## PENDAHULUAN
Komponen terbesar dari biaya produksi pada kegiatan budidaya perikanan adalah pakan, yaitu mencapai 60%-70%. Hal  tersebut menjadi  salah  satu permasalahan  dalam kegiatan budidaya karena harga bahan pakan konven- sional, terutama sumber protein seperti tepung ikan dan bungkil kedelai, berfluktuasi dan masih harus diimpor untuk  memenuhi  kebutuhan  industri  peternakan  dan perikanan.  Kenyataan  tersebut  membawa  dampak mahalnya  harga  pakan  dan  semakin  tingginya  biaya produksi yang harus dikeluarkan dalam kegiatan budidaya perikanan. Berbagai upaya dilakukan untuk mengatasi
permasalahan bahan pakan tersebut yang salah satunya adalah  dengan  mencari  bahan  baku  pakan  alternatif yang  tersedia  secara  lokal,  berlimpah,  dan  terjaga kontinuitasnya,  serta  dapat  menggantikan  atau mengurangi penggunaan bahan pakan impor.
Pemanfaatan bahan baku pakan alternatif telah banyak dilakukan yaitu dengan menggunakan bahan baku pakan lokal yang mudah didapat dan biasanya berupa limbah yang belum termanfaatkan secara optimal. Beberapa bahan baku pakan lokal yang mempunyai potensi sebagai bahan baku pakan alternatif adalah yang berasal dari limbah industri pertanian seperti bungkil kelapa sawit, ampas sagu, bungkil biji karet, bungkil kelapa, kopra, kulit buah kakao,  daun  rami,  limbah  tanaman  pisang,  limbah singkong, dan dedak padi, serta limbah peternakan seperti isi rumen (Wizna et al., 2008), limbah udang, limbah bulu ayam (Cortezi et al., 2008) dan sebagainya. Akan tetapi, upaya pemanfaatan bahan baku pakan lokal tersebut masih mengalami kendala yaitu tingginya kandungan serat kasar yaitu lebih dari 7%, rendahnya kandungan protein kasar bahan baku, keseimbangan asam amino yang rendah, dan adanya zat anti nutrisi.
Kandungan serat kasar yang tinggi menyebabkan bahan baku lokal tersebut perlu diolah lagi agar dapat digunakan sebagai bahan baku pakan ikan. Halver (1989) menyatakan bahwa ikan kurang mampu mencerna serat kasar karena dalam  usus  ikan  tidak  terdapat  mikroba  yang  dapat memproduksi enzim selulase. Serat diperlukan dalam jumlah yang terbatas dalam badan ikan yaitu maksimal 7% dalam  pakan  (Robinson  et  al.,  2001).  Lebih  lanjut dinyatakan bahwa  untuk ikan-ikan  catfish serat  dapat digunakan dalam pakan pada level antara 3%-6%. Kandungan serat kasar yang tinggi dalam pakan akan meningkatkan jumlah  limbah  yang  berada  dalam  perairan  karena rendahnya tingkat kecernaan pakan.
