## AKTIVITAS ANTIMIKROBA DARI EKSTRAK DAN FRAKSI ORGANISME LAUT SPONS Stylissa carteri YANG DIKOLEKSI DARI PERAIRAN SELAT LEMBEH KOTA BITUNG
Cavieta Ciendy Ashtita Watupongoh 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Henki Rotinsulu 1) 1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Sponge is a multi-cell marine biota whose tissue and organ functions are very simple. Sponges have considerable potentially in producing active compounds that  can be used in the pharmaceutical world. This study aimed to determine the presence of antimicrobial activity from extracts and fractions of the Stylissa carteri Sponge on against the microbes of Staphylococcus aureus, Escherichia coli, and Candida  albicans.  The  extraction  process  was  carried  out  by  maceration  using  ethanol  solvent,  and fractionation  was  carried  out  using  methanol,  n-hexane  and  chloroform  solvents.  Antimicrobial activity  was  carried  out  by  disk  diffusion  agar  method.  The  results  showed  that  the  crude  ethanol extracts  and  methanol  fractions  of  the  Stylissa  carteri  sponge  actively  inhibited  the  growth  of Staphylococcus aureus, Escherichia coli, and Candida albicans microbes.
Keywords : Stylissa carteri, antimicrobial, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans.

## ABSTRAK
Spons  merupakan  biota  laut  multi  sel  yang  fungsi  jaringan  dan  organnya  sangat  sederhana. Spons memiliki potensi cukup besar dalam  menghasilkan senyawa aktif yang dapat digunakan dalam dunia  farmasi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  adanya  Aktivitas  Antimikroba  dari  ekstrak dan  fraksi  Spons Stylissa  carteri terhadap  mikroba Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli ,  dan Candida  albicans .  Dilakukan  proses  ekstraksi  dengan  cara  maserasi  terhadap  sampel  menggunakan pelarut  etanol,  dan  dilakukan  fraksinasi  menggunakan  pelarut  metanol,  n-heksan  dan  kloroform. Aktivitas  antimikroba  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak  kasar  dan  fraksi  metanol  dari  spons Stylissa  carteri aktif  menghambat  pertumbuhan  mikroba Staphylococcus aureus, Escherichia coli , dan Candida albicans.
Kata  Kunci : Stylissa  carteri ,  antimikroba, Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli,  Candida albicans.

## PENDAHULUAN
Indonesia  sebagai  negara  yang  sangat kaya  dengan  sumber  daya  alam  yang melimpah  dengan  luas  lautannya  terdiri  dari 5,8 juta km²  atau sekitar 70% dari luas total wilayah Indonesia. Wilayah lautan Indonesia terdapat  berbagai  macam  spesies  organsime laut  baik  tumbuhan  maupun  hewan.  Salah satu  invertebrata  yang  jumlahnya  sangat banyak  di  lautan  Indonesia  ialah  spons. Spons  laut  memiliki  potensi  bioaktif  yang sangat  besar.  Selama  50  tahun  terakhir  telah banyak  kandungan  bioaktif  yang  ditemukan. Kandungan  bioaktif  tersebut  dikelompokan kedalam  kelompok  yang  besar  seperti antiflammantory, antitumor, antivirus, antimalaria, antibiotik (Rasyid, 2009).
Senyawa antimikroba yang dihasilkan oleh  mikroba  pada  umumnya  merupakan metabolit  sekunder  yang  tidak  digunakan untuk  proses  pertumbuhan,  tetapi  digunakan untuk pertahanan diri dan persaingan dengan mikroba  lain  dalam  mendapatkan  nutrisi, habitat,  oksigen  dan  cahaya.  Antimikroba dapat  digolongkan  dalam  antibakteri  atau antifungi.  Beberapa  ekstrak  yang  didapatkan memiliki  kemampuan  dalam  menghambat pertumbuhan  mikroba.  Ekstrak  ialah  sediaan yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa  aktif  dari  simplisia  nabati  atau hewani  menggunakan  pelarut  yang  sesuai, kemudian  semua  atau  hampir  semua  pelarut diuapkan (Ditjen POM, 2000).
