## KADAR FENOLIK DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL
RUMPUT LAUT COKLAT ( Padina australis )
Tri Saptari H 1 ., Triastinurmiatiningsih 1 , Bina Lohita S 2 ., Indah Nur Sayyidah 1
1 Program Studi Biologi FMIPA Universitas Pakuan.
2 Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Pakuan.
Email : trisaptari@unpak.ac.id

## ABSTRAK
Rumput laut coklat Padina australis merupakan salah satu sumber daya alam laut yang keberadaannya  sangat  melimpah  di  perairan  pantai  Bayah,  Banten  Indonesia. Kandungan  senyawa  fenolik  dan  turunannya  (flavonoid)  berhubungan  dengan aktivitasnya  sebagai  antibakteri  dan  antioksidan.  Fenolik  dianggap  sebagai  molekul dengan potensi tertinggi untuk menetralkan radikal bebas. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan  kadar  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol P.  australis menggunakan  pereaksi Follin-ciocalteu dan  1,1-diphenyl-2-picryl  hydrazyl  (DPPH) ekstrak  etanol P.  australis .  Hasil  penelitian  menunjukkan  kadar  fenolik  sebesar 42,62 mg  SAG/g  serbuk  dan  pada  konsentrasi  5000  ppm  menghambat  sebesar 66,  01  % radikal bebas DPPH.
Kata kunci: Padina  australis, kadar  fenolik,  aktivitas  antioksidan, Follin-ciocalteu ,

## DPPH

## PHENOLIC CONTENT AND ANTIOXIDANT ACTIVITY OF Padina australis BROWN SEAWEED ETHANOL EXTRACT ABSTRACT
Padina australis brown seaweed is one of marine natural resources which is abundant in the  Bayah  coastal  waters,  Banten  Indonesia.  The  chemical  content  of  phenolic  and  its derivatives  (flavonoid)  of  this  seaweed are  associated  with  their  activities  as antibacterial and antioxidant. Phenolics are regarded as the molecules with the highest potential to neutralize free radicals. This study was carried out to determine the phenolic content  and  antioxidant  activity  of P.  australis extract  use Follin-ciocalteu and  1,1- diphenyl-2-picryl  hydrazyl  (DPPH)  reagent. The  result  of  phenolic  content  was  42.62 mg GAE and at 5000 ppm concentrations it inhibit 66.01 % DPPH free radicals.
Keywords : Padina australis, phenolic content, antioxidant activity, Follin-ciocalteu ,

