Accredited by Ministry of Research, Technology                                 DOI: https://doi.org/10.35799/jis.v22i2.43434 and Higher Education No:105/E/KPT/2022                Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jis
Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi dari Daun Kamboja Putih (Plumeria alba L.) terhadap 1,1-Difenilpikrilhidrazin (DPPH)
Aloysius Barry Anggoro 1*) , Erlien Lusy Wijaya 2) , Novi Elisa 3)
1,3) Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Yayasan Pharmasi Semarang, Semarang, Indonesia
2) Sekolah Menengah Kejuruan Farmasi Yayasan Pharmasi Semarang, Semarang, Indonesia *Corresponding author: edwardobarry11@gmail.com

## ABSTRAK
Radikal bebas merupakan senyawa yang berperan dalam peningkatan resiko penyakit degeneratif yang  mendominasi  angka  kematian  di  Indonesia.  Antioksidan  sebagai  penangkal  radikal  bebas, salah  satunya  terdapat  dalam  daun  kamboja.  Daun  kamboja  putih  dipilih  karena  relatif  aman, ketersediaan yang melimpah, dan memiliki potensi sebagai antioksidan yang cukup menjanjikan. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas antioksidan dari ekstrak, partisi dan fraksi dari daun  kamboja  putih.  Metode  ekstraksi  yang  dipakai  adalah  remaserasi  menggunakan  pelarut metanol,  dilanjutkan  dengan  partisi  menggunakan  pelarut n- heksana,  etil  asetat  dan  air.  Partisi dengan  IC 50 paling  rendah  atau  memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi  selanjutnya  difraksinasi dengan kromatografi kolom. Penentuan aktivitas antioksidan dengan metode DPPH dilakukan pada panjang gelombang 516,3 nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa partisi etil asetat memiliki IC 50 terendah sebesar 94,43 ppm dibandingkan dengan partisi lainnya, sedangkan fraksi 2 memiliki daya antioksidan  tertinggi  diikuti  fraksi  3  dan  fraksi  1  dengan  IC 50 berturut-turut  sebesar  54,11  ppm; 77,79 ppm dan 84,07 ppm.
Kata kunci: Antioksidan; kamboja putih; metode DPPH; profil kromatografi
Antioxidant Activity of Extracts and Fractions of White Cambodian Leaves (Plumeria alba L.) against 1,1-Diphenylpicrylhydrazine (DPPH)

## ABSTRACT
Free  radicals  are  compounds  that  play  a  role  in  increasing  the  risk  of  degenerative  diseases  that dominate mortality rates in Indonesia. Antioxidants as an antidote to free radicals, one of which is found in frangipani leaves. White frangipani leaves were chosen because they are relatively safe, abundantly available, and have promising potential as antioxidants. This study aims to determine the  antioxidant  effect  of  extracts,  partitions,  fractions  from  white  frangipani  leaves,  and  the  thin layer chromatographic profile of the partition with the highest antioxidant activity. The extraction method being used was maceration using methanol followed by partioning the crude extract using n- hexane, ethyl acetate and water solvents. The partition with the lowest IC 50 or having the highest antioxidant  activity  is  then  fractionated  using  column  chromatography.  The  determination  of antioxidant activity using DPPH method was performed at 516.3 nm. The results showed that  the ethyl acetate partition had the lowest IC 50 among other partitions (94.43 ppm), whereas fraction 2 had  the  highest  antioxidant  effect  which  was  followed  by  fraction  3  and  fraction  1  with  IC 50 respectively, 54.11 ppm; 77.79 ppm and 84.07 ppm.
Keywords: Antioxidant; chromatography profil; DPPH method; white frangipani
(Article History:  Received 06-09-2022; Accepted 11-09-2022; Published 13-09-2022)

## PENDAHULUAN
Penyakit  degeneratif  seperti  diabetes, jantung,  dislipdemia,  obesitas  dan  kanker merupakan  penyakit  yang  mendominasi angka kematian di Indonesia dan juga banyak negara  di  dunia  (Purnamasari,  2018). Perubahan  lingkungan,  teknologi  dan  gaya
hidup yang tidak sehat merupakan faktor yang mengubah pola penyakit ini menjadi mendominasi,  dan  adanya  senyawa  radikal bebas  turut  berperan  dalam  meningkatkan faktor resiko untuk penyakit-penyakit tersebut.  Usaha  menangkal  radikal  bebas dilakukan dengan pemberian senyawa
antioksidan  baik  sintetik  maupun  alami (Anggraito et al ., 2018; Sugiani & Nursanyoto, 2012).
