## ALCHEMY : JOURNAL OF CHEMISTRY

## Artikel Penelitian
Analisis Sidik Jari Kromatografi Lapis Tipis Anting-Anting ( Acalypha indica L.)
Muhammad Teguh Laksono, Elok Kamilah Hayati*
Program Studi Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, Indonesia,
65144 INFO ARTIKEL ABSTRAK Sejarah Artikel Diterima 2 April 2021 Direvisi 19 Agustus 2021 Tersedia online 9 Desember 2021
* Penulis korespondensi:
eloksunardji@yahoo.com
Anting-anting plant ( Acalypha indica L.) is a plant that the community has used as raw  material  for  herbal  medicine.  Anting-anting  plants  contain  chemical compounds, so it is difficult to ensure these plants' safety and quality control. The research objective was to validate the method by knowing the stability, specificity, precision, and rigidity of the chromatographic profile of alkaloid compounds in the TLC analysis of the anting-anting extract. Extraction was carried out using ethyl acetate solvent for 20 minutes  with a frequency of 42 kHz. The eluent used is cyclohexane:  toluene:  diethylamine  (75:15:10)  with  Dragendorff  reagent.  The method of validation was acceptable according to the criteria except for the stability test of the analyte during chromatography. The instability of the analyte is indicated that not all spots form a straight diagonal line. The specificity of the method was carried out by comparing the fingerprint patterns of the leaves of the anting-anting with  ekor  kucing  ( Acalypha  hibsida Farm.)  and  teh-tehan  plants ( Acalypha siamensis ). The fingerprint profile showed a yellow stain (Rf = 0.39) on the leaves of the anting-anting, which did not appear in the fingerprint profiles of the two comparison samples.
Keywords: anting-anting, fingerprint analysis, thin layer chromatography, method validation
Anting-anting ( Acalypha indica L.) merupakan tanaman yang telah dimanfaatkan masyarakat sebagai bahan baku obat herbal. Anting-anting mengandung banyak senyawa kimia sehingga sulit menjamin keamanan dan pengendalian mutu dari tanaman  tersebut.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  validasi  metode  dengan mengetahui  kestabilan,  spesifitas,  presisi,  dan  ketegaran  profil  kromatografi senyawa  alkaloid  pada  analisis  KLT  ekstrak  anting-anting.  Ekstraksi  dilakukan menggunakan pelarut etil asetat selama 20 menit dengan frekuensi 42 kHz. Eluen yang  digunakan  adalah  sikloheksana  :  toluena  :  dietilamin  (75:15:10)  dengan reagen  Dragendorff.  Validasi  metode  dapat  diterima  sesuai  kriteria  kecuali  uji stabilitas  analit  selama  kromatografi.  Ketidakstabilan  analit  ditunjukkan  dengan seluruh  noda  yang  dihasilkan  tidak  membentuk  garis  diagonal  yang  lurus. Spesifitas pada metode dilakukan dengan membandingkan pola  sidik jari daun anting-anting dengan daun ekor kucing ( Acalypha hibsida Farm) dan daun teh- tehan ( Acalypha siamensis ). Profil sidik jari menunjukkan bahwa terdapat noda berwarna kuning kehijauan ( Rf = 0,39) pada daun anting-anting yang tidak muncul pada profil sidik jari kedua sampel pembanding tersebut.
Kata kunci: anting-anting, analisis sidik jari, kromatografi lapis tipis, validasi metode

