Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR)
Volume 6 Nomor 1, 2024
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v6i1.15546
Standarisasi dan Analisis Kandungan Flavonoid Total Daun Pulai ( Alstonia shcolaris L.)
A.Mu'thi Andy Suryadi 1* , Mahdalena Sy. Pakaya 2 , Mohamad Adam Mustapa 3 , Andi Makkulawu 4 , Faramita Hiola 5
1,2,3,4,5 Jurusan Farmasi Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: a.muthi@ung.ac.id

## ABSTRAK
Tumbuhan pulai ( Alstonia scholaris ) merupakan salah satu tumbuhan yang sering digunakan untuk  pengobatan  tradisonal.    Daun  pulai  ( Alstonia  scholaris )  Merupakan  salah  satu  bagian tumbuhan  yang  banyak  digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  obat  tradisional  untuk pengobatan demam, gatal-gatal, malaria dan diare. Kandungan senyawa metabolit sekunder yang  terdapat  dalam  tanaman  ini  adalah  flavonoid,  tannin,  dan  steroid.  Penelitian  ini bertujuan untuk menetapkan beberapa parameter spesifik maupun nonspesifik dan penetapan kadar flavonoid total dari ekstrak etanol 70% daun pulai. Standarisasi ekstrak tumbuhan obat perlu dilakukan sebagai upaya penjaminan mutu obat tradisional. Hasil uji standarisasi untuk parameter spesifik menunjukkan organoleptic ekstrak berupa ekstrak kental, berwarna hijau kehitaman,  rasa  pahit  pekat  dan  berbau  khas,  dengan  kandungan  senyawa  larut  air (20,14%±0,1649), senyawa larut etanol (9,495±0,0928). Hasil standarisasi untuk parameter non spesifik menunjukkan kadar air (9,17%±0,02055), kadar abu total (1,76%±0,00547), kadar abu tidak  larut  asam  (2,82%±0,01257)  dan  susut  pengeringan  (5,08%±0,04636).  Sedangkan  hasil untuk analisis kadar flavonoid fraksi ekstrak etanol 70% daun pulai di lakukan pada panjang gelombang  438,36  nm dengan  nilai  absorbansi  yaitu  0,0011.  Kadar  total  flavonoid dihitung dengan  persamaan  linear  standar  kuersetin  yaitu  y=  0,0643x  +  (-0,0232)  dengan  koifisien korelasi (R) = 0,9974 dengan kadar flavonoid total sebesar 0,377%.

## Kata Kunci:
Daun Pulai (Alstonia scholaris); Standarisasi Spesifik Non Spesifik; Spektrofotometri UV-Vis
Diterima: 23-10-2023 Disetujui: 04-01-2024 Online: 15-01-2024

