## UJI KUALITAS AIR MINUM ISI ULANG DISEKITAR KAMPUS UIN RADEN FATAH PALEMBANG
1 Riri Novita Sunarti
1 Dosen Prodi Biologi Sains, Fakultas Tarbiyah dan Keguruan, UIN Raden Fatah Palembang Jl. Prof.K.H. Zainal Abidin Fikri No. 1A KM 3.5, Palembang 30126, Indonesia
Email : ririnovitasunarti_uin@radenfatah.ac.id

## ABSTRACT
Humans  need  water  for  various  purposes,  such  as  bathing,  cooking  and  most  importantly  for  everyday consumption. Along with today's technological advances and accompanied by increasingly busy human activity then people tend to choose a more practical way with relatively low cost to meet the needs of drinking water by using  drinking  water  contents  ulang.Permenkes  No.  429  in  2010,  assessed  quality  drinking  water  from microbiological  parameters  are not  the discovery of  total coliform bacteria in  10 ml of sample. According to some  previous  studies,  many  refill  drinking  water  depot  that  produce  water  does  not  comply  with  the microbiological  peryaratan.  The  purpose  of  this  study  is  to  conduct  a  microbiological  water  quality presentation based on the value of MPN Coliform, by identifying the presence of Escherichia coli in drinking water produced depot refill drinking water around the UIN Raden Fatah Palembang. The study was conducted in  June  2016  in  the  Laboratory  of  the  Faculty  of  Mathematics  and  Teaching  Tarbiyah  Raden  Fatah  State Islamic University in Palembang. This study uses qualitative descriptive method by comparing the laboratory results with standard  tables Most  Probable Number  (MPN), which  consists  of  a test estimation, confirmation test, and test the amplifier. Get their research results in the bacteria Escherichia coli and Coliform. Of the four samples  unfit  for  consumption  because  of  a  fourth  consecutive  MPN  values  per  10  ml  coliform  bacteria  are 12.4 per 100 ml;  22.7 per 100 ml; 14 per 100 ml; 1100 per 100 ml, and contains the bacteria Escherichia coli sequentially 12.4 per 100 ml;  22.7 per 100 ml; 3 per 100 ml; 1100 per 100 ml.

## Keywords: Escherichia coli, Coliform, (Most Probable Number) MPN

## ABSTRAK
Manusia membutuhkan air untuk berbagai macam keperluan, seperti mandi, memasak dan yang paling penting untuk  konsumsi  sehari-hari.  Seiring  dengan  kemajuan  teknologi  sekarang  ini  dan  diiringi  dengan  semakin sibuknya  aktivitas  manusia  maka  masyarakat  cenderung  memilih  cara  yang  lebih  praktis  dengan  biaya  relatif murah dalam memenuhi kebutuhan air minum yaitu dengan menggunakan air minum isi ulang. Permenkes No. 429  tahun  2010,  air  minum  berkualitas  dinilai  dari  parameter  mikrobiologi  yaitu  tidak  ditemukannya  bakteri total coliform dalam 10 ml sampel. Menurut beberapa penelitian sebelumnya, banyak depot air minum isi ulang yang  memproduksi  air  tidak  sesuai  dengan  peryaratan  secara  mikrobiologis  tersebut.  Tujuan  penelitian  ini adalah  melakukan  pengujian  kualitas  air  secara  mikrobiologis  berdasarkan  nilai  MPN  Coliform,  dengan  cara mengidentifikasi  adanya  bakteri Escherichia  coli pada air minum  yang diproduksi depot air minum isi ulang disekitar  UIN  Raden  Fatah  Palembang.  Penelitian  dilakukan  pada  Juni  2016  di  Laboratorium  MIPA  Fakultas Ilmu  Tarbiyah  dan  Keguruan  Universitas  Islam  Negeri  Raden  Fatah  Palembang.  Penelitian  ini  menggunakan metode  kualitatif  secara  deskriptif  dengan  membandingkan  hasil  laboratorium  dengan  tabel  baku Most Probable  Number (MPN)  yang  terdiri  dari  uji  pendugaan,  uji  penegasan,  dan  uji  penguat.  Hasil  penelitian  di dapatkan adanya bakteri Escherichia coli dan Coliform. Dari ke empat sampel tidak layak untuk  di konsumsi sebab dari keempat secara berurutan nilai MPN per 10 ml bakteri Coliform yaitu 12.4 per 100 ml;  22.7 per 100 ml; 14 per 100 ml; 1100 per 100 ml dan mengandung bakteri Escherichia coli secara berurutan 12.4 per 100 ml; 22.7 per 100 ml; 3 per 100 ml; 1100 per 100 ml.
Kata kunci: Escherchia coli , Coliform, ( Most Probable Number ) MPN

