## OPTIMASI STERILISASI EKSPLAN UMBI DAN BULBIL PORANG

## ( Amorphopalus muelleri Blume.) PADA KULTUR IN VITRO

## OPTIMIZATION OF STERILIZATION ON TUBER AND BULBIL OF PORANG
( Amorphopalus muelleri Blume.) BY IN VITRO CULTURE
Ayuni Adawiyah * , Ateng Supriyatna, Nenden Nur Amalia, Muchfa Eprilia Muhsin, Reni Annisa, & Sri Firti Solihah
Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Sunan Gunung Djati, Bandung Jl. A.H. Nasution No. 105, Cibiru, Bandung, 40614 - Indonesia
*Korespondensi: ayuniadawiyah@uinsgd.ac.id

## ABSTRAK
Sterilisasi  merupakan  salahsatu  faktor  penting  keberhasilan  kultur in  vitro .  Tujuan  dari penelitian ini adalah untuk menentukan optimasi sterilisasi yang tepat untuk perbanyakan porang secara in  vitro .  Penelitian  ini  melakukan  lima  model  perlakuan  sterilisasi  dengan  eksplan  berupa umbi dan bulbil. Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan bahwa eksplan bulbil lebih baik untuk digunakan  dalam  perbanyakan  porang  dibandingkan  dengan  umbi.  Selain  itu,  eksplan  yang digunakan  harus  dalam  keadaan  segar.  Adapun  perlakuan  sterilisasi  yang  paling  optimal  adalah dengan  dilakukan  perendaman  detergen  selama  10  menit,  lalu  perendaman  menggunakan fungisida  3  g  L -1 +  bakterisida  3  g  L -1 (12  jam),  kemudian  clorox  30%  (15  menit)  ditambah perlakuan didalam LAF berupa perendaman alkohol 70% (1 menit), asam askorbat 100 mg L -1 (1 jam), alkohol 70% (5-10 detik), clorox 1% (10 menit), betadine 10% (10 menit), dan betadine 15 tetes  (10  menit)  berturut-turut, dengan  eksplan  yang  digunakan  berupa  bulbil  dengan  dilakukan teknik  pengupasan  kulit  dan  pemotongan  menjadi  bagian  yang  lebih  kecil  sebelum  perlakuan sterilisasi  didalam  LAF.  Ditunjukkan  hasil  eksplan  yang  bertahan  hingga  ±  90  HST  tanpa  adanya kontaminasi.
Kata kunci: bulbil; sterilisasi; porang; umbi; in vitro

## ABSTRACT
Sterilization  is  an  important  factor  in  the  success  of  in  vitro  culture.  The  purpose  of  this study was to determine the proper sterilization optimization for porang propagation in vitro. This study  conducted  five  models  of  sterilization  treatment  with  explants  in  the  form  of  tubers  and bulbils. Based on the results of the study showed that bulbil explants were better for use in porang propagation than bulbs. In addition, the explants used must be fresh. The most optimal sterilization treatment is by soaking detergent for 10 minutes, then soaking using fungicide 3 g L -1 + bactericide 3  g  L -1 (12  hours),  then  clorox  30%  (15  minutes)  plus  treatment  in  LAF  in  the  form  of  alcohol soaking 70 % (1 minute), ascorbic acid 100 mg L -1 (1 hour), alcohol 70% (5-10 seconds), clorox 1% (10 minutes), betadine 10% (10 minutes), and betadine 15 drops (10 minutes) ) successively, with the  explants  used  in  the  form  of bulbils  with  the  skin  peeling  technique  and  cutting  into smaller parts before sterilization treatment in LAF. The results showed that explants survived up to ± 90 DAP without any contamination.
Keywords: bulbil; sterilization; porang; tuber; in vitro

## PENDAHULUAN
Tanaman  porang  ( Amorphophallus muelleri )  merupakan  salah  satu  anggota Famili  Aracea  yang  dicirikan  dengan habitus  berupa  herba,  monokotil,  dan hidup  menahun.  Porang  mudah  ditemui di  berbagai  tempat  yang  ternaungi, seperti  hutan,  lereng-lereng,  tepi  hutan jati  dan  belukar,  di  sepanjang  sungai  di daerah  tropis  (Ekowati et  al. ,  2015).
