BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 3 (2020) : 479 - 486 E-ISSN: 2714-8564

## Induksi Kalus dengan 2,4D dan BAP pada Eksplan Daun Vegetatif dan
Generatif Tempuyung ( Sonchus arvensis L.)
Shilfiana Rahayu 1* , Suharyanto 2
1 Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Sunan Kalijaga Jl Marsda Adisucipto, Depok, Sleman, 55221, Indonesia
2 Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada Jl.Teknika Selatan,Skip Utara, Sleman, 55221, Indonesia email: shilfiana.rahayu@uin-suka.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 18/12/2020 Disetujui  : 21/12/2020
Abstract Tempuyung ( Sonchus arvensis L.) is a plant that has many benefits and medicinal potential. This plant contains high flavonoids and terpenoids. The propagation of this plant is very important to do to provide medicinal ingredients on a prefabrication scale and to produce materials that have a high  compound  content.  The  tissue  culture  is  one  of  the  fastest  ways  in  plant  propagation  and can  increase  the  content  of  secondary  metabolites  in  plants.  The  method  to  produce  high compounds and produce somatic embryos in large quantities can be through callus culture. The research aim was to find the effect of 2,4D and BAP hormones and leaf explant variations on the growth of tempuyung callus. In this research, a combination of 2,4D (0; 0.5; 1 ppm) and BAP (0; 0.5;  1  ppm)  hormone  was  used  in  inducing  callus,  and  explants  used  in  this  research  were vegetative  leaves  and  generative  leaves  of  tempuyung.  The  results  of  this  study  showed  that callus  was  produced  within  10-14  days,  with  the  friable  callus  texture  and  yellow  in  colour. Vegetative  leaf  explants  initiate  callus  faster  than  generative  leaves.  Other  results  showed  that the  best  combination  in  callus  production  was  BAP  0.5  ppm  and  2.4D  1  ppm,  and  the  most optimal leaf explants in producing callus were found in vegetative leaf explants Key words :  2,3D, BAP, callus, leaf, tempuyung

## Abstrak
Tempuyung  ( Sonchus  arvensis L.)  merupakan  tanaman  yang  memiliki  banyak  manfaat  dan berpotensi  sebagai  obat.  Tanaman  ini  diketahui  memiliki  kandungan  flavonoid  dan  terpenoid yang  tinggi.  Propagasi  tanaman  ini  sangat  penting  dilakukan  untuk  menyediakan  bahan  obat dalam  skala  prefabrikasi  dan  menghasilkan  bahan  yang  memiliki  kandungan  senyawa  yang tinggi.  Metode  kultur  jaringan  merupakan  salah  satu  cara  yang  cepat  dalam  propagasi  tanaman dan  dapat  meningkatkan  kandungan  metabolit  sekunder  dalam  tanaman.  Metode  untuk menghasilkan  senyawa  yang  tinggi  dan  menghasilkan  somatik  embrio  dalam  jumlah  yang banyak dapat melalui kultur kalus. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh hormon 2,4D  dan  BAP  serta  variasi  eksplan  daun  terhadap  pertumbuhan  kalus  tempuyung.  Pada penelitian ini digunakan kombinasi hormon 2,4D (0; 0,5; 1 ppm) dan BAP (0; 0,5; 1 ppm) dalam menginduksi  kalus,  dan  eksplan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  daun  vegetatif  dan daun  generatif  tempuyung.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  kalus  dihasilkan  dalam waktu 10-14 hari, dengan jenis kalus friabel dan berwarna kuning. Eksplan daun vegetatif lebih cepat  inisiasi  kalusnya  dibanding  daun  generatif.    Hasil  lain  menunjukkan  bahwa  kombinasi terbaik  dalam  produksi  adalah  BAP  0,5  ppm  dan  2,4D  1  ppm,  dan  eksplan  daun  yang  paling optimal dalam menghasilkan kalus terdapat pada eksplan daun vegetatif.
Kata kunci : 2,4D, BAP, daun, kalus, tempuyung.

