e- ISSN:2528-0759; p-ISSN:2085-5842
JIPK. Volume 10 No 1. April  2018

## JIPK JURNAL ILMIAH PERIKANAN DAN KELAUTAN

## Research Article
Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri  Proteolitik  yang  Berasosiasi  dengan  Lamun ( Enhalus acoroides) di Pantai Bama, Taman Nasional Baluran, Situbondo, Jawa Timur
Isolation and Characterization Proteolytic Bacteria which is Associated with Sea Grass (Enhalus  acoroides )  in  Bama  Beach,  Baluran  National  Park,  Situbondo, East Java.
Rachmat Rizaldi 1 , Woro Hastuti Setyantini 2 *, dan Sudarno 2
1 Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga, Surabaya 60115
2 Departemen Manajemen Kesehatan Ikan dan Akuakultur, Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga, Surabaya 60115

## ARTICLE INFO
Received: April 19, 2018 Accepted: April 27, 2018
*) Corresponding author: E-mail: worohastuti79@gmail.com
Kata Kunci :
Lamun (Enhalus acoroides), Bakteri proteolitik,  Asosiasi,  Enzim protease
Keywords :
Lamun  ( Enhalus  acoroides) , Proteolytic bacteria, Associations, Protease enzyme

## Abstrak
Lamun  adalah  tumbuhan  sejati  yang  hidup  di  perairan  pantai  yang kurang  dimanfaatkan  dalam  bidang  perikanan,  selain  sebagai bioindikator  kualitas  air  laut.  Beberapa  mikroorganisme  yang berasosiasi  dengan  lamun Enhalus  acoroides antara  lain  benthos, kapang,  bakteri  dan  plankton.  Bakteri  proteolitik  merupakan  bakteri yang mampu menghasilkan enzim protease. Enzim perotese merupakan enzim  yang  paling  banyak  digunakan  dalam  kehidupan.  Bakteri merupakan sumber enzim yang paling banyak digunakan dibandingkan dengan  tanaman  dan  hewan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  jenis  isolat  bakteri  proteolitik  yang  berasosiasi  dengan lamun Enhalus  acoroides di  Taman  Nasional  Baluran,  Situbondo. Penelitian  ini  menggunakan  metode  survei  dengan  dianalisis  secara deskriptif  dengan  bantuan  tabel  dan  gambar.  Hasil  yang  peroleh menunjukkan bahwa terdapat 12 isolat bakteri yang berasosisasi dengan lamun Enhalus  acoroides .  Terdapat  empat  isolat  yang  tergolong sebagai  bakteri  proteolitik  karena  mampu  mendagradasi  kasein  dalam media  TSA  +  2%  NaCL  yang  ditambah  1  %  susu  skim,  tampak  dari pembentukan zona bening. Pengamatan  morfologi  koloni dan sel serta pengujian biokimia dari keempat isolat (EA-1, EA-2, EA-9 dan EA-10) terdapat  kesamaan  karakteristik  dengan  empat  genus  bakteri  berturut- turut  yaitu Staphylococcus sp., Plesiomonas  shigeloides,  Bacillus sp., Pseudomonas sp.

## Abstract
Seagrass is a true living plants underutilized coastal waters in the field of fisheries,  as  well  as  bio-indicators  of  the  quality  of  sea  water.  Some microorganisms  associated  with  seagrass Enhalus  acoroides among others  benthos,  fungi,  bacteria  and  plankton.  Proteolytic  bacteria  are bacteria  that  are  capable  of  producing  the  enzyme  protease.  Protease enzyme  is  an  enzyme  that  is  most  widely  used  in  life.  Bacteria  are  a source  of  enzymes  that  are  most  widely  used  compared  to  plants  and animals.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  type  of proteolytic bacterial isolates associated with seagrass Enhalus acoroides
in  Baluran  National  Park,  Situbondo.  This  study  used  survey  method with descriptive analysis with tables and figures. The results obtained that  there  are  12  bacterial  isolates  associated  with  seagrass Enhalus acoroides . There are four isolates were classified as proteolytic bacteria because it can degrade casein in TSA media + 2 % NaCL plus 1% skim milk  which  is  evidenced  by  the  formation  of  clear  zones.  Observations colony  morphology  and  cells  as  well  as  testing  of  Biochemistry  of  the four isolates (EA-1, EA-2, EA-9 and EA-10) were obtained, with similar characteristics  to  the  four  genera  of  bacteria  in  a  row  as  follows Staphylococcus sp., Plesiomonas shigeloides , Bacillus sp., Pseudomonas sp.
Cite this as: Rachmat, R., Woro, H. S., & Sudarno. (2018). Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Proteolitik yang Berasosiasi dengan Lamun  ( Enhalus  acoroides )  di  Pantai  Bama,  Taman  Nasional  Baluran,  Situbondo,  Jawa  Timur .  Jurnal  Ilmiah  Perikanan  dan Kelautan, 10(1):8–14. http://doi.org/10.20473/jipk.v10i1.8314

