March 2017
FORMULASI MIKROEMULSI EKSTRAK TERPURIFIKASI DAUN BAYAM MERAH ( Amaranthus tricolor L.) SEBAGAI SUPLEMEN ANTIOKSIDAN
MICROEMULSION FORMULATIONS OF PURIFIED EXTRACT OF RED LEAVES SPINACH( Amaranthus tricolor L.)AS ANTIOXIDANT SUPPLEMENTS
Dwi Lestari Handayani*, Yusriadi, Ririen Hardani Jurusan Farmasi,Fakultas MIPA,UniversitasTadulako, Palu.
Received  9 Juni 2016/Accepted  4 Oktober 2016

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  mengenai  formulasi  mikroemulsi  ekstrak  terpurifikasi  daun  bayam  merah ( Amaranthus  tricolor L.)  sebagai  suplemen  antioksidan  dengan  tujuan  untuk  dapat  mengetahui  formula  yang dapat  membentuk  sediaan  mikroemulsi  yang  memenuhi  stabilitas  mutu  fisik  dan  mengetahui  aktivitas antioksidan  (IC 50 )  dari  sediaan.Ekstrak  dibuat  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96% kemudian  selanjutnya  dilakukan  purifikasi  menggunakan  pelarut  n-heksan  dan  etil  asetat,  setelah  itu  diuji aktivitas antioksidannya. Formula yang dapat membentuk mikroemulsi ekstrak terpurifikasi daun bayam merah yang jernih adalah menggunakan minyak kelapa murni (VCO) sebesar 15%, tween 80 sebesar 40%, dan gliserin sebesar 35%. Uji stabilitas fisik yang dilakukan meliputi uji organoleptis, pengukuran diameter globul, uji pH, uji  viskositas  dan  uji  sentrifugasi.Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  secara in-vitro menggunakan  metode peredaman DPPH dan menggunakan Vitamin C sebagai kontrol positif. Data hasil pengukuran dianalisis secara statistik  menggunakan  metode paired  samples  T  test. .  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  mikroemulsi  ekstrak terpurifikasi daun bayam merah menunjukkan nilai IC 50 pada hari ke-1 sebesar 1,83 ppm dan hari ke-28 sebesar 3,71 ppm. Sedangkan mikroemulsi vitamin C menunjukkan nilai IC 50 pada hari ke-1 sebesar 0,24 ppm dan hari ke-28 sebesar 2,51 ppm. Meskipun mengalami penurunan aktivitas antioksidan, namun masing-masing sediaan masuk dalam kategori antioksidan yang sangat kuat.
Kata kunci : Mikroemulsi, Amaranthus tricolor L, stabilitas fisik, DPPH.

## ABSTRACT
A  research  has  conducted  about  the  microemulsion  formulation  of  purified  extract  of  red  spinach leaves  ( Amaranthus  tricolor L.)  as  an  antioxidant  supplement  with  the  aim  to  be  able  to  know  the  formula  to form a microemulsion which meet the physical quality stability and determine antioxidant activity (IC50) of the preparation. Extracts prepared by maceration method using ethanol 96% and then later do the purification using solvent  n-hexane  and  ethyl  acetate,  after  it  tested  its  antioxidant  activity.  Formula  to  form  a  microemulsion purified extract of red spinach leaves clear is to use virgin coconut oil (VCO) by 15%, tween 80 for 40%, 35% glycerin and 10% distilled  water. Physical stability test  was conducted on the organoleptic test,  measuring the diameter  of  globules,  pH  test,  test  and  test  viscosity  centrifugation.  Test  of  antioxidant  activity  in  vitro  using DPPH  method  and  using  Vitamin  C  as  a  positive  control.  Measurement  data  were  statistically  analyzed  using paired samples T test. The test results of antioxidant activity microemulsion purified extracts of spinach leaves, red  show  IC50  values  on  day  1  was  1.83  ppm  and  the  28th  day  amounted  to  3.71  ppm.  While  vitamin  C microemulsion shows IC50 values  on day 1 of 0.24 ppm and the 28th day of 2.51 ppm. Despite the decreased antioxidant activity, but each of the stocks included in the category of very powerful antioxidants.
Keyword : Microemulsion, Amaranthus tricolor L, physic stability, DPPH .
*Corresponding Author: Dwi Lestari Handayani anhiinonk@gmail.com (ph: +62-823-9570-2333)

