J. Kartika Kimia , November 2020, 3, (2), 70-76 Journal homepage : http://jkk.unjani.ac.id/index.php/jkk P-ISSN: 2655-1322     E-ISSN: 2655-0938

## Optimasi Sintesis Alkildietanolamida Menggunakan Response Surface Methodology pada Reaksi Enzimatis Minyak Inti Buah Ketapang dan Dietanolamina
Optimization Synthesis of Alkyldiethanolamide Using Response Surface Methodology in the Enzymatic Reaction of Ketapang Kernel Oil and
Diethanolamine
Sonia Larasati Datun, Dedy Suhendra, Erin Ryantin Gunawan *
Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mataram *E-mail: erinryantin@unram.ac.id
DOI: https://doi.org/10.26874/jkk.v3i2.64
Received : 7 Nov 2020, Revised : 30 Nov 2020, Accepted : 30 Nov 2020, O nline : 30 Nov 2020

## Abstrak
Tujuan  dari  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  kondisi  optimum  reaksi  yang  dapat  menghasilkan persentase yield maksimal dan  interaksi  antar  variabel  pada  sintesis  alkildietanolamida  secara enzimatis  menggunakan lipozyme TL  IM.  Metode  yang  digunakan  yaitu Response  surface methodology (RSM) yang terdapat pada software design expert v.7. Hasil yang diperoleh yaitu kondisi optimum pada waktu reaksi 1,13 jam, suhu reaksi 32,05 °C, rasio dietanolamina : minyak (1 g : 9,57 mmol)  dan  rasio  enzim  :  minyak  (1  :  0,12)  g  dengan  persen  hasil  prediksi  sebesar  62,4542%  dan persen hasil aktual sebesar 62,0000%. Interaksi antar variabel dapat diamati melalui model quadratic .
Kata kunci: Surfaktan, Alkildietanolamida, RSM, Design expert v.7, Lipozyme

## Abstract
The purpose of this study was to determine the optimum conditions for the reaction that could produce the  maximum  yield  percentage  and  the  interaction  between  variables  in  the  enzymatic  synthesis  of alkyldiethanolamide  using  lipozyme  TL  IM.  The  method  used  is  the  Response  Surface  Methodology (RSM) contained in the expert design software v.7. The results obtained are the optimum conditions at the  reaction  time  1.13  hours,  reaction  temperature  32.05  °  C,  the  ratio  of  diethanolamine:  oil  (1  g: 9.57 mmol), and the ratio of enzymes: oil (1: 0.12) g with percent prediction results of 62.4542% and the percent of actual results of 62.0000%. The interaction between variables can be observed through a quadratic model.
Keywords: Surfactant, Alkyldiethanolamide, RSM, Design expert v.7, Lipozyme