## ABSTRACT
The island plant (Alstonia scholaris) is one of the plants that is often used for traditional medicinePulai plant (Alstonia  scholaris  L.)  is  often  used  as  a  traditional  medicine  to  treat  fever,  itch,  malaria,  and diarrhea.  The  secondary  metabolite  compounds  obtained  from  this  plant  are  flavonoid,  tannin,  and steroid. This study aims to determine the specific and non-specific parameters and the total flavonoid levels of Pulai's 70% ethanol extract. The standardization of medicine plant extract is needed as an effort to traditional medicine quality control. The standardization test result for specific parameter showed that the organoleptic extract was a dark green and thick extract, bitter, and had a distinctive smell, containing water  soluble  content  (20.14%  ±0.1649)  and  ethanol  soluble  content  (9.495%±0.0928).  The standardization for non-specific parameter showed water content (9.17%±0.02055), total ash content (1.76%±0.00547),  acid  insoluble  ash  content  (2.82%±0.01257),  and  drying  shrinkage  (5.08%± 0.04636). Meanwhile, the analysis of flavonoid level of Pulai's 70% ethanol extract fraction was done at
the  wavelength  of  438.36  nm  and  the  absorbance  value  of  0.0011.  The  total  flavonoid  content  was analyzed  using  quercetin  standard  linear  equation  of  y=0.0643x  +  (-0.0232)  with  the  correlational coefficient (R)- 0.9974, and the total flavonoid content of 3.77%.
Copyright © 2024 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Pulai leaf (Alstonia scholaris); Standardization of specific and non-specific; UV-Vis Spectrofotometry
Received: 2023 -10-23 Accepted: 2024-01-04 Online: 2024 -01-15 1. Pendahuluan
Bidang kesehatan di Indonesia akhir-akhir ini mulai menyuarakan istilah back to nature atau  kembali  ke  alam  dengan  mengembangkan  tumbuh-tumbuhan  yang berpotensi  sebagai  tumbuhan  obat,  mengingat  tingginya  potensi  kekayaan  alam Indonesia yang sangat memungkinkan berbagai jenis tumbuhan hidup dan berkembang dengan  subur.  Banyaknya  jenis  tumbuhan  yang  tumbuh  di  Indonesia  menjadikan Indonesia memiliki beragam jenis tumbuhan yang dapat dijadikan sebagai tumbuhan obat. Menurut Ditjen POM [1], Indonesia memliki kurang lebih 30.000 jenis tumbuhan dan sekitar 7.000 tumbuhan berkhasiat dan digunakan sebagai obat tradisonal.
Salah  satu  tumbuhan  yang  berkhasiat  sebagai  obat  dan  banyak  digunakan masyarakat  untuk  pengobatan  tradsional  adalah  tumbuhan  pulai.  Pulai  ( Alstonia shcolaris ) adalah tumbuhan yang dapat ditemukan di Indonesia dan banyak digunakan sebagai bahan obat [2]. Melihat keberadaan tumbuhan pulai yang banyak ditemukan di Indonesia,  maka  tumbuhan  ini  sering  dijadikan  sebagai  obat  tradisional  dalam lingkungan masyakarat secara turun temurun. Bagian dari tumbuhan pulai yang sering digunakan  untuk  pengobatan  yaitu  daun,  kulit  batang  dan  bunga.  Masyarakat  di Indonesia memanfaatkan tumbuhan pulai secara tradisional untuk pengobatan demam, gatal-gatal,  malaria,  batuk  berdahak,  diare,  kencing  manis,  penurun  kolesterol, cacingan, rematik akut, dan hipertensi.
Tanaman  pulai  diketahui  mengandung  senyawa  flavonoid  yang  berfungsi sebagai antioksidan, sehingga diharapkan dapat melindungi sel terhadap oksidasi lipid. Flavonoid  merupakan  kandungan  khas  pada  tanaman  hijau,  yang  sebagian  besar mempunyai kegunaan sebagai antioksidan, antiinflamasi dan sebagai anti kanker [3]. Selain mengandung flavonoid yang berfungsi sebagai antioksidan, secara empiris pulai digunakan sebagai obat penyakit kulit, hal ini berhubungan dengan manfaat flavonoid yang  dapat  berfungsi  sebagai  antihistamin  dengan  mekanisme  stabilisasi  sel  mast sehingga menghambat pelepasan histamine [4,5].
Banyak penelitian mengenai tumbuhan pulai ( Alstonia shcolaris. ) yang mengarah pada  pengembangan  obat  tradisional.  Hal  ini  memerlukan  adanya  upaya  untuk menjamin  mutu  dan  keamanan  ( safety )  dari  obat  tradisional,  mulai  dari  pemilihan simplisia, penyarian senyawa dalam ekstrak, hingga seluruh proses selesai dan beredar pada masyarakat. Produk obat yang dibuat dari bahan alam harus dan telah memenuhi semua  persyaratan  obat  tradisional.  Salah  satu  upaya  untuk  memenuhi  persyaratan tersebut  maka  diperlukan  proses  standarisasi.  Standarisasi  ekstrak  bertujuan  untuk mempertahankan  konsistensi  senyawa  aktif  yang  akan  diproduksi  dan  pemekatan kandungan  senyawa  aktif  pada  ekstrak.  Persyaratan  mutu  ekstraksi  terdiri  dari parameter standar spesifik dan non spesifik.
Berdasarkan  penjelasan  di  atas,  kami  tertarik  untuk  melakukan  pengujian terhadap parameter standarisasi spesifik dan non spesifik pada ekstrak tumbuhan Pulai
( Alstonia shcolaris ) sehingga dapat mengetahui hasil parameter spesifik dan non spesifik dari  ekstrak  tumbuhan  pulai  serta  melakukan  pengujian  menggunakan  metode spektrofotometri  UV-Vis  untuk  mengetahui  persen  kadar  flavonoid  pada  ekstrak tumbuhan pulai ( Alstonia scholaris ).

## 2.  Metode Desain Penelitian
Penelitian ini menggunakan desain penelitian eksperimental untuk menetapkan standarisasi baik parameter spesifik dan nonspesifik, melakukan uji kualitatif senyawa metabolit  sekunder  serta  uji  kuantitatif  kadar  flavonoid  total  dengan  metode spektrofotometri UV-Vis dari ekstrak daun pulai ( Alstonia scholaris ).

## Bahan penelitian
Bahan yang digunakan adalah simplisia daun pulai (Alstonia scholaris L.), AlCl 3 , asam asetat anhidrat, aquadest, bubuk magnesium, dragendrof, etanol 70% dan 95 %, etil asetat, FeCl 3 , H 2 SO 4 , HCl,  klorofrom, lempeng KLT, libermen burchard, n-heksan, NaOH, dan pereaksi mayer.

