## http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati

## PENGARUH EKSTRAK ETANOL DAUN SAMBILOTO TERHADAP JUMLAH DAN MOTILITAS SPERMATOZOA MENCIT JANTAN
Susilo 1 , Budhi Akbar 2 , Ika Pratinaningsih 3
Pendidikan Biologi, Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka, Jl. Tanah Merdeka, Kp. Rambutan, Ciracas, Jakarta Timur, 13830.
e-mail: * 1 susilo@uhamka.ac.id, 2 budhiakbar@uhamka.ac.id, 3 ikapratinaningsih@yahoo.com
Diterima :05 November 2018 Disetujui : 19 November 2018
e-ISSN : 2541-4208 p-ISSN : 2548-1606
DOI: 10.15575/biodjati.v3i2.3505
Abstrak. Tanaman  sambiloto  (Andrographis  paniculata  Ness.)  merupa- kan  salah  satu  tanaman  obat  yang  dipercaya  dapat  mengobati  berbagai penyakit  seperti  influenza,  anti  kanker,  meningkatkan  ketahanan  tubuh dan  anti-fertilitas.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh dari  daun  sambiloto  terhadap  jumlah  dan  motilitas  spermatozoa  mencit (Mus musculus L.) jantan galur DDY (Deutschland, Denken, and Yoken). Sebanyak 24 ekor mencit jantan dengan berat antara 100-125gramdibagi menjadi empat kelompok perlakuan yaitu P0, P1, P2 dan P3 dengan mas- ing-masing  dosis  0,  84,  140  dan  196  mg/kg  berat  badan  yang  diberikan ekstrak etanol secara oral selama 15 hari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa  kelompok  perlakuan  P3  (196  mg/kg  berat  badan)  menunjukkan jumlah  spermatozoa terbanyak  yaitu  7,33 juta/ml,  mengalami  penurunan sebesar  78,86%  terhadap  kontrol.  Kandungan  senyawa  andrografolid dan flavonoid pada ekstrak sambiloto diduga kuat menjadi penyebab pe- nurunan  jumlah  dan  motilitas  spermatozoa  mencit.  Hasil  penelitian  ini memberikan  informasi  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol  daun  sambiloto berpengaruh terhadap jumlah dan motilitas spermatozoa mencit jantan. Kata Kunci: daun sambiloto, mencit jantan, motilitas, sperma,
Abstract . Sambiloto or Bitter plants (Andrographis paniculata Ness.) are one  of  the  medicinal  plants  that  are  believed  to  be  able  to  treat  various diseases  such  as  influenza,  anti-cancer,  body  resistance  and  antifertility. This study aimed to determine the effect of bitter leaf on the number and motility  of  spermatozoa  of  male  mice  (Mus  musculus  L.)  DDY  (Deut- schland,  Denken,  and  Yoken)  strains.24  maleDDY  strain  mice  with100- 125 g of weight divided into four treatment groupsnamely P0, P1, P2 and P3with  dose  0,  84,  140  and  196  mg/kg  bwrespectively  by  givenethanol extract orally for 15 days. The results showed that in the treatment group P3 (196 mg/kg bw) showed the highest number of spermatozoa was 7.33 million/ml, a decrease of 78.86% of the control. The content of androgra- pholide and flavonoid compounds in the sambiloto extract is strongly sus- pected  to  be  reason  of  the  decrease  in  the  number  and  motility  of  mice spermatozoa.  Overall,  the  administration  of  ethanol  extract  of  sambiloto leaves affects the number and motility of spermatozoa in male mice. Keywords : male mice, motility, sambiloto leaves, sperm,
http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati

## Cara Sitasi
Susilo., Akbar, B. & Pratinaningsih, I. (2018).  Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Sambiloto Terhadap Jumlah dan Motilitas Spermatozoa Mencit Jantan . Jurnal Biodjati , 3 (2), 166-172.

