## Jurnal Sains Akuakultur  Tropis D e p a r t e m e n  A k u a k u l t u r
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan - Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH, Tembalang, Semarang 50275 Telp. (024) 7474698, Fax.: (024) 7474698
Email: sainsakuakulturtropis@gmail.com , sainsakuakulturtropis@undip.ac.id
PENGARUH EKSTRAK BAWANG PUTIH ( Allium sativum ) TERHADAP TINGKAT PENCEGAHAN INFEKSI BAKTERI Vibrio harveyi DAN KELULUSHIDUPAN IKAN NILA SALIN ( Oreochromis niloticus )
The Effect of Garlic Extract (Allium sativum) on the Prevention Level of Vibrio Harveyi Bacterial Infection and the Survival Rate of Saline Tilapia (Oreochromis Niloticus)
Raynol Simorangkir, Sarjito *) , A. H. Condro Haditomo
Departemen Akuakultur Jurusan Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto Tembalang, Semarang, Jawa Tengah-50275

## ABSTRAK
Vibrio harveyi merupakan salah satu agen pembawa penyakit vibriosis yang menjadi penyebab kematian masal  dalam  budidaya  ikan  bersalinitas  baik  pembenihan  maupun  pembesaran.  Bawang  putih  ( Allium  sativum ) sebagai salah satu tanaman obat terbukti memiliki aktivitas antibakteri terhadap spektrum luas bakteri Gram positif maupun  Gram  negatif,  sehingga  berpotensi  dijadikan  antibiotik  alami.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji pengaruh  penambahan    ekstrak  bawang  putih  ( A.  sativum )  pada  pakan  terhadap  kelulushidupan  ikan  nila  salin ( Oreochromis  niloticus )  yang  diinfeksi  oleh  bakteri V.harveyi. Penelitian  dilakukan  dengan  metode  eksperiman menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan dan 3 ulangan. Parameter yang diamati yaitu kelulushidupan ( survival rate /SR), total leukosit, dan gejala klinis secara morfologi ikan nila salin yang diinfeksi bakteri V.harveyi . Total ikan uji sebanyak 120 ekor dengan panjang rata-rata ± 10 cm. Perlakuan yang diberikan yaitu A (0 ppm), B (50 ppm), C (100 ppm), dan D (150 ppm) didapat berdasarkan hasil uji pendahuluan berupa uji zona hambat. Pergantian air dilakukan setiap  3 kali sehari   sebanyak 30% dari air pemeliharaan  selama 14  hari. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  penambahan  ekstrak  bawang  puith  berpengaruh  nyata  terhadap kelulushidupan  (p<0,05).  Perlakuan  D  (150  ppm)  menunjukkan  kelangsungan  hidup  tertinggi  (68,15%),  diikuti perlakuan C (66,67%), B (62,96%) dan A (48,15%). Konsentrasi terbaik ditunjukkan oleh perlakuan D yaitu 150 ppm.
Kata Kunci :     bawang  putih  ( Allium  sativum ),  nila  salin  ( Oreochromis  niloticus ), Vibrio  harveyi, kelulushidupan, respon imun

## ABSTRACT
Vibrio harveyi is one of the carriers of vibriosis disease which is a cause of mass death in maternity and aquaculture both hatchery and enlargement. Garlic (Allium sativum) as one of the medicinal plants has been shown to have antibacterial activity against the broad spectrum of Gram positive and Gram negative bacteria, so  that it has the potential to be used as a natural antibiotic. This study aims to examine the content of garlic extract (A. sativum) in feed on the survival of saline tilapia (Oreochromis niloticus) which is infected by  V.harveyi bacteria. The  research  was  conducted using  the  experimental  method  with  Completely  Randomized  Design  (CRD)  with  4 treatments and 3 replications. Parameters observed was survival rate (SR), total leukocytes, and morphologically clinical symptoms of saline tilapia infected with V.harveyi bacteria. The total test fish was 120 tails with an average length of ± 10 cm.. The treatments given were A (0 ppm), B (50 ppm), C (100 ppm), and D (150 ppm) obtained based on the results of the preliminary test in the form of a inhibitory zone test. Water exchange were carried out every 3 days 30% of the rearing water for 14 days. The results of the study prove the existence of realistic garlic
extracts for survival (p <0.05). Treatment D (150 ppm) showed the highest survival (68.15%), followed by treatment C (66.67%), B (62.96%) and A (48.15%). The best concentration is shown by treatment D, which is 150 ppm.
Keyword : garlic (Allium sativum), Saline Tilapia (Oreochromis Niloticus), Vibrio harveyi, survival rate, immune respons

