Abstrak — Yeast merupakan  salah  satu  mikroorganisme  tanah yang  banyak  ditemukan  di  daerah  rhizosfer.  Salah  satu kemampuan yeast adalah  fermentasi.  Budidaya  SDN  merupakan metode  budidaya  tanaman  yang  bertujuan  memperbaiki  area rhizosfer sehingga nutrisi tesimpan dengan baik. Pada penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  fermentasi  etanol  dan tingkat kadar produksi etanol pada isolat genus yeast Candida (1), Candida (2), Lindnera , Saccharomyces , Saccharomycopsis dengan menggunakan  konsetrasi  glukosa  yang  berbeda.  Metode  utama penelitian ini meliputi subkultur yeast tanah, uji fermentasi gula, uji  fermentasi  substrat  glukosa,  pengukuran  kadar  gula  reduksi dan  pengukuran  kadar  etanol.  Fermentasi  substrat  glukosa dilakukan  menggunakan  berbagai  konsentrasi  yaitu  10%,  20% dan  30%  dengan  lama  fermentasi  24  jam.  Isolat  yang  mampu tumbuh pada subkultur medium YMEA adalah yeast Saccharomyces dan Lindnera .  Hasil  uji  fermentasi  menunjukkan bahwa  isolat yeast    Lindnera dan Saccharomyces berpotensi menghasilkan  etanol  dengan  kadar  etanol  tertinggi  pada konsentrasi  substrat  glukosa  30  %  sebesar  60,7%  pada  isolat Lindnera dan 69,5% pada isolat Saccharomyces .
Kata  Kunci —  Etanol,  fermentasi ,  Lindnera,  Saccharomyces, yeast .

## I. PENDAHULUAN
ANAH  merupakan  salah  satu  ekosistem  yang  dapat menunjang  kehidupan  mikroba  dengan  baik,  karena memiliki  senyawa  organik  dan  mineral.  Banyak  faktor yang  mempengaruhi  kehidupan  mikroba  didalam  lingkungan tanah seperti faktor abiotik (yang meliputi sifat fisik dan kimia tanah)  dan  biotik  (adanya  mikrobia  lain  dan  tanaman  tingkat tinggi)  yang  ikut  berperan  dalam  menentukan  tingkat pertumbuhan  dan  aktifitas  mikroba  tersebut.  Struktur  tanah, jenis  tanah,  aerasi  tanah,  ketersediaan  air  dan  suhu  tanah merupakan  sifat-sifat  fisik  yang  berperan  dalam  menentukan kelangsungan  proses  fisiologi  mikroba  [1].  Tanah  di  daerah Kota  Batu  berupa  tanah  mekanis  yang  banyak  mengandung mineral  yang  berasal  dari  ledakan  gunung  berapi,  sifat  tanah semacam  ini  mempunyai  tingkat  kesuburan  yang  tinggi sehingga  sebagian  lahan  tanah  di  daerah  tersebut  digunakan untuk pertanian dan agrowisata [2]. Salah satu area tanah yang memiliki populasi mikroba dalam jumlah besar yaitu dibagian rhizosfer.  Rhizosfer  merupakan  daerah  yang  ideal  untuk pertumbuhan mikroorganisme tanah yang umumnya didominansi  oleh  bakteri,  aktinomicetes,  dan  fungi  [3].
Rhizosfer  kaya  akan  eksudat  yang  dikeluarkan  oleh  tanaman melalui  proses  sekresi  akar.    Kandungan  eksudat  antara  lain karbohidrat,  asam  amino,  asam  organik,  enzim,  dan  senyawa- senyawa  lain.  Kandungan  eksudat  inilah  yang  dapat dimanfaatkan oleh mikroba tanah [4].
Salah  satu  mikroorganisme  yang  dapat  ditemukan  di  area rhizosfer  adalah yeast.  Yeast memanfaatkan  eksudat  akar melalui  proses  dekomposisi  [5].  Mikroorganisme  tanah  akan berkumpul  di  dekat  perakaran  tanaman  (rhizosfer)  yang menghasilkan  eksudat  akar  dan  serpihan  tudung  akar  sebagai sumber  makanan  mikroba  tanah  [6].  Budidaya  SDN  ( Soil Drive  Nutrient )  merupakan  suatu  budidaya  tanaman  yang menggunakan  metode Vesicular  Arbuscular  Mycorrhizal (VAM) simbion mikoriza dari tiga akar tanaman yang berbeda. Penggunaan  metode  ini  bertujuan  untuk  memperbaiki  daerah sekitar  akar  (rizosfer)  sehingga  nutrisi  akan  disimpan  dan tersedia dengan baik pada area tersebut. Ketika nutrisi tersedia dalam  jumlah  banyak,  maka  populasi yeast yang  didapatkan akan semakin meningkat dan beragam [7].
