## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSAN KULIT BUAH NAGA MERAH (Hylocereus polyrhizus Britton & Rose) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus ATCC 25923
Sri Amalia *) , Sri Wahdaningsih, Eka Kartika Untari Department of Pharmacy, Faculty of Medical, Universitas Tanjungpura, Pontianak Indonesia *)Email: melly.amalia14@yahoo.com

## ABSTRACK
Inappropiate antibiotic use was one of the main reason that caused pathogenic microorganism resistance, leads to ineffective treatment. One of those resistance bacteria is Staphylococcus aureus. The research for discovering new antibiotics can help with this issue. The peel of red dragon fruit (Hylocereus polyrhizus) is one of the plants that has antibacterial compounds. The aim of this research is to prove and determine the minimum inhibitory concentration (MIC) value of n-hexane fraction of red dragon fru it’s peel againts Staphylococcus aureus ATCC 25923. The peel was  maserated  with  chloroform,  then  fractinated  by  n-hexane.  Futhermore,  the  antibacterial  properties  of  the fraction  was  tested  using  Disc  Diffusion  (Kirby-Bauer)  methode  with  40,  20  dan  10  mg/mL  concentrations. Ampisilin used as control positive. Based on the phytochemical screening of the fraction, the n-hexane fraction of the dragon fruit’s peel contain triterphenoid, steroid and alkaloid. Clear zones produced by 40 mg/mL is 12,80 mm and for 2 0 mg/mL is 11,17 mm. Wherea concentration 10 mg/mL didn’t show any inhibitory zone. According to this reasearch, the MIC value of the fraction is  20 mg/mL.
Keywords: Antibacterial, n- Hexane fraction of dragon fruit’s peel, Staphylococcus aureus ATCC 25923.

## I. PENDAHULUAN
Latar Belakang
Antibiotik merupakan senyawa yang digunakan untuk mengatasi infeksi bakteri. Permasalahan  penggunaan  antibiotik  saat  ini  dalam pengobatan  adalah  resistensi  antibiotik.  Penggunaan antibiotik yang tidak sesuai menyebabkan mikroorganisme  pathogen  menjadi  resisten  sehingga pengobatan  infeksi  menjadi  tidak  efektif.  Salah  satu bakteri yang mengalami resistensi adalah Staphylococcus  aureus.  Bakteri Staphylococcus aureus terdapat  pada  saluran  pernapasan  atas, tangan,  dan  rambut.  Bakteri  ini  dapat  menyebabkan keracunan  dan  kerusakan  pada  kulit  (Melliawati, 2009).
Penemuan  senyawa  antibiotik  baru  yang belum mengalami resistensi menjadi salah satu solusi alternatif untuk mengatasi permasalahan ini. Senyawa  tersebut  dapat  diperoleh  dari  tanaman. Tanaman  memiliki  kandungan  senyawa  yang berpotensi  sebagai  antibakteri  dengan  mekanisme aksi  yang  baru  dan  belum  mengalami  resistensi. Tanaman  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri  salah satunya  adalah  buah  naga  merah  (Hylocereus polyrhizus Britton & Rose).
Buah  naga  merah  merupakan  buah  dari  suku Cactaceae,  yang  mulai  banyak  dikonsumsi  di Indonesia.  Buah  naga  merah  secara  berkala  dapat mencegah  dan  mengobati  osteoporosis,  hipertensi, diabetes dan menurunkan kolesterol (Warisno, 2010).
Penelitian  mengenai  khasiat  buah  naga  merah  juga telah  banyak  dilakukan.  Buah  naga  merah  memiliki khasiat  sebagai  antihepatotoksik  (Latif  dkk,  2006), antioksidan  (Wu,  2000)  dan  hipokolesterole-mik (Khalili, 2010). Pemanfaatan buah naga merah hanya terpaku  pada  daging  buahnya,  sedangkan  kulitnya belum dimanfaatkan  secara  optimal.  Penelitian membuktikan  bahwa  fraksi  n-heksan  yang  memiliki kedekatan famili dengan buah naga merah mempunyai aktivitas antibakteri pada Staphylococcus aureus.  Penelitian  Nurmahani  juga  membuktikan bahwa  ekstrak  n-heksan,  kloroform  dan  etanol  kulit buah naga merah  memiliki aktivitas antibakteri pada bakteri Gram  positif  dan  Gram  negatif  (Nurmahani, 2012).
Penelitian  mengenai aktivitas  antibakteri pada kulit buah naga merah hanya sebatas proses ekstraksi, sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut hingga  proses  fraksinasi.  Penelitian  ini  diharapkan dapat  memberikan  informasi  mengenai  potensi  kulit buah  naga  merah  sebagai  alternatif  pengobatan antibakteri alami pada Staphylococcus aureus.

