## AKTIVITAS ANTIBAKTERI KAPANG ENDOFIT DARI TANAMAN KINA
( Cinchona calisaya
Wedd.)
Alfida Zakiyah 1, Nani Radiastuti 1* , La Ode Sumarlin 2
1 Program Studi Biologi, FST Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
2 Program Studi Kimia, FST Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
* Corresponding author : n_radiastuti@yahoo.com

## Abstract
Endophytic  microorganisms  are  microorganisms  that  live  in  the  tissues  of  plant  organ  and  not harm  its  host.  One  of  them  is  the  endophytic  fungi.  Endophytic  fungi  could  produce  the  same compound as the host plant. The Plants produced alkaloids quinine that could potentially inhibit the bacteria  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli.  This  study  aims  to  test  the  potential  of endophytic fungi produced quinine as an antibacterial. The method used to test the antibacterial is a paper disc diffusion. Results of the analysis of data using one-way ANOVA showed that there are significant  differences  zona  between  the  diametre  of  inhibitory  of  the  endophytic  fungi  extract. Endophytic  fungi  M16  and  M33  produced  the  greatest  inhibition  zone  against  Staphylococcus aureus and Escherichia coli 14.9 mm and 9.2 mm respectively.

## Keywords : Antibacterial, Cinchona plant, Endophytic fungi

## PENDAHULUAN
Tanaman  obat  merupakan  salah  satu sumber  bahan  baku  obat.  Sebagian  besar komponen  kimia  yang  berasal  dari  tanaman yang  digunakan  sebagai  bahan  baku  obat ialah  metabolit  sekunder.  Tanaman  mengha- silkan  metabolit  sekunder  dengan  struktur molekul  dan  aktivitas  biologi  yang  beraneka ragam  serta  berpotensi  untuk  dikembangkan menjadi  obat  berbagai  penyakit  (Semangun, 1996).
Tanaman  kina  ( Cinchona  calisaya Wedd.) sudah dikenal sebagai salah satu jenis tanaman  obat  yang  berkhasiat  untuk  mengo- bati  penyakit  malaria.  Khasiat  dari  tanaman ini  berasal  dari  senyawa  metabolit  sekunder berupa  kuinin  yang  terkandung  di  dalamnya. Senyawa  lain  yang  terkandung  dalam  ta- naman  kina  adalah  kinidin,  sinkonidin  dan sinkonin (Winarno, 2006).
Pemanfaatan sumber daya hayati tanaman  obat-obatan  dilakukan  dengan  cara mengekspalorasi  secara  fitokimia.  Cara  ini dilakukan  dengan  mengekstrak  bagian  ta- naman secara fisik dan kimia. Cara lain dalam memproduksi  senyawa  metabolit  sekunder sejenis  yang  terdapat  dalam  tanaman  adalah dengan  pemanfaatan  mikroorganisme  endo-
fitik  yang  hidup  dalam  jaringan  tanaman (Winarno,  2006).    Mikroorganisme  endofitik adalah  mikroorganisme  yang  hidup  dan berasosiasi  di  dalam  jaringan  tanaman  inang. Asosiasi  yang  terjadi  umumnya  bersifat mutualisme.  Kemampuan  mikroorganisme endofitik  memproduksi  senyawa  metabolit sekunder  sesuai  dengan  tanaman  inangnya merupakan  peluang  yang  sangat  baik  (Petrini et  al .,  1992).  Pemanfaatan  mikroorganisme endofit diharapkan dapat melestarikan tanaman  inangnya  yang  membutuhkan  waktu bertahun-tahun  untuk  tumbuh  dan  berkem- bang.
