Hasil Penelitian
PENGARUH KONSUMSI MINUMAN BEROKSIGEN TERHADAP INFLAMASI DAN KAPASITAS ANTIOKSIDAN PENDERITA PENYAKIT-PARU-OBSTRUKTIF-KRONIK (PPOK)

## [Influence of Oxygenated Water Consumption in
Chronic-Obstructive-Pulmonary-Disease (COPD) Patients]
Fransiska Rungkat Zakaria 1) , Intan Nurul Azni 2) *, Elvira Syamsir 2) , Amalia KM. 3) dan Cholid Yamani 3)
1) Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor
2) Program Studi Ilmu Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor
3) Klinik dr. Katili, Jl. Raya Dramaga, Bogor
Diterima 01 Agustus 2013 / Disetujui 05 Februari 2014

## ABSTRACT
Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) is one of the leading cause of death in the world that represents an important public health problem. Oxygenated water is water added with high concentration of oxygen such that the oxygen concentration is higher than normal water. The objective of this study was to assess the influence of oxygenated water consumption on the alteration of proinflammatory cytokines (TNF-α, IL1-β, and IL6) and antioxidant capacity of COPD patients. Sixteen COPD patients were allowed to drink 385 mL oxygenated water two times a day for 21 days.  The  alteration  of  proinflammatory  cytokines  and  antioxidant  capacity  are  measured  by  comparing  plasma  concentration  before  and  after intervention. The results suggest that oxygenated water consumption significantly reduce proinflammatory cytokines plasma (TNF-α, IL1-β, and IL6) at 5% significance level with 81.25% of respondents having lower TNF-α, 75% of respondents with lower IL-1β, and 62.25% of respondents having lower  the  IL-6  in  plasma  concentration  after  21  days  intervention.  There  were  43.75%  of  respondents  with  decreased  antioxidant  capacity concentration. However, it was not significant at the 5% level significance. Decrease in antioxidant capacity was probably a resulted from poordiet and drugs consumption during the intervention period.
Keywords : antioxidant-capacity, COPD, proinflammatory-cytokines, oxygenated water

## ABSTRAK
Penyakit  Paru  Obstruktif  Kronik  (PPOK)  merupakan  salah  satu  penyakit  penyebab  kematian  terbesar  di  dunia  dan  telah  menjadi  masalah kesehatan  masyarakat.  Minuman  beroksigen  adalah  air  yang  ditambahkan  dengan  oksigen  dengan  konsentrasi  tinggi  sehingga  konsentrasi oksigen yang terkandung di dalamnya lebih tinggi dari air biasa. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengkaji pengaruh dari konsumsi minuman beroksigen  terhadap  perubahan  nilai  absorbansi  sitokin  proinflamasi  (TNF-α,  IL-1β,  dan  IL-6)  dan  kapasitas  antioksidan  total  pada  penderita PPOK. Sebanyak 16 penderita PPOK diminta untuk mengonsumsi 385 mL minuman beroksigen dua kali sehari selama 21 hari. Perubahan nilai absorbansi  sitokin  proinflamasi  dan  kapasitas  antioksidan  total  diukur  dengan  membandingkan  perubahannya  sebelum  dan  setelah  periode intervensi. Setelah 21 hari, nilai absorbansi sitokin proinflamasi (TNF-α, IL-1β, dan IL-6) menunjukkan penurunan yang signifikan ( p <0.05). Sebesar 81.25%  responden  mengalami  penurunan  nilai  absorbansi  TNF-α,  75%  responden  mengalami  penurunan  nilai  absorbansi  IL-1β,  dan  62.25% responden mengalami penurunan nilai absorbansi IL-6. Sebanyak 43.75% responden mengalami penurunan kapasitas antioksidan total, namun penurunan  ini  tidak  signifikan  ( p >0.05).  Penurunan  kapasitas  antioksidan  total  diduga  disebabkan  pola  makan  yang  buruk  dan  konsumsi  obat- obatan selama periode intervensi.
Kata kunci : kapasitas-antioksidan-total, minuman-beroksigen, PPOK, sitokin-proinflamasi

