## IDENTIFIKASI AKTIVITAS IMUNOGLOBULIN M (IG.M) EKSTRAK ETANOLIK DAUN CEPLUKAN ( Physalis Minima Linn.) PADA MENCIT
Nurmaya Effendi * , Harti Widiastuti **
*, ** Laboratorium Kimia Farmasi, Universitas Muslim Indonesia, Makassar
PENDAHULUAN S istem  imun  adalah  sistem  yang sangat  penting  bagi  tubuh  untuk menghindari dan melawan berbagai  penyakit  (Abbas et  al ,  2007).
Keseimbangan  sistem  imun  dapat  di- pengaruhi oleh faktor internal dalam tubuh dan faktor eksternal yang perlu dipertahan- kan untuk menjaga tubuh agar tetap sehat.
Senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam tumbuhan  yang  berefek  memicu  sistem imun  pada  dekade  terakhir  ini  mulai  ban- yak diaplikasikan sebagai ’’ immunotherapy’’ yaitu  suatu  cara  pen- gobatan  yang  mengkombinasikan  pen- gobatan  konvensional  dengan  terapi  imun untuk  memperoleh  hasil  pengobatan  yang maksimal  terhadap  berbagai  penyakit

## Abstrak
Sistem  imun  adalah  sistem  yang  sangat  penting  bagi  tubuh  untuk  menghindari  dan melawan berbagai penyakit. Keseimbangan sistem imun dapat dipengaruhi oleh faktor inter- nal dalam tubuh dan faktor eksternal yang perlu dipertahankan untuk menjaga tubuh agar tetap  sehat  .  Sistem  imun  ini  berkaitan  erat  dengan  adanya  antibodi.  Antibodi  merupakan protein  immunoglobulin  yang  disekresi  oleh  sel  B  yang  terfiksasi  oleh  antigen.  Tanaman ceplukan  (Physalis  minima  Linn.)  termasuk  famili  Solanaceae  merupakan  tanaman  yang tidak  banyak  diketahui  orang  bahwa  dapat  menyembuhkan  berbagai  penyakit.  Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kemampuan ekstrak etanol daun ceplukan (Physalis minima Linn.) untuk meningkatkan aktivitas IgM.
Daun  ceplukan  kering  dimaserasi  dengan  etanol.  Ekstrak  etanolik  cair  yang  di- peroleh  dikentalkan  dengan  rotavavor  dan  kemudian  disuspensikan  dengan  Na-CMC  se- bagai pembawa. Ekstrak diberikan secara oral kekelompok mencit uji dengan menggunakan kontrol negatif Na-CMC dan selanjutnya diimunisasi dengan suspensi sel darah merah dom- ba secara intraperitonial dan setelah lima hari selanjutnya darah mencit diambil secara in- trakardial.  Darah  mencit  selanjutnya  digumpalkan,  serumnya  lalu  diencerkan  dengan  PBS dan  diuji  lagi  dengan  sel  darah  merah  domba,  dan  setelah  diinkubasi  selanjutnya  diamati pengenceran tertinggi darah yang dapat mengaglutinasi sel darah domba.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanolik  daun  Ceplukan  (Physalis minima Linn.) konsentrasi 4%, 8% dan 12% b/v dapat meningkatkan aktivitas Ig.M dengan titer  imunoglobulin  rata-rata  masing-masing  sebesar  1/32,  1/128  dan  1/64  sedangkan kelompok perlakuan kontrol, rata-rata titer imunoglobulinnya hanya 1/8.
Kata Kunci : sistem imun, antibiotik, ceplukan, IgM
(Ma’at,  2010).  Sistem  imun  ini  berkaitan erat  dengan  adanya  antibodi.  Antibodi merupakan  protein  immunoglobulin  yang disekresi  oleh  sel  B  yang  terfiksasi  oleh antigen.  Semua  molekul  antibodi  terdiri dari dua untaian peptida pendek yang sama yang  dikenal  dengan light  chain , kappa dan lambda yang  terdiri  dari  230  asam amino,  sedang  yang  terdiri  dari  untaian peptida  yang  panjang  disebut heavy  chain (imunoglobulin) yang terdiri dari lima jenis yaitu  IgG,  IgA,  IgM,  IgD  dan  IgE (Bratawidjaja,  2004).  Memelihara  daya tahan  tubuh  tidak  cukup  hanya  dengan keseimbangan gizi yang dilengkapi dengan vitamin, mineral dan asam amino esensial. Daya  tahan  tubuh  alami  harus  diciptakan oleh  kesehatan  organ-organ  tubuh  yang terutama terdiri dari ketahanan permukaan epitel yaitu jaringan kulit organ,