Spons  ialah  salah  satu  hewan  dari filum  porifera  juga  merupakan  invertebrata laut  yang  hidup  pada  ekosistem  terumbu karang. Spons merupakan biota laut multi sel yang  fungsi  jaringan  dan  organnya  sangat sederhana.  Spons Stylissa  carteri dapat menghasilkan metabolit sekunder dari proses
metabolisme  dalam  sel  yang  ada  pada tubuhnya.  Adapun  metabolit  sekunder  yang dihasilkan  memiliki  struktur  yang  khas dibandingkan  spesies-spesies  organisme  laut lainnya,  karena  bergantung  pada  lingkungan dan  interaksi  (simbiosis)  dengan  organisme lainnya, baik pada organisme yang menguntungkan  maupun  predator.        Dari berbagai  penelitian,  spesies  ini  memiliki senyawa metabolit sekunder berupa alkaloid, steroid,  dan  terpenoid  (Gozcelioglu  dan Konuklugil, 2012).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan September 2018 sampai bulan Desember  2018  di  Laboratorium  Farmasi Lanjutan,  Laboratorium  Farmakologi  serta Laboratorium  Mikrobiologi  Program  Studi Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi. Bentuk Penelitian Bentuk penelitian ini ialah eksperimen  laboratorium  yang  akan  menguji komponen yang diekstrak dari Spons Stylissa carteri sebagai  antimikroba  yang  diperoleh dari perairan Selat Lembeh.
Alat dan Bahan
a. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini  yaitu  masker,  sarung  tangan,  gunting, pisau,  tabung  oksigen,  snorkel,  fins, zipper lock  bag ,  botol  600  ml,  talenan, cool  box , kamera underwater ,  erlenmeyer  (Pyrex), corong,  oven , timbangan  analitik,  spatula, corong  pisah,  gelas  ukur,  gelas  kimia (Pyrex),  cawan  petri,  autoklaf,  pinset, pembakar  spritus, vortex  mixer , micro  tubes , batang  pengaduk, Laminar  air  flow, rak tabung reaksi, tabung reaksi, lemari
pendingin,  inkubator,  cakram  ( paper  disc) , mikropipet, digital  caliper ,  kertas  label, spidol permanen.
b. Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu
Spons Stylissa carteri , mikroba uji Staphylococcus aureus , Escherichia coli , dan Candida  albicans ,  etanol  96%,  akuades, metanol, n-heksan, kloroform, nutrient broth, nutrien agar, potato dextrose agar, kloramfenikol,  kertas  cakram,  label,  spidol permanen,  tissue,  aluminium  foil,  kertas saring, kapas.
Prosedur Penelitian Ekstraksi Spons Stylissa  carteri. ,  sebanyak  288 g  diekstraksi  dengan  menggunakan  cara maserasi. Sampel dipotong kecil-kecil dengan  ukuran  1  cm²  lalu  dimasukkan  ke dalam  botol  dan  direndam  dengan  larutan etanol  96%  sampai  sampel  terendam  secara keseluruhan  dan  dibiarkan  selama  24  jam. Sampel  yang  direndam  disaring  dengan menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  1  dan  debris  1.  Debris  1  direndam dengan  larutan  etanol  96%  sampai  sampel terendam  secara  keseluruhan  kemudian dibiarkan  selama  24  jam.  Sampel  tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 2 dan debris 2. Debris 2 kemudian  direndam  dalam  larutan  etanol 96%  sampai  sampel  terendam secara keseluruhan  dan  dibiarkan  selama  24  jam, sampel tersebut disaring menggunakan kertas saring  menghasilkan  filtrat  3  dan  debris  3. Filtrat  1,  2  dan  3  dicampur  menjadi  satu kemudian disaring, lalu dievaporasi menggunakan rotary  evaporator sehingga didapat ekstrak kasar Spons Stylissa carteri ., kemudian ditimbang menggunakan timbangan  analitik,  diperoleh  ekstrak  etanol sebanyak  2,64  g.  Selanjutnya  ekstrak  etanol
Spons Stylissa  carteri digunakan  dalam fraksinasi dan pengujian antimikroba.

