dan  larutan NaCMC  sesuai  kelompok  masing-masing. Pada hari ke-12, 13 dan 14, hewan coba diberi suspense  parasetamol  dengan  dosis  900 mg/kgBB. Stelah hari ke15 hewan dikorbankan dan  diambil  darahnya  melalui  hati.  Darah disentrifuge  untuk  diambil  serumnya  dan dilakukan  pemeriksaan  SGOT,  SGPT  dan MDA.
(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2
2,214 2,638 2,726 2,828 2,734 0 1 2 3 4 µ k at /L kelompok perlakuan NILAI MEAN SGOT

## HASIL
Tabel 1. Hasil Uji Repeated Measures Anova pada Level SGOT Darah Tikus Putih Jantan Galur Wistar
Kelompok Perlakuan Nilai Rerata SGOT ± SD (µkat//L) (n=5) Nilai p I    (Ekstrak Tempe  160 mg/kg bb) 2,726±0,10784 <0.001 II   (Ekstrak Tempe  320 mg/kg bb) 2,6380± 0,06140 III  (Ekstrak Tempe  640 mg/kg bb) 2,2140± 0,12562 IV  (Kontrol Air suling) 2,8280 ± 0,14096 V   (Kontrol NaCMC 1%) 2,7340 ±0,09236
Tabel 2    Hasil Uji Pairwise Comparison Bonferroni pada level SGOT Darah Tikus Putih
Jantan Galur Wistar. Kelompok Perlakuan Selisih Rerata SGOT (µkat//L); (n=5) IK95% (n=5) Nilai p III vs I 0,424 0,568 - 0,280 <0.001 III vs II 0,512 0,656 – 0,368 <0.001 III vs IV 0,614 0,758 – 0,470 <0.001 III vs V 0,520 0,664 – 0,376 <0.001
Gambar 1. Perbedaan Rerata Level SGPT Darah Tikus Putih Jantan Galur Wistar
Tabel 3. Hasil Uji Repeated Measures Anova pada Level SGPT Darah Tikus Putih Jantan Galur Wistar
Kelompok Perlakuan Nilai Rerata SGPT ± SD (µkat//L) (n=5) Nilai p I   (Ekstrak Tempe  160 mg/kg bb) 2,064±0,423 0.007 II  (Ekstrak Tempe  320 mg/kg bb) 1,8100±0,066 III (Ekstrak Tempe  640 mg/kg bb) 1,494± 0,159 IV (Kontrol Air suling) 2,064± 0,129 V  (Kontrol NaCMC 1%) 1,919±0,357
(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2
Tabel 4. Hasil Uji Pairwise Compatison Bonferroni pada Level SGOT Darah Tikus Putih
Jantan Galur Wistar Kelompok Perlakuan Selisih Rerata SGPT (µkat//L); (n=5) IK95% (n=5) Nilai p III vs I 0,548 0,916 – 0,180 0,006 III vs II 0,316 0,684 - 0,052 0,089 III vs IV 0,692 1,060 – 0,323 0.001 III vs V 0,570 0,940 – 0,201 0.004
Gambar 2 Perbandingan Rerata Level SGPT Darah Tikus Putih Jantan Galur Wistar
Tabel 5. Hasil Uji Repeated Measures Anova pada Level MDA Darah Tikus Putih Jantan Galur
Wistar Kelompok Perlakuan Nilai Rerata ± SD MDA (nmol//mL) (n=5) Nilai p I    (Ekstrak Tempe  160 mg/kg bb) 0,373±0,015 <0.001 II   (Ekstrak Tempe  320 mg/kg bb) 0,373± 0,007 III  (Ekstrak Tempe  640 mg/kg bb) 0,289± 0,0134 IV (Kontrol Air suling) 0,368 ± 0,137 V  (Kontrol NaCMC 1%) 0,360 ±0,039
Tabel 6 Hasil Uji Pairwise Comparison Bonferroni pada Level MDA Darah Tikus Putih Jantan
Galur Wistar Kelompok Perlakuan Selisih Rerata MDA (nmol//mL); (n=5) IK95% (n=5) Nilai p III vs I 0,084 0,104 - 0,063 <0.001 III vs II 0,834 0,105 – 0,063 <0.001 III vs IV 0,097 0,118 – 0,08 <0.001 III vs V 0,928 0,113 – 0,072 <0.001
(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2

## PEMBAHASAN
Untuk  mendapatkan  isoflavon  tempe  maka dilakukan  proses  ekstraksi  dengan  cara maserasi karena pengerjaannya secara sederhana  dan  tidak  memerlukan  alat  yang khusus,  bisa  digunakan  pada  sampel  relatif banyak  dan  tidak  memerlukan  pemanasan. Meserasi sampel dilakukan  pada bejana gelap terlindung  dari  cahaya  untuk  menghindari pengaruh oksidasi. Pada penelitian ini digunakan  metanol  untuk  memaserasi  tempe sebagai  pelarut,  juga  berdasarkan  penelitian sebelumnya  (Suarsana et  al ,  2006)  karena metanol memiliki kemampuan untuk melarutkan  komponen  favonoid  dalam  tempe lebih  besar  dibandingkan  dengan  pelarut  air, dan juga menunjukan bahwa metanol mempunyai  kelebihan  dalam  melarutkan senyawa isoflavon tempe yang sangat menentukan  dalam  aktivitas  antioksidannya. Dari  maserasi  1  kg  tempe,  dan  menguapkan pelarutnya  dengan destilasi  vakum  didapatkan ekstrak kental sebanyak 31,05 gram.