Berbagai pengolahan terhadap bahan pakan berserat tinggi  telah  banyak  dilakukan  untuk  meningkatkan efisiensi penggunaan pakan seperti pengolahan secara fisik, kimia, dan biologi atau kombinasinya (fermentasi). Pengolahan  secara  fermentasi  dengan  menggunakan

## PENGGUNAAN ENZIM CAIRAN RUMEN SEBAGAI ALTERNATIF UNTUK MENDUKUNG PEMANFAATAN BAHAN BAKU PAKAN IKAN LOKAL

## Wahyu Pamungkas
Balai Penelitian dan Pemuliaan Ikan Jl. Raya Sukamandi No. 2, Subang 41256 E-mail:  baginfo_lrptbpat@yahoo.com;  yhoe_pamungkas@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Pemanfaatan bahan baku pakan alternatif telah banyak  dilakukan  yaitu  dengan  menggunakan bahan baku pakan lokal yang mudah didapat dan biasanya berupa limbah yang belum termanfaat- kan secara optimal. Namun, upaya pemanfaatan bahan baku pakan lokal tersebut masih mengalami kendala  salah  satunya  adalah  tingginya  kan- dungan serat kasar yaitu lebih dari 7%. Kandungan serat kasar yang tinggi menyebabkan bahan baku lokal  tersebut  perlu  diolah  lagi  agar  dapat digunakan sebagai bahan baku pakan ikan. Salah satu alternatif teknologi yang dapat digunakan adalah  pemanfaatan  cairan  rumen  untuk  me- nurunkan kandungan serat kasar bahan pakan. Cairan rumen merupakan salah satu sumber bahan alternatif  yang  murah  dan  dapat  dimanfaatkan dengan mudah sebagai sumber enzim hidrolase. Pengolahan bahan baku pakan lokal hasil limbah agro industri dan limbah peternakan menggunakan enzim  cairan  rumen  akan  dapat  memberikan dampak peningkatan nilai nutrisi bahan pakan lokal sehingga dapat digunakan menjadi sumber pakan alternatif yang berkualitas.
KATA KUNCI: bahan  baku  pakan  lokal,  cairan rumen, enzim, limbah peternakan
kapang terhadap bahan pakan yang mengandung pati dan serat tinggi mempunyai suatu kelemahan di mana hifa dari kapang tersebut merupakan serat kasar sehingga kandungan serat kasar substrat tetap tinggi. Upaya lain yang  telah berkembang  di  bidang peternakan  adalah pemanfaatan cairan rumen untuk menurunkan kandungan serat kasar bahan pakan. Cairan rumen domba merupakan salah satu sumber bahan alternatif yang murah dan dapat dimanfaatkan  dengan  mudah  sebagai  sumber  enzim hidrolase (Moharrery & Das, 2002). Cairan rumen yang diperoleh dari rumah potong hewan kaya akan kandungan enzim pendegradasi serat, mengandung enzim  -amilase, galaktosidase,  hemiselulase,  selulase,  dan  xilanase. Menurut Kung et al., 2000, cairan rumen mengandung enzim protease/deaminase yang menghidrolisis protein atau peptide, amylase yang menghidrolisis pati, selulase yang menghidrolisis selulosa, hemiselulase (xylanase) yang menghidrolisis  hemiselulosa  (xylan),  lipase  yang menghidrolisis lemak, fitase yang menghidrolisis fitat, dan lain-lain.
Pemanfaatan bahan baku pakan lokal hasil limbah agro industri dan limbah peternakan yang ditingkatkan nilai nutrisinya diharapkan akan dapat menjadi sumber pakan alternatif yang berkualitas. Dalam tulisan ini akan diuraikan pemanfaatan cairan rumen  dalam meningkatkan nilai nutrisi bahan baku pakan lokal sehingga dapat dijadikan sebagai sumber bahan baku pakan alternatif untuk pakan ikan.

## Kendala Pemanfaatan Bahan Baku Lokal sebagai Bahan Pakan
Pemanfaatan bahan baku pakan alternatif telah banyak dilakukan yaitu dengan menggunakan bahan baku pakan lokal yang mudah didapat dan biasanya berupa limbah yang belum termanfaatkan secara optimal. Beberapa bahan baku pakan lokal yang mempunyai potensi sebagai bahan baku pakan alternatif adalah yang berasal dari limbah industri pertanian dan perkebunan seperti bungkil kelapa sawit, bungkil biji karet, bungkil kelapa, kopra, kulit buah kakao, dan daun rami (Kamaruddin et al., 2008), serta limbah peternakan seperti isi rumen (Wizna et al., 2008), limbah udang, limbah bulu ayam (Cortezi et al., 2008), dan limbah industri seperti ampas kecap (Marzuqi et al., 2008).
