RESPONS KEKEBALAN BAWAAN IKAN NILA ( Oreochromis niloticus ) YANG DIBERI PAKAN DENGAN SUPLEMENTASI  DAUN ALPUKAT ( Parsea americana Mill)
Sri Dwi Hastuti, Anis Zubaidah # , dan Siti Fatimah
Program Studi Akuakultur, Jurusan Perikanan, Fakultas Pertanian dan Peternakan, Universitas Muhammadiyah Malang
(Naskah diterima: 02 Januari 2024; Revisi final: 13 Mei 2024; Disetujui publikasi: 13 Mei 2024)

## ABSTRAK
Penyakit pada budidaya ikan nila merupakan permasalahan utama yang dapat menurunkan produksi dan menyebabkan kerugian. Selama ini upaya pengobatan dan pencegahan penyakit dilakukan dengan menggunakan antibiotik dan bahan kimia yang tidak ramah lingkungan, sehingga dapat meninggalkan residu pada daging ikan dan mencemari perairan. Oleh karena itu perlu alternatif penanggulangan penyakit dengan pemanfaatan bahan alami seperti daun alpukat yang mengandung senyawa saponin, tanin, flavonoid, alkaloid, dan fenol yang dapat berfungsi sebagai imunostimulan. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi respons kekebalan nonspesifik ikan nila yang diberi pakan dengan suplementasi daun alpukat. Metode yang digunakan adalah eksperimen dengan rancangan acak lengkap menggunakan empat perlakuan dan tiga ulangan. Dosis perlakuan yang digunakan adalah: perlakuan P1 (suplementasi daun alpukat 0,25%); perlakuan P2 (suplementasi daun alpukat 0,5%); perlakuan P3 (suplementasi daun alpukat 0,75%); dan perlakuan P0 (kontrol tanpa suplementasi daun alpukat). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ikan nila yang diberi pakan mengandung daun alpukat menunjukkan level hematokrit, leukokrit, dan aktivitas fagositosis yang berbeda nyata (P<0,05) dengan ikan yang diberi pakan kontrol. Hematokrit tertinggi diperoleh pada dosis  0,5%;  sedangkan leukokrit tertinggi diperoleh pada dosis 0,75% dan aktivitas fagositosis terbaik diperoleh pada dosis 0,75% dengan nilai sebesar 33,69, 2,44, dan 72% secara berturut-turut. Suplementasi daun alpukat pada pakan tidak berpengaruh nyata terhadap pertumbuhan dan kelangsungan hidup ikan nila. Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa daun alpukat memiliki potensi dalam meningkatkan sistem kekebalan bawaan ikan nila, khususnya pada hematokrit dan leukokrit serta aktivitas fagositosisnya.
KATA KUNCI: aktivitas fagositosis; diferensial leukosit; hematokrit; leukosit
ABSTRACT: The Innate Immune Responses of Tilapia ( Oreochromis niloticus ) Fed with Feed Supplementation of Avocado ( Parsea americana Mill) Leaves
Disease in tilapia farming is a major problem that can reduce production and inflict irrevocable economic losses. Conventionally, efforts to treat and prevent diseases are carried out using antibiotics and chemicals that are not environmentally friendly, leaving residues on the fish
#Korespondensi: Program Studi Akuakultur, Jurusan Perikanan,
Fakultas Pertanian dan Peternakan, Universitas Muhammadiyah Malang Email: aniszubaidah@umm.ac.id
flesh and polluting the aquatic environment. Therefore, alternative disease preventions and cures are increasingly researched, focusing on natural ingredients such as avocado leaves, which contain saponins, tannins, flavonoids, alkaloids, and phenols that can function as immunostimulants. This study aimed to evaluate the nonspecific immune response of tilapia fed with feed supplemented with avocado leaves. The study used experimental units consisting of four treatments and three replications arranged in a completely randomized design. The treatment doses were: treatment P1 (0.25% avocado leaves supplementation); treatment P2 (0.5% avocado leaves supplementation); treatment P3 (0.75% avocado leaves supplementation); and treatment P0 (control without avocado leaves supplementation). The results showed that tilapia fed with feed containing avocado leaves showed levels of hematocrit, leukocrit, and phagocytic activity that were significantly different (P<0.05) from the fish fed with the control feed. The highest hematocrit was obtained at the dose of 0.5%; while the highest leukocrit was obtained at the dose of 0.75% and the best phagocytic activity was obtained at the dose of 0.75% with values   of 33.69, 2.44, and 72%, respectively. Supplementation of avocado leaves in feed did not have a significant effect on the growth and survival of tilapia. Based on the results, This study concludes that avocado leaves have the potential to improve the innate immune system of tilapia, especially in hematocrit and leukocrit as well as phagocytic activity.
KEYWORDS: differential leucocytes; haematocrit; leukocrit; phagocytosis activity

## PENDAHULUAN
Ikan nila merupakan salah satu jenis ikan air tawar yang banyak dibudidayakan karena memiliki beberapa keunggulan seperti pertumbuhannya yang cepat, mampu beradaptasi pada berbagai kondisi lingkungan, cara budidayanya mudah, dagingnya tebal serta rasanya enak (Aziz & Barades, 2021). Peningkatan produksi ikan nila dapat dilakukan melalui sistem budidaya intensif. Akan tetapi budidaya intensif membawa dampak berupa meningkatnya serangan penyakit yang disebabkan oleh bakteri dan menjadi ancaman kerugian dalam budidaya ikan nila.
Penggunaan antibiotik selama ini digunakan untuk mengatasi penyakit bakterial pada ikan nila, namun aplikasi antibiotik dapat meninggalkan residu pada tubuh ikan yang membahayakan konsumen dan mencemari lingkungan. Oleh karena itu, perlu alternatif penanggulangan penyakit bakterial pada ikan nila dengan pemanfaatan tumbuhan alami yang memiliki properti sebagai immunostimulan. Imunostimulan mampu meningkatkan dan mengaktifkan mekanisme pertahanan imun spesifik maupun
nonspesifik ikan (Payung & Manopo, 2015).
Daun alpukat memiliki potensi sebagai imunostimulan dan mengandung senyawa antibakteri seperti saponin, tanin, dan flavonoid. Kandungan senyawa daun alpukat yaitu: saponin 1,29 mg per 100 g, tanin 0,68 mg per 100 g, flavonoid 8,11 mg per 100 g, alkaloid 0,51 mg per 100 g, dan fenol 3,41 mg per 100 g (Ernawati & Sari, 2015; Patala et al. , 2020). Penelitian Anggorowati et al . (2016) menunjukkan bahwa daun alpukat mempunyai efek menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus sp . , Pseudomonas sp., Proteus sp., Escherichea sp., dan Bacillus sp. pada pengujian in vitro . Sejauh ini penelitian mengenai pemanfaatan daun alpukat sebagai antibakteri dan imunostimulan dalam dunia perikanan belum banyak dilakukan. Berdasarkan uraian di atas, maka perlu dilakukan penelitian mengenai respons kekebalan bawaan ikan nila dengan pakan yang disuplementasi daun alpukat dengan tujuan untuk mengevaluasi respons imun bawaan ikan nila serta mengetahui dosis daun alpukat yang memberikan respons imun bawaan terbaik pada ikan nila.

