ISSN-p : 1410-590x ISSN-e : 2614-0063
Efek Saponin Terhadap Penghambatan Planktonik Dan Mono-Spesies Biofilm Candida  albicans ATCC  10231  Pada  Fase  Pertengahan,  Pematangan  Dan Degaradasi
The Effect of Saponins on the Inhibition of Planktonic and Biofilm Mono- Species Candida albicans ATCC 10231 in The, Middle, Maturation and Degardation phase
Hasyrul Hamzah 1* , Triana Hertiani 2 , Sylvia Utami Tunjung Pratiwi 2 , Titik Nuryastuti 3 1 Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Kalimantan Timur 2 Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
3 Departemen    Mikrobiologi,  Fakultas Kedokteran,    Kesehatan   Masyarakat   dan  Keperawatan, Universitas Gadjah Mada
Corresponding author: Triana Hertiani; Email: hertiani@ugm.ac.id Submitted: 24-02-2020 Revised: 09-07-2020 Accepted: 12-08-2020
ABSTRAK Saponin  merupakan  salah  satu  jenis  metabolit  sekunder  dari  tanaman  yang  memiliki  aktivitas antibakteri  namun  aktivitas  antibiofilmnya  terhadap C.  albicans ATCC  10231  belum  pernah  dilaporkan. Penemuan kandidat antibiofilm baru terhadap biofilm C. albicans menjadi tantangan yang harus di atasi dalam mencegah  infeksi  yang  berhubungan  dengan  biofilm.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efektivitas saponin dalam menghambat dan mendegradasi C. albicans ATCC 10231. Pengujian planktonik, penghambatan biofilm dan pengujian degradasi biofilm ditentukan dengan menggunakan metode microtiter broth . efektivitas antibiofilm  saponin  terhadap  biofilm  dianalisis  dengan  menghitung minimum  biofilm  inhibitor  konsentrasi (MBIC 50 )  dan nilai  minimum  biofilm  eradication  concentration (MBEC 50 ).  Senyawa  saponin 1  %  memberikan aktivitas  penghambatan  pada  fase  planktonik C.  albicans sebesar  79,48  %  ±  0,01,  fase  pertengahan  biofilm sebesar 56,00 % ± 0,02, fase pematangan 35,55 ± 0,03 Hasilnya juga memberikan bukti aktivitas saponin dapat mendegradasi 50 % biofilm C. albicans sebesar 51,03 ± 0,01. Oleh karena itu, senyawa saponin potensial untuk dikembangkan sebagai kandidat obat-obat antibiofilm baru terhadap biofilm C. albicans . Kata kunci : Saponin; Biofilm; Planktonik; C. albicans

## ABSTRACT
Saponin is one of the secondary metabolites of plants that have antibacterial activity but the antibiofilm activity against C. albicans ATCC 10231 has never been reported. The discovery of new antibiofilm candidates for C. albicans biofilms is a challenge that must be overcome in preventing infections related to biofilms. This study  aims  to  determine  the  effectiveness  of  saponins  in  inhibiting  and  degrading C.  albicans ATCC  10231. Planktonic  testing,  biofilm  inhibition  and  biofilm  degradation  testing  were  determined  using  the  microtiter broth method. the effectiveness of antibiofilm saponin on biofilms was analyzed by calculating the minimum biofilm concentration inhibitor (MBIC 50 ) and the minimum value of biofilm eradication concentration (MBEC 50 ). Saponin 1 % compound gives inhibitory activity in the planktonic phase of C. albicans at 79.48% ± 0.01, mid phase biofilm at 56.00 % ± 0.02, maturation phase 35.55 ± 0.03 The results also provide evidence of activity saponins can degrade 50 % biofilm C. albicans by 51.03 ± 0.01. Therefore, saponin compounds are potential to be developed as candidates for new antibiofilm drugs against C. albicans biofilms. Keywords : Saponin; Biofilm; Planktonik; C. albicans

## PENDAHULUAN
Berdasarkan  data  National  Institutes  of Health  (NIH)  USA,  lebih  dari  60%  dari  semua infeksi  mikroba  berhubungan  dengan  biofilm (Lewis,  2001).  Biofilm  sebagai  bagian  dari pertahanan  mikroba  relatif  lebih  sulit diberantas dengan antibiotik. Dengan demikian mikroba  patogen  dalam  bentuk  biofilmnya dapat  menimbulkan  masalah  serius  bagi Kesehatan    manusia     (Hamzah     dkk.,     2019;
