## AKTIVITAS PENANGKAP RADIKAL BEBAS EKSTRAK METANOL KULIT BUAH DAN BIJI BUAH DELIMA (Punica granatum. L )
Vina N. Van Harling

## A BSTRACT
Penelitian tentang Aktivitas Penangkap Radikal Bebas Ekstrak Metanol Kulit Buah dan Biji  Delima  (Punica granatum)  dilakukan dengan  tujuan  untuk  menentukan  aktivitas penangkap radikal bebas dari ekstrak methanol kulit buah dan biji delima ungu, dan menentukan  IC 50 nya.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa:  Aktivitas  penangkap radikal bebas ekstrak metanol kulit buah dan biji delima berturut – turut sebesar 61,44
% dan 64,95 % pada konsentrasi 250mg/ml. Nilai IC50 dari ekstrak metanol kulit buah delima  ungu  sebesar  1,6869  g/g  DPPH,  sedangkan  pada  bijinya  sebesar  1,3569  g/g DPPH
Keywords : delima ungu, asam elagat, penangkap radikal bebas, IC 50

## 1. PENDAHULUAN
Buah  delima  atau  yang  sering  disebut sebagai pomegranate (Prancis) yang berarti apel berbiji  banyak,  tidak  terlalu  populer  bagi masyarakat  Indonesia.  Orang  menanamnya hanya  sebatas  tanaman  hias  saja,  padahal  buah berpenampilan  seksi  ini  mempunyai  banyak manfaat. Di Indonesia terdapat tiga jenis delima, yaitu  delima  merah,  delima  putih,  dan  delima ungu [1] .
Asupan  senyawa  antioksidan  polifenol yang  berfungsi  melumpuhkan  sel  kanker  dan mengatasi pengerasan pada dinding arteri, dapat diperoleh  dengan  mengkonsumsi  buah  delima. Laporan  penelitian  yang  disampaikan  beberapa pakar  kanker  dari  American  Association  for Cancer  Research  pada  konferensi  nasional  di bulan  November  2003  menyatakan  bahwa ekstrak buah delima dapat membantu menyembuhkan dan mencegah kanker kulit [2] . Salah  satu  anggota  fenolik  yang  relatif baru  dan  belum  banyak  dikenal  di  Indonesia adalah  asam  elagat,  yang  ternyata  sangat berpotensi sebagai antioksidan kuat. Kandungan antioksidan  pada  Delima  diperantarai  oleh
aktivitas  dari  kelompok  fenol  hidroksil  yang meliputi tannin dan flavonoid. [3] Selain berpotensi sebagai antioksidan kuat ternyata juga berpotensi untuk anti pembengkakan, antibakteri, antimutagen,  dan  menghambat  pertumbuhan tumor. [2] Khasiat  delima  yang  lain  dalam pengobatan  di  antaranya  sebagai  antikanker karena  kandungan  antioksidannya  yang  tinggi, penyakit  kardiovaskular,  antidiabetes,  infeksi bakteri  dan  resistensi  antibiotik,  memperbaiki kerusakan  kulit  akibat  induksi  sinar  ultraviolet, alzheimer,  obesitas,  dan  antiplasmodial. [4] dan juga  dari  hasil  penelitian  memiliki  aktivitas sebagai Selective Estrogen Receptor Modulators (SERMs). [5]
Asam elagat merupakan senyawa kompleks  yang  banyak  ditemukan  pada  buah  – buahan,  sayuran  dan  kacang  -  kacangan.  Selain ditemukan  pada  macam  –  macam  buah  beri, ternyata  asam  elagat  juga  banyak  terkandung dalam  buah  –  buahan  seperti  pada:  nanas, kelengkeng,  apel,  jambu  biji,  dan  delima.  Pada umumnya  jika  kita  mengkonsumsi  buah  delima maka  kulit  dan  biji  delima  langsung  dibuang tanpa  dimanfaatkan.  Padahal  dari  kulit  dan  biji
Politeknik Katolik Saint Paul Jl. R. A. Kartini No. 1, Sorong vina.nathalia@poltekstpaul.ac.id
buah delima ada banyak manfaat yang masih bisa diambil  salah  satunya  adalah  sebagai  sumber asam elagat. [6]
Hasil asam elagat yang diperoleh merupakan recovery (perolehan kembali) dimana limbah padat yang terbuang percuma dapat diolah kembali  sehingga  menghasilkan  produk  yang berguna dan bernilai ekonomi.