Ekstrak tempe yang mengandung isoflavon ini  kemudian  diberikan  kepada  hewan  coba. Perlakuan pada hewan adalah dengan pemberian  ekstrak  tempe  pada  tiga  kelompok perlakuan dengan dosis  masing-masing adalah 160, 320 dan 640 mg/kgBB/hari/hari selama 14 hari  dan  sebagai  kontrol  kelompok  perlakuan air suling dan NaCMC 1%. Pada hari ke 12, 13 dan 14 di berikan parasetamol dosis toksik 900 mg/kg  BB/hari.  Pemilihan  dosis  didasarkan dari dosis yang dilakukan peneliti sebelumnya yang  melakukan  penelitian  untuk  melihat penggunaan ekstrak tempe terhadap fungsi hati tikus  (Suarsana et  al ,  2006)  dan  dosis  yang digunakan pada penelitian ini dinaikkan 2 kali lipat,  sehingga  penelitian  ini  dimaksudkan untuk  menambah  data  pada  hati  tikus  putih jantan galur wistar.
Setelah pemberian perlakuan selama 14 hari dan  pada  hari  ke  15,  tikus  dimatikan  dengan cara  anastesi  dengan    ether.  Darah  diambil melalui  jantung  dan  ditampung  dalam  tabung reaksi. Kemudian segera dilakukan pemeriksaan  fungsi  hati  berupa  kadar  SGOT dan  SGPT  pada  Balai  Besar  Laboratorium Kesehatan Palembang, yang merupakan laboratorium
pemerintah yang sudah terakreditasi sehingga diharapkan mendapatkan data  yang  akurat.  Dan  pemeriksaan  MDA
dilakukan  pada  Laboratorium  Bio  Sains  Riset Palembang.
Pemeriksaan  SGOT,  SGPT  dan  MDA  ini untuk mengukur seberapa besar tempe dengan dosis di atas dapat melindungi fungsi hati tikus setelah  pemberian  parasetamol  dengan  dosis 900  mg/kbBB.  Di  dalam  tubuh,  pada  proses metabolisme, parasetamol selain diubah menjadi  asetaminofen  sulfat  dan  glukuronida, asetaminofen  dan  metabolitnya  p-aminofenol juga akan diubah oleh menjadi metabolit antara yang  reaktif  yaitu  N-acetyl-benzoquineimine (NAPQI).  Pengubahan  oleh  enzim  P450 berlangsung di hati. Lebih lanjut NAPQI akan berkonjugasi  dengan  glutathione  interseluler membentuk  asam  merkapturat  yang  tidak toksik.  Namun  pada  dosis  yang  berlebihan, NAPQI yang terbentuk sedemikian banyaknya melebihi kecepatan pembentukan dan regenerasi  glutathion  yang  diperlukan  untuk mendetoksifikasi  NAPQI.  Sehingga  NAPQI bebas  yang  tidak  terkonjugasi  ini  dapat berikatan  dengan  komponen  protein  hati. Ikatan  kovalen  ini  mempengaruhi  aktivitas biologis  normal  dan  bersifat  toksis  terhadap hati,  sehingga  mencetuskan  berbagai  derajat kerusakan sel bahkan kematian. Kerusakan ini diperparah  dengan  adanya  tambahan  NAPQI hasil  metabolisme  hati.  Kerusakan  hati menyebabkan  berkurangnya  kemampuan  hati untuk  menjalankan  fungsinya  secara  normal, dengan kerusakan hati, maka kadar SGOT  dan SGPT  hati  dapat  mengalami  kebocoran  dan kembali  ke  dalam  darah  yang  berakibat  pada peningkatan  kadar  SGOT  dan  SGPT  serum (Wilson, 2005 dan Deim et al , 1989).
