AKTIVITAS ANTIBAKTERI BEBERAPA SPONS DARI PERAIRAN TASIK RIA TERHADAP BAKTERI Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus
(The Antibacterial Activity Of Several Sponges From The Waters Of Tasik Ria Against Escherichia coli And Staphylococcus aureus bacteria)
Abrianto A. O. Rompis 1* , Fitje Losung 1 , Deiske A. Sumilat 1 , Agung B. Windarto 1 , Stenly Wullur 1 , Laurentius T. X. Lalamentik 2
(1) Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Manado.e-mail : abriantorompis@gmail.com
(2) Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Manado.

## ABSTRACT
The sponge is one of the sea organisms that has a prospect as a source of natural compounds including peptides, steroids, asetogenin, terpenoids, alkaloids, cyclic halide and nitrogen. This research was directed to obtain several species of sponges from the waters of Tasik Ria as well as testing the antibacterial activity of extracts  from  some  of  the  sponge  against  the  bacteria Escherichia  coli and Staphylococcus  aureus . From the  identification, seven  species  of sponges  were found, which consists of: Amphimedon sp., Axinosa sp., Aaptos sp., Theonella sp., Cribochalina sp., Hyrtios sp., and Lendenfeldia sp. The tests of antibacterial activity of  the  extracts  from  these  sponges  against  test  bacteria E.  coli and S.  aureus showed some positive results. Extract from Axinosa sp. sponge(16 mm) showed the strongest antibacterial activity on Escherichia coli bacteria. Followed by Hyrtios sp.  extract  (13.5 mm), Aaptos sp.  extract  (13 mm), Lendenfeldia sp.  extract  (13 mm)  and Cribochalinai sp.  extract(10.5  mm).  While  the  the  tests  on Staphylococcus  aureus bacteria  showed  that  the  strongest  antibacterial  activity was found from Axinosa sp. sponge extract (16.5 mm), followed by the extract from Aaptos sp. (15 mm), Lendenfeldia sp. extract (14.5 mm), Hyrtios sp. extract(13.5 mm) and Cribochalina sp. extract (11 mm). Keywords: Sponge, antibacterial, Escherichia coli, Staphylococcus aureus

