## ANALISIS BUNGA TELANG ( Clitoria ternatea ) DENGAN VARIASI Ph METODE LIQUID CHROMATOGRAPH-TANDEM MASS SPECTROMETRY (LC-MS/MS)

## Sumartini, Yusep Ikrawan, Fauzan Miftah Muntaha.
Program Studi Teknologi Pangan, Fakultas Teknik, Universitas Pasundan, Jl. Dr.Setiabudi No. 93, Bandung, 40153, Indonesia
E-mail: tinitafsil@yahoo.com

## Abstrak
Tujuan dari penelitian adalah untuk mengetahui pH optimum dan kandungan senyawa aktif pada bunga telang ( Clitoria ternatea ) . Manfaat dari penelitian adalah untuk memberikan informasi kepada masyarakat luas mengenai kandungan  bunga  telang  sehingga  dapat    di  maksimalkan    penggunaan  nya. Penelitian  ini  meliputi  penelitian pendahuluan  dan  penelitian  utama.  Pada  penelitian  pendahuluan  dilakukan  analisis  aktivitas  antioksidan  pada ekstrak bunga telang kering dengan berbagai pH yaitu 4, 5 dan 6 untuk menentukan aktivitas antioksidan terkuat. Pada penelitian utama digunakan instrument LC-MS/MS unttuk mengetahui kandungan senyawa apa yang ada dalam ekstrak bunga telang. Hasil  penelitian pendahuluan yaitu aktivitas antioksidan terkuat pada ekstrak bunga telang kering pH 6 dengan aktivitas antioksidan sebesar 344,17 ppm. Hasil penelitian utama ekstrak bunga telang memiliki  12 antosianin 18 flavonol dan 11 flavon.

## Abstract
The purpose of this research is to find out the optimum pH and content of active compounds in the butterfly pea (Clitoria ternatea). The benefit of this research is to provide information to the general public about the contents of  the  telang  flower  so  that  its  use  can  be  maximized.  This  research  includes  preliminary  research  and  main research. In the preliminary study an antioxidant activity analysis was carried out on dried butterfly pea flower extracts with various pH 4, 5 and 6 to determine the strongest antioxidant activity. In the main research, LC-MS / MS instrument was used to find out what compounds are in the butterfly pea extract. Preliminary research results are the strongest antioxidant activity in dried butterfly pea extracts pH 6 with antioxidant activity of 344.17 ppm. The main research results of butterfly pea extract have 12 anthocyanin 18 flavonols and 11 flavones. Keyword: Butterfly pea, HPLC, LC-MS/MS, pH, butterfly pea extract, antioxidant. Etanol, Flavonoid

## 1. Pendahuluan
Bunga telang (Clitoria Terenatea) adalah bunga yang mengandung tinggi antioksidan yang biasanya tumbuh  di  pekarangan  rumah,  hutan  atau  bahkan pinggiran  kebun.  Bunga  telang  yang  tinggi antioksidan  lebih  dikenal  oleh  masyarakat  sebagai tanaman obat, umumnya bunga telang dimanfaatkan sebagai obat mata, obat untuk menghilangkan dahak pada  bronkitis  kronis,  menurunkan  demam,  serta iritasi  kandungan  kemih  dan  saluran  kencing. (Suarna, 2005)
Bunga telang di Indonesia biasanya digunakan sebagai pewarna makanan atau  juga merebus bunga secara  langsung  untuk  dijadikan  obat  herbal sehingga  belum  populer  di  kalangan  masyarakat untuk dijadikan produk lebih lanjut. Hingga saat ini penelitian untuk pengembangan bunga telang belum banyak  dilakukan  karena  banyak  yang  belum mengetahui manfaat dari bunga telang. Pemanfaatan bunga telang dalam bidang pangan telah dilakukan di  beberapa  negara.  Warna  biru  dari  bunga  telang telah dimanfaatkan sebagai pewarna biru pada ketan di  Malaysia.  Bunga  telang  juga  dimakan  sebagai sayuran  di  Kerala  (India)  dan  di  Filipina  (Lee, 2011).
Antioksidan  didefenisikan  sebagai  senyawa yang  bekerja  menghambat  oksidasi  dengan  cara bereaksi  dengan  radikal  bebas  reaktif  yang membentuk  radikal  bebas  tidak  reaktif  yang  tidak stabil.  Antioksidan  merupakan  semua  bahan  yang dapat  menunda  atau  mencegah  kerusakan  akibat oksidasi  pada  molekul  sasaran.  Dalam  pengertian kimia antioksidan adalah senyawa-senyawa pemberi elektron, tetapi dalam pengertian biologis lebih luas lagi,  yaitu  semua  senyawa  yang  dapat  meredam dampak negatif oksidan, termasuk enzim-enzim dan protein-protein pengikat logam. Beberapa penelitian juga  mengungkapkan  peran  dari  stress  oksidatif yang disebabkan oleh radikal bebas dalam berbagai penyakit  yang  berbahaya,  seperti  penyakit  kanker, penyakit yang berhubungan dengan kardiovaskular, dan  penyakit  degeneratif.  Penelitian-penelitian tersebut  juga  menyampaikan  bahwa  antioksidan memiliki  nilai  terapetik  pada  penyakit-penyakit tersebut (Barhe dan Tchouya, 2014).
Antioksidan  dapat  diperoleh  dalam  bentuk sintesis  dan  alami  Antioksidan  sintesis  seperti buthylatedhydroxytoluene (BHT), buthylated hidroksianisol  (BHA),  dan  ters-butylhydroquinone (TBHQ) secara efektif dapat menghambat oksidasi. Antioksidan  sintesis  bersifat  karsinogenik  dalam
jangka  tertentu  dapat  menyebabkan  racun  dalam tubuh, sehingga dibutuhkan antioksidan alami yang lebih  aman.  Antioksidan  alami  dapat  ditemukan pada  sayur-sayuran  yang  mengandung  fitokimia, seperti flavonoid, isoflavin, flavon, antosianin, dan vitamin C.
