PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
IN SILICO STUDY OF CLOVE (Syzygium aromaticum L .) EUGENOL COMPOUNDS ON ER-

## 𝜶 , ER- 𝜷 AND HER-2 RECEPTORS IN BREAST CANCER
STUDI IN SILICO SENYAWA EUGENOL CENGKEH ( Syzygium aromaticum L.) TERHADAP RESEPTOR ER- 𝜶 , ER- 𝜷 DAN HER-2 PADA KANKER PAYUDARA
Khumairah Mohtar 1)* , Fatimawali 1) ,  Erladys M. Rumondor 1) , Olvie S. Datu 1) , Trina Tallei 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Program Studi Biologi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *khumairahmohtar01@gmail.com

## ABSTRACT
Breast cancer is a malignant tumor that can attack the breast tissue which consists of the mammary glands, mammary gland ducts, and the supporting tissues of the breast. Breast cancer develops from normal cells that undergo proliferative changes. Breast cancer is a type of cancer with the greatest prevalence in women in Indonesia. Estrogen receptor alpha (ER-α), estrogen beta (ER-β) and human epidermal growth factor receptor 2 (HER-2) induced by the hormone estrogen will activate genes that play a role in the growth of breast cancer cells. This study aims to determine the potential results of the interaction of the molecular bonding of clove eugenol  compounds  to  the  receptor  target  in  breast  cancer.  The  method  used  is  molecular  docking  using Autodock Vina software. The results showed that eugenol compounds can interact with ER-α, ER-β, and HER- 2 and have the potential as breast anticancer with the best binding affinity based on the observed RMSD value.

## Keywords : ER-α, ER-β, HER-2, Eugenol, docking

## ABSTRAK
Kanker payudara adalah tumor ganas yang dapat menyerang jaringan payudara yang terdiri dari kelenjar susu, saluran kelenjar susu, dan jaringan penunjang payudara. Kanker payudara berkembang dari sel normal yang mengalami  perubahan  proliferatif.  Kanker  payudara  adalah  jenis  kanker  dengan  prevelensi  terbesar  pada wanita  di  Indonesia.  Reseptor  estrogen  alfa  (ER-α),  estrogen  beta  (ER-β)  dan  reseptor  faktor  pertumbuhan manusia-2 (HER-2) yang diinduksi oleh hormon estrogen akan mengaktifkan gen-gen yang berperan dalam pertumbuhan  sel  kanker  payudara.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  hasil  interaksi penambatan molekuler senyawa eugenol cengkeh terhadap target reseptor pada kanker payudara. Metode yang digunakan  yaitu  penambatan  molekuler  docking  menggunakan  perangkat  lunak  Autodock  Vina.  Hasil penelitian  menunjukan  bahwa  senyawa  eugenol  dapat  berinteraksi  dengan  ER-α,  ER-β,  dan  HER-2  dan berpotensi  sebagai  antikanker  payudara  dengan  binding  affinity  terbaik  didasarkan  pada  nilai  RMSD  yang dilihat.
Kata kunci : ER-α, ER-β, HER-2, Eugenol, docking
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Kanker payudara adalah tumor ganas yang dapat  menyerang  jaringan  payudara  yang  terdiri dari  kelenjar  susu  (kelenjar  pembuat  air  susu), saluran  kelenjar  (saluran  air  susu),  dan  jaringan penunjang payudara. Kanker payudara menyebabkan  sel  dan  jaringan  payudara  berubah bentuk  menjadi  abnormal  dan  bertambah  banyak secara tidak terkendali (American Cancer Society, 2017).
Estrogen-α  (ER-α)  berhubungan  dengan stimulasi estrogen pada ekspresi gen dan proliferasi sel.  ER-α  berperan  penting  dalam  perkembangan kanker payudara, bekerja sebagai ligand-inducible transcription  factor ,  dan  dapat  digunakan  untuk menentukan pertumbuhan, survival, serta diferensiasi  sel  kanker  payudara  (Anggorowati, 2013).  Estrogen-β  (ER-β)  bertindak  sebagai modulator  negatif  pada  aksi  ER-α  dan  juga memberi  efek  supresi  pertumbuhan.  Estrogen diketahui  memainkan  peran  yang  penting  dalam perumbuhan sel kanker payudara sebab terekspresi secara  berlebih  dalam jaringan  kanker  (Ikeda  dan Inoue, 2004).
