## STUDI AWAL PERKEMBANGAN LARVA Oryzias javanicus DI INDONESIA

## PRELIMINARY STUDY OF LARVAL DEVELOPMENT Oryzias javanicus IN INDONESIA
Rachma Puspitasari * dan Suratno Pusat Penelitian Oseanografi – LIPI *E-mail: poespitsari@gmail.com

## ABSTRACT
Java medaka Oryzias javanicus potentially developed as test organism, represents the coastal region because it has a high adaptability in freshwater, brackishwater and marine environments. Utilization of it as a test organism has some obstacles such as lack of number of test organisms with same size or age.  The  fulfillment  of  number  can  be  solved  if  the  test  organism  is  cultivated  exclusively  in  the laboratory. This study was a preliminary study to get information about suitable salinity for spawning and  hatching.  Parameter  observed  were  spawning  ability  in  0  and  20  ppt  and  hatching  rate  of  egg among 0, 15, and 30 ppt and development of larval fish in 0 ppt. Result indicated that the fish was be able to spawn in 0 and 20 ppt. Eggs were hatched within 9 days in 30 ppt, faster than in freshwater and 15 ppt. In general, O. javanicus was be able to spawn either in freshwater or seawater, but there are differences in the behavior of fish in the laying of egg. Fish will carried their eggs in the abdomen in freshwater, while 20 ppt salinity fish tends to release the eggs. O. javanicus be able to live and lay eggs  on  freshwater  and  seawater.  Selection  of  salinity  is  adjusted  to  test  requirement  in  egg  phase, pascalarva or adult. In general, breeding of fish easier and faster done in fresh water while hatching eggs take place more quickly in high salinity.
Keywords: Indonesia, Java Medaka, Oryzias javanicus, test organism

## ABSTRAK
Java  medaka Oryzias  javanicus berpotensi  dikembangkan  sebagai  biota  uji  yang  mewakili  wilayah pesisir  karena  memiliki  kemampuan  adaptasi  yang  tinggi  di  lingkungan  tawar,  payau  dan  laut. Pemanfaatan ikan ini sebagai biota uji menghadapi beberapa kendala seperti kurangnya jumlah biota uji dengan ukuran atau umur yang seragam. Pemenuhan jumlah biota ini hanya dapat dicapai apabila biota uji tersebut sudah dibudidayakan secara khusus di laboratorium. Penelitian ini merupakan tahap awal yang bertujuan mencari informasi mengenai salinitas yang cocok untuk pemijahan dan penetasan telur O. javanicus . Parameter yang diamati adalah salinitas yang cocok untuk bertelur di 0 dan 20 ppt, lamanya perkembangan larva pada salinitas 0, 15, dan 30 ppt dan fase perkembangan larva ikan pada salinitas 0 ppt. Hasil menunjukkan bahwa ikan mampu bertelur di 0 dan 20 ppt. Lama penetasan telur terjadi dalam 9 hari pada salinitas 30 ppt, lebih cepat daripada di air tawar dan 15 ppt Secara umum, O. javanicus bertelur baik  di air tawar atau air laut, tetapi ada perbedaan dalam perilaku ikan  dalam peletakan telur. Induk  ikan  akan tetap membawa telurnya di bagian abdomen pada habitat air tawar, sedangkan  induk  yang  menetas  di  salinitas  20  ppt  cenderung  melepaskan  telurnya. O.  javanicus terbukti mampu hidup dan bertelur pada air tawar dan air laut.  Pemilihan salinitas pemeliharaan ikan disesuaikan  dengan  kebutuhan  pengujian  pada  fase  telur,  pascalarva  atau  dewasa.  Secara  umum, pemijahan  induk  lebih  mudah  dan  lebih  cepat  dilakukan  di  air  tawar  sedangkan  penetasan  telur berlangsung lebih cepat di lingkungan bersalinitas tinggi.
