## POTENSI  Azotobacter sp. ST.04  DAN  KOMPOS Azolla pinata UNTUK MENINGKATKAN EFISIENSI BIODEGRADASI HIDROKARBON
DALAM PROSES BIOREMEDIASI LIMBAH MINYAK BUMI
( The Potential of Azotobacter sp. and Azolla pinata Komposting to Enhance Hydrocarbon Biodegradation Efficiency in the Petroleum
Waste Bioremediation Process)
Pujawati Suryatmana 1 dan Mieke Rochimi Setyawati 1
1 Staf  Pengajar Jurusan Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran
Jl. Raya Bandung Sumedang KM 21, Jatinangor (45363), Jawa Barat Telp. 022-7797200, Fax. 022-7796316, e-mail: pujawati_s@yahoo.com

## ABSTRACT
The  Petroleum  hydrocarbon  waste  is  one  of  Pollutant  contributing  which  cause problem  in  environmental.  Azotobacter  is  a  rizobacteria  type  which  is  capable fixating  dinitrogen.  The  result  investigation  showed  that  Azotobacter  sp  strain AV04  is  capable  producing  many  extra-cellulary  biomolecule.  That  strain  AV04 known  is  capable  producing  a  biomolecule  which  acting  as  strong  bioemulsifier. Azolla pinata is a hydro  plant that can contributes of N, P dan K nutrition to the Soil.  This  plant  has  potentialy  as  a  nutrition  organic  source.  The  research  was focused  on  the  role  of  the  two  agents,  i.e.    Azotobacter  sp  starin  AV04  as  the biosurfactan  producing  bacteria  and  Azolla  pinata  composted  in  the biodegradation  hydrocarbon  processes.  Results  showed  that  the  Total  Petroleum Hydrocarbon  (TPH)  efficiency  in  the  1 st week  and    5 th week,  which  was  in  the treatment of 10% (w/w) of A. pinata  and 2% (v/w) of Azotobacter sp starin AV04, was  reaching  in  value  56.15  %  and    98.03  %  respectively.  In  the  optimum treatment  showed  that  the  TPH  removal  efficiency  consistently  was  significantly rising up  as long as 5 week period of bioremediation. The residue compounds of Petroleum  after  one  week  period  incubation  on  the  optimum  treatment  were constituting hydrocarbon comprise of 26 species of hydrocarbon compound, while at  the  same  time  and    in  the  control  treatment  founded  the    hydrocarbon compounds remain were still about 37 species of Hydrocarbon compound.
Key  words:  Azolla  pinata,    Azotobacter  sp.  strain  AV04,  Biosurfactant, Hydrocarbon  Biodegradation,  Petrobacter

## PENDAHULUAN
Jenis  pencemar  yang  sampai saat ini masih memerlukan penanganan  yang  komprehesif  di
Indonesia  maupun  di  dunia  adalah timbunan lumpur minyak (oil sludge) sisa  destilasi  minyak  mentah  yang tersimpan  diberbagai  kolam  atau tanki  penampung  oleh  perusahaan- perusahaan  minyak  yang  beroperasi di  Indonesia.  Perusahhaan  miyak seperti  PT.  Caltex  Pacific.  PT. PERTAMINA,  PT.  UNOCAL,  PT. Vico  menimbun  lumpur  minyak antara  400  m 3 sampai  20.000  m 3 per hari  (Pertamina,  2005).  Lumpur minyak tersebut dikategorikan sebagai  bahan  berbahaya  beracun
(B3)  yang  termasuk  sumber  spesifik dengan  kode  kegiatan  2320  menurut Peraturan Pemerintah No. 85/1999 jo No.  18/1999  tentang  Pengolahan Limbah  B3.  Dan  biaya  pengolahan limbah  tersebut  diperkirakan  US$ 200-300  (Djuangsih,  1997).  Deposit Lumpur  minyak  tersebut  di  atas dapat  secara  langsung  ataupun  tidak langsung dapat membahayakan manusia  dan  lingkungan.  Limbah minyak  bumi  disusun  dari  berbagai senyawa  hidrokarbon  berantai  C2 sampai  C44,  yang  terdiri  dari  jenis hidrokarbon alifatik dan poliaromatik.  Senyawa-senyawa  ini bersifat  toksik  dan  sangat  sulit terdegradasi.  Teknologi  yang  masih dapat  diandalkan  dan  memiliki prospek  untuk  mengatasi  hal  di  atas adalah Teknologi Bioremediasi. Kebehasilan proses bioremediasi limbah minyak bumi dapat direpresentasikan  oleh  peningkatan laju dan efisiensi biodegradasi hidrokarbonnya  (Suryamana  et  al., 2006). Masalah utama yang menyebabkan  minyak  bumi  sulit terdegradasi adalah rendahnya derajat  kelarutan.  Menurut  Allen  et al. (1998) kecepatan degradasi dibatasi  oleh  transfer  masa  dari  fase padat  ke  fase  cair,  dengan  demikan tingkat  kelarutan  hidrokarbon  adalah salah  satu  faktor  pembatas  yang mempengaruhi
kecepatan
biodegradasi  minyak  bumi.  Faktor pembatas  tersebut  berkaitan  dengan ketersediaan  substrat  untuk  segera didegradasi oleh mikroorgansme (Allen  et  al.,1998).  Dari  masalah yang dihadapi tersebut maka penggunaan  senyawa  biosurfaktan atau bioemulsifyer yang dapat meningkatkan  kelarutan  hidrokarbon minyak  bumi  sangat  diperlukan.
