Identifikasi Senyawa Bioaktif Dan Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daging Teripang Holothuria (Halodeima) atra Jaeger 1833 Asal Perairan Pantai Kalasey, Minahasa
(Identification of Bioactive Compounds and Antibacterial Activity of Sea Cucumber, Holothuria (Halodeima) atra Jaeger 1833 Flesh Extract from Kalasey Coastal Waters, Minahasa District)
Thresia T. Mewengkang 1 , Rosita A. J. Lintang 2* , Fitje Losung 2 , Deiske A. Sumilat 2 , Lawrence J. L. Lumingas 2
1 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia
2 Staf Pengajar Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia
*Corresponding author: rositalintang@unsrat.ac.id

## Abstract
Sea  cucumbers  are  one  of  the  marine  biotas  that  contain  bioactive  compounds  that  have  the potential  as  antibacterial  ingredients.  The  purpose  of  this  study  was  to  perform  antibacterial testing on fractions of the extract of the sea cucumber H. atra meat and to conduct a zoochemical analysis  to  determine  the  content  of  bioactive  compounds  that  can  inhibit  bacterial  growth. Antibacterial testing using disc diffusion method against Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria. The results showed that the methanol extract of sea cucumber flesh could inhibit the growth of both types of test bacteria. In antibacterial testing for S. aureus , the ethyl acetate fraction was 11.8 mm, the n-hexane fraction was 7 mm, and the methanol fraction was 8.6 mm, while for E. coli the ethyl acetate fraction was 10.88 mm, the n-hexane fraction was 7 mm, and 8.6  mm  methanol  fraction.  The  compounds  contained  in  the  ethyl  acetate  fraction  of  sea cucumber H.  atra flesh  extract  are  alkaloids,  flavonoids,  steroids,  and  saponins  which  are compounds that can inhibit bacterial growth with their respective working mechanisms.
Keywords: Disc diffusion, Extraction, Fractionation, Sea cucumber ( H.atra ), Zoo-chemical,

## Abstrak
Teripang  merupakan  salah  satu  biota  laut  yang  memiliki  kandungan  senyawa  bioaktif  yang berpotensi sebagai bahan antibakteri. Tujuan penelitian ini melakukan pengujian antibakteri pada fraksi-fraksi  dari  ekstrak  daging  teripang H.  atra dan  melakukan  analisis  zookimia  untuk mengetahui  kandungan  senyawa  bioaktif  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri. Pengujian  antibakteri  menggunakan  metode  difusi  cakram  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  daging teripang memiliki dapat menghambat pertumbuhan kedua jenis bakteri uji. Pengujian antibakteri terhadap S. aureus fraksi etil asetat sebesar 11,8 mm, fraksi n-heksan 7 mm, dan fraksi metanol 8,6 mm sedangkan untuk bakteri E. coli fraksi etil asetat sebesar 10,88 mm, fraksi n heksana 7 mm,  dan  fraksi  metanol  8,6  mm.  Kandungan  senyawa  yang  yang  terkandung  dalam  fraksi  etil asetat  ekstrak  daging  teripang H.  atra yaitu  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  steroid,  dan  saponin yang  merupakan  senyawa  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  mekanisme kerja masing-masing.
Kata Kunci : Difusi cakram, Ekstraksi, Fraksinasi , Teripang ( H. atra ), Zoo-kimia,