## 1. Pendahuluan
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara  tropis  yang  kaya  akan  keanekaragaman  jenis  tumbuhan  dan  banyak dimanfaatkan sebagai bahan baku obat herbal [1]. Saat ini obat herbal banyak digunakan sebagai pengobatan alternatif karena ketersediaannya yang melimpah di alam, harga terjangkau, dan tidak menimbulkan efek samping [2]. Anting-anting ( Acalypha indica L.) merupakan salah satu tanaman yang termasuk dalam genus Acalypha dengan ciri daun berbentuk belah ketupat, daun tunggal, berwarna hijau, berujung runcing, dan tepi bergerigi [3]. Tanaman ini telah dimanfaatkan oleh masyarakat sebagai obat herbal dengan berbagai khasiat diantaranya, obat disentri, diare, gangguan pencernaan, muntah darah, mimisan [4], antibakteri [5, 6], antioksidan [7], antidiabetes [8], dan menurunkan kadar gula darah [9]. Anting-anting secara empiris juga dapat digunakan sebagai pengobatan antimalaria [8]. Alkaloid yang terkandung dari ekstrak etil asetat daun  anting-anting  secara in  vivo diketahui  dapat  menghambat  pertumbuhan  parasit  dengan  cara  menghalangi pertumbuhan parasit melalui intraseluler kolin [10].
Anting-anting mengandung senyawa flavonoid, triterpenoid, saponin, senyawa fenolik, steroid, tanin, minyak atsiri, asam askorbat, ꞵ -sitosterol, kuersetin, dan kaemfero [10, 11, 12, 13]. Kualitas dan keaslian tanaman obat dapat dievaluasi berdasarkan senyawa penciri yang terkandung didalamnya. Kehadiran senyawa-senyawa penciri tidak selalu menjamin bahwa produk tersebut mengandung satu jenis tanaman obat tanpa adanya campuran tanaman lain yang mempunyai kemiripan fisiknya. Oleh karena itu, perlu dikembangkan suatu metode kendali mutu untuk tanaman obat.
Banyaknya kandungan senyawa kimia dalam suatu tanaman obat dapat menjadi faktor kesulitan dalam menjamin pengendalian mutu dari tanaman tersebut. Hal tersebut dapat memungkinkan terjadinya pemalsuan obat apabila terjadi penurunan pasokan bahan baku suatu tanaman obat. Pemalsuan obat herbal biasanya dilakukan dengan mencampurkan dengan tanaman yang memiliki morfologi sama atau berkerabat dekat. Oleh sebab itu, perlu adanya metode pengendalian mutu yang dapat menunjukkan ciri spesifik dari suatu tanaman obat, sehingga mampu menghasilkan suatu produk yang bermutu terkait konsistensi kualitas, khasiat, dan keamanannya [14].
Analisis sidik jari merupakan salah satu metode yang digunakan untuk menampilkan senyawa aktif yang dikandung oleh  suatu  tanaman  obat  dalam  bentuk  kromatogram  sidik  jari,  sehingga  karakteristik  tanaman  obat  tersebut  dapat digambarkan secara menyeluruh [15]. Metode ini dimanfaatkan untuk kontrol kualitas senyawa multikomponen dalam suatu tumbuhan obat karena profil kromatografi yang dihasilkan dapat menggambarkan komposisi sampel dan stabilitasnya [16]. Metode analisis sidik jari pada penelitian ini menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) karena waktu yang dibutuhkan lebih singkat, sampel dan fase gerak yang digunakan lebih sedikit, serta lebih sensitif dan selektif [17]. Analisis sidik jari kromatografi lapit tipis (KLT) dapat memberikan data fundamental yang mengindikasikan stabilitas dan konsistensi produk obat herbal [18]. Penelitian ini bertujuan mengembangkan metode analisis sidik jari anting-anting menggunakan KLT hasil ekstraksi ultrasonik dengan validasi metode meliputi stabilitas analit, spesifitas, presisi, presisi antara, dan ketegaran.

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1. Bahan
Adapun bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun anting-anting ( Acalypha indica L.), daun ekor kucing ( Acalypha hibsida Farm.), dan daun teh-tehan ( Acalypha siamensis) yang berasal dari pesisir pantai di Kabupaten Malang. Bahan kimia lain yang juga diperlukan adalah standar berberin 100 ppm, etil asetat p.a (Merck), sikloheksana p.a (Merck), toluena, dietilamin, reagen Dragendorff, dan pelat KLT silika gel 60 F 254 (Merck, Darmsatd, Jerman).

## 2.2. Preparasi Sampel
Bagian anting-anting ( Acalypha indica L.) yang digunakan adalah daunnya. Daun dicuci bersih, dipotong kecil-kecil dan dikeringaningkan. Simplisia yang telah kering dihaluskan dan dilakukan pengayakan dengan ukuran 90 mesh.

## 2.3. Ekstraksi Anting-Anting
Simplisia daun anting-anting ditimbang sebanyak 1 g dan diekstraksi dengan 10 mL etil asetat. Kemudian disonikasi pada frekuensi 42 kHz selama 20 menit pada suhu ruang. Hasil ekstraksi disaring dan diambil ekstrak kasarnya [19].

