## UJI TOKSISITAS EKSTRAK DAUN AFRIKA ( Vernonia amygdalina )

## DENGAN METODE Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

## Nur Hasanah, Billy Arnanda
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Kharisma Persada Tangerang Selatan, 15417
E-mail : Nurhasanahbik51@gmail.com

## ABSTRAK
Daun afrika ( Vernonia amygdalina ) merupakan salah satu tumbuhan obat yang tumbuh di Indonesia. Daun ini mengandung senyawa alkaloid, saponin, tanin, fenolik, flavonoid, triterpenoid, steroid dan glikosida. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  toksisitas  ekstrak  daun  afrika  ( Vernonia  amygdalina ), mengetahui tampilan fisik ekstrak daun afrika ( Vernonia amygdalina ), dan mengetahui kandungan kimia daun afrika  ( Vernonia  amygdalina ).  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  metode Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT). Penelitian ini menggunakan hewan uji larva Artemia salina Leach yang dibagi dalam 5 kelompok, tiap kelompok terdiri dari 10 ekor, dengan replikasi 2 kali tiap kelompok. Konsentrasi ektrak daun afrika  ( Vernonia  amygdalina )  yang  digunakan  yaitu  1  ppm,  10  ppm,  20  ppm,  100  ppm,  dan  500  ppm  dan dilakukan  partisi  ekstrak  dengan  pelarut  etanol,  n-Heksan,  dan  etil  asetat.  Pengamatan  terhadap  larva  yang mati  dilakukan  24  jam  setelah  pemberian  ekstrak.  Berdasarkan  data,  LC 50 ekstrak  daun  afrika  ( Vernonia amygdalina )  ditentukan  dengan  analisa  probit.  Hasil  dari  analisa  probit  menunjukkan  LC 50 fase  etanol menunjukkan  nilai  123  ppm,  fase  n-Heksan  menunjukan  nilai  LC 50 3548  ppm,  dan  fase  etil  asetat  tidak memiliki  nilai  LC 50 .  Hasil  itu  menunjukan  bahwa  hanya  ekstrak  fase  etanol  daun  afrika  ( Vernonia amygdalina ) yang  mempunyai potensi toksik, hal ini ditunjukkan dengan harga LC 50 > 1000 ppm. Kata Kunci : Toksisitas, ekstrak daun afrika ( Vernonia amygdalina ), Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

## ABSTRACT
Vernonia  amygdalina  is  one  kind  of  medical  plant  in  Indonesia.  The  leaves  contains  alkaloids, saponins, tannin, phenolics, flavonoids, triterpenoids, steroid and glycosides bioactive compounds. The aims of the research is determine the lethal toxicity value of Vernonia amygdalina, determine physical appearance of Vernonia  amygdalina, and determine bioactive compounds of  Vernonia  amygdalina. The method used in this research is Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method. This research use larva Artemia salina Leach that devided  into  5  groups.  Each  group  consist  of  10  larva  with  two  replications.  Vernonia  amygdalina concentration  used  are  1  ppm,  10  ppm,  20  ppm,  100  ppm,  and  500  ppm  and  done  extract  partition  with ethanol,  n-Hexane,  and  ethyl  acetate.  Observations  were  made  during  24  hours  of  Artemia  salina  Leach mortality.  Based on the data, LC 50 Vernonia amygdalina determined by probity analysis. The result of probity analysis shows ethanol extract is 123 ppm, LC 50 n-Hexane extract is 3548 ppm, and ethyl acetate extract has no LC 50 . The result indicates only ethanol extract having toxic value. In this case indicates with LC 50 > 1000 ppm.
Keywords : Toxicity, Vernonia amygdalina, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