Bagian  yang  dimanfaatkan  adalah umbinya  yang  mengandung  glukomanan yang  sangat  tinggi  (±  40%),  kaya  serat, dan  tidak  terdapat  kolesterol  (Imelda et al. ,  2007).  Glukomanan  dimanfaatkan sebagai  bahan  pangan,  seperti  tepung dan  manosse,  serta  untuks  berbagai keperluan  industri,  seperti  farmasi, kosmetik, bahan pelapis, dan pengemulsi (Dinoto et al. , 2013). Tanaman porang sangat berpotensi untuk lebih dikembangkan pembudidayaannya  di  Indonesia  untuk memenuhi permintaan pasar secara luas, intensif,  dan  berkelanjutan  (Azis et  al. , 2014).  Selain  dari  nilai  jualnya  yang tinggi  dan  banyak  diperlukan,  tanaman porang  merupakan  jenis  tanaman  liar yang  mudah  didapatkan.  Selain  itu  juga tanaman  porang  dapat  tumbuh  dibawah naungan  sehingga  cocok  dikembangkan sebagai  tanaman  sela  di  antara pepohonan  kayu  dan  dapat  dikelola dengan sistem pertanian agroforestry.
Dilihat  dari  jumlah  produksi  dan permintaan,  Indonesia  sudah  mampu sedikitnya mengekspor porang ke Jepang sebanyak  3000  ton  tahun -1 .  Jumlah  ini masih  belum  mencukupi  kebutuhan pasar,  sehingga  prospek  pengembangan dan peluang bisnis masih tinggi. Adapun produksi  porang  di  dunia  sudah mencapai 30 ribu ton tahun -1 , dan jumlah ini hanya baru ditanam secara komersial di  Asia.  Belum  ada  laporan  produksi komersial  tanaman  ini  di  Eropa  dan Amerika  (Zhang et  al. ,  2010).  Namun sayangnya,  proses  budidaya  tanaman porang menghadapi beberapa permasalahan, diantaranya adalah
perbanyak  jumlah  umbi  yang  lama  dan tingkat  pengisian  umbi  ( bulking )  yang tidak  efisien  menyebabkan  siklus  hidup Amorphophallus sp. menjadi panjang. Hal ini menyebabkan produksi umbi komersil  secara  optimal  baru  bisa diperoleh  setelah  3  tahun  masa  tanam. Selain  itu,  terdapat  pula  serangan penyakit seperti busuk lunak ( Pectobacterium  carotovora )  dan  hawar bibit  ( Sclerotinium  rolfsii Sacc)  dapat berkontribusi  pada  rendahnya  hasil produksi  (Zhang et  al. ,  2010).  Kultur in vitro merupakan  salah  satu  teknik  yang efektif  dan  efisien  untuk  perbanyakan bibit  dengan  cepat,  jumlah  yang  banyak dan  seragam,  serta  berkesinambungan (Azis et al. , 2014). Melalui kultur in vitro ini  diharapkan  perbanyakan  tanaman
porang  dapat  dilakukan  relatif  lebih singkat.  Hal  ini  sama  artinya  dengan produksi  umbi  porang  yang  juga  bisa ditingkatkan  dalam  waktu  yang  lebih singkat pula.
Sterilisasi  sangat  penting  dalam teknik  perbanyakan  secara in  vitro
(Shofiyani et  al. ,  2019).  Sterilisasi dilakukan untuk memusnahkan kemungkinan adanya mikroba kontaminan  pada  media  kultur in  vitro. Mikroba  kontaminan  tersebut  bisa berupa bakteri, virus, khamir, dan jamur yang dapat mengakibatkan terhambatnya  pertumbuhan  eksplan
(Natasha  dan  Restiani,  2019).  Menurut Sandra  (2002)  dalam  Shofiyani et  al .