keseimbangan  faktor-faktor  humoral  yaitu jaringan hati dan ginjal serta keseimbangan faktor-faktor
seluler. Organ-organ pendukung  daya  tahan  tubuh  alamiah  ini
dapat dipelihara dan ditingkatkan fungsinya  melalui  konsumsi  tanaman  obat (Winarno, 2003).
Upaya penemuan obat baru yang ber- sumber  dari  bahan  alam  telah  banyak  dil- akukan secara eksploratif. Indonesia adalah negara yang kaya dengan tumbuhan (lebih kurang 30.000 spesies) dan baru 940 jenis tumbuhan  telah  diketahui  berkhasiat  se- bagai obat (Soeksmanto et al ., 2010). Salah
satu tumbuhan yang berkhasiat obat adalah daun ceplukan. Tanaman ceplukan ( Physalis  minima Linn.),  merupakan tanaman  yang  tidak  banyak  diketahui orang  bahwa  dapat  menyembuhkan berbagai  penyakit  dan  tidak  sulit ditemukan, dapat tumbuh didataran rendah hingga  dataran  tinggi,  sehingga  bisa dijumpai  di  pekarangan  dan  mendapat sinar matahari penuh dan tanahnya gembur (Siyok, 2002). Kandungan kimianya antara lain  asam  klorogenat,  asam  citrun,  fisalin, flavonoid, saponin dan polifenol (Winarno, 2003). Selain itu, daun ceplukan juga berkhasiat sebagai antipiretik, analgetik,  diuretik,  anti  inflamasi  dan detoksifikasi (Wijayakusuma, 2004).
Berdasarkan uraian tersebut,  muncul permasalahan  tentang  apakah  ekstrak etanolik  daun  ceplukan  yang  dapat meningkatkan  aktivitas  Ig.M  karena mengandung  senyawa  polifenol  yang diketahui aktif sebagai senyawa  yang ber- tanggung  jawab  untuk  memicu  sistem imun  tubuh,  dengan  alasan  tersebut  maka dilakukanlah penelitian ini. Hasil penelitian  yang  diperoleh  nantinya  di- harapkan dapat memberi informasi kepada masyarakat  tentang  penggunaan  daun ceplukan  sebagai  imunoterapi  yang  dapat dipertanggungjawabkan secara ilmiah. Se- lanjutnya  dapat  diteliti  golongan  bioaktif yang  bertanggung  jawab  sebagai  pemicu aktivitas IgM dan dapat digunakan sebagai
senyawa  pemandu  yang  dapat  dikem- bangkan sebagai obat baru.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  kemampuan  ekstrak  etanol daun  ceplukan  ( Physalis  minima Linn. ) untuk meningkatkan aktivitas IgM..

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  alat  rotavapor, autoklaf,  batang  pengaduk,  Erlenmeyer, gelas  piala,  labu  alas  bulat,  mikropipet, pipet,  piring  Mikrotitrasi  ( Wheel  plate )  96 lubang,  sendok  tanduk,  spoit,  sentrifuge, tabung  reaksi,  tabung  venoject,  timbangan analitik, timbangan gram, tip pipet, wadah maserasi, water bath
Bahan-bahan  yang  digunakan  da- lam  penelitian  ini  adalah  alumunium  foil, Sel  darah  merah  Domba,  etanol,  Mencit ( Mus  musculus ),  Kertas  saring,  Na  CMC, larutan PBS, daun Ceplukan ( Physalis min- ima Linn.)

## Prosedur Penelitian
Pengambilan Sampel Daun Ceplukan
Sampel  berupa  daun  Ceplukan ( Physalis  minima Linn.)  diambil  di  kota Makassar,  pada  pukul  10.00  dipetik  daun kelima dari pucuk.
Pengolahan Sampel Daun Ceplukan
Sampel  daun  Ceplukan  ( Physalis minima Linn.)  yang  telah  dikumpulkan, dipotong-potong kecil, dikeringkan dengan
cara  diangin-anginkan  pada  tempat  yang tidak terkena sinar matahari langsung.

