Salin et al./Jurnal Ilmu dan Teknologi Peternakan Topis 6(1):78-84

## Kualitas Semen Cair Kambing Boer Berbahan Pengencer Air Kelapa Muda Varietas Viridis Setelah Simpan Dingin
Muhammad Ade Salim 1* , Muhammad Nur Ihsan 2 , Nurul Isnaini 2 ,  Trinil Susilawati 2*
1 Mahasiswa Program Doktor Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya
2 Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya
* Email korespondensi: ade_73salim@yahoo.com, trinil_susilawati@yahoo.com
(Diterima: 14-12-2018; disetujui 5-1-2019)

## ABSTRAK
Air kelapa muda varietas viridis dapat dijadikan pengencer aletrnatif semen cair bagi program IB di daerah minim sarana semen beku. Tujuan penelitian ini untuk menguji pengaruh penggunaan air kelapa  muda viridis sebagai  bahan  pengencer  terhadap  kualitas  semen  cair  kambing  Boer  setelah didinginkan.  Dilaksanakanselama  3  bulan  di  Laboratorium  Fakultas  Peternakan  UBUnit SumberSekar,Malang.  Metodenya  yaitu  eksperimen.  Semen  dari    3  pejantan  Boer  umur  3-5  tahun, dikoleksi seminggu sekali dengan VB. Air kelapa muda viridis umur 5-7 bulan serta tris aminomethane sebagai kontrol. Didesain menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK) dengan 2 perlakuan yaitu P0  (tris  aminomethane  +  10%  KT)  dan    P1  (air  kelapa  muda viridis +  10%  KT)  masing-masing diulang  10  kali.  Data  dianalisis  dengan  analisis  Ragam  (Anova)  dengan software Genstat  18. Variabelnya  yaitu  motilitas  individu,  viabilitas  dan  abnormalitas.  Hasil  penelitian  yaitu  motilitas individu  pada  P1bertahan  sampai  4  hari  (40,5±  24,3%),  viabilitas  terbaik  sampai  hari  ke-5 (42±24,6%),  abnormalitas  terendah  di  hari  ke-7(1,31±  0,6).  Kesimpulannya,  Pengencer  air  kelapa muda viridis dapat mempertahankan kualitas semen cair kambing Boer selama 4 hari untuk motilitas dan 5 hari untuk viabilitas.
Kata Kunci :pengencer, air kelapa, varietas viridis

## ABSTRACT
Young  viridis  coconut  water  could  be  used  as  an  alternative  to  liquid  semen  diluent  for artificial  insemination  program  in  the  area  with  limited  facility  for  frozen  semen  production.  This study evaluated the use of young coconut water as a diluent on liquid semen quality of Boer goat after cold storage. This study was carried out for 3 months at Sumber Sekar Laboratory, Faculty of Animal Husbandry, University of Brawijaya, Malang. The semen was collected from 3 Boer bucks aged at 3 to  5  years  old.  The  semen  collection  was  done  once  a  week  with  the  aid  of  artificial  vagina.  The diluents  used  were  young  Viridis  coconut  (5  to  7  months  old)  and  tris  aminomethane.  The  method used  was  an  experiment  in  a  randomized  block  design  with  2  treatments  and  10  replicates.  The treatments used were T0: tris aminomethane + 10% egg yolk (control) and T1:  young Viridis coconut water  +  10%  egg  yolk.  Data  were  analyzed  by  analysis  of  variance  using  Genstat  18  software.  The variables measured were sperm individual motility, viability, and abnormality. The results showed that the sperm individual motility in T1 survived up to 4 days (40.5± 24.3%), the best viability at 5 days (42.0±24.6%),  while the lowest abnormality at 7 days (1.31±0.6). It could be concluded that: 1. Tris aminomethane  diluent  has  higher  quality  with  the  storage  length  up  to  9  days,  2.  Young  Viridis coconut water diluent could preserve liquid semen quality of Boer goat up to 4 days for sperm motility and 5 days for sperm viability.
