Jurnal Lahan Suboptimal ISSN: 2252-6188 (Print), ISSN: 2302-3015 (Online, www.jlsuboptimal.unsri.ac.id) Vol. 3, No.1: 90-96, April 2014
Degradasi Tanah Lahan Suboptimal oleh Bacillus mycoides Indigenous dan Kinetika Reaksinya
Degradation Soil of Suboptimal Land by Bacillus mycoides Indigenous and its Kinetics Reaction
Zainal Fanani *)1 , Bambang Yudono 1 dan Veriana Romarito Situmorang 2
1 Jurusan Kimia FMIPA Universitas Sriwijaya
2 Alumni Jurusan Kimia FMIPA Universitas Sriwijaya Telp./Faks. +62711580269
*) Penulis untuk korespondensi: unsri@sentrahakiunsri.ac.id

## ABSTRACT
Research about degradation soil of suboptimal land from  Lilin River PERTAMINA Musi  Banyuasin  Regency,  South  Sumatera  have  been  done.  The  aim  of  this  research  is knowing  the  capability  of Bacillus  mycoides on  degradation  petroleum  hydrocarbon.  The measurement of first sludge TPH was 71.1567%. First TPH was become more liquid than before  on  5;  7.5;  10;  12.5  and  15%  with  fresh  soil,  bulking  agent  and Bacillus  mycoides was added 10% from medium total weight. Incubation for 14 days gives result decreasing TPH on each medium become 2.3679; 4.5123; 5.9070; 6.0223 and 8.0010% which is first order reaction. Medium 10% on incubation day 14 th ; 17 th ; 22 nd ; 26 th and 31 st . On continue, decreasing TPH is  5.9070;  4.5970;  4.0463;  3.7230 and 3.29% with  constant  rate reaction on  0.0361  day -1 .  GC-MS  result  sample  analysis  shows  that Bacillus  mycoides have  an ability  to  degradation  C 19 H 40 ;  C 21 H 44 ;  C 24 H 50 and  C 28 H 58 with  percentage  of  concentrate decreasing from those compound is 99.32%.
Keywords: Differential, order, TPH

## ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian biodegradasi tanah lahan suboptimal yang terkontaminasi minyak  bumi  asal  PERTAMINA  Sungai  Lilin  Kabupaten  Musi  Banyuasin  Sumatera Selatan.  Penelitian  ini  bertujuan  menentukan  kemampuan Bacillus  mycoides dalam mendegradasi hidrokarbon minyak bumi. Pengukuran TPH awal sludge adalah 71,1567%. TPH  awal  diencerkan  menjadi  5,  7,5,  10,  12,5  dan  15%  dengan  tanah  segar  dan bulking agent serta  ditambahkan  inokulasi  bakteri Bacillus  mycoides sebanyak  10%  dari  total bobot  media.  Inkubasi  selama  14  hari  memberikan  hasil  penurunan  TPH  tiap  media menjadi  2,3679,  4,5123,  5,9070,  6,0223  dan  8,0010%  dengan  reaksi  berorde  satu.  Media 10% pada inkubasi hari ke-14, 17, 22, 26 dan ke-31. Secara berturut-turut, penurunan TPH adalah  5,9070,  4,5970,  4,0463,  3,7230  dan  3,29%  dengan  konstanta  laju  reaksi  sebesar 0,0361  hari -1 .  Hasil  analisa  GC-MS  menunjukkan  bahwa Bacillus  mycoides mampu mendegrasi  C 19 H 40 ,  C 21 H 44 ,  C 24 H 50 dan  C 28 H 58 dengan  persen  penurunan  kosentrasi  dari senyawa-senyawa tersebut sebesar 99,32%.
Kata kunci: Diferensial, orde, TPH