## 1. Pendahuluan
Lamun  berperan  penting  dalam  siklus  ekologi pada  perairan  dangkal  pantai  tropis  dan  subtropis (Kurniawan  dkk. , 2010).  Fungsi  ekologi  lamun diantaranya  adalah  sebagai  tempat  pemijahan,  asuhan, mencari makan dan tempat perlindungan berbagai jenis biota laut (Thomascik et al ., 1997). Organisme laut yang hidupnya menetap diperkirakan sangat bergantung pada mekanisme  pertahanan  kimia  untuk  melawan  hewan- hewan  pemangsa  dan  perlekatan  dari  mikroorganisme patogenik (Watermann, 1999).
Pada  ekosistem  lamun,  bakteri  berperan  sebagai pengurai  primer,  berfungsi  dalam  pelepasan  dan pengikatan  unsur  hara  dari  fraksi  mineral  sedimen menjadi  nutrien  yang  diperlukan  lamun.  Bakteri  yang berasosiasi  dengan  lamun  ada  beberapa  yang menguntungkan,  yaitu  bakteri  yang  dapat  memberikan kontribusi  untuk  pertahanan  inangnya  dengan  sekresi antibiotik  dan  substansi  bioaktif  lainnya  (Watermann, 1999).  Bakteri  akan  mendegradasi  substrat  serasah lamun  yang  ada  pada  sedimen  dengan  menggunakan enzimnya  (Udy  dan  Dennison,  1996).  Bakteri merupakan  sumber  enzim  yang  paling  banyak digunakan  dibandingkan  dengan  tanaman  dan  hewan. Sebagai  sumber  enzim,  bakteri  memiliki  keunggulan karena  pertumbuhannya  cepat,  mudah  ditumbuhkan, mudah diatur produksinya dan mudah direkayasa secara genetika (Irma dkk., 2009).
Bakteri  proteolitik  merupakan  bakteri  yang mampu  menghasilkan  enzim  protease.  Protease  tidak hanya  berperan  dalam  proses  metabolisme  seluler, namun  juga  dapat  diaplikasikan  dalam  bidang  industri (Gupta dkk., 2002). Bakteri proteolitik yang didapatkan diharapkan  bisa  dijadikan  sebagai  kandidat  bakteri probiotik.  Berdasarkan  hal  tersebut  maka  pada penelitian ini dilakukan isolasi dan karakterisasi bakteri proteolitik  yang  berasosiasi  dengan  lamun Enahlus
acoroides yang berada di Pantai Bama, Taman Nasional (TN) Baluran, Situbondo, Jawa Timur.

## 2. Materi dan Metode

## 2.1 Materi Penelitian
Materi  penelitian  yang  digunakan  adalah sampel lamun Enhalus acoroides yang diperoleh dari Pantai  Bama,  Taman  Nasional  Baluran,  Situbondo serta bahan lainnya seperti akuades, NaCl fisiologis 0,9 %, air laut steril, Tryptic Soy Agar (TSA), Skim
Milk Agar (SMA), kertas cakram (kertas Whatmann).

