Majalah Farmaseutik Vol. 15 No. 1: 28-34 ISSN-p : 1410-590x
ISSN-e : 2614-0063
Pengaruh  Bentuk  Sediaan  Farmasi  Terhadap  Aktivitas Antibakteri  Minyak  Sirih  Merah  ( Piper crocatum  Ruiz  &

## Pav.)
Effect  of  Forms  of  Pharmaceutical  Preparations  on  Antibacterial  Activity  of Red Betel Oil (Piper crocatum Ruiz & Pav.)
Marchaban * , Anisa Ragil Handayani, Elsa Putri Kartika, Sudarsono Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Corresponding author: Marchaban : Email: march@ugm.ac.id

## ABSTRAK
Minyak Sirih Merah (MSM) yang diperoleh dari distilasi uap dan air dari daun Sirih Merah  ( Piper  crocatum  Ruiz  &  Pav. )  mempunyai  potensi  sebagai  antibakteri.  Formulasi suatu bahan aktif menjadi suatu sediaan farmasi bisa berpengaruh terhadap aktivitas bahan aktifnya. Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan pengaruh bentuk sediaan terhadap aktivitas  antibakteri  MSM.  Penelitian  dilakukan  dengan  memformulasi  MSM  menjadi bentuk  sediaan  emulsi,  mikroemulsi  dan  solubilisasi,  kemudian  diuji  aktivitas antibakterinya terhadap Escherichia coli ATCC 25922 dengan metode mikrodilusi dengan kadar 1,25% menggunakan pembaca ELISA pada 570 nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa  formulasi  sediaan  mengurangi  aktivitas  antibakteri.  MSM  murni  mempunyai hambatan pertumbuhan bakteri (HPB) 66,59%, sedangkan diantara bentuk sediaan yang dibuat  aktivitas  paling  tinggi  adalah  bentuk  mikroemulsi  (HPB  49,58%),  diikuti  bentuk emulsi  (HPB  17,45%),  dan  kemudian  bentuk  solubilisasi  (HPB  0%)  atau  kehilangan antivitas antibakterinya.
Kata kunci: minyak sirih merah, emulsi, mikroemulsi, solubilisasi, antibakteri
ABSTRACT
The  Red  Sirih  Essential  Oil  (RSEO)  which  be  obtained  from  red  betel  leaf  ( Piper crocatum Ruiz  &  Pav.)  by  water  and  vapour  distillation  has  potential  as  antibacterial activity. Formulation of an active pharmaceutical ingredient to become a pharmaceutical dosage  form  can  generally  modify  their  activity.  The  aim  of  the  study  is  to  proof  the influence of dosage forms to the activity of RSEO. The study was done by formulating the RSEO to become emulsion, microemulsion and solubilisation dosage forms, and then, their antibacterial activity againt Escherichia coli ATCC 25922 by microdilution method  of 1.25% using ELISA reader at 570 nm. The results showed that formulation reduced antibacterial activity.  The  raw  RSEO  had  a  Bacterial  Growth  Inhibition  (BGI)  of  66.59%,  whereas microemulsion had 49.58%, emulsion had 17.45%, and solubilisation had 0% of BGI, that mean lost its antibacterial activity.
Keyword : red betel oil, emulsion, microemulsion, solubilization, antibacterial
PENDAHULUAN Bahan baku obat baik itu berasal dari produk  sintesis  maupun  dari  bahan  alam,
aktivitas farmakologinya akan berubah atau dipengaruhi  oleh  formulasi,  apakah  itu karena bahan tambahan untuk membentuk
vehikulum  maupun  bentuk  sediaan.  Atas dasar itu para formulator harus memperhitungkan  apakah  bahan  obat tersebut  akan  dinaikkan  ketersediannya atau  bahkan  sebaliknya  diturunkan ketersediaannya,  semua  tergantung  dari maksud pembuatan sediaan tersebut.
