## Jurnal Ilmiah Farmako Bahari
ANTI BREAST CANCER VIRTUAL SCREENING FROM ACTIVE COMPOUND OF BLACK MULBERRY ROOT ( Morus nigra L.)
Riska Prasetiawati 1 , Rima Afriani 2 , Benny Permana 3 , Novriyanti Lubis* 4
1,2,4 Program Studi Farmasi Universitas Garut, Jalan Jati No 42B Tarogong Kaler, Garut, Jawa Barat, 44151,Indonesia
3 Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung, Jalan Ganeca No 10 Bandung, Jawa Barat, 40132, Indonesia
*Corresponding author: Novriyanti Lubis (novriyantilubis@uniga.ac.id)

## ARTICLE HISTORY
Received: 7 June 2022                               Revised: 16 January  2023                             Accepted: 25 January 2023

## Abstract
Breast  cancer  is  an  overgrown  or  unstable  development  of  breast  cells  that  later spread out to the cells or organ near the breast or to the other parts of the body. Black mulberry  root  was  observed  and  it  shows  the  activity  as  an  antioxidant  and  anti- inflammation.  Based  on  the  research,  a  compound  from  black  mulberry  root  is acquired which is predicted to has an activity as the anti-breast cancer because of its antioxidant  and  anti-inflammation.  The  aim  of  this  study  is  to  observed  a  new  anti- breast cancer compound candidate an active compound from black mulberry root has great interactions towards the ER- α and ER-β through pharmacophore identification and molecular docking method. 29 black mulberry root compounds were determined using the pharmacophore screening method with the LigandScout 4.3 program and tethered  to  target  receptors  using  the  molecular  tethering  method  with  the AutoDockTools  1.5.6  program.  Based  on  the  result  of  mooring  analysis,  an  active compound  of  black  mulberry  root  known  as  Morachalcone  A  is  gained  as  the  lead compound towards the ER- β. Morachalcone A has pharmacophore fit score of 67,55% and a free binding energy (ΔG) of -11.28 kkal/mol where the binding energy is lower than the natural ligand Genistein which is the natural ligand from ER- β with the value of  -10,25  kkal/mol  with  amino  acids  moored  to  the  Morachalcone  A  are  GLU305, HIS475, LEU298 dan GLY472. It shows that Morachalcone A has the potential as the new anti-breast cancer compound candidate which targeted to the ER- β. Through the toxicity test and physicochemical properties, Morachalcone A compound has met the requirements.  Meanwhile,  through  the  pharmacokinetics  profile  test  results,  the Morachalcone A compound has not meet the requirements.
Key words: black mulberry root, breast cancer, ER- α and ER-β ,molecular docking, pharmacophore screening
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25

## SKRINING VIRTUAL ANTIKANKER PAYUDARA DARI SENYAWA AKTIF AKAR MURBEI HITAM ( Morus nigra L.)

## Abstrak
Penyakit kanker payudara disebabkan oleh adanya pertumbuhan sel-sel yang tidak normal dan tidak terkontrol di dalam payudara. Akar Murbei Hitam ( Morus nigra L.) telah  diteliti  menunjukkan  aktivitas  sebagai  antioksidan  dan  antiinflamasi. Berdasarkan  paparan  tersebut,  didapatkan  senyawa  dari  akar  Murbei  Hitam  yang diprediksi  memiliki  aktivitas  antikanker  payudara.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk memperoleh kandidat senyawa baru antikanker payudara serta membuktikan bahwa senyawa-senyawa yang berasal dari senyawa aktif akar Murbei Hitam dapat memiliki interaksi  baik  terhadap  ER- α dan  ER-β melalui  metode  identifikasi  farmakofor dan penambatan  molekul .  29  senyawa  akar  Murbei  Hitam  terlebih  dahulu  ditentukan menggunakan  metode  skrining  farmakofor  dengan  program  LigandScout  4.3  dan ditambatkan  pada  reseptor  target  menggunakan  metode  penambatan  molekul dengan  program  AutoDockTools  1.5.6.  Analisis  hasil  penambatan  diperoleh  satu senyawa  aktif  akar  Murbei  Hitam  sebagai lead  compound terhadap  ER- β  yaitu Morachalcone  A  yang  memiliki  pharmacophore  fit  score  67,55%  dan  nilai  ikatan energi  bebas  (ΔG)  -11.28  kkal/mol,  dimana  nilai  energi  bebas  lebih  rendah dibandingkan dengan ligan alami Genistein yang merupakan ligan alami dari ER- β yaitu  sebesar  -10,25  kkal/mol  dan  residu  asam  amino  yang  terikat  pada Morachalcone  A  yaitu  GLU305,  HIS475,  LEU298  dan  GLY472.  Perolehan  data tersebut menggambarkan bahwa Morachalcone A memiliki potensi sebagai kandidat senyawa  baru  antikanker  payudara  yang  ditargetkan  pada  ER- β.  Dilihat  dari pengujian toksisitas dan sifat fisikokimia senyawa Morachalcone A telah memenuhi persyaratan. Tetapi dilihat dari hasil pengujian profil farmakokinetikanya senyawa ini belum memenuhi persyaratan.
Kata kunci : akar murbei, ER- α dan ER-β, kanker payudara, penambatan molekul, skrining farmakofor

