## ISOLASI DAN SELEKSI ISOLAT POTENSIAL CENDAWAN DARK SEPTATE ENDOPHYTE ASAL AKAR Pinus merkusii

## Isolation and Selection of Potential Isolates of Dark Septate Endophyte Fungi from Pinus merkusii Roots
Jumadil Akhir 14* , Sri Wilarso Budi 2 , Elis Nina Herliyana 2 , dan Surono 3
(Diterima 20 November 2023 /Disetujui 18 Desember 2023)

## ABSTRACT
Root isolation activities to obtain dark septate endophytic fungi are currently mostly carried out on agricultural and plantation crops, while less so on forestry crops. Roots are a suitable habitat for the growth of various microorganisms, including dark septate endophytic fungi. The research aims to isolate the roots of Pinus merkusii plants from four locations, test pathogenicity, and test the biomass of sweet caisim mustard seeds. The research used a descriptive method by observing the number of dark septate endophytic fungal isolates obtained and the pathogenicity of these isolates. Meanwhile, sweet ciasim mustard seed biomass from the pathogenicity test results of non-pathogenic isolates was analyzed using a completely randomized design. The results of root isolation from Pinus merkusii stands obtained as many as 25 isolates by isolating 1,160 root segments. Isolation of Pinus merkusii roots from the IPB Dramaga Campus obtained 16 isolates, Dabun Gelang Village, Gayo Lues Regency obtained 2 isolates, Gunung Walat University Forest obtained 2 isolates, and Gunung Halimun Salak National Park obtained 5 isolates. Pathogenicity tests showed that 12 isolates were pathogenic and 13 isolates were non-pathogenic. Biomass analysis of sweet ciasim mustard seeds on non-pathogenic isolates obtained the highest biomass in the control treatment (not inoculated) and the lowest in isolates Apg 23.5 and Hs 14.6b. There is still a lack of isolates obtained from isolation activities in this research, so it is necessary to find an appropriate sterilization method to obtain the maximum number of isolates and have the potential to become non-pathogenic isolates.
Keywords: Pinus merkusii, dark septate endophyte, isolation

## ABSTRAK
Kegiatan  isolasi  akar  untuk  mendapatkan  cendawan dark  septate  endophyte saat  ini  lebih  banyak  dilakukan  pada tanaman pertanian dan perkebunan, sedangkan pada tanaman kehutanan masih kurang. Akar merupakan habitat yang sesuai untuk  pertumbuhan  berbagai  mikroorganisme  termasuk  cendawan dark  septate  endophyte .  Tujuan  penelitian  untuk mengisolasi akar tanaman Pinus merkusii yang berasal dari empat lokasi, uji patogenisitas dan biomassa benih sawi caisim manis. Penelitian menggunakan metode deskriptif yaitu dengan mengamati jumlah isolat cendawan dark septate endophyte yang  diperoleh  dan  sifat  patogenisitas  dari  isolat,  sedangkan  biomassa  benih  sawi  ciasim  manis  dari  hasil  pengujian patogenisitas isolat non patogen di analisis dengan menggunakan rancangan acak lengkap. Hasil isolasi akar dari tegakan Pinus merkusii diperoleh sebanyak 25 isolat dengan mengisolasi sebanyak 1.160 segmen akar. Isolasi akar Pinus merkusii dari kampus Dramaga IPB diperoleh sebanyak 16 isolat, Desa Dabun Gelang Kabupaten Gayo Lues diperoleh 2 isolat, Hutan Pendidikan  Gunung  Walat  diperoleh  2  isolat  dan  Taman  Nasional  Gunung  Halimun  Salak  diperoleh  5  isolat.  Pengujian patogenisitas diperoleh 12 isolat yang bersifat patogen dan 13 isolat non patogen. Analisis biomassa benih sawi ciasim manis pada isolat non patogen diperoleh biomassa tertinggi pada perlakuan kontrol (tidak diinokulasi) dan terendah pada isolat Apg 23.5 dan Hs 14.6b. Masih minimnya jumlah isolat yang diperoleh dari kegiatan isolasi pada penelitian ini, maka perlu dicarikan metode sterilisasi yang sesuai, sehingga diperoleh jumlah isolat yang maksimal dan mempunyai potensi sebagai isolat non patogen.
Kata kunci: Pinus merkusii , dark septate endophyte, isolasi
1 Mahasiswa Program Studi Silvikultur Tropika, Sekolah Pascasarjana, IPB University Jl. Ulin Kampus IPB, Dramaga, Bogor, Jawa Barat, Indonesia 16680
2 Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan dan Lingkungan, IPB University Jl. Ulin Kampus IPB, Dramaga, Bogor, Jawa Barat, Indonesia 16680
3 Badan Riset Inovasi Nasional, Jakarta Pusat, 10340
4 Program Studi Kehutanan, Fakultas Pertanian, Univesitas Syiah Kuala, Banda Aceh, 23111
* Penulis korespondensi: e-mail: jumadilakhirbb@usk.ac.id