Jin-Hyung Lee dkk., 2013) Biofilm  merupakan  kumpulan  sel-sel mikroba yang melekat secara irreversibel pada suatu  permukaan  dan  terbungkus  dalam matriks  Extracellular  Polymeric  Substances (EPS)  yang  dihasilkannya  sendiri  serta memperlihatkan  adanya  perubahan  fenotip seperti  perubahan  tingkat  pertumbuhan  dan perubahan  transkripsi  gen  dari  sel  planktonik atau  sel  bebasnya  (Abbas et al .,  2013;   Donlan

## Hasyrul Hamzah, et al
and  Costeron,  2002;  Hamzah et  al .,  2018; Hertiani et  al .,  2011;  Nuryastuti et  al .,  2018; Pratiwi et al ., 2015)
C.  albicans  merupakan  salah  satu  jenis jamur pembentuk biofilm yang sangat patogen. Pada individu immunocompromised , C. albicans telah  muncul  sebagai  patogen  oportunistik. Jamur ini berkolonisasi pada jaringan epitel dan menyebabkan
infeksi
superfisial dan mengancam jiwa . C. albicans telah menjadi salah satu penyebab utama morbiditas dan mortalitas di  seluruh  dunia  pada  individu-individu immunocompromised  (Almirante et  al .,  2005; Hamzah et al ., 2020).
Di  Amerika  75%  wanita  pada  masa reproduksi  pernah  mengalami  vulvavaginistis candidiasis . Antara 40-50%
penderita mengalami infeksi berulang dan 5-8% penderita infeksi candida kronis (Wilson, 2004). Dari 345 kasus candidemia yang diteliti di sebuah rumah sakit  di  Spanyol  mortalitas  mencapai  44% dengan  perincian  dari  angka  tersebut  51% disebabkan  oleh  infeksi  C.  albicans  (Almirante dkk.,  2005).  Sementara  itu,  di  Jerman  angka kematian akibat necrosectomy yang disebabkan oleh infeksi jamur termasuk Candida mencapai 62% (Kujath dkk., 2005).
Indonesia memiliki sumber
keanekaragaman  tanaman  yang  sangat  tinggi, dan  menjadi nomor dua terbesar di dunia dalam aspek  keanekaragam  hayati.  Masyarakat menggunakan  pengetahuan  mereka  untuk memanfaatkan  tanaman  untuk  menggantikan obat-obatan modern dalam menjaga kesehatan dan  mengobati  penyakit(Nurwijayanto  dkk., 2019).
Saponin  merupakan  salah  satu  jenis metabolit sekunder dari tanaman yang memiliki aktivitas
antibakteri namun
aktivitas antibiofilmnya pada fase pertengahan,
pematangan  dan  degradasi  terhadap  jenis C. albicans ATCC 10231 belum pernah dilaporkan. Oleh  karena  itu  penelitian  ini  bertujuan  untuk mengujikan  senyawa  saponin  terhadap C. albicans ATCC  10231,  yang  nantinya  dapat menjadi informasi terbaru bagi masyarakat.

## METODOLOGI
Alat dan Bahan Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Laminar  Air  Flow ,  inkubator  (IF-2B) (Sakura,  Japan), micropipet  pipetman (Gilson, France), multichannel  micropipette (Socorex, Swiss), microplate  flat-bottom  polystyrene  96
well (Iwaki,  Japan), mikrotiter  plate  reader (Optic  Ivymen  System  2100-C,  Spain ), spektrofotometri  (Genesys  10  UV  Scanning, 335903)  (Thermo  Scientific  Spectronic,  USA), autoclave (Sakura,  Japan),  timbagan  analitik (AB204 -5, Switzerland). Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  senyawa  Saponin  (Sigma-Aldrich, Germany)  merupakan  koleksi  Biologi  Farmasi UGM,  isolat C.  albicans standar  pembentuk biofilm  ( C.  albicans  ATCC  10231 )  yang  berasal dari koleksi laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi UGM, Nystatin, DMSO 1%, NaCl, Standar Mc Farland 0,5, akuades steril, media Sabouraud Dextrose Broth (SDB), media RPMI, larutan PBS ( Phosphate  Buffer  Saline ),  kristal  violet  1  %, sarung tangan disposable dan masker.

