# Korespondensi:  Balai  Riset  Perikanan  Budidaya  Air  Payau  dan Penyuluhan  Perikanan.  Jl.  Makmur  Dg.  Sitakka  No.  129,
Maros  90511,  Sulawesi  Selatan,  Indonesia. Tel.  +  62  411  371544 E-mail:  siganus007@yahoo.com
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra

## PERFORMANSI PERTUMBUHAN DAN REPRODUKSI UDANG WINDU, Penaeus monodon YANG DIBERI PAKAN  DENGAN PENAMBAHAN VITAMIN C  DAN E
Usman # ,  Kamaruddin,  Asda  Laining,  Samuel  Lante,  dan  Bunga  Rante  Tampangallo
Balai Riset Perikanan Budidaya Air Payau dan Penyuluhan Perikanan Jl. Makmur Dg. Sitakka No. 129, Maros 90511, Sulawesi Selatan
(Naskah diterima: 5 Agustus 2019; Revisi final: 28 Oktober 2019; Disetujui publikasi: 30 Oktober 2019)

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  mengevaluasi  pengaruh  penambahan  vitamin  C  dan  E  dalam  pakan  terhadap performansi pertumbuhan dan reproduksi udang windu fase prematurasi. Dua pakan uji dengan perlakuan: penambahan vitamin C (mengandung ascorbic acid 406,1 mg/kg) dan vitamin E (mengandung 286,3 mg/kg) (PS), dan  tanpa penambahan vitamin C dan E (PK).  Hewan uji yang digunakan adalah udang windu fase prematurasi hasil budidaya berbobot awal 43,1±5,1 g untuk betina dan 41,9±4,4 g untuk jantan, dipelihara dalam  2  petak  tambak  beton  berukuran  1000  m 2 dengan  kepadatan  awal  100  ekor/tambak  dan  rasio udang jantan : betina adalah 4 : 6. Udang tersebut diberi pakan uji sebanyak 3% dari biomassa per hari selama 3 bulan di tambak. Selanjutnya udang dipindahkan ke bak pematangan gonad untuk mengevaluasi kinerja reproduksinya. Hasil penelitian menunjukan bahwa,laju pertumbuhan spesifik, total hemosit, jumlah sel sperma, gonada somatic indeks, dan hepatosomatic indeks cenderung lebih tinggi pada udang yang diberi pakan uji PS dibandingkan yang diberi pakan PK. Udang yang diberi pakan uji PS juga memiliki fekunditas, diameter telur, daya tetas telur, dan produksi nauplii yang cenderung lebih tinggi, meskipun secara statistik tidak berbeda nyata (P>0,05) di antara kedua perlakuan. Hasil penelitian ini menunjukkan penambahan vitamin C dan E dalam pakan cenderung meningkatkan performansi pertumbuhan dan reproduksi udang windu.
KATA KUNCI: udang windu, pertumbuhan, reproduksi,vitamin C dan E
ABSTRACT: Growth and reproductive performances of tiger shrimp, Penaeus monodon, fed vitamin C and E supplemented  diet. By:  Usman,  Kamaruddin,  Asda Laining,  Samuel  Lante,  and Bunga  Rante Tampangallo
This experiment was aimed to evaluate the effects of feed supplemented with vitamin C and E on the growth and reproductive performances of prematurated tiger shrimp. Two test diets were formulated as the treatments: diet with the addition of vitamin C (contain ascorbic acid of 406.1 mg/kg diet) and vitamin E (contain 286.3 mg/kg diet) (PS), and a diet without the addition of vitamin C and E (PK). The test shrimp were prematurated tiger shrimp with an average initial weight of 43.1 ± 5.1 g/ind. for females and 41.9 ± 4.4 g/ind. for males. The tiger shrimp were cultured in two of 1,000 m 2 concrete ponds with a density of 100 ind./pond, and the ratio of male : female was 4 : 6. The shrimp were fed with the experimental diets at a rate of 3% of body weight/day for three months. The shrimp were then transferred to concrete tanks for reproductive evaluation. The results showed that the specific growth rates, total hemocytes, number of sperm cells, gonado-somatic index, and hepatosomatic index tended to be higher in the shrimp fed with the PS test diet compared to the shrimp fed with the PK test diet. The shrimp fed with the PS test diet had higher egg fecundity, egg diameter, hatching rate, and nauplii production compared to the shrimp fed with the PK test diet. However, the study found no significant difference (P>0.05) between the two treatments. The addition of vitamins C and E in the diet could improve the growth and reproductive performance of tiger shrimp.
KEYWORDS: tiger shrimp; growth; reproduction; vitamin C and E
200 mg/kg dan konsentrasi vitamin E sebanyak 100 mg/kg  dalam pakan  induk  udang windu.  Sementara Alava  et  al.  (1993)  menerapkan  konsentrasi  asam askorbat  (vitamin  C)  492  mg/kg  dan  vitamin  E  482 mg/kg  dalam  pakan untuk  memacu    perkembangan ovarium udang kuruma, Penaeus javonicus. Meskipun penting  dalam  proses  reproduksi,  vitamin  E  yang berlebihan dalam pakan juga dapat mengganggu proses metabolisme  seperti  timbulnya  reaksi  toksik  dalam hati  dan  memperlambat  pertumbuhan  ikan  (Halver, 2002).
Selain  faktor  tersebut,  vitamin  C  dan  vitamin  E juga berperan penting dalam menstimulasi mekanisme imun  pada  hewan  akuatik,  serta  berfungsi  sebagai antioksidan yang kuat (Guillaume et al., 1999). Kondisi lingkungan hidup udang yang sering tidak mendukung dan serangan penyakit yang semakin meningkat saat ini cenderung menyebabkan udang mengalami stres tinggi yang tentunya memicu terjadinya radikal bebas, sehingga sangat diperlukan adanya respons imun yang tinggi, serta peran dari antioksidan ini. Berdasarkan hal  tersebut,  maka  penelitian  ini  dilakukan  untuk mendapatkan informasi tentang pengaruh penambahan vitamin  C  dan  vitamin  E  dalam  pakan  terhadap performansi pertumbuhan dan reproduksi udang windu fase  prematurasi  dalam  rangka  mendukung domestikasi.

