Screening Fitokimia dan Studi Aktivitas Ekstrak Daun Sintok ( Cinnamomum sintoc Bl. ) Sebagai Antioksidan dan Antihiperlipidemia
( Phytochemical Screening and Activities Study of Sintoc Leaves (Cinnamomum sintoc Bl.) Extracts as Antioxidant and Antihyperlipidemic )
Ardine Kumalasari 1,2) , Wuryanti Handayani 1) , Tri Agus Siswoyo 2)
1) Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember
2) Central for Development of Advanced Science and Technology (CDAST), Universitas Jember Jln. Kalimantan 37, Jember 68121
E-mail : wuryanti.handayani@gmail.com

## Abstrak
Cinnamomum sintoc Bl. merupakan tanaman yang memiliki kandungan minyak atsiri di kulit batangnya yang digunakan untuk antioksidan, antihiperlipidemia dan lain-lain. Dari penelitian ini, senyawa metabolit sekunder dari daun sintok (kadar air 54,7%±0,69) diekstrak dengan metanol dan dianalisis dengan reagen spesifik. Daun sintok diekstraksi secara maserasi bertingkat   dengan   meningkatkan   kepolaran   pelarut,   yaitu   n-heksana,   etil   asetat,   metanol.   Uji   antioksidan   dan antihiperlipidemia dilakukan pada  setiap ekstrak(HS, ES, MS) menggunakan standar asam galat equivalent. Total fenolik dan total flavonoid dihitung menggunakan kurva standar asam galat dan kuersetin, hasil total fenolik dari setiap ekstrak antara   lain   HS   (39,23±2,79   mg   AGE/g);   ES   (110,77±2,37   mg   AGE/g);   dan   MS   (283,63±3,96   mg   AGE/g).  Aktivitas antioksidan  pada  ekstrak   ditentukan   dengan   kemampuan   ekstrak   untuk  meredam   DPPH    sedangkan   aktivitas antihiperlipidemia ekstrak ditentukan dengan kemampuan ekstrak untuk menghambat kinerja lipase. Potensi ekstrak daun sintok terhadap antioksidan cukup tinggi hanya untuk ekstrak MS, sedangkan potensi terhadap antihiperlipidemia untuk semua jenis ekstrak.
Kata Kunci: Cinnamomum sintoc Bl., fitokimia, maserasi, fenolik, antioksidan, antihiperlipidemia .

## Abstract
Cinnamomum sintoc Bl. is one of  plant who has essential oil on their bark and it is used as antioxidant, antihyperlipidemic, etc. From this study secondary metabolite compounds of sintok leaves (water percentage   54,7%±0,69) extracted with methanol and than analyzed with spesific reagent. Sintok leaves been extracted by continuous maseration with increasing solvent polarity, of n-hexane, ethyl acetate, and methanol. Antioxidant and antihyperlipidemic test used every extract(HS, ES, MS) using standart galat acid eqivalent. Fenolics and flavonoids total counting use standart curve galat acid and quersetin, total result of fenolics from every extract such us HS (39,23±2,79 mg GAE/g); ES (110,77±2,37 mg GAE/g); dan MS (283,63±3,96 mg GAE/g). Antioxidant activities of extract determined with capabilties of extract to muffle  DPPH while antihyperlipidemic activities of extract determined with capabilties of extract to obstruct lipase working. Potential of extract sintoc leaves to antioxidant high enough only to extract MS, while potential to antihyperlipidemic for all varian extract.
Keywords: Cinnamomum sintoc Bl., phytochemical, maseration, phenolics, antioxidant, antihyperlipidemic.