## BAHAN DAN METODE
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimen. Rancangan penelitian menggunakan rancangan acak lengkap dengan empat perlakuan dan tiga kali ulangan. Perlakuan yang digunakan adalah suplementasi daun alpukat pada pakan ikan nila sebagai berikut:
P0 (kontrol): perlakuan tanpa suplementasi daun alpukat P1: perlakuan suplementasi daun alpukat dengan dosis 0,25% kg -1 pakan P2: perlakuan suplementasi daun alpukat dengan dosis 0,5% kg -1 pakan P3: perlakuan suplementasi daun alpukat dengan dosis 0,75% kg -1 pakan

## Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Agustus-November 2023. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Perikanan, Fakultas Pertanian dan Peternakan, Universitas Muhammadiyah Malang.

## Prosedur Penelitian

## Persiapan Wadah dan Hewan Uji
Wadah yang digunakan pada penelitian ini adalah akuarium ukuran 40x30x30 cm 3 sebanyak 12 buah dengan kapasitas 36 L. Akuarium dibersihkan dan dibilas sampai bersih kemudian dikeringkan selama 1 hari. Pengisian akuarium menggunakan air tawar yang berasal dari air sumur sebanyak 30 L. Ikan nila uji yang digunakan sebanyak 5 ekor per akuarium dengan ukuran 12-16 cm. Ikan diadaptasikan selama 7 hari agar dapat beradaptasi dengan lingkungan baru.

## Pembuatan Bubuk Daun Alpukat
Pembuatan bubuk daun alpukat mengacu pada Sentat et al. (2017) dengan cara daun alpukat dikumpulkan,  disortasi basah, dan  dicuci
dengan air bersih. Daun alpukat dikeringkan dengan cara digulung dan dilindungi dari sinar matahari langsung. Daun alpukat yang sudah kering dihaluskan menggunakan blender dan diayak menggunakan saringan ukuran 40 mesh hingga diperoleh tepung daun alpukat.

## Pembuatan Pakan Uji
Pembuatan pakan uji dilakukan dengan cara menimbang tepung daun alpukat sesuai dosis yang telah ditentukan seperti pada Tabel 1. Pakan komersial yang mengandung protein 23-25% ditimbang sebanyak 1 kg untuk setiap perlakuan. Tepung daun alpukat dimasukkan dalam campuran 5 g tepung Progol sebagai perekat dan 150 mL air, kemudian diaduk rata dan disemprotkan pada pakan komersial sesuai perlakuan. Pakan uji selanjutnya dikeringkan dengan cara dijemur di bawah sinar matahari hingga kering dan disimpan di kulkas pada suhu 4 ⁰ C sampai saat digunakan.

## Pemeliharaan Ikan Uji dan Pengambilan Sampel Darah
Perlakuan pemberian pakan uji pada ikan nila dilakukan selama 28 hari. Pakan diberikan dengan frekuensi dua kali sehari sebanyak 5% dari bobot ikan pada pagi dan sore hari, pukul 08.00 dan 16.00 WIB. Penyiponan akuarium dilakukan setiap hari untuk membersihkan kotoran dan feses. Pengukuran kualitas air berupa suhu dilakukan setiap hari selama pemeliharaan. Pengukuran pH dan oksigen terlarut atau dissolved oxygen (DO) dilakukan seminggu sekali selama penelitian. Pada awal dan akhir penelitian dilakukan pengukuran pertumbuhan dengan menimbang bobot dan panjang masing-masing individu ikan nila dari setiap wadah akuarium percobaan dengan cara sampling sebanyak tiga ekor ikan sampel pada setiap akuarium percobaan. Pengambilan sampel darah ikan dilakukan pada awal dan akhir penelitian dengan cara ikan uji dibius menggunakan minyak cengkeh dengan dosis 1 mL per 8 L air. Darah diambil
dari vena caudalis dengan menggunakan spuit 1 mL yang telah dibasahi dengan EDTA (10%) sebagai antikoagulan. Sampel darah kemudian dimasukkan ke dalam tabung eppendorf untuk pengujian lebih lanjut.

## Pengukuran Hematokrit dan Leukokrit
Pengukuran kadar hematokrit dan leukokrit dilakukan berdasarkan metode Hastuti et al. (2016) dengan cara sampel darah dimasukkan ke dalam tabung kapiler hematokrit sampai batas volume dan ditutup dengan Vitrex kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 1.000 rpm selama 5 menit. Level hematokrit dapat dinyatakan dengan panjang sel darah merah di dalam tabung kapiler hematokrit dibagi dengan total panjang volume darah di dalam tabung dikalikan 100. Sementara level leukokrit dinyatakan dengan panjang sel darah putih di dalam tabung kapiler hematokrit dibagi dengan total panjang volume darah di dalam tabung dikalikan 100. Perhitungan kadar hematokrit dan leukokrit ditentukan dengan rumus 1 dan 2 sebagai berikut:
Hematokrit =
Panjang endapan sel darah dalam tabung x100 .......(1) Panjang total volume darah dalam tabung Leukokrit = Panjang endapan sel darah dalam tabung x100 .......(2)
Panjang total volume darah dalam tabung

## Pengukuran Aktivitas Fagositosis
Pengukuran aktivitas fagositosis dilakukan berdasarkan metode Ode et al . (2023). Sampel darah sebanyak 50 μL dimasukkan ke dalam tabung eppendorf dan ditambahkan 50 μL suspensi bakteri A. hydrophila pada kepadatan (10 8 CFU mL -1 ). Sampel dihomogenisasi dan diinkubasi pada suhu kamar selama 20 menit. Sampel diambil sebanyak 10 μL diteteskan pada kaca preparat dan difiksasi dengan metanol selama 8 menit, kemudian direndam dalam pewarna Giemsa selama 3-4 menit. Selanjutnya kaca preparat dicuci pada air mengalir dan dikering-anginkan serta diamati di bawah mikroskop dengan perbesaran 400X. Aktivitas fagositosis dapat dihitung dengan menggunakan rumus 3:
Fagositosis = Jumlah sel fagosit yang memfagosit bakteri
x100 .....(3)
100 sel fagosit yang diamati