## Penyiapan Hewan Coba Mencit
Hewan  coba  yang  digunakan  adalah Mencit  jantan  ( Mus  musculus) yang berbadan sehat dengan berat badan 25 – 30 gram.  Jumlah  Mencit  yang  digunakan sebanyak  16  ekor  yang  dibagi  dalam  4 kelompok, yakni 1 kelompok kontrol dan 3 kelompok perlakuan. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun

## Ceplukan
Daun  Ceplukan  ( Physalis  minima Linn. ) yang telah dikeringkan, dimasukkan dalam  bejana  maserasi,  ditambahkan pelarut  etanol  hingga  sampel  terendam. Dibiarkan  selama  5  hari  dengan  sesering mungkin  diaduk.  Setelah  5  hari,  disaring kemudian  diperas  dan  ditambah  cairan penyari  lagi,  penyaringan  dilakukan  tiga kali. Sari yang diperoleh diuapkan dengan rotavapor.
Pembuatan Suspensi Na-CMC 1 %
Ditimbang  Na.CMC  sebanyak  1 gram. Ditambahkan sedikit demi sedikit ke dalam akuades panas sambil dikocok kuat dengan  batang  pengaduk.  Kemudian ditambahkan dalam larutan tersebut 50 ml akuades  yang  tidak  dipanaskan  sedikit demi sedikit sambil diaduk. Akuades yang digunakan adalah 100 ml.

## Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Ceplukan
Suspensi  ekstrak  etanol  daun
Ceplukan  ( Physalis  minima Linn.)  dibuat dengan menambahkan larutan koloidal Na- CMC  1%  b/v  sebagai  pembawa,  dibuat dalam  konsentrasi  4%  b/v,  8%  b/v  dan 12%  b/v.  Cara  pembuatan  konsentrasi  4% b/v  adalah  dengan  menimbang  ekstrak sebanyak  4  gram  kemudian  digerus  dalam lumpang,  lalu  ditambahkan  larutan  Na- CMC  1%  b/v  dalam  labu  terukur  100  mL hingga  tanda.  Untuk  membuat  suspensi ekstrak  dengan  konsentrasi  8%  b/v  dan 12% b/v dilakukan dengan cara yang sama dengan menimbang ekstrak masing-masing sebanyak  8  gram  dan  12  gram.  Suspensi dibuat segar setiap kali pertakuan.
Penyiapan  Suspensi  Sel  Darah  Merah (SDMD) 2 %
Tampung darah Domba dalam wadah bersih  dan  kering  yang  berisi  serbuk EDTA  sebagai  antikoagulan.  Untuk  1  mL darah  Domba,  diperlukan  1  mg  EDTA. Pisahkan sel darah merah Domba (SDMD) dan  plasmanya  dengan  pemusingan  pada sentrifus  1500  rpm.  Selanjutnya  cuci  sel darah  merah  dengan  menambahkan  PBS ( Phosphat Buffered Saline ) dalam jumlah besar  dan  tabung  berisi  suspensi  tersebut dibolak-balik beberapa kali dan disentrifus kembali. Lakukan pencucian paling sedikit
3  kali.  Setelah  selesai,  PBS  dibuang  dan diperoleh  SDMD  100  %.  Kemudian  pada SDMD  100  %    tadi  tambahkan  PBS dengan  volume  sama  hingga  diperoleh suspensi  SDMD  50  %.  Siapkan  antigen
yang akan digunakan dengan mengencerkan 0,4 mL suspensi SDMD 50 % dengan 9,6 mL PBS sehingga diperoleh 10 mL suspensi antigen (SDMD 2 %).
Pembuatan  Larutan  Phospate  Buffer Saline
Phospat  Buffered  Saline (PBS) disiapkan dengan terlebih membuat larutan A yaitu larutan KH 2 PO 4 .H 2 O 1,38 g/L dan KCl  8,3  g/L  dan  larutan  B  yaitu  larutan NaH 2 PO 4 1,42  g/L  dan  NaCl  8,5  g/L. selanjutnya 280 mL larutan A ditambahkan pada 720 mL larutan B.