Yeast dapat dibedakan atas dua kelompok berdasarkan sifat metabolismenya  yaitu  bersifat  fermentatif  dan  oksidatif.  Jenis fermentatif  dapat  melakukan  fermentasi  alkohol  yaitu memecah  gula  (glukosa)  menjadi  alkohol  dan  gas  [8]. Yeast merupakan salah satu kelompok mikroorganisme yang banyak diteliti  berkaitan  dengan  kemampuanya  dalam  memecah  gula menjadi  etanol  sehingga  beberapa yeast digunakan  sebagai agen fermentasi etanol.
Berdasarkan  kemampuan yeast dalam  fermentasi  maka penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  fermentasi etanol  dan  tingkat  kadar  produksi  etanol  pada  isolat  genus yeast  Candida (1), Candida (2), Lindnera , Saccharomyces , Saccharomycopsis dengan  menggunakan  konsetrasi  glukosa yang berbeda.

## II. METODOLOGI

## A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Februari  hingga  Mei  2016 di  Laboratorium  Mikrrobiologi  dan  Bioteknologi,  Jurusan Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS).

## Uji Potensi Fermentasi Etanol Yeast Tanah yang
Diisolasi dari Metode Budidaya SDN di Daerah Batu, Jawa Timur
Dwi Yanuar Rakhma Sari 1 , Triono Bagus Saputro 1 dan Anton Muhibuddin 2
1 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS). Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
2 Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian, Universitas Brawijaya (UB). Jl. Veteran, Malang 65145 Indonesia e-mail : trionobsaputro@bio.its.ac.id
T

## B. Alat dan Bahan
Peralatan  yang  diperlukan  dalam  penelitian  tugas  akhir  ini adalah  tabung  reaksi,  cawan  petri,  enlemeyer,  hot  plate,  pipet ukur, gelas ukur, beaker glass, jarum ose, autoklaf, timbangan analitik, magnetic  strirer ,  Laminar  Air  Flow  (LAF), spektrofotomoter  (GENESYS  10S  UV  Vis),  bunsen,  kuvet, mikroskop  (Olympus  Binokular  CX22),  gelas  obyek,  penutup gelas obyek, rotary shaker, tabung durham, rak tabung reaksi, rotary  evaporator  (EYELA  N-1110S-WD),  vortex  dan piknometer.
Bahan  yang  digunakan  antara  lain  Isolat Candida (1), Candida (2), Lindnera , Saccharomyces , Saccharomycopsis koleksi  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Brawijaya  Malang, (NH 4 ) 2 SO 4 ,  MgSO 4 .7H 2 O,  KH 2 PO 4 ,  alkohol  70%,  akuades, kloramfenikol,  media yeast  malt  broth (YMB),  media yeast malt extract agar (YMEA), Bromothymol blue , pepton water , glukosa dan laktofenol biru.
C. Cara Kerja
1) Subkultur Isolat Yeast
Isolat yeast yang diujikan dalam penelitian ini adalah  isolat yeast koleksi  Jurusan  Agroekoteknologi,  Fakultas  Pertanian, Universitas Brawijaya Malang.  Isolat yeast di subkultur pada medium  YMEA  ( Yeast  Malt  Extract  Agar ).  Medium  YMEA steril  dituangkan  ke  dalam  tabung  reaksi  sebanyak  ±  5  mL. Tabung  reaksi  tersebut  diletakkan  pada  posisi  miring  dan didinginkan  sampai  medium  memadat,  kemudian  disimpan pada suhu ruang. Selanjutnya, isolat yeast diinokulasikan pada medium YMEA slant menggunakan jarum ose dan diinkubasi selama  2-4  hari  pada  suhu  ruang.  Keberhasilan  subkultur ditandai dengan tumbuhnya isolat yeast pada medium YMEA. 2) Uji Karakteristik Isolat Yeast
Pengamatan  karakter  makroskopis  dilihat  berdasarkan kenampakan  koloni  yang  tumbuh  pada  media  padat  ( Yeast Malt  Ekstract  Agar ),  meliputi:  tekstur  koloni,  warna  koloni, tepi atau margin koloni, elevasi, dan permukaan koloni.