## DPPH
PENDAHULUAN Rumput laut ( seaweed ) merupakan salah  satu  sumber  daya  hayati  yang sangat  melimpah  di  perairan  Indonesia yaitu sekitar 8,6% dari total biota di laut (Dahuri,  1998).  Rumput  laut  coklat mengandung  senyawa  aktif  yang  dapat
berfungsi  sebagai  antioksidan  alami diantaranya phlorotannin dari  golongan fenol  dan  pigmen fucoxanthin serta xantofil (Peng et  al .,  2011). Padina australis merupakan  salah  satu  rumput laut  coklat  yang    memiliki  bentuk lembaran  atau  filamen  yang  lebar
berwarna cokelat transparan (Kemenangan et al., 2017). Penelitian P. australis yang  pernah  diteliti  antara  lain aktivitas antibakteri ekstrak etanol terhadap Staphylococcus aureus , Streptococcus  pneumoniae , Escherichia coli dan Neisseria gonorrhoeae . Aktivitas antioksidan ekstrak dinyatakan aktif dengan dekolorisasi larutan metanol-DPPH (Hongayo et al. , 2012). Penelitian  Haryani et  al., (2008) menunjukkan  bahwa P.  australis dapat menghambat pertumbuhan bakteri E. coli . Hambatan  terhadap  pertumbuhan  bakteri karena ekstrak etanol mengandung senyawa  terpenoid,  steroid,  alkaloid  dan fenolik.  Senyawa  fenolik  merupakan molekul  yang  dapat  bertindak  sebagai antioksidan  untuk  mencegah  penyakit jantung,  anti  radang,  anti  kanker  dan antidiabetes, dan
antimutagenesis. Penggunaan makanan dari produk tanaman seperti buah-buahan, sayuran dan kacang-kacangan  sebagian  besar  terkait dengan  adanya  senyawa  fenolik  pada tanaman tersebut (Khoddami et al., 2013). Senyawa fenolik memiliki cincin aromatik dengan  satu  atau  lebih  gugus  hidroksi (OH-)  dan  gugus-gugus  lain  penyertanya. Senyawa  ini  diberi  nama  berdasarkan nama  senyawa  induknya  yaitu  fenol. Senyawa  fenol  kebanyakan  memiliki gugus  hidroksi  lebih  dari  satu  sehingga disebut sebagai polifenol. Beberapa senyawa yang termasuk dalam kelompok fenolik adalah fenol sederhana,  polifenol,  kumarin,  tannin,
saponin, dan flavonoid. Senyawa
tersebut  biasanya  berada  dalam  bentuk glikosida atau ester  pada  tanaman (Proestos et al. , 2006).
Salah  satu  analisis  penentuan  kadar fenolik  menggunakan  pereaksi  Folin- Ciocalteu  (FC).  Reaksi  kolorimetri  yang digunakan  pada  analisis  dengan  pereaksi FC menggunakan senyawa standar, kemudian  diukur  konsentrasi  total  gugus hidroksi  fenolik  pada  ekstrak  tanaman.
Polifenol  dalam  ekstrak  tanaman  bereaksi dengan pereaksi FC membentuk kompleks dari  kromofor  membentuk  kompleks fosfotungstatfosfomolibdenum  berwarna biru.  Absorpsi  maksimum  berhubungan dengan  larutan  basa  dan  konsentrasi senyawa  fenolik  (Bralainski et  al .  2013). Metode  FC  ini  mudah,  sederhana, menggunakan  peralatan  yang  umum digunakan  dan  memberikan  hasil  data yang berkorelasi antara nilai di dalam satu sampel (Pelozo et al ., 2008).
Efek  berbahaya  dari  radikal  bebas menyebabkan  potensi  kerusakan  biologis ( oxidative  stress) sehingga  dapat  merusak jaringan  lipid,  protein  atau  DNA  seluler dan menimbulkan sejumlah penyakit pada manusia  serta  dalam  proses  penuaan (Valko et  al. ,  2006).  Menurut  Halliwell dan Gutteridge (2000) antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat spesies oksigen reaktif/spesies  nitrogen  aktif  (ROS/RNS) dan  juga  radikal  bebas  sehingga  dapat mencegah penyakit-penyakit yang dihubungkan dengan radikal bebas seperti karsinogenesis, kardiovaskular dan penuaan dini. Beberapa penelitian menunjukkan  penggunaan  DPPH  untuk metode  penangkal  radikal  mempunyai keuntungan  yaitu  mudah  digunakan, tingkat  sensitivitas  tinggi,  dan  dapat menganalisis  sejumlah  besar  sampel dalam jangka waktu  yang singkat (Kim et al. , 2002). DPPH merupakan radikal yang stabil  dan  digunakan  untuk  menskrining beberapa  senyawa  metabolit  sekunder seperti dibawah ini (Gambar 1).

## METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Mei  -  Juli  2017  di  Laboratorium Biologi, Laboratorium Farmasi dan
Laboratorium  Kimia  FMIPA  Universitas
Pakuan.
Gambar 1. Struktur kimia senyawa fenoli
1-10 (Brighente et al ., 2007) Alat dan Bahan Alat yang digunakan dalam
penelitian  ini,  antara  lain,  kertas  saring, corong,  botol  gelap, rotary  evavorator , cawan  uap,  timbangan  analitik, grinder , alat-alat  gelas, moisture  balance dan spektrofotometer UV-Vis .
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  rumput  laut P. australis dari  perairan  Pantai  Bayah (Banten), etanol 96%, asam galat, Na 2 CO 3 7,5%,  asam  askorbat,      metanol,  pereaksi Follin-Ciocalteu  dan  DPPH.  Bahan  kimia diperoleh dari Sigma-Aldrich .
Pembuatan Simplisia Padina australis P. australis yang telah dicuci bersih, ditiriskan  untuk  membebaskan  sisa-sisa air  cucian,  kemudian  diangin-anginkan. Kemudian  dikeringkan  dalam  oven  pada suhu 50° C. Dihaluskan menggunakan alat ( grinder ) hingga menjadi serbuk. Diperoleh simplisia kering.
Susut pengeringan dihitung dengan rumus:

## Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air simplisia dilakukan  dengan  menggunakan  alat
moisture  balance dengan  menimbang kurang  lebih  satu  gram  serbuk  simplisia (DepKes RI, 1979).
Pembuatan  Ekstrak Padina  australis
(Depkes, 1995)
Ditimbang  150  g  serbuk  simplisia kemudian dimaserasi menggunakan pelarut  etanol  96%  sebanyak  3,5  L hingga  warna  konstan  dan  dikocok selama  10  menit  dalam  rentang  1  jam selama 5 kali sehari, agar massa bioaktif dapat  keluar dari thallus nya  yang padat. Kemudian  maserat  disaring,  diperoleh filtrat ekstrak cair etanol. Ekstrak cair di evaporasi menggunakan rotary
evavorator pada  suhu  45 0 C  sampai dihasilkan  ekstrak  kental.  Rendemen ekstrak dihitung dengan  rumus :

## Pembuatan  Larutan  Induk  Asam  Galat 100 ppm
Ditimbang  100  mg  asam  galat dimasukkan  kedalam  labu  ukur  100  mL, kemudian  dilarutkan  dengan  aquadest sampai tanda batas (1000 ppm). Untuk  mendaptkan  larutan  induk  asam galat  dengan  konsentrasi  100  ppm, dilakukan  dengan  cara  memipet  10  mL asam  galat  (100  ppm),  dimasukkan kedalam labu ukur 100 mL dan dilarutkan kedalam larutan aquadest sampai  tanda  batas.  Ditentukan  panjang gelombang maksimum dan waktu inkubasi optimum dari asam galat.

## Pembuatan Deret Standar Asam Galat
Dibuat  deret  standar  asam  galat konsentrasi  1,  2,  3,  4  dan  5  ppm  dari larutan induk asam galat 100 ppm dengan cara  dipipet  masing-masing  0,1  ;  0,2 ; 0,3 ; 0,4 dan 0,5 mL. kemudian masing- masing  dimasukkan  dalam  labu  ukur 10  mL,  ditambahkan  500  µL  pereaksi Follin-Ciocalteu  lalu  dikocok  hingga homogen  kemudian  ditambahkan  aquades
Susut pengeringan= Berat awal - Berat akhir
Berat awal
×100%
Rendemen ekstrak = Berat ekstrak yang diperoleh Berat awal simplisia ×100%
hingga tanda batas dan dikocok hinga homogen.
Penetapan Kadar Fenolik Total Penetapan kadar fenolik menggunakan  metode  Folin-Ciocalteu dengan  modifikasi  (Brighente et  al ., 2007).  Pada  penelitian  ini,  campuran reaksi terdiri dari 10 mg ekstrak dalam 1,0
L aquadest, ditambahkan 500 µL pereaksi Follin-Ciocalteu. Setelah dikocok homogen  kemudian  ditambahkan  4  mL Na 2 CO 3 7,5%,  dikocok  selama  1  menit. Campuran diukur pada panjang gelombang  maksimum  dan  diinkubasi pada waktu optimum (dilakukan
penentuan  sebelumnya).  Kurva  kalibrasi menggunakan  asam  galat  100  ppm,  dan hasil  dinyatakan  dalam  g/100g  ekstrak (%).
Ditentukan  kurva  standar,  regresi linier  y  =  bx  +  a  dibuat  berdasarkan  data absorbansi  dan  konsentrasi  dari  larutan standar, dimana:
x : konsentrasi sampel  (mg/L)
y : absorbansi sampel
b : intersept dari kurva standar a : slope standar dari kurva standar Kadar polifenol total dihitung menggunakan rumus berikut: Keterangan: Vs : Volume (mL) C  : Kadar total polifenol (ppm) Fp : Faktor pengenceran B  :  Bobot  ekstrak  yang  digunakan (gram)
Uji Aktivitas  Antioksidan
Metode
DPPH
Aktivitas  antioksidan  ekstrak P.
australis ditentukan dengan metode Brand-Williams et  al .  (1995)  dengan beberapa  modifikasi.  Sebanyak  10.000 ppm  ekstrak  etanol P.  australis dibuat konsentrasi  312,5  ;  625  ;  1250  ;  2500  ; 5000 µl/mL. Dipipet masing-masing 3 mL
larutan  ekstrak  dan  ditambahkan  1  mL larutan  DPPH  1  mM  dalam  metanol. Campuran dikocok dan didiamkan selama waktu  optimum  dan  diukur  pada  panjang gelombang  optimum.  Digunakan  larutan standar  asam  askorbat  dengan  deret larutan  0,625  ;  1,25;  2,5  ;  5  dan  10 µL/mL.  Dipipet  3  mL  masing-masing konsentrasi,  ditambahkan  1  mL  larutan DPPH  1  mM,  kemudian  ditambahkan metanol  p.a  sampai  batas  (10  mL),  dan dihomogenkan  selama  waktu  optimum pada  suhu  kamar.  Nilai  persentase hambatan terhadap DPPH dihitung menggunakan rumus berikut :
Nilai  IC 50 (Inhibition  Concentration  50) diperoleh  dari  perpotongan  garis  antara 50% daya hambat dengan sumbu konsentrasi menggunakan persamaan linier  (y  =  bx  +  a),  dimana  y  =  50  dan  x menunjukkan IC 50 (Windono et al., 2004). -