## PENDAHULUAN
Pertambahan  penduduk  yang  pesat  me- rupakan salah satu masalah bagi negara-negara yang  sedang  berkembang  termasuk  Indonesia. Berdasarkan data Badan Pusat Statistik (2016), rata-rata  pertumbuhan  penduduk  Indonesia masih  diangka  1,49%  per  tahun.  Hal  tersebut berarti tiap tahun penduduk Indonesia bertam- bah sekitar 4 juta jiwa. Laju pertumbuhan pen- duduk  yang  tinggi  tersebut  dapat  mengaki- batkan  ledakan  jumlah  populasi  jika  tidak  di- atasi  dengan  benar.  Salah  satu  cara  yang  dila- kukan  pemerintah  dari  dulu  adalah  melalui program Keluarga Berencana.
Program  Keluarga  Berencana  (KB)  me- rupakan  sarana  penyediaan  kontrasepsi  yang bertujuan untuk pencegahan terjadinya pelebu- ran antara sel sperma pria dengan sel telur wa- nita. Sarana kontrasepsi sebagian besar dilaku- kan oleh wanita dari peserta keluarga berenca- na,  sedangkan  partisipasi  pria  dalam  ber-KB masih  rendah,  pilihannya  masih  berbatas  pada penggunaan  metode  pencegahan  kehamilan, seperti  kontrasepsi  kondom,  vasektomi,  me- tode  senggama  terputus,  metode  pantang  ber- kala/ sistem kalender (Ekarini, 2008). Kelema- han  alat  kontrasepsi  kondom  memberikan  ke- tidaknyamanan  pada  pasangan  dan  dapat  me- nimbulkan  alergi  disekitar  penis  atau  vagina. Sedangkan  efek  samping  jangka  panjang  pada pria  yang  pernah  menjalani  program  kontra- sepsi  seperti  halnya vasektomi  yaitu dapat ter- jadinya  insidensi  kanker  testis  dan  kanker prostat (Anton & Andari, 2013).
Salah  satu  usaha  yang  sedang  dilakukan adalah  menemukan obat  antifertilitas bagi pria yang tidak  memiliki efek samping (Daniyal  & Akram,  2015;  Dzulfiqor,  et  al,  2015;  Sunda-
ram,  1990;  Susilo  &  Akbar,  2016).  Penggu- naan  kontrasepsi  alami  untuk  menghambat spermatogenesis  agar  sperma  yang  dihasilkan berkurang  dapat  dimanfaatkan  para  pasangan yang  sudah  berkeluarga  dengan  beralih  ke tumbuhan  sambiloto  ( Andrographis  panicula- ta ). Tumbuhan sambiloto telah diuji dan diper- caya  memiliki  kandungan  kimia  yang  berpo- tennsi sebagai obat anti-fertilitas bagi pria (Al- lan et al, 2009; Lingampally, Solanki, & Raja, 2012; Shah, Singh, Shah, & Kakar, 2016; Sun- daram,  1990).  Kandungan  kimia  tersebut  ada- lah  andrografolid,  yaitu  senyawa  kimia  yang banyak terdapat di dalam sambiloto (Ashafa et al,  2012;  Halim  et  al,  2004).  Andrografolid merupakan  zat  aktif  yang  berfungsi  mencegah pembelahan  sel  (sitokinesis).  Andrographolide dapat mempengaruhi pertumbuhan normal dan perkembangan  indung telur (ovarium) (Shinde et  al,  2012).  Mekanisme  yang  terjadi  adalah proses  gametogenesis  pada  tahap  proliferasi mengalami  penurunan  yang  mengakibatkan produksi  spermatogonia  juga  akan  menurun. Andrografolid  dapat  mempengaruhi  jumlah produksi sel–sel sperma dalam tubuli seminife- ri  dan  dapat  berimbas  pada  jumlah  spermato- zoa  yang  dihasilkan  (Adelati,  Juniarto  &  Mi- ranti,  2016;  Susanti  et  al,  2017).  Penelitian yang  dilakukan  di  India  dengan  hewan  uji  ti- kus  jantan,  tumbuhan  sambiloto  dalam  bentuk serbuk  daun  kering  dengan  dosis  105  mg/kg berat badan yang diberikan selama 60 hari da- pat  menghentikan  spermatogenesis  pada  tahap perkembangan  dan  pematangan  sel–  sel  sper- ma (Dewi, 2013).
