## AKIBAT INFEKSI Candida albicans DAN PEMBERIAN KORTIKOSTEROID MENYEBABKAN KONDISI IMUNOSUPRESI ORGAN BURSA FABRICIUS PADA AYAM PEDAGING
The Effect of Candida albicans Infection and Corticosteroid Treatment to Immunosuppression Condition of Bursa Fabrisius in Broiler Chickens
Faisal Jamin Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh e-mail: ngohdex@yahoo.co.id

## Abstrak
Masalah  kesehatan  ayam  masih  merupakan  hal  utama  dalam  usaha  berternak  ayam. Berbagai  jenis  penyakit  unggas  menular  tersebar  secara  merata  di  wilayah  di  Indonesia  diantaranya Avian  influenza, Newcastle  Disease, Infectious  Bursal  Disease, Pullorum, Kolibasillosis,  Ascariasi. Candida albicans merupakan  flora  normal  pada  ayam  yang  dapat  berubah  menjadi  patogen  pada kondisi imunosupresi (gangguan sistem imunitas). Ayam broiler yang digunakan dalam penelitian ini, ayam  umur  1  hari  (DOC)  sebanyak  100  ekor,  dibagi  dalam  4  (tiga)  kelompok  perlakuan  dan  5 ulangan, masing-masing terdiri dari 25 ekor ayam, setiap ulangan terdiri dari 5 ekor.  Setiap kelompok diberikan  perlakuan  sebagai  berikut:  ayam  diberikan  pakan  basal  (Kontrol/CC0),  ayam  diberikan pakan  basal  dan    diinfeksikan C.  albicans konsentrasi  10 5 CFU/ml  secara  di  cekok  (CC1),  ayam diberikan  pakan  basal  dan  kortikosteroid  (3  mg/kg  BB)  dengan  cara  di  cekok  (CC2),  dan  ayam diberikan pakan basal dan di cekok kortikosteroid 3 mg/kg BB serta diinfeksi C. albicans konsentrasi 10 5 CFU/ml    secara  di  cekok  (CC3). Bursa  Fabricius  di  koleksi  untuk  dibuat  preparat  histopatologi dengan  metode  pewarnaan  HE.  Berdasarkan  data  penelitian  yang  diperoleh  bahwa  pemberian kortokosteroid  mendepresi  kerja  dari  Bursa  Fabrisius serta  Infeksi C.  albicans pada  ayam  yang terdepresi sistem kekebalannya dan memperburuk sistem kekebalan.
Kata Kunci: Immunosuppression, Corticosteroids, Candida albicans, Bursa Fabricius

## Abstract
Poultry  sector  remain  problemed  in  animal  health  system.  Several  of  infectious  poultry diseases  are  spread  across  regions  in  Indonesia,  such  as  Avian  Influenza  (AI),  Newcastle  Disease (ND),  Infectious Bursal  Disease (IBD),  Cholera,  Pullorum,  Dwarfism,  and Ascariasis. Candida albicans is a flora in a chicken otherwise in immunosuppression (immune system disorder) condition turned  into  a  pathogen. One  hundred day  old  broiler  chickens (DOC)  into  four  groups,  divided  into four groups.  Group  CC0  (control),  fed  with  basal  comercial  nutrient,  group  CC1  chickens  fed  with basal and infected C. albicans (dose of 10 5 CFU/ml), group CC2, chickens fed with basal and treated by corticosteroids (3 mg/Kg), group CC3, fed with basal and treated by corticosteroids (3 mg/Kg) and infected C. albicans (dose of 10 5 CFU/ml). Each group contain 5 replications. Bursa of Fabrisius were collected  for  histopathology  assay  using  Haematoxylin  Eosin  stained  method.  Haematoxylin  Eosin stained  method  applied  for  HP  assay.  HP  assayed  cause Bursa  of Fabricius were  decreased  of  their activity. Based on research data obtained, this research concluded that corticosteroids and C. albicans infection  resulted  decreasing  of  lymphoid activity  of  chicken.  Corticosteroids  and  infection C. albicans together  were  giving  lower  respon  of  lymphoid  activity  compore  to  each  treatment  of corticosteroid and C. albicans.
