## AKTIVITAS ANTIFUNGI EKSTRAK DAUN PICUNG TERHADAP CENDAWAN Botryodiplodia theobromae PENYEBAB MATI PUCUK BIBIT JABON MERAH
Antifungal Activity of Picung Leaf Extracts Against Botryodiplodia theobromae A Dieback Fungus of Jabon Merah Seedling
L.M. Alfin Agushara Bena 1 , Achmad 2 , dan Syamsul Falah 3
1) Mahasiswa pascasarjana Program Studi Silvikutur Tropika, Fakultas Kehutanan IPB,
2) Staf Pengajar pada Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan IPB,
3) Staf Pengajar pada Departemen Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam IPB, Kampus Dramaga, Bogor-16680.

## ABSTRACT
Invasion of Botryodiplodia theobromae as a dieback fungus on jabon merah ( Anthocephalus macrophyllus ) seedlings is a crucial issues. This pathogenic fungus needs to be controlled precisely. Phytochemical compounds of plant material is one alternative fungicides. Crude extracts of picung ( Pangium edule ) leaf in water and methanol solvent known to have antifungal potential. However, its activity against B. theobromae need to be revealed. In vitro assay aimed to measuring antifungal  activity  of  water  and  methanol  extracts  of  picung  leaf  on  controlling  growth  of B.  theobromae pathogenic fungus.  Hot  water  extraction  and  maceration  in  methanol  was  conducted  to  obtain  crude  extract  materials.  In-vitro antifungal  assay  of  water  and  methanol  extracts  of  picung  leaf  was  conducted  by  food  poisoning  method  on  Potato Dextrose Agar media. The results showed that water and methanol extracts of pangi leaf be able to suppress the growth of B.  theobromae on  the  first  day  of  observation,  with  the  highest  antifungal  index  reached  100%  at  concentration  of 25mg/mL  and  50mg/mL,  respectively.  This  indicates  that  water  and  methanol  extracts  of  picung  leaf  have  antifungal activity. Generally, there was a trend of decrease in antifungal index over time.
Key words: antifungal activity, Botryodiplodia theobromae , jabon merah, picung

## PENDAHULUAN
Serangan  cendawan  patogen  penyakit  mati  pucuk ( dieback ) pada bibit tanaman jabon merah ( Anthocephalus  macropyllus )  menjadi  masalah  krusial yang  perlu  dikendalikan.  Kondisi  bibit  yang  masih sukulen  rentan  terhadap  gangguan  penyakit  sehingga berpotensi  menjadi  inang  bagi  patogen  (Aisah et  al . 2015).  Cendawan  patogen  penyebab  mati  pucuk  pada bibit  Jabon  merah  adalah Botryodiplodia  theobromae . Yanti et  al. (2015)  melaporkan  kejadian  penyakit  mati pucuk  pada  bibit  jabon  merah  yang  terinfeksi B. theobromae mencapai  100%  dengan  tingkat  keparahan 38%.
B. theobromae (sinonim: Lasiodiplodia theobromae ) merupakan  anamorf  dari Botryosphaeria  rhodina , konidia  berbentuk  elipsoidal  bersel  dua  (Watanabe 2002). Cendawan ini diketahui sebagai patogen tanaman berkayu  khususnya  di  daerah  tropis  (Ellis et  al. 2007). B.  theobromae menyebabkan  busuk  jaringan  pada  yam putih  ( Dioscorea  rotundata ) di  Nigeria  (Markson et  al . 2012),  patogen intercrops di  Ghana  menyebabkan busuk  jaringan  pada  buah  coklat,  mangga,  pisang  dan yam  (Twumasi et  al .  2014),  patogen  mati  pucuk  pada Pouteria sapota di Meksiko (Pedraza et al . (2013), dan merupakan  patogen  primer  penyakit  mati  pucuk  pada bibit  jabon  putih  ( A.  cadamba )  dengan  tingkat
patogenisitas yang tinggi hingga menimbulkan kematian bibit (Aisah 2014).
