## IDENTIFIKASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI PADA REAKTOR WETLAND

## IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION OF BACTERIA FOUND IN WETLAND REACTOR
1* Karina Patria Soedjatmiko dan 2 Herto Dwi Ariesyady
1,2 Program Studi Teknik Lingkungan Fakultas Teknik Sipil dan Lingkungan, Institut Teknologi Bandung Jl Ganesha 10 Bandung 40132
*1 karina.soedjatmiko@gmail.com dan 2 herto@ftsl.itb.ac.id
Abstrak: Salah  satu  unsur  dalam  pengolahan  air  limbah  menggunakan  reaktor  constructed  wetland adalah  degradasi  polutan  oleh  mikroorganisme  yang  terdapat  pada  tanah.  Mikroorganisme membutuhkan nutrient berupa zat organik untuk proses metabolisme, sehingga dapat memanfaatkan zat- zat organik yang terdapat dalam air limbah. Studi ini dilakukan untuk mengidentifikasi dan mengetahui karakteristik bakteri yang ditemukan pada reactor wetland tersebut dan menganalisis sifat bakteri berupa kurva  tumbuh.  Bakteri  diisolasi  dari  tanah  pada  reaktor,  kemudian  diidentifikasi  menggunakan  API  20 NE  dan  dan  diukur  kurva  tumbuhnya  menggunakan  metode  tidak  langsung.  yaitu  dengan spektrofotometri  hingga  tercapai  fase  stasiuner,  kemudian  diinokulasi  ke  dalam  air  limbah  domestik untuk  mengukur  kemampuan  bakteri  untuk  hidup  dalam  air  limbah.  Dari  kesembilan  bakteri  yang diisolasi, seluruhnya bersifat Gram negatif dan berbentuk batang atau batang pendek. Identifikasi bakteri menunjukkan  bahwa  bakteri  berasal  dari  genus  Aeromonas,  Pseudomonas,  Empedobacter,  Moraxella, Vibrio, Ralstonia, dan Brevundimonas. Kurva tumbuh untuk masing-masing bakteri menunjukkan bahwa pada  bakteri  Aeromonas  hydrophilia  tidak  didapat  fase  lag  atau  fase  lag  kurang  dari  satu  jam. Sedangkan  dalam  perhitungan  laju  pertumbuhan  eksponensial  (K),  mean  doubling  time  (g),  dan konstanta  laju  pertumbuhan  spesifik  (µ),  didapat  bahwa  bakteri  ini  juga  memiliki  nilai  g  yang  paling kecil.  Bakteri  yang  diinokulasi  ke  dalam  air  limbah  menunjukkan  bahwa  seluruh  bakteri  dapat menyisihkan  COD,  dengan  penurunan  COD  terbesar  oleh  Moraxella  dan  terkecil  oleh  Pseudomonas luteola.
Kata kunci : wetland, bakteri, API 20 NE,  kurva tumbuh, air limbah domestik
Abstract : One element in treating wastewater using a constructed wetland reactor is the degradation of pollutants  by  microorganisms  found  in  soil.  Microorganisms  require  various  organic  substrates  to  fuel metabolic processes, which can utilize organic substances found in wastewater. This study is conducted to  identify  and  characterize  the  bacteria  found  in  the  wetland  reactor  and  to  analyze  the  bacteria characteristics  by  mapping  a  growth  chart  for  each  of  the  bacteria.  The  bacteria  is  isolated  from  the reactor and identified using API 20 NE, and the growth curve is measured using spectrophotometry up to a stationary phase. The bacteria is then inoculated into domestic wastewater to measure the ability of the bacteria to live in wastewater. All nine bacteria that were isolated were Gram negative and were rods or short  rods.  Identification  of  the  bacteria  showed  that  the  bacteria  were  from  the  genus  Aeromonas, Pseudomonas,  Empedobacter,  Moraxella,  Vibrio,  Ralstonia,  and  Brevundimonas.  The  growth  curve showed  that  the  bacteria  Aeromonas  hydrophilia  did  not  experience  a  lag  phase  or  the  lag  phase  was very short. This bacteria also had the shortest mean doubling time (g). Wastewater samples which were inoculated  with  bacteria  showed  a  decrease  of  COD  in  all  samples,  with  the  largest  decrease  by  the bacteria Moraxella and the lowest by Pseudomonas luteola.