Salah  satu  mikroorganisme  yang memiliki  lapisan  ekskret  yang  dapat berfungsi sebagai bioemulsifyer/biosurfaktan adalah Azotobacter  spp.  (Surytamana  et  al., 2006).  Azotobacter  sp.  strain  AV04 merupakan strain yang sangat potensial menghasilkan biosurfaktan. Kajian  potensi  biosurfaktan  yang diproduksi  dari  Azotobacter  dalam bidang  bioremediasi  sangat  menarik dan  potensial  untuk  dikembangkan. Masalah  lain  dalam  penanganan limbah  minyak  bumi  adalah  tingkat toksisitas yang tinggi dari hidrokarbon  komponen  penyusun minyak  bumi,  kondisi    optimum sistem  bioremediasi.  Faktor  tersebut adalah  kelembaban,  aerasi  yang memadai,    ketersediaan  substrat  dan nutrisi yang optimum untuk
mendukung  aktifitas  petrofilik  di dalam sistem (Cookcson, 1996). Salah  satu  alternatif  untuk mengatasi permasalahan
yang dihadapi  dalam  penanganan  limbah minyak  bumi  seperti  yang  telah disampaikan  yaitu  melalui  aplikasi dua agen biologis yang dapat bekerja secara  sinergi,  yaitu  melalui  aplikasi
Azotobacter sp. strain AV04 penghasil biosurfaktan yang diombinasikan dengan  Azolla piñata yang telah terkomposkan. Azolla piñata adalah tanaman air yang bersimbiosis dengan Cyanobacteri penambat N 2. Karakteristik ini mengakibatkan
Azolla  piñata  merupakan  bahan organik  yang  kaya  akan  nutrisi terutama  N  dan  P.  Sampai  saat  ini Azolla  baru  dimanfaatkan  sebagai pupuk hijau dan belum dimanfaatkan sebagai  bulking  agent  dan  nutrisi dalam proses bioremediasi. Tumbuhan A. pinnata ini mempunyai kandungan  unsur  hara,  terutama nitrogen sangat tinggi, (Arifin,
2003). Azolla pinnata dapat berfungsi sebagai sumber nutrisi bagi petrobacter dan  bulking agent untuk meningkatkan kinerja proses bioremediasi  limbah  minyak  bumi, melalui peningkatan efektifitas Petrobacter dalam mendegradasi hidrokarbon minyak bumi.
Fokus penelitian adalah peran Azotobacter  sp.  strain  AV04  dan Azolla  pinata  dalam  meningkatkan efektifitas  biodegradasi  hidrokarbon limbah  minyak  bumi  dalam  proses bioremediasi  limbah  minyak  bumi dalam Sistem Land Treatment. Penelitian ini didasarkan pada konsep  optimalisasi  pemanfaatan keragaman  hayati  yang  tepat  yang memiliki  potensi  dalam  mendukung proses  bioremedaiasi  limbah  minyak bumi,  sehingga  dapat  meningkatkan laju biodegradasi hidrokarbon limbah minyak  bumi  yang  bertujuan    untuk percepatan proses dekontaminasi lahan  tercemar  limbah  minyak  bumi secara maksimal dan efektif.

