## DAYA HIDUP SPERMATOZOA KAMBING PERANAKAN ETAWA YANG DIPRESERVASI DENGAN BERBAGAI JENIS PENGENCER
Muhammad Rizal 1 , Muhammad Thahir 2
1 Jurusan Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Lambung Mangkurat, Jl. Jenderal Ahmad Yani Km, 36 Banjarbaru 70714. Telp. 0511-4781551. *Email: mrizal@unlam.ac.id
2 Dinas Pertanian Kabupaten Enrekang, Jl. Poros Pinang – Rappang Km. 3 Enrekang 91712

## Abstrak
Tujuan penelitian ini adalah menguji efektivitas pengencer Tris, natrium sitrat, dan laktosa dalam mempertahankan daya hidup spermatozoa kambing peranakan etawa (PE) yang dipreservasi pada suhu  3 – 5 o C.    Semen  ditampung  dengan  vagina  buatan  satu  kali  dalam  satu  minggu sebanyak enam  kali  sebagai  ulangan.    Semen  segar  dibagi  ke  dalam tiga buah  tabung  reaksi, masing- masing  diencerkan  dengan  pengencer  Tris, natrium sitrat,  dan  laktosa  sebagai  perlakuan. Kemudian disimpan di dalam lemari es pada suhu 3 – 5 o C. Data dianalisis dengan rancangan acak lengkap  dengan tiga perlakuan  dan enam kali ulangan. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa volume  semen  segar  kambing  PE  rata-rata 1,05 ml,  warna krem,  konsistensi  kental,  pH 6,9, gerakan  massa  ++ – +++,  konsentrasi  spermatozoa 3.756,67 juta  sel/ml,  spermatozoa  motil 76,67%,  spermatozoa  hidup 85,83%, dan spermatozoa  abnormal 4,5%. Ketiga  jenis  pengencer memiliki  kemampuan  yang  sama  dalam  mempertahankan  daya  hidup  spermatozoa  kambing  PE selama preservasi.  Pada hari keempat preservasi, persentase SM dan SH perlakuan Tris (44,17 dan 57,83%) tidak berbeda nyata dengan natrium sitrat (43,33 dan 56,67%), dan laktosa (43,33 dan 54,17%).    Di simpulkan  bahwa pengencer  Tris, natrium sitrat,  dan laktosa  memiliki kemampuan  yang  sama  dalam  mempertahankan  kualitas  spermatozoa  kambing  PE  selama preservasi pada suhu 3 – 5 o C. Pengencer Tris, natrium sitrat, dan laktosa mampu mempertahankan persentase spermatozoa motil  sebesar  40% selama  tiga  hari preservasi  pada  suhu 3 – 5 o C, dan memenuhi syarat digunakan dalam program inseminasi buatan (IB).
Kata kunci: Tris, natrium sitrat, laktosa, daya hidup spermatozoa, kambing PE.

## Abstract
The  purpose  of  this  research  was  to  examine the  effectivity of Tris, sodium citrate,  and lactose extenders in  maintaining viability  of etawa  crossbreed  (EC) goat spermatozoa preserved  at  3 – 5 o C. Semen was collected using artificial vagina once a week for six times as replicate. Fresh semen was divided into three tubes then diluted with Tris, sodium citrate, and lactose extenders, respectively. Diluted-semen  were stored  in  refrigerator  at  3 – 5 o C. Quality  of  diluted-semen including  percentages  of  motile spermatozoa  (MS)  and live  spermatozoa  (LS) were  evaluated every  day  during  storage  at  3 – 5 o C  for four days. Data  were  analyzed  using  completely randomized  design  with three treatments  and six replicates. Results  of  this  study  showed  that mean  volume,  colour,  consistency,  pH,  mass  activity,  spermatozoa  concentration,  MS,  LS, and spermatozoa  abnormal of  PE goat fresh  semen were 1.05 ml,  cream,  thick, 6.9,  ++ – +++, 3,756.67 million  cell/ml,  76.67%, 85.83%, and  4.5%,  respectively. Tris, sodium citrate,  and lactose  extenders have  same  ability  in  maintaining viability  of  EC  goat spermatozoa during preserved  at  3 – 5 o C.    At  day-4 storage,  percentages  of  MS  and  LS for Tris  (44.17 and 57.83%) was  no  difference  significant  with sodium citrate (43.33 and 56.67%), and  lactose (43.33 and 54.17%). In  conclusion, Tris, sodium citrate,  and  lactose  extenders have  same  ability  in maintaining viability  of  EC  goat spermatozoa during  preserved  at  3 – 5 o C.    Tris, sodium citrate, and  lactose  extenders could  be  maintaining 40%  in percentage  of  motile  spermatozoa for three days after preserved at 3 – 5 o C, and suitable for use in artificial insemination (AI) program.