## 2.4. Uji Stabilitas Analit pada Pelat dan Dalam Larutan
Ekstrak sebanyak 15 µL diaplikasikan sebanyak 4 lajur pada pelat KLT 5x10 cm. Ekstrak segar daun anting-anting diaplikasikan  pada  lajur  1.  Lalu  ekstrak  tersebut  disimpan  dan  pelat  didiamkan  selama  90  menit.  Ekstrak  yang  telah disimpan selama 90 menit sebelumnya diaplikasikan pada lajur 3. Disiapkan pula ekstrak segar daun anting-anting yang akan diaplikasikan pada lajur 2 dan 4 segera sebelum dielusi. Kemudian, pelat dikembangkan menggunakan bejana twin trough dan didokumentasikan sebelum dan setelah derivatisasi. Ekstrak dapat dikatakan stabil 90 menit pada pelat dan 90 menit dalam larutan sebelum proses kromatografi jika perbedaan nilai Rf ≤ 0,05 [20].

## 2.5. Uji Stabilitas Analit selama Kromatografi
Ekstrak diaplikasikan sebanyak 15 µL sebagai noda pada sudut kiri bawah pelat KLT berukuran 10x10 cm (10 mm dari masing-masing tepi). Pelat dielusi dalam bejana twin trough hingga fase gerak mencapai tinggi 8 cm dari posisi aplikasi ekstrak.  Setelah  proses elusi,  pelat  diangkat  dan  dikeringanginkan.  Kemudian,  pelat  diputar  90°  ke kanan  dan  dielusi menggunakan eluen yang baru hingga mencapai tinggi 8 cm. Pelat disemprot menggunakan pereaksi Dragendorff dan didokumentasi. Ekstrak dikatakan stabil jika noda atau pola membentuk posisi diagonal lurus yang menghubungkan posisi awal ekstrak dan ditotolkan dengan titik perpotongan garis dari dua sisi pelarut [20].

## 2.6. Uji Stabilitas Visualisasi
Ekstrak daun anting-anting diaplikasikan sebanyak 15 µL pada pelat KLT 2x10 cm, kemudian pelat dikembangkan menggunakan bejana twin trough. Selanjutnya pelat diderivatisasi dan diamati di bawah lampu UV 366 nm. Pengamatan dilakukan pada menit ke-5, 10, 20, 30, dan 60. Hasil yang diperoleh dikatakan stabil jika tidak terjadi perubahan yang signifikan pada noda selama 60 menit [20].

## 2.7. Uji Spesifitas
Ekstrak  daun  anting-anting,  ekstrak  daun  ekor  kucing,  dan  ekstrak  daun  teh-tehan  masing-masing  diaplikasikan sebanyak 15 µL pada lajur 1, 2, dan 3 pada pelat KLT 4x10 cm. Pelat dielusi menggunakan bejana twin trough . Pelat didokumentasikan sebelum dan setelah derivatisasi, kemudian hasil kromatogram dibandingkan [20].

## 2.8. Uji Presisi
Sampel  daun  anting-anting  diekstraksi  dengan  ekstraksi  ultrasonik  sebanyak  3  kali.  Masing-masing  ekstrak diaplikasikan  sebanyak  15  µL  pada  pelat  KLT  10x10  cm  (setiap  1  ekstrak  diaplikasikan  pada  3  lajur  dalam  1  pelat). Pengaplikasian ekstrak dilakukan pada tiga pelat yang berbeda. Pengembangan setiap pelat dilakukan pada chamber dengan menggunakan fase gerak yang baru disiapkan hingga proses elusi mencapai tinggi 8 cm. Pelat didokumentasi sebelum dan setelah disemprot menggunakan pereaksi Dragendorff. Nilai Rf pada masing-masing zona noda dihitung dan ditentukan rerata serta simpangan relatifnya. Hasil dapat diterima jika pola sidik jari identik terkait dengan jumlah, letak, warna, intensitas noda, dan memiliki perbedaan nilai Rf ≤ 0,02 [20].

## 2.9. Uji Presisi Antara
Pengaplikasian ekstrak dilakukan pada 2 hari yang berbeda setelah dilakukannya pengujian presisi. Pada hari kedua dan ketiga disiapkan pelat KLT dan diaplikasikan sebanyak 3 kali ulangan (satu pelat per hari). Masing-masing ekstrak kasar diaplikasikan sebanyak 15 µL pada pelat KLT 10x10 cm (setiap 1 ekstrak diaplikasikan pada 1 lajur). Kemudian pengembangan setiap pelat dilakukan di bejana pengembang hingga mencapai tinggi 8 cm. Pelat didokumentasi sebelum dan setelah disemprot menggunakan pereaksi Dragendorff. Nilai Rf pada masing-masing zona noda dihitung kemudian ditentukan rerata dan simpangan relatifnya. Hasil dapat diterima jika pola sidik jari identik terkait jumlah, letak, warna, intensitas warna, dan perbedaan nilai Rf ≤ 0,05 [20].

