Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR)
Volume 4 Nomor 1, Maret 2022
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v4i1.13811
Pengaruh Pemberian Lozenges Kombinasi Kulit Pisang dan Kulit Nanas terhadap  Tikus Putih ( Rattus norvegicus

## L.) galur Wistar
Adelita Ahyanurri 1* , Liza Pratiwi 1 , Hadi Kurniawan 1 , Inarah Fajriaty 1 , Siti Nani Nurbaeti 1 , Fajar Nugraha 1 , Pratiwi Apridamayanti 1
1 Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinis, Jurusan Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi Pontianak 78115, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: adelitaahyanurri@gmail.com

## ABSTRAK
Kulit pisang dan kulit nanas memiliki kandungan kalium yang tinggi. Kombinasi keduanya berpotensi  untuk  dimanfaatkan  menjadi  sediaan lozenges sebagai  terapi  suportif  kalium. Keamanan lozenges kombinasi  kulit  pisang  dan  kulit  nanas  harus  dipastikan  melalui  uji toksisitas akut. Salah satu parameter yang diamati selama pengujian toksisitas adalah indeks organ.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  hubungan  dosis  dan  toksisitas  pada pemberian oral secara akut lozenges kombinasi kulit pisang dan kulit nanas terhadap indeks organ jantung, paru-paru, hati, limpa, dan ginjal pada tikus putih ( Rattus norvegicus L.) galur Wistar. Pengujian toksisitas akut dilakukan dengan metode OECD 425 Up-and-Down Procedure (UDP). Tikus dikelompokkan menjadi kelompok dosis 2000 mg/KgBB dan kelompok dosis 5000 mg/KgBB sebanyak 5 ekor perkelompok. Data indeks organ masing-masing kelompok dianalisis  menggunakan  SPSS Independent  Sample  T-test dengan  taraf  kepercayaan  95% (p>0,05).  Hasil  penelitian  menunjukkan  indeks  organ  jantung,  paru-paru,  hati,  limpa  dan ginjal  antar  kelompok  dosis  2000  mg/KgBB  dan  5000  mg/KgBB  tidak  berbeda  signifikan (p>0,05).  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  dapat  disimpulkan  bahwa  sediaan lozenges kombinasi kulit pisang dan kulit nanas tidak memberikan pengaruh terhadap indeks organ jantung, paru-paru, hati, limpa dan ginjal tikus putih ( Rattus norvegicus L.) galur Wistar.
Kata Kunci: Indeks Organ, Kulit Nanas, Kulit Pisang, Lozenges , Toksisitas Akut
Diterima:
27-02-2022 Disetujui: 5-03-2022 Online: 10-03-2022

## ABSTRACT
Banana  peel  and  pineapple  peel  have  high  potassium  content.  The  banana  peel  and  pineapple  peel combination can be used as lozenges in potassium supportive therapy. The safety of banana peel and pineapple peel combination lozenges must be ensured by the acute toxicity test. One of the parameters observed  during  toxicity  testing  is  the  organ  index.  This  study  aims  to  determine  the  relationship between dose and toxicity in acute oral administration of banana peel and pineapple peel combination lozenges on the heart, lungs, liver, spleen, and kidneys organ index in white rats (Rattus norvegicus L.) Wistar strain. Acute toxicity based on OECD 425 guidelines for the Up-and-Down Procedure (UDP) method. Rats were grouped into 2000 mg/kg BW and 5000 mg/kg BW dose groups, consisting of 5 rats. Organ  indexes  were  analyzed  using  SPSS  Independent  Sample  T-test  with  95%  confidence  level (p>0.05). The result showed no significant difference between both doses (P>0.05) in heart, lungs, liver, spleen, and kidneys organ index. Based on the results, it can be concluded that banana peel and pineapple peel combination lozenges did not affect white rats’ heart, lungs, liver, spleen, and kidney organ index.
Copyright © 2022 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Organ Index, Pineapple Peel, Banana Peel, Lozenges, Acute Toxicity
Received: 2022-02-27 Accepted: 2022-03-5 Online: 2022-03-10

