## ANALISIS HASIL ISOLASI BAKTERI LOKAL TERHADAP KEMAMPUANNYA MENDEGRADASI BERBAGAI JENIS MINYAK BUMI

## ANALYSIS OF ISOLATION LOCAL BACTERIA THAT ABILITY TO DEGRADING VARIOUS TYPES OF OIL
Himawan Ganjar P 1 dan Edwan Kardena 2
Program Studi Teknik Lingkungan Fakultas Teknik Sipil dan Lingkungan, Institut Teknologi Bandung Jl. Ganesha No. 10 Bandung 40132
1 himawan.g@students.itb.ac.id dan 2 kardena@pusat.itb.ac.id
Abstrak:  Salah  satu  yang  kasus  yang  sering  terjadi  di  Indonesia  yang  berkaitan  dengan  minyak  bumi  adalah terjadinya kontaminasi minyak ke tanah. Salah satu cara penanganannya adalah dengan pengolahan secara biologi dengan menggunakan bakteri. Sebelum dilakukan pengolahan, bakteri harus diuji terlebih dahulu untuk mengetahui kemampuannya dalam mendegradasi minyak. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memperoleh isolat terbaik yang mampu mendegradasi beberapa jenis minyak bumi.  Penelitian ini menggunakan bakteri lokal yang terdapat pada tanah yang diindikasikan tercemar oleh oli. Penelitian diawali dengan mengisolasi bakteri yang berasal dari tanah tercemar oli ke media agar kaya nutrisi. Bakteri yang tumbuh dipilih beberapa untuk kemudian dimurnikan dan diuji pada media cair SBS (Standar Basal Salt) dengan tambahan berbagai jenis minyak yang akan diuji. Minyak yang akan diujikan berupa minyak tanah, solar, dan oli. Masing-masing minyak yang diujikan akan divariasikan dengan komposisi 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, dan 0,6%. Uji degradasi minyak dilakukan selama 7 hari dengan rentang waktu 1 hari sekali. Hasilnya pertumbuhan diperoleh dua isolat yang memiliki kemampuan mendegradasi minyak yaitu  isolat  A-1  (Bacillus  simplex)  dan  A-2  (Bacillus  firmus).  Uji  pendegradasian  bakteri  terhadap  minyak  tanah, solar,  dan  oli  dilakukan  untuk  mengetahui  kinetika pertumbuhan  bakteri.  Hasil  dari  kinetika  menunjukkan  bahwa Bacillus  simplex  memiliki  Ks  =  4,26  g/L  dan  µ maks =  0,090/hari  pada  minyak  tanah,  Ks  =  3,68  g/L  dan  µ maks = 1,240/hari pada solar, dan Ks = 2,06 g/L dan µ maks = 0,240/hari pada oli. Untuk Bacillus firmus Ks = 0,69 g/L dan µ maks = 0,056/hari pada minyak tanah, Ks = 8,00 g/L dan µ maks = 1,127/hari pada solar, dan Ks = 13,36 g/L dan µ maks = 0,543/hari pada oli. Dari hasil tersebut diketahui bahwa Bacillus simplex paling baik untuk mendegradasi minyak terutama pada jenis solar.

## Kata kunci: bakteri lokal, degradasi, isolat bakteri, minyak , Standard Basal Salt
Abstract : One of the cases that often occur in Indonesia which associated with petroleum is oil contaminated to soil. One of the methode to handling this is with biology process using the bacteria. Before do the process, bacteria must have tested before to know that ability for petroleum degradation. The purpose of this research is to get the best isolate for  degrading  some  kind  of  petroleum.  This  reasearch  is  used  local  bacteria  that  obtained  from  soil  indicated contaminated with oil. The research begin with isolation bacteria from contaminated soil with oil to rich nutrition agar.  Bacteria  were  grown  selected  some  for  later  purified  and  tested  in  liquid  SBS  medium  with  the  addition  of various types of oil to be tested. The oil will be tested in the form of kerosene, diesel, and oil. Each oil is tested to be varied with the composition of  0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, and 0.6%. Oil degradation test performed for 7 days with 1 day of observation time span once. The results are found two kind of isolates that have skill to degradation oil that  isolates  are  isolate  A-1  (Bacillus  simplex)  and  A-2  (Bacillus  firmus).  Bacteria  degaradation  test  of  kerosene, diesel, and oil did to know kinetic growth bacteria. Result from kinetic growth show that Bacillus simplex had Ks = 4,26 g/L and µ maks = 0,090/day on kerosene, Ks = 3,68 g/L and µ maks = 1,240/day on diesel, and Ks = 2,06 g/L and µ maks = 0,240/day on oil. For Bacillus firmus Ks = 0,69 g/L and µ maks = 0,056/day on kerosene, Ks = 8,00 g/L and µ maks = 1,127/day on diesel, and Ks = 13,36 g/L and µ maks = 0,543/day on oil. From that result know Bacillus simplex is the best for petroleum degradation especially for diesel.
Keywords : bacterial isolates, degradation, local bacteria, oil , Standard Basal Salt