Key words : wetland, bacteria, API 20 NE, growth curve, domestic wastewater

## PENDAHULUAN
Constructed  wetland atau  lahan  basah  buatan  merupakan  salah  satu  cara  untuk  mengolah  air limbah,  baik  air  limbah  domestik  maupun  industri,  terutama  untuk  mengurangi  beban  polutan organik  yang  terdapat  dalam  air  limbah.  Metode  pengolahan  air  limbah  dengan wetland termasuk  salah  satu  metode  yang  hemat  biaya  dengan  operasional  yang  minimum,  dengan merancang  keadaan  yang  menyerupai  lahan  basah  di  alam  yang  memanfaatkan  proses  alami yang  terjadi  antara  vegetasi,  mikroba,  dan  substrat. Wetland biasanya  ditandai  dengan  adanya air  di  permukaan  atau  dekat  permukaan  tanah,  dengan  aliran  yang  sangat  lambat.  Aliran  yang lambat ini memungkinkan pengendapan sedimen dalam air saat air mengalir melewati wetland (Davis, 2011).
Selain proses sedimentasi, ada beberapa proses yang berperan dalam penurunan jumlah polutan dalam air, yaitu absorpsi oleh tanaman, adsorpsi, filtrasi, volatisasi, dan degradasi oleh mikroorganisme.  Umumnya  mikroorganisme  ini  tumbuh  melekat  pada  akar  tanaman  dan menguraikan zat-zat organik yang terdapat dalam air sebagai sumber untuk proses metabolisme. Beberapa  genus  bakteri  yang  sering  ditemukan  dan  berperan  terutama  dalam  penguraian  zat organik adalah Pseudomonas, Flavobacterium, Archromobacter, dan Alcaligenes (Jorgensen et al .,  2005),  dan  bakteri  lain  seperti Acinetobacter,  Arthrobacter,  Bacillus,  Micrococcus, dan Serratia (Udotong et  al .,  2008).  Bakteri  berperan  dalam  banyak  proses  degradasi  polutan, misalnya  proses  anaerob  seperti  denitrifikasi,  metanogenesis,  dan  reduksi  sulfat  (Balasooriya, 2008), dan proses aerob seperti fiksasi nitrogen dan degradasi zat organik menjadi hasil samping atau by-product metabolisme  dan  zat  kimia  dalam  air,  sehingga  menambah  ketersediaan senyawa nitrat, sulfat, fosfat, dan logam-logam esensial (Chaudhuri dan Thakur, 2006).
Dalam  penelitian  ini,  bakteri  yang  terdapat  dalam  tanah  pada wetland akan diidentifikasi  dan  dianalisis.  Bakteri  pada wetland atau  pada tanah  biasanya  sangat  sulit  untuk diidentifikasi  secara  menyeluruh,  terutama  dalam  kondisi  laboratorium,  karena  dari  seluruh bakteri  yang  terdapat  pada  tanah,  96%  hingga  99%  dari  bakteri  tersebut  tidak  akan  tumbuh dalam  kondisi  laboratorium,  sehingga  gambaran  mengenai  bakteri  yang  terdapat  pada  tanah, khususnya wetland ,  sangat  terbatas.  Kebanyakan  spesies  bakteri  yang  terdapat  di  alam  belum pernah  diidentifikasi,  dan  hal  ini  hanya  akan  dapat  dilakukan  jika  ditemukan  teknologi  baru (Chaudhuri dan Thakur, 2006).
Reaktor  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  menggunakan  sistem sub-surface  flow dengan menggunakan tanaman Typha latifolia sebagai media tanaman. Air yang diolah berasal dari IPAL Bojongsoang.