## Fraksinasi
Sebanyak 1,00 g ekstrak etanol Spons Stylissa  carteri dimasukkan  ke  dalam Erlenmeyer  dan  dilarutkan  dengan  100ml metanol  80%.  Setelah  sampel  larut,  sampel dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak  100 mL.  Sampel  kemudian  dikocok  berulangkali dalam corong pisah hingga homogen. Sample dibiarkan hingga membentuk lapisan metanol (MeOH)  dan  lapisan  n-heksan.  Masing- masing lapisan metanol dan lapisan n-heksan ditampung  di  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  n-heksan  selanjutnya  dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga kering,  lalu  ditimbang  dengan  timbangan analitik  dan  diperoleh  fraksi  n-heksan sebanyak 1,75 g. Selanjutnya lapisan metanol ditambahkan  dengan  akuades  100  mL, kemudian dipartisi  dengan pelarut  kloroform menggunakan  perbandingan  1:1  v/v  setelah itu  dikocok  dalam  corong  pisah  hingga homogen.  Lapisan  metanol  dibiarkan  hingga membentuk dua lapisan yaitu lapisan metanol dan lapisan kloroform. Masing-masing lapisan  metanol  dan  lapisan  kloroform ditampung  ke  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan kloroform dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga  kering  lalu ditimbang  dengan  timbangan  analitik  dan diperoleh fraksi kloroform sebanyak 1,484 g. Lapisan  metanol  yang  ditampung  pada wadah  lain  dievaporasi  menggunakan rotary evaporator hingga  kering  lalu  ditimbang dengan  timbangan  analitik  dan  diperoleh fraksi  metanol  sebanyak  7,4  g.  Ketiga  fraksi yang  diperoleh  akan  digunakan  dalam pengujian  antimikroba.  Rendemen-rendemen ekstrak dan fraksi dihitung dengan persamaan berat hasil ekstrak/fraksi
dibagikan  dengan  berat  awal  ekstrak/fraksi kemudian dikalikan dengan 100%.

## Sterilisasi dan Pembuatan Media Sterilisasi Alat
Alat-alat gelas yang digunakan dalam penelitian aktivitas antimikroba ini disterilkan terlebih dahulu dengan menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121  ºC selama  15  menit,  pinset  dibakar  dengan pembakaran  di  atas  api  langsung  dan  media disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu  121  ºC selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair BI
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g, natrium  klorida  0,3  g  dan  akuades  sebanyak 100  ml  diaduk  sampai  homogen  kemudian disterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu  121˚C selama 15 menit dan setelah itu didinginkan. Setelah  dingin,  media  cair  B1  di  tutup dengan aluminium  foil (Dwijendra et  al , 2014).

## Pembuatan Media Uji
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g, natrium klorida 0,3 g, agar 1,5 g dan akuades sebanyak  100  ml  diaduk  sampai  homogen kemudian  disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu 121˚C  selama  15  menit  (Dwijendra et  al ., 2014).

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara  1  mg ekstrak kasar Spons Stylissa carteri. dilarutkan  dalam  200  μL  metanol  dan dikocok  hingga  homogen  menggunakan vortex. Perlakuan  yang sama dilakukan pada fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian aktivitas  antimikroba  ini  menggunakan kloramfenikol paper  disc .  Kontrol  negatif yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu menggunakan  pelarut  metanol,  dengan  cara membuat  larutan  stok  metanol  dengan mengambil  sebanyak  200  μL  metanol kemudian  di  totolkan  pada paper  disc (Lalamentik, 2017).