## PENDAHULUAN
Cinnamomum   merupakan   genus   tanaman   pepohonan evergreen aromatik. Kulit kayu genus tanaman ini sering digunakan   sebagai   rempah-rempah   dan   obat.  Banyak senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam genus c innamomum ini[1].   Tanaman   sintok  sebagai   salah   satu spesies   dari   genus cinnamomum ini,   bagian   kulit batangnuya  sering   digunakan  sebagai   obat.   Kulit   batang sintok mengandung  alkaloid,  flavonoid,  fenolik dan  lain- lain[2].
Senyawa   metabolit   sekunder   merupakan   senyawa organik alami yang berasal dari tumbuhan dimana senyawa ini  bertindak  sebagai   pelindung tumbuhan  dari   gangguan lingkungan.   Senyawa   ini   memiliki   struktur   kimia   yang kompleks dimana senyawa ini merupakan produk buangan ( waste   products )   dari   suatu   biosintesis[3]. Senyawa   ini dapat diisolasi melalui tahapan proses seperti penghalusan, pengeringan   ataupun   liofiliasi   buah   dan   sayuran   dengan
cara   perendaman   dan   selanjutnya   diekstrak   dengan pelarut[4].   Senyawa   ini   banyak   digunakan   sebagai antioksidan, antimikroba, antikanker dan lain sebagainya.
Antioksidan dalam arti kimia merupakan senyawa donor elektron terhadap radikal bebas. Antioksidan secara biologis mampu   mengatasi   dampak   negatif   dari   oksidasi   dalam tubuh   seperti   kerusakan   sel   tubuh.   Keseimbangan   antara oksidan dan antioksidan sangat  penting, hal ini berkaitan dengan sistem imunitas dalam tubuh[5]. Bentuk alami yang berpotensi   sebagai   antioksidan   adalah   tanaman   yang mengandung   flavonoid   dan   tanin   dimana   kedua   senyawa tersebut   tergolong   senyawa   fenolik[6].   Hiperlipidemia adalah  tingginya kadar  asam  lemak  dalam   darah.  Lemak dalam   tubuh   dihidrolisis   oleh   lipase   pankreas   untuk menghasilkan   asam   lemak.   Asam   lemak   hasil   hidrolisis trigleserida   oleh   lipase   pankreas   diangkut   menuju permukaan   mikrovili   lalu   diserap   ke   dalam   pembuluh darah[7].  Penurunan resiko penyakit  hiperlipidemia dapat dilakukan dengan penghambatan aktivitas lipase pankreas
sehingga   penumpukan   asam   lemak   dalam   darah   akan berkurang.

## METODE PENELITIAN
Penelitian   ini   dilakukan   di   laboratorium Center   for Development   of   Advance   Science   and   Technology (CDAST) Univeristas Jember.
Bahan-bahan   yang   digunakan   dalam   penelitian   ini adalah   daun   sintok   diperoleh   dari   Taman   Nasional Merubetiri   Kabupaten   Jember,  n-heksana   (Merck),   etil asetat   (Merck),   metanol   (Merck),   NaOH   (Merck),   HCl (Merck),   reage   Dragendroff   (Merck),   H2SO4   (Merck), FeCl3   (Merck),     asam   galat   (Sigma-Aldrich),   kuersetin (nacalai   tasque),  DPPH  (nacalai   tasque),   asam   askorbat (nacalai tasque),   lipase procine pancreas (Sigma Aldrich), orilstat (Roche S. p. A. Millan) akuades, tisu, kertas saring, dan aluminium foil .
Peralatan  yang  digunakan dalam  penelitian ini  adalah blender, ayakan berukuran 60 mesh, seperangkat alat gelas, oven,   blender,  neraca   analitik   (ES   2255M-DR),   shaker, rotary   evaporator   (Steroglass),   buchner,   set   alat spektrofotoeter   Uv-Vis   (Hitahi   U-2900),   dan   set   alat microplate reader.

## Preparasi Sampel
Daun   sintok   dipisahkan   dari   batangnya   kemudian dibersihkan.   Sampel   dikering   anginkan   dalam   ruangan selama 10 hari tanpa terkena sinar matahari. Sampel daun yang   telah   kering   dihaluskan   menggunakan   blender   dan diayak menggunakan ayakan 60 mesh.

## Penentuan kadar air
Sampel  daun dan simplisia  daun sintok sebanyak 3-4 gram  dioven selama 3-5 jam pada suhu 105 0 C. Sampel selanjutnya didinginkan dalam desikator selama 30 menit, lalu ditimbang sampai diperoleh berat konstan [8].