## 1 Pendahuluan
Surfaktan  adalah  senyawa  yang  memiliki dua  gugus,  yaitu  hidrofobik  (lipofilik)  dan hidrofilik (lipofobik) dalam satu molekul. Gugus ini sangat membantu untuk menurunkan tegangan permukaan  cairan  sehingga  banyak  digunakan sebagai bahan tambahan dalam industri detergen, kosmetik, makanan, tekstil, industri minyak bumi dan  farmasi.  Dikarenakan  kegunaanya  dalam berbagai  bidang  industri,  kebutuhan  akan
surfaktan  di  Indonesia  terus  meningkat  setiap tahunnya.  Kebutuhan  penggunaan  surfaktan  di Indonesia  sekitar  95.000  ton  per  tahun, sedangkan  kapasitas  produksi  dalam  negeri sekitar  55.000  ton  per  tahun  dan  45.500  ton masih  diimpor  dan  diproduksi  dari  bahan petroleum  yang  tidak  dapat  diperbaharui.  Selain itu  harga  surfaktan  mencapai  US$16  per  liter yang  harganya  terus  menanjak.  Salah  satu
surfaktan yang banyak dibutuhkan yaitu alkildietanolamida [1].
Alkildietanolamida atau asam lemak dietanolamida  dapat  berperan  sebagai  surfaktan karena  memiliki  sifat  menyerupai  detergen karena memiliki molekul ampifilik.
Alkildietanolamida  merupakan  senyawa  amida yang  banyak  digunakan  dalam  industri  kimia, kosmetik,  maupun  otomotif  [2].  Surfaktan alkildietanolamida biasanya dibuat dengan menggunakan bahan dasar berupa minyak nabati yang  diperoleh  dari  minyak  kelapa  sawit  dan minyak kelapa karena mengandung rantai karbon C12-C18.  Minyak  kelapa  sawit  dan  minyak kelapa  merupakan  komoditas  pangan  sehingga digunakan  untuk  memenuhi  kebutuhan  primer manusia [3], oleh karena itu diperlukan alternatif lain  untuk  pembuatan  surfaktan  ini.  Salah  satu minyak  nabati  lain  yang  mengandung  C12-C18 dan  tidak  digunakan  sebagai  bahan  pangan adalah minyak inti buah ketapang.
Biji  ketapang  memiliki  kandungan  minyak (trigliserida)  yang  tinggi,  yaitu  sekitar  54%. Minyak  ketapang  mengandung  asam  palmitat (25-31%),  oleat  (31-38%),  stearat  (3-4%),  dan linoleat  (12-21%)  [4].  Kandungan  minyak  inti ketapang  hampir  sama  dengan  asam  lemak  yang terdapat  pada  minyak  kelapa  sawit  dan  minyak kelapa  sehingga  memiliki  prospek  yang  tinggi untuk  dijadikan  pilihan  baru  bahan  dasar pembuatan surfaktan alkildietanolamida.
Sintesis  alkildietanolamida  dari  minyak  inti buah  ketapang  yang  dikatalisis  menggunakan Lipozyme TL  IM  dengan  metode  optimasi one variable  at  time telah  dilakukan  sebelumnya untuk  melihat  interaksi  antara  satu  variabel  uji terhadap  respon.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa kondisi reaksi optimal adalah 2 jam waktu reaksi,  dengan  rasio  massa  minyak  (g)  terhadap dietanolamina (mmol) 1 : 5, rasio massa minyak terhadap  enzim  (g)  1  :  0,075,  dan  suhu  reaksi 40 ⁰ C memperoleh persentase alkildietanolamida sebesar  56%  [5].  Hasil  tersebut  belum  mencapai hasil maksimum. Selain itu, metode one variable at  time memiliki  kekurangan,  yaitu  tidak  dapat melihat  pengaruh  lebih  dari  satu  variabel  dan interaksi  yang  terjadi  antar  variabel  yang  dapat mempengaruhi  perolehan yield .  Oleh  karena  itu, diperlukan metode optimasi yang dapat melakukan  optimasi  dengan  lebih  baik  yaitu salah  satunya  dengan  metode Response  Surface Methodology (RSM).
RSM  adalah  teknik  statistik  yang  efektif untuk  mengetahui  proses  yang  kompleks.  Ide utama  dari  metode  ini  adalah  untuk  menentukan pengaruh  antar  variabel  independen  terhadap respons  ( yield ),  mendapatkan  model  hubungan antara  variabel  independen  dan  respons  serta mendapatkan kondisi optimum yang menghasilkan respons terbaik. Selain itu keunggulan metode ini adalah tidak memerlukan data eksperimental dalam jumlah besar [6], hanya diperlukan  30  data  eksperimen  yang  sudah ditentukan oleh software dengan mempertimbangkan variabel-variabel independen yang digunakan jika menggunakan metode ini.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  pada  penelitian ini akan dilakukan optimasi sintesis alkildietanolamida  menggunakan  RSM  pada reaksi  enzimatis  minyak  inti  buah  ketapang  dan dietanolamina.

## 2 Metode Penelitian

## 2.1 Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah  alat  gelas  yang  ada  di  laboratorium oleokimia,  timbangan  analitik  (DC-600A),  pH meter  (PH-009(I)A),  kromatografi  lapis  tipis, stirer  water  bath (Biosan  WB-4MS),  statif  dan klem,  desikator, bunchner , vaccum  filtration , rotary evaporator (B-ONE RE-1000VN), spektrofotometer FT-IR (ParkernElmer-Spectrum Two, AS).
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  bahan  yang  berderajat  p.a, yaitu n- heksan dan dietanolamina (Sigma Aldrict, German),    NaS 2 O 4 anhidrat  (Merck,  German), biji  ketapang,  , Lipozyme  TL  1M (Novozymes 2A330045,  Denmark), n- heksan  teknis  (Merck, German),  metanol  (Merck,  German),  etanol (Merck, German), HCl (Merck, German), NaOH (Merck,  German),  silika  gel,  Na 2 S 2 O 3 (Merck, German), virgin  coconut  oil (VCO)  (Al  amin, Indonesia),  indikator  PP  (Merck,  German), aquades.