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Pada  pengujian aktivitas  antimikroba  ini,  cakram  ( paper disc )  yang  digunakan  berukuran  6  mm dengan  daya  serap  50  μL  tiap  cakram. Sebanyak  300  μL  mikroba  yang  telah dikultur,  dipipet  dan  diinokulasi  pada  30  ml media agar lalu diaduk  hingga homogen dan kemudian  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri dan  tunggu  sampai  media  agar  mengeras. Kemudian,  larutan  uji  yang  telah  disiapkan ditotolkan  pada  masing-masing  cakram dengan  menggunakan  mikropipet.  Setelah agar  mengeras,  kertas  cakram  yang  telah ditotolkan  sampel  Spons Stylissa  carteri , kontrol positif dan kontrol negatif diletakkan ke  dalam  cawan  petri  dengan  menggunakan pinset.  Selanjutnya,  cawan  petri  diberi  label dan  diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu 37 0 C selama 1 x 24 Jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Hambat
Pengamatan dilakukan setelah 24 jam masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitar  cakram menunjukkan  kepekaan  mikroba  terhadap antibiotik  atau  bahan  antimikroba  yang digunakan sebagai bahan uji yang dinyatakan
dengan diameter zona bening. Diameter zona bening diukur menggunakkan digital caliper .
Kemudian  zona  bening  yang  telah  diukur, dikategorikan  berdasarkan  pedoman  Davis dan Stout (1971).

## Hasil dan Pembahasan
Ekstraksi dan Fraksinasi
Spons Stylissa  carteri yang  telah diambil  dari  Selat  Lembeh  Bitung  dipotong kecil-kecil  dengan  ukuran    ±1cm 2 .  Hal  ini bertujuan  untuk    memperbesar  ukuran permukaan sampel sehingga proses  ekstraksi dapat  berjalan  optimal  karena  semakin  luas permukaan  sampel  maka  interaksi  antara pelarut  dan  sampel  semakin  baik.  Sampel kemudian  di  ekstraksi  dengan  menggunakan metode maserasi.
Penggunaan  metode  maserasi  paling mengguntungkan pada isolasi senyawa bahan alam  laut,  karena  pada  saat  perendaman sampel  akan  terjadi  pemecahan  dinding  sel dan  membrane  sel  pada  sampel,  karena terdapat  perbedaan  tekanan  didalam  dan diluar  sel  sehingga  metabolit  sekunder  akan terlarut  dalam  pelarut  organik  dan  ekstrak senyawa  yang  dihasilkan  akan  sempurna karena mudah diatur melalui proses perendaman.  Sampel  spons Stylissa  carteri dilakukan dengan etanol 96% sampai semuai sampel  terendam,  karena  pelarut  etanol  96% memiliki  sifat  selektif,  tidak  beracun  dan bersifar universal yang cocok untuk mengekstrak semua golongan senyawa metabolit  sekunder  (Kristianti et  al., 2008).
Metode  maserasi  dipilih  karena  cara  kerja dan  peralatan  yang  digunakan  sederhana, mudah diusahakan, mampu menarik senyawa-senyawa yang berkhasiat, dan untuk menghindari  kerusakan  beberapa  senyawa aktif  dari  Spons Stylissa  carteri (Kristiani, 2014).
Tabel 1. Rendemen ekstrak Spons Stylissa carteri
Setelah  dilakukan  proses  maserasi selanjutnya  dilakukan  proses  fraksinasi dimana  metode  penelitian  ini  menggunakan metode  fraksinasi  cair-cair,  yang  merupakan metode pemisahan dengan menggunakan dua pelarut  dalam  satu  corong  pisah  sehingga senyawa  tidak  saling  tercampur  karena memiliki  sifat  kepolaran  yang  berbeda. Pelarut yang  digunakan  untuk  proses fraksinasi  ini  yaitu  n-heksan,  kloroform  dan metanol.  Proses  fraksinasi  dilakukan  secara bertingkat  berdasarkan  tingkat  kepolaran pelarut  yaitu  mulai  dari  pelarut  non  polar selanjutnya  semi  polar  dan  terakhir  pelarut polar (Engka, 2016).
Table 2. Massa fraksi beserta rendemen
Perbedaan nilai rendemen ini disebabkan oleh perbedaan jenis pelarut yang digunakan.  Pelarut  yang  berbeda  akan melarutkan  senyawa-senyawa  yang  berbeda tergantung  tingkat  kepolarannya.  Oleh  sebab itu, jumlah ekstrak yang dihasilkan tergantung jenis pelarutnya  (Mujipradhana et al. , 2018).
