e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya  Perairan Volume II No 1 Oktober 2013 ISSN: 2302-3600

## IMUNOGENISITAS HEAT KILLED VAKSIN INAKTIF
Aeromonas salmonicida PADA IKAN MAS (Cyprinus carpio)
Fredi Wintoko * , Agus Setyawan † ‡ , Siti Hudaidah † dan Mahrus Ali †

## ABSTRAK
Aeromonas  salmonicida merupakan  bakteri  penyebab  penyakit furunculosis dan carp erytrodermatitis. Saat ini sudah dikembangkan vaksin inaktif A. salmonicida dengan formalin yang memiliki imunogenisitas yang cukup tinggi. Vaksin inaktif dengan  metode  lain  perlu  dilakukan,  salah  satunya  inaktivasi  dengan  pemanasan (heat killed) . Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui imunogenisitas heat killed vaksin A.  salmonicida pada  ikan  mas (Cyprinus  carpio). Penelitian  telah dilaksanakan  pada  bulan  Oktober  sampai  Desember  2012,  di  Laboratorium Budidaya  Perikanan,  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Lampung.  Penelitian  ini dilakukan dengan membandingkan antara pemberian vaksin dan tanpa pemberian vaksin.  Bakteri A.  salmonicida diinaktifasi  dengan  pemanasan  pada  suhu  100ºC selama  1  jam.  Uji  viabilitas  dilakukan  pada  media  GSP (Glutamat  Starch Pseudomonas ) untuk memastikan bakteri sudah inaktif. Konsentrasi vaksin diukur dengan spektofotometer ( 𝜆 =625 nm) dan dibandingkan dengan standar Mc Farland. Vaksinasi dilakukan dua tahap secara injeksi intraperitoneal, vaksinasi I dilakukan dengan konsentrasi 10 7 sel/ikan dengan volume 0,1 ml/ikan. Vaksinasi II dilakukan 8  hari  setelahnya  dengan  konsentrasi  yang  sama.  Pengambilan  darah  untuk pengamatan hematologi dilakukan sebelum vaksin, 7 hari setelah vaksinasi I, 7 hari setelah  vaksinasi  II.  Ikan  yang  divaksinasi  menunjukan  adanya  peningkatan imunogenisitas yang ditandai dengan peningkatan nilai titer antibodi, total leukosit, dan korelasi negatif antara total leukosit dengan hematokrit.
Kata  kunci: Aeromonas  salmonicida ,  vaksin,  titer  antibodi,  total  leukosit, hematokrit.
Pendahuluan Bakteri Aeromonas salmonicida merupakan jenis bakteri Aeromonas sp ., yang  diindikasi  mampu  menyerang semua  spesies  ikan  baik  air  tawar
* Mahasiswa Jurusan Budidaya Perairan Universitas Lampung
† Dosen Jurusan Budidaya Perairan Universitas Lampung
‡ Alamat Korespondensi: agus.setyawan[at]fp.unila.ac.id
maupun  air  laut.  Bakteri  ini    mampu menginfeksi  spesies  ikan  air  tawar golongan cyprinid misalnya  ikan  mas ( Cyprinus  carpio )  dan  penyakit  yang ditimbulkan yaitu carp erytrodermatitis
(Irianto, 2005). Dampak negatif serangan bakteri A. salmonicida terhadap sistem budidaya mengakibatkan menurunnya status
kesehatan  ikan  sampai  menyebabkan kematian. Kualitas dan kuantitas produk budidaya akan menurun serta berimbas kepada  menurunnya  produksi  serta kerugian secara ekonomi.
Pengendalian penyakit carp erytrodermatitis memerlukan
pencegahan  penyakit  yang  aman,  baik bagi  ikan,  manusia  dan  lingkungan, salah  satunya  dengan  penggunaan vaksin.  Vaksinasi  menjadi  cara  yang paling efektif untuk pencegahan penyakit.  Keberhasilan  vaksinasi  pada ikan dapat  dibuktikan pada tahun 1993 di  Norwegia,  vaksin A.  salmonicida yang  digunakan  mampu  menurunkan wabah penyakit furunculosis dan penggunaan  antibiotik  yang  semula mencapai  puluhan  ton  per  tahun menjadi hanya beberapa ratus kilogram saja (Soeripto, 2002).
