## PenambahanMinyakIkanDalamPengencerSkim Milk-Egg Yolk TerhadapMotilitas Dan Abnormalitas AyamKampungPasca Thawing
(The Addition of fish oil into skim milk-egg yolk extender on the sperm motility and abnormalities post thawed of native chicken)
Abdul Malik 1* , M.Shahdan 1 , M.Irwan Zakir 1 ,N. Sasongko 2 , Sakiman 2
1 Bagian ProduksiTernak, FakultasPertanian, Universitas Islam Kalimantan (UNISKA) Muhammad ArsyadAl banjari Banjarmasin
2 Balai InseminasiBuatan, Dinas PerkebunandanPeternakan, Provinsi Kalimantan Selatan *korespondensi :sidol_99@yahoo.com

## Intisari
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengevaluasi  pengaruh  penambahan  minyak ikan dalam pengencer susu skim dan kuning telur terhadap motilitas dan abnormalitas spermatozoa  sebelum  dan  setelah  pembekuan  pada  ayam  kampung.  Koleksi  semen dilakukan  dengan  menggunakan  metode  urut/massage  punggung  abdominal  pada ayam  jantan.  Segera  setelah  ditampung    semen  dievaluasi  secara  makroskopik  dan mikroskopik  kemudian  diencerkan,  semen  dicampur  dengan  pengencer  susu  skim dan kuning  telur  sesuai  dengan  perlakuan.  Perlakuan    P0  (semen  dan  pengencer  tanpa minyakikan)  sebagai  kontrol,  P1(ditambah  minyak  ikan  50  mg/100ml  pengencer),  P2 (ditambah  minyak  ikan  100mg/100ml  pengencer),  P3  (ditambah  minyak  ikan 150mg/100ml pengencer) dan P4(ditambah minyakikan 200mg/100ml pengencer) yang kemudian  di  bekukan.  Paramaeter  yang  diamati  pada  dalam  penelitian  ini  adalah motilitas  dan  abnormalitas  sebelum  dan  pasca  pembekuan.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  penambahan  minyak  ikan  dalam  pengencer  susu  skim  -  kuning telur sebelum pembekuan (before freezing)  pada perlakuan P1, P2 dan P3 menunjukkan tidak perbedaan  motilitas  yang nyata (P>0,05) dibanding dengan perlakuan P0( kontrol ) namun  jika  dibandingkan  dengan  perlakuan  P4  hasilnya  berbeda  nyata  (P<0,05). Sedangkan  rataan  motilitas  spermatozoa  setelah  pembekuan  ( pasca  thawing ) menunjukkan  bahwa  control  berbeda  nyata  (P>0,05)  dengan  perlakuan  P2  dan  P3, namun tidak menunjukkan perbedaan yang nyata (P <0,05) dengan perlakuan P1 dan P4. Berdasarkan  data  tersebut  menunjukkan  bahwa  penambahan  minyak  ikan  pada perlakuan    P2  memeberikan  hasil  yang  baik  karena  menunjukkan  tren  kenaikan  yang optimal pada motilitas sperm ayam pasca thawing.
Kata kunci : Ayam kampung, spermatozoa, minyak ikan, motilitas, abnormalitas,

## Abstract
The objective of the study  was  to evaluate the effect of addition of fish oil in the skim milk - egg yolk extender on the sperma motility  and abnormalities before freezing and post thawed in native chicken. Semen is collected  with massage of abdominal  method. The  parameters  observed  in  this  study  were  sperm  motility  and  abnormalities  before freezing  and  post  thawed.   Immediately, After  semen    collected  then  diluted,  and  then the  semen    mixed  with  skim  milk-egg  yolk  extender  according  to  of  the  treatment. Treatment of P0 (semen mixed  diluent without fish oil) as control, P1 (50mg fish oil in
the 100ml extender), P2 (100mg fish oil in the 100ml extender), P3 (150mg fish oil in the 100ml  extender)  and  P4  (200mg  fish  oil  in  the  100ml  extender).  All  treatments  were freezing. One week after freezing in straws was  thawed, and  then Spem motility   and abnormalities  was  evaluated.  The  results  showed  that  the  addition  of  fish  oil    in  skim milk-egg  yolk  before freezing  shown  that    treatment  P1,  P2  and  P3  were  no  significant (P>0.05) compared with treatment of  P0 (control) but when compared with P4 treatment the results was significant different  (P< 0.05). Whereas, the motility post-thawing  was significant  different  (P>  0.05)  between    control  and    P2,P3.  While,  it  no  significant different (P<0.05) with P1 and P4. Based on these data indicate that the addition of honey on  the  treatment  of  P2  give  good  result  in  motility  of  post-thawing  in  native  chicken spermatozoa.