Kata kunci: Indonesia, Java Medaka, Oryzias javanicus , organisme uji

## I. PENDAHULUAN
Beberapa hewan akuatik  di  Indonesia telah  dikenal  penggunaannya  sebagai  biota uji  dalam  penelitian  ekotoksikologi  akuatik diantaranya  larva kerang hijau, Perna viridis (Puspitasari,  2011);  fitoplankton  akuatik seperti Chaetoceros  gracilis (Puspitasari and Hindarti, 2009; Puspitasari, 2011; Puspitasari and  Lestari,  2014,  Suratno et  al. ,  2015), Tetraselmis sp, Isochrysis sp (Puspitasari and Purbonegoro,  2011,  Suratno et  al. ,  2015), ikan  seperti Chromis  viridis (Arifin  and Hindarti,  2006)  serta  amphipod  (Hindarti et al ., 2010). Sejak tahun 2000an, pemanfaatan ikan  dari  genus  Oryzias  mulai  banyak  di- kenal. Oryzias javanicus atau popular dengan Java  Medaka,  merupakan  spesies  bioindika- tor dari ikan bertulang sejati. Ikan ini tersebar di  sebagian  besar  wilayah  Asia.  Ikan  ini dapat  hidup  di  air  tawar,  payau  maupun  air laut (Ismail and Yusof, 2011). Genus Oryzias terdiri  lebih  dari  14  spesies,  diantaranya adalah O.  latipes ,  salah  satu  spesies  yang telah  dikenal  sebagai  biota  uji  (Khodadoust et al ., 2013). Spesies yang lainnya yaitu Java medaka  ( O.  javanicus) tersebar  di  Malaysia, Singapore,  Indonesia,  Thailand  dan  Bagian Barat  Kalimantan  (Ismail  and  Yusof,  2011). Oryzias  dancena (atau  dikenal O.  melas- tigma ) terdistribusi di Pakistan, India, Burma dan  Thailand. Oryzias  latipesis terdistribusi di  Japan,  Korea  dan  China. O.  marmoratus ditemukan  endemik  di  danau  air  tawar  di dataran  tinggi  Pulau  Sulawesi,  Indonesia (Inoue and Takei, 2002).
Spesies  ini  memiliki  kemampuan adaptasi yang tinggi di lingkungan tawar dan laut  (Inoue  and  Takei,  2002)  sehingga pemanfaatan sebagai biota uji dapat mewakili wilayah  pesisir.  Java  medaka  berpotensi dikembangkan  sebagai  biota  uji  (Imai et  al., 2005)  karena  memiliki  sebaran  geografi  dan ketersediaan  yang  luas,  umur  dan  siklus hidup  yang  pendek,  laju  pertumbuhan  yang cepat,  mudah  diidentifikasi  dan  mudah  di- kultur.  Telurnya  besar,  transparan  sehingga memudahkan  pengamatan  dalam  penelitian
fase-fase  perkembangan.  Fertilisasi  berlang- sung  eksternal,  segera  setelah  memijah. Pemijahan  berlangsung  cepat,  kurang  dari  1 menit (Ismail and Yusof, 2011). Waktu yang dibutuhkan  untuk  matang  sejak  memijah kira-kira  mencapai  100  hari  (Imai et  al ., 2005).  Java  medaka  memiliki  toleransi  yang tinggi  terhadap  perubahan  salinitas  (Inoue and Takei, 2002), memiliki oosit dan sperma- tosit  yang  siap  diobservasi  2-3  minggu setelah  memijah  serta  memiliki  karakteristik seksual  sekunder  yang  siap  diobseravsi  60 hari  setelah  memijah ( Imai et  al .,  2005). Khodadoust et  al .  (2013)  meneliti  tentang sensitivitas  antara  juvenil  dan  Java  Medaka dewasa  terhadap  kadmium  adalah  sebesar 6,02  mg/l  and  6,63  mg/l.  Khodadoust  and Ismail  (2014)  menemukan  bahwa  ada  ko- relasi  positif  antara  kadar  metalotionin  ter- hadap  akumulasi  kadmium  pada  organ  ikan. Akumulasi  logam  tembaga  tertinggi  ditemu- kan  di  insang,  sedangkan  akumulasi  kad- mium  tertinggi  ditemukan  di  organ  pencer- naan (Khodadoust et al ., 2012).