## PENDAHULUAN
1
Penyakit  Paru  Obstruktif  Kronis  (PPOK)  merupakan penyakit  paru  kronik  yang  menjadi  masalah  kesehatan masyarakat  karena  angka  kesakitan  dan  kematian  yang disebabkan  penyakit  ini  sangat  tinggi.  Di  tahun  2004,  64  juta orang  menderita  penyakit  ini.  Di  tahun  2005,  PPOK  telah menjadi penyebab kematian dari lebih dari 3 juta orang di dunia (WHO, 2012).
*Penulis Korespondensi: E-mail: inazni@gmail.com
Minuman  beroksigen  merupakan  air  yang  ditambahkan oksigen  dengan  konsentrasi  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan kadar oksigen yang secara alami sudah terdapat dalam air.  Menurut  Speit et  al .  (2002),  air  minum  biasa  hanya mengandung  5-7  ppm  oksigen  sedangkan  pada  minuman beroksigen kadarnya dapat mencapai 80-130 ppm.
Salah  satu  keraguan  dari  minuman  beroksigen  adalah adanya  kemungkinan  berkurangnya  kadar  oksigen  setelah kemasannya  dibuka.  Ketika  oksigen  telah  berkurang,  maka oksigen yang masuk ke saluran pencernaan dikhawatirkan akan sangat  sedikit  sehingga  tidak  memberikan  pengaruh  terhadap peningkatan  oksigen.  Namun  menurut  Nestle et  al .  (2003) dengan  uji in  vivo dalam  mulut,  ketersedian  oksigen  dalam
Hasil Penelitian
minuman  beroksigen  setelah  dikonsumsi  dan  dikumur-kumur dalam  mulut  selama  10  detik,  masih  dalam  konsentrasi  yang cukup tinggi, yaitu ± 140 ppm.
Beberapa studi telah meneliti mengenai manfaat konsumsi minuman  beroksigen.  Hasil  studi  menimbulkan  pro  dan  kontra terhadap  manfaat  konsumsi  minuman  beroksigen.  Penelitian yang  dilakukan  oleh  Wing et  al .  (2003),  menunjukkan  bahwa suplementasi  minuman  beroksigen  tidak  memiliki  efek  yang signifikan terhadap oksigenasi darah pada keadaan hipoksemia selama  60  menit.  Studi  yang  dilakukan  oleh  Wing-Gaia et  al . (2005)  menunjukkan  konsumsi  minuman  beroksigen  tidak meningkatkan performa berolahraga pada subjek pria yang aktif berolahraga  dengan  durasi  sedang.  Selain  itu,  penelitian Sommer et al . (2007) menunjukkan bahwa pemberian minuman beroksigen  tidak  memberikan  pengaruh  terhadap  peningkatan fungsi kognitif.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Forth  dan  Adam  (2001) menunjukkan  bahwa  air  dengan  kandungan  oksigen  80  ppm dapat meningkatkan konsentrasi oksigen dalam vena porta hati sebesar 10 mmHg. Penelitian lain yang dilakukan oleh Jung et al .  (2012)  menunjukkan  pemberian  minuman  beroksigen  pada babi  dapat  meningkatkan  fungsi  imun  dengan  meningkatkan proliferasi  sel  mononuklear  pada  pembuluh  darah  perifer, interleukin 1β, dan rasio sel CD4 + :CD8 + . Kekhawatiran dalam konsumsi minuman beroksigen adalah dugaan  peningkatan  produksi reactive  oxygen  species (ROS) karena  suplai  oksigen  dalam  konsentrasi  tinggi.  Hal  tersebut dikhawatirkan  dapat  menyebabkan  luka  pada  sel  termasuk kerusakan DNA bila pertahanan antioksidan dalam tubuh tidak baik.  Namun  berdasarkan  penelitian  Speit et  al .  (2002), konsumsi  minuman  beroksigen  tidak  menimbulkan  efek genotoksik  berdasarkan  uji in  vivo dan in  vitro .  Penelitian dilakukan oleh Handajani et al . (2009) menunjukkan kadar MDA pada  subjek  diabetes  mellitus  dengan  status  gizi  normal  yang diberikan  minuman  beroksigen  selama  45  hari  cenderung menurun.  Studi  yang  dilakukan  oleh  Gruber et  al .  (2005) menunjukkan  konsumsi  air  beroksigen  dalam  jangka  panjang tidak  membahayakan  hati,  sel  darah,  dan  sistem  imun. Penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh  Wing et  al .  (2003) menunjukkan  bahwa  suplementasi  minuman  beroksigen  pada keadaan  hipoksia  tidak  meningkatkan  kadar  MDA  dan  mampu menurunkan lipid peroksidase. Sampai saat ini belum ada studi yang  meneliti  tentang  manfaat  konsumsi  minuman  beroksigen pada  penderita  PPOK.  Sedangkan  saat  ini  penderita  PPOK semakin  bertambah  akibat  gaya  hidup  yang  tidak  sehat  dan buruknya  kondisi  lingkungan.  Oleh  karena  itu,  studi  mengenai pengaruh konsumsi minuman beroksigen pada penderita PPOK perlu  dilakukan  agar  diketahui  sejauh  mana  manfaat  dari konsumsi  minuman  tersebut  bagi  penderita  PPOK.    Dalam penelitian  ini  diteliti  pengaruh  konsumsi  minuman  beroksigen secara  rutin  oleh  penderita  PPOK.  Parameter  yang  akan dianalisis adalah nilai absorbansi TNF- α, IL-1β, IL-6, dan kadar kapasitas antioksidan total dalam plasma darah. TNF- α, IL-1β, dan IL-6 dianalisis untuk mengetahui kondisi inflamasi sistemik setelah pemberian minuman beroksigen. Sedangkan kapasitas antioksidan  total  dianalisis  karena  berhubungan  dengan kemungkinan terbentuknya reactive oxygen species akibat pem- berian oksigen dalam konsentrasi tinggi.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah  sampel minuman beroksigen dengan konsentrasi oksigen sebesar 100 ppm,  plasma  darah  responden  yang  diambil  sebelum  dan sesudah periode intervensi, antioxidant assay kit (Sigma Aldrich CS0790 ) , mouse  monoclonal  TNF-α  antibody (Santa  Cruz  sc- 101425), mouse  monoclonal  IL-1β  antibody (Santa  Cruz  sc- 52865), mouse  monoclonal  IL-6  antibody (Santa  Cruz  sc- 28343) , mouse IgG antibody (HRP) (Gene Tex GTX26789), dan substrat  TMB/3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine  Liquid  Substrate (Sigma-Aldrich T4444).

## Persiapan responden
Responden sejumlah 16 orang berasal dari pasien yang ter- daftar pada poli paru Klinik dr. Katili Dramaga, Bogor. Pemilihan calon  responden  berdasarkan  catatan  rekam  medis  pasien klinik  tersebut.  Calon  responden  yang  terpilih  adalah  pasien klinik  dr.  Katili  yang  memiliki  riwayat  keterbatasan  kronis  pada paru.  Calon  responden  kemudian  diundang  untuk  dilakukan pemeriksaan fisik, laboratorium,  radiologi, EKG dan spirometri. Hasil pemeriksaan lalu ditelaah oleh dokter spesialis paru klinik untuk  menentukan  apakah  calon  responden  tersebut  memiliki diagnosis  PPOK.  Pasien  yang  hasil  pemeriksaannya  ter- diagnosis  PPOK  kemudian  diundang  lagi  untuk  mendapat penjelasan  mengenai  penelitian  ini.  Calon  responden  yang bersedia  terlibat  dalam  penelitian  ini  kemudian  diminta  kese- diaannya untuk menandatangani informed consent .
Penelitian  ini  telah  mendapatkan  persetujuan  dari  komisi etik  Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan, Kementerian  Kesehatan  RI  dengan  nomor ethical approval KE.01.10/EC/650/2012.

