Aning  Yulianingtyas,  Bambang  Kusmartono:  Optimasi  volume  pelarut  dan  waktu  maserasi  pengambilan flavonoid daun belimbing wuluh ( averrhoa bilimbi l. )

## OPTIMASI VOLUME PELARUT DAN WAKTU MASERASI PENGAMBILAN FLAVONOID DAUN BELIMBING WULUH
( AVERRHOA BILIMBI L. )

## Aning Yulianingtyas, Bambang Kusmartono
Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknologi Industri, IST AKPRIND Jalan Kalisahak No.28, Komplek Balapan, Yogyakarta aningyulia@gmail.com;  Bambang_kusmartono@yahoo.co.id

## Abstrak
Belimbing  wuluh  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  mengandung  flavonoid  dan  banyak dijumpai  di  Indonesia  namun  pemanfaatannya  belum  optimal.Flavonoid  merupakan  salah  satu golongan fenol alam terbesar yang fungsinya  tidak hanyasebagai antioksidan namun juga dapat melindungi  struktur  sel,  meningkatkan  efektivitas  vitamin  C,  anti-inflamasi,  mencegah  keropos tulang, antidiare, antidiabetes, dan antibiotik.Beberapa penelitian sebelumnya masih menekankan pada uji efektivitas flavonoid sebagai obat tradisional, namun belum ada penelitian yang mengkaji kondisi  optimal  pengambilan  flavonoid  dari  daun  belimbing  wuluh.  Penelitian  ini  bertujuan mengetahui kondisi optimalyang meliputi volume pelarut dan waktu maserasi, sehingga diperoleh flavonoid  terekstrak  yang  paling  optimal  dan  diharapkan  selanjutnya  dapat  meningkatkan efektivitasnya  sebagai  bahan  pembuatan  obat  tradisional.  Penelitian  dimulai  dengan  preparasi bahan. Kemudian sebanyak 10 gram bahan dimaserasi menggunakan pelarut etanol 96% dengan volume  pelarut  dan  waktu  maserasi  yang  divariasikan.  Sebelum  waktu  maserasi  mulai  dihitung, dilakukan  pengadukan  dengan  pengaduk  merkuri  berkecepatan  200  rpm  selama  1  jam.  Hasil maserasi  disaring  menggunakan  corong  buchner,  dipekatkan  menggunakan  rotary  evaporator. Ekstrak  kental  yang  diperoleh  dianalisis  secara  kuantitatif  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis. Kondisi optimal dari penelitian ini tercapai saat digunakan volume pelarut 250 mL yang dimaserasi selama 48 jam dimana diperoleh berat flavonoid terekstrak sebanyak 72,31 mg.
Kata kunci : flavonoid, daun belimbing wuluh, volume pelarut, waktu maserasi

## OPTIMIZATION OF SOLVENT VOLUME AND MACERATION TIME ON EXTRACTION OF FLAVONOIDS FROM AVERRHOA BILIMBI LEAVES

## Abstract
Bilimbi  is  one  of  the  plants  that  contains  flavonoids  and  it  can  be  found  in  Indonesia,  however  its utilization is not optimal yet. Flavanoids are known as one of the largest natural phenols which has functions not only as an antioxidant but also can protect the cell structure, improve the effectiveness of vitamin C, anti- inflammatory,  preventing  bone  loss,  antidiarrheal,  antidiabetic  and  antibiotics.  Some  previous  research  is focused on testing the effectiveness of flavonoids as traditional medicine, but there is no research evaluating the  optimal  conditions  of  flavonoids  extraction  from  bilimbi’s  leaves.  This  research  aims  to  determine  the optimal  conditions  which  include  the  volume  of  solvent  and  maceration  time,  in  order  to  obtain  the  most optimal  of  flavonoids  extracted  and  are  expected  can  improve  its  effectiveness  as  materials  for  traditional medicine  in  the  future.  The  research  begin  with  the  preparation  of  materials.  Then,  10  grams  of  bilimbi’s leaves  were  macerated  using  ethanol  96%  by  volume  solvent  and  maceration  time  varied.  Before  the maceration time is calculated, stirring with a mercury stirrer speed of 200 rpm for 1 hour. Liquid extract of maceration is filtered by using a buchner funnel, then concentrated by using rotary evaporator. Condensed extract was analyzed quantitatively by using UV-Vis spectrophotometer. Optimal conditions of this research was  obtained  when  using  volume  of  solvent  250  mL  and  macerated  for  48  hours  which  72.31  mg  of flavonoids extracted as its result.