Pengembangan O.  javanicus sebagai biota  uji  di  Indonesia  masih  membutuhkan penelitian  lapangan  maupun  skala  laborato- rium.  Penelitian  lapangan  diperlukan  untuk memperoleh  informasi  mengenai  distribusi, kelimpahan dan habitat, sedangkan penelitian laboratorium  diperlukan  untuk  informasi sensitivitas  terhadap  kontaminan,  reproduksi mulai  dari  pemijahan  sampai  fase-fase  per- kembangan. Berdasarkan American Standard Testing  Material (1994),  ada  beberapa  per- syaratan  sebagai  biota  uji  yang  harus  di- penuhi, antara lain 1) Memiliki database tok- sikologi yang dapat menunjukkan sensitivitas relatifnya  terhadap  berbagai  kontaminan penting dalam sedimen; 2) Memiliki database untuk  prosedur uji interlaboratorium;  3)  Me- miliki  kontak  langsung  dengan  sedimen;  4) Mudah diperoleh, baik dari budidaya maupun dari  alam;  5)  Mudah  dipelihara  di  labora- torium; 6) Mudah diidentifikasi; 7) Memiliki nilai  ekonomi  atau  ekologi  yang  penting;  8) Memiliki  kisaran  distribusi  geografi  yang luas, diutamakan merupakan spesies asli dari
habitat  tersebut  atau  memiliki  kesamaan niche dengan  habitat  yang  diteliti;  9) Memiliki kisaran toleransi yang luas terhadap sifat  fisika-kimiawi  sedimen  misalnya  ter- hadap  ukuran  partikel  sedimen  ( grain  size ); 10)  Kompatibel  dengan  metode  uji  dan  titik akhir pengamatan ( endpoint ) yang sudah ada; 11)  Sudah  pernah  digunakan  pada  artikel jurnal;  12)  Responsnya  telah  teruji  pada populasi alami. Beberapa kendala yang dapat dihadapi  dalam  penyediaan  biota  uji  di laboratorium  adalah  kurangnya  jumlah  biota uji  dalam  jumlah  yang  dibutuhkan  dengan ukuran atau umur yang seragam. Pemenuhan jumlah biota ini hanya dapat dipenuhi apabila biota uji tersebut sudah dibudidayakan secara khusus  di  laboratorium.  Oleh  karena  itu, informasi biologi seperti salinitas yang cocok untuk  pemijahan  ikan O.  javanicus sangat diperlukan .
Penelitian  mengenai  perkembangan larva  ikan Oryzias  latipes pernah  dilakukan oleh  Iwamatsu  pada  tahun  2004  dan  2011, sedangkan  pada  ikan O.  javanicus terakhir pernah  dilakukan  pada  tahun  1984  oleh Iwamatsu  dan  Hirata.  Di  Indonesia,  peneli- tian  mengenai O.  javanicus masih  sangat terbatas dan baru berfokus pada distribusinya saja. Menurut Suratno et al . (2014), melapor- kan  bahwa  spesies  ini  ditemukan  di  wilayah Gending  dan  Bayeman  (Probolinggo,  Jawa Timur) dan S. Gosong, (Tangerang, Banten). Puspitasari et  al .  (2016)  menambahkan  dis- tribusi ikan ini di daerah muara Banjir Kanal
Barat  (Semarang,  Jawa  Tengah)  dan  Sungai Kaligangsa  (Tegal,  Jawa  Tengah).  Ikan  ini ditemukan  pada  lingkungan  air  yang  aman yaitu  berada  dibawah  baku  mutu  yang ditetapkan  oleh  Kementrian  Negara  Ling- kungan  Hidup.  Namun  ada  kecenderungan ditemui  pada  lokasi  yang  sedimennya  ber- potensi  tingkat  sedang  untuk  dapat  menim- bulkan  efek  biologis  yang  merugikan  jika dilihat  berdasarkan  indeks Sediment  Quality Guidelines nya  berkisar  antara  0,1  sampai  1 (Puspitasari et al ., 2016).