## PENDAHULUAN
Akar  merupakan  habitat  yang  sesuai  untuk pertumbuhan berbagai mikroorganisme termasuk cendawan  (Tamilarasi et  al. 2007).  Akar  berfungsi sebagai  penyerap  hara  dan  air  yang  sangat  dibutuhkan dalam  pertumbuhan  dan  perkembangan  tanaman (Rusdiana et al. 2000). Keanekaragaman spesies endofit akar dipengaruhi oleh faktor iklim, fisik, kimia, biologi dan  faktor  antropogenik,  sehingga  jaringan  akar merupakan  habitat  yang  sesuai  untuk  beragam  mikroba termasuk  dalam  hal  ini  cendawan  endofit  (Sieber  dan Grünig 2006). Kegiatan isolasi akar untuk mendapatkan cendawan endofit dari tanaman inang harus memperhatikan  teknik  sterilisasi  permukaan  yaitu dengan  memotong  bagian  dalam  organ  tanaman  seperti yang  terdapat  pada  bagian  akar,  membersihkan  tanah yang menempel pada bagian akar. Hal ini dilakukan agar cendawan epifit dari bagian luar organ tanaman tidak ikut diisolasi.  Selanjutnya  yang  harus  diperhatikan  adalah saat  pemotongan  bagian  segmen  akar  untuk  eksplan isolasi  menjadi  potongan  kecil  dan  lamanya  waktu pengeringan sampel di atas kertas saring steril terutama pada organ tanaman yang mengeluarkan lendir (Strobel 2003; Strobel dan Daisy 2003).
Cendawan  endofit  mampu  menginfeksikan  pada jaringan tanaman tanpa menyebabkan munculnya gelaja penyakit  dan  menunjukkan  tanaman  mampu  tumbuh dengan  baik  (Doss et  al. 1998).  Hal  ini  disebabkan adanya  hubungan  mutualisme  antara  cendawan  endofit dan tanaman inang yang bersifat saling menguntungkan (Schulz  dan  Boyle  2006).  Cendawan  endofit  hampir dapat  ditemukan  pada  semua  tumbuhan  dalam  hal  ini pohon,  rumput,  alga  dan  tumbuhan  herbal  dan kebanyakan  endofit  termasuk  dalam  Ascomycetes  dan fungi imperfecti (Huang et al. 2001).
Beberapa  penelitian  yang  menjelaskan  keberadaan cendawan endofit seperti penelitian yang dilakukan pada tanaman Pegagan ( Centella asiatica ) oleh Susilowati et al. (2019) dengan menggunakan indeks keanekaragaman Shannon-Wiener  ditemukan  nilai  keanekaragaman endofit  tertinggi  terdapat  pada akar (1,91), daun (1,79), stolon  (1,75)  dan  tangkai  daun  (1,29).  Demikian  juga penelitian  yang  dilakukan  oleh  Arifuddin et  al. (2017) pada  tanaman  Tapak  Dara  ( Catharanthus  roseus ) frekwensi  pertumbuhan  koloni  fungi  sebesar  19,23% pada  daun  dan  21,43  pada  bagian  akar,  dan  penelitian yang dilakukan oleh Munif et al. (2015) isolasi terhadap 4 jenis tanaman kehutanan (mahoni, trembesi, gaharu dan meranti) yang telah berumur 4-5 bulan hanya didapatkan 33  isolat  pada  akar.  Selanjutnya  isolasi  yang  dilakukan pada akar tanaman Shorea leprosula dan Shorea selanica juga  diperoleh  persentase  fungi  endofit  yang  masih sangat rendah yaitu sebesar 5,8% sampai 7,1% (Hakim et al. 2014).  Salah  satu  kelompok  cendawan  endofit  yang telah  teridentifikasi  sebagai  cendawan dark  septate endophyte (DSE) adalah ditandai dengan ciri umum yaitu membentuk koloni berwarna gelap pada media agar dan mengalami pertumbuhan yang lambat apabila ditumbuhkan  pada  media  PDA  (Surono  dan  Narisawa 2018).
Penelitian  mengenai  keberadaan  cendawan  DSE pada akar tanaman kehutanan sangat menarik dilakukan
karena  selama  ini  informasi  terkait  dengan  DSE  masih sangat minim sekali bila dibandingkan dengan tanaman pertanian maupun perkebunan. Untuk itu perlu dilakukan isolasi  pada  tanaman  kehutanan,  dalam  hal  ini  kami melakukan  isolasi  akar  pada  tanaman Pinus  merkusii agar diperoleh isolat yang potensial khususnya diperoleh isolat  yang  non  patogen.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengisolasi dan menguji kemampuan patogenisitas dari isolat  yang  telah  diperoleh.  Diharapkan  dari  kegiatan isolasi  akar  dari  tanaman P.  merkusii diperoleh  isolat yang potensial yaitu bersifat non non patogen dan isolat yang  diperoleh  akan  digunakan  untuk  penelitian  tahap selanjutnya.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan September 2020 sampai bulan Mei 2021. Pengambilan sampel akar Pinus merkusii dilakukan  pada  4  lokasi  yaitu  satu  sampel  di Kabupaten Gayo Lues, Provinsi Aceh dan dan 3 sampel diambil  di  Provinsi  Jawa  Barat  (Hutan  Pendidikan Gunung  Walat  Kabupaten  Sukabumi,  Taman  Nasional Gunung  Halimun  Salak  dan  Kampus  Dramaga  IPB University). Kegiatan isolasi dan seleksi isolat potensial dari  akar P  merkusii dilakukan  di  laboratorium  Balai Standarisasi  Instrumen  Pertanian  (BSI)  Cimanggu, Bogor.