Emulsi o/w yang berupa dispersi fase minyak dalam fase air bisa digunakan untuk menaikkan  ketersediaan  bahan  obat  yang sedikit  atau  tidak  larut  dalam  air  tetapi bersifat  lipofil  dengan  cara  memperbesar luas  antarmuka  antara  fase  air  dan  fase minyak  (Marchaban  dkk,  2015).  Untuk mendispersikan  minyak  dalam  fase  air (o/w)  diperlukan  emulgator  baik  dari golongan  surfaktan,  hidrokoloid  maupun padat  halus  yang  terdispersi.  Emulsi  atau juga  disebut  makroemulsi  partikel  fase dispers mempunyai ukuran >500 nm.
Emulsi  spontan  yang  didiskripsikan sebagai emulsi yang terjadi secara spontan dan  bentuknya  transparan/  translusen, sering  juga  disebut  mikroemulsi  atau bahkan  nanoemulsi  tergantung  berapa ukuran  partikel  dari  fase  dispers  yang terjadi. Untuk mendapatkan emulsi spontan (mikro atau nanoemulsi) selain diperlukan surfaktan sebagai emulgator juga diperlukan kosurfaktan (golongan surfaktan  yang  lebih  hidrofil  dan mempunyai  rantai  C  yang  pendek  kurang dari  8)  untuk  menaikkan  tegangan  lateral ( π ) sehingga tegangan antarmuka ( γ i ) akan menjadi negatif. Dari rumus γ i = γ (o/w) – π maka kalau π lebih besar dari γ (o/w) maka
γ i akan  menjadi  negatif.  Ini  yang menyebabkan dinding antaramuka minyak dan air patah dan menjadi partikel-partikel yang lebih kecil (Denoel dkk., 1981).
Solubilisasi terjadi karena penyisipan molekul  bahan  obat  yang  lipofil  ke  dalam misel  yang  terbentuk  karena  adanya surfaktan dengan kadar di atas konsentrasi kritik  misel  (CMC).  Solubilisasi  berupa cairan jernih, transparan/translusen, stabil secara termodinamika.
Bahan  obat  yang  dipresentasikan dalam  bentuk  solubilisasi,  kemungkinan menjadi  kurang  berefek  karena  hampir semua zat aktif terjerat di dalam misel maka zat  menjadi  tidak  available  karena  sangat sedikit  yang  berada  dalam  keadaan  bebas dan  ini  tergantung  harga  koefisien  partisi antara di dalam dan di luar misel.
MSM  adalah  minyak  atsiri  yang didapat dari distilasi air dan uap dari daun Sirih  Merah  ( Piper  crocatum Ruiz  &  Pav.) dan diketahui mempunyai efek antibakteri (Dubick, 1986).

## METODOLOGI

## Bahan
Daun Sirih Merah, tween-80, span-80,
PEG-400, Escherichia  coli ATCC  25922,
media Mueller Hinton Broth (MHB).
Alat Alat gelas, neraca analitik (Santorius BP 310), magnetic stirrer (Labtech ST 12), Particle Size Analyzer (Horiba Scientific SZ- 100), hotplate (Cimarec  2  Thermolyne),
Gambar  1.  Skematisasi  Surfaktan  dan
Kosurfaktan  pada  Antarmuka  Partikel (Denoel dkk., 1981)
Gambar 2. Skematisasi solubilisasi o/w; a. Penyisipan  zat  non-polar;  b.  Penyisipan zat lipofil pada umumnya; c. Adsorpsi zat yang tidak larut dalam air dan tidak larut dalam  minyak;  d.  Penyisipan  di  dalam rantai polietilenoksida (Denoel dkk, 1981)
autoklaf (Sakura, OSK 6508 Steam Pressure Apparatus), shaker incubator (OSK Controller  Incubator),  inkubator  (Imperial III  Incubator), vortex  mixer (Thermo Scientific), pemanas listrik, almari pendingin,  spektrofotometer  (UV-1700
PharmaSpec Shimadzu), LAF cabinet (ESCO Class  II  Biosafety  Cabinet),  bunsen,  ose, Eppendorf  steril,  mikropipet, yellow  tip , blue tip , vial, tabung reaksi, wadah plastik, rak  rabung  reaksi,  seperangkat  alat destilasi.
