## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara  dengan keanekaragaman hayati yang melimpah (Yulian & Safrijal, 2019).  Kondisi  alam  dan  cuaca  yang  mendukung sehingga banyak keanekaragaman hayati. Sekitar 30.000 jenis tanaman obat yang ada di Indonesia hanya  1.200 jenis  tanaman  saja  yang  dapat  dimanfaatkan  menjadi tanaman obat (Fajar et al., 2018). Tanaman obat adalah jenis-jenis tanaman yang berfungsi dan berkhasiat untuk
obat  dan  digunakan  untuk  penyembuhan  atau  untuk mencegah  berbagai  penyakit.  Tanaman  obat  bisa bersumber dari turun temurun atau nenek moyang yang memberikan  informasi  mengenai  berbagai  macam tanaman  yang  dapat  berkhasiat  sebagai  obat  (Sarno, 2019).
Berkaitan  dengan  penyakit  yang  terjadi  dimasyarakat dari semua penyakit yang ada salah satu yang berperan penting  adalah  antioksidan  yang  berfungsi  sebagai
Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi n-Heksan Daun Benalu ( Dendrophthoe petandra (L.) Miq ) dengan Metode FRAP ( Ferric Reducing Antioxidant Power ) serta Penetapan Kadar Flavonoid Total
Antioxidant Activity of Extract and n-Hexane Fraction of Benalu Leaves (Dendrophthoe petandra (L.) Miq) Using The FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power) Method and Determination of Total Flavonoid Level
Retno Ermadiningtyas 1
Kunti Nastiti 1*
Muhammad Zulfadhilah 1
*1 Pharmacy Department, Health Faculty, Sari Mulia University, Banjarmasin City, South Borneo 70238, Indonesia
2 Information Technology Department, Science Faculty, Sari Mulia University, Banjarmasin City, South Borneo 70238, Indonesia
*email: kuntinastiti86@gmail.com

## Abstrak
Daun Benalu ( Dendrophthoe petandra (l..) Miq ) merupakan salah satu tanaman yang digunakan  masyarakat  Daerah  Mentewe,  Tanah  Bumbu,  Kalimantan  Selatan  untuk mengobati amandel (tonsilitis). Daun benalu diperoleh dari tanaman yang tumbuh di jeruk  nipis.  Tanaman  ini  mengandung  senyawa  flavonoid  yang  mempunyai  banyak aktivitas  farmakologi  salah  satunya  sebagai  antioksidan.  Tujuan  penelitian  ini untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  ekstrak  dan  fraksi  n-Heksan  pada  daun  benalu ( Dendrophthoe  petandra  (L.)  Miq )  dengan  metode  FRAP  ( Ferric  Reducing  Antioxidant Power )  serta  penetapan  kadar  flavonoid  total.  Metode  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah metode eksperimental dengan metode ekstraksi maserasi dengan menggunakan  etanol  96%.  Hasil  ekstrak  dilakukan  pengujian  antioksidan  dengan metode  FRAP  dan  penetapan  kadar  flavonoid  total.  Aktivitas  antioksidan  dan penetapan  kadar  flavonoid  diukur  mrnggunakan  spektrofotometri  Uv-Vis.  Hasil penelitian menunjukkan aktivitas ekstrak dan fraksi n-Heksan daun benalu berturut- turut memiliki nilai sebesar 72,57 dan 70,09 mgAAE/g. Kadar flavonoid total berturut- turut  sebesar  12,443  dan  3,43  mg  QE ( Quersetin  Equivalen ) .  Ekstrak  memiliki  aktivitas antioksidan  dan  kadar  flavonoid  yang  tinggi  daripada  fraksi  n-Heksan  pada  daun benalu ( Dendrophthoe petandra (L.) Miq ).