## PENDAHULUAN
Mikroemulsi  merupakan  suatu  sistem dispersi  yang  dikembangkan  dari  sediaan emulsi.Mikroemulsi  adalah  dispersi  isotropik yang  terdiri  dari  fase  minyak  dan  fase  air  yang distabilkan  oleh  molekul  surfaktan  dan  atau  ko- surfaktan  pada  lapisan  antar  muka  (Volkov, 2001).Bila  dibandingkan  dengan  emulsi,  banyak karakteristik  dari  mikroemulsi  yang  membuat sediaan  ini  menarik  untuk  digunakan  sebagai salah  satu  sistem  penghantaran  obat,  antara  lain mempunyai kestabilan dalam jangka waktu yang lama  secara  termodinamika,  kenampakan  jernih dan  transparan,  memiliki  viskositas  rendah, tegangan  antarmuka  rendah,  terbentuk  secara spontan, mempunyai daya larut yang tinggi serta mempunyai kemampuan penetrasi yang baik.
Adapun komponen pembentuk mikroemulsi  yang  digunakan  terdiri  dari  fase minyak yaitu VCO, surfaktan yaitu tween 80 dan kosurfaktan  gliserin. Virgin  Coconut  Oil ( VCO ) kaya  asam  lemak  rantai  medium  terutama  asam laurat,  berpotensi  sebagai  fase  minyak  pada pembuatan  mikroemulsi o/w serta  memiliki aktivitas  antioksidan.  Tween  80  merupakan surfaktan  nonionik  yang  memiliki  toksisitas rendah sehingga dapat digunakan untuk penggunaan  oral  dan  parenteral  (Marina,  dkk, 2009) nilai HLBnya 14,9 (Ansel, 2008). Gliserin digunakan  dalam  berbagai  formulasi  farmasi termasuk  oral,  topikal,  dan  parenteral.  Gliserin digunakan  sebagai  kosurfaktan  pada  beberapa formulasi  mikroemulsi  karena  tidak  rentan terhadap  oksidasi  pada  penyimpanan  serta  dapat digunakan  sebagai  peningkat  viskositas  (Rowe, 2009).
Salah  satu  tumbuhan  yang  berpotensi sebagai  antioksidan  adalah  bayam  merah ( Amaranthus tricolor L.). Adapun senyawa yang berpotensi  sebagai  antioksidan  yaitu  flavanoid, antosianin  dan  vitamin  C  (Supriyatna,  dkk., 2014).  Jenis  ini  sering  digunakan  sebagai  obat alami, secara empiris untuk mencegah osteoporosis,  mengobati  penyakit  kuning,  alergi, menjaga kesehatan mata dan kulit, meningkatkan kadar  hemoglobin  dalam  darah  dan  mengobati luka bakar. Ekstrak terpurifikasi yaitu suatu hasil ekstraksi  selektif  yang  hanya  menyari  senyawa- senyawa  yang  berguna  dan  membatasi  sekecil mungkin  zat  yang  tidak  dibutuhkan  ikut  tersari seperti  komponen  zat  ballast  (Balai  Besar Penelitian  Dan  Pengembangan  Pascapanen Pertanian).

## METODE PENELITIAN BAHAN
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  daun  bayam  ( Amaranthus tricolor L.),  koran,  tween  80,  gliserin,  VCO, akuades,  etanol  pro  analisis,  vitamin  C,  etanol 96%, etil asetat, n-hexana, DPPH, dan aluminium foil.

## METODE Pengambilan Sampel
Bayam merah terlebih dahulu dipisahkan dari  akar  dan  batangnya,  selanjutnya  dicuci dengan air mengalir sampai bersih dan ditiriskan. Kemudian  dirajang  kecil-kecil,  lalu  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  dalam  ruangan, setelah itu disortasi kering dan diblender.

## Ekstraksi Sampel
Sebanyak  1000  g  serbuk  kering  daun bayam  merah  ( Amaranthus  tricolor L.)direndam dengan  etanol  secukupnya  selama  3  x  24  jam dalam wadah maserasi dan dilakukan pengadukan setiap hari kemudian disaring. Filtrat yang  diperoleh  diuapkan  dengan  menggunakan rotary evaporator (rotavapor) sehingga diperoleh ekstrak kental.

## Pembuatan  Ekstrak  Terpurifikasi Daun Bayam Merah
Sebanyak  20  g  ektrak  etanol  dilarutkan dalam  etanol  96%  sampai  larut,  kemudian ditambahkan  40  ml  air  suling,  dimasukkan  ke dalam corong pisah, lalu ditambahkan 100 ml  n- heksana,  lalu  dikocok,  dan  didiamkan  sampai terdapat  2  lapisan  yang  terpisah.  Lapisan    n- heksana  (lapisan  atas)  diambil  dengan  cara dialirkan,  dan  fraksinasi  dilakukan  sampai lapisan    n-heksana  jernih.  Lapisan    n-heksana yang  dikumpulkan  disimpan  dalam  wadah. Kemudian  pada    residu    (sisa)  ditambahkan  100 ml  etilasetat,  lalu  dikocok,  didiamkan  sampai terdapat 2 lapisan yang terpisah, lapisan etilasetat (lapisan atas) diambil dengan cara dialirkan, dan fraksinasi  dilakukan  sampai  lapisan  etilasetat jernih.  Lapisan  etilasetat  yang  dikumpulkan disimpan  dalam  wadah.  Lapisan  air  (sisa) diambil dan dipekatkan dengan rotary evaporator sehingga  didapat  fraksi  air  (Bassett, et al ., 1994).

