## Imunostimulator Ekstrak Etanol Anredera Cordifolia Terhadap Titer Widal Salmonella typhi O Pada Rattus Norvergicus Galur Wistar
Imunostimulator Extract Ethanol Anredera cordifolia to Titer Widal Salmonella typhi O onRattus norvergicus  Galur Wistar
Pancawari Ariami, Siti Zaetun, Addien Faqih Pajenengan, Maruni Wiwin Diarti* Poltekkes Kemenkes Mataram
(Email: maruniwiwindiarti@yahoo.com )

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  yaitu  menganalisis ekstrak  etanol  daun Anreder  acordifolia sebagai imunostimulator terhadap titer widal S. typhi O pada hewan coba tikus putih jantan galur wistar. Jenis penelitian  yaitu quasi-eksperiment dengan  design non  equivalent  control  group .  Penelitian  ini menggunakan  hewan  coba tikus  putih  jantan  galur  wistar.  Konsentrasi ekstrak  etanol daun binahong yang diberikan sebesar 75% . Hewan coba diinduksikan antigen S.typhi O dua kali dengan volume  0,2 mL secara intra peritonial, diinkubasi selama 7 hari. Pemeriksaan Titer Widal S.typhi O dengan cara kualitatif dan semi kuantitatif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa titer tertinggi yang dapat terdeteksi pada  seluruh  kelompok  kontrol  yaitu  1/640  dan  seluruh  kelompok  perlakuan  yaitu  1/1.280  yang membuktikan adanya peningkatan titer setelah pemberian ekstrak etanol  daun Anredera  cordifolia . Hasil uji mann-whitney menunjukkan nilai p = 0,025, p < 0,05 yang membuktikan adanya perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan yang diberikan. Kesimpulan ekstrak etanol  daun Anredera  cordifolia berpotensi  sebagai imunostimulator terhadap  titer  widal S.typhi  O pada hewan coba tikus putih jantan galur wistar.
Kata kunci: Anredera cordifolia , Imunostimulator, Titer Widal, Salmonella typhi O

## ABSTRACT
The purpose of this study was to examine the ethanol extract of Anrederacordifolia leaves as an immunostimulator against the widal S. Typhi O titer in wistar strain male white rats. This research was a quasi-experimental study with a non-equivalent control group design. This study used wistar strain male white rats as experimental animals. The concentration ethanol extract of binahong leaves given was 75%. The experimental animals have induced with S.typhi O antigen twice with a volume  0.2 mL intraperitoneal, incubated for seven days. Examination of Widal S. Typhi O titer by qualitative and semi- quantitative methods. The results showed that the highest titer that could be detected in the entire control group  was  1/640.  The  entire  treatment  group  was  1  /  1,280,  which  proved  an  increase  in titer  after giving Anrederacordifolia leaf ethanol extract. The mann-whitney test results showed a value of p = 0.025, p <0.05, which proved a significant difference between the control group and the intervention group. Conclusion ethanol extract of Anredera cordifolia leaves can be an immunostimulator against WidalS.typhi O titers in wistar strain male white mice .
Key words: Anredera cordifolia , Imunostimulator, Titer Widal, Salmonella typhi O
https://doi.org/10.33860/jik.v15i1.413
Vol.15 No.1 Mei 2021: Hal. 12-18 p-ISSN: 1907-459X  e-ISSN: 2527-7170
Poltekita: Jurnal Ilmu Kesehatan http://jurnal.poltekkespalu.ac.id/index.php/JIK
© 2021 by the authors. Submitted for possible open access publication under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution (CC BY SA) license (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).

## Original Article

## PENDAHULUAN
Demam typhoid atau yang biasa disebut dengan typhus  abdominalis merupakan  salah satu infeksi yang terjadi di usus halus. Penyakit ini merupakan masalah kesehatan yang penting di  dunia  terkait  dengan  angka  morbiditas  dan mortalitas  yang  ditimbulkan  penyakit  ini terutama  di  negara  berkembang 1 .  Indonesia yang  merupakan  negara  beriklim  tropis menyebabkan angka infeksi bakteri Salmonella typhi di negara ini cukup tinggi 2 . Hal ini terjadi terus menerus di seluruh daerah dengan angka mobiditas  157/100.000  penduduk  di  daerah semi kota 3 .