## Alat penelitian
Alat  yang  digunakan  yaitu,  batang  penganduk,  blender  ( Philips ®),  cawan porselin, chamber, corong, deksikator ( duran ®), gelas kimia ( pyrex ®), gelas ukur ( pyrex ®), kain saring, kertas saring, krus silicat, lampu UV 366 nm, Oven ( memmert  type UN260 ®),  penotol,  pipet  tetes,  quersetin,  rotary  evaporator  ( RV  8  V  Ika  germany ®), spektrofotometri Uv-Vis, Spetrofotometri serapan atom, sendok tanduk, tabung reaksi ( pyrex ®), tanur ( thermolyne ®), timbangan analitik ( krem ®), toples, dan vial.
Ekstraksi Daun Pulai ( Alstonia scholaris L. )
Tumbuhan pulai ( Alstonia scholaris ) diperoleh dari Desa Haya-haya, Kecamatan Limboto  Barat,  Kabupaten  Gorontalo,  Provinsi  Gorontalo.  Daun  pulai  yang  telah diambil dicuci bersih, dirajang kemudian dikeringkan. Pengeringan dilakukan dibawah sinar  matahari  tidak  langsung  dan  kemudian  simplisia  kering  dihaluskan  agar memperoleh serbuk simplisia. Serbuk yang telah didapatkan selanjutnya diayak dengan menggunakan  ayakan  No.  60. Sebanyak  300  gram  simplisia  daun  pulai  ( Alstonia scholaris )  diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  bertingkat  dengan  pelarut,  N- Heksan,  etil  asetat  dan  etanol  70%  dengan  masing-masing  pelarut  sebanyak  3000  ml. Maserasi dilakukan selama 3×24 jam untuk masing-masing pelarut disertai dengan proses pengadukan  secara  berkala.  Setelah  selesai  proses  maserasi,  sampel  disaring  untuk memisahkan filtrat dan residu. Seluruh filtrat yang didapatkan dari masing-masing proses ekstraksi  dipekatkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  40°C  sampai  mendapatkan ekstrak kental dan kemudian ditimbang bobot ekstrak dan dihitung persentase rendamen .

## Penetapan Parameter Spesifik
Penetapan Organolepik
Penetapan ini menggunakan panca indra untuk mengetahui bentuk, warna, bau, dan rasa dari sampel.

## Penetapan Senyawa Larut Dalam Air
Ekstrak  sebanyak  2  g  ekstrak  dimaserasi  selama  24  jam  dengan  40  ml  air- kloroform (1 mL kloroform dalam 39 mL air) menggunakan labu bersumbat, dikocok berkali-kali  selama  6  jam  pertama.  Kemudian  dibiarkan  selama  18  jam.  Setelah  itu
disaring. Uapkan 8 mL filtrat. Residu dipanaskan pada suhu 105 o C hingga bobot tetap. Dihitung kadar dalam persen senyawa yang larut dalam air terhadap berat ekstrak awal [6].

## Penetapan Senyawa Larut Dalam Etanol
Sebanyak  2  gram  ektrak  dimaserasi  selama  24  jam  dengan  40  mL  etanol  95% menggunakan labu bersumbat, dikocok berkali-kali selama 6 jam pertama. Kemudian dibiarkan  selama  18  jam.  Disaring  dengan  cepat  untuk  menghindari  terjadinya penguapan etanol. Kemudian diuapkan 8 mL filtrat hingga kering. Residu dipanaskan pada suhu 105 o C hingga bobot tetap.

## Skrining Fitokimia Uji Flavonoid
Masing-masing  ektrak  etanol,  etil  asetat  dan  N-Heksan  sebanyak  1  ml dimasukan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 2 mL HCl pekat kemudian dikocok. Apabila terbentuk larutan berwarn merah, kuning, atau jingga menunjukkan adanya flavonoid [8].

## Uji alkaloid
Sebanyak 5 tetes filtrat dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 2- 3  tetes  HCl  2N  serta  2  tetes  pereaksi  Dragendorf.  Jika  terbentuk  endapan  berwarna coklat kemerahan dari warna jingga, hal ini menunjukkan adanya senyawa alkaloid [8].

## Uji Terpenoid dan Steroid
Masing-masing ektrak etanol, etil asetat dan N-heksan sebanyak 1 ml dimasukan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 0,5 mL asam asetat anhidrat dan 2 mL H 2 SO 4 . Jika terbentuk  cincin  berwarna  merah  positif  terpenoid,  sedangkan  jika  terbentuk  cincin ungu positif steroid [8].

## Uji Saponin
Masing-masing ektrak etanol, etil asetat dan n-heksan sebanyak 1 ml dimasukan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 2 mL aquadest kemudian dipanaskan selama 2-3 menit,  tunggu  hingga  dingin  kemudian dikocok  selama  10  detik,  diamati  perubahan yang terjadi. Apabila terbentuk buih selama tidak kurang dari 10 menit serta dengan penambahan HCl 2N buih tidak hilang maka positif mengandung saponin [8].

## Uji Tanin
Masing-masing ektrak etanol, etil asetat dan n-heksan sebanyak 1 ml dimasukan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 1 mL larutan FeCl 3 %. Apabila berubah warna biru tua, biru kehitaman atau hitam kehijauan menunjukkan adanya tannin [8].