Mengingat  animo  masyarakat  Indonesia belakangan  ini  lebih  banyak  memilih obat tra- disional  karena  dianggap  relatif  lebih  murah, efisien dan lebih aman dari efek samping diban
http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
dingkan  dengan  obat  sintetik,  maka  penelitian pengaruh ekstrak etanol daun sambiloto terha- dap  jumlah  dan  motilitas  spermaozoa  mencit jantan penting untuk dilakukan, selain itu hasil dari penelitian ini dapat digunakan sebagai ba- han rujukan bagi  masyarakat dan para peneliti lain yang mengkaji topik yang relevan.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium Kesmavet  Dinas  Peternakan,  Perikanan  dan Kelautan  Propinsi  DKI  Jakarta  pada  bulan April  –  Juni  2015.  Rancangan  penelitian menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL) dengan empat kelompok perlakuan dan enam ulangan pada 24 ekor mencit jantan den- gan  berat  antara  100-125gr.  Dosis  yang  digu- nakan  dalam  penelitian  yaitu  P0  (kontrol),  P1 (dosis  84  mg/kg  berat  badan),  P2  (140  mg/kg berat  badan)  dan  P3  (196  mg/kg  berat  badan) yang diberikan secara oral selama 15 hari per- lakuan.  Bahan  yang  digunakan  adalah  ekstrak etanol daun sambiloto yang diperoleh dari Ba- litro Bogor, aquabides, NaCl 0,9%, klorofoam, etanol 96% dan alkohol 70%. Alat yang digu- nakan adalah papan bedah, satu set alat bedah, hemositometer  Improved  Neubauer,  cawan petri, mikroskop dan lain-lain.
Pada  hari  ke  16  mencit  dibius  dengan kloroform dan  dibedah untuk pengambilan or- gan  testis  dan  epididimis.  Selanjutnya  sample diletakkan di cawan petri yang berisi 1 ml laru- tan  NaCl  0,9%.  Perhitungan  jumlah  sperma dilakukan  dengan  pengenceran  20  kali  pada pipet  leukosit,  dengan  cara  menghisap  sperma menggunakan  pipet  leukosit  sebanyak  0,005 ml.  Selanjutnya,  pipet  yang  berisi  sperma  di- kocok membentuk angka delapan agar sperma homogen.  Perhitungan  jumlah  sperma  dilaku- kan  dengan  mengamati  spermatozoa  pada  he- mositometer  Improved  Neubauer  di  bawah Mikroskop  Binokuler  Olympus  Cx22.  Jumlah
spermatozoa  yang  didapat  dimasukkan  ke  da- lam  rumus  perhitungan  konsentrasi  spermato- zoa menurut Ilyas (2007) berikut ini.
