## Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau, 6(2) Oktober 2021, pp.74-81
Publisher by : Program Studi Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Batanghari ISSN 2503-4766 (Print) | ISSN 2597-8837 (Online) | DOI 10.33087/akuakultur.v6i2.118
Gambaran Aktivasi Sistem Imun Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ) Terhadap Penambahan Tepung Daun Sangkareho ( Callicarpa longifolia Lam . ) Melalui Pakan
Immune System Activation Of Tilapia (Oreochromis Niloticus) On Feeding Of Sangkareho (Callicarpa Longifolia Lam.) Leaves

## *Maryani, Mohamad Rozik, Nursiah, dan Asri Pudjirahaju
Fakultas Pertanian, Universitas Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia *email korespondensi : maryani@fish.upr.ac.id
Abstrak. One way to improve the quality of the seed from cultured fish is to increase the immune response so that it is immune to disease  attacks.  This  study  aims  to  increase  the  non-specific  immune  response  of  tilapia  by  giving  the  optimum  dose  of sangkareho leaf extract. The treatment given was the difference in the dose of the leaf extract, where the difference in the  dose was as follows: A = dose 0 gr/kg feed, B = dose 5 gr/kg feed, C = dose 10 gr/kg feed, D = dose 15 gr /kg of feed, and E = dose of 20 g/kg of feed. The main parameters observed were the examination of the number of Hb, He, erythrocytes, leukocytes, and survival  rate  (SR).  Blood  sampling  during  the  study  was  carried  out  on  the  16th  day  after  being  given  the  extract  of  the sangkareho leaf, and infected with A. hydrophila bacteria. The results showed that the use of the extract of the bay leaf as  an immunostimulant affected the number of Hb, He, erythrocytes, leukocytes, and the survival rate of tilapia infected by Aeromonas hydropila.
Keywords : Aeromonas hydrophila, leaves sangkareho extract, nile tilapia, immunostimulant
Abstract. Salah satu cara untuk meningkatkan kualitas benih dari ikan budidaya adalah dengan meningkatkatkan respon imun sehingga kebal terhadap serangan penyakit. Penelitian ini bertujuan untuk meningkatkan respon imun non spesifik dari ikan  nila dengan  pemberian  dosis  optimum  ekstrak  daun  sangkareho . Perlakuan  yang  diberikan  adalah  perbedaan  dosis  ekstrak  daun sangkareho,  dimana  perbedaan  dosis  tersebut  adalah  sebagai  berikut  :  A  =  dosis  0  gr/kg  pakan,  B  =  dosis  5  gr/kg  pakan,  C  = dosis  10  gr/kg  pakan,  D  =  dosis  15  gr/kg  pakan,  dan  E  =    dosis  20  gr/kg  pakan.    Parameter  utama  yang  diamati  adalah pemeriksaan  jumlah  Hb,  He,  eritrosit,  leukosit,  dan  tingkat  kelangsungan  hidup  (SR).    Pengambilan  darah  selama  penelitian, dilakukan dilakukan pada hari ke-16 setelah diberi ekstrak daun sangkareho, dan diinfeksi bakteri A.hydrophila. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  penggunaan  ekstrak  daun  sangkareho  sebagai  imunostimulan  mempengaruhi  jumlah  Hb,  He,  eritrosit, leukosit, dan tingkat kelangsungan hidup ikan nila yang terinfeksi oleh Aeromonas hydropila . Kata kunci : Aeromonas hydrophila, daun sangkareho, ikan nila, imunostimulan

## PENDAHULUAN
Di  Indonesia,  beberapa  kali  wabah  penyakit  dengan  mortalitas  yang  tinggi  menyerang  pada  ikan-ikan budidaya;  misalnya  pada  tahun  1980-an  wabah  penyakit  Bercak  Merah  yang  diakibatkan  oleh  serangan  bakteri Aeromonas  hydrophila pada  ikan  mas,  tawes  dan  patin  terutama  di  Jawa  Barat.    Pengendalian  perluasan  penyakit harus dilakukan sedini mungkin, agar tidak terjadi kerugian ekonomi.  Upaya pengendalian dapat dilakukan dengan pemakain bahan kimia.  Namun pemakaian bahan kimia untuk jangka panjang dapat menimbulkan dampak negatif bagi  lingkungan  perairan,  menimbulkan  resistensi  patogen  dan  residu  antibiotik  yang  berdampak  pada  kesehatan konsumen dan pemasaran.  Untuk menghindari hal itu, pengembangan ketahanan tubuh dengan imunostimulan yang ramah lingkungan merupakan pilihan yang tepat.
Penggunaan    tanaman    obat    atau    fitofarmaka    merupakan    solusi    yang    dapat  dilakukan  untuk  mengatasi permasalahan  tersebut.  Fitofarmaka  atau  tanaman  obat  adalah  obat  alamiah  yang  bahan  bakunya  disarikan  dari tanaman  untuk  digunakan  dalam      pengobatan     (Yuslianti  et  al.,      2016). Dari hasil  uji fitokimia  yang  dilakukan diketahui  bahwa  Daun  sangkareho Callicarpa  longifolia Lam . sebagai  tanaman  obat  khas  Kalimantan  Tengah diketahui  mengandung  bahan  aktif alami  (fitokimia) berupa  flavonoid, steroid  dan  tannin  yang  diduga  mempunyai efek imunomodulator.
Pemanfaatan  daun  yang  mengandung  tannin,  flavonoid  dan  steroid  sebagai  immunostimulan  dapat diindikasikan dengan meningkatkan profil darah ikan. Daun Sangkareho yang memiliki kandungan serupa diprediksi dapat memberikan dampak terhadap profil darah ikan. Informasi penggunaan daun Sangkareho sebagai tanaman obat memerlukan penelitian untuk memastikan potensinya sebagai sumber immunostimulan.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efektivitas  ekstrak  daun sangkareho ( C. longifolia Lam.) yang  diberikan  lewat  pakan  ikan  komersil  untuk pencegahan   penyakit   MAS   ( Motile   Aeromonas Septicemia ) yang  ditinjau  dari  kelangsungan hidup  dan  hematologi  ikan  nila  ( Oreochromis niloticus ).
Maryani, Mohamad  Rozik,  Nursiah,  Asri  Pudjirahaju. Gambaran  Aktivasi  Sistem  Imun  Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus) Terhadap Penambahan Tepung Daun Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) Melalui Pakan