Penelitian  ini  merupakan  penelitian awal  yang  bertujuan  mencari  informasi mengenai  salinitas  yang  cocok  untuk  pemi- jahan induk dan penetasan telur O. javanicus , serta  lama  waktu  menetas  dari  telur  menjadi larva  ikan.  Keberhasilan  pemeliharaan  ikan ini  di  laboratorium  akan  mengkonfirmasi salah  satu  persyaratan  biota  uji  yaitu  mudah dipelihara di laboratorium.

## II. BAHAN DAN METODE

## 2.1. Koleksi dan Pemeliharaan Ikan
Ikan  dewasa  ditangkap  dari  daerah Tangerang  pada  kisaran  salinitas  20-22  ppt. Ikan dipelihara dalam akuarium kaca dengan sistem  resirkulasi  dalam  salinitas  0  (tawar) dan 20 ppt (salinitas di habitat asli) dan suhu 25-26  C.  Pakan  diberikan  dua  kali  sehari, berupa  pelet  Tetrabits  untuk  ikan  dewasa berukuran  3-4  cm  (Gambar  1),  dan  naupli artemia untuk benih ikan.
(a) (b)
Gambar 1. Oryzias javanicus dewasa dewasa (a) betina (b) jantan.
2.2. Pengamatan Telur dan Perkem- bangan Larva Ikan  dewasa  dipelihara  di  akuarium bersuhu  25-26  C  dan  diamati  setiap  hari untuk  mengamati  saat  bertelur.  Pengamatan kemampuan bertelur ikan dilakukan pada dua perlakuan  salinitas,  yaitu  salinitas  0  ppt  dan salinitas  20  ppt  (ikan  paling  banyak  dite- mukan).  Induk  betina  yang  membawa  telur hasil  pemeliharaan  di  laboratorium,diambil dengan  jaring  (Gambar  2a),  ditempatkan dalam  Beaker  dan  diaerasi.  Telur  dipisahkan dari  induk  dengan  menggunakan  pinset dengan  hati-hati  dan  diletakkan  di  petri  disk bersih (Gambar 2b).
(a) (b) (c)
Gambar  2.  (A)  Induk  ikan O.  javanicus betina yang membawa telur, (B) Telur  yang  sudah  dipisahkan, (C)  Telur  yang  diamati  dengan mikroskop  dengan  perbesaran 400x.
Pemisahan  telur  dari  induk  dan diletakkan  pada  petrisik  dimaksudkan  untuk mempermudah  pengamatan  di  mikroskop.
Satu  induk  ikan  bisa  menghasilkan  13-20 telur yang saling melekat.
Telur  yang  dihasilkan  kemudian  di- transfer  ke  dalam  Beaker  Glass.  Perlakuan yang  dilakukan  untuk  penetasan  telur  ada tiga  salinitas  yaitu  salinitas  0,  air  laut  steril bersalinitas  15  dan  30  ppt  dan  masing- masing  diaerasi.  Tujuan  perlakuan  adalah melihat  pada  salinitas  mana  telur  akan  me- netas  lebih  cepat.  Sekitar  sepuluh  sampai lima belas telur dipindahkan dengan hati-hati ke  dalam  petri  disk  berisi  akuades  dan  di- amati  setiap  hari  dengan  bantuan  mikroskop cahaya (Gambar 2c). Analisis perkembangan telur dilakukan secara deskriptif dan literatur dari Iwamatsu (2004; 2011).

