Jurnal : Jurnal Kesehatan Prima Volume
: 9, No.2, Agustus 2015, Halaman : 1534-1545
ISSN Print
: 1978 – 1334, ISSN Online : 2460 – 8661

## ___________________________________________________________________________
Pancawati Ariami, Hesti Suliastiningsih, Maruni Wiwin Diarti: Jurusan Analis Kesehatan  Poltekkes Kemenkes Mataram, Jl. Prabu Rangkasari Dasan Cermen Sandubaya Mataram

## PROFIL LEUKOSIT TIKUS PUTIH YANG DIBERI AIR SEDUHAN
KELOPAK BUNGA ROSELA MERAH ( Hibiscus sabdariffa )
Pancawati Ariami, Hesti Suliastiningsih, Maruni Wiwin Diarti
Abstract :  Roselle  is  a  plant  that  has  many  benefits  with  vitamin  C,  iron  ,folic  acid  ,  and  amino  acids    highly needed by the body. This study aimed to determine the effect of the provision of water steeping red roselle calyx ( Hibiscus  sabdariffa )  on  peripheral  blood  leukocyte  counts  in  rats  ( Rattus  norvegicus )  Wistar  strain.  Pre Experimental  Research  done.  The  results  showed  the  average  number  of  leukocytes  in  peripheral  blood  of experimental animals before treatment was 4060 / µL, and after the treatment is 8120 / µL . This shows that red roselle calyx (Hibiscus sabdariffa) can increase the number of leukocytes of 4060 / µL . Based on the results of statistical  tests  Paired  T  -  Test  showed  no  significant  difference  steeping  water  provision  red  roselle  calyx ( Hibiscus  sabdariffa )  on  peripheral  blood  leukocyte  counts  in  rats  ( Rattus  norvegicus )  Wistar  strain,  the probability of 0.004 < α 0.05. Provision of water steeping red roselle calyx (Hibiscus sabdariffa) effect on the number  of  leukocytes  in  peripheral  blood  white  rats  ( Rattus  norvegicus )  Wistar  strain  .  The  number  of leukocytes  increased  2  -fold  with  water  provision  steeping  red  roselle  calyx  after  9  days  of  treatment  with  a concentration of 2 % .
Kata Kunci: Red Roselle, Number of Leukocytes, Rat

## PENDAHULUAN
Darah  umumnya  dipandang  sebagai  cairan tubuh  yang  kental,  berwarna  merah  dan  tidak transparan  serta  berada  dalam  suatu  ruang  tertutup yang dinamai sebagai sistem pembuluh darah.  Enam puluh  persen  (60%)  berat  badan  tubuh  manusia merupakan  komponen  berupa  cairan,  yang  terbagi atas  cairan  intrasel  dan  cairan  ekstrasel.    Cairan ekstrasel  terdiri  dari  cairan  yang  terdapat  dalam pembuluh  darah  yang  disebut  cairan  intravaskuler dan  cairan  antar  sel  yang  berada  di  luar  pambuluh darah disebut cairan interstisiel.  Cairan intravaskular terdiri dari cairan darah, yaitu  plasma darah dan sel- sel  darah  (Sadikin,  2002  ;  Brunner  &  Suddarth, 2001).
Sel-sel darah terdiri dari sel darah merah, sel darah  putih,  dan  keping  darah  atau  trombosit.    Jenis
sel  darah  yang  digunakan  sebagai  mediator  respons imun  terhadap  infeksi  atau  rangsangan  peradangan lainnya  adalah  leukosit  (Sadikin,  2002  ;  Stephen  & William, 2010).
Leukosit  memiliki  peranan  penting  dalam melawan  mikroorganisme  yang  masuk  pada  tubuh manusia  seperti  bakteri,  virus  dan  parasit.    Semua terjadi  secara  normal  dari  berbagai  tingkatan  pada kulit,  mulut,  saluran  nafas,  saluran  cerna,  membran yang  melapisi  mata,  bahkan  saluran  kemih.  Hal tersebut  dapat  dihindari  apabila  seseorang  memiliki sistem pertahanan tubuh yang baik.  Soewolo (2000) menyatakan,  bahwa  dalam  tubuh  manusia  telah memiliki  sistem  pertahanan  tubuh  sejak  lahir  yang disebut kekebalan bawaan dengan adanya leukosit.
Jumlah  leukosit  normal  dalam  sirkulasi darah  tubuh  manusia  berkisar  antara  5.000  sampai 9.000  per  mikroliter  darah.    Jenis-jenis  leukosit
terdiri  dari  neutrofil,  basofil,  eosinofil,  monosit  dan limfosit.    Kelima  jenis  leukosit  tersebut  dapat mengalami peningkatan (leukositosis) atau penurunan  (leukopenia)  disebabkan  oleh  adanya infeksi.    Apabila  leukosit  sebagai  pertahanan  tubuh berkurang  maka  mikroorganisme  mudah  untuk menginfeksi seseorang. Untuk mempertahankan daya tahan  tubuh  yang  diperankan  oleh  leukosit, masyarakat banyak mengkonsumsi suplemen. (Stephen & William, 2010 ; Yuliarti, 2009).
