## UPAYA ISOLASI β -ASARONE PADA EKSTRAK n-HEKSAN RIMPANG DRINGO (Acorus calamus L.) ASAL KABUPATEN PINRANG
Siti Sya’diyah *) , Risda Waris, Ahmad Najib Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia *)Email : dyah.nady@rocketmail.com

## ABSTRACT
The isolation of n-hexane extract from Sweet Flag rhizome (Acorus calamus L.) was done. The aim of this research is to obtain β -asarone isolate as marker compound of   Sweet Flag (Acorus calamus L.). Sample from 1 kg of dried rizhome, mascerate using n-hexane. This process produce 31 ml thick extract. Isolation of n-hexane extract using column chromatography with isocratic methode using n-hexane etil acetat 8 : 2.  The isolate identified by UV-Vis spectroscopy,  IR spectroscopy,  ( 1 H) NMR and Gas Chromatography Mass Spectro. From the data result show that isolate is β -asarone.
Keyworks : n-Hexane Extract, Sweet Flag Rhizome, Spectrometry, β -asarone

## I. PENDAHULUAN Latar Belakang
Pengobatan  dan  pendayagunaan obat  tradisional  merupakan  salah  satu komponen  program  pelayanan  kesehatan serta  merupakan  satu  alternative  untuk memenuhi kebutuhan dasar penduduk Indonesia  di  dunia  kesehatan.  Namun pengetahuan  tentang  obat  tradisional  masih bersifat empiris dan  masih  kurang didukung dengan  data  ilmiah  tentang  kandungan kimianya  dan  pemerintah  menggalakkan penelitian tentang obat tradisional. Untuk itu dalam  pemanfaatan  obat  tradisional  dapat teratasi (Wijayakusuma, 2000).
Dringo (Acorus calamus L.)  adalah tanaman yang mengandung bahan kimia aktif pada  bagian  rimpang  baik  dalam  bentuk tepung ataupun minyak yang dikenal sebagai minyak atsiri. Tumbuhan ini mudah tumbuh dan  dikembangbiakkan  serta  tidak  beracun bagi  manusia,  karena  secara  tradisional banyak  digunakan  sebagai  obat  sakit  perut dan  penyakit  kulit,  serta  dipercaya  dapat mengusir pengaruh roh jahat terutama untuk bayi dan balita (Onasis, 2001).
Sebagai  obat  tradisional  Dringo (Acorus  calamus L.)  disebutkan  memiliki khasiat  sebagai  stimulan,  stomatikum,  tonik saraf,  antirematik,  sedative.  Juga  dikatakan mempunyai khasiat antiaritmia, dan antikonvulsan mirip dengan quinidin.
Dekokta  atau  infus  rimpangnya  adalah pengobatan  yang  efektif  terhadap kembung, demam  dan  sakit  perut.  Untuk  pemakaian
luar rimpangnya digunakan untuk pengobatan tapal, atau lotion untuk lumbago, rematik, demam dan untuk stimulasi sirkulasi darah.  Juga  dicatat  kegunaannya  sebagai insehisi  dain  sektifungal  dan  antibakteri (Onasis, 2001).
Setiap tumbuhan memiliki komponen kimia yang spesifik dan demikian pula  komponen  kimia  yang  terdapat  pada tumbuhan  Dringo  (Acorus  calamus L.). Komponen  kimia  utama  (mayor  compound) yang terdapat pada tumbuhan ini adalah cis- asaron, trans-asaron α - patchoulen, β - caryophyllen, humulen, metal-eugenol, elemicine, cis-0cimen (Najib, 2010).