Sementara  itu  menurut  Robbins-kumar, tanda jelas kematian sel terdapat di dalam inti. Pada morfologi jejas satu arah, dimulai dengan inti  yang  mengalami  kariolisis  yaitu  kromatin basofil  menjadi  pucat,  perubahan  yang diduga mencerminkan aktivasi DNAse pada penurunan  PH  sel,  kemudian  inti  mengalami piknosis,  ditandai  dengan  pengisutan  inti  dan bertambah basofil, terakhir inti akan mengalami  karioreksis,  dimana  inti  piknosis atau  yang  sebagian  piknosis  mengalami fragmentasi.  Dengan  perjalanan  waktu,  inti pada sel yang nekrosis sama sekali menghilang (Robbins,2007).
1. SGOT
Pemberian ekstrak tempe dengan dosis 160, 320,  640  mg/kgBB/hari  selama  14  hari    dan
(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2
parasetamol dosis toksik di hari ke 12, 13, dan 14 pada tikus putih jantan galur wistar terdapat perbedaan  yang  signifikan  (p<0,001)  antara kelompok perlakuan dan kelompok kontrol air suling dan  Larutan NaCMC  1%  dengan  rerata nilai  SGOT  pada  masing-masing  kelompok sebesar  2,064±0,423  µkat//L  (Ekstrak  Tempe 160 mg/kg bb), 1,8100±0,066 µkat//L ( Ekstrak Tempe    320  mg/kg  bb),  1,494±  0,159  µkat//L (Ekstrak Tempe  640 mg/kg bb), dibandingkan dengan rerata SGOT pada kelompok air suling sebesar  2,064±  0,129  µkat//L.  Demikian  juga pada kontrol larutan air suling  dan NaCMC 1% nilai rerata SGOT sebesar 1,919±0,357 µkat//L Berdasarkan  hasil  analisis  statistik  uji repeated  measures  anova  yang  dilanjutkan denga post hoc pairwise comparison Bonferroni ketetahui bahwa terdapat perbedaan signifikan antara  perlakuan  ekstrak  tempe  dosis  640  mg dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan dosis  160,  230  mm/kg  bb,  kelopok  air  suling, dan  kelompok  NaCMC  1%  terhadap  kadar SGOT  darah  tikus  putih  jantan  galur  wistar pemberian ekstrak tempe dan parasetamol dosis toksik, nilai p < 0,001.

## 2. SGPT
Pada  penelitian  ini  didaptkan  perbedaan signifikan  kadar  SGPT  antara  kelompok perlakuan tempe dibandingkan dengan kelompok kontrol (nilai p=0,007). Dosis tempe 640 mg/kgBB/hari lebih efektif dalam memberikan efek hepatoprotektif dibandingkan dengan dosis 160 dan 320 mg/kgBB/hari (Tabel 4.3 dan 4.4) Pemberian ekstrak tempe dengan dosis 640 mg/kgBB/hari  kadar  SGPT  lebih  rendah dibandingkan dosis lain, hal ini diduga adanya kandungan flavanoid dalam ekstrak tempe yang bersifat  antioksidan  memberikan  pencegahan atau perlindungan pada membran sel hati akibat keadaan  stres  oksidatif  berupa  radikal  bebas sehingga terjadi keseimbangan.
