## MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI DENGAN
EKSTRAK SIRIH ( Piper betle Linn) DAN POTENSI PENGGUNAANNYA DALAM PENGAWETAN IKAN
Abdul Jabarsyah
Jurusan Manajemen Sumberdaya Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Mulawarman, Jln Pasir Balengkong Kampus Gunung Kelua Samarinda.

## ABSTRACT
The purpose of this  work  was  to observe the effect the extracts of Piper  betle  Linn on the  growth  of  bakteri.  The  work  was  conduted  on  September  to  October  2012.    The extract of Piper betle  Linnwas 20 ppt, 40 ppt, 60 ppt, and 80 ppt. The bacteria used was (Vibrio sp). Bacteria cultured on Tryptic Soy Agar (TSA). The growth bacteria observed on  the  media  and  data  were  analyzed  statistically.The  Results  of  this  work  showed  the differences of concentration of extract of piper betle leaf affected the growth of bacteria. The growth of bacteria  was lower on 80 ppt < 60 ppt < 40 ppt and 20 ppt respectively. The  best  concerntration  the  extract  were  between  80  ppt  and  60  ppt  base  on the  F t e s t )  and  t t e s t (0.01  and  0.05).That  the  extract  may    useful  for  fish preservation under cool condition.
Keyword : Piper betle leaf extract, bacteria.

## PENDAHULUAN
Ikan dikenal dengan produk makanan yang mudah busuk (edible goods) artinya ikan mudah mengalami kemunduran mutu  terutama  segera  setelah  mati.  Proses kemunduran  mutu  ikan  dimulai  dari  proses perombakan  enzymatic  dalam  tahap  proses rigomortis,  kemudian  berlanjut  dengan perombakan struktur urat daging (Jabarsyah et al ., 1999).  Proses selanjutan diikuti oleh pertumbuhan  bakteri  yang  sangat  cepat. Sebagaimana diketahui bahwa bakteri dapat tumbuh  dan  berkembang  cepat  dalam daging  ikan  pada  suhu  kamar.    Agar  ikan tetap  segar  ketika  sampai  pada  tingkat konsumen,  berbagai  upaya  telah  banyak dilakukan  antara  lain  penyimpanan  dengan suhu  dingin  dan  pembekuan,  tujuannya adalah selain memperlambat proses perombakan enzim juga untuk menghambat pertumbuhan bakteri. Aktifitas
pertumbuhan  bakteri  dipengaruhi  oleh
faktor  lingkungan  antara lain  faktor  abiotik yang  terdiri  dari  faktor  fisika  dan  kimia. Faktor fisika meliputi : temperatur, kebasahan, nilai osmotik radiasi. Sedangkan  faktor  kimia  meliputi  zat-zat kimia  yang  cocok  sebagai  medium  untuk pertumbuhan  bakteri,  terutama  medium yang  bersifat  isotonis  terhadap  isi  sel bakteri (Dwijoseputra, 1990 dan Bauman et al., 1994).
Saat  ini  berbagai  jenis  produk makanan olahan baik dari hasil laut maupun produk makanan lainnya  yang dijual dalam berbagai  bentuk  dan  kemasan.  Penggunaan bahan  pengawet  dalam  produk  makanan olahan  adalah  hal  yang  lazim  agar mempunyai  daya  simpan  cukup  lama. Namun  beberapa  produk  makanan  olahan sering menggunakan bahan-pahan pengawet  yang  berbahaya  bagi  kesehatan. Untuk  itu  perlu  ada  upaya  untuk  mencari bahan-bahan pengawet yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri sehingga
mempunyai  daya  simpan  yang  lama  tetapi tidak berbahaya bagi kesehatan.
