Menara Perkebunan , 2007, 75(1), 43-55.

## Potensi fungi pelapuk putih asal lingkungan tropik untuk bioremediasi  herbisida
The potential white-rot fungi native of  tropical environment for herbicides bioremediation
Laksmita Prima SANTI 1) , Lisdar Idwan SUDIRMAN 2) , &  Didiek Hadjar GOENADI 1)
1) Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia, Bogor 16151, Indonesia
2) Fakultas MIPA, Jurusan Biologi, Institut Pertanian Bogor ,Bogor, Indonesia

## Summary
Fungal treatment by using white-rot fungi to  reduce  a  wide  variety  of  herbicide  com- pounds  is  a  specialized  bioremediation  pro- cess.  A  laboratory  experiment  was  conducted to  determine  the  ability  of Phanerochaete chrysosporium , Ceriporiopsis  subvermispora , and Pleurocybella  porrigens and  seven  white- rot  fungi  isolated  from  a  native  of  tropical environment  to  grow  on  yeast  malt  extract glucose (YMG) agar containing high concentration of (I) 2,4-dichlorophenoxy acetic acid,  (R)  glyphosate,  and  (G)  paraquat.  The data  indicated  that P.  chrysosporium could grow  on  YMG  media  containing  5000  ppm  of (I)  2,4-D,  whereas  BPBPI  02/04  isolate  on YMG  250  ppm  of  (R)  glyphosate  or  (G) paraquat.  Relative values of growth inhibition of  these  fungi  are  81.1;  27.8;  and  50.0% respectively.  Biodegradation  capability  of herbicides by candidate inoculants in soil-sand media  was  also  determined  in  greenhouse experiment  by  using  peanut,  sorghum,  corn, and Borreria  alata as  bio-indicators.  Peanut and B.  alata were  found  to  be  the  best responsive  seedlings  as  bio-indicator  on  the presence  of  (I)  2,4-D  herbicide  in  soil-sand media.
Keywords : Herbicide,  white-rot  fungi,  bio- remediation ]

## Ringkasan
Teknologi  bioremediasi  dengan  fungi pelapuk  putih  (FPP)  digunakan  untuk  me- reduksi  sejumlah  senyawa  herbisida.  Kegiatan penelitian  yang  dilakukan  di  laboratorium bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  tum- buh Phanerochaete  chrysosporium,  Ceripo- riopsis  subvermispora, dan Pleurocybella porrigens serta tujuh isolat FPP yang diperoleh dari  lingkungan  tropik  secara in  vitro pada medium  agar yeast  malt  extract  glucose (YMG)  yang  mengandung  (I)  2,4-dikloro- fenoksi  asam  asetat,  (R)  glifosat,  dan  (G) parakuat  konsentrasi  tinggi.  Dari  data  yang diperoleh,  diketahui  bahwa Ph.  chrysosporium memiliki  kemampuan  tumbuh  dalam  medium padat  YMG  yang  mengandung  5000  ppm  (I) 2,4-D  dan  isolat  BPBPI  02/04  pada  250  ppm (R)  glifosat  dan  (G)  parakuat  dengan  nilai hambatan pertumbuhan relatif terhadap kontrol (HPR)  masing-masing  81,1;  27,8;  dan  50,0%. Pengujian  isolat  terpilih  terhadap  kemampuan mendegradasi  herbisida  di  dalam  medium tanah  dan  pasir  juga  dilakukan  di  rumah  kaca dengan  menggunakan  kacang  tanah,  sorgum, jagung, dan Boreria alata sebagai bioindikator. Kacang tanah dan B. alata memberikan respon terbaik terhadap keberadaan herbisida (I) 2,4-D di dalam medium tanah dan pasir .
[
Santi et al.

## Pendahuluan
Fungi  pelapuk  putih  (FPP)  dapat digunakan  sebagai  agen  hayati  bioreme- diasi  dalam  berbagai  tingkat  kontaminasi. FPP  dapat  mendekontaminasi  polutan tunggal  maupun  campuran  karena  meng- hasilkan  enzim  ekstraselular  oksidatif, seperti  lakase  dan peroksidase  yang  dapat menginisiasi  penyerangan  senyawa  poli- mer aromatik kompleks.
Sebagian  besar  penelitian  bioreme- diasi  difokuskan  pada  spesies  fungi  ter- tentu yaitu Phanerochaete chrysosporium , Ph.sordida , Pleurotus ostreatus , Phellinus weirii dan Polyporus  versicolor .    Fungi- fungi  tersebut  dapat  menguraikan  sejum- lah  senyawa  xenobiotik  seperti  hidro- karbon aromatik (benzo α-piren, penatren, piren),  organik  klor  (insektisida  alkil halida, kloroanilin, DDT, pentaklorofenol, triklorofenol,  poliklorinasi  bifenil,  asam asetat  triklorofenol),  nitrogen  aromatik [2,4-dinitrotoluena, 2,4,6-trinitrotoluena
(TNT)]  dan  beberapa  senyawa  pewarna (Kullman  &  Matsumura,  1996;  Lestan  & Lamar, 1996;  Duran et al., 2002).  Namun demikian,  informasi  mengenai  kemam- puan  FPP  dalam  mendegradasi  senyawa herbisida  berbahan  aktif  2,4-D,  glifosat, dan  parakuat  yang  banyak  digunakan  di lahan  pertanian  dan  perkebunan  di Indonesia    masih  sangat  terbatas  (Michel et al .,1995; Castillo,  2000;  Vadali,  2001; Haney et al ., 2002).
Penelitian  ini  bertujuan  menganalisis kemampuan isolat FPP yang diisolasi dari lingkungan  tropik    dalam  mendegradasi senyawa  herbisida  berbahan  aktif  2,4-D, glifosat, dan parakuat dalam medium agar yang  kemudian  dilanjutkan  dengan  peng- ujian  di  rumah  kaca  dengan  mengguna- kan  medium  tanah-pasir  dan  tanaman indikator (bioindikator).  Keefektifan FPP
sebagai  agen  hayati  bioremediasi  tanah yang  tercemar  dapat  diketahui  bila  bio- indikator  dapat  tumbuh  normal  dalam medium  tanam  yang  mengandung  herbi- sida.

