Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## AKTIVITAS INHIBITOR TIROSINASERUMPUT LAUT Halimeda Spp DARI PESISIR ACEH BARAT

## Mohamad Gazali
Prodi Ilmu Kelautan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan UniversitasTeuku Umar Korespondensi : mohamadgazali@utu.ac.id

## abstract
Seaweeds have been utilized by local community as foodstuff, cosmeceutical, traditional drug and others. There are three major groups of seaweeds namely brown algae (Phaeophyta), red (Rhodophyta) and green (Chlorophyta). Halimeda sppis one of green algae which sufficiently dominant at the coastal of WestAceh. Seaweed contains bioactive compound which can serve as a defense from ultraviolet radiation that caused hyperpigmentation effect. The purpose of this  study  is  to  analyse  the  tyrosinase  inhibitory  activity  of Halimeda sppextract  from WestAceh.  The  results  shown  that  the  methanol  extract  of Halimeda spppossess phytochemical  properties  such  as  ekstrak Halimeda spp  mengandung  senyawa  alkaloid, flavonoid,  phenol,  tannin  and  steroid.  Tyrosinase  inhibitory  activity  of Halimeda sppmethanol  extract    is  the  best  extract  which  can  be  inhibit  monophenolase  with    IC 50 : 57300,660µg/ml  and  IC 50 =  3981685,489µg/ml  in  diphenolase  pathway  with  kojic  acid  as positive  control.  Moreover,etyl  acetateand n- hexane  extract  have  no  activity  of tyrosinaseinhibitor.  Therefore,  new  finding  of  tyrosinase  inhibitor  agent  from  green  algae Halimeda sppgive  the  fruitfull  information  forcosmeceutical  industry. Halimeda sppparts could be complementaryeach other in providing the raw material of cosmetic product.
Keywords :Aceh, Halimeda spp, Seaweed, Tyrosinase Inhibitor

