## ARSHI

## Analisis Kolorimetri Kadar Hemoglobin Darah dengan
Metode Pencitraan Digital Menggunakan Desktop Scanner
Koekoeh Santoso 1 *, Muhammad Agil 2 , Ridzky Pratama 3
1 Departemen Anatomi Fisiologi dan Farmakologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor
2 Departemen Klinik Reproduksi dan Patologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor
3 Program Pendidikan Profesi Dokter Hewan, Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor
ABSTRAK: Spektrofotometer adalah sistem baku berbasis kolorimetri dalam pengukuran kadar Hemoglobin (Hb). Penggu- naan scanner untuk mengukur kadar Hb berbasis kolorimetri telah dilakukan sebagai sistem alternatif. Kurva baku kanal war- na scanner yang paling curam adalah blue . Perbandingan kurva baku spektrofotometer dengan kanal warna blue menunjukan nilai y = 0.3131x + 0.0565 dengan R 2 = 0.9954 dan angka konversi nilai absorbansi desktop scanner menjadi kadar Hb adalah 73.6. Hasil uji Pasangan T menghasilkan nilai p sebesar 0.325 atau tidak berbeda nyata pada p ˃ 0.05.
Kata kunci: desktop scanner , imageJ , kadar hemoglobin, kolorimetri.

## ■ PENDAHULUAN
Spektrofotometer  adalah  sistem  baku  dalam  pengukuran kadar  Hemoglobin  (Hb)  berbasis  kolorimetri  (Ohta  dan Roberton  2005;  Frankhauser  2007),  namun  mahal  dan  me- merlukan  tenaga  ahli,  sehingga  diperlukan  sistem  alternatif berbasis  kolorimetri  yang  murah,  mudah,  dan  cepat  yaitu dengan memanfaatkan desktop scanner dan teknik pengola- han dan pengukuran citra menggunakan ImageJ .

## ■ BAHAN DAN METODE
Sebanyak  120  µl  darah  kelinci  ditambahkan  dalam  tabung reaksi  berisi  30  ml  reagen  Drabkin  yang  dimodifikasi  (Re- zende et  al .  2006),  kemudian  diencerkan  dengan  reagen hingga  konsentrasi  100%,  90%,  80%,  70%,  60%,  dan  50% dalam  tabung  terpisah  untuk  membuat  kurva  standar.  Mas- ing-masing larutan diukur absorbansinya dengan spektrofo- tometer  Hitachi  U-2001  pada  panjang  gelombang  540  nm. Dari masing-masing tabung tersebut diambil 25 µl kesumur microplate dengan  5  kali  pengulangan  untuk  dipindai menggunakan desktop  scanner HP®  Scanjet  7490c  dan disimpan  dalam  bentuk tagged  image  file  format (TIFF) agar dapat diproses dan diukur absorbansinya menggunakan ImageJ . Kadar Hb diperoleh dengan rumus Hb = Abs x 36.8 g/dL.  Hasil  ini  digunakan  untuk  mendapatkan  konstanta yang  digunakan  melakukan  konversi  absorbansi desktop scanner menjadi  kadar  Hb.  Analisa  kuantitatif  dilakukan menggunakan  program  Microsoft  Excel  2010  untuk  mem- buat grafik dan uji pasangan T menggunakan SPSS 19.0.

## ■ HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengukuran  absorbansi  larutan  yang  diencerkan  hingga konsentrasi 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, dan 50% dengan spektrofotometer  menghasilkan  kurva  absorbansi  y  = 0.00047  ×  -0.0222  dengan  R 2 =  0.9992  (Gambar  1). Scan- ner telah  digunakan  untuk  mengukur  glukosa,  kolesterol, dan  kreatinin  darah  (De  Morais  dan  De  Lima  2014);  diag- nosa  atherosklerosis  (Mann et  al. 2015);  serta  kandungan pati pada kentang (Matthews et al. 2004).
Gambar  1  Kurva  absorbansi  dari  pengukuran  hemoglobin  darah kelinci menggunakan spektrofotometer
Hasil  pengukuran  menggunakan scanner menghasilkan kurva  absorbansi  untuk  warna R/red,  G/green, dan B/blue

