## Journal of Agromedicine and Medical Sciences
. 2022. 8(3): 164-169
JOURNAL OF AGROMEDICINE AND MEDICAL SCIENCES (AMS) ISSN: 2460-9048 (Print), ISSN: 2714-5654 (Electronic)
Available online at http://jurnal.unej.ac.id/index.php/JAMS
Profil LC-MS/MS dan Kadar Fenolik Total Ekstrak Bunga Telang dan Rosela Sebagai Kandidat Inhibitor NPC1L1
LC-MS/MS Profile and Total Phenolic Content of Telang Flower Extract and Roselle as NPC1L1 Inhibitor Candidate
Erna Susanti 1 * ) , Meiria Istianasari 2
1,2 Pharmacy and Food Analyst Academy of Putra Indonesia Malang, Malang, Indonesia

## Article Info
Article History: Received: June 7, 2022
Accepted: October 17, 2022 Published: October 31, 2022
*) Corresponding author: E-mail: abiyatur@gmail.com

## How to cite this article:
Susanti  E,  Istianasari  M.  (2022).  LC- MS/MS  Profile  and  Total  Phenolic Content  of  Telang  Flower  Extract  and Roselle  as  NPC1L1  Inhibitor  Candidate. Journal  of      Agromedicine  and  Medical Sciences, 8(3): 164-169
https://doi.org/10.19184/ams.v8i3.3208 0

## Abstrak
Penghambatan  aterogenesis  dapat  dilakukan  melalui  beberapa  mekanisme  salah satunya  melalui  penghambatan  absorbsi  kolesterol  intestinal  melalui  penghambatan NPC1L1.  Aktivitas  ekstrak  bunga  telang  dalam  mengatasi  berbagai  permasalahan penyakit  degeneratif  terutama  cardiovaskuler  sudah  banyak  dibuktikan  dengan penelitian ilmiah. Begitu juga terkait aktivitas bunga rosella. Penelitian sebelumnya yang dilakukan peneliti menunjukkan potensi ekstrak bunga rosella sebagi agonis LXR salah satu  jalur  yang  berperan  pada  hambatan  NPC1L1.  Kombinasi  kedua  ekstrak  tersebut diharapkan dapat meningkatkan aktivitasnya sebagai kandidat inhibitor NPC1L1. Tujuan penelitian ini adalah berdasarkan hasil penentuan kadar fenolik total serta karakterisasi senyawa  aktif  dengan  LC  MS/MS  ekstrak  bunga  telang  dan  rosella  diharapkan  dapat dikembangkan  menjadi  penelitian  lanjutan  secara  invivo  untuk  menguatkan  bukti ilmiahnya sehingga dapat dikembangkan menjadi sediaan fitofarmaka. Metode analisis instrumentasi  dengan  LC-MS/MS  untuk  mengidentifikasi  kandungan  seyawa  aktif sehingga  didapatkan  ekstrak  bunga  telang  dan  rosela  yang  terstandarisasi.  Demikian juga  dengan  metode  Folin  Ciocalteu  dapat  digunakan  unutk  penentuan  kadar  total fenolik dalam ekstrak  yang dianalisis. Kadar  fenolik total berdasarkan urutan terbesar adalah  ekstrak  bunga  rosella  ungu  (114,129.35  ±  266.20  µg  GAE),  kombinasi  ekstrak rosella  ungu dan bunga telang (101,760.58 ± 116.09  µg GAE ), ekstrak bunga telang ( 90,477.41 ± 107.38 µg GAE)  dan ekstrak bunga rosella merah (    84,601.00 ± 266.91 µg GAE). Kombinasi ekstrak menunjukkan kadar fenolik total yang berkurang dibandingkan dengan  ekstrak  tunggalnya.  Kandungan  fenolat  pada  masing-  masing  ekstrak mempengaruhi total fenolik pada kombinasi ekstrak.Teridentifikasi  8 senyawa  antosinin baik pada ekstrak bunga telang maupun ekstrak Bunga Rosella .Kesimpulan penelitian ini adalah  ekstrak  bunga  telang  dan  bunga  rosella  potensial  dikembangkan  sebagai kandidat inhibitor NPC1L1
Kata Kunci : Inhibitor NPC1L1, ektsrak bunga telang , Rosela, fenolik total,  LC-MS/MS, atherogenesis.