## Perlakuan Terhadap Hewan Uji

## Kelompok Kontrol
Mencit  jantan  diimunisasi  dengan suspensi  sel  darah  merah  Domba  2% dengan  volume  0,1  mL/ekor  secara intraperitonial. Selanjutnya diberi suspensi Na-CMC 1% dengan volume 1 mL secara oral setiap hari selama 6 hari. Selanjutnya pada  hari  kelima  setelah  imunisasi,  darah Mencit diambil secara intrakardial.

## Kelompok II
Mencit  jantan  diimunisasi  dengan suspensi  sel  darah  merah  Domba  2% dengan  volume  0,1  mL/ekor  secara intraperitonial.  Selanjutnya  mencit  jantan diberi  suspensi  ekstrak  etanolik  daun Ceplukan ( Physalis minima Linn.) dengan konsentrasi  4%  b/v  dengan  volume  1  mL secara  oral  setiap  hari  selama  6  hari. Selanjutnya  pada  hari  kelima  setelah imunisasi,  darah  Mencit  diambil  secara

## intrakardial.

## Kelompok III
Mencit  jantan  diimunisasi  dengan suspensi  sel  darah  merah  Domba  2% dengan  volume  0,1  mL/ekor  secara intraperitonial.  Selanjutnya  mencit  jantan diberi  suspensi  ekstrak  etanolik  daun Ceplukan  ( Physalis  minima Linn.)  dengan konsentrasi  8%  b/v  dengan  volume  1  mL secara  oral  setiap  hari  selama  6  hari. Selanjutnya  pada  hari  kelima  setelah imunisasi,  darah  Mencit  diambil  secara intrakardial.

## Kelompok IV
Mencit  jantan  diimunisasi  dengan suspensi  sel  darah  merah  Domba  2% dengan  volume  0,1  mL/ekor  secara intraperitonial.  Selanjutnya  mencit  jantan diberi  suspensi  ekstrak  etanolik  daun Ceplukan  ( Physalis  minima Linn.)  dengan konsentrasi  4%  b/v  dengan  volume  1  mL secara  oral  setiap  hari  selama  6  hari. Selanjutnya  pada  hari  kelima  setelah imunisasi,  darah  Mencit  diambil  secara intrakardial.

## Teknik Pengambilan Sampel Darah
Pengambilan  sampel  darah  mencit secara  intrakardial  pada  jantung  dengan
menggunakan spoit.

## Pengujian Aktivitas IgM
Darah yang telah diambil selanjutnya dibiarkan  menggumpal  pada  suhu  kamar selama  1-2  jam,  selanjutnya  disentrifus dengan  kecepatan  3000  rpm  selama  10 menit dan diambil serumnya (supernatan). Serum  selanjutnya  diencerkan  secara ”double  dilution”  1/4,  1/8,  1/16,  1/32, 1/64,  1/128,  1/1256  dan  1/1512  dengan PBS,  sebanyak  50  L  untuk  setiap  sumur pada  piring  mikrotitrasi  ( wheel  Plate  96) selanjutnya  pada  tiap  sumur  ditambahkan 50  L suspensi sel darah merah domba 2% lalu diaduk rata (digoyang-goyang) selama 5 menit. Selanjutnya diinkubasi pada 37 0 C selama  60  menit  dan  didiamkan  semalam pada  suhu  kamar.  Dilakukan  pengamatan pengenceran  tertinggi  dari  serum  darah mencit  yang  masih  dapat  mengaglutinasi sel darah merah domba.

## Pengumpulan dan Analisis Data
Data  pengamatan  yang  diperoleh, diolah  berdasarkan  hasil  aglutinasi  dan dianalisis.

## HASIL PENELITIAN
Perlakuan
Aglutinasi Titer IgM Kontrol Ciplukan 4% Ciplukan 8% Ciplukan 12% Replikasi 1 1/8 1/32 1/128 1/64 Replikasi 2 1/8 1/32 1/128 1/64 Replikasi 3 1/8 1/32 1/128 1/64
Data uji aktivitas immunoglobulin M
(IgM)  setelah  pemberian  ekstrak  etanol daun  Ceplukan  ( Physalis  minima Linn.) 4%, 8% dan 12% b/v berdasarkan titer im- munoglobulin M (IgM) pada mencit jantan 5 hari setelah diberikan SDMD 2%  dapat dilihat pada tabel.