## PENDAHULUAN
Pengembangan ikan nila unggul yang dapat hidup di perairan dengan salinitas tinggi yang disebut ikan nila salin yang mampu berkembang dan tumbuh di perairan payau dengan kadar garam lebih dari 20 ppt atau bahkan di perairan  laut  dengan  salinitas  hingga  32  ppt  melalui  pemanfaatan  karakter  euryhaline  yang  dimiliki  ikan  nila. Pengembangan  budidaya  ikan  nila  di  perairan  payau  ( brackishwater )  dan  perairan  dengan  salinitas  tinggi  sudah menjadi  perhatian  dilingkup  budidaya  (Jalaluddin,  2014).  Pengembangan  budidaya  ikan  nila  di  perairan  payau ( brackishwater )  dan  perairan  dengan  salinitas  tinggi  sudah  menjadi  perhatian  dilingkup  budidaya.  Salah  satu kendala usaha budidaya ikan nila adalah perubahan lingkungan lahan budidaya akibat tingginya pencemaran dan kesalahan  penanganan  budidaya  antara  lain  kurang  efisiennya  penggunaan  pakan  sehingga  memicu  timbulnya masalah  penyakit.  Penyakit vibriosis disebabkan  oleh  beberapa  jenis  bakteri vibrio seperti: Vibrio  harveyi,  V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. fischeri . Bakteri V.harveyi merupakan jenis Vibrio yang paling berbahaya diantara jenis lainnya (Muliani et al. 2015).
Penanganan  penyakit  selama  ini  dilakukan  dengan  menggunakan  antibiotik.  Penggunaan  antibiotik  untuk pengobatan penyakit pada hewan air secara berlebihan dapat menimbulkan resistensi terhadap bakteri patogen dan menghasilkan  residu  antibiotik  dalam  produk  akuakultur  yang  merupakan  ancaman  bagi  kesehatan  ikan.  Oleh karena  itu,  diperlukan  alternatif  pengobatan  menggunakan  antibiotik  yang  bersifat  hayati  agar  lebih  ramah lingkungan. Maka dilakukan suatu pencegahan dengan bahan-bahan alami yang aman dan ramah lingkungan yaitu bawang  putih  ( Allium  sativum ).  Bawang  putih  diharapkan  dapat  menjadi  obat  alternatif  untuk  mengatasi pertumbuhan  dari  bakteri V.harveyi tersebut.  Kandungan  alisin  dalam  bawang  putih  dipercaya  dapat  membunuh bakteri gram positif maupun gram negatif. Penelitian ini dilakukan sebagai salah satu langkah penemuan antibiotik alternatif alami dalam akuakultur khususnya budidaya ikan nila salin.
Tujuan dari penelitian ini adalah mengkaji pengaruh penambahan ekstrak bawang putih ( A.sativum ) terhadap kelulushidupan ikan nila salin yang diinfeksi bakteri V.harveyi . Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi, pengetahuan dan solusi kepada pembudidaya ikan nila salin dalam memilih bahan alami sebagai alternatif pengobatan vibriosis .

