Aktivitas Hepatoproteksi Ekstrak Etanol Kecambah Kedelai ( Glycine max ) dengan Parameter Histopatologi Hepar pada Tikus yang Diinduksi
Parasetamol

## Hepatoprotective Activity of Soybean Sprouts (Glycine max) Ethanol Extract on Histopathological Parameters of Liver in Rats Inducted by Paracetamol

## Sitti Rahimah, Maulita Indrisari, Ade Irma Sari, Asril Burhan
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, Jl. Perintis Kemerdekaan Km. 13,7 Daya. Makassar 90242
Sur-el: st.rahimah07@gmail.com

## Abstrak
Kedelai  ( Glycine  max (L .) Merr) mengandung  senyawa  flavonoid  yang  berfungsi  sebagai  hepatoprotektor. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  hepatoproteksi  ekstrak  etanol  kecambah  kedelai  pada  tikus jantan  yang  diinduksi  parasetamol  dengan  parameter  histopatologi.  Ekstraksi  dengan  metode  maserasi  dengan menggunakan pelarut etanol 70% dilakukan untuk mendapatkan ekstrak etanol kecambah kedelai. Hewan uji yang digunakan  adalah  tikus  jantan  ( Rattus  norvegicus )  sebanyak  15  ekor  dan  dibagi  menjadi  5  kelompok,  secara berturut-turut adalah kelompok I sebagai kontrol tanpa  induksi, kelompok II sebagai kontrol dengan pemberian induksi  parasetamol,  kelompok  III,  IV  dan  V  yang  diberi  ekstrak  etanol  kecambah  kedelai,  berturut-turut  200 mg/kgBB, 300 mg/kgBB dan 400 mg/kgBB. Pada hari ke-8 seluruh tikus, kecuali kelompok I, diberikan induktor kerusakan  hepar,  yaitu  parasetamol  dosis  180mg/200gBB.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol kecambah kedelai 400 mg/kgBB memiliki aktivitas hepatoproteksi paling efektif dibandingkan dosis 200 mg/kgBB dan 300 mg/kgBB dengan parameter histopatologi tikus jantan yang diinduksi parasetamol.
Kata kunci : Glycine max (L .) Merr, Kecambah kedelai, Hepatoproteksi, Histopatologi

## Abstract
Soybean (Glycine max (L.) Merr) contains flavonoid compounds which acts as hepatoprotector. The aim of this study  is  to  identify  the  hepatoprotector  effect  of  soybean  ethanol  extract  to  rats  induced  by  paracetamol  with histopathological  parameters.  Animals  that  have  been  used  in  this  experimental  are  15  male  rats  (Ratus norvegicus), divided into 5 groups, in which the group I as control without induction, group II as a control with induction, group III, IV and V administered  soybean ethanol extract, respectively,  200mg/kgBW, 300mg/kgBW and 400mg/kgBW. On the 8th day all rats, except the group I, were given liver failure inductor, paracetamol with dose 180mg/200gBW. The results of this study has shown that the ethanol extract of soybean 400 mg/kgBB had the most effective hepatoprotector activity compared to 200 mg/kgBB and 300 mg/kgBB dose with histopathological parameters of the rats induced paracetamol.
Keywords : Glycine max (L.) Merr, Soybean, Hepatoprotection, Histopathology

## PENDAHULUAN
Hepatoprotektor adalah suatu senyawa obat yang  dapat  memberikan  perlindungan  pada hati  dari  kerusakan  yang  ditimbulkan  oleh obat,  senyawa  kimia,  dan  virus.  Zat-zat beracun,  baik  yang  berasal  dari  luar  tubuh seperti  obat  maupun  dari  sisa  metabolisme yang  dihasilkan  sendiri  oleh  tubuh  akan
didetoksifikasi oleh enzim-enzim hati sehingga  menjadi  zat  yang  tidak  aktif  (Hadi, 2002).  Sel-sel  hati (hepatosit) mempunyai kemampuan  regenerasi  yang  cepat.  Oleh karena  itu  sampai  batas  tertentu,  hati  dapat mempertahankan fungsinya bila terjadi gangguan  ringan.  Pada  gangguan  yang  lebih berat, terjadi gangguan fungsi yang serius dan
akan berakibat fatal (Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik, 2007).
