## JURNAL KIMIA MULAWARMAN
Vol 21, No. 1, November 2023 pp. 55-61 https://jurnal.kimia.fmipa.unmul.ac.id/index.php/JKM P-ISSN 1693-5616 E-ISSN 2476-9258
Toksisitas dan Antioksidan Ekstrak Etilasetat dan n - Butanol  Hipokotil  Sarang  Semut, Myrmecodia pendens Merr. & Perry
Vino Soaduon Hamonangan a *, Endah Wydiastuti a , Lina Marlina b , Partomuan Simanjuntak a,b , Rudi Kartika c
a Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila, Indonesia
a Pusat Riset Bahan Baku Obat dan Obat Tradisional (BBO OT), Badan Riset dan Inovasi Nasional, Indonesia
a Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mulawarman, Indonesia * Corresponding Author: vinosoaduon@rocketmail.com

## ABSTRACT
The "sarang semut" Myrmecodia pendens Merr is an epiphytic plant from the Papua  region.&  Perry (Rubiaceae)  has  been  known  as  a  ”multidrug”  plant (cures several diseases).   This  research  aims  to  know  the  toxicities  and antioxidant power of ethylacetate and n-butanol extracts from sarang semut plants, and their chemical profiles on thin-layer chromatography (TLC) and high-performance  liquid  chromatography  (HPLC).  The  toxicity  assay  was carried out by testing on shrimp larvae Artemia salina, while the antioxidant assay was carried out with a free radical scavenging method using hydrazil diphenyl picryl reagent (DPPH).  The results showed that ethyl acetate extract showed  higher  toxicity  (LC 50 =  101,  mg/mL)  and  antioxidant  (IC 50 =  18.23 mg/mL) values than n-BuOH extract for toxicity (LC 50 = 154.59 mg/mL) and antioxidant (IC 50 = 29.58 mg/mL). TLC analysis shows the best separation of chemical  compounds  in  ethyl  acetate  extract  with  chloroform-methanol solvent (10:1) and n -butanol extract with chloroform-methanol-water solvent (5:5:1).  HPLC analysis shows the best separation of chemical compounds in ethyl acetate extract with n-hexane-ethyl acetate solvent (10: 1) and n-butanol extract, namely methanol-water (10: 1).
This is an open-access article under the CC – BY-SA license.
Article History Received 2023-10-03 Revised 2023-11-06 Accepted 2023-11-07

## Keywords
Myrmecodia pendens- merr & perry
Rubiaceae
Antioxidant
Toxicities HPLC TLC

## 1. Pendahuluan
Keanekaragaman  hayati  Indonesia  sangat  terkenal  di  dunia  dengan  menempati  urutan kedua setelah Brazilia. Tumbuhan di Indonesia diperkirakan terdapat lebih kurang dari 40.000 jenis sedangkan tumbuhan yang baru ada 3000 jenis yang telah diketahui potensinya dan telah dimanfaatkan  sebagai  penghasil  bahan  kimia  karbohidrat,  protein,  lemak,  vitamin,  maupun sebagai obat. Pemanfaatan sebagai obat adalah warisan nenek moyang Indonesia yang perlu dilestarikan dan dikembangkan, disebabkan tumbuhan ini mempunyai efek farmakologi dalam penyembuhan bermacam-macam penyakit, sehingga tumbuhan obat menjadi pilihan alternatif dalam pengobatan [1].
Papua  merupakan  daerah  di  Indonesia  yang  memiliki  beberapa  tumbuhan  obat.  Satu  di antara  tumbuhan  obat  tersebut  yaitu  sarang  semut, Myrmecodia  pendens Merr.  &  Perry (Rubiaceae). Tumbuhan sarang semut adalah tumbuhan epifit yang ada pada tumbuhan lain dengan batang bagian bawahnya menggelembung yang diselubungi oleh duri dan berisi rongga sebagai tempat koloni semut [2,3].  Penelusuran pustaka mengenai penelitian sarang semut ini telah  banyak  dilakukan  seperti  pengujian  antikanker  [4] , penghambat  xantinosidase [5],
Vol 21, No. 1, November 2023 pp. 55-61
sitotoksik dan antioksidan pada ekstrak air sarang semut [6]. Pemanfaatan sarang semut telah terbukti dapat menyembuhkan berbagai jenis penyakit seperti mimisan, tukak lambung, wasir, migrain, gangguan jantung, gangguan fungsi ginjal dan prostat, kanker, serta tumor [3].
Berdasarkan  multikhasiat  tersebut,  maka  penelitian  masih  terus  dilakukan  untuk mengungkap dan menambah informasi mengenai sarang semut. Pada penelitian ini dilakukan analisa hayati pendahuluan seperti pengujian toksisitas dan antioksidan dan menentukan profil senyawa  kimia  berdasarkan  analisis  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dan  kromatografi  cair kinerja  tinggi  (KCKT)  dari  ekstrak  etilasetat  dan  n-butanol  tumbbuhan  epifit  sarang  semut. Tahap  awal  penelitian  ini  adalah  pembuatan  ekstrak  metanol,  kemudian  ekstrak  metanol dipartisi dengan air dan etilasetat, dan bagian airnya dipartisi Kembali dengan n -BuOH. Ekstrak etilasetat  dan  n-BuOH  yang  diperoleh  dilakukan  uji  antioksidan  dengan  metode  peredaman radikal bebas, uji toksisitas dengan menggunakan larva udang, Artemia salina dan analisis profil senyawa kimia dengan KLT dan KCKT.
2. Metodologi