(2019),  sterilisasi  sangat  menentukan keberhasilan  kultur  jaringan  terutama sterilisasi eksplan yang berasal dari luar atau  lapang.  Jika  sterilisasi  gagal  maka kegiatan selanjutnya tidak bisa dilakukan (tidak  bermanfaat).  Hal  ini  karena mikrobia  akan  berkompetisi  dalam  hal nutrisi  dengan  eksplan.  Mengingat kondisi  steril  adalah  salah  satu  faktor yang menentukan keberhasilan kultur in vitro, pemilihan  metode  sterilisasi  yang tepat  sangat  penting  untuk  dioptimasi. Menurut  Habibah et  al. (2013),  tahap sterilisasi permukaan eksplan merupakan  tahap  awal  perkembangan
kultur in vitro . Sterilisasi dapat dilakukan dengan  berbagai  cara,  baik  secara  fisik maupun kimia. Secara fisik melalui suhu,
tekanan,  radiasi  dan  penyaringan, misalnya  sterilisasi,  pembakaran  atau sanitasi. Secara kimia melalui perubahan komposisi  molekul  misalnya  dengan senyawa  senyawa  fenolik,  alkohol,  klor, iodium, dan etilen oksida. Keefektifan zat antimikrobial  tergantung  konsentrasi, jumlah  dan  jenis  mikroorganisme,  suhu, bahan organik terlarut dan pH.  Menurut Natasha  dan  Restiani  (2019),  hal  yang penting  diperhatikan  dalam  tahap sterilisasi adalah eksplan yang steril dan menjaga agar jaringan dari eksplan tidak rusak  akibat  dari  konsentrasi  sterilan yang  digunakan.  Kesulitan  perbanyakan tumbuhan yang terkontaminasi mikroorganisme  dengan  kultur  jaringan, yaitu bagaimana mematikan atau menghilangkan  mikroorganisme  dengan bahan sterilian tanpa mematikan tumbuhan  (eksplan).  Menurut  Gunawan (1987)  dalam  Shofiyani et  al. (2019), bahan-bahan  sterilisasi  yang  biasa digunakan  umumnya  bersifat  toksik terhadap  jaringan.  Sehingga  perlu ditentukan  konsentrasi  sterilan  yang tepat agar bisa menghilangkan kontaminan  tetapi  tidak  merusak  atau mematikan eksplan.
Berbagai  cara  sterilisasi  telah banyak  dilakukan  oleh  peneliti  maupun pelaksana  kultur in  vitro untuk menghilangkan sumber kontaminan yang terdapat  dalam  eksplan  secara  efektif.
Kombinasi  bahan  sterilan  dan  waktu
perendaman yang tepat merupakan salah satu faktor yang menentukan keberhasilan streilisasi. Terdapat
berbagai  bahan  kimia  sterilan  yang dibutuhkan  untuk  sterilisasi  eksplan diantaranya  sodium  hipoklorit  (clorox), merkuri  khlorit  (sublimat),  detergen, alkohol 70%, HgCl 2 , bakterisida, fungisida,  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ), dan tween (Shofiyani dan Hajoeningtijas,
2010). Berdasarkan penelitian yang dilakukan  oleh  Handayani et  al. (2021) dalam kultur endosperma kepel secara in vitro melakukan perlakuan pra sterilisasi pada  biji  kepel  dengan  merendamnya dalam larutan detergen 2 g L -1 selama 10 menit,  kemudian  dibilas  sebanyak  3  kali menggunakan akuades, kemudian direndam dalam bakterisida dan
fungisida  masing-masing  2  g  L -1 selama 60  menit  sambil  digojok.  Setelah  itu, dibilas  dengan  akuades  didalam  LAF. Kemudian  biji  dicelupkan  ke  dalam alkohol  70%  selama  3  detik.  Lalu ditiriskan diatas tisu steril. Adapun pada penelitian  yang  dilakukan  oleh  Habibah et  al. (2013)  jamur  endofit  pada  daun burahol  dapat  dieliminasi  dengan penyiraman  fungisida  secara  teratur, selain  itu  pada  perlakuan  sterilisasi permukaan  eksplan  paling  optimal adalah  dengan  perendaman  fungisida selama  24  jam,  dilanjutkan  perendaman bakterisida  dan  fungisida  selama  30
menit,  perendaman  alkohol  70%  selama 1  menit,  dilanjutkan  dengan  clorox  15% selama  10  menit,  dan  klorofil  10% selama 10 menit berturut-turut.