Beberapa  penyebab  penyakit  hati  antara lain:  infeksi  virus  hepatitis  yang  dapat ditularkan  melalui  selaput  mukosa  dan hubungan seksual atau darah (parenteral), zat- zat  toksik  seperti  alkohol  atau  obat-obat tertentu,  genetik  atau  keturunan  seperti hemochromatosis , gangguan imunologis seperti hepatitis  autoimun yang  ditimbulkan karena  adanya  perlawanan  sistem  pertahanan tubuh  terhadap  jaringan  tubuhnya  sendiri, kanker  seperti Hepatocellular  Carcinoma dapat  disebabkan  oleh  senyawa  karsinogenik antara lain aflatoksin, polivinil klorida (bahan pembuat plastik), virus, dan lain-lain. Hepatitis B  dan  C  maupun  sirosis  hati  juga  dapat berkembang  menjadi  kanker  hati  (Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik, 2007) .
Beberapa tanaman telah diketahui memiliki fungsi  sebagai  hepatoprotektor.    Komponen yang  terdapat  dalam  tanaman    tersebut  kaya akan  antioksidan  yang  dapat  melindungi  hati dari  kerusakan  akibat  induksi  hepatotoksin. Dua sumber antioksidan yang digunakan saat ini,  yaitu  antioksidan  sintetik  (antioksidan yang diperoleh dari hasil sintesa reaksi kimia) dan  antioksidan  alami  (antioksidan  hasil ekstraksi  bahan  alami  atau  yang  terkandung dalam bahan alami). Antioksidan alami berasal dari  senyawa  fenolik  seperti  golongan flavonoid.  Flavonoid  adalah  suatu  golongan metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  oleh tanaman kedelai termasuk kelompok flavonoid, merupakan salah satu bahan pangan
penghasil  antioksidan  alami.  Salah  satu komponen  senyawa  bioaktif  yang  terdapat dalam kedelai dan bertindak sebagai antioksidan  adalah  isoflavon  (Saija,  et  al., 1995).
Kandungan  isoflavon  akan  meningkat melalui proses perkecambahan atau germinasi. Isoflavon  terdapat  dalam  empat  bentuk  yaitu (1)  bentuk  aglikon  (non  gula)  :  genistin, daidzein, dan glisitin; (2) bentuk glikosida dari daidzin,  genistin  dan  glisitin;  (3)  bentuk asetilglikosida  :  6”-O-asetil  daidzin,  6”-O- asetil  genistin,  6”-O-asetil  glisitin;  dan  (4) bentuk  malonilglikosida  :  6”-O-malonil daidzin,  6”-O-malonil  genistin,  6”-O-malonil glisitin (Wang & A.Murphy, 1994).
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan untuk  mengetahui  aktivitas  hepatoproteksi ekstrak  etanol  kecambah  kedelai  terhadap gambaran  histopatologi  hepar  tikus  jantan yang  terinduksi  paracetamol  dengan  harapan dapat  memberikan  informasi  ilmiah  untuk pengembangan ilmu pengetahuan dan pengobatan  dari  pemanfaatan  kecambah kedelai.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  antara  lain timbangan  analitik,  timbangan  hewan  uji, blender,  bejana  maserasi,  kandang  tikus, rotary  evaporator, sentrifuge dan humalyzer . Bahan–bahan yang digunakan pada penelitian ini  adalah  kacang  kedelai,  tablet  parasetamol 500  mg,  etanol  70%,  air  suling,  natrium
karboksi  metal  selulosa  (Na.  CMC),  asam klorida,  besi(iii)  klorida,  asam  asetat  glasial, asam sulfat, serbuk magnesium.
Kacang  kedelai  ( Glycine  max (L .) Merr) diperoleh  dari  daerah  Soppeng  Sulawesi Selatan.  Subjek  penelitian  adalah  hewan  uji tikus  dengan  kriteria  sehat,  aktivitas  normal, dewasa,  berat  badan  150-200  g  sebanyak  15 ekor. Hewan coba dibagi menjadi 5 kelompok, masing-masing terdiri atas 3 ekor tikus. Tikus telah diadaptasikan dengan suasana laboratorium sebelum diberi perlakuan selama 9 hari.