## PENDAHULUAN
Menurut  Hamdiyati  (2010),  air  merupakan materi  penting  dalam  kehidupan.  Semua  makhluk
hidup  membutuhkan  air.  Misalnya  sel  hidup,  baik hewan  maupun  tumbuhan,  sebagian  besar  tersusun oleh  air,  yaitu  lebih  dari  75%  isi  sel  tumbuhan  atau
Jurnal Bioilmi Vol. 2 No. 1 Januari  2016 | 41 lebih dari 67% isi sel  hewan. Dari sejumlah 40 juta mil  kubik  air  yang  berada  di  permukaan  dan  di dalam tanah, ternyata tidak lebih dari 0,5% (0,2 juta mil-kubik)  yang  secara  langsung  dapat  digunakan untuk  kepentingan  manusia.  Karena  dari  jumlah  40 juta mil-kubik, 97% terdiri dari air laut dan jenis air lain  yang  berkadar  garam  tinggi,  2,5%  berbentuk salju dan es-abadi yang dalam keadaan mencair baru dapat dipergunakan secara langsung oleh manusia.
Air merupakan materi esensial bagi kehidupan makhluk  hidup,  karena  makhluk  hidup  memerlukan air  untuk  mempertahankan  kelangsungan  hidupnya. Secara  umum  fungsi  air  dalam  tubuh  setiap organisme  adalah  untuk  melarutkan  senyawa organik, menstabilkan suhu tubuh dan melangsungkan berbagai reaksi kimia tingkat seluler (Campbell, 2002).
Masalah  utama   yang   harus dihadapi   dalam pengolahan    air    ialah  semakin    tingginya    tingkat pencemaran  air,  baik  pencemaran  yang  berasal  dari air limbah  rumah  tangga  maupun  limbah industri, sehingga  upaya-upaya  baru  terus  dilakukan  untuk mendapatkan  sumber  air,  khususnya    untuk pemenuhan    akan    air  minum  yang  memenuhi persyaratan  yang  telah    ditetapkan.    Dalam pengelolaannya,  air    minum    isi    ulang    rentan terhadap kontaminasi dari berbagai mikroorganisme  terutama  bakteri Coliform.
Air minum yang ideal seharusnya jernih, tidak berwarna, tidak berasa, dan tidak berbau. Air minum pun  seharusnya  tidak  mengandung  mikroorganisme patogen  dan  segala  makhluk  yang  membahayakan bagi  kesehatan  manusia,  dan  tidak  mengandung  zat kimia  yang  dapat  mengubah  fungsi  tubuh.  Air seharusnya  tidak  korosif,  tidak  meninggalkan endapan  pada  seluruh  jaringan  distribusinya.  Pada hakikatnya  tujuan  ini  dibuat  untuk  mencegah
terjadinya  serta  meluasnya  penyakit  bawaan  air (Sumirat, 1994).
Untuk  memenuhi  kebutuhan  air  minum masyarakat  luas,  saat  ini  terdapat  lebih  dari  350 industri air minum dalam kemasan dengan produksi lebih  dari  lima  milyar  liter  per  tahun.  Bukan  hanya industri  air  minum  dalam  kemasan,  industri  air minum  isi  ulang  (AMIU)  juga  tumbuh  pesat  dan merupakan  salah  satu  alternatif  terhadap  suplay  air minum  di  kota-kota  besar  dengan  harga  terjangkau. Disisi  lain  perkembangan  air  minum  isi  ulang berpotensi  menimbulkan  dampak  negatif  terhadap kesehatan  bila  tidak  ada  regulasi  yang  efektif (Suprihatin, 2004).
Proses pengolahan air minum pada prinsipnya  harus  mampu    menghilangkan  semua jenis polutan, baik  pencemaran fisik,  kimia maupun mikrobiologis. Bisnis air minum isi ulang merupakan  fenomena  yang  tidak  dapat  dihilangkan. Pengaturan  berupa  standar  produk  dan  prosesnya sangat  diperlukan  dalam  mengawasi  pelaksanaanya. Pihak konsumen akan terlindungi dan juga usaha air minum  isi  ulang  itu  sendiri.    Depot  air  minum  isi ulang  sampai  saat  ini  masih  ada  yang  belum memenuhi standarisasi baku untuk memprosesan air minum.  Beberapa  penyakit  menular  sewaktu-waktu meluas menjadi wabah (epidemi) karena tercemarnya  air  minum  isi  ulang,  diketahui  bahwa air  tersebut  banyak  yang  telah  terkontaminasi  oleh bakteri (Sulistyawati, 2003).
Untuk  memenuhi  kebutuhan  air  minum masyarakat  luas,  saat  ini  terdapat  lebih  dari  350 industri air minum dalam kemasan dengan produksi lebih  dari  lima  milyar  liter  per  tahun.  Bukan  hanya industri  air  minum  dalam  kemasan,  industri  air minum  isi  ulang  (AMIU)  juga  tumbuh  pesat  dan merupakan  salah  satu  alternatif  terhadap  suplay  air
Disisi  lain  perkembangan  air  minum  isi  ulang berpotensi  menimbulkan  dampak  negatif  terhadap kesehatan  bila  tidak  ada  regulasi  yang  efektif (Suprihatin, 2004).
Kebutuhan masyarakat di sekitar kampus UIN Raden  Fatah  Palembang  akan  air  minum  terus meningkat  tidak  diimbangi  dengan  ketersediaan  air bersih  yang  ada.  Salah  satu  penyebabnya  adalah sedikitnya  tempat  yang  memiliki  sumber  air  untuk diolah  menjadi  air  minum.  Sumber  yang  ditemukan disekitar kampus UIN Raden Fatah Palembang ialah air  tanah  atau  air  sumur.  Namun,  pencemaran  air yang  semakin  meluas  tak  jarang  membuat  air  tanah menjadi  tidak  layak  untuk  dikonsumsi.  Menurut Pelczar (2009) air mungkin saja terlihat jernih, tidak berbau,  dan  tidak  berasa,  tetapi  tidak  aman  untuk diminum.  Air  minum  isi  ulang  adalah  jawaban masyarakat  disekitar  kampus  UIN  Raden  Fatah sebagai salah satu sumber pemenuhan kebutuhan air minum,  selain  itu  air  minum  isi  ulang  dirasa  murah dan praktis.
Meningkatnya permintaan masyarakat disekitar kampus UIN Raden Fatah akan air minum isi  ulang  yang  murah  dan  praktis  menjadikan banyaknya  usaha  depot  air  minum  isi  ulang  yang bermunculan.  Menurut  Marpaung  dan  Bowo  (2013) air  minum  isi  ulang  memang  dapat  dijadikan  salah satu  solusi  untuk  memenuhi  kebutuhan  air  minum, akan  tetapi  dikarenakan  belum  adanya  standarisasi dalam  peaturan  untuk  proses  pengolahan  air  maka kualitas  air  minum  isi  ulang  tidak  dapat  menjamin bahwa  air  yang  diproduksinya  sesuai  dengan kualitas standar air minum.
Air  yang  aman  untuk  diminum  adalah  air bersih  yang  harus  memenuhi  persyaratan  secara fisik,  kimia,  radioaktif,  dan  mikrobiologi  yang
ditetapkan  oleh  pemerintah.    Secara  mikrobiologi salah  satu  syarat  air  bersih  yang  dapat  dikonsumsi adalah  tidak  ditemukannya Escherichia  coli dalam 100  ml 3 . Escherichia  coli juga  termasuk  bakteri yang  dapat  menyebabkan  keluhan  diare.  Selain  itu air  yang bersih ialah tidak berbau, tidak berasa, dan tidak berwarna (Afif dkk , 2015).
Pemeriksaan  air  secara  mikrobiologi  sangat penting dilakukan. Pemeriksaan secara mikrobiologi baik  secara  kuantitatif  maupun  kualitatif  dapat dipakai  sebagai  pengukuran  derajat  pencemaran  air secara  mikrobiologi,  umumnya  ditunjukkan  pada kehadiran  bakteri  Coliform  dan  fekal  Coliform. Bakteri  Coliform  adalah  bakteri  indikator  adanya pencemaran  bakteri  patogen.  Penentuan  Coliform fecal menjadi indikator dikarenakan jumlah koloninya pasti berkarelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Makin sedikit kandungan  Coliform  artinya  kualitas  air  semakin baik (Nisak dkk, 2012).
