PEMBERIAN SALEP EKSTRAK BUNGA BIDURI ( Calotropis gigantea ) UNTUK PENYEMBUHAN LUKA PADA MENCIT ( Mus musculus )

## SECARA KLINIS DAN HISTOPATOLOGIS
Marphirah
Program Studi Magister Pendidikan Biologi FKIP Universitas Syiah Kuala Banda Aceh Email: marphirahs@gmail.com

## ABSTRAK
Bunga  biduri  ( Calotropis  gigantea )  memiliki  beberapa  senyawa  penting  dalam  penyembuhan  luka, yaitu alkaloid, flavonoid, tannin, karbohidrat, glikosida, senyawa fenol, saponin, protein, asam amino, lemak,  minyak, serta kalotropin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian salep ekstrak bunga biduri terhadap penyembuhan luka secara klinis dan histopatologi. Penelitian dilakukan pada  bulan  Januari  sampai  Agustus  2018.  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah eksperimental  laboratorium  dengan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dalam  5  perlakuan  yaitu kontrol positif  yang  diberi  salep  betadin,  kontrol  negatif  yang  diberi  salep  kosong,  perlakuan  salep  ekstrak bunga biduri 5%, perlakuan salep ekstrak bunga biduri 10% dan perlakuan salep ekstrak bunga biduri 15%. Luka eksisi dengan diameter 1 cm dibuat pada bagian punggung mencit dengan anestesi ketamine. Data dianalisis dengan menggunakan Analisis Varian (ANAVA) dan dilanjutkan dengan Uji Duncan pada α: 0,05. Hasil uji ANAVA satu arah berbeda secara signifikan terhadap pengamatan klinis dan histopatologis. Hasil pengamatan secara klinis menunjukkaan bahwa waktu pengecilan diameter luka paling  cepat  terdapat  pada  kelompok  perlakuan  dengan  salep  ekstrak  bunga  biduri  15%.  Hasil pengamatan  secara  histopatologi  menunjukkan  bahwa  jumlah  fibroblas  tertinggi  terdapat  pada kelompok  perlakuan  salep  ekstrak  bunga  biduri  15%.  Dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian  salep ekstrak bunga biduri berpengaruh terhadap penyembuhan luka pada mencit baik secara klinis maupun histopatologi. Konsentrasi 15% merupakan perlakuan terbaik dalam mempercepat penyembuhan luka..
Kata Kunci: Salep Ekstrak Bunga Biduri, Luka Eksisi dan Penyembuhan Luka

## ABSTRACT
Milkweed  ( Calotropis gigantea )  flower  has  some  important  compounds  in  wound  healing  such  as alkaloids,  flavonoids,  tannins,  karbohydrates,  glikosides,  phenols,  saponins,  protein  and  amino  acid, and  calothropin.  The  aim  of  this  study  was  to  determine  the  clinical  and  histopathological  effect  of milkweed extract ointment towards wound healing in mice ( Mus musculus ). The research was carried out in  January  to  August  2018.  This study  used  experimental method  with  Completely  Randomized Design (CRD) with five treatments: betadine oinment as positive control, vaseline oinment as negative control,  and  three  experimental  treatment  with  milkweed  extract  ointments  in  5%,  10%  and  15% concentration.  Every  treatment  contains  of  6  mice  each,  which  were  wounded  with  1  cm  diameter excision  on  its  back  after  injected  with  ketamine  anesthesia.  Data  were  analyzed  using  Analysis  of Varians (ANOVA) and continued with Duncan Test α 0,05.  The clinical result showed that the fastest time  of  wound  diameter  reduction  found  on  experimental  treatment  with  15%  milkweed  extract ointment.  The  histopathological  result  showed  that  the  highest  fibroblast  number  found  on  the experimental  treatment  with  15%  milkweed  extract  ointment.  It  was  concluded  that  the  milkweed extract ointment have an effect on wound healing in mice clinically and histopathologically with 15% concentration being the best in promoting wound healing.
Keywords: Milkweed Extract Ointment, Excision Wound and Wound Healing

