## ANTIOXIDANT AND ANTIBACTERIAL ACTIVITIES FROM MEAT AND INTESTINES SEA CUCUMBER EXTRACT
( Stichopus Variegatus )
Asep Roni, Aditya Septian Al- mu’ti, R. Herni Kusriani
Fakultas Farmasi Universitas Bhakti Kencana, Jln. Soekarno-Hatta No. 754 Bandung
Korespondensi: Asep Roni (asep.roni@bku.ac.id)

## ARTICLE HISTORY
Received: 12 December 2019             Revised:  27 January 2020              Accepted: 1 February 2020

## Abstract
Indonesian waters have a diversity of marine which can be used for health and one of them gamat sea cucumber (Stichopus variegatus.) The purpose of this study was to  compare  the  antioxidant  and  antibacterial  activity  on  meat  and  intestines  gamat sea  cucumbers.  Extraction  of  sea  cucumber  gamat  done  by  maceration  using solvent  ethanol  96%.  Meanwhile,  meat  and  intestines  extract  against  performed testing  of  antibacterial  and  antioxidant.  Antibacterial  test  of  mikrodilusi  bacteria Propionibacterium  acnes  and  Staphylococcus  epidermidis,  while  antioxidant  test  is done  qualitative  and  quantitative.  Minimum  inhibitor  concentration  values  (MIC) against  Propionibacterium  acnes  from  sea  cucumber  meat  extract  is  256  mg  /  mL and the sea cucumber intestines extract is 512 mg / mL. Meanwhile, the value of the MIC against  Staphylococcus  epidermidis  extracts  from  meat  was  64  μg/mL  and intestines  MIC extract  is  256  μg/mL.  Test  results  qualitative  antioxidant  activities, indicated with a yellow spot with a purple background, this suggests the compounds contained in the extract may inhibit free radical DPPH. Antioxidant activity extract of meat  and  intestines  extract  sea  cucumber  gamat  indicated  by  the  value  of 𝐼𝐶 50 37.89 µg/mL and 20.46 µg/mL. Meat and intestines extract sea cucumber potentially antibacterial  against  bacteria  Propionibacterium  acnes  and  Staphylococcus epidermidi, as well as having a strong antioxidant activity.
Key Word : Antibacterial, Antioxidant, and Sea Cucumber Gamat ( stichopus variegatus ).

## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN ANTIBAKTERI DARI EKSTRAK DAGING DAN USUS TERIPANG GAMAT ( Stichopus Variegatus)

## Abstrak
Perairan  Indonesia  memiliki  keanekaragaman  biota  laut  yang  dapat  dimanfaatkan untuk kesehatan, salah satunya yaitu teripang gamat ( Stichopus variegatus.) Tujuan dari penelitian  ini adalah untuk mengetahui perbandingan aktivitas antioksidan dan antibakteri  pada  daging  dan  usus  teripang  gamat.  Ekstraksi  teripang  gamat dilakukan  dengan  cara  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%,  selanjutnya terhadap ekstrak daging dan usus dilakukan pengujian antibakteri dan antioksidan. Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  terhadap  bakteri Propionibacterium  acnes dan Staphylococcus epidermidis dengan metode mikrodilusi , sedangkan uji  antioksidan
dilakukan secara kualitatif dengan KLT dan kuantitatif menggunakan spektrofotometri  UV-Vis.  Nilai  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  terhadap bakteri Propionibacterium acnes dari ekstrak daging teripang adalah 256 μg/mL dan pada  ekstrak  usus  teripang  adalah  512  μg/mL.  Sedangkan,nilai  KHM  terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dari ekstrak daging adalah 64 μg/mL dan KHM ekstrak usus adalah 256 μg/mL. Hasil uji aktivitas antioksidan secara kualitatif yang ditunjukan  oleh  spot  berwarna  kuning  dengan  latar  belakang  ungu,  menunjukkan bahwa  terdapat  senyawa  dalam  ekstrak  yang  dapat  menghambat  radikal  bebas DPPH.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  daging  dan  ekstrak  usus  teripang  gamat ditunjukkan dengan  nilai IC 50 sebesar 37.89 µg/mL dan 20.46 µg/mL. Berdasarkan hasil  tersebut,  ekstrak  daging  dan  usus  teripang  berpotensi  sebagai  antibakteri terhadap Propionibacterium  acnes dan Staphylococcus  epidermidi, serta  memiliki aktivitas antioksidan yang kuat.
Kata  Kunci :  Antioksidan,    Antibakteri  dan  Teripang  Gamat  ( stichopus variegatus ).