Akan tetapi, antioksidan sintetik seperti Butil  Hidroksi  Anisol  (BHA)  dan  Butil Hidroksi  Toluene  (BHT)  dapat  menjadi senyawa  promotor  terjadinya  karsinogenesis (Farag et  al .,  1989;  Hanani,  2014)  Senyawa alami  dari  tumbuhan  berkhasiat  antioksidan lebih  dipilih  terutama  karena  Indonesia termasuk dalam 17 negara megabiodiversitas dunia  terbesar  sehingga  komoditas  bahan baku obat herbal tidak menjadi permasalahan yang  berarti  (Rajeswara et  al .,  2012). Penelitian  sebelumnya  menyatakan  bahwa ekstrak metanol daun kamboja putih memiliki potensi  aktivitas  antioksidan  yang  cukup menjanjikan  dibandingkan  dengan  ekstrak yang  menggunakan  pelarut  lainnya,  bahkan, pada beberapa konsentrasi larutan uji minimal (2  dan  4  μg/ml),  didapat  hasil  prosentase peredaman radikal DPPH lebih besar daripada larutan  standar  vitamin  C,  yaitu  36.71, 45.29% (Chaudhuri,  2015). Hal  ini  didukung dengan  prosentase  kandungan  senyawa polifenol  yang  cukup  tinggi  yaitu  sebesar sebesar 89,7 mg GAE/g dan nilai total fenolik sebesar  74,7  mg  kuersetin  (Dawood et  al ., 2016).
Chaudhuri (Chaudhuri, 2015),
menunjukkan  skrining  awal  dari  ekstrak metanol  daun  kamboja  putih  menunjukkan berbagai macam metabolit sekunder meliputi terpenoid,  flavonoid,  tanin,  alkaloid,  steroid, saponin, glikosida, dan karbohidrat.
Ringkasan  dari  jurnal  mengenai  kamboja putih  melaporkan  bahwa  pada  daunnya terdapat kandungan bioaktif steroid, flavonoid, dan alkaloid, sedangkan pada daun segar dan batang mengandung pluierid, asam resinat,  fulvoplumierin,  campuran  terpenoid, sterol dan plumierid (Sura et al ., 2018). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  kemampuan  antioksidan  dari senyawa  dalam  ekstrak,  partisi  dan  fraksi methanol  daun  kamboja  putih,  serta  profil kromatografi lapis tipis dari fraksi aktif.

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain  bahan  utama  yaitu daun  kamboja  putih  yang  diperoleh  dari daerah  Pucanggading,  Semarang  yang  telah dideterminasikan  ke  Laboratorium  Fakultas
Biologi Universitas Gajah Mada, Yogyakarta. Bahan  untuk  remaserasi  ekstrak  daun  yaitu metanol  teknis.  Bahan  untuk  ekstraksi  cair- cair berupa n- heksana teknis, etil asetat teknis dan akuades. Proses fraksinasi menggunakan n- heksana  dan  etil  asetat  p.a  dalam  berbagai perbandingan pelarut.
Uji aktivitas antioksidan menggunakan 1,1-
difenilpikrilhidrazin  (DPPH)  serta  silika  gel GF 254 sebagai fase diam pada KLT.
Alat yang digunakan antara lain adalah bejana  maserasi  tertutup  (stoples  kaca), corong  Buchner, rotary  vacuum  evaporator , plat  silika  F 254 ,  corong  pisah,  kolom kromatografi dan spektrofotometer uv-vis.