## 1. Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara  tropis  yang  memiliki  keanekaragaman  hayati. Indonesia diperkirakan memiliki 30.000 spesies tanaman obat. Sebanyak 7.500 spesies diantaranya diketahui memiliki khasiat herbal. Namun, jenis tanaman obat yang telah dimanfaatkan  menjadi  obat  herbal  hanya  1.200  spesies.  Tanaman  obat  dimanfaatkan oleh masyarakat menjadi bahan baku bumbu dapur dalam rumah tangga, bahan baku industri makanan dan minuman, obat tradisional, dan kosmetik[1]. Jenis tanaman obat yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  obat  herbal  adalah  tanaman  pisang  kepok  ( Musa paradisiaca L.) dan nanas ( Ananas comosus ).
Tanaman  pisang  dan  nanas  merupakan  komoditas  unggulan  di  Indonesia. Berdasarkan data Badan Pusat Statistik pada tahun 2020, produksi nanas di Indonesia mencapai 2.447.243 ton. Sedangkan, produksi pisang di Indonesia mencapai 8.182.756 ton.  Tingginya  produksi  nanas  dan  pisang  di  Indonesia  disertai  tingginya  konsumsi pisang  dan  nanas  di  masyarakat  [2].  Masyarakat  biasanya  mengonsumsi  pisang  dan nanas hanya bagian dagingnya saja, sedangkan bagian kulit tidak diolah yang akhirnya menjadi  limbah.  Limbah  yang  dibiarkan  tanpa  diolah  menyebabkan  pencemaran lingkungan. Salah satu bentuk optimalisasi limbah kulit pisang dan kulit nanas yaitu dengan mengolah limbah tersebut menjadi sediaan farmasi.
Beberapa  penelitian  sebelumnya  menunjukkan  tanaman  pisang  kepok  dan nanas mengandung kalium dalam jumlah yang tinggi.  Sumber kalium terdapat pada buah pisang dan buah nanas baik dari bagian daging maupun kulitnya. Bagian kulit mengandung  kalium  lebih  tinggi  daripada  bagian  daging.  Kandungan  kalium  kulit pisang  kepok  sebesar  1.312,63  ±  4,13  mg/100  g  dan  kandungan  kalium  kulit  nanas sebesar 1.349,5 ± 28,9 mg/100 g [3,4]. Hasil penelitian lainnya menunjukkan kombinasi kulit pisang dan kulit nanas memiliki kandungan kalium yang lebih tinggi yaitu 4.748,3 g/100 g [5]. Oleh karena itu, kombinasi kulit pisang dan kulit nanas berpotensi untuk dimanfaatkan menjadi sediaan farmasi berupa lozenges sebagai terapi suportif kalium.
Pemanfaatan  limbah  kulit  pisang  dan  kulit  nanas  menjadi  sediaan  farmasi  harus terjamin  aman  [6].  Kulit  pisang  dan  kulit  nanas  memiliki  beberapa  potensial  toksik. Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  pada  limbah  kulit  pisang  dan  kulit  nanas terkandung logam Pb, bakteri patogen, dan senyawa saponin yang dapat menyebabkan hemolysis [7,8,9,10]. Pengujian terhadap toksisitas dari  sediaan lozenges kombinasi kulit pisang  dan  kulit nanas perlu  dilakukan  untuk memastikan  keamanan sediaan.  Salah satu parameter yang diamati pada pengujian toksisitas suatu senyawa atau sediaan uji adalah indeks organ. [11]
Indeks  organ  dapat    menjadi    data  pendukung  sebagai  indikator  pengaruh senyawa  uji  terhadap organ hewan uji.  Penelitian Ibrahim, dkk. (2012) menunjukkan pemberian timbal asetat pada hewan uji menyebabkan peningkatan secara signifikan berat dan indeks organ hati, ginjal, jantung, dan limpa tikus. Peningkatan indeks organ dapat disebabkan nekrosis dan apoptosis yang berhubungan  dengan akumulasi lipid pada organ [12].
Data  toksisitas  akut  pada  parameter  indeks  organ  jantung,  paru-paru,  hati, limpa, dan ginjal dari sediaan lozenges kombinasi kulit pisang dan kulit nanas belum tersedia.  Oleh  karena  itu,  uji  toksisitas  akut  perlu  dilakukan  pada  sediaan lozenges kombinasi kulit pisang dan kulit nanas untuk memastikan keamanan sediaan sebelum diberikan kepada manusia. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui hubungan dosis dan toksisitas  pada  pemberian  oral  secara  akut lozenges kombinasi  kulit  pisang  dan  kulit nanas terhadap indeks organ jantung, paru-paru, hati, limpa, dan ginjal pada tikus putih ( Rattus norvegicus L.) galur Wistar.

