## UJI DAYA HAMBAT RAMUAN HERBAL (BAWANG PUTIH, DAUN SIRIH, DAN KAYU MANIS) TERHADAP PERTUMBUHAN
Bacillus subtilis DAN Escherichia coli

## Muh. Nur Hidayat, Amriana Hifiza, Ismawati Asmar
Jurusan Ilmu Peternakan Fakultas Sains dan Teknologi UIN Alauddin Makassar Email : hidayat.peteruin@gmail.com

## ABSTRACT
This  study  aims  to  determine  the  inhibitory  activity  of  garlic,  betel  leaf  and cinnamon herbal remedy made to the growth of B. subtilis and E. coli , and to know the long fermentation of the best herbs to inhibit the growth of B. subtilis and E. coli . This research was  conducted  in  the  Laboratory  of  Microbiology  and  Animal  Health  High  School Agricultural  Extension  (HSAE/)  Gowa.  The  treatment  is  given  as  follows:  The  herb  is fermented for 0 days without EM4 (control) P0; herb fermented for 0 days without EM4 P1; herb that is fermented for 7 days with EM4 P2; herb that is fermented for 14 days with EM4 P3; herb fermented for 21 days at EM4 P4. The data obtained were processed using Completely Randomized Design (CRD) and what if the test significant, then continued with the smallest Significant Difference Test (SDT). Results of analysis of variance showed that the treatment significantly (P<0.05) against on the growth of B. subtilis and E. coli. The conclusion of this study is, materials that are made of herbal ingredients (garlic, betel leaf and cinnamon) has a diameter of inhibition zones on treatment significantly (P<0.05) on the growth of B. subtilis and E. coli . and long fermentation excellent for growth resistor B. subtilis and E. coli is at P3 treatment 14 days fermentation.
Keywords : Herbal Remedy (Garlic, Betel Leaf and Cinnamon), B. subtilis, E. coli.

## PENDAHULUAN
Tanaman obat merupakan salah satu tanaman yang tumbuh secara alamiah dialam terbuka, dan untuk  saat  ini  tanaman obat  cukup banyak dikembangkan melihat  dari segi manfaat  tanaman  tersebut.  Secara  tradisional  tanaman  obat  cukup  berkhasiat menyembuhkan penyakit, lebih tepatnya apa bila diaplikasikan pada ternak unggas akan memperoleh  ternak  yang  organik,  seperti  menghilangkan  bau  kotoran  ternak, meningkatkan nafsu makan, dan peningkatkan daya tahan tubuh.
Ramuan  tanaman  obat  pada  umumnya  dikomsumsi  oleh  manusia  yang  tujuan menjaga kesehatan atau sebagai pengobatan beberapa penyakit tertentu. Ramuan tanaman obat yang diolah secara tradisonal adalah obat dari bahan alami terutama tumbuh-tumbuhan yang memiliki kadungan tertentu guna penyembuhan. Ramuan tanaman obat merupakan
warisan  budaya  bangsa  yang  telah  digunakan  turun  temurun  untuk  penyembuhan  dan menjaga kesehatan.
Sebagaimana  diketahui  ramuan  tanaman  obat  (jamu)  dapat  meningkatkan kebugaran  dan  ketahanan  tubuh  manusia  yang  menggunakannya,  demikian  pula  apabila diberikan pada ternak. Ramuan beberapa tanaman obat yang diberikan pada ternak dapat meningkatkan nafsu makan dan peningkatan produktifitas ternak.
Menurut  Sumardi  (2006),  peternak  yang  secara  rutin  memberikan  ramuan  obat tradisional  pada  ternaknya  baik  melalui  air  minum  atau  dicampur  dalam  pakan,  dan ternaknya terhindar dari serangan penyakit, karena obat pabrik mahal maka para peternak skala  kecil  mencari  alternatif  lain  dengan  menggunakan  jamu  hewan.  Secara  umum didalam  tanaman  obat  (rimpang,  daun,  batang,  akar,  bunga  dan  buah)  terdapat  senyawa aktif  seperti  alkoloid,  fenolik,  tripenoid,  minyak  atsiri  glikosida  dan  sebagainya  yang bersifat  sebagai  antiviral,  anti  bakteri  serta  imunomodulator.  Komponen  senyawa  aktif tersebut  berguna  untuk  menjaga  kesegaran  tubuh  serta  memperlancar  peredaran  darah. Bahan ramuan tanaman obat (empon-empon) dibuat sesuai kepentingan dan fungsinya yang bisa dipilih dari satu jenis atau beberapa jenis tanaman obat antara lain kunyit, lengkuas, jahe,  temulawak,  kencur  dan  lainnya  dibuat  menjadi  ramuan  yang  biasa  disebut  jamu hewan.
Berdasarkan hal tersebut diatas, penggunaan jamu herbal ini dapat lebih baik maka perlu dilakukan penelitian dengan uji aktifitas ramuan herbal (bawang putih, daun sirih dan kayu manis) terhadap pertumbuhan mikroba B. subtilis dan E. coli .

