Volume 6, No 1, Januari - Juni 2023 e-ISSN : 2598-7453 DOI: https://doi.org/10.31539/bioedusains.v6i1.5308

## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI PENDEGRADASI LIMBAH
CAIR  MINYAK KELAPA SAWIT ( Elaeis guineensis Jacq )
Hasni Aida 1 , Kartika Manalu 2
Universitas Islam Negeri Sumatera Utara 1,2
Hasniaida855@gmail.com 1

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  keberadaan  bakteri  pendegradasi  di sungai  Simangalam  yang  mengandung  limbah  cair  kelapa  sawit.  Metode  yang digunakan adalah metode deskriptif. Data penelitian diperoleh dengan melakukan tahapan-tahapan  yang  dimulai  dari  sterilisasi  alat,  pengambilan  sampel  limbah, pembuatan  media,  isolasi  bakteri,  pemurnian,  pewarnaan  gram,  uji  motilitas,  uji katalase,  TSIA,  sitrat,  gelatin  dan  perhitungan  total  bakteri  (TPC).  Hasil  dari penelitian  ini  didapatkan  6  isolat  bakteri.  Simpulan  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  terdapat  6  isolat  bakteri  yang  mampu  mendegradasi  limbah  cair  kelapa sawit di Desa Gunung Melayu Kabupaten Labuhanbatu Utara, diantaranya terdiri dari  genus  Deinococcus  sp.  (HB1ST1),  Morganella  sp.  (HB2ST2),  Rhodobacter sp.  (HB3ST2),  Lysinibacillus  sp.  (HB4ST2),  Paracoccus  sp.  (HB5ST2),  dan Bacillus sp. (HB6ST2).
Kata Kunci: Isolat, Kelapa Sawit, dan Limbah Cair.

## ABSTRACT
This  study  aims  to  determine  the  presence  of  degrading  bacteria  in  the Simangalam  river  which  contains  palm  oil  wastewater.  The  method  used  is descriptive  method.  The  research  data  was  obtained  by  carrying  out  the  stages starting  from  tool  sterilization,  waste  sampling,  media  preparation,  bacterial isolation,  purification,  gram  staining,  motility  test,  catalase  test,  TSIA,  citrate, gelatin  and  total  bacteria  count  (TPC).  The  results  of  this  study  obtained  6 bacterial isolates. The conclusions of this study indicate that there are 6 bacterial isolates  capable  of  degrading  palm  oil  wastewater  in  Gunung  Melayu  Village, North  Labuhanbatu  Regency,  including  the  genus  Deinococcus  sp.  (HB1ST1), Morganella  sp.  (HB2ST2),  Rhodobacter  sp.  (HB3ST2),  Lysinibacillus  sp. (HB4ST2), Paracoccus sp. (HB5ST2), and Bacillus sp. (HB6ST2).
Keywords: Isolate, Palm Oil, and Liquid Waste.