Salah  satu  cara  pengendalian B.  theobromae yang potensial  untuk  dikembangkan  adalah  pemanfaatan biopestisida  yang  berasal  dari  ekstrak  tumbuhan,  cara pengendalian tersebut lebih ramah lingkungan. Menurut Chye  dan  Sim  (2009)  metabolit  sekunder  tumbuhan merupakan  sumber  terbaik  senyawa  fitokimia  sebagai antimikroba.  Eksplorasi  dan  studi  efektifitasnya  terus dilakukan  saat  ini  untuk  memberikan  informasi alternatif bahan aktif pestisida. Picung ( Pangium edule ) adalah  salah  satu  spesies  tumbuhan  yang  telah dilaporkan memiliki potensi antimikroba.
Picung  merupakan  anggota  famili  Silacaceae (sebelumnya  ditempatkan  pada  Flacourtiaceae)  yang dikenal  dengan  nama  lokal  kluwak,  pucung,  pucong, pakem  (Jawa),  kepayang,  kapenceung,  kapecong, kepayang,  simuang,  kayu  tuba  buwah  (Sumatera), picung,  pucung,  pacung  (Sunda)  (Lim  2013).  Daun picung dimanfaatkan sebagai obat anti-jamur pada kulit manusia atau sebagai pembunuh  kuman (Partomihardjo dan  Rugayah  1989).  Ekstrak  air  daun  atau  buah  segar picung  digunakan  sebagai  obat  luar  untuk  meredakan proses pembusukan jaringan ( putrefaksi ) dan mengeliminasi  parasit  pada  manusia  (Wiart  2006). Ekstrak  kasar  metanol  daun  picung  bersifat  antibakteri Bacillus  cereus , Escherichia  coli , Staphylococcus aureus , Salmonella  typhimurium dan Pseudomonas
aeruginosa (Suhardi 2009) serta  menunjukkan aktivitas antifungi  terhadap  cendawan  patogen  antraknosa Colletotrichum gloeosporioides pada mangga ( Mangifera indica ) dan C. capsici pada cabai ( Capsicum annuum ) (Johnny et al . 2010; 2011).
Potensi  antimikroba  khususnya  antifungi  dari ekstrak air dan metanol daun picung dalam mengendalikan  cendawan B.  theobromae , patogen  mati pucuk bibit jabon merah belum pernah dilaporkan. Oleh sebab  itu,  studi  aktivitas  antifungi  dari  ekstrak  air  dan metanol daun picung perlu dilakukan.

## TUJUAN PENELITIAN
Penelitian ini bertujuan untuk  mengungkap aktivitas antifungi  dari  ekstrak  air  dan  ekstrak  metanol  daun picung dalam mengendalikan pertumbuhan cendawan B. theobromae penyebab  mati  pucuk  bibit  jabon  merah secara in vitro .

## BAHAN DAN METODE

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penyiapan  isolat  cendawan  patogen B.  theobromae serta  uji  aktivitas  antifungi  dari  ekstrak  air  dan  ekstrak metanol  daun  picung  dilakukan  di  Laboratorium Penyakit  Hutan  Institut  Pertanian  Bogor  (IPB). Ekstraksi daun picung dilakukan di Laboratorium Kimia Kayu IPB. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret sampai Juli 2016.

## Alat dan Bahan Penelitian
Peralatan  yang  digunakan  adalah  cawan  petri  kaca diameter  9  cm, cork  borer diameter  6mm,  mikropipet, inkubator, mikroskop  cahaya, laminar  air  flow, autoclave , water  bath , rotary  vacuum  evaporator , beaker  glass ,  toples  kaca,  erlenmeyer,  tabung  reaksi, dan kamera digital.
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun  picung  yang diperoleh dari pohon yang tumbuh di hutan kampus IPB Darmaga,  isolat B.  theobromae koleksi  Laboratorium Penyakit  Hutan  IPB,  media  biakan Potato  Dextrose Agar (PDA), chloramphenicol ,  alkohol  70%,  aquades steril,  metanol  98%,  dan  kertas  saring  Whatman  no.1 (diameter 150 mm).

## Studi pendahuluan
Isolat  cendawan  patogen B.  theobromae diperoleh dari  koleksi  Laboratorium  Penyakit  Hutan  IPB.  Isolat kemudian diremajakan dan dipelihara pada media kultur PDA selektif dengan tambahan antibiotik chloramphenicol 50 mg/L. Penambahan
chloramphenicol pada  media  PDA  merujuk  pada Twumasi et  al .  (2014)  untuk  menghindari  kontaminasi bakteri.