Menurut Hamdiyati (2010), kualitas air harus memenuhi  3 persyaratan,  yaitu kualitas fisik,  kimia, dan  biologis.  Kualitas  fisik  berdasarkan  pada kekeruhan,  temperatur,  warna,  bau,  dan  rasa. Kualitas kimia adanya senyawa-senyawa kimia yang beracun,  perubahan  rupa,  warna,  dan  rasa  air,  serta reaksi-reaksi  yang  tidak  diharapkan  menyebabkan diadakannya  standar  kualitas  air  minum.  Standar kualitas air memberikan batas konsentrasi maksimum yang dianjurkan dan yang diperkenankan bagi  berbagai  parameter  kimia,  karena  pada konsentrasi  yang  berlebihan  kehadiran  unsur-unsur tersebut  dalam  air  akan  memberikan  pengaruh negatif,  baik  bagi  kesehatan  maupun  dari  segi pemakaian  lainnya.  Kualitas  biologis  didasarkan pada kehadiran kelompok-kelompok mikroba tertentu  seperti  mikroba  patogen  (penyakit  perut),
pencemar  (terutama Coli ),  penghasil  toksin  dsb.
Indikator  kehadiran  bakteri  coliform  merupakan polusi  kotoran  akibat  kondisi  sanitasi  yang  buruk terhadap air dan makanan.
Menurut Darmawan (2011), colifrom merupakan  bakteri  yang  memiliki  habitat  normal  di usus  manusia  dan  juga  hewan.  Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik  lain.  Lebih  tepatnya,  bakteri  coliform fekal  adalah  bakteri  indikator  adanya  pencemaran dikarenakan  jumlah  koloninya  pasti  berkolerasi positif  dengan  keberadaan  bakteri  patogen.  Selain itu, mendeteksi coliform jauh lebih murah, cepat dan sederhana  dari  pada  mendeteksi  bakteri  patogenik lain.  Menurut  Suriaman  (2008),  bakteri  kelompok coliform  meliputi  semua  bakteri  berbentuk  batang, gram  negatif,  tidak  membentuk  spora  dan  dapat menfermentasi laktosa dengan memproduksi gas dan asam  pada  suhu  37 o C  dalam  waktu  kurang  dari  48 jam.  Adapun  bakteri Escherichia  coli selain memiliki  karakteristik  seperti  bakteri  coliform  pada umumnya  juga  dapat  menghasilkan  senyawa  indole didalam  air  pepton  yang  mengandung  asam  amino triptofan,  serta  tidak  dapat  menggunakan  natrium sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon.
Escherichia  coli adalah  bakteri  yang  banyak ditemukan  di  dalam  usus  besar  manusia  sebagai flora normal. Sifatnya unik karena dapat menyebabkan  infeksi  primer  pada  usus  manusia, seperti  juga  kemampuannya  menimbulkan  infeksi pada  jaringan  tubuh  lain  diluar  usus. Escherichia coli tumbuh  baik  pada  hampir  semua  media  yang biasanya  dipakai  di  laboratorium  mikrobiologi  pada media  yang  dipergunakan  untuk  isolasi  kuman enterik (Februhartanti dan Iswaranti, 2006).
Menurut  Emingko  (2011),    bahaya  bakteri Esherichia  coli pada  manusia  bila  dalam  jumlah
yang  berlebihan  maka  dapat  mengakibatkan  diare dan  bila  bakteri  ini  menjalar  ke  sistem  organ/tubuh yang  lain  dapat  menginfeksi  seperti  pada  saluran kencing  dapat  mengakibatkan  infeksi  saluran kencing  (ISK).  Sedangkan  menurut  Suriawiria (1996),  bakteri coliform dicurigai  berasal  dari  tinja. Kehadiran  bakteri  ini  di  dalam  berbagai  tempat mulai  dari  air  minum,  bahan  makanan  ataupun bahan-bahan  lain  untuk  keperluan  manusia,  tidak diharapkan  dan  bahkan  sangat  dihindari.  Hubungan antara  tinja  dan  bakteri coliform dapat  menjadikan bakteri  ini  sebagai  indikator  alami  kehadiran  materi fekal.  Suatu  subtrat  atau  benda  misalnya  air  minum didapatkan  bakteri  ini,  langsung  ataupun  tidak langsung air minum tersebut dicemari materi fekal.
Menurut  Suriawira  (1996),  Bakteri Coliform dapat dibedakan menjadi 2 kelompok :
1. Coliform  fekal, contoh  : Escherichia  coli , merupakan  bakteri  yang  berasal  dari  kotoran hewan  dan  manusia.  Adanya Escherichia  coli dalam air minum, hal ini menunjukkan bahwa air minum  yang  dikomsumsi    telah  terkontaminasi oleh  feses  manusia,  oleh  karena  itu  standar  air minum  mensyaratkan Escherichia  coli harus 0/100 ml.
2. Coliform  non  fekal misalnya  : Enterobakter aerogenes, biasanya  ditemukan  pada  hewan  atau tanaman yang telah mati.
Bakteri Coliform sebagai  suatu  kelompok dicirikan  sebagai  bakteri  berbentuk  batang  gram negatif,  tidak  membentuk  spora, aerobik ,  dan anaerobik fakultatif  yang  memfermentasi  laktose dengan menghasilkan asam dan gas dalam waktu 48 jam pada suhu 35 °C-37 °C (Pelczar,1988).
Bagi  manusia  air  minum  ialah  salah  satu kebutuhan utama mengingat air sebagai faktor utama dalam penularan penyakit khususnya dalam
Jurnal Bioilmi Vol. 2 No. 1 Januari  2016 | 44 masyarakat, maka tujuan utama penyedian air bersih atau  air  minum  adalah  untuk  mencegah  penyakit yang dibawa oleh air (Suriawira, 1996).
Air yang harus diminum adalah air yang sehat yang  harus  memenuhi  persyaratan  Bakteriologi, kimia  radioaktif  dan  fisik  berdasarkan  KepMenKes RI  No  :  907/MenKes/SK/VII/2002  tentang    syarat- syarat  dan  pengawasan  kualitas  air  minum,  dimana untuk  nilai Most  probable  Number (MPN)  yaitu  0  / 100 ml contoh air yang dianalisis (Sunarti, 2015).
Pemeriksaan MPN dilakukan untuk pemeriksaan  kualitas  air  minum,  air  bersih,  air badan, air pemandian  umum, air kolam renang dan pemeriksaan angka kuman pada air PDAM.
Menurut  Sunarti  (2015)  Dalam  metode  MPN untuk air minum ada dua tahap pemeriksaan yaitu : a. Tes Pendahuluan ( Presumtive Test )
Pemeriksaan  pada  tes  pendahuluan  dengan menginokulasi    pada  media Lactose  Borth dilihat  ada  tidaknya  pembentukan  gas  dalam tabung  durham  setelah  di  inkubasi  selama  24    – 48  jam  pada  suhu  35 o C    –    37 o C.  Bila  terdapat pembentukan  gas  tabung  durham  maka  tes  air minum  menurut    KepMenKes  RI  No.  : 907/MenKes/SK/VII/2002.  bila  setelah  48  jam tidak  terbentuk  gas,  hasil  dinyatakan  negatif  dan tidak perlu melakukan penegasan.
b. Tes Penegasan ( Confirmatif Test )
Pemeriksaan pada tes penegasan dengan penanaman  pada  media Brillian  Green  Lactosa Bileborth (BGLB),    dilihat  ada  tidaknya pembentukan  gas  dalam  tabung  durham  setelah diinkubasi  selama  48  jam.  Bila  terbentuk  gas dalam  tabung  durham  maka  tes  dinyatakan positif.
Menurut  Hamdiyati  (2010),  untuk  melihat kualitas  air  dengan  indikator  coliform,  maka  perlu
dilakukan  uji  kualitatif  dan  kuantitatif  bakteri coliform  melalui  3  tahapan  yaitu  uji  Penduga (presumptive test), uji Penetap (Confirmed Test), uji Pelengkap (Completed test).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu  dan Tempat
Penelitian  di  lakukan  pada  tanggal  18-25  Juni 2016 di Laboratorium MIPA Fakultas Ilmu Tarbiyah dan Keguruan Universitas Islam Negeri Raden Fatah Palembang.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  bersifat  eksperimen  yang menggunakan  metode  penentuan  nilai  MPN  untuk mengetahui  kualitas  air  pada  sampel  secara kuantitatif.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah tabung  reaksi,  tabung  durham,  pipet  ukur,  bunsen, cawan  petri,  gelas  ukur,  jarum  ose,  rak  tabung reaksi, kertas label, erlenmeyer dan inkubator.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah empat sampel air, media Lactose Borth (LB), media Brilliant  Green  Lactase  Bilebroth (BGLB), media Eosin Methelin Blue (EMB), dan alkohol 96% dan kapas.