## Pelaksanaan intervensi
Setiap responden diberikan minuman beroksigen sebanyak 2  botol  per  hari.  Pemberian  minuman  beroksigen  tersebut dilakukan  dengan  cara  mendatangi  langsung  responden  ke rumahnya dua kali sehari yaitu pada pagi dan sore hari selama 21  hari.  Minuman  beroksigen  yang  diberikan  pada  responden ialah  sebanyak  385  mL  per  botol  dengan  kandungan  oksigen 100 ppm per botol.
Selama  periode  intervensi,  kebiasaan,  jenis  dan  jumlah makanan dan minuman, dan merokok terus dipantau, selain itu kondisi psikis pasien juga dipantau melalui pengisian kuesioner. Kuesioner  diisi  dengan  melakukan  wawancara  langsung  pada responden  penderita  PPOK  pada  hari  pertama,  keempat, ketujuh, keempat belas, dan kedua puluh satu.

## Pengambilan darah
Pengambilan darah akan dilakukan 2 kali selama rangkaian penelitian, yaitu pada tahap awal (sebelum intervensi) dan pada akhir  kegiatan  (hari  ke-21).  Darah  responden  yang  diambil kemudian  disentrifus  ( Eppendorf  Centrifuge 5417C)  dengan kecepatan  1500  rpm  selama  10  menit.  Setelah  disentrifus ( Eppendorf Centrifuge 5417C), akan diperoleh tiga lapisan yaitu plasma  darah  (lapisan  atas), buffy  coat yang  mengandung  sel darah  putih  (lapisan  tengah),  dan  sel  darah  merah  (lapisan
Hasil Penelitian
bawah).  Plasma  kemudian  disimpan  dalam freezer dengan suhu -20°C untuk digunakan sebagai sampel (Perdani, 2012).
Analisis  sitokin  proinflamasi  (Santa  Cruz  Biotechnology, Inc- Dallas, Texas)
Analisis  sitokin  proinflamasi  dilakukan  dengan  metode ELISA indirect (modifikasi  Anggraini,  2012).  Sebanyak  100  µL plasma  yang  diencerkan  dengan carbonate/bicarbonate  buffer (Sigma Aldrich C3041) ( TNF-α = 1: 400, IL-1β dan IL-6 = 1: 500) dimasukkan  ke  dalam microplate 96 well (Corning®Costar  96 Well White Flat Bottom Polystyrene High Bind Microplate 3922), kemudian  diinkubasi  pada  suhu  4°C  selama  1  malam.  Cairan dalam microplate dibuang  (dengan  cara  membalik microplate dan dihentakkan) dan dicuci dengan PBST [larutan PBS (Sigma Aldrich  P4417)    dengan  0.05%  Tween  20  (Sigma  Aldrich P1379)] sebanyak 200 μL/sumur. Selanjutnya ditambahkan 100 μL skim  milk (Frisian  Flag)  5%  pada  masing-masing well dan inkubasi  pada  37°C  selama  1  jam.  Cairan  dalam microplate dibuang  dan  dicuci  dengan  PBST.  Kemudian  ditambahkan antibodi  primer,  yaitu  antibodi monoclonal  anti- TNF  α human produced  in  mouse (Santa  Cruz  sc-101425)  1:3000/  antibodi monoclonal  anti- IL-1β human  produced  in  mouse (Santa  Cruz sc-52865)  1:5000/antibodi monoclonal  anti- IL-6 human produced  in  mouse (Santa  Cruz  sc-28343)  1:1000  sebanyak 100 µL dan diinkubasi pada suhu 37°C  selama 1 jam. Cairan dalam microplate dibuang  dan  dicuci  dengan  PBST.  Antibodi sekunder  yaitu  antibodi  HRP  IgG anti-mouse (Gene  Tex GTX26789)  1:10.000  ditambahkan  sebanyak  100  µL  dan inkubasi  pada  suhu  37°C  selama  1  jam.  Cairan  dalam microplate dibuang  dan  dicuci  dengan  PBST.  Substrat  TMB (Sigma-Aldrich  T4444)  ditambahkan  sebanyak  50  µL  dan inkubasi  pada  suhu  ruang  selama  5  menit.  Kemudian ditambahkan  H 2 SO 4 1  N  sebagai stop  solution .  Penghitungan waktu  inkubasi  dimulai  sejak  penambahan  substrat  pada  w ell terakhir. Intensitas warna terbentuk dapat dibaca dengan ELISA reader ( Labsystems ) pada panjang gelombang 450 nm.

## Analisis kapasitas antioksidan total
Analisis  kapasitas  antioksidan  total  menggunakan  metode Trolox  Equivalent  Antioxidant  Capacity (Sigma-Aldrich,  2012) dengan  menggunakan antioxidant  assay  kit (Sigma  Aldrich CS0790). Sebanyak 10 μL standar Trolox ditambahkan dengan 20 μL larutan mioglobin.  Pada well untuk sampel, dimasukkan 10  μL  sampel  dan  20  μL  larutan  mioglobin.  Lalu  ditambahkan 150 μL larutan ABTS ke tiap well . Kemudian diinkubasi selama 5  menit  pada  suhu  ruang.  Sebanyak  100  μL stop  solution ditambahkan  ke  dalam  tiap well dan  absorbansi  dibaca  pada panjang gelombang 405 nm. Rata-rata absorbansi pada setiap standar  Trolox  dikalkulasi  untuk  mendapatkan  kurva  standar. Lalu  konsentrasi  antioksidan  dikalkulasi  dengan  menggunakan persamaan yang diperoleh dari regresi linear kurva standar:
X (mM) = y ( 405 ) - inte cept ope x faktor pengenceran
X  (mM)  –  konsentrasi  antioksidan  (mM)  relatif  terhadap konsentrasi standar Trolox.