## PENDAHULUAN
Persebaran  perkebunan  kelapa  sawit  selalu  mengalami  peningkatan sehingga  produksi  minyak  di  negara  Indonesia  meningkat  juga.  Perkembangan industri  kelapa  sawit  ini  dapat  menimbulkan  dampak,  baik  dampak  negatif maupun  dampak  positif.  Dampak  positifnya  yaitu  dapat  meningkatkan  devisa Negara dan meningkatnya kesejahteraan masyarakat. Adapun dampak negatifnya yaitu  dapat  menimbulkan  limbah  yang  bisa  mencemari  lingkungan  jika  limbah tersebut  tidak  dikelola  dengan  baik  dan  benar.  Dampak  pencemaran  ini  dapat
berdampak pada lingkungan hidup maupun berdampak pada kualitas sumber daya alam  Hal  ini  dapat  terjadi  karena  jumlah  limbah  pabrik  kelapa  sawit  terus bertambah (Chairunnisa & Riyanto, 2019).
Limbah cair industri kelapa sawit adalah salah satu penyebab pencemaran di  lingkungan  dan  sekitarnya.  Limbah  cair  kelapa  sawit  ini  memiliki  kandungan organik  yang  cukup  tinggi  sehingga  dapat  mengganggu  air  dan  tanah.  Apabila bahan  polutan  ini  dibuang  ke  badan  air  maka  dapat  menyebabkan  terganggunya kualitas  air  dan  juga  dapat  menurunkan  daya  dukung  lingkungan  perairan disekitar  pabrik  dan  sekelilingnya.  Dampak  dari  terganggunya  daya  dukung lingkungan  ini  yaitu  terjadinya alga  gloming dan  menyebabkan  kematian organisme  air.  Tidak  hanya  sampai  disitu,  dampak  lainnya  yaitu  dapat menimbulkan  bau  busuk.  Aktivitas  yang  dapat  di  lakukan  untuk  mengurangi dampak  pencemaran  dari  limbah  cair  minyak  kelapa  sawit  yaitu  dengan bioremediasi (Yuna & Mardina, 2019).
Salah satu tahap dari bioremediasi yaitu biodegradasi. Proses biodegradasi ini  memanfaatkan  mikroorganisme  atau  enzim  yang  dapat  di  hasilkan  dari mikroorganisme  itu  sendiri.  Prinsip  kerjanya  yaitu  dengan  cara  merombak senyawa-senyawa  organik  yang  ada  di  lingkungan  tempat  terjadi  pencemaran secara alami. Penelitian yang dilakukan oleh Swandi et al., (2018) terdapat bakteri pendegradasi  dari  limbah  cair  kelapa  sawit,  adapun  jumlah  isolat  bakteri pendegradasi  yang  didapatkan  yaitu  ada  5  isolat  bakteri  dengan  menggunakan metode  cawan  tuang (pour  plate  method) yang  ditanam  pada  medium  NA (nutrient agar).
Desa Gunung Melayu merupakan desa yang berada di Kecamatan Kualuh Selatan  Kabupaten  Labuhanbatu  Utara.  Sungai  yang  terletak  di  Desa  Gunung Melayu  yaitu  sungai  Simangalam.  Salah  satu  industri  kelapa  sawit  membuang limbah  cair  kelapa  sawit  ke  sungai  Simangalam  sehingga  mengakibatkan  air sungai  berwarna  kecoklatan  dan  terdapat  lapisan  minyak  di  atas  permukaan sungai,  hal  ini  menyebabkan  sungai  Simangalam  tercemar  dan  mengakibatkan ikan  menjadi  mati.Hasil  wawancara  dan  survei  yang  telah  dilakukan  di  Desa Gunung  Melayu  diketahui  bahwa  banyak  masyarakat  yang  memanfaatkan  air sungai  tersebut  sebagai  mata  pencaharian  untuk  memenuhi  kebutuhan  seperti pangan, sandang, dan papan warga  yang tidak memiliki kebun kelapa sawit atau hanya untuk sekedar penghasilan sampingan.
Pencemaran  sungai  dapat  dikurangi  dengan  sistem  bioremediasi.  Salah satu  tahap  dari  bioremediasi  yaitu  biodegradasi.  Biodegradasi  memiliki  manfaat untuk  lingkungan  dengan  menggunakan  mikroba  yang  alami  untuk  menguraikan bahan  pencemar  dengan  cara  merombak  senyawa-senyawa  organik  yang  ada  di lingkungan tempat terjadi pencemaran secara alami (Rolando et al., 2020).
Isolasi dan identifikasi bakteri pendegradasi ini belum ada dilakukan pada sungai Simangalam di Desa Gunung Melayu Kabupaten Labuhanbatu Utara. Oleh sebab i tu,  perlu  dilakukan  penelitian  tentang  isolasi  dan  identifikasi  bakteri
pendegradasi  di  Desa  Gunung  Melayu  Kabupaten  Labuhanbatu  Utara.  Peneliti menggunakan  kajian  tersebut  guna  refrensi  dan  khazanah  bagi  pembaca  terkait isolasi dan identifikasi bakteri pendegradasi limbah cair  minyak kelapa sawit.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  November  2022  di  Laboratorium Mikrobiologi,  Departemen  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam,  Universitas  Sumatera  Utara,  Medan.  Lokasi  pengambilan  sampel  limbah cair  kepala  sawit  yaitu  kolam  pembuangan  limbah  sebelum  dialirkan  ke  sungai Simangalam di Desa Gunung Melayu Kabupaten Labuhanbatu Utara dengan dua titik pengambilan sampel.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  deskriptif.  Data penelitian  diperoleh  dengan  melakukan  tahapan-tahapan  yang  dimulai  dari sterilisasi  alat,  pengambilan  sampel  limbah,  pembuatan  media,  isolasi  bakteri, pemurnian,  pewarnaan  gram,  uji  motilitas,  uji  katalase,  dan  perhitungan  total bakteri (TPC).