Jalannya penelitian Determinasi Tanaman Dilakukan oleh Laboratorium Sistematika  Tumbuhan  Fakultas  Biologi Universitas  Gadjah  Mada  Yogyakarta, menyatakan  kebenaran  tanaman  sirih merah  (Piper  crocatum  Ruiz.  &  Pav)  yang masuk dalam suku Piperaceae.
Destilasi Minyak Sirih Merah (MSM) Daun  sirih  didestilasi  selama  4  jam dengan uap dan air, minyak hasil destilasi ditampung dalam corong pisah, dipisahkan. MSM  dibebaskan  dari  air  dengan  natrium sulfat  anhidrat,  didapat  rendemen  0,11% v/b.
Pembuatan Emulsi Optimasi formula MSM dalam bentuk emulsi pada berbagai variasi HLB (Tabel I) (Elsa Putri dkk, 2018). Dimasukkan ke dalam vial paraffin cair, MSM,  tween-80  dan  span-80  kemudian diaduk  dengan magnetic  stirrer selama  1 jam.  Emulsi  yang  didapatkan  disimpan dalam  suhu  kamar  dan  dijaga  konstan
(Mollet,  2001).  Emulsi  yang  paling stabil  dipilih  sebagai  formula  bentuk emulsi untuk percobaan aktivitas mikrobiologiknya. Pembuatan Mikroemulsi Optimasi formula MSM dalam bentuk mikroemulsi  pada  berbagai  variasi  rasio surfaktan-kosurfaktan  (Tabel  II) (Kartika, dkk, 2018). Dimasukkan  ke  dalam  vial  MSM, paraffin  cair,  tween-80,  PEG-400,  dan  air kemudian  diaduk  dengan magnetic  stirrer selama  1  jam.  Emulsi  yang  berupa  jernih (paling  jernih)  yang  didapatkan  disimpan dalam  suhu  kamar  dan  dijaga  konstan (Mollet,  2001).  Emulsi  yang  paling  jernih dipilih sebagai formula bentuk mikroemulsi  untuk  percobaan  aktivitas mikrobiologiknya.

## Pembuatan Solubilisasi
Optimasi formula MSM dalam bentuk solubilisasi  pada  berbagai  variasi  rasio surfaktan-MSM  (Tabel  III).  Ke  dalam  vial dimasukkan  masing  masing  komponen formula kemudian diaduk dengan menggunakan  magnetic  stirrer  selama  1 jam. Solubilisasi           dengan pengamatan visual paling jernih dipilih sebagai formula yang  digunakan  dalam  penelitian  uji antibakteri selanjutnya.

## Volume Sedimentasi (F)
Tiap  formula  emulsi  yang  sudah dibuat dimasukkan ke dalam tabung reaksi berskala  dan  diamati  pemisahan  fase yang  terjadi  sampai  dengan  2  jam setelah   pembuatan.  Hasil  pemisahan  fase
Tabel I. Formula MSM Bentuk Emulsi No.  MSM (g) Parafin cair (g)  Tween 80 (g) Span 80 (g) Air (g) HLB 1 0,125 0,875 0,500 - 3,500 15 2 0,125 0,875 0,125 0,375 3,500 7 3 0,125 0,875 - 0,500 3,500 4,3 4 0,125 0,875 0,375 0,125 3,500 12,3 5 0,125 0,875 0,250 0,250 3,500 9,65 6 0,125 0,875 - 0,500 3,500 4,3