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  banyak  potensi  tanaman obat  yang  belum  banyak  diteliti,  sekurang- kurangnya 9.600 spesies tumbuhan memiliki khasiat obat.  Salah  satunya  adalah  tempuyung  ( Sonchus arvensis L.)  yang  banyak  ditemukan  di  seluruh wilayah  Indonesia  dan  dikenal  sebagai  tanaman infasif  (Utami,  2008).  Tempuyung  diketahui memiliki banyak manfaat untuk mengobati penyakit asma,  bronchitis,  batuk,  dan  memiliki  aktivitas antibakteria,  anti-inflamasi,  antioksidan,  diuretik, sedatif, dan hipnotik (Delyan, 2016).
Tempuyung mengandung triterpenoid, flavonoid, inositol, manitol dan kalsium. Kandungan metabolit  tempuyung  banyak  terdapat  di  daun (Sulaksana et  al., 2004).  Daun  tempuyung mengandung  kandungan  senyawa  kimia  seperti, flavonoid  (kaemferol,  luteolin-7-glukosida  dan apigenin-7-O-glukosida),  kumarin  dan  taraksasterol (Sriningsih et al ., 2012). Kandungan total triterpenoid dalam daun tempuyung sebesar 64,79%, sedangkan  kandungan  flavonoid  total  dalam  daun tempuyung  sebesar  14,04%  dengan  jenis  yang terbesar adalah apigenin-7-O-glikosida (Rumondang et  al .,  2013).  Menurut  penelitian  Sukandar  dan Safitri (2016), penggunaan tempuyung sebagai obat termasuk  aman  bahkan  jika  digunakan  untuk  ibu hamil dan tidak menimbulkan efek samping.
Tempuyung  merupakan  tanaman  tahunan yang  bergetah,  tumbuh  liar  di  tempat  terbuka  yang terlindungi  atau  sedikit  terkena  sinar  matahari  dan perkembangbiakannya sangat cepat dan melalui biji yang  mudah  terbawa  angin  (Lumbanraja,  2009). Tempuyung  tumbuh  subur  pada  tanah  berpasir  atau menempel  pada  batu.  Batang  tanaman  tempuyung, bergetah  putih,  percabangan  monopodial,  hijau keputih-putihan  (Winarto,  2004).  Daunnya  tunggal, bagian  bawah  membentuk  roset  akar,  bentuk lonjong  atau  lanset,  tepi  bergelombang,  ujung
runcing,  panjang  5-50  cm,  lebar  5-10  cm  dan berwarna hijau (Wahyuni et al ., 2019).
Pengambilan  tanaman  tempuyung  di  alam secara  langsung  dapat  menimbulkan  masalah hilangnya  sumber  plasma  nuftah  karena  adanya kendala  dalam  budidayanya.  Bahan  herbal  yang diedarkan  di  Indonesia  pada  saat  ini,  diduga sebagian besar bahan bakunya sudah  mulai  diimpor dari  beberapa  negara  sehingga  diperlukan  peran bioteknologi  untuk  mengatasi  masalah  ini.  Proses kultur  jaringan  dapat  dilakukan  memproduksi metabolit  sekunder  yang  sama  dengan  metabolit sekunder  yang  diproduksi  oleh  tanaman  aslinya, meski  pada  kondisi  tertentu  bisa  menghasilkan senyawa yang berbeda (Katno & Widiyastuti, 2004; Shyamkumar et  al., 2007).  Metode  produksi senyawa aktif dan propagasi tanaman melalui teknik kultur  jaringan  melalui  kultur  kalus  dipandang  jauh lebih  efisien  jika  dibandingkan  dengan  cara konvensional,  karena  didalamnya  dapat  dilakukan perekayasaan  sehingga  diperoleh  senyawa  aktif dengan  kualitas  yang  lebih  baik  dan  diproduksi tanaman  yang  lebih  banyak  dibandingkan  dengan secara konvensional (Shyamkumar et al., 2007).
