## Pengaruh Variasi Organic Loading Rate Limbah Buah Jeruk Terhadap Konversi Biohidrogen pada Reaktor Kontinyu Sirkulasi
Nazarruddin Sinaga 1 * dan Muhammad Farizan Praevia 2
* Departemen Teknik Mesin, Fakultas Teknik, Universitas Diponegoro
2 Magister Energi, Sekolah Pascasarjana, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH. Tembalang, Semarang, 50275 Indonesia Email: nsinaga19.undip@gmail.com ; farizanpraevia@students.undip.ac.id

## Abstrak
Salah satu energi alternatif terbarukan saat ini yang sedang dikembangkan untuk mengganti bahan bakar fosil adalah biohidrogen. Biohidrogen dapat diperoleh dari hasil fermentasi limbah biomassa berupa limbah jeruk. Jeruk  mengandung  senyawa  yang  dapat  diolah  untuk  menghasilkan  hidrogen  melalui  fermentasi  anearob. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  variasi Organic  Loading  Rate limbah  buah  jeruk  yang diumpankan  setiap  harinya  ke  dalam  biodigester  terhadap  produksi  gas  hidrogen  yang  dihasilkan.  Gas hidrogen merupakan suatu senyawa yang memilki potensi yang cukup menjanjikan sebagai salah satu sumber energi untuk di masa depan. Energi dari hasil kalor pembakaran hidrogen ini mencapai 120,1 MJ/Kg, dimana angka ini bahkan hampir tiga kali lipat lebih besar dari energi yang dihasilkan pembakaran gasoline . Variasi Organic Loading Rate yang digunakan pada penelitian ini adalah 2,25 L/hari dan 2,75 L/hari. Hasil penelitian menunjukkan adanya pengaruh organic loading rate terhadap produksi biohidrogen. Semakin besar OLR maka semakin  besar  gas  hidrogen  yang  terbentuk.  Hasil  gas  hidrogen  yang  diperoleh  yaitu  sebesar  11,728  %. Konversi limbah biomassa menjadi gas hidrogen dinilai mendukung konsep Waste to Energy pemerintah dan menjadi salah satu solusi energi alternatif di Indonesia. Gas hidrogen selanjutnya dapat dikonversi menjadi panas dan listrik.
Kata kunci: Biohidrogen, Jeruk, Biodigester, Organic Loading Rate, Waste to Energy

## Abstract

## Effect of Organic Loading Rate Variation in Orange Fruit Waste Biohydrogen Conversion Using Continuous Circulation Reactor
One of kinds of renewable alternative energy source that can be developed to substitute fossil fuels is biohydrogen. Biohydrogen is obtained from the fermentation of biomass, orange waste. Oranges contain compounds that can be treated to produce hydrogen through  anaerob fermentation. This research aims to determine the effect of organic rate’s variation of oranges that inputted per day to the biodigeste r. Organic loading rate that been used in this research were 2,25 L/day and 2,75 L/day. The results show that the influence of organic loading rate to biohydrogen  production.  The  results  reveal  that  the  higher  the  OLR  is,  the  more  hydrogen  is  produced.  The production of hydrogen on OLR 2.75 L is higher than OLR 2.25 L. The hydrogen production’s concentration is 11.728 %. The conversion of biomass waste into hydrogen gas is considered to support Indonesia governments about Waste to Energy concept and become one of the alternative energy solutions in Indonesia. Hydrogen gas can then be converted into heat and electricity.