## I. Pendahuluan
Rumput  laut  merupakan  salah  satusumberdaya  hayati  yang  sangat  melimpahdi perairan  Indonesia.  Produksi  rumput  lautnasional  tahun  2014  mencapai  10,2  juta  tonatau meningkat tiga kali lipat dari produksirumput laut tahun 2010 yaitu 3,9 juta ton.Peningkatan rata-rata produksi rumput lautper tahun mencapai 27,71% (DPT 2015).
Rumput laut adalah makroalga laut yang ditemukan menempel pada substrat perairan dasar laut. Makroalga terdapat tiga kelompok makroalga meliputi alga cokelat (Phaeophyta), alga  merah  (Rhodophyta)  dan  alga  hijau  (Chlorophyta).Alga  laut  hijau  dengan  nilai ekonomistinggi  dan  potensial  untuk  dikembangkanbanyak  terdapat  di  perairan  Indonesia antaralain  di  Kepulauan  Seribu  dan  PerairanSekotong.  Kepulauan  Seribu,  DKI Jakartamerupakan  perairan  yang  dipengaruhioleh  sungai-sungai  yang  bermuara  di TelukJakarta dan Teluk Banten (Booij et al .,  2001;Farhan dan Lim 2012).
Spesies Halimeda spp  merupakan  salah  satu  alga  hijau  yang  distribusi  ekologinya ditemukan di sepanjangpesisir Lhok Bubon Aceh Barat. Rumput laut  mengandung  senyawa bioaktif  yang  berperan  sebagai  suatu  pertahanan  dari  radiasi  ultraviolet  yang  menyebabkan terjadinya  hiperpigmentasi  kulit.  Tujuan  kajian  ini  adalah  untuk  melakukan  investigas senyawa  bioaktif  dan  aktivitas  inhibitor tirosinase alga hijau Halimeda sppasal Pesisir  Aceh Barat agar kedepan dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku biofarmaka.
Pembentukan  melanin  berlebih  pada  kulit  disebut  dengan  hiperpigmentasiatau melanogenesis. Untuk mengurangi pembentukan  melanin pada kulit,diperlukan bahan untuk menghambat  pembentukannya.  Mekanisme  pengurangan  melanin  pada  kulit  manusia  ada
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
beberapa  cara,  seperti  dengan  antioksidan,  inhibitor  tirosinase,  menghambat  melanin bermigrasi dari sel satu ke sel lain, danaktivitas hormon (Prota dan Thomson, 1976, Pawelek dan Korner,  1982).
Penelitian  ini  difokuskan  untuk  mengurangi  pembentukan  melanin  dengan jalurinhibitor  tirosinase  dan  antioksidan.Enzim  tirosinase  atau  fenol  oksidase  merupakan enzim  utama  yang  berperandalam  biosintesis  melanin  di  dalam  tubuh  makhluk  hidup (Likhitwitayawuid,  2008).  Pigmen  melanin  dibiosintesis  dari  tirosina  dengan  oksidasi enzimatik  olehtirosinase.  Melanin  umumnya  terdistribusi  pada  permukaan  tubuh  dan retina(Yamauchi et  al .,  2011).  Biosintesis  melanin  oleh  enzim  tirosinase  dilakukandengan mengatalisis  2  reaksi  menggunakan  molekul  oksigen,  yaitu  reaksiortohidroksilasi  tirosina menjadi  3,4-dihidroksifenilalanina  atau  DOPA(monofenolase)  dan  oksidasi  DOPA  menjadi dopakuinon  (difenolase).  Enzimtirosinase  pada  mamalia  berperan  dalam  reaksi  pigmentasi kulit,  mata,  dan  rambut(Likhitwitayawuid  2008).  Hasil  oksidasi  mengalami  polimerisasi membentukpigmen  cokelat,  merah,  atau  hitam  dengan  jalur  penggandengan  radikal bebas(Sanchez-Ferrer et al. 1995). Spesies oksigen reaktif (SOR) suatu waktu akanterbentuk pada saat dihasilkannya melanin. Keberadaan SOR akan meningkatkanpembentukan melanin. Oleh karena itu, dibutuhkan penangkapan radikal bebasoleh antioksidan.