## Perhitungan Tipe Leukosit
Perhitungan jenis leukosit dilakukan berdasarkan metode Maftuch (2018). Kaca objek direndam dalam metanol untuk menghilangkan lemak yang menempel. Sampel darah diteteskan sebanyak 10 μL pada kaca objek kemudian dibuat ulasan darah dengan menggunakan kaca objek lainnya. Ulasan darah selanjutnya difiksasi dengan metanol selama 8 menit, kemudian diangin-anginkan. Preparat darah diwarnai dengan pewarna Giemsa selama 15 menit kemudian dicuci
Tabel 1. Komposisi pakan dengan suplementasi daun alpukat Table 1. Feed composition with supplementation of avocado leaves
Perlakuan Treatments Bubuk daun alpukat (g) Avocado leaves powder (g) Perekat (g) Binder (g) Pakan komersial (g) Commercial feed (g) P0 (0%) 0 g 5 g 1000 g P1 (0,25%) 2,5 g 5 g 1000 g P2 (0,5%) 5 g 5 g 1000 g P3 (0,75%) 7,5 g 5 g 1000 g
dan dibilas dengan air mengalir. Setelah itu dilakukan penghitungan jenis leukosit yang diamati dari 100 jumlah sel yang dihitung dengan menggunakan mikroskop dengan perbesaran 400X.

## Pertumbuhan Bobot dan Panjang Absolut
Pengukuran bobot ikan uji dilakukan pada awal dan akhir penelitian. Rumus 4 digunakan untuk menghitung pertumbuhan bobot absolut adalah sebagai berikut:
W = Wt –Wo .......... ..........................................(4)
Keterangan:
W   = Pertumbuhan bobot absolut (g) Wt  = Berat akhir ikan (g) Wo  = Berat awal ikan (g)
Pengukuran panjang ikan uji dilakukan pada awal dan akhir penelitian. Rumus 5 digunakan untuk menghitung pertumbuhan panjang absolut adalah sebagai berikut:
L = Lt – Lo ..........................................................(5)
Keterangan: L   : Pertambuhan panjang absolut (cm) Lt  : Panjang akhir ikan (cm) Lo : Panjang awal ikan (cm)

## Tingkat Kelangsungan Hidup
Perhitungan tingkat kelangsungan hidup atau survival rate (SR) pada ikan uji dilakukan dari awal hingga akhir penelitian. Parameter SR dapat dihitung dengan rumus 6 sebagai berikut:
SR = Nt x100 .........................................(6) No
Keterangan: SR  = Tingkat kelangsungan hidup (%) Nt  = Jumlah ikan pada akhir penelitian (ekor) No = Jumlah ikan pada awal penelitian (ekor)

## Kualitas Air
Parameter kualitas air yang diukur pada penelitian ini meliputi suhu, pH, dan DO. Pengukuran kualitas suhu dilakukan setiap hari dengan menggunakan termometer. Pengukuran pH dan DO dilakukan seminggu sekali masing-masing dengan menggunakan pH paper dan DO meter .

## Analisis Data
Data hasil penelitian terdiri atas kadar hematokrit (perbandingan jumlah sel darah merah dengan volume darah), leukokrit (persentase volume leukosit di dalam volume darah), aktivitas fagositosis, diferensiasi leukosit, pertumbuhan, kelangsungan hidup, dan kualitas air. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan SPSS 25 dengan analysis of variance (ANOVA). Jika hasil menunjukkan berbeda nyata atau berbeda sangat nyata, dilanjutkan dengan Uji Duncan untuk membandingkan nilai antar perlakuan.
Budidaya hewan uji yaitu ikan nila dalam studi ini dilakukan dengan mengikuti standar secara nasional yang berlaku, yaitu SNI pembesaran nila (SNI 7550.2009).

## HASIL DAN BAHASAN

## Hematokrit
Pengukuran level hematokrit pada darah ikan nila dilakukan sebelum dan sesudah ikan diberi perlakuan suplementasi bubuk daun alpukat dalam pakan. Hematokrit merupakan nilai perbandingan antara volume sel darah merah dan plasma darah yang digunakan sebagai indikator untuk mengetahui kondisi kesehatan ikan (Hastuti et al. , 2016). Hasil pengukuran level hematokrit dapat dilihat pada Gambar 1.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan suplementasi daun alpukat pada pakan ikan nila berpengaruh nyata terhadap kadar hematokrit darah dengan nilai hematokrit
tertinggi terdapat pada perlakuan P2 dengan nilai sebesar 33,69%, sedangkan nilai terendah pada perlakuan P0 sebesar 30,28%. Berdasarkan hasil analisis uji one-way ANOVA diperoleh hasil bahwa suplementasi bubuk daun alpukat pada pakan memberikan pengaruh nyata (P<0,05) terhadap kadar hematokrit ikan nila uji. Ikan yang diberi pakan tambahan bubuk daun alpukat mempunyai kadar hematokrit lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan kontrol. Kadar hematokrit pada seluruh perlakuan masih tergolong normal. Maftuch (2018) menyatakan bahwa kisaran normal hematokrit pada ikan nila adalah 20,49-38,76%. Sementara menurut Prasetio et al. (2017), ikan air tawar dikatakan sehat apabila kadar hematokritnya berkisar antara 22-60%. Selanjutnya dikatakan bahwa nilai hematokrit ikan di bawah 22% menunjukkan ikan mengalami anemia dan kemungkinan mengalami infeksi penyakit bakteri, kekurangan pakan, rendahnya kandungan protein pakan, dan kekurangan vitamin.  Sebaliknya apabila nilai hematokrit ikan lebih besar dari 60% menandakan bahwa ikan dalam keadaan stres. Menurut Sani (2014), kadar hematokrit pada ikan bervariasi
dipengaruhi oleh nutrisi, jenis kelamin, umur, ukuran tubuh, dan masa pemijahan. Osman et al. (2018) berpendapat bahwa nilai kadar hematokrit erat kaitannya dengan nilai kadar hemaglobin dan sel darah merah, semakin rendah jumlah eritrosit, maka semakin rendah pula kadar hematokrit dalam darah.
Peningkatan nilai hematokrit setelah suplementasi bubuk daun alpukat ke dalam pakan disebabkan karena daun alpukat mengandung senyawa seperti flavonoid dan tanin yang mampu mengaktifkan sel imun pada ikan. Ridwan et al. (2020) menyatakan bahwa flavonoid dapat meningkatkan kerja organ- organ penghasil darah sehingga produksi darah dapat ditingkatkan. Sementara Wahyono et al. (2023) melaporkan bahwa senyawa flavonoid, tanin, dan vitamin C dapat bekerja sebagai antioksidan dalam menetralisasi radikal bebas dan berperan dalam proses perbaikan struktur sel darah. Selanjutnya dikatakan bahwa senyawa fitokimia tersebut dapat merangsang kinerja organ yang memproduksi darah seperti ginjal untuk meningkatkan produksi eritrosit dalam darah sehingga akan berdampak pada meningkatknya level hematokrit.
Gambar 1. Hematokrit darah ikan nila dengan penambahan tepung daun alpukat pada pakan. Huruf yang berbeda menyatakan perbedaan pengaruh antarperlakuan (P<0,05)
Figure 1. Hematocrit levels in the blood of tilapia fed with feed-supplemented avocado leaves powder. Different letters indicate significant differences among treatments (P<0,05)