## LATAR BELAKANG
Penggunaan  herbal  sebagai  obat- obatan  tradisional  telah  diterima  luas  di negara-negara  maju  maupun  berkembang sejak  dahulu,  bahkan  dalam  20  tahun terakhir  perhatian  dunia  terhadap  obat- obatan  tradisional  semakin  meningkat, baik  di  negara  yang  sedang  berkembang maupun  negara-negara  maju. World Health  Organization (WHO)  atau  Badan Kesehatan  Dunia  menyebutkan  bahwa hingga  65%  dari  penduduk  negara  maju menggunakan  pengobatan  tradisional  dan obat-obat  dari  bahan  alami  (Departemen Kesehatan RI, 2000).
Semua  spesies  tanaman  yang  ada di  dunia  sebenarnya  berguna  untuk manusia. Namun hanya beberapa tanaman tertentu  yang  secara  alami  memiliki  sifat obat.  Kualitas  tanaman  obat  ditentukan oleh struktur bahan kimia yang menyusunnya.  Setiap  spesies  tanaman mengandung  bahan  kimia  yang  dapat mempengaruhi makhluk hidup lain (Savitri A, 2016).
Secara
umum, tanaman mensintesis senyawa yang disebut metabolit  primer,  yakni  protein,  lemak, dan  karbohidrat.  Senyawa  –  senyawa tersebut sangat penting untuk keberlangsungan  hidup  dan  reproduksi tanaman  dan  juga  untuk  hewan  atau
manusia  yang  mengkonsumsinya  (Savitri A, 2016).
Tanaman  obat  selain  mensintesis metabolit primer, juga mensintesis sejumlah  komponen  tumbuhan,  yang disebut  metabolit  sekunder.  Metabolit sekunder digunakan untuk pertahanan diri bagi  tanaman  diantaranya  melindungi tanaman  terhadap  jamur,  bakteri,  hewan, bahkan  tanaman  lain.  Metabolit  sekunder memainkan peran penting dalam melawan penyakit  dan  predator  bagi  tanaman. Dengan  kata  lain,  senyawa  sekunder dalam  keadaan  murni  bisa  menjadi  obat sekaligus  racun  bagi  makhluk  hidup  lain yang mengkonsumsinya (Savitri, 2016).
Indonesia  merupakan  negara  di benua Asia yang terkenal karena keanekaragamannya, baik keanekaragaman  suku  bangsa  maupun keanekaragaman  alamnya.  Salah  satu keanekaragaman  alam  yang  dimiliki Indonesia  adalah  keanekaragaman  hayati khususnya tumbuhan. Selain itu Indonesia juga memiliki keanekaragaman etnis yang memiliki  berbagai  macam  pengetahuan tentang obat tradisional yang menggunakan bahan-bahan dari tumbuhan.  Banyak  dari  jenis  tumbuhan itu  telah  ribuan  tahun  digunakan  oleh nenek  moyang  bangsa  Indonesia  dan dokter  sebagai  bahan  obat  atau  jamu
tradisional untuk berbagai macam penyakit dan memberikan hasil yang baik bagi pemeliharaan kesehatan serta pengobatan.  Di  bumi  ini  diperkirakan terdapat  40.000  spesies  tumbuhan.  Dari jumlah  tersebut  sekitar  30.000  spesies hidup  di  kepulauan  Indonesia  dan sekurang-kurangnya 9.600 spesies diketahui berkhasiat obat, tetapi baru 300 spesies  yang  telah  dimanfaatkan  sebagai bahan  baku  obat  tradisional  dan  industri obat  tradisional  (Departemen  Kesehatan RI, 2000).
Indonesia memiliki
keanekaragaman  hayati  yang  sangat lengkap. Anugerah ini membuat Indonesia  menjadi  negara  pengobatan herbal  terbaik  di  dunia.  Beragam  jenis tanaman obat dapat tumbuh dengan subur di  Indonesia.  Tanaman  obat  menjadi bahan  utama  dalam  pembuatan  jamu  dan obat-obatan herbal (Hariana A, 2013).
Salah  satu  tanaman  obat  yang terdapat  di  Indonesia  adalah  daun  afrika ( vernonia  amygdalina ),  yang  diketahui memiliki  efektivitas  yang  sangat  besar. Daun  afrika  mengandung  flavonoid, glikosida, saponin, tannin, dan triterpenoid/steroid (Setiawan, 2012).
Senyawa-senyawa  tersebut  merupakan kandungan paling utama dari daun afrika. Daun  afrika  berasal  dari  benua  Afrika, khususnya Nigeria, Kamerun dan Zimbabwe.  Daun  afrika  di  Nigeria  sering
digunakan untuk bahan makanan dan obat tradisional  yang  dikombinasikan  dengan tanaman  lain  untuk  mengobati  berbagai penyakit. Seiring berjalannya waktu daun afrika  semakin  banyak  digunakan  di berbagai  negara  salah  satunya  Indonesia (Ijeh, 2010).
Tulisan-tulisan  ilmiah  mengenai tanaman afrika masih sangat terbatas,  terutama  daunnya  yang  sangat bermanfaat  untuk  kesehatan.  Hal  ini patut  disayangkan  karena  berlimpahnya jumlah daun afrika di Indonesia khususnya di daerah Batang, Jawa Tengah serta  khasiat  daun  afrika  yang  sangat bermanfaat  bagi  masyarakat.  Penelitian yang akan dilakukan meliputi uji toksisitas  dari  ekstrak  daun  afrika.  Uji toksisitas ini akan dilakukan menggunakan  metode Brine  Shrimp Lethality  Test (BSLT)  pada  larva  udang tujuannya untuk mengetahui ada tidaknya kandungan toxic (racun)  dalam  daun afrika.
Berdasarkan  penjelasan  dan  data penggunaan  obat  tradisional  maka  dapat diketahui  masalah  dalam  penelitian  ini adalah masih kurangnya pemanfaatan dan tulisan ilmiah tentang obat tradisional dari daun  afrika.  Oleh  karena  itu,  peneliti bermaksud  melakukan  penelitian  yang berjudul  Uji  Toksisitas  Ekstrak  Daun Afrika  ( Vernonia  amygdalina )  Dengan
Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test
(BSLT).

## METODE
Instrumen penelitian yang digunakan  adalah  alat-alat  laboratorium seperti  gelas  ukur  merek phyrex ,  tabung reaksi  merek phyrex ,  neraca  analitik, pipet,  batang  pengaduk  kaca,  cawan, penjepit  kayu,  oven, water  bath ,  kertas saring  dan  alat-alat  tambahan  lain  seperti pisau,  kain  flannel,  dan  airator  merek Nikita  Star,  arus  =  3,5L/menit.  Bahan yang  digunakan  adalah  daun  afrika ( Vernonia amygdalina ), etanol, n-Heksan, etil  asetat,  larva Artemia  salina  Leach , dan air laut.
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  daun  afrika  yang diambil  dari  Desa  Sembojo,  Kecamatan Tulis,  Kabupaten  Batang,  Jawa  Tengah. Daun  afrika  segar  seberat  2  Kg  dipotong kecil-kecil  kemudian  dikeringkan  dengan cara  diletakkan  di  tempat  terbuka  dengan sirkulasi  udara  yang  baik  dan  tidak terkena  langsung  sinar  matahari.  Karena pada pengeringan langsung terhadap sinar matahari  akan  merusak  komponen  aktif pada  daun  afrika.  Selanjutnya  simplisia daun  afrika  diekstraksi  dengan  metode maserasi,  dengan  cara  merendam  daun afrika  dalam  pelarut  etanol  70%  selama 24  jam,  lalu  disaring  dengan  kain  flannel dan  direndam  kembali  dalam  etanol  70%
sampai  tersari  atau  terekstraksi  sempurna yang  ditandai  dengan  warna  etanol menjadi  bening  kembali.  Setelah  itu, pelarut etanol yang masih tersisa diuapkan  pada  penangas  air  atau water bath sambil  diaduk  sehingga  didapatkan ekstrak yang kental.
Penetasan  larva Artemia  salina Leach dilakukan selama 48 jam. Penetasan dilakukan dengan cara merendam  telur  tersebut  dalam  air  laut secukupnya  pada  wadah.  Sebelumnya wadah  dipasang  aerator,  aerator  ini berguna  untuk  menjaga  kadar  oksigen dalam  wadah.  Wadah  yang  telah  terisi telur dan telah dipasangi aerator selanjutnya  diletakkan  di  ruang  yang cukup cahaya. Cahaya ini berfungsi untuk pertumbuhan larva Artemia salina Leach.
Dalam  waktu  48  jam  telur  akan  berubah menjadi  larva Artemia  salina  Leach (Mutiah D, 2010).
Setelah  didapatkan  larva Artemia salina Leach , dilakukan pembuatan larutan  induk  dengan  ekstrak  etanol  daun afrika  dengan  konsentrasi  2000  ppm  atau sebanyak  400  mg  ekstrak  dalam  200  ml air laut. Kemudian dilakukan pengenceran dengan  air  laut  menjadi  konsentrasi  1
ppm,  10  ppm,  20  ppm,  100  ppm,  500 ppm.
Pembuatan  partisi  ekstrak  n- Heksan    dilakukan  dengan  menimbang 2gram  ekstrak  etanol  daun  afrika  dan disuspensikan dengan air sebanyak 20 ml, setelah larut kemudian dimasukkan dalam corong  pisah  dan  ditambahkan  dengan total  n-Heksan  sebanyak  65  ml,  lalu diuapkan  sampai  mendapatkan  ekstrak kental. Cara tersebut juga dilakukan pada pembuatan partisi ekstrak etil asetat.
10  ekor  larva Artemia  salina Leach dimasukkan kedalam tabung reaksi yang  berisi  10  ml  konsentrasi  1  ppm,  10 ml konsentrasi 10 ppm, 10 ml konsentrasi 20 ml, 10 ml konsentrasi 100 ppm, dan 10
ml konsentrasi 500 ppm. Selain itu, dibuat kontrol  negatif  yang  berisi  10  ml  air  laut tanpa penambahan ekstrak. Kriteria standar  untuk  menilai  kematian  larva udang  adalah  bila  larva  udang  tidak menunjukkan pergerakan selama beberapa detik observasi. Setiap konsentrasi  perlakuan  dilakukan  replikasi sebanyak  2  kali  ( duplo ).  Data  yang dikumpulkan  adalah  data  primer  yang didapatkan  dari  jumlah  larva  udang  yang mati  24  jam  setelah  perlakuan  pada  tiap- tiap  konsentrasi  ekstrak  daun  afrika (Mutiah, 2010).