Senyawa penanda adalah unsur yang terkandung  dalam  suatu  bahan  tumbuhan obat yang ditetapkan secara kimia dan untuk tujuan pengawasan. Senyawa penanda umumnya  digunakan  ketika  unsur  pokok dengan  aktivitas  terapeutik  yang  telah diketahui  tidak  ditemukan  atau  tidak  dapat dipastikan,  dan  dapat  digunakan  untuk menghitung  bahan  tumbuhan  atau  sediaan tumbuhan  yang  terdapat  dalam  produk  jadi. Bila  bahan  awal  diuji,  senyawa penanda dalam bahan tumbuhan atau sediaan tumbuhan harus ditentukan secara kuantitatif (Fabiola, 2005).
Dalam  rangka  menambah  data ilmiah  tentang  pemanfaatan  bahan  alam sebagai  tumbuhan  yang  berkhasiat  obat, maka  penelitian  ini  ditunjukan  untuk mendapatkan salah  satu  senyawa  penanda
pada tumbuhan Dringo (Acorus calamus L.) yaitu β -Asarone. II. MATERIAL DAN METODE PENELITIAN A. Material
Alat : Kromatografi Gas-Spektroskopi Massa (KG-SM),  lampu  UV  254  nm  dan  366  nm, separangkat    alat    rotavapor  (Ika ® Werke  @
Rvor), seperangkat alat Kromatografi Kolom,
KLT  dan  KLTP  (Camag),  seperangkat  alat gelas (Pyrex), sentrifuge (IKA), spektrofometer IM (Alpha), spektrofotometer UV-Vis (Hitachi), spektroskopi magnetik inti proton ( 1 H) NMR.
Bahan  : Benzen,  etil  asetat,  n-heksan, kloroform, lempeng KLT (E.merck), lempeng KLT preparatif (E.Merck), rimpang Dringo (Acorus calamus L.), silika gel G.60 (kasar).

## B. Metode
1. Ekstraksi secara maserasi Ditimbang rimpang Dringo (Acorus calamus L.) yang  telah  diserbukkan, dimasukkan  ke  dalam  wadah maserasi kemudian  ditambahkan  n-heksan  (hingga terendam seluruh permukaan simplisia), lalu ditutup  rapat  dan  dibiarkan  selama  5  hari dengan  pengadukan  sesering  mungkin. Setelah  itu disaring dan ampas ditambahkan dengan  cairan  penyari  yang  baru.  Hal  ini dilakukan hingga 3 kali, hasil penyairan yang di  dapat  kemudian  dipekatkan  dengan  cara diuapkan dengan Rotavapor hingga diperoleh ekstrak n-heksan kental.

## 2. Identifikasi KLT
Fraksi  n-heksana  ditotolkan  pada lempeng  KLT  menggunakan  pipa  kapiler kemudian dielusi dengan cairan pengelusi n- heksana : etil asetat 8 : 2 di dalam chamber. Lempeng  dikeluarkan  dari  chamber  dan diangin-anginkan hingga cairan pengelusinya menguap.  Kemudian  kromatogram  yang dihasilkan  diamati  nodanya  di  bawah  sinar ultra  violet  (UV)  pada  panjang  gelombang 254 nm dan 366 nm.
3. Isolasi  dengan  Metode  Kromatografi Kolom Konvensional
Kemudian fraksi n-heksana diisolasi secara  kromatografi  kolom  konvensional dengan  fase  diam  berupa  silica  gel  G.60 (kasar)  dan  fase  gerak  menggunakan  cairan pengelusi n-heksana  :  etil  asetat  (8:2) pemilihan  fase  gerak  ini  didasarkan  pada
orentasi  yang  telah  dilakukan  sebelumnya menggunakan  kromatografi  lapis  tipis.