## Leukokrit
Hasil pengukuran leukokrit pada ikan nila yang diberikan pakan dengan suplementasi daun alpukat dapat dilihat pada Gambar 2. Level leukokrit tertinggi didapatkan pada perlakuan P3 dengan nilai sebesar 2,44%, sedangkan kadar leukokrit terendah pada P0 sebesar 2,03%. Level leukokrit darah ikan nila pada penelitian ini masih dalam kisaran normal sesuai dengan laporan Riauwaty & Syawal (2016) yang menyatakan bahwa level leukokrit pada ikan nila berkisar antara 1,78-3,10%. Berdasarkan hasil analisis uji one-way ANOVA diperoleh hasil bahwa pemberian pakan yang mengandung bubuk daun alpukat memberikan pengaruh nyata (P<0,05) terhadap leukokrit darah ikan uji. Ikan yang diberi pakan dengan suplementasi bubuk daun alpukat memiliki leukokrit yang lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan kontrol.
Leukokrit merupakan persentase volume leukosit di dalam volume darah, sehingga peningkatan jumlah leukosit akan meningkatkan level leukokrit.  Meningkatnya jumlah leukosit merupakan salah satu parameter respons imun (Suseno et al. , 2022). Leukosit merupakan salah satu komponen darah yang berfungsi sebagai pertahanan non-spesifik yang akan melokalisasi dan mengeliminasi patogen melalui proses fagositosis. Kadar leukosit dan leukokrit darah dapat bervariasi dipengaruhi oleh jenis ikan, suhu, dan musim serta adanya infeksi. Apabila ikan terinfeksi oleh suatu patogen tertentu maka akan terjadi peningkatan atau penurunan jumlah total leukosit (Riauwaty & Syawal, 2016).
Menurut Prasetio et al. (2017), leukosit berfungsi dalam sistem imun ikan yang melindungi tubuh terhadap kuman-kuman penyakit yang menyerang tubuh dengan cara fagositosis dan menghasilkan antibodi. Sebagai tambahan Syawal et al. (2021) menyatakan bahwa peningkatan sel leukosit merupakan refleksi keberhasilan sistem imunitas ikan dalam mengembangkan respons imunitas seluler (kekebalan non- spesifik) yang memicu respons kekebalan.
Kandungan flavonoid dalam daun alpukat dapat berfungsi sebagai imunomodulator yang dapat memengaruhi kualitas dan intensitas respons imun. Flavonoid dapat merangsang sistem imun dengan cara mengirimkan sinyal secara intraseluler pada reseptor sel sehingga kinerja sel lebih aktif. Mekanisme kerja flavonoid dalam memacu sistem imun adalah mempercepat aktivasi leukosit dan makrofag sehingga proses fagositosis terhadap benda asing dapat dilakukan dalam waktu yang cepat (Payung & Manoppo, 2015). Bahan aktif yang terkandung dalam daun alpukat seperti saponin, tanin, dan flavonoid memiliki peranan dalam meningkatkan sistem kekebalan ikan terhadap serangan penyakit. Saponin diketahui memiliki peranan sebagai antimikroba yang dapat meningkatkan kekebalan tubuh sehingga tahan terhadap infeksi penyakit dan dapat melancarkan sistem pencernaan. Flavonoid berfungsi sebagai antioksidan yang dapat menjaga sistem imun tubuh. Sementara itu tanin memiliki sifat antiseptik sehingga memiliki efek yang baik pada saluran pencernaan (Veronica et al. , 2021).

## Diferensial Leukosit
Leukosit terdiri atas limfosit, monosit, basofil, neutrofil, dan eosinofil yang merupakan komponen darah yang berfungsi sebagai sistem pertahanan tubuh (Prasetio et al. , 2017). Dalam penelitian ini, perhitungan diferensial leukosit dilakukan untuk mengetahui persentase limfosit, monosit, dan neutrofil darah ikan nila uji. Hasil perhitungan diferensial leukosit selama penelitian dapat dilihat pada Tabel 2. Kadar limfosit darah ikan nila setelah perlakuan menunjukkan hasil tertinggi pada perlakuan P3 dengan nilai sebesar 74%, dan terendah pada P0 sebesar 65%. Berdasarkan hasil analisis uji one-way ANOVA diperoleh hasil bahwa suplementasi bubuk daun alpukat pada pakan memberikan pengaruh nyata (P<0,05) terhadap nilai limfosit. Nilai limfosit pada semua perlakuan masih berada pada kisaran normal yaitu antara 65-74%. Hal ini sesuai dengan pendapat Riauwaty & Syawal (2016)
yang menyatakan bahwa bahwa persentase limfosit ikan nila normalnya berkisar antara 60-80%. Meningkatnya limfosit pada ikan uji dikarenakan tanaman alpukat mengandung senyawa aktif fitokimia yaitu flavonoid yang bersifat antioksidan yang dapat meningkatkan fungsi imun dengan mencegah terjadinya kerusakan sel dan memperkuat kapasitas sistem kekebalan melalui mekanisme kerja
enzim dalam antioksidan. Selanjutnya dikatakan bahwa flavonoid yang terkandung dalam tanaman berperan dalam pengaturan sitokin seperti interleukin dan interferon yang berperan sebagai biokatalis dalam pembentukan sel darah putih sebagai bagian dari sistem kekebalan non-spesifik (Nhu et al. , 2022).
Limfosit merupakan jenis sel darah putih
Gambar 2. Leukokrit darah ikan nila dengan penambahan tepung daun alpukat pada pakan. Perbedaan huruf mengindikasikan perbedaan pengaruh antarperlakuan (P<0,05)
Figure 2. Leukocrit levels in the blood of tilapia fed with feed-supplemented avocado leaves powder. Different letters indicate significant differences among treatments (P<0,05)

