## BIOAKTIVITAS EKSTRAK KULIT BATANG TUMBUHAN LANGKA
MERANTI LILIN ( SHOREA TEYSMANIANA DIER)
Jufrizal Syahri, Kamal Rullah, Sri Hilma Siregar
Universitas Muhammadiyah Riau, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau
Email: jsyachri@gmail.com

## ABSTRAK
Tumbuhan Shorea teysmaniana Dier adalah tumbuhan khas Provinsi Riau yang sudah langka dan dikenal dengan  nama  Meranti  Lilin.  Kulit  batang  tumbuhan  ini  diekstrak  dengan  metoda  maserasi,  sehingga didapatka  ekstrak  heksan  40,69  g,  ekstrak  etilasetat  133,22  g,  dan  ekstrak  methanol  386,29  g.  Masing- masing ekstrak dilakukan uji antibakteri dengan metoda difusi dan uji anti oksidan dengan metoda DPPH. Uji  antibakteri  dilakukan  terhadap  bakteri Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus,  Sallmonella  typhii, Bacillus subtilis dengan konsentrasi 1% . Ekstrak heksana tidak menunjukkan aktivitas, ekstrak etilasetat memberikan zona bening berturut-turut (mm) 13,2; 12,3; 9,6; 9;9. Ekstrak metanol menunjukkan aktifitas dg membentuk zona bening berturut-turut (mm) 10,6; 10,3; 8,1; 11,0. Berdasarkan aktivitas inilah proses isolasi  dilanjutkan  dengan  menggunakan  kromatografi  vacum  cair  sehingga  dihasilkan  12  fraksi  untuk setiap  ekstraknya.  Ekstrak  aktif  dilanjutkan  untuk  diisolasi  sampai  senyawa  murni,  untuk  ekstrak  etil asetat menghasilkan 2 senyawa murni dengan kode HT1 dan HT2 .
Kata kunci : Bakteri, Shorea teysmaniana Dier dan zona bening
1. PENDAHULUAN
Tumbuhan S.teysmaniana Dier sering dikenal dengan  nama  daerah  Riau  yaitu  Meranti  Lilin, adalah  salah  satu  spesies  yang  termasuk  genus utama  dari  tumbuhan  famili  Dipterocarpaceae yang  merupakan  tanaman  langka  di  Indonesia. Kelangkaan  tumbuhan  ini  dikarenakan  memiliki nilai  ekonomi  yang  sangat  tinggi,  yaitu  sebagai bahan  baku  bangunan,  industri  kayu  lapis, industri PULP dan Peaper. Sementara itu ditinjau dari  sisi  bioaktivitasnya  belum  ada  peneliti  yang melaporkannya,  sehingga  sangat  perlu  dilakukan penelitian terhadap bioaktivitas kandungan senyawa kimia dari kulit batang meranti lilin ini.
Penelusuran  literatur  terhadap  tumbuhan genus Shorea diketahui  bahwa  sudah  mulai banyak penelitian yang mengungkapkan kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  dan bioaktivitasnya.  Penelitian  yang  telah  dilaporkan yaitu  penelitian  terhadap  kulit  batang Shorea seminis V.Sl  dan  berhasil  mengisolasi  senyawa Laevifonol (1) ,  Diptoindonesin  A (2) ,  dan Ampelopsin  A (3) ,  namun  aktivitasnya  tidak dilaporkan  (Aminah et  al ,  2003).  Syahri et  al , 2010 berhasil mengisolasi senyawa bergenin (4) ,
yang  memiliki  bioaktivitas  sebagai  antibakteri. Semua  senyawa  yang  ditemukan  ini  merupakan senyawa fenolik dan tergolong kedalam oligostilbenoid. Karena senyawa golongan fenolik  memiliki  aktivitas  yang  sangat  banyak, dan  berpotensi  untuk  dijadikan  sebagai  bahan dasar obat, maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut  terhadap  tumbuhan S.teysmaniana Dier untuk menemukan senyawa fenolik lain atau baru yang memiliki potensi sebagai obat.
Penelitian  eksplorasi  potensi  kimia  yang intensif  pada  tanaman  ini  akan  memberikan kontribusi  besar  terhadap  ilmu  kimia  khususnya pada  genus Shorea .  Hasil  penelitian  ini diharapkan  menjadi  sumber  informasi  baru mengenai  kandungan  metabolit  sekunder  pada tumbuhan S.teysmaniana Dier  yang  bermanfaat pada  bidang  pertanian,  kehutanan,  dan  untuk pengembangan bidang kesehatan seperti antioksidan,  antikanker,  antimikroba, insektisida, dan fungisida. Dengan demikian dapat meningkatkan nilai tambah pemanfaatan tumbuhan S.teysmaniana dan  merupakan  aset daerah Riau yang bernilai ekonomi tinggi.