## Metode
Penyiapan jamur uji Jamur Candida  albicans di  tumbuhkan selama  72  jam  pada  suhu  37⁰C  di Sabouraud Dextrose  Broth (SDB). Densitas optik 600 dari kultur mikroba disesuaikan menjadi 0,1 setara dengan  standar  McFarland  0,5  ~  1,5  x 10 8 CFU/ml)

## Pengujian antijamur
Uji  ini  dilakukan  dengan  menggunakan metode  mikrodilusi.  Pengujian  dilakukan  pada microtiterplate flat-bottom polystyrene 96 wells dengan seri kadar senyawa saponin yaitu 1 %, 0,5  %,  0,25  %,  0,125  %  b/v.  Kontrol  yang digunakan  yaitu  kontrol  positif  menggunakan nystatin  1  %  b/v.  Kontrol  negatif  berupa suspensi  mikroba  serta  kontrol  pelarut disesuaikan  dengan  pelarut  senyawa  uji.  Ke dalam masing-masing wells microplate dimasukkan media RPMI. Kemudian diinkubasi pada  suhu  37 0 C  selama  72  jam.  Mikroplate dilakukan  proses  pembacaan  absorbansi dengan  menggunakan microplate  reader pada panjang gelombang 595 nm.
Pengujian  penghambatan  pembentukan biofilm  Fase  pertengahan  (24  jam)  dan pematangan  (48  jam)  dengan  metode microbroth dillution.
Untuk  menilai  pengaruh  isolat  uji terhadap pembentukan biofilm mono-spesies C. albicans , digunakan microtiter plate polystyrene flat  bottom  96-well (Pierce  dkk.,  2010). Sebanyak  100  µL  suspensi C.  albicans (10 7 CFU/mL) dimasukkan pada tiap wells microtiter
plate kemudian  diinkubasi  pada  suhu  ±  37 0 C selama 90 menit untuk fase perlekatan biofilm. Setelah masa inkubasi, plate dicuci menggunakan 150 µL akuadest steril sebanyak tiga kali untuk menghilangkan sel-sel yang tidak melekat.  Sebanyak  100  µL  media  yang mengandung  isolat murni saponin dengan seri konsentrasi (1 %, 0,5 %, 0,25 %, 0,125 % b/v), ditambahkan  ke  setiap  sumuran  yang  telah dicuci. Sebagai kontrol media digunakan media tanpa  pertumbuhan  mikroba,  dan  suspensi mikroba  digunakan  sebagai  kontrol  negatif. Sebagai  kontrol  positif  digunakan  suspensi mikroba yang diberi antijamur nystatin kadar 1 %  b/v. Plate kemudian  diinkubasi  pada  suhu 37°C selama 24 jam untuk pembentukan biofilm fase  pertengahan  dan  selama  48  jam  untuk pembentukan biofilm fase pematangan.
Selanjutnya plate dicuci menggunakan air suling sebanyak tiga kali, dan dikeringkan pada suhu kamar selama 5 menit untuk menghilangkan  sisa  air.  Sebanyak  125  µL larutan kristal violet 1 % ditambahkan ke dalam tiap wells untuk  mewarnai  biofilm  yang  telah terbentuk, baik sel mati maupun sel hidup yang juga  merupakan  komponen  penyusun  dari biofilm, kemudian diinkubasi pada suhu kamar. Setelah  inkubasi  pada  suhu  kamar, microplate dicuci  dengan  air  mengalir  sebanyak  tiga  kali untuk  membersihkan  sisa  kristal  violet  dan ditambahkan 200 µL etanol 96 % ke dalam tiap sumuran untuk  melarutkan  biofilm  yang terbentuk.  Pembacaan Optical  Density (OD) dilakukan  dengan microplate  reader pada panjang gelombang 595 nm.
Nilai  OD  selanjutnya  digunakan  untuk menghitung  persen  penghambatan  pada persamaan berikut:
% penghambatan
(𝑂𝐷 𝑟𝑒𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓 – 𝑂𝐷 𝑟𝑒𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑢𝑗𝑖 )
𝑂𝐷 𝑟𝑒𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓

## 𝑋 100
Kadar    sampel  yang  dapat  menghambat paling  sedikit  50  %  pembentukan    biofilm dianggap  sebagai Minimal  Biofilm    Inhibition Concentration MBIC 50 (Hamzah et  al .,  2018; Pierce et al ., 2010; Pratiwi et al ., 2015; Pratiwi and Hertiani., 2017).