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Serbuk Simplisia Padina autralis P. australis yang digunakan diperoleh  dari  pantai  Bayah,  Banten sebanyak  4600  g  setelah  melalui  proses pembuatan  serbuk  simplisia  dan  diayak menggunakan mesh 40 diperoleh sebanyak  925  g  dengan  rendemen  yaitu 80%.  Serbuk  simplisia  yang  didapat berwarna  kecoklatan  serta  memiliki  bau yang khas (Gambar 2).
Gambar 2. Serbuk simplisia P.
australis
Analisis Karakteristik Simplisia Penetapan Kadar Air
Kadar polifenol total= Vs mL x C ppm x Fp x 10 -6
B (g) ×100% % inhibisi  = Absorbansi blanko-Absorban sampel Absorbansi blanko ×100%
Penetapan  kadar  air  berguna  untuk memberikan batasan minimal atau rentang tentang  besarnya  kandungan  air  di  dalam bahan.  Penetapan  kadar  air  dilakukan menggunakan  alat moisture  ballance.
Semakin  besar  kadar  air  yang  diperoleh maka semakin banyak pula
mikroorganisme  yang  mungkin  tumbuh dan  akan  meyebabkan  kerusakan  pada simplisia  tersebut.  Penghilangan  kadar  air hingga  jumlah  tertentu  berguna  untuk memperpanjang  daya  tahan  simplisia selama  proses  penyimpanan  (Depkes  RI, 2000).  Dari  hasil  penetapan    kadar  air serbuk  simplisia P.  australis didapatkan rata-rata  sebesar  4,26%,  Hasil  tersebut memenuhi  syarat  dimana  syarat  kadar  air tidak lebih dari 10 % (Depkes RI, 1995).
Rendemen Ekstrak Padina australis Ekstrak P.  australis didapat  dengan cara  ekstraksi  menggunakan  metode maserasi.  Metode  maserasi  merupakan suatu  metode  pemisahan  dengan  cara penyarian  yang  sederhana  dilakukan dengan  cara  merendam  serbuk  simplisia dalam  cairan  penyari.  Maserasi  bertujuan untuk  menghindari  terjadinya  kerusakan terhadap  komponen  organik  penyusun yang  tidak  tahan  terhadap  panas  dan memudahkan penarikan senyawa kimia di dalamnya  (Depkes  RI,  2000).  Serbuk simplisia awal P. australis yang digunakan sebanyak 150 g setelah melalui proses  maserasi  diperoleh  ekstrak  etanol sebanyak 5,22 g dengan rendemen ekstrak yaitu 3,48%. Penentuan rendemen dimaksudkan untuk mengetahui perbandingan antara ekstrak yang
diperoleh  (jumlah  hasil  ekstrak)  dengan simplisia awal (Depkes RI, 2000).
Penetapan Kadar Fenolik Total Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Penentuan  harus  dilakukan  pada panjang  gelombang  maksimum  untuk mengetahui  besarnya  panjang  gelombang
yang diperlukan asam galat untuk mencapai  serapan  maksimum.  Penentuan panjang  gelombang  dilakukan  dengan menggunakan  larutan  asam  galat  sebagai standar  analisis  kuantitatif.  Penentuan panjang  gelombang  maksimum  dilakukan pada  650-800  nm.  Panjang  gelombang yang didapat adalah 750m (Gambar 3).
Gambar 3. Kurva panjang gelombang maksimum asam galat