Bahan baku pakan lokal mempunyai kandungan nutrisi yang potensial digunakan sebagai bahan baku pakan ternak maupun ikan. Beberapa bahan baku pakan lokal seperti bungkil inti sawit mempunyai kandungan protein antara 13,6%-17,45% dan kandungan lemak kasar berkisar antara 17,1%-21,55% (Sundu et al., 2003), limbah udang memiliki kandungan energi metabolis (ME) sebesar 1.190 kkal/kg,
protein kasar (PK) 43,4%; kalsium (Ca) 7,05%; dan fosfor (P) 1,52% (Hartadi et al., 1997). Tepung cangkang udang mengandung protein kasar antara 35%-45% dan berkualitas baik, di samping itu, juga mengandung mineral (kalsium, fosfor, dan magnesium).
Namun demikian, pemanfaatan bahan baku pakan lokal tersebut masih mengalami kendala yang salah satunya adalah  tingginya  kandungan  serat  kasar.  Kandungan protein kasar bungkil inti sawit sekitar 11,30%-17,00% namun kandungan lemak dan serat kasar cukup tinggi yaitu masing-masing sebesar 4,50%-17,00% dan 16%-23%. Lemak  yang  tinggi  akan  menyebabkan  ketengikan sehingga  memperpendek  daya  simpan  bahan  pakan tersebut,  sedangkan  serat  kasar  yang  tinggi  akan menyebabkan bahan pakan sulit dicerna oleh ternak atau ikan. Menurut Wiramiharja et al. (2007), tepung bulu yang berpotensi digunakan sebagai bahan pakan ikan sumber protein  mempunyai  daya  cerna  yang  rendah  karena mengandung  tingkat  keratin  yang  tinggi,  keras, berserabut, dan ikatan disulfide yang kuat. Hal tersebut menyebabkan perlunya pengolahan bahan baku pakan lokal tersebut sebelum digunakan sebagai bahan pakan.

## Serat Kasar dalam Bahan Pakan
Serat  kasar  adalah  penyusun  utama  dinding  sel tumbuhan dan merupakan fraksi karbohidrat yang telah dipisahkan dengan bahan ekstrak tanpa nitrogen (BETN) yang  tidak  larut  dalam  basa  dan  asam  encer  setelah pendidihan  selama 30  menit.  Serat  kasar terdiri  atas selulosa,  hemiselulosa,  dan  lignin  yang  sulit  dicerna (Tillman et al., 1989).
Serat kasar dibutuhkan dalam pakan untuk membantu proses pencernaan makanan. Menurut Piliang (2006), serat kasar membantu mempercepat ekskresi sisa-sisa makanan  melalui  saluran  pencernaan.  Lebih  lanjut dinyatakan bahwa dalam keadaan tanpa serat, feses dengan kandungan air rendah akan lebih lama tinggal dalam saluran usus yang dapat menyebabkan gangguan pada gerakan peristaltik  pada  usus  besar  sehingga  ekskresi  feses menjadi  lebih  lamban.  Sebaliknya,  pakan  dengan kandungan serat kasar yang tinggi dapat menyebabkan absorbsi zat makanan berkurang  dan koefisien cerna semua zat makanan menurun.
Kadar serat kasar yang berbeda pada bahan penyusun pakan dapat mempengaruhi nilai energi yang tersedia dalam pakan karena terdapat korelasi negatif antara kadar serat dalam pakan dengan energi yang tersedia dalam pakan. Semakin tinggi kandungan serat kasar pakan maka semakin rendah jumlah energi yang tersedia. Hal tersebut disebabkan serat kasar tidak mampu menyediakan energi
yang dapat dimanfaatkan oleh ikan. Serat kasar yang berisi selulosa, hemiselulosa, dan lignin relatif sulit dicerna dan merupakan sumber energi yang rendah.
