## Pengembangan Pembalut Pintar untuk Deteksi Dini Kondisi Hiperurisemia dan Hiperkolesterolemia

## ( Development of Smart Pads for Early Detection of Hyperuricemia and Hypercholesterolemic Conditions )
Itut Septiana Dewi, Bambang Kuswandi * , Ari Satia Nugraha Fakultas Farmasi Universitas Jember Jln. Kalimantan No. 37 Jember 68121 *e-mail: b.kuswandi@gmail.com

## Abstract
Hyperuricemia  and  hypercholesterolemia’s  cases  are  increasing.  Noninvasive  early  detection  method should  be  develope.  Development  of  smart  sanitary  napkins  based  on  paper  chip  biosensors  using “Whatman”  filter  paper  through  screen  printing  and  immobilized  with  pH  6  citrate  buffer  and  iron  (III)- actress-  (1,10-phenanthroline)  complex  reagent  for  detection  of  uric  acid  and  cholesterol  oxidase enzymes  and  reagent  2,2'-azino-bis  (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic  acid  (ABTS))  for  cholesterol detection.  The  analysis  of  the  paper  chip  biosensor  has  a  response  time  of  10  minutes  for  uric  acid detection and 25 minutes for cholesterol detection. Uric acid linearity 2 - 20 mg / dL and cholesterol 50 - 500  mg  /  dL. The  LOD  and  LOQ  detection  areas  for uric  acid  were  0.322 mg  /  dL  and  0.965  mg /  dL, respectively, while the cholesterol detection areas were 8.740 mg / dL and 26.221 mg / dL, respectively. NaCl  interference  interfering  with  the  detection  of  uric  acid  and  cholesterol  was  5.746%  and  6.388%, respectively  and  creatinine  interference  interfering  with  the  detection  of  uric  acid  and  cholesterol  was 5.868%  and  5.583%,  respectively.  The  precision  for  uric  acid  detection  was  1.252%  (RSD  <3.7%)  and cholesterol detection was 0.059% (RSD <2.7%). The accuracy (% recovery) for uric acid detection was 100.333% and for cholesterol, the detection was 100.016%. Smart bandages can be used to analyze the initial conditions of hyperuricemia and hypercholesterolemia.
Keywords : Biosensors, Cholesterol, Gout, Hyperuricemia, Hypercholesterolemia

## Abstrak
Kasus  hiperurisemia  dan  hiperkolesterolemia  semakin  meningkat.  Upaya  deteksi  dini  yang  non  invasif perlu  dilakukan.  Pengembangan  pembalut  pintar  berbasis  biosensor chip kertas  menggunakan  kertas saring  “ Whatman” melaui  cetak  sablon  dan  telah  diimmobilisasi  dengan  dapar  sitrat  pH  6  dan  reagen kompleks besi (III)-tris-(1,10-phenantrolin) untuk deteksi asam urat serta enzim kolesterol oksidase dan reagen 2,2'-azino-bis  (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic  acid  (ABTS)) untuk  deteksi  kolesterol.  Analisis biosensor chip kertas  mempunyai  waktu  respon  10  menit  untuk  deteksi  asam  urat  dan  25  menit  untuk deteksi kolesterol. Linieritas asam urat 2 – 20 mg/dL dan kolesterol 50 – 500 mg/dL. LOD dan LOQ area deteksi asam urat berturut-turut adalah 0,322 mg/dL dan 0,965 mg/dL, sedangkan area deteksi kolesterol berturut-turut yaitu 8,740 mg/dL dan 26,221 mg/dL. Interferensi NaCl mengganggu deteksi asam urat dan kolesterol  masing-masing  adalah  5,746%  dan  6,388%  dan  interferensi  kreatinin  mengganggu  deteksi asam  urat  dan  kolesterol  masing-masing  adalah  5,868%  dan  5,583%.  Presisi  untuk  deteksi  asam  urat adalah  1,252  %  (RSD  <  3,7  %)  dan  deteksi  kolesterol  adalah  0,059  %  (RSD  <  2,7  %).  Akurasi  (% recovery ) untuk deteksi asam urat sebesar 100,333 % dan untuk deteksi kolesterol sebesar 100,016 %. Pembalut pintar dapat digunakan untuk menganalisis kondisi awal hiperurisemia dan hiperkolesterolemia.
Kata kunci : Asam urat, Biosensor, Hiperurisemia, Hiperkolesterolemia, Kolesterol

