ISSN: 1410-8917 e-ISSN: 2597-9914
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 173 – 178

## Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi
Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Aktivitas Antibakteri Loloh (Obat Tradisional Bali) Air Perasan dan Air Rebusan Daun Sirih terhadap Bakteri Streptococcus pyogenes

## Penyebab Radang Tenggorokan
I Made Sumarya a,1 , I Wayan Suarda a,2 , Ni Luh Gede Sudaryati a,3
a Fakultas Teknologi Informasi dan Sains, Universitas Hindu Indonesia Denpasar Bali Indonesia
* Author emails: 1 sumaryaimade@yahoo.com , 2 iwynsuarda@gmail.com , 3 luhgedesudaryati@gmail.com https://doi.org/10.14710/jksa.22.5.173-178
Art ic le   Info

## Ab s t rac t
Article history:
Received: 29 April 2019 Revised: 2 August 2019
Accepted: 9 August 2019 Online: 30 September 2019
Keywords: Betel leaf; Loloh ; antibacterial; Streptococcus pyogenes
Title: Antibacterial Activity of Loloh (Traditional Balinese Medicine) Decoction Water and Squeeze Water of betel Leaf against Bacteria Streptococcus pyogenes causes of sore throat
Sore  throat  is  a  respiratory  infection  caused  by  a  bacterial  infection  of Streptococcus pyogenes .  Betel  leaf  is  used  for loloh (traditional  medicine)  which  has  antimicrobial activity. The purpose of this study was to determine the content of active compounds and  the  antibacterial  activity  of  the  boiled  water  and  juice  of  betel  leaf  against Streptococcus pyogenes . Explorative research using GC-MS method was used to identify and  determine  the  abundance  (content)  of  active  compounds  from loloh while  the experimental research with the Randomized Post Test Only Control Group Design was carried out by treating the samples in four groups those are the negative control group with distilled water, the positive control group with 30 μg vancomycin, the treatment group with boiled water of betel leaf and betel leaf juice water to prove the antibacterial activity  of loloh .  The  antibacterial  activity  data  of  the  study  results  were  analyzed statistically nonparametric through the Kruskal-Wallis test. The results showed that the betel leaf boiled water contained 0.472% hydroxicavicol active compound and had an  average  antibacterial  activity  of  6.50±0.224  mm  against Streptococcus  pyogenes bacteria. Whilst the juice of betel leaves did not contain active compounds and had no antibacterial activity.

## Ab s t rak
Kata Kunci: Daun sirih; Loloh ;
antibakteri; Streptococcus pyogenes
Radang  tenggorokan  adalah  termasuk  penyakit  infeksi  saluran  pernapasan  yang disebabkan  oleh  infeksi  bakteri Streptococcus  pyogenes .  Daun  sirih  digunakan  untuk loloh (obat  tradisional)  yang  memiliki  aktivitas  antimikroba.  Tujuan  penelitian  ini adalah  untuk  menentukan  kandungan  senyawa  aktif  dan  aktivitas  antibakteri loloh dari  air  rebusan  dan  air  perasan  daun  sirih  terhadap  bakteri Streptococcus  pyogenes . Penelitian  ekploratif  dengan  metote  GC-MS  digunakan  untuk  mengidentifikasi  dan menentukan kelimpahan (kandungan) senyawa aktif dari loloh sedangkan penelitian eksperimen dengan The Randomissed Post Test Only Control Group Design dilakukan dengan memberi perlakuan terhadap sampel dalam empat kelompok yaitu kelompok kontrol negatif dengan aquades, kelompok kon trol positif dengan vancomicin 30 μg, kelompok perlakuan dengan loloh air rebusan dan loloh air perasan daun sirih untuk membuktikan aktivitas antibakteri dari loloh . Data aktifitas antibakteri hasil penelitian
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 173 – 178 174
dianalisis secara statistik nonparametrik melalui uji Kruskal-Wallis. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa loloh air  rebusan  daun  sirih  mengandung  senyawa  aktif hidroksikavikol 0,472% dan memiliki aktifitas antibakteri rata-rata 6,50±0,224 mm terhadap  bakteri Streptococcus  pyogenes . Loloh air  perasan  dari  daun  sirih  tidak mengandung senyawa aktif dan tidak memiliki aktivitas antibakteri.