Keywords: Tris, sodium citrate, lactose, spermatozoa viability, PE goat.

## PENDAHULUAN
Kambing peranakan etawa  (PE)
merupakan  hasil  persilangan antara kambing etawa  dan  kambing  lokal
Indonesia  yang  memiliki  kemampuan memproduksi  susu  cukup  tinggi  untuk daerah  tropik. Kambing PE tersebut memiliki  potensi  yang  besar untuk dikembangkan  sebagai  salah  satu  ternak penghasil susu di Indonesia, karena telah mampu  beradaptasi  secara  baik  dengan iklim  di  daerah  tropik.    Kambing tersebut  juga  dapat  dimanfaatkan  untuk meningkatkan potensi kambing-kambing lokal lainnya melalui persilangan dengan teknologi  reproduksi,  seperti  inseminasi buatan (IB) (Souhoka et al., 2009).
Penerapan teknologi IB harus didahului  dengan  upaya  pengolahan semen,  yang  terdiri  atas:  penampungan, pengenceran,  dan  penyimpanan  semen. Unsur-unsur  yang  digunakan dalam menyusun  pengencer  semen  terdiri  atas beberapa  bahan  kimiawi  yang  berfungsi sebagai  sumber  energi, penyangga, pelindung  spermatozoa,  dan  antibiotik sebagai unsur pengendali perkembangan mikroorganisme. Campbell et al. (2003) menyatakan  bahwa  bahan  pengencer semen harus  memiliki  nutrisi  yang cukup,  pH  sekitar  6,5 – 6,7,  mengandung penyangga (buffer), serta mampu memberikan proteksi terhadap kontaminasi  bakteri  dan kejutan  dingin (cold shock).
Sumber energi utama bagi spermatozoa  adalah  fruktosa, yang dimetabolisir sehingga
dihasilkan
adenosin trifosfat (ATP) sehingga
spermatozoa tetap dapat gergerak (motil) (Paulenz et  al.,  2002). Hal  ini  karena fruktosa  lebih  mudah  dimetabolisme oleh  spermatozoa, sehingga umum diberikan  pada  pengencer  semen  cair dan semen  beku  pada  berbagai jenis ternak  (Vishwanath dan  Shannon, 2000; Eiman et al., 2004). Kuning telur ayam juga merupakan  salah  satu  bahan  yang
lazim  digunakan  dalam  membuat  suatu pengencer semen. Lesitin yang terkandung  di  dalam  kuning  telur ayam adalah  alasan  utama  pemanfaatannya sebagai  bahan  penyusun  pengencer semen.    Lesitin  dibutuhkan  sebagai pelindung membran plasma sel spermatozoa untuk  mencegah  terjadinya kejutan  dingin  (cold  shock)  saat  semen disimpan pada suhu dingin (Quinn et al., 1980; Watson, 1981).
Beberapa  jenis  pengencer  telah diteliti  dan  diterapkan  dalam  proses pengolahan  semen,  seperti: susu  segar, susu skim, tris kuning telur, sitrat kuning telur, dan laktosa kuning telur (Vishwanath  dan Shannon,  2000) pada berbagai  jenis  ternak. Menurut Paulenz et  al.  (2002)  masing-masing  pengencer memiliki  keistimewaan  dan  mampu memberikan  pengaruh  yang  berbeda terhadap  kualitas  spermatozoa selama proses  preservasi.
Penelitian  ini bertujuan  untuk  menguji  kemampuan pengencer  Tris, natrium sitrat,  dan laktosa  dalam  mempertahankan  daya hidup  spermatozoa  kambing  PE selama preservasi pada suhu 3 – 5 o C.

## MATERI DAN METODE Penampungan dan Pengolahan Semen
Semen  ditampung menggunakan vagina  buatan  satu  kali  dalam  satu minggu  dari satu ekor kambing PE dewasa  yang  berumur  sekitar  empat tahun.    Penampungan  semen  dilakukan sebanyak enam kali  sebagai  jumlah ulangan.