## ABSTRAK
Spons  merupakan  salah  satu  biota  laut  yang  sangat  prospektif  sebagai sumber  senyawa  bahan-bahan  alami  antara  lain  peptide,  terpenoid,  steroid, asetogenin, alkaloid, halide siklik dan senyawa nitrogen. Penelitian ini diarahkan untuk mendapatkan beberapa spesies spons dari perairan Tasik Ria serta menguji aktivitas antibakteri dari beberapa ekstrak spons terhadap bakteri Escherichia coli dan bakteri Staphylococcus aureus . Hasil identifikasi spons ditemukan sebanyak tujuh  spesies  yang  terdiri  dari: Amphimedon sp., Axinosa sp., Aaptos sp., Theonella sp., Hyrtios sp., Cribochalina sp.  dan Lendenfeldia sp..  Aktivitas antibakteri dari beberapa ekstrak spons terhadap bakteri uji E. coli dan S. aureus terdapat  diameter  zona  hambat  bervariasi  yaitu  bakteri Escherichia  coli menunjukkan  aktivitas  antibakteri ekstrak  spons  terkuat  pada  spons Axinosa sp (16 mm), disusul ekstrak spons Hyrtios sp. (13,5 mm), ekstrak spons Aaptos sp.
(13 mm), ekstrak spons Lendenfeldia sp. (13 mm) dan ekstrak spons Cribochalinai
sp.  (10,5  mm).    Sedangkan  pada  bakteri Staphylococcus  aureus menunjukkan aktivitas antibakteri ekstrak spons terkuat yaitu:  ekstrak spons Axinosa sp. (16,5 mm), disusul ekstrak spons Aaptos sp. (15 mm), ekstrak spons Lendenfeldia sp. (14,5 mm), ekstrak spons Hyrtios sp. (13,5 mm) dan ekstrak spons Cribochalina sp.(11mm).
Kata Kunci : Spons, Antibakteri, Escherichia coli, Staphylococcus aureus
PENDAHULUAN Negara Republik Indonesia memiliki  wilayah  laut  yang  sangat  luas sehingga menjadikan Indonesia sebagai negara  bahari  yang  kaya  akan  sumber daya  hayati  laut.    Selain  itu  laut berfungsi sebagai cadangan sumber air di  dunia,  habitat  untuk  berbagai  biota, dan bahan makanan dari berbagai biota laut, tetapi juga sebagai sumber bahan pembuatan  kosmetik  dan  obat-obatan. Salah  satu  komponen  biota  penyusun terumbu  karang yang  mempunyai potensi  bioaktif  yang  belum  banyak dimanfaatkan yaitu spons (Dault, 2009; Darajati et al ., 2016). Sejumlah senyawa metabolit sekunder  dengan  potensi  farmakologis dari  organisme  laut  seperti  poliketida, alkaloid,  terpenoid,  peptide,  protein, lipida, shikimate, glikosida, dan isoprenoida  telah  ditemukan  beberapa tahun  terakhir  (Rateb  dan  Ebel,  2011). Salah  satu  organisme  yang  memiliki potensi  penghasil  senyawa  adalah spons.
Spons merupakan  salah  satu biota  laut  yang  sangat  prospektif sebagai sumber senyawa bahan-bahan alami  antara  lain  alkaloid,  terpenoid, steroid, asetogenin, halida siklik, peptida, dan senyawa nitrogen. Senyawa-senyawa ini memiliki aktivitas farmakologis seperti
antifouling, antitumor, anti-inflamasi, antivirus, antibakteri, dan antimalaria (Bara, 2007; Rompas,  2011;  Rahman et  al .,  2014;
Blunt et al ., 2015).
Bertolak  dari  asumsi  mengenai potensi metabolit sekunder yang dimiliki oleh
hewan
laut,
kemudian
berkembanglah penelitian untuk
pemanfaatan  metabolit  sekunder  bagi kesejahteraan  manusia  dalam  bidang kesehatan.  Pemanfaatan  spons  laut
sekarang ini cenderung semakin meningkat,  terutama  untuk  mencari senyawa bioaktif baru dan memproduksi senyawa bioaktif tertentu (Undap et al ., 2017).
Pengumpulan  spesimen  untuk pemanfaatan  tersebut,  pada  umumnya diambil  secara  langsung  dari  alam. Maka  peneliti  merasa  perlu  untuk melakukan  penelitian  mengenai  biota laut  khususnya  spons  dalam  upaya penemuan  senyawa  bioaktif  antibakteri untuk dijadikan bahan baku obat-obatan yang dapat membunuh bakteri.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan untuk  mendapatkan  beberapa  spesies spons  dari  perairan  Tasik  Ria  serta Menguji aktivitas antibakteri dari beberapa ekstrak spons terhadap
bakteri Escherichia  coli dan bakteri Staphylococcus aureus ..

## METODE PENELITIAN

## Lokasi Penelitian
Sampel  diambil  dari  Perairan Tasik Ria (Gambar 4) melalui penyelaman,  menggunakan  satu  set alat  snorkling  pada  kedalaman  3-7
meter dari permukaan air laut.
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Juni 2018.
Gambar 1. Lokasi Pengambilan Sampel

## Ekstraksi Spons
Spons  yang  diperoleh  ditimbang terlebih dahulu untuk mengetahui berat basah  spons,  kemudian  dibersihkan dipotong kecil-kecil
berbentuk kubus/dadu  lalu  dimasukkan  ke  dalam botol plastik yang telah berisikan etanol 200 gr, semua botol sampel diberi label selanjutnya  dimaserasi  pada  suhu ruangan  selama  1x24  jam.    Setelah dilakukan  proses  maserasi,  kemudian difiltrasi  dengan  cara  ekstrak  spons yang  akan  diperoleh  dari  proses maserasi berbentuk larutan dan disaring menggunakan    filter  paper  untuk memisahkan  debris  dan  filtrat  sampel. Filtrat  kemudian  diuapkan  dengan  alat rotary vacuum evaporator untuk memisahkan  ekstrak  kasar  spons  dari pelarut.

