JBE 6 (1) (2021) 9-17

## BIO-EDU: Jurnal Pendidikan Biologi
https://jurnal.unimor.ac.id/JBE/index

## Ekstrak Daun Beluntas (Pluchea indica) sebagai Antibakteri
Streptococcus mutans ATCC 25175 Penyebab Karies Gigi
Endrik Nurrohman 1* , Yuni Pantiwati 1 , Eko Susetyarini 1 , Erika Khoirul Umami 1 1 Pendidikan Biologi, Universitas Muhammadiyah Malang Jl. Raya Tlogomas No. 246 Malang, Jawa Timur. Fax: 0341464318
endrik.18@gmail.com
DOI: https://doi.org/10.32938/jbe.v6i1.992

## Abstrak
Streptococcus  mutans menjadi  penyebab  kerusakan  gigi,  hasil  Riskesdes  tahun  2018  di  Indonesia  gigi rusak atau berlubang sebesar 45,3%. Bidang kedokteran telah memanfaatkan bahan alam sebagai altenatif pengobatan.  Beluntas  ( Pluchea  indica )  berkhasiat  sebagai  obat  herbal  dengan  kandungan  bahan  aktif alkaloid,  flavonoid,  dan  tannin  dan  berpotensi  sebagai  antibakteri. Tujuan  Penelitian  ini  menganalisis aktivitas  antibakteri  berbagai  konsentrasi  ekstrak  daun  beluntas  terhadap  diameter  zona  hambat  bakteri Streptococcus  mutans ATCC  25175.  Jenis  penelitian  adalah  eksperimen.  Penelitian  dilakukan  di Laboratorium  Teknik  Kimia  Politeknik  Negeri  Malang  dan  Laboratorium  Biologi  Universitas Muhammadiyah  Malang.  Penelitian  dilaksanakan  pada  Bulan  Oktober  sampai  Desember  2020. Rancangan penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 7 perlakuan dan 3 ulangan. Standar  kekeruhan  isolat  bakteri  menggunakan Mcferland 10 8 .  Desain  penelitian Posttest-Only  Control Design . Analisis  data  menggunakan  Anova  satu  jalur  dan  uji  lanjut  Duncan  5%.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  terdapat  pengaruh  pemberian  berbagai  konsentrasi  ekstrak  daun  beluntas  terhadap zona hambat bakteri Streptococcus mutans . Hasil analisis  duncan menunjukkan bahwa konsentrasi  25% memberikan  pengaruh  paling  signifikan  dibandingkan  perlakuan  lainya  dan  berbeda  signifikan  dengan perlakuan yang lain namun tidak mendekati perlakuan kontrol  positif. Temuan penelitian ini kandungan senyawa  aktif  pada  daun  beluntas  berpengaruh  sebagai  antibakteri Streptococcus  mutans ,  pada konsentrasi 5% adalah konsentrasi hambat minimum (khm).
Kata Kunci : Antibakteri, Ekstrak Daun Beluntas, Streptococcus mutans ATCC 25175 .

## Abstract
Streptococcus mutans is the cause of tooth decay, the results of the 2018 Riskesdes in Indonesia, damaged or  perforated  teeth  amounted  to  45.3%.  The  medical  field  has  used  natural  ingredients  as  alternative treatments.  Beluntas  (Pluchea  indica)  has  medicinal  properties  with  active  ingredients  of  alcaloid, flavonoids, and tannins and has the potential to  be antibacterial . The purpose of this study  is to  analyze the  antibacterial  activity  of  various  concentrations  of  beluntas  leaf  extract  by  examining  the  inhibition zone’s  diameter  of Streptococcus  mutans ATCC  25175  bacteria.  This  type  of  research  is  experimental. The research was conducted at the Chemical Engineering Laboratory of State Polytechnic of Malang and the  Biology  Laboratory  of  the  University  of  Muhammadiyah  Malang.  The  study  was  conducted  from October  to  December  2020.  The  research  design  used  a  completely  randomized  design  (CRD)  with  7 treatments and 3 replications. The standard of turbidity of bacterial isolates used Mcferland 10 8 . Research design was Posttest-Only Control Design. Data analysis used one-way ANOVA and Duncan's continued test of 5%. The results showed that there was an effect of giving various concentrations of beluntas leaf extract on the inhibition zone of Streptococcus mutans bacteria. The results of Duncan's analysis showed that  the  concentration  of  25%  had  the  most  significant  effect  compared  to  other  treatments  and  was significantly different from other treatments but rather far from the positive control treatment result. The
findings of this study is the content of active compounds in beluntas leaves have an effect as antibacterial towards Streptococcus  mutans ,  also,  at  a  concentration  of  5%  with  minimum  inhibitory  concentration (khm).
