## PROFIL SENYAWA DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK
DAUN SEPAT (Mitragynaspeciosa) DAN DAUN DADANGKAK (Hydrolea spinosa L.)
Rakhmadhan Niah*, Eka Kumalasari Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin
*Email: nia.rachma91@gmail.com
Artikel diterima: 14 Agustus 2019; Disetujui: 19 Oktober 2019

## ABSTRAK
Daun sepat ( Mitragynaspeciosa ) dan daun dadangkak ( Hydrolea spinosa L.) merupakan  tumbuhan  daerah  Kalimantan  Selatan.  Tumbuhan  tersebut  sering dimanfaatkan  secara  tradisional  untuk  mengurangi  kadar  gula  dalam  darah  dan antibakteri.  Efektivitas tersebut diduga karena terdapat aktivitas antioksidan kuat pada  senyawa  golongan  flavonoid.  Senyawa  golongan  flavonoid  bekerja melalui mekanisme  penangkapan  radikal  bebas,  mengurangi  stress  oksidatif.  Tujuan penelitian  ini  adalah  mengetahui  profil  senyawa  flavonoid  daun  sepat  dan  daun dadangkak dengan  uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH ( 1,1-diphenyl- 2picrylhydrazyl ).
Ekstrak  daun  sepat  dan  daun  dadangkak  dibuat  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  metanol.  Profil  senyawa  flavonoid  diperoleh  secara kuantitatif  dengan  menggunakan  larutan  baku  kuersetin.  Ekstrak  yang  diperoleh diuji  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-diphenyl- 2picrylhydrazyl ). Hasil penelitian menunjukkan  nilai flavonoid total pada pelarut metanol adalah daun dadangkak 51.19 mg QE/g ekstrak dan daun sepat 43.25 mg QE/g  ekstrak.  Aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  (<  50  μg/mL)  terdapat  pada ekstrak  metanol  daun  sepat  dengan  nilai 34.70  μg/mL  dan ekstrak  metanol  daun dadangkak dengan nilai 38.41μg/mL.
Kata kunci: Flavonoid, DPPH, Sepat, Dadangkak

## ABSTRACT
Sepat  folium  (Mitragynaspeciosa)  and  dadangkak  folium  (Hydrolea spinosa L.)  are  plants  in  South  Kalimantan.  These  plants  are  often  used traditionally  to  reduce  blood  sugar  and  antibacterial  levels.  The  effectiveness  is suspected  because  there  is  strong  antioxidant  activity  in  flavonoid  compounds. Flavonoid  compounds  work  through  the  mechanism  of  capturing  free  radicals, reducing oxidative stress. The purpose of this study was to determine the profile of flavonoid  compounds  of  sepat  folium  and  dadangkak  folium  by  test  the antioxidant activity with DPPH (1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl) method.
Extract of sepat folium and dadangkak folium were made by the maceration method  using  methanol  as  a  solvent.  Profiles  of  flavonoid  compounds  were obtained quantitatively by the standard solution of quercetin. The extract obtained was  tested  for  antioxidant  activity  by  the  DPPH  (1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl)
method. The results showed that the total flavonoid value in methanol solvent was the  extract  of  dadakak  folium  is  51.19  mg  QE  /  g  extract  and  extract  of  sepat folium is 43.25 mg QE / g extract. Very strong antioxidant activity (<50 μg / mL) was found in methanol extracts of sepat folium with a value of 34.70 μg / mL and methanol extracts of dadangkak folium with a value of 38.41 μg / mL.
Keywords: Flavonoids, DPPH, Sepat,  Dadangkak

## PENDAHULUAN
Stres  oksidatif  dan  gangguan sistem antioksidan telah diidentifikasi  sebagai  proses  penting dalam patofisiologi
berbagai penyakit.  Peningkatan  kadar  radikal bebas  dalam  tubuh  menyebabkan kerusakan  fungsi  ginjal  dan  organ lain. Pasien dengan penyakit diabetes, stres oksidatif yang
diperantarai hiperglikemia
memainkan  peran  penting  dalam perkembangan  penyakit  (Ganesan et al .,  2018).  Patofisiologi  penyakit batu kalsium oksalat, oksalat meningkatkan  pembentukan  radikal bebas yang selanjutnya meningkatkan kadar peroksidasi lipid dalam  ginjal,  yang  mengarah  pada
cedera  tubulus  ginjal  dan fibrosis
tubulointerstitial (Khan 2014).