## BAHAN DAN METODE
Galur  Azotobacter  sp.  strain AV04 yang digunakan dalam penelitian  ini  diisolasi  dari  Rhizosfir tanaman jagung area lahan Percobaan Fakultas Pertanian Unpad.
Hasil  penelitian  diketahui  bahwa strain  ini  mampu    memproduksi biosurfaktan  dalam  media  yang mengandung substrat glukosa 1-2 %.
Sedangkan petrobakter
yang digunakan  adalah  konsorsium  dari Bacillus  cereus,  Enterobacter  sp., Acinetobacter  sp.,  Pseudomonas  sp. Limbah  minyak  yang  digunkaa dalam  penelitian  ini  berasal  dari tempat  deposit  limbah  di  PT.
Pertamina Balongan Indramayu. Sedangkan  Azolla  pinata    berasal dari dari daerah Leles dan dikembangkan di Laboratorium
Biologi  dan  Bioteknologi  Tanah Faperta  Unpad.  Tanah  Fluventic Eutrudepts asal Jatinangor digunakan sebagai  media  untuk  uji  efisiensi bioremediasi limbah minyak bumi.

## Produksi  Kultur  Azotobacter  sp. strain AV04
Kultur    segar  Azotobacter  sp strain  AV04  sebanyak  10  %    (v/v) diinokulasika kedalam Media
Selektif  mineral  glukosa  2  %  (v/v). Inkubasikan  dilakukan  pada  suhu 30 o C  dengan  pengocokan  (agitasi) 100  rpm.  Pada  jam  ke  96  dilakukan panen  kultur  Azotobacter  sp.  strain AV04  yang  sudah  menghasilkan Biosurfactan AV04.

## Pembuatan Kompos Azolla pinnata
Azola pinnata yang digunakan  pada  percobaan  ini  yaitu dalam bentuk  A. pinnata yang sudah dikomposkan. Azolla pinnata diinkubasi  selama  3  hari  dengan  10
%  penambahan    tanah  organik sebagai sumber dekomposer. Pengujian Biodegradasi Hidrokarbon Minyak Selama Proses Bioremediasi Pengujian biodegradasi hidrokarbon  minyak  bumi  dilakukan dalam system Land Treatment Bioremediation, menggunakan mikrokosmos  berukuran  panjang 55 cm,  lebar  37  cm  dan  tinggi  19  cm dengan  volume  38665  cm 3 .  Tanah yang  digunakan  adalah  Fluventic Eutrudepts  asal  Jatinangor  yang diambil  sampai  kedalaman  25  cm. Percobaan yang dilakukan menggunakan Rancangan Acak Kelompok Pola Faktorial. Perlakuan    terdiri  dari  2
faktor  yaitu  Faktor  pertama  dosis  A. pinnata  (A)  terdiri  dari  4  taraf,  yaitu : a 0 = tanpa  A. pinnata (0%) a 1 = A. pinnata (5% wt/ wt) a 2 = A. pinnata (10% wt/wt) a 3 = A. pinnata (15% wt/wt)
Faktor  kedua  dosis  Azotobacter  sp strain  AV04  (B)  terdiri  dari  4  taraf, yaitu : b 0 =  tanpa  Azotobacter  sp  strain AV04 (0%) b 1 =    Azotobacter  sp  strain  AV04
(1% v/wt)
b 2 = Azotobacter sp strain AV04
(2% v/wt)
b 3 = Azotobacter sp strain AV04
(3% v/wt)
Percobaan  diulang  3    kali,
sehingga diperoleh jumlah mikrokosmos  percobaan  sebanyak  4 x  4  x  3  =  48  mikrokosmos percobaan.
Analisis Respon
a. Total  Petroleum  Hidrokarbon (TPH)  setiap  interval  7  hari selama  proses  bioremediasi, dinyatakan dalam (%).