## Kata Kunci:
Antioksidan Dendrophthoe petandra (L.) Miq FRAP Flavonoid Total
Keywords :
Antioxidant Dendrophthoe petandra (L.) Miq
FRAP
Flavonoid Level

## Abstract
Benalu leaves (Dendrophthoe petandra (L.) Miq is one of the plants people of Mentewe, Tanah Bumbu, South Kalimantan to treat tonsils (tonsilitis). Benalu leaves are obtained from plants  that  grow  on  lime.  This  plant  contains  flavonoid  compounds  which  have  many pharmacological activities, one of which is an antioxidant. Antioxidant and flavonoid level are determined by the Spectrofotometri Uv-Vis. The results showed the benalu leaves extract and n-hexan fraction had a values of 72,57 and  70,09 mgAAE/g. Flavonoid level in the extract  12,443 mg  QE ( Quersetin  Equivalen ) and  the  n-Hexane  fraction  3,43 mg  QE ( Quersetin Equivalen ) . Extract had higher antioxidant activity and total flavonoid level than n-Hexane fraction in the benalu leaves  ( Dendrophthoe petandra (L.) Miq ).
© 2024 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v10i2.5606
penangkal  radikal  bebas.  Radikal  inilah  yang  yang menyebabkan  terjadinya  peroksidasi  lemak  pada membrane sel sehingga sel mengalami kerusakan.
Antioksidan  bagi  tubuh  sangat  penting  agar  terhindar dari  serangan  radikal  bebas,  antioksidan  sebagai inhibitor  yang  kerjanya  menghambat  oksidasi  dengan cara berekasi dengan radikal bebas reaktif membentuk radikal  bebas  tidak  reaktif  yang  relatif  stabil  sehingga dapat melindungi sel dari efek berbahaya radikal bebas (Qonitah, 2020) ;(Nastiti et al., 2021).
Pengujian  antioksidan  selain  menggunakan  metode DPPH  bisa  juga  menggunakan  metode  FRAP.  Dimana metode FRAP memiliki rinsip kerja yang didasari  pada adanya reduksi zat tidak berwarna kompleks Fe 3+ + e - menjadi  Fe 2+ berwarna  biru  pekat  karena  mengalami interaksi dengan antioksidan potensial
Senyawa  yang  berpotensi  sebagai  sumber  antioksidan tinggi  adalah  flavonoid  dan  mempunyai  efek farmakologis yang banyak, salah satunya adalah sebagai analgetik, antibakteri, antiinflamasi, dan antikanker.
Flavonoid  total  merupakan  uji  kuantitatif  untuk menentukan  jumlah  kadar  flavonoid  total  yang terkandung  dalam  suatu  ekstrak  dilakukan  dengan mengukur nilai absorbansinya menggunakan spektrofotometri UV-Vis. Kadar flavonoid total dalam tanaman berbeda-beda diantara setiap bagian, jaringan, dan umur tanaman juga dipengaruhi oleh faktor-faktor lingkungan (Satria et al., 2022).
Berdasarkan  hal  diatas,  penelitian  ini  ingin  melihat aktivitas  antioksidan  dari  esktrak  dan  fraksi  n-Heksan daun  benalu  ( Dendrophthoe  petandra  (L.)  Miq. )  dengan metode FRAP.

## METODOLOGI

## Alat dan bahan
Alat  yang  digunakan  yaitu Rotary  evaporator , spektrofotometri  Uv-Vis,  labu  ukur,  pipet  ukur,  pipet
volume,  sentrifuge,  tabung  sentrifuge,  kuvet  kaca, corong pisah, tiang klem corong pisah, kertas pH.
Bahan yang digunakan yaitu daun benalu ( Dendrophthoe petandra (L.) Miq ), etanol 96%, n-Heksan, aquades, asam askorbat, NaOH, KH 2 PO 4 , kalium ferrisianida 1%, FeCl 3 0,1%,  TCA,  kuersetin,  AlCl 3 10%,  asam  asetat,  asam oksalat 1%.

## Metode Pelaksanaan
Pengolahan Sampel
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  benalu  ( Dendrophthoe petandra  (L.)  Miq )  menggunakan  metode  maserasi sehingga  diperoleh  ekstrak  kental  (Charmelya et  al ., 2023).  Kemudian  dilakukan  pengujian  aktivitas antioksidan dan kadar flavonoid total.