## Hasil Optimasi Waktu Inkubasi
Penentuan  optimasi  waktu  inkubasi bertujuan  untuk  mengetahui  waktu  yang dibutuhkan  suatu  zat  untuk  bereaksi secara  optimum  sehingga  menghasilkan serapan yang stabil. Waktu optimum yang dibutuhkan  larutan  asam  galat  pada panjang  gelombang  maksimum  750  nm yaitu menit ke-60 (Gambar 4).
Gambar 4. Kurva optimasi waktu inkubasi asam galat

## Pengukuran Kurva Kalibrasi
Kurva  kalibrasi  ditentukan  untuk menghasilkan persamaan liniearitas antara absorbansi dengan konsentrasi dan menunjukkan besarnya konsentrasi larutan
1.1 1.15 1.2 1.25 1.3 690 710 730 750 770 790 Abs o rba ns i Panjang gelombang (nm) 0.55 0.56 0.57 0.58 0.59 0.6 0.61 0 20 40 60 80 Abs o rba ns i
Waktu inkubasi (menit)
sampel dari hasil pengukuran. Konsentrasi sampel  larutan  dapat  diperoleh  dengan mudah  melalui  kurva  standar  asam  galat dibuat kedalam beberapa deret konsentrasi antara lain 10 sampai 100 ppm. Persamaan  yang  didapat  adalah  y  = 0,1492x  +  0,0514  dan  nilai  R 2 =  0,9997 yang  artinya  mendekati  linearitas.  Data lengkap  hasil  absorbansi  pengukuran dapat dilihat Gambar 5.
Gambar 5. Kurva Kalibrasi Standar Asam Galat

## Kadar Fenolik
Kadar  fenolik  sampel  dihitung melalui  persamaan  garis  y  =  bx  +  a dengan  nilai  absorbansi  sampel  yang dihasilkan  sebesar  0,115.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol P. australis memiliki  kadar  fenolik  total sebesar 42,62 mg SAG/g serbuk.
Gugus  aromatik  pada  senyawa fenolik menunjukkan kemampuannya sebagai antioksidan dan antimikroba yang dapat  melindungi  tubuh  dari  reaksi oksidasi  dan  sifat  patogen.  Radikal  bebas dapat  merusak  sampai  sel  biomolekul seperti  asam  nukleat,  protein,  lipid  dan karbohidrat,  dan  berkontribusi  dalam stress  oksidatif  dan  beberapa  penyakit. Antioksidan  dapat  mengganggu  produksi radikal bebas dan berperan untuk menonaktifkannya (Bajpai et al ., 2005).
Penetapan Aktivitas Antioksidan
Penetapan Panjang Gelombang