## 2.10. Uji Ketegaran terhadap Bejana Pengembang
Ekstrak diaplikasikan pada pelat KLT 4x10 cm. Ekstrak diaplikasikan pada lajur 1 dan 2 sebanyak 15 µL, sedangkan standar berberin 100 ppm pada lajur 3 sebanyak 1 totol. Pelat dikembangkan dalam bejana twin trough dan flat bottom . Pelat didokumentasi sebelum dan setelah disemprot menggunakan pereaksi Dragendorff. Kemudian, dibandingkan hasil pengelusian menggunakan bejana twin trough dan flat bottom . Hasil dapat diterima jika pola sidik jari identik terkait dengan jumlah, letak, warna, intensitas warna noda, dan perbedaan nilai Rf ≤ 0,05 [20].

## 2.11. Uji Ketegaran terhadap Jarak Pengembangan
Ekstrak diaplikasikan pada pelat KLT 4x10 cm. Ekstrak diaplikasikan pada lajur 1 dan 2 sebanyak 15 µL, sedangkan standar berberin pada lajur 3 sebanyak 1 totol. Pelat dikembangkan dalam bejana twin trough hingga fase gerak mencapai tinggi 7 cm dari tanda titik awal penotolan. Pelat didokumentasi sebelum dan setelah disemprot menggunakan pereaksi Dragendorff. Kemudian, pelat hasil pengujian jarak pengembangan 7 cm dan 8 cm dibandingkan. Hasil dapat diterima jika pola sidik jari identik terkait dengan jumlah, letak, warna, intensitas warna, dan perbedaan nilai Rf ≤ 0,05 [20].

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Preparasi Sampel
Sampel  dicuci  untuk  menghilangkan  pengotor  yang  dapat  mengganggu  proses  ekstraksi.  Kemudian  sampel dikeringanginkan karena alkaloid memiliki sifat fisik yang kurang tahan terhadap panas [19]. Pengeringan berfungsi untuk
menurunkan  kadar  air,  mencegah  tumbuhnya  jamur,  dan  menghilangkan  reaksi  enzimatis,  sehingga  sampel  dapat disimpan lebih lama. Sampel yang telah kering dihaluskan dengan ayakan 90 mesh dan diperoleh serbuk halus. Ukuran partikel yang semakin kecil akan memperluas permukaan sampel sehingga dapat memperbesar interaksi antara partikel serbuk dengan pelarut dan menyebabkan pelarut lebih mudah memecah dinding sel sampel.

## 3.2. Ekstraksi Ultrasonik Daun Anting-Anting ( Acalypha indica L.)
Ekstraksi daun anting-anting dilakukan menggunakan pelarut etil asetat secara ultrasonik dengan waktu optimum 20 menit. Hal tersebut dikarenakan pelarut tersebut memiliki sifat semipolar, sehingga dapat melarutkan senyawa semipolar yang terdapat di dalam sel, salah satunya adalah alkaloid. Perbandingan antara sampel dan pelarut yang digunakan adalah 1:10 (b/v) karena dapat menghasilkan pola pemisahan alkaloid yang jelas pada anting-anting [21, 22]. Hasil ekstraksi daun anting-anting diperoleh ekstrak berwarna hijau kehitaman ( Gambar 1 ).
Gambar 1. Filtrat ekstrak daun anting-anting ( Acalypha indica L.).

## 3.3. Stabilitas Analit
Uji stabilitas pada daun anting-anting bertujuan untuk mengetahui mutu bahan baku maupun produk tanaman tersebut baik selama masa penyimpanan maupun pengujian. Stabilitas analit sebelum dan setelah proses elusi maupun setelah derivatisasi perlu diketahui karena selama proses preparasi, elusi, hingga derivatisasi dan deteksi UV dilakukan secara terpisah  yang  dapat  memengaruhi  sistem  kerja  kromatografi.  Keberadaan  sampel  pada  permukaan  pelat  KLT  berupa ekstrak dapat terpengaruh oleh cahaya, udara, debu, suhu, dan faktor-faktor lainnya yang dapat mengubah sampel.