HER-2 (human  epidermal  growth  factor receptor  2) berperan  dalam  proliferasi,  migrasi, bertahan hidup dan pertumbuhan sel. Proliferasi sel epithelial  salah  satunya  diatur  oleh Human Epidermal Growth Factor Receptor (HER). Sekitar 20-25%  kanker  payudara  menunjukkan  ekspresi berlebih dari gen tersebut. Kanker payudara HER- 2  positif  cenderung  lebih  agresif  dan  menyebar lebih cepat daripada kanker lainnya (Franklin et al ., 2004).
Pengobatan  menggunakan  metabolit  aktif antiestrogen tamoksifen yaitu 4-
Hidroksitamoksifen yang  merupakan  modulator reseptor  estrogen  selektif  (SERM)  dari  kelompok triphenylethylene adalah terapi lini pertama untuk sebagian  besar  pasien  dengan  kanker  payudara, untuk  kanker  payudara  dengan  status  HER-2 positif. Obat yang paling banyak digunakan adalah trastuzumab,  yang  bekerja  pada  reseptor  HER-2 yang  ada  pada  sel  kanker  payudara  dan menghambat pertumbuhan sel-sel kanker payudara (Lykkesfeldt et al , 1994). Namun dalam beberapa waktu  ada  wanita  yang  mendapat  pengobatan 4- Hidroksitamoksifen dan  trastuzumab  mengalami penurunan  respon  atau  bahkan  tidak  memberikan respon  terhadap  pengobatan  kemoterapi  kanker payudara.  Hal  tersebut  mungkin  terjadi  karena timbulnya reseitensi. Sekitar 40% pasien akhirnya kambuh  dan  meninggal  karena  resistensi  setelah
terapi selama 7-10 bulan (Ring et al , 2004; Wind et al , 2011).
Diperlukan  suatu  pengembangan  terapi terhadap  kanker  payudara  yang  memiliki  target spesifik dan selektifitas yang tinggi terhadap terapi kanker payudara dengan eksplorasi potensi bahan alam  berkhasiat.  Eugenol  merupakan  salah  satu senyawa  dari  kelompok  phenylpropene  dengan rumus molekul 𝐶 10 𝐻 12 𝑂 2 . Eugenol disintesis dari L-phenylalanine menjadi conyferyl alcohol, coniferyl  acetate dan  kemudian  menjadi  eugenol melalui  proses eugenol  synthase (EGS)  (Louie et al ., 2007). Eugenol berwarna kuning bening hingga kuning  pucat,  kental  seperti  minyak,  bersifat mudah larut dalam pelarut organik dan sedikit larut dalam air. Eugenol memiliki berat molekul 164,20 dengan titik didih 250–255ºC. Eugenol merupakan salah satu essential oil yang terdapat pada cengkeh dengan kandungan 80-90% (Prianto, et al . 2013).
Beberapa  hasil  penelitian  menunjukkan bahwa eugenol memiliki berbagai aktivitas biologi, seperti:  antifungi,  antikanker,  dan  antiinflamasi. Sebagai aktivitas antikanker eugenol bersifat pro- apoptotik pada kanker payudara dengan menurunkan  regulasi  E2F1/survivin  (Al-sharif et al ., 2013).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah  eugenol  berpotensi  untuk  menghambat ekspresi berlebih reseptor ER- 𝛼 , ER- 𝛽 , dan HER2, dimana dalam pengujian terhadap potensi eugenol sebagai agen antikanker payudara maka dilakukan dengan  mengetahui  afinitas  dan  visualisasi interaksi ikatan dari eugenol terhadap protein target ER- 𝛼 ,  ER- 𝛽 ,  dan  HER2  dengan  menggunakan metode molecular  docking secara in  silico (pemodelan komputer).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas  Sam  Ratulangi  Manado  untuk  proses penambatan  molekuler  selama  bulan  Desember 2020 hingga Maret 2021.