Kolom  dibuat  dengan  cara  basah,  dimana terlebih dahulu tabung diisi dengan setengahnya dengan silika gel lalu silika gel dikeluarkan dari dalam tabung dan ditimbang,  kolom  dibebas  lemakkan  dengan dengan  cara  membilasnya  dengan  metanol, sumbat  bagian  bawah  kolom  dengan  kapas agar  silica  gel  tidak  mencemari  tampungan fraksi.  Silica  gel  dibuat  lumpuran  dari sebagian eluen yang telah disiapkan lumpuran itu kemudian dituangkan ke dalam kolom  selama  proses  pengendapan  kolom diketuk-ketuk  tiap  sisinya  hingga  tidak terbentuk  gelembung  gas  dan  diperoleh kerapatan kolom yang seragam. Ekstrak yang akan  difraksinasi  tersebut  diletakkan  di  atas permukaan  silca  gel  secara  merata.  Setelah itu  eluen  dialirkan  dan  fraksi-fraksi  yang diperoleh ditampung pada vial yang disediakan.  Fraksi di  identifikasi  dengan kromatografi lapis tipis dan yang memberikan  profil  kromatogram  yang  sama disatukan dalam satu fraksi.
4. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif Fraksi dari fraksi n-heksan rimpang
Dringo    (Acorus  calamus L.)  hasil  dari kromatografi kolom ditotolkan pada lempeng KLTP dengan ukuran 10 x 20 cm, selanjutnya dielusi  dalam  chamber  yang berisi  eluen n- Heksana : etil asetat (8:2). Kemudian diamati dibawah  sinar  UV  254  nm  dan  366  nm. Lempeng  yang  telah  diamati  diberi  batas noda dan dikeruk, lalu ditampung pada vial. Hasil kerukan tersebut selanjutnya ditambahkan  pelarut  n-heksan  kemudian disaring.  Filtrat  diuapkan  lalu  ditambahkan kembali  dengan  pelarut  metanol  kemudian filtrat  ditotolkan  pada  lempeng  KLT, selanjutnya dielusi dengan eluen n-Heksana : etil  asetat  (8:2).  Jika  proses  elusi  selesai kemudian diamati di bawah sinar UV 254 nm dan 366  nm.  Dan  menghasilkan  1  noda tunggal yang menandakan isolat tunggal.
5. Uji Kemurnian Isolat
a. Elusi Sistem Multi Eluen Uji kemurnian isolat juga dilakukan
dengan menggunakan  beberapa variasi eluen yaitu n-heksan : kloroforom (2 : 4), n- heksan : etil asetat (8 : 2), benzen : etil asetat (4 : 1), dan  benzen  :  etil  asetat  (7  :  3) penampakan noda  tunggal  menandakan  bahwa  golongan senyawa dari isolat yang didapat merupakan komponen kimia yang tunggal.
b. Kromatografi Lapis Tipis Dua Dimensi
Isolat  yang  telah didapat  kemudian ditotol pada lempeng kromatografi lapis tipis dengan  ukuran  10  x  10  cm.  lalu  dielusi dengan  cairan  pengelusi.  Untuk  proses  elusi yang  pertama  dilakukan  dengan  cara menotolkan  isolat  yang  telah  dilarutkan dengan pelarut  yang sesuai dengan lempeng kemudian dielusi dengan menggunakan eluen n-heksana  :  etil  asetat  (9  :  1).  Proses  elusi yang  kedua  dengan  cara  memutar  lempeng berlawanan  arah  jarum  jam  sehingga  hasil elusi  yang  pertama  menjadi  titik  awal pengelusian  untuk  yang  kedua  dengan menggunakan eluen n-heksana : etil asetat (8 :  1).  Apabila  pada  dua  kali  proses  elusi  ini hanya  menunjukkan  satu  bercak  tunggal maka  dapat  dikatakan  bahwa  isolat  yang didapatkan adalah komponen yang tunggal.
6. Identifikasi Isolat Murni
a. Identifikasi  Spektrofotometri  Ultra Violet Visible Isolat  yang  diperoleh  kemudian diidentifikasi  dengan  Spektrofotometri  Ultra Violet  Visible.  Senyawa  dilarutkan  dalam metanol absolut kemudian cuplikan dimasukkan kedalam kuvet (sampel
kompartemen) yang berada diantara monokromator  dan  detektor,  spektrum  yang dihasilkan  akan  direkam  pada  alat  perekam (rekorder).