## PENDAHULUAN
Keanekaragaman  biota  laut  yang dimiliki  Indonesia  sangatlah  tinggi  yang memiliki  potensi  sebagai  bahan  dasar untuk  obat-obatan.  Salah  satu  biota  laut yang memiliki potensi sebagai bahan obat yaitu teripang. Teripang memiliki kandungan  senyawa  bioaktif  yang  ada  di
dalamnya  memiliki  potensi  sebagai  bahan antibakteri (Bordbar et al, 2011 ; Hossain et al ,  2020).  Teripang  memiliki  kandungan senyawa  bioaktif  yang  ada  di  dalamnya memiliki potensi sebagai bahan antibakteri (Mahmudah et al, 2019).Teripang termasuk dalam  filum  Echinodermata  pada  kelas Holothuroidea.  Menurut  Setyastuti et  al . (2014),  teripang  jenis Holothuria  atra
merupakan jenis
teripang yang kelimpahanya  paling  banyak  ditemukan pada  perairan  yang  dangkal.  Memiliki  ciri- ciri  morfologi  dengan  bentuk  tubuh  bulat memanjang,  berwarna  hitam,  terkstur tubuh yang kasar, dan saat diangkat keatas tidak  mengeluarkan  getah  atau  yang disebut tubulus cuvierian (Wildati, 2019).
Sistem  metabolisme  yang  ada  pada teripang digunakan untuk alat mempertahankan diri dari ancaman bahaya atau  kondisi  lingkungan  yang  kurang  baik yang dapat menghasilkan senyawa- senyawa  bioaktif  yang  memiliki  manfaat dalam bidang farmasi contohnya bermafaat sebagai  antibakteri  (Mahmudah et  al , 2019). Antibakteri merupakan senyawa/zat yang  dapat  mengobati  penyakit  yang disebabkan
oleh bakteri. Bakteri Escherichia  coli merupakan  bakteri  gram negatif dan Staphylococcus aureus merupakan  bakteri  gram  positif,  kedua bakteri ini merupakan bakteri patogen yang paling  sering  menginfeksi  manusia  dan ditemukan telah resistensi terhadap beberapa  antibiotik  (Ritan et  al., 2021  ; Novard et  al., 2019).  Resistensi  terhadap antibiotik  membuat  bakteri  tidak  akan terganggu dengan adanya antibiotik tersebut  sehingga  perlu  adanya  penelitian untuk  kandungan  senyawa  bioaktif  pada teripang yang memiliki kandungan senyawa  yang  berpotensi  sebagai  agen penghambat pertumbuhan bakteri (Martiningsih, 2014).
Proses  awal  yang  dilakukan  untuk isolasi kandungan senyawa bioaktif dengan melakukan proses ekstraksi, yang bertujuan  untuk  menarik  zat  aktiv  yang terdapat  dalam  sampel  dengan  prinsip kerja  didasarkan  pada  pelarut  yang digunakan  serta  perbandingan  antara sampel dan pelarut dalam proses ekstraksi (Susanty, 2016). Metode ekstraksi maserasi  merupakan  metode  ekstraksi yang dilakukan dengan kondisi dingin serta pengerjaan  yang  dilakukan  mudah  karena tidak  perlu  adanya  proses  pemanasan sehingga  kecil  kemungkinan  bahan  alami akan rusak (Leba, 2017).
Identifikasi  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  merupakan  langkah awal yang dilakukan dalam penelitian untuk
mencari  bahan  dasar  yang  berpotensi sebagai  bahan  obat  baru  (Rasyid,  2012). Mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder mengacu pada pengujian fitokimia  kualitatif  yaitu  uji  senyawaa alkaloid, saponin, fenol,
steroid/triterpenoid, flavonoid (Shaikh,
2020).  Berdasarkan  uraian  di  atas  peneliti merasa  harus  melakukan  penelitian  untuk biota  laut  teripang  dengan  melakukan ekstraksi  senyawa  bioaktif  yang  memiliki aktivitas antibakteri serta melakukan pengujian  zookimia  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  bioaktif  yang  ada dalam  teripang Holothuria  atra yang memiliki potensi dapat menghambat pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  selang  bulan Maret – Juni 2022. Sampel teripang diambil di  perairan  pantai  Kalasey,  Kabupaten Minahasa.  Pengambilan  sampel  dilakukan saat  malam  pada  saat  surut  terendah. Proses ekstraksi, fraksinasi, dan pengujian antibakteri  dilakukan  di  Laboratorium Biologi  Molekuler  dan  Farmasetika  Laut, Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan, Universitas  Sam  Ratulangi,  dan  untuk pengujian  zookimia  kualitatif  dilakukan  di Divisi  Mikrobiologi,  Laboratorium  Farmasi, Fakultas
Matematika
dan Ilmu
Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi.