## PENDAHULUAN
Lahan  suboptimal  adalah  lahan  yang tidak dapat secara obtimal dalam pemanfaatannya karena beberapa hal antara lain minim unsur hara, pengairan yang tidak
bisa  optimal  dan  pencemaran  lahan  karena aktifitas manusia. Aktivitas industri perminyakan umumnya menghasilkan limbah  minyak  dan  terjadi  tumpahan  baik di  tanah  maupun  perairan  (Nugroho  2006).
Limbah  dan  tumpahan  tersebut  akan semakin meningkat sejalan dengan meningkatnya  aktivitas  industri  perminyakan di  lapangan.  Penanganan  yang  tidak  tepat dapat  mengakibatkan  pencemaran  tanah s ehingga  tanah  perkebunan  akan  berubah menjadi lahan suboptimal (Santosa 2003).
Usaha perbaikan tanah lahan suboptimal akibat dari limbah minyak bumi secara konvensional hasilnya kurang memuaskan.  Membuang  bahan  pencemar dengan  membenamkannya  kedalam  tanah tidak menanggulangi masalah. Bahan tersebut  dapat  meresap  ke  dalam  air  tanah dan  mencemari  perairan.  Alternatif  lain yang  dapat  digunakan  dalam  pemulihan lahan  suboptimal  tersebut  adalah  teknologi bioremediasi  yaitu  menggunakan  bakteri untuk  mengurai  rantai  hidrokarbon  yang terdapat  pada  minyak  bumi.  Penerapannya pada  lahan  suboptimal  akibat  tercemar minyak bumi dapat mengurangi konsentrasi limbah  minyak  yang  ada  dan  membantu usaha  penormalan  kembali  lingkungan tersebut  (Yani et  al. 2003).  Keputusan Menteri  No.04/1995  menyebutkan  bahwa pengolahan  limbah  minyak  bumi  secara biologis harus dapat menurunkan konsentrasi  hidrokarbon  hingga  mencapai ambang  batas  yang  disyaratkan  aman  bagi lingkungan
yaitu 10.000
ppm (Edvantoro 2003).
Aktivitas bakteri dalam mendegradasi minyak  bumi  tergantung  kepada  fisiologi bakteri  dan  kondisi  beberapa  parameter lingkungan setempat, yaitu pH, kelembaban, aerasi, temperatur dan ketersediaan  nutrisi.  Pemilihan  inokulan yang  sesuai  dan  menciptakan  kondisi lingkungan  yang  optimal  untuk  bakteri dapat  mempercepat  proses  biodegradasi sehingga memungkinkan terjadinya pengurangan konsentrasi hidrokarbon secara maksimal. Bioremediasi dapat dilakukan  dengan  menggunakan  bakteri indigenous  maupun  menginokulasi  bakteri terpilih dari tempat lain. Beberapa penelitian  juga  telah  menginokulasi  bakteri pendegradasi  minyak  bumi  dari  daerah disekitar  limbah  minyak  bumi  itu  berada (Kim et al . 2005).
Bakteri Bacillus mycoides merupakan spesies  bakteri  dari  Genus Bacillus yang merupakan  salah  satu  dari  jenis  bakteri yang  dapat  mendegradasi  limbah  minyak bumi.  Bakteri  pendegradasi  contohnya Pseudomonas sp. ,  Bacillus sp., Nocardia sp., Staphylococcuc sp. mendegradasi rantai hidrokarbon dari minyak bumi dan menjadikannya  sebagai  sumber  nutrisi untuk  berkembang  biak  (Herdiyantoro 2005). Herdiyantoro (2005) juga menyebutkan  bahwa  bakteri  dari  Genus Bacillus ini dapat menghasilkan biosurfaktan  yang  dapat  meningkatkan kemampuan  mendegradasi  limbah  minyak bumi.
Penelitian  degradasi  tanah  lahan  sub optimal  yang  terkontaminasi  minyak  bumi oleh Bacillus mycoides dan untuk menentukan keberhasilan degradasi tersebut maka  dianalisa  penurunan  kandungan senyawa-senyawanya  dengan  mengunakan alat  GC-MS.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk menentukan  kinetika  biodegradasi  tanah terkontaminasi  minyak  bumi  oleh Bacillus mycoides dan  menentukan  orde  reaksi  dan konstanta  laju  degradasinya,  menentukan kemampuan Bacillus mycoides untuk menurunkan  TPH  dan  menentukan  jenis rantai hidrokarbon yang mampu didegradasi oleh Bacillus mycoides .

