Jurnal : Jurnal Kesehatan Prima Volume
: 9, No.1, Februari 2015, Halaman : 1403-1411
ISSN Print
: 1978 – 1334, ISSN Online : 2460 – 8661

## ___________________________________________________________________________
Ahmad Zainudin, Uswatun Hasanah, Yan Reiza Pemana : Jurusan Farmasi Poltekkes Medikal Farma , Jl. Batu Dawe Mataram
UJI AKTIVITAS DIURETIK EKSTRAK AKAR AREN (Arenga pinnata (Wurmb.) Merr.) TERHADAP TIKUS PUTIH GALUR WISTAR ( Rattus Norvegicus)
DENGAN PEMBANDING FUROSEMID
Ahmad Zainudin, Uswatun Hasanah, Yan Reiza Pemana
Abstract : Background: Traditional  medicine  herb  ingredient  or  ingredients  are  derived  from  growing-plants, animals,  and  minerals,  galenik  preparations  or  mixtures  of  these  materials  that  are  passed  down  through generations has been used for the treatment of. Sugar Palm roots (Arenga pinnata (Wurmb.) Merr.) nutritious as deciduous deciduous urine and menstruation. The purpose of this research is to know the diuretic activity of root extract  of  white  rat  strain  aren  wistar  (Rattus  norvegicus),  and  knowing  the  optimal  levels  of  root  extract  of Palm  that  has  a  diuretic  activity  of  white  rats  wistar  strain.  As  many  as  25  test  animal's  tail  is  divided  into  5 groups:  control  group  i.e  treatment  of  negative  (aquadest),  a  positive  control  group  (furosemid  suspension), group  root  extract  aren  100  mg/kg,  group  root  extract  aren  200  mg/kg  and  groups  of  Palm  root  extract  300 mg/kg.  Diuretic  effect  of  testing  done  by  looking  at  the  volume  of  urine  is  issued  for  18  hours.  The  results showed issuing Palm root extract during the time of observation going on increased volume of urine. Data were analyzed  with spss 16, unlike any real treatment tested by one way ANOVA. Increased concentrations of root extract aren showed better results. Based on these results, it was concluded that root extract has a diuretic effect of areca palm (p < 0.05) and optimal levels of root extract of Palm that has a diuretic activity of white rats wistar strain is 300 mg/kg.
Kata Kunci : The Effect Of Diuretics, Palm Root Extract, Rattus Norvegicus.