## Abstract
Inhibition of atherogenesis can  be done through several mechanisms, one of which is through inhibition of intestinal cholesterol absorption through inhibition of NPC1L1. The activity  of  Telang  flower  extract  in  overcoming  various  problems  of  degenerative diseases, especially cardiovascular disease, has been proven by many scientific studies. Likewise,  related  to  the  activity  of  Rosella  flowers.  Previous  research  conducted  by researchers showed the potential of Rosella flower extract as an LXR agonist, one of the pathways that play a role in NPC1L1 inhibition. The combination of the two extracts is expected to increase its activity as a candidate for NPC1L1 inhibitor. The study was based

## Pendahuluan
Aktivitas  ekstrak  bunga  telang  dalam  mengatasi  berbagai permasalahan  penyakit  degeneratif  sudah  banyak  dibuktikan dengan penelitian ilmiah ( Alfrian,et al 2013; Karuna,et al,  2013). Beberapa  penelitian  yang  terkait  aktivitas  bunga  telang  antara lain  penelitian  Ponnusammy    menunjukkan  bahwa  aktivitas antioksidan ekstrak bunga telang tertinggi dibandingkan dengan 15  jenis  ekstrak  bunga  lain(Ponnusamy  S,  et  al,  2014).    Daisy menjelaskan  juga  terkait  antivitas  antidiabetic  dari  ekstrak  air bunga  telang  telah  dibuktikan  dengan  pemberian  ekstrak  air bunga telang pada dosis 400 mg/kg berat badan secara oral. Efek tersebut  ditunjukkan  oleh  menurunnya  glukosa  serum  dan glikosilasi  hemoglobin  pada  tikus  percobaan.  Efek  lain  dari ekstrak  bunga  telang  dapat  meningkatkan  insulin  serum  dan glikogen otot hati dan tulang (Daisy et al., 2009). Penelitian lain oleh  Nair  et  al  menunjukkan  bahwa  ekstrak  bunga  telang memiliki  aktifitas  antiinflamasi  pada cell  line makrofag  RAW 264.7(Nair et al. 2015). Menurut Shen et al kandungan  bioaktif bunga  segar  Bunga  Telang    yang  bersifat  lipofilik  (kelompok fitosterol  dan  asam  lemak  )lebih  banyak dibanding  kandungan hidrofilik (antosianin dan flavonol glikosida)  yaitu sebesar 27,67 dan 11,08 mg/100 g bunga segar (Shen et al., 2016). Kandungan senyawa  fenol  dalam  ekstrak  kering  Bunga  Telang  menurut penelitian Singh et al antara antara 53-460 mg ekuivalen asam galat (Singh et al., 2018).
Sedangkan  penelitian  aktivitas  Rosella  antara  lain  oleh Mahadevan  et  al  menunjukkan  hambatan  radikal  anion superoksid  sebesar  70±80%  ekstrak  rosela  aktivitas pada  dosis 1000µg  (Mahadevan  et  al.  2009;  Al-hashimi,  Alaa  G.  2012). Rosela juga memiliki aktivitas antiinflamasi menurut penelitian Dianasari & Fajrin hambatan inflamasi sebesar 22,03; 31,48; dan 31,93%. Senyawa antosianin salah satu kandungan dari ekstrak rosela mampu meningkatkan sekresi insulin (Dianasari & Fajrin 2015).  Efek  lain  terhadap  tekanan  darah  ditunjukkan  oleh penelitian  Kusumastuti  dengan  pemberian  teh  rosela  dapat menurunkan  tekanan  datah  sistolik  dan  diastolic  (Kusumastuti 2014).
Penelitian  terkait  aktivitas  kombinasi  kedua  ekstrak  tersebut antara  lain  adalah  penelitian  Adisakwatana  dimana  kombinasi kedua ekstrak tersebut meningkatkan penghambatan enzim α - amilase  (Adisakwattana  et  al.,  2012).  Efek  hipoglikemik  juga
ditunjuukan  oleh  kombinasi    bunga  telang  dan  buah  delima (Punica  gratum)  yang  setara  dengan  obat  diabetes  metformin (Borikar  et  al.,  2018).  Hasil  penelitian  ini  meningkatkan eksplorasi  aktivitas  kombinasi  dari  beberapa  ekstrak  bunga telang  dengan  ekstrak  sumber  antosianin  lain.  Berdasarkan keberagaman aktivitas farmakologi dari kedua ekstrak tersebut sangat  dimungkinkan  keduanya  memiliki  aktivitas  sebagai penghambat absorbsi kolesterol intestinal atau dikenal sebagai inhibitor  NPC1L1  sebagai  protein  kunci  yang  berperan  pada proses  tersebut.  Polifenol    berhubungan  dengan  aktivitas sebagai  inhibitor  NPC1L1  berdasar  penelitian  sebelumnya menunjukkan  bahwa  l uteolin  and  quercetin  menunjukkan efek  penghambatan  NPC1L1  yang  sama  dengan Ezetimibe.
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas  diperlukan  penelitian  yang bertujuan untuk mengetahui aktivitas potensial dari kombinasi ekstrak  bunga  telang  dan  rosella  sebagai  inhibitor  NPC1L1 berdasarkan  hasil  penentuan  kadar  fenolik  total  serta karakterisasi  profil  senyawa  aktif  dengan  LC/  MS-MS. Selanjutnya  dari  hasil  penelitian  ini  dapat  dikembangkan penelitian  in  vivo  maupun  insilico  sebagai  bukti  ilmiah  yang mendukung aktivitasnya sebagai inhibitor NPC1L1.