Melanogenesis merupakan suatu proses produksi melanin oleh melanosit di dalam kulit dan  folikel-folikel  rambut  (Spritz  dan  Hearing,  1994).  Proses  ini  menghasilkan  sintesis pigmen-pigmenmelaninyang memainkan peranan protektif dalam melawan fotokarsinogenesis kulit (Biessert,  2002) dan spesi oksigen reaktif ( reactive oxygen  species ) (Kim  dan  Uyama  2005).  Namun  demikian,  manusia  menyadari  warna  kulitnya  akibat  dari pewarnaan  yang  tidak  diinginkan  atau  hiperpigmentasi  (Slowminski et  al .  2004). Hiperpigmentasi  ini tidak  hanya  menjadi  masalah estetika  namun  juga  masalah dermatologi (Lin et  al .  2008).  Stimulus  psikologis  melanogenesis  adalah  radiasi  ultraviolet  cahaya matahari  yang  bertindak  secara  langsung  di  dalam  melanosit  dan  secara  tidak  langsung melalui  pelepasan  faktor-faktor  yang  berasal  dari  keratinosit  seperti  MSH  (α- melanocytestimulatinghormone ) (Friedmann dan Gilcrest 1987 ; Libow et al . 1988 ; Hunt et al .  1994).  Salah  satu  agen  penyebab  terbesar  hiperpigmentasi  adalah  cahaya  ultraviolet (Gilchrest et  al .  1996).  Sebenarnya,  radiasi  ultraviolet  (100  -  290  nm)  dapat  diserap  oleh lapisan  ozon  dan  tidak  berpengaruh  pada  kulit.  Namun,  radiasi  ultraviolet  (290  -  320  nm) mempengaruhi  lapisan superfisial kulit (epidermis) dan  menyebabkan kulit terbakar (Pandel et  al .  2013).  Enzim  kunci  yang  berperan  dalam  biosintesis  melanin  adalah  tirosinase  yang diketahui  sensitif  terhadap  radiasi  cahaya  ultraviolet  dengan  keberadaan  oksigen  (Ha et  al ., 2007).
Enzim merupakan biokatalis yang mampumeningkatkan laju reaksi kimia tertentu tanpa ikutbereaksi  (Montgomery et  al .,  1993).  Tirosinasemerupakan  enzim  yang  mengatur biosintesis  melanin.Pembentukan  melanin  dapat  dihambat  dengan  caramenurunkan  sintesis tirosinase  atau  menghambat  aktivitasnya  (Hartanti  dan  Setiawan,  2009).  Enzimtirosinase bekerja  mengubah  tirosin  menjadi  3,4-dihidroksifenilalanin  (DOPA)  dan  kemudian menjadidopakuinon yang selanjutnya melalui beberapa tahaptransformasi dikonversi menjadi melanin (Fitrie, 2004).
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Inhibitor tirosinase akan menghambat reaksipencokelatan atau pembentukan melanin. Berbagaiinhibitor tirosinase telah banyak digunakan dalambahan kosmetik sebagai pencegah hiperpigmentasi,  diantaranya  adalah  asam  askorbat,  arbutin,  asam  kojat,merkuri,  dan hidrokuinon. Dari beberapa senyawatersebut, asam kojat memiliki efek inhibisi dankestabilan paling besar, namun menurut Miyazawa danTamura (2007), asam kojat bersifat karsinogenik
Sejauh  ini, sejumlah senyawa  yang berasal dari sumber alami  maupun sintetik sudah diuji dapat menghambat aktivitas tirosinase yang mengarah pada overproduksi melanin pada lapisan epidermis kulit (Cabanes et al ., 2001). Namun demikian, hanya sedikit dari senyawa tersebut diterapkan di dalam bahan kosmetik sebagai aditif karena aktivitas inhibisi tirosinase yang  masih  rendah,  keterbatasan  sumber  bahan  baku  dan  pertimbangan  keamanan.  Fokus penelitian  ini  adalah  penyelidikan  senyawa  bioaktif  potensial  sebagai  inhibitor  tirosinase yang berasal dari sumber-sumber alami seperti alga hijau Halimeda spp.
Selanjutnya,  eksplorasi  senyawa  bioaktif  yang  dapat  digunakan  perlakuan  gangguan dermatologis  yang  berhubungan  dengan  hiperpigmentasi  kulit,  stres  oksidatif  pada  rumput laut Halimeda sppsedang diinvestigasi.