## b. Identifikasi  Spektrofotometri  Infra Merah
Isolat murni yang diperoleh dilanjutkan dengan identifikasi
Spektrofotometri  Infra  Merah  dengan  cara menempatkan  cuplikan  sebagai  film  yang tipis  di  antara  dua  lapisan  natrium  klorida yang transparan, kemudian ditempatkan pada celah sinar infra merah antara monokromator dengan  detektor,  selanjutnya  direkam  pada alat pencatat.

## c. Identifikasi ( 1 H) NMR
Sampel  dilarutkan  dalam  deutero khlroform (CDCl 3 ) dan
kemudian ditambahkan  beberapa  tetes  Tetra  Matil Silana (TMS). Pergeseran kimia TMS diatur pada  0,0  ppm.  CDCl 3 dan  TMS  digunakan langsung tanpa pemurnian.
d. Identifikasi Kromatografi Gas- Spektroskopi Massa Isolat murni yang diperoleh dilanjutkan dengan identifikasi Kromatografi Gas dengan cara menyuntikkan sampel pada ruang  penyuntikan,  yang  kemudian  sampel akan  dipisahkan  dalam  kolom  pada  KG, kemudian data akan dikirimkan pada detektor yang  kemudian  akan  terbaca  pada  layar  dan tercetak sebagai kromatotron.

## III. HASIL DAN KESIMPULAN

## A. Hasil
Simplisia  kering  rimpang  Dringo (Acorus  calamus L.)  sebanyak  1  kg, dimaserasi tiga kali menggunakan pelarut n- heksan sebanyak 5,6 L menghasilkan ekstrak n-heksan kental sebanyak 31 ml.
Ekstrak  n-heksan yang  diperoleh, kemudian di profil KLT dengan
menggunakan  eluen  n-heksan  :  etil  asetat dengan perbandingan 6 : 4, 7 : 3, 8 : 2 dan 9 : 1.  Dari  profil  KLT,  pemisahan  noda  yang baik terdapat pada lempeng yang menggunakan perbandingan eluen 8 : 2.
Isolasi  β -asarone  ekstrak  n-heksan dilakukan  dengan  metode  Kromatografi Kolom,  dengan  adsorben  silika  gel  G.60 sebagai fase diam sebanyak 64 g, menggunakan  eluen  n-heksan  :  etil  asetat sebagai fase gerak dengan perbadingan 8 : 2.
Pada
kromatografi kolom, didapatkan 307 vial yang digabung menjadi 3 fraksi.  Dilakukan  profil  KLT  pada  masing- masing fraksi menggunakan eluen n-heksan : etil asetat 8 : 2.
Fraksi pertama di isolasi lebih lanjut dengan  kromatografi  lapis  tipis  preparatif (KLTP)  dan  diperoleh  4  pita.  Pita  pertama diberi tanda, dan kemudian dikeruk. Pita hasil kerukan,  dilarutkan  dengan  n-heksan  dan kemudian disentrifuge.