## Pendahuluan
Kanker adalah suatu penyakit tetapi tidak menyebabkan penularan karena kanker terjadi akibat proliferasi sel  yang tidak terkendali, sehingga menjalar ke organ  tubuh lain yang letaknya jauh dan mengarah menyerang jaringan disekitarnya. Dari tahun ke tahun jumlah penderita kanker semakin bertambah dan dikategorikan sebagai suatu penyakit  yang  kompleks. 1 Berdasarkan  data  badan  kesehatan  dunia  (WHO),  pada tahun 2018 diperkirakan sebanyak 9,6 juta orang meninggal karena penyakit kanker. Setiap tahunnya angka kejadian kanker diperkirakan akan meningkat dan diperkirakan mencapai  23,6  juta  pengidap  kanker  baru  per  tahun  pada  2030. 2 Kanker  payudara menempati peringkat kelima berdasarkan kedua jenis kelamin dan semua usia, dilihat dari  jenis-jenis  kanker  yang  menyebabkan  kematian  setelah  kanker  paru-paru, kolorektum, perut dan hati. Kanker payudara bisa terjadi terhadap pria maupun wanita.
Hasil penelitian GLOBOCAN International Agency for Research on Cancer (IARC) tahun 2018 menunjukkan bahwa sebanyak 2.088.849 pengidap kanker payudara dan persentase  kematian  akibat  kanker  payudara  sebesar  6,6%. 3 Kanker  payudara disebabkan oleh berbagai hal diantaranya faktor genetik, penggunaan kontrasepsi atau terapi  penggantian  hormon  wanita,  radiasi  (sinar  X)  ke  payudara,  gaya  hidup  yang kurang baik dan faktor reproduksi seperti nuliparitas (wanita yang belum melahirkan) dan  kehamilan  pertama  pada  umur  di  atas  30  tahun,  tidak  pernah  menyusui  anak,
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25
faktor  reproduksi  lain  yang  mungkin  berperan  yaitu  menarche  (menstruasi  pertama) pada usia muda dan menopause (berhentinya menstruasi) pada usia lebih tua. 4 Penelitian  terdahulu  menginformasikan  bahwa  proses  menyusui  dapat mengurangi  risiko  terkena  kanker  payudara. 5 Perkembangan  jaringan  payudara melibatkan  beberapa  hormon  diantaranya  hormon  prolaktin,  progesterone,  estrogen dan  pertumbuhan.  Namun  demikian  terpapar  hormon  estrogen  secara  berlebihan dapat memicu timbulnya pertumbuhan sel secara abnormal diluar batas biasanya pada bagian  tertentu.  Mekanisme  terjadinya  kanker  payudara  akibat  terpapar  estrogen belum diketahui secara pasti, karena masih menjadi kontroversi diakibatkan stimulasi estrogen terhadap pembelahan sel epitel atau karena diakibatkan oleh estrogen atau metabolitnya yang secara langsung bertindak sebagai mutagen. Penemuan reseptor estrogen, selain bisa digunakan sebagai prediksi dan penanda prognostik, bisa  juga sebagai target yang efisien untuk pengobatan kanker. Hal ini menyebabkan perlunya dilakukan  berbagai  penelitian  untuk  menemukan  obat  alternatif  yang  berpotensi sebagai  obat  antikanker,  baik  itu  dari  bahan alam.  Obat antikanker merupakan  obat sintesis yang umumnya memiliki efek samping cukup besar yang tidak diinginkan dan harga yang relatif mahal, sehingga banyak masyarakat yang berpaling pada obat dari bahan alam.
Pengembangan obat dari bahan alam saat ini menjadi jalan untuk meminimalisir efek samping obat. Salah satu tumbuhan yang dimanfaatkan sebagai obat adalah akar Murbei  Hitam.  Akar  Murbei  Hitam  ( Morus  nigra L.)  tersebar  luas  di  berbagai  negara dengan iklim tropis maupun subtropis salah satunya Indonesia. 6 Tumbuhan ini umum digunakan  untuk  obat-obatan  tradisional  dan  sebagian  besar  masyarakat  hanya memanfaatkan bagian buah, ranting serta daun, sedangkan akarnya hanya dijadikan sebagai  limbah.  Akar  Murbei  Hitam  ( Morus  nigra L.)  diprediksi  memiliki  aktivitas antikanker payudara karena memiliki aktivitas sebagai antioksidan, dan antiinflamasi. Kandungan metabolit sekunder dalam ekstrak Akar Murbei Hitam ( Morus nigra L.) yang berupa  flavonoid  merupakan  golongan  terbesar  dari  senyawa  fenol.  Flavonoid merupakan senyawa aktif berfungsi sebagai antiinflamasi, antibakteri dan antioksidan.
Berdasarkan kajian tersebut dapat dijadikan pilihan sebagai bahan baku obat yang dapat memberikan manfaat, juga berpotensi dengan efek yang setara atau lebih dari pada ligan alami, tetapi memiliki efek samping yang lebih rendah. 7 Pada penelitian ini dilakukan  pengujian  secara in  silico dengan  skrining  farmakofor  dan  penambatan molekular  senyawa dari akar Murbei Hitam ( Morus nigra L.) terhadap ER- α dan ER-β sebagai senyawa baru antikanker payudara. Dilakukan pengujian profil farmakokinetika  dan  sifat  fisikokimia  dari  senyawa  melalui  situs  Pre-ADMET  dan Lipinski’s Rule of Five.