Berbagai penelitian telah dilakukan  terhadap  optimasi  sterilisasi eksplan dalam kultur in vitro menyatakan bahwa konsentrasi senyawa kimia  seperti  detergen,  bakterisida, fungisida, dan alkohol yang dikombinasikan dengan waktu perendaman  yang  tepat  cukup  baik untuk menurunkan kemungkinan
munculnya  kontaminasi  pada  eksplan.
Oleh  karena  itu,  tujuan  penelitian  ini adalah  untuk  menentukan  sterilisasi eksplan  umbi  dan  bulbil  yang  optimal untuk kultur in vitro porang ( Amorphophallus muelleri Blume).

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  di Laboratorium Kultur Jaringan, UIN Sunan Gunung  Djati  Bandung,  pada  bulan
Januari-Mei 2021. Alat yang digunakan dalam
penelitian  adalah  botol  kultur,  Bunsen, LAF  ( Laminar  Air  Flow ), petridish ,  pisau bedah ( scalpel ), timbangan analitik, hand sprayer ,  kompor,  gelas  ukur, autoclave, microfilter, pipet  ukur,  pH  meter, aluminium  foil, plastic  wrapping ,  pensil, kertas label, rak kultur, kamera, dan alat tulis.
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  umbi  dan  bulbil porang,  media Murashige  and  Skoog , agar-agar, gula, air kelapa, BAP, akuades,
detergen,  clorox,  spritus,  alkohol  70%, bakterisida,  fungisida,  asam  askorbat, dan betadine. Tabel 1. Perlakuan sterilisasi umbi dan bulbil porang Pra Perlakuan Perlakuan Eksplan Detergen (10 menit) [A] Bakterisida 2g L -1 + fungisida 2 g L -1 (4 jam) Clorox 20% (10 menit) Umbi, bulbil yang dikecambahkan Detergen (10 menit) [B] Fungisida 3 g L -1 (5 jam), Bakterisida 3 g L -1 (5 jam), Clorox 10% (15 menit) Umbi yang dikecambahkan Detergen (10 menit) [C] Fungisida 3 g L -1 (5 jam), Bakterisida 3 g L -1 (5 jam), Clorox 10% (15 menit)
Pelakuan dalam LAF: As. Askorbat 500 mg L -1 (15 menit) 2x, Alkohol 70% (5 menit), Betadine (5 menit) Bulbil yang dikecambahkan dan dilakukan pengupasan kulit sebelum perlakuan dalam LAF Detergen (10 menit)
[D] Fungisida 3 g L -1 + Bakterisida 3 g L -1 (12 jam) Clorox 30% (15 menit)
Perlakuan di LAF: Alkohol 70 % (1 menit), As. Askorbat 100 mg L -1 (1 jam), Alkohol 70% (5-10 detik), Clorox 1% (10 menit), Betadine 10% (10 menit), Betadine 15 tetes (10 menit) Umbi, dan Bulbil yang dikecambahkan dan dilakukan pengupasan kulit sebelum perlakuan dalam LAF Detergen (10 menit) [E] Fungisida 3 g L -1 + Bakterisida 3 g L -1 (12 jam) Clorox 30% (15 menit)
Perlakuan di LAF:
Alkohol 70% (1 menit), As. Askorbat 100 mg L -1 (1 jam), Alkohol 70% (5-10 detik), Clorox 1% (10 menit), Betadine 10% (10 menit), Betadine 15 tetes (10 menit) Bulbil dan Umbi tanpa dikecambahkan dan dilakukan pengupasan kulit sebelum perlakuan dalam LAF
Eksplan  yang  digunakan  adalah mata tunas umbi dan bulbil porang yang akan  ditumbuhkan  dalam  media  MS0 dengan  penambahan  ZPT  (Zat  Pengatur Tumbuh) BAP, dengan 4 taraf konsentrasi BAP (0; 0,5; 1; 1,5). Tabel 1 menunjukkan beberapa variasi sterilisasi  yang  dilakukan.  Variasi tersebut  dilihat  dari  beberapa  faktor, yakni  bahan  kimia  sterilan,  waktu perendaman, jenis eksplan, dan konsentrasi  BAP  yang  digunakan. Penelitian ini dilakukan secara berangsur-angsur  dimulai  dari  tahap  A hingga  E  sehingga  bahan  sterilisasi, waktu  perendaman,  dan  jenis  eksplan yang digunakan ditentukan berdasarkan
