ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF EXTRACT ETHANOL SPONGE (Mycale vansoesti Sensu) COLLECTED FROM THE MANTEHAGE ISLANDS
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SPONS (Mycale vansoesti Sensu) YANG DIKOLEKSI DARI KEPULAUAN MANTEHAGE
Stela Mahdalena Lampogajo 1)* , Adithya Yudistira 1) , Erladys Rumondor 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
* stelalampongajo12@gmail.com

## ABSTRACT
Mycale  sponges  have  potential  as  antioxidants.  Mycale  vansoesti  Sensu  is  one  of  the  dominant sponges in the Mantehage Islands, Manado. This study is a laboratory experimental study with the ethanol extract of Mycale Vansoesti Sensu sponge with the DPPH [1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl] method to analyze antioxidant activity using a spectrophotometer. The results of this study show that  the  antioxidant  levels  of  the  Mycale  vansoesti  Sensu  Sponge  in  the  waters  of  the  island  of Mantehage have antioxidant activity and the higher the concentration the higher the antioxidant content produced. The greatest antioxidant content is found in the Mycale vansoesti Sensu Sponge with  a  concentration  of  0,35  mg  /  L.  This  shows  that  the  extract  of  the  Mycale  vansosti  Sensu sponge  has  vital  potential  as  an  antioxidant  that  provides  added  value  in  the  pharmaceutical industry.
Keywords: Antioxidant, DPPH, Mycale vansoesti Sensu, Mantehage Island.

## ABSTRAK
Spons  genus Mycale terdapat  potensi  sebagai  antioksidan. Mycale  vansoesti Sensu  merupakan salah  satu  jenis  spons  yang  cukup  dominan  dikepulauan  Mantehage,  Manado.  Penelitian  ini merupakan  eksperimental  laboratorium  dengan  pengujian  terhadap  ektrak  etanol  spons Mycale Vansoesti Sensu dengan  metode  DPPH  [1,1- difenil -2- pikrilhidrazil ]  untuk  menganalisis  aktivitas antioksidan  dengan  menggunakan  spektrofotometer.  Hasil  penelitian  ini  memperlihatkan  kadar antioksidan dari Spons Mycale vansoesti Sensu di perairan pulau Mantehage mempunyai aktivitas antioksidan dan semakin tinggi konsentrasi semakin tinggi pula kadar antioksidan yang dihasilkan. Kadar  antioksidan  yang  paling  besar  terdapat  pada  Spons Mycale  vansoesti  Sen su dengan konsentrasi 0,35 mg/L. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak spons Mycale vansosti Sensu memiliki potensi vital sebagai antioksidan yang memberikan nilai tambah dalam industri farmasi.
Kata kunci : Antioksidan, DPPH, Mycale vansoesti Sensu, pulau Mantehage.

## PENDAHULUAN
Antioksidan merupakan suatu senyawa  yang  dapat  menghambat  atau mencegah proses oksidasi senyawa lain yang diakibatkan oleh adanya suatu radikal bebas. Antioksidan  dapat  mencegah  terjadinya kerusakan pada sel terutama pada bagian-bagian  sel  seperti  DNA,  sel  otak, jaringan  kulit,  dan  sebagainya.  Antioksidan dapat  berupa  enzim  yang  terdapat  dalam tubuh seperti superoksida dismutase, glutation  peroksidase,  dan  katalase.  Selain itu,  antioksidan  dapat  pula  merupakan senyawa non-enzim. Antioksidan ini didapat dari  asupan  makanan  yaitu  dari  antioksidan alami  yang  terkandung  dalam  makanan maupun  antioksidan  sintetik  yang  sengaja ditambahkan pada suatu makanan. (Tristantini dkk, 2016).