Patogenitas penyakit demam typhoid ini dilihat  dari  adanya  rangsangan  antigen  kuman yang  akan  memicu  respon  imunitas  humoral melalui sel limfosit B, kemudian berdiferensiasi menjadi  sel  plasma  yang  akan  mensintesis Imunoglobulin (Ig). terbentuk pertama kali pada infeksi  primer  adalah  antibodi  O  (IgM)  yang cepat  menghilang,  kemudian  disusul  antibodi flagela H  (IgG).  IgM  akan  muncul  48  jam setelah  terpapar  antigen 4 .Penanggulangan infeksi  bakteri  dapat  dilakukan  dengan memberikan  antibiotik,  karena  antibiotik memiliki  peranan  penting  dalam  mengatasi bakteri  di  dalam  tubuh 5 . Imunostimulator merupakan  bahan  yang  dapat  meningkatkan kerja  komponan-komponen  sistem  imun. Sistem  imun  terdiri  atas  imunitas  non  spesifik dan spesifik. Imunostimulator dapat mengaktivasi sistem imun dengan berbagai cara seperti  meningkatkan  jumlah  aktivitas  sel  T, NK-cell dan  makrofag  serta  melepaskan interferon dan interleukin . Imunostimulator bisa  berupa  bahan  yang  berasal  dari  tanaman (bahan alam).
Pemanfaatan bahan alam semakin diminati  masyarakat  karena  relatif  tidak memiliki efek samping dan juga harganya tidak mahal bila dibandingkan bahan sintetik 6 .  Salah satu  tumbuhan  yang  memiliki  potensi  sebagai Imunostimulator alami adalah tanaman Binahong  ( Anrederacordifolia (Ten.)  Steenis).
Tanaman  Binahong  memiliki  akar,  umbi, batang,  bunga,  daun  yang  mengandung senyawa  aktif  yaitu  flavonoid,  alkanoid, terpenoid dan saponin 7 .
Flavonoid  merupakan  senyawa  yang memiliki kemampuan memperbaiki respon host yang  mengaktivasi  monosit  yang  berfungsi untuk  melakukan  fagositosis  terhadap  benda asing meskipun mekanisme aktivasinya belum
dapat  dijelaskan.  Flavonoid  dan  alkaloid mampu meningkatkan proliferasi dari sel B dan sel T limfosit, pelepasan sitokin spesifik seperti TNF-α,  IFN-γ  dan  IL-4.  Selain  itu  juga berpotensi  bekerja  terhadap  limfokin  yang dihasilkan  oleh  sel  T  sehingga  akan  memacu sel-sel  fagosit  termasuk  monosit  untuk melakukan  respon  fagositosis 6 .  Senyawa fenolik  juga  mempunyai  khasiat  antioksidan yaitu  mampu  menginaktivasi  berkembangnya reaksi oksidasi dengan cara mencegah terbentuknya radikal bebas.
Radikal bebas merupakan oksigen reaktif yang  akan  menyerang  membran  sel.  Senyawa antioksidan  akan  menjaga  dan  berfungsinya membran  lipid,  protein  sel,  dan  asam  nukleat; serta mampu mempertahankan keutuhan bentuk sel  terhadap  serangan  dari  antigen.  Monosit yang dipapar senyawa antioksidan ekstrak daun binahong dapat mempertahankan bentuk selnya sehingga monosit akan secara aktif melakukan fungsinya sebagai sel fagosit 6 . Hasil penelitian menunjukkan  ekstrak  etanol  daun  Binahong mengandung  flavonoid  total  sebesar  11,263 mg/kg  (segar)  dan  7,81  mg/kg  (kering)  dan Ekstrak  etanol  daun  Binahong  memiliki antioksidan  total  sebesar  4,25  mmol/100g (segar) dan 3,68 mmol/100g (kering) 8,9 .
Penelitian  bahan  alam lain yang mengandung flavonoid, seperti meniran ( Phyllanthus  niruri L.)  memiliki  kemampuan dalam  memperbaiki    sistem  imun.  Ekstrak etanol Daun Johar (Cassia siamea Lamk.) yang kaya akan flaovonoid memiliki potensi bekerja sebagai imunostimulan 10 . Flavonoid berpotensi bekerja terhadap limfokin yang dihasilkan oleh sel T sehingga akan merangsang sel-sel fagosit untuk  melakukan  respon  fagositosis 11 .    Efek ekstrak daun Binahong sebagai zat Imunostimulator pada  sel  monosit  telah dibuktikan  dan  sebagai  antimikroba  terhadap beberapa kuman juga telah dibuktikan secara in vitro namun belum banyak yang membuktikan secara in vivo .
