## VOLATILE FATTY ACIDS

## (VFA) DAN AMONIA (NH 3 ) LITTER AYAM FERMENTASI DENGAN LAMA PERAM YANG BERBEDA SECARA IN VITRO
( In Vitro Volatile Fatty Acids (VFA) And Ammonia (NH 3 ) Litter Chicken Fermentation with Different Period)
Marry Christiyanto, Surono, Fathiyatul Ilmi Munarifdah, dan Cahya Setya Utama
Program Studi S1 Peternakan Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang Jl. Prof. H. Soedarto, S.H, Kota Semarang, Jawa Tengah 50275 *Email: marrychristiyanto@gmail.com

## ABSTRACT
The aim of this study was to examine the effect of different periods of fermentation of chicken litter on in vitro volatile fatty acids (VFA) and ammonia (NH 3 ) concentrations. This study used a completely randomized design (CRD) with 4 treatments and 4 replications. The treatments tested were T0 = fermentation 0 weeks, T1 = fermentation 3 weeks, T2 = fermentation 6 weeks and T3 = fermentation 9 weeks. The parameters observed in the study were the concentration of VFA and NH 3 fermentation litter. The results showed that the concentration of VFA and NH 3 was not significantly affected by the length of ripening, with the average value concentration of VFA total fermented litter ranging from 70 – 85 mM while the concentration of NH 3 in the fermented litter was 18,84 – 23,28 mg/100 ml. The conclusion of the study was that different fermentation times did not affect the concentration of total VFA and NH 3 concentrations.
Keywords: Fermentation, in vitro, Litter, NH 3 , VFA.

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji pengaruh lama peram yang berbeda pada fermentasi litter terhadap konsentrasi volatile fatty acids (VFA) total dan amonia (NH 3 ) secara in vitro . Penelitian menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan dan 4 ulangan. Perlakuan yang diuji adalah T0= lama peram litter ayam fermentasi 0 minggu, T1= lama peram litter ayam fermentasi 3  minggu,  T2=  lama  peram litter ayam fermentasi  6  minggu  dan  T3=  lama  peram litter ayam fermentasi 9 minggu. Parameter yang diamati dalam penelitian adalah konsentrasi VFA dan NH 3 litter fermentasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi VFA total litter dan NH 3 tidak dipengaruhi secara nyata (P>0,05) oleh lama pemeraman, dengan nilai rataan konsentrasi VFA total litter fermentasi berkisar antara 70 – 85 mM sedangkan konsentrasi NH 3 litter fermentasi yaitu 18,84 – 23,28 mg/100 ml. Kesimpulan penelitian adalah lama fermentasi yang berbeda tidak memberikan pengaruh terhadap konsentrasi VFA total dan NH 3 litter ayam.
Kata Kunci : Fermentasi , in vitro , Litter , NH 3 , VFA .