## PENDAHULUAN
Salah  satu  kasus  yang  sering  terjadi  di  Indonesia  yang  berkaitan  dengan  minyak  bumi  adalah terjadinya kontaminasi petroleum hidrokarbon ke tanah.
Kontaminasi  hidrokarbon  biasanya  berasal  dari  aktivitas  pertambangan  yang  terjadi  akibat  kurangnya kehati-hatian  dalam  menyimpan  bahan  bakar  seperti solar  sehingga  timbul  tumpahan,  kemudian adanya kebocoran dari tangki penyimpanan dan pipa, dan penyimpanan oli bekas yang tidak dibatasi oleh kolam (Smith et al . ,  2015).  Sebagai  konsekuensinya  pemerintah  sebagai  pengatur  harus  memiliki  rekomendasi untuk batas konsentrasi hidrokarbon yang diizinkan agar tidak melampau dan dapat mengganggu kesehatan manusia dan lingkungan (Duan et al ., 2013)
Dalam mengatasi masalah ini, secara umum dilakukan metode pengolahan secara biologi. Hal ini dikarenakan  metode  pengolahan  secara  fisika  dan  kimia  untuk  mereduksi  polutan  hidrokarbon  sangat mahal, membutuhkan waktu yang lama, dan tidak ramah lingkungan. (Mandri dan Lin 2007; Van Hamme et al.,  2003).  Oleh  karena  itu,  bioremediasi  adalah  pilihan  metode  yang  cukup  menjanjikan  dalam menyisihkan polutan hidrokarbon di lingkungan (Obayori, 2009).
Bioremediasi adalah proses pengolahan minyak bumi yang sudah lama atau tumpahan/ceceran minyak pada lahan  terkontaminasi  dengan  memanfaatkan  makhluk  hidup  mikroorganisme,  tumpahan  atau  organisme lain untuk mengurangi konsentrasi atau menghilangkan daya racun bahan pencemar (KepMen LH No. 128, 2003).
Bioremediasi  merupakan  suatu  cara  pengolahan  dengan  memanfaatkan  mikroorganisme  untuk menghilangkan  racun  atau  polutan  menggunakan  berbagai  macam  kemampuan  metabolismenya  untuk menghilangkan dan mendegradasi polutan di lingkungan. Selain itu, pengolahan ini juga bersahabat dengan lingkungan dan tidak terlalu mahal bila dibandingkan dengan pengolahan secara fisika dan kimia seperti pirolisis, insinerasi, dan lain-lain (Bao et al ., 2012; Ferradji et al ., 2014)
Sebelum melakukan bioremediasi pada tanah yang tercemar sebaiknya  dilakukan uji laboratorium terhadap  bakteri  yang  akan  digunakan  untuk  mengetahui  kemampuannya  dalam  mendegradasi  minyak. Untuk memperoleh bakteri yang bisa dipergunakan untuk mendegadasi minyak, dapat diperoleh dengan cara membuat isolat bakteri dari tanah yang telah tercemar minyak.
Bakteri yang telah mampu hidup dalam lingkungan yang tercemar oleh hidrokarbon dapat dikatakan telah mampu  beradaptasi  dengan  lingkungannya.  Berdasarkan  hal  tersebut  penelitian  ini  dilakukan.  Untuk memperoleh  isolat  bakteri  yang  mampu  mendegradasi  hidrokarbon  yang  kemudian  akan  dapat dimanfaatkan untuk proses bioremediasi pada tanah tercemar hidrokarbon lainnya .

## MATERIAL DAN METODOLOGI
Beberapa  penelitian  telah  menemukan  adanya  mikroorganisme  yang  dapat  mendegradasi  hasil olahan minyak bumi seperti oli, minyak tanah dan solar. Umumnya mikroorganisme tersebut ditemukan dari  sampel  tanah  yang  tercemar  oleh  minyak,  oleh  karena  itu  penelitian  dimulai  dengan  pengambilan sampel  tanah  yang  diduga  terkontaminasi  oleh  minyak  oli.  Sehingga  diharapkan  akan  diperoleh mikroorganisme  yang  mampu  mendegradasi  berbagai  hasil  olahan  minyak  bumi.  Secara  garis  besar metodologi penelitian dapat dilihat pada Gambar 1 .

