UJI TOKSISITAS EKSTRAK Selaginella willdenowii TERHADAP KELANGSUNGAN HIDUP JUVENIL IKAN MAS ( Cyprinus sp.)
TOXICITY TEST OF Selaginella willdenowii EXTRACT ON SURVIVAL OF COMMON CARP JUVENILE ( Cyprinus sp.)
Akmalia Rahmani 1 , Endang L. Widiastuti 1 , M Kanedi 1 , G. Nugroho Susanto 1
1 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung E-mail : akmalia_rahmani@yahoo.com
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung Jl. Soemantri Brojonegoro No.1, Bandar Lampung, Lampung, Indonesia, 35145

## Abstrak
Selaginella willdenowii merupakan jenis tumbuhan yang memiliki senyawa aktif biflavonoid hasil dari metabolit  sekunder.  Sifat  toksik  Biflavonoid  diduga  mampu  menghambat  pertumbuhan  sel  kanker. Jika  asumsi  ini  benar, Selaginella dapat  dikembangkan  sebagai  bahan  baku  obat  tradisional. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  tingkat  toksisitas  ekstrak Selaginella  willdenowii terhadap ikan  mas  juvenil.  Ekstrak  dibuat  dari  keseluruhan  bagian Selaginella yang  dimaserasi  dengan menggunakan  aquades,  kemudian  ekstrak  dipanaskan  di  dalam  oven  sampai  menjadi  pasta.  Pasta tersebut diencerkan menggunakan aquades hingga didapatkan ekstrak cair dengan konsentrasi yang berbeda yaitu 0%, 5%, 10%, 20%, 40%, 50%. Masing-masing konsentrasi kemudian dituangkan pada media  air  ikan  mas  juvenil.  Penelitian  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  3  kali ulangan.  Analisis  data  menggunakan  ANOVA  dengan  α  5%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak Selaginella  willdenowii menggunakan  aquades  tidak  cukup  memberi  efek  racun  yang  dapat mempengaruhi  hidup  juvenile  ikan  mas  karena  nilai  toksiknya  tidak  lebih  besar  dari  1000  μg/ml walaupun dapat meningkatkan nilai mortalitas ikan mas yang dapat terlihat pada konsentrasi 50% dan hal ini tidak menunjukkan adanya perbedaan yang nyata dengan konsentrasi yang lebih rendah.
Kata kunci : Selaginella willdenowii , Uji Toksisitas, Ikan Mas ( Cyprinus sp . )

## Abstract
Selaginella  willdenowii is  one  of  plants  producing  bioactive  substance,  biflavonoid  as  its  secondary metabolites.  Biflavonoid  is  toxic  and  assumed  to  inhibit  the  growth  of  cancer  cells.  This  assumption leads to the use of selaginella as one of traditional medicines. This study was conducted to determine the  toxicity  level  of Selaginella  willdenowii extract  on Cyprinus sp  juvenile.  Maceration  by  using aquadest  was  made  for selaginella in  order  to  get  the  extract  and  followed  by  dehydration  using heating oven to get paste of the extract. The pasted extract then  was used by diluting with aquadest and made in different concentration namely 0, 5, 10, 20, 40, 50%. Each concentration was applied to Cyprinus sp juveniles. Randomized design was applied to this study with 3 replications. ANOVA with a 5% significance was applied. The result indicated that the highest  percentage mortality was showed by 50% extract concentration. How ever, based on the toxic value <1000 μg/ml, the 50% of Selaginella willdenowii did  not  show  any  toxicity  on  the Cyprinus sp.  juvenile  as  well  it  did  not  significantly different compare to those lower concentrations.
Keyword: Selaginella willdenowii , Toxicity Test, Common Carp ( Cyprinus sp.)