## Uji Fitokimia
Simplisia  daun   sintok   sebanyak   10   gram   dimaserasi menggunakan   metanol   (p.a)   sebanyak   50   mL.   Maserasi dilakukan selama 3x24 jam, ekstrak disaring menggunakan corong buchner. Filtrat di evaporasi sehingga membentuk ekstrak kental. Ekstrak diuji dengan reagen spesifik masing- masing senyawa metabolit sekunder antara lain flavonoid, alkaloid, steroid, terpenoid, dan tanin[9].
Tabel 1. Perubahan Warna Positif Screening Fitokimia
Seyawa Metabolit Sekunder Reagen Spesifik Perubahan Positif Flavonoid Alkaloid Steroid Terpenoid Tanin Reagen Basa (NaOH) Reagen Dragendroff Asam kuat Asam kuat Besi(III) klorida Kuning Endapan orange Hijau Coklat
Hijau kehitaman

## Ekstraksi Senyawa Metabolit Sekunder
Simplisia sebanyak ±50 gram direndam dengan heksana sebanyak 250 mL dan di shaker selama 3x24 jam pada suhu ruang  dengan kecepatan  150 rotation per minutes (rpm). Hasil rendaman difiltrasi, residu diekstrak kembali dengan heksana. Aktivitas ini diulang sebanyak ±9 kali. Filtrat dari heksana dicampur dan dilakukan evaporasi  dengan untuk
menghasilkan ekstrak (HS). Residu sisa heksana diuapkan untuk   menghilangkan   larutan   heksana,   selanjutnya dilakukan   ekstraksi   serupa   dengan   pelarut   yang   berbeda yaitu etil asetat untuk ekstrak ES dan metanol untuk ekstrak MS.

## Pembuatan Larutan Stock
Ekstrak   kental   HS,   ES   dan   MS   diambil   ±20,00   mg ditambah dengan 10 mL methanol. Larutan stock dikocok hingga   homogen.   Larutan   stock   digunakan   sebagai pengujian.

## Analisa Total Fenolik
Larutan stock ekstrak HS, ES dan MS sebanyak 50 mL dimasukkan   dalam   tabung   reaksi   yang   berbeda.   Setiap tabung reaksi ditambahkan 1 mL Na 2 CO 3 2% ( w / v ) dan 50 mL   reagen   Folin-Ciocalteu   50%   ( v / v )   dan   diinkubasi kembali   selama   30   menit.   Larutan   diukur   absorbansinya dengan   spektrofotometer   UV-Vis   dengan   panjang gelombang   750   nm.   Total   fenolik   dari   ekstrak-ekstrak tersebut ditentukan dalam mg asam galat equivalent (AGE) per gram dengan menggunakan hasil persamaan dari kurva standar asam galat[10].

## Analisa Total Flavonoid
Larutan stock ekstrak HS, ES dan MS sebanyak 150 mL dimasukkan   dalam   tabung   reaksi   yang   berbeda.   Setiap tabung reaksi ditambahkan 400 mL akuades, 30 mL NaNO 2 5% ( w / v ) dan 3 mL AlCl 3 10% ( v / v ). Setelah diinkubasi selama 6 menit ditambahkan 200 mL NaOH 1 M dan 240 mL   akuades.   Larutan   diukur   absorbansinya   dengan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 415 nm. Total flavonoid dari ekstrak-ekstrak tersebut ditentukan dalam   mg   kuersetin equivalent (KE)   per   gram   dengan menggunakan   hasil   persamaan   dari   kurva   standar kuersetin[11].

## Uji Antioksidan
Sebayak   200   μL   ekstrak   dengan   5   konsentrasi   yang berbeda (μg AGE/mL) dimasukkan ke dalam 96- well plates dan  ditambahkan   100   μL   reagen   DPPH   90  μM   lalu diinkubasi selama 30 menit. Absorbansi larutan diukur pada panjang gelombang 515 nm. Vitamin C digunakan sebagai pembanding.  Persen   peredaman   radikal   DPPH   pada masing-masing   konsentrasi   ekstrak   dihitung  untuk mendapatkan nilai IC 50 [12].

