## INDONESIA
Isolasi, Identifikasi Dan Uji Bioaktivitas Metabolit Sekunder Dari  Fraksi  n-Heksana Kayu Akar Tumbuhan Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.) Yang Tidak Aktif Terhadap Udang Artemia salina Leach.
Jamius B. Stepanus* 1 dan Nunuk H. Soekamto 2
1 Fakultas Teknik, Universitas Papua, Manokwari, Indonesia
2 Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Hasanuddin, Makassar Indonesia
*alamat email korespondensi: j.stepanus@unipa.ac.id

## Abstract
Ethnobotany  exploration  and  base  on  chemotaxonomy  and  phylogenetic  study,  shown  that  root wood  of  Kleinhovia  hospita  Linn  (Paliasa)  plant  potentially  produces  various  structure  and bioactive of  secondary metabolite. This research aimed was to isolate, identify and determine the bioactivity  of  secondary  metabolite  of  n-hexane  fraction  that  not  active  towards  Artemia  salina Leach shrimp from root wood of Kleinhovia hospita Linn plant. Isolation methods that used were extraction,  fractionation  and  purification.  Secondary  metabolite  identification  by  analyses  IR spectroscopy  while  bioactivity  test  based  on  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BST)  using  A.  salina. Result showed that two compounds were obtained, predicted as steroidal alkaloid with their toxicity value (LC 50 ) were > 1000 µg/mL dan 107,54  µg/mL respectively.
Keywords: Artemia salina Leach., Kleinhovia hospita Linn., IR spectrum, Sterculiaceae, steroidal alkaloid.

## Abstrak
Penelusuran secara etnobotani dan berdasarkan kajian kemotaksonomi serta filogenetik menunjukkan  kayu  akar  tumbuhan  Kleinhovia  hospita  Linn.  (Paliasa)  berpotensi menghasilkan metabolit sekunder dengan stuktur beragam dan bersifat bioaktif. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi, mengidentifikasi dan menentukan bioaktivitas metabolit sekunder pada fraksi n-heksan yang tidak aktif terhadap udang Artemia salina Leach dari kayu  akar  tumbuhan  K.  hospita.  Metode  isolasi  yang  digunakan  terdiri  dari  ekstraksi, fraksinasi dan pemurnian. Identifikasi metabolit sekunder melalui analisis spektroskopi IR sedang uji  bioaktivitas senyawa berdasarkan metode Brine Shrimp Lethality Test (BST) menggunakan  A.  salina.  Hasil  penelitian  diperoleh  dua  senyawa  yang  diduga  sebagai

## Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
steroid alkaloidal dengan nilai toksisitas (LC 50 ) masing-masing senyawa adalah > 1000 µg/mL dan 107,54  µg/mL.
Kata Kunci: Artemia salina Leach., Kleinhovia hospita Linn., spektrum IR, Sterculiaceae, steroid alkaloidal.

## I. PENDAHULUAN
Salah  satu  famili  tumbuhan  tropis
Indonesia yang cukup besar adalah Sterculiaceae  yang  terdiri  atas  70  genus  dan sekitar  1500  spesies  (Mabberley,  1997). Penelusuran  secara  etnobotani  menunjukkan bahwa tumbuhan famili Sterculiaceae memiliki  khasiat  pengobatan  dan  telah dimanfaatkan  oleh  masyarakat  sebagai  obat tradisional.  Misalnya, P.  celebicum telah dimanfaatkan  oleh  masyarakat  Sulawesi Selatan sebagai obat  penyakit  disentri, luka pada  gusi  dan  sebagai  obat  anti  infeksi (Marzuki et al., 2014). Akar Helicteres isora digunakan  untuk  radang  ginjal  kronik  dan buahnya  sebagai  jamur  untuk  membasmi cacing pita (Kamiya et al., 2001). Sementara itu, daun Sterculia africana digunakan sebagai obat kejang-kejang (Hamza et al., 2006).
Hasil survei etnobotani memperlihatkan bahwa  salah  satu  tumbuhan  potensial  yang banyak ditemukan di daerah Sulawesi Selatan adalah  spesies  tumbuhan Kleinhovia  hospita Linn.  dikenal  dengan  nama  daerah  paliasa (Makassar)  atau  aju  pali  (Bugis). K.  hospita
merupakan  spesies  tumbuhan  berkhasiat dari famili Sterculiaceae (WHO, 2009). Kayu akar K.  hospita berpotensi  besar  menghasilkan senyawa-senyawa  metabolit  sekunder  yang beragam dan yang memiliki sifat bioaktif. Hal ini  didukung  oleh  penyelidikan  secara kemotaksonomi dan filogenetik, yaitu spesies- spesies  tumbuhan  dari  famili  yang  sama memiliki  anatomi  dan  morfologi  yang  mirip, akibatnya  akan  mengalami  proses  fisiologi yang  mirip  pula.  Karena  fisiologi  berkaitan dengan  sel,  maka  spesies-spesies  tumbuhan dari famili yang sama berkemungkinan besar akan  memiliki  kandungan  senyawa  kimia yang sama pula.
Penelitian  terhadap    akar spesies tumbuhan lainnya dari famili Sterculiaceae memperlihatkan potensi senyawa  bioaktif.  Misalnya,  ekstrak  etanol dari  akar Hermania  depressa ,  bermanfaat sebagai  antibakteri  terhadap Bacillus  subtilis (Reid  et  al.,  2005) . Ekstrak  etanol  akar Helicteres isora bermanfaat sebagai antidiabetes dan efek hipolipidemik (Chakrabarti  et  al.,  2002).  Bagian  akar

## Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
tumbuhan
Helicteres angustifolia menunjukkan  aktivitas  penghambat  yang signifikan  terhadap  pertumbuhan  sel-sel in vivo melanoma SK-MEL-28 yang akut (Chen et al., 2006). Hoelzel et al. (2005) melaporkan adanya  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak metanol  kulit  akar Waltheria  douradinha . Penelitian  lainnya  menunjukkan  ekstrak metanol dari kulit akar Cola nitida dan Cola milleni memiliki  aktivitas  antimikrobakteria (Adeniyi et al., 2004).
Berdasarkan  studi  literatur  di  atas, diduga bahwa bagian kayu akar dari tumbuhan K.  hospita yang  juga  termasuk  famili Sterculiaceae  berkemungkinan  mengandung senyawa  metabolit  sekunder  yang  berpotensi sebagai  senyawa  bioaktif.  Hasil  kajian terhadap  penelitian-penelitian    tersebut  juga menunjukkan  bahwa  hasil  ekstrak  diperolehi hanya dari pelarut polar.  Sehingga,  penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi, mengidentifikasi dan menentukan bioaktivitas metabolit  sekunder  pada  fraksi n- heksan (sebagai  pelarut  non  polar)  yang  tidak  aktif terhadap  udang Artemia  salina Leach  dari kayu akar tumbuhan K . hospita .

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1 Sampel
Kayu  akar  tumbuhan K.  hospita didapatkan  dari  Desa  Jambu,  Kecamatan Bajo,  Kabupaten  Luwu,  Sulawesi  Selatan.
Spesimen tumbuhan diidentifikasi di Herbarium Bogoriensis, LIPI Bogor.

## 2.2  Isolasi
Kayu  akar  tumbuhan K.  Hospita yang telah  digiling  menjadi  serbuk  dimaserasi dengan  pelarut  metanol  selama  1  x  24  jam sebanyak  beberapa  kali.  Maserat  kemudian dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator untuk  memisahkan  pelarut  metanol,  lalu dipartisi dengan pelarut n -heksan. Hasil partisi n -heksan  selanjutnya    difraksinasi  melalui kromatografi kolom vakum (KKV), kromatografi  kolom  tekan  (KKT)  dan kromatografi kolom gravitasi (KKG) menggunakan eluen yang sesuai berdasarkan analisis dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dan  setiap  hasil  dari  fraksinasi  dimonitor kembali melalui analisis dengan KLT.

## 2.3 Analisis KLT
Analisis dengan KLT dilakukan terhadap maserat,  ekstrak  hasil  partisi,  fraksi dan  isolat  tunggal  menggunakan  berbagai variasi  pelarut/eluen.  Eluen  yang  digunakan dapat berupa campuran dua atau tiga pelarut. Nilai retention factor (R f ) dihitung menggunakan persamaan berikut :
f Jarak tempuh noda (cm) R Persamaan (1)
Jarak tempuh eluen (cm)
=

## Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
2.4 Fraksinasi
Fraksinasi  dilakukan  dengan  3  jenis kromatografi  kolom  yaitu  KKV,  KKG  dan KKT  dengan  menggunakan  eluen  yang bervariasi.  Hasil  fraksinasi  dianalisis  dengan KLT  menggunakan  eluen  yang  sesuai  agar dapat  menggabungkan  fraksi-fraksi  dengan nilai retention factor (R f ) yang sama.