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu cangkul,  sekop,  plastik  sampel,  meteran,  GPS, laminar air flow cabinet, autoklaf, timbangan analitik, hot plate dan stirer, oven,  labu ukur,  labu  erlenmeyer, gelas  piala,  cawan  petri,  bunsen,  korek  api,  spatula, jarum inokulasi, botol semprot, kain kasa, kertas label, cork  borer,  alumunium  foil,  gunting,  kamera  digital, spidol, botol plastik berukuran 500 gr dan perlengkapan alat tulis.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah akar  dari  tanaman P.  merkusii ,  benih  sawi  ciasim manis, air steril, alkohol 70% dan 96%, chlorox 20%, spirtus, parafilm, media CMA 50% dan CMMYA 50%, PDA dan OMA.

## Pengumpulan Data atau Prosedur Penelitian

## Pengambilan Sampel Akar Pinus merkusii
Sampel akar P. merkusii diambil dari empat lokasi. Lokasi  pertama  berada  di  Kabupaten  Gayo  Lues, Provinsi Aceh, Indonesia (koordinat: 4 0 1’12,34416” N, 97 0 15’28,9332” E) pada ketinggian 1.078 meter di atas permukaan  laut  (mdpl).  Lokasi  kedua,  ketiga  dan keempat berada di Provinsi Jawa Barat Indonesia yaitu Kampus IPB Dramaga Bogor (koordinat: 06 0 33’23.4” N, 106 0 43’43.7” E) pada ketinggian 203 mdpl, Gunung Hutan  Pendidikan  Walat  yang  terletak  di  Kabupaten Sukabumi  (koordinat:  06 0 54'48.4"S,  106 0 49'25.6"BT) pada  ketinggian  607  mdpl  dan  Taman  Nasional Gunung  Halimun  Salak  yang  terletak  di  Kabupaten
Bogor (koordinat: 06 0 40'38, 1"S, 106 0 41'27.7"E) pada ketinggian 855 mdpl.
Sampel  akar  diambil  di  sekitar  tanaman  sehat dengan  mengambil  sebagian  akar  dari  tegakan P. merkusii .  Sampel  akar  diambil  dari  5  tegakan P. merkusii yang  dipilih  secara  acak,  dan  sebelumnya telah  dibuatkan  plot  dengan  ukuran  20  m  x  20  m. Pengambilan sampel akar dilakukan dengan menggali tanah  hingga  ditemukan  akar  halus  di  bawah  tegakan pohon P.  merkusii .  Akar  diambil  dengan  ukuran  10 sampai 15 cm kemudian dibawa ke laboratorium untuk dilakukan isolasi.

## Isolasi Akar Pinus merkusii
Isolasi  akar P.  merkusii mengikuti  metode  tersebut (Surono  dan  Narisawa  2017).  Sampel  akar  diambil sepanjang  5  cm  dan  dicuci  dengan  air  mengalir  hingga tidak  ada  lagi  tanah  yang  menempel  pada  bagian permukaan  akar.  Sampel  akar  yang  telah  dibersihkan selanjutnya diletakkan di atas nampan yang dilapisi kertas tisu.  Kegiatan  sterilisasi  dilakukan  didalam  laminar dengan membungkus sampel akar dengan kain kasa. Akar direndam dalam larutan alkohol 70% selama ± 30 detik, larutan clorox 20% selama ± 30 detik, kemudian dibilas dua kali dengan menggunakan air akuades steril. Setelah disterilkan, akar dipotong-potong berukuran 0,5-1 cm dan ditempatkan dalam cawan petri (diameter 9 cm) dan berisi media CMA 50% dengan komposisi (CMA 0,85 gr, Bacto agar  0,75  gr,  chloramphenicol  0,05  gr  dan  aquades  100 ml). Sebanyak 5-6 segmen akar diisolasi ke dalam cawan yang berisi  media CMA 50% dan ditempatkan di  ruang inkubasi pada suhu 26 0 C - 30 0 C hingga cendawan yang diinginkan (cendawan DSE) tumbuh.