## Analisis data
Analisis  statistik  terhadap  data  yang  diperoleh  mengguna- kan  uji  t  berpasangan  untuk  melihat  adanya  pengaruh  nyata konsumsi minuman beroksigen sebelum dan sesudah intervensi terhadap  nilai  absorbansi  sitokin  proinflamasi  dan  kapasitas antioksidan total.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik responden
Berdasarkan jenis kelamin, responden terdiri dari 11 orang pria  dan  5  orang  wanita.  Berdasarkan  usia,  responden  di- kategorikan menjadi 2 bagian yaitu dewasa dan lansia. Kategori ini  berdasarkan  definisi  lansia  dari  WHO,  yaitu  yang  tergolong lansia adalah yang berumur 60 tahun ke atas. Terdapat 43.77% responden yang dikategorikan ke dalam usia dewasa, sedang- kan  56.23%  responden  dikategorikan  ke  dalam  usia  lansia (Tabel 1).
Tabel 1.  Karakteristik  responden  berdasarkan  jenis  kelamin,  usia,
dan indeks massa tubuh Karakteristik Individu Jumlah (orang) Persentase (%) Jenis kelamin: -Pria -Wanita 11 5 68.75 31.25 Usia: -Dewasa (< 60 tahun) -Lansia (≥ 60 tahun) 7 9 43.77 56.23 Indeks massa tubuh: -Kurang (<18.5 kg/m 2 )
-Normal (18.5-24.9 kg/m 2 ) -Lebih (≥ 25 kg/m 2 ) 4 11 1 25.00 68.75 6.25
Berdasarkan  kategori  jenis  kelamin  dan  usia,  responden lebih  banyak  berjenis  kelamin  pria  dan  lansia.  Menurut Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (2011), umur dan jenis kelamin merupakan faktor-faktor yang mempengaruhi per- kembangan keparahan PPOK. Hal ini terkait dengan kebiasaan merokok yang lebih banyak pada jenis kelamin pria. Sedangkan usia lanjut berhubungan dengan lamanya terpapar dengan asap rokok dan partikel-partikel berbahaya ke dalam paru-paru.
Berdasarkan  indeks  massa  tubuh,  responden  dibagi  men- jadi  tiga  kelompok  yaitu underweight ,  normal,  dan overweight . Pembagian kategori ini berdasarkan kategori WHO (2006), yaitu untuk  berat  badan  kurang  apabila  memiliki  IMT  <18.5  kg/m 2 , berat badan normal jika IMT 18.5-24.9 kg/m 2 , dan berat badan lebih jika IMT ≥ 25 kg/m 2 . Berdasarkan kategori tersebut, maka mayoritas  responden  yaitu  sebesar  68.75%  dikategorikan normal (Tabel 1).

## Nilai absorbansi sitokin proinflamasi
Nilai absorbansi TNF-α, IL 1-β, dan IL-6 diukur dari plasma darah  responden.  Analisis  nilai  absorbansi  TNF-α,  IL  1-β,  dan IL-6  dilakukan  dengan  metode  ELISA (Enzyme  Linked Immunosorbent  Assay)  indirect .  Hasil  dari  analisis  ini  berupa nilai absorbansi atau optical density , dimana nilai tersebut akan berkorelasi  positif  dengan  kadar  TNF-α,  IL  1-β,  dan  IL-6  pada plasma  responden,  sehingga  semakin  tinggi  nilai optical
Hasil Penelitian
density nya maka semakin tinggi kadarnya dalam plasma darah responden (Crowther, 1995).

## Nilai absorbansi tumor nekrosis faktor α (TNF-α)
Berdasarkan  hasil  analisis  yang  ditampilkan  pada  Gambar 1, umumnya nilai absorbansi TNF-α pada responden menurun setelah intevensi minuman beroksigen selama 21 hari. Secara rata-rata,  penurunan  nilai optical  density TNF-α  yaitu  dari 0.185±0.011  menjadi  0.176±0.021  (Tabel  2).  Sebanyak  13 responden  (81.25%)  mengalami  penurunan  nilai  absorbansi TNF-α,  sedangkan  3  responden  (18.75%)  mengalami  pening- katan nilai absorbansi TNF-α. Penurunan nilai absorbansi TNF- α  pada  responden  berkisar  2–18%,  sedangkan  peningkatan nilai  absorbansi  TNF-α  pada  responden  berkisar  0.2–20%. Secara statistik penurunan tersebut signifikan ( p <0.05). Hal ini menunjukkan  pemberian  minuman  beroksigen  secara  rutin selama  21  hari  mampu  menurunkan  nilai  absorbansi  TNF-α pada plasma darah responden PPOK.
Adanya  peningkatan  nilai  absorbansi  TNF-α  pada  respon- den  diduga  karena  responden  memiliki  riwayat hypertension heart  disease dan  penyakit  jantung.  Menurut  Granger  (2006), terdapat  hubungan  antara  hipertensi  dengan  peningkatan  nilai absorbansi  TNF-α,  dimana  sistem  regulasi  tekanan  darah seperti  sistem  renin  angiotensin  dan  sistem  syaraf  simpatetik dapat  berinteraksi  dengan  TNF-α.  Sistem  syaraf  simpatetik dapat  merangsang  pelepasan  TNF-α.  Selain  itu  angiotensin  II juga dapat meningkatkan sintesis dari TNF-α.
Selain  itu  peningkatan  nilai  absorbansi  TNF-α  juga  dapat disebabkan  karena  selama  periode  intervensi,  beberapa responden  terserang  influenza.  Menurut  Seo  dan  Webster (2002), virus influenza mampu menginduksi ekspresi dari TNF-α pada manusia. Hal ini merupakan mekanisme pertahanan alami untuk melawan virus influenza. TNF-α memiliki peranan penting dalam melawan virus influenza sebelum respon imun sekunder teraktivasi.

