## Isolasi Brucella abortus dari cairan higroma dan susu
Tri Handayani 1, *, Susan Maphilindawati Noor 2 , Fachriyan Hasmi Pasaribu 3
1 Laboratorium Kesehatan dan  Reproduksi Ternak, Pusat Aplikasi Isotop dan Radiasi, Badan Tenaga Nuklir Nasional, Jakarta
2 Divisi Bakteriologi, Balai Besar Penelitian Veteriner, Bogor
3 Departemen Ilmu Penyakit Hewan dan Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor, Bogor
ABSTRAK: Brucella abortus merupakan salah satu bakteri penyebab keguguran pada ternak sapi. Sampel cairan higroma dan susu digunakan untuk screening keberadaan bakteri B. abortus dari ternak  yang dicurigai  menderita brucellosis. Tujuan dari penelitian  ini  adalah  untuk  memperoleh  bakteri B.  abortus dari  sampel  cairan  higroma  dan  susu.  Total  36  sampel  cairan higroma  dan  susu  diperoleh  dari  NTT  dan  Jawa  barat.  Sampel  ditumbuhkan  dalam  media  TSB  dan  TSA  dengan  CO 2 5  %. Hasil  pemeriksaan  menunjukkan  morfologi  koloni  bakteri  bulat,  halus  dan  permukaan  convex,  hasil  pewarnaan  Gram menunjukkan  bakteri  gram  negatif,  coccobacillus  dan  memiliki  kecenderungan  sendiri-sendiri  ataupun  berpasangan.  Uji biokimiawi katalase dan  oksidase menunjukkan hasil positif, sedangkan uji sitrat negatif.  Bakteri memerlukan penambahan 5% CO 2 dalam pertumbuhannya, memiliki kemampuan memproduksi H 2 S, dan urease serta  tumbuh dengan keberadaan Basic Fuchin, tetapi tidak tumbuh di zat warna Thionin. Bakteri yang tumbuh tersebut diidentifikasi sebagai B. abortus .Total isolat B. abortus yang diperoleh pada penelitian ini adalah 16 isolat dari 36 sampel cairan higroma dan susu.
Kata kunci: isolasi, Brucella abortus , cairan higroma, susu

## ■ PENDAHULUAN
Bakteri Brucella abortus merupakan salah satu bakteri yang menyebabkan  keguguran  pada  ternak  (Quinn et  al ,  2002; Dereje et  al ,  2018).  Penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri Brucella  sp .  disebut  brucellosis.  Secara  klinis  keberadaan bakteri  ini    ditandai  dengan  abortus,  retensi  plasenta, orchitis, eididimitis, dan architis, namun hal tersebut jarang terjadi.  Penyebaran  bakteri  dapat  terjadi  melalui  ekskresi bakteri dari kotoran uterus dan susu.  Selain itu manifestasi atau  indikator  umum  di  beberapa  negara  tropis  adanya infeksi  brucellosis  adalah  cairan  higroma  pada  persendian (OIE,  2016).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh bakteri B. abortus dari cairan higroma dan susu.

## ■ BAHAN DAN METODE
Total  sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  sebanyak  36 sampel.  Sampel  diperoleh  dari  ternak  sapi  yang  dicurigai menderita  brucellosis  di  wilayah  Belu  dan  TTU,  Nusa Tenggara  Timur  dan  Bogor,    Jawa  barat  (Tabel  1).  Teknik isolasi  bakteri B.  abortus dilakukan  secara  konvensional. Cairan higroma dimasukkan ke dalam  tabung berisi media Tryptic  Soy  Broth (TSB)  dengan  penambahan Fetal  Calf Serum (FCS) dan Brucella selective supplement . Selanjutnya sampel diinkubasi pada suhu 37 °C selama 3 - 5 hari  di  inkubator  CO 2 .  Setelah  terlihat  kekeruhannya  maka bakteri  dikultur  pada  media  yang  mengandung Triptic  Soy Agar (TSA)  dan Brucella  selective  supplement dan
diinkubasi  selama  3  -  5  hari  di  inkubator  CO 2 .  Isolasi dilakukan  berdasarkan  metode Alton et  al .  (1988)  dan  OIE (2016).  Selanjutnya  dilakukan  identifikasi bakteri    meliputi morfologi  koloni,  pewarnaan  Gram  dan  uji  biokimiawi (oksidase,  katalase  dan  uji  sitrat),  biotyping  isolat  terhadap penggunaan CO 2 , produksi H 2 S, aktifitas urease, pertumbuhan pada zat warna Basic fuchsin dan Thionin.