## HASIL PENELITIAN Hasil Isolasi Bakteri
Adapun  hasil  isolasi  bakteri  dari  dua  sampel  limbah  cair  minyak  kelapa sawit  sungai  Simangalam  setelah  diinkubasi  selama  72  jam  dapat  diamati  pada gambar berikut.
Gambar1. Hasil Isolasi Bakteri Pendegradasi Limbah Cair Minyak Kelapa Sawit setelah 72 Jam, dengan U1. Sampel 1 dan U2. Sampel 2

## Karakterisasi Morfologi Koloni Isolat Bakteri
Isolat  bakteri  yang  telah  berhasil  dimurnikan  kemudian  dikarakterisasi secara  makroskopis  dengan  melakukan  pengamatan  morfologi  koloni  bakteri, yang  meliputi  bentuk,  margin,  elevasi,  dan  warna  koloni.  Hasil  karakterisasi morfologi koloni bakteri dapat diamati pada tabel berikut.
U1 U2
Tabel 1. Karakterisasi Morfologi Koloni Isolat Bakteri Kode Isolat Bentuk Margin Elevasi Warna HB1ST1 Circular Entire Convex Putih kuning HB2ST2 Circular Entire Flat Putih kuning HB3ST2 Irregular Undulate Flat Merah HB4ST2 Irregular Undulate Flat Merah HB5ST2 Irregular Undulate Convex Putih kuning HB6ST2 Irregular Lobate Flat Merah
Setelah  dilakukan  penelitian  diketahui  bahwa  dari  enam  isolat  bakteri, terdapat dua isolat yang memiliki bentuk koloni circular (HB1ST1 dan HB2ST2) dan empat isolat dengan bentuk koloni irregular . Isolat dengan kode HB1ST1 dan HB2ST2  sama-sama  memiliki  margin entire (rata)  dan  berwarna  putih  kuning, tetapi  isolat  HB1ST1  memiliki  elevasi convex ,  berbeda  dengan  isolat  HB2ST2 yang memiliki elevasi flat . Adapun isolat HB3ST2 dan HB4ST2 memiliki bentuk, margin,  elevasi,  dan  warna  yang  sama,  yaitu irregular , undulate , flat ,  dan berwarna  merah.  Isolat  HB5ST2  memiliki  karakter  morfologi  bentuk irregular , margin undulate , elevasi convex , dan berwarna putih kuning. Sementara itu, isolat HB6ST2  memiliki  bentuk  koloni irregular ,  margin lobate ,  elevasi flat ,  dan berwarna merah.

## Karakterisasi Morfologi Sel dan Gram Isolat Bakteri
Setelah  dilakukan  karakterisasi  secara  makroskopis,  isolat  bakteri selanjutnyadikarakterisasi  secara  mikroskopis  melalui  pewarnaan  Gram. Pewarnaan Gram ini bertujuan untuk mengetahui bentuk dan penataan sel bakteri,
Tabel 2. Karakterisasi Morfologi Sel dan Gram Isolat Bakteri
Kode Isolat Bentuk Penataan Gram HB1ST1 Coccus Streptococcus + HB2ST2 Bacil Streptobacil - HB3ST2 Coccus Monococcus - HB4ST2 Bacil Streptobacil + HB5ST2 Coccus Monococcus - HB6ST2 Bacil Streptobacil +
Tabel  yang  disajikan  di  atas  menunjukkanbahwa  terdapat  enam  isolat bakteri,tiga isolat yang memiliki bentuk morfologi sel coccus (HB1ST1, HB3ST2, dan  HB5ST2)  dan  tiga  isolat  dengan  bentuk  sel bacil (HB2ST2,  HB4ST2,  dan HB6ST2).

## Hasil Uji Biokimia
Selain  pengamatan  secara  makroskopis  dan  mikroskopis,  karakteristik biokimia tiap isolat juga perlu diperoleh dengan uji biokimia untuk membedakan isolat  bakteri  yang  satu  dengan  yang  lainnya.  Uji  biokimia  yang  dilakukan  pada penelitian ini, meliputi uji hidrolisis gelatin, uji sitrat, uji TSI ( Triple Sugar Iron ),
produksi gas, uji hidrogen sulfida, motilitas, dan katalase. Setelah diperoleh data- data  hasil  uji  biokimia  tersebut,  selanjutnya  dilakukan  identifikasi  genus  bakteri yang  mengacu  pada  buku  pedoman  identifikasi  bakteri, Bergey’s  Manual  of Determinative  Bacteriology tahun  1994.  Hasil  identifikasi  genus  bakteri  dan  uji biokimia  isolat  bakteri  pendegradasi  limbah  cair  minyak  kelapa  sawit  dapat diamati pada tabel berikut.
Tabel 3. Hasil Uji Biokimia Kode Isolat Morfologi Sel Uji Biokimia Identifikasi Genus Bentuk Penataan Gram Hidrolisa Gelatin Uji Sitrat HidrogenSulfida Motilitas  Katalase S/B Gas  H 2 S HB1ST1 Coccus Streptococcus + - - A/K - - - + Deinococcus HB2ST2 Bacil Streptobacil - - - A/K + - + + Morganella HB3ST2 Coccus Monococcus - - - A/K - - + + Rhodobacter HB4ST2 Bacil Streptobacil + - - K/K + - + + Lysinibacillus HB5ST2 Coccus Monococcus - - - K/K + - + + Paracoccus HB6ST2 Bacil Streptobacil + - - K/K - - + + Bacillus
Keterangan tanda tabel di atas adalah (+) = hasil uji positif; (-) = hasil uji negatif; S = Slant ; B = Butt ; A/K = Merah/Kuning; K/K = Kuning/Kuning.
Berdasarkan  tabel  yang  disajikan  tersebut,  dapat  diketahui  bahwa  semua isolat bakteri yang diperoleh menunjukkan hasil negatif pada uji hidrolisis gelatin, uji sitrat, dan uji hidrogen sulfida.

