## Uji Viabilitas Isolat Bakteri Penambat Nitrogen Halotoleran pada Komposisi Bahan Pembawa yang Berbeda
( Viability Test of Nitrogen Halotolerant Fixing Bacteria Isolates at Different Carrier Composition)
1 Nida Uli Al-Azmiya, 2 Fiqriah Hanum Khumairah, 3 Mieke Rochimi Setiawati,
3 Tualar Simarmata
1 Mahasiswa Pascasarjana Program Studi Ilmu Tanah, Fakultas Pertanian, Universitas Padjadjaran
2 Program Studi Pengelolaan Lingkungan, Jurusan Manajemen Pertanian, Politeknik Pertanian Negeri Samarinda, Jl. Samratulangi, Sei Keledang,
Samarinda, Kalimantan Timur, 75131, Indonesia
3 Departemen Ilmu Tanah, Fakultas Pertanian, Universitas Padjadjaran, Jl. Raya Bandung Sumedang KM. 21, Hegarmanah, Kec. Jatinangor, Kabupaten Sumedang, Jawa Barat, 45363, Indonesia Korespondensi: tualar.simarmata@unpad.ac.id

## ABSTRACT
The  process  of  microbial  inoculation  into  plant  biomass  which  will  be  decomposed needs a suitable carrier material to facilitate the application of the microorganisms to be used. Halophilic bacteria are a type of microorganism that can survive high salt levels by maintaining an osmotic balance. The bacterial consortium is a collection of bacteria that  work  together  to  form  a  community,  to  produce  a  significant  product.  The experiment  aims  to  determine  the  effect  of  carrier  composition  on  inoculant  viability. The experiment was carried out at the laboratory CV. Bintang Asri Arthauly Bandung, West  Java,  Indonesia.  The  study  used  a  non  factorial  randomized  design  with  three replications.  The  treatment  design  to  be  tested  in  this  experiment,  among  others:  c1: Peat 50% + Compost 50% + Nutrition 0%, c2: Peat 50% + Compost 45% + Nutrition 5%, c3: Peat 50% + Compost 40% + Nutrition 10%, c4: Peat 50% + Compost 25 % + Biochar  25%  +  Nutrition  0%,  c5:  Peat  50%  +  Compost  22.5%  +  Biochar  22.5%  + Nutrition 5%, c6: Peat 50% + Compost 20% + Biochar 20% + Nutrition 10%, c7: Peat 50% + Compost 20% + Biochar 20% + Dolomite 5% + Guano 5% + Nutrition 0%, c8: Peat 50% + Compost 17.5% + Biochar 17.5% + Dolomite 5% + Guano 5 % + Nutrition 5%,  c9:  Peat  50%  +  Compost  15%  +  Biochar  15%  +  Dolomite  5%  +  Guano  5%  + Nutrition  10%.  The  results  of  the  second  stage  experiment  showed  that  the  c8 composition had the best viability in all carrier compositions.

## Keywords: Nitrogen Fixing Bacteria, Carrier, Saline Soil

## PENDAHULUAN
Proses  inokulasi  mikroba  ke biomas  tanaman  yang  akan  di dekomposisi memerlukan bahan pembawa  (carrier)  yang  sesuai  untuk memudahkan pengaplikasian
mikroorganisme  yang  akan  digunakan. Bahan  pembawa  yang  sesuai  untuk pertumbuhan  mikroorganisme  dapat menjaga  viabilitas  dan  efektivitas  tetap tinggi  selama  masa  penyimpanan (Ferreira  and  Castro  2005;  Arora  et  al. 2008).  Media  pembawa  yang  baik adalah  tidak  bersifat  racun  bagi mikroba,  daya  absorbs  tinggi,  tidak keras, mudah dihancurkan dan disterilkan,  daya  adhesi  juga  baik terhadap  biji,  murah  dan  mudah tersedia,  kapasitas  menahan  air  cukup tinggi  dan  mengandung  cadangan makanan  yang  cukup  untuk  menjamin pertumbuhan  mikroba  (Setiawati et  al.
2015) .