## PENDAHULUAN
PENDAHULUAN uka  merupakan  rusaknya  sebagian  dari jaringan  tubuh  yang  umumnya  terjadi pada  kulit  yang  merupakan  pelindung pertama  terhadap  pengaruh  luar  seperti  gesekan,
benturan,  panas,  dingin,  gangguan  sinar  radiasi, dan  mikroba  [1].  Setelah  terjadi  luka,  jaringan tubuh  akan  memulai  proses  penyembuhan  luka. Proses  penyembuhan  luka  merupakan  suatu interaksi  yang  kompleks  dari  aksi  selular  dan
JurnalBiotik, ISSN: 2337-9812, Vol. 6, No. 2, Ed. September 2018, Hal. 139-149
biokimia  dalam  pembentukan  kembali  suatu integritas struktural dan fungsional serta memulihkan  kekuatan  dari  jaringan  yang  terkena trauma.  Penyembuhan  luka  merupakan  proses kompleks yang secara umum dapat dibagi menjadi 3 tahapan, yaitu reaksi inflamatori, proliferasi, dan remodeling [2]. Proses  penyembuhan  luka  dapat  dilihat secara  klinis  dan  histopatologi.  Secara  klinis, penyembuhan  luka  ditandai  dengan  terhentinya perdarahan,  terbentuknya  jaringan  granulasi  dan menyempitnya  area  luka.  Secara  histopatologi, proses  penyembuhan  luka  ditandai  dengan munculnya sel-sel inflamasi, reepitalisasi, pembentukan pembuluh darah baru dan serat-serat kolagen [3]. Pengobatan luka dilakukan dengan pengaplikasian obat-obatan penyembuh luka pada permukaan  luka.  Obat  penyembuh  luka  secara umum  dapat  dikelompokkan  menjadi  dua  jenis, yaitu obat sintetis dan obat alami. Povidone Iodium merupakan  kandungan  yang  biasanya  terdapat dalam  obatsintetis  yang  umum  digunakan  untuk penyembuhan  luka.  Obat  penyembuh  luka  alami yang biasanya digunakan masyarakat berasal dari berbagai  tanaman  herbal.  Penggunaan  tanaman herbal  untuk  pengobatan  telah  dilakukan  sejak jaman  dahulu  kala  dimana  ketersediaan  obat- obatan sintetis masih sangat terbatas. Menurut data World  Health  Organization  (WHO)  sekitar  80% populasi  dari  negara  berkembang  menggunakan tanaman  herbal  untuk  mengatasi  masalah kesehatan.  Selain  mampu  mengurangi  efek samping yang dapat ditimbulkan oleh obat sintetik, tanaman  herbal  juga  aman  dan  harganya terjangkau [3].
Biduri (Calotropis gigantea) adalah tanaman liar  yang  termasuk  ke  dalam  tanaman  getah  dan hidup  di  daerah  tropis.  Biduri  secara  luas  telah dilaporkan  memiliki  sifat  analgesik,  antimikroba, antioksidan,  antipiretik,  insektisida,  sitotoksisitas, pencahar, dan prokoagulan [5]. Biduri merupakan salah satu tanaman yang sering digunakan sebagai obat penyembuh luka dalam pengobatan tradisional  di  India  (ayurvedic  treatment). Tanaman  biduri  menghasilkan  getah  berwarna putih  yang  terdapat  pada  semua  bagian  tanaman, baik batang, daun, bunga dan akar [6].
Hampir  semua  bagian  dari  tanaman  biduri dapat digunakan untuk pengobatan. Bunga biduri diketahui  memiliki  sifat  anti  mikroba  [7],