## Pendahuluan
Pola  hidup  masyarakat  saat  ini  yang tidak  teratur  dapat  menyebabkan  resiko berbahaya  bagi  kesehatan  tubuh  manusia. Salah satunya dapat memicu penyakit degenarif yang  secara  umum  menyerang  sistem  saraf, pembuluh  darah,  tulang  dan  otot  dimana penyabab  dari  penyakit  tersebut  belum  dapat dideteksi  secara  pasti.  Konsentrasi  asam  urat dan  kolesterol  yang  tinggi  dapat  menjadi  faktor resiko pada penyakit degeneratif [1].
Asam urat merupakan produk akhir dari metabolisme  purin  (nukleoprotein)  oleh  tubuh yang  dapat  ditemukan  keberadaannya  dalam darah  dan  urin  [2,3].  Menurut  WHO,  ukuran kadar  normal  asam  urat  pada  laki-laki  dewasa adalah  sekitar  2  –  7,5  mg/dL  dan  pada  wanita dewasa  adalah  sekitar  2  –  6,5  mg/dL.  Untuk anak-anak  dengan  usia  10  –  18  tahun,  kadar normal asam urat untuk anak laki-laki adalah 3,6 –  5,5  mg/dL  dan  pada  anak  perempuan  adalah 3,6 – 4 mg/dL [4].
Kolesterol  merupakan  zat  alamiah  atau bahan pembangun esensial berupa  lemak yang berfungsi untuk sintesis zat-zat penting di dalam tubuh.  Peningkatan  jumlah  kolesterol  dalam darah  (hiperkolesterolemia)  dapat  terjadi  jika kolesterol  dikonsumsi  secara  berlebihan  [5]. Dalam  serum  atau  darah  manusia,  biasanya pengukuran  kadar  kolesterol  normal  umumnya berada pada rentang 140 – 200 mg/dL [6,7].
Darah  merupakan  jaringan  cair  berupa plasma  yang  di  dalamnya  terdiri  dari  sel-sel darah  (unsur  padat)  dan  termasuk  sumber penting  dalam  perawatan  kesehatan  manusia pada  berbagai  layanan  klinis  [8,9].  Menstruasi merupakan  proses  pengeluaran  darah  secara alami  melalui  vagina  yang  terjadi  pada  wanita setiap satu bulan sekali akibat dari endometrium yang  tidak  dibuahi  oleh  sperma  [10,11].  Pada penelitian  ini  digunakan  sampel  berupa  plasma darah  menstruasi  karena  secara  umum konsentrasi  metabolit  lebih  tinggi  di  dalam plasma  dan  sebagai  deteksi  biomarker  plasma menunjukkan  sensitivitas  yang  lebih  tinggi [8,12].
Pada  penelitian  ini  digunakan  reagen untuk  deteksi  asam  urat  dalam  plasma  darah mesntruasi  yaitu  kompleks  besi  (III)-tris-(1,10- phenantrolin) yang akan menimbulkan perubahan  warna  dari  merah  muda  menjadi merah kekuningan (oren) ketika reagen tersebut bereaksi  dengan  asam  urat  sebagai  analit  [13]. Untuk  deteksi  penentuan  kolesterol  dalam plasma  darah  menstruasi  digunakan 2,2'-azino-
bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS)) . Metode ini merupakan pengujian baru, sederhana  dan  sensitif  sebagai  deteksi kolorimetri kolesterol melalui H 2 O 2 , dimana 2,2'- azino-bis  (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic  acid (ABTS) dioksidasi oleh H 2 O 2 untuk menghasilkan produk berwarna hijau [14].
Pada  penelitian  sebelumnya,  telah dilakukan  pengembangan  biosensor  kertas sebagai  deteksi  asam  urat  dalam  sampel  urin. Penelitian  ini  selanjutnya  dilakukan  guna melanjutkan  pengembangan  pembalut  pintar berbasis biosensor kertas dengan menggunakan sampel plasma darah menstruasi untuk  deteksi  kondisi  hiperurisemia  dan hiperkolesterolemia [15].
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka dikembangkan  biosensor Lab  On  Chip (LOC) berbasis  kertas  dalam  bentuk  pembalut  pintar. Biosensor  pembalut  pintar  yang  dikembangkan pada  penelitian  ini  memilki  beberapa  kelebihan seperti:  murah,  volume  yang  dibutuhkan  sedikit serta  penggunaannya  lebih  mudah  dan  tidak memerlukan tenaga medis. Chip kertas ini dapat mendeteksi  adanya  kadar  asam  urat  dan kolesterol  dalam  darah  menstruasi  secara simultan [15].