Ket.  KS:  konsentrasi  spermatozoa;  n:  jumlah  sperma;
Fp:  Faktor  pengenceran;  k:  jumlah  kotak  kecil Neubauer;  vNaCl:  Volume  NaCl  fisiologis; 10.000:  Volume  kamar  hitung  Neubauer;  angka 25: jumlah kotak kecil Neubauer
Pengamatan  motilitas  spermatozoa  dila- kukan  dengan  mengamati  intensitas  pergera- kan  satu  sel  spermatozoa  selama  1  menit  dan dihitung  berapa  kali  spermatozoa  tersebut mengalami  pergerakan  ekor  dengan  cepat  dan lurus  ke  depan.  Data  yang  didapat  kemudian diakumulasikan  untuk  selanjutnya  dianalisis. Teknik  analisis  data  dengan  menggunakan program  pengolahan  data  statistik  yang  meli- puti  uji  normalitas,  uji  homogenitas,  uji  para- metrik  ( one-way ANOVA)  atau  uji  non  para- metrik  (Kruskal  Wallis).  Bila  pada  data  yang diperoleh  terdapat  perbedaan  yang  signifikan, maka  dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata  Ter- kecil (BNT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  difokuskan  pada  aktifitas anti-fertilitas  bedasarkan  pengaruh  ekstrak etanol  daun  sambiloto  terhadap  jumlah  dan motilitas  sperma  pada  mencit  jantan  galur DDY.  Berdasarkan  hasil  penelitian  (Tabel  1), secara umum menggambarkan adanya penuru- nan  jumlah  dan  motilitas  spermatozoa  dengan bertambahnya  dosis  ekstrak  sambiloto  yang diberikan  pada  hewan  percobaan  mencit  jan- tan.  Konsentrasi  spermatozoa  dalam  semen harus cukup agar proses fertilisasi  terjadi.  Ka- tegori konsentrasi spermatozoa normal yang
KS = n x10.000 x Fp x x vNaCl

## http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
didefinisikan  oleh  World  Health  Organization yaitu  >20  x10 6 /ml  dan  jika  konsentrasi  sper- matozoa  <20  x  10 6 /ml  maka  spermatozoa  da- lam kategori sub-fertile (Cooper et al, 2010).
Uji  statistik  menunjukkan  perbedaan nyata  antara  empat  perlakuan  jumlah  sperma dengan  pemberian  ekstrak  etanol  daun  sambi- loto (Gambar 1).
Penelitian  dengan  pemberian  ekstrak etanol  daun  sambiloto  terhadap  mencit  jantan pada kelompok kontrol menunjukan nilai rata- rata jumlah spermatozoa sebesar 34,66 juta/ml (kategori  normal).  Hal  tersebut  dapat  ditunju- kan  dari  data  kelompok  kontrol  yang  jumlah spermatozoanya lebih dari 20 juta/ml.  Terjadi penurunan jumlah spermatozoa pada perlakuan P3 (dosis 196 mg/kg berat badan) dengan hasil rata–rata  7,33  juta/ml.  Penurunan  jumlah spermatozoa  disebabkan  adanya  senyawa  an- drografolid  dan  flavonoid  dalam  sambiloto yang berfungsi  sebagai  antiandrogenik dengan cara  menghambat  enzim  aromatase  yaitu  en- zim  yang  berfungsi  mengkatalis  konfersi  an- drogen  menjadi  estrogen  yang  akan  mening- katkan  hormon  testosterone  (Oyedemi,  et  al, 2010).  Tingginya  konsentrasi  testosteron  akan berumpan  balik  negatif  ke  hipofisis  sehingga sedikit mensekresikan FSH dan LH yang akan berakibat  mengganggu  spermatogenesis.  Se- perti  yang  diketahui  bahwa  FSH  bertugas  da- lam  merangsang  sel  sertoli,  fungsi  sel  sertoli yaitu bertanggung jawab terhadap pematangan sel  spermatogenik  dalam  tubulus  semineferus, seperti  untuk  suplai  nutrisi,  diferensiasi  sper- matid menjadi spermatozoa dan hormon untuk pematangan  spermatozoa.  Sel  sertoli  menjadi ciri  spesifik  untuk  aktivitas  metabolisme  pro- tein, seperti Androgen Binding Protein (ABP), protein  tersebut  disekresikan  secara  maksimal ketika tahap spermatogenesis, yaitu tahap spe- sifik  pematangan  sel  selama  perubahan  sper- matid  berekor  dan  saat  metamorfosis  sperma- tid  menjadi  spermatozoa  (Hansson,  et  al,
1978).  ABP  dari  bagian  basal  akan  mengikat testosteron yang berada pada membran tubulus seminiferus  dan  membawanya  ke  daerah  lu- men  untuk  dipergunakan  menstimulasi  tahap metamorfosis.  Bila  terdapat  hambatan  pada sekresi  ABP  oleh  sel  sertoli  dapat  dipastikan bahwa transport testosteron juga akan tergang- gu. Hal  ini tentu  juga akan berimbas pada sti- mulasi  perubahan  spermatid  menjadi  sperma- tozoa sehingga jumlah spermatozoa yang dile- pas  dalam  lumen  akan  berkurang  dan  dihasil- kan  spermatozoa  yang  belum  matang  (Ma et al, 2015).