## Ekstraksi
Preparasi  sebelum  ekstraksi  dilakukan dengan  cara  mencuci  bersih  daun  kamboja putih yang telah dikumpulkan serta melakukan  sortasi  basah  dan  kering.  Daun kamboja  putih  yang  telah  dicuci  bersih dikeringkan  dengan  tidak  terkena  sinar matahari  secara  langsung.  Daun  kamboja kering  selanjutnya  diblender  agar  didapat ukuran  partikel  yang  kecil,  kemudian  diayak dengan  pengayak  ukuran  40  mesh.  Metode ekstraksi yang dipilih adalah cara dingin yaitu remaserasi  dengan  merendam  simplisia menggunakan pelarut metanol dengan perbandingan  1:3  selama  5  hari  sambil dilakukan  pengadukan  berkala.  Penggantian pelarut  dilakukan  setiap  hari.  Filtrat  diambil, kemudian  ditampung  dan  diuapkan  dengan vakum rotary evaporator pada suhu 30-40˚C.

## Partisi / Ekstraksi cair-cair (LLE)
Sejumlah 10g ekstrak kering dilarutkan dalam  pelarut  akuades  100mL  dalam  corong pisah  kemudian  ditambah  pelarut n- heksana (1:1).  Campuran  digojog  hingga  terbentuk  2 lapisan kemudian dilakukan ekstraksi dengan n- heksana 1-2 kali. Fase n- heksana dikumpulkan, kemudian dilumpurkan dengan magnesium  sulfat  anhidrat,  didekantasi,  dan diuapkan. Pada fase air, selanjutnya dilakukan partisi ulang dengan etil asetat.

## Kolom Kromatografi
1g  ekstrak  kering  hasil  dari  partisi dengan  konsentrasi  hambat  50%  (IC 50 ) terendah  diimpregnasi  dengan  sejumlah massa  yang  sama  dari  silika  kemudian dihomogenkan. Campuran tersebut dilarutkan dengan n -heksana:etil asetat (2½:1½) kemudian dimasukkan ke kolom 1cm dengan 10g silika yang telah dimampatkan (kompak).
Sampel  dielusi  dengan  fase  gerak  terpilih yaitu n -heksana:  etil  asetat  (2½:1½)  dan filtrate sejumlah 2mL ditampung dalam vial- vial untuk diuapkan sampai pekat. Fraksi yang diperoleh  sejumlah  30  vial  kemudian dilakukan  KLT  dan    fraksi  yang  memiliki profil  yang  sama  digabung  menjadi  satu  dan siap untuk uji antioksidan.
Uji  Aktivitas  Antioksidan  dengan  DPPH (Difenilpikrilhidrazin)
Metode DPPH merupakan metode yang sederhana, cepat dan mudah untuk penapisan aktivitas penangkalan radikal beberapa senyawa, selain itu metode ini terbukti akurat, efektif  dan  praktis  (Molyneux,  2004). Pengujian antioksidan dimulai dengan mengukur  absorbansi  DPPH  0,07  mM menggunakan  modifikasi  metode  Marinova- Batchvarov  (Marinova  &  Batchvarov,  2011) dan  1,0  ml  metanol  pro  analisis  sebagai blangko  pada  panjang  gelombang yang  telah ditetapkan
(516,3 nm) secara
spektrofotometri.  Kemudian,  pengukuran absorbansi  sampel  (ekstrak,  partisi,  maupun fraksi  dengan  seri  konsentrasi)  dilakukan dengan mencampurkan 1,0 ml sampel dengan 4,0  ml  DPPH  0,07  mM  dalam  tabung  reaksi divortex,  dibiarkan  ditempat  gelap  hingga operating  time tercapai.  Aktivitas  penangkal radikal bebas DPPH (%IC 50 ) dihitung dengan rumus berikut:
IC 50 = A blanko – A sampel x 100%
A blanko A=serapan/absorbansi
Konsentrasi  ekstrak,  partisi,  dan  fraksi daun  kamboja  putih  yang  digunakan  adalah 20, 30, 40, 50, 60 dan 70 ppm. Masing-masing konsentrasi  dibaca  serapannya,  dan  diukur serapan  blangko.  Data  aktivitas  antioksidan penangkal  radikal  DPPH  sampel  dianalisis dan masing-masing dihitung nilai IC 50 secara regresi  linier.  IC 50 adalah  konsentrasi  yang mampu menghambat 50% DPPH.