Pengujian  penghambatan  pembentukan biofilm Fase degradasi Efek saponin juga diperiksa pada biofilm strain C.  albicans ATCC    10231   menggunakan
metode yang dijelaskan sebelumnya  (Ali et al ., 2010; Hamzah et al ., 2018). Biofilm diinokulasi dalam microtiter plate dengan cara yang mirip dengan yang dijelaskan di atas. Setelah inkubasi pada  37 0 C  selama  48  jam, plate dicuci menggunakan  150µL  akuadest  steril  sebanyak tiga kali untuk menghilangkan sel-sel yang tidak melekat.  Sebanyak  100  µL  media  yang mengandung  isolat  murni  dengan  seri konsentrasi  (1  %  b/v,  0,5  %  b/v,  0,25  %  b/v, 0,125 % b/v), ditambahkan ke setiap wells yang telah  dicuci.dan  kemudian  diinkubasi  kembali pada  37 0 C  selama  48  jam.  Nystatin  pada konsentrasi 1 % b/v digunakan sebagai kontrol positif.  Setelah  inkubasi,  plat  dicuci  tiga  kali dengan 200 mL PBS steril untuk menghilangkan sel-  sel  yang  melekat.  Degradasi  biofilm dikuantifikasi  dengan  125  µL  larutan kristal violet  1  % ke dalam tiap sumuran.  Selanjutnya diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  15  menit. Setelah  inkubasi microplate dicuci  dengan  PBS dan ditambahkan 200 µL etanol 96 % ke dalam tiap  sumuran  untuk  melarutkan  biofilm  yang terbentuk.  Pembacaan Optical  Density (OD) dilakukan  dengan microplate  reader pada panjang  gelombang  595  nm  (Hamzah et  al ., 2018).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Efek Saponin terhadap Planktonik
C.  albicans dengan  menggunakan  metode mikrodilusi Mikrodiluasi  merupakan  suatu  metode antibakteri dan antijamur dengan prinsip yang serupa  dengan  metode  dilusi  cair  namun menggunakan jumlah senyawa, media, bakteri, jamur  dalam  jumlah  yang  sedikit  dan  dengan menggunakan alat microplate 96 wells . Metode ini  dipilih  karena  lebih  sensitif,  efektif  dalam pengerjaannya, sampel yang digunakan  sedikit dan lebih efesien karena dapat menguji banyak sampel dalam waktu yang singkat.
Hasil  yang  diperoleh  pada  pengujian antijamur  menggunakan  mikrodilusi  yaitu senyawa saponin mampu memberikan aktivitas penghambatan  terhadap C.  albicans sebesar 79,48  %  ±  0,01  dan  lebih  baik  dari  aktivitas yang  diberikan  kontrol  obat  nystatin  sebesar 78,49  %  ±  0,01  (Gambar  1).  Hasil  ini memberikan  bukti  bahwa  senyawa  saponin memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai antijamur.  Hasil  ini  juga  diketahui  bahwa terdapat  korelasi  antara  konsentrasi  senyawa dengan  presentase  penghambatan  terhadap

## Hasyrul Hamzah, et al
C.  albicans .  Semakin  tinggi  konsentrasi memberikan  aktivitas  penghambatan  semakin besar.  Pernyataan  ini  sesuai  dengan  Coleman dkk., (2010) Bahwa saponin memiliki aktivitas sebagai  anti  jamur  yang  kedepannya  dapat dijadikan  sebagai  generasi  baru  senyawa antijamur.
Efek Saponin terhadap mono-spesies biofilm C. albicans fase pertengahan (24h). Biofilm merupakan komunitas heterogen dari  mikroorganisme  yang  menempel  pada permukaan abiotik atau biotik.