Pemakaian  suplemen  dalam  kehidupan masyarakat  berkembang  pesat  seiring  dengan banyaknya gangguan kesehatan karena terganggunya keseimbangan  fungsi  tubuh.    Tetapi  suplemen  yang dipasaran  masih  banyak  yang  memberikan  zat tambahan  yang  berfungsi  supaya  tampilannya  lebih bagus  dan  awet  sehingga  dapat  menghilangkan beragam nutrisi dan gizi yang ada dalam bahan baku alaminya dimana efektifitas dan keamanannya masih belum  diatur  oleh  badan  POM  (pengawas  obat  dan tanaman).  suplemen  juga  tidak  mengandung  serat alami dan zat fitokimia sehingga dapat mengakibatkan  gangguan  pada  mekanisme  atau sistem kerja tubuh jika  mengkonsumsi dalam jangka waktu  yang  lama  oleh  sebab  itu  obat  tradisional adalah  obat  alternatif  yang  digunakan  sebagai pengganti  suplemen  tanpa  menyebabkan  efek samping yang mengganggu mekanisme tubuh karena mengandung  serat  alami  dan  zat  fitokimia,  salah satunya dengan memanfaatkan rosela (Yuliarti, 2009, Anonim 2013).
Rosela  merupakan  tumbuhan  liar    yang dibudidayakan    kira-kira  hampir  seluruh  bagian tanaman  ini  dapat  digunakan  untuk  kebutuhan
pengobatan.  Secara  tradisional,  masyarakat  lebih sering  menggunakan  kelopak  bunga  rosela  sebagai minuman  yang diseduh, dimana  dengan  konsentrasi 2%  dalam  penelitian    Herrera  Arellano,  dkk  mampu menurunkan  tekanan  darah  sistolik  dari  139,05 menjadi  123,  73  mmHg.  Sementara  tekanan  darah diastolik  turun  dari  90,81  menjadi  79,52  mmHg  dan berdasarkan hasil penelitian Siti munaworah, dengan konsentrasi 2% dapat meningkatkan kadar hemaglobin  (Hb),  dan  jumlah  eritrosit.    Rosela  juga digunakan  sebagai  obat  herbal  antikanker,  diuretik, peluruh  batu  ginjal,  antikolesterol,  antibakteri,  dan antidiabetes.  Kelopak  bunga  rosela  mengandung flavonoid, gossypetine , hibiscetine ,  dan sabdaretine , kalsium,  magnesium,  beta-karoten,  fosfor,  zat  besi, asam  organik,  asam  amino  essensial  (lisin  dan organin),  polisakarida,  dan  Omega-3.    Kelopak bunga  rosela  juga  mengandung  vitamin  C  dalam kadar  tinggi  yang    berfungsi  untuk  meningkatkan daya  tahan  tubuh  manusia  terhadap  serangan penyakit (Widyanto & Nelistya, 2009).
Vitamin  C  merupakan  antioksidan  yang penting,  dimana  vitamin  C  ini  dapat  mereduksi  ion ferri  (Fe  3+  )  menjadi  ion  ferro  (Fe  2+  )  yang  ada dalam  saluran  pencernaan  sehingga  mudah  untuk  di absorbsi,  selain  itu  juga  dapat  melepaskan  besi  dari transferin dalam plasma agar dapat bergabung dalam feritin  yang  ada  pada  jaringan.  Vitamin  C  dapat membantu  konversi  asam  folat  menjadi  bentuk  aktif serta  dapat  pemeliharaan  fungsi  imun  seluler  dan terbukti  dapat  melindungi  fungsi  leukosit  (Winarno, 2004 ;  Subowo, 1993).
Kelopak bunga rosela yang banyak mengandung  vitamin  C,  berfungsi    meningkatkan
daya  tahan  tubuh  dimana  daya  tahan  tubuh dipengaruhi  oleh  respon  imun  yang  diperankan  oleh leukosit.  Atas  dasar  hubungan  kandungan  vitamin  C dan  respon  imun  oleh  leukosit,  hal  tersebut menjadikan  peneliti  memanfaatkan  kelopak  bunga rosela  dalam  meningkatkan  daya  tahan  tubuh sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  mengenai “Pengaruh  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela  merah ( Hibiscus sabdariffa ) terhadap jumlah leukosit darah tepi  hewan  coba  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus ) strain wistar”.
Tujuan  penelitian  adalah  untuk  mengetahui pengaruh  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela  merah ( Hibiscus sabdariffa ) terhadap jumlah  leukosit pada darah  tepi  hewan  coba  tikus  putih ( Rattus norvegicus ) strain  wistar dengan  menghitung  jumlah leukosit  sebelum  dan  setelah  pemberian  air  seduhan kelopak bunga rosela merah ( Hibiscus sabdariffa ).
Secara  praktis  penelitian  ini  memberi informasi  bagi  masyarakat  tentang  manfaat  tanaman rosela  sebagai  salah  satu  tanaman  yang  dapat meningkatkan kekebalan tubuh dengan cara meningkatkan  jumlah  sel  darah  putih    (lekosit). Menambah pengetahuan bagi mahasiswa dan sebagai bahan  pertimbangan  untuk  penelitian  selanjutnya. Menambah  wawasan  dan  pengetahuan  tentang manfaat rosela, khususnya dibidang klinik.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian Pra Eksperimental dengan rancangan penelitian The One Group Pretest-Posttest Design .
Unit Eksperimen. Hewan coba adalah tikus putih  ( Rattus  norvegicus )  strain  wistar,  jenis  kelami
jantan,  sehat  dan  berumur    3-4  bulan.  Rosela  yang digunakan  adalah  Kelopak  bunga  rosela  merah kering yang diperoleh dari Apotik.
Besar  Unit  Eksperimen. Jumlah  unit eksperimen dalam penelitian ini ditemukan berdasarkan  pendapat  Weill  bahwa  sampel  minimal untuk  pemakaian  hewan  coba      adalah  4  ekor  dan dengan  faktor  koreksi  25%  dari  unit  eksperimen, maka  pada  penelitian  ini  digunakan  5  ekor  tikus putih  ( Rattus  norvegicus )  strain  wistar  (Harmita  & Maksum, 2008).