Pilihan terapi saat ini untuk pencegahan  kerusakan  ginjal  akibat glukosa dan toksisitas oksalat berada pada  level  awal.  Hal  tersebut
dikarenakan  pengaruh  pola  hidup, seperti kualitas makanan,
Beberapa agen
phytotherapeutic telah diusulkan sebagai  alternatif  yang  berguna untuk pencegahan berbagai penyakit. Perawatan kesehatan dalam
pengelolaan penyakit telah mendapat perhatian lebih di antara para peneliti karena biokompatibilitas dan efisiensinya.  Hal  ini  dapat  dikaitkan dengan salah satu metabolit sekunder yang  kaya  akan  antioksidan,  yaitu flavonoid  (Ganesan et  al .,  2018).
Sifat  biologis  dari  bahan  herbal menarik  para  peneliti  untuk  untuk mengembangkan  obat  terapi  herbal potensial.  Berbagai  tanaman  daerah Kalimantan  Selatan  sudah  banyak digunakan  secara  emperis  untuk pengobatan  diabetes  mellitus  dan gangguan  ginjal.  Senyawa  fitokimia tumbuhan  tersebut  diduga  mampu memanipulasi dengan berbagai mekanisme sehingga dapat
mengurangi komplikasi diabetes melalui  pengurangan  stres  oksidatif, ROS  dan  TNF-α  5  (Liao et  al .,
2018).
Daun sepat ( Mitragynaspeciosa ) dan daun dadangkak  ( Hydrolea  spinosa L.) merupakan  tumbuhan  yang  banyak tumbuh  di  Kalimantan  Selatan. Secara  emperis  daun  sepat  dan  daun dadangkak digunakan sebagai minuman seduhan untuk menurunkan  kadar  gula  dalam  darah
pada pasien diabetes mellitus . Mekanisme  tanaman  tersebut  diduga melalui mekanisme antioksidan yang terdapat  pada  senyawa  flavonoid. Flavonoid  merupakan  senyawa  yang memiliki  sejumlah  gugus  hidroksil yang tidak tersubstitusi (Adhayanti et al .,  2018).  Pembuktian  bahwa  daun sepat  dan  daun  dadangkak  memiliki kemampuan  antioksidan  perlu  dikaji
menggunakan metode DPPH.
Semakin tinggi  kadar  flavonoid total maka semakin tinggi aktivitas antioksidan tumbuhan tersebut (Indayani et al ., 2019). Penelitian ini bertujuan mengetahui profil senyawa flavonoid  daun  sepat  dan  daun
dadangkak dengan aktivitas antioksidan.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  daun  sepat daerah  Barabai  dan  daun  dadangkak daerah Banjarmasin, Kalimantan
Selatan.  Bahan  lain  yang  digunakan yaitu metanol p.a (Merck), kuarsetin, dan 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazil(DPPH) (Sigma-
aldrich).  Alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  antara  lain  blender (Philips  HR  2115  Blender  tango Plastik), vorteks (lokal), rotary evaporator (Heidolph Instrument Laborota  4000),  spektrofotometer UV-Vis
(U-2800 Hitachi), timbangan analitik (Ohaus), dan alat- alat gelas (Pyrex).

## Tahap Pendahuluan
Penelitian diawali dengan melakukan determinasi tanaman daun  sepat  dan  daun  dadangkak  di Laboratorium Biologi, Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat. Tahap dilanjutkan dengan melakukan pengolahan
simplisia. Simplisia tersebut
dihaluskan  hingga  lolos  mesh  60. Serbuk  kering  ditimbang  dengan menghitung rendemen simplisia.