## 2.  Metode
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Farmakologi  dan  Klinis  Program  Studi Farmasi, Universitas Tanjungpura, Pontianak, Kalimantan Barat.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  alat  bedah  (M376108), ayakan  20  mesh,  baskom,  batang  pengaduk,  bejana  infusa,  blender  (Philips),  cawan penguap, corong buchner, corong kaca, erlenmeyer, gelas beker (Iwaki pyrex), hot plate (HP  10-2),  kain  flanel,  kertas  saring,  kandang  hewan  uji,  kapas,  keranjang,  kompor, mortar  dan  stamper,  neraca  analitik  (Shimadzu  AUY-220),  oven,  penjepit  cawan, paralon, pinset, pisau, platform, sendok tanduk, sonde oral, spatula, spuit 3 cc (Terumo), talenan, termometer, timbangan tikus (Ohaus PioneerTM), tisu, dan toples.
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu asam pikrat (Riedel-de Haën Chemical), akuades, glukosa c.p. (Pudak), kloroform p.a. (EMSURE), kulit nanas ( Ananas comosus ), kulit pisang ( Musa paradisiaca L.), pakan hewan uji charoen pokphand 551,  dan  sukrosa  c.p.  (ROFA).  Kulit  pisang  dan  kulit  nanas  dikumpulkan  pada Desember 2021 dari Pasar Teratai Kecamatan Pontianak Barat, Kota Pontianak, Provinsi Kalimantan Barat.

## Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih ( Rattus norvegicus L.) betina galur Wistar yang  memenuhi kriteria yaitu sehat, tingkah laku dan aktivitas normal, tidak ada kelainan anatomi yang tampak, rambut tidak kusam, rontok atau botak, tidak hamil,
berat badan minimal 120 gram dengan variasi berat badan tidak lebih dari  20%, dan umur 6 sampai  8 minggu. Hewan uji  diaklimatisasi  selama 7 hari  di  dalam kandang dengan  12  jam  terang  dan  12  jam  gelap.  Pemberian  makanan  sesuai  standar laboratorium  dan  minuman  diberikan  tanpa  batas  ( ad  libitum ).  Kaji  etik  penggunaan hewan uji  dalam penelitian ini  telah dinyatakan lolos oleh Komite Kaji Etik Fakultas Kedokteran,  Universitas  Tanjungpura,  Pontianak,  Kalimantan  Barat  dengan  nomor surat 227/UN22.9/PG/2022.

## Preparasi Sampel
Kulit  pisang  dan  kulit  nanas  disortir,  dicuci,  dirajang,  kemudian  dikeringkan dengan  oven  pada  suhu  50 o C  sampai  kering.  Simplisia  kulit  pisang  dan  kulit  nanas kering disortir dan dihaluskan menggunakan blender kemudian diayak dengan ayakan nomor  mesh  20.  Sebanyak  200  gram  simplisia  kulit  pisang  dan  kulit  nanas  (3:1) diekstraksi menggunakan metode infusa. Campuran dipanaskan dalam pelarut akuades hingga  suhu  90 o C,  kemudian  direbus  selama  15  menit.  Setelah  itu,  infusa  disaring menggunakan kertas saring. Ampas dari hasil penyaringan diekstraksi kembali dengan 3 kali pengulangan. Hasil infusa dipekatkan dengan oven pada suhu 50 o C selama 24 jam.  Ekstrak  kombinasi  kulit  pisang  dan  kulit  nanas  selanjutnya  digunakan  dalam pembuatan  lozenges.  Sediaan  uji  dibuat  dalam  dua  jenis  dosis  yaitu  dosis  2000 mg/KgBB dan 5000 mg/KgBB. Glukosa dan sukrosa (70%:30%) dilarutkan dalam 100 mL  air  mendidih.  Ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  campuran  dan  dihancurkan hingga larut. [5]