hasil  yang  diamati  pada  tahapan sebelumnya.  Selanjutnya  diuji  dengan perlakuan  yang  lebih  baik  pada  tahap berikutnya.  Penelitian  ini  dianalisis secara deskriptif,
berdasarkan keberadaan  kontaminasi  dan  lama eksplan bertahan hidup.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sterilisasi  merupakan  tahap  awal yang  sangat  penting  dalam  kultur in vitro .  Jika  tahap  ini  tidak  berhasil  maka teknik  pengkulturan  tidak  mungkin dapat dilakukan. Ketidakberhasilan
tersebut  dipengaruhi  oleh  adanya kontaminasi  mikroorganisme  seperti jamur  dan  bakteri  yang  dapat  merusak sel  atau  jaringan  yang  dikultur  dan menyebabkan  pertumbuhan  menjadi terhambat atau bahkan kematian eksplan. Bahan sterilisasi yang
digunakan umumnya clorox, alkohol, dan benlate.  Dalam  penelitian  ini  dilakukan perlakuan  awal  dengan  perendaman detergen  selama  10  menit,  dengan eksplan  berupa  umbi  dan  bulbil  porang.
Perlakuan  A,  B,  C,  dan  D  menggunakan eksplan yang sebelumnya dikecambahkan terlebih dulu. Sedangkan perlakuan E menggunakan eksplan bulbil yang  segar.  Teknik  sterilisasi  juga dilakukan  di  dalam  LAF  pada  perlakuan C,  D,  dan  E.  Pada  tahap  ini  eksplan dikupas  terlebih  dulu  dan  dipotong
menjadi  bagian  lebih  kecil.  Selanjutnya dilakukan perendaman
kembali menggunakan  beberapa  bahan  kimia sterilan,  seperti  asam  askorbat,  clorox, betadine,  dan  alkohol.  Perendaman menggunakan  asam  askorbat  bertujuan untuk meminimalisir terjadinya browning yang  disebabkan  keluarnya eksudat  berupa  senyawa  fenol  akibat pengirisan/penyayatan  organ.  Sepeti yang dinyatakan George dan Sherrington (1984)  dalam  Widayanti et  al. (2014) menyatakan  bahwa browning dapat ditanggulangi salah satu caranya
memodifikasi  potensial  redoks  dengan penambahan  asam  askorbat  (C 6 H 8 O 6 ) pada  media  kultur.  Hasil  optimasi sterilisasi  eksplan  umbi  dan  bulbil porang dapat dilihat pada tabel 2.
Perlakuan B dan C dilakukan dalam waktu  bersamaan  dengan  dibedakan jenis  eksplan,  bahan  sterilisasi,  dan waktu perendamannya. Hal ini dilakukan,  karena  pada  perlakuan  A, media  dengan  eksplan  umbi  lebih  cepat (±2 HST) dan lebih banyak kontaminasinya,  sedangkan  eksplan bulbil bisa bertahan sedikit lebih lama (± 4 HST) dan lebih sedikit kontaminasinya. Sehingga,  eksplan  bulbil  yang  dipilih untuk  digunakan  pada  perlakuan  C dengan  perlakuan  sterilisasi  yang  lebih ditingkatkan  dari  perlakuan  B.  Pada perlakuan  D  dilakukan  kembali  uji sterilisasi  menggunakan  eksplan  umbi
dengan  bahan  sterilisasi  dan  waktu perendaman  yang  ditingkatkan,  namun hasil tetap menunjukkan bahwa penggunaan  eksplan  umbi  tidak  lebih baik  dari  eksplan  bulbil.  Sehingga  pada perlakuan  E,  digunakan  eksplan  berupa bulbil saja. Pada  penelitian  ini,  konsentrasi BAP tidak berpengaruh terhadap optimasi  sterilisasi  umbi  dan  bulbil porang.  Ditunjukkan  dengan  adanya kontaminasi  yang  acak  pada  berbagai konsentrasi media.