## Uji Antihiperlipidemia
Pembuatan Substrat p-NPB sebanyak 1,61 mg ditambah 1,0 mL triton X-100 4%   (w/v).   Setelah   itu   dipanaskan   pada   suhu   55-60 o C hingga larut. Selanjutnya ditambah 0,1 mL buffer asetat 1 M (pH 5,61) dan diinkubasi selama 5 menit lalu ditambah 0,8 mL akuades[13].

## Pengujian Sampel
Subtrat sebanyak 300,0 mL dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 5 menit. Sampel (20 mg AGE) sebanyak 50 mL dan 80,0 mL lipase ditambahkan dan diinkubasi  pada suhu 37 o C selama 15 menit. Dilakukan penambahan 670,0 µL aseton. Absorbansinya diukur pada panjang gelombang 412 nm[13].

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun   sintok   memiliki   kadar   air   54,7%,   sedangkan simplisia daun sintok memiliki kadar air 10,8%. Rendemen ekstrak   yang   diperoleh   dari   hasil   ekstraksi   dapat   dilihat pada   Tabel   2.   Perbedaan   rendemen   yang   diperoleh   dari masing-masing   pelarut   menandakan   polaritas   senyawa kimia yang terekstrak. Kenaikan kepolaran pelarut ekstraksi diikuti   oleh   kenaikan   rendemen   ekstrak.   Hal   ini menunjukan   bahwa   dalam   daun   Sintok   banyak   memiliki senyawa kimia polar daripada non polar.
Tabel 2. Rendemen Ekstrak Daun Sintok
Pelarut Berat ekstrak (g) Rendemen (%) n-heksana etil asetat metanol 1,490 1,700 3,380 2,98 3,42 7,11 Hasil Screening Fitokimia Daun Sintok
Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa ekstrak MS memiliki   kandungan   senyawa   metabolit   sekunder   lebih banyak daripada HS dan ES. Perubahan warna ekstrak daun sintok juga sesuai dengan perubahan warna yang dijelaskan oleh   literatur   ketika   ditambahkan   masing-masing   reagen. Perubahan   warna   ekstrak   dibandingkan   dengan   kontrol negatif yang berupa metanol[9].
Tabel 3. Hasil Screening Fitokimia Jenis Senyawa Hasil Uji HS ES MS Flavonoid Alkaloid Steroid Terpenoid Tanin - - + - - + - + - - + +
+ + + (+) hasil positif; (-) hasil negative

## Kandungan Total Fenolik dan Flavonoid Daun Sintok
Prinsip   metode   analisa   total   fenolik   berdasarkan kemampuan   ion   fenolat   yang   merupakan   bentuk   aktif senyawa fenolik untuk mereduksi reagen Folin-Ciocalteu. Ion   fenolat   dibentuk   dari   hasil   reaksi   senyawa   fenolik dengan natrium karbonat. Reduksi reagen Folin-Ciocalteu oleh   ion   fenolat   mengubah   warna   reagen   dari   kuning menjadi biru karena terbentuknya kompleks. Standar total fenolik   dalam   ekstrak   menggunakan   perhitungan   dari persamaan kurva standar asam galat. Kurva standar yang dihasilkan   persamaan   linier   y   =   0,044x   –   0,019   dengan linieritas sebesar 0,991. Total fenolik ekstrak daun Sintok ditunjukan pada Gambar 1.
Gambar 1. Total fenolik daun sintok
Total   fenolik   ekstrak   daun   Sintok   meningkat   seiring dengan   peningkatan   kepolaran   pelarut   yang   digunakan untuk   mengekstrak.   Kepolaran   yang   tinggi   menyebabkan pelarut metanol memiliki total fenolik lebih tinggi daripada pelarut yang lain. Hal ini disebabkan kemampuan metanol dalam   membentuk   ikatan   hidrogen,   interaksi   dipol-dipol dan van der Waals dengan senyawa fenolik.
Prinsip   metode   analisa   flavonoid   berdasarkan pembentukan   kompleks   antara   gugus   katekol   yang   telah teroksidasi dengan logam alumunium pada senyawa AlCl 3 . Kompleks   tersebut   memiliki   warna   kuning   pada   kondisi basa.   Reduksi   senyawa   kompleks   oleh   NaOH   mengubah warna reagen menjadi kuning karena terbentuknya struktur quinon. Standar total flavonoid dalam ekstrak menggunakan perhitungan dari persamaan kurva standar kuersetin. Kurva standar   yang   dihasilkan   persamaan   linier   y   =   0,0181x   – 0,0059   dengan   linieritas   sebesar   0,99.   Total   flavonoid ekstrak daun Sintok ditunjukan pada Gambar 2.

