Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  Etanol  dan  Fraksi Organik Rimpang Wualae ( Etlingera elatior (Jack) R.M.

## Smith)
Wa Ode Sitti Musnina 1 , Wahyuni 2 , Fadhliyah Malik 2 , Yusni Oktaviani Timung 2 , Carla W. Sabandar 3 , Sahidin 2
1 Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tadulako, Jl. Soekarno Hatta Km. 9 Palu
2 Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu, Jl. H. E. A. Mokodompit Kendari 93232
3 Jurusan Farmasi Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Sembilan Belas November, Kolaka 931517
E-mail: waodesittimusnina@gmail.com

## Abstrak
Wualae ( Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) merupakan tanaman rempah yang digunakan oleh masyarakat sebagai obat tradisional. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui metabolit sekunder, aktivitas antibakteri dan aktivitas antijamur ekstrak etanol dan fraksi organik    rimpang wualae .  Rimpang wualae diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  etanol  kemudian  di  fraksinansi menggunakan  pelarut  n-heksana,  etil  asetat,  dan  metanol.  Fraksi n-heksana,  etil asetat,  dan  metanol  diuji  secara in  vitro dengan metode Cup-plate technique , yang dilakukan terhadap bakteri Gram positif Staphylococcus aureus ATCC 25923 , Bacillus subtilis FNCC  0060 dan Streptococcus  mutans ATCC  2517  dan  bakteri  Gram  negatif Escherichia  coli ATCC  35218 ,  Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enteric dan jamur Candida albicans ATCC 10231. Kandungan senyawa metabolit sekunder rimpang wualae ditentukan dengan metode skrining fitokima menggunakan perekasi warna. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol fraksi n-heksana, etil  asetat,  metanol  dan  etanol  rimpang wualae memiliki  kandungan  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tannin  dan  terpenoid.  Ekstrak etanol mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, tannin, dan terpenoid, fraksi n-heksana mengandung terpenoid, fraksi etil asetat mengandung  flavonoid,  tannin  dan  terpenoid,  fraksi  metanol  mengandung  alkaloid,  saponin,  tannin,  fraksi  etanol  mengandung flavonoid, saponin, tannin, dan terpenoid.  Hasil pengujian aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak etanol, fraksi n-heksana, etil asetat, metanol dan etanol rimpang wualae tidak aktif terhadap bakteri S. aureus, B. subtilis, S. mutans, E. coli, P, aeruginosa dan S. enterica pada konsentrasi 100-12,5 mg/mL. Pengujian antijamur menunjukkan bahwa fraksi etil asetat aktif terhadap jamur C. albicans pada konsentrasi 100, 50, 25, dan 12,5 mg/mL dengan nilai DDH masing-masing sebesar nilai 9,75; 9,5; 8,75; dan 8 mm
Kata kunci: wualae , Etlingera , antimikroba, obat tradisional, Sulawesi Tenggara

## 1. Pendahuluan
Penyakit  infeksi  merupakan  salah  satu  masalah kesehatan  terbesar  tidak  saja  di  Indonesia,  tapi  juga  di seluruh  dunia.  Selain  virus,  bakteri  juga  tidak  kalah pentingnya  dalam  menyebabkan  penyakit  infeksi  [1]. Penyakit  infeksi  bahkan  banyak  disebabkan  oleh mikroorganisme flora normal seperti bakteri Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli [2]  dan  jamur Candida albicans [3]. Kecombrang merupakan salah satu jenis  rempah-rempah  yang  sejak  lama  dikenal  dan dimanfaatkan oleh manusia sebagai obat-obatan berkaitan dengan  khasiatnya,  yaitu  sebagai  penghilang  bau  badan dan  bau  mulut  [4].  Bagian  yang  biasa  digunakan  dari tanaman ini adalah bunga, daun dan batangnya. Beberapa penelitian  menunjukkan  bunga  dan  daun  kecombrang memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  Gram positif  maupun  Gram  negatif  [5,6].  Laporan  lain  jug menunjukkan  bahwa daun  dan  rimpang wualae memiliki aktivitas sebagai antibakteri dan antijamur [7].
Wualae mengandung senyawa alkaloid, saponin, tanin, fenolik, flavonoid, triterpenoid, steroid, vitamin, mineral,
dan  glikosida  yang  berperan  sebagai  antimikroba  dan antioksidan [8], dan memiliki kandungan rimpang wualae adalah  alkaloid,  flavonoid  dan  minyak  atsiri  [9],  serta mengandung senyawa flavonoid dan saponin [10]. Wualae juga mengandung polifenol dan minyak atsiri. Kandungan kimia  yang  paling  banyak  ditemukan  pada  tanaman rimpang adalah fenolik.
Penyebab  infeksi  luka  pada  jaringan  kulit,  mukosa mulut, saluran  kemih, saluran napas, jerawat, luka bakar, dan infeksi nosokomial antara lain, bakteri P. aeruginosa yang  bersifat  Gram  negatif  dan S.  aureus yang  bersifat Gram  positif  [11].  Penelitian  sebelumnya  menunjukkan ekstrak  etanol  dan  etil  asetat  pada  tumbuhan  ( Etlingera elatior (Jack)  R.M  Smith)  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri terhadap bakteri Bacillus cereus, Pseudomonas aeuruginosa, Samonella thyphi murium, E. coli, S. aureus [12] . uraian  di  atas,  maka  perlu  dilakukan  penelitian terhadap aktivitas antibakteri dan antijamur ekstrak etanol dan fraksi organik rimpang wualae terhadap bakteri uji S.
aureus ATCC  25923 ,  B.  subtilis FNCC  0060 , Streptococcus mutans ATCC 25175, E. coli ATCC 35218 , P.  aeruginosa,  Salmonella  enterica dan  jamur Candida albicans ATCC 10231.