Fraksi serat diukur berdasarkan kelarutannya dalam larutan detergen netral yang membagi serat makanan menjadi Neutral Detergent Soluble (NDS) berisi isi sel yang larut dalam detergen dan Neutral Detergent Fiber (NDF) berisi dinding sel yang tidak larut dalam larutan detergen. Acid Detergent Fiber (ADF) merupakan fraksi serat yang diukur dengan cara melarutkan dinding sel (NDF) kembali dengan larutan asam. Bagian yang tidak larut dalam larutan asam tersebut yang dinyatakan sebagai ADF yang berisi lignoselulosa. Kandungan hemiselulosa merupakan selisih kandungan NDF dan ADF. Selulosa dan lignin merupakan bagian dari ADF di mana selulosa adalah bagian yang larut dalam H 2 SO 4 72% dan lignin merupakan bagian yang tidak larut (Van Soest et al., 1991). Skema penguraian fraksi serat disajikan pada Gambar 1.
Kemampuan ikan dalam mencerna serat kasar dibatasi oleh  kemampuan  mikroflora  dalam  ususnya  untuk mensekresikan selulase (Bureau, 2000). Keterbatasan ikan dalam memanfaatkan serat berkaitan dengan ketersediaan enzim selulolitik yang terbatas dalam saluran pencernaan ikan,  bahkan  pada  level  tertentu  dapat  menghambat pertumbuhan ikan.

## Cairan Rumen sebagai Sumber Enzim
Isi rumen merupakan limbah rumah potong hewan yang apabila tidak ditangani dengan baik dapat mencemari
lingkungan.  Wizna  et  al.  (2008)  menyatakan  bahwa xanthophyl yang terdapat dalam isi rumen, sebagian besar terdiri  atas  hijauan,  diduga  dibutuhkan  oleh  pigmen kuning  telur  dan  kulit  unggas.  Manfaat  lain  dari penggunaan isi rumen sebagai bahan pakan adalah adanya vitamin  B12  sebagai  faktor  protein  hewan  yang menyebabkan isi rumen mempunyai nilai secara biologi yang  sama  dengan  tepung  ikan  dan  ekstrak  hati. Kandungan nutrisi dari isi rumen sapi adalah 9,29% air; 8,45% protein kasar; 1,23% lemak kasar; 33,53% serat kasar; 0,20% Ca; 0,45% P; 16,19% abu; dan 31,60% NFE. Isi rumen berpotensi  sebagai  feed  additive.  Cairan  rumen  telah digunakan sebagai sumber inokulan dalam pengolahan silase jerami padi. Lebih lanjut dinyatakan bahwa cairan rumen pada onggok sebagai bahan baku penyusun ransum komplit dapat meningkatkan kandungan VFA (volatile fatty acid).
Rumen diakui sebagai sumber enzim pendegradasi polisakarida. Polisakarida dihidrolisis di rumen disebabkan pengaruh  sinergis  dan  interaksi  dari  kompleks mikroorganisme, terutama selulase dan xillanase. Ada dua grup jenis mikroorganisme yang diyakini pada cairan rumen (liquid phase) dan yang menempel pada digesta rumen.  Enzim  yang  aktif  mendegradasi  struktural polisakarida  hijauan  kebanyakan  aktif  pada  mikro- organisme yang menempel pada partikel pakan.