Skrining  Fitokimia  ekstrak,  partisi  dan fraksi daun Kamboja putih
Skrining  kandungan  senyawa  kimia dari daun kamboja putih meliputi uji fenolik, flavonoid,  tanin,  saponin,  alkaloid,  dan terpenoid/steroid. Metode skrining mengikuti prosedur  standar  yang  telah  ada.  Senyawa fenolik  diidentifikasi  dengan  mereaksikan sampel  dengan  larutan  FeCl 3 10%  yang memberikan  warna  biru  tua,  biru  kehitaman
atau  hitam  kehijauan  menunjukkan  adanya senyawa polifenol. Uji flavonoid: 1 ml larutan sampel yang telah diuapkan ditambah serbuk magnesium  klorida  dan  0,5  ml  asam  klorida (uji shinoda) serta amil alkohol. Hasil positif adalah  warna  merah  jingga  sampai  merah ungu  pada  lapisan  amil  alkohol.  Tanin diidentifikasi  dengan  melarutkan  1g  sampel dalam  akuadest  panas  kemudian  ditambah larutan  NaCl  10%.  Hasil  dinyatakan  positif apabila terbentuk warna hijau kehitaman atau biru tua. Adanya senyawa saponin ditunjukkan  dengan  adanya  busa  setelah penambahan  akuades  yang  telah  dipanaskan dan busa tetap stabil setelah ditambah HCl 2N. Uji  alkaloid  dinyatakan  positif  dengan pereaksi Dragendorf apabila terbentuk endapan  coklat  merah,  selain  itu  juga  positif membentuk  endapan  putih  dengan  reagen Mayer. Terpenoid dinyatakan positif berwarna merah atau ungu, sedangkan steroid positif berwarna biru atau hijau. Hal ini terjadi apabila  sampel  ditambahkan  kloroform  dan pereaksi Liebermann Burchard yaitu campuran  antara  asam  asetat  dengan  asam sulfat pekat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Metode yang digunakan untuk ekstraksi daun  kamboja  putih  adalah  remaserasi (perendaman  dengan  penggantian  pelarut) menggunakan  pelarut  metanol  (1:3)  untuk setiap kali perendaman. Hal ini dimaksudkan agar  jumlah  rendemen  yang  dihasilkan  lebih banyak. Rendemen yang dihasilkan dari 200g penimbangan  serbuk  kering  adalah  9,79%. Perendaman  simplisia  dengan  pelarut  yang sesuai akan menyebabkan terjadinya pemecahan  membran  dan  dinding  sel sehingga  terjadi  perbedaan  tekanan  di  dalam dan  luar  sel  yang  menyebabkan  senyawa metabolit  sekunder  dalam  sitoplasma  akan larut  dalam  pelarut  organik  (Hanani,  2014). Metanol  merupakan  pelarut universal selain etanol,  sehingga  diharapkan  dapat  menyari semua  senyawa  polar,  semi  polar  dan  non polar karena memiliki gugus polar (-OH) dan gugus non polar (-CH 3 ).
Ekstrak kering yang dihasilkan, dipartisi  dengan  eluen n- heksana  dan  etil asetat  (ekstraksi  cair-cair),  diuapkan  hingga didapat  ekstrak  kental.  Pemisahan  terjadi karena  berat  jenis  dan  polaritas  cairan  yang berbeda. Skrining fitokimia dilakukan terhadap  ekstrak  metanol,  partisi  air,  etil
asetat, dan n- heksana. Uji ini memperlihatkan bahwa  daun  kamboja  putih  mengandung beberapa  metabolit  sekunder.  Tabel  1 menunjukkan  bahwa  serbuk  dan  ekstrak metanol  daun  kamboja  putih  mengandung semua golongan senyawa metabolit sekunder.