## Tabel 2. Jumlah limfosit, monosit, dan neutrofil darah ikan nila yang diberi suplementasi tepung daun alpukat
Table 2. Lymphocyte, monocyte, and neutrophile counts of tilapia fed with feed-supplemented avocado leaves powder
Perlakuan Treatments Sebelum treatment Before treatment Setelah treatment After treatment Limfosit (%) Lymphocyte (%) Monosit Monocyte (%) Neutrofil Neutrophile (%) Limfosit Lymphocyte (%) Monosit Monocyte (%) Neutrofil Neutrophile (%) P0 (0%) 66 ± 2,51 12 ± 1,52 21 ± 2,08 65 ± 2,64 a 12 ± 2,08 22 ± 1,52 P1 (0,25%) 67 ± 1,00 13 ± 1,52 19 ± 1,52 66 ± 2,64 a 12 ± 0,57 21 ± 2,08 P2 (0,5%) 65 ± 3,60 14 ± 2,08 20 ± 1,52 70 ± 4,00 ab 11 ± 1,52 19 ± 2,51 P3 (0,75) 68 ± 4,00 13 ± 2,51 18 ± 1,52 74 ± 2,30 b 10 ± 1,52 15 ± 1,52
Keterangan: P0 (pakan tanpa suplementasi daun alpukat); P1 (pakan dengan suplementasi daun apukat 0,25% kg -1 pakan);  P2 (pakan dengan suplementasi tepung daun alpukat 0,5% kg -1 pakan); dan P3 (pakan dengan suplementasi tepung daun alpukat 0,75% kg -1 pakan).  Huruf yang berbeda pada kolom yang sama menyatakan perbedaan pengaruh antarperlakuan (P<0,05)
Note: P0 (diet without avocado leaves); P1 (diet with avocado leaves supplementation at 0.25% kg -1 feed); P2 (diet with avocado leaves supplementation at 0.5% kg -1 feed); and P3 (diet with avocado leaves supplementation at 0.75 kg -1 feed) . Different superscripts in the same column indicate significant differences among treatments (P<0.05)
yang paling banyak ditemukan, sementara neutrofil dan monosit sedikit ditemukan. Limfosit memegang peran penting dalam sistem imun spesifik dan terdiri dari sel B dan sel T serta natural killer (NK) (Ode et al. , 2023). Harpeni et al . (2015) menyatakan bahwa mekanisme kerja limfosit dalam sistem imun adalah menyediakan zat imun sebagai pertahanan tubuh dengan cara mengenali antigen melalui reseptor spesifik pada membran sel. Adanya sel reseptor spesifik memungkinkan sel T lebih cepat mengenali antigen yang ada sehingga langsung memberikan reaksi imun dan merangsang sel B untuk mengeluarkan antibodi. Imunostimulasi akan merangsang proses produksi lisozim dan komplemen yang akan mengaktifkan limfosit B untuk berdiferensiasi sehingga lebih aktif memproduksi antibodi spesifik. Utami et al. (2013) mengatakan penurunan jumlah limfosit dalam darah terjadi karena sebagian besar limfosit ditarik dari sistem peredaran darah dan bersaing ke jaringan tempat terjadinya peradangan.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan tepung daun alpukat pada pakan tidak berpengaruh nyata terhadap jumlah monosit darah ikan uji (P>0,05). Nilai monosit ikan nila dalam penelitian ini berkisar antara 10-12%, nilai tersebut dapat dikatakan normal walaupun agak rendah sesuai dengan pendapat Utami et al. (2013) yang menyatakan bahwa nilai monosit ikan nila normal adalah sebesar 14,13%. Sementara itu Harpeni et al . (2015) berpendapat bahwa monosit banyak ditemukan pada area peradangan atau infeksi. Monosit akan meningkat jumlahnya jika terdapat infeksi bakteri (Utami et al. , 2013). Sebagai tambahan Riauwaty & Syawal (2016), menyatakan bahwa monosit berfungsi memfagosit benda-benda asing termasuk agen penyakit dan memiliki kemampuan memfagosit lebih besar daripada neutrofil.  Monosit berperan sebagai makrofag dalam memakan benda asing yang masuk ke dalam tubuh serta memberikan informasi serangan penyakit pada leukosit. Makrofag menjalankan fungsi penting dalam kekebalan non-spesifik melalui proses fagositosis untuk
mengeliminasi patogen dan selanjutnya mensekresi berbagai sitokin seperti IL-4, IL- 6, dan IL-12 untuk memfasilitasi produksi dan pematangan sel T. Han et al. (2022) melaporkan bahwa flavonoid dapat mengatur fungsi makrofag pada tikus secara in vitro . Neutrofil merupakan bagian dari leukosit yang berperan dalam mekanisme pertahanan tubuh. Aktivitas neutrofil dalam menyerang antigen yang masuk ke dalam tubuh dilakukan melalui proses fagositosis (Utami et al. , 2013). Hasil penelitian menunjukkan bahwa neutrofil tertinggi ditemukan pada perlakuan P0 yaitu sebesar 22% dan terendah pada perlakuan P3 sebesar 15%. Nilai tersebut tergolong normal pada ikan nila sesuai dengan pendapat  Utami et al. (2013) yang menyatakan nilai neutrofil ikan nila normal sebesar 22,73%. Neutrofil melindungi tubuh dari infeksi bakteri melalui sekresi enzim proteolitik dan lisozim untuk menghancurkan bakteri (Ode et al. , 2023). Hartika et al. (2014) mengatakan bahwa rendahnya nilai neutrofil menunjukkan tidak adanya serangan mikroorganisme sehingga neutrofil belum banyak diproduksi oleh tubuh ikan, sementara peningkatan jumlah neutrofil merupakan akibat dari mekanisme imun yang bekerja sebagai respons terhadap infeksi di dalam tubuh serta menunjukkan peningkatan aktivitas pengumpulan makrofag di tempat infeksi, sehingga makrofag akan lebih mudah menghancurkan partikel asing. Han et al. (2022) menyatakan bahwa flavonoid yang terkandung dalam tumbuhan mampu meningkatkan fungsi neutrofil.

