E-ISSN:
2548-1398 Published by: Ridwan Institute
Syntax Literate: Jurnal Ilmiah Indonesia p–ISSN: 2541-0849 e-ISSN: 2548-1398 Vol. 7, No. 5, Mei 2022
AKTIVITAS PENGHAMBATAN XANTIN OKSIDASE HERBA TAPAK LIMAN, BIJI JINTAN HITAM, DAN DAUN TALOK SECARA IN SILICO DAN IN VITRO
Marybet Tri Retno Handayani 1,2 , Esti Mumpuni 2 , Dian Ratih Laksmitawati 2 1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Pakuan, Bogor, Indonesia
2 Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila, Srengseng Sawah, Jakarta Selatan, Indonesia Email: marybettrh@gmail.com, esti_mumpuni@yahoo.com, dianratih.ffup@gmail.com

## Abstrak
Hiperurisemia  adalah  peningkatan  kadar  asam  urat  darah  di  atas  normal  yang merupakan  faktor  resiko  penyakit  gout.  Allopurinol  digunakan  untuk  terapi hiperurisemia,  namun  masyarakat  Indonesia  menyukai  herbak  sebagai  alternatif terapi.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas  penghambatan  xantin oksidase secara in silico dan in vitro pada tanaman herba tapak liman (Elephantopus scaber  Linn),  biji  jintan  hitam  (Nigella  sativa  Linn)  dan  daun  talok  (Muntingia calabura  Linn).  Pada  pengujian  secara  in  silico,  70  senyawa  bioaktif  yang  berasal dari herba tapak liman, biji jintan hitam dan daun talok diujikan sebagai ligan dan divisualisasikan  interaksinya  terhadap  reseptor  pada  enzim  yang  berperan  sebagai antihiperurisemia dengan metode Structure based ligand Dari hasil docking diperoleh 15 senyawa uji yang dapat menghambat enzim xantin oksidase kerena memperoleh score docking lebih kecil dari kontrol positif. Kemudian dilakukan penelitian secara in  vitro  untuk  mengetahui  aktivitas  penghambatan  xantin  oksidase  oleh  ekstrak etanol 70% herba tapak liman, biji jintan hitan, dan daun talok, hasil menunjukkan adanya  aktivitas  penghambatan  xantin  oksidase  masing-masing  sebesar  41,08%; 34.92%; dan 31,57%. Tanaman herba tapak liman (Elephantopus scaber Linn), biji jintan  hitam  (Nigella  sativa  Linn)  dan  daun  talok  (Muntingia  calabura  Linn) mengandung senyawa yang memiliki aktivitas sebagai penghambat xantin oksidase pada hiperurisemia.
Kata kunci : Xantin oksidase, docking, Elephantopus scaber, Nigella sativa, Muntingia calabura

## Abstract
Hyperuricemia is an increase in blood uric acid levels above normal which causes gout. There are several herbs that are often used by people as a treatment, including tapak  liman  herbs,  black  cumin  seeds  and  talok  leaves.  This  study  tested  the inhibition  of  xanthine  oxidase  activity  in  silico  and  in  vitro  on  tapak  liman  herbs (Elephantopus scaber Linn), black cumin seeds (Nigella sativa Linn) and talok leaves (Muntingia calabura Linn). In in silico testing 70 bioactive compounds derived from tapak  liman  herbs,  black  cumin  seeds  and  talok  leaves  were  tested  as  ligands  and modeled  the  interaction  of  compounds  on  enzymes  that  act  as  antihyperuricemia. From  the  results  of  the  docking,  15  compounds  can  inhibit  the  xanthine  oxidase enzyme because they get a smaller docking score’s than positive control. Then an in
vitro study was conducted, the results showed an inhibitory activity by 70% ethanol extract  of  tapak liman  herb,  black  cumin  seeds  and  talok  leaves,  each  of  41.08%; 34.92%; and 31.57% .
Keywords: Xantin oksidase, docking, Elephantopus scaber, Nigella sativa, Muntingia