Untuk itulah maka penelitian ini dilakukan dengan  maksud  untuk  untuk  menentukan aktivitas  penangkap  radikal  bebas  dari  ekstrak methanol  kulit  buah  dan  biji  delima  ungu,  dan menentukan IC 50

## 2. KAJIAN LITERATUR
2.1 Delima Delima  ( Punica  granatum  L. )  adalah tanaman buah-buahan yang dapat tumbuh hingga 5–8  m.  Tanaman  ini  diperkirakan  berasal  dari Iran,  namun  telah  lama  dikembangbiakan  di daerah  Mediterania.  Tanaman  ini  juga  banyak ditanam  di  daerah  Cina  Selatan  dan  Asia Tenggara [1] .
Ada  tiga  jenis  delima  yang  tersebar  di Indonesia,  dikelompokkan  berdasarkan  warna buahnya,  yaitu delima  putih,  delima  merah,  dan delima ungu. Delima yang paling terkenal adalah delima  merah,  sedangkan  delima  ungu  kini menjadi  tanaman  langka  yang  tidak  dikenal secara  luas.  Padahal  menurut  para  ahli,  delima ungu  lebih  berkhasiat  dibandingkan  dengan delima putih.
Delima  merah  memiliki  rasa  yang  lebih manis dan segar, sedangkan delima putih rasanya lebih  sepat  dan  kesat,  serta  kurang  manis.  Rasa kesat  pada  buah  delima  disebabkan  oleh kandungan  flavonoid  (golongan  polifenol)  yang tinggi.  Salah  satu  peran  flavonoid  yang  penting adalah  sebagai  antioksidan.  Hal  itulah  yang menyebabkan  buah  delima  sering  dimanfaatkan sebagai obat. Ekstrak buah delima merah secara in  vitro (uji  di  luar  tubuh)  terbukti  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  kuat,  sehingga  dapat bersifat kemopreventif (mencegah) atau kemoterapis  (mengobati)  sel  kanker  prostat  dan juga berkhasiat untuk mencegah kanker payudara dan kanker kolon [7] .
Beberapa penelitian ilmiah telah membuktikan manfaat tanaman delima.
Penelitian  Dr.  Navarro  dari  Instituto  Mexicano del Seguro Social, Meksiko, membuktikan bahwa ekstrak metanol yang terdapat pada kulit delima merupakan  senyawa  yang  ampuh  melawan bakteri  penyebab  diare,  yaitu: Staphylloccus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella  typhi, dan Candida albicans [7] .
Kulit  buah  dan  kulit  batang  delima mengandung 20-30 persen elligatannin (tannin), dan  0,5-1  persen  alkaloid  yang  terdiri  dari pelletierine yang  sangat  toksik  atau  beracun, pseudopelletierine , methylpelletierine , punikalin, punikalagin,  granatin, betulic  acid,  ursolic  acid, isoquercitrin, resin, triterpenoid, kalsium oksalat, dan pati.
(a)                                       (b)
Gambar 1. Senyawa kimia pada buah delima Keterangan gambar : (a) Punikalagin (b) Isoquercitrin

## 2.2 Antioksidan
Antioksidan  merupakan  zat  yang  dapat mencegah  terbentuknya  radikal  bebas.  Radikal bebas  merupakan  atom  atau  molekul  yang sifatnya  tidak  stabil  dan  dapat  menimbulkan kerusakan  jaringan.  Antioksidan  merupakan senyawa  kimia  yang  dapat  menurunkan  laju reaksi  oksidasi  pada  reaksi  kimia  yang  di dalamnya  terjadi  transfer  elektron  dari  suatu substansi  ke  agen  pengoksidasi.  Antioksidan sangat  bermanfaat  dalam  konteks  kimia  dan biologi  karena  mampu  melindungi  sel  dari kerusakan  komponennya  sebagai  akibat  reaksi oksidasi.  Antioksidan  terdiri  atas  antioksidan endogen  yang  dihasilkan  oleh  tubuh  sendiri  dan antioksidan eksogen yang berasal dari makanan [8] . Berdasarkan sumbernya, antioksidan dibagi  dalam  dua  kelompok  yaitu  antioksidan sintetik  dan  antioksidan  alami.  Antioksidan
sintetik  diperoleh  dari  hasil  sintesa  reaksi  kimia seperti  Butil  Hidroksi  Anisol  (BHA),  Butil Hidroksi  Toluen  (BHT),  propil  galat,  dan  Tert- Butil  Hidroksi  Quinon  (TBHQ).  Sedangkan antioksidan  alami  adalah  antioksidan  yang diperoleh dari hasil ekstraksi bahan alami [9] .