## Cara Kerja

## Sterilisasi Alat dan bahan
Seluruh  alat  yang  akan  digunakan  dicuci bersih  dan  dikeringkan.  Tabung  reaksi,  gelas  ukur, dan  erlenmeyer  ditutup  mulutnya  dengan  kapas. Cawan  petri  dibungkus  dengan  kertas,  kemudian semuanya  dimasukkan  dalam  plastik  tahan  panas dan  sterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu  121°C selama 30 menit. Jarum ose disterilkan dengan  cara memijarkan  pada  api  bunsen.  Seluruh  media

## Pembuatan Media Lactose Borth (LB)
Sebanyak  13  gram Lactose  Borth (LB) dilarutkan dalam 1000 ml aquades, kemudian diaduk sampai  larut  dan  dipanaskan  hingga  mendidih.  Lalu disterilkan  selama  15  menit  di  autoklaf  dengan tekanan udara 1 atm dan suhu 121°C.
Pembuatan Media Brilliant Green Lactase
Bilebroth (BGLB)
Sebanyak  40  gram Brilliant  Green  Laktosa Bileborth (BGLB)  dilarutkan  dalam  1000  ml aquades,  kemudian  diaduk  sampai  larut  dan dipanaskan  hingga  mendidih.  Lalu  disterilkan selama 15 menit di autoklaf dengan tekanan udara 1 atm dan suhu 121°C.
Pembuatan Media Eosin Methelin Blue (EMB)
Sebanyak  37,5  gram Eosin  Methelin  Blue
(EMB)  dilarutkan  dalam  1000  ml  aquades, kemudian  diaduk  sampai  larut  dan  dipanaskan hingga  mendidih.  Lalu  disterilkan  selama  15  menit di  autoklaf  dengan  tekanan  udara  1  atm  dan  suhu 121°C.

