## Mandala of Health
Vol. 13, No. 2, Februari 2021, Hal. 108-117 ISSN: 0216-3098 DOI: 10.20884/1.mandala.2021.13.2.8906
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK CABAI RAWIT ( Capsicum frustescens L.) TERHADAP GAMBARAN HISTOLOGI

## ORAL SQUAMOUS CELL CARCINOMA (STUDI IN VIVO )
EFFECT OF CAYENNE PEPPER EXTRACT ( Capsicum frustescens L.)

## ON HISTOLOGICAL FEATURES OF ORAL SQUAMOUS CELL CARCINOMA (IN VIVO STUDY)
Pratiwi Nur Widyaningsih 1*) , Fitri Aniowati 2 , Cantika Nadrotan Naim 3 , Nova Dwi Anggraeni 4
1 Departemen Biologi Oral, Jurusan Kedokteran Gigi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Soedirman
Jl, Dr. Soeparno, Karangwangkal, Grendeng, Kecamatan Purwokerto Utara, Kabupaten Banyumas, Jawa Tengah, Indonesia
2 Mahasiswa Kedokteran Gigi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto- Indonesia
Jl, Dr. Soeparno, Karangwangkal, Grendeng, Kecamatan Purwokerto Utara, Kabupaten Banyumas, Jawa Tengah, Indonesia
3 Mahasiswa Farmasi, Fakultas Ilmu-Ilmu Kesehatan, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto-Indonesia
Jl, Dr. Soeparno, Karangwangkal, Grendeng, Kecamatan Purwokerto Utara, Kabupaten Banyumas, Jawa Tengah, Indonesia

## ABSTRAK
Oral squamous cell carcinoma (OSCC) merupakan kanker rongga mulut yang sering ditemukan  dengan  harapan  hidup  rendah.  OSCC  merupakan  penyakit  multifaktorial dengan  gejala  yang  sering  muncul  berupa  ulserasi  dengan  tepi  eksofitik  dan  persisten. Cisplatin merupakan  agen  kemoterapi  yang  banyak  digunakan  dalam  mengobati  OSCC, akan  tetapi cisplatin memiliki  efek  toksisitas  yang  tinggi.  Cabai  rawit  ( Capsicum frustescens L.)  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  banyak  dikonsumsi  dan  memiliki kandungan  kapsaisin  yang  dapat  berperan  sebagai  antikanker  dengan  cara  meningkatkan antibodi  p53  dalam  proses  apoptosis  sehingga  dapat  mencegah  proliferasi  sel  kanker  dan mendegradasi  mutasi  gen  p53.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  pemberian ekstrak cabai rawit ( Capsicum frustescens L.) terhadap gambaran histologi oral squamous cell carcinoma (studi in vivo ). Tiga puluh tikus Wistar jantan berusia 2 bulan, berat 150- 200  gram,  dibagi  menjadi  5  kelompok  yaitu  kelompok  kontrol    negatif  (K-)  tanpa perlakuan, kelompok kontrol positif (K+) diberikan paparan DMBA, kelompok perlakuan paparan  DMBA  dan  induksi cisplatin ,  paparan  DMBA  dan  induksi  gel  nanopartikel ekstrak kapsaisin 1% dan 3%. Data dianalisis secara statistik dengan uji One-Way Anova dilanjutkan Post hoc LSD. Hasil menunjukan terdapat perbedaan signifikan (P<0.05) pada semua  kelompok,  kecuali  kelompok  KP  1  terhadap  KP  2,  KP3  terhadap  K+,  kelompok KP1  dan  KP    terhadap  kelompok  K-.  Pemberian  gel  nanopartikel  kapsaisen  1%
pengaruh pemberian ekstrak cabai rawit ( capsicum frustescens l.) terhadap gambaran histologi oral squamous cell carcinoma (studi in vivo ) ( Pratiwi Nur Widyaningsih)
memberikan efek yang sama dengan pemberian  cisplatin terhadap jumlah mitosis dan sel atipik pada kondisi OSCC.
Kata kunci : Cabai rawit, OSCC, kapsaisin, cisplatin

## ABSTRACT
Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a cancer of the oral cavity that is often associated with a low life expectancy. OSCC is a multifactorial disease, and its symptoms typically  manifest  as  ulceration  with  exophytic  and  persistent  edges.  Cisplatin  is  a commonly  used  chemotherapeutic  agent  for  treating  OSCC,  but  it  has  high  toxicity. Cayenne  pepper  (Capsicum  frutescens  L.)  is  a  widely  consumed  plant  that  contains capsaicin,  which  can  act  as  an  anticancer  agent  by  increasing  p53  antibodies  in  the apoptosis  process,  thereby  preventing  cancer  cell  proliferation  and  degrading  p53  gene mutations. This study aims to determine the effect of administering cayenne pepper extract (Capsicum frutescens L.) on the histological features of oral squamous cell carcinoma (in vivo  study).  Thirty  male  Wistar  rats,  aged  2  months  and  weighing  150-200  grams,  were divided  into  five  groups:  negative  control  group  (K-)  without  treatment,  positive  control group  (K+)  given  DMBA  exposure,  treatment  group  with  DMBA  exposure  and  cisplatin induction,  treatment  group  with  DMBA  exposure  and  induction  of  gel  nanoparticles containing 1% capsaicin extract, and treatment group with DMBA exposure and induction of gel nanoparticles containing 3% capsaicin extract. The data were analyzed statistically using the One-Way ANOVA test followed by Post hoc LSD. The results showed significant differences (P<0.05) among all groups, except between KP1 and KP2, KP3 and K+, and KP1 and KP-. The administration of 1% capsaisen nanoparticle gel had a similar effect to cisplatin administration in terms of the number of mitoses and atypical cells under OSCC conditions.