Semen segar kambing PE yang telah ditampung  segera  dievaluasi  untuk mengetahui  kualitasnya.    Semen  yang memenuhi  syarat  kualitas  (spermatozoa motil  70%,  gerakan  massa  ++  atau +++, dan spermatozoa  abnormal  <10%) dibagi ke dalam tiga buah tabung reaksi yang  berisi  tiga  jenis  pengencer  semen, yaitu:  Tris, natrium sitrat,  dan  laktosa. Semen diencerkan hingga  mencapai konsentrasi 100  juta  spermatozoa  motil
setiap mililiter. Komposisi  pengencer dasar Tris terdiri atas: 3,32 g Tris(hidroksimetil)aminometan,  1,86  g asam  sitrat,  dan  1,37 g  fruktosa  yang dilarutkan dengan akuabidestilata hingga mencapai  volume  100  ml. Komposisi pengencer  dasar  natrium  sitrat terdiri atas: 2,9 g natrium sitrat, 1,37 g fruktosa yang  dilarutkan dengan  akuabidestilata hingga  mencapai  volume  100  ml. Komposisi  pengencer  dasar  laktosa terdiri  atas:  9  g  laktosa,  1,37  g  fruktosa yang  dilarutkan dengan  akuabidestilata hingga  mencapai  volume  100  ml. Masing-masing  pengencer  mengandung 20%  kuning  telur  ayam  ras dan ditambahkan  antibiotik  berupa 1.000 IU penisilin  dan  1.000 µg streptomisin setiap mililiter pengencer.
Ketiga tabung  reaksi yang  berisi semen masing-masing perlakuan ditutup rapat  kemudian dimasukkan  ke gelas piala  yang  telah  diisi  air  bersih dan disimpan di dalam refrigerator lemari es pada  suhu  3 – 5 o C.    Semen  masing- masing  perlakuan  dievauasi  kualitasnya setiap  hari  selama empat hari hingga persentase spermatozoa  motil  mencapai 40% (SNI 4869.3-2014).
Variabel Kualitas Semen yang Dievaluasi Kualitas semen  dievaluasi  pada
tahap  setelah  penampungan  (semen segar), pengenceran, dan selama penyimpanan.    Kualitas  semen  yang dievaluasi  pada  tahap  semen  segar adalah:  volume,  warna,  kekentalan (konsistensi),  pH  (derajat  keasaman), konsentrasi spermatozoa, gerakan massa spermatozoa, persentase spermatozoa motil, persentase spermatozoa  hidup, dan persentase spermatozoa  abnormal. Kualitas spermatozoa  yang  dievaluasi setelah pengenceran  dan  penyimpanan meliputi: persentase spermatozoa  motil dan persentase spermatozoa hidup.
Persentase spermatozoa motil: persentase  spermatozoa  yang  bergerak
progresif
(bergerak ke depan). Dievaluasi secara subyektif pada
delapan  lapang  pandang  yang berbeda dengan  mikroskop  cahaya  pembesaran 400x (Rasul et  al., 2001). Angka  yang diberikan  berkisar  antara  0  dan  100% dengan skala 5%.
Persentase spermatozoa hidup: persentase  spermatozoa  yang  hidup. Dievaluasi dengan  pewarnaan eosin- nigrosin (Felipe-Perez et  al., 2008). Spermatozoa  yang  hidup  ditandai  oleh kepala  berwarna  putih atau  transparan, sedangkan  yang  mati  ditandai  oleh kepala  berwarna  merah.    Sebanyak minimum  200  spermatozoa  dievaluasi dengan  mikroskop  cahaya  pembesaran 400x.

## Analisis Data
Data  dianalisis dengan  analisis ragam  dalam  bentuk  rancangan  acak lengkap dengan tiga perlakuan dan enam kali  ulangan. Perbedaan  antarperlakuan diuji  dengan  uji  beda  nyata  terkecil (Steel dan Torrie, 1993).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Semen  Segar Kambing
PE
Hasil  penelitian  diperoleh  volume semen segar rata-rata 1,05 ml (Tabel 1). Peneliti sebelumnya melaporkan volume semen kambing  PE yang  bervariasi, yakni: rata-rata 1,52  ml  (Hastono et  al., 1998), 0,95  ml (Tambing et  al., 2001), 1,42  ml  (Yusuf et  al.,  2005), 0,68  ml (Souhoka et  al.,  2009), 0,9  ml  (Winarto dan  Isnaini,  2008), 1,9  ml  (Heriyanta et al.,  2013), 0,87  ml  (Kaka et  al.,  2014), dan 1,5 ml (Rizal et al., 2014).