## Perkecambahan  dan  Ekstraksi  kecambah kedelai
Biji  kacang  kedelai  dicuci,  lalu  direndam dalam air selama ± 4 jam, kemudian ditiriskan, lalu  diletakkan  diatas  kapas    dan  selanjutnya ditutup  kembali  dengan  kapas  dan  kain. Sampel dibiarkan hingga 3 - 4 hari pada tempat gelap sambil sesekali disemprot dengan air dan diatur temperatur dan kelembapannya.
Ekstrak  dibuat  dengan  cara  maserasi. Kecambah kedelai yang didapatkan dari proses perkecambahan  dibersihkan,  dirajang  dan ditimbang  sebanyak  500  gram.  Sampel kemudian dimasukkan dalam bejana maserasi dan ditambahkan pelarut etanol 70% sebanyak 5  Liter. Kecambah kedelai dimaserasi selama 3  hari  pada  suhu  kamar  sambil  sekali-kali diaduk kemudian difiltrasi menggunakan kain flannel. Ampas  diremaserasi  dengan  pelarut yang  sama  hingga  diperoleh  filtrat  berwarna bening. Filtrat dikumpulkan kemudian
dipekatkan  dengan rotary  evaporator sampai didapatkan  ekstrak  kental  lalu  dihitung rendemen.

## Uji Pendahuluan

## Uji Flavonoid
Ekstrak  sebanyak  ±  1  gram  dicampur dengan  3  mL  etanol  70%  lalu  dikocok, dipanaskan,  dan  dikocok  lagi  kemudian disaring.  Filtrat  yang  diperoleh  ditambahkan serbuk Mg sebanyak 0,1 gram dan 2 tetes HCl pekat.  Terbentuknya  warna  merah  pada lapisan etanol menunjukkan adanya flavonoid (Harborne, 1987).

## Uji Saponin
Ekstrak  sebanyak  ±  1  gram  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  20  mL  air panas,  kemudian  dikocok  secara  vertikal selama  15  menit.  Hasil  positif  senyawa saponin  ditunjukkan  dengan  terbentuk  buih. Ditambahkan  beberapa  tetes  HCl,  terbentuk busa  stabil  lebih  kurang  1  cm  (Direktorat Jenderal POM, 1995).

## Pembuatan Suspensi Paracetamol 7,2 % b/v dan  Suspensi  Ekstrak  Etanol  Kecambah Kedelai
Paracetamol  dihaluskan  lalu  ditimbang sebanyak 2,7 gram. Serbuk paracetamol yang telah  halus  didispersikan  dengan  Na.  CMC 1%.  Campuran  dicukupkan  hingga  volume akhir 38 mL. Campuran diaduk hingga merata.
Sediaan  uji  ekstrak  kecambah  kedelai dibuat  dengan  menimbang  berturut-turut  160
mg (setara dengan dosis 200 mg/kg BB),  240 mg  (setara  dengan  dosis  300  mg/kg  BB)  dan 320  mg  (setara  dengan  dosis  400  mg/kg  BB) ekstrak  kental  dan  disuspensikan  dengan larutan  Na.  CMC  1%  dan  dicukupkan volumenya hingga diperoleh volume akhir 10 mL.

## Uji Aktivitas Hepatoprotektif
Pembagian Kelompok Hewan Uji
Hewan  uji  tikus  ( Rattus  norvegicus ) diadaptasikan selama 2 minggu lalu ditimbang dan diberikan perlakuan selama 8 hari. Hewan uji  dibagi  menjadi  5  kelompok,  masing- masing  kelompok  terdiri  dari  3  ekor  tikus, secara berturut-turut, selama 7 hari kelompok I  (kelompok  kontrol  tanpa  induksi)  dan kelompok  II  (kelompok  kontrol  dengan induksi)  diberikan  larutan  Na.  CMC  1  %, kelompok III, IV, dan V dilakukan pemberian ekstrak etanol kecambah kedelai dengan dosis per  hari  masing-masing  40  mg/200  gramBB, 60 mg/200  gramBB dan 80 mg/200 gramBB. Pada  hari  ke  8  kelompok  II,  III,  IV  dan  V diberikan suspensi Paracetamol dosis hepatotoksik  sebesar  180  mg  /  200  gram  BB per hari.