## 2.1. Alat dan Bahan
Bahan penelitian :  Simplisia  hipokotil  sarang  semut  yang  dikoleksi  tahun  2019  dan determinasi dilakukan di Herbarium Bogoriensis, Pusat Penelitian Biologi- LIPI.
Bahan kimia : 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH), asam askorbat, etil asetat, n -butanol, telur udang Artemia salina L, air laut buatan, DMSO (dimetil sulfoksida), silika gel 60 (70-230 mesh), n -heksan.
Alat : Timbangan  analitik,  lempeng  silika  gel  GF 254 ,  sonikator,  mikrokapiler,  bejana kromatografi, alat penyemprot pereaksi, lampu TL 18 watt, Spektrofotometer UV-VIS  (DU 650 Beckman), KCKT (UV 970 Jasco) dan perangkat alat gelas.

## 2.2. Metode

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak dilakukan berdasarkan panduan teknologi ekstrak oleh Dep. Kes (2000) [7].  Serbuk  hipokotil  Sarang  semut  direfluks  dengan  MeOH,  disaring,  diuapkan  dengan evaporator, dan refluks dilakukan sebanyak 3 kali.  Ekstrak MeOH kemudian dipartisi dengan etilasetat  sebanyak  3  kali,  kemudian  lapisan  airnya  dilanjutkan  partisi  dengan  n-BuOH sebanyak 3 kali.

## Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etil Asetat dan n-Butanol dengan DPPH
Pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etilasetat  dan n -butanol  dilakukan  berdasarkan metode Molyneux yang telah dimodifikasi [8].
Uji Toksisitas Ekstrak Etil Asetat dan n-Butanol dengan Larva Udang Artemia salina L.
Pengujian  toksisitas  ekstrak  etilasetat  dan n -butanol  dilakukan  berdasarkan  metode Meyer  (1984)  [9]  yang  dimodifikasi  dengan  metode  Hanafi et  al (2020)  [10]  dengan menggunakan larva udang, Artemia salina L.

## Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Analisis profil senyawa kimia dengan KLT untuk mengetahui pola pemisahan senyawa kimia  berdasarkan  kepolaran  yang  dikandung  ekstrak  etilasetat  dan n -BuOH  dengan menggunakan pelarut n- heksana-etil asetat  (5:1),  kloroform-metanol  (10:1),  dan kloroform- metanol-air (5:5:1).