## Perhitungan Total Koloni Bakteri (TPC)
Selain  pengamatan  secara  makroskopis,  mikroskopis,  dan  karakteristik biokimia tiap isolat juga perlu dilakukan TPC dengan tujuan untuk menunjukkan jumlah mikroba yang terdapat pada suatu produk dengan cara menghitung koloni bakteri yang ditumbuhkan pada media agar.
Tabel 4. Total Koloni Bakteri No. Sampel Ulangan (U) Total Koloni Bakteri (CFU/ml) 1 Sampel 1 1 3 × 10 7 2 4 × 10 7 Rata-rata 3,5 × 10 7 2 Sampel 2 1 9 × 10 7 2 8 × 10 7 Rata-rata 8,5 × 10 7
Tabel yang disajikan di atas menunjukkan total koloni bakteri dari sampel 2, dengan  rata-rata  85.000.000  CFU/ml  memiliki  nilai  yang  lebih  tinggi  dari  total koloni bakteri sampel 1, yaitu senilai 35.000.000 CFU/ml.

## PEMBAHASAN

## Isolasi Bakteri
Isolasi  bakteri  yang  dilakukan  menggunakan  media Nutrient  Agar (NA) sebanyak 5,32 gram dan dilarutkan dalam 100 ml aquadest dengan tambahan 10
ml  limbah  cair  minyak  kelapa  sawit,  berhasil  diperoleh  berbagai  macam  koloni bakteri  yang  tumbuh  dan  menunjukkan  zona  halo  di  sekitar  koloni  yang  tumbuh pada  media  tersebut.  Koloni  bakteri  yang  diisolasi  merupakan  bakteri  aerobik, karena  cara  sampling  dan  metode  inkubasi  yang  dilakukan  membuat  tersedianya oksigen  bebas  secara  berlimpah.  Zona  halo  di  sekitar  koloni  bakteri  digunakan sebagai  indikator  kualitatif  untuk  menunjukkan  bahwa  bakteri  memiliki kemampuan untuk mendegradasi limbah cair minyak kelapa sawit. Koloni bakteri yang memperlihatkan adanya zona halo di sekitarnya akan dilanjutkan pada tahap pemurnian isolat bakteri. Adapun hasil isolasi bakteri dari dua sampel limbah cair minyak kelapa sawit sungai Simangalam setelah diinkubasi selama 72 jam.
Mikroorganisme yang diisolasi dari limbah cair minyak kelapa sawit atau palm oil mill effluent (POME) memiliki kemampuan untuk mendegradasi sumber karbon  yang  terdapat  pada  limbah  tersebut  dalam  (Imo  &  Ihejirika,  2021). Kemampuan bakteri dalam mendegradasi limbah cair minyak kelapa sawit dapat ditentukan  dari  proporsi  bakteri  yang  tumbuh  membentuk  zona  halo  dan  tidak pada medium.Semakin besar zona halo yang terbentuk, maka semakin besar pula kemampuan  bakteri  dalam  mendegradasi  limbah  tersebut  (Chairunnisa  et  al., 2019).