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah tanah  terkontaminasi  minyak  bumi  yang diambil  dari  lahan  suboptimal  PERTAMINA Sungai  Lilin,  Kabupaten  Musi  Banyuasin, Sumatera  Selatan,  Inokulum  bakteri Bacillus mycoides yang  diperoleh  dari  sekitar  lahan terkontaminasi  minyak  tersebut,  tanah  segar, n-heksan  sebagai  pelarut,  pupuk  urea,  TSP dan  KCl  serta  serbuk  kayu  sebagai Bulking agent .
Alat  yang  digunakan  dalam  proses penelitian  ini  adalah  Box  media  yang berukuran  13  L,  sekop  kayu  untuk  aerasi, Bekker  gelas,  gelas  ukur,  pipet  ukur,  pipet tetes, labu takar, tabung autoklaf, seperangkat alat ekstraksi berupa Sohxlet, oven, desikator, timbangan, soil tester, dan instrumen GC-MS.
Pengukuran TPH Awal TPH  awal  yang  dimaksud  adalah Total Petroleum Hydrocarbon yang terkandung  pada  tanah  lahan  suboptimal yang terkontaminasi minyak sebelum mendapat  perlakuan  lain.  Tanah  lahan suboptimal terlebih dahulu dibersihkan dari pengotor-pengotor  misalnya  plastik  dan kayu.  Tanah  tersebut  dipanaskan  dalam Bekker gelas bersih pada oven dengan suhu 100 o C  -  110 o C.  Tanah  yang  sudah dipanaskan, kembali didinginkan dan ditimbang  sebanyak  5  g  untuk  diekstrak dengan  menggunakan  pelarut  n-heksan  dan alat  Soxhlet.  Proses  ekstraksi  dengan metode  sokletasi  dilakukan  sampai  isi tabung  Soxhlet  terlihat  jernih  dan  ekstrak sampel  tanah  tertampung  di  labu  didih didestilasi  pada  suhu  69 o C,  selanjutnya ekstrak  tanah  sampel  yang  terdapat  di  labu didih  dimasukkan  ke  dalam  desikator  dan ditimbang  hingga  diperoleh  hasil  yang tepat.  Perulangan  dilakukan  agar  didapat kondisi  TPH  awal  yang  lebih  tepat  untuk mewakili  nilai  TPH  awal  dari  sampel tersebut.

## Pembuatan Media
Hasil TPH awal dari tanah terkontaminasi  minyak  bumi  di  atas diketahui  maka  dibuat  media  dengan berbagai konsentrasi dengan mengencerkan %TPH awal dari sampel tanah menjadi 5,0; 7,5;  10,0;  12,5  dan  15,0%  dengan pengencer  berupa  tanah  segar  (TS)  dan bulking  agent (BA).  Tanah  segar  diperoleh dari  daerah  yang  bukan  lahan  pertanian, bukan tanah yang mengandung kompos dan bukan  tanah  berpasir,  sedangkan bulking agent yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  serbuk  kayu  yang  sudah  berukuran lebih  halus.  Massa  setiap  bahan  (sampel tanah : tanah segar : bulking agent ) dihitung dengan perbandingan tertentu. Setiap media dihaluskan agar tidak terdapat sampel tanah yang  menumpuk.  Dilakukan  homogenisasi dan  diukur  TPH  awal  untuk  setiap  media 5,0%;  7,5%;  10,0%;  12,5%  dan  15,0% (TPH 0 ).  Setiap  media  memiliki  massa  total sebesar 1000 g.
Penambahan Bacillus  mycoides pada Media
Media  yang  sudah  disediakan  selalu dijaga kelembabannya dengan cara disirami air  bersih  sebelum  bakteri  dimasukkan  ke dalam  media.  Sebagai  nutrisi  bakteri sebelum mendegradasi hidrokarbon minyak bumi  sebagai  makanannya  ditambahkan nutrien  N,  P  dan  K  dengan  rasio  5:1:0,1. Nutrisi  ini  diperoleh  dari  pupuk  urea sebagai  sumber  N,  pupuk  TSP  sebagai sumber  P  dan  pupuk  KCl  sebagai  sumber K.  Sementara  unsur  C  diperoleh  dari sampel  tanah.  Setelah  media  ditambahkan dengan  nutrien,  dijaga  kelembabannya, maka dimasukkan isolat Bacillus mycoides . Sterilisasi  tetap  dijaga  pada  saat  bakteri dicampur  dengan  media.  Proses  media dicampur dengan Bacillus mycoides dilakukan  pada  suhu  ruangan.  Setelah dicampur,  maka  dilakukan  pengadukan (aerasi).  Tujuan  aerasi  adalah  agar  bakteri tersebar merata pada media. Masing-masing media dicampurkan dengan bakteri Bacillus mycoides sebanyak  100  mL  atau  10%  dari massa total media.
Biodegradasi oleh Bakteri Bacillus mycoides
Kelembaban media bioremediasi dijaga  pada  (40),  pH  (5,8-6,5)  dan dilakukan  aerasi  setiap  hari.  Derajat keasaman (pH)  dan kelembaban dijaga dan diukur  dengan soil  tester .  Jika  pH  naik, maka  disemprot  dengan  larutan  dolomit (kapur)  dengan  konsentrasi  1  N.  Jika kelembaban menurun, maka disiram dengan air  bersih  sampai  kondisi  kelembaban normal.  Setelah  14  hari  waktu  inkubasi maka  diukur  TPH  dari  masing-masing media (TPH 14 ) dan dihitung orde reaksinya dengan  Metode  Differensial.  Khusus  untuk media 10,0%, TPH diukur pada hari ke-14, 17,  22,  26  dan  ke-31  waktu  inkubasi    dan dari  data  nilai  konstanta  laju  degradasi dihitung dengan metode Integral. TPH 0 dan TPH 31 dari  media  10%  diuji  kandungan hidrokarbonnya  dengan  menggunakan  GC- MS  sehingga  diperoleh  dugaan  komponen hidrokarbon  yang  mampu  didegradasi  oleh Bacillus mycoides.