Metabolit  sekunder  yang  dihasilkan oleh  mikroorganisme  endofit  diduga  sama seperti yang terkandung di tanaman inangnya (Petrini et  al .,  1992).  Hal  ini  terjadi  karena adanya  kemungkinan  transfer  genetik  antara tanaman inang dan mikroba endofit, sehingga zat-zat  yang  bermanfaat  di  tanaman  juga dapat  dihasilkan  oleh  mikroba  endofitnya (Syarmalina et  al .,  2007).  Mikroba  endofit yang  berpotensi  memiliki  metabolit  yang sama dengan tanaman inangnya salah satunya kapang endofit. Beberapa penelitian mengenai kandungan  kuinin  pada  tanaman  kina  dan kapang  endofitnya  telah  dilakukan.  Kapang
endofit  yang  diisolasi  dari  tanaman  kina ( Cinchona  ledgeriana )  mengandung  kuinin sebesar 0,423 mg/L sedangkan kapang endofit dari  kina  ( Cinchona  Succirubra )  meng- hasilkan kuinin sebesar 0,080 mg/L (Winarno, 2006). Produksi senyawa alkaloid kuinin dari kapang  endofit  tanaman  kina  sudah  pernah dilaporkan,  namun  masih  sangat  sedikit informasinya.  Kapang  endofit  pada  tanaman kina berpotensi  menghasilkan alkaloid  kuinin khususnya yang diisolasi dari batang tanaman kina  (Winarno,  2006;  Maehara et  al., 2011; Simanjuntak et  al., 2002).  Penelitian  ini menggunakan  kapang  endofit  dari  berbagai bagian  tanaman  kina  untuk  diuji  potensinya sebagai antibakteri dan penghasil kuinin.
Kinin sulfat diketahui berpotensi menghambat bakteri Gram positif dan negatif seperti Staphylococcus  aureus , Enterobacter agglomerans,  Klebsiella  pneumonia dan Escherichia coli (Kharal et al ., 2009). Kapang endofit  genus Fusarium sp.  dari  lengkuas merah  ( Alpinia  galanga (L.)  (Wild)  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  aureus. Kapang  endofit Cladosporium sp.  dari lengkuas  merah  ( Alpinia  galanga (L.)  (Wild) dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri E. coli (Kusumaningtyas et  al .,  2010).  Isolat kapang endofit dari daun jambu biji ( Psidium guajava L.) Trichoderma sp.  mampu  meng- hambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli (Azizah, 2008). Saat ini informasi potensi antibakterial kapang  endofit  dari  tanaman  kina  ( Cincho- nacalisaya Wedd.)  belum  pernah  dilaporkan. Penelitian  ini  diharapkan  dapat  melaporkan beberapa  kapang  endofit  yang  telah  diisolasi dari  tanaman  kina  yang  berpotensi  sebagai antibakteri. Oleh karena itu perlu diteliti lebih lanjut  apakah  kapang  endofit  dari  beberapa strain  yang  diisolasi  dari  seluruh  bagian tanaman  kina  dapat  berpotensi  untuk  dijadi- kan senyawa antibakteri.

## MATERIAL DAN METODE
Sumber Isolat
Kapang endofit yang digunakan sebanyak  27  isolat.  Kapang  endofitdiisolasi dari  tanaman  kina  di  Pusat  Perkebunan  Teh dan  Kina  (PPTK),  Gambung,  Ciwidey, Bandung,  Jawa  Barat.Lokasi  Sampling  l7°
8'35.78"S,  107°30'59.55"E.  pH  tanah  6,8  dan kelembaban  tanah  35%.  Bahan  yang  digu- nakan  adalah  kapang  endofit  yg  digunakan sebanyak  27  dengan  genus  berbeda,  kultur bakteri S.  aureus ATCC  6538  dan  bakteri E. coli ATCC 8739.

## Persiapan Isolat Kapang Endofit
Isolat  Kapang  Endofit  sebanyak  27 dengan  genus  berbeda  ditumbuhkan  pada cawan  petri  berisi  media Potato  Dextrose Agar (PDA).

## Pembuatan Media Pembuatan Media PDA dan PDB
Sebanyak 39 g PDA dilarutkan di dalam 1000  ml  akuades  menggunakan  erlenmeyer. Larutan dihomogenisasi dan dididihkan menggunakan hot  plate dan magnetic  stirer. Media  PDA  lalu  disterilisasi  menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama ± 15 menit pada  tekanan  1,5  atm.  Media  dituang  ke cawan petri steril.
Sebanyak  26,4  g  PDB  dilarutkan  di dalam  1000  ml  akuades  menggunakan  erlen- meyer. Larutan dihomogenisasi menggunakan hot  plate dan magnetic  stirer. Media  dituang ke dalam botol besar sebanyak 200 ml. Media PDB  lalu  disterilisasi  menggunakan  autoklaf pada  suhu  121°C    selama  ±  15  menit  pada tekanan 1,5 atm.

## Subkultur Kapang Endofit
Masing-masing  isolat  kapang  endofit dari  37  isolat  ditanam  pada  media  PDA  di cawan petri selama ±7 hari. Miselium kapang yang  telah  tumbuh  diambil  dan  di  tanam kembali pada media PDA miring.