## Sumber Mikroorganisme
Sumber mikroorganisme diperoleh dari tanah suatu bengkel kendaraan bermotor di daerah Husein Sastranegara, Kota Bandung, Jawa barat yang diduga telah terkontaminasi oleh oli sehingga diharapkan akan ditemukan mikroorganisme yang mampu mendegradasi minyak.

## Media Pertumbuhan
Media pertumbuhan mikroorganisme terbagi menjadi dua yaitu media cair dan media agar. Pada media cair yang digunakan adalah medium SBS ( Standard Basal Salt ) dengan kandungan KH 2 (PO 4 ) 0.135 gr, K 2 HPO 4 0.450 gr, (NH 4 ) 2 SO 4 0.135 gr, dan MgSO 4 0.060 gr per 500 ml aquadest. Media ini disterilisasi dengan  autoclaf  pada  kondisi  121 o C  selama  15  menit  kemudian  didinginkan  hingga  sama  dengan  suhu ruangan.
Media agar yang digunakan terdiri dari dua jenis yaitu media agar SBS dan media agar kaya nutrisi. Perbedaaan dari agar SBS dan agar kaya nutirisi adalah pada agar kaya nutirisi ditambahkan yeast extract sebanyak 0,135 gr per 500 ml. Media agar dibuat dengan menambahkan agar Bakteriologi sebanyak 1% (w/v) ke media cair. Kemudian media disterilisasi pada autoclaf dengan kondisi yang sama dengan medium cair. Setelah agar mengeras dioleskan oli sebanyak 0,1 ml sebagai sumber karbon.

## Gambar 1 Metodologi penelitian

## Sumber Karbon dan Zat Kimia
Sumber karbon dalam eksperimen ini adalah oli bekas kendaraan khususnya motor yang diperoleh dari  bengkel  kendaraan  bermotor,  minyak  tanah  dari  warung,  dan  solar  jenis  Pertamina  DEX  (Diesel Environmental Extra) dari stasiun pengisian bahan bakar minyak.

## Isolasi, Seleksi, dan Pemurnian Bakteri Pendegradasi Minyak
Pada  penelitian  proses  isolasi  dan  pemurnian  dilakukan  dengan  menggunakan  media  agar  kaya nutrisi  dan  agar  SBS.  Sedangkan  untuk  uji  biodegradasi  minyak  dipergunakan  media  SBS  cair  dengan tambahan minyak sesuai dengan konsentrasi yang telah ditentukan dalam reaktor yang berupa gabungan dari erlenmeyer dan shaker. 1. Isolasi bakteri dari kultur campuran
Mikroorganisme dari tanah diisolasi dengan cara memasukkan 5 gram tanah ke dalam tabung reaksi 20 ml dan ditambahkan 10 ml aquades kemudian diletakkan pada vortex hingga tanah dan aquades teraduk merata selama 2 menit. Air dari hasil pencampuran diambil sebanyak 1 ml dan dimasukkan kedalam aquades 9 ml. Aquades kemudian diaduk kembali dengan vortex selama 2 menit. Ambil kembali 1 ml hasil pencampuran ke  aqudes  9  ml  selanjutnya.  Pengulangan  seperti  ini  berlanjut  hingga  lima  kali  atau  setara  dengan  nilai pengenceran 10 -5 . Hasil dari pengenceran 10 -3 hingga 10 -5 diambil sebanyak 0,1 ml dengan mikropipet dan diinokulasikan  pada  media  agar  kaya  nutrisi  dengan metode spread  plate pada cawan petri.  Media agar kemudian diinkubasi dengan kondisi terbalik pada 30 o C selama kurang lebih tiga hari. 2. Seleksi bakteri
Pada  tahap  ini  isolasi  hasil  inkubasi  akan  diseleksi.  Cara  menyeleksi  mikroorganisme  tersebut  adalah dengan memilih koloni yang berbeda secara fisik. Kemudian menumbuhkannya kembali pada media agar SBS dengan tambahan oli pada permukaannya sebanyak 0.1 ml. Oli yang ditambahkan diratakan dengan menggunakan batang L. Cawan petri yang telah berisi oli dan koloni terpilih kemudian diinkubasi pada suhu 30 o C selama kurang lebih tiga hari.
3. Pemurnian bakteri
Setelah melalui proses seleksi, mikroorganisme kemudian diisolasikan kembali pada media yang sama yaitu agar SBS dengan tambahan oli. Metode isolasi dan penumbuhan yang dipergunakan menyerupai metode pada saat seleksi. Hasil pertumbuhan diamati untuk memperhatikan mikroorganisme yang tumbuh telah benar-benar sejenis dari bentuk fisik yang tampak dari cawan petri dan pada mikroskop.