Keywords: Biohydrogen, Orange, Biodigester, Organic Loading Rate, Waste to Energy

## PENDAHULUAN
Peningkatan  kebutuhan  hidup  manusia menyebabkan  kebutuhan  akan  energi  menjadi masalah besar yang dihadapi oleh negara di dunia, termasuk Indonesia. Tidak ditemukannya cadangan dalam jumlah yang besar, menjadikan permasalahan  energi  menjadi  topik  utama. Sementara kenyataannya manusia tetap memerlukan
energi dalam menjalankan aktivitasnya.  Aktivitas  manusia  ini  menyebabkan konsumsi  energi  selalu  meningkat  dari  tahun  ke tahun. Berdasarkan Outlook Energi Indonesia 2020 yang  dikeluarkan  oleh  Dewan  Energi  Nasional, konsumsi  energi  final  di  Indonesia  mengalami peningkatan    sebesar  5,5%  per  tahun  dalam sepuluh  tahun  terakhir  (2010-2020).  Dimana sebagian besar sumber energi tersebut merupakan energi fosil. Peningkatan konsumsi energi ini tidak sesuai  dengan  ketersediaan  energi  yang  terdapat di  bumi.  Permasalahan  energi  dalam  memenuhi kebutuhan manusia perlu  ditangani secara serius. Sumber  energi  terbarukan  merupakan  sumber energi  alternatif  yang  dapat  menggantikan  posisi sumber energi saat ini, yang masih didominasi oleh minyak  dan  gas  bumi.  Salah  satu  upaya  dalam mengembangkan  sumber  energi  alternatif  yaitu dengan  penggunaan  biohidrogen.  Biohidrogen merupakan  sintesis  gas  hidrogen  menjadi  bahan bakar  dengan  pemanfaatan  limbah  biomassa. Limbah  biomassa  dengan  perlakukan  secara termokimia atau biologis dapat menghasilkan gas hidrogen.  Limbah  biomassa  berupa  substrat  kaya akan  karbohidrat  dicampur  dengan  bakteri anaerob  yang  bertugas  mengoksidasi  bahan tersebut  sehingga  melepaskan  elektron,  yang dalam kondisi gelap diterima oleh proton sehingga dihasilkan  molekul  gas  hidrogen  (H 2 ) dan  asam organik (Levin et al., 2004; Abubackar et al. , 2019). Hidrogen  merupakan  suatu  senyawa  yang memilki  potensi  yang  cukup  menjanjikan  sebagai salah  satu  sumber  energi  untuk  di  masa  depan. Energi  dari  hasil  kalor  pembakaran  hidrogen  ini mencapai  120,1  MJ/Kg,  dimana  angka  ini  bahkan hampir tiga kali lipat lebih besar dari energi yang dihasilkan pembakaran gasoline (Widjaja, 2010).
Hidrogen diperoleh melalui proses fermentasi anaerob pada limbah biomassa. Dengan menggunakan bantuan mikroorganisme, diperoleh senyawa  hidrogen  yang  diinginkan.  Proses
produksi  hidrogen  ini  tidak  membutuhkan  energi yang  besar  karena  fermentasi  yang  digunakan dalam  kondisi  gelap.  Hidrogen  yang  diproduksi dari  limbah  biomassa  ini  disebut  biohidrogen. Biohidrogen  berpotensi  sebagai  bahan  bakar alternatif karena memiliki kandungan energi yang tinggi  dan  produk  pembakarannya  yang  ramah lingkungan (Purnomohadi, 2015).
Pembuatan  gas  hidrogen  dari  limbah biomassa  hingga  saat  ini  sulit  untuk  diproduksi dalam skala besar. Kendala tersebut terjadi karena terdapat  kesulitan  dalam  mengontrol  kondisi operasi fermentasi dan serta aktivitas bakteri yang digunakan. Jenis reaktor yang digunakan sejauh ini berupa reaktor batch , dimana proses produksi gas hidrogen  hanya  dapat  dilakukan  pada  skala laboratorium. Hasil gas yang diperoleh juga relatif sedikit.  Sebuah  terobosan  baru  dalam  produksi biohidrogen dari limbah biomassa adalah dengan menggunakan reaktor kontinyu (Wang et al. , 2013). Limbah  biomassa  disirkulasi  di  dalam  biodigester untuk  memaksimalkan  produk  gas  hidrogen.