## 2. Metode

## 2.1 Umum
Sampel  berasal  dari  Desa  Sambeani  Kecamatan Abuki  Kabupaten Konawe. Penelitian ini  dilakukan pada di  Laboratorium  Farmasi  Universitas  Halu  Oleo,  dan determinasi  tanaman  di  Pusat  Penelitian  Biologi  LIPI Cibinong.  Mikroba  uji Staphylococcus  aureus ATCC 25923 ,  Bacillus  subtilis FNCC  0060 ,  Streptococcus mutans ATCC  25175, Escherichia  coli ATCC  35218 , Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica dan jamur Candida  albicans ATCC  10231  merupakan  koleksi Laboratorium Farmasi Universitas Halu Oleo.

## 2.2 Penyiapan Sampel dan Ekstraksi
Sampel  rimpang  dibersihkan,  dicuci  setelah  itu dipotong-potong  kecil  secara  terpisah.  Tiap  sampel dikeringkan kemudian dihaluskan menggunakan pencacah elektrik.  Tiap  serbuk  sampel  dimaserasi  menggunakan pelarut  etanol  selama  3×24  jam.  Filtrat  dari  tiap  sampel yang  diperoleh  dipekatkan  menggunakan  evaporator hingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Hasil  maserasi difraksinasi  menggunakan  pelarut n -heksana,  etil  asetat, metanol  dan  etanol  (fraksi  organik).  Ekstrak  etanol,  dan fraksi  organik  diuji  kandungan  senyawa  metabolit sekundernya,  kemudian  diuji  aktivitasnya  terhadap mikroba uji.

## 2.3 Identifikasi dan karakterisasi ekstrak
Identifikasi  senyawa  yang  terkandung  di  dalam ekstrak  rimpang Wualae menggunakan  skrining  fitokimia [21,  22].  Karakterisasi  ekstrak  meliputi  penetapan  kadar air, kadar abu, kadar sari larut etanol dan kadar sari larut air [22]

## 2.4 Uji Aktivitas Antimikroba
Bakteri uji yang digunakan yakni bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923, Bacillus  subtilis FNCC  0060 ,  Streptococcus  mutans ATCC  25175, Escherichia coli ATCC 35218, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica serta jamur C. albicans ATCC 10231 menggunakan  metode  difusi  agar  yaitu  teknik  sumuran ( cup-plate technique ) [23].

## 3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Ekstraksi dan Fraksinasi
Serbuk rimpang wualae sebanyak 710,6 g dimaserasi menggunakan etanol 96%. Pemilihan etanol 96%  sebagai pelarut, karena etanol merupakan salah satu pelarut  yang
aman  dan  diperbolehkan  atau  disarankan  oleh  BPOM, selain itu etanol memiliki kemampuan menyari yang baik mulai dari senyawa non polar sampai senyawa polar [13]. Maserasi dilakukan selama 3x24 jam dengan menggunakan  pelarut  etanol,  residu  dan  filtrat  diganti selama 1x24 jam. Pengadukan dalam proses maerasi juga dilakukan  untuk  menghomogenkan antara serbuk dengan cairan penyari dan mengoptimalkan proses difusi. Kontak yang  cukup  besar  dan  merata  akan  menghasilkan penarikan  zat  aktif  yang  lebih  optimal.  Ekstrak  rimpang wualae diperoleh  sebanyak  24,74  gram  dengan  nilai rendamen 3,48 %.
Fraksinasi  dilakukan  dengan  metode  ekstraksi  cair- cair  didasarkan  pada  perbedaan  tingkat  kepolaran  pelarut yang  digunakan.  Teknik  pemisahannya  melibatkan  dua pelarut  yang  tidak  saling  campur  dalam  corong  pisah. Fraksinasi  dilakukan  dengan  menggunakan  pelarut n - heksan,  etil  asetat,  metanol  dan  etanol.  Fraksi n -heksana, etil asetat, metanol, dan etanol masing diperoleh 4,9; 4 , 50; 5; dan 4,79 g.