## Karakterisasi Morfologi Koloni Isolat Bakteri
Setelah  dilakukan  penelitian  diketahui  bahwa  dari  enam  isolat  bakteri, terdapat dua isolat yang memiliki bentuk koloni circular (HB1ST1 dan HB2ST2) dan empat isolat dengan bentuk koloni irregular . Isolat dengan kode HB1ST1 dan HB2ST2  sama-sama  memiliki  margin entire (rata)  dan  berwarna  putih  kuning, tetapi  isolat  HB1ST1  memiliki  elevasi convex ,  berbeda  dengan  isolat  HB2ST2 yang memiliki elevasi flat . Adapun isolat HB3ST2 dan HB4ST2 memiliki bentuk, margin,  elevasi,  dan  warna  yang  sama,  yaitu irregular , undulate , flat ,  dan berwarna  merah.  Isolat  HB5ST2  memiliki  karakter  morfologi  bentuk irregular , margin undulate , elevasi convex , dan berwarna putih kuning. Sementara itu, isolat HB6ST2  memiliki  bentuk  koloni irregular ,  margin lobate ,  elevasi flat ,  dan berwarna merah.
Tujuan  dari  purifikasi  isolat  bakteri  yaitu  untuk  memperoleh  koloni tunggal  dengan  morfologi  yang  berbeda  dengan  pemisahan  dari  koloni  lain ataupun kontaminan. Koloni yang dimurnikan ini diseleksi berdasarkan perbedaan morfologi  seperti  warna,  tekstur,  elevasi,  margin,  dan  lingkar  konsentrisnya (Layly et al., 2021).

## Karakterisasi Morfologi Sel dan Gram Isolat Bakteri
Setelah  dilakukan  penelitian  diketahui  bahwa  dari  enam  isolat  bakteri, terdapat  tiga  isolat  yang  memiliki  bentuk  morfologi  sel coccus (HB1ST1, HB3ST2,  dan  HB5ST2)  dan  tiga  isolat  dengan  bentuk  sel bacil (HB2ST2, HB4ST2,  dan  HB6ST2).  Dari  tiga  isolat  dengan  bentuk  sel coccus ,  terdapat  dua
isolat  (HB3ST2  dan  HB5ST2)  dengan  penataan monococcus ,  berbeda  dengan penataan  isolat  HB1ST1  yang  berantai  atau streptococcus .  Sementara  itu,  semua isolat  yang  memiliki  bentuk  sel bacil memiliki  penataan streptobacil .  Adapun, dari  seluruh  isolat  yang  diwarnai,  diperoleh  tiga  isolat  bakteri  Gram  positif (HB1ST1, HB4ST2, dan HB6ST2) dan tiga isolat bakteri Gram negatif (HB2ST2, HB3ST2, dan HB5ST2).
Bakteri Gram positif berwarna ungu disebabkan oleh adanya kompleks zat warna kristal violet-iodin tetap dipertahankan di dinding sel bakteri setelah diberi aseton  alkohol,  sementara  itu  bakteri  Gram  negatif  berwarna  merah  karena kompleks tersebut larut pada saat pemberian aseton alkohol sehingga mengambil warna  merah  safranin.  Perbedaan  warna  ini  menunjukkan  adanya  perbedaan struktur dinding sel bakteri Gram positif dan negatif di mana bakteri Gram positif memiliki dinding sel dengan kandungan peptidoglikan yang lebih tinggi, berbeda dengan  bakteri  Gram  negatif  yang  memiliki  kandungan  lipid  yang  lebih  tinggi (Khairunnisa, 2018).