## II. Metode Penelitian

## Waktu dan Lokasi
Penelitian  ini  dilaksanakan  mulai  bulan  Juni  –  Agustus  2017.    Lokasi  pengambilan sampel Halimeda sppadalah  pesisir  pantai  Lhok  Bubon  Kabupaten  Aceh  Barat. Selanjutnya dilakukan  penelitian  ekperimental  yang  dilaksanakan  di  Pusat  Studi  Biofarmaka  Lembaga Penelitian dan Pengabdian Masyarakat Institut  PertanianBogor (Gambar 1).

## Gambar 1. Lokasi Pengambilan Sampel

## Bahan dan Alat
Sampel  yang  digunakan  adalah Halimeda spp.  Bahan  kimia  yang  digunakan  yaitu metanol  p.a,  etanol  p.a,  kloroform  p.a,  NH 3 ,  H 2 SO 4 2M,  H 2 SO 4 pekat,  pelarut  dragendorf,
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
mayer,  wagner,  serbuk  Mg.  HCl,  amil  alkohol,  FeCl 3 10  %,  NaOH  10  %,  CH 3 COOH anhidrat,  dietil  eter,  folin  ciolcetau  50  %,  asam  galat,  Na 2 CO 3 5  %, n- heksana,  DMSO ( dimetilsulfoksida ),  akuades,  akuabides,  buffer  fosfat  pH  6.5,  L-tirosin,  L-DOPA,  enzim tirosinase (Sigma 333 unit/ml dalam buffer fosfat).
Instrumen  yang  digunakan  adalah  spektrofotometer  UV-Vis, multiplate  well reader (ELISA), multiwell plates , eppendorf microcentrifuge tube , oven, tanur listrik, vorteks, sonikator,  inkubator,  eksikator,  corong  buchner , hot  plate,  nyala  bunsen,  neraca  analitik (Sartorius),  rotavapor  putar,  tabung  reaksi,  gelas  erlenmeyer,  gelas  piala,  pipet  volumetrik, pipet  mikro,  pipet  dot,  penjepit  kayu,  cawan  petri,  cawan  porselin,  kertas  saring,  corong, sudip, labu takardan  rak tabung reaksi.

