## AQUASAINS
PROFIL HISTOPATOLOGI KERAPU TIKUS ( Cromileptes altivelis ) YANG
DISTIMULASI JINTAN HITAM ( Nigella sativa ) DAN DIINFEKSI Viral
Nervous Necrosis (VNN)
Septi Diana Sari 1 · Wardiyanto 2 · Agus Setyawan 2
Ringkasan Black cumin (Nigella sativa) has been used as an immunostimulant in humpback grouper (Cromileptes altivelis) was infected with Viral Nervous Necrosis (VNN). The addition of 7,5% black cumin in fi- sh feed showed to increase innate immu- ne responsee of humpback grouper. Howe- ver, then was unknown histopathology effe- ct forward black cumin administration in fish. This research purpose was to know pro- file of histopathological humpback grouper stimulated black cumin and infected VNN. Fish was organized in five tanks based on treatment i.e control, VNN infected fish, and VNN infected fish with additional 2,5 %, 5 %, and 7,5 % black cumin in fish feed. Then was five organs i.e brain, eyes, kid- ney, liver, and gills, that observed each fish sample. Result of this research showed that the addition of black cumin, was not affect histopathology profile in humpback grouper that infected with VNN.
Keywords humpback grouper, black cumin, VNN, histopathology
Received: 28 April 2014 Accepted: 24 Juli 2014
1 )Alumni Jurusan Budidaya Perairan, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung
2 ) Dosen Jurusan Budidaya Perairan Universitas Lampung Alamat: Jurusan Budidaya Perairan Fa- kultas Pertanian Unila Jl. Prof. S. Brodjonegoro No. 1 Gedong Meneng Bandar Lampung 35145 E-mail: agus.setyawan@fp.unila.ac.id

## PENDAHULUAN
Viral Nervous Necrosis (VNN) adalah je- nis virus Nodaviridae yang menyerang ke- rapu, terutama pada stadia larva dan be- nih. VNN dapat menyebabkan kematian mas- sal hingga mencapai 100% pada stadia la- rva [1]. [2] menyatakan bahwa Viral Ne- rvous Necrosis (VNN) dapat menyebabk- an kematian karena virus ini merusak saraf sentral pada ikan, sehingga berbagai rang- sangan tidak mampu direspon dan keseim- bangan dalam bergerak terganggu sehing- ga sulit berenang dan akhirnya ikan meng- alami kematian.
Salah satu cara untuk mengatasi masalah kerapu yang terinfeksi virus adalah dengan perbaikan nutrisi dengan memanfaatkan res- pon imun yang terdapat pada tubuh ikan [3]. Ekstrak-ekstrak herbal saat ini banyak dipergunakan untuk stimulan, salah satu- nya adalah jintan hitam ( Nigella sativa ). Banyaknya jintan hitam yang diperjualbe- likan di pasaran dapat dijadikan sebagai al- ternatif imunostimulan untuk menanggula- ngi VNN. Penggunaan imunostimulan pa- da benih kerapu dapat meningkatkan keke- balan terhadap infeksi VNN, terutama da- lam peningkatan respon imun non-spesifik [4]. Pemanfaatan jintan hitam sebagai imu- nostimulan dapat menurunkan mortalitas rainbow trout ( Oncorhynchus mykiss ) ter- hadap serangan patogen [5].
Septi Diana Sari 1 et al.
Pemeriksaan histopatologi dilakukan mela- lui pemeriksaan terhadap perubahan-perubahan abnormal pada tingkat jaringan. [6] menya- takan bahwa kelebihan pemeriksaan histo- patologi dalam mendiagnosa penyakit in- feksi adalah untuk mengetahui penyebab infeksinya, klasifikasi penyakit berdasark- an waktu dan distribusi penyakit serta ter- deteksinya penyakit infeksi pada ikan-ikan yang tidak menunjukkan gejala klinis.
[7] menyatakan bahwa virus menyebabk- an perubahan karakteristik selama replika- si saat menginfeksi sel. Gambaran dari in- feksi virus, baik dalam sel maupun jaringan dapat menunjukkan perubahan gejala ser- ta fungsi sel dan jaringan. Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian yang difokusk- an pada pengaruh penambahan jintan hi- tam pada konsentrasi yang berbeda pada kerapu tikus yang diinfeksi VNN terhadap perubahan struktur jaringannya.