b. Residu  Hidrokarbon  sebelum dan sesudah proses bioremdiasi Analisis Total Petroleum Hidrokarbon (TPH) Isolasi  residu  total  petroleum hidrokarbon (TPH) dari tanah percobaan  dilakukan  dengan  metode Gravimetrik ekstraksi n-heksan
(Modifikasi dari Metode Iwabuchi et al.,    2002).    Pengambilan  sampel dilakukan  dalam  interval  24  jam pada  7  hari  pertama  dan  minggu selanjutnya  analisis  dilakukan  dalam interval 7 hari. Analisis Hidrokarbon komponen  penyusun  minyak  Bumi dengan  menggunakan    GC/MS dilakukan  untuk  mengetahui  residu hidrokarbon setelah proses bioremdiasi berlangsung. HASIL DAN PEMBAHASAN Efisiensi Biodegradasi Hidrokarbon  Selama  Minggu  ke  1 pada Proses Bioremediasi Pengaruh A. pinnata dan Azotobacter sp.  strain  AV04  ditunjukkan  dengan adanya efek interaksi yang signifikan terhadap efisiensi
biodegrdasi
hidrokarbon (Tabel 1 dan 2). Hasil  percobaan  dari  proses Biodegradasi  Hidrokarbon  Minyak Bumi pada minggu pertama menunjukkan  bahwa  pada  perlakuan control  (tanpa  Azolla  pinata)  yang menggunakan  Azotobacter  sp.  strain AV04  untuk  tiap  variasi  konsentrasi Azotobacter sp. AV 04 menunjukkan efisiensi  biodegradasi  hidrokarbon yang  signifikan  dibandingkan  tanpa Azotobacter  sp.  strain  AV04.  Tetapi tidak  berbeda  nyata  meningkatkan efisiensi biodegradasi antar
perlakuan  pada  variasi  konsentrasi Azotobacter  sp.  strain  AV04.  Pola tersebut  juga  terjadi  pada  perlakuan aplikasi  Azolla  piñata  dosis  5  %.
Sedangkan  pada  aplikasi  Azolla piñata 10 %, hasil efisiensi biodegradasi  tidak  berbeda  nyata meningkatkan  efisiensi  biodegradasi antar  perlakuan  tanpa  Azotobacter, Azotobacter  1  %  dan  3  %.  Tetapi berbeda  nyata  dengan  perlakuan Azotobacter  dosis  2  %.    Sedangkan efisiensi  biodegradasi  pada  aplikasi Azolla  pinata  dengan  dosis  15  %
tidak  memberikan  perbedaan  nyata antara  perlakuan  Azotobacter.    Dan aplikasi  tiap  taraf  Azolla  piñata memberikan  perbedaan  nyata  dalam meningkatkan  efisiensi  biodegradasi hidrokarbon  untuk  taraf  perlakuan tanpa  Azotobacter,  1  %  dan  2  % Azotobacter sp. strain AV04. Efisiensi  biodegradasi  hidrokarbon tertinggi    diperoleh    nilai    efisiensi biodegradasi sebesar  56.15 % (Tabel 1). Tabel  1.  Efek    Azotobacter  sp.  strain  AV04  dan  A.  pinnata  terhadap  Efisiensi penyisihan total petroleum hidrokarbon (TPH) pada minggu ke-1 selama proses bioremediasi berlangsung A. pinnata Azotobacter sp strain AV04 (Kontrol) (1%) (2%) (3%) ( Kontrol) 18.33 a A 27.31 a B 35.53 a B 37.10 a B (5%) 40.16 b A 41.74 b A 45.56 b A 42.14 a A (10%) 38.47 b A 41.24 b A 56.15 c B 38.82 a A (15%) 39.77 b A 38.37 b A 43.07 ab A 38.61 a A Keterangan  :  Nilai  rata-rata  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama  berbeda  tidak nyata  menurut  Uji  Jarak  Berganda  Duncan  pada  taraf  kepercayaan  5
%.  Angka  yang  ditandai  huruf  kapital  dibaca  horizontal  dan  huruf kecil dibaca vertikal. Hasil percobaan dapat menggambarkan bahwa ternyata kompos Azolla piñata yang diaplikasikan dalam sistem bioremeiasi  selama  periode  satu minggu    belum  mampu  mendukung kinerja Azotobacter dalam meningkatkan biodegradsai hidrokarbon pada proses bioremediasi yang sedang berlangsung.  Kecuali  pada  dosis Azolla  piñata  10  %  menunjukkan bahwa  kompos  Azolla    pinata mampu meningkatkan
kinerja
Azotobacter  sp.  strain  AV04  pada dosis  2  %,  hal  ini  ditunjukkan dengan  nilai  efisiensi  biodegradasi tertinggi dibandingkan perlakuan lain yang  mencapai  56,15  %  selama waktu satu minggu proses bioremediasi berlangsung. Hasil
seperti yang tersebut di atas disebabkan  karena  kompos  Azolla piñata  yang  diaplikasikan  masih
belum terdekomposisi sempurna, sehingga  hal  ini  mengakibatkan bahan  organik  yang  berasal  dari Azolla pinata belum berperan sebagai  bahan  organik  yang  dapat mensuplai nutrisi dan sumber karbon awal yang diperlukan untuk Petrobacter  dan  Azotobacter  di dalam sistem. Hal ini dapat dikatakan  bahwa  bahan  organik
Azolla  yang  ada selama  periode satu minggu belum mampu meningkatkan viabilitas  dan  aktivitas  Azotobacter dalam  perannya  menstimulasi  proses biodegradasi  hidrokarbon  minyak bumi yang ada. Sedangkan Azotobacter mampu membantu meningkatkan    efektifitas  kinerja Petrobacter tanpa ditambahkan kompos Azolla piñata. Efisiensi Biodegradasi Hidrokarbon  selama  minggu  ke  5 pada Proses Bioremediasi Hasil analisis pada minggu ke 5 pada
proses bioremediasi
berlangsung  menunjukkan  interaksi yang  signifikan  antar  perlakuan
Azotobacter  sp.  train  AV0  dengan Azolla piñata. Hasil analisis
ditampilkan pada Tabel 2.