## Kegiatan pemurnian isolat akar Pinus merkusii
Setelah  isolat  yang  diinginkan  tumbuh  pada  media isolasi  maka  tahapan  selanjutnya  adalah  isolat  tersebut dipindahkan ke media CMMYA 50% dengan komposisi (CMA 0,85 gr, Bacto agar 0,75 gr, Malt extract 1 gr, Yeast extract 0,1 gr, chloramphenicol 0,05 gr dan aquades 100 ml)  untuk  kegiatan  pemurnian.  Isolat  yang  telah  murni selanjutnya dipindahkan untuk ditumbuhkan pada media PDA  sebagai  media  pengujian  isolat.  Komposisi  media PDA (PDA 3,9 gr, chloramphenicol 0,025 gr dan aquades 100 ml).

## Pengujian Patogenisitas secara In Vitro
Pengujian  patogenisitas  menggunakan  benih  sawi ciasim manis. Benih sawi ciasim manis diperoleh di toko perlengkapan  pertanian.  Sebelum  sterilisasi,  dilakukan seleksi  pada  benih  yang  sehat.  Benih  yang  berwarna kemerahan digunakan untuk pengujian karena dianggap sehat,  sedangkan  benih  yang  berwarna  coklat  tidak digunakan.  Hal  ini  dilakukan  berdasarkan  pengamatan pra  penelitian  pada  saat  perkecambahan,  dimana  benih yang  berwarna  kemerahan  lebih  banyak  berkecambah dan tumbuh lebih baik dibandingkan dengan benih yang berwarna coklat. Kegiatan sterilisasi benih menggunakan etanol  70%  selama  1,5  menit,  Clorox  20%  selama  3 menit,  dan  pembilasan  menggunakan  akuades  steril sebanyak tiga kali kemudian dikeringkan dalam laminar. Langkah  selanjutnya  adalah  menumbuhkan  benih  pada
media agar menggunakan cawan petri  (diameter  9 cm). Komposisi media agar (Bacto agar 2 gr, chloramphenicol 0,025  gr  dan  aquades  100  ml).  Benih  yang  telah ditumbuhkan  pada  media  agar  selanjutnya  disimpan dalam  wadah  gelap  pada  suhu  ruang  26 0 C  -  28 0 C. Perkecambahan benih sawi ciasim manis terjadi setelah 24 jam penyimpanan.

## Pengujian Patogenisitas
Metode yang digunakan untuk pengujian patogenisitas  berdasarkan  (Surono  dan  Narisawa  2018), yang telah dimodifikasi. Media yang digunakan untuk uji patogenisitas  adalah  media  OMA  dengan  komposisi (Oatmeal  1  gr,  Bacto  agar  1,8  gr,  MgSO 4 .7H 2 0  0.1  gr, KH 2 PO 4 0,15 gr, NaNO3 0,1 gr, chloramphenicol 0,1 gr dan  aquades  100  ml).  Media  OMA  yang  telah  di autoclave pada suhu 121 0 C selama 3 jam dibiarkan agak dingin dan selanjutnya dituangkan ke dalam cawan petri (diameter  5,5  cm)  dan  dibiarkan  selama  dua  hari  untuk menunjukkan bahwa media yang digunakan masih steril dan tidak terjadi kontaminasi sebelum digunakan.
Uji  patogenisitas  pada  25  isolat  dilakukan  untuk mengetahui apakah isolat yang diperoleh bersifat patogen atau  nonpatogen.  Sebanyak  3  keping  isolat  DSE berukuran (diameter 0,5 cm) yang telah ditumbuhi pada media PDA, diambil dengan menggunakan alat cork bore untuk  ditumbuhkan  pada  media  OMA.  Isolat  yang ditumbuhkan pada media OMA diinkubasi selama 14 hari pada suhu ruang 26 0 C – 30 0 C. Setelah 14 hari inkubasi, isolat  yang  tumbuh  pada  media  OMA  diberi  perlakuan dengan benih sawi ciasim manis yang sebelumnya telah dikecambahkan  pada  media  agar.  Masing-masing sebanyak 3 benih sawi ciasim manis yang berkecambah dipindahkan ke media OMA yang telah ditumbuhi isolat. Isolat  yang  diberi  perlakuan  benih  sawi  ciasim  manis dimasukkan ke dalam botol plastik berukuran 500 gr dan sebelumnya  telah  disterilkan  dengan  disemprot  alkohol 96%  dan  di  UV  dalam  laminar  selama  1  jam.  Setelah diberikan perlakuan maka tindakan selanjutnya diletakkan pada rak inkubasi selama 14 hari pada suhu 28 0 C  –  30 0 C.  Untuk  perlakuan  kontrol  pada  media  OMA digunakan  benih  sawi  ciasim  manis  yang  tidak diinokulasi  isolat.  Setiap  perlakuan  isolat  ditanami  tiga benih  sawi  ciasim  manis  dan  setiap  perlakuan  diulang sebanyak tiga kali termasuk perlakuan kontrol, sehingga diperoleh 225 benih sawi ciasim manis. Parameter yang diamati  adalah  biomassa  benih  sawi  ciasim  manis  dan potensi isolat baik patogen maupun non patogen.