analgesik, antibakteri, prokoagulan dan sitotoksik [8],  serta  antitumor  [9].  Aktivitas  penyembuhan luka  disebabkan  adanya  kandungan  fitokimia berupa  flavonoid  yang  mempercepat  proses penyembuhan dengan cara meningkatan epitelisasi sehingga pembentukan kolagen meningkat [10]. Ekstrak metanol dari bunga biduri mengandung  alkaloid,  karbohidrat,  flavonoid, glikosida, tannin, senyawa fenol, saponin, protein, asam amino, lemak, minyak,  triterpenoid, steroid dan  kalotropin  [11,12].  Dari  hasil  penelitian tersebut menunjukkan bahwa dalam ekstrak bunga biduri  terkandung  lebih  beragam  senyawa  kimia aktif dibandingkan dengan ekstrak pucuk dan daun biduri.  Walaupun  berada  pada  satu  batang  yang sama,  namun  komposisi  senyawa-senyawa  kimia yang  terkandung  dalam  setiap  bagian  tanaman berbeda-beda,  baik  di  akar,  batang,  daun,  atau bunga.  Senyawa-senyawa  kimia  tersebut  telah diketahui  berperan  dalam  mempercepat  proses penyembuhan luka. Namun, hingga saat ini, belum ada  penelitian  tentang  manfaat  ekstrak  bunga biduri untuk menyembuhkan luka.
Terdapat  berbagai  bentuk  sediaan  obat, seperti  salep  (vaselin),  gel  atau  lotion.  Bentuk sediaan  salep  dipilih    sebagai  bentuk  sediaan karena  memiliki  stabilitas  yang  baik,  berupa sediaan halus, mudah digunakan, nyaman dipakai, mampu  menjaga  kelembapan  kulit  dan  tidak mengiritasi kulit [13].

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan mengunakan desain Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL),  terdiri  atas  5 perlakuan  dan  6  ulangan.  Perlakuan  terdiri  atas kontrol  positif  (K+)  yang  diberi  salep  betadin, kontrol  negatif  (K-)  yang  diberi  salep  kosong, perlakuan  P1  yang  diberi  salep  ekstrak  bunga biduri  konsentrasi  5%,  perlakuan  P2  yang  diberi salep  ekstrak  bunga  biduri  konsentrasi  10%  dan perlakuan  P3  yang  diberi  salep  ekstrak  bunga biduri konsentrasi 15%.
Objek  pada  penelitian  ini  adalah  mencit (Mus musculus) albino jantan. memiliki berat 30- 50 gram dan usia 2-3 bulan dan telah diadaptasikan selama  1  minggu.  Hewan  ini  diperoleh  dari Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas  Syiah Kuala.
Pembuatan Ekstrak Bunga Biduri

## Pemberian Salep Ekstrak Bunga Biduri (Calotropis gigantea)…
Sebanyak  3  kg  bunga  Biduri  yang dikumpulkan dari daerah pesisir pantai Alue Naga dicuci  bersih  dan  dikeringanginkan  selama  2-3 minggu hingga dihasilkan 250 gram bunga biduri kering [12]. Proses ekstraksi dilakukan menggunakan cara maserasi dengan pelarut etanol 70%. Maserasi dilakukan selama 3 x 24 jam pada suhu kamar lalu difiltrasi dengan corong Buchner. Ekstrak  yang  diperoleh  dipisahkan  dari  pelarut dengan  penguap  putar  (rotary  evaporator)  pada suhu 600C hingga diperoleh ekstrak kental.