## Metode Penelitian
Jenis  penelitian  yang  dilakukan  adalah experimental  laboratories dengan  tujuan  untuk mengembangkan  pembalut  pintar  berbasis biosensor chip kertas  untuk  deteksi  dini  kondisi hiperurisemia  dan  hiperkolesterolemia  yang dilakukan di Laboratorium Chemo and Biosensor  Group dan  Laboratorium  Kimia Analisis, Fakultas Farmasi, Universitas Jember.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini antara  lain  labu  ukur,  pipet  tetes,  pipet  volume, plat  tetes,  batang  pengaduk,  neraca  analitik, tabung  vaculab,  tabung  eppendorf  mikropipet, ultrasonikator,  sentrifugal,  pH  meter,  lemari  es, stopwatch ,  vial  kaca,  botol  kaca  coklat,  sudip besi,  ball  filler  serta  set  alat  sablon  (Papan sablon, kaca media sablon, photozol TS, screen sablon  T  77  (30  x  40  cm)).  Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  meliputi  kertas saring  “ Whatman ”  halus  150  mm  (Cat  No  1001 150),  kain  kasa  hidrofil  steril,  pembalut  merek “ Laurer ”  ukuran  25  cm,  kapas,  pewarna  hitam “ Sunrise  Screen  Ink ”  (CV.  Cipta  Warna  Jaya), tinta  pasta  karet  Type  MD  “ Sunrise ”  (warna putih), emulsifier “ Sunrise ”, double tape , standar asam  urat,  1,10-phenantrolin,  FeCl 3 .6H 2 O,
standar  kolesterol,  enzim  kolesterol  oksidase, 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS)) ,  kloroform,  asam  sitrat,  natrium hidroksida  (NaOH)  p.a,  asam  klorida  (HCl)  0,1 M,  asam  sulfat  (H 2 SO 4 )  p.a,  natrium  karbonat (Na 2 CO 3 ),  etanol  96%,  aquadest,  aquabidest steril  (WFI),  larutan  pewarna  sintetik  ( Ponceau 4R Cl.16255).

## Preparasi reagen
Pembuatan  larutan  dapar  sitrat  dan  reagen komplek besi (III)-tris-(1,10-phenantrolin). Larutan  dapar  sitrat  dipreparasi  dari  sejumlah serbuk asam sitrat (C 6 H 8 O 7 ) dan NaOH dengan kapasitas  masing-masing  0,01  yang  dilarutkan dengan aquadest dalam labu ukur 100 mL pada rentang pH 5 – 8. pH dikontrol menggunakan pH meter.  Larutan  reagen  komplek  besi  (III)-tris- (1,10-phenantrolin) yang pertama dibuat larutan besi  (III)  1000  mg/dL  yaitu  dengan  cara melarutkan 700 mg FeCl 3 .6H 2 O dalam aquadest secukupnya. Kemudian dibuat larutan tris-(1,10- phenantrolin)  1000  mg/dL  yaitu  dengan  cara melarutkan  300  mg  phenantrolin  dalam aquadest  secukupnya  dan  dilakukan  dalam keadaan  panas.  Selanjutnya,  dibuat  campuran larutan  besi  (III)  dan  tris  (1,10-phenantrolin) dalam  labu  ukur  100  ml,  kemudian  diadkan sampai tanda batas. Diperoleh konsentrasi 1000 mg/dL.  Kemudian  laruran  kompleks  besi  (III)- tris-(1,10-phenantrolin) diencerkan dengan konsentrasi 100 – 1000 mg/dL).
Pembuatan larutan enzim kolesterol oksidase dan  reagen 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline- 6-sulfonic  acid (ABTS)) .  Enzim  kolesterol oksidase  25  Unit  dilarutkan  dengan  larutan dapar fosfat  salin (PBS) pH 6,5 dalam labu ukur 5  ml.  Kemudian  diencerkan  menjadi  5  Unit enzim  kolesterol  oksidase.  Enzim  kemudian disimpan dalam freezer untuk menjaga aktivitas enzim  agar  tidak  rusak.  Larutan  reagen 2,2'- azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS)) dengan  konsentrasi  standar  2000  – 5000  mg/dL  diperoleh  dari  larutan  induk  ABTS 5000  mg/dL  yang  dibuat  dengan  cara melarutkan  250  mg  ABTS  ditambah  dengan aquabidest  steril  sampai  5  ml.  Selanjutnya  dari larutan  induk  5000  mg/dL  ini  dilakukan pengenceran larutan reagen dengan konsentrasi 2000 – 5000 mg/dL.
Desain Chip Kertas
Membuat  desain  cetakan  kertas  dengan menggunakan aplikasi CorelDRAW X-7 (64-Bit). Pembuatan chip kertas  menggunakan  kertas saring  “ Whatman ”.  Kertas  saring  selanjutnya
disablon dengan menggunakan tinta pasta karet MD  “ Sunrise ”  (warna  putih)  oleh  ahli  dibidang penyablonan.  Selanjutnya  akan  dihasilkan bentukan  daerah  deteksi  yang  meliputi  daerah deteksi  asam  urat  dan  kolesterol  yang ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1.  Area Deteksi Chip Kertas
Optimasi Chip Ketas  dan  Karakteristik Chip Kertas
Optimasi  yang  dilakukan  meliputi  volume total sampel, volume reagen, optimasi konsentrasi  dan  intensitas  warna  reagen. Karakterisasi yang dilakukan dalam penelitian ini meliputi  waktu  respon,  linieritas,  batas  deteksi ( LOD ),  batas  kuantitasi  ( LOQ ),  selektivitas, presisi  dan  akurasi.  Hasil  dianalisis  secara visual  (perubahan  warna)  dan  progam Image  J untuk melihat nilai mean RGB.
Aplikasi Chip Kertas  pada  Sampel  Serum Darah Simulasi
Pengaplikasian deteksi asam urat dilakukan dengan  mencampurkan  serum  darah  simulasi (darah  vena)  sebanyak  250  µl  dengan  standar asam  urat  250  µl  dalam  dua  konsentrasi  yaitu konsentrasi  rendah  (normal)  2  mg/dL  dan konsentrasi  tinggi  (upnormal)  20  mg/dL. Sedangkan  untuk  deteksi  kolesterol  dilakukan hanya  dengan  serum  darah  simulasi  (darah vena) sebanyak 250 µl karena standar kolesterol yang  dilarutkan  dengan  pelarut  kloroform  tidak dapat larut atau tercampur dengan serum darah simulasi. Sampel diujikan pada chip kertas yang telah diimmobilisasi reagen, kemudian diteteskan  pada  area  deteksi  dengan  volume optimal  yang  telah  ditetapkan.  Setelah  itu, diamati perubahan warna yang terjadi.

