POLA PERTUMBUHAN Nannochloropsis oculata PADA KULTUR SKALA LABORATORIUM, INTERMEDIET, DAN MASSAL
PATTERNS GROWTH OF Nannochloropsis oculata IN CULTURE SCALE LABORATORY, INTERMEDIATE, AND BULK
Indah Permata Sari dan Abdul  Manan
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
One  type  of  phytoplankton  that  are  used  in  marine  fish  hatchery  activities  namely Nannochloropsis oculata . The purpose of study case is to know patterns growth of N. oculata in culture scale laboratory, intermediate, and bulk. Study was held in Situbondo Brackishwater Aquaculture Center of East Java in January-February 2011. Study case methods used is descriptive method. N. oculata culture techniques performed by multilevel methods, beginning with the isolation of phytoplankton in the media for/liquid, culture in test tubes 10 ml and elenmeyer 50-100 ml, culture on the bottle 100-1000 ml, culture in karboy of 20 liters, intermediate scale culture 100 - 1000 liters and a mass-scale culture with a volume of  more than 1000  liters. Laboratory-scale use  Walne  for  fertilizer. Intermediate-scale use of  fertilizers FeCl 3 1-2  ppm,  10  ppm  EDTA,  Na 2 HPO 4 10-15  ppm,  100-150  ppm  KNO 3 ,  and  Tracemetals/vitmix  5 ml/m 3 , mass-scale culture use of fertilizers FeCl 3 1 ppm, 5 ppm EDTA, TSP 20 ppm, ZA 40 ppm and 50 ppm  urea.  Water  quality  measurement  results  obtained  by  laboratory  scale  temperature  is  23  -  25°C, intermediates and  mass scale  is 30°C, pH  in the culture laboratory scale and  intermediate  is 7.7 to 7.8, mass culture pH is 7.9, salinity laboratory scale 29-30 ppt, intermediates and mass scale 30 ppt. During mass  culture  of N.  oculata showed  that  the  growth  pattern  in  accordance  with  the  general  pattern  of phytoplankton growth. Mass-scale culture produce 1504 x 10 4 cells/ml for six days.
Keywords : Nannochloropsis oculata , culture techniques, patterns growth

## Pendahuluan
Pakan  merupakan  salah  satu  faktor pembatas  bagi  organisme  yang  dibudidayakan. Sebagian  besar  stadia  awal  larva  ikan  ( finfish, non  finfish ),  memerlukan  pakan  alami fitoplankton atau zooplankton. De Pauw (1982); Fulks  and  Main  (1991)  menyatakan  bahwa fitoplankton  sangat  dibutuhkan  dalam  kegiatan budidaya  yang  bersifat  komersial,  seperti  pada jenis ikan (larva dan atau dewasa), bivalvia dan moluska  (larva,  juvenil  dan  dewasa).  Beberapa faktor yang perlu diperhatikan dalam pemilihan pakan alami adalah ukuran  yang  sesuai  dengan bukaan  mulut  larva,  mudah  dicerna,  tidak beracun,  mudah  dikultur  secara  massal  dan mengandung nutrisi tinggi (Brown, 1997; Fulks and Main, 1991).
Ketersediaan pakan alami  harus dalam jumlah  yang  cukup,  berkesinambungan  dan tepat  waktu.  Untuk  dapat  memenuhi  target produksi  tersebut,  akan  lebih  mudah  tercapai dengan  melakukan  kultur  fitoplankton.  Salah satu  jenis  fitoplankton  yang  sering  digunakan pada kegiatan pembenihan  ikan  laut  yaitu  jenis Nannochloropsis oculata .
Pertumbuhan N.  Oculata dalam  media kultur  dapat  ditandai  dengan  bertambah besarnya ukuran sel atau bertambah  banyaknya jumlah  sel.  Kepadatan  sel  dalam  kultur N. Oculata digunakan untuk  mengetahui pola per- tumbuhan  jenis  fitoplankton tersebut. Berdasar- kan pola pertumbuhan fitoplankton, maka waktu pemanenan dilakukan saat fitoplankton mencapai puncak populasi.