## Metode
Penelitian  ini  termasuk  jenis  penelitian  deskriptif  analitik  yang bertujuan untuk mendapatkan karakteristik profil senyawa aktif ekstrak  bunga  telang  dan  rosella  serta  kadar  total  fenolik. Instrumen analisis kualitatif dan kuantitatif  senyawa aktif yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  LC-MS/MS  dan Spektrofotometri  UV-Vis.  Persetujuan  etik  penelitian  telah didapatkan  dari  LPPM  Akfar  Putra  Indonesia  Malang  dengan No.39/ B.2/LPPM Aka.Akfar.PIM/VIII/2021.

## Pembuatan Larutan Induk Asam Galat
Sebanyak 50 mg asam galat  dilarutkan dengan etanol p.a sampai 50 mL sehingga konsentrasi larutan induk 2000 mg/L. Kemudian larutan  diencerkan hingga diperoleh konsentrasi 40, 60, 80, 100 dan 120 mg/L.

## Pembuatan Larutan Sampel
Larutan induk dibuat dalam konsentrasi 2000 mg/L dengan cara
on the results of the determination of total phenolic levels and the characterization of the active  compounds  with  LC  MS/MS  extracts  of  telang  flower  and  rosella,  which  are expected to be developed into further research in vivo to strengthen scientific evidence so that they can be developed into phytopharmaca preparations. Instrumentation analysis method with LC-MS/MS to identify the content of active compounds and determination of total phenolic content with Folin ciocalteu in order to obtain standardized extracts of telang  flower  and  roselle.  The  total  phenolic  content  based  on  the  largest  order  was purple rosella flower extract (114.129.35 ± 266.20 g GAE), a combination of purple rosella and telang flower extract (101.760.58 ± 116.09 g GAE), telang flower extract (90.477.41 ±  107.38  g  GAE)  and  extract  red  rosella  flowers  (84,601.00  ±  266.91  g  GAE).  The combination of extracts showed reduced total phenolic content compared to the single extract.  The  phenolic  content  in  each  extract  affected  the  total  phenolic  in  the combination  of  extracts.  8  anthocinin  compounds  were  identified  in  both  the  telang flower extract and the rosella flower extract.
Keywords :  NPC1L1  inhibitor,  telang  ,  extract,  Roselle,  total  phenolics,  LC-MS/MS, atherogenesis

## 100 mg ekstrak ditambahkan etanol p.a  sampai volume 50 mL.

## Penentuan Panjang Gelombang Maksimal
Absorbansi  larutan standar diukur pada panjang gelombang 500 sd  800  nm  unutk  menntukan  panjang  gelombang  maksimal. Preparasi larutan standar adalah sebagai berikut : 0,1 mL larutan standar  ditambah    1  mL  reagen  Folin-Ciocalteu  (1:10  v/v  air), didiamkan 5 menit. Campuran ditambah 0,8 mL Na 2 CO 3 (75 g/L air) didiamkan selama 30 menit pada suhu ruang.