## 2.2 Metode Penelitian
Pengambilan  lamun  dilakukan  secara  acak ( random sampling ) dengan transek kuadran berukuran 1 x 1 m dengan jarak tiap kuadran transek 25  m  secara  vertikal  (arah  menuju  laut)  sepanjang 50m  dan  horizontal  (searah  garis  pantai)  sepanjang 100 m. Sampel lamun sebanyak 10 gr dicuci dengan air  laut  steril,  kemudian  digerus,  selanjutnya ditambahkan  NaCl  fisiologis  sebanyak  10  ml. Larutan  stok  sampel  1  ml  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  yang  berisi  9  ml  NaCl  fisiologis (pengenceran  10 -1 )  kemudian  dikocok  dengan menggunakan vortex. Pengenceran dilakukan hingga 10 -6 .
Hasil  pengenceran  sampel  10 -6 diinokulasi dalam  medium  TSA  +  2%  NaCl  dengan  metode tuang ( pour plate ) selanjutnya diinkubasi selama 24 jam  pada  suhu  30 0 C  (Massinai,  2013).  Tiap  koloni yang  berbeda  secara  morfologi  (warna,  bentuk, elevasi  dan  tepi)  dipisahkan  dan  diinokulasi  dengan metode  goresan  ( streak  plate ),  sehingga  diperoleh isolat  murni.  Karakteristik  bakteri  proteolitik menggunakan  metode disk  diffusion yaitu  dengan cara  meneteskan  isolat  bakteri  pada  kertas  cakram lalu  diletakkan  pada  media  TSA  +  2  %  NaCl  yang ditambahkan  susu  skim  1%.  Setelah  didapatkan
JIPK. Volume 10 No 1. April  2018 / Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Proteolitik yang Berasosiasi dengan Lamun…………..
isolat  bakteri  proteolitik,  bakteri  yang  memiliki aktivitas  enzim  proteolitik  selanjutnya  diidentifikasi dengan  uji  biokimia  secara  bertahap  menurut  bagan alir  dikotomi  berdasarkan Bergey’s Manual  of Determinative Bacteriology (Holt et al., 1994).

## 2.3 Parameter Penelitian
Parameter  utama  dalam  penelitian  ini  adalah adanya keberadaan isolat bakteri serta mengidentifikasi jenis isolat bakteri proteolitik yang berasosiasi dengan lamun Enhalus acoroides di  perairan  Pantai  Bama, Taman Nasional Baluran, Situbondo, Jawa Timur. Uji aktivitas  proteolitik  dan  identifikasi  bakteri  dilakukan di  Balai  Karantina  Ikan,  Pengendalian  Mutu  dan Keamanan Hasil Perikanan Kelas 1 Juanda, Surabaya. Parameter  pendukung  dalam  penelitian  ini  adalah kualitas  perairan  padang  lamun Enhalus  acoroides di Pantai  Bama,  Taman  Nasional  Baluran.  Adanya parameter  pendukung  sangat  berpengaruh  terhadap parameter utama dalam penelitian ini.

## 2.4 Analisis Data
Data  hasil  penelitian  ini  berupa  data  morfologi sel  dan  koloni  isolat  serta  hasil  uji  biokimia  bakteri proteolitik  yang  diperoleh  dari  lamun Enhalus acoroides di  Pantai  Bama,  Taman  Nasional  Baluran. Data dianalisis secara deskriptif dengan bantuan Tabel dan Gambar.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Parameter  utama  dalam  penelitian  ini  adalah adanya keberadaan isolat bakteri serta mengidentifikasi jenis isolat bakteri proteolitik yang berasosiasi dengan lamun Enhalus acoroides di  perairan  Pantai  Bama, Taman Nasional Baluran, Situbondo, Jawa Timur. Uji aktivitas  proteolitik  dan  identifikasi  bakteri  dilakukan di  Balai  Karantina  Ikan,  Pengendalian  Mutu  dan Keamanan Hasil Perikanan Kelas 1 Juanda, Surabaya. Parameter  pendukung  dalam  penelitian  ini  adalah kualitas  perairan  padang  lamun Enhalus  acoroides di Pantai  Bama,  Taman  Nasional  Baluran.  Adanya parameter  pendukung  sangat  berpengaruh  terhadap parameter utama dalam penelitian ini.

## 2.4 Analisis Data
Data  hasil  penelitian  ini  berupa  data  morfologi sel  dan  koloni  isolat  serta  hasil  uji  biokimia  bakteri proteolitik  yang  diperoleh  dari  lamun Enhalus acoroides di  Pantai  Bama,  Taman  Nasional  Baluran. Data dianalisis secara deskriptif dengan bantuan Tabel dan Gambar.