Keywords : flavonoids, bilimbi’s leaves, volume of solvent, maceration time

## PENDAHULUAN
Flavonoid  adalah  salah  satu  golongan  fenol alam  terbesar,  karena  mempunyai  sejumlah  gugus hidroksil  yang  tak  tersulih,  atau  suatu  gula, flavonoid merupakan senyawa polar, maka umumnya flavonoid larut dalam pelarut polar seperti etanol  (EtOH),  metanol  (MeOH),  butanol  (BuOH), aseton, dimetil sulfoksida (DMSO), dimetil formamida  (DMF),  air  dan  lain-lain  (Markham, 1988).  Flavonoid  merupakan  salah  satu  kelompok senyawa fenolik yang banyak terdapat pada jaringan tanaman.Flavonoid  sebenarnya  terdapat  pada  semua bagian  tumbuhan  termasuk  daun,  akar,  kayu,  kulit, tepung  sari,  nektar,  bunga,  daun  buni  dan  biji. Penyebaran jenis flavonoid pada golongan tumbuhan yang  terbesar,  yaitu  pada  angiospermae.Berbagai jenis senyawa, kandungan dan aktivitas antioksidatif flavonoid  sebagai  salah  satu  kelompok  antioksidan alami  yang  terdapat  pada  sereal,  sayur-sayuran  dan buah,  telah  banyak  dipublikasikan.  Beberapa penelitian sebelumnya menyebutkan bahwa flavonoid tidak hanya berfungsi sebagai antioksidan namun  juga  memiliki  manfaatmelindungi  struktur sel,  meningkatkan  efektivitas  vitamin  C,  anti- inflamasi,  mencegah  keropos  tulang,  antidiare, antidiabetes bahkan antibiotik.
Belimbing  wuluh  yang  juga  dikenal  dengan nama  lain  belimbing  asem,  limeng,  calingcing, bainang (Mus, 2012) merupakan salah satu tanaman yang  banyak  dijumpai  di  Indonesia  namun pemanfaatannya  belum  optimal.  Tanaman  ini tumbuh  di  tempat  yang  terkena  sinar  matahari langsung  dan  cukup  lembab,  dengan  ketinggian hingaa  500  meter  di  atas  permukaan  laut. Perkembangbiakannya  dapat  dengan  menyemai  biji atau  pencangkokkan  (Yuniarti,  2008).  Ekstrak  daun belimbing  wuluh  mengandung  senyawa  fitol (senyawa  diterpen  alkohol  asiklik),  dietil-ftalat, flavonoid,  tanin,  sulfur,  asam  format,  asam  sitrat, kalium  sitrat,  saponin,  kalium  oksalat.  Zakaria  et al.(2007) dalam jurnal Tropical Medicine menyebutkan  bahwa  flavonoid  dalam  ekstrak  daun belimbing  wuluh  adalah  luteolin  dan  apigenin (Kresnanugraha, 2012). Tanaman ini secara tradisional  dipercaya  dapat  mengobati  hipertensi, diabetes  melitus,  demam,  radang  poros  usus,  batuk, encok, dan  menghilangkan jerawat (Thomas, 1989). Dalam  penelitian  Kusumadewi  (2008) disebutkan bahwa  kandungan  flavonoid  dalam  ekstrak  daun belimbing  wuluh  terbukti  dapat  menurunkankadar gula  darah  sebesar  (24,71 ± 2,52)%  dan  (36,65 ± 2,99)%.  Beberapa  penelitian  sebelumnya  masih menekankan  pada  uji  efektivitas  flavonoid  daun belimbing  wuluh  sebagai  obat  tradisional,  namun belum ada penelitian yang mengkaji kondisi optimal pengambilan  flavonoid  dari  belimbing  wuluh, khususnya bagian daun. Padahal penelitian mengenai  kondisi  optimal  pengambilan  flavonoid
cukup  penting  mengingat  hasil  dari  penelitian tersebut  dapat  digunakan  untuk  meningkatkan efektivitasnya  sebagai  bahan  pembuatan  obat tradisional apalagi obattradisional kini terus dikembangkan karena dinilai lebih aman dibandingkan  obat  kimia  sintetis  yang  berpotensi menimbulkan  lebih  banyak  efek  samping(Oktora, 2006).  Berdasarkan  uraian  di  atas,  tujuanpenelitian ini  ialah  mengetahui  volume  pelarut  dan  waktu maserasi  yang  paling  optimaldalam  pengambilan flavonoid  dari  daun  belimbing  wuluh  sehingga diperoleh  berat  flavonoid  terekstrak  yang  paling optimal.Adapun  batasan  masalah  dalam  penelitian iniyaituhanya  menggunakan  dua  varibel  meliputi volume  pelarut  dan  waktu  maserasi.  Kemudian, analisis  kuantitatif  hasil  penelitian  berupa  berat flavonoid keseluruhan (total) yang terkandung dalam bahan  yang  berhasil  terekstrak,  bukan  berupa golongan flavonoid tertentu.