## Pengolahan dan Analisis Data
Data  jumlah  isolasi  isolat  dan  patogenisitas  di analisis secara deskriptif dan data biomassa benih ciasim manis  diolah  dan  di  analisis  dengan  menggunakan perangkat  lunak Microsoft  Office  Excel dan Statistical Analysis System (SAS) versi 9.0. Pengaruh perlakuan di analisis  secara  statistik  dengan  menggunakan  ANOVA (Analisis Varian) pada taraf kepercayaan 95%.  Apabila terdapat  pengaruh  yang  nyata  pada  variabel  percobaan, maka akan dilanjutkan dengan uji Duncan dengan tingkat kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi Akar Pinus merkusii
Hasil  isolasi  akar P.  merkusii yang  berasal  dari  4 lokasi disajikan pada Tabel 1. Dari hasil isolasi akar P. merkusii yang  berasal  dari  Kampus  Dramaga  IPB diperoleh  16  yaitu  Apls  3.1.3,  Apls  3.4.3,  Apls  1.5.3, Apls  1.4.1,  Apls  3.1.4,  Apls  2.3.1.1,  Apls  3.4.2,  Apls 2.1.1,  Apls  3.4.3b,  Apls  3.4.1.1,  Pls  2.4,  Pls  12.5,  Pls 17.4, Pls 18.1, Pls 32.1 dan Pls 25.2, diperoleh 2 isolat yang  berasal  dari  Debun  Gelang  Kab.  Gayo  Lues  yaitu Apg  11.3  dan  Apg  23.5,  dan  2  isolat  yang  berasal  dari Hutan Pendidikan Gunung Walad yaitu Gw 37.6 dan Gw 1.5  serta  5  isolat  yang  berasal  dari  Taman  Nasional Gunung  Halimun  Salak  yaitu  Hs14.6a,  Hs14.6b, Hs14.6c,  Hs  6.1  dan  Hs  9.5.  Isolasi  akar P.  merkusii dengan menggunakan sebanyak 1.160 segmen akar dan diperoleh  sebanyak  25  isolat  atau  sebesar  8.2%. Persentase  isolat  terbanyak  dari  4  lokasi  terdapat  pada kampus  Dramaga  IPB  yaitu  berjumlah  16  isolat  atau sebesar 5% sedangkan jumlah isolat yang paling sedikit berasal  dari  Dabun  Gelang  Kabupaten  Gayo  Lues  dan Hutan  Pendidikan  Gunung  Walat  yaitu  masing-masing berjumlah 2 isolat.
Penelitian yang dilakukan oleh Hakim et al. (2014) menyajikan temuan bahwa persentase kemunculan fungi endofit  pada  akar Shorea  leprosula masih  tergolong rendah,  berkisar  antara  6%  hingga  11%.  Rendahnya persentase ini menunjukkan bahwa interaksi antara fungi endofit  dan  akar  tanaman  tersebut  cenderung  kurang umum atau memiliki tingkat keberlanjutan yang rendah pada spesies tersebut. Masih rendahnya persentase isolat Dark  Septate  Endophytes  (DSE)  yang  ditemukan  pada akar Pinus  merkusii ,  menurut  penilaian  kami,  mungkin memiliki  keterkaitan  dengan  metode  isolasi  yang diterapkan  dalam  penelitian  tersebut.  Metode  isolasi yang digunakan dalam suatu penelitian dapat memengaruhi  hasil  yang  diperoleh,  terutama  dalam mengidentifikasi  dan  mengukur  jumlah  fungi  endofit yang hadir dalam suatu ekosistem.
Selain itu, rendahnya persentase isolat DSE tersebut juga dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor lingkungan yang  terkait  dengan  lokasi  pengambilan  sampel  akar.
Faktor-faktor  ini  termasuk  kondisi  kesuburan  tanah, kondisi  geografis,  dan  umur  tanaman.  Beberapa penelitian lain, seperti yang disebutkan oleh Sondergaard et al. (2004) dan Sieber dan Grünig (2006), menekankan bahwa  kondisi  lingkungan  di  sekitar  tanaman  dapat memainkan peran kunci dalam mempengaruhi keragaman  dan  kelimpahan  cendawan  endofit.  Hasil yang rendah pada persentase isolat DSE pada akar Pinus merkusii dapat diartikan sebagai refleksi dari kompleksitas interaksi antara tanaman, fungi endofit, dan lingkungan tempat tanaman tersebut tumbuh. Temuan ini memberikan  dasar  untuk  lebih  mendalam  dalam memahami dinamika hubungan antara tanaman dan fungi endofit dalam konteks ekologi dan keberlanjutan hutan.