## Pengambilan Sampel
Sampel  air  diambil  dengan  menggunakan botol  kaca  yang  berwarna  gelap  yang  sudah disterilisasi  dengan  volume  150  ml.  Sampel  air didapatkan dari  depot air isi ulang disekitar kampus Universitas  Islam  Negeri  (UIN)  Raden  Fatah Palembang.  Air  tersebut  didapatkan  dari  empat tempat  yang  berbeda,  sampel  pertama  merupakan sampel  air  dari  Rawa  Jaya  I,  sampel  kedua merupakan  sampel  air  dari  Rawa  Jaya  III,  sampel ketiga  merupakan  sampel  air  dari  Rawa  Jaya  II, sampel  keempat  merupakan  sampel  air  dari  sekitar daerah Pahlawan.

## Uji Pendugaan
Disiapkan  9  tabung  kultur  yang  masing- masing  berisi  10  ml  media  cair  kaldu Lactose  Bord (LB)  steril  yang  sudah  dilengkapi  dengan  tabung durham.  Diatur  letaknya  pada  rak  tabung  dan masing-masing  diberi  kode  (A1,  A2,  A3,  B1,  B2, B3,  C1,  C2,  C3).  Lalu  dituangkan  air  sampel menggunakan  pipet  steril  masing-masing  sebanyak 10 ml ke dalam tabung kultur yang berkode A1, A2, A3. Kemudian dituangkan air sampel menggunakan pipet  steril  masing-masing  sebanyak  1  ml  ke  dalam tabung kultur yang berkode B1, B2, B3. Selanjutnya dituangkan  air  sampel  menggunakan  pipet  steril masing-masing  sebanyak  0,1  ml  ke  dalam  tabung kultur  yang  berkode  C1,  C2,  C3.  Terakhir, diinkubasikan  9  tabung  kultur yang  sudah diperlakukan pada suhu 37°C selama 1×24 jam.

## Uji Penegasan
Disiapkan  tabung  kultur  yang  masing-masing berisi  10  ml  media  cair Brilliant  Green  Laktosa Bileborth (BGLB)  steril  yang  sudah  dilengkapi dengan tabung durham. Tabung diatur letaknya pada rak  tabung  dan  masing-masing  diberi  kode  yang sesuai  dengan  kode  tabung  yang  positif  pada  uji pendugaan,  misalnya  A1,  A2,  A3,  B1,  B2,  B3,  C1, C2,  C3  sehingga  jumlahnya  sama  dengan  jumlah tabung  yang  positif  saja.  Lalu  air  dituangkan  ke dalam  sampel  yang  sudah  diinkubasi  dalam  media kultur  laktosa  menggunakan  pipet  steril  masing- masing sebanyak 1 ml ke dalam tabung yang positif. Kemudian  tabung  kultur  diinkubasikan  pada  suhu 45°C selama 1×24 jam.

## Uji Penguat
Sampel  yang  positif  pada  uji  penegasan diinokulasi  sebanyak  satu  ose  ke  permukaan  media Eosin  Methylene  Blue (EMB)  secara  zig-zag  lalu diinkubasi  pada  suhu  37˚C  selama  1×24  jam.
Pertumbuhan  koloni  diamati  pada  media Eosin Methylene Blue (EMB). Koloni  yang menampakkan adanya  kilau  metalik  adalah  koloni  bakteri Escherichia  coli .  Setelah  semua  pengujian  selesai, ditentukan  nilai  MPN  Coliformnya  berdasarkan tabel  MPN  pada  lampiran.  Nilai  MPN  ditentukan berdasarkan  jumlah  tabung  yang  positif  dari perlakuan,    dan  dihitung  =  MPN  tabel  x  1/ pengenceran tengah.

## Perhitungan bakteri Koliform dan Escherichia coli
Perhitungan dengan Metode MPN didapatkan dengan  mencocokkan  antara  hasil  analisa  dengan tabel  MPN  (Depkes  RI,  2002),  yaitu  tabel  yang memberikan  Jumlah  Perkiraan  Terdekat  ( The  Most Probable Number ), yang tergantung dari kombinasi tabung positif (yang mengandung bakteri Coli ) dan negatif  (yang  tidak  mengandung  bakteri Coli )  dari kedua  tahap  tes.  Angka  MPN  tersebut  mempunyai arti  statistik  dengan  derajat  kepercayaan  ( level  of significancy ) 95%.Apabila hasil tabung yang positif terdapat  pada  kombinasi  tabung  yang  positif  pada tabel  MPN,  maka  jumlah  bakteri E. coli dan Koliform dihitung menggunakan tabel MPN.
a. Apabila hasil tabung yang positif tidak terdapat pada kombinasi tabung yang positif pada tabel MPN maka jumlah bakteri E. coli dan Koliform dihitung dengan rumus :
Jumlah Bakteri (JPT/100 ml)=  A    X   100 √B x A Keterangan:
A. = Jumlah tabung yang positif
B. = Volume (ml) sampel dalam tabung yang negatif
C. = Volume (ml) sampel dalam semua tabung (Depkes RI, 2002).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Pengujian  kualitas  air  isi  ulang  dilakukan dengan  metode  MPN  ( Most  Probable  Number ) terhadap  bakteri  C oliform dan E.coli .  Sampel diambil  dari  empat  sumber  depot  air  minum  isi ulang  di  kawanan  UIN  Raden  Fatah  Palembang. Sampel  pertama  dari  kawasan  Rawa  Jaya  I,  sampel kedua  dari  Rawa  Jaya  III,  sampel  ketiga  dari  Rawa Jaya  II,  sampel  keempat  merupakan  sampel  air  dari sekitar  daerah  Pahlawan.  Pengujian  dilakukan dengan  3  tahapan,  yaitu  uji  pendugaan,  uji penegasan dan uji penguat.