3. MDA Terdapat perbedaan yang signifikan (p<0,001) antara level MDA serum tikus putih jantan galur wistar antara kelompok perlakuan dan  kelompok  kontrol  air  suling  dan  Larutan NaCMC 1%. Rerata nilai MDA pada tikus yang diberikan ekstrak tempe dengan dosis 160, 320, 640  mg/kgBB/hari  selama  14  hari    dan parasetamol dosis toksik di hari ke 12, 13, dan 14  pada  masing-masing  kelompok  sebesar
0,373±0,015  µkat//L  (Ekstrak  Tempe    160 mg/kg  bb),  0,373±  0,007  µkat//L  (Ekstrak Tempe  320 mg/kg bb), 0,289± 0,0134 µkat//L (Ekstrak  Tempe   640 mg/kg bb),  lebih  rendah dibandingkan  dengan  rerata  MDA  pada kelompok  air  suling  sebesar  0,368  ±  0,137 µkat//L. Demikian juga pada kontrol larutan air suling  dan NaCMC 1% sebesar  0,360 ±0,039 µkat//L
Berdasarkan  hasil  analisis  statistic  uji repeated  measures  anova  yang  dilanjutkan denga post hoc pairwise comparison Bonferroni ketetahui bahwa terdapat perbedaan signifikan antara  perlakuan  ekstrak  tempe  dosis  640  mg dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan dosis  160,  230  mm/kg  bb,  kelopok  air  suling, dan  kelompok  NaCMC  1%  terhadap  kadar MDA  serum  darah  tikus  putih  jantan  galur wistar pemberian ekstrak tempe dan parasetamol dosis toksik, nilai p < 0,001.
Dengan demikian pemberian ekstrak tempe dosis 160 dan 320 mg/kgBB/hari belum mampu mencegah radikal bebas yang di hasilkan pada proses  metabolisme  parasetamol,  sehingga mengganggu  keutuhan  sel  hati  tikus  atau menimbulkan  kelainan  histopatologi  sel  hati tikus.  Tetapi  pada  pemberian  ekstrak  tempe dosis    dengan  dosis  640  mg/kgBB/hari/hari terlihat  adanya  penurunan  tingkat  keparahan nekrosis dan perlemakan, hal ini menunjukkan adanya proses penghambatan atau pencegahan terhadap  radikal  bebas  yang  dihasilkan  oleh paresetamol yang dapat merusak sel hati tikus. Peran  isoflavon  yang  terdapat  dalam  tempe terbukti dapat  menghambat radikal bebas yang diakibatkan  oleh    metabolit  yang  reaktif  yaitu N-acetyl-benzoquineimine (NAPQI).
Penurunan  tingkat  keparahan  lemak  pada  sel hati  disebabkan  oleh  efek  isoflavon  yang berasal  dari  tempe  bersifat  hipolipidemik (Karyadi,2000).  Selain  itu  senyawa-senyawa lain  yang  terdapat  di  dalam  tempe  seperti protein,  asam  lemak  tak  jenuh,  serat  dan  yang lainnya terbukti mempunyei efek hipokolesterolemik  dan  normokolesterolemik, karena  fungsinya  yang  dapat  menurunkan dan menormalkan  kadar  kolesterol  (Pakasi,2000) Hal ini terlihat hasil pemeriksaan histopatologi sel hati tikus.
Perubahan  tingkat  keparahan  nekrosis  dan perlemakan  ini  diduga  karena  peran    6,7,4- trihidroksi  isoflavon  yang  terkandung  pada tempe  mengeliminasi  kelebihan Reaktive
(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2
Oxygen  Species (ROS),  menghambat    radikal bebas,  dan menaikkan  cadangan glutation hati sehingga mengurangi efek buruk radikal bebas yang dihasilkan oleh parasetamol, oleh karena itu  kerusakan sel hati  berkurang dan sekaligus beradaptasi  untuk  melakukan  perbaikan  sel yang  rusak  (Crawford, 1995).  Turunnya  kadar SGOT danSGPT  menunjukan bahwa pada hati, terjadi  penurunan  nilai  transaminase  tetapi masih  pada  level  normal,    menunjukkan perbaikan  kelainan  nekrosis  hati  (Dalimarta, 2006).