Spons  (porifera)  merupakan  biota laut  multi  sel  yang  fungsi  jaringan  dan organnya  sangat  sederhana.  Habitat  spons umumnya  adalah  menempel  pada  pasir, batu-batuan  dan  karang-karang  mati.  Biota laut ini dikenal dengan "filter feeders", yaitu mencari  makanan  dengan  mengisap  dan menyaring  air  melalui  sel  cambuk  dan memompakan  air  keluar  melalui  oskulum. Spons  laut  adalah hewan  multisel  yang berevolusi  dari  sekitar  600  juta  tahun  yang lalu (Abou-Hussein dan Youssef, 2016).
Radikal bebas didefinisikan sebagai  molekul  yang  membawa  satu  atau lebih  elektron  tak  berpasangan  dan  mampu eksis  secara  independen.  Radikal  bebas memiliki  jumlah  elektron  ganjil  sehingga berumur  pendek,  sangat  reaktif,  dan  tidak stabil. Radikal bebas dapat bereaksi dengan cepat dengan molekul lain dengan menangkap  elektron  untuk  menjadi  stabil. Radikal  bebas  akan  menjadi  seimbang dengan  mengambil  elektron  pada  molekul terdekat.  Sementara  itu  molekul  yang diserang  akan  menjadi  radikal  bebas  yang disebabkan kehilangan elektron tdan
memulai reaksi berantai sehingga menyebabkan kerusakan pada sel.(Rivan,2018) Menurut  penelitian  (Annaila,  2018).
Hasil metabolit sekunder dari beberapa spons terbukti  mengandung  senyawa-senyawa  aktif sebagai "lead compound" dalam pengembangan  obat  antibiotik,  antikanker, antivirus  dan  Iain-lain.  Hal  ini  membuktikan bahwa  spons  spons  sangat  potensial  dalam
pengembangan  industri  farmasi,  mengingat senyawa-senyawa  aktif yang dihasilkan mempunyai  perbedaan  dengan  senyawa  yang dihasilkan  oleh  tumbuh-tumbuhan  darat  yang selama  ini  merupakan  sumber  utama  bahan obat-obatan.
Penelitin yang dilakukan oleh (Muhamad,  S  dkk,  2019)  memperlihatkan hasil  kadar  antioksidan  dari  Spons Stylissa sp di  perairan  Selat  Lembeh  mempunyai aktivitas  antioksidan  dan  semakin  tinggi konsenstrasi  semakin  tinggi  pula  kadar antioksidan yang dihasilkan. Kadar antioksidan  yang  paling  besar  terdapat  pada Spons Stylissa  sp dengan  konsentrasi  100 mg/L yang  merupakan kosentrasi yang besar . Berdasarkan data tersebut peneliti bermaksud untuk  menguji  aktivitas  antioksidan  Spons (Mycale  vansoesti Sensu ) yang  diambil  dari perairan Pulau Mantehage dengan menggunakan metode DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ),dan
melihat apakah  ada  aktivitas  antioksidan  pada kosentrasi kecil.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Oktober  2020  -  Desember  2020  di  dua tempat yaitu, laboratorium penelitian Farmasi Program  studi  Farmasi  Fakultas  Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam dan laboratorium Hama  dan  Penyakit  Tumbuhan  fakultas Pertanian Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Bentuk  dari  penelitian  ini  adalah eksperimental laboratorium yang akan menguji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ) dari eksrak Spons (Mycale vansoesti Sensu ) dari perairan pulau Mantehage.

## Alat dan Bahan
Alat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini ialah alat-alat seperti, labu ukur, Erlenmeyer, cawan petri, wadah botol, spatula, gelas arloji, timbangan digital, spektrofotometer  UV-Vis, aluminium  foil,
corong, mikro pipet, tabung reaksi, evaporator.
Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  etanol  96%,  DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ),  dan  serbuk vitamin C p.a sebagai pembanding.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel ini diambil di perairan pulau Mantehage menggunakan alat bantu (Masker dan  Snorkel).  Sebelum  diambil  sampel  di foto  menggunakan  kamera  bawah  laut setelah  diambil  di  masukan  dalam  kantong plastik  jepit  yang  sudah  di  siapkan  dan  di simpan dalam kotak pendingin lalu di bawah ke  Laboratorium  penelitian  lanjut  Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi.