## Fermentasi Cair
Kapang yang sudah diremajakan selama ±  7  hari  pada  media  PDA  di  cawan  petri diambil menggunakan sedotan steril sebanyak 3  cuplikan.  Kapang  lalu  ditumbuhkan  secara duplo di dalam media PDB sebanyak 200 ml. Medium  berisi  kapang  dalam  kondisi  statis dan diletakkan pada suhu ruang (Zaini 2012). Proses  fermentasi  ini  berlangsung  selama  ± 21  hari  (Kharismaya  2010;  Bungihan et  al . 2013).

## Ekstraksi Metabolit Sekunder
Ekstraksi hasil  fermentasi  (duplo) dilakukan  dengan  pelarut  yang  berbeda. Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan
pelarut  kloroform  dan  etil  asetat.  Hasil fermentasi  pertama  dilarutkan  menggunakan kloroform  (CHCl 3 )  dan  hasil  kedua  meng- gunakan  etil  asetat  (EtOAc). Masing-masing ekstraksi  dilakukan  sebanyak  3  kali  dengan perbandingan  kultur  :  pelarut  =  1:1.  Filtrat (fraksi air) dan miselium (biomassa) dipisahkan (Kharismaya, 2010).
Bagian  biomassa  kapang  dihancurkan hingga  halus  lalu  dicampur  kembali  dengan filtrat  dan  ditambahkan  pelarut  (Bungihan et al., 2013).  Campuran  dikocok  atau  dishaker agar  tercampur  sempurna.  Ekstrak  yang didiamkan selama ± 2 hari akanmembentuk 2 fase  (Kharismaya,  2010).  Ekstraksi  dengan kloroform  diambil  fase  bagian  bawah, sedangkan ekstraksi dengan etil asetat diambil fase bagian atas.
Hasil  ekstraksi  lalu  dipekatkan  meng- gunakan rotary  evaporator .  Ekstrak  dengan kloroform  dipekatkan  pada  suhu  ≤  45°C, sedangkan  hasil  ekstraksi  dengan  etil  asetat dipekatkan  pada  suhu  ≤  60°C  (Winarno, 2006,  Bungihan et  al., 2013).  Bobot  ekstrak diper-oleh  dari  selisih  antara  bobot  botol berisi  ekstrak  dan  bobot  botol  kosong (Azhari, 2012).

## Preparasi Inokulum Bakteri Uji
Sebanyak  1  ose  masing-masing  koloni bakteri  uji  diambil  dari  kulturpersediaan  dan digoreskan  pada  permukaan  agar  miring. Bakteri uji lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37-38ºC. Biakan bakteri uji umur 24 jam diinokulasikan  sebanyak  1  ose  ke  dalam  30 ml  media  NB  steril.  Bakteri  uji  diinkubasi pada rotary  shaker hingga  koloni  bakteri  ter- suspensi.  Sampling S.  aureus dan E.  coli dilakukan  berdasarkan  fase  midlog,  telah diketahui  fase mid  log untuk S.  aureus pada menit  ke  600,  sedangkan E.  coli pada  menit ke-450  jumlah  sel  8,70  x  10 8 selml -1 dan jumlah sel 5,90 x 10 8 selml -1 Jauhari 2010).
Teknik inokulasi bakteri yang dilakukan dalam  penelitian  ini  adalah pour  plate . Sebanyak  1  ml  suspensi  masing-masing  bak- teri  uji  diinokulasikan  ke  dalam  erlenmeyer 200  ml  yang  berisi  100  ml  media  NA  yang masih cair (≤45°C). Campuran dihomogenkan
dengan  sedikit  pengocokan  seperti  angka delapan  agar  suspensi  tercampur  rata,  kemu- dian  dituang  ke  dalam  cawan  petri  dan didiamkan  hingga  campuran  suspensi  bakteri uji membeku.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Hasil  sampel  yang  sudah  dipekatkan lalu ditimbang dan dilarutkan kembali dengan pelarut  organik  dengan  konsentrasi  yang sama.  Sekitar  10  μl  sampel  (1000  ppm) diteteskan  ke  kertas  cakram  steril  berukuran diameter  6  mm,  yang  selanjutnya  digunakan untuk uji aktivitas antibakteri (Azizah, 2008).