## PENDAHULUAN
Selaginella  willdenowii merupakan  salah  satu jenis  tumbuhan  paku  yang  banyak  dijumpai  di hutan sekunder. Di Indonesia  dikenal berbagai jenis selaginella yaitu: Selaginella    aristata , S. ciliaris , S.  frondosa,  S.  intermedia , S.  invol- vens , S . longiaristata,  S.  opaca , S.  ornata , S. plana , S.  remotifolia , S.  repanda , S.  rothertii ,
S.  singalanensis , S . subalpina,    S.  willdenowii ,
S.  zollingeriana,  S.  angustiramea,S.  caudata,
S.  velutina,  S.  cupressina,  S.  vonroemeri, dan S.  ketra-ayam,  S.  mayeri  dan  Selaginella  will- denowii banyak  digunakan  dalam  penelitian karena  banyak  mengandungan  zat-zat  kimia yang  bermanfaat  sebagai  bahan  baku  obat . Ekstrak Selaginella banyak  mengandung  bifla- vonoid,  4,7-di-O-metilamentoflavon,  isokripto- merin,  dan  7-O-metilrobusta-flavon  yang  seca- ra  signifikan  sitotoksik  terhadap  berbagai  sel kanker  (Silva et  al. 1995).  Menurut    Thomson
(2007), kandungan kimia yang banyak terdapat pada Selaginella tersebu t, dapat  bermanfaat sebagai  sebagai  anti  kanker. Selaginella juga memiliki  manfaat  sebagai  bahan  baku  antiok- sidan  (Chikmawati et  al ,  2009).  Biflavonoid yang  paling  kuat  dalam  menghambat  sel  kan- ker  adalah  ginkgetin  (Kim  dkk.,  2001).  Untuk membuktikan  bahwa Selaginella  willdenowii ini memiliki  sifat  toksik  seperti Selaginella yang lain, maka perlu dilakukan uji toksisitas.
Toksisitas Selaginella bisa  diuji  bertahap  pada organisme  hidup,  salah  satunya  adalah  ikan mas.  Menurut  Lilis  (2006),  Salah  satu  para- meter  pengujian  bahan  toksik  terhadap  hewan uji  adalah  LD 50 atau  LC 50. Suatu  tumbuhan dikatakan  bersifat  toksik  bila  konsentrasi  yang digunakan  menye-babkan  kematian  sebanyak 50% dari organisme uji.

## BAHAN dan METODE
Pembuatan Ekstrak Tanaman Selaginella Akar, batang, dan daun Selaginella dikeringkan di  dalam  oven  dengan  suhu  40-50 o C  selama 5x24  jam  sampai  benar-benar  kering.  Selan- jutnya, Selaginella yang  telah  kering  dipotong- potong  dan  dihaluskan  dengan  blender  kering. Selaginella yang  telah  halus  direndam  selama 24  jam  kemudian  disaring,  langkah  ini  diulang sebanyak 3 kali sampai dihasilkan ekstrak. Eks- trak Selaginella kemudian  digoyang  dengan shaker  selama  24  jam  pada  kecepatan  rendah agar  ekstrak  homogen.  Tahap  terakhir,  ekstrak Selaginella kemudian  diuapkan  di  dalam  oven dengan  suhu  40-50ºC  hingga  menjadi  pasta dan  siap  digunakan  sebagai  larutan  stok  pada penelitian.

## Persiapan Wadah Hewan Uji
Wadah  yang  digunakan  sebanyak  18  buah toples  dengan  ukuran  2.500  ml  yang  telah  di- sterilkan dan diisi air sebanyak 1.000 ml.
Perlakuan  Ekstrak Selaginella Terhadap  He- wan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam  uji  toksisitas adalah  ikan  mas  dengan  bobot  ±  3  g  per individu.  Hewan  uji  dipelihara  dalam  18  toples yang telah diisi air. Masing-masing toples berisi 3 ekor ikan mas dengan 3 pengulangan.

## Pengambilan Data
Pengamatan  dilakukan  dengan  menghitung jumlah ikan mas yang mati di setiap wadah pa- da 12 jam, 24 jam, 36  jam, 48 jam, 60 jam, 72 jam, 84 jam, dan 96 jam setelah perlakuan pa- da tiap konsentrasi.