Tabel 2. Pengaruh perlakuan sterilisasi pada kultur in vitro umbi dan bulbil porang Perlakuan Eksplan Rerata waktu muncul kontaminasi (HST) Persentase kontaminasi (%) Persentase eksplan hidup (%) Pra sterilisasi Sterilisasi Jamur Bakteri Detergen (10 menit) [A] Umbi dan bulbil yang dikecambahkan Umbi: 4 Bulbil: 3 100 0 0 Detergen (10 menit) [B] Umbi yang dikecambahkan 3 100 0 0 Detergen (10 menit) [C] Bulbil yang dikecambahkan dan dilakukan pengupasan kulit sebelum perlakuan dalam LAF 4 50 0 50 (bertahan hingga 27 HST) Detergen (10 menit) [D] Umbi, dan Bulbil yang dikecambahkan dan dilakukan pengupasan kulit sebelum perlakuan dalam LAF Bulbil: 11 Umbi: 12 Bulbil:71 Umbi:90 0 Bulbil: 29 Umbi: 10 (Bertahan hingga 30 < X < 60 HST ) Detergen (10 menit) [E] Bulbil tanpa dikecambahkan dan dilakukan pengupasan kulit sebelum perlakuan dalam LAF 0 0 0 100 (bertahan hingga 90<x<120 HST dalam keadaan dorman, kemudian mengalami browning ) Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan bahwa sterilisasi umbi dan bulbil  yang  paling  optimal  adalah perendaman menggunakan fungisida 3 g L -1 +  bakterisida  3  g  L -1 (12  jam), kemudian  clorox  30%  (15  menit)
ditambah perlakuan didalam LAF berupa perendaman  alkohol  70%  (1  menit), asam  askorbat  100  mg  L -1 (1  jam), alkohol 70% (5-10 detik), clorox 1% (10 menit),  betadine  10%  (10  menit),  dan betadine  15  tetes  (10  menit)  berturut- turut,  dengan  eksplan  yang  digunakan berupa  bulbil  dan  dilakukan  teknik pengupasan  kulit  dan  pemotongan menjadi bagian yang lebih kecil sebelum
perlakuan  sterilisasi  didalam  LAF. Ditunjukkan hasil eksplan yang bertahan hingga  ±  90  HST  tanpa  adanya kontaminasi.  Meskipun  begitu,  eksplan tidak bertahan sampai terlihat pertumbuhan, melainkan terjadi browning .  Hal  ini  dimungkinkan  media yang digunakan belum optimal, dan perlu dilakukan subkultur ke media baru.
(a) (b) (c) (d) (e)
(f)
Gambar 1. Kontaminasi oleh jamur pada eksplan (a) bulbil dan (b) umbi yang dikecambahkan; Kontaminasi oleh  jamur  pada  eksplan  (c)  bulbil  dan  (d)  umbi  yang  dikecambahkan  dan  dilakukan  perlakuan dalam LAF; kontaminasi oleh jamur pada eksplan (e) bulbil dan (f) umbi yang tidak dikecambahkan dan dilakukan perlakuan dalam LAF
Bahan  kimia  sterilan  dalam penelitian  ini  terdiri  atas  bakterisida, fungisida,  dan  clorox  yang  berfungsi sebagai bahan desinfektan atau antiseptik untuk membunuh mikroorganisme  di  permukaan  eksplan.