## METODE PENELITIAN

## A. Waktu dan tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juni – Juli 2013. Lokasi penelitian bertempat di Laboratorium Mikrobiologi dan Kesehatan Hewan Sekolah Tinggi Penyuluh Pertanian (STPP) Gowa.
B. Materi Penelitian
1. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini, adalah sebagai berikut;
Tabel 1. Komposis Bahan Untuk Ramuan Herbal
Jenis bahan Jumlah Bawang putih 62.5gr Daun sirih 62.5gr Kayu manis 62.5gr Molases 250 ml EM 4 250 ml
Bahan lain yang digunakan untuk penelitian ini adalah: NA (Nutrien Agar) 4 gr, alkhol, dan biakan bakteri B. subtilis dan E. coli.

## 2. Alat
Peralatan yang digunakan adalah autoklaf, lemari asam, incubator, cawan petri, ose bulat, neraca analitik, oven,  pipet mikro, blender, pisau, tempat penampung, kertas disk, gelas kimia, labu erlemeyer, aluminium foil, ring sumuran, pinset, karet gelang.

## C. Parameter Penelitian
Parameter yang diukur dalam penelitian ini adalah zona daya hambat ramuan herbal terhadap bakteri Gram positif ( B, subtilis ) dan Gram negatif ( E, coli ).

## D. Desain Penelitian
Percobaan  dilaksanakan  berdasarkan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Susunan setiap perlakuan terdiri dari 3 ulangan.
P0 : Ramuan herbal yang difermentasi selama 0 hari tanpa EM4 P1 : Ramuan herbal yang difermentasi selama 0 hari dengan EM4 P2 : Ramuan herbal yang difermentasi selama 7 hari dengan EM4 P3 : Ramuan herbal yang difermentasi selama 14 hari dengan EM4 P4 : Ramuan herbal yang difermentasi selama 21 hari dengan EM4
Jenis Mikroba ,
B : Bakteri B. subtilis
E : Bakteri E.coli
Masing-masing  jenis  mikroba  diberikan  kode  B  untuk  bakteri B.  subtilis dan  E untuk E. coli .

## E . Metode Kerja

## 1. Tahap Persiapan
a. Pembuatan ramuan herbal
Masing  –  masing  bahan  (bawang  putih,  dauh  sirih,  dan  kayu  manis)  ditimbang menggunakan  neraca  analitik  seberat  62,5  gram  dicuci  dan  dihaluskan  menggunakan blender,  kecuali  kayu  manis  ditumbuk  sampai  halus  dan  dicampur  menjadi  satu.  Secara terpisah  dicampur  juga  molases  dan  EM4  dengan  takaran  masing–masing  250  ml. Selanjutnya  semua  dicampur  dan  ditambahkan  air  (sumur),  kemudian  diaduk  hingga homogen.
Dalam penelitian ini ramuan herbal  yang dibuat hanya menggunakan larutan saja (tampa ampas), hal ini dilakukan untuk mengetahui sejauh mana pertumbuhan dari mikroba tersebut apabila media tersebut hanya berupa larutan (tanpa ampas),
b. Pembuatan medium NA (Nutrien Agar)
Masing–masing  bahan  (ekstrak  beef  1,5  gram,  pepton  2,5  gram,  bacto  agar  7,5 gram)  ditiimbang  dengan  teliti,  lalu  dilarutkan  ke  dalam  aquadest  500  ml,  kemudian dipanaskan  sambil  diaduk  hingga  homogen,  selanjutnya  wadah  ditutup  dengan  baik, kemudian disterilkan dalam otoklaf pada tekanan 2 atm, suhu 121o C selama 15 menit.
c. Sterilisasi alat bahan