## Identifikasi Senyawa
a. Uji Flavonoid Sebanyak  0,5  mg  ekstrak  terpurifikasi  daun bayam  merah  ditambahkan  serbuk  Mg  2  mg,
lalu  tambahkan  3  tetes  HCl  pekat.  Larutan berwarna orange menunjukkan positif flavanoid (Harbone, 1987).
b. Uji Antosianin Sebanyak  0,5  g  ekstrak  terpurifikasi  daun bayam merah ditambahkan HCl 2M sebanyak 5 ml kemudian dipanaskan hingga suhu100ºC selama  5  menit.  Hasil  positif  bila  timbul warna merah (Harbone, 1987).
c. Uji Vitamin C Sebanyak  2  ml  ekstrak  terpurifikasi  daun bayam merah ditambahkan 4 tetes larutan biru metilen  P,  panaskan  hingga  suhu  40ºC.  Hasil positif  bila  warna  biru  tua yang  dalam  waktu
3  menit  berubah  menjadi  biru  muda  atau hilang (Depkes, 1979).
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Terpurifikasi Daun Bayam (Molyneux, 2004)
a. Pembuatan Larutan Induk DPPH (0,5 mM) Ditimbang  4,929  mg  DPPH,  masukkan dalam  labu ukur  25  ml,    ditambah  etanol  pro analisis sampai tanda batas dan kocok.
b. Pembuatan Larutan Blanko Dipipet  sebanyak  5  ml  larutan  DPPH induk,  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  lalu ditambahkan etanol pro analisis hingga 25 ml.
c. Pengukuran Serapan Blanko Dipipet  4  ml  larutan  blanko,  kemudian dihomogenkan dan dibiarkan selama 30 menit selanjutnya diukur serapannya pada   panjang gelombang 517 nm.
d. Larutan Pembanding Vitamin C Ditimbang  vitamin  C  pro  analisis sebanyak 10 mg. Dilarutkan dengan air bebas CO 2 secukupnya,  dimasukkan  ke  dalam  labu ukur  10  ml  lalu  ditambahkan  etanol  pro analisis  hingga  10  ml,  sehingga  konsentrasi yang  diperoleh  yaitu  1000  ppm.  Selanjutnya lakukan  pengenceran  bertingkat,  dipipet 1  ml dari masing-masing pengenceran dan masukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  ml.  Ke dalam  tiap  labu  ukur  ditambahkan  1,5  ml larutan  DPPH  blanko  kemudian  dicukupkan dengan  etanol  pro  analisis  hingga  didapat konsentrasi 0,001  ppm,  0,01  ppm,  1  ppm,  10 ppm. Dari masing-masing  konsentrasi dipipet 4  ml  lalu  didiamkan  selama  30  menit kemudian diukur absorbansinya pada panjang gelombang 517 nm.
e. Pembuatan Larutan Uji Ditimbang  10  mg  ekstrak.  Dilarutkan dengan air bebas CO 2 secukupnya, dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  ml  , sehingga  konsentrasi  yang  diperoleh  yaitu
1000  ppm.  Selanjutnya  lakukan  pengenceran bertingkat,  dipipet  1  ml  dari  masing-masing pengenceran  dan  masukkan  ke  dalam  labu ukur  10  ml.  Ke  dalam  tiap  labu  ukur ditambahkan  1,5  ml  larutan  DPPH  blanko kemudian  dicukupkan  dengan  etanol  pro analisis  hingga  didapat  konsentrasi  0,001 ppm, 0,01 ppm, 1 ppm, 10 ppm. Dari masing- masing  konsentrasi  dipipet  4  ml  didiamkan selama 30 menit kemudian diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  517 nm.

## Formulasi
a. Orientasi Basis Orientasi basis dilakukan untuk menentukan  komposisi  bahan  yang  sesuai untuk  menghasilkan  sediaan  mikroemulsi yang  jernih.  Pada  orientasi  ini,  mikroemulsi dibuat  dengan  memvariasikan  fase  minyak, surfaktan  dan  kosurfaktan  serta  kecepatan pengadukan. Dimana basis mikroemulsi yang digunakan  berupa  VCO  sebagai  fase  minyak (15%  -  30%),  tween  80  sebagai  surfaktan (20% - 40%) dan gliserin sebagai kosurfaktan (15% - 35% serta kecepatan pengadukan yang digunakan yaitu kecepatan rendah dan tinggi.
b. Formula Berdasarkan  orientasi  yang  dilakukan, dipilih  basis  yang  menghasilkan  mikroemulsi yang  jernih  dan  transparan  kemudian  pada formula terpilih tersebut ditambahkan ekstrak terpurifikasi daun bayam merah sebanyak 0,1 %.
c. Cara Pembuatan Sediaan mikroemulsi yang dibuat sebanyak 100 ml. Masukkan ekstrak tepurifikasi  daun  bayam  merah  ke  dalam cawan  porselin,  dilarutkan  dengan  tween  80, kemudian diaduk hingga homogen. Kemudian masukkan  VCO  ke  dalam  gelas  kimia,  lalu ditambahkan  campuran  ekstrak  tepurifikasi daun  bayam  merah  dan  tween  80,    kemudian diaduk  dengan  menggunakan  magnetik  stirer dengan  kecepatan  rendah  selama  10  menit. Selanjutnya  tambahkan  gliserin  ke  dalam campuran  tersebut    lalu  diaduk  kembali dengan  kecepatan  rendah  menggunakan magnetik  stirer  selama  10  menit.  Setelah  itu tambahkan  akuades  ke  dalam  campuran tersebut dengan pengadukan konstan menggunakan  magnetik  stirer  kecepatan rendah  hingga  30  menit.  Selanjutnya  hasil yang  diperoleh  dimasukkan  ke  dalam  wadah dan ditutup rapat.