## Sterilisasi Alat dan Media
Alat-alat  yang  digunakan  untuk skrining  antibakteri  pada  penelitian  ini seperti  tabung  reaksi,  erlenmeyer, cawan petri disk, dan beberapa peralatan  gelas  lainnya  dibungkus dengan  kertas  dan  dimasukkan  ke dalam oven pada suhu 150 o C selama ± 120  menit.    Untuk  sterilisasi  media  di autoklaf  selama  15  menit  pada  suhu 121 o C  (Ortez, 2005).
Pembuatan  Media  B1  dan  Preparasi Bakteri

## Media Cair B1
Media  cair  B1  ini  dibuat  untuk keperluan penelitian skrining antibakteri dari  ekstrak  spons.    Media  cair  B1 digunakan  untuk  kultur  bakteri  uji ( Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus ), takaran masing-masing  bahan untuk  pembuatan  media  yakni:  pepton 0,5  gram, ekstrak daging ( meat extract ) 0,3  gram,  natrium  klorida  (NaCl)  0,3 gram,  dimasukkan  ke  dalam  gelas erlenmeyer dan dilarutkan dalam aquades  sebanyak  100  ml,  kemudian dibuat  homogen,  selanjutnya  ditutup dengan menggunakan kertas aluminium foil lalu  disterilkan  dalam  autoklaf  pada suhu 121 o C selama ± 15 menit.
Inokulasi Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus pada  Media Cair Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus diambil menggunakan jarum ose dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang telah  berisikan  media  cair  yang  dibuat sebelumnya, kemudian dibungkus dengan menggunakan kertas alumunium foil dan dibiarkan selama 1 x 24 jam (Ortez, 2005).

## Media Padat B1
Media  padat  B1  (Gambar  6)  dibuat dengan  menggunakan  bahan-bahan dengan takaran pepton 1 gram, ekstrak daging ( meat extract ) 0,6 gram, natrium klorida  (NaCl)  0,6  gram,  agar  6  gram, semuanya  dimasukkan  dalam  gelas erlenmeyer dan dilarutkan dalam aquades sebanyak 200 ml.  Media padat B1  dibuat  untuk  dua  bakteri  masing- masing  sebanyak  200  ml,  kemudian dibuat homogen menggunakan magnetic stirrer , setelah itu ditutup dan dibungkus menggunakan kertas alumunium foil lalu  disterilkan  dengan autoklaf pada suhu 121 o C selama ± 15 menit,  selanjutnya  media  dibiarkan sampai suhu ± 40 o C kemudian masukkan  bakteri  yang  telah  dikultur dengan  media  cair  B1  menggunakan mikropipet  sebanyak  2  ml,  kemudian ditutup kembali menggunakan alumunium foil dan diaduk dengan cara digoyang  perlahan,  setelah  itu  dituang ke  dalam  cawan  petri  disk  yang  sudah steril.
Penyiapan Kontrol Positif dan
Kontrol Negatif
Kontrol  positif  berfungsi  sebagai tolok  ukur  dalam  mengamati  diameter zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh ekstrak  sampel  spons.  Sedangkan kontrol  negatif  berguna  untuk  melihat apakah  pelarut  yang  digunakan  pada penelitian  ini  memberikan  pengaruh terhadap  zona  hambat  ekstrak  sampel atau  tidak.    Kontrol  positif  akan  dibuat dengan  melarutkan  250  mg  obat kloramfenikol  dengan  250  ml  aquades.
Sedangkan kontrol negatif hanya menggunakan pelarut metanol/CH 3 OH.

## Pembuatan Konsentrasi Sampel
Ekstrak kasar sampel spons pada penelitian ini menggunakan konsentrasi 100 mg/ml dan diencerkan
menggunakan  pelarut  metanol  100% menggunakan  mikropipet.  Selanjutnya masing-masing ekstrak sampel diujikan pada media bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .
Skrining Aktivitas Antibakteri Ekstrak

## Spons
Skrining antibakteri beberapa ekstrak  spons  menggunakan  ekstrak kasar sampel spons dengan konsentrasi 100  mg/ml,  kemudian  ambil  ekstrak sebanyak 50 µl menggunakan mikropipet  dan  ditotolkan  pada  setiap kertas  cakram  dan  dimasukkan  ke dalam  wadah  steril  yang  telah  diberi label  (Wikler et  al .,  2009).    Setelah semua  kertas  cakram  ditotol  dan dibungkus,  kemudian  kertas  cakram dikeluarkan satu persatu dari wadah dan diletakkan di atas media padat B1 yang akan  dibuat.    Skrining  antibakteri  yang dilakukan pada penelitian ini
menggunakan metode difusi Agar ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer ).    Data  akhir hasil  olahan  perangkat  lunak  surfer ditampilkan  dalam  bentuk  peta,  yaitu peta  arah  pergerakan  dan  kecepatan arus.