## Hasil Penelitian
Hasil  dari  optimasi  penelitian  ini  adalah volume  total  sampel  40  µl  dan  volume  reagen sebanyak  3  µl.  Optimasi  konsentrasi  komplek besi  (III)-tris-(1,10-phenantrolin)  sebesar  800 mg/dL  karena  pada  konsentrasi  tersebut
Reagen komplek besi urat(III)-tris-
(1,10- phenantrolin) untuk eteksi asam urat Reagen ABTS untuk deteksi kolesterol
Sisa sampel
perubahan  warna  merah  kekuningan  yang paling  jelas  dengan  intensitas  warna  yang digunakan yaitu mean RGB karena mengasilkan nilai slope yang  paling  besar  dan  nilai  r mendekati 1.
Gambar 2. Optimasi Konsentrasi komplek besi (III)-tris-(1,10-phenantrolin)
Optimasi reagen 2,2'-azino-bis(3- ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS))
sebesar  5000  mg/dL  karena  pada  konsentrasi tersebut  menghasilkan  perubahan  warna  hijau yang paling jelas dengan intensitas warna yang digunakan yaitu mean Blue karena menghasilkan nilai slope yang paling besar dan nilai r mendekati 1.
Gambar  3.  Optimasi  Konsentrasi 2,2'-azino- bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS))
Karakteristik Chip Kertas Beberapa  uji  ini  dilakukan  untuk  mengetahui karekteristik chip kertas yaitu waktu respon yang dibutuhkan chip kertas  untuk  deteksi  asam  urat 10 menit dan kolesterol 25 menit.
Penentuan  linieritas  standar  asam  urat digunakan  rentang  konsentrasi  2  –  20  mg/dL. Sedangkan  untuk  rentang  konsentrasi  standar kolesterol  yaitu  50  –  500  mg/dL.  Konsentrasi tersebut  dipilih  karena  menghasilkan  nilai koefisien korelasi yang baik yaitu (r ± 1) [16].
Gambar 4. Kurva Linieritas Standar Asam Urat
Gambar 5. Kurva Linieritas Standar Kolesterol
Rentang linieritas tersebut kemudian didapatkan  hasil  nilai  Limit  Deteksi  (LOD)  dan Limit  Kuantitasi  (LOQ)  dengan  menggunakan program Validation  Methode  of  Analysis seperti yang tertera pada Tabel 1.
Tabel 1. Uji LOD dan LOQ Deteksi Parameter Konsentrasi (mg/dL) Asam Urat LOD 0,322 LOQ 0,965 Kolesterol LOD 8,740 LOQ 26,221
Selektivitas standar asam urat dan kolesterol dilakukan  dengan  menambahkan  pengganggu berupa NaCl dan kreatinin yang telah ditetapkan seperti  pada  Tabel  2,  3  dan  4.  Hasil  yang diperoleh NaCl mengganggu standar asam urat dan kolesterol masing-masing yaitu 5,746% dan 6,388%.  Sedangkan  kreatinin  mengganggu standar  asam  urat  dan  kolesterol  masing- masing  yaitu  5,868%  dan  5,583%.  Syarat selektivitas  yang  baik  jika  nilai  %  interferensi  < 5% [16].
y = 0,0094x + 0,1306 0 2 4 6 8 10 0 200 400 600 800 1000 1200 Δ me a n RG B Konsentrasi (mg/dL) y = 0,0078x + 90,353 0 20 40 60 80 100 120 140 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 Δ me a n B lu e Konsentrasi (mg/dL)
Tabel  2. Hasil  Uji  Selektivitas  Standar  Asam Urat 10 mg/dL Perbandingan Konsentrasi (mg/dL) Mean RGB Δ mean RGB % Interferen Asam Urat 10 mg/dL (1:0) 10 224,576 - - Asam Urat : NaCl (1:1) 10 : 10 223,121 1,205 0,537% Asam Urat : NaCl (1:10) 10 : 100 218,848 5,728 2,551% Asam Urat : NaCl (1:100) 10 : 1000 211,672 12,90 4 5,746%