## PENDAHULUAN
Obat  tradisional  adalah  bahan  atau  ramuan bahan  yang  berasal  dari  tumbuhtumbuhan,  hewan, dan  mineral,  sediaan  galenik  atau  campuran  dari bahan  tersebut  yang  secara  turun-temurun  telah digunakan  untuk  pengobatan  (Depkes,  2000).  Aren (Arenga  pinnata  (Wurmb.)  Merr.)  adalah  tanaman yang termasuk  famili palmae  dan secara tradisioanal antara  lain  digunakan  sebagai  obat  untuk  penyakit batu ginjal (Anonim, 2005). Kandungan kimia dalam akar  aren  adalah  saponin,  flavonoid,  dan  polifenol (Hidayat  dan  Hutapea,1991).  Kandungan  kimia dalam  akar  aren  adalah  saponin,  flavonoid,  dan polifenol.  Akar  aren  (Arenga  pinnata  (Wurmb.) Merr.)  berkhasiat  sebagai  peluruh  air  seni  dan peluruh haid.
Diuretik  dipercaya  menjadi  salah  satu  cara yang  ampuh  untuk  menangani  masalah  hipertensi dan merupakan salah satu rekomendasi antihipertensi dari  WHO  tahun  2003  dan  JNC  (Japan  Nuclear Cycle  Development  Institute)  VII  (Anonim  2005). Selain  itu,  penelitian  dan  pengembangan  tumbuhan obat  yang  berkhasiat  diuretika  ini  merupakan  salah satu  prioritas  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia didalam penggalian, pelestarian, pengembangan  dan  pemanfaatan  tumbuhan  obat Indonesia  (Hembing  1992).  Untuk  itu,  penelitian  ini dilakukan  agar  dapat  memberikan  nilai  tambah  bagi akar aren untuk meningkatkan derajat kesehatan.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  adanya  aktivitas  diuretik  ekstrak  akar aren (Arenga pinnata (Wurmb.) Merr.) terhadap tikus
putih  galur  wistar,  dan  mengetahui  kadar  optimal ekstrak  akar  aren  (Arenga  pinnata  (Wurmb.)  Merr.) yang  memiliki aktivitas diuretik terhadap tikus putih galur  wistar.  Dari  hasil  penelitian  ini  diharapkan penelitian  ini  dapat  bermanfaat  memperkaya  data ilmiah tentang obat tradisional Indonesia,
memberikan informasi tanaman yang dapat berkhasiat sebagai diuretik, dan dapat memanfaatkan aren  untuk  keperluaran  yang  lebih  penting,  bukan hanya  dimanfaatkan  untuk  minuman  keras  dan sebagai  dasar  untuk  melakukan  penelitian  lebih lanjut  dalam  rangka  pengembangan  obat  alami khususnya  akar  aren  (Arenga  pinnata  (Wurmb.) Merr.)  sehingga  dapat  diisolasi  dan  dijadikan  obat fitofarmaka,  mampu  menjadi  obat  alternatif  yang digunakan  untuk  diuretik  yang  murah  dan  mudah didapat.

## METODE PENELITIAN
Desain  penelitian  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah rancangan Pretes-Postes dengan Kelompok Kontrol (Pretest-Postest with Control Group). Dalam rancangan  ini  dilakukan  randomisasi,  artinya pengelompokan  anggota-  anggota  kelompok  kontrol dan  kelompok  eksperimen  dilakukan  berdasarkan acak  atau  random.  Kemudian  dilakukan  pretes  (01) pada kedua kelompok tersebut, dan diikuti intervensi (X)  pada  kelompok  eksperimen.  Setelah  beberapa waktu  dilakukan  postes  (02)  pada  kedua  kelompok tersebut.

## Tabel 1. Rancangan Penelitian
Pretes Perlakuan Postes 01 X 02
01 02
Dengan  randomisasi  (R),  maka  kedua kelompok  mempunyai  sifat  yang  sama  sebelum dilakukan  intervensi  (perlakuan).  Karena  kedua kelompok sama pada awalnya, maka perbedaan hasil postes  (02)  pada  kedua  kelompok  tersebut  dapat disebut  sebagai  pengaruh  dari  intervensi  atau perlakuan.

## Alat dan bahan
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  sonde  lambung,  gelas  ukur,  timbangan digital,  maserator,  evaporator,  oven,  ayakan  20 Mesh,  gelas  piala  100  ml,  gelas  piala  1  L,  batang pengaduk,  spuit  1cc,  spuit  3cc,  kandang  metabolit. Bahan  yang  digunakan  adalah  ekstrak  etanol  70% akar  aren,  tikus  putih  jantan  galur  wistar  dengan bobot  badan  berkisar  200-300  gram,  aquadest, furosemid, PGA 2%, dan pH- Indikator. Zat uji yang digunakan adalah ekrstrak akar aren yang di maserasi dengan etanol 70%.

## Metodologi
Penelitian ini dilaksanakan dalam dua tahap, yaitu  tahap  persiapan,  penapisan  fitokimia  dan pelaksanaan.  Tahap  persiapan  meliputi  pembuatan simplisia,  pembuatan  ekstrak  etanol  akar  aren,  dan persiapan  kandang,  pakan,  dan  hewan  percobaan. Tahap  pelaksanaan  meliputi  perlakuan,  pengamatan dan analisis data.

