POTENSI ANTIBAKTERI EKSTRAK DAGING BUAH KELUBI (Eleiodoxa conferta) BANGKA BELITUNG MENGGUNAKAN MICROWAVE-ASSISTED EXTRACTION (MAE)
Antibacterial Potential of Kelubi Fruit Meat Extract (Eleiodoxa conferta) Bangka Belitung Using Microwave-Assisted Extraction (MAE)
Surtina, Ratih Puspita Sari, Zulita, Rani, Occa Roanisca , Robby Gus Mahardika*
Department of Chemistry, Faculty of Engineering, Universitas Bangka Belitung Kampus Terpadu UBB, Balunijuk, Merawang, Kabupaten Bangka, Kepulauan Bangka Belitung
*Corresponding author, e-mail: robby@ubb.ac.id
Received: Jul. 2019 Published: Jan. 2020

## ABSTRACT
Antibacterial tests were carried out using ethanol extract of kelubi meat ( Eleidoxa conferta ), extraction using the Microwave-Assisted Extraction method with  a ratio  of 2:  20 for 30 minutes at  60 °C. Antibacterial tests using diffusion methods with concentrations of 20%, 40%, 60%, 80%, and 100%; positive control of 0.005% amoxillin and DMSO negative control. Antibacterial test results showed that the inhibition zone of ethanol extract in E. coli bacteria with a concentration of 20% was in the moderate category, for a concentration of 40% including the strong category while the concentration of 60%, 80% and 100% was very strong. The inhibition zone of ethanol extract for the S. aureus bacterium with a concentration of 20% is included in the strong category while the concentration of  40%,  60%,  80%,  and  100%  is  categorized  as  very  strong.  From  these  results  it  can  be  concluded  that  the inhibitory zone in Stapylococcus aureus bacteria is greater than that of E. coli bacteria.
Keywords: Kelubi, Microwave-Assisted Extraction, Extracts, antibacterials.