Tabel 1. Karakteristik Semen Segar kambing PE Variabel Rata-rata  SD Volume (ml) 1,05  0,17 Warna Krem Konsistensi (kekentalan) Kental Derajat keasaman (pH) 6,90  0,10 Gerakan massa spermatozoa ++ – +++ Konsentrasi spermatozoa (juta sel/ml) 3.756,67  295,01 Persentase spermatozoa motil (%) 76,67 ± 2,58 Persentase spermatozoa hidup (%) 85,83  2,48 Persentase spermatozoa abnormal (%) 4,50  1,05
Warna  semen  segar  yang  diperoleh adalah krem dan  konsistensi  kental (Tabel 1). Warna semen segar kambing PE  adalah  putih  hingga  krem  dengan konsistensi agak  kental hingga kental (Tambing et  al., 2001;  Yusuf et  al.,
2005; Winarto  dan  Isnaini,  2008; Souhoka et  al.,  2009).    Menurut  Evans dan Maxwell (1987) warna semen segar kambing  yang  normal  adalah  putih hingga  krem.    Selanjutnya  dinyatakan bahwa  semen  segar  yang  memiliki jumlah spermatozoa banyak akan mengakibatkan  semen  lebih  kental  dan berwarna lebih pekat.
Gerakan  massa  spermatozoa  yang diperoleh adalah ++ hingga +++ dengan pH  rata-rata 6,9 (Tabel  1). Gerakan massa  spermatozoa  kambing  PE  adalah ++  hingga +++ (Tambing et  al., 2001; Yusuf et al., 2005; Winarto dan  Isnaini, 2008; Souhoka et al., 2009; Kaka et al., 2014;  Rizal et  al.,  2014).    Derajat keasman (pH)  semen  segar kambing  PE berkisar  antara  6,6  dan 7,13 (Suwarso, 1999; Yusuf et al., 2005; Souhoka et al., 2009; Kaka et al., 2014).
Hasil penelitian diperoleh konsentrasi spermatozoa rata-rata 3.756,67 juta  sel/ml (Tabel  1). Peneliti sebelumnya melaporkan konsentrasi spermatozoa kambing PE yang
bervariasi,  yaitu: rata-rata 2.070  juta sel/ml (Hastono et al., 1998), 2.940 juta sel/ml Tambing et  al.  (2001),  2.806,3
juta sel/ml (Yusuf et  al.,  2005), 3.344 juta sel/ml (Winarto  dan  Isnaini,  2008),
4.148,57  juta sel/ml (Souhoka et  al.,
2009), 2.434,75 juta sel/ml (Heriyanta et al., 2013), 3.756 juta sel/ml (Rachmawati et al., 2013), 1.741,17 juta sel/ml (Kaka et al., 2014), dan 2.140 juta sel/ml (Rizal et  al.,  2014). Menurut
Evans  dan  Maxwell  (1987)  konsentrasi spermatozoa  kambing yang  normal berkisar antara 2.500 juta dan 5.000 juta sel/ml.
Persentase  spermatozoa  motil yang diperoleh pada penelitian ini adalah rata- rata 76,67% dan persentase spermatozoa hidup  rata-rata 85,83% (Tabel  1). Persentase spermatozoa motil dan spermatozoa hidup semen segar kambing PE masing-masing rata-rata 50 dan  64,75%  (Hastono et  al.,  1998), 78,13  dan  94,08% (Suwarso, 1999), 72,79  dan  82,54% (Tambing et  al., 2001),  77,5  dan  83,95%  (Yusuf et  al., 2005), 79  dan  90,75%  (Winarto  dan Isnaini,  2008), 70  dan  83,895  (Souhoka et  al.,  2009), 63,13%  (Rachmawati et al.,  2013),  75  dan  85%  (Akmal et  al., 2014), serta 76,67 dan 81,45% (Kaka et al., 2014).
Persentase  spermatozoa  abnormal yang  diperoleh  adalah rata-rata 4,5% (Tabel  1).