Keywords : diluents, coconut water, viridis variety

## PENDAHULUAN
Air kelapa memiliki kandungan biokimiawi  seperti  glukosa,  protein,  lemak, vitamin C serta antioksidan yang dapat dijadikan
sebagai  bahan  pengencer  semen  alternatif  untuk menggantikan  pengencer  yang  menggunakan bahan  yang  didatangkan  dari  luar  negeri  dengan bahan  baku  sintetis  yang  tidak  menutup
p-ISSN: 2406-7489    e-ISSN: 2406-9337

## Terakreditasi
Ditjen Penguatan Riset dan Pengembangan, Kemenristekdikti Keputusan No: 21/E/KPT/2018, Tanggal 9 Juli 2018
Jurnal Ilmu dan Teknologi Peternakan Tropis ,
Januari 2019, 6(1):78-84
http://ojs.uho.ac.id/index.php/peternakan-tropis
kemungkinan  terpapar  residu  kimiawi  yang bersifat  reduktif  bagi  spermatozoa.Antara  air kelapa  berbeda  komponen,komposisi  maupun konsentrasi kandungan biokimiawinya tergantung lokasi  tumbuh,  umur  buah  maupun  varietas  dan jenis  (Yong et  at  al. ,  2009).  Perbedaan  ini  akan mempengaruhi komponen eksogen yang tersuspensi  di  dalamya  seperti  spermtozoa  yang hendak dicampurkan, karena perbedaan komposisi  kimia  dan  berat  molekulnya.  Menurut Naing  (2010)  perbedaan    komposisi  dan  berat molekullarutan akan mempengaruhi spermatozoa semen kambing selama kriopreservasi.
Hasil  penelitian  terdahulu  pada  jenis  air kelapa tua viridis yang ditambahkan 20% kuning telur  sebagai  bahan  pengencer  semen  cair  pada ternakKambing  Boer  diperoleh  kualitas  semen cair sebagaimana laporan Aziz et al . (2017) yaitu air kelapa viridis tua + 20% kuning telur mampu mempertahankan  kualitas  semen  cair  kambing Boer  sampai  2  hari  simpan  dengan  motilitas individu mencapai 61 ±1,3%, viabilitas mencapai 67,14±17,99%  dan  abnormalitas  1,70±0,99%. Penggunaan  air  kelapa viridis muda  sebagai bahan pengencer semen cair kambing Boer yaitu karena  secara  biologis  memiliki  kandungan nutrien  dan  antioksidan  yang  dapat  menjaga kualitas  semen  selama  pendinginan,  juga  secara teknis  mudah  diperoleh.  Kandungan  lemak  yang rendah  pada  air  kelapa viridis muda  (0,044% dalam 100 ml) dibanding yang tua (0,10% dalam 100ml), bisa mencegah terjadinya reaksi saponifikasi  atau  penyabunan  saat  pendinginan sehingga  mencegah  kematian  spermatozoa.Air kelapa  sebagai  produk  sampingan  dari  buah kelapa  yang  produk  utamanya  adalah  kopra, sangat  mudah  ditemui  di  seluruh  wilayah Indonesia, apalagi air kelapa muda viridis atau air kelapa  muda  hijau  sangat  mudah  ditemui dibandingkan dengan kelapa merah atau rubescens .  Oleh  karena  itu  untuk  membantu meningkatkan  aplikasi  teknologi  IB  di  daerah yang  tidak  didukung  fasilitas  pembuatan  semen beku  untuk  tujuan  IB,  maka  perlu  cari  alternatif bahan pengencer dari sumber lokal sebagai bahan dasar pengencer semen sehingga dapat digunakan sebagai  bahan  pengencer  untuk  dicampurkan pada  ejakulat  kambing  atau  ternak  lainnya. Dengan  demikian  dapat  diperoleh  sebuah terobosan  baru  untuk  menggantikan  bahan pengencer seman cair sintetis ke bahan pengencer berbasis  bahan lokal  yang high  quality sekaligus hight  fertility ,  efektif,  efisien  dan  fleksibel. Berdasarkan  pemikiran  inilah,  maka  penelitian ini  dilakukan.  Tujuan  Penelitian  ini  yaitu
mengujikualitas  semen  cair  kambing  Boer dengan  bahan  pengencer  air  kelapa  varietas viridis muda yang ditambahkan 10% kuning telur setelah pendinginan.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilakukan  selama 3  bulan, bertempat  di  Laboratorium  Reproduksi  Ternak Fakultas  Peternakan  Universitas  Brawijaya  unit Sumber  Sekar.  Metode  yang  digunakan  yaitu eksperimen.  Bahan  utama  yaitu  ejakulat  dari  3 ekor  kambing  boer  umur  3-5  tahun  ditampung  1 minggu  sekali  dengan  vagina  buatan,  air  kelapa viridis muda, larutan pengencer kontrol yaitu tris aminomethane.  Bahan  lain  berupa  aquabidest, aquadest,  alkohol  70%,  antibiotik,  NaCl  3%, NaHCO3,  Eosin-Negrosin,  Perlakuannya  yaitu P0:    Tris  aminometahan  +  10  kuning  telur (kontrol)  dan    (P1):  Air  kelapa  muda viridis + 10% kuning telur dan diulang 10 kali setiap.