## Pembuatan Salep
Ekstrak  bunga  biduri  dicampurkan dengan vaselin putih lalu diaduk hingga homogen sesuai  dengan  perbandingan  konsentrasi  salep yang  telah  ditentukan,  lalu  dimasukkan  kedalam wadah  yang  tertutup  dan  steril  [14].  Masing- masing salep dibuat sebanyak 5 gram.

## Pembuatan Luka
Pembuatan  luka  dilakukan  dengan  terlebih dahulu  mencukur  rambut  di  daerah  punggung bagian atas, dan pada saat akan dibuat luka, mencit dibius terlebih dahulu dengan ketamin. Kemudian dibersihkan dengan alkohol 70% lalu dibuat luka berbentuk lingkaran dengan diameter 1 cm, dengan cara  mengangkat  kulit  dengan  pinset,  dan digunting sampai bagian subkutan [15].

## Aplikasi Salep Pada Mencit
Sebanyak  30  ekor  mencit  dibagi  menjadi  5 kelompok  dengan  masing-masing  kelompok berjumlah 6 ekor dan di.berikan perlakuan sebagai berikut : - P1  : Luka diaplikasi dengan salep bunga biduri konsentrasi 5% - P2  : Luka diaplikasi  dengan  salep bunga biduri konsentrasi 10% - P3  : Luka diaplikasi dengan salep bunga biduri konsentrasi 15% - K+  : Luka  diaplikasi  dengan  Betadine  salep (kontrol positif) - K-  : Luka  diaplikasi  dengan  salep  kosong (kontrol negatif) Pengaplikasian  dilakukan  secara  topikal sampai menutupi seluruh permukaan luka, dimulai setelah terbentuk luka (hari ke 0). Masing-masing kelompok diaplikasi salep sebanyak 3 kali sehari, setiap  pagi,  siang  dan  sore  hari  dengan  selisih
waktu  4  jam  setiap  harinya  [16].  Pada  hari  ke  1 sampai  ke  14  dilakukan  pengamatan  klinis  pada luka dengan mengukur diameter luka. Pada hari ke 14 setelah dilakukan pengamatan kemudian mencit dieuthanasia dan diambil sampel histologisnya.

## Pengamatan Penyembuhan Luka Secara Klinis
Perubahan secara klinis dilakukan setiap hari sampai  hari  ke  14  dengan  pengamatan  langsung pada bagian luka dengan melihat waktu pengecilan diameter  luka  Ukuran  luka  diukur  menggunakan jangka  sorong  pada  arah  vertikal,  horizontal  dan kedua diagonal.
Pembuatan Preparat dan Pengamatan Histopatologi Adapun  tahap-tahap  dalam  pembuatan preparat  histopatologi  yaitu  fiksasi  jaringan, trimming,  dehidrasi,  penjernihan  (clearing), pencetakan  (embedding),  pengirisan  (sectioning),
pewarnaan  (staining),  dan  penutupan  jaringan dengan cover glass (mounting).
Setelah dilakukan eksisi  kemudian difiksasi di  dalam  larutan  formalin  10%  selama  12  jam. Kemudian dilakukan trimming pada mukosa labial lalu didehidrasi dalam aseton. Proses inidilakukan pada  masing-masing  cairan  selama  1  jam.  Tahap selanjutnya  ialah  penjernihan  (clearing),  zatyang digunakan  dalam  proses  ini  adalah  benzol  yang masing-masing direndam selama 1 jam. Sebelum proses  pencetakan  dilakukan  proses  infiltrasi parafin  masing-masing  selama  1  jam.  Kemudian dilakukan  proses  pencetakan(embedding),  proses ini dikerjakan di dekat sumber panas dengan alat- alat  yangtelah  dihangatkan  terlebih  dahulu  untuk mencegah  pembekuan  parafin  sebelumproses selesai.  Zat  yang  digunakan  adalah  Parafin histoplast  yang  memiliki  titikcair  56-57°C. Cetakan  diisi  dengan  parafin  cair  kemudian jaringan  diletakkan  didalamnya  dengan  bantuan pinset yang telah dipanaskan di atas lampu spritus. Selanjutnya  blok  tersebut  diletakkan  di  dalam wadah yang telah berisi es batu. Blok parafin yang sudah setengah beku diberi label untukmemudahkan identifikasi jaringan. Tahap  selanjutnya  adalah  pendinginan blokparafin pada suhu 4-5°C. Setelah dingin blok parafin dilepaskan dari cetakannyadan siap untuk tahap pengirisan jaringan menggunakan alatmikrotom  (5µm).  Hasil  potongan  yang berbentuk  pita  (ribbon)  tersebut  dibentangkan  di
atas  waterbath  yang  bersuhu  46°C.  Potongan jaringan tersebut kemudian ditempelkan pada gelas objek  yang  telah  diolesi  larutan  albumin  yang dicampur  dengan  gliserin  (1:1)  dan  diletakkan  di atas hot plate untuk mengeringkan sisa-sisa air. Selanjutnya  preparat  diwarnai  dengan pewarnaan Hematoksilin danEosin (HE). Preparat dideparafinisasi dengan dicelupkan secara bertahap  ke  dalamlarutan  xylol  I  dan  II  masing- masing  selama  15  menit.  Kemudian  dicelupkan kedalam alkohol absolut (I dan II), alkohol 80% (I
dan II), alkohol 70% (I dan II), alkohol 50% (I dan II), alkohol 30% (I dan II) masing-masing selama 2  menit.  Lalu  dicelupkan  ke  dalam  wadah  yang berisi air selama 1-2 menit. Kemudian direndam di dalam  larutan  Hematoksilin  selama  15  menit,
dicuci  di  bawah  air  mengalir  selama  10  menit, dicelupkan ke dalam asid alkohol dan air masing- masing 3x dan4x celupan. Lalu direndam ke dalam alkohol (30%, 50%, 70%) masing-masing selama 1  menit.  Untuk  pewarnaan  Eosin,  preparat direndam di dalam larutan Eosin selama 1-3 menit kemudian  dicelupdengan  air  sebanyak  3X  celup, alkohol  (70%,  80%,  96%,  dan  absolut)  masing- masing  selama  2  menit.  Kemudian  dilakukan proses  penjernihan  (clearing)  kembali  dengan xylol  (I  dan  II)  masing-masing  selama  5  menit. Terakhir  adalah  penutupan  jaringan  yang dilakukan dengan cara gelas objek ditetesi dengan balsem  Kanada.  Setelah  itu  jaringan  ditutup dengan  cover  glas  ssecara  hati-hati  [17]. Pengamatan penyembuhan luka secara histopatologi  dilakukan  dengan    penghitungan jumlah  neokapilerisasi,  jumlah  jaringan  ikat (fibroblas) dan serabut kolagen dengan menggunakan  mikroskop  Olympus  dengan  400x pembesaran daan 3 lapang pandang.