## 3.2 Skrining Fitokimia
Hasil  skrining  fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstak kental    daun,  buah,  rimbang  dan  akar  tanaman Wualae mengandung  flavonoid  (Tabel  1).  Flavonoid  merupakan senyawa polifenol mempunyai kemampuan  untuk menyumbangkan  atom  hidrogen  kepada  senyawa  radikal bebas  [6].  Hal  ini  memperkuat  dugaan  semua  bagian tanaman Wualae memiliki potensi sebagai antioksidan .
Tabel  1. Hasil  skrining  fitokimia  ekstraks  etanol,  fraksi  n- heksana, etil asetat, dan metanol  rimpang wualae Metabolit Sekunder Ekstrak Etanol Fraksi n -heksana  Etil asetat  Metanol Etanol Alkaloid + - - + - Flavonoid + - + - + Saponin + - - + + Tanin + - + + + Terpenoid + + + - +
Keterangan:  (+) mengandung senyawa yang diuji; (-) tidak mengandung senyawa yang diuji
Komposisi  kualitatif  ekstrak  etanol  rimpang wualae terdiri  dari  lima  golongan  senyawa  metabolit  sekunder yakni  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tannin  dan  terpenoid. Alkaloid  hanya  terdistribusi  pada  fraksi  metanol,  dimana hal  ini  menunjukkan  jenis  alkaloid  yang  terkandung  pada rimpang wualae bersifat  polar  karena  hanya  terdistribusi pada  fraksi  yang  lebih  polar  polar.  Flavonoid  selain  pada ekstrak  etanol  rimpang wualae, juga terdistribusi  pada fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  etanol.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  flavonoid  yang  terkandung  pada  ekstrak  rimpang wualae bersifat  polar  dan  non  polar.  Flavonoid  yang bersifat polar terdistribusi pada fraksi etanol, karena etanol merupakan  pelarut  bersifat  polar.  Sedang  flavonoid  yang terdistribusi pada etil asetat bersifat non polar dibandingkan yang  terdistribusi  pada  etanol.  Hasil  distribusi  flavonoid pada  fraksi  etanol  dan  fraksi  etil  asetat  menunjukan flavonoid  yang  terdistribusi  pada  fraksi  etanol  dan  fraksi etil  asetat  merupakan  jenis  senyawa  flavonoid  yang berbeda  karena  sifat  kepolarannya  berbeda.  Saponin  dan
tannin bersifat polar, sesuai dengan hasil skrining fitokimia ekstrak  rimpang wualae saponin  hanya  terdistribusi  pada fraksi etanol dan fraksi metanol, sedang tanin terdistribusi pada  ekstrak  etanol,  etil  asetat,  dan  fraksi  metanol. Sehingga  senyawa  tannin  dan  terpenoid  yang  terkandung pada ekstrak wualae bersifat polar dan non polar, Senyawa terpenoid  yang  terkandung  pada  ekstrak  etanol  rimpang wualae ada  yang  bersifat polar dan  ada  yang  bersifat non polar berdasarkan distribusinya pada masing-masing fraksi organik.  Terpenoid  terdistribusi  pada  fraksi  n-heksan, fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  etanol.  Jenis  senyawa  yang terdistribusi  pada  ekstrak  dan  fraksi  organik  rimpang wualae merupakan jenis senyawa terpenoid  yang berbeda karena  sifat  kepolarannya  berbeda.  Perbedaan  jenis senyawa  yang  dikandung  oleh  masing-masing  fraksi  ini akan memberikan aktivitas biologi yang berbeda-beda pula pada masing-masing fraksi.