## II. METODOLOGI

## A. Bahan dan Alat
Bahan yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu  kulit  buah  naga  merah,  kloroform,  n-heksan, dimethylsulfoksida  (DMSO),  aquades,  ampisilin, Mueller  Hinton  Agar  (MHA),  dan  Mc  Farland  0,5. Alat  yang  digunakan  yaitu  corong  pisah, rotary
evaporator,  jarus  ose,  cawan  petri,  dan  jangka sorong.

## B. Pembuatan  Fraksi  n-Heksan  Kulit  Buah  Naga Merah
Sampel yang digunakan adalah kulit dari buah naga  merah  yang  didapat  di  Perkebunan  Petani Mekar  Sari  Kecamatan  Segedong,  Kabupaten Pontianak,  Provinsi  Kalimantan  Barat.  Kulit  tersebut dicuci  dengan  air  mengalir,  kemudian  dirajang  dan disortasi basah. Setelah itu dikeringkan dan diblender hingga  menjadi  simplisia.  Simplisia  kemudian dimaserasi menggunakan pelarut kloroform selama 7 hari.  Ekstrak  kloroform  kemudian  difraksinasi  cair- cair  dengan  pelarut  n-heksan.  Fraksi  n-heksan kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator dan dilakukan skrining firokimia (alkaloid,  tanin,  polifenol, triterpenoid,  steroid, saponin dan flavonoid).

## C. Pembuatan  Variasi  Konsentrasi  Fraksi  n- Heksan Kulit Buah Naga Merah
Larutan  stok  fraksi  n-heksan  kulit  buah  naga merah  adalah  80  mg/mL,  dengan  melarutkan sebanyak  800  mg  fraksi  n-heksan  pada  DMSO  10% dalam  10  mL  aquades.  Kemudian  dilakukan pengenceran  bertingkat  untuk  membuat  konsentrasi 40, 20 dan 10 mg/mL.

## D. Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  n- Heksan Kulit Buah Naga Merah
Aktivitas  antibakteri  sampel  dilakukan  pada bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923  yang diperoleh  dari  Departemen  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Pengujian menggunakan  metode Disc  diffusion (Kirby  Bauer). Bakteri  dari  media  peremajaannya  diinokulasikan pada  media  MHA  yang  telah  padat.  Kemudian diteteskan  20  L  fraksi  n-heksan  kulit  buah  naga merah  dengan  berbagai  konsentrasi  pada  cakram kertas  (6mm),  kemudian  diinkubasi  dalam  inkubator selama  24  jam,  setelah  itu  diukur    diameter  zona hambat  atau  zona  bening  dengan  jangka  sorong (ICMR,  2009).  Kontrol  positif  yang  digunakan adalah  ampisilin  20  g.  Kontrol  negatif  yang digunakan adalah DMSO 1dan 10%.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  telah  dilakukan  terhadap fraksi  n-heksan  kulit  buah  naga  merah.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  fraksi  n-heksan  kulit buah naga merah menunjukkan hasil positif terhadap pemeriksaan    alkaloid,  triterpenoid dan  steroid. Sedangkan  senyawa  fenolik,  tanin,  flavonoid  dan
saponin  menunjukkan  hasil  negatif.  Hasil  skrining terdapat pada Tabel 1.
Tabel  1. Hasil skrining  fitokimia  Fraksi  n-Heksan
Kulit Buah Naga Merah Pemeriksaan Reagen Hasil Alkaloid Mayer + Dragendrof + Wagner + Polifenol FeCl 3 1% - Flavonoid Mg, HCl - Saponin Air , HCl - Steroid/Triterpenoid Lieberman Burchard - Tanin FeCl 3 5% -
Ket: (+) positif : mengandung golongan senyawa; (-) negatif: tidak mengandung golongan senyawa.