## PENDAHULUAN
Di  Indonesia  banyak  terdapat  tumbuhan yang  memiliki  buah  yang  rasanya  masam sehingga  dikenal  dengan  nama  asam  salah satunya  yaitu  kelubi.  Biasanya  buah  kelubi  bisa dikonsumsi tanpa diolah sebagai bahan makanan seperti pada makanan khas Bangka yaitu lempah kuning. Kelubi bisa memberikan rasa asam yang merupakan ciri khas dari makanan tersebut serta kelubi  juga  banyak  diolah  menjadi  manisan. Kelubi  merupakan  sejenis  salak  hutan  yang termasuk  kedalam  Genus Eleiodoxa dan  famili Arecaceae dengan  nama  ilmiah  ( Eleiodoxa conferta ) (Lim, 2012).
Kelubi  atau  asam  paya  banyak  tumbuh dilingkungan  lembab  hutan  berpayau  di  tepi sungai  atau  rawa.  Kelubi  banyak  ditemukan  di wilayah  Malaysia  dan  Indonesia  (khususnya Sumatera)  (Lim,  2012).  Kelubi  merupakan tanaman yang mirip dengan tanaman nipah ( Nypa fruticans )  yang  dapat  mencapai  ketinggian maksimal  hingga  5  meter.  Ciri  daunnya mempunyai  warna  hijau  lurus  dengan  susunan
saling  berhadapan  dengan  panjang  sekitar  1,5  m dan lebar sekitar 3-5 cm. Pelepah daun keluar dari batang  perdu  dan  dapat  mencapai  3-4  meter. Pelepah  daun  ditutupi  oleh  duri  dengan  panjang antara  5-7  meter.  Ppelepah  akan  mati  setelah ketiak  pelepah  mengeluarkan  bunga  dan  daun. Akar  tanaman  ini  berupa  akar  serabut,  dan  antar batang tumbuh rapat (Mohamad dkk., 2018).
Buah  kelubi  ( Eleiodoxa  conferta )  telah dilaporkan mengandung 82,2 % air, 0,8 % protein, 3,1% lemak, 11,8% karbohidrat, 11,8% serat, dan kadar  abu  0,7  %.  Selain  itu,  buah  kelubi  juga mengandung  mineral  dan  vitamin  seperti  K  227 mg, Ca 26 mg, Mg 22 mg, P 10 mg,  Fe 5,5 mg, Zn 8,9 ppm, Mn 5 ppm, Cu 2,9 ppm, dan vitamin C  0,6  mg  (Lim,  2012).  Buah  kelubi  ( Eleiodoxa conferta )  ini  juga  dilaporkan  mengandung antosianin  dalam  ekstrak  etanol  dan  digunakan sebagai dye-sensitized  solar  cells  ( DSSCs ) dengan efisiensi 1,00 % (Jaafar dkk., 2018).
Uji  fitokimia  ekstrak  kasar  metanol  dari Eleiodoxa  conferta dilaporkan  mengandung flavonoid, fenolik, dan saponin. Ekstrak kasar ini
bersifat  sangat  kuat  sebagai  antioksidan  dengan nilai  IC 50 sebesar  26,828    μg/mL  (Afriani  dkk., 2014). Mokhtar dan Aziz, (2015) melaporkan air buah kelubi mengandung tiga asam organik yaitu asam malat, asam oksalat, dan asam askorbat. Air buah  kelubi  ini  mempunyai  sifat  antibakteri terhadap  bakteri S.  aureus (zona  hambat  10,7 mm), B.  cereus (zona  hambat  11,3  mm), E. coli (zona  hambat  12,7  mm), P.  Aeruginosa (zona hambat  8,7  mm)  dan Salmonella  spp (zona hambat 10,3 mm). Sedangkan ekstrak kasar etanol dilaporkan memiliki zona hambat S. aureus 9,63 mm  dan S.  thypi 17,61  mm  (Safitri  dkk.,  2017). Baik  air  atau  ekstrak  kasar  etanol  buah  kelubi telah  dilaporkan  bersifat  antibakteri.  Tetapi berdasarkan penelitian tersebut ekstraksi terhadap buah  kelubi  yang  dilaporkan  menggunakan blander  maupun  dengan  perendaman  atau maserasi.  Metode  ekstraksi  yang  dilakukan membutuhkan  1-4  hari  untuk  mendapatkan ekstrak  buah  kelubi.  Sehingga  perlu  adanya efisiensi  ekstraksi  buah  kelubi  mengingat kebutuhan  dan  pengembangan  antibakteri  masih perlu dilakukan karena hal penyebaran penyakit, infeksi dan resistensi akan antibakteri yang terus meningkat (Kresse dkk . , 2007).
Salah satu metode ekstraksi yang efisien yaitu kombinasi  panas  dengan  gelombang  mikro dengan menggunakan Microwave-Assisted Extraction (MAE)  (Mahardika  dan  Roanisca, 2019)  (Mandal  dkk.,  2007).  Jika  meserasi membutuhkan waktu lebih dari 24 jam, ekstraksi dengan  MAE  hanya  membutuhkan  beberapa menit  saja.  Selain  itu  metode    MAE  tidak membutuhkan banyak pelarut  (Enggiwanto dkk., 2018). Oleh sebab itu perlu dilakukan pengembangan  antibakteri  ekstrak Eleiodoxa conferta menggunakan Microwave-Assisted Extraction (MAE).

## METODOLOGI

## Alat
Aluminium  foil, Kertas  cakram , Botol sampel, Microwave  Assisted  Extaction (MAE) , corong, neraca analitik , blender, rotary evaporator, oven,  plastik  sampel , kertas  saring, tabung  reaksi,  cawan  petri,  jangka  sorong,  pipet mikro, bunsen
Bahan Daging  Buah  Kelubi,  FeCl 3 ,  Aquades, Etanol,  Alkohol,  Kloroform,  Pereaksi  Wagner, Asam  Asetat  Glasial,  Pereaksi  Mayer,  Bakteri
Staphylococcuaureus ,  Bakteri E.  coli, H 2 SO 4,