Sirih  ( Piper  betle Linn)  merupakan jenis  tanaman  yang  memiliki  banyak manfaat  dalam  kehidupan  masyarakat Indonesia.  Berbagai  manfaat  sirih  antara lain  sebagai  antibiotic  untuk  obat  luka. Selain  itu  ekstrak  sirih  dinilai  cukup  baik untuk  menahan  laju  pertumbuhan  bakteri dan tidak berbahaya bagi kesehatan. Dalam berbagai penelitian menunjukan bahwa sirih dapat  menahan  laju  pertumbuhan  bakteri sehingga  berpotensi  untuk  dapat  digunakan sebagai  bahan  pengawet  ikan  (Jabarsyah et al ., 2005).
Penelitian ini bertujuan untuk mendeterminasi  potensi  ekstrak  sirih  untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri  pada ikan.  Penelitian ini juga dilakukan uji coba terhadap  daya  simpan  ikan  segar  yang diberi ekstrak sirih. Namun belum dilakukan terhadap uji rasa.    Penelitian ini diharapkan ada uji lanjutan, sehingga dapat dikembangkan  menjadi  bahan  alternative sebagai bahan pengawet ikan segar.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Tehnologi  Hasil  Perikanan Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan Universitas Borneo Tarakan dan Laboratorium Mikrobiologi Universitas
Mulawarman.    Penelitian  dimulai  dari  Juli sampai bulan Oktober 2012. Sampel bakteri ( Vibrio  sp )  diperoleh  dari  Laboratirum Mikrobiologi  Universitas  Mulawarman, kemudian  dimurnikan  dalam  biakan  TSB. Extrak  sirih  dibuat  sedemikan  rupa  dengan wearing  blender  kemudian  disaring  dengan menggunakan  kertas  saring.    Cairan  extrak sirih  dibuat  menjadi  konsentrat  sirih.
Sebelum digunakan konsentrat sirih disimpan dalam lemari pendingin.  Sebagai
Pembanding  dalam  penelitian  ini  juga menggunakan  extrak  sirih  yang  diperoleh dari Balai Penelitian Pengobatan Jatim.
Bakteri Vibrio  sp dibiakan  dalam TSB selama 24 jam pada suhu 35 ° C hingga mencapai  pertumbuhan  optimal  (10 -6 ),
ambil 1 ml untuk disebarkan pada beberapa media TSA yang sudah disiapkan sebelumnya.    Untuk  membuat  beberapa konsentrasi ekstrak sirih, konsentrat diencerkan  dengan  aquades.  Ektrak  sirih dari  tiap-tiap  konsentrasi  dipindahkan kedalam cawan petri yang telah disterilkan. Sebagai kontrol juga telah disiapkan larutan antibiotic  dan  larutan  phosphate  buffer saline  (PBS).  Untuk  tujuan  observasi kemampuan ektrak sirih dalam menghambat pertumbuhan
bakteri, konsentrasi  ekstrak  sirih  yang  digunakan adalah 20 ppt 40 ppt, 60 ppt dan 80 ppt, dan konsentrasi  ini  diharapkan  tidak  melebihi kadar  batas  hambat  minimum.  Aktivitas antimikroba dapat meningkat dari bakteriostatik  menjadi  bakterisida  bila kadar
antimikrobanya ditingkatkan melebihi  kadar  hambat  minimum  (MIC) yaitu  konsentrasi  minimum  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  yang ditandai dengan terbentuknya daerah bening disekitar cakram disk (Dharma,1985).
Kertas  saring  yang  telah  disterilkan dimasukan  kedalam  ekstrak  sirih  dari  tiap konsentrasi,  larutan  antibiotik,  dan  larutan phosphate buffer saline (PBS) dan dibiarkan  beberapa  saat  hingga  meresap. Kertas  saring  yang  telah  direndam  dalam larutan  tersebut  diatas  diletakan  di  atas biakan  bakteri  yang  telah  disiapkan sebelumnya,  kemudian  dibiakan  dalam inkubator pada suhu 33 ° C selama 24 jam. Faktor yang diamati adalah resistensi  bakteri  terhadap  konsentrasi ekstrak sirih. Pengamatan terhadap pertumbuhan  bakteri  dilakukan  dengan melihat  lapisan  bening/cincin  di  sekitar kertas  saring,  dan  panjang  cicin  yang terbentuk di sekitar kertas saring.