Untuk  uji  kemurnian,  dilakukan metode  multi  eluen,  eluen  yang  digunakan adalah n-heksan : etil asetat 8 : 2 didapatkan noda tunggal dengan  nilai  Rf 0,54, benzen : etil  asetat  4  :  1  didapatkan  noda  tunggal dengan nilai Rf 0,54, eluen benzen : etil asetat 7 : 3 didapatkan noda tunggal dengan nilai Rf 0,78,  n-heksan : kloroform 2 : 4 didapatkan noda tunggal dengan nilai Rf 0,81. Kemudian dilakukan  KLT  2  dimensi  menggunakan eluen  n-heksan  :  etil  asetat  9  :  1  untuk  arah pertama,  didapatkan  noda  tunggal  dengan nilai Rf 0,47. Untuk arah kedua
menggunakan eluen n-heksan : etil asetat 8 : 2  didapatkan  noda  tunggal  dengan  nilai  Rf 0,52. Interpretasi data spektro UV-visibel menunjukkan  serapan  maksimum  pada panjang  gelombang  224,50  nm  dan  serapan tertinggi adalah 3.905 nm. Data spektrum : NO P/V Wavelength Abs 1 311.50 2.289 2 306.00 2.224 3 302.00 2.231 4 384.00 1.260 5 224.50 3.905 6 309.50 2.160 7 304.00 2.203 8 286.00 1.212 9 282.00 1.194 Interpretasi data spektra infra merah menunjukkan daerah serapan (cm -1 ). Terdapat suatu pita uluran peak ukuran C-O dalam daerah sidik jari pada 1050-1260 cm -1 dengan serapan atau intensitas yang kuat, dan tidak ditemukan peak yang kuat pada daerah bilangan gelombang 1640-1820 cm -1 sebagai posisi  absorbsi  C=O  untuk  alkaloid,  keton, asam  karboksilat  dan  ester,  maka  dapat disimpulkan  bahwa  isolat  yang  di  analis adalah  eter.  Terdapat  pita  pada  daerah bilangan  gelomang  pada  1300-1600  cm -1 yang  menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut
manganduk struktur aromatik atau heteroaromatik.  Juga  ditemukan  peak  atau puncak  sedang  hingga  kuat  di  daerah  1450- 1650  cm -1 menandakan  adanya  cincin aromatik. Sehingga dapat disimpulkan bahwa isolat yang dianalis merupakan senyawa eter aromatic.
Terdapat pita,  peak  atau  puncak yang  sangat  kuat  di  daerah  2855-2923  cm -1 dan juga peak yang lemah di daerah bilangan gelombang 1375-1450 cm -1 merupakan pita serapan dari hidrokarbon (C-H).

## Daerah
Serapan
(cm -1 ) pada Sampel Daerah serapan (cm -1 ) literatur Jenis Senyawa Gugus 2923, 2854 2850 – 2950 Absorbsi Alkana C-H 1608, 1509 1500 – 1650 Absorbsi Alkena dan Aromatik C=C 2923, 1460, 2919, 1861, C-H
Gambar 1. Diagram data Spektrum UV-Vis isolat ekstrak n-heksan rimpang Dringo (Acorus calamus L.)
1373, 765 1458, 1378 dan 720 Hidrokarbon (minyak) 1373 1380 Absorbsi Alkana C-H dan CH 3 1042, 1077 800 – 1300 Isopropil Eter R-O-R 1460 690, 755, 1450, 1580 dan 1600 Benzen
Gambar 2. Diagram data Spektrum Infra Merah isolat ekstrak n-heksan   rimpang Dringo (Acorus calamus L.) dengan pelarut metanol
Untuk  hasil  interpretasi  data  ( 1 H) NMR,  pada  gesekan  kimia  antara  0,8-1,8 ppm  ditemukan  tiga  peak  (tidak  ekivalen) dengan  luas  relatif peak  masing-masing adalah  3  (sesuai  jumlah  proton  masing- masing)  merupakan  proton  dari  CH 3 .  Pada daerah  gesekan  kimia  sekitar  3,7  ppm kemungkinan – CH 2 – dengan  luas  peak  2, dan pada gesekan kimia 3,8 ppm kemungkinan  berasal  dari  proton – CH= (terdapat 1 proton dengan luas peak relatif 1) dan  pada  gesekan  kimia  4,6  ppm, kemungkinan  proton  dari  =CH 2 (terdapat  2 proton  dengan  luas  peak  relatif  2).  Pada daerah  gesekan  kimia  6,6  dan  6,8  ppm terdapat  peak  dengan  luas  peak  relatif masing-masing  1  (sesuai  jumlah proton), terjadi  pola  pemisahan  peak  karena  kedua proton yang menempel pada struktur benzen tidak  ekivalen.  Pada  daerah  gesekan  kimia tersebut  dapat  disimpulkan  peak  tersebut
merupakan  pola  gesekan  dari  senyawa aromatik. Terdapat proton yang mempunyai kopling  konstan  1,3393  Hz  dan  1,2900 dengan  nilai 24,65. Pada daerah 3,7856 Hz dan 3,7753 dengan nilai 5,15.