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  maserasi.  Maserasi  adalah teknik  yang  digunakan  untuk  menarik  atau mengambil  senyawa  yang  diinginkan  dari  suatu larutan  atau  padatan    dengan  teknik  perendaman terhadap  bahan  yang  akan  diekstraksi.  Sampel  yang telah  dihaluskan  direndam  dalam  suatu  pelarut organik  selama  beberapa  waktu  (Ibrahim  dan Marham,  2013).  Menurut  Koirewoa  (2012),  proses ini  sangat  menguntungkan  dalam  isolasi  senyawa bahan  alam  karena  selain  murah  dan  mudah dilakukan,  dengan  perendaman  sampel  tumbuhan akan  terjadi  pemecahan  dinding  dan  membran  sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel,  sehingga  metabolit  sekunder  yang  ada  dalam sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut  organik  dan ekstraksi  senyawa  akan  sempurna  karena  dapat diatur  lama  perendaman  yang  dilakukan.  Pelarut yang  mengalir  ke  dalam  sel  dapat  menyebabkan protoplasma membengkak dan bahan kandungan sel akanlarut  sesuai  dengan  kelarutannya.  Pemilihan pelarut  untuk  proses  maserasi  akan  memberikan efektivitas  yang  tinggi  dengan  memperhatikan kelarutan  senyawa  bahan  alam  dalam  pelarut tersebut.
Analisis  kuantitatif  flavonoid  menggunakan spektrofotometer UV-Vis  yaitu  alat  yang digunakan untuk  mengukur  transmitansi,  reflektansi  dan absorbsi  dari  cuplikan  sebagai  fungsi  dari  panjang gelombang  (Yanto,  2013).  Spektroskopi  serapan ultraviolet  dan  serapan  tampak  barangkali  merupa- kan  cara  tunggal  yang  paling  berguna  untuk menganalisis  struktur  flavonoid.  Keuntungan  utama cara  ini  ialah  sangat  sedikitnya  jumlah  flavonoid yang  diperlukan  untuk  analisis  lengkap.  Flavonoid yang  sudah  dikenal  dianalisis  secara  kuantitatif dengan  menggunakan  persamaan  Beer-Lambert (Markham,  1988).  Pada  prakteknya  persamaan  ini tidaklah ideal (biasanya tidak melalui titik 0,0) tetapi ada  koreksinya  berupa  intersep  sehingga  secara
Aning  Yulianingtyas,  Bambang  Kusmartono:  Optimasi  volume  pelarut  dan  waktu  maserasi  pengambilan flavonoid daun belimbing wuluh ( averrhoa bilimbi l. )
umum  mengikuti  persamaan  linier  y=ax+b,  dalam hal ini y adalah absorbansi dan x adalah konsentrasi serta  a  sebagai  slope  (tg  α)  adalah Ʃ b  atau  ab, sedangkan b adalah intersep, dengan membuat kurva baku  maka  konsentrasi  dan  nilai  b  dapat  diketahui. Kurva  baku  dibuat  dengan  cara mengukur absorbansi beberapa seri larutan standar. Selanjutnya dengan  cara  intrapolari  terhadap  kurva  baku,  maka dari  pengukuran  absorbansi  dapat  ditentukan konsentrasi.  Harga  a  juga  dapat  ditentukan  dengan cara  mengukur  besarnya  sudut  α.  Persamaan  kurva baku  dapat  ditentukan  dengan  cara  manual  maupun dengan  cara  program excel, sehingga  untuk menghitung  konsentrasi  digunakan  persamaan  linier yang  didapatkan  dari  entri  data  absorbansi  dan konsentrasi (Sitorus, 2009).