## Bahan dan Metode

## Mikroorganisme
FPP  yang  digunakan  sebagai  acuan dalam  penelitian  ini  yaitu Ph.  chryso- sporium (ATCC34541), C. subvermispora (CBS  34763),  dan P.  porrigens. FPP acuan  dipelihara  dalam  agar  miring Yeast Malt  extract  Glucose (YMG)  dengan komposisi  4  g  ekstrak  khamir,  10  g  malt ekstrak,  4  g  glukosa,  dan  2%  agar  bakte- riologi dan satu liter akuades.  Ketiga FPP tersebut  merupakan  koleksi  Balai  Peneli- tian  Bioteknologi  Perkebunan  Indonesia, Bogor.

## Bahan herbisida dan tanaman indikator
Herbisida  yang  digunakan  untuk kegiatan  penelitian  meliputi:  (i)  2,4-D (Indamin  720  HC,  Indagro,  Inc.),  (ii) glifosat  (Roundup,  Monagro  Kimia),  dan (iii)  parakuat  (Gramoxone,  Zeneca). Selanjutnya masing-masing ditulis (I) 2,4- D;  (R)  glifosat,  dan  (G)  parakuat. Tanaman indikator yang digunakan terdiri dari  kacang  tanah,  sorgum,  jagung  dan Boreria alata .  Kriteria pemilihan tanaman ini  didasarkan  kelompok  tanaman  target yang  sesuai  dengan  yang  tercantum  pada label  kemasan  tiap  produk  herbisida  uji serta  tanaman  tersebut  mudah  dalam pemeliharaan  di  rumah  kaca.  Benih kacang  tanah  var.  Turangga  dan  sorgum (UpCa.S1)  diperoleh  dari  Balai  Penelitian Bioteknologi  dan   Sumberdaya   Genetik
Potensi fungi pelapuk putih asal lingkungan tropik ...
Pertanian,  Cimanggu,  Bogor.  Sedangkan benih  jagung  manis  diperoleh  dari  toko Mitra  Tani,  Bogor,  dan B.  alata dari  KP Ciomas.

## Pengambilan spesimen fungi pelapuk kayu
Pengambilan  spesimen  dilakukan  di Kebun  Teh  Malabar  (Jawa  Barat),  Kebun Percobaan  Ciomas,  dan  Lapangan  Golf Gunung  Geulis,  Bogor.  Teknik  isolasi berdasarkan  pada  metode  yang  dikemu- kakan oleh Ainsworth (1995). Isolat murni yang  diperoleh  selanjutnya  dipelihara dalam  medium  agar  miring  YMG  untuk dilakukan pengujian lebih lanjut berupa uji Bavendamm  ( Bavendamm  Test ).  Untuk keperluan pengujian ini digunakan medium PDA yang ditambah dengan 0,1% asam  galat    (Nishida et  al., 1988).    Uji Bavendamm  dilakukan  untuk  mengetahui kemampuan  FPP  yang  diperoleh  dalam menghasilkan  enzim  ekstraselular  oksi- dase.  Kemampuan  tersebut  digunakan untuk  membedakan  antara  FPP  dengan fungi  pelapuk  cokelat.  Bila  terbentuk warna cokelat pada permukaan agar maka mengindikasikan  adanya  aktivitas  fenol oksidase  yang  berarti  aktivitas  dari  FPP (Rayner & Boddy,  1988).

## Pengaruh  herbisida  terhadap  pertum- buhan FPP
Pengujian  pengaruh  herbisida  ter- hadap pertumbuhan FPP dilakukan dengan cara  menumbuhkan  isolat  FPP    hasil isolasi  dan  tiga  isolat  acuan  ke  dalam medium  padat  YMG  yang  ditambah dengan  masing-masing  herbisida  uji dengan konsentrasi  sebagai berikut:  (i)  (I) 2,4-D:    100,  500,  750,  1000,  1250,  1500, 1750, 2000, 2250, 2500, 3000, 3500, 4000
4500, dan  5000 ppm, (ii)  (R) glifosat: 25, 50,  100,  150,  dan  250  ppm,  dan  (iii)  (G) parakuat:  10,  15,  25,  50,  75,  150,  dan 250 ppm.  Pengaruh herbisida uji terhadap pertumbuhan  FPP  dinyatakan  dalam  nilai (%)  hambatan  pertumbuhan  relatif  (HPR) terhadap  kontrol  (tanpa  herbisida)  yang dihitung dengan rumus:

## HPR = diameter koloni kontrol – diameter koloni perlakuan x 100% diameter koloni kontrol
Dalam  uji  ini,  peubah  yang  diamati meliputi  diameter  koloni  dan  ambang batas  konsentrasi  penghambatan  herbisida uji  terhadap  pertumbuhan  FPP  pada  suhu ruang.  Masa  inkubasi  ditetapkan  berda- sarkan  pertumbuhan  miselium  sampai memenuhi  cawan  Petri  pada  perlakuan kontrol.
Penetapan tanaman indikator (bio- indikator)
Untuk  keperluan  uji  keefektifan  bio- degradasi  herbisida,  sebanyak  2  kg  tanah dan  pasir  dicampur  dengan  perbandingan 1:1 dan ditempatkan dalam ember volume 3  L.  Medium  ini  selanjutnya  diberi  herbi- sida  uji  1,0%  (v/b)  dengan  konsentrasi dosis  lapang  atau  kelipatannya  masing- masing  (I)  2,4-D  dengan  konsentrasi  144, 1440  (dosis  lapang),  atau  2880  ppm,  (R) glifosat  250,  3.600  (dosis  lapang),  atau 7200  ppm,  dan  (G)  parakuat  10,  40,  200 (dosis  lapang),  atau  1000  ppm  (dosis lapang).    Medium  campuran  tanah-pasir serta  herbisida  diinkubasi  selama  tujuh hari dan selanjutnya dilakukan penanaman benih  tanaman  uji  yang  telah  terlebih dahulu  dikecambahkan  selama  2-3  hari. Setiap  perlakuan  diulang  sebanyak  tiga kali  dengan  satu  ember  medium  berisi  10 kecambah.  Sebagai  pembanding  diguna-
Santi et al.
kan  medium  campuran  tanah-pasir  tanpa penambahan  herbisida.  Pengamatan  per- tumbuhan  bibit  meliputi  tinggi  (cm)  dan daya  tumbuh  atau  kemampuan  tumbuh menjadi bibit yang bertunas atau tanaman hidup  yang  dinyatakan  dalam  persen  (%) yang diukur pada hari ke-10 setelah tanam dengan rumus :
Daya Tumbuh =  Jumlah kecambah yang tumbuh x 100% Jumlah kecambah awal
Bibit  yang  memberikan  respons  ter- baik  terhadap  perlakuan  beberapa  tingkat konsentrasi  herbisida  tersebut  digunakan sebagai  tanaman  indikator  untuk  peng- ujian lebih lanjut.

## Uji  keefektifan  biodegradasi  herbisida  di dalam medium campuran tanah dan pasir
Uji keefektifan biodegradasi herbisida dilakukan  dengan  memodifikasi  metode yang dilakukan oleh Milosevic & Govedarica  (2002).    Kegiatan  uji  keefek- tifan  ini  dilakukan  dengan  menggunakan dua  isolat  potensial  terseleksi  secara bersama-sama.  Penggunaan  isolat  secara bersama-sama untuk mendegradasi senya- wa xenobiotik lebih efisien apabila diban- dingkan dengan penggunaan isolat tunggal (Nakamura et  al .,  2000;  Bennet et  al .,
2002;  dan  Murialdo et  al .,  2003).
Berdasarkan  uji  pendahuluan  diketahui bahwa  pertumbuhan  dua  isolat  potensial yang  ditumbuhkan  secara  bersama-sama dalam  medium  yang  mengandung  (I) 2,4-D  akan  menghasilkan  berat  kering miselium  lebih  besar  apabila  dibanding- kan  dengan  isolat  tunggal  (data  tidak dipublikasi).
Sebanyak enam cuplikan isolat berdiameter  8  mm  dari  dua  isolat  FPP terseleksi  ditumbuhkan  secara  terpisah  di
dalam 200 mL medium cair YMG selama tujuh hari di atas mesin pengocok dengan kecepatan 100 rpm pada temperatur ruang. Setelah  akhir  inkubasi,  sebanyak  50  mL inokulum  dari  dua  isolat  FPP  tersebut masing-masing  diinokulasikan  ke  dalam 1000  g  tandan  kosong  kelapa  sawit (TKKS)  yang  telah  disterilkan.    Inkubasi terhadap FPP terseleksi yang ditumbuhkan pada  TKKS  sebagai  bahan  pembawa  ini dilakukan selama 21 hari pada suhu ruang.
Untuk  keperluan  medium  uji,  disiap- kan  sebanyak  2  kg  campuran  tanah  dan pasir  (1:1)  dalam  ember  volume  tiga  liter yang  masing-masing  diberi  1,0%  (v/b) herbisida  1440  dan  2880  ppm  (I)  2,4-D, kemudian dicampur secara merata dengan 2,5%  (b/b)  TKKS  yang  mengandung inokulum  dua  isolat  FPP  terseleksi. Selanjutnya  medium  campuran  tanah, pasir,  herbisida  dan  inokulum  masing- masing  diinkubasi  selama  7,  14,  dan  21 hari.   Pada akhir  inkubasi, benih tanaman terpilih  yang  telah  berkecambah  berumur 2-3 hari, ditanam dalam medium tersebut. Sebagai  pembanding  digunakan  medium campuran  tanah  dan  pasir  (kontrol)  dan medium  campuran  tanah,  pasir  dan  1440 atau  2880  ppm  (I)  2,4-D  tetapi  tanpa inokulum  FPP.  Peubah  yang  diamati meliputi tinggi dan daya tumbuh (%) pada hari ke-14 setelah tanam.