Menurut  Jawetz  (1984),  diameter hambatan yang dibentuk merupakan ukuran kekuatan  suatu  zat  antimikroba  terhadap bakteri yang diperiksa. Daya zat antimikroba  ini  dapat  diukur  setelah  di inkubasi  selama  18  -  24  jam  pada  saat terbentuknya  daerah  batas  dari  perbedaan kepadatan pertumbuhan bakteri.
Data  hasil  observasi  diuji  secara statistik  dengan  analisa  keragaman  atau  uji F,  dengan  tingkat  kesalahan  pada  level  5% dan 1% pada F tabel .
Untuk  mengetahui  konsentrasi  yang efektif  menghambat  pertumbuhan  bakteri dilakukan  dengan  Uji  Beda  Nyata  Terkecil (BNT).    Untuk  mengetahui  daya  simpan ikan  segar  yang  diberi  ekstrak  sirih dilakukan hanya dalam tahap uji organoleptik,  tetapi  belum  sampai  pada tahap uji rasa.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sebagaimana  telah  dijelaskan  di atas,  untuk  menentukan  tingkat  resistensi bakteri  terhadap  ekstrak  sirih  dilakukan pengukuran  terhadap  nilai  penghambat pertumbuhannya  dengan  mengamati  luas diameter  ruang  kosong  pada  media. Rerata nilai hambatan pertumbuhan bakteri  berdasarkan  hasil  obsevasi  selama 24  jam  pada  media  percobaan  dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Diameter  rerata  daya  hambat  ekstrak  sirih  terhadap  pertumbuhan  bakteri
Virio sp selama 24 jam (mm) No Konsentrasi (ppt) Rerata luasan hambatan (mm) 1 PBS ( 0 ) 0.3 ± 0.1 2 20 2.3 ± 0.2 3 40 2.8 ± 0,2 4 60 5.3 ± 0.2 5 80 5.8 ± 0.3
Berdasarkan  hasil  observasi  dari beberapa  perlakuan,  bahwa  dosis  ekstrak sirih dengan konsentrat 20 ppt dan 40 ppt tidak  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Vibrio  sp ,  sementara  pada  dosis dengan  konsentrasi  dari  40  ppt  telah menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Hasil yang lebih signifan terjadi pada perlakuan dengan  dosis  80  ppt.  Hasil  ini  sejalan dengan  hasil  analisis  sidik  ragam  yang menunjukkan  bahwa  ekstrak  sirih  sangat
berpengaruh terhadap daya hambat bakteri Vibrio  sp berturut  80  ppt  >  60  ppt  >  40 dan  20  ppt.  Sementara  40  dan  20  ppt hampir tidak terlihat perbedaannya dengan  kontrol.  Akan  tetapi  Bonang  dan Koeswardono (1982)  menemukan  bahwa lebar  daerah  hambatan  disekitar  cakram disk  tergantung  pada  daya  serap  ekstrak kedalam  agar  dan  kepekaan bakteri terhadap  ekstrak  yang  dipergunakan  bukan berarti mengabaikan konsentrasi ekstrak.
Tabe1 2. Analisis sidik ragam dengan tingkat kepercayaan 95 dan 99%
Satuan Kwadrat Derajat Bebas Jumlah kwadrat Kwadrat Tengah F.Hit F. Tabel 0.05 0.01 Perlakuan 4 130.00 42,61 14,89 ** 2,67 4,43 Galat 8 20.33 2,86 Total 11 150,33 Sebagaimana  terlihat  pada  Tabel  2 bahwa  konsentrasi  ekstrak  yang  berbeda memberikan  hasil  yang  berbeda  sangat nyata  pula  pada  selang  kepercayaan  99%. Luas  diameter  hambatan  pertumbuhan bakteri  yang  dibentuk  semakin  meningkat
dengan  meningkatnya  konsentrasi  ekstrak yang diberikan. Perhitungan tingkat keragaman masing-masing
perlakuan diketahui  dari  uji  BNT  pada  taraf  nyata (0,05) dan taraf sangat nyata (0,01) disajikan sebagaimana  disajikan  pada  Tabel  3.