Pembentukan  kalus  dipengaruhi  oleh  jenis eksplan dan kombinasi Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) pada  medium  kultur.  Tipe  eksplan  yang  berbeda akan  memberikan  respon  yang  berbeda  terhadap kecepatan  pembentukan  dan  pertumbuhan  serta perkembangan kalus (Adil et al. , 2018). Penggunaan hormon  2,4D  dan  BAP  sudah  banyak  dilakukan untuk  menghasilkan  kalus  pada  tanaman  (Aziz et al., 2014).  Menurut  Indah  dan  Ermavitalini  (2013),
2,4-D  memiliki  sifat  lebih  stabil  dibanding  dengan golongan auksin lainnya, karena tidak mudah terurai oleh  enzim-enzim  yang  dikeluarkan  oleh  sel tanaman  ataupun  oleh  pemanasan  saat  sterilisasi. Aziz, et  al. (2014)  menyebutkan  BAP  termasuk hormon  sintetik  dan  memiliki  sifat  lebih  stabil  dan kuat  dibandingkan  jenis  hormon  sitokinin  lainnya
seperti  kinetin  dan  zeatin.  Hormon  BAP  berperan dalam  perkembangan  eksplan  yaitu  mamacu pembelahan sel, pembentukan tunas, dan multiplikasi  tunas.  Menurut  Mahadi et  al .  (2014), hormon  2,4-D  dapat  merangsang  pembentukan  sel- sel. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  hormon  2,4D  dan  BAP  serta  variasi eksplan daun terhadap pertumbuhan kalus tempuyung.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  April hingga Oktober 2017 di Laboratorium Bioteknologi Fakultas  Biologi  Universitas  Gadjah  Mada.  Bahan eksplan yang digunakan adalah daun vegetatif (daun yang  membentuk  roset)  dan  generatif  (daun  yang menempel  pada  tangkai  bunga)  pada  tanaman Tempuyung  ( Sonchus  arvensis L.).  Bahan  kimia yang  digunakan  antara  lain:  medium  MS,  hormon 2,4D  dan  BAP,  akuades,  alkohol  70%,  fungisida, klorox,  KOH,  HCl,  aluminium  foil,  dan  kertas saring  steril.  Konsentrasi  media  perlakuan  pada penelitian  ini  merupakan  kombinasi  dari  hormon 2,4D  (0,  0.5,  1  ppm)  dan  BAP  (0,  0.5,  1  ppm), sehingga  ada  9  perlakuan  dan  terdapat  5  ulangan pada masing-masing perlakuan.
Eksplan disterilisasi menggunakan rendaman fungisida dengan konsentrasi 4 g/L selama 15 menit, setelah itu dibilas dengan aquades steril. Selanjutnya adalah  sterilisasi  di  dalam  LAF,  eksplan  direndam dalam  larutan  klorox  15%  selama  15  menit,  setelah itu  dibilas  dengan  akuades  steril.  Eksplan  hasil sterilisasi  ditiriskan  di  atas  kertas  saring,  lalu dipotong  persegi  dengan  ukuran  ±  1  cm.  Potongan eksplan  ditanam  di  dalam  botol  kultur  dan  ditutup dengan aluminium foil. Kultur diinkubasi pada suhu 20 0 C  dengan  waktu  periodisasi  24  jam  selama  31 hari.  Parameter  yang  diamati  pada  kultur  kalus antara  lain,  warna  kalus,  tekstur  kalus,  waktu terbentuknya  kalus,  dan  jumlah  kalus.  Data
dianalisis  secara  kualitatif  dengan  mengambil gambar foto kultur.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Lama  Waktu  Pembentukan  Kalus  dan Persentase  Pembentukan  Kalus  Tempuyung ( Sonchus arvensis L.)
Lama  waktu  pembentukan  dan  persentase pembentukan  kalus  pada  daun  vegetatif  dan generatif  tempuyung  dapat  dilihat  pada  Tabel  1. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  lama  waktu pembentukan kalus dapat bervariasi tergantung pada media  pertumbuhan  dan  jenis  eksplan  yang digunakan  (Marlin et  al .,  2012).  Pemilihan  hormon 2,4D  dan  BAP  dalam  penelitian  ini  dikarenakan kedua  hormon  ini  merupakan  hormon  auksin  dan sitokinin  yang  stabil,  tidak  mudah  terurai  akibat sterilisasi  dan  rusak  oleh  enzim  yang  dikeluarkan oleh eksplan (Indah & Ermavitalini, 2013).