Key Words: Native chicken, spermatozoa, Fish oil, motility, abnormalities

## Pendahuluan
Pola  pemeliharaan  ayam kampong  pada  umumnya  masih bersifat  ektensif  dan  sebagian semi  intensif.  Selama  ini  sistem perkembang biakan ayam kampung masih bersifat tradisional  terutama  masalah perkawinannya.  Campur  tangan peternak dalam perkawinan ayam  kampung  masih  relatif rendah  sehingga  efisiensi  dalam pola  pemeliharaan  masih  belum maksimal, yang berdampak pada belum  optimalnya  reproduk- tivitas ayam kampung. Inseminasi  buatan  (IB)  meru- pakan  salah  satu  teknologi  yang banyak digunakan untuk meningkatkan  produksi  ternak termasuk  pada  unggas,  dalam memperbaiki  mutu  genetik  dan meningkatkan  efisiensi  repro- duksi.  Faktor  penting  yang mempengaruhi keberhasilan program  IB  anatara  lain  adalah kualitas semen, kebersihan semen yang  di  tampung,  keterampilan petugas  inseminasi  buatan,  serta bahan pengencer. Diantara faktor
tersebut  yang  memegang  peran penting dalam menentukan fertilitas  telur  adalah  kualitas semen  yang  masuk  didalamnya adalah  bahan  pengencer  (Isnaini, 2000).
Kualitas semen ayam bergantung pada proses penyimpanan  (preservasi)  yang meliputi  suhu  penyimpanan, sumber energy untuk spermatozoa  selama  preservasi dan  bahan  pengencer  yang digunakan. Pengencer harus dapat  menyediakan  nutrisi  bagi kebutuhan  spermatozoa  selama penyimpanan,  harus  memung- kinkan  sperma  dapat  bergerak secara  progresif,  tidak  bersifat racun  bagi  sperma,  melindungi spermatozoa terhadap cold shock,  sebagai  buffer  atau penyangga untuk mencegah perubahan pH, mempertahankan tekanan osmotik dan keseimbangan  elektrolit  serta mengandung  antibiotik  yang dapat  mengurangi  pertumbuhan bakteri.  Salah  satu  bahan  yang mempunyai  asam  lemak  tak jenuh  adalah  minyak  ikan.
Minyak  ikan  kaya  akan  asam lemak  tak  jenuh  sehingga  rentan terhadap  kerusakan  peroksidasi dan pengaruh cold shock ( Maxwell dan  Watson,  1996).  Penambahan DHA dari minyak ikan kepengencer  kuning  telur  efektif untuk  meningkatkan  motilitas progresif dan integritas membrane  dalam  semen  babi pasca  thawing  (Kaeoket  et  al., 2010).  B  mengevaluasi  pengaruh penambahan  minyak  ikan  dalam pengencer susu skim dan kuning telur  terhadap  motilitas  dan abnormalitas
spermatozoa sebelum  dan  setelah  pembekuan pada ayam kampung

## Materi Dan Metode
Penelitian  ini dilakukan di Lab.Balai Inseminasi Buatan (BIB) Provinsi  Kalimantan  Selatan  di Banjar  baru  dan  Teaching  farm Fakultas  Pertanian,  Universitas
Islam  Kalimantan  (UNISKA)
MAB dan Sebanyak 4 ekor ayam kampung  lokal  jantan  umur  2 tahun digunakan dalam penelitian  ini.  Pakan  yang diberikan  adalah  konsentran ( kandungan  protein  18% )  dengan air  minum  adlibitum,  semen ditampung dengan meng- gunakan  metode  pengurutan atau  massage  abdominal  adopsi dari  Rowe et  al (2010)  yang disempurnakan  oleh    Malik et  al .
(2013).  Segera  setelah  koleksi semen  dilakukan  evaluasi  secara makroskopik  dan  mikroskopik terhadap semen segar.
Evaluasimakroskopikdilakukanm eliputi  pH,  warna,  kekentalan.