Pengamatan karakter mikroskopis dilakukan dengan melihat karakteristik reproduksi generatif dan vegetatifnya. Reproduksi generatif  dapat  diamati  dari  ada  atau  tidaknya  askospora  dan basidiospra.  Sementara  reproduksi  vegetatif  dapat  diamati dari: budding dan  pembentukan  spora  aseksual.  Terkait  tipe budding ,  beberapa  tipe  yang  sering  ditemukan  pada yeast , antara lain dengan tipe: multipolar, bipolar, unipolar dan fusi. Sedangkan  karakter  mikroskopis  lainnya  seperti,  bentuk  sel (bulat,  oval,  silinder,  ovoid,  sperikal,  spheroid).  Pengamatan secara  mikroskopis  dilakukan  dengan  cara  membuat  preparat biakan  di  atas  kaca  objek  yang  telah  diwarnai  dengan laktofenol,  kemudian  ditutup  dengan cover glass dan ditetesi minyak  imersi.  Setelah  itu  dilihat  karakter  selnya  pada mikroskop dengan perbesaran 400×.
3) Uji  Potensi Fermentasi Gula
Uji fermentasi gula dilakukan dengan cara 1 ose isolat yeast dari medium padat yang telah berumur 24-48 jam diambil lalu diinokulasikan  ke  dalam  media  uji  fermentasi  yang mengandung  glukosa  1%  pada  tabung  reaksi.  Sebelumnya media  sudah  diberi  indikator bromothymol  blue sebagai indikator terjadinya fermentasi. Kemudian tabung dihomogenkan, dan ditambahkan kloramfenikol sebagai
(a)

## (b)
Gambar  1.  Uji  fermentasi  gula  dengan  indikator bromthymol  blue .  (a)  isolat Saccharomyces ;(b) isolat Lindnera (Sumber: dokumentasi  pribadi, 2016).Keterangan:  medium  yang  berwarna  hijau  sebelum  terjadi  fermentasi, medium berwarna kuning setelah terjadi fermentasi.
antibakteri dan pepton water sebagai sumber nitrogen. Setelah itu  dilakukan  inkubasi  selama  72  jam  pada  temperatur  25- 28 0 C.  Hasil  positif  tampak  jika  terjadi  perubahan  warna  pada medium dan juga adanya gelembung gas pada tabung Durham. Warna  medium  berubah  dari  biru  menjadi  kuning  karena formasi asam dan gas yang dihasilkan [9].

## 4) Pembuatan Kurva Pertumbuhan
Diambil 1 ose isolat yeast kemudian disuspensikan kedalam pada  100  mL  air  fisiologis  steril  0,85%  (NaCl  dan  aquades), dihitung  nilai  OD  nya  menggunakan  spektrofotometer  pada panjang  gelombang  600  nm  hingga  mencapai  nilai  OD  =  0,5 [10].    Selanjutnya  kultur  diambil  20  ml  dan  ditambahkan kemedium YMB sebanyak 180 ml kemudian diinkubasi  dalam rotary  shaker dengan  kecepatan  130  rpm  pada  suhu  ruang. Setiap  24  jam  dihitung  OD  kultur  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang 600nm selama 8 hari. Data OD yang didapatkan kemudian dibuat kurva pertumbuhannya sehingga umur starter dapat ditmukan [11]. 5) Uji  Fermentasi Substrat Glukosa
Uji fermentasi substrat glukosa dilakukan dengan menginokulasi  sebanyak  10%  (w/v)  isolat  starter  yang  telah diinkubasi  selama  2  hari  kedalam  medium  uji  fermentasi substrat  glukosa  yang  masing-masing  terdiri  atas  konsentrasi 10%,  20%,  30%.  Fermentasi  dilakukan  selama  24  jam  di rotary shaker (130 rpm) dengan suhu ruang.
6) Pengukuran Kadar Gula Reduksi
Larutan  Asam  3,5-dinitrosalisilat  (DNS)  dibuat  dengan menimbang  1  g  NaOH,  dilarutkan  dengan  60  ml  akuades, ditambah  18,2  g  Na-K  Tartrat,  1  g  asam  3,5-dinitrosalisilat (ditambahkan  perlahan  lahan  sambil  diaduk  hingga  larut sempurna), kemudian ditambah 0,2 g fenol untuk menstabilkan warna  dan  0,05  g  Na 2 SO 3 .  Lalu  dipindahkan  kedalam  labu ukur,  kemudian  diencerkan  dengan  akuades  hingga  mencapai 100 mL, kemudian kocok hingga homogen [12].
Analisis  kadar  glukosa  dilakukan  dengan  metode  DNS ( Dinitrosalicylic  acid )  yaitu  sampel  hasil  hidrolisis  enzimatik dalam  keadaan  jernih dipipet sebanyak 0,2 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang bersih. Selanjutnya ditambahkan 1,8
Terdapat gas
Terdapat gas
Tabel 1.
Karakterisasi Makroskopik Isolat Yeast Saccharomyces dan Lindnera Kode isolat Bentuk Elevasi Margin Warna Permukaan I1 Circular Convex Entire Cream Smooth shiny I2 Circular Convex Entire Cream Smooth shiny Keterangan: kode I1 isolat yeast Saccharomyces, kode I2 isolat yeast Lindnera.