## III. HASIL DAN BAHASAN

## 3.1. Kemampuan Bertelur Ikan
O. javanicus yang dipelihara di 0 dan
20  ppt  sama-sama  dapat  menghasilkan  telur. Sekitar  >50%  dari  jumlah  ikan  yang  di- pelihara  di  tiap  akuarium  mampu  bertelur. Namun,  ada  perbedaan  perilaku  ikan  dalam meletakkan  telur  yaitu  di  kondisi  air  tawar, ikan  betina  akan  membawa  telur  menempel di bagian abdomennya, sedangkan di kondisi air  laut,  ikan  cenderung  melepas  telur-telur- nya  sehingga  tidak  menempel  di  abdomen. Oleh  karena  itu,  pada  akuarium  air  laut ditambahkan  jaring  ikan  berwarna  kuning (Gambar 3) sebagai tempat peletakan telur.
Gambar 3. Penggunaan jaring berwarna kuning dalam akuarium air laut untuk tempat meletakkan telur.
Ada  kesulitan  dalam  memisahkan telur  pada  kondisi  air  laut  karena  telur  ter- sebut  cenderung  melekat  pada  jaring-jaring tersebut  dan  menyebabkan  sebagian  telur menjadi rusak sehingga telur yang digunakan untuk  pengamatan  penetasan  selanjutnya adalah  telur  yang  berasal  dari  perlakuan  air tawar.  Namun,  secara  umum  dari  hasil pengamatan  dapat  dikatakan  bahwa  pada salinitas 0 dan 20 ppt ikan O. javanicus dapat bertelur.  Hal  ini  selaras  dengan  hasil  dari Inoue  and  Takei  (2002)  yang  menyatakan bahwa O.  javanicus dapat  bertelur  di  air tawar,  campuran  50%  air  laut,  dan  air  laut (35  ppt).  Adanya  hasil  penelitian  ini  maka budidaya di laboratorium menjadi mudah dan cepat  karena  sudah  diperoleh  informasi bahwa  dalam  salinitas  tawar  maupun  laut ternyata induk O. javanicus dapat memijah.

## 3.2. Perkembangan Larva Ikan
Telur yang diamati perkembangannya secara  mikroskopik  bersumber  dari  pemi- jahan di air tawar karena relatif lebih mudah dalam  penanganan  dan  pemindahan  ke  petri disk  untuk  pengamatan  detil.  Telur  terfer- tilisasi  berbentuk  bulat,  transparan,  ber- ukuran  sekitar  1,1  mm  (Gambar  2c).  Telur menempel  erat  pada  tubuh  induk  dan  perlu dipisahkan  dengan  hati-hati  dengan  pinset. Telur  bergerombol  satu  sama  lain  (13-20 telur),  membentuk  kumpulan  seperti  anggur yang  dihubungkan attaching  filament satu sama  lain  (Gambar  2c).  Permukaan  telur, dijumpai vili-vili halus ( nonattaching filament ).
Telur  normal  dijumpai yolk berukur- an besar serta oil droplet yang tersebar tidak merata  di  sitoplasma  sel  (Gambar  4). Oil droplet ini berisi substansi koloidal (Iwamatsu,  2004).  Pada  akhir  stage  2 ( blastodisc  stage ), oil  droplet akan  ter- kumpul  pada  salah  satu  kutub  telur  ( vegetal pole )  dan  blastomer  berpindah  ke  sisi  yang berlawanan yaitu animal pole .
Gerakan ini disebut dengan Oscillatory  contraction (Iwamatsu,  2004). Fase  satu  sel,  dua  sel,  empat  sel  rata-rata
berkisar  antara  15-20  menit  pada  tiap fasenya.  Pengamatan  perkembangan  telur terfertilisasi  mulai  dari  pembelahan  sel sampai  fase  anggur  (morula)  berlangsung antara 2-3 jam (Gambar 5).