## Metode

## Alat
Perangkat Keras (Hardware)
Perangkat berupa Asus Laptop dengan spesifikasi Processor Intel®  CoreTM  i5- 8250U CPU @ 1.60 GHz RAM 4,00 GB.
Perangkat Lunak (Software)
Sistem Operasi Windows 10 Home, 64-bit, dilengkapi dengan beberapa perangkat lunak  yang  digunakan  dalam  penelitian  secara  komputasi  ini  diantaranya  terdiri  dari program  LigandScout®  4.3  (Free  Trial  30  Days),  Discovery  Studio  Visualizer®, ChemDraw®  Ultra  12.0,  Chem3D®  Pro  12.0,  Notepad++®,  Autodock  Tools®  (The Scripps Research Institute, Amerika), serta situs Protein Data Bank (https://www.rcsb.org/), PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.ni h.gov/), Lipinski’s Rule
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25
of Five (http://www.scfbio-iitd.res.in/software/drugdesign/lipinski.jsp), DUD-E
(http://dude.docking.org/), dan Pre-ADMET ( https://preadmet.bmdrc.kr/ ).

## Bahan

## Struktur Tiga Dimensi Reseptor
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah struktur 3D protein dari ER- α (reseptor estrogen alfa) dan ER- β (reseptor estrogen beta), sebagai pembandingnya digunakan ligan alami dari masing-masing reseptor yaitu ER- α dengan ligan alami 4- hydroxytamoxifen  dan  ER- β  ligan  alaminya  genistein    yang  didapat  dari  metode kristalografi  sinar-X  dengan  resolusi  berturut-turut  1.9  Å  dan  1.8  Å  diperoleh  dari website Protein Data Bank      ( https://www.rcsb.org/ ). Identitas makromolekul tersebut adalah 3ERT dan 1QKM berformat (.pdb).

## Struktur Tiga Dimensi Ligan
Struktur  tiga  dimensi  ligan  yang  digunakan  adalah  senyawa-senyawa  yang terdapat dalam akar Murbei Hitam ( Morus nigra L.) yang didapat melalui pengunduhan dari  situs  (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)  dengan  format(.sdf)  dan  menggambar ulang menggunakan program ChemDraw® Ultra 12.0.