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilaku- kan dengan metode Kirby-Bauer atau metode difusi  cakram.  Setiap  kertas  cakram  steril yang ditetesi sampel ekstraksi didiamkan ±15 menit.  Secara  aseptik  kertas  cakram  dile- takkan  dalam  cawan  petri  yang  berisi  bakteri uji.  Kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu cakram kloramfenikol 10 μl dan kuinin 10 μl (1000  ppm).  Kontrol  negatif  yang  digunakan adalah  cakram  yang  ditetesi  akuades  steril, kloroform dan etil asetat.
Pengujian dilakukan sebanyak tiga kali. Cakram  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama 18-24  jam,  lalu  dilakukan  pengukuran  zona hambat  di  sekitar  cakram  menggunakan jangka sorong (Azizah, 2008). Diameter zona hambat  ialah  diameter  yang  tidak  ditumbuhi oleh bakteri pada kertas cakram.

## Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode penelitian  eksperimen  dengan  menggunakan desain Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri atas tiga kali pengulangan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Aktivitas  Antibakteri  Kapang  Endofit Terhadap Bakteri Uji
Aktivitas  antibakteri  dapat  diketahui dengan  melihat  ada  atau  tidaknya  daerah hambatan  (zona  hambat)  pada  pertumbuhan bakteri  di  media  padat.  Adapun  rata-rata diameter  zona  hambatan  dari  uji  aktivitas antibakteri tersebut dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 . Zona hambat hasil ekstraksi kapang endofit dengan pelarut etil asetat
Kapang  endofit  kina  tidak  seluruhnya  positif menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji.  Daya hambat  ekstrak  kapang  menggunakan  etil asetat  terhadap  bakteri  uji  dapat  dilihat  pada Gambar 1, Hasil zona hambat dari ektrak etil asetat  terhadap  bakteri  S.  aureus  dihasilkan zona  yang  cukup  besar  oleh  kapang  M16, M19, M35, M49 dan M51.
Etil  asetat  dan  akuades  steril  yang digunakan  sebagai  kontrol  negatif  tidak menghasilkan  zona  hambat  karena  keduanya terbukti  tidak  memiliki  kemampuan  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Kontrol positif  kuinin  sulfat  dan  antibiotik  kloram- fenikol  digunakan  untuk  membanding-kan zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak kapang  endofit.  Ekstrak  kapang endofit  M16, M19,  M35,  M49  dan    M51  menghasilkan zona  hambat  lebih  besar  dari  kontrol  kuinin terhadap S.  aureus masing-masing  sebesar 11,26  mm,  10,20  mm,  8,83  mm,  10,80  mm dan 7,40 mm.
Analisis  data  menunjukkan  zona  ham- bat kapang endofit ekstrak etil asetat terhadap bakteri S.  aureus dan E.  coli diperoleh  nilai Ftabel  <  Fhitung  dan  nilai  p  <  0,05  seperti yang  telah  dilampirkan.  Kesimpulan  yang diperoleh dari hasil tersebut adalah H0 ditolak dan  H1  diterima.  Hal  ini  dapat  dikatakan
bahwa  terdapat  perbedaan  yang  signifikan pada  diameter  zona  hambat  antar  isolat ekstrak etil asetat.
Berdasarkan  hasil  analisis  data  meng- gunakan  SPSS  ANOVA  satu  arah  ( One  way ) pada  uji  Duncan,  kapang  endofit  M16 memiliki  zona  hambat  terhadap  bakteri S . aureus paling  besar  (11,2  mm).  Kapang endofit  M23  memiliki  zona  hambat  terbesar terhadap  bakteri E.  coli (6,3  mm).  Zona hambat  yang  dihasilkan  oleh  seluruh  kapang endofit ekstrak etil asetat lebih kecil dari zona hambat  kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif terhadap  bakteri  uji.  Zona  hambat  kapang endofit  terhadap  bakteri E.  coli seluruhnya lebih  kecil  dari  zona  hambat  dari  kuinin sebagai kontrol positif.
Hasil  uji  antibakteri  ekstrak  kapang endofit  menggunakan  pelarut  etil  asetat memperlihatkan  nilai  rata-rata  zona  hambat terhadap  bakteri S.  aureus lebih  besar  diban- dingkan  besar  zona  hambat  terhadap  bakteri E. coli. Kapang endofit kina tidak seluruhnya positif  menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji yang diekstraksi dengan etil asetat. Hasil zona hambat  ekstrak  etil  asetat  terhadap  bakteri S. aureus cukup  besar  dihasilkan  oleh  kapang endofit  M16,  M19,  M35,  M49  dan  M51.