Tujuan  dari  studi  kasus  ini  adalah untuk mengetahui pola pertumbuhan N. Oculata pada kultur skala laboratorium, intermediet, dan massal.

## Metodologi
Metode  yang  digunakan  pada  studi kasus  ini  adalah  metode  deskriptif.  Suryabrata (1993)  menyatakan  bahwa  metode  deskriptif adalah  metode  untuk  membuat  pencandraan secara  sistematis,  faktual  dan  akurat  mengenai fakta-fakta  dan  sifat-sifat  populasi  atau  daerah tertentu. Studi kasus dilaksanakan pada tanggal 24  Januari  –  24  Februari  2011  di  Balai Budidaya  Air  Payau  Situbondo,  Desa  Pecaron, Kecamatan  Panarukan,  Kabupaten  Situbondo, Propinsi Jawa Timur.
Sterilisasi Alat dan Bahan
Kegiatan  kultur  diawali dengan sterilisasi  alat  dan  bahan.  Sterilisasi  alat  dan bahan adalah perlakuan untuk menjadikan suatu alat atau bahan yang bebas dari mikroorganisme yang tidak diingikan (Isnansetyo dan Kurniastuti,  1995).  Sterilisasi  peralatan  yang terbuat  dari  gelas  seperti  erlenmeyer,  test tube, petri disk disterilkan dengan autoclave. Sebelum digunakan  peralatan  dicuci  dan  disikat  dengan detergen  kemudian  dibilas  air  tawar,  tunggu kering,  setelah  itu  ditutup  rapat  dengan alumunium  foil  dan  plastik,  sedangkan  tabung reaksi  dan  pipet  ditutup  kapas,  dibungkus alumunium  foil  dan  plastik.  Setelah  itu  diatur rapi  dalam  autoclave,  autoclave  ditutup  rapat dan  dioperasikan  pada  suhu  121 o C  dengan tekanan  1  atm,  selama  30  menit.  Sterilisasi peralatan  selain  gelas  seperti  toples,  akuarium, bak  fiber, bak  beton sterilisasi dengan  mencuci dan  menyikat  menggunakan  detergen,  bilas  air tawar. Sedangkan bak beton tambahkan  larutan kaporit 20-30 ppm direndam 24 jam.
Media  yang  telah  steril  perlu  penge- cekan  dengan  Natrium  Thiosulfat  10  ppm  dan aerasi  kuat,  supaya  tidak  ada  kaporit  tersisa. Sterilisasi media kultur yang berasal dari air laut dengan purefilter UV  1  mikron  dan catridge filter 5  µm.  Air  laut  yang  keluar  ditampung dalam  ember,  dimasukan  erlenmeyer,  disteril- kan  dengan  autoclave,  autoclave  ditutup  rapat dan  dioperasikan  pada  suhu  121 o C  dengan tekanan 1 atm atau 15 psi, selama 30 menit.
Kultur Nannochloropsis oculata
Kultur  volume  10  ml  dalam  tabung reaksi  dengan  merupakan  kultur  tahap  pertama diperoleh dari hasil kultur media agar. Hasil dari kultur  tabung  reaksi  dijadikan  bibit  kultur berikutnya pada erlenmeyer volume 50-100 ml. Media  kultur  ini  menggunakan  air  laut  steril berasal  dari purefilter UV  1  mikron  dan catridge filter 5 µm. Salinitas air laut masih 34 ppt  dan  harus  diturunkan  hingga  salinitasnya menjadi  29-30  ppt.  Penurunan  ini  dilakukan dengan menambahkan aquades sebanyak 10 %, untuk mencegah kenaikan salinitas media kultur akibat  sterilisasi  menggunakan  autoclave. Pengambilan  bibit  melalui  koloni  yang  tumbuh dan  berkembang  di  media  agar  dipindahkan menggunakan  jarum  ose,  masukkan  dalam tabung reaksi berisi air laut steril sebagai media kultur.