Pemeriksaan
Histopatologi

## Preparat

## Mikroskopik
Hewan  coba  yang  telah  diberi  perlakuan selama 8 hari selanjutnya dilakukan pengambilan organ hati tikus dengan cara neck dislocation, tikus  dibedah  dan  diambil  organ hati.  Kemudian  difiksasi  selama  48  jam
dengan Phosphat  Buffered  Shalin (PBF). Jumlah Phosphat  Buffered  Shalin (PBF) minimal  10  kali  volume  jaringan.  Setelah jaringan  organ  yang  berada  di  dalam  larutan fiksasi  matang,  jaringan  ditiriskan  pada saringan,  selanjutnya  dipotong  menggunakan pisau scalpel dengan  ketebalan  0,3  -  0,5  mm dan  disusun  pada tissue  cassette, diletakkan pada  keranjang  khusus  lalu  dimasukkan  ke dalam tissue  processor dengan  pengaturan waktu sebagaimana yang terlihat pada tabel 1.
Tissue  cassette yang  berisi  spesimen dikeluarkan dan dimasukkan ke dalam wadah yang  tersedia  pada  alat embedding  center . Setelah proses dehidrasi dilakukan, kemudian dilanjutkan  dengan  penghilangan  udara  dari jaringan  dengan  menggunakan  mesin  vakum yang  di  dalamnya  terdapat  tabung  untuk menyimpan  keranjang  yang  diisi  parafin  cair
Tabel   1.  Prosedur tissue processor dan pengaturan waktu
No Proses Pereaksi Durasi jam 1 Fiksasi Buffer Formalin 10% 2 2 Fiksasi Buffer Formalin 10% 2 3 Dehidrasi Alkohol 70 % 1 4 Dehidrasi Alkohol 90 % 1 5 Dehidrasi Alkohol 100 % 1 6 Dehidrasi Alkohol 100 % 2 7 Dehidrasi Alkohol 100 % 2 8 Clearing Toluen 1 9 Clearing Toluen 1,5 10 Clearing Toluen 1,5 11  Impregnasi Paraffin 2 12  Impregnasi Paraffin 3 Total Waktu 20
dengan  temperatur  59-60 o C. Tissue  cassette divakum selama 30 menit. Keranjang diangkat lalu tissue cassette dikeluarkan dan disimpan pada temperatur 60 0 C untuk sementara waktu sebelum pencetakan dilakukan dengan parafin cair.
Cetakan dari bahan stainles steel ditempatkan pada sisi kanan dan kiri dispenser paraffin.  Kemudian  jaringan  dimasukkan kedalam  cetakan  sambil  diatur  dan  sedikit ditekan.  Sementara  itu  ditempat  lain  telah disiapkan  parafin  cair  dalam  tempat  khusus, sehingga  dicapai  suhu  60 0 C.  Parafin  cair tersebut dituangkan ke dalam jaringan sampai seluruh  jaringan  terendam  parafin.  Parafin dibiarkan  membeku  diatas  mesin  pendingin. Selanjutnya  blok  parafin  dilepas  dari  cetakan dan  disimpan  di freezer (-20 0 C)  sebelum dilakukan pemotongan.
Blok  parafin  yang  mengandung  jaringan, kemudian  dipotong  dengan  menggunakan mesin mikrotom dengan ketebalan berkisar 5- 6  µm.  Potongan  tersebut  diletakkan  secara hati-hati  diatas  permukaan  air  dalam floating out , yang berisi 100 mL aquadet dan gelatin 5 gram  yang  dibiarkan  melarut  sempurna dengan suhu 40 0 C. Potongan yang bagus, tidak tergores, tidak mengkerut dipilih dan diambil dengan  gelas  slide  yang  sudah  bernomor sesuai  dengan  nomor  epi/patologi  dan  slide tersebut ditempatkan diatas plat pemanas slide, minimal dua jam.