Dengan  demikian,  peneliti  tertarik  untuk melakukan  pengkajian  lebih  lanjut  secara in vivo untuk mengetahui aktivitas
Imunostimulator ekstrak daun Binahong secara fisiologis  terhadap  titer  widal S.typhi O  pada hewan  coba  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus ) jantan galur wistar.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian quasi-eksperiment dengan  rancangan non equivalent  control  group. Penelitian  ini dilaksanakan  di  Laboratorium  Farmakologi Universitas Mataram pada tahun 2018.  Hewan coba  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  tikus  putih  ( R.novergicus) jantan  galur wistar, jenis kelamin jantan, sehat fisik, umur 3- 4  bulan  dengan  berat  badan  100-300  g 12 . Konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  binahong (A.cordifolia (Ten.)  Stennis)  yang  diberikan sebesar  75%.    Jumlah  sampel  yang  digunakan adalah 6 ekor hewan coba dengan faktor koreksi 25%  dari  unit  eksperiment.  Sehingga  jumlah hewan  coba  tikus  putih  ( R.norvegicus )  yang digunakan adalah 6 ekor + faktor koreksi = 6 + (6 x 25%) = 6 + 2 = 8 ekor. Cara pengambilan sampel non random purposive sampling .  Alat, bahan,  dan  sampel  penelitian  :kandang  tikus putih, tabung reaksi, rak tabung reaksi, tabung vaccutainer, alat  bedah  tikus,  (gunting  dan pinset), timbangan,tissue, label/tanda, sentrifuge, rotator, slide putih, lemari pendingin,  dispenser, yellow  tipe ,  batang pengaduk,  alat  ekstraksi,  daun  binahong, aquadest,  larutan  kloroform,  larutan  garam fisiologis,  pakan  tikus  standar,  serum  hewan coba tikus putih, reagen test widal, reagen Anti- O (somatik),hewan coba tikus putih ( R.novergicus) jantan galur wistar.
Cara Kerja Penelitian Persiapan  dan  Aklimatisasi  Hewan Coba  Tikus  Putih  (R.novergicus)  jantan galur wistar : Aklimatasi hewan coba selama 7 hari  terhadap  air,  makanan,  udara  dan  kondisi laboratorium.  Pakan  yang  diberikan  selama aklimatasi  adalah  pakan  ternak  standart  dan aquadest.
Cara  Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun Binahong (A.cordifolia(Ten.)Steenis).
Daun Binahong ( A.cordifolia( Ten.) Steenis)  diperoleh  di  wilayah  Ampenan tepatnya di Lingkungan Pondok Prasi Kelurahan  Bintaro  Kecamatan  Ampenan  Kota Mataram.  Daun  binahong  dicuci  di  bawah  air mengalir,  diiris  tipis-tipis,  dikering  anginkan selama 14 hari, dihaluskan dengan blender dan diayak  sehingga  diperoleh  serbuk  daun binahong.  Serbuk  daun  binahong  dimaserasi menggunakan  etanol  96%  sampai  seluruh bagian terendam dengan perbandingan 1:10 (1 bagian serbuk daun binahong dalam 10 bagian larutan  etanol)  selama  1  hari  dalam  wadah
berbahan gelas dan bermulut lebar. Setiap hari dilakukan pengadukan selama 5 menit. Ekstrak kemudian  disaring  dengan  corong Buchner sehingga  didapatkan  ekstrak  cair.  Ekstrak  cair diuapkan  sampai  bebas  dari  pelarut  etanol menggunakan  rotavaporator  pada  suhu  40°C selama 3 jam hingga ekstrak menjadi kental 6 .
Pembuatan  Konsentrasi  Ekstrak  Etanol Daun Binahong (A.cordifolia (L.) Steenis.).
Konsentrasi ekstrak etanol daun binahong yang digunakan dalam penelitian ini adalah75% yang dimana hal ini didasarkan atas penelitian  yang  dilakukan  oleh 6 yang membuktikan  bahwa    ekstrak  daun  binahong ( A.cordifolia (Ten.)  Stennis)  secara in  vitro dapat  meningkatkan aktivitas fagositosis monosit  dan  aktivitas  fagositosis  tertinggi adalah  kelompok  ekstrak  daun  binahong konsentrasi 50% dan 100%. 6
Penginduksian  Antigen  S.typhi  O  pada Hewan  Coba  Tikus  Putih  (R.novergicus)