## Parameter Penelitian
Persentase Mortalitas Juvenil dihitung dengan rumus : (juvenil mati/ jumlah total juvenil) x100%
Untuk mencari angka probit dibuat persamaan garis : Y = bX + a dimana   Y = log konsentrasi X = Angka probit

## Analisis Data
Penelitian  ini  disusun  dengan  menggunakan rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  3  kali pengulangan.  Dengan  konsentrasi  0%,  5%, 10%,  20%,  40%,  dan  50%.  LC 50 dicari  dengan persamaan  regresi  linier  yang  merupakan hubungan  antara  konsentrasi  dengan  per- sentase  kematian.  Untuk  mengetahui  adanya perbedaan yang signifikan antar perlakuan, da- ta  dianalisis  dengan  menggunakan  varian  satu arah (ANOVA) ( α = 0,05).

## HASIL dan PEMBAHASAN

## A.  Nilai Mortalitas Ikan Mas
Tabel 1.  Mortalitas  juvenil  ikan  mas  karena diberi ekstrak Selaginella wilde nowii Konsentrasi Nilai Mortalitas (%) 0% 11,11 5% 11,11 10% 33,33 20% 33,33 40% 44,44 50% 55,55
Table  1.  di  atas  menunjukkan  peningkatan kematian  pada  setiap  penambahan  konsen- trasinya, namun persentase mortalitasnya tidak menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  pada setiap  konsentrasi  yaitu  dapat  dilihat  pada konsentrasi  0%  memiliki  nilai  mortalitas  yang sama  dengan  5%.    Hal  ini  diduga  konsentrasi ekstrak  aquades  S elaginella 5%  belum  me- miliki  daya  toksik  jika  dibandingkan  dengan kontrol.  Nilai  toksik  dari  ekstrak  aquades Selaginella mulai  terlihat  pada  konsentrasi yang  lebih  tinggi  yaitu  pada  konsentrasi  10% dan  20%.  Demikian  juga  pada  penambahan konsentrasi  selanjutnya  yaitu  40%  jumlah kematian  juvenil  ikan  mas  semakin  mening- katkan  yaitu  sebesar  44,44%,  begitu  juga  de- ngan  konsentrasi  tertinggi  50%  yang  menga- lami mortalitas yang paling tinggi diantara kon- sentrasi  yang  lain  sebesar  55,55%.  Menurut Chikmawati (2009), S. willdenowii memiliki sifat
toksik karena adanya kandungan saponin yang lebih tinggi daripada jenis Selaginella lainnya.
B.  Korelasi  antara  ekstrak Selaginella de- ngan nilai mortalitas ikan mas
Hubungan  rerata  kematian  juvenile  ikan  mas dengan besarnya konsentrasi ekstrak Selaginella yang  diberikan  dapat  dilihat  pada Gambar 1 berikut.
Gambar 1.   Hubungan  antara  mortalitas  ikan mas  dengan  peningkatan  kon- sentrasi ekstrak Selaginella
Gambar  1  di  atas  menjelaskan  tentang  hu- bungan  antara  nilai  rerata  mortalitas  juvenile ikan  mas  yang  diberi  ekstrak selaginella de- ngan  tingkatan  konsentrasi  yang  berbeda.  Hal ini diduga karena ekstrak Selaginella yang me- ngandung  biflavonoid  dapat  menimbulkan  ke- matian  ikan  mas.  Pada  Gambar  1  di  atas  juga terlihat adanya korelasi antara rerata mortalitas dengan  peningkatan  konsentrasi  ekstrak,  de- ngan adanya nilai R = 0,972 yang hampir men- dekati  1.  Angka  tersebut  menunjukkan  bahwa hubungan  antara  penambahan  konsentrasi ekstrak Selaginella sangat  mempengaruhi  ke- matian  ikan  mas.  Nilai  LC50  dihitung  dengan memasukkan  nilai  50  kedalam  persamaan regresi y= 0,003(50) + 0,035 = 18,5%, dengan kata lain nilai LC 50 sebesar 18.500 ppm. Hal ini menunjukkan  bahwa  nilai  LC 50 kurang  toksik dalam  mempengaruhi  hidup  juvenil  ikan  mas. Sedangkan  pada  pengamatan  perjam  dari  12 jam setelah perlakuan  sampai 96 jam didapat- kan  hasil  mortalitas  yang  berbeda-beda.  Pada 12  jam  setelah  perlakuan  dan  24  jam  selan- jutnya  didapatkan  angka  probit  sebesar  y=0, hal ini diduga karena ikan mas masih beradap- tasi dengan perlakuan yang diberikan sehingga tidak terjadi mortalitas pada jam tersebut.
Sebagian  ikan  mas  mengalami  kematian  yang tinggi  pada  jam  ke-36  hampir  untuk  setiap konsentrasi  yang  diujikan.  Gambar  2  menun- jukkan  bahwa  pemberian  ekstrak Selaginella yang  berbeda  pada  ikan  mas  cukup  mempe-