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian ini telah dilaksanakan pada bulan Juli  - Oktober 2021 yang bertempat di Laboratorium Kesehatan Ikan, Jurusan Perikanan Fakultas Pertanian Universitas Palangka Raya. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah  ekstrak  daun  sangkareho  ( C.  longifolia Lam.) , ikan  nila  ( O.  niloticus )    ukuran  8-12  cm,  isolat  bakteri A. hydrophila , alkohol, TSA, TSB, dan GSP, EDTA, HCl, larutan PBS, hayem, dan pellet komersil. Adapun peralatan yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain;  wadah,  tabung  eppendof,  mikropipet,  timbangan  analitik,  tabung reaksi,  cawan  petri,  autoclave,  inkubator,  syrenge,  mikroskop  binokuler,  haemositometer,  object  dan  cover  glass, DO-meter, pH-meter, spektrofotometer.
Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah  metode  eksperimen  dengan  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  satu  faktor  dengan  lima  taraf  perlakuan.  Untuk  mengurangi  tingkat  kekeliruan  maka  dilakukan ulangan  sebanyak  tiga  kali.    Dosis  daun  sangkareho  sebagai  perlakuan  terdiri  dari  A=0;  B=5;  C=10;  D=15;  E=20 g/kg  pakan.    Daun  sangkareho  sebagai  perlakuan  diberikan  pada  ikan  setelah  sebelumnya  dicampurkan  ke  dalam pakan pellet.
Ikan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah  ikan nila ( O. niloticus ) berukuran 25-40 gram.  Ikan uji dipelihara dengan kepadatan 25 ekor dalam wadah berisi 90 L air.  Selama masa aklimatisasi dan selama penelitian, ikan diberi pakan pellet komersil berkadar protein 30-40% ad-libitum diberikan dengan 3 kali pemberian (pagi, siang dan sore hari).  Penyiponan akuarium dilakukan setiap pagi hari dan dilakukan penambahan air sampai setinggi air semula.

## Prosedur Penelitian Persiapan Wadah dan Ikan Uji
Wadah  pemeliharaan  dicuci  dengan  bersih  dan  dibilas  serta  diisi  dengan  air.  Kemudian  dimasukkan  kalium permanganat  (KMnO 4 )  25  ppm  ke  dalam  wadah  pemeliharaan  dan  diaerasi  kuat  selama  24  jam  agar  wadah pemeliharaan bebas dari patogen, kemudian dibilas dan dikeringkan selama 1 hari (Asniatih, 2013).
Penyediaan Biakan Bakteri A. hydrophila
Biakan  bakteri A.  hydrophila yang  digunakan  untuk  uji  tantang  berasal  dari  Balai  Besar  Pengembangan Budidaya  Air  Tawar  (BBPBAT)  Mandiangin  Kabupaten  Banjar  Kalimantan  Selatan.  Biakan  bakteri  sebelum digunakan  diisolasi  pada  media  agar Brain  Heart  Infusion  Agar (BHIA)  yang  telah  disterilkan  menggunakan autoclave. Isolat  bakteri A.  hydrophila yang  berasal  dari  biakan  kemudian  diambil  menggunakan  jarum  ose  dan selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam  media  agar  dengan  membentuk  pola.  Isolat  bakteri  pada  media  agar  BHIA kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 o C selama 24 jam.