## a. Uji Praduga
Hasil uji praduga terhadap kualitas air isi ulang ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Uji  praduga  digunakan untuk  mengetahui  ada  tidaknya  bakteri Coliform dalam  air  isi  ulang.  Sampel  difermentasikan  pada media  media  LB  ( Lactose  Broth )  masing-masing sebanyak  10  mL,1  mL  dan  0.1  mL.  Hasil  positif menunjukkan adanya gelembung gas yang dihasilkan  pada  tabung  durham.    Gelembung  gas dihasilkan  dari  aktifitas  bakteri  koliform  yang memfermentasikan laktosa sebagai sumber karbohidratnya  dan  menghasilkan  gas  sebagai produk  akhirnya  (Gambar  1).  Menurut  Nuria dkk (2009), tabung durham berfungsi untuk menangkap gas hasil fermentasi laktosa agar dapat diamati.
Tabel 2. Data Hasil Praduga pada Air Isi Ulang Inkubasi 24 jam pada Suhu 37 o Sampel Jumlah Tabung NPM/ 100 ml/g Keterangan 10 ml 1 ml 0.1 ml I 2 3 2 210 Positif Coliform II 2 3 3 290 Positif Coliform III 2 0 1 14 Positif Coliform IV 3 3 3 >1100 Positif Coliform
Semua  sampel  menunjukkan  hasil  yang  positif, berarti semua sampel mengandung Coliform. Jumlah bakteri koliform berbeda-beda dengan nilai tertinggi
yaitu  >  1000  NPM/mL  dan  yang  terendah  14 NPM/mL (Tabel 2).
a b
Gambar 1. Uji Praduga; a) hasil positif  dengan adanya gelembung gas pada media LB  b) Hasil negatif, tidak terbentuk gelembung gas pada media LB
b. Uji  Penegasan
Tabung  yang  menunjukkan  hasil  positif diuji lebih lanjut dengan uji penegasan menggunakan  media  selektif Brilliant  Green Lactose Bilebroth (BGLB). Uji ini dilakukan untuk membuktikan  adanya  bakteri  koliform  fecal  pada sampel  air,  dengan  cara  membedakan  adanya gelembung  atau  tidak  adanya  gelembung  (Gambar 2).
Gelembung  udara  yang  dihasilkan  pada tabung  durham  disebabkan  oleh  adanya  aktivitas
respirasi  mikroorganisme,  yang  berupa  berupa gelembung  gas  (Nuria dkk 2009).  Tabung dinyatakan  positif  bila  di  dalam  tabung  durham terbentuk gas dan dinyatakaan negatif apabila tidak adanya gelembung (Gambar 2).
Hasil uji penegasan ditunjukkan pada Tabel 2,  didapatkan  bahwa  keempat  sampel  positif mengandung  bakteri  koliform  fekal . Nilai  rata-rata MPN  tertinggi  pasa  sampel  keempat  yaitu  >  1100 MPB/  100mL  dan  nilai  terendah  pada  sampel  3 yaitu 14 MPN/ 100mL.

## a                           b
Gambar  2.  Uji  Penegasan  pada  media  BGLB;  a)  hasil  positif    dengan  adanya  gelembung  gas  b)  Hasil negatif, tidak terbentuk gelembung gas
Tabel 3. Hasil uji Penegasan MPN pada air isi ulang dari depot di sekitar UIN Raden Fatah Palembang Sampel  Suhu ( 0 )  Hasil Uji Penegasan
MPN/
100mL/g Keterangan 10 1 10 2 10 3 I 37 2 2 0 21 Positif Coliform Fekal II 37 1 2 3 36 Positif Coliform Fekal III 37 2 0 1 14 Positif Coliform Fekal IV 37 3 3 3 >1100 Positif Coliform Fekal
c. Uji Penguat
Uji  penguat  untuk  mengetahui  adanya  bakteri Escherichia  coli pada  sampel  dengan  menggunakan media  agar (Eosin  Methylen  Blue  ) EMB. Uji  ini dinyatakan  positif  apabila  pada  cawan  petri ditemukan  koloni  yang  berwarna  hijau  metalik. Hasil  uji  ini  memperlihatkan  bahwa  bakteri  yang tumbuh  pada  media  EMB  berwarna  hijau  metalik seperti  yang  ditunjukkan  pada  Gambar  3.  Menurut Brooks  (2008)  bila  dalam  biakan  media  EMB
terdapat  bakteri Escherichia  coli maka  asam  yang dihasilkan dari fermentasi akan menghasilkan warna koloni  yang  spesifik  untuk  bakteri Escherichia  coli yaitu  koloni  yang  berwarna  hijau  dengan  kilap logam. Hasil pengamatan diketahui bahwa karakeristik  koloni  pada  sampel  I  dan  II  berwarna hijau  metalik  diduga  mengandung Escherichia  coli. Koloni  pada  sampel  III  dan  IV  berwarna  hijau metalik  dan  putih  menunjukkan  bahwa  terdapat koloni Escherichia coli dan koliform lain.
Gambar 3.  Biakan bakteri pada media EMB; a) koloni bakteri Escherichia coli b) Koloni bakteri koliform lain