Mikroba-mikroba rumen mensekresikan enzim-enzim pencernaan ke  dalam cairan  rumen untuk  membantu mendegradasi partikel makanan. Enzim-enzim tersebut
Gambar 1. Skema penguraian fraksi serat (van Soest et al., 1991)
Bahan  makanan NDS Neutral Detergent Soluble (Isi sel) ADF Acid Detergent insoluble Fiber (Lignosellulosa) Detergen netral Acid Insoluble (Lignin) ADS Acid Detergent Soluble (Hemisellulosa) Soluble (Sellulosa) NDF Neutral Detergent Fiber (Dinding sel) H 2 SO 4 72% Detergen asam
antara lain adalah enzim yang mendegradasi substrat selulosa  yaitu  selulose,  hemiselulosa/xylosa  adalah hemiselulase/xylanase, pati adalah amilase, pektin adalah pektinase,  lipid/lemak  adalah  lipase,  protein  adalah protease,  dan  lain-lain.  Aktivitas  enzim  dalam  cairan rumen juga tergantung dari komposisi atau perlakuan makanan (Moharrery & Das, 2002). Agarwal et al. (2002) melaporkan bahwa anak domba dengan bobot badan 23,5 kg yang diberi makan minum susu sampai 8 minggu dan diteruskan  dengan  50%  konsentrat  dan  50%  rumput sampai umur 24 minggu mendapatkan bahwa enzim-enzim yang ada dalam cairan rumen antara lain carboxymethyl celulase dengan aktivitas enzim 3,60 umol glukosa/jam/ mL, alpha amylase 0,33 umol glukosa/menit/mL, xylanase 0,29 umol xylosa/menit/mL, beta-glukosidase 0,20 umol p-nitrofenol/menit/mL, alpha-glukosidase 0,008 mol p- nitrofenol/menit/mL, urease 0,05 umol NHs-N/menit/mL, dan  protease  452,7  ug  hidrolisis  protein/jam/mL. Moharrery & Das (2002) mengukur aktivitas enzim pro- tease, selulase, amylase, lipase, dan urease pada cairan rumen domba dan mendapatkan bahwa cairan rumen yang berisi enzim-enzim dari sel-sel bakteri, aktivitas enzimnya lebih tinggi dari cairan rumen tanpa protozoa dan tanpa sel-sel bakteri (Tabel 1).

## Isolasi dan Produksi Enzim Cairan Rumen
Isolasi dan produksi enzim cairan rumen dilakukan di laboratorium yang mempunyai fasilitas sentrifuse suhu dingin. Cairan rumen diambil dari rumah pemotongan hewan (RPH) dan cairan rumen tersebut diusahakan selalu berada dalam kondisi dingin. Cairan rumen yang telah diperoleh  selanjutnya  segera  disentrifugasi  dengan kecepatan  10.000  rpm  selama  20  menit  kondisi  4 o C, kemudian supernatan yang terbentuk direaksikan dengan amonium sulfat 60% dan diaduk menggunakan magnetic stirer selama kurang lebih satu jam. Cairan rumen yang telah  direaksikan  dengan  amonium  sulfat  kemudian didiamkan selama 24 jam pada suhu 4 o C. Setelah disimpan selama 24 jam, selanjutnya cairan rumen disentrifugasi pada kecepatan 10.000 rpm selama 20 menit kondisi 4 o C.
Supernatan  yang  terbentuk  dibuang  dan  endapannya digunakan  sebagai  sumber  enzim.  Enzim  kemudian dilarutkan dalam buffer fosfat dengan perbandingan 1:1 (endapan dari 100 mL supernatan cairan rumen dilarutkan dalam 100 mL buffer fosfat pH 7,0 dan disimpan pada suhu 4 o C apabila tidak segera digunakan (Fitriliyani, 2010). Skema isolasi dan produksi enzim cairan rumen disajikan pada Gambar 2.

## Enzim  Cairan  Rumen  Pendegrasi  Serat  dalam  Bahan Pakan
Enzim selulase, amylase, protease, dan lipase pada cairan rumen yang berisi enzim-enzim dari sel-sel bakteri mempunyai aktivitas enzim yang lebih tinggi dari cairan rumen tanpa protozoa dan sel-sel bakteri (Moharrery & Das, 2002). Lebih lanjut dinyatakan bahwa pada cairan rumen domba bebas sel mikroba didapatkan aktivitas selulase sebesar 0,03 IU/mL/menit, sedangkan aktivitas enzim lainnya yang diperoleh adalah amilase sebesar 1,16 IU/mL/menit, protease 0,22 IU/mL/menit, dan lipase 1,22 IU/mL/menit.  Aktivitas  enzim  dalam  cairan  rumen tergantung dari komposisi atau perlakuan makanan.