## Nilai absorbansi interleukin 1β (IL-1β)
Interleukin-1β (IL-1β) adalah salah satu sitokin yang terlibat dalam  sebuah  proses  inflamasi.  Beberapa  studi  menunjukkan peningkatan  ekspresi  dari  IL-1β  pada  penderita  PPOK. Peningkatan  level  IL-1β  pada  penderita  PPOK  berhubungan dengan eksaserbasi dari penyakit tersebut (Mortaz et al. 2012). Berdasarkan  hasil  analisis  yang  ditampilkan  pada  Gambar 2,  umumnya  nilai  absorbansi  IL-1β  pada  responden  menurun setelah intevensi minuman beroksigen selama 21 hari. Secara rata-rata,  penurunan  nilai optical  density IL-1β  yaitu  dari 0.167±0.026 menjadi 0.148±0.016 (Tabel 2).
Sebesar  12  responden  (75%)  mengalami  penurunan  nilai absorbansi  IL-1β,  sedangkan  4  responden  (25%)  mengalami
peningkatan  rata-rata  nilai  absorbansi  IL-1β.  Penurunan  nilai absorbansi IL-1β pada responden berkisar 0.8–49%, sedangkan peningkatan  nilai  absorbansi  IL-1β  berkisar  0.5–21%.  Secara statistik penurunan tersebut signifikan pada tingkat kepercayaan 95%  dengan  nilai p <0.05.  Hal  ini  menunjukkan  pemberian minuman  beroksigen  secara  rutin  selama  21  hari  mampu  me- nurunkan nilai absorbansi IL-1β pada plasma darah responden PPOK.
Peningkatan nilai absorbansi IL1-β pada responden diduga karena selama intervensi responden menderita influenza. Selain merangsang produksi TNF-α, virus influenza juga mampu mem- buat  makrofag  memicu  produksi  IL-1β  (Seo  dan  Webster, 2002).