Jumlah  rendemen  ekstrak  bergantung pada  kondisi  alamiah  senyawa,  metode
ekstraksi,  ukuran partikel  sampel, dan waktu ekstraksi,  serta  perbandingan  sampel  dengan pelarut (Harborne, 1987).
Uji  Aktivitas  Antimikroba  Spons Stylissa carteri
Pengujian aktivitas antimikroba dengan
menggunakan mikorba uji Staphylococcus aureus , Escherichia coli , dan Candida  albicans dari  ekstrak  etanol,  fraksi metanol, fraksi n-heksan dan farksi kloroform  menggunakan  metode  difusi  agar. Metode  difusi  agar  adalah  metode  yang dilakukan dengan pengukuran dan pengamatan  diameter  zona  bening  yang terbentuk  disekitar  cakram  yang  berisi  zat antimikroba yang diletakkan pada media agar yang  telah  diinokulasi  mikroba  (Lalamentik, 2017).  Mikroba  uji  yang  digunakan  adalah Staphylococcus  aureus untuk  mewakili bakteri  Gram  positif, Escherichia  coli untuk mewakili  bakteri  Gram  negatif  dan Candida albicans untuk  mewakili  jamur.  Tujuan penggunaan  mikroba  ini  untuk  mengetahui apakah ekstrak dan fraksi dari Stylissa carteri memiliki  aktivitas  antimikroba  serta  untuk mengetahui  spektrum  aktivitas  antimikroba dari Stylissa  carteri apakah  memiliki spektrum  luas,  yaitu  dapat  membunuh banyak  jenis  mikroba  seperti  bakteri  Gram positif  dan  Gram  negatif,  atau  spektrum sempit yaitu hanya membunuh salah satu dari bakteri  Gram  positif  atau  bakteri  Gram negatif.
Hasil yang didapatkan pada pengujian ini,  yaitu  adanya  zona  hambat  disekeliling cakram  yang  berukuran  6mm  ( paper  disc ) ditandai  dengan  adanya  zona  bening,  hal  ini menunjukkan  adanya  kepekaan  mikroba terhadap  ekstrak  atau  fraksi  dari  spons Stylissa carteri dan antibiotik yang
digunakan sebagai kontrol positif. Dilakukan pengamatan  setelah  di  inkubasi  pada  suhu 37 ℃ selama 1x24jam dengan 3kali pengulangan  pada  masing-masing  mikroba, pengulangan dilakukan untuk lebih mengakuratkan  hasil  yang  akan  diperoleh (Mujipradana et al. , 2018)
Tabel 3. Hasil rata-rata Aktivitas Antimikroba
Keterangan :
(Sa) Staphylococcus aureus
(Ec) Eschericia coli
(Ca) Candida Albicans
(EE) Ekstrak Etanol
(FH) Fraksi Heksan
(FK) Fraksi Kloroform
(FM) Fraksi Metanol
( Jumlah zona bening
( ̅ Jumlagh Rata-rata
Digunakan kontrol positif dan negatif sebagai  pembanding.  Kontrol  positif  yang digunakan dalam penelitian ini yaitu
kloramfenikol, digunakan kloramfenikol sebagai kontrol positif dikarenakan kloramfenikol  memiliki  spektrum  yang  luas. Penggunaan kontrol positif berfungsi sebagai kontrol  dari  zat  uji,  dengan  membandingkan diameter  daerah  hambat  yang  terbentuk (Dwijendra et  al. ,  2014).  Diperoleh  zona hambat  dari  kontrol  positif  kloramfenikol yaitu  sebesar  20,00  mm  dibandingkan dengan  ekstrak  dan  fraksi  dari Stylissa carteri.
Kontrol  negatif  yang digunakan  yaitu metanol.  Kontrol  negatif  digunakan  untuk mengetahui  ada  atau  tidaknya  pengaruh terhadap  pertumbuhan  mikroba  uji,  sehingga dapat  diketahui  bahwa  aktivitas  yang ditunjukan  oleh  ekstrak  atau  fraksi  ialah  zat yang terkandung dalam sampel bukan berasal dari pelarut yang digunakan.