Radikal  bebas  terbentuk  dalam  tubuh  secara terus menerus, baik melalui proses metabolisme sel normal,  peradangan,  kekurangan  gizi,  serta  akibat respons  terhadap  pengaruh  dari  luar  tubuh,  seperti polusi  lingkungan,  ultraviolet  (UV),  dan  asap rokok.Pembentukan  radikal  bebas  secara  alami terjadi  di  dalam  tubuh,  yang  merupakan  hasil samping dari proses metabolisme tubuh.
Radikal bebas adalah suatu atom atau molekul yang  mempunyai  elektron  tidak  berpasangan. Elektron  tidak  berpasangan  tersebut  menyebabkan radikal  bebas  sangat  reaktif  yang  kemudian  akan menangkap  atau  mengambil  elektron  dari  senyawa lain  seperti  protein,  lipid,  karbohidrat,  dan  DNA untuk menetralkan diri. Radikal bebas dapat masuk ke  dalam  tubuh  dan  menyerang  sel-sel  yang  sehat dan menyebabkan sel-sel tersebut kehilangan fungsi dan strukturnya. Akumulasi dari kerusakan tersebut berkontribusi  terhadap  beberapa  penyakit  dan menyebabkan  kondisi  yang  biasa  disebut  sebagai penuaan dini (Liochev, 2013).
Metode untuk  menganalisa antioksidan adalah HPLC  merupakan  teknik  pemisahan  yang  diterima secara  luas  untuk  analisis  dan  pemurnian  senyawa tertentu dalam suatu sampel (Gandjar dan Rohman, 2007).HPLC  memiliki  kemajuan  dalam  teknologi kolom,  sistem  pompa  tekanan  tinggi,  dan  detektor yang sensitif sehingga HPLC menjadi suatu sistem pemisahan  dengan  kecepatan  dan  efisiensi  yang tinggi  (Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat  dan Makanan RI, 1995). Metode HPLC bersifat selektif dan  sensitiv  sehingga  cocok  digunakan  dalam analisis  kuantitatif  beberapa  senyawa  secara simultan  ,Kelebihan  metode  HPLC  inilah  yang dimanfaatkan  oleh  peneliti  untuk  memisahkan antioksidan  dari  senyawa-senyawa  lain  nya  dalam bunga telang (Khopkar, 1990).

## 2. Bahan dan Metode Penelitian
Bahan  baku  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  bunga  telang  berumur  4-6  minggu  yang diperoleh  dari  daerah  Jogjakarta,  etanol,  dan  asam sitrat
Bahan kimia yang digunakan untuk uji aktivitas antioksidan yaitu 1,1- diphenyl -2- picryhydrazil (DPPH).
Alat  yang  digunakan  untuk  ekstraksi  bunga telang  adalah  Timbangan  digital  dengan  merk Mettler  Toledo,  baskom,  gelas  kimia  500ml,  gelas ukur  100ml,  corong,  kertas  saring,  kertas  karbon, vacuum evaporator dengan merk Buchi, spektrofotometer  Uv-Visible  dengan  merk  Genesis 20,  dan Liquid  Chromatograph-tandem  Mass Spectrometry (LC-MS/MS).
Penelitian  pendahuluan  yang  dilakukan  yaitu mengetahui  hasil  ekstraksi  bunga  telang  kering dengan  hanya  menggunakan  pelarut  etanol.  Lama ektraksi    yang  akan  dilakukan  yaitu  dengan  lama waktu 24 jam dengan variasi pH 4, 5dan 6. Respon pada  penelitian  pendahuluan  adalah  analisis aktivitas antioksidan dengan metode DPPH.
Penelitian  utama  yaitu  meliputi  pembuatan ekstrak bunga telang dan untuk mengetahui senyawa aktif  dalam  bunga  telang  menggunakan  instrumen LC-MS/MS.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Penelitian  pendahuluan  yang  dilakukan  yaitu mengetahui  hasil  ekstraksi  bunga  telang  kering dengan hanya menggunakan pelarut etanol. Respon pada  penelitian  pendahuluan  adalah  analisis aktivitas antioksidan dengan metode DPPH.
Tabel 1. Data Aktivitas Antioksidan Ekstrak Bunga Telang pH 4
Konsentrasi (ppm) Rata-Rata Nilai Absorbansi % Inhibisi IC 50 (ppm) 0 0.790 0 106,863 100 0.715 9.494 200 0.587 25.696 300 0.488 38.225 400 0.389 50.759 Tabel 2. Data Aktivitas Antioksidan Ekstrak Bunga Telang pH 5 Konsentrasi (ppm) Rata-Rata Nilai Absorbansi % Inhibisi IC 50 (ppm) 0 0.792 0 94.104 100 0.705 10.985 200 0.572 27.778 300 0.473 40.278 400 0.366 53.788 Tabel 2. Data Aktivitas Antioksidan Ekstrak Bunga Telang pH 6 Konsentrasi (ppm) Rata-Rata Nilai Absorbansi % Inhibisi IC 50 (ppm) 0 0.802 0 64,477 100 0.695 13.342 200 0.561 30.050 300 0.451 43.766 400 0.340 57.606
Berdasarkan  data  hasil  analisis  aktivitas antioksidan, diperoleh nilai IC 50 pada ekstrak bunga telang  kering  pH  4  yaitu  392.77  ppm,  nilai  IC 50 ekstrak bunga telang kering pH 5 yaitu 370.87 ppm dan nilai IC 50 pada ekstrak bunga telang kering pH 6  yaitu  344.13  ppm.  Nilai  IC 50 menunjukan konsentrasi larutan sampel yang mampu mereduksi
aktivitas  DPPH  sebesar  50%.  Semakin  kecil  nilai IC 50 semakin  tinggi  aktivitas  antioksidan  sampel tersebut (Wirani, 2017). Tingkat kekuatan antioksidan dengan metode DPPH dapat dilihat pada tabel 15.