Keywords : Antibacterial, Beluntas Leaf Extract, Streptococcus mutans ATCC 25175.

## PENDAHULUAN
Streptococcus mutans merupakan salah satu bakteri penyebab kerusakan gigi dan bau  mulut.  Karies  gigi  secara  umum  dikenal  di  masyarakat  adalah  kerusakan  jaringan gigi. Penyakit ini dapat menyerang semua populasi manusia tanpa memandang ras dan umur  (Nahak,  2013).  Penyakit  karies  gigi  menduduki  peringkat  kedua  setelah  flu (Rosenberg,  2010).  Hasil  RisKesDes  tahun  2018  proporsi  terbesar  masalah  gigi  di Indonesia  adalah  gigi  rusak/  berlubang/  sakit  (45,3%).  Sedangkan  masalah  kesehatan mulut yang mayoritas dialami penduduk Indonesia adalah gusi bengkak (abses) sebesar 14%  (Kemenkes,  2021).  Karies  gigi  terjadi  karena  pada  permukaan  email  gigi  terjadi proses demineralisasi karena adanya asam yang diproduksi oleh bakteri plak utamanya yaitu Streptococcus mutans (Lewis & Ismail, 1993).
Streptococcus  mutans merupakan  bakteri  yang  bersifat  fakultatif  anaerobik, kelompok  bakteri  gram  positif  (Charke,  1924;  Metwalli et  al., 2013).  Bakteri  ini berbentuk  bulat  atau  coccus,  susunanya  seperti  rantai,  umumnya  dapat  dijumpai  di rongga  mulut  (Vinogradov et  al., 2004).  Bakteri  ini  termasuk  kelompok  flora  normal dan bakteri yang dapat menghasilkan asam laktat (Argimon & Caufiled, 2011). Namun jika  terjadi  penumpukan  asam  laktat  pada  gigi  akan  menyebabkan  kerusakan  berupa karies gigi.
Usaha  pencegahan  yang  umum  dilakukan  adalah  dengan  cara  mekanik  seperti menyikat  gigi  pada  waktu  yang  tepat  dan  dengan  cara  yang  benar  (Nahak,  2013), dan dengan cara kimiawi yaitu menggunakan obat kumur yang bersifat sterilisasi bagi mulut (Kustiawan, 2002). Salah satu kekurangan dari obat-obat sterilisasi ini bersifat antigenik dan sitotoksik yang hanya efektif dalam waktu singkat (Grossman et al., 1995; Walton et al., 2000), serta menimbulkan resistensi bakteri (Manu, 2013). Penggalian potensi bahan aktif senyawa metabolit sekunder sebagai alternatif dari tumbuh-tumbuhan merupakan hal yang menarik untuk dijadikan bahan pilihan sebagai bahan  antibakteri  dan  sangat  penting  untuk  diteliti.  Selain  banyak  tumbuhan  di  sekitar masyarakat  yang  banyak  manfaatnya,  obat  herbal  yang  berasal  dari  tumbuh-tumbuhan memiliki efek samping yang lebih rendah dibandingkan obat-obat kimia (Pargaputri et al, 2019).  Alasan  lain  adalah  potensi  bahan  tradisonal  yang  berasal  dari  tumbuhan masih banyak yang belum dibuktikan bioaktivitasnya secara ilmiah (Hertiani, 2003).