Persentase spermatozoa abnormal  kambing  PE rata-rata 17% (Hastono et al., 1998),
10,17%
(Tambing et al., 2001), 4,59% (Yusuf et
al., 2005), 15,78% (Winarto dan Isnaini, 2008), 7,12%  (Souhoka et  al.,  2009), dan  10,35% (Kaka et  al.,  2014). Menurut  Delgadillo  (1992)  persentase spermatozoa  abnormal  kambing  yang normal adalah sekitar 6 – 10%.
Berdasarkan  pada  data  karakteristik semen  segar tersebut  di  atas diperoleh hasil  yang  bervariasi  antarindividu kambing  PE.    Hal  ini  disebabkan  oleh perbedaan  potensi  genetik  masing- masing  individu,  manajemen,  frekuensi penampungan,  dan  lain-lain  (Toelihere, 1981).    Semen  segar kambing  PE yang digunakan dalam penelitian ini memiliki semen  dengan kualitas  yang  baik  dan memenuhi  syarat  untuk  diproses  lebih lanjut,  baik  dalam  bentuk  semen  cair- dingin  maupun  semen  beku. Hal  ini karena  semen  segar  tersebut  memiliki konsistensi  agak  kental  hingga kental, gerakan massa spermatozoa ++ dan +++, persentase spermatozoa  motil  76,67%, dan persentase spermatozoa  abnormal 4,5%.    Semen  segar  yang  baik  harus memiliki  konsistensi  agak  kental  atau kental  dan  gerakan  massa  ++  atau  +++
(Toelihere,
1981), persentase spermatozoa  motil  70% (Evans  dan
Maxwell, 1987), dan persentase spermatozoa  abnormal kurang  dari 10% (Delgadillo, 1992).
Kualitas Spermatozoa setelah Preservasi pada Suhu 3 – 5 o C Hasil penelitian menunjukkan
bahwa secara statistik tidak ada perbedaan  yang  nyata  antarperlakuan terhadap  kualitas  spermatozoa  kambing PE  selama  preservasi  pada suhu 3 – 5 o C. Nilai  persentase  spermatozoa  motil (Tabel 2) dan spermatozoa hidup (Tabel 3) yang  diencerkan  dengan  pengencer Tris, natrium sitrat,  dan  laktosa  relatif sama mulai dari hari pertama hingga hari kelima preservasi. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa  kimia  yang  terkandung di dalam ketiga jenis pengencer tersebut memiliki  kemampuan  yang  sama  dalam melindungi  spermatozoa  dari  proses kerusakan  selama  preservasi  pada  suhu rendah (3 – 5 o C).
Tabel 2.  Rata-rata persentase spermatozoa motil selama preservasi pada suhu 3 – 5 o C Perlakuan Penyimpanan hari ke- 1 2 3 4 5 Tris 76,67 ± 2,58 70,00 ± 0,00 53,44 ± 4,08 44,17 ± 3,76 25,00 ± 4,47 Na sitrat 76,67 ± 2,58 69,17 ± 2,04 52,50 ± 2,74 43,33 ± 2,58 22,50 ± 2,74 Laktosa 76,67 ± 2,58 69,17 ± 2,04 56,67 ± 2,58 43,33 ± 2,58 25,73 ± 3,76
Preservasi  semen  pada  suhu  rendah akan  menyebabkan  terjadi  kerusakan membran plasma sel spermatozoa akibat pengaruh kejutan  dingin yang  dapat berakibat terhadap kematian sel. Menurut White (1993) pengaruh kejutan dingin  berkaitan  dengan  perubahan fosfolipid  yang  menyusun  membran plasma sel, yakni perubahan bentuk dari cair  ke  gel  yang  terjadi  pada  suhu  di bawah  20 o C.    Perubahan  tatanan rantai asam  lemak  dan  protein  pada  membran plasma  menyebabkan  kebocoran  atau selektivitas  membran  plasma  rusak,
yang  menyebabkan  ion-ion  seperti  ion kalsium  bebas  masuk  ke  sel. Dampak negatif utama yang timbul akibat kejutan dingin  adalah  menurunnya  motilitas spermatozoa karena terjadinya kontraksi selubung  lipoprotein  membran  plasma sel, sehingga memecah selubung lipoprotein  membran  plasma  sel  dan menyebabkan keluarnya substansi intraseluler  yang  vital. Oleh  karena  itu, menurut Kayser et  al. (1992) dalam preservasi  spermatozoa  pada  suhu  yang mendekati 0 o C diperlukan zat pelindung di  dalam  pengencer,  seperti  fosfolipid
kuning  telur  dan  krioprotektan,  serta proses  pendinginan  harus  dilakukan secara  bertahap.