## Parameter Penelitian
Parameter  yang  diamati  pada  pemeriksaan klinis  adalah  waktu  mengecil  diameter  luka  pada hari  ke  1  sampai  hari  ke  14.  Parameter  yang diamati  pada  pemeriksaan  histopatologi  adalah jumlah jaringan ikat (fibroblas).

## Teknik Pengumpulan Data
Teknik  pengumpulan  data  yang  digunakan adalah  pengamatan  langsung.  Terdapat  dua  jenis data yang diperoleh pada penelitian ini, yaitu data dari hasil pengamatan secara klinis dan data hasil pengamatan secara histopatologi.

## Analisis Data
Data  hasil  pengamatan  dianalisis  secara statistik dengan menggunakan uji parametric yaitu ANAVA  satu  arah  ( one  way  ANOVA ).  Analisis dilakukan  untuk  mengetahui  ada  atau  tidaknya pengaruh  pada  perlakuan.  Apabila  terdapat perbedaan,    maka  dilakukan  uji  lanjutan.  Uji lanjutan  yang  digunakan  adalah  uji  Duncan. Kesimpulan  yang  diambil  berdasrkan  nilai signifikansi p < 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Pengamatan Klinis
Hasil  pengamatan  makroskopik  penyem- buhan  luka  secara  klinis  dapat  dilihat  pada Gambar 1.
Berdasarkan Gambar 1 terlihat bahwa pada hari ke 1 luka yang diberi perlakuan salep ekstrak bunga  biduri  15%  (P3)  dan  kontrol  positif  (K+) sudah  mulai  mongering.  Sedangkan  pada  luka pada  perlakuan  kontrol  negative  (K-)  dan  salep ekstrak bunga biduri 5% (P1) dan 10% (P2) masih terlihat agak basah. Pada hari ke 7 permukaan  luka pada  perlakuan  P3,  K+  dan  P2  sudah  mulai tertutup    keropeng,  diameter  luka  sudah  mulai mengecil dan terjadi reepitelisasi. Sedangkan pada kontrol negatif (K-) dan perlakuan P1 luka sudah tertutup  keropeng,  namun  diameter  luka  belum berkurang  dan  tidak  terlihat  adanya  reepitelisasi. Pada  hari  ke  14  luka  pada  perlakuan  P3  nyaris tertutup sempurna, hanya tersisa sedikit lagi bagian yang belum tertutup sempurna, yaitu pada bagian tengah luka.
Pada  luka  yang  tertutup  juga  sudah  mulai terlihat tumbuh rambut-rambut halus. Pada kontrol positif (K+), P1 dan P2 luka sudah tertutup namun belum  sempurna.  Hanya  terdapat  sedikit  rambut halus  yang  tumbuh.  Sedangkan  pada  kontrol negatif  terjadi  penebalan  keropeng,  luka  belum tertutup  sempurna  dan  terlihat  sedikit  sekali rambut yang tumbuh. Hasil pengamatan rata-rata waktu mengecilnya  diameter  luka  pada  mencit  masing- masing  kelompok  perlakuan  dapat  dilihat  pada Gambar 1. Berdasarkan gambar 1, terlihat bahwa terdapat  variasi  waktu  pengecilan  diameter  luka pada setiap perlakuan. Waktu tercepat pengecilan diameter  luka  ditemukan  pada  perlakuan  yang diberi salep ekstrak bunga  biduri 15%  (P3)  yaitu 6,00  ±  0,63  hari,  kemudian  diikuti  yang  diberi
Tabel 1.  Perbandingan Proses Penyembuhan Luka secara Makroskopis pada Hari Ke 1, 7, dan 14  pada Masing-masing Perlakuan
Perlakuan Pengamatan Hari Ke 1 7 14
K+ K- P1 P2 P3
Gambar 1.  Perbandingan Rata-rata Waktu Mengecil Diameter Luka
salep  ekstrak  bunga  biduri  5%  (P1),  10%  (P2), kontrol positif (K+) dan kontrol negatif (K-) secara berturut-turut adalah 6,83 ± 0,75 hari, 6,67 ± 0,52 hari, 6,83 ± 0,75 hari dan 9,83 ± 0,75 hari. Hasill ANAVA  satu  arah  terhadap  rata-rata  waktu mengecilnya diameter  luka menunjukan nilai yang berbeda,  dimana  nilai  F  hitung  >  F  tabel sebagaimana terlihat pada Tabel 2.
Tabel 2.  Hasil  ANAVA  Satu  Arah  Waktu
Mengecilnya Diameter Luka Variasi db   JK KT F Hit F Tab Perlakuan  4 49,13  12,28  25,95 2,76* Galat 25  11,83  0,473 *berbeda Hasil tersebut menunjukan bahwa perlakuan pemberian salep ekstrak bunga biduri berpengaruh terhadap  waktu  mengecilnya  diameter  luka  pada penyembuhan  luka.  Untuk  melihat  perlakuan mana  yang  menunjukan  pengaruh,  maka  data selanjutnya diuji dengan uji Duncan, yang hasilnya dapat dilihat pada Tabel 3. Tabel 3.  Uji  Duncan  terhadap  Waktu  Mengecil- nya Diameter Luka Perlakuan Rerata Waktu Pengecilan Diameter Luka ± SD P3 6,00 ± 0,63 a P1 6,83 ± 0,75 b P2 6,67 ± 0,52 c K+ 6,83 ± 0,75 c K- 9,83 ± 0,75 d
Ket:  Superskrip dengan huruf yang berbeda pada kolom  yang  samamenunjukkan  perbedaan yang nyata
Hasil  uji  lanjut  menggunakan  uji  Duncan, menunjukkan  bahwa  pemberian  salep  ekstrak bunga  biduri  15%  (P3)  berbeda  secara  nyata (P<0,05)  dibandingkan  dengan  perlakuan  salep ekstrak bunga biduri 5% (P1), salap ekstrak biduri 10% (P2), kontrol positif (K+) dan kontrol negatif (K-). Perlakuan P1 berbeda secara nyata (P<0,05) dibandingkan dengan P2, K+ dan K-. Perlakuan P2 berbeda  secara  nyata  (P<0,05)  dibandingkan dengan  K-,  namun  tidak  berbeda  secara  nyata (P>0,05)  dibandingkan  dengan  kontrol  positif (K+).  Hasil  ini  membuktikan  bahwa  pemberian salep  ekstrak  bunga  biduri  berpengaruh  terhadap pengecilan diameter luka. Pemberian salep ekstrak
bunga  biduri  15%  lebih  efektif  dibandingkan dengan salep ekstrak bunga biduri 10% dan 5%.