Preparasi Sampe l Spons (Mycale  vansoesti Sensu ) yang  sudah  diambil  dicuci  kembali  dan dipotong-potong  kecil  lalu  sebanyak  500  g sampel  dimasukan  kedalam  wadah  botol, sampel  dimaserasi  dengan  etanol  96% sebanyak 200 mL.

## Ekstraksi
Sampel Mycale  vansoesti Sensu sebanyak 500 g di remaserasi dengan pelarut etanol 96% sebanyak 200 mL dengan 3 kali pengulangan  selama  24  jam.  Sampel kemudian disaring untuk mendapatkan filtrat. Hasil  yang  didapatkan  kemudian  diuapkan menggunakan Evaporator sehingga menghasilkan ekstrak kasar dari sampel.
Pembuatan  Larutan  Stok  Ekstrak  Etanol ( Mycale vansoesti Sensu) Sebanyak 100 mg ekstrak Mycale
Vansoesti Sensu. dilarutkan  dalam  100  mL etanol 96%. dengan masing-masing konsentrasi  0,25,  0,3  dan  0,35  mg/L dihitung dengan menggunakan rumus pengenceran, yaitu :
Dari  masing-masing  hasil  yang  didapatkan dari  hasil  V1  dipipet  dan  ditambahkan  etanol 96%  hingga  mencapai  tanda  batas  (10  mL), kemudian dipindahkan ke dalam tabung reaksi dan  ditutup  dengan  menggunakan aluminium
foil untuk digunakan pada perlakuan selanjutnya.

## Pembuatan Larutan DPPH
Larutan  DPPH  40  ppm  dibuat dengan  cara  menimbang  DPPH  sebanyak  4 mg  kemudian  dilarutkan  dengan  100  mL etanol 96% dalam labu ukur.

## Pembuatan Larutan Vitamin C
Vitamin C p.a ditimbang sebanyak 10  mg  dan  dilarutkan  dalam  etanol  96% sebanyak  10  mL,  kemudian  buat  larutan  stok untuk  konsentrasi  0,25,  0,3  dan  0,35  mg/L dengan  ditambahkan  entanol  96%  sampai tanda  batas  (10  mL)  pada  masing  –  masing larutan  sebanyak  3  kali  pengulangan.  Sampel vitamin  C p.a di  pipet  sebanyak  2  mL dimasukan  kedalam  tabung  reaksi  dengan masing-masing konsentrasi 0,25, 0,3, dan 0,35 mg/L  dan  di  tambahkan  2  mL  larutan  DPPH kedalam masing-masing kosentrasi dan divortex  selama  5  detik  sebanyak  3  kali pengulangan. Kemudian diuji pada spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang 517 nm.