O H O O O O HO HO OH OH OH HO HO H H H HO 1. Leavifonol 2. Diptoindonesin A O OH HO OH H OH HO H H OH 3. Ampelopsin A 4. Bergenin
Manfaat  penelitian  ini  memiliki  dua  arah yaitu  untuk  aplikasi  dan  pengembangan  ilmu. Peningkatan  nilai  tambah bahan obat  tradisional, pembenaran  penggunaan  di  masyarakat  sebagai obat  alternatif  merupakan  salah  satu  kegunaan aplikasi.  Dalam  pengembangan  ilmu,  temuan penelitian  berupa  senyawa  bioaktif  dapat dikembangkan menjadi senyawa medisinal unggulan yang bernilai ekonomi tinggi.
Penelitian ini sangat penting mengingat di negara maju alur pikir teknologi kesehatan saat ini tidak lagi  menggunakan  senyawa  kimia  sintetik, namun  pencarian  senyawa  kimia  alami  tunggal atau  campuran  menjadi  prioritas.  Sehingga penelitian  ini  juga  merupakan  salah  satu  model pencarian  devisa  dari  keanekaragaman  hayati yang selama ini belum banyak dilakukan.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  sebagai  berikut: rotary  evaporator Heidolph  VV  2000,  kromatografi  kolom  vakum
cair  berdiameter  5  cm  dan  tinggi  30  cm, Chamber, peralatan  distilasi, Melting  Point Apparatus , lampu UV model UVL-56, spektrofotometer  IR  merk  Shimadzu  type  IR Prestige-21,  spektrofotometer  UV-Visible  merk Hitachi  U-2001,  spektrofotometer  NMR  merk JEOL type  ECA  500  dengan  medan  magnet  500 MHz,  inkubator,  cawan  petri,  pipet  mikro,  dan peralatan lainnya yang sesuai prosedur kerja
Sampel  yang  digunakan  adalah  kulit  batang dari  tumbuhan Shorea  teysmaniana Dier.  Bahan yang  digunakan  adalah  pelarut  teknis  untuk isolasi  dan  pelarut  pure  analitis  untuk  analisis spektroskopi,  silika  gel  60  GF 254 (Merck,  No. katalog  1.07730.1000),  reagen  penampak  noda anisaldehid  (0,5  mL  anisaldehid  +  50  mL  asam asetat  glasial  +  9  mL  H 2 SO 4 pekat),  plat  KLT GF 254 (Merck,  No.  katalog  1.05554.0001,  60 F 254 ),  dan  aquadest.  Bakteri  yang  digunakan yaitu: Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus, Sallmonella typhii, Bacillus subtilis.
O OH OH HO HO OH H H O OH OH OH H HO 4 5 6 7 2 3 8 9 O 1 O 12 11 10 HO MeO OH O H H OH CH 2 OH 13 OH
Sebanyak  5  kg  kulit  batang Shorea teysmaniana dibersihkan  dengan  sikat  kawat. Selanjutnya  sampel  yang  telah  dibersihkan  di keringanginkan  terlebih  dahulu  hingga  kering lalu di dihaluskan sampai pada kehalusan tertentu hingga  diperoleh  sebuk  kering  kulit  batang Shorea teysmaniana Serbuk kering kulit kemudian  direndam  dengan  pelarut n- heksana didalam bejana ekstraksi untuk menarik senyawa- senyawa  non-polarnya,  lalu  disaring.  Proses ekstraksi dilakukan berulang-ulang hingga ekstrak  yang  keluar  tidak  berwarna  atau  tidak menampakkan  noda  bila  ditotolkan  pada  plat KLT.  Ekstrak  yang  didapat  diuapkan  dari pelarutnya menggunakan alat destilasi vakum dan rotary  evaporator ,  sehingga  didapat  ekstrak kental n- heksana  sebanyak  40,69  g  yang berwarna coklat  muda.  Prosedur  yang  sama juga dilakukan untuk  menarik senyawa-senyawa semi polar dan polar, yang masing-masingnya berturut-turut menggunakan etilasetat dan methanol,  sehingga  didapatkan  ekstrak  kental etilasetat sebanyak 133,22 g berwarna coklat tua, dan  ekstrak  kental  methanol  sebanyak  386,29  g berwarna coklat kehitaman.