Gambar 2 . Zona hambat hasil ekstraksi kapang endofit dengan pelarut kloroform
Hasil zona hambat terbesar sebesar 14,6 mm  dan  terkecil  5,5  mm  dari  ekstrak  kloro- form  terhadap  bakteri S.  aureus yang  terlihat pada Gambar 2. Masing-masing zona hambat dihasilkan  oleh  ekstrak  kapang  endofit    M16 dan  kapang  endofit  M35.  Zona  hambat terbesar  (9,2  mm)  dan  terkecil  (5,7  mm) terhadap  bakteri E.  coli dihasilkan  oleh ekstrak  kapang  endofit  M33  dan  M97, sedangkan  pelarut  kloroform  dan  akuades sebagai kontrol negatif terbukti tidak menghasilkan  area  zona  hambat  terhadap bakteri uji.
Kontrol  positif  kuinin  dan  antibiotik kloramfenikol  digunakan  untuk  memban- dingkan    zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh ekstrak  kapang.  Ekstrak  kapang  M16,  M25, M33,  M63  menghasilkan  zona  hambat  yang lebih  besar  dari  kontrol  positif  kuinin  terha- dap  bakteri S.aureus masing-masing  sebesar 14,66 mm, 12,80 mm, 13,76 mm, 12,30 mm. Ekstrak  kapang  M16,  M23,  M25,  M33, menghasilkan  zona  hambat  yang  lebih  besar dari  kontrol  positif  kuinin  terhadap  bakteri E.coli masing-masing  sebesar  7,70  mm,  6,70 mm, 6,56 mm, 9,26 mm (Gambar 2).
Hasil  zona  hambat  kapang  endofit ekstrak  kloroform  terhadap  bakteri S.  aureus dan E.  coli .  dari  analisis  data  menunjukkan
nilai  Ftabel  <  Fhitung  dan  nilai  p  <  0,05 dengan kesimpulan yang diperoleh adalah H0 ditolak  dan  H1  diterima.  Hal  ini  dapat  dika- takan  bahwa  terdapat  perbedaan  yang signifikan  pada  diameter  zona  hambat  antar isolat  ekstrak  kloroform.  Berdasarkan  hasil analisis  data  mengguanakan  SPSS  ANOVA satu  arah  ( One  way )  uji  lanjut  Duncan, kapang  endofit  M16  memiliki  zona  hambat terhadap  bakteri S.  aureus paling  besar, sedangkankapang  endofit  M23  menunjukkan zona hambat terbesar terhadap bakteri E. coli . Beberapa ekstrak kapang endofit menghasilkan  zona  hambat  yang  lebih  besar dari  kontrol  kuinin  sulfat  terhadap  bakteri S.aureus .  Hal  ini  diduga  kapang  endofit menghasilkan senyawa yang lain selain kuinin sulfat  yang  dapat  berperan  sebagai  antibak- teri.  Mikroorganisme  endofit  dapat  mengha- silkan  senyawa  bioaktif  selain  senyawa  yang terkandung di tanaman inangnya.
Semakin  besar  zona  hambat  maka semakin  besar  aktivitas  antibakteri  yang  ada (Pratiwi,  2008).  Zona  hambat  ekstrak  kapang endofit  menggunakan  etil  asetat  seluruhnya lebih  kecil  daripada  zona  hambat  dari  anti- biotik kloramfenikol, sehingga ekstrak kapang endofit  belum  memiliki  kemampuan  sebesar antibiotik  kloramfenikol  dalam  menghambat
bakteri  uji.  Hasil  ekstraksi  bahan  bioaktif alami  tidak  sebanding  dengan  senyawa  anti- bakteri yang terkandung dalam kloramfenikol.
Hal  ini  diduga  kapang  endofit  mengha- silkan  senyawa  yang  lain  selain  kuinin  sulfat yang  dapat  berperan  sebagai  antibak-teri. Mikroorganisme  endofit  dapat  menghasilkan senyawa bioaktif selain senyawa yang terkan- dung  di  tanaman  inangnya  (Pratiwi,  2008). Hasil  ini  menunjukkan  zona  hambat  yang dihasilkan  ekstrak  kapang  endofit  menggu- nakan  kloroform  ternyata  lebih  efektif  dalam menghambat  bakteri S.  aureus dan E.  coli dibandingkan  ekstrak  kapang  endofit  dengan etil asetat.
