http://jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindo/index

## Uji Aktivitas Antiinflamasi Teh Cang Salak Secara In Vitro Dengan Metode Stabilisasi Membran Human Red Blood Cell
Burhannuddin Burhannuddin * , I Wayan Karta Program Studi Teknologi Laboratorium Medis, Poltekkes Kemenkes Denpasar, Indonesia
Article info Abstrak History
Submission : 25-10-2022 Review : 31-05-2023 Accepted : 23-09-2023
* Email: boerhannuddin@gmail.com
DOI: 10.33096/jffi.v10i2.903
Kata Kunci: cang salak tea, anti-inflation test, stabilization of red blood cell membrane Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi teh cang salak secara invitro. Teh cang salak dibuat dalam empat formulasi yaitu P1, P2, P3, dan P4. Keempat formulasi  diuji antiinflamasi dengan metode stabilisasi  membrane  sel  darah  merah.  Nilai  stabilisasi  masing-masing formulasi  selanjutnya  dianalisis  secara  statistika  dengan  uji One-Way Anova dan  LSD.  Formulasi  teh  cang  salak  mengandung  senyawa fitokimia seperti polifenol (379,094 – 430,299 mg/100g GAE), flavonoid (5,299 –  7,959 mg/100g QE), alkaloid (24,312  – 28,472 mg/100g) dan memiliki aktivitas antioksidan dengan nillai 3,996 – 6,222 ppm. Senyawa aktif  polifenol  dengan  kadar  paling  tinggi  terdapat  pada  formulasi  P2, flavonoid  pada  P2,  dan  alkaloid  pada   P3.  Aktivitas  antioksidan  paling tinggi terdapat pada formulasi P1 yang memiliki nilai PPM paling rendah pada uji IC 50 . Persentase stabilisasi pada berbagai formulasi teh cang salak memiliki perbedaan bermakna dengan nilai tertinggi  pada formulasi  P1 (112,6 %), diikuti dengan formulasi P2 (102 %), P3 (100,2 %), dan P4
(99,7 %) (P≤0.05). Berdasarkan hasil uji LSD teh cang salak formulasi P1,  P2,  dan  P3  berbeda  signifikan  dengan  kontrol  positif  (P≤0.05). Sedangkan formulasi P4 tidak berbeda secara signifikan dengan kontrol positif  (P≥0.05).  Teh  cang  salak  formulasi  P1,  P2,  P3,  dan  P4  mampu menstabilkan  membran  sel  darah  merah  yang  menunjukkan  adanya aktivitas antiinflamasi yang kuat

## Abstract
Keywords: cang salak tea, anti-inflation test, stabilization of red blood cell membrane This study aims to determine the anti-inflammatory activity of cang salak tea (CST) in vitro. CST was made in four formulations namely P1, P2, P3, and  P4.  The  four  formulations  were  tested  for  anti-inflammation  by stabilizing the red blood cell membrane method. The stabilization value of  each formulation  was  then  statistically  analyzed  using  the  One-Way Anova  and  LSD  tests.  CST  formulation  contains  phytochemical compounds  such  as  fophenols  (379.094  –  430.299  mg/100g  GAE), flavonoids  (5.299  –  7.959  mg/100g  QE),  alkaloids  (24.312  –  28.472 mg/100g) and has antioxidant activity with a value of 3,996 - 6,222 ppm. Polyphenolic  active  compounds  with  the  highest  levels  were  found  in formulation  P2,  flavonoids  in  P2,  and  alkaloids  in  P3.  The  highest antioxidant activity was found in the P1 formulation which had the lowest PPM  value  in  the  IC 50 test.  The  percentage  of  stabilization  in  various formulations of cang salak tea had significant differences with the highest score in formulation P1 (112.6%), followed by formulation P2 (102%), P3 (100.2%), and P4 (99.7%) (P≤0.05). Based on the results of the LSD test  of  cang  salak  tea,  formulations  P1,  P2,  and  P3  were  significantly different from the positive control (P≤0.05). While the P4 formulation was not significantly different from the positive control (P≥0.05). Cang salak tea formulations P1, P2, P3, and P4 are able to stabilize the red blood cell membrane which shows strong anti-inflammatory activity.