Keywords: Immunosuppression, Corticosteroids, Candida albicans, Bursa of Fabricius

## PENDAHULUAN
Masalah
kesehatan ayam masih merupakan  hal  utama  dalam  usaha  berternak ayam.    Berbagai  jenis  penyakit  unggas  menular
tersebar  secara  merata  di  wilayah  di  Indonesia diantaranya  Avian Influenza (AI),  Newcastle Disease  (ND),  Infectious  Bursal  Disease  (IBD), Kolera  Unggas,  Pullorum,  Kekerdilan,  Ascariasis, dan  Leukositozoonosis (Dharmayanti et  al.,
2004).    Namun  demikian  sedikit  informasi tentang  penyakit  unggas  yang  disebabkan  oleh Candida  albicans yang  merupakan  penyebab candidiasis  pada  ternak  ayam.    Gangguan kesehatan  pada  ayam  oleh Candida  albicans bersifat  oportunistik  tidak  seperti  penyakit  virus Avian  Influenza  yang  memang  tergolong imunosupresif  (menekan  kekebalan  tubuh). Sebagai  penyakit  yang  bersifat  oportunistik, Candida merupakan  penyakit  yang  sangat ditentukan  oleh  kondisi  kekebalan  tubuh  ayam, kualitas pakan, air dan lingkungan.  Dampak dari gangguan  kesehatan  dari  ayam  akibat  infeksi penyakit virus dan bakteri berpotensi meningkatkan  candidiasis.  Kondisi  yang  nyata akibat candidiasis pada ternak ayam ialah terjadi penurunan kualitas bobot ayam dan produksi dari telur pada peternakan ayam. Kondisi imunosupresi (gangguan sistem imunitas)
berpeluang  terhadap  timbulnya  candidiasis  dan kondisi  ini  menunjukan Candida telah  berubah menjadi  patogen  (Jawetz et  al., 1996). C. albicans merupakan  fungi  opportunistik  yang menginfeksi  hewan  akibat  pemberian  antibiotik, agen  sitotoksik, dan  obat  imunosupresif  (Tunca et al., 2006).
Tujuan penelitian  ini adalah  untuk mengetahui perubahan histopatologi organ Bursa Fabrisius sebagai  bentuk
respon  imun  yang dapat  timbul  pada  kondisi  tanggap  kebal  yang tertekan (imunosupresif) akibat pemberian kortikosteroid dan infeksi C. albicans pada ayam pedaging.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  fasilitas kandang percobaan FKH IPB, Bagian Laboratorium  Patologi  Departemen  Klinik, Reproduksi,  dan  Patologi  Fakultas  Kedokteran Hewan,  Institut  Pertanian  Bogor  dan  Bagian Laboratorium  Mikrobiologi  Departemen  Ilmu Penyakit  Hewan  dan  Kesehatan  Masyarakat Veteriner,  Fakultas  Kedokteran  Hewan,  Institut Pertanian Bogor.

## Bahan dan Alat
Material penelitian yang digunakan adalah ayam  pedaging  umur  1  hari  (DOC)  sebanyak  100 ekor, dibagi dalam 4 (empat) kelompok perlakuan, masing-masing  terdiri  dari  25  ekor  ayam. C. albicans yang digunakan pada penelitian ini adalah C.  albicans diperoleh  dari  Balai  Besar  Veteriner (BBvet)  Bogor  yaitu C.  albicans (No.  BCC: F0058). Bahan imunosupresan adalah kortikosteroid  yaitu prednisone (3  mg/Kg  Berat Badan) yang diberikan pada ayam dan vaksin yang dipergunakan  yaitu  vaksin Newcastle  Disease
(ND)  strain  La-Sota  dan  vaksin  Gumboro  (IBD) yang  merupakan  vaksin  aktif.    Vitamin,  antibiotik dan  ransum  yang  digunakan  diperoleh  dari  suatu produk komersil.  Bahan untuk pembuatan preparat histopatologi meliputi larutan buffer netral formalin (BNF)  10%,  untuk  pewarnaan  Heamatosilin  Eosin (HE)  dan Periodic  Acid  Schiff (PAS)  bahan  untuk prosesing  jaringan  alkohol  dengan  konsentrasi bertingkat  (70%,  80%,  90%,  alkohol  95%,  dan alkohol  absolut), larutan phosphate buffered  saline (PBS)  0.1  M  pH  7,4,  larutan  penjernih  (xylol), parafin  cair  histoplast  dengan  titik  leleh  56-57 0 C, pewarna Meyer’s Hematoksilin, Eosin, Periodic Acid, Schiff,  air  sulfit,  asam  Asetat  (1%  dan  3%), Alcian  blue  (pH  2,5)  dan  lithium  karbonat. Sedangkan  peralatan  yang  digunakan  antara  lain Autotechnic  Tissue  Processor,  mikrotom, paraffin embedding  console,  pisau  mikrotom,  objek  glass, gelas penutup, dan inkubator.