Keywords : Cayenne pepper, OSCC, capsaicin, cisplatin
Penulis korespondesi:
Pratiwi Nur Widyaningsih, Jurusan Kedokteran Gigi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Soedirman Jl. Dr. Soeparno, Kampus Karangwangkal, Purwokerto Utara Email: pratiwinurwidyaningsih@gmail.com

## PENDAHULUAN
Kanker rongga mulut menempati peringkat ke 6 hingga 8 dari seluruh jenis kanker yang paling sering terjadi di seluruh dunia. Dimana 95% dari kanker rongga mulut secara histologis  diklasifikasikan  sebagai oral  squamous  cell  carcinoma (OSCC)  (Bhudy et  al,, 2015). Oral squamous cell carcinoma (OSCC) merupakan jenis kanker rongga mulut yang paling  sering  ditemukan  dengan  tingkat  harapan  hidup  yang  rendah.  Hal  ini  disebabkan akibat  terlambatnya  dalam  mendeteksi  dan  mendiagnosa  OSCC  (Salian et  al .,  2016).
OSCC adalah jenis neoplasma maligna yang berasal dari keratinosit superbasal epidermis, serta  merupakan  jenis  neoplasma  non  melanoma  terbanyak  setelah  karsinoma  sel  basal (Bhudy et al,, 2015). OSCC sering menyerang pada pasien laki-laki diatas usia 45 tahun. OSCC  disebabkan  oleh  banyak  factor,  dengan  faktor  resiko  terbesar  disebabkan  dari konsumsi  tembakau  dan  alkohol  berlebih,  faktor  genetik,  trauma,  serta  infeksi  virus (Riskayanti et  al .,  2021).  Gejala  yang  sering  muncul  pada  OSCC  antara  lain  ulserasi dengan  tepi  eksofitik  dan  persisten  yang  terjadi  dalam  jangka  waktu  lebih  dari  2 minggu (Mahawar et al., 2020). Salah satu penanda OSCC secara histologi ditandai dengan adanya perubahan  bentuk  seperti  stratifikasi  epitel  yang  tidak  beraturan,  hilangnya  polaritas  sel basal,  peningkatan  mitosis,  serta  munculnya keratin  pearls didalam rete  ridge .  Selain  itu juga  terdapat  perubahan  sitologi  seperti  variasi  ukuran  inti  yang  tidak  normal,  variasi abnormal pada bentuk inti, variasi ukuran dan bentuk sel yang tidak normal, peningkatan rasio  inti-sitoplasma,  serta  peningkatan  jumlah  dan  ukuran  nukleus  (Wetzel  and Wollenberg, 2020).
Cisplatin ( cis-diaminedichloroplatinum (II) atau CDDP) adalah agen kemoterapetik yang banyak digunakan sebagai obat antikanker. Cisplatin banyak digunakan sebagai obat dasar  pada  kemoterapi  dan  juga  sering  dikombinasikan  dengan  agen  kemoterapi  lainnya (Hung et  al .,  2020). Cisplatin bekerja  dengan  cara  menginduksi  apoptosis  dan menghentikan siklus sel pada interaksi DNA sehingga dapat menyebabkan kerusakan pada DNA  sel  karsinogen  (Alonso et  al., 2020).  Walaupun cisplatin dapat  menyebabkan terjadinya  kematian  sel,  obat  ini  dapat  menyebabkan  resistensi  serta  memiliki  efek toksisitas yang tinggi (Mehanna et al., 2019). Selain itu, cisplatin juga dapat menyebabkan terjadinya nephrotoxicity,  cardiotoxicity, neurotoxicity dan ototoxicity (Pfankuchen et  al., 2015).