Teknik  Pengambilan  Sampel. Teknik pengambilan  sampel  yang  digunakan  adalah Non Random  purposive  Sampling yaitu  pengambilan sampel  yang  didasarkan  pada  suatu  pertimbangan atau kriteria tertentu yang dibuat oleh peneliti sendiri (Notoadmojdo,  2005).  Adapun  kriteria  hewan  coba yang  digunakan  sebagai  sampel  penelitian:  jenis kelamin jantan, umur 3-4 bulan, berat badan 180-250 gram,  fisik  dalam  keadaan  sehat.  (Harmita  & Maksum, 2008).
Jenis  Data  dan  Skala  Data. Data  dari variabel  bebas  berupa  perlakuan  pemberian  air seduhan  kelopak  bunga  Rosela  merah  dengan konsentrasi  2%  (b/v)  terhadap  hewan  coba  tikus putih ( Rattus norvegicus ) strain wistar, jenis datanya adalah  data  primer  dan  skala  datanya  adalah  rasio. Data  dari  variabel  terikat  berupa  jumlah  leukosit pada  darah  tepi  hewan  coba  tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  strain  wistar  dalam  satuan  µl,  jenis datanya adalah data primer dan skala datanya adalah rasio.
Cara  Pengumpulan  Data. Instrumentasi: Timbangan, Beaker glass, Pipet tetes, Lampu spritus,
Kandang (bak plastik), Gelas ukur, Mikroskop, Spuit 3  cc,  Blue  tip,  Yellow  tip,  Gunting,  Pinset,  Spidol permanent  hitam,  Botol  dengan  pipa,  Kaca  obyek, Handsaplast,  Tissue  dan  kapas.  Bahan  Penelitian: Kelopak  bunga  Rosela  merah  yang  dikeringkan, Hewan  coba  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  strain wistar jantan sebanyak 5 ekor, Bahan makanan tikus berupa pakan standar, Bahan minum tikus berupa air mineral, Aquades, Cat Giemsa, Alkohol.

## Metode  Kerja  Penelitian
Jumlah  leukosit  darah  hewan  coba  tikus putih    ( Rattus  norvegicus )    strain    wistar    sebelum dan  setelah  pemberian  air seduhan  bunga   Rosela konsentrasi    2%  (b/v)  diukur    dengan  menggunakan alat  Sysmex.  Adapun  metode  kerja  dari  penelitian ini adalah  sebagai  berikut :
a. Persiapan    dan    aklimatisasi    hewan    coba tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  strain  wistar.
Penelitian    menggunakan    tikus    putih    ( Rattus norvegicus )  strain    wistar    karena    beberapa alasan    antara    lain,    mudah  dikembang    biakan, mudah    dipelihara,    mudah    diambil    darahnya cukup  melalui  ekor  untuk  mendapatkan  darah kapiler,    fisiologinya    diperkirakan    identik dengan    manusia    (Harmita    &  Maksum,    2008). Aklimatisasi    hewan    coba    selama    7    hari terhadap    air,  makanan,    udara    dan    kondisi Laboratorium.    Pakan    yang    diberikan  selama aklimatisasi    adalah  pakan  ternak  standart  dan aquadest.
b. Persiapan    dan    pembuatan    air    seduhan kelopak bunga  rosela  ( Hibiscus  sabdariffa )
Bunga rosela yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelopak bunga Rosela merah kering  yang
diperoleh  di  Apotik.    Kemudian  ditimbang  2 gram    dan    diseduh    dengan    air  panas  100  ml. Hasil  seduhan  kemudian  ditampung  dalam wadah  menggunakan  beaker  glass.  Air  seduhan tersebut    diasumsikan  merupakan  air  seduhan kelopak  bunga  rosela  dengan    konsentrasi    2%
(b/v) (Widyanto & Nelistya, 2009).
c. Penentuan Dosis air seduhan Rosela
Jumlah (mg) air seduhan kelopak rosela diberikan pada  masing-masing  hewan  coba  berbeda tergantung  dari  berat  badan  masing-masing hewan  coba.    Untuk  mengetahui  dosis  efektif  air kelopak  rosela  terhadap  jumlah  leukosit  pada darah  tikus  putih  digunakan  perhitungan  sebagai berikut :
Keterangan :
BB (s) :  Berat  badan  tikus  putih  yang sebenarnya
BB (std)  :  Berat badan standar (200 gram) V :  Volume  maksimum  yang  bisa diterima  oleh    lambung  hewan coba tikus putih (5 ml)
Hasil  perhitungan  tersebut  merupakan  hasil konversi  dari  berat  badan  masing-masing  tikus putih.  Contoh  perhitungan:  Bila  berat  badan hewan  coba  tikus  putih  sebenarnya  180  gram. Berat badan hewan coba tikus putih standart   200 gram.  Volume  maksimum  yang  bisa  diterima oleh lambung hewan coba tikus putih 5 ml. Maka pemberian  3  kali  sebanyak  4,5  ml.  Pemberian dilakukan  3  kali  dengan  volume  pemberian  1,5 pada  setiap  pemberian  (hasil  pemberian  tersebut
merupakan  hasil  konversi  dari  berat  badan masing-masing tikus putih).
d. Perlakuan    hewan    coba    tikus    putih    ( Rattus norvegicus ) .