## PENDAHULUAN
Ruminansia  merupakan  salah  satu komoditas  penghasil  protein  hewani  yang potensial  melalui  produknya  berupa  daging dan  susu.  Salah  satu  hambatan  yang  sering terjadi  pada  usaha  peternakan  ruminansia adalah  ketersediaan  hijauan  pakan  yang terbatas (Lestari et al. , 2015). Hal ini disebabkan semakin  sedikitnya  lahan  penanaman  rumput dan  meluasnya  area  pemukiman  penduduk serta cuaca yang tidak menentu menyebabkan
produksi  hijauan  tidak  optimal.  Oleh  karena itu, perlu pakan tambahan seperti bahan pakan sumber protein untuk menunjang produktivitas ruminansia. Bahan pakan sumber protein relatif mahal  dan  harganya  meningkat  setiap  tahun, sehingga  untuk  memenuhi  kebutuhan  pakan ruminansia  perlu  alternatif  pengganti  pakan sumber protein dengan harga yang relatif murah. Salah satu alternatifnya yaitu pemanfaatan litter ayam  broiler. Litter ayam  broiler  merupakan limbah  dari  peternakan  ayam  broiler  yang terdiri  dari  ekskreta  (urin  dan  feses),  bahan
Christiyanto, dkk
alas  tidur  (sekam),  bulu,  pakan  yang  tercecer dan  biomassa  bakteri  ( Chaudhry et  al., 2012). Litter broiler  digunakan  sebagai  bahan  pakan untuk ruminansia didasarkan pada kandungan nutriennya  sebagai  sumber  nitrogen  non protein (NPN) yang cukup tinggi dengan kadar bahan  kering  (BK)  sebesar  61  –  95%  dan  serat 11 – 52% (Lanyasunya et al ., 2006). Litter ayam broiler memiliki jumlah NPN seperti asam urat, purin, dan allantoin yang dapat digunakan oleh mikroba  rumen,  sehingga  cocok  digunakan sebagai  bahan  pakan  alternatif  ruminansia ( Azizi-Shotorkhoft et  al., 2012).  Kandungan nutrien litter broiler yaitu protein kasar (PK) 25 – 50%, total digestible nutrients (TDN) 55 – 60% (Rahimi et al., 2018). Litter broiler mengandung Ca sebesar 2,4%, P 1,8%, K 1,8% (Roothaert dan Matthewman, 1992). Pemanfaatan litter sebagai pakan alternatif ruminansia perlu ditingkatkan kualitasnya  melalui  proses  pengolahan,  antara lain dengan proses fermentasi.
Fermentasi  adalah  proses  pemecahan komponen  kompleks  menjadi  lebih  sederhana (Suningsih et  al., 2019).  Manfaat  fermentasi yaitu  untuk  meningkatkan  nutrien  pakan, meningkatkan nitrogen, palatabilitas, konsumsi dan  kecernaan  pakan  (Hidraningrum et  al., 2011).  Pengolahan  fermentasi  pada litter bertujuan meningkatkan kecernaan serat kasar sehingga produksi VFA meningkat, kandungan nitrogen  (N)  juga  meningkat  dengan  adanya tambahan berupa NBP selama masa fermentasi. Mikrobia  rumen  akan  menghidrolisis  protein dan  NBP  menjadi  peptide  dan  asam  amino yang  selanjutnya  didegradasi  menjadi  NH 3 dalam rumen, sehingga produksi NH 3 juga akan semakin tinggi. NH 3 yang meningkat berfungsi untuk  mengurangi  atau  menghilangkan patogen  seperti  salmonella  atau  zat  beracun pada litter (Joan et al. , 1998). Fermentasi dapat menurunkan  serat  kasar  sehingga  degradasi dalam  rumen  meningkat  akibatnya  kecernaan bahan  organik  meningkat.  Peningkatan kecernaan  bahan  organik  mengakibatkan produksi  VFA  meningkat  (Rahman et  al ., 2019).  Hasil  penelitian Azizi-Shotorkhoft et  al. (2013)  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  VFA pada olahan litter ayam broiler dengan tingkat kandungan molasses yang berbeda sebesar 90,1 –  93,3  mmol/l  sedangkan  konsentrasi  NH 3 sebesar 19,9 – 23, 3 mg/dl. Penelitian Negesse et  al. (2007)  menunjukkan  bahwa performance dari Spansish and Boer × Spanish Doeling yang mengkonsumsi pakan dengan level litter broiler yang  berbeda  menghasilkan  konsentrasi  VFA
sebesar 74,8 – 88,9 Mm dan NH 3 sebesar 7,6 – 16, 1 mg/dl. Tujuan  penelitian  adalah  mengkaji pengaruh litter ayam  yang  difermentasi  pada lama  peram  yang  berbeda  terhadap  kadar VFA  dan  NH 3 dalam  rumen  sapi  secara in vitro .  Manfaat  penelitian  adalah  mendapatkan informasi  mengenai  pemberian  pakan litter terhadap  konsentrasi  VFA  dan  NH 3 di  dalam rumen sapi. Hipotesis dari penelitian ini adalah lama  fermentasi  dapat  mempengaruhi  tingkat konsentrasi VFA dan NH 3 .

