## MODEL RLB TURUNAN NAFTAKUINON INHIBITOR SEL LINE HELA
Samsul Hadi 1* , Uripto Trisno Santoso 2 , Muhammad Luthfi Firdaus 3 1,3 Program Studi Farmasi, Universitas Lambung Mangkurat
2 Program Studi Kimia, Universitas Lambung Mangkurat
*Email 1 : samsul.hadi@ulm.ac.id Email 2 : utsantoso@ulm.ac.id Email 3 : luthfi.9750@gmail.com
Artikel diterima: 7 Juli 2022; Disetujui: 1 Oktober 2022 DOI: https://doi.org/10.36387/jiis.v7i2.966

## ABSTRAK
Kanker  serviks  merupakan  penyakit  yang  berbahaya  bagi  kehidupan. Naftaquinon merupakan agen antikanker yang sudah berhasil disintesis turunannya, sehingga  diperlukan  studi  HKSA  untuk  mengevaluasi  potensinya.  Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  menentukan  deskriptor  molekuler  senyawa  turunan naftokuinon  yang  berpengaruh  signifikan  terhadap  aktivitas  antikanker  sel  HeLa dan menyusunnya menjadi suatu model HKSA yang valid. Sebanyak 15 senyawa dari  turunan  naftokuinon  digunakan  untuk  pemodelan.  Deskriptor  yang  dicoba meliputi deskriptor topologi dan deskriptor sifat fisiko-kimia sebanyak 1.863 buah. Hasil  analisis  korelasi  diperoleh  17  deskriptor  yang  layak  untuk  diuji  dalam pemodelan.  Hasil  metode  backward  diperoleh  3  deskriptor  yang  berpengaruh signifikan, yaitu AATSC6Z, AATSC7m, dan MAXaaCH. Model RLB berbasis 3 deskriptor ini memenuhi persyaratan goodness of fit dengan R=0,873, R 2=0,763,
R  2  Adjusted=0,698,  nilai  F=0,0009  (Ftabel=11,778).  Hasil  uji  validasi  dengan metode CV-LOO diperoleh nilai Q2=0,572 dan CV-LMO diperoleh nilai Q2=0,518 sehingga model HKSA ini dapat dinyatakan sebagai model HKSA yang valid.
Kata kunci: Naftokuinon, Deskriptor, HKSA, RLB

## ABSTRACT
Cervical cancer is a disease that is dangerous for life. Naphtaquinone is an anticancer  agent  whose  derivatives  have  been  successfully  synthesized,  so  it  is necessary to study QSAR to evaluate its potency. The purpose of this study was to determine  the  molecular  descriptors  of  naphtoquinone-derived  compounds  that have a significant effect on the anticancer activity of HeLa cells and compile them into a valid QSAR model. A total of 15 compounds from naphtoquinone derivatives were used for modeling. The descriptors that were tried included 1,863 topological descriptors  and  physico-chemical  properties  descriptors.  Results  of  correlation analysis obtained 17 descriptors that are feasible to be tested in modeling. Results of backward method obtained 3 descriptors that have a significant effect, namely AATSC6Z,  AATSC7m,  and  MAXaaCH.  The  MLR  model  based  on  3  descriptors fulfills  the  goodness  of  fit  requirements  with  R=0.873,  R2=0.763,  R  2 Adjusted=0.698,  F  value=0.0009  (Ftable=11.778).  The  results  of  the  validation
test  using  the  CV-LOO  method  obtained  a  value  of  Q2=0.572  and  CV-LMO obtained a value of  Q2=0.518 so that this HKSA model can be stated as a valid HKSA model.
Keywords: Naftokuinon, Descriptor, QSAR, MLR