## METODOLOGI
Metodologi yang digunakan dalam penelitian ini ditunjukkan dalam Gambar 1.

## Gambar 1 Metodologi penelitian
Sample  tanah  diambil  dari  reaktor wetland dan  bakteri  yang  terdapat  di  sampel  tanah tersebut  diisolasi  dengan  cara total  plate  count (TPC).  Sampel  tanah  diencerkan  dengan  air destilasi  steril  hingga  derajat  10 -7 .  Isolasi  kemudian  dilakukan  dengan  menginokulasi  hasil pengenceran  pada  media  agar  nutrisi  (Oxoid)  secara pour  plate dengan  tujuan  koloni  bakteri akan tumbuh terpisah sehingga lebih mudah untuk diamati dan dimurnikan.
Setelah bakteri diisolasi, selanjutnya bakteri dimurnikan dengan cara mengambil koloni bakteri  dengan  morfologi  yang  berbeda-beda  dengan  jarum  inokulasi  yang  steril,  kemudian koloni  tersebut  diinokulasi  pada  agar  nutrisi  dengan  cara streak. Pola streak berupa four-way streak yang  bertujuan  agar  koloni  bakteri  dari streak akan  terpisah-pisah.  Koloni  yang  sudah dibiakkan pada media kemudian diberi pewarnaan Gram dan diamati di bawah mikroskop untuk diketahui  sifat  Gram  dan  mengamati  jika  koloni  bakteri  yang  dibiakkan  sudah  murni.  Koloni yang sudah murni dibiakkan kembali pada agar nutrisi miring.
Identifikasi bakteri yang sudah murni dilakukan dengan menggunakan API 20 NE yang khusus untuk bakteri yang bersifat Gram negatif, karena sampel bakteri yang didapat seluruhnya bersifat  Gram  negatif.  API  20  NE  merupakan  produk  buatan  Biomerieux  yang  menggunakan serangkaian  uji  biokimia  untuk  mengidentifikasi bakteri.  Hasil dari  uji  biokimia  dapat  diamati

## Isolasi bakteri
1. Total plate count (TPC) tanah wetland
2. Pengambilan koloni bakteri dari hasil TPC
Pemurnian bakteri
1. Pembiakkan bakteri pada media agar nutrisi 2. Pengamatan bakteri dengan pewarnaan Gram

## Uji pertumbuhan
1. Pengukuran korelasi antara absorbansi media tumbuh dengan jumlah bakteri 2. Pengukuran absorbansi untuk menggambarkan kurva tumbuh

## Analisis data
1. Penghitungan konstanta G, k, dan µ
2. Penghitungan penurunan COD oleh bakteri
3. Perbandingan hasil percobaan dengan literatur

## Identifikasi bakteri
1. Inokulasi kultur bakteri pada API 20 NE
2. Pencocokan hasil inokulasi dengan database

## Uji konfirmasi
1. Inokulasi bakteri pada kaldu nutrisi
2. Inokulasi kultur bakteri pada air limbah domestik dan pengukuran COD
secara  visual  dengan  pengamatan  perubahan  warna  pada  media,  dan  hasil  uji  biokimia kemudian dicocokkan dengan database bakteri untuk memperoleh spesies bakteri tersebut.
Pembuatan  kurva  tumbuh  dilakukan  dengan  metode  tidak  langsung,  yaitu  dengan pengukuran  dengan  spektrofotometer.  Kurva  standar  untuk  tiap  bakteri  dibuat  dahulu  agar diketahui  korelasi  antara  jumlah  bakteri  dengan  absorbansi  media  tumbuh,  dengan  cara membiakkan  bakteri  pada  media  tumbuh  dan  mengukur  absorbansi  media  dan  jumlah  bakteri dengan  cara  TPC  dengan  konsentrasi  bakteri  yang  berbeda-beda.  Selanjutnya,  media  tumbuh berupa  kaldu  nutrisi  (Oxoid)  diinokulasi  dengan  5%  v/v  bakteri  dan  diukur  absorbansinya hingga dapat diamati fase log dari tiap bakteri.