Tabel  3.  Tingkat  Kekuatan  Antioksidan  dengan Metode DPPH
Nilai IC 50 ( ppm ) Tingkat Aktivitas Antioksidan 151-200 Lemah 100-150 Sedang 50-100 Kuat <50 Sangat Kuat
Sumber  :  Blois,  1958  dalam  Mohamad  Hasan Furqon, 2016
Hasil  analisis  aktivitas  antioksidan  ekstrak bunga  telaang  kering  pH  4  menurut  tabel  1. menunjukan  aktivitas  yang  sangat  lemah  dengan rentan  nilai  IC50  >200  ppm.  Hal  ini  disebabkan karena kadar air pada bunga  masih tinggi. Kadar air yang  cukup  tinggi  pada  suatu  bahan menyebabkan senyawa antioksidan yang terdapat pada bahan akan semakin sedikit nilainya karena kandungan air lebih banyak  dari  pada  kandungan  senyawa  antioksidan. Aktivitas  antioksidan  akan  semakin  kuat  apabila kandungan air bahan dikurangi ( Rakhmawati dalam Wirani,  2017).  Kadar  air  yang  tinggi  juga  dapat menyebabkan senyawa flavonoid teroksidasi sehingga menurunkan aktivitas antioksidan.
Penyebab  lain  rendahnya  aktivitas  antioksidan pada  daun  segar  yaitu  karena  flavonoid  yang terkandung  dalam  bahan  segar  masih  berikatan dengan  gugus  glikosida.  Gugus  glikosida  yang berikatan  dengan  flavonoid  dapat  menurunkan aktivitas  antioksidan  (Tiaraswara,  2015).  Menurut Harbone  (1996)  flavonoid  dalam  tumbuhan  sering terdapat sebagai glikosida (flavonoid glikosida) dan jarang sekali ditemukan dalam bentuk tunggal atau aglikol flavonoid.
Menurut  fukumoto  dan  Mazza  (2000)  dalam Tiaraswara  (2015)  aktivitas  antioksidan  akan meningkat  dengan  bertambahnya  gugus  hidroksi dan menurun dengan adanya gugus glikosida.
Hasil analisis aktivitas antioksidan ekstrak daun bunga  telang  pH  6  tabel  3.  Menunjukan  aktivitas yang kuat dibandingkan dengan pH  lainnya dengan nilai  yaitu  344.13  ppm.  Hal  ini  disebabkan  karena antioksidan pada bunga telang maksimal pada pH 6- 8  yaang  menyebabkan  warna  menjadi  biru.  Salah satu  faktor  yang  mempengaruhi  warna  dari antosianin  adalah  perubahan  pH.  Sifat  asam  akan menyebabkan  warna  antosianin  menjadi  merah, sedangkan  sifat  basa  menyebabkan  antosianin menjadi  biru.  Selain  faktor  perubahan  pH, konsentrasi  pigmen,  adanya  campuran  dengan senyawa-senyawa  lain,  jumlah  gugus  hidroksi  dan metoksi  juga  mempengaruhi  warna  antosianin (Satyatama, 2008).
Menurut  penelitian  Muhamad  Yamin  (2017) penggunaan suhu 500 pada pengeringan teh herbal ketepeng  cina  menunjukan  kandungan  senyawa fenolik  dan  flavonoid  yang  tinggi  karena  senyawa tersebut  tahan terhadap panas, tetapi  semakin lama pengeringan  menyebabkan  senyawa  fenolik  dan flavonoid  berkurang  karena  semakin  lama  panas kontak  dengan  bahan  yang  menyebabkan  senyawa fenolik  dan  flavonoid  mengalami  kerusakan  dan dapat menurunkan aktivitas antioksidan.
Aktivitas antioksidan pada ekstrak bunga telang kering  lebih  rendah  karena  terjadi  proses  oksidasi enzimatis pada bunga.(Rohdiana, 2001).
Proses pengeringan menyebabkan daun kontak dengan udara langsung yang menyebabkan senyawa antioksidan mengalami kerusakkan. Selain penggunaan panas antioksidan juga akan mengalami kerusakan  apabila  kontak  langsung  dengan  udara sehingga  menyebabkan  senyawa  yang  bersifat antioksidan  teroksidasi  dan  terdegradasi  sehingga menurunkan aktivitasnya (Burda dan Oleszek dalam Tiaraswara, 2015).
Perubahan  warna  dari  merah  melalui  ungu  ke biru  adalah  ciri  dari  antosianin  yang  mengandung gugus-gugus  hidroksil  bebas  pada  cincin  B  dan terletak  bersebelahan  seperti  lazimnya  ditemukan pada  glikosida  dari  sianidin  dan  delfinidin.  Oleh karena  itu  glikosida  dari  pelarginidin  tidak memperlihatkan  perubahan  warna  yang  menyolok. Fenomena ini dapat digunakan untuk mengenal pola hidroksilasi  dari  cincin  B  dari  molekul  antosianin yang  dipisahkan  dari  suatu  jaringan  tumbuhan. Antosianin  atau  antosianidin  diuraikan  oleh  basa, dimana struktur flavilium putus pada atom oksigen dari cincin piroksinium, menghasilkan dua fragmen, yaitu  floroglusinol  dan  turunan  asam  benzoat. Penguraian ini dapat dilakukan bila antosianin atau antosianidin  dipanaskan  dengan  larutan  barium hidroksida atau Natrium Hidroksida.