## I. Pendahuluan
Inflamasi  adalah  suatu  respon  protektif normal  yang  ditimbulkan  oleh  kerusakan  pada jaringan  (Ramadhani  &  Sumiwi,  2015).  Inflamasi dapat  disebabkan  oleh  trauma  fisik,  zat  kimia perusak,  atau  zat-zat  mikrobiologik.  Inflamasi bertujuan  untuk  menginaktivasi  atau  merusak organisme  yang  menyerang,  menghilangkan  zat iritan,  dan  mengatur  derajat  perbaikan  jaringan (Suryani et al ., 2018). Proses ini melalui serangkaian mekanisme  seperti  vasodilatasi,  peningkatan permeabilitas  vaskuler,  peningkatan  aliran  darah, dan  juga  pergerakan  leukosit  ke  tempat  inflamasi untuk  menetralisir  kerusakan  (Rahmawati et  al .,
2017). Berbagai contoh penyakit yang  berhubungan dengan  inflamasi  antara  lain  asma,  rhinitis  alergi, osteoarthritis,dan lain-lain (Suryani et al ., 2018). Inflamasi biasanya diobati dengan menggunakan  obat  antiinflamasi  golongan  steroid (AIS)  dan  obat  antiinflamasi  golongan  nonsteroid (AINS). Obat antiinflamasi golongan steroid bekerja dengan  cara  menghambat  pelepasan  prostagladin dari  sel-sel  sumbernya.  Pemakaian  obat-obat tersebut   mempunyai   efek samping  seperti  iritasi gastrointestinal,  kerusakan  ginjal,  diare,  sakit kepala, depresi, pankreatitis dan terapi ini terkadang agresif dan tidak efektif dalam beberapa kasus. Obat antiinflamasi golongan  nonsteroid  merupakan  obat analgetik lemah, antiflogistik, yang bekerja melalui mekanisme  lain  seperti  inhibisi  siklooksigenase (Dewi  et  al.,  2015).  Obat  antiinflamasi  nonsteroid (AINS)  terutama  digunakan  untuk  gejala  yang berhubungan  dengan  artritis.  Artritis  merupakan peradangan pada satu atau lebih persendian disertai dengan  rasa  sakit,  kebengkakan,  kekakuan,  dan keterbatasan  bergerak.  Indikasi  lain  meliputi sindroma nyeri miofasial, gout, demam, dismenore, migrain,  nyeri  perioperatif,  profilaksis  stroke  dan infark  miokard (Soleha et al., 2018). Obat  antiinflamasi  steroid  dan  nonsteroid memiliki    banyak    efek    samping    sehingga  perlu terus dilakukan  pengembangan  antiinflamasi  yang berasal  dari  bahan  alam,  terutama  pada  tanaman (Ramadhani and Sumiwi, 2015). Penggunaan bahan alam  atau  obat  tradisional  dapat  menjadi  alternatif sebagai  agen  antiinflamasi  dengan  efek  samping yang lebih rendah. Masyarakat juga dapat memilih terapi  alami  untuk  mengontrol  penyakit  terkait inflamasi  misalnya dengan mengonsumsi  makanan fungsional  tertentu.  Sifat  fungsional  dari  makanan tersebut  ditentukan  oleh  komponen  bioaktif  yang terkandung  di  dalamnya,  seperti  serat  pangan, antioksidan, prebiotik, dan golongan fitokimia. Salah  satu  makanan  fungsional  alami  yang berpotensi  digunakan  sebagai  agen  antiinflamasi adalah  teh  cang  salak.  Teh  cang  salak  merupakan minuman  herbal  hasil  inovasi  teh  yang  dibuat  dari limbah  kulit  salak  dan  kayu  secang  (Caesalpinia sappan L.). Hasil analisis fitokimia menunjukkan teh cang  salak  memiliki  kandungan  aktif  seperti
flavonoid,  tannin,  alkaloid,  dan  terpenoid  yang memiliki aktivitas antiinflamasi (Karta et al., 2019). Flavonoid  ditemukan  melimpah  di  berbagai  buah, sayuran,  minuman  (teh,  kopi),  kacang-kacangan, dan  produk  sereal.  Flavonoid  melalui  mekanisme penghambatan  signal  nuclear  factor-kappa  B (NFκB) dapat memodulasi ekspresi gen proinflamasi sehingga  melemahkan respons inflamasi  (Choy  et  al.,  2019).  Flavonoid  juga memiliki  efek  biokimiawi,  yang  menghambat sejumlah enzim seperti  aldose reductase, xan-thine oxidase, phosphodiesterase, Ca+2-ATPase, lipoksigenase,  dan  cycloxygenase.  Flavonoid  juga mampu  meregulasi  berbagai  hormone  seperti estrogen,  androgen  dan  hormon  tiroid.  Aktivitas antiinflamasi  flavonoid  dapat  pada  fase  inflamasi proliferatif  dan  eksudatif  (Rathee  et  al.,  2009). Flavonoid, saponin dan tannin memiliki kemampuan menstabilkan membran sel darah merah sehingga  dapat  berperan  sebagai  metabolit antiinflamasi (Arifah et al., 2017).
Studi tentang potensi teh cang salak sebagai makanan  fungsional  yang  digunakan  sebagai  agen antiinflamasi belum banyak dilaporkan.
Berdasarkan kandungan fitokimia yang dimiliki, teh cang  salah  berpotensi  dikembangkan  menjadi  obat antiinflamasi  untuk  mengontrol  berbagai  penyakit terkait  inflamasi  di  masyarakat.  Aktivitas antiinflamasi  teh  cang  salak  perlu  diuji  untuk meningkatkan  nilai  guna  teh  cang  salak  sekaligus sebagai  upaya  menemukan    obat  antiinflamasi berbahan  alam  dengan  efek  samping  lebih  rendah dibandingkan  obat  antiinflamasi  sintetik  yang beredar  di  masyarakat.  Dalam  penelitian  ini, aktivitas  antiinflamasi  teh  cak  salak  akan  diuji secara  invitro  dengan  metode  Stabilisasi  Membran Human Red Blood Cell . Pada metode ini, sel darah merah  digunakan  sebagai  system  model  untuk melihat interaksi sampel dengan membran. Aktivitas antiinflamasi  dilihat  ketika  membran  sel  darah merah  diinduksi  dengan  larutan  hiposalin  dan diinduksi  dengan  panas  yang  akan  mengganggu kestabilan  biomembrannya.  Model  uji  ini  relatif lebih  mudah  diterapkan  di  laboratorium  untuk melihat  potensi  antiinflamasi  suatu  bahan  alam secara invitro.