Tahapan pembuatan fraksi daun Benalu
a. 20  gram  ekstrak  daun  benalu  dilarutkan  dengan 150 ml aquadest masukkan kedalam corong pisah.
b. Tambahkan  150  ml  n-Heksan  (1:1)  lalu  gojok homogen dan diamkan hingga 2 fase.
c. Ambl fraksi n-Heksan.
d. Fraksi  yang  diperoleh  di  pekatkan  menggunakan rotary evaporator .
Ekstrak dan fraksi yang didapatkan dilakukan pengujian antioksidan  menggunakan  metode  FRAP  ( Ferric Reducing Antioxidant Power ).
a. Pembuatan kurva baku vitamin C dengan diambil masing-masing  1  ml  larutan  vitamin  C  pada konsentrasi  60,  70,  80,  90  dan  100  ppm ditambahkan 1 ml dapar fosfat 0,2 M ( pH 6,6 ) dan 1  ml  K 3 Fe(CN) 6 1%,  lalu  diinkubasi  selama  20 menit  pada  suhu  50 ℃ .  Setelah  diinkubasi ditambahkan 1 ml TCA dan disentrifuge 3000 rpm selama 10 menit. Setelah disentrifuge ditambahkan 1  ml  aquades  dan  0,5  ml  FeCl 3 0,1%.  Larutan didiamkan selama waktu Operating time .
b. Pengukuran  antioksidan  sampel  ditimbang  10  mg ekstrak dan fraksi n-Heksan dan dilarutkan dalam
etanol 96%, kemudian diambil 1 ml K3Fe(CN)6 1% lalu  diinkubasi  selama  20  menit  pada  suhu  50 ℃ .
Setelah  diinkubasi  ditambahkan  1  ml  TCA  dan disentrifuge  3000  rpm  selama  10  menit.  Setelah disentrifuge ditambahkan 1 ml aquades dan 0,5 ml FeCl 3 0,1%.  Larutan  didiamkan  selama  waktu Operating  time dan  diukur  absorbansinya  pada
Panjang gelombang yang didapat. Blanko digunakan larutan oksalat (Raharjo & Haryoto, 2019).
Ekstrak  dan  fraksi  n-Heksan  kemudian  dilakukan pengujian penetapan kadar flavonoid total.
a. Pembuatan larutan baku induk kuersetin 1000 ppm 25 mg kuersetin dilarutkan dengan etanol 96% dalam labu ukur 25 ml ad 25 ml hingga tanda batas.
b. Pembuatan larutan baku standar 100 ppm dipipet 2,5 ml  dan  dimasukkan  kedalam  labu  ukur  25  ml,  lalu diencerkan  menggunakan  etanol  96%  hingga  tanda batas.
c. Penentuan Panjang gelombang maksimum kuersetin ambil 1 ml baku standar, tambahkan 1 ml AlCl 3 10% dan  8  ml  asam  asetat  5%.  Tentukan  Panjang gelombang maksimum pada 370-450 nm.
d. Penetapan Operating time
Ambil 1 ml baku standar, tambahkan 1 ml AlC l3 10% dan 8 ml asam asetat 5%. Absorbansi dengan Panjang gelombang  yang  telah  diperoleh.  Dengan  interval waktu  2  menit  sampai  diperoleh  absorbansi  yang stabil.
e. Pembuatan kurva standar kuersetin Ambil baku standar ddan buat seri konsentrasi yaitu 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm dan 12 ppm.