Pembuatan  Larutan  Pengencer  Kontrol  (Tris aminomethan) + 10% Kuning Telur
Larutan  pengencer  tris  aminomethan  + kuning  telur  10  %  dibuat  dalam  100  ml sebagaimana  Susilawati  (2013)  yaitu  tris  amino methan 1,363 gr, asam sitrat 0,762 gr, lactose 1,5 gr,  fructose  0,5  gr,  kuning  telur  10  gr,  raffinosa 2,7gr,  streptomycin,  0,1,  aquabidest  80  ml, penicillin  0,1.  Dicampur  hingga  merata  dengan durasi  15  menit  melalui stirrer ,  kemudian ditambahkan penicilin dan streptomicin sebanyak 0,1 gr.  Pencampuran kuning telur dilakukan saat hendak  dipakai,  yaitu  diambil  10%  kemudian dicampurkan,  distirrer  15  menit,  kemudian disentrifugasi  dua  kali  pada  kecepatan  1500  rpm durasi  30  menit.  Hasil  sentrifugasi  diambil supernatannya  kemudian  dicampurkan  pada ejakulat sesuai perlakuan.
Pembuatan  Larutan  Pengencer  Air  Kelapa Muda viridis + 10% Kuning Telur
Air  kelapa viridis muda  masing-masing diambil  100  ml,  disaring  dengan  kertas  saring whettman ukuran 0,2 mm. Dilakukan pengukuran derajat  keasamannya  dengan  kertas indikator  pH merek  MN,  selanjutnya  dipakai  50  ml  untuk preparasi sampel. Kemudian dilakukan inaktivasi pada suhu 56 o C selama 20 menit. Diukur lagi pH, bila  terindikasi  asam,  ditambahkan  buffer NaHCO 3 sebanyak  0,2  gr.  Menjelang  digunakan dicampurkan  10%  kuning  telur  dengan  prosedur yang sama seperti pada tris aminomethane.

## Pencampuran Pengencer dan Semen
Sebanyak  0,07  ml  pengencer  diisikan dalam  tabung  reaksi,  kemudian  diambil  lagi semen0,07  ml  dicampurkan  pada  tabung  reaksi pada  masing-masing  perlakuan  pada  suhu 33 o C.sehingga  perbandingannya  sama.  Sampel diletakkan dalam refrigerator posisi cool bottom hingga  terjadi  penurunan  suhu  ke  25 o C. Selanjutnya  masing-masing  perlakuan  diisikan dengan  pengencer  lagi  sebanyak  0,86  ml sehingga volume sementara jadi 1 ml di masing- masing  perlakuan.  Saat  suhu  turun  20 o C dicampurkan  lagi  pengencer  2  ml  pada  tabung sampel  sesuai  perlakuan  sehingga  volume sementara jadi 3ml. Tahap berikutnya suhu turun lagi  10 o C  ditambahkan  lagi  2  ml  pengencer, sehingga  volume  total  menjadi  5  ml.  Tahap terakhir  kedua  sampelditempatkan  pada  poisisi cool  top sampai  suhu  turun  stabil  pada  4-5 o C. Penilaian  kualitas  semen  cair  kedua  sampel dilakukan setelah 1 jam simpan pada suhu 4-5 o C sebagai H1.
Uji  Kualitas  Mikrokopis  Spermatozoa  setelah Perlakuan
Motilitas individu: diamati dengan mikroskop  cahaya  pembesaran  400x  merek Olympus menggunakan cover glass suhu konstan 37 o C,  kemudian  menentukan  spermatozoa  yang bergerak  progresif.  Mengambil  setetes  sampel, ditempatkan  di  atas object  glass dan  ditutupi cover  gl ass,  mengamati  spermatozoa  yang bergerak  progresif    dalam  beberapa  lapangan pandang.  (Hafez  &  Hafez,  2008;    Susilawati, 2011; Susilawati 2013).
Uji  viabilitas:  diamati  pada  spermatozoa yang hidup dengan
kepala transparandibandingkan spermatozoa mati ditandai kepala merah setelah dilakukan preparasi ulas  dengan  eosin-negrosin.  Persentase  dihitung berdasarkan  total  spermatozoa  yang  kepalanya transparan (hidup) dibagi total spermatozoa hasil pengamatan  dikalikan  100%.  Diamati  pada pembesaran  400x  menggunakan  mikroskop cahaya  merek  Olympus  (Hafez  &  Hafez,  2008; Susilawati, 2011; Susilawati 2013).