## 3.3.1. Stabilitas Analit pada Pelat dan Dalam Larutan
Stabilitas analit pada pelat dan dalam larutan (sebelum kromatografi) dapat diketahui dengan mengembangkan dua ekstrak  yang disiapkan  pada waktu  berbeda.  Lajur  1 dan 2  bertujuan  untuk  mengevaluasi stabilitas  analit  pada  pelat, sedangkan lajur 3 dan 4 untuk mengevaluasi stabilitas analit dalam larutan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa keempat lajur menghasilkan pola yang relatif sama ( Gambar 2 ). Tidak ada perbedaan jumlah, warna, dan intensitas noda pada kromatogram yang dihasilkan. Analit dikatakan stabil pada pelat dan dalam larut apabila perbedaan nilai Rf yang diperoleh ≤ 0,05 [20]. Hal tersebut mengindikasikan bahwa analit tetap stabil meskipun didiamkan pada pelat dan dalam larutan selama 90 menit sebelum kromatografi dimulai.
Gambar 2. Stabilitas analit daun anting-anting selama 90 menit pada pelat dan dalam larutan. Lajur (1), sampel 90 menit sebelum kromatografi, Lajur (2) dan (4), sampel segar sebelum kromatografi, lajur (3) sampel 90 menit sebelum aplikasi pada pelat. (A) pelat KLT tanpa penyinaran lampu UV dan (B) pelat KLT di bawah lampu UV 256 nm.

## 3.3.2. Stabilitas Visualisasi
Uji  stabilitas visualisasi  perlu dilakukan  karena  adanya  waktu  jeda  dalam  penyelesaian  kromatografi  dan  deteksi komponen.  Uji  tersebut  dilakukan  untuk  mengetahui  ketahanan  pola  dan  intensitas  warna  pada  pelat  yang  telah
A B
diderivatisasi  menggunakan  reagen  Dragendorff  selama  60  menit.  Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa  tidak  ada perubahan pada jumlah noda maupun intensitas warna pada pelat, sehingga hal tersebut mengindikasikan bahwa profil sidik  jari  daun  anting-anting  setelah  derivatisasi  dengan  reagen  Dragendorff  secara  penampakan  visual  tidak  terjadi perubahan yang signifikan selama 60 menit pengamatan ( Gambar 3 ).
Gambar 3. Stabilitas visualisasi daun anting-anting setelah derivatisasi dengan reagen Dragendorff.

## 3.4. Uji Spesifitas
Uji  spesifitas  anting-anting  dilakukan  dengan  membandingkan  tanaman  yang  berkerabat  dekat  dan  mempunyai morfologi yang sama dengan anting-anting. Pada penelitian ini uji spesifitas dilakukan dengan menggunakan tanaman ekor kucing dan tanaman teh-tehan sebagai pembanding ( Gambar 4 ). Suatu metode kualitatif dikatakan spesifik jika pengujian terhadap dua sampel uji atau lebih dengan identitas yang sama memberikan hasil yang sama, dan begitupun sebaliknya.
Gambar 4. Morfologi (A) daun anting-anting, (B) daun ekor kucing, dan (C) daun teh-tehan.
Gambar 5 . Hasil uji spesifitas (1) daun anting-anting, (2) daun ekor kucing, (3) daun teh-tehan, dan (4) standar berberin 100 ppm. (A) pelat KLT tanpa penyinaran lampu UV dan (B) pelat KLT di bawah lampu UV 256 nm.
Pada uji spesifitas daun anting-anting menghasilkan 8 noda, daun ekor kucing menghasilkan 7 noda, dan daun teh- tehan menghasilkan 7 noda ( Gambar 5 ). Selain itu, ketiga sampel memiliki noda dengan nilai Rf yang sama yaitu pada nilai Rf 0,39; 0,38; 0,38; dan 0,39. Namun, daun anting-anting memiliki noda penciri berwarna kuning kehijauan yang samar yaitu pada Rf 0,39 sehingga noda ini yang membedakan dengan kedua sampel pembanding lainnya. Berdasarkan hasil uji spesifitas daun anting-anting tersebut dikatakan spesifik karena memiliki pola, jumlah, posisi, warna, dan intensitas noda yang dihasilkan berbeda dengan dua tanaman sampel pembanding lainnya.
A B