## Alat dan Bahan Alat
Laptop Hewlett-Packard dengan spesifikasi  Intel®  Core™  i3-7020U  @2.30GHz, RAM  4  gigabyte  dan  Graphic  Card  (Intel®  HD Graphic  520  dan  AMD  Radeon  Graphic). Perangkat  lunak  yang  digunakan  berupa  Sistem Operasi Windows 10, Paket Autodock Tools ( The
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Scripp  Research  Institute ),  Open  Babel  2.3.2, Discovery  Studio  Visualizer  2020  ( Dessault Systemes  BIOVIA ),  Autodock  Vina  ( The  Scripp Research Institute ).
Bahan Struktur  tiga  dimensi  dari  reseptor  ER- 𝛼 , ER- 𝛽 ,  dan  Her  2  diunduh  dari  situs  Protein  Data Bank dengan PDB ID : 5W9D, 1QKM, dan 4RJ3 dan  Struktur  tiga  dimensi  ligan  yaitu  senyawa eugenol diunduh dari situs PubChem.

## Prosedur
Langkah awal sebelum  melakukan proses penambatan  molekul  yaitu  penyiapan  struktur makromolekul  Reseptor  dan  ligan  yang  akan digunakan.  Pengunduhan  makromolekul  ER-α (PDB ID : 5W9D), ER-β (PDB ID : 1QKM), dan Her-2  (PDB  ID  :  4RJ3)  dilakukan  lewat  server online  Protein  Data  Bank  dengan  format  .pdb. Struktur yang diperoleh ini dipisahkan dari residu non standar yang masih terdapat dalam makromolekul untuk memperoleh struktur molekul murni  yang  siap  ke  tahap  selanjutnya  dengan menggunakan  perangkat  lunak Discovery  Studio Visualizer 2020. Kemudian makromolekul reseptor dioptimasi  dengan  Autodocktools.  Setelah  itu dilakukan pengaturan grid box mengikuti area sisi aktif  reseptor. Grid  box ini  meliputi  center_x, center_y, center_z, untuk mengatur parameter box pada  makromolekul  protein,  kemudian  size_x, size_y,  dan  size_z,  dan spacing (angstrom)  untuk menentukan  besar  kecilnya grid  box untuk  ruang penambatan  ligan  tersebut.  Setelah  dioptimasi reseptor tersebut disimpan dalam format PDBQT, selanjutnya  untuk  persiapan  ligan  diunduh  pada website Pubchem dan diunduh dengan format .sdf. Struktur  yang  diunduh  dalam  bentuk  3D.  Ligan telah  dipreparasi  dengan  Open  Babel  yang merupakan  perangkat  lunak  untuk  mengubah bebarapa  format  berkas  kimia.  Perangkat  ini berfungsi  sebagai  pencarian  konformer  dan penggambaran  2D,  koversi batch dan  pencarian sub struktur dan kemiripan (O,Boyle et al ., 2011).
Kemudian dilakukan Pengoptimasian ligan dengan cara  penambahan  muatan gasteiger (muatan parsial)  dan  pengaturan number  of  active  torsion
dengan
menggunakan Autodocktools. Autodocktool juga menambahkan nilai TORSDOF ( Torsion Degree of Freedom ) pada ligan. File ligan hasil  pengoptimasian  disimpan  dalam  format PDBQT (.pdbqt).