Cairan rumen telah digunakan sebagai sumber inokulan dalam pengolahan silase jerami padi dan menghasilkan penurunan bahan kering 10,6%; kadar serat 15,98%; serta meningkatkan kandungan protein 54,50% (Purnomohadi, 2006). Hasil penelitian Hardiyanto (2001) menyatakan bahwa cairan rumen yang ditambahkan pada onggok sebagai bahan pakan penyusun ransum komplit dapat meningkatkan  kandungan  VFA  (volatile  fatty  acids). Penambahan cairan rumen sebesar 620 dan 1.240 U/kg pada wheat pollard menghasilkan penurunan kandungan polisakarida  berturut-turut  sebesar  4%  dan  3,9%  dan kandungan polisakarida wheat pollard tanpa enzim lebih tinggi dibandingkan dengan yang ditambahkan enzim (Pantaya, 2003).
Hasil penelitian Fitriliyani (2010) yang menggunakan enzim cairan rumen domba untuk menghidrolisis tepung daun lamtoro menunjukkan adanya penurunan kandungan
Enzim Cairan rumen tanpa protozoa Cairan rumen bebas sel mikroba Cairan rumen dengan sel mikroba Selulase-Fpase (ug glukosa/mL/jam) 738,5±3,45 162,2±33,70 405,30±44,19 Protease (unit/mL) 0,201±0,078 0,090±0,027 0,220±0,046 Amilase (ug glukosa/menit/mL) 172,2±45,9 60,05±10,96 208,7±97,0 Lipase (unit/mL) 1,076±0,309 0,339±0,080 1,225±0,803
1) Enzim dari cairan rumen anak domba yang diberi makan air susu dan konsentrat sampai umur 9 minggu (Moharrery & Das, 2002)

## Tabel 1. Komposisi enzim cairan rumen domba 1)
serat kasar pada penambahan enzim 100 mL/kg bahan dengan  lama  waktu  inkubasi 24  jam  sebesar  53,64%. Penambahan  enzim  cairan  rumen  akan  merombak komponen  bahan  yang  sulit  dicerna  menjadi  mudah dicerna yang dapat dimanfaatkan oleh hewan. Lebih lanjut dilaporkan bahwa kurva respons kadar total gula yang diukur pada inkubasi 2 jam menghasilkan kurva respons linier sedangkan periode 24  jam menghasilkan kurva respons  kuadratik.  Fitriliyani  (2010)  mengungkapkan adanya perbedaan respons tersebut di atas diduga adanya hubungan antara ketersediaan substrat dengan waktu inkubasi. Pada waktu inkubasi 2 jam jumlah substrat yang tersedia  masih  memungkinkan  enzim  untuk  bekerja sedangkan pada periode inkubasi 24 jam kerja enzim sudah maksimal untuk merombak subtrat yang tersedia. Hasil penelitian Alemawor (2009) mendapatkan adanya peningkatan  kualitas  nutrisi  yang  lebih  baik  pada penggunaan multienzim pada bahan baku pakan dengan nilai total gula meningkat, serat kasar, NDF, ADF, selulosa, dan lignin yang menurun. Hasil penelitian Sandi et al. (2010) menunjukkan bahwa penambahan enzim cairan rumen dan bakteri Leuconostoc mesenteroides pada silase berbahan baku singkong mampu menurunkan kandungan serat kasar dan sianida pada umbi, serta meningkatkan protein bahan.