## Jantan Galur Wistar.
Hewan  coba  tikus  putih  dimasukkan  ke dalam  kandang  restriksi  tikus.  Pada  bagian peritonial  tikus  didesinfektan  menggunakan alkohol  70%.  Diinduksikan  antigen S.typhi  O volume 0,2 ml secara intra peritonial. Di tunggu selama  7  hari  masa  inkubasi.    Diinduksikan kembali antigen S.typhi O volume sebanyak 0,2 ml  secara  intra  peritonial.    Di  tunggu  kembali selama  7  hari  masa  inkubasi.  Volume pemberian  ekstrak  etanol  daun  binahong konsentrasi  75%  pada  masing-masing  hewan coba  berbeda  tergantung  dari  berat  badan hewan  coba  yang  diberikan  selama  7  hari. Untuk  mengetahui  volume  efektif  Ekstrak Etanol daun Binahong sebagai Imunostimulator terhadap Titer Widal Salmonella typhi O pada hewan  coba  tikus  putih  maka  digunakan perhitungan berat badan hewan coba tikus putih yang  sebenarnya  dibagi  berat  badan  standart hewan  coba  tikus  putih  (200  gram)  di  kalikan volume  maksimum  yang  bisa  diterima  oleh lambung hewan coba tikus putih (1 ml) dibagi frekuensi pemberian etanol daun binahong (1 x sehari).
Pemeriksaan  Titer  Widal  S.typhi  O  setelah Pemberian Ekstrak Etanol Daun Binahong.
Pengambilan darah tikus putih dengan cara  pembedahan  dan  diambil  darah  melalui jantung  tikus  sebanyak  3  ml.  Disentrifuge dengan  kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit.
Dipisahkan  darah  dengan  serum.  Serum  siap digunakan untuk pemeriksaan widal. 13 . Pemeriksaan Titer Widal S.typhi O : Cara  Slide  Kualitatif : Diletakkan  satu tetes  kontrol  positif  pada  lingkaran  reaksi  di slide.  Diletakkan  50  µl  garam  fisiologis  pada lingkaran reaksi berikutnya di slide. Diletakkan satu tetes serum untuk diuji ke masing-masing lingkaran reaksi yang digunakan. Ditambahkan satu  tetes  suspensi  antigen S.typhi O  ke lingkaran  reaksi  yang  mengandung  kontrol positif dan garam fisiologis. Ditambahkan satu tetes suspensi antigen S.typhi O sesuai dengan lingkaran  reaksi  yang  mengandung  serum pasien. Dicampur tiap lingkaran reaksi dengan batang pengaduk secara terpisah. Slide dibolak- balik  secara  perlahan,  dan  amati  terbentuknya aglutinasi secara makroskopik pada waktu  satu menit.
Cara Slide Semi Kuantitatif :
Diletakkan menggunakan pipet 80 µl, 40 µl, 20 µl,  10  µl,  dan  5  µl  serum  untuk  diuji  pada  5 lingkaran reaksi  yang  berbeda  pada  slide.  titer yang sesuai diperoleh akan 1:20, 1:40, 1:80, 1: 160, dan 1: 320 pada masing-masing lingkaran reaksi. Ditambahkan satu tetes suspensi antigen S.typhi O  sesuai  dengan  lingkaran reaksi  yang mengandung serum pasien. Dicampur pada tiap lingkaran  reaksi  dengan  batang  pengaduk secara  terpisah.  Slide  dibolak-balik  secara perlahan,  dan  diamati  terbentuknya  aglutinasi secara  makroskopik  pada  waktu    satu  menit. Apabila  titer  lebih  dari  1/320  maka  dilakukan pegenceran  dengan  cara  : Disiapkan  4  tabung reaksi  dan  diberi  label  ½,  ¼,  1/8,  dan  1/16. Dimasukkan  500  ul  NaCl  0,85%  pada  tiap tabung. Dipipet 500 ul serum tikus putih pada tabung  pengenceran  ½,  campur.    Dari  tabung pengenceran ½ dipipet 500 ul serum tikus putih yang  sudah  diencerkan  dan  dipindahkan  ke tabung pengenceran ¼. Dari tabung pengenceran ¼ dipipet 500 ul serum tikus putih yang  sudah  diencerkan  dan  dipindahkan  ke tabung pengenceran 1/8. Dari tabung pengenceran  1/8  dipipet  500  ul  serum  tikus putih  yang  sudah  diencerkan  dan  dipindahkan ke  tabung  pengenceran  1/16.  Dari  tabung pengenceran  1/16,  500  ul  serum    tikus  putih yang  sudah  diencerkan  dibuang.  Dipipet  dari masing-masing  tabung  sebanyak  5  ul  dan ditambahkan reagen antigen S.typhi O . Diamati
aglutinasi yang terjadi dan kalikan dengan titer 1/320  pada  pengenceran  terakhir  yang  masih terjadi aglutinasinya. 14 .