## MATERI DAN METODE

## Materi
Materi  penelitian  adalah litter ayam fermentasi  pada  lama  peram  yang  berbeda. Bahan yang digunakan yaitu litter ayam , urea, starter ,  mineral,  tetes,  garam, litter fermentasi, aquades, larutan Mc Dougall, cairan rumen sapi segar, larutan pepsin HCl 0,2%, es batu, larutan H 2 SO 4 15%, larutan NaOH 0,5 N, larutan HCl 0,5 N, larutan indikator PP (Phenol Phtalein 0,1%), larutan  natrium  nitroprusida,  larutan  fenol, larutan  pengoksidasi.  Alat  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah timbangan analitik, tabung  fermentor,  pipet,  waterbath  Memmert dengan  suhu  39  –  40 0 C,  sentrifuge  Hettich Universal  320  R,  enlenmeyer  Duran  250  ml, kompor  listrik,  tabung  suling  khusus,  labu destilasi, tabung leibag dan spektofotometer UV Vis 640 nm.

## Metode
Metode yang digunakan dalam penelitian terdiri  dari  4  tahap  utama  yang  meliputi rancangan  penelitian,  tahap  fermentasi,  tahap pengambilan data dan analisis data.

## Rancangan penelitian
Penelitian menggunakan rancangan acak  lengkap  (RAL)  dengan  4  perlakuan  dan 4  ulangan  yaitu  T0  =  Lama  peram litter ayam fermentasi  0  minggu,  T1  =  Lama  peram litter ayam fermentasi 3 minggu, T2 = Lama peram litter ayam fermentasi  6  minggu,  T3  =  Lama peram litter ayam fermentasi 9 minggu.

## Tahap fermentasi
Fermentasi litter dilaksanakan  sesuai prosedur Natsir et al. (2019). Penelitian diawali dengan  cara litter yang  sudah  dikumpulkan
JITP Vol. 9 No. 2,  2021
dari  16  kandang  kemudian  digabungkan  dan dijemur untuk mendapatkan kadar air kurang dari 14%. Sampel kemudian dibagi menjadi 16 bagian dengan berat masing-masing sebanyak 1 kg dan dihaluskan. Litter yang sudah ditimbang sebanyak 1 kg dituang pada nampan. Molasses ditimbang sebanyak 60 g dan dicampur dalam air  sebanyak  100  ml  dan  selanjutnya  dituang di atas litter . Garam, starter mix culture (bakteri selulolitik, amilolitik, lipolitik dan bakteri asam laktat),  mineral  mix  dan  urea  masing-masing ditimbang  sebanyak  60  g  serta  dicampurkan dan dihomogenkan.

## Tahap pengambilan data
Pengambilan  data  dilakukan  dengan teknik in  vitro dilakukan  dengan  menyerupai kondisi  rumen  yang  sebenarnya,  percobaan ini dilakukan dengan metode Tilley dan Terry (1963). Cairan rumen sapi segar diperoleh dari Rumah  Potong  Hewan  sebagai  inokulum. Masing-masing  sampel  dimasukkan  sebanyak 0,56 gram ke dalam tabung fermentor yang sudah disterilisasi  kemudian  sampel  diberi  larutan Mc Dougall sebanyak 40 ml dan cairan rumen sapi sebanyak 10 ml, selanjutnya ditambahakan gas CO 2 selama 10-20 detik untuk menciptakan kondisi anaerob dan ditutup dengan tutup karet. Kemudian tabung diinkubasi dalam waterbath selama  3  jam  dan  dihentikan  fermentasinya dengan cara diletakkan dindalam air es. Larutan kemudian disentrifuge pada kecepatan 3000 rpm selama 15 menit dan supernatan dapat diambil untuk analisis VFA dan NH 3 . Analisa  VFA  total  dilakukan  dengan metode  destilasi  uap  (General  Laboratory Procedure,  1966).  Produksi  VFA  total  dapat dihitung  dengan  rumus  menurut  Rahayu et al., 2018).  Analisis  Amonia  (NH 3 )  dilakukan dengan  metode  spektrofotometer  (Azizah  dan Humairoh, 2015).