Hidrolisis bungkil kelapa sawit menggunakan enzim cairan rumen domba 100 mL/kg bahan dengan lama waktu
inkubasi selama 24 jam dapat menurunkan kandungan serat  kasar  bungkil  kelapa  sawit  sebesar  56,97%  dan meningkatkan  nilai  kecernaan  bahan  sampai  42,26% (Pamungkas,  2011).  Hasil  penelitian  Zuraida  (2011) menunjukkan bahwa penambahan enzim cairan rumen domba berpengaruh nyata terhadap penurunan serat kasar bungkil kelapa. Penurunan serat kasar bungkil kelapa tertinggi diperoleh pada perlakuan volume enzim 125 mL/kg bungkil kelapa dengan lama waktu inkubasi 24 jam yaitu dari 13,76% menjadi 6,98%. Adapun pada hasil uji  kecernaan  menunjukkan  bahwa  kecernaan  bahan (bungkil kelapa) yang telah dihidrolisis dengan enzim cairan rumen domba sebesar 60,64% di mana nilai tersebut lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kecernaan  bungkil kelapa  tanpa  dihidrolisis  dengan  enzim  rumen  yaitu 45,71%.  Dari  hasil-hasil  penelitian  tersebut  dapat disimpulkan bahwa penggunaan enzim cairan rumen dapat menurunkan serat kasar dan meningkatkan nilai kecernaan bahan pakan sehingga dapat digunakan sebagai bahan pakan ikan.

## KESIMPULAN
Enzim  cairan  rumen  sebagai  salah  satu  alternatif teknologi yang dapat dimanfaatkan dalam menghidrolisis serat kasar dan meningkatkan nilai nutrisi bahan baku pakan  lokal.  Hal  tersebut  akan  berdampak  pada optimalisasi  pemanfaatan  limbah  agroindustri  dan
Gambar 2. Isolasi dan produksi enzim cairan rumen (Sumber: Pamungkas, 2011) Cairan  rumen Disentrifugasi Supernatan + amonium sulfat 60% Endapan  -----  sumber  enzim Disentrifugasi Dilarutkan dalam buffer fosfat pH 7, perbandingan 1:1 Disimpan pada suhu 4 o C
Isolasi dan Produksi Enzim Cairan Rumen Domba
peternakan sebagai bahan baku pakan alternatif yang mempunyai potensi untuk dikembangkan dan diman- faatkan sebagai bahan baku pakan ikan.

## DAFTAR ACUAN
Alemawor, F., Dzogbefia, V.P., Oddoye, E.O.K., & Oldham, J.H.  2009.  Enzyme  cocktail  for  enhancing  poultry utilization of cocoa pod husk. Scientific Research and Essays, 4(6): 555-559.
Agarwal, N., Kamra, D.N., Chaundhary, L.C., Agarwal, I., Sahoo, A., & Pathak, N.N. 2002. Microbial status and rumen  enzyme  profile  of  crossbred  calves  fed  on different microbial feed additives.  Letter in  Applied Microbiology, 34: 329-336.
Bureau, D.P. 2000. Feather Meals and Meat and Bone Meals  From  Different  Origin  as  Protein  Source  in Rainbow Trout (Onchorhyncus  mykis) Diets.  Aquacul- ture, 181: 281-291.
Cortezi, M., Contiero, J., De Lima, C.J.B., Lovaglio, R.B.,
&  Monti,  R.  2008.  Characterization  of  a  feather degrading by Bacillus amyloliquefaciens.
Fitriliyani, I. 2010. Peningkatan kualitas nutrisi tepung daun lamtoro  dengan  penambahan  ekstrak  enzim  cairan rumen domba untuk pakan ikan nila (Oreochromis sp). Disertasi. Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Halver, J.E. 1989. Fish Nutrition. Second Edition. Aca- demy Press Inc, New York.
Hardiyanto,  S.  2001.  Kecernaan  (in vitro)  dan  kelarutan ransum  komplit  domba  berbahan  baku  jerami  ter- amoniasi dan onggok yang mendapat perlakuan cairan rumen. Skripsi. Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor.
Hartadi, H., Reksohadiprodjo, S., & Tillman, A.D. 1997. Tabel Komposisi Pakan untuk Indonesia. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.
Kamaruddin, Usman, & Tangko, A.M. 2008. Persiapan dan penyusunan bahan baku lokal untuk formulasi pakan ikan. Media Akuakultur, 3(2): 150-156.
Kung, L. Jr., Treacher, R.J., Nauman, G.A., Smagala, A.M.,
Endres, K.M., & Cohen, M.A. 2000. The effect of treat- ing forages with fibrolytic enzymes on its nutritive value and lactation performance of dairy cows. J. Dairy Sci., 83: 115-122.