## B. Uji Aktivitas Antibakteri
Penentuan aktivitas antibakteri fraksi n-heksan kulit buah naga merah dilakukan dengan metode disc diffusion Kirby-Bauer  yaitu  penentuan  sensivitas bakteri  dengan  suatu  zat  tertentu  yang  kemungkinan memiliki  aktivitas  antibakteri  dengan  menggunakan cakram kertas.
Hasil  uji  aktivitas  fraksi  n-heksan  kulit  buah naga  merah  terhadap Staphylococcus  aureus adalah konsentrasi  40  dan  20 mg/mL memiliki  aktivitas antibakteri,  sedangkan  10 mg/mL tidak  memiliki aktivitas  antibakteri  karena  tidak  terdapat  zona bening  disekitar  cakramnya.  Rata-rata  zona  hambat fraksi  n-heksan  kulit  buah  naga  merah  dengan konsentrasi  40 mg/mL adalah  12,8  mm  dan konsentrasi  20 mg/mL adalah  11,17  mm.    Kontrol negatif  DMSO  dengan  berbagai  konsentrasi  terbukti tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri,  sehingga  dapat dipastikan aktivitas antibakteri yang dihasilkan murni dari  fraksi  n-heksan  kulit  buah  naga  merah  tanpa pengaruh  dari  pelarutnya.    Kontrol  positif  ampisilin memiliki  rata-rata  zona  hambat  sebesar  32,70  mm terhadap Staphylococcus  aureus.  Hasil  pengujian aktivitas  antibakteri  fraksi  n-heksan  kulit  buah  naga merah, DMSO dan ampisislin terdapat pada tabel 2.
Tabel  2. Hasil  Pengujian  Antibakteri  Fraksi  n- Heksan Kulit Buah Naga Merah Terhadap Staphylococcus aureus Konsentrasi ppm Zona Hambat (mm) Rata-rata (mm) I II III 20.000 14,50 10 9 11,17 40.000 12 11,40 15 12,80
10.000 - - - - Ampicilin 28,70 33,40 36 32,70 DMSO 10% - - - - DMSO 1% - - - -
Ket: - = tidak terdapat zona hambat
Berdasarkan  tabel  2  dapat  ditentukan  bahwa konsentrasi  hambat  minimum  fraksi  n-heksan  kulit buah  naga  merah  terhadap Staphylococcus  aureus adalah  20.000  ppm  atau  20  mg/mL  dengan  zona hambat  rata-rata  11,17  mm. Konsentrasi  20 mg/mL dinyatakan sebagai KHM karena merupakan konsentrasi  terkecil  yang  masih  dapat  menghasilkan zona hambat.
Rata-rata  zona  hambat  dari  kedua  konsentrasi fraksi  n-heksan  kulit  buah  naga  merah,  maka  zona hambat yang dihasilkan semakin besar. Zona hambat yang  dihasilkan  oleh  konsentrasi  40  mg/mL dinyatakan peka sebagai antibakteri karena Departemen Kesehatan menyebutkan bahwa mikroba dinyatakan  peka  terhadap  antibakteri  asal  tanaman apabila mempunyai ukuran diameter daya hambatannya (daerah bening) 12-24 mm (Depkes RI, 1988). Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri Gram  positif. Bakteri  Gram  positif  memiliki kepekaan terhadap antibakteri lebih baik dibandingkan Gram negatif karena adanya perbedaan struktur  dinding  sel.  Struktur  dinding  sel  bakteri Gram  negatif  relatif  lebih  kompleks,  berlapis  tiga yaitu  lapisan  luar  yang  berupa  lipoprotein,  lapisan tengah  yang  berupa  lipopolisakarida  dan  lapisan dalam  berupa  peptidoglikan.  Sedangkan  struktur dinding  sel  mikroba  gram  positif  relatif  lebih sederhana sehingga memudahkan senyawa antimikroba  untuk  masuk  ke  dalam  sel  dan menemukan  sasaran  untuk  bekerja  (Zuhud  dkk, 2001).