II. Metode Penelitian

## II.1 Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  antara  lain  gelas standar,  tabung  reaksi,  mikropipet  200  μL, mikropipet  1000  μL,  neraca  analitik,  seperangkat alat  spektrofotometer  UV-Vis,  vial,  oven, sentrifugator,  tabung  sentrifus,  autoklaf,  spuit,  pH meter,  vortex,  dan  mikrotips,  Bahan-bahan  yang digunakan dalam penelitian ini antara lain teh cang salak,  suspensi  sel  darah  merah,  NaCl,  dinatrium hidrogen fosfat (Na 2 HPO 4 .2H 2 O), natrium dihidrogen fosfat (NaH 2 PO 4 .H 2 O), natrium diklofenak,  etanol  96%,  dekstrosa,  natrium  sitrat, asam sitrat, dan akuades.

## II.2 Pembuatan Formulasi Teh Cang Salak
Teh cang salak dibuat dengan mencelupkan 1 kemasan teh yang mengandung masing-masing 1 g serbuk kulit salak dan kayu secang ke dalam 200 ml air panas (100 o C) selama 10 menit. Teh cang salak dibuat menjadi empat formulasi yaitu P1 (teh cang salak  pemakaian  ke-1),  P2  (teh  cang  salak pemakaian ke-2), P3 (teh cang salak pemakaian ke- 3),  dan  P4  (teh  cang  salak  pemakaian  ke-4). Formulasi  P1  dibuat  dengan  mencelupkan  1 kemasan teh ke dalam 200 ml air panas. Formulasi P2  dibuat  dengan  mencelupkan  kemasan  teh  dari formulasi P1 ke dalam 200 ml air panas. Formulasi P3  dibuat  dengan  mencelupkan  kemasan  teh  dari formulasi P2 ke dalam 200 ml air panas. Formulasi P4  dibuat  dengan  mencelupkan  kemasan  teh  dari formulasi  P3  ke  dalam  200  ml  air  panas.  Masing- masing  formulasi  diulang  tiga  kali  dengan  tiap ulangan terdiri dari tiga replikasi.

## II. 3 Pembuatan Larutan Uji
Larutan  Alsever  dibuat  dengan  2  gram dekstrosa, 0,8 gram natrium sitrat, 0,05 gram asam sitrat dan 0,42 gram NaCl dilarutkan dalam aquades sampai 100 mL pada suhu ruang. Dapar Fosfat pH 7,4  (0,15  M)  dibuat  dengan  13,35  gram  dinatrium hidrogen  fosfat  (Na 2 HPO 4 .2H 2 O)  dilarutkan  dalam aquades  sampai  500  mL  (0,15  M).  4,14  gram natrium dihidrogen fosfat (NaH 2 PO4.H 2 O) dilarutkan dalam aquades sampai 200 mL (0,15 M). Kemudian  80,8  mL  larutan  Na 2 HPO 4 .2H 2 O  (0,15 M)  dicampurkan  dengan  19,2  mL  larutan NaH 2 PO4.H 2 O (0,15 M) pada suhu ruang. Isosalin dibuat  dengan  2,125  gram  NaCl  dilarutkan  dalam dapar fosfat pH 7,4 (0,15 M) sampai volume 250 mL pada  suhu  ruang.  Hiposalin  dibuat  dengan  0,625 gram  NaCl  dilarutkan  dalam  dapar  fosfat  pH  7,4 (0,15  M)  sampai  volume  250  mL.  Masing-masing larutan disterilisasi dengna autoklaf pada suhu 121 o C, selama 15 menit. Larutan control positif dibuat dengan  melarutkan  0,1  gr  Natrium  diklofenak  ke dalam 100 mL isosalin (0,1%).

## II.4 Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah
Darah sebanyak 10 mL lalu dimasukkan ke dalam  tabung  sentrifus  yang  telah  berisi  larutan alsever steril sebanyak 10 mL. Campuran darah dan larutan alsever steril tersebut kemudian disentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 menit pada suhu 27 o C. Supernatan yang terbentuk  dipisahkan menggunakan  pipet  steril.  Endapan  sel-sel  darah yang tersisa kemudian dicuci dengan larutan isosalin dan disentrifugasi kembali. Proses tersebut diulang 4  kali  sampai  isosalin  jernih.  Volume  sel  darah diukur  dan  diresuspensi  dengan  isosalin  sehingga didapatkan  suspensi  sel  darah  merah  dengan konsentrasi 10% v/v.