## Uji Stabilitas Sediaan Mikroemulsi
a. Pemeriksaan Organoleptis Pemeriksaan organoleptis meliputi konsistensi,  warna  dan  bau  yang  diamati secara visual (Depkes RI, 1995).
b. Pengukuran Diameter Globul Pengukuran ini dilakukan dengan mikroskop optik, dimana mikroemulsi diletakkan  pada  kaca  objek  dan  ditutup dengan  kaca  penutup.  Pengamatan  ini dilakukan pada pembesaran tertentu. Distribusi  ukuran  partikel  dapat  diamati dengan  mikrometer  yang  telah  dikalibrasi (Oktaviani, 2014).
c. Uji pH
Pengukuran pH dilakukan dengan menggunakan pH meter. Pengukuran
dilakukan  selama  4  minggu  setiap  1  minggu sekali (Jufri, 2004). d. Uji Viskositas Pengukuran dilakukan dengan viskometer Brookfield. Pengamatan viskositas  mikroemulsi  dilakukan  selama  4 minggu setiap 1 minggu sekali (Jufri, 2004).
e. Uji Sentrifugasi
Sedian  mikroemulsi  dimasukkan  ke dalam tabung sentrifugasi kemudian
dilakukan  pengocokan  atau  sentrifugasi  pada kecepatan  3750  rpm  selama  5  jam  dengan pengamatan tiap 15 menit (Jufri, 2004).
f. Pengukuran Penurunan Aktivitas Antioksidan dengan  metode  peredaman    DPPH  (2,2- difenil-1-picrilhidrazil)
Sebanyak 10 mg  mikroemulsi dilarutkan dalam  etanol  pro  analisis  hingga  volumenya menjadi  10  ml,  dimana  konsentrasi  yang diperoleh  adalah  1000  ppm.  Selanjutnya lakukan  pengenceran  bertingkat,  dipipet 1  ml dari masing-masing pengenceran dan masukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  ml.  Ke dalam  tiap  labu  ukur  ditambahkan  1,5  ml larutan  DPPH  blanko  kemudian  dicukupkan dengan  etanol  pro  analisis  hingga  didapat konsentrasi 0,001  ppm,  0,01  ppm,  1  ppm,  10 ppm. Dari masing-masing  konsentrasi dipipet 4  ml  didiamkan  selama  30  menit  kemudian diukur absorbansinya pada panjang
gelombang  517  nm.  Uji  penurunan  aktivitas antioksidan  mikroemulsi  ekstrak  daun  bayam dilakukan  sebanyak  2  kali  selama  28  hari penyimpanan yaitu hari ke-1 dan hari ke-28.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  pada  pengamatan organoleptis, uji sentrifugasi, pengukuran diameter  globul  dan  uji  aktivitas  antioksidan mikroemulsi  selama  28  hari  penyimpanan dibandingkan  secara  deskriptif  sehingga  dapat diketahui  sediaan  mikroemulsi  yang  stabil. Dimana pengukuran aktivitas antioksidan mikroemulsi  dilakukan  dengan  menggunakan metode  DPPH  dan  untuk  menentukan  besarnya aktivitas antioksidan (IC 50 ) menggunakan metode persamaan  garis  regresi  linear  dengan  rumus Y  =  aX  +  b.    Sedangkan paired  sample  T  test digunakan  untuk  mengetahui  adanya  perbedaan pH dan viskositas dengan selang waktu 1, 7, 14, 21 dan 28 hari.

## HASIL

## Hasil Identifikasi Tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di UPT. Sumber  Daya  Hayati  Sulawesi,  Universitas Tadulako  menyatakan  bahwa  tumbuhan  yang digunakan dalam penelitian ini adalah tumbuhan bayam  merah  ( Amaranthus  tricilor L.)  yang diperoleh  dari  Kelurahan  Balaroa,  Kecamatan Palu Barat, Sulawesi Tengah.

## Hasil Pembuatan Ekstrak Terpurifikasi Daun Bayam Merah
Simplisia  sebanyak  1000  g  diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol  96%  sebanyak  15  Liter.  Hasil  ekstrak kental etanol daun bayam  merah yaitu 120,26 g, sedangkan hasil ekstrak terpurifikasi daun bayam merah  yaitu  41,34  g  sehingga  rendemen  yang diperoleh yaitu 34,37%.
Tabel 1. Hasil identifikasi senyawa
No. Komponen Hasil 1 Flavonoid + 2 Antosianin + 3 Vitamin C +
Tabel 2. Hasil pengujian antioksidan ekstrak terpurifikasi daun bayam merah
Tabel 3. Hasil orientasi basis
Tabel 4. Formula mikroemulsi
Bahan Fungsi Konsentrasi (%) Ekstrak terpurifikasi daun bayam merah Zat aktif 0,1 VCO Fase minyak 15 Tween 80 Surfaktan 40 Gliserin Kosurfaktan 35 Akuades Fase air Ad 100