## Pembuatan Kurva Kalibrasi
Penentuan kurva kaliberasi dilakukan dengan proses yang sama seperti tahapan pada penentuan panjang gelombang maksimum dengan menyiapkan 7 seri konsentrasi yang berbeda.

## Pengujian Polifenol Total
Larutan sampel disiapkan dengan memipet  0,1 mL ditambah 1 mL  reagen  Folin-Ciocalteu  (1:10  v/v  air),  didiamkan  5  menit kemudian  ditambah  0,8  mL  Na 2 CO 3 (75  g/L  air)  didiamkan  30 menit  pada  suhu  ruang.  Dilakukan  pengukuran  absorbansi. Kandungan  polifenol  total  dinyatakan  dalam  mg  GAE (ekuivalensi asam galat) dalam 1 gram ekstrak.

## Hasil
Karakteristik simplisia dan ekstrak baik ekstrak Bunga Telang maupun  ekstrak  Bunga  Rosella  menunjukkan  ciri-  ciri simplisia serta ekstrak sesuai dengan Farmakope Herbal Ed II tahun  2017.  Rendemen  yang  diperoleh  juga  memenuhi syarat sesuai dengan referensi tersebut.

## Penentuan Kurva Standart TPC (Total Phenolic Content)
Standar yang digunakan pada penentuan kadar fenolik total adalah asam galat dengan konsentrasi baku kerja 2 sd 40 ppm. Data absorbansi baku kerja dengan 2 replikasi dapat dilihat pada Tabel 3. sedangkan kurva standart dapat dilihat di Gambar 1.