## Pendahuluan
Perairan  di  Indonesia  memiliki  keanekaragaman  biota  laut  yang  sangat  tinggi yang dapat dimanfaatkan untuk kehidupan. Pencarian obat-obatan berbahan dasar biota  laut  perlu  dilakukan  karena  terkait  dengan  meningkatnya  sifat  resistensi berbagai  penyakit  terhadap  berbagai  penyakit  terhadap  jenis  obat-obatan  yang sudah  ada.  Salah  satu  biota  laut  yang  memiliki  potensi  ekonomi  adalah  teripang (Holothuroidea).
Teripang  merupakan  hewan  invertebrata  yang  memiliki  tubuh  yang  lunak, berdaging  dan  berbentuk  silindris  memanjang  seperti  ketimun.  Teripang  dapat ditemukan  hampir  di  seluruh  perairan  pantai,  mulai  dari  daerah pasang surut  yang dangkal  sampai  perairan  yang  dalam. 1 Teripang  umumnya  menempati  ekosistem terumbu  karang  dengan  perairan  yang  jernih,  bebas  dari  polusi,  air  relatif  tenang dengan mutu  air  yang  cukup  baik.  Habitat  yang  ideal  bagi  teripang  adalah  air  laut dengan salinitas 29- 33 ‰ yang memiliki kisaran pH 6,5-8,5, kecerahan air laut 50- 150 cm, kandungan oksigen terlarut 4-8 ppm, dan suhu air laut berkisar antara 20- 25ºC. 2
Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa  kandungan  asam  lemak  tidak jenuh  dalam  teripang  seperti  EPA  (Asam  EikosaPentaenoat)  dan  DHA  (Asam Dokosa  Heksaenoat)  merupakan  jenis  asam  lemak  yang  dikenal  memainkan peranan  penting  sebagai  agen  penyembuh  luka,  antitrombotik  mengurangi pembekuan  darah  di  dalam  saluran  darah  dan  memperlambat  proses  degenerasi sel yang dapat membantu mengurangi penyakit jantung, stroke  dan memperlambat proses  penuaan 3 Teripang  juga  mengandung  mineral  yang  cukup  lengkap  berupa kalsium,  natrium,  fosfor,  kromium,  mangan,  zat  besi,  kobalt,  seng  dan  vanadium. 4 Pemanfaatan  ekstrak  teripang  pasir  sebagai  sumber  testosterone  dan  antigen 5 , pemanfaatan teripang sebagai steroidal 6 , dan mengandung kolagen, vitamin C, zat- zat mineral seperti khromium, ferum, kadmium, mangan, nikel, kobalt, dan seng. Berdasarkan  uraian  diatas,  maka  perlu  dilakukan  uji  aktivitas  antioksidan  dan antibakteri  dari  ekstrak  daging  dan  ekstrak  usus  teripang Stichopus  variegatus . Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat  memberikan  informasi  ilmiah  dalam  bidang kimia  bahan  alam  hayati  dan  farmasi  dalam  upaya  pemanfaatan  senyawa antioksidan dari teripang Stichopus variegatus.

## Metodologi Penelitian

## Tempat dan Sampel Penelitian
Teripang  gamat  ( Stichopus  variegatus ) didapatkan  dari  daerah  pantai Kepulauan Seribu, Jakarta. Selanjutnya penelitian terhadap S. variegatus dilakukan di Sekolah Tinggi Farmasi Bandung di bulan februari 2018 sampai bulan juni 2018.