Penelitian  sebelumnya  menunjukan bahwa  vaksin A.  salmonicida yang diinaktivasi menggunakan 1% formalin memiliki  imunogenesitas  yang  cukup tinggi pada ikan mas (Cyprinus carpio) yang  ditunjukan  dengan  reaksi  titer antibodi  mencapai  2 7 (Setyawan  dkk., 2012). Belum diketahui imonogenisitas vaksin  inaktif A.  salmonicida dengan pemanasan  ( heat  killed ) pada ikan mas yang  diperoleh  dengan  cara  bakteri diinaktifasi  melalui  pemanasan  air sampai 100ºC. Bakteri yang diinaktifasi dengan  pemanasan  hanya  mengandung polisakarida  (karbohidrat)  karena  saat pemanasan  bagian  lipid  terhidrolisis yang  disebut  sebagai  antigen  O A. salmonicida .  Antigen  O  merupakan penyusun  senyawa  lipopolisakarida yang  mampu  memunculkan  respon kekebalan  pada  hewan.  Beberapa
penelitian menunjukan adanya
peningkatan imunogenisitas vaksin yang  diinaktivasi  dengan  pemanasan antara  lain  vaksin Streptococcus sp . pada  ikan  nila (Oreochromis  niloticus) (Purwaningsih  dan  Taukhid,  2010), vaksin Ichthyophthirius multifiliis pada ikan  jambal  siam (Pangasius  sutchi) (Syawal dan Siregar, 2010), dan vaksin Aeromonas  hydrophila pada  ikan  lele dumbo (Clarias  gariepinus) (Kamiso dkk.,  1997).  Oleh  karena  itu  perlu dilakukan  penelitian  imunogenisitas heat killed vaksin inaktif A. salmonicida pada ikan mas.

## Bahan dan Metode
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan Oktober-Desember 2012 di Laboratorium Budidaya Perikanan, Universitas Lampung. Penelitian dilakukan dengan dua perlakuan, yakni kontrol  (tanpa  vaksin)  dan  perlakuan pemberian  vaksin.  Semua  perlakuan dilakukan  tiga  kali  ulangan.  Parameter yang  diamati  meliputi:  titer  antibodi, jumlah  total  leukosit,  nilai  hematokrit, dan kualitas air meliputi suhu, pH, dan oksigen  terlarut.  Akuarium  berukuran 60  x  40  x  40  cm  sebanyak  6  buah  dan ikan  mas  dengan  berat  ±  30  gram  (10 ekor/  akuarium)  digunakan  dalam penelitian  ini.  Pengaruh  perlakuan terhadap parameter pengamatan dianalisis  dengan  menggunakan  t-tes dengan signifikasi 95%.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil uji titer antibodi (Ab) menunjukan bahwa  ikan  yang  divaksinasi  dengan antigen  O A.salmonicida memiliki respon  imun  adatif  yang  lebih  tinggi dibanding  ikan  yang  tidak  divaksinasi. Nilai  rata-rata  titer  antibodi  tertinggi setelah  vaksinasi  ke-2  sebesar  6,  dan 2,33  pada  ikan  yang  tidak  divaksinasi
(dan Gambar 1). Hasil t-tes pada selang kepercayaan  95%  menunjukkan  bahwa vaksin antigen O A.salmonicida
memberikan  pengaruh  nyata  terhadap titer  antibodi.  Hal  ini  menunjukan
vaksin  antigen  O A . salmonicida yang diinduksi  ke  dalam  tubuh  ikan  melalui injeksi mampu membentuk dan meningkatkan  produksi  antibodi  pada ikan uji.
Gambar  1 . Nilai  Rata-rata  Titer  Antibodi  Ikan  Mas  ( Cyprinus  carpio )  Sebelum Vaksinasi,  Satu  Minggu  Setelah  Vaksinasi  I,  satu  Minggu  Setelah Vaksinasi II.
Figure   1. The mean value of antibody titer of common carp before vaccination,
one week after the vaccination I, one week after the vaccination II. Antibodi  merupakan  hasil  respon  dari sistem  imunitas  berupa  pertahanan humoral, berupa protein yang bentuknya  menyerupai  Y  ( roughly  Y- shape )  yang  digunakan  sebagai  sistem imun untuk mengidentifikasi, menetralisasi  dan  membunuh  benda asing  ataupun  patogen  seperti  bakteri dan virus (Thomas, 2004).
Total  leukosit  yang  meningkat  pada ikan  yang  divaksinasi  menunjukan bahwa  vaksin  yang  masuk  ke  dalam tubuh  ikan  memberikan  efek  positif terhadap  peningkatan  jumlah  total leukosit  dalam  darah.  Nilai  rata-rata tertinggi  setelah vaksinasi  ke-2 sebesar 74,5  x  10 3 sel/mm 3 pada  ikan  yang divaksinasi,  dan  40,7  x  10 3 sel/mm 3 pada ikan yang tidak divaksin (Gambar 2). Hasil t-tes pada selang kepercayaan 95%  menunjukkan  bahwa  vaksin
antigen  O A.  salmonicida memberikan pengaruh  nyata  terhadap  total  leukosit.