Lima  (5)  ekor  tikus  putih  di  aklimatisasi  dengan lingkungan,  suhu,  dan  kelembapan  selama  7  hari (Harmita & Maksum, 2008). Tikus putih diambil darah  bagian  vena  ventralis  ekor  dengan  cara bagian ekor diberi kompresan air hangat selama 5 menit,  untuk  melebarkan  vena.  Ditusuk  dengan menggunakan  spuit  3  cc,  diambil  darahnya  dan ditampung  pada  effendrof  1,8  ml  yang  ditetesi dengan  EDTA  4%  2  tetes.    Dihitung  jumlah leukosit  pada  darah  hewan  coba  tikus  putih menggunakan  alat  Sysmex.  Pemberian  air seduhan  kelopak  bunga  rosela  pada  hewan  coba tikus  putih  dengan  dosis  sesuai  dengan  berat badan  standart  dan  nilai  konversi  selama  9  hari. Pengambilan  darah  vena  ventralis  pada  ekor setelah  pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga rosela selama 9 hari. Perhitungan jumlah leukosit pada darah hewan coba tikus putih.
e. Penghitungan leukosit  pada Tikus putih Alat  automatik  (Sysmex),  prinsip: Sampel darah      dicampur      antikoagulan      EDTA kemudian dilakukan   perhitungan   jumlah   sel – sel      darah,      kadar      hemoglobin,      nilai hematokrit,      indeks      eritrosit,      hitung  jenis leukosit   dihitung dengan   alat Pentra   XL   80 ,
Cell   DYN   Emerald   an   Call   DYN   3200 .
Hitung  jenis  leukosit  dengan  sedian  apus.
Letakan  sedian  yang  akan  dipulas  di  atas  rek tempat  memulas  dengan  lapisan  darah  keatas. Teteskanlah  sekian  banyak  metilalkahol  ke  atas
sedian  itu,  sehingga  bagian  yang  terlapis  darah tertutup seluruhnya. Biarkan selama 5 menit atau lebih lama. Tuanglah kelebihan metilalkohol dari kaca.  Liputilah  sedian  itu  dengan  Giemsa  yang telah  diencerkan  dengan  larutan  penyanggah  dan biarkan  selama  20  menit.  Bilaslah  dengan  air suling.  Letakkan  sedian dalam  sikap  vertikal dan biarkan  mengering  pada  udara  dan  lakukan pemeriksaan  dengan  menggunakan  mikroskop. Leukosit  sejumlah  100  sel  dihitung  dalam lapangan  pandang  berbeda  dan  pembacaan dilakukan  pada  bagian  dimana  eritrosit  saling berdekatan  tetapi  tidak  saling  menumpuk  atau jarang.  Setiap  jenis  sel  darah  putih  dinyatakan dalam  persen  (%)  dan  jumlah  absolut  dihitung dengan  mengalikan  persentase  jumlah  dengan jumlah  leukosit,  hasinya  dinyatak  dalam  sel/µl (Gandasoebrata, 1984).
Cara Pengolahan Data dan Analisa Data Pengolahan  Data, hasil  pemeriksaan  jumlah leukosit  sebelum  dan  setelah  pemberian  air seduhan  kelopak  bunga  Rosela  merah  dengan konsentrasi  2%  (b/v)  selama  9  hari  terhadap hewan coba tikus putih ( Rattus norvegicus ) strain wistar dapat dimasukkan dalam table.
Analisis  Data. Data  dianalisis  secara  statistik menggunakan  uji  T-berpasangan  ( paired  T-test ) dengan  tingkat  kepercayaan  95%  ( p ɑ  0,05), dengan bantuan komputer program SPSS.

## HASIL PENELITIAN
Hasil  Pemeriksaan  Jumlah  Leukosit  pada  Darah Tepi Hewan Coba Tikus Putih ( Rattus norvegicus )
Sebelum  dan  Setelah  Pemberian  Air  Seduhan Kelopak Bunga Rosela ( Hibiscus sabdariffa ).
Penelitian  ini  merupakan  penelitian Pra Eksperimental. Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk membedakan jumlah leukosit  pada darah tepi hewan coba  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  sebelum  dan setelah  pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela ( Hibiscus  sabdariffa ).  Adapun  hasil  pemeriksaan jumlah leukosit terhadap 5 ekor hewan coba (4 ekor eksperimen  dan  1  ekor  faktor  koreksi)  sebelum  dan setelah  pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1.  Hasil  Pemeriksaan  Jumlah  Leukosit Hewan  Coba  Tikus  Putih  ( Rattus  norvegicus ) Sebelum  dan  Setelah  Pemberian  Air  Seduhan Kelopak Bunga Rosela ( Hibiscus sabdariffa )
Nomor Tikus Jumlah Leukosit pada Darah Hewan Coba Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) Kelompok Perlakuan Sebelum (µL) Setelah (µL) 1 6.800/ µL 8.600/ µL 2 2.800/ µL 7.000/ µL 3 3.300/ µL 9.100/ µL
4 4.600/ µL 9.600/ µL 5 2.800/ µL 6.300/ µL Total 20.300/ µL 40.600/ µL Rerata 4.060/ µL 8.120/ µL Tabel 1. menunjukan rerata hasil pemeriksaan  jumlah  leukosit  pada  darah  tepi  hewan coba  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus) sebelum pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela  merah ( Hibiscus  sabdariffa )  adalah  4060/  µL  dan  rerata hasil  pemeriksaan  jumlah  leukosit  pada  darah  tepi hewan  coba  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus) setelah pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela ( Hibiscus  sabdariffa )  adalah  8120/  µL.  Hal  tersebut menunjukan bahwa air seduhan kelopak bunga rosela dapat  meningkatkan  jumlah  leukosit  sebesar  4060/ µL.