## Hasil Pengujian Stabilitas Sediaan Mikroemulsi
Tabel 5. Hasil pengamatan organoleptis sediaan mikroemulsi Formula Mikroemulsi Selang Waktu Tekstur Warna Bau Basis Hari ke-1 Kental Kuning Muda Khas Minyak Hari ke-7 Kental Kuning Muda Khas Minyak Hari ke-14 Kental Kuning Muda Khas Minyak Hari ke-21 Kental Kuning Muda Khas Minyak Hari ke-28 Kental Kuning Muda Khas Minyak Ekstrak Terpurifikasi Daun Bayam Merah Hari ke-1 Kental Jingga Khas Minyak Hari ke-7 Kental Jingga Khas Minyak Hari ke-14 Kental Jingga Khas Minyak Hari ke-21 Kental Jingga Khas Minyak Hari ke-28 Kental Jingga Khas Minyak Vitamin C Hari ke-1 Kental Kuning Khas Minyak Hari ke-7 Kental Kuning Khas Minyak Hari ke-14 Kental Kuning Khas Minyak Hari ke-21 Kental Kuning Khas Minyak Hari ke-28 Kental Kuning Khas Minyak
Sampel IC 50 rata-rata (ppm) ± SD (n=3) EkstrakEtanoldaun bayam merah 6,85 ± 0 Ekstrak terpurifikasidaun bayam merah 3,44 ± 0,12 Vitamin C 0,9 ± 0,03 Bahan Baku Konsentrasi B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 VCO 30% 30% 25% 25% 20% 20% 15% 15% Tween 80 25% 25% 30% 30% 35% 35% 40% 40% Gliserin 15% 20% 20% 25% 25% 30% 30% 35% Akuades 30% 25% 25% 20% 20% 15% 15% 10%
Keruh  Keruh  Keruh  Keruh  Keruh  Keruh  Keruh  Jernih
Tabel 6. Hasil pengukuran diameter globul sediaan mikroemulsi Formula Ukuran Globul (µm) Mikroemulsi Hari ke-1 Hari ke-28 Basis <5 <5 Ekstrak terpurifikasi daun bayam merah <5 <5 Vitamin C <5 <5 Tabel 7. Hasil pengujian sentrifugasi sediaan Formula Mikroemulsi Hasil Basis Tidak terjadi pemisahan fase Ekstrak terpurifikasi daun bayam merah Tidak terjadi pemisahan fase Vitamin C Tidak terjadi pemisahan fase Tabel  8.  Hasil  pengukuran  aktivitas  antioksidan sediaan mikroemulsi Formula Mikroemulsi IC 50 rata-rata (ppm) ± SD (n=3) Hari ke-1 Hari ke-28 Basis 13,93 ± 0,17 15,15 ± 1,06 Ekstrak terpurifikasi daun bayam merah 2,24 ± 0,74 2,89 ± 0,96 Vitamin C 0,72 ± 0,9 3,19 ± 0,76