## Hasil  dan  Pembahasan

## Pengambilan spesimen fungi pelapuk kayu
Fungi  pelapuk  kayu  yang  diperoleh dalam  penelitian  ini  berjumlah  15 spesimen (Tabel 1). Tujuh isolat di antara- nya  berhasil  dimurnikan  dan  berdasarkan uji  Bavendamm  termasuk  dalam  kelom- pok  FPP.    Sebagian  besar  spesimen  yang diperoleh memiliki tubuh buah yang keras dan  diduga  merupakan genus Ganoderma
Potensi fungi pelapuk putih asal lingkungan tropik ...
Tabel 1.  Determinasi spesimen fungi  pelapuk kayu yang diperoleh dari lingkungan tropik.
Table 1.  Determination of wood decay fungi specimen from native tropical environment.
No. Nomor akses Acession number Nama spesimen/ciri tubuh buah Name of specimen/ Characteristic of fruiting body Warna tubuh buah Fruiting body color Tipe pelekatan pada substrat kayu Attachment type on wood substrate Uji Bavendamm Bavendamm test 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 BPBPI 01/04 BPBPI 02/04 BPBPI 03/04 BPBPI 04/04 BPBPI 05/04 BPBPI 06/04 BPBPI 07/04 BPBPI 08/04 BPBPI 09/04 BPBPI 10/04 BPBPI 11/04 BPBPI 12/04 BPBPI 13/04 BPBPI 14/04 BPBPI 15/04