## BAHAN DAN METODE

## Pakan Uji
Bahan utama untuk pakan uji berupa pakan udang komersial yang  memiliki kandungan  protein sekitar 45% dan lemak sekitar 6%, berbentuk crumble (starter), dan ditepungkan. Penambahan bahan lainnya berupa tepung  ikan,  tepung  terigu  dan  wheat  gluten  untuk menghasilkan pakan dengan kandungan protein sekitar 45%,  lemak  11%,  dan  gross  energy  18,3  MJ/kg;  serta ketahanan  dalam  air  4  jam.  Berdasarkan  hasil penelitian sebelumnya, juga  dilakukan penambahan karotenoid  (Laining  et  al.,  2016a)  dan  penambahan sumber  lemak  (Laining  et  al.,  2016b).  Sebagai perlakuan adalah penambahan vitamin C dan vitamin E  dalam  pakan  yaitu:  PS  =  dalam  formulasi  pakan ditambahkan 0,2% Stay C (mengandung ascorbic acid 36%) dan vitamin E sebanyak 0,02% (mengandung 50% tocoferol), sehingga dalam pakan mengandung ascorbic acid  406,1  mg/kg  pakan  dan  tocoferol  286,3  mg/kg pakan;  dan  PK  =  dalam  formulasi  pakan  tanpa penambahan vitamin C dan vitamin E. Komposisi bahan dan  proksimat  pakan  uji  disajikan  pada  Tabel  1. Komposisi pakan ini juga digunakan untuk mengetahui pengaruh vitamin C dan E terhadap profil asam lemak pada  hepatopancreas  dan  oosit  dari  udang  windu (Usman et al., 2019).

## PENDAHULUAN
Domestikasi udang windu  harus terus dilakukan agar dihasilkan induk yang berkualitas melalui kegiatan budidaya yang ramah lingkungan dan berkelanjutan. Untuk  menghasilkan  induk  yang  berkualitas,  maka pengembangan  pakan  buatan  dengan  spesifikasi nutrisi tertentu harus dilakukan sejak fase prematurasi yaitu saat ukuran udang sekitar 40 g karena pada fase tersebut udang windu sudah memasuki fase persiapan untuk perkembangan organ reproduksi (Paibulkichakul et  al.,  2008;  Hoa,  2009).  Beberapa  hasil  penelitian melaporkan tentang kebutuhan nutrien udang windu pada masa awal fase reproduksi tersebut seperti: dosis dan  jenis  karotenoid  yaitu  astaxanthine  (0,125%); cantaxanthine (0,068%); dan karotenoid dari spirulina (0,3%) ditemukan berperan penting dalam peningkatan jumlah induk matang gonad sebesar 86,75% pada udang betina dan sebesar 82,3% pada udang jantan (Laining et  al.,  2016a).  Kadar  total  karotenoid  tersebut  juga meningkat dalam oosit dan hepatopankreas masing- masing  sebesar  554,6  dan  558,1  µg/g  lebih  tinggi dibandingkan dalam daging dan karkas yang berturut- turut hanya sebesar 249,3 dan 55,8 µg/g. P engkayaan pakan komersil dengan kombinasi lemak (minyak ikan 5% dan minyak zaitun 1%) juga dilaporkan cenderung meningkatkan pertumbuhan dan meningkatkan total asam lemak dalam daging dan hepatopankreas udang windu dibandingkan pakan komersil tanpa pengayaan lemak tersebut (Laining et al., 2016b).
Nutrien  lainnya  yang  dilaporkan  juga  sangat diperlukan dalam masa pertumbuhan dan reproduksi ikan dan krustase adalah vitamin C dan E. Vitamin ini tidak dapat disintesis di dalam tubuh sehingga harus diperoleh  melalui  asupan makanan.  Penelitian  pada udang kuruma (Marsupenaeus japonicus) menunjukkan bahwa vitamin C maupun vitamin E meningkatkan daya tetas dan tingkat metamorfosis  larva dari naupli ke zoea seiring dengan meningkatnya dosis kedua vita- min tersebut yaitu 0, 500, dan 1.000 mg ascorbic acid/ kg  pakan  dan  0,  300,  dan  600  mg  -tocopherol/kg pakan, dan interaksi antara vitamin C dan E dideteksi pada  kedua  variabel  tersebut  (Binh  et  al.,  2012). Selanjutnya,  pada  fase  maturasi  udang  galah (Macrobrachium  rosenbergii)  dilaporkan  bahwa suplementasi vitamin C hingga 918 µg/g dan vitamin E  hingga  899  µg/g  meningkatkan  konsentrasi  asam askorbat  dan  -tocopherol  dalam  oosit  dan  larva seiring  dengan  meningkatnya  kadar  kedua  vitamin tersebut dalam pakan, namun tidak berpengaruh nyata pada frekuensi pemijahan dan fekunditas udang (Cavalli et al., 2003). Paibulkichakul et al. (2008) menggunakan vitamin  E  sebanyak  100  mg/kg  pakan  untuk  udang windu fase prematurasi. Demikian juga Laining et al. (2014) menggunakan konsentrasi vitamin C sebanyak

## Pemeliharaan  Hewan  Uji  dan  Pengumpulan Data

## Pemeliharaan  udang  di  tambak  beton
Udang windu hasil seleksi ditebar dan dipelihara pada  dua  petak  tambak  masing-masing  berukuran 1.000 m 2 per petak. Hewan uji berupa udang windu fase prematurasi dengan bobot awal rata-rata 43,1 ± 5,1  g  untuk  betina  dan  41,9  ±  4,4  g  untuk  jantan diperoleh dari hasil budidaya. Udang tersebut ditebar dengan kepadatan 100 ekor per tambak (0,1 ekor/m 2 ) dengan  rasio  jantan  :  betina  masing-masing  4:6. Pemberian pakan uji dilakukan empat kali sehari pada pagi,  siang,  sore,  dan  malam  hari  dengan  dosis  3% dari bobot biomassa per hari selama tiga bulan masa pemeliharaan.
Pengamatan pertumbuhan udang dilakukan setiap bulan. Setelah pemeliharaan selama dua bulan dan tiga bulan  (saat  panen)  udang  di  tambak,  dilakukan pengambilan cairan haemolimp untuk analisis jumlah total sel hemosit dan aktivitas phenoloksidase dalam tubuh  sebagai  indikator  respons  imun  udang berdasarkan metode yang dilakukan oleh Tenriulo et al.  (2014).  Untuk  mempertahankan  mutu  air  tetap dalam kondisi optimal, maka dilakukan pergantian air setiap tiga hari sebanyak 10%-20%, serta penggunaan
kincir  pada  malam  hari.  Selama  pemeliharaan, dilakukan pengukuran beberapa peubah kualitas air secara harian dan mingguan seperti salinitas (27-36 ppt),  suhu  air  (26,14°C-32,12°C);  pH  (8,29-8,50); amoniak  nitrogen  total  (TAN:  0,0600-0,3637  mg/L); nitrit (0,0056-0,0077 mg/L); dan alkalinitas (90-116 mg/ L). Nilai kualitas air tersebut cukup optimum untuk pertumbuhan dan kehidupan udang windu.