dinyatakan dengan harga F dengan rumus F =Hu/Ho  ...  (1).  Keterangan:    F  =  rasio pemisahan  fase,  Ho  =  tinggi  emulsi  mula- mula,  Hu  =  tinggi  emulsi  pada  waktu pengamatan. Uji Mikrobiologi Alat-alat dan media sebelum digunakan  disterilisasi  terlebih  dahulu dengan  cara  yang  sesuai.  Stok  mikroba hasil   kultur   dalam   media    MHB   diukur Tabel II. Formula MSM dalam bentuk mikroemulsi No. MSM (g) Parafin cair (g) Tween 80 (g) PEG 400 (g) Air (g) 1 0,125 0,125 1,250 - 3,500 2 0,125 0,125 0,625 0,625 3,500 3 0,125 0,125 0,417 0,833 3,500 4 0,125 0,125 0,313 0,937 3,500 5 0,125 0,125 0,25 1 3,500 6 0,125 0,125 0,208 1,042 3,500 7 0,125 0,125 0,179 1,071 3,500 8 0,125 0,125 0,156 1,094 3,500 9 0,125 0,125 0,139 1,111 3,500 10 0,125 0,125 0,125 1,125 3,500 11 0,125 0,125 - 1,250 3,500 12 0,125 0,125 0,625 0,625 3,500 13 0,125 0,125 0,833 0,417 3,500 14 0,125 0,125 0,937 0,313 3,500 15 0,125 0,125 1,000 0,250 3,500 16 0,125 0,125 1,014 0,236 3,500 17 0,125 0,125 1.071 0,179 3,500 18 0,125 0,125 1.094 0,156 3,500 19 0,125 0,125 1.111 0,139 3,500 20 0,125 0,125 1.125 0,125 3,500 Tabel III. Komposisi Tween-80, MSM, dan Air untuk Pembuatan Solubilisasi No Tween-80 (g) MSM (g) Air (g) 1 0,500 0,025 4,475 2 1,000 0,025 3,975 3 1,500 0,025 3,475 4 0,500 0,050 4,450 5 1,000 0,050 3,950 6 1,500 0,050 3,450 7 0,500 0,075 4,425 8 1,000 0,075 3,925 9 1,500 0,075 3,425 10 0,500 0,100 4,400 11 1,000 0,100 3,900 12 1,500 0,100 3,400 13 0,500 0,125 4,375 14 1,000 0,125 3,875 15 1,500 0,125 3,375
nilai  OD 600nm (Optical  Density)  terlebih dahulu  dengan  spektrofotometer  UV-Vis. Selanjutnya dilakukan pengenceran dengan media agar nilai OD 600nm mikroba yang akan diuji sebesar 0,3 (untuk E.coli setara dengan 1-2  x  10 8 CFU/mL)  (Brooks,  2007). Suspensi kemudian diencerkan lagi 120 kali untuk mendapatkan nilai akhir 10 6 CFU/mL dikarenakan  untuk  uji  mikrodilusi  ini terdapat  50µL  suspensi  bakteri  dan  50µL sampel,  sehingga  setara  dengan  5x  10 5 CFU/mL atau 5x10 4 CFU/100 µL. Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC
25922  secara  in  vitro  dengan  metode mikrodilusi  cair  ( broth  microdillution method ). Uji ini dilakukan untuk mengetahui persentase pengambatan sampel  terhadap  bakteri  uji.  MSM  dibuat kadar  2,5%  b/b  dengan  dilarutkan menggunakan DMSO 5%. Karena sampel uji dalam  tiap well sebesar  50µL  sedangkan volume total tiap well sebesar 100µL maka kadar minyak atsiri sirih merah dalam tiap well menjadi  1,25  %  b/b.  Sampel yang  diujikan  antara  lain  sediaan  MSM dalam  bentuk  emulsi,    minyak  atsiri  daun sirih merah kadar 2,5% b/b, blanko emulsi, MSM  bentuk  mikroemulsi  kadar  2,5%, blanko  mikroemulsi,  akuades  dan  DMSO sebagai  kontrol  pelarut,  amoksisilin  kadar 2,5%b/b  sebagai  kontrol  positif,  dan kontrol media.