## Persiapan
Pembuatan  Simplisia  Akar  aren  diperoleh dari  pegunungan  gunung  sari  Lombok  Barat.  Akar
aren  dibersihkan  dari  kotoran  yang  menempel, kemudian  dicuci  dengan  air  mengalir  sampai  bersih dan  ditiriskan.  Akar  aren  dikeringkan  dengan  lemari pengering pada suhu 40 0C selama empat hari. Daun yang  telah  kering  dipisahkan  dari  pengotornya kemudian  digiling  dan  diayak  sehingga  diperoleh serbuk simplisia dengan ukuran Mesh 20.

## Pembuatan Ekstrak
Akar  Aren  Ekstraksi  adalah  kegiatan penarikan  kandungan  kimia  yang  dapat  larut sehingga  terpisah  dari  bahan  yang  tidak  dapat  larut dengan  pelarut  cair.  Simplisia  yang  diekstrak mengandung  senyawa  aktif  yang  dapat  larut  dan senyawa  yang  tidak  dapat  larut  seperti  serat, karbohidrat, protein, dan lain-lain (Depkes RI 2000). Menurut  Harbone  (1987)  ekstraksi  adalah  proses mengisolasi  senyawa  dari  tanaman,  hewan,  maupun mineral.  Ragam  ekstraksi  bergantung  pada  tekstur dan kandungan air bahan tumbuhan yang diekstraksi pada  jenis  senyawa  yang  diisolasi.  Ekstraksi  juga amat  bergantung  pada  jenis  dan  komposisi  dari cairan  pengekstraksi.  Untuk  memperoleh  sediaan obat  yang  cocok  umumnya  digunakan  campuran etanol-air  sebagai  cairan  pengekstraksi  (Voight 1994). Pembuatan ekstrak etanol akar aren dilakukan dengan  metode  maserasi  yaitu  menambahkan  etanol 70%  ke  dalam  simplisia  akar  aren,  direndam  selama 2x24  jam  kemudian  ditampung  dalam  suatu  wadah. Perbandingan  banyaknya  alkohol  dengan  akar  aren sebanyak  10:1.  Kemudian,  hasil  maserasi  dari ekstrak etanol dilakukan evaporasi dengan alat rotary evaporator (40 0 C dan 50 rpm) yang bertujuan untuk menguapkan  pelarutnya  hingga  berupa  ekstrak kental.  Maserasi  adalah  cara  ektraksi  yang  paling
sederhana  yang  dilakukan  dengan  merendam  serbuk simplisia  dalam  larutan  penyari  untuk  menyari kandungan  zat  aktif  dari  simplisia.  Keuntungan  dari cara  ekstraksi  dengan  maserasi  adalah  cara pengerjaan  dan  peralatan  yang  digunakan  sederhana dan  mudah  diusahakan  sedangkan  kerugiannya adalah pengerjaannya lama dan penyariannya kurang sempurna (Depkes 1989).