Hal  yang  selanjutnya  dilakukan  yaitu penambatan molekul reseptor dan ligan dengan Autodock Vina. Langkah awal yang dilakukan tahap  ini  yaitu  dengan  menyalin  berkas reseptor  dan  ligan  yang  sudah  dalam  format pdbqt.  ke  dalam  folder  vina.  Berkas konfigurasi  molekul  dan  urutan  sisi  aktif masing-masing  diketik  pada  notepad.  Nama berkas dapat ditulis bebas dengan menunjukan reseptor dan ligan  yang  akan digunakan pada proses  penambata.  Nama  berkas  yang  tertulis pada  notepad  harus  sama  dengan  berkas  di folder vina. Urutan sisi aktif ligan yang sudah diatur  sebelumnya,  disimpan  dengan  nama ‘seq.txt’. Center_x, center_y, center_z, size_x, size_y,  dan  size_z  merupakan  grid  box parameter  yang  sudah  diatur  sebelumnya. Berkas  disimpan  dengan  nama  ‘conf.txt’. Setelah pengaturan berkas konfigurasi selesai, maka  proses  penambatan  dengan  vina  dapat dijalankan melalui perintah Command Prompt dengan perinta sebagai berikut  “Vina --config conf.txt    --log  log.txt”.  proses  penambatan dengan  vina  berlangsung  selama  5-10  menit untuk  sekali  proses  penambatan.  Setelah mencapai 100 persen pada proses penambatan, maka akan diperoleh 2 berkas baru pada folder vina,  yaitu  ‘log.txt’  dan  ‘out.pdbqt’.  Berkas ‘log.txt’ berisikan nilai afinitas ikatan dan Root Mean  Square  Deviation (RMSD),  sedangkan berkas ‘out.pdbqt’ merupakan konformasi dari ligan-ligan  yang  ditambatkan.  Kemudian dijalankan  perintah  “Vina_split  --input out.pdbqt”  maka  akan  muncul  berkas  baru pada folder vina dengan nama “out_ligand_1” dan seterusnya. Hal ini bertujuan untuk melihat sejumlah ligan yang berhasil ditambatkan.
Tahap terakhir yaitu visualisasi dengan cara drag reseptor dan out ligan 1 pada Discovery studio visualisai  kemudian  lihat  hasilnya  dalam  bentuk 2D dan 3D.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sebelum  dilakukan  proses  molekuler docking dilihat terlebih dahulu konformasi masing- masing  ligan  hasil  penambatan  dengan  urutkan berdasarkan nilai binding affinity dari yang terkecil sampai  yang  terbesar.  Nilai binding  affinity yang kecil  (semakin  negatif)  menunjukkan  bahwa konformasi  yang  terbentuk  stabil  dan  tidak
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
membutuhkan energi yang besar untuk melakukan pengikatan atau interaksi. Sedangkan nilai binding affinity yang besar menunjukkan kurang stabilnya kompleks yang terbentuk. Untuk pengikatan ligan dan  reseptor  dengan  nilai binding  affinity yang renda memiliki potensi untuk melakukan pengikatan  dengan  target  atau  reseptor  tinggi (Pujiastuti, 2017).
Pada Tabel  1. Merupakan  hasil  penambatan molekuler reseptor ER-α (PDB ID : 5W9D), ER-β (PDB  ID  :  1QKM),  dan  Her-2  (PDB  ID  :  4RJ3) dengan native ligand dari masing-masing reseptor dan ligan Eugenol serta ligan kontrol positif yang digunakan yaitu 4-hidroksitamoksifen dan Trastuzumab.
Tabel 1. Binding affinity ligan terhadap reseptor ER-α (5W9D), ER-β (1QKM), dan HER-2 (4RJ3).
Identitas PubChem Ligan Binding affinity (kkal/mol) 5W9D 1QKM 4RJ3 131704461 9XY -6,7 - - 5280961 GEN - -9,1 - 86278568 3QS - - -8,7 3314 Eugenol -5.7 -6.3 -6.3 449459 4-Hidroksitamoksifen -6,4 -5.5 - 146160902 Trastuzumab - - -8.8
Hasil  penambatan  antara  ligan  murni senyawa  cengkeh  yang  dipakai  yaitu  eugenol dengan  reseptor  ER-α  pada  konformasi  ke-1 didapatkan  nilai  RMSD  sebesar  0.000  Å  dengan energi  sebanyak  -5.7  kcal/mol,    ER-β  pada konformasi  ke-1  didapatkan  nilai  RMSD  sebesar 0.000 Å dengan energi sebanyak -6.3 kcal/mol dan Her-2  pada  konformasi  ke-1  didapatkan  nilai RMSD sebesar 0.000 Å dengan energi sebanyak - 6.3 kcal/mol yang menandakan bahwa secara teori, ligan dan reseptor yang divalidasi telah memenuhi kriteria  valid .  Tiga  parameter  yang  biasanya
dipertimbangkan saat menghitung hasil penambatan  molekuler  yaitu binding  affinity , interaksi  residual  asam  amino  yang  terlibat, dan  energi  ikatan  hidrgoen  (Ladokun et  al ., 2018).  Perlu  dilihat  visualisasi  hasil  interaksi yang  terjadi antara  ligan  dengan  residu  asam amino reseptor. Pengidentifikasian ini
menggunakan program Discovery Studio Visualizer  2020. Tabel  2. Sampai Tabel  4. Memperlihatkan hasil uji dan visualisasi interaksi tersebut.