## Pembahasan
Hasil  pengujian  dari  empat  sampel  air minum  isi  ulang  menunjukkan  bahwa  keempat sampel  mengandung  bakteri  pencemar.  Menurut BPOM  (2008)  batas  ambang  mikroba  coliform dalam air minum kemasan adalah 0 koloni/100 mL. Berdasarkan hasil Tabel 1 dan 2, kandungan bakteri Coliform pada  masing-masing  sampel  melebihi  2 koloni/100  mL  sehingga  dikatagorikan  bahwa keempat  sampel  air  minum  isi  ulang  tersebut  tidak layak konsumsi.
Keberadaan Coliform dalam keempat sampel  mengindikasikan  bahwa  adanya  mikroba yang  bersifat  enteropatogenik  dan  atau  toksigenik yang  berbahaya  bagi  kesehatan.  Bakteri Coliform merupakan bakteri indikator sanitasi, yang keberadaannya  dalam  pangan  menunjukkan  bahwa air  atau  makanan  tersebut  pernah  tercemar  oleh
feses manusia karena bakteri ini lazimnya pada usus manusia  (Widiyanti  &  Ristiati  2004).  Bakteri Coliform adalah  golongan  campuran  bakteri  fekal dan bakteri non fekal. Hasil uji penegasan (Tabel 2) menunjukkan bahwa bakteri Colifom yang terkandung  dalam  sampel  adalah Coliform fekal. Menurut  Fardiaz  (1993) Coliform fekal  merupakan golongan  bakteri  yang  berasal  dari  kotoran  hewan atau manusia, contohnya Escherichia coli.
Hasil  uji  penguat  menunjukkan  bahwa semua  sampel  mengandung Escherichia  coli dan bakteri Coliform lainnya (Gambar 3). Bakteri E.coli merupakan  bakteri  gram  negatif  berbentuk  batang pendek.  Kehadiran  bakteri E.coli pada  air  minum memperlihatkan  buruknya  kualitas  air  minum tersebut.  Bakteri  ini  termasuk  bakteri  patogen penyebab diare (Simadibrata dan Daldiyono 2009). Penyakit  diare  digolongkan  sebagai  penyebab
b
a
Jurnal Bioilmi Vol. 2 No. 1 Januari  2016 | 49 kematian  peringkat  ke-13  dengan  proporsi  3.5%  di Indonesia  dan  urutan  pertama  yang  menyebabkan pasien  rawat  inap  di  rumah  Sakit  (Kemenkes  RI 2011).
Keberadaan Coliform dalam keempat sampel  (Tabel  1  &  2)  menunjukkan  bahwa  tahap pengolahan  air  minum  isi  ulang  tidak  higienis karena  mengalami  kontak  dengan  feses  yang berasal  dari  usus  manusia  baik  secara  langsung maupun tidak langsung dan dimungkinkan mengandung  bakteri  patogen  lain  yang  berbahaya. Menurut  Nuria dkk (2009),  adanya  kontaminasi mikroba pada air minum isi ulang dapat disebabkan oleh  berbagai  macam  faktor,  antara  lain  (1) Lamanya  waktu  penyimpanan  air  dalam  tempat penampungan  sehingga  mempengaruhi  kualitas sumber  air  baku  yang  digunakan;  (2)  Adanya kontaminasi  selama  memasukkan  air  ke  dalam tangki  pengangkutan;  (3)  Tempat  penampungan kurang  bersih;  (4)  Proses  pengolahan  yang  kurang optimal;  (5)  Kebersihan  lingkungan;  (6)  Adanya kontaminasi dari galon yang tidak disterilisasi.
Permasalahan ini perlu ditanggulangi dengan cara meminimalisir kemungkinan kontaminasi  bakteri.  Proses  pengolahan  air  minum dilakukan dengan memperhatikan air baku, kebersihan  operator,  penanganan  terhadap  wadah pembeli  dan  kondisi  depot.  Operator  menjaga kebersihan diri sendiri untuk mengurangi kontaminsasi  dengan  mencuci  tangan  sebelum menangani  wadah  konsumen.  Sterilisasi  wadah konsumen  dilakukan  dengan  cara  pencucian menggunakan deterjen khusus  yang disebut dengan tara  pangan  ( food  grade )  dan  dibilas  dengan  air bersih  suhu  60-85 0 C.  Depot  menyediakan  tisu beralkohol untuk  membersihkan mulut  galon  untuk mengurangi  tingkat  kontaminasi  bakteri  dari  luar
terutama  yang  menggunakan  dispenser.  Faktor  lain yang  tidak  kalah  penting  adalah  lingkungan  depot air  minum  itu  sendiri,  depot  dikondisikan  terbebas dari  debu  dan  pencemar  lain  yang  berpotensi mengkontaminasi air isi ulang (Afif et al. 2015).

## KESIMPULAN
Hasil pengujian kualitas air isi ulang dengan metode  MPN  memperlihatkan  bahwa  keempat sampel  tidak  layak  dikonsumsi  karena  terdapat bakteri Escherichia coli dan Coliform non fekal..