## 3.3 Karakterisasi Ekstrak
Tabel 2. Hasil Karakteristik Ekstrak Etanol Rimpang Wualae Jenis Karakterisasi Hasil Organoleptis Bentuk Kental Warna Coklat Bau Khas Kadar Air 1,87 % Kadar Abu 3,15 % Kadar Sari Larut Etanol 41,65 % Kadar Sari Larut Air 36,62 %
Penetapan organoleptik ekstrak merupakan cara untuk mendeskripsikan bentuk, warna, dan bau guna pengenalan awal yang sederhana [14]. Hasil karakterisasi organoleptik ekstrak  rimpang wualae yakni  ekstrak  berkonsistensi kental,  dan  berbau  khas  dengan  warna  coklat.  Tujuan pemeriksaan  kadar  air  adalah  untuk  memberi  batasan minimal  besarnya  kandungan  air  dalam  ekstrak.  Makin tinggi kadar air, makin mudah untuk ditumbuhi jamur dan kapang.  Kadar  air  ekstrak  etanol  rimpang wualae yaitu 1,87%.  Sedangkan  batasan  minimal  kadar  air,  yakni dibawah 10%. Hasil menunjukkan, bahwa kadar air ekstrak etanol  rimpamg  wualae,  berada  dalam  batas  yang  telah ditetapkan.
Penentuan kadar abu memberikan gambaran kandungan mineral.  Prinsipnya ekstrak dipanaskan, hingga senyawa  organik  dan  turunannya  terdestruksi  dan menguap, sampai hanya unsur mineral dan anorganik saja yang tersisa. Kadar abu ekstrak rimpang wualae diperoleh sebesar  3,15%.  Menurut  Farmakope  herbal  I  kadar  abu tidak lebih dari 7%. Hal ini dapat disimpulkan bahwa kadar abu  rimpang wualae berada  dalam  batas  yang  telah ditetapkan,  artinya  ekstrak  mengandung  logam  dalam batasan yang masih dapat diterima.
Penentuan  kadar  senyawa  terlarut  dalam  pelarut tertentu,  dalam  hal  ini  (air  dan  etanol)  dengan  cara melarutkan  ekstrak  menggunakan  pelarut  (alkohol/air),
untuk  ditentukan  jumlah  larutan  yang  identik  dengan jumlah senyawa kandungan secara gravimetrik [14]. Kadar sari larut air ekstrak rimpang wualae adalah 36,62 % dan kadar sari larut etanol ekstrak rimpang wualae adalah 41,65 %. Hasil uji ini menunjukkan kadar senyawa dalam ekstrak lebih banyak terlarut dalam etanol dibandingkan dalam air. Hal  ini  disebabkan,  pelarut  yang  digunakan  pada  proses ekstraksi  menggunakan  pelarut  organik  yaitu  etanol. Sehingga senyawa-senyawa yang tersari atau terserap lebih besar  senyawa  organik  dibanding  dengan  senyawa anorganik [15].