## Nilai absorbansi interleukin 6 (IL-6)
IL-6  merupakan  jenis  sitokin  proinflamasi  lain  yang  juga berperan  sebagai  mediator  dalam  terjadinya  inflamasi.  Sama halnya  dengan  TNF  α  dan  IL  1-β,  kadar  IL-6  pada  penderita PPOK  juga  umumnya  lebih  tinggi  jika  dibandingkan  dengan orang  sehat.  Penelitian  Yanbaeva et  al. (2009)  menunjukkan kadar  IL-6  pada  penderita  COPD  lebih  tinggi  dibanding  pada orang  sehat  mantan  perokok.  Berdasarkan  hasil  analisis  yang ditampilkan  pada  Gambar  3,  umumnya  nilai  absorbansi  IL-6 pada  responden  menurun  setelah  intevensi  minuman  ber- oksigen  selama  21  hari.  Secara  rata-rata,  penurunan  nilai optical density IL-6 yaitu dari 0.228±0.035 menjadi 0.211±0.018 (Tabel 2).Sebesar 10 responden (62.5%) mengalami penurunan nilai  absorbansi  IL-6,  sedangkan  6  responden  (37.5%)  me- ngalami peningkatan rata-rata nilai absorbansi IL-6. Penurunan tersebut  signifikan  secara  statistik  ( p <0.05).  Hal  ini  menunjuk- kan pemberian minuman beroksigen secara rutin selama 21 hari mampu  menurunkan  nilai  absorbansi  IL-6  pada  plasma  darah responden PPOK.
Peningkatan IL-6 pada beberapa responden diduga karena responden tersebut memiliki riwayat hypertension heart disease dan penyakit jantung. Selain memicu produksi TNF-α, penyakit yang  berhubungan  dengan  kardiovaskular  seperti  hipertensi dan penyakit jantung juga memicu produksi IL-6. Kedua sitokin tersebut mempengaruhi fungsi pembuluh darah dan endotelium dalam mengatur regulasi tekanan darah. Adanya kedua sitokin tersebut  di  dalam  plasma  berkorelasi  dengan  peningkatan tekanan darah (Granger, 2006).
Pada  responden  lain,  peningkatan  IL-6  diduga  karena responden tersebut tergolong obesitas. Menurut Greenberg dan Obin  (2006),  ekspresi  IL-6  cenderung  meningkat  pada kelompok obesitas. Jumlah ini akan lebih banyak terdapat pada jaringan lemak dibanding jaringan otot. Peningkatan jumlah IL-6 dapat dideteksi pada plasma.
Tabel 2.  Perbandingan nilai absorbansi TNF-α, IL-1β, dan IL-6 serta kadar kapasitas antioksidan total sebelum dan sesudah intervensi
Parameter Statistik TNF-α IL-1β IL-6 TAC Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah Rata-rata (n=16) 0.185 0.176 0.167 0.148 0.228 0.211 0.437 mM 0.463 mM Standar deviasi 0.011 0.021 0.026 0.016 0.035 0.018 0.139 0.161 Uji t berpasangan p-value = 0.026 p-value = 0.027 p-value = 0.041 p-value = 0.715
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 N K N L N K N P L P L Dewasa Lansia % Perubahan -2.105 -4.529 -6.114 -4.188 -2.887 -13.325 -11.193 20.904 8.951 0.282 -8.877 -3.862 -18.493 -8.451 -16.424 -9.290
-50 -40 -30 -20 -10 0 10 20 30 40 50 % P er ub ah an 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 N K N L N K N P L P L
Dewasa
Lansia
% Perubahan 10.460 -4.457 0.515 -13.030 20.974 -12.256 -6.250 -7.986 4.942 -15.915 -6.250 -49.206 -0.782 -12.817 -34.812 -1.113
-50 -40 -30 -20 -10 0 10 20 30 40 50 % P er ub ah an 1 2 3 4
5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 N K N L N K N P L P L Dewasa
Lansia
% Perubahan -10.204 -17.675 -16.667 -15.523 30.000 3.431 5.000 24.200 -6.045 -2.192 -20.424 -20.372 -18.217 -2.181 -33.537 11.631
-50 -40 -30 -20 -10 0 10 20 30 40 50 % P eru ba ha n Keterangan: K = berat badan kurang, N = berat badan normal, L = berat badan lebih, L = laki-laki, P = perempuan
Gambar 1.  Persentase perubahan nilai absorbansi TNF–α sesudah intervensi selama 21 hari
Keterangan: K = berat badan kurang, N = berat badan normal, L = berat badan lebih, L = laki-laki, P = perempuan
Gambar 2. Persentase perubahan nilai absorbansi IL-1β sesudah intervensi selama 21 hari
Keterangan: K = Berat badan kurang, N = Berat badan normal, L = berat badan lebih, L = laki-laki, P = perempuan
Gambar 3. Persentase perubahan nilai absorbansi IL-6 sesudah intervensi selama 21 hari
Berdasarkan penelitian ini, mayoritas responden mengalami penurunan nilai absorbansi sitokin proinflamasi baik TNF-α, IL1- β, dan IL-6. Hal ini menunjukkan bahwa oksigen yang terdapat dalam  minuman  beroksigen  mampu  diserap  oleh  tubuh sebagaimana  penelitian  Forth  dan  Adam  (2001)  dan  Nestle et al. (2004), yang menyatakan bahwa minuman oksigen dengan konsentrasi  80  ppm  mampu  diserap  oleh  tubuh,  sehingga meningkatkan  tekanan  oksigen  di  vena  porta  hati  sebesar  10 mmHg.  Selain  itu,  menurut  penelitian  Nestle et  al. (2004), konsumsi  minuman  oksigen  dengan  konsentrasi  tinggi  mampu
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
1 2 3 4
5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 N K N L N K N P L P L
Dewasa
Lansia
% Perubahan -9.083 4.632 69.322 -36.349 5.853 201.146 -54.326 18.289 -8.246 15.509 21.461 -52.008 42.003 -19.975 -4.608 56.093
-100 -50 0 50 100 150 200 250 % P er ub ah an
meningkatkan  ketersediaan  oksigen  di  organ  pencernaan. Setelah  diserap  di  dalam  sistem  pencernaan,  maka  oksigen tersebut  mampu  memperbaiki  sistem-sistem  di  dalam  tubuh salah  satunya  sistem  imun.  Sehingga  konsumsi  minuman  ber- oksigen  secara  rutin  mampu  memperbaiki  keadaan  inflamasi dan menurunkan nilai absorbansi sitokin proinflamasi TNF-α, IL 1-β, dan Il-6 pada penderita PPOK.
Kapasitas antioksidan total/ total antioxidant capacity (TAC) Pada  penderita  PPOK, reactive  oxygen  species (ROS) dihasilkan dari leukosit di dalam darah maupun dari udara yang tercemar  polutan  seperti  asap  rokok,  maupun  gas-gas  ber- bahaya  yang  bersal  dari  lingkungan  yang  tercemar.  ROS  ini akan ditangkap oleh sistem antioksidan di dalam tubuh. Adanya kerusakan sistem antioksidan yang disebabkan oleh ROS dapat dilihat  dari  kadar  kapasitas  antioksidan  total  yang  dapat dianalisis dari plasma darah (Rahman et al . 2000).
Salah  satu  masalah  yang  dikhawatirkan  dari  pemberian oksigen  berkonsentrasi  tinggi  adalah  terbentuknya  ROS  yang tinggi. Umumnya kadar ROS pada penderita PPOK juga tinggi. Penelitian  Rahman et  al .  (2000)  menunjukkan  kapasitas antioksidan  total  pada  plasma  penderita  PPOK  lebih  rendah secara  signifikan  dibandingkan  dengan  kapasitas  antioksidan total  pada  subjek  sehat  perokok.  Hal  ini  tentu  saja  menjadi sangat berbahaya apabila intervensi ini menimbulkan penurun- an  kapasitas  antioksidan  total  pada  penderita  PPOK.  Untuk itulah  parameter  kapasitas  antioksidan  total  juga  dianalisis untuk  mengkaji  pengaruh  konsumsi  minuman  beroksigen  dari segi keamanan terhadap antioksidan tubuh.
Berdasarkan  hasil  analisis  yang  terdapat  Gambar  4,  per- bandingan  antara  responden  yang  mengalami  penurunan  dan peningkatan  kadar  kapasitas  antioksidan  total  hampir  sama yaitu  7  responden  (43.75%)  mengalami  penurunan  dan  9 responden  (56.25%)  mengalami  peningkatan.  Peningkatan kadar kapasitas antioksidan total pada responden berkisar 4.6- 201%, sedangkan penurunan kadar kapasitas antioksidan total responden berkisar 4–54%. Secara rata-rata, perubahan kadar
kapasitas antioksidan total yaitu dari 0.437±0.139 mM menjadi 0.463±0.161 mM (Tabel 2).
Berdasarkan  analisis  statistik,  pemberian  minuman  ber- oksigen  tidak  menurunkan  kapasitas  antioksidan  total  secara signifikan.  Untuk  itu  maka  perlu  dikonfirmasi  dari  hasil food recall dan  kebiasaan  responden  selama  penelitian  yang  di- tanyakan  pada  saat  wawancara.  Dari  hasil food  recall dan catatan  hasil  wawancara,  maka  diketahui  bahwa  responden yang mengalami penurunan kapasitas antioksidan total selama periode intervensi mengonsumsi obat-obatan, banyak mengon- sumsi  lauk  yang  digoreng  dan  daging  sapi,  dan  kurang konsumsi sayur dan buah.
Konsumsi  obat-obatan  merupakan  salah  satu  hal  yang mempengaruhi kadar kapasitas  antioksidan seseorang, karena untuk  mendetoksifikasi  obat-obatan  tersebut  dibutuhkan  kerja dari  enzim  fase  1  dan  enzim  fase  2  yang  melibatkan  sistem antioksidan  tubuh.  Berdasarkan  hasil  wawancara,  diketahui bahwa  responden  yang  mengalami  penurunan  konsentrasi antioksidan total, mengonsumsi obat flu beberapa hari sebelum pengambilan  darah  tahap  2.  Parasetamol  merupakan komponen  dari  obat  flu.  Berdasarkan  penelitian  Srinivasa et  al . (2010),  tikus  yang  mengonsumsi  parasetamol  mengalami peningkatan  kadar  MDA,  lipid  dan  peroksida  serta  mengalami penurunan  kadar  glutation,  katalase,  dan  total  thiol,  dimana glutation  dan  katalase  merupakan  komponen-komponen  dari sistem antioksidan endogenous (Ferrari, 2012).
Minimnya  konsumsi  sayur  dan  buah  dapat  menyebabkan turunnya  kapasitas  antioksidan  total  pada  responden  karena sayur  dan  buah  merupakan  sumber  vitamin  A,  C  dan  E  yang merupakan  vitamin  antioksidan  yang  mampu  memperbaiki fungsi  paru  pada  penderita  PPOK,  sehingga  minimnya konsumsi  sayuran  dan  buah-buahan  dapat  berkontribusi terhadap rendahnya kapasitas antioksidan total (Rahman et al . 2000).  Penurunan konsentrasi kapasitas antioksidan total juga dialami  pada  responden  yang  banyak  mengonsumsi  makanan yang  digoreng  dan  daging  sapi  pada  saat  periode  intervensi. Makanan yang digoreng merupakan sumber asam lemak trans.
Keterangan: K = berat badan kurang, N = berat badan normal, L = berat badan lebih, L = laki-laki, P = perempuan
Gambar 4.  Persentase perubahan kadar kapasitas antioksidan total sesudah intervensi selama 21 hari
Hasil Penelitian
Menurut  Sartika  (2011),  konsumsi  lemak  trans  yang  ber- lebihan  dapat  menyebabkan  peningkatan  kolesterol  LDL  dan penurunan kolesterol HDL dalam darah. Sedangkan daging sapi merupakan  makanan  yang  mengandung  asam  lemak  jenuh yang tinggi, konsumsi asam lemak jenuh yang berlebihan juga berpotensi  menyebabkan  peningkatan  kolesterol  LDL. Kolesterol LDL yang teroksidasi dapat memicu terjadinya stres oksidatif  dan  berhubungan  dengan  konsentrasi  kapasitas antioksidan  total.  Menurut  penelitian  Pitsavos et  al .  (2005), terdapat  hubungan  negatif  antara  konsentrasi  kapasitas antioksidan  total  dengan  konsentrasi  kolesterol  LDL  yang teroksidasi.