## Analisa Data
Data yang dikumpulkan untuk mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh  pemberian ekstrak  daun  binahong  ( A.Cordifolia (Ten.) Steenis) sebagai Imunostimulator terhadap titer widal S.typhi O  hewan  coba  tikus  putih ( R.norvegicus )  galur  wistar  dilakukan  dengan uji  analisis  statistik non-parametrik uji mann- whitney dengan tingkat kepercayaan 95% (α = 0,05).

## Kelayakan etik Penelitian
Kelayakan etik Penelitian dari Komisi etik penelitian  kesehatan  Universitas  Mataram nomor:  76/UNI8.8/ETIK/2018  tanggal  10 Maret 2018.

## HASIL
Tabel  1  menunjukkan  hasil  pengukuran titer  widal  tikus  putih  ( Rattus  novergicus) jantan  galur  wistar  pada  pemberian  ekstak etanol daun binahong (Anredera cordifolia (L.)
Steenis).  Titer  tertinggi  yang  dapat  terdeteksi pada seluruh kelompok kontrol yaitu 1/640 dan seluruh kelompok perlakuan yaitu 1/1.280 yang membuktikan adanya peningkatan titer setelah pemberian Ekstrak etanol daun binahong.  Hasil analisis menggunakan uji mann-whitney menyatakan  bahwa  adanya  perbedaan  antara kelompok  kontrol  dan  perlakuan  yang  dilihat dari  p value  = 0,025.  Hasil  penelitian menunjukkan ada pengaruh pemberian ekstrak etanol  daun  binahong  ( A.cordifolia( Ten.) Stennnis)  sebagai Imunostimulator terhadap titer  widal S.typhi O  pada  hewan  coba  tikus putih  ( R.novergicus) jantan  galur  wistar.
Kondisi ini menunjukan bahwa ekstrak Etanol Daun Anredera cordifolia berpotensi sebagai Imunostimulator terhadap titer widal S.typhi O pada hewan coba tikus putih jantan galur wistar. Tabel  1  Analisis  statistik  menggunakan  uji mann-whitney menunjukkan nilai p = 0,025, p < 0,05  yang  membuktikan  adanya  perbedaan yang  signifikan  antara  kelompok  kontrol  dan kelompok perlakuan yang diberikan.

## Tabel 1   Hasil Pengukuran Titer Widal Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar pada Pemberian Ekstrak Daun Binahong
Perlakuan Titer Widal Salmonella typhi O p (Mann-Whitney) 1 2 3 Kontrol (-) 1/640 1/640 1/640 0,025 Perlakuan 1/1.280 1/1.280 1/1.280

## PEMBAHASAN
Penginduksian  antigen S.typhi  O pada tiap  hewan  coba  tikus  putih  (kelompok perlakuan  dan  kelompok  kontrol)  melalui  i.p (intraperitonial) masing-masing  sebanyak  2 kali.  Penginduksian  pertama  diberikan  antigen S.typhi O dengan volume 0,2 ml lalu diinkubasi selama  1  minggu.  Penginduksian  kedua, diberikan  antigen S.typhi  O dengan  volume yang sama yaitu 0,2 ml dan diinkubasi selama 1 minggu.  Penginduksian  antigen S.typhi  O tersebut  berdasarkan  hasil  studi  pendahuluan. Studi pendahuluan yang dilakukan menggunakan prinsip vaksinasi. Vaksin adalah suatu  bentuk  produk  biologi  yang  diketahui berasal  dari  virus,  bakteri  atau  dari  kombinasi antara  keduanya  yang  dilemahkan.  Vaksin diberikan  kepada  individu  yang  sehat  guna merangsang munculnya antibodi atau kekebalan  tubuh  guna  mencegah  dari  infeksi penyakit tertentu 15 . Prinsip ini digunakan untuk merangsang  terbentuknya  antibodi  setelah diinduksikan  antigen S.typhi  O pada  hewan coba  tikus  putih  ( R.novergicus )  jantan  galur wistar.  Pada  percobaan  pertama  dilakukan penginduksian  1  kali  dengan  volume  antigen sebanyak  0,2  ml  dan  diinkubasi  selama  1 minggu  dengan  hasil  tidak  didapatkan  respon imun atau tidak terbentuknya antibodi S.typhi O pada  hewan  coba  tikus  putih  ( R.  novergicus ) jantan galur wistar. Sedangkan pada percobaan kedua  dilakukan  penginduksian  sebanyak  2 kali.  Penginduksian  pertama  diberikan  antigen S.typhi O dengan volume 0,2 ml lalu diinkubasi selama 1 minggu.