## 3.4 Uji Aktivitas Antimikroba
Metode difusi dipilih karena pada metode ini ada atau tidakadanya  pertumbuhan  bakteri  dapat  teramati  dengan jelas,  sehingga  dapat  memudahkan  dalam  pengamatan terhadap bakteri uji. Keuntungan dibandingkan metode lain yakni, sederhana, biayanya terjangkau, kemampuan untuk menguji  sebagian  besar  mikroorganisme  dan  kemudahan untuk  menginterprestasikan  hasil  yang  disediakan.  Uji aktivitas  antibakteri,  diawali  dengan  peremajaan  bakteri, untuk memaksimalkan hasil uji aktivitas antibakteri dengan cara  mengganti  media  hidup  bakteri  dengan  waktu inokulum  1x24  jam.  Penggantian  media  tempat  hidup bakteri, juga berguna untuk memperbaharui nutrisi bakteri, sehingga mempercepat adaptasi bakteri dan mempersiapkan bakteri pada kondisi yang eksponensial.
Penelitian  uji  aktivitas  antibakteri  menggunakan beberapa  konsentrasi  ekstrak,    larutan  kontrol  positif  dan larutan kontrol negatif.  Konsentari ekstrak, kontrol positif dan  kontrol  negatif  dalam  sumuran  akan  berdifusi  pada media yang telah ditanami bakteri. Dasar pengamatan dari metode ini adalah terbentuk atau tidaknya Diameter Daerah Hambat (DDH) pertumbuhan bakteri yang ditandai dengan adanya  zona  bening  disekitar  sumuran.  Hasil  pengukuran diameter  daerah  hambat  (DDH)  ekstrak  etanol  rimpang wualae terhadap bakteri S. aureus ATCC 25923, B. subtilis FNCC 0060 , S. mutans ATCC 2517 yang ditunjukkan pada Gambar  1  tidak  terbentuk  zone  bening  disekitar  sumuran yang berisi ekstrak artinya ekstrak etanol rimpang wualae tidak dapat menghambat pertumbuhan keempat bakteri uji tersebut.
Gambar 1 . a. 100 ppm, b. 300 ppm, c. 500 ppm, d. 700 ppm, e. kontrol negatif dan f. kontrol positif.
Aktivitas  daya  hambat  antibakteri  ekstrak  etanol rimpang wualae terhadap  bakteri Escherichia  coli  ATCC 35218, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica juga menujukkan  tidakadanya  zona  bening  yang  terbentuk  di sekitaran sumuran yang berisis ekstrak etaol artinya ekstrak rimpang wualae tidak aktif terhadap E. coli ATCC 35218 ,
Pseudomonas  aeruginosa,  Salmonella  enterica .  Hasil pengujian ini dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. a. 100 ppm, b. 300 ppm, c. 500 ppm, d. 700 ppm, e. kontrol negatif dan f. kontrol positif
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  ditunjukkan  pada Gambar 2, ekstrak rimpang wualae tidak memiliki aktivitas sebagai  antibakteri,  [7]  melaporkan  bahwa  daun  dan ekstrak  rimpang wualae memiliki  aktivitas  sebagai antimikroba dan antifungi, berbeda dengan hasil penelitian yang  telah  dilakukan  pada  penelitian  ini,  hal  ini dimungkinkan  perbedaan  jenis  senyawa  yang  dikandung oleh wualeae yang  disebabkan  oleh  perbedaan  tempat tumbuh  etlingera  yang  digunakan  pada  penelitian  ini dengan wualae yang telah dilaporkan sebelumnya. Selain itu  hal  ini  juga  dapat  disebabkan  oleh  kadar  senyawa metabolit sekunder yang bersifat aktif sebagai antimikroba yang  dimiliki  pada  ekstrak  etanol  rimpang wualae terlalu kecil terhadap total kandungan senyawa pada ekstrak etanol rimpang wualae .  Total  kandungan  senyawa  metabolit sekunder  ekstrak  etanol  ( rude  extract )  rimpang wualae yang  masih  banyak  ini  dikarenakan  belum  dilakukan pemisahan  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder berdasarkan  sifat  kepolarannya.  Dengan  melakukan pemisahan  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder (fraksinasi)  diharapkan  konsentrasi  golongan  senyawa pada masing-masing fraksi akan lebih besar dibandingkan kandungannya  dalam  ekstrak  etanol,  sehingga  perlu dilakukan fraksinasi untuk meningkatkan konsentrasi jenis senyawa serta memisahkan kandungan senyawa berdasarkan  kepolarannya.  Pada  penelitian  ini  dilakukan fraksinasi  dengan  menggunakan  pelarut  n-heksana,  Etil asetat  serta  metanol.  Fraksi  yang  diperoleh  sebanyak  4 fraksi yaitu n-heksana, etil asetat, metanol dan etanol.