## 3.5. Presisi dan Presisi Antara
Uji presisi dan presisi antara dilakukan untuk mengetahui stabilitas analit dengan mengamati pengaruh lingkungan penyimpangan  dengan  perlakuan  yang  berbeda  hari.  Berdasarkan  hasil  pengembangan  pada  uji  presisi  diperoleh simpangan baku Rf (∆ Rf ) senyawa berberin intrapelat pada pelat 1, pelat 2, dan pelat 3 berturut-turut adalah 0,0063; 0,0195;  dan  0,0063  ( Gambar  6 dan Tabel  1 ).  Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  diperoleh  simpangan  baku Rf (∆ Rf ) senyawa berberine antarpelat sebesar 0,0153, sehingga presisi dapat diterima karena memenuhi syarat keberterimaan yaitu ≤ 0,02.
(a) (b) (c) Gambar 6. Uji presisi daun anting-anting pada hari pertama, (a) pelat ke-1; (b) pelat ke-2; dan (c) pelat ke-3. A1 = Ekstrak Ulangan 1 (Lajur 1); A2 = Ekstrak Ulangan 1 (Lajur 2); A3 = Ekstrak Ulangan 1 (Lajur 3); B1 = Ekstrak Ulangan 2 (Lajur 1); B2 = Ekstrak Ulangan 2 (Lajur 2); B3 = Ekstrak Ulangan 2 (Lajur 3); C1 = Ekstrak Ulangan 3 (Lajur 1); C2 = Ekstrak Ulangan 3 (Lajur 2); C3 = Ekstrak Ulangan 3 (Lajur 3).
Tabel 1. Noda Penciri Senyawa Berberin Hasil Kromatografi Ekstrak Etil Asetat Daun Anting-Anting Ekstrak Lajur Rf Senyawa Berberin Hari ke-2 Hari ke-3 Pelat 1 Pelat 2 Pelat 3 A A1 0,325 0,313 0,300 0,350 0,338 A2 0,313 0,313 0,300 A3 0,313 0,300 0,300 B B1 0,313 0,300 0,300 0,363 0,313 B2 0,313 0,300 0,300 B3 0,313 0,288 0,300 C C1 0,313 0,275 0,288 0,375 0,300 C2 0,313 0,263 0,288 C3 0,300 0,263 0,300 Rerata Rf intrapelat 0,313 0,290 0,296 0,363 0,317 Rerata Rf antarpelat 0,300 0,363 0,317 Rerata Rf semua pelat 0,307 SD Rf intrapelat 0,0063 0,0195 0,0063 0,0125 0,0191 SD Rf antarpelat 0,0153 0,0125 0,0191 SD Rf semua pelat 0,0238
Uji presisi antara dilakukan dengan mengembangkan 3 ekstrak yang telah dianalisis pada hari pertama, dan dilakukan kembali pada hari kedua dan ketiga pada satu pelat KLT 4x10 cm per harinya. Masing-masing ekstrak diaplikasikan pada 1 lajur pada pelat yang sama sehingga terdapat 3 lajur pada satu pelat KLT ( Gambar 7 ). Hasil pengembangan pada hari pertama hingga hari ketiga sebagai uji presisi antara diperoleh simpangan baku Rf (∆ Rf ) berturut-turut adalah 0,0063; 0,0125;  dan  0,0191.  Berdasarkan  data  tersebut  dapat  diperoleh simpangan  baku Rf (∆ Rf )  antarpelat sebesar 0,0238, sehingga dapat disimpulkan bahwa uji presisi antara dapat diterima karena memenuhi syarat keberterimaan uji presisi antara yaitu ≤ 0,05.

## 3.6. Ketegaran
Uji ketegaran merupakan uji yang digunakan untuk mengetahui kemampuan suatu metode dalam mempertahankan hasil  yang  tidak  berbeda  signifikan  apabila  dilakukan  variasi  parameter  [23].  Pada  penelitian  ini  dilakukan  dua  variasi parameter,  yaitu  jenis  bejana  pengembang  dan  jarak  pengembangan.  Jenis  bejana  pengembang  yang  dibandingkan
adalah twin  trough  chamber dan flat  bottom  chamber .  Sedangkan  validasi  metode  ketegaran  pada  variasi  jarak pengembangan  dilakukan  dengan  membandingkan  hasil  kromatogram  pada  jarak  pengembangan  8  cm  dengan  jarak pengembangan 7 cm.
(a) (b) (c)
Gambar 7. Uji presisi antara daun anting-anting pada pelat (a) hari ke-1, (b) hari ke-2, dan (c) hari ke-3.