Pada  penelitian  ini  dilakukan  pengamatan perubahan  histopatologi  menggunakan  mikroskop cahaya untuk melihat perubahan jaringan dan video micrometer untuk mengukur diameter timus.
Pembuatan Preparat dan Pengamatan
Histopatologi
Organ Bursa Fabrisius yang telah difiksasi BNF 10% di potong  setebal 0,5 cm dimasukan  ke dalam tissue  cassette dan  difiksasi  dalam  larutan fiksasi  BNF  10%.  Proses  selanjutnya  adalah dehidrasi, dalam mesin prosesor jaringan menggunakan  alkohol  bertingkat  70%,  80%,  90%, dan 100%. Tahapan selanjutnya adalah penjernihan (clearing) menggunakan  xylol  dan embedding dilakukan  dalam  blok  paraffin  pada paraffin embedding console, selanjutnya dilakukan pemotongan  jaringan (sectioning) menggunakan mikrotom  dan  kemudian  jaringan  diletakan  diatas objek glass.  Potongan jaringan yang sudah berada di objek  glass dideparafinisasi  dan dehidrasi  untuk selanjutnya  dilakukan  pewarnaan Hematoksilin Eosin. Kemudian  didehidrasi  kembali  dalam bertingkat 70%, 80%, 90%, dan 100%.
Selanjutnya adalah penjernihan (clearing) menggunakan  xylol.  Sedian  histologi  pada  objek glass  ditutup  dengan  cover  glass.  Pengamatan sediaan  histologi  dilakukan  dengan  menggunakan mikroskop  cahaya  dan  diukur  dengan  video mikrometer.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Respon  kekebalan  ayam  dipicu  oleh pemaparan  antigen  yang  strukturnya  dikenali sebagai  suatu  benda  asing  (non-self).    Antigen dapat  disuguhkan  kepada  sistem  kekebalan sebagai  kompleks  multiantigen  (partikulat) misalnya:  virus,  bakteri,  parasit,  fungi,  dan
partikel  artifisal  atau  sebagai  antigen  tunggal misalnya protein dan polisakarida (Leenaars dan Hendriksen.  2005). Hanly et  al., (1995) menyatakan  bahwa  sistem  kekebalan  dapatan (antigen-spesifik) memiliki efisiensi dan spesifisitas  yang  tinggi,  tetapi  memiliki  respon yang  lebih  lambat  daripada  sistem  kekebalan bawaan (innate unspecific).
Bursa
Fabricius adalah organ limfoepitelial  yang  terdapat  pada  unggas,  tetapi tidak terdapat pada hewan mamalia. Berasal dari pertemuan ektoendodermal sebagai struktur yang berbentuk bulat, seperti kantong di bagian dorsal kloaka (Tizard, 1987).  Bursa berkembang secara cepat  pada  unggas  muda  dan  mencapai  ukuran
maksimum  antara  minggu  ke  4  sampai  12 minggu.    Pada  umumnya,  unggas  mengalami regresi bursa dengan cepat setelah 20 sampai 24 minggu.    Involusi  bursa  Fabricius  dimulai  pada umur  14 minggu  hingga  5  bulan  (Riddel.  1987). Kecepatan  tumbuh  dan  regresi  bursa  fabricius bervariasi  bergantung  pada  tipe,  galur,  kondisi ayam  dan  hormon  seks,  sedangkan  kecepatan tubuh  dan  besar  pada  anak  ayam  ada hubungannya  pada  resistens  terhadap  penyakit (Glick.  2000).    Semakin  sering  bursa  fabricius membentuk  antibodi  maka  akan  menyebabkan deplesi  dan  pengecilan  folikel  limfoid  sehingga berat relatif bursa menurun (Tizard, 1987).