Masing-masing  diambil  1  ml, tambahkan  AlCl 3 10% dan 8 ml asam asetat 5% diamkan selama operating time dan ukur absorbansinya.
f. Penentuan kadar flavonoid total ekstrak dan fraksi n-Heksan  dipipet  masing-masing  1  ml  ekstrak  dan fraksi  tambahkan  1  ml  AlCl3  10%  dan  8  ml  asam asetat 5% didiamkan selama operating time . Lakukan pengukuran  dengan  spektrofotometri  Uv-Vis
dengan  Panjang  gelombang  yang  diperoleh (Asmorowati & Lindawati, 2019 ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  proses  maserasi  menggunakan  simplisia  kering sebanyak 1.849,01 gram. Kemudian diekstraksi dengan pelarut  etanol  96%  setiap  3x24  jam  menghasilkan ekstrak kental sebanyak 67,04 gram. Rendemen ekstrak yang didapatkan sebesar 3,6257%. Pemilihan etanol 96% dikarenakan mampu menyari Sebagian besar kandungan kimia tanaman.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Berdasarkan hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun benalu, didapatkan hasil sebagai berikut:
Tabel I. Hasil Pengukuran Absorbansi Sampel
Ekstrak Daun Benalu Jeruk Nipis Absorbansi (289 nm) Aktivitas Antioksidan (mgAAE/g) Replikasi 1 0,048 62,72 Replikasi 2 0,050 64,54 Replikasi 3 0,050 64,54 Replikasi 4 0,064 77,27 Replikasi 5 0,069 81,81 Replikasi 6 0,072 84,54 Rata – Rata 72,57
Hasil  uji  aktivitas  fraksi  n-Heksan  daun  benalu, didapatkan hasil sebagai berikut:
Tabel II. Hasil Pengukuran Absorbansi Sampel
Ekstrak Daun Benalu Jeruk Nipis Absorbansi (289 nm) Aktivitas Antioksidan (mgAAE/g) Replikasi 1 0,049 63,63 Replikasi 2 0,049 63,63 Replikasi 3 0,054 68,18 Replikasi 4 0,055 69,09 Replikasi 5 0,062 75,45
Replikasi 6 0,069 81,81 Rata- Rata 70,29
Adapun didasari pada adanya reduksi zat tidak berwarna kompleks Fe 3+ + e - menjadi Fe 2+ berwarna biru pekat karena  mengalami  interaksi  dengan  antioksidan potensial. Adapun perubahan warna ini akan dilihat dari membentuknya kompleks senyawa berwarna biru pada larutan. Semakin tinggi absorbansi yang didapatkan maka semakin  tinggi  kemampuan  mereduksi  (Gulcin,  2020). Hasil akhir dari metode FRAP yaitu dinyatakan sebagai AAE ( Ascorbic Acid Equivalent ) dengan memasukkan nilai absorbansi  sampel  pada  persamaan  regresi vitamin C yang  dinyatakan  dengan AAE/g ekstrak (Julizan, 2019).
Pada  penentuan  nilai  aktivitas  antioksidan  pada penelitian ini didapatkan nilai vitamin C sebesar  45,47 mgAAE/g  masuk  kedalam  kategori  sangat  kuat. Berdasarkan penelitian (Purwanto et al., 2017) nilai <50 merupakan  kategori  sangat  kuat  nilai  50-100  kategori kuat serta 100 – 150 kategori lemah.
Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  dan  fraksi  n-Heksan daun benalu dengan metode FRAP diperoleh persamaan regresi  linear  yaitu  y  =  0,0011x  –  0,021  dengan  nilai koefisen (r) = 0,9742. Nilai hasil FRAP diperoleh dengan cara  memasukkan  hasil  rata-rata  absorbansi  sampel ekstrak  kedalam  persamaan  regresi  linear  didapatkan 72,57 mg AAE/g dan hasil rata-rata absorbansi fraksi n- Heksan  yaitu  sebesar  70,09  mg  AAE/g  termasuk kedalam  antioksidan  yang  kuat.  Nilai  antioksidan termasuk pada kategori antioksidan tinggi berdasarkan penelitian (Hartati, 2016) menunjukkan bahwa ekstrak etanol  beras  hitam  sebesar  59,521  mg  AAE/g  yang berarti memiliki antioksidan tinggi. Pada penelitian  (G. Borges et al ., 2010) di keluarga berry dimana yang besar daya antioksidan menggunakan metode FRAP pada black currants sebesar  51,6 𝜇 mol  Fe 2+/ g  dengan  pereaksi TPTZ,  sedangkan  pada  penelitian  ini  didapatkan antioksidan  dengan  uji  FRAP  sebesar  72,57  mgAAE/g dengan pereaksi menggunakan TCA.