Tabel 2. Konsentrasi Gula Reduksi Yang Digunakan Oleh Yeast Saccharomyces dan
Lindnera Kode isolate Konsentrasi gula (%) Konsentrasi gula sisa (%) Konsentrasi konsumsi gula (%) Kadar etanol (%) I1 10 1,24 8,76 29,6 20 3,28 16,72 16,8 30 0,80 29,20 69,5 I2 10 4,12 5,88 0 20 3,41 16,59 12,3 30 0,81 29,19 60,7
Keterangan:  Kode  I1  isolat yeast  Saccharomyces ,  kode  I2  isolat yeast Lindnera.
(a)             (b)                      (c) Gambar  2.  Pengamatan  mikroskopik  isolat Saccharomyces, (a)  dokumentasi pribadi, 2016; (b) Muhibuddin, 2015, Kurtzman dan Fell, 1998.
(a)               (b)                   (c) Gambar  3.  Pengamatan  mikroskopik  isolat Lindnera, (a)  dokumentasi pribadi, 2016; (b) Muhibuddin, 2015; (c) Mestre et al ,. 2011.
mL akuades dan 2 mL reagen DNS. Tabung reaksi dipanaskan pada  air  mendidih  selama  5  menit  agar  terjadi  reaksi  antara glukosa  dalam  sampel  dengan  DNS.  Tabung  didinginkan hingga  mencapai  suhu  ruang,  selanjutnya  absorbansi  sampel diukur pada panjang gelombang 540 nm dengan spektrofotometer UV-Vis [13].
1) Pengukuran Kadar Etanol
Analisis  kadar  etanol  dapat  dengan  cara  penetapan  berat jenis  menggunakan  metode  piknometer.  Etanol  hasil fermentasi  dipisahkan  dengan  destilasi  uap  menggunakan rotary  vakum  evaporator  kemudian  etanol  hasil  sulingan  ini ditentukan  beratnya  pada  temperatur  ruang  dan  dibandingkan dengan  berat  akuades  yang  ditentukan  dengan  menggunakan piknometer. Dari hasil perbandingan berat etanol dengan berat akuades akan diperoleh berat jenis destilat.
Kadar  etanol  diperoleh  dari  berat  jenis  etanol  yang didapatkan  yang  selanjutnya  ditentukan  dengan  menggunakan tabel  AOAC  ( Analysis  of  Association  of  Official  Analitical Chemists ) [14].

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Hasil Karakterisasi  Yeast
Uji  karakterisasi yeast terdiri  atas  makroskopis  dan mikroskopis.  Berdasarkan  hasil  subkultur  pada  medium  baru hanya  dua  isolat  yang  tumbuh  membentuk  koloni  yaitu  isolat yeast Lindnera dan Saccharomyces .  Pengamatan  karakteristik makroskopis dilakukan dengan melihat koloni yang ditumbuhkan pada media padat (YMEA) yang meliputi bentuk koloni,  warna  koloni,  permukaan  koloni,  elevasi  koloni,  tepi koloni.  Hasil  pengujian  karakter  makroskopis  ditampilkan pada Tabel 1.
Pengamatan mikroskopis yeast dilakukan dengan pewarnaan lactofenol  tryphan  blue dan  diamati  dengan  mikroskop perbesaran  400×.  Metode  pewarnaan  ini    merupakan  metode khusus untuk pewarnaan mikroorganisme jenis fungi [15].
Pengamatan  mikroskopis  menunjukkan  bahwa  genus Saccharomyces memiliki  ciri  pertunasan  multilateral  dan bentuk  sel  oval.  Genus Lindnera memiliki  bentuk  sel  bulat. Genus Lindnera memilki  bentuk  bulat  hingga  oval  dan membentuk  multilateral  budding  dan  genus Saccharomyces memiliki  ciri  sel  berbentuk  bulat,  oval  dan  multilateral budding [16]-[17].
Berdasarkan  hasil  uji  konfirmasi  karakter yeast yang dilakukan menunjukkan ciri-ciri yang sama dengan isolat yeast koleksi  Jurusan  Agroekoteknologi,  Fakultas  Pertanian, Universitas Brawijaya Malang.

## B. Hasil Uji Potensi Fermentasi Gula
Uji  fermentasi  gula  dilakukan  dengan  menginokulasi sebanyak 1 ose isolat yang telah berumur 48 - 78 jam ke dalam medium  steril  mengandung  glukosa  dan  ditambahkan bromthymol  blue (sebagai  indikator).  Media  fermentasi  harus mengandung senyawa yang dapat dioksidasi dan difermentasikan oleh yeast . Reaksi  dalam  fermentasi  glukosa (C 6 H 12 O 6 ),    yang  merupakan    gula   paling  sederhana melalui fermentasi  akan  menghasilkan  etanol (C 2 H 5 OH). Persamaan reaksi kimia pada fermentasi glukosa yaitu (1).