Saat  ini  banyak  dilakukan  uji  pengembangan  dari  bahan  alam  seperti  buah  dan tanaman  sebagai  alternatif  bahan  antikanker.  Cabai  rawit  ( Capsicum  frustescens L.) merupakan salah satu tanaman yang banyak dikonsumsi oleh masyarakat Indonesia karena dapat  menimbulkan  sensasi  rasa  pedas.  Cabai  rawit  ( Capsicum  frustescens L.)  memiliki kandungan kapsaisin, alkaloid, flavonoid, dan terpenoid (Ernawati et al., 2018). Kapsaisin ( 8-methyl-N-vanillyl-6-noneamide )  merupakan  senyawa  alkaloid  dan  bertanggung  jawab terhadap  rasa  pedas  pada  cabai  rawit  (Lavorgna et  al., 2019).  Kandungan  kapsaisin  pada cabai rawit memiliki kandungan terbesar dibandingkan varietas cabai lainnya yaitu sebesar 2,11%. Kapsaisin memiliki fungsi sebagai antikanker dengan cara meningkatkan antibodi p53 yang berperan dalam proses apoptosis  serta dapat mencegah terjadinya proliferasi sel kanker dan mendegradasi mutasi yang terjadi pada gen p53 (Garufi, 2016).
Pemanfaatan  bahan  herbal  dalam  bentuk  sediaan  topikal  belum  begitu  banyak dikembangkan,  sehingga  dengan  adanya  inovasi  bentuk  sediaan  seperti  gel  nanopartikel dapat  meningkatkan  penetrasi  dan  absorbsi  senyawa  suatu  bahan  aktif.  Gel  nanopartikel merupakan  sediaan  gel  dengan  mengeluarkan  partikel  berukuran  kecil  sehingga memudahkan  dalam  mencapai  target.  Selain  itu,  penggunaan  nanopartikel  akan mewujudkan bioavailabilitas yang lebih tinggi dibandingkan sediaan peroral, serta mudah diterima  oleh  pasien  karena  penggunaannya  yang  praktis,  aman,  dan  tidak  terasa  sakit (Macedo et al., 2020). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efek pemberian
pengaruh pemberian ekstrak cabai rawit ( capsicum frustescens l.) terhadap gambaran histologi oral squamous cell carcinoma (studi in vivo ) ( Pratiwi Nur Widyaningsih)
ekstrak cabai rawit ( Capsicum frustescens L.) terhadap gambaran histologi oral squamous cell carcinoma (studi in vivo ).

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian  experimental  laboratoris  dengan  rancangan penelitian posttest-only  with  control  group  design .  Penelitian  dilaksanakan  di Laboratorium  Farmakologi  FK  Unsoed,  Laboratorium  Riset  FK  Unsoed,  Laboratorium Lingkungan Fakultas Biologi Unsoed, serta Laboratorium Biologi Jurusan Farmasi, FIKES Unsoed.  Sejumlah  30  ekor  tikus  Wistar  ( Rattus  norvegicus )  dibagi  menjadi  5  kelompok menggunakan teknik simple random sampling dengan masing-masing kelompok terdapat 5 ekor tikus dan 1 ekor tikus untuk ketentuan dropout .

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  antara  lain:  penumbuk,  kandang  kayu tikus,  masker  medis,  sarung  tangan, object  glass ,  gunting  pemotong  rahang,  kaca  daya sebar, timbangan digital, pipet volume, aluminium foil, cetakan parafin, batang pengaduk, gelas ukur, spatula, pot sampel, spuit 1 cc, cryotube , microbrush swab , well plate 46-well , micropipet .
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  cabai  rawit  hijau,  tikus  wistar ( Rattus  norvegicus )  berjenis  kelamin  jantan  berusia  2  bulan  dengan  berat  badan  150-200 gram, DMBA, aquades, iodine, pakan hewan ( vital horse ), basis karbopol, minyak jagung, cisplatin ,  trietanolamin,  natrium  metabisulfat,  ketamin,  metil  paraben,  gliserin,  propilen glikol, air suling, dietil eter, etanol 96%, neutral buffered formalin 10% , salin, phosphate buffer saline , n-heksana, methanol.

## Jalannya Penelitian
1. Persiapan Penelitian
Pengajuan ethical clearance di Komisi Etik Penelitian Kesehatan (KEPK) FK Unsoed dengan nomor Ref: 125/KEPK/VII/2021.
2. Pembuatan Ekstrak Kapsaisin Cabai  rawit  hijau  sebanyak  2  kg  diperoleh  dari  Desa  Kemutug  Kidul,  Kecamatan Baturraden,  Kabupaten  Banyumas  dengan  pemupukan  menggunakan  urea  22gram pertanaman  kemudian  dideterminasi  di  Laboratorium  Lingkungan,  Fakultas  Biologi Unsoed dengan nomor sertifikat  084/HP.LL/VI/2021. Cabai rawit  yang akan diproses menjadi gel, dipilah kulit dan plasenta cabai dari biji cabainya. Hal ini bertujuan untuk mendapatkan kandungan kapsaisin terbaik. Kulit dan plasenta cabai dilakukan ekstraksi dengan pelarut etanol 96% dengan kecepatan pengadukan 200 rpm, suhu 50 o C, selama 4  jam  di  Laboratorium  Biologi  Farmasi,  Jurusan  Farmasi,  FIKES  Unsoed.  Kemudian ekstrak  dievaporasi  hingga  menghasilkan  ekstrak  kental  dan  filtrat  cabai  rawit  hijau. Ekstrak  kental  diisolasi  untuk  mengetahui  keberadaan  senyawa  kapsaisin  dengan menambahkan  dietil  eter,  kemudian  dikocok,  didinginkan  dan  didiamkan  hingga terbentuk kristal.