## 1. Pendahuluan
Penyakit  infeksi khususnya  infeksi  saluran pernapasan  merupakan  penyakit  menular  paling mematikan ke tiga dari 10 penyebab kematian terbesar di dunia setelah penyakit jantung iskemik dan penyakit paru obstruktif kronik di tahun 2016 [1]. Radang tenggorokan (faringitis) termasuk penyakit infeksi saluran pernapasan  yang  disebabkan  oleh  infeksi  bakteri Streptococcus pyogenes atau  dikenal  dengan Streptococcus group A [2].
Bakteri S.  pyogenes merupakan  salah  satu  bakteri patogen yang banyak menginfeksi manusia. Diperkirakan 5-15%  individu  normal  memiliki  bakteri  ini  yang biasanya  terdapat  pada  saluran  pernafasan.  Bakteri S. pyogenes dapat  menginfeksi  ketika  pertahanan  tubuh inang  menurun  atau  ketika  organisme  tersebut  mampu berpenetrasi  melewati  pertahanan  inang  yang  ada.  Bila bakteri ini tersebar sampai ke jaringan yang rentan, maka akan menyebabkan infeksi [3].
Sirih  hijau  ( Piper  betle Linn)  merupakan  salah  satu tanaman  obat  yang  ada  di  Indonesia,  banyak dimanfaatkan  dalam  kehidupan  sehari-hari  sebagai tanaman  obat,  khususnya  oleh  masyarakat  Bali,  banyak digunakan  sebagai  bahan  obat  tradisional loloh dalam bentuk  ramuan.  Seperti  disebutkan  Dalam  lontar  Taru Premana  bahwa,  sirih  ( Base/sedah )  kasiatnya  panas ( Wasiat  titiang  panes ),  daunnya  yang  muda  digunakan untuk loloh diisi telor ayam, madu, lengkuas 5 iris untuk mengobati sakit limuh /kelepu.
Loloh adalah  minuman  herbal  yang  diproduksi  dan dikonsumsi  secara  tradisional  di  Bali  (Indonesia)  untuk mencegah  dan  mengobati  berbagai  macam  penyakit.  51 spesies tanaman dari 32 famili yang telah didokumentasikan  digunakan  untuk  membuat loloh dengan cara direbus ( decoction ) atau digerus (dihaluskan) dari  bagian  tanaman-tanaman  tersebut.  Tanaman- tanaman ini sudah diteliti dengan baik dan menunjukkan aktivitas farmakologi (misalnya antimikroba, antikanker,  antidiabetes).  Salah  satu  dari  tanaman- tanaman tersebut adalah sirih [4].
Pemakaian  daun  sirih  secara  tradisional  yang menjanjikan,  menyebabkan  berbagai  penelitian  kimia dan  biologi  telah  dilakukan  pada daun  sirih.  Hasil-hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  daun sirih  mengandung senyawa aktif alkaloid, tanin, steroid dan fenolik seperti safrol,  kavibetol,  eugenol,  kavikol,  dan  hidroksikavikol , memiliki  aktivitas  biologik  antimikroba  [5,  6,  7].  Oleh karena  itu  penelitian  ini,  ingin  membuktikan  aktivitas antibakteri  dari loloh air  perasan  dan  air  rebusan  daun sirih ( Piper betle L.) terhadap bakteri S. pyogenes sebagai penyebab  penyakit  radang  tenggorokan  yang  banyak diderita oleh masyarakat khususnya anak-anak.