## METODE PENELITIAN
Bahan  penelitian. Bahan  yang  digunakan  adalah daun  belimbing  wuluh,  etanol  96%,  aquadest, larutan standar quercetin dan larutan AlCl 3 5%.
Alat  penelitian. Alat  yang  digunakan  adalah timbangan  digital,  blender,  ayakan  30  mess, erlenmeyer,  pengaduk  merkuri, buchner  funnel, rotary  evaporator ,  gelas  ukur, beaker  glass ,  labu takar,  gelas  arloji,  corong  kaca,  pipet  tetes,  batang pengaduk dan spektrofotometer UV-Vis.
Prosedur  penelitian. Tahapan  penelitian  ini  adalah sebagai berikut: (1) Preparasi bahan yaitu mengeringkan  dan  menghaluskan  daun  belimbing wuluh,  (2)  Analisis  bahan  baku  meliputi  analisis kadar  air  dan  analisis  kuantitatif  flavonoid  dalam bahan  baku  awal,  (3)  Pembuatan  sampel  penelitian dan  (4)  Analisis  kuantitatif  flavonoid  hasil penelitian.  Pada  preparasi  bahan,  daun  belimbing wuluh  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan dan  tidak  terkena  cahaya  matahari  secara  langsung selama  ±  5  hari.  Pengeringan  ini  bertujuan mencegah kerja enzim dari tumbuhan tersebut. Daun yang  telah  kering  dihaluskan  dengan  blender, kemudian  diayak  menggunakan  ayakan  30  mess agar  diperoleh  derajat  kehalusan  yang  sama sehingga ekstraksi dapat berjalan lebih optimal.
Tahap  selanjutya  adalah  analisis  bahan  baku. Analisis kadar air dilakukan dengan cara menimbang  bahan  yang  telah  dihaluskan  sebanyak 1-2  gram  dalam  botol  timbang  yang  telah  diketahui beratnya.  Kemudian  dikeringkan  dalam  oven  pada suhu  100-105 0 C  selama  3-5  jam  tergantung bahannya.  Kemudian  didinginkn  dalam  eksikator dan ditimbang. Panaskan lagi dalam oven selama 30 menit,  dinginkan  dalam  eksikator  dan  ditimbang, perlakuan  ini  diulang  sampai  tercapai  berat  konstan (selisih  penimbangan  berturut-turut  kurang  dari  0,2 mg).  Pengurangan  berat  merupakan  banyaknya  air dalam bahan pengulangan dilakukan hingga
diperoleh berat konstan(Sudarmadji, 1997). Sedangkan  analisis  kuantitatif  flavonoid  dalam bahan  baku  menurut  Worotikan dilakukan  dengan menimbang  2  gram  serbuk  daun  belimbing  wuluh, larutkan  dalam  50  mL  aquadest  lalu  saring menggunakan buchner  funnel hingga  diperoleh larutan jenih. Ambil 1 mL larutan jernih tersebut dan tambahkan 3 mL larutan AlCl 3 5%. Tambahkan pula aquadest hingga volume 10 mL. Ukur absorbansinya pada  panjang  gelombang  420  nm  (Suryanto,  2007). Kemudian  berat  flavonoid  dalam  bahan  dapat dihitung  menggunakan  persamaan  yang  sama dengan analisis kuantitatif hasil penelitian.
Tahap  pembuatan  sampel  yaitu  ekstraksi dengan  metode  maserasi  atau  perendaman,  dimana 10  gram  serbuk  dimaserasi  menggunakan  larutan etanol  96%  sebanyak  P  ml  selama  T  jam  dalam erlenmeyer.  P  ml  mewakili  variabel  volume  pelarut (mL)  sedangkan  T  jam  mewakili  variabel  waktu maserasi. Penelitian dilakukan menggunakan metode optimasi  pada  varibel  pertama  yaitu  volume  pelarut kemudian  hasil  terbaik  dari  variabel  pertama digunakan untuk menentukan optimasi pada variabel kedua  yaitu  waktu  maserasi.  Sebelum  waktu maserasi  mulai  dihitung,  dilakukan  pengadukan menggunakan  pengaduk  merkuri  berkecepatan  200 rpm  selama  1  jam.  Hasil  maserasi  disaring menggunakan buchner  funnel hingga  diperoleh ekstrak  cair  yang  bebas  dari  ampas  daun  belimbing wuluh.Ekstrak  cair  tersebut  dipekatkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  ±80 0 C  selama  ±1,5 jam  sehingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Ekstrak kental yang diperoleh kemudian ditimbang
Untuk tahap analisis kuantitatif flavonoid hasil penelitian,  langkah  awal  yaitu  pembuatan  larutan standar  flavonoid  quercetin  sebagai  kurva  standar, yaitu  menimbang  15  mg  quercetin  diencerkan menjadi  100  ml,  lalu  dibuat  larutan  dalam  beberapa konsentrasi  yaitu  0;  0,015;  0,030;  0,045;  0,060; 0,075  dan  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang  420  nm.  Hasil  dari  pengukuran absorbansi  inilah  yang  kemudian  digunakan  untuk membuat kurva standar flavonoid.