## Persiapan pakan uji
Daun sangkareho sebagai perlakuan diberikan pada ikan setelah dicampurkan terlebih dahulu ke dalam pakan pelet.  Persiapan perlakuan dikerjakan dengan cara pertama-tama daun sangkareho dicuci kemudian dipotong kecil- kecil dan selanjutnya dijadikan tepung dengan menggunakan blender dan disaring dengan menggunakan ayakan 100 mesh.  Daun  sangkareho  yang  sudah  dalam  bentuk  tepung  selanjutnya  dicampurkan  ke  dalam  pakan  dengan  cara ditimbang  sesuai  dosis  yang  diperlukan  dengan  menggunakan  timbangan  digital  berketelitian  0,01  g.  Pembuatan pakan  berdasarkan  metode  modifikasi  dari  Payung  et  al.,  (2015)  yakni  daun  sangkareho  yang  sudah  ditimbang dilarutkan  dalam  sedikit  air  (100  ml  untuk  pembuatan  1  kg  pakan)  kemudian  tambahkan  ke  dalam  pakan  pelet dengan  cara  disemprotkan  dengan  menggunakan  sprayer.    Pencampuran  larutan  daun  sangkareho  dilakukan sedemikian  rupa  agar  tercampur  secara  merata  pada  pakan.  Pakan  yang  sudah  ditambahkan  daun  sangkareho selanjutnya  dikering-anginkan  dalam  temperatur  ruang  dan  setelah  kering  dimasukan  dalam  kotak  plastik  atau kantong plastik dan disimpan dalam lemari pendingin sampai saat akan digunakan.

## Pemeliharaan Ikan Uji
Ikan  nila  ( O.  niloticus )  berukuran  8-12  cm  terlebih  dahulu  diadaptasikan  selama  5  hari  di  dalam  bak  fiber, selama adaptasi ikan diberi pakan tanpa perlakuan dengan frekuensi pemberian 3 kali sehari (pagi, siang  dan sore) secara  ad  libitum.  Ikan  uji  sebelum  dimasukkan  ke  dalam  wadah  penelitian,  terlebih  dahulu  ditimbang  bobot tubuhnya  dengan  menggunakan  timbangan  analitik  dan  diukur  panjang  tubuhnya  dengan  menggunakan  penggaris. Kemudian ikan dimasukkan ke dalam wadah penelitian dengan padat tebar 1 ekor/2 L air.

## Pemeriksaan Parameter Penelitian
Pengambilan  darah  selama  penelitian,  dilakukan  sebanyak  dua  kali,yaitu  pengambilan  darah  yang  pertama dilakukan  pada  hari  ke-14  setelah  diberi  ekstrak  daun  sangkareho,  dan  pengambilan  darah  kedua  pada  hari  ke-30 setelah  diberi  ekstrak  daun  sangkareho  dan  diinfeksi  bakteri A.hydrophila. Pengambilan  darah  dilakukan  dengan
Maryani, Mohamad  Rozik,  Nursiah,  Asri  Pudjirahaju. Gambaran  Aktivasi  Sistem  Imun  Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus) Terhadap Penambahan Tepung Daun Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) Melalui Pakan
0 5 10 A B C D
E
7,24 7,09
7,58 7,78 7,65 8,22 8,33 8,62 8,56 8,68
K ad ar Hem o gl o b in (d L- 1) Perlakuan
Kadar Hemoglobin (dL-1 ) Setelah Pemeliharaan Selama 14 Hari Kadar Hemoglobin (dL-1 ) Setelah Setelah Infeksi Hari Ke-16
cara  alat  suntik  dan  tabung  eppendorf  dibilas  dengan  dengan  antikoagulan  Na-sitrat  3,8  %.  Darah  ikan  diambil dengan menggunakan syringe 1 ml yang ditusukkan sampai tulang vertebrae dimana terdapat vena caudalis. Darah didiamkan  mengalir  secara  kapiler  lalu  dihisap  dengan  ditarik  secara  perlahan.  Darah  yang  telah  diambil, dimasukkan ke dalam tabung eppendorf untuk segera diamati gambaran darahnya.

## Analisis Data
Parameter  yang  diamati  selama  penelitian  ini  adalah  pengamatan  gambaran  darah  ikan  meliputi  leukosit, eritrosit,  hematokrit  dan  hemoglobin  pada  ikan.  Pengamatan  pendukung  adalah  kualits  air.    Parameter  kualitas  air yang diamati pada penelitian ini meliputi suhu, pH, dan juga oksigen terlatur (DO).  Data kelangsungan hidup ikan dan  data  gambaran  darah  ikan  disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan  grafik.  Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan menggunakan analisa variansi (ANOVA) dan uji rentang Student Newman-Keuls.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Untuk  menjelaskan  lebih  lanjut  mengenai  pengaruh  pemberian  imunostimulan  daun  sangkareho    dapat dilihat  dari  parameter  sistem  imun  ikan  nila  yaitu  :  hemaglobin,  hematokrit,  eritrosit  total,  leukosit  total  dan differensial leukosit (limfosit, monosit dan neutrophil).