Beberapa  sel  akan  saling  terikat  dan melekat  pada  suatu  substrat  dan  terbungkus dalam
matriks
extracellularpolymeric substance (EPS) sehingga membentuk struktur
yang kompleks(Anderson dkk., 2003;
Cavalheiro  dan  Teixeira,  2018;  Cowan  dkk.,
2000;  Hall-Stoodley  dkk.,  2004;  Harriott  dan Noverr, 2010; Hasyrul Hamzah dkk., 2020). Dalam  penelitian  ini  kami  mengevaluasi potensi antibiofilm saponin terhadap penghambatan mono – spesies biofilm C. albicans. Hasil  ini  menunjukkkan  bahwa saponin mampu menghambat 50 % pembentukan biofilm C. albicans (Gambar 2). Penghambatan  saponin  terhadap C. albicans fase pertengahan sebesar 56,00 ± 0,02 lebih rendah dibandingkan dengan kontrol obat nystatin 70,67 ± 0,01. Aktivitas MBIC 50 senyawa saponin  berada  pada  kadar  1  %  b/v  hal  ini membuktikan bahwa aktivitas senyawa saponin masih  dapat  memberikan  penghambatan  pada
Gambar 1. Efek antijamur senyawa saponin terhadap C. albicans
Gambar 2. Efek senyawa saponin terhadap mono-spesies C. albicans , Abu-Abu: Fase pertengahan (24 Jam), Hitam: Fase pematangan (48 Jam)
mono-spesies biofilm C. albicans . Hasil ini juga menujukkan  bahwa  senyawa  saponin  lebih cepat  memberikan  aktivitasnya  dibandingkan pertumbuhan  biofilm,  sehingga  pertumbuhan biofilm  tidak  dapat  membentuk  struktur komplek
dan
menghasilkan
matriks
Extracelullar  Polimeric  Substances (EPS) lebih banyak  yang  akan  memberikan  pertahanan yang  kuat  pada C.  albicans ,  sehingga  senyawa obat tidak dapat menembus sel target. Hasil ini diperkuat  dengan  pernyataan  (Coleman  dkk., 2010)  bahwa  senyawa  saponin  dapat menganggu  Hifa C.  albicans DAY185  dan pembentukan biofilm.
Hasil  ini  juga  menunjukkan  bahwa mikroba  yang  membentuk  biofilm,  lebih  sukar untuk  dihambat  dibandingkan  mikroba  yang membentuk  planktonik,  hal  ini  dikarenakan mikroba  yang  membentuk  planktonik  hanya berupa  sel  tunggal  sedangkan  mikroba  dalam biofilm  cenderung  hidup  bersama  (banyak koloni) menempel dan tumbuh pada permukaan,  dan  membentuk  struktur  berlapis yang dibungkus oleh matriks EPS.
Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Drake dkk.  (2018)  yang  mengemukakan  bahwa mikroba  pada  biofilm  berbeda  dengan  sel planktonik dari berbagai cara tumbuhnya. Salah satu  konsekuensi  dari  berbagai  perbedaan  ini adalah  bahwa  mikroba  dalam  biofilm  telah terbukti  lebih  resisten  terhadap  antibiotik  dan antimikroba (Drake et al ., 2018.).
Proses  penghambatan  senyawa  uji terhadap  pertumbuhan  biofilm  yaitu  dengan menghambat pelekatan mikroba ke permukaan sehingga  perkembangan  biofilm  terganggu, ketika  perkembangan  biofilm  terganggu,  ini akan  mempengaruhi  struktur  biofilm  untuk meningkatkan pertahanan terhadap antimikroba.  Selain  itu  senyawa  uji  juga merusak  matriks  EPS  biofilm,  hal  ini  akan menyebabkan  jalur  komunikasi  sel  dan  nutrisi antar mikroba terputus sehingga mikroba yang tadinya ingin membentuk biofilm akan menjadi lisis atau mati, karena hilangnya nutrisi sebagai penyusun pembentukan biofilm.
Efek  demetoksi  kurkumin  terhadap  mono- spesies  biofilm C.  albicans fase  pematangan (48h). Pada  fase  ini  senyawa  saponin mengalami  penurunan  aktivitas  dibandingkan pada  fase  penghambatan  sel  planktonik  dan biofilm  fase  pertengahan.  Hal  ini  dikarenakan
pada fase ini biofilm C. albicans telah terbentuk secara  sempurna  sehingga C.  albicans mendapatkan  perlindungan  yang  cukup  kuat, hal  ini  terlihat  dari  lapisan  lendir  yang dihasilkan  biofilm  fase  pematangan  lebih banyak dibandingkan dengan fase pertengahan bukan  hanya  itu  matrik  EPS  yang  dihasilkan pada  fase  ini  jauh  lebih  banyak  dibandingkan pada fase pertengahan, dimana EPS inilah yang menjadi  pelindung  dan  penyedia  nutrisi  bagi kelangsungan  biofilm C.  albicans sehingga koloni-koloni  baru  terus  terbentuk.  Hal  ini sesuai dengan penelitian Hamzah et al . (2018) yang menyatakan bahwa pada fase pematangan, agen  antimikroba  akan  memiliki  lebih  banyak kesulitan untuk
menembus pertahanan biofilm.Biofilm  dewasa  terdiri  atas  dasar  ragi dengan  unsur-unsur  hifa  membentuk  jaringan yang  kompleks  terbungkus  dalam  EPS  dan menjauh dari permukaan (Harriott and Noverr, 2010).