## II.5 Uji Antiinflamasi Formulasi Teh Cang Salak
Pengukuran  aktivitas  antiinflamasi  teh  cang salak terhadap stabilisasi membran sel darah merah menggunakan  empat  larutan  yaitu  larutan  uji  (te cang  salak),  larutan  natrium  diklofenak,  larutan kontrol uji, dan larutan kontrol negatif. Larutan uji (4,5 mL) terdiri dari 1 mL dapar fosfat pH 7,4 (0,15
M), 0,5 mL suspensi sel darah merah, 1 mL larutan teh cang salak (P1-P4) dan 2 mL hiposalin . Larutan kontrol positif terdiri dari 1 mL dapar fosfat pH 7,4 (0,15  M),  0,5  mL  suspensi  sel  darah  merah,  1  mL larutan Na diklofenak dan 2 mL hiposalin. Larutan kontrol uji terdiri dari 1 mL dapar fosfat pH 7,4 (0,15 M),  0,5  mL  larutan  isosalin  sebagai  pengganti suspensi sel darah merah, 1 mL larutan sampel dan 2 mL hiposalin. Larutan kontrol negatif terdiri dari 1 mL dapar fosfat pH 7,4 (0,15 M), 0,5 mL suspensi sel  darah  merah,  1  mL  larutan  isosalin  sebagai pengganti larutan sampel dan 2 mL hiposalin. Setiap larutan di atas kemudian diinkubasi pada 37 o C  selama  30  menit  dan  disentrifugasi  pada  5000 rpm  selama  10  menit.  Cairan  supernatan  yang didapat  diambil  dan  kandungan  hemoglobinnya diperhitungkan dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 560 nm. Stabilitas membran sel darah merah dapat dihitung dengan rumus pada formula 1.
% stabilitas membran:
= 100 – { abs sampel uji-abs larutan kontrol larutan uji x 100 %} (1) abs larutan kontrol negatif
III. Hasil dan Pembahasan Pada  penelitian  ini,  teh  cang  salak  dibuat dalam  berbagai  formulasi  kemudian  dilakukan  uji fitokimia,  uji  aktivitas  antioksidan,  dan  uji antiinflamasi.  Teh  cang  salak  pada  berbagai formulasi  mengandung  polifenol,  flavonoid,  dan alkaloid dengan kadar yang bervariasi (Tabel 1).
Tabel 1. Hasil uji fitokimia dan aktivitas antioksidan formulasi teh cang salak
Formulasi Polifenol (mg/100g GAE) Flavonoid (mg/100g QE) Alkaloid (mg/100 g) IC 50 PPM P1 399.640 7.477 24.312 3.966 P2 430.290 7.959 24.668 5.225 P3 379.094 5.365 28.472 5.037 P4 420.821 5.229 25.129 6.222
Kadar polifenol pada berbagai formulasi teh cang  salak  berkisar  antara  379.094  -  430.299 mg/100g  GAE.  Kadar  flavonoid  berkisar  antara 5.299  –  7.959  mg/100g  QE.  Sedangkan  kadar alkaloid  berkisar antara 24.312  – 28.472 mg/100g. Kadar polifenol dan flavonoid paling tinggi terdapat pada formulasi teh cang salak P2 dan kadar alkaloid tertinggi  pada  formulasi  teh  cang  salak  P3. Kandungan  polifenol,  flavonoid,  dan  alkaloid  teh cang  salak  pada  berbagai  formulasi  menunjukkan potensinya sebagai minuman herbal yang baik untuk kesehatan.  Bahan-bahan  aktif  tersebut  di  dalam tubuh  dapat  berperan  sebagai  antioksidan  dan antiinflamasi.
Polifenol  merupakan  bahan  aktif  yang berperan  utama  pada  mekanisme  antiinflamasi dengan  menggunakan  berbagai  komponen  yang terlibat dalam respon inflamasi sebagai target kerja. Polifenol  meregulasi  system  imun  dengan  cara menghambat  sintesis  dan  ekspresi  gen  sitokin proinflamasi.  Senyawa  aktif  ini  memberikan  efek yang baik  untuk  kesehatan pada berbagai  penyakit inflamasi  kronis.  Polifenol  pada  berbagai  ekstrak tanaman  bermanfaat  dalam  pencegahan  dan perkembangan  penyakit  kronis  terkait    inflamasi seperti  seperti  diabetes,  obesitas,  neurodegenerasi, kanker,  dan  penyakit  kardiovaskular  (Yahfoufi  et al.,  2018).  Polifenol  memodulasi  jalur  pensinyalan inflamasi  melalui mekanisme berbasis antioksidan. Polifenol  dapat  mengurangi  stres  oksidatif  yang akan menghambat transduksi sinyal untuk produksi mediator  pro-inflamasi  (Singh et  al .,  2020). Polifenol  memiliki efek penting dalam melindungi tubuh  terhadap faktor eksternal  dan membersihkan reaktif oksigen spesies (ROS) yang terjadi sebagai akibat dari beberapa penyakit. Polifenol melindungi tubuh dari penyakit dan menghentikan perkembangannya  dengan  mekanisme  tertentu (Güneş Bayir, Aksoy and KoçyiğiT, 2019)
Bahan  aktif  lain  yang  teridentifikasi  pada formulasi  teh  cang  salak  adalah  flavonoid  yang dapat  berperan  sebagai  agen  antiinflamasi. Flavonoid  merupakan  senyawa  bioaktif  polifenol yang banyak ditemukan di berbagai buah, sayuran, minuman (teh, kopi), kacang-kacangan, dan produk sereal. Flavonoid bertindak sebagai inhibitor NFkB, yang  memodulasi  ekspresi  gen  pro-inflamasi sehingga  menurunkan  respon  inflamasi  yang menjadi  penyebab  utama  berbagai  penyakit kardiovaskular  (Choy et  al .,  2019).  Sebagai  agen antiinfamasi, flavonoid bekerja dengan mengurangi