Hasil  pengujian  antibakteri  kontrol positif  antibiotik  kloramfenikol  terhadap bakteri S.  aureus dan E.  coli menunjukkan adanya  zona  hambat.  Antibiotik  kloram- fenikol  memiliki  spektrum  yang  luas  atau memiliki  kemampuan  dalam  menghambat pertumbuhan  dari  bakteri  Gram  positif  dan bakteri  Gram  negatif.  Besar  zona  hambat yang  dihasilkan  pada  penelitian  ini  terhadap bakteri S.  aureus dan E.  coli ialah  sebesar 14,5 mm dan 17 mm.
Zona  hambat  terbesar  dari  ekstrak kloroform  dan  etil  asetat  terhadap  bakteri  uji dihasilkan  oleh  kapang  endofit  M16.  Hal  ini karena  kapang  endofit  M16  diduga  memiliki kemampuan  untuk  menghasilkan  senyawa bioaktif  antibakteri  yang  lebih  tinggi  diban- dingkan  kapang  endofit  lainnya.  Kapang endofit Fusarium sp. dari lengkuas merah dan daun  mimba  dapat  menghasilkan  senyawa seperti fenol untuk menghambat pertumbuhan bakteri S.  aureus dan E.  coli (Astuti,  2005, Kusumaningtyas et  al .,  2010).  Zona  hambat yang dihasilkan kapang endofit ekstrak kloro- form  rata-rata  lebih  besar  dibandingkan  eks- trak etil asetat. Hal ini diduga karena senyawa yang  ada  pada  kapang  endofit  lebih  mudah larut atau ditarik oleh pelarut non polar seperti kloroform.  Sebagian  besar  senyawa  alkaloid dapat  larut  atau  disari  oleh  pelarut  non  polar seperti kloroform (Wibisana, 2010).
Ekstraksi  kapang  endofit  menggunakan pelarut  kloroform  dan  aetil  asetat  menghasil- kan rata-rata diameter zona hambat yang lebih luas  terhadap  pertumbuhan  bakteri S.  aureus
dibandingkan  bakteri E.  coli .  Bakteri S. aureus lebih  peka  terhadap  metabolit  yang dihasilkan kapang endofit daripada bakteri E. coli .  Hal  ini  disebabkan  adanya  perbedaan struktur dinding sel bakteri Gram positif yang diwakili  oleh S.  aureus dan  bakteri  Gram- negatif  yang  diwakili  oleh  bakteri E.  coli . Struktur  dinding  sel  bakteri  Gram  positif relatif  sederhana  yang  terdiri  atas  tiga  lapis yaitu  selaput  sitoplasmik,  lapisan  peptide- glikan  dan  lapisan  luar  yang  disebut  simpai. Sebaliknya, bakteri Gram negatif mempunyai struktur  yang  berlapis-lapis  dan  sangat  kom- pleks (Pratiwi, 2008).
Struktur  dinding  sel  bakteri  Gram positif yang relatif sederhana tersebutlah yang menyebabkan  antibiotik  lebih  mudah  masuk ke  dalam  sel  dan  menemukan  sasaranuntuk bekerja  (Pratiwi,  2008).  Hal  ini  berbeda dengan  bakteri  Gram  negatif,  dimana  anti- biotik  harus  melewati  struktur  dinding  sel yang  relatif  kompleks.  Kerja  antibiotik  pada bakteri Gram negatif seperti E. coli , pertama- tama  harus  menembus  membran  terluar  selu- bung  bakteri  secara  difusi  pasif  melalui saluran  yang  terbentuk  oleh  pori  protein. Setelah  menembus  membran  terluar,  anti- biotik  masuk  melalui  dinding  sel  melewati ruang periplasma dan mencapai sasaran, yaitu enzim  serin  protease  yang  terdapat  pada membran terdalam (sitoplasma). Enzim inilah yang bertanggung jawab terhadap biosintesis- dinding  sel  (Siswandono,  1995).  Lapisan lipopolisakarida  yang  dimiliki  bakteri  Gram negatif  dapat  berfungsi  mencegah  kerusakan sel  terhadap  enzim  dan  bahan  kimia  yang dapat  merusak  sel.  Lisozim  dapat  merusak bakteri  Gram  positif,  sedangkan  pada  bakteri Gram  negatif  lapisan  membran  luar  yang dimilikinya  mencegah  kerusakan  sel  bakteri, oleh  karena  enzim  tersebut  tidak  dapat menembus  lapisan  membran  luar  (Pratiwi, 2008).