## Pengujian Patogenisitas secara In Vitro
Analisis dari hasil pengujian patogenisitas terhadap isolat  akar P. merkusii yang  dapat  dilihat  pada  Tabel  2 mengungkapkan  bahwa  dari  25  isolat  yang  diuji, sebanyak  12  isolat  menunjukkan  sifat  patogen, sedangkan  13  isolat  bersifat  non  patogen.  Pengujian dilakukan menggunakan benih sawi ciasim manis, yang dianggap  sebagai  indikator  benih  yang  non  mikoriza (Dalimunthe et  al. 2019).  Isolat-isolat  yang  bersifat patogen, seperti Apls 3.1.3, Apls 3.4.3, Apls 1.4.1, Apls 2.3.1.1, Apls 3.4.2, Apls 2.1.1, Apls 3.4.3b, Apls 3.4.1.1, Pls  25.2,  Apg  11.3,  Hs  6.1,  dan  Hs  9.5,  diduga menyebabkan  gangguan  fisiologi  pada  bibit  sawi  yang ditandai dengan gejala busuk atau nekrosis.
Tabel 1  Hasil  pengujian  patogenisitas  isolat  akar  P. merkusii yang berasal dari 4 lokasi
No Asal Isolat Patogen Non- Patogen Total 1 Kampus Dramaga IPB 9 7 16 2 Dabun Gelang Kab. Gayo Lues 1 1 2 3 Gunung Walat Kab.Sukabumi - 2 2 4 Gunung Halimun Salak Kab. Bogor 2 3 5 Total 12 13 25 A B C
Gambar 1  Hasil pengujian patogenisitas isolat akar P. merkusii  pada  benih  sawi  ciasim  manis secara in vitro, (A) isolat patogen, (B) non patogen, (C) kontrol
Tabel 2  Isolat hasil isolasi dari akar P. merkusii yang berasal dari 4 lokasi
No Lokasi Sampel akar Jumlah Segmen Akar Jumlah Isolat Isolation Rate 1 Kampus Dramaga IPB 320 16 5% 2 Dabun Gelang Kab. Gayo Lues 252 2 0,79% 3 Hutan Pendidikan Walat Kab.Sukabumi 300 2 0,67% 4 Taman Nasional Gunung Halimun Salak Kab. Bogor 288 5 1,74% Total 1.160 25 8,2%
Sebaliknya,  isolat-isolat  non  patogen,  seperti  Apls 1.5.3, Apls 3.1.4, Pls 2.4, Pls 12.5, Pls 17.5, Pls 18.1, Pls 32.1, Apg 23.5, Gw 37.5, Gw 1.5, Hs14.6a, Hs14.6b, dan Hs14.6c, tidak menunjukkan gejala gangguan pada benih sawi. Benih sawi ciasim manis yang dapat tumbuh pada media perlakuan (OMA+cendawan) namun tidak normal dianggap sebagai indikator bahwa benih tersebut bersifat patogenik,  sementara  yang  tumbuh  normal  bersifat  non patogenik (Irawati et al. 2017).
Perlu  diperhatikan  bahwa  beberapa  cendawan endofit, terutama cendawan DSE, memiliki karakteristik khusus yang mewajibkan pertumbuhannya di media yang sesuai  dan  tidak  dapat  tumbuh  di  media  buatan.  Media OMA,  yang  sering  digunakan  dalam  penelitian  ini, umumnya digunakan untuk menumbuhkan dan menyimpan kultur isolat dalam jangka waktu yang lama serta mengandung nutrisi lengkap (Khastini et al. 2015). Hasil  analisis  patogenisitas  memberikan  pemahaman mendalam  mengenai  potensi  risiko  beberapa  isolat cendawan terhadap benih sawi ciasim manis, yang dapat menjadi  dasar  untuk  merancang  strategi  pengelolaan penyakit tanaman.