## Tabel  3.  Hasil  Uji  Selektivitas  Standar  Asam
Urat 7 mg/dL Perbandingan Konsentrasi (mg/dL) Mean RGB Δ mean RGB % Interferen Standar Asam Urat 7 mg/dL (1:0) 7 225,610 - - Asam Urat : Kreatinin (1:0,1) 7 : 0,7 224,271 1,399 0,593% Asam Urat : Kreatinin (1:1) 7 : 7 220,630 4,980 2,207% Asam Urat : Kreatinin (1:10) 7 : 70 212,372 13,23 8 5,868%

## Tabel 4. Hasil Uji Selektivitas Standar Kolesterol
50 mg/dL
Perbandingan Konsentrasi (mg/dL) Mean Blue Δ mean Blue % Interferen Standar Kolesterol 50 mg/dL (1:0) 50 163,444 - - Standar Kolesterol : NaCl (1:1) 50 : 50 156,931 6,513 3,985% Standar Kolesterol : NaCl (1:10) 50 : 500 155,115 8,329 5,096% Standar Kolesterol : NaCl (1:20) 50 : 1000 153,004 10,40 1 6,388% Standar Kolesterol : Kreatinin (1:0,1) 50 : 0,1 157,545 5,899 3,609% Standar Kolesterol : Kreatinin (1:1) 50 : 50 155,141 8,303 5,080% Standar Kolesterol : Kreatinin (1:10) 50 : 500 154,319 9,125 5,583%
Konsentrasi  uji  presisi  pada  standar  asam urat adalah 11 mg/dL atau 110 ppm, sedangkan untuk  standar  kolesterol  yaitu  230  mg/dL  atau
2300  ppm  yang  dilakukan  selama  3  hari berturut-turut dengan 6 kali replikasi.
Hasil rata-rata % RSD uji standar asam urat sebesar 1,252% yang telah memenuhi persyaratan untuk uji presisi dengan konsentrasi 110  ppm  (antara  100  sampai  1000  ppm)  yaitu sebesar  3,7%.  Sedangkan  untuk  rata-rata  % RSD uji standar kolesterol sebesar 0,059% juga telah  memenuhi  persyaratan  uji  presisi  dengan konsentrasi  2300  ppm  (antara  1000  sampai 10000 ppm) yaitu sebesar 2,7% [17].
Tabel 5. Uji Presisi Standar Asam Urat Hari Ke - Rata – Rata Kadar (mg/dL) SD % RSD (n = 6) 1 11,319 0,143 1,263 % 2 11,475 0,149 1,298 % 3 11,385 0,136 1,195 % Rata – Rata % RSD 1,252 %