Serbuk simplisia diuji secara analisis kualitatif/Skrining  Fitokimia  (Ariani et  al .,  2018).  Serbuk  daun  kemudian diekstraksi  dengan  menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut metanol. Ekstrak kental yang
diperoleh dihitung persentase
rendemennya (Niah et al ., 2018).

## Uji Flavonoid Total
Larutan  ekstrak  1000  ppm diambil  sebanyak  1  mL,  tambahkan 1 mL  AlCl 3 10%  dan  8  mL  asam asetat 5%, diam kan selama 1 menit, dilakukan pembacaan  absorbansi pada  panjang  gelombang  maksimum (Bakti et al ., 2017).
Pengujian Aktivitas Antioksidan DPPH ( 1,1-diphenyl-
2picrylhydrazyl )  dibuat  larutan  stok 80 ppm. Buat konsentrasi sampel uji 10  ppm,  20  ppm,  30  ppm,  40  ppm dan  50  ppm.  Masing-masing  sampel uji  diambil  2  mL  dan  dimasukkan kedalam  tabung  reaksi.  Tambahkan larutan  DPPH  sebanyak  2  mL, kemudian  dikocok  dan  diinkubasi selama  ±15  menit.  Hitung  serapan
menggunakan  spektrometer  UV-VIS dengan  panjang  gelombang  517  nm, sehingga didapat nilai IC 50 (Lestari et al ., 2018; Safitri et al ., 2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi tumbuhan dilakukan  di  Labolatorium  FMIPA Universitas  Lambung  Mangkurat, hasil  determinasi  dari  daun  kayu sepat  menunjukan  species  dari  daun kayu sepat adalah Mitragynaspeciosa . Hasil determinasi daun dadangkak menunjukkan spesies Hydrolea spinosa L.  Serbuk  daun  kayu  sepat yang didapat sebanyak 300 gram dan serbuk daun dadangkak yang didapat adalah  400  gram.  Susut  pengeringan yang  diperoleh  dari  pengolahan simplisia  tersebut  adalah  0,67  % untuk  daun  sepat  dan  1,176%  untuk daun  dadangkak.  Susut  pengeringan tersebut  menjadi  indikator  tentang besarnya  senyawa  yang  hilang  pada proses  pengeringan.  Adapun  ekstrak kental  yang  diperoleh adalah  ekstrak metanol  daun  sepat  sebesar  17,00  % dan ekstrak methanol daun dadangkak 33,50% .
Skrining fitokimia profil senyawa yang dilakukan meliputi uji fenolik  dan  uji  flavonoid. Uji skrining fitokimia menunjukan bahwa  ekstrak  metanol  sepat  dan ekstrak metanol dadangkak mengandung  fenol  dan  flavonoid. Flavonoid yang tereduksi dengan Mg dan  HCl  dapat  memberikan  warna merah,  kuning  atau  jingga  (Latifah, 2015). Pengujian fenol menunjukkan hasil  positif  dengan  terbentuknya perubahan  warna  ekstrak  menjadi warna hijau kehitaman setelah penambahan  FeCl 3 ,  warna  positif pada pengujian karena terbentuknaya
kompleks Fe 3+
dengan fenol (Agustin,  2018). Hasil  tersebut membuktikan bahwa ekstrak metanol daun sepat dan ekstrak metanol daun dadangkak  memiliki  profil  senyawa fenolik,  khususnya  flavonoid.  Oleh karena  itu,  penelitian  dilanjutkan dengan analisis kuantitatif menggunakan  spektrofotometri  uv- vis  untuk  menganalisis  kandungan flavonoid  total  pada  ekstrak  metanol daun sepat dan ekstrak metanol daun dadangkak.