Langkah  selanjutnya  adalah  melakukan pewarnaan blok paraffin. Sebelum pewarnaan dilakukan,  semua  bahan  pewarna  harus
diperiksa  kejernihannya  dan  disesuaikan dengan  jadwal  penggantian  yang  tersedia  (3 kali  penggunaan  setiap  pemakaian).  Tahap Pewarnaan  Mayers  Hematoxylin  Eosin  dapat dilihat pada tabel 2.
Setelah pewarnaan dilakukan coverslipping .
Coverslips disiapkan secukupnya  sesuai  dengan  jumlah  preparat yang baru saja diwarnai lalu teteskan 1-2 tetes ‘ entellan ’  pada  tiap coversli p.  Balik  dan tutupkan  pada  slide  preparat  yang  baru  saja diwarnai,  cegah  jangan  sampai  terbentuk gelembung udara, biarkan preparat yang sudah tertutup  dengan coverslip lalu  dibiarkan sampai mengering sempurna. Bersihkan slide glass dengan xylol lalu  berilah  nomor  sesuai dengan  nomor  yang  ada  di  etiket slide  glass tersebut dan siap untuk diperiksa.
Preparat yang telah selesai dibuat, dilakukan  pengamatan  dengan  mikroskop,
Tabel  2.  Tahapan Pewarnaan Mayers Hematoxylin Eosin No Pereaksi Waktu (menit) 1 Xylol I 2 2 Xylol II 2 3 Alkohol 100% I 1 4 Alkohol 100% II 1 5 Alkohol 95% I 1 6 Alkohol 95% II 1 7 Mater’s Haematoxylin 15 8 Rendam dalam tap water 20 9 Masukkan ke dalam eosin 0,25 -2 10  Alkohol 95% III 2 11  Alkohol 95% IV 2 12  Alkohol 100% III 2 13  Alkohol 100% IV 2 14  Alkohol 100% V 2 15  Xylol III 2 16  Xylol IV 2 17  Xylol V 2
kemudian  dibuat  foto  dengan  perbesaran  400 kali  dan  hasil  foto  dikumpulkan.  Penilaian dilakukan  dengan  memberikan  skor  terhadap kondisi  sel  hepatosit  pada  masing-masing tikus.  Skor  0  diberikan  untuk  gambar  yang tidak ditemukan nekrosis, skor 1 untuk gambar yang nekrosis minimal, skor 2 untuk nekrosis ringan,  skor  3  untuk  nekrosis  sedang,  skor  4 untuk nekrosis berat dan skor 5 untuk nekrosis masif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan proses pengecambahan  dengan  tujuan meningkatkan kadar aglikon, dimana pada proses ini senyawa isoflavon  mengalami  transformasi  terutama melalui  proses  hidrolisis  sehingga  diperoleh senyawa  yang  disebut  aglikon.  Senyawa aglikon tersebut adalah genistein, glisitein dan daidzein  (Suyanto,  2007).  Pengecambahan kacang kedelai sebanyak 500 gram menghasilkan kecambah sebesar 800 gram .
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  70%. Metode  maserasi  sangat  efektif  untuk mengekstraksi suatu simplisia yang lembut/tidak keras seperti kecambah.
Keuntungan  menggunakan  metode  ini  adalah dapat menghindarkan kerusakan senyawa aktif yang  terkandung  dalam  suatu  simplisia termasuk senyawa flavonoid yang tidak tahan panas.  Beberapa  senyawa  flavonoid  mudah teroksidasi  pada  suhu  tinggi,  sehingga flavonoid sangat cocok jika diekstraksi dengan metode  maserasi  yang  tidak  menggunakan
pemanasan  (Yohanes  Adithya  Koirewoa, 2006).  Ekstraksi  kecambah  kacang  kedelai sebanyak  800  gram  menghasilkan  ekstrak sebanyak 50,6 gram.