## Coprinus sp
Lunak (Agaricales)
Mycena sp
Lunak (Agaricales)
Keras (Polyporales)
Trametes versicolor Ganoderma sp
Keras (Polyporales) Lunak (Agaricales) Keras (Polyporales) Phanerochaete sp
Pycnoporus sp
Ganoderma sp
Ganoderma sp Lunak (Agaricales) Putih-hitam White-black Putih-coklat White- brown Putih White Putih White Hijau-putih Green-white Hijau Green Putih White Cokelat Brown Putih White Kuning Yellow Putih White Orange Orange Putih White Cokelat Brown Putih White Eccentrically stipitate Eccentrically stipitate Eccentrically stipitate Eccentrically stipitate Dimidiate Dimidiate Dimidiate Dimidiate Resupinate Dimidiate Resupinate Fan-shape Broadly attached Fan-shape Eccentrically stipitate - + + - - + *) + *) + - - + + + + *) +
*) isolat belum berhasil dimurnikan ( The isolates have not yet been identified )
(BPBPI  07/04,  13/04,  dan  14/04), Trametes versicolor (BPBPI 06/04), dan Pycnoporus sp  (BPBPI  12/04).  Tiga spesimen  yang  memiliki  tubuh  buah keras  lainnya  (BPBPI  05/04,  08/04,  dan
10/04) belum dapat diidentifikasi. Spesimen BPBPI 11/04 yang dimurnikan dalam  medium  PDA  memiliki  penam- pakan  morfologi  seperti Ph.  chryso- sporium .    Di  lain  pihak,  dua  spesimen
Santi et al.
yang  memiliki  tubuh  buah  lunak  diiden- tifikasi  sebagai Coprinus sp    (BPBPI 01/04)  dan Mycena (BPBPI  03/04). Sedangkan  empat  spesimen  bertubuh buah lunak lainnya (BPBPI 02/04, 04/04, 09/04,  dan  15/04)  belum  dapat  diiden- tifikasi
Pengaruh herbisida terhadap pertumbuhan FPP
Berdasarkan  pengamatan  diketahui bahwa  pertumbuhan  miselium Ph.chryso- sporium lebih  cepat  dibandingkan  dengan pertum-buhan  miselium  dua  isolat  acuan lainnya  maupun  tujuh  isolat  uji  yang diisolasi  dari  lingkungan  tropik.  Diameter koloni  miselium Ph.  chrysosporium dapat mencapai  9  cm  setelah  inkubasi  tiga  hari pada  suhu  ruang.  Sedangkan  untuk  men- capai  diameter  yang  sama  (9  cm), sembilan  isolat  uji  lainnya  memerlukan waktu  inkubasi  tujuh  hari. Ph.  Chryso- sporium baru  mengalami  hambatan      per- tumbuhan pada medium padat YMG yang mengandung  2000–  5000  ppm  (I)  2,4-D dengan  nilai  HPR  46,7  sampai  81,1% (Gambar 1a). Di lain pihak,  pertumbuhan C. subvermispora dan P. porrigens sudah terhambat penuh pada konsentrasi 2000 ppm (I) 2,4-D.
Pertumbuhan Ph. chrysosporium dalam medium padat YMG yang mengan- dung  25  sampai  250  ppm  (R)  glifosat mengalami  hambatan  dengan  nilai  HPR berkisar  antara  57,8  sampai  81,1%, sedangkan  kedua  isolat  acuan  lainnya memiliki    nilai  HPR  15,6  sampai  78,3% (Gambar  1b).    Hasil  penelitian  ini  juga menunjukkan bahwa apabila dibandingkan dengan Ph. chrysosporium dan C. subver- mispora, maka P.  porrigens memiliki kemampuan tumbuh terbaik dalam medium  padat  YMG    yang  mengandung
25  sampai  250  ppm  (R)  glifosat    dengan nilai HPR 15,6 – 62,2%. Nilai HPR untuk pengujian  pertumbuhan  dalam  medium YMG  yang  mengandung  parakuat  ditam- pilkan pada Gambar 1c.  Pada konsentrasi 250  ppm  (G)  parakuat,  nilai  HPR  dari masing-masing  isolat  acuan  yaitu  65,6% ( C. subvermispora ), 100%     ( Ph. chryso- sporium ), dan 72,2% ( P. porrigens ). Di  lain  pihak,  tujuh  isolat  FPP  yang diperoleh  dari  tiga  lokasi  pengambilan spesimen  memiliki  kemampuan  tumbuh yang  cukup  bervariasi  di  dalam  medium padat YMG yang mengandung 2.500 ppm (I)  2,4-D,  250  ppm  (R)  glifosat,  dan  250 ppm  (G)  parakuat  dengan  kisaran  HPR masing-masing  adalah  41,1  sampai  100% [(I)  2,4-D],    27,8  sampai  77,8%  [(R) glifosat],  dan  50,0  sampai  85,6%  [(G) parakuat].    Ketiga  konsentrasi  herbisida tersebut  di  atas  merupakan  ambang  batas konsentrasi maksimum yang masih memungkinkan untuk pertumbuhan tujuh spesimen FPP yang diperoleh dari lapang. Berdasarkan hasil penelitian ini diketahui  bahwa  isolat  BPBPI  02/04 mampu  tumbuh  dalam  medium  padat YMG  yang  mengandung  (R)  glifosat  dan (G)  parakuat  sampai  tingkat  konsentrasi 250  ppm  dengan  nilai  HPR  masing- masing sebesar 27,8 dan 50,0% (Gambar 2). Kemampuan tumbuh tersebut lebih  baik  apabila  dibandingkan  dengan kemampuan tumbuh tiga isolat acuan pada perlakuan yang sama.  Pada medium padat YMG,  isolat  BPBPI  02/04  baru  meng- alami hambatan pada konsentrasi 100 ppm (R)    glifosat  dan  150  ppm    (G)  parakuat dengan  nilai HPR masing-masing 5,8 dan 14,4%.  Isolat  BPBPI  02/04  dapat  pula tumbuh  di  dalam  medium  YMG  padat yang  mengandung  (I)  2,4-D  sampai tingkat  konsentrasi  2.500  ppm  dengan nilai HPR 41,1%.  Namun demikian pada
Potensi fungi pelapuk putih asal lingkungan tropik ...
Gambar 1. Nilai  HPR Ph. chrysosporium, C. subvermispora ,  dan P. porrigens dalam  medium  padat YMG yang mengandung  (I) 2,4-D (a), (R) glifosat (b), dan (G) parakuat (c).
Figure 1.  Relative   value    of    growth   inhibition   of Ph. chrysosporium , C. subvermispora, and P. porrigens in  solid   YMG  media   containing  (I) 2,4-D (a), (R )  glyphosate  (b), and (G) paraquat (c ). c 0 20 40 60 80 100 120 15 25 50 75 150 250 Konsentrasi (G) parakuat (ppm) H P R ( % ) Ph. chrysosporium C. subvermispora P. porrigens Konsentrasi/ Concentration (G) parakuat/ paraquat (ppm) a 0 20 40 60 80 100 120 1 000 1 500 2 000 2 500 5 000 Konsentrasi (I) 2,4-D (ppm) H P R ( % ) Ph. chrysosporium C. subvermispora P. porrigens Konsentrasi/ Concentration (I) 2,4 D(ppm) b 0 20 40 60 80 100 120 25 50 100 150 250 Konsentrasi (R) glifosat (ppm) H P R ( % ) Ph. chrysosporium C. subvermispora P. porrigens Konsentrasi/ Concentration (R) glifosat/ glyphosate (ppm)
Santi et al.
Gambar 2.  Nilai HPR Ph. chrysosporium, C. subvermispora , P. porrigens dan  BPBPI 02/04  di  dalam medium padat YMG  yang  mengandung  2500 ppm (I) 2,4-D,  250 ppm (R) glifosat, dan (G) parakuat  setelah tujuh hari inkubasi.
Figure 2.   Relative  value of  growth  inhibition  of Ph.chrysosporium,  C. subvermispora, P. porrigens and BPBPI 02/04 in solid YMG media containing 2500 ppm  of (I)2,4-D, and 250 ppm of (R) glyphosate and (G) paraquat after seven days incubation.
konsentrasi  uji  yang  lebih  tinggi  dari 2.500  ppm,  pertumbuhan  isolat  BPBPI 02/04  mengalami  hambatan  dengan  nilai HPR  mencapai  100%.    Berdasarkan  hasil pengujian  yang  telah  diuraikan,  maka isolat Ph.  chrysosporium dan  BPBPI 02/04    digunakan  untuk  pengujian  lebih lanjut.
Penetapan tanaman indikator (bio- indikator)
Bibit  tanaman  yang  baru  berke- cambah  umumnya  memiliki  sifat  yang lebih peka terhadap perlakuan herbisida di dalam  media  tanam  (Devlin et  al. ,  1992). Kegiatan  penetapan  bioindikator  dilaku- kan  pada  bibit  tanaman  yang  baru  meng- alami perkecambahan 2-3 hari.  Pengaruh
pemberian  herbisida  (I)  2,4-D  dengan beberapa  tingkat  konsentrasi  (144,  1.440, dan  2880 ppm)   terhadap    pertumbuhan bibit  tanaman  uji  telah  tampak  pada  hari ke-5  setelah   tanam.  Hasil     pengamatan yang  dilakukan  terhadap  pertumbuhan bibit  kacang  tanah  dan  jagung  menunjuk- kan  bahwa  dengan  semakin  tinggi konsentrasi  herbisida  yang  diberikan, terutama herbisida (I) 2,4-D, pertumbuhan kedua  bibit  tersebut  semakin  terhambat dan  bibit  tumbuh  secara  abnormal  (daun keriting,  beberapa  diantaranya  mengering atau membusuk). Bahkan pada konsentrasi 144  sampai    2880  ppm  (I)  2,4-D  daya tumbuh  bibit  sorgum  dan B.  alata 0%. Pemberian  herbisida  (R  )  glifosat  dan  (G) parakuat dosis rendah sampai tinggi dalam medium   tanam  tidak   memberikan   per-
0 20 40 60 80 100 120 (I) 2,4-D 2500 ppm (R ) glifosat 250 ppm (G) parakuat 250 ppm H P R ( % ) Ph. chrysosporium C. subvermispora P. porrigens BPBPI 02/04
(R)glifosat/g lyphosate 250 ppm (G)parakuat/ paraquat 250 ppm (I) 2,4 D 2500 ppm

## Potensi fungi pelapuk putih asal lingkungan tropik ...
Tabel 2.  Pertumbuhan   bibit tanaman    dalam  medium   campuran   tanah, pasir, dan   mengandung herbisida  (I) 2,4-D; (R ) glifosat; atau (G) parakuat 10 hari  setelah tanam.
Table 2.  Seedling   growth   of   various  plants in  mixed soil-sand  containing  herbicide (I) 2,4-D; (R ) glyphosate; or (G) paraquat media, 10 days after planting .