## Analisis Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Analisis KCKT untuk ekstrak etil asetat dilakukan dengan menggunakan variasi pelarut n - heksan-etil  asetat  (1  :  1  ~  10  :  1).  Sedangkan  untuk  ekstrak n -BuOH  dengan  menggunakan variasi pelarut metanol dan air (1 : 1 ~ 10 : 1).
Vol 21, No. 1, November 2023 pp. 55-61
Kondisi instrumen kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) sebagai berikut :
1.   Untuk pemisahan ekstrak etil asetat Fase mobil : n -heksan-etil asetat (10 : 1 ~ 1 : 1) Fase stasioner : Sperishorb S5W Detektor : UV 254 nm Kecepatan : 1,0 ml per menit Tekanan : 112-115 kg/cm 2 Sistem : Isokratik Volume yang diinjek  : 20 μ l 2.   Untuk pemisahan ekstrak n -butanol Fase mobil : metanol pro analisis, metanol-air (10:1 ~ 1 : 1) Fase stasioner : Capcel pak C 18 Detektor : UV 254 nm Kecepatan : 0,6 ml per menit dan 1,0 ml per menit Tekanan : 112-114 kg/cm 2 , 250-253 kg/cm 2 Sistem : Isokratik Volume yang diinjek  : 20 μl
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etil-asetat dan n -BuOH
Hasil pengujian aktivitas antioksidan yang ditunjukkan dengan nilai IC 50 terhadap ekstrak etil asetat dan n -butanol dan vitamin C sebagai kontrol positif di sajikan pada Tabel 1 .
Tabel 1. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etil asetat dan n -Butanol No Sampel IC 50 ( μ g/mL) 1. Ekstrak  etil  asetat 18,23 2. Ekstrak n -butanol 29,58 3. Vitamin C 4,08
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  menunjukkan  bahwa  nilai  IC 50 ekstrak  etil  asetat  dan n - butanol  memiliki  aktivitas  antioksidan  sedang  yaitu  18,23  mg/mL  dan  29,58  mg/mL  (Lihat Tabel 1). Aktivitas antioksidan dikelompokkan 3 golongan, yaitu antioksidan tinggi (IC 50 =10-20 μg/mL),  antioksidan  sedang    (LC 50 =21- 100  μg/mL),  dan  antioksidan  rendah  (IC 50 =101-200 μg/mL).
3.2. Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Etil asetat dan n -Butanol
Hasil pengujian toksisitas ekstrak etilasetat dan n -BuOH terhadap larva udang Artemia salina L dapat dilihat pada Tabel 2 .
Tabel 2. Toksisitas ekstrak etil asetat dan n -butanol terhadap larva udang A. salina No Sampel LC 50 ( μ g/ml) 1. Ekstrak  etil  asetat 101,84 2. Ekstrak n -butanol 154,59
Hasil uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat    memiliki  toksisitas  lebih  tinggi  (LC 50 =101,84 μ g/mL)    dari    ekstrak n -butanol (LC 50 =154,59 μ g/mL). Hasil ini menunjukkan bahwa senyawa nonpolar dan semipolar dalam
Vol 21, No. 1, November 2023 pp. 55-61
simplisia  sarang  semut  mempunyai  daya  sitotoksik  dan  antioksidan  lebih  tinggi  (medium) dibandingkan kandungan senyawa polar dalam ekstrak n -butanol.
3.3. Analisis KLT Ekstrak Etil asetat dan n -Butanol
Hasil analisis kromatografi lapis tipis (KLT) terhadap ekstrak etil asetat dan n -butanol serta ekstrak metanol sebagai pembanding dapat dilihat pada Gambar 1 .
Gambar 1. Kromatogram KLT untuk ekstrak etil asetat, ekstrak n -butanol, dan ekstrak metanol sebagai pembanding
Keterangan :
I
:   Ekstrak MeOH
II :   Ekstrak Etil asetat III :   Ekstrak n -BuOH Fase diam :   Silika gel GF 254 Penyemprot :   CeSO 4 / H 2 SO 4
Jarak rambat
:   4,5 cm
Deteksi :   Sinar UV 254 nm
Setelah disemprot, kemudian dipanaskan sampai timbul bercak
Fase  gerak  yang  digunakan  pada  pemisahan  senyawa  kimia  dalam  ekstrak  etil  asetat memberikan profil senyawa kimia lebih baik dengan fase gerak n -heksan-etil asetat =5 : 1 dan kloroform-metanol (10:1), sedangkan ekstrak n -butanol dengan fase gerak kloroform-metanol- air  (5:5:1).    Hal  ini  dapat  diketahui  berdasarkan  azas like  dissolve  like ,  senyawa  non- polar/semipolar tereluasi dengan pelarut nonpolar/semipolar ( n -heksan-etilasetat), senyawa polar tereluasi dengan pelarut polar (kloroform-metanol-air).

## 3.4. Analisis KCKT Ekstrak Etil  asetat dan n -Butanol
Berdasarkan hasil analisis kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan fase gerak yang telah dicobakan menunjukkan bahwa pemisahan senyawa kimia pada ekstrak etil asetat yang terbaik adalah fase gerak n -heksan-etil asetat (10:1) ( Lihat Gambar 2A, 2B )  sedangkan untuk ekstrak n -butanol adalah fase gerak metanol-air (10:1) (Lihat Gambar 3A, 3B, 3C dan 3D ) .
Vol 21, No. 1, November 2023 pp. 55-61

## A
B
Gambar 2. Pola Kromatogram KCKT untuk Ekstrak Etil asetat , (a) Fase gerak n-heksan-etil asetat (5:1), (b) Fase gerak n-heksan etilasetat (10:1)
A
B
Vol 21, No. 1, November 2023 pp. 55-61
C
D
Gambar 3. Pola Kromatogram KCKT untuk Ekstrak n -butanol, (a) Fase gerak MeOH-air(2:1), (b) Fase gerak MeOH-air (5:1), (c) Fase gerak MeOH-air (10:1), (d) Fase gerak MeOH.