## Prosedur
Prosedur penelitian ini dibagi menjadi dua prosedur besar yaitu dilakukan terlebih dahulu skrining farmakofor mulai dari persiapan struktur makromolekul EER- α dan ER- β sampai dengan analisis hasil dan skrining farmakofor pada senyawa uji. Kemudian dilanjutkan  dengan  penelitian,  penambatan  molekul,    langkah  pertama  persiapan struktur makromolekul EER- α dan ER-β dan terakhir analisis dan validasi penambatan molekul sehingga didapatkan data berupa nilai RSMD, ∆G, nilai KI dan interaksi ikatan.
Bagan alur penelitian dapat dilihat pada Gambar 1 dan Gambar 2.
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25
Gambar 1. Alur penelitian skrining farmakofor
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25
Gambar 2. Alur penelitian penambatan molekul
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25

## Hasil
Tabel 1. Hasil Skrining Farmakofor Senyawa Akar Murbei Hitam (Morus nigra L.) terhadap 4-Hydroxytamoxifen No. Nama Senyawa Matching Features Fit Score 1 Cudraflavone C 60.84 2 Cudraflavone B 60.76 3 Norartocarpetin 53.74 4 Morachalcone A 53.70 5 Steppogenin-7-O- β-D- glucoside 53.37 6 2,4,2’ ,4’ - tetrahydroxychalcone 52.67 7 Oxyresveratrol-2-O- β- D- glucopyranoside 52.43 8 Morin-7-O- β-D- glucoside 51.96
Tabel 2. Hasil Skrining Farmakofor Senyawa Akar Murbei Hitam (Morus nigra L.) terhadap Genistein No Senyawa Matching Features Fit Score 1 2,4,2’ ,4’ - tetrahydroxychalcone 67.72 2 Oxyresveratrol- 3’ -O-β- D-glucopyranoside 67.60 3 Morachalcone A 67.55 4 Oxyresveratrol-2-O- β- D- glucopyranoside 67.51 5 Steppogenin-7-O- β-D- glucoside 67.25 6 Moracin M 51.89
Penjelasan  simbol  kuning  interaksi  hidrofobik,  merah  menunjukkan  akseptor  ikatan hidrogen, hijau menandakan donor ikatan hidrogen, biru merupakan cincin aromatik.
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25
Tabel 3. Hasil Validasi Metode dengan Redocking Ligan Alami Kode PDB Grid Box RMSD Ikatan Energi Bebas Residu Asam Amino 3ERT X: 30.010 Y: -1.913 Z: 24.207 1,02 Å -11,51 ARG394, GLU353 1QKM X: 22.438 Y: 8.003 Z: 113.539 0,5 Å -10,25 ARG346, GLU305, LEU339, HIS475
Hasil Penambatan Molekul ER- α dan ER-β
Tabel 4. Hasil Penambatan Molekul ER- α No Senyawa /Ligan Uji ΔG (kkal / mol) Jumlah Ikatan Hidrogen Residu Asam Amino KI (nM) Ligan alami Ligan alami 4-OHT - 11,51 2 ARG394, GLU353 3.64 Senyawa aktif akar Morus nigra L. 1 Cudraflav one C -9.60 4 GLU353, 92.35 LEU346, MET343, THR347 2 Cudraflav one B -8.99 3 LEU387, 256.17 MET343, THR347 3 Oxyresv eratrol-2- O- β-D- glucopyr anoside -8.82 5 ARG394, GLU353, GLY521, HIS524, THR347 339.88 4 Steppogeni n-7-O- β- D-gucoside -8.44 6 ARG394, ASP351, LEU346, LEU384, MET344 THR347 655.06 5 2,4,2',4'- tetrahydro xychalcoe -8.33 5 ARG394, GLU353, GLY521, HIS524, LEU346 789.51
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25
Tabel 4. (Lanjutan) No Senyawa Ligan Uji ΔG (kkal/ mol) Jumla h Ikatan Hidrogen Residu Asam Amino KI (nM) Ligan alami Ligan alami 4-OHT -11,51 2 ARG394, GLU353 3.64 Senyawa aktif akar Morus nigra L. 6 Morachal cone A -7.91 2 ASP351, THR347 1.59 µM 7 Morin-7 O- β-D- glucoside -7.78 3 GLU353, MET343, THR347 2µM 8 Norartoca rpetin -7.38 4 GLU353, GLY521, HIS524, LEU387 3.89 µM
Tabel 5. Hasil Penambatan Molekul ER- β
Ligan alami Ligan alami Genistein -10,25 4 ARG346, GLU305, LEU339, HIS475 30.70 nM Senyawa aktif akar Morus nigra L. 1 Morachalcone A -11.28 4 GLU305, HIS475, LEU298, GLY472 5.39 2 Steppogeni 7-O- β- D-glucoside -9.29 2 GLU305 LEU298 155.51 3 2,4,2’,4’- tetrahydroxychalc one -8.91 4 GLU305, ARG36, GLY42, LEU298 296.21 4 Oxyresveratrol- 2-O- β-D- glucopyranoside -8.75 4 GLU305, LEU339, HIS475, GLY472 385.03 5 Moracin M -8.64 1 GLU305 464.30 6 Oxyresveratrol- 3’-O- β-D- glucopyranoside -8.54 4 GLU305, LEU339, HIS475, GLY472 545.52
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25
Tabel 6. Sifat Fisikokimia Senyawa Uji Lipinski’s rule of five No Senyawa/ Ligan Uji Donor Hidrogen Akseptor Hidrogen Bobot Molekul Log P Persyaratan 1 Cudraflavone C 4 6 450 6.14 Memenuhi 2 Cudraflavone B 3 6 420 5.33 Memenuhi 3 Oxyresveratrol- 2-O- β-D- glucopyranoside 7 10 408 0.61 Memenuhi 4 Steppogenin-7- O- β-D-glucoside 7 11 450 -0.31 Memenuhi 5 2,4,2',4'- tetrahydroxychal cone 4 5 272 2.4 Memenuhi 6 Morachalcone A 4 5 354 4.3 Memenuhi 7 Morin-7-O- β-D- glucoside 8 12 464 -0.51 Memenuhi 8 Moracin M 3 4 242 3.21 Memenuhi 9 Norartocarpetin 4 6 286 2.12 Memenuhi 10 Oxyresveratrol- 3’-O-β-D- glucopyranoside 7 9 406 0.15 Memenuhi Tabel 7. Data Hasil Pengujian PreADME dan Uji Toksisitas
No  Nama Senyawa Caco-2 cell (nm sec-1 ) HIA (%) Protein Plasma Binding Muta Genik Karsino genik 1 Cudraflavone C 20.644 b 89.999 a 99.97 a Non- mutagen Negatif 2 Cudraflavone B 19.35 b 92.47 a 94.29 a Non- mutagen Negatif 3 Oxyresveratrol-2- O- β-D- glucopyranoside 11.02 b 28.29 b 96.26 a Mutagen Positif 4 Steppogenin-7-O- β-D- glucoside 9.73 b 21.74 b 67.34 b Non- mutagen Negatif 5 2,4,2',4'- tetrahydroxychalcone 20.01 b 80.61 a 100 a Mutagen Positif 6 Morachalcone A 20.57 b 86.73 a 100 a Non- mutagen Negatif 7 Morin-7-O- β-D- glucoside 9.73 b 21.74 b 67.34 b Mutagen Negatif 8 Moracin M 0.42 c 87.26 a 96.67 a Mutagen Positif 9 Norartocarpetin 18.57 b 79.43 a 97.27 a Mutagen  Positif
10 Oxyresveratrol- 3’- O- β-D- glucopyranoside 10.16 b 36.73 b 95.24 a Mutagen  Positif
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25