Antosianin  atau  antosianidin  yang  tidak mengandung  gugus-gugus  hidroksil  bebas  dan terikat  bersebelahan,  bereaksi  dengan  hidrogen peroksida  menghasilkan  turunan  asam  benzoat. Reaksi  penguraian  oleh  hidrogen  peroksida  ini terjadi karena pemutusan ikatan antara C-2 dan atom C-3 dari cincin piroksonium.
Gambar  1.  Grafik  Kromatogram  LC-MS/MS Ekstrak Bunga Telang Negatif
Gambar  2.  Grafik  Kromatogram  LC-MS/MS Ekstrak Bunga Telang Positif
LC-MS/MS  merupakan  salah  satu  teknik analisis dengan resolusi tinggi dan dapat digunakan dalam analisis kuantitatif maupun analisis stuktural sehingga dapat memberikan pendekatan yang sangat berguna  dalam  menentukan  profil  suatu  metabolit. MZ  mine  mencakup  semua  tahapan  pada  tahap pemrosesan  data  awal  kromatogram  LC-MS/MS dan utamanya digunakan dalam tujuan metabolomik seperti  pengidentifikasian  suatu  senyawa  dalam suatu  sampel  (Katajama  dan  Oresic  ,2005).  MZ mine  mengolah  kromatogram  LC-MS/MS  menjadi bentuk  mass array. Mass array adalah matriks data tiga  dimensi  yang  mengandung  informasi  massa akurat  dari  puncak  terdeteksi,  waktu  retensi,  dan intensitas puncak (Tanaka et al. 2011).
Pendugaan  identifikasi  metabolit  dilakukan dengan membandingkan nilai massa akurat puncak terdeteksi hasil mass array dengan nilai massa akurat senyawa  pigmen  yang  terdapat  pada  Kyoto Encyclopedia  of  Genes  and  Genomes  (KEGG) (www.kegg.jp). Analisis LC-MS/MS dengan teknik ionisasi  umumnya  menghasilkan  ion  molekuler ([M+H]+  atau  [M+H]-)  bergantung  pada  beberapa faktor seperti sifat  kimia analat, polaritas tegangan ESI,  sifat  matriks,  dan  komposisi  pelarut  sehingga tidak  mudah  untuk  memprediksi  muatan  ion  yang dihasilkan dalam perlakuan (Halket, 2005)
Hasil  identifikasi  LC-MS/MS  secara  semi kuantitatif ekstrak metanol bunga telang menunjukkan adanya senyawa-senyawa aktif berupa pigmen dan non pigmen. Cairan pelarut yang digunakan  yaitu  metanol.  Digunakan  metanol karena efektif dalam proses ekstraksi dibandingkan dengan  yang  lain.  Sebenarnya  metanol  ini  bersifat toksik  tapi  karena  tanaman  tersebut  dalam  hal  ini bunga telang tidak diketahui kandungan senyawanya  maka  digunakan  metanol  karena bersifat  semi  polar  karena  zat  aktif  yang  akan diambil  komponen  kimianya  belum  diketahui  sifat kepolarannya apakah polar ataukah non polar maka dengan itu digunakan metanol.
Efektif  dalam  hal  ini  bahwa  ekstrak  metanol mampu  menarik  komponen  kimia  pada  zat  aktif melalui  prinsip  ekstraksi  yaitu  difusi-osmosis  atau osmosis-difusi.  Dimana  cairan  penyari  masukkan dalam  zat  aktif  pada  suatu  wadah  yang  diberikan tekanan  dalam  hal  ini  pengadukan  maka  cairan penyari kan berosmosis masuk kedalam sel pada zat aktif sehingga terjadi perbedaan konsentrasi didalam sel dan diluar sel, sehingga konsentrasi didalam sel lebih tinggi sehingga komponen kimianya terdesak keluar maka cairan penyari yang bersatu dengan zat
aktif akan keluar sehingga disini terjadi proses difusi (Syahrul, 2014).
Suatu tanaman dalam mempertahankan kelangsungan hidupnya selalu melakukan metabolisme primer.  Hasil metabolisme  primer ini berupa metabolit primer seperti karbohidrat, protein, lemak,  vitamin  dan  mineral.  Disamping  adanya metabolisme  primer,  tanaman  juga  melakukan metabolisme sekunder yang mana metabolit primer sebagai  prekursornya.  Metabolisme  sekunder dilakukan tanaman dalam mempertahankan hidupnya dari serangan biotik dan abiotik disekitar tumbuhnya.  Hasil  metabolisme  sekunder  berupa metabolit  sekunder    seperti  senyawa  –  senyawa fenol,    penil  propanoid,    saponin,  terpenoid, alkaloid, tanin, steroid dan flavonoid.
Flavonoid adalah senyawa yang terdiri dari 15 atom  karbon  yang  umumnya  tersebar  di  dunia tumbuhan. Lebih  dari  2000 flavonoid yang berasal dari  tumbuhan  telah  diidentifikasi,  tetapi  ada  tiga kelompok  yang  umum  dipelajari,  yaitu  antosianin, flavonol,  dan  flavon.  Antosianin  (dari  bahasa Yunani anthos, bunga dan kyanos, biru-tua) adalah pigmen berwarna yang umumnya terdapat di bunga berwarna  merah,  ungu,  dan  biru  .  Pigmen  ini  juga terdapat di berbagai bagian tumbuhan lain misalnya, buah  tertentu,  batang,  daun  dan  bahkan  akar. Flavonoid sering terdapat di sel epidermis. Sebagian besar flavonoid tersimpan di vakuola sel tumbuhan walaupun  tempat  sintesisnya  ada  di  luar  vakuola.( Hahlbrock,1981).