## KESIMPULAN
Pemberian  minuman  beroksigen  selama  21  hari  mampu menurunkan nilai absorban sisitokin proinflamasi berupa TNF α, IL  1-β,  dan  IL-6  secara  signifikan  pada  penderita  PPOK. Sebesar  81.25%  responden  mengalami  penurunan  nilai absorbansi  TNF-α  pada  plasma,  75%  responden  mengalami penurunan  nilai  absorbansi  IL-1β  pada  plasma,  dan  62.5% responden  mengalami  penurunan  nilai  absorbansi  IL-6  pada plasma.   Setelah  intervensi  selama  21  hari,  sebesar  43.75% responden  mengalami  penurunan  kapasitas  antioksidan  total. Sedangkan sebesar 56.25% responden mengalami peningkatan kapasitas  antioksidan  total.  Penurunan  kadar  kapasitas antioksidan  total  diduga  disebabkan  karena  pola  makan  yang buruk  seperti  rendahnya  konsumsi  sayur  dan  buah  serta tingginya konsumsi daging merah dan makanan yang digoreng. Selain itu konsumsi obat-obatan selama periode intervensi juga diduga  menyebabkan  turunnya  kadar  kapasitas  antioksidan total pada responden.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  PT.  Triusaha  Mitraraharja (Garuda food ) dan dapat terlaksana dengan bantuan dari Klinik dr.  Katili,  Dramaga  dan  Departemen  Parasitologi  Balai  Besar Penelitian dan Veteriner, Bogor.