## Analisis data
Data  penelitian  yang  diperoleh  dianalisis dengan  analisis  varians  (ANOVA),  dan  diuji
lanjut  dengan  uji  Duncan  (Steel  dan  Torrie, 1990).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  tentang  VFA  Total  dan NH 3 litter yang difermentasi pada lama peram yang berbeda dapat dilihat pada Tabel 1.

## Konsentrasi VFA Total
Tabel 1. menunjukkan bahwa lama peram yang berbeda berpengaruh tidak nyata (P>0,05) terhadap  konsentrasi  VFA  total litter ayam fermentasi.  Konsentrasi  VFA  total litter ayam fermentasi  secara  berturut-turut  T0,  T1,  T2 dan T3 adalah 75; 82,5; 85 dan 70 mM. Volatile fatty acids merupakan produk akhir fermentasi karbohidrat  dalam  rumen.  Hasil  konsentrasi VFA  total litter ayam  fermentasi  tersebut sudah cukup baik. Sari et al . (2019) menyatakan bahwa konsentrasi VFA yang optimum dalam mendukung  perkembangan  mikrobia  rumen yaitu  sekitar  70  –  150  mM.  Lama  fermentasi litter tidak  berbeda  nyata  pada  kadar  serat kasar (SK) litter perlakuan, sehingga konsentrasi VFA  total  yang  dihasilkan  dari  perombakan SK  oleh  mikroba  rumen  relatif  sama.  Lama fermentasi litter tidak berpengaruh nyata pada konsentrasi  VFA  total  diduga  disebabkan karena  mikroba  selulolitik  yang  ada  dalam starter kurang dominan, sehingga tidak optimal dalam mendegradasi SK. Jumlah SK yang relatif sama  mengakibatkan  konsentrasi  VFA  total tidak berpengaruh nyata. Muslimah et al . (2020) menyatakan  bahwa  serat  kasar  mengandung selulosa  dan  hemiselulosa  yang  dapat  di fermentasi mikroba rumen menjadi VFA. Sandi et  al. (2015)  menambahkan  bahwa  selulosa, pati  dan  hemiselulosa  dalam  pakan  dicerna oleh  mikrobia  rumen  menghasilkan  gula-gula sederhana, gula-gula sederhana akan mengalami glikolisis  menjadi  asam  piruvat  kemudian diubah  menjadi  VFA,  H 2 O,  karbondioksida (CO 2 )  dan  gas  metan  (CH 4 ). Volatile  fatty  acids merupakan  sumber  energi  utama  bagi  ternak
Tabel 1. Pengaruh Umur Panen Berbeda terhadap Kandungan dan Produksi BK dan PK Sorghum Green Fodder Hydroponic Parameter Perlakuan Lama Peram (minggu) T0 T1 T2 T3 VFA (mM) 75 82,5 85 70 NH 3 (mg/100 ml) 23,28 18,84 19,71 22,86
Ket.: T0: Lama peram litter ayam fermentasi 0 minggu; T1:  Lama peram litter ayam fermentasi 3 minggu; T2: Lama peram litter ayam fermentasi 6 minggu ; T3: Lama peram litter ayam fermentasi 9 minggu