## Pertumbuhan Bakteri
Pada tahap ini, bakteri akan ditumbuhkan pada erlenmeyer 250 ml yang telah berisi media SBS cair sebanyak 100 ml dan tambahan minyak. Jumlah bakteri yang dimasukkan kedalam media sebanyak satu ose. Untuk tiap isolat bakteri yang terpilih akan diuji untuk mendegradasi berbagai jenis minyak dengan variasi konsentrasi 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, dan 0,6%. Selama degradasi akan dilakukan perhitungan pertumbuhan  bakteri  dengan  metode  tidak  langsung  melalui  pengukuran  spektrofotometer.  Perhitungan pertumbuhan bakteri diamati tiap  1 hari sekali selama 7 hari.

## Metode Analisa
Metode  untuk  menganalisa  kemampuan  mikroorganisme  dalam  mendegradasi  minyak  dilakukan dengan cara
1. Membuat  kinetika  pertumbuhan  bakteri  berdasarkan  kemampuannya  mendegradasi  berbagai  jenis minyak bumi yang diberikan.
Pembuatan  kinetika  pertumbuhan  bakteri  diawali  dengan  pembuatan  kurva  pertumbuhan  bakteri.  Kurva pertumbuhan bakteri diperoleh melalui pengukuran dengan menggunakan spektrofotometer. Sebanyak 3 ml sampel bakteri yang telah dibiakkan dalam media cair SBS diambil dan dimasukkan ke dalam kuvet kemudian  diukur  pada  spektrofotometer  dengan  panjang  gelombang  600  nm.  Pengukuran  pertumbuhan bakteri  dilakukan  tiap  1  hari  selama  7  hari.  Kurva  yang  terbentuk  dari  hasil  pengukuran  kemudian disesuaikan dengan kurva standarnya.
Kurva  standar  dibentuk  dengan  menumbuhkan  bakteri  pada  media  cair  SBS  sebanyak  500  ml dengan tambahan oli bekas sebanyak 0,3% (v/v) dan dikocok selama 7 hari.  Hasil dari pengocokan diambil dan dilakukan pengenceran dengan variasi pengenceran 0%, 20%, 40%, 60%, 80% dan 100% dalam tabung 10 ml. Hasil pengenceran diukur dalam spektrofotometer dengan panjang gelombang 600 nm dan dilakukan pengukuran VSS ( Volatile Suspended Solid ) untuk mengetahui banyaknya bakteri yang tumbuh tiap satuan mg/L.
Kinetika pertumbuhan bakteri diperoleh melalui pendekatan monod dengan mencari nilai  µ maks dan Ks dengan cara melinierisasikan persamaan monod pada Persamaan (1) menjadi persamaan Lineweaver- Burk seperti pada Persamaan (2)
𝜇 = 𝜇 𝑚𝑎𝑘𝑠 𝑆 𝐾 𝑠 +𝑆 (1)
1 𝜇 = 1 𝜇 𝑚𝑎𝑘𝑠 + 1 𝑆 𝐾 𝑠 𝜇 𝑚𝑎𝑘𝑠 (2)
2. Membuat kurva pH sebagai tanda adanya reaksi yang terjadi pada bioreaktor. Pembuatan kurva pH dilakukan dengan pengukuran pH media dengan menggunakan pH meter.
3. Analisa Total Petroleum Hidrokarbon (TPH)
Pengukuran  TPH  dilakukan  pada  awal  percobaan  (hari  ke-0)  dan  pada  akhir  percobaan  (hari  ke-7). Pengukuran TPH dilakukan dengan menggunakan  metode gravimetri dengan prosedur ekstraksi Soxhlet untuk  mengekstrak  minyak  dari  larutan.  Hasil  pengukuran  TPH  terbaik  kemudian  dianalisa  dengan menggunakan GC/MS untuk mengetahui senyawa apa saja yang hilang dan konsentrasinya selama proses pertumbuhan terjadi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  diawali  dengan  pembuatan  isolat  bakteri  dari  kultur  campuran  tanah  yang  tercemar. Hasil pembuatan isolat dari kultur campuran adalah terjadinya pertumbuhan hanya pada hasil pengenceran 10 -3 yang  tumbuh  pada  agar  kaya  nutrisi.  Koloni  yang  tumbuh  pada  media  agar  kaya  nutrisi  kemudian diseleksi dengan cara memperhatikan ciri-ciri fisik yang ditampakkan. Seleksi dilakukan secara acak dari koloni yang telah tumbuh. Koloni yang telah diambil dinokulasikan kembali pada media agar SBS yang telah diolesi oli sebanyak 0,1 ml sebagai sumber karbon. Media diinkubasi pada suhu 30 o C selama tiga hari. Dari hasil seleksi diperoleh dua buah isolat yang tumbuh yaitu isolat A-1 dan isolat A-2. Isolat yang telah