## 2. Metodologi

## 2.1. Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun  sirih  segar dikumpulkan dari petani dari Desa Senganan Kecamatan Penebel  Kabupaten  Tabanan.  Biakan  murni  bakteri Streptococcus  pyogenes dari  Laboratorium  Mikrobiologi Universitas Udayana. Bahan lain NaCl 0,9%, Muller Hinton Blood (MHB)(Hardy  Diagnostics  a  Culture  of  Service TM ), Cakram  Disk  Vancomicin,  Cakram  Disks  blank (Liofilchem Antibiotic Disks According to EUCAST, CLSI, BSAC) dan aquades.

## 2.2. Metode
Pembuatan loloh air rebusan daun sirih yaitu dengan membersihkan  daun  sirih  segar  dengan  air  mengalir kemudian ditimbang 100 g dan dipotong kecil-kecil. Daun Sirih direbus ( decoction ) dengan aquadest 200 mL sampai mendidih  selama  15  menit  dan  disaring  dengan  kertas saring whatman. Filtratnya ditampung dalam botol.
Pembuatan loloh air perasan daun sirih yaitu dengan membersihkan/mencuci  daun  sirih  segar  dengan  air mengalir, kemudian ditimbang 100 g dan dihaluskan/digerus  dengan mortar dan pestle. Ditambah aquadest 200 mL diaduk kemudian diperas dan disaring dengan  kertas  saring  whatman.  Air  perasan/filtrate ditampung dalam botol.
Analisis  GC-MS.  Sebelum  dialalisis  GC-MS  terlebih dahulu loloh air  rebusan  dan  air  perasan  daun  sirih diuapkan  airnya  dalam  oven  pada  70°C  sampai  habis sehingga  didapatkan  ekstrak  kental  berwarna  coklat. Analisis GC-MS ekstrak loloh air rebusan dan air perasan daun sirih diseting kondisinya sebagai berikut: GC 6890N dari  Hewlett-Packard  (Palo  Alto,  CA,  USA)  dirangkai dengan  detektor  massa  (MS5973,  Hewlett-Packrad) digunakan untuk analisis sampel ekstrak loloh air rebusan dan air perasan daun sirih. Kondisi analisis adalah sebagai berikut: Kolom HP 5MS (30 m x 0,25 mm dan ketebalan film  0,25  mm)  digunakan  dan  aliran  fase  bergerak  (He) diatur  pada  0,7  mL/menit.  Di  bagian  kromatografi  gas suhu  dijaga  pada  50°C  selama  1  menit  dan  kemudian ditingkatkan sampai 150°C dengan kenaikan pemanasan 10°C/menit.  Setelah  periode  ini,  suhu  dijaga  pada  150°C selama  2  menit.  Terakhir  suhu  ditingkatkan  sampai 280°C  dengan  kenaikan  pemanasan  20°C/menit  dan kemudian dijaga pada 280°C selama 30 menit [8].
Uji  aktivitas  antibakteri.  Cakram  disk  kosong disiapkan direndam ke dalam loloh air rebusan dan loloh air perasan daun sirih hingga loloh meresap sampai jenuh. Kontrol negatif digunakan cakram disk yang direndam ke dalam  aquadest  dan  kontrol  positif  digunakan  cakram disk antibiotik Vancomycin 30 µg. Suspensi Streptococcus pyogenes dengan kepekatan 0,5% Mc Farland digoreskan
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 173 – 178
pada permukaan media MHB secara merata. Media MHB didiamkan  selama  15  menit  agar  suspensi  bakteri meresap  ke  dalam  media.  Masing-masing  cakram  disk yang  telah  jenuh  dengan  masing-masing  perlakuan ( loloh daun  sirih,  kontrol  positif  dan  negatif)  kemudian ditempelkan  pada  permukaan  media  MHB  yang  sudah digoreskan  suspensi  bakteri  kemudian  diinkubasi  pada suhu 37°C selama 24 jam dengan posisi terbalik.  Setelah selesai  diinkubasi  diameter  zone  hambat  pertumbuhan bakteri yang berupa daerah bening disekitar cakram disk diukur  dengan  jangka  sorong.  Untuk  mendapatkan  data yang  valid,  dimana  jumlah  perlakuannya  sebanyak  4 perlakuan  yaitu  kontrol  negatif,  kontrol  positif, perlakuan dengan loloh air rebusan dan loloh air perasan daun  sirih  maka  banyaknya  ulangan  yang  dilakukan sesuai  dengan  rumus  Federer,  1963  untuk  uji  aktivitas antibakteri adalah sebanyak 6 kali ulangan [9].