## 1) Sterilisasi menggunakan oven
Alat– alat yang tahan panas tinggi misalnya labu erlemeyer, cawan petri, dan tabung reaksi, di sterilkan dengan menggunakan oven biasa pada suhu 180oc, tetapi terlebih dahulu dicuci bersih dan disterilkan dengan menggunakan alkohol kemudian dibungkus dengan kertas.
2) Sterilisasi menggunakan autoklaf
Media  dan  bahan  disterilkan  dengan  tekanan  tinggi  menggunakan  autoklaf pada tekana 2 ATM (atmosfer) dengan suhu 121oC selama 15–30 menit. Biasanya bergantung  pada  jenis  dan  banyaknya  bahan.  Medium  yang  disterilkan  adalah medium NA (Nutrien Agar) dan Aquadest.

## 3) Sterilisasi menggunakan bunsen
Alat  yang  terbuatt  dari  kawat  platina  seperti  kawat  ose,  disterilkan menggunakan bunsen dengan cara membakar alat tersebut di atas api sampai pijar.
Disamping  itu,  juga  digunakan  dalam  pengerjaan  secara  aseptis  untuk  meghindari terjadinya kontaminasi.
4) Sterilisasi menggunakan aquadest
Aquadest  dimasukkan  kedalam  labu  erlenmeyar  kemudian  ditutup  dengan menggunakan  kapas  dan  alumunium  foil  kemudian  disterilkan  ke  dalam  autoklaf pada tekanan 2 ATM dengan suhu121oc selama 20 menit.

## 2. Tahap Pelaksanaan

## a. Peremajaan Mikroba uji
Biakan B. subtilis dan E. coli masing-masing 1 kawat ose diinokulasikan ke dalam medium NA Miring, kemudian diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37 o C.

## b. Pembuatan suspensi mikroba
Biakan B. subtilis dan E. coli yang telah diremajakan diambil dalam beberapa ose lalu diinokulasikan ke dalam 10 ml aquadest steril kemudian digoyangkan
c. Pengujian daya hambat
Pengujian  zona  hambatan  pada  media  padat  digunakan  untuk  penentuan  efek antibakteri dan fermentasi terhadap bakteri uji B.subtilis dan E. coli.
1) Cawanpetri  diisi  dengan madium  NA teknis 1,6% (w/v) ± 8 ml dan dibiarkan memadat.
2)  Ring  sumuran  ( well )  steril  diameter  10  cm  dimasukkan  kedalam  cawan  petri. Natrium agar yang masih dalam keadaan cair (suhu 40-45 0 c) diinkubasi dengan biakan bakteri  patogen. Kemudian masukkan ke dalam cawanpetri  yang  berisi ring steril dan dibiarkan memadat.
3) Setelah memadat ring diangkat dengan menggunakan pinset. Sampel dimasukkan ke dalam lubang sumuran sebanyak 0,5 ml selanjutnya diinkubasi dengan suhu 370c selama 24-48 jam
d. Pengamatan pengolahan data
Pengamatan dan pengolahan data dilakukan setelah masa inkubasi yng dilakukan selama 24-48 jam pada suhu 37 o C. Diameter zona bening yang terbentuk diukur dengan Calliper. Area  dari  keseluruhan  zona  dihitung  kemudian  dikurangi  area  sumuran  dan hasilnya dilaporkan sebagai zona hambatan