Senyawa  fenolik  dihasilkan  sebagai respon  terhadap  stress  lingkungan  dengan senyawa  flavonoid  termasuk  kelompok terbesar  dalam  golongan  senyawa  ini  (Hanin &  Pratiwi,  2017). Flavonoid  ditemukan pada serbuk,  ekstrak,  partisi  etil  asetat  dan  air, sedangkan pada partisi n- heksana warna tidak mengindikasikan  adanya  flavonoid,  hal  ini sesuai,  karena  jenis  flavonoid  dalam  daun kamboja  putih  mempunyai  bentuk  sebagai aglikon  polifenol/polihidroksi  dan  glikosida flavonoid. Senyawa ini mempunyai tipe yang beragam  dan  berada  dalam  bentuk  bebas (aglikon)  dan  bentuk  terikat  (aglikon), Aglikon  polimetoksi  bersifat  non  polar, aglikon  polihidroksi  bersifat  semipolar  dan glikosida  flavonoid  bersifat  polar  (Harborne, 1987; Markham, 1988). Setidaknya sembilan senyawa  polifenol  dan  sepuluh  senyawa flavonoid teridentifikasi dalam ekstrak metanol daun kamboja putih  (Dawood et al ., 2016). Alkaloid terdapat pada semua hasil uji dalam jumlah sedikit, dari hasil tampak bahwa kamboja  putih  mengandung  alkaloid  dalam bentuk  bebas  maupun  garamnya.  Plumierid merupakan  senyawa  pahit  dalam  kamboja putih  yang  mungkin  masuk  dalam  golongan ini.  Tanin  merupakan  senyawa  golongan fenol,  memiliki  sifat  antimikroba.  Tanin memiliki cukup banyak gugus –OH sehingga akan larut dalam senyawa polar. Dari hasil uji fitokimia, hanya partisi n- heksana yang tidak terdapat kandungan tanin. Saponin merupakan glikosida  triterpen  yang  memiliki  sifat cenderung  polar  karena  ikatan  glikosidanya (sapogenin),  senyawa  ini  bersifat  aktif permukaan sehingga akan menimbulkan buih bila digojog dengan air. Serbuk, ekstrak, dan partisi  air  mengandung  sedikit  senyawa saponin  hal  ini  terlihat  pada  pembentukan buih yang tidak tinggi.
Terpenoid merupakan komponen utama  penyusun  minyak  atsiri.  Di  alam banyak  dijumpai  dalam  bentuk  glikosida, glikosil ester, dan iridoid.
Senyawa  steroid  maupun  terpenoid biasanya  mudah  larut  dalam  pelarut  organik non polar. Hasil skrining menunjukkan bahwa
dalam partisi n- heksana banyak mengandung triterpenoid dan steroid, sedangkan partisi air tidak mengandung kedua senyawa tersebut.
Tabel 1. Uji Fitokimia Ekstrak Metanol, Partisi n- heksana, etil asetat dan air
Keterangan: S =serbuk; E =ekstrak; H = n- heksana; EA =etil asetat; A =akuadest
(+)  memberikan warna dengan intensitas rendah (++) memberikan warna dengan intensitas sedang (+++) memberikan warna dengan intensitas tinggi (-) Negatif
Partisi etil asetat selanjutnya difraksinasi  dengan  kromatografi  kolom. Untuk mendapatkan profil kromatografi lapis tipis  yang  baik  (pemisahan  senyawa  yang optimal)  maka  dilakukan  optimasi  setelah dilakukan  orientasi  perbandingan  pelarut n- heksana-etil  asetat.  Dari  hasil  orientasi, diperoleh bahwa untuk partisi etil asetat, fase gerak n- heksana: etil asetat (3:1) adalah rasio yang  terbaik  sehingga  dilakukan  optimasi dengan  fase  gerak  yang  sama  dengan perbandingan  lebih  spesifik.  Berdasarkan hasil optimasi, maka fase gerak terpilih adalah n- heksana:  etil  asetat  (2½:1½).  Gambar  1 menunjukkan kromatogram KLT hasil orientasi dan optimasi pelarut dari partisi etil asetat di UV 254 dan 365 Partisi kental yang diperoleh kemudian difraksinasi dengan pelarut n- heksana: etil  asetat  (2½:1½)  untuk  mendapat  profil kromatografi dari masing-masing fraksi. Hasil yang    memiliki  profil  KLT  yang  sama digabungkan.  Sebanyak  tiga  fraksi  diperoleh pada pemisahan dengan kromatografi kolom. Fraksi  1  dan  2  secara  visual  cukup  jelas menunjukkan bercak di UV 254 nm, sedangkan fraksi 3 dan 4 tidak jelas terlihat secara visual. Fraksi  1  menunjukkan  5  bercak  dan  fraksi  2 menunjukkan  6  bercak  di  UV 254 nm.  Bercak pada UV 254 nm terlihat gelap di semua fraksi.