Analisis  hasil  dilakukan  dengan  menimbang  5 gr  sampel,  larutkan  dalam  100  ml  aquadest  lalu saringmenggunakan buchner funnel hingga diperoleh larutan jenih. Ambil 1 mL larutan jernih tersebut dan tambahkan  3  mL  larutan  AlCl 3 5%  dan  aquadest hingga  volume  10  mL.  Ukur  absorbansi  masing- masing  sampel  pada  panjang  gelombang  420  nm. Kadar  flavonoid  bisa  dihitung  dengan  persamaan berikut:
Dimana  x  merupakan  kadar  flavonoid,  y  adalah besaran  absorbansi,  a  dan  b  merupakan  persamaan yang diperoleh dari perhitungan kurva standar.Berat flavonoid terekstrak dapat dihitung dengan persamaan berikut:
Variabel  penelitian .  Penelitian  ini  meliputi  dua variabel yaitu variabel volume pelarut dimana proses maserasi  dilakukan  dengan  variasi  volume  pelarut yaitu PI (100 mL), PII (150 mL), PIII (200 mL), PIV (250 mL), PV (300 mL) dan variabel waktu maserasi dimana  proses  maserasi  dilakukan  dengan  variasi waktu  maserasi  yaitu  TI  (6  jam),  TII  (18  jam), TIII(24  jam),  TIV  (30  jam),  TV  (48  jam),  TVI  (66 jam),TVII(78 jam).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisis  bahan  baku .  Bahan  baku  berupa  serbuk daun  belimbing  wuluh  dilakukan  analisis  kadar  air dan  berat  flavonoid  terekstrak.  Hasil  analisis menunjukkan bahwa daun belimbing wuluh mempunyai  kadar  air  sebesar  7,9%.  Hal  ini memenuhi  persyaratan  kadar  air  simplisia  kering yaitu  maksimal  10%.  Sedangkan  untuk  berat flavonoid terekstrak, berdasarkan analisis kuantitatif menggunakan  Spektrofotometer  UV-Vis  diperoleh berat  flavonoid  dalam  bahan  baku  sebanyak  80  mg tiap 10 g serbuk daun belimbing wuluh
Kurva  standar  flavonoid. Larutan  standar  yang digunakan  adalah  quercetin.Pembuatan  sampel untuk  perhitungan  kurva  standar  yaitu  dengan menimbang quercetin kemudian diencerkan menggunakan  aquadest.Larutan  sampel  tersebut dibuat dalam beberapa konsentrasi yang berbeda.
Tabel 1. Data absorbansi sampel perhitungan kurva standar Absorbansi Konsentrasi S 0,0 0,00 0,00 S 0,1 0,06 0,015 S 0,2 0,115 0,03 S 0,3 0,17 0,045 S 0,4 0,218 0,06 S 0,5 0,27 0,075
Gambar 1 . Kurva standar flavonoid
Pengaruh volume pelarut terhadap berat flavonoid terekstrak. Untuk  mempelajari pengaruh variabel volume pelarut, sebanyak 10 gr bahan baku dimaserasi selama 24 jam dalam pelarut etanol 96% dengan  volume  pelarut  yang  divariasikan.  Setelah dilakukan  evaporasi  dan  dianalisis  menggunakan Spektofotometer UV-Vis maka dapat diketahui volume  pelarut  mana  yang  menghasilkan  ekstrak kental  dengan  flavonoid  terekstrak  yang  terbesar. Berdasarkan  analisis  kuantitatif  flavonoid  dari ekstrak kental diperoleh hasil sebagai berikut :
Tabel 2. Berat flavonoid terekstrak pada berbagai volume pelarut
Dari  Tabel  2,  pengaruh  volume  pelarut terhadap berat flavonoid terekstrak dapat membentuk  kurva  hubungan  antara  volume  pelarut dan  flavonoid  terekstrak.  Kurva  tersebut  dapat dilihat pada Gambar 2.
