## 102 VOLUME 12 NOMOR 2 DESEMBER 2016
PENGARUH PEMBERIAN EKTRAK BIJI ANGGUR ( Vitis vinifera ) TERHADAP KADAR SERUM ASAM URAT PADA TIKUS PUTIH JANTAN ( Rattusnorvegicus strain wistar ) MODEL HIPERURISEMIA
Novi  Puspita  Sari 1 ,  Isbandiyah 2 ,  Bambang  Widiwanto 3
Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Muhammadiyah  Malang Jl.  Bendungan  Sutami  188  A  Malang,  65145
Email  :  novipuspita.fk@gmail.com

## ABSTRAK
Hiperurisemia adalah salah satu faktor yang menyebabkan angka kejadian infalmasi gout arthtritis akut, dan beberapa penyakit lain. Terjadinya hiperurisemia dapat di hambat dengan senyawa flavonoid seperti katekin dan epikatekin yang dapat menghambat enzim xantin oksidase senyawa tersebut terkandung dalam biji anggur (Vittis vinifera) .penelitian ini bertujuan untuk Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak biji anggur (Vitis vinnifera) terhadap serum asam urat dalam darah tikus putih (Rattusnorvegicus strain wistar) yang di induksi diet tinggi purin.. metode yang di gunakan merupakan Eksperimental, Post Test Only Control Group Design dilakukan selama 25 hari dengan menggunakan 28 ekor tikus putih jantan, di bagi dalam 1 kontrol positif  dan 3 kelompok control perlakuan. Setiap kelompok di berikan diet tinggi purin 20mg/ekor selama 8hari, kemudian pada kelompok perlakuan yang diberikan ekstrak biji anggur pada kelompok 1,2, dan 3 dengan dosis berturut turut 0,9, 2,7,  dan  5,4  mg  selama  10  hari.  Analisis  data  menggunakan uji One  way ANOVA, post  hoc  bonferroni ,  uji  korelasi  dan  uji regresi.hasil  menunjukan one  way Anova  didapatkan  perbedaan  yang  signifikan  p<0.001  Hasil  uji  post  hoc  di  dapatkan perbedaan yang bermakna antara tiap-tiap kelompok perlakuan, namun uji  korelasi  dan regresi tidak signifikan.ddaru uji statistic dapat di simpulkan pemberian ekstrak biji anggur berpengaruh, tetapi tidak berhubungan terhadap penurunan kadar serum asam  urat  pada  tikus model hiperurisemia
Kata kunci : Asam Urat, Ekstrak Biji Anggur , Epikatekin, Katekin.

## ABSTRACT
Hyperuricemia  is  one  of  the  factors  that  cause  the  incidence  of  inflammation  in  acute  Gout  arthritis  and  other  disease. Hiperuricemia  can  be  prevented  by  grape  seed  (vitis  vinifera)  extracts  which  has  cathecin  and  epithecin  that  posses  inhibition  of  xanthine oxidase enzyme Objective  from this experiment  to  evaluate  the  effects of grape  seed  (vitis  vinifera)  extracts  toward serum uric  acid in white male rats (Rattus novergicus wistar strain)induced with high purin dietaryusing method Experimental, Post Test Only Control Group Design for  25  days  by    28  white  male rats  were  divided  into  1  positive  control  group  and  3  treatment  groups. Each  group  were  given high purin dietary 20 mg/rats for 8 days, then the 1, 2 and 3 treatment groups were given grape seed extracts at dose  0.9 , 2.7, and 5.4 mg  respectively for  10 days. Data were analized using  one way ANOVA,  Post hoc  bonferroni and  Regression  test . The result  of  one  way anova  showed a  significant  difference      p<0.001.  Post  hoc  test  also  showed  significant  differences  between  each  treatment  group.  but  the  correlation  and regression  test was  not significant.Grape  seed  extract  affect but  not related  to  decreased of serum  uric  acid  levels in    white  male rats  model hyperuricemi
Keyword  : Grape  seed  extract,  catechin,  epicatechin,  uric  acid