## Prosedur
Prosedur  penelitian  dimulai  dari  pengambilan  sampel Halimeda spp , sampel kemudian  diidentifikasi  di  Laboratorium  Perikanan  Universitas  Teuku  Umar.  Setelah  itu, Halimeda sppdiambil  dan  dikeringkandi  bawah  sinar  matahari  dan  digiling  untuk  dijadikan simplisia  (serbuk)  dan  dilakukan  penentuan  kadar  air  dan  kadar  abu.  Sebelumnya  semua simplisia  diuji  fitokimia,  kemudian  simplisia  (serbuk)  diekstraksi  secara  bertingkat  dengan cara  maserasi  dimulai  dengan  pelarut  non  polar  ( n- heksana)  kemudian  diekstraksi  kembali dengan pelarut semi-polar (etil asetat). Selanjutnya, diekstraksi kembali  dengan pelarut polar (metanol). Setelah itu, dilakukan uji aktivitas inhibitor tirosinase dengan menggunakan multi- well plate reader (ELISA). Penentuan kandungan total fenol dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  dan  kemudian  dibuat  korelasi  linear  antara  kandungan  total  fenol dan prosentase inhibisi tirosinase.

## Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Preparasi sampel ekstrak Halimeda sppdilakukan dengan cara mengeringkan di bawah sinar  matahari  dan  selanjutnya  digiling  menjadi  simplisia  (serbuk).  Sampel  kering  berupa serbuk  kemudian  ditentukan  kadar  air  dan  kadar  abu,  lalu  dilakukan  ekstraksi  secara bertingkat dengan metode maserasi dimulai dengan pelarut non polar ( n- heksana), semi-polar (etil  asetat)  dan  polar  (metanol).  Ekstrak  tersebut  diperoleh  dengan  menyaring  simplisia sampel dengan menggunakan kertas saring biasa dan selanjutnya dipekatkan dengan penguap putar  ( rotary  evaporator )  pada  suhu  30 0 C  kemudian  rendemen  tiap  ekstrak  dihitung (Batubara et  al. , 2010).

## Uji Fitokimia
Uji  fitokimia  merupakan  uji  pendahuluan  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa spesifik  seperti  alkaloid,  triterpenoid,  steroid,  saponin,  flavonoid,  hidrokuinon  dan  tanin secara kualitatif  (Harborne, 1987).

## Uji Alkaloid
Ekstrak Halimeda sppdengan  bobot  tertentu  dilarutkan  dengan  ml  kloroform  dan beberapa  tetes  NH 4 OH  kemudian  disaring  ke  dalam  tabung  reaksi  bertutup.  Ekstrak kloroform  dalam  tabung  reaksi  dikocok  dengan  10  tetes  H 2 SO 4 2M  dan  lapisan  asamnya
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
dipisahkan ke dalam tabung reaksi lain. Lapisan asam ini diteteskan pada lempeng tetes dan ditambahkan  pereaksi  Mayer,  Wagner  dan  Dragendorf  yang  akan  menimbulkan  endapan dengan warna berturut-turut putih, coklat dan merah jingga.

## Uji Saponin dan Flavonoid
Ekstrak Halimeda sppdengan  bobot  tertentu  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi kemudian ditambahkan 6 ml akuades dan dipanaskan selama 5 menit, setelah itu disaring dan filtratnya digunakan untuk pengujian. Uji saponin dilakukan dengan pengocokan 2 ml filtrat dalam tabung reaksi tertutup selama  10 detik kemudian dibiarkan selama 10  menit, adanya saponin  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  buih  stabil.  Sebanyak  10  ml  filtrat  yang  lain ditambahkan  0,5  g  serbuk  magnesium,  2  ml  alkohol  klorhidrat  (campuran  HCl  37%  dan EtOH  95  %  dengan  volume  yang  sama)  dan  3  tetes  amil  alkohol  kemudian  dikocok  kuat- kuat, terbentuknya  warna  merah,  kuning  dan  jingga  pada  lapisan  amil  akohol  menunjukkan adanya flavonoid.