Gambar  4.  Telur  ikan O.  javanicus yang sudah  terfertilisasi.  1. Vegetal pole ;  2.  Sitoplasma  berisi oil droplet yang  tersebar  secara acak;  3.  Blastomer;  4. Attach- ing filament .
Blastomer kemudian mengalami pembelahan menjadi 2, 4, 8 dan 32 sel sekitar 15-20  menit  pada  tiap  fasenya,  kemudian memasuki  fase  morula  (mencapai  64-128 blastomer).  Di  akhir  pengamatan  sekitar  24 jam,  telur  memasuki  fase  gastrula  akhir ditandai  dengan  terbentuknya embrionic body yang  jelas  teramati  (Gambar  6a).  Pada hari  ketiga,  lensa  mata  sudah  terbentuk walaupun  bintik  mata  belum  terlihat  jelas (Gambar 6b).
Lensa  mata  dapat  diamati  dengan jelas.  Secara  teori,  pada  fase  ini  terbentuk fore  brain dan mid  brain pada  larva (Iwamatsu,  2004).  Aliran  sirkulasi  darah mulai  terlihat  di  bawah  mikroskop  berupa aliran  tak  terputus  yang  dapat  diamati (Gambar  7  dan  8).  Tahap  organogenesis seperti  pembentukan  jantung, air  bladder tidak  dapat  diamati  secara  jelas,  namun secara teori  proses ini  terus berlanjut sampai penetasan (Gambar 7 dan 8).
(a) (b) (c) (d)
Gambar 5. Perkembangan telur ikan mulai dari pembelahan 2 sel (a), fase 4 sel (b), fase 8 sel (c) dan fase morula (d).
(a) (b)
Gambar  6.  Perkembangan embryonic  body pada fase gastrula akhir  (a) dan lensa mata (b).
Gambar 7. Organogenesis pada larva ikan.
Fase ke 40 (Iwamatsu, 2004), seluruh organ  sudah  terbentuk  sempurna,  bintik hitam dijumpai secara merata di tubuh larva. Telur  sudah  menetas  menjadi  larva  ikan  dan
larva  sudah  bergerak  aktif  (Gambar  10). Secara  umum,  organogenesis  yang  terjadi dalam  11  hari  dapat  menggambarkan  per- kembangan  larva O.  javanicus secara  seder- hana.
Gambar 8. Telur ikan yang siap menetas.
Gambar 10. Larva ikan yang telah menetas setelah 11 hari pada kondisi air tawar.
Waktu  yang  dibutuhkan  telur  sampai penetasan adalah sekitar 11 hari pada kondisi air  tawar  0  ppt  dan  salinitas  15  ppt, sedangkan  pada  salinitas  30  ppt  membutuh- kan waktu sekitar 9 hari. Laju penetasan telur O.  javanicus berlangsung  lebih  cepat  pada salinitas  tinggi.  Hal  ini  selaras  dengan penelitian Inoue and Takei (2002). Inoue and Takei  (2002)  telah  membandingkan  ke- mampuan  bertelur  dan  menetas  dari  4  genus Oryzias yaitu O.  javanicus,  O.  dancena,  O. latipes dan O.  marmoratus pada  air  tawar (FW),  50%  air  laut  (50%  SW)  dan  air  laut (SW).  Laju  penetasan  telur  tertinggi  dalam air tawar,  yang berasal  dari pemijahan  induk di  salinitas  laut,  dimiliki  oleh O.  javanicus diikuti  O .  latipes , O  dancena dan O. marmoratus .  Laju  penetasan  telur  tertinggi dalam  air  laut,  yang  berasal  dari  pemijahan induk  di  air  tawar,  berturut-turut  dimiliki oleh O.  javanicus ,  diikuti O.  latipes ke- mudian O. dancena .  Inoue and Takei  (2002) melaporkan  bahwa  telur  ikan O.  javanicus yang  dipijahkan  pada  air  tawar  kemudian menetas  di  air  tawar  mencapai  70-75% sedangkan yang menetas di air laut mencapai 80-90%.  Adapun  telur  ikan  yang  dipijahkan di  air  laut  kemudian  menetas  di  air  laut mencapai  80-90%  sedangkan  yang  menetas di  air  tawar  mencapai  100%.  Dengan  de- mikian,  hasil  paling  optimal  yang  diperoleh adalah  kondisi  pemijahan  induk  di  air  laut dan  penetasan  telur  di  air  tawar.  Namun demikian,  telur  dari  induk  yang  memijah pada kondisi air tawar (<20 hari) lebih cepat menetas  daripada  ikan  yang  memijah  pada kondisi laut (20-25 hari), mengacu pada hasil tersebut,  kondisi  yang  dianjurkan  untuk pemijahan adalah kondisi air tawar, kemudian  ditetaskan  di  salinitas  laut  agar waktu menetas lebih singkat.