Dari  kurva  tumbuh  yang  dibuat,  maka  dapat  dihitung  nilai  laju  pertumbuhan eksponensial  (K), mean  doubling  time (g),  dan  konstanta  laju  pertumbuhan  spesifik  (µ). Perhitungan dilakukan dari pengamatan fase log dengan menggunakan persamaan (1), (2), dan (3) (Sterritt dan Lester, 1988):
Bakteri  yang  sudah  dimurnikan  pun  diinokulasi  ke  dalam  air  limbah  domestik,  untuk mengetahui  kemampuan  bakteri  untuk  bertahan  hidup  dalam  air  limbah  domestik  dan kemampuan  untuk  mendegradasi  polutan  di  dalam  air  tersebut,  yang  diketahui  melalui pengukuran  COD  ( Chemical  Oxygen  Demand )  pada  sampel  air  dengan  jangka  waktu  3  dan  7 hari setelah inokulasi ke dalam air limbah.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi  bakteri  dilakukan  tiga  kali,  yaitu  pada  awal running reaktor,  pada  awal perubahan debit air  yang  memasuki  reaktor,  dan  di akhir running. Dari  masing-masing  isolasi bakteri  diambil  tiga  koloni  bakteri  yang  tampak  memiliki  morfologi  yang  berbeda-beda. Masing-masing bakteri yang belum diidentifikasi diberi nama B1 hingga B9. Hasil pengamatan bakteri secara visual dan dengan mikroskop ditunjukkan dalam Tabel 1.
Tabel 1 Hasil pengamatan kultur bakteri murni Sampel bakteri  Gram Bentuk Pigmen B1 Negatif  Batang Tidak berpigmen B2 Negatif  Batang Kuning B3 Negatif  Batang pendek  Tidak berpigmen B4 Negatif  Batang pendek  Tidak berpigmen B5 Negatif  Batang Tidak berpigmen B6 Negatif  Batang pendek  Kuning B7 Negatif  Batang pendek  Tidak berpigmen B8 Negatif  Batang Tidak berpigmen B9 Negatif  Batang Kuning
Pengamatan bakteri dengan mikroskop dapat dilihat pada Gambar 2.
(1) (2)
(3)
(a) (b) (c) (d) (e) (f) (g) (h) (i) Gambar 2 Pengamatan bakteri (a) B1; (b) B2; (c) B3; (d) B4; (e) B5; (f) B6; (g) B7; (h) B8; (i)
B9
Bakteri  yang  sudah  diisolasi  seluruhnya  bersifat  Gram  negatif,  sehingga  digunakan peralatan  API  20  NE  (Biomerieux)  untuk  mengidentifikasi  bakteri  tersebut.  API  20  NE digunakan  untuk  mengidentifikasi  bakteri  dengan  cara  uji  biokimia.  Hasil  dari  uji  biokimia tersebut dapat diamati secara visual dan kemudian dimasukkan ke dalam program Apiweb untuk dicocokkan  dengan  database  bakteri  yang  ada  untuk  mengetahui  spesies  bakteri  tersebut. Tingkat  kecocokan  sampel  bakteri  dengan  bakteri  yang  terdapat  dalam  database  program dianggap valid jika tingkat kecocokan mencapai 80% atau lebih. Ketidakcocokan hasil API 20 NE dapat terjadi karena setiap uji biokimia memiliki persentase kemungkinan untuk positif atau negatif dan tidak memiliki kepastian hasil 100%. Contoh API 20 NE yang sudah memiliki hasil dapat dilihat pada Gambar 3.