## Analisis Data
Penentuan  orde  reaksi  menggunakan metode  diferensial,  sedangkan  penentuan konstanta  reaksi  menggunakan  metode integral.

## HASIL
Penurunan  TPH  dari  tiap  media bioremediasi setelah 14 hari waktu inkubasi disajikan pada Tabel 1, sedangkan pengukuran TPH dari media 10% pada hari ke-14, 17, 22, 26 dan ke-31 waktu inkubasi disajikan pada Gambar 1. Untuk menentukan dugaan senyawa yang mengalami  biodegradasi  ditentukan  dengan GC-MS (Tabel 2).

## PEMBAHASAN

## Penurunan TPH
Rata-rata  penurunan  TPH  selama waktu  inkubasi  14  hari  adalah  39,48% (Tabel 1). Persen penurunan ini menunjukkan  bahwa  media  bioremediasi memberikan  kondisi  yang  baik  untuk Bacillus  mycoides sebagai  pendegradasi
hidokarbon  sehingga Bacillus  mycoides bekerja  dengan  baik.  Fungsi  penambahan bulking  agent yang  berupa  serbuk  kayu pada  penelitian  ini  adalah  sebagai  rongga antara  sampel  tanah  dengan  tanah  segar (porositas).  Rongga  berupa  bulking  agent ini  dapat  memberikan  aerasi  untuk  bakteri Bacillus mycoides yang bersifat aerob untuk dapat  tumbuh  dengan  baik  dan  dapat mendegradasi  hidrokarbon  minyak  bumi untuk  sumber  energi  pertumbuhannya. Estuningsih et  al. (2008)  menyebutkan bahwa  media  bioremediasi  menggunakan tanah  segar  dari  sekitar  lahan  yang terkontaminasi  minyak  bumi  yang  diteliti. Tujuan  pemberian  nutrisi  pada  media adalah  untuk  menyediakan  nutrisi  awal yang  dapat  dikonsumsi  oleh  bakteri Bacillus  mycoides sebelum  mendegradasi hidrokarbon minyak bumi untuk kelangsungan  hidupnya.  Estuningsih et  al. (2008)  melaporkan  bahwa  rasio  C:N:P sebesar  100:5:1  memberikan  hasil  yang paling  baik  dalam  proses  biodegradasi tanah terkontaminasi minyak bumi.
Tabel 1. Penurunan TPH setelah 14 hari waktu inkubasi
0 2 4 6 8 10 12 0 10 20 30 40 waktu inkubasi (hari) T P H ( % )
Gambar 1. Grafik penurunan TPH pada media 10%
Media TPHawal TPH setelah 14 hari waktu inkubasi % Penurunan 5,0% 7,5% 10,0% 12,5% 15,0% 4,1772% 6,6009% 9,8196% 10,8693% 13,4163% 2,3679% 4,5123% 5,9070% 6,0223% 8,0010% 41,18 31,64 39,84 44,59 40,14
Rata-rata % penurunan TPH =  39,478
Tabel 2. Daftar komponen hidrokarbon yang didegradasi oleh Bacillus mycoides dari Analisa GC-MS No Dugaan senyawa Waktu retensi Luas puncak %Penurunan luas puncak TPH awal TPH akhir 1 2 3 4 C 19 H 40 C 21 H 44 C 24 H 50 C 28 H 58 19.272 20.275 21.227 23.006 11532410 12235678 10924657 8595758 51086 62664 161593 22005 99,55 99,48 98,52 99,74
Rata-rata % penurunan Peak Area  = 99,3225%
Keterangan:    Angka-angka  yang  diikuti  huruf  yang  sama  pada  baris  yang  sama  berarti  berbeda  tidak  nyata pada uji BNT 5%
y = 1.0378x - 3.6436 R 2 = 0.9276 -2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 ln C ln r Gambar 2. Grafik penentuan orde reaksi dengan metode differensial y = -0.0362x + 2.2448 R 2 = 0.9733 0 0.5 1 1.5 2 2.5 0 5 10 15 20 25 30 35 waktu inkubasi (hari) ln T P H
Gambar 3. Grafik penentuan konstanta laju degradasi dengan metode integral
Untuk  menentukan  penurunan  TPH setiap  saat  maka  dipilih  dari  media  10% pada hari ke-14, 17, 22, 26 dan ke-31 waktu inkubasi  dan  disajikan  pada  Gambar  1. Grafik  penurunan  TPH  tersebut  dapat menunjukkan bahwa bakteri Bacillus mycoides bekerja  dengan  baik  dalam
mendegradasi  limbah  minyak  bumi  yang terkandung  dalam  media.  Selama  31  hari waktu  inkubasi  bakteri Bacillus  mycoides mampu  menurunkan  TPH  sebesar  66,5% dengan  rata-rata  persen  penurunan  sebesar 2,15% per hari. Penurunan TPH berlangsung  sangat  cepat  pada  hari  ke-14
waktu  inkubasi  dengan  persen  penurunan TPH  sebesar  2,82%  per  hari  karena  pada awal waktu inkubasi terjadi proses biodegradasi oleh Bacillus mycoides dengan  menggunakan  hidrokarbon  minyak bumi  yang  lebih  mudah  untuk  didegradasi. Menurut  Fatima et  al. (2003),  di  dalam proses  biodegradasi  hidrokarbon  minyak bumi  akan  terjadi  penguraian  fraksi parafinik,  naftenik  dan  aromaik.  Parafinik merupakan  fraksi  yang  paling  mudah didegradasi, sedangkan naftenik dan aromatik  lebih  sulit  untuk  didegradasi.  Hal tersebut  berkaitan  dengan  perbandingan bobot  unsur-unsur  karbon  dan  hidrogen yang  terdapat  didalamnya  atau  perbedaan susunan  unsur-unsur  karbon  dan  hidrogen didalam  molekul-molekul  persenyawaan tersebut (Kim et al. 2005).