Ujiabnormalitas: diamati kelainan-kelainan morfologik  spermatozoa  baik  primer  seperti kepala macrochepalis dan microchepalis, sekunder  seperti  ekor  melingkar  maupun  tersier seperti  kepala  dan  ekor  terputus.  Persentasenya yaitu  jumlah  spermatozoa  abnormal  dibagi seluruh  spermatozoa  yang  diamati  dikalikan 100%. Prosedurnya bersamaan dengan viabilitas, tetapi  obyek  yang  diamati  yaitu  spermatozoa
yang  mengalami  kelainan  morfologik.  Minimal sejumlah  200  spermatozoa  dihitung  pada  lima lapangan  pandang.  (Hafez  &  Hafez,  2008; Susilawati, 2011; Susilawati 2013).

## Variabel Penelitian
Variabel  penelitian  meliputi  motilitas individu, viabilitas dan abnormalitas.

## Analisis Data
Data  kualitas  semen  cair  dianalisis menggunakan Analisis Ragam (ANOVA) dengan taraf  nyata  P<0,05  dan  sangat  nyata  P<0,01 (Yitnosumarto, 1993). Perbedaan antar perlakuan, diuji menggunakan uji Jarak Berganda Duncan’s (Stell dan Torrie, 2004) yang dianalisis menggunakan program Gentat 18.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sebelum semen digunakan sebagai sampel, terlebih  dahulu  dilakukan  analisis  terhadap kualitasnya  setelah  penampungan  baik  secara makroskopis  maupun  mikroskopis.Data  kualitas semen sebelum perlakuan kambing Boer disajikan pada Tabel 1.

## Tabel 1. Data Kualitas Semen Kambing Boer
Variabel Rataan ± SD Volume (ml) 1,34 ± 0,3 Warna Kream Susu pH 7 Konsentrasi (  x 10 7 ) 464,7 ± 97,9 Motilitas Massa 3+ Motilitas Individu (%) 78 ± 4,1 Viabilitas 74 ± 11,9 Abnormalitas 2± 1,2
Kualitas mikroskopis maupun makroskopis semen  sebelum  perlakuan  sebagaimana  pada Tabel  1,dapat  diproses  penyimpanan  dingin sebelum  dilakukan  inseminasi  buatan.  Volume semen  rataannya  yaitu  1,34±0,3  ml,  hasil  ini lebih  banyak  dari  hasil  Audia et  al. (2017)  yaitu 1,02±0,29 juga Rochim et al. (2017). Konsentrasi semen  yaitu  464,7±  97,9  x107  lebih  tinggi  dari Pamungkas et  al. (2014)  yaitu  412,5±683  x107. Motilitas  individu,  rataannya  yaitu  78±  4,1% lebih  rendah  dari  Lestari et  al. (2014)  yaitu 80±0,00. Persentase spermatozoa hidup (viabilitas)  mencapai  74±11,9  lebih  rendah  dari hasil  penelitian  Mugiyati et  al. (2017)  yaitu 79,81±8,63. Abnormal rata-rata 2,0± 1,2%, tinggi dari  Mugiyati et  al. (2017)  yaitu  0,95±0,83. Berdasarkan  data  kualitas  semen  tersebut,  dapat diproses  lebih  lanjut  untuk  uji  kualitas  semen setelah  penyimpanan  maupun  sampai  pada inseminasi buatan (IB).
Kualitas  Semen  Cair  Kambing  Boer  Setelah Perlakuan
a. Motilitas Individu Spermatozoa
Rataan  Motilitas  Individu  Spermatozoa semen  cair  kambing  boer  setelah  mengalami Perlakuan tersaji pada Tabel 2.
Motilitas  individu  semen  cair  kambing Boer seperti tertera pada Tabel 2 memperlihatkan daya tahan motilitas individu pada pengencer tris mencapai  9  hari  dengan  nilai  42,5±13,2%,dan untuk  pengencerair  kelapa  muda viridis daya tahan motilitasnya hanya mencapai 4 hari dengan nilai  40,5±  24,3%.  Hasil  analisisis  ragam
memperlihatkan Perlakuan berbeda sangat Nyata (P<0,01)  terhadap  motilitas  individu  semen  cair kambing  Boer  pada  hari  ke-6  sampai  hari  ke-9 simpan.  Uji  lanjut  Duncan  diperoleh  hasil perlakuan  pengencer  tris  aminomethane  yang terbaik  yaitu  42,5±13,2%  sampai  hari  ke-9  dari pada  pengencer  Air  kelapa  muda viridis yang hanya mencapai 4 hari 40,5±24,3 simpan. Hal ini karena  peran  pengencer  tris  sebagai buffer yang menjaga  kestabilan  pH,  kesimbangan  elektrolit serta  osmolaritasnya  selama  pendinginan  4-5 o C lebih baik dari pengencer air kelapa muda viridis selama pendinginan.