Hasil  API  20  NE  yang  sudah  diinokulasi  dan  diinkubasi  direkam  dan  dimasukkan  ke dalam program Apiweb. Hasil spesies bakteri yang diidentifikasi dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 Nama spesies sampel bakteri Sampel bakteri  Nama spesies B1 Stenotrophomonas maltophilia B2 Empedobacter brevis B3 Aeromonas hydrophila B4 Pseudomonas luteola B5 Moraxella sp. B6 Vibrio alginolyticus B7 Aeromonas hydrophila B8 Ralstonia pickettii B9 Brevundimonas vesicularis
Spesies-spesies bakteri yang telah ditemukan kebanyakan ditemukan pada air atau tanah yang  terkontaminasi,  sehingga  cocok  dengan  kondisi  di  mana  bakteri  diisolasi. Stenotrophomonas maltophilia merupakan bakteri yang sering ditemukan pada rhizosphere atau di  tanah  sekitar  akar  tanaman.  Bakteri  ini  dapat  ditemukan  secara  luas  di  lingkungan  alami (Pages et al ., 2008).
Empedobacter  brevis (sebelumnya  dikenal  sebagai Flavobacterium  breve )  dapat ditemukan  di  lingkungan  tanah,  air,  maupun  pada  tanaman. E.  brevis sering  ditemukan  pada tanah yang lembab, dan sebelumnya ditemukan pada rhizopshere atau lingkungan akar tanaman (Panaiyadiyan dan Chellaia, 2011).
Aeromonas  hydrophila merupakan  bakteri  yang  sering  ditemukan  di  lingkungan perairan,  seperti  danau,  sungai,  air  laut,  efluen  air  limbah  domestik,  dan  air  baku  untuk  air minum (http://www.hc-sc.gc.ca/ewh-semt/pubs/water-eau/pathogens- pathogenes/aeromonas_hydrophila-eng.php).
Pseudomonas  luteola merupakan  bakteri  yang  terdapat  dalam  air  atau  lingkungan lembab dan tidak biasa terdapat pada manusia (http://www.usmicro- solutions.com/referencelibrary/bacteriallibrary.html).
Vibrio alginolyticus sering ditemukan pada air asin atau pada makhluk perairan seperti ikan (Molitoris et al ., 1985). Kehadiran bakteri ini di sampel yang diambil dari reaktor wetland dapat  disebabkan  oleh  kehadiran  ikan  dalam  air  limbah  yang  memasuki  IPAL  Bojongsoang, atau karena air yang berasal dari peternakan ikan turut masuk ke dalam air tersebut.
Ralstonia  pickettii merupakan  bakteri  yang  sering  ditemukan  di  daerah lembab seperti tanah,  sungai,  dan  danau.  Bakteri  ini  mudah  tumbuh  dalam  lingkungan  dengan  kondisi  yang beragam,  dari  lingkungan  dengan  jumlah  nutrien  yang  minimal  (olgiotrofik),  dan  juga  dapat hidup dalam lingkungan dengan pencemaran logam berat yang tinggi (http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Ralstonia_pickettii).
Brevundimonas  vesicularis sering  ditemukan  pada  tanah  yang  lembab  dan  pada  air limbah,  dan  memiliki  kemiripan  dengan Pseudomonas  aeruginosa yang  dapat  hidup  dalam kondisi beragam dengan jumlah nutrien yang sedikit maupun banyak (olgiotrofik).
Kurva  tumbuh  diukur  dengan  cara  tidak  langsung,  yaitu  dengan  spektrofotometri dengan panjang gelombang 610 nm. Kaldu nutrisi yang telah diinokulasi dengan biakan bakteri sebanyak 5% v/v diinkubasi dan diukur absorbansinya setiap jam hingga tercapai fasa log dan stasioner.  Pengukuran pada  penelitian  ini dilakukan  selama  20 jam.  Hasil  kurva  tumbuh  dapat dilihat pada Gambar 4.