Pada penelitian ini ekstrak etanol dan fraksi  metanol  merupakan  ekstrak  dan  fraksi yang efektif dalam menghambat
pertumbuhan bakteri gram positif Staphylococcus  aureus bakteri  gram  negatif Escherichia coli dan jamur Candida albicans. Terdapat  respon  yang  berbeda  dari dua  golongan  bakteri  dan  jamur  terhadap senyawa  antimikroba.  Hal  ini  disebabkan karena  adanya  perbedaan  kepekaan  pada bakteri  Gram  positif,  bakteri  Gram  negatif dan  jamur  terhadap  senyawa  antimikroba yang  terkandung  dalam  ekstrak  dan  fraksi Spons Stylissa  carteri. Bakteri  Gram  positif cenderung  lebih  sensitif  terhadap  komponen antimikroba. Hal ini disebabkan oleh struktur dinding  sel  bakteri  Gram  positif  lebih sederhana  sehingga  memudahkan  senyawa antimikroba  untuk  masuk  ke  dalam  sel  dan menemukan sasaran untuk bekerja, sedangkan  struktur  dinding  sel  bakteri  Gram negatif  lebih  kompleks  dan  berlapis  tiga, yaitu  lapisan  luar  berupa  lipoprotein,  lapisan
tengah  yang  berupa  peptidoglikan,  dan lapisan  dalam  lipopolisakarida  (Pelczar  dan Chan, 1986).
Pada  pengujian  aktivitas  antimikroba dari sampel Spons Stylissa carteri penggolangan  kekuatan  daya  antimikroba digolongkan  menurut  pedoman  Davis  and Stout (1971) yang ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel 4. Kategori Kekuatan Daya Antimikroba
Pada  ekstrak  etanol  menunjukkan bahwa  zona  bening  yang  terbentuk  pada Escherichia  coli tergolong  sedang  yaitu (9,00mm)  dan  pada Staphylococcus  aureus juga  tergolong  sedang  yaitu  (8,14mm) sedangkan  pada Candida  albicans zona bening  yang  terbentuk  tergolong  besar  yaitu (11,00mm).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol memiliki spektrum  kerja  yang luas dalam menghambat aktivitas antimikroba  dengan  bakteri Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli dan  jamur Candida albicans.
Pada  fraksi  kloroform  menunjukkan bahwa  tidak  terdapat  zona  bening  yang terbentuk  pada Escherichia  coli yaitu (0,00mm)  dan  pada Staphylococcus  aureus juga  tidak  terdpat  zona  bening  yaitu (0,00mm)  begitupun  pada Candida  albicans tidak  terdapat  zona  bening  yang  terbentuk yaitu (00,00mm).
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi kloroform  memiliki  spektrum  kerja  yang sempit dalam menghambat aktivitas antimikroba  dengan  bakteri Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli dan  jamur Candida albicans.
Pada  fraksi  metanol  menunjukkan bahwa  zona  bening  yang  terbentuk  pada Escherichia  coli tergolong  kuat  yaitu (13,00mm)  dan  pada Staphylococcus  aureus juga  tergolong  kuat  yaitu  (13,76mm) sedangkan  pada Candida  albicans zona bening  yang  terbentuk  tergolong  besar  yaitu (12,00mm).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa fraksi metanol memiliki spektrum kerja yang luas dalam menghambat aktivitas
antimikroba  dengan  bakteri Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli dan  jamur Candida albicans.
Pada  fraksi  n-heksan  menunjukkan bahwa  tidak  terdapat  zona  bening  yang terbentuk  pada Escherichia  coli yaitu (0,00mm)  dan  pada Staphylococcus  aureus juga  tidak  terdpat  zona  bening  yaitu (0,00mm)  begitupun  pada Candida  albicans tidak  terdapat  zona  bening  yang  terbentuk yaitu  (00,00mm).  Hal  ini  menunjukkan bahwa  fraksi  n-heksan  memiliki  spektrum kerja  yang  sempit  dalam  menghambat aktivitas antimikroba dengan bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli dan
jamur Candida albicans.