Walaupun data penelitian awal belumlah  selengkap  penelitian  Inoue  and Takei (2002) tersebut, namun diperoleh suatu kemiripan  pola  pada  penelitian  ini  bahwasa- nya  pemijahan  induk  lebih  mudah  dan  lebih cepat  dilakukan  di  air  tawar  sedangkan  pe- netasan  telur  berlangsung  lebih  cepat  di
lingkungan  bersalinitas  tinggi.  Namun  de- mikian,  informasi  mengenai  persentase penetasan  telur  belum  dapat  ditampilkan karena  merupakan  faktor  yang  belum teramati.
Hasil  penelitian  ini  sangat  berguna bagi  budidaya  ikan  medaka  dalam  kaitannya sebagai  penyiapan  biota  uji.  Jika  yang  ingin digunakan  sebagai  biota  uji  adalah  juvenil atau  bentuk  dewasanya  maka  ikan  medaka hasil tangkapan di  alam,  yang diperoleh dari tempat  yang  bervariasi  salinitasnya,  dapat dipelihara  di  air  tawar  maupun  laut  karena ikan  ini  mampu  beradaptasi  dalam  rentang salinitas yang luas.

## IV. KESIMPULAN
O.  javanicus terbukti  mampu  hidup dan  bertelur  pada  air  tawar  dan  air  laut. Pemilihan  salinitas  pemeliharaan  ikan  dise- suaikan  dengan  kebutuhan  pengujian  pada fase  telur,  pascalarva  atau  dewasa.  Secara umum  pemijahan  induk  lebih  mudah  dan lebih cepat dilakukan di  air tawar sedangkan penetasan  telur  berlangsung  lebih  cepat  di lingkungan bersalinitas tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin,  Z.  and  D.  Hindarti.  2006.  Effects  of cyanide on ornamental coral reef fish, Chromis  viridis . Marine  Research  in Indonesia , 30:15-20
American  Standard  Testing  Material.  1994. Standard  guide  for  designing  biolo- gical  tests  with  sediments.  ASTM  E 1525-94. American society for testing and  materials.  West  Conshohocken, PA, USA. 942-959pp.
Khodadoust,  D.,  A.  Ismail,  S.  Zahmir,  and Zulkifli.  2012.  Application  of  Java Medaka  ( Oryzias  javanicus )  fish  and surface  sediments  to  assess  Cd  and Cu  contamination  in  Linggi  Estuary,
Malaysia. Acta  Biologica  Malay- siana, 1(2):46-54.
Khodadoust, D., A. Ismail, S. Z. Zulkifli, and F. H Tafeyeh. 2013. Short time effect of cadmium on juveniles and adults of Java Medaka ( Oryzias javanicus ) fish as  a  bioindicator  Ecotoxicological Studies. Life Sci. J ., 10(1):1857-1861. Khodadoust,  D.  and  A.  Ismail.  2014
Metallothionein-like  protein  levels  in Java Medaka fish ( Oryzias javanicus ) exposed to different concentrations of cadmium. Walailak J. Sci. and Tech ., 11(10):883-893.