Data  aktivitas  antibakteri  berupa  diameter  zone hambat  pertumbuhan  bakteri  disajikan  dalam  rata- rata±SE dianalisis secara statistik nonparametrik dengan Uji  Kruskal-Wallis  yang  dilanjutkan  dengan  Uji  Mann- Whitney untuk membandingkan nilai rata-rata aktivitas antibakteri antar masing-masing kelompok.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Hasil
Dari  analisis  GC-MS  ekstrak  air  rebusan  dan  air perasan daun sirih diperoleh hasil bahwa ekstrak loloh air rebusan  menunjukkan  adanya  satu  puncak  senyawa dengan  retention  time  (t R ),  Area  puncak  (%)  seperti disajikan  pada  Gambar  1  dan  secara  terperinci ditampilkan pada Tabel 1.
Hasil  kromatogram  tersebut  di  atas  (Gambar  1.  dan Tabel  1.)  menunjukkan  bahwa  hanya  ada  satu  puncak senyawa pada waktu retensi (t R ) 19,101 menit dengan luas area puncak 94,42% yaitu senyawa Hydroxychavicol yang merupakan  senyawa  turunan  fenol.  Ekstrak loloh air perasan  daun  sirih  tidak  ditemukan  adanya  puncak senyawa, seperti disajikan pada Gambar 2.
Gambar 1. Kromatogram Ekstrak Loloh Air Rebusan Daun Sirih
Tabel 1 . Senyawa yang Terdeteksi pada Ekstrak Loloh Air Rebusan Daun Sirih
No. Puncak Waktu Retensi (menit) Luas Area (%) Rumus Molekul Nama Senyawa 1 19,101 94,42  C 9 H 10 O 2 Hydroxychavicol Catatan :  Kemungkinan  senyawa  berdasarkan Database NIST02 Library Qualty 90 ke atas
Gambar 2. Kromatogram Ekstrak Loloh Air Perasan Daun Sirih
Berdasarkan  hasil  analisis  GC-MS  (Tabel  1)  ekstrak loloh air  rebusan  daun  sirih  terdeteksi  adanya  1  puncak senyawa  pada  retention  time  (t R )  19,101  menit  dengan luas  area  puncak  94,42%  maka  disimpulkan  bahwa ekstrak loloh air  rebusan  daun  sirih  mengandung senyawa  aktif  hirdroksikavikol  sebanyak  94,42%  (b/v). Ekstrak  ini  berasal  dari  200  mL loloh air  rebusan  daun sirih  yang  diuapkan  airnya  sampai  habis  sehingga senyawa  aktif  hidroksikavikol  dalam  200  mL loloh air rebusan  daun  sirih  adalah  94,42%  (b/v)  dibagi  200  mL yaitu sama dengan 0,472% (b/v). Senyawa hidroksikavikol merupakan senyawa turunan fenol.
Loloh air rebusan dan air perasan daun sirih setelah diuji aktivitas antibakterinya terhadap bakteri S. pyogenes dengan  metoda  difusi  cakram  disk  (CD)  sebanak  6  kali ulangan  data  aktivitas  antibakterinya  berupa  rata-rata zone  hambat  pertumbuhan  bakteri Streptococcus seperti disajikan dalam Tabel 2 dan Gambar 3.