## Identifikasi  Senyawa Terbiodegradasi
Data  pada  Tabel  2  menunjukkan persen  penurunan  yang  signifikan  pada setiap  puncak  yang  dibandingkan  dengan waktu  retensi  yang  identik.  Penurunan  luas puncak  pada  senyawa-senyawa  diatas mencapai angka rata-rata 99,3225%. Dugaan  senyawa  yang  dapat  didegradasi oleh Bacillus  mycoides adalah  senyawa alkana  (C n H 2n+2 ).  Berdasarkan  data  daftar komponen  hidrokarbon  yang  didegradasi oleh Bacillus  mycoides dari  Analisa  GC- MS  diatas  terlihat  bahwa  bakteri Bacillus mycoides mampu  mendegradasi  senyawa hidrokarbon rantai panjang. Senyawa hidrokarbon  rantai  panjang  yang  dapat didegradasi  oleh  bakteri Bacillus  mycoides antara  lain  C 19 H 40 ,  C 21 H 44 ,  C 24 H 50 dan C 28 H 58 .
Kinetika  Degradasi  pada  Tanah  oleh Bacillus mycoides
Untuk menentukan orde reaksi kinetika  degradasi  tanah  lahan  suboptimal oleh Bacillus  mycoides menggunakan metode  differensial.  Pengujian  data  hasil pengamatan  dari  penurunan  TPH  untuk setiap konsentrasi 5, 7,5, 10, 12,5 dan 15% disajikan  dalam  grafik  penentuan  orde reaksi  dengan  metode  differensial  (Gambar 2).  Laju  reaksi  biodegradasi  (r)  ditentukan
dengan  menghitung  perubahan  penurunan TPH  tiap  waktu  (hari)  tertentu  pada konsentrasi TPH yang terukur (C). Menurut metode differensial kemiringan garis (1,0378)  merupakan  orde  reaksi  sehingga disimpulkan orde reaksi biodegradasi adalah  orde  satu.    Untuk  menguji keakuratan  orde  satu  ini  digunakan  metode integral  dan  sekaligus  untuk  menentukan konstanta reaksinya.
Metode  integrasi  untuk  orde  satu berlaku persamaan:
TPHo kt TPH ln ln   
sehingga  konstanta  reaksi  degradasi  (k) dapat  ditentukan  dengan  memplotkan  ln TPH  sebagai  sumbu- y dengan  waktu inkubasi sebagai sumbu- x sehingga diperoleh  grafik  pada  Gambar  3.  Dengan kemiringan garis dapat ditentukan konstanta laju degradasi sebesar 0,0361 per hari  dan  dari  intersep  diperoleh  TPHo sebesar 2,25% sehingga diperoleh persamaan laju degradasi:
25 , 2 ln ) 0361 , 0 ( ln    t TPH
Batas ketentuan supaya lahan suboptimal  dapat  dimanfaatkan  apabila kandungan  TPH  maksimal  1%  (KEPMEN Lingkungan  Hidup  2003)  sehingga  dengan persamaan  laju  degradasi  yang  diperoleh dapat  ditentukan waktu  (t)  yang diperlukan yaitu sebesar 62,5 hari. Hal ini mempunyai arti  bahwa  dengan  waktu  tiga  bulan biodegradasi  tanah  lahan  suboptimal  yang tercemar minyak bumi sudah dapat dimanfaatkan  kembali  untuk  bercocok tanam.