Flavon  merupakan  molekul  dengan  berat rendah fitokimia polifenol, berasal dari metabolisme sekunder  tanaman.  Flavona  dapat  diklasifikasikan ke dalam berbagai kelas, yaitu: Flavonol (Quercetin, Kaempferol, Myricetin, Fisetin), Flavones
(Luteolin, Apigenin), Flavanon (Hesperetin, Naringenin),  Glikosida  flavonoid  (Astragalin, Rutin), Flavonoligans (Sibilinin), Flavans
(Catechin,  Epicatechin),  Isoflavon  (Genistein, Daidzein),  Anthocyanidins  (Cyanidin,  Delphidin),
Aurones (Leptosidin, Aureusidin),
Leucoanthocyanidis  (Terasacidin),  Neoflavonoids (Coutareagenin,  Dalbergin).  Semua  kelas  flavon merupakan  pemeran  dalam  berbagai  kegiatan biologis (Singh, 2014 ).
Quercetin  adalah  pigmen  dari  tumbuhan (flavonoid). Flavonoid adalah bahan kimia tertentu yang  terdapat  pada  tanaman,  yang  disebut fitonutrien,  dan  memiliki  berbagai  manfaat  untuk kesehatan.  Quersetin  adalah  senyawa  kelompok flavonol terbesar, kuersetin dan glikosidanya berada dalam  jumlah  sekitar  60-75%  dari  flavonoid. Kuersetin  dipercaya  dapat  melindungi  tubuh  dari beberapa  jenis  penyakit  degenerative  dengan  cara mencegah  terjadinya  proses  peroksidasi  lemak. Kuersetin  memperlihatkan  kemampuan  mencegah proses  oksidasi  dari  Low  Density  Lipoproteins (LDL) dengan cara menangkap radikal bebas.
Quercetin  paling  sering  dikonsumsi  untuk mengobati kondisi jantung dan pembuluh darah dan mencegah kanker. Suplemen tersebut juga biasanya digunakan  untuk  mengatasi  radang  sendi,  infeksi kandung kemih, dan diabetes. (Resi, 2009).
Kempferol  suatu  flavonoid  golongan  flavon, yang  telah  banyak  diteliti  memiliki  potensi antioksidan  dan  proteksi  selular.  Senyawa  ini  juga telah  banyak  diteliti  memiliki  efek  antiproliferatif pada  berbagai  type  sel  kanker  antara  lain;  kanker paru,  leukemia,  esophangial,  prostat,  mulut,  dan kanker  kolon.  Kaempferol  terbukti  mempunyai aktivitas  antibakteri  namun  belum  diketahui  pasti bagaimana  mekanismenya.  Struktur  kaempferol hampir  mirip  dengan  quercetin  sehingga  dapat diasumsikan bahwa mekanisme hambatnya terhadap pertumbuhan  bakteri  sama  dengan  quercetin  yaitu menghambat sintesis DNA (Lim et al., 2007).
Secara  kimia  antosianin  merupakan  turunan struktur  aromatik  tunggal,  yaitu  sianidin,  dan semuanya  terbentuk  dari  pigmen  sianidin  dengan penambahan  atau  pengurangan  gugus  hidroksil, metilasi dan glikosilasi (Harborne 2005). Antosianin adalah  senyawa  yang  bersifat  amfoter,  yaitu memiliki  kemampuan  untuk  bereaksi  baik  dengan asam  maupun  dengan  basa.  Dalam  media  asam antosianin  berwarna  merah,  dan  pada  media  basa berubah menjadi ungu dan biru (Man 1997).
Menthoside.  termasuk  family  Labiatae  yang memiliki kandungan bahan aktif, aroma yang khas. Menthoside  dalam  penelitian  menyatakan  bahwa Mentha  spp  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang cukup  tinggi  sehingga  dapat  dimanfaatkan  sebagai sumber  antioksidan  untuk  penghambatan  radikal bebas.
Luteolin  adalah  flavon,  sejenis  flavonoid, dengan  penampilan  kristal  berwarna  kuning. Luteolin  adalah  senyawa  pewarna  kuning  utama yang  diperoleh  dari  tanaman  Reseda  luteola,  yang telah  digunakan  sebagai  sumber  pewarna  dan  juga sebagai antiinflamasi (Murray R, 2009)
Antosianidin  termasuk  jenis  flavonoid  yang utama yang banyak ditemukan di alam dalam bentuk 3 atau 3,5 - glikosida disebut antosianin. Antosianin adalah  senyawa-  senyawa  yang  berperan  dalam memberikan  warna  merah,  ungu,  dan  biru  pada kelopak  bunga  dan  buah.  Sianin  adalah  bentuk antosianin dan antosianidin terurai. (Parwata, 2016) Gambar 16. Kromatogram Senyawa Isohyperoside Isohyperoside  adalah  flavonoid,  sejenis  senyawa kimia.  Ini  adalah  kuersetin  3-O-glukosida  . Isoquercetin  dapat  diisolasi  dari  berbagai  jenis tumbuhan  termasuk  Mangifera  indica  (mangga) Isoquercetin  juga  merupakan  antioksidan  yang sangat  baik  dan  juga  berfungsi  untuk  menurunkan tekanan darah . (Arifin, 2018)
Isoharmnetin termasuk jenis flavonol. Isoharmnetin  dapat  melindungi  sel  CaCo-2  yang terdapat  pada  saluran  pencernaan  dari  oksidasi rantai ganda DNA dan bersifat antioksidan. Aglikon
flavonol  utama  yang  diproduksi  oleh  tanaman adalah  quarcetin,  myricetin,  kaempferol  dan isorhamnetin.  Sementara  sejumlah  lebih  terbatas buah-buahan dan sayur-sayuran mengandung flavon struktural  terkait  apigenin  dan  luteolin.  Dalam jaringan  tanaman,  flavonol  dan  flavon  ditemukan konjugasi  gula,  terutama  glukosa,  rhamnosa  dan rutinose (Hollman, 1998).