diperoleh ini  kemudian  diuji  kemampuannya  untuk  mendegradasi  minyak  dalam  media  cair  SBS.  Isolat kemudian  diinokulasikan  ke  media  sebanyak  satu  ose  dan  diaduk  dengan rotary  shaker selama  7  hari. Pengamatan  pertumbuhan  dilakukan  tiap  1  hari  sekali  dengan  mengambil  sampel  sebanyak  3  ml  dan dimasukkan kedalam kuvet dan diukur densitas optiknya pada spektrofotometer. Turbiditas yang terukur merupakan  tanda  adanya  pertumbuhan  dari  bakteri.  Nilai  dari  turbiditas  yang  diperoleh  kemudian dikonversikan ke kurva standar untuk memperoleh nilai biomassa dari bakteri sehingga diperoleh hasil dari kurva pertumbuhan bakteri seperti yang dapat dilihat pada Gambar 2.
(a) (b) (c) (d) (e) (f)
Gambar 2. Kurva pertumbuhan isolat A-1 pada minyak tanah (a) solar (c) dan oli (e) dan isolat A-2 pada minyak tanah (b) solar (d) dan oli (f)
Selanjutnya, hasil dari pertumbuhan ini akan dipergunakan untuk mencari nilai laju pertumbuhan spesifik (µ) seperti yang terlihat pada Tabel 1 .
150 160 170 180 190 200 0 1 2 3 4 5 6 7 VSS (m g /L ) waktu (hari) 150 160 170 180 190 200 0 1 2 3 4 5 6 7 VSS (m g /L ) waktu (hari) 150 350 550 750 950 1150 0 1 2 3 4 5 6 7 VSS (m g /L ) waktu (hari) 150 350 550 750 950 1150 0 1 2 3 4 5 6 7 VSS (m g /L ) waktu (hari) 150 200 250 300 350 400 450 0 1 2 3 4 5 6 7 VSS (m g /L ) waktu (hari) 150 200 250 300 350 400 450 0 1 2 3 4 5 6 7 VS S ( m g /L ) waktu (hari)
Tabel 1. Laju pertumbuhan spesifik bakteri Konsentasi minyak tanah (%)   µ Isolat A-1 (/hari)  µ Isolat A-2 (/hari) 0,1 0,023 0,036 0,2 0,023 0,040 0,3 0,029 0,038 0,4 0,097 0,035 0,5 0,071 0,050 0,6 0,063 0,115 Konsentasi solar (%) 0,1 0,271 0,114 0,2 0,362 0,386 0,3 0,677 0,325 0,4 0,731 0,536 0,5 0,897 0,286 0,6 0,583 0,316 Konsentasi oli (%) 0,1 0,097 0,042 0,2 0,108 0,126 0,3 0,159 0,124 0,4 0,099 0,418 0,5 0,376 0,324 0,6 0,275 0,242
Untuk  menentukan  nilai  μ,  pertumbuhan  bakteri  diamati  dengan  cara  ditumbuhkan  pada konsentrasi  substrat  yang  berbeda-beda.  Linearisasi  kurva  pertumbuhan  bakteri  pada  fase  eksponensial menghasilkan garis regresi dengan slope yang merupakan laju pertumbuhan spesifiknya (Devianto, 2005).
Selama  pertumbuhan  bakteri  akan  memakan  minyak  yang  diberikan  dan  sebagai  hasil metabolismenya bakteri akan melepaskan asam ke lingkungan sehingga akan terjadi penurunan pH seperti yang  dapat  dilihat  pada Gambar  3 .  Menurut  Middelbeek et al.  (1992)  pada  fase  eksponensial  mikroba membelah dengan cepat dan konstan, pada fase ini kecepatan pertumbuhan sangat dipengaruhi oleh media tempat  tumbuhnya  seperti  pH  dan  kandungan  nutrien,  juga  kondisi  lingkungan  termasuk  suhu  dan kelembaban udara.
Menurut Gaudy dan Gaudy (1981), organisme yang tumbuh dalam lingkungan aerobik juga mampu memproduksi  asam.  Oksidasi  dari  komponen  organik  dapat  menghasilkan  karbondioksida  yang  cukup untuk menurunkan pH secara signifikan jika lingkungan tidak memiliki cukup buffer untuk menahannya.

