UJI DAYA HAMBAT DAGING BUAH SIRSAK ( Annona muricata L. ) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI

## Porphyromonas gingivalis
Priskila Gabriela Tani 1) , P. Mona Wowor 2) , Johanna A. Khoman 1)
1) Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran UNSRAT, Manado, 95115.
2) Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi Manado, 95115

## ABSTRACT
Chronic  Periodontitis  is  an  infection  of  the  periodontal  tissue  that  usually  slow.  The  main cause  of  this  disease  periodontitis  is  Porphyromonas  gingivalis  which  is  a  Gram-negative  and anaerobic  bacteria  colonize  in  the  mouth  tissue.  Resistance  of  Porphyromonas  gingivalis  against antibiotics  allows  the  use of  herbal  medicines  from  natural  materials  into  one  of the  alternatives in the  treatment  of  chronic  periodontitis.  Soursop  fruit  (Annona  muricata  L)  is  one  of  natural compounds in Indonesia and used as a medicinal herb. The leaves of soursop fruit is believed to have a  pharmacological  effect,  because  it  contains  flavonoids,  tannins,  saponins,  alakaloids,  and anthochyanins as antibacterial.The purpose of this study is to find out whether soursop fruit has its inhibit  Porphyromonas  gingivalis.  This  study  using  pure  experimental  with  design  studypost  test onlycontrol grup design. Methods used as test of bacteri are using the modification Kirby bauer paper disc.  The  concentration  of  flesh  soursop  fruit  used  in  study  is  100%.  Control  positive  using Metrodinazole and control negative use aquadest. Bacteria of  Porphyromonas gingivalis taken from stock  bacteria  laboratory FMIPA  University  Of  Sam  Ratulangi Manado.  The  results  showed  of  this study  indicate  the  avarange  value  of  inhibition  zone  of  soursup  fruit  flesh  (Annona  muricata  L.)  to Porphyromonas gingivalis of 11,3 mm. Based on this research can be concluded that the soursop fruit flesh has the inhibitory power to growth of Porphyromonas gingivalis. Inhibition zone of soursup fruit flesh (Annona muricata L.) against Porphyromonas gingivalis of 11,3 mm.
Keywords : Soursop fruit (Annona muricata L), Porphyromonas gingivalis, Inhibitory

## ABSTRAK
Periodontitis kronis merupakan infeksi pada jaringan periodontal yang biasanya berjalan lambat. Penyebab  utama  penyakit  periodontitis  ini  ialah  bakteri Porphyromonas  gingivalis yang  merupakan bakteri  anaerob  Gram  negatif  dan  berkoloni  dalam  jaringan  mulut.  Resistennya Porphyromonas gingivalis terhadap obat antibiotik memungkinkan penggunaan obat herbal dari bahan alam menjadi salah  satu  alternatif  dalam  perawatan  periodontitis  kronis.  Buah  sirsak  (Annona  muricata L .) merupakan  salah  satu  bahan  alam  di  Indonesia  yang  digunakan  sebagai  obat  herbal.  Buah  sirsak dipercaya  memiliki  efek  farmakologis,  karena  mengandung  senyawa  flavonoid,  tannin,  saponin, alkaloid,  dan  antosianin  yang  bersifat  antibakteri.  Tujuan  dari  penelitian  ini  ialah  untuk  mengetahui apakah buah sirsak memiliki daya hambat terhadap bakteri Porphyromonas  gingivalis. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian Post test only control group design , dengan metode modifikasi Kirby-bauer menggunakan kertas saring. Konsentrasi daging buah sirsak  yang  dipakai  dalam  penelitian  ini  yaitu  100%,  kontrol  positif  antibiotik  metrodinazol  serta kontrol  negatif  menggunakan  akuades.  Bakteri Porphyromonas  gingivalis diambil  dari  stok  bakteri murni Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin Makasar dan dikultur di  Laboratorium  Farmasi  Fakultas  FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi  Manado.  Hasil  penelitian menunjukkan  nilai  rata-rata  zona  hambat  daging  buah  sirsak  terhadap Porphyromonas  gingivalis sebesar  11,3  mm.  Berdasarkan  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  daging  buah  sirsak  memiliki  efek daya  hambat  terhadap  pertumbuhan Porphyromonas  gingivalis .  Zona  hambat  daging  buah  sirsak terhadap pertumbuhan Porphyromonas gingivalis sebesar 11,3 mm.
