## JANHUS Journal of Animal Husbandry Science
Jurnal Ilmu Peternakan Fakultas Pertanian, Universitas Garut ISSN : 2548-7914
PENGARUH LAMA THAWING TERHADAP KUALITAS SPERMATOZOA SEMEN BEKU SAPI BALI ( Bos sondaicus ) di DINAS PERTANIAN PROVINSI MALUKU UTARA
(Effect of Thawing Time on the Quality of Frozen Semen Spermatozoa of Bali Cattle (Bos sondaicus) In Agricultural Department of North Maluku)
Fifi Andrefani ) , Oktora Dwi Putranti 2 , dan Abdurahman Hoda 3
1,2,3 Fakultas Pertanian, Program Studi Peternakan Universitas Khairun Ternate
Email : 1 fifiandrefani07@gmail.com
2 oktora.unkhair@gmail.com

## Abstrak
Penelitian ini dilaksanakan di Dinas Pertanian Provinsi Maluku Utara (Sofifi). Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui pengaruh lama thawing terhadap kualitas semen beku Sapi Bali. Analisis data yang digunakan dalam penelitian ini menggunakan Anlisis Of Variance (ANOVA)  satu  arah  dengan  empat  macam  perlakuan  yaitu  15,  30,  45  dan  50  detik menggunakan  air  ledeng  (PDAM)  temperature  25 ‐ 30 o C  dan  dilakukan  4  kali  ulangan. Perlakuan pada penelitian ini yaitu P1: thawing 15 detik, P2: thawing 30 detik, P3: thawing 45  detik,  dan  P4: thawing 50  detik.  Parameter  yang  diamati  pada  penelitian  ini  adalah Motilitas, Viatabilitas, dan Abnormalitas. Hasil menunjukkan nilai terbaik Motilitas pada 15 detik sebesar 86,25%. Viatabilitas sebesar 83,75%. Sedangkan pada Abnormalitas  thawing 15 detik memiliki nilai yang lebih rendah sebesar 15,00%. Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa lama thawing 15 detik dan 30 detik mempunyai kualitas sperma yang lebih baik daripada lama thawing 45 dan 50 detik.
Kata Kunci : Thawing, Motilitas, Viatabilitas, dan Abnormalitas.

## Abstract
This  research  was  carried  out  in  the  agricultural  department  of  North  Maluku  Province (Sofifi). The purpose of this study was to determine the effect of thawing time on the quality of  Bali frozen semen.  Analysis  of  the  data  used in  this  study  used  an  one-way analysis  of variance (ANOVA) with four types of treatments, namely 15 seconds, 30,45, and 50 seconds using  tap  water  (PDAM)  temperature  of  25-30°C  and  carried  out  4  replications.  This research is: P1: 15 seconds thawing, P2: 30 seconds thawing, P3: 45 seconds thawing, and P4: 50 seconds thawing. The parameters observed in this study were motility, viatability, and abnormalities.  The  results  showed  the  best  value  of  motility  at  15  seconds  at  86.25%. Viatability  is  83.75%.  Whereas  the  15  second  thawing  abnormality  has  a  lower  value  of 15.00%. Based on the results of the study it can be concluded that the length of thawing 15 seconds and 30 seconds has better sperm quality than the thawing duration of 45 and 50 seconds.
Keyword s : Thawing, Motility, Viatability, and Abnormalities.

## 1 Pendahuluan
Peningkatan produktifitas ternak sapi dibutuhkan bioteknologi di bidang Inseminasi Buatan (IB). IB merupakan suatu cara untuk memasukan semen (sperma) yang telah dicairkan dan telah diproses terlebih dahulu yang berasal dari ternak jantan ke saluran alat kelamin betina dengan menggunakan metode dan alat khusus yang disebut insemination gun. Inseminasi buatan merupakan metode yang tepat dan dapat diterima secara luas oleh masyarakat (Solihati dan Kune, 2009).
Keberhasilan  IB  salah  satunya  adalah  kualitas  semen  dari  pejantan  unggul  yang  berkaitan  erat dengan kualitas spermatozoa. Kualitas spermatozoa dipengaruhi oleh faktor internal (umur, bangsa dan genetik) maupun faktor eksternal (pakan, lingkungan, dan pengencer yang digunakan seperti air ledeng/PDAM). Semen yang umum digunakan untuk melakukan inseminasi yaitu semen beku dan semen cair, namun semen beku memiliki daya simpan yang lebih lama dibandingkan dengan semen cair (Wijayanti dan Simanjuntak, 2006).
Thawing merupakan  pencairan  kembali  semen  yang  telah  dibekukan  sebelum  dilakukan inseminasi.  Suhu  dan  lama thawing mempunyai  pengaruh  besar  terhadap  keadaan  spermatozoa khususnya  keutuhan  spermatozoa  dalam  semen.  Kombinasi  suhu  dan  lama  thawing  yang  baik adalah  yang  dapat  mencegah  khususnya  spermatozoa  sehingga  tetap  memiliki  kemampuan membuahi ovum yang tinggi. Keberhasilan thawing 40% dan presentase yang abnormal maksimal 10% (Toelihere, 1993).
Kegagalan  inseminasi  buatan  sering  disebabkan  kerna  kurang  diperhatikan  waktu thawing yang tepat  oleh  inseminator.  Sehingga  perlu  dilakukan  uji  kualitas  semen  beku  dengan  lama  waktu thawing agar  dapat  mencegah  penurunan  kualitas  spermatozoa  sehingga  tetap  memiliki kemampuan membuahi ovum yang tinggi. Fertilisasi akan terganggu apabila abnormalitas primer mencapai 18-20% (Arifiantini dkk, 2006).

## 2 Metodologi

## 2.1 Waktu dan Tempat
Penelitian ini telah dilaksanakan selama tiga bulan mulai dari bulan Febuari sampai April 2018. Pada Dinas Pertanian Provinsi Maluku Utara di Sofifi.

## 2.2 Bahan dan Metoda Penelitian

## Bahan dan Alat Penelitian
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah semen  beku  sapi  Bali, eosin negrosin, cover glass ,  alkohol,  tisu,  kapas,  kertas  label,  kertas  lakmus,  spirtus,  korek  api  dan  air.  Alat  yang
digunakan  antara  lain:  termometer,  mikroskop, object  glass ,  pipet  tetes, stopwactch , kontainer , gunting, dan kamera.

## Metode Penelitian
Semen beku yang digunakan dalam penelitian ini adalah semen beku sapi Bali yang ada di Dinas Pertanian  Propinsi  Maluku  Utara  (Sofifi).  Semen  beku  yang  digunakan  berasal  dari  Balai Inseminasi Buatan Lembang dan Singoari. Sperma segar diencerkan dengan tris kuning telur atau Skim, diekuilibrasi pada temperature 5 o C selama 2 jam, kumudian dikemas dalam straw dengan ukuran 0,25 ml, ujung straw ditutup, dan diekulibrasi 4-5 o C selama 3 jam, selanjutnya diletakkan dalam styrofoam dalam uap nitrogen cair selama 10 menit dan dimasukkan dalam nitrogen cair (- 196 o C) untuk penyimpanan.

## Parameter yang Diukur
Parameter yang diukur dalam penelitian ini antara lain:
1. Motilitas
2. Viatabilitas
3. Abnormalitas

## Analisis Data
Analisis data yang digunakan dalam penelitian ini menggunakan Anlisis Of Variance (ANOVA) satu arah. Apabila terdapat perbedaan yang nyata ( P≤0,05), maka dilanjutkan dengan uji Tukey- Prosedur dengan SPSS 16 (Hartono,2008).

## 3 Hasil dan Pembahasan

## Motilitas Spermatozoa
Hasil  analisis  Tukey  (pada  Tabel  4)  memperlihatkan  bahwa  perlakuan  15  dan  30  detik dengan lama thawing berbeda nyata (P<0,05) terhadap motilitas sperma sapi Bali.
Tabel 1. Hasil Analisis Motilitas Spermatozoa Semen Beku Sapi Bali (Rataan ± SD)
Parameter Lama Thawing (detik) 15 30 45 50 pH 7,0 a 7,0 a 7,0 a 7,0 a Motilitas(%) 86,25 ± 2,5 a 78,75 ± 9,46 a 65,00 ± 00 b 65 ± 00 b ab Superskip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05)
Hal ini  disebakan  karena  sperma  sapi  Bali  adalah  sperma  yang  sudah  dewasa atau  sudah cukup umur. Data hasil penelitian di atas menunjukkan bahwa semen beku yang digunakan memenuhi
syarat untuk disimpan dan di inseminasikan, pada semen beku sapi Bali mempunyai nilai tertinggi pada perlakuan lama thawing selama 15 detik yaitu 86,25 ± 2,5% (Tabel 1). Motilitas spermatozoa minimal  40%.  Arifiantini  dkk  (2006)  melaporkan  motilitas  spermatozoa  pada  sapi  FH  dengan menggunakan pengencer kacang kedelai (KK), tris sukrosa (TS) dan tris masing-masing 50,20 ± 7,07; 46,04 ± 3,54; dan 43,02 ± 7,68%.
Perlakuan metode thawing pada semen beku sapi Bali berpengaruh terhadap motilitas spermatozoa (P<0,05). Evaluasi motilitas spermatozoa post thawing adalah salah satu parameter yang banyak digunakan untuk menentukan kualitas semen sapi yang akan digunakan untuk menentukan kualitas semen sapi yang akan digunakan untuk inseminasi buatan. Syarat minimal motilitas semen post thawing agar semen dapat dipergunakan dalam inseminasi buatan adalah 40% (Garner dan Hafez, 1993 dalam Oktora, 2017).
Thawing yang  dilakukan  dengan  suhu  29ºC  selama  15  detik  dan  30  detik  memperlihatkan persentase  motilitas  yang  lebih  tinggi  86,25  ±  2,5;  78,75  ±  9,46%  (P<0,05)  dibandingkan  pada thawing selama 45 dan 50 detik, sedangkan pada thawing 15 dan 30 detik tidak berbeda (P<0,05). Diduga pada perlakuan tersebut metabolisme spermatozoa berjalan sempurna karena sesuai dengan suhu fisiologis yang normal pada sapi bali, pada suhu fisiologis, aktivitas reaksi enzimatik yang berlangsung selama metabolisme sel berlangsung optimal.

## Spermatozoa Hidup
Rataan persentase spermatozoa sapi Bali dengan lama thawing yang berbeda disajikan pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil Analisis Viatabilitas Semen Beku Sapi Bali (Rataan ± SD)
Parameter Lama Thawing (detik) 15 30 45 50 Ph 7,0 a 7,0 a 7,0 a 7,0 a Sperma Hidup(%) 83,75 ± 13,35 a 78,75 ± 16,64 a 72,5 ± 18,35 a 70 ± 2,16 a ab Superskip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05).
Hasil penelitian di atas (pada Tabel 2) menunjukkan bahwa viatabilitas pada tingkat thawing yang berbeda tidak berpengaruh pada spermatozoa hidup sapi Bali. Namun, thawing 15 detik memiliki nilai yg lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan lama thawing lainnya. pada lama thawing 15 detik  tidak  berbeda  (P>0,05)  dibandingkan  dengan  lama thawing 30  detik,  namun  lebih  tinggi (P<0,05) dibandingkan dengan lama thawing 45 detik dan 50 detik. Hal ini menunjukkan bahwa spermatozoa mampu menjaga stabilitas ion dalam intraseluler sehingga keseimbangan metabolisme dalam sel berjalan dengan normal (Sayoko dkk , 2007).
Thawing yang  dilakukan  pada  15  detik,  30  detik,  dan  45  detik  memperlihatkan  persentase viatabilitas yang lebih tinggi (P<0,05) dibandingkan pada thawing selama 50 detik. Sedangkan pada thawing 15, 30, 45, dan 50 detik tidak berpengaruh nyata (P>0,05). Angka persentase pengamatan
terbaik pada thawing 15,30, dan 45 detik menghasilkan nilai pengamatan viatabilitas yang tinggi yaitu 83,75 ± 13,35; 78,75 ± 16,64; dan 72,50 ± 18,35%. Hasil tersebut menunjukkan waktu 15 detik  memiliki  nilai lebih baik  sesuai  pernyataan  Arifiantini (2012)  bahwa  waktu  thawing  tidak boleh lebih dari 15 detik.

## Abnormalitas Spermatozoa
Morfologi  sperma  adalah  bentuk  sperma  yang  terdiri  atas  kepala  dan  ekor.  Evaluasi  morfologi sangat penting karena mengindikasikan proses spermatogenesis berjalan normal. Data abnormalitas ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Analisis Abnormalitas Semen Beku Sapi Bali (Rataan ± SD)
Parameter Lama Thawing (detik) 15 30 45 50 pH 7,0 a 7,0 a 7,0 a 7,0 a Abnormalitas(%) 15,00 ± 11,74 a 19,25 ± 15,84 a 24,00 ± 8,67 a 26,75 ± 13,88 a ab Superskip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05)
Data  di  atas  menunjukkan  bahwa  abnormalitas  pada  tingkat thawing yang  berbeda  tidak berpengaruh pada abnormalitas spermatozoa sapi Bali (pada Tabel 6). Namun, thawing 15 detik memiliki nilai yang lebih rendah di bandingkan dengan lama thawing lainnya. pada lama thawing 30  detik  lebih  rendah  (P>0,05)  dibandingkan  dengan  45  detik.  Namun  tidak  berbeda  (P>0,05) dengan lama thawing 50 detik.
Gambar 3. Morfologi spermatozoa sapi bali a.) Bentuk morfologi abnormalitas spermatozoa ekor melingkar. b.) Bentuk morfologi abnormalitas spermatozoa kepala terputus
Abnormalitas  ekor  berbentuk  melingkar  atau  terdapat  patahan  sering  disebut simple  bent  tail. Abnormalitas simple bent tail menyebabkan sperma tidak dapat bergerak progresif ke depan hanya bergerak melingkar di tempat (Putranti, 2016). Sperma  yang bergerak di tempat tentu saja tidak
a
b
dapat  membuahi  oosit,  karena  pembuahan  dapat  terjadi  bila  sperma  utuh  bergerak  progresif sehingga  mampu  membuahi  oosit.  Sperma  yang  terputus  kepala  dan  ekor  tentu  saja  tidak  dapat membuahi  karena  tidak  ada  ekor  yang  menggerakan  untuk  menuju  sel  telur.  Tanpa  memandang abnormalitas primer maupun sekunder, sperma dapat mebuahi sel telur apabila abnormalitas sperma kurang dari 20% (Soeparna dan Nurcholidah, 2014).

## 4 Kesimpulan dan Saran

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  lama thawing 15  detik  dan  30  detik mempunyai kualitas sperma yang lebih baik daripada lama thawing 45 dan 50 detik.

## Saran
Berdasarkan hasil penelitian dapat dikemukakan beberapa saran sebagai berikut Perlu dilakukan penelitian lanjutan pada spermatozoa sapi yang berbeda dan sebagai sarana pelaksanaan IB, peneliti menyarankan bahwa waktu efektif untuk thawing pada semen beku sapi bali berkisar antara 1 menit (15 detik) dengan menggunakan air ledeng yang suhunya berkisar antara 25-30ºC.

## 5 Daftar Pustaka
Arifiantini, I. Wresdiyati, T dan Retnani, E. F. 2006. Kajian Banding Morfometri Sperma Sapi Bali ( Bos  sondaicus )  Menggunakan  Pewarnaan  Williams,  Eosin,  Eosin  Nigrosin  dan  Formol Saline. J Sain Vet
Arifiantini I. 2012. Teknik Koleksi dan Evaluasi Semen pada Hewan. PT Penerbit IPB Press. Bogor
Garner, D.L., E. and S. E. Hafez. 2000. Spermatozoa and seminal plasma. In: Reproduction in Farm Animals. 7 th Ed B Hafez/ESE Hafez. Lipponcott Williams & Wilkins.USA.96-109.
Hartono. 2008. Teori Partofolio dan Analisis Investasi Edisi Kelima. BPFE. Yogyakarta.
Putranti,O.D. 2016. Disertasi. Pengaruh Penambahan Kafein Pada Sperma Kauda Epididimis Sapi Bali Pasca Thawing Terhadap Fertilitas Secara Fertilisasi In Vitro . Universitas Padjadjaran.
Soeparna dan Nurcholidah, S. 2014. Ilmu Reproduksi Ternak . Institut Pertanian Bogor Press
Sayoko  Y,  M  Hartono,  dan  PE  Silotonga.  2007.  Faktor-faktor  yang  Mempengaruhi  Persentase Spermatozoa  Hidup  Semen  Beku  Sapi  pada  Berbagai  Inseminator  di  Lampung  Tengah. Kumpulan Abstrak Skripsi Jurusan Produksi Ternak. Universitas Lampung.
Solihati Nurcholidah dan Kune Petrus, 2009. Pengaruh jenis pengencer terhadap motilitas dan daya tahan  hidup  spermatozoa  semen  cair  sapi  Simmental.  Fakultas  Peternakan  Universitas Padjadjaran. Bandung.
Toelihere, M.R., 1993. Inseminasi Buatan pada Ternak, Angkasa, Bandung.
Wijayanti Gratiana E. dan Simanjuntak Sorsa B.I. 2006. Viabilitas sperma ikan Nilem (Osteochilus hasselti C.V.) setelah penyimpanan jangka pendek dalam larutan ringer. 2:207-214.