Penginduksian  kedua,  diberikan  antigen S.typhi O dengan volume yang sama yaitu 0,2 ml  dan  diinkubasi  selama  1  minggu  dengan hasil didapatkan respon imun atau terbentuknya antibodi S.typhi O dengan titer > 1/320. Hal ini membuktikan  adanya  respon  imun  yaitu terbentuknya  antibodi S.typhi O  pada  hewan coba  tikus  putih  ( R.novergicus )  galur  wistar. Kelompok  perlakuan  diberikan  ekstrak  etanol daun  binahong  ( A.  cordifolio (Ten.)  Steenis)
dan kelompok kontrol diberikan aquadest steril masing-masing  selama  7  hari  melalui  oral (sonde)  dengan  volume  sesuai  perhitungan yang  dikonversi  dengan  berat  badan  tikus. Setelah  7  hari,  dilakukan  pembedahan  pada hewan  coba  untuk  pengambilan  sampel  darah untuk  di  ukur  titer  widalnya  menggunakan pemeriksaan  widal.  Hasil  yang  didapatkan menunjukkan bahwa  titer tertinggi yang dapat terdeteksi pada seluruh kelompok kontrol yaitu 1/640  dan  seluruh  kelompok  perlakuan  yaitu 1/1.280 yang membuktikan adanya peningkatan titer  setelah  pemberian  ekstrak  etanol  daun binahong. Dari hasil analisis statistik menggunakan  uji mann-whitney didapatkan hasil  yang  signifikan  dimana  nilai  p  =  0,025 yang  membuktikan  adanya  perbedaan  yang signifikan  antara  kelompok  kontrol  dan perlakuan yang diberikan.
Umumnya  antigen  yang  masuk  dalam tubuh baik yang disebabkan oleh bakteri, virus, parasit,  fungi,  prion,  dan  viroid  akan  selalu memicu  sistem  kekebalan  tubuh  dimulai  dari pertahanan  tubuh  non  spesifik  dengan  cara memusnahkan  bakteri  serta  pertahanan  tubuh spesifik  dengan  membentuk  pertahanan  yang lebih  kompleks  melalui  produksi  antibodi ataupun dengan memproduksi berbagai sitokin 16 . Meningkatnya titer antibodi menunjukkan peningkatan populasi sel plasma. Meningkatnya sel plasma menunjukkan bahwa pemberian  ekstrak  etanol  daun  binahong memiliki  efek Imunostimulator berdasarkan hasil  rata-rata  jumlah  peningkatan  titer  yang dibandingkan dengan kontrolnya.
Perlakuan  yang  diberikan  merupakan dosis  optimum  yang  dapat  diberikan  sebagai efek Imunostimulator .  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  oleh 6 menyatakan  bahwa  terdapat perbedaan yang signifikan terhadap peningkatkan  aktivitas  fagositosis  monosit secara In  vitro setelah  diberikan  ekstrak  daun binahong dengan konsentrasi 50% dan 100% 6 . Peningkatan  titer  widal    pada  kelompok perlakuan lebih tinggi dibandingkan kelompok
kontrol.  Menunjukkan  peningkatan  aktivitas sistem  imun.  Hal  ini  membuktikan  ekstrak etanol daun binahong bersifat Imunostimulator . Ekstrak etanol daun binahong mengandung  senyawa  flavonoid  dan  alkaloid. Golongan  senyawa  tersebut  sudah  diketahui bermanfaat  sebagai  imunostimulan.  Flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol terbesar yang ditemukan di alam. Senyawa ini memiliki kemampuan  memperbaiki  respon  host  yang mengaktivasi  monosit  yang  berfungsi  untuk melakukan  fagositosis  terhadap  benda  asing meskipun mekanisme aktivasinya belum dapat dijelaskan.  Bukan  hanya  itu,  flavonoid  juga mempunyai  peranan  dalam  meningkatkan sekresi  IL-2.  IL-2  dapat  bertindak  sebagai faktor  proliferasi  dan  diferensiasi  sel  B 17 . Ketika  terjadi  gangguan  dikarenakan  tubuh terpapar  oleh  antigen S.typhi  O yang dilemahkan disini berperan sebagai antigen. Sel Th2  melalui  aktivasi  sel  B  untuk  membuat antibodi  dan  menstimulasi  imunitas  humoral. Sel  B  dalam  sistem  imun  akan  berproliferasi membentuk sel plasma kemudian juga memproduksi Imunoglobulin.