Dengan menggunakan sistem kontinyu, diharapkan produksi biohidrogen
dapat dimaksimalkan dalam skala besar.
Berdasarkan Survei Sosial Ekonomi Nasional (SUSENAS),  dimana  data  konsumsi  yang  tercatat merupakan  konsumsi  jeruk  untuk  kebutuhan rumah tangga, pola perkembangan konsumsi jeruk pada  periode  1995-2014  fluktuatif  namun cenderung
meningkat dengan rata-rata pertumbuhan  11,65%  per  tahun  (Suwardi,  2015). Besarnya tingkat konsumsi buah jeruk menyebabkan limbah organik yang dihasilkan juga semakin besar. Dari mulai limbah dari perkebunan jeruk  hingga  limbah  ditingkat  konsumen.  Limbah organik  yang  dihasilkan  buah  jeruk  (Citrus  sp.) dapat  dimanfaatkan  menjadi  bahan  baku pembuatan biohidrogen. Karena jeruk merupakan salah  satu  buah – buahan  yang  mengandung senyawa karbohidrat, hidrokarbon, dan ester yang dapat  diolah  untuk  dihasilkan  biohidrogen. Penggunaan  limbah  buah  jeruk  sebagai  sumber bahan baku biohidrogen dapat menjadi salah satu solusi  energi  alternatif  di  Indonesia.  Berdasarkan data dari Kementerian Kesehatan RI (2018), dalam 100  gram  sari  buah  jeruk  mengandung  kalori sebesar  44  kal;  karbohidrat  sebesar  11  gram; protein sebesar 0,8 gram; lemak sebesar 0,2 gram; vitamin A, B1, C 239,1 gram; dan mineral lainnya.
Karbohidrat, lemak, dan protein yang terkandung dalam  limbah  buah  jeruk  dapat  dimanfaatkan sebagai  sumber  gas  hidrogen  selanjutnya  dapat dikonversi  menjadi  panas  dan  listrik.  Penelitian yang  dilakukan  (Nurhayati,  2017)  dengan menggunakan  bahan  yang  sama  dengan  variasi Organic  Loading  Rate (ORL)  2,2  ;  2,5  ;  3,1  L/hari menghasilkan  gas  hidrogen  tertinggi  di  3,76%. Penelitian  yang  dilakukan  (Bonanza  dan  Sarto, 2016)  dengan  variasi  berupa total  solid (%) menghasilkan 11,7% gas hidrogen pada ORL 2.75 L/hari. Kedua hasil penelitian menunjukkan adanya produksi  biohidrogen  dengan  menggunakan limbah  buah  jeruk.  Hal  tersebut  yang  mendorong penelitian biohidrogen ini.

## METODOLOGI
Penelitian  bertujuan  untuk  menunjukkan bahwa gas hidogen akan menjadi salah satu energi alternatif  di  masa  depan  menggantikan  bahan bakar  fosil  (De  Gruyter,  2015).    Biohidrogen merupakan proses produksi gas hidrogen dengan memanfaatkan limbah biomassa dengan fermentasi  anaerob.  Selama  proses  fermentasi anaerob,  tidak  ada  udara  dan  cahaya  yang menghambat  aktivitas  bakteri  pembentuk  gas (Manish dan Banerjee, 2008).
Reaktor tempat terjadinya proses fermentasi biomassa
disebut biodigester. Biodigester  dirancang  khusus  dengan  rapat  dan kedap  udara  untuk  memaksimalkan  proses fermentasi.  Proses  fermentasi  pada  pembuatan biohidrogen  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor, antara  lain:  temperatur,  derajat  keasaman  (pH), nutrisi, dan Hydraulic Retention Time (HRT). Temperatur  sangat  mempengaruhi  proses fermentasi  anaerob  yang  dilakukan.  Setiap golongan  mikroorganisme  mempunyai  suhu optimum  untuk  pertumbuhannya,  sehingga  suhu fermentasi harus diatur secara tepat. Mikroorganisme dibagi menjadi beberapa macam, yaitu:  psikrofilik  (0-20°C),  mesofilik  (20-42°C)  dan termofilik  (42-75°C).  Reaktor  fermentasi  anaerob normalnya beroperasi pada kisaran suhu mesofilik dan  termofilik  (Xiao et  al .,  2013).  Penelitian  ini menggunakan ambien temperature sebesar 25  °C menyesuaikan dengan jenis bakteri mesofilik yang digunakan dan lebih mudah untuk dikontrol.