## Pemisahan Menggunakan KLT
Hasil ekstrak yang mengandung paling banyak senyawa diidentifikasi kembali menggunakan KLT. Ekstrak ditotolkan pada lempeng silika dan dielusi menggunakan fase gerak yang sesuai berdasarkan literature. Hasil penampakan dilihat menggunakan lampu UV 366 dan dihitung nilai Rf.

## Parameter Non Spesifik

## Penetapan Kadar Air
Sebanyak 1 gram ektrak ditimbang dimasukan ke dalam cawan yang sebelumnya telah dipanaskann. Kemudian dipanaskan dalam oven pada suhu 105 o C selama 5 jam. Dimasukan cawan dalam deksikator hingga suhu kamar dan dicatat bobot tetap yang diperoleh [6].

## Penetapan Kadar Abu
Sebanyak  2  g  ektrak  dimasukan  kedalam  krus  silikat  yang  sebelumnya  telah dipijarkan  dan  ditimbang  kemudian  ektrak  dipijar  diatas  pembakar  (tanur)  secara bertahap  sampai  pada  suhu  500ºC-600ºC    hingga  arang  tersebut  habis,  setelah  itu dihitung bobot [6].

## Penetapan Kadar Abu tidak larut asam
Abu  yang  telah  diperoleh  dari  penetapan  kadar  abu  sebelumnya,  didihkan dengan pelarut HCl sebanyak 25 mL selam 5 menit. Kemudian bagian yang tidak larut asam dikumpulkan disaring menggunakan kertas saring dan dipijarkan hingga bobot tetap dan ditingbang (A1). Tentukan kadar Abu [7].

## Penetapan Susut Pengeringan
Sebanyak 2 g ekstrak ditimbang dalam cawan porselin yang sebelumnya telah dipanaskan  pada  suhu  105 o C  selama  30  menit.  Sebelum  ditambang  ektrak  tersebiut diratakan menggunakan batang pengaduk hingga terbentuk lapisan  setebal (5-10 mm). Lalu  dikeringkan  pada  suhu  105 o C  selama  30  menit  dalam  oven.  Kemudian  cawan dikeluarkan  dari  oven  dan  dimasukan  dalam  deksikator  sampai  dingin.  Kemudian dicatat bobot tetap yang diperoleh [7].

## Penetapan Kadar Flavonoid

## Penentuan panjang gelombang quersetin
Penentuan  panjang  gelombang  quersetin  dilakukan  dengan  cara  membuat quersetin 100 ppm, kemudian sebanyak 1 mL larutan quersetin reaksikan dengan 1 mL AlCl3 2% dan ditambahkan 8 mL asam asetat 5 % larutan dibiarkan selama 30 menit kemudian lakukan pembacaan pada rentang panjang gelombang 200-600 nm [8].

## Pembuatan kurva standar quersetin
Ditimbang sebanyak 25 mg baku strandar qursetin dan dilarutkan dalam 25 ml etanol 70%. Larutan stok dipipet sebanyak 1 mL dan dicukupkan volumenya sampai 10 mL dengan methanol sehingga diperoleh 100 ppm. Dari larutan standar quersetin 100 ppm kemudian dibuat beberapa  konsetrasi yaitu 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm, dan 25  ppm  dari  masing-masing  konsetrasi  laruttan  standar  quersetin  dipipet  1  mL. Kemudian  ditambahkan  1  mL  AlCl3  2%  dan  ditambahkan  8  mL  asam  asetat  5%. Kemudian sampel diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar. Absorbansi ditentukan menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimum

## Penentuan kadar flavonoid Pulai ( Alstonia scholaris )
Ditimbang sebanyak 25 mg ektrak dan dilarutkan dalam 25 mL metanol, larutan stok dipipet sebanyak 1 mL dan dicukupkan volumenya sampai 10 mL dengan metanol. Diambil 1 mL larutan ektrak  kemudian ditambahkan 1 mL AlCl3 2 % dan ditambahalan 8  mL  asam  asetat  5%  dan  sampel  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu kamar.Absorbansi  ditentukan  menggunakan  metode  spektrofotometri  UV-Vis  pada panjang gelombang maksimum . Untuk penetapan kadar senyawa flavonoid dalam sampel ekstrak etanol daun pulai dapat dihitung dengan rumus [12] :
Kadar senyawa flavonoid = X µg / mL×volume akhir (mL) berat peimbangan sampel
Keterangan : X = konsentrasi (ppm) vol = volume pengenceran yang digunakan (ml)