Kategori  motilitas  spermatozoa  normal yaitu > 50% dan bila spermatozoa < 50% ma- ka  motilitas  sperma  dalam  kategori  subfertile (Johnson  &  Everitt’s,  2007).  Hasil  penelitian terhadap  rata–rata  motilitas  spermatozoa  den- gan pemberian ekstrak sambiloto  pada kelom- pok  kontrol  sebesar  110,83  kali/menit.  Data tersebut  tergolong  kategori  normal  karena jumlahnya >50% dan data tersebut mengalami penurunan  pada  kelompok  P3  sebesar  75,16 kali/menit dengan pemberian dosis 196 mg/kg berat  badan  ekstrak  sambiloto.  Data  seleng- kapnya disajikan pada Gambar 2 berikut ini.
Hasil  analisis  statistik  menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun sambilo- to  dengan  P1  dosis  84  mg/kg  berat  badan,  P2 dosis 140 mg/kg berat badan dan P3 dosis 196 mg/kg  berat  badan  tidak  berpengaruh  nyata/ tidak  signifikan  perbedaannya  dalam  penuru- nan  motilitas  spermatozoa.  Salah  satu  faktor penyebabnya  adalah  kurangnya  prosedur  pen- gamatan  karena  peneliti  hanya  mengamati  in- tensitas pergerakan satu sel sperma selama sa- tu  menit  untuk  mengetahui  sperma  tersebut motil  atau  tidak.  Pengamatan  satu  sel  sperma ternyata  belum  dapat  mewakili  seluruh  perge- rakan  sperma  yang  lainnya.  Motilitas  sperma- tozoa  dipengaruhi  lama  waktu  di  epididimis, morfologi,  flagel,  antibodi,  pH,  konaentrasi cairan atau sekret dan abnormalitas spermato
http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
zoa mengganggu produksi energi untuk berge- rak (Erris & Harahap, 2014).
Tanaman  sambiloto  mengandung  se- nyawa  andrografolid  (senyawa  keton  diterpe- noid,  triterpenoid)  dan  senyawa  flavonoid yangdiduga  dapat  menyebabkan  abnormalitas organel  sel  pada  bagian  leher  spermatozoa, sehingga  menyebabkan  fungsi  mitokondria dalam  menghasilkan  energi  tidak  maksimal dan akhirnya berpengaruh terhadap penurunan motilitas  spermatozoa.  Bila  sebagian  sperma- tozoa yang dihasilkan mengalami abnormalitas dalam  pembentukannya,  maka  hal  tersebut akan  berpengaruh  pada  saat  pematangan  di epididimis  (Hansson  et  al,  1978). Pematangan
sperma  di  epididimis  terjadi  selama  18  jam sampai  10  hari.  Selama  proses  tersebut,  sper- ma  mengembangkan kemampuan  bergeraknya walaupun  beberapa  faktor  lain  masih  dapat mencegah  motilitas  spermatozoa  sampai  sete- lah ejakulasi terjadi (Arthur, 1990)
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  maka dapat diketahui  bahwa senya- wa  aktif  andrografolid  pada  ekstrak  sambiloto dapat  mempengaruhi  sel  spermatogenik dalam testis  khususnya  spermatid  dan  spermatozoa. Sehingga  pelepasan  spermatozoa  dari  testis berkurang  dan  mengganggu  pematangan  di epididimis  yang  mengakibatkan  gangguan nurunan jumlah dan motilitas spermatozoa.
Tabel 1. Hasil rata – rata jumlah sperma dan motilitas sperma Perlakuan JS (juta/ml) MS (kali/menit) P0 34,66 a 110,83 a P1 26,33 b 91,83 b P2 14,33 c 83,16 b P3 7,33 d 75,16 b
Ket: JS= rerata jumlah sperma; MS= rerata motilitas sperma; Keterangan P0 (kontrol), P1 (do- sis 84 mg/kg berat badan), P2 (140 mg/kg berat badan) dan P3 (196 mg/kg berat badan).