Fermentasi secara anaerob sangat bergantung  kepada  pH,  karena  masing-masing jenis bakteri yang terlibat dalam reaksi mempunyai rentang pH tertentu untuk dapat tumbuh. Nilai pH optimal untuk mikroba yang memproduksi metana adalah 6,8 - 7,2 (Purnomohadi, 2015). Pada proses asidogenesis  akan  dihasilkan  asam  yang  akan mengubah  pH  sistem  menjadi  lebih  rendah. Peningkatan jumlah asam yang sangat besar tidak diiinginkan
karena akan
menghambat pertumbuhan  bakteri  metanogen  penghasil metana.
Semua  organisme  membutuhkan  suatu bahan untuk pertumbuhannya, makro nutrien dan kekurangan  nutrisi  ini  akan  memberikan  dampak negatif  pada  pertumbuhannya  (Lettinga,  1995). Nutrisi yang dimaksud adalah nitrogen dan fosfor, selain itu masih ada sulfur, kalium, magnesium dan lainnya.  Selain  itu  perlu  juga  dilihat  kandungan inhibitor  dalam  substrat  sehingga  dapat mengontrol pertumbuhan mikroba.
Hydraulic  Retention  Time (HRT)  adalah periode waktu rata-rata bagi setiap input substrat untuk  tinggal  di  dalam  reaktor  fermentasi  dan diolah  oleh  mikroorganisme.  Dibutuhkan  waktu tinggal  optimum  agar  produk  biohidrogen  yang dihasilkan  maksimum.  Waktu  tinggal  substrat  di dalam reaktor dapat diatur dengan jumlah substrat ( Organic Loading Rate ) yang dimasukkan ke sistem (Bonanza dan Sarto, 2016).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengamati pengaruh  variable Organic  Loading  Rate (ORL, L/hari)  terhadap  gas  hydrogen  yang  dihasilkan. Dicari  hubungan  antara  kedua  variable  tersebut hingga  diperoleh  waktu  tinggal  optimal  bahan organic  didalam  reaktor.  Penelitian  dilakukan  di Laboratorium  Teknik  Pangan  dan  Bioproses, Departemen  Teknik  Kimia,  Universitas  Gadjah Mada  dengan  rangkaian  alat  utama  penelitian ditunjukkan oleh Gambar 1. Bahan yang digunakan dalam penelitian antara lain : Sampah buah jeruk yang diperoleh dari Pasar buah Gemah Ripah, Gamping, Yogyakarta, Inokulum berupa campuran yang  diperoleh  dari  : Sludge dari  limbah  buah diperoleh dari instalasi biogas Pasar Buah Gemah Ripah Gamping, Sludge berupa  ampas  tahu pengrajin tahu diperoleh dari Industri Tahu Bantul, Sludge kotoran  sapi,  Medium  PYG  (glucose, peptone, yeast extract, resazurin dan L-Cysteine
Gambar 1. Rangkaian Alat Utama Penelitian
HCl), Gas Nitrogen, Garam NaCl 95%, NaOH pellet, HCl 37%.