Bakterisida  untuk  membunuh  bakteri, sedangkan  fungisida  untuk  membunuh cendawan  atau  jamur.  Adapun  asam askorbat digunakan untuk meminimalisir terjadinya browning (pencoklatan)  pada eksplan. Adapun jika dibandingkan
penggunaan  eksplan  antara  umbi  dan bulbil,  terlihat  persentase  kontaminasi lebih  banyak  terjadi  pada  eksplan  umbi yakni  sebesar  90%  dengan  rata-rata waktu  muncul  kontaminasi  12  HST, dibanding bulbil dengan persentase 71% kontaminasi  dengan  rata-rata  muncul kontaminasi  11  HST  pada  perlakuan keempat.
Kontaminan  dalam  perbanyakan porang  secara in  vitro umumnya disebabkan  oleh  jamur.  Terlebih  jika eksplan  yang  digunakan  berupa  umbi yang  diperoleh  dari  dalam  tanah,  maka kemungkinan kontaminasi menjadi sangat  besar.  Meskipun  perlakuan sterilisasi  dilakukan  sebanyak  2  kali, yakni  pertama  pada  bagian  permukaan dan kedua setelah dilakukan pengupasan dan  pemotongan,  kontaminasi  masih sangat  besar  pada  eksplan  yang dikecambahkan.  Hal  ini  menunjukkan
bahwa  eksplan  yang  digunakan  baik umbi  atau  bulbil  tidak  perlu  dilakukan perkecambahan terlebih dahulu.
Gambar  1  menunjukkan  bahwa eksplan a hingga d yang dikecambahkan mengalami kontaminasi, ditandai dengan eksplan  yang  diselimuti  oleh  hifa  jamur berwarna  putih.  Menurut  Rahmawati (2008)  dalam  Natasha  dan  Restiani (2019)  menyatakan  patogen  yang muncul  mempertahankan  dirinya  dalam bentuk miselium atau dalam bentuk lain yaitu  bisa  di  dalam  embrio,  dalam  kulit maupun di permukaan eksplan.
Kontaminasi  berupa  jamur  terjadi  pada permukaan  eksplan  ditandai  dengan munculnya  hifa  yang  menyelimuti eksplan berbentuk kapas berwarna putih dan  spora  yang  berwarna  hitam.  Selain kontaminasi  oleh  jamur,  eksplan  e  dan f pada  awalnya  mengalami  dorman kemudian lama-kelamaan eksplan mengalami browning . Dormannya eksplan kemungkinan disebabkan media yang digunakan kurang optimal,
sehingga  perlu  dilakukan  subkulttur  ke media  baru.  Adapun browning menurut Hutami  dan  Sri  (2008)  terjadi  akibat akumulasi  kandungan  fenolik  yang teroksidasi akibat goresan atau luka pada sel, menyebabkan tanaman yang dikultur menjadi kecokelatan atau kehitaman dan gagal  tumbuh.  Akibat  adanya  aktivitas enzim oksidase yang  mengandung tembaga  seperti tirosinase dan polifenol
AGROSCRIPT Vol. 3 No.2 (2021) Hal. 121-131
oksidase .  Menurut  Widayanti et  al. (2014) browning dapat  menyebabkan pertumbuhan dan perkembangan
eksplan  terhambat. Browning terjadi sebagai  bentuk  adaptif  dari  sistem biologi  akibat  pengaruh  fisik  dan biokimia.
KESIMPULAN Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan bahwa eksplan bulbil lebih baik untuk perbanyakan porang
dibandingkan  dengan  umbi.  Eksplan yang  digunakan  harus  dalam  keadaan segar.  Adapun  perlakuan sterilisasi  yang paling  optimal  adalah  dengan  dilakukan perendaman  detergen  selama  10  menit, lalu perendaman menggunakan fungisida 3  g  L -1 +  bakterisida  3  g  L -1 (12  jam), kemudian  clorox  30%  (15  menit) ditambah perlakuan didalam LAF berupa perendaman  alkohol  70%  (1  menit), asam  askorbat  100  mg  L -1 (1  jam), alcohol 70% (5-10 detik), clorox 1% (10 menit),  betadine  10%  (10  menit),  dan betadine  15  tetes  (10  menit)  berturut- turut,  dengan  eksplan  yang  digunakan berupa  bulbil  dengan  dilakukan  teknik pengupasan  kulit  dan  pemotongan menjadi bagian yang lebih kecil sebelum perlakuan  sterilisasi  didalam  LAF. Ditunjukkan hasil eksplan yang bertahan hingga  ±  90  HST  tanpa  adanya kontaminasi.