## HASIL
Tabel 1. Hasil Partisi Ekstrak
Parameter Ekstrak Etanol Partisi Ekstrak n-Heksan Etil Asetat Jumlah 26,12 gram 0,4 gram 0,2 gram Rendemen 6,35% - - Kadar Air 11,25% - - Kadar Abu 14,69% - - Kadar Abu tak larut asam 0,03% - - Organoleptis a. Warna Hijau Tua Hijau Tua Hijau Tua b. Bau Aromatik Aromatik Aromatik
c. Bentuk Pasta Pasta Pasta d. Rasa Pahit Pahit Pahit
Berdasarkan  Tabel  1,  diketahui  bahwa jumlah  ekstrak  etanol  yang  didapatkan adalah  26,12  gram,  0,4  gram  didapatkan dari  partisi  ekstrak  n-Heksan,  dan  0,2 gram  didapatkan  dari  partisi  ekstrak  etil
asetat.  Organoleptis  yang  didapatkan  dari ketiga partisi ekstrak yaitu berwarna hijau tua, berbau aromatik, berbentuk pasta, dan memiliki rasa pahit .   Tabel 1. Hasil Uji Toksisitas Awal Crude Ekstrak Nilai LC 50 (ppm) Fase Etanol 123 ppm Fase n-Heksan 3548 ppm Fase Etil Asetat -
Berdasarkan    tabel  2.  Diketahui bahwa crude ekstrak  yang  memiliki  nilai toksisitas  paling  tinggi  yaitu  pada  fase etanol dengan nilai LC 50 sebesar 123 ppm,
selanjutnya  fase  n-Heksan  memiliki  nilai LC 50 3548  ppm,  dan  fase  etil  asetat  yang tidak memiliki nilai LC 5.

## Tabel 2. Hasil Uji Fitokimia
Uji Fitokimia Hasil Alkaloid + Saponin + Tanin + Fenolik + Flavonoid + Triterpenoid + Steroid + Glikosida +
Berdasarkan  tabel  3.  Diketahui bahwa  ekstrak  daun  afrika  memiliki kandungan alkaloid, saponin, tanin,
fenolik,  flavonoid,  triterpenoid,  steroid, dan glikosida.