Bakteri  halofilik  merupakan
jenis  mikroorganisme  yang  dapat bertahan  pada  kadar  garam  tinggi dengan cara mempertahankan keseimbangan osmotik. Bakteri halofilik dapat menjadi kunci
penggunaan teknologi biofertilizer pada lahan  salin,  isolat  toleran  salin  yang berpotensi sebagai inokulan biofertilizer merupakan salah satu solusi yang dapat dilakukan  sebagai  upaya  pemanfaatan lahan  salin  dalam  bidang  pertanian.
Konsorsium bakteri merupakan
kumpulan  bakteri  yang  bekerja  sama membentuk  suatu  komunitas,  untuk
menghasilkan  produk  yang  signifikan (Arora,  2005).  Suatu  konsorsium  akan menghasilkan  produk  yang  dapat dimanfaatkan  bersama,  sehingga  dapat saling  mendukung  pertumbuhan  isolat tunggal  dan  lainnya  (Bailey et  al., 2006).
Selain  itu  jumlah  koloni  bakteri yang  terdapat  pada  rhizosfer  dapat mempengaruhi respon tanaman terhadap pertumbuhan (Syamsiah, 2014; Iswati, 2012). Efektivitas penggunaan pupuk hayati dapat meningkat  dengan  penggunaan  carrier yang  tepat.  Pemilihan  bahan  carrier dipilih karena berkaitan dengan viabilitas  dan  daya  simpan.  Bahan pembawa biasanya berasal dari bahan di mana  mikroorganisme  pupuk  hayati bisa  hidup  lama  serta  efektif  jika diaplikasikan. Umumnya mikroba dalam  pupuk  hayati  dikemas  dalam bahan  pembawa  berbentuk  serbuk  atau bentuk cairan. Sebagai bahan pembawa inokulan serbuk, dapat digunakan bahan organik  seperti  gambut,  arang,  sekam dan  kompos.  Berbeda  dengan  pupuk anorganik  maupun  organik,  pupuk hayati  memiliki  masa  kaduluarsa  yang relatif pendek, yaitu sekitar 6 sampai 12 bulan  (Danapriatna  dan  Simarmata, 2011).
Aplikasi  BPN  sebagai  pupuk hayati  memerlukan  bahan  pembawa
(carrier) sebelum diaplikasikan ke tanah yang digunakan sebagai media
pertumbuhan  dalam  jangka  waktu tertentu.  Carrier  yang  tepat  dapat meningkatkan  efektivitas  pupuk  hayati karena  berkaitan  dengan  viabilitas  dan daya  simpan  bahkan  komposisi  carrier yang tepat memberikan viabilitas bahan aktif dalam pupuk hingga 2 tahun.
Bahan  pembawa  atau  carrier dapat  berbentuk  padat  atau  cair  yang biasanya  berasal  dari  bahan  dimana mikroorganisme  pupuk  hayati  bisa hidup  nyaman  dan  lama  serta  efektif jika  diaplikasikan  (FNCA,  2006). Banyak  bahan  yang  dapat  digunakan sebagai  carrier  untuk  inokulan  antara lain  gambut,  lignit,  arang,  vermikulit, zeolite, kompos, biocahar dan lain lain. Diantara  beberapa  bahan  itu  gambut adalah  yang  paling  banyak  digunakan untuk  carrier  bakteri  (Sutariati  et  al.,
2014). . Campuran kompos dan gambut merupakan bahan pembawa terbaik bagi bakteri dengan viabilitas bakteri mencapai  42  minggu  Danapriatna  dan Simarmata  (2011).  Selain  gambut  dan kompos,  bahan  lain  yang  digunakan sebagai  carrier  antara  lain  biochar.
Kualitas  biochar  tergantung  dari  jenis dan karakteristik bahan yang digunakan (Shenbagavalli dan Mahimairaja, 2012).
