## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SENYAWA PIRAZOLIN 3-(2- METOKSI-FENIL)-5-NAFTALEN-1-IL-4,5-DIHIDRO-1H-PIRAZOL
Nurlaili, Jasril, Hilwan Yuda Teruna
Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas  Riau e-mail : jasril.k@lecturer.unri.ac.id; Nurlaili@grad.unri.ac.id

## ABSTRACT
Pyrazoline  compounds  are  reported  to  have  many  useful  biological  activities  such  as  antimicrobials, antihyperglycemia,  antioxidants,  anti-inflammatory,  anticancer  and  anticonvulsants.  The  pyrazoline analogues  of 3-  (2-methoxy-phenyl)  -5-naphthalene-1-yl-4,5-dihydro-1H-pyrazol  were  synthesized  using glacial  acetic  acid  as  catalyst  and  assisted  by  microwave  irradiation.  The  structures  of  the  compounds were  obtainedby  UV,  IR  and  HRMS  spectroscopy  data.  Antioxidant  activity  test  using  DPPH  method showed that pyrazoline compound had IC 50 value of 27.41 μg/mL.
Keywords: Pyrazoline, microwave irradiation, characterization, antioxidant, DPPH.

## 1. PENDAHULUAN
Pirazolin  memilki  peran  penting  dalam berbagai  sintesis  senyawa  heterosiklik  lain seperti isoksazol, kuinolinon, tiadiazin, benzofuranon  dan  benzodiazepin  (Jayapal  dan Sreedhar,  2010)  serta  telah  digunakan  secara intensif  sebagai  farmakofor  dalam  mendesain obat-obatan  maupun  sinton  untuk  sintesis senyawa  organik  (Jaishree  dkk.,  2010). Pirazolin  diklasifikasikan  ke  dalam  golongan alkaloid tetapi jarang ditemukan di alam. Salah satu metode preparatif untuk sintesis pirazolin yang  umum  dikenal  adalah  reaksi  siklisasi antara  keton  α,  β  tak  jenuh  atau  keton  α,  β epoksi  dengan  hidrazin  dan  turunannya (Sakthinathan dkk., 2012).
Pirazolin merupakan senyawa heterosiklik  lingkar  lima  yang  memiliki  dua atom  nitrogen  saling  berdekatan  didalam cincinnya  dan  hanya  memiliki  satu  ikatan rangkap  endosiklik  (Bagade  dkk.,  2010). Pirazolin  banyak  digunakan  dalam  kehidupan sehari-hari  dan  memiliki  nilai  teraupetik  yang baik  (Arora  dkk.,  2012).  Pada  penelitian
sebelumnya  pirazolin  mempunyai  aktivitas biologi seperti antibakteri, antitumor, antikanker, antidiabetes, anti-inflamasi (Bagade  dkk.,  2010),  antidepresi,  antiamoeba dan antitubecular (Prasad dkk., 2010).
Pada  umumnya,  sintesis  senyawa pirazolin  dilakukan  dalam  2  tahap.  Tahap pertama  adalah  sintesis  senyawa  kalkon melalui  reaksi  kondensasi  aldol  menggunakan turunan  benzaldehid  dan  keton  sebagai starting  material dalam  suasana  asam  atau basa. Tahapan kedua, sintesis senyawa kalkon dengan  turunan  hidrazin  membentuk  senyawa pirazolin (Singh dkk., 2009). Sintesis senyawa pirazolin dapat dilakukan menggunakan katalis asam  atau  basa,  pemanasan,  pengadukan,  dan radiasi menggunakan gelombang mikro (Azarifar  dkk.,  2002).  Namun  beberapa  tahun terakhir  ini  penggunaan  energi microwave dalam  reaksi  organik  sangat  populer  karena lebih aman, ramah lingkungan ( green chemistry ),  cepat  dan  menghasilkan  produk yang  lebih  banyak  dibandingkan  metode konvensional.
Senyawa pirazolin hasil sintesis dikarakterisasi  berdasarkan  interpretasi  data spektroskopi  UV,  IR  dan  HRMS  kemudian dilakukan  ujiaktivitas  antioksidan  dengan menggunakan  metode  DPPH  ( 2,2-diphenyl-1- picryl  hydrazyl )  yang  merupakan  radikal sintetik  yang  larut  dalam  pelarut  polar  seperti metanol.  Senyawa  antioksidan  akan  bereaksi dengan  senyawa  radikal  DPPH  melalui mekanisme donasi atom hidrogen dan menyebabkan  terjadinya  perubahan  warna DPPH  dari  ungu  kekuning  pada  panjang gelombang  517  nm  (Hanari  dkk.,  2005). Senyawa  antioksidan  memiliki  peran  yang sangat  penting  dalam  kesehatan.  Berbagai bukti  ilmiah  menunjukkan  bahwa  senyawa antioksidan mengurangi resiko terhadap penyakit  kronis  seperti  kanker  dan  penyakit jantung.  Karakter  utama  senyawa  antioksidan adalah  kemampuannya  untuk  menangkap radikal bebas (Prakash, 2001).