## Kinetika Bakteri Pendegradasi Minyak
Setelah  diperoleh  hasil  perhitungan  dari  laju  pertumbuhan  spesifik  masing-masing  isolat  dari berbagai  macam  substrat  dengan  berbagai  macam  konsentrasi  kemudian  dibentuklah  sebuah  kurva perbandingan  antara  laju  pertumbuhan  spesifik  bakteri  (µ)  terhadap  konsentrasi  substrat  (S)  untuk memperoleh laju pertumbuhan maksimum (µ maks ) dan konstanta kejenuhan monod (K S ) yang merupakan parameter  kinetika  yang  spesifik  untuk  setiap  mikroorganisme.  Kinetika  pertumbuhan  bakteri  diperoleh melalui  pendekatan  monod  dengan  mencari nilai   µ maks dan  Ks  dengan  cara  melinierisasikan  persamaan monod  pada  menjadi  persamaan  Lineweaver-Burk. Kurva  Lineweaver-Burk  oleh  bakteri isolat  A-1 dan isolat A-2 dapat dilihat pada Gambar 4 .
Gambar 3. Kurva pH isolat A-1 pada minyak tanah (a) , solar (c) , dan oli (e) dan isolat A-2 pada minyak tanah (b) , solar (d) , dan oli (f)
Gambar 4. Kurva Lineweaver-Burk isolat A-1 pada minyak tanah (a) solar (c) dan oli (e) dan isolat A- 2 pada minyak tanah (b) solar (d) dan oli (f)
Hasil  dari  perhitungan  laju  pertumbuhan  spesifik  maksimum  (µ maks )  dan  konstanta  kejenuhan monod  (Ks)  bakteri  isolat  A-1  dan isolat  A-2  pada  berbagai  macam  substrat  minyak  dapat  dilihat  pada Tabel 2 berikut.
Tabel 2. Hasil perhitungan Ks dan µ maks bakteri pada minyak No Bakteri Substrat Ks (g/L)  µ maks (/hari) 1. isolat A-1 Minyak tanah 4,26 0,090 Solar 3,68 1,240 Oli 2,06 0,240 2. isolat A-2 Minyak tanah 0,69 0,056 Solar 8,00 1,127 Oli 13,36 0,543

