KELAINAN RANGKA FETUS MENCIT ( Mus musculus ) GALUR BALB/C AKIBAT PEMBERIAN DEET (Diethyltoluamide)

## Wiwik Kusmawati
Program Studi Pendidikan Biologi FPIEK IKIP Budi Utomo Malang Jl. Citandui No. 46 Malang Email; wiwikkusmawati@gmail.com

## ABSTRACT
The study was aimed to identify the effect of DEET on fetal skeletal abnormalities of Balb/C strain mice. Thirty five female Balb/C strain mice were used in this study. The female mice were  mated  with  male  mice  used  one  mating  method.  Mice  in  treatment  group  were administered  dermally  with  281,25;  562,5  1125  and  2250  mg/kg  BW  DEET  disolved  in ethanol at gestation day of 6 to 15, while mice in control were administered with ethanol. Mice in group were repeated seven times. At gestation day 18, the mice were sacrificed and fetal skeletal abnormalities were observed. Bone staining subsequently was done by using Alizarin  Red  S.  Results  were  analyzed  by  using  SPSS  program  version  16  personal computer,  one  way  ANOVA  and  multiple  comparison  test  with  significance  level  of  0,05. Skeletal abnormalities such as supraoccipital, sternal, vertebral, sacrocaudal and phalanx were not found in all doses administered. From these experiment we suggested that DEET has  no  effects  in  fetal  skeletal  abnormalities  such  as  supraoccipital,  sternal,  vertebral, sacrocaudal and phalanx.
Keywords: DEET, Fetal skeletal abnormalities

## PENDAHULUAN
Diethyltoluamide (DEET), dikenal dengan nama produk dagang Autan, Detamide, Metadelphen,  Repper-det,  Repladin  Special, Oldtime Woodsman, Cutter, Muskol, Chemform,  Baker’s  Antifol  ataupun  Off. DEET  mempunyai  nama  kimia  diethyl-m- toluamide; diethyl-meta-toluamide; N,N- diethyl-3-methyl-benzamide ataupun 3-methyl- N,N-diethylbenzamide (Cecchine, et al ., 2002;
Anonim 1 ,  2002;  Anonim 3 ,  2002).  DEET merupakan pestisida kelompok pengusir serangga ( insect repellent ). DEET ini termasuk kelas  kimia aromatic  amide yaitu  N,N- dialkylarylamide  (Anonim 2 ,  2002;  Anonim 3 , 2002).
Insect repellent yang mengandung DEET  digunakan  untuk  mengusir  gigitan  lalat hitam, lalat kuda, lalat pasir, kutu kucing, kutu anjing,  agas  dan  nyamuk  (famili  Culicidae) (Anonim 2 ,  2002;  Anonim 3 ,  2002).  DEET paling  efektif  untuk  mengusir  nyamuk Aedes aegypti dan Aedes  taeniorhynchus (Pronczuk, 1990).
Salah  satu  strategi  untuk  memperkecil kejadian arthropod-borne  disease adalah dengan  menggunakan  personal  proteksi  yaitu dalam  bentuk insect  repellent .  DEET  adalah proteksi  yang  paling  efektif  terhadap  penyakit malaria, dengue  fever , yellow  fever , epidemic
polyarthritis , encephalitis , bancroftian filariasis (Fradin, 1998; Anonim 4 , 2003).
Karbon  dioksida  dan  asam  laktat  yang dihasilkan  oleh  manusia  merupakan attractant yang  sangat  penting  bagi  nyamuk  untuk menggigit  inang.  DEET  mengusir  nyamuk dengan  penghambatan  kemoreseptor  pada antenanya  yang  distimulasi  oleh  asam  laktat (Fradin,  1998;  Cecchine, et  al .,  2002; Anonim 3 , 2002).
Penelitian  yang  dilakukan  Yayasan Lembaga  Konsumen  Indonesia  (YLKI)  pada tahun  1995,  menemukan  bahan  aktif  DEET pada berbagai produk insect repellent (Anonim 2 ,  2003;  Anonim 3 ,  2003).  Produk insect  repellent ini  dapat  membahayakan manusia  karena  kandungan  bahan  aktif  DEET (Anonim 1 ,  2003).  Bahaya  DEET  adalah  dapat mengakibatkan  kegilaan  ( maniac  psychosis ), kejadian  kardiovaskuler,  alergi  kulit  dan dermatis (Cecchine, et al ., 2002). Produk yang mengandung DEET ataupun isomernya sangatlah efektif sebagai insect repellent tetapi juga  dapat  mengakibatkan  reaksi  dermal  dan neurologik pada manusia (Anonim 1 , 2002). DEET  merupakan  pestisida  yang  sangat unik,  karena  dapat  digunakan  secara  langsung pada  kulit  manusia  dengan  tujuan  untuk mencegah  gigitan  serangga  (Anonim 1 ,  2002). Pada  umumnya  DEET  digunakan  pada  kulit
manusia,  pakaian,  hewan  peliharaan,  tenda, alas tidur gulungan, mesh insect nets dan kasa jendela  (Fradin,  1998;  Anonim 2 ,  2002; Anonim 1 , 2002).
DEET dapat terabsorpsi masuk ke dalam kulit  dan  dapat  didistribusikan  pada  seluruh organ  termasuk  otak  dan  fetus  (Anonim 1 , 2002).  Senyawa  ini  dapat  diekskresikan melalui urin (Pronczuk, 1990; Anonim 1 , 2002; Anonim 2 , 2002).
Studi  yang  dilakukan  terhadap  tikus dengan pemberian DEET selama kebuntingan, ternyata  senyawa  ini  dapat  terabsorpsi  masuk ke  dalam  kulit  dan  dapat  melintasi  plasenta (Pronczuk,  1990;  Pergament  and  Amy,  1992; Anonim 4 ,  2003).  DEET  yang  diberikan  pada kulit  betina  albino  selama  kebuntingan ditemukan  terdapat  pada  plasenta,  fetus  dan induk  pada  masa  tiga  bulan  sesudah  kelahiran (Pronczuk, 1990).
Terdapat  dalam  laporan  kasus  pada manusia  tentang  gambaran  maternal  akibat DEET dengan kadar 25 % yang diberikan pada lengan  dan  kaki  setiap  hari  selama  kehamilan. Akibatnya  bayi  yang  terlahir  mengalami kecacatan  sehubungan  dengan  wajah,  seperti: retardasi  sensorimotor,  problem  otot  dan kehilangan pendengaran (Anonim 4 , 2003).
Pemberian DEET pada kulit tikus betina albino  selama  kebuntingan  meningkatkan kecepatan  kematian  post  natal  dan  embrional (Pronczuk,  1990).  Kelinci  bunting  yang  diberi DEET 0, 50, 100, 500, 1000 atau 5000 mg/kg BB dalam pelarut etanol pada tulang punggung tercukur  pada  umur  kebuntingan  ke-0  –  29 hari,  menunjukkan  tidak  ada  peningkatan kejadian  anomali  skeletal  atau  jaringan  lunak yang  diamati  pada  kelompok  kontrol  dan perlakuan (Anonim 1 , 2002).
Dari  hasil  penelitian,  DEET  dapat mengakibatkan efek teratogenik dan embriotoksik pada embrio ayam white leghorn dengan  1,27  mikromol  DEET  yang  diberikan pada  membran  khorio-allantois.  Sebanyak  41 %  embrio  dapat  bertahan  hidup  dan  33  % embrio  mengalami  malformasi,  umumnya kejadian  kardiovaskuler,  muskuloskeletal  dan kecacatan  sistem saraf pusat (Anonim 1 , 2002). Kecacatan  kelahiran  akibat  pemberian  DEET juga  terjadi  pada  embrio  ayam  domestik ( Gallus  gallus  domesticus, famili  Phasianidae: burung  belibis,  kalkun,  ayam  pegar  dan  ayam hutan) (Anonim 3 , 2002).
Dari  uraian  diatas,  maka  sangatlah penting  untuk  mengkaji  efek  DEET  terhadap
kelainan  rangka  fetus  mencit  ( Mus  musculus ) galur  Balb/C.  Penelitian  ini  merupakan penelitian  terapan  yang  dikerjakan  secara eksperimen  laboratorik  dengan  menggunakan hewan  coba  mencit  sebagai  model.  Hal  ini karena  pola  perkembangan  embrio  mencit hampir sama dengan manusia, siklus hidupnya pendek, mudah dipelihara dan cepat berkembang biak. Dengan demikian perlakuan yang  diberikan  kepada  mencit  dan  hasil  dari perlakuan yang didapatkan dalam penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai pertimbangan penggunaan DEET pada manusia.

## METODE PENELITIAN Mengawinkan Mencit
Mengawinkan mencit dengan cara mencit  betina  dikumpulkan  dengan  mencit jantan dalam satu kandang dengan menggunakan  metode one  mating. Untuk mengetahui  apakah  pada  mencit  betina  sudah dikawini  atau  belum,  maka  pada  hari berikutnya setelah dikawinkan, diamati adanya sumbat  vagina  ( vaginal  plug ).  Sumbat  vagina ini terdiri dari gelatin yang sudah menggumpal yang berfungsi untuk menjaga agar spermatozoa  tidak  tumpah  keluar.  Apabila terdapat  sumbat  vagina  maka  dapat  dianggap bahwa  kopulasi  telah  terjadi  dan  pada  saat  ini dianggap  sebagai  kebuntingan  hari  ke  nol. Dengan  adanya  tanda  kebuntingan  ini,  mencit betina  diletakkan  pada  kandang  individual. Nomor mencit diberikan dengan cara pemberian  tanda  pada  bagian  kuping  mencit, kemudian  dicatat  tanggal  estrus,  tanggal kopulasi, tanggal pemberian DEET dan tanggal saat dikorbankan.

## Pembuatan Larutan
Dosis yang digunakan pada penelitian ini adalah 0; 281,25; 562,5; 1125 dan 2250 mg/kg BB.  Dosis  tersebut  merupakan  ½,  ¼,  1/8  dan 1/16  dosis  kisaran  terendah  dari  LD 50 pada mencit  yaitu  4500  mg/kg  BB  (Pronczuk, 1990).

## Cara Perlakuan
Mencit  betina  bunting  dikelompokkan menjadi  empat  kelompok  (terdiri  dari  satu kelompok kontrol dan tiga kelompok perlakuan). Sebelum digunakan untuk pengujian, mencit tersebut selama satu minggu diadaptasikan untuk hidup bersama dalam satu kandang  dan  ditimbang  berat  badannya.  Pada
kelompok perlakuan diberi DEET dermal pada tulang  punggung  tercukur  dengan  ukuran  2x2 cm pada dosis 0; 281,25; 562,5; 1125 dan 2250 mg/kg  BB  pada  umur  kebuntingan  ke-6  –  15 hari. Untuk dosis 0 mg/kg BB (kontrol) hanya diberikan etanol.

## Pengamatan
Pada  umur  kebuntingan  ke-18  hari, induk mencit ditimbang kemudian dikorbankan untuk  pembedahan.  Pada  setiap  pembedahan diawali  dengan  pembiusan  menggunakan kloroform, kemudian hewan coba ditelentangkan  di  atas  papan  seksi  dan  mulai dilakukan  pembedahan.  Pembedahan  dimulai dari  vagina  menuju  ke  arah  perut  dengan menggunakan gunting kecil. Selanjutnya dicari uterus untuk mengeluarkan fetus dan dimasukkan  ke  dalam  alkohol  96  %  untuk selanjutnya dilakukan  pewarnaan  rangka dengan menggunakan Alizarin Red S 0,01 %.

## Analisa Data
Hasil  yang  diperoleh  dianalisis  dengan menggunakan  personal  komputer  program SPSS versi 11 dengan ANOVA satu jalur serta uji  perbandingan  berganda  (BNT)  pada  taraf signifikansi  = 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Data  rata-rata  berat  fetus  dapat  dilihat pada tabel 1 dan gambar 1.
Tabel 1. Rata-rata  berat  fetus  (mg)  setelah pemberian berbagai dosis DEET Dosis DEET (mg/kg BB) Berat fetus (mg) 0 281,25 562,5 1125 2250 0,9049 0,5964 0,7837 0,8979 0,6573
Gambar 1. Rata-rata berat fetus (mg) setelah pemberian berbagai dosis DEET
Dari  hasil  analisis  varians  satu  jalur menunjukkan  bahwa  berat  fetus  setelah pemberian berbagai dosis DEET tidak terdapat perbedaan yang signifikan dengan p>0,05.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa setelah  pemberian  berbagai  dosis  DEET  0; 281,25; 562,5; 1125 dan 2250 mg/kg BB tidak ditemukan kelambatan penulangan pada tulang supraoksipital, kelainan jumlah tulang sternum, tulang  vertebralis,  tulang  sakrokaudalis  dan tulang  phalanx  anggota  depan  dan  belakang. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  setelah pemberian  berbagai  dosis  DEET  0;  281,25; 562,5;  1125  dan  2250  mg/kg  BB  tidak ditemukan  kelambatan  penulangan  pada  digit yang  diketahui  dari  jumlah  tulang  phalanx anggota  yang  meliputi  anggota  depan  dan belakang.
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 0 281,25 562,5 1125 2250 B er a t fet us ( m g )
Dosis DEET (mg/kg BB)
Gambar 2. Tulang supraoksipital fetus mencit (perbesaran 10x)
A = Kontrol; B = Perlakuan dosis DEET 2250 mg/kg BB;
so = Tulang supraoksipital
Gambar 3. Tulang sternum fetus mencit (perbesaran 10x)
A = Kontrol; B = Perlakuan dosis DEET 2250 mg/kg BB; st = Tulang sternum Gambar 4. Tulang vertebralis fetus mencit (perbesaran 10x)
A = Kontrol; B = Perlakuan dosis DEET 2250 mg/kg BB; v = Tulang vertebralis
A A B B A B

## Gambar 5. Tulang sakrokaudalis fetus mencit (perbesaran 10x)
A = Kontrol; B = Perlakuan dosis DEET 2250 mg/kg BB; sk = Tulang sakrokaudalis
Gambar 6. Tulang phalanx anggota depan fetus mencit (perbesaran 10x)
A = Kontrol; B = Perlakuan dosis DEET 2250 mg/kg BB;
p = prosimal; m = median; d = distal
Gambar 7. Tulang phalanx anggota belakang fetus mencit (perbesaran 10x)
A = Kontrol; B = Perlakuan dosis DEET 2250 mg/kg BB;
p = prosimal; m = median; d = distal Pemberian  berbagai  dosis  DEET  tidak ditemukan  kelainan  rangka  yang  meliputi kelambatan penulangan pada tulang supraoksipital, kelainan jumlah tulang sternum, tulang  vertebralis,  tulang  sakrokaudalis  dan tulang phalanx anggota depan dan belakang.
Hal  ini  sesuai  dengan  studi  yang dilakukan  pada  kelinci  bunting  yang  diberi DEET  0,  50,  100,  1000  atau  5000  mg/kg  BB dalam  pelarut  etanol  pada  tulang  punggung tercukur  pada  umur  kebuntingan  ke-0  –  29 hari.  Hasil  penelitian  tersebut  menunjukkan bahwa tidak ada peningkatan kejadian anomali skeletal  ataupun  jaringan  lunak  yang  diamati pada kelompok perlakuan dan kontrol (Anonim 1 , 2002).

## KESIMPULAN
Dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian DEET 0; 281,25; 562,5; 1125 dan 2250 mg/kg BB pada umur kebuntingan ke-6 – 15 hari pada kulit  dorsal  mencit  strain  Balb/C  tidak menyebabkan  kelainan  rangka  fetus  yaitu kelambatan penulangan pada tulang supraoksipital, kelainan jumlah tulang sternum, tulang  vertebralis,  tulang  sakrokaudalis  dan tulang phalanx anggota.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim 1 .  2002.  DEET.  Extension  Toxicology
Network (EXTOXNET). (Online).
A B
(http://pmep.cce.cornell.edu/profiles/Ext oxnet/carbaryl-dicrotophos/deet-ext. html. Diakses pada 27 November 2003.
Anonim 2 .  2002.  Insect  Repellent.  The  Poison Center. (Online). (http://www.mnpoison. org/mnpoison/pdfs/Insect%20Repellent. pdf. Diakses pada tanggal 27 November 2003.
Anonim 3 . 2002. DEET (Insect Repellent). West Nile Virus (WNV) . (Online). (http://212.187.155.84/wnv/List_WPMo d_Cont/westnile/Chemical?Deet.htm. Diakses  pada  tanggal  27  November
2003. Anonim 1 . 2003. Obat Nyamuk Bakar
Indonesia  Berbahaya?.  Kalbe.  (Online).
(www. kalbe.co.id/kfportal.nsf/0/865fd77ad7b3 9d447256da40003a7c8?OpenDocument
&AutoFramed-17k. Diakses pada tanggal 2 Desember 2003.
Anonim 2 . 2003. Jangan Asal Semprot. Intisari , (Online).  Kamis,  11  September  2003, (http://www.indomedia.com/intisari/Inti sari.cdf. Diakses pada tanggal 2 Desember 2003.
Anonim 3 .  2003.  Jangan  Remehkan  Efek Negatif  Anti-Nyamuk!.  Suara  Karya. Kamis, 11 September 2003.
Anonim 4 . 2003. Bug Repellent and Pregnancy.
Missouri Teratogen Information Services (MOTIS) . (Online).
(http://www.gnetics. missouri.edu/motis/bud_repellent_and_p regnancy.htm.  Diakses  pada  tanggal  27 November 2003.
Cecchine, G., Beatrice A. Golomb, Lee H. H., Dala  M.  Spektor,  C.  Ross  Anthony. 2002.  DEET  .  A  Review  of  the Scientific  Literature  as  it  Pertains  to Gulf  War  Illness,  (Online),  Volume  8, (pecticide. www.fwjustice.org./EHP%/20Training/c hap%205%20repro.pdf.  Diakses  pada tanggal 27 November 2003.
Fradin, M. S. 1998. Mosquitoes and Mosquito Repellents: A Cliniician’s Guide. Annals
of Internal Medicine. (Online).
(http://www.acponline.org/journals/anna ls/01jun98/mosquito.htm.  Diakses  pada tanggal 25 Desember 2003.
Pergament,  E.  and  Amy  S.  R.  1992.
Insecticides. Illinois Teratogen Information  Services  (ITIS),  (Online), (http://www.fetal- exposure.org/INSECT.  html.  Diakses pada tanggal 27 November 2003.
Pronczuk,  M.  D.  1990.  Pesticide  Documents (PDs) DEET. INCHEM . (Online). (http://www.inchem.org/document/pds/p ds/pest80_e.htm.  Diakses  pada  tanggal 27 November 2003.