Gambar  1.  Data  jumlah  sperma  dengan  pemberian  ekstrak  etanol  daun loto. Keterangan P0 (kontrol), P1 (dosis 84 mg/kg berat badan), P2 (140 mg/kg berat badan) dan P3 (196 mg/kg berat badan).
34,66 a 26,33 b 14,33 c 7,33 d 0 5 10 15 20 25 30 35 40 P0 P1 P2 P3
Gambar 2. Data motilitas sperma dengan pemberian ekstrak etanol daun sambi- loto.  Keterangan  P0  (kontrol),  P1  (dosis  84  mg/kg  berat  badan),  P2 (140 mg/kg berat badan) dan P3 (196 mg/kg berat badan).

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  sambiloto  ( Andro- graphis  paniculata) berpengaruh  terhadap jumlah spermatozoa. Pemberian ekstrak etanol daun sambiloto dengan dosis terbaik yaitu 196 mg/kg  berat  badan  pada  perlakuan  tiga  ber- pengaruh  nyata  terhadap  penurunan  jumlah spermatozoa sebesar 78,86% terhadap kontrol. Pemberian ekstrak etanol daun sambiloto pada kelompok  perlakuan  tidak  berpengaruh  nyata terhadap penurunan motilitas spermatozoa.

## DAFTAR PUSTAKA
Adelati,  S.,  Juniarto,  A.  Z.  &  Miranti,  I.  P. (2016).  Histopatologi  Spermatogenesis Testis Tikus Wistar Diabetes melitus . Jur- nal  Kedokteran  Diponegoro ,  5(4),  1760- 1769.
Allan, J. J., Pore., M. P., Deepak, M., Murali, B.,  Mayachari.,  A.  S.  &  Agarwal,  A. (2009). Reproductive and  Fertility Effects of  an Extract of Andrographis Paniculata in  Male  Wistar  Rats. International  Jour-
nal of Toxicology , 28(4), 308–317. Anton, D. & Andari, D. (2013). Memilih Kon- trasepsi Alami dan Halal . Solo: Aqwame- dika.
Arthur,  C.  G.  (1990). Fisiologi  Manusia  dan Mekanisme  Penyakit .  Jakarta:  Buku  Ke- dokteran EGC.
Ashafa,  A.  O.  T.,  Orekoya,  L.  O.  &  Yakubu, M. T. (2012). Toxicity Profile of Ethanol- ic  Extract  of Azadirachta  Indica Stem Bark  in  Male  Wistar  Rats. Asian  Pacific Journal  of  Tropical  Biomedicine ,  2(10), 811–817.
Badan Pusat Statistik. (2016). Statistik Indone- sia 2016. (S. P. dan K. Statistik, Ed.) (Vol. 3). Jakarta: Badan Pusat Statistik.
Cooper,  T.  G.,  Noonan,  E.,  Eckardstein,  S. von, Auger, J., Baker, G., Behre, H. M. & Mbizvo,  M.  T.  (2010).  World  Health  Or- ganization  Reference  Values  for  Human Semen  Characteristics. Human  Reproduc- tion Update , 16(3), 231–245.
Daniyal, M. & Akram, M. (2015). Antifertility activity of medicinal plants. Journal of the Chinese Medical Association ,  78(7), 382–
91.83 b 83.16 b 75.16 b 0 20 40 60 80 100 120 P0 P1 P2 P3 110,83 a
http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
388.
Dewi, N. (2013). Khasiat & Cara Olah Sambi- loto  untuk  Menumpas  Berbagai  Penyakit. Yogyakarta: Pustaka Baru Press.
Dzulfiqor,  Y.,  Akbar,  B.  &  Susilo,  S.  (2015). Uji Ekstrak Etanol Daun Pegagan ( Centel- la asiatica L.  Urban)  Terhadap  Fertilitas Tikus Putih ( Rattus norvegicus L.)  Betina pada  Tahap  Praimplantasi. Al-Kauniyah , 8(2), 101–107.