## PEMBAHASAN
Imunoglobulin  merupakan  substansi molekul  dalam  serum  yang  menetralkan dan menghancurkan antigen atau mikroorganisme penyebab infeksi.
Molekul ini dibentuk oleh sel B dalam dua bentuk yang berbeda yaitu sebagai reseptor permukaan  untuk  antigen  dan  sebagai antibodi yang disekresikan ke dalam cairan ekstraseluler.  Imunoglobulin  memiliki banyak  persamaan  dalam  hal  struktur  dan sifat  biologiknya,  berbeda  dalam  susunan asam amino yang membentuk molekulnya. Antibodi  yang  dibentuk  sebagai  reaksi terhadap salah satu jenis antigen mempunyai  susunan  asam  amino  yang berbeda  dengan  antibodi  yang  dibentuk terhadap  antigen  lain  dan  masing-masing hanya dapat berikatan dengan antigen yang relevan  dan  antibodi  berfungsi  sebagai adaptor  yang  mengikat  antigen  melalui binding site nya yang spesifik.
Ceplukan mengandung asam klorogenat,  asam  citrun,  fisalin,  alkaloid dan  polifenol.  Menurut  Wagner,  senyawa alkaloid,  polifenol  dan  plavonoid  bersifat
imunostimulator.
Injeksi  suatu  substansi  asing  ke dalam  binatang  yang  mampu  membuat respon  imun  akan  menghasilkan  antibodi spesifik  yang  muncul  dalam  serum sesudah  beberapa  waktu  berlangsung. Imunogen  tersebut  akan  menyebabkan pengiriman  sinyal  pada  sel-sel  yang bertugas untuk membuat antibodi. Antigen yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  sel  darah  merah  domba  (SDMD) karena  merupakan  antigen  yang  terbaik untuk  pengujian  produksi  antibodi  pada hewan  percobaan  mencit,  keutamaan SDMD  dari  antigen  yang  lain  adalah SDMD  mudah  diperoleh  dalam  suspensi yang  uniform  dan  dapat  diukur,  cukup stabil  dan  lisisnya  dapat  dilihat  dengan mudah.  Pengamatan  dengan  melihat aglutinasi  yaitu pengenceran tertinggi  dari serum darah mencit yang masih memberikan  reaksi  aglutinasi  positif. Aglutinasi  terjadi  bila  antigen  yang berbentuk  partikel  direaksikan  dengan antibodi spesifik. Antibodi tersebut disebut spesifik  jika  hanya  bereaksi  dengan antigen  yang  merangsang  produksinya. Gumpalan  yang  terbentuk  antara  antigen dan  antiserum  spesifik  akan  bersatu  dan akhirnya  mengendap  sebagai  gumpalan- gumpalan besar dan mudah terlihat dengan cairan  di  atasnya  tetap  jernih.  Hal  ini terjadi  karena  pada  umumnya  antibodi memiliki  lebih  dari  satu  reseptor  pengikat
antigen sehingga antibodi  bereaksi  dengan molekul  antigen  lain  yang  mungkin berikatan  dengan  salah  satu  molekul antibodi  dan  terbentuklah  gumpalan. Reaksi  aglutinasi  dibantu  oleh  suhu  yang tinggi  (37 0 C),  oleh  gerakan yang menambah  kontak  antigen  dan  antibodi (misalnya  mengocok,  mengaduk  dan memusing)  dan  dengan  adanya  larutan yang mengandung garam (PBS) menyebabkan berkumpulnya gumpalan.
Bila  antigen  pertama  kali  masuk  ke dalam tubuh, terjadilah respon imun primer yang  ditandai  dengan  dihasilkannya  IgM beberapa hari setelah pemaparan.
Sebaliknya IgG mulai diproduksi 6 – 7 hari setelah  pemaparan  antigen  oleh  karena  itu pengambilan darah untuk pengukuran IgM dilakukan 5 hari setelah pemberian SDMD atau pemaparan antigen.
Dari hasil pengamatan titer aglutinasi, menunjukan peningkatan aktivitas  imunoglobulin  M  (IgM).  Hal  ini dapat  dilihat  pada  kelompok  perlakuan pemberian  ekstrak  etanol  daun  Ceplukan ( Physalis minima
Linn.)
dengan
konsentrasi  4%,  8%  dan  12%  b/v  titer imunoglobulin  rata-rata  masing-masing sebesar  1/32,  1/128  dan  1/64  sedangkan kelompok perlakuan kontrol, rata-rata titer imunoglobulinnya hanya 1/8.
Titer  imunoglobulin  M  (IgM)  dari serum darah mencit yang diberikan ekstrak daun  Ceplukan  mengalami  peningkatan
tertinggi  pada  konsentrasi  8%  b/v  dimana titer  naik  enam  belas  tingkat  pengenceran dibanding  kontrol  tetapi  seiring  dengan peningkatan  konsentrasi  ekstrak,  titer mengalami  penurunan  bahkan  pada pemberian  dengan  konsentrasi  12%  b/v titer yang diperoleh hanya sebesar delapan tingkat  pengenceran  dibanding  kontrol. Hal  ini  diduga  disebabkan  karena  respon imun sangat ditentukan oleh kesetimbangan jumlah antigen dan antibodi. Apabila jumlah dari antigen atau antibodi  tidak  seimbang  (salah  satu diantaranya berlebihan) maka pembentukan antibodi akan terganggu. Berdasarkan pengamatan pengenceran  tertinggi  dari  serum  darah mencit  yang  masih  dapat  mengaglutinasi sel darah merah domba 2% memperlihatkan bahwa  pemberian  ekstrak etanol  daun  Ceplukan  memberikan  efek terhadap peningkatan
aktivitas Imunoglobulin  M  (IgM)  dan  peningkatan aktifitas  Imunoglobulin  M  (IgM)  karena terjadi peningkatan titer.

