pISSN : 2355-9942, eISSN:2656-792X
Terakreditasi Nasional, Dirjen Pendidikan Tinggi, Riset, dan Teknologi Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi RI
S.K. No. 105/E/KPT/2022 Received: 24 November 2022, Accepted: 29 Maret 2023 Published online: 18 Juni 2023 DOI: https://doi.org/10.35508/nukleus.v10i1.8930 https://ejurnal.undana.ac.id/index.php/nukleus/article/view/8930

## PENGARUH BREED TERHADAP MOTILITAS SPERMA SAPI LOKAL INDONESIA DAN Bos taurus DI BALAI INSEMINASI BUATAN
(Effect breeds on sperm motility of indonesian local bulls and bos taurus at Artificial Insemination Center)
M. Hasan 1 , A. Rahmi 2* , R. Handarini 2 , T. Maulana 3 , S. Said 3 , E.M. Kaiin 3 , A. Baharun 2 1 Mahasiswa Program Studi Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Djuanda, Jl. Tol Jagorawi No.1, Ciawi, Bogor 16680, Indonesia
2 Program Studi Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Djuanda, Jl. Tol Jagorawi No.1, Ciawi, Bogor 16680, Indonesia
3 Pusat Riset Zoologi Terapan, Badan Riset dan Inovasi (BRIN), Cibinong, Jl. Raya Jakarta-Bogor, Cibinong, Bogor 16911, Indonesia
* Correspondent author, email: annisa.rahmi@unida.ac.id

## ABSTRAK
Upaya untuk meningkatkan pengembangan ternak lokal dapat dilakukan melalui penerapan teknologi inseminasi buatan  (IB)  dengan  memanfaatkan  semen  beku.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  pengaruh  breed terhadap motilitas sperma semen beku sapi madura, sapi bali, dan Bos taurus  di Balai Besar Inseminasi Buatan (BBIB)  Singosari.  Penelitian  ini  menggunakan  semen beku  bangsa  pejantan  sapi  lokal  (sapi  madura  dan  sapi bali)  dan  sapi  Bos  taurus  (sapi  simental  dan  sapi  limousin)  yang  diproduksi  oleh  BBIB  Singosari.  Evaluasi motilitas  spermatozoa  menggunakan  computer  assisted  sperm  analysis  (CASA,  Spermvision,  Minitube®, Germany).  Analisis  data  dilakukan  secara  umum  berdasarkan  model  linear,  one-way  ANOVA  menggunakan software  SPSS  versi  26.  Uji  lanjut  dilakukan  menggunakan  Duncan’s  multiple  range  test  (DMRT)  untuk menentukan  perbedaan  antar  paramater.  Hasil  penelitian  menunjukkan  parameter  total  motility  (TM)  dan progresive  motility  (PM)    sperma  semen  beku  menunjukkan  hasil  berturut-turut  sebesar  63,89±1,72%  dan 54,38±4,39% (sapi madura), 51,48±3,30% dan 42,47±5,48% (sapi bali), 58,21±1,13% dan 44,38±3,15% (sapi simental), serta 58,12±1,64% dan 51,49±3,03% (sapi limousin). Parameter PM sperma semen beku bangsa sapi lokal (sapi madura dan sapi bali) maupun sapi Bos taurus (sapi simental dan sapi limousin) tidak menunjukkan perbedaan  (P>0.05)  motilitas  sperma.  Kualitas  semen  beku  (motilitas  sperma)  pada  semua  pejantan  dalam penelitian  ini  sesuai  dengan  Standar  Nasional  Indonesia  (SNI)  semen  beku  sapi  dan  layak  untuk  digunakan dalam program IB.