Gambar  3. a.  Fraksi  h-heksana,  b.  Fraksi  etil  asetat,  c.  Fraksi metanol, d. Fraksi etanol, e, kontrol negatif, dan f. kontrol positif
Hasil uji  menunjukan  keempat  fraksi  tidak  aktif terhadap  keenam  bakteri  uji  yang  ditandai  dengan  tidak terbentuknya zona bening disekitaran sumuran yang berisi keempat  fraksi  organik.  Sehingga  berdasarkan  hasil  uji pada  penelitian  ini  disimpulkan  bahwa  ektrak  etanol rimpang wualae serta  fraksi  orgnaniknya  tidak  memiliki aktivitas sebagai antibakteri.
Gambar  4. a.  Fraksi  h-heksana,  b.  Fraksi  etil  asetat,  c.  Fraksi metanol, d. Fraksi etanol, e. kontrol negatif, dan f. kontrol positif
Sebelum  dilakukan  pengujian  aktivitas  antijamur, juga  dilakukan  peremajaan  jamur  terlebih  dahulu  dengan waktu inokulum 3x24 jam, untuk memaksimalkan hasil uji aktivitas  dengan  cara  mengganti  media  hidup  jamur. Penggantian media tempat hidup jamur, juga berguna untuk memperbaharui  nutrisi  jamur,  sehingga  mempercepat adaptasi  jamur  dan  mempersiapkan  jamur  pada  kondisi yang eksponensial.
Aktivitas  daya  hambat  antijamur  fraksi  n-heksana, metanol,  etil  asetat  dan  etanol  rimpang wualae terhadap jamur  uji Candida  albicans ATCC  10231  juga  dilakukan uji  pendahuluan  terlebih  dahulu  pada  konsentrasi  200 mg/mL  yang  dapat  dilihat  pada  Gambar  5 . Hasil  uji aktivitas  anti  fungi  yang  ditunjukka  pada  Gambar  5 menunjukkan  bahwa,  pada  fraksi  etil  asetat  memiliki aktivitas antijamur yang lebih besar dari pada fraksi-fraksi yang lain.
Gambar 5. a. Fraksi etil asetat, b. Fraksi metanol, c. Fraksi etanol, d. Fraksi h-heksana, e. kontrol negatif dan f. kontrol positif
Zona  hambat  yang  terbentuk  tergantung  pada  tinggi atau rendahnya aktivitas yang terkandung di dalam fraksi. Zona  hambat  yang  besar  disebabkan  oleh  tingginya aktivitas antijamur yang ada dalam fraksi yang dipengaruhi oleh  kandungan  senyawa  yang  dimiliki  oleh  fraksi  etil asetat.  Sedangkan  Tidak  terbentuknya  zona  hambat  pada fraksi tertentu disebabkan oleh kecilnya aktivitas sehingga belum mampu  menghambat  mikroba.  Selanjutnya dilakukan pengujian antijamur dengan 4 konsentrasi yaitu, 100 mg/mL, 50 mg/mL, 25 mg/mL, dan 12,5 mg/mL, hasil pengujian  ini  dapat  dilihat  pada  Gambar  6.  Variasi konsentrasi  yang  digunakan  lebih  kecil  dibandingkan konsentrasi  ekstrak  pada  uji  pendahuluan,  hal  ini dimaksudkan untuk melihat konsentrasi terkecil fraksi etil asetat  yang  memiliki  aktivitas  menghambat  pertumbuhan C. albicans .
Gambar 6 : a. 100 mg/mL, b. 50  mg/mL, c. 25 mg/mL. d. 12,5 mg/mL, e. kontrol negatif dan f. kontrol positif.
Tabel 3. Hasil pengukuran diameter daerah hambat (DDH) fraksi etil  asetat  rimpang wualae terhadap  jamur Candida albicans ATCC 10231.
Berdasarkan  tabel  3  diperoleh  informasi  bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak maka semakin besar pula diameter  zona  hambat  yang  terbentuk.  Diameter  zona hambat  terbesar  pada  konsentrasi  100  mg/mL  yaitu  9,75 mm,  sedangkan  diameter  zona  hambat  terkecil  pada konsentrasi  12,5  mg/mL  yaitu  8  mm.  Aktivitas  fraksi menurun  seiring  dengan  penurunan  konsentrasi,  yang ditunjukkan dengan diameter zona hambat yang terbentuk juga  semakin  kecil.  Antimikroba  dikatakan  mempunyai aktivitas  yang  tinggi  terhadap  mikroba,  apabila  nilai konsentrasi  minimumnya  rendah  tetapi  mempunyai  daya hambat yang besar.