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Zona Hambat
Setelah  pentotolan  ekstrak  pada kertas  cakram  yang  diletakkan  pada media  padat,  diinkubasi  pada  suhu ruangan,  setelah  24  jam  aktivitas antibakteri  dari  masing-masing  ekstrak spons  diukur  diameter  zona  hambat yang terbentuk di sekitar ekstrak spons dengan menggunakan penggaris dalam satuan  (mm)  dan  diamati  zona  hambat ekstrak spons pada bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Identifikasi Spons
Dalam penelitian ini hasil identifikasi  spons  ditemukan  sebanyak tujuh spesies yang terdiri dari: Amphimedon sp., Axinosa sp., Aaptos sp., Theonella sp., Hyrtios sp., Cribochalina sp. dan Lendenfeldia sp.

## Pengeringan Ekstrak Kasar Spons
Sampel spons yang sudah menjadi ekstrak di evaporasi menggunakan alat rotary vacuum evaporator selanjutnya dikeringkan menggunakan freezedryer (Gambar 15).
Ekstrak  kasar  yang  telah  di freezedryer (Gambar  16)  ditimbang kembali  agar  dapat  mengetahui  berat akhir ekstrak untuk menentukan konsentrasi dari masing-masing ekstrak kasar.
Gambar 2. Ekstrak yang telah dikeringkan menggunakan Freezedryer