## Penapisan Fitokimia
Setiap  tanaman  obat  mengandung  beragam senyawa  organik  yang  terbentuk  dan  terkandung  di dalam  tanaman  tersebut.  Kandungan  senyawa  aktif yang  terdapat  dalam  tumbuhan  dapat  diketahui melalui  perlakuan  metode  pemisahan,  pemurnian, dan identifikasi kandungan di dalam tanaman dengan penapisan  fitokimia  (Harbone  1987).  Kandungan senyawa  organik  yang  umum  diidentifikasi  adalah alkaloid,  tanin,  flavonoid,  saponin,  steroid,  dan triterpenoid.
Uji Flavonoid. Sebanyak 0.1 gram ekstrak akar aren ditambah  metanol  sampai  terendam  lalu  dipanaskan. Filtratnya  ditambah  NaOH  10%  atau  H2SO4  pekat. Terbentuknya  warna  merah  karena  penambahan NaOH  10%  menunjukkan  adanya  senyawa  fenolik hidrokuinon sedangkan warna merah akibat penambahan  H2SO4  pekat  menunjukan  adanya flavonoid .
Uji Alkaloid. Sebanyak 0.1 gram ektrak etanol daun alpukat  ditambahkan  5  ml  kloroform  dan  3  tetes amoniak. Fraksi kloroform dipisahkan dan diasamkan  dengan  2  tetes  H2SO4  2M.  Fraksi  asam dibagi menjadi tiga tabung kemudian masing-masing ditambahkan  pereaksi  Dragendorf,  Meyer  dan Wagner. Adanya alkaloid ditandai dengan
terbentuknya  endapan  putih  pada  pereaksi  Meyer, endapan  merah  pada  pereaksi  Dragendorf,  dan endapan coklat pada pereaksi Wagner.
Uji  Tanin. Sebanyak  0.1  gram  ekstrak  akar  aren ditambahkan  5  ml  aquadest  kemudian  dididihkan selama  5  menit  kemudian  disaring  dan  filtratnya ditambahkan  dengan  5  tetes  FeCl3  1%  (b/v).  Warna biru  tua  atau  hitam  kehijauan  yang  terbentuk menunjukkan adanya tanin.
Uji  Kuinon. Sebanyak  5  ml  larutan  ekstrak  akar arenditambahkan gelatin kemudian disaring kemudian  filtrat  ditambahkan  NaOH  1  N.  Jika terbentuk warna merah berarti mengandung kuinon. Uji  Saponin. Sebanyak  0.1  gram  ekstrak  akar  aren ditambahkan  5  ml  aquadest  lalu  dipanaskan  5  menit kemudian  dikocok  selama  5  menit.  Busa  yang terbentuk setinggi kurang lebih 1 cm dan tetap stabil setelah  didiamkan  selama  10  menit  menunjukan adanya saponin.
Perlakuan  Penelitian  aktivitas  diuretik  dari akar  aren  ini  dilakukan  dengan  menggunakan  tikus
putih  jantan  galur  Sprague-Dawley  yang  telah dipuasakan  minimal  selama  18  jam.  Untuk  uji aktivitas  akar  aren  pada  percobaan  ini  digunakan  25 tikus  sehat  dengan  berat  badan  berkisar  200  gram- 300 gram yang terbagi dalam 5 kelompok, yaitu: 1. Kelompok  kontrol  normal  (P1):  tikus  dicekok aquades.
2. Kelomok  kontrol  positif  (P2):  tikus  dicekok furosemid.
3. Kelompok perlakuan I (P2): tikus dicekok ekstrak akar aren dosis 100 mg/kg bb.
4. Kelompok  perlakuan  II  (P3):  tikus  dicekok ekstrak akar aren dosis 200 mg/kg bb.
5. Kelompok  perlakuan  III  (P4):  tikus  dicekok ekstrak akar aren dosis 300 mg/kg bb (Antia et al. 2005).
Semua kelompok perlakuan diberikan secara  oral  pada  masing-masing  tikus  sesuai  dengan berat  badan.  Volume  pemberian  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel 2. Jumah Dosis Yang Diberikan Kepada Hewan Uji
No BB Tikus (kg) Perlakuan Dosis (mg) Volume Pemberian (ml) 1 285 1
2 275 Aquadest 1 3 290 1 4 270 1 5 265 1 6 282 Furosemid 1.02 0.25 7 262 0.94 0.24 8 205 0.74 0.18 9 222 0.80 0.20 10 260 0.94 0.23 11 236 Ekstrak Akar aren 100 mg/kg BB 23.60 0.47 12 238 23.80 0.48 13 215 21.50 0.43 14 218 21.80 0.44 15 289 28.90 0.58 16 225 Ekstrak Akar aren 200 mg/kg BB 45.00 0.90 17 223 44.60 0.89 18 289 57.80 1.16 19 277 55.40 1.11 20 210 42.00 0.84 21 240 Ekstrak Akar aren 300 mg/kg BB 72.00 1.44 22 265 79.50 1.59 23 201 60.30 1.21 24 213 63.90 1.28 25 253 75.90 1.52
Sebelum perlakuan, tikus dipuasakan minimal selama 18 jam. Pengujian ini menggunakan metode Lipschitz (Lipschitz 1943). Sebelum dilakukan  pengujian,  tikus  diberikan  loading  dose berupa  aquadest  hangat  sebanyak  50  ml/kg  bb  baru kemudian  dicekokan  masing-masing  perlakuan dengan  dosis  pemberian  1  ml/100  gram  bb. Pengamatan  dilakukan  terhadap  volume  urin  yang dikeluarkan  setiap  jam  selama  6  jam  kemudian dilanjutkan  selama  18  jam  dan  diukur  pH  urin  pada jam  pertama,  selain  itu  diamati  pula  warna  urin. Hewan  di  tempatkan  dalam  kandang  metabolit  dan urin ditampung dengan gelas piala 100 ml.
Analisis Data
Pengkuran volune urin tikus setiap jam ke 1, 2, 3, 4, 5,  6,  dan  18.  Data  volume  urin  ini  kemudian dianalisis  menggunakan  program statistic SPSS  16 dengan  metode one  way ANOVA  dengan  uji  lanjut uji LSD ( Least Significant Difference ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil

## Hasil Pembuatan Ekstrak Etanol Akar Aren
Akar  aren  yang  sudah  dicuci  bersih kemudian dipotong-potong kecil lalu dijemur hingga
kering.  Blander  akar  aren  yang  sudah  kering  sampai menghasilkan  serbuk  dan  diayak  dengan  ayakan  20 mesh.  Proses  selanjutnya  adalah  maserasi  dengan pelarut  etanol  70%  sehingga  mengahasilkan  ekstrak etanol akar aren.

## Hasil Uji Fitokimia
Uji  Fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui kandungan  senyawa organic  dari ekstrak etanol akar aren. Hasil uji fitokimia dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Akar Aren.
No Uji Hasil 1 Flavonoid +
2 Alkaloid
+ 3 Steroid/Triterpenoid + 4 Tanin + 5 Saponin + 6 Antrakuinon + 7 Terpenoid +
Dari  tabel  diatas,  senyawa  yang  terkandung dalam  akar  aren  antara  lain  Flavonoid,  Alkaloid, Steroid, Tanin, Saponin, Antrakuinon dan Terpenoid.

## Hasil Pengukuran Volume Urin
Hasil  rata-rata  pengukuran  volume  urin selama pengamatan dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 4.Volume Urin Rata-Rata Selama 18 Jam.
Perkakuan Volume urine tiap jam (ml) 1 2 3 4 5 6 18 I 0.16 0.38 0.62 0.68 1.32 3.3 5.56 II 3.34 4.46 5.56 6.42 7.46 8.4 10.28 III 0.16 1.22 2.18 3.24 4.42 5.4 6.44 IV 0.26 1.66 2.6 3.68 4.66 5.6 7.56 V 0.54 2.6 4.7 5.6 7.48 8.3 10.16
Ket  :  I  =  kelompok  kontrol  negatif  (aquadest);  II  = kelompok control positif (furosemid); III = kelompok ekstrak  akar  aren  100  mg/kg  BB;  IV  =  kelompok ekstrak  akar  aren  200  mg/kg  BB;  V  =  kelompok ekstrak akar aren 300 mg/kg BB.
Untuk  mengetahui  dan  menganalisis  apakah  ada perbedaan nyata terhadap perlakuan, maka dilakukan uji  ANOVA.  Hasil  uji  ANOVA  dapat  dilihat  pada tabel 5.