Penurunan  hidrokarbon  dari minggu ke-1 sampai ke-5 mengalami proses  biodegradasi  yang  cepat.
Perlakuan dengan menggunakan Azotobacter  sp.  strain  AV04  yang dikombinasikan  dengan  A.  pinnata menunjukkan  peningkatan  efisiensi biodegradasi Hidrokarbon yang signifikan dibandingkan kontrol.
Aplikasi Azolla pinta pada dosis 5 % memberikan  peningkatan  efisiensi yang  signifikan  apabila  ditambahkan Azotobacter pada konsentrasi sebesar 3  %.  Sementara  penggunaan  Azolla piñata  10  %  baru  memberikan peningkatan efisiensi secara signifikan apabila ditambahkan Azotobacter  pada  konsentrasi    2  % dan penggunaan Azolla piñata pada
Tabel 2. Efek  Azotobacter sp strain AV04 dan A. pinnata terhadap efisiensi
penyisihan total petroleum hidrokarbon (TPH) pada minggu ke-5 A. pinnata Azotobacter sp. strain AV04 (Kontrol) (1%) (2%) (3%) ( Kontrol) 70,44 a A 81,18 a C 76,86 a B 78,63 a BC (5%) 84,39 b A 86,29 b A 87,01 b A 95,73 b B (10%) 91,64 c A 89,74 c A 98,03 c B 95,56 b B (15%) 94,99 d A 97,17 d A 95,90 c A 95,04 b A Keterangan:  Nilai  rata-rata  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama  berbeda  tidak nyata menurut Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf kepercayaan 5
%.  Angka  yang  ditandai  huruf  kapital  dibaca  horizontal  dan  huruf kecil dibaca vertikal
kosentrasi  15  %    dengan
Azotobacter  sp.  strain  AV04  pada konsentrasi  3  %  tidak  meningkat secara signifikan. Efisiensi biodegradasi  hidrokarbon  terbaik pada  minggu  ke-5  terjadi  pada perlakuan  kombinasi  A.  pinnata padakonsentrasi  10 % (w/w) dengan Azotobacter  sp.  strain  AV04  pada konsentrasi  2  %  (v/w)  yaitu  dapat mencapai  nilai  efisiensi  biodegrdasi sebesar 98,03 % (Tabel 2).