## DMSO

## Prosedur Kerja Preparasi Sampel
Sampel  penelitian  ini  merupakan  daging buah  kelubi  ( Eleiodoxa  conferta )  yang  diambil dari  Desa  Pergem,  Air  Gegas,  Bangka  Selatan. Sampel  dikeringkan  diudara  terbuka  selama  5 hari,  setelah  itu  digiling  dengan  blender  dan diayak. Serbuk  dengan ukuran  <0,2  mm  melalui tahap  selanjutnya  yaitu  ekstraksi,  sedangkan ukuran  serbuk  <0,2  mm  diblender  kembali (Roanisca dkk., 2019)
Ekstraksi Senyawa Aktif dan Karakterisasi Pelarut
Serbuk  kering  buah  kelubi  ( Eleiodoxa conferta )  diambil  2-gram  dimasukan  20  mL pelarut  dalam  tabung microwave . Microwave yang  digunakan  adalah  MARS  6  dari  CEM (Gambar  1).  Tabung  (vessel)  yang  digunakan adalah EasyPrep  plus berbahan  teflon  (Gambar 2).  Pelarut  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  etanol.  Masing-masing  pelarut  digunakan tabung microwave. Tabung selanjutnya dimasukkan dalam Microwave-Assisted
Extraction (MAE) pada suhu dan pewer 60°C dan 1200  W  dengan Ramp 20  menit  dan hold 10 menit.  Ekstrak  dipisahkan  dari  residu  dengan kertas saring. Ekstrak yang didapatkan kemudian dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator vacuum hingga  didapatkan  ekstrak  pekat (Dahmoune, 2015).
Gambar 1. MARS 6 dari CEM Corporation

## Uji Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  terhadap ekstrak  hasil Microwave  Assisted  Extraction (MAE).  Pengujian  dilakukan  terhadap  jenis bakteri gram (+) dan gram (-) yaitu S. aureus dan
1
E.  coli. Pengujian  ini  dilakukan dengan  difusi agar  pada  masing-masing  hasil  ekstraksi  dan partisi diuji dalam berbagai konsentrasi sebanyak 20%, 40%, 60%, 80% dan 100%;  kontrol positif 0,05% amoxillin dan  kontrol  negatif  DMSO  1 mL.  Selanjutnya  cawan  petri  yang  berisi  bakteri S.  aureus  dan E.  coli yang  telah  diinokulasikan sebanyak 2 ose diinkubasi pada suhu 37 ℃ selama 24  jam.  Kemudian  diamati  pertumbuhan  bakteri dan  diukur  diameter  zona  hambatannya  dengan menggunakan jangka sorong (Miranti dkk.,2013).
Gambar 2. Tabung ( vessel ) yang digunakan untuk MAE

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Preparasi Sampel
Buah  Kelubi  di  kupas  dan  dipisahkan  dari bijinya.  Setelah  itu  dilakukan  penjemuran dibawah sinar matahari selama 5 hari hingga tidak terdapat  lagi  kadar  air  dan  selanjutnya  diblander hingga halus (Atisanto dkk . , 2017).
(a) (b)
Gambar 3. (a) Buah kelubi segar; (b) Buah kelubi kering
Preparasi  sampel  dilakukan untuk  membuat sampel  buah  kelubi  menjadi  serbuk  yang  siap pakai  (Gambar  3).  Pembuatan  sampel  menjadi serbuk untuk memudahkan dalam ekstraksi yang
dilakukan  dengan  metode Microwave-Assisted Extraction .

## Ekstraksi
Ekstraksi yang dilakukan pada penelitian ini menggunakan metode Microwave Assisted Extraction (MAE)  pada  suhu  60°C  dan  power 1200 W dengan  waktu Ramp 20 menit  dan hold 10 menit.  Setelah dilakukan ekstraksi kemudian ekstrak  tersebut  di  evaporasi  dengan rotary evaporator dengan  suhu  60°C  hal  ini  bertujuan untuk  menghilangkan  pelarut  yang  digunakan pada  saat  ekstraksi.  Ekstrak  yang  telah dievaporasi yang awalnya berupa larutan menjadi kental. Hasil evaporasi didapatkan ekstrak kental berwarna  merah  kecokelatan  dengan  rendemen 34,766% (Gambar 4).
Gambar 4. Hasil Ekstraksi menggunakan MAE