## Pemeliharaan  udang  di  bak  pematangan gonad
Setelah tiga bulan pemeliharaan di tambak, udang sudah mencapai fase akhir prematurasi (calon induk) dengan ukuran bobot > 80 g untuk betina dan > 70 g  untuk  jantan.  Udang  tersebut  dipanen  dan dipindahkkan  ke  bak  maturasi  (bak  beton)  untuk dimatangkan gonadnya di hatchery. Proses pematangan gonad induk udang ini terdiri atas dua bagian:
(i) Induk dimatangkan gonadnya untuk diambil sampel gonad dan hatinya untuk menghitung gonad somatic index (GSI), hepato somatic index (HSI), dan jumlah sperma dalam spematofora
(ii) Induk  dimatangkan  gonadnya  untuk  dipijahkan, ditetaskan  telurnya,  dan  menghasilkan  nauplii (larva)
Tabel 1. Komposisi bahan dan komposisi proksimat pakan uji (% bahan kering)
Table 1. Ingredients and proximate composition of test diets (% dry matter)
PS PK 67.4 67.4 14.2 14.2 9.32 9.54
4.8 4.8
3 3 1 1 0.2 0 0.02 0 0.06 0.06 - Protein kasar (Crude protein ) 45.2 44.9 - Lemak (Lipid ) 10.7 10.5 - Serat kasar (Crude fibre ) 1.7 1.7 - Abu (Ash ) 9.6 9.7 - BETN (NFE ) 1) 32.8 33.2 - Energi total (Gross energy ) (MJ/kg) 2) 18.3 18.3 - Vitamin C (mg/kg) 406.1 Tidak terdeteksi Not detected - Vitamin E (mg/kg) 286.3 181.6
Komposisi proksimat pakan (Proximate composition of test diets ):
Bahan (Ingredients )
Pakan udang komersial Commercial shrimp-feed
Tepung ikan (Fish meal ) Tepung terigu (Wheat flour ) Wheat gluten Minyak ikan (Fish oil ) Minyak olive (Olive oil ) Vitamin C (Stay C )
Vitamin E
Carophyll pink
Pada bagian (i), induk udang dipelihara dalam dua bak beton masing-masing berkapasitas 20 m 3 . Induk yang terseleksi untuk dimatangkan gonadnya masing- masing 40 ekor untuk perlakuan PS dan 40 ekor untuk perlakuan PK (masing-masing 20 ekor betina dan 20 ekor jantan). Pada proses maturasi, udang diberi pakan sebanyak 3% dari total biomassa per hari berupa pakan uji 50% (pelet) dan pakan segar 50% (cumi-cumi dan hati  sapi).  Induk  yang  telah  memiliki  tingkat kematangan gonad (TKG) III-IV (berdasarkan kriteria oleh  Diwan  et  al.,  2009)  dibedah,  diambil  dan ditimbang gonad dan hepatopankreasnya untuk udang betina.  Sementara pada  induk jantan,  spermatofora dari  induk  dikeluarkan  mengikuti  metode  yang digunakan  Lante  &  Laining  (2016)  dengan menggunakan  transformer  elektrik  yang  dilengkapi dua elektroda. Kedua elektroda ditempelkan dekat kaki renang ke-5 dengan rangsangan aliran listrik 4-20 volt AC  sehingga  spematofora  keluar.  Spermatofora ditimbang,  dimasukkan  ke  dalam  tabung  dan ditambahkan 3,0 mL larutan Ca2 + bebas garam, serta dihomogenkan  dengan  homogenizer.  Spermatozoa diambil sebanyak 0,1 mL dan dimasukkan ke dalam hematocitometer untuk dihitung di bawah mikroskop.
Pada  bagian  (ii),  induk  udang  dipelihara  dalam empat bak beton masing-masing berkapasitas 3 m 3 . Bak  dilengkapi  dengan  sistem  air  mengalir.  Setiap perlakuan pakan uji (PS dan PK) masing-masing terdiri dari dua unit bak (ulangan). Induk udang dipelihara dengan  kepadatan  14  ekor  per  bak  dengan perbandingan tujuh ekor induk betina dan tujuh ekor induk  jantan.  Setiap  individu  udang  diberi  penanda (tagging) pada bagian tangkai mata dan karapaks udang. Induk betina yang telah ganti kulit lalu diinseminasi (mengikuti metode yang digunakan Lante & Laining, 2016)  dengan  spermatofora  dari  jantannya,  lalu diablasi, dan selanjutnya diamati perkembangan go- nad hingga pemijahannya selama 40 hari pemeliharaan di  bak  beton.  Pengamatan  harian  perkembangan kematangan gonad dilakukan setelah tujuh hari ablasi setiap pukul 16.30-17.00 WITA. Induk matang (TKG- III—IV) dipindahkan ke bak pemijahan volume 200 L. Jumlah induk yang memijah dihitung, dan selanjutnya dikembalikan  ke  bak  pematangan.  Telur  yang dipijahkan diambil sampelnya yang representatif untuk dihitung jumlahnya. Penetasan telur dilakukan dalam bak  pemijahan  setelah  dilakukan  pembersihan  dan pensucihamaan telur dengan iodin. Telur yang menetas menjadi nauplii diambil sampelnya yang representatif dan dihitung untuk mengetahui daya tetas telur dan jumlah produksi nauplii.

## Peubah yang  diamati
Dalam mengevaluasi efek dari pemberian pakan uji, maka dilakukan pengamatan terhadap beberapa peubah yaitu:
 Laju  pertumbuhan  spesifik  udang  dihitung berdasarkan rumus berikut (Xavier et al., 2016):
di mana:
Wt = rata-rata bobot akhir, Wo = rata-rata bobot awal, dan t = periode pemeliharaan (hari)
 Sintasan
 Pengamatan jumlah sperma dilakukan berdasarkan metode yang digunakan oleh Laining et al. (2014).