Marzuqi, M., Giri, N.A., Agustina, E., & Suwirya, K. 2008. Pengaruh  tepung  ampas  kecap  sebagai  substitusi tepung ikan dalam pakan terhadap pertumbuhan dan nilai kecernaan juvenil ikan kerapu macan (Epinephelus fuscoguttatus). J. Perikanan UGM, IX(2): 254-260.
Moharrery, A. & Das Tirta, K. 2002. Correlation between microbial  enzyme  activities  in  the  rumen  fluid  of sheep under different treatments. Reprod. Nutr. Dev., 41: 513-529.
Pamungkas, W. 2011. Uji  Efektivitas penambahan enzim cairan  rumen  domba  terhadap  penurunan  serat  kasar dan nilai kecernaan bungkil kelapa sawit sebagai pakan benih ikan patin siam (Pangasius hypophthalmus). Tesis. Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor, 62 hlm.
Pantaya, D. 2003. Kualitas ransum hasil pengolahan steam pelleting  berbasis  wheat  pollard  yang  mendapat perlakuan  enzim  rumen  pada  broiler.  Tesis.  Program Pascasarjana IPB, Bogor.
Piliang, W.G. 2006. Fisiologi Nutrisi. IPB. Press. Bogor. Purnomohadi, M. 2006. Peranan bakteri selulotik cairan rumen pada fermentasi jerami padi terhadap mutu pakan. J. Protein, 3: 108-114.
Robinson, E.H., Menghe, H.Li, & Bruce, B.M. 2001. A practical  guide  to  nutrition  feeds,  and  feeding  of Catfish. Bull. 1113. Mississippi Agricultural & Forestry Experiment Station. Mississippi State University.
Sandi, S., Laconi, E.B., Sudarman, A., Wiryawan, K.G., &
Mangundjaja, D. 2010. Kualitas Nutrisi Silase Berbahan Baku Singkong yang Diberi Enzim Cairan Rumen Sapi dan Leuconostoc mesenteroides. Media Peternakan, 33(1): 25-30.
Sundu, B., Kumar, A., & Dingle, J.G. 2003. Perbandingan dua produk enzyme komersial pencerna beta mannan pada  ayam pedaging  yang mengkonsumsi  bungkil kelapa sawit dengan level yang berbeda.  Prosiding Seminar  Nasional  Pemanfaatan  Sumberdaya  Hayati berkelanjutan, hlm. 19-25.
Tillman,  A.D.,  Hartadi,  H.,  Reksohadiprodjo,  S., Prawirokusumo, S., & Lebdosoekojo, S. 1991. Ilmu Makanan  Ternak  Dasar.  Cetakan  ke-5.  Yogyakarta: Gadjah Mada University.
Van  Soest,  P.J.,  Robertson,  J.B.,  &  Lewis,  B.A.  1991. Methods for dietary fiber, neutral detergent fiber and non-starch  polysaccharides  in  relation  to  animal nutrition. J. Dairy Sci., 74: 3,583-3,597.
Wiramiharja, Y., Hernawati, R., Harahap, I.M., & Niwa, Y.
2007. Nutrisi dan bahan pakan ikan budidaya. Fresh- water  Aquaculture  Development  Project.  Balai Budidaya  Air  Tawar  Jambi  Japan  International  Co- operation Agency, 100 hlm.
Wizna, H., Abbas, Y., Rizal, I.P., Kompiang, & Dharma, A. 2008. Improving the quality of sago pith and rumen content mixture as poultry feed through fermenta-
tion by Bacillus amyloliquefaciens.  Pakistan Journal of Nutrition, 7(2): 249-254.
Zuraida,  D.  2011.  Efektifitas  penambahan  enzim  cairan rumen  domba  terhadap  penurunan  serat  kasar  dan
peningkatan  kecernaan  bungkil  kelapa  sebagai  pakan ikan  nila  merah  Oreochromis  sp.  Tesis.  Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor,