## Karakteristik Morfologi Mycobacterium tuberculosis yang Terpapar  Obat Anti TB Isoniazid  (INH)
Widodo 1 , Agus Irianto 2 dan Hendro Pramono 2
1 Poltekkes Kemenkes Semarang
2 Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto Email : widodo124@ymail.com

## Abstract
INH’s  role  in  inhibiting  the  synthesis  of  mycolic  acid  which  is  a  component  of  the  cell  wall  of M. tuberculosis . The experiment research method using a complete randomized experimental design with variations in exposure time 24 hours, 48 hours, 72 hours and 96 hours on INH concentration of 0.5 μg/ ml with 6 replications . The results showed influence on each 0.5 μg/ml INH treatment towards the characteristics of M.  tuberculosis ,  at  24  hours  of  exposure was obtained 18.25% percentage growth, the average cel l size was 1.64 x 0.35 μm, the percentage of cell damage was 28.1%. At 48 hours of exposure was obtained 7.9% percentage of cell growth, the average cell size was 1.64 x 0.36 μm, the percentage of cell damage was 41%. At 72 hours of exposure was obtained 7.0% percentage of cell growth,  the  average  cell  size  was  1.64  x  0.32  μm,  the  percentage  of  cell  damage  was  53.4%.  At  96  hours  of exposure was obtained 1.6% percentage of cell growth, the average cell size was 1.61 x 0.29 μm, the percentage of cell damage was 57%. Morphological changes in cells exposed to 0.5 μg/ml INH were wrinkles on the cell surface and  length  shrinkage  occur  after  the  regeneration  of  cells,  the  cells  surface  began  to  become  rough  and  has  little damage,  the  cells  experience  lysis  and  the  half  part  of  it  was  oval,  the  cell’s  shape  changes  into  cocci. The characteristics  of M.  tuberculosis exposed  to  INH  0.5  ug/ml  were  changes  in  cell  morphology,  shorter  and  change form rods into cocci. However, the morphological changes did not endure permanently in the next generation.
Keywords : M. tuberculosis , INH, phenotype.

## Abstrak
INH mempunyai peranan dalam menghambat sintesis asam mikolat yang merupakan komponen pembentuk dinding sel M.  tuberculosis .  Metode  penelitian  eksperimen  dengan  menggunakan  Rancangan  percobaan  acak  Lengkap dengan variasi waktu pemaparan 24 jam, 48 jam, 72 jam dan 96 jam pada konsentrasi INH 0,5 μg/ml dengan jumlah ulangan  6.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ada  pengaruh  pada  masing- masing  perlakuan  INH  0,5  μg/ml  terhadap karakteristik M. tuberculosis, pada pemaparan 24 jam diperoleh persentase pertumbuhan 18,25%,  ukuran rerata sel 1,64  x  0,35  µm, persentase kerusakan  sel  28,1%.  Pada pemaparan  48  jam  diperoleh persentase pertumbuhan sel 7,9%,    ukuran  rerata  sel  1,64  x  0,36  µm,  persentase  kerusakan  sel  41%,  pada  pemaparan  72  jam  diperoleh persentase  pertumbuhan  sel  7,0%,    ukuran  rerata  sel  1,64  x  0,32  µm,  persentase  kerusakan  sel  53,4%,  pada pemaparan  96  jam  diperoleh  persentase  pertumbuhan  sel  1,6%,  ukuran  rerata  sel  1,61  x  0,29  µm,    persentase kerusakan sel 57%. Perubahan morfologi sel yang terpapar INH 0,5 μg/ml pada permukaan sel terjadi kerutan dan penyusutan  panjang  sel  setelah  regenerasi,  permukaan  sel  mulai  kasar  dan  sedikit  ada  kerusakan,  sel  mengalami lisis dan sebagian sel berbentuk oval , sel mengalami perubahan bentuk menjadi kokus. karakteristik M. tuberculosis yang terpapar INH 0,5 µg/ml mengalami perubahan morfologi sel, menjadi lebih pendek dan perubahan bentuk dari batang menjadi kokus, namun perubahan morfologi ini tidak terjadi secara permanen pada generasi berikutnya.

## Kata kunci
: M. tuberculosis , INH, Morfologi.

## Pendahuluan
Perkembangan  resistensi  INH  adalah  awal munculnya  Multi  Drung  Resistant  (MDR)  sebagai hasil  akuisisi  dari  mutasi  gen  untuk  target  obat yang  berbeda,  diperberat  dengan  kasus  Human Immunodeficiency  Virus  HIV  dan  ketidakpatuhan pasien  dalam  pengobatan  (Rattan et  al .,  1998). INH  adalah  obat  yang  memerlukan  aktivasi  oleh katalase  atau  enzim  KatG  peroksidase  yang dikodekan  oleh  gen katG ,  INH  menghambat sintesis  asam  mikolat  melalui  NADH-protein, reduktase  enoil  asil  dikodekan  oleh Inha (Rawat et al .,  2003).  INH  sangat aktif  terhadap  kompleks MTB ( M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum dan M. microti ) dengan konsentrasi hambatan minimal
0,02-0,06  mg/ml    (Youatt,  1969;  Rattan et  al ., 1998).
Resistensi  pada M.  tuberculosis terjadi secara spontan untuk INH dengan frekuensi 1 dari 10 5 -10 6 basil  per  generasi  (Zhang et  al .,  2009). Resistensi M. tuberculosis terhadap obat disebabkan  karena  adanya  mutasi  gen  selain  itu karena  pengaruh  seleksi  strain  yang  resisten selama  proses  terapi  (Kochi et  al .,  1993). M. tuberculosis resisten  secara  alami  terhadap antibiotik  dikaitkan  dengan  struktur  dari  dinding sel yang mengandung mikolat sehingga permeabilitas rendah terhadap beragam antibiotik. Hal  ini  karena  porin  pada M.  tuberculosis tidak mudah  dilalui  zat  terlarut  dalam  konsentrasi
rendah  dan  in  aktivasi  enzim  terhadap  obat (Jarlier dan Nikaido, 1994).
Pada  penelitian  Takayama et  al. (1973) dengan  menggunakan  sampel M.  tuberculosis yang dipaparkan  dengan    INH  0,5  µg/ml  tidak menunjukkan  terjadinya  perubahan  morfologi pada  pemaparan  selama  3  jam,  perubahan morfologi  terjadi  setelah  24  jam  pada  dinding  sel yang diamati dengan mikroskop elektron. Dinding sel bakteri dapat mengalami perubahan struktural dinamis selama terpapar obat, sehingga mengurangi  sifat  resisten  terhadap  asam  yang dapat  berfungsi  sebagai  strategi  adaptif  untuk bertahan  hidup  pada  inang  (Kochi et  al .,  1993). Pada  pengamatan  strain  mutan,  menunjukkan terjadinya  penumpukan  asam  mikolat  lebih  tinggi di  dinding  sel  bila  dibandingkan  dengan  tipe  liar (Lee et al. , 1999)
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  melakukan evaluasi  karakteristik M.  tuberculosis yang terpapar  oleh  INH  dilihat  dari  morfologi  dinding sel,  pengecatan Ziehl  Neelsen, dan jumlah koloni yang  tumbuh  untuk mengetahui  dampak  dari  INH terhadap terjadinya perubahan karakteristik secara fenotip.

## Materi dan Metode
Penelitian  dilaksanakan    Laboratorium Kesehatan  Propinsi  Jawa  Tengah,  Laboratorium Struktur  dan  Perkembangan  Hewan  Universitas Jenderal
Soedirman dan Laboratorium International  Tropical  Marine  and  Earth  Sciences Laboratory (ITMEL) Universitas Jenderal
Soedirman.
Sampel  diperoleh  dari  BKPM  Semarang dengan  kriteria  sampel  sputum  penderita  TB belum  mengalami  pengobatan,  diperoleh  hasil mikroskopis  BTA  dengan  hasil  minimal  +1, dilakukan  kultur  pada  LJ,  dilakukan  DST, identifikasi M.tuberculosis Jenis  penelitian  eksperimental  dengan variasi  waktu  pemaparan  INH  yaitu  24  jam,  48 jam,  72  jam  dan  96  jam  dengan  konsentrasi  INH 0,5  µg/ml    dengan  jumlah  pengulangan  6. Variabel  bebas  lama  paparan  INH  terhadap M. tuberculosis ,  sedangkan  variabel  terikatnaya pertumbuhan koloni M. tuberculosis , morfologi sel dengan pengamatan mikroskopis dan SEM. Kultur M.tuberculosis pada  media  LJ selama 5 minggu kemudian dilakukan pemaparan terhadap INH selama 24 jam, 48 jam, 72 jam dan 96 jam kemudian diisolasi pada media Lowenstein Jensen  selama  5  minggu  dengan  suhu  37 0 C dilakukan  pengamatan  setiap  minggu  dicatat pertumbuhan  koloni  selama  5  minggu.  Dilakukan uji  niacin,  katalase  tahan  panas,  dilakukan pengecatan  dengan  menggunakan  pengecatan Ziehl  Neelsen,  pengecatan  Gram  diamati  dengan mikroskop  multimedia  Nikon  1000  ,  processing sampel M.  tuberculosis untuk  pengamatan dengan mikroskop Elektron Hitachi 3000 X.

## Hasil dan Pembahasan
Sampel  dahak  yang  diperoleh  dari  Balai Kesehatan  Paru  Masyarakat  Semarang  (BKPM Semarang),  dilakukan  uji  langsung  dengan melakukan pembuatan preparat sedian, kemudian dilakukan pengecatan Ziehl Neelsen (ZN), proses kultur  dilakukan  dengan  dekontaminasi  NaOH, kemudian  ditanam  pada  media  Lowenstein Jensen  (LJ)  selama  5  minggu,  pengamatan  pada setiap minggu, setelah tumbuh kemudian dilakukan  uji  asam  P  nitrobenzoat  (PNB),  niacin dan  katalase  panas  untuk  menentukan  subtipe bakteri.  Pemeriksaan  sampel    A,  B,  C  dan  D dengan  hasil  kultur  3  +,  niacin  positif,    katalase panas  negatif,  PNB  hasil    negatif,  hal  ini menujukkan  bahwa  bakteri  tersebut  termasuk subtipe M.  tuberculosis ,  selanjutnya  dilakukan  uji DST  INH  0,2  µg/ml,  hasil  yang  diperoleh  dari sampel  A,  B,  C  dan  D  semua  bakteri M. tuberculosis sensitif terhadap INH 0,2 µg/ml.
M.  tuberculosis diinkubasi  pada  suhu  37 0 C selama 5 minggu, adapun yang belum menunjukkan  pertumbuhan  diinkubasi  kembali sampai 8 minggu, apa bila tidak ada pertumbuhan dilaporkan  sebagai  hasil  negatif.  Pada  beberapa sampel terdapat perubahan warna dari biru muda menjadi hijau tua.
Pertumbuhan M. tuberculosis
Pada
penelitian
ini
pengamatan pertumbuhan dilakukan dengan melakukan inokulasi  kembali  pada  media  LJ  selama  5 minggu, dilakukan pemeriksaan dengan mikroskop elektron terhadap bakteri  yang tumbuh pada media LJ. Pada penelitian pengamatan hasil setelah  terpapar  INH  0,5  µg/ml  melalui  inokulasi terlebih  dahulu,  sedangkan  penelitian  Takayama et  al. (1973)  pengamatan  dilakukan  secara langsung  setelah  dilakukan  pemaparan  dengan INH.
Gambar  1 Pertumbuhan M. tuberculosis yang terpapar  INH 0,5 µg/ml
Pada  pengamatan  pertumbuhan  koloni yang  tidak  terpapar  INH  sudah  muncul  koloni bakteri pada 2 minggu inkubasi,  sedangkan pada
sampel yang dipaparkan dengan INH baru muncul koloni  bakteri  pada  3  minggu  dengan  suhu inkubasi  37 0 C  suasana  aerobe.  Pemaparan selama  24  jam  koloni  bakteri  tumbuh  sebanyak 113  koloni,  pemaparan  48  jam  koloni  bakteri tumbuh  sebanyak  43  koloni,  pemaparan  selama 72  jam  koloni  bakteri  sebanyak  37  koloni, pemaparan selama 96 jam koloni bakteri 8 koloni.
Ukuran M. tuberculosis
Pertumbuhan M.  tuberculosis bervariasi  dalam ukuran  dan  bentuk  dari  cocco  basil  ke  batang panjang,  dengan  ukuran  sel  pada  strain  H37 subkultur  di  Columbia  University  bervariasi  dari 4,3x0,4  µm  dan  1,0x0,2  µm  (Velayati  dan  Farnia, 2012). M.  tuberculosis menjadi  lebih  pendek dalam  kultur  yang  lebih  tua  dan  bulat  telur  saat kondisi kekurangan nutrisi (Shleeva et al ., 2011).

## Gambar 2    Ukuran  rerata  panjang  dan  lebar
Mycobacterium  tuberculosis dengan menggunakan  mikroskop  trinokuler Nikon  (Kultur  5  minggu  pada  media LJ
Hasil  pengukuran  rerata  panjang  dan  lebar M.  tuberculosis pada  sampel  dahak  dengan panjang  2,92  x  0,34  µm  setelah  dilakukan  kultur pada media LJ (sampel TO) ukuran menjadi 1,84 x  0,38  µm  ini  dikarenakan  pada  saat  pembuatan preparat inkubasi pada media LJ hanya 5 minggu kemudia dilakukan paparan dengan INH konsentrasi  0,5  µg/ml  sesuai  dengan  perlakuan kemudian  diinkubasi  pada  media  LJ  selama  5 minggu.
Diperoleh hasil pengukuran M. tuberculosis pada  pemaparan  INH  selama  24  jam  dengan ukuran rerata 1,64 x 0,35 µm, lama pemaparan 48 jam  ukuran  rerata  1,64  x  0,36  µm,  lama pemaparan 72 jam rerata ukuran 1,64 x 0,32 µm, lama pemaparan 96 jam rerata ukuran 1,61 x 0,29 µm.  INH  mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri M. tuberculosis Pemberian  INH  secara in  vitro sebanyak 0,5 µg/ml akan mempengaruhi biosintesis asam mikolat lama paparan berkorelasi  dengan  kerusakan  sel  pada M. tuberculosis dan ukuran panjang bakteri (Takayama et al ., 1973).
Tabel 1: Persentase kerusakan M.tuberculosis terpapar INH 0,5 µg/ml
Sampel persentase Normal % persentase abnormal % 24 jam 71.09.00 28.01.00 48 jam 59.00.00 41.00.00 72 jam 46.06.00 53.04.00 96 jam 43.00.00 57.00.00
M.tuberculosis (H37Rv)  sebagai  kontrol negatif,  He  sebagai  kontrol  positif    dan  strain kultur M.  tuberculosis yang  semuanya  memiliki bentuk 100 % normal, sedangkan pada pemaparan  INH  selama    24  jam  menyebabkan 71,9  %    normal  dan    28,1  %  abnormal, pemaparan  INH  selama  48  jam  menyebabkan 59,0 % normal dan 41,0 % abnormal, pemaparan INH selama 72  jam menyebabkan 46,0 % normal dan 53,4  % abnormal, pemaparan INH selama 96 jam  menyebabkan  43,0  %  normal  dan  57,0    % abnormal pengamatan dilakukan dengan mikroskop multimedia Nikon 1000 dengan kriteria sel  normal  berbentuk  batang  ,  ukuran  normal, sedangkan      kriteria    sel    abnormal  kerusakan pada  dinding  sel,  penyerapan  warna  tidak maksimal  (berwarna  pucat),  bentuk  bengkok  dan menyerupai kokus.
Morfologi M. tuberculosis
M.  tuberculosis yang  diamati  dengan  SEM mengalami  dua  fitur  yang  berbeda,  pertama  sel mengalami  retakan  atau  gerakan post  fission gerakan  yang  dikarenakan  dinding  sel  berlapis – lapis  dimana  lapisan  dalam  membentuk  septum sedangkan  lapisan  luar  pecah  di  satu  sisi,  fitur kedua terkait dengan pembelahan sel membentuk struktur percabangan sementara (Dahl, 2004).
Gambar 3.A) bakteri berbentuk normal tidak ada  yang  mengalami  kerusakan  dinding  sel, gambar  3.B)  pada  kontrol  negatif  H37RV  yang telah  disubkultur  sebelumnya  memiliki  bentuk yang  normal  dengan  membentuk  diplo  basil  dan bergerombol, gambar 3.C) pada kontrol positif HE bentuk  normal  seragam  dengan  persebaran merata  tidak  banyak  yang  membentuk  fragmen, gambar  3.D)  pada  paparan  24  jam  bentuk morfologi  mulai  ada  perubahan  salah  satunya perubahan  ukuran,  adanya  kerutan  pada  sel, gambar 3.E) paparan 48 jam banyak dijumpai sel yang  rusak  pada  permukaan  dinding  sel,  adanya sel yang pucat akibat tidak mampu mempertahankan warna merah saat de colorisasi dengan asam, gambar 3.F) pada paparan 72 jam banyak  sel  yang  pucat  dan  terdapat  sel  dengan
bentuk  oval,  gambar  3.G)  pada  paparan  96  jam M.tuberculosis berbentuk  kokus  dengan  sifat resisten  terhadap  INH,  gambar  3.H)  generasi  ke dua  dari  paparan  96  jam  perubahan  morfologi
yang  awalnya  banyak  dijumpai  bentuk  kokus  dan mulai ber agam bentuk sel dengan mempertahankan  warna  merah  lebih  kuat.
Gambar 3.   Morfologi M.  tuberculosis pengecatan  Ziehl  Neelsen  ,  (pengamatan  perbesaran  1000  X mikroskop  trinokuler  a)  Tanpa  terpapar  obat,  b)  sebagai  kontrol  Strain M.  tuberculosis (H37Rv)  ,  c)  Kontrol  Resistensi  INH  dan  Entabuntol  (HE),  d)  terpapar  INH  24  jam,  e) terpapar  INH  48  jam,  f)  terpapar  INH  72  jam,  g)  terpapar  INH  96  jam,  h)  Resistensi  dari proses pemaparan.
Gambar  4.   Morfologi M. tuberculosis (scanning microscope elektron perbesaran 10.000 X) A. tanpa ada perlakuan,  B.  Kontrol  negative  merupakan M.  tuberculosis Strain  H37Rv  tanpa  ada perlakuan  Obat  INH  ,  C.  Kontrol  positif  merupakan M.  tuberculosis yang  telah  terhadap resistensi  INH  dan  Entambutol  (HE),  pemaparan  Isoniazid  0,5  µg/ml  pada  D.  Terpapar  24 jam , E terpapar 48 jam, F. Terpapar 72 jam, G. Terpapar 96 jam
Gambar  4.  A)  menujukkan  sel  yang  belum mengalami  paparan  INH  dengan  bentuk  batang, gambar  4.B)  menunjukkan  kontrol  negatif  dari H37RV  dengan  bentuk  sel  normal  tidak  ada kerusakan  pada  permukaan  sel,  gambar  4.C) kontrol  Positif  HE  dengan  hasil  pengamatan bentuk  sel  normal  banyak  dijumpai  sel  dengan ukuran  kecil.  Gambar  4.D)  waktu  paparan  INH selama    24  jam  terlihat  adanya  sedikit  kerutan pada  dinding  sel  yang  diperlihatkan  dengan  anak panah  warna  merah,  gambar  4.E)  waktu paparan 48  jam  dijumpai  sel  dengan  bentuk  bulat  dan menggerombol  bentuk  sel  tak  beraturan,  gambar
4.F) waktu paparan 72 jam ditemukan sel dengan bentuk  ujung  bercabang  seperti  huruf  Y,  bentuk sel  beragam  didominasi  bentuk  batang,  gambar 4.G)  waktu  paparan  96  jam  dijumpai  sel  pada bagian  ujung  membentuk  bulat  dan  sel  dengan bentuk  bulat  mendominasi.  Hasil  pengamatan bentuk  sel  beragam  ada  yang  mengalami percabangan  pada  bagian  ujung  sel,  ada  yang mengalami  pematahan  pada  salah  satu  sisi  sel, bentuk  sel  ada  yang  membengkok  ke  kanan maupun  ke  kiri,  banyak  dijumpai  ukuran  dibawah normal.  Pada paparan selama 96 jam persentase kerusakan  mencapai  57  %  dengan  dominasi
bentuk  sel  yang  menyerupai  kokus  berantai, kerusakan  dapat  terlihat  jelas  pada  pengamatan SEM  dengan  adanya  patahan  pada  bagian  sel, dijumpai  serpihan  sel  yang  mengalami  lisis,  pada pengecatan ZN terdapat perubahan bentuk sel ke arah kokus tiap sel terdiri dari 2 sampai 3 sel. lama  papran  terhadap  bentuk  dinding  sel M.  tuberculosis setelah  24  jam  dipaparkan menunjukan  gambaran  morfologi  mulai  beragam dengan  urutan  perubahan  morfologi  sebagai berikut  :  1.  Terjadi  kerutan  pada  permukaan  sel penyusutan  panjang  setelah  regenerasi,  2. Permukaan  sel  mulai  kasar  dan  sedikit  ada kerusakan,  3.  Sitoplasma  mulai  dikeluarkan  dari sel,  4.  Sel  mengalami  perubahan  bentuk  dari batang menjadi kokus.
Selubung  pada M.  tuberculosis memiliki tiga  komponen  penyusun  yaitu    struktur  plasma membran, dinding dan kapsul. Pelasma membran memainkan  peran  dalam  proses  patologis, dinding  menyerupai  dinding  gram  positif  tetapi memiliki  lapisan  lipid  ester  mikolat  yang  semua komponennya  mempunyai  peran  penting  dalam fisiologi  dan  patogenesitas  (Daffe  dan  Draper, 1997).
Hilangnya  L,D  transpeptidase  1  dan  2  dari M.  tuberculosis (LdtMt  dan  LdtMt2  )  mampu merubah  morfologi  permukaan  sel,  bentuk, ukuran,  matrik  seluler,  pengaturan  beberapa protein  dengan  berat  molekul  rendah  yang ditujukan ke membran atau keluar sel, mempengaruhi pertumbuhan, virulensi dan ketahan M. tuberculosis untuk amoxicillin clavulanate dan vancomycin (Schoonmaker et al ., 2014). Mekanisme penetrasi molekul kecil kedalam  sel M.  tuberculosis melalui  selubung  sel yang terdiri membran plasma, dinding  dan kapsul secara  struktural  berbeda  dari  Gram  positif  dan Gram  negatif,  seluruh  selubung  sel  mycobacteria dapat  dipecah  menjadi  dua  komponen  utama yaitu  struktur  membran  sel  dan  dinding  sel. Dinding sel terdiri dari asam mikolat yang kovalen dengan  kompleks  arabinogalactan,  peptidoglikan. Mycobacteria mampu menghasilkan banyak asam mikolat  dengan  berbagai  ukuran  panjang  dan modifikasi tergantung spesies dan kondisi pertumbuhan  (Daffe  dan  Draper,  1997  ;  Barry et al , 2007) . Pengunaan  fuksin  pada  pewarnaan M. tuberculosis dengan  konsentrasi  0,3  %  akan mengurangi sensitivitas, tetapi penggunaan fuksin diatas  0,3  %  memiliki  sensitivitas  yang  sama hanya  menggunakan  reagen  yang  lebih  banyak (Selvakumar et  al .,  2005).  Morfologi  di M. tuberculosis diklasifikasikan ke dalam dua kategori  sel –  sel  tersebut  sering  terlihat  pada fase  eksponensial  pertumbuhan  yang  batang,  V, Y  atau  bercabang  dan  bila  dalam  kondisi  stress atau  lingkungan  yang  kurang  menguntungkan
berbentuk  bulat,  oval,  atau  bengkok  menyerupai huruf L (Velayati dan Farnia, 2012 ; Dahl, 2004).
M.  tuberculosis selama  pembentukan septum  membran  plasma  dan  dinding  sel  bagian dalam  tumbuh  ke  dalam  lapisan  dinding  sel  luar tetap  utuh.  Setelah  menyelesaikan  pembentukan septum  lapisan  dalam  mungkin  terus  tumbuh memberikan  tekanan  pada  lapisan  luar  dinding sel,  selanjutnya  akan  terbentuk  2  sel  anak  (Dahl, 2004 ; Malhotra et al ., 2010). Cabang pertama kali terlihat  sebagai  tunas  kecil  setelah  tumbuh  akan melepaskan  diri  sebagai  sel  terpisah.  pada penelitian  ini  paparan  selama  96  jam  57  %  sel berbentuk  bulat,  oval  dikarenakan  pengaruh adaptasi  terhadap  INH  0,5  µg/ml  kondisi  ini  akan kembali seperti semula bila faktor yang mempengaruhi telah dihilangkan.

## Simpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  karakteristik M.  tuberculosis yang  terpapar  INH  0,5  µg/ml diperoleh  kesimpulan  :  (1).  Terjadi  penurunan jumlah sel dan pertumbuhan koloni sel yang tanpa paparan  INH  muncul  pada  2  minggu  inkubasi, sedangkan  pada  sel  yang  terpapar  INH  muncul koloni  pada  3  minggu  inkubasi  pada  suhu  37 0 C suasana  aerobe,  dan  (2).  Terjadi  kerutan  pada permukaan  sel,  penyusutan  panjang  sel    setelah regenerasi,  Permukaan  sel  mulai  kasar  dan sedikit ada kerusakan, sitoplasma mulai dikeluarkan  dari  sel,  sel  mengalami  perubahan bentuk dari batang menjadi kokus.

## Daftar Referensi
Dahl, J. L. 2004. Electron microscopey analysis of Mycobacterium  tuberculosis  cell  division. FEMS Microbiology Letters. 240 (1) : 15-20.
Jarlier,  V.,  and    Nikaido,  H.  1994.  Mycobacterial cell  wall:  structure  and  role  in  natural resistence  to  antibiotics. FEMS  Microbiology Letters. 123(1-2), 11-18.
Kochi,  A.,  Vareldzis,  B.,  and  Styblo,  K.  1993. Multidrug-resisten tuberculosis and its control. Research  in  Microbiology. 144(2): 104-110.
Larrouy-Maumus,  G.,  Marino,  L.  B.,  Madduri,  A. V.,  Ragan,  T.  J.,  Hunt,  D.  M.,  Bassano,  L., Gutierrez,  M.G.,  Moody,  D.B.,  Pavan,  F.  R., and  de  Carvalho,  L.  P.  S.  2016.  Cell- Envelope  Remodeling  as  a  Determinant  of Phenotypic Antibacterial Tolerance in Mycobacterium  tuberculosis.  ACS  Infectious Diseases. 2(5): 352-360.
Lee, A. S., Lim, I. H., Tang, L. L., Telenti, A., and Wong,  S.  Y.  1999.  Contribution  of  kasA Analysis  to  Detection  of  isoniazid-Resisten
Mycobacterium tuberculosis in Singapore. Antimicrobial Agents and
Chemotherapy. 43(8): 2087-2089.
Malhotra,  D.,  Portales-Casamar,  E.,  Singh,  A.,
Srivastava, S., Arenillas, D., Happel, C., .and Biswal,  S.  2010.  Global  mapping  of  binding sites  for  Nrf2  identifies  novel  targets  in  cell survival response through  ChIP-Seq profiling and network analysis. Nucleic Acids Research. 38(17): 5718-5734.
Ramaswamy,  S.  V.,  Reich,  R.,  Dou,  S.  J., Jasperse, L., Pan, X., Wanger, A., Quitugua, T.,  and  Graviss,A,  2003.  Single  nucleotide polymorphisms  in  genes  associated  with isoniazid resistence in Mycobacterium tuberculosis. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 47 : 1241-1250.
Rattan,  A.,  Kalia,  A.,  and  Ahmad,  N.  1998.
Multidrug - resisten Mycobacterium tuberculosis : molecular perspectives
Emerging  Infectious  Diseases. 4(2)  :  195 – 209.
Rawat, R., Whitty, A., and Tonge, P. J. 2003. The isoniazid-NAD  adduct  is  a  slow,  tight-binding inhibitor of InhA, the Mycobacterium tuberculosis  enoyl  reductase:  adduct  affinity and  drug  resistence.  Proceedings  of  the National  Academy  of  Sciences.  100(24): 13881-13886.
Schoonmaker,  M.  K.,  Bishai,  W.  R.,  and Lamichhane, G.
2014. Nonclassical transpeptidases of Mycobacterium tuberculosis  alter  cell  size,  morphology,  the cytosolic matrix, protein localization, virulence, and  resistence  to  β-lactams. Journal of Bacteriology. 196(7): 1394-1402.
Selvakumar,  N.,  Gomathi Sekar,  M.,  Rahman,  F.,
Syamsunder,  A.,  Duraipandian,  M.,  Wares, F.,  and  Narayanan,  P.  R.  2005.  Comparison of variants of carbol-fuchsin solution in Ziehl- Neelsen  for  detection  of  acid-fast  bacilli [Technical Note]. The International Journal of
Tuberculosis  and  Lung  Disease.  9(2):  226- 229.
Shleeva,  M.O.,  Kudykina,  Y.K.,  Vostroknutova, G.N.,  Suzina,  N.  E.,  Mulyukin,  A.  L.,  and Kaprelyants, A. S. 2011. Dormant ovoid cells of  Mycobacterium  tuberculosis  are  formed  in response  to  gradual  external  acidification. Tuberculosis. 91 (2): 146 – 154.
Takayama,  K.,  Wang,  L.,  and  David,  H.  L.  1973. Effect of isoniazid on the in vivo mycolic acid synthesis,  cell  growth,  and  viability  of Mycobacterium tuberculosis. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2(1): 29-35.
Thanky,  N.  R.,  Young,  D.  B.,  and    Robertson,  B.
D. 2007. Unusual features of the cell cycle in mycobacteria: polar-restricted growth and the snapping-model of cell division. Tuberculosis. 87(3): 231-236. Velayati,  A.A.,  and  Farnia,P.  2012.  Morphological Characterization of
mycobacterium tuberculosis. INTECH Open Access
Publisher.
http://www.interchopen.com/books/understan ding-tuberculosis              diakses  10  Agustus 2016.
Youatt,  J.  1969.  A  Review  of  the  Action  of isoniazid  1. American  Review  of  Respiratory Disease. 99(5): 729-749.
Zhang,  Y.,  Garbe,  T.,  and  Young,  D.  1993. Transformation with Kat G restores isoniazid ‐ sensitivity  in  Mycobacterium  tuberculosis isolates  resisten  to  a  range  of  drug concentrations. Molecular  Microbiology. 8(3): 521-524.
Zhang, Y., and  Yew, W. W. 2009. Mechanisms of drug resistence in Mycobacterium tuberculosis  [State  of  the  art  series.  Drug- resisten  tuberculosis.  Edited  by  CY.  Chiang. Number  1  in  the  series]. The  International
Journal of Tuberculosis and Lung Disease. 13(11): 1320-1330
.