## Uji  Terpenoid  dan  Steroid
Ekstrak Halimeda sppdilarutkan dengan 25 ml EtOH panas (50 0 C) kemudian disaring dalam tabung  reaksi  dan  diuapkan  sampai  kering.  Residu  ditambahkan  dietil  eter  dan  ekstrak  eter dipindahkan  ke  dalam  lempeng,  lalu  ditambahkan  3  tetes  anhidrida  asam  asetat  dan  1  tetes H 2 SO 4 pekat(uji  Lieberman-Burchard).  Warna  merah  atau  ungu  menunjukkan  adanya triterpenoid dan warna hijau atau biru menunjukkan adanya steroid.

## Uji Tanin
Ekstrak Halimeda sppditambah  100  ml  akuades  dipanaskan  selama    5  menit  dan  disaring. Lalu ke dalam sebagian filtrat ditambahkan larutan FeCl 3 , bila terjadi warna hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin.

## Uji  Aktivitas  Inhibisi Tirosinase
Uji  ini  ditunjukkan  dengan  menggunakan  metode-metode  seperti  yang  dijelaskan dahulu  (Curto et  al .  1999  ;  Nerya et  al .  2003).  Ekstrak Halimeda sppdilarutkan  di  dalam DMSO  ( dimetilsulfoksida )  pada  konsentrasi  akhir  20  μg  ml -1 .  Larutan  ekstrak  tersebut kemudian didilusi pada 600 μg ml -1 di dalam 50 mM buffer fosfat (pH 6.5). Ekstrak tersebut diuji pada tingkat konsentrasi dari 31.25 menjadi 2000 μg ml -1 .  Asam kojat sebagai kontrol positif yang juga diuji pada konsentrasi 7.8125 menjadi 500 μg  ml -1 . Di dalam pelat tetes 96 sumur. Sebanyak 70 μl dari masing-masing ekstrak pengenceran ini ditambahkan dengan 30 μl  enzim  tirosinase  (Sigma  333  unit/ml  dalam  buffer  fosfat  pH  6.5),  setelah  itu  dilakukan inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit. Kemudian ditambahkan 110 μl substrat (2 mM L- tirosin  atau  12  mM  L-DOPA)  dalam  sumur multi-well  plate yang  sudah  ditentukan,  larutan tersebut  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu  kamar.  Larutan  tersebut  diukur  dengan menggunakan multi-well  plate  reader (ELISA)dengan  panjang  gelombang  492  nm,  hal  ini bertujuan untuk menentukan persen inhibisi dan nilai konsentrasi hambatan 50%  (IC 50 ).
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## Analisis Data

## Perhitungan Persentase Aktivitas Inhibisi Tirosinase
Perhitungan  persentase  inhibisi  dihitung  dengan  cara  membandingkan  absorbansi sampel  tanpa  penambahan  ekstrak  dan  sampel  dengan  penambahan  ekstrak.  Nilai  IC 50 diperoleh  dari  persamaan  kurva  regresi  linear  antara  %  inhibisi  (sebagai  sumbu y )  dan konsentrasi  ekstrak  (sebagai  sumbu x ).  Pengukuran  persentase  aktivitas  inhibisi  dapat dirumuskan (Chang et al . 2005) : % inhibisi  = [(A - B)/A] x 100 % Keterangan : A    : absorbansi blanko (tanpa sampel) B   : absorbansi sampel (penambahan sampel).