C 6 H 12 O 6 → 2 C 2 H 5 OH + 2 CO 2 + 2 ATP                             (1)
Hasil  positif  menunjukkan  terjadinya  perubahan warna dari hijau  menjadi  kuning  dan  munculnya  gas.  Medium  yang mengalami fermentasi gula akan berubah menjadi asam, maka pH  akan  turun  dan  akhirnya  indikator  BTB  ini  akan  berubah warna menjadi kuning. Pada pH 7,5 keatas indikator BTB akan berwarna biru, sedangkan pada pH netral akan berwarna hijau. Indikator BTB dalam larutan asam berwarna kuning [18].

## C. Kurva Pertumbuhan Isolat Yeast
Pembuatan  kurva  pertumbuhan  isolat  diperlukan  untuk menentukan  umur  starter  terbaik  yang  diperlukan  untuk produksi etanol.  Fase pertumbuhan sel dapat dibagi menjadi
Berat jenis etanol = Berat etanol dengan piknometer Berat aquades dengan piknometer
beberapa  tahap  yaitu:  fase  lag,    fase    log  (percepatan pertumbuhan), fase  stasioner (kecepatan  pertumbuhan  tetap) dan    fase    kematian    (pertumbuhan    semakin    lambat    dan sebagian    sel    mati)  [19].  Fase pertumbuhan pada isolat yeast Lindnera dan Saccharomyces dapat  dilihat  pada  Gambar  4 dan Gambar 5.
Pada  grafik  kurva  pertumbuhan  baik  isolat yeast Lindnera dan Saccharomyces tidak  tampak  adanya  fase  lag  atau  fase adaptasi.  Tidak  adanya  fase  adaptasi  ( lag  phase )  pada  kedua kurva pertumbuhan dapat disebabkan karena perhitungan nilai absorbansi  pada  sampel  starter  dilakukan  pada  tiap  24  jam sekali  sehingga  fase  adaptasi  tidak  tampak  pada  kurva petumbuhan atau terlewati.
Fase  eksponensial  pada  isolat yeast Lindnera dan yeast Saccharomyces terjadi pada jam ke-0 sampai jam ke-72. Pada fase  ini  mikroba  membelah  dengan  cepat  dan  konstan.  Sel yeast membelah  tiap  90  menit  sekali.  Pada  fase  eksponensial, sel melakukan konsumsi nutrien dalam medium fermentasi dan proses fisiologis lainnya. Etanol merupakan salah satu produk senyawa  yang  dihasilkan  pada  fase  eksponensial  [20]. Berdasarkan  pada  kurva  pertumbuhan  pada  Gambar  4  dan Gambar  5 dapat diketahui umur kultur starter yang digunakan untuk  produksi  etanol  adalah  36  jam  setelah  inokulasi. Penentuan  umur  starter  didapatkan  pada  pertengahan  fase eksponensial.

## D. Potensi Fermentasi Etanol
1) Hasil fermentasi etanol yeast pada jam ke 24
Pada  gambar  6  menunjukkan  kadar  etanol  yang  dihasilkan oleh yeast  Saccharomyces dan Lindnera pada  masa  inkubasi 24  jam  dengan  konsentrasi  glukosa  10%,  20%  dan  30%. Kadar  etanol  yang  dihasilkan  oleh yeast  Saccharomyces pada konsentrasi  glukosa  10%  sebesar  29,6%,  konsentrasi  substrat glukosa  20%  sebesar  16,8%  dan  pada  konsentrasi  substrat glukosa 30% sebesar 69,5%. Pada konsentrasi substrat glukosa 10% yeast Lindnera tidak  mengkonversi  gula  menjadi  etanol sehingga  kadar  etanol  0%  sedangkan  kadar  etanol  pada konsentrasi  substrat  glukosa  20%  sebesar  12,3%  dan konsentrasi substrat glukosa 30% sebesar 60,7%. Kadar etanol tertinggi  pada  kedua  isolat yeast terjadi  pada  konsentrasi substrat glukosa 30%.