Bahan ekstraksi daun picung berupa simplisia kering dari  daun  picung  tua.  Daun  tua  yang  dipilih  memiliki ciri helaian daun berbentuk jantung  melebar di pangkal dan  ujung  daun  meruncing,  permukaan  atas  daun
berwarna  hijau  mengkilap,  permukaan  bawahnya berbulu  rapat  warna  coklat  (Sari  dan  Suhartati  2015). Daun  dikering-anginkan  selama  sepuluh  hari  kemudian digiling  hingga  halus  (Johnny et  al .  2011;  Mora et  al . 2014).  Simplisia  kering  kemudian  ditetapkan  kadar  air yang mengacu pada Suhardi (2009), sehingga diperoleh kadar air simplisia kering 8.16%.
Ekstraksi  dilakukan  menggunakan  dua  jenis  pelarut polar,  yaitu  air  (aquades)  dan  metanol  teknis  98%. Kedua  pelarut  dipilih  berdasarkan  pertimbangan ekonomis dan kemudahan aplikasi. Metode ekstraksi air panas dan metanol merujuk pada Falah et al . (2010) dan Suhardi (2009) dengan  modifikasi. Perbandingan bobot simplisia  dengan  volume  pelarut  untuk  ekstraksi  air panas  dan  maserasi,  masing-masing  1:4  dan  1:3. Ekstraksi  dengan  air  panas  dilakukan  pada waterbath suhu  100 o C  selama  4  jam,  sedangkan  ekstraksi  dengan pelarut  metanol  dilakukan  pada  suhu  ruangan  selama  3 hari  dan  dimaserasi  kembali  sebanyak  3  kali.  Ekstrak disaring menggunakan kertas saring Whatman no.1 dan dikeringkan  menggunakan rotary  vacuum  evaporator pada  suhu  60ºC.  Rendemen  ekstrak  air  dan  metanol yang  diperoleh  masing-masing  sebesar  14.91%  dan 16.01%.
Ekstrak  kering  berupa  padatan  digunakan  untuk membuat  larutan  perlakuan.  Ekstrak  kering  dilarutkan dalam  aquades  steril  dengan  konsentrasi  sesuai perlakuan.  Khusus  untuk  ekstrak  metanol,  sebelum dilarutkan  ke  dalam  aquades  didahului  pemberian  dua tetes  (±0.1  mL)  pelarut  untuk  melarutkan  ekstrak,  hal yang  sama  juga  dilakukan  pada  larutan  perlakuan kontrol.
Konsentrasi ekstrak perlakuan yang diujikan adalah: (A)  kontrol,  aquades  tanpa  ekstrak;  (B)  ekstrak  25 mg/mL; (C) ekstrak 50 mg/mL; (D) ekstrak 75 mg/mL; (E)  ekstrak  100  mg/mL.  Larutan  perlakuan  disterilisasi menggunakan autoclave pada  suhu  121 o C  selama  15 menit,  merujuk  pada  Achmad et  al .  (2012)  dan  Winara (2014).

## Uji Aktivitas Antifungi Ekstrak Daun Picung secara In Vitro
Pengujian  aktivitas  antifungi  ekstrak  daun  picung terhadap B.  theobromae pada  media  padat  dilakukan berdasarkan metode peracunan makanan ( poisoned food technique )  (Vyas 1984).  Perlakuan  ekstrak  air  dan ekstrak  metanol  diuji  terpisah,  masing-masing  ekstrak terdiri  atas  5  perlakuan.  Sebanyak  2  mL  dari  masing- masing  larutan  perlakuan  dimasukkan  ke  dalam  cawan pertri  steril  diameter  9  cm,  kemudian  ke  dalam  cawan yang  sama  dicampurkan  10  mL  media  PDA,  digoyang hingga homogen. Untuk perlakuan kontrol, ditambahkan  2  mL  aquades  tanpa  ekstrak  dan  10  mL media  PDA.  Proporsi  larutan  ekstrak  di  dalam  PDA merujuk  pada  Abdel-Monaim et  al. (2011).  Cawan berisi  media  uji  selanjutnya  diinokulasi B.  theobromae dengan cara meletakkan inokulum diameter 6 mm pada bagian  tengah  cawan,  kemudian  diinkubasi  selama  tiga hari.  Pengamatan  dilaksanakan  setiap  hari  selama  tiga hari. Data yang dikumpulkan adalah rerata pertambahan diameter radial koloni miselia.
Rancangan  percobaan  yang  digunakan  adalah Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) in  time (Mattjik  dan Sumertajaya  2013)  dengan  tiga  ulangan.  Variabel  yang dianalisis  adalah  indeks  antifungi  ekstrak  (IA) menggunakan formula Yang dan Zhang (2012):
( )   [ ]
D a adalah rerata pertambahan diameter radial koloni miselia  pada  cawan  perlakuan  ekstrak  (cm),  dan D b adalah  rerata  pertambahan  diameter  radial  koloni miselia pada cawan kontrol (cm).

## Analisis Data
Analisis  yang  digunakan  untuk  menguji  pengaruh perlakuan terhadap variabel pengamatan adalah analisis ragam. Apabila perlakuan menunjukkan pengaruh nyata terhadap  variabel  yang  diamati  maka  dilanjutkan  uji jarak berganda Duncan (Mattjik dan Sumertajaya 2013). Analisis  dilakukan  dengan  bantuan software SPSS versi 17.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Aktivitas  Antifungi  Ekstrak  Daun  Picung  secara In Vitro
Ekstrak  air  dan  metanol  daun  picung  secara  umum menunjukkan  aktivitas  antifungi  terhadap  cendawan B. theobromae .  Hal  ini  terlihat  pada  kurva  respon pertumbuhan koloni terhadap pemberian ekstrak air dan metanol,  masing-masing  disajikan  pada  Gambar  1  dan 2.  Penambahan  ekstrak  air  dan  metanol  berbagai konsentrasi, nyata menekan pertumbuhan B. theobromae .
Penambahan  ekstrak  air  daun  picung  pada  media tumbuh  PDA  mampu  menekan  pertumbuhan  koloni B. theobromae secara nyata dibanding kontrol (Gambar 1). Konsentrasi  ekstrak  air  daun  picung  50  dan  75  mg/mL merupakan  konsentrasi  yang  paling  efektif  menekan pertumbuhan  koloni B.  theobromae dibanding  terhadap kontrol  dan  perlakuan  ekstrak  daun  picung  pada konsentrasi lain.
Seperti  halnya  aplikasi  ekstrak  air  daun  picung, penambahan  ekstrak  metanol  daun  picung  pada  media tumbuh  PDA  mampu  menekan  pertumbuhan  koloni B. theobromae dibandingkan  terhadap  kontrol.  Ekstrak metanol daun picung 100 mg/mL merupakan konsentrasi  yang  mampu  menekan  paling  efektif terhadap pertumbuhan koloni B. Theobromae (Gambar 2).
Gambar 1  Respon pertumbuhan koloni B. theobromae terhadap pemberian ekstrak air daun picung selama tiga hari pengamatan
Gambar 2  Respon pertumbuhan koloni B. theobromae terhadap pemberian ekstrak metanol daun picung selama tiga hari pengamatan
A (Kontrol)
B (25 mg/mL) C (50 mg/mL) D (75 mg/mL) E (100 mg/mL) A (Kontrol) B (25 mg/mL) C (50 mg/mL) D (75 mg/mL)
E (100 mg/mL)
Gambar 3  Indeks antifungi ekstrak air daun picung terhadap B. theobromae
Gambar 4  Indeks antifungi ekstrak metanol daun picung terhadap B. theobromae
Berdasarkan  indeks  antifungi,  ekstrak  air  dan metanol daun picung mampu menghambat pertumbuhan koloni B.  theobromae secara  nyata  (Gambar  3  dan  4). Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  daun  picung  pada media  tumbuh  PDA,  menunjukkan  semakin  tinggi indeks  antifungi  dan  semakin  tinggi  daya  hambat terhadap  pertumbuhan  koloni B.  theobromae .  Aplikasi semua  perlakuan  konsentrasi  baik  ekstrak  air  maupun ekstrak metanol daun picung,  indeks antifungi menurun pada hari pertama hingga pengamatan hari ketiga.
Indeks  antifungi  menunjukkan  bahwa  ekstrak  air maupun  metanol  daun  picung  mengandung  senyawa yang bersifat antifungi dan mampu menekan pertumbuhan  koloni B.  theobromae .  Johnny et  al . (2010;  2011)  menjelaskan  aplikasi  ekstrak  kasar metanol  daun  picung  pada  konsentrasi  1  µg/mL  dan 0.01 µg/mL masing-masing mampu menekan pertumbuhan Colletotrichum capsici dan C. gloeosporioides . Hasil penelitian Syahbirin et al . (2005) menunjukan  senyawa  fitokimia  yang  terkandung  dalam ekstrak daun picung berupa sianida, alkaloid, flavonoid, tanin, triterpenoid, saponin dan steroidal.
Menurut  Sortino et  al .  (2012)  senyawa  alkaloid, flavonoid,  tanin,  terpenoid,  saponin  dan  steroidal merupakan  senyawa  antifungi.  Selain  itu,  sianida merupakan  senyawa  toksik  terhadap  respirasi  seluler (Scott  2008).  Mekanisme  aktivitas  antifungi    senyawa fitokimia  dijelaskan  Sortino et  al .  (2012)  sebagai berikut:  (1)  penghambatan  sintesis  dinding  sel,  (2) distrupsi  membran  sel,  dan  (3)  gangguan  metabolisme sel.
Perubahan  morfologi  hifa B.  theobromae akibat pemberian  ekstrak  daun  picung  yaitu  penyimpangan bentuk  hifa  berupa  benjolan  ( bulging ),  diameter  yang lebih  kecil  dari  ukuran  normal  dengan  cabang  yang banyak  (Gambar  5).  Menurut  Aderiye  dan  Oluwole (2015) aktivitas antifungi mengakibatkan peng- gelembungan  sel  hingga  terbentuk  benjolan  pada  hifa bahkan pecahnya  sel, pertumbuhan hifa  menjadi kerdil, pendek,  dan  memiliki  percabangan  yang  banyak. Diduga  bahwa  senyawa  fitokimia  ekstrak  daun  picung berperan sinergis dalam mempengaruhi metabolisme sel B. theobromae secara luas.
A (Kontrol)
B (25 mg/mL) C (50 mg/mL) D (75 mg/mL) E (100 mg/mL) A (Kontrol) B (25 mg/mL) C (50 mg/mL) D (75 mg/mL) E (100 mg/mL)
Gambar 5  Morfologi  hifa B.  theobromae ,  (a)  normal,  (b)  terbentuk  benjolan,  (c)  ukuran  diameter  lebih  kecil  dan bercabang banyak
Pada  percobaan  yang  telah  dilakukan,  aktivitas antifungi  dari  ekstrak  air  maupun  metanol  daun  picung terhadap  pertumbuhan B.  theobromae menurun  dari pengamatan pertama sampai pengamatan ketiga. Hal ini disebabkan  senyawa  fitokimia  dari  bahan  tanaman mudah  terdegradasi  secara  alami  sehingga  keefektifan segera  menurun.  Selain  itu,  diduga  cendawan  patogen mempunyai  resistensi  terhadap  senyawa  fitokimia. Henry  dan  Nyns  (1975) dalam Salisbury  dan  Ross (1995) menjelaskan beberapa spesies cendawan resisten terhadap sianida yang merupakan senyawa fitokimia.

## KESIMPULAN
Ekstrak  air  dan  ekstrak  metanol  daun  picung memiliki  aktivitas  antifungi  terhadap  pertumbuhan B. theobromae secara in  vitro pada  media  tumbuh  PDA. Aplikasi  ekstrak  air  dan  metanol  pada  konsentrasi  25 mg/mL  dan  50  mg/mL  mampu  menekan  pertumbuhan B. theobromae dengan indeks antifungi 100%.

## SARAN
Perlu  dilakukan  studi  lanjutan  untuk  mengungkap jenis  senyawa  antifungi  dan  efektifitasnya  dalam mengendalikan  pertumbuhan  cendawan  patogen B. theobromae .