## 2.2 Optimasi dengan RSM
Data  kondisi  optimum one  variable  at  time yang  telah  diperoleh  sebelumnya  dijadikan sebagai  acuan  untuk  memperoleh  30  keadaan optimum reaksi yang akan dilakukan. Dimasukkan range data  kondisi  optimum  ke dalam Software  Design  Expert  v.7 dari  masing- masing  faktor,  yaitu  waktu  reaksi  (jam), temperatur  (°C),  jumlah  dietanoamina  (mmol)
dan  massa  enzim  (g)  dengan  data  optimum sebagai pusat data.
Untuk  waktu  reaksi  optimum  pada  2  jam maka dimasukkan data 0; 1; 3; dan 4 jam. Untuk temperatur  reaksi  optimum  diperoleh  pada  suhu 40°C maka data yang dimasukkan adalah 20; 30; 50;  dan  60°C.  Untuk  mmol  dietanolamina diperoleh  kondisi  optimum  10  mmol  maka  data yang dimasukkan adalah 0; 5; 15; dan 20 mmol. Sedangkan  untuk  massa  enzim  dengan  kondisi optimum  0,15  g  maka  dimasukkan  data  adalah 0,05;  0,1;  0,20;  dan  0,25  g.  Setelah  data-data yang  diperoleh  dimasukkan,  maka  diperoleh  30 data  eksperimen  optimum  untuk  diketahui  data mana  yang  memiliki  prediksi yield paling  tinggi setelah disintesis di laboratorium.
Yield sampel  hasil  optimasi  kemudian  di masukkan  ke  dalam Software  Design  Expert  v.7 untuk  dianalisis  model  matematikanya,  ANOVA (analisis  varian),  dan  kondisi  optimum  reaksi, serta  prediksi yield optimum  berdasarkan  model matematika yang sudah diperoleh.

## 2.3 Sintesis dan Analisis
Alkildietanolamida
disintesis dengan menggunakan metode yang dikembangkan dengan modifikasi dan penyesuaian pada kondisi dari  masing-masing  reaksi  yang  dilakukan. Reaksi secara umum, yaitu campuran reaksi yang terdiri  dari  trigliserida  minyak  ketapang,  pelarut n -heksan  dan  dietanolamida  sebagai  substrat yang  sudah  dinetralkan  pada  pH  7  direaksikan sesuai dengan kondisi reaksi yang diperoleh dari aplikasi design expert v.7.
Pemurnian alkildietanolamida dapat dilakukan dalam empat tahap. Pertama, pemisahan  enzim  dari  campuran  produk  dengan cara  penyaringan  menggunakan  kertas  saring. Kedua, pemisahan fraksi n -heksan dari lapisan air menggunakan  corong  pisah.  Ketiga,  untuk mendapatkan  alkildietanolamida  padat,  fraksi n- heksana  didinginkan  dalam freezer (<-5°C) selama  5  jam  kemudian  difiltrasi.  Keempat, alkildietanolamida  yang  didapat  pada  kertas saring  dicuci  dengan n- heksana  dan  dikeringkan dalam  desikator  yang  telah  diisi  dengan  fosfor pentaoksida  selama  24  jam  untuk  memperoleh alkildietanolamida murni.
Hasil  alkildietanolamida  yang  diperoleh kemudian  dianalisis  menggunakan  kromatografi lapis  tipis, Fourier  Transform  Infra  Red (FTIR) dan uji Kjeldahl.