 Tingkat pemijahan merupakan persentase jumlah pemijahan  induk  betina  dari  jumlah  induk  yang diinseminasi.
 Fekunditas telur yaitu jumlah telur yang dihasilkan oleh  seekor  induk  pada  setiap  pemijahan  (Yano et al., 1996), yang dihitung dengan rumus:
di mana:
F = fekunditas telur (butir telur)
Vb = volume air di dalam bak pemijahan (L) Vg = volume air sampel dalam beaker glass (mL)
n = jumlah telur sampel yang ada di dalam beaker glass (butir)
 Daya tetas telur dihitung berdasarkan persentase jumlah telur yang menetas menjadi nauplii terhadap jumlah produksi telur
 Diameter  telur,  total  produksi  telur,  dan  total produksi nauplii per bak
Pada analisis proksimat pakan uji, sampel yang rep- resentative dianalisis berdasarkan AOAC (1999) berupa: bahan kering (DM), contoh dikeringkan dengan oven
  100% x t LnWo LnWt (%/hari) SGR   100 x penelitian awal udang Jumlah penelitian akhir udang Jumlah (%) SR  100% x udang tubuh l bobot tota gonad bobot index somatic Gonad  100% x udang tubuh l bobot tota reas hepatopank bobot index somatic Hepato    n x Vg : Vb F 
pada suhu 105°C hingga bobotnya konstan, protein kasar  dianalisis dengan  metode micro-Kjeldahl,  dan lemak ditentukan secara gravimetrik dengan ekstraksi chloroform: methanol pada sampel, serat kasar dengan pemanasan  yang  disertai  pencucian  asam  dan  basa secara bergantian, dan abu dengan pembakaran dalam tanur pada suhu 550°C selama 24 jam. Kandungan vi- tamin C dan E dalam pakan dianalisis di Laboratorium Saraswanti, Bogor menggunakan high performance liq- uid chromatography (HPLC).
Peubah performansi pertumbuhan (sintasan dan laju pertumbuhan),  respons  imun  (jumlah  total  hemosit dan aktivitas phenoloksidase) pada pemeliharaan di tambak,  serta  beberapa  peubah  reproduksi  seperti jumlah  sperma,  GSI,  dan  HIS  dianalisis  secara deskriptif.  Sedangkan  tingkat  pemijahan  induk, fekunditas telur, diameter telur, dan jumlah produksi telur, serta jumlah produksi nauplii dianalisis dengan uji  T.

## HASIL DAN BAHASAN

## Performansi  Pertumbuhan  dan  Respons  Imun Udang Windu di Tambak Beton
Performansi pertumbuhan dan respons imun udang windu selama pemeliharaan di tambak beton disajikan pada  Tabel  2.  Pada  Tabel 2  terlihat  bahwa  nilai  laju pertumbuhan spesifik udang untuk kedua perlakuan
cukup tinggi (1,09%-1,12%/hari untuk betina, dan 0,77%- 0,88%/hari  untuk  jantan),  meskipun  hewan  uji  yang digunakan  sudah  memasuki  fase  prematurasi.  Laju pertumbuhan spesifik udang windu yang diberi pakan uji  dengan  penambahan  vitamin  C  dan  vitamin  E cenderung  lebih  tinggi  dibandingkan  udang  windu yang  diberi  pakan  uji  tanpa  penambahan  vitamin  C dan vitamin E, baik udang windu betina maupun udang windu jantan. Hal ini menunjukkan bahwa penambahan vitamin  C  dan  vitamin  E  dalam  pakan  tersebut memberikan respons positif  terhadap pertumbuhan udang windu fase prematurasi di tambak. Vitamin C merupakan salah satu jenis vitamin esensial bagi ikan dan krustase yang berperan penting dalam reaksi di dalam sel, terkait dengan kemampuannya dalam proses oksidasi, dan reduksi yang reversible (Conklin, 1997), terlibat dalam pertumbuhan, biosintesis hormon ste- roid dan kolagen, meningkatkan respons imum dan toleransi  terhadap  racun  dan  stressor  lingkungan (Waagbo, 2010; NRC, 2011). Penambahan vitamin C dalam  pakan  telah  dilaporkan  dapat  meningkatkan pertumbuhan, sintasan, efisiensi pakan, laju moulting, respons imun, dan toleransi terhadap stres lingkungan pada udang penaeid (Hsu & Shiau, 1997; Lee & Shiau, 2002; Celada et al., 2013).  Demikian juga  vitamin E memiliki  sifat  reduksi  yang  tinggi  yang  dapat melindungi  zat  penting  dari  oksidasi  secara  in  vivo dan  berperan  penting  dalam  pemeliharaan  proses
  n x Vg : Vb F 
Tabel 2. Performansi pertumbuhandan respons imun udang windu setelah pemeliharan selama tiga bulan di tambak beton
Table 2. Performance of growth and immune response of tiger shrimp after cultured for 3 months in a concrete pond