## 3.1 Lamun Enhalus acoroides
Lamun Enhalus acoroides yang berada di
perairan  Pantai  Bama  memiliki  karakteristik rhizome berukuran  1,5 – 1,8  cm,  akar  berwarna  putih  dengan panjang antara 9 – 15 cm. Daun berbentuk seperti pita dengan pinggiran daun yang menebal dan lebar antara 8  –  20  mm  serta  panjang  antara  10  –  60  cm.  Hal tersebut  sesuai  dengan  Waycott et  al .  (2004)  yang menyatakan Enhalus  acoroides mempunyai rhizome (akar rimpang) berdiameter 1,3 – 1,7 cm yang tertutup rapat  dengan  rambut-rambut  yang  kaku  dan  keras. Bentuk  daun  seperti  pita  dengan  tepi  rata  dan  ujung tumpul,  panjangnya  antara  65  –  150  cm  dan  lebar antara 1,2 – 2,0 cm (Dahuri, 2003).

## 3.2  Isolasi  dan  Pemurnian  Bakteri  Assosiasi  Lamun Enhalus acoroides
Pada  isolasi  tahap  awal  diperoleh  sebanyak  20 strain  bakteri  berdasarkan  pada  perbedaan  morfologi koloni  bakteri  secara  makroskopis.  Pada  tahap pemurnian  bakteri  dari  20  isolat  bakteri,  dilakukan penyeleksian  berdasarkan  kesamaan  morfologi  koloni bakteri baik dari segi warna, bentuk, elevasi dan tepian.
Hasil  pemurnian  diperoleh  12  isolat  bakteri yang  berasosiasi  dengan  lamun Enhalus  acoroides di Pantai  Bama,  TN  Baluran.  Pengamatan  morfologi  sel menggunakan pewarnaan Gram dan bentuk sel dengan mikroskop  perbesaran  1000x.  Hasil  pengamatan morfologi  sel  dari  12  isolat  bakteri  asosiasi  lamun Enhalus  acoroides diperoleh  morfologi  sel  berbentuk bulat ( coccus ) dan batang ( bacill ) dan hasil pewarnaan Gram  menunjukkan Gram negatif kecuali isolat EA-1 dan  EA-9  yang  Gram  positif.  Hal  ini  sesuai  dengan Pelczar  dan  Chan  (1986),  yang  menyatakan  bahwa bakteri  laut  95%  adalah  Gram  negatif,  sebagian bersifat  motil,  70%  mengandung  pigmen  dan mempunyai toleransi yang besar terhadap suhu. Isolat bakteri  yang  diperoleh  adalah  Gram  negatif,  karena bakteri  Gram  negatif  memiliki  struktur  dinding  sel yang  lebih  kompleks  dibanding  bakteri  Gram  positif. Menurut Fardiaz (1989), bakteri Gram negatif mampu bertahan di kondisi lingkungan yang ekstrim.
Isolat  bakteri  yang  ditemukan  lebih  banyak berbentuk bulat ( coccus )  dibandingkan dengan batang ( bacill ). Pelczar dan Chan (1986), kebanyakan bakteri berbentuk  bulat  (coccus)  hidup  saling  melekat  satu sama  lain  membentuk  kumpulan  yang  kuat  karena adanya  bahan  yang  dihasilkan  seperti  lendir.  Bakteri batang  ( bacill )  yang  ditemukan  kemungkinan  karena bakteri tersebut memiliki flagel yang digunakan untuk bergerak  untuk  mendapatkan  tempat    pelekatan. Menurut  Aryulina  (2005)  menyatakan  flagellum memungkinkan  bakteri  bergerak  menuju  kondisi lingkungan  yang  menguntungkan  atau  menghindar dari lingkungan yang merugikan bagi kehidupannya.
Tabel 1. Morfologi koloni dan sel bakteri lamun Enhalus acoroides yang berasal dari perairan Pantai Bama, TN Baluran.

## 3.3 Uji Aktivitas Proteolitik
Isolat  bakteri  asosiasi  yang  menghasilkan enzim  protease  adalah  isolat  dengan  kode  EA-1, EA-2,  EA-9  dan  EA-10.  Dari  pengamatan  secara makroskopis  dari  ke-empat  isolat  Bakteri  yang memiliki aktivitas proteolitik tersebut menunjukan    perbedaan    dari    segi    tepi,  bentuk, elevasi,    dan    warna.    Hal    ini    diduga    karena setiap    isolat    berbeda  jenis    sehingga  aktivitas proteolitik  yang  ditunjukan  juga  berbeda  yaitu dari    diameter    zona    bening  yang  terlihat. Pengukuran    zona    bening    pada    isolat    bakteri proteolitik  menunjukkan    perbedaan  dari  tiap isolat.  Aktivitas  paling  rendah    ditunjukkan    pada isolat    EA-2    dengan    diameter  zona  bening  7,5 mm.  Zona  bening  yang    paling  besar  ditunjukkan oleh  isolat  EA-1  dengan  diameter  zona  bening  18 mm.