Pada penelitian ini lama waktu pembentukan kalus sekitar 10-14 hari. Waktu pembentukan paling cepat  pada  kedua  eksplan  terdapat  pada  perlakuan 2,4D  1  ppm  (D1B0)  yaitu  terjadi  pada  hari  ke-10. Secara  umum  lama  waktu  pembentukan  kalus  pada kedua  eksplan  hampir  bersamaan,  tetapi  pada perlakuan D0.5B1, D1B0.5 dan D1B1 eksplan daun vegetatif  lebih  cepat  terbentuk.  Hasil  ini  berkaitan dengan  struktur  morfologi  dan  anatomi  daun tempuyung.  Pada  daun  vegetatif  memiliki  struktur yang  lebih  lunak  dan  tebal,  jaringan  penyusunnya sebagian  besar  berupa  parenkim,  sedangkan  daun generatif  strukturnya lebih  kaku dan kasar, jaringan sklerenkim  lebih  banyak  ditemukan  pada  organ  ini (Wahyuni et al ., 2019).
Jaringan  parenkim  lebih  mudah  membentuk kalus dibandingkan jaringan sklerenkimatis sehingga  pembentukan  kalus  dari  daun  vegetatif lebih mudah. Pada umumnya kemampuan pembentukkan  kalus  dari  jaringan  tergantung  dari, umur  fisiologi  dari  jaringan  waktu  diisolasi,  musim pada  waktu  bahan  tanaman  diisolasi,  bagian
tanaman  yang  dipakai,  dan  jenis  tanaman.  Kalus dapat  diinisiasi  dari  hampir  semua  bagian  tanaman, tetapi  organ  yang  berbeda  menunjukkan  kecepatan pembelahan sel yang berbeda pula.
Pada media MS0 dan BAP 0,5 ppm (D0B0.5) tidak  ada  pertumbuhan  kalus,  sedangkan  persentase pembentukan  kalus  pada  media  lainnya  mencapai 100%  dari  eksplan  yang  ditumbuhkan.  Pada
perlakuan  kontrol  (MS0),  kedua  eksplan  tidak tumbuh  kalus  dan  daun  hanya  melekuk.  Hal  ini disebabkan  medium  MS0  tidak  mengandung  ZPT atau  zat  organik  yang  dapat  menginduksi  kalus. Selain  itu  menurut  Gunawan  &  Mulyani  (2004) konsentrasi  hormon  endogen  dalam  tanaman  tidak mencukupi untuk pembentukan kalus.
Tabel 1. Waktu  pembentukan  kalus  dan  persentase  terbentuknya  kalus  tempuyung  dengan  hormon  2,4D  dan BAP pada eksplan daun vegetatif dan generatif
No. Perlakuan Waktu terbentuk kalus (hari ke-) Persentase pembentukan kalus (%) Daun vegetatif Daun generatif Daun vegetatif Daun generatif 1 MS0 0 0 0 0 2 D0B0,5 0 0 0 0 3 D0B1 14 14 100 100 4 D0,5B0 14 14 100 100 5 D0,5B0,5 14 14 100 100 6 D0,5B1 10 12 100 100 7 D1B0 10 10 100 100 8 D1B0,5 10 12 100 100 9 D1B1 10 12 100 100 Catatan:
D = 2,4 B = BAP
Induksi  kalus  pada  tanaman  tempuyung tergolong  cepat  yaitu  10  hari,  sama  halnya dalam  penelitian  Lizawati et  al . (2012)  yang menggunakan  hormon  2,4D  dan  BAP  dalam menginduksi  kalus  pada  daun  durian  dalam waktu  cepat  yaitu  8  hari.  Perlakuan  terbaik dalam  menginduksi  kalus  pada  kedua  eksplan terdapat  pada  perlakuan  2,4D  1  ppm  (D1B0) yaitu selama 10 hari. Secara umum pembentukan  kalus  dari  daun  vegetatif  lebih cepat  dibandingkan  dengan  daun  generatif. Setiap jenis eksplan dan tanaman yang berbeda
memberikan  respon  yang  berbeda  dalam induksi kalus (Marlin et al ., 2012).