Ekarini,  B.  (2008). Analisis  Faktor–Faktor yang  Berpengaruh  Terhadap  Partisipasi Pria  dalam  Keluarga  Berencana  di  Ke- camatan  Selo  Kabupaten  Boyolali .  Un- iversitas Diponegoro.
Erris & Harahap, I. (2014). Pengaruh Kebisin- gan  Terhadap  Kuantitasdan  Kualitas Spermatozoa Tikus Putih ( Rattus norvegi- cus )  Jantan  Dewasa. Media  Litbangkes , 24(3), 123-128.
Halim,  V.  S.,  Soegihardjo,  C.  J.  &  Rizal,  D. M.  (2004).  Pengaruh  Ekstrak  Etanol  Her- ba  Sambiloto  ( Andrographis  paniculata (Burm.f.)  Nees)  Terhadap  Spermatogene- sis Mencit Jantan Dewasa dan Uji Kualita- tif  Kromatografi  Lapis  Tipis. Majalah Farmasi Indonesia , 15(3), 136–143.
Hansson,  V.,  Djøseland,  O.,  Reuseh,  B.,  At- tramadal,  A.  &  Torgersen,  O.  (1978).  An Androgen  Binding  Protein  in  The  Testis Cytosol  Fraction  of  Adult  Rats.  Compari- son  with  the  androgen  binding  protein  in the epididymis. Steroids , 21(3), 457–474. Ilyas, S. (2007). Azoospermia dan Pemulihan- nya  Melalui  Regulasi  Apoptosis  Sel  Sper- matogenik Tikus (Rattus sp) pada Penyun- tikan  Kombinasi  TU  &  MPA .  Universitas Indonesia.
Lingampally, V.,  Solanki, V. R.  &  Raja, S. S. (2012).  Andrographolide:  an  effective  an- ti-fertility Agent for The Control of Tribo- lium  Confusum. Asian  Journal  of  Plant Science and Research , 2(3), 313–317.
Ma, Y., Yang, H. Z., Xu, L. M., Huang, Y. R., Dai, H. L.  & Kang, X. N. (2015).  Testos- terone  Regulates  the  Autophagic  Clear- ance  of  Androgen  Binding  Protein  in  Rat Sertoli Cells. Scientific Reports , 5 , 1–8. Oyedemi,  S.,  Yakubu,  M.  &  Afolayan,  A.
(2010). Effect of Aqueous Extract of Leo- notis leonorus (L.) R. Br. Leaves  in  Male Wistar  rats.  Hum. Exp.  Toxicol, 29,  377– 384.
Shah,  M.,  Singh,  R.,  Shah,  R.  &  Kakar,  S. (2016). An  Overview  of The Current Me- thodologies  Used  for  Evaluation  of  Anti- Fertility  Agents. Asian  Pacific  Journal  of Reproduction , 5(3), 175–178.
Shinde, N., Chauhan, A. S., Sanjay, K., Gupta, Bodakhe,  S.  H.  &  Pandey,  D.  P.  (2015). Antifertility Studies of Curcumin and An- drographolide  Combination  in  Female Rats. Asian  Pacific Journal  of  Reproduc- tion , 4(3), 188-194.
Sundaram,  J.  (1990).  Antifertility  effects  of andrographolide in rats. J. Ecobiol , 2 (4). Susanti, N. M. P., Warditiani, N. K., Juwianti, C.,  &  Wisesa,  I.  N.  T.  (2017).  Potensi Toksisitas  Andrografolid  dari  Sambiloto ( Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) Pada  Kulit  dan  Mata  Secara  In  Silico. Jurnal Farmasi Udayana , 6(1), 47-49.
Susilo, & Akbar, B. (2016). Pengaruh  Ekstrak buah takokak ( Solanum torvum S.) Terha- dap  Jumlah  dan  Motilitas  Spermatozoa Tikus  Putih  ( Rattus  norvegicus L.)  galur Sprague  Dawley. BIOMEDIKA ,  9(2),  45– 51.