## AKTIVITAS    ANTIINFLAMASI  EKSTRAK    ETANOL    DAN    AIR    BERAS
HITAM ( Oryza sativa L. indica ) PADA TIKUS WISTAR JANTAN
(Activities Antiinflammatory Ethanol Extract And Water Black Rice
( Oryza Sativa L. Indica ) On Male Wistar Rats)

## Fadjar Kurnia Hartati
Dosen Jurusan Teknik Pangan Fakultas Pertanian Universitas Dr. Soetomo Surabaya Email : fadjarkurnia@ymail.com

## ABSTRAK
Inflamasi  merupakan  suatu  respon  terhadap  cedera  jaringan  dan  infeksi didalam  sel  tubuh.  Pada  kondisi  tertentu  inflamasi  yang  terjadi  menyebabkan  bahaya bagi  penderita  salah  satu  respon  bahaya  yang  ditunjukkan  adanya  respon  inflamasi, sehingga  dibutuhkan  agen  inflamasi  dari  luar  tubuh  seperti  obat  anti  inflamasi  yaitu flavonoid yang diperoleh dari ekstrak beras hitam ( Oryza sativa L . indica ). Penelitian ini bertujuan  untuk  menguji  efek  antiinflamasi  ekstrak  etanol  dan  air  beras  hitam  ( Oryza sativa L .  indica )  terhadap  edema  kaki  tikus  putih  jantan  galur  wistar  yang  diinduksi dengan  karagenan  0,2  %.  Pengujian  dilakukan  dengan  metode Rat  hind  paw  edema atau  pembentukan  radang  buatan  pada  telapak  kaki  kiri  tikus  putih  jantan.  Perlakuan dilakukan  terhadap  lima  kelompok  yaitu  kelompok  kontrol  positif  diberi  Natrium diklofenak, kontrol  negatif  diberi  akuades  dan kelompok  uji  diberi  ekstrak beras  hitam 30 mg/KgBB, 100 mg/KgBB dan 300 mg/KgBB. Volume edema kaki tikus putih jantan galur wistar diukur setiap jam selama 5 jam menggunakan plethysmometer . Data yang diperoleh  dianalisa  dengan  uji  MANOVA  satu  arah  yang  dilanjutkan  dengan  uji  LSD dengan  taraf  kepercayaan  95%.Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  beras  hitam dapat  menurunkan  volume  edema  kaki  tikus  putih  jantan  galur  wistar  yang  diinduksi dengan  larutan  natrium  diklofenak  0,2  %  dengan  daya  antiinflamasi  tertingi  pada ekstrak  etanol  beras  hitam100  mg/KgBB  sebesar  91,65  %,lebih  tinggi  dibandingkan dengan natrium diklofenak yang memiliki daya antinflamasi 85,93%.
Kata Kunci : anti-inflamasi, beras hitam, etanol, air

## ABSTRACT
Inflammation  is  a  responce  to  tissue  injureand  infection  beneath  the  body cell.In  certain  condition,  the  inflammation  can  cause  danger  to  the  patient.  One  of dangerous response is anafilatic reaction. Therefore, inflammation agent from outside the  body  is  urgently  needed,  such  as,  flavonoid,  compound  which  is  obtained  from black  rice  (Oryza  sativa  L.  indica).    This  study  aims  to  examine  the  antiinflammatory effects of ethanol and water extract from black rice (Oryza sativa L. indica)  on edema of white males wistar foot  induced with 0,2% karagenan. The test was done using rat hind  paw  edema  or  esthablished  an  artificial  inflammation  in  left  foot  of  white  male rats.The  treatments  were  carried  out  on  five  groups,  the  positive  control  group  was administered with diclofenac sodium, the negative control group was administered with aquadest, and the extract groups were administered with 30 mg/KgBB, 100 mg/KgBB and 300 mg/KgBB of black rice extract. Edema volume were measured every hour for 5  hours  using  plethysmometer.  Obtained  data  were  analyzed  by  one-way  MANOVA followed by LSD test with confident level was 0,05. The result of this study indicate that black rice can reduce edema volume of rat foot that induced with 0,2% karagenan and antiinflamatory  of  ethanol  extract  from  black  rice  100  mg/KgBB  by  91,65  %,  higher compared with diclofenac sodium which has anti-inflammatory 85.93%.
Keywords: Antiinflamation,black rice, ethano, water.

## PENDAHULUAN
Inflamasi merupakan suatu
respon  terhadap  cedera  jaringan  dan infeksi  didalam  sel  tubuh.  Proses inflamasi menyebabkan reaksi vascular dimana  cairan  elemen-elemen  darah, sel darah putih (leukosit), dan mediator kimia  berada  pada  tempat  jaringan yang  cedera  atau  yang  mengalami infeksi.
Proses tersebut merupakan suatu  perlindungan  dari  tubuh  untuk menetralisir  dan  membasmi  agen-agen yang  berbahaya  yang  menyebabkan jaringan  yang  cedera  atau  infeksi  agar kembali  normal  dan  bekerja  pada fungsinya  [1].  Pada  kondisi  tertentu inflamasi  yang  terjadi  menyebabkan bahaya  bagi  penderita  salah  satu respon bahaya yang ditunjukkan adanya  respon  inflamasi  yaitu  reaksi anafilatik,  sehingga  dibutuhkan  agen inflamasi  dari  luar  tubuh  seperti  obat anti  inflamasi non  steroid yang  mudah ditemukan oleh
masyarakat.
Penggunaan  obat  AINS  dalam  jumlah tinggi  dapat  menyebabkan tinnitus , penurunan  pendengaran  dan  vertigo [2].
Pengembangan obat anti inflamasi dari bahan alami telah banyak dilakukan  salah  satunya  adalah  beras hitam (Oryza sativa L.indica).
Beras hitam mengandung antosianin  (cyanidin,  pelargonidin,  dan peonidin), karotenoid (lutein,
zeaxanthin,  likopen  dan  β-karoten),  ɣ- oryzanols, flavon dan flavonoid (luteolin, apigenin, quercetin dan isorhamnetin)(3), sehingga diduga berkhasiat sebagai antiinflamasi (4).

## METODOLOGI PENELITIAN Bahan
Bahan yang akan digunakan dalam penelitian  ini  adalah  beras  hitam  yang diperoleh  dari  Kecamatan  Kepanjen,
Malang pada bulan Januari – Mei 2015. Reagen yang digunakan pada
penelitian  ini  adalah  akuades  pH  7, etanol  dan  aquadest  yang  di  peroleh dari  toko  kimia  Makmur  Sejati  dan Panadia. Karagenan dan Natrium
diklofenak  diperoleh  dari  laboratorium Biokimia  dan  Nutrisi  Pangan  Jurusan Teknologi  Hasil  Pertanian,  Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya  Malang.  Hewan  coba  yang digunakan  pada  penelitian  ini  adalah tikus  putih  ( Rattus  norvegicus) jenis wistar jantan dengan berat minimal 160 gram usia 3 bulan.

## Alat
Alat  yang  digunakan  pada  ekstraksi beras  hitam  adalah  timbangan  analitik, blender kering, glassware, rotary evaporator , dan freeze dryer . Alat untuk pemeliharaan  tikus  adalah  Bak  plastik berukuran 45 cm x 35,5 cm x 14,5 cm, kandang  tikus  dari  kawat  berukuran 36,5  cm  x  28  cm  x  15,5  cm,  botol  air, timbangan tikus, serta sonde. Alat yang digunakan  untuk  pengujian  aktivitas anti  inflamasi  hewan  coba  adalah penggaris dan plethysmometer .

## Metode
Uji  aktivitas  antiinflamasinya  secara in vivo, tikus  di  induksi  karagenan  0,2%
sebanyak 0,2 mL setiap tikus menggunakan Rancangan Acak Lengkap yang dibagi menjadi 5 kelompok (P), masing-masing kelompok  menggunakan  3  hewan percobaan.  Pengelompokan  tikus  yaitu
:  P1  :  Kontrol  Negatif,  P2  :  Kontrol Positif  dengan  pemberian  natrium diklofenak  13,5  mg/Kg  BB,  P3  : Kelompok  Uji  dengan  dosis  ekstrak  30 mg/Kg  BB,  P4  :  Kelompok  Uji  dengan dosis  ekstrak  100  mg/Kg  BB,  P5  : Kelompok Uji dengan dosis ekstrak 300 mg/Kg BB.

## Pembuatan  Ekstrak  Etanol  dan  Air Beras Hitam
Pembuatan  ekstrak  etanol  beras hitam dilakukan dengan cara maserasi. Serbuk simplisia  beras hitam  sebanyak 200  g  diekstraksi  menggunakan  etanol 95  %  sebanyak  2000  mL.  Proses maserasi  dilakukan  di  dalam  wadah berwarna  gelap  yang  ditutup  rapat selama  3  x  24  jam  sambil  sesekali diaduk  selama  30  menit  per  hari.
Maserat  yang  didapat  disaring  dengan kertas saring dikumpulkan lalu diuapkan menggunakan evaporator pada suhu 50 o C. Ekstrak yang diperoleh  diuapkan  dengan water  bath. Sedangkan pembuatan  ekstrak  air dilakukan  dengan  cara  yang  sama dengan ekstrak
etanol, namun maserasi  menggunakan  aquadest  dan penguapan menggunakan freeze dry .

## Pengujian Aktivitas Antiinflamasi
Pengujian in  vivo meliputi  proses adaptasi  selama  1  minggu.  Pemberian pakan  pada  tikus  dilakukan  secara ad libitum .  Pada  minggu  selanjutnya  tikus diinduksi larutan karagenan 2% dengan dosis  0,2  mL  pada  telapak  kaki  tikus agar  menyebabkan  edema  maksimal yang diukur
dengan alat
plethysmometer .  Setelah  terbentuknya edema  maka  akan  diberikan  Na- diklofenak  dan  ekstrak  beras  hitam sesuai perlakuan. Pembengkakan yang terbentuk diukur
menggunakan
pletysmometer setiap  jamnya  untuk mengetahui penurunan radang [5]. Analisis Data Data yang diperoleh dari pengukuran  volume  telapak  kaki  tikus setiap  waktu  pada  semua  kelompok ditabulasikan.  Jika  data  terdistribusi normal, dilanjutkan dengan uji MANOVA  satu  arah  dengan  taraf kepercayaan  95%  dan  uji  LDS  untuk melihat  perbedaan  antara  kelompok. Besarnya daya antiinflamasi dinyatakan dengan  Persen  Daya  Antiinflamasi (%DAI).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil rerata volume edema kaki tikus setiap jamnya dapat dilihat pada Tabel 1 berikut.
Tabel 1.  Rerata Perubahan Edema Setiap Jamnya
Jam Ke- Perlakuan Kontrol (-) Kontrol (+) 30 mg/kg BB 100 mg/kg BB 300 mg/kg BB Etanol Air Etanol Air Etanol Air 0 0,28 0,43 0,40 0,25 0,43 0,28 0,27 0,28 1 0,65 0,58 0,65 0,60 0,53 0,60 0,58 0,65 2 0,68 0,55 0,63 0,55 0,60 0,57 0,55 0,65 3 0,68 0,50 0,60 0,58 0,50 0,60 0,55 0,65 4 0,63 0,50 0,63 0,55 0,40 0,58 0,58 0,60 5 0,63 0,43 0,53 0,43 0,38 0,43 0,50 0,55
Pada Tabel 1 diketahui terjadi kenaikan presentase  edema  pada  setiap  waktu pengamatan  Efek  penurunan  pada kontrol positif terjadi mulai pada jam ke 2,  pada  jam  ke  1  menunjukkan  edema terus  meningkat.  Hal  ini  disebabkan karena  tidak  adanya  agen  antiinflamasi yang membantu
menurunkan presentase  edema  yang  terbentuk sehingga  edema  terus  meningkat  [6]. Presentase  edema  pada  kontrol  positif mengalami  penurunan  pada  jam  ke  2 karena  karagenan  dalam  penelitian sebelumnya  mengatakan  maksimum edema  terbentuk  sampai  jam  ke  4 setelahnya  edema  yang  terbentuk  dari karagenan akan mengalami penurunan
[7]. Karagenan mampu membuat inflamasi karena karagenan merupakan polisakarida  sulfat  dengan  molekul besar  yang  mampu  menimbulkan  jejas jaringan atau inflamasi apabila diinduksikan  pada  tikus.  Jejas  jaringan tersebut mampu menimbulkan gangguan  pada  membran  sel  yang memicu asam arakidonat mengeluarkan mediator-mediator inflamasi seperti prostagladin dan leukotrien.  Leukotrien  dikeluarkan  dari jalur  lypoxygenase  dan  prostagladin dikeluarkan  dari  jalur cyclooxygenase (COX).  Selain  itu  trauma  jaringan  juga memicu mediator-mediator pro- inflamasi  seperti  IL- 1,  TNFα  dan  NO. Mediator-mediator tersebut mampu
menyebabkan
peningkatan permeabilitas  kapiler  yang  selanjutnya membuat  keluarnya  cairan  pembuluh darah  ke  jaringan  interstitial,  dan akhirnya  menyebabkan  peningkatan cairan  ekstravaskuler  yang  disebut dengan edema[8].
Gambar 1. Daya  Anti  Inflamasi  Oleh Natrium  Diklofenak,  Ekstrak  Etanol  dan  Air
Beras Hitam Dengan 3 Dosis Berdasarkan  Tabel  2  perlakuan kontrol obat dapat dilihat terus mengalami penurunan terhadap edema yang terbentuk, penurunan mulai terlihat  pada  jam  ke  2.  Penurunan edema  secara  signifikan  terlihat  pada jam  ke  3  sampai  jam  ke  5.  Hal  ini sesuai  dengan  inhibisi  radang  yang terlihat  pada  Gambar  1  menunjukan pada  jam  ke  1  tidak  ada  efek penurunan  radang  jika  dibandingkan dengan  kontrol  negatif,  penurunan radang secara signifikan setelah jam ke 2  sampai  ke  5.  Pada  jam  ke  3  menuju ke 4 daya antinflamasi tidak terlalu jauh berbeda, dimungkinkan efektifitas penurunan radang oleh natrium diklofenak  telah  menurun.  Penurunan efektifitas natrium diklofenak dipengaruhi oleh kadar natrium diklofenak  didalam  plasma  darah  [9].
Natrium diklofenak sebagai agen antiinflamasi berfungsi
untuk meredakan  nyeri  dan  pembengkakan yang  terjadi  akibat  efek  dari  inflamasi. Natrium  diklofenak  akan  menghambat enzim  COX1  yang  akan  menghasilkan prostagladin.  Penghambatan  Natrium diklofenak terhadap kedua enzim tersebut  tidak  selektif,  tetapi  Natrium
diklofenak  efektif  dalam  menghambat enzim  tersebut [10].  Natrium  diklofenak dinilai efektif sebagai agen antiinflamasi tetapi  tidak  menurunkan  demam  yang terjadi  akibat  inflamasi.  Efek  toksik yang  diberikan  oleh  Natrium  diklofenak lebih  rendah  dari  obat  antiinflamasi jenis asam asetic, sehingga penggunaannya dalam terapi osteoarthritis cukup aman. Prostagladin yang dihasilkan akan memicu pembengkakan  pembuluh  darah  dan meningkatkan  pengeluaran  histamine dan  bradikinin  yang  memicu  rasa  nyeri pada area pembengkakan [11].
Berdasarkan Tabel 1 secara umum baik  pada  perlakuan  ekstrak  etanol maupun  air  30  mg/KgBB,  100mg/KgBB dan 300 mg/KgBB menunjukan adanya penurunan edema dari jam ke 1 sampai jam  ke  5.  Pada  perlakuan  ekstrak etanol  menunjukkan  penurunan  edema lebih  signifikan  dibandingkan  dengan penurunan edema pada ekstrak air. Hal ini  sejalan  dengan  daya  anti-inflamasi yang ditunjukan pada Gambar 1. Hal ini disebabkan  senyawa  bioaktif  banyak yang  larut  dalam  pelarut  semi  polar seperti  etanol  [12].  Adapun  dosis terbaik  adalah  dosis  ekstrak  yang menunjukkan  daya  antiinflamasi  sama atau hampir sama dengan obat antiinflamsi ( natrium diklofenak), dalam hal ini adalah dosis 100 mg/KgBB. Dari  hasil  penelitian  ini  terlihat bahwa  ekstrak  etanol  beras  hitam memiliki potensi antiinflamasi. Ferrandiz  dan  Alcaraz  (1991)  dalam Setyawan et al., (2005) mengemukakan bahwa  hal  ini  diduga  karena  efek flavonoid yang terkandung dalam ekstrak  etanol  beras  hitam  yang  dapat menghambat  akumulasi  leukosit  di daerah  inflamasi.  Pada  kondisi  normal leukosit  bergerak  bebas  sepanjang dinding endotel, tetapi selama inflamasi,  berbagai  mediator  radang menyebabkan adhesi leukosit ke dinding endotel sehingga menyebabkan leukosit menjadi immobil dan menstimulasi degranulasi netrofil.

## KESIMPULAN
Daya  anti  -  inflamasi  tertinggi terdapat  pada  ekstrak  etanol  beras hitam  ( Oryza  sativa L. indica )  100 mg/KgBB  yaitu  sebesar  91,65  %, sedangkan daya anti-inflamasi
terendah  terdapat  pada  ekstrak  air beras hitam ( Oryza sativa L. indica ) 300 mg/KgBB yaitu sebesar 10%. Berdasarkan  uji  LSD  dengan  taraf kepercayaan 95%, ekstrak etanol beras hitam  100  mg/KgBB  memiliki  daya antiinflamasi  yang  paling  besar  dengan nilai  signifikan  0,51  yang  menyatakan bahwa  ekstrak  etanol  beras  hitam memiliki  daya  antiinflamasi  yang  mirip dengan  Natrium  diklofenak  dengan daya antiinflamasi sebesar 85,93 %.

## DAFTAR PUSTAKA
Mitchell,  R.N.  2006.  Buku  Saku  Dasar Patologis  PenyakitRobbins  &
Contran,  Ed  7.  Hatono  A, penerjemah; Handayani S et al, editor.  New  York;  Elsevier  Inc. Terjemahan dari: Pocket Companion  To  Robbins  & Cotran  Pathologic  Basic  of Diease 7th edition. Katzung,  B.G.,  Payan,  D.G.  (2002).
Obat  antiinflamasi  nonsteroid; analgesik nonopioid; obat yang digunakan pada gout. Dalam B.
G. Katzung, Farmakologi dasar dan  klinik (6th  ed.)(pp.558- 582). Jakarta: EGC
Lane, I. W., Contreras E. 1992. Journal
Naturopathic  Medicine 3  :  86- 88.  Dalam  Fontenele,  J.B., Glaucia  B.A,  Alencar  W.d  dan Viana  G.S.d.B.  1997.  The Analgesic and Anti- Inflammatory  Effects  of  Shark Cartilage  Are  Due  to  a Peptide Molecule  and  Are  Nitric  Oxide (NO) System Dependent. J.Biol.Pharm.Bul l  20  (11)  :
1151 – 1154.
Min, S., S. Ryu and D. Kim. 2010. Anti- inflammatory  Effect  of  Black
Rice, Cyanidin-3-O- β- glycoside,  and  Its  Metabolites, Cyanidin  and  Protocatechuic Acid. International Immunopharmacology,  10  (7): 959-966. WWF.  2013.  Perayaan  Coral  Triangel Day di Jakarta Semarak, Publik Dukung Petisi #SOSharks.<http://www.wwf.or .id/berita_fakta/berita_fakta/?28 442/Perayaan-Coral-Triangle- Day-di-Jakarta-Semarak-
Publik-Dukung-Petisi- SOSharks>.  Tanggal  akses  : 5/10/2013 AOAC.  1995.  Official  Methods  of Analysis.  Associationof  Official Analytical  Chemists.  16th  Ed., Arlinglington, VA Fridiani,  D.  2012.  Uji  Antiinflamas
Ekstrak  Umbi  Rumput  Teki (Cyperus  rotundus  L) Pada Kaki  Tikus  Wistar  Jantan  yang Diinduksi Karagenan. Hasil Skripsi.  Fakultas  Kedokteran Gigi Universitas Jember. Jember Morris,  C.  J.  2003.  Carrageenan- Induced Paw Edema in the Rat and Mouse. Dalam Winyard, P. G. Dan Willoughby, D.A.
Inflammation Protocols. Journal Methods  in  Molecular  Biology . 225; 115-121. Contran,  RS.,  Mitchell  RN.  2007. Inflamasi  Akut  dan  Kronik. Dalam  :  Kumar  V.,  Contran R.S,  Robbin  S.I.  (Eds)  Buku Ajar  Patologi  Robbins  ,  Ed  7, vol  1  Jakarta  :  EGC.  Dalam  P, Ayu  S.  D.  2012.  Uji  Efek Antiinflamasi  Ekstrak  Daun  Ubi Jalar Ungu ( Ipomea batatas L .) Pada Telapak Kaki Tikus Strain Wistar ( Rattus novergicus ) yang Diinjeksi Karagenan. Radde,  C  dan  Macleod,  S.M.  1998. Pediatric Pharmacology ad Therapeutics. 2sd edition. Hipocrates. Dalam Fajriani. 2008. Peemberian Obat- Obatan  Anti  Inflamasi  Non Steroid  (AINS)  Pada  Anak. Indonesian Journal of Dentistry
15 (3); 200-204.
Histifarina  D.  Dan  D.  Musaddad  2004. Penggunaan Sulfit dan Kemasan Vakum untuk mempertahankan Mutu Tepung Bawang Merah selama Penyimpanan. J. Hort.14(1) : 67-73. Irawadi  TT.  1990.  Kajian  Hidrolisis Limbah Lignoselulosa dari Industri Pertanian. Journal Teknologi  Industri  Pertanian .  8 (3) : 124-134. Eales,  L.J.  2003.  Imunology  for  Life Scientist Chichester. Jhon Wiley  &  Sons  Ltd.  P.94-96. Dalam  P,  Ayu  S.  D.  2012.  Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Daun  Ubi  Jalar  Ungu  ( Ipomea batatas  L .)  Pada  Telapak  Kaki Tikus  Strain  Wistar  ( Rattus novergicus ) yang Diinjeksi Karagenan.