## DISKUSI
Pengujian  pada  ekstrak  daun afrika  berfungsi  untuk  mengetahui  toksik tidaknya  daun  afrika.  Ekstrak  etanol dengan  berat  26,12  gram  yang  memiliki bentuk  berupa  pasta  berwarna  hijau  tua pekat  beraroma  khas  aromatik  daun kemudian  dilarutkan  ke  dalam  pelarut organik  polar  hingga  nonpolar  secara berurutan.  Penggunaan  pelarut  etanol karena  etanol  mempunyai  polaritas  yang tinggi  sehingga  dapat  mengekstrak  bahan lebih  banyak  dibandingkan  jenis  pelarut organik yang lain, etanol mempunyai titik didih  yang  rendah  dan  cenderung  aman, serta  etanol  tidak  berbahaya  dan  beracun (Gamse T, 2002). Partisi awal menggunakan  pelarut n -heksan  diperoleh fase n -heksan  seberat  0,4  g.  Penggunaan pelarut n -heksan karena n- heksan bersifat nonpolar sehingga dapat menarik senyawa kimia  nonpolar  dari  tumbuhan,  dan n- heksan  memiliki  toksisitas  relatif  rendah (Gamse T, 2002). Selanjutnya
menggunakan pelarut etil asetat diperoleh fase  etil  asetat  seberat  0,2  g.  Alasan menggunakan  pelarut  etil  asetat  karena etil  asetat  bersifat  semipolar  sehingga dapat menarik senyawa bersifat polar dan
nonpolar,  memiliki  toksisitas  rendah,  dan mudah diuapkan (Gamse T, 2002).
Dari  hasil  penelitian  menunjukan bahwa fraksi larut air yang menggunakan pelarut  etanol  diperoleh  bahwa  kematian larva  (LC 50 )  berada  pada  konsentrasi  123 ppm.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa senyawa  toksik  pada  ekstrak  daun  afrika bersifat  larut  air  atau  polar.  Senyawa polar  dalam  daun  afrika  diantaranya flavonoid,  tanin,  glikosida,  dan  fenolik. Senyawa-senyawa itu masuk dalam senyawa  polar  karena  memiliki  gugus hidroksil  (Akbar  B,  2010).  Dengan konsentrasi  123  ppm  tersebut  daun afrika dapat  digunakan  sebagai  antibakteri (Mayer, 1982).
Pada pengujian menggunakan pelarut etil asetat yang merupakan pelarut semipolar  diperoleh  bahwa  tidak  terjadi kematian larva (LC 50 ). Hal ini menunjukkan bahwa senyawa toksik daun afrika tidak bersifat semipolar.
Pada pengujian menggunakan pelarut n-Heksan yang merupakan pelarut nonpolar  menunjukkan  bahwa  kematian larva (LC 50 ) berada pada konsentrasi 3548 ppm.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa senyawa  yang  tidak  larut  air  yang
terkandung  dalam  daun  afrika  tidak bersifat  toksik  karena  senyawa  dikatakan toksik apabila memiliki nilai LC 50 kurang dari  1000  ppm  (Mayer,  1982).  Senyawa kimia  daun  afrika  yang  tak  larut  air diantaranya  adalah  steroid,  steroid  masuk ke  dalam  senyawa  tak  larut  air  karena memiliki golongan lipid.
Hasil  uji  toksisitas crude ekstrak daun  afrika dengan  metode  BSLT menunjukkan  bahwa  ekstrak  fase  etanol (larut  air)  daun  afrika  memiliki  nilai toksisitas  paling  tinggi  dengan  LC50 sebesar  123  ppm.  Dengan  tingginya  nilai toksisitas  fase  etanol  ada  beberapa  faktor yang mempengaruhinya diantaranya, kandungan  senyawa  polar  pada  daun afrika merupakan  senyawa  yang  paling aktif  dibandingkan  dengan  senyawa nonpolar  dan  semipolar  pada  daun. Menurut  Mayer  1982,  apabila  fase  atau ekstrak memiliki nilai LC 50 123 ppm atau LC50  >  30-200  ppm  berpotensi  sebagai antibakteri.
Hasil  penelitian  diperoleh  bahwa ekstrak daun afrika mengandung alkaloid, saponin, tanin, fenolik, flavonoid, triterpenoid,  steroid,  glikosida.  Aplikasi alkaloid  yaitu  sebagai  analgesik,  obat malaria, dan obat kanker (Akbar B, 2010).
Aplikasi  saponin  yaitu  sebagai  anti kanker,  anti  mikroba,  meningkatkan sistem  imunitas,  dan  dapat  menurunkan kolesterol (Lenny S, 2006). Aplikasi tanin yaitu  sebagai  anti  diare,  anti  bakteri, antioksidan, dan penawar racun (Akbar B, 2010).  Aplikasi  fenolik  yaitu  sebagai antioksidan, meningkatkan sistem kekebalan  tubuh,  dan  meningkatkan sirkulasi  darah  (Wahyuni  S,  2009). Aplikasi  flavonoid  yaitu  sebagai  anti diabetes,  anti  kanker,  penyakit  jantung, dan  antioksidan  (Wadodkar  SG,  2008). Aplikasi triterpenoid yaitu sebagai antiseptik, antimikroba, efek ekspektoran, obat  penyakit  diabetes,  dan  mengatasi gangguan  menstruasi  (Lenny  S,  2006). Aplikasi  steroid  yaitu  sebagai  obat jantung, stimulasi tumor prostat, dan obat gangguan hati (Murray K, 2009). Aplikasi glikosida yaitu sebagai analgesik, antibakteri,  antitusif,  dan  anti  kanker (Sumardjo D, 2006).
Hasil pada penelitian ini diperoleh bahwa kandungan fitokimia dalam ekstrak daun afrika yang menunjukan efek toksik adalah  flavonoid,  tanin,  glikosida,  dan fenolik. Dimana senyawa-senyawa tersebut  merupakan  senyawa  yang  larut air (larut dalam pelarut polar.

## SIMPULAN
Hasil Penelitian menunjukan bahwa nilai LC 50 fraksi etanol daun afrika berada  pada  konsentrasi  123  ppm,  fraksi etil asetat daun afrika tidak memiliki nilai LC 50 , dan nilai LC 50 fraksi n-Heksan daun afrika berada pada konsentrasi 3548 ppm. Organoleptis ekstrak daun afrika
didapatkan hasil warna hijau tua, berbentuk  pasta,  berasa  pahit,  dan  berbau aromatik.  Hasil  uji  fitokimia  diketahui bahwa  flavonoid,  tanin,  glikosida,  dan fenolik  merupakan  senyawa  yang  paling aktif yang terkandung dalam daun afrika.

## DAFTAR PUSTAKA
Akbar  B.2010. Tumbuhan  Dengan Kandungan  Senyawa  Aktif  Yang Berpotensi Sebagai Bahan Antifertilita .Jakarta: Adabia Press Departemen Kesehatan Republik Indonesia,  2000  dalam  Hanifatan
H F.2012. Proses Pembuatan Jamu Sediaan  Kapsul  dan  Analisis Pemanfaatan  Metabolit  Sekunder Daun  Jati  Belanda  (Guazuma
ulmifolia  lamk)  di  CV.  Herba Nirmala .Surakarta  :  Universitas Sebelas Maret Surakarta Gamse T.2002.Liquid-Liquid Extraction and Solid Liquid Extraction.  Institute  of  Thermal Process and Environmental
Engineering.
Hariana  A.2013. Tumbuhan  Obat  dan
Khasiatnya. Jakarta : Penebar
Swadaya Grup
Ibrahim  N,  Aprianti  S,  Arif  M,
Hardjoeno.  2006.  Hasil  Tes  Laju
Endap  Darah  Cara  Manual  dan Automatik. Indonesian  Journal  of Clinical  Pathology  and  Medical Laboratory ,  Vol.  12,  No.  2,  Mar 2006: 45-48
Ijeh.2010.Current  Perspectives  on  The Medical  Potentials  of  Vernonia amygdalina Del. Journal of
Medicinal
Plant Research 5(7):1051-1061 Lenny  S.2006. Senyawa  Triterpenoida dan  Steroida .  Medan:  Universitas
Sumatera Utara Mayer, 1982 dalam Rizqillah N.2013. Uji Toksisitas Akut
Ekstrak  n-Heksan  Daun  Garcinia benthami  Pierre  Terhadap  Larva
Artemia  Salina  Leach  Dengan Metode  Brine  Shrimp  Lethality Test (BSLT) .Jakarta : UIN Jakarta Murray  K.2009. Biokimia Harper Edisi 27 .Jakarta:Buku Kedokteran EGC
Mutiah  D.2010. Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak  Etanol  Buah  Anggur (Vitis  Vinivera)  Terhadap  Larva Artemia  Salina  Leach  Dengan
Metode  Brine  Shrimp  Lethality Test (BSLT). Semarang : Universitas Diponegoro
Savitri  A.2016. Tanaman  Ajaib!  Basmi Penyakit dengan TOGA (Tanaman Obat  Keluarga) .Depok  :  Bibit Publisher
Silvani  H,  Sureskiarti  E  .2016.
Hubungan  peran  aktif  keluarga sebagai  pengawas  minum  obat (PMO) Dengan angka
kekambuhan  TB  paru  di  ruang seruni RSUD abdul wahab sjahranie  Samarinda. Jurnal  Ilmu
Kesehatan .Vol.4 No. 2, Desember 2016 Sumardjo D.2006. Pengantar Kimia .Jakarta : Kedokteran EGC Wahyuni S.2009. Tumbuhan Obat Hias Berpotensi .Jakarta:Elex
Media
Komputindo