## Maksimum
Tahap  awal  yang  dilakukan  pada penentuan aktivitas  antioksidan ini  adalah penetapan panjang  gelombang maksimum larutan DPPH. Penetapan panjang gelombang maksimum ini bertujuan untuk mengetahui  pada  panjang  gelombang larutan DPPH yang menghasilkan absorbansi maksimum pada spektrofotometer UV-Vis. Hal ini berkenaan  dengan  kepekaan  analisis, dimana perubahan absorbansi untuk satuan  konsentrasi  adalah  yang  paling besar pada panjang gelombang maksimum sehingga akan diperoleh kepekaan analisis yang  maksimum  (Chow et  al .,  2003). Panjang  gelombang  maksimum  yang didapat  untuk  pengujian  antioksidan  ini adalah  515  nm  dengan  absorbansi maksimum 0,843.
Gambar 6. Kurva Panjang Gelombang Maksimum DPPH

## Hasil Optimasi Waktu Inkubasi
Penetapan waktu inkubasi optimum  ditujukan  untuk  menentukan waktu  penyimpanan  yang  memberikan serapan stabil atau waktu yang dibutuhkan oleh  suatu  zat  agar  dapat  bereaksi  secara maksimal.  Waktu  inkubasi  optimum  yang didapat  pada  menit  ke-  30  (Gambar  7). Pengukuran  aktivitas  antioksidan  ini menggunakan  vitamin  C  (asam  askorbat) sebagai standar.
Asam askorbat merupakan salah satu antioksidan
y = 0.1492x + 0.0514 R² = 0.9997 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 2 4 6 Ab so rbans i Konsentrasi kurva kalibrasi 0.76 0.78 0.8 0.82 0.84 0.86 490 500 510 520 530 Abs o rba ns i Panjang gelombang (nm)
Gambar 7. Kurva Optimasi Waktu
Inkubasi
sekunder  yang  memiliki  kemampuan menangkap  radikal  bebas  dan  mencegah terjadinya  reaksi  berantai.  Pengukuran  ini menggunakan asam askorbat dalam beberapa tingkat konsentrasi untuk mendapatkan  aktivitas  antioksidan,  yaitu kemampuan untuk dapat meredam radikal bebas  dengan  menggunakan  metode DPPH  yang kemudian ditetetapkan dalam kurva  kalibrasi  antara  %inhibisi  terhadap konsentrasi vitamin C adalah y = 7,9394x +  0,3521  dan  R 2 =  0,9939.  Persamaan regresi  linier  tersebut  digunakan  untuk menentukan IC 50 dari larutan vitamin C.
Nilai IC 50 adalah besarnya konsentrasi antioksidan untuk menghambat  radikal  bebas  sebesar  50  %.
Salah satu metode untuk menentukan nilai IC 50 dengan  peredaman  radikal  bebas DPPH.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa Vitamin C berpotensi aktif sebagai antioksidan  dengan  IC 50 sebesar 6 ,253 ppm.  P ada  konsentrasi  5000  ppm  ekstrak etanol P.  australis menghambat  sebesar 66,01 % radikal bebas DPPH.
Kemampuan  menghambat  yang  lemah pada  konsentrasi  5000  ppm  menunjukkan rendahnya  kekuatan  antioksidan  dari ekstrak  etanol P.  australis .  Pereaksi DPPH  bersifat  stabil.  Pada  penelitian  ini, pengurangan kemampuan mereduksi radikal
DPPH ditentukan dengan
penurunan absorbansi pada panjang gelombang  515  nm  yang  diinduksi  oleh
antioksidan (AH) setelah 30 menit, seperti reaksi  dibawah  ini  (Brighente et  al ., 2007):
DPPH . + AH              DPPH – H + A .

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan,  kadar  fenolik  ekstrak  etanol rumput  laut  coklat  adalah  42,62  mg SAG/g  dan pada  konsentrasi  5000  ppm menghambat  sebesar 66,  01  %  radikal bebas DPPH.
.