Nevadensin merupakan beberapa jenis flavonoid.  Flavonoid  memiliki  efek  menghambat ACE  (Angiotensin  Converting  Enzyme  Inhibitor) sehingga  angiotensin  I  tidak  diubah  menjadi angiotensin  II.  Hal  ini  membuat  pembuluh  darah tidak  mengalami  vasokonstriksi  namun  justru vasodilatasi,  tahanan  perifer  total  menurun.  Juga menimbulkan berkurangnya sekresi hormon aldosteron dan ADH (Anti Diuretic Hormone) yang menyebabkan  peningkatan  ekskresi  air  dan  garam. Keadaan-keadaan tersebut akan menurunkan tekanan darah. Guyton & Hall, 2017)
Schaftoside  berfungsi  sebagai  penghambat makan  atau  bersifat  toksik  langsung  terhadap serangga. Senyawa ini menjadi  faktor penting bagi ketahanan suatu varietas (Iswanto, 2016)
Methoxydaidzein  adalah  senyawa  alami  yang ditemukan  secara  eksklusif  dalam  kacang  kedelai dan kacang-kacangan lainnya dan secara struktural termasuk dalam kelas senyawa yang dikenal sebagai isoflavon  .  Daidzein  dan  isoflavon  lainnya diproduksi  di tanaman melalui jalur fenilpropanoid dari  metabolisme  sekunder  dan  digunakan  sebagai pembawa  sinyal,  dan  respons  pertahanan  terhadap serangan patogen. Pada manusia, penelitian terbaru menunjukkan  kemampuan  menggunakan  daidzein dalam  pengobatan  untuk  meredakan  menopause, osteoporosis,  kolesterol  darah,  dan  menurunkan risiko beberapa kanker terkait hormon, dan penyakit jantung. (Jung, 1999)
Apigenin  adalah  komponen  flavonoid  pada seledri  yang  utama,  dan  ianya  adalah  termasuk  ke dalam  golongan  flavon.  Ketika  dalam  tubuh,  apiin iaitu  glikosida  flavonoid,  asam  lambung  dapat menghidrolisis  senyawa  ini  menjadi  gula  dan aglikon  apigenin.  Dari  proses  hidrolisis  apiin, apigenin telah terbentuk, dan proses ini dibantu oleh asam lambung (HCl) (Soedibyo, 1998).
Robinetin antioksidan adalah komponen flavonoid memiliki potensi antioksidan dan proteksi selular.  Kaempferol  terbukti  mempunyai  aktivitas antibakteri namun belum diketahui pasti bagaimana mekanismenya.  Struktur  kaempferol  hampir  mirip dengan  quercetin  sehingga  dapat  diasumsikan bahwa mekanisme hambatnya terhadap pertumbuhan  bakteri  sama  dengan  quercetin  yaitu menghambat sintesis DNA
Adenosin  merupakan  nukleosida  purin  yang terbentuk dari pemecahan adenosin trifosfat (ATP). ATP merupakan sumber energi utama dari sel untuk sistem  transpor  dan  banyak  enzim.  Kebanyakan ATP  diubah  menjadi  ADP,  yang  akan  dihidrolisis
lebih jauh menjadi AMP. Banyak ADP dan AMP di refosforilasi dalam mitokondria dengan menggunakan enzim dengan bantuan oksigen. Jika banyak  ATP  yang  dihidrolisis  dan  tidak  terlalu banyak oksigen, maka beberapa AMP akan diubah menjadi adenosin menggunakan enzim.
Trigonelline merupakan hormon tanaman yang memiliki sifat antara lain anti kanker, anti migrain, antiseptik,  hipokolesteromik,  hipoglikemik  dan antipiretik (Martin et al, 1997).
Cairan  pelarut  yang  digunakan  yaitu  metanol. Digunakan  metanol  karena  efektif  dalam  proses ekstraksi dibandingkan dengan yang lain.
Sebenarnya  metanol  ini  bersifat  toksik  tapi  karena tanaman  tersebut  dalam  hal  ini  bunga  telang  tidak diketahui  kandungan  senyawanya  maka  digunakan metanol  karena bersifat semi polar karena zat  aktif yang  akan  diambil  komponen  kimianya  belum diketahui  sifat  kepolarannya  apakah  polar  ataukah non polar maka dengan itu digunakan metanol.
Efektif  dalam  hal  ini  bahwa  ekstrak  metanol mampu  menarik  komponen  kimia  pada  zat  aktif melalui  prinsip  ekstraksi  yaitu  difusi-osmosis  atau osmosis-difusi.  Dimana  cairan  penyari  masukkan dalam  zat  aktif  pada  suatu  wadah  yang  diberikan tekanan  dalam  hal  ini  pengadukan  maka  cairan penyari kan berosmosis masuk kedalam sel pada zat aktif sehingga terjadi perbedaan konsentrasi didalam sel dan diluar sel, sehingga konsentrasi didalam sel lebih tinggi sehingga komponen kimianya terdesak keluar maka cairan penyari yang bersatu dengan zat aktif  akan  keluar  sehingga  disini  terjadi  proses difusi.