## Bahan dan Cara Kerja Pengambilan Sampel
Penyiapan  bahan  meliputi  pengumpulan  bahan  yang  akan  digunakan  yaitu Teripang gamat ( Stichopus variegatus ) yang didapatkan di daerah pantai Kepulauan Seribu, Jakarta. Lalu dilakukan pengolahan bahan hingga menjadi Ekstrak

## Ekstraksi Teripang
Ekstraksi dilakukan secara maserasi selama 3 x 24 jam menggunakan pelarut etanol  96%  sebanyak  500  mL.  Setiap  24  jam,  hasil  ekstrak  diambil  dan  diganti menggunakan pelarut etanol 95% yang baru, serta dimonitoring dengan KLT. Hasil maserasi  yang  berupa  larutan  kemudian  disaring  dengan  kertas  saring  sehingga didapatkan  filtrat  dan  residu.  Filtrat  yang  diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50-60ºC.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak daging dan usus teripang ditotolkan pada pelat Kromatografi Lapis Tipis (KLT)  dengan  fase  gerak  Kloroform  :  Etanol  (9:1)  lalu  disemprot  dengan  larutan DPPH 0,2%. Selanjutnya ekstrak daging teripang dan ekstrak usus teripang masing- masing ditimbang 50 mg, dilarutkan dengan ethanol p.a lalu dimasukkan ke dalam labu  ukur  50  mL,  kemudian  dibuat  larutan  seri  20,  40,  60,  80,  100,  120  dan  140 μg/mL,  dibandingkan  dengan  larutan  seri  vitamin  C  dibuat  1,  2,  3,  4,  5,  6  dan  7 μg/mL.  Larutan  vitamin  C,  Ekstrak  Daging  Teripang  dan  Ekstrak  Usus  Teripang sebanyak 2 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan larutan DPPH 0,1 mM  sebanyak  2  mL,  dikocok  dengan  vortex  hingga  homogen,  diinkhubasi  dalam ruang  gelap  selama  30  menit. 7 Selanjutnya  serapan  diukur  pada  panjang gelombang 515-520 nm. Konsentrasi sampel dan persen inhibisinya diplot masing- masing  pada  sumbu  x  dan  y  pada  persamaan  regresi  linier.  Persamaan  tersebut digunakan untuk menentukan nilai IC 50 .

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daging  teripang  dan  ekstrak  usus teripang  terhadap Staphylococcus  epidermidis dan Propionibacterium  acnes dilakukan  dengan  menggunakan metode  mikrodilusi.  Disiapkan  pelat  mikro,  media Natrium Broth dan Natrium Agar dan suspensi bakteri sesuai kekeruhan Mc Farland 0,5. Kemudian dibuat campuran media dengan suspensi bakteri. 8
Pada  kolom  nomor  1  diisi  dengan  kontrol  negatif  yaitu  media mueller  hinton broth (MHB),  pada  kolom  2  diisi  dengan  kontrol  positif  yaitu  media  MHB  dengan Suspensi  bakteri.  Pada  baris  A  hingga  baris  H  dimulai  dari  kolom  ke  tiga  hingga kolom  ke  dua  belas  dimasukan  campuran  media  dan  suspensi  bakteri,  lalu ditambahkan  ekstrak  dimulai  dari  kolom  ke  dua  belas.  Kemudian  dari  kolom  dua belas  diambil  dimasukan  ke  kolom  nomor  sebelas.  Pengenceran  terus  dilakukan sampai kolom ke tiga. Pelat diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam. Penentuan nilai  KHM  dilihat  dari  kejernihan  yang  terjadi  pada  masing-masing  plate  dan pengujian KBM dilakukan dari hasil KHM dipindahkan pada media padat MHA  yang akan ditunjukan dengan terbentuknya zona bening.