## F. Pengolahan Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  pengamatan  dianalisis  dengan  analisis  varians berdasarkan Rancangan Acak Lengkap (RAL), 5x4 dengan 5 perlakuan dan 4 ulangan, pada taraf kepercayaan α = 0, 005 dan apabila dalam pengujian perlakuan berpengaruh nyata, dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) (Gasperz, 1991).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari hasil penelitian yang dilakukan pada uji daya hambat ramuan herbal (bawang putih,  daun  sirih  dan  kayu  manis)  terhadap  pertumbuahan B.  subtilis dan E.  coli dapat dilihat pada Tabel 2:
Tabel  2. Data  zona  hambatan  ramuan  herbal  (bawang  putih,  daun  sirih  dan  kayumanis) terhadap pertumbuhan B. subtilis dan E. coli. Jenis Bakteri Perlakuan (mm) P0 P1 P2 P3 P4 B. subtilis 18.4 a ±0.05 19.5 ab ±0.29 22.8 bc ±0.01 25.9 c ± 0.00 21.8 bc ± 0.00 E. coli 11.9 a ±0.00 11.5 a ±0.00 20.2 b ±0.19 25.7 c ± 0.00 21.9 b ± 0.00
Superscrip yang berbeda pada baris yang sama berbeda nyata (P<0,05)
Hasil  analisis  ragam  pada  Tabel  2,  menunjukkan  bahwa  perlakuan  berpengaruh (P<0,05) terhadap pertumbuahan B. subtilis dan E. coli . Berdasarkan Uji BNT terhadap B. subtilis  menunjukkan  perlakuan  P0  (18,4  mm)  dan  P1(19,5  mm)  tidak  berbeda  nyata, demikian juga perlakuan P2(22,8 mm) dan P4(21,8 mm) tidak berbeda nyata, sedangkan P3 (25,9 mm) berbeda nyata dengan semua perlakuan pada Uji daya hambat ramuan herbal. Berdasarkan  Uji  Beda  Nyata  Terkecil  (BNT)  terhadap E.  coli menunjukkan  perlakuan P0(11,9 mm) dan P1(11.5 mm) tidak berbeda nyata, demikian juga pada perlakuan P2 (20,2 mm) dan P4 (21,9 mm) tidak berbada nyata, sedangkan P3 (25,7 mm) berbeda nyata dengan semua perlakuan pada Uji daya hambat ramuan herbal.