PS PK Bobot akhir rata-rata Average final body weight  (g) Betina (Female ): 119.1 ± 13.8 Jantan (Male ): 90.7 ± 8.7 Betina (Female ): 113.9 ± 12.4 Jantan (Male ): 84.9 ± 8.8 Laju pertumbuhan spesifik (%/hari) Specific growth rate (%/day) Betina (Female) : 1.12 Jantan (Male ): 0.88 Betina (Female ): 1.09 Jantan (Male): 0.77 Sintasan Survival rate  (%) 98.0 96.0 Bulan ke-2 (The 2 nd months ) 4.93 ± 0.52 3.67 ±  0.47 Bulan ke-3 (The 3 rd months ) 0.84 ± 0.76 0.56 ± 0.41 Bulan ke-2 (The 2 nd months ) 0.11 ± 0.01 0.10 ± 0.02 Bulan ke-3 (The 3 rd months ) 0.11 ± 0.08 0.11 ± 0.03 Aktivitas phenoloksidase Phenoloxidase activity  (unit)
Jumlah hemosit total (x 10 7 sel/mL) Number of total hemocyte (x 10 7 cell/mL) Peubah Variables Pakan uji (Test diet )
metabolisme normal dan fungsi fisiologis dalam tubuh (Sen  et  al.,  2006).  Selanjutnya,  Gao  et  al.  (2012) melaporkan  adanya  peningkatan  performansi pertumbuhan yang nyata pada ikan red sea bream yang diberi  pakan  dengan  suplementasi  vitamin  E dibandingkan yang tidak diberi vitamin E. Penambahan vitamin  E  dalam pakan  juga  meningkatkan  efisiensi pakan karena vitamin E berperan dalam peningkatan aktivitas enzim pencernaan protease dan lipase (He et al., 2017).
Setelah tiga bulan pemeliharaan di tambak beton, sintasan udang windu yang diberi pakan uji dengan penambahan vitamin C dan vitamin E relatif lebih tinggi (98,0%) dibandingkan sintasan udang yang diberi pakan uji tanpa penambahan vitamin C dan vitamin E (96,0%). Demikian  juga  kandungan  total  hemosit  dalam haemolimp  rata-rata  cenderung  lebih  tinggi  pada udang yang diberi pakan uji dengan penambahan vita- min C dan vitamin E dibandingkan pada udang yang diberi pakan uji tanpa penambahan vitamin C dan vi- tamin E, baik pada saat setelah dua bulan pemeliharaan maupun pada saat setelah tiga bulan pemeliharaan di tambak. Pada saat setelah dua bulan pemeliharaan di tambak, rata-rata nilai aktivitas phenoloksidase dalam haemolimp juga cenderung lebih tinggi pada udang yang diberi pakan uji dengan penambahan vitamin C dan vitamin E dibandingkan pada udang yang diberi pakan uji tanpa penambahan vitamin C dan vitamin E. Pada saat setelah tiga bulan pemeliharaan di tambak, nilai  aktivitas  phenoloksidase  dalam  haemolimp tampak berdinamika naik dan rata-rata cenderung lebih rendah  pada  udang  yang  diberi  pakan  uji  dengan penambahan vitamin  C dan vitamin  E dibandingkan pada udang yang diberi pakan uji tanpa penambahan vitamin  C  dan  vitamin  E.  Nilai  total  hemosit  dan aktivitas  phenoloksidase  yang  didapatkan  pada penelitian ini lebih tinggi daripada yang didapatkan oleh Tenriulo et al. (2014) pada udang windu transveksi yang  diuji  tantang  dengan  Vibrio  harveyi  yaitu  total hemosit  1,18-1,94  (x  10 7 sel/mL)  dan  aktivitas phenoloksidase 0,03-0,071 unit. Total hemosit dalam hamolimp berperan membantu inang untuk bereaksi melawan bahan asing dan berbagai respons terhadap infeksi,  sehingga  total  hemosit  udang  yang  rendah rentan terhadap patogen sebaliknya total hemosit yang tinggi  dapat  meningkatkan  status  kesehatan organsime  karena  berpeluang  terbentuknya  sel-sel fagositik yang sangat berperan dalam mengendalikan serangan  mikroorganisme  (Johansson  et  al.,  2002). Sementara  phenoloksidase  merupakan  salah  satu bentuk pertahanan tubuh humoral krustase (Fagatao et  al.,  2011).  Menurut  Braak  (2002),  kinerja  sistem pertahanan tubuh terpusat pada sistem proPO. Enzim proPO dikonversi menjadi enzim fenoloksidase (PO) dengan  bantuan  enzim  yang  mengaktifkan
profenoloksidase.  Enzim  PO  mengkatalisis  oksidasi fenol  menjadi  kuinon,  yang  selanjutnya  akan menyebabkan terjadinya melanisasi ditandai dengan pembentukan  warna  bercak  gelap  di  bawah  kulit. Enzim ini  akan merangsang  aktifnya reaksi  biologis seperti fagositosis, enkapsulasi, dan nodulasi sebagai pertahanan  inang  (Rodriquez  &  Le  Moullac,  2000). Secara umum, sintasan udang windu yang didapatkan pada akhir pemeliharaan di tambak tergolong tinggi. Hal ini ditunjang oleh pakan dan kualitas air yang cukup mendukung  bagi  sintasan  dan  pertumbuhan  udang windu.