3. Pembuatan Gel Nanopartikel Ekstrak Kapsaisin Sediaan gel nanopartikel dibuat sebanyak 100gram dengan variasi konsentrasi ekstrak 1%  dan  3%.  Sediaan  dikerjakan  dengan  menimbang  seluruh  bahan  yang  diperlukan. Karbopol  dicampurkan  dalam  air  suling  dan  berperan  sebagai  basis  gel.  Kemudian
metil  paraben  dilarutkan  dalam  propilen  glikol  dan  ditambahkan  metabisulfat  hingga homogen.  Larutan  dicampurkan  dalam  basis  gel  dan  dihomogenisasi.  Pembuatan nanopartikel dikerjakan dengan melakukan pengadukan pada magnetic stirrer selama 2 jam.
4. Pembuatan Model Tikus OSCC
Sampel  penelitian  adalah  30  ekor  tikus  wistar  ( Rattus  norvegicus )  berjenis  kelamin jantan  berusia  2  bulan  dengan  berat  150-200gram  yang  diperoleh  dari  Laboratorium Riset  FK  UGM.  Tikus  wistar  diberikan  penanda  untuk  membedakan  masing-masing kelompok  uji  dan  dilakukan  proses  aklimatisasi  selama  1  minggu.  Dilakukan penimbangan  berat  badan  setelah  proses  aklimatisasi,  sebelum  diinduksi  DMBA,  dan sebelum perlakuan. Sampel dibagi menjadi 5 kelompok dengan metode sistem random sampling yaitu  Kelompok  kontrol  negatif  (K-)  tanpa  perlakuan,  kelompok  kontrol positif  (K+)  diberikan  paparan  DMBA,  kelompok  perlakuan  1  (KP  1)  diberikan paparan DMBA dan induksi cisplatin , kelompok perlakuan 2 (KP 2) diberikan paparan DMBA dan induksi gel nanopartikel ekstrak kapsaisin 1%, kelompok perlakuan 3 (KP 3)  diberikan  paparan  DMBA  dan  gel  ekstrak  kapsaisin  3%.  Induksi  OSCC  dilakukan pada kelompok 2, 3, 4, dan 5. Larutan karsinogen dibuat dengan melarutkan sejumlah serbuk  DMBA  dalam  minyak  jagung  dan  dilakukan  homogenisasi  menggunakan vortex selama ± 15 menit. Induksi karsinogen dilakukan selama 2 kali dalam seminggu, selama  3  minggu  dengan  dosis  induksi  yang  diberikan  20  mg/kgBB.  Sebelum dilakukan induksi, tikus dianestesi menggunakan ketamin secara intramuskular dengan dosis 0.2 mL/200 gram BB dan disesuaikan dengan berat badan masing-masing tikus. Pemberian DMBA dilakukan dengan injeksi mukosa bukal kanan sesuai dengan dosis yang  diperlukan.  Dosis  yang  diperoleh  dilarutkan  pada  1  ml  minyak  jagung  secara injeksi  mukosa  bukal.  Perlakuan  tikus  didahului  dengan  anestesi  ketamin.  Setelah perlakuan, tikus di palpasi nodul kanker 4 kali seminggu, selama 2 minggu.
5. Pemberian Perlakuan Perlakuan  dilakukan  setelah  pengamatan  dengan  frekuensi  satu  kali  sehari  selama  1 minggu. Pada kelompok 3 diberikan perlakuan menggunakan cisplatin secara intravena dengan  dosis  5mg/kgBB.  Kelompok  4  diberikan  perlakuan  menggunakan  sediaan  gel nanopartikel  kapsaisin  1%  dengan  dosis  sebesar  1mg/kgBB  melalui  mukosa  bukal kanan.  Kelompok  5  diberikan  perlakuan  menggunakan  sediaan  gel  nanopartikel kapsaisin 3% melalui mukosa bukal kanan.
6. Pembedahan Hewan Uji Dilakukan  persiapan  prosedur  pembedahan  pada  bulan  ketiga  setelah  dinyatakan sampel  terkena  kanker  dan  telah  diberi  gel  nanopartikel  ekstrak  kapsaisin.  Dilakukan cervical dislocation pada tikus dipapan bedah dan dipastikan tikus terfiksasi baik. Pada penelitian ini diambil jaringan mukosa  bukal kanan yang sebelumnya dibasahi dengan Toluidine  Blue (TB)  1%.  Organ  dibersihkan  dari  lemak  yang  menempel,  dicuci,  dan dibandingkan. Organ dimasukan dalam pot formalin 4-10% dan buffer formalin.