## Penentuan Kadar Fenolik Total
Kadar Fenolik Total Ekstrak bunga telang dan ekstrak bunga rosella berikut kombinasinya dapat dilihat pada Tabel  4.
Hasil penentuan kadar total fenolik  menunjukkan hasil dengan urutan  terbesar  adalah  ekstrak  bunga  rosella  ungu,  kombinasi ekstrak rosella ungu dan bunga telang, ekstrak bunga telang, dan ekstrak bunga rosella merah.
Gambar 1. Kurva kaliberasi Kadar Fenolik Total  ekivalen dengan Asam Galat
Tabel 1. Kadar Fenolik Total Ekstrak bunga telang dan ekstrak bunga rosella berikut kombinasinya
E*G/F (µg/ml) TPC (mg GAE) 1 Rosela Merah 6,930.66 84.701 6,938.92 84.803 6,897.64 84.298 rata-rata 84.601 ± 0.267 2 Bunga Telang 16,040.57 90.353 16,073.58 90.539 16,073.58 90.539 rata-rata 90.477 ± 0.107 3 Rosela Ungu 12,226.89 114.821 12,276.42 114.283 12,276.42 114.283 rata-rata 114.129 ± 0.266 4 Kombinasi Bunga Telang & Rosela Ungu 14,472.17 101.760 14,488.68 101.876 14,455.66 101.644 rata-rata 101.760 ±0. 116
y = 0,0212x + 0,0082 R² = 0,9993 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 0 10 20 30 40 50 A b sorban si
Konsentrasi (ppm)
Gambar 2 . Profil LC MS/MS ekstrak bunga telang
Gambar 3 . Profil LC MS/MS ekstrak bunga rosela
Pembahasan LC-MS/MS
dapat digunakan sebagai analisis kualitatif.identifikasi  suatu  senyawa  dalam  ekstrak  dapat ditentukan  dengan  data  M/Z  yang  merupakan  kromatogram hasil LC-MS/MS. Teknik analisis ini menunjukkan  resolusi tinggi sehingga identifikasi metabolit sekunder dalam ekstrak tanaman dapat dilakukan dengan tepat(Katajama dan Oresic ,2005)
Sifat  kimia  analit  sangat  berpengaruh  terhadap  hasil  analisis
dengan  LC-MS/MS.  Metode  ini  menggunakan  teknik  ionisasi umumnya  menghasilkan  ion  molekuler  ([M+H]+  atau  [M+H]-). Faktor lain yang berpengaruh terhadap hasil analisis ini adalah polaritas dan komposisi pelarut. Sifat matriks yang dianalisis juga berpengaruh  tehadap  hasil  analisis  selain  tegangan  ESI  yang digunakan (Halket, 2005). Hasil karakterisasi LC-MS/MS ekstrak etanol bunga telang menunjukkan metabolit sekunder dengan 8 karakteristik  yang  berbeda.  Berdasarkan  data  teridentifikasi golongan  antosianin  yaitu  Cyanidin  3,5-O-  diglucosida,
Cyanidin3-O- sophorosida, Cyanidin3-O-glucosida , Cyanidin3-O- rutinosida,  Cyanidin3-O-xylosylrutinosida,  pelargonidin  3-O- glucosylrutinosida, pelargonidin 3-O- rutinosida, pelargonidin 3- O-glukosida.    Metabolit  golongan  antosianin  yang  terdeteksi adalah Cairan pelarut yang digunakan yaitu etanol.  Etanol yang digunakan dapat menyari komponen aktif dalam sampel karena sifat  polaritasnya.  Hasil  identifikasi  LC-MS/MS  menunjukkan komponen utama dalam ekstrak adalah senyawa antosianin.
Menurut  Harborne  2005,  Antosianin  merupakan  derivate sianidin    yang  mengalami  metilasi  maupun  glikosilasi.  Jumlah gugus  hidroksil  membedakan  karakteristik  dari  antosianin (Harborne  2005).  Man  1997  menyebutkan  bahwa  Antosianin berubah  warna  jika  berada  pada  kondisi  asam  maupun  basa. Antosianin juga bersifat amfoter (Man 1997). Warna merah pada buah disebabkan karena kandungan antosianin. Hasil penelitian Parwata  2016  menunjukkan  bahwa  antosianin  utama  ekstrak bunga telang pada pH 6 yang diuji dengan instrumen LC-MS/MS mengandung  senyawa  aktif  yaitu  12  antosianin.  Antosianin merupakan  golongan  flavonoid.  Jenis  flavonoid  di  alam  yang telah  teridentifikasi  lebih  dari  2000  jenis.  Secara  structural flavonoid  merupakan    struktur  kimia  dengan  15  atom  karbon. Dari  segi  bahasa  antosianin  berarti  pigmen  berwarna  dalam bunga  atau  buah.  Metabolit  sekunder  lain  yang  banyak  ada dalam  tanaman  adalah  Flavon  yang  banyak  berperan  dalam aktivitas farmakologi.