Hasil Pemeriksaan
Jenis-jenis Leukosit
( Diffcount )  pada  Darah  Tepi  Hewan  Coba  Tikus Putih  ( Rattus  norvegicus ) Sebelum  dan  Setelah Pemberian  Air  Seduhan  Kelopak  Bunga  Rosela ( Hibiscus sabdariffa ).
Tabel 2. Hasil Pemeriksaan Hitung Jenis Leukosit Tepi hewan Coba Tikus Putih ( Rattus Norvegicus ) Sebelum dan Setelah Pemberian Air Seduhan Kelopak Bunga Rosela ( Hibiscus Sabdariffa ).
Jenis-jenis
Leukosit (Diffcount ) Perlakuan Sebelum Setelah T 1 T 2 T 3 T 4 T 5 Rerata T 1 T 2 T 3 T 4 T 5 Rerata Basofil (%) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Eosinofil (%) 0 5 % 0 2% 0 1,4% 0 0 0 0 0 0 Neutrofil Stab (%) 46% 0 13% 17% 1% 15,4% 2% 10% 22% 6% 8% 9,6% Neutrofil Segmen (%) 30% 1 % 26% 43% 3% 20,6% 0 29% 15% 24% 41% 21,8% Monosit (%) 0 0 4% 6% 1% 2,2% 2% 3% 1% 2% 5% 2,6% Limfosit (%) 24% 1 % 57% 32% 14% 25,6% 96% 58% 62% 58% 31% 31%
Tabel 2. menunjukan rerata hasil pemeriksaan  jenis-jenis  leukosit  pada  darah  tepi hewan coba tikus putih ( Rattus norvegicus) sebelum pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela  merah ( Hibiscus  sabdariffa )  adalah  basofil  0%,  eosinofil 1,4%,  neutrofil  36%,  monosit  2,2%,  dan  limfosit 25,6%.  sedangkan  rerata  hasil  pemeriksaan  jumlah leukosit  pada  darah  tepi  hewan  coba  tikus  putih ( Rattus  norvegicus) setelah  pemberian  air  seduhan kelopak  bunga  rosela  ( Hibiscus  sabdariffa )  adalah basofil  0%,  eosinofil  0%,  neutrofil  31,4%,  monosit 2,6%,  dan  limfosit  61%.  Hal  tersebut  menunjukan bahwa  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela  dapat meningkatkan jumlah jenis-jenis leukosit yang masih dalam rentang yang normal.

## Analisa Data
Data  hasil  pemeriksaan  perbedaaan  jumlah leukosit pada darah  hewan coba tikus putih sebelum dan  setelah  pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga rosela  dilakukan  analisis  data  menggunakan  uji statistik  pada  tingkat  kepercayaan  95%  diperoleh hasil analisis sebagai berikut :
1. Hasil uji Shapiro-Wilk
Uji Shapiro-Wilk pada  tingkat  kepercayaan  95%
(α 0,05) bertujuan untuk melihat atau mengetahui apakah  data  hasil  penelitian  berdistribusi  normal atau  tidak.  Adapun  hasil  uji Shapiro-Wilk dapat dilihat pada Tabel 3
Tabel 3.  Hasil Uji Shapiro-Wilk Dari Hasil Pemeriksaan  Jumlah  Leukosit Pada Darah Tepi Hewan Coba Tikus Putih Sebelum dan Setelah Pemberian Air Seduhan Kelopak Bunga Rosela.
Tests of Normality
jumlah Lekosit sebelum pemberian air seduhan kelopak bunga rosela 2% Shapiro-Wilk Sig. jumlah Lekosit setelah pemberian air seduhan kelopak bunga rosela 2% sebelum pemberian seduhan rossela .135 setelah pemberian seduhan rossela .513
a. Lilliefors Significance   Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Tabel  3  hasil  uji Shapiro-Wilk menunjukan data jumlah  leukosit  sebelum  pemberian  air  seduhan kelopak  bunga  rosela  merah  probabilitasnya adalah  0,135  >  0,05  yang  menunjukan  bahwa data  tersebut  berdistribusi  normal.  Data  jumlah leukosit  setelah  pemberian  air  seduhan  kelopak bunga  rosela  merah  probabilitasnya  adalah  0,513
>  0,05  yang  menunjukan  bahwa  data  tersebut berdistribusi normal.
2. Hasil Uji Paired T-Test
Uji Paired  T-Test bertujuan  untuk  mengetahui perbedaan jumlah leukosit pada darah tepi hewan coba  tikus  putih  sebelum  dan  setelah  pemberian air  seduhan  kelopak  bunga  rosela  merah.  Uji Paired T-Test dilakukan dengan bantuan
komputer program SPSS pada tingkat kepercayaan  95%  (α  0,05).  Adapun  hasil  uji Paired T-Test dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4.   Hasil uji Paired T-Test Dari Hasil Pemeriksaan Jumlah Leukosit Pada Darah Tepi Hewan Coba Tikus Putih Sebelum dan Setelah Pemberian Air Seduhan Kelopak Bunga Rosela
Paired Samples Test
Paired Differences
t df Sig. (2- tailed) Mean Std. Deviation Std. Error Mean 95% Confidence Interval of the
Difference Lower Upper
P a i
r 1 jumlah Lekosit sebelum pemberian air seduhan kelopak  bunga  rosela  2%  - jumlah Lekosit
setelah
pemberian air seduhan kelopak bunga rosela 2% - 6.08850E 3 2596.765 14 821.16 924 - 7946.113 87 - 4230.886 13 - 7.414 9 .000
Tabel  4  menunjukan  hasil  analisis Paired  T-Test pada  jumlah  leukosit  tikus  putih  sebelum  dan setelah  pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga rosela  merah  ( Hibiscus  sabdariffa )  memiliki perbedaan yang bermakna karena probabilitasnya
0,000  <  α  0,05,  dengan  demikian  H 0 yang menyatakan  tidak  ada  perbedaan  jumlah  leukosit pada  darah  tepi  hewan  coba  tikus  putih  sebelum dan setelah pemberian air seduhan kelopak bunga rosela  merah  ditolak,  sedangkan  H a yang
menyatakan  ada  perbedaan  jumlah  leukosit  pada darah tepi hewan coba tikus sebelum dan setelah pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela merah  diterima.  Dalam  hal  ini,  artinya  terdapat pengaruh  pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga rosela  merah  ( Hibiscus  sabdariffa )  terhadap jumlah  leukosit  pada  darah  tepi  hewan  coba ( Rattus norvegicus ) strain Wistar.