Pengujian  Larutan  Kontrol  DPPH  dan Aktivitas  Antioksidan  dengan  Metode DPPH
Larutan  kontrol  DPPH  diuji  pada spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang 517 nm sebagai absorbansi kontrol dalam  pengujian  ini.  Pada  masing-masing kosentrasi    Sampel    ditambahkan  2  ml larutan  DPPH  dan  diinkubansi  selama  30 menit  pada  suhu  37 0 C.  Untuk  mengetahui aktivitas dari penangkal radikal bebas tersebut, di  uji  pada  spektrofotometer.  Berubahnya warna ungu menjadi warna kuning menunjukkan  efisiensi  penangkal  radikal bebas. Diukur absorbansi pada spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang  517  nm  setelah  diinkubasi  selama 30  menit  berubahnya  warna  menjadi  kuning menunjukan bahwa, masing-masing konsetrasi menunjukkan  efisiensi  penangkal  radikal bebas  di  uji  dengan  spektrofotometer  UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm. Kemudian  diamati  perbandingan  dengan vitamin  C p.a sebagai  standar.  Aktivitas penangkapan  radikal  bebas  (persen  inhibisi) dihitung  sebagai  presentase  berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan rumus :
V 1 .M 1 = V 2 .M 2
%𝐈𝐧𝐡𝐢𝐛𝐢𝐬𝐢 = 𝑨  𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 − 𝑨  𝒔𝒂𝒎𝒑𝒆𝒍 𝑨  𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 × 𝟏𝟎𝟎%

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Dari  hasil  pengukuran  menggunakan
Spektrofotometer  Uv-Vis,  pada  penelitian  ini
diperoleh absorbansi yang kemudian digunakan  untuk  perhitungan  nilai  persen inhibisi  atau  persen  perendaman  senyawa antioksidan  terhadap  DPPH.  Data  persen inhibisi  ekstrak  etanol  spons Mycale  vansoesi Sensu dan Vitamin C p.a sebagai pembanding disajikan pada tabel 1 berikut ini :
Tabel 1. Hasil perbandingan pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Mycale vansoesti Sensu dengan Vitamin C.
Kosentrasi Pengulangan Nilai rata-rata I II III Sampel 55% 56,4% 48% 53,13% Vitamin C 96,8% 92,7% 97,6 95,7% 0,3 ppm Sampel 56,3% 53,6% 52,4% 54,33% Vitamin C 97,6% 98,6% 98,8% 98,33% 0,35 ppm Sampel 70,1% 55,7% 56,3% 60,7% Vitamin C 98,8% 99,6% 98,9% 99,1% Pembahasan Pemanfaatan  Spons  dalam  bidang farmasi selama ini masih terbatas.
Sedangkan,  potensi  Spons  laut  di  Indonesia khususnya  di  Sulawesi  Utara  sangat  besar. Biota  laut  yang  digunakan  yaitu  spons Mycale  vansoesti  Sensu .  Pada  penelitian Marzuki,  (2016)  diketahui  spons  memiliki aktivitas  sebagai  antimikroba  sehingga kemungkinan  untuk  spons Mycale  vansoesti
Sensu  juga  dapat  mengandung  senyawa metabolit sekunder sebagai aktivitas antioksidan yang diproduksi ketika mempertahankan diri dari lingkungan maupun dari serangan organisme lain.
Sebagai
parameter pengujian antioksidan  dilakukan  dengan  menggunakan metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Pemilihan  metode  ini  karena  merupakan metode  yang  sederhana,  mudah,  cepat  dan peka serta hanya memerlukan sedikit sampel untuk  evaluasi  aktivitas  antioksidan.  DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) merupakan radikal  bebas  sintetik  berwarna  ungu  yang banyak  digunakan  dalam  uji  aktivitas antioksidan.    Reaksi  DPPH  dengan  atom
hidrogen  yang  terdapat  dalam  antioksidan dapat  membuat  larutan  DPPH  menjadi berkurang  reaktivitasnya,  yang  ditunjukkan dengan  memudarnya  warna  ungu  menjadi kuning.  Perubahan  warna  ini  mengakibatkan perubahan absorbansi pada panjang gelombang  maksimum  DPPH  menggunakan spektrofotometri  UV-Vis  yang  menjadi patokan  (Molyneux,  2004).  Sempurnanya campuran DPPH dan ekstrak dibantu dengan perlakuan  di  vortex  selama  10  detik.  pada Penelitian  (Rumagit,  2015),  Berkurangnya intensitas warna larutan DPPH tersebut dapat menunjukkan  bahwa  terjadi  reaksi  antara atom  hidrogen  yang  dilepas  oleh  bahan  uji dengan  molekul  radikal  DPPH  sehingga terbentuk senyawa
1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil  yang  berwarna  kuning  .  Pada sampel Mycale vansoesti Sensu yang telah di tambahkan  Larutan  DPPH    tidak  terjadi perubahan  warna  yang  berarti  tidak  terjadi reaksi  antara  atom  hidrogen  yang  dilepas oleh bahan uji.