## Rata-rata tinggi dan daya tumbuh bibit
Height and growth viability rates of seed Kacang tanah Peanut Sorgum Sorghum Jagung Maize B. alata Pertumbuhan fisik Physical growth Jenis herbisida/ konsentrasi Type of herbicide/ concentration (ppm) Tinggi Height (cm) Daya tumbuh Growth viability (%) Tinggi Height (cm) Daya tumbuh Growth viability (%) Tinggi Height (cm) Daya tumbuh Growth viability (%) Tinggi Height (cm) Daya tumbuh Growth viability (%) Kontrol ( Control ) /0 15,0 100 17,0 80 35,8 100 11,6 100 Normal (I) 2,4-D/144 7,0 100 mati/ dead 0 23,6 100 mati/ dead 0 Abnormal (I) 2,4-D/1 440 4,0 40 mati/ dead 0 8,1 100 mati/ dead 0 Abnormal (I) 2,4-D/2 880 mati/ dead 0 mati/ dead 0 8,0 100 mati/ dead 0 Abnormal (R) glifosat (glyphosate )/ 250 15,0 100 15,0 60 31,3 100 10,8 100 Normal (R) glifosat (glyphosate) /3 600 13,0 100 17,3 80 29,9 100 8,9 100 Normal (R) glifosat (glyphosate) /7 200 13,0 100 22,3 80 32,6 100 8,5 100 Normal (G) parakuat ( paraquat )/10 15,7 100 26,0 100 27,3 100 12,3 100 Normal (G) parakuat( paraquat )//40 tp *) tp 20,8 90 32,1 100 10,5 100 Normal (G) parakuat( paraquat )//200 15,0 100 16,2 90 35,4 100 7,8 100 Normal (G) parakuat( paraquat )/1000 12,7 90 tp tp tp tp 5,8 90 Normal
*) tp = tidak ada perlakuan / untreated
Santi et al.
bedaan hambatan pertumbuhan jagung dan sorgum  serta  tidak  memberikan  respons abnormalitas  terhadap  keempat  bibit tanaman uji.
Di antara empat bibit yang digunakan sebagai  bioindikator,  bibit  kacang  tanah dan B. alata memberikan respon pertum- buhan  yang  berbeda  terhadap  pemberian beberapa  tingkat  konsentrasi  herbisida dalam  medium  persemaian  yang  ditandai dengan semakin tinggi konsentrasi (I) 2,4- D,  (R)  glifosat,  atau  (G)  parakuat  yang diberikan,  maka  pertumbuhan  kedua  bibit tanaman ini semakin terhambat  (Tabel 2). Hambatan  pertumbuhan  pada  perlakuan (R)  glifosat  atau  (G)  parakuat  terlihat nyata  terutama  pada B.  alata .    Berdasar- kan  hasil  yang  diperoleh  dari  perlakuan pendahuluan  tersebut  di  atas,  maka  uji keefektifan  biodegradasi  herbisida  oleh FPP  di  dalam  tanah  terutama  ditujukan untuk  herbisida      (I)  2,4-D  dengan  meng- gunakan  bibit  kacang  tanah  dan B.  alata s ebagai bio-indikator.
Uji  keefektifan  biodegradasi  herbisida  di dalam medium campuran tanah dan pasir
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa rata-rata  tinggi  dan  daya  tumbuh  bibit kacang  tanah  dalam  medium  campuran tanah  dan  pasir,  (I)  2,4-D  dan  inokulum FPP  lebih  baik  apabila  dibandingkan dengan pertumbuhan dalam medium yang sama  tetapi  tanpa  penambahan  inokulum. Indikasi  tersebut  terutama  pada  perlakuan 2.880 ppm (I) 2,4-D dengan masa inkubasi tujuh hari.
Indikasi awal adanya proses degradasi (I) 2,4-D oleh FPP adalah tinggi dan daya tumbuh bibit kacang tanah dalam medium campuran tanah, pasir, 2880 ppm (I) 2,4-D dan inokulum FPP masing-masing 10,7  cm  dan  100%  nyata  lebih  baik
apabila  dibandingkan  dengan  perlakuan yang  sama  tetapi  tanpa  inokulum  FPP (6,6 cm dan 83,3%).  Semakin lama inku- basi  (I)  2,4-D  di  dalam  media  campuran tanah-pasir,  maka  faktor  lingkungan  ter- utama  panas  sinar  matahari  yang  meng- akibatkan  penguapan  ( volatilization )  dan fotodekomposisi  cukup  berpengaruh  ter- hadap  laju  degradasi  (I)  2,4-D  di  dalam media campuran tersebut. Oleh karena itu, daya  tumbuh  bibit  kacang  tanah  dalam medium campuran tanah dan pasir dengan perlakuan  1440  dan  2880  ppm  (I)  2,4-D selama  14  dan  21  hari  tidak  memberikan perbedaan yang cukup signifikan (Gambar 3  dan  4)  baik  tanpa  inokulum  maupun dengan inokulum.  Penelitian ini memper- kuat hasil yang  dilaporkan oleh Milosevic & Govedarica (2002).
Adapun faktor lingkungan yang dapat mempengaruhi  keberadaan  dan  tingkat konsentrasi  herbisida  di  dalam  tanah antara    lain    dekomposisi  secara  kimia, penguapan,  fotodekomposisi,  penyerapan oleh  tanaman,  pencucian,  dan  hilang mengikuti aliran permukaan (Devlin et al ., 1992).    Senyawa  2,4-D  tidak  bertahan lama di dalam tanah (non-persisten) sebab akan  cepat  didegradasi.    Aktivitas  residu 2,4-D  di  dalam  tanah  dapat  berlangsung selama  satu  sampai  enam  minggu.  Bio- degradasi  2,4-D  berhubungan  dengan mekanisme biotransformasi senyawa halogen  dan  berlangsung  dalam  kondisi aerobik.    Di  dalam  tanah,  2,4-D  didegra- dasi  melalui  beberapa  tahap  oleh  mikro- organisme  antara  lain  menjadi  2,4- diklorofenol  dan  4-klorofenol,  dan  pada tahap  akhir  degradasi  akan  diperoleh molekul–molekul dalam bentuk yang tidak berbahaya.    Mekanisme  utama  degradasi 2,4-D oleh mikroorganisme tanah meliputi pemutusan  rantai  asam  asetat  sehingga membentuk  2,4-diklorofenol  (2,4-DCP)
Potensi fungi pelapuk putih asal lingkungan tropik ...
Gambar 3.   Rata-rata tinggi bibit kacang tanah pada medium campuran tanah, pasir dan 1440 atau 2880 ppm (I) 2,4-D tanpa dan dengan campuran inokulum Ph. chrysosporium dan BPBPI 02/04. Kontrol : medium campuran tanah dan pasir tanpa (I) 2,4-D.
Figure 3. Rates of peanut seedling height in mixed soil-sand and 1440 or 2880 ppm (I) 2,4-D media with  and  without  Ph.  chrysosporium  and  BPBPI  02/04  inoculums.    Control:  mixed  soil- sand media without (I) 2,4-D.
Gambar  4.    Rata-rata  daya  tumbuh  bibit  kacang  tanah  pada  medium  campuran  tanah,    pasir  dan  1440 atau  2880  ppm  (I)  2,4-D  tanpa  dan  dengan  campuran  inokulum Ph.  chrysosporium dan BPBPI 02/04.  Kontrol : medium campuran tanah dan pasir tanpa (I) 2,4-D.
Figure 4.  Rates of peanut seedling growth viability in mixed soil-sand and 1440 or 2880 ppm (I) 2,4-D media  with  and  without  Ph.  chrysosporium  and  BPBPI  02/04 inoculums. Control:  mixed soil-sand media without (I) 2,4-D.
0 5 10 15 20 25 7 hari 14 hari 21 hari Masa inkubas i (I) 2,4-D dan inokulum dalam media T in g g i b ib it k a c a n g t a n a h (c m ) Kontrol 1440 2880 1440+inokulum 2880+inokulum T in g g i b ib it k ac an g t a n ah H e ig h t o f p ea n u t se e d li n g (c m ) 7 hari ( days )                    14 hari ( days )             21 hari ( days )
Masa inkubasi (I) 2,4-D dan inokulum dalam medium Time of incubation (I) 2,4-D in  media inoculums
kontrol ( control ) 1140 2880 +inokulum( inoculums ) 2880 1440 +inokulum ( inoculums ) 0 20 40 60 80 100 120 7 hari 14 hari 21 hari Masa inkubasi (I) 2,4-D dan inokulum dalam media D a y a t u m b u h k a c a n g t a n a h (% ) Kontrol 1440 2880 1440+inokulum 2880+inokulum 7 hari ( days )                  14 hari ( days )                 21 hari ( days ) Masa inkubasi (I) 2,4-D dan inokulum dalam medium Time of incubation (I) 2,4-D in  media inoculums kontrol ( control ) 1140 2880 +inokulum( inoculums ) 2880 1440 +inokulum ( inoculums ) D ay a t u m b u h k ac an g t a n ah G ro w th v ia b il it y o f p e a n u t se ed li n g ( % )
Santi et al.
yang  diikuti  pula  oleh  pemecahan  dan degradasi  cincin  aromatik  menghasilkan asam-asam  alifatik  seperti  asam  suksinat. Menurut  Valli  &  Gold  (1991),  proses biodegradasi  2,4-D  oleh Ph.  chryso- sporium didahului  oleh  pelepasan  kedua atom  klorin,  kemudian  berlanjut  pada pemecahan cincin aromatik.
B.  alata memberikan  respons  yang lebih sensitif terhadap pemberian (I) 2,4-D di dalam tanah apabila dibandingkan bibit kacang  tanah.    Perlakuan  masa  inkubasi 1440  atau  2880  ppm  (I)  2,4-D  selama tujuh  dan  14  hari  di  dalam  medium  cam- puran  tanah  dan  pasir,  tanpa  inokulum maupun  dengan  inokulum  memberikan tinggi  bibit  0  cm  dan  daya  tumbuh  0%. Namun demikian, pada medium campuran tanah, pasir, dan 1440 ppm (I) 2,4-D masa inkubasi    21  hari  dengan  penambahan Ph.  chrysosporium dan  BPBPI  02/04, B.  alata menunjukkan  daya  tumbuh sebesar  30%  dengan  tinggi  rata-rata mencapai  5,7  cm.    Daya  tumbuh  dan tinggi B.  alata ini  lebih  rendah  apabila dibandingkan  dengan  pertumbuhan  di dalam  medium  yang  sama  tetapi  tanpa pemberian  (I)  2,4-D  (kontrol)yang  dapat mencapai  100%  dengan  tinggi  rata-rata 15,1  cm.    Di  lain  pihak, B.  alata tidak memiliki  daya  tumbuh  (0%)  pada  media campuran tanah, pasir dan 1440 atau 2880 ppm  (I)  2,4-D  tanpa  inokulum  dengan masa inkubasi 21 hari.