## DAFTAR PUSTAKA
Abdel-Monaim  MF,  Abo-Elyousr  KAM,  Morsy  KM. 2011. Effectiveness of plant extracts on suppression  of  damping-off  and  wilt  diseases  of lupine  ( Lupinustermis Forsik). Crop  Protection . 30:185-191.doi:10.1016/j.cropro. 2010.09.016. Achmad, Anggraeni I, Herliyana EN, Ansori A, Rijal S. 2012.  Keefektifan  penghambatan  ekstrak  daging biji  picung  terhadap  pertumbuhan Rhizoctonia sp. dan Cylindrocladium sp.  secara in  vitro . J  Hort. 22(3):268-275.
Aderiye  BI,  Oluwole  OA.  2015.  Antifungal  agents  that target fungal cell wall components: a review. Agric and Biol Sci Journal . 1(05): 206-216.
Aisah  AR.  2014.  Identifikasi  dan  patogenisitas cendawan  penyebab  primer  penyakit  mati  pucuk pada bibit jabon [ Anthocephalus cadamba (Roxb). Miq] [tesis]. Bogor (ID):Institut Pertanian Bogor.
Aisah  AR,  Soekarno  BPW,  Achmad.  2015.  Isolasi  dan identifikasi  cendawan  yang  berasosiasi  dengan penyakit  penyakit  mati  pucuk  pada  bibit  jabon ( Anthocephalus cadamba (Roxb.) Miq. J Penelitian Hutan Tanaman . 12(3):153-163.
Chye  FY,  Sim  KY.  2009.  Antioxidative  and antibacterial  activities  of Pangium  edule seed extracts. Int J Pharmacol. 5(5):285-
297.doi:10.3923/ijp.2009. 285.297.
Ellis  D,  Davis  S,  Alexiou  H,  Handke  R,  Bartley  R. 2007. Description  of  Medical  Fungi Ed  ke-2. Adelaide  (AU):  School  of  Molecular  and Biomedical Science University of Adelaide.
Falah  S,  Safithri  M,  Katayama  T,  Suzuki  T.  2010.
Hypoglycemic  effect  of  mahogany  ( Swietenia macrophylla King)  bark  extracts  in  alloxan- induced  diabetic  rats. Wood  Research  Journal. 1(2):89-94.
Johnny  L,  Yusuf  UK,  Nulit  R.  2010.  The  effect  of herbal plant extracts on the growth and sporulation of Colletotrichum  gloeosporioides . J  Applied Biosci . 34:2218-2224.
Johnny L, Yusuf UK, Nulit R. 2011. Antifungal activity of  selected  plant  leaves  crude  extracts  against  a pepper anthracnose fungus, Colletotrichum capsici (Sydow) butler and bisby (Ascomycota: Phyllachorales). African J Biotechnol .
10(20):4157-4165.doi:10.5897/ AJB10.2085.
Lim  TK.  2013. Edible  Medicinal  and  Non-Medicinal Plants. Volume  5. Fruits .  Dordrecht  (NL): Springer  Science  Business  Media.  hlm  780– 781.doi: 10.1007/978-94-007-5653-3_42.
Markson  AA,  Amadioha  AC,  Omosun  G,  Madunagu BE,  Udo  SE,  Umana  EJ.  2012.  Control  of Botryodiplodia  theobromae causing  tissue  rot  of white yam ( Dioscorea rodunata Poir). Scholarly J Agric Sci . 2(1):1-7. Mattjik  AA,  Sumertajaya  IM.  2013. Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab . Jilid I. Bogor (ID): IPB Pr.
Mora  E,  Emrizal,  Mulyantika  E.  2014.  Isolasi  senyawa dari  ekstrak  etil  asetat  daun  kepayang  ( Pangium
a b
c
edule Reinw.)  dan  uji  aktivitas  anti  bakteri. Farmasains . 2(3).
Partomihardjo T, Rugayah. 1989. Pangi ( Pangium edule Reinw.)  dan  potensinya  yang  mulai  dilupakan. Media Konservasi . 2(2):45-50.
Pedraza  JMT,  Aguilera  JAM,  Diaz  CN,  Ortiz  DT, Monter  AV,  Mir  SGL.  2013.  Control  of Lasiodiplodia  theobromae the  causal  agent  of dieback  of  sapote  mamey  [ Pouteria  sapote (Jacq)
HE  Moore  y  Stearn]  in  Mexico. Rev  Fitotec  Mex . 36(3):233-238.