Kata kunci : Buah sirsak (Annona muricata L. ), Porphyromonas gingivalis, daya hambat.

## PENDAHULUAN
Salah  satu  penyakit  gigi  dan mulut  yang  banyak  ditemukan  pada masyarakat  yaitu  penyakit  periodontal atau  periodontitis.  Penyakit  periodontal merupakan  infeksi  kronis  pada  rongga mulut  dengan  gambaran  klinis  berupa inflamasi  kronis  pada  gingiva,  destruksi jaringan  periodontal,  kehilangan  tulang alveolar, terbentuknya poket periodontal,  dan  gigi  goyang.  Apabila penyakit tersebut tidak dilakukan perawatan yang tepat dapat mengakibatkan  gigi  tanggal.  Penyakit periodontal berawal dari adanya inflamasi  pada  gingiva  ke  jaringan periodontal (Saputri dkk,
2010;
Suwandi,  2010;  Kusumawardani  dkk, 2010).
Penyebab  utama  penyakit  ini yaitu
mikroorganisme yang
berkolonisasi  di  permukaan  gigi  atau plak.  Kultur  mikroorganisme  (bakteri) yang ditemukan pada plak menunjukkan adanya  bakteri  Gram  negatif  tertentu pada  penyakit  periodontitis  spesifik seperti periodontitis kronis (Saputri dkk, 2010; Suwandi, 2010).
Penyakit  periodontal  merupakan salah  satu  masalah  kesehatan  gigi  dan mulut yang sering dijumpai di masyarakat.
Berdasarkan profil
kesehatan  Indonesia  tahun  2011,  pada tahun  2010  terdapat  92.979  masyarakat yang  berkunjung  ke  rumah  sakit  umum milik Kementerian Kesehatan dan
Pemerintah  Daerah  karena  menderita penyakit periodontal.
Penggunaan  obat  herbal  dari bahan  alam  secara  umum  dinilai  lebih aman daripada penggunaan obat modern, karena obat herbal sebagai obat tradisional  memiliki  efek  samping  yang relatif  lebih  sedikit  daripada  obat
modern  (Sari  LORK,  2006)  Karena  itu perlu  dikembangkan  bahan  alternatif yang  digunakan  sebagai  obat  herbal, salah satunya ialah buah sirsak ( Annona muricata  L.) yang  merupakan  tanaman yang dapat digunakan sebagai antibakteri. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa ekstrak daun, buah, batang,  biji,  akar,  dan  kulit  tanaman sirsak  memiliki  daya  hambat  terhadap bakteri  patogen.  Daging  buah  sirsak ( Annona muricata L.) dipercaya memiliki efek farmakologis yaitu mengurangi  resiko  diabetes,  menyerap kolestrol  jahat  dalam  tubuh,  dan mencegah  asam  urat.  Hal  ini  di sebabkan daging buah sirsak mengandung senyawa flavonoid,
antosianin,  tannin,  saponin  dan  alkaloid yang  bersifat  antibakteri  (Tuna  dkk, 2015; Haryanto, 2016)

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini merupakan penelitian  eksperimental  menggunakan rancangan  eksperimental  murni  ( true eksperimental ) dengan rancangan penelitian post  test  only  control  grup design . Penelitian ini telah dilaksanakan di Laboratorium Farmasi Fakultas
MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado  pada  bulan  Desember  2016  - Maret  2017.  Alat  dan  bahan    yang digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu daging buah sirsak,
bakteri Porphyromonas  gingivalis,  Brain  Heart Infrusion  broth  (BHI-B),  Nutrient  agar (NA), Muller-Hinton  agar (MHA),
Larutan  BaCL 2 1%,  Larutan  H 2 SO 4 1%, Metrodinazol  50µg,  Aquades,  Cawan petri  (d  =  9  cm),  tabung  Erlenmeyer, tabung  reaksi,  jarum  ose,  pinset,  kapas lidi  steril, mikropipet, batang pengaduk,
timbangan  digital,  inkubator, vacum
rotary evaporator, autoclave , api bunsen,  mistar,  sendok  plastik,  masker, sarung  tangan,  spidol,  kamera,  jas  lab, dan sendok.