Sedangkan  evaluasi  mikroskopik dilaksanakan meliputi persentase sperma hidup dan mati, konsentrasi, motilitas dan abnormalitas. Semen yang memenuhi  persyaratan  langsung dicampur  dengan  pengencer dasar  yaitu  skim  milk-egg  yolk kemudian  dilakukan  penelitian sesuai dengan perlakuan.
Perlakuan  pada  penelitian ini  terdiri  atas  kelompok  control (P0) hanya pengencer dasar ( skim milk-egg yolk ) tanpa diberi minyak ikan (Natural, 1000 mg) mengandung  Omega-3  Marine; Triglycerides  (300  mg)  as  EPA (180 mg) and DHA (120 mg) dari Nature’s  Care  (Manufacture  Pty, Ltd. Minna Close Belrose,
Australia).  P1  (tambahan  minyak ikan  50  mg/100  ml  pengencer), P2  (tambahan  minyak  ikan  100 mg/100  ml  pengencer),  P3 (tambahan  minyak  ikan  150 mg/100  ml  pengencer)    dan    P4 (tambahan  minyak  ikan  200 mg/100 ml pengencer).
Proses pembekuan dilakukan  setelah  semen  yang diencerkan dengan larutan perlakuan,  dimasukan  ke  dalam straw (volume  0,25  ml/ straw ) yang    ujung straw telah  ditutup dengan  serbuk  PVC. Straw yang sudah  diisi  dengan  semen ditempatkan dalam lemari pendingin untuk proses ekuilibrasi,  selama  60  menit. Straw yang  sudah  diekuilibrasi kemudian  ditempatkan  pada
sebuah rak kawat, yang ditempatkan  5  cm  di  atas permukaan  nitrogen  cair  untuk didinginkan dengan uap nitrogen cair  selama  4  menit  sebelum dibenamkan  ke  dalam  nitrogen cair  pada  suhu  –196  ºC  untuk selanjutnya disimpan beku. Semen  beku  disimpan  dalam nitrogen cair selama satu minggu sebelum  di  thawing  untuk dilakukan evaluasi untuk motilitas. Motilitas  dan  abnormalita spermatozoa  diamati  3  jam sebelum  proses  pembekuan  dan setelah pembekuan (pasca tawing).  Parameter  yang  diamati pada  penelitian  ini  adalah motilitas dan abnormalitas sebelum dan setelah pembekuan. Pengamatan  dilakukan  dengan menggunakan    kaca  objek  untuk tiap sampelnya. Sedangkan pengamatan terhadap daya hidup/abnormalitas spermatozoa dilakukan  dengan  pewarnaan eosin  nigrosin    dengan  cara semen diambil dan ditetes 1 tetes pada  object  glass  kemudian diteteskan  pewarna  eosin  sitrat sebanyak  2  tetes  selanjutnya dibuat  preparat  hapusan  dan dianginkan sampai kering, kemudian  preparat  diperiksa dibawah mikroskop untuk menghitung  jumlah  spermatozoa masih  hidup.  Sebanyak  minimal 200  spermatozoa  diamati  dengan mikroskop  cahaya  pembesaran 400 kali.
Data  yang  dikumpulkan berupa  motilitas  yang  dilakukan
dengan  pengamatan  pada  saat sebelum dan sesudah pembekuan. Data yang diperoleh ditabulasikan selanjutnya dianalisis  dengan  menggunakan analysis  of  variance  (ANOVA) selanjutnya  dilakukan  pengujian statistik  dengan  menggunakan General Linear Model (Multivariate). Bila terjadi perbedaan  yang  bermakna  pada perlakuan  maka  dilakukan  uji lanjutan  menggunakan  Duncan. Penghitungan  statistik  dilakukan dengan  menggunakan  SPSS  16.0 for windows.

## Hasil Dan Pembahasan
Hasil  penelitian  mengenai kualitas  semen  segar  pada  ayam kampong  menunjukkan  bahwa rata-rata pH, konsentrasi, volume dan  warna  semen  per  ejakulat pada penelitian ini secara berurutan  adalah  7,0-7,2;    2,81  × 10 9 sperm/ml; 0.20-0.40 ml/ejaculate serta berwarna keputih-putihan. Sedangkan persentasi motilitas dan abnormalitas  pada  semen  segar ayam  kampong  sesaat  sebelum perlakuan rata-rata adalah 82.31±0.67%  dan  10,95±0.91%. Hasil  pengamatan  motalitas  dan abnormalitas pada ayam kampong  tersebut  menunjukkan bahwa  semen  segar  layak  untuk dilakukan/dilanjutkan    proses pembekuan.  Sedangkan  rerata hasil penelitian sebelum pembekuan dan setelah pembekuan (pasca thawing) pada
Tabel  1.  Rerata  motilitas  spermatozoa  ayam  kampung  sebelum  ( bofore freezing ) dan setelah pembekuan pada perlakuan yang berbeda.
Perlakuan Motility (%) Sebelum pembekuan Pasca thawing P0 (tanpa minyak ikan) 48,03±1.76 b 25,71±0,92 a P1 ( 50 mg/100 ml pengencer) 50,07±1.05 b 27,25±0,16 a P2 ( 100 mg/100 ml pengencer) 51,16±0.27 b 35,07±0,17 b P3 ( 150 mg/100 ml pengencer) 47,23±0.30 b 33,15±1,03 b P4 ( 200 mg/100 ml pengencer) 31,41±0.15 a 26,29±0,12 a
Keterangan:Angka yang diikuti huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata (P>0,05).
motilitas dan abnormalitas disajikan  pada  Table  1  dan  2. Berdasarkan hasil analisis statistic  menunjukkan  bahwa rataan  motilitas  spermatozoa yang disimpan selama 3 jam pada suhu sekitar 4 ⁰ C sebelum pembekuan  ( before  freezing )  tidak menunjukkan  perbedaan  yang nyata  (P  >  0,05)  antara  control dan  peralakuan  pada  P1,  P2  dan P3.  Sedangkan  motilitas  pada perlakuan P4 menunjukkan perbedaan  yang  nyata  (P>  0,05) dengan  semua  perlakuan  dan kontrol  (P0).  Sedangkan  pada rataan  motilitas  spermatozoa setelah pembekuan ( pasca
thawing )  menunjukkan  bahwa perlakuan  control  berbeda  nyata (P>0,05)  dengan  perlakuan  P2 dan P3, namun tidak menunjukkan  perbedaan  yang nyata (P <0,05) dengan perlakuan P1  dan  P4  (Tabel  1).  Rataan Abnormalitas dari hasil penelitian  pada  penyimpanan selama  3  jam  pada  suhu  sekitar 4 ⁰ C  sebelum  pembekuan (before freezing )  dan  pasca  thawing menunjukkan tidak ada perbedaan  yang  nyata  (P<0,05) antara control dan semua perlakuan baik sebelum dibekukan maupun setelah proses pembekuan (Tabel 2).
Tabel 2. Rerata Abnormalitas spermatozoa ayam kampung sebelum ( bofore freezing ) dan setelah pembekuan pada perlakuan yang berbeda
Perlakuan Abnormalitas  (%) Sebelum pembekuan Pasca thawing P0 (tanpa minyak ikan) 17,12±1,02 14,75±0,65 P1 ( 50 mg/100 ml pengencer) 16,75±0,85 14,51±0,23 P2 ( 100 mg/100 ml pengencer) 16,09±0,96 13,25±0,77 P3 ( 150 mg/100 ml pengencer) 16,01±1,04 12,50±0,09 P4 ( 200 mg/100 ml pengencer) 15,24±0,72 13,26±0,80 Salah  satu  factor  penting dalam  mengevaluasi  parameter kualitas  semen  unggas  adalah motilitas sperma, karena parameter tersebut dapat digunakan  untuk  memprediksi tingkat  kesuburan  ayam  jantan
(Lukaszewicz,  1988;  Froman  et
al., 1998; Suidzinska and Lukaszewicz, 2008).  Berdasarkan hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa penambahan minyak ikan pada dosis 100 mg/100
ml/pengencer  memberikan  hasil yang  paling  baik  disbanding dengan  semua  perlakuan  dan control.  Bila memperhatikan tren data  tersebut,  hasil  motilitas pasca  thawing    menunjukkan tren  peningkatan  seiring  dengan penambahan minyak ikan sampai pada perlakuan (P2), begitu pada perlakuan  P3  dimana  jumlah minyak  ikan  bertambah  maka terjadi menurunkan motilitasnya. Fenomena  tersebut  dikuatkan dengan  hasil  penelitian  Malik  et al.  (2017)  yang    menyatakan bahwa  pemberian  minyak  ikan dosis  100mg  dalam    100  ml pengencer  membrikan  dampak positip terhadap motilitas spermatozoa sapi. Terjadinya kenaikan persentase motilitas sperma ayam,  pasca  thawing  seiring penambahan  minyakikan  pada pengencer  karena  minyak  ikan banyak  mengandung  omega  3,
saturated fatty acid (SFA),
polyunsaturated  fatty  acid (PUFA) dan docosahexaenoic  acid (DHA) yang  berperan  dalam  proses pembekuan  spermatozoa.  Hal tersebut didukung oleh beberapa peneliti yang mengatakan bahwa pemberian  minyak  ikan  yang kaya  omega  3  dan  DHA  dalam pengencer  dapat  meningkatkan motilitas  sperma  pasca  thawing
(Aksoy  et  al.,  2006;  Amin  et  al., 2010)
Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian  tersebut  menunjukkan bahwa penambahan minyak ikan sebanyak 100 mg/100 ml pengencer  skim  milk-egg  yolk  ( P2) memeberikan hasil yang baik karena menunjukkan tren kenaikan  yang  optimal  pada motilitas  sperm  ayam  pasca thawing.

## Daftar Pustaka
Am-in N, Kirkwood RN, Techakumphu M, Tantasuparuk  W.  2011. Lipid  profiles  of  sperm and  seminal  plasma  from boars  having  normal  or low sperm motility. Therigenology, 75, 897-903.
Aksoy  Y,  Aksoy  H,  Altinkaynak K,  Aydin  HR,  Ozkan  A. 2006.  Sperm  fatty  acid composition  in  subfertile men. Prostaglandins  Leukot Essent  Fatty  Acids ,  75,  75- 79..  DOI:  10.1016/j.plefa. 2006.06.002
Froman,  D.P.,  Feltmann,  A.J.
1998.    Sperm  mobility:  a quantitative  trait  of  the domestic fowl ( Gallus domesticus ). Biol. Reprod.,1998; 58: 376–384.
Olayemi, FO., Adeniji D., Oyeyemi, MO. 2011. Evaluation of sperm motility  and  viability  in honey-included  egg  yolk based  extenders.  Global
Veterinaria. 7(1):19-21.
Isnaini  N.  2000. Kualitas  Semen Ayam Arab dalam Pengencer NaCl  Fisiologis  dan  Ringer’s pada  Suhu  Kamar .  Habitat 11 : 113 Kaeoket K, Sang-urai P, Thamniyom A, Chanapiwat P, Techakumphu M.2010. Effect  of  docosa  hexaenoic acid on quality of cryopreserved  boar  semen in  different  breeds. Reprod Domest  Anim, 45,  458-463. DOI: 10.1111/j.1439- 0531.2008.01239.x
Lukaszewicz,  E.1988.Study  of diluents  of  cock’s  semen storage  in  the  light  of laboratory  estimation  and fertility  rate.Poult.  Sci.34: 43–59.
Malik,  A.,  AW  Haron.,  Rosnina, YM.,Nesa.,  M  Bukar  and A  Kasim.  2013.  Evaluation of  the  ejaculate  quality  of the  red  jungle  fowl,
domestic  chicken,  and bantam chicken in Malaysia. Turk J Vet Anim Sci. 37: 564-568. Malik A, Syarifdjaya M, Gunawan  A,  Erlina  S,
Jaelani  A,  Wibowo  DB.
2017.Effect  of  fish  oil addition  to  the  skim  milk- egg  yolk  extender  on  the quality  of  frozen-thawed Bali  bull  spermatozoa. Kafkas Univ Vet FakDerg, 23 (4):  651-654, . DOI:  10.9775
/kvfd.2017.17556.
Maxwell  and  Stojanov,  1996. W.M.C. Maxwell, T. Stojan ovLiquid  storage  of  ram semen  in  the  absence  or presence of some antioxidants Reprod. Fertil. Dev., 8 :1013-1020 Rowe,  M.,  Swaddle,  JP.,  Pruett- Jones,  S.,  Webster,  MS.
2010.  Plumage  coloration, ejaculate quality and reproductive phenotype in the  red-backed  fairy-wren. J.  Anim.  Behav.  79:  1239– 1246.
Suidzinska,  A,  and  Lukaszewicz E. 2008. The effect of breed on freezability of semen of fancy  fowl. Anim  Sci  Pap Rep 26: 331-340