## Identifikasi Sampel
Identifikasi  jenis  teripang  dilakukan dengan melihat ciri-ciri morfologi mulai dari bentuk,  warna,  serta  ukuran  tubuh. Pengamatan dipandu dengan buku “ Commercially Important Sea Cucumber of The Word ” (Purcel et al. , 2012) dan World Register of Marine Species (WORMS).

## Preparasi Sampel
Sampel yang diperoleh segera dicuci bersih dengan air mengalir untuk menghilangkan  pasir  yang  menempel. Selanjutnya teripang dibela untuk memisahkan  bagian  isi  perutnya  dengan daging.

## Ekstraksi dan Partisi
Proses  ekstraksi  dilakukan  pada bagian daging teripang H. atra menggunakan  metode  maserasi.  Sampel dimasukkan  ke  dalam  toples  kaca  lalu direndam  dengan  pelarut  metanol  dengan perbandingan  1:3  kemudian  diletakkan  di atas orbital  shaker dengan  kecepatan 150rpm selama 24 jam. Sampel selanjutnya  diremaserasi  sebanyak  3x. Filtrat yang diperoleh selanjutnya dievaporasi  dengan  suhu  40 o C  untuk mendapatkan ekstrak kasar. Ekstrak kasar ditimbang beratnya untuk mengetahui nilai rendemennya.
Esktrak  kasar  yang  diperoleh  dari proses  maserasi  sebanyak  15gr  ekstrak dilarutkan kembali dengan 100 ml metanol, lalu  dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah dan ditambahkan pelarut n-heksan dengan perbandingan  yang  sama.  Selanjutnya, corong  pisah  dikocok-kocok  dan  diamkan sampai  terbentuk  dua  lapisan.  Masing- masing lapisan ditampung ke dalam wadah dan  lapisan  n-heksan  di  evaporasi  dan didapatkan  fraksi  n-heksan.  Selanjutnya larutan  metanol  dimasukkan  kembali  dan ditambahlan  dengan  pelarut  etil  asetat dilakukan hal yang sama sampai terbentuknya dua lapisan kemudian setiap lapisan  dievaporasi  dan  didapatkan  fraksi etil asetat dan fraksi metanol.

## Pengujian Antibakteri

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  berbahan  kaca  dicuci bersih kemudian dikeringkan setelah kering alat-alat tersebut dibungkus dengan kertas dan disterilkan ke dalam oven selama 2 jam dengan  suhu  150 o C.  Sedangkan,  untuk bahan  media  cair  dan  media  padat disterilkan  ke  dalam  autoclave  selama  20 menit pada suhu 120 o C. Setelah disterilkan alat  dan  bahan  siap  digunakan  dalam pengujian.

## Pembuatan Media Cair
Media cair untuk kultur bakteri dibuat dengan  melarutkan Nutrient  Broth  (NB) sebanyak  1,3gr  ke  dalam  100ml  air. Sebelum  disterilkan  maka  larutan  media yang berada dalam erlenmeyer dipanaskan hingga homogen selanjutnya media
dituang ke dalam 10 tabung reaksi. Tabung reaksi  yang  telah  berisi  media  cair disumbat dengan kapas lalu disterilkan dan setelah  itu  media  siap  digunakan  sebagai media kultur bakteri.

## Pembuatan Media Padat
Media padat dibuat dengan menambahkan  agar  sebanyak  1,5%  ke dalam media cair. Semua bahan dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer  lalu dipanaskan  untuk  melarutkan  bahan- bahan  dengan  sempurna.  Setelah  terlarut sempurna  media  diangkat  dan  dipisahkan ke  dalam  dua  erlenmeyer  untuk  masing- masing  bakteri.  Setiap  erlenmeyer  ditutup dengan  aluminium  foil  lalu  disterilkan. Setelah  steril  media  didiamkan  hingga hangat siap digunakan dalam pengujian.