## Perlakuan Hewan Uji
Hewan  uji  dikelompokkan  menjadi  2  kelompok  yaitu  kelompok  dosis  2000 mg/KgBB dan dosis 5000 mg/KgBB dengan 5 ekor masing-masing kelompok. Sediaan uji diberikan dalam dosis tunggal oral. Pemberian sediaan uji disesuaikan dengan berat badan masing-masing tikus dengan ketentuan maksimal volume sediaan 1 ml/100 gBB. Kemudian, semua hewan uji diamati tanda-tanda efek toksik akut selama 14 hari. Pada akhir  pengujian,  hewan  uji  ditimbang  dan  diterminasi  untuk  dilakukan  pengamatan indeks organ [11,13].

## Pengamatan Indeks Organ
Organ  yang  diamati  yaitu  jantung,  paru,  hati,  limpa,  dan  ginjal.  Pengamatan dilakukan terhadap ada tidaknya kerusakan masing-masing organ. Organ dikeringkan terlebih  dahulu  dengan  kertas  penyerap,  kemudian  segera  ditimbang  untuk mendapatkan berat organ. Indeks organ dalam % diperoleh dengan membandingkan berat  organ  dengan berat  badan  hewan  uji.  Perhitungan  indeks  organ menggunakan rumus sebagai berikut [11]:

## Analisis Data
Data indeks organ dianalisis menggunakan software SPSS ( Statistical Product and Service  Solutions )  dengan  analisis Independent  Sample  T-test dengan  taraf  kepercayaan
Indeks organ = Berat organ (gram) Berat badan tikus (gram) 𝑥 100%
95% (p > 0,05) [14,15,16]. Variabel independen pada penelitian ini adalah dosis sediaan uji yaitu dosis 2000 mg/KgBB dan dosis 5000 mg/KgBB. Sedangkan, variabel dependen yaitu  data  indeks  organ.  Tujuannya  untuk  menganalisis ada  tidaknya  pengaruh  dari perbedaan pemberian dosis terhadap indeks organ hati, ginjal, jantung, paru-paru, dan limpa. [18] Hasil  analisis  dengan  nilai  signifikansi  >  0,05  menunjukkan  variabel independen  mempunyai  pengaruh  yang  signifikan  terhadap  variabel  dependen. Sedangkan,  hasil  analisis  dengan  nilai  signifikansi  <  0,05  menunjukkan  variabel independen  tidak  mempunyai  pengaruh  yang  signifikan  terhadap  variabel dependen. [18]