## Tabel 6. Uji Presisi Standar Kolesterol
Hari Ke - Rata – Rata Kadar (mg/dL) SD % RSD (n = 6) 1 230,431 0,191 0,083 % 2 230,439 0,127 0,055 % 3 230,308 0,087 0,038 % Rata – Rata % RSD 0,059 % Uji akurasi dilakukan menggunakan konsentrasi  presisi  yang  ditambahkan  dengan konsentrasi adisi 80%, 100% dan 120%.
Hasil rata-rata % recovery standar asam urat sebesar  100,333%  yang  telah  memenuhi persyaratan  % recovery untuk  uji  akurasi dengan  konsentrasi  uji  presisi  110  ppm  (antara 100  sampai  1000  ppm)  yaitu  sebesar  98%  - 105%.  Seangkan  rata-rata  % recovery standar kolesterol  sebesar  100,016%  juga  telah memenuhi  persyaratan  % recovery untuk  uji akurasi dengan konsentrasi uji presisi 2300 ppm (antara 1000 sampai 10000 ppm) yaitu sebesar 97% - 103% [18].
Tabel 7. Uji Akurasi Standar Asam Urat
Konsentrasi % Recovery ± SD % RSD 80 % 100,221 % ± 0,237 0,236 % 100 % 100,841 % ± 0,825 0,818 % 120 % 99,936 % ± 0,159 0,159 % Rata – Rata % Recovery ± SD 100,333 % ± 0,407
Tabel 8. Uji Akurasi Standar Kolesterol Konsentrasi % Recovery ± SD % RSD 80 % 100,024 % ± 0,107 0,107 % 100 % 99,983 % ± 0,077 0,077 % 120 % 100,042 % ± 0,035 0,035 % Rata – Rata % Recovery ± SD 100,016 % ± 0,073 Uji sampel serum darah simulasi menggunakan  darah  vena  yang  telah  dicampur dengan  masing-masing  standar  asam  urat  dan kolesterol  dan  kolesterol.  Hasil  uji  seperti  pada Tabel 9 dan Tabel 10.
Tabel  9.  Uji  Sampel  Serum  Darah  Simulasi Standar Asam Urat
Konsentrasi Standar Rata – Rata mean RGB Rata – Rata Δ mean RGB Rata – Rata Kadar (mg/dL) Blanko 224,464 - - 2 mg/dL (Normal) 221,226 13,238 2,083 20 mg/dL (Upnormal) 202,236 22,229 20,037

## Tabel  10.  Uji  Sampel  Serum  Darah  Simulasi Standar Kolesterol
Konsentrasi Standar Rata – Rata mean Blue Rata – Rata Δ mean Blue Rata – Rata Kadar (mg/dL) Blanko 247,174 - - Sampel Kosongan 165,656 81,518 22,042 (a)            (b) (c)
(a) Asam urat konsentrasi 2 mg/dL
(b) Asam urat konsentrasi 20 mg/dL
(c) Kolesterol konsentrasi 22 mg/dL
Gambar  6.  Hasil  Uji  Sampel  Serum  Darah Simulasi
Chip kertas yang telah diimmobilisasi dengan reagen  selanjutnya  dirangkai  pada  pembalut. Hasil  uji  pada  sampel  darah  menstruasi  pada pembalut  pintar  tertera  pada  Gambar  7.  Jika warna  berubah  menjadi  merah  kekuningan (oren)  untuk  deteksi  asam  urat  dan  hijau  tua untuk deteksi kolesterol, hal tersebut menunjukkan adanya kadar analit yang berlebih dan  menandakan  adanya  kondisi  hiperurisemia dan  hiperkolesterolemia.  Jika  berubah  warna
tidak  terlalu  pekat  maka  menandakan  kondisi kadar asam urat dan kolesterol yang normal.
Gambar  7.  Hasil  Uji  Sampel  Plasma  Darah Menstruasi