Kata-kata kunci: jenis sapi, Bos taurus, sapi lokal, motilitas sperma

## ABSTRACT
The attempt to achieved the goal could be through using artificial insemination (AI) by frozen semen. This study aims to evaluate the effect of the breed on sperm motility using Madura, Bali bulls and Bos taurus frozen semen. The experiment used local bull frozen semen (Madura and Bali bull breeds) and Bos taurus bull (Simmental and Limousin  breeds)  produced  by  Singosari’s  artificial  insemination  center.  Sperm  motility  evaluation  was conducted using computer-assisted sperm analysis (CASA, Spermvision, Minitube®, Germany). The analyzing data uses a generalized linear model, one- way ANOVA using the SPSS 26 software. Duncan’s multiple range test (DMRT) was used to determine  any significant differences. The result shows for total motility (TM) and progressive  motility  (PM)  are  63.89±1.72% and  54.38±4.39%  (Madura  bull), 51.48±3.30%  and  42.47±5.48% (Bali bull), 58.21±1.13% and 44.38±3.15% (Simmental bull), also 58.12±1.64% and 51.49±3.03% (Limousin bull). There is no differential sperm motility (P>0.005) in both parameters for all breeds. All frozen semen used in this study qualifies with Indonesian National Standards and is approved for use in the artificial insemination program.
Keywords: bull breeds, Bos taurus, local bulls, sperm motility

## PENDAHULUAN
Pengembangan  potensi  genetik  plasma nutfah  ternak  sapi  lokal  Indonesia  perlu dipertahankan  eksistensinya  (Baharun et  al ., 2017)  untuk  mencapai  swasembada  daging nasional  tahun  2026.  Salah  satu  upaya pengembangan  ternak  lokal  dapat  dilakukan melalui  penerapan  teknologi  inseminasi  buatan (IB)  dengan  memanfaatkan  semen  beku (Ristiani et  al .,  2020).  Penyediaan  semen  beku yang berkualitas dari pejantan diperlukan untuk meningkatkan produktivitas ternak guna menghasilkan  keturunan  dengan  fertilitas  yang tinggi  (Kaya  dan  Memili  2016).  Kualitas  dan produksi  semen  dipengaruhi  oleh  berbagai faktor  seperti  genetik,  pakan,  temperatur, musim,  frekuensi  ejakulasi,  umur  (Baharun et al .,  2021),  bobot  badan  dan breed pejantan (Novianti et  al .,  2020).  Semen  dengan  kualitas baik dihasilkan mulai dari produksi semen segar di  Balai  Inseminasi  Buatan  (BIB)  dan  diproses menjadi  semen  beku  sesuai  dengan  standar operasional  prosedur  (SOP)  BIB  (Raafi et  al ., 2021)  untuk  menjamin  kualitasnya  tetap dipertahankan selama dalam proses penyimpanan.
Penilaian  kualitas  semen  beku  dapat dilakukan  melalui  pengukuran  multiparametrik yang  berhubungan  dengan  kemampuan  sperma bertahan  hidup  dalam  proses  pembekuan ( freezing capability ) untuk dapat
mempertahankan motilitas sperma pasca
pembekuan  (Baharun et  al .,  2017).  Motilitas sperma merupakan salah satu parameter penting dalam  menentukan  kualitas  semen  beku. Beberapa  penelitian  menunjukkan  penurunan motilitas sperma semen beku dapat berhubungan dengan teknik pembekuan, jenis dan konsentrasi krioprotektan  (Herbowo et  al .,  2019),  jenis bahan  pengencer  (Baharun et  al .,  2017),  umur pejantan  (Baharun et  al .,  2021),  dan  pengaruh individu  (Indriastuti et  al .,  2020)  termasuk bangsa pejantan (Novianti et al ., 2020).
Pemanfaatan dan produksi semen beku di BIB nasional maupun BIB daerah berfokus pada sapi lokal maupun sapi eksotik (sapi Bos taurus ) (Baharun et al ., 2021) yang berhubungan dengan produksi  sperma.  Komposisi  membran  plasma antar  bangsa  ternak  berbeda-beda  yang  dapat mempengaruhi  freezing  capability  pada  saat  di thawing  (Zamuna et  al .,  2015).  Perbedaan komponen dan karakteristik sperma pada bangsa ternak  memungkinkan  dapat  berefek  terhadap kualitas  semen  beku  yang  diproduksi.  Oleh karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  dapat membandingkan  motilitas  sperma  semen  beku pada sapi lokal Indonesia (sapi madura dan sapi bali) dengan sapi Bos taurus di BBIB Singosari. Penelitian  ini  diharapkan  sebagai  informasi dalam  menentukan  kualitas  semen  beku (motilitas sperma) untuk program aplikasi IB di masyarakat.

