Jurnal Pendidikan Kimia Vol. 8, No. 3, Desember 2016, 164-168 ISSN:2085-3653 http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/jpk Analysis of secondary metabolite compounds from leaves extract kesambi ( Schleichera oleosa ) and antioxidant activity test
Boima Situmeang 1* ; Weny Nuraeni 1 ; Agus Malik Ibrahim 1 dan Saronom Silaban 2
1 Jurusan Analis Kimia, Sekolah Tinggi Analis Kimia Cilegon, Banten 2 Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Negeri Medan, Medan *Korespondensi: boimatumeang@gmail.com
Abstract. Kesambi  (Schleichera  oleosa)  is  one  of  plants  that  have  the  potential  to  treat  various deasease. Kesambi plant or kusum widely spread in Asia such as India, Nepal, Malaysia and Indonesia. In Indonesia, this plant widely available in Java precisely Cilegon and Jember area. This study aimed to analyze the content of secondary metabolites from plants kesambi extract and antioxidant activity test of  hexane,  ethyl  acetate  and  water  fraction.  Analysis  of  secondary  metabolites  is  done  with phytochemical  and  GC-MS  test  methods.  Extraction  was  done  by  using  maceration  and  fractionation methods. Antioxidan tactivity test using DPPH methods. The content of secondary metabolites contained in leaves kesambi (Schleichera oleosa) are flavonoids, alkaloids, tannins, phenols, and steroids. Based on IC 50 values were obtained from three fraction, ethyl acetate fraction had a strong radical inhibition rate  than  the  fraction  of  water  and  n-hexane.  IC 50 fraction  of  ethyl  acetate,  water,  and  n-hexane successively are: 206.0851; 272.2891 and 425,1143 ppm respectively.
Keyword: kesambi, schleichera oleosa, DPPH, antioxidant

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  sekelompok bahan  kimia  baik  berupa  atom  maupun molekul  yang  memiliki  elektron  tidak berpasangan  pada  lapisan  luarnya.  Radikal bebas  juga  dijumpai  pada  lingkungan, beberapa  logam  (misalnya  besi,  tembaga), asap  rokok,  polusi  udara,  obat,  bahan beracun,  makanan  dalam  kemasan,  bahan aditif,  dan  sinar  ultraviolet  dari  matahari maupun  radiasi  (Arif,  2006).  Radikal  bebas yang berlebihan dapat mengakibatkan penyakit terutama kanker. Umumnya manusia pada  keadaan  normal  memiliki  antioksidan dalam  tubuhnya,  tetapi  pemaparan  radikal bebas  yang  berlebihan  tidak  mampu  ditahan oleh  tubuh,  maka  diperlukan  asupan antioksidan dari luar (eksogen) (Rahayu et al. , 2015).
Informasi  mengenai  kandungan  tanaman yang  memiliki  khasiat  bagi  kesehatan  masih belum  banyak  diketahui.  Seperti  tanaman kesambi (Schleichera  oleosa) ,  dari  beberapa penelitian  sebelumnya disebutkan  bahwa tanaman  ini  memiliki  banyak  manfaat. Tanaman ini dipercaya sebagai tanaman obat, kulit  kayu  kesambi  dapat  digunakan  sebagai bahan  penyamak  kulit,  karena  menurut  hasil penelitian,  dalam  kulit  kesambi  ditemukan 6,1-14,3  %  zat  penyamak  (Bachli,  2007). Bahkan  dahulu  masyarakat  Bali  dan  Madura menggunakan kulit kesambi sebagai obat kulit
yang  sangat  manjur,  terutama  terhadap penyakit  kudis  dan  penyakit  kulit  lainnya. Selain  itu,  kayu  kesambi  sangat  kuat  dan keras.  Oleh  karena  itu  dahulu  lebih  banyak digunakan  sebagai  bahan  pembuatan  jangkar untuk  perahu  kecil.  Daun  kesambi berkhasiat sebagai  obat  eksem,  obat  kudis,  obat  koreng dan  obat  radang  telinga.  Buah  dari  tanaman kesambi banyak  mengandung  vitamin  C  yang baik  sebagai  antioksidan  (Suita,  2012). Berdasarkan  penelitian  sebelumnya  terhadap buah  kesambi  ( Schleichera  oleosa )  dari  tiga ekstrak  yakni  ekstrak n -  heksan,  etil  asetat dan air memberikan nilai aktivitas antioksidan  dengan  persentase  berturut  turut 60,91, 43,53 dan 34,94 % (Thatavong, 2015).
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  menguji kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  dan uji  aktivitas  antioksidan  dalam  daun  kesambi dengan  menggunakan  tiga  fraksi  yang  sama pada  penelitian  Thatavong  (2015).  Penelitian ini  juga  diharapkan  dapat  memberikan pengetahuan mengenai antioksidan yang lebih luas,  dapat  menambah  wawasan  dan informasi  yang  baru  mengenai  senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam daun  kesambi.  Daun  kesambi  diekstraksi menggunakan metode maserasi. Ekstrak yang dihasilkan  dilakukan  uji  fitokimia  senyawa metabolit sekunder dan uji aktivitas antioksidan  dengan  metode  DPPH  ( 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl ) dengan
pengukuran absorbansi larutan menggunakan spektrofotometer  UV–Vis  pada  panjang gelombang 515 nm.