## Pembahasan
Chip kertas  dibuat  dari  kertas  saring " Whatman "  yang  tersablon  dengan  tinta  pasta karet  untuk  memberi  batas  dari  daerah  uji. Immobilisasi  masing-masing  reagen  dengan metode  adsorpsi  pada  daerah  uji  kemudian didiamkan hingga kering pada suhu ruang. Chip kertas  membutuhkan  waktu  10  menit  untuk deteksi  asam  urat  dan  25  menit  untuk  deteksi kolesterol.
Linieritas  dari  standar  asam  urat  yang digunakan  yaitu  konsentrasi  2  –  20  mg/dL  dan diperoleh persamaan regresi y = 12,19673000 + 0,50066970x dengan nilai koefisien korelasi (r) = 0,9999,  sedangkan  untuk  standar  kolesterol  50 –  500  mg/dL  diperoleh  persamaan  regresi  y  = 79,28854000  +  0,10113550x  dengan  nilai koefisien korelasi (r) = 0,9999. Nilai batasdeteksi (LOD)  dan  bataskuantitasi  (LOQ)  area  deteksi asam urat berturut-turut adalah 0,322 mg/dL dan 0,965  mg/dL,  sedangkan  LOD  dan  LOQ  area deteksi  kolesterol  berturut-turut  yaitu  8,740 mg/dL  dan  26,221  mg/dL.  Nilai  %  interferensi NaCl  mengganggu  deteksi  asam  urat  dan kolesterol  masing-masing  adalah  5,746%  dan 6,388%  dan  nilai  %  interferensi  kreatinin mengganggu  deteksi  asam  urat  dan  kolesterol masing-masing  adalah  5,868%  dan  5,583% dimana  syarat  selektivitas  yang  baik  adalah %interferensi < 5%.
Nilai rata-rata % RSD dari deteksi asam urat selama  3  hari  adalah  1,252  %  memenuhi persyaratan  <  3,7  %  dan  rata-rata  %  RSD  dari deteksi kolesterol selama 3 hari adalah 0,059 % juga memenuhi persyaratan < 2,7 %. Biosensor chip kertas  akurat  dan  memenuhi  persyaratan dengan  nilai  rata-rata  perolehan  kembali  (% recovery )  untuk  deteksi  asam  urat  sebesar 100,333 % dan untuk deteksi kolesterol sebesar 100,016 %.
Biosensor chip kertas  yang  telah  berupa pembalut  pintar  dapat  langsung  diaplikasikan pada  sampel  plasma  darah  menstruasi  wanita produktif  yang  sedang  dalam  masa  menstruasi di  hari  kedua  atau  ketiga.  Pembalut  pintar  ini hanya  digunakan  pada  wanita  yang  belum pernah  melakukan  pemeriksaan  kadar  asam urat dan kolesterol secara medis di laboratorium klinik maupun rumah sakit.

## Kesimpulan dan Saran
Kondisi  optimum  operasional chip kertas meliputi  volume  total  sampel  serum  darah simulasi  optimum  yang  digunakan  pada chip kertas  adalah  30  µL,  volume  reagen  optimum adalah  3  µL.  Waktu  respon  yang  dihasilkan setelah pemberian sampel yaitu 10 menit untuk deteksi  asam  urat  dan  25  menit  untuk  deteksi kolesterol.    Intensitas  warna  yang  digunakan untuk  analisis  data  yaitu  nilai mean RGB  untuk deteksi  asam  urat  dan  nilai mean  Blue untuk deteksi kolesterol. Chip kertas sebagai biosensor  memiliki  koefisien  korelasi  (r)  = 0,9999  untuk  deteksi  asam  urat,  sedangkan untuk  deteksi  kolesterol  memiliki  nilaikoefisien korelasi  (r)  =  0,9999.  Nilai  batasdeteksi  (LOD) dan  batas  kuantitasi  (LOQ)  area  deteksi  asam urat  berturut-turut  adalah  0,322  mg/dL  dan 0,965  mg/dL,  sedangkan  LOD  dan  LOQ  area deteksi  kolesterol  berturut-turut  yaitu  8,740 mg/dL  dan  26,221  mg/dL. Chip kertas  tidak selektif  terhadap  komponen  pengganggu  NaCl untuk deteksi asam urat dan kolesterol masing- masing  adalah  5,746%  dan  6,388%  dan komponen  kreatinin  mengganggu  deteksi  asam urat  dan  kolesterol  masing-masing  adalah 5,868%  dan  5,583%,  dimana  syarat  selektivitas yang baik adalah %interferensi < 5%.
Berdasarkan  hasil  karakteristik  dan  aplikasi chip kertas  pada  pembalut  pintar  untuk  sampel serum darah simulasi dan sampel plasma darah menstruasi dapat disimpulkan bahwa chip kertas untuk mendeteksi kadar asam urat dan kreatinin dapat  digunakan  sebagai  alternatif  untuk mendeteksi  kondisi  awal  hiperurisemia  dan hiperkolesterolemia  secara  cepat,  mudah, murah  dan  praktis  jika  dibandingkan  dengan  uji laboratorium klinik maupun rumah sakit.
Penelitian  selanjutnya  diharapkan  dapat dilakukan modifikasi bentuk dan teknik pencetakan chip kertas  sehingga  dapat menghasilkan  model chip kertas  yang  batas sablon  karetnya  benar-benar  mampu  untuk menahan  cairan  dan  sampel  plasma  darah menstruasi  yang  digunakan.  Melakukan  uji stabilitas  agar  dapat  mengetahui  masa  atau
waktu pakai dari biosensor pembalut pintar dan melakukan  pemilihan  indikator  warna  lain  yang lebih  stabil  dan  memiliki  respon  warna  yang lebih  jelas  selain  kompleks  besi  (III)-tris-(1,10- phenantrolin) dan
2,2'-azino-bis
(3-
ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS)) .