## PENDAHULUAN
Hiperurisemia adalah salah satu faktor yang menyebabkan angka kejadian inflamasi pada Gout arthritis  akut (Jatuworapruk,  2014) .  Gout  menjadi salah satu prevalensi dari penyakit yang berhubungan dengan lifestyle, sebuah penelitian di Jepang yang di lakukan  tahun  2004  oleh    National  Livelihood menyatakan 874000 orang di rawat di rumah sakit karena  gout  ,apabila  di  bandingkan  dengan  tahun 1986  maka  angka  kejadian  meningkat  3.4  kali (Kushiyama,  2014)    Pada  suatu  studi  didapatkan insiden  gout  4,9%  pada  kadar  asam  urat  darah  > 9mg/dL,  0,5%  pada  kadar  7  –  8,9  mg/dL,  dan 0,1%  pada  kadar  <7  mg/dL (Lugito,2013) .  Selain mengakibatkan  gout  arhtritis  belakangan  ini hiperurisemia  di  hubungkan  dengan  penyakit kardiovaskular.  Data  terakhir menunjukkan  bahwa serum asam urat ( SAU ) yang tinggi sering dikaitkan dengan sejumlah besar penyakit,  SAU  tinggi  juga tampaknya menjadi faktor risiko independen untuk penyakit kardiovaskular dan diabetes tipe 2 (Borghi, 2014). Hiperurisemia  dapat  didefinisikan  sebagai meningkatnya  kadar serum urat dalam darah pada tingkat  >7mg/dL (Brooks,  2010) .  Beberapa  faktor yang  menyebabkan    kenaikan  jumlah  serum  asam urat  adalah  jenis  kelamin,  ph  urin,  dan  konsumsi diet  tinggi  purin  seperti  hasi  makanan  laut  dan daging.  Pada  penelitian  yang  di  lakukan  di  rumah sakit  umum  kota  Tegal,  yang  subjek  penilitianya 50% merupakan pengkonsumsi makanan diet tinggi purin  menunjukan  bahwa  tingkat  asam  urat  lebih tinggi  di  bandingan  dengan  yang  mengkonsumsi sedikit  makan  laut (Purwanti,  2009) .  Pengobatan hiperurisemia yang sering di gunakan adalah senyawa allopurinol  sebagai  agen  yang  dapat  menghambat enzim  Xanthin Oksidase.  Namun dalam beberapa penelitian penggunaan allopurinol sebagai obat yang dapat menurunkan asam urat mempunyai beberapa efek  samping.Allopurinol  dapat  menyebabkan intoleransi gastrointestinal seperti muntah dan diare, ruam  danalergi,  kejadian  ini  lebih  sering  terjadi  di Asia (Dean, 2013) . Di karenakan efek samping yang ada  maka  di  gunakan  terapi  alternative  sebagai pilihan. Salah satu bahan yang banyak di sebutkan adalah biji anggur ( Vitis vinifera ) yang mengandung kandungan  fenol  yang  terdiri  dari  katekin  dan epikatekin (Elagamey,  et  al,  2013) .  pada  penelitian sebelumnya di sebutakn bahwa komponen katekin dan epikatekin yang terdapat pada ekstrak teh hijau
dapat  menghambat  kerja  enzim  xantin  oksidase yang  dapat  menurunkan  kadar  SUA.
Dari  uraian  di  atas  maka  penelitian  ini  di lakukan untuk mengetahui biji anggur ( Vitis vinifera ) yang  memngandung  komponen  katekin  dan epikatekin  sebagai  penghambat  enzim  xanthine oksidase dalam menurunkan kadar asam urat dalam darah.