Peningkatan total leukosit mengindikasikan adanya respon perlawanan  tubuh  terhadap  antigen penyebab  penyakit  (Alamanda  dkk., 2007).  Meningkatnya  total  leukosit memperlihatkan peningkatan kekebalan tubuh yang ditandai dengan peningkatan  aktifitas  sel  fagosit  yang berfungsi  untuk  melakukan  fagositosis terhadap  benda  asing  yang  masuk  ke dalam tubuh ikan. Fagositosis merupakan langkah awal untuk mekanisme respon imunitas, berikutnya adalah  terbentuknya  respon  spesifik yang berupa antibodi, sedangkan peningkatan  proses  fagositosis  ini menunjukan adanya peningkatan kekebalan tubuh (Zainun, 2007).
1±1 2±1 2.33±0,58 1.33±0,58 3.67±0,58 6±1 0 1 2 3 4 5 6 7 SEBELUM VAKSIN 7 HARI SET ELAH VAKSIN I 7 HARI SET ELAH VAKSIN II PERLAKUAN H A S IL T IT E R A N T IB O D Y ( 2 L o g Y ) A B
Gambar  2.  Nilai  Rata-rata  Total  Leukosit    Ikan  Mas  ( Cyprinus  carpio )  Sebelum Vaksin,  Satu  Minggu  Setelah  Vaksinasi  I,  Satu  Minggu  Setelah Vaksinasi II.
Figure   2. The mean value of leucosite before vaccination I, one week after the vaccination II.
Persentase  rata-rata  nilai  hematokrit pada  ikan  yang  divaksinasi  sebesar 24,6%  setelah  vaksinasi  ke-2,  namun pada  ikan  yang  tidak  divaksin  sebesar 34,7%  (Gambar  3).  Hasil  t-tes  pada selang  kepercayaan  95%  menunjukkan bahwa vaksin antigen O A. salmonicida memberikan  pengaruh  nyata  terhadap persentase  nilai  hematokrit.  Penurunan nilai  hematokrit  pada  ikan  yang divaksinasi menunjukan adanya perubahan  fisiologis  akibat  vaksinasi dalam  tubuh  ikan.  Menurunnya  kadar hematokrit  dapat  dijadikan  indikator bahwa vaksin yang diberikan pada ikan memiliki  hubungan  korelasi  positif dalam  peningkatan  total  leukosit  pada tubuh  ikan.  Dalam  hal  ini  peningkatan total  leukosit  akibat  pemberian  vaksin, secara tidak langsung dapat
meningkatkan  respon  imun  alami  yang ditandai dengan peningkatan sel fagosit berupa  monosit  dan  limfosit.  Sel–sel fagosit  tersebut  memiliki  hubungan korelasi terhadap uji titer antibodi yang telah  dilakukan,  yaitu  sel  fagosit berfungsi  sebagai  pengenalan  antigen atau  vaksin  yang  diberikan  pada  tubuh ikan. Dengan demikian sel fagosit yaitu limfosit  dapat  mengenali  antigen,  dan dapat merangsang sel memori, dan sel B untuk  menghasilkan  antibodi,  yang peningkatannya  terlihat  pada  reaksi aglutinasi  dengan  uji  titer  antibodi. Antibodi  tidak  saja  meningkatkan pertahanan humoral tetapi juga pertahanan  seluler  sehingga  hasil  kerja masing-masing  maupun  hasil  kerja antara  pertahanan  humoral  dan  seluler meningkat (Soeripto, 2002).
40.5±550.7 40.6±585.9 40.7±680.6 40.8±692.8 57.8±2608.3 74.5±3897.4 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 SEBELUMVAKSIN 7 HARI SET ELAH VAKSIN I 7 HARI SET ELAH VAKSIN II PERLAKUAN J U M L A H T O T A L L E U K O S IT (1 0 ³ se l/ m m ³) A B
Gambar  3.  Nilai  Rata-rata  Persentase  Hematokrit  Ikan  Mas  ( Cyprinus  carpio ) Sebelum  Vaksin,  Satu  Minggu  Setelah  Vaksinasi  I,  Satu  Minggu Setelah Vaksinasi II.
Figure      3.  The  mean  of  the  percentage  hematocrit  profile  of  the  common  carp before the vaccination, one week after the vaccination I, one week after the vaccination II.