Golongan senyawa Hasil Uji Partisi S E H EA A Fenolik +++ +++ + +++ +++ Flavonoid ++ ++ - + ++ Alkaloid + + + + + Tanin + + - + + Saponin ++ ++ - - + Terpenoid /  Steroid ++ +++ +++ +++ + +++ - -
Fraksi 1, 2 dan 3 secara jelas menunjukkan 4 bercak  di  UV 365 nm.  Bercak  yang  menyerap sinar UV 254 nm diprediksi mempunyai ikatan rangkap  terkonjugasi  (kromofor),  sedangkan bercak  di  UV 365 nm  berwarna  merah  coklat dan berfluoresensi biru. Gambar 2. memperlihatkan  profil  pemisahan  senyawa dalam kamboja putih dengan kolom kromatografi  (setelah  penggabungan)  di  UV 254 nm dan 365 nm.
Gambar 1. Profil Pemisahan dan Optimasi partisi etil  asetat  dalam  berbagai  ratio  fase  gerak n- heksana : etil asetat di UV 254 nm (A) dan di UV 365 nm (B)
Gambar 2. Profil KLT hasil fraksinasi partisi etil asetat  daun  kamboja  putih  di  UV 254 dan 365 nm setelah profil yang sama digabungkan
Potensi  antioksidan  penangkal  radikal bebas  ditentukan  dengan  menggunakan DPPH, suatu radikal sintetik yang stabil dalam larutan air atau metanol dan mampu menerima sebuah  elektron  atau  radikal  hidrogen  untuk menjadi  molekul  diamagnetik  yang  stabil (Kedare  &  Singh,  2011).  Perubahan  warna violet DPPH menjadi kuning diikuti penurunan  serapan  pada  panjang  gelombang maksimum  (516,3  nm),  ini  menunjukkan adanya  aktivitas  antioksidan  yang  dapat dilihat  dari  %  peredaman  (kemampuan mereduksi). DPPH pada uji ini ditangkap oleh antioksidan  yang  melepaskan  hidrogen,
sehingga  membentuk  DPPH  tereduksi  (DPP- hidrazil).
Hasil  dari  tabel  pengujian  aktivitas antioksidan  menunjukan  bahwa  semakin besar  konsentrasi  larutan  antioksidan  yang diberikan  maka  konsentrasi  DPPH  akan semakin berkurang.
Pengujan antioksidan partisi n -heksana, partisi etil asetat dan partisi air daun kamboja dilakukan  untuk  melihat  fraksi  mana  yang paling efektif sebagai antioksidan dan setelah itu  dilakukan  fraksinasi  hingga  didapatkan fraksi 1, 2 dan 3. Pembanding yang digunakan adalah  rutin  karena  rutin  merupakan  suatu senyawa  antioksidan dari  golongan  glikosida flavonoid  yang  cukup  efektif  guna  meredam radikal  bebas.  Parameter  yang  digunakan dalam mengukur kekuatan antioksidan digambarkan dengan nilai IC 50 . IC 50 merupakan  konsentrasi  antioksidan  yang menghambat  atau  meredam  50%  radikal bebas.  Semakin  kecil  IC 50 maka  semakin besar kemampuan dalam menghambat radikal bebas.
IC 50 didapatkan dari
mengekstrapolasikan  konsentrasi  dengan  % peredaman  melalui  persamaan  regresi  linier. Rutin  merupakan  glikosida  flavonoid  yang digunakan sebagai kontrol positif karena telah terbukti  aktivitas  antioksidannya  (Kedare  & Singh, 2011).