Jumlah Kalus dan Morfologi Kalus
Tempuyung ( Sonchus arvensis L.)
Jumlah  kalus  yang  dihasilkan  dari  berbagai media  2,4D  dan  BAP  pada  eksplan  daun  vegetatif dan  generatif  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Hasil menunjukkan  bahwa  jumlah  kalus  yang  terbentuk dari  eksplan  daun  vegetatif  dan  generatif  pada minggu  ke-3  setelah  terbentuk  kalus  memiliki jumlah  yang  bervariasi.  Secara  umum  pada  kedua eksplan  menunjukkan  persentase  pembentukan kalus  yang  sama,  tetapi  jumlah  yang  dihasilkan berbeda.
Tabel 2. Jumlah kalus dan morfologi kalus tempuyung dengan hormon 2,4D dan BAP pada minggu ke-3
No. Perlakuan Jumlah kalus Deskripsi morfologi kalus Daun vegetatif Daun generatif Daun vegetatif Daun generatif 1 MS0 - - daun melekuk daun melekuk 2 D0B0.5 - - daun melekuk dan tumbuh tunas dari venasi daun melekuk dan tumbuh tunas dari venasi 3 D0B1 ++ + kalus putih kekuningan dan friable kalus putih kekuningan dan friable 4 D0.5B0 ++ + kalus kuning kecoklatan dan friable kalus kuning dan friable 5 D0.5B0.5 ++ + kalus kuning dan friable kalus kuning kecoklatan dan friable 6 D0.5B1 +++ ++ kalus kuning dan friable kalus kuning dan friable 7 D1B0 ++++ +++ kalus kuning dan friable kalus kuning dan friable 8 D1B0.5 +++++ ++++ kalus kuning dan friable kalus kuning dan friable 9 D1B1 ++++ +++ kalus kuning dan friable kalus kuning dan friable
Catatan: D = 2,4 D B = BAP
Morfologi  kalus  yang  terbentuk  pada  kedua eksplan  hampir  sama,  yaitu  sama-sama  memiliki tekstur  friabel  pada  semua  perlakuan.  Warna  kalus setiap  perlakuan  juga  bervariasi,  tetapi  sebagian besar berwarna kuning, hingga akhirnya mengalami pencoklatan  sebagai  tanda  kematian  jaringan  kalus. Eksplan pada mulanya mengalami penggembungan, setelah itu terjadi akumulasi fenol yang menyebabkan  warna  kuning  pada media, akumulasi fenol  dalam  jumlah  yang  banyak  dapat  merubah warna kalus menjadi coklat kehitaman. Warna kalus juga  dapat  mengindikasikan  kondisi  yang  berbeda- beda  pada  kalus.  Warna  kuning  cerah  menandakan kalus  yang  sehat,  warna  kemerahan  dan  kecoklatan menandakan  kalus  sudah  dewasa,  dan  warna  putih transparan  menunjukkan  kalus  embrionik.  Menurut Jannah et  al .  (2016)  perubahan  warna  kalus disebabkan  adanya  perbedaan  laju  pertumbuhan pada kalus. Tekstur kalus friable dikarenakan sel-sel penyusun  kalus  berupa  sel  parenkim  yang mempunyai  ikatan  yang  renggang  dengan  sel-sel lain, sehingga mudah remah.
Kalus dapat dihasilkan dari organ  yang telah dilukai,  di  dalam  media  yang  mengandung  hormon auksin dan sitokinin. Warna kalus dapat bermacam- macam  tergantung  dari  jenis  sumber  eksplan.  Pada umumnya untuk eksplan yang mempunyai kambium tidak  membutuhkan  penambahan  ZPT  untuk menginduksi  terbentuknya  kalus  karena  secara alamiah pada jaringan berkambium yang mengalami luka  akan  tumbuh  kalus  untuk  menutupi  luka  yang terbuka. Namun pada penelitian ini kalus tidak bisa diinduksi tanpa adanya hormon pertumbuhan.