## 2. METODOLOGI PENELITIAN Alat dan bahan
Alat-alat yang digunakan yaitu satu set peralatan  destilasi,  neraca  analitik,  ultrasonik (Ney ® ), oven microwave (Samsung  ME109F), tabung reaksi bertutup, kertas saring Whatmann,  pompa  vakum,  corong buchner , chamber,  termometer,  alat  penentu  titik  leleh Fisher John , lampu UV (Camag  254 dan 366 nm)  model  UVL-56,  spektrofotometer  UV- Visible  (Genesys  10S  UV-VIS  v4.002 2L9N175013),  spektrofotometer  IR  (FTIR Shimadzu, IR Prestige-21), spektroskopi NMR (Agilent  500  MHz),  HPLC  (Shimadzu  LC Solution),  serta  alat  gelas  yang  umum digunakan  untuk  sintesis,  uji  toksisitas  dan  di Laboratorium Kimia FMIPA-UR sesuai dengan prosedur kerja.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah 1-naftaldehid (Merck), 2- metoksi  asetofenon  (Merck),  etanol  absolut (Merk),  natrium  hidroksida,  asam  klorida
(Merck),  hidrazin  hidrat  (Merck),  asam  asetat glasial  (Merck),  indikator  universal,  plat  KLT GF 254 ,  aqua  DM,  aluminium  foil, n -heksan, etilasetat,  metanol,  diklorometan,  kloroform, larva  udang,  air  laut,  dimetil  sulfoksida,  dan lain sebagainya.

## Sintesis senyawa pirazolin
Senyawa  kalkon  (0,288  g  ;  1  mmol) dan  10  mL  etanol  absolut  masing-masing dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  bertutup, kemudian kalkon dilarutkan dengan menggunakan  ultrasonikasi  sampai  homogen. Setelah  itu,  ditambahkan  hidrazin  (0,6  g,  12 mmol) lalu dihomogenkan. Campuran tersebut ditambahkan  10  tetes  asam  asetat  glasial kemudian  diiradiasi  menggunakan microwave dengan daya 180 Watt selama 4 menit. Kontrol reaksi  dilakukan  setiap  1  menit  menggunakan KLT.  Setelah  reaksi  selesai,  campuran didiamkan  hingga  terbentuk  endapan.  Padatan yang  terbentuk  disaring  menggunakan  corong buchner dan  dicuci  dengan  metanol  dingin kemudian divakum hingga kering, pengeringan  dilakukan  pada  suhu  ruang. Selanjutnya  senyawa  yang  diperoleh  diuji kemurniannya  dengan  KLT,  pengukuran  titik leleh dan HPLC.

## Uji aktivitas antioksidan
Senyawa murni yang dihasilkan dilanjutkan  dengan  uji  aktivitas  sebagai antioksidan. Pada uji ini menggunakan metode DPPH ( 2,2-diphenyl-1-picryl hydrazyl ). Sebelumnya  larutan  induk  dibuat  dengan melarutkan  sampel  sebanyak  2  mg  dalam  2 mL  metanol  (konsentrasi  sampel  diperoleh 1000  µg/mL).  Sebanyak  100  µL  sampel dimasukkan  ke  dalam microplate baris  A (plate terdiri dari A-H masing-masing berjumlah 12 sumur).
Sebanyak  50  µL  metanol  dimasukkan pada  masing-masing  sumur  pada  baris  B-F. Baris  A  dipipet  sebanyak  50  µL  dan
dimasukkan  ke  baris  B,baris  B  dipipet  50 µLdimasukkan ke baris C, dan baris C dipipet 50  µL  dimasukkan  ke  baris  D,  hal  yang  sama dilakukan  sampai  baris  F.  Selanjutnya  ketika sampai  di  baris  F  dipipet  50  µL  lalu  dibuang, sehingga  didapatkan  konsentrasi  1000  µg/mL, 500  µg/mL,  250  µg/mL,  125  µg/mL, 62,5µg/mL,  dan  31,25µg/mL  sedangkan  pada baris  G-H  diisi  dengan  metanol  50  µL.  Baris
A-H  ditambahkan  dengan  DPPH  80  µg/mL sebanyak 80 µL. Setelah itu diinkubasi selama 30  menit.  Aktivitas  penangkapan  radikal diukur  sebagai  penurunan  absorbansi  DPPH dengan microplate reader dan olah data.Aktivitas  antioksidan  sampel  ditentukan oleh besarnya hambatan serapan radikal DPPH melalui perhitungan persentase inhibisi serapan DPPH dengan menggunakan rumus : % Inhibisi         = % 100 . . .   Kontrol Abs Sampel Abs Kontrol Abs