Ekstrak  yang  telah  didapatkan  diuji pendahuluan  untuk  menentukan  kandungan kimia  yang  terdapat  dalam  ekstrak  kecambah kedelai.  Berdasarkan  hasil  uji  pendahuluan dari ekstrak etanol kecambah kedelai menggunakan reaksi warna atau pengendapan membuktikan bahwa ekstrak etanol kecambah kedelai  mengandung  senyawa  golongan fenolik berupa flavonoid dan saponin. Hasil ini sesuai  penelitian  Retno  &  Widyastuti  (2012) yang  mengatakan  bahwa  kedelai  termasuk tanaman yang mengandung banyak flavonoid. Peneliti lainnya menyatakan bahwa ditemukan senyawa  golongan  saponin  yang  memiliki beberapa  aktivitas  seperti  hepatoprotektif, anti-hiperlipidemia,  anti-kanker,  antioksidan dan  anti-HIV  (Kanchana,  Santha,  &  Raja, 2015).
Pengamatan terhadap histologi hati sebagaimana tersaji pada gambar 1, kelompok I  kontrol  tanpa  induksi  (individu  A,  B,  C), didapatkan  gambaran  histologi  hepar  yang
Tabel   3.  Hasil ekstraksi kecambah kedelai Berat kecambah Berat Ekstrak Rendemen 500 g 50,6 g 10,12% Tabel   4.  Hasil Uji Pendahuluan No. Uji Pendahuluan Hasil Uji Pendahuluan 1. Flavonoid Positif (+) 2. Saponin Positif (+) 3. Fenolik Positif (+)
normal  dengan  skor  0    yang  menunjukkan bahwa  organ  hepar  pada  kelompok  ini  tidak terjadi kerusakan pada sel. Hal ini mengindikasikan  bahwa  pemberian  Na-CMC 1%  tidak  menyebabkan  kerusakan  sel.  Na- CMC dapat digunakan  sebagai  bahan pengemulsi sampel.
Pada gambar  D, E dan  F dari kelompok II induksi  paracetamol  terlihat  lebih  dari  ⅔ lobulus mengalami kematian (nekrosis) tingkat berat sehingga mendapat skor 4. Tanda panah pada gambar E terlihat adanya congesti dan nekrosis pada pembuluh darah, sedangkan panah  pada  gambar  D  dan  F  terlihat  adanya peradangan sel dan perdarahan yang meningkat.  Gambar  tersebut  menunjukkan bahwa parasetamol dosis 180mg/200 gramBB dapat menyebabkan terjadinya kerusakan hati. Mekanisme  kerusakan  hati  bukan  disebabkan oleh  parasetamol  itu  sendiri,  tetapi  dari  salah
satu metabolitnya yaitu n-asetil-p- benzoquinonemine (NAPQI).  Induksi  dengan parasetamol  dosis  toksik  akan  menyebabkan tingginya  metabolit  reaktif  NAPQI  sehingga jalur  reaksi  sulfasi  dan  glukoronidasi  akan jenuh  akibatnya  glutation  (GSH)  akan menetralisir NAPQI menjadi asam merkapturat  (bentuk  non  toksik).  GSH  yang digunakan  dalam  jumlah  yang  tinggi  akan menyebabkan deplesi dari glutation, sehingga NAPQI akan     meningkat dan menyebabkan kerusakan sel-sel hepar (Wibowo WA, 2005).