Tabel 1 Rataan diameter plika bursa fabricius (µm) dan jumlah folikel limfoid (pembesaran objektif 10x)
Parameter Perlakuan Pengamatan Minggu Ke- 2 3 4 5 6 Diameter Plika Bursa Fabricius CC0 12,525 a 7,461 a 12,229 a 13,648 a 15,195 a CC1 6,335 b 10,080 b 11,159 a 15,108 b 9,229 b CC2 11,655 a 11,777 b 11,154 a 13,802 a 15,547 a CC3 11,025 a 9,471 b 8,845 b 11,672 b 6,991 b Jumlah Folikel Limfoid CC0 32,34 a 23,65 a 26,21 a 24,78 a 23,21 a CC1 24,66 b 18,56 b 18,50 b 18,31 b 16,53 b CC2 31,03 a 23,03 a 26,70 a 24,47 b 21,00 a CC3 23,78 b 17,81 b 18,47 b 18,50 b 15,50 b
Keterangan: Huruf superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan hasil yang  berbeda nyata (P<0,05)
Unit dasar bursa Fabricius adalah folikel limfoid.    Folikel  berkembang  dari  interaksi pertumbuhan  epitel  dan  sel  mesenkim.    Setiap folikel  terdiri  dari  medulla  dan  korteks.    Pada pewarnaan  umum Hematoksilin  Eosin (HE) bagian  korteks  mengambil  warna  lebih  kuat  di bandingkan medulla, sama seperti kandungannya yang  relatif  lebih  banyak  mengandung  limfosit kecil.  Pucuk epitel dipenuhi oleh sel-sel limfosit yang  akhirnya  membentuk  bagian  medulla  dari folikel limfoid bursa Fabricius.  Folikel dipenuhi oleh sel-sel limfosit dalam melakukan proliferasi. Jumlah total folikel limfoid pada bursa Fabricius yang  matang  atau  dewasa  sekitar  8.000  sampai 20.000 folikel limfoid /bursa Fabricius (Oláh dan Glick,  1978).    Bursa  Fabricius  adalah  organ tempat pendewasaan dan diferensiasi sel limfosit B  yang  berperan  untuk  memberi  reaksi  terhadap benda  asing  atau  antigen  yang  masuk  ke  dalam tubuh.   Deplesi pada bursa Fabricius  merupakan suatu  keadaan  dimana  jumlah  sel  limfosit  pada folikel  limfoid  berkurang  yang  ditunjukkan dengan  jumlah  folikel  limfoid  dimana  jumlah folikel limfoid dan kerenggangan sel-sel limfosit pada tiap folikel pada bursa Fabricius.
Tabel 1 dan  Gambar  1 menunjukkan penurunan  jumlah  dari  folikel  limfoid  pada
Kelompok  yang  diinfeksikan C.  albicans (CC1) dan Kelompok yang diberikan kortikosteroid dan diinfeksikan C. albicans (CC3)  memiliki jumlah yang  berbeda  nyata  (P<0.05)  dengan  Kelompok Kontrol  (CC0)  dan  Kelompok  yang  diberikan kortikosteroid  (CC2)  (minggu  ke-2,  ke-3,  ke-4 dan ke-6), ini menunjukkan bahwa kortikosteriod mendepresi  sel  limfosit  B  sehingga  folikel limfoid  pada  bursa  fabricius  tidak  berkerja dengan  baik  walaupun  adanya  infeksi C. albicans juga  tidak  bisa  mengertak  kerja  dari Bursa  Fabricius sedangkan  infeksi C.  albicans pada  Kelompok  yang  diinfeksikan C.  albicans (CC1)  juga  mampu  medepresi  sel  limfosit  B. Sedangkan Kelompok yang diberikan kortikosteroid  juga  menunjukkan  hal  yang  sama walaupun  tidak  separah  dengan  Kelompok  yang diberikan  kortikosteroid  dan  diinfeksikan C. albicans, dimana kortikosteroid juga mendepresi folikel  limfoid.  Penurunan  fungsi  dari  folikel limfoid  menunjukkan  adanya  imunosupresi  juga terjadi sebagai akibat adanya pemberian kortikosteroid.    Hal ini  dapat  dilihat  pada (Gambar  1)  dimana corticosterone dengan menggunakan  dosis  terapi  secara  farmakologis mengakibatkan  deplesi  cepat  pada Bursa Fabricius
(Dohms dan Metz, 1991).