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Senyawa  analog  pirazolin  yaitu  3-(2- metoksi-fenil)-5-naftalen-1-il-4,5-dihidro-1 H - pirazol  disintesis  melalui  reaksi  kondensasi aldol  antara  kalkon  dengan  dua  senyawa turunan hidrazin yaitu hidrazin hidrat menggunakan  katalis  asam  asetat  glasial  di bawah  kondisi  iradiasi  gelombang  mikro dengan  daya  180  Watt  selama  4  menit. Senyawa  yang  diperoleh  berupa  kristal  putih dengan hasil rendemen yang memuaskan.
Senyawa analog pirazolin yang diperoleh  tanpa  dilakukan  proses  pemurnian karena  berdasarkan  uji  KLT  senyawa  ini  satu noda dan berdasarkan uji titik leleh range titik leleh  dari  senyawa  ini  2  derajat  yang menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut  sudah murni.  Senyawa  yang  murni  dikarakterisasi menggunakan  spektroskopi  UV,  FTIR,  dan HRMS.
Skema  reaksi  sintesis  senyawa  analog pirazolin  secara  umum  diperlihatkan  pada Gambar  1 dan  reaksi  pembentukan  senyawa pirazolin  dari  kalkon  dan  hidrazin  hidrat diperlihatkan  pada Gambar  2 .  Senyawa analog  pirazolin  diuji  dengan  KLT  dan menunjukkan  satu  noda,  selisih  titik  leleh  2,
maka  disimpulkan  senyawa  tersebut  murni. Selanjutnya,  senyawa  diidentifikasi  dengan spektroskopi UV, FTIR, dan HRMS. Spektrum UV senyawa pirazolin memperlihatkan serapan maksimum pada 222 nm dan 296 nm, hal ini menunjukkan bahwa senyawa pirazolin tersebut memiliki ikatan rangkap terkonjugasi.
Hasil analisis spektroskopi FTIR menunjukkan  munculnya  beberapa  puncak yang  menunjukkan  vibrasi  ikatan  yang  khas untuk  senyawa  pirazolin.  Spektrum  IR senyawa menunjukkan adanya serapan maksimum  pada  bilangan  gelombang  3363 cm -1 yang  mengindikasikan  adanya  vibrasi streching gugus  N-H  aromatik  ( strong );
bilangan gelombang 1596 cm -1
mengindikasikan adanya streching gugus C=N ( strong ). Pada bilangan gelombang 3048 cm -1 , 3007  cm -1 ,  1509  cm -1 dan  1336  cm -1 menunjukkan adanya vibrasi ikatan dari gugus C-H aromatik, C-H alifatik, C=C aromatik, C- N,  dan  pada  bilangan  gelombang  1239  cm -1 mengindikasikan  adanya  gugus  C-OCH 3 ( strong ).
Gambar 1. Reaksi sintesis senyawa pirazolin
Gambar 2 . Reaksi pembentukan senyawa pirazolin dari kalkon dan hidrazin hidrat
Spektrum HRMS dari senyawa pirazolin terukur sebagai [M + H] + dengan m/z 303,1492  dengan  kelimpahan  100%.  Massa terhitung  dari  senyawa  yang  diharapkan menunjukkan  [M  +  H] + =  303,1497  dan memiliki  selisih  yang  kecil  yaitu  0,0005 dengan rumus molekul C 20 H 18 ON 2 .
Berdasarkan hasil
uji aktivitas
antioksidan  menggunakan  metode  DPPH
senyawa  pirazolin  hasil  sintesis  memiliki aktivitas  sebagai  antioksidan.    Hal  ini dikarenakan senyawa pirazolin tersebut memiliki nilai IC 50 <100  μg/mL  yang dikategorikan bersifat aktif sebagai antioksidan  yang  dapat  menghambat  radikal DPPH.
Senyawa Struktur Senyawa Nilai IC 50 (µg/mL) Pirazolin 27,41