## III. Hasil dan Pembahasan

## Analisis Fitokimia
Analisis  fitokimia  merupakan  salah  satu  cara  untuk  mengetahui  kandungan  metabolit sekunder pada suatu sampel (Harborne 1987). Analisis ini sangat berguna untuk menentukan golongan  utama  senyawa  aktif  dari  ekstrak Halimeda sppyang  memiliki  potensi  sebagai inhibitor  enzim  tirosinase.  Uji  yang  dilakukan  meliputi  uji  alkaloid,  saponin,  flavonoid, triterpenoid, steroid, dan tanin.
Berdasarkan  hasil  penelitian,  skrining  fitokima  ekstrak Halimeda spp  memiliki  hasil positif  pada  senyawa  alkaloid,  fenol,  flavonoid,  tanin  dan  steroid  yang  kebanyakan  pada pelarut  polar.  Sementara  pada  pelarut  etil  asetat  hanya  terdeteksi  senyawa  fenol  (Gazali in press).Istilah  fitokimia  mengacu  pada  variasi  secara  luas  senyawa  yang  diperoleh  dari tumbuhan  dan  terutama  digunakan  untuk  menjelaskan  kelas-kelas  senyawa  yang  diketahui mempunyai  pengaruh  pada  kesehatan  manusia.  Senyawa  metabolit  sekunder  merupakan kelas-kelas  senyawa  yang  diketahui  menunjukkan  aktivitas  melawan  beberapa  penyakit ringan dan oleh karena itu dijelaskan penggunaan obat-obat tradisional (herbal)  yang berasal dari tumbuhan untuk perlakuan beberapa penyakit.
Menurut  Harborne  (1984)  bahwa  analisis  fitokimia  merupakan  suatu  cara  untuk mengetahui  metabolit  sekunder  pada  sampel.  Berdasarkan  hasil  analisis  fitokimia  bahwa ekstrak Halimeda spp  mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  tanin  dan  steroid. Analisis  ini  sangat  berguna  untuk  menentukan  kategori  utama  senyawa  aktif  dari Halimeda sppyang  memiliki  aktivitas  inhibitor  tirosinase.Senyawa  flavonoid  dan  fenol  dan  tanin ekstrak  metanol Halimeda spp  memainkan  peranan  penting  dalam  aktivitas  inhibitor tirosinase.  Kandungan  flavonoid    dan    tanin  diasumsikan  memberikan  aktivitas  inhibisi tirosinase yang lebih besar.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Tabel1. Sifat Fitokimia Ekstrak Halimeda spp( Gazali, Inpress )
Senyawa Etanol Etil Asetat n-heksana Alkaloid a. Mayer - - - b. Wagner + - - c. Dragendroff + - - Flavonoid + - - Fenol + + - Saponin - - - Tannin + - - Steroid + - - Triterpenoid - - -
Keterangan : + = ada      ; - = tidak ada

## Aktivitas Inhibisi Tirosinase
Aktivitas  inhibisi  tirosinase  dilakukan  untuk  mengetahui  keberadaan  dan ketidakberadaan  aktivitas  inhibisi  tirosinase  pada  ekstrak  metanol,  etil  asetat  dan  n-heksan. Aktivitas inhibisi tirosinase menunjukkan bahwa dengan nilai IC 50 yaitu konsentrasi yang bisa menghambat 50% enzim tirosinase. Berdasarkan hasil bahwa ekstrak Halimeda sppmemiliki potensi sebagai  inhibitor tirosinase seperti pada Gambar2.
Gambar 2. Perbandingan Persentase inhibisi (%)  dan (ppm) pada jalur monofenolase
Pada  Gambar  2  di  atas  menunjukkan  jika  konsentrasi  (ppm)  tinggi  maka  persentase inhibisi juga meningkat dengan nilai koefisien determinasi yaituy = 9,9721ln(x) - 59,255and R-squared  (R 2 =  0,845).  Ini  menunjukkan  bahwa  variabel    persentase  inhibisi  dan konsentrasi (ppm) secara signifikan mempengaruhi sebanyak 84% pada jalur monofenolase.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Gambar 3. Perbandingan persentase inhibisi (%) dan konsentrasi (ppm) pada jalur difenolase
Gambar  3  menunjukkan  perbandingan  antara  persentase  inhibisi  dan  konsentrasi (ppm)  pada  jalur  difenolase  menunjukkan  bahwa  nilai  koefisien  determinasi  yaitu  y  = 4,3166ln(x)  -  15,575and  R-squared  (R 2 =  0,915).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  variabel persentase inhibisi dan konsentrasi (ppm) secara signifikan mempengaruhi sebesar 91% pada jalur  monofenolase.  Jadi,  kita  menyimpulkan  bahwa  persentase  inhibisi  dan  konsentrasi (ppm) sangat berpengaruh positif dengan tingkat signifikan 95%.
Table 2.  Aktivitas inhibitor Tirosinase (IC 50 ) ekstrak Halimeda spp
Ekstrak IC 50 (µg/ml) Monophenolase IC 50 (µg/ml) Diphenolase Metanol 57300,660 3981685,489 Etil asetat - - n-heksan - - Asam Kojat 48,409 112,947 Keterangan  :  IC 50 =    konsentrasi  ekstrak  yang  bisa  menghambat  aktivitas  tirosinase  sebesar 50%; - : tidak mencapai  50%  inhibisi pada konsentrasi maksimum  5000 µg/ml.
Berdasarkan  hasil  analisis  bahwa  dengan  pelarut  yang  berbeda  meliputi  ekstrak  n- heksan, etil asetat, dan metanol. Kami melakukan skrining aktivitas inhibitor tirosinase (jalur monofenolase  dan  difenolase).  Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  aktivitas  inhibitor tirosinase ekstrak metanol Halimeda sppmerupakan hasil baik yang cukup mampu melakukan inhibisi  aktivitas  enzim  tirosinase  pada  jalur  monofenolase  dengan  nilai  IC 50 sebesar  : 57300,660µg/ml  dan  IC 50 =  3981685,489µg/ml  pada  jalur  difenolase  dengan  asam  kojat sebagaicontrol positif.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Sementara itu,  pada ekstrak etil asetat dan ekstrak n-heksan tidak memiliki aktivitas inhibitor  tirosinase.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  non-polar  dan  semi-polar  pada Halimeda spp tidak memiliki kemampuan pada aktivitas inhibisi tirosinase. Oleh karena itu, penemuan  baru  agen  inhibitor  tirosinase  yang  berasal  dari Halimeda sppmemberikan informasi  yang  bermanfaat  untuk  industri  kosmetik.  Perhatian  utama  pada  eksplorasi Halimeda sppyang  diselidiki  oleh  para  ilmuwan  dapat  menghambar  terjadinya hiperpigmentasi  kulit.    Jadi,  spesies Halimeda sppmerupakan  salah  satu  rumput  laut  yang prospektif  untuk  kepentingan  kosmetik.  Hal  ini  masih  dimanfaatkan  secara  tradisional  oleh masyarakat pesisir untuk perawatan kulit.