ngaruhi kelangsungan hidup ikan. Hal ini dapat dilihat  dengan  nilai  R=0,693.  Pada  36  jam  se- telah perlakuan juga terlihat terjadi peningkatan persentase  kematian  pada  setiap  konsentrasi yang  berbeda.  Hal  ini  juga  terlihat  pada  kon- sentrasi 50% yang mengalami peningkatan ter- tinggi  sebesar  0,7%  apabila  dibandingkan  de- ngan konsentrasi lainnya
Gambar 2.  Hubungan  antara  mortalitas  ikan mas  dengan  peningkatan  konsen- trasi ekstrak Selaginella wildenowii setelah 36 jam.
Gambar  3.  Hubungan  antara  mortalitas  ikan mas  dengan  peningkatan  konsen- trasi  ekstrak Selaginella  wildewii pada 48, 72, 84 jam
Dari  ketiga  waktu  berbeda  diatas  (48  jam,  72 jam,  dan  84  jam)  hewan  uji  sama-sama  me- ngalami  peningkatan  nilai  kematian  pada  kon- sentrasi  40%  dan  pada  konsentrasi  50%  mes- kipun ada yang mengalami penurunan persen- tase kematian namun hubungan antara penam- bahan  konsentrasi  dengan  rerata  persentase kematian  sangat  kecil.  Secar  visual  pada  saat 48,  72,  dan  84  jam  setelah  perlakuan  dengan konsentrasi  berbeda,  ikan  yang  terkena  racun atau  zat  toksik  sudah  mengalami  gejala-gejala seperti  gerakan  hiperaktif,  menggelepar,  lum- puh  dan  kemudian  mengalami  kematian  pada konsentrasi  40%.  Sudarmo  (1992),  mengata- kan  bahwa  hewan  uji  yang  terkontaminasi  ra- cun  memperlihatkan  gejala  stress  bila  diban- dingkan  dengan  kontrol,  yaitu  ditandai  dengan menurunnya  nafsu  makan,  gerakan  kurang stabil, dan cenderung berada di dasar.
Pada  saat  60  jam  setelah  perlakuan  se- lanjutnya mengalami penurunan nilai mortalitas dengan  angka  probit  y=  0,000x+0,057  R=0 yang  menunjukkan  bahwa  penambahan  kon- sentrasi  ekstrak Selginella sudah  tidak  mem- pengaruhi kematian hewan uji dan pada 96 jam didapatkan  angka  probit  sebesar  y=  0,  hal  ini diduga  karena  ekstrak Selaginella sudah  tidak memberi  efek  racun terhadap  hewan  uji  terlalu banyak karena semua zat sudah mulai tercam- pur  dengan  media  air  dan    hewan  uji  sudah mengalami  kekebalan  terhadap  zat  toksik  itu sendiri.  Sesuai  dengan  pendapat  Effendie (1979) bahwa secara klinis hewan yang terkon- taminasi  racun  memperlihatkan  gejala  stress bila dibandingkan dengan kontrol yang ditandai dengan  menurunnya  nafsu  makan,  gerakan kurang  stabil,  dan  cenderung  berada  di  dasar, hal  ini  dilakukan  untuk  memperkecil  proses biokimia  dalam  tubuh  yang  teracuni,  sehingga efek lethal yang terjadi lebih lambat.
Meyer et  al .,  (1982)  menyebutkan  bahwa  eks- trak tanaman dikatakan toksik jika memiliki LC 50 <1. 000 μg/ml.  Pada penelitian ini digunakan 20 g  pasta  sebagai  larutan  stok,  apabila  20  g tersebut  dijadikan  ppm  maka  besaran  ekstrak pasta tanaman yang digunakan adalah 200.000 ppm  (20 5 μg/ml),  hal  ini  menunjukkan  bahwa Selaginella willdenowii tidak cukup toksik untuk mempengaruhi  kelangsungan  hidup  juvenile ikan  mas  walaupun  pada  data  terjadi  pening- katan  mortalitas  ikan  mas  pada  setiap  penam- bahan  konsentrasi  yang  berbeda.  Pada  pene- litian  sebelumnya,  tanaman Selaginella yang sering dikenal dengan sebutan ketra ayam me- miliki kandungan biflavonoid yang lebih banyak dari Selaginella jenis lain berupa ginkgetin, iso- ginkgetin,  amentoflavon,  morelloflavon,  robus- taflavon,  hinokiflavon,  saponin,  dan  ochnafla- von. Senyawa-senyawa ini memiliki struktur da- sar  yang  serupa  yaitu  5,7,4’-trihidroksi  flavo- noid, tetapi berbeda pada sifat dan letak ikatan antar  flavonoid.  Adanya  kandungan  biflavonoid sebesar  2,46  ppm  yang  terdapat  pada Sela- ginella jenis  ini  yang  menyebabkan  toksisitas ekstrak  menjadi  lebih  tinggi  dibandingkan Se- laginella jenis lainnya (Rahman et al. 2007).