## Performansi  Reproduksi  Udang  Windu  di  Bak Pematangan
Performansi  reproduksi  udang  windu  selama  di tambak  secara  visual  belum  tampak,  yaitu  belum mengalami  perkembangan  kematangan  gonad  dan belum  ditemukan  adanya  udang  betina  yang  telah mengalami  perkawinan  secara  alami  di  tambak. Sementara performansi reproduksi udang windu yang tidak  diinseminasi  selama  pemeliharaan  di  bak pematangan  disajikan  pada  Tabel  3.  Pada  Tabel  3 tersebut terlihat bahwa jumlah sel sperma dalam setiap kantong spermatofor pada induk udang jantan yang diberi pakan uji dengan penambahan vitamin C dan vitamin E rata-rata sebanyak 38,96 x 10 6 sel; cenderung lebih tinggi daripada jumlah  sel sperma pada induk udang jantan yang diberi pakan uji tanpa penambahan vitamin  C dan  vitamin E  rata-rata  sebanyak 37,72  x 10 6 sel.  Vitamin  E  berperan  dalam  penguatan, peningkatan  dan  perkembangan  organ  reproduksi, mencegah  degenerasi  spematogenium,  serta meningkatkan  sintasan  spermatid  (Cheah  &  Yang, 2011).  Vitamin  E  merupakan  salah  satu  molekul antioksidan  yang  paling  penting  dalam mempertahankan  stres  oksidatif  dan  mencegah produksi lemak peroksida yang bersifat radikal bebas, karena  radikal  bebas  ini  dapat  menyebabkan infertilitas, morfologi sperma yang tidak normal, serta jumlah sperma yang rendah. Demikian juga vitamin C berperan penting dalam organ reproduksi, dan asupan vitamin  C  berhubungan  erat  dengan  jumlah  dan motilitas  sperma,  serta  mencegah  sperma  dari kerusakan oksidatif DNA (Begum et al., 2009). Jumlah sel sperma induk udang jantan yang didapatkan pada penelitian ini lebih rendah dibandingkan dengan yang didapatkan oleh Laining et al. (2014) yaitu sebanyak 63,8-91,6 x 10 6 sel dari induk udang jantan yang diberi pakan mengandung tepung cacing laut.
Dalam mempercepat pematangan induk udang di bak beton yang tidak diinseminasi, maka pada induk betina  dilakukan  ablasi  mata.  Selama  pemeliharaan tersebut, didapatkan induk betina yang berkembang gonadnya hingga tingkat III-IV sebanyak 16 ekor pada
udang yang diberi pakan uji dengan penambahan vita- min C dan vitamin E, lebih banyak dibandingkan pada induk udang yang diberi pakan uji tanpa penambahan vitamin  C  dan  vitamin  E  yaitu  10  ekor.  Nilai  gonad somatic index (GSI) dan hepato somatic index (HIS) pada induk  udang  betina  yang  diberi  pakan  uji  dengan penambahan vitamin C dan vitamin E juga cenderung lebih tinggi berturut-turut sebesar  4,97% dan 3,15% dibandingkaan pada induk udang windu yang diberi
pakan uji tanpa penambahan vitamin C dan vitamin E yaitu  berturut-turut  4,47%  dan  3,07%.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  aktivitas metabolisme  ke  arah perkembangan gonad udang juga sedikit meningkat oleh adanya penambahan vitamin C dan E. Menurut Cavalli et al. (2003) vitamin C dan E sangat berperan dalam  proses  vitellogenesis,  dan  vitellogenin  pada udang  sebagian  besar  diproduksi  pada  bagian hepatopankreas dan ovari (Quackenbush, 1989).
Tabel 3. Performansi reproduksi udang windu yang tidak diinseminasi selama pemeliharaan di bak pematangan
Table 3. Reproductive performance of not inseminated tiger shrimp during rearing  in the maturation tank
PS PK Jumlah sperma/spermatofor (x10 6 sel) Number of sperm/spermatophore (x10 6 cell) 38.96 ± 30.59 (n=10) 37.72 ± 27.61 (n=9) TKG induk betina (akhir) Female gonad stages (final) III-IV (n=16) III-IV (n=10) GSI  (%) 4.97 ± 1.36 (n=16) 4.47 ± 1.63 (n=10) HSI  (%) 3.15 ± 0.50 (n=16) 3.07 ± 0.48 (n=10)
Peubah
Variables
Pakan uji (Test diet )
Tabel 4. Rata-rata performansi reproduksi udang windu betina yang diinseminasi selama pemeliharaan di bak pematangan
Table 4. The average of reproductive performance of inseminated tiger shrimp during rearing in the matura- tion tank
Keterangan: Nilai dalam baris yang sama diikuti oleh superscript yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata (P>0,05) Note: Means  in  the same  row followed  by the  same  superscript  are not  significantly  different  (P>0.05))
PS PK Jumah induk betina per bak (ekor) Number of female per tank (ind.) 7 7 Jumlah induk betina diinseminasi Number of  female inseminated  (%) 78.5±10.0 a 85.7 ± 20.2 a Jumlah induk memijah Number of female spawned  (%) 61.7 ± 30.6 a 75.7 ± 6.1 a Jumlah fekunditas telur per pemijahan (butir) Egg fecundity per spawned (egg) 131,308 ± 5,032 a 88,621 ±  58,814 a Produksi telur per bak (butir) Total egg production pertank (egg) 464,916 ± 209,417 a 377,999 ± 142,833 a Diameter telur Egg diameters (µm) 280.3 ± 2.4 a 276.1 ± 3.7 a Kisaran daya tetas telur Hatching rate ranges  (%) 0-38.0 a 0-21.0 a Kisaran jumlah produksi nauplii per bak (ekor) Nauplii production ranges per tank (ind.) 0-48,100 a 0- 8,500 a Peubah
Variables Pakan uji (Test diet )
Hasil  pengamatan performansi  reproduksi  induk udang windu yang diinseminasi disajikan pada Tabel 4. Meskipun setiap bak berisi tujuh ekor induk betina, namun tidak semua induk betina tersebut mengalami ganti kulit selama pengamatan berlangsung, dan hanya induk betina yang mengalami ganti kulit (kulit lembek) yang dapat diinseminasi. Hal ini menyebabkan hanya 78,5% induk betina yang diinseminasi pada perlakuan PS  dan  85,7%  induk  betina  yang  diinsemiasi  pada perlakuan PK, dan nilai pada kedua perlakuan tersebut tidak berbeda nyata (P>0,05). Demikian juga beberapa variabel  kinerja  reproduksi  lainnya  seperti  jumlah induk memijah, fekunditas telur, jumlah produksi telur, diameter telur, daya tetas telur, dan jumlah produksi nauplii,  semuanya  tidak  menunjukkan  adanya perbedaan  yang  nyata  (P>0,05)  di  antara  kedua perlakuan  tersebut.  Namun  demikian,  berdasarkan data tersebut tampak bahwa dari sekian banyak variabel yang diamati, umumnya memberikan indikasi bahwa performansi  reproduksi  udang  windu  yang  diberi pakan dengan penambahan vitamin C dan vitamin E dalam pakan uji cenderung lebih tinggi dibandingkan pada udang yang diberi pakan tanpa penambahan vita- min C dan vitamin E. Vitamin C merupakan salah satu komponen  nutrisi  esensial  yang  diperlukan  dalam pakan  dan  berperan  penting  dalam  peningkatan frekuensi pemijahan, kualitas telur, dan sperma udang penaeid  (Cahu  et  al.,  1995;  Wouters  et  al.,  1999; Wouters  et  al.,  2001).  Vitamin  E  juga  berperan meningkatkan  kualitas  telur  hewan  akuatik  seperti dilaporkan pada ikan gilthead sea bream (Izquierdo et al., 2001) dan rainbow trout (Bilguven, 2014). Usman et al. (2019) juga melaporkan bahwa udang windu fase prematurasi  yang  diberi  pakan  komersial  yang dimodifikasi  dengan  suplementasi  vitamin  C  dan  E memiliki  kandungan  asam  lemak  arachidonic  (ARA), docosahexaenoic (DHA), dan eicosapentaenoic (EPA) pada hepatopankreas dan oosit yang lebih tinggi (indikasi kualitas  induk  yang  lebih  baik)  dibandingkan  pada hepatopankreas  dan  oosit  udang  windu  fase prematurasi  yang  diberi  pakan  tanpa  suplementasi vitamin  C  dan  E.  Vitamin  C  dan  vitamin  E  secara sinergis mampu mencegah low density lipoprotein (LDL) teroksidasi, berfungsi sebagai antioksidan, utamanya pada membrane sel atau tepatnya pada lipid membran sel, sirkulasi LDL, hati, dan jaringan adrenalin (Combs, 1992).
Telur-telur yang diproduksi oleh induk udang windu tambak ini umumnya tidak fertil baik dari induk yang diberi pakan uji dengan penambahan vitamin C dan vitamin  E  maupun  dari  induk  yang  diberi  pakan  uji tanpa penambahan vitamin C dan vitamin E. Lante & Laining (2016) melaporkan bahwa induk udang windu tambak  sangat  sulit  kawin  secara  alami,  sehingga
diperlukan  inseminasi  buatan.  Pada  penelitian  ini, beberapa induk udang windu tambak tersebut telah diinseminasi  buatan,  namun  telur  yang  dihasilkan umumnya  masih  belum  fertil.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  metode  inseminasi  buatan  yang  diterapkan masih perlu diperbaiki. Beberapa hal yang masih perlu perbaikan dalam metode inseminasi ini antara lain: (i) memastikan  posisi  peletakan  spermatofora  dalam telicum induk betina yang tepat, (ii) adanya jaminan spermatofara  tidak  terlepas  dari  telicum  sebelum terjadi pembuahan, (iii) induk betina tidak mengalami stres yang berlebihan selama proses inseminasi, dan lain-lain. Rendahnya tingkat fertilitas dan daya tetas telur yang dihasilkan dari pemihajan induk udang windu hasil budidaya di tambak ini, menyebabkan produksi nauplii dari kedua perlakuan pakan uji masih rendah.