## Tabel 5. Hasil Uji ANOVA
ANOVA Volumeurin Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 96.704 4 24.176 760.252 .000 Within Groups .636 20 .032 Total 97.340 24
Setelah  melakukan  uji  ANOVA  maka  analisis dilanjutkan ke uji LSD ( Least Significant Difference )
untuk  mengetahui  perlakuan  mana  yang  tidak berbeda  nyata.  Hasil  uji  LSD  ( Least  Significant
Difference) dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel 6. Hasil uji LSD (Least Significant Difference)
Multiple Comparisons
Volumeurin LSD (I) Perlakuan (J) Perlakuan Mean Difference (I-J) Std. Error Sig. 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 1 2 -4.7200 * .1128 .000 -4.955 -4.485 3 -.8800 * .1128 .000 -1.115 -.645 4 -2.0000 * .1128 .000 -2.235 -1.765 5 -4.8000 * .1128 .000 -5.035 -4.565 2 1 4.7200 * .1128 .000 4.485 4.955 3 3.8400 * .1128 .000 3.605 4.075 4 2.7200 * .1128 .000 2.485 2.955 5 -.0800 .1128 .486 -.315 .155 3 1 .8800 * .1128 .000 .645 1.115 2 -3.8400 * .1128 .000 -4.075 -3.605 4 -1.1200 * .1128 .000 -1.355 -.885 5 -3.9200 * .1128 .000 -4.155 -3.685 4 1 2.0000 * .1128 .000 1.765 2.235 2 -2.7200 * .1128 .000 -2.955 -2.485 3 1.1200 * .1128 .000 .885 1.355 5 -2.8000 * .1128 .000 -3.035 -2.565 5 1 4.8000 * .1128 .000 4.565 5.035 2 .0800 .1128 .486 -.155 .315 3 3.9200 * .1128 .000 3.685 4.155 4 2.8000 * .1128 .000 2.565 3.035
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