## Gambaran Darah Ikan nila 1.  Kadar Hemoglobin (Hb)
Rata-rata kadar hemoglobin ikan nila setelah pemeliharaan selama 14 hari dengan pemberian imunostimulan menggunakan  ekstrak  daun  sangkareho  berkisar  antara  7,09-7,78  dL -1 ,  sedangkan  pasca  uji  tantang  dengan A. hydrophila kadar  hemoglobin  ikan  nila  berkisar  antara  8,22-8,68  dL -1 .    Untuk  lebih  jelasnya  dapat  dilihat  pada Gambar 1.
Gambar 1. Histogram  Hemoglobin  Ikan  nila  ( O.  niloticus )  yang    diberi  Perlakuan  Daun  Sangkareho  Selama Penelitian
Berdasarkan  Gambar  1,  dapat  diketahui  bahwa  kadar  hemoglobin  pada  ikan  nila  mengalami  peningkatan setelah  penginfeksian  dengan A.hydrophila pada  tiap  perlakuan  kecuali  pada  perlakuan  A  (0  g)  yang  mengalami penurunan. Penentuan kadar hematokrit dan hemoglobin dalam cairan darah berguna untuk melihat kesehatan ikan serta hubungan antara darah dan hormon pada ikan.
Hemoglobin merupakan bagian dari sel plasma darah yang berfungsi sangat penting dalam sistem peredaran darah  pada  ikan.  Hemoglobin  adalah  protein  dalam  eritrosit  yang  tersusun  atas  protein  globin  tidak  berwarna  dan pigmen  heme  yang  dihasilkan  dalam  eritrosit  dan  kemampuan  darah  untuk  mengangkut  oksigen  bergantung  pada hemoglobin dalam darah (Prasetio et al., 2017).
B.  Blaxhall  (1973)  mengatakan  bahwa  kadar  hemoglobin  yang  rendah  merupakan  indikator  bahwa  ikan terkena  anemia.  Ikan  yang  mengalami  anemia  tidak  mampu  menyerap  besi  dalam  jumlah  yang  cukup  untuk membentuk  hemoglobin.  Pada  kondisi  ini  maka  akan  terbentuk  sel  darah  merah  yang  mengandung  hemoglobin dalam jumlah yang sedikit.  Menurut Fujaya (2004), ada korelasi yang kuat antara hemoglobin, sel darah merah dan hematokrit,  semakin  rendah jumlah  sel-sel  darah  merah,  maka  semakin  rendah  pula  kandungan  hemaglobin  dalam darah. Prasetio et al., (2017) menyatakan rendahnya hemoglobin menyebabkan laju metabolisme menurun dan energi yang dihasilkan menjadi rendah. Hal ini membuat ikan menjadi lemah dan tidak memiliki nafsu makan serta terlihat diam didasaratau menggantung dibawah permukaan air.
Maryani, Mohamad  Rozik,  Nursiah,  Asri  Pudjirahaju. Gambaran  Aktivasi  Sistem  Imun  Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus) Terhadap Penambahan Tepung Daun Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) Melalui Pakan
Menurut Sherif & Feky (2009), pada Suhu perairan 15-30 0 C kadar hemoglobin ikan nila Normal berkisar antara  7,5  –  8  dL -1 .    Demikian  juga  pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Salasia  et  al.,  (2001)  menunjukkan  hasil bahwa kadar normal hemoglobin dalam darah ikan Nila sebesar 5,05–8,33 g dL-1 (Salasia et al., 2001).
Peningkatan  hemoglobin  pada  ikan  nila  dapat  di  sebabkan  oleh  aktivitas  flavonoid  dalam  kandungan senyawa aktif tanaman daun sangkareho. Aktivitas flavonoid dapat meningkatkan kerja organ-organ penghasil darah sehingga  produksi  darah  meningkat  (Wahjuningrum  et  al.,  2008).  Selain flafonoid  zat  lain  yang  terkandung  dalam buah  daun  sangkareho  adalah  steroid  dan  tanin,  yang  berfungsi  dalam  memperbaiki  dan  mengaktifkan  molekul protein yang rusak dan dapat membantu memperbaiki dan mengaktifkan hemoglobin yang rusak (Wang, 2002).