## METODE PENELITIAN
Pengujian sampel dilakukan di Laboratorium  Reproduksi,  Pusat  Riset  Zoologi Terapan  Badan  Riset  dan  Inovasi  Nasional (BRIN)  selama  dua  bulan  (Agustus-September 2022). Penampungan semen dan produksi semen beku  di  BBIB  Singosari  dilakukan  berdasarkan Standar Operasional Prosedur (SOP), yaitu SNI ISO 9001:2015 No. G.01-ID0139-VIII-2019 dan dalam  pengawasan  dokter  hewan.  Setiap  tahap dalam  penelitian  ini  mempertimbangkan  aspek kesejahteraan hewan. Penelitian ini menggunakan  sampel  semen  beku  yang diperoleh  dari  serangkaian  proses,  termasuk proses  penampungan  semen  dari  pejantan menggunakan  vagina  buatan,  yang  tidak mempengaruhi proses fisiologis normal.
Masing-masing  dua  buah  straw  (batch produksi yang berbeda) semen beku dari 4 ekor pejantan  (sapi  madura,  sapi  bali,  sapi  simental,
dan  sapi  limousin)  dengan  kode  produksi  yang tersedia dari BBIB Singosari. Pencairan kembali (thawing)  semen  beku  dilakukan  dalam  water bath (37oC, 30 detik).
Penilian  motilitas  sperma  dilakukan menggunakan computer assisted sperm analysis (CASA, Tiefenbach, Minitub®, Germany), yang dihubungkan  dengan  Carl  Zeiss  Microimaging GmbH (Gottingen, Germany) dilengkapi dengan penghangat dengan suhu 38 oC. Aliquots (6 µL) sampel  semen  diteteskan  pada  object  glass  dan ditutup  menggunakan  cover  glass.  Pengamatan kinematika  sperma  dilakukan  pada  7500-1000 sel  sperma  dari  total  lima  lapang  pandang menggunakan  software  Sperm  Vision®  dengan pengaturan khusus untuk sperma sapi. Parameter yang  dievaluasi  khusus  total  motility  (TM)  dan progressive motility (PM).
Analisis  data  dilakukan  secara  umum berdasarkan  model  linear,  one-way  ANOVA menggunakan software SPSS versi 26. Uji lanjut
dilakukan  menggu nakan  Duncan’s  multiple range  test  (DMRT)  untuk  menentukan perbedaan antar paramater.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  tidak terdapat  perbedaan  (P>0.05)  motilitas  sperma semen beku pada bangsa sapi lokal dan sapi Bos taurus .  Parameter  TM  dan  PM  sperma  semen beku  menunjukkan  hasil  berturut-turut  sebesar 63,89±1,72%  dan  54,38±4,39%  (sapi  madura), 51,48±3,30%  dan  42,47±5,48%  (sapi  bali), 58,21±1,13%  dan  44,38±3,15%  (sapi  simental), serta  58,12±1,64%  dan  51,49±3,03%  (sapi limousin)  (Tabel  1).  Hasil  penelitian  ini  masih sesui  dengan  Standar  Nasional  Indonesia  (SNI) semen  beku  sapi  (SNI  nomor:  4869.1:2017) (BSN,  2021)  dan  Peraturan  Menteri  Pertanian Republik Indonesia (nomor: 10/Permentan/PK.210/3/2016) semen beku sapi, serta  sama  dengan  nilai  persentase  motilitas spermatozoa pada sapi lokal (Raafi et al ., 2021) dan sapi Bos taurus (sapi simental) (Baharun et al ., 2022).