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0 0.015 0.03 0.045 0.06 0.075
A b sor b an si Konsentrasi
Volume Pelarut (mL) Kadar Ekstrak Kental (%) Berat Ekstrak Kental (mg) Berat Flavonoid Terekstrak (mg) PI 100 0,745 4800 35,76 PII 150 0,7675 6400 49,12 PIII 200 0.915 6130 56,09 PIV 250 0,9328 6210 57,93 PV 300 1,1263 4380 49,332
Gambar 2 . Pengaruh volume pelarut terhadap flavonoid terekstrak
Dari Tabel 2 dan Gambar 2 dapat dilihat bahwa semakin  banyak  volume  pelarut  yang  digunakan maka  berat  flavonoid  terekstrak  semakin  banyak. Hal  ini  disebabkan  semakin  banyak  pelarut  maka pemecahan  dinding  dan  membran  sel  akibat perbedaan  tekanan  antara  di  dalam  dan  di  luar  sel berjalan  lebih  optimal  sehingga  flavonoid  di sitoplasma akan semakin banyak yang terlarut dalam pelarut (Koirewoa, 2012). Namun, berdasarkan hasil penelitian  dapat  dilihat  bahwa  terjadi  penurunan berat flavonoid terekstrak pada penambahan volume pelarut  lebih  dari  250  mL  karena  jumlah  volume yang  terlalu  besar  menyebabkan  turbulensi  yang terjadi  semakin  kecil  sehingga  mengurangi  jumlah flavonoid  yang  terekstrak.  Titik  optimal  tercapai pada volume pelarut 250 mL, sehingga penambahan jumlah  pelarut  lebih  dari  250  mL  tidak  lagi  efektif untuk meningkatkan berat flavonoid terekstrak.
Flavonoid  terekstrak  paling  optimal  dalam penelitian  ini  diperoleh  menggunakan  volume pelarut  250  ml  atau  perbandingan  bahan-pelarut sebesar 1:25. Peningkatan  hasil flavonoid terekstrak yang  dipengaruhi  perbandingan  bahan-pelarut  juga dilaporkan  dalam  penelitian  Liu  et  al.(2014) menggunakan  metode Microwave-Assisted  Extrac- tion (MAE) dimana dari perbandingan bahan-pelarut 1:8  hingga  1:16  diperoleh  hasil  terbaik  pada perbandingan  1:12.  Dalam  penelitian  tersebut penambahan  jumlah  pelarut  setelah  titik  optimal tercapai,  tidak  lagi  mampu  meningkatkan  flavonoid terekstrak  secara  signifikan.  Nilai  perbandingan bahan-pelarut  yang  tepat  dapat  dipilih  berdasarkan peraturan  dimana  nilai  tidak  boleh  terlalu  kecil sehingga  senyawa  bioaktif  tidak  dapat  sepenuhnya diekstraksi  atau  terlalu  tinggi  yang  menyebabkan biaya  untuk  pemurnian  zat  terlarut  dari  pelarut terlalu  mahal  (Fengwei  Ma  et  al.,  2014). Berdasarkan  penelitian  Fengwei  Ma  et  al.(2014) penambahan  jumlah  pelarut  mengakibatkan  jumlah flavonoid  terekstrak  naik  dari  ±40  mg/g  menjadi 70mg/g,  penjelasan  dari  kemungkinan  yang  terjadi
adalah  bahwa  peningkatan  perbandingan  bahan- pelarut  dapat  menambah  difusivitas  dari  pelarut  ke dalam  sel  dan  meningkatkan  desorpsi  senyawa flavonoid dalam sel.