Pengujian aktivitas antioksidan dalam penelitian ini menggunakan perbandingan 1 : 1  yang  artinya  2  mL  larutan  DPPH

## 0,25ppm
dicampurkan dengan 2 mL larutan. Campuran  dihomogenkan  dan  diinkubasi selama  30  menit  pada  tempat  gelap  dengan suhu  37  C.  Hal  ini  dilakukan  untuk menghindari
kontaminasi dan mengoptimalkan  aktivitas DPPH  agar  terjadi reaksi  antara  DPPH  dengan  sampel  yang diuji.  Hasil  pengujian  perbandingan aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  spons Mycale vansoesti Sensu  dan  vitamin  C  dengan kosentrasi  yang    Kecil  yaitu  0,25  0,3  dan 0,35.  (Tabel  1)  juga  menukjukkan  bahwa adanya  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol spons Mycale  vansoesti sensu  dan  semakin tinggi  kosentrasi  semakin  tinggi  juga  nilai inhibisi,  tetapi  kandungan  antioksidan  pada sampel  spons Mycale  vansoesti Sensu  lebih rendah  dibandingkan  dengan  vitamin  C. Aktivitas  antioksidan  yang  paling  banyak terdapat  pada  Kosentrasi  0,35  karena pengulangan    yang  dilakukan  3  kali memberikan hasil yang akurat.
Dalam  penelitian  ini,  uji  DPPH dilakukan  dengan  mengamati  penurunan absorbansi  pada  panjang  gelombang  517  nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis.  Penurunan  nilai  absorbansi  sebagai akibat  dari  penurunan  intensitas  warna  dari larutan yaitu dari warna ungu menjadi warna kuning.  Penurunan  intensitas  warna  itu terjadi  karena  penambahan  radikal  hidrogen dari senyawa antioksidan pada elektron yang tak berpasangan pada radikal nitrogen dalam struktur  senyawa  DPPH  (Rorong,  2008). sedangkan,  pada  Sampel Mycale  vansoesti sensu dengan kosentrasi kecil nilai absorbansinya  meningkat  dikarenakan  tidak adanya peningkatan itensitas cahaya.
Hasil penelitian  didapat  pada  tabel 1 menunjukan  nilai  persentase  inhibisi  pada ekstrak  etanol  sponge Mycale  vansoesti Sensu    yang  menunjukan  bahwa  sampel tersebut memiliki kadar antioksidan. Menurut Molyneux (2004) nilai standar kadar antioksidan  adalah  50%.  Pada  ekstrak  Spons Mycale  vansoesti Sensu    memiliki  persen inhibisi  rata-rata  paling  tinggi  yaitu  sebesar 60,7%.  Penigkatan  persen  inhibisi  pada ekstrak etanol menandakan bahwa konsentrasi ekstrak yang ditambahkan mempengaruhi  kemampuan  ekstrak  dalam merendam  radikal  bebas.  Hal  ini  didukung oleh  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Hanani et  al.,  (2005)  yang  menyatakan  bahwa presentasi  penghambat  atau  persen  inhibisi
terhadap  aktivitas  radikal  bebas  akan  ikut meningkat  seiring  dengan  meningkatnya konsentrasi.  Aktivitas  antioksidan    pada spons Mycale vansoesti Sensu memiliki Nilai kadar yang standar, ini kemungkinan  disebabkan  oleh  berbagai faktor,  diantaranya  karena  metode  ekstraksi yang  digunakan  kemungkinan  tidak  cukup menarik  komponen  kimia  yang  bersifat antioksidan  dalam  spons Mycale  vansoesti Sensu  dan  juga  Kosentrasi  yang  digunakan pada percobaan ini kecil. Selain itu vitamin C merupakan senyawa murni sedangkan ekstrak etanol spons Mycale vansoesti Sensu masih  merupakan  senyawa  campuran  dan belum  diketahui  kandungan  senyawanya yang  bersifat  antioksidan,  dimana  adanya senyawa  yang  tidak  bersifat  antioksidan kemungkinan  bisa  mempengaruhi  aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  spons Mycale vasoesti Sensu itu sendiri. Menurut penelitian Palekahelu (2018), rendahnya nilai rendemen juga dapat mempengaruhi hasil.