Antioksidan dapat diklasifikasikan berdasarkan mekanismenya. Gordon [10]
mengklasifikasikan menjadi dua tipe yaitu :
1. Antioksidan Primer
Antioksidan  primer  dapat  bereaksi  dengan radikal  lipid  dan  merubahnya  menjadi produk  yang  lebih  stabil.  Radikal  lipid dalam  bentuk  radikal  alkil  peroksi  (ROO×) adalah  agen  pengoksidasi  dan  dapat direduksi  dengan  anion  kemudian  diubah menjadi hidroperoksida oleh donor elektron atau  donor  hidrogen,  AH×  ,  contoh antioksidan primer adalah senyawa fenolik.
2. Antioksidan Sekunder Antioksidan  sekunder  merupakan  senyawa yang  berfungsi  mencegah  reaksi  berantai autooksidasi.  Antioksidan  sekunder  dapat bekerja melalui berbagai macam mekanisme,
seperti  melalui  senyawa  yang  dapat mengikat logam ( chelators atau sequestering  Agents),  Oxygen  scavengers , merubah  hidroperoksida  menjadi  species non  radikal,  menyerap  radiasi  UV  atau mendeaktivasi  oksigen  singlet.  Contoh antioksidan  sekunder  antara  lain  :  asam askorbat,  asam  sitrat,  b-karoten,  enzim superoksida dismutase, dll.
Senyawa  antioksidan  alami  tumbuhan umumnya adalah senyawa fenolik atau polifenolik yang dapat berupa golongan flavonoid,  turunan  asam  sinamat,  kumarin,  dan tokoferol.  Senyawa  –  senyawa  fenolik  yang terdapat pada tanaman merupakan senyawa yang sangat  penting  dan  sangat  berperan  sebagai antioksidan  alami.  Senyawa  antioksidan  fenolik ini  multifungsional  karena  dapat  berperan sebagai  pereduksi,  penangkap  radikal  bebas, pengkelat logam, peredam terbentuknya oksigen singlet [11] .

## 2.3 Asam Elagat
Asam  elagat  merupakan  senyawa  fenolik kompleks yang ditemukan pada beberapa varietas tumbuhan terutama buah – buahan. Asam elagat pada  tumbuhan  diperoleh  dari  hidrolisis  tanin, yaitu elagitanin sebagai komponen struktur pada dinding  sel  dan  membran  sel.  Asam  elagat merupakan  senyawa  fenolik  kompleks  yang ditemukan  pada  beberapa  varietas  tumbuhan terutama  buah  –  buahan.  Asam  elagat  banyak ditemukan  pada  macam  –  macam  buah  beri misalnya: strawberrie, rasberrie, cranberrie , dan anggur  selain  itu,  asam  elagat  juga  dapat ditemukan  di  dalam  sayuran  dan  kacang  – kacangan [1] .
Senyawa  asam  elagat  memiliki  massa molekul  relatif  sebesar  302,197  gram/mol, dengan  berat  jenis  sebesar  1,67  gram/ml sedangkan  rumus  molekulnya  adalah  C 14 H 6 O 8 . Asam elagat (ellagic Acid) adalah suatu senyawa asam  yang  mempunyai  cincin  polisiklik  yang mengandung dua dihidroksifenol. [8]

## Gambar 2. Struktur Kimia Asam Elagat
Asam elagat pada tumbuhan diperoleh dari hidrolisis tanin, yaitu elagitanin sebagai komponen  struktur  pada  dinding  sel  dan membran  sel.  Elagitanin  adalah  ester  glukosa dengan asam elagat yang ketika dihidrolisis akan menghasilkan asam elagat. [12] Senyawa ini dapat digunakan sebagai obat anti kanker.
2.4 Aktivitas Penangkap Radikal Bebas
Aktivitas  antioksidan  menggambarkan kemampuan  suatu  senyawa  yang  mengandung antioksidan  untuk  menghambat  laju  reaksi pembentukan  radikal  bebas.  Penentuan  aktivitas antioksidan  yang  terdapat  di  dalam  suatu tumbuhan  tertentu  umumnya  dilakukan  secara spektrofotometri.
Metode-metode yang
digunakan  antara  lain  : -Carotene  Bleaching Method,  DPPH  Radical  Scavenging Method, TBARS Assay, Rancimat assay, dan lain-lain. Salah  satu  metode  yang  sederhana  dan cepat  untuk  mengukur  aktivitas  antioksidan adalah dengan menggunakan radikal bebas yang stabil dari 1,1-diphenyl-2-pcrylhydrazyl (DPPH). DPPH secara luas telah digunakan untuk menguji kemampuan  suatu  bahan  yang  berperan  sebagai penangkap radikal bebas atau donor hidrogen dan untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  dalam makanan [14 ] .