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Proses  ekstraksi  dilakukan dengan  metode  maserasi  bertingkat menggunakan tiga pelarut yang memiliki tingkat kepolaran yang berbeda. Maserasi dilakukan selama 3x24  jam  untuk  masing-masing  pelarut  dengan  perbandingan  sampel  dan  pelarut sebanyak 300 gram : 3 Liter. Dari banyak sampel dan pelarut diperoleh hasil rendamen seperti pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Persentase Rendamen Ekstrak Daun Pulai ( Alstonia scholaris ) Fraksi Berat Sampel (g) Pelarut (mL) Berat Ekstrak Kental (g) Rendemen (%) N-Heksan 300 3000 9 3 Etil Asetat 278 3000 18 6,47 Etanol 70% 247 3000 31 12,55
Hasil  menunjukkan  persentase  rendemen  dari  ke  tiga  pelarut  berbeda-beda. Rendamen pada ekstrak n-heksan hanya diperoleh sebesar 3%, pada etil asetat sebesar 6,47%  dan  pada  hasil  etanol  memperoleh  hasil  paling  besar  yaitu  12,55%,  hal dikarenakan kemampuan dari masing-masing pelarut yang memiliki tingkat kepolaran yang  beda.  Sehingga  etanol  dengan  sifat  polar  dapat  menarik  lebih  banyak  senyawa daripada  pelarut  non  polar  dan  semi  polar  sperti  n-heksan  dan  etil  asetat  [9,10]. Berdasarkan hasil rendamen yang diperoleh, hanya rendamen ekstrak etanol 70% yang memenuhi  standar.  Menurut  Depkses  RI  [6],  hasil  rendamen  yang  diperoleh  dapat menunjukkan bahwa ekstrasi yang dilakukan berlangsung sempurna dan masuk dalam rang 10-15%.
Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui senyawa metabolit apasaja yang terkandung  dalam  masing-masing  ekstrak.  Uji  ini  dilakukan  dengan  menggunakan pereaksi  warna  yang  berbeda-beda  unrtuk  tiap  senyawa  metabolit  sekunder.  hasil skrining fitokimia ekstrak daun pulai ( Alstonia scholaris ) dapat dilihat pada tabel 2. Hasil menunjukkan  ekstrak  daun  pulai  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  berupa senyawa flavonoid, tannin dan steroid pada fraksi ekstrak etanol dan senyawa steroid pada  fraksi  ekstrak  etil  asetat,  sedangkan  pada  fraksi  n-heksan  tidak  teridentifikasi adanya senyawa metabolit sekunder.
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Pulai ( Alstonia scholaris ) Fraksi pelarut Hasil Senyawa Alkaloid (dragendrfof) Flavonoid (HCl+Mg) Tannin (FeCl 3 ) Soponin (air panas +HCl) Steroid/terpenoid (H2SO4 + as. asetat anhidrat) Etanol 70% - + + - + Etil asetat - - - - + N-Heksan - - - - -
Ekstrak etanol 70% yang memilki kandungan senyawa flavonoid kemudian di lakukan uji organoleptik yang meliputi bentuk, warna, rasa dan bau. Hasil organoleptik dari ekstrak etanol 70% daun pulai dapat dilihat pada tabel 3. Uji organoleptik bertujuan untuk  memberikan  pengenalan  awal  ekstrak  secara  objektif  dan  sederhana  yang dilakukan dengan menggunakan panca indra. Uji organoleptik meliputi pemeriksaan bentuk ekstrak yang kental, warna ekstrak yang hijau kehitaman, bau atau aroma yang khas, dan rasa dari ekstrak yang pahit pekat.
Tabel 3. Hasil Organoleptik Ekstrak Etanol 70% Daun Pulai (Alstonia scholaris)
Sampel Uji Organaleptik Hasil Ekstrak Daun Pulai ( Alstonia Scholaris ) Warna Hijau Kehitaman Bentuk Ekstrak Kental Rasa Pahit Pekat Bau Khas