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Grup  Biokemosensor  (CBG)  Fakultas  Farmasi Universitas Jember yang telah banyak membantu  dan  mendukung  terlaksananya penelitian  ini  mulai  dari  penyediaan  alat,  bahan dan juga tempat penelitian.

## Daftar Pustaka
[1]  Maryani H, Handajani A, Roosihermiatie B. Faktor-faktor  yang  berhubungan  dengan pola kematian pada penyakit degeneratif di indonesia. Buletin Penelitian Sistem
Kesehatan . 2010. 13(1):42–53.
[2]  Dalimartha  S. Atlas  Tumbuhan  Obat Indoneia . Edisi Jilid 2. Jakarta: PT. Pustaka Pembangunan Swadaya Nusantara. 2000.
[3]  Khasanah  M,  Supriyanto  G,  Handajani  S. Deteksi  Sensitif  Asam  Urat  Secara Stripping Voltammetry Menggunakan Hanging  Mercury  Drop  Electrode  (HMDE). Universitas Airlangga. 2006.
[4]  Simamora  RH,  Saragih  E.  Penyuluhan kesehatan  masyarakat :  penatalaksanaan perawatan penderita asam urat menggunakan  media  audiovisual. Jurnal Pendidikan Dan Pemberdayaan Masyarakat . 2019. 6(1):24–31.
[5]  Listiyana  A,  Mardiana  D,  Prameswari  GN. 2013. Obesitas sentral dan kadar kolesterol darah  total. KESMAS  -  Jurnal  Kesehatan Masyarakat . 2013. 9(1):37–43.
[6]  Zhao  C,  Wan  L,  Jiang  L, Wang  Q, Jiao  K. Highly  sensitive  and  selective  cholesterol biobiosensor  based  on  direct  electron transfer of hemoglobin. Analytical Biochemistry . 2008. 383:25–30.
[7]  Faridha  DI.  Prevalensi  Hiperkolesterolemia Pada Pasien Usia Remaja Di Laboratorium Klinik  Thamrin  Medan  Tahun  2017. Universitas Medan Area. 2019
[8]  Siswanto.  Darah  Dan  Cairan  Tubuh. Universitas Udayana. 2017.
[9]  Samukange WT, Gardarsdottir H, Leufkens HGM,  Mantel-Teeuwise  AK.  Selection  of blood,  blood  components,  and  blood products as essential medicines in 105 low-
and  middle-income  countries. Transfusion Medicine Reviews . 2019:1–7.
[10]  Yang  H,  Zhou  B,  Prinz  M,  Siegel  D. Proteomic  analysis  of  menstrual  blood. Molecular and Cellular Proteomics . 2012.11(10):1024–1035.
[11]  Gibson  L,  Yamakoshi  B,  Burgers  L, Alleman  P. Menstrual  Health  and  Hygiene . Dalam  Unicef  for  Every  Child.  Editor  P. Poirier. New York: UNICEF. 2019.
[12]  Yu  Z,  Kastenmüller  G,  He  Y,  Belcredi  P, Möller  G,  Prehn  C,  et  al.,  Differences between  human  plasma  and  serum metabolite  profiles. PLoS  ONE .  2011. 6(7):1–6.
[13]  Prihatiningrum
IR. Pengembangan
Biosensor Kimia Optik Untuk Deteksi Asam
Urat Berbasis Membran Ferriin. Universitas Jember. 2007.
[14]  Hayat  A,  Haider  W,  Raza  Y,  Marty  JL. Colorimetric cholesterol biosensor based on peroxidase  like  activity  of  zinc  oxide nanoparticles incorporated carbon
nanotubes. Talanta . 2015. 143:1–19.
[15]  Pramulia  R.  Pengembangan  Pembalut Pintar Untuk Deteksi Dini Anemia Defisiensi Besi. Universitas Jember. 2011.
[16]  Gandjar  IG.  Rohman  A. Kimia  Farmasi Analisis .  Yogyakarta:  Pustaka  Pelajar. 2007.
[17]  Huber  L. Validation  and  Qualification  in Analytical Laboratories, 2nd Ed . New York: Taylor & Francis. 2007.