## 2.5  Uji Toksisitas
Fraksi  dan  isolat    tunggal    yang didapatkan diuji toksisitasnya terhadap udang A. salina (Meyer et al., 1982).

## 2.6  Identifikasi
Isolat tunggal/murni diuji kemurniannya melalui pengukuran titik leleh dan melalui analisis KLT dengan menggunakan  tiga  jenis  sistem  eluen. Penentuan golongan isolat tunggal dilakukan melalui uji golongan. Elusidasi struktur isolat melalui analisis data spektroskopi IR (Merek Shimadzu Type Alat IRPrestige-21).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1  Maserasi dan Ekstraksi
Sampel kayu akar K. hospita dihaluskan menjadi  serbuk  (5,09  kg)  lalu  dimaserasi dengan  pelarut  metanol  selama  1  x  24  jam sebanyak 5 kali. Maserat metanol kemudiannya dievaporasi menghasilkan maserat metanol pekat dengan berat 76,84 g.
Selanjutnya,  maserat  metanol  pekat  dipartisi secara  kontiniu  mulai  dari  pelarut  non  polar yaitu n -heksana  ,  pelarut  semipolar  yaitu klorofom (CHCl 3 ) dan pelarut polar yaitu etil asetat  (EtOAc).  Hasil  partisi  diperlihatkan pada Tabel 1.

## Tabel 1. Hasil Ekstraksi
Pelarut Warna Residu Berat (g) n-heksana Hijau Kehitaman 7,59 CHCl 3 * Coklat Kemerahan  12,40 EtOAc* Coklat 11,55
Sumber: Hasil Penelitian (2022) * Hasil Partisi oleh Peneliti Lain

## 3.2  Fraksinasi dan Pemurnian
Ekstrak n -heksana  berwarna  hijau kehitaman seberat 7,59 g difraksinasi melalui KKV  (diameter  kolom  7  cm)  dengan peningkatan kepolaran eluen yaitu n -heksana, n -heksana  :  EtOAc  (eluen  99,5% n -heksan  : 0,5%  EtOAc  memberikan  R f =  0,3),  aseton dan  metanol.  Hasil  fraksinasi  diperoleh  26 fraksi  utama  dan  berdasarkan  kromatogram hasil  analisis  KLT  diperoleh  16  fraksi gabungan,  A-P.  Penggabungan  fraksi-fraksi berdasarkan  nilai  R f yang  sama.  Penentuan fraksi aktif dan tidak aktif didasarkan metode Brine  Shrimp  Test (BST)  dan  nilai  toksisitas (LC 50 )  masing-masing  fraksi  gabungan,  A-P diperlihatkan pada Tabel 2 .
Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
Tabel 2. Nilai Toksisitas (LC 50 ) Fraksi- Fraksi dari Ekstrak n -Heksana
Fraksi Nilai toksisitas (LC 50 ) (µg/mL) A - B - C - D 769,16 E 836,37 F > 1000 G 682,67 H > 1000 I 408,91 J 427,41 K 836,30 L 807,38 M 14,61 N 47,62 O > 1000 P 665,41 Sumber: Hasil Penelitian (2022)
Keterangan :
(i) Fraksi dengan nilai LC 50 < 500 µg/mL bersifat toksik  (fraksi  aktif)  dan  fraksi  dengan  nilai LC 50 > 500 µg/mL bersifat  tidak toksik (fraksi tidak aktif).
(ii) Nilai LC 50 fraksi A, B dan C tidak ditentukan karena merupakan fraksi berminyak dan sukar larut dengan pelarut uji.
3.3   Senyawa I
Filtrat fraksi H seberat 540,3 mg (berat setelah  filtrat  dievaporasi)  berwarna  oranye kekuningan, difraksinasi melalui KKV (diameter  kolom  3  cm)  dengan  peningkatan kepolaran eluen yaitu n -heksana, n -heksana :
EtOAc  (eluen  95% n -heksana  :  5%  EtOAc memberikan  R f =  0,3),  aseton    dan  metanol. Berdasarkan kromatogram hasil analisis KLT terhadap  22  fraksi  dari  fraksinasi  tersebut (Gambar  1),  diperoleh  11  fraksi  gabungan yaitu H F. 1-2 , H F. 3 ,   H F. 4 , H F. 5-7 , H F. 8-9 , H F. 10 , H F. 11 , H F. 12-13 , H F. 14-18 ,  H F. 19-20 dan H F.
21-22.
Endapan putih yang terbentuk pada fraksi H F. 8-9 (55,4  mg)  dikristalisasi  dan  rekristalisasi dengan  pelarut n -heksana,  CHCl 3 dan  aseton menghasilkan  kristal  putih  (42,8  mg). Selanjutnya,  diuji  kemurniannya  melalui analisis  KLT  menggunakan  tiga  jenis  sistem eluen (Gambar 2). Berdasarkan 3
kromatogram tersebut, maka kristal dari fraksi gabungan H F. 8-9 merupakan isolat murni dan dinyatakan  sebagai senyawa  I .  Senyawa  I tidak berpendar di bawah lampu UV.
(i) Eluen 80% n -heksana : 20% EtOAc (ii) Eluen 60% n -heksana : 40% EtOAc Gambar 1. Kromatogram Hasil Analisis KLT Fraksi H F.1 - H F.22 (Sumber: Hasil Penelitian (2022))
Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
Gambar 2. Kromatogram Hasil Analisis KLT Kristal dari Fraksi Gabungan H F. 8-9 Sumber: Hasil Penelitian (2022)