## calabura

## Pendahuluan
Asam  urat  merupakan  hasil  akhir  metabolisme  purin  dalam tubuh.  Dalam  keadaan normal terjadi keseimbangan antara pembentukan dan degradasi nukleotida purin serta kemampuan  ginjal  dalam  mengekskresikan  asam  urat (Widyanto,  2017) .  Asam  urat dalam darah dapat diekskresikan melalui ginjal atau disimpan di tempat penyimpanan, yaitu dalam jaringan terutama jaringan sendi. Peningkatan kadar asam urat dalam darah (hiperurisemia) merupakan faktor utama terjadinya artritis gout (Weaver, 2008) . Asam urat  merupakan  senyawa  kimia  hasil  akhir  dari  metabolisme  asam  nukleat  atau metabolisme  purin  dalam tubuh.  Berdasarkan  penyelidikan  bahwa  90%  dari  asam  urat merupakan hasil katabolisme purin oleh enzim guanase dan xantin oksidase (Rina, Eff, Rahayu, & Syachfitri, 2016).
Xantin oksidase adalah enzim yang mengkatalisis metabolisme hipoxantin menjadi xantin  dan  kemudian  xantin  menjadi asam  urat (Indonesia,  2011) .  Suatu  senyawa  atau bahan  yang  dapat  menghambat  enzim  ini  berpotensi  sebagai  obat  anti  hiperurisemia seperti allopurinol dan metabolit utamanya oksipurinol (Ngestiningsih & Hadi, 2011) . Masyarakat  Indonesia  menyukai  herbal  sebagai  alternatif  terapi,  berdasarkan pengalaman empirik di masyarakat Indonesia, beberapa jenis tanaman obat seperti daun talok (Muntingia calabura), dan biji jintan hitam (Nigella sativa) dapat digunakan untuk menghilangkan gejala inflamasi, serta mampu menurunkan kadar asam urat dalam darah. Demikian  juga  biji  jintan  hitam  (Nigella sativa)  yang  telah  terbukti  dapat  menurunkan kadar  IL-67 (Azter,  2009) .  Pada  penelitian  lain  menunjukkan  kandungan  senyawa flavonoid  pada  estrak  etanol  70%  herba  tapak  liman  (Elephantopus  scaber)  efektif memberikan penurunan kadar asam urat darah (Nguyen et al., 2004) .
Selain  itu  herba  tapak  liman  secara  empiris  di  masyarakat  juga  digunakan  sebagai peluruh  kencing  (diuretik). Kandungan  alkaloid  dan  flavonoid  pada  tapak  liman  dapat menghambat  pengkristalan  asam  urat  di  dalam  tubuh (Kabeer,  2014) .  Beberapa  asam fenolat  dan  flavonoid  pada  herba  tapak  liman  sudah  terisolasi (Venkatachallam, Pattekhan,  Divakar,  &  Kadimi,  2010). Biji  jintan  hitam  digunakan  dalam  pengobatan tradisional  untuk  mengobati  penyakit  asma,  batuk,  bronchitis,  sakit  kepala,  asam  urat, demam,  influenza.  Ekstrak  kering  biji  jinten  hitam,  menunjukkan  aktivitas antihiperurisemia secara in vivo terhadap mencit putih jantan galur Balb-C yang diinduksi dengan kalium oksonat dosis 250 mg/kgBB. (Suhendi, Nurcahyanti, Muhtadi, & Sutrisna, 2011) . Minyak biji jintan hitam dapat digunakan untuk mengkontrol diabetes, hipertensi, kanker,  antiinflamasi,  gangguan  ginjal  dan  komplikasi  pada  kardiovaskular.  Beberapa senyawa  sudah  diisolasi  dengan  aktivitas  tersebut (Akram  Khan  &  Afzal,  2016).
Pengobatan  tradisional  oleh  rakyat  Peru, bunga  talok  dan  kulit  pohon talok  digunakan
sebagai  antiseptik  dan  untuk  mengurangi  pembengkakan  pada  ekstremitas  bawah, sedangkan  daun,  baik  direbus  atau  direndam  dalam  air,  digunakan  untuk  mengurangi ulkus  lambung  dan  pembengkakan  kelenjar  prostat,  dan  untuk  meredakan  sakit  kepala dan demam (Moghadamtousi et al., 2015).
Bukti-bukti  penelitian  di  atas  menunjukkan  potensi  ketiga  tanaman  sebagai  terapi penyakit hiperurisemia dan inflamasi. Namun khasiat tersebut belum pernah dikaji secara in  silico  kandungan  senyawa  apa  yang  dapat  menghambat  xantin  oksidase.  Molecular docking merupakan suatu teknik penelitian komputasi yang melakukan pendekatan dalam mendesain obat berdasarkan struktur kimianya dengan memprediksi pada tingkat akurasi yang  tinggi  apakah  suatu  molekul  dapat  berikatan  secara  selektif  dengan  reseptor  dan memberikan gambaran interaksi secara molecular antara enzim dan ligan (Alvita, 2017). Oleh  karena itu  pada  penelitian ini  dilakukan  uji  in  silico  pada  senyawa  yang  terdapat dalam tanaman  tapak  liman,  biji jintan  hitam  dan  daun  talok  melalui  kajian  molecular docking  untuk  menentukan  senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antihiperurisemia  dan  uji secara  in  vitro  untuk  menentukan  aktivitas  penghambatan  enzim  xantin  oksidase  oleh masing-masing ekstrak tanaman uji.

## Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  menggunakan  aplikasi  yang  dapat diunduh  dengan  secara  gratis  yaitu  Protein-Ligand  ANT  system  (PLANTS),  Co- Prendrivelinux-KDE,  YASARA  dan,  ChemSketch.  Serta  menggunakan  peralatan laboratorium antara lain timbangan analitik, alat-alat gelas (Pyrex), alat-alat volumetrik, pH meter, kertas saring, spatula, kertas perkamen, pipa kapiler, , oven, tabung. Laptop Samsung AMD E-300 HD Graphic 1.30 Hz/ 32-bit operating system / 2.00 GB.
Bahan yang akan digunakan dalam penelitian adalah Kristal enzim xantin oksidase yang diperoleh dari Protein Data Bank, struktur virtual senyawa pada herba tapak liman (Elephantopus  scaber),  biji  jintan  hitam  (Nigella  sativa),    daun  talok  (Muntingia calabura),  enzim  xantin  oksidase  dalam  suspensi  ammonium  sulfat  (X1875),  substrat Xantin  (sigma  X4002),  dimetilsulfoksida  (DMSO),  dapar  fosfat  pH  7,5,  natrium hidroksida  1  N,  asam  klorida  1  N  dan  etanol  70%,    herba  tapak  liman  (Elephantopus scaber), dan  biji jinten hitam (Nigella sativa) dan daun talok (Muntingia calabura) yang diperoleh dari Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat (Balittro), Bogor.

## In Silico
Preparasi reseptor .
Struktur komplek protein Xantin Oksidase didapatkan dari Protein Data Bank (PDB) dari situs http://www.rscb.org/pdb. Dipreparasi kembali dengan program YASARA dan diperoleh tiga file yaitu protein.mol2, ref_ligand.mol2 dan ligand.mol2.

## Preparasi ligan.
Dilakukan preparasi ligan protein, ligan kontrol positif (Allopurinol), ligan senyawa uji  dengan  Marvin  Sketch.  Ligan  disimpan  sebgagai  ligand_2D.mrv  dilakukan
Conformational search lalu disimpan hasil pencarian konformasi sebagai ligand dan tipe file.mol2.
Optimasi protein dan menetapkan RMSD .
Native ligand yang sudah dipreparasi lalu dioptimasi dengan struktur kristal protein menggunakan  program  PLANTS  yang  dihubungkan  program  C0-Pendrivelinux-KDE hingga  didapat  score.  Dipilih  score  terbaik  lalu  disimpan  dalam  bentuk  file  mol.2 Dihitung  besarnya  RSMD  pose  hasil  optimasi  dengan  referensi  hasil  eksperimen  atau struktur kristal protein dengan program YASARA.
Docking ligan uji dan pembanding .
Dilakukan  docking  menggunakan  program  PLANTS  yang  dihubungkan  dengan program Co-Pendrivelinux-KDE. Diperoleh besarnya best score dari ligan pembanding atau kontrol positif dan masing-masing ligan uji yang nantinya akan dibandingkan dengan nilai best score.
Visualisasi interaksi ligan dan reseptor .
Membuat file hasil docking dari masing-masing ligan senyawa uji dengan program YASARA (tipe file.pdb) atau VMD. File hasil docking inilah yang akan divisualisasi dan diinterpretasi untuk diketahui interaksi-interaksi yang
In Vitro Ekstraksi .
Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  ektraksi  kinetik. Ditimbang  masing-masing  sejumlah  500  gram  simplisia  herba  tapak  liman,  biji  jintan hitam  dan  daun  talok  kemudian  diekstraksi  menggunakan  etanol  70%.  Pemeriksaan organoleptik meliputi bentuk, bau dan warna. Pengamatan bentuk dilakukan secara visual dari ekstrak herba tapak liman, biji jintan hitam dan daun talok, untuk pengamatan warna dilakukan secara visual terhadap ektrak herba tapak liman, biji jintan hitam dan daun talok yang  dikemas  dalam  botol  bening.  Pengamatan  bau  dari    ekstrak  yang  telah  disimpan dalam wadah yang sesuai dengan cara membuka tutup botol dan mencium aromanya.

## Skrining fitokimia ekstrak.
Skrining  fitokimia  dilakukan  secara  kualitatif  dengan  menggunakan  metode  uji dragendroff,,  uji  FeCl3,  uji  Shinoda,  uji Salkowski,  uji  Keller  killiani,  dan  uji  saponin (abbas dkk,2012).
Pembuatan larutan uji.
Ekstrak herba tapak liman, biji jintan hitam dan, daun talok ditimbang sejumlah 50 mg,  kemudian  ditambahkan  dengan  beberapa  tetes  dimetilsulfoksida  (DMSO)  hingga larut, lalu ditambahkan dapar fosfat pH 7,5 ad 5 mL sehingga diperoleh konsentrasi induk 10000 bpj.