## Biomasa benih sawi ciasim manis
Hasil pengujian patogenisitas dengan menggunakan benih  sawi  ciasim  manis  diperoleh  13  isolat  yang  non patogen.  Selain  informasi  isolat  non  patogen  diperoleh juga  data  biomassa  dari  hasil  pengujian  patogenisitas yang disajikan pada Gambar 2.
Perlakuan benih sawi ciasim manis tanpa pemberian isolat  DSE  pada  media  OMA  (perlakuan  kontrol) menunjukkan  hasil  biomassa  yang  berbeda  nyata  yaitu sebesar  0.0051  gr  bila  dibandingkan  dengan  pemberian isolat Hs 14.6c, Hs 14.6a, Pls 2.4, Pls 12.5, Pls 32.1, Pls 17.4, Apls 1.5.3, Gw 1.5, Pls 18.1, Gw 37.6, Hs 14.6b, dan  Apg  23.5  dan  Apls  3.1.4  masing-masing  sebesar 0,0043  gr;  0,0043  gr;  0,0043  gr;  0,0042;  0,0039  gr;
0,0039  gr;  0,0038  gr;  0,0038  gr;  0,0037  gr;  0,0035  gr;
0,0034 gr;  0,0034 gr dan 0,0034 gr secara berturut-turut. Sedangkan perlakuan antar isolat (diinokulasi DSE) tidak menunjukkan perbedaan yang nyata.
Biomassa  benih  sawi  ciasim  manis  pada  perlakuan kontrol  menunjukkan  hasil  yang  berbeda  nyata  jika dibandingkan  dengan  perlakuan  isolat  yang  diinokulasi
DSE.  Pertumbuhan  benih  sawi  ciasim  manis  pada perlakuan  kontrol  (tidak  diinokulasi)  masih  sangat mendukung karena ketersediaan unsur hara pada media OMA.  Pada  perlakuan  yang  di  inokulasi  isolat, kemungkinan  ketersediaan  nutrisi  pada  media  OMA telah  berkurang,  karena  nutrisi  pada  media  OMA  telah dimanfaatkan  oleh  isolat  selama  14  hari  masa  inkubasi sebelum  diberikan  perlakuan  pada  benih  sawi  ciasim manis. Namun secara umum perlakuan isolat DSE masih memberikan  pengaruh  positif  terhadap  pertumbuhan benih  sawi  ciasim  manis  dan  menunjukkan  adanya aktivitas  dari  cendawan  endofit  (Newsham  2011; Mayerhofer et al. 2013).

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Kegiatan  isolasi  akar Pinus  merkusii dari  4  lokasi dengan  menggunakan  1.160  segmen  akar  diperoleh sebanyak 25 isolat yang teridentifikasi sebagai cendawan DSE. Isolasi akar Pinus merkusii dari kampus Dramaga IPB  diperoleh  sebanyak  16  isolat  (5%),  Dabun  Gelang Kabupaten Gayo Lues diperoleh 2 isolat (0,79%), Hutan Pendidikan  Gunung  Walat  diperoleh  2  ioslat  (2%)  dan Taman  Nasional  Gunung  Halimun  Salak  diperoleh  5 isolat  (1,74%).  Hasil  pengujian  patogenisitas  dengan menggunakan  media  OMA  diperoleh  12  isolat  yang bersifat patogen dan 13 isolat non patogen. Dari analisis biomassa  benih  sawi  ciasim  manis  pada  isolat  non patogen  diperoleh  biomassa  tertinggi  pada  perlakuan kontrol (tidak diinokulasi DSE) dan terendah pada DSE isolat  Apg  23.5  dan  Hs  14.6b  masing-masing  sebesar 0,0051 gr, 0,0034 gr dan 0,0034 gr secara berturut-turut.