Pengaruh  waktu  maserasi  terhadap  berat flavonoid  terekstrak .  Dari  Gambar  2  dapat disimpulkan  bahwa  volume  pelarut  sebanyak  250 mL  memberikan  hasil  flavonoid  terekstrak  paling banyak,  sehingga  untuk  mempelajari  pengaruh waktu  maserasi  maka  sebanyak  10  gr  bahan  baku dimaserasi  dalam  250  mL  pelarut  etanol  96% dengan  waktu  maserasi  yang  divariasikan.  Setelah dilakukan  evaporasi  dan  diperoleh  ekstrak  kental etanol  yang  mengandung  flavonoid  dilakukan kembali  analisis  kuantitatif  flavonoid  sehingga diperoleh hasil sebagai berikut:
Tabel 3. Berat flavonoid terekstrak pada berbagai
waktu Waktu Maserasi (jam) Kadar Ekstrak Kental (%) Berat Ekstrak Kental (mg) Berat Flavonoid Terekstrak (mg) TI 6 1,0025 3350 33,584 TII 18 0,8025 6990 56,095 TIII 24 0,9328 6210 57,93 TIV 30 0,85 7140 60,69 TV 48 0,8883 8140 72,31 TVI 66 0,6788 10160 68,97 TVII 78 0,996 6020 59,96
Dari  Tabel  3,  pengaruh  waktu  maserasi terhadap berat flavonoid terekstrak dapat membentuk  kurva  hubungan  antara  waktu  maserasi dan berat flavonoid terekstrak. Kurva tersebut dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Pengaruh waktu maserasi terhadap flavonoid terekstrak
Dari Tabel 3 dan Gambar 3 dapat dilihat bahwa semakin lama  waktu  maserasi  maka berat  flavonoid
y = -0.0014x 2 + 0.6324x - 13.781 20 30 40 50 60 50 100 150 200 250 300 350 Fl av o n o id Ter e kstr ak (m g) Volume Pelarut (mL)
y = -0.0176x 2 + 1.8271x + 24.69 20 30 40 50 60 70 80 0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 78 Fl av o n o id Ter e kstr ak (m g)
terekstrak  semakin  banyak.  Hal  ini  disebabkan waktu  kontak  antara  bahan  dan  pelarut  menjadi bertambah lama sehingga kemampuan pelarut untuk mengambil  flavonoid dalam  bahan  semakin optimal pula (Koirewoa, 2012). Berdasarkan  hasil penelitian tersebut  titik  optimal  tercapai  pada  48  jam,  dimana laju  difusi  flavonoid  dari  permukaan  padatan  ke pelarut  sama  besarnya  dengan  laju  difusi  flavonoid dari  pelarut  ke  permukaan  padatan  sehingga konsentrasi  flavonoid  dalam  pelarut  sudah  berada dalam  kesetimbangan.  Hal  ini  menyebabkan penambahan waktu maserasi diatas 48 jam tidak lagi efektif untuk meningkatkan berat flavonoid terekstrak, namun yang terjadi justru berat flavonoid terekstrak  cenderung  menurun.  Hasil  flavonoid terekstrak paling optimal yaitu 72,31 mg/10 g bahan baku lebih banyak dibanding-kan flavonoid terekstrak  dari  buah  belimbing  wuluh  berdasarkan penelitian  Muhamad  et  al.(2014)  dimana  diperoleh 0,3 mg/g bahan baku dengan waktu maserasi selama 60  menit,  maserasi  yang  dilakukan  lebih  dari  60 menit  tidak  menunjukkan  perbaikan  karena  adanya degradasi  flavonoid  dari  paparan  panas,  cahaya maupun oksigen. Perbedaan hasil flavonoid terekstrak  tersebut  dipengaruhi  beberapa  perlakuan berbeda yang diterapkan pada penelitian sebelumnya antara lain bahan baku yang digunakan berupa buah belimbing  sehingga  kandu-ngan  flavonoid  dalam bahan  baku  awal  berbeda,  dilakukan  pengadukan secara kontinu sepanjang waktu maserasi berlangsung  yang  memungkin  interaksi  antara pelarut dan zat terlarut berjalan lebih optimal dalam waktu relatif singkat, pelarut yang digunakan adalah metanol  50%,  dan  maserasi  berlangsung  pada  suhu 50 o C dimana dari hasil penelitian tersebut flavonoid terekstrak  meningkat  sebanyak  45%  saat  suhu dinaikkan  dari  30  -  70 o C.  Pengaruh  penambahan waktu  maserasi  juga  disebutkan  dalam  penelitian Liu  et  al.(2014)  dimana  yield  flavonoid  terekstrak naik dari 2,5 mg/g menjadi 3,5 mg/g.

## SIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa volume  pelarut  danwaktu  maserasi  dapat  mempe- ngaruhi  berat  flavonoid  terekstrak  dalam  daun belimbing  wuluh.Semakin  banyak  volume  pelarut yang  ditambahkan  dan  semakin  lama  waktu  mase- rasi  yang dilakukan  maka  flavonoid terekstrak  yang didapatkan  semakin  banyak,  akan  tetapi  setelah tercapai  kondisi  optimum  hasil  flavonoid  terekstrak cenderung  menurun.  Kondisi  optimal  proses  pe- ngambilan  flavonoid  dari  daun  belimbing  wuluh (Averrhoa bilimbi L.) dicapai saat digunakan volume pelarut  250  mL  yang  dimaserasi  selama  48  jam sehingga  diperoleh  flavonoid  terekstrak  sebanyak 72,31 mg.