## BAHAN  DAN  METODE

## Persiapan  Hewan  Model
Penelitian  ini  dilakukan  selama  25  hari dengan  menggunakan  28  ekor  tikus  putih  jantan yang  kemudian  dibagi  menjadi  4  kelompok perlakuan.  Masing-masing  kelompok  tersebut  di adaptasikan  terlebih  dahulu  dengan  lingkungan selama  7  hari.Pada  hari  ke-8  sampai  dengan  hari ke-15  diberikan  diet  tinggi  purin  berupa  jus  otak kambing  20mg/ekor  pada  kelompok  kontrol positifdan  3  kelompok  perlakuan.
Pembuatan  Ekstrak  Biji  anggur
Buah  anggur  di  pisahkan  dari  bijinya  di keringkan  (di  tempat  teduh,  suhu  udara  25-30ºC selama 1 minggu dan digilin menjadi bubuk halus. Bubuk  biji  anggur  (0,2  gram)  dimaserasi  dalam 20ml etanol  80% suling  selama 24  jam pada  suhu 5  ºC  .Filtrate  yang  di  dapat  di  pekatkan  dengan menggunakan rotatory  evaporator selama  ±  1  jam dan dilanjutkan dengan menggunkan waterbath pada suhu  60C  yang  dijaga  konstan  sampai  didapatkan bobot  konstan  sehingga  di  peroleh  biji  anggur ekstrak etanol. Hasil di fraksi lagi menggunakan etil asetat.

## Pemberian Perlakuan
Penelitian  ini  dilakukan  selama  25  hari dengan  menggunakan  28  ekor  tikus  putih  jantan yang  kemudian  dibagi  menjadi  4  kelompok perlakuan.Masing-masing  kelompok  tersebut  di adaptasikan  terlebih  dahulu  dengan  lingkungan selama  7  hari.  Pada  hari  ke-8  sampai  dengan  hari ke-15  diberikan  diet  tinggi  purin  20mg/ekor  pada kelompok  kontrol  positif  dan  3  kelompok perlakuan,  kemudian  pada  hari  ke-16  sampai  hari ke-25  hanya  kelompok  perlakuan  yang  diberikan ekstrak  biji anggur masing-masing  pada kelompok 1,2,  dan  3  dengan  dosis  0,9,  2,7,  dan  5,4  mg sedangkan pada kelompok kontrol di beri placebo berupa  lautan  NaCl  0.9%.

## 104 VOLUME 12 NOMOR 2 DESEMBER 2016

## Pengambilan  Darah  Hewan  Coba
Setelah hewan coba teranastesi dengan baik (keadaan  pingsan),  hewan  coba  diletakkan  pada meja  lilin  dan  keempat  kaki  hewan  coba  difiksasi terhadap  meja  lilin  dengan  menggunakan  jarum pentul.Dengan  menggunakan  gunting  bedah, dilakukan  pembedahan  pada  abdomen  hingga setinggi  leher.  Kemudian  dengan  menggunakan spuit 3 ml, darah hewan coba diambil dari ventrikel kiri  sebanyak    ±  3  ml.  Darah  yang  telah  diambil sebanyak  ±  3  ml,  dilakukan  sentrifuge  dengan kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit  untuk mengambil supernatannya.

## Pemeriksaan  Kadar  Kolesterol  Total
a.  Kadar asam urat di tetapkan berdasarkan reaksi enzimatik  menggunakan  reagen  uric  acid  FS* TBHBA, perhitungan kadar asam urat dilakukan dengan  cara  membandingkan  langsung  hasil serapan larutan uji dengan asam  urat standart.
Kadar  asam  urat  serum(mg/dL)  dihitung dengan  menggunakan  rumus  :