Motilitas  sperma  merupakan  aspek penting dalam menentukan proses fertilisasi dan berpengaruh  pada  perkembangan  embrio (Rodriguez-Villamil et  al .,  2016).  Pergerakan motilitas  sperma  (kinematika)  berhubungan dengan  ketersediaan  energi  melalui cyclic adenosine  monophosphate (cAMP)  dan protein kinase A signaling pathway yang diatur melalui mekanisme cyclic adenosine monophosphate / protein  kinase -A  (cAMP/PKA) (Qu et al ., 2007).
Penilaian  molititas  sperma  merupakan metode  penilian  yang  paling  umum  digunakan untuk menilai kualitas semen oleh produsen dan berhubungan  dengan  fertilitas  ( O’Meara et  al ., 2022).  Adanya  keterbatasan  penilian  motilitas sperma  yang  dilakukan  oleh  produsen  masih menggunakan  penilaian  secara  subyektif, sehingga berpengaruh pada variasi hasil fertilitas di  lapangan.  Penggunaan  sistem  komputer (CASA)  untuk  menilai  motilitas  sperma dilakukan  guna  memastikan  kualitas  semen khususnya semen beku untuk dapat menentukan pola  gerakan  spermatozoa  yang  memungkinkan berhubungan  dengan  proses  fertilisasi  maupun fertilitas  pejantan  di  lapangan  ( O’Meara et  al ., 2022).
Pola  pergerakan  sperma  merupakan ukuran  yang  menunjukkan  seberapa  cepat
sperma bergerak, yang dinyatakan dalam satuan µm/detik.  Kecepatan  pergerakan  sperma  dari breed sapi  lokal  dan  sapi Bos  taurus dihitung dan  dianalisis  menggunakan  CASA  (Tabel  1). Hasil penelitian menunjukkan pola gerak sperma pada  semua  pejantan  (sapi  madura,  sapi  bali, sapi  simental,  dan  sapi  limousin)  tidak menunjukkan  perbedaan  (P>0,05).  Penilaian pola  gerak  sperma  semen  beku  menggunakan CASA  pada  penelitian  ini  menunjukkan  hasil yang  sama  dengan  yang  dilaporkan  oleh Diansyah et  al .  (2022)  pada  sapi  bali.  Tekin et al .  (2022)  melaporan  bahwa  pola  gerak  sperma seperti  parameter Linearity (LIN), Wobble (WOB), Amplitude of lateral head displacement (ALH),  dan Beat/cross  frequency (BCF) merupakan  parameter  yang  sama  pentingnya dengan  motilitas  dan  perlu  dipertimbangkan untuk  menilai  fertilitas  pejantan  berdasarkan gerakan  kinetikanya.  Aspek  kinetika  sperma berkaitan  dengan  fertilitas  untuk  menentukan waktu dan keberhasilan fertilisasi dalam saluran reproduksi betina  (Tekin et  al .,  2022).  Evaluasi kualitas semen beku menggunakan CASA dapat memprediksi  kemampuan  fertilitas  sperma ( O’Meara et  al .,  2022).  Fertilitas  merupakan kemampuan  sperma  untuk  dapat  membuahi  sel telur sampai dengan mempertahankan perkembangan  embrio  (Rodriguez-Villamil et al ., 2016).
Motilitas  sperma  merupakan  salah  satu karakteristik  penting  dari  kualitas  semen  yang dapat  mempengaruhi  fertilitas  pejantan.  Hasil penelitian  menunjukkan  tidak  ada  pengaruh (P>0.05) breed terhadap motilitas sperma semen beku pada semua pejantan yang digunakan baik sapi  lokal  (sapi  madura  dan  sapi  bali)  dan  sapi Bos  taurus (sapi  simental  dan  sapi  limousin) (Tabel  2).  Beberapa  laporan  menunjukkan bahwa  rata-rata  motilitas  sperma  semen  beku sapi  lokal  Indonesia  seperti  sapi  madura (45,57%)  (Rosyada et  al .,  2021)  dan  sapi  bali (44,79%) (Asni et al ., 2022), maupun sapi lokal lainnya  seperti  sapi  pasundan  (49,14%) (Baharun et  al .,  2017)  sama  dengan  penelitian ini.