Suatu sifat yang diamati dalam jaringan yang membentuk  kalus  adalah  bahwa  pembelahan  sel tidak  terjadi  pada  semua  sel  dalam  jaringan  asal, tetapi  hanya  sel  di  lapisan  perifer  yang  membelah terus  menerus,  sedangkan  sel-sel  yang  di  tengah tetap quiscent atau  diam.  Gambar  1  menunjukkan pertumbuhan  kalus  dimulai  dari  bagian  perifer  atau tepi, kemudian berkembangan ke bagian tengah.
Gambar 1. Perkembangan kalus daun vegetatif tempuyung pada media 2,4D 1 ppm + BAP 0,5 ppm selama 31 hari. A. Hari ke-10, B. Hari ke-17, C. Hari ke-24, D. Hari ke-31. Bar = 1 cm.
Perlakuan  BAP  0,5  ppm  dapat  menginduksi tunas pada bagian venasi, dikarenakan hormon BAP merupakan hormon sitokinin yang dapat menginduksi tunas pada jaringan tanaman dan pada konsentrasi 0,5 ppm secara tunggal dapat menginduksi  tunas  pada  tanaman  tempuyung. Pembentukan tunas terjadi pada kedua jenis eksplan, tetapi  jumlah  tunas  yang  terbentuk  lebih  banyak pada eksplan daun vegetatif. Menurut Wahyuningtyas et  al .  (2014),  morfogenesis  pada tanaman  tergantung  pada  jumlah  hormon  eksogen dan  endogen  pada  tanaman.  Perlakuan  BAP  1  ppm menginduksi  kalus  berwarna  kuning  keputihan dalam  jumlah  yang  sedikit  dan  pembentukannya lama,  sama  halnya  dengan  perlakuan  2,4D  0,5  ppm + BAP 0,5 ppm dan 2,4D 0,5 ppm.
Kalus  yang  dihasilkan  pada  perlakuan  2,4D 0,5 ppm+BAP 0,5 ppm berwarna kuning, sedangkan kalus  yang  dihasilkan  dari  perlakuan  2,4D  0,5  ppm lebih  mudah  mencoklat.  Perlakuan  2,4D  0,5  ppm  + BAP  1  ppm,  2,4D  1  ppm,  2,4D  1  ppm  +  BAP  0,5 ppm  dan  2,4D  1  ppm  +  BAP  1  ppm  sama-sama menghasilkan  kalus  berwarna  kuning  dan  waktu induksinya cepat. Sejalan dengan penelitian Amaniar  (2014),  kombinasi  hormon  2,4D  dan  BAP menghasilkan  kalus  dengan  warna  segar,  yaitu kuning  kehijauan,  Hal  ini  dikarenakan  adanya pigmen  dan  klorofil  pada  kalus  yang  dikultur  pada media kombinasi 2,4D dan BAP.
Menurut Karjadi & Buchory (2007), hormon auksin  dan  sitokinin  mempengaruhi  pertumbuhan
dan  morfogenesis  tumbuhan  dalam  kultur  sel, jaringan,  dan  organ  tanaman.  Interaksi  antar  ZPT yang diberikan dalam media dan diproduksi oleh sel secara endogen akan menentukan arah pertumbuhan.  Media  pertumbuhan  yang  diberikan penambahan  ZPT,  menyebabkan  kalus  dapat tumbuh  maksimal  setelah 31 hari atau  minggu ke-3 setelah terbentuknya kalus.
Hormon 2,4D memberikan pengaruh terhadap  perkembangan  sel  karena  auksin  dapat meningkatkan  permeabilitas  sel  (Wahyuningtyas et al .,  2014),  meningkatkan  sintesis  protein,  tekanan osmotik sel, plastisitas dan meningkatkan pengembangan dinding sel (Abidin, 1994). Hormon BAP  sebagai  sitokinin  berfungsi  dalam  sintesis protein dan pembelahan sel. Peningkatan pembelahan  sel  dan  sintesis  protein  mengakibatkan sel  berproliferasi  dengan  cepat  dan  meningkatkan volume sel, sehingga berat akan meningkat.