## Penetapan Kadar Flavonoid Total
Berdasarkan hasil uji kadar flavonoid total ekstrak dan fraksi  n-Heksan  daun  benalu,  didapatkan  hasil  sebagai berikut :
Tabel III. Penentuan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Berat Ekstrak (gram) Absorbansi rata-rata ( ƛ) Kadar Ekivalen (ppm) Kadar Flavonoid Total (mg QE/g) 0,1 g 0,437 12,443 12,443
Tabel IV. Penentuan  Kadar  Flavonoid  Total  Fraksi n- Heksan Berat fraksi (gram) Absorbansi rata-rata ( ƛ) Kadar Ekivalen (ppm) Kadar Flavonoid Total (mg QE/g) 0,025 g 0,236 3,43 3,43
Penentuan  kurva  standar  kuersetin  dilakukan  dengan cara  mengukur  absorbansi  dari  larutan  baku  standar kuersetin  dengan  berbagai  konsentrasi  yaitu  6  ppm,  8 ppm, 10 ppm, dan 12 ppm yang kemudian di diamkan selama 50 menit dan diukur dengan panjang gelombang 413 nm didapat yaitu semakin tinggi konsentrasi maka semakin  tinggi  pula  nilai  absorbansi  yang  didapatkan (Asmorowati  &  Lindawati,  2019).  Sedangkan  pada persamaan regresi linear kurva standar kuersetin yang diperoleh  adalah  y=0,0223x  +  0,1595  dengan  nilai koefisien  korelasi  (r)  sebesar  0,9611.  Nilai  (r)  yang diperoleh  mendekati  angka  1  menunjukkan  bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier, sehingga dapat dikatakan  bahwa  absorbansi  dan  konsentrasi  memiliki korelasi  yang  sangat  kuat  (Asmorowati  &  Lindawati, 2019).
Berdasarkan  data  pada  penelitian  sampel  diperoleh kadar flavonoid total ekstrak dan fraksi n-Heksan daun Benalu  Jeruk  Nipis  (Dendrophthoe  petandra  (L.)Miq.) berturut-turut  yaitu  sebesar  12,443  mg  QE (Quersetin Equialen)/ g  dan  3,43  mg  QE (Quersetin  Equialen)/ g.  Dari  hasil penentuan  kadar  flavonoid  total  ekstrak  daun  Benalu Jeruk  Nipis  (Dendrophthoe  petandra  (L.)Miq)  yang didapat  kurang  lebih  kecil  dibandingkan  dengan
penelitian  (Satria,  2021)  yang  menghasilkan  kadar flavonoid total ekstrak daun Benalu Teh (Dendrophthoe petandra (L.)Miq) sebesar 13,7021 mg QE (Quersetin  Equialen)/ g.  Flavonoid  total  fraksi  n-Heksan didapatkan kecil  karena  melalui  proses  pemisahan sehingga  senyawa  golongan  tertentu  saja  yang  dapat larut  dalam  pelarut  n-Heksan.  Daun  Benalu  Teh (Dendrophthoe petandra (L.)Miq) merupakan salah satu tanaman  yang  memiliki  aktivitas  sama  seperti  daun Benalu  Jeruk  Nipis  (Dendrophthoe  petandra  (L.)Miq) yaitu  sebagai  antioksidan.  Benalu  teh  memiliki antioksidan yang tinggi sehingga memiliki manfaat yang baik untuk aktivitas antikanker dan antiradang. Dimana artinya  Daun  Benalu  Jeruk  Nipis  juga  memiliki antioksidan  yang  sama  seperti  Daun  Benalu  Teh  dan memiliki aktivitas yang sama.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh, disimpulkan bahwa aktivitas antioksidan ekstrak daun benalu dengan kategori  antioskidan  kuat  dan  pada  fraksi  n-Heksan kategori  antioksidan  lemah,  pada  uji  kadar  flavonoid total didapatkan nilai pada ekstrak lebih besar daripada fraksi n-Heksan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terimkasih  kepada  semua  pihak yang baik secara langsung maupun tidak langsung telah terlibat dalam penelitian ini. Serta terimakasih sebesar- besarnya  kepada  Ibu  Kunti  Nastiti  dan  Bapak Muhammad  Zulfadhilah  yang  telah  membimbing penelitian ini hingga selesai.