Pengujian dilakukan terhadap 1 plate uji dan 1 plate blanko. Plate uji berisi 50 µL sampel  dan  50  µL  suspensi  bakteri. Sedangkan plate blanko berisi 50µL sampel dan 50 µL larutan salin tanpa ditambahkan suspensi  bakteri. Microplate diletakkan dalam kotak yang dilapisi tisu yang dibasahi selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  37°C selama  18-24  jam  menggunakan shaker incubator . Microplate dikeluarkan  dari shaker  incubator kemudian  ditambahkan
pada masing-masing well 10 µL, konsentrasi 5mg/mL dan diinkubasi selama 4 jam pada temperatur 37°C. Setelah inkubasi, microplate ditambahkan  DMSO  1%  dan diinkubasi  kembali  selama  30  menit  pada temperatur 37°C kemudian diukur nilai OD dengan  ELISA reader pada  panjang gelombang 570nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Formulasi Sediaan Emulsi
Hasil  dari  pembuatan  emulsi  yang paling stabil (harga F paling tinggi) adalah yang  mempunyai  nilai  HLB  7,  yang  terdiri atas    MSM  0,125g,  paraffin  cair  0,875g, tween-80  0,125g,  span-80  0,375g  dan  air 3,500g. Hasil ini ditunjukan dengan harga F =  1  selama  pengamatan  2  jam.  Kepada formula  ini  kemudian  ditetapkan  ukuran partikelnya dengan PSA dan diperoleh rata- rata  ukuran  partikel  yaitu  684,6  nm (Gambar 1). (Kartika dkk., 2017).
Formulasi Sediaan Mikroemulsi Hasil dari formulasi sediaan mikroemulsi diperoleh bentuk mikroemulsi/emulsi spontan dengan kriteria  sediaan  yang  secara  fisik transparan/jernih.  Hasil  itu  didapat  pada formula  yang  terdiri  atas  0,125g  MSM, 0,125g  paraffin  cair,    0,417g  tween-80, 0,833g  PEG-400,  dan  3,500g  air.  Sediaan mikroemulsi  mempunyai  ukuran  partikel rata-rata 410,0 nm yang ditetapkan dengan PSA  (Gambar  2)  (Kartika  dkk.,  2017). Ukuran partikel dari mikroemulsi bisa lebih kecil dikarenakan adanya kosurfaktan PEG- 400.  Kosurfaktan  akan  menyebabkan tegangan  lateral  (π)  menjadi  tinggi.  Dari rumus γ i =  γ o/w – π  kalau  tegangan  lateral tinggi  bisa  berakibat  γ i menjadi  negative sehingga  terjadilah  pemecahan  partikel menjadi jauh lebih kecil dan secara spontan, dan terlihat transparan (Denoel, dkk, 1981).

## Formulasi Sediaan Solubilisasi
Hasil  dari  formulasi  sediaan  MSM bentuk  solubilisasi  diperoleh  dengan kriteria sediaan yang secara fisik
%Penghambatan=
(1 − 𝑂𝐷 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑢𝑗𝑖−𝑂𝐷 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑂𝐷 𝑃𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 𝑢𝑗𝑖−𝑂𝐷 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 ) 𝑥100%
…… (2) (Quave dkk, 2008
transparan/jernih,  dan  stabil  secara termodinamik.  Hasil  itu  didapat  pada formula  yang  terdiri  atas  0,125g  MSM, 1,500g  tween-80,  dan  3,375g  air.  Sediaan solubilisasi  mempunyai  ukuran  partikel rata-rata 15,6 nm yang ditetapkan   dengan PSA  (Gambar  3).  Ukuran  partikel  MSM dalam  bentuk  solubilisasi  atau  solubilisasi dalam  misel  jauh  lebih  kecil  dikarenakan MSM yang disisipkan ke dalam misel berupa molekul  MSM.  Ini  terjadi  kalau  surfaktan berada  pada  nilai  HLB  yang  relatif  tinggi, pada  konsentrasi  yang  cukup  tinggi,  dan konsentrasi  minyak  yang  relatif  sangat sedikit.  Dengan ukuran partikel misel rata- rata  15,6  nm  sehingga  sediaan  terlihat sebagai  transparan  (Passet  dkk.,  1983; Denoel dkk., 1981).
Gambar 3. Ukuran partikel fase dispers emulsi ditetapkan dengan PSA (Kartika dkk,
2017)
Gambar 4. Ukuran partikel fase dispers mikroemulsi ditetapkan dengan PSA (Kartika dkk, 2017)
Uji Antibakteri
Hasil  uji  yang  dinyatakan  sebagai Hambatan  Pertumbuhan  Bakteri  (HPB) Escherichia  coli ATCC  25922  (Gambar  6) diperoleh  bahwa  HPB  E.  coli  dari  MSM (dalam  kadar  yang  sama)  MSM  sebagai bahan murni adalah 66,59%,  dalam bentuk emulsi adalah 17,45%, bentuk mikroemulsi adalah  49,58  %,  dan  dalam  bentuk solubilisasi  relatif  0%  atau  bisa  dikatakan kehilangan potensi antibakteri.