Hasil  analisis  statistik  nonparametrik  dengan  Uji Kruskal-Wallis terhadap data aktivitas antibakteri (Tabel 2)  menunjukkan  bahwa  rata-rata  aktivitas  antibakteri antara  kelompok  kontrol  negatif,  kelompok  perlakuan dengan loloh air rebusan dan loloh air perasan daun sirih dan  kelompok  kontrol  positif  berbeda  secara  sangat signifikan (p<0,01). Selanjutnya hasil analisis Uji Mann- Whitney  menunjukkan  bahwa  rata-rata  aktivitas antibakteri  antara  kelompok  kontrol  negatif  dengan kelompok perlakuan dengan loloh air rebusan daun sirih dan  dengan  kelompok  kontrol  positif,  antara  kelompok perlakuan  dengan loloh air  rebusan  daun  sirih  dengan kelompok perlakuan dengan loloh air perasan daun sirih dan  dengan  kelompok  kontrol  positif,  antara  kelompok perlakuan  dengan loloh air  rebusan  daun  sirih  dengan kelompok  kontrol  positif  berbeda  secara  signifikan (p<0,05). Sedangkan  antara  kelompok  kontrol  negatif dengan  kelompok  perlakuan  dengan loloh air  perasan daun  sirih  sama-sama  tidak  memiliki  aktivitas antibakteri  yaitu  nilai  zone  hambatnya  sama-sama  nol mm (Tabel 1.).
minute Ab u n d an ce minute A b u n d an ce
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 173 – 178 176
Tabel 2. Rata-rata (±SE) Zone Hambat Pertumbuhan Bakteri S. pyogenes Kelompok Perlakuan Rata-Rata Zone Hambat (mm) Normalitas (Sig) Kruskal- Wallis (Sig) K- 0±0,000 a - AR 6,50±0,224 b 0,004 0,000** AP 0±0,000 a - K+ 17,00±0,316 c 0,212 Keterangan:
1. Nilai  rata-rata  dengan  huruf  yang  sama  pada  kolom  yang sama menunjukkan perbedaan yang signifikan (p>0,05)
2. Nilai rata-rata dengan huruf ang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang signifikan (p<0,05)
K- = Kontrol Negatif
AR = Air Rebusan Daun Sirih AP = Air Perasan Daun Sirih
K+ = Kontrol Positif
** Perbedaan yang sangat signifikan
Keterangan:
K- = Kontrol Negatif AR = Air Rebusan Daun Sirih AP = Air Perasan Daun Sirih K+ = Kontrol Positif
Gambar 3. Zone Hambat Pertumbuhan Bakteri S. pyogenes

## 3.2. Pembahasan
Loloh merupakan  minuman  herbal  yang  diproduksi dan dikonsumsi secara ekskusif di Bali (Indonesia) untuk mencegah dan mengobati berbagai macam penyakit  [4]. Loloh juga  dikenal  sebagai  obat  tradisional  di  Bali  yang dibuat  dari  bagian  tanaman  obat  tertentu  seperti  kulit batang ( babakan ), daun dan lain-lain dicampur atau tidak dengan  bahan-bahan  lain  (dalam  bentuk  ramuan) sebagai mana yang tercantum dalam Lontar Taru Premana yang merupakan  naskah  kuno  yang  berbicara  tentang obat-obatan  herbal  tradisional. Loloh daun  sirih merupakan  obat  tradisional  Bali  yang  dibuat  dari  daun sirih  segar  dapat  digunakan  sebagai  obat  antibakteri karena  daun  sirih  berdasarkan  hasil  penelitian mengungkapkan bahwa ekstrak daun sirih mengandung senyawa  bioaktif  antibakteri  potensial  hidroksikavikol [10,  11].  Hidroksikavikol  merupakan  senyawa  turunan fenol dengan struktur kimia seperti Gambar 4.
Gambar 4. Struktur Kimia Hidroksikavikol
dengan nilai m/z 150, Dapat diperoleh dari daun sirih serta  dari  tanaman  rempah-rempah  Indonesia  seperti Eugenia  polyantha [12].  Memiliki  sifat  antibakteri  yaitu dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  cara meracuni protoplasma, merusak dan menembus dinding sel  serta  mengendapkan/denaturasi  protein  sel  bakteri. Disamping itu juga dapat menginaktifkan enzim di dalam sel  bakteri  dan  menyebabkan  kebocoran  sel  sehingga mengakibatkan kematian sel bakteri [13]. Hidroksikavikol juga memiliki mode aksi yang lain seperti inhibitor enzim COX-1/COX-2, lipase  pancreas  [12] antioksidan  [14]  dan anti fungi [15].