Sampel  yang  digunakan  yaitu  1 buah  sirsak  yang  matang,  dicuci  hingga bersih kemudian dikeringkan. Kemudian kulit  buah  sirsak  tersebut  dikupas, daging  dan  biji  buah  sirsak  kemudian dipisahkan. Kemudian di timbang sebanyak  100  gram  daging  buah  sirsak, kemudian buah sirsak dihaluskan dengan  blender  kemudian  disimpan dalam botol steril kaca tertutup. Metode pengujian yang digunakan dalam penelitian  ini  ialah  metode  modifikasi Kirby-Bauer dengan menggunakan kertas  saring.  Bakteri Porphyromonas gingivalis yang  disimpan  di  media  agar yang  diambil  dari  stok  bakteri  murni  di laboratorium Farmasi MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado, diambil dengan jarum  ose  steril,  lalu  ditanamkan  pada media agar miring dengan cara menggores.  Bakteri  yang  telah  digores pada  media  agar  diinkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  pada  suhu  37 o C selama  1  ×  24  jam.  Bakteri  yang  telah diinkubasi diambil koloninya dari media
agar miring dengan menggunakan jarum ose  steril  kemudian  dimasukkan  ke
dalam  BHI-B  sampai  kekeruhannya sama  dengan  standar  McFarland.  Lidi kapas  steril  dicelupkan  ke  dalam suspensi  bakteri  hingga  basah.  Lidi kapas  diperas  dengan  menekankan  pada dinding  tabung  reaksi  bagian  dalam, kemudian  digores  merata  pada  media MHA  sampai  permukaannya  tertutupi. Selanjutnya kertas saring pertama dicelupkan ke dalam daging buah sirsak konsentrasi  100%,  kemudian  diletakkan di  atas  media  MHA  yang  sudah ditanamkan bakteri. Kertas saring kedua dicelupkan  dengan  kontrol  positif  yaitu metronidazol  yang  sudah  dilarutkan dengan  akuades.  Kemudian  petridish diinkubasi  dalam  inkubator  dalam  suhu 37ºC selama 1 × 24 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Cawan petri yang telah diinkubasi  selama  24  jam  dengan  suhu 37ºC  dalam  inkubator  diambil  lalu dilihat zona hambat yang terbentuk pada media yang mengandung bakteri
Porphyromonas  gingivalis .  Kemudian zona hambat tersebut diukur
diameternya dengan menggunakan mistar  dalam  satuan  millimeter  (mm). Pengamatan  zona  hambat  dilakukan dengan cara mengukur diameter vertikal dan  diameter  horizontal  dari  zona hambat  yang  terbentuk  di  sekitar  kertas saring. Kedua diameter tersebut
dimasukkan  ke  dalam  rumus  untuk mencari rata-rata diameter zona hambat.