## 3 Hasil dan Diskusi
Pengolahan  data  dilakukan  menggunakan aplikasi design  expert  v.7 dengan  RSM.  RSM merupakan suatu metode gabungan antara teknik matematika dan teknik statistik, digunakan untuk membuat model dan menganalisa suatu respon, y yang dipengaruhi oleh beberapa variabel bebas/faktor  x  guna  mengoptimalkan  respon tersebut [7].
Pertimbangan  penting  dalam  RSM  adalah bagaimana  menentukan  faktor  dan  level  yang dapat cocok dengan model yang akan digunakan. Jika  faktor  atau  level  yang  dipilih  dalam  suatu penelitian  tidak  tepat,  maka  kemungkinan terjadinya  ketidakcocokan  model  akan  sangat besar  dan  akan  bersifat  bias.  Oleh  karena  itu, dalam  menggunakan  metode  RSM  peneliti menentukan suatu rancangan percobaan, memperkirakan parameter yang diperlukan untuk mendapatkan  model  yang  sesuai,  memeriksa kesesuaian  model  uji  (uji Lack  of  Fit ), menentukan  atau  menduga  di  mana  peningkatan respons  akan  terjadi,  kemudian  melakukan percobaan  dengan  titik-titik  rancangan  yang terkonsentrasi  di  sekitar  daerah  yang  dicurigai terjadi  peningkatan.  Persen  hasil  dari  ke-30 sampel  yang  telah  dicobakan  diperoleh  setelah sintesis alkildietanolamida dilakukan (Tabel 3.1). Hasil  yang  diperoleh  kemudian  dimasukkan  ke dalam kolom respons pada aplikasi design expert v.7 untuk  memperoleh  hasil  prediksi.  Hasil prediksi  dapat  diketahui  dengan  menggunakan perhitungan statistik sebagai berikut:
Yield  (%)  =  52,33  –  1,42A  –  4,25B  +  4,42C  – 0,25D  +  2,50AB  +  2,13AC  + 3,62AD  –  0,13BC  +  3,37BD  + 0,75CD  –  2,38A 2 +  1,12B 2 – 7,25C 2 + 2,25D 2
Berdasakan  pengujian  kecocokan  model, analisis regresi dan uji lack of fit model diperoleh data persen hasil prediksi menggunakan software design  expert  v.7 .  Hasil  tersebut  kemudian dibandingkan dengan hasil aktual yang diperoleh dengan melakukan sintesis di laboratorium. Hasil aktual dan prediksi yield alkildietanolamida dapat dilihat pada Tabel 1
Data Tabel 1 dapat dilihat bahwa baik secara aktual maupun prediksi, persen hasil alkildietanolamida yang diperoleh cukup signifikan dilihat dari nilai Prediction Error Sum of  Square (PRESS)  atau  prediksi  error  yang diperoleh  pada  model  memiliki  nilai  terendah yaitu  6254,20.  Hal  ini  menunjukkan  terdapat korelasi antara hasil perhitungan menggunakan
software design expert v.7 dengan hasil yang diperoleh secara nyata di laboratorium.
Tabel 1 . Hasil sintesis alkildietanolamida
(a) (b)
Gambar  1. Grafik  pengaruh  suhu  dan  dietanolamina  terhadap  respon  alkildietanolamida  kontur  plot  (a)  dan grafik 3D (b)