Hasil  histologi  kelompok  III  ekstrak kecambah kedelai (EKK) dosis 200 mg/kgBB, tanda  panah  pada  gambar  G  menunjukkan adanya congesti ,  juga  terjadi  nekrosis  pada pembuluh  darah  dan  disertai  peningkatan  sel radang.  Tanda  panah  pada  gambar  I  terlihat adanya  sel  radang  yang  meningkat  disertai nekros  is  sel    hepar.  Gambar  G  dan I
Tabel   5.  Hasil pemeriksaan Histopatologi Kelompok perlakuan Skor Kelompok I (Kelompok Kontrol tanpa Induksi) Tikus I (A) 0 Tikus II (B) 0 Tikus III (C) 0 Kelompok II (Kelompok Induksi Parasetamol) Tikus I (D) 4 Tikus II (E) 4 Tikus III (F) 4 Kelompok III (EKK 200 mg/KgBB) Tikus I (G) 4 Tikus II (H) 3 Tikus III (I) 4 Kelompok IV (EKK 300 mg/KgBB) Tikus I (J) 3 Tikus II (K) 3 Tikus III (L) 3 Kelompok V (EKK 400 mg/KgBB) Tikus I (M) 1 Tikus II (N) 2 Tikus III (O) 1 Keterangan EEK = Ekstrak Kecambah Kedelai 3 = Nekrosis Sedang 0 = Tidak Ditemukan nekrosis 4 = Nekrosis Berat 1 = Nekrosis Minimal 5 = Nekrosis Masif
2 = Nekrosis Ringan
menunjukkkan lebih dari ⅔ lobulus mengalami nekrosis sehingga  mendapatkan skor 4. Sedangkan tanda panah pada gambar H
terlihat  adanya  nekrosis  berupa  sel  hati piknosis dan sel radang meningkat. Kerusakan ini  menunjukkan  sekitar  ⅓ lobulus yang
A B C Kelompok I: Kontrol tanpa Induksi D E F Kelompok II: Kontrol dengan Induksi G H I Kelompok III: EKK 200 mg/kgBB J K L
Kelompok IV: EKK 300 mg/kgBB
M
N
O
Kelompok V: EKK 400 mg/kgBB
Gambar  1 : Hasil pengamatan histopatologi pada setiap tikus
mengalami nekrosis yang mendapatkan skor 3.
Nekrosis  yang  terjadi  pada  gambar  H tergolong  dalan  nekrosis  dengan  tingkat sedang  jika  dibandingkan  dengan  nekrosis pada gambar G dan I.
Gambaran histopatologi kelompok IV EKK dosis  300  mg/kgBB  pada  gambar  J  (tanda panah) menunjukkan adanya  sel hati piknosis dan  perdarahan  disertai  sel  radang,  tanda panah  pada  gambar  K  terlihat  adanya  sel hepatic dan sel radang meningkat,  dan panah pada gambar L terjadi congesti pada pembuluh darah kapiler dan sel radang yang meningkat. Dari ketiga gambar tersebut terlihat lebih dari ⅓  lobulus  mengalami nekrosis sehingga mendapatkan  skor  3.  Hal  ini  menunjukkan sudah ada aktivitas hepatoproteksi dari ekstrak etanol  kecambah  kedelai  pada  tikus  jantan yang diinduksi parasetamol
Tanda panah pada gambar M dari kelompok V  EKK  400  mg/kgBB  menunjukkan  adanya kerusakan yang sangat minimal pada sel hati, panah  pada  gambar  O  juga  ditemukan  sel radang  tetapi  dalam  jumlah  yang  minimal. Pada  kedua  gambar  diatas  mendapat  skor  1 karena  kerusakan  pada  sel  masih  minimal, sedangkan panah pada gambar N menunjukkan  adanya  perdarahan  dan  sel radang  dengan  derajat  ringan  sehingga mendapatkan skor 2 karena lebih kecil dari ⅓ lobulus mengalami nekrosis .  Dari  hasil tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  kecambah  kedelai  memiliki  aktivitas hepatoproteksi  dengan  dosis  400  mg/kgBB memberikan perlindungan terhadap kerusakan
hati paling baik dengan parameter histopatologi  tikus  jantan  yang  diinduksi paracetamol.