## Pembahasan
Reseptor estrogen merupakan protein penting sebagai target aksi molekul obat atau ligan. Pada penelitian ini digunakan dua jenis reseptor, yaitu reseptor estrogen alfa (ER- α) dan reseptor estrogen beta (ER-β) dengan kode berturut-turut 3ERT dan 1QKM. Ligan yang digunakan adalah senyawa aktif dari akar  Murbei Hitam ( Morus nigra L.). Untuk Struktur 3D diperoleh dari website Pubchem. Jumlah kandungan total senyawa  aktif  dalam  akar  Murbei  hitam  ( Morus  nigra L.)  terdapat  29  senyawa. Sebagai  pembandingnya,  digunakan  4-Hydroxytamoxifen  dan  Genistein.  Skrining virtual  farmakofor  dilakukan  dengan  tujuan  untuk  pengayaan  maksimum  senyawa aktif  pada  daftar  hit.  Untuk  mengetahui  bahwa  LigandScout®  yang  merupakan perangkat lunak dapat digunakan pada penelitian ini maka dilakukan validasi. Model farmakofor yang valid dapat mengidentifikasi senyawa aktif yang dikenal dan sedikit mungkin decoy. Hasilnya diketahui bahwa dari total senyawa active dan decoy yaitu 250 didapatkan 118 senyawa hit dengan nilai AUC100  sebesar 0,95  untuk ER- α dan untuk  ER- β  didapatkan  82  senyawa  hit  dengan  nilai  AUC100  0,81.  Dapat disimpulkan,  metode  yang  telah  digunakan  telah  memenuhi  persyaratan  yaitu  nilai AUC100 ≥ 70%. 8,9
Parameter-parameter untuk penentuan afinitas senyawa uji terhadap reseptor yaitu (KI) konstanta inhibisi dan (ΔG) nilai ikatan energi. Afinitas ligan semakin tinggi jika nilai KI semakin kecil dan nilai (ΔG) semakin negatif. Parameter hasil terbaik dari proses penambatan dilihat juga dari residu asam amino dari interaksi ikatan hidrogen dengan  reseptor.  Hasil  skrining  farmakofor  dan  penambatan  molekul  senyawa  uji Murbei Hitam ( Morus nigra L.) terhadap ER- α tidak ditemukan senyawa uji dengan nilai energi bebas (∆G) lebih rendah dibandingkan dengan senyawa alami yaitu  4- OHT. Nilai energi bebas dari  ligan  alami 4-OHT  ialah -11,51 kkal/mol. Sedangkan terdapat 1 senyawa akar Murbei hitam ( Morus nigra L.)  yang berhasil ditambatkan terhadap ER- β dengan energi bebas lebih rendah dibanding ligan alami. Nilai energi bebas dari ligan alami Genistein ialah -10,25 kkal/mol dan residu asam amino yang terikat yaitu GLU305, LEU298, HIS475, dan GLY472. Senyawa yang memiliki energi bebas lebih rendah dari ligan alami pada ER- β yaitu Morachalcone A  dengan nilai energi bebas -11.28 kkal/mol dan terdapat interaksi antara genistein dengan reseptor menghasilkan 4 residu asam amino yaitu GLY305, GLU305, HIS475, dan LEU339 . Analisis sifat fisiko kimia ligan dilakukan berdasarkan Lipinski’s rule of five. Aturan Lipinski  dapat menunjukkan  tingkat  hidrofob  atau  hidrofilitas molekul  obat sebelum dilakukan  percobaan  penambatan.  Beberapa  kriteria  persyaratan  tersebut  adalah nilai  log  P  <  5,  jumlah  donor  ikatan  hidrogen  <  5,  jumlah  akseptor  donor  ikatan hidrogen  <10,  dan  mempunyai  BM  <  500  Da. 10 Dari  hasil  skrining  farmakofor  dan penambatan molekul, didapatkan senyawa yang sudah memenuhi persyaratan dari Lipinski’s rule of five . Artinya sifat fisiko kimia senyawa yang terkandung dalam akar Murbei  hitam  ini  memiliki  profil  difusi  pasif  yang  baik  karena bobot molekul  kurang dari  500  Da.  Hasil  penambatan  molekul  senyawa  aktif  dari  akar  Murbei  Hitam terhadap  ER- α  tidak  terdapat  senyawa  uji  dengan  energi  ikatan  terendah  yang dibandingkan  dengan  ligan  alami  4-Hydroxytamoxifen.  Sedangkan  untuk  ER- β terdapat  1  senyawa  uji  dengan  energi  ikatan  terendah  yang  dibandingkan  dengan ligan alami genistein yang sudah memenuhi persyaratan Lipinski’s rule of five. Yang artinya senyawa dari akar Murbei Hitam ( Morus nigra L.) dapat dibuat dalam bentuk sediaan oral. 10