Pada  penelitian  ini,  nilai  IC 50 rutin sebesar 9.66 ppm sehingga termasuk kedalam antioksidan  sangat  kuat.  Partisi n- heksana memiliki  nilai  IC 50 sebesar  216.56  ppm, artinya partisi n- heksana mempunyai aktivitas antioksidan  yang  lemah,  Partisi  etil  asetat mempunyai aktivitas antioksidan yang paling besar  jika  dibanding  dengan  aktivitas antioksidan  partisi n- heksana  dan  fraksi  air dengan  nilai  IC 50 sebesar  94.43  ppm  artinya fraksi  etil  asetat  mempunyai  aktivitas antioksidan  yang  kuat.  Etil  asetat  akan  lebih banyak menarik senyawa-senyawa semi polar yaitu flavonoid polihidroksi, seperti catechin, epicatechin,  rutin,  hisperedin,  narenigin, hesperitin, apigenin, kaemferol, dan diosmitin karena  sifat  polaritas  yang  sama,  selain  itu juga akan menarik senyawa-senyawa polifenol dan asam fenolat, seperti pyrogallol, rosmaric,  ferrulic  acid,  vanillic  acid,  p coumaric  acid,  ellaglic  acid,  salycillic  acid, cinamic  acid,  dan  protocathecuic dalam dalam  daun  kamboja  putih  (Dawood et  al .,
2016).  Fraksi  air  mempunyai  nilai  IC 50 sebesar  115.09  ppm,  senyawa  kuersetin
merupakan  jenis  glikosida  flavonoid  yang akan lebih terlarut dalam fraksi ini. Aktivitas antioksidan  fraksi  air  lebih  besar  jika dibandingkan  aktivitas  antioksidan  partisi n- heksana,  sedangkan  untuk  ekstrak  daun kamboja mempunyai nilai IC 50 sebesar 119.22 ppm  termasuk  antioksidan  sedang. Pelarut dengan  polaritas  yang  sama  dengan  zat terlarut dalam sampel akan mampu melarutkan dan mengekstraknya dengan baik (Dai & Mumper , 2010)
Gambar 3. IC 50 dari ekstrak metanol, partisi n- heksana, etil asetat dan air serta larutan baku rutin.
Partisi etil asetat mempunyai IC 50 yang kuat, hal tersebut bisa dikarenakan kandungan fitokimia  dalam  fraksi  etil  asetat  yaitu mengandung flavonoid, terpenoid dan steroid yang mempunyai aktivitas sebagai antioksidan. Partisi etil asetat difraksinasi dan didapatkan  fraksi  1,  fraksi  2  dan  fraksi  3, selanjutnya  diuji  aktivitas  antioksidan  untuk mengetahui fraksi yang paling efektif. Fraksi 1  mempunyai  aktivitas  antioksidan  sebesar 84,07  ppm,  fraksi  2  sebesar  54,11  ppm sedangkan  fraksi  3  mempunyai  aktivitas antioksidan  sebesar  77,79  ppm  sehingga fraksi  yang  mempunyai  aktivitas  antioksidan paling besar adalah fraksi 2.
Gambar 4. IC 50 dari fraksi etil asetat dan baku rutin
Fraksi  etil  asetat  2  mempunyai  daya antioksidan  lebih  rendah  jika  dibandingkan
dengan  rutin  sebagai  kontrol  positif  karena fraksi etil asetat 2 masih terdiri dari beberapa campuran senyawa yang mungkin mempunyai potensi yang sama (efek aditif/sinergis) sebagai antioksidan, sedangkan rutin adalah senyawa murni.

## KESIMPULAN
Partisi  dan  fraksi  etil  asetat  daun kamboja putih mampu secara optimal menarik sejumlah senyawa flavonoid polihidroksi dan senyawa fenol sehingga menghasilkan aktivitas antioksidan yang tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggraito,  Y.U.,  Susanti,  R.,  Ari,  R.S.I., Lisdiana,  Yuniastuti,  A.,  Habibah,  N.