## Uji Antibakteri
Ekstrak etanol daging buah kelubi memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri S.  aureus dan bakteri E. coli ditandai dengan terbentuk zona hambat  (Gambar  5).  Pada  umumnya  hubungan konsentrasi  dan  zona  hambat  berbanding  lurus, semakin  besar  konsentrasi  sampel  maka  zona hambat yang terbentuk semakin besar juga.
Data pengukuran zona hambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan bakteri E. coli menggunakan ekstrak etanol buah kelubi disajikan pada Tabel 1. Berdasarkan  penelitian  Lestari  dan  Ardiningsih (2016), kategori zona hambat antibakteri sebagai berikut:  zona  hambatan  20  mm  atau  lebih termasuk  sangat  kuat,  10-20  mm  termasuk  kuat, 5-10 mm termasuk sedang dan 5 mm atau kurang termasuk lemah.
Dari kategori tersebut maka dapat diketahui bahwa zona hambat ekstrak etanol untuk bakteri S.  aureus dengan  konsentrasi  20%  termasuk kategori  kuat  sedangkan  untuk konsentrasi  40%, 60%,  80%,  dan  100%  termasuk  kategori  sangat kuat dan bakteri E. coli dengan konsentrasi 20% dan 40% termasuk dalam kategori kuat sedangkan konsentrasi  60%,  80%,  100%  termasuk  kategori
1
sangat  kuat.  Dari  hasil  di  atas  dapat  diketahui bahwa  ekstrak  etanol  daging  buah  kelubi memiliki  aktivitas  antibakteri  pada  bakteri S. aureus dan E.  coli. Menurut  Sari  dkk . ,  (2019) kandungan fitokimia pada air kelubi mengandung senyawa  alkaloid,  fenol  hidrokuinon,  saponin, dan flavonoid. Sedangkan steroid tidak ditemukan pada  air  buah  kelubi  yang  berasa  asam.    Hal  ini menunjukkan  bahwa  sangat  kuatnya  aktivitas
daya hambat bakteri S. aureus dan E. coli diduga disebabkan adanya senyawa fenolik dan alkaloid.
Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  zona hambat bakteri S. aureus lebih besar dibandingkan dengan zona hambat bakteri E. coli. Hal  ini  dikarenakan S.  aureus termasuk  dalam bakteri  gram  positif  yang  dimana  memiliki dinding  sel  yang  lebih  sederhana  dibandingkan bakteri  gram  negatif  seperti E.  coli. Oleh  sebab
Tabel 1.  Hasil diameter zona hambat
Bakteri uji Konsentrasi Ekstrak Buah Kelubi Ulangan (mm) Total Rata-rata (mm) Kategori I II Stapylococcus aureus 20% 19,64 19,64 38,64 19,64 Kuat 40% 20,21 20,21 40,42 20,21 Sangat kuat 60% 21,06 21,06 42,12 21,06 Sangat kuat 80% 25,66 25,66 50,33 25,66 Sangat kuat 100% 26,17 26,17 52,35 26,17 Sangat kuat K (+) 29,16 29,16 58,32 29,32 Sangat kuat K (-) 0 0 0 0 - Escherichia coli 20% 10,61 10,86 20,47 10,73 Kuat 40% 12,70 11,61 24,31 12,15 Kuat 60% 15,83 17,52 33,35 16,67 Sangat kuat 80% 16,02 18,14 34,16 17,08 Sangat kuat 100% 19,26 18,69 37,95 18,97 Sangat kuat K (+) 21,28 22,54 43,82 21,91 Sangat kuat K (-) 0 0 0 0 - Ket: K(+) = kontrol positif ( amoxillin ); K(-) = kontrol negatif (DMSO)
Gambar 5. (a) Zona hambat S. aureus 40% , (b) Zona hambat E. coli 40%, (c) Kontrol positif S. aureus (d) Kontrol positif E. coli
1
itu , senyawa  antibakteri  lebih  mudah  masuk  ke dalam bakteri gram positif (Connel dkk., 2013).
Berdasarkan penelitian sebelumnya, air buah kelubi  ( Eleiodoxa  conferta )  yang  diekstrak menggunakan  blander  memiliki  zona  hambat bakteri S.aureus sebesar  10,7  mm  dan E.  coli sebesar 12,7 mm (Mokhtar dan Aziz, 2015). Zona hambat ini lebih rendah jika dibandingkan ekstrak etanol  menggunakan  MAE.  Selain  itu,  menurut Safitri dkk., (2017) ekstrak etanol hasil maserasi buah kelubi ( Eleiodoxa conferta) pada konsentrasi 80% memiliki zona hambat S. aureus sebesar 9,63 mm. Maserasi ini dilaporkan selama 4  hari.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  dengan pelarut  yang  sama,  aktivitas  antibakteri  ekstrak MAE lebih baik jika dibandingkan dengan ekstrak maserasi  atau  hasil  blander.  Adanya  radiasi gelombang mikro dari microwave dapat membantu  memecah  dinding  sel  khususnya  dari buah kelubi tersebut sehingga difusi pelarut lebih mudah  masuk  ke  dalam  sel  dan  melarutkan senyawa  aktif  didalamnya  (Mahardika  dan Roanisca,  2019).  Di  sisi  lain  waktu  ekstraksi dengan  MAE  lebih  singkat  jika  dibandingkan dengan  maserasi.  Hal  ini  yang  membuat  MAE lebih efisien dibandingkan maserasi.