## PEMBAHASAN
Pengujian
antioksidan dilakukan terhadap ekstrak terpurifikasi daun bayam merah yang  diformulasi  dalam  sediaan  mikroemulsi. Bayam  merah  ( Amaranthus  tricolor L.)  yang digunakan  diperoleh  dari  kelurahan  Balaroa, Kecamatan  Palu  Barat,  Sulawesi  Tengah.  Untuk memastikan  jenis  bayam  merah  yang  digunakan maka  dilakukan  identifikasi  tumbuhan  di  UPT Sumber  Daya  Hayati  Sulawesi  dan  hasilnya menunjukkan  bahwa  tumbuhan  yang  digunakan adalah  bayam  merah  ( Amaranthus  tricolor L.). Bayam merah diekstraksi secara maserasi dengan menggunakan  pelarut  etanol  96%  dan  diperoleh ekstrak  kental  etanol  sebanyak  120,26  g, selanjutnya  dipurifikasi  dengan  menggunakan pelarut  n-heksan  dan  etil  asetat  sehingga
diperoleh  ekstrak  terpurifikasi  sebanyak  41,34  g dengan  rendemen  sebesar  34,37%.  Etanol  96% digunakan sebagai larutan penyari karena bersifat semipolar  sehingga  dapat  menarik  senyawa- senyawa  yang bersifat antioksidan,  tidak menimbulkan  toksik,  dan  banyak  digunakan secara  umum  sebagai  penyari.  Adapun  proses purifikasi  dilakukan  bertujuan  untuk    menyari senyawa-senyawa  yang  berguna  dan  membatasi sekecil  mungkin  zat  yang  tidak  dibutuhkan  ikut tersari seperti komponen zat ballast (karbohidrat, protein,  lemak,  resin,  klorofil).  Pelarut  n-heksan dan etil asetat digunakan dalam proses purifikasi untuk menarik senyawa non polar dan semi polar yang  terkandung  dalam  ekstrak  daun  bayam merah.
Pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak terpurifikasi  daun  bayam  merah  dilakukan dengan  menggunakan  metode  DPPH  (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil) dan menggunakan pembanding  vitamin  C.  DPPH  merupakan senyawa  radikal  bebas  yang  stabil,  dimana warna DPPH berubah dari ungu menjadi kurang berwarna  apabila  kadarnya  berkurang  baik melalui  proses  donasi  hidrogen  maupun  donasi elektron  (Widyastuti,  2010).  Senyawa  yang memiliki  aktivitas  tersebut  dianggap  sebpagai antioksidan  yang  adalah  penangkap  radikal bebas.  Vitamin  C  merupakan  antioksidan    non enzimatis yang berperan sebagai reduktor untuk berbagai  radikal  bebas.  Selain  itu  juga meminimalkan terjadinya kerusakan yang disebabkan  oleh  stres  oksidatif  serta  vitamin  C telah  diketahui  secara  umum  merupakan  salah satu sumber antioksidan (Foyer, 1993). Berdasarkan hasil yang diperoleh ekstrak etanol daun  bayam  merah,  ekstrak  terpurifikasi  daun bayam  merah  dan  vitamin  C  memiliki  aktivitas antioksidan (IC 50 ) yang sangat kuat dengan nilai berturut-turut  sebesar  6,85  ppm,  3,44  ppm  dan 0,88  ppm.  Menurut  Blois  (2003)  aktivitas antioksidan  berdasarkan  nilai  IC 50 nya,  yaitu dapat  dikelompokkan  dalam  beberapa  katagori sangat kuat<50 ppm, kuat (50-100 ppm), sedang (101-250 ppm), lemah (250-500 ppm) dan tidak kuat>500 ppm.
Mikroemulsi terdiri dari fase minyak, air, surfaktan  dan  kosurfaktan.Dalam  penelitian  ini mikroemulsi  yang  dibuat  adalah  mikroemulsi m/a,  dimana  minyak  adalah  fase  dalam  dan  air adalah  fase  luar.Tujuan  dibuat  mikroemulsi minyak dalam air yaitu untuk melindungi ekstrak terpurifikasi daun bayam merah agar aktivitasnya tidak  berubah  dan  tetap  berada  dalam  fase minyak  karena  adanya  lapisan  antar  muka  yang
kuat dari surfaktan dan kosurfaktan.Mikroemulsi tipe  minyak  dalam  air  dapat  menutupi  bau  atau rasa  yang  tidak  enak  dari  fase  minyak  dan  juga mudah dicuci atau dibersihkan sehingga nyaman untuk  digunakan.Minyak  tidak  mudah  larut  di dalam  saluran  pencernaan  maka  dari  itu diformulasikan  menjadi  sediaan  mikroemulsi minyak dalam air.
Mikroemulsi  tersusun  dari  misel-misel yang  dapat  meningkatkan  kelarutan  esktrak terpurifikasi daun bayam merah di dalam saluran pencernaan  sehingga  dengan  cepat  siap  untuk diabsorpsi.Misel  adalah  sistem  koloidal  yang terbentuk  dengan  penyusunan  sendiri  ( self assembling) .Inti  misel  dapat  mensolubilisasi agen  lipofilik,  sedangkan  bagian  luar  hidrofilik berperan  sebagai  penstabil  antarmuka  untuk melindungi  inti  hidrofobik  dari  lingkungan eksternal air. Proses miselisasi berperan meminimalisasi  energi  bebas  dari sistem,  bagian hidrofobik  molekul  tersembunyi  dan  ikatan hidrogen  dibangun  diantara  bagian  hidrofilik dalam air. Misel merupakan calon pembawa obat yang  menarik  untuk  penghantaran  obat  dengan kelarutan  buruk.  Misel  dapat  mensolubilisasi suatu obat pada konsentrasi yang jauh lebih besar dari  kelarutan  intrinsik  bahan  yang  akan menyebabkan  peningkatan  ketersediaan  hayati dan menurunkan toksisitas.
Formulasi  mikroemulsi  diawali  dengan orientasi  basis  sediaan  yang  terdiri  dari  VCO sebagai fase minyak, Tween 80 sebagai surfaktan dan  Gliserin  sebagai  kosurfaktan  Fase  minyak yang  digunakan  adalah  minyak  kelapa  murni (VCO)  dengan  konsentrasi  15%.  Surfaktan  yang digunakan  yaitu  tween  80  dengan  konsentrasi 40%.  Kosurfaktan  yang  digunakan  adalah gliserin dengan konsentrasi 35%. Minyak kelapa murni  (VCO)  digunakan  sebagai  fase  minyak karena tidak mudah berbau tengik dan mengandung  asam  lemak  jenuh  yang  tinggi sehingga  tidak  mudah  untuk  teroksidasi  (Setiaji, 2006).  Tween  80  digunakan  sebagai  surfaktan karena  merupakan  surfaktan  nonionik  yang memiliki  toksisitas  rendah  sehingga  aman  untuk digunakan  (Ansel.  2008).  Tween  80  memiliki nilai  HLB  yang  tinggi  yaitu  14,9,  dimana  untuk menghasilkan  mikroemulsi  m/a  dibutuhkan surfaktan  yang  memiliki  rentang  HLB  8-20%, adapun  nilai  HLB  ini  menunjukkan  sifat  dari surfaktan  untuk  dapat  bercampur  dengan  air. Gliserin  digunakan  sebagai  kosurfaktan  pada beberapa  formulasi  mikroemulsi  karena  tidak rentan terhadap oksidasi pada penyimpanan serta
dapat  digunakan  sebagai  peningkat  viskositas (Rowe,2009).
Pemilihan  surfaktan  dan  kosurfaktan merupakan  tahap  yang  sangat  penting  dalam pembuatan mikroemulsi. Surfaktan yang digunakan  harus  dapat  menurunkan  tegangan permukaan  antara  dua  fase  sehingga  kedua  fase tersebut  dapat  terdispersi  dengan  baik  dan kosurfaktan membantu melapisi globul mikroemulsi  yang  telah  dilapisi  surfaktan sehingga lebih rapat dan menghasilkan mikroemulsi  yang  lebih  stabil.  Pembentukan globul  mikroemulsi  diperoleh  dari  pengadukan dan pembentukan film kompleks pada antarmuka air  dan  minyak  oleh  surfaktan  dan  kosurfaktan. Hal tersebut akan menyebabkan reduksi antarmuka  antara  minyak  dan  air  menuju  nilai paling  rendah  (Swarbrick,  1994).  Ukuran  globul yang kecil menghasilkan sediaan yang jernih dan transparan.  Dengan  ukuran  partikel  yang  lebih kecil,  maka  sediaan  dapat  memberikan  efisiensi absorbsi  yang  tinggi  pada  berbagai  rute pemberian.  Berdasarkan  hasil  orientasi,  basis yang  menghasilkan  tampilan  visual  yang  jernih dan  transparan  yaitu  B8,  kemudian  dibuatlah sediaan mikroemulsi dengan konsentrasi zat aktif yaitu  ekstrak  terpurifikasi  daun  bayam  merah sebesar 0,1%.
Evaluasi stabilitas sediaan yang dilakukan  meliputi  pengamatan  organoleptik, ukuran  globul  ,pH,  viskositas  dan  sentrifugasi. Stabilitas  sediaan  farmasi  merupakan  salah-satu faktor  yang  penting  untuk  menghasilkan  hasil produksi yang baik.Ketidakstabilan partikel obat dapat mengakibatkan penurunan sampai hilangnya  khasiat  obat.Obat  dapat  berubah menjadi toksik atau terjadi perubahan penampilan  sediaan  (warna,  bau,  rasa  dan konsistensi).Berdasarkan hasil evaluasi organoleptik  selama  28  hari,  dapat  diamati bahwa mulai dari basis mikroemulsi, mikroemulsi  ekstrak  terpurifikasi  daun  bayam merah  dan  mikroemulsi  vitamin  C  tidak mengalami perubahan selama masa penyimpan.
Penentuan  ukuran  globul  dilakukan untuk  mengetahui  ukuran  globul  pada  sediaan mikroemulsi  karena  sediaan  mikroemulsi  yang memiliki  ukuran  partikel  yang  kecil  dapat mempengaruhi kejernihan sediaan mikroemulsi.Pengukuran dilakukan dengan menggunakan  mikroskop  optik  yang  telah dipasang alat mikrometer yang telah dikalibrasi. Pengukuran  dilakukan  dengan  menggunakan perbesaran  40  kali.  Hasil  yang  diperoleh  dari ketiga formula didapatkan ukuran globul kurang
dari  5  µm.  Karena  alat  ukur  hanya  bisa mengukur    partikel  dengan  ukuran  minimal  ±  5 µm,  sehingga  ukuran  mikroemulsi  secara  tepat belum bisa ditentukan dengan alat ini.
Hasil pengukuran pH sediaan mikroemulsi
menunjukkan pada basis mikroemulsi, mikroemulsi ekstrak ekstrak terpurifikasi daun bayam merah dan mikroemulsi  vitamin  C  tetap  stabil  selama penyimpanan (p>0,05, uji t berpasangan).