## Hasil Pengamatan Histopatologis
Hasil  pengamatan  gambaran  histopatologis jaringan  kulit  mencit  pada  proses  penyembuhan luka pada kontrol positif (K+), kontrol negatif (K), perlakuan  pemberian  salep  ekstrak  bunga  biduri
5% (P1), salep ekstrak bunga biduri 5% (P1) dan salep ekstrak bunga biduri 5 % (P1) yang diamati pada  hari  ke  14  setelah  perlakuan  dengan pewarnaan  HE  dengan  pembesaran  400  x  dapat dilihat pada Gambar 2. Gambar 2. Fotomikroskopis Histopatologis Kulit Mencit pada Pengamatan Hari Ke 14 Setiap Perlakuan dengan Pewarnaan HE dan Pembesaran 400x (Tanda Panah: Fibroblas).
Berdasarkan  fotomikrograf  histopatologis diatas terlihat bahwa ada pengaruh pemberian sal ep  ekstrak  bunga  biduri  terhadap  perubahan jaringan  kulit  mencit  pada  proses  penyembuhan luka  yang  diamati  berdasarkan  jumlah  sel fibroblas.  Hasil  pengamatan  yang  dilakukan didasarkan  pada  jumlah  sel  fibroblas  terdapat variasi  tingkat  lesi  degenerasi  maupun  kongesti yang ditemukan. Pada kontrol positif yang diberi salep betadin (K+) ditemukan lesi degenerasi dan kongesti  pada  jaringan  luka  dalam  jumlah  yang sedikit.  Pada kontrol negatif (K-)  ditemukan lebih banyak dibandingkan dengan kontrol positif (K+). Pada  pemberian  salap  ekstrak  bunga  biduri  5% (P1),  ditemukan  juga  variasi  lesi  degenerasi  dan kongesti. Degenerasi dan kongesti yang ditemukan pada  perlakuan  salep  ekstrak  bunga  biduri,
menurun  seiring  dengan  peningkatan  dosis  salep yang  diberikan.  Pada  pemberian  salep  ekstrak bunga  biduri  10%  (P2)  lesi  degenerasi  dan kongesti  lebih  sedikit.  Pada  pemberian  salep ekstrak  bunga  biduri  15%  (P5)  degenerasi  lebih sedikit.  Hal  ini  mungkin  berkaitan  dengan  peran salep  ekstrak  bunga  biduri  dalam  memperbaiki kerusakan jaringan pada luka.
Data  hasil  pengamatan  jumlah  fibroblas dapat  dilihat  pada  Gambar  4.  Hasil  pengamatan menunjukkan  bahwa  jumlah  fibroblast  tertinggi terdapat pada perlakuan salep ekstrak bunga biduri 15%  (P3)  yaitu  5,66  ±0,57.  Diikuti  oeh  kontrol positif (K+), perlakuan P2, P1 dan kontrol negatif (K-) secara berturut-turut yaitu 5.34 ±0,97, 5,22 ± 0,72 dan 3,88± 0,62.
Gambar 4. Perbandingan Rerata Jumlah Sel Fibroblas pada Berbagai Perlakuan pada Pengamatan Hari ke 14
Hasil  ANAVA  satu  arah  terhadap  rata-rata fibroblas menunjukan nilai yang berbeda, dimana nilai F hitung > F tabel. Hasil ANAVA satu arah terhadap jumlah fibroblas dapat dihat pada Tabel 3. Tabel 3.  Hasil  ANAVA  Satu  Arah  terhadap Jumlah Fibroblast Variasi Db   JK KT F Hit  F Tab Perlakuan  4 11.125  2,78 6.11 2,76* Galat 25 11.385  0,455 *berbeda Hasil tersebut menunjukan bahwa perlakuan pemberian salep ekstrak bunga biduri berpengaruh terhadap  jumlah  fibroblas  pada  penyembuhan luka.  Untuk  melihat  perlakuan  mana  yang menunjukan pengaruh, maka data selanjutnya diuji dengan  uji  Duncan,  yang  hasilnya  dapat  dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Uji Duncan Perlakuan Rerata jumlah fibroblast ± SD K- 3,88± 0,62 a P1 5,10 ± 0,47 b P2 5,22 ± 0,72 b K+ 5,34 ± 0,97 b
Perlakuan Rerata jumlah fibroblast ± SD P3 5,66 ±0,57 b
Ket: Superskrip  dengan  huruf  yang  berbeda  pada kolom  yang  samamenunjukkan  perbedaan yang nyata
Hasil  uji  lanjut  menggunakan  uji  Duncan menunjukkan  bahwa  pemberian  salep  ekstrak bunga  biduri  (P3)  berbeda  secara  nyata  (P<0,05) dibandingkan dengan kontrol negatif (K-). Namun tidak  berbeda  secara  nyata  (p>0,05)  dengan perlakuan  salep  ekstrak  bunga  biduri  5%  (P1), salep ekstrak biduri 10% (P2), kontrol positif (K+). Hasil  ini  membuktikan  bahwa  pemberian  salep ekstrak bunga biduri berpengaruh terhadap jumlah fibroblast  pada  penyembuhan  luka.  Pemberian salep  ekstrak  bunga  biduri  15%  lebih  efektif dibandingkan  dengan  salep  ekstrak  bunga  biduri 10% dan 5%.
Penyembuhan luka melibatkan proses dasar biokimia dan seluler. Secara umum, penyembuhan luka  dibagi  menjadi  3  fase  yaitu  fase  inflamasi, fase  proliferasi  dan  fase  maturasi  (remodeling). Pada  kenyataannya,  fase-fase  penyembuhan tersebut  saling  tumpang  tindih  dan  durasi  dari setiap fase serta waktu untuk penyembuhan yang sempurna  tergantung  pada  banyak  faktor, diantaranya  faktor  usia,  nutrisi,  obat-obatan, infeksi,  suplai  darah  dan  adanya  benda  asing. Selain itu, besarnya ukuran luka, kedalaman luka, lokasi  luka  dan  kondisi  fisiologis  umum  juga mempengaruhi lamanya penyembuhan luka [5].