Tabel 2. Hasil Uji In Silico Senyawa Eugenol cengkeh, dengan Senyawa Pembanding dan Native Ligand Reseptor ER-α dengan Metode Molekular Docking Autodock Vina
Ligan binding affinity (kkl/mol) RMSD (A) Residu Asam Amino Interaksi Ikatan Ligan Asli 9XY (Native Ligand) -6,7 0.000 Ser-B:464, Ser-B:463, Arg-A:436, His-B:476, Lys-B:472, Met-A:437, Arg-A:434
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Eugenol ( Syzygium aromaticum L.) -5.7 0.000 Ser-A:433, Ser-B:463, Ala-A:430, Lys-B:472, Arg-A:434, Met-A:437 4-Hidroksitamoksifen (Kontrol Positif) -6,4 0.000 Met-A:437, Lys-A:472, Arg-A:434, Arg-A:436
Tabel 3. Hasil Uji In Silico Senyawa Eugenol cengkeh, dengan Senyawa Pembanding dan Native Ligand Reseptor ER-β dengan Metode Molekular Docking Autodock Vina
Ligan binding affinity (kkl/mol) RMSD (A) Residu Asam Amino Interaksi Ikatan Ligan Asli GEN (Native Ligand) -9,1 0.000 Leu-A:298, Met-A:336, Leu-A:476, His-A:475, Glu-A:305, Leu-A:343, Met-A:340, Leu-A:339, Phe-A:356, Ala-A:302 Eugenol ( Syzygium aromaticum L.) -6.3 0.000 Met-A:295, Thr-A:299, Leu-A:301, Ala-A:302, Met-A:340, Rhe-A:377, Leu-A:380, His-A:475, Gly-A:472, Met-A:336, Leu-A:298, Ile-A:376, Ile-A:373, Phe-A:356, Leu-A:476
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
4-Hidroksitamoksifen (Kontrol Positif) -5,5 0.000 Tyr-A:488, Leu-A:477, Leu-A:476, Asp-A:489
Tabel 4. Hasil Uji In Silico Senyawa Eugenol cengkeh, dengan Senyawa Pembanding dan Native Ligand Reseptor HER-2 dengan Metode Molekular Docking Autodock
Vina Ligan binding affinity (kkl/mol) RMSD (A) Residu Asam Amino Interaksi Ikatan Ligan Asli 3QS (Native Ligand) -8,7 0.000 Lys-A:89, Gln-A:85, Leu-A:83, Ala-A:31, Val-A:18, Gly-A:13, Ala-A:144, Leu-A:134, Ile-A:10, His-A:84 Eugenol ( Syzygium aromaticum L.) -6.3 0.000 Leu-A:83, Val-A:64, Aly-A:33, Asp-A:145, Phe-A:80, Ile-A:10, Val-A:18, Ala-A:31, Leu-A:134, Ala- A: 144 Trastuzumab (Kontrol Positif) -8,8 0.000 Lys-A:89, His-A:84, Ile- A:10, Lys- A:88
Berdasarkan  hasil  uji  dan  visualisasi interaksi menunjukan bahwa pada tabel 2. Sisi aktif makromolekul ER-α dari kanker payudara
yaitu  terdapat  26  asam  amino  residu  berupa Ser395,  His398,  Pro399,  Gly400,  Lys401, Arg412,  Asp426,  Met427,  Leu429,  Ala430,