Tabel 3.Daftar  uji  BNT  diameter  hambatan  yang  dibentuk  oleh  ekstrak  sirih  terhadap perkembangan Vibrio Sp (BNT 5% = 2,145 : BNT 1% = 2,977)
Konsentrasi Kontrol 20 ppt 40 ppt 60 ppt 80 ppt Keterangan kontrol - 1.3 NS 3.6** 4.8** 8.3** *   beda nyata 20 ppt - 0.6 NS 3.4* 9.2** ** beda sangat nyata 40 ppt - 2.2 NS 9.8** NS  tidak  berbeda nyata 60 ppt - 1.4 NS 80 ppt -
Kemampuan  zat  antimikroba  untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri  menjadi lebih  besar  pada  konsentrasi  ekstrak  yang lebih  tinggi.  Berdasarkan  analisis  sidik ragam  sebagaimana  dapat  dilihat  pada Tabel  2  menunjukkan  bahwa  daya  hambat ekstrak  sirih  lebih  efektif  pada  konsentrasi antara  60  -  80  ppt.  Dengan  demikian  dapat dikatakan  bahwa  ekstrak  sirih  bersifat menghambat,  karena  dalam  observasi  ini pertumbuhan  bakteri  terhenti  dan  disekitar cakram  disk  terlihat  lingkaran  bening  yang tidak  ditumbuhi  bakteri  setelah  di  inkubasi selam  24  jam.  Ekstrak  sirih  diduga  bekerja mirip  dengan  cara  kerja  fenol  yaitu  dengan merusak sel bakteri. Senyawa fenol sebagai antimikroba meracuni
protoplasma, merusak  dan  menembus  dinding  sel  serta mengendapkan  protein  sel  bakteri.  Oleh Gan et  al., (1987),  dijelaskan  bahwa mekanisme  senyawa  fenol  dan  turunannya yang terdapat dalam sirih berfungsi sebagai antimikroba karena dapat mengubah tengangan  permukaan  lapisan  dinding  sel (surface-active  agents)  sehingga  merusak permeabilitas  selektif    membran  sel milcroba yang berasal protein asam nukleat, nukleotida dan lain-lain. Kandungan senyawa  triterpenoid,  flavonoid  dan  tanin pada Piper  betle Linn  diduga  berperan sebagai antimikroba yang mampu melawan beberapa  bakteri  Gram  positif  dan  negatif (Robinson  1995  dan  Newall et  al .,  1996). Berbagai  manfaat  sirih  antara  lain  sebagai antibiotic untuk obat luka Selain itu ekstrak
sirih dinilai cukup baik untuk menahan laju pertumbuhan  bakteri  dan  tidak  berbahaya bagi  kesehatan  (Jabarsyah dkk .,  2005). Dalam  berbagai  penelitian  menunjukan bahwa sirih dapat menahan laju pertumbuhan  bakteri  sehingga  berpotensi untuk  dapat  digunakan  sebagai  bahan pengawet ikan (Hermawan et al. , 2007 dan Jabarsyah et  al .,  2005).    Diketahui  bahwa komponen  penyusun  minyak  atsiri  daun sirih  terdiri  dari  82,8%  senyawa  fenol  dan 18,2%  senyawa  aktif  lainnya.  Senyawa fenol  yang  merupakan  komponen  utama minyak  atsiri  (Pelczar  and  Reid,  1979). Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  yang diberikan  diduga  kandungan  fenolnya semakin  meningkat  sehingga  ada  dugaan bahwa daya hambat yang ditimbulkan akan semakin  kuat.  Dengan  kata  lain  bahwa semakin  tinggi  kandungan  fenol  ekstrak kemampuannya  sebagai  antioksidan  juga semakin meningkat. Senyawa-senyawa fenol  mampu  memutuskan  ikatan  silang ( cross linkage ) peptidoglikan dalam usahanya  menerobos  dinding  sel  mikroba (Ingram. 1981). Jika dilihat dari hasil uji organoleptik dalam percobaan daya simpan ikan  segar,    maka  dapat  dilihat  bahwa ikan segar yang disimpan dalam wadah pendingin telah diberi ekstrak sirih, ternyata lebih  kelihatan  segar  jika  dibandingkan dengan ikan yang disimpan dalam pendingin  yang  tidak  diberi  ekstrak  daun sirih.  Fenol  yang terkandung dalam ekstrak