Perbedaan besarnya daerah  hambatan  untuk  masing- masing konsentrasi dapat disebabkan dengan besar/kecilnya  konsentrasi  zat  aktif  yang  terkadung  pada ekstrak yang mempengaruhi banyak sedikitnya kandungan zat yang bersifat aktif terhadap mikroba yang terdistribusi pada fraksi organik. Besaran konserasi zat aktif pada fraksi organik  akan  mempengaruhi  kecepatan  difusi  bahan antimikroba  ke  dalam  medium  tempat  mikroba  tumbuh untuk  dapat  menghambat  pertumbuhan  mikroba  tersebut. Selain itu kemampuan menghambat pertumbuhan mikroba juga  dipengaruhi  oleh  kepekaan  pertumbuhan  mikroba terhadap konsentrasi antimikroba yang diberikan dalam hal ini  fraksi  etil  asetat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini, faktor  lainnya  yakni  reaksi  antara  bahan  aktif  dengan
medium,  medium  yang  terlalu  padat  akan  menyebabkan sulitnya  bahan  aktif  menembus  ke  dalam  medium, menyebabkan kemampuan bahan aktif untuk menghambat pertumbuhan mikroba juga akan berkurang.
Beberapa  faktor  teknis  yang  dapat  mempengaruhi aktivitas fraksi etil asetat dalam menghambat pertumbuhan C.  albicans pada  penelitian  ini  yakni  fase  pertumbuhan, besar  inokulum,  medium,  lama  inkubasi,  dan  suhu lingkungan.  Besar  inokulum Candida  albicans sudah disesuaikan  dengan  standar  McFarland  0,5  atau  setara dengan  jumlah  150  CFUx  10 6 fungi  /mL  yang  telah dikonfirmasi dengan membandingkan standar Mc Farland 0,5  dengan  suspensi C.  albicans menggunakan  tabung reaksi.  Medium  yang  digunakan  adalah  Potato  Dextrosa Agar (PDA), medium ini merupakan medium standar untuk pertumbuhan  fungi.  Lama  inkubasi  yang  baik  untuk pertumbuhan fungi adalah 24 jam, karena pada inkubasi ini pertumbuhan  fungi  optimal.  Suhu  inkubasi  berada  pada suhu optimum 37°C [2].
Zona  hambat  yang  terbentuk  disebabkan  karena adanya  zat-zat  aktif  yang  terkandung  dalam  rimpang wualae seperti flavonoid, tannin dan terpenoid. Ketiga zat aktif ini memiliki mekanisme berbeda dalam menghambat pertumbuhan  fungi.  Flavonoid  mampu  berikatan  dengan enzim ekstraseluler dan protein terlarut [16]. Tanin mampu menginhibisi  enzim  ekstraselular  jamur  dengan  cara membentuk  kompleks  dengan  protein  (enzim  tersebut) [17]. M ekanisme penghambatan terpenoid terhadap jamur dengan cara mendistorsi dan merusak fungsi membran sel fungi sehingga mengalami kebocoran [18]
Tiga fraksi  organik lainnya  juga  memiliki  golongan senyawa  yang  dikandung  oleh  etil  asetat  tetapi  tidak memiliki  aktivitas  yang  sama  dengan  fraksi  etil  asetat terhadap C.  albicans ,  hal  ini  disebabkan  jenis  senyawa yang terkandung dalam setiap fraksi organik berbeda-beda yang  disebabkan  oleh  perbedaan  sifat  kepolaran  pelarut masing-masing fraksi organik, sehingga memiliki aktivitas biologi yang berbeda-beda pula.
Adapun mekanisme kerja anti jamur yakni Golongan azol-imidazol, relatif berspektrum luas, bersifat fungistatik dan  bekerja  dengan  cara  menghambat  sintesis  ergosterol jamur yang mengakibatkan timbulnya defek pada membran sel  jamur.  Obat  antijamur  golongan  azol  antara  lain  : klotrimazol, ketokonazol, ekonazol, oksikonazol, sulkonazol  dan  mikonazol,  mempunyai  kemampuan mengganggu  kerja  enzim  sitokrom  P-450  lanosterol  14- demethylase  yang  berfungsi  sebagai  katalisator  untuk mengubah  lanosterol  menjadi  ergosterol  [19].  Sedangkan Kloramfenikol memiliki kemampuan menghambat pertumbuhan  bakteri,  karena  strukturnya  memungkinkan terjadinya interaksi sebagai inhibitor enzim peptidiltransferase  pada  ribosom  50S  bakteri,  sehingga sintesis proteinnya terhambat [20].