## Kultur Bakteri
Penelitian  ini  menggunakan  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .  Sebanyak  200  µl  dari  masing- masing bakteri diambil dan dimasukkan ke dalam media cair lalu diinkubasi selama 24 jam  untuk  bakteri  yang  siap  digunakan dalam pengujian.

## Uji Antibakteri
Pengujian  dilakukan  dengan  metode difusi agar cakram ( disc diffusion Kriby and Bauer ).  Sehingga  kertas  cakram  yang digunakan  berukuran  6  mm  serta  ekstrak yang  ditotolkan  sebanyak  30µl.  Media padat  yang  telah  dibuat  ditambahkan sebanyak  1  ml  bakteri  untuk  masing- masing  bakteri  uji,  kemudian  dihomogen dengan menggoyangkan  secara  perlahan. Selanjutnya media dimasukkan ke dalam 3 cawan  petri  untuk  masing-masing  bakteri dibuat tiga replikasi, dan media didiamkan hingga  mengeras.  Selanjutnya  kertas cakram  yang  telah  ditotolkan  diletakkan pada permukaan media padat lalu diinkubasi  selama  24  jam.  Pengamatan dilakukan  dengan  melihat  zona  bening yang  terbentuk  disekitar  kertas  cakram kemudian  diukur  dengan  mistar  dalam satuan  millimeter.  Sebagai  pembanding dalam pengujian antibakteri maka digunakan  kontrol  negatif  yaitu  pelarut metanol  dan  kontrol  positif  menggunakan antibiotik kloramfenikol.

## Uji Zookimia Kualitatif
Uji  senyawa  alkaloid,  sebanyak  1 ml ekstrak  diambil  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  kemudian  ditambahkan  10 tetes asam sulfat 2N. Setelah dikocok akan terbentuk  dua  lapisan,  kemudian  lapisan bagian  atas  diambil  dan  dibagi  kedalam  3 tabung  reaksi.  Lalu  tiap  tabung  reaksi  di tambahkan  3  tetes  pereaksi  mayer, dragendrof,  dan  wagner.  Menunjukkan positif  jika  pada  pereaksi  mayer  terdapat endapan putih/kuning, pereaksi dragendrof endapan merah/jingga, dan pereaksi wagner endapan coklat.
Uji senyawa saponin, sebanyak 1 ml ekstrak  diambil  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  lalu  ditambahkan  aquades. Kemudian  larutan  dididihkan  dan  dikocok kuat-kuat  jika  terdapat  buih  yang  stabil selama  3  menit  dan  tidak  hilang  setelah ditambahkan HCL maka dinyatakan positif mengandung saponin. Uji senyawa fenol, 1 ml  ekstrak  diambil  dan  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  lalu  ditambahkan  3 tetes FeCl 5% jika terjadi perubahan warna coklat,  jingga,  biru,  atau  ungu  dinyatakan positif mengandung fenol.
Uji senyawa steroid/triterpenoid, sebanyak  1  ml  ekstrak  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  ditambahkan  3  tetes asam  sulfat  jika  terjadi  perubahan  warna merah/jingga menunjukkan adanya senyawa triterpenoid dan jika terjadi warna biru/hijau  adanya  kandungan  steroid.  Uji senyawa flavonoid, 1 ml ekstrak dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  lalu ditambahkan 3 tetes HCL pekat dan 0,2gr Mg  dinyatakan  positif  jika  terjadinya perubahan  warna  merah,  jingga,  dan kuning  dalam  waktu  3  menit.  Uji  senyawa tanin, ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi  lalu  ditambahlan  3  tetes  FeCl  1% akan dinyatakan positif jika terjadi perubahan warna hijau, biru, ataau ungu.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Identifikasi
Sampel teripang yang diambil memiliki  ciri-ciri,  seluruh  bagian  tubuh berwarna hitam pekat (Gambar 1), memiliki 20  tentakel  berwarna  hitam  pada  bagian mulut,  bentuk  papilla  seperti table dan button ,  panjang  tubuh  20  cm,  dan  tidak memiliki tubulus  cuvierian .  Berdasarkan uraian  dan  dari  panduan  yang  digunakan sampel  yang  diambil  merupakan  jenis teripang Holothuria atra .