Perbandingan  antara  bibit  dan  media kultur  adalah  1:5  atau  1:10.  Mencegah terjadinya  kontaminasi  udara,  mulut  tabung ditutup  alumunium  foil.  Pemupukan  dengan pupuk  grade  PA (proanalyse) yaitu  pupuk
Walne.  Pembuatan  pupuk  skala  laboratorium dengan  cara  merebus  air  laut  steril  dan  bahan- bahan  pupuk  walne,  aduk  merata.  Tujuan perebusan supaya larutan pupuk steril. Tabung- tabung  reaksi  yang  telah  terisi  media, fitoplankton  dan  dipupuk  ditempatkan  dalam rak  tabung  reaksi  pada  rak  kultur  dilengkapi lampu TL 40 watt 1-2 buah 1000-2000 lux dan diinkubasikan  pada  suhu  23 o C.  Selama  masa kultur  stok  bibit  dalam  tabung  reaksi  harus dikocok  setiap  hari  dengan  tujuan  untuk menghindari  terjadinya  pengendapan  fito- plankton  dan  difusi  udara  untuk  meningkatkan kelarutan  CO 2 (Cahyaningsih,  2010).  Waktu pemanenan yang baik adalah 7-8 hari.
Kultur  1000  ml  ini  dilakukan  pada toples  kaca  atau  bottle  pada  tahap  ini  bibit diperoleh dari hasil kultur tahap pertama. Media kultur yang digunakan berasal dari air laut yang telah disaring menggunakan catridge filter 5 µm dan purefilter UV  1  mikron  supaya  steril. Salinitas  media  air  laut  30-32  ppt.  Setelah persiapan  air  selesai  bibit  dicampurkan  dengan media  dengan  perbandingan  1:2  atau  1:5. Pemupukan  dengan  pupuk  Walne . Diinkubasi pada  suhu  24 o C  dengan  lampu  TL  40  watt  2 buah  1000  -  2000  lux.  Pada  tahap  ini ditambahkan  pemberian  aerasi  yang  digunakan untuk meningkatkan kelarutan CO 2 pada media kultur.
Kultur  volume  20  liter  ini  dilakukan pada toples plastik pada tahap ini bibit diperoleh dari hasil kultur tahap kedua. Media kultur yang digunakan  berasal  dari  air  laut  yang  telah disaring menggunakan catridge filter 5 µm dan purefilter UV 1 mikron, air yang belum diguna- kan  ditampung  dalam  drum  bervolume  150  L yang  disterilkan  menggunakan  klorin  atau larutan  kaporit  10  ppm  dan  ditambahkan thiosulfat 5 ppm untuk mentralkan air. Salinitas media  air  laut  31-32  ppt.  Kemudian  bibit  atau stater dicampurkan ke media dengan perbandingan  1:7.  Pemupukan  dengan  pupuk Walne . Diinkubasi  pada  suhu  25 o C  dengan lampu  TL  40  watt  sebanyak  2  buah  yaitu sebesar  1000  -  2000  lux.  Pemberian  aerasi digunakan  untuk  meningkatkan  kelarutan  CO 2 pada media kultur.
Kultur skala  intermediet  menggunakan wadah  aquarium  150  liter  dan  bak  fiber  500  lt dan  1000  lt.  Sebelum  digunakan  untuk  kultur aquarium,  bak  fiber,  selang  dan  batu  aerasi dicuci  dan  disikat  dengan  detergen  sampai kotoran-kotoran  dan  lendir-lendir  yang  me- nempel hilang, bilas air tawar. Pengisian air laut bersalinitas 30-32 ppt dengan selang spiral yang diberi filter  bag sebagai  penyaring  air  laut. Treatment air laut menggunakan larutan kaporit
20  ppm,  diaerasi  kuat  agar  kaporit  tercampur merata  sehingga  dapat  mematikan  organisme- organisme  patogen,  setelah  15  menit  matikan aerasi agar chlor tidak mudah menguap, biarkan selama 24 jam. Pengecekan air dengan chlorine test,  bila  berwarna  kuning  berarti  media  belum netral dan bila jernih atau sudah tidak berwarna berarti  media  sudah  netral.  Menetralkan kandungan  kaporit  dalam  media  dengan Natrium  thiosulfat  10  ppm.  Media  kultur  yang telah  netral  dari  kandungan  kaporit  dapat digunakan  untuk  kultur.  Stater  atau  bibit N. oculata yang digunakan berasal dari kultur skala laboratorium  dengan  kepadatan  awal  kultur kurang  lebih  2  juta  sel/ml,  bibit  dimasukkan dalam media kultur.