Dari hasil yang telah disampaikan  menunjukkan  bahwa antara Azolla piñata mampu memberikan kontribusi penting dalam  menciptakan  kondisi  sistem bioremediasi  limbah  minyak  bumi  . Hal  ini  terjadi  karena    Azolla  piñata berperan sebagai  pemasok nutrisi N, P dan K yang efektif bagi Petrobacter.  Sedangkan  Azotobater sp.  strain  AV04  berkotribusi  dalam pemasok nutrisi N dan biosurfaktan , yang dapat mengakibatkan terjadinya kondisi optimal bagai berlangsungnya pross degradasi hidrokarbon  minyak  bumi.  Agent hayati  tersebut  juga  dapat  bekerja secara  mandiri  yang  ditunjukkan dengan nilai efisiensi yang signifikan meningkat  dibandingkan  kontrol. Namun  demikian  kinerja  sistem bioremediasi  dapat  bekerja  secara maksimal apabila kedua  agen hayati tersebut diaplikasikan secara bersama  dalam  kombinasi  yang tepat. Berdasarkan  hasil  analisis seperti dijelaskan di atas menunjukkan  bahwa  kompos  yang berasal  dari  Azolla  pinata  dapat berfungsi  sebagai  bahan  organik yang dapat memberikan kondisi yang baik  bagi  pertumbuhan  dan  aktifitas Azotobacter  sp.  strain  AV05  selama
proses biodegradasi hidrokarbon
limbah minyak bumi yang
berlangsung.  Hal  ini  disebabkan bahan  organik  Azolla  piñata  pada minggu kelima inkubasi sudah mengalami dekomposisi yang sempurna  sehingga  dapat  berperan sebagai  bahan  pemasok  nutrisi  N,  P dan  K  serta  mikronutrien  yang diperlukan untuk aktifitas Azotobacter  sp.  strain  AV04.  Hasil analisis kompos Azolla pinata menunjukkan kandungan  makro dan mikrinutrien cukup tinggi (Tabel 3.). Kandungan  bahan  organik  yang tinggi  dari  kompos  Azolla  piñata memberikan  kotribusi  yang  positif bagi  Azotobacter  sp.  strain  AV04 karena dapat mempertahankan kondisi  kelembaban  yang  diperlukan oleh  Azotobacter.    Di  samping  itu kandungan  P  dari  kompos  Azolla pinata  juga  cukup  tinggi,  hal  ini sangat  berperan  sebagai  sumber fosfat  yang  diperlukan  Azotobacter dan  petrofilik  dalam  aktifitasnya mendegradasi  hidrokarbon  selama proses  bioremediasi  berlangsung. Cookson,  1996,  mengatakan  bahwa proses bioremediasi
akan berlangsung  optimal  apabila  tersedia kandungan  fosfat  yang  memadai pada  taraf  perbandingan  C  :  N    :  P sebesar  100  :  10  :  1.  Dengan demikian peran Azolla piñata sebagai  pemasok  N  dan  P  dalam sistem bioremediasi yang berlangsung dapat memenuhi kriteria yang optimal.
Analisis  Senyawa  Hidrokarbon Limbah minyak bumi sebelum dan setelah Proses Bioremediasi Pola  karakteristik  senyawa residu  hidrokarbon  setelah  proses bioremediasi berlangsung pada
kondisi  perlakuan  kombinasi  taraf terbaik  dari  Azolla  pinata  dan biosurfaktan  AzV04  dibandingkan kontrol,  ditampilkan pada Gambar 2 a. dan b.
(a).Minggu 0 dan 1                                           (b). Minggu 0 dan 1
Gambar  2.  Kromatogram  hasil  analisis  perlakuan  kontrol  (a);  dan  perlakuan kombinasi  taraf  terbaik  (b),  pada  inkubasi/  proses  bioremediasi minggu 0 dan 1 Senyawa hidrokarbon penyusun  limbah  minyak  bumi terdiri dari 36 spesies senyawa, ke 36 jenis  hidrikarbon  penyusun  tersebut terdiri dari hidrokarbon yang beragam  yaitu  antara  hidrokarbon alifatik  yang  berantai C antara C 11 sampai  C44,  dan  senyawa  alisiklik terdiri  dari  naftalen  hidrokarbon siklo berantai 14. Setelah mengalami proses bioremediasi pada minggu  ke  1  dalam  kondisi  aplikasi hanya menggunakan petrobacter, menunjukkan  bahwa  hidrokarbon
yang terdeteksi menjadi 37 senyawa. Hal  ini  menunjukkan  pada  proses bioremediasi  periode  waktu  satu minggu terbentuk senyawa intermediate. Sedangkan pada perlakuan  aplikasi  A.  pinata  dan Azotobacter sp. strain AV04, terdeteksi  residu  hidrokarbon  hanya 26  senyawa.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  dengan  aplikasi  kedua  agent biologis  pada  dosis  terbaik  proses bodegradasi  mampu  menyisihkan hidrokarbon secara efektif dan
signifikan  hanya  dalam  waktu    satu minggu.
SIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa A. pinata terbukti  merupakan  bahan  organik yang dapat digunakan sebagai agen bioremediasi  yang  potensial,  karena berfungsi  sebagai  bahan  organik yang  menyumbangkan  unsur-unsur penting  seperti  C-organik,  N  dan  P serta    mempertahankan  kelembaban dan  aersai.  Kondisi  ini  memberikan kontribusi terhadap terciptanya lingkungan  yang optimal bagi proses bidegradasi hidrokarbon limbah minyak bumi.  Azotobacter sp. strain AV04 terbukti membantu meningkatkan efisiensi proses degrdadasi hidrokarbon minyak bumi,  karena    Azotobacter  sp.  strain AV04 membantu dalam meningkatkan  ketersediaan  substrat bagi Petrobacter akibat adanya mekanisme peningkatan dispersi senyawa  hidrokarbon  minyak  bumi berukuran  large  droplet  oil  menjadi ukuran  micelle  oil  yang  mudah segera digunakan petrobacter. Efisiensi  biodegradasi  TPH  tertinggi secara konsisten terjadi pada perlakuan A. pinnata dengan konsentrasi  10  %  (w/w)  dan  dengan Azotobacter sp. strain AV04
konsentrasi 2 % (v/w). Nilai efisiensi degradasi  yang  dapat  dicapai  pada minggu  I  dan  minggu  V  berturut- turut  sebesar  56,15  dan  98,03    %. Pada  kombinasi  kosentrasi  A.  pinata dan  Azotobacter  sp.  strain  AV04 yang  tepat  dapat  mengakibatkan kinerja proses bioremediasi berlangsung secara maksimal. UCAPAN TERIMAKSIH Diucapakan terimakasih kepada Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Departemen Pendidikan    dan  Kebudayaan    yang
telah  membiayai  penelitian  ini  pada Program  Hibah  Kompetensi  TA.
2012  dan  Ir.  Made  Renayasa  di
Pertamina Balongan Indramayu yang telah memfasilitasi tersedianya sampel  limbah  minyak  bumi  untuk digunakan dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Allen,  C.C.R.,  D.R.  Boyd,  F.
Hempenstall,  M.J.  Larkin, and N.D. Sarma. 1998. Contrasting Effect of a Nonionic  Surfactan  on  the Biotransformation of Polysiclic Aromatic Hydrocarbons to cis- Dihydrodiols by Soil Bacterial. Appl. Environ. Microbiol. 65: 1335-1339. Al-Tahhan, R.A., T.R.Sandrin., A.A. Badour,  and  R.M.  Maier. 2000.  Thamnolipid  Induce Removal of Lipopolysacaharida from Pseusodomonas  aeruginusa: Effect on Cell Surface Properties  and  Interaction with  Hidrophobic  Substrat. Appl. Environ. Microbiol. 66: 3262-3268. Arifin, Z. 2003. Azolla, Pembudidayaan dan Pemanfaatan  pada  Tanaman Padi. Penebar Swadaya. Jakarta. Atlas,  R.M.,  R.  Bartha,  and  Hsu. 1992.  Microbial  Ecology: Fundamental  and  Aplication 3 rd ed. The Benjamin/Cummings  Publh.
Com,Inc. Redwood City, California. Atlas, R.M. 2000. Bioremediation of Petroleum Polutant. International  Biodeterioration &  Biodegrdation  Journal.  35: 317 – 327. Cookson, Jhon, T. 1996. Bioremediation  Engineering Design and Application, Mc.Graw  Hill,  Inc,  United States of America. Djuangsih,  N.  1997.  Pemanfaatan Limbah  Katalis  Pasca  Perengkahan Minyak Residu untuk  Menghasilkan  Produk Semen Tersubstitusi dan Filter  Aspal  Beton  yang Aman dan Akrab Lingkungan.  Riset Unggulan Terpadu Menristek. Iwabuchi,  N.,  M.  Sunairi,  M.  Urai, C.  Itoh,  H.  Anzai,  and  S. Harayama. 2002. Extracellular  Polysacharides of  Rhodococus  rhodochrous S-2 Stimulate the Degradation  of  Aromatic Components in Crude Oil by Indigenous  Marine  Bacteria.
Appl.  Environ.  Microbiol. 68: 2337.
Pertamina.  2005.    Produksi  Minyak Nasional, Majalah Pertamina, IV-5.
Suryamana,  P.  2006.  Biodegradasi Hidrokarbon  Minyak  Bumi dengan Penambahan Azotobacter Chroococcum Ac04 sebagai Bakteri Penghasil Biosurfactan. Disertasi Program Studi Teknik Lingkungan Program Pasca sarjana, ITB. Bandung (tidak dipublikasikan).