7. Pengamatan Histologi Pengamatan  histologi  menggunakan  metode  pewarnaan  hematoksilin  dan  eosin  (HE) dengan  5  lapang  pandang.  Hematoksilin  akan  mewarnai  bagian  inti  sel  menjadi  biru kehitaman, sementara eosin akan mewarnai bagian sitoplasma sel dan sebagian jarngan ikat  dengan  intensitas  warna  merah  muda,  orange,  dan  merah  (Bancroft and Gamble, 2013). Pengamatan pada preparat hematoksilin eosin dilakukan oleh dua peneliti untuk menghindari  bias.  Kemudian  dilihat  pada  3  lapang  padang  perbesaran  100x  dan  400x untuk melihat invasi sel kanker pada sel basal (Varadarajan et al., 2020).
pengaruh pemberian ekstrak cabai rawit ( capsicum frustescens l.) terhadap gambaran histologi oral squamous cell carcinoma (studi in vivo ) ( Pratiwi Nur Widyaningsih)

## Analisis Data
Analisis data yang dilakukan adalah uji normalitas dan uji homogenitas. Jika varian data  homogen  dan  sebaran  data  normal,  maka  digunakan  uji One  Way  Anova .  Jika  tidak homogen digunakan uji Kruskal Wallis . Selanjutnya, dilakukan uji Mann Whitney sebagai lanjutan Kruskal Wallis dan Post Hoc LSD sebagai uji lanjutan One Way Anova.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  pengamatan  histologi  mukosa  bukal  kanan  menggunakan  pewarnaan  HE dengan parameter sel atipik dan mitosis yang selanjutnya dianalisis statistic dengan uji One Way Anova dan Post Hoc LSD terlihat pada Tabel 1 .
Tabel 1. Hasil Uji Post Hoc LSD Jumlah Mitosis dan Sel Atipik No. K elompok K - K + KP 1 KP 2 KP 3 1. K- 0.003* 0.191 0.093 0.004* 2. K+ 0.003* 0.010* 0.018* 0.687 3. KP 1 0.191 0.010* 0.600 0.015* 4. KP 2 0.093 0.018* 0.600 0.028* 5. KP 3 0.004* 0.687 0.015* 0.028*
Keterangan : * = terdapat perbedaan yang signifikan ( p≤0,05) antar kelompok
Pada  kelompok  kontrol  negatif  (K-)  yang  tidak  diberikan  perlakuan  menunjukkan gambaran  mikroskopis  sel  basal  normal.  Pengamatan  mikroskopis  pada  kelompok  kontrol  positif (K+) menunjukkan  adanya mitosis  dan akumulasi  sel  atipik, serta sel basal mengalami perubahan bentuk menjadi ireguler. Hasil pemeriksaan preparat histologi pada kelompok perlakuan kedua (KP 2)  menunjukkan  adanya  penurunan  sel  atipik  dan  jumlah  mitosis  dibandingkan  dengan  kelompok perlakuan yang lain. Jumlah mitosis dan sel atipik pada kelompok perlakuan pertama (KP 1) tidak berbeda  signifikan  (P>0.05)  bila  dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan  kedua  (KP  2).  Hasil pengamatan histologi dapat dilihat pada Gambar 1.
Pada penelitian ini, sampel diambil dari jaringan OSCC mukosa bukal kanan tikus wistar yang telah diinduksi DMBA dan diberikan perlakuan. Pada kelompok kontrol positif (K+)  signifikan  terhadap  kelompok  perlakuan  pertama  (KP  1)  yaitu  kelompok  dengan induksi  DMBA  dan  diberikan  cisplatin. Cisplatin merupakan  salah  satu  agen  kemoterapi yang  paling  sering  digunakan  dalam  pengobatan OSCC.  Cisplatin bekerja  dengan  cara melakukan  mekanisme  aksi  sitotoksik  dengan  menginduksi  terjadinya  apoptosis  serta menghentikan  interaksi  DNA  yang  nantinya  akan  membentuk  ikatan  DNA- cisplatin . Sebelum  berikatan  dengan  DNA  pada  sitoplasma  sel, cisplatin akan  mengaktivasi  atom klorin  yang  dapat  berikatan  dengan  DNA,  sehingga  DNA  akan  mengalami  kerusakan dengan  mengeblok  fase  G2  pada  siklus  sel  dan  terjadi  fase  mitosis  yang  menyebabkan terjadinya  apoptosis  (Dasari  and  Tchounwou,  2014).  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Magnano et  al (2021)  yang  menyatakan  bahwa cisplatin merupakan  agen  kemoterapik standar  yang  dapat  meningkatkan  apoptosis  dan autophagy pada  OSCC  dengan  cara meningkatkan  induksi reactive  oxygen  species (ROS).  Pada  penelitian  ini  terlihat  dari gambaran histologi kelompok kontrol positif (K+) menunjukkan adanya peningkan jumlah sel  atipik,  sedangkan  pada  kelompok  perlakuan  pertama  (KP  1)  jumlah  sel  atipik  dan mitosis mengalami penurunan, meskipun masih ada sel atipik yang terlihat.