## Pemberian Salep Ekstrak Bunga Biduri (Calotropis gigantea)…
Fase  awal  penyembuhan  luka  yaitu  fase inflamasi.  Fase  ini  berawal  dari  terjadinya  luka hingga  hari  ke  3  sampai  hari  ke  5.  Tanda dimulainya penyembuhan luka secara makroskopis  dapat  dilihat  dari  terhentinya pendarahan pada area luka, atau disebut juga fase hemostatis.  Pada  fase  ini  luka  akan  terlihat bengkak dan basah [1]. Kandungan  kalotropin  yang terdapat pada bunga biduri sangat membantu dalam tahap awal ini.  Kalotropin  merupakan  enzim  protease  yang menyerupai  papain  pada  pepaya.  Kalotropin bersifat prokoagulan yang membantu dalam proses pembekuan darah saat terjadinya luka. Selain itu, kalotropin  dapat  menghidrolisis  jendalan  darah (blood clot) sehingga sirkulasi darah pada daerah luka  menjadi  lancar  dan  lebih  baik  yang mengakibatkan  suplai  nutrisi  dan  oksigen  ke daerah luka menjadi lebih banyak [18]. Bunga  biduri  mengandung  alkaloid  yang bersifat  anti  bakteri  yang  dapat  mengganggu terbentuknya  lapisan  sel  bakteri  sehingga  pada daerah luka tidak terjadi infeksi. Selain itu alkaloid juga bersifat analgetik dan astringen yang mampu meredakan  rasa  nyeri  pada  daerah  luka.  Bunga biduri  juga  mengandung  flavonoid  yang  bersifat antiinflamasi  dan  anti  nyeri  sehingga  dapat mengurangi  rasa  sakit  dan  peradangan  pada  area luka.  Kalotropin  yang  terkandung  dalam  bunga biduri  juga  dapat  mengurangi  inflamasi  dengan menetralkan bradikinin dan eukasinoid proinflamasitori ke level dimana proses perbaikan dan regenerasi  jaringan yang luka dapat dimulai. Fase  selanjutnya  yaitu  fase  proliferasi  yang berlangsung dari hari ke 5 sampai hari ke 21. Pada fase ini terjadi aktivitas seluler yang penting dalam memperbaiki  dan  menyembuhkan  luka  yang ditandai dengan proliferasi sel. Secara garis besar proses  yang  terjadi  pada  fase  ini  adalah reepitelisasi  ,  fibroplasia,  konstruksi  luka  dan neovaskulerisasi  atau  neokapilerisasi.  Fibroblast memiliki  peran  yang  sangat  besar  dalam  proses penyembuhan luka. Fibroblast bertanggung jawab pada  persiapan  menghasilkan  produk  struktur protein yang digunakan selama proses rekonstruksi  jaringan.  Setelah  terjadinya  luka, fibroblast akan aktif bergerak dari jaringan sekitar luka  ke  dalam  daerah  luka  kemudian  akan berproliferasi dan mengeluarkan beberapa substansi  yang  berperan  dalam  mambangunn jaringan baru seperti kolagen. Pada fase proliferasi
terjadi pembentukan sel dan pembuluh darah baru. Sejumlah sel dan pembuluh darah dalam jaringan baru disebut jaringan granulasi.  [19].
Pada hari ke 7 setelah perlukaan, terlihat luka mulai menutup. Menutupnya luka disebabkan oleh terjadinya  proses  reepitelisasi.  Pada  kelompok perlakuan  pemberian  salep  ekstrak  bunga  biduri konsentrasi  15%  (P3)  diameter  luka  mulai mengecil pada hari ke 6, lebih cepat dibandingkan dengan  kelompok  perlakuan  lain.  Kecepatan menutupnya luka seiring dengan kecepatan waktu proliferasi  sel  fibroblast.  Luka  yang  diberi  salep ekstrak bunga biduri akan lebih cepat merangsang proliferasi sel fibroblast sehingga jumlah fibroblast pada daerah luka akan lebih banyak dan luka akan cepat  menutup.  Terbentuknya  jaringan  granulasi yang sempurna akan menutup permukaan luka. Adanya kandungan flavonoid, tanin, saponin,  dan alkaloid pada getah biduri sehingga dapat mempercepat proses terjadianya reepitelisasi.  Tanin  yang  terdapat  pada  tanaman biduri memiliki zat astringen yang berperan dalam kontraksi  luka  dan  peningkatan  epitelisasi. Saponin dengan cara meningkatan hydroxyproline,  meningkatan  tensile  strength, meningkatan pembentukan kolagen dan epitelisasi yang  lebih  baik.  Alkaloid  yang  terdapat  pada ekstrak bunga biduri juga berperan penting dalam penyembuhan  luka  dengan  merangsang  agen  sel proliferasi dan memproduksi kolagen [19].
Fase yang terakhir pada proses penyembuhan luka adalah fase maturasi (remodeling). Fase ini dimulai sejak minggu ke 3 setelah  perlukaan  hingga  berahun-tahun  lamanya tergantung  pada  jenis  luka.  Tujuan  dari  fase maturasi adalah untuk menyempurnakan terbentuknya jaringan yang baru menjadi jaringan yang  kuat.  Fibroblast  sudah  mulai  meninggalkan jaringan granulasi, warna kemerahan sudah mulai berkurang  dan  serat  fibrin  dari  kolagen  menjadi bertambah  banyak  untuk  memperkuat  jaringan parut [19].