Tabel 2. Rataan motilitas individu (%) spermatozoa semen cair kambing boer setelah perlakuan
Keterangan : **) Notasi yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang sangat nyata (P<0,01).
Hafez  &  Hafez  (2008)  menjelaskan  tris aminomethane dapat mempertahankan perubahan derajat  pH,  tekanan  osmotik  dan  keseimbangan elektrolit selama penyimpanan dingin semen cair. Selain  itu  peranlesithin  dan  lippoprotein  kuning telur  sebagai scavengercold  shock  effect karena memiliki  strukturmolekul  besar  yang  berperan mengcover  membrane  spermatozoa  sehingga tidak  terjadi  kerusakan  membrane  saat  proses penurunan  suhu.  Daya  tahan  motilitas  individu ini  karena  adanya  kandungan  nutrisi  dan antioksidan  pada  larutan  tris  juga  karena  adanya kandungan  glukosa,  protein  vitamin  dan  asam- asam amino  L-tyrosin,  L-Tryptofan  dan  L- phenylalanin serta lipid dan mineral pada kuning telur  yang  mencegah  efek  kejutan  dingin  pada membraan  spermatozoa  saat  penurunan  suhu, sebagaimana  pendapat  Anton  (2005);  Susilawati (2011);  Chenoweth  dan  Lorton.,  (2014).  Air kelapa  muda viridis mampumempertahankan motilitas  individu  sampai  lama  simpan  4  hari karena  kandungan  glukosa  yang  menyediakan energi  untuk  gerak  melalui  pembentukan  ATP dan  ADP  di  mithokondria.  Menurut  Gadea (2003),  proporsi  energi  endogen  mithokondria terbatas  bila  dilakukan  penyimpanan  dingin, sehingga  dibutuhkan  energi  eksogen  pengencer. Selain itu kandungan lemaknya 0,044%, menjadi penyuplai  energi  dan  pelindung  dari  efek cold shock saat  simpan  dingin.  Selain  lemak,  adanya unsur  nutrisi  lain  seperti  protein  0,22% mengandung  berbagai  asam  amino  seperti arginin, alanin, sistein dan serin yang merupakan
4  asam  amino  utama  dalam  air  kelapa  muda (Barlina,  2004)  yang  berperan  membangun protein untuk aktivitas metabolsime spermatozoa.
b. Viabilitas Spermatozoa
Data  hasil  analisis  viabilitas  spermatozoa semen  cair  kambing  boer  setelah  perlakuan tersaji  pada  Tabel  3.  Data  rataan  viabilitas spermatozoa  setelah  perlakuan  seperti  pda  Tabel 3, yaitu viabilitas spermatozoa selama pendinginan  terbaik  yaitu  pada  pengencer  tris yang  mencapai  9  hari  simpan  dengan  nilai 57±18,1% sedangkan untuk perlakuan pengencer air kelapa muda viridis mencapai lama simpan 5 hari  yaitu  42±24,6%.  Hasil  analisis  statistic (Anova)terlihat  Perlakuan  tidak  berpengaruh nyata  (P>0,05)  terhadap  viabilitas  spermatozoa semen  cair  kambing  Boer  di  lama  simpan  H-4, tetapi berbeda nyata (P<0,05) di H-5 sampai H-6 dan  sangat nyata (P<0,01) pada H-7 sampai H-9. Hasil  uji  lanjut  Duncan  diperoleh  pengencer  tris aminomethnae  yang  terbaik  dengan  daya hidupnya  mencapai  9  hari  simpan  yaitu 57±18,1%.  Sifat buffer dan  kandungann  nutrisi pada  larutan  tris  aminomethane  dan    di  kuning telur  berupa lecithin dan lippoprotein dapat memper-tahankan  kestabilan  pH  semen  cair kambing  boer  sampai  lama  simpan  mencapai  9 hari.Daya hidup spermatozoa setelah pengenceran  pada  P1  setelah  4  hari  simpan rendah    karena  kandungan  antioksidannya sedikit.  Hasil  analisa  antioksidan  pengencer  air kelapa  muda viridis dengan  metode  IC 50 yaitu
Perlakuan H1 H 2 H 3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 P0 73,5 ±2,4 67,5 ±5,4 61±12,9 55,5±14 ,6 54,5± 12,8 52±9,5b ** 50±9,7b ** 46,5±11 ,6b** 42,5± 13,2b** P1 71,5 ±4,1 68,5± 5,3 64± 9,4 40,5± 24,3 33± 23,4 14,5± 17,1a** 7±10,6a ** 2,4±6,3a ** 1± 3,2a**
2539,00  mg/ml.  Nilai  antioksidan  menggunakan analisa diphenyl  picrylhydrazyl (DPPH)  tersebut memiliki  kekuatan  antioksidan  yang  lemah.