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Salah satu tujuan utama uji toksisitas praklinik adalah untuk mengidentifikasi organ  target  dari  efek  toksik  senyawa  uji.  Data  berat  organ  dan  indeks  organ  dapat menjadi    data  pendukung  sebagai  indikator  pengaruh  senyawa  uji  terhadap  organ hewan  uji,  namun  tidak  bisa  menampilkan  kerusakan  pada  organ.  Oleh  karena  itu, dalam  pengujian  toksisitas  dilakukan  pengamatan  indeks  organ.  Indeks  organ merupakan  perbandingan  antara  berat  organ  dengan  berat  badan  hewan  uji.  Berat badan  memiliki  korelasi  dengan  berat  organ.  Perubahan  berat  badan  dapat  disertai dengan  pembengkakan  atau  penyusutan  organ  [19,20].  Perbandingan  indeks  organ antara  kelompok  dosis  2000  mg/KgBB  dan  dosis  5000  mg/KgBB  untuk  melihat  ada tidaknya perbedaan signifikan setelah pemberian sediaan dengan dosis yang berbeda.
Organ-organ  yang  diamati  yaitu  jantung,  hati,  paru-paru,  ginjal,  dan  limpa. Berdasarkan Peraturan Badan Pengawas Obat dan Makanan, pengamatan organ dalam pengujian toksisitas sekurang-kurangnya dilakukan pada 5 organ utama yaitu jantung, paru, hati, limpa, dan ginjal [11]. Kelima organ tersebut merupakan organ vital yang memiliki peranan penting bagi tubuh. Jantung merupakan organ yang memiliki fungsi sebagai  pemompa  darah.  Efek  toksik  dari  zat  xenobiotik  pada  jantung  dapat menyebabkan  degenerasi  dan  nekrosis  miokard  jantung.  Hati  dan  ginjal  merupakan organ yang penting dan sensitif terhadap aksi obat. Hati berperan dalam  metabolisme obat, transportasi,  dan pembersihan zat asing. Ginjal  merupakan organ utama untuk ekskresi obat-obatan. Zat toksin dapat menyebabkan glomerulonefritis dan degenerasi granular  tubulus  epitel  ginjal  [20,21].  Limpa  merupakan  organ  penting  dalam pengaturan  imunitas  tubuh  [22].  Kerusakan  pada  limpa  dapat  menyebabkan splenomegali dan gangguan kekebalan tubuh [23]. Paru-paru merupakan organ penting dalam  sistem  pernapasan  dan  pertukaran  gas  dalam  tubuh.  Paparan  zat  toksik  yang bersifat  pneumotoksisitas  ditandai  dengan  peningkatan  secara  signifikan  kadar  sel darah  putih  dan  berat  organ  relatif  paru-paru  [24].  Pengamatan  dilakukan  terhadap berat organ dan indeks organ masing-masing kelompok yang dapat dilihat pada Tabel 1 dan Gambar 1.
Tabel 1. Rata-rata berat badan dan berat organ kelompok dosis 2000 mg/KgBB dan
5000 mg/KgBB Kelompok Dosis Berat Badan (g) Jantung (g) Paru (g) Hati (g) Ginjal (g) Limpa (g) 2000 mg/KgBB 186,18 0,55 0,91 6,90 1,26 0,54 5000 mg/KgBB 201,29 0,58 0,95 7,19 1,28 0,64
Gambar 1 . Indeks organ kelompok dosis 2000 mg/KgBB dan dosis 5000 mg/KgBB
Berdasarkan hasil perhitungan indeks organ kedua kelompok dosis, kelompok dosis 5000 mg/KgBB memiliki indeks organ limpa lebih tinggi daripada kelompok dosis 2000 mg/KgBB. Peningkatan indeks organ limpa dapat disebabkan adanya pengaruh sediaan uji terhadap sistem imun. Hasil ini perlu dianalisis lebih lanjut melalui histologi organ limpa. Pembesaran limpa dapat disebabkan meningkatnya jumlah sel langerhans yang berkaitan dengan adanya peningkatan sistem imun [25]. Peningkatan indeks organ secara signifikan dapat menjadi indikator adanya efek toksik senyawa atau sediaan uji. Penelitian Ibrahim, dkk. (2012) menunjukkan pemberian timbal asetat pada hewan uji menyebabkan peningkatan secara signifikan berat dan indeks organ hati, ginjal, jantung, dan  limpa  tikus  dibandingkan  kelompok  normal.  Peningkatan  indeks  organ  dapat disebabkan  nekrosis  dan  apoptosis  yang  berhubungan  dengan  akumulasi  lipid  pada organ. Pemberian  timbal  menyebabkan  akumulasi  lipid  yang  signifikan  di  dalam  sel ginjal tikus [12].
Hasil  analisis  data  indeks  organ  menunjukkn  nilai  signifikansi  yaitu  p>0,05, sehingga dapat disimpulkan bahwa indeks organ antara kelompok dosis 2000 mg/KgBB dan  kelompok  dosis  5000  mg/KgBB  tidak  berbeda  signifikan.  Perbedaan  dosis pemberian sediaan uji tidak memberikan pengaruh terhadap perkembangan berat organ jantung,  hati,  paru-paru,  limpa  dan  ginjal  tikus.  Hasil  ini  sejalan  dengan  penelitian Edenta,  dkk  (2017)  yang  menunjukkan  pemberian  ekstrak  kulit  pisang  dosis  5000 mg/KgBB tidak menimbulkan kerusakan pada hati [26]. Penelitian lainnya oleh Ajayi, dkk. (2021) juga menunjukkan pemberian ekstrak kulit nanas dosis 5000 mg/KgBB tidak mempengaruhi indeks organ mencit [27].