## Pembuatan larutan dapar fosfat.
Kalium dihidrogen fosfat 100 mL dicampurkan dengan dikalium hydrogen fosfat 195 mL. Larutan kalium dihidrogen fosfat 0,05 M dibuat dengan cara kalium dihidrogen fosfat ditimbang sebanyak 0,6845 g, dilarutkan dalam akuades sampai dengan 100 mL. disesuaikan pH larutan menjadi 7,5 dengan natrium hidroksida 0,2 N.
Pembuatan larutan enzim xantin oksidase .
Enzim xantin oksidase dipipet sebanyak 38,5 mikroliter menggunakan mikropipet kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang  telah  dikalibrasi  1  mL  dan ditambahkan  larutan  dapar  fosfat  0,05  M  sampai  tanda  kalibrasi,  sehingga  diperoleh larutan enxim xantin oksidase 0,19 U/mL.
Pembuatan larutan substrat xantin .
Sebanyak 15,21 mg xantin ditimbang, kemudian ditambahkna dengan 5 tetes NaOH 1 N hingga larut, setelah itu diencerkan dengan dapar fosfat sampai dengan 100 mL.
Pembuatan standar allopurinol .
Sebanyak 10 mg standar allopurinol ditambahkan 5 tetes NaOH 1 N aduk hingga larut, lalu diencerkan dengan akuades di dalam labu tentukur 10 mL sehingga diperoleh konsentrasi  1000  bpj.  Larutan  standar  Allopurinol  kemudian  diencerkan  sehingga menjadi 300 bpj.
Uji hambat xantin oksidase secara in vitro .
Larutan  ekstrak  uji  300  bpj  /  Allopurinol  300  bpj  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi sebanyak 0,5 mL. campuran dengan dapar fosfat 0,005M pH7,5 sebanyak 1,45 mL kemudian  ditambah  1  mL  larutan  substrat  xantin  0,4  mM..  Setelah  itu  dilakukan prainkubasi pada suhu 25o C selama 15 menit, reaksi dimulai dengan penambahan enzim xantin oksidase 0,19 unit/mL sebanyak 0,05 mL lalu diinkubasi pada suhu 25oC selama 45 menit. Setelah inkubasi, campurkan segera ditambahkann HCl 1 N sebanyak 0,5 mL untuk  menghentikan  reaksinya.  Asam  urat  yang  terbentuk  diukur  serapannya menggunakan  spektrofotometer  UV  pada  panjang  gelombang  291  nm.  Pengujian  ini dilakukan sebanyak 3 kali.

## Analisa Data
Persentase penghambatan xantin oksidase dihitung dengan rumus : % inhibisi = (B-KB) – (S-KS) x 100%
(B – KB) Keterangan : B    : Serapan Blangko KB : Serapan Kontrol Blangko S    : Serapan Sampel KS : Serapan Kontrol Sampel
Kemudian data dianalisis secara statistika deskriptif untuk menentukan persentase penghambatan  terbesar.  Bila  data  rata-rata  yang  diperoleh  dari  data  penelitian  terbukti homogen dan terdistribusi normal, maka perbedaan statistik diuji dengan menggunakan uji ANOVA.