## Interaksi Antar Variabel
Kontur  pada  Gambar  3.1  memperlihatkan hubungan  antara  variasi  suhu  dan  jumlah dietanolamina.  Penambahan  suhu  cenderung mengurangi yield yang  dihasilkan,  sedangkan penambahan  dietanolamina  meningkatkan  nilai dari yield. Suhu  yang  berlebih  atau  diatas  30  °C tidak  berkontribusi  terhadap  peningkatan  persen yield dari produk yang dihasilkan. Hal ini karena peningkatan  temperatur  mengakibatkan  substrat mengalami  perubahan  konformasi  sehingga  sisi aktif  substrat  tidak  dapat  lagi  atau  mengalami
hambatan  dalam  memasuki  sisi  aktif  enzim  [8]. Reaksi kimia akan berlangsung lambat pada suhu rendah,  sedangkan  pada  suhu  yang  lebih  tinggi reaksi  kimia  berlangsung  cepat.  Berdasarkan Gambar 3.2 terlihat hubungan antara variasi suhu dan  enzim. Yield optimum  diperoleh  pada keadaan  suhu  30  °C  dan  0,1  g  enzim. Yield alkildietanolamida  mengalami  penurunan  seiring bertambahnya suhu. Hal ini dikarenakan peningkatan  temperatur  mengakibatkan  enzim mengalami  denaturasi  [9].  Sebagian  besar  enzim manusia  memiliki  suhu  optimum  sekitar  35-40
°C.  Apabila  terjadi  proses  denaturasi,  maka bagian  aktif  enzim  akan  terganggu  sehingga konsentrasi efektif enzim menjadi berkurang dan terjadi penurunan kecepatan reaksi.
(a) (b)
Gambar 2. Grafik pengaruh suhu dan enzim terhadap respon alkildietanolamida kontur plot (a) dan grafik 3D (b)
(a) (b)
Gambar 3. Grafik pengaruh waktu dan suhu terhadap respon alkildietanolamida kontur plot (a) dan grafik 3D (b)
(a)
(b)
Gambar  4. Grafik  pengaruh  waktu  dan  dietanolamina  terhadap  respon  alkildietanolamida  kontur  plot  (a)  dan grafik 3D (b)
Berdasarkan  Gambar  3.3  terlihat  hubungan antara  waktu  dan  suhu  dengan yield yang diperoleh.  Permukaan  kontur  pada  Gambar  3.3 menunjukkan  bahwa  yield  maksimum  dapat diperoleh  pada  waktu  1-2  jam,  sedangkan  suhu yang  digunakan  30-32,5  °C.  Pada  kondisi  ini,
dapat  diperoleh yield alkildietanolamida  sebesar 59,2331%. Hal ini sesuai dengan teori laju reaksi, dimana  semakin  lama  waktu  reaksi  maka  reaksi akan berlangsung makin sempurna [10].
Berdasarkan kontur pada Gambar 3.4, dapat diketahui  bahwa  dengan  kondisi  waktu  1-3  jam
dan jumlah dietanolamina 10-12,5 mmol didapatkan  persen yield sebesar  53,0723%. Gambar  tersebut  menunjukkan  penambahan jumlah  substrat  akan  meningkatkan  nilai yield , begitu  pula  sebaliknya.  Konsentrasi  substrat terlalu  tinggi  dapat  meningkatkan  viskositas larutan  sehingga  interaksi  antar  reaktan  menjadi tidak efektif dan dapat menghambat reaksi [11].
Berdasarkan  Gambar  3.5  terlihat  hubungan antara  variasi  waktu  dan  jumlah  enzim  dengan yield yang  dihasilkan.  Pada  gambar  tersebut
terlihat  bahwa  dengan  melakukan  penambahan pada  jumlah  enzim, yield yang  dihasilkan  akan semakin  rendah.  Sedangkan  waktu  reaksi  antara 1-1,5  jam  akan  meningkatkan yield .  Rendahnya produk  yang  dihasilkan  ini  disebabkan  oleh penghentian  reaksi  kearah  produk  dikarenakan terbatasnya  jumlah  substrat  yang  dapat  diubah oleh  enzim  lipase  menjadi  produk  sehingga peningkatan  konsentrasi  enzim  tidak  disertai dengan jumlah substrat yang tidak memadai akan meningkatkan jumlah produk [12].
(a)
(b)
Gambar 5. Grafik pengaruh waktu dan enzim terhadap respon alkildietanolamida kontur plot (a) dan grafik 3D (b)
(a) (b)
Gambar 6. Grafik  pengaruh  dietanolamina dan  enzim  terhadap  respon  alkildietanolamida  kontur plot  (a) dan grafik 3D (b)
Berdasarkan  Gambar  6  dengan  kondisi optimum  dietanolamina  sebesar  10-12,5  mmol dan  0,15  g  enzim  terlihat  hubungan  keduanya dengan yield yang  diperoleh.  Meningkatnya jumlah  dietanolamina  akan  meningkatkan yield alkildietanolamida yang dihasilkan. Gambar juga menunjukkan grafik mengalami penurunan dengan  penambahan  enzim.  Hal  ini  disebabkan karena pada jumlah enzim sebanyak 0,15 g masih mampu untuk mengikat banyak substrat dan pada kondisi  tersebut  sudah  terjadi  kesetimbangan reaksi. Sedangkan apabila dilakukan penambahan enzim  maka  jumlah  enzim  akan  lebih  banyak dibandingkan  substrat.  Selain  itu,  untuk  suatu
konsentrasi  enzim,  tingkat  reaksi  meningkat dengan meningkatnya konsentrasi substrat sampai satu titik jenuh. Hal ini disebabkan karena pada keadaan jenuh seluruh molekul enzim yang ada telah mengikat substrat, sehingga penambahan  substrat  tidak  akan  meningkatkan laju reaksi menjadi lebih cepat [10].

## Kondisi Optimum Sintesis Alkildietanolamida
Optimasi  dengan  RSM  pada Design Expert  v.7 melalui  persamaan  orde  2  diperoleh solusi  optimasi  dengan  kombinasi  dan  prediksi persen  hasil  yang  dapat  dilihat  pada  Tabel  3.2. Berdasarkan  Tabel  3.2  dihasilkan  kondisi
optimum, yaitu pada waktu reaksi 1,13 jam, suhu 32,05  °C,  jumlah  dietanolamina  9,57  mmol,  dan enzim  0,12  g  dengan  perolehan yield optimum prediksi  sebesar  62,4541%  dan  persen yield aktual  sebesar  62,0000%.  Hal  ini  menunjukkan
bahwa  tidak  terjadi  perbedaan  yang  signifikan antara hasil perhitungan dan eksperimen. Artinya data eksperimen mendekati perhitungan statistiknya.
Tabel 2 Kondisi Optimum Sintesis Alkildietanolamida