## 3.4 Uji Biokimia
Ciri utama  suatu  bakteri yang  perlu diketahui  dalam  mengkarakterisasi  bakteri adalah  melalui  beberapa  uji  morfologi  dan uji biokimia  (Sudarsono,  2008).  Pengujian  yang dilakukan  meliputi  uji  oksidase,  uji  katalase,  uji O/F,  uji triple  sugar  iron  agar (TSIA),  uji  lysin iron  agar  (LIA),  uji  motility,  indole,  ornithine (MIO), uji  metil red (MR), uji  Voges  – Proskauer (VP),  uji  Simmons  citrate  dan  uji  gula-gula (glukosa,  laktosa,  sukrosa,  arabinosa,  manitol, inositol,  maltosa,  trehalose,  dulcitol  dan  xylose). Hasil  pengamatan  morfologi  dan  uji  biokimia yang  dibandingkan  dengan  buku Bergey’s Manual  of Determinative    Bacteriology  ( Holt et al .,    1994) dan    buku Biochemical  Tests      for
Identification  of  Medical
Bacteria ( Faddin and Jean, 1980 )
Kode Isolat Morfologi Koloni Morfologi Sel Bentuk Tepi Elevasi Warna Bentuk Gram EA-1 Tak Utuh Cembung Putih Coccus Positif beraturan Susu EA-2 Filament Bergerigi Membukit Putih Bacill Negatif bening EA-3 Bulat Utuh Datar Krem Coccus Negatif EA-4 Bulat Berombak cembung Krem Coccus Negatif EA-5 Bulat Utuh Datar Oranye Coccus Negatif EA-6 Bulat Bergerigi Cembung Coklat Bacill Negatif EA-7 Bulat Utuh Cembung Abu- Coccus Negatif abu EA-8 Bulat Utuh Datar Krem Coccus Negatif EA-9 Tak Utuh Datar Putih Bacill Positif beraturan EA-10 Bulat Bergerigi Datar Krem Bacill Negatif EA-11 Tak Utuh Cembung Oranye Coccus Negatif beraturan pudar EA-12 Akar Berbelah Datar Oranye Coccus Negatif
Tabel 2. Hasil uji biokimia dari isolat bakteri proteolitik
No. Uji Biokimia Kode isolat bakteri EA-1 EA-2 EA-9 EA-10 1. Gram + - + - 2. Oksidase - + - + 3. Katalase + + + + 4. O/F F F F O 5. 6. TSIA, Gas,  H2S (S/B)
LIA
(S/B)
K,A,H2S
+
K,A,
G, H2 S
+/H2S
K,A,H2S
+ A,A + 7. Motilitas - + + + 8. Gelatin + - + - 9. Indole - + - - 10 . Ornithine + + + + 11 . MR - + + - 12 . VP - - + - 13 . Arginin + + + - 14 . Simmon Citrate V+ + V+ V+ 15 . Uji Glukosa + + + - gula- Laktosa + + - V- gula Sukrosa + + + + Arabinase + + V- V- Manitol + + - + Inositol + + - V+ Maltosa + + V+ + Trehalose + + + + Dulcitol - + - V- Xylose + + V+ V-
Hasil identifikasi
Ps eu do m ona s sp. Ba cill us sp. Ple sio m on as shigelloide s Sta ph ylo co ccu s sp.
diperoleh kesesuaian karakteristik pada beberapa  genus  bakteri.  Kode  isolat  EA-1 memiliki kesamaan karakteristik dengan Staphylococcus sp., EA-2 dengan Pleciomonas shigeloides, EA-9      dengan Bacillus  sp. dan EA-10 dengan Pseudomonas sp.. Isolat bakteri Staphylococcus sp.  memiliki  zona  bening sebesar  18  mm. Hal  ini  didukung  dengan pernyataan Fatoni dkk. (2007) bahwa Staphyllococcus sp.  termasuk Plesiomonas shigeloides merupakan  bakteri  air  dan  sedimen tanah  yang  memiliki kemampuan  proteolitik serta termasuk bakteri patogen yang merugikan bagi organisme laut (Pereira et al ., 2008).
Bakteri Bacillus sp.  memiliki  zona bening sebesar 8 mm. Menurut Yuni ati (2015), bakteri Bacillus sp. merupakan bakteri proteolitik  karena  mampu  menghasilkan  enzim protease  terlihat  dari  zona  bening  yang terbentuk pada media susu skim. Sankaralingan et al .,  (2012)  menyatakan  bahwa  bakteri Pseudomonas sp.  dapat  menghasilkan  enzim protease pada berbagai media yang mengandung  sumber  protein  seperti  agar-agar, karginan  dan  polyacrylamide.  Zona  bening paling  besar  yang  terbentuk  dari  aktivitas proteolitik ditunjukkan oleh bakteri Staphylococcus sp. yaitu 18 mm dan yang
paling  kecil  adalah  bakteri Plesiomonas shigeloides sebesar  7,5  mm.  Beberapa  bakteri patogen  dapat  memproduksi  enzim  protease yang  digunakan  untuk  merusak  struktur jaringan inang (Baehaki dkk., 2005). Dua isolat bakteri (EA-9 atau Bacillus sp. dan EA-10 atau Pseudomonas sp.) yang diperoleh dari penelitian  ini  dapat  digolongkan  sebagai  calon kandidat  bakteri  probiotik.  Menurut  Feliatra (2004), beberapa jenis bakteri kandidat probiotik antara lain Lactococcus sp.,
Carnoacterium sp., Bacillus sp., Eubacterium sp., Pseudomonas sp., Lactobacillus sp., Micrococcus sp. dan Biftidobacterium sp.