## DAFTAR PUSTAKA
Azis,  Masruri,  Ratnasari,  &  Rahayu.
(2014).  Induksi  Kalus  Umbi  Iles- Iles  (Amorphophallus  muelleri Blume) dengan Kombinasi Konsentrasi 2,4 D dan BAP secara In  Vitro. LenteraBio,  3 (2),  109- 114. Dinoto,  Achmad,  Watumlawar,  C.  C.,  & Yopi. (2013). In Vitro Modulation of  Human  Intestinal  Microbiota by Mannoligosaccharides Synthesized from Amorphophallus muelleri Glucomannan. Microbiology Indonesia, 7 (4), 144-151.
Ekowati,  Gustini,  Yunawiadi,  B.,  & Azrianingsih,  R.  (2015).  Sumber Glukomanan  dari  Edible  Araceae di Jawa Timur. J-Pal, 6 (1), 32-41. Habibah, N., Sumadi, & Ambar, S. (2013). Optimasi  Sterilisasi  Permukaan Daun  dan  Eliminasi  Endofit pada Burahol. Biosaintifika,  5 (2),  94- 99.
Handayani,  E.,  Irsyadi,  M.  B.,  Aris,  I., Alawiyah,  R.  L.,  Ayuningtias,  N., Permatasari,  F.,  et  al.  (2021). Optimasi  Sterilisasi  Endosperma Kepel  (Stelecthocarpus  burahol [BI]  Hook  F.  &  Th)  Secara  In Vitro. Bio  Edu:  Jurnal  Pendidikan Biologi, 6 (2), 113-121. Hutami, & Sri. (2008). Masalah Pencoklatan pada Kultur Jaringan. Agrobiogen, 4 (2), 83-88. Imelda,  Wulansari,  &  Suryasari.  (2007). Mikropropagasi  Tanaman  Iles- Iles  (Amorphophallus  muelleri Blume). Ilmiah  Nasional,  8 (4), 217-223. Natasha,  K.,  &  Restiani,  R.  (2019). Optimasi Sterilisasi Eksplan pada Kultur  In  Vitro  Ginseng  Jawa (Talium  paniculatum). Prosiding Symbion  (Symposium  on  Biology Education) (pp. 87-95). Yogyakarta:  Universitas  Ahmad Dahlan.
Shofiyani,  A.,  Purnawanto,  A.  M.,  Zahara, R.,  &  Aziz,  A.  (2019).  Pengaruh Berbagai  Sterilan  dan  Waktu Perendaman Terhadap Keberhasilan  Sterilisasi  Eksplan Daun Kencur (Kaempferia galanga L) pada Teknik Kultur In Vitro. Seminar  Nasional  Hasil Penelitian  dan  Pengabdian  pada Masyarakat  IV  Tahun  2019 (pp. 668-678).  Purwokerto:  LPPM- Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Widayanti, A. I., Dwiyani, R., & Yuswanti,
H.  (2014).  Pengaruh  Kombinasi Napthalene  Acetic  Acid  (NAA)  - Benzyl  Amino  Purine  (BAP)  dan Jenis Eksplan pada Mikropropagasi  Anggrek  Vanda tricolor Lindl. var. suavis. Agrotrop, 4 (1), 13-18.
Zhang,  Donghua,  Wang,  Q.,  &  George,  S. (2010).  Mechanism  of  Staggered Multiple  Seedling  Production from  Amorphophallus  Bulbifer and  Amorphophallus  muelleri and Its Application to Cultivation in  Southeast  Asia. Journal  of Tropical Agriculture and Development, 54 (3), 84-90.