Dari hasil yang diperoleh menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  dan fraksi  metanol  menghasilkan  zona  bening berdiameter  sedang  dan  besar  yang  mampu mengambat pertumbuhan mikroba uji Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli dan Candida  albican s. Sedangkan  untuk  fraksi kloroform  dan  n.heksan  tidak  adanya kepekaan  aktivitas  antimikroba  umtuk  itu tidak  terdapat  zona  bening  pada  saat pengujian.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa
spons Stylissa  carteri yang  diperoleh  dari Selat  Lembeh  Bitung  hanya  memiliki aktivitas antimikroba pada ekstrak etanol dan fraksi metanol. Aktivitas yang dihasilkan dari bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia coli dan Candida  albicans tergolong aktivitas  yang  sedang  8.14  mm  dan  besar 13,76 mm. Sedangkan untuk fraksi kloroform dan n-heksan tidak adanya kepekaan aktivitas antimikroba  untuk  itu  tidak  terdapat  zona bening pada saat pengujian.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan aktivitas  antimikroba  ekstrak  dan  fraksi spons Stylissa carteri , maka dapat disarankan perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut tentang  uji  antimikroba  dengan  metode pengujian yang berbeda atau dengan menggunakan mikroba uji yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Davis,  W.  W.,  T.R.  Stout.  1971.  Disc  plate method  of  microbiological  assay. Journal of microbiology . 22 : 659-665.
Ditjen  POM.  2000. Parameter  Standar
Umum  Ekstrak  Tumbuhan Obat. Cetakan Pertama. Jakarta: Departeman  Kesehatan  RI.  Hal  :  10- 12. Dwijendra,  I.  M.,  D.  S.  Wewengkang.,  F. Wehantou. 2014. Aktivitas Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea herbacea yang diperoleh dari Teluk Manado.
Pharmacon . 3(4) : 1-9.
Engka,  T.  2016.  Aktivitas  Antioksidan  dan Penentuan  Kandungan  Total  Fenolik dan  Flavonoid  dari  Umbi  Kuso Mafola  ( Drynaria quercifolia L.)
[ skripsi ]. Program  Studi
Farmasi FMIPA
Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Gozcelioğlu,  B.,  Konuklugil,  B.,  2012, Qualitative  Detection  of  Some Secondary  Metabolites  from  Three Turkish  Marine  Sponges, Fabad  J. Pharm. Sci., 37: 73-78.
Harborne,J.B.  1987.  Metode  Fitokimia:
Penentuan cara modern menganalisis  tumbuhan.  Kokasih Padmawita, Iwang Soediro. Penerjemah. Bandung: ITB. Terjemahan  dari:  Phytochemical methods. Huliselan, Y. M.,M.R.J. Runtuwene., D.S.Wewengkang.  2015.  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol,  Etil Asetat  dan  N-Heksan  dari  Daun Sesewanua ( Clerodendron squamatum Vahl). Pharmacon . 4(3): 155-163.
Kristiani,  V  2014.  Pengaruh  Konsentrasi
etanol dan Waktu Maserasi Terhadap Perolehan Fenolik, Flavonoid, dan Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Rmbut  Jagung [ skripsi ]. Fakultas Teknik
universitas  Katolik  Widya Mandala,
Surabaya.
Kristanti, A. N., N.S. Aminah., M. Tanjung.,
B.  Kurniadi.  2008. Buku  Ajar Fitokimia . Unair Press, Surabaya.
Mujipradana,  V.N.,  D.  S.  Wewengkang.,  E.
Suryanto. 2018. Aktivitas Antimikroba  dari  Ekstrak  Ascidian
Herdmania  momus pada  Mikroba Patogen Manusia. Pharmacon . 7(3): 338-347.
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in
manual of antimicrobial
susceptibility  testing.  Marie  B.
Coyle (Coord. Ed). American society for Microbiology, America.
Pelczar,  M.  J.,  Chan,  E.  C.  S.,  1986. Dasar- dasar  Mikrobiologi .  Terjemahan Hadioetomo,  R.S.  Imas,  T.S.S., Tjitrosomo. Jakarta : UI Press.
Rasyid  A.  2009.  Senyawa-senyawa  Bioaktif dari  Spons.  Oseana.  Hlm  25-32. Schlagel.G.H. 1993.General Microbiologi seventh eition. Cambrige University Press.