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kulit  batang meranti  lilin  ( Shorea  teysmaniana )  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, Sallmonella  typhi dan bacillus  subtilis dengan menggunakan  metode  difusi  agar.  Prosedur pengujian  aktivitas  antibakteri  adalah  bakteri  uji di  inokulasikan  kedalam  media  Nutrient  Broth (NB) sebanyak 3 jarum ose, diinkubasi selama 24 jam  pada  suhu  37 o C.  Suspensi  bakteri  hasil inkubasi  dikocok  dengan  alat  pemutar  kemudian
diukur  transmitannya  pada  panjang  gelombang 580  nm.  Transmitan  (T)  diatur  sebesar  25  % dengan  cara  penambahan  bakteri  atau  medium cair,  suspensi  bakteri  T  25%  dimasukkan kedalam  cawan  petri  0,3  mL,  kemudian ditambahkan medium Nutrient Agar (NA) 10 mL yang  belum  membeku.  Dengan  suhu  sekitar 40 o C.  Selanjutnya  digoyang-goyang  sampai membeku.  Kedalam  medium  yang  berisi  bakteri dimasukkan  kertas  cakram  6  mm  dan  ditetesi dengan 10 μL larutan ekstrak dengan konsentrasi 1  %  dalam  pelarut n -heksana,  methanol, etilasetat,  dan  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu  37 o C  diukur  diameter  hambatan  yang terbentuk. (Niwa, 1997).
Uji antioksidan dilakukan dengan menimbang  sebanyak  0,0050  g  ekstrak  kulit batang  meranti  lilin  ( Shorea  teysmaniana ) kemudian  dilarutkan  dalam  labu  ukur  5  mL dengan  metanol  didapat  konsentrasi  larutan  stok ekstrak 1000 ppm. larutan stok dipipet dilarutkan dalam 5 mL  metanol untuk  mendapatkan larutan (500,  250,  125,  62.5,  31.3  ppm).  Pada  masing- masing  konsentrasi  dipipet  50  µL  masukkan dalam  plate  dengan  pengulangan  tiga  kali, ditambahkan  120  µL  metanol  dan  ditambahkan DPPH  80  µL  dengan  konsentrasi  400  ppm diinkubasi  selama  30  menit  ditempat  gelap  pada suhu  ruang.  Kemudian  ukur  serapan  dengan microplate reader 96 dengan panjang gelombang 517  nm  (Su  Zhi-heng et  al 2010).  Aktivitas antioksidan  sampel  ditentukan  oleh  besarnya hambatan serapan radikal DPPH melalui perhitungan  persentase  inhibisi  serapan  DPPH dengan menggunakan rumus (Andayani, 2008).
% Inhibisi = Abs. Kontrol – Abs.sampel x 100%
Abs. Kontrol
Sebanyak  25  g  ekstrak  etilasetat  dipisahkan dengan  menggunakan  kromatografi  vakum  cair (KVC)  dengan  menggunakan  silika  gel  60  PF 254 ukuran  40-63  m  (230-400  mesh)  sebagai  fase diam. Diameter kolom yang digunakan 5 cm dan tinggi  silika  10  cm.  Pengelusian  dilakukan menggunakan  fase  gerak n- heksana,  etilasetat dan metanol dengan metode SGP ( Step Gradient
Polarity )  yaitu  metode  elusi  di  mana  pelarut ditingkatkan kepolarannya secara bertahap dalam berbagai  perbandingan.  Volume  fase  gerak  yang digunakan masing-masing adalah 150 ml.
Hasil  KVC  ini  mendapatkan  15  fraksi, namun  setelah  dilakukan  Kromatografi  Lapis Tipis  (KLT)  beberapa  fraksi  memiliki  Rf  yang hampir  sama  yaitu  fraksi  (5  dan  6)  dan  fraksi (7
dan  8),  sehingga  fraksi  yang  memiliki  Rf  sama ini digabungkan dan akhirnya diperoleh 13 fraksi saja.  Pada  fraksi  3  terdapat  bayangan  Kristal (senyawa),  dan  dari  hasil  KLT  menunjukkan  2 noda  sehingga  dilakukan  pemisahan  lebih  lanjut dengan menggunakan kolom kromatografi gravitasi  dan  rekristalisasi  diperoleh  senyawa murni  berwarna  putih  dan  diberi  kode HT1 . Penentuan kemurnian dilakukan dengan menggunakan HPLC, dan memberikan satu peak (puncak) yang menunjukkan senyawa HT1 sudah murni.
Gabungan  fraksi  5  dan  6  disebut  FG1,  FG1 memiliki  berat  2,4  g  lalu  dilakukan  pemisahan lanjutan  dengan  mengguankan  kromatografi kolom grafitasi dan diperoleh sebanyak 123 vial. Pada  fial  12-24  terdapat  senyawa  berbentuk Kristal,  namun  setelah  dilakukan  pengecekan menggunakan  KLT  masih  terdapat  3  noda, sehingga  masih  perlu  dilakukan  pemisahan  lebih lanjut  dengan  menggunakan  kolom  kromatografi preparative, dan diperoleh senyawa murni dengan kode HT2 .  Kedua  senyawa  murni  ini  dilakukan
pengujian  profil  fitokimia  untuk  menentukan golongan senyawanya.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan bahwa  ekstrak  methanol  dan  etilasetat  aktif terhadap bakteri uji sedangkan ekstrak n -heksana tidak  aktif.  Ekstrak  methanol  mempunyai diameter  hambatan  terhadap Escherichia  coli 13,2 mm, Ekstrak etilasetat mempunyai diameter hambatan  terhadap Escherichia  coli 10,6  mm, Ekstrak methanol mempunyai diameter hambatan terhadap Staphylococcus  aureus 12,3  mm, Ekstrak etilasetat mempunyai diameter hambatan terhadap Staphylococcus  aureus 10,3  mm, Ekstrak methanol mempunyai diameter hambatan terhadap Sallmonella  typhi 9,6  mm,  Ekstrak etilasetat mempunyai diameter hambatan terhadap Sallmonella  typhi 8,1  mm,  Ekstrak methanol mempunyai diameter hambatan terhadap bacillus  subtilis 9,9  mm  (Gambar  1), Ekstrak etilasetat mempunyai diameter hambatan terhadap bacillus subtilis 11,0 mm.
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak n -heksana, etilasetat, methanol dari kulit batang
S.teysmaniana No Jenis Ekstrak Konsentrasi mg/ml Diameter Hambatan (mm) Escherichia coli Staphylococcus aureus Sallmonella typhii Bacillus subtilis 1. n -Heksana 10 0 0 0 0 2. Methanol 10 13,2 12,3 9,6 9,9 3. Etilasetat 10 10,6 10,3 8,1 11,0
Gambar 1. Hambatan antibakteri ekstrak metanol terhadap koloni bacillus subtilis
Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  pada masing-masing  ekstrak,  didapati  ekstrak n - heksana,  etilasetat  dan  metanol  memiliki  nilai IC 50 terhadap  radikal  bebas  DPPH  berturut-turut sebesar  >1000  µg/ml,  260  µg/ml,  dan  67  µg/ml. Ekstrak  metanol  dan  ekstrak  etilasetat  memiliki
aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  karena  pada kedua-dua  fraksi  ini  banyak  terdapat  senyawa semi polar dan polar seperti senyawa fenolik dan senyawa  polifenol  yang  umumnya  bersifat antioksidan.
Tabel 2. Hasil uji aktivitas sitotoksik ekstrak kulit batang Shorea teysmaniana No Ekstrak Nilai IC 50 1 n- heksana >1000 µg/ml 2 Etilasetat 260 µg/ml 3 Metanol 67 µg/ml 4 Asam askorbat (Vit C) 5,9 µg/ml
Hasil  isolasi  senyawa  dari  ekstrak  etilasetat diperoleh 2 senyawa murni dengan kode HT1 dan HT2 yang  dibuktikan  dengan  memberikan  satu puncak  setelah  dianalisis  menggunakan  HPLC (Gambar  2).  Hasil  pengujian  fitokimia  kedua senyawa  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa HT1 dan HT2 merupakan golongan senyawa fenolik.
Gambar 2. Hasil analisis senyawa HT1 dengan menggunakan HPLC

## 4. KESIMPULAN
Tumbuhan Shorea teysmaniana Dier (Meranti  Lilin)  memiliki  potensi  sebagai  salah satu  obat  alternative,  ini  terbukti  bahwa
tumbuhan  khas  Riau  ini  mengandung  senyawa aktif  antimikroba,  dan  antioksidan,  terlihat  dari aktivitas  ekstrak  terhadap  uji  antimikroba  dan antioksidan.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Aminah, N.S., Achmad, S.A., Hakim, E.H., Syah,
Y.M., Juliawaty, L.D., dan Ghisalberti, E.L. (2003).  Laevifonol,  Diptoindonesin  A,  dan Ampelopsin  A,  Tiga  Dimer  Stilbenoid  dari Kulit  Batang Shorea  seminis V.  Sl. (Dipterocarpaceae). Jurnal  Matematika  dan Sains . 8 (1). 31-34
Syahri,  J.  (2010).  Bergenin  dari  kulit  batang Shorea  seminis  V.Sl  dan  uji  aktivitasnya sebagai antibakteri
Niwa,  Y.,  1997,  Radikal  Bebas  Mengundang Kematian,  NTV.  Japan,  Personal  Care  Co. Ltd, 9-10; 19 dan 30.
Zheng,  Z.,  Zhao,  S.,  Deng,  J-Z,  Zhu,  F.,  (1995). Isolation and identification of resveratrol 4- C-glucoside., Zongguo Yaoke Daxue Xuebao (Chinese), 26, 5-7.