## Tabel 1. Sampel cairan higroma, dan susu pada penelitian
No Sampel Lokasi sampel Jumlah 1 Cairan Higroma Belu dan TTU, NTT 20 2 Susu Bogor, Jawa Barat 16 Jumlah 36

## ■ HASIL DAN PEMBAHASAN
Nusa  Tenggara  Timur  (NTT)  dan  Jawa  Barat  merupakan daerah  dengan  populasi  sapi  yang  relatif  tinggi. Berdasarkan  data  Statistik  Peternakan  dan  Kesehatan Hewan  2016  diketahui  bahwa    jumlah  sapi  potong  di  NTT tahun 2016 sebanyak  930.997 ekor, dan jumlah sapi perah di  Jawa  Barat  119.287  ekor.  Pemilihan  sampel  di  daerah Jawa  barat  berdasarkan  ternak  mempunyai  riwayat keguguran,  sedangkan    sampel  dari  NTT  berdasarkan
ISSN 2581-2416 DOI: http://dx.doi.org/10.29244/avl.2.3.55-56 http://journal.ipb.ac.id/index.php/arshivetlett
Diterima: 06-06-2018 | Direvisi: 03-07-2018 | Disetujui: 30-07-2018 © 2018 CC-BY-SA. Ini adalah artikel Open Access yang didistribusikan ber- dasarkan ketentuan dari Creative Commons Attribution ShareAlike 4.0 Inter- national License ( https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/ ).
adanya  pembesaran  bagian  lutut  pada  ternak  sapi.  Tingkat kejadian  brucellosis  di  Belu,  NTT  menunjukkan  prevalensi mencapai  14,9%  (Lake,  2010).  Pada  kasus  brucellosis kronis  dapat  terjadi  radang  persendian  kaki  yang  biasanya akan  terakumulasi  cairan  higroma.  Penelitian  ini,  bakteri yang  terisolasi  sebagai B.  abortus memiliki  karakteristik yaitu morfologi koloni bulat, halus,licin, permukaan convex dan  seperti  setetes  madu.  Pewarnaan  gram  menunjukkan bakteri gram negatif, coccobacillus dan memiliki kecenderungan  sendiri-sendiri  ataupun  berpasangan.  Uji biokimiawi  katalase  dan  oksidase  menunjukkan  hasil positif,  sedangkan  uji  sitrat  negatif.    Bakteri  memerlukan penambahan  5%  CO 2 dalam  pertumbuhannya,  memiliki kemampuan  memproduksi  H 2 S,  dan  urease  serta    tumbuh dengan keberadaan Basic Fuchin, tetapi tidak tumbuh di zat warna Thionin.
0 5 10 15 20 J um la h is ol a t Cairan Higroma Susu
Gambar 1 Jumlah isolat Brucella abortus dari sampel cairan higroma dan susu.
Berdasarkan  Gambar  1  isolat  bakteri B.  abortus yang diperoleh dari 20 sampel cairan higroma sebanyak 16 isolat. Sedangkan  16  sampel  susu  yang  dilakukan  analisis  tidak diperoleh  isolat  bakteri B.  abortus .  Hasil  penelitian  ini sesuai  pada  penelitian  dengan  sampel  susu  dimana  tidak didapatkannya  isolat,  tetapi  isolat  diperoleh  dari  membran dan  liver  fetus  (Manthew et  al ,  2015).  Studi    pada  10 sampel cairan higroma diperoleh 10 isolat B. abortus (Chisi et al , 2017). Higroma merupakan salah satu sampel pilihan yang  dapat  digunakan  dalam  studi  bakteriologi  (Sanogo et al ,  2013).    Hasil  penelitian  lain  didapatkannya  17  isolat B. abortus dari 360 sampel susu dan darah (Md. Sadequ et al , 2018),  dan  11  isolat  dari  217  sampel  susu  (Denis et  al , 2015).    Penelitian  dengan  sampel  higroma  dan  susu  pada hewan  kerbau  menunjukkan  hasil  negatif,  tetapi  isolat diperoleh  dari  sampel  plasenta dan  organ  fetus  (Kirit et  al , 2017).  Beberapa  kemungkinan  yang  menyebabkan  sampel susu  tidak  diperoleh  isolat  karena  jumlah  bakteri  dalam sampel  terlalu  rendah,  volume  susu  saat  inokulasi  atau kultur  sedikit,  eskresi  bakteri  dalam  susu  bersifat intermitent,  faktor  transportasi  selama  pengambilan  sampel dan penyimpanan (Alton et al , 1988; Jennifer et al , 2012).
■ SIMPULAN
Hasil  isolasi  36  sampel  cairan  higroma  dan  susu  diperoleh 16 isolat bakteri B. abortus dari sampel cairan higroma.