Antosianin  bunga  telang  memiliki  kekhasan  tersendiri  karena mengandung  dua  gugus  asil  dengan  delfinidin  sebagai aglikonnya.  Sifat  antosianin  ini  lebih  stabil  dibandingkan antosianin  yang  tidak  terasilasi.  Antosianin  tersebut  adalah ternatin. Teridentifikasi ternatin A1, A2, A3, B1, B2, B3, B4, D1, dan  D2  serta  6  jenis  ternatin  lain  yaitu  C1,  C2,  C3,  C4,  C5,  D3, Preternatin  A3  dan  C4  (Da-Costa-Rocha  et  al,  2014;  Riaz  G, Chopra  R.  2018).  Ternatin  A1  merupakan  struktur  antosianin yang paling kompleks (Terahara et al., 1990) sedangkan ternatin B2 dan B1 merupakan senyawa yang terbanyak ada dalam Bunga Telang (Riaz G, Chopra R. 2018). Aktivitas antioksidan antosianin terkenal  paling  tinggi.  Kandungan  gugus  hidroksil  dan  gula tekonjugasi memiliki peran penting dalam aktivitasnya sebagai antioksidan.    Kandungan  gugus  tersebut  memiliki  kemampuan menyumbang  hidrogen  kepada  radikal    bebas  sehingga  lebih stabil  dan dapat meredam aktivitas radikal bebas.
Komponen  bioaktif  pada  bunga  telang  yang  lain  yang diperkirakan  memiliki  manfaat  fungsional  adalah  fenol. Kandungan utamanya adalah fitosterol, asam lemak, antosianin dan flavonol glikosida (Shen et al., 2016). Kandungan total fenol antara  53-  460  mg  ekivalen  asam  galat/  gram  ekstrak  kering (Adisakwattana et al., 2012; Chayaratanasin et al., 2015; Singh et al., 2018).
Chayaratanasin  menyebutkan    kandungan  flavonoid  rata-rata 11.2  mg  ekuivalen  katekin  tiap  gram  ekstrak  kering (Chayaratanasin et al., 2015). Flavonoid 25,8 mg setara kuersetin per  gram  ekstrak  (Singh  et  al.,  2018).  Flavonol,  antosianidin, flavanol,  dan  flavon  merupakan  4  komponen  utama  flavonoid pada bunga telang (Da-Costa-Rocha et al, 2014). Kaempferol 3- glikosida kandungannya sekitar 87% total flavonol glikosida (Da- Costa-Rocha, et al, 2014). Salah satu kelompok lain dari golongan flavonoid ini adalah  Quercetin dimana kandungannya sekitar 60- 75%  dari  flavonoid.  Aktivitas  antioksidan  Quersetin  berperan pada  penghambatan  penyakit  degenaratif  karena  efek
antioksidan yang dimilikinya. Hambatan   peroksidasi lemak serta okdidasi  Low Density Lipoproteins (LDL) merupakan mekanisme utama dalam pencegahan penyakit degenarativ.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  dapat  ditarik kesimpulan sebagai berikut :
1.  Kadar  fenolik  total  berdasarkan  urutan  terbesar  adalah ekstrak bunga rosella ungu (114.129 ± 0.266 mg GAE), kombinasi ekstrak rosella ungu dan bunga telang (101.760  ± 0.116 mg GAE ), ekstrak bunga telang (    90.477 ± 0.107mg GAE)  dan ekstrak bunga rosella merah (    84.601 ± 0.266g  mg GAE) 2.  Kombinasi  ekstrak  menunjukkan  kadar  fenolik  total  yang berkurang dibandingkan dengan ekstrak tunggalnya. Kandungan fenolat  pada  masing-  masing  ekstrak  mempengaruhi  total fenolik pada kombinasi ekstrak.
3 . Teridentifikasi  8 senyawa  antosinin baik pada ekstrak bunga telang maupun ekstrak Bunga Rosella.