A.,  &  Bintari,  S.  H.  2018.  Metabolit Sekunder Dari Tanaman : Aplikasi dan Produksi (1st ed.). Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Semarang. http://www.riset.unisma.ac.id/index.ph p/mipa/article/view/1132/1569.
Chaudhuri,  S.  2015.  Screening  of  in-vitro Antioxidant Profile of Different Extracts of the Leaves of Plumeria alba Linn. J.Adv.Pharm.Edu  &  Res. , 5(2):
98–102.
Dai,  J.,  &  Mumper,  R.J.  2010.  Plant phenolics:  Extraction,  analysis  and their antioxidant and anticancer properties. Molecules , 15(10): 7313–
7352. https://doi.org/10.3390/ molecules15107313. Dawood, H.D., Hassan, R.A., & Abdel-fattah, S.M. 2016. Antioxidant Activity Evaluation  of  Methanolic  Extract  and Crude  Polysaccharides  from  Plumeria alba L. Leaves. International Journal of Advance  Research , 4(5): 1688–1701. https://doi.org/10.21474/IJAR01. Farag, R.S., Badei, A.Z.M.A., Hewedi, F.M.,
& El-Baroty, G.S.A. 1989. Antioxidant activity of some spice essential oils on linoleic  acid  oxidation  in  aqueous media. Journal  of  the  American  Oil Chemists’  Society , 66(6): 792–799. https://doi.org/ 10.1007/BF02653670.
Hanani,  E.  2014.  Analisis  Fitokimia.  EGC Medical Publisher.
Hanin,  N.N.F.,  &  Pratiwi,  R.  2017. Kandungan  Fenolik,  Flavonoid  dan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun Paku  Laut  (Acrostichum  aureum  L.) Fertil dan Steril di Kawasan Mangrove Kulon  Progo,  Yogyakarta. Journal  of Tropical Biodiversity and Biotechnology , 2(2): 51–56. https://doi.org/10.22146/jtbb.29819.
Harborne,  J.B.  1987.  Metode  Fitokimia : Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan (II). Penerbit ITB, Bandung.
Kedare,  S.B.,  &  Singh,  R.P.  2011.  Genesis and  development  of  DPPH  method  of antioxidant  assay. Journal  of  Food Science  and  Technology , 48(4): 412–
422. https://doi.org/10.1007/s13197- 011-0251-1.
Marinova,  G.,  &  Batchvarov,  V.  2011. Evaluation of the Methode for Determination  of  the  Free  Radical Scavenging Activity By DPPH. Bulgarian  Journal  of  Agricultural
Science , 17(1): 11–24.
Markham,  K.R.    1988.  K.R.-Markham-Cara- Mengidentifikasi-Flavonoid.-intro.pdf. Penerbit ITB, Bandung.
Molyneux, P.  2004. The Use of the stable free
radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for  estimating  antioxidant  activity. Songklanakarin Journal Science Technology , 26(2): 211–219. https://doi.org/10.1287/isre.6.2.144.
Purnamasari,  D.  2018.  The  Emergence  of
Non-communicable Disease in
Indonesia. Acta  Medica  Indonesiana , 50(4): 273–274.  http://www.ncbi.nlm. nih.gov/pubmed/30630990
Rajeswara,  R.B.R.,  Syamasundar,  K.V., Rajput, D.K., Nagaraju, G., & Adinarayana,  G.  2012.  Biodiversity,
Conservation and Cultivation of
Medicinal Plants. Journal of Pharmacognosy , 3(2): 59–62. https://doi.org/10.13140/2.1.2927.4247
Sugiani,  P.P.S.,  &  Nursanyoto,  H.  2012. Peranan  Gizi  dalam  Penuaan  Dini. Jurnal Ilmu Gizi , 3(1): 60–80.
Sura,  J.,  Dwivedi,  S.,  &  Dubey,  R.  2018. Pharmacological,  phytochemical,  and traditional uses of Plumeria alba LINN. an  Indian  medicinal  plant. Journal  of Pharmaceutical and BioSciences , 6(1):
1. https://doi.org/10.31555/jpbs/ 2018/6/1/1-4.