Salisbury  FB,  Ross  CW.  1995. Fisiologi  Tumbuhan Jilid  II .  Diah  RL,  Sumaryono,  penerjemah. Bandung  (ID):  ITB  Pr.  Terjemahan  dari: Plant Physiology . Ed ke-4.
Sari  R,  Suhartati.  2015.  Pangi  ( Pangium  edule Reinw.) sebagai  tanaman  serbaguna  dan  sumber  pangan. Info  Teknis  EBONI [Internet].  [diunduh  2016  Feb 25]; 12(1):23–37. Tersedia pada:
http://balithutmakassar.org/wp- content/uploads/2014/11/3_Pangium-edule_Info- Teknis-Eb oni-Vol-12-No-1-2015.pdf.
Scott  P.  2008. Physiology  and  Behaviour  of  Plant .
Chichester  (UK): J Wiley.
Sortino M, Derita M, Svetaz L, Raimondi M, Di Liberto M,  Petenatti  M,  Gupta  M,  Zacchino  S.  2012.  The role  of  natural  products  in  discovery  of  new  anti- infective  agents  with  emphasis  on  antifungal compounds.  Di  dalam:  Valdir  Cechinel-Filho  V, editor. Plant  Bioactives  and  Drug  Discovery Principles, Practice and Perspectives . Brazil (BR): J Wiley. hlm 205-239.
Suhardi.  2009.  Isolasi  dan  karakterisasi  ekstrak  kasar daun  pakem  ( Pangium  edule Reinw.)  sebagai penghambat  bakteri  patogen  dan  pembusuk daging. J Teknol Pert . 4(2):84-95.
Syahbirin  G,  Batubara  I,  Setiawati  T,  Nulhakim  L. 2005.  Senyawaaktif  daun  picung  ( Pangium  edule
Reinw.)  sebagai  insektisida  botani  terhadap  ulat gerayak  ( Spodoptera  litura F.)  (Lepidoptera: Noctuidae). Prosiding  Simposium  Nasional  Kimia Bahan Alam XV [internet]. 2005 Sep13-14; Bogor, Indonesia.  Bogor  (ID):  Departemen  FMIPA  IPB. Hlm  56-66.  [diunduh  2016    Mar  02].  Tersedia pada: http://repository.ipb.ac.id/ bitstream/handle/123456789/51057/gustini%20sya hbirin_.pdf?sequence=2&isAllowed=y.
Twumasi P, Ohene-Mensah  G, Moses E. 2014. The rot fungus Botryodiplodia  theobromae strains  cross infect  cocoa,  mango,  banana,  and  yam  with significant  tissue  damage  and  economic  losses.
African J of Agric . 9(6):613-
619.doi:10.5897/AJAR2013.7528.
Vyas  SC.  1984. Systemic  Fungicides .  New  Delhi  (IN): Tata McGraw-Hill Publishing Company Limited.
Watanabe  T.  2002. Pictorial  Atlas  of  Soil  and  Seed Fungi Morphologies of Cultured Fungi and Key to Species . Ed ke-2. Boca Raton (US): CCR Pr.
Wiart  C.  2006. Medicinal  Plants  of  The  Asia-Pacific: Drugs  for  The  Future?. Toh  Tuck  Link  (SN): World Scientific Publishing. hlm 177.
Winara  A.  2014.  Bioaktivitas  ekstrak  mahoni  dan identifikasi jenis isolat Botryodiplodia sp. penyebab  mati  pucuk  pada  bibit  jabon  [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Yang  H,  Zhang  H.  2012.  Synergistic  interaction  of  tea saponin  with  mancozeb  against Pestalotiopsis theae . Crop  Protection .  40:126-131.doi:10.1016/ j.cropro.2012.04.013.
Yanti  LA,  Achmad,  Khumaida  N.  2015.  Uji  resistensi bibit  jabon  putih  dan  merah  ( Anthocephalus spp.) terhadap Botryodiplodia theobromae (Pat.) penyebab  penyakit  mati  pucuk. J  Silvikultur Tropika . 06(2):83-92.