Pemupukan  dengan  FeCl 3 1-2  ppm, EDTA  10  ppm,  Na 2 HPO 4 10-15  ppm,  KNO 3 100-150 ppm, dan Tracemetals/vitmix 5  ml/m 3, aerasi  dibesarkan  sehingga  pupuk  menyebar merata. Setelah pupuk merata aerasi dikecilkan, untuk  menghindari  terjadinya  kontaminasi  saat kultur.  Pemeliharan  bibit  selama  7  hari. Pemanenan  bibit  dilakukan  setelah  5-6  hari dengan  kepadatan  mencapai  12-16  juta  sel/ml akan  ditransfer  ke  kultur  skala  massal menggunakan  pompa  celup  disambung  selang spiral  ke  dalam  bak  fiber  volume  500  liter dengan  perbandingan  antara    bibit  dan  media 1:4,  dilakukan  pemupukan  seperti  kultur  pada aquarium.  Pemanenan  menggunakan  pompa celup  pada  bak  fiber  500  liter  dilakukan  pada hari  ke  enam  dengan  cara  ditransfer  dan dialirkan  dengan  selang  spiral  kekultur  massal untuk dijadikan bibit.
Kultur  skala  massal  diawali  dengan pencucian  bak  kultur.  Pengisian  air  laut bersalinitas  30-32  ppt  pada  bak  melalui  pipa inlet yang diberi filter bag berukuran 10 mikron sebagai penyaring air laut. Perbandingan antara bibit  dan  media  air  laut  yaitu  1:4.  Pertama pengisisan  air  laut  10  ton  ke  dalam  bak, kemudian bibit menggunakan pompa celup dan selang  spiral  1  inch  sebanyak  2  ton  sehingga volume  total  dalam  bak  12  ton. Treatment air laut  dengan  larutan  kaporit  50  ppm,  diaerasi kuat  agar  kaporit  tercampur  merata  sehingga dapat mematikan organisme-organisme patogen, setelah 15 menit matikan aerasi agar chlor tidak mudah  menguap,  biarkan  selama  24  jam. Menetralkan  kandungan  kaporit  dalam  media maka  ditambahkan  Natrium  thiosulfat  25  ppm. Setelah  15  menit  media  netral  dilakukan pemupukan. Media kultur yang telah netral dari kandungan  kaporit  dapat  digunakan  untuk kultur.
Stater  atau  bibit N.  oculata yang digunakan  berasal  dari  kultur  skala  intermediet
dengan  kepadatan  awal  kultur  kurang  lebih  2 juta  sel/ml,  bibit  dimasukkan  dalam  media kultur.  Pemupukan  dengan  komposisi  pupuk FeCl 3 1  ppm,  EDTA  5  ppm,  TSP  20  ppm,  ZA 40  ppm  dan  Urea  50  ppm,  aerasi  dibesarkan sehingga  pupuk  menyebar  dan  tidak  langsung mengendap  ke  dasar.  Pemeliharan  bibit  selama 7 hari. Pemanenan bibit setelah 5-6 hari dengan kepadatan mencapai 12-16 juta sel/ml kemudian ditransfer  ke  kultur  skala  massal  menggunakan pompa celup disambung selang spiral ke dalam bak  beton volume 12 ton dengan perbandingan antara    bibit  dan  media  1:4.  Teknik  panen dengan  menggunakan  pompa  celup  dan didistribusikan  kedalam  bak  pembenihan sebagai pakan  larva dan  juga berfungsi  sebagai penyangga  lingkungan  dan  juga  didistribusikan ke dalam bak rotifer.