Menurut  Filbert  et  al.,  (2014)  semakin  rendah nilai  antioksidan  IC 50 ,  maka  semakin  baik aktivitas antioksidan dari sampel pengujiannya.
Tabel 3. Data viabilitas spermatozoa semen cair kambing boer setelah perlakuan
Perlakuan H1 H 2 H 3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 P0 76± 11,3 75± 9,5 74± 8,2 62± 15,8 64± 12,9b* 65± 12,6b* 53± 14,8b** 55± 15,1b** 57± 18,1b** P1 77± 10,2 77± 11 66± 9,3 49± 27,6 42± 24,6a* 30± 33,2a* 25± 28,5a** 20± 22,9a** 12± 23a**
Notasi superkrip (a,b*)  yang  berbeda pada kolom  yang  sama  menunjukkan perbedaan  yang  nyata (P<0,05) Notasi superskrip  (a,b**)  yang  berbeda  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  perbedaan  yang  sangat  nyata  (P<0,01)
Rendahnya kandungan antioksidan pada pengencer  air  kelapa  muda viridis ini  diperkuat dengan  hasil  analisis superokidase  dismutase (SOD)  sampel  air  kelapa  muda  di  laboratorium Farmakologi  Fakultas  Kedokteran  UB,  yaitu 36,676±  2,19  ng/100ml  pada  1  hari  simpan,  3 hari  simpan  36,527±  2,20  ng/100ul  dan  8  hari simpan  24,830±  8,93ng/  100ul  sedangkan  pada analisa malondialdehyda (MDA)  yaitu  1  hari simpan  0,941±  0,0ng/100ml,  3  hari  simpan 1,160±  0,4  dan  8  hari  simpan  1,370±  0,3 ng/100ul.Terlihat  aktivitas  enzim  SOD  nya menjadi  menurun  seiring  peningkatan  durasi simpan dan berbanding terbalik dengan kadar malondyaldehyda (MDA). Selain kandungan  antioksidan  yang  rendah  penyebab lain  rendahnya  daya  hidup  spermatozoa  pada pengencer  air  kelapa  muda viridis ada  4  faktor yaitu:  (1)  Peristiwa  metabolisme  anaerob  terjadi pada  spermatozoa  karena  proses  glikolisis  pada sitoplasma  saat  pendinginan  sehingga  terjadi penumpukan  asam  laktat  dan  kehadiran  spesies oksigen  reaktif  yang  bersifat  reduktif  bagi spermatozoa. Gibb dan Aitken, (2016) menjelaskan  ejakulat  yang  disimpan  secara  in vitro lebih cepat mengalami kematian disebabkan karena terjadinya peroksidasi lipid dan pembentukan ROS. (2) Perubahan struktur lemak pada air kelapa akibat pendinginan dari liquid ke semiliquid ,  menyebabkan  spermatozoa  memacu energi  lebih  besar  untuk  bergerak  pada  larutan pengencer  yang  pekat,  bila  terjadi  secara  jangka panjang, maka akan mengurangi energi sehingga pergerakan  semakin  lemah  dan  terjadi  kematian spermatozoa. Peningkatan viscositas juga menyebabkan peningkatan tekanan osmotik pada pengencer  (Viswanath  dan  Shanon,  2000) sehingga  larutan  menjadi  hipertonis  yang
menyebabkan  pengeluran  cairan  intraseluler maka  terjadi  dehidrasi  pada  spermatozoa  yang menyebabkan spermatozoa mengkerut dan terjadi kematian  (Si et  al .,2006;  Andrabi,  2007).  (3) Perubahan  mekanis  pengencer  dari liquid ke semiliquid tentu  menyebabkan  terjadi  perubahan struktur permukaan membran spermatozoa sehingga  meningkatan  permiabilitasnya,  yang berpengaruh terhadap pertukaran ion dan air dari intra  maupun  ekstraseluer  menjadi  tergangggu sehingga  terjadi  penurunan  fungsi  fisiologis sampai  kematian  spermatozoa.  Menurut  Rizal  et al  (2003),  apabila  terjadi  kerusakan  pada membran  plasma  dapat  menyebabkan  hilangnya enzim-enzim  yang  diperlukan  dalam  proses metabolisme  sehingga  tidak  dihasilkan  energi yang  menyebabkan  penurunan  motilitas  dan viabilitas.  4.  Adanya  gerakan  hiperaktivasi  pada spermatozoa  di  larutan  pengencer  air  kelapa muda viridis yang  ditandai  dengan  pola  gerakan yang  membentuk  kurva  linier,  cepat  dan  menuju satu  arah,  menyebabkan  terjadi  kematian spermatozoa  karena  energi  telah  terkuras  pada masa-masa awal penyimpanan sehingga semakin lemah  dan  bahkan  mati  seiring  bertambahnya durasi  simpan.  Hal  ini  sesuai  pendapat  Ho  dan Suarez  (2011) bahwa  pada  media  yang  memiliki viscositas  rendah  seperti  media-media  in  vitro terjadi gerakan hyperaktivasi.