Efek  hepatoproteksi  kecambah  kedelai diduga  karena  kecambah  kedelai  memiliki kandungan  senyawa  antioksidan  yang  aktif secara biologis salah satunya adalah flavonoid. Flavonoid dan tanin merupakan senyawa yang bersifat  antioksidan  karena  memiliki  gugus hidroksi  fenolik  dalam  struktur  molekulnya yang memiliki daya tangkap radikal bebas dan sebagai pengkhelat logam. Aktivitas antioksidan  flavonoid  dan  tanin  dikarena kedua  senyawa  tersebut  memiliki  gugus hidroksil  yang  terikat  pada  karbon  cincin aromatik. Senyawa ini mempunyai kemampuan  untuk  menyumbangkan  atom hidrogen,  sehingga  radikal  dapat  tereduksi menjadi bentuk yang lebih stabil. Jumlah dan posisi  gugus  hidroksil  pada  flavonoid  dan tanin sangat mempengaruhi aktivitas antioksidan  kedua  senyawa  tersebut.  Gugus hidroksil  pada  senyawa  flavonoid  dan  tanin akan  menggantikan  glutation  yang  telah terdeplesi oleh radikal bebas akibat pemberian parasetamol  dosis  toksik  (Zakaria,  2007; Seyoum  A,  2006).  Gugus  hidroksil  pada flavonoid dan tanin akan membantu konjugasi parasetamol  menjadi  asam  merkapturat  dan mengubah metabolit reaktif parasetamol yaitu NAPQI  menjadi  metabolit  non-aktif  yang bersifat  hidrofilik  yang  dieksresikan  melalui urin.  Melalui  mekanisme  ini  secara  tidak langsung  enzim  sitokrom  P-450 yang merupakan salah satu mixed function oxydase
systems  (MFO) dapat  direduksi  sehingga metabolit reaktif NAPQI dapat diturunkan dan aktvitas hepatoproteksi dapat terwujud (Williams, 2002; Seyoum A, 2006).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan  maka  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak etanol kecambah kedelai ( Glycine max (L .) Merr)  memiliki  aktifitas  hepatoproteksi berdasarkan  gambaran  histopatologi  hepar tikus jantan yang diinduksi parasetamol.

## DAFTAR PUSTAKA
Direktorat  Bina  Farmasi  Komunitas  dan Klinik. (2007). Pharmaceutical Care Untuk Hati. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Direktorat  Jenderal  POM.  (1995). Materia Medika  Indonesia  Edisi  6. Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
Hadi,  S.  (2002). Gastroenterologi. Bandung: PT. Alumni.
Harborne, J. B. (1987). Metode Fitokimia Edisi kedua. Bandung: ITB.
Kanchana,  P.,  Santha,  M.  L.,  &  Raja,  K.  D. (2015).  A  Review  On  Glycine  max  (L) Merr  (Soybean). World  Journal  Of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences,
5 (1), 356-371.
Retno,  T.,  &  Widyastuti,  S.  K.  (2012). Pengaruh  Pemberian  Isoflavon  Terhadap Peroksida  Lipid  pada  Hati  Tikus  Normal.
Indonesian Medicus Veterinus , 483-491.
Saija,  A.,  Scalese,  M.,  Lanza,  M.,  Marzullo, D.,  Bonina,  F.,  &  Castelli,  F.  (1995). Flavonoids as antioxidant agents: importance  of  their  interaction  with biomembranes. Free  Radical  Biology  and Medicine,  19 (4),  481-486.  Retrieved  from www.ncbi.nlm.nih.gov:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/759 0397 Seyoum  A,  A.  K.-f.  (2006).  Structure-radical scavenging activity relationships of flavonoids. Phytochemistry , 2058-70. Suyanto,  P.  (2007). Prospek  dan  Manfaat Isoflavon untuk Kesehatan. Jakarta: Direktorat Teknologi Bioindustri. Retrieved  from  Direktorat  Teknologi Bioindustri, Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi .
Wang,  H.-j.,  &  A.Murphy,  P.  (1994). Isoflavone Content in Commercial Soybean Foods. Journal  Of  Agricultural  and  Food Chemistry , 1666-1673.
Wibowo  WA,  M.  L.  (2005).  Pengaruh pemberian perasan buah mengkudu (Morindia citrifolia) terhadap kadar SGOT dan  SGPT  tikus  putih  (Rattus  novergicus) diet tinggi lemak. Journal Unair , 1-5.
Williams,  D.  (2002). Drugs  Metabolisms  - Foye’s Principles of Medicinal Chemistry:
5th Edition. Philadelpia: Lippincott William & Witkins.
Yohanes  Adithya  Koirewoa,  F.  F.  (2006). Academia  Edu. Retrieved  2012,  from https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/phar macon/article/download/445/356 :
https://ejournal.unsrat.ac.id
Zakaria,  Z.  (2007).  Free  radical  scavenging activity of some plants. IJPT , 87-91.