Bibit  yang  digunakan  dapat  diambil dari bak kultur lain yang terlebih dahulu di cek laboratorium  untuk  mengetahui  kualitas N. oculata yang  baik.  Kualitas  yang  baik  dapat diketahui  dari  kepadatan  plankton  dan  ada tidaknya  kontaminasi  baik  dari  protozoa maupun  dari  spesies  plankton  lain.  Bibit dialirkan kedalam bak kultur dengan menggunakan  slang  spiral  dan  pompa  celup. Jika  kualitas  plankton  pada  kultur  massal  tidak baik,  stater  diambil  dari  kultur  intermediet  dan disalurkan  dengan  pipa  PVC  dengan  pompa celup  dan  selang  spiral.  Bibit  yang  digunakan berumur  enam  hari  karena  merupakan  puncak pertumbuhan plankton.
Kepadatan fitoplankton dihitung dengan  menggunakan  hemacytometer  dan  alat bantu  handcounter.  Hemacytometer  merupakan suatu alat yang terbuat dari gelas dibagi menjadi kotak-kotak  pada  dua  tempat  bidang  pandang. Cara  penghitungan  kepadatan  fitoplankton dengan  hemacytometer  adalah  dibersihkan  dan dikeringkan  terlebih  dahulu  dengan  kertas tissue, gelas penutupnya dipasang. Fitoplankton yang  akan  dihitung  kepadatannya  diteteskan menggunakan pipet tetes pada bagian parit yang melintang  hingga  penuh.  Penetesan  harus  hati- hati  agar  tidak  terjadi  gelembung  udara  di bawah  gelas  penutup.  Selanjutnya  hemocyto- meter  tersebut  diamati  mikroskop  dengan perbesaran 100 atau 400 kali dan dicari  bidang berkotak-kotak  yang  berjumlah  enam  belas (Isnansetyo dan Kurniastuti, 1995).

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  monitoring  kuantitas  kultur N. oculata skala  laboratorium,  intermediet  dan massal  menunjukkan  sesuai  dengan  pola pertumbuhan  fitoplankton  yang  normal. N. oculata mengalami tingkat kepadatan pada hari
ke–6 dengan kepadatan sel mencapai 1504 x 10 4 sel/ml  pada  bak  1  dan  1516  x  10 4 pada  bak  2. Pola  pertumbuhan  kultur N.  oculata skala laboratorium,  intermediet  dan  massal  dapat dilihat pada gambar 1, 2, dan 3.
Pola  pertumbuhan  yang  normal  hanya dimiliki  oleh  fitoplankton  kualitas  yang  baik yang dapat digunakan sebagai pakan alami larva ikan.  Keberhasilan  kultur  tercapai  bila  media kultur  dipadati  oleh  populasi  fitoplankton.
Pertumbuhan  sel  dalam  kultur  ditandai  dengan bertambah  besarnya  ukuran  sel  dan  banyaknya jumlah  sel.  Keberhasilan  kultur    dipengaruhi oleh  media  kultur  yang  bebas  kontaminasi, waktu  kultur,  kualitas  bibit,  kepadatan  awal tebar bibit, kondisi lingkungan seperti kuantitas cahaya matahari dan musim.
Berdasarkan pola pertumbuhan fitoplankton,  maka  pemanenan  harus  dilakukan saat  fitoplankton  mencapai  puncak  populasi. Apabila belum mencapai puncak populasi, maka sisa-sisa zat hara masih ada dan membahayakan organisme  yang  mengkonsumsinya  (Isnansetyo dan  Kurniastuti,  1995).  Pemanenan N.  oculata bila digunakan sebagai bibit sebaiknya pada hari keenam  karena  pada  puncak  populasi, sedangkan  pemanenan  pada  hari  ketujuh langsung dialirkan  menggunakan  pompa celup yang disambung selang spiral dan pipa PVC ke bak-bak kultur rotifer dan bak-bak pemeliharaan larva Ikan Bawal Bintang.