PreADME  adalah  satu  prosedur  yang  dilakukan  untuk  memprediksi  profil farmakokinetika  terhadap  senyawa-senyawa  yang  telah  diketahui  nilai  fungsi skoringnya  (KI  dan  ΔG).  Data-data  yang  akan  digunakan  sebagai  acuan  untuk absorbsi yaitu HIA Human Intestinal Absorption, permeabilitas (Caco-2), dan Plasma Protein  Binding.  Sel  Caco-2  digunakan  untuk in  vitro sehingga  dapat  diketahui
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25
perjalanan  obat melalui  epitel  intestinal  yang  berada  dalam  adenokarsinoma  kolon manusia. HIA untuk in vivo yaitu nilai yang menghitung bioavailabilitas dan absorbsi dari  rasio  ekskresi  seperti  melalui  urin,  empedu,  dan  feses. Parameter  HIA  sangat penting bila sediaan obat akan dibuat oral, maka senyawanya diharapkan mempunyai nilai  absorbsi  yang  baik  pada  dinding  usus  agar  dapat  masuk  ke  pembuluh  darah sehingga  bisa  mencapai  reseptor  targetnya.  Nilai  absorbsi  rata-rata  ada  di  tingkat well-absorbed yaitu berada di kisaran nilai 70-100%, artinya tingkat absorbsi senyawa uji pada usus berada pada tingkat yang baik. Untuk senyawa Morachalcone A dengan energi  terendah  juga  memiliki  tingkat  absorbsi  yang  baik. 10 Dari  hasil  skrining farmakofor  dan  penambatan  molekul  senyawa  yang  diuji,  seluruhnya  memiliki keterikatan pada protein plasma yang kuat. Artinya, kandungan senyawa pada akar Murbei hitam ini tidak dapat berdifusi dengan baik menembus membran sel karena keterikatannya  dengan  protein  plasma  rata-rata  lebih  dari  90%  yang  bermakna senyawa-senyawa tersebut tidak bebas atau terikat pada protein plasma. 11
Kandidat  obat  dari  suatu  senyawa  perlu  dilakukan  uji  toksisitas  agar  aman digunakan pada manusia. Untuk pengujiannya menggunakan uji Ames Toxicity pada website PreADMET.  Ames  Test  merupakan  metode  yang  memanfaatkan  bakteri untuk  menilai  potensi  mutagenik  senyawa.  Mutagen  merupakan  agen  yang  dapat menyebabkan  Mutasi  pada  kromosom  atau  DNA  dan  perubahan  pada  informasi genetik.  Sedangkan  karsinogen  ialah  agen  atau  apa  saja  yang  dapat  memicu terjadinya kanker atau tumor. 12 Hasil pengujian toksisitas senyawa uji, diperoleh data 6  senyawa  memiliki  sifat  mutagen  serta  5  senyawa  non  mutagen  dan  5  senyawa bersifat karsinogenik dan non karsinogen. Pada ER- α, Cudraflavone B mempunyai kemiripan  terhadap  4-OHT  dengan  pharmacophore-fit  score  60,84  namun  tidak didukung dengan nilai ikatan energi yang lebih rendah terhadap ligan alami. Hal ini mungkin disebabkan oleh beberapa faktor seperti jarak ikatan, jenis ikatan dan jumlah ikatan  yang  terjadi.  Sedangkan  pada  ER- β Morachalcone A mempunyai kemiripan farmakofor  dengan  Genistein  dan  didukung  dengan  nilai  ikatan  energi  yang  lebih rendah. Dilihat dari residu asam aminonya pun, Morachalcone A memiliki residu asam amino  yang sama  dengan  ligan  alaminya,  artinya  interaksi  antara  Morachalcone A dengan reseptor dapat stabil. Tetapi untuk senyawa uji 2,4,2’,4’-tetrahydroxychalcone yang  mempunyai  kemiripan  dengan  pharmacophore-fit  score  67,72  terhadap Genistein namun tidak didukung dengan nilai ikatan energi yang lebih rendah yaitu - 8.91.  Jika  dibandingkan  dengan  Morachalcone  A  yang  memiliki  4  ikatan  hidrogen yang sama dengan l igan alami, sedangkan 2,4,2’,4’-tetrahydroxychalcone diketahui memiliki 4 ikatan hidrogen yang berbeda dan memiliki jarak ikatan yaitu 2.4 kkal/mol sedangkan Morachalcone A yaitu 1.7 kkal/mol.