## Analisa Total Petroleum Hidrokarbon
Hasil  pertumbuhan  bakteri  akan  berhubungan  langsung  dengan  seberapa  banyak  minyak  yang berhasil  didegradasi  atau  dimakan  oleh  bakteri.  Hasil  pencernaan  ini  akan  berdampak  langsung  pada menurunnya TPH yang diberikan sehingga akan diperoleh nilai dari penyisihan TPH. Hasil pengukuran dari penyisihan minyak dilakukan pada awal dan akhir percobaan untuk mengetahui seberapa besar minyak yang didegradasi oleh bakteri. Hasil dari penyisihan tersebut dapat dilihat pada Tabel 3 dibawah. Dari hasil pengukuran diketahui bahwa minyak jenis solar yang terbaik didegradasi oleh bakteri dan menghasilkan pengukuran nilai TPH yang lebih baik bila dibandingkan dengan oli dan minyak tanah. Berdasarkan hasil tersebut maka dipilihlah TPH terbaik untuk diuji kandungan yang diperoleh dari hasil proses degradasi oleh bakteri.
Tabel 3. Penyisihan TPH oleh bakteri
Konsentrasi minyak (%) TPH Isolat A-1 (%) TPH Isolat A-2 (%) Minyak Tanah 0,1 72,57 69,10 0,2 71,28 62,95 0,3 63,89 70,27 0,4 66,18 71,03 0,5 67,11 71,86 0,6 66,19 70,72 Solar 0,1 69,20 65,61 0,2 68,20 66,97 0,3 70,06 68,42 0,4 71,06 68,95 0,5 71,40 69,45 0,6 67,38 67,48 Oli 0,1 66,90 57,18 0,2 56,63 50,00 0,3 60,37 64,90 0,4 62,85 69,44 0,5 70,33 69,65 0,6 69,01 68,78
Dari  semua  hasil  yang  diperoleh  saya  memilih  untuk  melakukan  uji  GC/MS  pada  solar  dengan konsentrasi  0,5%  hasil  degradasi  bakteri isolat  A-1  karena  dari  segi  pertumbuhan  dan  hasil  pengukuran TPH  cenderung  yang  terbaik  diantara  yang  lainnya.  Kurva  hasil  pengukuran  GC/MS  dapat  dilihat  pada Gambar 5 .
(a)
(b)
Gambar 5. Kurva hasil pengukuran GCMS solar pada awal percobaan (a) akhir percobaan (b)
Kurva diatas menunjukkan hasil pengukuran pada awal sebelum dilakukannya uji degradasi oleh bakteri. Pada masing-masing puncak terdapat nomor yang menyatakan jenis senyawa yang terkandung dari solar yang terukur. Kandungan senyawa tersebut dapat dilihat pada Tabel 4 dan Tabel 5 .
Hasil dari GCMS yang dilakukan pada akhir percobaan menujukkan puncak kurva yang dihasilkan menurun ketinggiannya dan jumlah dari puncaknya pun berkurang. Hal ini menunjukkan bahwa minyak solar  telah  didegradasi  oleh  bakteri.  Berdasarkan  hasil  uji  GCMS  pada  awal  dan  akhir  percobaan  dapat dilihat bahwa ada beberapa senyawa yang hilang dan ada juga yang berkurang seperti senyawa nonane, decane, oxirane, naftalene, dodecane, undecane, tetradecane, eicosane, hexadecane dan oktadecane.
Tabel 4. Senyawa-senyawa hasil GCMS awal solar
Peak#  Name Peak#  Name 1  Nonane 20  Cyclohexane, octyl-
2  Decane (CAS) n-Decane
21  Hexadecane
3  Oxirane, tetradecyl-
22  1H-indene, octahydro-2,2,4,4,7,7-hex
4  Undecane (CAS) n-Undecane
23  Hexadecane
5  Naphthalene, 1,2,3,4-tetrahydro-
24  Dodecane, 2-cyclohexyl-
6  Dodecane
25  Pentadecane, 2-methyl-
7  Undecane, 2,6-dimethyl-
26  Hexadecane
8  Sulfurous acid, 2-ethylexyl pentyl est
27  Pentadeane, 2,6,10,14-tetramethyl- 9  Naphtalene, 1,2,3,4-tetrahydro-6
28  Heptadecane
10  Hexadecane (CAAS) n-Hexadecane
29  Pentadeane, 2,6,10,14-tetramethyl- 11  Napthalene, 1,2,3,4-tetrahydro-2,6-
30  Octadecane (CAS) n-Octadecane 12  Napthalene, 1,2,3,4-tetrahydro-1,5-
31  Hexadecane, 2,6,10,14-tetramethyl-
13  Napthalene, 1,2,3,4-tetrahydro-2,7- 32  Heneicosane 14  Tetradecane, 2,6,10-trimethyl- 33  Eicosane 15  Hexadecane, 2,6,10,14-tetramethyl- 34  Heneicosane 16  Tetradecane 35  Eicosane 17  Nonane, 5-(2-methylprpyl)- 36  Eicosane 18  Naphthalene, decahydro-1,6-dimethyl 37  Eicosane 19  1H-indene, octahydro-2,2,4,4,7,7-hex 38  Eicosane Tabel 5. Senyawa-senyawa hasil GCMS solar setelah percobaan Peak#  Name Peak#  Name 1  Tetradecane 8  Nonadecane (CAS) n-Nonadecane 2  Pentadecane (CAS) n-Pentadecane 9  Heneicosane 3  Butylated Hydroxytoluene 10  Heneicosane 4  Heptadecane 11  Heneicosane 5  Pentadecane, 2,6,10-trimethyl- 12  Heneicosane 6  Heptadecane 13  Heneicosane 7  Pentadecane, 2,6,10,14-tetramethyl 14  Heneicosane

## Identifikasi Bakteri Pendegradasi Minyak
Isolat yang diperoleh dari hasil pertumbuhan dalam cawan petri kemudian diisolasikan kedalam agar miring dan diinkubasi selama 24 - 48 jam. Bakteri yang tumbuh kemudian diidentifikasi menggunakan uji biokimia. Identifikasi bakteri dilakukan pada Laboratorium Mikrobiologi di Laboratorium Kesehatan. Hasil uji laboratorium dapat dilihat pada Tabel 6 berikut
Tabel 6. Hasil uji fisik dan biokimia bakteri Uji yang Dilakukan Isolat A-1 Isolat A-2 Gram Gram positif Gram positif Morfologi sel Batang Batang Spora Ada spora Ada spora Katalase + + Oksidase - - Vogus Proskauer - - Simon Sitrat - - Arabinosa - + Glukosa - - Manitol + + Xylosa - - Laktosa - -
Uji yang Dilakukan Isolat A-1 Isolat A-2 Sukrosa + - Arginin - - Lysin - - Urease - - H2S - - Indol - - Motilitas + + Metil Red - - Gelatin - - Prediksi Jenis Bacillus simplex Bacillus firmus