## Analisis  Data
Data-data  yag  diperoleh  dalam  penelitian ini  dianalisis  menggunakan  uji  normalitas  dan  uji homogenitas.  Apabila  hasil  sebaran  data  normal, gunakan  uji One  Way  Anova ,  lalu  uji  Post  hoc Bonferroni  jika  varian  data  sama,  jika  varian  data tidak  sama  maka  menggunakan  uji  Post  hoc Tamhane kemudian dilanjutkan dengan uji Regresi Linier  dan  uji  korelasi.    Data  penelitian  diolah dengan menggunakan program komputer statistik SPSS 20.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar rerata  asam urat  tikus putih  jantan (Rattus  norvegicus  strain  wistar)  pada  masing- masing kelompok diperoleh dari hasil perhitungan adalah  sebagai  berikut  :
Keterangan tabel:
a.  K+  :  sebagai  kontrol  positif  di  beri  diet tinggi purin (jus otak kambing 20 mg/ekor) dan  placebo  aqusdes  1  ml/ekor/hari  tanpa ekstrak  biji  anggur
b.  P1  :  sebagai  kelompok  perlakuan  diet  tinggi purin jus otak kambing 20 mg /ekor) dengan ekstrak  biji  anggur  0,9  mg/ekor/hari
c.  P2  :  sebagai  kelompok  perlakuan  diet  tinggi purin  (jus  otak  kambing  20  mg/ekor/hari) dengan  ekstrak  biji  anggur  2,7  mg/ekor/ hari
d.  P3  sebagai  kelompok  perlakuan  diet  tinggi purin  (jus  otak  kambing  20 mg/  ekor/hari) dengan  ekstrak  biji  anggur  5,4  mg/ekor/ hari
Dapat  dilihat  dari  data  tabel  5.1  di  atas bahwa  terdapat  perbedaan  rerata  kadar  serum asam  urat  tikus  pada  kontrol  positif  yang  di  beri diet  tinggi  purin  dengan  kelompok  tikus  yang  di beri  perlakuan  ektrak  biji  angggur (vitis  vinifera) pada  masing  masing  dosis.  Dengan  demikian, berdasarkan  penilaian  secara  deskriptif  menurut rata-rata kadar asam urat pada tikus putih tersebut, maka dapat dikatakan  bahwa pemberian perlakuan berupa  ekstrak  biji  anggur(vitis  vinifera)    dengan dosis  0,9  mg/ekor,  2,7  mg/ekor,  dan  dosis    5,4 mg/ekor  menunjukkan  efek  atau  pengaruh  yang berbeda  jika  dibandingkan  dengan  kontrol  positif yang  di  induksi diet  tinggi  purin.
Pada  uji One  way ANOVA  menunjukkan adanya  pengaruh  yang  bermakna  sehingga  perlu dilakukan uji pembanding ganda ( multiple comparisons ) dengan uji post hoc . Karena data normal dan homogen maka  digunakan post  hoc Bonferroni  untuk membandingkan  antar  kelompok  kontrol  dan kelompok  perlakuan.  Pada  uji post  hoc ,  dapat
PENGARUH PEMBERIAN EKTRAK BIJI  ANGGUR 105
disimpulkan  terdapat  perbedaan  yang  signifikan antara  2  kelompok  apabila  nilai  p  <  0.05.
Dari  hasil  uji  korelasi  pearsondi  dapatkan nilai signifikansi 0.216 sehingga dikatakan tidak ada hubungan yang bermakna secara statistik.
Hasil uji regresi menunjukkan tidak adanya pengaruh  yang signifikan  antara  kelompok perlakuan  yang  diberikan  ekstrak  biji  anggur kulit hitam terhadap penurunan kadar serum asam urat  dilihat  dari  nilai  sig  Uji  t  yang  >0,05  dengan nilai  sig  0,216.Berdasarkan  hasil  pengamatan  dan analisa  statistik  pada  kelompok  perlakuan  yang  di berikan  ekstrak  biji  anggur  dengan  melakukan  uji oneway ANOVA dan multiple  comparation dengan Post  Hoc  bonfferoni di  katakan  terdapat  adanya hubungan  pemberian  ekstrak  biji  anggur  terhadap penurunan  kadar  