## Kesimpulan
Berdasarkan  pengujian  skrining  farmakofor  dan  penambatan  molekul  yang dilakukan pada 29 senyawa aktif dari akar Murbei hitam ( Morus nigra L.) terhadap ER- α dan ER-β. Hasil yang diperoleh untuk ER-α didapatkan 8 senyawa hit. Namun saat  dilakukan  pengujian  penambatan  molekul  tidak  ditemukan  senyawa  uji  yang memiliki  nilai  energi  bebas  lebih  rendah  dibandingkan  dengan  ligan  alami  4- Hydroxytamoxifen.  Sedangkan  untuk  ER- β  didapatkan  6  senyawa  hit.  Kemudian dilakukan  penambatan  molekul  hasilnya  didapatkan  1  senyawa  aktif  yaitu morachalcone  A  dengan  pharmacophore  fit  score  lebih  dari  50%  dan  nilai  energi bebas -11,28 kkal/mol, yang memiliki nilai energi bebas lebih rendah dibandingkan dengan ligan alami Genistein. Dari hasil  prediksi parameter absorbsi dan distribusi menunjukkan  bahwa  senyawa  morachalcone  A  memiliki  nilai  Caco-2  cell  sebesar 20,57 nm sec-1, %HIA sebesar 86,7% dan %PPB sebesar 100%. Untuk pengujian toksisitasnya,  morachalcone  A  bersifat  non-mutagenik  dan  tidak  bersifat karsinogenik.  Hal  ini  menggambarkan  bahwa  morachalcone  A  mempunyai  fungsi
Vol. 14 ; No. 1 ; January 2023 Halaman 13-25
sebagai  calon  senyawa  baru  antikanker  payudara  bila  dibandingkan  terhadap senyawa aktif dari akar Murbei hitam lainnya.