Aktivitas  antibakteri  yang  potensial  dari  daun  sirih juga  diungkapkan  oleh  para  peneliti  yang  lain. Diantaranya  adalah  oleh  Sarma dkk. [16]  dan  Balaji dkk. [17]. Efek antibakteri ekstrak air kasar daun sirih terhadap S.  mutans juga  diungkapkan  oleh  Nalina  dan  Rahim  [6], terhadap Streptoccocus pyogenes dan staphilococcus aureus. oleh  Arambewela dkk. [5],  terhadap  bakteri  patogen pangan oleh Suliantari [18] dan oleh peneliti-peneliti lain sebelumnya.
Hasil  penelitian  yang  menunjukkan  bahwa loloh air rebusan daun sirih mengandung senyawa hidroksikavikol sebanyak  0,472%  (b/v)  dimana  hidroksikavikol merupakan  senyawa  turunan  fenol  yang  bersifat antibakteri,  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri S.  pyogenes sebesar  rata-rata  6,50±0,224  mm. Hasil ini sesuai dengan hasil penelitian Nalina dan Rahim [6],  yaitu  ekstrak  air  kasar  daun  sirih  mengandung senyawa  hidroksikavikol  sebagai  komponen  utama  dan memiliki aktivitas antibakteri dan penelitian
Thamaraikani dan Kulandhaivel [11], yang mengungkapkan  bahwa  hidroksikavikol  dari  ekstrak methanol daun sirih memiliki aktivitas antimikroba yang potensial terhadap E.coli and Salmonella .
Daya  hambat  bakteri loloh air  rebusan  daun  sirih tergolong  kedalam  katagori  sedang  sesuai  dengan kategori  daya  hambat  bakteri  [19]  hal  ini  disebabkan karena  kandunan  senyawa  hidroksikavikolnya  dalam loloh air rebusan daun sirih sangat sedikit yaitu 0,472% (b/v)  sehingga  tidak  cukup  kuat  untuk  menghambat pertumbuhan  bakteri S. pyogenes . Sedikitnya kandungan senyawa  hidroksikavikol  dalam loloh air  rebusan  daun sirih  disebabkan  karena  kurang  lamanya  proses perebusan  yaitu  hanya  15  menit  sehingga  senyawa- senyawa  aktif  antibakterinya  (hidroksikavikol)  belum maksimal  terekstraksi.  Hal  ini  didukung  oleh  penelitian Nalina  dan  Rahim  [6],  yang  menyebutkan  bahwa pembuatan ekstrak air kasar daun sirih yaitu dengan cara merebus  ( decoction )  dari  konsentrasi  10%  (b/v)  hingga menjadi  90%  (b/v).  Dengan  dipekatkan  hingga  9  kali maka  dapat  mengekstrak  senyawa  aktif  hidroksikavikol kedalam  ekstrak  hingga  mengandung  hidroksi  kavikol sebanyak 39,31% (b/v) dan memiliki aktivitas antibakteri sebesar 30±0,86 mm. Menurut Setyanti [20], menyatakan bahwa  cara  membuat  jamu  daun  sirih,  hanya  perlu merebus beberapa lembar daun sirih dalam 4-5 gelas air sampai  airnya  menyusut  (tersisa  kira-kira  satu  gelas). Demikian juga dalam pembuatan loloh untuk obat di Bali biasanya  perebusan  dilakukan  hingga  airnya  menyusut 50%.