Pemberian  dolomit  juga  dapat meningkatkan  pH  sehingga  dapat digunakan  sebagai  media  pembawa karena  mudah  diatur  pHnya.  Guano juga  dapat  memacu  pertumbuhan mikroba  karena  bahan  organik  yang terkandung  pada  guano  dapat  menjadi sumber  energi  bagi  mikroba.  Selain jumlah  inokulan  penambahan  bahan pengaya  berupa  larutan  nutrisi  juga memengaruhi  viabilitas  carrier  (Stella dan  Sivasak,  2009).  Bahan  pengaya diberikan  bertujuan  agar  Bakteri Penambat  Nitrogen  memperoleh  unsur hara  yang  lengkap  dan  meningkatkan sumber  energi  selama  di  dalam  carrier dan bakteri tetap hidup. Bahan pengaya yang  dapat  digunakan  sebagai  nutrisi untuk  Bakteri  Penambat  Nitrogen. Berdasarkan  uraian  diatas,  diharapkan komposisi  carrier  dapat  berpengaruh terhadap  viabilitas  inokulan  bakteri penambat Nitrogen.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari 2020 sampai dengan Mei 2020 di laboratorium CV. Bintang Asri Arthauly Bandung, Jawa Barat.
Alat  dan  yang  digunakan  terdiri atas:  media  NA  ( Nutrient  Agar) salin,
konsorsium bakteri penambat N
halotoleran,  petridish,  ose,  autoclave, inkubator dan laminar air flow.
Pelaksanaan  percobaan  dengan mencampur  semua  bahan  pembawa sesuai  perlakuan  masing-masing,  lalu dikemas  dalam  alumunium  foil  ukuran
40 g yang telah disterilisasi menggunakan  autoclave  dengan  suhu
121ºC tekanan 15 Psi selama 15 menit.
Kemudian menambahkan suspensi isolat  konsorsium  ke  dalam  bahan pembawa  yaitu  sebanyak  20%  dari volume bahan pembawa. Setelah proses pemberian  inokulan  dan  penambahan nutrisi, pupuk hayati disimpan
diruangan  dengan  suhu  kamar  selama 12 minggu.
Uji  viabilitas  isolat  bakteri penambat  nitrogen  dilakukan  untuk mengetahui kemampuan bertahan hidup isolat  bakteri  penambat  nitrogen  dalam kurun  waktu  tertentu  pada  berbagai media carrier dan mendapatkan komposisi  terbaik  dalam  meningkatkan pertumbuhan tanaman padi. Uji
viabilitas  dilakukan  pada  isolat  unggul terkarakterisasi  yang  diinokulasi  pada berbagai macam komposisi carrier.
Penelitian  ini  menggunakan metode Rancangan acak lengkap (RAL) yang  terdiri  dari  9  perlakuan  yang diulang  sebanyak  3  kali.  Adapun rancangan perlakuan yang akan diujikan dalam percobaan ini antara lain: c 1 :  Gambut  50%  +  Kompos  50%  + Nutrisi 0%,
c 2 :  Gambut  50%  +  Kompos  45%  +
Nutrisi 5%,
c 3 :  Gambut  50%  +  Kompos  40%  + Nutrisi 10%,
c 4 :  Gambut  50%  +  Kompos  25%  + Biochar 25% + Nutrisi 0%,
c 5 :  Gambut  50%  +  Kompos    22,5%  + Biochar 22,5% + Nutrisi 5%,
c 6 :  Gambut  50%  +  Kompos  20%  + Biochar 20% + Nutrisi 10%,
c 7 : Gambut 50%+Kompos 20%+Biochar 20%+Dolomit 5%+Guano 5%+Nutrisi 0%, c 8 : Gambut 50%+Kompos 17,5%+Biochar 17,5%+Dolomit 5%+Guano 5%+Nutrisi 5%, c 9 : Gambut 50%+Kompos 15%+Biochar 15%+Dolomit 5%+Guano 5%+Nutrisi 10%.
Pengamatan  yang  dilakukan dengan cara menghitung populasi isolat bakteri  penambat  N    menggunakan metode Total Plate Count (TPC) dengan
media NA pada 0, 2, 4, 6, 8, 10 dan 12 MSP.
Data  yang  diperoleh  dianalisis menggunakan  DSAASTAT.  dengan ANOVA,  jika  menunjukkan  perbedaan yang  signifikan  maka  dilakukan  uji lanjut Duncan pada taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  analisis  uji  statistik menunjukkan  bahwa  terdapat  pengaruh
signifikan antara faktor perlakuan isolat Bakteri  Penambat  N  Halotoleran  dan bahan pembawa terhadap populasi akhir bakteri.  Konsorsium  isolat  Bakteri penambat Nitrogen yang diinokulasikan pada  sembilan  bahan  pembawa  pupuk hayati yang berbeda dan di simpan pada ruangan  dengan  suhu  kamar  dapat bertahan  hidup  sampai  minggu  ke  12. Dapat  di  lihat  pada  Tabel  1.