## Hasil dan Pembahasan Validasi Metode Docking
Enzim  dapat  digunakan  dalam  aplikasi  docking  apabila  divalidasi  akan menghasilkan Root Mean Square Deviation (RMSD). Besarnya nilai Root Mean Square Deviation  (RMSD)  menunjukkan  keakuratan  perhitungan,  jika  nilai  RMSD  >2Å  ini menunjukkan  bahwa  penyimpangan  dari hasil  perhitungan  lebih  besar,  sedangkan  jika nilai RMSD <2Å ini menunjukkan bahwa semakin kecil kesalahan dari hasil perhitungan
sehingga  dikatakan  lebih  akurat  perhitungannya.  Namun  hasil  validasi  dengan  nilai RMSD  <  4Å  masih  lazim  digunakan  (Ferwadi  &  Gunawan,  2017).  Setelah  dilakukan validasi terhadap enzim, maka enzim yang digunakan ialah enzim xantin oksidase dengan kode  PDB:  1FIQ  dengan  nilai  RSMSD  2,5518  Å.  Meskipun  terdapat  enzim  xantin oksidase lain dalam PDB yang juga dapat berperan dalam penyakit hiperurisemia, Docking Ligan Uji
70 senyawa dari tanaman herba tapak liman (Elephantopus scaber Linn), biji jintan hitam (Nigella sativa Linn), dan daun talok (Muntingia calabura Linn) yang diuji secara in silico menggunakan metode docking molecular. Hasil skor yang diperoleh kemudian dilakukan pemilihan senyawa representatif aktif dengan nilai ChemPLP lebih kecil (lebih negatif)  dibandingakan  dengan  Allopurinol  sebagai  senyawa  pembanding.      Senyawa kandidat  aktif  sebagai  penghambat enzim  xantin  oksidase  pada  herba tapak  liman,  biji jintan hitam, dan daun talok ditunjukkan oleh nilai score docking yang lebih kecil (minus) dibandingkan  dengan  kontrol  positif  (allopurinol)  pada  uji  in  silico.  Menurut  hasil docking diperoleh 15 kandidat senyawa dari herba tapak liman, biji jintan hitam, dan daun talok  yang  memilki  aktivitas  antihiperurisemia  dan  berpotensi  menghambat  reseptor enzim  xantin  oksidase,  diantaranya:  senyawa  kandidat  aktif  pada  herba  tapak  liman adalah Ethyl Caffeate; P-coumaric acid; E-3-(3-ethoxy-4-) hydrophenyl acrvlic acid;  dan 3 methoxy 4-hydroxy cinnamaldehide, senyawa kandidat aktif pada biji jintan hitam yaitu Nigellicne  dan  Octadecenamide,  dan  senyawa  kandidat  aktif  pada  daun  talok  yaitu Calaburone,  Muntingone,  Quercetin,  2’,4’-dihidroxy-3’methoxydihydrochalcone, Eugenol, Pyridoxine, (-)-3’-Methoxy-2’,4’,β-trihydroxydihydrochalcone, dan Citronellol.
Tabel 1
Nilai Score Docking Senyawa Kandidat Aktif Pada Herba Tapak Liman, Biji Jintan
Hitam, Dan Daun Talok. No Senyawa representatif aktif pada herba tapak liman, biji jintan hitam, dan daun talok Score docking senyawa uji Score docking allopurinol
1
Callaburone
-98,5628 -78,5289 2 Nigellicine -92,8863
3 E-3-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) acrvlic acid -92,792 4 Muntingone -91,6723 5 Quercetin -90,9668 6 Octadecenamide -89,6428 7 2’-4’dihydroxy-3’-methoxydihydrochalcone -88,6086 8 Ethyl Caffeate -86,7475 9 4,2’-dihydroxy-3’-methoxydihydrochalcone -85,6869 10 P-coumaric acid -84,717 11 (-)-3’-methoxy-2’,4’,β- trihydroxydihydrochalcone -82,6329 12 3 methoxy 4-hydroxy cinnamaldehyde -81,8345 13 Eugenol -81,2257
14 Pyridoxine -80,7288 15 Citronellol -79,3154

## Visualisasi Senyawa Kandidat Aktif
Senyawa kandidat aktif sebagai ligan pada reseptor enzim xantin oksidase secara in silico  divisualisasi  menggunakan  aplikasi  VMD.  Aplikasi  VMD  akan  menunjukkan bentuk ikatan dari suatu senyawa dengan reseptornya secara 3D dan dapat menunjukkan jarak  ikatan  dari  struktur  yang  diuji  dengan  asam  aminonya.  Dari  hasil  analisis  dapat diketahui  asam  amino  yang  aktif  dalam  binding  site  reseptor  atau  enzim.  Terdapat beberapa residu asam amino pada reseptor yang berdekatan pada senyawa representatif aktif. Residu asam amino tersebut berpengaruh terhadap inhibisi reseptor enzim xantin oksidase  senyawa  respresentatif  aktif.  Maka  hasil  elusidasi  moda  ikatan  senyawa kandidat  aktif  dengan  pembanding  didapatkan  bahwa  asam  amino  yang  berpengaruh terhadap aktifitas inhibisi enzim xantin oksidase antara lain ALA910, ARG912, GLN201, GLY913, GLY722, GLY790, GLU802, PHE911, PHE912, PHE798, dan PHE914.

## Tabel 2
Visualisasi Kandidat Senyawa Aktif Penghambat Xantin Oksidase Pada Herba Tapak Liman, Biji Jintan Hitam, Dan Daun Talok Serta Jarak Ikatannya (Dalam Å) Dengan Asam Amino Pada Reseptor
No. Visualisasi Senyawa Kandidat Aktif Jenis Asam Amino Jarak Ikatan (Å) 1 Calaburone ARG912 PHE911 GLY913 PHE798 GLY933 1,51 2 1,8 1,17 1,37 2 Nigellicne GLY913 GLY799 ARG912 PHE912 PHE911 PHE798 0,76 1,03 0,51 1,31 1,91 1,47 3 ARG912 GLY913 PHE911 ALA910 0,43 1,19 1,96 1,19
E-3-(3-Ethoxy-4-hydroxypenyl) acrvlic acid 4 Muntingone
ALA910 GLY913 ARG912 GLY722 1,2 1,18 1,11 1,07 5 Quercetin
GLN120 ARG912 GLY913 ALA910 GLY799 PHE911 1,14 0,84 0,84 1,13 1,57
1,83
6 Octadecenamide
GLN201 ARG912 GLY913 PHE914 ALA910 GLU802 GLY799 0,95 1,51 0,78 1,93 0,71 1,73 1,51