## Hasil Ekstraksi
Proses  ekstraksi  yang  dilakukan dengan  metode  maserasi  dengan  pelarut metanol  terhadap  daging  teripang.  Filtrat yang  dihasilkan  dari  maserasi  setelah proses  evaporasi  pada  ekstrak  kasar daging teripang memiliki berat ekstrak 25 gr dengan nilai rendemen sebesar 6,76 % dan memiliki warna merah bata.

## Hasil Partisi
Proses partisi dilakukan pada ekstrak kasar  daging  teripang.  Dari  hasil  partisi diperoleh tiga fraksi dengan sifat kepolarannya  yang  berbeda  yaitu  semi polar  (fraksi  etil  asetat),  polar  (fraksi metanol), dan non polar (fraksi n -heksan). Warna  fraksi  yang  didapatkan  setelah evaporasi di mana fraksi n-heksan berwarna  jingga  dengan  berat  1,190  gr  , fraksi  etil  asetat  berwarna  merah  dengan berat 6,625 gr, dan fraksi metanol berwarna merah  muda  dengan  berat  6,987  gr. Selanjutnya masing-masing fraksi dilakukan pengujian antibakteri.

## Pengujian Antibakteri Fraksi
Pengujian antibakteri dilakukan terhadap  ketiga  fraksi  yang  didapatkan. Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam masa  inkubasi  untuk  melihat  zona  bening yang  terbentuk  disekitar  kertas  cakram (Gambar 2) serta kekuatan daya antibakteri yang ada dan melihat spektrum antibakterinya.
Berdasarkan  data  yang  ditampilkan pada Tabel 1,  menunjukkan bahwa fraksi- fraksi  memiliki  daya  antibakteri  spektrum luas. Namun berdasarkan pernyataan dari David  dan  Stout  (1971)  penggolongan kriteria kekuatan sesuatu bahan antibakteri yaitu  ada  3  kategori  yakni  diameter  zona hambat  <5  mm  dikategorikan  lemah,
diameter  5-10  mm  dikategorikan  sedang, dan diameter 10-20 mm dikategorikan kuat maka  hasil  yang  diperoleh  dalam  proses pengujian  ini  berbeda  dalam  fraksi  etil asetat dikategorikan kuat, sedangkan fraksi n-heksan dan metanol dikategorikan sedang. Dalam hal ini, bisa dilihat fraksi etil asetat  memiliki  aktivitas  yang  terbaik menunjukkan  bahwa  senyawa  antibakteri yang potensial dari teripang Holothuria atra larut pada pelarut etil asetat atau tandanya memiliki  kandungan  senyawa  yang  larut pada  kepolaran  yang  mirip  dengan  etil asetat yaitu tergolong semi polar.
Peneltian  yang  sama  dilakukan  oleh Kano  (2022),  pada  fraksi-fraksi  dari teripang P.  graeffei memiliki  aktivitas antibakteri  berspektrum  luas  yang  dapat menghambat  bakteri  gram  negatif  dan gram  positif.  Penelitian  dilakukan  oleh Umboh  (2018)  pengujian  antibakteri  pada jenis  teripang  yang  sama H.  atra untuk fraksi n-heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol  serta  daya  hambat  yang  paling besar  ada  pada  fraksi  kloroform  yang berarti  senyawa  yang  potensial  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  ada pada golongan senyawa semi polar.