sirih diduga menghambat
pertumbuhan  mikroba  yang  terdapat  dalam wadah  penyimpanan.  Pelczar  dan  Chan, 1981,  menemukan  bahwa  fenol  dapat mendenaturasi  sel  protein  mikroba.  Selain sel  protein  terdenaturasi,  enzym  yang menjadi katalisator semua aktivitas metabolisme  sel  mikroba  yang  juga  ikut terdenaturasi, sehingga aktifitas metabolisme  sel  mikroba  juga  menjadi terhenti (Lawrence dan Block, 1968). Akan tetapi  dalam  penelitian  yang  dilaporkan oleh  Jawetz et  al .,  (1986)  bahwa  tiap-tiap mikroba  memiliki  respon  pertumbuhan yang  berbeda-beda  terhadap  ekstrak  sirih, karena  tiap-tiap  jenis  mikroba  memiliki lapisan dinding sel yang berbeda-beda.
Berdasarkan  hasil  observasi  dan keterangan tersebut di atas dapat disimpulkan bahwa ektrak sirih ( Piper betle Linn)  dan  menghambat  laju  pertumbuhan bakteri.  Dengan  demikian  ekstrak  sirih mempunyai  kemungkinan  untuk  dapat digunakan  sebagai  bahan  pengawet  ikan segar dan produk-produk hasil perikanan.

## DAFTAR PUSTAKA
Dharma,  AR  1985. Tanaman  Obat Tradisional Indonesia. Balai Pustaka. Jakarta.
Jabarsyah,  A. Tsuchimoto. M., Kozuru.  Y.,
Misima.  T.,  Yada.  O.,and  Tachibana. K.  1999. The  Influence  of  Pink
Muscle  in  Ordinary  Muscle  of  Fishes on  Rigor  Mortis  Progress. J.  of Fisheries Sci. 63 : 472-477.
Jawetz. E., J.L. Melnick and E.A. Adelberg.
1984. Edisi  XVI.  Microbiology  Untuk
Profesi  Kesehatan. Penertbit  Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Jawetz. E., J.L. Melnick and E.A. Adelberg. 1986. Edisi  XVI.  Microbiology  Untuk Kesehatan. Penertbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Julia  Reveny,  2011. Antimicrobial  Activity of  the  Extract  and  Fraction  of  Red Betel  Leaf  (Piper  betle  Linn.). Jurnal ILMU DASAR, Vol. 12 No. 1, 6-12.
Ingram,  L.  O.  1981. Mechanism  of  lysis  of E.  coli  by  ethanol  and  other chaotropic agents. Journal of Bacteriology. 146 (1): 331-335. Lawrence,  C.A.  and  S.S.  Block.  1968. Desinfection, Sterilization and Preservation. Lea and Febiger. Philadelphia.
Newall,  CA,  Anderson  LA,  Phillipson  JD.
1996. Herbal  Medicines  A  Guide  for Health-care Professionals . The Pharmaceutical Press. London.
Gan,  S.  1987. Farmakologi  dan  Terapi. Penerbit Gaya Baru. Jakarta..
Pelczar,  M.  J.  and  R.  D.  Reid.  1979. Microbiology. M.  C.  Graw  Hill  Book Co. New York.
Robinson  T.1995. Kandungan  Organik TumbuhanTinggi .  Penerjemah: K. Padmawinata. Edisi IV.Bandung: ITB Press.