Gambar 1 Fotomikrograf  Bursa  Fabricius.  Ayam  Pedaging  Kelompok  Kelompok  Kontrol  (CC0), Kelompok yang diinfeksikan C. albicans (CC1), Kelompok yang diberikan kortikosteroid (CC2), dan Kelompok yang diberikan kortikosteroid dan diinfeksikan C. albicans (CC3). Pewarnaan  HE,  Pembesaran  Objektif  20x  .  (a)  Folikel  Limfoid,  Deplesi  (df),  tidak Deplesi (td) dan Udema (ud). Bar 100 µm.

## KESIMPULAN
Berdasarkan data penelitian yang diperoleh  bahwa  pemberian  kortokosteroid mendepresi  kerja  dari Bursa  Fabrisius serta Infeksi C.  albicans pada  ayam  yang  terdepresi sistem kekebalannya memperburuk sistem kekebalan.

## DAFTAR PUSTAKA
Damayanti R,  NLP. I. Dharmayanti, R. Indriani, A  Wiyono,  Darminto.  2004.  Deteksi Virus  Avian  Influenza  Subtipe  H5N1 pada  Organ  Ayam  yang  Terserang  Flu Burung Sangat Patogenik di Jawa Timur dan Jawa Barat dengan Teknik
Imunohistokimia.  JITV.  9(3):  197 – 203. Lokakarya Nasional Inovasi Teknologi  Dalam  Mendukung  Usaha ternak Unggas Berdayasaing   27.
Dohms J.E., Metz A. (1991). Stress-mechanisms of  immunosuppression. Vet.  Immunol. Immunopathol. 30, 89-109.
Glick  B.  2000.  Immunophysiology.  Sturkieis Avian Physiology. Editor: G.C.
Whittow.  Fifth  Edition.  Academic
Press, London. Halaman: 658-659.
Hanly  WC,  Artwohl  JE,  and  Bennett  BT.  1995.
Review of Polyclonal Antibody
Productions by Procedures in Mammals and Poultry. ILAR News 37:93. Jawetz  E.,  Melnick  JL.,  Adelberg  EA.  1996. Mikrobiologi  Kedokteran. ED  ke-20. Nugroho Edi dan Maulany RF, penerjemah. Penerbit  Buku  Kedokteran EGC, Jakarta. Halaman: 627-629. Terjemahan dari: Medical Microbiology.
Leenaars  M,  Hendriksen  CFM.  2005.  Critical Steps  in  the  Production  of  Polyclonal and Monoclonal  Antibodies:  Evaluation and  Recommendations, J.  ILAR.  46: 269-279.
Oláh, I., Glick, B.  1978. The number and size of the  follicular  epithelium  (FE)  and follicles in the bursa of Fabricius. Poult. Sci. 57, 1445 – 1450. df df ud df CC0 CC1 CC2 CC3 a td
Riddel C. 1987. Avian Histopathology. American Association of Avian Pathologist University of Pennsylvania, New
Boston  Center  Pennsylvania.  Halaman:
8-14.
Tizard  Ian.  1987. Veterinary  Immunology  an Introduction Third Edition. WB Saunder Company, Philadelphia. Halaman: 59.
Tunca  R,  Haziroglu  R,  Ataseven  L,  Ozen  H, Toplu  N.  2006.  Pathological  and Immunohistochemical  investigation  of naturally  occurring  systemic Candida albicans infection in dogs. Turk. J. Vet. Anim. Sci. 30: 545-551.