Saponin  1  %  memberikan  aktivitas penghambatan  pada  fase  pematangan  sebesar 35,55  ±  0,03,  sedangkan  aktivitas  (nystatin) yang digunakan sebagai kontrol obat menunjukkan  aktivitas  penghambatan  lebih baik  dengan  aktivitas  penghambatan  yang diberikan sebesar 55.64 ±1.24 (Gambar 2). Hal ini menujukkan pada fase pematangan (48 jam) senyawa  saponin  tidak  mampu  memberikan aktivitas 50 %.
Hasil  ini  memberikan  bukti  bahwa semakin  lama  waktu  pertumbuhan  biofilm maka susunan matriks yang dihasilkan semakin banyak  juga,  dan  struktur  biofilm  yang terbentuk semakin kuat dan kompleks, sehingga senyawa  uji  atau  kontrol  obat  mengalami penurunan  aktivitas  dalam  menghambat biofilm.  Hasi  ini  diperkuat  dengan  pernyataan Hamzah  (2018) yang menyatakan bahwa pada fase  pematangan,  agen  antimikroba  akan memiliki  lebih  banyak  kesulitan  untuk menembus pertahanan biofilm. Adanya interaksi antarspesies menyebabkan terjadinya kolonisasi dan dinamika infeksi, serta sejumlah respon  lainnya  (Donlan,  2002;  Harriott  dan Noverr, 2011).
Efek  saponin  terhadap  mono-  spesies  biofilm Candida albicans Fase degradasi. Hasil  penelitian  pada  fase  degradasi menunjukkan bahwa saponin dengan konsentrasi  1  %  v/v  memberikan  aktivitas penghambatan  biofilm  pada  fase  degradasi

## Hasyrul Hamzah, et al
sebesar   51,03 ± 0,01 dan sedikit lebih baik dari kontrol  obat  nystatin  sebesar  50,21  ±  0,01 (Gambar 3). Aktivitas MBEC 50 senyawa saponin berada pada kadar 1 % b/v.
Pada  fase  ini  terdapat  penurunan aktivitas  penghambatan  dari  fase  pertengahan yaitu 56,00 ± 0,01 namun pada fase pematangan 35,55  ± 0,03, efektivitas senyawa saponin fase degradasi  lebih  baik  dalam  memberikan aktivitas penghambatan.
Penurunan aktivitas pada fase degradasi disebabkan karena pertumbuhan pembentukan biofilm  pada  fase  ini  lebih  panjang  dari  fase pertengahan,
hal
ini menyebabkan pembentukan biofilm C. albicans lebih kompleks dan  terstruktur  sehingga  matriks  EPS  yang dihasilkan semakin banyak untuk melindungi C. albicans .  mikroba  pada  fase  degradasi membentuk suatu kominikasi sel yang sangat terstruktur  satu  sama  lainnya  dan  saling bersinergi  antar  mikroba  dalam  membetuk biofilm  sehingga  menghasilkan  komposisi EPS dan nutrisi yang sangat lengkap dan tebal. Matrisk  EPS  ini  dapat  terlihat  dari  lendir mikroba  biofilm  yang  diujikan  di mikroplate 96 wells , dimana lendir yang dihasilkan pada fase  degradasi  sangat  kental  dan  padat. Olehnya  senyawa  antimikroba  sangat  sulit untuk mengahancurkan biofilm pada fase ini dibandingkan dengan fase lainnya.
Hasil ini sesuai dengan peryataan Pratiwi (2015)  bahwa  pada  fase  degradasi  biofilm merupakan fase
terpanjang
dalam pembentukan  biofilm.  Fase  ini  berbeda dengan  fase  pertengahan  dan  pematangan, dimana  pada  fase  ini  struktur  EPS  biofilm yang  terbentuk  semakin  banyak,  tebal  dan
sangat  kompleks  sehingga  perlindungan C. albicans dari agen antimikroba dan antibiofilm menjadi semakin kuat.