## KESIMPULAN
Ekstrak daging buah kelubi memiliki potensi antibakteri terhadap bakteri S. aureus dan E. coli, Rata-rata  zona  hambat    ekstrak  etanol  untuk bakteri S.  aureus untuk  konsentrasi  20%;  19,64 mm  termasuk  kategori  kuat    sedangkan  untuk konsentrasi  40%,  60%,  80%,  dan  100%  secara berurutan  yaitu  20,12  mm;  21,06  mm;  25,665 mm;  26,175  mm  termasuk  kategori  sangat  kuat dan  bakteri E.  coli dengan  konsentrasi  20%; 10,735 mm dan 40% , 12,155 mm termasuk dalam kategori  kuat  sedangkan  konsentrasi  60%,  80%, 100%  secara  berurutan  16,675  mm;  17,08  mm; 18,975 mm termasuk kategori sangat kuat. Hal ini menunjukkan  bahwa  antibakteri    ekstrak  etanol daging buah kelubi  bakteri S. aureus lebih bagus di bandingkan bakteri E. coli

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti berterimakasih kepada Kemenristekdikti Direktorat Jendral
Pembelajaran  dan  Kemahasiswaan  yang  telah memberikan bantuan dana penelitian berdasarkan SK No. 1020/B3. 1/KM/2019