Untuk  mengurangi pengaruh kejutan dingin selama
preservasi semen pada suhu rendah, para peneliti  di  bidang  preservasi  semen umumnya  menambahkan  susu  atau kuning  telur  ayam  di  dalam  pengencer (Aku et  al.,  2007; Andrabi et  al.,  2008; Akhter et  al.,  2010). Di  dalam  ketiga jenis pengencer  yang  digunakan  dalam penelitian ini terdapat kuning telur ayam yang  mengandung  fosfolipid  berupa
fosfatidil kolin  (lesitin). Briand-Amirat et  al.  (2007)  menyatakan bahwa lesitin yang ada di dalam kuning  telur mengandung gliserol, asam lemak
sederhana, fosfat, dan kolin. Lipoprotein  kuning  telur berinteraksi dengan lipoprotein  membran  plasma sel spermatozoa dan melindungi spermatozoa  dari  pengaruh kejutan dingin yang  pada  akhirnya  dapat mempertahankan motilitas dan viabilitas spermatozoa (Morton et al., 2010).
Tabel 3.  Rata-rata Persentase Spermatozoa Hidup selama Preservasi pada Suhu 3 – 5 o C Perlakuan Penyimpanan hari ke- 1 2 3 4 5 Tris 85,50 ± 1,52 80,33 ± 1,63 65,50 ± 3,62 57,83 ± 3,87 38,50 ± 2,59 Na sitrat 84,33 ± 1,97 79,17 ± 1,47 67,17 ± 1,83 56,67 ± 1,86 36,67 ± 1,63 Laktosa 85,00 ± 2,10 80,17 ± 1,60 65,50 ± 1,05 54,17 ± 1,17 36,50 ± 0,55 Karbohidrat  yang  terkandung  di dalam  pengencer  Tris, natrium sitrat, dan  laktosa  berperan  sebagai  senyawa krioprotektan
ekstraseluler, yang berfungsi  melindungi  membran  plasma sel  spermatozoa  dari  proses  perusakan akibat  pengaruh  kejutan  dingin  selama penyimpanan pada suhu rendah (3 – 5 o C). Karbohidrat  merupakan  senyawa  yang dapat  berperan  sebagai krioprotektan ekstraseluler,  dan  berfungsi  melindungi membran  plasma  sel dari  kerusakan (Supriatna dan Pasaribu, 1992). Menurut Viswanath dan Shannon (2000) senyawa krioprotektan golongan karbohidrat memiliki kemampuan menggantikan molekul air secara normal dalam  kelompok  polar hydrated.    Sifat- sifat karbohidrat ini  akan  membantu menstabilkan  membran  plasma  sel spermatozoa selama masa transisi melewati  zona  suhu  yang  kritis,  serta mengubah  sifat  mekanik  pengencer melalui  peningkatan  viskositas. Di samping  itu,  karbohidrat  juga  berfungsi sebagai  substrat  yang  akan  dimetobilisir oleh  spermatozoa  untuk  menghasilkan energi  berupa adenosine  trifosfat  (ATP)
sehingga  spermatozoa  dapat  bergerak (motil) (Paulenz et al., 2002;
Vishwanath  dan  Shannon, 2000; Eiman et al., 2004).
Hasil  penelitian ini menunjukkan bahwa  pengencer  Tris, natrium sitrat, dan  laktosa  mampu  mempreservasi spermatozoa  kambing  PE  pada  suhu 3 – 5 o C selama  tiga  hari  dan  masih  layak digunakan dalam  program  IB,  karena memiliki  persentase  spermatozoa  motil masing-masing sebesar 44, 43, dan 43%. Semen  kambing  yang  memenuhi  syarat digunakan  dalam  program  IB  harus memiliki persentase  spermatozoa  motil minimum 40% (SNI 4869.3-2014).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian ini dapat  disimpulkan  bahwa  pengencer
Tris, natrium sitrat, dan laktosa memiliki kemampuan yang sama dalam mempertahankan  kualitas  spermatozoa kambing  PE  selama  preservasi pada suhu  3 – 5 o C. Pengencer  Tris, natrium sitrat, dan laktosa mampu mempertahankan persentase spermatozoa motil  sebesar  40% selama
tiga  hari preservasi pada  suhu 3 – 5 o C, dan memenuhi  syarat digunakan  dalam program IB.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhter,  S.,  M.S.  Ansari,  B.A.  Rakha, S.M.H.  Andrabi,  M.  Anwar, and N.  Ullah. 2010. Effect  of fructose  addition  in  skim  milk extender  on  the  quality  of  liquid nili-ravi  buffalo  (Bubalus  bubalis) semen. Pakistan J.  Zool. 42:227- 231.