Kadar  etanol  isolat yeast  Saccharomyces pada    konsentrasi substrat  glukosa  20%  lebih  rendah  dibanding  dengan  kadar etanol  pada  konsentrasi  substrat  10%.  Hal  tersebut  dapat disebabkan  karena  faktor  fisik  dan  kimia yang mempengaruhi fisiologis  inokulum  sehingga  berpengaruh  pula  pada  hasil fermentasi.  Pada  penelitian  ini  dimungkinkan  faktor  suhu  dan proses  aerasi  yang  tidak  sempurna  yang  mempengaruhi  hasil fermentasi.  Suhu  yang  digunakan  pada  proses  fermentasi adalah  suhu  ruang.  Suhu  perlu  dikontrol  karena  sangat mempengaruhi  pertumbuhan  mikroorganisme  yang  berperan dalam proses fermentasi [21]. Suhu yang terlalu tinggi ataupun rendah  dapat  mempengaruhi  pertumbuhan yeast dalam  proses fermentasi  [22].  Sedangkan  proses  aerasi  bertujuan  untuk memenuhi  kebutuhan  oksigen  bagi yeast. Oksigen  tetap dibutuhkan  dalam  jumlah  sedikit.  Oksigen  dibutuhkan  untuk pertumbuhan  sel  dalam  memproduksi  ATP  selama  proses fermentasi  [23].  Sebaliknya  jika  oksigen  terlalu  banyak  maka
yeast akan  melakukan  respirasi  dengan  menghasilkan  air  dan CO 2 . Kadar  etanol  yang  dihasilkan  oleh yeast mengalami kenaikkan  dari  konsentrasi  substrat  10%  sampai  konsentrasi 30%.  Hal  tersebut  didukung  pendapat  [24],  yang  menyatakan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  substrat  atau  gula  reduksi yang  dapat  dipecah  oleh  sel  khamir  menjadi  etanol  maka semakin  tinggi  pula  konsentrasi  etanol  yang  dihasilkan.  Pada awal  fermentasi yeast mampu  mengkonsumsi  glukosa  dalam jumlah  tinggi.  Selama  24  jam  fermentasi,  kadar  oksigen  pada botol masih mencukupi untuk pertumbuhan sel yeast dan untuk melakukan  fermentasi  sehingga  kedua  isolat  mampu menghasilkan etanol.
2) Hubungan kadar gula reduksi dengan kadar etanol
Pada  tabel  2  diatas  dapat  diketahui  secara  umum  terjadi penurunan kadar gula reduksi selama proses fermentasi. Proses fermentasi  yang  menghasilkan  etanol  mengakibatkan  gula reduksi  menurun  secara  signifikan.  Kemampuan yeast dalam memproduksi  etanol  tinggi  ditandai  dengan  semakin  besar konsumsi  gula  sehingga  terjadi  penurunan  konsentrasi  gula sisa. Makin banyak gula reduksi yang dimanfaatkan oleh yeast maka  makin  tinggi  pula  konsentrasi  etanol  yang  dapat dihasilkan  dan  sebaliknya  makin  sedikit  gula  reduksi  yang dimanfaatkan  oleh yeast maka  makin  rendah  pula  konsentrasi etanol  yang  dihasilkan.  Tetapi  selama  proses  fermentasi  tidak semua  gula  dikonversi  menjadi  etanol.  Terlihat  pada konsentrasi  substrat  glukosa  10%, yeast  Lindnera tidak menghasilkan etanol tetapi kadar gula reduksi menurun.
Penurunan  gula  reduksi  sisa  tidak  hanya  diubah  oleh yeast menjadi  etanol  tetapi  juga  dimanfaatkan  oleh yeast untuk pertumbuhan  sel  sebagai  sumber  karbon.  Tidak  semua  gula dimanfaatkan  oleh  mikroba untuk  pembuatan  etanol  akan tetapi  ada  sebagian  gula  yang  digunakan  untuk  metabolisme intraseluler seperti sintesis enzim, DNA, dan sebagainya [25]. Jumlah  gula  yang  dibutuhkan  untuk  metabolisme yeast berbeda-beda  tiap  strain.  Pada  konsentrasi  substrat  yang rendah, yeast akan kelaparan dan produktivitas menurun [26]. Diduga pada Konsentrasi substrat glukosa 10% yeast Lindnera tidak menghasilkan etanol karena glukosa hanya mampu untuk memenuhi kebutuhan intraseluler.  Pertumbuhan dan konsumsi gula  oleh yeast tergantung  pada  spesies yeast ,  konsentrasi gula, ketersediaan oksigen dan parameter lingkungan lainnya.
Sejauh ini dari semua yeast, yang telah diidentifikasi, dapat menggunakan  glukosa  sebagai  sumber  karbon  tunggal.  Jalur metabolisme karbon umumnya sama antara spesies yeast. yang berbeda.  Dalam    fermentasi  glukosa    didegradasi    menjadi etanol    dan  CO 2 melalui    suatu    jalur    metabolisme    yang disebut  glikolisis.  Jalur  glikolisis  disebut  juga  sebagai  jalur Embden–Meyerhof–Parnas [27].