Langkah  penelitian  dilakukan  sebagai  berikut:  (1) Persiapan  dan  Uji  Kebocoran  Alat  Uji  kebocoran biodigester  dilakukan  dengan  mengisi  setengah biodigester dengan air lalu seluruh lubang output ditutup. Digester yang terisi air didiamkan selama 24  jam  dengan  tujuan  memastikan  tidak  ada kebocoran  air  pada  sambungan  atau  bagian  lain. Jika  tidak  ada  air    yang  menetes,  maka  digester dinyatakan  lolos  uji  kebocoran.  Uji  kebocoran dilanjutkan dengan uji kebocoran gas, mengingat fase dari produk adalah gas. Seluruh lubang seperti lubang keluaran 1, 2, 3, serta effluent ditutup. Dari saluran input dialirkan  udara,  sementara  bagian sambungan  digester  diolesi  dengan  busa  sabun. Jika  pada  bagian  tersebut  terbentuk  gelembung atau buih, maka digester masih dinyatakan bocor, sehingga  pada  bagian  yang  bocor  harus  dilem. Termasuk juga saat di lubang yang sudah ditutup dtemukan buih, maka alat harus dilem kembali. (2) Pretreatment Inokulum: Pretretment bertujuan untuk mengnonaktifkan aktivitas bakteri metanogen  dengan  perlakuan  pH.  Sludge  dari effluent digester biogas, sampah tahu, dan kotoran sapi  masing-masing  diambil  sebanyak  100  mL, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  Erlenmeyer. Sludge  ditetesi  HCl  2  M  hingga  mencapai  pH  3. Selanjutnya sludge didiamkan selama 24 jam dalam
Erlenmeyer  tertutup.  Setelah  24  jam,  Sludge ditetesi NaOH hingga mencapai pH 7  (Nurhayati, 2017). (3) Tahap Enrichment: Tujuan dilakukannya tahap Enrichment adalah  untuk  memperbanyak jumlah  bakteri  penghasil  biohidrogen.  Bahan bahan  yang  digunakan  untuk  membuat  medium enrichment terdiri dari: aquadest, pepton, L-cystein HCl,  resazurin,  yeast  extract,  glukosa,  dan  larutan NaOH.  Prosedur  pembuatan  medium  enrichment dilakukan  sama  seperti  pada  penelitian  produksi biohidrogen dengan reaktor batch yang dilakukan oleh Purnomohadi, 2015. Inokulum campuran yang telah  di  enrichment  disiapkan  sebanyak  350  ml untuk  masuk  ke  dalam  biodigester.  (5)  Persiapan Limbah Buah Jeruk sebagai Input Biodigester : Input berupa  limbah  buah  jeruk  yang  digunakan merupakan limbah buah jeruk yang diperoleh dari Pasar  Buah  Gamping,  Sleman.  Buah  jeruk  yang diperoleh  dikupas  dengan  tujuan  diambil  bagian buahnya,  lalu  dipisahkan  antara  padatan  dan cairannya  dengan  menggunakan  juicer.  Padatan atau  ampas  buah  jeruk  yang  masih  terkandung cairannya  diperas  dengan  kain  belacu  untuk mendapatkan slurry buah jeruk yang lebih banyak. Jumlah  cairan  limbah  jeruk  yang  dipersiapkan dengan juicer disesuaikan  dengan  kebutuhan variasi loading rate 2,25 liter/hari dan 2,75 liter/hari. (5) Persiapan Medium Produksi : Medum Produksi digunakan  berupa  PYG  ( pepton-yeast-glucose ) yang  mengandung  10  g/L  pepton,  10  g/L  yeast

## Keterangan:
1. Tangki input 2. Reaktor
3. Tangki Antara
4. Tangki Effluent
5. Bak Penampung Effluent
6. Gas Meter
7. Pompa Input
8. Pompa Sirkulasi 1
9. Pompa Sirkulasi 2