Kemampuan  ekstrak  etil  asetat  kapang endofit  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri  Gram  positif  disebabkan  terdapatnya metabolit sekunder yang dihasilkan. Mekanis- me  penghambatan  pada  bakteri  Gram  positif, yaitu  merusak  lapisan  peptidoglikan  pada  sel bakteri  sehingga  menyebabkan  ikatan  hidro-
gen  antara  peptida  yang  menyusun  lapisan peptidoglikan  tidak  terbentuk  secara  utuh (Ainurrochmah et al., 2013).
Prescott et  al., (2005)  mengatakan, aktifvitas  antibakteri  antibiotik  kloramfenikol dibagi  menjadi  tiga  yaitu  diameter  12  mm termasuk  kategori  resisten,  13-17  mm  terma- suk intermediet dan >18 mm merupakan kate- gori  yang  sensitif.  Berdasarkan  zona  hambat yang  terbentuk  dapat  diketahui  bahwa  ke- mampuan  kloramfenikol  terhadap  bakteri  uji termasuk kategori intermediet.
Diameter  zona  hambat  dari  ekstrak kapang endofit M16 hasil ekstraksi kloroform terhadap  bakteri S.  aureus ternyata  melebihi zona  hambat  kloramfenikol,  sedangkan  dia- meter  zona  hambat  kapang  M16  terhadap bakteri E.  coli sebesar  11,2  mm.  Dapat  dike- tahui bahwa kapang endofit M16 hasil ekstrak kloroform  memiliki  kemampuan  yang  sama dengan  kloramfenikol  dalam  mengham-bat bakteri S.  aureus dan  termasuk  kategori intermediet,  sedangkan  kemampuan  antibak- teri  kapang  endofit  hasil  ekstrak  kloroform ataupun  etil  terhadap  bakteri E.  coli lebih rendah  dibandingkan  dengan  kloramfenikol. Perbedaan  kemampuan  dalam  memproduksi senyawa  antibakteri  dari  hasil  ekstraksi  etil asetat  dan  kloroform  menunjukkan  adanya perbedaan  senyawa  bioaktif  yang  dihasilkan oleh  masing-masing  hasil  ekstraksi  begitu juga  perbedaan  konsentrasi  yang  dihasilkan. Oleh karena itu, perlu dilakukan analisis lebih lanjut  untuk  mengetahui  senyawa-senyawa yang  dapat  diperoleh  dari  hasil  ekstraksi dengan pelarut etil asetat dan kloroform  yang memiliki kemampuan sebagai antibakterial.

## KESIMPULAN
Kapang  endofit  dari  tanaman  kina  ( C. calisaya )  memiliki  potensi  sebagai  senyawa antibakteri.  Kapang  endofit  M16  memiliki zona  hambat  terbesar  terhadap  bakteri S. aureus sebesar  14,9  mm  dan  kapang  endofit sp.1  memiliki  zona  hambat  sebesar  9,2  mm terhadap E. coli.

## DAFTAR PUSTAKA
Ainurrochmah, A., Ratnasari, E., &  Lisdiana.
(2013).  Efektivitas  ekstrak  daun  Bina- hong  ( Anredera  cordifolia )  terhadap penghambatan pertumbuhan bakteri Shigella flexneri dengan metode sumur- an. Ejournal  Lantera  Bio .  2(3),  233- 237.
Astuti,  P.  D.  (2005).  Isolasi  komponen  aktif antibankteri  ekstrak  kloroform  daun Mimba  ( Azadirachta  indica A.  Juss) dengan Bioautografi. 3(2), 43-46.
Azhari,  A.  (2012).  Aktivitas  Sitotoksik  dan Apoptosis  Sel  Khamir  Ekstrak  Kloro- form  Kapang  Endofit Evodia  suaveo- lens . Skripsi .  Departemen  Biokimia.
Fakultas MIPA. IPB. Bogor.
Azizah, N. N. (2008). Isolasi dan Identifikasi Jamur  Endofit  dari  Daun  Jambu  Biji ( Psidium  guajava L.)  Penghasil  Anti- bakteri  Terhadap  Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Skripsi .