Dasar-dasar dan syarat-syarat pemilihan cairan penyari  yaitu  ada  beberapa  factor  yang  harus diperhatikan yaitu jenis senyawa yang akan ditarik atau  kandungan  kimia  pada  zat  aktif  dan  cairan penyari  yang  digunakan  (pelarut  yang  digunakan) dalam  hal  ini  tingkat  kepolarannya.  Tidak  toksik, murah,  mudah  terbakar,  ramah  lingkungan  mudah didapat.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan, maka diperoleh kesimpulan sebagai berikut.
1. Hasil  penelitian  pendahuluan  pada  ekstrak kering bunga telang pada pH 4 menggunakan metanol  dengan  hasil  analisis  aktivitas antioksidan yaitu 392.91 ppm. Ekstrak kering bunga  telang  pada  pH  5    dengan  aktivitas antioksidan  yaitu  371.00  ppm  ppm.  Ekstrak kering  bunga  telang  pada  pH  6  dan  aktivitas antioksidan dengan 344.37 ppm.
2. Hasil  penelitian  utama  ekstrak  bunga  telang pada  pH  6  yang  diuji  dengan  instrumen  LC- MS/MS  mengandung  senyawa  aktif  yaitu  12 antosianin diantaranya yaitu cyanidin, Isoquercetin,  Cyanin  dan  kaempferol  18 flavonol yaitu quercetin, Schaftoside, Trigonelline, Robinetin, Isohyperoside dan 11 flavon yaitu menthoside
luteloin,
Grosvenorine, Limocitrin dan viscumnoside

## Daftar Pustaka
1. Agilent  Technologies,  (2001),  Agilent  LC- MS Primer. U.S.A
2. Ana,  Z.,  Berta,  K.  L.,  Budiyati,  S.  (2012), Ektraksi dan Analisis Zat  Warna Biru Bunga Telang  (Clitoria  Ternatea)  Sebagai  Pewarna
Alami, Universitas Diponegoro: Semarang.
3. Arifin
B. 2018, STRUKTUR, BIOAKTIVITAS  DAN  ANTIOKSIDAN FLAVONOID,  Fakultas  Matematika  Dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Andalas. Padang.
4. Anastasia,  F,  V,  S.(2012).  Validasi  Metode dan Penetapan Kadar Kuersetin Total dalam Daun  Teh  Segar  (Camellia  sinensisO.K.), Teh  Hijau,  dan  Teh  Hitam  dengan  Metode Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  (KCKT) Fase  Terbalik.  Skripsi  Fakultas  Farmasi. Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
5. AOAC.  (1995).    Official  Methods  of Analysis of the Analytical Chemists. Edition
Association of Official Analytical Chemists:Washington DC.
6. Barhe,  T.A.  and  Tchouya,  G.R.,  2014, Comparative  Study  of  the  Anti-oxidant Activity  of  the  Total  Polyphenols  Extracted from  Hibiscus  Sabdariffa  L.  Glycinemax  L. Merr.,  Yellow  Tea  and  Red  Wine  through Reaction  with  DPPH  Free  Radical,  Arabian Journal of Chemistry.
7. Bowers LD. (1989) High-performance liquid chromatography/mass  spectrometry:  state  of the art for the drug analysis laboratory. Clin Chem.
8. Covey  TR,  Lee  ED,  Henion  JD.  (1986). High-speed  liquid  chromatography  tandem mass  spectrometry  for  the  determination  of drugs in biological samples. Anal Chem
9. Dalimartha, S. (2009). Atlas Tumbuhan Obat Jilid 6. Jakarta: PT Pustaka Bunda.
10. Ginting,  Karisma.  (2012).  Validasi  Metode LC-MS/MS untuk Penentuan Senyawa Asam trans, trans-Mukonat, Asam Hippurat, Asam 2-metil  Hippurat,  Asam  3-metil  Hippurat, Asam  4-metil  Hippurat  dalam  Urin  sebagai Biomarker  Paparan  Benzena,  Toluena,  dan Xilena. Universitas Indonesia, Bogor.
11. Guyton  A.  C.,  Hall  J.  E.  1997.  Buku  Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 9. Jakarta
12. Hollman  PC,  Katan  MB  (1998).  "Health effects and bioavailability of dietary flavonols.".
13. Harborne,  J.B.  1996.  Metode  Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Terbitan Kedua. ITB. Bandung.
14. Hahlbrock  K.  1981.  Flavonoids.  dalam  The Biochemistry  of  Plants,  Vol.  7:  Secondary Plant Products. New York: Academic Press.
15. Halket JM, Waterman D, Przyborowska AM, Patel RK. 2005. Chemical derivatization and mass spectral libraries in metabolic profilling by  GC/MS  and  LC/MS.  Journal  of Experimental
16. Iswanto, H. (2016). Peran Senyawa Metabolit Sekunder  Tanaman  Padi.  Balai  Besar Penelitian  Tanaman  Padi,  Subang,  Jawa Barat, Indonesia.
17. Jung W, Yu O, Lau SMC, O'Keefe DP, Odell J, Fader G, McGonigle B. 1999. Identification  and  expression  of  isoflavone synthase, the key enzyme for biosynthesis of isoflavones in legumes. Bioteknologi Alam
18. Khopkar, S.M. (2008). Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : UI Press
19. Lee,  M.  P.,  Abdullah,  R.,  dan  Hung,  K.  L. 2011.Thermal Degradation of Blue Anthocyanin  Extract  of  Clitoria  ternatea Flower.International Conference on
Biotechnology and Food Science.
20. Liochev, S.I.,2013, Reactive Oxygen Species and the Free Radical  Theory of Aging, Free Radical Biology and Medicine.
21. Man,  J.  M.  de.  1997.  Kimia  Makanan.  ITB. Bandung
22. Martin,  M.J.,  pables,  F.,  Belle,  M.A., Gonzales,  A.G.,  1997,  Determination  of trigonelline in green and roasted coffee from single column ionic chromatography,
Fresenius J Anal Chem
23. Mailandari,  M.  (2012).  Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Daun  Garcinia  kyda Roxb. Dengan Metode DPPH dan Identifikasi  Senyawa  Kimia  Fraksi  yang Aktif. Journal. Depok: Universitas
Indonesia.