Gambar  1. Gambaran  mikroskopis  mukosa  bukal kanan  dengan pewarnaan HE. A:  Kelompok kontrol  negatif  (K-),  B:  kelompok  kontrol  positif  (K+),  C  :  kelompok  perlakuan pertama  (KP  1),  D:  kelompok  perlakuan  kedua  (KP  2),  E:  kelompok  perlakuan ketiga  (KP  3).  Panah  merah  menunjukkan  mitosis  sel,  sedangkan  panah  hitam menunjukkan sel atipik.
Kelompok  perlakuan  pertama  (KP1)  terdapat  perbedaan  signifikan  terhadap kelompok  perlakuan  ketiga  (KP3).  Berdasarkan  hasil  preparat  histologi  menunjukkan bahwa sel atipik dan mitosis pada perlakuan pertama lebih sedikit dibandingkan kelompok perlakuan  ketiga  (KP3).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa cisplatin lebih  efektif  daripada  gel nanopartikel  kapsaisin  3%. Cisplatin merupakan  agen  kemoterapetik  utama  pada pengobatan  OSCC  dimana  target  utamanya  adalah  DNA  mitokondria  (mtDNA)  dan berikatan terhadap DNA nuklear sehingga dapat menginduksi adanya apoptosis. Meskipun cisplatin merupakan  agen  anti  kanker  yang  sering  digunakan,  beberapa  penelitian menyebutkan  bahwa cisplatin dapat  menyebabkan  terjadinya  resistensi.  Beberapa  sel kanker  dapat  bertransisi  menjadi pseudo-differentiated sehingga  tidak  mampu  melakukan replikasi  mtDNA  dan  menjadikan  mtDNA  sebagai  target  utamanya  (Aminudin et  al., 2020).  Pada  penelitian  ini,  gel  nanopartikel  kapsaisin  3%  meskipun  mampu  melakukan apoptosis  akan  tetapi  dengan  dosis  yang  lebih  besar  kurang  berefek  terhadap  OSCC.  Hal
pengaruh pemberian ekstrak cabai rawit ( capsicum frustescens l.) terhadap gambaran histologi oral squamous cell carcinoma (studi in vivo ) ( Pratiwi Nur Widyaningsih)
ini sejalan dengan penelitian Lewinska et al., (2015)  yang melaporkan kapsaisin 250 µM tidak  mampu  mestimulus  terjadinya  apoptosis  pada  sel  kanker  A549  dan  DU145.  Selain itu, kapsaisin dengan dosis yang lebih tinggi dapat menurunkan aktivitas metabolik dengan mendorong pembentukan antiproliferatif dan aksi sitostatik.
Kelompok  perlakuan  pertama  (KP1)  dan  perlakuan  kedua  (KP2)  terdapat perbedaan signifikan. Berdasarkan hasil pemeriksaan histologi, gel nanopartikel kapsaisin 1%  terlihat  lebih  mampu  menyebabkan  apoptosis  dan  proliferasi  sel  dibandingkan  gel nanopartikel kapsaisin 3%. Hal ini dibuktikan dengan lebih sedikitnya ditemukan sel atipik dan  sel  yang  mengalami  mitosis  pada  perlakuan  OSCC  yang  siberikan  gel  nanopartikel kapsaisin  1%.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  Huang et  al (2021)  dimana  kapsaisin dengan  dosis  yang  rendah  mampu  menjadi  obat  kemoterapetik  tanpa  menurunkan efektivitas  obat  antikanker  lain  dan  dapat  mengatasi  resistensi  terhadap  obat  tersebut. Selain itu, kapsaisin dapat memicu terjadinya degradasi mutasi gen p53 dan mengaktifkan fungsi p53. Kapsaisin dalam jumlah yang rendah mampu meningkatkan protein LC3-II dan ATG5  serta  hasil  pewarnaan fluorescence LC3  menunjunkkan  adanya  bentuk autophagosome pada sel yang diinduksi kapsaisin (Garufi et al., 2016).
Kelompok  perlakuan  kedua  (KP2)  menunjukan  hasil  yang  signifikan  terhadap kelompok kontrol positif (K+). Hal ini mengindikasikan bahwa gel nanopartikel kapsaisin 1%  memiliki  efek  antikarsinogenik.  Hal  ini  sejalan  dengan  Mosqueda-Solis et  al (2021) yang menyebutkan bahwa kapsaisin dapat meningkatkan metabolisme beberapa polycyclic aromatic  hydrocarbons seperti  pirin  benzoa-3  dan  dapat  menekan  ikatan  terhadap  DNA. Selain itu kapsaisin juga dapat meningkatkan aktivitas sitokrom p450 dan NADPH. Selain itu  kapsaisin  dapat  menekan  sinyal  jalur  intrinsik  dan  ekstrinsik  yang  berperan  dalam proses  invasi  dan  migrasi  sel  malignan.  Penelitian  sebelumnya  menyebutkan  bahwa kapsaisin  1%  dapat  berperan  sebagai  agen  anti  kanker  melalui  induksi  fase  istirahat  sel G0/G1,  sehingga  dapat  menghambat  pertumbuhan  tumor  yang  menyebabkan  terjadinya apoptosis (Chapa-Olivier and Mejia-Teniente, 2016). Aktivitas proapoptotis pada kapsaisin dimediatori oleh TRPV1 ( transient receptor potential vanilloid type-1 ) pada beberapa jenis kanker.  TRPV1  merupakan  kation channel nonselektif  yang  ditemukan  pada  TRPs ( transient  potential  receptors ).  Sampai  saat  ini  kapsaisin  diidentifikasi  sebagai  agonis TRPV1  (Reyes-Escogido et  al., 2011).  Selain  itu,  kapsaisin  juga  dapat  meningkatkan aktivitas kaspase 3-7-9 dan potensial membrane mitokondria (Gonzales et al ., 2014). Pada kelompok perlakuan ketiga (KP3) tidak terjadi perbedaan bermakna (P>0.05) terhadap  kelompok  kontrol  positif  (K+).  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena  pada  gel nanopartikel 3%  kurang memberikan efek terhadap OSCC. Pada penelitian  Kamarudin et al (2019)  menyebutkan  bahwa  kapsaisin  dapat  bersifat  sebagai  agen  mutagenik  dengan adanya  peningkatan  dosis  dan  lamanya  waktu  paparan.  Kapsaisin  dapat  menginduksi terjadinya apoptosis sel pada waktu paparan 24 jam ( early apoptosis ) hingga 48 dan 72 jam ( late  apoptosis ).  Penelitian  Huang et  al (2021)  menyebutkan  bahwa  kapsaisin  memiliki efek sitotoksik moderat pada 2 oral carcinoma cell dan tidak terbukti terjadi apoptotis pada kapsaisin  200  µM  yang  dianalisa  pada  jumlah  sub  G1  dan  tingkat  pembelahan caspase-3 serta PARP. Pemberian kapsaisin bersamaan dengan obat antikanker dapat meningkatkan siklus  riboforin  II  dari  membrane  retikulum  endoplasma,  melemahkan  fungsi  regulasi  P- glikoprotein dan meningkatkan proliferasi sel pada OSCC.

## KESIMPULAN
Pemberian  gel  nanopartikel  kapsaisin  memiliki  efek  dalam  peningkatan  aktivitas apoptosis serta mampu menurunkan aktivitas proliferasi pada OSCC yang ditandai dengan adanya  penurunan  jumlah  sel  atipik  dan  mitosis.  Gel  nanopartikel  kapsaisin  1%  efektif dalam pengobatan OSCC dan berpotensi sebagai alternatif pengobatan OSCC

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi atas Program Kreativitas Mahasiswa Riset Eksakta (PKM-RE) Tahun 2021.

## DAFTAR PUSTAKA
Aminudin,  A.,  Ng,  P.,  Leong,  C.,  Chua,  E.  2020.  Mitochondrial  DNA  alterations  may influence  the  cisplatin  responsiveness  of  oral  squamous  cell  carcinoma. Scientific Report . 10:7885
Bancroft,  J.D., and Gamble,  M.  2008. Theory  and  Practice  of  Histological  Techniques: Immunohistochemical Techniques. United State: Churchill Livingstone Elsevier. Bhudy,  T.I.,  Soemaryono,  B.,  Aprillia,  U.  2015.  Penentuan  Grading  Tumor  Ganas  Oral Squamous  Cell  Carcinoma  Berdasarkan  Gambaran  Histopatologi. Jurnal  Biosains Pascasarjana . 17(1): 46-51.
Camacho-Alonso, F., Gomez-Albentosa, Onate-Sanchez, R., Tudela-Mulero, M., Sanchez- Siles M., Gomez-Garcia, F., Guerrero-Sanchez, Y. 2020. In Vitro Study of Synergic Effect  of  Cisplatin  and  Low  Molecular  Weight  Heparin  on  Oral  Squamous  Cell Carcinoma. Frontiers in Oncology . 10: 549412.
Chapa-Oliver,  A.,  Mejia-Teniente,  L.  2016.  Capsaicin:  From  Plants  to  a  Cancer- Suppressing Agent. Molecules. 21(8): 1-14.
Dasari,  S.,  Tchounwou,  P.  2014.  Cisplatin  in  cancer  therapy:  molecular  mechanisms  of action. Eur J Pharmacol. 740: 364-378.
Ernawati, L., Witjahyo, R.B.B., Ismail, A. 2018. Pengaruh Pemberian Ekstrak Cabai Rawit (Capsicum  frutescens  L.)  terhadap  Gambaran  Mikroskopis  Ginjal  Mencit  BALB/C. Jurnal Kedokteran Diponegoro. 7(4): 1647-1660
Garufi  ,A.,  Pistritto,  G.,  Cirone,  M.,  D’Orazi,  G.  2016.  Reactivation  of  Mutan  P53  by Capsaicin, the Major Constituent of Peppers. J. Exp. Clin. Cancer Res. 35(1): 136.