Departemen Biologi. Fakultas Sains dan Teknologi. UIN. Malang.
Bungihan,  M.,  Tan,  A.  M.,  Takayama,  H., Cruz, D. E., & Nonato, G. M. (2013). A new  macrolide  isolated  from  the endophytic  fungus Colletotrichum sp. Philippine Science Letters 6 (1), 57-73. Jauhari, L. T. (2010). Seleksi dan Identifikasi Kapang  Endofit  Penghasil  Antimikroba Penghambat Pertumbuhan Mikroba Patogen. [Skripsi] .  Departemen  Biologi Fakultas  Sains  dan  Teknologi.  UIN. Jakarta.
Kharal,  A.  S.,  Hussain,  Q.,  Ali,  S.,  &
Fakhuruddin. (2009). Quinine is bactericidal. J  Pak  Med  Assoc 59,  208- 211.
Kharismaya,  W.  (2010).  Biotransformasi palmatin  oleh  jamur  endofit  dari  tum- buhan  akar  kuning  ( Arcangelisa  flava L. Merr). [Skripsi] . Departemen Farma- si.  Fakultas  Kedokteran  dan  ilmu Kesehatan.  Universitas  Islam  Negeri Syarif Hidayatullah. Jakarta.
Kusumaningtyas, E., Natasia, M., & Darmono.  (2010).  Potensi  metabolit kapang endofit rimpang lengkuas merah dalam menghambat pertumbuhan
Escherichia  coli  dan  Staphylococcus aureus dengan  media  fermentasiPotato Dextrose  Broth  (PDB)  dan  Potato
Dextrose Yeast (PDY) . Prosiding
Teknologi  Peternakan  dan  Veteriner Ramah  Lingkungan  dalam  Mendukung Program  Swasem-bada  Daging  dan
Peningkatan Keta-hanan Pangan . Bogor. 819-824.
Maehara,  S.,  Simanjuntak,  P.,  Kitamura,  C., Ohashik,  &  Shibuya,  H.  (2011). Cinchona Alkaloids Are Also Produced by  an  Endophytic  Filamentous  Fungus Living in Cinchona Plant. Chem Pharm Bull . 59(8), 1073-1074. Pratiwi,  S.  T.  (2008). Mikrobiologi  Farmasi .
Erlangga. Jakarta.
Petrini, O., Sieber, T. N., Toti, L., & Viret, O.
(1992).  Ecology  metabolite  production and  substrate  utilization  in  endophytic fungi . Natural Toxins 1, 185-196.
Prescott, L. M., Harley,  J. P., & Klein, D.  A. (2002) .  Microbiology .  Sthed.  New York. Mac Graw Hill.
Simanjuntak, P., Bustanussalam, Prana, T. K.,
Ohashi,  K.,  &  Shibuya,  H.  (2002).
Produc-tion  Of  Quinine  Alkaloid  By
Some Endophytic Microbes With Addition Of Inducer Substances [Studies  on  Endophytic  Microbes  of
Cinchona sp.  plants  (2)]. Majalah Farmasi Indonesia 13(1), 1-6. Semangun,  H.  (1996). Pengantar  Ilmu Penyakit Tumbuhan. Yogyakarta: UGM Press.
Syarmalina,  W.,  Lely,  &  Laupa,  N.  (2007).
Uji  sitotoksik  hasil  fermentasi  kapang endo-fit  buah  mahkota  dewa  ( Phaleria mac-rocarpa )  terhadap  sel  MCF-7. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia 5(1), 23-24.
Wibisana,  A.  (2010).  Difusi  teknologi ekstraksi kinin dan sinkonin dari produk samping  lndustri  kina  dan  sintesis turunannya. Tugas Akhir . Balai Pengkajian  Biotek-nologi,  TAB,  BPPT.
Jakarta. Winarno, E. K. (2006). Produksi alkaloid oleh mikroba  endofit  yang  diisolasi  dari batang kina Cinchona ledgeriana Moens  dan Cinchona  Pubescens Vahl ( Rubiaceae ). Jurnal  Kimia  Indonesia.
1(2), 59-66.
Zaini, N. C., Indrayanto, G., & Sugiyanto, N. E.  N.  (2012).  Produksi  antibiotika  baru dari jamur endofit Cladosporium oxysporum dari tumbuhan Aglaia odorata Lour. Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.