## Christiyanto, dkk
ruminansia  dan  sebagai  sumber  kerangka karbon  bagi  pembentukan  protein  mikroba. Konsentrasi  VFA  dapat  dipengaruhi  oleh tingkat fermentabilitas bahan pakan, pH rumen, kecernaan  bahan  pakan,  jumlah  serta  macam bakteri  yang  ada  dalam  rumen.  Hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Rahayu et  al. (2018)  yang menyatakan bahwa faktor yang mempengaruhi konsentrasi VFA antara lain jumlah dan macam mikroba  dalam  rumen,  fermentabilitas  pakan, pH rumen, kecernaan bahan pakan dan jumlah karbohidrat yang mudah larut.
Tinggi  rendahnya  konsentrasi  VFA pada  rumen  dipengaruhi  oleh  bahan  organik yang  terdapat  dalam  litter  ayam  yang  berupa serat  kasar,  BETN,  lemak  dan  protein  kasar. Jumlah  VFA  yang  dihasilkan  menunjukkan kemampuan  pakan  yang  didegradasi  oleh mikrobia rumen. Jena et al . (2020) menyatakan bahwa  semakin  sedikit  produksi  VFA  yang dihasilkan  maka  semakin  sedikit  pula  protein dan karbohidrat yang mudah larut. Rahayu et al., (2018) menambahkan bahwa semakin tinggi konsentrasi  VFA  mengindikasikan  fermentasi semakin  efektif  dan  apabila  konsentrasi  VFA terlalu  tinggi  dapat  berdampak  mengganggu keseimbangan rumen.
Perlakuan T2 memberikan konsentrasi VFA total paling tinggi meskipun tidak berpengaruh nyata pada litter fermentasi dengan lama peram yang  berbeda  diduga  karena  kemampuan mikroba starter dalam  mendegradasi  pakan lebih optimal di minggu ke 6. Peningkatan lama fermentasi litter menyebabkan  meningkatnya kesempatan  mikroba  dari starter untuk melakukan  pertumbuhan,  perkembangan  dan fermentasi,  sehingga  semakin  lama  waktu fermentasi  maka  jumlah  mikroba  semakin banyak  dalam  mendegradasi  substrat.  Hal  ini sesuai dengan pendapat Yuliana dan Chuzaemi (2019) yang menyatakan bahwa semakin lama fermentasi  semakin  banyak  substrat  yang dirombak  oleh  mikroba.  Lama  peram litter ayam fermentasi selama 6 minggu memberikan hasil  VFA  total  terbaik.  Amin et  al. (2015) menyatakan  bahwa  lama  fermentasi  30  hari memberikan  waktu  yang  cukup  bagi  mikroba untuk mendegradasi substrat.
Konsentrasi amonia (NH 3 )
Tabel 1. menunjukkan bahwa lama peram yang berbeda berpengaruh tidak nyata terhadap konsentrasi  NH 3 litter ayam  fermentasi. Konsentrasi  NH 3 litter ayam  fermentasi  secara