## Skrining Fitokimia Ekstrak
Skrining fitokimia yang dilakukan terhadap ekstrak herba tapak liman, biji jintan hitam  dan  daun  talok  merupakan  tahapan  awal  untuk  mengidentifikasi  kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada ekstrak etanol 70% herba tapak liman, biji  jintan  hitam,  dan  daun  talok.  Hasil  pengujian  menunjukkan  adanya  kandungan senyawa alkaloid,  flavonoid, tannin, terpenoid, saponin, fenolik, dan triterpenoid pada ekstrak herba tapak liman, biji jintan hitam, dan daun talok.

## Tabel 3
Hasil skrining fitokimia pada ekstrak etanol 70% herba tapak liman, biji jintan hitam,
dan daun talok Pengujian Fitokimia Ekstrak Herba Tapak Liman Biji Jintan Hitam Daun Talok Alkaloid + + + Saponin + + +
Tannin + + + Fenolik + + + Flavonoid + + + Triterpenoid + + + Steroid - + + Glikosida + + +

## Uji Penghambatan Xantin Oksidase Secara In Vitro
Uji  penghambatan  aktivitas  enzim  xantin  oksidase  secara  in  vitro  dilakukan menggunakan proses enzimatis dengan menghitung banyaknya asam urat yang terbentuk, dan dapat dihitung dalam serapan yang terbentuk dengan spektrofotometri UV VIS 291 nm. Uji secara in vitro menunjukkan persentase penghambatan xantin oksidase tertinggi diperoleh ekstrak etanol 70% herba tapak liman dengan 41,08,%, kemudian ekstrak etanol 70% biji jintan hitam sebesar 34,92% dan ekstrak etanol 70% daun talok sebesar 31,57%. Ekstrak yang digunakan merupakan crude ekstrak atau ekstrak kasar, sehingga ekstrak yang digunakan masih mengandung berbagai  macam komponen senyawa.

## Tabel 4
Hasil uji penghambatan xantin oksidase secara in vitro. Bahan Uji Rata-rata % inhibisi (%) ± SD (n=3) Ekstrak herba tapak liman (300 bpj) 41,08 ± 0.025 Ekstrak biji jintan hitam (300 bpj) 34,92 ± 0.05 Ekstrak daun talok (300 bpj) 31,57 ± 0.04 Allopurinol (300bpj) 37,35 ± 0.072
Senyawa  callaburone  memiliki  score  docking  tertinggi,  dengan  score  tersebut diduga  senyawa  callaburone  dapat  berikatan  dengan  ligan  pada  active  site  sehingga pembentukkan  asam  urat  dapat  terhambat.  Sedangkan  dalam  uji  in  vitro ekstrak  herba tapak  liman  memperoleh  persentase  penghambatan  xantin  oksidase  tertinggi dibandingkan  dengan  ekstrak  biji  jintan  hitam,  ekstrak  daun  talok,  dan  allopurinol. Kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam ekstrak tapak liman yakni 3-methoxy-4 hydroxy cinnamaldehyde ; P-coumaric acid ; E-3-(3-ethoxy-4-hydroxypenyl) acrylic acid dan Ethyl Caffeate. Hasil statistik menyebutkan bahwa masing-masing ekstrak mampu menghambat pembentukkan asam urat dengan nilai sig >1. Hasil ANOVA menunjukkan terdapat  perbedaan  yang  signifikan  antara  aktivitas  penghambatan  xantin  oksidase allopurinol (kontrol positif) dengan masing-masing ektrak uji (ekstrak etanol 70% herba tapak  liman,  biji  jintan  hitam,  dan  daun  talok).  Pada  uji  lanjut  Duncan  menyatakan aktivitas  pemnghambatan  xantin  oksidase  oleh  ekstrak  etanol  70%  herba  tapak  liman, ekstrak  etanol  70%  biji  jintan  hitam,  ekstrak  etanol  70%  daun  talok,  dan  allopurinol terdapat perbedaan nyata.

## Kesimpulan
Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa herba tapak liman, biji jintan hitam, dan  daun  talok  memiliki  senyawa  kandidat  aktif  sebagai  penghambat  xantin  oksidase secara in silico, dengan senyawa callaburone sebagai senyawa dengan docking tertinggi. Secara in vitro ekstrak etanol 70% herba tapak liman, biji jintan hitam dan daun talok masing masing menunjukkan adanya aktivitas penghambatan enzim xantin oksidase.