Fraksi etanol 70% selanjutnya diuji parameter sari larut pelarut tertentu. Pelarut yang  dimaksud  adalah  air  dan  etanol.  Pengujian  ini  dilakukan  dengan  melarutkan ekstrak  pada  air  ataupun  etanol  dan  dilihat  banyaknya  kandungan  senyawa  yang terlarut dalam pelarut-pelarut tersebut. Hasil menunjukan senyawa dalam ekstrak daun pulai lebih banyak terlarut dalam air dengan presentase sebesar 20,14% dan senyawa yang terlarut dalam etanol hanya sebanyak 9,49%, hal ini karena tingkat kepolaran air lebih tinggi sehingga banyaknya senyawa polar yang tertarik dalam air dibandingkan senyawa yang terlarut dalam etanol. Serta air dapat melarutkan senyawa-senyawa polar seperti senyawa flavonoid dan senyawa tanin [11].
Tabel 4. Hasil Uji Sari Larut Pelarut Tertentu Ekstrak Etanol 70% Daun Pulai
Sampel Parameter Hasil ±SD Daun Pulai Senyawa larut dalam air 20,14% 0,1649 Senyawa larut Etanol 9,49% 0,0928
Penentuan  Pola  kromatogram  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT) dilakukan  dengan  menggunakan  perbandingan  fase  gerak  yang  memilki  tingkat kepolaran  yang  berbeda  dan  hampir  mendekati  kepolaran  senyawa  yang  akan ditentukan dengan melihat jalan noda dan dihitung nilai Rf. Eluen yang digunakan pada kromatografi lapis tipis yaitu berupa perbandingan antara N-Heksan: Etil asetat dengan perbandingan  7:3.  Jarak  noda  dan  nilai  Rf  yang  ditempuh  fraksi  ekstrak  etanol  70% dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Etanol 70% Daun Pulai
Eluen N – Heksan : Etil asetat (7:3) Jerak tempuh noda (cm) Jarak tempuh pelarut (cm) Harga Rf Daun pulai (Alstonia scholaris L.) 0,9 4 Rf 1 0,22 1,5 4 Rf 2 0,37 2.1 4 Rf 3 0,52 2,6 4 Rf 4 0,67
Pola kromatogram pada tabel 5 menunjukkan semakin besar nilai Rf dari sampel maka semakin besar pula jarak yang ditempuh oleh senyawa pada plat KLT [12]. Nilai Rf  menunjukan  perbandingan  waktu  tertahannya  analit  dalam  fase  diam  terhadap waktu tertahannya fase gerak. Nilai Rf yang teridentifikasi pada sampel yaitu 0,22; 0,37; 0,52 dan 0,67. Ke empat nilai Rf ini diperkirakan masuk dalam rentang nilai Rf untuk senyawa  flavonoid  yaitu  pada  rentang  0,2-0,8.  Nilai  Rf  untuk  senyawa  flavonoid berkisar antara 0,2-0,8 dengan dinyatakan lain dapat dilihat dari hasil fluoresensi yang
Parameter nonspesifik merupakan pengujian yang meliputi uji kadar air, kadar abu  total,  kadar  abu  tidak  larut  asam,  dan  susut  pengeringan.  Hasil  dari  ke  empat parameter  ini  dapat  dilihat  pada  tabel  6.  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  sampel ekstrak etanol 70% memilki kadar air yang masih baik karena masih masuk dalam range untuk penetapan standar kadar air ekstrak kental yaitu 5-30% [14]. Pentapan kadar air dalam  suatu  ekstrak  atau  bahan  sangat  diperlukan  karena  jika  bahan  mengandung kadar  air  yang  cukup  tinggi  dapat  menyebabkan  bahan  cepat  ditumbuhi  jamur  dan mudah rusak. Hal sependapat dikatakan oleh Supriningrum [15], bahwa kadar air yang besar  dapat  menyebabkan  pertumbuhan  mikroba  karena  air  merupakan  media pertumbuhan mikroorganisme dan juga sebagai media terjadinya reaksi enzimatis yang dapat menguraikan senyawa aktifnya.
Tabel 6. Hasil Uji Parameter Nonspesifik Etanol 70% Daun Pulai Parameter Hasil ±SD Syarat Kadar Air 9,17% 1,1188 5-30% Susut Pengeringan 5,08% 1,1390 <11% Kadar Abu Total 1,76% 0,0380 <10% Kadar Abu tidak larut asam 2,82% 0,0212 <4,60%
Penentuan  kadar  abu  ini  bertujuan  untuk  memberikan  gambaran  kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari awal proses sampai mendapat sisa dari pengabuan [16]. Hasil rata-rata yang diperoleh dari penelitian ini yaitu 1,76%±0.0038 dan hasil ini masih masuk dalam rentang yang disyaratkan, di mana syarat kadar abu total yaitu <10,2% [6]. Menurut Saragih [17], apabila semakin tinggi kadar abu suatru bahan, maka semakin tinggi mineral yang terkandung dalam bahan tersebut.