Isoflavon merupakan bagian dari flavanoid. Isoflavon  yang  telah  dikenal  lebih  dari  200 senyawa,  merupakan  isomer  yang  cincin benzen  terikat  pada  karbon  tiga  struktur heterolisis.  Secara  in  vitro,  isoflavonoid  dapat menghambat  pertumbuhan  sel  kanker  prostat (Tim  Praktikum  Biokimia  Pangan  UGM, 2001).  Flavanoid  dilaporkan  mengeliminasi kelebihan    ROS  (Reaktif  Oxygen  species), penangkal  Radikal  bebas.  dan  menaikkan cadangan glutation hati yang bermanfaat untuk mengurangi efek buruk radikal bebas termasuk yang  dihasilkan  oleh  Parasetamol.  Lebih  jauh dijelaskan bahwa flavanoid bersifat antioksidan karena memiliki gugus hidroksi  fenolik dalam struktur  molekulnya  yang  memiliki  daya tangkap  radikal  bebas  dan  sebagai  pengkhelat logam.  Dengan  adanya  energi,  flavanoid  akan melepaskan  hidrogen  dan  membangkitkan radikal  baru  yang  lebih  relatif  stabil  dan  tidak reaktif  karena  adanya  efek  resonansi  inti aromatis.  Jumlah  gugus  OH  pada  flavanoid sangat mempengaruhi antioksidan.
Isoflavon  dalam  mekanisme  kerjanya  sebagai antioksidan diduga mencegah terjadinya reaksi oksidasi  dengan  bekerja  sebagai  reduktor  dan mencegah  membran  sel  dari  oksidasi  asam lemak tak jenuh menjadi lipid peroksidasi, serta menangkal radikal bebas dengan menghentikan reaksi berantai dan melindungi sel dari aktivasi DNA  sehingga  dapat    mengurangi  terjadinya kerusakan  sel  (Tranggano,2003).  Isoflavon yang terdapat pada tempe mempunyai aktivitas antioksidan  7,5  -  12,18  mikromol/g  yang equivalen  dengan  antioksidan  sintetik  BHT (hidroksi  toluen  terbutilasi)  (Lee et  al ,  2004).
BHT adalah adalah suatu zat antioksidan yang sering digunakan pada kosmetik, makanan dan obat-obatan. BHT digunakan dengan konsentrasi  0,5  %-1%.  Selain  itu  menurut Suarsana  dkk  (2006),  ekstrak  tempe  dapat
melindungi  fungsi  hati  tikus  dalam  kondisi stres.  Terlihat  dari  penurunan  kadar  enzim SGOT  dan  SGPT pada  tikus  stres  yang  diberi ekstrak tempe. Yoghurt yang dibuat dari tempe juga  terbukti  dapat  mencegah  kerusakan  hati (Purba,  2010).  Enzim  yang  sering  berkaitan dengan kerusakan hati adalah aminotransferase.  Aspartat  aminotransferase (AST/SGOT)  memerantai  reaksi  antara  asam aspartat  dan  asam  alfa  ketoglutamat.  Alanin aminotransferase  (ALT/SGPT)  memindahkan satu gugus amino antara alanin dan asam alfa- ketoglutamat.  Walaupun  SGOT  dan  SGPT sering  dipakai  sebagai  enzim  hati  karena tingginya konsentrasi keduanya dalam hepatosit,  namun  hanya  SGPT  yang  spesifik. SGOT  terdapat  di  miokardium,  otot  rangka, otak dan ginjal.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan tentang  pengaruh  pemberian  ekstrak  tempe terhadap  fungsi  dan  histopatologi  hati  tikus putih  jantan  galur  wistar  dengan  pemberian parasetamol  dosis  toksik  dapat  disimpulkan sebagai berikut :
1. Ekstrak  tempe  terbukti  bersifat  protektif terhadap fungsi dan histopatologi hati oleh parasetamol dosis toksik
900mg/kgBB/hari.  Efek  protektif  dari ekstrak tempe yang terjadi mengikuti  pola dependent manner.
2. Ekstrak tempe pada dosis 640 mg/kgBB/hari dapat menyebabkan penurunan  kadar  SGOT,  SGPT,  dan MDAyang  signifikan  dibanding  dengan kontrol.
Disarankan  kepada  peneliti  selanjutnya agar  dapat  melakukan  penelitian  lebih  lanjut dengan  mengujicobakan  kepada  responden manusia sehat.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Christopher,  Dillon,  Bateman,  Simpson, And MacDonaldet al., 2002. Paracetamol- related deaths in Scotland , 1994-2000. Br J Clin Pharmacol. October.