## Konflik Kepentingan
Penulis  menyatakan  tidak  terdapat  konflik  kepentingan pada penelitian ini.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  kami  sampaikan  kepada  Lembaga Penelitian  dan  Pengabdian  Masyarakat  Akafarma  Putra Indonesia  Malang  yang  telah  mendanai  penelitian  ini  melalui program Penelitian Dosen tahun 2021.

## Kontribusi Penulis
Erna  Susanti  :  konseptualisasi  penelitian,  penulisan  naskah, pengumpulan data penelitian, revisi naskah. Meiria Istiana sari : pengambilan  sampel,  pengumpulan data  penelitian, penyusunan data penelitian.

## References
Afrians,  K.  2013.  Potensi  ekstrak  kelopak  rosella  dalam mencegah  aterosklerosis.  Journal  of  Chemical Information  and  Modeling,  53(9),  1689-1699. http://eprints.umm.ac.id/id/eprint/48378
Al-hashimi,  Alaa  G.  2012.  Antioxidant  and  Antibacterial Activities  of  Hibiscus  Sabdariffa  L  .  Extracts.  African Journal of Food Science Vol. 6(21) pp. 506-511, DOI: 10.5897/AJFS12.099
Adisakwattana S, Ruengsamran T,  Kampa P,  Sompong W, 2012, In vitro inhibitory effects of plant-based foods and their combinations on intestinal α -glucosidase and pancreatic α -amylase,    Jul  31;12:110.  doi:  10.1186/1472-6882-12- 110.
Borikar SP,  Kallewar N, 2018, Dried flower powder combination of Clitoria  ternatea  and Punica granatum demonstrated analogous  anti-hyperglycemic  potential  as  compared with standard drug metformin: In vivo study in Sprague
Dawley  rats,  Journal  of  Applied  Pharmaceutical Science 8(11):75-79 . DOI:10.7324/JAPS.2018.81111.
Chayaratanasin  P,  2015,  Inhibitory  effect  of  Clitoria  ternatea flower  petal  extract  on  fructose-induced  protein glycation and oxidation-dependent damages to albumin in  vitro,  BMC  Complementary  and  Alternative Medicine 15(1) DOI:10.1186/s12906-015-0546-2
Da-Costa-Rocha,  I.  B.  A  phytochemical  and  pharmacological review.  Food  Chemistry.  2014.  Dec  15;165:424-43. doi: 10.1016/j.foodchem.2014.05.002
Da-Costa-Rocha I, Bonnlaender B, Sievers H, Pischel I,  Heinrich M,  2014,  Hibiscus  sabdariffa  L.  -  a  phytochemical  and pharmacological  review.    Food  Chemistry  Dec 15;165:424-43. doi: 10.1016/j.foodchem.2014.05.002.
Dianasari, D& Fajrin, FA 2015, Uji aktivitas antidiabetes ekstrak air  kelopak  bunga  rosela  (Hibiscus  sabdariffa  L.)  pada tikus  dengan  metode  induksi  aloksan,  Jurnal  Farmasi
Sains
dan
Terapan, 2(1):54±58. DOI: https://doi.org/10.33508/jfst.v2i1.812
Daisy, P., Santosh, K. & Rajathi, M., 2009. Hypoglycemic Effects of  Clitoria  ternatea  Linn.  (Fabaceae)  in  Alloxan-induced Diabetes  in  Rats.  Tropical  Journal  of  Pharmaceutical Research, 8(5), pp. 393-398.
Kusumastuti, IR 2014, Roselle (Hibiscus sabdariffa Linn.) effects on  lowering  blood  pressure  as  treatment  for hypertension,Journal
Majority, 3(7):70±74. https://juke.kedokteran.unila.ac.id/index.php/majority/
article/view/480/481
Ponnusamy S,  Gnanaraj WE, Antonisamy JM.,  2014, Flavonoid Profile  Of  Clitoria  Ternatea  Linn,  Traditional  Medicine
Journal, 19(1),
ISSN
: 1410-5918
https://doi.org/10.22146/tradmedj.8083
Mahadevan,  N,  Shivali,  P&Kamboj  2009,  Hibiscus  sabdariffa Linn.,  An  overview,  Natural  Product  Radiance, 8(1):77±83.
Nurfaradilla  SA,  Saputri  FC,  Harahap  Y,  2020,  Pharmacokinetic
Herb-Drug Interaction between Hibiscus
sabdariffa Calyces Aqueous Extract and Captopril in Rats https://doi.org/10.1155/2020/5013898
Nair,  V.  et  al.,  2015.  Protective  Role  of  Ternatin  Anthocyanins and  Quercetin  Glycosides  from  Butterfly  Pea  (Clitoria ternatea  Leguminosae)  Blue  Flower  Petals  against Lipopolysaccharide  (LPS)-Induced  Inflammation  in Macrophage Cells. J. of Agricultural and Food Chemistry, 63, pp. 6355−6365 DOI: 10.1021/acs.jafc.5b00928
Riaz  G,  Chopra  R.  2018,  A  review  on  phytochemistry  and therapeutic  uses  of  Hibiscus  sabdariffa  L.,  Biomed Pharmacother.
2018
Jun;102:575-586. doi: 10.1016/j.biopha.2018.03.023.
Shen, Y. et al., 2016. Butterfly pea (Clitoria ternatea) seed and petal  extracts  decreased  HEp2  carcinoma  cell  viability. International Journal of Food Science and Technology, 51, pp. 1860 – 1868  https://doi.org/10.1111/ijfs.13158
Vankar,  P.  S.  &  Srivastava,  J.,  2010.  Evaluation  of  Anthocyanin Content in Red and Blue Flowers. International Journal of Food Engineering, 6(4), pp. Article 7.
Savic IM, Nikolic VD, Savic IM, Nikolic LB, Jovic MD, 2014,  The qualitative analysis of the green tea extract using ESI-MS method.  Adv  Technol,  3(1):  30-7.  https://scindeks- clanci.ceon.rs/data/pdf/2217-9712/2014/2217-
97121401030S.pdf
Karuna A. Talpate, Uma A. Bhosale, Mandar R. Zambare,  Rahul Somani, 2013, Antihyperglycemic and antioxidant activity of Clitorea  ternatea Linn.  on  streptozotocin-induced diabetic rats, Oct-Dec; 34(4): 433 – 439.doi: 10.4103/0974- 8520.127730