24. Michael Vogeser, Christoph Seger. (2018). A decade  of  HPLC-MS/MS  in  the  routine clinical laboratory-goals for futher development. Clinical Biochemistry
25. Mardiah, Arifah R, Reki  W.A, dan Sawami. 2009.  Budidaya  dan  Pengolahan  Rosela  si merah segudang manfaat.
Jakarta:
Agromedia pustaka.
26. Murray  R.  K.,  Granner  Daryl  K.,  Rodwell Victor W., 2009. Biokimia Harper,     (Andri Hartono).Edisi 27.Penerbit
Buku
Kedokteran, EGC. Jakarta.
27. Najafian  L,  Babji  AS.  2014.  Production  of bioactive peptides using enzymatic hydrolysis  and  identification  antioxidative peptides  from  patin  (Pangasius  sutchi) sarcoplasmic protein hydrolysate. Journal  of Functional Food.
28. Ou,  B.,  Huang,  D.J.,  Woodill,  M.H., Flanagan,  J.A.,  and  Deemer,  E.K.,  2002, Analysis  of  Antioxidant  Activities  of
Common  Vegetables  Employing  Oxygen Radical  Absorbance  Capacity  (ORAC)  and Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP). Assays: A Comparative Study, J. Agric. Food Chem
29. Parwata, I. 2016, Flavonoid. Journal FMIPA. Denpasar: Universitaas Udayana.
30. Pratama, Yosi. (2013). Pemanfaatan Ekstrak Daun Jati (Tectona grandis Linn. F.) sebagai Indikator Titrasi Asam-Basa. Skripsi Fakultas  MIPA  Jurusan  Kimia  Universitas Negeri Semarang. Semarang. 31. Resi A. 2009, MAKALAH KIMIA ORGANIK  BAHAN  ALAM  FLAVONOID (Quercetin). Tesis Fakultas MIPA universitas Hasanudin. Semarang
32. Rohdiana,  D.  (2001).  Aktivitas  Daya Tangkap Radikal Polifenol dalam Daun Teh.
Majalah Jurnal Indonesia.
33. Soedibyo,M., Dalimartha., S. 1998.
Perawatan Rambut dengan  Tumbuhan Obat dan Diet Suplemen.  Jakarta
34. Suarna  IW.  2005.  Kembang  telang  (Clitoria ternatea)  tanaman  pakan  dan  penutup  tanah. Lokakarya Nasional Tanaman Pakan Ternak. Bogor (Indonesia): Puslitbang Peternakan.
35. Siagian A. 2002. Bahan Tambahan Makanan. Fakultas  Kesehatan  Masyarakat,  Universitas Sumatera Utara.
36. Singh,  M.;  Kaur,  M.;  Silakari,  O.  Flavones: An  Important  Scaffold  for  Medicinal Chemistry. Eur. J. Med. Chem. 2014
37. Sunardi, K.I., 2007, Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Belimbing  Wuluh (Averrhoa blimbi, L.) terhadap 1,1-Diphenyl- 2-Picrylhidrazyl  (DPPH),  Seminar  Nasional Teknologi Pangan. Jakarta.
38. Supratman,  U.,  2010,  Elusidasi  Struktur
Senyawa Organik. Widya Padjajaran: Bandung
39. Sutedi,  Endang.  (2013).  Potensi  Kembang Telang  (Clitoria  ternatea)  Sebagai  Tanaman Pakan  Ternak.  Skripsi  Fakultas  Peternakan. Bogor.
40. Stevenson, P.C., F.M. Kimmins, R.J. Grayer, and  S.  Raveendranath.  1996.  Schaftosides from  rice  phloem  as  feeding  inhibitors  and resistance  factors  to  brown  planthopper, Nilaparvata lugens.
41. Tanaka K, Li F, Morikawa K, Nobukawa T, Kadota  S.  2011.  Analysis  of  biosynthetic fluctuations of cultured Taxus seedling using a  metabolomic  approach.  Phytochemistry. 72:1760-1766.
42. Reyhan,  Muhammad.(2017).  Karakterisasi dan  Identifikasi  Senyawa  Aktif  Ekstrak Pigmen  Telur  Keong  Mas  (Pomacea canaliculata).  Skripsi  Fakultas  Teknologi Pangan. Institut Pertanian Bogor: Bogor.
43. Rohman,  A.  Gandjar,  I.G.  2007.  Kimia
Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar
:Yogyakarta.
44. Winarsih,  Sri.(2018),  Identifikasi  Senyawa Aktif Crude Ekstrak Bunga Lawang (Illicium verum)  dan  Uji  Antimikrobia  Pembusuk Dari  Daging  Ayam  Broiler.  Universitas Muhammadiyah Malang, Malang.
45. Wirani,  R.  (2017).  Kajian  Perbandingan Daun  dengan  Ampas  Buah  Black  Mulberry
(Morus Nigra. L) Terhadap Karakteristik Teh
Celup. Tugas Akhir. Program Studi Teknologi Pangan, Fakultas Teknik Universitas Pasundan. Bandung.
46. Yeni  M.  (2013),  Penyiapan  Material  Acuan Untuk  PenentuanTrigonelline  Dalam  Biji Kopi  Hijau  Menggunakan  HPTLC.  Jurusan Kimia FMIPA, Universitas Jember.
47. Zheng W. and Wang S.Y., 2009. Antioxidant Activity  and  Phenolic  Compounds  in Selected  Herbs.  J.Agric.Food  Chem,  ACS
Publications: Washington D.C.