## Skrining Aktivitas Antibakteri Spons
Setelah  pengamatan  selama  1  x 24  masa  inkubasi  dengan  2  kali pengulangan untuk masing-masing ekstrak  spons  terhadap  kedua  bakteri
Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus mendapatkan  hasil  hambatan yang terbentuk disekitar ekstrak (daerah bening) menunjukkan kepekaan bakteri uji terhadap senyawa antibakteri maupun antibiotik (kloramfenikol) sebagai kontrol positif.
Aktivitas antibakteri ekstrak spons terhadap ke dua bakteri uji dapat dilihat pada (Gambar 3 dan 4).
Gambar 3. a. Aktivitas Antibakteri Beberapa Ekstrak spons pada Media Bakteri Escherichia coli Percobaan 1
Gambar 3. b. Aktivitas Antibakteri
Beberapa Ekstrak spons pada Media
Bakteri Escherichia coli Percobaan 2
Gambar 4. a. Aktivitas Antibakteri Beberapa Ekstrak spons pada Media Bakteri Staphylococcus aureus Percobaan 1
Gambar 4. a. Aktivitas Antibakteri Beberapa Ekstrak spons pada Media Bakteri Staphylococcus aureus
Percobaan 2 Keterangan:
1. Amphimedon sp., 2. Axinosa sp., 3. Aaptos sp., 4. Theonella sp., 5. Hyrtios sp.,6 Cribochalina sp., 7. Lendenfeldia sp. -    Kontrol negatif +   Kontrol positif Keterangan: 2. 1. Amphimedon sp., 2. Axinosa sp., 3. Aaptos sp., 4. Theonella sp., 5. Hyrtios sp.,6 Cribochalina sp., 7. Lendenfeldia sp.
-    Kontrol negatif
+   Kontrol positif Keterangan: 1. Amphimedon sp., 2. Axinosa sp., 3. Aaptos sp., 4. Theonella sp. 5. Hyrtios sp.,6 Cribochalina sp., 7. Lendenfeldia sp.
-    Kontrol negatif +   Kontrol positif Keterangan: 1. 1. Amphimedon sp., 2. Axinosa sp., 3. Aaptos sp., 4. Theonella sp., 5. Hyrtios sp.,6 Cribochalina sp., 7. Lendenfeldia sp.
-    Kontrol negatif +   Kontrol positif
Tabel  1. Diameter  Zona  Hambat  dari  beberapa  Ekstrak  Spons  terhadap  Bakteri Escherichia coli .
No Ekstrak spons Berat kering Escherichia coli Zona hambat (mm) Percobaan 1 Percobaan 2 Rerata 1 Amphimedon sp. 4,981 g - - - 2 Axinosa sp. 3,501 g 16 16 16 3 Aaptos sp. 2,612 g 13 13 13 4 Theonella sp. 2,119 g - - - 5 Hyrtios sp. 1,571 g 13 14 13,5 6 Cribochalina sp. 1,810 g 10 11 10,5 7 Lendenfeldia sp. 1,047 g 12 14 13 Kloramfenikol (+) - 22 22 22 Metanol (-) - - - - Kosentrasi kontrol positif 250 mg/m Diameter kertas cakram 6 mm Daya serap kertas cakra 100 μl Banyaknya ekstrak dalam kertas cakram 50 μl Konsentrasi sampel dalam kertas cakram 100ml/mg
Tabel  2. Diameter  Zona  Hambat  dari  beberapa  Ekstrak  Spons  terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus . No  Ekstrak spons Berat kering Staphylococcus aureus Zona hambat (mm) Percobaan 1 Percobaan 2 Rerata 1 Amphimedon sp. 4,981 g - - - 2 Axinosa sp. 3,501 g 18 15 16,5 3 Aaptos sp. 2,612 g 15 15 15 4 Theonella sp. 2,119 g - - - 5 Hyrtios sp. 1,571 g 13 14 13,5 6 Cribochalina sp. 1,810 g 11 11 11 7 Lendenfeldia sp. 1,047 g 14 15 14,5 Kloramfenikol (+) - 21 21 21 Metanol (-) - - - - Kosentrasi kontrol positif 250 mg/m Diameter kertas cakram 6 mm Daya serap kertas cakram 100 μl Banyaknya ekstrak dalam kertas cakram 50 μl Konsentrasi sampel dalam kertas cakram 100ml/mg
Data tabel  1  dan  2 menunjukan  bahwa aktivitas  antibakteri  dari  beberapa ekstrak  spons  terhadap  bakteri  uji Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus terdapat  diameter  zona  hambat bervariasi.    Bakteri Escherichia  coli
menunjukkan aktivitas antibakteri ekstrak  spons  terkuat  sebagai  berikut: ekstrak  spons Axinosa sp  (16  mm), diikuti  ekstrak  spons Hyrtios sp.  (13,5 mm), ekstrak spons Aaptos sp. (13 mm),
ekstrak spons Lendenfeldia sp. (13 mm) dan  ekstrak  spons Cribochalinai sp.
(10,5  mm).    Sedangkan  pada  bakteri Staphylococcus  aureus menunjukkan aktivitas  antibakteri  ekstrak  spons terkuat  sebagai  berikut:    ekstrak  spons Axinosa sp.  (16,5  mm),  diikuti  ekstrak spons Aaptos sp.  (15  mm),  ekstrak spons Lendenfeldia sp.  (14,5  mm), ekstrak spons Hyrtios sp. (13,5 mm) dan ekstrak  spons Cribochalinai sp.  (11
mm).    Dibandingkan  dengan  kontrol positif  (kloramfenikol)  bahwa  senyawa dari  ekstrak  spons  mempunyai  zona hambat yang lebih besar.  Kontrol positif sebagai  pembanding  memiliki  aktivitas terhadap  bakteri Escherichia  coli dan bakteri Staphylococcus aureus
sehingga  senyawa  antibakteri  yang terdapat  dalam  ekstrak  spons  yang dikoleksi  dari  Perairan  Tasik  Ria digolongkan  sebagai  senyawa  yang bersifat  sedang/ moderate (Patel et  al ., 2014).
Pada  penelitian  ini  ekstrak  spons menunjukkan adanya bioaktivitas beberapa ekstrak spons yang berpotensi  membunuh  bakteri E.  coli dan bakteri S. aureus .  Dalam penelitian ini  tampak  bahwa  kloramfenikol  lebih efisien dalam menghambat pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli maupun bakteri Staphylococcus aureus .
Kontrol  negatif  berfungsi  untuk memperlihatkan
apakah
metanol berpengaruh  pada  ekstrak  atau  tidak. Kontrol negatif menunjukkan perbedaan terhadap  ekstrak  sampel  uji.    Dalam penelitian  ini,  kontrol  negatif  tidak menunjukkan  adanya  zona  hambat pada  skrining  antibakteri  terhadap bakteri Escherichia  coli dan  bakteri Staphylococcus aureus . Ini mengindikasikan  bahwa  kontrol  negatif tidak berpengaruh pada skrining antibakteri beberapa ekstrak spons.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kseimpulan
Telah  di  peroleh  tujuh  spesies spons  dari  Perairan  Tasik  Ria  di antaranya: Amphimedon sp., Axinosa sp., Aaptos sp., Theonella sp., Hyrtios sp., Cribochalina sp.,  dan Lendenfeldia sp.  Pada  penelitian  ini  tampak  bahwa kloramfenikol lebih efisien dalam menghambat pertumbuhan bakteri
Escherichia coli maupun bakteri
Staphylococcus aureus .