## ■ INFORMASI PENULIS

## Penulis untuk Korespondensi
* TH : trihanda@batan.go.id PAIR PAIR BATAN, Jalan Lebakbulus Raya no 49 Jakarta Selatan.

## Kontribusi penulis
TH menulis paper. SMN dan FP memberikan masukan pada paper. Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.

## ■ UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada Mbak Shelyn dan Pak Agus dari  IPB, Bapak Supartono dan Mbak Ira BBALITVET, Dokter John dari NTT dan PAIR BATAN yang telah memberikan dana untuk penelitian ini.

## ■ PUSTAKA ACUAN
Alton GG, Jones LM, Angus RD, Vengr JM. 1988. Techniques for The Brucellosis Laboratory. Paris: Institute National De La Re- cherche Agronomique.
Chisi SL, Marageni Y, Naidoo P, Zulu G, Akol GW, Van Heerden H.  2017.  An  evaluation  of  serological  tests  in  the  diagnosis  of bovine brucellosis in naturally infected cattle in KwaZulu-Natal province in South Africa.  J S Afr Vet Assoc. 88(1): 1-7. Denis RM, Shaman M, Sofia B, Joseph E, George WN, Charles W,
Gerald M, Markus K, Ulf Magnusson. 2015. Isolation and  mo- lecular  characterization  of  brucella  isolates  in  cattle  milk  in Uganda. BioMed Research International. 2015:1-9.
Dereje  T,  Benti  D,  Feyisa  B,  Abiy  G.  2018.    Review  of  common causes  of  abortion  in  dairy  cattle  in  Ethiopia. J  Vet  Med  Anim Health. 10(1): 1-13.
Jennifer AZ, Maves RC, Nydam DV, Ayvar V, Cepeda D, Castillo R,  Diaz-Pino  A,  Saito  M,  Gilman  RH.  2012.  Effect  of  storage temperature and sample volume on Brucella melitensis isolation from goat milk. Int J Tropical Dis Health. 2012: 207-213.
Kirit BP, HC Chauhan, BK Patel, SS Patel, MD Shrimali, JK Kala,
SI  Patel,  AN  Modi,  AC  Patel,  Manish  Rajgor,  MA  Patel,  MG Patel, BS Chandel. 2017.  Isolation, identification and molecular detection  of Brucella  abortus from  buffaloes  in  Gujarat,  India. Int J Curr Microbiol App Sci. 6(4): 1787-1795.
Lake, PRMT. 2010. Kajian Lintas Seksional Brucellosis pada Sapi di Kabupaten Belu. Tesis. Universitas Gadjah Mada.
Mathew  C,  M  Stokstad,  TB  Johansen,  S  Klevar,  RH  Mdegela,  G Mwamengele, P Michel, L Escobar, D Fretin, J Godfroid. 2015. First  isolation,  identification,  phenotypic and  genotypic  charac- terization of Brucella abortus biovar 3 from dairy cattle in Tan- zania. BMC Veterinary Research. 11(1):156.
Md.  Sadequl  I,  Md.  Ariful  I,  Mst.  Minara  K,  Sukumar  S,  Md.
Samiul  B,  Md.  Mahmodul  H.  2018.  Molecular  detection  of Brucella spp . from milk of seronegative cows from some select- ed Aaea in Bangladesh. Journal of Pathogens 2018:1-7.
OIE.  World  Organization  for  Animal  Health.  2016.  Terrestrial Mannual. Chapter 2.1.4. Brucellosis. www.oie.int.
Quinn  PJ,  BK  Markey,  ME  Carter,  WJ  Donnelly,  FC  Leonard. 2002.  Veterinary  Microbiology  and  Microbial  Disease.  Black- well publishing. 162-167.
Sanogo  M,  Abatih,  Eric  Thys  ,  Fretin  D, Berkvens  D,  Saegerman C.  2013.  Importance  of  identification  and  typing  of  brucella from  west  African  cattle:  A  review.  Veterinary  Microbiology 164(3-4): 202–211.