Parameter kualitas air pada media ikan penelitian masih sesuai dengan kebutuhan  optimum  pada  kehidupan ikan  mas,  dengan  rata-rata  oksigen terlarut  5,2–6,8  ppm,  suhu  air  berkisar 25-27  ºC,  pH  air  berkisar  7,0–7,5.  Hal ini  sesuai  dengan  kisaran  parameter
kualitas  air  yang  dinyatakan  (Cholik dkk., 2005) yaitu pada pagi dan sore hari kualitas  air  yang  dibutuhkan  untuk oksigen terlarut lebih dari tiga, suhu 25- 30 ºC, dan pH 7-8.
Tabel 4. Parameter Kualitas Air Dalam Penelitian Yang Dibandingkan Dengan Literature.
Table 4. (The Parameter quality of the water in the research compared with the literature)
Perlakuan Parameter Pagi Sore DO (ppm) Suhu ( 0 C) pH DO (ppm) Suhu ( 0 C) pH A : Kontrol 5.5 25 – 27 7.3 5.2 25 – 27 7.0 B : Vaksin 6.8 25 – 26 7.2 6.5 25 – 27 7.5 Baku Mutu *) > 3 25 – 30 7 – 8 > 3 25 – 30 7 – 8 *) Cholik, 2005.
Penelitian  ini  menguatkan  penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Kamiso dkk., (1997); Purwaningsih dan
Taukhid    (2010);  Syawal  dan  Siregar,
(2010), bahwa vaksin yang diinaktivasi
dengan heat  killed untuk  pencegahan penyakit  pada  ikan  yang  disebabkan bakteri, mampu menstimulasi kekebalan  pada  tubuh  ikan  sehingga
33.3±1.53 33.7±0.92 34.7±1.29 33.5±1.25 30.9±1.55 24.6±0.45 0 5 10 15 20 25 30 35 40 SEBELUM VAKSIN 7 HARI SET ELAH VAKSIN I 7 HARI SET ELAH VAKSIN II PERLAKUAN H A S IL P E N G A M A T A N H E M A T O K R IT ( %) A B
dapat  meningkatkan  imonogenisitas pada ikan.

## Daftar Pustaka
Alamanda,  I.E.,  Handajani,  N.S.,  dan
Budiharjo,  A.  2007.  Penggunaan Metode Hematologi dan Pengamatan  Endoparasit  Darah untuk  Penetapan  Kesehatan  Ikan Lele  Dombo  ( Clarias  gariepinus ) di Kolam Budidaya Desa Mangkubumen  Boyolali.  FMIPA Universitas Sebelas Maret. Surakarta. Hal: 34-38. Cholik, F., Jagatraya, A.G., Poernomo, R.P., dan Jauzi, A. 2005.
Akuakultur .  Masyarakat  Perikanan
Nusantara.  Taman  Akuarium  Air Tawar. Jakarta. 415 hlm. Irianto, A.  2005. Patologi Ikan Teleostei . Universitas Gajah Mada.
Yogyakarta. 256 hlm. Kamiso, H. N, Triyanto dan Hartati, S. 1997. Uji Antigenisitas dan Efikasi Vaksin Aeromonas hydrophila pada Lele Dumbo. Jurnal Perikanan 1(2): 9-16.
Purwaningsih,  U,  dan  Taukhid  2010. Vaksin  Anti Streptococus spp.
Inaktivasi  melalui Heat  Killed untuk Pencegahan Penyakit
Streptococcosis pada  Ikan  Nila ( Oreochromis niloticus ). Prosiding: Forum Inovasi Teknologi Akuakultur . Balai  Riset  Perikanan Air  Tawar.  Sempur.  Bogor.  Hal. 901-904. Setyawan,  A.,  Hudaidah,  S.,  Ranopati, Z.,Z., dan Sumino. 2012. Imunogenisitas Vaksin Inaktif Whole Cell Aeromonas salmonicida pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio ). Aquasains 1(1): 17–21. Soeripto.  2002.  Pendekatan  Konsep Kesehatan Hewan melalui Vaksinasi. Litbang Pertanian , 21(2): 48-55. Syawal,  H  dan  Siregar,  Y.I.  2010. Imunisasi Ikan Jambal Siam dengan  Vaksin Ichthyophthirius multifilis . FPIK 11 (3): 163-167.
Thomas, P. 2004. Bacteria and Viruses . Lucent  Library  of  Science  and
Technology. USA. p 225–230. Zainun, Z. 2007. Pengamatan Parameter Hematologis  pada  Ikan  Mas  yang Diberi Immunostimulan. Balai Besar Pengembangan Budidaya Air Tawar, Sukabumi. Hal: 45-49