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan,  maka  dapat  diambil  kesimpulan bahwa  sintesis  senyawa  pirazolin  3-(2- metoksi-fenil)-5-naftalen-1-il-4,5-dihidro-1 H - pirazol dari kalkon dengan hidrazin
menggunakan iradiasi gelombang mikro
dengan katalis asam asetat glasial menghasilkan persen rendemen yang memuaskan.  Hasil  karakterisasi  menggunakan spektroskopi UV, FT-IR dan HR-MS menunjukkan bahwa struktur molekul senyawa hasil  sintesis  sesuai  dengan  struktur  molekul target.  Uji  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode  DPPH  menunjukkan  bahwa  senyawa pirazolin  bersifat  aktif  antioksidan  dengan nilai IC 50 sebesar 21,41 µg/mL.

## SARAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan,  maka  dapat  diberikan  saran  untuk penelitian selanjutnya yaitu modifikasi struktur dengan  menambahkan  substituen  lainnya selain  gugus  metoksi  baik  pada  cincin  fenil ataupun  pada  cincin  naftalen  mengingat potensi  yang  ada  pada  senyawa  ini.  Selain  itu perlu dilakukan uji bioaktivitas lainnya seperti antiinflamasi,  antimikroba,  antimalaria,  dan lain  sebagainya  guna  memperoleh  informasi potensi pemanfaatan senyawa lebih luas.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  kepada  Prof.  Dr. Jasril,  MS  dan  Dr.  Hilwan  Yuda  Teruna,  M. Si,  Apt  yang  telah  membimbing  penulis  dari awal hingga terselesaikannya penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Arora,  P.,  Arora,  V.,  &  Lamba,  H.  S.  2012.
Synthesis  and  Biological  Activities  of Some  3,5  Disubstituted  Pyrazoline Derivatives of 2-acetylnaphthalene. International  Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical  Sciences . 4 (4)  :  303-
306.
Azarifar,  D  &  Shaebanzadeh.  2002.  Synthesis and characterization of new 3,5- dinaphtyl  substituted  2-pyrazolines  and study  of  their  antimicrobial  activity.
Molecules. 7 : 885-895.
Bagade, S.  B., Chovatia, Y. S.,  Gandhi,  S. P.,
&  Gorde,  P.  L.  2010.  Synthesis  and Antibacterial Activity of Some Pyrazoline Derivatives. Oriental Journal of Chemistry . 26 (1) : 275-278.
Jaishree, D.M., Manoja, S.C., Balsere, N.G., & Rajput,  P.R.  2010.  Synthesis  and  Study of  Chlorosubstituted  4-Aroyl  and  4- Alkoyl-Pyrazolines, Pyrazoles and Their Effect on Some Flowering Plants. Indian Journal of Chemistry . 49 : 505-555.
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antioksidan senyawa pirazolin hasil sintesis.
Jayapal,  M.R.,  &  Sreedhar,  N.Y.  2010.
Anhydrous  K 2 CO 3 as  Catalyst  for  the Synthesis of Chalcones Under Microwave Irradiation . Journal of Pharmaceutical  Science  and  Research.
2 (10): 644-647.
Prakash,  A.  2001.  Antioxidant  Activity.
Medalion Laboratories Analitical
Progress . 19 (2).
Prasad,  Y.  R.,  Raharman,  S.  H.,  Kumar, Phani.,  &  Bhuvaneswari,  K.  2010. Synthesis and Antihisteminac Activity of
Novel Pyrazoline Derivatives.
International  Journal  of  ChemTech
Research . 11 (2) : 16-20.
Sakthinathan,  S.P.,  Vanangamudi,  G.,  & Thirunarayanan,  G.  2012.  Synthesis, Spectral  Studies  and  Antimicrobial
Activities of Some 2-Naphthyl Pyrazoline Derivatives. Elsevier Journal . 95 : 693-700.
Singh,  P.,  Negi,  J.S.,  Pant,  G.J.,  Rawat, M.S.M. &  Budakoti,  A. 2009. Synthesis and  characterization  of  a  novel  2- pyrazolin. Open Access Molbank M614.