Penentuan  kadar  abu  tidak  larut  asam  dilakukan  untuk  melihat  besarnya kandungan  mineral  eksternal  yang  tidak  diinginkan  yang  biasa  berupa  senyawa- senyawa  pengotor  dan  adanya  logam  [18].  Hasil  rata-rata  yang  diperoleh  yaitu 2,82%±0,0212 yang berarti hasil tersebut memenuhi parameter standar untuk kadar abu tidak larut asam yaitu <4,60% [6]. Menurut Kartikasari dkk, [19] adanya kandungan abu tidak larut dalam asam yang rendah menunjukkan adanya pasir atau pengotor yang lainnya  dalam  kadar  yang  rendah.  Pengujian  susut  pengeringan  dilakukkan  untuk menentukan batasan maksimal rentang besarnya senyawa yang hilang ketika sampel saat  dalam  proses  pengeringan  [20].  Hasil  yang  diperoleh  dari  pengujian  susut pengeringan  yaitu  5,08%±1,1390. Berdasrkan  hasil yang  diperoleh  susut  pengeringan ekstrak  etanol  70%  masih  memenuhi  stantar  susut  pengeringan  Depkes  RI  [6],  yaitu kurang dari sama dengan 11%.
Tabel 7. Nilai Absorbansi Larutan Baku Kuersetin Konsentrasi (ppm) Absorbansi 5 0,327 10 0,633 15 0,887 20 1,275 25 1,628
Nilai absrobansi yang telah diperoleh dari pengukuran larutan baku, selanjutnya dimasukan  dalam  persamaan  regresi  untuk  menentukan  panjang  gelombang  dari kuersetin, dan nilai hasil pengukuran absorbansi sampel digunakan untuk menghitung kadar  flavonoid  total  dari  ekstrak  sampel  pulai.  hasil  regresi  linier  dari  konsentrasi larutan  baku  kuersetin  dengan  nilai  serapannya  sehingga  memperoleh  persamaan y=0,0643x-0,0232 dengan nilai koefisien determinasi (R) yaitu 0,9974 yang menunjukan semakin baik nilai serapannya. Hasil dari nilai absorbansi dan panjang gelombang kadar total flavonoid dapat dilihat pada tabel 7 dan tabel 8.
Tabel 8. Panjang Gelombang Dan Perhitungan Kadar Total Flavonoid Daun Pulai
Sampel Ekstrak Daun Pulai Hasil Panjang gelombang maksimum 438,36 nm Kadar flavonoid total 37,7 µg/ml
Penetapan  kadar  flavonoid  ekstrak  etanol  70%  daun  pulai  ( Alstonia  scholaris ) dilakukan  dengan  metode  spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang  gelombang maksimum 438 nm. Hal ini di lihat dari nilai absorbansi tertinggi kuersetin. Penentuan kadar  flavonoid  ditentukan  dengan  persamaan  regersi  kurva  standar  dengan
konsentrasi  larutan  kuersetin  adalah  5  ppm.  10  ppm,  15  ppm,  20  ppm  dan  25 ppm.dengan nilai absrobansi masing-masing  0.327 ; 0.633; 0.887; 1.275 dan 1.628. Hasil absorbansi yang diperoleh dari larutan standar memperlihatkan bahwa semakin tinggi konsentrasi  zat  maka  akan  semakin  tinggi  pula  nilai  serapannya,  sehingga  hal  ini menunjukkan  hubungan  lurus  antara  konsentrasi  dan  nilai  absorbansinya  [21].  Nilai absorbansi  yang  diperoleh  dimasukan  dalam  persamaan  regresi  yang  diperoleh persamaan y= 0.0643x- 0.0232 dengan nilai R= 0.9974. Persamaan regresi yang diperoleh selanjutnya  digunakan  untuk  menentukan  kadar  flavonoid  total  pada  ekstrak  daun pulai (Alstonia scholaris) .
Menurut  Mukhriani dkk,  [22],  untuk  menghitung  kadar  kadar  flavonoid  total terlebih dahulu dihitung rata-rata nilai absorbansi sampel, dari hasil rata-rata tersebut masukan  ke  dalam  persamaan  garis  linier  sehingga  diperoleh  kadar  total  flavonoid untuk  ekstrak  etanol  adalah  37,7  µg/ml  (3,77%).  Senyawa  flavonoid  merupakan senyawa  metabolit  sekunder  yang  dapat  memberikan  aktifitas  sebagai  antioksidan, antibakteri, antivirus dan juga sebagai antihistamin [23].