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Afif,  F.,  Erly,  dan  Endrinaldi.  2015.
Identifikasi Bakteri Escherichia coli Pada Air Minum  Isi  Ulang  yang  Diproduksi  Depot  Air Minum  Isi  Ulang  di  Kecamatan  Padang Selatan (online).  Website:  http://jurnal.fk. unand.ac.id.pdf.  Diakses  pada  hari  Sabtu,  25 Juni 2016 pukul 13.25 WIB.
[2] Alquran  dan  terjemah.  2014.  Al-furqon.
Bandung. CV Diponegoro. [3] Badan POM RI. 2008. Pengujian Mikrobiologi Pangan . Artikel. Jakarta.
Diakses pada Desember 2014. Pk. 05.30
[4] Bambang,  Andrian  G  dkk.  2014. Analisis Cemaran  Bakteri  Coliform  dan  Identifikasi Escherichia coli pada Air Isi Ulang di  Depot Kota  Manado .  Tersedia:  http  ://ejournal. unstrad.ac.id/indeks.php/parmacon/artikel/do wnload/5450/4957&sa=U&ved. Diakses pada hari Rabu 22 Juni 2016 pada jam 19.53 WIB.
[5] Brooks, Geo F. 2008. Mikrobiologi
Kedokteran . Jakarta: EGC.
[6] Campbell,  N.A.  2002. Biologi  Edisi  Kelima Jilid 2 . Jakarta : Erlangga.
[7] Darmawan,  Y.  2011.  Bakteri  Coliform. Tersedia:http//wisuda.unud.ac.id/pdf/1009005 011BAB%25202.Yuli%2520/2011/Darmawa n.pdf&sa=U&ved. Diakses pada hari Rabu 22
Juni 2016 pada jam 19.29 WIB.
[8] Depkes RI. 2002. Syarat-syarat dan Pengawasan Kualitas Air Minum. PerMenKes RI  NO.  907/Menkes/SK/VII/2012.  Jakarta  : Depkes RI.
[9] Emingko. 2011. Manfaat dan  Bahaya Bakteri Esherichia coli, http://www.emingko.com.
[10] Februhartanti  dan  Iswaranti.  2006.  Amankan
Makanan  Jajanan  Anak  Sekolah  Indonesia. http://www.gizi.net/cgi- bin/berita/fullnews.cgi?newsid.  Diakses  pada 10 Agustus 2016. Diakses 11 Agustus 2016.
[11] Fardiaz,  S.  1993.  Analisis  Mikrobiologi Pangan. PAU. IPB
[12] Hamdiyati, Y. 2010. Mikrobiologi Lingkungan (Mikrobiologi Tanah dan Mikrobiologi Air). Tersedia: Http:// File. Upi. Edu/ Direktori/ Fpmipa/ Jur._ Pend._
Biologi/  2010/  196611031991012  Yanti_ Hamdiyanti/  Mikrobiologi_  Air.  Pdf&Sa= U&Ved. Diakses pada hari Rabu 22 Juni 2016 pada jam 19.20 WIB.
[13] KepMenkes. 2002.  Syarat-syarat        dan Pengawasan Kualitas Air Minum. Jakarta
[14] Kemenkes  RI.  2011.  Situasi  Diare  di Indonesia. Buletin Jendela Data dan informasi kesehatan: Triwulan II.
[15] Suriaman,  2008.  Mikrobiologi  Lingkungan.
Tersedia:  http:  //repository.  usu.  ac.  id/ bitstream/123456789/35037/4/Chapter%2520
II.pdf&sa=U&ved. Diakses pada hari Rabu 22 Juni 2016 pada jam 19.25 WIB.
[16] Widiyanti, Manik Ni Luh Putu. 2004. Analisis
Kualitatif  Bakteri  Koliform  Pada  Depot  Air Minum  Isi  Ulang  di  Kota  Singaraja  Bali. Tersedia:  http://www.unhas.ac.id/hasbi/TOT- AtmeSpr/eSpring%2520TTT/background/Air %25203.pdf&sa=U&ved.  Diakses  pada  hari Rabu 22 Juni 2016 pada jam 19.21 WIB.
[17] Marpaung,  Manuel  Deddy  Oke  dan  Bowo
Djoko  Marsono.  2013.  Uji  Kualitas  Air Minum  Isi  Ulang  di  Kecamatan  Sukolilo
Surabaya Ditinjau dari Prilaku dan Pemeliharaan Alat. Website:
http://download.portalgaruda.org/
article.php?article=89208&val=4186&title=. Diakses pada hari Jumat, 24 Juni  2016 pukul
23.09 WIB.. [18] Nisak,  Aulia  Jauharum,  dkk.  2012.  Uji Kualitas Air (online). Website: http://www.scribd. com/mobile/doc/ujikualitasair.pdf. Diakses
pada  hari  Jumat,  24  Juni  2016  pukul  20.40 WIB.
[19] Nuria,  M.C.,  Rosyid  A,.  Sumantri.  2009.  Uji Kandungan Bakteri Escherichia coli pada Air Minum  Isi  Ulang  dari  Depot  Air  Minum  Isi Ulang  di  Kabupaten  Rembang.  Diakses  pada Oktober 2014 pk. 20.35.
[20] Pelczar, M. J. 2009. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: UI-Perss. [21] Sulistyawati.2003. Studi Kulaitas
Bakteriologis  Air  Minum  Isi  Ulang  Tingkat
Produsen  Di  Kota  Semarang.  FK  UNDIP Skripsi.
[22] Sumirat. 1994. Kesehatan Lingkungan. Bandung: Gadjah Mada University Press.
[23] Sunarti,  R  N.  2015.  Uji  Kualitas  Air  Sumur Dengan  Menggunakan  Metode  MPN  (Most Probable  Numbers).  Bioilmi  Vol.  1  No.  1. Website  :  http://jurnal.radenfatah.ac.id/index. php/Alilmi/article/download/58.  diakses  pada Kamis, 23 Juni 2016 Pukul 09.42 WIB.
[24] Suprihatin.  2004.  Keamanan  Air  minum  Isi Ulang. http//air. Bappenas.
go.id/doc/pdf/kliping/Keamanan  Air  Minum Isi Ulang.pdf (14 April 2009).
[25] Suriawira.  U.  1996.  Air  Dalam  Kehidupan Dan Lingkungan yang Sehat. Penerbit Alumni Bandung.
[26] Widiyanti  dan  Ristiati.  2004.  Analisis Kualitatif  Bakteri  Koliform  Pada  Depo  Air Minum  Isi  Ulang  Di  Kota  Singaraja  Bali.
Bali. Jurnal Ekologi Kesehatan. Diakses pada Maret 2015. Pk. 05.25.