## PEMBAHASAN
Sel  darah  putih  (Leukosit)  adalah  sel  lain yang  terdapat  di  dalam  darah.  Pada  umumnya leukosit  berperan  dalam  mempertahankan  tubuh terhadap penyusupan benda asing yang kemungkinan dapat  membahayakan  tubuh.  Jumlah  leukosit  di dalam  darah  tidak  sebanyak  sel  darah  merah  (SDM) yaitu  berada  dalam  jumlah  antara  0,1-0,2%  dari jumlah  SDM.  Leukosit  tidak  diperlukan  tiap  saat  di seluruh tubuh. Sel ini hanya diperlukan pada tempat- tempat  tejadinya  konflik  dengan  benda  asing. Apabila benda asing yang masuk dalam tubuh cukup banyak,  sebagian  dari  leukosit  akan  memperbanyak diri dengan mitosis di luar jaringan sumsum tulang.
Jumlah normal leukosit mempunyai rentangan  yang  cukup  luas,  yaitu  antara  5.000- 10.000/µL.  Setiap  saat    tubuh  seseorang  akan  selalu kontak dengan benda asing  sehingga jumlah leukosit tersebut  dapat  berubah-ubah  dari  waktu  ke  waktu, dalam  batas-batas  yang  masih  bisa  di  kontrol  oleh tubuh  tanpa  menimbulkan  gangguan  fungsi.  Bila jumlah  keseluruhan  leukosit  di  atas  10.000/µL,  hal ini  menandakan  tubuh  seseorang  sedang  terjadi konflik dengan benda asing dalam jumlah yang lebih besar  dari  biasanya,  yang  dapat  disebabkan  oleh berbagai  hal  seperti  infeksi  (Sadikin,  2002).  Pada
hasil  penelitian  menunjukan  rerata  jumlah  leukosit pada  darah  hewan  coba  sebelum  pemberian  air seduhan  kelopak  bunga  rosela  merah  adalah 4060/µL,  dan  rerata  jumlah  leukosit  pada  darah  tepi hewan  coba  setelah  pemberian  air  seduhan  kelopak bunga rosela merah adalah 8120/µL.
Hasil  penelitian  perbedaan  jumlah  leukosit pada  darah  tepi  hewan  coba  tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  strain Wistar sebelum  dan  setelah pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela  merah ( Hibiscus sabdariffa ) yang diperiksa dengan menggunakan  alat  automatik  Sysmex Emerald dan dianalisa  dengan  uji  statistik Paired  T-Test pada tingkat  kepercayaan  95%  menunjukan  adanya perbedaan yang bermakna yang dibuktikan dari hasil uji statistik dengan probabilitas 0,000 <  α 0,05. Hal ini  menunjukan  bahwa  air  seduhan  kelopak  bunga rosela merah ( Hibiscus sabdariffa ) dapat meningkatkan  jumlah  leukosit    yang  berperan penting dalam sistem pertahanan tubuh.
Selain  terjadi  peningkatan  jumlah  leukosit, disisi lain juga terjadi peningkatan jenis leukosit pada darah tepi hewan coba tikus putih yaitu jenis limfosit. Hal  ini  dapat  dilihat  dari  hasil  pembacaan diffcount pada  Tabel  2.  peningkatan  tersebut  dapat  terjadi karena  adanya  beberapa  kandungan  gizi  pada kelopak  bunga  rosela  yang  memiliki  peranan  dalam hal  peningkatan  jumlah  leukosit  dan  persentase limfosit. Kandungan gizi yang terdapat pada kelopak bunga  rosela  diantaranya  yaitu  vitamin  C,  Fe,  asam folat  dan  beberapa  asam  amino  yaitu  asam  amino essensial  (lisin  dan  arganin).  Semua  kandungan  gizi tersebut merupakan komponen yang sangat
dibutuhkan  untuk  metabolisme  tubuh  khususnya leukosit.
Vitamin  C  dalam  leukosit  digunakan sebagai  satu  komponen  penunjang  bagi  kehidupan sel  tersebut.  Schmidt  (1985)  dalam  Asmanik  (2005) menyatakan bahwa, konsentrasi vitamin C dalam sel granulosit  yaitu  10-40  kali  lebih  tinggi  daripada konsentrasi  dalam  plasma.  Hal  tersebut  menunjukan adanya transport vitamin C ke dalam sel secara aktif.
Keberadaan  vitamin  C  dalam  leukosit sangat  menunjang  kehidupan  sel  tersebut,  karena vitamin  C  berfungsi  sebagai  antioksidan  yang  dapat melindungi  dari  radikal  bebas.  Hariyatmi  (2004) dalam Iswara (2009) menyatakan bahwa, antioksidan adalah substansi yang diperlukan tubuh untuk radikal bebas  dan  mencegah  kerusakan  yang  ditimbulkan oleh  radikal  bebas  terhadap  sel  normal,  protein,  dan lemak.  Antioksidan  menstabilkan  radikal  bebas dengan  melengkapi  kekurangan  elektron  yang dimiliki  radikal  bebas,  dan  menghambat  terjadinya reaksi berantai dari pembentukan radikal bebas yang dapat menimbulkan stres oksidatif.