Tabel 1. Motilitas sperma sapi lokal Indonesia dan sapi Bos taurus menggunakan CASA
Parameter Breed Sapi Madura Bali Simental Limousin Total Motile (%) 63,89±1,72 a 51,48±3,30 a 58,21±1,13 a 58,12±1,64 a Progressive (%) 54,38±4,39 a 42,47±5,48 a 44,38±3,15 a 51,49±3,03 a DAP (µm) 33,52±2,63 a 27,64±4,64 a 30,87±2,80 a 35,11±2,75 a DCL (µm) 52,2±4,56 a 40,54±7,88 a 44,74±3,67 a 55,72±10,05 a DSL (µm) 23,87±2,98 a 19,33±4,23 a 22,01±2,44 a 22,40±1,96 a VAP (µm/s) 75,30±5,93 a 65,17±8,58 a 72,37±6,04 a 82,04±6,02 a VCL (µm/s) 116,95±10,16 a 95,07±15,21 a 104,55±8,06 a 129,45±10,05 a VSL (µm/s) 53,72±6,67 a 45,61±8,12 a 51,79±5,24 a 52,57±3,97 a STR (VSL/VAP) 0,71±0,06 a 0,69±0,03 a 0,71±0,01 a 0,63±0,03 a LIN (%) 0,45±0,06 a 0,47±0,02 a 0,49±0,02 a 0,40±0,02 a WOB (%) 0,64±0,04 a 0,68±0,02 a 0,68±0,02 a 0,62±0,01 a ALH (µm) 5,07±0,67 a 4,64±0,48 a 5,56±0,46 a 6,22±0,22 a BCF (Hz) 28,14±2.47 a 24,40±4,48 a 26,07±2,00 a 26,28±1,72 a
DAP: Average  path distance ;  DCL: Curved  line  distance ;  VAP: Average-path  velocity ;  VCL: Curvilinear  velocity ;  VSL: Straight-line  velocity ;  STR: Straightness ;  LIN: Linearity ;  WOB: Wobble ;  ALH: Amplitude  of  lateral  head  displacement ; BCF: Beat/cross frequency ; huruf yang sama pada baris yang sama menunjukkan berbeda tidak nyata (P>0,05).
Rentang  PM  dalam  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  semua  pejantan  memiliki kemampuan  yang  baik  untuk  bertahan  dalam proses  pembekuan  ( freezing  capability )  (Tabel 2).  Hal  ini  memungkinkan  dipengaruhi  oleh kemampuan  membran  sperma  untuk  dapat melindungi seluruh komponen sel dan merespon tekanan osmotik ekstraselular selama kriopreservasi  (Mughal et  al .,  2017).  Membran plasma  sperma  berperan  penting  dalam pengaturan  ion  kalsium,  kalium,  dan  natrium yang diperlukan untuk aktivitas mitokondria dan
pergerakan  (motilitas)  sperma  (Khalil et  al ., 2018). Perbedaan morfologi mitokondria sperma juga  dapat  memengaruhi  perubahan  struktur mitokondria  selama  kriopreservasi,  yang  dapat menyebabkan  penurunan  fungsi  mitokondria dalam  menghasilkan  ATP  untuk  pergerakan sperma (Islam et al ., 2021). Hasil penelitian ini dapat  menjelaskan  bahwa  penggunaan  semen beku  sapi  lokal  (sapi  madura  dan  sapi  bali) maupun sapi Bos taurus (simental dan limousin) untuk  program  IB  memiliki  kualitas  semen (motilitas sperma) yang sama baiknya.