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  dari  hasil  penelitian yang telah dilakukan maka, dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  spons Mycale  vansoesti Sensu  dari  perairan  pulau Mantehage,  Kota  Manado  memiliki  aktivitas antioksidan  disetiap  konsentrasi.  Aktivitas antioksidan tertinggi terlihat pada konsentrasi tertinggi  yaitu  pada  konsentrasi  0,35  mg/L dengan mencapai presentase 60,7 %.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  untuk  mengetahui  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  ekstrak  etanol  spons Mycale  vansoesti Sensu.  dan  pengujian aktivitas antioksidan dengan metode lain dan sebaiknya  membandingkan  hasilnya  dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Annaila,  Bian  Ihda.  (2018).  Isolasi  Dan Identifikasi  Senyawa  Metabolit Sekunder  Dari  Fraksi  Kloroform Batang  Benalu  ( Dendrophthoe Farcata (L.F)  Ettingsh)  Pada Tanaman  Mindi (Melia  azedarach L). [Skripsi]. Fakultas Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam. UNY: Yogyakarta.
Abou-Hussein, D.R, dan Youssef, D.T. 2016. Mirabolides  A  and  B;  New Cytotoxic  Glycerides  From  The Red Sea Sponge Theonella Mirabilis. Marine  Drugs. 14(8) .
Hal 55.
Hanani  E,  Mui’im  A  ,  Sekarini  R,  dan
Wiryowidagdo, S. 2005. Identifikasi    Senyawa Antioksidan Dalam Spons Callispongia sp. Dari
Kepulauan  Seribu. Jurnal  Ilmiah
Kefarmasian. 2(3) : 127-133.
Muhammad  S,  Adithya  Y,  Defny  S.W.2019.
Ujiaktivitas antioksidan Stilissa  sp. Dengan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrihidrazil). PHAR
ACON.
Marzuki, I. 2018. Eksplorasi Spons Indonesia Seputar  Kepulauan  Spermonde.
Nas Media Pustaka, Makassar. Molyneux,  P.  2004 .  The  Use  of  The  stable Free Radikal DPPH. J.Sci. Technol. 26(2) : 211-219.
Rivan,  S.  2018  Pengaruh  Radikal  Bebas
Terhadap  Proses  Inflamasi  Pada Penyakit  Paru  Obstruktif  Kronis (PPOK). Jurnal Departemen Kesehatan Masyarakat. 317-324.
Rumagit H. , Runtuwene, dan Sudewi. 2015. Uji  Fitokimia  Dan  Uji  Aktivitas Antioksidan  Dari  Ekstrak  Etanol Spons Lamellodysudea  herbacea . Jurnal Ilmiah. 4(3).
Rorong,  J.  2008.  Uji  aktivitas  Antioksidan Dari  Daun  Cengkeh  ( Eugenia Carryophillus) Dengan  Metode DPPH. Journal Chemstry Progress. 1(2) . Tristantini,  Dewi,  dkk.2016. Pengujian Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH Pada Daun Tanjung (Mimusops elengi L). Yogyakarta: Pengembangan Tenologi  Sumber  Daya  Alam Indonesia. Palekahelu,  N.  2018.  Aktivitas  Antioksidan Dan  Antibakteri  Dari  Ekstrak
Etanol  Dan  Metanol  Daun  Kapehu (Guioa  diplopetala).  Jurnal  Ilmiah
Farmasi. 3(4).