## 4 Kesimpulan
Perbandingan  data  nilai  prediksi  dan eksperimen  memperlihatkan  bahwa  data  yang diperoleh  memiliki  korelasi  yang  baik.  Hasil perolehan  dengan  menggunakan  RSM  dapat melihat  interaksi  antar  setiap  faktor  yang berperan  dalam  kenaikan yield pada  sintesis alkildietanolamida.  Model  yang  diperoleh  dapat digunakan  untuk  melihat  prediksi  hasil  sintesis alkildietanolamida yang dilakukan.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  kepada  Direktorat  Jendral Pendidikan  Tinggi  (Dikti)  atas  dukungan  dana penelitian  pada  skema  PDUPT  2019  dan  LPPM Universitas Mataram.

## Daftar Pustaka/ References
[1] Swasono AWP., Elvarosa, PD., Masyithah, Z., 2012, Sintesis Surfaktan Alkil
Poliglikosida  dari  Glukosa  dan  Dodekanol dengan Katalis Asam, Jurnal Teknik Kimia USU , 1(1): 1-6.
[2] Lubis  FS.,  2018,  Karakteristik  Senyawa Alkanolamida dari Minak Jarak Costor dan Dietanolamine  dengan  Katalis  KOH, KONVERSI , 7(2): 31-36.
[3] Kurouw  S.  dan  Santoso,  B.,  2015  Minyak Kelapa  sebagai  Sumber  Asam  Lemak Rantai Medium, 1(1): 73-78.
[4] Gunawan  ER.,  Suhendra,  D.,  Wulandari, BN.,  dan  Kurniawati,  L.,  2019,  Enzimatic Synthesis  of  Palmitoylethanolamide  from Ketapang  Kernel  Oil, Journal  of  Physics , 1321(2): 1-6.
[5] Gunawan  ER.,  Suhendra,  D.,  Hidayat,  I., dan  Kurniawati,  L.,  2018, Optimization of Alkyldiethanolamide Synthesis from Terminalia  cattapa  L.  Kernel  Oil  Through Enzymatic Reaction, Journal Oleo Science , 67(8): 949-955.
[6] Suhendra  D.,  Gunawan,  ER.,  Nurita,  AD., Komalasari,  D.,  dan  Ardianto,  T.,  2017, Optimization of the Enzymatic Synthesis if Biodiesel  from  Terminalia  cattapa  L. Kernel  Oil  Using  Response  Surface Methodology, Journal  Oleo  Science ,
66(3): 209-215.
[7] Wahjudi  D.,  2017,  Aplikasi  Metode Response Surface Untuk Optimasi Kualitas
Warna  Minyak  Goreng, Jurnal  Keilmuan dan Aplikasi Teknik Industri, 1(1): 1-11.
[8] Widhiantari  IA.,  Sandra,  Djoyowasito,  G., 2019,  Perubahan  Sifat  Fisik  Buah  Tomat setelah  Proses  Transportasi, Jurnal  Ilmiah Rekayasa  Pertanian  dan  Biosistem ,  7(2): 139-147.
[9] Noviyanti  T.,  Ardiningsih,  P.,  Rahmalia, W.,  2012,  Pengaruh  Temperatur  terhadap Aktivitas  Enzim  Protase  dari  Daun Sansakng  ( Pycnarrhena  cauliflora Diels), JKK, 1(1): 31-34.
[10] Putri,  M.  F.,  Padil,  dan  Yelmida,  2014, Pengaruh  Waktu  Reaksi  dan  Penambahan Volume Enzim terhadap Pemurnian Selulosa-α  Pelepah  Sawit  Menggunakan
Enzim Xylanase dari Trichoderma sp.
[11] Gunawan,  E.  R.,  dan  Suhendra,  D.,  2008, Wax  Esters  Production  By  Alcoholysis  of Palm  Oil  Fraction, Indonesian  Journal , 8(3): 356-362.
[12] Suhendra, D., Yunus, W. M. Z. W., Harun, M.  J.,  Basri,  M.,  dan  Silong,  S.,  2005, Enzymatic  Synthesis of  Fatty  Hydroxamic Acids  from  Palm  Oil, Journal  of  Oleo Science , 54(1): 33-38.