## A.  Uji  Daya  Hambat  Ramuan  Herbal  (Bawang  Putih,  Daun  Sirih  Dan  Kayu  Manis) Terhadap Pertumbuhan B. Subtilis.
Bedasarkan hasil analisis sidik ragam pada Tabel. 2 menunjukkan bahwa perlakuan berpengaruh nyata (P<0.05) terhadap pertumbuhan B. subtilis. Diperoleh hasil pengukuran
tertinggi berada pada perlakuan P3 (25.9 mm) yang berbeda nyata dengan perlakuan P1, P2 dan P4 dengan diameter zona hambatan masing - masing perlakuan P1 (19,5 mm), P2 (22,8 mm)  dan  P4  (21,8  mm),  namuan  pada  perlakuan  P0  diperoleh  diameter  zona  hambatan terendah yakni sebesar P0 (18,4 mm). Hal ini disebabkan perlakuan P0 merupakan kontrol dari semua perlakuan.
Kemampuan daya hambat ramuan herbal (bawang putih, daun sirih dan kayu manis) terhadap pertumbuhan bakteri B. subtilis berpengaruh nyata (P<0.05). Hasil penelitian pada Tabel. 2, menunjukkan bahwa lama waktu fermentasi diperoleh zona daya hambat semakin luas terutama pada perlakuan P3 (25,9 mm). Hal ini mungkin disebabkanpada perlakuan P3, senyawa bahan aktif yang terkandung didalam ramuan herbal tersebut meningkat pada lama  waktu  fermentasi  14  hari.  Namun  selanjutnya  zona  daya  hambat  mengalami penurunan dengan bertambahnya lama waktu fermentasi, seperti terlihat pada perlakuan P4 yang  difermentasi  selama  21  hari.  Diameter  zona  daya  hambat  yang  diperoleh  pada perlakuan  P4,  yaitu  21,8  mm.  Penururnan  zona  daya  hambat  pada  perlakuan  P4 kemungkinan disebabkan kandungan bahan aktif yang terkandung didalam ramuan herbal mengalami penurunan sehingga zona daya hambat yang diperoleh sangat kecil.
Ramuan  herbal  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  diantaranya  adalah  bawang putih, daun sirih dan kayu manis untuk menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif dan Gram negatif.  Kemampuan menghambat dari ramuan herbal (bawang putih, daun sirih dan kayu  manis)  terhadap  pertumbuhan  bakteri B.  subtilis dan E.  coli tampak  berpengaruh nyata.  Hasil  penelitiaan  pada  Tabel  4  menunjukkan  bahwa  dengan  bertambahnya  lama waktu  fermentasi,  maka  ada  kecederungan  bertambah  luas  daya  hambat  ramuan  herbal terhadap pertumbuhan bakteri E. coli dan B. Subtilis.
Melalui  uji  beda  nyata  terkecil  (BNT)  dapat  diketahui  bahwa  zona  daya  hambat tertinggi  pada  ramuan  herbal  terhadap  pertumbuhan B.  subtilis dan E.  coli berada  pada perlakuan P3 dengan lama fermentasi 14 hari dengan masa inkubasi 24-48 jam. Penggunaan daya hambat paling efektif digunakan untuk menghambat pertumbuhan B. subtilis dan E. c oli  adalah  pada  hari  ke-14.  Mengacu  pada  standar  yang  ditetapkan  oleh  Departemen Kesehatan (1988) disebutkan bahwa mikroba dinyatakan peka terhadap antimikroba asal tanaman  apabila  mempunyai  ukuran  diameter  daya  hambatannya  12-24  mm.  hasil pengamatan  tersebut  menunjukkan  bahwa  ramuan  herbal  (bawang  putih,  daun  sirih  dan kayu  manis)  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  bakteri B.  subtilis dan E.  c oli  dengan diameter yang dihasilkan lebih dari standart yang ditentukan oleh Departemen Kesehatan yaitu 12 - 24 mm.
Pada  Tabel  2  di  atas  perlakuan  paling  berpengaruh  berada  pada  perlakuan  P3 terhadap  bakteri B.  subtilis dan E.  coli dengan  luas  zona  hambatan  yang  terbentuk  pada masing –masing bakteri yakni : pada bakteri B, subtilis sebesar 2,59 mm dan pada bakteri E. c oli sebesar 25.7 mm dengan lama fermentasi 14 hari. Perbedaan diameter daya hambat yang ditunjukkan pda tabel 4 pada ramuan herbal terhadap bakteri B. subtilis dan E. coli , disebabkan  karena  adanya  perbedaan  struktur  dinding  sel  yang  dimiliki  oleh  masing– masing bakteri. Diameter daya hambat ramuan herbal pada E .coli lebih kecil dari pada B. subtilis. Menurut Jawetz (1986), dinding sel E. coli terdiri dari beberapa lapis peptidoglikan dengan  tiga  polimer  pembungkus  yang  terletak  diluar  lapisan  peptidoglikan  yaitu lipoprotein,  selaput  luar  dan  lipopolisakarida, E.  coli memiliki  lapisan  peptidoglikan dengan tiga polimer maka selnya akan tidak mudah terdenaturasi oleh zat antimikroba yang terkandung  dalam  ramuan  jamu  herbal  sehingga  diameter  daya  hambatnya  lebih  kecil dibandingkan dengan zona hambatan pada B. subtilis yang memiliki zona hambatan yang lebih besar.