berturut-turut  T0,  T1,  T2  dan  T3  adalah  23,28; 18,84;  19,71  dan  22,86  mg/100  ml.  Amonia merupakan  hasil  degradasi  protein  dan non protein  nitrogen (NPN)  yang  masuk  kedalam rumen ruminansia. Lama fermentasi litter pada konsentrasi NH 3 tidak berpengaruh nyata diduga disebabkan  karena  VFA  total  yang  dihasilkan tidak  berpengaruh  nyata,  dengan  kata  lain ketersediaan C untuk sintesis mikroba juga juga relatif sama antar perlakuan. Hal ini berkaitan dengan  kemampuan  mikroba  untuk  tumbuh dan  berkembang,  ketersediaan  C  yang  sama berarti pula jumlah mikroba yang berkembang juga sama. Rafleliawati et al. (2016) menyatakan bahwa  N  merupakan  prekusor  utama  dalam proses sintesis protein mikroba dan C digunakan sebagai  kerangka  karbon  dan  energi.  Amonia dihasilkan dari proses deaminasi atau pelepasan gugus  amina  dari  asam  amino.  Hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Widyawati  (2008)  bahwa asam amino yang berasal dari degradasi protein akan  mengalami  deaminasi  menjadi  amonia, asam  alfa  keto  dan  CO 2 .  Jumlah  bakteri  yang relatif  sama  antar  perlakuan  mengakibatkan kemampuan deaminasi oleh mikroba juga sama sehingga  NH 3 yang  dihasilkan  menjadi  tidak berbeda antar perlakuan.
Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa konsentrasi  NH 3 cenderung  sama  dengan penelitian terdahulu Azizi-Shotorkhoft et al. (2013) yang menyatakan bahwa NH 3 pada pengolahan litter ayam  broiler  dengan  tingkat  kandungan molasses yang  berbeda  yaitu  sebesar  19,9  –  23, 3  mg/dl.  Satter  dan  Slyter  (1974)  menyatakan bahwa konsentrasi NH 3 yang diperlukan untuk perkembangan mikroba rumen berkisar antara 5,0 – 8,0 mg/100 ml. Leng (1980) menambahkan bahwa konsentrasi NH 3 cairan rumen bervariasi antara  1  –  34  mg/100  ml.  Konsentrasi  NH 3 perlakuan  yang  tinggi  diduga  berasal  dari  N ekskreta yang ada di dalam litter ayam. Azizi- Shotorkhoft et al. (2012) menyatakan bahwa litter broiler mengandung NPN yang tinggi sebesar 960 g/kg yang terdiri dari asam urat, purin, dan alantoin  yang  dapat  digunakan  oleh  mikroba rumen.  Rahayu et  al. (2018)  menambahkan bahwa faktor yang mempengaruhi konsentrasi NH 3 antara  lain  jumlah  pakan  dan  kelarutan, lama  inkubasi,  karbohidrat  dalam  pakan  serta pH rumen. Izzatullah et al . (2018) menyatakan bahwa  konsentrasi  NH 3 menunjukkan  tinggi rendahnya  kandungan  protein  kasar  yang dirombak oleh mikroba rumen.
JITP Vol. 9 No. 2,  2021