Gambar 3 . Struktur Radikal Bebas DPPH [13]
Tahun  1992,  DPPH  ditemukan  oleh Goldschmidt  dan  Renn,  DPPH mempunyai  sifat tidak larut dalam air dan biasa digunakan sebagai reagen  kalorimetri  untuk  proses  redoks.  DPPH tidak  hanya  bereaksi  dengan  oksigen  aktif  saja tetapi  dapat  menghambat  polimerisasi  atau radikal  bebas  dari  jenis  antioksidan  misalnya: amina,  fenol  atau  komponen  alami  (vitamin, ekstrak tanaman, obat-obatan). Selain itu, DPPH juga dapat menghambat proses homolitik [13] .
Aktivitas  antioksidan  dengan  metode DPPH  sering  disebut  dengan  istilah  DPPH radical  scavenging  activity .  Molekul  DPPH dikarakteristikan  sebagai  radikal  bebas  yang stabil,  dan  ketika  DPPH  dicampurkan  dengan senyawa yang dapat mendonorkan atom hidrogen, DPPH  akan  tereduksi  dan  kehilangan  warna violetnya  menjadi  warna  kuning  pucat.  Sesuai mekanisme  kerja  antioksidan  (AH)  yang bertindak  sebagai  aseptor  hidrogen  yang  lebih dikenal sebagai antioksidan primer. Senyawa ini memberikan  atom  hidrogen  secara  cepat  ke radikal bebas (DPPH) yang digambarkan sebagai Z×  untuk  mengubah  ke  bentuk  yang  stabil, molekul  pendonor  sebagai  AH (Gambar  4  dan 5.) , reaksinya adalah
Dimana  ZH  adalah  bentuk  tereduksi, sementara  turunan  radikal  antioksidan  (A × )
tersebut  memiliki  keadaan  yang  lebih  stabil dibanding  radikal  bebas  dari  DPPH  dan  tidak mempunyai  energi  yang  cukup  untuk  bereaksi dengan  molekul  DPPH  lain  untuk  membentuk radikal yang baru. Aktivitas antioksidan didapatkan  dari  besarnya  persentase  penurunan absorbansi  atau  jumlah  DPPH  yang  bereaksi dengan senyawa pendonor atom H [15][16]
Gambar  4. Reaksi  DPPH  dengan  radikal bebas [13]
Gambar 5. Reaksi DPPH dengan anion X - [13]
Aktivitas penangkap radikal bebas didapatkan dari  jumlah  DPPH yang  bereaksi.  Ekstrak  kasar yang  memiliki  nilai  IC 50 kurang  dari  50  mg/ml dapat  dinyatakan  memiliki  aktivitas  penangkap radikal bebas yang berarti [17]

## 3. METODE PENELITIAN
3.1 Alat dan Bahan
Alat  :  Piranti  yang  digunakan  adalah neraca analitik, desikator, rotary evaporator, oven, spektrofotometer UV Mini, mikropipet, labu ukur, pipet ukur, peralatan gelas, sinar UV, refluks.
Bahan  :  Sampel  yang  digunakan  adalah kulit buah dan biji delima ungu (Punica granatum L.)  segar.  Bahan  kimia  yang  digunakan  adalah metanol, akuades, TCA 2 N
3.2 Metode
3.2.1 Ekstrasi Asam Elagat
Sampel  sebanyak  250  gram  dilarutkan dalam 400 ml metanol, direfluks selama 24 jam, kemudian  dievaporasi  sampai  kering  (sebagai ekstrak  kasar).  Hasil  ekstrak  dihidrolisa  dengan Tri  Chloro  Asetic  (TCA)  2  N  dalam  metanol selama  2  jam  (mengandung  total  asam  elagat). Kemudian digunakan pelarut metanol : air = 4:1 untuk memisahkan senyawa asam elagat dengan senyawa  yang  lain.  Hasil  isolasi  dilarutkan dengan  metanol  dan  ditempatkan  pada  botol sampel. Kemurniannya diukur dengan
menggunakan HPLC. [18] 3.2.2 Pengukuran Aktivitas Penangkap Radikal Bebas  dengan Menggunakan Metode DPPH [19]
1 ml sampel dengan konsentrasi 250µg/ml ditambah  dengan  3  ml  DPPH  0,1  mM  dalam etanol 95 %. Larutan diinkubasi pada suhu ruang dan  dalam  ruang  gelap  selama  30  menit. Absorbansi diukur pada panjang gelombang 517 nm.  sebagai  blanko  digunakan  pelarut  sampel sebagai  pengganti  sampel.  Sebagai  pembanding digunakan asam elagat.