AR K+ AP K- K- K+ AR AP
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 173 – 178 177
Loloh air perasan daun sirih tidak memiliki aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri S.  pyogenes karena berdasarkan  hasil  analisis  GC-MS  tidak  mengandung senyawa  aktif  antibakteri. Hal  ini  kemungkinan disebabkan  karena  dalam  proses  pembuatan loloh daun sirih  dengan  cara  digerus/dihaluskan  kemudian  diperas tidak  cukup  untuk  merusak  dinding  sel  daun  sirih sehingga  senyawa-senyawa  aktifnya  yang  bersifat antibakteri  tidak  terekstraksi  kedalam  air  perasan. Dengan  demikian  proses  pembuatan loloh dengan  cara direbus  lebih  efektif  untuk  mengekstrak  senyawa- senyawa  aktif  antibakterinya  dibandingkan  denan  cara diperas.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan maka dapat  disimpulkan  bahwa: loloh air  rebusan  daun  sirih mengandung senyawa aktif hidroksikavikol 0,472% (b/v) memiliki aktivitas antibakteri rata-rata 6,50±0,224 mm terhadap bakteri Streptococcus pyogenes. Loloh air perasan daun  sirih  tidak  mengandung  senyawa  aktif  dan  tidak memiliki aktivitas antibakteri.

## Ucapan Terimakasih
Peneliti  mengucapkan  banyak  terimakasih  dan penghargaan  yang  tinggi  kepada  Rektor  Universitas Hindu  Indonesia  Denpasar  yang  telah  mendanai penelitian  ini  melalui  Dana  Hibah  Penelitian  Internal Universitas Hindu Indonesia tahun 2018.

## Referensi
[1]  World Health Organization. The top 10 causes of death . 2018;  Available  from: http://www.who.int/news- room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of- death .
[2]  Mayo  Clinic. Strep  Throat .  2018;  Available  from: https://www.mayoclinic.org/diseases- conditions/strep-throat/symptoms-causes/syc- 20350338 .
[3]  Sri  Agung  Fitri  Kusuma,  Bakteri Streptococcus pyogenes , in: U. Padjadjaran (Ed.), Bandung, 2010.
[4]  Wawan Sujarwo, Ary Prihardhyanto Keim, Valentina Savo,  Paolo  Maria  Guarrera,  Giulia  Caneva, Ethnobotanical  study  of Loloh :  Traditional  herbal drinks from Bali (Indonesia), Journal of Ethnopharmacology , 169, (2015) 34-48 https://doi.org/10.1016/j.jep.2015.03.079 [5]  L.S.R Arambewela, L.D.A.M Arawwawala, K
Kumaratunga,  D  Dissanayake,  W  Ratnasooriya,  S Kumarasingha, Investigations on Piper betle grown in Sri Lanka, Pharmacognosy Reviews , 5, 10, (2011) 159- 163 http://doi.org/10.4103/0973-7847.91111
[6]  T  Nalina, ZHA  Rahim, The  crude  aqueous  extract  of Piper  betle  L.  and  its  antibacterial  effect  towards Streptococcus mutans , American Journal of Biochemistry and Biotechnology , 3, 1, (2007) 10-15 http://doi.org/10.3844/ajbbsp.2007.10.15
[7]  KY  Pin,  A  Luqman  Chuah,  A  Abdull  Rashih,  MP Mazura,  J  Fadzureena,  S  Vimala,  MA  Rasadah, Antioxidant  and  Anti-Inflammatory  Activities  of Extracts  of  Betel  Leaves  (Piper Betle)  from  Solvents with  Different  Polarities, Journal  of  Tropical  Forest Science , 22, 4, (2010) 448-455
[8] Ataç  Uzel,  Kadri˙ye  Sorkun,  Özant  Önçağ,  Dilşah Çoğulu,  Ömür  Gençay,  Beki˙r  Sali˙h,  Chemical compositions  and  antimicrobial  activities  of  four different Anatolian propolis samples, Microbiological Research , 160, 2, (2005) 189-195 https://doi.org/10.1016/j.micres.2005.01.002
[9]  Kusriningrum  Rochiman,  Dasar  Perancangan Percobaan dan Rancangan Acak Lengkap, Universitas Airlangga, 1989.