Area pergesera n kimia pada sampel Area pergeser an kimia litera- tur Jenis Senya-wa Gu-gus 1,2900 ; 1,3393 1 – 2 Proton hidrokar- bon -CH- 3,7753 ; 3,8596 3 – 4 Proton metoksi, metilen oksi atau metin oksi
-OCH 3 -OCH 2 - -OCH- 6-7 Proton aromatik
O C H 3 H 3 C O H H C H 3 O C H 3 H H O C H 3 H 3 C O H H O C H 3 H H m / e = 2 0 8 m / e = 1 9 3 O C H 3 H 3 C O H H O C H 3 H m / e = 1 7 7 O C H 3 H 3 C O O C H 3 m / e = 1 6 5 O C H 3 H 3 C O O m / e = 1 5 0 H 3 C O O C H 3
m / e = 1 3 7
Spektrum  massa  senyawa  hasil isolasi  memperlihatkan  adanya  puncak  ion molekular  pada  m/e  =  208  (M + )  yang menunjukkan  bahwa  senyawa  hasil  isolasi
mempunyai  berat  molekul  208  yang  sama dengan  berat  molekul  β -asarone.  empunyai fragmentasi  yaitu  pada  m/e  41,  69,  91,  137, 165, 177, 193 dan 208
Dengan fragmentasi sebagai berikut :
Gambar  3. Diagram  data  Spektrum  ( 1 H)  NMR  isolat  ekstrak  n-heksan  rimpang  Dringo  (Acorus calamus L.) dengan Pelarut CDCl 3
[Sumber: Jee Yeon Lee, 2004 dengan aplikasi Chem Draw]
Gambar 4 : Diagram data Spektrum Kromatografi Gas Spektroskopi Massa isolat ekstrak n- heksan rimpang Dringo (Acorus calamus L.)

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  diuraikan,  dapat  diambil  kesimpulan bahwa  senyawa  berupa  minyak  berwarna kuning yang  mempunyai  rumus  molekul C 12 H 16 O 3 dengan  rumus  kimia cis-1,2,4- trimetoksi-5-(1-propenil)-benzen dengan nama lain β -asarone telah berhasil diisolasi.
Gambar 5. Tumbuhan dan Rimpang Dringo (Acorus calamus .L)

## DAFTAR PUSTAKA
1. Adnan,  M.,  1997. Tehnik  Krimatografi Untuk Analisis Bahan Makanan,
Yogyakarta ; Andi
2. Agusta,  A.,  2000. Minyak  Atsiri Tumbuhan Tropika Indonesia. Bandung; Institut Teknonoloi Bandung
3. Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat dan  Makanan.  1978. Materi  Medika
Terapi Indonesia Vol.II. Jakarta; Departemen Kesehatan Republik
Indonesia.
4. Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat dan Makanan. 1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Jakarta; Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
5. Erstellt.  2000. Riechstofflexikon  β - asaron.  (online). http://www.omikron- online.de/cyberchem/aroinfo/asaron_b.h tm. diakses 20 Desember 2011.
6. Fabiola, C.R., Hutabarat. 2005. Pemastian  Mutu Obat. Vol.2.  Jakarta; EGC.
7. Fessenden,  F.  1992. Kimia  Organik. Jakarta ; Erlangga.
8. Gandjar, G,I.  & Rahman, A. 2008. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta; Pustaka Pelajar.
9. Gritter, R.J., 1991, Pengantar kromatografi, Terjemahan Padmawinata,  Edisi  Ketiga, Bandung;
Institut Teknologi Bandung.