## Kesimpulan
Dalam  penelitian  ini  diperoleh  15 spesimen  fungi  pelapuk  kayu.  Tujuh spesimen  di  antaranya  FPP. Ph. c hryso- sporium memiliki  kemampuan  tumbuh  di dalam  medium  YMG  yang  mengandung 5.000  ppm  (I)  2,4-D.    Sedangkan  isolat
BPBPI  02/04  yang  merupakan  isolat indigenous lingkungan  tropik  memiliki kemampuan  tumbuh  yang  baik  dalam medium  YMG  yang  mengandung  (R) glifosat  dan  (G)  parakuat  sampai  tingkat konsentrasi 250 ppm.  Diperolehnya isolat unggul BPBPI 02/04 memberikan peluang untuk  penelitian    lebih  lanjut.    Bibit kacang  tanah  dan B.  alata memberikan respons  sebagai  bio-indikator  yang  baik terhadap  perlakuan  beberapa  tingkat konsentrasi herbisida uji, terutama terhadap  pemberian  herbisida  (I)  2,4-D dalam medium  campuran tanah  dan  pasir. Tinggi  dan  kemampuan  tumbuh  bibit kacang  tanah  dalam  medium  campuran tanah, pasir dan 1.440 atau  2.880 ppm (I) 2,4-D dengan inokulum campuran Ph. chrysosporium dan BPBPI 02/04 lebih baik  apabila  dibandingkan  dengan  per- lakuan  yang  sama  tetapi  tanpa  penam- bahan inokulum.