## Daftar Pustaka
1.   Soemitro MP, Kusumadjayanti N. Berani deteksi dini. Healthy life; 2018. 12 –23 p.
2.   Dewi  GAT,  Hendrati  LY.  Analisis  risiko  kanker  payudara  berdasar  riwayat pemakaian kontrasepsi hormonal dan usia. J Berk Epidemiol. 2015;3(1):12 –23. 3.   Fei J, Zhou L, Liu T, Tang XY. Pharmacophore modeling, virtual screening, and molecular docking studies for discovery of novel Akt2 inhibitors. Int J Med Sci. 2013;10(3):265 –75.
4.   Hussain  F,  Rana  Z,  Shafique  H,  Malik  A,  Hussain  Z.  Phytopharmacological potential of different species of Morus alba and their bioactive phytochemicals: A review. Asian Pac J Trop Biomed. 2017;7(10):950 –6.
5.   Inte: Ligand. Inte:ligand advanced molecular design. http://www.inteligand.com/. 2018.
6.   Inte: Ligand. Inte:ligand creating a pharmacophore from a single protein-ligand complex. 2010.
7.   Pusat  Data  dan  Informasi  Kementerian  Kesehatan  RI.  Bulan  peduli  kanker payudara infodatin. Jakarta; 2016. 1 –9 p.
8.   Khaira Y N, Ramadhania ZM. Kandungan senyawa kimia Murbei Hitam ( Morus nigra L.) dan efek farmakologinya. Farmaka. 2018;16(2):213 –21.
9.   Nursamsiar  N,  Surantaatmadja  SI,  Tjahjono  DH.  Absorption,  distribution  and toxicity prediction of curculigoside a and its derivative. In: Proceedings of the 3rd international  conference  on  computation  for  science  and  technology.  Atlantis Press; 2015.
10.  Prasetiawati  R,  Zamri  A,  Barliana  MI,  Muchtaridi  M.  In  silico  predictive  for modification  of  chalcone  with  pyrazole  derivatives  as  a  novel  therapeutic compound for targeted breast cancer treatment. J Appl Pharm Sci. 2019;9(2):20 – 8.
11.  Suparman E, Suparman E. Peranan estrogen dan progesteron terhadap kanker payudara. J Biomedik. 2014;6(3):141 –8.
12.  World  Health  Organization.  International  agency  for  research  on  cancer. iarc.who.int. 2018. p. 99 –100.