## DAFTAR PUSTAKA
Fengwei Ma, Yang Zhao, Xiaojian Gong, Yu Xie, & Xin  Zhou,  2014.  Optimization  of  Quercitrin and  Total  Flavonoids  Extraction  from  Herba Polygoni  Capitati  by  Response  Surface Methodology.  Pharmacogn  Mag.  10(Suppl  1): S57–S64.
Ibrahim,  S.  dan  Marham,  S.,  2013,“ Teknik Laboratorium  Kimia  Organik” ,  Graha  Ilmu, Yogyakarta.
Koirewoa,  Y.  A.,  Fatimawali,  W.  I.  Wiyono,  2012.
Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid dalam Daun Beluntas (Pluchea indica L.). Laporan  Penelitian .  FMIPA  UNSRAT. Manado.
Kresnanugraha,  Y.,  2012.  Uji  Penghambatan Aktivitas  Enzim  Xantin  Oksidase  dari  Ekstrak Daun  Belimbing  Wuluh (Averrhoa  bilimbi  L.) dan Identifikasi Golongan Senyawa dari Fraksi Aktif. Skripsi .  FMIPA  Universitas  Indonesia. Jakarta.
Kusumadewi,  G.  C.,  Uji  Efek  Penurunan  Kadar Glukosa Darah Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh  (Averrhoa  bilimbi  L.)  pada  Kelinci Jantan yang Dibebani Glukosa. Skripsi .Fakultas
Farmasi. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Liu,  Xue-gui.,  Fu-yu  Jiang,  Pin-yi  Gao, Mei  Jin,  Di Yang, Zhong-feng  Nian, and  Zhen-xue  Zhang, 2014.  Optimization  of  Extraction  Conditions for  Flavonoids  of Physalis  alkekengi var. franchetii Stems by Response Surface Methodology
and
Inhibition of
Acetylcholinesterase  Activity.  Journal  of  The Mexican  Chemical  Society  vol  59  no.1. Mexico Markham,  K.  R.,  1988,  “ Cara  Mengidentifikasi Flavonoid” , ITB, Bandung.
Muhamad,  N.,  S.  A.  Muhmed,  M.  M.  Yusoff,  J. Gimbun,  2014.  Influence  of  Solvent  Polarity and  Conditions  on  Extraction  of  Antioxidant, Flavonoids and Phenolic Content from Averrhoa bilimbi. Journal of Food Science and Engineering 4, 255-260.
Mus,  C.,  2012.Belimbing  Wuluh .  www.plantamor. com. Diakses tanggal 23 September 2014.
Oktora,  L.,  2006.  Pemanfaatan  Obat  Tradisional dengan Pertimbangan
Manfaat dan Keamanannya. Majalah Ilmu Kefarmasian. Vol III, No 1 Fak.Farmasi Jember. Surabaya.
Sitorus,  M.,  2009,  “ Spektroskopi  Elusidasi  Struktur Molekul Organik” , Graha Ilmu, Medan. Sudarmadji,  S.,  1997,“ Prosedur  Analisa  untuk Bahan  Makanan  dan  Pertanian” ,  Liberty,
Yogyakarta.
Aning  Yulianingtyas,  Bambang  Kusmartono:  Optimasi  volume  pelarut  dan  waktu  maserasi  pengambilan flavonoid daun belimbing wuluh ( averrhoa bilimbi l. )
Suryanto,  E.,  2007. Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Flavanoid dari Buah Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC) pada Ikan Mas ( Cyperinus carpio L). Jurnal Sains. UNSRAT. Manado.
Thomas, A. N. S., 1989,“ Tanaman Obat
Tradisional”, Kanisius, Yogyakarta. Yanto,  A.,  2013.Makalah  Spektrofotometri  Uv-Vis, Infra Merah Dan Densitomete . http://andriyanto507.blogspot.com.
Diakses tanggal  24 September 2014.
Yuniarti,  T.,  2008,“ Ensiklopedia  Tanaman  Obat Tradisional”, Medpress, Yogyakarta.