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  subkultur  pada  medium  YMEA  hanya dua isolat yang mampu tumbuh membentuk koloni yaitu isolat yeast  Saccharomyces dan Lindnera.  Yeast dari  genus Saccharamomyces memiliki  potensi  fermentasi  etanol  pada konsentrasi  substrat  glukosa 10%,  20%  dan  30%.  Pada yeast Lindera memiliki potensi fermentasi pada konsentrasi substrat
glukosa,  20%  dan  30%.  Sedangkan  pada  konsentrasi  substrat glukosa  10% yeast  Lindnera tidak  mampu  menghasilkan etanol.  Kadar  etanol yeast  Saccharomyces pada  konsentrasi substrat  glukosa  10%  sebesar  29,6%,  konsentrasi  substrat glukosa 20% sebesar 16,8% dan pada konsentrasi 30% sebesar 69,5%. Kadar etanol yang dihasilkan oleh yeast Lindnera pada konsentrasi  substrat  glukosa  20%  sebesar  12,3%  dan  pada konsentrasi substrat glukosa 30% sebesar 60,7%.
Penelitian selanjutnya disarankan dilakukan penelitian lebih lanjut  terkait  dengan  uji  potensi  fermentasi  etanol  dengan mengontrol  suhu  pada  proses  fermentasi,  menghitung  jumlah sel yeast dan  mengukur  pH  selama  proses  fermentasi.  Pada proses destilasi dengan menggunakan rotary vakum evaporator perlu  dilakukan  destilasi  dengan  suhu  yang  sesuai  ataupun dapat digunakan alat GC ( gas crhomatography )

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis    D.Y.R.S mengucapkan  terima kasih  kepada Allah SWT  yang  telah  memberikan  rahmat  dan  karunia  sehingga naskah  tugas  akhir  ini  dapat  terselesaikan  dengan  baik  dan lancar. Kepada dosen pembimbing Pak Triono Bagus Saputro S.Si.,M.Biotech  dan  Pak  Dr.  Anton  Muhibudin  SP.MP,  serta kepada  keluarga,  teman-teman  dan  semua  pihak  yang  telah banyak membantu dalam penyelesaian naskah tugas akhir ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] M. Ma’shum, J.  Soedarsono, dan L. Susilowati. “Biologi Tanah. CPIU Pasca  IAEUP,  Bagpro  Peningkatan  Kualitas  Sumberdaya  Manusia”. Ditjen  Pendidikan  Tinggi,  Departemen  Pendidikan  Nasional.  Jakarta. (2003).
[2] R. Wardani. “Analisis Kualitas Lahan Untuk Kebun Apel Pada Berbagai Bentuk  Lahan  Di  Kecamatan  Bumiaji  Batu”.  Universitas  Brawijaya. Malang. (2005).
[3] W.  Meng,  C.  Jia-Kuan,  C  and L.  Bo.    “Characterization  of  bacterial community structure and diversity in rhizosphere soils of three plants in rapidly  changing  salt  marshes  using  16S  Rdna”. Pedosphere . Vol.17, No.5 (2007) 545–556.
[4] R.E.  Hoagland,  dan  R.D. Williams.  “The  Influence  of  Secondary  Plant Compounds  on  The  Associations  of  Soil  Microorganisms  and  Plant Roots.  In  The  Chemistry  of  Allelopathy.  Biochemical  Interactions among  Plants”.  Washington  D.  C: American  Chemical  Society :  (1985) 301–325.
[5] A.G.  Kartasapoetra,  M.  M.  Sutedjo  dan R.  D.  S.  Sastroatmodjo .
“ Mikrobiologi Tanah”. Jakarta: Rineka Cipt . (1991) .
[6] B.J.J.  Lugtenberg  and  Lev  V  Kravchenko.    “Tomato  Seed  And  Root Exudate  Sugars:Composition,  Utilization  By  Pseudomonas  Biocontrol Strains  And  Role  In  Rhizosphere  Colonization”. Enviromental Microbiology . Vol 1 (5). (1999). 439-446
[7] A.  Muhibuddin,  dan  I.  Sastrahidayat.  “Soil  Drive  Nutrients  Creation through  Alternate  Host  System  Propagation  of  VAM  to  Support Selective  Exploration  of  Microbial  Fermentation”.  Universitas Brawijaya. Malang. (2015).
[8] S.  Fardiaz.  “Mikrobiologi  Pangan  I” . Jakarta.  Gramedia  Pustaka Utama. (1992).
[9] K.  Van-Rijj.  “The  Yeasts:  A  Taxonomic  Study”.  Elsevier  Science: Amsterdam . 1987.
[10] V.  Lundblad  dan  K.    Struhl.  “Yeast.  Current  Protools  in  Moleculer Biology”. USA: John Wiley and Sons, Inc. (2008).
[11] V.N.  Jisha,  R.B.  Smitha  and  S.  Pradeep.  “Versatility  of  Microbial Proteases”. Advances in Enzyme Research 1 :  (2013)  39-51 .