Pengendapan  dilakukan  bila  ingin menyimpan N.  oculata yang  akan  dijadikan bibit  dan  untuk  proses  pengiriman N.  oculata karena  tidak  memerlukan  volume  air  yang banyak.  Pengendapan  dengan  cara  menampung N.  oculata yang  telah  siap  panen  dalam  bak fiber  bervolume  0,5  ton.  Tambahkan  flokulan (bahan  kimia)  NaOH  teknis  atau  soda  api sebanyak 100 gram. Tuangkan larutan soda api, aerasi  kuat  selama  1  jam  supaya  soda  api tercampur  merata. Soda api  sangat aman untuk N. oculata karena tidak merusak selnya. Setelah 1 jam, matikan aerasi dan biarkan selama 10-15 jam  akan  terjadi  proses  pengendapan  yang sempurna  ditandai  dengan  adanya  larutan  hijau yang  mengendap  didasar  dan  larutan  bening berada  diatasnya.  Larutan  bening  dibuang  dan didapatkan  endapan  alga  sekitar  25-30  liter. Endapan N.    oculata dapat  digunakan  sebagai bibit untuk kultur berikutnya.
Hasil pengukuran kualitas air diperoleh suhu  pada  kultur N.  oculata pada  skala laboratorium  adalah  23  –  25 o C,  skala intermediet  dan  skala  massal  sebesar  30°C. Sumber  kuantitas  cahaya  pada  kultur  skala intermediet  dan  skala  massal  diperoleh  dari sinar matahari secara langsung, skala laboratorium  dari  lampu  TL  sebesar  1450 lux . Pengukuran  intensitas  cahaya  menggunakan luxmeter .  Nilai  pH  diukur  menggunakan  pH meter.  Nilai  pH  kultur  skala  laboratorium  dan intermediet  berkisar  antara  7,7-7,8  sedangkan pada kultur massal pH sebesar 7,9.
Pengukuran  salinitas  dapat  mengguna- kan  refraktometer.  Hasil  pengukuran  salinitas pada media kultur N. oculata skala laboratorium dipertahankan pada salinitas 29 - 30 ppt dengan
penambahan  aquadest  10%,  untuk  mencegah terjadinya  kenaikan  salinitas  akibat  dilakukan sterilisasi  menggunakan  autoclave.  Sedangkan pada  skala  intermediet  dan  massal  salinitasnya 30 ppt.

## Kesimpulan
Hasil  monitoring  kuantitas  kultur N. oculata skala  laboratorium,  intermediet  dan massal  menunjukkan  sesuai  dengan  pola pertumbuhan  fitoplankton  yang  normal. N. oculata mengalami  tingkat  kepadatan  tertinggi pada hari ke–6.

## Daftar Pustaka
Brown,  M.R,  S.W  Jeffery,  J.K.  Volkman  and G.A.  Dunstan.  1997.  Nutritional Properties  of  Microalgae  for  Mari- culture. Aquaculture 151. P 315-331. Cahyaningsih,  S.,  A.  N.  M.  Muchtar,  S.  J.
Purnomo,  I.  Kusumaningrum,  Pujiati, A. Haryono, Slamet, dan Asniar. 2009. Juknis Produksi Pakan Alami. Departemen  Kelautan  dan  Perikanan Direktorat Jendral Perikanan Budidaya Balai  Budidaya  Air  Payau  Situbondo.
35 hal.
De  Pauw,  N.  1982.  Use  and  Production  of Microalgae  As  Food  for  Nursery Bivalves. Laboratory of Marine Culture State University of Ghent, Belgium.
Fulks,  W.  and  K.L.  Main.  1991.  Rotifer  and Microalga  Culture  System.  Proceeding of  a  US,  Asia  Workshop,  Honolulu, Hawai. p. 3-52.
Isnansetyo,  A.  dan  Kurniastuty.  1995.  Teknik Kultur Phytoplankton dan Zooplankton Pakan  Alami  untuk  Pembenihan Organisme Laut. Kanisius. Yogyakarta.