Antibakteri yang merupakan zat yang menghambat  pertumbuhan  bakteri  dan digunakan secara khusus untuk mengobati infeksi. Berdasarkan cara kerjanya, antibakteri  dibedakan  mejadi  dua  yaitu bakterisidal dan bakteriostatik. Bakterisidal yang  merupakan  zat  antibakteri  yang berkerja  mematikan  bakteri,  sedangkan bakteriostatik  zat  antibakteri  yang  dapat menghambat pertumbuhan bakteri (Umboh et al, 2018). Fraksi etil asetat diuji kembali aktivitas antibakteri untuk melihat mekanisme  kerjanya  dengan  pengamatan yang dilakukan selama 3x24 jam.
Berdasarkan hasil pengamatan (Tabel 2) zona hambat yang terbentuk ada pada  kategori  kuat  namun  saat  proses pengamatan  zona  bening  yang  terbentuk mulai berkurang. Berdasarkan pengamatan  yang  dilakukan  fraksi  etil asetat  daging  teripang H.  atra bersifat sebagai  bakteriostatik  yang  hanya  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  bukan mematikan  bakteri  karena  pada  saat pengamatan diameter zona hambat semakin berkurang.
Gambar 2. Hasil Pengujian Antibakteri
Keterangan :
E : Fraksi Etil Asetat
N : Fraksi N-heksan
- : Kontrol Negatif M : Fraksi Metanol + : Kontrol Positi
Tabel 1. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Fraksi-fraksi Fraksi Bakteri Uji Staphylococcus aureus Escherichia coli I (mm) II (mm) III (mm) Rata- rata (mm) I (mm) II (mm) III (mm) Rata-rata (mm) Etil asetat 13,5 12,5 9,5 11,8 11 10,5 10,5 10,8 N-heksan 7 7 6,5 7 6,5 7 7 7 Metanol 8,5 8 8 8,6 8,5 8 8 8,6 Kontrol Positif (+) 16,5 15 17 16,6 16,5 17 14,5 16 Kontrol Negatif (-) 0 0 0 0 0 0 0 0
Tabel 2. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Fraksi Etil Asetat
Fraksi Bakteri Uji Escherichia coli Staphylococcus aureus I (mm) II (mm) III (mm) Rata-rata (mm) I (mm) II (mm) III (mm) Rata-rata (mm) Etil asetat 11 10,5 10 10.5 15 12 12 13 Kontrol Positif (+) 17 17 17 17 16 16 16 16 Kontrol Negatif (-) 0 0 0 0 0 0 0 0
Gambar 3. Pengujian Antibakteri Fraksi Etil Asetat
Keterangan : E : Fraksi Etil Asetat - : Kontrol Negatif + : Kontrol Positif
Diameter  zona  hambat  atau  zona bening yang terbentuk pada bakteri E. coli lebih  kecil  dibandingkan  dengan  diameter
zona  hambat  pada  bakteri  S.  aureus (Gambar  3).  Bakteri  gram  positif  memiliki kepekaan  lebih  baik  pada  antibakteri
dibandingkan  gram  negatif  dikarenakan struktur  dinding  selnya.  Menurut  Umboh (2018),  bakteri  gram  negatif  memiliki struktur  sel  yang  berbeda  dengan  bakteri gram  positif,  struktur  dinding  sel  gram negatif lebih kompleks memiliki tiga lapisan yaitu  lipoprotein,  lipopolisakarida,  dan peptidoglika.  Sedangkan  struktur  dinding sel bakteri gram positif memiliki dinding sel lebih  sederhana  yang  sebagian  terusun oleh polisakarida yang dapat memudahkan antibakteri  untuk  masuk  dan  merusak. Dapat  diketahui  bahwa  pada  penelitian pengujian  antibakteri  yang  dilakukan  oleh Dwicahyani  (2018),  mekanisme  kerja  dari ekstrak  teripang H.  atra bersifat  sebagai
bakteriostatik dengan memiliki daya hambat yang lemah.