## 4.  Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat  disimpulkan  bahwa  sediaan lozenges kombinasi kulit pisang dan kulit nanas tidak mempengaruhi indeks organ tikus putih ( Rattus norvegicus L.) galur Wistar.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Laboratorium  Farmakologi  dan  Farmasi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura yang telah menyediakan tempat dan alat untuk penelitian ini.

## Referensi
[1] Salim,  Z.,  Munadi,  E.  (2017).  Info  Komoditi  Tanaman  Obat.  Jakarta:  Badan Pengkajian  dan  Pengembangan  Perdagangan  Kementerian  Perdagangan Republik Indonesia.
[2] Kementerian  Pertanian.  (2018).  Statistik  konsumsi  pangan.  Jakarta:  Pusat  Data dan Sistem Informasi Pertanian Sekretariat Jenderal Kementerian Pertanian.
[3] Oyeyinka, B.O., Afolayan, A.J. (2019). Comparative evaluation of the nutritive, mineral,  and  antinutritive  composition  of Musa  sinensis L.  (Banana)  and Musa paradisiaca L. (Plantain) fruit compartments. Plants. 8(12), 598.
[4] Morais, D.R., Rotta, E.M., Sargi, S.C., Bonafe, E.G., Suzuki, R.M., Souza, N.E., dkk. (2017). Proximate composition, mineral contents and fatty acid composition of the different parts and dried peels of tropical fruits cultivated in Brazil. J Braz Chem Soc. 28(2),308-318.
[5] Nugraha,  F.,  Apridamayanti,  P.,  Kurniawan,  H.,  Fajriaty,  I.,  Nurbaeti,  S.N., Pratiwi, L., Anggraeni, S. (2021). Analisis kadar kalium ekstrak kombinasi kulit pisang  ( Musa  paradisiaca L.)  dan  kulit  nanas  ( Ananas  comosus (L.)  Merr)  secara spektrofotometri serapan atom. Jurnal Sains dan Kesehatan. 3(6), 846-852.
[6] BPOM RI. (2020). Peraturan BPOM Nomor 11 Tahun 2020 tentang kriteria dan tata laksana registrasi suplemen kesehatan. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan.
[7] Hammid,  S.A.,  Ainu,  N.,  Selamanya,  R.  (2019).  Anaerobic  digestion  of  fruit wastes for biogas production. IJARIIE. 5(4), 34-38.
[8] Asquer, C., Pistis, A., Scanio, E.A. (2013). Characterization of fruit and vegetable wastes  as  a  single  substrate  for  the  anaerobic  digestion.  Environtmental Engineering and Management Journal. 12(S11), 89-92.
[9] Sanatang,  Lio  T.M.P.  (2021).  Skrining  bakteri  pada  kulit  pisang  dengan menggunakan  media  nutrient  agar  dan  blood  agar.  Bioma:  Jurnal  Biologi Makassar. 6(1), 31-36.
[10] Gunwantrao,  B.B.,  Bhausaheb,  S.K.,  Ramrao,  B.S.,  Subhash,  K.S.  (2016). Antimicrobial activity and phytochemical analysis of orange ( Citrus aurantium l.) and pineapple ( Ananas comosus l. Merr.) peel extract. Annals of Phytomedicine. 5(2), 156-160.
[11] BPOM RI. (2014). Peraturan BPOM Nomor 7 Tahun 2014 Tentang Pedoman Uji Toksisitas Non Klinik secara In Vivo. Jakarta: BPOM RI.
[12] Ibrahim, N.M., Eweis, E.A., Beltagi, H.S., Mobdy, Y.E. (2012). Effect of lead acetate toxicity  on  esperimental  male  albino  rat.  Asian  Pacific  Journal  of  Tropical Biomedicine. 2(1), 41-46.
[13] OECD/OCDE.  (2008).  Acute  Oral  Toxicity  –  Up-and-Down-Procedure  (UDP). Oecd Guidel Test Chem. 425.