Tabel 2. Pengaruh bangsa sapi terhadap motilitas sperma semen beku
Breed Rata-rata±SD (%) P-value Madura 54,38±4,39 a 0,106 Bali 42,47±5,48 a 0,230 Simental 44,38±3,15 a 0,112 Limousin 51,49±3,03 a 0,097
Huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan berbeda tidak nyata (P>0,05)

## SIMPULAN
Motilitas  spema  semen  beku  sapi  lokal Indonesia  (sapi  madura  dan  sapi  bali)  dan  sapi Bos  taurus  (sapi  simental dan  sapi  limousin)  di
BBIB  Singosari  memiliki  kualitas  yang  sama baiknya, sehingga layak untuk digunakan dalam program IB.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lanjutan terkait faktor intrinsik dan ekstrinsik sperma yang dapat mempengaruhi motilitas sperma sapi lokal (sapi
madura dan sapi bali) serta sapi Bos taurus (sapi simental  dan  sapi  limousin)  yang  berhubungan dengan fertilitas.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  Lembaga Penelitian  dan  Pengabdian  Masyarakat  (LPPM) Universitas  Djuanda  dengan  nomor  kontrak 1052/01/K-X/IX/2022.  Apresiasi  dan  ucapan terima  kasih  juga  disampaikan  kepada  Tim
Peneliti  dari  Pusat  Riset  Zoologi  Terapan, Kelompok  Riset  Repronomik  Hewan,  Badan Riset  dan  Inovasi  Nasional  (BRIN),  Cibinong yang  telah  mendukung  dan  mengizinkan kegiatan ini dilakukan.

## DAFTAR PUSTAKA
Asni  NK,  Bebas  IW,  Trilaksana  IGNB.  2022. Kualitas semen beku selama penyimpanan di  Satuan  Pelayanan  Inseminasi  Buatan Mengwi,  Kabupaten  Badung.  Buletin Veteriner  Udayana  14(4):356-362.  doi: 10.24843/bulvet.2022.v14.i04.p07
Baharun  A,  Arifiantini  RI,  Yusuf  TL.  2017. Freezing  capability  of  Pasundan  bull sperm  using  tris-egg  yolk,  tris-soy,  and andromed®  diluents.  Jurnal  Kedokteran
Hewan 11(1):45-49. doi: 10.21157/j.ked.hewan.v11i1.5810
Baharun A, Said S, Arifiantini RI, Karja NWK.
2021. Correlation between age, testosterone and adiponectin concentration, and sperm abnormalities in Simmental  bulls.  Veterinary  World 14(8):2124-2130. doi: 10.14202/vetworld.2021.2124-2130 Baharun A, Said S, Arifiantini RI, Karja NWK. 2022.  Karakteristik  Semen  dan  Korelasi antara  Konsentrasi  Testosteron  dengan Libido  Pejantan  Sapi  Simental.  Acta Veterinaria  Indonesiana  10(1):1-7.  doi: https://doi.org/10.29244/avi.10.1.1-7 BSN  (Badan  Standarisasi  Nasional).  2017. Semen  Beku-  Bagian  1:  Sapi.  Jakarta, Badan Standarisasi Nasional.
Herbowo  MT,  Arifiantini  RI,  Karja  NWK, Sianturi  RG.  2019.  Cryopreservation  of Swamp Buffalo semen in skim milk yolk- based diluent with two different. Tropical Animal  Science  Journal  42(1):1-13.  doi: https://doi.org/10.5398/tasj.2019.42.1.13
Indriastuti  R,  Ulum  MF,  Arifiantini  RI, Purwantara  B.  2020.  Individual  variation in  fresh  and  frozen  semen  of  Bali  bulls (Bos  Sondaicus).  Veterinary  World 13(5):840-846. doi: 10.14202/vetworld.2020.840-846
Islam  MM,  Umehara  T,  Tsujita  N,  Shimada.