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Ser432,  Ser433,  Arg434,  Arg436,  Met437, Val458,  Tyr459,  Thr460,  Phe461,  Leu462, Ser463,  Ser464,  Leu469,  Lys472,  Asp473, His476. Residu asam amino dari ligan asli/ native ligand yang  berikatan  dengan  reseptor  ER-α yaitu  Ser-B:464,  Ser-B:463,  Arg-A:436,  His- B:476,  Lys-B:472,  Met-A:437,  Arg-A:434 sedangkan eugenol berikatan dengan residu Ser- A:433, Ser-B:463, Ala-A:430, Lys-B:472, Arg- A:434,  Met-A:437  dan 4-Hidroksitamoksifen berikatan  dengan  Met-A:437,  Lys-A:472,  Arg- A:434,  Arg-A:436.  Dari tabel  3. Sisi  aktif makromolekul ER-β dari kanker payudara yaitu terdapat  12  asam  amino  residu  berupa  Trp335, Met473,  Leu476,  Leu477,  Met479,  Cys481, Val484,  Val485,  Pro486,  Val487,  Tyr488, Asp489.  Residu  asam  amino  dari  ligan asli/ native  ligand yang  berikatan  dengan reseptor  ER-β  yaitu  Leu-A:298,  Met-A:336, Leu-A:476, His-A:475, Glu-A:305, Leu-A:343, Met-A:340,  Leu-A:339,  Phe-A:356,  Ala-A:302 sedangkan  eugenol  berikatan  dengan  residu Met-A:295, Thr-A:299, Leu-A:301, Ala-A:302, Met-A:340, Rhe-A:377, Leu-A:380, His-A:475, Gly-A:472,  Met-A:336,  Leu-A:298,  Ile-A:376, Ile-A:373,  Phe-A:356,  Leu-A:476  dan 4- Hidroksitamoksifen berikatan  dengan  Tyr- A:488, Leu-A:477, Leu-A:476, Asp-A:489. Dan dari Dari tabel 4. Sisi aktif makromolekul HER- 2  dari  kanker  payudara  yaitu  terdapat  42  asam amino  residu  berupa  Glu8,  Lsy9,  Ile10,  Gly11, Glu12,  Gly13,  Thr14,  Tyr15,  Gly16,  Val17, Val18,  Lys20,  Ala31,  Leu32,  Lys34,  Ile35, Val64,  Leu78,  Phe80,  Glu81,  Phe82,  Leu83, His84,  Gln85,  Asp86,  Lys89,  His125,  Asp127, Lys129,  Gln131,  Asn132,  Leu134,  Ala144, Asp145,  Leu148,  Ala149,  Val154,  Thr158, Glu162, Val163, Val164, Thr165.  Residu asam amino  dari  ligan  asli/ native  ligand yang berikatan  dengan  reseptor  HER-2  yaitu  Lys- A:89, Gln-A:85, Leu-A:83, Ala-A:31, Val-A:18, Gly-A:13,  Ala-A:144,  Leu-A:134,  Ile-A:10, His-A:84  sedangkan  eugenol  berikatan  dengan residu  Leu-A:83,  Val-A:64,  Aly-A:33,  Asp- A:145,  Phe-A:80,  Ile-A:10,  Val-A:18,  Ala-31, Leu-A:134,  Ala-  A:  144  dan  trastuzumab berikatan dengan Lys-A:89, His-A:84, Ile-A:10, Lys-A:88.    Hal  ini  menunjukan  bahwa  dari ketiga tabel tersebut hampir semua residu asam amino  dari  ligan  yang  digunakan  bekerja  pada sisi aktif dari reseptor pada kanker payudara.