## MATERI DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Agus- tus - Oktober 2013 di Balai Besar Pengem- bangan Budidaya Laut (BBPBL) Lampung. Penelitian ini terdiri dari 4 perlakuan ya- itu dengan penambahan jintan hitam da- lam pakan dengan konsentrasi yang berbe- da per-kg pakan (0; 2,5; 5; 7,5%), dimana setiap bak perlakuan terdapat 10 ekor ik- an. Ikan dipelihara dengan pemberian pak- an dua kali sehari pada waktu pagi dan so- re hari. Pemberian jintan hitam dilakuk- an selama masa pemeliharaan. Pada hari ke-38 pemeliharaan dilakukan uji tantang menggunakan ekstrak VNN sebanyak 0,1 ml/ikan dengan injeksi secara intra perito- neal (i.p). Setelah diinfeksi VNN, ikan di- amati gejala-gejala abnormal yang terjadi dan saat ikan mengalami moribund (seka- rat), ikan dinekropsi untuk dibuat preparat histopatologi dan kemudian diamati peru- bahan struktur jaringan pada ikan uji.
Pengamatan perubahan jaringan dilakuk- an pada organ otak, mata, ginjal, hati, dan insang pada tingkatan penambahan kon- sentrasi jintan hitam yang berbeda 0; 2,5; 5; 7,5% per-kg pakan, yang dibandingkan dengan kontrol (tanpa distimulasi jintan
hitam dan diinfeksi VNN). Hasil peneliti- an dianalisis secara deskriptif, analisis yang dilakukan menggunakan referensi dari [8].

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil gejala klinis setelah dilakukan uji tan- tang mengindikasikan bahwa ikan uji ter- infeksi VNN, gejala yang ditimbulkan ya- itu nafsu makan menurun, menunjukkan tingkah laku berenang yang tidak beratur- an atau berenang memutar ( whirling ), ge- rak renang yang pasif, dan berada di dasar kolam terlihat seperti mati. Gejala klinis yang ditimbulkan menunjukkan perbedaan pada tingkat konsentrasi pemberian jintan hitam.
Otak merupakan organ target penyerangan VNN, karena akibat pelemahan saraf oleh VNN pada otak sehingga mengakibatkan gerakan renang ikan berputar-putar ( whir- ling ) [1] Pengamatan pada organ otak, di- ketahui bahwa kerapu tikus terinfeksi VNN karena ditemukan adanya vakuolisasi (Gam- bar 1). Vakuolisasi terbentuk karena ter- jadinya degenerasi. Degenerasi merupakan perubahan jaringan menjadi bentuk yang kurang aktif [9].
Organ mata ikan yang terserang VNN juga mengalami pelemahan saraf sehingga meng- akibatkan ikan menjadi buta dan berenang abnormal [1]. Hasil pengamatan histopato- logi mata (Gambar 2) ditemukan adanya kerusakan berupa vakuolisasi pada lapisan inner nuclear . Vakuola yang terbentuk ke- mungkinan karena mengalami oedem. Oe- dem merupakan keadaan abnormal pada jaringan yang bercirikan adanya rongga di- antara sel atau karena penumpukan cairan di jaringan interestisial [10].
Hasil pengamatan histopatologi organ gin- jal (Gambar 3), pada perlakuan A meng- alami histopatologi nefritis kronis (pera- dangan pada glomerulus) ditandai dengan adanya infiltrasi sel limfosit. Infiltrasi li- mfosit merupakan penimbunan bahan pa- tologis dalam jaringan atau sel yang tidak normal atau dalam jumlah yang berlebih- an [11]. Penimbunan bahan patologis yang berlebihan mengakibatkan inflamasi atau reaksi peradangan.
Gambar 1 Histopatologi otak kerapu tikus ( Cromileptes altivelis ) yang terinfeksi VNN dengan pewarnaan H-E dan perbesaran 400x. Keterangan: a. korteks, b. medulla, c. sel-sel neuroglia; 1. Vakuolisasi
Gambar 2 Histopatologi mata kerapu tikus ( Cromileptes altivelis ) yang terinfeksi VNN dengan pewarnaan H-E dan perbesaran 400x. Keterangan: a. pigment epithelium, b. photoreceptor layer (cones and rods), c. inner nuclear layer, d. Inner plexiform layer; 1. Vakuolisasi.