Tabel  3. Hasil  Uji  Kruskal  Wallis  Zona  Hambat Fraksi n-Heksan  Kulit  Buah  Naga Merah terhadap Staphylococcus aureus Kelompok vs Kelompok p-value DMSO 20 0,0369 40 0,0369 Ampisilin 0,0369 20 40 0.2752* Ampisilin 0.04953 40 Ampisilin 0.04953 Ket:  *  =  p-value  <  0,05  ,  data  tidak  berbeda signifikan. Zona hambat yang dihasilkan dianalis menggunakan  program  R  versi  3.0.3  dengan  metode uji  Kruskal  Wallis.  Nilai  p-value  hasil  uji  beda dengan  Kruskal  Wallis  terdapat  pada  tabel  3.  Hasil uji  beda  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan yang signifikan pada kedua variasi konsentrasi fraksi n-heksan  dengan  kontrol  negatif  ini  menyatakan bahwa sampel  memiliki aktivitas antibakteri. Namun zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh  fraksi  n-heksan kulit buah naga merah tidak sebaik kontrol positifnya yaitu  ampisilin  karena  kedua  konsentrasi  berbeda signifikan  dengan  ampisilin.  Konsentrasi  20  mg/mL dan  40  mg/mL  tidak  memiliki  perbedaan  yang signifikan  sehingga  dapat  diasumsikan  bahwa penggunaan  konsentrasi  20  mg/mL  sudah  dapat digunakan  sebagai  antibakteri  karena  memiliki aktivitas  antibakteri  yang  sama  dengan  konsentrasi 40 mg/mL.
Beberapa  senyawa  pada  fraksi  n-heksan  yang diduga  memiliki  aktivitas  antibakteri  berdasarkan hasil  skrining  fitokimia  adalah  alkaloid,  steroid  dan triterpenoid.  Penelitian  Luo  juga  menyatakan  bahwa kulit  buah  naga  merah  mengandung β -amirin (15.87%), α -amirin (13.90%), octacosane (12.2%), γ - sitosterol  (9.35%), octadecane (6.27%), tetracosanol (5.19%), sitostenone (4.65%),  dan campesterol (4.16%) yang  sebagian  besar  senyawa  tersebut tergolong  senyawa triterpenoid dan  steroid  (Luo, 2014 ).
Mekanisme  kerja  alkaloid  sebagai  antibakteri diprediksi  melalui penghambatan sintesis dinding sel yang  akan  menyebabkan  lisis  pada  sel  sehingga  sel akan  mati  (Lamothe  dkk,  2009).  Menurut  Cowan steroid dapat berinteraksi dengan membran fosfolipid sel  yang  bersifat  impermeabel  terhadap  senyawa- senyawa  lipofilik  sehingga  menyebabkan  integritas membran  menurun,  morfologi  membran  sel berubah, dan akhirnya dapat menyebabkan membran sel rapuh dan  lisis. Triterpenoid dapat bereaksi  dengan  protein transmembran  pada membran  luar  dinding  sel bakteri,  membentuk  ikatan  polimer  yang  kuat sehingga  mengakibatkan  rusaknya  porin.  Rusaknya porin  yang  merupakan  pintu  keluar  masuknya senyawa  akan  mengurangi  permeabilitas  dinding  sel bakteri  yang  akan  mengakibatkan  sel  bakteri  akan kekurangan  nutrisi,  sehingga  pertumbuhannya  akan terhambat atau mati.