## IV. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  bahwa Halimeda sppmemiliki  aktivitas  inhibitor tirosinase walaupun masih jauh dari ekstrak tanaman lainnya. Akan tetapi alga hijau Halimeda sppbelum dimanfaatkan oleh masyarakat pesisir sebagai bahan pencerah kulit.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  berterima  kasih  kepada  mahasiswa  Prodi  Sumberdaya  Akuatik  yang membantu  dalam  mengumpulkan  sampel  makroalga  laut. Penulis  juga  mengucapkan  terima kasih  kepada  laboran  pusat  studi  biofarmaka  LPPM-IPB  yang  sudah  membantu  dalam pengujian aktivitas inhibitor tirosinase. Penelitian ini didanai oleh Kemristek-DIKTI melalui hibah kompetitif nasional.

## Daftar Pustaka
Batubara  I,  Darusman  LK,  Mitsunaga  T,  Rahmiwati  M,  Djauhari  E.  2010.  Potency  of Indonesian  Medicinal  Plants  a  Tyrosinase  Inhibitor  and  Antioxidant  Agent.  J  Biol Scie 10: 138-144.
Beissert  S.  2002.  Use  of  mutant  mice  in  photoimmunological  and  photocarcinogenetic investigation. Methods 28 : 130–137.
Booij  K,  Hillebrand  TJ,  van  Ooijen  J.  2001.Nutrien,  trace  metal  and  organiccontaminant  in Banten bay, Indonesia.Marine Pollution Bulletin. 42(11): 1187-1190.
Cabanes JS, Chazarra, Carmona FG. 1994.  Kojic acid, a cosmetic skin whitening agent is a slow-binding inhibitor of catecholase activity of tyrosinase. J. Pharm. Pharmacol. 46 : 928 - 985.
Curto  EV,  Kwong  C,  Hermersdosfer  H,  Glatt  H,  Santis  C.  1999.  Inhibitor  of  mammalian melanocyte tyrosinase: in vitro comparisons of alkyl esters of gentisic acid with other putative inhibitor. Biochem Pharm 57: 663-672.
[DPT]  Ditjen  Perikanan  Tangkap.  2015.Indonesia  produsen  rumput  laut cottonii terbesar dunia. http://kkp.go.id. Diaksespada tanggal 5 Oktober 2018 pada pukul12.00 WIB.
Farhan  AR,  Lim  S.  2012.  Vulnerabilityassessment  of  ecological  condition  inseribu  island, Indonesia. Ocean and Coastal Management . (65) : 1-14
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Fitrie,  A.A.,  2004,  Histologi  dari  melanosit.  e-USURepository  Universitas  Sumatera  Utara 5:1-6.
Friedmann  PS, Gilcrest BA. 1987. Ultraviolet radiation directly induces pigment production by cultured human melanocytes. J. CellPhysiol . 133: 88-94.
Gilchrest  BA, Park HY,  Eller MS, Yaar M. 1996. Mechanisms of ultraviolet light-induced pigmentation. Photochem and Photobiol. 63(1): 1-1 0.
Ha YM, Chun SW, Song S, Lee H, Suh H, Chung HY. 2007. 4-(6-Hydroxy-2-naphthyl)-1,3- bezendiol: A potent, new tyrosinase inhibitor. Biol. Pharm. Bull. 30 (9) : 1711-1715.
Harborne JB. 1984. Phytochemical Method: A guide to modern techhniques of plant analysis. Second  edition. Chapman  and Hall. New York.
Hartanti,  L.,  Setiawan,  H.K.,  2009,  Inhibitorypotential  of  some  synthetic  cinnamic acidderivatives towards tyrosinase enzyme, IndoJ Chem 9:158-168
Hunt  G, Todd  C,  Cresswell JE,  Thody  AJ. 1994.  α-Melanocyte stimulating hormone and its  analogue  Nle4DPhe7α-MSH  affect  morphology,  tyrosinase  activity  and melanogenesis in cultured human melanocytes. J.Cell. Sci. 107 : 205-211.
Kim,  Y.-J.;  Uyama,  H.  2005.  Tyrosinase  inhibitors  from  natural  and  synthetic  sources: Structure,inhibition mechanism and perspective for the future. Cell. Mol. Life Sci. , 62 , 1707–1723.
Libow LF, Scheide S, De Leo VA. 1988. Ultraviolet radiation acts as an independent mitogen for normal human melanocytes in culture. Pig. Cell Res 1: 397-401.
Likhitwitayawuid K. 2008. Stillbenes with tyrosinase inhibitory activity. J CurrSci. 94:44-52.
Lin JW, Chiang HM, Lin YC, Wen KC. 2008. Natural products with skin-whitening effects. J. Food and Drugs Analysis . (16). 2: 1-10.
Miyazawa,  M,  Tamura,  N.,  2007,  Inhibitorycompound  of  tyrosinase  activity  from  the sprout of Polygonum hydropiper L.(Benitade), Biol Pharm Bull 30:595-597.
Montgomery,  R.,  Conway,  T.W.,  Spector,  A.A.,1993,  Biokimia  Berorientasi  pada KasusKlinik, Staf Pengajar FKUI, penerjemah;Jakarta: Binarupa Aksara.
Nerya O, Musa R, Khatib S, Tamir S, Vaya J. 2004. Chalcones as potenttyrosinase inhibitors: the effect of hydroxyl position sand numbers.Phytochemistry 65: 1389-1395.
Pandel R, Polsaj B, Godic A, Dahmane R. 2013. Skin photoaging and the role of antioxidants in its prevention. Dermatology . 1-11. Pawelek  JM,  Korner  AM.  1982.  The  biosynthesis  of  mammalian  melanin. Am  Sci. 70:136-145
Prota G, Thomson RH. 1976. Melanin pigmentation in mammals. Endeavor:35: 32-38.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 5, Nomor 2, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Sanchez-Ferrer  A,  Rodrygez-Lopez  JN,  Garcya-Carmona  F.  1995.  Tyrosinase:

## Acomprehensive review of its mechanism. Biochim Biophys Acta. 1247:1-11.
Slowminski  A,  Desmond  JT,  Shibahara  S,  Wortsman  J.  2004.  Melanin  pigmentation  in  mammalian skin and its hormonal regulation. Physiol. Rev . 84 : 1155 – 1228
Spritz  RA, Hearing VJ. 1994. Genetic disorder dipigmentation. Adv. Hum. Genet. 22 : 1- 45.
Yamauchi  K,  Mitsunaga  T,  Batubara  I.  2011.  Isolation,  identification  andtyrosinase inhibitory activities of the extractives from Allamanda cathartica.J Natural Resources 2:167-172.