serum  asam  urat  dalam  darah tikus  putih  hal  ini  di  sebabkan  kerja catechin mirip dengan  allupurinol  yang  menghambat  kerja  enzim xantin  oksidase  sehingga  pembentukan  asam  urat yang  berlebihan  dapat  dihentikan. Catechin dapat pula  meningkatkan  pembentukan  enzim  urikase yang  menambah  asam  urat  menjadi  alantoin  yang mudah  larut  dalam  air  serta  mudah  diekskresikan lewat ginjal (Prabowo, 2007) . Hal ini juga di dukung oleh penelitian sebelumnya dengan judul Amplification of Antioxidant Activity and Xanthine Oxidase Inhibition of  Catechin  by  Enzymatic  Polymerization diaman  pada penelitian tersebut dikatakan bahwa hasil dari poly (catechin) yang  mereka  dapatkan merupakan salah satu inhibitor terhadap enzim  xantin oxidase yang kerjanya hampir sama denga obat anti-hyperurisemia senyawa  allopurinol (Motoichi  et  al,  2003).
Namun dalam penelitian ini apabila di lihat kekuatan hubunganya dengan uji korelasi di dapatkan hasil  yang  tidak  signifikan  dikarenakan  pada  dosis tertinggi dengan di berikan ekstrak biji anggur 5,4 mg/ekor nilai kadar serum asam  urat tidak   turun jika  di  bandingkan  dengan  dosis  0,9  mg  dan  2,7 mg. Hal ini dapat di pengaruhi karena dalam tubuh memiliki Total Antioxidant Capacity (TAC) dengan nilai  baseline  800µm  menurut  penelitian  Lotito  & Frei (2006).  Dalam penelitian tersebut di katakana konsumsi makanan yang tingi akan flavonoid dapat meningkatkan kadar urat dalam darah Dari penelitian tersebut untuk mengetahui total antioksidan dengan metode ferric-reducing antioxidant potential (FRAP) di ukur setelah 2 jam konsumsi , didapatkan bahwa strawberry  meningkatkan  antioxidant  capacity
sebesar 21 µm , bayam 53 µm dan  anggur merah dapat  meningkatkan  21µm.
Dalam  penelitian  lainya  dikatakan  bahwa konsumsi  teh  dimana  didalamnya  terdapat kandungan antioksidan berupa flavonoid juga dapat meningkatkan  asam  urat,  bisa  di  katakana  apabila terdapat  peningkatan  7%  dari  TAC  dapat menyebabkan  peningkatan  asam  urat  sebanyak  5 sampai  7% dari rerata asam urat. Dengan demikian dari  beberapa  studi  yang  menunjukkan  bahwa konsumsi  makanan  tinggi  flavonoid  dapat meningkatkan  urat  plasma,  meskipun  mekanisme yang  mendasari  tidak  dijelaskan.(Lotito  &  Frei, 2006).  Selain  itu  pendapat  ini  di  buktikan  dalam pengolahan  data  apabila  kelompok  dengan  dosis 5.4 mg/ ekor di hilangkan maka di dapatkan hasil yang signifikan Secara prosentase besarnya kontribusi yang di peroleh adalah 84,4% dengan melihat nila adjusted  R  square =  0,848  maka  dapat  di  katakana hasilnya bermakna.
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  dari penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  biji anggur  anggur  dapat  menurunkan  kadar  serum asam  urat  pada  tikus  jantan  yang  diberikan  diet tinggi  purin  pada  dosis  tertentu  yaitu  dosis  0,9 mg/ekor  dan  2,7  mg/  ekor  di  karenakan  pada dosis  tertinggi  5,4  mg/  ekor  penurunan  kadar asam urat pada tikus jantan tidak sebaik penurunan pada  dosis  yang  lebih  rendah.  Hal  ini  disebabkan karena kemungkinan dosisi 5,4 mg/ ekor tersebut terlalu  tinggi  sehingga  telah  malebihi  total Antioxidant  capacity  (TAC)  pada  tikus.