## SIMPULAN
Dari hasil pengamatan dan pembahasan dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut:
1.  Ekstrak Selaginella  willdenowii tidak  cukup toksik terhadap ikan mas juvenil.
2.  Pada konsentrasi 50% ekstrak aquades Se- laginella  willdenowii tidak  mampu  memberi efek  racun  terhadap  ikan  mas  juvenil  dan
hal  ini  tidak  menunjukkan  adanya  perbe- daan  yang  nyata  dengan  konsentrasi  yang lebih rendah.

## DAFTAR PUSTAKA
Chikmawati,  T.,  A.  Wijayanto,  dan  Miftahudin.
2009. Potensi  Selaginella  Sebagai  Anti- oksidan . Bogor: FMIPA IPB
Effendie, M. I. 1979. Metode Biologi Perikanan .
Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.
Erlan.  2005.  Pengaruh  berbagai  media  terha- dap  pertumbuhan  bibit  mahkota  dewa ( Phaleria  macrocarpa (Scheff.)  Boerl.)  di polibag. J. Akta Agrosia 7(2):72-75.
Kim, J. and E.J. Park. 2002. Cytotoxic antican- cer  candidates  from  natural  resources. Current Medicine  in Chemical Anti-Cancer Agents 2 : 485-537
Lilis  Suhaerah.  2006. Zoologi  Vertebrata .  Ar- desigen. Bandung.
Madhuri,  G.  and  A.R.  Reddy.  1999.  Plant blotechnology of flavonolds. Plant
Biotechnology 16 (3): 179-199.
Meyer,  B.N et  al .  1982.  Brine  Shrimp  :  A Convenient  General  Bioassay  for  Active Plant  Constituent. Plant  Res  Medica 45  : 31-34.
Rahman,  M.  Riaz  M.  Desai  U.R.  2007.
Synthesis of biologically relevant biflavonoids . Reviev. Chemistri and Biodiversity 4 : 2495-2527.
Setyawan,  A.D.  2011. Natural  products  from Genus  Selaginella  (Selaginellaceae).  Nu- santara Bioscience 3: 44-58.
Silva G.l et al . 1995.Cytotoxic biflavonoids from Selaginella wildenowii .J Phyto 4: 129-134.
Thomson  G.,E.  2007. The  Health  Benefit  of
Traditional Chinese Plant Medicine: Weighing the scientific evidence. Australia: RIRDC Pr.
Yamaguchi,  L.F.,  D.G.  Vassao,  M.J.  Kato,  and P.  Mascio.  2005.  Biflavonoids  from Brazilian  pine  Araucaria  angustifoliaas potentials  protective  agents  against  DNA damage  and  lipoperoxidation. Phyto- chemistry . 66: 2238-2247.