## 3.6.1 Ketegaran terhadap Jenis Bejana Pengembang
Uji ketegaran terhadap jenis bejana pengembang dilakukan dengan mengembangkan ekstrak anting-anting pada lajur 1 dan 2, serta standar berberin 100 ppm di lajur 3 menggunakan dua tipe bejana, yaitu twin trough chamber dan flat bottom chamber . Hasil kromatogram uji ketegaran terhadap jenis bejana menunjukkan bahwa kedua bejana menghasilkan pola sidik  jari  yang  berbeda  secara  visual  ( Gambar  8 ).  Hasil  perhitungan  rerata  nilai Rf kedua  pelat  menunjukkan  bahwa perbedaan jenis bejana pengembang tidak menimbulkan perbedaan nyata pada nilai Rf yang diduga berberin (Data tidak ditunjukkan). Berdasarkan nilai Rf yang diperoleh dapat diketahui bahwa simpangan baku nilai Rf (∆ Rf ) antarpelat yaitu 0,037  (Data  tidak  ditunjukkan),  sehingga  uji  ketegaran  terhadap  jarak  pengembangan  dapat  diterima  karena  hasil simpangan baku Rf (∆ Rf ) ≤ 0,05.
Gambar 8. Perbandingan kromatogram hasil pengembangan menggunakan jenis bejana (1) twin trough dan (2) flat bottom.
Gambar 9. Perbandingan hasil kromatogram dengan jarak pengembangan (1) 8 cm dan (2) 7 cm.