produksi  reaktif  oksigen  spesies  (ROS)  dan melakukan down-regulation pada beberapa mediator inflamasi seperti menghambat jalur kunci pensinyalan nuclear  factor-kappa  B (NF-KB); mitogen-activated  protein  kinase  (MAPK)  dan signal  transducers  and  activators  of  transcription (STAT)  (Ginwala  et  al.,  2019).  Flavonoid  juga memiliki efek biokimia, yang menghambat sejumlah enzim  seperti aldose  reductase , xanthine  oxidase , phosphodiesterase ,  Ca+2-ATPase, lipoxygenase , cycloxygenase ,  dll.  Flavonoid  dapat  merugulasi produksi  berbagai  hormon  seperti  estrogen, androgen  dan  hormon  tiroid.  Aktivitas  anti- inflamasi  dari  flavonoid  dapat  ditemukan  pada kedua  fase  inflamasi,  yaitu  fase  proliferatif  dan eksudatif  (Ratehe et al ., 2012) Selain  polifenol  dan  flavonoids,  senyawa aktif  lain  yang  terdapat  pada  formulasi  teh  cang salak  adalah  alkaloid.  Alkaloid  adalah  golongan senyawa  kimia  yang  biasanya  bersifat  basa  dan memiliki  setidaknya  satu  atom  nitrogen  dalam cincin  heterosiklik.  Alkaloid  memiliki  berbagai aktivitas  biologis  termasuk  antimalaria,  antiasma, antikanker, antihipertensi, antispasmodik, antiaritmia,  analgesik,  antibakteri,  dan  efek antidiabetes, serta memiliki efek stimulan pada SSP, relaksan otot, dan sifat vasodilatasi (Ti et al., 2021). Alkaloid memiliki efek antioksidan dan antiinflamasi  yang  sangat  baik.  Hasil  studi melaporkan  senyawa  aktif  ini  dapat  mengurangi kerusakan dan peradangan kolon pada Inflammatory  bowel  disease  (IBD). Peran  alkaloid dalam terapi IBD dapat melalui berbagai mekanisme seperti  meningkatkan  status  oksidatif  dan proinflamasi kolon, mempertahankan struktur  epitel dan  memodulasi  komposisi  mikrobiota  usus  (Peng et al., 2019). Alkaloid juga dilaporkan memiliki efek terapeutik  yang  potensial  terhadap  beberapa penyakit NDDs seperti Alzheimer (AD), Huntington (HD),  Parkinson  (PD),  Epilepsi,  Skizofrenia,  dan stroke.  Alkaloid  dapat  memperbaiki  patofisiologi penyakit-penyakit  tersebut  karena  dapat  berfungsi sebagai reseptor dari adenosin, sebagai antioksidan dan  anti-amiloid,  sebagai  inhibitor  MAO, asetilkolinestrase, dan butyrylcholinesterase (Hussain et al ., 2018). Pada penelitian ini, analisis fitokimia bahan aktif pada formulasi teh cang salak dilakukan secara kuantitatif  dengan  menghitung  kadar  polifenol, flavonoid,  dan  alkaloids.  Analisa  secara  kualitatif pada  kandungan  fitokimia  teh  cang  salak  telah
dilaporkan  pada  studi  sebelumnya  oleh  (Karta, Iswari and Susila, 2019). Formulasi teh cang salak dilaporkan  mengandung  berbagai  bahan  bioaktif seperti  flavonoid,  tannin,  alkaloid,  terpenoid  dan persenyawaan fenol. Kandungan bahan-bahan aktif tersebut  menyebabkan  teh  cang  salak  berpotensi dikembangkan  sebagai  minuman  antioksidan  yang mencegah  dan  mengontrol  penyakit  degeneratif (Karta, Iswari and Susila, 2019).
Penentuan  aktivitas  antioksidan  teh  cang salak pada berbagai formulasi dilakukan dengan uji IC50.  IC50  merupakan  uji  yang  menggambarkan konsentrasi  yang  dapat  menghambat  aktivitas radikal bebas DPPH sebanyak 50 %. Semakin kecil IC50  menandakan  semakin  besar  aktivitas antioksidan  bahan  aktif  yang  terdapat  pada formulasi  teh cang salak. Nilai IC 50 teh cang salak pada  berbagai  formulasi  berkisar  antara  3,996  – 6,222  ppm.  Nilai  IC 50 terendah  terdapat  pada  teh cang salak formulasi P1 yang menunjukkan aktivitas antioksidan  paling  tinggi  dibandingkan  formulasi P2, P3, dan P4.
Aktivitas  antiinflamasi  formulasi  teh  cang salak  pada  penelitian  ini  diujikan  pada  sel  darah merah  dengan  menghitung  stabilitas  membran  sel setelah diberi perlakuan dengan teh cang salak. Pada uji  ini,  formulasi  teh  cang  salak  dicampurkan  ke dalam  larutan  hipotonis  kemudian  ditambahkan dengan suspensi  sel  darah merah. Sel darah merah dalam  larutan  hipotonis  selanjutnya  diberi  induksi panas dengan menginkubasi pada suhu 56 oC untuk memicu  lisis  sel.  Kondisi  tersebut  akan menyebabkan  sel  darah  meras  lisis  kemudian melepaskan  hemoglobin  yang  dapat  diukur kadarnya  dengan  spektrofotometer  pada  panjang gelombang 640 nm.