[10] A  Syahidah,  CR  Saad,  MD  Hassan,  Y  Rukayadi,  MH Norazian,  MS  Kamarudin,  Phytochemical  analysis, identification  and  quantification  of  antibacterial active  compounds  in  betel  leaves,  Piper  betle methanolic  extract, Pakistan  Journal  of  Biological Sciences , 20, 2, (2017) 70-81 http://doi.org/10.3923/pjbs.2017.70.81
[11]  I.  Thamaraikani,  M.  Kulandhaivel,  Purification  of Hydroxychavicol  from  Piper  betle  Linn  and Evaluation  of  Antimicrobial  Activity  against  Some Food  Poison  Causing  Bacteria, Journal  of  Pure  and Applied Microbiology , 11, (2017) 1883-1889 http://doi.org/10.22207/JPAM.11.4.28
[12] Eisuke Kato, Ryo Nakagomi, Maria D. P. T. Gunawan- Puteri, Jun Kawabata, Identification of hydroxychavicol and its dimers, the lipase inhibitors contained  in  the  Indonesian  spice,  Eugenia polyantha, Food  Chemistry ,  136,  3, (2013)  1239-1242 https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.09.013
[13] Eric E. Conn, Outlines of biochemistry, Wiley, 1987.
[14] M. C. Chang, B. J. Uang, C. Y. Tsai, H. L. Wu, B. R. Lin, C. S. Lee, Y. J. Chen, C. H. Chang, Y. L. Tsai, C. J. Kao, J. H.  Jeng,  Hydroxychavicol,  a  novel  betel  leaf component,  inhibits  platelet  aggregation  by suppression  of  cyclooxygenase,  thromboxane production and calcium  mobilization, British Journal of Pharmacology , 152, 1, (2007) 73-82 http://doi.org/10.1038/sj.bjp.0707367
[15] Intzar Ali, Farrah G. Khan, Krishan A. Suri, Bishan D. Gupta,  Naresh  K.  Satti,  Prabhu  Dutt,  Farhat  Afrin, Ghulam N. Qazi, Inshad A. Khan, In vitro antifungal activity of hydroxychavicol isolated from Piper betle L, Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials , 9, 1, (2010) 7 http://doi.org/10.1186/1476-0711-9-7
[16] Chayanika  Sarma,  Prasad  Rasane,  Sawinder  Kaur, Jyoti Singh, Joginder Singh, Yogesh Gat, Umar Garba, Damanpreet  Kaur,  Kajal  Dhawan,  Antioxidant  and antimicrobial potential of selected varieties of  Piper betle  L.  (Betel  leaf), Anais  da  Academia  Brasileira  de Ciências , 90, 4, (2018) 3871-3878
https://dx.doi.org/10.1590/0001-3765201820180285
[17] Kaveti Balaji, Lisa tan, Sarnia, Sin kuan, Mirza Baig, Antibacterial  Activity  Of  Piper  Betel  Leaves, International Journal of Pharmacy Teaching & Practices , 2, 3, (2011) 129-132
[18] Suliantari,  Aktivitas  Antibakteri  dan  Mekanisme Penghambatan Ekstrak Sirih Hijau (Piper betle Linn) terhadap  Bakteri  Patogen  Pangan,  Program  Studi Ilmu Pangan, Institut Pertanian Bogor, Bogor
[19] Lu'lu  A'lana,  Rafika  Sari,  Pratiwi  Apridamayanti, Penentuan Nilai FICI Kombinasi Ekstrak Etanol Kulit Daun  Lidah  Buaya  (Aloe  vera  (L)  Burm.f)  dan Gentamisin Sulfat Terhadap Bakteri Escherichia coli, Pharmaceutical  Sciences  and  Research  (PSR) ,  4,  3,
(2018) 132-142 http://dx.doi.org/10.7454/psr.v4i3.3695
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (5) (2019): 173 – 178 178
[20] Christina  Andhika  Setyanti. Resep  Jamu  Daun  Sirih Sederhana  ala  Mustika  Ratu .  2015;  Available  from: https://www.cnnindonesia.com/gaya- hidup/2015042-2201134-262-48580/resep-jamu- daun-sirih-sederhana-ala-mustika-ratu .