## Saran
Perlu adanya pemurnian ekstrak dari spons yang ada aktivitas antibakteri dan perlu dilakukan pengujian antibakteri  spons  dengan  jenis  bakteri yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Bara,  R.  2007.  Study  Metabolic  Rate and Metabolism in the Spons Haliclona  oculata Using Different 13 C Labeled Substrates.  Thesis.  Wageningen University, Netherlands. Hal. 47. Blunt,  J.  W.,  Copp,  B.,  R.,  Keyzers,  R. A., Munro, M. H. G., Prinsep, M. R. 2015.  Marine  Natural  Products. Nat. Prod. Rep. 32. DOI: 10.1039/c4np00144c.  Hal.  116 – 211.
Dault,  A.  2009.  Pemuda  dan  Kelautan. Sumber Daya Kelautan. PT. Citra Aji  Parama,  Yogyakarta.  Hal.  18- 19.
Darajati, W., S. Pratiwi, E. Herwinda, A., D., Radiansyah, V., S., Nalang, B., Nooryanto,  J.,  S.,  Rahajoe,  R., Ubaidillah, I., Maryanto, R., Kurniawan,  T.,  A.,  Prasetyo,  A., Rahim,  J.,  Jefferson,  F.,  Hakim. 2016. Indonesian Biodiversity Strategy  and  Action  Plan  2015- 2020. (E. S. S. Endah Murniningtyas, Wahyuningsih Darajati & Tim, Eds.). Kementrian Perencanaan Pembangunan Nasional/ BAPPENAS. Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion Testing in Manual of Antimicrobial Susceptibility  Testing.  Marie  B. Coyle  (Coord  Ed).  American Society for Microbiology. Rompas,  R.  2011.  Farmakognosi  Laut (Sumber Baru Ekonomi Kelautan). Dewan Kelautan Indonesia, Jakarta. Hal. 21. Rahman,  H.  Usman.,  A.  Ahmad.  2014. Isolasi, Identifikasi dan Uji Bioaktivitas  Metabolit  Sekunder Ekstrak Kloroform Spons Petrosia alfiani dari  Kepulauan  Barrang
Lompo. FMIPA UNHAS, Makassar. Hal. 1-5. Undap,  N.I.J.,  Sumilat,  D.A.,  Bara,  R. 2017.  Aktivitas  Antibakteri  Spons Agelas tubulata dan Phyllospongia sp.  dari  Perairan Pantai Malalayang Manado Terhadap Pertumbuhan Beberapa Strain  Bakteri. Jurnal  Ilmu  dan Managemen Perairan. ISSN: 2337-5000. (Accepted). 5(1). Wikler,  M.  A.,  F.  R.,  Cockeril,  K.  Bush, M. N. Dudley, J. M., Eliopoulos, D. J.  Hardy,  D.  W.,  Hecht.  2009. Performance Standards for Antimicrobial  Disk  Susceptibility Tests:  Approved  Standard  10 th
Edition.  Clinical  and  Laboratory Standards Institute. Pennsylvania, USA. Hal. 11-17.