Teh  cang  salak  dalam  berbagai  formulasi yang ditambahkan pada uji tersebut berfungsi untuk menjaga stabilitas membran sel. Aktivitas antiinflamasi  dari  teh  cang  salak  dilihat  dari kemampuannya mempertahankan stabilitas membran sel darah merah. Hasil uji antiinflamasi teh cang  salak  pada  berbagai  formulasi  menunjukkan aktivitas antiinflamasi yang tinggi (Gambar 1).
Gambar 1 . Rata-rata persentase stabilitas membran sel darah merah
Berdasarkan Gambar 1 di atas, pemberian teh cang salak mampu menjaga stabilitas membran sel darah  merah.  Aktivitas  antiinflamasi  tertinggi ditemukan pada teh cang salak formulasi P1 dengan persentase  stabilitas  membran  sel  darah  merah mencapai 112,6 %, diikuti dengan formulasi P2 (102
%), P3 (100, 2 %), dan P4 (99,7 %). Teh cang salak formasi  P1  memiliki  kepekatan  paling  tinggi diantara formulasi lainnya dalam volume yang sama (200 ml). Bahan aktif yang terdapat pada formulasi ini  bekerja  secara  maksimal  dalam  menjaga stabilitas membran sel sehingga tidak ada sel darah merah  yang mengalami  lisis.  Bahan  aktif  teh  cang salak berdifusi ke dalam membran sel darah merah dan  bekerja  mempertahankan  stabilitas  membran yang  menunjukkan  fungsinya  sebagai  agen antinflamasi. Difusi bahan aktif tersebut
menyebabkan absorbansi larutan setelah disentrifugasi  menjadi  lebih  rendah  dibandingkan dengan kontrol larutan uji.
Berdasarkan analisis statistika menggunakan One-way anova , terdapat perbedaan bermakna nilai stabilitas  membran  sel  darah  merah  pada  berbagai formulasi teh cang salak. Teh cang salak formulasi P1 memiliki persentase stabilitas membran sel yang secara  signifikan  lebih  tigggi  dibandingkan formulasi P2, P3, P4, dan kontrol positif (P≤0.05). Perbedaan  nilai  stabilitas  membran  sel  yang  tidak signifikan terdapat pada formulasi teh cang salak P4 dengan  kontrol  positif  (P≥0.05).  Kontrol  positif yang digunakan dalam penelitian ini adalah natrium diklofenak,  merupakan  obat  golongan  nonsteroid yang  digunakan  sebagai  pereda  peradangan.  Pada penelitian  ini,  stabilitas  membran  sel  darah  merah
teh  cang  salak  formulasi  P1,  P2,  dan  P3  secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol positif.  Sedangkan  teh  cang  salak  formulasi  P4 memiliki stabilitas membran sel yang tidak berbeda bermakna  dengan  kontrol  positif.  Formulasi  P4 merupakan teh cang salak dengan kepekatan paling rendah dibandingkan formulasi lainnya. Hasil uji ini mengindikasikan  bahwa  teh  cah  salak  pada kepekatan  P4  memiliki  efektifivitas  yang  sama dengan  kontrol  positif  dalam  menjaga  stabilitas membran sel darah merah.
Uji  antiinflamasi  teh  cang  salak  dalam penelitian ini dilakukan secara invitro menggunakan metode stabilisasi membran sel darah merah. Prinsip pada  uji  ini  adalah  membran  sel  darah  merah memiliki  struktur  yang  sama  dengan  membran lisosom.  Dalam  kondisi  fisiologi,  stabilisasi  pada membran lisosom penting untuk membatasi respon inflamasi  dengan  cara  mencegah  pelepasan  enzim dari  dalam lisosom. Neutrofil yang teraktivasi  saat terjadinya  inflamasi  akut  dan  kronis  akan  memicu lepasnya  enzim  lisosom  dan  meningkatkan  respon inflamasi (Kumar et al., 2012). Pada penelitian ini, stabiliasi  membran  sel  darah  merah  diukur  pada berbagai formulasi teh cang salak yang mengandung berbagai bahan antiinflamasi. Sel darah merah yang dikondisikan  pada  larutan  hipotonik  dan  diinduksi dengan  panas  analog  dengan  stabilisasi  membran lisosom sehingga hasil ujinya dapat digunakan untk mengetahui  aktivitas  antiinflamasi  dari  teh  cang salak
Pada kondisi hipotonis, sel darah merah akan lisis  karena  terjadi  perpindahan  pelarut  melalui membran  semipermeable.  Larutan  akan  bergerak dari konsentrasi rendah ke konsentrasi tinggi melalui membran sel. Hal ini dapat menyebabkan terjadinya oksidasi  lipid  dan  protein  sehingga  memicu kerusakan  membran  sehingga  terjadi  hemolisis. Aktivitas  antiinflamasi  dapat  diukur  berdasarkan besar kecilnya sel darah merah yang mengalami lisis (Kumar,  2011).  Pada  penelitian  ini,  lisisnya  sel darah merah ditandai dengan keberadaan hemoglobin  dalam larutan yang ditentukan dengan mengukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang 560  nm  menggunakan  spektrofotometer  UV-ViS. Nilai  absorbansi  yang  rendah  menunjukkan terjadinya  stabilisasi  membran  sel  darah  merah akibat pemberian teh cang salak meskipun diinduksi dalam kondisi hipotonis dan panas.