## 2.  Kadar Hematokrit (He)
Hematokrit  adalah  angka  yang  menujukkan  persentase  zat  padat  dalam  darah  terhadap  cairan  darah. Hematokrit  digunakan  mengukur  perbandingan  antara  eritrosit  dengan  plasma,  sehingga  hematokrit  memberikan rasio total eritrosit dengan total volume darah dalam tubuh. Hematokrit merupakan persentase dari volume sel darah merah yang ada didalam tubuh ikan. Nilai hematokrit dipengaruhi oleh ukuran dan jumlah eritrosit (Dosim, 2013). Rata-rata  kadar  hematokrit  ikan  nila  setelah  pemeliharaan  selama  14  hari  dengan  pemberian  imunostimulan menggunakan  ekstrak  daun  sangkareho  berkisar  antara  21,14-23,54%,  sedangkan  pasca  uji  tantang  dengan A. hydrophila kadar  hematokrit  ikan  nila  berkisar  antara  17,65-22,12%.    Untuk  lebih  jelasnya  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
Gambar 2. Histogram  Hematokrit  Ikan  Nila  ( O.  niloticus )  yang    diberi  Perlakuan  Daun  Sangkareho  Selama Penelitian
Berdasarkan Gambar 2 dapat dilihat bahwa setelah penginfeksian dengan A. hydrophila terhadap ikan nila, maka  kadar  hematokrit  meningkat  pada  semua  perlakuan  kecuali  pada  perlakuan  A  (0  g).    Penurunan  kadar hematokrit  pada  perlakuan  A  diduga  karena  menurunnya  jumlah  eritrosit  dalam  darah  dan  akan  diikuti  oleh penurunan kadar hematokrit.
Penurunan  hematokrit  ini  menunjukkan  ikan  mengalami  gejala  anemia.  Anemia  berdampak  pada terhambatnya  pertumbuhan  ikan  karena  rendahnya jumlah  eritrosit  mengakibatkan  suplai  makanan  ke  sel, jaringan dan  organ  berkurang  sehingga  proses  metabolisme  ikan  terhambat  (Kurniawan  et  al.,  2014).  Fujaya  (2004) menyatakan  bahwa  terdapat  korelasi  yang  kuat  antara  hematokrit  dan  jumlah  hemoglobin  darah,  dimana  semakin rendah jumlah sel-sel darah merah maka semakin rendah pula kandungan hemoglobin dalam darah.
Angka (2005) menyatakan bahwa hematokrit ikan bervariasi tergantung pada faktor nutrisi dan umur ikan. Kisaran  kadar  hematokrit  ikan  adalah  20-30%  (Bond  1979).  Hematokrit  yang  mengalami  penurunan  umumnya terjadi  pada  ikan  yang  stres  (Azhar,  2013).  Penurunan  hematokrit  juga  terjadi  pada  ikan  yang  terdedar  bakteri patogen dan belum diberikan immunostimulan (Wahjuningrum et al., 2008).
Kadar hematokrit ikan nila selama penelitian berada pada kisaran yang normal. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian imunostimulan daun sangkareho dalam pakan memberikan pengaruh yang baik terhadap hematokrit darah ikan nila.
0 5 10 15 20 25 A B C D E
21,14 22,01 21,89 22,21 23,54 17,65 18,73 20,49 22,12 21,67
K ad ar Hem ato kr it (% ) Perlakuan
Kadar Hematokrit (%) Setelah Pemeliharaan Selama 14 Hari Kadar Hematokrit (%) Setelah  Infeksi Hari Ke-16
Maryani, Mohamad  Rozik,  Nursiah,  Asri  Pudjirahaju. Gambaran  Aktivasi  Sistem  Imun  Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus) Terhadap Penambahan Tepung Daun Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) Melalui Pakan
0 20 40 60 A B C D E 29,12 28,87 30,45 32,38 33,15 30,22 33,48 40,25 43,73 39,26 To tal Leu ko si t (× 10 3 sel /m m 3 )

## Perlakuan
Leukosit  Setelah Pemeliharaan Selama 14 Hari

## 3.  Eritrosit (Sel Darah Merah)
Sel  darah  merah  merupakan  sel  darah  yang  paling  banyak  jumlahnya  dibandingkan  dengan  sel  lainnya. Dalam  kondisi  normal, jumlah  eritrosit  mencapai  hampir  separuh  dari  volume  darah. Jumlah  eritrosit normal  pada ikan  teleostei  antara  1,05–3,0  x  10 6 /mm3  (Irianto,  2005),  Eritrosit  juga  dapat  menggambarkan  kondisi  tubuh  ikan tersebut karena dapat menunjukkan pertahanan tubuh ikan terhadap bakteri patogen (Putri et al. 2013).
Eritrosit ikan mempunyai inti, umumnya berbentuk bulat dan oval tergantung jenis ikannya. Inti sel eritrosit terletak  sentral  dengan  sitoplasma  terlihat  jernih  kebiruan  dengan  pewarnaan  giemsa  (Chinabut et  al .  1991). Pengukuran total eritrosit dilakukan untuk melihat perubahan total eritrosit yang terjadi setelah dilakukan pemberian imunostimulan dengan ekstrak daun sangkareho dan setelah diinfeksi dengan A. hydrophila .
Rata-rata  total  eritrosit  ikan  nila  setelah  pemeliharaan  selama  14  hari  dengan  menggunakan  ekstrak  daun sangkareho  berkisar  antara  3,29-3,73  (×10 5 sel/mm 3 ),  sedangkan  pasca  uji  tantang  dengan A.  hydrophila total eritrosit ikan nila berkisar antara 2,68-4,16 (×10 5 sel/mm 3 ).  Untuk lebih jelasnya dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Histogram Eritrosit Ikan Nila  ( O. niloticus ) yang diberi  Perlakuan  Daun Sangkareho Selama Penelitian
Jumlah  eritrosit  total  selama  pemberian  daun  sangkareho  dalam  pakan  masih  berada  pada  kisaran  normal. Ketika  nilai  eritrosit  berada  dalam  kisaran  normal,  hal  ini  menunjukan  bahwa  pemberian  imunostimulan  daun sangkareho  pada  perlakuan  tidak  mengganggu  kesehatan  ikan  namun  diduga  dapat  meningkatkan  status  kesehatan ikan nila.