## KESIMPULAN
Bacillus  mycoides mampu  mendegradasi tanah  lahan suboptimal  yang  terkontaminasi minyak  bumi  dengan  persen  penurunan  TPH rata-rata    sebesar  39,48%  dengan  orde  reaksi satu  dan  konstanta  reaksi  0,0361  per hari serta  persen  penurunan  konsentrasi  alkana sampai 99,32%. Penormalan lahan suboptimal  tersebut  diperlukan  waktu minimal tiga bulan.

## DAFTAR PUSTAKA
Edvantoro BB. 2003. Implementasi peraturan tentang pengelolaan limbah B3  dan  bioremediasi  di  Indonesia. Prosiding  Seminar  Bioremediasi  dan Rehabilitasi lahan Sekitar Perminyakan dan Pertambangan . Bogor,  20  Februari  2003.  Bogor: Forum Bioremediasi IPB.
Estuningsih  SP,  Said  M,  Yudono  B,
Munawar,  Nasrudin.  2008,  Kegiatan pengolahan tanah terkontaminasi minyak bumi secara biologis (Bioremediasi)  di  lapangan  Sei  Lilin Field Jambi. Pusat penelitian Lingkungan Hidup, Universitas
Sriwijaya. Hlm 1-79. Fatima  MB,  Camargo  FAO,  Okeke  B, Frankenberger-Junior WT. 2003.
Bioremediation  of  soil  contaminated by  diesel  oil. Brazilian  Journal  of
Microbiology 34(1).
Herdiyantoro D. 2005. Biodegradasi hidrokarbon minyak bumi oleh
Bacillus sp. dari Ekosistem Air Hitam Kalimantan Tengah dengan penambahan surfaktan [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, IPB.
KEPMEN  Lingkungan  Hidup.  2003. Tata Cara Dan Persyaratan Teknis
Pengolahan  Limbah  Minyak  Bumi Dan  Tanah  Terkontaminasi  Oleh
Minyak Bumi Secara Biologis . Kim  SJ et  al. 2005.  Evaluation  of bioremediation effectiveness on crude oil contaminated sand. Journal ChemoSphere 59:845. Nugroho A. 2006. Bioremediasi Hidrokarbon  Minyak  Bumi .  Graha Ilmu Universtitas Trisakti, Indonesia Santosa DA. 2003.
Environmental biotechnology: biotechnology for degradation  of  oil  sampel  tanah, remediation  of  acid  rock  drainage  and detoxification  of  mercury. Prosiding Seminar  Bioremediasi  dan  Rehabilitasi Lahan Sekitar Perminyakan dan Pertambangan .  Bogor,  20  Februari 2003. Bogor: Forum bioremediasi IPB . Yani  M,  Fauzi  AM,  Aribowo  F.  2003.
Bioremediasi  lahan  terkontaminasi senyawa hidrokarbon. Prosiding Seminar Bioremediasi dan rehabilitasi lahan Sekitar Perminyakan dan Pertambangan . Bogor, Forum Bioremediasi IPB.