## Aktivitas Fagositosis
Aktivitas fagositosis merupakan reaksi pertahanan non-spesifik yang berperan dalam menghadapi serangan patogen. Hasil pengukuran aktivitas fagositosis ikan nila dalam penelitian ini dapat dilihat pada Gambar 3. Berdasarkan hasil penelitian diketahui bahwa aktivitas fagositosis tertinggi ditemukan pada perlakuan P3 dengan nilai sebesar 72%, disusul perlakuan P2 sebesar 58%, sedangkan nilai terendah pada perlakuan P1 sebesar 42%, dan
P0 sebesar 40%. Berdasarkan hasil analisis uji one-way ANOVA diketahui bahwa suplementasi bubuk daun alpukat dalam pakan memberikan pengaruh nyata (P<0,05) terhadap aktivitas fagositosis. Ikan yang diberi perlakuan suplementasi bubuk daun alpukat menunjukkan aktivitas fagositosis lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan kontrol. Nursida & Putri (2020) menyatakan bahwa aktivitas fagositosis merupakan suatu proses predasi benda asing yang masuk ke dalam tubuh yang terlihat dengan teknik pewarnaan bakteri yang disimpan dalam neutrofil. Sel yang mengalami proses fagositosis ditandai dengan adanya bakteri yang menempel pada permukaan sel fagosit atau terdapat pada sitoplasma sel fagosit. Utami et al. (2013) berpendapat bahwa aktivitas fagositosis merupakan pertahanan pertama respons seluler yang dilakukan oleh monosit (makrofag) dan granulosit (neutrofil). Limfosit yang teraktivasi akan berdiferensiasi dari sel kognitif yang mengenali antigen menjadi sel efektor yang berfungsi membuang antigen. Sel T-sitolitik yang terdiferensiasi memiliki lebih banyak butiran sitoplasma yang mengandung protein yang berfungsi untuk melisiskan sel target. Limfosit B berdiferensiasi menjadi sel plasma penghasil antibodi.
Menurut Wahyono et al. (2023), peningkatan aktivitas fagositosis mengindikasikan peningkatan jumlah leukosit. Kandungan antioksidan flavonoid dalam daun alpukat diduga dapat meningkatkan performa sistem imun termasuk aktivitas fagositosis ikan nila. Peningkatan aktivitas fagositosis disebabkan karena flavonid berperan dalam limfokin yang diproduksi oleh sel T dan akan menstimulasi sel fagosit untuk melakukan respons (Utami et al. , 2013). Antioksidan dari flavonoid dapat meningkatkan aktivitas fagositosis yang merupakan respons imun non- spesifik. Mekanisme antioksidan dari flavonoid dalam meningkatkan aktivitas fagositosis dengan cara menghambat pelepasan oksigen dan radikal bebas. Wahyono et al. (2023) menambahkan tanin juga merupakan senyawa fitokimia yang banyak terkandung dalam bahan pakan asal tumbuhan. Tanin dapat menstimulasi aktivitas fagositosis sel sebagaimana polifenol dan flavonoid. Tanin dan flavonoid bersifat merusak dinding sel bakteri dan memudahkan sel fagosit untuk melakukan fungsinya dalam memfagosit agen penyakit melalui mekanisme opsonin. Opsonin merupakan bahan yang berfungsi untuk meningkatkan aktivitas fagositosis.
Gambar 3. Aktivitas fagositosis darah ikan nila dengan suplementasi tepung daun alpukat pada pakan. Huruf yang berbeda menyatakan perbedaan pengaruh antarperlakuan (P<0.05)
Figure 3. Phagocytic activity in the blood of tilapia fed with feed-supplemented avocado leaves powder. Different superscripts indicate significant differences among treatments (P<0.05)

## Pertumbuhan Bobot dan Panjang Mutlak
Pertumbuhan mutlak diperoleh dari hasil pengurangan bobot akhir ikan dengan bobot awal ikan. Pertumbuhan panjang  mutlak adalah total panjang ikan di akhir penelitian dikurangi total panjang ikan di awal. Hasil pertumbuhan bobot dan panjang mutlak selama penelitian dapat dilihat pada Gambar 4 dan 5.
Berdasarkan hasil analisis uji one-way ANOVA diperoleh hasil bahwa suplementasi bubuk daun alpukat pada pakan tidak memberikan pengaruh (P>0,05) terhadap pertumbuhan bobot dan panjang absolut ikan nila. Hal ini dikarenakan kandungan yang terdapat pada daun alpukat tidak mampu memenuhi kebutuhan protein dan nutrisi ikan. Anggraeni dan Abdulgani (2013) berpendapat

## Gambar 4. Pertumbuhan bobot absolut ikan nila dengan pakan yang disuplementasi tepung daun alpukat
Figure 4. Absolute weight growth of tilapia fed with feed-supplemented avocado leaves powder
Gambar 5. Pertumbuhan panjang mutlak ikan nila dengan pakan yang disuplementasi tepung daun alpukat
Figure 5. Absolute length growth of tilapia with diet-supplemented avocado leaves powder
Gambar 6. Kelangsungan hidup ikan nila yang diberi pakan yang disuplementasi tepung daun alpukat Figure 6. Survival rate of tilapia fed with a diet supplemented with avocado leaves powder
bahwa pertumbuhan ikan erat kaitannya dengan ketersediaan protein dalam pakan. Protein digunakan sebagai sumber energi bagi ikan dan merupakan zat gizi yang dibutuhkan ikan untuk pertumbuhannya. Selain itu adanya kandungan bahan antinutrisi dalam tumbuhan yang ditambahkan dalam pakan ikan dapat mengganggu pertumbuhan ikan. Hal ini sebagaimana yang dilaporkan oleh Safrida et al . (2021)  bahwa kandungan tanin dalam bahan pakan dapat menekan pertumbuhan hewan ternak disebabkan tanin yang dapat berikatan dengan protein dan menurunkan daya cerna protein. Nhu et al. 2022 menambahkan bahwa bahan pakan yang berasal dari tumbuhan selain mengandung nilai nutrisi tetapi juga mengandung bahan antinutrisi. Bahan antinutrisi tersebut di antaranya adalah senyawa polifenol seperti flavonoid, senyawa fenolik seperti tanin, dan senyawa terpenoid seperti saponin. Keberadaan senyawa ini dapat menghambat aktivitas enzim pencernaan sehingga dapat menghambat pertumbuhan dan menurunkan survival ikan. Bahan antinutrisi dapat memengaruhi efisiensi pakan dan pencernaan ikan yang menyebabkan penurunan dalam mekanisme penyerapan nutrisi (Nhu et al. , 2022).