Perlakuan P3 penyembuhannya terlihat lebih baik karena tidak meninggalkan bekas luka. Hal ini dikarenakan  semakin  banyaknya  jaringan  ikat pada luka semakin besar kontraksi luka, sehingga luka  akan  tertarik  dan  menyebabkan  besar  luka mengecil.  Ini  membuktikan  bahwa  pemberian salep ekstrak bunga biduri 15% lebih meningkatkan pembentukan jaringan ikat kolagen pada luka daripada perlakuan lain.
Ekstrak bunga biduri mengandung senyawa flavonoid  yang  berperan  dalam  meningkatkan kelangsungan hidup kolagen, mencegah kerusakan sel, mempromosikan sintesis DNA serta pencegahan infeksi luka.selain  itu, ekstrak bunga biduri  juga  mengandung  senyawa  alkaloid  yang berperan  dalam  merangsang  agen  sel  proliferasi
dan  memproduksi  kolagen  serta  saponin  yang meningkatkan  tensile  strenght  dan  meningkatkan pembentukan  kolagen  dan  epitelisasi  yang  lebih baik. KESIMPULAN Kesimpulan dalam penelitian ini diantaranya:  (1)  Pemberian  salep  ekstrak  bunga biduri konsentrasi
berpengaruh terhadap penyembuhan  luka  secara  klinis,  yaitu  dengan mempercepat  waktu  mengecilnya  luka;  dan  (2) Pemberian salep ekstrak bunga biduri konsentrasi
berpengaruh  terhadap  penyembuhan  luka  secara histopatologi,  ditandai  dengan  meningkatnya jumlah fibroblast.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Morison,  M.  J.  2004. Manajemen  Luka . Penerbit Buku Kedokteran EGC: Jakarta [2]  Thakur, R., Jain, N., Pathak, R., Sandhu, S.S. 2011.  Review  article:  Practice  in  wound healing  studies  of  plants.  Evidence-Based Complementary  and  Alternative  Medicine; 1-17. [3]  Cavalcante,  G.M.,  Paula,  R.J.,  Souza,  L.P., Sousa, F.B., Mota, M.R., Alves, A.P. 2011. Experimental model of traumatic ulcer in the cheek  mucosa  of  rats.  Acta  Cirúrgica Brasileira; 26(3):227-234. [4]  Sari,  L.  2006.  Pemanfaatan  obat  tradisional dengan pertimbangan manfaat dan keamanannya.  Majalah  Ilmu  Kefarmasian; 3(1):01-07. [5]  Kumar,  S.S.,  Sivamani,  P.,  Baskaran,  C., Mohamed,  J.M.  2012.  Evaluation  of  anti microbial activity and phytochemical analysis  of  organic  solvent  extracts  of calotropis gigantea. IOSR J. of Pharm; 2(3): 389-394. [6]  James, et al. 2011. Assessment of Biological Activities:  A  Comparison  of  Pergularia daemia  and  Jatropha  curcas  Leaf  Extracts. British Biotechnology Journal. Vol. 1(3): 85- 100. [7]  Habib  &  Karim.  2009.  Antimicrobial Activity  of  Di-(2-ethylhexyl)  Phthalate  and Anhydrosophoradiol-3-acetate Isolated from Calotropis gigantea (Linn.) Flower. Mycobiology; 37(1): 31-36. [8]  Habib & Karim. 2012. Antitumor Evaluation of di-(ethylhexyl) Phthalate (DEHP) Isolated from  Calotropis  gigantea  L.  Flower.  Acta
Pharm; 62: 607-615.
[9]  Babu, S.A.R., & Karki. 2012. Wound healing Calotropis  gigantae  leaves  in  albino  wistar rats. In. J. Pharm; 2(1): 195-199. [10]  Sharma,  Y.,  Jayabalan,  Ramandeep,  S., Alok,  S.  2013.  Current  Aspecs  of  Wound Healing  Agents  from  Medicinal  Plants:  A
Review. Journal of Medicinal Plants Studies.
Vol. 1(3):1-11. [11]  Dhivya & Manimegalai. 2013. Preeliminary Phytochemical  Screening  and  GC-MS Profiling  of  Ethanolic  Flower  Extract  of Calotropis  Gigantea  Linn.  Journal  of Pharmacognosy and Phytochemistry; 2(3):28-32. [12]  Ansel, H.C. 2004. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. 4th ed. Jakarta:UI Press. [13]  Sachdeva,  K.,  Garg,  P.,  Singhal,  M., Srivastava,  B.    2011.  Pharmacological evaluation  of  Jatropha  curcas  Linn  (stem bark)  for  wound  healing  potential  in  rats.
Pharmacologyonline. Vol: 3:251-264. [14]  Murugan.  2012.  Antimicrobial  activity  of leaves  and  latex  extract  of  the  herbal  plant Calotropis  gigantea  (Erukku  in  Tamil).
IJBPAS; 1(3): 261-170. [15]  Yuhernita, Juniarti, Aryenti. 2014. Pengaruh Pemberian  Gel  Dari  Ekstrak  Meanol  Daun Jarak  Tintir  (Jatropha  multifida)  Terhadap Kepadatan Kolagen dan Jumlah Angiogenesis  dalam  Proses  Penyembuhan Luka.  Prosiding  Seminar  Nasional  dan Workshop  “Perkembangan  Terkini  Sains
Farmasi dan Klinik IV”.
[16]  Lenard,  L.  &  Dean,  W.,  English,  J.  2000. Controlling  Inflammation  with  Proteolytic Enzymes.http://www.allergyresearchgroup.c om. Diakses tanggal 15 Juli 2018.
[17]  Hatz,  R.A.,  Niedner,  R.,  Vanscheidt,  W.
2004. Physiology of Wound Healing. Berlin:
Springer-Verlag GmbH Co, p: 1-16.
[18]  Eroschenko,  V.P.  2003.  Atlas  Histologi Difiore:  Dengan  Korelasi  Fungsional.  Edisi 9. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
p. 7-31;61-65.
[19]  Syarfati, K, Eriani, Damhoeri, A. 2011. The potential of jarak cina (Jatropha multifida L.) secretions  in  healing  new-wounded  mice. Jurnal Natural. 11(1):16-19