Tabel 1. Perbandingan rata-rata diameter zona hambat terhadap Porphyromonas gingivalis Cawan Petri Diameter zona hambat (mm) Daging Buah Sirsak Metronidazol (Kontrol +) Akuades (Kontrol -) I 7 25 0 II 8 35 0 III 12.5 36.5 0 IV 14 41 0 V 15 43 0 Total 56.5 180.5 0 Rerata 11.3 36.1 0
Hasil  penelitian  menunjukkan  adanya zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar kertas  saring  yang  direndam  daging  buah sirsak  pada  lima  kali  pengujian  di  lima cawan  petri.  Diameter  zona  hambat  yang dihasilkan daging buah sirsak sebesar 11,3 mm  (Tabel  2).  David  dan  Stout  dalam penelitiannya pada tahun 1971 menggolongkan nilai zona hambat menjadi (1) tidak ada zona hambat, (2) lemah yaitu zona hambat kurang dari 5 mm, (3) sedang yaitu zona hambat 5-10 mm, (4) kuat yaitu zona  hambat  11-20  mm,  (5)  sangat  kuat yaitu zona hambat 21-30 mm. 24
Berdasarkan penggolongan tersebut, daging  buah  sirsak  termasuk  golongan kuat  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis . Namun,  jika  dibandingkan  dengan  zona hambat  yang  terbentuk  di  sekitar  kedua kelompok  kontrol,  diameter  zona  hambat daging  buah  sirsak  lebih  kecil  daripada zona  hambat  yang  berada  di  sekeliling antibiotik  metronidazol,  sedangkan  pada kertas saring yang direndam akuades tidak terbentuk zona hambat. Perendaman dilakukan  selama  10-15  menit  agar  kertas saring  terserap  dengan  baik.  Menurut penelitian  yang  dilakukan  oleh  Jarvinen dkk.  di  Finlandia  pada  tahun  1993, terbentuknya  diameter  zona  hambat  suatu antibiotik  yang  lebih  besar  dapat  terjadi karena telah diketahui  MIC dari  antibiotik tersebut terhadap bakteri yang
dihambatnya (Jarvinen dkk, 1993)
Berdasarkan  hal  tersebut,  diameter  zona hambat antibiotik metronidazol lebih besar (Tabel  3)  karena  MIC  metronidazol terhadap Porphyromonas  gingivalis telah diketahui  yakni  0,125  μg/ml,  sedangkan untuk  kemampuan  daging  buah  sirsak belum  diketahui  konsentrasi  paling  tepat untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri tersebut. Dalam hal ini, antibiotik
metronidazol  juga  menunjukkan  diameter zona  hambat  yang  lebih  besar  karena memiliki  spektrum  yang  luas  dalam menghambat bakteri anaerob seperti bakteri Porphyromonas  gingivalis (Ardila dkk, 2010; Wright dkk, 2017).
Metronidazol  dipilih  sebagai  kontrol positif  karena  antibiotik  ini  merupakan antibiotik  yang  sering  digunakan  dalam perawatan  penyakit  periodontitis  kronis dengan  sifatnya  yang  efektif  terhadap bakteri anaerob. Porphyromonas gingivalis merupakan  bakteri  anaerob Gram negatif. Metronidazol memiliki sifat antibakterisid.  Mekanisme  metronidazol dalam membunuh bakteri ini yaitu dengan cara  masuk  ke  dalam  mikroorganisme tersebut  dan  bereduksi  menjadi  produk polar yang menghasilkan 2-hydroxymethyl metronidazol  yang  akan  berikatan  dengan DNA  bakteri  dan  mengganggu  struktur heliksnya,  kemudian  menghambat  sintesis asam  nukleatnya  dan  mengakibatkan kematian  sel  bakteri.  Wright  dkk,  2017; Krismariono 2009).
Zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar kertas  saring  yang  direndam  daging  buah sirsak  menunjukkan  kandungan  yang terdapat  pada  daging  buah  sirsak  mampu menghambat pertumbuhan bakteri Porphyromonas  gingivalis (Tabel  2).  Hal ini terjadi karena kandungan senyawa aktif pada daging buah sirsak lebih berpengaruh terhadap  beberapa  bakteri  gram  negatif dari  pada  gram  positif.  Hal  ini  dapat didasarkan  pada  penelitian  sebelumnya yang  dilakukan  oleh  Pangestuti  AL  yang menunjukkan  bahwa  fraksi  polar  ekstrak etanol daging buah sirsak mempunyai daya hambat  terhadap  bakteri  Gram  negatif Pseudomonas  aeroginosa dan Shigella sonnei mempuyai  KHM  yang  sama,  yaitu 1,25%.  Hal  ini  disebabkan  karena  bakteri Gram negatif memiliki peptidoglikan yang
cukup  tipis  yang  terdiri  dari  1-2  lapis dengan  susunan  yang  tidak  kompak sehingga  memiliki  permeabilitas  yang tinggi.  Sedangkan  pada  bakteri  Gram positif  memiliki  lapisan  peptidoglikan yang  cukup  tebal  terdiri  dari  30  lapis peptidoglikan dengan susunan yang kompak, sehingga
mempunyai permeabilitas  yang  rendah.  Tebalnya lapisan  peptidoglikan  dan  rendahnya permeabilitas  paa  bakteri  Gram  positif menyebabkan  senyawa  antibakteri  sulit menembus  dinding  sel  bakteri  sehingga efek antibakteri lebih optimal pada bakteri Gram negatif (Pangestuti, 2016).