[14] Hidayat,  M.,  Prahastuti,  S.,  Delima,  E.R.,  Setiawati,  L.,  Soemardji,  A.A.  (2017). High doses of soybean, jati belanda and their combination extracts have no acute toxic effects. Heal Sci J Indones. 8(2), 124-132.
[15] Nugroho, R.A., Aryani, R., Manurung, H., Rudianto, R., Prahastika, W., Juwita, A., dkk. (2020). Acute and subchronic toxicity study of the ethanol extracts from Ficus deltoidea leaves in male mice. Macedonian Journal of Medicinal Sciences. 8(A), 76-83.
[16] Amaral, L.A., Cavalcante, A.C.F.P.S., Almeida, T.S.F., Santos, M.M.R., Portugal, L.C., Santos, B.S., dkk. (2021). Acute and subacute (28 days) oral toxicity studies of  tucum  almond  oil  (Bactris  setosa  Mart.)  in  mice.  Drug  and  Chemical Toxicology. 1-7.
[17] Wati,  H.,  Muthia,  R.,  Kartini,  Setiawan,  F.  (2021).  Acute  toxicity  study  of  the ethanolic extract of Eleutherine bulbosa Urb in Wistar rats. Pharmacy Education. 21(2), 143-147.
[18] Magdalena, R., Krisanti, M.A. (2019). Analisis penyebab dan solusi rekonsiliasi Finished Goods menggunakan hipotesis statistik dengan metode pengujian Independent Sample T-Test di PT.Merck, Tbk. TEKNO. 16(1), 35-48.
[19] Nirogi, R., Goyal, V.K., Jana, S., Pandey, S.K., Gothi, A. (2014). What suits best for organ weight analysis: Review of relationship between organ weight and body/brain weight for rodent toxicity studie. International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research. 5(4), 1525-1532.
[20] Wang, W., Zhang, J., Zhou, X., Wei, X., Cheng, F., Li, B., dkk. (2019). Acute and subacute toxicity assessment of Oxyclozanide in wistar rats. Frontiers in Veterinary Science. 6(294).
[21] Corsini,  A.,  Bortolini,  M.  (2013).  Drug-induced  liver  injury:  the  role  of  drug metabolism and transport. The Journal of Clinical Pharmacology. 53(5), 463-474.
[22] Cesta,  M.F.  (2006).  Normal  structure,  function,  and  histology  of  the  spleen. Toxicologic Pathology. 34, 455-465.
[23] Less, J.G., White, D., Keating, B.A., Barki-Luke, M.E., Makker, P.G.S., Goldstein, D.,  Taylor,  G.M.  (2020).  Oxaliplatin-induced  haematological  toxicity  and splenomegaly in mice. Plos One.
[24] Bouakkaz, I., Khelili, K., Rebai, T., Lock, A. (2018). Pulmonary toxicity induced by n-hexane in wistar male rats after oral subchronic exposure. Dose-Response: An International Journal. 1-8.
[25] Chen, Y., Chen, S., Song, C., Yin, Z., Chen, Z., dkk. (2015). Acute and subchronic toxicity  as  well  as  evaluation  of  safety  pharmacology  of  traditional  Chinese medicine “Huhezi”. Int. J Clin Exp Med. 8(8), 14553-14584.
[26] Edenta, C., Okoduwa, S.I.R., Okpe, O. (2017). Effect of aqueous extract of three cultivars of banana ( Musa acuminata ) fruit peel on kidney and liver function indices in Wistar rats. Medicines. 4(77), 1-7.
[27] Ajayi, A.M., Coker, A.I., Oyebanjo, O.T., Adebanjo, I.M., Ademowo, O.G. (2021). Ananas comosus (L.) Merrill (pineapple) fruit peel extract demonstrates antimalarial, anti-nociceptive and anti-inflammatory activities in experimental models. Journal of Ethnopharmacology. 282(114576), 1-8.