Dewasa ini,  bidang kedokteran telah memanfaatkan bahan alam sebagai altenatif pengobatan, salah satunya adalah beluntas . Beluntas ( Pluchea indica ) sebagai salah satu tumbuhan  herba  yang  mudah  didapatkan  (Susetyarini et  al., 2020),  telah  dilaporan berkhasiat sebagai obat herbal (Susetyarini, 2013), dan berpotensi sebagai antimikroba (Purnomo,  2001;  Pratiwi,  2005),  serta  mempunyai  daya  antibakteri  (Pratiwi,  2005, Pergaputri et  al., 2019).  Kandungan  senyawa  dalam  daun  beluntas  memiliki  beberapa aktivitas biologis dan berbagai aktivitas farmakologi (Fitriansyah et al, 2018). Beluntas mengandung  bermacam  senyawa  aktif,  pada  daun  terkandung  senyawa  aktif  alkaloid, flavonoid,  tanin  (Susetyarini,  2011;  Febrianta et  al., 2015).  Aktivitas  bahan  aktif beluntas seperti flavonoid, tanin, dan minyak atsiri memiliki efek antibakterial (Michael
& Chan, 1988; Nahak, 2013; Pargaputri et al, 2019).
Parameter  kemampuan  suatu  ekstrak  yang  berasal  dari  tumbuhan  untuk  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  adalah  dengan  mengamati  dan  mengukur  adanya zona bening atau zona hambat yang ada di sekitar cakram disc yang telah diberi ekstrak sehingga  didapatkan  data  kualitatif  dan  kuantitatif.  Tujuan  penelitian  ini  adalah menganalisis  daya  kerja  antimikrobial  berbagai  konsentrasi  ektrak  daun  beluntas ( Pluchea  indica )  terhadap  diameter  zona  hambat  bakteri Streptococcus  mutans ATCC 25175 secara In-vitro.

## METODE
Jenis  penelitian  adalah  penelitian  eksperimen.  Perlakuan  sebanyak  lima konsentrasi  ektrak  daun  beluntas  dan  kontrol,  jumlah  ulangan  sebanyak  tiga  kali. Penelitian dilakukan di Laboratorium Biologi Universitas Muhammadiyah Malang dan Laboratorium  Teknik  Kimia  Politeknik  Negeri  Malang.  Penelitian  dimulai  pada Oktober sampai November 2020. Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya isolat bakteri Streptococcus mutans , media MHA, aquades, alkohol, cawan petri,  inkubator,  autoclave,  magnetic  stirrer,  hot  plate,  jangka  sorong, cakram  disc . Sampel daun beluntas didapatkan dari Laboratorium herbal  Materia Medica Kota Batu Jawa Timur. Teknik sampling yang digunakan adalah Purposive Random Sampling. Prosedur penelitian dengan langkah-langkah: 1) pembuatan ekstrak daun beluntas di Laboratorium Teknik Kimia Politeknik Negeri Malang  2) peremajaan dan streaking isolat bakteri Streptococcus mutans pada media agar, 3) perlakuan berbagai konsentrasi ekstrak daun beluntas, 4) pengeraman selama 1x 24 jam menggunakan inkubator pada suhu  37 o C,  5)  mengukur  zona  hambat  atau  zona  bening  yang  terbentuk  menggunakan jangka  sorong.  Rancangan  penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL). Desain  penelitian  ini post-test  only  control  group  design. Standar  kekeruhan  isolat bakteri  yang  distreaking  menggunakan Mcferland 10 8 .  Pengumpulan  data  dengan  cara mengukur  zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar cakram  disc .  Zona  hambat  yang terbentuk  diukur  menggunakan alat  jangka  sorong. Analisis  data  menggunakan  Anova satu jalur dan uji lanjut Duncan 5% dengan bantuan aplikasi SPSS 21.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  uji  anava  menunjukkan  bahwa  nilai  sig  0,000  <  0,05,  artinya  terdapat pengaruh pemberian berbagai konsentrasi ekstrak daun beluntas terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus  mutans ,  hal  tersebut  ditandai  dengan  adanya  zona  bening  di sekitar cakram disc . Hasil pengamatan diameter zona hambat disajikan pada Tabel 1. Tabel 1. Diameter Zona Hambat Pertumbuhan Streptococcus mutans No  Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) Rata-rata (mm) Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 1 K - 0 0 0 0 2 Ekstrak 5% 12,5 11,4 17,8 13,9 3 Ekstrak 10% 13,8 12,3 18,6 14,9 4 Ekstrak 15% 15,0 13,2 18,9 15,7 5 Ekstrak 20% 15,7 13,8 21,1 16,9 6 Ekstrak 25% 17,1 16,7 25,0 19,6 7 K + 38,4 32,1 33,4 34,6 Keterangan : Ekstrak (Daun Beluntas); K+ (Amoksisilin); K- (Aquades).