## Kelangsungan Hidup
Menurut Iskandar dan Elrifadah (2015), survival rate (SR) adalah persentase ikan uji yang hidup pada akhir pemeliharaan dari jumlah ikan uji yang ditebar pada saat pemeliharaan dalam suatu wadah. Hasil SR selama penelitian dapat dilihat pada Gambar 6.
Berdasarkan hasil analisis uji one-way ANOVA diketahui bahwa suplementasi bubuk daun alpukat pada pakan tidak memberikan pengaruh (P>0,05) terhadap kelangsungan hidup. Hal ini menunjukkan kandungan racun pada bubuk daun alpukat tidak membahayakan tubuh ikan tetapi menghambat pertumbuhan ikan. Iskandar dan Elrifadah (2015) menyatakan bahwa kelangsungan hidup ikan nila sangat ditentukan oleh pakan dan kondisi lingkungan. Pemberian pakan dengan kualitas dan kuantitas yang cukup serta kondisi lingkungan yang baik dapat menunjang kelangsungan hidup ikan nila.

## Kualitas Air
Kualitas air merupakan faktor yang sangat penting dan berpengaruh dalam pertumbuhan dan kelangsungan hidup ikan. Kualitas air yang diukur dalam penelitian ini meliputi suhu, pH, dan DO. Hasil pengukuran kualitas air selama pemeliharaan masih berada pada kisaran normal bagi kehidupan ikan yang disajikan pada Tabel 3.
Parameter kualitas air dari hasil penelitian menunjukkan suhu berkisar antara 25-28 ⁰ C, pH pada kisaran 6-8, dan DO 4,5-5 ppm. Kualitas air selama penelitian masih sesuai dengan SNI 7550:2009 yaitu oksigen terlarut optimal untuk pembesaran ikan nila adalah > 3 mg L -1 , suhu optimal dalam pembesaran ikan nila adalah sekitar 25-32°C, dan pH optimal untuk kegiatan pembesaran ikan nila adalah 6,5-8,5.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa suplementasi daun alpukat pada pakan memberikan pengaruh nyata terhadap kadar hematokrit, leukokrit, aktivitas fagositosis, dan keragaman leukosit. Kadar hematokrit terbaik terdapat pada perlakuan P2 (dosis 0,5% daun alpukat dalam pakan), kadar leukosit, aktivitas fagositosis, limfosit, monosit, dan neutrofil paling baik terdapat pada perlakuan P3 (dosis 0,75%). Daun alpukat memiliki potensi dalam meningkatkan kekebalan bawaan pada ikan nila. Untuk meningkatkan pertumbuhan disarankan agar daun alpukat dapat difermentasi terlebih dahulu untuk menurunkan zat antinutrisi yang terkandung di dalamnya.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih penulis ucapkan kepada Rektor Universitas Muhammadiyah Malang beserta stafnya. Ucapan terima kasih juga diberikan kepada Dekan Fakultas Pertanian Peternakan yang telah memberikan pendanaan dalam penelitian ini lewat skema Block Grant Fakultas.

## DAFTAR ACUAN
Anggorowati, D. A., Priandini, G., & Thufail. (2016). Potensi daun alpukat ( Persea americana Miller) sebagai minuman teh herbal kaya antioksidan. Industri Inovatif: Jurnal Teknik Industri , 6 (1), 1-7. https://doi. org/10.36040/industri.v13i2
Anggraeni, N. M., & Abdulgani, N. (2013). Pengaruh pemberian pakan alami dan pakan buatan terhadap pertumbuhan ikan betutu ( Oxyeleotris marmorata ) skala laboratorium. Jurnal Sains dan Seni ITS ,
2 (2), E197-E201. https://doi.org/10.12962/
j23373520.v2i2.4067
Perlakuan Treatments Parameter kualitas air Water quality parameters Suhu ( ⁰ C)
Temperature ( ⁰ C) pH Oksigen terlarut (mg L -1 ) Dissolved oxygen (mg L -1 ) P0 (0%) 25-28 6-8 4,5-5 P1 (0,25%) 25-28 6-8 4,5-5 P2 (0,5%) 25-28 6-8 4,5-5 P3 (0,75%) 25-28 6-8 4,5-5 SNI 7550.2009 (Badan Standardisasi Nasional, 2009) 25-32 6,5-8,5 >3