## 4.  Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakuan, dapat disimpulkan bahwa Ekstrak Daun Pulai ( Alstonia scholaris ) berdasarkan pengujian standarisasi meliputi parameter spesifik  dan  non-spesifik  memenuhi  standarisasi  mutu  bahan  baku.  Serta kadar  total flavonoid ekstrak daun Pulai ( Alstonia scholaris ) yakni sebesar 37,7 µg/ml (3,77%).

## Referensi
[1]. Ditjen POM. (2014). Farmakope Herbal Indonesia.. Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
[2]. Silalahi M. (2015). Pengetahuan mahasiswa prodi Pendidikan Biologi FKIP UKI terhadap keanekaragaman  tumbuhan  di  lingkungan  kampus  Universitas  Kristen  Indonesia Cawang,  Jakarta  Timur  sebagai  langkah  awal  untuk  mewujudkan  Green  Campus . Laporan  Penelitian.  Prodi  Pendidikan  Biologi,  FKIP.  Universitas  Kristen Indonesia, Jakarta
[3]. Trinovita,  Yulis.,  Mundriyastutik,  Yayuk.,  Fanani,  Zaenal.,  dan  Fitriyani,  Ana Nurul.  (2019). “Evaluasi  Kadar  Flavonoid  Total  pada  Ekstrak  Etanol  Daun Sangketan ( Achyranthes aspera ) dengan Spektrofotometri”. Indonesia Jurnal Farmasi Vol. 4 No.1
[4]. Zuraida, Z., Sulistiyani Sulistiyani, Dondin Sajuthi, Irma Herawati Suparto. (2017). Fenol,  Flavonoid,  Dan  Aktivitas  Aantioksidan  Pada  Ekstrak  Kulit  Batang  Pulai (Alstonia  Scholaris  R.Br) . Jurnal  Penelitian  Hasil  Hutan,  Institute  Pertanian  Bogor . Vol. 35, No. 3 ISSN : 0216-4329 (211-219)
[5]. Kawuri, W. T., Ratih, D. Y., & Novan A. S., (2019). Efek Antihistamin Ekstrak Daun Jambu  Biji  (Psidium  Guajava)  Pada  Tikus  Putih  (Rattus  Norvegicus)Engan Diinduksi Ovalbumin. Smart Medical Journal. Vol. 2 No. 1 Eissn: 2621-0916 [6]. Departemen Kesehatan, (2000) . Parameter Standar Ekstrak Tumbuhan Obat . Jakarta: BPOM
[7]. Ditjen POM. (2008). Farmakope Herbal Indonesia. Edisi Kesatu. Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
[8]. Ipandi, I., Liling Triyasmono, Budi Ptayitno. (2016). Penentuan Kadar Flavonoid Total  Dan  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Kajajahi  (Leucosyke Capitellata Wedd.). journal farmasi sandi karsa. 4 (7) 155-160 [9]. Agoes, G., (2007). Teknologi Bahan Alam. Bandung : ITB Press
[10]. Siregar, A. F., Sabdono A., & Pringgenies, D., (2012). Potensi Antibakteri Ekstrak Rumput  Laut  Terhadap  Bakteri  Penyakit  Kulit  Pseudomonas  Aeruginosa, Staphylococus Epidermis, Dan Micrococus Luteus . Journal Of Marine Reaserch , 1(2), 152-160
[11]. Supriningrum,  Risa, Nurul  Fatimah  dan Yenni  E.  P.  (2019). Karakterisasi  Spesifik Dan Non Spesifik Ekstrak Etanol Daun Putat (Planchonia valida). Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Samarinda : samarinda
[12]. Rohman A. (2009). Kromatografi Untuk Analisis Obat . Yogyakarta: Graha Ilmu [13]. Anthony C Moffat, M David Osselton BW. (2011). Clarke’s Analysis Of Drugs And Poisons. Fourth Edi . Watts J, Editor. USA : Pharmaceutical Press;
[14]. Voight.  (1995). Buku  Pelajaran  Teknologi  Farmasi .  Yogyakarta:  Gadjah  Mada University Press. Hal 577
[15]. Supriningrum, R. Fitri H., dan Liya. (2017). Karakterisasi dan skrining fitokimia daun singkil (Premna corymbosa Rottl & Wild) . Jurnal Ilmiah Ibnu Sina , 2(2): 241
[16]. Hidayanti.  (2017). Standarisasi  Non  Spesifik  Ekstrak  Etanol  Daun  Dan  Kulit  Batang Beremuk (Cresentia cufete Lin.) . Jurnal Ilmiah Cendekia Eksakta Issn2528-5912 [17]. Saragih,  R.  (2014).  Uji  kesukaan  panelis  pada  teh  daun  torbangun  (Coleus ambonicus). E-Journal WIDYA Kesehatan dan Lingkungan, 1(1): 52 [18]. Vernanda,  Dkk.  (2019).  Standarisasi  Spesifik  Dan  Nonspesifik  Simplisia  Dan Ekstrak  Etanol  Bawang  Putih  Tunggal  Terfermentasi  (Allium  sativunm  Lin.). Journal Of Pharmacy Science And Practice Vol. 6 No.2 [19]. Kartikasari,  D.,  Nurkhasanah,  Suwijiyo,  P.  (2014) .  Karakterisasi  Simplisia  Dan Ekstrak Etanol Daun Bertoni (Stevia rebaudiana) Dari Tiga Tempat Tumbuh. Proceeding Seminar Nasional Perkembangan Terbaru Pemanfaatan Herbal Sebagian Agen Preventif Pada Terapi Kanker .. Halaman:149- 150 [20]. Marpaung  ,Mauritz  Pandapotan.  ,  Anggun  Septiyani.  (2020).  Penentuan Parameter Spesifik Dan Nonspesifik Ekstrak Kental Etanol Batang Akar Kuning (Fibraurea  chloroleuca  Miers) .  Journal  saince. 1(3)  231-236  Universitas  Kader Bangsa: Palembang
[21]. Mulja,  M.,  Suharman,  (1995),  Analisis  Instrumen,  Cetakan  1,  26-32,  Airlangga University Press, Surabaya.
[22]. Mukhriani,  Faridha  Yenny  Nonci,  Sitti  Munawarah.  (2015). Analisis  Kadar Flavvonoid  Total  pada  Ekstrak  Daun  Sirsak  (Annona  muricata  L,,)  dengan  Metode Spektrofotometri Uv-Vis . JF Fik UINAM 3, no 2 [23]. Wang CM, Chen HT, Wu ZY, Jhan YL, Shyu CL, & Chou CC. (2016). Antibacterial and  synergistic  activity  of  pentacyclic  triterpenoids  isolated  from  Alstonia scholaris . Molecules , 21(139): 1-1