## 3.4   Senyawa II
Crude crystal fraksi O berwarna kuning dengan  berat  50,9  mg  difraksinasi  melalui KKG (diameter kolom 7,5 mm) dengan eluen n -heksana,  40% n -heksana  :  60%  EtOAc, aseton dan metanol. Hasil fraksinasi diperoleh 16 fraksi dan berdasarkan kromatogram hasil analisis  KLT  (Gambar  3)  diperoleh  6  fraksi gabungan yaitu O 1-2 , O 3 , O 4 , O 5-6 , O 7-9 , O 10-
16 . Noda-noda yang teramati pada kromatogram tidak berpendar di bawah lampu UV.  Pada  fraksi  gabungan  O 5-6 ,  terbentuk
endapan kuning seberat 28,9 mg. Kristalisasi dan  rekristalisasi  terhadap  endapan  dengan menggunakan  pelarut n -heksana,  CHCl 3 dan aseton menghasilkan kristal berwarna kuning yang  kemudiannya  diuji  kemurnian  melalui analisis  KLT  menggunakan  tiga  jenis  sistem eluen  (Gambar  4).  Noda  tunggal  pada  3 kromatogram tersebut mengindikasikan bahwa kristal fraksi gabungan O 5-6 merupakan isolat  murni  yang  selanjutnya  dinyatakan sebagai senyawa  II .  Senyawa  II  tidak berpendar di bawah lampu UV.
( Eluen 40% n -heksana : 60% EtOAc)
Gambar 3. Kromatogram Hasil Analisis KLT Fraksi O 1 -O 16 (Sumber: Hasil Penelitian (2022))
(i) 40% n -heksana: 60% CHCl 3 (R f = 0,175) (ii) 95% n -heksana : 5% aseton  (R f = 0,525)
(iii) 60% n -heksana : 40% EtOAc  (R f = 0,75)

## Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
Gambar 4. Kromatogram Hasil Analisis KLT Kristal Fraksi Gabungan O 5-6
Sumber: Hasil Penelitian (2022)
Tabel 3. Karakteristik Senyawa I dan II
Senyawa Warna Kristal Berat (mg) Titik Leleh ( o C) Pereaksi Liebermann- Buchard Pereaksi Dragendorff Nilai Toksisitas (LC50) (µg/mL) I Putih 42,8 135-136 Warna Biru Kehijauan Endapan Berwarna Kuning > 1000 II Kuning 22,3 202-204 Warna Merah Kebiruan Endapan Berwarna Kuning 107,54 Sumber: Hasil Penelitian (2022)
Anderson  et  al.  (1991)  melaporkan  bahwa suatu  ekstrak  bersifat  toksik  jika  nilai toksisitasnya  (LC 50 ) adalah  kurang  dari  500 µg/mL  sementara  suatu  senyawa  murni bersifat  toksik  jika  nilai  toksisitasnya  (LC 50 ) adalah  kurang  dari  200  µg/mL.  Nilai  LC 50 bagi senyawa I dan II masing-masing adalah
>1000 µg/mL dan 107,54 µg/mL.
Berdasarkan  nilai  LC 50 tersebut,  maka senyawa  I  bersifat  tidak  toksik  sebaliknya senyawa  II  tergolong  sebagai  senyawa  yang bersifat toksik terhadap benur udang A . salina .
3.5  Spektrum  Infra  Red  (IR)  senyawa  I dan senyawa II
Spektrum  IR  (KBr)  senyawa  I  dapat  dilihat pada  Gambar  5.  Spektrum  IR  senyawa  I memperlihatkan  pita  serapan  (  maks )  pada bilangan gelombang 3392 cm -1 (O-H stretching )  yang  mengidentifikasikan  gugus OH. Ini didukung oleh serapan pada 1051 cm - 1 (C-O stretching )  sebagai  gugus  CO. Selanjutnya, teramati gugus CH alifatik pada serapan 2958 cm -1 , 2927 cm -1 dan 2854 cm -1
(C-H stretching )  dan  ini  diperkuat  oleh serapan  dari  gugus  CH 3 dan  CH 2 dengan
(i) 60% CHCl 3 : 40% EtOAc (R f = 0,2)
(ii) 30% n -heksan : 70% EtOAc (R f = 0,45) (iii) 60% n -heksan : 40% aseton (R f = 0,625)

## Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
masing-masing bilangan gelombang 1375 cm - 1 (CH 3 bending ) dan 1460 cm -1 (CH 2 bending ).
Gugus olefin teramati pada serapan 1649 cm -1
(C=C stretching ).  Dua  gugus  karbonil  yaitu
C=O ester dan C=O karboksil masing-masing terlihat pada serapan 1741 cm -1 dan 1699 cm -
1 (C=O stretching ).
Gambar 5. Spektrum IR Senyawa I
Sumber: Hasil Penelitian (2022)

## Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
Gambar 6. Spektrum IR Senyawa II Sumber: Hasil Penelitian (2022)
Sementara itu, gugus C  ikatan rangkap tiga  N diperhatikan  pada  serapan  tajam  pada bilangan  gelombang  2364  cm -1 dan  ini didukung  dengan  adanya  gugus  C-N  pada serapan  1543 cm -1 dan  1516  cm -1 .  Hasil  uji golongan  senyawa  I  memberikan  warna  biru
kehijauan  setelah  penambahan  pereaksi Liebermann-Buchard yang menunjukkan bahwa  senyawa  I  positif  sebagai  senyawa steroid.  Dengan  adanya  gugus  C-N  pada spektrum,  maka  dilakukan  uji  golongan lainnya yaitu uji Dragendorff untuk penentuan

## Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
kandungan  senyawa  alkaloid.  Hasil  uji Dragendorff terhadap senyawa I memberikan endapan  berwarna  kuning  yang  menyatakan bahwa senyawa I positif alkaloid. Berdasarkan data  tersebut,  diduga  senyawa  I  adalah senyawa steroid alkaloidal.
Hasil  uji  golongan  dengan  pereaksi Liebermann-Buchard  memperlihatkan  warna merah  kebiruan  yang  menyatakan  bahwa senyawa II positif steroid. Sementara hasil uji golongan  dengan  pereaksi  Dragendorff teramati  endapan  berwarna  kuning  yang menyatakan  bahwa  senyawa  II  positif alkaloid. Spektrum IR senyawa II (Gambar 6) memperlihatkan  kemiripan  dengan  spektrum IR  senyawa  I,  sehingga  kedua  senyawa tersebut  memiliki  gugus  fungsi  yang  sama. Dengan  demikian,  senyawa  II  juga  diduga sebagai senyawa steroid alkaloidal.