## KESIMPULAN
Udang windu fase prematurasi yang diberi pakan dengan penambahan vitamin  C (mengandung 406,1 mg/kg pakan) dan vitamin E (mengandung 286,3 mg/ kg  pakan)  memiliki  performansi  pertumbuhan  dan reproduksi,  serta  respons  imun  yang  relatif  lebih tinggi dibandingkan udang yang diberi pakan uji tanpa penambahan  vitamin  C  dan  vitamin  E.  Penambahan vitamin C dan E dalam pakan cenderung meningkatkan performansi  pertumbuhan,  dan  reproduksi  udang windu.

## DAFTAR  ACUAN
Alava,  V.R.,  Kanazawa,  A.,  Teshima,  S.,  &  Koshio,  S.
(1993).  Effect  of  dietary  phospholipid  and  n-3 highly  unsaturated  fatty  acids  on  ovarian  deve- lopment  of  Kuruma  prawn.  Nippon  Suisan Gakkaishii, 59, 345-351.
AOAC International. (1999). Official methods of analy- sis. 16 th ed.  USA:  Gaithersberg,  Maryland.  Asso- ciation  of  Official  Analytical  Chemists  Interna- tional, 1141 pp.
Begum,  H.,  Moniruddin,  A.B.M.,  &  Nahar,  K.  (2009). Environmental and nutrition aspect in male infer- tility. Journal of Medicine, 10, 16-19.
Bilguven, M. (2014).  The effects of vitamin  A and E supplementation  into  the  female  broodstock diets of rainbow trout (Oncorhyinchus mykiss, W.) on the fecundity and egg quality parameters. Jour- nal of Animal and Veterinary Advances, 13(19), 1120- 1125.
Binh,  T.N.,  Koshio,  S.,  Sakiyama,  K.,  Harakawa,  S., Gao, J., Mamauag, R.E., Ishikawa, M., & Yokoyama, S. (2012). Effects of dietary vitamin C and E and their  interaction  on  reproductive  performance, larval quality and tissue vitamin contents in kuruma
shrimp, Marsupenaeus japonicus Bate. Aquaculture, 334-337, 73-81.
Braak, K.van den. (2002). Haemocytic defence in black tiger  shrimp  (Penaeus  monodon).  Ph.D.  Thesis. Nedherlands: Wageningen University, 159 pp.
Cahu, C.L., Cuzan, G., & Quazuguel, P. (1995). Effect of highly unsaturated fatty acid, alpha-tocopherol and ascorbic acid in broodstock diet on egg com- position and development of Penaeus indicus. Com- parative Biochemistry Physiology, 112(3-4), 417-424.
Cavalli,  R.O.,  Batista,  F.M.M.,  lavens,  P.,  Sorgeloos, P.,  Nelis,  H.J.,  &  De  Leenheer,  A.P.  (2003).  Effect of dietary supplementation of vitamin C and E on maternal  performance  and  larval  quality  of  the prawn  Macrobrachium  rosenbergii.  Aquaculture, 227(1-4), 131-146.
Celada, J.D., Fuertes, J.B., Carral, J.M., Saez-Royuela, M., Gonzalez, A., & Gonzalez-Rodriquez, A. (2013). Effect of vitamin C inclusion in practical diets on sur vival  and  growth  of  juvenile  crayfish (Pacifastacus leniusculus Dana, Astacidae) from the onset of exogenous feeding. Aquaculture Nutrition, 19, 110-116.
Cheah,  Y.  &  Yang,  W.  (2011).  Function  of  essential nutrition  for  high  quality  spermatogenesis. Advances in Bioscience and Biotechnology, 2, 182-197.
Combs,  G.F.Jr.  (1992).  The  vitamin:  Fundamental aspects  in  nutrition  and  health.  New  York:  Aca- demic Press, 525 pp.
Conklin,  D.E.  (1997).  Vitamin.  In  D’Abramo,  L.R., Conklin, D.E., & Akiyama, D.M. (Eds.). Crustacean Nutrition — Advances in Word Aquaculture VI. USA: Los Angeles, Baton Rouge. World Aquacuture So- ciety, p. 123-149.
Diwan, A.D., Joseph, S., & Ayyappan, S. (2009). Physio- logy  of  reproduction,  breeding  and  culture  of tiger  shrimp  Penaeus  monodon  (Fabricius).  Delhi. India: Narendera Publishing House, 292 pp.
Fagatao, F.F., Kondo, H., Aoki, T., & Higono, I. (2011). Prophenoloxidase has a role in innate immunity in  penaeid  shrimp.  In  Bondad-Reantoso,  M.G., Jones, J.B., Corsin, F., & Aok. T. (Eds.). Diseases in Asia Aquaculture VII. Selangor, Malaysia: Fish Health Section, Asian Fisheries  Society, p. 171-176.
Gao, J., Koshio, S., Ishikawa, M., Yokoyama, S., Maung, R.E.P., & Han, Y. (2012). Effect of dietary oxidized fish oil with vitamin E supplementation on growth performance and reduction of lipid peroxidation in  tissues  and  blood  of  red  sea  bream,  Pagrus major. Aquaculture, 356-357, 73-79.
Guillaume,  J.,  Kaushik,  S.,  Bergot,  P.,  &  Metailler,  R.
(1999). Nutrition and feeding of fish and crusta- ceans. UK: INRA, IFRAMER, Springer, 408 pp.
Halver, J.E. (2002). The vitamins. In Halver, J.E. & Hardy, R.W.  (Eds.).  Fish  Nutrition.  New  York:  Academic Press, p. 453-504.
He,  M.,  Wan,  K.,  Liang,  X.,  Fang,  J.,  Geng,  Y.,  Chen, Z., Pu, H., Hu, Y., Li, X., & Liu, L. (2017). Effect of dietary vitamin E on growth performance as well as  intestinal  structure  and  function  of  channel catfish  (Ictalurus  punctatus,  Rafinesque,  1818). Experimental  and  Therapeutic  Medicine,  14,  5703- 5710.