## 4. Kesimpulan
Ekstrak etil asetat memiliki aktivitas antioksidan dan toksisitas lebih tinggi dibandingkan dengan  ekstrak n -butanol.  Hasil  analisis  kromatografi  lapis  tipis  diperoleh  fase  gerak  untuk pemisahan senyawa kimia pada ekstrak etil asetat adalah fase gerak  kloroform-metanol (10:1) sedangkan ekstrak n -butanol adalah fase gerak kloroform-metanol-air (5:5:1). Hasil analisis kromatografi  cair  kinerja  tinggi  diperoleh  fase  gerak  untuk  pemisahan  senyawa  kimia  pada ekstrak  etil asetat  yaitu  fase gerak n -heksan-etil  asetat  (10:1),  sedangkan  ekstrak n -butanol yaitu fase gerak metanol-air (10:1).

## References
[1] D.  S.  Fabricant  and  N.  R.  Farnsworth,  “The  value  of  plants  used  in  traditional  medicine  for  drug discovery.,” Environmental  Health  Perspectives ,  vol.  109,  no.  suppl  1,  pp.  69 – 75,  Mar.  2001,  doi: 10.1289/ehp.01109s169 .
[2] S. Duryatmo , “ Sarang semut vs peyakit maut ,” Majalah trubus , vol. 37, no. 439, pp. 12-15, 2006.
[3] A. Subroto, and H. Saputro, “ Gempur penyakit dengan sarang semut ,” Jakarta: Penebar Swadaya , hal. 26 – 28; 41-46, 2006.
[4] A. Soeksmanto, M. A. Subroto, H. Wijaya, and P. . Simanjuntak, “Anticancer Activity Test for Extracts of  Sarang  Semut  Plant  (Myrmecodya  pendens)  to  HeLa  and  MCM- B2  Cells,” Pakistan  Journal  of Biological Sciences , vol. 13, no. 3, pp. 148 – 151, Jan. 2010, doi: 10.3923/pjbs.2010.148.151 .
[5] P. Simanjuntak, Fanny, M. A. Subroto , “Isolasi Senyawa Aktif dari Ekstrak Hipokotil Sarang Semut (Myrmecodia  pendens  Merr.  &  Perry) sebagai  Penghambat  Xantinoksidase,” Jurnal  Ilmu Kefarmasian  Indonesia, vol.  8,  no.  1,  pp.  49-54,  Apr.  30,  2010.  [Online].  Available: http://jifi.farmasi.univpancasila.ac.id/index.php/jifi/article/view/366
[6] Bustanussalam,  M.  Bintang,  and  P.  Simanjuntak, “ Molecular  Structure  Elucidation  of  the  Polar Fraction  ”Sarang  semut”  plant Myrmecodia  pendens Merry  &  Perry,  Which  has  Cytotoxic  and  as
Vol 21, No. 1, November 2023 pp. 55-61
antioxidant ” in International Conference  on Biotechnology Proceeding , in Bogor, Indonesia, 13-14 Nov 2012, pp. 401 – 409, 2013
[7] Departemen Kesehatan Republik Indonesia. “ Buku panduan teknologi ekstrak ,” Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, hal. 10-14, 24, 2000.
[8] P.  Molyneux, “ The  use  of  the  stable  free  radical  diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for  estimating antioxidant  Activity ,” Songklanakarin  J.  Sci.  Technol, vol.  26,  no.  2,  pp.    211-219,  2004.  [Online]. Available: https://www.researchgate.net/Philip-Molyneux-5/237620105
[9] B. N. Meyer, N. R. Ferrigni, J. E. Putnam, L. Jacobsen, D. E. Nichols, and J. L. McLaughlin, “Brine shrimp: a convenient general bioassay for active plant constituents,” Planta Medica , vol. 45, no. 05, pp. 31 – 34, May 1982, doi: 10.1055/s-2007-971236 .
[10] Hanafi, C. Irawan, S. M. Sirait, L. Sulistiawaty, and S. R. Setyawati, “Toxicity Test with BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) Method on Methanol, Ethyl Acetate Extract, Hexane on Seeds and Rind of Matoa extract (Pometia pinnata),” Oriental J. Chemistry , vol. 36, no. 6, pp. 1143 – 1147, Dec. 2020, doi:
10.13005/ojc/360618 .