c. Abnormalitas Spermatozoa
Rataan  abnormalitas  spermatozoa  semen cair  kambing  boer  setelah  perlakuan  disajikan pada Tabel 4.  Data  Tabel  4,  memperlihatkan rataan abnormalitas spermatozoa setelah perlakuan tertinggi pada P0 di lama simpan 6 hari dengan  nilai  2,27±1,4%  dan  terendah juga  di  P0 pada lama simpan 1 hari dengan nilai 1,12±0,7%.
Tabel 4. Data rataan abnormalitas spermatozoa semen cair kambing boer setelah perlakuan
Perlakuan H1 H 2 H 3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 P0 1,12± 0,7 1,63± 0,7 1,36± 0,9 1,65± 1 1,4±1 2,27± 1,4 1,21± 0,7 1,45± 0,5 1,25± 0,9b** P1 1,61± 0,7 1,73± 0,4 1,55± 1,1 1,58± 0,7 1,6± 1,1 1,82± 0,8 1,31± 0,6 1,77± 0,8 1,95± 0,7a** Notasi superskrip (a,b**) yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang sangat nyata (P<0,01) Hasil  analisis  Ragam,  Perlakuan  tidak berpengaruh terhadap abnormalitas spermatozoa  sampai  pada  lama  simpan  8 hari,  namun  pada  lama  simpan  9  hari, perlakuan  Berbeda  Sangat  Nyata  (P<0,01). Uji  lanjut  Duncan,  nilai  abnormalitas terendah  yaitu  pada  pengencer  P0  1,12± 0,7%  di  lama  simpan  hari  ke-1.  Rendahnya abnormalitas ini menunjukkan bahwa perlakuan  tidak  berperan  pada  kerusakan struktur  dan  morfologi  spermatozoa  secara masif,  namun  karena  kejadian  teknis  yang menyebabkan  beberapa  spermatozoa  dari populasi  yang  ada  mengalami  kerusakan morfologik  sekunder  bahkan  tersier.  Namun abnormalitas ini layak untuk diproses sebagai sampel  semen  untuk  tujuan  IB.  Menurut  Ax et  al .,(2008)  abnormalitas  masih  di  bawah 15%  belum  mempengaruhi  keberhasilan  IB, sedangkan menurut Susilawati (2011)
abnormalitas >20% kualitas semennya sudah diragukan.  Hari  ke-8  terjadi  abnormalitas tinggi disebabkan karena terjadinya peningkatan viscositas larutan sampel karena menumpuknya  jumlah  spermatozoa  yang telah  mati  sehingg  menjadi  toksik  maupun karena peningkatan pHdan konsentrasi radikal  bebas  sehingga  terjadi  kerusakan struktural.  Menurut  Yulnawati  dan  Setiadi (2005), keberadaan zat  yang  bersifat  toksik baik    yang    berasal    dari  spermatozoa    yang telah    mati    maupun    yang    berasal  dari  zat yang  terkandung  dari  pengencer  yang  telah mengalami  oksidasi  akibat    penyimpanan dapat menyebabkan  tingginya  kadar  radikal bebas.

## KESIMPULAN
Pengencer tris aminomethane memiliki kualitas  lebih  tinggi  dengan  lama  simpan mencapai  9  hari  dengan  motilitas  individu dan  viabilitas  >  40  dan  55%  dengan abnormalitas  <3  %.  Pengencer  air  kelapa
muda viridis dapat mempertahankan kualitas semen cair kambing boer selama4 hari untuk motilitas  individu  yaitu  >40%  dan  5  hari untuk viabilitas viabilitas yaitu > 45%.

## DAFTAR PUSTAKA
Andrabi, S.M.H. 2007. Fundamental principles  of  cryopreservation  of Bos taurus and Bos indicus Bull Spermatozoa. Mini review. Int. J. Agri. and Biol. 9:367-369
Anton,  M.,  F.  Nau,  &  Y.  Nys.,  2005. Bioactive  Egg  Components  and  Their Petential  Uses.  The  XIth  European Symposium on the Quality of Egss and Egg Product. Doorth, The Netherlands.