## BIBLIOGRAFI
Akram Khan, M., & Afzal, M. (2016). Chemical Composition Of Nigella Sativa Linn:
Part 2 Recent Advances. Inflammopharmacology , 24 (2–3), 67–79.
Https://Doi.Org/10.1007/S10787-016-0262-7 Google Scholar
Alvita, Imelda Dian. (2017). Skrining Virtual Senyawa Inhibitor Enzim A-Amilase Pada Beberapa Tanaman Dengan Aktivitas Anti-Obesitas (Skripsi). Jakarta: Universitas Pancasila.
Azter, Abdul Arief. (2009). Uji Ekstrak Etanol Herba Tapak Liman Terhadap Penurunan Kadar  Asam  Urat  Pada  Tikus  Putih  Jantan  Yang  Diinduksi  Kafeina (Skripsi).
Jakarta: Universitas Islam Negri Syarif Hidayatullah. Google Scholar
Ferwadi, Susmi, & Gunawan, Rahmat. (2017). Studi Docking Molekular Senyawa Asam Sinamat Dan Derivatnya Sebagai Inhibitor Protein 1J4X Pada Sel Kanker Serviks Molecular Docking Study Of Cinnamate Acid Compound And Its Derivatives As Protein 1J4X Inhibitor To Cervical Cancer Cell. Jurnal Kimia Mulawarman , 14 (2),
85–90. Google Scholar
Indonesia,  Kementrian  Kesehatan  Republik.  (2011). Suplemen  II  Farmakope  Herbal Indonesia. (1st  Ed.).  Jakarta:  Direktorat  Jendral  Bina  Farmasi  Dan  Alat Kesehatan. Google Scholar
Kabeer,  Farha  Arakkaveettil.  (2014).  Chem-Comp  Elephantopus  Scaber.Pdf. Pharmacologia , 8 (Phytopharmacological Profile Of Elephantopus Scaber).
Moghadamtousi,  Soheil  Zorofchian,  Fadaeinasab,  Mehran,  Nikzad,  Sonia,  Mohan, Gokula,  Ali,  Hapipah  Mohd,  &  Kadir,  Habsah  Abdul.  (2015).  Annona  Muricata (Annonaceae):  A  Review  Of  Its  Traditional  Uses,  Isolated  Acetogenins  And Biological Activities. International Journal Of Molecular Sciences , 16 (7), 15625– 15658. Https://Doi.Org/10.3390/Ijms160715625 Google Scholar
Ngestiningsih, Dwi, & Hadi, Suyanto. (2011). Ekstrak Herbal (Daun Salam, Jintan Hitam, Daun  Seledri)  Dan  Kadar  IL-6  Plasma  Penderita  Hiperurisemia. Materia  Medika Indonesia , 45 (2), 113–117. Google Scholar
Nguyen, Mai Thanh Thi, Awale, Suresh, Tezuka, Yasuhiro, Tran, Quan Le, Watanabe, Hiroshi,  &  Kadota,  Shigetoshi.  (2004).  Xanthine  Oxidase  Inhibitory  Activity  Of Vietnamese Medicinal Plants. Biological & Pharmaceutical Bulletin , 27 (9), 1414– 1421. Https://Doi.Org/10.1248/Bpb.27.1414. Google Scholar
Rina,  Aprilita,  Eff,  Yanti,  Rahayu,  Sri  Teguh,  &  Syachfitri,  Resta  Dwi.  (2016).  Uji Aktivitas  Penghambatan  Xantin  Oksidase  Secara  In-Vitro  Glukopiranosida (C20H22O10) Yang Diisolasi Dari Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa (Scheff.) Boerl). Pharm Sci Res , 3 (1), 1–11. Google Scholar
Suhendi,  Andi,  Nurcahyanti,  Muhtadi,  &  Sutrisna,  EM.  (2011).  Antihyperurisemia
Activity Of Water Extract Of Black Seed (Coleus Ambonicus Lour) In Balb-C Mice And Its Standardization. Majalah Farmasi Indonesia , 22 (2), 77–84. Google Scholar
Venkatachallam, Suresh Kumar Tiruppur, Pattekhan, Hajimalang, Divakar, Soundar, & Kadimi, Udaya Sankar. (2010). Chemical Composition Of Nigella Sativa L. Seed Extracts Obtained By Supercritical Carbon Dioxide. Journal Of Food Science And Technology , 47 (6), 598–605. Https://Doi.Org/10.1007/S13197-010-0109-Y.
Google Scholar
Weaver,  Arthur  L.  (2008). Epidemiology  Of  Gout. 75  Suppl  5 ,  S9-12. Https://Doi.Org/10.1038/Nrrheum.2010.78
Widyanto, Fandi Wahyu. (2017). Arthritis Gout Dan Perkembangannya. Saintika Medika , 10 (2), 145–152. Google Scholar
Akram Khan, M., & Afzal, M. (2016). Chemical Composition Of Nigella Sativa Linn: Part 2 Recent Advances. Inflammopharmacology , 24 (2–3), 67–79.