Hasil pengukuran zona hambat didapatkan hasil bahwa  perlakuan kontrol negatif tidak  memberikan  efek  terhadap  pertumbuhan  bakteri  (0  mm)  dan  perlakuan  berbagai konsentrasi  ekstrak  daun  beluntas  menunjukan  hasil  diameter  yang  berbeda  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Rata-rata  diameter  zona  hambat  perlakuan  ekstrak daun  beluntas  dengan  konsentrasi  5%  diameter  zona  hambat  sebesar  13,9  mm, konsentrasi 10% sebesar 14,9 mm, konsentrasi 15% sebesar 15,7 mm, konsentrasi 20% sebesar 16,9 mm, konsentrasi 25% sebesar 19,6 mm dan kontrol positif 34,6 mm. Hasil pengamatan dan pengukuran diameter zona hambat disajikan pada Gambar 1.

## Gambar 1. Hasil Pengamatan dan Pengukuran Diameter Zona Hambat
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  beluntas  adalah  respon  dari  ketidakmampuan sel  bakteri  untuk  tumbuh  dikarenakan  adanya  senyawa  yang  ada  pada  ekstrak  daun beluntas  yang  dapat  menekan  pertumbuhan  sel-sel  bakteri.  Hasil  penelitian  kandungan senyawa  pada  daun  beluntas  adalah  tanin,  flavonoid,  dan  alkaloid  (Susetyarini,  2011). Beluntas  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  tanin  dan  minyak  atsiri  dan  bersifat antibakteri  (Agoes,  2010).  Aktivitas  tanin  yang  terkandung  dalam  daun  beluntas bertindak  sebagai  antibakteri  karena  menyebabkan  kerusakan  pada  membran  sel akibatnya  terjadi  kerusakan  intraselular  (Slots  &  Martin,  1992).  Tanin  akan  berikatan dengan enzim bakteri dan bekerja sebagai inhibitor. Hal ini menyebabkan terganggunya metabolisme  atau  matinya  sel  (Michael  &  Chan  1988;  Mahtati,  2004).  Tanin  dapat menginaktivasi  adhesin  mikroba,  enzim,  dan  protein  transport  pada  membran  sel sehingga mampu menghambat pertumbuhan bakteri (Hamdiyati et al., 2009).
Menurut  Ajizah  (2004)  tanin  merupakan  kelompok  senyawa  polifenol  yang memiliki aktifitas antibakteri dengan jalur mengganggu permeabilitas sel, akibatnya sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhannya terhambat atau bahkan mati  diduga  tanin  mampu  mengkerutkan  dinding  atau  membran  sel.  Masduki  (1996) menyatakan bahwa tanin juga mempunyai daya antibakteri dengan cara  mempresipitasi protein, karena diduga tanin mempunyai efek yang sama dengan senyawa fenolik. Efek antibakteri  tanin antara  lain  melalui  reaksi  dengan  membran  sel, inaktivasi enzim, dan destruksi atau inaktivasi fungsi materi genetik (Akiyama et al ., 2001).
Selain tanin, senyawa kelompok flavonoid juga memiliki efek antibakteri karena kemampuannya  untuk  berinteraksi  dengan  DNA  bakteri  (Sabir,  2003).  Flavonoid memiliki  efek  farmakologis  sebagai  bahan  antibiotik  alami  yang  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri, virus, maupun jamur (Armedita et al., 2018). Ion hidroksil dalam flavonoid yang secara kimia dapat merubah senyawa organik dan transport nutrisi yang dapat  menyebabkan  efek  toksis  terhadap sel  bakteri  (Sabir,  2005).  Flavonoid  berperan sebagai  antibakteri  dengan  cara  membentuk  senyawa  kompleks  terhadap  protein
ekstraseluler  yang  mengganggu  integritas  membran  bakteri  (Supriatni et  al .,  2017). Flavonoid  bersifat  polar  karena  mengandung  sejumlah  hidroksil.  Perbedaan  kepolaran antara  lipid  penyusun  DNA  dengan  gugus  alkohol  pada  senyawa  flavonoid  tersebut mengalami lisis dan mati (Susilawati et al., 2014).