Eksplan  daun  vegetatif  menghasilkan  kalus yang  lebih  banyak  dibandingkan  dengan  eksplan daun  generatif.  Perlakuan  dengan  jumlah  kalus terbanyak  terdapat  pada  perlakuan  2,4D  1  ppm  + BAP  0.5  ppm  (D1B0.5),  hal  ini  dikarenakan  pada perlakuan  ini  perpaduan  komposisi  auksin  dan sitokinin  optimal  untuk  digunakan  sebagai  media pertumbuhan  kalus.  Hasil  ini  sesuai  dengan pendapat  Marlin et  al., (2012),  diperlukan konsentrasi  auksin  yang  tinggi  dalam  merangsang pembentukan kalus.
A B C D

## SIMPULAN
Kombinasi  hormon  2,4D  dan  BAP  dapat menginduksi  kalus  pada  eksplan  daun  tempuyung. Kalus  daun  yang  dihasilkan  bertekstur  vriabel  dan berwarna  kuning  hingga  kecoklatan.  Media  terbaik dalam  pertumbuhan  kalus  adalah  kombinasi  2,4D 0,5 ppm dan BAP 1 ppm karena menghasilkan kalus dalam waktu yang cepat, kalus segar dan berjumlah banyak,  dan  eksplan  terbaik  untuk  menginduksi kalus adalah daun vegetatif.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih diucapkan pada Fakultas Biologi  UGM  dan Bantuan  Operasional  Perguruan Tinggi  Negeri  (BOPTN),  yang  telah  memberikan fasilitas  dan  dana  penelitian  untuk  mendukung keberhasilan penelitian ini.

## DAFTAR REFERENSI
Abidin,  Z.  1994. Dasar-Dasar  Pengetahuan  Tentang  Zat Pengatur Tumbuh . Bandung: PT Angkasa : 85.
Adil,  M.,  Ren,  X.,  Kang,  D.I.,  Thi,  L.T.,  Jeong,  B.R. 2018.  Effect  of  explant  type  and  plant  growth regulators  on  callus  induction,  growth  and secondary  metabolites  production  in Cnidium officinale Makino. Molecular  Biology  Reports, 45(6): 1919-1927.
Aziz,  M.M.,  Ratnasari,  E.,  Rahayu,  Y.S.  2014.  Induksi kalus  umbi  iles-iles  ( Amorphophallus  muelleri ) dengan kombinasi 2,4-D dan BAP secara in vitro. Lentera Bio, 3(2): 109–114.
Delyan,  E.  2016.  Analysis  of  the  composition  of  volatile compounds of field sow thistle ( Sonchus arvensis L.) leaves using the method of gas chromatography  with  mass-detection. Pharm Inno, 5: 118-121.
Gunawan,  D.,  Mulyani,  S.  2004.  Ilmu  Obat  Alam (Farmakognosi)  Jilid  I.  Jakarta:  Penerbit  Penebar Swadaya.
Indah,  P.N.  dan  Ermavitalini,  D.  2013.  Induksi  daun nyamplung  ( Calophyllum  inophyllum Linn.)  pada beberapa kombinasi konsentrasi 6- benzylaminopurine (BAP) dan 2,4-
dichlorophenoxyacetic acid  (2,4-D). Jurnal Sains dan Seni Pomits , 2 (1): 2337-3520
Jannah,  R.,  Suwirmen,  Noli,  Z.A.  2016.  Pengaruh Pemberian Elisitor Cu 2+ terhadap Kalus Artemisia vulgaris dalam  Upaya  Penyediaan  Artemisinin sebagai  Antimalaria. Prosiding  Seminar  Nasional Masyarakat Biodiversitas Indonesia . 26
September 2016. Samarinda: 2(2): 155-158.