Apabila membandingkan MSM murni dengan MSM dalam bentuk sediaan terlihat bahwa  formulasi  secara  jelas  mengurangi antivitas  antibakteri  dari  MSM,  hal  ini kemungkinan  dikarenakan  sediaan  perlu
membuat MSM “released” dari mediumnya, sedangkan  kalau  bahan  murni  langsung sudah  berada  dalam  keadaan  “released” apalagi  untuk  penggunaan  topical.  Namun demikian kita tidak bisa menggunakan MSM langsung  untuk  terapi,  harus  dibentuk menjadi  suatu  sediaan  farmasi  karena bentuk  murni  MSM  seperti  bahan  aktif lainnya  tidak  nyaman  dan  tidak  praktis kalau digunakan secara langsung, jadi harus dalam bentuk sediaan. Membandingkan ketiga sediaan emulsi,  mikroemulsi,  solubilisasi,  maka bentuk  mikroemulsi  mempunyai  HPB 49,58% lebih besar dibanding emulsi yang
HPB  nya  17,45%.  Hal  ini  disebabkan  oleh
Gambar 5. Ukuran partikel MSM bentuk solubilisasi ditetapkan dengan PSA
Gambar 6. Perbandingan aktivitas MSM dalam bentuk murni, emulsi, mikroemulsi, dan solubilisasi
karena  “released”  MSM  dalam  bentuk mikroemulsi lebih baik dibanding HPB dari emulsi.  “Released”  MSM  dari  mikroemulsi lebih baik karena partikel fase dispers MSM dalam  bentuk  mikroemulsi  lebih  kecil dibandingkan  partikel  fase  dispers  dalam bentuk emulsi, atau dengan perkataan lain luas  antarmuka  antara  fase  internal  dan fase eksternal lebih luas pada mikroemulsi. MSM dalam bentuk solubilisasi relatif kehilangan HPB nya, dimana harga HPBnya adalah  0%,  padahal  kalau  dilihat  dari ukuran  partikel  fase  dispers  bentuk solubilisasi  jauh  lebih  kecil  dibanding mikroemulsi.  Dalam  bentuk  solubilisasi, MSM  disisipkan  ke  dalam  misel  dalam bentuk  molekul,  dan  MSM  terjerat  di dalam  misel  sehingga  sulit  untuk  di- “released”  menjadi  bentuk  bebas  dalam medium, padahal  yang berefek antibakteri adalah  yang  berada  dalam  kondisi bebas  atau  “released”. (Marchaban  dkk.,
1983). Untuk  mengetahui  perbedaan  dari tiap  kelompok  data  dari  berbagai  sediaan tersebut dilakukan uji normalitas menggunakan  Saphiro-Wilk.  Dari  uji  ini didapatkan  hasil  bahwa  data  terdistribusi secara  normal.  Selanjutnya  dilakukan  uji homogenitas  varian  dengan  metode  uji Levene. Berdasarkan hasil analisis, harga p- value  >0,05.  Hal  ini  berarti  ragam  antar kelompok  perlakuan  homogen.  Kemudian dilakukan  uji  perbandingan  berganda, menggunakan  Tukey  HSD.  Data  yang terdistribusi  normal  selanjutnya  dianalisis menggunakan  ANOVA,  dari  hasil  uji  dapat disimpulkan  bahwa  terdapat  perbedaan yang  signifikan  persentase  penghambatan antar sediaan.