## KESIMPULAN  DAN  SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat kesimpulan  bahwa  Ekstrak  biji  anggur  pada  dosis tertentu berhubungan terhadap rerata kadar serum asam urat tikus yang di induksi diet tinggi purin.Dosis optimal  ekstrak  biji  anggur  yang  berpengaruh terhadap  penurunan  kadar  serum  asam  urat  pada tikus yang di induksi diet tinggi purin  penelitian ini adalah  dosis  2,7  mg/  ekor.  Tidak  terdapat hubungan  jumlah  dosis  yang  di  berikan  dengan kadar  serum  asam  urat  pada  tikus
Saran  yang  dapat  dijadikan  sebagai  bahan pertimbangan  dan  masukan  untuk    penelitian selanjutnya  perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  seberapa  besar  pengaruh  golongan

## 106
VOLUME 12 NOMOR 2 DESEMBER 2016
flavonoid cathecin dan epicathekin yang  dapat menghambat xantin oxidase , pengaruh ekstrak biji anggur  dengan  dosis  yang  merupakan  kelipatan dari dosis terendah untuk mengetahui dosis toksik minimal yang di timbulkan sebelum dosis  5.4mg/ ekor, serta tentang total flavonoid dalam biji anggur yang dapat mempengaruhi sehingga melebihi Total Antioksidan  Capacity  (TAC)  dalam  tikus  yang mempengaruhi  produksi  asam  urat.

## DAFTAR  PUSTAKA
Elagemey,A.A,  Abdel  Wahab,Shimma  and  Abdel Moghib.  2013, Comparative  Study  of Morphological  Characteristics  and  Chemical Constituents  for  Seeds  of   Some  Grape  Table Varieties .Journal  of   American  Science 2013;9(1)
Fahlen  Mark,  Mahendra  Agraharkar  et  al.2015 , Uric  Acid  Nephropathy .American  College  of Physicians, Renal Physicians Association.
Feig  DI,  Johnson  RJ.2003,  Hyperuricemia  in  childhood primary hypertension.
Hypertension.2003,42(3):247-25  10.1161/ 01.HYP.0000085858.66548.59.
Feig DI, Soletsky B, Johnson RJ, Effect of  allopurinol on blood  pressure  of  adolescents  with  newly  diagnosed essential  hypertension:  a  randomized  trial.  Jurnal Am  Med  Assoc.  2008,  300  (8):  924-932.
10.1001/jama.300.8.924.
Ferruzzi.  M.  2010. Bioavailability  of   gallic  acid  and catechins  from  grape  seed  polyphenol  extract  is improved by repeated dosing in rats: Implications for treatment  in  Alzheimer’s. DiseaseJournal Alzheimers  Dis.  doi:  10.3233/JAD-2009- 1135 Jatuworapruk K, Srichairatanakool et al. 2014. Effects of  green  tea  extract  on  serum  uric  acid  and  urate clearance  in  healthy  individuals. Journal  clinical rheumatology  2014  september  ;20(6):310-3. doi:  10.1097/RHU.0000000000000148..
Nata  Pratama  Hardjo  Lugito  ,  2013.  Nefropati
Urat,  CDK-204/  vol.  40  no.  5,
Prabowo  S,  2007 ,    Pengaruh  Green  Tea  terhadap Kadar Malondialdehida dan Aktivitas Superoksida pada  Artritis  Ajuvan  (Model  Hewan  untuk Rheumatoid Artritis) Prosiding Seminar Nasional Tanaman Obat dan Obat Tradisional, Surakarta 10  –  11  Juli  2007.  .Balitbang
Pribadi  F.W,  Ernawati  DA,  2010, Efek  Catechin Terhadap  Kadar  Asam  Urat,  C–Reactive Protein(Crp)  Dan  Malondialdehid  Darah  Tikus Putih (Rattus Norvegicus) Hiperurisemia, Mandala of   Health,4,pp.  39-46,
Samah et al , 2012, Phenolic Compounds and Antioxidant Activity  of   White,  Red,  Black  Grape  Skin  and White  Grape  Seeds, Life  Science  Journal,9,pp. 3464-3474