Akmal, M., T.R. Ferasyi, H. Budiman, Razali, Azhari, Anwar, F.A.
Pamungkas, S. Nasution,
T. Armansyah, M. Hambal, Syafruddin, dan  A. Sayuti.    2014. Suplemen bungkil inti sawit tepung  daun  katuk  berpotensi meningkatkan kualitas spermatozoa pada kambing peranakan ettawa. Jurnal Kedokteran Hewan 8:142-146. Aku, A.S., N. Sandiah, P.D. Sadsoitoeban,  M.R.  Amin,  dan Herdis.  2007. Manfaat  lesitin nabati pada preservasi dan kriopreservasi semen: Suatu kajian pustaka. Anim. Prod. 9:49-52.
Andrabi, S.M.H., M.S. Ansari, N. Ullah, M.  Anwar,  A.  Mehmood,  and  S. Akhter. 2008. Duck  egg  yolk  in extender  improves  the  freezability of buffalo bull spermatozoa. Anim. Reprod. Sci. 104:427-433
Briand-Amirat, L., D. Tainturier, and M. Anton. 2007.    Use  of  Egg Compounds  for  Cryoprotection  of Spermatozoa.    In    Bioactive  Egg
Compounds.  Huopalahti,  R.,  R. López- Fandin˜o, M. Anton, and R. Schade  (Eds.).  Springer,  New York
Campbell, J.R., M.D. Kenealy, and K.L.
Campbell. 2003.  Animal Science.
4th Ed. New York: Mc Graw-Hill.
Delgadillo, J.J.,  B. Leboeuf, and P. Chemineau.    1992.    Abolition  of seasonal  variations  in  semen quality  and  maintenance  of  sperm fertilizing  ability  by  photoperiodic cycles in goat bucks. Small Rum. Res. 9:47-59. Eiman,  M.,  E.  Aboagla, and T.  Terada.
2004. Effects  of  egg  yolk  during the freezing step of cryopreservation  on  the  viability of goat spermatozoa. Theriogenology 62:1160-1172.
Evans, G. and W.M.C. Maxwell.  1987.
Salamon’s  Artificial  Insemination of Sheep and Goats.  Butterworths, London. Felipe-Perez, Y.E., M.L. Juarez- Mosqueda, E.O. Hernandez- Gonzalez, and J.J. Valencia.  2008. Viability  of  fresh  and  frozen  bull sperm  compared  by  two  staining techniques. Acta Vet. Bras. 2:123- 130. Hastono, I.M. Budiarsana, R.S.G. Sianturi, U. Adiati, dan  D.
Yulistiani.    1998.    Kualitas  semen kambing  PE  pada  umur  yang berbeda  di  Kecamatan  Kaligesing.
Di  dalam:  Prosiding  Seminar Nasional Peternakan dan Veteriner.    Bogor,  1-2  Desember 1998.  Hlm. 324-327
Heriyanta, E., M.N. Ihsan, dan  N.
Isnaini. 2013.    Pengaruh  umur kambing  peranakan  etawah  (PE) terhadap  kualitas  semen  segar. Jurnal Ternak Tropika 14:1-5.
Kaka, A., Nalley, W.M.M., P. Kune, dan Burhanuddin.    2014.    Persentase nira lontar (Borassus flabellifer L) dalam pengencer Tris-kuning telur terhadap kualitas semen cair kambing  peranakan  etawah  yang disimpan  suhu 3 - 5  °C. Jurnal
Nukleus Peternakan 1:21-27.