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  penyakit tidak menular penyumbang kematian utama di seluruh dunia dan salah satu diantara  kanker  mematikan  adalah kanker serviks. Kanker servik menyebabkan  kematian  yang  tinggi pada  Wanita  dengan angka kematian per tahunnya diperkirakan meningkat dengan  jumlah  awal  311.000  hingga menjadi 400.000 (WHO, 2020).Salah satu cara untuk melakukan pengobatan  terhadap  kanker  adalah kemoterapi. Meskipun kemajuan besar  telah  dibuat  oleh  para  peneliti dalam  penemuan  agen  antikanker namun  pencarian  agen  baru  masih sangat  diperlukan  karena  masih belum  terpenuhinya  beberapa  faktor, khususnya selektivitasnya yang masih rendah. Agen antikanker yang selektivitasnya rendah dapat memacu munculnya  sifat  toksik,  penyebaran metastatik, dan resistensi (Sigmond et al., 2003).
Salah  satu  senyawa  alami memiliki  khasiat  sebagai  antikanker
adalah  golongan  senyawa  kuinon Gambar  1  (Prachayasittikul  et  al., 2014).  Senyawa  derivat  dari  1,4- naftokuinon seperti plumbagin, mitomycin,  dan  shikonin  memiliki kemampuan  2  yang  kuat  untuk menghambat proliferasi dan menimbulkan  apoptosis  pada  sel kanker. Senyawa turunan naftokuinon terutama  golongan  7-metiljuglona yang diekstrak dari Euclea natalensis (suatu tumbuhan yang biasa digunakan oleh masyarakat di Afrika Selatan untuk  pengobatan antikanker secara  tradisional)  juga  memiliki aktivitas kanker dan beberapa turunan senyawa  ini  memiliki  aktivitas  yang lebih tinggi daripada senyawa naftokuinon.
Kishore  et  al.,  (2014)  telah melakukan  sintesis  dan  uji  aktivitas antikanker senyawa turunan 7- metiljuglona secara spesifik terhadap beberapa  sel  kanker  line  (human cancer  lines),  seperti  human  cervical epithelial  carcinoma  (HeLa),  sel prostate ephitelial carcinoma
(DU145),  Oesophageal  carcinoma (SNO), dan sel
breast adenocarcinoma  (MCF7).  Hasil  dari penelitiannya  menunjukkan  bahwa sebagian  besar  senyawa  turunan tersebut memiliki aktivitas antikanker dengan  nilai  IC50  >  10,0  µM.  Di antara 19 buah senyawa uji, hanya ada satu senyawa yang memiliki aktivitas antikanker  paling  potensial  terhadap sel  HeLa,  yaitu  senyawa  19  (2,5- Dihydroxy-7-methyl-1,4- naphtoquinone) dengan IC50 sebesar 5,3  M terhadap sel HeLa dan hanya ada  dua  senyawa  yang  memiliki aktivitas  antikanker  paling  potensial terhadap sel DU145 yaitu senyawa 19 dengan IC50 = 6,8  M dan senyawa 5 (8-Chloro-5-hydroxy-6-methyl-1,4- naphtoquinone)  dengan  IC50  =  9,3
 M.  Nilai  IC50  terhadap  sel  HeLa senyawa  19  lebih  rendah  daripada Cisplatin (IC50 = 10  M) tetapi tinggi daripada Doxorubicin Cisplatin (IC50 = 0,01  M).
Salah  satu  metode  SAR  yaitu QSAR  atau  biasa  disebut  HKSA memiliki  hipotesis  bahwa  aktivitas biologis senyawa serupa dari molekul berbeda  dapat  dibandingkan  secara kuantitatif  berdasarkan  karakteristik
komponen strukturnya (Asmara et al., 2013).  Metode  ini  juga  dapat digunakan untuk memprediksi struktur  senyawa  baru  yang  lebih poten  (Noor  et  al.,  2016).  Sehingga berdasarkan  hal  itu  peneliti  tertarik mengkahi  HKSA  dari  senyawa senyawa  ini  dalam  rangka  pencarian senyawa baru yang memiliki aktivitas antikanker lebih tinggi. Penelitian ini menggunakan senyawa turunan naftokuinon jenis 5-hidroksi-1,4- naftokuinon  sebagai  uji  penelitian HKSA terhadap sel kanker HeLa.

## METODE PENELITIAN
Bahan O O X R3 R2 R1 Gambar 1. Struktur Naftokuinon
(7-metiljuglona) (Kishore, et al., 2014).
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  data  struktur kimia dan data dari senyawa turunan 1,4-naftokuinon yang disertakan nilai IC 50 dari  15  senyawa  yang  terpilih dalam eksperimen pada sel HeLa dan
dapat  dilihat  pada  tabel  1.  Alat  yang digunakan adalah laptop Asus X441N yang  berspesifikasi: Prosessor  tipe Intel®  Celeron®-N3350  up  to  2.4 GHz , Harddisk 500 megabyte ,
Random  Access  Memory (RAM)
sebesar  4  GB  dan  perangkat  lunak Windows 10 Pro, Hyperchem® 8.0.5, ChemAxon  Marvin  Suite©  20.20.0, Microsoft  Excel  2016 ,  dan Mordred Descriptor web UI .
Tabel 1. Daftar senyawa turunan naftokuinon golongan juglone beserta IC50 sebagai antikanker terhadap sel HeLa Senyawa Subtituen IC50 pIC50 R1 R2 R3 X 1 -CH 3 -H -OH -H 66.6 4.176 2 -CH 3 -H -OH -CL 13.5 4.869 3 -CH 3 -H -OH -Br 11.3 4.946 4 -CH 3 -H -OH -F 10.2 4.991 5 -H -CH 3 -OH -Cl 10.1 4.995 6 -H -CH 3 -OH -H 16.4 4.785 7 -CH3 -H -OCH 3 -Cl 19.1 4.718 8 -CH3 -H -OC 2 H 5 -Cl 19 4.721 9 -CH3 -H -OCOCH 3 -Cl 26.2 4.581 10 -CH3 -H -OCOCH 3 -H 17.2 4.764 11 -CH3 -H -OCH 3 -H 21.1 4.675 12 -CH3 -H -OC 2 H 5 -H 29.7 4.527 13 -H -CH3 -OCH 3 -Cl 41.5 4.381 14 -H -CH3 -OC 2 H 5 -Cl 33.2 4.478 15 -H -CH3 -OCOCH 3 -Cl 21.8 4.661 Preparasi Struktur Kimia Turunan Naftokuinon Struktur senyawa turunan naftokuinon digambar dengan
menggunakan  program Hyperchem® 8.0.5 dengan  diawali  menggambar struktur  senyawa  1,4-naftokuinon sebagai  struktur  dasar.  Selanjutnya dilakukan  substitusi  pada  gugus hidroksil (-OH) pada atom C-5, gugus
hidrogen (-H) di  C-6, gugus metil di C-7  dan  gugus  halogen  (Cl,  Br,  F) pada atom C-8.
Optimasi Geometri
Optimasi geometri dengan metode  semi-empirik Parametric Model 3 (PM3) dan metode optimasi Polak-Ribiere dengan batas
konvergensi  0,001  kkal/(  Åmol)  dan
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
batas iteras 50. File yang sudah dibuat disimpan dalam format smi .

## Pemilihan Deskriptor
Deskriptor      yang    digunakan
dan perhitungan nilainya
menggunakan    3  program  yaitu Hyperchem®  8.0.5 (Yunta,  2013) , Mordred  Descriptor dan ChemAxon Marvin  Suite©  20.20.0 (ChemAxon, 2016).
Analisa Statistika
Analisis datanya adalah regresi
linier berganda (RLB). Hasil perhitungan deskriptor dan nilai pIC 50 senyawa turunan Naftokuinon digunakan sebagai variabel perhitungan  regresi  linier.  Variabel
bebas yaitu hasil perhitungan deskriptor dan variabel terikat adalah pIC 50 senyawa  turunan  Naftokuinon. Metode seleksi deskriptor yang lebih berpengaruh dilakukan dengan metode backward ,  Software  yang digunakan untuk teknik analisis RLB adalah Microsoft Excel 2016 .
Validasi Model
Model  persamaan  yang  akan digunakan  dalam  penelitian  ialah model  persamaan  yang  memenuhi kriteria validasi yaitu: R, R 2 , Q 2 , R 2 -
R 2 adj, F

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Preparasi Struktur Kimia Senyawa
Turunan Naftokuinon 15 senyawa turunan
Naftokuinon  yang  dibuat  dalam gambar dengan format file mol. untuk aplikasi Hyperchem®  8.0.5 dan dengan format  file  smi. untuk digunakan  pada ChemAxon© dan Mordred  yang  pada  gugus  karbon nomor 5 sampai dengan gugus karbon nomor 8 (gugus nomor 8 ditambahkan unsur  halogen  dan  hidrogen).  Data yang  telah  dibuat  akan  digunakan untuk  berbagai  aktivitas  observasi seperti  tahapan  selanjutnya  yaitu optimasi geometri.
Optimasi metode memakai Polak Ribiere agar konformasi stabil. Selanjutnya,  optimasi  geometri  yang telah dilakukan pada semua senyawa turunan  naftokuinon  dilakukan  uji descriptor melalui Hyperchem® , ChemAxon© , dan Mordred.