## KESIMPULAN
Daging  buah  sirsak  memiliki daya  hambat  terhadap  pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis. Zona hambat yang terbentuk sebesar 11,3 mm yang zona hambatnya termasuk kategori kuat.

## SARAN
Diharapkan    dapat  dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai uji daya hambat  kadar  minimum  daging  buah sirsak  terhadap  bakteri Porphyromonas gingivalis, sehingga  dapat  diketahui
Minimal Inhibitory Concentration
(MIC) daging  buah  sirsak  terhadap bakteri Porphyromonas gingivslis.

## DAFTAR PUSTAKA
Ardila CM,  Lopez MA, Guzman IC. High resistance against clyndamycin,
metronidazole,  and  amoxicillin  in Porphyromonas
gingivalis and
Aggregatibacter
actinomycetemcomitans isolated  of periodontal  disease.  Med  oral  patol oral cir bucal. 2010; 15(6): h.e950.
Haryanto,  Ambarsari  MA,  Munawaroh R.  Aktivitas  antibakteri  fraksi  n- heksan  ekstrak  etanol  daging  buah sirsak ( Annona muricata L) terhadap pseudomonas  aeruginisa, shigella sonnei dan serta bioautografinya.  Tersedia  dalam  : http://eprints.ums.ac.id/26260/10/N ASKAH_PUBLIKASI.pdf  di  akses pada 5 Oktober 2016.
Jarvinen  H,  Tenovuo  J,  Huovinen  P.  In vitro  susceptibility  of Streptococcus mutans to  chlorhexidine and six other antimicrobial  agents.  Journal  ASM. 1993; p. 1158-9.
Kusumawardani  B,  Pujiastuti  P,  Sari DS.  Uji  biokimiawi  sistem  API  20 A mendeteksi Porphyromonas gingivalis isolat  klinik  dari  plak subgingiva pasien pariodontitis kronis.  Jurnal  PDGI.  2010;  59(3): h.110–1. Krismariono  A.  Antibiotika  sistemik dalam perawatan penyakit periodontal.  Periodontal  Journal. 2009; 1(1). h.15-7.
Pangestuti AL, Haryanto, Indrayudha P.
Aktivitas  antibakteri  polar  ekstrak etanol  daging  buah  sirsak  ( Annona muricata L)  terhadap pseudomonas aeruginisa,  shigella  sonnei dan serta bioautografinya. Tersedia dalam : http://eprints.ums.ac.id/26260/10/N ASKAH_PUBLIKASI.pdf di  akses pada 5 Oktober 2016.
Saputri  TO,  Zala  HQ,  Arnanda  BB,
Ardhani  R.  Saliva  as  an  early detection tool for chronic obstructive  pulmonary  disease  risk in patiens with periodontitis. Journal  of  Dentistry  Indonesia. 2010; 17 (3): h.88.
Suwandi  T.  Parawatan  awal  penutupan
diastema gigi goyang pada penderita periodontitis kronis
dewasa. Jurnal PDGI. 2010; 59 (3): h.105–9.
Tuna  MR,  Kepel  BJ,  Leman  MA.  Uji daya  hambat  ekstrak  daun  sirsak ( Annona  muricata L)  terhadap pertumbuhan Staphylococcus
aureus secara in vitro. Jurnal Ilmiah
Farmasi. 2015; 4(4): h. 2302.
Wright  TL,  Ellen  RP,  Lacroix  JM,
Sinnadurai  S,  Mittelman  MW.
Effects of metronidazole in Porphyromonas gingivalis biofilms. Tersedia dalam: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/1 0.1111/j.16000765.1997.tb00560.x/
abstract;jsessionid=7535F2D298F3 517AB1DEE9F63F2C8407.f02t02. Diakses 13 Maret 2017.