## Gambar 4 Kurva tumbuh bakteri
Kurva tumbuh bakteri menunjukkan bahwa waktu lag untuk pertumbuhan bakteri cukup lama, kecuali untuk bakteri B3 dan B7. Ada beberapa hal yang dapat menyebabkan waktu lag yang  lama.  Pertama,  jumlah  bakteri  yang  diinokulasi  ke  dalam  media  pada  awal  perhitungan kurva  tumbuh  hanya  sedikit,  sehingga  membutuhkan  waktu  lama  untuk  mencapai  fase  log. Kedua,  bakteri  yang  diinokulasi  ke  dalam  media  dapat  bersifat  rusak,  sehingga  membutuhkan waktu  lama  untuk  bereproduksi  dan  mencapai  fase  log.  Ketiga,  bakteri  yang  diinokulasi  ke dalam media masih dalam fase beradaptasi dengan media baru, sehingga membutuhkan waktu yang lama untuk terbiasa dengan media tersebut dan mencapai fase log.
B3  dan  B7  yang  tidak  memiliki  fase  lag  dapat  disebabkan  karena  bakteri  yang diinokulasi  ke  dalam  media  masih  dalam  fase  log  atau  dalam  keadaan  baik,  sehingga  tidak membutuhkan banyak waktu untuk bereproduksi. Kemungkinan lain adalah fase lag terjadi pada satu jam pertama, sehingga pada pengukuran kurva tumbuh fase lag tidak teramati. B3 dan B7 kemungkinan jugaakan lebih cepatberadaptasi dengan media lain seperti air limbah, karena fase lag  yang  cepat  dapat  menunjukkan  bahwa  bakteri  ini  membutuhkan  sedikit  waktu  untuk beradaptasi.
Waktu lag yang cepat atau tidak ada dapat bermanfaat jika diinokulasi ke dalam media air limbah. Dengan waktu lag yang cepat, maka waktu yang dibutuhkan untuk menguraikan zat organik dalam air seharusnya menjadi lebih cepat, sehingga bakteri ini akan lebih efisien waktu jika dilihat dari sisi pandang efisiensi pengurangan polutan.
Fasa log dari kurva tumbuh bakteri digunakan untuk menghitung konstanta K, g, dan µ, di mana fasa log tiap bakteri dapat dilihat pada Gambar 5.
J um la h B a k ter i (1 0 6 ) Waktu (jam) B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9

## Gambar 5 Fase log dari kurva tumbuh bakteri
Dari fase log masing-masing bakteri, maka konstanta g dan K untuk setiap bakteri dapat dihitung  menggunakan  rumus  (1),  (2),  dan  (3).  Hasil  perhitungan  konstanta  tersebut  dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3 Konstanta pertumbuhan bakteri Bakteri K (jam -1 ) g (jam) µ (jam -1 ) B1 0,45 2,24 0,31 B2 0,59 1,68 0,41 B3 0,66 1,52 0,46 B4 0,52 1,91 0,36 B5 0,74 1,35 0,51 B6 0,38 2,65 0,26 B7 1,38 0,73 0,95 B8 1,37 0,73 0,95 B9 0,83 1,20 0,58
Dari  data  tersebut,  dapat  dilihat  bahwa  bakteri  B7  juga  memiliki mean  doubling  time yang  paling  cepat. Mean  doubling  time yang  singkat  artinya  bakteri  tersebut  membutuhkan waktu  yang  lebih  sedikit  untuk  bereproduksi,  sehingga  dalam  satu  periode  waktu  bakteri  ini dapat bereproduksi lebih banyak dan memiliki populasi yang lebih besar dibandingkan bakteri lainnya.
Nilai  µ  menunjukkan  laju  pertumbuhan  spesifik  bakteri,  yang  mencerminkan pertumbuhan  bakteri  selama  masih  ada  substrat.  Nilai  ini  berbanding  lurus  dengan  laju pertumbuhan  eksponensial  (K),  di  mana  dianggap  bahwa  selama  masih  ada  substrat,  maka pertumbuhan  log  akan  terus  terjadi  karena  kondisi  masih  optimal  untuk  pertumbuhan  bakteri, dan jumlah bakteri yang mati dapat diimbangi oleh bakteri yang bereproduksi.