## IV. KESIMPULAN
Hasil  penelitian  terhadap  fraksi n - heksana  yang  tidak  aktif  terhadap A.  salina dari  kayu  akar K.  hospita telah  diisolasi  dua metabolit  sekunder  steroid  alkaloidal  yaitu senyawa  I  seberat  42,8  mg  (0.56  %  untuk setiap  gram  ekstrak n -heksana)  dan  senyawa II seberat 22,3 mg (0.29 % untuk setiap gram ekstrak n -heksana).  Senyawa  I  bersifat  tidak toksik  dengan  nilai  toksisitas  LC 50 >  500 µg/mL  sedangkan  senyawa  II  bersifat  toksik dengan nilai toksisitas (LC 50 )  107,54 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Adeniyi,  B.  A.,  Groves,  M.  J.,  &
Gangadharam,  P.  R.  J.  (2004).  In  vitro anti-mycobacterial  activities  of  three species of Cola plant extracts (Sterculiaceae). Phytotherapy Research
, 18 (5),414–418.  https://doi.org/10.1002 /ptr.1468.
Anderson, J. E., Goetz, C. M., & Mclaughlin, J.  L.  (1991).  107-I  I  I. Phytochemical Analysis , 2 , 107–111.
Chakrabarti,  R.,  Vikramadithyan,  R.  K., Mullangi, R., Sharma, V. M., Jagadheshan, H., Rao, Y. N., Sairam, P., & Rajagopalan, R. (2002). Antidiabetic and hypolipidemic activity of Helicteres isora  in  animal  models. Journal  of Ethnopharmacology , 81 (3),  343–349. https://doi.org/10.1016/S0378-741(02) 00120-4
Chen,  W.,  Tang,  W.,  Lou,  L.,  &  Zhao,  W. (2006). Pregnane, coumarin and lupane derivatives  and  cytotoxic  constituents from Helicteres angustifolia. Phytochemistry , 67 (10),1041–1047.
https://doi.org/10.1016
/j.phytochem.2006.03.005
Hamza,  O.  J.  M.,  van  den  Bout-van  den Beukel, C. J. P., Matee, M. I. N., Moshi, M. J., Mikx, F. H. M., Selemani, H. O., Mbwambo, Z. H., Van der Ven, A. J. A. M., & Verweij, P. E. (2006). Antifungal

## Jamius Bin Stepanus dan Nunuk Hariani Soekamto, Akta Kimia Indonesia 8(1), 2023, 47-57
activity of some Tanzanian plants  used traditionally for the treatment of fungal infections. Journal of Ethnophar macol-
ogy , 108 (1),124–2.https://doi.org/10.10 16/  j.jep.2006 .04.026
Hoelzel, S. C. S. M., Vieira, E. R., Giacomelli, S. R., Dalcol, I. I., Zanatta, N., & Morel, A.  F.  (2005). An  unusual  quinolinone alkaloid from Waltheria
douradinha . 66 ,1163–1167.  https://doi. org/ 10.1016/j.phytochem.2005.03.019
Kamiya,  K.,  Saiki,  Y.,  Hama,  T.,  Fujimoto, Y., Endang, H., Umar, M., & Satake, T. (2001).  Flavonoid  glucuronides  from Helicteres isora. Phytochemistry , 57 (2), 297–301.https://doi.org/10.1016/S0031 -9422(01)00005-X Mabberley,  D.  J.  (1997). The  Plant-Book:  A Portable  Dictionary  of  the  Vascular Plants (Second). Cambridge University Press.
Marzuki,  A.,  Noor,  A.,  Soekamto,  N.,  & Harlim,  T.  (2014). Elusidasi  Struktur
Molekul  Asam  2,3,  32-trihidroksi-12-
oleanen-28-oat Ekstrak Kloroform Pterospermum celebicum Miq
[Universitas  Hasanuddin].http://reposi- tory.unhas.ac.id/handle/123456789/
10212
Meyer, B. N., Ferrigni, N. R., Putnam, J. E.,
Jacobsen,  L.  B.,  Nichols,  D.  E.,  & McLaughlin, J. L. (1982). Brine shrimp: A convenient general bioassay for active plant  constituents. Planta  Medica ,
45 (1), 31–34. https://doi.org/ 10.1055/s- 2007-971236
Reid,  K.  A.,  Jäger,  A.  K.,  Light,  M.  E.,
Mulholland,  D.  A.,  &  Van  Staden,  J.
(2005). Phytochemical and pharmacological screening of
Sterculiaceae  species  and  isolation  of antibacterial  compounds. Journal  of Ethnopharmacology , 97 (2), 285–
291.https://doi.org/10.1016/j.jep.  2004
.11.010.
WHO,  W.  H.  O.  (2009). Medical  Plants  in Papua New Guinea . WHO Press.