Luas zona hambatan tertinggi dari Tabel 2 berada pada bakteri B. subtilis dengan perlakuan  P3  (25,9  mm)  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  ke-4  perlakuan  lainnya, dibandingkan dengan luas zona hambatan yang dimiliki oleh bakteri E. coli yang memiliki perlakuan  tertinggi  berada  pada  P3  (25,7  mm)  yang  berbeda  nyata  dengan  perlakuan lainnya. Menururt Ribonson (1995), beberapa faktor yang dapat mempengaruhi kerja zat antibakteri diantaranya: umur bakteri, konsentrasi zat antimikroba, kandungan bahan aktif zat  antimikroba,  dan  sebagainya.  Hal  ini  akan  mempengaruhi  populasi  mikroba (peningkatan  laju  kematian  mikroba)  yang  erat  kaitannya  dengan  umur  mikroba.  Pada umumnya  umur  mikroba  yang  masih  muda  memiliki  daya  tahan  yang  lebih  rendah dibandingkan dengan mikroba yang sudah tua (fase stasioner) yang memiliki daya tahan yang lebih tinggi, dan hal ini didukung oleh kemampuan suatu bahan dalam menghambat suatu mikroba yang tergantung pada tinggi rendahnya suatu konsentrasi dan bahan aktif zat antimikroba.  Kematian  mikroba  berhubungan  langsung  dengan  bahan  aktif  zat antimikroba. Hal ini bererti semakin tinggi kandungan zat antimikroba yang dimiliki oleh suatu  ramuan  herbal  maka  tingkat  daya  hambat  yang  diperoleh  akan  semakin  luas  dan kematian mikroba akan semakin cepat.
Terbentuknya  zona  hambatan  disebabkan  oleh  adanya  zat-zat  yang  bersifat antibakteri  yang  terkandung  dalam  bahan  yang  digunakan  pada  ramuan  herbal  (bawang putih, daun sirih, dan kayu manis) sebagaimana diketahui bahan untuk pembuatan ramuan herbal memiliki beberapa kadungan kimia; seperti senyawa alkali, tannin, minyak atsirih,
senyawa folifenol dan sebagainya. Pada ramuan herbal yang digunakan untuk menghambat pertumbuhan B.  subtilis dan E.coli memiliki  kandungan  kimia  diantaranya  senyawa Alkaloid dari bawang putih mengandung racun yang mampuh menghambat pertumbuhan bakteri B. subtilis dan E. coli dan dapat menyebabkan sel bakteri menjadi lisis lebih terpapar oleh zat tersebut dan akan menganggu sel bakteri dalam penyerapan protein oleh cairan sel sedangkan  alicin  yang  terdapat  pada  bawang  putih  sebagai  penghambat  pertumbuhan bakteri (Clifton, 1958).
Daun sirih dapat digunakan sebagai antibakteri karena mengandung 2,5% minyak atsiri  yang  sebagian  besar  terdiri  dari betephenol yang  merupakan  isomer Euganol allypyrocatechine , Cineol methil euganol, Caryophyllen (siskuiterpen), kavikol , kavibekol , estragol dan terpinen yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. kayu manis memiliki bahan aktif yang merupakan senyawa fenol, dan aldehida yang merupaka senyawa utama dari minyak atsirih kayu manis (Rahmat, 2000).
Bahan-bahan  (herbal  )  yang  yang  digunakan  dalam  penelitian  untuk  pembuatan ramuan herbal memiliki potensi sebagai antimikroba. Hal ini disebabkan kandunga kimia yang dimiliki oleh semua bahan lebih tinggi. Pada daun sirih memiliki kandungan minyak atsirih sekitar 1,8-4,2% dan bersifat antimikroba yang sangat kuat  yaitu 5 kali dari fenol yang  dikandung  oleh  kayu  manis,  sedangkan  bawang  putih  memiliki  senyawa alkaloid yang bersifat  racun  yang mampuh menghambat pertumbuhan B. subtilis dan E.  coli dan dapat  menyebabkan sel  bakteri  menjadi  lisis lebih terpapar oleh zat  tersebut  (Zainuddin, 2010).
Berdasarkan  hasil  zona  hambatan  yang  diperoleh  pada  Tabel  2  dapat  diketahui bahwa terjadi penurunan pada perlakuan P4 terhadap zona hambatan pada bakteri B. subtilis dan E.  c oli,  hal  ini  disebabkan  area  zona  hambatan  yang  terbentuk  perlahan-lahan  akn ditumbuhi  kembali  oleh  bakteri  dan  juga  dapat  dipengaruhi  oleh  kandungan  bahan  aktif antimikroba  yang  terdapat  didalam  ramuan  herbal  mulai  berkurang  selain  itu  juga dipengaruhi  oleh  lamanya  fermentasi  dan  beberapa  faktor  yang  mempengaruhi menurunnya daya kerja dari zat anti bakteri diantaranya umur bakteri yang digunakan sudah tua dan sudah mengalami beberapa kali peremajaan bakteri .
Penurunan  daya  hambat  yang  terjadi  pada  hari  ke-21  pada  perlakuan  P4  ini Sebagaimana  diketahui  ramuan  herbal  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  hanya menggunakan  larutan  tanpa  ampas  dan  tidak  menutup  kemungkinan  bahan-bahan  yang digunakan  jumlahnya  sangat  sedikit  yakni  sekitar  62,5  gr  sehingga  area  zona  hambatan yang  diperoleh  pada  Tabel  2  pada  perlakuan  P4  lebih  kecil.  Menurut  Sumardi  (2006),
bahwa  sifat  antimikroba  yang  terdapat  pada  ramuan  herbal  adalah  sebagai  zat baketeriostatik, yang berarti hanya dapat menghambata pertumbuhan bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif, hal ini disebabkan karena area zona hambatan yang terbentuk, secara  perlahan-lahan  akan  ditumbuhi  kembali  oleh  bakteri  tersebut.  Sehingga  sifat antimikroba dari ramuan herbal ini tidak dapat digolongkan kedalam bakteriostatik karena tidak dapat membunuh
Berdasarkan uraian di atas, membuktikan bahwa ramuan herbal mempunyai dasar kuat digunakan sebagai bahan obat karena mengandung bahan aktif zat antimikroba yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri B. subtilis dan Es. coli dengan komponen bahan aktif yang terkandung didalam ramuan herbal yakni minyak atsiri, fenol, alkeolid, tannin, eguenol yang dapat memepengaruhi pertumbuhan bakteri B. subtilis dan E.coli .