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa lama fermentasi yang berbeda tidak berpengaruh nyata pada konsentrasi VFA total dan NH 3 .

## Saran
Sebaiknya  perlu  dilakukan  penambahan mikroba selulolitik dalam starter fermentasi.

## Ucapan terimakasih
Ucapan  terima  kasih  kepada  Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat atas  fasilitasnya  dalam  penugasan  kegiatan Penelitian Dasar Direktorat Riset dan Pengabdian Masyarakat  Direktorat  Jenderal  Riset  dan Pengembangan Kementeriaan Riset, Teknologi, dan  Pendidikan  Tinggi  dengan  Nomor:  225  – 67/UN7.6.1/PP/2020 Tanggal 20 Maret 2020.

## DAFTAR PUSTAKA
Amin, M., S. D. Hasan, O. Yanuarianto dan M. Iqbal.  2015.  Pengaruh  lama  fermentasi terhadap  kualitas  jerami  padi  amoniasi yang ditambah probiotik dan Bacillus sp . J. Ilmu dan Teknologi Peternakan Indonesia, 1 (1): 11 – 17.
Azizah,  M  dan  M.  Humairoh.  2015.  Analisis kadar  Amonia  (NH 3 )  dalam  air  sungai Cileungsi. J. Nusa Sylva., 15 (1): 47 – 54.
Azizi-Shotorkhoft,  A.,  Y.  Rouzbehan  dan  H.
Fazaeli. 2012. The influence of the different carbohydrate  sources  on  utilization efficiency  of  processed  broiler  litter  in sheep. J. Lives. Sci., 148: 249-254.
Azizi-Shotorkhoft, A., J. Rezaei dan H. Fazaeli.
2013.  The  effect  of  different  levels  of molasses  on  the  digestibility,  rumen parameters  and  blood  metabolites  in sheep fed processed broiler litter. J. Anim. Feed Sci. Technol., 179: 69-76.
Chaudhry S. M dan Z. Naseer. 2012. Processing and nutritional value of broiler litter as a feed for Buffalo Steers. J. Anim. Plant. Sci., 22 (3): 358-364.
General  Laboratory  Procedure.  1966.  General Laboratory  Procedure.  Department  of Dairy  Science.  University  of  Animal, Butterworths London.
Harahap,  N.,  E.  Mirwandhono  dan  N.  D. Hanafi. 2017. Uji kecernaan bahan kering, bahan organic, kadar NH3 dan VFA pada pelepah  daun  sawit  terolah  pada  sapi secara in vitro . J. Peternakan, 1 (1): 13 – 21.
Hindraningrum, N., M. Bata dan S. A. Santosa. 2011.  Produk  fermentasi  rumen  dan produksi  protein  mikroba  sapi  lokal yang  diberi  pakan  jerami  amoniasi  dan beberapa bahan pakan sumber energi. J. Agribisnis Peternakan, 11 (2): 29 – 34.
Izzatullah, A. Y., Sutrisno dan L. K. Nuswantara. 2018.  Produksi  VFA,  NH 3 dan  protein total  secara in  vitro pada fooder jagung hidroponik  dengan  media  perendaman dan  penggunaan  dosis  pupuk  yang berbeda. J. Ilmu dan Teknologi Peternakan, 6 (1): 13 – 18.
Jena,  K.,  M.  K.  Kleden  dan  I.  Benu.  2020. Kecernaan nutrien dan parameter rumen pakan  konsentrat  yang  mengandung tepung  daun  kersen  sebagai  pengganti jagung  secara in  vitro .  J.  Nukleus Peternakan, 7 (2): 118 – 129.
Joan, S. J., J. H. Kirk, E. R. Atwill dan J. S. Cullor. 1998.  Prevalence  of  selected  microbial pathohens  in  processed  poultry  waste used as dairy cattle feed. J. Poult. Sci., 77: 808 – 811.
Kurniawati, A. 2007. Teknik produksi gas in vitro untuk  evaluasi  pakan  ternak  :  volume produksi gas dan kecernaan bahan pakan. J. Ilmiah Aplikasi Isotop dan Radiasi, 3(1): 40 – 49.
Lanyasunya,  T.  P.,  W.  H.  Rong,  S.  A. Abdulrazak, P. K. Kaburu , J. O. Makori , T. A. Onyango dan D. M. Mwangi. 2006. Factors  limiting  use  of  poultry  manure as protein supplement for dairy cattle on Smallholder Farms in Kenya. Intl.  J. Poult. Sci., 5 (1): 75 – 80.
Leng,  R.  A.  1980.  Principle  and  Practice  of Feeding Tropical Crop and by Products to Ruminant.  Department  of  Biochemistry and Nutrition. University of New England. Armidale, Australia.
Lestari, V. S., D. P. Rahardja dan M. B. Rombe. 2015. Pengetahuan dan sikap peternak sapi potong  terhadap  teknologi  pengolahhan limbah pertanian sebagai pakan ternak. J. Ilmu dan Teknologi Peternakan, 4(2): 90 – 93.