## Tabel 3. Kualitas air media pemeliharaan ikan nila yang diberi suplementasi tepung daun alpukat
Table 3. Water quality of rearing media of tilapia feed with feed-supplemented avocado leaves powder
Keterangan: P0 (pakan tanpa suplementasi daun alpukat); P1 (pakan dengan suplementasi daun apukat 0,25% kg -1 pakan);  P2 (pakan dengan suplementasi tepung daun alpukat 0,5% kg -1 pakan); dan P3 (pakan dengan suplementasi tepung daun alpukat 0,75% kg -1 pakan)
Note: P0 (diet without avocado leaves); P1 (diet with avocado leaves supplementation at 0.25% kg -1 feed); P2 (diet with avocado leaves supplementation at 0.5% kg -1 feed); and P3 (diet with avocado leaves supplementation at 0.75 kg -1 feed)
Aziz, R., & Barades, E. (2021). Adaptasi benih ikan nila ( Orechromis niloticus ) pada kenaikan salinitas yang berbeda. Jurnal Perikanan , 11 (2), 251-258. https://doi. org/10.29303/jp.v11i2.262
Badan Standardisasi Nasional. (2009). SNI 7550.2009. Kelas pembesaran ikan nila (Oreochromis niloticus Bleeker) di kolam air tenang . Badan Standardisasi Nasional
Ernawati, & Sari, K. (2015). Senyawa kimia dan aktivitas antibakteri ekstrak kulit alpukat ( Persea americana Mill) terhadap bakteri Vibrio alginolyticus. Jurnal Studi Kedokteran Hewan , 3 (2), 203-211. https://dx.doi. org/10.35508/jkv.v3i2.1043
Han, L., Fu, Q., Deng, C., Luo, L., Xiang, T., & Zhao, H.  (2022). Immunomodulatory potential of flavonoids for the treatment of autoimmune diseases and tumour. Scandinavian  Journal of Immunology , 95, e13106. https://doi.org/10.1111/sji.1310
Harpeni, E. (2015). Kajian Ulva sp . sebagai suplemen pakan terhadap performa pertumbuhan dan respon imun non spesifik ikan nila ( Oreochromis niloticus ). Jurnal Maspari , 7 (2), 65-84. https://doi. org/10.56064/maspari.v7i2.2486
Hartika, R., Mustahal, & Putra, A. N. (2014). Gambaran darah ikan nila ( Oreochromis niloticus ) dengan penambahan dosis prebiotik yang berbeda dalam pakan. Jurnal Periakanan dan Kelautan , 4 (1), 259-267. http://dx.doi.org/10.33512/jpk.v4i4.174
Hastuti, S. D., Munro, J., & Pyecroft.  (2016). Growth and non-specific immune responses of Asian seabass ( Lates calcarifer ) fed on commercial and mixed pure nucleotide diet. Aquacultura Indonesiana ,
17 (2), 69-74. http://dx.doi.org/10.21534/ ai.v17i2.59
Iskandar, R. & Elrifadah (2015). Pertumbuhan dan efisiensi pakan ikan nila ( Oreochromis niloticus ) yang diberi pakan buatan berbasis kiambang. Ziraa’ah Majalah Ilmu Pertanian , 4 (1). http:// dx.doi.org/10.31602/zmip.v40i1.93
Maftuch. (2018). Hematological analysis of Nile tilapia ( Oreochromis niloticus ) and striped catfish ( Pangasius hypophthalmus ) using hematology analyzer tool software at Fish Breeding Center Jojogan, Tuban, East Java. Research Journal of Life Science ,
5 (2), 107-115. https://doi.org/10.21776/ ub.rjls.2018.005.02.4
Nhu, P. N., Hang, B. T. B., Phuong, N. T., Kestemont P., & Huong D. T. T. (2022) Effects of plant extracts on selected haematological parameters, digestive enzymes, and growth performance of striped catfish, Pangasianodon hypophthalmus (Sauvage, 1878) fingerlings. AACL Bioflux , 15 (4), 1790-1806.
Nursida, N. F., & Putri, T. W. (2020). Pengaruh daun ubi jalar ( Ipomoea batatas ) terhadap profil darah dan sintasan ikan nila ( Oreochromis niloticus ). https://doi. org/10.35724/mfmj.v3i1.3169
Ode, I., Sukenda, Widanarni, Wahjuningrum, D., Yuhana, M. & Setiawati, M. (2023). Effect of clove powder Syzygium aromaticum supplementation on growth and health status of cantang grouper ( Epinephelus fuscoguttatus ♀ × Epinephelus lanceolatus
♂ ) in floating net cage. Jurnal Perikanan Universitas Gadjah Mada , 25 (1), 1-7. https:// doi.org/10.22146/jfs.78348
Patala, R., Dewi, N. P., & Pasaribu, M. H. (2020). Efektivitas ekstrak etanol biji alpukat ( Persea americana Mill.) terhadap kadar glukosa darah tikus putih jantan ( Rattus novergicus ) model hiperkoleleolemia- diabetes. Jurnal Farmasi Galenika (e-Journal) ,
6 (1), 7-13. https://doi.org/10.22487/
j24428744.2020.v6.i1.13929
Payung, C. N., & Manoppo, H. (2015). Peningkatan respon kebal non spesifik dan pertumbuhan ikan nila ( Oreochromis niloticus ) melalui pemberian jahe, Zingiber officinale . e-Journal Budidaya Perairan ,
3 (1), 11-18. https://doi.org/10.35800/ bdp.3.1.2015.6925
Prasetio, E. Fakhrudin M., & Hasan, H. (2017). Pengaruh serbuk lidah buaya ( Aloe vera ) terhadap hematologi ikan jelawat ( Leptobarbus hoevenii ) yang diuji tantang bakteri Aeromonas hydrophila . Jurnal Ruaya ,
5 (2), 44-54. https://doi.org/10.29406/ jr.v5i2.721
Riauwaty, M. & Syawal, H. (2016). Gambaran darah ikan nila ( Oreochromis niloticus ) di kolam budidaya di Kecamatan Marpoyan Damai Kota Pekanbaru. Jurnal Perikanan dan Kelautan , 21 (1), 1-6. https://doi. org/10.31258/jpk.21.1.1-6
Ridwan, M., Lukistyowati, I., & Syawal, H. (2020). Hematologi eritrosit ikan patin siam ( Pangasius hypophthalmus ) yang diberi pakan dengan penambahan larutan biji mangga harumanis ( Mangifera indica L.) Jurnal Ruaya , 8 (2), 114-121. https://doi. org/10.29406/jr.v8i2.2120
Safrida, S. , Wasilah, N., & Supriatno, S. (2021).
Effect of diet combination of avocado Persea americana and pumpkin Cucurbita moschata on Osphronemus gouramy Lac. IOP Conference Series: Earth and Enviromental Science , 674 , 012109. https://doi. org/10.1088/1755-1315/674/1/012109
Sani, A., Dahlia, Amrullah, & Yuliadi. (2014).
Pengaruh penambahan fukoidan pada pakan terhadap respon imun non spesifik induk ikan nila ( Oreochromis niloticus ).
Jurnal Tropis Galung , 3 (3), 159-170. https:// doi.org/10.31850/jgt.v3i3.89
Sentat, T., & Permatasari, R. (2017). Uji aktivitas ekstrak etanol daun alpukat ( Persea americana Mill.) terhadap penyembuhan luka punggung mencit putih jantan ( Mus musculus ). Jurnal Ilmiah Manuntung , 1 (2), 100-106. https://doi. org/10.51352/jim.v1i2.20
Suseno, D. N., Puspitasari, I., & Jayanti, S. (2022). Efektivitas probiotik terhadap efisiensi pakan dan ulas darah ikan komet ( Carassius auratus ). Grouper: Jurnal Ilmiah Perikanan , 13 (2), 184-190. https://doi. org/10.30736/grouper.v13i2.137
Utami, D. T., Prayitno, S. B. Hastuti, S., & Santika, A. (2013). Gambaran parameter hematologis pada ikan nila ( Oreochromis niloticus ) yang diberi vaksin DNA Streptococcus iniae dengan dosis yang berbeda. Journal of Aquaculture Management and Technology , 2 (4), 7-20.
Veronica, D. R., Martaningrum E. T., Agustono, & Lokapitasari, W. P. (2021). The inclusion of moringa leaf extract fermentation in commercial feed to enhance feed conversion ratio and specific growth rate of tambaqui fish, Colossoma macropomum . IOP Conference Series: Earth and Environmental Science , 718 , 012079. https://doi. org/10.1088/1755-1315/718/1/012079
Wahyono, H., Lukistyowati, I., & Riauwaty, M.
(2023). Hematology of Osphronemus goramy fed containing fermented turi ( Sesbania grandiflora ) leaf meal and challenged with Aeromonas hydrophila . Asian Journal of Aquatic Sciences , 6 (3), 317-333. https://doi. org/10.31258/ajoas.6.3.317-333