Saponin bekerja sebagai antibakteri dengan mengganggu stabilitas membran sel bakteri  sehingga  menyebabkan  sel  bakteri  mengalami  lisis,  berdasarkan  hal  tersebut maka  mekanisme  kerja  saponin  termasuk  dalam  kelompok  antibakteri  yang mengganggu permeabilitas membran sel (Susilawati et al., 2014). Aktifitas dari saponin menyebabkan kerusakan struktur dinding sel dan bakteri mengalami lisis dan akhirnya bakteri mengalami kematian (Djide, 2008)
Berdasarkan  lebar  dan  sempitnya  zona  hambat  yang  dibentuk,  senyawa antimikrobial  memiliki  beberapa  criteria,  diantaranya  yaitu  menurut  David  and  Stout (1971) dalam Ambarwati (2007) tingkat penghambatan pertumbuhan bakteri jika zona hambat  5  mm  atau  kurang  maka  tingkat  penghambatannya  dikategorikan  lemah,  5-10 mm  dikategorikan  sedang,  10-19  mm  dikategorikan  kuat,  dan  20  mm  atau  lebih dikategorikan  sangat  kuat.  Berdasarkan  kriteria  tersebut  maka  secara  keseluruhan kemampuan  ekstrak  daun  beluntas  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Streptococcus mutans termasuk dalam kategori sedang (5-10 mm).
Senyawa  antibakteri  dalam  interaksinya  dengan  sel  bakteri  memiliki karakteristik  atau  yang  bersifat  dapat  menekan  pertumbuhan  bakteri  disebut  dengan bakteriostatik  sedangkan  senyawa  yang  dapat  membunuh  sel-sel  bakteri  disebut bakteriosida  (Waluyo,  2011). Senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam tumbuhan  adalah  kelompok  bakteriostatik.  Mekanisme  menghambat  senyawa  aktif terhadap  sel  bakteri  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor.  Pelczar  dan  Chan  (2012) mengungkapkan  bahwa  terdapat  beberapa  faktor  yang  dapat  mempengaruhi  zat antimikroba  yaitu  konsentrasi  zat  antimikroba,  jumlah  mikroorganisme,  suhu,  spesies mikroorganisme, adanya bahan organik, dan pH.
Hasil  uji  Duncan  menunjukkan  bahwa  perlakuan  ekstrak  beluntas  paling  baik ada  pada  perlakuan  25%,  perlakuan  5%  signifikasinya  paling  rendah.  Perlakuan  5% tidak  berbeda  signifikan  dengan  perlakuan  10%,  15%,  dan  20%,  tetapi  berbeda signifikan  dengan  perlakuan  25%.  Perlakuan  25%  berbeda  signifikan  dengan  seluruh perlakuan  yang  lainnya.  Perlakuan  berbagai  konsentrasi  ekstrak  berbeda  signifikan dengan kontrol positif (Amoksisilin). Hasil uji Duncan disajikan pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil Uji Duncan Berbagai Konsentrasi Ekstrak Daun Beluntas
a b b b b c d 0 5 10 15 20 25 30 35 40 kontrol - konsentrasi 5% konsentrasi
10% konsentrasi 15% konsentrasi 20% konsentrasi 25% kontrol + R ata -r ata ( m m )
Banyak  laporan  dan  publikasi  hasil  penelitian  yang  menerangkan  bahwa  ekstrak daun  beluntas  berpotensi  sebagai  antibakteri.  Hasil  penelitian  Syaravina et  al (2018), ekstrak  beluntas  berpengaruh  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Streptococcus mutans pada  konsentrasi  25%.  Hasil  penelitian  Nahak et  al., (2015)  konsentrasi  25% ekstrak  daun Pluchea  indica memiliki  daya  hambat  sebanding  dengan chlorhexidine 0,12%  dalam  menghambat  diameter  bakteri Streptococcus  mutans .  Banyaknya penelitian yang serupa tentang potensi ekstrak pada daun beluntas sebagai antimikroba menguatkan  penelitian  ini  bahwa  memang  benar  adanya  zona  hambat  yang  terbentuk berasal  dari  aktivitas  bahan  aktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak  daun  beluntas.  Hal tersebut dikuatkan oleh Septiana et al., (2016) yang menyebutkan bahwa senyawa aktif yang terdapat pada daun beluntas merupakan senyawa aktif yang bersifat antibakteri.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berbagai  konsentrasi  ekstrak  daun  beluntas  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan bakteri Streptococcus  mutans ATCC  25175 . Diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan berbanding  lurus  dengan  tingginya  konsentrasi  ekstrak  yang  diberikan.  Konsentrasi 25%  memberikan  pengaruh  yang  paling  signifikan  dibandingkan  dengan  konsentrasi yang lain. Konsentrsi Hambat Minimum (KHM) adalah 5%.