Ax, R.L., M. Dally, B.A. Didion, R.W. Lenz, C.C.  Love,  D.D.  Varner,  B.  Hafez,  & M.M.  Bellin.  2008.  Semen  Evaluation. In  Farm  Animal  Reproduction  ed  By Hafez  ESE.  7 th edition.  Blackwell Publishing. USA. pp 365-375.
Aziz, A. F., M.A, Salim., N. Isnaini., A.P.A, Yekti, & T. Susilawati. 2017, Pengaruh pengencer  air  kelapa  tua  yang  berbeda varietas  terhadap  kualitas  semen  cair kambing  boer  pada  penyimpanan  3- 5 o C.  Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan 28(2):112-120.
Chenoweth,  P.J.  &  S.P.    Lorton,  2014.
Animal Andrology, Theori and
Aplications.  Cab-International,  Oxfor- side. UK.
Filbert, H.S.J. Koleangan. M.R.J. Runtuwene, &  V.S.  Kamu.  2014.  Penentuan aktivitas    antioksidan    berdasarkan nilai  IC50 ekstrak  metanol  dan  fraksi hasil  partisinya  pada  kulit biji pinang yaki  ( Areca  vestiaria Giseke),  Jurnal MIPA Unsrat Online 3(2):149-154.
Gacitua,  H  &  A.  Arav,  2005.  Successful Pregnancies  with  Directional  Freezing of  Large  Volume  Buck  Semen, Theriogenology 63:931–938.
Gadea,  J.  2003.  Semen  Extenders  used  in artificial insemination of swine. Spanish Agric Res. 1(2):17-27.
Gibb, Z  & R.J. Aitken. 2016. The  Impact of Sperm  Metabolism  during  In  Vitro Storage:  The  Stallion  as  a  Model,
Hindawi Publishing Corporation BioMed Research International Volume 2016.
Hafez, B. & E.S.E, Hafez. 2008. Spermatozoa and Seminal Plasma. In :  Reproduction in Farm Animals. 7 th Edition.
Blackwell Publishing. USA. pp 96-102.
Ho,  H.H  and  S,  S.  Suarez,  2001.
Hyperactivation of Mammalian
Spermatozoa: Function and Regulation, Reproduction 122 :  519–526.
Mugiyati.,  M.A.  Salim.,  N.  Isnaini  &  T. Susilawati.  2017.  Pengaruh  air  kelapa merah  yang  muda  dan  tua  sebagai pengencer  terhadap  kualitas  semen kambing  boer  selama  penyimpanan dingin.  J.  Ternak  Tropika  18(1)1:20- 26.
Naing,  S.W.,  H.  Wahid.,  K.  M,  Azam.,  Y. Rosnina., A.B. Zuki., S. Kazhal., M.M. Bukar.,  M.  Thein.,  T.  Kyaw.,  &  M.M.
San,  2010.  Effect  of  sugars  on characteristics of Boer goat semen after cryopreservation. Animal Reproduction Science 122:23-28.
Rizal,  M.,  M.R,Toelihere.,  T.L  Yusuf,  B.
Purwantara,  &  B,  Situmorang,  2003.
Kualitas  semen  beku  domba  garut dalam  berbagai  konsentrasi  gliserol. JITV 7:194-199.
Si  W,  Benson  JD,  Men  H,  &  Critser  J.  K. 2006.  Osmotic  tolerance  limits  and effects  of  cryoprotectants  on  the motility,  plasma  membrane  integrity and  acrosomal  integrity  of  rat  sperm. Cryobiology 53:336–348.
Steel,  R.G.D  dan  J.H.  Torrie.  1995.  Prinsip dan  Prosedur  Statistika.  Alih  Bahasa  : Bambang Sumantri. Gramedia Pustaka, Jakarta.
Susilawati,  T.  2011.  Spermatology.  UB
Press. Malang.
Susilawati,  T.  2013.  Pedoman  Inseminasi
Buatan pada Ternak. UB-Press, Malang.
Vishwanath, R & P. Shannon. 2000. Storage of  bovine  semen  in  liquid  and  frozen state. Anim. Reprod Sci. 62:23- 53.
Yitnosumarto, S. 1993. Percobaan Perancangan, Analisis dan Interpretasinya. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.
Yulnawati  &  M.  A,  Setiadi.  2005.  Motilitas dan keutuhan membran plasma spermatozoa  epididimis  kucing  selama penyimpanan  pada  suhu  4°C.  Media Kedokteran Hewan 21(3):100-104.
Yong,  J.W.H.,  Ge,  Liya,  Fei  Ng,  Yan,  Ngin Tan,  &  Swee,  2009.  The    chemical composition and  biological  properties of    coconut    ( Cocos    nucifera    L .) water.  Molecules  14 (12):5144-5164.