Hoa, N.D.  (2009). Domestication  of black  tiger  shrimp (Penaeus monodon) in recirculation systems in Viet- nam.  Ph.D.  Thesis.  Belgium:  GhentUniversity.
Hsu,  T.S.  &  Shiau,  S.Y.  (1997).  Comparison  of L-ascorbyl-2-polyphosphate with L-ascorbyl-2-sul- fate  in  meeting  vitamin  C  requirement  of  juve- nile  grass  shrimp,  Penaeus  monodon.  Fisheries Science, 63(6), 958-962.
Izquierdo,  M.S.,  Fernandes-Palacios,  H.,  &  Tacon, A.G.J.  (2001).  Effect  of  broodstock  nutrition  on reproduction  performance  of  fish.  Aquaculture, 197, 25-42.
Johansson,  M.W.,  Keyser,  P.,  Sritunyalucksana,  K.,  & Soderhall, K. (2002). Crustacean haemosytes and haemotopoiensis. Aquaculture, 191, 45-92.
Laining, A., Usman, & Trismawanti, I. (2016a). Dietary carotenoid  in  prematuration  diet  enhanced  go- nadal maturation and total carotenoid in several tissues of pond reared black tiger shrimp (Penaeus monodon). Indonesia: Surabaya, 26-29 April 2016. Book of Abstract of Asian Pacific Aquaculture 2016.
Laining,  A.,  Rachmansyah,  Usman,  Palinggi,  N.N.,
Kamaruddin,  L ante,  S.,  Trismawanti  I., Santiadjinaata,  W.,  Tamsil,  Rosni,  Umar,  & Ramadhan. (2016b). Formulasi pakan prematurasi udang windu. Laporan Tahunan. Balai Renelitian dan  Pengembangan  Budidaya  Air  Payau,  Maros, 33 hlm.
Laining, A., Usman, & Rachman Syah. (2014). The use seaworm  meal  in  maturation  diet  as  partial substitution  of  fresh  diet  for  pond  reared  tiger shrimp broodstoock. IndonesianAquaculture Jounal, 9(2), 123-132.
Lante,  S.  &  Laining,  A.  (2016).  Aplikasi  inseminasi buatan pada udang windu, Penaeus monodon alam menggunakan sumber  dan jumlah  spermatofora yang  berbeda.  Jurnal  Riset  Akuakultur,  11(3), 271-280.
Lee, M.H. & Shiau, S.Y. (2002). Dietary vitamin C and its derivatives affect immune responses in grass shrimp, Penaeus monodon. Fish Shellfish Immunol., 12, 119-129.
National Research Council (NRC). (2011). Nutrient re- quirements of fish and shrimp Washington, D.C.: National Academy Press, 392 pp.
Paibulkichakul,  C.,  Piyatiratitivorakul,  S.,  Sorgeloos, P., & Menasveta, P. (2008). Improved maturation of  pond-reared,  black  tiger  shrimp  (Penaeus monodon)  using  fish  oil  and  astaxanthin  feed supplements. Aquaculture, 282, (1-4), 83-89.
Rodriquez,  L.  &  Le  Moullac, G.  (2000).  State  of  the art  immunological  tools  and  health  control  of penaeid shrimp. Aquaculture, 191, 109-119.
Quackenbush,  L.S.  (1989).  Vitellogenesis  in  the shrimp, Penaeus vannamei in  vitro studies  of the isolated  hepatopancreas  and  ovary.  Comparative Biochemistry and Physiology, 94B, 253-261.
Sen, C.K., Khanna, S., & Roy, S. (2006). Tocotrienols: Vitamin E beyond tocopherol. Life Scince, 78, 2088- 2098.
Tenriulo,  A.,  Parenrengi,  A.,  &  Tampangallo,  B.R. (2014).  Respons  imum  udang  windu,  Penaeus monodon,  yang  membawa  marker  DNA  tahan penyakit setelah dipapar bakteri pathogen Vibrio harveyi.  Dalam  Sugama,  K.,  Kusnendar,  E., Rachmansyah, Giri, I N.A., Yuhana, M., Kristanto, A.H.,  Imron,  Radiarta,  I  N.,  &  Dewi,  R.R.S.P.S.
(Eds.). Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur (FITA) 2014. Pusat Penelitian dan Pengembangan Perikanan Budidaya, hlm. 975-983.
Usman,  Kamaruddin,  Laining,  A.,  &  Trismawanti,  I.
(2019). Fatty acid profile of hepatopancreas and oocyte  of  tiger  shrimp,  Penaeus  monodon,  fed modified-commercial  diet  by  supplementing vitamin  C  and  E.  Aquacultura  Indonesiana,  20(1), 15-23.
Waagbo,  R.  (2010).  Review  article:  Water  soluble vitamin in fish ontogeny. Aquaculture Research, 41, 733-744.
Wouters,  R.,  Gomez,  L.,  Lavens,  P.,  &  Calderon,  J. (1999).  Feeding  enriched  Artemia  biomassa  to Penaeus vannamei broodstock its effect on repro- ductive performance and larval quality. Journal of Shellfish Research, 18(12), 651-656.
Wouters,  R.,  Lavens,  P,  Nieto,  J.,  &  Sorgeloos,  P.
(2001). Penaeid shrimp broodstock nutrition: an updated  review  on  research  and  development. Aquaculture, 202, 1-21.
Xavier,  B.,  Jain,  K.K.,  Pal,  A.K.,  Sahu,  N.P., Maheswarudu,  G.,  Gal,  D.,  &  Kumar,  S.  (2016). Mixed feeding schedule of low and high protein in the diet of Labeo rohita (Hamilton) fingerlings, effect  on  growth  performance,  haemato-immu- nological  and  stress  responses.  Aquaculture,  22, 652-663.
Yano,  I.,  Ruchimat,  T., Sutarmat,  T.,  Tridjoko,  Lante, S.,  Hutapea,  J.H.,  Makinouchi,  S.,  &  Kuma,  C. (1996).  Effects  of  vitamin  E  on  maturation  and spawning in giant tiger prawn, Penaeus monodon. Suisanzoshoku, 44(4), 497-502.