## Saran
Ekstrak  daun  beluntas  berpotensi  sebagai  anti  bakteri  pertumbuhan Streptococcus  mutans, namun  perlu  dikaji  lebih  lanjut  terkait  dengan  potensi  ekstrak masing-masing  organ  tumbuhan  dan  uji  kuantitatif  fitokimia  senyawa  metabolit sekundernya.

## DAFTAR RUJUKAN
Argimon,  S.,  Caufiled,  P.  W.  (2011).  Distribution  of  Putatif  Virulance  Genes  in Streptococcus  mutans Strain  Does  Not  Correlate  with  Caries  Experience.
Journal of Clinical Microbiology, 49(3): 984-992.
Ajizah, A. (2004). Sensitivitas Salmonella typhimurium terhadap Ekstrak Daun Psidium guajava L. Bioscientiae , 1(1): 31-82.
Akiyama, H., Fuji., Yamasaki. (2001). Antibacterial Action of Several Tannins Agains Staphylococcus  aureus , Journal  of  Antimicrobia  Cahemotherapy .  4(8):  487- 491.
Ambarwati. (2007). Efektivitas Zat Antibakteri Biji Mimba ( Azadirachta indica ) untuk Menghambat  Pertumbuhan Salmonella  thyposa dan Staphylococcus    aureus . Biodiversitas , 8 (3):47-61.
Agoes, A. (2010). Tanaman Obat Indonesia Buku 1 . Jakarta.Salemba Medika.
Charle,  J.K.  (1924).  On  the  Bacterials  Factor  in  The  Ecology  of  Dental  Caries. Britih Journal of Experimental Pathology , 5: 141-147.
Djide,  N,  &  Sartini.  (2008). Analisis  Mikrrobiologi  Farmasi .  Universitas  Hasanuddin:
Makassar
Fitriansyah, Mohamad Irfan, Raden Bayu Indradi. (2018). Review: Profil Fitokimia Dan Aktivitas  Farmakologi  Baluntas  ( Pluchea  indica L.). Farmaka. Suplemen, 16 (2): 337-346.
Febrianta  F,  (2015).  Effects  of Pluchea  indica  Less Leaf  Extract  and  Chlorine  to Hematological  Profiles  of  Broiler  Chickens. International  Journal  of  Poultry Science 14(10): 584-588.
Grossman L.I, Oliet S, and Del Rio C.E. (1995). Ilmu Endodontik dalam Praktek, Edisi Kesebelas. Alih bahasa : Abyono R. Penerbit Buku Kedokteran EGC: Jakarta. p: 24849; 251; 255-57
Hamdiyati, Yanti., Kusnadi, dan Irman Rahadian.  (2009). Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun    Patikan  Kebo  (Euphorbia  hirta)  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus epidermidis .  FPMIPA UPI: Bandung.
Hertiani,T.,  Palupi,  S.  I.,  Sanliferianti,  dan  Nurwindasari,  D.H.,  (2003).  Uji  Invitro
Antimikroba  terhadap Staphylococus  aureus,  Eschericia  coli,  Shygella dysentriae dan Candida  albicans dari  Beberapa  Tanaman  Obat  Tradisional untuk Penyakit Infeksi. Jurnal Farmasi Indonesia Pharmacon , 4 (2): 89-95. Kementrian  Kesehatan  Republik  Indonesia,  (2021). Situasi  Kesehatan  Gigi  dan  Mulut 2019 . Kesiapsiagaan Menghadapi Infeksi Covid-19. GERMAS Kemenkes RI. https://www.kemkes.go.id/article/view/20030900005/situasi-kesehatan-gigi- dan-mulut-2019.html . Dipublikasikan Pada : Senin, 09 Maret 2020. Diakses 20 Maret 2021.