## Christiyanto, dkk
Muslimah,  A.  P.,  R.  Istiwati,  A.  Budiman,  B. Ayuningsih  dan  I.  Hernaman.  2020.
Kajian in vitro ransum sapi potong yang mengandung bungkil tengkawang terhadap  fermentabilitas  dan  kecernaan. J. Ilmiah Peternakan Terpadu, 8 (1): 21 – 26.
Natsir, M. H., Mashudi, O. Sjofjan, A. Irsyamawati dan Hartutik. 2019. Teknologi Pengolahan Bahan Pakan Ternak. UB Press, Malang.
Negesse,  T.,  A.  K.  Patra,  A.  Tolera,  R.  C.
Merkel,  T.  Sahlu  dan  A.  L.  Goetsch. 2007.  Performance  of  Spanish  and  Boer × Spanish doeling consuming diets with different  levels  of  broiler  litter.  Small Ruminant Research,  69: 187 – 197.
Rafleliawati,  P.,  Surahmanto  dan  J.  Achmadi.
2016. Efek pemanasan pada molases yang ditambahkan urea terhadap ketersediaan NH 3 volatile  fatty  acids dan  protein total  secara in  vitro .  Jurnal  Ilmu-Ilmu Peternakan, 26(2): 24-29.
Rahayu, R. I., A. Subrata dan J. Achmadi. 2018. Fermentasi  ruminal in  vitro pada  pakan berbasis  jerami  padi  amoniasi  dengan suplementasi tepung pisang dan molasses. J. Peternakan Indonesia, 20 (3): 166 – 174.
Rahimi, M. R., Y. A. Alijoo, R. Pirmohammadi dan M. Alimirzaei. 2018. Effects of feeding with  broiler  litter  in  pellet-form  diet on  Qizil  fattening  lambs’  performance, nutrient  digestibility,  blood  metabolites and  husbandry  economics.  J.  Vet.  Res. Forum., 9 (3) : 245 – 251.
Rahman,  A.,  B.  I.  M.  Tampoebolon,    Sunarso dan  L.  K.  Nuswantara.  2020.  Pengaruh perbedaan  aras  starter  pada  fermentasi sabut  kelapa  terhadap  kecernaan  bahan pakan  dan  produksi volatile  fatty  acids secara in  vitro .  J.  Ilmiah  Peternakan Terpadu, 8 (2): 66 – 71.
Roothaert,  R.  I  dan  R.  W.  Matthewman.  1992. Poultry  wastes  as  foods  for  ruminants and associated aspects of animal welfare. Asian-Australasian.  J.  Anim.  Sci.,  5  (4): 593 – 600.
Sandi, S., A. I. M. Ali dan A. A. Akbar. 2015. Uji in  vitro wafer  ransum  komplit  dengan bahan perekat yang berbeda. J. Peternakan Sriwijaya, 4(2): 7 – 16.
Sari,  I.  P.,  L.  K.  Nuawantara  dan  J.  achmadi. 2019. Pengaruh suplementasi karbohidrat mudah larut yang berbeda dalam pakan berbasisi  jerami  padi  amoniasi  terhadap degradabilitas  ruminal  in  vitro.  J.  Sains Peternakan Indonesia, 14(2): 161 – 170.
Satter,  L.  D  dan  L.  L.  Slyter.  1974.  Effect  of ammonia  concentration  on  rumen microbial production in vitro. J. Nutr., 32: 194.
Steel.,  R.  G.  D  dan  J.  H.  Torrie.  1990.  Prinsip dan Prosedur Statistik. Suatu Pendekatan Biometrik.  Alih  Bahasa  Ir.  B.  Soemantri. Ed II. Gramedia, Jakarta.
Suningsih,  N.,  W.  Ibrahim,  O.  Liandris  dan  R.
Yulianti.  2019.  Kualitas  fisik  dan  nutrisi jerami  padi  fermentasi  pada  berbagai penambahan  starter.  J.  Sains  Peternakan Indosesia, 14 (2): 191 – 200.
Tilley, J. M. A dan R. A. Terry. 1963. A two-stage technique  for  in  the in  vitro digestion  of forage  crops.  J.  of  the  British  Grassland Society, 18: 104 – 111.
Widyawati, S. D. 2008. Efek perbedaan sumber protein  dan  rasio  urea-molases  dalam pakan suplemen yang ditambahkan dalam ransum  terhadap  produksi  mikrobia rumen secara in vitro. J. Sains Peternakan, 6 (1): 34 – 41.
Yuliana,  A  dan  S.  Chuzaemi.  2019.  Pengaruh lama  fermentasi  ampas  putak  ( Coryphe gebanga )  terhadap  kualitas  fisik  dan kualitas  kimia  menggunakan Aspergillus oryzae. J. Nutrisi Ternak Tropika, 2 (1): 19
– 32.