Pengenalan oleh toll-like receptor (TLRs) akan menstimulasi produksi sitokin pro inflamasi  termasuk  IL-1  dan  IL-6 18 .  Kedua interleukin  yang  sudah  teraktifasi  bekerja secara  sinergis  untuk  proliferasi  sel  T  dan merangsang  pembentukan antibodi  oleh sel  B. Peran  Th1  adalah  memproduksi  interferon gamma  yang  memiliki  fungsi  utama  dalam imunitas  nonspesifik  dan  spesifik,  yaitu mengaktifkan  makrofag,  merangsang  ekspresi MHC  kelas  I  dan  II  APC,  merangsang  efek sitolitik  sel  natural  killer  (NK)  dalam  melisis sel-sel  yang  terinfeksi  virus  dan  bekerja terhadap  sel  B  dalam switching subkelas  Ig  G yang berpartisipasi dalam eliminasi mikroba 19 .
Titer  widal  yang  meningkat  menunjukkan imunitas  adaptif  yang  teraktivasi.  Konsentrasi 75% ektrak etanol daun binahong terbukti baik sebagai Imunostimulator , karena dapat memberikan  imunostimulan  dengan  ditandai peningkatan  titer  widal  yang  di  induksikan antigen S.typhi O.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Titer  widal  pada  kelompok  perlakuan hewan  coba  tikus  putih  ( R.novergicus) jantan galur  wistar  masing-masing  yang  diberikan ekstrak etanol daun bihahong ( A.cordifoila (Ten.)  Steenis)  konsentrasi  75%
adalah  1/1.280.Titer  widal  pada  kelompok kontrol hewan coba tikus putih ( R.novergicus) jantan  galur  wistar  masing-masing  yang  tidak diberikan  ekstrak  etanol  daun  bihahong ( A.cordifoila (Ten.)  Steenis)  adalah  1/640. Ekstrak  etanol  daun  binahong  ( A.cordifolia ( Ten.) Steenis) berpotensi sebagai Imunostimulator terhadap titer widal
Salmonella typhi O pada hewan coba tikus putih ( R.norvegicus ) jantan galur wistar.
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai potensi ekstrak etanol daun binahong ( A.cordifolia (Ten.) Steenis) sebagai Imunostimulator pada  respon  imun  spesifik selular  yaitu  sel  T helper atau  sel  CD4. Penelitian  ini  dapat  dikembangkan  dengan  uji coba  daya  protektif  dalam  mencegah  adanya infeksi  mikroorganisme  lainnya.  Masyarakat dapat  menggunakan  ekstrak  daun  binahong sebagai bahan alami dalam meningkatkan daya tahan tubuh terhadap infeksi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih    kepada  Direktur  Poltekkes Kemenkes  Mataram,  Kepala  Laboratorium Farmakologi  Universitas  Mataram,  Ketua Komisi  Etik  Fakultas  Kedokteran  universitas Mataram yang telah memfasilitasi pelaksanaan penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Velina  VR,  Hanif  AM.  Artikel  Penelitian Gambaran Hasil Uji Widal Berdasarkan Lama Demam  pada  Pasien  Suspek  Demam  Tifoid. Jurnal  Fakultas  Kedokteran  Universitas Andalas. 2014;5(3):687–91.
2. Rahayu T, Ekstrak P, Beluntas D, Rahayu T, Waluyo J, Aisyah IN, et al. Pengaruh Ekstrak Daun Beluntas ( Pluchea indica ( L .) Less .) Terhadap  Demam  Tifoid  Pada  Tikus  Putih  ( Rattus norvegicus L .) Jantan Dan Pemanfaatannya  Sebagai  Buku  Nonteks. Artikel Ilmiah Mahasiswa. 2012;1(1):1–4.
3. Cita  YP.  Bakteri  Salmonella  typhi  dan Demam Tifoid. Jurnal Kesehatan Masyarakat. 2011;6(1):42–6.
4. Marleni  M.  Ketepatan  uji  tubex  TF dibandingkan Nested-PCR dalam mendiagnosis  demam  tifoid  pada  anak  pada demam  hari  ke-4.  Palembang:  Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya; 2012.