## Gambar 1. Grafik pengaruh lama penyimpanan terhadap ph mikroemulsi
Hasil  pengukuran  viskositas  mikroemulsi pada  mikroemulsi  ekstrak  terpurifikasi  daun bayam  merah  tidak  mengalami  perubahan  yang signifikan  selama  penyimpanan  (p>0,05;  uji  t berpasangan),  sedangkan  untuk  nilai  viskositas pada  basis  mikroemulsi  menunjukkan  adanya perbedaan  yang  signifikan  pada  penyimpanan hari  ke-7  dan  hari  ke  -14  dan  sediaan mikroemulsi    vitamin  C  pada  penyimpanan  hari ke-28 (p<0,05; uji t berpasangan). Perbedaan ini dapat  disebabkan  oleh  beberapa  faktor  yaitu faktor formulasi seperti komposisi bahan maupun penyimpanan seperti suhu dan tempat penyimpanan.
Uji sentrifugasi dilakukan untuk mengetahui kestabilan mikroemulsi. Mikroemulsi disentrifugasi dengan menggunakan kecepatan  3750rpm  selama  5  jam  dengan pengamatan  tiap  30  menit.  Uji  sentrifugasi  ini menggambarkan  kestabilan  sediaan  selama proses pendistribusian ataupun selama penyimpanan  karena  adanya  pengaruh  gravitasi
bumi.  Setelah  pengujian,  terlihat  bahwa  sediaan mikroemulsi  tidak  terjadi  pemisahan.  Hal  ini berarti  bahwa  sediaan  ini  stabil  selama  1  tahun karena adanya pengaruh gravitasi bumi (Octaviani, 2014).

## Gambar 2. Grafik pengaruh lama penyimpanan terhadap viskositas  mikroemulsi
Metode  pengujian  aktivitas  antioksidan mikroemulsi yang dilakukan dalam penelitian ini sama  dengan  pengujian  aktivitas  antioksidan ektrak  terpurifikasi  daun  bayam  merah  yaitu dengan metode DPPH (2,2-diphenil-1- picrilhidrazil).  Pengujian  ini  dilakukan  untuk mengetahui  IC 50 dari  sediaan  mikroemulsi  yang telah  dibuat.  Nilai  IC 50 adalah  suatu  konsentrasi yang  dapat  meredam  radikal  bebas  sebanyak 50%.  Dalam  penelitian  ini  digunakan  vitamin  C murni sebagai pembanding yang juga diformulasi dalam  sediaan  mikroemulsi  agar  lebih  mudah untuk  dibandingkan.  Hasil  pengukuran  aktivitas antioksidan sediaan mikroemulsi cenderung tidak mengalamiperubahan  yang  signifikan  selama penyimpanan  (p>0,05;  uji  t  berpasangan)  dan memiliki  efek  antioksidan  yang  sangat  kuat, dimana  pada  hari  pertama  nilai  IC 50 basis mikroemulsi  sebesar  14  ppm,  mikroemulsi ekstrak  terpurifikasi  daun  bayam  sebesar  1,83 ppm  sedangkan  mikroemulsi  vitamin  C  sebesar 0,24  ppm.  Setelah  penyimpanan  selama  28  hari, aktivitas antioksidan sediaan mikroemulsi menurun dan menunjukkan IC 50 basis mikroemulsi  sebesar  16,05  ppm,  mikroemulsi
4 4.5 5 5.5 6 1 7 14 21 28
Basis Ekstrak terpurifikasi daun bayam merah Vitamin C 250 300 350 400 450 1 7 14 21 28 Basis Ekstrak terpurifikasi daun bayam merah Vitamin C pH Hari ke Hari ke Viskositas
ekstrak  terpurifikasi  daun  bayam  sebesar  3,27 ppm  sedangkan  IC 50 mikroemulsi  vitamin  C sebesar 2,51  ppm.
Ekstrak  terpurifikasi  daun  bayam  merah memiliki kemampuan untuk melindungi kerusakan sel oleh radikal bebas. Pada penelitian secara in  vitro, antioksidan  melindungi  DNA dari kerusakan oksidatif, menonaktifkan hidrogen peroksidase dan nitrogen dioxide  serta melindungi limfosit dari nitrogen dioksida (NO) yang dapat merusak membran sel (Black, 1998).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih saya ucapkan kepada  Kanda Iyam Santoso dan Istigfarin selaku laboran yang telah membantu selama penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Ansel, H. C., 2008, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi , Edisi ke-4, UI Press, Jakarta.
Balai  Besar  Penelitian  Dan  Pengembangan Pascapanen Pertanian. Tanaman Obat .Teknologi Pascapanen Tanaman Obat. Bogor.
Bassett, J.,  et.al., 1994,  Buku  Ajar  Vogel:  Kimia Analisis  Kuantitatif  Anorganik ,  Edisi  4,
EGC, Jakarta.
Black  HS.Radical  intereception  by  carotenoids and  effects  on  UV  carcinogenesis.  Nutr Cancer 1998;31(3);212-7.
Blois, 2003, Comparison of Antioxidant Activities of Kudzu Root,JFS.
Depkes  RI,  1979,  Farmakope  Indonesia,  Edisi III,  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia, Jakarta.
Depkes  RI,  1995,  Farmakope  Indonesia,  Edisi IV,  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia, Jakarta.
Foyer,  C.,  1993, Ascorbic  Acid.In”Antioxidants in Higher Plants” ,CPC Press. Boca Raton, FL.
Harbone,  J.  B.,  1987, Metode  Fitokimia ,  ITB, Bandung.  Dalam  Skripsi  Cristadeolia
Program
Studi Farmasi,
FMIPA,
Universitas Tadulako, Palu.
Jufri,  M.,  dkk.,  2004, Formulasi  Gameksan Dalam Bentuk Mikroemulsi , Majalah Ilmu Kefarmasian,  Vol.  I,  No.3,  Desember 2006, 160-714.
Marina, A. M., Che Man, Y. B., Nazimah, S. A. H., & Amin, I. (2009).Chemical properties of  virgin  coconut  oil.  Jour-nal  of  the American  Oil  Chemists’  Society  86:  301- 307.
Molyneux,  P.,  2004,  The  Use  of  Stable  Free
Radical  Diphenylpicrylhidrazyl  (DPPH)
for Estimating Antioxidant Activity. Dalam  Skripsi  Cristadeolia  Program  Studi
Farmasi,  FMIPA,  Universitas  Tadulako,
Palu.
Oktaviani,  C.,  2014, Formulasi  Mikroemulsi Ekstrak Bawang Huta n ( Eleutherine bulbosa (Mill.)Urb.) Sebagai  Antioksidan ,
Skripsi  Program  Studi  Farmasi,  FMIPA, Universitas Tadulako, Palu.
Rowe,  R.  C., et.  al, 2009, Handbook  of Pharmaceutical  Excipients ,  6 th editition, Pharmaceutical Press, London.
Setiaji, B. Dan Prayugo, S., 2006, Membuat VCO Berkualitas  Tinggi ,  Penerbit  Swadaya, Jakarta.
Supriyatna,  dkk.,  2014, Suplemen  Herbal  dan Makanan Super , Deepublish, Yogyakarta.
Swarbrick,  J.  dan  Boylan  J.  C.,  1994,
Encyclopedia of Pharmaceutical
Technologi ,  Marcel  Dekker  Inc.,  New York.
Volkov,  A.  G.,  2001, Liquid  Interfaces  in Chemical,  Biological  and  Pharmaceutical Applications ,  Marcel  Dekker  Inc.,  New York.
Widyastuti,  N.,  2010, Pengukuran  Aktivitas Antioksidan dengan Menggunakan Metode CUPRAC,  DPPH  dan  FRAP  Serta Kolerasinya  dengan  Fenol  dan  Flavanoid dari  Enam  Tanaman ,  Departemen  Kimia, IPB, Bogor.