Bakteri  yang  sudah  diisolasi  dibiakkan  dalam  kaldu  nutrisi  (Oxoid)  dan  kemudian diinokulasi ke dalam air limbah domestik untuk mengetahui kemampuan bakteri mendegradasi polutan  di  dalam  air.  Sampel  air  limbah  diinkubasi  pada  suhu  ruang  untuk  mengetahui kemampuan degradasi pada suhu ruang. Parameter yang diukur adalah COD (Chemical Oxygen Demand). Hasil pengukuran dapat dilihat pada Tabel 4.
J um la h B a k ter i (1 0 6 ) Waktu (jam) B1 B2 B3 B4
B5
B6 B7 B8 B9
Tabel 4 Pengukuran COD pada air limbah yang diinokulasi Sampel COD (mg/l) Hari ke-0 Hari ke-3 Hari ke-7 B1 311,60 273,05 205,50 B2 311,60 350,17 239,06 B3 311,60 290,78 256,85 B4 311,60 312,06 304,80 B5 311,60 121,21 111,11 B6 311,60 343,43 262,63 B7 311,60 258,86 198,63 B8 311,60 304,96 232,88 B9 311,60 316,50 245,79
Dari  pengukuran  yang  dilakukan,  dapat  dilihat  bahwa  seluruh  bakteri  memiliki kemampuan  tertentu  untuk  mendegradasi  polutan  dalam  air  limbah.  Kemampuan  degradasi yang paling besar ditunjukkan oleh sampel bakteri B5, dan kemampuan paling kecil ditunjukkan oleh B4. Penggambaran perubahan COD dapat dilihat pada Gambar 6.

## Gambar 6 Penurunan COD oleh sampel bakteri
Adanya penurunan nilai COD pada seluruh sampel menunjukkan bahwa seluruh bakteri ini  memiliki  kemampuan  untuk  hidup  dalam  air  limbah  dan  memanfaatkan  senyawa  yang terdapat  dalam  air  untuk  proses  metabolisme.  Besarnya  penurunan  COD  tidak  sebesar penurunan  COD  pada  reaktor wetland secara  keseluruhan,  yang  memiliki  efisiensi  penyisihan COD  total  sebesar  43%  hingga  79%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  bakteri  yang  terdapat  pada tanah wetland bukan  merupakan  satu-satunya  faktor  dalam  penurunan  COD  pada  air  limbah, dan terdapat proses lain yang lebih berpengaruh dalam penyisihan COD, misalnya sedimentasi atau absorpsi dan adsorpsi oleh tanaman.
Kinerja  bakteri  sampel  dalam  menyisihkan  COD  pada  percobaan  ini  tidak memperhitungkan kompetisi dengan bakteri dan mikroorganisme lain yang terdapat pada tanah reaktor.  Pada  kondisi  reaktor  yang  sesungguhnya,  kinerja  bakteri  akan  dipengaruhi  oleh kehadiran  bakteri  dan  mikroorganisme  lain  yang  terdapat  dalam  tanah  sehingga  terdapat
CO D (m g /l) Hari B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9
kompetisi  antar  bakteri,  yang  dapat  menimbulkan  kinerja  bakteri  yang  berbeda  dibandingkan keadaan laboratorium.

## KESIMPULAN
Bakteri  yang  sudah  diisolasi  dari wetland dimurnikan  dan  diamati  untuk  mengetahui sifat  dari  bakteri  tersebut.  Dari  bakteri  yang  sudah  didapat,  seluruh  bakteri  tersebut  bersifat Gram negatif dan berbentuk batang atau batang pendek. Bakteri yang didapat berasal dari genus yang beragam, yaitu Aeromonas, Moraxella, Pseudomonas, Empedobacter, Stenotrophomonas, Ralstonia, Vibrio, dan Brevundimonas. Seluruh bakteri ini dapat ditemukan pada tanah dan/atau lingkungan perairan, sehingga wajar ditemukan pada reaktor wetland pada penelitian ini.