% ℎ
= − 100%
Masing  –  masing  sampel  ditentukan Inhibition Concentration (IC 50 ) yaitu kemampuan menangkap  radikal  bebas  dalam  sampel  untuk menghambat  50  %  radikal  bebas  DPPH. Perhitungan  IC 50 dengan  berbagai  konsentrasi sampel (25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250µg/ml ).
3.2.3 Analisa Data
Data  yang  diperoleh  dianalisa  dengan menggunakan  uji  t  dengan  tingkat  kepercayaan 5 % dan ulangan sebanyak 5 kali.

## 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Aktivitas Penangkap Radikal Bebas Ekstrak Metanol Kulit Buah dan Biji Delima Ungu dengan Metode DPPH
Persentasi  penghambatan  ekstrak  metanol kulit  buah  dan  biji  delima  pada  konsentrasi 250µg/ml berkisar antara 61,44 ± 2,80 - 64,95 ± 6,16.
Tabel  1. Aktivitas  Penangkapan  Radikal  Bebas Ekstrak  Metanol  Kulit  Buah  dan  Biji  Delima  Ungu dengan Metode DPPH
Sampel (250µg/ml)
% penghambatan ± SE Kulit Buah 61,44 ± 2,80 (a) Biji 64,95 ± 6,16 (a)
Keterangan : Angka angka yang diikuti dengan huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata, sedangkan angka – angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  tidak  sama menunjukkan berbeda nyata ( Uji t dengan a = 5 %).
Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa aktivitas  penangkap  radikal  bebas  ekstrak metanol kulit buah delima sebesar 61,44 % tidak berbeda  secara  bermakna  (a  =  5  %)  dengan ekstrak  biji  (64,95  %).  Hal  ini  diduga  karena sampel  kulit  buah  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  sampel  yang  segar  dengan kadar air tinggi (78,08 % w/w). Akibatnya berat atau  jumlah  sampel  yang  digunakan  dalam pengujian  jauh  lebih  kecil  atau  sedikit  jika dibandingkan  berat  atau  jumlah  kulit  buah  yang kering,  sehingga  aktivitas  penangkap  radikal bebas tidak sebesar aktivitas pada sampel kering. Sesuai  Singh  et  al [2] ,  yang  menyatakan  bahwa aktivitas  penangkap  radikal  bebas  ekstrak metanol  kulit  buah  dan  biji  delima  kering  pada konsentrasi 50 ppm mampu menghambat radikal bebas  DPPH  sebesar  81  %  dan  23,2  %. Kandungan  air  dalam  sampel  mempengaruhi besarnya aktivitas penangkap radikal bebas. Hal ini  membuktikan  bahwa  sampel  kering  lebih efektif  daripada  sampel  yang  segar  dalam pengujian  aktivitas  penangkap  radikal  bebas dengan menggunakan metode DPPH.
Aktivitas ekstrak metanol tersebut mempunyai  sifat  untuk  menghalangi  oksidasi radikal  bebas  dan  mendonorkan  hidrogen  dari kelompok hidroksil fenolik menjadi produk yang
stabil  dengan  tidak  mengalami  proses  inisiasi atau propagasi dalam mekanisme antioksidan [6] .
Asam  elagat  sebagai  senyawa  referensi menunjukkan  persentasi  penghambatan  sebesar 94,55  ±  2,69  pada  konsentrasi  250μg/ml, sedangkan  ekstrak  metanol  kulit  buah  dan  biji pada  konsentrasi  yang  sama  menunjukkan persentasi penghambatan berturut – turut sebesar 61,44 ± 2,80 dan 64,95 ± 6,16 (Gambar 6.).
Gambar  6. Histogram  Aktivitas  Penangkap  Radikal Bebas  Ekstrak  Metanol  Kulit  Buah  dan  Biji  Delima Ungu dengan Metode DPPH dan Asam Elagat sebagai Pembanding.
4.2 Penentuan  IC 50 Ekstrak  Metanol  Kulit Buah  dan  Biji  Delima  Ungu  dengan Metode DPPH
Hasil  penentuan  IC 50 terhadap  ekstrak metanol  kulit  buah  dan  biji  delima  dapat  dilihat pada Gambar 3. dan Tabel 3. Nilai IC 50 adalah konsentrasi  ekstrak  kulit  buah  dan  biji  delima ungu yang dibutuhkan untuk menangkap radikal bebas  DPPH  sebesar  50  %.  Nilai  IC 50 yang rendah menunjukkan aktivitas penangkap radikal bebas yang tinggi.