## 4. Kesimpulan
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri S. aureus , B. subtilis, S. mutans, E. coli, P. aeruginosa dan S. enteric menunjukkan  ekstrak  dan  fraksi  organik  rimpang wualae tidak  aktif  sebagai  antibakteri.  Uji  antijamur menunjukkan fraksi etil asetat aktif terhadap C. albicans .

## Ucapan Terima Kasih
Penulis menyampaikan terima kasih kepada Kementerian  Riset,  Teknologi,  dan  Pendidikan  Tinggi  RI melalui  pendanaan  Penelitian  Dasar  Unggulan  Perguruan Tinggi 2017.

## Daftar Pustaka
1. Mulholland, A., 2005, Bacterial infections - A Major Cause of Death Among Children in Africa. NEJM ; 352:75-7.
2. Jawetz, E., J. L. Melnick, E. A. Adelberg, G. F. Brocks, J. S. Butel,  dan  L.  N.  Ornston,  2007, Mikrobiologi  Kedokteran , 20 th edition, EGC, Jakarta.
3. Kandoli,  F.,  J.  Abijulu,  dan  M.  Leman.,  2016,  Uji  Daya Hambat  Ekstrak  Daun  Durian  ( Durio  zybethinus )  terhadap Pertumbuhan Candida albicans secara In Vitro , Jurnal Ilmiah Farmasi – UNSRAT , 5(1) , 2302-2493.
4. Hidayat  dan  Hutapea.  1991.  Inventaris  Tanaman  Obat Indonesia.  Balai  Penelitian  dan  Pengembangan  Departemen Kesehatan RI. Jakarta
5. Hudaya,  Adeng.  2010. Uji  Antioksidan  dan  Antibakteri Ekstrak  Air  Bunga  Kecombrang ( Etlingera elatior ) Sebagai Pangan  Fungsional  Terhadap  Staphylococus  aureus  dan Eschericia coli .  Skripsi.  Jakarta:  Universitas  Islam  Negeri Syarif Hidayatullah.
6. Ningtyas,  Rina.  2010. Uji  Antioksidan  dan  Antibakteri Ekstrak Air Daun Kecombrang (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) .  Skripsi.  Jakarta:  Universitas  Islam  Negeri  Syarif Hidayatullah.
7. Juwita T., Irma M.P. dan Jutti, L., 2018. Torch ginger (etlingera elatior): A review on its botanical aspects, phytoconstituents and pharmacological activities. Pak. J. Biol. Sci , 21( 4 ). 151-165.
8. Fitriani, 2014, Isolasi Minyak Kecombrang ( Etlingera Elatior ) Sebagai Bahan Pembuatan Parvum, Abstrak. Universitas Pendidikan Indonesia. Jakarta.
9. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000. Penelitian Tanaman Obat Dibeberapa Perguruan Tinggi Indonesia Edisi X. Percetakan Negara : Jakarta. Depkes [7] (2000)
10. Virgianti  Peti  Dewi,  Shofi  Masfufah,  2015,  Efektifitas Ekstrak  Daun  Kecombrang  ( Etlingera  Elatior )  Sebagai
Antioviposisi  Nyamuk Aedes  Aegypti,  Jurnal  Kesehatan Bakti Tunas Husada, Vol. 14(1) . Virgianti (2015)
11. Naufalin,  R.  Betty,  S.L.J.,  Feri,  K.,  Mirnawati  S.,  dan Herastuti,  R.,  2005,  Antibacterial  Activity  of  Kecombrang Flower  Extract  Toward  Pathogenic  and  Food  Spoilage Bacteria, Jurnal Teknol dan Industri Pangan , Vol. 16(2) . 12. Nurfadilah,  2013,  Uji  Bioaktifitas  Antibakteri  Ekstrak  Dan Fraksi Lamun Dari Kepulauan Spermonde, Makassar, Skripsi . 13. Ditjen  POM,  1995, Farmakope Indonesia Edisi  IV,  Depkes RI, Jakarta.
14. Departemen Kesehatan R epublik Indonesia, 2000. Parameter Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat .  Diktorat  Jendral POM. Jakarta.Depkes 2000
15. Angelina,  M.,  Puteri  A.,  Muchammad  I.,  Lia  M.,  dan Muhammad  H.  2015.  Karakterisasi  Ekstrak  Etanol  Herba Katumpangan Air ( Paperomia pellucid L. Kunth). Biopropal Industri . 6 (2) .
16. Cowan, M.M., 1999, Plant Products as Antimicrobial Agents, Clinical Microbiology Reviews , Vol.12( 4 ): 564–582.
17. Laks,  P.E.,  McKaig,  P.A.,  Hemingway,  R.W.  (1988) Flavonoid biocides: wood preservatives based on condensed tannins. Holzforschung 42( 5 ):299 – 306.
18. Haraguchi,  H.,  S.  Kataoka,  S.  Okamoto,  M.  Hanafi  dan  K. Shibata. 1999. Antimicrobial triterpenes from Ilex integra and the mechanism of antifungal action. Phytotheraphy Research , Vol 13 : 151-156.
19. Brennan  B,  Leyden  JJ.Overview  of  topical  therapy  for common  superficial  fungal  infections  and  the  role  of  new topical  agents.  Journal  of  the  American  Academy  of Dermatology, February 1997, part 1, volume 36, number 2.
20. Gunawan,G., Sulistia., 2007, Farmakologi dan terapi edisi 5. Jakarta:  Departemen  farmakologi  dan  terapeutik  fakultas kedokteran universitas Indonesia
21. Widyaningtias  NMR,  Yustiantara  PS,  Paramita  NLPV.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Terpurifikasi  Daun  sirih  hijau ( Piper betle L.) Terhadap Bakteri Propionibacterium acnes . Jurnal Farmasi Udayana , 2014, 3(1) ; 50-53.
22. Harborne  JB.  Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara  Modern Menganalisis  Tumbuhan.  Terjemahan  Padmawinata  K  dan Soediro I. Bandung: Penerbit ITB, 1987
23. Sadarun  B,  Malaka  MH,  Wahyuni  W,  Sahidin  S.  Senyawa Steroid  Spons  Xestospongia  sp.  dari  Perairan  Sulawesi Tenggara, Pharmauho , 2018, 4(2) .
© 2019 by the authors; This article is an open access article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/ licenses/by/4.0/)