## 4.  Leukosit (Sel Darah Putih)
Leukosit  merupakan  unit  sistem  pertahanan  tubuh  paling  aktif  dan  beredar  di  dalam  sirkulasi  darah  dalam berbagai  tipe.  Fungsi  utama  leukosit  adalah  merusak  bahan-bahan  infeksius  dan  toksik  melalui  proses  fagositosis dengan membentuk antibodi (Rustikawati, 2012). Penambahan daun Sangkareho pada pakan terhadap gambaran sel darah putih ikan Nila mampu memberikan perbedaan jumlah nilai leukosit pada setiap perlakuan.
Rata-rata  total  leukosit  ikan  nila  setelah  pemeliharaan  selama  14  hari  dengan  perendaman  menggunakan ekstrak  daun  sangkareho  berkisar  antara  28,87-  33,15  (×10 3 sel/mm 3 ),  sedangkan  pasca  uji  tantang  dengan A. hydrophila total  leukosit  ikan  nila  berkisar  antara  30,22-43,73  (×10 3 sel/mm 3 ).    Untuk  lebih  jelasnya  dapat  dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Histogram    Leukosit    Ikan  Nila  ( O.  niloticus )  yang    diberi  Perlakuan  Daun  Sangkareho  Selama Penelitian
0 2 4 6 A B C D E
3,29 3,51 3,54 3,67 3,73 2,68 3,66 3,72 4,16 4,02 Er itr o si t (× 10 5 sel /m m 3 ) Perlakuan Eritrosit  Setelah Pemeliharaan Selama 14 Hari
Eritrosit  Setelah  Infeksi Hari Ke-16
Maryani, Mohamad  Rozik,  Nursiah,  Asri  Pudjirahaju. Gambaran  Aktivasi  Sistem  Imun  Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus) Terhadap Penambahan Tepung Daun Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) Melalui Pakan
0 20 40 60 80 100 A B C D E 45,67 88,89 88,89 93,33 91,67 Ti n gka t Kel an gsu n gan H id u p ( %) Ikan N ila Perlakuan Tingkat Kelangsungan Hidup Ikan Nila
Pemberian  daun  Sangkareho  terhadap  nilai  leukosit  ikan  Nila  menunjukkan  adanya  perbedaan  antara perlakuan. Penambahan daun Sangkareho diprediksi mampu meningkatkan kadar leukosit didalam darah ikan Nila. Meningkatnya  leukosit  didalam  darah  dipengaruhi  oleh  salah  satunya  adanya  flavonoid  didalam  daun  Sangkareho. Wahjuningrum  et  al.  (2008)  menyatakan  bahwa  flavonoid  dapat  meningkatkan  produksi  leukosit.  Flavonoid  juga memacu  sistem  imun  karena  leukosit  sebagai  pemakan  benda  asing  lebih  cepat  diaktifkan.  Menurut  Fauzan  et  al. (2017)  menyatakan  bahwa  saat  jumlah  leukosit  didalam  tubuh  ikan  sedikit,  maka  ikan  tersebut  rentan  terhadap serangan infeksi bakteri patoge. Jumlah leukosit normal pada ikan Nila bekisar antara 20.000 - 150.000 sel/mm 3 . Berdasarkan  hasil  pengamatan  selama  penelitian  menunjukkan  bahwa  terjadi  peningkatan  jumlah  leukosit pada  perlakuan  yang  diberikan  imunostimulan  daun  sangkareho,  mengindikasikan  bahwa  daun  sangkareho  yang diberikan melalui pakan mampu  meningkatkan jumlah leukosit yang berperan dalam sistem pertahanan tubuh  ikan nila sehingga sistem kekebalan tubuh ikan nila juga dapat meningkat. Hal ini sesuai dengan pendapat dari Arindita et al. (2014) bahwa meningkatkanya total leukosit ini  dikarenakan adanya tanaman obat yang dicampurkan ke dalam pakan berfungsi sebagai imunostimulan bagi tubuh ikan.

## Kelangsungan Hidup Ikan nila
Data penghitungan kelangsungan hidup ikan nila dapat dilihat pada Gambar 8 di bawah ini.
Gambar 8. Histogram      Tingkat  Kelangsungan    Hidup    Ikan    Nila  ( O.    niloticus )  yang    diberi  Perlakuan  Daun Sangkareho Selama Penelitian
Data pada Gambar 8, menunjukkan bahwa kelangsungan hidup pada perlakuan D (15 g/kg pakan) lebih tinggi yakni 93,33% dibandingkan dengan perlakuan lainnya.   Kelangsungan hidup terendah  terjadi pada perlakuan A (0 g/kg pakan)  yakni 45,67%.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa senyawa metabolit sekunder yakni flavonoid, steroid dan tannin yang diduga  mempunyai  efek  imunomodulator.mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen  A.  hydrophyla  yang ditandai dengan tingginya sintasan ikan nila pada perlakuan dengan pemberian daun sangkareho dibanding dengan perlakuan  A(0  g/kg  pakan).  Menurut  Anderson  (1992),  steroid,  flavonoid,  fenol,  dan  tanin  tergolong  paraimunitas yang  bekerja  sebagai  mitogen,  yang  dapat  mengaktivasi  sel  pertahanan  seluler.    Perlakuan  D  (15  g/kg  pakan) merupakan  konsentrasi  terbaik  dengan  kelangsungan  hidup  93,33%.    Hal  ini  diduga  senyawa  immunostimulator sudah  mencapai  titik  optimal  dalam  meningkatkan  imunitas  ikan  nila  karena  adanya  senyawa-senyawa  metabolit sekunder yang dikandung ekstrak daun sangkareho untuk melawan serangan bakteri A.hydrophila yang ditandai pada hasil presentasi jumlah sel darah putih tertinggi di antara perlakuan lain.
Flavonoid  selain  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri,  menghambat  produksi  enteroksin  juga  memacu sistem  imun  (Vieira dalam Dadang  2014).  Optimalnya  jumlah  konsentrasi  membuat  senyawa-senyawa  tersebut bekerja maksimal dalam membuat pertahanan non spesifik ikan nila semakin kuat yang ditandai dengan jumlah sel darah putih yang tinggi setelah diberi perlakuan, sehingga setelah diuji tantang mekanisme pertumbuhan bakteri A. hydrophila menjadi  terhambat  dan  tingkat  patogenitas  menurun.  Dengan  maksimalnya  kerja  immunostimulator menjadikan  ikan nila pada perlakuan ini sehat yang ditandai dengan tidak adanya gejala klinis fisik, gerak  renang, nafsu makan dan refleks yang normal sehingga energi yang dikeluarkan oleh benih pada perlakuan ini tidak terlalu besar hanya digunakan untuk melawan serangan bakteri.
Maryani, Mohamad  Rozik,  Nursiah,  Asri  Pudjirahaju. Gambaran  Aktivasi  Sistem  Imun  Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus) Terhadap Penambahan Tepung Daun Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) Melalui Pakan