Kustiawan,W.  (2002).  Lubang  Gigi  (Karies)  dan  Perawatanya.  Artikel  (Serial  Online)
(Cited 26 Oktober 2020) Available from: http://www.pikiran rakyat.com.
Lewis,  D.W.,  &  Ismail,  A.  I.  (1993).  Dental  Caries,  Diagnosis,  Risk  Factors  and Prevention, Can Med Assoc J , 1(1): 408-417.
Manu,  (2013).  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Beluntas  terhadap
Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis dan Pseudomonas aeruginosa . Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya, 2(1):1–10.
Mahtuti,  Erni  Y.  (2004).  Pengaruh  Daya  Antimikroba  Asam  Tanat  terhadap
Pertumbuhan  Bakteri Salmonela  typhii Secara  In-Vitro.  Tesis  Master  dari JIPTUNAIR.
Michael J. Pelczar and E.C.S. Chan. (1988). Dasar-dasar mikrobiologi 2 . Penerjemah: Ratna  Siri  Hadioetomo,  dkk.  Penerbit  Universitas  Indonesia  (UI-Press): Jakarta. hlm: 456-467
Metwalli,  K.  H.,  Khan,  S.  A.,  Krom,  B.  P.,  Jabra,  Rizk  M.  A.  (2013). Streptococcus mutans,  Candida  albicans, and  The  Human  Mouth:  A  Sticky  Situation . PLoS Pathog , 9 (10):1–5.
Masduki  I,  (1996).  Efek  Antibakteri  Ekstrak  Biji  Pinang  ( Areca  catechu )  terhadap S. aureus dan E. coli. Cermin Dunia Kedokteran, 109: 21-24.
Nahak,  M.  M.,  Tedjasulaksana  R,  Sumerti  N.  N.  (2015).  Efektivitas  Kumur  Ekstrak Etanol Daun Beluntas ( Pluchea indica . L.) untuk Menurunkan Jumlah Koloni Streptococcus sp . pada Plak Gigi. J Skala Husada .12(4):56–64
Nahak, Maria Martina. (2013). Ekstrak Etanol Daun Beluntas ( Pluchea indica L.) dapat Menghambat  Pertumbuhan  Bakteri Streptococcus  mutans . Jurnal  Kesehatan Gigi , 1(1): 40-50.
Pargaputri,  Agni  Febrina,  M.  Mudjiono,  Agus  Subiwahjudi.  (2019).  Daya  Antibakteri
Ekstrak Daun Beluntas ( Pluchea Indica Less) terhadap Streptococcus viridans (In-Vitro). Laporan  Penelitian.  Under  Graduate  Dentistry ,  Faculty  of Dentistry, Airlangga University, Prof. Dr. Moestopo 47, Surabaya
Pratiwi,  Rini.  (2005).  Perbedaan  Daya  Hambat  terhadap Streptococcus  mutans dari Beberapa Pasta Gigi yang Mengandung Herbal. Majalah Kedokteran Gigi, 38 (2):64-67.
Purnomo, M. (2001). Isolasi Flavonoid dari Daun Beluntas (Pluchea indica Less) yang Mempunyai  Aktivitas  Antimikroba  terhadap  Penyebab  Bau  Keringat  secara Bioautografi. Thesis. Universitas Airlangga: Surabaya.
Pelczar,  M.  J.  dan  Chan,  E.C.S.  (2012). Dasar-dasar  Mikrobiologi  2 .  Jakarta. Universitas Indonesia.