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan percobaan dapat diambil kesimpulan bahwa isolat bakteri yang berasal dari tanah yang tercemar oleh oli di sebuah bengkel di Kota Bandung diperoleh dua jenis bakteri yang mampu mendegradasi minyak yaitu Bacillus simplex dan Bacillus firmus . Dari kedua bakteri yang diperoleh  keduanya  mampu  mendegradasi  minyak  yang  diberikan  dengan  baik  akan  tetapi  lebih unggul untuk  mendegradasi  minyak  jenis  solar.  Diantara  kedua  isolat  tersebut  yang  paling  baik  dalam mendegradasi solar adalah Bacillus simplex dengan hasil kinetika pertumbuhan Ks = 3,86 g/L dan  µmaks = 1,240/hari. Pertumbuhan bakteri yang dihasilkan ternyata akan berpengaruhi terhadap tingkat keasaman lingkungan. Kondisi pH lingkungan  yang awalnya netral yaitu 6,9 berubah asam   menjadi 6  – 5 karena aktivitas  pertumbuhan  yang  ternyata  menghasilkan  asam  dan  dilepaskan  ke  lingkungan.  Perbedaaan konsentrasi  substrat  yang  diberikan  ternyata  memiliki  pengaruh  pada  pertumbuhan.  Semakin  banyak konsentrasi substrat yang diberikan ternyata tidak menjadi jaminan pertumbuhannya akan menjadi lebih baik daripada konsentrasi yang sedikit. Hal ini terlihat dari hasil penelitian bahwa bakteri Bacillus simplex cenderung tumbuh maksimum pada konsentrasi minyak 0,5% sedangkan Bacillus firmus cenderung baik pertumbuhannya pada konsentrasi minyak 0,4%. Hasil dari pengukuran TPH menunjukkan bahwa bakteri cenderung  mampu  mendegradasi  solar  dengan  baik.  Selain  tampak  dari  hasil  penurunan  TPH  yang dihasilkan yaitu sebesar 71,40% juga dari hasil pengkuran GCMS. Hasil pengkuran GCMS menunjukkan bahwa  ada  beberapa  senyawa  yang  hilang  seperti  selama  percobaan  yaitu  nonane,  decane,  oxirane, naftalene, dodecane, undecane, tetradecane, eicosane, hexadecane dan oktadecane.

## DAFTAR PUSTAKA
Bao,  M. T.,  L.  Wang,  P.  Sun,  L.  Cao,  Zou,  Y.  Li.  2012. Biodegradation  of  crude  oil  using an  efficient microbial consortium in a simulated marine environment. Mar. Pollut. Bull. 64, 1177-1185. Duan,  L.,  R.  Naidu,  P.  Thavamani,  J.  Meaklim,  M.  Megharaj.  2013. Managing  Longterm  Polycyclic Aromatic Hydrocarbon Contaminated Soil : A Risk-Based Approach. Environ. Sci. Pollut. Res. Ferradji, F.Z., S. Mnif, A. Badis, S. Rebbani, D. Fodil, K. Eddouaouda, S.S. Ferradji. 2014. Naphtalene and Crude Oil Degradation by Biosurfactant Producing Streptomyces spp. Isolated From Mitidja Palin Soil (North of Algeria). Int. Biodeterior. Biodegrad. 86, 300-308. Gaudy, A.F. Jr dan E.T. Gaudy. 1981. Microbiology for Environmental Scientists and Engineers. McGraw Hill Book Co. New York.
Kepmen LH no 128. 2003. Tata Cara dan Persyaratan Teknis Pengolahan Limbah Minyak Bumi dan Tanah Terkontaminasi Oleh Minyak Bumi Secara Biologis.
Mandri,  T.  dan  Lin  J.  2007. Isolation  and  Characterization  of  Engine  Oil  Degrading  Indigenous Microorganisms in Kwazulu-Natal, South Africa. African Journal of Biotechnology Vol. 6(1), pp. 023-027
Middlebeek,  E.J.,  R.O.  Jenkins  dan  J.S.  Drijver-de  Haas.  1992. Growth  in  Batch  Culture.  In  Vitro Cultivation of Micro-organisms . Biotechnology by Open Learning.