Hal  ini  diperkuat  juga  dengan peryataan  Costerton et  al .,  (1995)  terapi antibiotik dapat mengeliminasi atau menurunkan planktonik, tetapi mikroba dalam biofilm  tetap  bertahan  ketika  diberikan antibiotik. ketika pengobatan dengan antibiotik selesai,  maka  biofilm  akan  membentuk  sel planktonik lagi yang mengakibatkan terjadinya infeksi akut.

## KESIMPULAN
Senyawa  saponin  memiliki  aktivitas antijamur  dan  antibiofilm  mono-spesies C. albicans pada fase pertengahan dan degradasi biofilm namun pada fase pematangan senyawa saponin tidak memberikan aktivitas yang lebih baik. Oleh karena itu senyawa saponin potensial untuk dikembangkan sebagai kandidat antijamur  dan  antibiofilm  mono-spesies C. albicans pada fase pertengahan dan degrdasi biofilm.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis
mengucapkan terimakasih banyak kepada Beasiswa Lembaga Pengelolaan Dana Pendidikan (LPDP) atas bantuan dana dan dukungan penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas,  H.A.,  Serry,  F.M.,  dan  EL-Masry,  E.M.,
2013.  Biofilms:  The  Microbial  Castle  of Resistance.
Ali, I., Khan, F.G., Suri, K.A., Gupta, B.D., Satti, N.K.,
Dutt,  P.,  dkk.,  2010.  In  vitro  antifungal
Gambar 3. Efek saponin terhadap penghambatan degradasi biofilm C. albicans
activity of hydroxychavicol isolated from
Piper  betle  L. Annals  of  Clinical
Microbiology and Antimicrobials , 9 : 7. Almirante, B., Rodriguez, D., Park, B.J., Cuenca-
Estrella, M., Planes, A.M., Almela, M., dkk.,
2005.  Epidemiology  and  Predictors  of Mortality in Cases of Candida Bloodstream  Infection:  Results  from Population-Based Surveillance, Barcelona,  Spain,  from  2002  to  2003. Journal  of  Clinical  Microbiology , 43 : 1829 – 1835.
Anderson, G.G., Palermo, J.J., Schilling, J.D., Roth, R.,  Heuser,  J.,  dan  Hultgren,  S.J.,  2003. Intracellular  bacterial  biofilm-like  pods in  urinary  tract  infections. Science  (New York, N.Y.) , 301 : 105 – 107.
Cavalheiro, M. dan Teixeira, M.C., 2018. Candida Biofilms:  Threats,  Challenges,  and
Promising  Strategies. Frontiers  in Medicine , 5 :.
Coleman,  J.J.,  Okoli,  I.,  Tegos,  G.P.,  Holson,  E.B.,
Wagner,  F.F.,  Hamblin,  M.R.,  dkk.,  2010. Characterization of plant-derived saponin natural products against Candida albicans. ACS  chemical  biology , 5 :  321 – 332. Costerton, J.W., Lewandowski, Z., Caldwell, D.E.,
Korber,  D.R.,  dan  Lappin-Scott,  H.M., 1995.  Microbial  biofilms. Annual  Review of Microbiology , 49 : 711 – 745.
Cowan,  S.E.,  Gilbert,  E.,  Liepmann,  D.,  dan
Keasling, J.D., 2000. Commensal Interactions  in  a  Dual-Species  Biofilm Exposed  to  Mixed  Organic  Compounds.
Applied and Environmental Microbiology , 66 : 4481 – 4485. Donlan,  R.  dan  Costeron,  J.,  2002. Biofilm: Survival Mechanism of Clinically Relevant Microorganism.Clin Microbial Rev . Donlan,  R.M.,  2002.  Biofilms:  Microbial  Life  on Surfaces. Emerging Infectious Diseases , 8 : 881 – 890.
Hall-Stoodley,  L.,  Costerton,  J.W.,  dan  Stoodley, P.,  2004.  Bacterial  biofilms:  from  the Natural  environment  to  infectious diseases. Nature Reviews Microbiology , 2 : 95 – 108. Hamzah,  H.,  Hertiani,  T.,  Pratiwi,  S.U.T.,  Murti,
Y.B.,  dan  Nuryastuti,  T.,  2020.  The Inhibition  and  Degradation  Activity  of Demethoxycurcumin as Antibiofilm on C. albicans ATCC 10231. Research Journal of Pharmacy and Technology , 13 : 377 – 382.