Hati merupakan organ yang memiliki ba- nyak fungsi diantaranya adalah pemben- tukan dan sekresi empedu, metabolisme zat- zat penting bagi tubuh, pertahanan tubuh, serta fungsi vaskuler. Berdasarkan banyak- nya fungsi hati maka dengan adanya keru- sakan atau kelainan pada hati akan mem- pengaruhi fungsi jaringan tubuh lainnya, oleh karena itu organ hati juga diamati. Hasil histopatologi organ hati (Gambar 4), sel-sel hepatosit mengalami degenerasi yang diikuti piknotik nukleus. Piknotik meru- pakan tahap awal terjadinya nekrosis. Sel
piknotik memiliki ciri inti yang berkerut dan berwarna gelap akibat paparan radiasi [11]. Keadaan abnormal berupa degenerasi juga terdapat pada ikan kontrol, sehingga hal tersebut mengindikasikan bahwa ada- nya faktor lain yang mempengaruhi sela- in penambahan jintan hitam dan infeksi VNN. Secara umum organ hati ikan kera- pu tikus mengalami degenerasi. Jenis-jenis degenerasi pada masing-masing perlakuan berbeda, hal tersebut menunjukkan adanya tingkat kerusakan yang berbeda pada hati. Gambaran organ hati yang normal seha-
Septi Diana Sari 1 et al.
Gambar 3 Histopatologi ginjal kerapu tikus ( Cromileptes altivelis ) yang terinfeksi VNN dengan pewarnaan H-E dan perbesaran 400x. Keterangan: a. Tubulus ginjal, b. Glomerulus, c. sel-sel leukosit; 1. infiltrasi sel limfosit
Gambar 4 Histopatologi hati kerapu tikus ( Cromileptes altivelis ) yang terinfeksi VNN dengan pewarnaan H-E dan perbesaran 400x. Keterangan: a. Inti sel hepatosit; 1. Vakuolisasi
rusnya ditandai dengan dijumpainya satu inti atau beberapa inti di tengah sel hati.
Insang merupakan alat respirasi pada ikan yang berhubungan langsung dengan ling- kungan luar sehingga berpeluang besar ter- infeksi penyakit. Hasil pengamatan histo- patologi insang (Gambar 5) menunjukkan bahwa struktur jaringan insang pada kon- trol, perlakuan A, B, C dan D tidak menga- lami perubahan spesifik. Hal tersebut meng- indikasikan bahwa VNN tidak menyerang insang dan juga tidak ada masalah dengan
kondisi perairan tempat pemeliharaan ik- an.
Berdasarkan hasil perbandingan gambar- an histopatologi pada masing-masing org- an tiap perlakuan, perlakuan A (penam- bahan jintan hitam 2,5%) menunjukkan ha- sil bahwa histopatologinya yang paling pa- rah, karena hampir disetiap organ yang di- amati terdapat keadaan abnormal kecua- li pada insang. Perubahan abnormal yang terjadi pada perlakuan A yaitu adanya va- kuola pada histopatologi organ otak dan mata.
Gambar 5 Histopatologi insang kerapu tikus ( Cromileptes altivelis ) yang terinfeksi VNN dengan pewar- naan H-E dan perbesaran 400x. Keterangan: a. lamella primer, b. lamella sekunder.
Histopatologi pada perlakuan B (penam- bahan jintan hitam 2,5 %) dan C (penam- bahan jintan hitam 5 %) tidak terdapat perubahan yang spesifik apabila dibandingk- an dengan kontrol. Namun, perlakuan C lebih baik dibandingkan dengan perlaku- an B, dilihat dari perubahan struktur jari- ngannya.