## 3.6.2 Ketegaran terhadap Jarak Pengembangan
Uji ketegaran terhadap jarak pengembangan dilakukan dengan mengembangkan ekstrak anting-anting pada lajur 1 dan 2, serta standar berberin 100 ppm pada lajur 3. Hasil kromatogram uji ketegaran terhadap jarak pengembangan secara visual menunjukkan bahwa perbedaan jarak pengembangan tidak memengaruhi pola sidik jari yang dihasilkan ( Gambar 9 ). Berdasarkan hasil kromatogram penurunan jarak pengembangan dari 8 cm ke 7 cm, diperoleh simpangan baku nilai Rf (∆ Rf ) antarpelat sebesar 0,025 (data tidak ditunjukkan) dan telah memenuhi syarat keberterimaan dengan nilai simpangan baku Rf (∆ Rf )  ≤  0,05.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  uji  ketegaran  jarak  pengembangan  daun  anting -anting  dapat dilakukan pada kedua variasi jarak tersebut.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa uji validasi metode dapat diterima sesuai kriteria kecuali uji stabilitas analit selama kromatografi. Profil sidik jari daun anting-anting terhadap daun ekor kucing menghasilkan 7 noda dan terhadap daun teh-tehan menghasilkan 7 noda. Selain itu, pada kromatogram daun anting-anting terdapat noda dengan warna kuning kehijauan yang sedikit samar pada Rf 0,39 yang tidak dimiliki oleh dua tanaman pembanding  tersebut.  Berdasarkan  hasil  validasi  dapat  disimpulkan  metode  ini  dapat  digunakan  dalam  kendali  mutu tanaman anting-anting.
. Daftar Pustaka
[1]  M. Untoro, E. Fachriyah, & D. Kusrini, “Isolasi dan Identifikasi Senyawa Golongan Alkaloid dari Rimpang Lengkuas Merah ( Alpinia purpurata ),” Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , vol. 19, no. 2, pp. 58 – 62, 2016.
[2] F. T. Rahmah, “Uji Toksisitas Anting -Anting ( Acalypha indica , L.) Hasil Ekstraksi Ultrasonik dengan Variasi Pelarut dan Lama Ekstraksi,” Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2018.
[3] R. Ocktarini, “Pengaruh Ekstrak Herba Anting-Anting ( Acalypha australis , L.) terhadap Kadar Glukosa Darah Mencit Ba lb/C Induksi Streptozotocin,” Skripsi, Universitas Sebelas Maret, Surakarta, 2010.
[4]  A. Ameilia, “Khasiat Anting -Anting ( Acalypha indica L),” Majalah Farmasetika , vol. 3, no. 1, pp. 7-11, 2018.
[5]  I. Batubara, W. T. Wahyuni, & I. Firdaus, “Utilization of Anting -Anting ( Acalypha indica ) Leaves as Antibacterial,” in IOP Conference Series: Earth and Environmental Science , vol. 31, no. 012038, 2016.
[6] I. Pratiwi, “Uji Antibakteri Ekstrak Kasar Daun Acalypha indica Linn. terhadap Bakteri Salmonella choleraesuis dan Salmonella typhimurium ,” Skripsi, Universitas Sebelas Maret, Surakarta, 2009.
[7]  V.  T.  Narwade,  A.  A.  Waghmare,  & A.  L.  Vaidya,  “Detection  of  Flavonoids  from Acalypha  indica L. ,” Journal  of Ecobiotechnology , vol. 3, no. 11, pp. 5 – 7, 2011.
[8]  M.  Wink,  "Ecological  Roles  of  Alkaloids,"  in Modern  Alkaloids:  Structure,  Isolation,  Synthesis  and  Biology, E. Fattorusso & O. Taglialatela-Scafati, Ed. Weinheim: Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA,  2007.
[9]  B. N. Aer, A. C. Wullur, & G. Citraningtyas , “ Uji Efek Ekstrak Etanol Kulit Terung Ungu ( Solanum melongena L.) terhadap Kadar Gula Darah pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar ( Rattus norvegicus ),” PHARMACON Jurnal Ilmiah Farmasi , vol. 2, no. 4, pp. 135 – 141, 2013.
[10]  E. K. Hayati, A. Jannah, & R. Ningsih, “Identifikasi Senyawa dan Aktivitas Antimalaria in Vivo Ekstrak Etil Asetat Anting-Anting ( Acalypha indica L.),” Molekul , vol. 7, no. 1, pp. 20 – 32, 2012.
[11]  S. Dalimartha, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 5 . Jakarta: Pustaka Bunda, 2008.
[12]  M. Masih, T. Banerjee, B. Banerjee, & A. Pal, “Antidiabetic Activity of Acalypha indica Linn. on Normal and Alloxan Induced Diabetic Rats ,” International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , vol. 3, no. 3, pp. 51 – 54,
2011.
[13]  H. S. Kirom & Z. M. Ramadhania, “ Review Artikel: Aktivitas Biologis Tanaman Kucing-Kucingan ( Acalypha indica L.),” Farmaka , vol. 15, no. 3, pp. 162 – 168, 2017.
[14]  M. Rafi, R. Heryanto, & D. A. Septaningsih, ATLAS Kromatografi Lapis Tipis Tumbuhan Obat Indonesia Volume I . Bogor: IPB Press, 2017.
[15]  X,-M. Liang, Y. Jin, Y.-P. Wang, G.-W. Jin, Q.. Fu, & Y.-S. Xiao, “Qualitative and Quantitative Analysis in Quality Control of Traditional Chinese Medicines ,” Journal of Chromatography A , vol. 1216, no. 11, pp. 2033 – 2044, 2009. [16]  L. Zhao, C. Huang, Z. Shan, B. Xiang, & L. Mei, “ Fingerprint Analysis of Psoralea corylifolia L. by HPLC and LC-MS ,” Journal of Chromatography B, Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences , vol. 821, no. 1, pp. 67 – 74, 2005.
[17] N. A. Andhika, “Sidik Jari Kromatografi Lapis Tipis dari Daun Tiga Jenis Jambu Biji,” Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2011.
[18]  S. R. Yolanda, “Pengembangan Metode Analisis Sidik Jari Sidaguri ( Sida rhombifolia L.) Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis,” Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2017.
[19] Y. Eleanore, “Analisis Fitokimia dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Sengon ( Paraserianthes falcataria (L) Nielsen) Menggunakan Metode DPPH," Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2013.
[20]  E. Reich, & A. Schibli, "Validation of High-Performance Thin-Layer Chromatographic Methods for the Identification of Botanicals in a cGMP Environment," Journal of AOAC International , vol. 91, no. 1, pp. 13-20, 2008.
[21] E. W. Safitri, “Optimasi Variasi Pelarut dan Variasi Lama Ekstraksi Ultrasonik Senyawa Aktif Alkaloid pada Anting - Anting ( Acalypha indica L.) serta Identifikasi Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis,” Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2018.
[22] Y. Qoriati, “Optimasi Ekstraksi Ultrasonik dengan Variasi Pelarut dan Lama Ekstraksi terhadap Kadar Alkaloid Total pada Anting-anting ( Acalypha indica L.) Menggunakan Spektrofotometer UV- Vis,” Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2018.
[23]  A. U. Fatahillah, “ Analisis Sidik Jari Kromatografi Lapis Tipis Tanaman Pegagan ( Centella asiatica ),” Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2016.