Hamzah,  H.,  Hertiani,  T.,  Pratiwi,  S.U.T.,  dan Nuryastuti,  T.,  2019.  The  Inhibition Activity  of  Tannin  on  the  Formation  of Mono-Species and Polymicrobial Biofilm Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus, Pseudomonas  aeruginosa,  and  Candida albicans. Majalah  Obat  Tradisional , 24 : 110 – 118.
Hamzah,  H.,  Hertiani,  T.,  Pratiwi,  S.U.T.,  dan Nuryastuti,  T.,  2020.  Inhibitory  activity and  degradation  of  curcumin  as  Anti- Biofilm  Polymicrobial  on  Catheters. International  Journal  of  Research  in Pharmaceutical Sciences , 11 : 830 – 835. Hamzah,  H.,  Pratiwi,  S.U.T.,  dan  Hertiani,  T.,
2018.  Efficacy  of  Thymol  and  Eugenol Against Polymicrobial Biofilm. Indonesian Journal of Pharmacy , 29 : 214.
Harriott, M.M. dan Noverr, M.C., 2010. Ability of
Candida  albicans  Mutants  to  Induce Staphylococcus aureus Vancomycin Resistance  during  Polymicrobial  Biofilm Formation.
Antimicrobial  Agents  and Chemotherapy , 54 : 3746 – 3755.
Harriott,  M.M.  dan  Noverr,  M.C.,  2011. Importance of Candida – bacterial polymicrobial biofilms in disease. Trends in Microbiology , 19 : 557 – 563. Hertiani,  T.,  Pratiwi,  S.U.T.,  Irianto,  I.D.K.,  dan Pranoto,  B.,  2011.  Effect  of  Indonesian medicinal  plants  essential  oils  on Streptococcus mutans biofilm.
Jin-Hyung Lee, Joo-HyoonPark, Hyun Seob Cho, Sang Woo Joo, Moo Hwan Choo, dan Jintae Lee,  2013.  Anti-Biofilm  activities  of Quarcetin  and  Tannic  acid  againts
Staphlococcus  aureus,Biofoling. The Journal of Bioadhesion and Biofilm Reseac ,
29:5 : 491 – 499. N urwijayanto, A., Na’iem, M., Wahyuono, S., dan Syahbudin,  A.,  2019.  Screening  of antioxidants properties from Understory plants  of  Gunung  Merapi  National  Park (Yogyakarta, Indonesia): potential use for alternative medicine.
Nuryastuti,  T.,  Setiawati,  S.,  Ngatidjan,  N., Mustofa, M., Jumina, J., Fitriastuti, D., dkk., 2018.  Antibiofilm  activity  of  (1)-N-2- methoxybenzyl-1,10-phenanthrolinium bromide  against  Candida  albicans. Journal  de  Mycologie  Médicale , 28 :  367 – 373. Pierce,  C.G.,  Uppuluri,  P.,  Tummala,  S.,  dan Lopez-Ribot,  J.L.,  2010.  A  96  well

## Hasyrul Hamzah, et al
microtiter  plate-based  method  for monitoring  formation  and  antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms. Journal of Visualized Experiments: JoVE ,. Pratiwi, S.U.T. dan Hertiani, T., 2017. Efficacy of
Massoia  Oil  in  Combination  with  Some Indonesian Medicinal Plants Oils as Anti- Biofilm Agent Towards Candida Albicans. International  Journal  of  Pharmaceutical Sciences and Research , 8 : 13. Pratiwi,  S.U.T.,  Lagendijk,  E.L.,  Hertiani,  T., Weert,  S.D.,  M,  C.A.,  dan  Hondel,  J.J.V.D.,
2015. Antimicrobial Effects of Indonesian Medicinal  Plants  Extracts  on  Planktonic and  Biofilm  Growth  of  Pseudomonas Aeruginosa  and  Staphylococcus  Aureus. International  Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Sciences , 183 – 191. Wilson,  C.S.,  2004.  'Treatment  for  Recurrent Vulvovaginitis  Candidiasis:  An Overview of Traditional and Alternative Therapies',. DTIC Document.