## METODE

## Bahan dan alat
Bahan  dalam  penelitian  ini  diantaranya: daun  kesambi  ( Schleichera  oleosa) ,  Metanol 96%, n -Heksan,  etil  asetat,  aquabidest,  HCl pekat,  serbuk  Mg,  NaOH  10%,  FeCl 3 10%, DPPH, Amoniak, pereaksi Dragendorff, H 2 SO 4 2 N, H 2 SO 4 pekat, CH 3 COOH, Kloroform, HCl 2  N,  air  panas.  Alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu, spektrofotometer UV-Vis, oven, alat gelas, penangas, peralatan maserasi, timbangan analitik, evaporator, tabung reaksi, incubator, dan GC-MS.

## Preparasi sampel
Sampel  yang  digunakan  yaitu  daun kesambi  ( Schleichera  oleosa )  sebanyak  4500
g. Sampel dikeringkan dengan cara ditempatkan dalam ruangan pada suhu 19 o C -
30˚C  selama  +  7  hari.  Kemudian  dihaluskan sampai didapatkan simplisia kesambi (Schleichera oleosa ).

## Ekstraksi dan fraksinasi
Serbuk  halus  (simplisia)  yang  telah didapatkan  sebanyak  1327  g  diekstraksi dengan  cara  maserasi  menggunakan  2,5  L metanol  96%  selama  2  x  48  jam  dengan dilakukan  pengadukan,  lalu  disaring  dengan kertas saring (Ajileye et al. , 2015). Filtrat yang dihasilkan  sebanyak  ±  3,5  L  dievaporasi  dan diuapkan  pada  suhu    50ºC  sampai  diperoleh ekstrak  kering  metanol  daun  kesambi (Trisharyanti et  al. ,  2011).  Ekstrak  kering daun  kesambi  yang  dihasilkan  diuji  fitokimia senyawa  metabolit  sekunder,  kemudian dipartisi mengunakan n -heksan : air (1 : 1) dan etil asetat. Fraksi n - Heksan, etil asetat dan air yang dihasilkan diuji aktivitas antioksidannya.
Skrining fitokimia senyawa metabolit sekunder
Uji fitokimia senyawa metabolit sekunder dilakukan pada ekstrak kering daun kesami.
Alkaloid
Sampel  sebanyak  ±  2  mL  dipipet  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi.  Sampel ditambahkan  5  mL  kloroform  dan  amoniak, kemudian  dipisahkan  ke  dalam  tabung  reaksi dan  ditambahkan  pereaksi  Dragendorff.
Endapan kemerahan yang terbentuk menunjukkan  positif  mengandung  alkaloid (Marlinda et al ., 2012).

## Flavonoid
Uji Wilstatter: (1) Ekstrak dipipet ± 1 mL dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi. Ekstrak  ditambahkan  serbuk  magnesium  dan 2-4  tetes  HCl  pekat,  kemudian  campuran dikocok.  Warna  jingga  yang  terbentuk menunjukkan  adanya  flavonoid  golongan flavonol dan flavanon. (2) Ekstrak sebanyak 1 mL  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  lalu ditambahkan  dengan  H 2 SO 4 2N  beberapa tetes, kemudian kocok kuat. Warna mencolok yang  terbentuk  seperti  merah,  kuning,  atau coklat  menunjukkan  adanya  flavonoid.  (3) Ekstrak sebanyak 1 mL dimasukkan ke dalam tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  larutan NaOH  10%  beberapa  tetes.  Perubahan  warna yang  terjadi  menunjukkan  adanya  flavonoid (Rahayu et al. , 2015).
Terpenoid & Steroid
Ekstrak  sebanyak  2  mL  ditambahkan  5 mL  larutan  kloroform:  air  (1  : 1)  dan  dikocok kuat.  Hasil  ekstrak  kloroform  dipisahkan  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi, kemudian  ditambahkan  10  tetes  asam  asetat anhidrat  dan  3  tetes  asam  sulfat  pekat.  Jika mengalami  perubahan  warna  merah  atau coklat menunjukkan adanya terpenoid (triterpenoid),  sedangkan  perubahan  warna menjadi  biru,  ungu  atau  hijau  menunjukkan adanya steroid.
Uji Saponin
Ekstrak sebanyak ± 2 mL dimasukkan ke dalam  tabung  reaksi  dan  diekstraksi  dengan air panas, dikocok kuat, kemudian ditambahkan  HCl  2  N  dan  dikocok  kuat kembali.  Saponin  ditunjukkan  jika  terbentuk buih  yang  tidak  hilang  setelah  didiamkan dalam waktu 10 menit (Agustina et al ., 2014).
Uji Fenolik
Ekstrak  sebanyak  1  mL  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  FeCl 3 5%  sebanyak  2–3  tetes.  Senyawa  fenol ditunjukkan jika terjadi perubahan warna biru kehitaman.

## Uji Tannin
Ekstrak  sebanyak  1  mL  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  1-2
tetes  FeCl 3 1%.  Senyawa  tanin  ditunjukkan jika terjadi perubahan warna hijau kehitaman, ungu, biru, atau hitam yang kuat (Marlinda et al., 2013).

## Uji aktivitas antioksidan
Pembuatan  Larutan  DPPH  ditimbang DPPH  kristal  untuk  dilarutkan  dalam  etanol tepat pada konsentrasi 0,004 % untuk segera digunakan  dan  dijaga  temperature  rendah terlindung  cahaya.  Sebanyak  1,2  ml  sampel ditambah 0,3 ml larutan DPPH 0,5 mM dalam methanol sehingga volume total campuran 1,5 ml  dan  campuran  dikocok  kuat.  Setelah didiamkan  pada  temperature  kamar  selama 30  menit,  sisa  DPPH  ditentukan  secara spektrofotometri pada panjang gelombang 515 nm  (Srinivas  &  Baboo,  2013).  Pengujian  ini juga  dilakukan  pengukuran  terhadap  blanko (larutan DPPH yang tidak mengandung bahan uji).  Aktivitas  penangkap  radikal  DPPH  (%) dihitung dengan rumus berikut.
Dimana A sp adalah serapan larutan sampel dan Abl adalah serapan larutan blangko
Data  aktivitas  antioksidan  penangkap radikal  DPPH  (%)  dianalisis  dan  masing- masing  dihitung  nilai  IC 50 melalui  analisis probit.  IC 50 adalah  konsentrasi  yang  mampu menghambat 50% DPPH. Pengujian dilakukan dengan dua kali replikasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Daun kesambi segar yang didapatkan dari desa Batukuda kecamatan Mancak, kabupaten Serang  Banten,  yaitu  sebanyak  4500  g.  Daun tersebut dikeringkan pada suhu kamar selama 1 minggu. Proses pengeringan dilakukan pada suhu  kamar,  terawasi  dan  tidak  terpapar matahari  langsung.  Hal  ini  bertujuan  untuk mencegah  perubahan  kimia,  menghentikan reaksi  enzimatik  (penguraian  bahan  kimia) dan mengurangi kandungan air dari simplisia agar  tidak  mudah  ditumbuhi  jamur.  Setelah betul-betul  kering  simplisia  dapat  disimpan dalam jangka waktu lama sebelum digunakan untuk analisis (Harborne, 2006). Serbuk daun kesambi yang diperoleh dari proses pengeringan  sebanyak  1327  g  kemudian dimaserasi  selama  2  x  48  jam  menggunakan pelarut  metanol  96%.  Penggunaan  pelarut
metanol  dalam  maserasi  terutama  ekstraksi bahan  alam,  karena  metanol  merupakan pelarut  universal.  Metanol  memiliki  gugus polar  (-OH)  dan  gugus  nonpolar  (-CH 3 )  yang dapat  menarik  analit-  analit  yang  bersifat polar dan nonpolar (Astarina et al. , 2013).
Ekstrak  kasar  yang  diperoleh  dari  proses maserasi sebanyak 3,5 L kemudian dievaporasi  pada  suhu  50˚C.  Hasil  dari evaporasi  ini  akan  menghasilkan  ekstrak kering dalam bentuk seperti gel (kental) yang nantinya akan diuji kembali untuk menentukan  kandungan  senyawa  metabolit sekunder dan uji aktivitas antioksidan dengan 3 fraksi. Proses evaporasi yang telah dilakukan menghasilkan  ekstrak  kering  daun  kesambi sebanyak 560 g (Tabel 1).
Tabel 1. Data rendemen daun kesambi ( Schleichera oleosa ) No Bahan Bobot (gram) Rendemen (%) 1. Daun Kesambi Segar 4500 - 2. Simplisia 1327 29,49 3. Ekstrak 560 42,20 Skrining fitokimia metabolit sekunder Ekstrak kering daun kesambi diidentifikasi menggunakan pereaksi- pereaksi  yang  dapat  nenunjukkan  adanya senyawa metabolit sekunder. Berikut hasil uji fitokimia senyawa metabolit sekunder eskstrak daun kesambi (Tabel 2).

## Uji aktivitas antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan dengan  ekstraksi  pada  ekstrak  kering  daun kesambi menggunakan pelarut dengan tingkat kepolaran  berbeda.  Pelarut  yang  digunakan yaitu n- heksan,  etil  asetat,  dan  air.  Ekstraksi bertingkat ini dilakukan agar komponen yang bersifat  nonpolar  dapat  tersari  dalam  pelarut n- heksan, komponen yang bersifat semi polar dapat  tersari  dalam  pelarut  etil  asetat,  dan komponen  yang  bersifat  polar  dapat  tersari dalam  pelarut  air.  Hasil  pengujian  sampel ekstrak  daun  kesambi  dari  ketiga  fraksi diperoleh data pada Tabel 3.
Terhadap  fraksi  etil  asetat  dan  air dilakukan  perlakuan  uji  antioksidan  yang sama.  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  dari masing-masing  ekstrak  menunjukkan  bahwa nilai  aktivitas  antioksidan  dari  fraksi  ekstrak etil  asetat  memiliki  nilai  penghambatan radikal yang kuat dibandingkan dengan fraksi
lainnya. Hal ini ditunjukkan dengan nilai IC 50 yang  didapatkan  dari  masing-  masing  fraksi. Nilai IC 50 yang dihasilkan dari fraksi etil asetat yaitu  206,0851  ppm,  fraksi n -heksan  yaitu 425,1143  ppm,  dan  fraksi  air  yaitu  272,2891 ppm.  Nilai  IC 50 tersebut  didapatkan  dari
persamaan regresi linier, dengan memasukkan  nilai  y  =  50,  maka  akan diketahui konsentrasi penghambatan oksidasi sebesar  50%.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 yang diperoleh, maka akan semakin tinggi aktivitas antioksidannya.
Tabel 2. Hasil uji fitokimia ekstrak daun kesambi Jenis uji Pereaksi Pengamatan Warna Hasil Alkaloid Kloroform, amoniak, dragendorff Terbentuk endapan orange. orange-merah Positif Flavonoid Serbuk Mg, HCl pekat Terjadi perubahan menjadi orange orange positif
H 2 SO 4 2N Terjadi perubahan menjadi coklat tua coklat positif NaOH 10 % Terjadi perubahan menjadi hijau lumut hijau positif Terpenoid Kloroform:air (1:1), asam asetat anhidrat, H 2 SO 4 pekat. Terjadi perubahan menjadi hijau tua hijau negatif Steroid Kloroform:air (1:1), asam asetat anhidrat, H 2 SO 4 pekat. Terjadi perubahan menjadi hijau tua hijau positif Saponin Air panas, HCl 2N Buih hilang dalam waktu 10 menit kuning orange negatif Fenolik FeCl 3 5% Terjadi perubahan menjadi biru kehitaman biru -hitam positif Tannin FeCl 3 1% Terjadi perubahan menjadi hijau kehitaman hijau-hitam positif Tabel 3. Data hasil uji aktivitas antioksidan fraksi n -heksan Ulangan ke- Konsentrasi (ppm) % Inhibisi Absorbansi Persamaan linier IC 50 (ppm) 1 0 0,0000 1,0590 y = 0,1033x + 2,9273 R 2 = 0,9403 455,6893 200 19,5467 0,8520 400 51,1804 0,5170 600 74,8820 0,2660 800 75,6374 0,2580 2 0 0,0000 1,2690 y = 0,1044x + 8,8101 R 2 = 0,9255 394,5393 200 32,4665 0,8570 400 60,5989 0,5000 600 78,3294 0,2750 800 81,4815 0,2350 Rata -rata 425.1143

## (a)                                               (b)
Gambar 1. Kurva persamaan regresi penetapan IC 50 fraksi n- heksan. (a) pengulangan 1, (b) pengulangan 2.

## KESIMPULAN
Nilai  indeks  aktivitas  antioksidan  dari fraksi n -heksan,  etil  asetat  dan  air  berturut- turut  yaitu:  0,4638;  0,9567;  0,7241,  hasil perhitungan  indeks  aktivitas  antioksidan dapat dilihat juga pada lampiran 11. Fraksi etil asetat  dan  fraksi  air  memiliki  indeks antioksidan yang sedang, sedangkan fraksi n- heksan  memiliki  indeks  aktivitas  antioksidan yang lemah.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina,  W.E.S.,  Retno,  S.D.A.,  Ashadi, Mulyani, B., & Puti, C.R. 2014. Skrining Fitokimia  dan  Identifikasi  Komponen Utama  Ekstrak  Metanol  Kulit  Durian ( Durio zlbethinus Murr) Varietas
Petruk. Prosiding  Seminar  Nasional Kimia  dan  Pendidikian  Kimia  IV , Surakarta, 2014:271-280.
Ajileye, O.O., Obuotor, E.M., Akinkunmi, E.O., &  Aderogba,  M.A.  2015.  Isolation  and characterization  of  antioxidant  and antimicrobial compounds from Anacardium occidentale L . (Anacardiaceae)  leaf  extract. King  Saud University , 27:244-252. Arif,  S.  2006.  Radikal  Bebas. UNAIR Surabaya , 2015, 1-9. Astarina,  N.W.G.,  Astuti,  K.W.,  &  Warditiani,
N.K.  2013.  Skrining  Fitokimia  Ekstrak Metanol  Rimpang  Bangle  ( Zingiber purpureum Roxb .). Universitas Udayana, 2013, 1-7.
Bachli,  Y.  2007.  Tanaman  Kesambi  dan Beternak  Kutu  Untuk  Kesejahteraan.
Buletin BPTP, Volume ke- 1(3).
Harborne,  J.B.  2006. Metode  Fitokimia Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan . Bandung: ITB Bandung.
Marlinda,  M.,  Sangi,  M.S.,  &  Wuntu,  A.D.
2012.  Analisis  Senyawa  Metabolit Sekunder  dan  Uji  Toksisitas  Ekstrak Etanol  Biji  Buah  Alpukat  ( Persea americana Mill.). Jurnal  Mipa  Unsrat Online , 1( 1 ):24-28. Rahayu,  S., Kurniasih, N.,  & Amalia,  V.  2015. Ekstraksi  dan  Identifikasi  Senyawa Flavonoid  Dari  Limbah  Kulit  Bawang Merah  Sebagai  Antioksidan  Alami. UIN Sunan Gunung Djati, 2( 1 ):1-8. Srinivas,  K.,  &  Baboo,  C.R.V.  2013. Antioxidant Activity of Ethanolic Extract of  Stem  Bark  of Schleichera  oleosa (Lour.Oken) . Inter.J. of Pharmacotherapy , 3( 1 ):12-14. Suita,  E.  2012. Seri  Teknologi  Pembenihan Tanaman  Hutan  Kesambi ( Schleicera oleosa MERR.).  Bogor:  Balai  Penelitian Teknologi Perbenihan Tanaman Hutan.
Thatavong,  X.  2015. Chemical  Constituents and  Biological  Activities  From  Crude Hexane  Extract  of  Schleichera  Oleosa Fruits . Chonburi: Burapha University. Trisharyanti,  I.,  Melannisa,  R.,  &  Ratri,  K. 2011. Korelasi Kandungan dan Aktivitas Antioksidan Daun Jambu Mete.
Biomedika , 3( 2 ):25-29.