10. Harborne,  JB.  1996. Metode  Fitokimia Edisi  II. Bandung;  Institut  Teknologi Bandung.
11. Harmita.  2006. Buku  Ajar  Analisis
Fisikokimia. Depok; Departemen Farmasi Universitas Indonesia.
12. Harmita. 2007. Buku Elusidasi Struktur. Depok; Departemen Farmasi Universitas Indonesia.
13. Hendayana,  S.,  et  al.  1994. Kimia Analitik  Instrumen.  Semarang:  IKIP Semarang Press.
14. Hostettmann,  K.,  dkk.  1995. Cara Kromatografi Preparatif. Diterjemahkan
oleh Dr. Kosasih Padmawinata. Bandung; Institut Teknologi Bandung.
15. Ismawan,  Bambang.  2009. Herbal Indonesia  Berkhasiat. Depok;  Trubus
Info Kit.
16. Jee Yeon Lee., et al. (2004). Antifungal activity  of β -asarone  from  rhizome  of
Acorus gramineus.
Journal of Agriculture  and  Food  Chemistry,  52,
776-780.
17. Khare,  Cp.  2007. Indian  Medicinal Plants. New Delhi, India; Springer.
18. Khopkar,  S.M.,  1990, Konsep  Dasar Kimia  Analitik.  Jakarta;  Universitas Indonesia Press.
19. McNair, H.M., Bonelli, E,J. 1988. Dasar Kromatografi  Gas.  Diterjemahkan  oleh Dr.  Kosasih  Padmawinata.  Bandung; Institut Teknologi Bandung.
20. Mulja,  M  &  Suharman,  A.,  1995, Analisis Instrumen. Surabaya; Airlangga Universitas Press.
21. Najib,A., 2010, Isolasi Identifikasi Aktif
Inhibitor  α -Glukodase  dari  fraksi        n- Butanol  Rimpang  Acorus  calamus  L.,
Fakultas Matematika  &  Ilmu  Peng. Alam.  Universitas  Indonesia,  Program Study          Magister  Ilmu  Kefarmasian, Depok.
22. Onasis, 2001, Efektivitas Minyak Rimpang Jeringau ((Acorus calamusLinn.)) Terhadap Kematian Nyamuk Aedes aegypy, (Online) (http:///chapter.pdf.F_885.Bab  II.html), diakses 30 Maret 2011.
23. Patra, A., Mitra, A.K. 1979. Constituents of Acorus calamus Linn. Indian Journal Chemistry, 17 B, 412-414.
24. Phongpaichit,S.et al. 2005.
Antimicrobial  activities  of  the  crude methanol  extract  of  Acorus  calamus
Linn.  Songklanakarin  Journal  science
Technology.27.517-523.
25. Sastrohamidjojo, H. 1985. Kromatografi. Yogyakarta; Liberty 26. Skoog, Douglas A.et.al.1996. Fundamentals  of  Analytical  Chemistry 7th Edition, Orlando : Saunders College Publishing (Online)
http://www.chemtry.org/kimia_analisis/ spektrofotometri_infra_merah/comment -page-1/  diakses 20 Desember 2011.
27. Sudjadi,  1986. Metode  Pemisahan. Yogyakarta;  Universitas  Gadja  Mada Press.
28. Sudjadi,  2007. Kimia  Farmasi  Analisis. Yogyakarta; Pustaka Pelajar.
29. Sutrisno, B. 1998. Taksonomi Spermathophyta untuk Farmasi. Jakarta;
Fakultas Farmasi Universitas Pancasila.
30. Tjitrosoepomo,  G.,  1989, Taksonomi Tumbuhan  Obat-Obatan.  Yogyakarta;
Universitas Gaja Mada Press.
31. Wijayakusuma.H.,2000, Tumbuhan
Berkhasiat  Obat  Indonesia  Jilid  I,
Jakarta; Prestasi Insan Indonesia
32. Wiryowidadgo,  S.  2001. Kimia  dan Farmakologi  Bahan  Alam. Jakarta;
Universitas Indonesia