## Gambar 2. Total flavonoid daun sintok

## Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Sintok
Prinsip   metode   analisa   aktivitas   ini   berdasarkan kemampuan antoksidan menghambat radikal bebas dengan mendonorkan atom hidrogen pada DPPH [14]. Hasil analisa kuantitatif   ini   berdasarkan   penurunan   intensitas   warna DPPH. Senyawa  DPPH yang memiliki warna  ungu akan menjadi kuning karena adanya delokalisasi  electron atom nitrogen oleh senyawa antioksidan[15]. Peredaman DPPH dalam   analisa   ini   merupakan   kemampuan   ekstrak   pada konsentrasi   terhadap   fenolik   untuk   menghambat   aktivitas radikal   bebas.   Konsentrasi   fenolik   digunakan   karena kebanyakan   senyawa   fenolik   yang   dapat   bersifat   sebagai antioksidan. Nilai IC 50 menunjukan nilai konsentrasi yang dibutuhkan   untuk   meredam   50%   aktivitas   radikal   bebas DPPH[16]. Potensi antoksidan yang dimiliki ekstrak daun Sintok   meningkat   seiring   dengan   kepolaran   pelarut   yang digunakan   untuk   mengekstrak.   Ekstrak   MS   memiliki potensi antioksidan paling baik sebagai peredaman DPPH karena memiliki IC 50 terkecil (Gambar 3). Senyawa fenolik polar memiliki substituen hidroksil lebih banyak dari pada senyawa fenolik semi polar dan non polar sehingga jumlah atom hydrogen yang mampu disumbangkan oleh senyawa fenolik polar untuk mereduksi radikal DPPH lebih banyak.
Gambar 3. Nilai IC 50 peredaman radikal DPPH oleh ekstrak daun Sintok

## Aktivitas Antihiperlipidemia Ekstrak Daun Sintok
Prinsip   metode   analisa   aktivitas   ini   berdasarkan kemampuan   ekstrak   dalam   menghambat   lipase   untuk memotong   p-NPB   menjadi   ion   p-nitrofenolat   dan   asam butirat. Hasil analisa kuantitatif ini berdasarkan penurunan intensitas warna kuning yang berasal dari reaksi antara ion p-nitrofenolat   dengan   aseton.   Ion   p-nitrofenolat   akan menjadi   kuning   karena   adanya   penambahan   atom   H sehingga menjadi senyawa p-nitrofenol yang memiliki sifat fisik   berwarna   kuning[17].   Analisa   ini   menggunakan orilstat sebagai kontrol positif penghambatan lipase. Potensi antihiperlipidemia yang dimiliki ekstrak daun Sintok sama dengan   pola   total   flavonoid(Gambar   2).   Ekstrak   ES memiliki   potensi   antihiperlipidemia   paling   baik   sebagai penghambatan lipase (Gambar 4).
Gambar 4. Nilai persen penghambatan lipase oleh ekstrak daun sintok.