## DAFTAR PUSTAKA
Crowther  JR.  1995.  ELISA:  Theory  and  Practice.  Humana Press, New Jersey.
Ferrari  CKB.  2012.  Effects  of  xenobiotics  on  total  antioxidant capacity. Interdicip Toxicol 5: 117-122. DOI: 10.2478/v1010 2-012-0019-0.
Forth W, Adam O. 2001.  Uptake of oxygen from the intestine- experiments with rabbits. Eur J med Res 6: 488-492.
Global  Initiative  for  Chronic  Obstructive  Lung  Disease.  2011. Global  Strategy  for  the  Diagnosis,  Management,  and Prevention  of  Chronic  Obstructive  Pulmonary  Disease (Revised  2011).  Global  Initiative  for  Chronic  Obstructive Lung Disease, Inc, Barcelona.
Granger JP. 2006. An emerging role of inflammatory cytokines in  hypertension.  Am  J  Physiol-Heart  C290:  H923-H924. DOI: 10.1152/ajpheart.01278.2005.
Greenberg AS, Obin MS. 2006. Obesity and the role of adipose tissue in inflammation and metabolism. Am J Clin Nutr 83: 461S-465S.
Gruber R, Axmann S, Shcoenberg MH. 2005. The influence of oxygenated water on the immune status, liver enzymes, and the  generation  of  oxygen  radicals:  a  prospective, randomised, blinded clinical study. Clin Nutr 24: 407-414.
Handajani YS, Tenggara R, Suyatna FD, Surjadi C, Widjaja NT. 2009.  The  effect  of  oxygenated  water  in  diabetes  mellitus. Med J Indones 18: 102-107.
Jung  BG,  Lee  JA,  Lee  BJ.  2012.  Oxygenated  drinking  water enhances  immune  activity  in  pigs  and  increases  immune responses of pigs during Salmonella thyphimurium infection. J  Vet  Med  Sci  74  12:  1651-1655.  DOI:  10.  1292/jvms.12- 0051.
Mortaz E, Adcock IM, Shafei H, Masjedi MR, Folkerts G. 2012.
Role  of  P2X7  receptors  in  release  of  IL-1β:  a  possible mediator of pulmonary inflammation. Tanaffos 11: 6-11.
Nestle N, Baumann T, Niessner R. 2003. Oxygen determination in  oxygen-supersaturated  drinking  waters  by  NMR relaxometry. Water Res 37: 3361-3366.
Nestle  N,  Wunderlich  A,  Nussle-Kugele  K.  2004.  In  vitro observationof  oxygen-supersaturated  water  in  the  human mouth  and  stomach.  Magn  Reson  Imaging  22:  551-556. DOI: 10.1016/j.mri.2004.01.040.
Perdani  CG.  2012.  Konsumsi  Minyak  Sawit  Mentah Meningkatkan  Kadar  Retinol  Plasma  dan  Menurunkan Aktivitas Enzim Penanda  Kesehatan Hati pada Ibu Rumah Tangga di Kecamatan Dramaga Kabupaten Bogor. [Tesis]. Bogor:  Fakultas  Tekonologi  Pertanian,  Institut  Pertanian Bogor.
Pitsavos  C,  Panagiotakos  DB,  Tzima  N,  Chrysohoou  C, Economou M, Zampelas A, Stefanadis C. 2005. Adherence to the mediterranean diet is associated with total antioxidant capacity in health adults: The ATTICA study. Am J Clin Nutr 82: 694-696.
Rahman I, Swarska E, Henry M, Stolk J, MacNee W. 2000. Is there any relationship between plasma antioxidant capacity and  lung  function  in  smokers  and  in  patients  with  chronic obstructive pulmonary disease?. Thorax 55: 189-193.
Sartika  RAD.  2011.  Effect  of  trans  fatty  acids  intake  on  blood lipid  profile  of  workers  in  east  kalimantan,  Indonesia. Malaysian J Nutr 17: 119-127.
Sigma-Aldrich. 2012. Product Information: Antioxidant Assay Kit. Sigma-Aldrich.
Speit  G,  Petra  S,  Kristina  T,  Andreas  R.  2002.  Oxygenated water does not induce genotoxic effects in the comet assay. Toxicol  Lett  133:  203–210.  DOI:  10.1016/S0378-4274(02) 00153-4.
Seo SH, Webster RG. 2002. Tumor necrosis factor alpha exerts powerful anti-influenza virus effects in lung epithelial cells. J Virol 76: 1071-1076.
Hasil Penelitian
Sommer AM, Bogusch C, Lerchl A. 2007. Cognitive function in outbred house mice after 22 weeks of drinking oxygenated water. Physiol Behav 91: 173-179. DOI: 10.1016/j.physbeh. 2007.02.007.
Srinivasa B, Kumar A, Lakshman K, Narasimha K, Devangam J, Shekar  S,  Nandeesh  R,  Velmurugan  C.  2010.  Chemo- protective and antioxidant activities of methanolic extract of amaranthus  spinosus  leaves  on  paracetamol  induced-liver damaged  in  rat.  Acta  Med  Saliniana  39:  68-74.  DOI: 10.5457/ams.159.10.
Wing  SL,  Askew  EW,  Luetkemeier  MJ,  Ryujin  DT,  Kamimori GH,  Grissom  CK.  2003.  Lack  of  effect  of  rhodiola  or oxygenated  water  supplementation  on  hypoxemia  and oxidative stress. Wilderness Environ Med 14: 9-16.
Wing-Gaia  SL,  Subudhi  AW,  Askew  EW.  2005.  Effects  of purified  oxygenated  water  on  exercise  performance  during acute  hypoxic  exposure.  Int  J  Sport  Nutr  Exerc  Metab  15: 680-688.
[WHO]  World  Health  Organization.  2006.  BMI  classification. http://apps.who.int/bmi/index.jsp?introPage=intro_3.html. [16 Juli 2013].
[WHO]  World  Health  Organization.  2012.  Chronic  Obstructive Pulmonary  Disease  (COPD).  http://www.who.int/media centre/factsheets/fs315/en/index.html. [26 Desember 2012].
Yanbaeva DG, Dentener MA, Spruit MA, Houwing-Duistermaat JJ, Kotz D, Passos VL, Wouters EFM. 2009. IL6 and CRP haplotypes  are  associated  with  COPD  risk  and  systemic inflammation: a case-control study. BMC Med Genet 10: 1- 11. DOI: 10.1186/1471-2350-10-23.