Obat 4-Hidroksitamoksifen
dan trastuzumab
sebagai
kontrol positif
mendapatkan hasil binding affinity -6.4 dan -8.8 untuk  reseptor  ER-α  dan  HER-2.  Hal  tersebut menunjukan  bahwa  senyawa  eugenol  memiliki hasil lebih rendah dari pada kedua pembanding pada  reseptor  tersebut.  Sehingga  eugenol  tidak lebih  berpotensi  dibanding  kontrol  positif  pada kedua  reseptor.  Eugenol  sebagai  senyawa identitas  dalam  cengkeh  diprediksi  memiliki potensi lebih dari kontrol positif 4- hidroksitamoksifen pada  reseptor  ER-β  dengan hasil  lebih  tinggi  dibanding  ligan  pembanding yang  memiliki  energi  ikatan  rendah  sehingga dapat diprediksi eugenol memiliki aktivitas lebih potensial  sebagai  antikanker  terhadap  reseptor ER-β dibandingkan dengan ligan
pembandingnya yaitu 4-hidroksitamoksifen secara in silico.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa ligan eugenol sebagai senyawa identitas dalam cengkeh berpotensi  secara in  silico sebagai  antikanker terhadap  reseptor  ER-α,  ER-β  dan  Her-2  pada kanker  payudara  dengan  hasil  interaksi  diperoleh nilai  RMSD  0,000  Å  pada  setiap  reseptor  dan binding  affinity secara  berturut-turut  yaitu  -5.7 kkal/mol, -6.3 kkal/mol, dan -6,3 kkal/mol

## SARAN
Penelitian ini merupakan hasil identifikasi  aktivitas  biologis  dari  senyawa eugenol  cengkeh  dengan  metode  pemodelan terkomputerisasi. Sehingga perlu dilakukan uji in vitro dan in vivo untuk mengetahui aktivitas senyawa  eugenol  cengkeh  erhadap  kanker payudara.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Sharif.  2013. Eugenol  Triggers  Apoptosis  in Breast Cancer Cell Through E2F1/Survivin Down Regulation . BMC Cancer. 13: 600.
American  Cancer  Society.  2017. Breast  Cancer Treatment  Guideline. Atlanta:  American Cancer Society.
Anggorowati,  L.  2013.  Faktor  Resiko  Kanker
Payudara Wanita. Jurnal Kesehatan Masyarakat. Universitas  Negeri  Semarang. 8 (2) (2013) 121-126.
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Franklin, M. C., Carey, K. D., Vajdos, F.F., Leahy, D. J., Mdevos, A. M., dan Sliwskowski, M. X.  2004. Insight  into  ErbB  signaling  from the  structure  of  the  ErbB2-pertuzumab complex . Cancer Cell, 5: 317 -28.
Ikeda  K,  Ogawa  S,  Tsukui  T,  Horie-Inoue  K, Ouchi  Y,  Kato  S,  Muramatsu  M,  Inoue  S. 2004. Protein  phosphatase  5  is  a  negative regulator  of  estrogen  receptor-mediated transcription. Mol  Endocrinol  18:  1131- 1143.
Ladokun,  O.  A.,  Abiola,  A.,  Okikiola,  D.,  and Ayodeji,  F.  2018. GC-MS  and  Molecular Docking  Studies  of  Hunteria  umbellata Methanolic extract as a potent anti-diabetic.
Elsevier. 13: 1-8.
Louie, G. V., Baiga, T. J., Bowman, M. E., Eduka,
T.  K.,  Taylor,  J.  H., Spassova,  S.  M.,
Pichersky,  E.,  Noel,  J.  P.  2007.  Strucutre and  Reaction  Mechanism  of  Basil  Eugenol Synthase. PLoS ONE 2(10): e993.
Lykkesfeldt, A. E., Madsen, M. W., dan Briand, P. 1994. Altered  Expression  of  Estrogen Regulated  Genes  in  a  Tamoxifen  Resistant and ICI 164,384 and ICI 182,780 Sensitive Human Breast Cancer Cell Line, MCF7/TAMR-1. Cancer Research, 54: 1587-
1595.
Prianto, H. Rurini, R. Unggul J. W. 2013. Isolasi dan  Karakterisasi  dari  Minyak  Bunga Cengkeh  ( Syzigium  aromaticum )  Kering Hasil Destilasi Uap. Kimia Student Journal . Universitas  Brawijaya  Malang.  1(2):  269- 275.
Pujiastuti,  M.  W.  dan  Sanjaya,  I.  G.  M.  2017. Penentuan  Aktivitas  Senyawa  Turunan Mangiferin  Sebagai  Antidiabetes  Pada Diabetes  Melitus  Tipe  2  Secara  In  Silico. UNESA Journal of Chemistry . Volume 6 (3): 172:176.
Ring,  A.,  Dowset,  M.  2004. Mechanism  of Tamoxifen  Resistance .  Endocrine  Related Cancer, 11: 643-648.
Wind,  N.  S.,  dan  Holen,  I.  2011. Multidrug Resistance in Breast Cancer: From In Vitro Models  to  Clinical  Studies. International Journal of Breast Cancer, 1-10.