Https://Doi.Org/10.1007/S10787-016-0262-7. Google Scholar
Alvita, Imelda Dian. (2017). Skrining Virtual Senyawa Inhibitor Enzim A-Amilase Pada Beberapa Tanaman Dengan Aktivitas Anti-Obesitas (Skripsi). Jakarta: Universitas Pancasila.
Azter, Abdul Arief. (2009). Uji Ekstrak Etanol Herba Tapak Liman Terhadap Penurunan Kadar Asam Urat Pada Tikus Putih Jantan Yang Diinduksi Kafeina (Skripsi).
Jakarta: Universitas Islam Negri Syarif Hidayatullah. Google Scholar
Ferwadi, Susmi, & Gunawan, Rahmat. (2017). Studi Docking Molekular Senyawa Asam Sinamat Dan Derivatnya Sebagai Inhibitor Protein 1J4X Pada Sel Kanker Serviks Molecular Docking Study Of Cinnamate Acid Compound And Its Derivatives As Protein 1J4X Inhibitor To Cervical Cancer Cell. Jurnal Kimia Mulawarman , 14 (2),
85–90. Google Scholar
Indonesia,  Kementrian  Kesehatan  Republik.  (2011). Suplemen  II  Farmakope  Herbal Indonesia. (1st Ed.). Jakarta: Direktorat Jendral Bina Farmasi Dan Alat Kesehatan.
Google Scholar
Kabeer,  Farha  Arakkaveettil.  (2014).  Chem-Comp  Elephantopus  Scaber.Pdf.
Pharmacologia , 8 (Phytopharmacological Profile Of Elephantopus Scaber).
Moghadamtousi,  Soheil  Zorofchian,  Fadaeinasab,  Mehran,  Nikzad,  Sonia,  Mohan, Gokula,  Ali,  Hapipah  Mohd,  &  Kadir,  Habsah  Abdul.  (2015).  Annona  Muricata (Annonaceae):  A  Review  Of  Its  Traditional  Uses,  Isolated  Acetogenins  And Biological Activities. International Journal Of Molecular Sciences , 16 (7), 15625– 15658. Https://Doi.Org/10.3390/Ijms160715625. Google Scholar
Ngestiningsih, Dwi, & Hadi, Suyanto. (2011). Ekstrak Herbal (Daun Salam, Jintan Hitam, Daun  Seledri)  Dan  Kadar  IL-6  Plasma  Penderita  Hiperurisemia. Materia  Medika
Indonesia , 45 (2), 113–117. Google Scholar
Nguyen, Mai Thanh Thi, Awale, Suresh, Tezuka, Yasuhiro, Tran, Quan Le, Watanabe, Hiroshi,  &  Kadota,  Shigetoshi.  (2004).  Xanthine  Oxidase  Inhibitory  Activity  Of Vietnamese Medicinal Plants. Biological & Pharmaceutical Bulletin , 27 (9), 1414– 1421. Https://Doi.Org/10.1248/Bpb.27.1414. Google Scholar
Rina,  Aprilita,  Eff,  Yanti,  Rahayu,  Sri  Teguh,  &  Syachfitri,  Resta  Dwi.  (2016).  Uji Aktivitas  Penghambatan  Xantin  Oksidase  Secara  In-Vitro  Glukopiranosida (C20H22O10) Yang Diisolasi Dari Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa (Scheff.) Boerl). Pharm Sci Res , 3 (1), 1–11. Google Scholar
Suhendi,  Andi,  Nurcahyanti,  Muhtadi,  &  Sutrisna,  EM.  (2011).  Antihyperurisemia Activity Of Water Extract Of Black Seed (Coleus Ambonicus Lour) In Balb-C Mice And Its Standardization. Majalah Farmasi Indonesia , 22 (2), 77–84. Google Scholar
Venkatachallam, Suresh Kumar Tiruppur, Pattekhan, Hajimalang, Divakar, Soundar, & Kadimi, Udaya Sankar. (2010). Chemical Composition Of Nigella Sativa L. Seed Extracts Obtained By Supercritical Carbon Dioxide. Journal Of Food Science And Technology , 47 (6), 598–605. Https://Doi.Org/10.1007/S13197-010-0109-Y.

## Google Scholar
Weaver,  Arthur  L.  (2008). Epidemiology  Of  Gout. 75  Suppl  5 ,  S9-12. Https://Doi.Org/10.1038/Nrrheum.2010.78
Widyanto, Fandi Wahyu. (2017). Arthritis Gout Dan Perkembangannya. Saintika Medika , 10 (2), 145–152. Google Scholar

## Copyright holder:
Marybet Tri Retno Handayani, Esti Mumpuni, Dian Ratih Laksmitawati (2022)
First publication right:
Syntax Literate: Jurnal Ilmiah Indonesia
This article is licensed under: