## Uji Antipiretik Patch Ekstrak Etanol Alang-Alang dengan
Enhancer SPAN-80 terhadapTemperatur dan Jumlah Neutrofil pada Tikus Putih
Mar’atus Solikhah (a)* , Rondius Solfaine (b) , Teguh Widodo (a)
(a) Fakultas Farmasi, Universitas Katolik Widya Mandala, Surabaya, Indonesia
(b) Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Wijaya Kusuma Surabaya, Indonesia
Alang-alang  dikenal  sebagai  tanaman  pengganggu,  namun  alang-alang  memiliki  banyak  manfaat  di  bidang kesehatan, salah satunya sebagai penurun demam karena alang-alang mengandung flavonoid. Flavonoid bekerja menghambat  enzim  siklooksigenase  yang  bertanggung  jawab  atas  produksi  mediator  inflamasi  sehingga  suhu tubuh akan kembali menjadi normal. Alang-alang diformulasikan dalam bentuk sediaan patch dengan penambahan enhancer Span-80 sebagai peningkat penetrasi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menganalisis  efektivitas sediaan patch ekstrak  etanol Imperata cylindrica dengan  dan  tanpa  penambahan enhancer Span-80  terhadap temperatur dan jumlah neutrofil tikus putih yang diinduksi vaksin DPT. Hewan perlakuan sebanyak 30 ekor tikus yang dibagi secara acak menjadi 5 kelompok perlakuan yaitu P0 (pemberian makan dan minum), P1 (parasetamol sirup), P2 ( patch tanpa ekstrak etanol alang-alang), P3 ( patch ekstrak etanol alang-alang tanpa enhancer ), dan P4 ( patch ekstrak etanol alang-alang dengan enhancer ). Pada penelitian ini, dilakukan pengamatan temperatur awal tubuh tikus, setelah diinduksi vaksin DPT pada menit ke-15, 30, 45, 60, 120, 180, 240, 300 dan jumlah neutrofil pada menit ke-0, 30, 60, 120, 180, 240, 300. Hasil penelitian menunjukkan bahwa patch ekstrak etanol alang- alang dapat menurunkan temperatur tubuh namun penurunan jumlah neutrofil tikus putih tidak berbeda bermakna antara patch ekstrak etanol alang-alang dengan atau tanpa enhancer .
Kata kunci: Imperata cylindrica , Tween-80, patch , temperatur, neutrofil

## Antipyretic Test of Ethanolic Extract of Cogon Grass Patch with SPAN-80 as Penetration Enhancer on Temperature and Number of Neutrofil in Albino Rats
Cogon grass was known  as  a  weed  plants, but cogon grass had many benefits in  the health  sector,  one  of the example was to reduce fever because cogon grass contain flavonoids. Flavonoids inhibit the cyclooxygenase enzyme which responsible for the production of inflammatory mediators so body temperature will return to normal. Cogon grass was formulated in patch dosage forms with the addition of Span-80 as a penetration enhancer. The purpose of this study was to analyze the effectiveness of Imperata cylindrica ethanolic extract patches with and without the addition of Span-80 as penetration enhancers on body temperature and number of neutrophil in albino rats which was induced by DPT vaccine. Thirty animals were adapted and divided randomly into 5 treatment groups namely P0 (feeding and drinking), P1 (paracetamol syrup), P2 (patch  without extract), P3 (patch  ethanolic  extract of cogon grass without enhancers), and P4 (patch ethanolic  extract of cogon grass with enhancers). In this research, the initial body temperature of rats was observed first, after DPT vaccine was induced at 15, 30, 45, 60, 120, 180, 240, 300 minutes and observations the number of neutrophils at 0, 30, 60, 120, 180, 240, 300 minutes. The results showed that patch ethanolic extract of cogon grass can reduce body temperature but there was not significantly different between patch ethanolic extract of cogon grass without enhancers and patch ethanolic extract of cogon grass with the addition of Span-80 enh’;ancers.
Keywords: Imperata cylindrica , Span-80, patch, temperature, neutrophil
*Corresponding author : e-mail smaratus29@gmail.com

## PENDAHULUAN
Demam  merupakan  peningkatan  suhu tubuh  yang  melebihi  variasi  normal  harian  dan terjadi  dengan  peningkatan  temperatur  patokan ( set  point )  di  hipotalamus  (Dinarello  dan  Porat, 2008). Demam dapat terjadi karena penyakit yang disebabkan oleh  virus,  bakteri, parasit, zat kimia, tumor  otak  dan  keadaan  lingkungan  yang  dapat berakhir  dengan heat  stroke (Ganong,  2008). Suhu  tubuh  manusia  dikontrol  oleh  hipotalamus. Suhu  tubuh  normal  pada  manusia  secara  umum adalah  98 o F  dan  98,6 o F  (36,7 o C  dan  37 o C)  bila diukur per oral, dan kira-kira 1 o F atau 0,6 o F lebih tinggi bila diukur per rektal (Guyton, 2016).
Salah  satu  cara  untuk  mengobati  demam adalah  dengan  menggunakan  obat  tradisional. Salah satu tanaman yang biasa digunakan sebagai obat  oleh  masyarakat  Indonesia  untuk  berbagai macam  keluhan  dan  penyakit  adalah  tanaman alang-alang ( Imperata cylindrica L.). Tanaman ini tumbuh  liar  sebagai  gulma  dan  biasanya digunakan  oleh  masyarakat  untuk  mengobati beberapa  penyakit  tertentu.  Menurut  Chang (2008)  akar  alang-alang  sangat  potensial dimanfaatkan  sebagai  sumber  untuk  pengobatan. Tanaman  yang  berkhasiat  sebagai  obat  memiliki efek  samping  yang  relatif  kecil  dibandingkan dengan  obat  kimia  (Kalay,  Bodhi  dan  Yamlean, 2014).
Alang-alang  ( Imperata  cylindrica L) merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  herbal  yang mempunyai banyak kegunaan di antaranya sebagai antipiretik dan antihipertensi. Menurut penelitian Ayeni  dan  Yahaya  (2010),  menunjukkan  bahwa ekstrak  daun  alang-alang  mengandung  tanin, saponin,  flavonoid,  terpenoid,  alkaloid,  fenol  dan cardiac glycosides. Flavonoid dapat menghambat enzim siklooksigenase khususnya siklooksigenase- 2  yang  berperan  dalam  biosintesis  prostaglandin sehingga  demam  terhambat (Kalay,  Bodhi  dan Yamlean, 2014).
Dari  berbagai macam sediaan transdermal, patch merupakan  salah  satu  sediaan  transdermal yang  diaplikasikan  pada  kulit,  dimana  zat  aktif yang  terkandung  dalam patch akan  dilepaskan dalam  dosis  tertentu  dan  berdifusi  secara  pasif melalui  kulit  yang  selanjutnya  akan  masuk  ke aliran darah (Patel et al ., 2012). Kelebihan sediaan transdermal adalah menghindari kesulitan absorbsi pada saluran cerna, aktivitas enzim, dan interaksi  obat  dengan  makanan,  minuman  dan obat  yang  diberikan  secara  per  oral  lainnya, subtitusi  pemberian  obat  per  oral  yang  tidak memungkinkan,  menghindari  efek  lintas  utama ( first-pass effect ), menghindari ketidak-nyamanan terapi  dengan  rute  parenteral,  dapat  dihentikan dengan cepat dengan cara melepas patch dari kulit. Keterbatasan  sediaan  dengan  rute  transdermal adalah  beberapa  pasien  mengalami  dermatitis sehingga pengobatan harus segera dihentikan dan
hanya  obat  yang  relatif  potensial  yang  dapat dihantarkan  secara  transdermal  karena  adanya keterbatasan  masuknya  obat  melalui  kulit  (Allen, Popovich, and Ansel 2014).
Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis efektivitas  sediaan patch ekstrak  etanol  alang- alang  dalam  menurunkan  temperatur  tubuh  dan jumlah  neutrofil  tikus  putih  dan  menganalisis efektivitas  sediaan patch ekstrak  etanol  alang- alang  dengan  penambahan enhancer Span-80 dalam menurunkan temperatur tubuh dan jumlah neutrofil tikus putih.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  sendok  tanduk,  pipet  tetes,  kertas perkamen,  batang  pengaduk,  gelas  ukur, beaker glass ,  cawan  petri,  mortir,  stamper,  oven,  lemari asam,  timbangan  analitik,  kandang  tikus,  wadah makanan  tikus,  wadah  minuman  tikus,  penutup kandang, label, sekam, timbangan hewan, gunting, plester, spuit ,  kapas,  sarung  tangan, ear termometer , stopwatch ,  mikroskop,  pipet  tetes, kaca objek, laptop, dan opti lab.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  ekstrak  etanol  alang-alang yang didapat dan telah distandarisasi dari Materia Medika  Indonesia,  Batu,  Malang,  Jawa  Timur, kitosan,  asam  asetat,  Span-80,  propilen  glikol, parasetamol  sirup,  WFI  ( Water  for  Injection ), vaksin DPT, pewarna Wright stain , dapar Wright stain .
Hewan  coba  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  tikus  putih  jantan  galur Wistar  sebanyak  30  ekor  berumur  2-3  bulan dengan berat badan 150-200 gram.

## Tahapan Penelitian
Pembuatan patch ekstrak etanol alang-alang Pembuatan patch dimulai  dengan  cara menimbang  bahan  dan  mengukur  larutan  yang akan  digunakan,  kemudian  mengasamkan  asam asetat dan WFI yang sudah dimasukkan ke dalam mortir  di  lemari  asam.  Selanjutnya  ke  dalam mortir  ditaburkan  kitosan  dan  ditambahkan  air suling  sedikit  demi  sedikit  hingga  kitosan  larut. Kitosan  dibiarkan  mengembang  dengan  cara didiamkan selama 2 hari. Setelah itu, ditambahkan Span-80 dan ekstrak etanol alang-alang ke dalam mortir,  diaduk  perlahan  hingga  homogen, kemudian ditambahkan propilen glikol. Campuran dipindahkan  ke  dalam  cawan  petri  dan dimasukkan ke dalam oven pada suhu 40°C selama 3 hari. Patch dipotong dengan ukuran 2 cm x 2 cm. Patch yang  telah  terbentuk  apabila  belum digunakan  dapat  disimpan  terlebih  dahulu  pada desikator.  Komposisi  dari patch ekstrak  etanol alang-alang dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Komposisi patch ekstrak etanol alang-alang
Nama Bahan P I P II F I F II F III Ekstrak etanol Imperata cylindrica - - - 13,8 ml 13,8 ml Kitosan - - 0,75 g 0,75 g 0,75 g Asam asetat - - 1 ml 1 ml 1 ml Span 80 - - - - 1,2 g Propilen glikol - - - 0,7 g 0,7 g Parasetamol - 0,375 ml - - - Aquadest - - Ad 80 ml Ad 80 ml Ad 80 ml
Keterangan: P1 = Perlakuan normal (hanya diberikan makan dan minum); PII = Kontrol positif (vaksin DPT+sirup parasetamol per oral 9 mg/200 g BB); F1 = Kontrol negatif (vaksin DPT+ patch kosong); FII = patch ekstrak tanpa enhancer ; FIII = patch ekstrak dengan enhancer

## Pengujian Efek Antipiretik
Pengujian efek antipiretik dilakukan dengan cara  pengukuran  temperatur  awal  pada  telinga tikus  putih  sebelum  diinduksi  vaksin  DPT  dan setelah  diinduksi  vaksin  DPT  sebanyak  0,2  ml secara intraperitonial. Pemberian patch pada tikus putih dilakukan dengan cara meletakkan patch di punggung tikus putih yang telah dicukur bulunya dengan  luas  sebesar  4  cm 2 .  Pengukuran temperatur  tubuh  tikus  dilakukan  dengan menggunakan ear themometer dan  diamati temperatur  sebelum  pemberian  vaksin  DPT  dan pada  menit  ke-15,  30,  45,  60,  120,180,  240,  dan 300 setelah pemberian vaksin DPT.

## Pengamatan Jumlah Neutrofil Tikus Putih
Pembuatan  preparat  hapusan  darah  dibuat dengan  cara  melukai  bagian  ekor  tikus  dengan menggunakan  jarum.  Selanjutnya  darah  ditetes- kan  dan  kemudian  digores  hingga  terbentuk hapusan  darah  tipis.  Selanjutnya,  diberi  pewarna Wright stain dan  dapar Wright stain .  Diamkan preparat  selama  20  menit  kemudian  dibilas
dengan  air  mengalir.  Preparat  diamati  dengan menggunakan  mikroskop  perbesaran  400x. Pengamatan  jumlah  neutrofil  dilakukan  pada menit ke-0, 30, 60, 120, 180, 240, dan 300.

## Analisis Data
Data yang diperoleh dari hasil pengamatan penurunan temperatur dan jumlah neutrofil pada tikus  putih  diuji  dengan  metode  statistik parametrik.  Analisis  data  dilakukan  dengan analisis varian One Way Anova . Apabila terdapat perbedaan bermakna (P < 0,05) maka dilanjutkan dengan  uji  Duncan.  Hal  ini  dilakukan  untuk mengetahui  perbedaan  bermakna  tiap  kelompok perlakuan hewan coba.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  evaluasi  fisik  sediaan patch yang dilakukan  antara  lain  organoleptis,  kejernihan, tekstur  permukaan,  aerasi,  keseragaman  bobot, ketebalan,  kadar  air  dan  ketahanan  daya  lipat. Hasil uji evaluasi fisik sediaan patch dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 . Hasil evaluasi fisik sediaan patch ekstrak etanol alang-alang ( Imperata cylindrica ) Kelompok Perlakuan Parameter Spesifikasi yang diinginkan Kontrol Negatif ( Patch tanpa ekstrak) Patch ekstrak tanpa Enhancer Patch Ekstrak dengan Enhancer Warna Tidak berwarna/ coklat tua Tidak berwarna Coklat tua Coklat tua Bau Tidak berbau/ berbau khas Tidak berbau Berbau khas Berbau khas Tekstur Permukaan Halus tanpa kerutan Halus tanpa kerutan Halus tanpa kerutan Halus tanpa kerutan Kejernihan Jernih Jernih Translusen Translusen Aerasi Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada Daya Lipat >200 >200 >200 >200
Hasil dari uji organoleptis yang meliputi warna dan bau  terdapat  perbedaan  warna  antara  kontrol negatif  yang  tidak  berwarna  dengan patch yang mengandung  ekstrak  etanol  alang-alang  yang berwarna  coklat  tua,  hal  ini  disebabkan  karena pemberian  ekstrak  akan  mempengaruhi  warna pada patch .  Parameter  bau  untuk patch tanpa ekstrak  tidak  berbau  karena  bahan-bahan  lain
yang  digunakan  tidak  berbau,  sedangkan  pada patch dengan  ekstrak  etanol  alang-alang  dengan atau  tanpa  penambahan enhancer Span-80 memiliki bau yang khas dari ekstrak etanol alang- alang.  Pada  uji  tekstur  permukaan,  semua patch memiliki tekstur permukaan yang halus dan tanpa kerutan.  Pada  uji  kejernihan  didapatkan  hasil patch kontrol  negatif  tidak  berwarna  (jernih)
sedangkan  pada patch dengan  ekstrak  memberi- kan  efek  translusen.  Pada  uji  aerasi  dapat  dilihat pada  masing-masing patch disetiap  kelompok perlakuan  tidak  terdapat  gelembung  udara  yang menandakan  bahwa  tidak  terdapat  aerasi. Gelembung udara pada patch akan terbentuk jika kecepatan pengadukan terlalu cepat sehingga pada waktu  pembuatan patch kecepatan  pengadukan diatur  untuk  menghindari  hal  tersebut.  Uji  daya lipat patch menunjukkan  bahwa  semua  formula telah memenuhi standar karena daya lipatnya lebih dari  200  kali,  hal  ini  dipengaruhi  oleh  pengaruh konsentrasi  dari plasticizer yang  digunakan. Pengujian  daya  lipat  ini  dilakukan  untuk mengetahui kekuatan elastisitas dari sediaan patch agar  patch  tidak  mudah  sobek  saat  digunakan. Hasil  evaluasi  keseragaman  bobot patch masing- masing formula dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel  3. Rata-rata  hasil  evaluasi  keseragaman bobot sediaan patch
Kelompok Perlakuan Rata-rata (gram) ± SD Kontrol Negatif 0,171 ± 0,0075 Patch Ekstrak  tanpa Enhancer 0,254 ± 0,058 Patch Ekstrak  dengan Enhancer 0,289 ± 0,026
Keseragaman  bobot  pada  sediaan patch dipengaruhi  oleh  komposisi  dari  masing-masing formula dan penyusutan air dalam sediaan patch . Dari hasil yang didapatkan pada uji keseragaman bobot tersebut, patch memiliki simpangan deviasi yang kecil sehingga patch mempunyai bobot yang seragam.  Keseragaman  bobot  dipengaruhi  oleh ketebalan patch. Hasil evaluasi ketebalan sediaan patch dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel 4. Rata-rata hasil pengamatan uji ketebalan sediaan patch Kelompok Perlakuan Rata-rata (gram) ± SD Kontrol Negatif 0,21 mm ± 0,0057 Patch Ekstrak  tanpa Enhancer 0,26 mm ± 0,0057 Patch Ekstrak  dengan Enhancer 0,27 mm ± 0,057
Hasil  pengamatan  uji  ketebalan  sediaan patch diperoleh  standar  deviasi  yang  rendah sehingga  dapat  dikatakan  bahwa patch memiliki ketebalan dan dosis yang merata pada tiap sediaan patch. Ketebalan sediaan patch dapat dipengaruhi oleh  posisi  rak  oven.  Apabila  rak  di  dalam  oven miring maka akan membuat ketebalan dari patch dan  dosis  dari  sediaan patch tidak  merata.  Hasil evaluasi kadar air pada sediaan patch dapat dilihat pada tabel 5.
Uji  kadar  air  dilakukan  untuk  mengetahui stabilitas patch terhadap  adanya  mikroba, persyaratan  untuk  kadar  air patch adalah  3,52  – 9,79 % (Fatmawaty dkk., 2017). Semakin kecil nilai
dari moisture  content maka patch tersebut semakin  stabil  pada  saat  penyimpanan  dan  tidak ditumbuhi mikroba. Akan tetapi, jika terlalu kecil dapat  menyebabkan patch terlalu  kering  dan rapuh,  sedangkan  jika  terlalu  besar  maka  dapat menyebabkan patch ditumbuhi mikroba.
Tabel 5. Rata-rata hasil uji kadar air patch
Kelompok Perlakuan Rata-rata (gram) ± SD Kontrol Negatif 5,23 % ± 1,015 Patch Ekstrak  tanpa Enhancer 10,25 % ± 2,25 Patch Ekstrak  dengan Enhancer 7,14 % ± 1,17 %
Pengujian  efek  antipiretik  dimulai  dengan pengukuran  suhu  awal  pada  masing-masing kelompok  perlakuan  dan  dilanjutkan  dengan pemberian patch .  Pada  menit  ke-0  suhu  awal kelompok  perlakuan  patch  ekstrak  dengan enhancer lebih  tinggi  dari  kelompok  perlakuan lainnya.  Hal  ini  disebabkan  karena  tikus mengalami  stress  akibat  tidak  dapat  beradaptasi dengan  baik  di  lingkungan  yang  baru  dan  bisa dipengaruhi oleh beberapa faktor lain seperti suhu dan  kelembaban  dari  ruangan  yang  digunakan. Pada menit ke-30 rata-rata temperatur tubuh tikus putih  menunjukkan  suhu  38ºC,  di  mana penempelan patch dan  pemberian  parasetamol sudah diberikan karena pada menit ini temperatur tubuh  tikus  mengalami  hipertermia  sehingga pemberian  obat  sudah  dapat  dilakukan.  Pada kelompok kontrol negatif, temperatur tubuh tikus lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kelompok perlakuan  lainnya.  Hal  ini  disebabkan  karena patch yang ditempelkan tidak mengandung bahan aktif  tetapi  hanya  mengandung  matriks  kitosan dan WFI yang tidak menurunkan temperatur. Pada menit  ke-120  temperatur  tubuh  tikus  pada kelompok  kontrol  negatif  mulai  menurun  hingga menit ke-300, tetapi temperatur tubuh tikus masih masuk ke dalam rentang temperatur demam. Hasil pengujian  efek  antipiretik  pada  tikus  putih  dapat dilihat pada Tabel 6 dan Gambar 1.
Berdasarkan  grafik  hasil  pengamatan temperatur  tubuh  tikus  putih  tampak  bahwa penurunan  temperatur  pada  kelompok patch ekstrak  etanol  dengan enhancer tidak  terlalu signifikan  dibandingkan  dengan  kelompok patch ekstrak etanol tanpa enhancer . Begitu pula dengan hasil uji statistik One Way Anova dari menit ke-45 hingga  menit  ke-300  penurunan  suhu  antara kelompok patch ekstrak etanol tanpa enhancer dan kelompok patch ekstrak  etanol  dengan enhancer tidak berbeda bermakna. Hasil yang diperoleh dari kontrol  positif  menunjukkan  adanya  peningkatan suhu  hingga  menit  ke-30  dan  menit  ke-45 dilanjutkan  dengan  penurunan  suhu  pada  menit ke-60 hingga menit ke-300. Penurunan suhu pada kontrol  positif  ini  tidak  terlalu  signifikan.  Hal  ini disebabkan  karena  dosis  parasetamol  pada  saat pemberian  secara  per  oral  tidak  masuk
sepenuhnya.  Berdasarkan  hasil  pengamatan  rata- rata temperatur tubuh pada tikus putih, formula 1 ( patch ekstrak  tanpa enhancer )  merupakan formula yang dapat menurunkan suhu paling cepat dimana  pada  menit  ke-60  suhu  tubuh  telah memasuki rentang suhu tubuh normal begitu pula pada menit ke120 hingga menit ke-300 penurunan suhu tubuhnya juga signifikan. Bila dibandingkan dengan  formula  2  ( patch ekstrak  dengan enhancer )  pada  menit  ke-60  suhu  tubuh  masih tinggi.  Pada  kelompok  perlakuan  normal  dan kelompok kontrol suhu tubuh tikus pada menit ke-
60 juga masih tinggi. Penurunan temperatur yang diberikan patch ekstrak  tanpa enhancer memang lebih  cepat,  akan  tetapi  penurunan  temperatur yang terlalu ekstrim akan menyebabkan hipotermia pada tikus sehingga pada menit ke-300 temperatur tikus naik menjadi sama dengan tikus pada  perlakuan patch ekstrak  dengan enhancer. Selain  itu,  pengaruh  dari  kitosan  sendiri  sebagai matriks  yang  memiliki  efek  meningkatkan penetrasi  juga  menyebabkan  temperatur  yang diberikan patch cepat turun.
Tabel 6. Rata-rata hasil pengamatan temperatur tubuh tikus putih pada masing-masing kelompok
perlakuan Temperatur Tubuh Tikus ( o C) Waktu (menit ke-) P1 (Hanya diberikan makan minum) P2 Kontrol Negatif (Vaksin DPT+ Patch kosong) P3 Kontrol Positif (Parasetamol) F1 Patch Ekstrak tanpa Enhancer F2 Patch Ekstrak dengan Enhancer T0 37,30 ± 0,35 b 36,71 ± 0,34 a 36,86 ± 0,22 ab 36,65 ± 0,48 a 37,06 ± 0,32 a T15 37,61 ± 0,35 a 37,46 ± 0,45 a 37,53 ± 0,36 a 37,58 ± 0,51 a 37,66 ± 0,37 a T30 37,63 ± 0,38 a 37,90 ± 0,35 a 38,15 ± 0,3 a 38,15 ± 0,91 a 38,11 ± 0,32 a T45 37,55 ± 0,37 a 37,93 ± 0,41 ab 37,9 ± 0,32 ab 37,91 ± 0,41 ab 38,03 ± 0,32 a T60 37,5 ± 0,2 a 37,75 ± 0,57 b 37,7 ± 0,28 ab 37,41 ± 0,52 a 37,73 ± 0,3 ab T120 37,36 ± 0,32 bc 37,75 ± 0,55 c 37,46 ± 0,24 bc 36,85 ± 0,27 a 37,35 ± 0,26 b T180 37,36 ± 0,56 bc 37,61 ± 0,59 c 37,25 ± 0,32 bc 36,7 ± 0,22 a 37,18 ± 0,31 ab T240 37,28 ± 0,45 bc 37,46 ± 0,52 c 37,08 ± 0,19 abc 36,75 ± 0,12 a 36,98 ± 0,17 ab T300 37,28 ± 0,53 ab 37,53 ± 0,5 b 36,93 ± 0,12 a 36,8 ± 0,24 a 36,93 ± 0,2 ab
Keterangan : Superskrip  yang  berbeda  pada  kolom  sama  menunjukan  perbedaan  signifikan antar kelompok perlakuan ( P < 0,05).
Gambar 1. Grafik hasil pengamatan temperatur tubuh tikus putih
Parameter  lain  yang  diamati  dalam penelitian ini adalah jumlah neutrofil pada darah tikus  putih.  Hasil  pengamatan  neutrofil  dengan menggunakan  mikroskop  dapat  dilihat  pada gambar  2.  Pada  menit  ke-30  semua  kelompok perlakuan mengalami peningkatan jumlah neutrofil.  Pada  menit  ke-60  kontrol  negatif, kelompok perlakuan patch ekstrak tanpa enhancer dan  dengan  enhancer  mengalami  peningkatan
jumlah  neutrofil,  sedangkan  kontrol  positif berbeda  bermakna  (P  <  0,05)  dengan  semua kelompok  perlakuan.  Pada  menit  ini  jumlah neutrofil  kontrol  positif  (parasetamol)  sedikit meningkat dan mengalami penurunan pada menit ke-120.
Masing-masing kelompok perlakuan terdapat perbedaan yang signifikan pada menit ke- 60  hingga  menit  ke-300  karena  kecepatan
penurunan neutrofil pada masing-masing kelompok perlakuan berbeda.  Pada menit ke-180 kelompok perlakuan patch ekstrak tanpa enhancer dan  dengan enhancer penurunan  jumlah neutrofilnya  tidak  berbeda  bermakna,  sedangkan kelompok  kontrol  positif  dan  negatif  masih mengalami peningkatan jumlah neutrofil. Peningkatan jumlah neutrofil pada kontrol positif disebabkan  parasetamol  memiliki  waktu  paruh yang  relatif  singkat  sekitar  1-3  jam  sehingga parasetamol  sudah  mulai  diekskresikan  dari tubuh.  Ada  juga  penelitian  yang  menyatakan bahwa parasetamol meningkatkan jumlah neutrofil (Oyedeji, Bolarinwa dan Ojeniran, 2013). Pada menit ke-240 terdapat perbedaan bermakna
antara kelompok kontrol positif dengan kelompok patch ekstrak  dengan enhancer dan  kontrol negatif.  Jumlah  neutrofil  pada  kelompok  kontrol positif  masih  tinggi  sedangkan  kelompok perlakuan patch ekstrak  tanpa enhancer dan dengan enhancer mengalami  penurunan  hingga mendekati  normal.  Pada  menit  ke-300  kelompok perlakuan patch ekstrak  tanpa enhancer dan kelompok  perlakuan patch ekstrak  dengan enhancer tidak berbeda bermakna karena jumlah neutrofil  sudah  kembali  ke  jumlah  normalnya. Pada kelompok kontrol negatif dan kontrol positif berbeda  bermakna  tetapi  jumlah  neutrofilnya masih sama-sama tinggi.
Gambar 2. Gambar hasil pengamatan neutrofil (  ) pada pengamatan mikroskop dengan perbesaran 400x
Gambar 3. Grafik rata-rata jumlah neutrofil pada tikus putih
Hasil pengamatan rata-rata jumlah neutrofil pada  tikus  putih  ditunjukkan  pada  Tabel  7  dan Gambar 3. Gambar 3 tersebut menunjukkan grafik rata-rata jumlah neutrofiil tikus putih pada setiap kelompok perlakuan. Jumlah neutrofil meningkat seiring  dengan  peningkatan  suhu  terutama  pada menit ke-30 setelah diinduksi dengan vaksin DPT. Jumlah  neutrofil  kontrol  negatif  pada  tikus  putih terus  meningkat  hingga  menit  ke-300.  Pada kelompok  kontrol  positif  jumlah  neutrofil menurun  pada  menit  ke-120,  kemudian  jumlah neutrofil  meningkat  hingga  pada  menit  ke-300.
Penurunan  jumlah  neutrofil  pada  kelompok perlakuan patch ekstrak  tanpa enhancer dan kelompok  perlakuan patch ekstrak  dengan enhancer terjadi pada menit ke-120 hingga menit ke-300.  Akan  tetapi,  tidak  terjadi  perbedaan bermakna pada penurunan jumlah neutrofil antara kelompok perlakuan patch ekstrak tanpa enhancer dan dengan enhancer.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  rata-rata jumlah neutrofil pada tikus putih, formula 1 ( patch ekstrak tanpa enhancer ) juga merupakan formula yang  dapat  menurunkan  jumlah  neutrofil  paling
cepat  dimana  pada  menit  ke-120  jumlah neutrofilnya  telah  menurun,  sedangkan  jumlah neutrofil  formula  2  ( patch ekstrak  dengan enhancer ) masih tinggi yang disebabkan pengaruh dari  suhu  awal  yang  lebih  tinggi  dari  kelompok perlakuan lain.
Dari  hasil  penelitian  pengamatan  neutrofil ini  dinyatakan  bahwa  ketika  temperatur  tubuh
tikus  kembali normal maka jumlah neutrofil juga menurun ke jumlah neutrofil normal tikus, begitu pula pada saat temperatur tubuh meningkat maka jumlah  neutrofil  dalam  tubuh  juga  meningkat. Dalam  hal  ini,  obat  belum  tentu  menurunkan jumlah  neutrofil.  Neutrofil  berkurang  karena sudah dikirim ke jaringan untuk mengatasi antigen yang menjadi penyebab sakit.
Tabel 7. Hasil rata-rata jumlah neutrofil tikus putih pada masing-masing kelompok perlakuan
Jumlah Neutrofil Tikus Putih (sel/µl) Waktu (menit ke-) P1 (hanya diberikan makan minum) P2 Kontrol Negatif (Vaksin DPT+ Patch kosong) P3 Kontrol Positif (Parasetamol) P4 Patch Ekstrak tanpa Enhancer P5 Patch Ekstrak dengan Enhancer T0 3163 ± 625,35 a 3207,2 ± 653 75 a 2743 ± 316,92 a 2721,9 ± 346,7 a 2827,4 ± 363,99 a T30 3122,8 ± 471,43 a 5021,8 ± 569,93 b 5317,2 ± 1028,5 b 5253,9 ± 992,82 b 6857,5 ± 860,19 c T60 3397,1 ± 448,79 a 7617,1 ± 713,54 c 5338,3 ± 1147,57 b 8060,2 ± 815,23 cd 8988,6 ± 1184,91 d T120 3059,5 ± 334,15 a 9136,3 ± 441,59 d 4135,6 ± 942,86 b 7342,8 ± 776,29 c 8355,6 ± 943,99 d T180 2296,2 ± 363,99 a 8608,8 ± 487,03 d 6013,5 ± 535,62 b 7469,4 ± 1053,14 c 7131,8 ± 959,71 c T240 2932,9 ± 334,15 a 8967,5 ± 617,18 d 6287,8 ±749,68 c 6203,4 ± 1115,23 c 5148,4 ± 623,64 b T300 3249,4 ± 436,11 a 9452,8 ± 995,77 d 6667,6 ± 727,99 b 4009 ± 273,48 a 3554,8 ± 500,02 a
Keterangan : Superskrip yang berbeda pada kolom sama menunjukan perbedaan signifikan   antar kelompok perlakuan ( P < 0,05).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  analisis  dari  penelitian yang  sudah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa patch topikal ekstrak etanol alang-alang ( Imperata cylindrica L.)  dengan  matriks  kitosan  dan enhancer Span-80 dapat menurunkan temperatur pada  tikus  putih,  dengan    adanya  perbedaan
bermakna  dengan patch tanpa  penambahan enhancer Span-80  (P<  0,05).  Namun patch ekstrak  etanol  alang-alang  ( Imperata  cylindrica (L.)  Beauv.)  tidak  memberikan  hasil  yang signifikan  pada  hasil  penurunan  jumlah  neutrofil pada tikus putih. (P>0,05).

## DAFTAR PUSTAKA
Allen,  L.V.,  Popovich,  N.G.  and  Ansel,  H.C.  2011 .  Ansel’s Pharmaceutical  Dosage  Forms  and  Drug  Delivery  Systems . Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia.
Ayeni, K.E. and Yahaya, S.A. 2010. Phytocemical screening of threeplants  neef  leaf  ( Azadirachta  indica ),  hibiscus  leaf ( Hibiscus  rosasinensis ),  and  spear  grass  leaf  ( Imperata cylindrica ), Continental  Journal  Pharmaceutical  Sciences .  4:
47-50.
Chang,  I.F.    2008.      Ecotypic  variation  of  a  medicinal  plant Imperata  cylindrical populations      in      Taiwan:      mass spectrometry-based  proteomic  evidence, Journal  of  Medical Plants . 2:71–76.
Dinarello, C.A. and Porat, R.  2008. Fever and hyperthermia, in Fauci,  A.S., Harrison’s  Pricipals  of  Internal  Medicine 17th Edition. McGraw-Hill Companies. New York. 118-108.
Fatmawaty,  A.,  Nisa,  M.,  Irmayani,  I.,  dan  Sunarti.  2017. Formulasi  patch  ekstrak  etanol  daun  murbei  ( Morus  alba L.) dengan variasi konsentrasi polimer polivinil pirolidon dan etil selulosa. Journal  of  Pharmaceutical  and  Medicinal  Sciences . 2(1): 17-20.
Ganong, W.F. 2008. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran . Edisi XX, EGC, Jakarta. 134-136.
Guyton,  A.C.  and  Hall,  J.E.  2016. Buku  Ajar  Fisiologi Kedokteran , Edisi 12, Elsevier Inc., Singapore.
Kalay, S., Bodhi, W. dan Yamlean, V.Y. 2014 . Uji efek antipiretik ekstrak  etanol  daun  prasman  ( Eupatorium triplinerve Vahl.) pada  tikus  jantan  galur  wistar  ( Rattus norvegicus L.,)  yang diinduksi vaksin DTP HB, Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi , 3(3): 182-187.
Oyedeji, K.O., Bolarinwa, A.F., and Ojeniran, S.S. 2013. Effect of paracetamol  (acetaminophen)  on  haematological  and reproductive parameters in male albino rats, Research Journal of Pharmacology . 7(2): 21 – 25.
Patel,  D.,  Chaudhary,  S.A.,  Parmar,  B.  and  Bhura,  N.  2012. Transdermal  drug  delivery  system:  a  reeview, The  Pharma Journal . 1(4):66-75.
Samuelson,  D.A.  2007. Textbook  of  Veterinary  Histology , Saunders, an imprint of Elsevier Inc, Philadelphia, 167-169.