Tabel 1. Uji Viabilitas isolat Bakteri Penambat N Halotoleran pada komposisi bahan pembawa yang berbeda
Perlakuan (Carrier) Waktu Perlakuan 0 MSP 2MSP 4 MSP 6 MSP 8 MSP 10 MSP  12 MSP C 1 1,24 a 3,81  a 21,33 b 4,00 ab 4,00 a 0,48 a 12,95 bc C 2 2,86 a 14,29 ab 7,43 a 4,00 ab 4,10 a 0,71 a 2,67 a C 3 0,76 a 30,29 c 31,71 b 1,52 ab 3,24 a 0,52 a 6,29 a C 4 1,10 a 2,29   a 21,33 b 0,76 a 4,19 a 0,19 a 7,52 ab C 5 2,24 a 6,10 ab 6,29 a 2,10 ab 2,86 a 0,29 a 5,38 a C 6 1,29 a 16,95 b 7,43 a 3,05 ab 3,43 a 0,24 a 2,48 a C 7 1,29 a 8,76  ab 7,43 a 6,29 bc 3,43 a 0,24 a 8,19 abc C 8 8,90 b 34,10 c 32,19 b 9,71 c 15,24 b 0,14 a 14,29 c C 9 9,67 b 4,38 ab 4,38 a 1,95 ab 4,00 a 0,29 a 4,00 a Keterangan:  Faktor  perlakuan  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  respon  berdasarkan Analisis Ragam pada taraf nyata 5%.
Secara  keseluruhan  komposisi bahan  pembawa  memberikan  hasil terhadap  viabilitas  konsorsium  Bakteri Penambat  N  Halotoleran  dengan  masih adanya  populasi  konsorsium  Bakteri Penambat  N  Halotoleran  sampai
minggu  ke  12  setelah  inkubasi.  Bahan pembawa  (carrier)  c8  yaitu  Gambut
50% + Kompos 17,5% + Biochar 17,5% +  Dolomit  5%  +  Guano  5%  +  Nutrisi
5% terlihat lebih baik dalam mempertahankan  populasi  konsorsium
Bakteri  Penambat  N  dibandingkan dengan bahan pembawa dengan komposisi yang lain. Bahan pembawa dengan formulasi  c 5 merupakan  pupuk  hayati dengan  populasi  terkecil  dibandingkan dengan  formulasi  yang  lain.  Namun, populasinya  masih  dalam  kisaran populasi standar pupuk hayati
berdasarkan  Permentan  No.  70  tahun 2011 untuk pupuk hayati yaitu minimal inokulan  bakteri  lebih  dari  atau  sama dengan  10 7 cfu/g.  bahan  pembawa dengan formulasi c 8 merupakan formulasi  yang  sangat  mendukung viabilitas  inokulan  konsorsium  Bakteri Penambat  Nitrogen  dengan  populasi sekitar 8,90 sampai dengan 34,10 x 10 7
CFU/ml  (Tabel  1.)  tingginya  viabilitas inokulan  konsorsium  Bakteri  Penambat Nitrogen  terjadi  dimungkinkan  karena adanya komposisi bahan pembawa yang cukup  seimbang  dan  penambahan nutrisi  yang  mencukupi  yang  dapat bertindak  sebagai  sumber  energi  dan
memberikan kelembaban yang mencukupi untuk perkembangan bakteri. Perubahan jumlah populasi bakteri pada media pembawa
dipengaruhi  oleh  bebrapa  faktor  yaitu nutrisi,  suhu,  pH,  ketersediaan  oksigen
dan  adanya  senyawa  toksis  yang mungkin  terkandung  dalam    bahan pembawa.  Pada  saat  nutrisi  telah  habis di  akhir-akhir  masa  penyimpanan,  di mana  mendekati  fase  stasioner  bakteri akan  memanfaatkan  bahan  pembawa sebagai  sumber  nutrient  (Noviana  dan Raharjo, 2009).