## 4. Kesimpulan
Hasil  isolasi  bakteri  dari  sampel  lamun Enhalus  acoroides diambil  dari  perairan  Pantai Bama,  Taman  Nasional    Baluran,  Situbondo, Jawa  Timur  diperoleh  12  isolat  bakteri  yang berasosiasi    dengan    lamun Enhalus  acoroides. Dari keduabelas isolat tersebut  diperoleh empat jenis    isolat    bakteri  yang    memiliki    aktivitas proteolitik yaitu
Staphylococcus sp.,
Plesiomonas shigeloides , Bacillus sp.,
Pseudomonas sp.

## Daftar Pustaka
Aryulina,  D.  (2005).  Biologi  I.  Jakarta:  Erlangga.
134 hal.
Baehaki,  A.,  Nurhayati,  T.,  &  Suhartono,  M.  T.  ( 2005).  Karakteristik  Protease  Dari  Bakteri
Patogen Staphylococcus epidermidis . Buletin
Teknologi Hasil Perikanan. Teknologi Pangan  dan  Gizi,  Institut  Pertanian  Bogor , 8(2) : 25-34.
Dahuri,  R.  (2003).  Keanekaragaman  Hayati  Laut Aset Pembangunan Berkelanjutan Indonesia. Jakarta: Penerbitan Gramedia Pustaka Utama. Hal 165-169.
Faddin, M., & Jean, F. (1980). Biochemical Test for Identification  of  Medical  Bacteria.  (2 nd ed.).
Baltimore,  USA:    Lipincott  Williams  and Wilkins Company.  438 pp.
Fardiaz,  S.  (1989).  Mikrobiologi  Pangan.  Bogor: PAU Pangan dan Gizi, IPB. 125 hal.
Fatoni,  A.,  Zusfahair, & Lestari, P. ( 2007). Isolasi dan  Karakterisasi Protease Ekstraseluler dari Bakteri  dalam  Limbah  Cair  Tahu.  Program Studi  Kimia,  Jurusan  MIPA,  Fakultas  Sains dan Teknik, Universitas Jenderal Soedirman. Jurnal Natur Indonesia , 10(2):1-6
Feliatra, Efendi, I., & Suryadi, E. (2004). Isolasi dan
Identifikasi  Bakteri  Probiotik  dari  Ikan Kerapu  Macan  ( Ephinephelus  fuscogatus )
dalam  Upaya  Efisiensi  Pakan  Ikan. Jurnal Indonesia, 6(2): 75-80.
Gupta,  R.,  Beg,  Q.  K.,  &  Lorenz,  P.  (  2002). Bacterial  alkaline  proteases:  molecular approaches  and  industrial  application. Appl Microbiol Biotechnol. 59:15-32.
Holt,  J.  G.,  Krig,  N.  R.,    Sneath,  P.,  Staley,  J.,  & Williams,  S.  (1994).  Bergeys  Manual  Of Determinative  Bacteriology  (  9th  ed.). Philadelphia  USA:  Lipincott  Williams  and Wilkins Company. 546 pp.
Irma,  M. P., Hendriani, R.,  & Kusuma, S. A. F. ( 2009).  Pencarian  Bakteri  Tanah  Penghasil Enzim Protease Dari Gunung Gede Cianjur. Fakultas  Farmasi.  Bandung:  Universitas Padjadjaran. 13 hal.
Kurniawan,  M.  L.,  Akbar,  M.  S.,  &  Saptorini,  D.
(2010).  Analisis  Kecenderungan  Persebaran