Pargaputri, P. F. (2016). Antibacterial Effects of Pluchea indica Less leaf Extract on E. faecalis and Fusobacterium nucleatum (In Vitro). Dent. Journal, 49(2): 93–98. Rosenberg,  J.  D.  (2010).  Dental  Caries  Article  (Serial  online)  (Cited  2020  September
20) Available from: http://www . Hlm. Nih. Gov/
medlineplus/ency/article/00/055.htm
Sabir  A.  2003.  Pemanfaatan  Flavonoid  di  Bidang  Kedokteran  Gigi. Majalah Kedokteran Gigi ( Dental Journal), Edisi Khusus Temu Ilmiah Nasional III: 81- 7.
Sabir  A.  2005.  Aktivitas  Antibakteri  Flavonoid  Propolis Trigona  sp terhadap  Bakteri Streptococcus  mutans (In  Vitro). Majalah  Kedokteran  Gigi  (Dental  Journal), 38(3): 759-768.
Susetyarini,  E.  (2013).  Aktivitas  Tanin  Daun  Beluntas  Terhadap  Konsentrasi Spermatozoa Tikus Putih Jantan. Jurnal Gamma , 8 (2):14-20.
Susetyarini,  Eko.,  Wahyono,  Poncojari.,  Latifa,  Roimil.,  Nurrohman,  Endrik.  (2020). The  Identification  of  Morphological  and  Anatomical  Structures  of Pluchea indica . Journal of Physics: Conference Series , 1539. 012001.
Susetyarini,  E,  (2011). Khasiat  Beluntas Sebagai  Antifertilitas  (Uji  pre-  klinis ).  UMM Press. Malang.
Susetyarini, E, (2011). Aktivitas dan Keamanan Senyawa Aktif Daun Beluntas Sebagai Antifertilitas  Serta  Pemanfaatannya  Sebagai  Buku  Antifertilitas .  Disertasi . Pasca UM. Malang.
Susetyarini,  Eko.,  Wahyono,  Poncojari.,  Latifa,  Roimil.,  Nurrohman,  Endrik.  2020.
Phytochemical Screening of Gotu Kola Extract (Centella asiatica (L.) Urban.) : Preliminary Research to Find Active Compounds Potential for Immunomodulator Candidate. International Conference on Science,
Infrastructure Technology and Regional Development (ICoSITeR) . ITERA.
Slots,  Jorgen  and  Martin  A.  Taubman.  (1992). Contemporary  Oral  Microbiology  and Immunology. Mosby Year Book, Inc. St Louis. p: 187
Supriatni,  D.,  Said,  I.,  &  Gonggo,  S.  T.  (2017).  Pemanfaatan  Ekstrak  Daun  Mahkota Dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl) sebagai Pengawet Tomat. Jurnal Akademika Kimia , 5(2):67-76. https://doi.org/10.22487/j24775185
.2016.v5.i2.8012
Septiana, Ilma Bayu., Erli,  Euis., Sopyan, Taupik.  (2016). Uji Ekstrak Daun Beluntas
( Pluchea  indica L.  Less)  terhadap  Zona  Hambat  Bakteri Escherichia  coli Patogen secara In Vitro. Jurnal Pendidikan Biologi (Bioed), 4(1): 64-69.
Syaravina, Clarissa Bonita., Amalina, Rizki., Hadianto, Eko.  (2018). Pengaruh Ekstrak Daun Beluntas ( Pluchea indica (L.) Less) 25% terhadap Biofilm Streptococcus Mutans -In Vitro. ODONTO Dental Journal , 5(1): 28-33. Susilowati,  A.  &  Andi,  B.  (2014). Pengaruh  Getah  Tanaman  jarak  Pagar  (Jatropha curcas  L)  terhadap  Daya  Hambat  Bakteri  Staphylococcus  aureus  secara  In Vitro . Skripsi. Semarang: Fakultas Peternakan, Universitas Diponegoro.
Walton and Torabinejad. (1994). Prinsip dan Praktik Ilmu Endodonsi , Edisi kedua. Alih Bahasa: drg. Narlan Sumawinata. Penerbit Buku Kedokteran EGC: Jakarta.
Waluyo, Lud. (2011). Mikrobiologi Umum. UMM Press: Malang.
Vinagrodov, A. W., Wiston, M., Rupp, C.J., Stoodley, P. (2004). Rheology of Biofilan Formed from The Dental Plague Patogen Streptococcus mutans . Biofilm , 1:49- 56.