## Hasil Uji Zookimia
Kandungan metabolit sekunder diidentifikasi  melalui  uji  zookimia  kualitatif dengan  adanya  perubahan  warna  setelah penambahan pereaksi (Gambar 4). Tujuan dilakukannya  uji  zookimia  kualitatif  untuk mengetahui senyawa bioaktif yang terkandung  dalam  teripang  H.  atra.  Hasil identifikasi metabolit
sekunder berdasarkan uji zookimia kualitatif fraksi etil asetat  daging  teripang Holothuria  atra mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid, steroid, dan saponin.
Gambar 3. Hasil Pengujian Fitokimia Kualitatif
Tabel 3. Hasil Uji Fitokimia Kualitatif No Metabolit Sekunder Metode Uji Hasil Positif Hasil 1 Alkaloid Pereaksi Mayer Terbentuk endapan Putih/kuning + Pereaksi Dragendroff Terbentuk endapan merah/jingga + Pereaksi Wagner Terbentuk endapam coklat mua/kuning - 2 Triterpenoid Asam Asetat anhidrat + Asam Sulfat Pekat Terbentuk warna merah, jingga, unggu, merah kecoklatan - 3 Steroid Terbentuk warna hijau + 4 Flavonoid Pereaksi HCL Pekat + Logam Mg Adanya buih dan berwarna jingga, merah, merah bata, kecoklatan + 5 Saponin Akuades Terbentu buih stabil + 6 Tanin Pereaksi FeCl 1% Terbentuk warna hitam kebiruan - 7 Fenolik Pereaksi FeCl 5% Terbentuk warna coklat jingga -
Senyawa  metabolit  sekunder  yang  dimiliki oleh  teripang Holothuria  atra merupakan senyawa  flavonoid, alkaloid,  steroid,  dan saponin  yang  memiliki  potensi  sebagai antibakteri  dengan  mekanisme  kerjanya masing-masing. Senyawa flavonoid memiliki  mekanisme  kerja  dapat  merusak dinding  sel  atau  merusak  permeabilitas dinding  sel  dan  menggangu  proses metabolismenya. Senyawa alkaloid memiliki mekanisme kerja sebagai
antibakteri  dengan  menggangu  komponen penyusun  peptidoglikan  pada  sel  bakteri sehingga  sel  tidak  terbentuk  secara  utuh. Senyawa steroid dengan mekanisme kerja dapat berinteraksi dengan membran fosfolipid  yang  dapat  menyebabkan  sel rapuh. Senyawa saponin dengan mekanisme  kerja sebagai antibakteri dengan cara menurunkan tegangan permukaan  dinding  sel  bakteri  sehingga dinding sel akan pecah yang membuat zat
antibakteri  dapat  masuk  untuk  merusak metabolismenya. Teripang jenis Holothuria atra merupakan  jenis  teripang  yang memiliki senyawa saponin jenis Holothurin B  (Triterpen  Glikosida)  dan  senyawa steroid  yang  berperan  penting  sebagai antimikroba atau antibakteri (Bordba et al., 2011).    Pengujian  zookimia  kualitatif dilakukan  juga  oleh  Dwicahyani  (2018) pada ekstrak teripang H. atra yang memiliki senyawa  bioaktif  seperti  flavonoid,  fenol, saponin, dan alkaloid yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri.

## KESIMPULAN
Pengujian antibakteri terhadap fraksi- fraksi ekstrak kasar daging H. atra memiliki aktivitas antibakteri berspektrum luas yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan E.  coli dengan  kekuatan antibakteri pada fraksi etil asetat dikategorikan  kuat.  Pengujian  zookimia kualitatif  pada  fraksi  etil  asetat  memiliki kandungan  senyawa  alkaloid,  flavonoid, saponin,  dan  steroid  yang  merupakan senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan  bakteri  dengan  mekanisme kerjanya masing-masing.