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  analisis  sidik  ragam  dan  pembahasan  maka  dapat  disimpulkan bahwa :
1.  Bahan-bahan  yang  dibuat  ramuan  herbal  (bawang  putih,  daun  sirih  dan  kayu  manis) memiliki zona daya hambat yang berpengaruh nyata pada perlakuan (P<0.05) terhadap pertubuhan B. subtilis dan E. coli.
2. Lama waktu fermentasi yang terbaik untuk menghambat pertumbuhan B. subtilis dan E.
coli berada pada perlakuan P3 dengan lama waktu fermentasi 14 hari.

## DAFTAR PUSTAKA
Clifton C. E . 1958. Introduction to the Bacteria . Second Edition. MC.
Departemen  Kesehatan.  1988. Inventaris  Obat  Indonesia  Jilid  I.  Badan  Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan . Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
Jawetz.  E.,  J.L.  Melnick  and  E.A.  Adelberg.  1986.  Edisi  XVI. Microbiology  Untuk Kesehatan . Penertbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Rahmat.  2000. Khasiat  dan  Manfaat  Daun  Sirih,  Obat  Mujarab  dari  Masa  Kemasa . Agromedia Pustaka, Jakarta.
Robinson, T. 1995. Kandungan Senyawa Organik Tumbuhan Tinggi . Diterjemahkan oleh Prof. Dr. Kosasih Padmawinata, Bandung: ITB.
Sumardi. 2006. Jamu Tahan Flu Burung . (Harian Kompas tanggal 17 Juli 2006. Jakarta).
Zainuddin,  D.  2010. Tanaman  Obat-Obatan (Online).  http://toni  komara.  blogspot.com/ 2010/01. (Diakses 13 April 2013).