## Pemilihan Deskriptor
Deskriptor yang dipilih
berdasarkan  parameter  yang  dipilih yaitu  parameter  yang  mempengaruhi struktur obat seperti parameter sterik,
elektronik  dan  hidrofobik.  Sebanyak 1.863 deskriptor diseleksi berdasarkan  pengaruhnya  terhadap aktivitas  biologis  senyawa  turunan naftokuinon secara statistika yaitu uji korelasi dan multikolinearitas menggunakan Microsoft Excel . Hasil dari  pemilihan  deskriptor  melalui  uji korelasi  dilanjutkan  melalui  seleksi multikolinearitas  hingga  terseleksi hingga  17  deskriptor.  Dari  seleksi multikolinearitas, dilanjutkan dengan perhitungan  regresi  dengan  seleksi satu  per  satu  deskriptor  dengan metode backward hingga  didapatkan 3 deskriptor terpilih dan dapat dilihat pada table 2.

## Validasi Model
Validasi data melihat nilai R, R2, R2 adjusted, SE (Standard Error), F, dan nilai  CV-LOO  (Q2).  Nilai  R  yang didapatkan yaitu 0,873 dengan persyaratan minimal nilai R yang baik adalah  di  atas  0,8  (Ananto,  2017). Nilai  R2  yang  didapatkan  dalam penelitian ini yaitu 0,763 yang mana dapat dinotasikan dengan 76,3% dari variasi data yang berarti bahwa besar pengaruh antara parameter sifat fisika kimia  senyawa  terhadap  aktivitasnya sebagai  antikanker  serviks  sebesar 76,3%. Persyaratan nilai R2 yang baik adalah ≥0,6 (Veerasamy et al., 2011), hasilnya dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 2. Hasil Seleksi Deskriptor
No Deskriptor Deskripsi Jenis Deskriptor 1 AATSC6Z Averaged and Centered Moreau-Broto Autocorrelation of Lag 6 Weighted by Atomic Number Topologi 2 AATSC7m Averaged and Centered Moreau-Broto Autocorrelation of Lag 7 Weighted by Mass Topologi 3 MAXaaCH Max of aaCH Topologi

## Tabel 3. Data Model RLB
Metode Pencarian Deskriptor R R 2 Adjusted R R 2 - R 2 adj SE (Standard Error) Sig. F CV LOO & LMO Backward AATSC6Z, AATSC7m, MAXaaCH 0,873 0,763 0,698 0,125 0,126 0,0009 0,572 & 0,518 Syarat ≥0,8 ≥0,6 R 2 -R 2 adj <0,3
≤0,5 >0,5
Nilai adjusted R 2 yang  didapat menunjukkan  aktivitas  antikanker dari  model  persamaan  yang  terpilih sebesar  69,8%.  Adapun  persyaratan validasi  dari  R 2 dengan  R 2 adj yaitu nilai  persyaratan  selisih  antara  R 2
dengan R 2 adj yaitu <0,3 (Veerasamy et al .,  2011),  yang  mana  selisih  antara R 2 dengan  R 2 adj  penelitian  ini sebesar 0,125.
Hasil  Validasi  Silang  Leave-One- Out dan Leave-Many-Out
Model  yang  terpilih  memiliki nilai  Q 2 sebesar  0,572  pada  seleksi LOO  dan  0,518  pada  seleksi  LMO yang  mana  persyaratan  nilai  validasi silang  Q 2 yang  baik  adalah  >0,5 (Veerasamy  et  al.,  2011).  Kemudian selisih  antara  R 2 dengan  Q 2 adalah 0,191  pada  hasil  seleksi  LOO  dan 0,245 pada hasil seleksi LMO dengan persyaratan  selisih  ini  adalah  <0,3. Hal  ini  berarti  dari  model  tersebut memiliki  daya  prediksi  kemampuan prediktor  sangat  tinggi  dan  tidak terjadi overfitting antara  variabel prediksi dengan eksperimen.
Nilai  PRESS  yang  didapatkan dari  penelitian  ini  adalah  0,208. Semakin  kecil  nilai  PRESS  berarti selisih  antara  aktivitas  eksperimen
dengan  aktivitas  prediksi  semakin kecil (lebih baik mendekati angka 0), yang  berarti  kemampuan  model persamaan tersebut dalam memprediksikan  suatu  nilai  aktivitas semakin bagus.
Berdasarkan  Gambar  2,  model persamaan dari model terpilih yaitu Y (Model) = 5,7654 - 0,1174 ( AATSC6Z )  -  0,0095  ( AATSC7m )  -
0,9552 ( MAXaaCH ). Model
persamaan  terpilih  dapat  digunakan untuk  menggambarkan  hubungan antara  senyawa  turunan  naftokuinon dengan aktivitasnya sebagai antikanker.
Deskriptor Terpilih
Deskriptor yang telah terseleksi hingga ke persamaan model merupakan deskriptor parameter topologi.  Deskriptor  terpilih  dalam model  persamaan  yang  diperoleh adalah  berupa  deskriptor  topologi yang  meliputi AATSC6Z , AATSC7m , dan MAXaaCH (Jäntschi,  2005;
Jäntschi & Bolboacă, 2007).
ATS ( Autocorrelation  of  a Topological  Structure )  atau  bisa disebut deskriptor Moreau-Broto autocorrelation
merupakan deskriptor topologi yang menyatakan
grafik  tetap  yang  menggambarkan
properti (atom) (Schnerider &
Baringhaus  2008).  Deskriptor  yang termasuk  dalam  golongan  descriptor ATS adalah AATSC6Z yang memiliki arti yaitu atom digambarkan
berdasarkan  autokorelasi ATS yang memiliki  jarak  tiap  atom  terpaut  6 ikatan pada grafik senyawa
berdasarkan  jumlah  atom. AATSC7m yang  memiliki  arti  yaitu  atom  yang digambarkan berdasarkan autokorelasi ATS yang memiliki jarak tiap atom terpaut 7 ikatan pada grafik senyawa berdasarkan massa atom.
(a) (b) Gambar 2. Grafik Hasil Persamaan Model Terpilih antara pIC 50 Eksperimen dengan pIC 50 Prediksi (a) menggunakan metode LOO dan (b) menggunakan metode LMO MAXaaCH merupakan
deskriptor yang menyatakan keadaan elektropologi  pada  elektronik  atom dan  karakterisasi  atom.  Setiap  atom dalam  grafik  molekul  diwakili  oleh variabel  keadaan  (E- state )  yang mengkodekan  keadaan  elektronik intrinsik  atom  sebagai  pengaruh elektronik  semua  atom  lain  (Hall  & Kier  1995).  Deskriptor MAXaaCH menyatakan  bahwa  semua  potensi
maksimum  elektronik  pada  senyawa naftokuinon  dipengaruhi  oleh  cincin aromatik  CH  itu  sendiri. MAXaaCH memiliki nama grup atom yaitu aCHa dengan grup simbolnya adalah aaCH . Ketiga deskriptor menghasilkan pIC 50 prediksi  yang  mana pIC 50 prediksi tidak  berbeda  jauh  dengan pIC 50 eksperimen  sebagaimana  ditunjukan pada gambar 3.
4,1 4,3 4,5 4,7 4,9 5,1 4,1 4,3 4,5 4,7 4,9 5,1 Nila i lo g a k tiv ita s p re d ik si Nilai log aktivitas eksperimen 3 3,5 4 4,5 5 5,5 3 4 5 N ila i lo g a k tiv ita s p re d ik si Nilai log aktivitas eksperimen
Gambar 3. Perbandingan antara pIC 50 Eksperimen dengan pIC50 Prediksi

## KESIMPULAN
Kesimpulan  model  persamaan terpilih  memiliki  Q 2 (LOO)  =  0,719 dan  Q 2 (LMO)  =  0,518    sehingga merupakan model yang valid.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  Peneliti  ucapkan terhadap Universitas Lambung Mangkurat

## DAFTAR PUSTAKA
Ananto, A. (2017). Analisis Hubungan  Kuantitatif  Struktur dan Aktivitas untuk Merancang Insektisida Baru Turunan Karbamat Menggunakan Metoda Semiempirik PM3 (Vol. 5).
Asmara, A., Siswanta, D., & Mudasir, M. (2013). Studi QSAR Senyawa Turunan Triazolopiperazin Amida Sebagai Inhibitor Enzim Dipeptidil  Peptidase-IV  (DPP IV) Menggunakan Metode
Semiempirik  AM1. Berkala
Ilmiah MIPA . ChemAxon.  (2016).  ChemAxon  - Software Solutions and Services  for  Chemistry  and Biology. In MarvinSketch, Version 16.10.31 . https://chemaxon.com/ Hall,  L.  H.,  &  Kier,  L.  B.  (1995).
Electrotopological State Indices for  Atom  Types:  A  Novel Combination  of  Electronic, Topological, and Valence State Information.  In J.  Chem.  In$
Comput. Sci (Vol. 35).
Jäntschi, L. (2005). Molecular Descriptors Family on Structure Activity Relationships 1. Review  of  the  Methodology. Leonardo Electronic Journal of
Practices and Technologies , 6 . Jäntschi,  L.,  &  Bolboacă,  S.  D.
(2007). Structure-Activity Relationships on the Molecular
Descriptors  Family  Project  at the  End. Leonardo  Electronic Journal of Practices and Technologies , 11 , 163–180.
Kishore,
N., Binneman, B.,
Mahapatra,  A.,  van  de  Venter, M.,  du  Plessis-Stoman,  D.,
0 2 4 6 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Perbandingan Aktivitas pIC50 Eksperimen dengan pIC50
Prediksi
pIC50 pIC50pred
Boukes,  G.,  Houghton,  P., Marion Meyer, J. J., & Lall, N. (2014). Cytotoxicity of synthesized 1,4- naphthoquinone  analogues  on selected  human  cancer    cell lines. Bioorganic  &  Medicinal Chemistry , 22 (17), 5013–5019. https://doi.org/10.1016/j.bmc.2 014.06.013
Noor, M., Kasmui, K., & Kusuma, S. B. W. (2016). Analisis Hubungan  Kuantitatif  Struktur dan Aktivitas Antimalaria
Senyawa  Turunan  Quinoxalin. Jurnal MIPA , 39 (1), 51–56. Prachayasittikul,  V.,  Pingaew,  R.,
Worachartcheewan, A., Nantasenamat, C., Prachayasittikul, S., Ruchirawat, S., & Prachayasittikul,  V.  (2014). Synthesis,  anticancer  activity and  QSAR  study  of  1,4- naphthoquinone derivatives. European Journal of Medicinal Chemistry , 84 , 247–263. https://doi.org/https://doi.org/1
0.1016/j.ejmech.2014.07.024
Schneider,  G.,  &  Baringhaus,  K.-H.
(2008). Molecular design. Concepts  and  applications.  In reciis (Vol.  3,  Issue  2).  Wiley- VCH  Verlag  GmbH  &  Co. http://www.reciis.cict.fiocruz.b r/index.php/reciis/article/view/ 259/286
Sigmond,  J.,  Backus,  H.  H.  J., Wouters,  D.,  Temmink,  O.  H., Jansen,  G.,  &  Peters,  G.  J. (2003).  Induction  of  resistance to  the  multitargeted  antifolate Pemetrexed (ALIMTA) in
WiDr human colon cancer cells
is  associated  with  thymidylate synthase overexpression. Biochemical Pharmacology , 66 (3), 431–438. https://doi.org/10.1016/s0006-
2952(03)00287-9
Veerasamy,  R.,  Rajak,  H.,  Jain,  A., Sivadasan, S., Varghese, C. P., &  Agrawal,  R.  K.  (2011).
Ravichandran  Veerasamy,  et al :  Validation  of  QSAR Models-Strategies and Importance Validation of QSAR Models-Strategies and Importance . WHO. (2020). A cervical cancer-free future: First-ever global commitment  to  eliminate  a cancer . November 2020. https://www.who.int/news/item
/17-11-2020-a-cervical-cancer- free-future-first-ever-global- commitment-to-eliminate-a- cancer
Yunta,  M.  J.  R.  (2013).  How  to
Calculate Binding Constants for Drug Discovery Studies.
American  Journal  of  Modeling and  Optimization , 1 (3),  61–70. https://doi.org/10.12691/ajmo- 1-3-7