## REFERENSI
Asmorowati, H., & Lindawati, Y. 2019. Penetapan Kadar Flavonoid  Total  Alpukat  (Persea  americana Mill.) dengan Metode Spektrofotometri UV- Vis. Jurnal  Ilmiah  Farmasi , 15 (2),  51–63.
https://doi.org/https://doi.org/10.20885/jif.vo l15.iss2.art1
Charmelya,  E.  N.,  Nastiti,  K.,  &  Budi,  S.  2023. Antibakteri  Fraksi  n-Hexan  Ekstrak  Daun Benalu (Dendrophthoe pentandra (L.) MIQ.) Terhadap  Bakteri  Streptococcus  pyogenes dan  Escherichia  coli. Sains  Medisina , 1 (6), 339–345.
Fajar,  R.  I.,  Wrasiati,  L.  P.,  &  Suhendra,  L.  2018. Kandungan Senyawa Flavonoid Dan Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Teh  Hijau  Pada Perlakuan Suhu Awal Dan Lama Penyeduhan.
Jurnal  Rekayasa  Dan  Manajemen  Agroindustri ,
6 (3), 196. https://doi.org/10.24843/jrma.2018.v06.i03.p

## 02
Nastiti, K., Noval, & Kurniawati, D. 2021. Uji Aktivitas Antioksidan  Kombinasi  Infusa  Daun  Sirih  ( Piper  Betle  L  )  ,  Ekstrak  Etanolik  Tanaman Bundung ( Actinuscirpus Grossus ) dan Kulit Jeruk Nipis ( Citrus Aurantifolia ). Jurnal Surya Medika , 7 (1). https://doi.org/https://doi.org/10.33084/jsm.v 7i1.2647 Qonitah,  F.  2020.  Aktivitas  Antioksidan  Krim  “X” Dengan  Metode  DPPH  ((1,1-Diphenyl-2- Picryl-Hidrazyl). Pharmed: Journal of Pharmaceutical  Science  and  Medical  Research , 3 (2), 68. https://doi.org/10.25273/pharmed.v3i2.760
Raharjo, D., & Haryoto. 2019. Antioxidant Activity of Mangrove  Sonneratia  caseolaris  L  using  the FRAP Method. International Summit on Science Technology and Humanity , 623–629.
Sarno. 2019. Pemanfaatan Tanaman Obat (Biofarmaka)
Sebagai  Produk  Unggulan  Masyarakat  Desa Depok  Banjarnegara. Jurnal  Pengabdian Masyarakat Unwahas , 4 (2), 73–78. https://doi.org/http://dx.doi.org/10.31942/ab d.v4i2.3007
Satria,  R.,  Hakim,  A.  R.,  &  Darsono,  P.  V.  2022. Penetapan Kadar Flavonoid Total Dari Fraksi n-Heksana Ekstrak Daun Gelinggang dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis. Journal of Engineering,  Technology,  and  Applied  Science , 4 (1), 33–46. https://doi.org/10.36079/lamintang.jetas- 0401.353 Yulian,  M.,  &  Safrijal,  S.  2019.  Uji  Antioksidan  Daun Benalu  Kopi  (Loranthus  Ferrugineus  Roxb.) dengan  Metode  DPPH  (1,1  –  Difenil  -2- Pikrilhidrazil). Lantanida  Journal , 6 (2). https://doi.org/10.22373/lj.v6i2.4127