Nilai absorbansi yang didapatkan selanjutnya digunakan untuk menentukan stabilitas membran sel darah  merah.  Nilai  persentase  stabilitas  membran yang mendekati atau melebihi kontrol positif dapat dikatakan kuat karena memiliki aktivitas antiinflamasi  yang  sebanding  atau  lebih  dari  pada kontrol positif. Pada penelitian ini, nilai persentase stabilitas membran pada semua formulasi  teh cang salak  memilki  nilai  lebih  tinggi  dibandingkan kontrol  positif.  Hal  ini  mengindikasikan  teh  cang salak memiliki aktivitas antiinflamasi yang kuat.
Teh  cang  salak formulasi  P4  memiliki  nilai persentase  stabilitas  membran  sel  yang  paling rendah  dibandingkan  formulasi  lainnya  namun nilainya  mendekati  dan  tidak  berbeda  secara bermakna  dengan  kontrol  positif.  Oleh  karena  itu, formulasi  teh  cang  salak  dengan  kepekatan  yang paling  rendah  dalam  penelitian  ini  masih  efektif untuk menstabilkan membran sel darah merah yang menunjukkan  aktivitas  antiinflamasi  yang  masih tinggi
IV. Kesimpulan
Teh cang salak memiliki aktivitas antiinflamasi  secara  in  vitro  yang  ditunjukkan dengan  kemampuan  menstabilkan  membran  sel darah merah.

## V. Ucapan Terima Kasih
Kami  mengucapkan  terimakasih  kepada Poltekkes Kemenkes Denpasar yang telah mendanai penelitian  ini  berdasarkan  surat  perjanjian pelaksanaan  penelitian  No.  DP.  02.01/  P.02/  PPK/ 4337 / 2021

## Daftar Pustaka
Arifah,  R.  N.,  Idiawati,  N.  and  Wibowo,  M.  A. (2017) ‘Uji  Aktivitas  Antiinflamasi  Ekstrak Kasar Buah Asam Paya ( Eleiodoxa conferta (  Griff  .)  Buret)  Secara  in-vitro  dengan Metode Stabilisasi Membran HRBC (human Red Blood Cell)’, Jkk, 6(1), pp. 21–24. Armadany,  F.  I.  et  al.  (2020)  ‘Uji  Potensi Antiinflamasi  Ekstrak Etanol Daun Bambu- Bambu  (Polygonum  pulchrum  Blume) Dengan  Metode  Stabilisasi  Membran  Sel Darah  Merah  Secara  In  Vitro’,  Majalah Farmasetika., 4(Suppl  1), pp. 144–151. doi: 10.24198/mfarmasetika.v4i0.25873.
Askandari  (2015)  Uji  Aktivitas  Anti  Inflamasi Ekstrak Etanol 70% Buah Parijoto (Medinilla speciosa  Blume)  Secara  In  Vitro  Dengan Metode Stabilisasi Membran HRBC (Human Red  Blood  Cell),  Skripsi.  UIN  SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA.
Choy,  K.  W.  et  al.  (2019)  ‘Flavonoids  as  natural anti-inflammatory  agents  targeting  nuclear factor-kappa  B  (NFκB)  signaling  in cardiovascular  diseases:  A  mini  review’, Frontiers in Pharmacology, 10(OCT), pp. 1– 8. doi: 10.3389/fphar.2019.01295.
Dewi,  A.  A.  T.  S.,  Puspawati,  N.  and  Suarya,  P. (2015) ‘Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Eter Kulit Batang Tenggulun (Protium Javanicum Burm)  Terhadap  Edema  Pada  Tikus  Wistar Yang Diinduksi  Dengan Karagenan’, Jurnal Kimia, 9(1), pp. 13–19.
Ginwala,  R.  et  al.  (2019)  ‘Potential  role  of flavonoids  in  treating  chronic  inflammatory diseases  with  a  special  focus  on  teh  anti- inflammatory activity of apigenin’, Antioxidants, 8(2), pp. 1–30. doi:
10.3390/antiox8020035.
GÜNEŞ  BAYIR,  A.,  AKSOY,  A.  N.  and KOÇYİĞİT,  A.  (2019)  ‘Teh  Importance  of Polyphenols  as  Functional  Food  in  Health’, Bezmialem  Science,  pp.  157–163.  doi: 10.14235/bas.galenos.2018.2486.
Hardy, R. S., Slamet, S. and Kamilla, L. (2019) ‘Uji Aktivitas  Anti  Inflamasi  Ekstrak  Bawang Dayak  (Eleutehrine  Americana  L.  Merr) terhadap  Stabilisasi  Membran  Sel  Darah Merah’,  Jurnal  Laboratorium  Khatulistiwa, 2(1), p. 30. doi: 10.30602/jlk.v2i1.324.
Harvard  Medical  School  (2020)  Understanding acute  and  chronic  inflammation,  Harvard
Health Publishing. Available at: https://www.health.harvard.edu/staying- healthy/understanding-acute-and-chronic- inflammation.