Histopatologi pada perlakuan D (penam- bahan jintan hitam 7,5 %) menunjukkan bahwa struktur jaringannya hampir sama dengan ikan kontrol dan menunjukkan ha- sil yang terbaik dibandingkan dengan per- lakuan A, B, dan C. Sehingga dapat dika- takan bahwa tingginya konsentrasi jintan hitam yang diberikan (2,6 % - 7,5%) ti- dak memberikan dampak kerusakan pada struktur jaringan organ, bahkan hasil pro- fil histopatologi yang terbaik ditunjukkan pada perlakuan D. Jadi, secara berurutan tingkat kerusakan terendah dari hasil gam- baran histopatologi adalah perlakuan D, perlakuan C, dan perlakuan B. Sesuai de- ngan penelitian sebelumnya yang dilakuk- an oleh [12], hasil pengamatan histopato- logi hepatosit pada tikus putih yang dibe- ri jintan hitam dengan dosis 500 – 1.500 mg/kgBB selama 21 hari, hasilnya tidak ada perubahan secara signifikan. Tingkat kerusakannya yang terjadi dapat dikenda- likan karena banyak kandungan jintan hi-
tam yang melindungi hati dari kerusakan yang lebih parah.

## Pustaka
1. Putri, R., U. Yanuhar dan A. M. Suryanto.
2013. Perubahan Struktur Jaringan Mata dan Otak pada Larva Ikan Kerapu Tikus ( Cromi- leptes altivelis ) yang Terinfeksi Viral Nervo- us Necrosis (VNN) dengan Pemeriksaan Scan- ning Electron Microscope (SEM). MSPi Stu- dent Journal 1: 1-10.
2. Prayitno, S. 2002. Peran Budidaya Perair- an Khususnya Penanganan Penyakit Ikan da- lam Pengelolaan Sumberdaya Perikanan. Se- marang: Universitas Diponegoro.
3. Suprayudi, M.A., L. Indriastuti dan M. Se- tiawati. 2006. Pengaruh Penambahan Bahan- Bahan Imunostimulan dalam Formulasi Pakan Buatan terhadap Respon Imunitas dan Per- tumbuhan Ikan Kerapu Bebek, Cromileptes altivelis . Jurnal Akuakultur Indonesia 5: 77- 86.
4. Roza, D., F. Johnny dan Tridjoko. 2006. Pe- ningkatan Respon Imun Non-Spesifik Benih Kerapu Bebek, Cromileptes altivelis dengan Imunostimulan dan Bakterin terhadap Infeksi Viral Nervous Necrosis (VNN). Jurnal Peri- kanan 8: 25-35.
5. Dorucu, M., S. Ozesen Colak, U. Ispir, B. Al- tinterim and Y. Celayir. 2009. The Effect of Black Cumin Seeds, Nigella sativa, on the Im- mune Response of Rainbow Trout, Oncorhyn- chus mykiss . Mediterranean Aquaculture Jo- urnal. Vol. 2(1); 27-33. 6. Purivirojkul, W. 2012. Chapter 9: His- tological Change of Aquatic Animals by Parasitic Infection. Diakses melalui ht- tp://dx.doi.org/10.5772/52769 InTech, pada tanggal 20 Desember 2013.
Septi Diana Sari 1 et al.
7. Gupta, E., P. Bhalla, N. Khurana and T.
Singh. 2009. Histopathology for the diagnosis of infectious diseases. Indian Journal of Medi- cal Microbiology 27: 100-106.
8. Genten, F., E. Terwinghe and A. Dangui.
2009. Atlas of Fish Histology. Science Publi- shers. USA. 9. Tavernarakis, N and M. Driscoll. 2001. Cell/Neuron Degeneration. Academic Press. USA. 10. Robinson, A. 2012. Oedema (Swelling). Egton Medical Information Systems Limi- ted (EMIS). Article patient. Diakses tang- gal 12 Desember 2013 melalui http:// patient.co.uk/health/oedema-swelling.pdf. 11. Mitchell, R.N. 2006. Buku Saku Dasar Patolo- gis Penyakit Robbins & Cotran Edisi 7 (Poc- ket Companion to Robbins & Cotran Patho- logic Basis of Disease 7 edition). EGC Medical Publisher. Jakarta. 12. Tamad, F.S.U., Z.S. Hidayat, dan H. Sulistyo. 2011. Gambaran Histopatologi Hepatosit Ti- kus Putih Setelah Pemberian Jintan Hitam se- lama 21 hari (Subkronik). Mandala of Health. Vol 5(3). Diakses tanggal 12 Desember 2013 melalui http://kedokteran.unsoed.ac.