## Uji Biokimia
Selain  karakteristik  makroskopis  dan  mikroskopis  isolat  bakteri, karakteristik biokimia juga perlu dilakukan untuk membedakan isolat bakteri yang satu dengan  yang lainnya. Uji biokimia yang dilakukan pada penelitian ini, yaitu uji  motilitas  menggunakan  3  gram  media Sulfide  Indole  Motility (SIM)  yang dilarutkan dalam 300 ml aquadest . uji motilitas isolat HB1ST1 menunjukkan hasil negatif,  sedangkan  lima  isolat  lainnya  (HB2ST2,  HB3ST2,  HB4ST2,  HB5ST2, dan HB6ST2) menunjukkan hasil  yang positif. Hasil ini mengindikasikan bahwa hanya  isolat  HB1ST1  yang  bersifat  non  motil  atau  tidak  memiliki  alat  gerak, sedangkan lima isolat lainnya bersifat motil atau memiliki alat gerak yang ditandai dengan adanya pertumbuhan atau jejak bakteri yang menyebar di sekitar tusukan jarum ose pada media SIM.
Bakteri yang motil memiliki kemampuan kemotaksis yang membuat selnya dapat bergerak sepanjang gradien kimia dan menuju ke tempat yang optimal untuk biodegradasi.  Motilitas  pada  bakteri  menambah  bioavaibilitas  sehingga  dapat meningkatkan bioremediasi limbah (Rolando et al., 2020). Motilitas suatu bakteri diketahui  dapat  meningkatkan  frekuensi  bakteri  untuk  bersentuhan  dengan  suatu permukaan  sehingga  tingkat  pergerakan  bakteri  berkorelasi  positif  dengan  laju perlekatan  bakteri  dengan  minyak.  Di  samping  itu,  densitas  bakteri  motil  juga memiliki waktu pertahanan  yang lebih lama daripada bakteri non motil sehingga penggunaan bakteri motil untuk biodegradasi limbah lebih menguntungkan karena memiliki kemampuan adhesi ke minyak  yang lebih cepat (Dewangan  &  Conrad, 2020).
Selain  uji  motilitas,  uji  biokimia  lain  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini adalah  uji  katalase  dengan  menggunakan  reagen  H 2 O 2 3%  untuk  menunjukkan kemampuan  isolat  bakteri  dalam  memproduksi  enzim  katalase  secara  kualitatif.
uji katalase semua isolat bakteri yang diperoleh pada penelitian ini menunjukkan hasil  yang  positif.  Hasil  positif  pada  uji  ini  ditandai  dengan  terbentuknya gelembung  gas  ketika  bakteri  ditetesi  dengan  reagen  H 2 O 2 3%.  Hasil  ini menunjukkan  bahwa  semua  isolat  memiliki  kemampuan  untuk  menghasilkan enzim katalase yang dapat menguraikan hidrogen peroksida.
Enzim katalase yang dihasilkan oleh mikroorganisme merupakan salah satu bentuk  pertahanan  yang  membuat  mikroorganisme  tersebut  mampu  untuk memperbaiki  atau  menghindari  kerusakan  yang  ditimbulkan  akibat  dampak oksidatif  dari  hidrogen  peroksida.  Katalase  mampu  untuk  menetralisir  efek berbahaya dari hidrogen  peroksida dengan cara menguraikannya menjadi air dan oksigen  sehingga  tidak  bersifat  toksik.  Selama  respirasi,  setiap  mikroorganisme baik aerobik, anaerobik, maupun fakultatif aerobik selalu memproduksi hidrogen peroksida yang bersifat toksik (Layly et al., 2021).
Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  aktivitas  mikroorganisme  dalam biodegradasi  limbah  cair  minyak  kelapa  sawit  adalah  kemampuannya  untuk tumbuh  pada  konsentrasi  toksisitas  tertentu.  Toksisitas  dalam  limbah  cair meningkat  ketika  konsentrasi  asam  naik.  Mikroorganisme  yang  terhambat pertumbuhannya  akan  mengalami  kesulitan  dalam  mendegradasi  limbah  cair tersebut (Dominic & Baidurah, 2022).
Adapun  pada  uji  gelatin  diketahui  bahwa  semua  isolat  bakteri  yang diperoleh menunjukkan  hasil negatif pada uji hidrolisis gelatin, uji sitrat, dan uji hidrogen sulfida. Hal ini berarti isolat bakteri tersebut tidak mampu menghasilkan enzim gelatinase, tidak mampu memanfaatkan sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon, dan tidak memproduksi endapan hitam, hidrogen sulfida.
Adapun pada uji TSI, isolat HB1ST1, HB2ST2, dan HB3ST2 menunjukkan hasil slant berwarna kuning dan butt berwarna merah (alkaline/acid)  yang berarti isolat bakteri tersebut hanya mampu memfermentasi glukosa, sebagai satu-satunya dekstrosa  pada  media  uji.  Isolat  HB4ST2,  HB5ST2,  dan  HB6ST2  menunjukkan hasil  slant  berwarna  kuning  dan  butt  berwarna  kuning  (K/K)  yang  berarti  isolat tersebut mampu memfermentasi glukosa, sukrosa, ataupun laktosa. Pada uji TSI, diamati  juga  adanya  produksi  gas,  baik  CO2  ataupun  H2  pada  isolat  HB2ST2, HB4ST2, dan HB5ST2 sebagai produk samping fermentasi. Sementara itu, isolat lainnya  menunjukkan  hasil  negatif  pada  produksi  gas.  Berdasarkan  data karakteristik  makroskopis,  mikroskopis,  dan  biokimia  yang  diperoleh,  hasil identifikasi  genus  isolat  bakteri  tersebut,  yaitu Deinococcus  sp. (HB1ST1), Morganella  sp. (HB2ST2), Rhodobacter  sp. (HB3ST2), Lysinibacillus  sp. (HB4ST2), Paracoccus sp . (HB5ST2), dan Bacillus sp. (HB6ST2).
Uji hidrogen sulfida bertujuan untuk mengamati kemampuan bakteri dalam mengonversi  asam  amino  alanin  menjadi  hidrogen  sulfida  yang  berupa  endapan hitam  pada  media  TSIA  ( Triple  Sugar  Iron  Agar ).  Hasil  uji  ini  menentukan kemampuan  bakteri  dalam  memfermentasi  asam  amino.  Adapun  uji  fermentasi karbohidrat  yang  juga  menggunakan  media  TSIA    bertujuan    untuk  mengetahui
kemampuan  bakteri  dalam  menghidrolisis  karbohidrat  yang  ditandai  dengan perubahan  warna  media  dari  merah  menjadi  kuning.  Pada  media  ini,  juga  dapat diamati  pembentukan  gas  yang  ditandai  dengan  adanya  keretakan  pada  media TSIA. Sementara itu, uji sitrat digunakan untuk menentukan kemampuan bakteri dalam  memanfaatkan  sitrat  sebagai  sumber  karbonnya.  Bila  bakteri  mampu memanfaatkan  sitrat,  maka  pH  media  SCA  ( Simmons’  Citrate  Agar )  akan  naik dan mengubah warna media dari hijau menjadi biru (Liempepas et al., 2019).
Kultur  konsorsium  bakteri  gabungan  memiliki  kemampuan  degradasi limbah  yang lebih baik  dibandingkan kultur bakteri tunggal. Hal ini dikarenakan setiap  individu  dalam  konsorsium  tersebut  bertindak  bersama-sama  untuk mempengaruhi  penguraian  polutan  organik  dalam  limbah  cair.  Konsorsium  ini juga mampu menyediakan microenvironment yang memadai. Adapun konsorsium bakteri  gabungan  yang  digunakan  meliputi  bakteri  yang  berasal  dari  genus Bacillus,  Micrococcus,  Providencia,  Klebsiella, dan Stenotrophomonas (Abu Hasan et al., 2021).
Rhodobacter merupakan  salah  satu  genus  bakteri  ungu  non-sulfur  yang mampu  berfotosintesis.  Bakteri  ini  mampu  memanfaatkan  limbah  cair  kelapa sawit  dan  menurunkan  total  nitrogen  dan  fosforus  di  dalamnya.  Hal  ini menjadikan  Rhodobacter  sebagai  salah  satu  bakteri  yang  berpotensi  untuk menurunkan  polutan  organik  dalam  limbah  tersebut.  Sementara  itu,  berbagai aplikasi  bakteri  untuk  pengolahan  limbah  cair  kelapa  sawit  yang  efisien  dan praktikal  sudah  pernah  dilakukan  dan  berhasil  mengurangi  nilai  COD,  volum pengerjaan,  pengaturan  suhu,  dan  waktu  retensinya.  Bakteri-  bakteri  tersebut berasal  dari  genus Bacillus,  Klebsiella,  Micrococcus,  Lysinibacillus,  Klebsiella, Stenotrophomonas, dan Clostridium (Dominic & Baidurah, 2022) .