Pengukuran kandungan flavonoid  total  dari  ekstrak  metanol
daun sepat dan ekstrak metanol daun dadangkak dilakukan dengan metode pewarnaan AlCl 3 . Prinsip dari metode  pewarnaan  ini  adalah  AlCl 3 membentuk  kompleks  asam  yang stabil  dengan  C-4  gugus  keto,  lalu dengan C-3 atau C-5 gugus hidroksil dari  flavon  dan  flavonol.  Selain  itu AlCl 3 juga    membentuk  kompleks asam  yang  labil  dengan  gugus  orto dihidroksil pada cincin A atau B dari flavonoid (Fessenden dan Fessenden    1986)  sehingga  akan mempunyai serapan maksimum pada panjang    gelombang  370.8  nm. Pengukuran    flavonoid  total  ini dimulai dengan  melakukan hidrolisis terhadap  sampel.  Hal  ini    bertujuan flavonoid    dalam  bentuk      glikosida (flavonoid yang masih terikat dengan gugus  gula)  dapat  terurai  menjadi flavonoid   dalam   bentuk   aglikon (flavonoid  tunggal)  karena  analisis flavonoid akan lebih baik jika berada dalam  bentuk  aglikonnya  (Harborne 1996).  Hasil  pengukuran    kadar flavonoid  total    pada    ekstrak metanol    dari    tumbuhan  sepat  dan dadangkak  dapat    dilihat    pada Gambar 1.
Gambar 1. Flavonoid total (a) ekstrak metanol daun sepat dan (b) ekstrak metanol daun dadangkak
Berdasarkan Gambar 1 didapat rerata  kadar  flavonoid  total  pada pelarut  metanol,  yaitu  dadangkak 51.19  mg  QE/g  ekstrak  dan  sepat 43.25 mg QE/g ekstrak.  Hal tersebut dipengaruhi  oleh  sifat  kelarutan  dari senyawa  flavonoid  pada  tumbuhan
yang digunakan. Flavonoid merupakan golongan metabolit sekunder  yang  terdiri  dari  beberapa struktur  yang  berbeda  sehingga memiliki  tingkat  kelarutan  yang berbeda-beda,  tetapi  pada  umumnya senyawa flavonoid larut dalam pelarut  semi  polar  hingga  polar
(Febrianti et  al .,  2018).  Tanaman
yang mengandung flavoloid
memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri,  antivirus,  antiradang,
antialergi, dan antikanker (Neldawati et  al .,  2013).  Aktivitas  Antioksidan daun  sepat  dan  daun  dadangkak dengan  pemilihan  pelarut  metanol (Niah et  al .,  2019),  diduga  dapat menangkal  radikal  bebas  dengan kategori  sangat  kuat.  Pengujian antioksidan  dengan  metode  DPPH memberikan  nilai  IC 50 yang  berbeda antara  kedua  tumbuhan  yang  dapat dilihat pada Gambar 2.
Efektivitas  suatu  sampel  untuk menangkal radikal bebas dari metode DPPH dinamakan dengan IC 50 , yaitu konsentrasi  yang  dapat  meredam 50%  radikal  bebas  DPPH  (Supomo et al ., 2016). Nilai IC 50 semakin kecil maka semakin besar aktivits
antioksidannya. Aktivitas antioksidan  sangat  kuat  (<  50 μg/mL)  terdapat  pada  ekstrak metanol  daun  sepat  dan  ekstrak metanol  daun  dadangkak  dengan nilai  berturut-turut  34.70  μg/mL; 38.41μg/mL.  Aktivitas  antioksidan tersebut termasuk aktivitas antioksidan  sangat  kuat  karena  nilai IC 50 kurang  dari  50  μg/mL (Molyneux  2004).  Hasil  tersebut dapat  disimpulkan  pelarut  metanol merupakan  pelarut  yang  efektif
a
b
untuk mengekstrak senyawa antioksidan. Walaupun kadar flavonoid total ekstrak metanol  daun
sepat lebih kecil dibandingkan ekstrak  metanol  dadangkak,  ekstrak metanol  daun  sepat  lebih  besar aktivitas antioksidannya
dibandingkan  ekstrak  metanol  daun dadangkak dengan hasil kedua ekstrak  tersebut  memiliki  aktivitas antioksidan sangat kuat. Hal tersebut diduga  ada  peran  senyawa  metabolit sekunder lain yang memiliki aktivitas antioksidan.
Gambar 2. Regresi Linier kurva baku kuersetin dan Aktivitas Antioksidan (IC 50 )
(a) Ekstrak Metanol daun sepat dan (b) Ekstrak Metanol daun dadangkak

## KESIMPULAN
Hasil skrining
fitokimia membuktikan bahwa ekstrak metanol daun sepat dan ekstrak metanol daun dadangkak  memiliki  profil  senyawa fenolik,  khususnya  flavonoid.  Oleh karena  itu,  penelitian  dilanjutkan dengan analisis
kuantitatif menggunakan  spektrofotometri  uv-
vis  untuk  menganalisis  kandungan flavonoid  total  pada  ekstrak.  Kadar flavonoid  total  pada  ekstrak  metanol daun  dadangkak  adalah  1.19  mg QE/g  ekstrak  dan  ekstrak  metanol daun  sepat  adalah  43.25  mg  QE/g ekstrak.  Aktivitas  antioksidan  sangat kuat  (<  50  μg/mL)  terdapat  pada kedua  ekstrak,  yaitu ekstrak  metanol
y = 1.1234x + 11.018
r = 0.9891 IC 50 = 34.70 PPM (a) y = 1.1382x + 6.278 r = 0.9864 IC 50 = 38.41 PPM (b) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 10 20 30 40 50 60 % D ay a h amb at r ad ik al b eb as PPM Sepat Metanol Dadangkak Metanol
Linear (Sepat Metanol)
Linear (Dadangkak Metanol)
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
daun sepat dan ekstrak metanol daun dadangkak  dengan  nilai  berturut- turut 34.70 μg/mL; 38.41μg/mL.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih diucapkan kepada  RISTEKDIKTI  yang  telah membantu  penelitian  ini  dengan skim  riset  penelitian  dosen  pemula tahun pendanaan 2019.

## DAFTAR PUSTAKA
Adhayanti,  I.,  Abdullah,  T.,  &
Romantika, R, 2018, Uji
Kandungan  Total  Polifenol Dan  Flavonoid  Ekstrak  Etil
Asetat Kulit Pisang Raja ( Musa Paradisiaca  Var.  Sapientum ), Media Farmasi , 14 (1), 39-45.
Agustin, D., 2018, Pengaruh Berbagai  Konsentrasi  Ekstrak Bunga Belimbing Wuluh (Averrhoa  Bilimbi) Terhadap Zona  Hambat  Pertumbuhan Streptococcus Pyogenes Sebagai Sumber Belajar Biologi,  Doctoral  Dissertation, University  Of  Muhammadiyah Malang. Ariani,  N.,  &  Niah,  R.  2018.  Uji Daya  Hambat  Ekstrak  Kulit Buah  Pisang  Kepok  ( Musa paradisiaca forma typica ) Terhadap Shigella  dysenteriae dan Salmonella  typhi .  Jurnal Ilmiah  Ibnu  Sina,  3(2),  312- 317.
Bakti,  A.  A.,  Triyasmono,  L.,  & Rizki,  M.  I.,  2017,  Penentuan
Kadar Flavonoid Total Dan Uji Antioksidan  Ekstrak  Etanol Daun Kasturi ( Mangifera Casturi Kosterm. ) Dengan Metode Dpph, Jurnal Pharmascience , 4 (1). Febrianti,  D.  R.,  &  Niah,  R.  2018. Analisis  Kandungan  Flavonoid Dan Aktivitas Antihiperurisemia Ekstrak Etanol  Daun  Sirsak  ( Anona muricata L.)  Pada  Mencit Jantan  Secara  In  Vivo.  Jurnal
Ilmiah  Ibnu  Sina,  3(2),  304- 311. Fessenden,  R.J  Dan  Fessenden,  J.S., 1986,  Kimia  Organik,  Alih Bahasa : Aloysius Pudjaatmaka,  Edisi  Ke-3,  Jilid 1, Erlangga, Jakarta. Ganesan P, Chandini Sk, Bhaskar N.,
2008,  Antioxidant  Properties Of  Methanol  Extract  And  Its Solvent  Fractions  Obtained From  Selected  Indian  Red Seaweeds, Bioresource Technology , 99: 2717–2723 Harborne, J., 1996, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan,  Cetakan  Kedua, Penerjemah:  Padmawinata,  K. Dan  I.  Soediro.  Bandung:
Penerbit Itb.
Indayani,  M.  K.,  Asnani,  A.,  & Suwarjoyowirayatno,  S.,  2019, Pengaruh  Metode  Pengeringan Yang Berbeda Terhadap Komposisi  Kimia,  Vitamin  C Dan Aktivitas Antioksidan Anggur Laut Caulerpa Racemosa. Jurnal Fish Protech , 2 (1).
Khan,  S.,  &  Jena,  G.,  2014,  Sodium Butyrate,  A  Hdac  Inhibitor Ameliorates  Enos,  Inos  And
Tgf-Β1-Induced  Fibrogenesis, Apoptosis And Dna Damage In The Kidney Of Juvenile
Diabetic Rats, Food And Chemical  Toxicology , 73 ,  127-
139.
Latifah, 2015, “Identifikasi Golongan  Senyawa  Flavonoid Dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan Pada  Ekstrak  Rimpang  Kencur Kaempferia Galanga L. Dengan  Metode  Dpph  ( 1,1- Difenil-2pikrilhidrazil )”, Skripsi, Malang: Jurusan
Kimia, Universitas Islam Negeri  Maulana  Ibrahim.  Hal:
38.
Lestari,  D.  M.,  Mahmudati,  N., Sukarsono,  S.,  Nurwidodo,  N., & Husamah, H., 2018,
Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak
Fenol Daun Gayam ( Inocarpus Fagiferus Fosb ). Majalah Ilmiah  Biologi  Biosfera:  A Scientific  Journal , 35 (1),  37- 43.
Liao,  Z.,  Cai,  H.,  Xu,  Z.,  Wang,  J., Qiu,  C.,  Xie,  J.,  &  Sui,  Z., 2018,  Protective  Role  Of
Antioxidant  Huskless  Barley
Extracts  On  Tnf-Α-Induced Endothelial  Dysfunction  In Human  Vascular  Endothelial Cells, Oxidative  Medicine  And
Cellular Longevity . Molyneux  P.,  2004,  The  Use  Of Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) For Estimating Antioksidan Activity,
Songklanakarin Journal Science Techology , 26(2): 211- 219. Neldawati,  Ratnawulan,  Gusnedi, 2013, Analisis Nilai Absorbansi  Dalam  Penentuan Kadar Flavonoid Untuk Berbagai  Jenis  Daun  Tanaman Obat, Journal Pillar Of Physics (2): 76-83. Niah,  R.,  &  Febrianti,  D.  R.,  2018, Optimasi Ekstrak Daun Karamunting ( Melastoma malabathricum L.) dari Berbagai Pelarut sebagai Antibakteri Tifoid, Jurnal
Insan Farmasi Indonesia , 1 (2),
191-200.
Niah,  R.,  Aryzki,  S.,  Sari,  A.  K.,  &
Dina, S. P. 2019. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 96% Rimpang Lengkuas Merah ( Alpinia purpurata
(Vieill.)  K.  Schum)  Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus . Jurnal  Ilmiah  Ibnu  Sina,  4(1), 203-209.
Supomo, S., Sapri, S., & Komalasari,
N., 2016, Formulasi Gel Antioksidan Ekstrak Kulit Buah Manggis ( Garcinia Mangostana L)  Dengan  Basis
Carbopol, Jurnal  Ilmiah  Ibnu Sina , 1 (1), 50-60.
Safitri,  F.  W.,  Syahreza,  A.,  & Sulistyaningrum,  I.  H.,  2016,
Antioxidant  Activities  And Antioxidant Cream Formulation Of Corn Silk ( Zea Mays L) Extract, Sains
Medika:  Jurnal  Kedokteran Dan  Kesehatan , 7 (2),  64-69.