Radikal  bebas  dalam  tubuh  merupakan bahan  yang  sangat  berbahaya.  Bahan  radikal  bebas tersebut  sebenarnya  merupakan  senyawa  atau molekul  yang  mengandung  satu  atau  lebih  elektron yang  tidak  berpasangan  pada  bagian  orbital  luarnya. Adanya elektron yang tidak berpasangan itulah yang mengakibatkan senyawa tersebut sangat reaktif untuk mencari  pasangannya  yaitu  dengan  cara  mengikat atau  menyerang  elektron  molekul  yang  berada disekitarnya.  Umumnya  radikal  bebas  mengikat molekul  besar  seperti  lipid,  protein,  maupun  DNA (pembawa  sifat).  Apabila  itu  terjadi,  akibatnya
adalah  kerusakan  sel  atau  pertumbuhan  sel  yang tidak  bisa  dikendalikan  (bisa  menimbulkan  kanker) (Sunardi, 2007).
Radikal  bebas  dapat  berasal  dari  hasil metabolisme  tubuh  dan  faktor  eksternal  seperti  hasil penyinaran  ultra  violet,  zat  kimiawi  dalam  makanan dan  polutan  lain.  Penyakit  yang  disebabkan  oleh radikal  bebas  biasanya  bersifat  kronis,  yaitu membutuhkan  waktu  bertahun-tahun  untuk  penyakit tersebut  menjadi  nyata.  Radikal  bebas  yang mengambil  elektron  dari  sel  tubuh  manusia  dapat menyebabkan    perubahan  struktur  DNA  sehingga timbullah  sel-sel  matur.  Bila  perubahan  DNA  ini terjadi bertahun-tahun, maka dapat menjadi penyakit kanker (Sunardi, 2007).
Secara terus-menerus radikal bebas terbentuk melalui peristiwa metabolisme, peradangan,  kekurangan  gizi  serta  respon  terhadap pengaruh  dari  luar  tubuh,  sehingga  peranan  vitamin C  sangatlah  dibutuhkan.  Vitamin  C  sebagai antioksidan  dapat  melindungi  membran  sel  dari destruksi radikal bebas dengan menyumbangkan satu elektron  pada  radikal  bebas  agar  lebih  stabil  dan tidak reaktif. Peranan vitamin C dalam penelitian ini dengan  terjadinya  peningkatan  jumlah  leukosit  yaitu dengan  melakukan  perlindungan  terhadap  sel-sel leukosit  tersebut  dari  radikal  bebas.  Hal  tersebut dilakukan  agar  jumlah  sel  tersebut  tidak  mengalami penurunan yang disebabkan penuaan sel dan berakhir pada apoptosis. Selain berfungsi sebagai antioksidan, vitamin C dapat membantu mempercepat pengabsorbsin  Fe  yang  juga  terdapat  pada  kelopak rosela. Besi pada saluran pencernaan dengan bantuan vitamin  C  dan  asam  amino  akan  mengalami  proses
reduksi  dari  bentuk  ferri  (Fe 3+ )  menjadi  ferro  (Fe 2+ ) yang mudah diserap. (Winarno,2004).
Zat besi dalam bentuk ferro yang terabsorbsi akan  mengaktifkan  enzim  reduktase  ribonukleutida. Enzim  tersebut  merupakan  salah  satu  komponen yang  dibutuhkan  untuk  sintesis  DNA  sebagai  salah satu  tahapan  mitosis  pada  sel,  sehingga  membantu terjadinya  pembentukan  sel  baru.  Besi  merupakan mineral  mikro  yang  esensial  bagi  tubuh,  terutama pada  proses  hemopoiesis  (pembentukan  sel  darah). Bentuk  konjugasi  Fe  yang  bertugas  mentransfer  Fe ke jaringan hemopoetik pada sumsum tulang sebagai pusat produksi sel darah adalah transferin (Sediaoetama, 1985).
Transferin  terdapat  dalam  dua  bentuk  yaitu transferin mukosa dan transferin reseptor. Transferin mukosa membawa Fe dari saluran cerna ke dalam sel mukosa  dan  memindahkannya  pada  transferin reseptor  yang  terdapat  pada  sel  mukosa.  Transferin reseptor  mengangkut  Fe  melalui  darah  ke  jaringan tubuh  yang  membutuhkan,  sedangkan  transferin mukosa  kembali  mengikat  Fe  dari  saluran  cerna (Almatsier, 2003).
Peningkatan  jumlah  leukosit  yang  terjadi pada  penelitian  ini  juga  disebabkan  oleh  kandungan asam folat yang terdapat pada kelopak Rosela. Asam folat  dikenal  sebagai  folasin  yang  turut  serta  dalam pembentukan beberapa asam amino dan pembentukan  beberapa  komponen  penting  termasuk pembentukan  sel  darah  dengan  cara  membantu proses sintesis DNA (Almatsier, 2003).