## Saran
Berdasarkan  hasil  isolasi  dari  akar Pinus  merkusii pada penelitian ini masih sangat sedikit diperoleh isolat yang  memiliki  karakteristik  seperti  cendawan  DSE  dan mempunyai sifat non patogen. Untuk mendapatkan isolat yang  lebih  banyak  dari  kegiatan  isolasi  maka  perlu dicarikan  metode  isolasi  dan  sterilisasi  akar  lainnya, sehingga  mampu  menghasilkan  isolat  DSE  yang  lebih banyak. Penggunaan komposisi media untuk isolasi juga perlu  dilakukan  agar  diperoleh  isolat  yang  mampu tumbuh dengan baik dan memiliki kecepatan tumbuh saat dilakukan isolasi akar tanaman.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifuddin M, Bone M, Iswahyudi I, Ibrahim A, Rijai L. 2017.  Isolasi  dan  karakterisasi  fungi  endofit tanaman  Tapak  Dara  ( Catharanthus  Roseus ). J Trop Pharm Chem . 4(1): 22–26.
Dalimunthe  CI,  Soekarno  BPW,  Munif  A,  Surono  S. 2019.  Seleksi  dan  uji  potensi  cendawan  dark septate endophyte sebagai agensia hayati penyakit jamur  akar  putih  ( Rigidoporus  microporus )  pada tanaman karet. J Penelit Karet . 37(1): 11–20.
Doss RP, Clement SL, Kuy SR, Welty RE. 1998. A PCR-
Gambar 2  Analisis sidik ragam biomassa benih sawi ciasim  manis  pada  pengujian  isolat  non- patogen
b b ab ab b b b b b b ab b ab a 0.0000 0.0010 0.0020 0.0030 0.0040 0.0050 0.0060 0.0070 Apls 153 Apls 314
Pls 2. 4 Pls 12. 5 Pls 17. 4 Pls 18. 1 Pls 32. 1 Apg 23. 5 Gw 37. 6 Gw 1. 5 Hs 14. 6a Hs 14. 6b
Hs 14. 6c Kontrol Biom as sa (g r) Kode Isolat
based  technique  for  detection  of  Neotyphodium endophytes  in  diverse  accessions  of  tall  fescue.
Plant  Dis .  82:  738–740.  doi:10.1094/pdis.1998. 82.7.738.
Hakim  SS,  Budi  SW,  Turjaman  M.  2014.  Sterilisasi permukaan  untuk  mengisolasi  fungi  endofit  akar pada Meranti Tembaga ( Shorea leprosula Miq . ) di  Hutan  Penelitian  Dramaga  leprosula  Miq  in Dramaga  Experimental  Forest. J  Silvikultur . 05(1): 49–53.
Huang Y, Wang J, Li G, Zheng Z, Su W. 2001. Antitumor and  antifungal  activities  in  endophytic  fungi isolated from pharmaceutical plants Taxus mairei, Cephalataxus fortunei and Torreya grandis. FEMS Immunol Med Microbiol . 31(2): 163–167. Irawati  AFC,  Mutaqin  KH,  Suhartono  MT,  Sastro  Y, Sulastri  N,  Widodo  N.  2017.  Eksplorasi  dan pengaruh cendawan endofit yang berasal dari akar tanaman cabai terhadap pertumbuhan benih cabai merah. J  Hortik .  27(1):  105.  doi:10.21082/jhort. v27n1.2017.p105-112.
Khastini RO, Marianingsih P, Gia S, Fitri S. 2015. Isolasi dan  penapisan  cendawan  endofit  akar  asal ekosistem  mangrove  Cagar  Alam  Pulau  Dua Banten. J Biosci . 12(1): 16–28.
Mayerhofer  MS,  Kernaghan  G,  Harper  KA.  2013.  The effects of fungal root endophytes on plant growth: A  meta-analysis. Mycorrhiza .  23(2):  119–128. doi:10.1007/s00572-012-0456-9.
Munif  A,  Wibowo  AR,  Herliyana  EN.  2015.  Bakteri endofit  dari  tanaman  kehutanan  sebagai  pemacu pertumbuhan tanaman tomat dan agens pengendali Meloidogyne sp . J Fitopatol Indones . 11(6): 179–186. doi:10.14692/jfi.11.6.179.
Newsham KK. 2011. A meta-analysis of plant responses to  dark  septate  root  endophytes. New  Phytol . 190(3):  783–793.  doi:10.1111/j.14698137.2010. 03611.x.
Rusdiana O, Fakuara Y, Kusmana C, Dan ), Hidayat Y. 2000. Respon pertumbuhan akar tanaman sengon
( Paraserianthes  falcataria )  terhadap  kepadatan dan kandungan air tanah podsolik merah kuning. Artik Trop For Manag J VI . 6(2): 43–53.
Schulz  B,  Boyle  C.  2006.  What  are  endophytes?  Di dalam: Microbial root endophytes . Springer. hlm 1–13.
Sieber TN, Grünig CR. 2006. Biodiversity of fungal root- endophyte  communities  and  populations,  in particular  of  the  dark  septate  endophyte Phialocephala fortinii sl. Di dalam: Microbial root endophytes . Springer. hlm 107–132.
Sondergaard  TE,  Schulz  A,  Palmgren  MG.  2004. Energization  of  transport  processes  in  plants. Roles of the plasma membrane H+-ATPase. Plant Physiol . 136(1): 2475–2482. doi:10.1104/pp.104.
048231.
Strobel G, Daisy B. 2003. Bioprospecting for microbial endophytes and their natural products. Microbiol Mol Biol Rev . 67(4): 491–502.
Strobel  GA.  2003.  Endophytes  as  sources  of  bioactive products. Microbes Infect . 5(6):535–544. doi:10.1016/S1286-4579(03)00073-X.
Surono,  Narisawa  K.  2018.  The  inhibitory  role  of  dark septate  endophytic  fungus Phialocephala  fortinii against Fusarium  disease on  the Asparagus officinalis growth  in  organic  source  conditions. Biol Control . 121: 159–167.
Susilowati DN, Rakhmaniar A, Radiastuti N, Roostika I. 2019.  Diversity  of  endophytic  fungy  in  the  root, leaf,  stolon  and  petiole  of  asiatic  pennywort ( Centella  asiatica ). Bul  Penelit  Tanam  Rempah dan Obat . 30(1): 47–58.
Tamilarasi  S,  Nanthakumar  K,  Karthikeyan  K, Lakshmanaperumalsamy  P.  2007.  Diversity  of root  associated  microorganisms  of  selected medicinal plants and influence of rhizomicroorganisms on the antimicrobial property of Coriandrum sativum. J Environ Biol . 29(1): 127.