## DAFTAR PUSTAKA
Bajpai,  M . , A.  Mishra,  D.A.  Prakash. 2005.  Antioxidant  and  free  radical scavenging  activities  of  some  leafy vegetables. Int. J. Food Sci.
Nutr. 2005. 56(7): 473-481.
Brand-Williams,  W.,  M.E.  Cuvelier,  C.
Berset.  1995.  Use  of  a  free-radical method  to  evaluate  antioxidant activity. Food  Sci  Technol-Lebens Wissens Technol . 28: 25-30.
Brighente,  I.M.C.,  M.  Dias,  L.G.  Verdi,
M.G.  Pizzolatti.  2007.  Antioxidant activity and total phenolic content of some Brazilian species. Pharmaceutical Biology . 45(2):
156-161.
Chow,  S.T.,  W.W.  Chaw,  Y.C.  Chung.
2003.  Antioxidant  activity  and safety  of    50%  ethanolic  red  bean extract (Phaceolus  raditus  L.  Var
Aurea).  Journal  of  Food  Sciene .  68
(1): 21-25.
Dahuri, R. 1998. Coastal zone management  in  Indonesia:  Issues and  approaches . Journal  of  Coastal Development . 1(2): 97-112. Depkes  RI.  1979. Materia  Medika Indonesia  Jilid  V .  Direktorat.
Jenderal  Pengawasan  Obat  Dan Makanan. Jakarta.
Depkes  RI.  2000. Parameter  Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat . Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia. Jakarta
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0 10 20 30 40 50 60 70 Abs o rba ns i Waktu inkubasi
Halliwell,  B.,  J.M.C  Gutteridge.  2000. Free  Radical  in  Biology  and
Medicine . Ed  4th,  Oxford  University Press New York. Haryani, T.S., B.L. Sari, T. Triastinurmiatiningsih. 2014. Efektivitas  ekstrak Padina australis sebagai  antibakteri Escheria  coli penyebab diare. Jurnal Ilmiah
Fitofarmaka .  4(2):42-49.  Universitas
Pakuan. Bogor. Hongayo,  M.C.,  R.C.  Larino,  D.L.
Malingin.  2012.  Antibacterial  and antioxidant  effects  of  brown  alga Padina australis Hauck crude extract . IAMURE International Journal  of  Science  and  Clinical Laboratory . 2(1): 1-5. Kemenangan,  F.R.,  G.D.  Manu,  F.B. Manginsela, F.B. 2017. Pertumbuhan  alga  coklat Padina australis di  Perairan  Pesisir  Desa Serei,  Kecamatan  Likupang  Barat,
Kabupaten  Minahasa  Utara. Jurnal
Ilmiah Platax . 5(2): 245-246.
Khoddami,  A.,  M.A.  Wilkes,  T.H. Roberts.  2013.  Techniques  for analysis of plant phenolic compounds . Molecules . 18(2): 2328-
2375.
Kim, D.K., K.W. Lee, H.J. Lee, C.Y Lee.
2002. Vitamin C equivalent
antioxidant  capacity  (VCEAC)  of phenolic  phytochemicals. J.  Agric.
Food Chem . 50(13): 3713-3717.
Pelozo,  M.I.G.,  M.L.C.  Cardoso,  J.C.P. Mello.  2008.  Spectrophotometric determination of tannins and caffeine in preparations from
Paullinia cupana var. sorbilis . Braz. Arch. Biol. Technol . 51: 447–451.
Peng,  J.P.  Yuan,    C.F.  Wu,  J.H.  Wang. 2011. Fucoxanthin, a marine carotenoid present in brown seaweeds  and  diatoms:  Metabolism and  bioactivities  relevant  to  human health. Mar . Drugs 9(10):1806- 1828.
Pelozo,  M.I.G.,  M.L.C.  Cardoso,  J.C.P.
Mello.  2008.  Spectrophotometric determination of tannins and caffeine in preparations from
Paullinia cupana var. sorbilis . Braz. Arch. Biol. Technol . 51, 447–451.
Proestos,    C.,    D.  Sereli,  M.  Komaitis.
2006.  Determination      of      phenolic compounds  in  aromatic  plants  by RP-HPLC    and      GC-    MS. Food Chemistry. 95(1): 44-52 .
Valko,  M.,  D.  Leibfritz,  J.  Moncol,
M.T.D. Cronin, M. Mazur, J. Telser. 2007. Free radicals and antioxidants in  normal  physiological  function and human desease. The International Journal of Biochemistry  &  Cell  Biology. 39: 44-84
Winarsi,  H.  2007. Antioksidan  Alami  dan Radikal Bebas . Yogyakarta