2021.  Saturated  fatty  acids  accelerate liniear  motility  through  mitochondrial ATP production in bull sperm.
Reproductive  Medicine  and  Biology 20(3):289-298. doi: 10.1002/rmb2.12381
Kaya A, Memili E. 2016. Sperm macromolecules  associated  with  bull fertility.  Animal  Reproduction  Science 169:88-94. doi: 10.1016/j.anireprosci.2016.02.015
Khalil WA, El-harairy MA, Zeidan AB, Hassan
MAE. 2018. Evaluation of bull spermatozoa during and after
cryopreservation:
Structural and ultrastructural insights. International journal of veterinary science and medicine 6(Supp 1): S49-S56. doi: 10.1016/j.ijvsm.2017.11.001
Mughal  DH,  Ijaz  A,  Yousaf  MS,  Wadood  F, Farooq,  Mahmood  SA,  Riaz  A.  2017. Effect of osmotic pressure on spermatozoa characteristics of cryopreserved  buffalo  bul  (Bubalus bubalis)  semen.  Journal  of  Applied Animal  Research  46(1):274-277.  doi: https://doi.org/10.1080/09712119.2017.12 95971 Novianti  I,  Purwantara  B,  Herwijanti  E, Nugraha CD, Putri RF, Furqon A, Septian WA,  Rahayu  S,  Nurgiartiningsih  VMA, Suyadi S. 2020. Effect of breed on semen characteristics  of  aged  bulls  in  the Indonesian National Artificial Insemination  Center.  Jurnal  Ilmu-Ilmu Peternakan 30(2):173-179. doi:
10.21776/ub.jiip.2020.030.02.10
O’Meara C, Henrotte E, Kupisiewicz K, Latour
C,  Broekhuijse  M,  Camus  A,  Gavin- Plagne  L,  Sellem  E.  2022.  The  effect  of adjusting  settings  within  a  Computer- Assisted Sperm Analysis (CASA) system on bovine sperm motility and morphology results.  Animal  Reproduction  19(1):1-13. doi: https://doi.org/10.1590/1984-3143- AR2021-0077
Peraturan Menteri Pertanian Republik Indonesia (Permentan).  2016.  Penyediaan  dan peredaran  semen  beku  ternak  ruminansia
nomor:
10/Permentan/PK.210/3/2016.
Jakarta: Kementan.
Raafi  M,  Yusuf  M,  Toleng  AL,  Diansyah  AM,
Surahman,  Sahiruddin.  2021.  Movement patterns of sperms at different bull breeds using  computer-assisted  sperm  analysis (CASA). The 3rd International Conference  of  Animal  Science  and Technology. IOP Conf. Series: Earth and Environmental Science. 788(2021)012137. doi:10.1088/1755-
1315/788/1/012137
Rodriguez-Villamil  P,  Hoyos-Marulanda  V, Martins  JA,  Oliveira  AN,  Aguiar  LH, Moreno FB, Velho AL, Monteiro-Moreira AC,  Moreira  RA,  Vasconcelos  IM, Bertolini M, Moura AA. 2016. Purification  of  binder  of  sperm  protein  1 (BSP1)  and  its  effects  on  bovine  in  vitro embryo  development  after  fertilization with  ejaculated  and  epididymal  sperm. Theriogenology
85(3):540-54. doi:
https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2
015.09.044
Rosyada  ZNA,  Tumbelaka  LI,  Ulum  MF, Solihin  DD,  Kaiin  EM,  Gunawan  M, Harsi  T,  Suharto  K,  Purwantara  B. 2021. Meta  data  analysis  of  cenception  rate  in relation  to  sperm  motility  in  Madura superior  bulls.  The  1st  Internasinal Conference  on  Livestock  in  Tropical Environment  (ICLiTE-1).  IOP  Conf. Series:  Earth  and  Environmental  Science 902(2021):012048.  doi:  10.1088/1755- 1315/902/1/012048 Tekin  K,  Inanc  ME,  Daskin  A.  2022. Relationship between CASA motility and kinetic  parameters  on  bull  fertility.
Cryobiology 71(3):568. doi:
10.1016/j.cryobiol.2022.10.132
Zamuna  AAKKM,  Susilawati  T,  Ciptadi  G, Marjuki.  2015.  Perbedaan kualitas  semen dan  produksi  semen  beku  pada  berbagai bagsa sapi potong. Jurnal Ternak Tropika 16(2):1-6. doi: 10.21776/ub.jtapro.
2015.016.02.1.