2. Cohen,  P.P.,  2006. Transamination  with
Purified Enzym Preparation
( Transaminase ),  Yale  University  School of Medicine. New Haven
3. Katzung,  B.G.  1997. Farmakologi  Dasar
(JPP) Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang Vol. 17, No. 2, Desember 2022, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/ 10.36086/jpp.v17i2
dan Klinik edisi VI . Terjemahan oleh : Staf dosen  Farmakologi  Fakultas  Kedokteran UNSRI.  Buku  Kedokteran  EGC,  Jakarta, Indonesia. Halaman 543-556.
4. Kumar  V.,  S.L.  Robbins,  1995. Robbins Basic  Pathology ,  7th  Edition.  Sounder Elsevier. Philadelphia
5. Lee,  J.,  M.  Renita,  R.J.  Fioritto,  SK. Martin,  SJ.  Scwartz,  2004. Isoflavone Characterization  and  Antioxidant  Activity of Ohio Soybeans . J. Agrie. Food. Chem
6. Mahadavan,  S,B,K,  McKiernan  P,J., Davies  p,  and  Kelly,  2006, Paracetamol Induced Hepatotoxicity , BMJ, July: 91(7): 598-603
7. Murray,  R.k.,D.K  Granner,  P.A.  Mayes, V.W.  Rodwell,  2003. Biokimia  Harper .
Edisi  ke-25.  Buku  Kedokteran  EGC, Jakarta
8. Mitruka  M.,1981. Clinical  Biochemical and  hematological  reference  values  in Normal Experimental  Animal  and  Normal Human. Second  Edition.  Messon  Pub. USA. Nurjdaman, Soejoto,Soetedjo,Faradz SMH,Witjahyo  B,Susilaningsih  N,dkk, 2001, Histologi  II ,  Badan  penerbit  FK UNDIP.Semarang
9. Pagliara,  P.,  2003. Kupffer  Cells  promote
Lead Nitrat-Induced Hepatocyte Apoptosis
Via Oxidative
Stress
Comparative histology. (  http://www.  Comparative hepatology.com/Content/2/1/8,
diakses pada tanggal 12 Januari 2012
10. Revianti  S.,  W.  Prananingrum,  R.P.  Sari, 2007. Peranan  Antioksidan  Ekstrak  Buah merah (Pandanus conoideus Lam) sebagai Hepatoprotektor . Denta. Jurnal Kedokteran Gigi. UHT. Jakarta 11. Rubin, R,Strayer ,D.S,2008. Rubins
Pathology: Clinicpathologic  Foundation  of medicine, Fifth edition, Wolterskluwer,New York 12. Sodeman  W.A.,  M.  Thomas,  1995. Patofisiologi  Sodeman  :    Mekanisme Penyakit  2 .  Penterjemah  A.  Hartono.
Jakarta Hipokrates. Jakarta
13. Suarsana I.N., N.W. Susari, T. Wresdiyati, A.  Suprayogi,  2006. Penggunaan  Ekstrak Tempe  terhadap  Fungsi  Hati  Tikus  dalam Kondisi Stress , Jurnal Vet. Yokyakarta 14. Sumardi, 2010. Efek Meniran ( Phyllanthus niruri Linn) terhadap Kadar AST dan ALT Mencir Balb/C yang Diinduksi
Asetaminofen. Skripsi FK. Undip Semarang
15. Tranggano,  RIS,  2003. Pemanfaatan
Berbagai  Zat  Aktif  dari  Tanaman  dalam
Sediaan  Kosmetik .  Dalam:  Proseding Seminar Nasional Tumbuhan Obat Indonesia  XXIII.  Jakarta  25-26  Maret 2003,  Penyelenggara  Fakultas  Farmasi Universitas  Pancasila.  Kelompok  Kerja Nasional  Tumbuhan  Obat  Indonesia.  Hal 53-54
16. Wang,  H.,J    dan  P.A.    Murphy,  1994. Isoflavone Content in Commercial soybean foods , j Agric. Food Chem. 42: 1666-1673
17. Wijaya S., 2011. Gangguan Faal Hati yang Sering Ditanyakan oleh Penderita. Majalah Medistra Hospital. Jakarta 18. Wilmana, F,P., 1995. Analgesik-
antipiretik, analgesik-antiinflamasi no steroid.  Dalam:  Ganiswara,  dkk  (eds ), Farmakologi dan Terapan , Edisi 4, Jakarta: bagian Farmakologi FK-UI, Hal:3-4, 15.