## ARSHI
y = 0.004x - 0.022 R² = 0.999 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 40 50 60 70 80 90 100 110 A bs orb a ns i Konsentrasi Larutan (%) Diterima  : 28 Juli 2017
Direvisi : 14 Agustus 2017
Disetujui  : 16 Agustus 2017
http://journal.ipb.ac.id/index.php/arshivetlett
Veterinary Letters dengan kemiringan paling curam adalah B/blue (Gambar 2), sehingga dipilih untuk perhitungan selanjutnya karena kanal warna  tersebut  paling  sensitif  terhadap  perubahan  konsen- trasi Hb (De Morais dan De Lima 2014).
Gambar  2  Kurva  absorbansi  dari  pengukuran  hemoglobin  darah kelinci  menggunakan scanner pada  kanal  warna Red , Green dan Blue
Hasil  perbandingan  absorbansi  spektrofotometer  den- gan desktop scanner menunjukan y = 0.3131x + 0.0565 den- gan  R 2 =  0.9954  dan  diperoleh  konstanta  73.6  untuk  men- gubahnilai  absorbansi desktop  scanner menjadi  kadar  Hb. Perbandingan  kadar  Hb  dari scanner dan  spektrofotometer dapat dilihat di Tabel 1. Hasil uji pasangan T menghasilkan nilai p sebesar 0.325.
Tabel  1  Absorbansi  dan  kadar  hemoglobin  darah  kelinci  yang  di- dapatkan dari scanner dan spektrofotometer Konsen- trasi (%) Abs Spektro Abs Scanner Hb Spektro (g/dL) Hb Scanner (g/dL) 100 0.5 ± 0.08 0.2 ± 0.03 16.6 ± 2.85 14.4 ± 2.36 90 0.4 ± 0.07 0.2 ± 0.03 14.7 ± 2.41 13.4 ± 2.02 80 0.4 ± 0.06 0.2 ± 0.03 12.9 ± 2.21 12.3 ± 2.03 70 0.3 ± 0.05 0.2 ± 0.02 11.2 ± 1.75 11.4 ± 1.75 60 0.3 ± 0.03 0.1 ± 0.02 9.5 ± 1.29 10.1 ± 1.27 50 0.2 ± 0.03 0.1 ± 0.02 7.9 ± 1.06 8.9 ± 1.18

## ■ SIMPULAN
Kadar  hemoglobin  yang  didapat  dengan scanner dan  spek- trofotometer  tidak  ditemukan  perbedaan  yang  signifikan pada tingkat kepercayaan 95%.

## ■ INFORMASI PENULIS

## Penulis untuk Korespondensi
koekoehipb@gmail.com

## Persetujuan Penulis
Semua penulis telah memberikan persetujuan terhadap versi akhir dari naskah ini.

## ■ UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  berterima  kasih  kepada  Laboratorium  Fisiologi,  Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.

## ■ PUSTAKA ACUAN
De Morais CLM, De Lima KMG. 2014. A colorimetric microwell method using a desktop scanner for biochemical assays. Talan- ta . 126:145-150.
Frankhauser DB. 2007. Spectrophotometer use. http://biology.clc.uc.edu/fankhauser/Labs/Microbiology/Growt h_Curve/Spectrophotometer.htm [diunduh 6 Februari 2015].
Kohl  SK,  Landmark  JD,  Stickle  DF.  2006.  Demonstration  of  ab- sorbance  using  digital  color  image  analysis  and  colored  solu- tions. J ChemEdu 83(4):644-646.
Mann E, Kolusheva S, Yossef R,  Porgador A, Aviram M, Jelinek R. 2015. Colorimetric polymer assay for the diagnosis of plas- ma  lipids  atherogenic  quality  in  hypercholesterolemic  pa- tients. Mol. Diagn. Ther . 19:35-43.
Matthews KR, Landmark JD, Stickle DF. 2004. Quantitative assay for starch by colorimetry using a desktop scanner. J ChemEdu. 81(5):702-704.
Ohta  N,  Robertson  A.  2005. Colorimetry:  Fundamentals  and  Ap- plications . West Sussex(GB): JohnWiley& Sons Ltd.
Rezende  EI,  Gomes  FR,  Malisch  JL,  Chappell  MA,  Garland  T.
2006. Maximal oxygen consumption in realtion to subordinate traits in lines of house mice selectively bred for high voluntary wheel running . J Appl Physiol. 101:477-485.
y = 1E-05x + 0.0001 R² = 0.4928 y = 0.001x + 0.009 R² = 0.998 y = 0.0015x + 0.0494 R² = 0.9979 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 40 50 60 70 80 90 100 110 A bsorba nsi Konsentrasi Larutan (%) Red Green Blue