## DAFTAR PUSTAKA
Afriani, S., Idiawati, N., Destiarti, L., Arianie, L., 2014,  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Daging Buah  Asam  Paya  ( Eleiodoxa  conferta Burret) Dengan Metode DPPH dan Tiosianat, J.  Kimia  Khatulistiwa ,  3(1),  49- 56.
Atisanto,  S.  V.,  Mulyani,  S.,  Triani,  I.G.  A.  L., 2017,  Pengaruh  jenis  pelarut  dan  suhu pengeringan  terhadap  karakteristik  ekstrak pada  buah  kelubi  ( Eleiodoxa  conferta ), Jurnal  Dari  Rekayasa  Dan  Manajemen Agroindustri , 5(3), 35-44.
Connell, K. M. G. O., Hodgkinson, J. T., Sore, H. F., Welch, M., Salmond, G. P. C., Spring, D. R.,  2013,  Combating  Multidrug-Resistant Bacteria: Current Strategies for the Discovery  of  Novel  Antibacterials, Angew.
Chem. Int. , 52(41), 2–30.
Dahmoune, F., 2015, Optimization of microwave- assisted  extraction  of  polyphenols  from M. communis L.  leaves, Food  Chemistry ,  166, 585-595.
Enggiwanto,  S.,  Istiqomah,  F.,  Daniati,  K., Roanisca,  O.,  Mahardika,  R.  G.,  2018, Ekstraksi  Daun  Pelawan  ( Tristaniopsis merguensis ) Sebagai Antioksidan Menggunakan Microwave-Assisted
Extraction  (  MAE  ). Indonesian  Journal  of Pure and Applied Chemistry , 1(2), 50–55. Hemwimon, S., Pavasant, P., Shotipruk, A., 2007, Microwave-assisted extraction of
antioxidative  anthraquinones  from  roots  of Morinda citrifolia . Separation and Purification Technology , 54(1), 44–50.
Jaafar,  H.,  Ain,  M.  F.,  Ahmad,  Z.  A.,  2018, Performance  of  E  .  conferta  and  G  . atroviridis fruit extracts as sensitizers in dye- sensitized  solar  cells  (  DSSCs  ), Ionics ,  24, 891–899.
Kresse, H., Belsey, M. J.,  Rovini, H., 2007, The antibacterial  drugs  market. Nature  Reviews Drug Discovery , 6(January), 19–20. Lestari,  Y.,  Ardiningsih,  P.,  2016,  Aktivitas
Antibakteri  Gram  Positif  Dan  Negatif  Dari Ekstrak  Dan  Fraksi  Daun  Nipah  (  Nypa fruticans Wurmb.), Jurnal Kimia
Katulistiwa , 5(4), 1–8. Lim,  T.  K.,  2012,  Scientific  Name.  In Edible Medicinal  and  Non-Medicinal  Plants, 1,
396–398.
Mahardika,  R.  G.,  Roanisca,  O.,  2019,
Microwave-Assisted Extraction of
1
Polyphenol  Content  from  Leaves  of
Tristaniopsis merguensis. ASEAN Journal of
Chemical Engineering , 19(2), 110–119. Mandal,  V.,  Mohan,  Y.,  Hemalatha,  S.,  2007, Microwave-Assisted Extraction- An Innovative  and  Promosing  Extraction  Tool for Medicinal Plant Research. Pharmaconosy Reviews, 1, 7-18.
Miranti,  M.,  Prasetyorini.,  Suwary,  C.,  2013, Perbandingan  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol  30% dan 96%  kelopak  bunga  rosella ( Hibiscus  sabdariffa )  terhadap  bakteri S. aureus , Ekologia , 13(1), 9-18
Mohamad,  N.  I.,  Manan,  M.  A.,  Abdullah  Sani, N.,  2018,  Antibacterial  potential  of  lactic acid  bacteria  isolated  from  local  pickled Eleiodoxa conferta (kelubi) against selected foodborne pathogens. Malaysian  Journal of Microbiology, 14(6), 490-496.
Mokhtar, S. I., Aziz, N. A. A., 2015, Organic Acid Content  and  Antimicrobial  Properties  of Eleiodoxa  conferta  Extracts  at  Different Maturity  Stages, J.  Trop.  Resour.  Sustain.
Sci. , 3, 72–76.
Roanisca,  O.,  Mahardika,  R.  G.,  Setiawan,  Y.,
2019, Tristaniopsis  merguensis Griff  .
Extract  as  Inhibitor  for  Corrosion  of Stainless  Steel. IOP  Conference  Series: Earth  and  Environmental  Science ,  353 012020.
Safitri, G. L., Wibowo, M. A., Idiawati, N., 2017,
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Kasar Buah  Asam  Paya  ( Eleiodoxa  conferta (Griff.) Buret) Terhadap Bakteri Staphylococcus  Aureus Dan Salmonella Thypi , Jurnal Kimia Khatulistiwa , 6(1), 17– 20.
Sari,  R.  P.,  Surtina,  Nazrun,  Mahardika,  R.  G. (2019).  Uji  Fitokimia  Dan  Aktivitas Antibakteri  Pada  Air  Kelubi  ( Eleiodoxa conferta ) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus , Seminar  Nasional  Penelitian  Dan Pengabdian  Pada  Masyarakat  III ,  61–63.
Pangkalpinang:
Universitas Bangka Belitung.