## Daftar Pustaka
Ainsworth,  A M.  (1995).  Isolation techniques for  basidiomycetes. World  J  Microbiol Biotechnol., 11, 364-366.
Bennet,  J.W,  K.G  Wunch  &  B.D  Faison
(2002).    Use  of  fungi  biodegradation. In : Hurst CCJ, editor. Manual of Environmental  Microbiology .    Ed  ke-2. Washington, D.C. ASM Press
Castillo,  M.  P.  (2000). Microorganism  in Bioremediation .    Department  of  Forest Mycology  and  Pathology.    http://www. mykopat.slu.se. [26 Sep 2003]
Devlin,  D.  L.,  D.  E.  Peterson  &  D.  L.  Regehr (1992). Residual,  Herbicides,  Degra- dation, and Recropping Intervals .  Kansas State University Agricultural Experiment.
Potensi fungi pelapuk putih asal lingkungan tropik ...
Station and Cooperative Extension Service. p 2-12.
Duran,  R.,  C.  Deschler,  S.  Precigou  & P. Goulas (2002).  Degradation of chloro- phenols by Phanerochaete chrysosporium effect  of  3,4-dichlorophenol  on  extra- cellular peroxidase activities. Appl Microbiol. Biotechnol., 59, 284-288.
Haney,  R.  l.,  S.  A.  Senseman,  F.  M.  Hons (2002).    Effect  of  Roundup  Ultra  on microbial  activity  and  biomass  from selected soils. J. Environ. Qual., 31, 730- 735.
Kullman,  S.  W.  &  F.  Matsumura    (1996).
Metabolic pathways utilized by Phanerochaete chrysosporium for degradation  of  the  cyclodiene  pesticide endosulfan. Appl.  Environ.  Microbiol ., 62, 593-600.
Lestan,  D. &  R. T. Lamar  (1996).  Develop- ment  of  fungal  inocula  for  bioaugmen- tation  of  contaminated  soils. App. Environ. Microbiol., 62, 2045-2052.
Michel,  F.  C.,  C.  A.  Reddy,    L.  J.  Forney (1995). Microbial degradation and humification of the law care pesticide 2,4- dichlorophenoxyacetic  acid  during  the composting  of  yard  trimmings .    Appl. Environ.  Microbiol., 61, 2566-2571.
Milosevic, N. A. &  M. M. Govedarica  (2002). Effect of herbicides on microbiological
properties  of  soil. In : Proceedings  for Natural  Sciences ,  Matica  Srpska  Novi Sad. 102, 5-21.
Murialdo,  S.E,  R.  Fenoglio,  P.M  Haure, J.F  Gonzalez  (2003).    Degradation  of phenol  and  chlorophenols  by  mixed  and pure cultures. Water SA ., 29 (4), 457-464.
Nakamura,  Y,  F.  Kobayashi,  A.  Kurosumi.
(2000). Production  of  Lignin-Degrading
Enzyme  and  Degradation  of  Agricultural Chemicals by White-rot Fungus .
Department  of  Chemistry  &  Chemical Engineering.    Faculty  of  Engineering, Kanazawa University Kodatsuno 2-40-20, Kanazawa, Ishikawa 920-8667, Japan.
Nishida,  T.,  Y.  Kashino,  A.  Mimura  & Y.  Takahara    (1988).    Lignin  biodegra- dation by wood-rotting fungi I.
Screening  of  lignin-degrading  fungi. Makuzai Gakkaishi, 34, 530-536.
Rayner, A. D. M. & L. Boddy  (1988 ).  Fungal Decomposition  of  Wood.    Its  Biology and  Ecology .    New  York,  John  Wiley and Sons.
Vadali,  M.    (2001).    Bioremediation  :  An overview. Pure Appl. Chem., 73, 1163- 1172.
Valli, K. & M.H. Gold  (1991).  Degradation of
2,4-dichlorophenol by the lignin- degrading fungus Phanerochaete chrysosporium . J.  Bacteriol., 173, 345-
352.