## KESIMPULAN
MSM  apabila  dibuat  dalam  bentuk sediaan  farmasi,  dapat  menurunkan aktivitas  antibakterinya.  Dari  MSM  yang dibuat  menjadi  3  (tiga)  sediaan  yang berbeda  yaitu  emulsi,  mikroemulsi,  dan solubilisasi, MSM dalam bentuk mikroemulsi mempunyai HPB paling tinggi
(49,58%),  lalu  diikuti  oleh  bentuk  emulsi (HPB  17,45%),  dan  bentuk  solubilisasi (HPB 0%)

## DAFTAR PUSTAKA
Handayani,  A.  R.  ,  2018,  Pengaruh  Bentuk Sediaan  Emulsi  dan  Solubilisasi Terhadap Potensi Ativitas Antibakteri
Dari Minyak Atsiri Daun Sirih Merah (Piper  crocatum  RUIZ  &  PAV.)  Pada Bakteri Escherichia  coli  ATCC  25922,  Skripsi,  Fak Farmasi UGM. Anonim, 1979, Farmakope  Indonesia ,  Edisi
III, Departemen  Kesehatan Republik
Indonesia, Jakarta. Bilia,  A.R.,  Guccione,  C.,  Isacchi,  B.,
Righeschi,  C.,  Firenzuoli,  F.,  dan Bergonzi,  M.C.,  2014,  Essential  Oils Loaded in Nanosystem: A Developing Strategy for a Successful Therapeutic Approach, Evidence Based Complementary and Alternative Medicine , 1-14. Brooks,  G.F.,  Carroll,  K.C.,  Butel,  J.S.,  &
Morse,  S.A.,  2007, Jawetz,  Melnick  & Adelsberg’s Medical Microbiology , 24 th Edition, The McGraw- Hill’s Company, New York.
Denoel,  A,  Jaminet,  Fr.,  and  Moes,  A., Pharmacy  Galenique  tome  II,  Les Press Univ Liege, Liege, 1981 Dubick MA, 1986, Historical perspectives on the  use  of  herbal  preparations  to promote  health. JN  The  Journal  of Nutrition ,  University  of  California, Davis, School of Medicine, 1348-1349. Kammona O, Kiparissides, C., 2012, Recent Advances in Nanocarrier-based Mucosal  Delivery  of  Biomolecules, Journal  of  Controlled  Release ,  161, 781-794. Kartika,  E.P.  ,  2018,  Pengaruh  Formulasi Bentuk Sediaan Emulsi dan Nanoemulsi Minyak Atsiri Saun Sirih Merah  (Piper  crocatum  Ruiz  &  Pav.) Terhadaap  Aktivitas  Antibakteri Escherichia coli ATCC 25922, Skripsi, Fak Farmasi UGM
Kartika,  E.P.,  Marchaban,  dan  Sudarsono, 2018,  Aktivitas  Antibakteri  Minyak Sirih  Merah  (Piper  crocatum  Ruiz  & Pav.)  Dalam  Bentuk  Sediaan  Emulsi dan Mikroemulsi, Majalah Farmaseutik,  Vol  14,  Nomor  2,  Th 2018, hal 79-86. Marchaban, Passet, J., Maillols, H., Saunal, H., dan Delonca, H., 1983, Physicochemical Study of Tensioactive-oil-water Mixtures, Pharm. Acta Helv., 58 (11), 298-302 Marchaban,  Fudholi,  A.,  Saifullah,  TN., Bestari,  AN.,  Saadah,  M.,  2015, Formulasi  dan  Teknologi  Sediaan Semipadat,  Fak  Farmasi  UGM, Yogyakarta Mollet,  H.,  dan  Grubermann,  A.,  2001, Formulation  Technology:  Emulsions, Suspensions,    Solid   Form ,   261-262, Wiley-Vch, Toronto, 73. Passet, J., Marchaban, M., Laget, G.P., Saunal, H.,  dan  Delonca,  1983,  Micellary Solubilization  of  the  Essential  Oil  of the Bergamot and Paraffin Oil, Pharm. Acta Helv., 58 (8), 210-216 Yuksel, K., Ucan, U.C., Kartal, M., Altun, M.L., Aslan,  S.,  Sayar,  E.,  and  Ceyhan,  T., 2006, GC-MS Analysis and Antibacterial  Activity  of  Cultivated Satureja  cuneifolia Ten  Essential  Oil,
Turkey  Journal  Chemistry ,  30,  253- 259.