## KESIMPULAN
Komposisi bahan pembawa pada semua  perlakuan  memenuhi  standar populasi yang ditetapkan oleh Peraturan Menteri Pertanian Nomor. 70/Permentan/  SR.140/10/2011  yaitu 10 7 cfu/g. Viabilitas terbaik  berdasarkan rata-rata  ada  pada  komposisi  c 8 pada seluruh komposisi bahan pembawa.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kami  sampaikan  kepada Universitas  Padjadjaran  yang  telah mendanai penelitian ini melalui program  ALG  (Academic  Leadership Grant) Unpad 2019.

## DAFTAR PUSTAKA
Agisti,  A.,  Alami,  N.  H,  dan  Hidayati, T.  N.  2014.  Isolasi  dan Identifiasi  Bakteri  Penambat Nitrogen  Non  Simbiotik  pada
Lahan Restorasi dengan Metode Legume  Cover  Crop  (LCC)  di Daerah Pasirian Lumajang Jawa
Timur.  Jurnal  Sains  dan  Seni POMITS. Vol. 3 (2). Arora, N.K., Khare, E. R., Naraian, and Maheshwari, D.K.. 2008. Sawdust as a superior carrier for production of multipurpose bioinoculant  using  plant  gowth promoting rhizobial and pseudomonas  strain  and  their impact  on  productivity  of Tridolium repense. Current Science. 95(1): 90-94.
Arora,  N.  K.  2015.  Plant  microbes
symbiosis: Applied facets, India:
Springer.
Bailey, M. J., Lilley, A.  K., Timms, W. T.  M.,  and  Spancher,  P.  T.  M. 2006.  Microbial  ecology  of aerial  plant  surface,  United Kingdom: CAB International.
Danapriatna,  N.  dan  Simarmata,  T. 2011.  Viabilitas  pupuk  hayati penambat  nitrogen  (Azotobacter dan  Azospirillum)  ekosistem padi  sawah  pada  berbagai formulasi bahan pembawa. Jurnal Agibisnis dan Pengembangan  Wilayah  3(1):1- 10. FNCA.  2006.  Biofertilizer  Manual. JAPAN Atomic Industrial Forum (Jaif). Ferreira,  E.M.  and  Castro,  I.V.  2005. Residues of the cork industry as carrier  for  the  production  of legume inoculants. Silva Luciana 13(2): 159-1967. Iswati,  R.  2012.  Pengaruh  Dosis Formula  PGPR  Asal  Perakaran Bambu  Terhadap  Pertumbuhan Tanaman Tomat (Solanum lycopersicum  syn).  J  Ago.  1(1): 9-12. Noviana,  L.,  dan  B,  Raharjo.  2009. Viabilitas  Rhizobakteri  Bacillus sp. DUCC-BR-K1.3 pada Media Pembawa Tanah Gambut Disubstitusi  dengan  Padatan Limbah  Cair  Industri  Rokok. Biologi FMIPA Undip. BIOMA,
Juni  2009.  Vol.  11,  No.  1,  Hal. 30-39.
Schottendreier,  M.,  and  U.  Falkengren-
Greup.  1999.  Plant  induced alteration in the rhizosphere and the utilization of soil heterogenicity.  Plant  Soil  209: 297-309.
Setiawati,  M.  R.,  Suryatmana,  P.,  and Herdiyantoro, D. 2015. Isolation and  Bioassay  Screening  of
Biofertilizer Diazotroph Bacteria from  Paddy  Field.  Academic Journal Science ISSN: 21656282 :04(03): 39. Shenbagavalli,  S.  and  Mahimairaja,  S. 2012. Production and characterization of biochar from different biological wastes. International  Journal  of  Plant, Animal,  and  Environmental Sciences 2 (1) : 197 – 201. Stella, D., and Sivasakthivelan, P. 2009. Effect  of  different  organic amendments addition into Azospirillum  bioinoculant  with lignite  as  carrier  material.
Bot.Res.Intl. 2(4) : 229 – 232. Sutariati,  G.A.K.,  dan  Muhidin.  2014. Biofertilizers :  Solusi  teknologi pengembangan lahan sub optimal. uhalu press. Syamsiah. M. 2014. Respon Pertumbuhan  Dan  Produksi Tanaman Cabai Merah (Capsicum  annum  L.)  Terhadap Pemberian  PGPR  Dari  Akar Bamboo  Dan  Urine  Kelinci.  J Ago. 4(2) : 109-114.