extract, 0,001 g/L resazurin., 0,5 g/L Lsisteine- HCl., 10  g/L  glukosa  (Purnomohadi,  2015).  Medium produksi disiapkan sebanyak 20 L untuk masuk ke dalam biodigester sebagai campuran pada loading rate  pertama.  Medium  produksi  kemudian dicampur dengan substrat jeruk sebanyak 15 L dan ditambahkan HCl atau NaOH hingga pH menjadi 7 (Nurhayati, 2017). (6) Pelaksanaan Proses Produksi Biohidrogen:  Langkah  diawali  dengan flushing menggunakan gas nitrogen. Ini dilakukan sebelum inokulum dan limbah jeruk dimasukkan ke dalam biodigester. Hal ini bertujuan untuk mengeluarkan gas  oksigen  yang  terjebak  dalam  selang  dan digantikan dengan gas nitrogen. (7) Pengambilan Sampel Gas Hidrogen: Gas diambil melalui Silicone rubber plug  dengan syringe sebanyak  5  ml, kemudian  gas  disimpan  dalam venoject dan dianalisis  kandungan  hidrogennya  dengan menggunakan Gas Chromatrography (GC).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  variasi Organic  Loading  Rate (OLR) sampah  buah  jeruk  terhadap  produksi  gas hidrogen  pada  biodigester  (Martín et  al., 2010). Dimana pada penelitian ini digunakan variasi OLR sebesar  2,25  L/hari  dan  2,75  L/hari.  Sampel  gas yang  diperoleh  dari  reaktor  dianalisis  kandungan hidrogennya
dengan
menggunakan Gas Chromatrography (GC).  Hasil  gas  hidrogen  yang diperoleh ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Data  Analisis  Hidrogen  dengan Gas
Chromatrography (GC) ORL (L/hari) Hari Ke- Kadar Gas H 2 , % 2,75 L 1 5,155 2 6,163 3 8,485 4 2,465 5 11,174 6 11,728 2,25 L 1 11,613 2 6,720 3 7,500 4 9,963 5 11,039
Berdasarkan Gambar 2 dapat dilihat bahwa gas  hidrogen  yang  dihasilkan  cenderung mengalami  kenaikan.  Memasuki  hari  ke-5  untuk kedua  variasi  gas  hidrogen  yang  dihasilkan cenderung steady
(konstan ) . Gambar 2 menunjukkan  bahwa  semakin  besar  variasi  OLR, maka kadar gas hidrogen yang dihasilkan semakin besar. Penelitian ini menunjukkan bahwa kadar gas hidrogen  yang  dihasilkan  ORL  2,75  L  lebih  tinggi dibanding  2,25  L.  Semakin  banyak  OLR  maka semakin banyak substrat yang dapat terdegradasi oleh  mikroorganisme  menjadi  gas  hidrogen.    Hal tersebut didukung oleh penelitian yang dilakukan Bonanza dan Sarto (2016), bahwa pada OLR 2.75 L diperoleh hydrogen 11.7% disbanding dengan OLR 2.5 L hanya 4,5%. Pada hari ke-4 produksi gas pada OLR 2,25 L justru lebih tinggi dibanding 2,75 L. Hal ini  disebabkan  karena  pada  hari  ke-4  OLR  2,75  L terdapat error dari  produksi  gas  yang  dihasilkan reaktor.  Pada  hari  tersebut  volume  gas  yang dihasilkan  pada  reaktor  lebih  sedikit  karena  tidak banyak  mikroorganisme  yang  mendegradasi substrat  menjadi  gas  hidrogen.  Kadar  hidrogen tertinggi  yang  dihasilkan  adalah  11,728%  pada variasi  OLR  2,75  L  di  hari  ke-6.    Perlu  diamati dengan lanjut titik optimum OLR yang di input ke dalam reaktor.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan diperoleh,  dapat  disimpulkan  bahwa  semakin tinggi  nilai Organic  Loading  Rate (ORL)  maka semakin tinggi kadar gas hidrogen yang dihasilkan. Kadar gas hidrogen yang diperoleh pada Organic Loading  Rate 2,75  L/hari  lebih  tinggi  daripada Organic Loading Rate 2,25 L/hari dengan produksi gas hidrogen tertinggi sebesar 11,728%.  Konversi limbah  biomassa  menjadi  gas  hidrogen  dinilai mendukung  konsep Waste  to  Energy pemerintah dan  dapat  menjadi  salah  satu  solusi  energi alternatif  di  Indonesia.  Gas  hidrogen  selanjutnya dapat  dijadikan  bahan  bakar  dikonversi  menjadi energi panas dan listrik. Oleh sebab itu diperlukan penelitian lebih lanjut terkait produksi biohidrogen, termasuk analisis mikroorganisme didalam proses konversi.