## PENUTUP

## Kesimpulan
Ekstrak  etanol  daun  Ceplukan ( Physalis minima
Linn.) dapat meningkatkan  aktivitas  Imunoglobulin  M (IgM). Konsentrasi  minimal  ekstrak etanolik  daun  ceplukan  yang  dapat meningkatkan  aktivitas  IgM  pada  mencit
adalah 4%, 8% dan 12%.

## Ucapan Terima Kasih
Terima kasih penulis haturkan kepada Rektor Universitas Muslim Indonesia (UMI) Makassar dan Kepala LP2S Univer- sitas Muslim Indonesia (UMI) Makassar

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas, K.A., Lichtman, A.H. dan Pillai, S., 2007, Celluler and Moleculer Immu- nology 6 th Ed, Saunders, USA.
Baratawidjaja, K. G., 2004, Imunologi Da- sar ,  edisi  ke-5,  Balai  Penerbit Fakultas  Kedokteran  Universitas  In- donesia, Jakarta.
Ma’at,  S., 2010,  Imunomodulator Manfaat dan  Bahayanya,  dalam Seminar  Na- sional Farmasi 2010, Stipar
’’Yayasan Pharmasi, Semarang. 26.
Siyok,  D.,  “ Morel  Berry,  Obat  Kencing Manis”, (http : // www.dayakologi.com./kr/ ind/2002/87/kesehatan.html.  Diakses
31 Januari 2012).
Soekamanto, A., M.A. Subroto, H. Wijaya dan P.  Simanjuntak.,  2010.  Anti- cancer activity for extracts of sarang semut  plant  ( Myrmecodia  pendens ) to  HeLa  and  MCM-B2  cells,  Paki- stan J. Biol. Sci., 13(3): 148-151.
Wijayakusuma, H., (2004), Bebas Diabetes Mellitus ala Wijayakusuma, Penerbit Puspa
Swara, Jakarta.
Winarno, M., (2003), ”Penelitian Aktivitas Biologik  Infus  Benalu  Teh  (Scurulla atropurpurea  Bl.  Danser)  Terhadap Aktivitas  Sistem  Imun  Mencit”,
Http://www.kalbefarma.com , diakses 20 Desember 2011.