## KESIMPULAN
Senyawa   metabolit   sekunder   yang   terkandung   dalam daun   Sintok   antara   lain   flavonoid,   alkaloid,   steroid terpenoid,   dan   tanin.   Ekstrak   MS   berpotensi   sebagai antioksidan   dibandingkan   vitamin   C   sebagai   standar sedangkan   HS   dan   ES   tidak   berpotensi.   Ekstrak   Sintok berpotensi sebagai antihiperlipidemia dibandingkan orlistat sebagai   standar.   Ekstrak   ES   paling   berpotensi   sebagai antihiperlipidemia   karena   memiliki   nilai   persen penghambatan lipase yang paling tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Kadam, D.  D., Mane, P.  C.,  dan  Chaundhari, R.  D. 2013. Phytochemical Screening and Pharmacological Applications   of   Some   Selected   Indian   Species. International Journal of Science and Research . 4 (3): 704-706.
[2] Alfira, A. 2014. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi   Aktif   Kulit   Batang   Sintok. Skripsi .   Jakarta:
UIN Syarif Hidayatullah.
[3] Wink.   1999. Metabolit   Sekunder   Manfaat   dan Perkembangannya   dalam   Dunia   Farmasi . http://lib.ugm.ac.id/ . [Diakses pada 20 April 2016].
[4] Merken,   H.   M.  dan  Beecher,   G.   R.   2000. Measurement   of   Food   Flavonoids   by   High- Perfomance   Liquid   Chromatogrphy. J   Aqric   Food Chem . 48(3): 577-599.
[5] Winarsi,   H.   2007. Antioksidan   Alami   dan   Radikal Bebas . Yogyakarta: Kanisius.
[6] Jin, L., Zhang, Y., Yan, L., Guo, Y., dan Niu, L. 2012. Phenolic   Compounds   and   Antioxidant   Activity   of Bulb Extracts of Six Lilium Species Native to China. Molecule . 17: 9361-9378.
[7] Shin,   J.   E.,   Han   M.   J.,   dan   Kim   D.   H.   2003.   3- methylethergalangin   Isolated   from   Alpinia Officinarum   Inhibits   Pancreatic   Lipase. J   Biol Pharma. 26(6): 854-857.
[8] Sudarmadji,   S.,   Haryono,   B.,   dan   Suhardi.   1989. Prosedur   Analisis   untuk   Bahan   Makanan   dan Pertanian. Yogyakarta: Liberty.
[9] Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur G., dan Kaur, H. 2011. Phytochemical Screening and Extraction: A Review. International Pharmaceutica Sciencia . 1(1): 98-106.
[10] Taga, M. S., Miller, E. E., dan Prat, D. E. 1984. Chia seeds as a source of nature lipid antioxidants. J. Am. Oil. Chem. Soc . 61: 928-931.
[11] Chang, W. C., Kim, S. C., Hwang, S. S., Choi., B. K., Ahn, H. J., Lee, M. Y., Park, S. H., dan Kim., S. K. 2002. Antioxidant activity and free radical scavenging capacity   between   Korean   medicinal   Plants   and flavonoids   by   assay-guided   comparison. Plant   Sci . 163: 1161-1168.
[12] Soler-Rivas, C., Espín, J. C., dan Wichers, H. J. 2000. An   easy   and   fast   test   to   compare   total   free   radical scavenger capacity of food stuffs. Phytochem . Anal . 11: 330-338.
[13] Nakaku,   N.   2002. Amano   Enzyme   for   Diagnostic . Japan: Amano Enzyme Inc.
[14] Prakash,   A.,   Rigelhof,   F.,   dan   Mlller,   E.   2001. Antioxidant Activity. Medalion Labs .
[15] Reynetson,   K.   A.   2007.  Phytochemical   Analysis   of Bioactive   Constituens   from   Edible   Myrtaceae   Fruit. Dissertation . New York: The City University of New York.
[16] Molyneux, P. 2004. The use of the stable free radical diphenylpicryl-hydrazyl   (DPPH)   for  estimating antioxidant  activity. Songklanakarin J. Sci. Technol. 26: 211–219.
[17] Pliego,   J.,   Mateos,   J.   C.,   Rodriguez,   J.,   Valero,F., Baeza, M., Femat, R., Camacho, R., Sandoval, G., dan Herrera-Lopez, E. J. 2015. Moitoring Lipase/Esterase Activity  by  Stopped  Flow  in  a  Sequential  Injection Analisys   System   Using  p-Nitrophenyl   Butirate. Sensors. 15: 2798-2811.