## Hasil dan Pembahasan

## Ekstraksi
Teripang gamat ( Stichopus variegatus ) yang telah dirajang ditimbang sebanyak satu  kg  setiap  masing-masing  baik  itu  daging  maupun  usus,  kemudian  diekstraksi menggunakan cara dingin yaitu maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Ekstrak kental  yang    diperoleh  sebanyak  107,31  gram  dengan  rendemen  10,73%  untuk daging teripang dan 88,64 gram dengan rendemen 8,86% untuk usus teripang.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap  ekstrak  daging  dan  ekstrak  usus Teripang  gamat Stichopus variegatus dilakukan  terhadap bakteri  gram  positif  yaitu Staphylococcus  epidermidis dan Propionibacterium  acne. Pada  pengujian  ini digunakan  konsentrasi  1024  µg/mL  sebagai  larutan  induk.  Hasil  dari  pengujian ekstrak  daging  terhadap  bakteri Propionibacterium  acnes yaitu  menunjukkan aktivitas  antibakteri  yang  lemah dengan  KHM  256  μg/mL  dan  pada  ekstrak  usus teripang  menunjukkan KHM  pada  512  μg/mL,  sedangkan  hasil  dari  pengujian ekstrak  daging  terhadap  bakteri Staphylococcus  epidermidis yaitu  menunjukkan aktivitas antibakteri yang cukup kuat dengan KHM 64 μg/mL dan pada ekstrak usus teripang menunjukkan KHM pada 256 μg/mL.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Pengujian kualitatif antioksidan dengan metode kromatografi  lapis tipis dengan pengembang  yang  digunakan  adalah  kloroform:etanol  (9:1)  dan  fase  diam  yang digunakan  adalah  silika  gel  F 254 .  Berdasarkan  hasil  pemantauan  yang  dilakukan terdapat  spot  berwarna  kuning  dengan  latar  ungu  yang  tampak  setelah  disemprot dengan  penampak  bercak  DPPH  0,2%  dalam  metanol,  pembentukan  1,1-difenil-2- pikrilhidrazin (bercak ungu) tersebut menandakan adanya senyawa antioksidan.
Gambar  1. Pola  kromatografi  ekstrak  daging  dan  usus  teripang  gamat Stichopus variegatus A: Ekstrak daging; B: Estrak usus; 1: dibawah lampu UV 256 nm;  2: dibawah  lampu UV 356nm; 3:  Visual  dengan  Penampak Bercak DPPH 0,2 %
Dari hasil penelitian didapatkan bahwa IC 50 pada ekstrak daging teripang gamat bernilai 37,81879 µg/ml sedangkan  IC 50 pada ekstrak usus teripang gamat bernilai 20,4594 µg/ml. Kedua sampel ekstrak daging maupun usus teripang masuk kepada rentang aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
1 2 A A B B A  B 3
Gambar 2. Grafik Ekstrak Daging Teripang gamat Stichopus variegatus
Gambar 3. Grafik Ekstrak Usus Teripang gamat Stichopus variegatus

## Kesimpulan
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa, ekstrak daging dan ekstrak usus teripang  gamat  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  uji Staphylococcus epidermidis dan Propionibacterium acnes dengan nilai KHM berturut- turut 64 μg/mL dan 256 μg/mL.
Ekstrak  Daging  dan  Ekstrak  Usus  Teripang  Gamat  memiliki  aktivitas antioksidan dengan nilai berturut-turut 37.82 µg/ml dan 20.46 µg/ml.

## Daftar Pustaka
1.  Dahuri  R.  Menggali  bahan  obat  di  dalam  laut.  Jakarta:  Departemen  Kelautan dan Perikanan; 2005.
2.  Meydia.  Isolasi  senyawa  steroid  dari  teripang  gamat stichopus  variegates dengan  berbagai  jenis  pelarut  [Skripsi].  Bogor:  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor; 2006.
3.  Bordbar  S,  Anwar  F,  Saari  N.  (2011).  High  value  component  and  bioactives form sea cucumber for functional food-A. Mar Drugs. 2011:9(10); 1761 –1805.
4.  Kordi  MGH.  Budidaya  biota  akuatik  untuk  pangan,  kosmetik,  dan obat-obatan. Yogyakarta: Lily Publisher; 2010.
5.  Kurnia, Devi. Pengaruh kelpat sentrifugal pada proses pemisahan hasil ekstrak teripang  pasir  sebagai  sumber  testoteron  alami  dan  antagis,  Yogyakarta.  In: Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia Kejuangan. 2010.
6.  Kustiariyah. Isolasi, karakterisasi dan uji aktivitas biologis senyawa steroid dari teripang  sebagai  aprodisiaka  alami,  [Thesis].  Bogor:  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor. 2006.
7.  Molyneux, P. The use of the stable free radical diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity. SOngklanakarin J. Sci. 2004: 26;211-219.
8.  Winn  WJr,  Allen  S,  Janda  W,  et  al .  Koneman’s  color  atlas  and  textbook  of diagnostic  microbiology.  6 th ed.  Philadelphia:  Lippincott  Williams  &  Wilkins; 2006.