## Kualitas Air
Ikan Nila ( O. niloticus ) memiliki toleransi yang tinggi terhadap perubahan lingkungan hidupnya, sehingga bisa dipelihara  di  dataran  rendah  yang  berair  payau  maupun  dataran  yang  tinggi  dengan  suhu  yang  rendah,  serta  tahan terhadap  kekurangan  oksigen  terlarut  di  air  (Pramloenita  et  al.,  2018).  Suhu  pada  semua  perlakuan  selama pengamatan menunjukkan kisaran antara 30 – 32  C. Kondisi tersebut masih berada diantara suhu optimum ikan Nila, dimana  Badan  Standarisasi  Nasional  (2009)  menyatakan  suhu  optimum  ikan  Nila  berkisar  antara  25–32  ºC. Pengamatan  pH  pada  semua  perlakuan  berkisar  antara  6,6  –  7,2  dan  masih  didalam  kisaran  normal  pH  untuk lingkungan ikan Nila. Nilai tersebut memenuhi persyaratan SNI 7550: 2009, yaitu sebesar 6,5 – 8,5. Oksigen terlarut dalam air berkisar antara 3,4 – 5,6 mgL-1. Nilai DO tersebut masih didalam standarisasi untuk ikan Nila (SNI 7550: 2009) yaitu minimal 3 mgL-1.

## KESIMPULAN
1. Pemberian daun Sangkareho  di dalam pakan berpengaruh terhadap profil darah ikan Nila, yakni sel darah putih (leukosit) dan sel darah merah (eritrosit), hemoglobin, dan hematokrit.
2. Pemberian  pakan  mengandung  daun  Sangkareho    pada  perlakuan  D  merupakan  perlakuan  terbaik  yang menghasilkan kelangsungan hidup tertinggi yakni 93,33%.
3. Nilai  parameter  kualitas  air,  baik  suhu,  pH,  DO,  dan  kecerahan  dalam  kisaran  yang  normal  dan  dalam  batas yang ditolerir oleh ikan .