Karjadi, A.K. dan Buchory, A. 2008. Pengaruh komposisi media  dasar,  penambahan  BAP,  dan  pikloram terhadap  induksi  tunas  bawang  merah. Jurnal Hortikultura, 18(1):1-9.
Katno,  dan  Widiyastuti  Y.  2004.  Analisis  kualitatif kandungan  kimia  kalus Sonchus  arvensis L.  hasil pertumbuhan  secara  kultur  jaringan. Media Litbang Kesehatan , 14 (1).
Lizawati,  N  dan  Desfira,  R.  2012.  Induksi  kalus  eksplan daun  durian  ( Durio  zibethinus Murr.cv.  Selat Jambi) pada beberapa kombinasi 2,4-D dan BAP. Bioplantae , 1(1): 2302-6472.
Lumbanraja,  L.B.  2009. Skrining  Fitokima  dan  Uji  Efek Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Tempuyung ( Sonchus  arvensis L.) terhadap  Radang  pada Tikus .  [Skripsi]  Fakultas  Farmasi,  Universitas Sumatera Utara, Medan. [Indonesia].
Mahadi, I., Syafi’I, W., Sari, Y. 2016. Induksi kalus jeruk kasturi  menggunakan  hormon  2,4d  dan  BAP dengan metode in vitro. Jurnal Ilmu Pengetahuan Indonesia, 21(2):84-89.
Marlin,  Yulian,  Hermansyah.  2012.  Inisiasi  kalus embriogenik  pada  kultur  jantung  pisang  curup dengan  penambahan  sukrosa  ,  BAP  dan  2,4-D.
Jurnal Agrivor , 11 (2): 275-283.
Rumondang,  M,  Kusrini,  D.,  Fachriyah,  E.  2013.  Isolasi, identifikasi, dan uji antibakteri senyawa triterpenoid dari ekstrak n-heksana daun tempuyung  ( Sonchus  arvensis L.). Chem  Info, 1 (1): 56-164.
Shyamkumar,  B.,  Anjaneyulu,  C.,  Giri,  C.C.    2007. Genetic  transformation  of Terminalia  chebula Retz.  and  detection  of  tannin  in  transformed tissue. Current Science, 92 (3).
Sriningsih,  Adji,  H.W.,  Sumaryono,  W.,  Wibowo,  A.E., Caidir,  Firdayani,  Kusumaningrum,  S.,  dan Kartakusuma, P. 2012. Analisa Senyawa Golongan Flavonoid Herba Tempuyung ( Sonchus arvensis L.).  [Laporan  Penelitian].  Pusat  P2 Teknologi  Farmasi  dan  Medika  Deputi  Bidang TAB BPPT. Jakarta. [Indonesia].
Sukandar,  E.Y.  and  Safitri,  D.  2016.  Evaluation  of teratogenic effect of tempuyung ( Sonchus arvensis )  extract  on  Wistar  Rats. International Journal  of  Pharmacognosy  and  Phytochemical Research , 8(5):761-766.
Sulaksana,  J.,  Budi,  S.,  Dadang,  I.J.  2004. Tempuyung Budi  Daya  Dan  Pemanfaatan  Untuk  Obat . Cetakan pertama. Jakarta: Penerbit Swadaya . Utami,  P.  2008. Buku  Pintar  Tanaman  Obat  431  Jenis tanaman  Penggemar  Aneka  Penyakit .  Jakarta: Penerbit Agromedia Pustaka.
Winarto,  W.P.  2004. Tempuyung  Tanaman  Penghancur Batu Ginjal . Depok: Agromedia Pustaka.
Wahyuni, D.K, Rahayu, S., Purnama, P.R., Saputro, T.B., Suharyanto, Wijayanti, N., Purnobasuki, H. 2019. Morpho-anatomical structure and DNA barcode of Sonchus  arvensis L. Biodiversitas ,  20  (8):  2417- 2426.
Wahyuningtyas, L., Resmisari, R.S., Nashichuddin. 2014. Induksi  kalus  akasia  ( Acasia  mangium )  dengan penambahan  kombinasi  2,4D  dan  BAP  pada media  MS. Jurnal  Biologi  UIN  Maulana  Malik Ibrahim