Hussain,  G.  et  al.  (2018)  ‘Role  of  plant  derived alkaloids and tehir mechanism in neurodegenerative  disorders’,  International Journal  of  Biological  Sciences,  14(3),  pp. 341–357. doi: 10.7150/ijbs.23247.
Institute for Quality and Efficiency in Health Care (2018) What  is an inflammation? Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK2 79298/?report=printable.
Karta, I. W. et al. (2018) Teh Cang Salak :Teh Dari Limbah Kulit Salak Dan Kayu Secang Yang
Berpotensi Untuk Pencegahan Dan Pengobatan Penyakit Degeneratif.
Karta, I. W., Iswari, P. A. K. and Susila, L. A. N. K. E.  (2019)  ‘Teh  Cang  Salak :  Teh  Dari
Limbah Kulit Salak Dan Kayu Secang Yang Berpotensi Untuk Pencegahan Dan Pengobatan Penyakit Degeneratif’, Meditory :  Teh  Journal  of  Medical Laboratory, 7(1), pp. 27–36. doi: 10.33992/m.v7i1.473.
Kumar, N. S. (2011). Evaluation of RBC Membran Stabilization  and  Antioxidant  of  Bombax ceiba in An In Vitro Methode. International Journal of Pharma and Bio Sciences, 2(1). Kumar, V., Bhat, Z. A., Kumar, D., Khan, N. A., and Chashoo,  I.  A.  (2012).  Evaluation  of  Anti- Inflammatory  Potential  of  Leaf  Extracts  of Skimmia Anquetilia. Asian Pasific Journal of Tropical Biomedicine, 2(8), 627–630.
Murningsih,  T.  and  Fathoni,  A.  (2019)  ‘Evaluasi Aktivitas  Anti-Inflamasi  dan  Antioksidan Secara  In-Vitro,  Kandungan  Fenolat  Dan Flavonoid  Total  Pada  Terminalia  spp.’, Journal  of  Chemical  Information  and Modeling,  53(9),  pp.  1689–1699.  doi: 10.1017/CBO9781107415324.004.
Peng, J. et al. (2019) ‘Plant-derived alkaloids: Teh promising  disease-modifying  agents  for inflammatory  bowel  disease’,  Frontiers  in Pharmacology,  10(APR),  pp.  1–15.  doi: 10.3389/fphar.2019.00351.
Rahmawati,  D.,  Sugihartini,  N.  and  Yuwono,  T. (2017)  ‘Daya  Antiinflamasi  Salep  Basis Larut  Air  Minyak  Atsiri  Bunga  Cengkeh  ( Syzygium  aromaticum  )  dengan  Variasi Komposisi  Enhancer  Asam  Oleat  dan Propilen  glikol’,  Berkala  Ilmu  Kesehatan Kulit dan kelamin, 29(3), pp. 182–187. Ramadhani, N. and Sumiwi, S. A. (2015) ‘Aktivitas Antiinflamasi  Berbagai  Tanaman  Diduga Berasal Dari Flavonoid’, Farmaka, 14(2), pp. 111–123.
Ratehe,  P.  et  al.  (2009)  ‘Mechanism  of  action  of flavonoids  as  anti-inflammatory  agents:  A review’,  Inflammation  and  Allergy  -  Drug Targets, 8(3), pp. 229–235. doi:
10.2174/187152809788681029.
Ratehe,  P.  et  al.  (2012)  ‘Mechanism  of  Action  of Flavonoids as Anti-inflammatory Agents: A Review’,  Inflammation  &  Allergy  -  Drug Targets, 8(3).
Setianto,  R.  (2020)  Studi  Etnomedisine  Di  Suku Tengger Probolinggo – Jawa Timur Dengan Uji  Stabilitas  Membran  Dan  Aktivitas Antiinflamasi  Program  Studi  S2  Ilmu Farmasi Fakultas Farmasi. Universitas Setia Budi.
Singh, A. et al. (2020) ‘Interaction of polyphenols as antioxidant and
anti-inflammatory compounds in brain–liver–gut axis’, Antioxidants, 9(8), pp. 1–20. doi:
10.3390/antiox9080669.
Soleha,  M.  et  al.  (2018)  ‘Profil  Penggunaan  Obat Antiinflamasi  Nonstreoid  di  Indonesia’, Jurnal Kefarmasian Indonesia, 8(2), pp. 109– 117. doi: 10.22435/jki.v8i2.316.
Subowo  (2010)  Imunologi  Klinik.  Edisi  ke-2. Jakarta: Sagung Seto.
Suryani, Benny, F. and Wahyuni  (2018) ‘Uji Efek Antiinflamasi  secara  In  Vivo  Nanopartikel Kurkumin yang Diformulasikan menggunakan Metode Reinforcement Gelasi Ionik’, Issn, 1(1), pp. 20–24.
Ti,  H.  et  al.  (2021)  ‘Progress  of  plant  medicine derived extracts and alkaloids on modulating viral  infections  and  inflammation’,  Drug Design,  Development  and  Tehrapy,  15,  pp. 1385–1408. doi: 10.2147/DDDT.S299120. Yahfoufi, N. et al. (2018) ‘Teh immunomodulatory and anti-inflammatory role of polyphenols’, Nutrients, 10(11), pp. 1–23. doi:
10.3390/nu10111618.