## DAFTAR PUSTAKA
Abubackar,  H.N.,  Keskin,  T.,  Yazgin,  O.,  Gunay,  B., Arslan,  K.  &  Azbar,  N.  2019.  Biohydrogen production  from  autoclaved  fruit  and vegetable  wastes  by  dry  fermentation  under thermophilic  condition. International  Journal of Hydrogen Energy , 44(34):18776-18784.
Bonanza, B.S.W. & Sarto, S. 2016. Pengaruh Variasi Organic  Loading  Rate  Sampah  Buah  Jeruk terhadap Produksi Biohidrogen pada Reaktor Kontinu. Jurnal Rekayasa Proses , 10(2):43-47. De  Gruyter,  2015.  Biohydrogen. Green  Processing and Synthesis Hydrogen Energy , 4:506 – 507 Levin, D.B., Pitt, L.  & Love, M., 2004. Biohydrogen production:  prospects  and  limitations  to practical  application. International  journal  of hydrogen energy , 29(2):173-185.
Manish,  S.  &  Banerjee,  R.  2008.  Comparison  of biohydrogen production processes. International  Journal  of  Hydrogen  Energy ,
33 (1):279-286.
Martín, M.A., Siles, J.A., Chica A.F., Martín, A. 2010. Biomethanization  of  Orange  Peel  Waste ,
Bioresource technology , 101:8993-8999 Nurhayati, A. 2017. Pengaruh Variasi Loading Rate Sampah  Buah  Jeruk  Terhadap  Produksi Biohidrogen  Pada  Reaktor  Kontinyu  Dengan Parameter  Volatile  Fatty  Acid,  Teknik  Kimia, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Purnomohadi,  A.  2015.  Pengaruh  Penambahan Hidrogen  Peroksida  terhadap  Produksi Biohidrogen  oleh  clostridium  bifermentans BLK YK-1999, Teknik Kimia, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta,
Suwardi.  2015.  Outlook  Komoditas  Pertanian Subsektor  Hortkultura  Jeruk,  Pusat  Data  dan Sistem  Informasi  Pertanian  -  Kementerian Pertanian, Jakarta,
Wang, C.C., Chang, C.W., Chu, C.P., Lee, D.J., Chang, B.V.  &  Liao,  C.S.,  2003.  Producing  hydrogen from  wastewater  sludge  by  Clostridium bifermentans. Journal of biotechnology , 102(1): pp.83-92.
Wang, X., Ding, J., Ren, N.Q., Liu, B.F. and Guo, W.Q., 2009. CFD simulation of an expanded granular sludge  bed  (EGSB)  reactor  for  biohydrogen production. International journal of hydrogen energy , 34(24):9686-9695.
Widjaja,  A.  2010.  Pengaruh  Konsentrasi  Substrat pada  Proses  Produksi  Hidrogen  Secara Fermentasi Anaerobik Menggunakan enterobacter aerogenes, Teknik Kimia, Institut Teknologi Sepuluh Nopember, Surabaya.
Xiao, Y., Zhang, X., Zhu, M. & Tan, W. 2013. Effect of the  culture  media  optimization,  pH  and temperature  on  the  biohydrogen  production and  the  hydrogenase  activities  by  Klebsiella pneumoniae  ECU-15. Bioresource  technology , 137:9-17.