## Perhitungan Total Koloni Bakteri (TPC)
Jumlah  koloni  bakteri  pada  limbah  cair  minyak  kelapa  sawit  sungai Simangalam  berhasil  diperoleh  dengan  metode  TPC  menggunakan  media Plate Count  Agar (PCA),  kemudian  jumlah  koloni  dihitung  dan  didata  sehingga  dapat ditentukan total koloni bakteri pada tiap sampel yang diuji. dapat diketahui bahwa total koloni bakteri dari sampel 2, dengan rata-rata 85.000.000 CFU/ml memiliki nilai yang lebih tinggi dari total koloni bakteri sampel 1, yaitu senilai 35.000.000 CFU/ml.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sampel  2  memiliki  keragaman  ataupun populasi bakteri yang lebih berlimpah daripada sampel 1.
Penelitian  terkait  total  koloni  bakteri  pada  limbah  cair  kelapa  sawit  juga dilakukan  oleh  Imo  dan  Ihejirika  (2021),  dengan  total  koloni  bakteri  tertinggi diperoleh  pada  saat  pengambilan  sampel  limbah  hari  ke-28  terdekomposisi  yaitu sebanyak 7.100.000 CFU/ml. Perbedaan jumlah koloni bakteri yang terdapat pada limbah  cair  minyak  kelapa  sawit  bergantung  pada  tahapan  dekomposisinya. Variasi  jumlah  koloni  bakteri  ini  juga  dapat  disebabkan  karena  beberapa
parameter,  seperti  nutrisi,  mineral,  suhu,  kadar  oksigen,  keasaman  (pH),  sampai volume limbah itu sendiri.