## DAFTAR PUSTAKA
Bordbar, S., F. Anwar., & N. Saari. (2011).
High-Value Components and Bioactives  From  Sea  Cucumber  for Functional  Food –  A  Review. Mar Drugs , 9, 1761-1805.
David,  W.  W.,&  T.  R.  Stout.  (1971).  Disc Plate  Method  of  Microbiological Assay. Journal  of  Microbiology,  22 , 659-665.
Dwicahyani,  T.  S.,  &  S.  L.  Rianingsih. (2018). Uji Bioaktivitas Ekstrak Teripang  Keling Holothuria  atra Sebagai  Antibakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . J. Peng
& Biotek Pi, 7(1) , 15-24.
Hossain, A., D. Dave., & F. Shahid. (2020). Northen  Sea  Cucumber  (Cucumaria Frondosa): A Potential Candidate for Functional  Food,  Nutraceutical,  and Pharmaceutical  Sector. Mar.  Drugs . 18(5):274,27pp.
Kano,  N.  N.,  F.  Losung.,  R.  Mangindaan., R.  Lintang.,  S.  Wulur.,  &  R.  Tumbol. (2022).  Aktivitas  Antibakteri  Dari Teripang  Laut  Yang  Di  Peroleh  Di Perairan Bunaken. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis, 10(1) , 95-101.
Leba, M. A. U. (2017). Ekstraksi dan Real Kromatografi. Yogyakarta :
Deepublish.
Mahmudah, R., A. Mu'nisa., & R. Ngitung.
(2019).  Identifikasi  Senyawa  Bioaktif Ekstrak  Teripang  Hitam  ( Holothuria edulis ). Prosiding  Seminar  Nasional Biologi VI , 609-613.
Martiningsih,  N.  (2014). Skrining  Awal Ekstrak Etil Asetat Spon Dysidea sp. Universitas  Penididikan:  Universitas Pendidikan.
Novard, M. F. A., N. Suharti., & R. Rasyid.
(2019). Gambaran Bakteri Penyebab Infeksi Pada Anak Berdasarkan Jenis Spesimen dan Pola Resistensinya di Laboratorium RSUD Dr. Djamil Pada Tahun  2014-2016. Jurnal  Kesehatan Andalas, 8(2) , 26-32.
Purcell,  S.  W.,  Y.  Samyn.,  &  C.  Conand. (2012). Commercially  Important  Sea Cucumber of The Word. Rome: Food and  Agriculture  Organization  of  The United Nations.
Rasyid,  A.  (2012).  Identifikasi  Senyawa Metabolit Sekunder Serta Uji Aktivitas Antibakteri  dan  Antioksidan  Ekstrak Metanol Teripang Stichopus hermani . Ilmu  dan  Teknologi  Kelautan  Tropis,
4(2) , 360-368.
Ritan, Y. E. H., D. S. Wewengkang., & J. P.
Siampa. (2021). Uji Antibakteri Ekstrak  dan  Fraksi  Alga Caulerpa racemose Dari Perairan Pulau Mantehage Minahasa Utara Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. PHARMACON,
10(2) , 905-911.
Setyastuti, A., I. Wirawati., & M.  Y. Iswari. (2018). Identification  and  Distribution of  Sea  Cucumber  Exploited  in
Lampung  Indonesia. Biodiversitas,
19(2) , 726-732.
Shaikh,  J.  R.  (2020).  Qualitative  test  for preliminary  phytochemical  screening an  overview. International  Journal  of Chemical Studies , 603-808.
Umboh, P. M. T., D. S. Wewengkang., & P. V.  Y.  Yamlean.  (2018).  Aktivitas Antibakteri  Fraksi  Teripang  Laut Holothuria  atra Terhadap  bakteri Escherichia coli dan Staphylococccus aureus . Pharmacon, 7(4) , 88-97.
Wildati, A. N. (2019). Diversitas Holothuroidea Berdasarkan Karakteristik  Morfologis  Di  Perairan Pantai  Utara  Jawa  Timur  dan  Pulau Mandangin Madura. Surabaya:
Jurusan  Sains  Fakultas  Sains  dan Teknologi  Universitas  Islam  Negeri Sunan Ampel. WoRMS. Holothuria  (Halodeima)  atra Jaeger 1833 . Diakses di: https://www.marinespecies.org/aphia .php?p=taxdetails&id=148748 pada 19 Juli 2022.