Hindarti,  D.,  R.  Puspitasari,  and  Z.  Arifin.
2010.  Preliminary  study  the  response of  amphipod, Grandidierella sp.  to contaminated  sediment  of  Jakarta Bay. Marine  Research  in  Indonesia , 35(2):33-40.
Imai,  S.,  J.  Koyama,  and  K.  Fujii.  2005. Effects  of  17  β-estradiol  on  the reproduction  of  Java  Medaka  ( Ory- zias  javanicus ),  a  new  test  species. Marine  Pollution  Bulletin, 51:708- 714.
Inoue,  K.  and  Y.  Takei.  2002.  Diverse adaptability in Oryzias species to high environmental  salinity. Zoological Science, 19:727–734.
Ismail,  A.  and  S.  Yusof.  2011.  Effect  of mercury  and  cadmium  on  early  life stages  of  Java  Medaka  ( Oryzias javanicus) :  a  potential  tropical  test fish. Marine  Pollution  Bulletin, 63: 347-349.
Iwamatsu,  T.  and  K.  Hirata.  1984.  Normal course  of  development  of  the  Java medaka, Oryzias  javanicus . Bull. Aichi  Univ.  Edu . Nat.  Sci .,  33:87– 109.
Iwamatsu,  T.  2004.  Stages  of  normal development  in  the  Medaka, Oryzias
latipes . Mechanism  of  development , 121:605-618.
Iwamatsu,  T.  2011.  Developmental  stages  in the  wild  medaka, Oryzias  latipes .
Bulletin  of  Aichi  Univ.  of  Education. 60:71-81.
Puspitasari,  R.  dan  D.  Hindarti.  2009. Korelasi  antara  logam  berat  dalam sedimen  dan  toksisitasnya  terhadap diatom, Chaetoceros  gracilis . Ose- anologi  dan  Limnologi  di  Indonesia, 35(2):131-149.
Puspitasari,  R.  2011.  Aspek  toksisitas sedimen  pesisir  Cirebon  terhadap  ab- normalitas  larva  Kerang  hijau. Perna viridis. Oseanologi  dan  Limnologi  di Indonesia, 37(2):235-245.
Puspitasari,  R.    dan  T.  Purbonegoro.  2011. Efek  tembaga  terhadap  pertumbuhan mikroalga laut, Isochrysis sp. Majalah  Ilmiah  Lingkungan  Tropis, 5(2):121-129 Puspitasari,  R.  and  Lestari.  2014. Chae- toceros  gracilis sebagai  bioindikator kualitas sedimen . J. Ilmu dan Teknologi  Kelautan  Tropis ,  6(1):187- 196.
Puspitasari,  R.,  Suratno,  Lestari,  T.  Pur- bonegoro,  dan  R.  Rositasari.  2016. Pengembangan  Bioindikator  untuk mendeteksi  pencemaran  di  ekosistem pesisir.  Laporan.  Pusat  Penelitian Oseanografi-LIPI. 38hlm.
Suratno, R. Puspitasari, T. Purbonegoro, dan Lestari.  2014.  Pengembangan  Bioin- dikator untuk mendeteksi pencemaran di  ekosistem  pesisir.  Pusat  Penelitian Oseanografi-LIPI. 68hlm.
Suratno, R. Puspitasari, T. Purbonegoro, and D.  Mansur.  2015.  Copper  and  cad- mium  toxicity  to  marine  phytoplank- ton, Chaetoceros  gracilis and Iso- chrysis sp. Indonesian  J.  of  Chemis- try , 15(2):172-178.
Diterima : 5 September 2016 Direview : 3 November 2016 Disetujui : 20 Mei 2017