Meiofauna  Pada  Lamun  Yang  Dipengaruhi Oleh  Variabel  Lingkungan  (studi  Kasus  di Pantai  Bama,  Taman  Nasional  Baluran, Situbondo).  Jurnal  Ilmu  Dasar.  Departemen Statistika.  Surabaya:    Institut  Teknologi  10 November Surabaya. 10 hal.
Massinai, S., Haris, A.,  Lisdayanti, E.,  & Gosary, B.  A.  (  2013).  Lamun  Pulau  Bonebatang,
Kepulauan Spermonde Dan Bakteri
Asosiasinya. Jurusan Ilmu Kelautan Fakultas Ilmu  Kelautan  Dan  Perikanan.  Makasar: Universitas Hasanuddin. 40 hal
Pelczar, M. J., & Chan, E. C. S. (1986). Dasar-Dasar Mikrobiologi.  Jilid  I.  (Terjemahan:  Ratna Siri Hadioetomo). Jakarta: UI Press. 154 hal.
Pereira, S. C., Amorim, S. D.,  Santos, A. F. M.,  &
Rodrigues,  D.  P.  (2008). Plesiomonas Shigelloides And  Aeromonadaceae  Family Pathogens  Isolated  From Marine  Mammals Of  Southern  And  Southeastern  Brazilian Coast.  Universidade  Federal  do  Rio  Grande do Sul, Imbé, RS, Brasil. Brazilian Journal of Microbiology , 39:749-755.
Sankaralingan, S., Shankar, T., Sendeshkannan, K., Ramasubburayan,  R.,  &  Prakash,  S.  (2012). Production  of  Protease  From Pseudomonas Sp.  by  Immobilization  Approach  on Different  Matrices.  Center  for  Marine Science  and  Technology,  M.S.  University, Tamilnadu,  India. European  Journal  of Applied Sciences , 4 (4): 146-156.
Sudarsono,  A.  (2008).  Isolasi  dan  Karakterisasi Bakteri  pada  Ikan  Laut  dalam  Spesies  Ikan Gindara ( Lepidocibium flavobronneum ).
Program  Studi  Teknologi  Hasil  Perikanan. Bogor: IPB. Hal 1-12.
Tomascik, T., Mah A. J., Nontji A., & Moosa, M. K.
(1997). The Ecology of the Indonesian Seas. Part  Two. The  Ecology  of  Indonesia  Series .
8: 235-243.
Udy, J. W., & Dennison, W. C. (1996). Estimating nutrient availability in seagrass sediment. In: Seagrass Biology.  Proceeding  of an International  Workshop,  Rottnest  Island, Western Australia, 25 – 29 January: 163-172.
Watermann,  B.  (1999).  Alternative  antifoulant techniques present and future. Limno Mar: 1-
6.
Waycott, M., McMahon, K., Mellors, J.,  Calladine, A., & Kleine, D. (2004). A Guide to Tropical
Seagrasses  of  the  Indo-West  Pacific. Townsville-  Queensland-Australia:  James
Cook University. 65 pp.
Yuniati, R., Nugroho, T. T.,  & Puspita, F. (2015). Uji  Aktivitas  Enzim  Protease  Dari  Isolat Bakteri Bacillus sp. Galur Lokal Riau. JOM FMIPA, 1(2):1-7.