Folat  dalam  makanan  terdapat  sebagai poliglutamat yang harus dihidrolisis menjadi monoglutamat  dalam  mukosa  usus  halus  agar  dapat
diserap  oleh  aliran  darah.  Pencernaan  ini  dilakukan oleh  enzim  hidrolase,  terutama conjugase pada mukosa bagian atas usus halus. Hidrolisis poliglutamat  dibantu  oleh  seng.  Setelah  dihidrolisis, monoglutamat  folat diikat oleh reseptor  folat  khusus pada  mikrovili  dinding  usus  halus  yang  juga merupakan alat angkut vitamin tersebut. Folat dalam sel  kemudian  diubah  menjadi  5-metil-tetrahidrofolat dan  dibawa  ke  hati  diubah  menjadi  asam tetrahidrofolat (THFA) dengan gugus metil disumbangkan pada metionin. Tetrahidrofolat bereaksi  dengan  enzim  poliglutamat  sintetase  untuk membentuk kembali poliglutamil folat yang kemudian  berikatan  dengan  beberapa  enzim  dan melakukan sebagian besar fungsi metabolik diantaranya  yaitu  dalam  proses  pembentukan  sel darah (Almatsier, 2003).
Asam  folat  diekskresikan  melalui  urine, cairan  empedu  dan  ditemukan  pula  dalam  tinja. Sebagian asam folat dalam cairan empedu mengalami enterohepatic  cycle asam  folat  yang ditemukan  dalam  tinja  sebagian  berasal  dari  hasil sintesis mikroflora usus (Sediaoetama, 1985).
Hasil  penelitian  ini,  telah  membuktikan bahwa  pemberian  air  seduhan  kelopak  rosela  merah ( Hibiscus  sabdariffa )  juga  dapat  meningkatkan jumlah  leukosit.  Peningkatan  jumlah  leukosit tersebut  dapat  terjadi  dikarenakan  kandungan  gizi yang  terdapat  pada  kelopak  Rosela  yang  memiliki potensi  dalam  hal  membantu  proliferasi  limfosit. Beberapa kandungan gizi tersebut akan menstimulusi proliferasi  leukosit  yang  terjadi  di  sumsum  tulang. Walaupun pada penelitian ini mempunyai kelemahan dimana  peneliti  tidak  mengetahui  bahwa  tikus  yang
dijadikan  sebagai  bahan  percobaan  mengalami anemia atau tidak.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Rerata  jumlah  leukosit  pada  darah  tepi  hewan  coba sebelum pemberian air seduhan kelopak bunga rosela adalah  4060/µL.  Rerata  jumlah  leukosit  pada  darah tepi  hewan  coba  setelah  pemberian  air  seduhan kelopak bunga rosela adalah 8120/µL. Ada pengaruh pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela  merah ( Hibiscus  sabdariffa )  terhadap  jumlah  leukosit  pada darah  tepi  hewan  coba  tikus  putih  ( Rattus norvegicus ) strain Wistar.

## Saran
Untuk  masyarakat  dapat  menggunakan kelopak  bunga  rosela  merah  ( Hibiscus  sabdariffa ) sebagai  obat  herbal  pengganti  suplemen  dalam meningkatkan daya tahan tubuh karena telah terbukti dapat  meningkatkan  jumlah  leukosit  yang  berperan penting  dalam  sistem  pertahanan  tubuh.  Perlu penelitian  lebih  lanjut  terhadap  air  seduhan  kelopak bunga  rosela  merah  pada  orang  dengan  gangguan penyakit tertentu.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,
2013. http://triksehatbugar.blogspot.com/2013/05/ waspadai-bahaya-suplemen-makanan.html. tnggal 7-7-2013.
Almatsier,  Sunita.  2003. Prinsip  dasar  Ilmu  Gizi . Jakarta : PT. Gramedia Pustaka  Utama.
Asmanik.  2005. Pengaruh  Pemberian  Vitamin  C Terhadap  Kuantitas  Leukosit  Mencit ( Mus musculus ).  Malang  :  Universitas  Islam Negeri Malang. Skripsi.
Brunner  &  Suddarth,  2001. Buku  Ajar  Keperawatan Medikal Bedah Edisi 8. Jakarta : EGC.
Gandasoebrata,  R,  2009. Penuntun  Laboratorium Klinik Cetakan 15. Jakarta : Dian Rakyat.
Harmita  dan  Maksum  Radji,  2008. Buku  Ajar Analisis Hayati Edisi III. Jakarta : EGC. Iswara, Arya. 2009. Pengaruh pemberian antioksidan  vitamin  C  dan  E  terhadap Kualitas Spermatozoa Tikus Putih Terpapar Allethrin .  Semarang  :  Universitas  Negeri Semarang.
Sadikin,  Mohamad,  Haji  DSc.,  2002. Biokimia Darah Cetakan I . Jakarta : Widya Medika.
Sediaoetama,  Achmad  Djaeni.  1985. Ilmu  Gizi .
Jakarta : PT. Dian Rakyat.
Soewolo,    2000. Fisiologi  Manusia .  Malang  :  UM Press.
Stephen  J.  M  &  William  F.G,  2010.  Patofisiologi Penyakit  Pengantar  Menuju  Kedokteran Klinik Edisi V. Jakarta : EGC.
Subowo,  1993. Imunologi  Klinik .  Bandung  : Angkasa.
Sunardi,  Ilham  Kuncahyo.  2002. Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Belimbing  Wuluh (Averrhoa  bilimbi,  l.)  Terhadap  1,1- diphenyl-2- Picrylhidrazyl (dpph ).
Yogyakarta : Universitas Setia Budi.
Widyanto    P.S  &  Nelistya  A,  2009. Rosela  Aneka Olahan,  Khasiat,  &  Ramuan,  Cetakan  III .
Jakarta : Penebar Swadaya.
Winarno,  2004. Kimia  Pangan  dan  Gizi .  Jakarta  : PT. Gramedia.
Yuliarti, Nuerheti, 2009. A To Z Supplement Edisi I. Yogyakarta : ANDI.