5. Saputra SA, Fifendy M, Fitriani V. Pengaruh Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Terhadap Pertumbuhan Salmonella typhi. Journal. 2008;1(1):1–2.
6. Wahyukundari  M,  Praharani  D.  Pengaruh Ekstrak Daun Binahong (Anredera Cordifolia
(Ten.) Stennis) Terhadap Aktivitas
Fagositosis  Monosit.  FORKINAS  VI  FKG
UNEJ. 2016;416–25.
7. Rimporok  S,  Kepel  BJ,  Siagian  K  V.  Uji Efektivitas Ekstrak Daun Binahong ( Anredera  Cordifolia  Steenis  )  Terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans Secara In Vitro.  Pharmacon  Jurnal  Ilmiah  Farmasi. 2015;4(4):15–21.
8. Selawa  W,  Revolta  M,  Runtuwene  J, Citraningtyas  G,  Studi  P,  Fmipa  F,  et  al. Kandungan Flavonoid dan Kapasitas Antioksidan  Total  Ekstrak  Etanol  Daun Binahong (Anredera cordifolia ( Ten .) Steenis
). Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi.
2013;2(01):18–23.
9. Anwar  TM,  Soleha  TU.  Manfaat  Daun Binahong (Anredera cordifolia) sebagai terapi Acne  Vulgaris.  Jurnal  Majority.  2016  Oct 1;5(4):179–83.
10.   Ningrum  DW,  Kusrini  D,  Fachriyah  E.  Uji Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Flavonoid dari Ekstrak Etanol Daun Johar (Senna siamea Lamk). Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi. 2017 Oct 1;20(3):123–9.
11.   Kusmardi, Kumala S, Wulandari D. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun Johar ( Cassia
siamea  Lamk  .)  Terhadap  Peningkatan
Aktivitas  Dan  Kapasitas  Fagositosis  Sel Makrofag.
Makara
Kesehatan.
2006;10(2):89–93.
12.   Harmita, Radji M. Buku Ajar Analisis Hayati. Jakarta: EGC Kedokteran; 2008.
13.   Zulkifli,  Wiwin  Diarti  M,  Jiwintarum  Y, Saraswati  L.  Jumlah  Eritrosit  Darah  Tepi Hewan Coba Tikus Putih (Rattus norvegicus)
Strain  Wistar  Yang  Diberikan  Air  Seduhan
Kelopak  Bunga  Rosela  Merah  (Hibiscuss sabdariffa). Media Bina Ilmiah.
2014;8(1978):11–7.
14.   Tulip Diagnostic (P) LTD. Widal Antigen Set /  Antigens  For  Slide  And  Tube  Tests. Gitanjali; 2017.
15.   Kementerian  Kesehatan  RI.  Vaksin  untuk pencegahan,  serum  untuk  pengobatan.  Biro Komunikasi  dan  Pelayanan  Masyarakat Sekretariat  Jenderal  Kementerian  Kesehatan RI. 2017. p. 18–9.
16.   Lehner  MD,  Lttner  J,  Bundschuh  DS,  van Rooijen  N,  Wendel  A,  Hartung  T.  Improved innate  emmunity  of  endotoxin-tolerant  mice increase  resistance  to  Salmonella  enterica serovar typhimurium infection despite attenuated  cytokine  response.  Infect  Immun.
2001;69:463–71.
17.   Hefni M, Rifa’i M, Widodo. Aktivitas Ekstrak Daun Kelor terhadap Respons Imun Humoral pada Mencit yang Diinfeksi Salmonella typhi. Jurnal Veteriner. 2013 Dec 26;14(4):519–26.
18.   Febyan,  Wijaya  SH,  Tannika  A,  Hudyono  J.
Role of Cytokines in Stressful Condition as A Trigger  for  A  Depression.  Jurnal  Penyakit Dalam Indonesia. 2019;6(4):210–4. 19.   Masyhuri DM, Murwani S, Winarso D. Efek Imunostimulator Ekstrak Etanol Kayu Manis (Cinnamomum burmannii)Terhadap
Peningkatan Jumlah Sel B220 dan Sel Bb220 - Imunoglobulin G pada Mencit Balb/C yang diinfeksi Salmonella enteritidis. The Student J Vet Sch Brawijaya Univ. 2014;3(4):1–10.