Metode  yang  digunakan  didasarkan  atas reaksi  reduksi  radikal  bebas  DPPH  yang  stabil. DPPH memiliki elektron yang tidak berpasangan dan  memiliki  absorbansi  maksimum  di  517  nm dengan spektrofotometer (warna ungu).  Elektron yang  tidak  berpasangan  tersebut  menjadi berpasangan  dengan  kehadiran  donor  hidrogen, yaitu  antioksidan  penangkap  radikal  bebas sehingga absorbansi menurun dan menghasilkan penurunan  warna  ungu  yang  setara  dengan jumlah  elektron  yang  ditangkap [20] .  Reaksi  ini telah banyak digunakan untuk menguji kemampuan  suatu  senyawa  sebagai  penangkap radikal  bebas  atau  donor  hidrogen  dan
mengevaluasi  aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak tanaman [12] .
Salah  satu  golongan  senyawa  yang  dapat menjadi  donor  hidrogen  adalah  fenolik.  Jumlah donor hidrogen yang bisa didonorkan dipengaruhi  oleh  jumlah  dan  posisi  gugus  OH pada  senyawa  fenolik.  Asam  elagat  mempunyai struktur  kimia  yang  menguntungkan  karena jumlah  gugus  OH  yang  banyak  sehingga  dapat mengikat  radikal  bebas  DPPH  dalam  jumlah yang relatif banyak [25] .
Tabel  2. Nilai  IC 5= Ekstrak  Metanol  Kulit  Buah  dan
Biji Delima Ungu dengan Metode DPPH Sampel IC 50 ±  SE (g/g DPPH) Kulit Buah 1,6869 ±  0,063 (a) Biji 1,3569 ±  0,1283 (b)
Keterangan : Angka-angka yang diikuti dengan huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata, sedangkan angka – angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  tidak  sama menunjukkan antar sampel berbeda nyata ( Uji t dengan  = 5 %).
Nilai IC 50 ekstrak biji delima ungu sebesar 1,3569 g/g DPPH lebih rendah dari pada ekstrak kulit  buahnya(1,6869  g/g  DPPH).  Ini  berarti aktivitas  penangkap  radikal  bebas  sebesar  50% pada  ekstrak  metanol  biji  lebih  tinggi  dari  pada kulit  buah.  Hal  ini  diduga  terkait  dengan kandungan  senyawa  yang  terdapat  di  kulit  buah dan  biji  delima.  Punikalagin  merupakan  salah satu senyawa tanin yang terkandung dalam kulit buah  dan  biji  delima.  Kandungan  punikalagin pada  biji  delima  lebih  banyak  dari  pada  kulit buahnya [20] .  Punikalagin  mempunyai  nilai  IC 50 yang cukup berarti yaitu 1,6 ppm [14] . Sedangkan kulit  buah  delima  lebih  banyak  mengandung antosianin dibandingkan dengan bijinya, ditandai dengan  warna  ekstrak  kulit  buah  yang  ungu [21] Punikalagin merupakan golongan elagitanin yang mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang  lebih tinggi jika dibandingkan dengan antosianin [22]
Menurut Talcoot dkk [23] asam elagat dalam ekstrak  kulit  buah  dan  biji  delima  berfungsi sebagai antioksidan kuat. Jika aktivitas penangkap  radikal  bebas  pada  ekstrak  metanol kulit  buah  dan  biji  delima  ungu  dibandingkan asam  elagat  dengan  IC50  sebesar  0,0025 g/gDPPH  tampak  bahwa  aktivitas  penangkap radikal bebas ekstrak metanol kulit buah dan biji
delima  ungu  jauh  lebih  rendah  dari  aktivitas penangkap  radikal  bebas  pada  asam  elagat (Gambar  7.) .  Hal  ini  diduga  karena  di  dalam ekstrak  metanol  kulit  buah  maupun  biji  masih berupa  campuran  (seperti  antosianin,  punikalin, punikalagin,  dan  alkaloid),  bukan  asam  elagat murni  sehingga  aktivitasnya  tidak  sebesar  asam elagat murni .
Gambar  7. Histogram  Nilai  IC 50 Ekstrak  Metanol Kulit  Buah  dan  Biji  Delima  Ungu  dengan  Metode DPPH dan Asam Elagat sebagai Pembanding
Bila  dibandingkan  IC 50 asam  elagat  (0,33 ppm) dengan IC 50 punikalagin (1,6 ppm) terlihat bahwa  asam  elagat  memiliki  kemampuan menangkap  radikal  bebas  lebih  tinggi  dari  pada punicalagin [22] .  Walaupun  demikian  dalam penelitian  ini  sampel  yang  digunakan  adalah ekstrak metanol kulit buah delima segar dan biji delima  yang  telah  dikeringkan,  sehingga  pada konsentrasi  yang  sama  (250  g/ml)  antara  kulit buah  dan  biji  delima  ternyata  menunjukkan aktivitas  yang  sama  tetapi  nilai  IC 50 yang dihasilkan oleh kulit buah lebih tinggi dari pada biji.
Senyawa  lain  selain  asam  elagat  yang diduga dapat berperan sebagai penangkap radikal bebas  dalam  ekstrak  tersebut  adalah  antosianin. Antosianin  mempunyai  aktivitas  penangkap radikal  bebas  yang  cukup  tinggi [24] .  Walaupun demikian  pada  saat  perolehan  ekstraknya digunakan pemanasan, sehingga diduga antosianin mengalami degradasi sehingga terjadi penurunan aktivitas penangkap radikal bebas.

## (1) KESIMPULAN
Kesimpulan  yang  dapat  diambil  dari penelitian ini adalah:
1. Aktivitas  penangkap  radikal  bebas  ekstrak metanol kulit buah dan biji delima berturut – turut  sebesar  61,44  %  dan  64,95  %  pada konsentrasi 250  g/ml.
2. Nilai  IC 50 dari  ekstrak  metanol  kulit  buah delima  ungu  sebesar  1,6869  g/g  DPPH, sedangkan  pada  bijinya  sebesar  1,3569  g/g DPPH.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] VAN HARLING, VINA. 2018. “PENENTUAN KADAR ASAM ELAGAT EKSTRAK  METANOL  KULIT  BUAH DAN  BIJI  BUAH  DELIMA  (Punica
Granatum.  L)”. SOSCIED 1  (2),  30-33.
https://doi.org/10.32531/jsoscied.v1i2.147. [2]  Winarno,  F.  G.,  2008. Sari  Buah  Delima dan Kesehatan Jantung. http://unisosdem.org/article_detail.php?ai d=3759&caoid=2&caid=42&gid
=5
[3]  Kurniawi ,  Y.,  2006. Sejuta  Khasiat  Delima.
http://www.harian-
global.com/news.php?item.7710.7
[4]  Luciana,  Titta.  "Optimasi  tablet  salut  film ekstrak  kulit  buah  delima  putih  (Punica granatum  L.)  menggunakan  PVP  K-30 sebagai  pengikat  dan  Ac-Di-Sol  sebagai penghancur." 2018
[5]  Ichram,  La  Ode  Abdur  Rauf,  and  Retno Sintowati. Pengaruh  Pemberian  Ekstrak Buah  Delima  (Punica  granatum  L.)
Terhadap  Morfologi  Spermatozoa  Pada Mencit  Jantan  (Mus  musculus  L.)  Yang
Diberi Paparan Asap Rokok . Diss.
Universitas Muhammadiyah Surakarta, 2019.
[6]   Singh, R. P., K. N. Chidambara Murthy, and G.  K.  Jayaprakasha,  2002. Studies  on  The Antioxidant Activity of Pomegranate (Punica  granatum)  Peel  and  Seed  Extracts Using  in  Vitro  Models. Human  Resource Development.  Central  Food  Technological Research  Institute.  Mysore  570  013.  India, and  Goverment  College  of  Pharmacy. Bangalore 560 027. India
[7] Astawan , M., 2008. Delima Si Cantik yang Istimewa. Ahli  Teknologi  Pangan  dan Gizi. Natural Healing Tue.
[8]  Ardiansyah, 2007. Antioksidan dan Peranannya Bagi Kesehatan. http://islamicspace.wordpress.com/2007/0 1/24/antioksidan-danperanannya-bagi
kesehatan/
[9]  Trilaksani,  W.,  2003. Antioxidant  :  Jenis, Sumber,  Mekanisme  Kerja  dan  Peran terhadap  Kesehatan. Institut  Pertanian Bogor.
[10] Gordon, M. H., 2001. The Development of Oxidative  Rancidity  in  Foods dalam Pokorny,  Jan,  Nedyalka  Yanislieva  and Michael  Gordon.  (editor). Antioxidant  in Food. Woodhead  Publishing  Limited.
Cambridge. England,7-21
[11] Kumalaningsih,  S.,  2006. Antioksidan Alami. Trubus Agrisarana. Surabaya.
[12]      Makfoeld  D.  dkk.  Kamus  Istilah  Pangan dan Nutrisi. Kanisius. Yogyakarta. 2006:79
[13]  Ionita,  P.,  2003. Is  DPPH  Stable  Free
Radical  a  Good  Scavenger  for  Oxygen Active  Species. Institute  of  Physical Chemistry,  Romania  University  of  York. Chemistry Department. YO10 5DD. UK.
[14]  Prakash,  Aruna.  2001. Antioxidant Activity.
http://www.terranostrachocolate.com/files
/  Comparatif  and  General  Antioxidant Information. Pdf.
[15]  Molyneux,  P.,  2004. The  Use  of  Stable Free  Radical  Diphenylpycryl-hydrazyl (DPPH)  for  Estimating  Antioxidant Activity. Songklanakarin  J.  Sci.  Technol.,
26 (2) : 211-219.
[16]  Prior,  R.  L.,  X.  Wu.  K.  Schaich,  2005. Standardized Methods of Determination of Antioxidant  Capacity  and  Phenolic  in Food  and  Dietary  Supplements. J.  Agric. Food Chem: 124
[17] Parejo,  L.,  F.  Viladomat,J.  Batisda,  A. Rosas-Romare,  G.  Saavendra,  M.A. Murcia,  A.  M.  Jimenez  and  C.  Codina., 2003. Investigation  of  Bolivian  Plant
Extract  for  Their  Radical  Scavenging
Activity  and  Antioxidant  Activity dalam Panicayupakaranant, P. And Kaewsuwan, S., 2004. Bioassay-guided Isolation of The Antioxidant Constituent from Cassia alata L. Leaves. Songklanakarin J. Sci. Technol.
26 (1) : 103-107.
[18] Bushman, S. B, Bliss P., Terry I., Boxin O., Jimmie M. C., and Steven J. Knappi, 2004. Chemical  Composition  of  Canbery  (Rubus spp)  Seed  and  Oil  and  Their  Antioxidant Potential. Journal  of  Agricultural  &  Food Chemistry 52 : 7932 - 7987.
[19] Banerjee, A.,N. Dasgupta, dan B.De. 2005. In  Vitro  Study  of  Antioxidant  Activity  of Syzigium  cumini  Fruit. J.  Food  Chemistry 90. 727-733.
[20] Zhu, Qin Yan, Robert M. Hackman, Jodi L. Ensunsa, Roberta R. Holt, and Carl L. Keen., 2002. Antioxidative  Activities  of  Oolong Tea. J. Agric. Food chem. 50 : 6929 – 6934
[21]  Wiryowidagdo,  S.,  2007. Delima  (Punica granatum  L.)  Obat  Tradisional  Indonesia Yang  Merupakan  Sumber  Antioksidan. Departemen  Farmasi  FMIPA  Universitas Indonesia.
[22]  Reddy,  M.  K.,  Shasi  K.  Gupta,  Melissa  R. Jacob,  Shabana  I.  Khan,  and  Daneel Ferreira, 2007. Antioxidant, Antimalarial an Antimicrobial  Activities  of  Tannin-Rich Fractions, Ellagitannins and Phenolic Acids from  Punica  granatum  L. Department  of Pharmacognosy.  School  of  Pharmacy.  The Univercity  of  Mississippi.  Univercity  MS. U.  S.  A.  Planta  Med  Georg  Thieme Verlag KG Stutgart. New York.
[23] Talcott, Mertens. S. U., Jilma-Stihlawetz P., Rios  J.,  Hingorani  L.,  and  Darendorf  H., 2006. Absorption, Metabolism, and Antioxidant Effects of Pomegranate (Punica granatum L.) Polyphenols After ingestion of a Standarddized Extract in Healthy Human Volunteers. J. Agric Food Chem. Phermaceutics  Department.  University  of
Florida. Gainesville. Florida 32610. USA.
[24] Nugroho, B., 2007. Antioksidan. http://nugrohob.wordpress.com/2007/12/03/ antioksidan/
[25] Vattem ,  D.  A  and  K.  Shetty,  2004.
Biological  Functionality  of  Ellagic  Acid.
Molecular  and  Cellular  Nutrition  601 University San Marcos. TX 78666. laboratory of Food Biotechnology
Department  of  Food  Science  University  of Massachachusetts Amherst. MA 01003