## Pembahasan
Tanzil  dalam  Bistani  (2006)  menyatakan bahwa  diuretik  adalah  obat  yang  bekerja  langsung
pada  ginjal  yang  meningkatkan  produksi  urin  dan garam  natrium,  selanjutnya  natrium  dikeluarkan bersama  klorida  dalam  bentuk  NaCl.  Efek  utama diuretik  secara  umum  adalah  mengurangi  reabsorbsi natrium  dan  klorida  serta  air  pada  tubulus  ginjal. Dengan  demikian  terjadi  peningkatan  kandungan NaCl  dan  volume  urin  akibat  penggunaan  suatu diuretik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui efek  diuretik  ekstrak  etanol  akar  aren  pada  tikus putih  jantan  galur  Wistar  dengan  pembanding furosemid  sebagai  kontrol  positif  dan  aquadest sebagai  kontol  negatif.  Volume  urin  tikus  diukur pada jam ke- 1, 2, 3, 4, 5, 6 dan 18 dihasilkan volume urin rata-rata seperti pada Tabel 3.
Hasil  pengumpulan  urin  menunjukkan bahwa  pada  kontrol  negatif  (aquadest)  sebesar  5,56 ml,  kontrol  positif  (furosemid)  sebesar  10,28  ml, ekstrak  akar  aren  dosis  100  mg/kg  BB  sebesar  6.44 ml,  ekstrak  akar  aren  dosis  200  mg/kg  BB  sebesar 7.56  ml,  ekstrak  akar  aren  dosis  300  mg/kg  BB sebesar  10,36  ml.  Dari  hasil  ini,  volume  urin terendah adalah kelompok kontrol negatif (aquadest) sebesar  5,56  ml,  hal  ini  disebabkan  karena  kotrol negative  tidak  terkandung  zat  aktif  yang  dapat meningkatkan volume urin dan volume urin tertinggi adalah furosemid sebesar 10,28 ml.
Dari  hasil  uji  ANOVA  diperoleh  ada perbedaan  nyata  terhadap  perlakuan  dengan  nilai Signifikansi sebesar p=0,000 (p<0,05). Uji dilanjutkan  dengan  uji  LSD  (Least  Significant Difference)  untuk  mengetahui  perlakuan  mana  yang tidak  berbeda  nyata,  sehingga  menghasilkan  kontrol positif  (furosemid)  tidak  berbeda  nyata  dengan pemberian ekstrak akar aren dengan dosis 300 mg/kg
BB  dengan  nilai  Signifikansi  p=0,486  (p>0,05). Pemberian ekstrak akar aren dengan dosis 100 mg/kg BB, 200 mg/kg BB, dan 300 mg/kg BB menujukkan terjadi  peningkatan  volume  urin  rata-rata  selama  18 jam,  semakin  tinggi  dosis  ekstrak  akar  aren  yang diberikan  maka  semakin  besar  volume  urin  yang dihasilkan.  Hal  ini  menunjukkan  adanya  aktivitas diuretik  dari  ekstrak  akar  aren  karena  akar  aren mengandung  flavonoid  yang  berkhasiat  sebagai diuretik.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  tersebut,  disimpulkan bahwa  ekstrak  akar  aren  (Arenga  pinnata  (Wurmb.) Merr.)  memiliki  efek  diuretik  (p<0,05)  dan  kadar optimal  ekstrak  akar  aren  yang  memiliki  aktivitas diuretik terhadap tikus putih  galur  wistar adalah 300 mg/kg BB.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim..  Anti  Hipertensi.  http://www.id.novartis. com/download/Obat %20antihipertensi%20Jan05.pdf.
(5
September 2014).
Bistani,  D.A.  Efek  Diuretik  Kopi  Susu  Pada  Tikus Putih  (Rattus  Norvegicus)  Dengan  Variasi Jenis  Susu.  Uniseversitas  Sebelas  Maret. Surakarta. 2006.
Depkes.  Vademekum  Bahan  Obat  Alam.  Jakarta:
Departemen Kesehatan RI. 1989.
Depkes,  Acuan  Sediaan  Herbal,  4-5,  Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2000.
Guyton AG. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Ed ke-
7.  Jakarta  :  Penertbit  Buku  Kedokteran.
EGJ. 1994.
Harborne,  J.B.,  Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara Modern Mengalaisis Tumbuhan, Diterjemahkan  oleh  Kosasih  Padmawinata dan  Iwang  Sudiro,  Edisi  II,  47-137,  147-
150, Penerbit ITB, Bandung. 1987,
Hembing  HM.  Tanaman  Berkhasiat  Obat  di Indonesia.  Jilid  II.  Jakarta:  Pustaka  Kartini. 1992.
Hidayat, S.S. dan Hutapea, J.R., Inventaris Tanaman
Obat  Indonesia  (I),  Departemen  Kesehatan dan Kesejahteraan Sosial Republik Indonesia, Jakarta. 1991.
Lu FC. Toksikologi Dasar. Terjemahan Edi Nugroho. Jakarta : UI Press. 1995.
Subahagio, Rahman I, Ibnusahni, Sutarjo, Sulaksono ME.  Pengaruh  Faktor  Keturunan  dan Lingkungan  terhadap  Sifat-sifat  Biologis terlihat pada Hewan Percobaan. Departemen
Kesehatan Republik  Indonesia.  Badan pengembangan  Kesehatan  Vol.  VII  No.1. 1997.
Pramono,  S.,  Sumarno,  dan  Waryono,  S.,  Flavonoid Daun  Sonchus  arvensis  L.  Senyawa  Aktif Pembentuk  Kompleks  dengan  Batu  Ginjal Berkalsium, warta tumbuhan obat Indonesia, vol. 2 No. 3, 5-7. 1993.
Robinson,  T.,  Kandungan  Organik  Tumbuhan Tinggi, Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata,  Edisi  Keenam,  191-213, Penerbit ITB, Bandung. 1995.
Voight, R. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Ed-5.
Noerono  S,  penerjemah.  Samhoedi  R, editor.  Yogyakarta:  Gajah  Mada  Press. Terjemahan dari Lehburch Der Pharmazeutischen Technology. 1994.