Kayser, J.P., R.P. Amann, R.K. Shidefer,  E.L.  Squires,  D.J. Jasko, and  B.W.  Pickett.    1992.    Effects of  liniar  cooling  rate  on  motion characteristics of stallion spermatozoa. Theriogenology 30:601-614. Morton,  K.M.,  G.  Evans,  and  W.M.C. Maxwell. 2010. Effect  of glycerol concentration, Equex STM  supplementation  and  liquid storage  prior  to  freezing  on  the motility  and  acrosome  integrity of frozen-thawed  epididymal  alpaca viguna pacos sperm. Theriogenology 74:311-316
Paulenz, H., L. Soderquist,  R. Perez-Pe, and K.A.    Berg. 2002. Effect  of different  extenders  and  storage temperatures on sperm viability of liquid ram semen. Theriogenology 57:823-836. Quinn, P.J.,  P.Y.W. Chow, and I.G. White. 1980. Evidence  that phospholipid protects ram spermatozoa  from  cold  shock  at plasma membrane site. J. Reprod. Fertil. 60:403-407.
Rachmawati, L.,  Ismaya,  dan P. Astuti. 2013.    Level  of testosterone, libido,  and sperm quality  of bligon, kejobong,  and etawah cross-bred bucks. Animal Production 15:76-82. Rasul, Z., N. Ahmad, and M. Anzar. 2001. Changes in motion characteristics,  plasma  membrane integrity and acrosome morphology during cryopreservation of buffalo spermatozoa. J.  Androl. 22:278- 283.
Rizal, M., B. Irawan, D. Biyatmoko, A. Wahdi,  Habibah, dan  M. Riyadhi. 2014.    Keberhasilan  kebuntingan kambing  peranakan  ettawa  yang diinseminasi  dengan  semen  cair. Agrinimal 4:1-4.
SNI  (Standar  Nasional  Indonesia). 2014. Semen  Beku Kambing  dan Domba. Jakarta: Badan Standardisasi Nasional (BSN). Souhoka, D.F., M.J. Matatula,  M.M.M. Nalley, dan M. Rizal.    2009. Laktosa  mempertahankan  daya hidup spermatozoa kambing peranakan etawah yang dipreservasi dengan plasma semen domba  priangan. Jurnal  Veteriner
10:135-142.
Steel, R.G.D dan J.H. Torrie.    1993. Prinsip  dan  Prosedur  Statistika, Suatu Pendekatan Biometrik. Alih bahasa: B.  Sumantri.    Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Supriatna, I.  dan F.H. Pasaribu.    1992.
In Vitro Fertilisasi, Transfer Embrio,  dan  Pembekuan  Embrio.
Pusat  Antar  Universitas,  Institut Pertanian Bogor, Bogor. Suwarso.    1999.    Peranan  Rafinosa dalam Pengencer Tris-Sitrat- Kuning Telur  terhadap  Kualitas Semen  Beku  Kambing  Peranakan Etawah. Tesis. Program Pascasarjana,  Institut  Pertanian Bogor, Bogor. Tambing, S.N.,  M.R. Toelihere,  T.L. Yusuf, dan I.K. Sutama.    2001. Kualitas  semen  beku  kambing Peranakan Etawah setelah ekuilibrasi. Hayati 8:70-75. Toelihere, M.R.    1981. Inseminasi Buatan  pada  Ternak.    Angkasa,
Bandung.
Viswanath, R.  and  P. Shannon.  2000.
Storage  of  bovine  semen  in  liquid frozen  state.    Anim.  Reprod.  Sci. 62:23-53.
Watson, P.F.    1981.    The  roles  of  lipid and  protein  in  the  protection  of ram  spermatozoa  at 5 o C  by  egg yolk lipoprotein.  J. Reprod. Fertil. 62:483-492.
White, I.G.  1993.  Lipid and Ca uptake of  sperm  in  relation  to  cold  shock and preservation: A review. Reprod. Fertil. Dev. 5:639-658. Winarto, A. dan N. Isnaini.    2008.
Pengaruh tingkat pengenceran
terhadapkualitas spermatozoa
kambing PE  setelah  penyimpanan pada  suhu  kamar.    Jurnal  Ternak Tropika 9:72-80. Yusuf, T.L., R.I. Arifiantini,  dan  N. Rahmiwati.    2005.    Daya  tahan semen  cair  kambing  peranakan etawah  dalam  pengencer  kuning telur dengan kemasan dan konsentrasi spermatozoa yang berbeda.    Jurnal  Pengembangan Peternakan Tropis 30:217-223.