## IV. KESIMPULAN
Fraksi  n-heksan  kulit  buah  naga  merah mengandung  senyawa  alkaloid,  steroid,  triterpenoid dan flavonoid. Fraksi n-heksan kulit buah naga merah memiliki aktivitas antibakeri pada bakteri Staphylococcus aureus. Konsentrasi hambat minimum  (KHM)  fraksi  n-heksan  kulit  buah  naga
merah  terhadap Staphylococcus  aureus adalah  625 ppm dengan zona hambat 17 mm.

## Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada laboratorium  bakteri  jurusan  analis  kesehatan Politeknik  Kesehatan  Kalimantan  Barat  karena  telah mengizinkan  kami  untuk  melakukan  penelitian  di laboratorium tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Departemen  Kesehatan RI. 1988. Inventaris Obat  Indonesia Jilid  I.  Badan  Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan, Jakarta.
2. Melliawati, Ruth. 2009. Esherichia  coli dalam Kehidupan Manusia. BioTrend.4(1).
3. Kaper, JB.,  Nataro, J.P dan Mobley, H.L. Pathogenic Staphylococcus  aureus. Nat. Rev. Microbiol. 2:123-140
4. Luo, H.,  Cai, Y.,  Peng, Z.,  Liu, T dan Yang, S. 2014. Chemical  Composition  and  In  Vitro Evaluation  of  The  Cytotoxic  and  Antioxidant Activities  of  Supercritical  Carbon  Dioxide Extracts  of  Pitaya  (Dragon  Fruit)  Peel. Chem. Central J.8(1):2-7.
5. Guarrera,  P.M.  2005. Traditional  phytotherapy in Central Italy (Marche, Abruzzo, and Latium). Fitoterapia.76(1):1 – 25.
6. Ahmad,  I  dan  Aqil,  F.  2007. In  vitro efficacy  of bioactive extracts of 15 medicinal plants against
ESβL -producing multidrug-resistant enteric bacteria. Microbiological  Research.162(3):264 – 275.
7. Barbour,  E.K.,  Al  Sharif,  M.  Dan  Sagherian, V.K.  2009.  Screening  of  selected  indigenous plants  of  Lebanon  for  antimicrobial  activity.
Journal of Ethnopharmacology.93(1):1 – 7.
8. Kristianto, D. 2008. Buah Naga Pembudidayaan di Pot dan di Kebun. Penebar Swadaya, Jakarta.
9. Warisno,  Dahana  K.  2010. Cara  Pintar Bertanaman  Buah  Naga  di  Kebun,  Pekarangan
dan  dalam  Pot.  PT.  Gramedia  Pustaka  Utama, Jakarta.
10. Latif, A.Z.,  Haque, M.  dan Shanmugasundaram, C.  2012. Clinical  study  of  preventive  potentials of  consumption  of Buah  naga [Cactaceae] against  paracetamol – induced  hepatotoxicity  as well  as  the  other  associated  biological  effects.
Asian J. Res. in Pharmaceutical Sciences.2(1):16-23.
11. Wu, L., Hsu, H., Chen, Y., Chiu, C., Lin, Y. dan Ho,  J.A.  2006. Antioxidant and  antiproliferative activities of red pitaya. J. Food Chem.95(2):319- 327.
12. Khalili,  M.A.,  Norhayati, A.H.,  Rokiah, MY., Asmah, R.,  Muskinah, M.S.  dan Manaf, A.A. Hypocholesterolemic Effect  of Red Pitaya (Hylocereus sp.) on Hypercholesterolemia Induced Rats. Int. Food Res. J. 16:431-440.
13. Nurmahani, M.M., Osman, A., Abdul Hamid, A., Mohamad  Ghazali, F.  dan Pak  Dek, M.S. Short Communication Antibacterial Property of Hylocereus  polyrhizus and Hylocereus undatus Peel Extracts. Int. Food  Res. J.  2012;19(1):77- 84.
14. Indian  Council  of  Medical  Research.  2009. Detection  of  Antimicrobial  Resistance  in Common  Gram  Negative  and  Gram  Positive Bacteria Encountered in Infectious deseases- An Update. ICMR Bulletin.39:1-3.
15. Lamothe, R.G.,  Mitchell,  G.,  Gattuso,  M., Diarra,  M.S.  dan Malouin, F.  2009. Plant Antimicrobial Agents and Their Effects on Plant and  Human  Pathogens. International  Journal  of Molecular Sciences.10:3400-3419.