Gonzales, C.B., Kirma, N.B., de la Chapa, J.J., Chen, R., Henry, M.A., Luo, S., et al . 2014. Vanilloids induce oral cancer apoptosis independent of TRPV1. Oral Oncol . 50: 437- 447.
Huang,  Y., Yuan, T.,  Liu,  B.,  Liu,  K.,  Wung, C., Chuang, S. 2021. Capsaicin potentiates anticancer  drug  efficacy  through  autophagy-mediated  ribophorin  II  downregulation and  necroptosis  in  oral  squamous  cell  carcinoma  cells. Frontiers  in  Pharmacology. 12. 676813
Hung,  C.,  Li,  F.,  Liang,  S.,  Wang,  L.,  Lin,  I.,  Chiu,  C.,  Lee,  C.,  Chen,  J.  2020.  Direct Binding  of  Cisplatin  to  p22phox,  An  Endoplasmic  Reticulum  (ER)  Membrane Protein,  Contributes  to  Cisplatin  Resistance  in  Oral  Squamous  Cell  Carcinoma (OSCC) Cell. Molecules . 25: 1-12.
Kamarudin,  M.F.,  Hossain,  M.Z.,  Mohamed  Alabsi,  A.,  Mohd  Bakri,  M.  2019.  The antiproliferative  and  apoptotic  effects  of  capsaicin  on  an  oral  squamous  cell  cancer type. Bioorg Med Chem. 27: 208-215.
pengaruh pemberian ekstrak cabai rawit ( capsicum frustescens l.) terhadap gambaran histologi oral squamous cell carcinoma (studi in vivo ) ( Pratiwi Nur Widyaningsih)
Lavorgna, M., Orlo, E., Nugnes, R., Piscitelli, C., Russo, C., Isidori, M. 2019. Capsaicin in hot chili peppers: in vitro evaluation of its antiradical, antiproliferative and apoptotic activities. Plant Foods Hum Nutr . 74 (2):164-170.
Lewinska,  A.,  Jarosz,  P.,  Czech,  J.,  Rzeszutek,  I.,  Bielak-Zmijewska,  A.,  Grabowska, W.,  et  al.  2015.  Capsaicin-induced  Genotoxic  Stress  Does  Not  Promote Apoptosis  in  A549  Human  Lung  and  DU145  Prostate  Cancer  Cells. Mutat.  Res. Genet. Toxicol. Environ. Mutagen. 779, 23–34.
Macedo, A.S., Castro, P.M., Roque, L., Thome, N.G., Reis, C.P., Pintado, M.E., Fonte, P. 2020.  Novel  and  revisited  approaches  in  nanoparticle  systems  for  buccal  drug delivery . Journal of Controlled Release . 320:125-141.
Mahawar, P., Reddy., S., Bhasin, M., Kakkad, A., Yadaw., A. 2020. Oral Squamous Cell Carcinoma Case Series: A Saga of Reaction Against Risk  Factors. Journal of Dental and Medical Sciences 19(7): 55-60
Mosqueda-Solis,  A.,  Lafuente-Ibanez  de  Mendoza,  I.,  Aguirre-Urizar,  J.,  Mosqueda- Taylor, A. 2021. Capsaicin intake and oral carcinogenesis: A systematic review. Med Oral Patol Oral Cir Bucal . 1(26): 261-268.
Pfankuchen,  D.B.,  Stolting,  D.P.,  Schlesinger,  M.,  Royer,  H.D.,  Bendas,  G.  2015.  Low Molecular  Weight  Heparin  Tinzaparin  Antagonizes  Cisplatin  Resistance  of  Ovarian Cancer Cell. BiochemPhatmacol . 97:147-157.
Reyes-Escogido,  M.,  Gonzales-Mondragon,  E.,  Vazquez-Tzompatzi,  E.  2011.  Chemical and Pharmacological Aspects of Capsaicin. Molecules. 16:1253-1270
Riskayanti,  N.,  Riyanto,  D.,  Winias.,  S.  2021.  Manajemen  Multidisiplin  Oral  Squamous Cell Carcinoma (OSCC): Laporan Kasus. Intisari Sains Medis 12(2): 621-626 Salian,  V.,  Dinakar,  C.,  Shetty,  P.,  Ajila,  V.  2016.  Etiological  Trends  in  Oral  Squamous Cell  Carcinoma:  A  Retrospective  Institutional  Study. Cancer  Transl  Med .  2  (2):33- 36.
Varadarajan,  V.  V.,  Nasri,  E.,  &  Dziegielewski,  P.  T.  2020.  Basal  cell  carcinoma  of  the oral cavity: a case report. Otolaryngology Case Reports, 100159. Wetzel, SL. Wollenberg, J. 2020. Oral Potentially Malignant Disorders. Dent Clin N Am . 64(1): 25–37.