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson, D.P.  1992.  Immunostimulant, adjuvant and vaccine carrier in fish : Applications to Aquaculture.  Annual Review of Fish Diseases 21 : 281 – 307.
Angka  SL.  2005.  Kajian  Penyakit  Motile  Aeromonad  Septicaemia  (MAS)  pada  Ikan  Lele  Dumbo  ( Clarias  sp. )  : Patologi,  Pencegahan  dan  Pengobatannya  dengan  Fitofarmaka.  [Tesis].  Sekolah  Pascasarjana,  Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Anonim. 2004. Pedoman Praktikum Penyakit Ikan . Jurusan Perikanan Fakultas Pertanian UGM, Yogyakarta. Arindita  C,  Prayitno  SB.  2014.  Pengaruh  penambahan  serbuk  lidah  buaya  (Aloe  Vera)  dalam  pakan  terhadap kelulushidupan dan profil darah ikan mas (Cyprinus Carpio) yang diinfeksi bakteri Aeromonas Hydrophila. Journal of Aquaculture Management and Technology 3(3): 66-75
Azhar  F.  2013.  Pengaruh  pemberian  probiotik  dan  prebiotik  terhadap  performan  juvenile  ikan  kerapu  bebek (Comileptes  altivelis).  Buletin  Veteriner  Udayana  6(1)Blaxhall,  P.C.  and    K.W.  Daisley.  1973.    Routine haematological methods for use with fish blood.  Journal Fish Biology 5 : 577 – 581.
Bond, C.E.  1979.  Biology of fishes.  Saunders College Publishing.  Philladelphia. 514 p. Chinabut, S., C. Limsuwan and P. Kitsawat.  1991.  Histology of the walking catfish ( Clarias batrachus ).  FDRC, Canada, 76p.
Dadang,  D.  2014.  Efektivitas  Ekstrak  Kipahit  Tithonia  diversifolia  dan  Kirinyuh  Eupatorium  inulaefolium  Untuk Pencegahan  dan  Pengobatan  Penyakit  Akibat  Infeksi  Aeromonas  hydrophila  Pada  Ikan  Lele  Clarias  sp. Melalui Pakan. Skripsi. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Institut Pertanian Bogor.
Dosim, Handayani E, Hardi, Agustina. 2013. Efek penginjeksian produk intraseluler (ICP) dan ekstraseluler (ECP) bakteri Pseudomonas sp. terhadap gambaran darah ikan nila (Oreochromis niloticus). Jurnal Ilmu Perikanan Tropis  19(1)  Ferguson,  H.,  W.,  1989.  Systematic  Pathology  of  Fish.  Lowa  State  University  Press.  Ames, lowa. 3-10 hal.
Sherif  E,  M.S.  and  A.M.I.  El-Feky.  2009.  Performance  of  nile  tilapia  (Oreochromis  niloticus)  fingerlings.  II. Influence of different water temperatures. International Journal of Agriculture and Biology. 11: 301–305. Fauzan  M,  Rosmaidar,  Sugito,  Zuhrawati,  Muttaqien,  Azhar.    2017.    Pengaruh  Tingkat  Paparan  Timbal  (Pb)
Terhadap  Profil  Darah  Ikan  Nila  ( Oreochromis  nilloticus ).    Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa  Veteriner  JIMVET. 01(4):702-708.
Fujaya, Y. 2004 . Fisiologi Ikan : Dasar Pengembangan Teknologi Perikanan . Jakarta : Rineka Cipta. 179 hlm. Irianto A. 2005. Patologi Ikan Teleostei. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta
Kurniawan  A,  Sarjito,  Prayitno  SB.  2014.  Pengaruh  pemberian  ekstrak  daun  binahong  (Anredera  cordifolia)  pada pakan terhadap kelulushidupan dan profil darah lele dumbo (Clarias gariepinus) yang diinfeksi Aeromonas caviae. Journal of Aquaculture Management and Technology 3(3): 76-85.
Payung  C.N.,  Manoppo,  H.    2015.    Peningkatan  Respon  Kebal  Non-spesifik  dan  Pertumbuhan  Ikan  Nila (Oreochromis niloticus) Melalui Pemberian Jahe, Zingiber officinale .  Jurnal Budidaya Perairan 3 (1): 11-18. Prasetio E, Fakhrdin M, Hasan H. 2017. Pengaruh serbuk lidah buaya (Aloe vera) terhadap hematologi ikan jelawat (Leptobarbus hoevenii) yang diuji tantang bakteri Aeromonas hydrophila. Jurnal Ruaya 5(2).
Maryani, Mohamad  Rozik,  Nursiah,  Asri  Pudjirahaju. Gambaran  Aktivasi  Sistem  Imun  Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus) Terhadap Penambahan Tepung Daun Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) Melalui Pakan
Putri R.R., Basuki F., Hastuti, S. 2013. Profil darah dan kelulushidupan ikan nila pandu F5 (Oreochromis Niloticus) yang  diinfeksi  bakteri  Streptococcus  agalactiae  dengan  kepadatan  berbeda.  Journal  of  Aquaculture Management and Technology 2(2): 47-56.
Rustikawati  I.  2012.  Efektivitas  ekstrak  Sargassum  sp.  terhadap  diferensiasi  leukosit  ikan  nila  (Oreochromis niloticus) yang diinfeksi Streptococcus iniae. Jurnal Akuatika 3(2).
Salasia, S.I.O., D. Sulanjari., dan A. Ratnawati. 2001. Studi hematologi ikan air tawar. Biologi 2(12):710-723 Standart Nasional Indonesia (SNI). 2009. No. 7550- 2009: Produksi ikan Nila (Oreochromis niloticus Bleeker) kelas pembesaran di kolam air tenang. Badan Standardisasi Nasional. Jakarta.
Wahjuningrum  D.,    N.  Ashry,  S.  Nuryanti.  2008.  Pemanfaatan  ekstrak  daun  ketapang  (Terminalia  cattapa)  untuk pencegahan  dan  pengobatan  ikan  Patin  (Pangasionodon  hypopthalmus)  yang  terinfeksi  Aeromonas hydrophila. Jurnal Akuakultur Indonesia 7(1): 79-94.
Wang, M. Y., West, B. J., Jensen, C. J., Nowicki, D., Su, C., Palu, A. K. & Anderson, G., 2002, Morinda citrifolia (Noni):  A  Literature  Review  and  Recent  Advances in  Noni  Research,  Acta  Pharmacol  Sin,  23  (12),  1127- 1141
Yuslianti  ER,  Bachtiar  BM,  Suniarti  DF,  Sudjiatmo  AB.  Standardisasi  Farmasitikal  Bahan  Alam  Menuju Fitofarmaka untuk Pengembangan Obat Tradisional Indonesia. Dentika Dent J. 2016;19(2):179–185.