Kurva tumbuh yang dibuat menunjukkan bahwa dua bakteri, B3 dan B7, tidak memiliki waktu  lag  atau  waktu  lag  bakteri  ini  sangat  cepat.  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena  waktu  lag terjadi dalam satu jam pertama, bakteri yang diinokulasi masih dalam keadaan log atau dalam keadaan yang tidak rusak, atau bakteri dapat cepat beradaptasi dengan media.
Dari nilai K, g, dan µ yang didapat, B7 terhitung juga memiliki nilai g ( mean doubling time ) yang paling singkat. Hal ini menunjukkan bahwa B7 dapat bereproduksi dengan cepat di dalam media.
Dari  uji  konfirmasi  dengan  inokulasi  bakteri  pada  air  limbah  domestik,  dapat  dilihat bahwa  bakteri  B5  memiliki  kemampuan  paling  baik  menguraikan  zat  organik  yang  terdapat dalam air. Pada seluruh inokulasi bakteri ditemukan penurunan zat organik, yang menunjukkan bahwa  bakteri  tersebut  dapat  hidup  dengan  baik  dalam  air  yang  serupa  dengan  air  limbah domestik.

## DAFTAR PUSTAKA
Balasooriya,  W.K.,  K.  Denet,  J.  Peters,  N.  E.  C.  Verboest,  dan  P.  Boecks.  2008. Vegetation composition  and  soil  microbial  community  structural  changes  along  a  wetland hydrological gradient. Copernicus Publications: Hydrology and Earth System Science, 12, 277-291, 2008.
Chaudhuri,  S.  Ray  dan  A.  R.  Thakur.  2006. Microbial  genetic  resource  mapping  of  East Calcutta wetlands. Current Science, Vol. 91, No. 2, 25 July 2006
Davis,  Luise.  2011. A  Handbook  of  Constructed  Wetlands. USDA-Natural  Resources Conservation Services.
http://www.hc-sc.gc.ca/ewh-semt/pubs/water-eau/pathogens-
pathogenes/aeromonas_hydrophila-eng.php (Diakses 22 Agustus 2011) http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Ralstonia_pickettii (Diakses 22 Agustus 2011) http://www.usmicro-solutions.com/referencelibrary/bacteriallibrary.html  (Diakses  22  Agustus 2011) Jorgensen,  S.  E. et  al .  2005. Waste  Stabilization  Ponds  and  Constructed  Wetland  Design Manual. UNEP-IETC : Copenhagen.
Molitoris,  E.,  S.  W.  Joseph,  M.  I.  Krichevsky,  W.  Sindhuhardja,  dan  R.  R.  Colwell.  1985. Characterization and Distribution of Vibrio alginolyticus dan Vibrio parahaemolyticus isolated  in  Indonesia. Applied  and  Environmental  Microbiology,  Dec.  1985,  p.  1388- 1394
Pages,  Delphine,  Jerome  Rose,  Sandrine  Conrod,  Stephane  Cuine,  Patrick  Carrier,  Thierry Heulin,  dan  Wafa  Achouak.  2008. Heavy  Metal  Tolerance  in Stenotrophomonas maltophila. PloS ONE 3(2): e1539.doi:10.1371/journal.pone.0001539
Panaiyadayan,  P.  dan  S.  R.  Chellaia.  2011. Biodiversity  of  Microorganisms  Isolated  from Rhizosphere Soils of Pachamalai Hills, Tamilnadu, India. Research Journal of Forestry, 5: 27-35.
Sterritt,  R.  M.  dan  Lester,  J.  N.  1988. Microbiology  for  Environmental  dan  Public  Health Engineers. St. Edmundsbury Press Ltd : Suffolk.
Udotong, Ime R., Ofonime U. M. John, dan Justina I. R. Udotong. 2008. Microbiological and Physiochemical Studies of Wetland Soils in Eket, Nigeria. World Academy of Science, Engineering and Technology 44 2008.
Zeller,  Simon  L.  2007. Host  plant  selectivity  of  rhizobacteria  in  a  crop-weed  model  system. Institute of Environmental Sciences, University of Zurich.