## SIMPULAN
Enam isolat bakteri yang mampu mendegdradasi limbah cair kelapa sawit di  Sungai  Simangalam  berdasarkan  data  karakteristik  makroskopis,  mikroskopis, dan  biokimia  diperoleh,  hasil  identifikasi  genus  isolat  bakteri  tersebut,  yaitu Deinococcus sp.  (HB1ST1), Morganella sp.  (HB2ST2), Rhodobacter sp. (HB3ST2), Lysinibacillus sp. (HB4ST2), Paracoccus sp. (HB5ST2), dan Bacillus sp. (HB6ST2).

## DAFTAR PUSTAKA
Abu  Hasan,  H.,  Abu  Bakar,  S.  N.  H.,  &  Takriff,  M.  S.  (2021).  Microalgae Biofilms  for  the  Treatment  of  Wastewater.  In Microalgae (pp.  381–407). Elsevier. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-821218-9.00012-8 chairunnisa,  Riyanto,  A.  K.  (2019).  Isolasi  dan  Uji  Bakteri  Lipolitik  dalam Mendegradasi  Minyak  pada  Limbah  Cair  Kelapa  Sawit  di  Kebun  Marihat, Pematang  Siantar. Jurnal  Ilmiah  Biologi  UMA  (  JIBIOMA  ) , 2 (september), 46–50.
Chairunnisa,  C.,  Riyanto,  R.,  &  Karim,  A.  (2019).  Isolasi  dan  Uji  Bakteri Lipolitik  dalam  Mendegradasi  Minyak  pada  Limbah  Cair  Kelapa  Sawit  di Kebun  Marihat,  Pematang  Siantar. Jurnal  Ilmiah  Biologi  UMA  (JIBIOMA) , 1 (2), 44–52. https://doi.org/10.31289/jibioma.v1i2.155 Dewangan, N. K., & Conrad, J. C. (2020). Bacterial Motility Enhances Adhesion to Oil Droplets. Soft Matter , 16 (35), 8237–8244. Dominic,  D.,  &  Baidurah,  S.  (2022).  Recent  Developments  in  Biological Processing  Technology  for  Palm  Oil  Mill  Effluent  Treatment—A  Review. Biology , 11 (4), 525. https://doi.org/10.3390/biology11040525 Imo, E. O., & Ihejirika, C. E. (2021). Microbial Load and Biodegradation of Palm Oil  Mill  Effluent  (POME)  by  Microorganisms  at  Different  Stages  of Discharge. EQA-International Journal of Environmental Quality , 44 , 9–17. Khairunnisa,  M.  (2018).  Isolasi  dan  Identifikasi  Staphylococcus  aureus  pada Ambing  Kambing  Peranakan  Etawa  (PE). JURNAL  ILMIAH  MAHASISWA VETERINER , 2 (4), 538–545.
Liempepas,  A.,  Lolo,  W.  A.,  &  Yamlean,  P.  V.  Y.  (2019).  Isolasi  dan  Uji Antibakteri dari  Isolat Bakteri  yang Berasosiasi dengan Spons Callyspongia aerizusa  serta  Identifikasi  secara  Biokimia. PHARMACON , 8 (2),  380. https://doi.org/10.35799/pha.8.2019.29304
Rahmatul Layly, I., MERYANDINI, A., HELIANTI, I., & ASTUTI, R. I. (2021). Identification  of  lipase  Producing  Bacteria  from  Palm  Oil  Sewage  Sludge Processing  Plant  at  Malimping,  Banten,  Indonesia. Biodiversitas  Journal  of Biological Diversity , 22 (10). https://doi.org/10.13057/biodiv/d221045 Rolando,  L., Vila, J., Baquero, R. P., Castilla-Alcantara, J. C., Barra Caracciolo, A., & Ortega-Calvo, J.-J. (2020). Impact of Bacterial Motility on Biosorption and  Cometabolism  of  Pyrene  in  a  Porous  Medium. Science  of  The  Total Environment , 717 , 137210. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2020.137210
Swandi,  M.  K.,  Nurmiati,  &  Periadnadi.  (2015).  Isolasi  Bakteri  Pendegradasi Limbah Cair Industri Minyak. Jurnal Biologi Universitas Andalas , 4 (1), 71– 76.
Yeanny, M. S., & Muthawali, D. I. (2018). Analysis of Mercury Bioaccumulation on Bivalve Species in Belawan River. Journal of Physics: Conference Series , 1116 (5). https://doi.org/10.1088/1742-6596/1116/5/052077 Yuna,  R.,  &  Mardina,  V.  (2019).  Pengujian  Karakteristik  Kimia  pada  Limbah Cair Kelapa Sawit di Pabrik X Evaluation of The Chemical Characteristics of Palm Oil Liquid Waste in Factory X. Jurnal Biologica Samudra , 1 (1), 1–08.