[12] S.  Maturindo.  “Hidrolisis  Enzimatis  Limbah  Tongkol  Jagung  Oleh Penicillium sp. H9 Dengan Variasi Ph Dan Suhu”. (Skripsi). Surabaya: Universitas Airlangga. (2014).
[13] F.I.  Oktavia,  D.A  Bambang,  dan  L.  Musthofa.  “Hidrolisis  Enzimatik Ampas Tebu (Bagasse) Memanfaatkan Enzim Selulase dari Mikrofungi
Trichoderma  reseei dan Aspergillus  niger Sebagai  Katalisator  dengan Pretreatment  Microwave”. Jurnal  Keteknikan  Pertanian  Tropis  dan Biosistem . Vol. 2 No. 3.(2014) 256-262.
[14] M. Bhavan. “Tables For Alkoholmetry Pyknometer Method”. Bureau Of Indian Standarts . New Delhi. (1991).
[15] J.P.  Harley,  Lansing,  dan  Prescott, Laboratory  Exercises  in Microbiology  Fifth  Edition ,  New  York:  Mc  Graw-Hill  Companies.
(2002).
[16] C.P.  Kurtzman,  C.J  Robnett,  C.  J.  and  E.  Basehoar-Powers. “Phylogenetic  relationships  among  species  of  Pichia,  Issatchenkia  and Williopsis  determined  from  multigene  sequence  analysis,  and  the proposal  of  Barnettozyma  gen.  nov.,  Lindnera  gen.  nov.  and Wickerhamomyces gen. nov”. FEM Yeast Res 8, (2008) 939–954 [17] C.P.  Kurtzman  and  W.F.  Jack.  “The  Yeast  A  Taxonomic  Study”. Elsivier. NewYork. (1998).
[18] W.  Winn,  S.  Allen,  W.  Janda,  E.  Koneman,  G.  Procop,  P. Schreckenberger,  and  G.  Woods.  “Color  atlas  and  textbook  of diagnostic  microbiology,  6th  ed”.  Lippincott,  Williams  and  Wilkins, Philadelphia, PA. (2006).
[19] E.  Oura.  “Reaction  Product  of  Yeast  Fermentations”.  Di  dalam  H. Dellweg  (ed.).  Biotechnology  Volume  III. Academic  Press ,  New  York.
(1983).
[20] R.  Natsir.  “Hubungan  Salinitas  Perairan  Dengan  Kuantitas  Bioetanol yang  Dihasilkan Oleh Nipah ( Nypa fruticans ) Pada Berbagai Metode” . Skripsi . Makassar . Program  Studi  Ilmu  Kelautan.  Universitas Hasanuddin. (2003).
[21] H.  Subekti.  “Produksi  Etanol  dari  Hidrolisat  Fraksi  Selulosa  Tongkol Jagung  oleh Saccharomyces  cerevisiae”. Skripsi .  Bogor:  Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor. (2006).
[22] Y. Jungwoo. “Enhanced Bioethanol Production by Zymomonas mobilis in  Response  to  the  Quorum  Sensing  Molecules  AI-2”. Thesis .  Durham University. (2011).
[23] T.  Roukas.  “Continuous  Ethanol  Production  fromNonsterilized  Carob Pod  Extract  by  Immobilized Saccharomyces  cerevisiae on  Mineral Kissiris  Using  A  Two-reactor  System”. Journal  Applied  Biochemistry and Biotechnology , Vol. 59, No. 3. (1996).
[24] Wignyanto.  Suharjono,  dan  Novita.  “Pengaruh  Konsentrasi  Gula Reduksi Saei Hati Nanas dan Inokulum Saccharomyces cerevisiae Pada Fermentasi Etanol”. Jurnal Teknologi Pertanian . VOL. 2, NO. 1, (April 2001) : 68-77.
[25] F. Hartina, A. Jannah, A. Maunatin. 2014. “Ferementasi Tetes tebu Dari Pabrik  Gula  Pagotan  Madiun  Menggunakan Saccharomyces  cerevisae Untuk  menghasilkan  Bioetanol  Dengan  Variasi  pH  Dan  Lama Fermentasi”. Alchemy . 3(1): (2014) 93-100.
[26] T. Arifa, A. Madiha, and F. Tasnim. “Effect Of Cultural Conditions on Ethanol  Production  By  Locally  Isolated Saccharomyces  Cerevisiae ”. BIO-07. J. App Pharm 3(2): (2010) 72-78.
[27] D.R.  Berry  dan  C.  Brown.  “Physiology  of  yeast  growth,  in  Yeast Biotechnology”. Berry D.R., Rusell I. and Steward G.G., Eds., Allen & Unwin London 159. (1987).