## MATERI DAN METODE
Materi dalam penelitian ini meliputi ikan nila salin ( O.niloticus ) dengan panjang rata-rata 10 cm sebanyak 120  ekor  (10  ekor/akuarium)  yang  dipelihara  dalam  12  akuarium berukuran  30  x  40  x  38  cm  berisi  10  L  air pemeliharaan (10 ppt) dan diberi pakan pellet komersil secara at satiation setiap 2x sehari (08.00 dan 16.00). Isolat bakteri V.harveyi yang digunakan diperoleh dari Balai Perikanan Budidaya Air Payau (BPBAP) Situbondo. Adapun bawang  putih  ( A.  sativum ) diperoleh  dari  daerah  Semarang,  Jawa  Tengah.  Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan Agustus – Oktober 2017 di laboratorium Kering Akuakultur, FPIK Semarang, Jawa Tengah.

## Metode
Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimental  dengan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  yang  terdiri dari 4 perlakuan dan 3 ulangan. Perlakuan yang diujikan yaitu penambahan ekstrak bawang puith kedalam pakan komersil. Persiapan ekstrak bawang putih, diperoleh dari 1 kg bawang putih yang diekstrak dengan menggunakan metode maserasi, dimana metode maserasi merupakan metode perendaman bawang putih yang direndam dengan larutan etanol. Selanjutnya  ekstrak bawang putih murni diencerkan dengan menggunakan larutan aquades untuk mendapatkan konsentrasi yang dinginkan. Perlakuan kultur bakteri V.harveyi dilakukan menggunakan media TSA ( Trypticase  Soya  Agar )  .  Sebelum  digunakan  bakteri  terlebih  dahulu  dilakukan  pasase.  Perlakuan  penambahan ekstrak bawang putih pada pakan diberikan pada awal  mulai pemeliharaan  hingga penginfeksian dengan bakteri V.harveyi yaitu selama 20 hari. Bakteri V.harveyi disuntikan dengan kepadatan 10 8 CFUml -1 sebanyak 5 ml/ekor. Berdasarkan  hasil  uji  pendahuluan  berupa  uji  zona  hambat,  dimana  hasil  zona  hambat  menunjukkan  diameter sebesar 5 mm untuk konsentrasi 150 ppm, maka konsentrasi tiap perlakuan yang dilakukan adalah A (0 ppm), B (50 ppm), C (100 ppm) dan D (150 ppm). Pergantian air dilakukan setiap 3 hari sekali sebanyak 30% dari air perlakuan, diaerasi  terus  menerus  dan  kualitas  air  dicek  pada  awal,  tengah  dan  akhir  penelitian  (Kongchum et  al., 2016). Parameter yang diamati meliputi kelulushidupan (SR) ikan nila salin selama pemeliharaan 14 hari dan pasca 7 hari pemeliharaan  setelah  infeksi V.harveyi ,  total  leukosit  dan  gejala  klinis  morfologi  ikan  nila  salin  yang  terinfeksi bakteri V.harveyi . Data dianalisis menggunakan analisis sidik ragam (ANOVA single factor ) selang kepercayaan
yang  digunakan  adalah  95%.  Setelah  dilakukan  analisis  ragam,  apabila  ditemukan  perlakuan  berbeda  nyata (p<0,05), maka dilakukan pengujian untuk beda nyata jujur (BNJ) menggunakan uji Duncan.

## Total Perhitungan Leukosit
Untuk  menghitung  total  leukosit,  maka  pertama-tama  darah  diambil  sebanyak  1  ml  dimasukkan  dalam eppendorf, selanjutnya sampel darah dimasukkan kedalam pipet thoma leukosit sampai skala 0,5 lalu ditambahkan larutan turk’s sampai skala 11 pada pipet thoma leukosit. Larutan tersebut dihomogenkan dengan cara mengayunkan pipet thoma leukosit secara perlahan-lahan selama 15-30 detik. Selanjutnya larutan dibuang 1-2 tetes lalu tetesan berikutnya  diteteskan  pada  sisi cover  glass yang  menutupi  haemacytometer  sehingga  larutan  akan  menyebar menutupi  permukaan haemocytometer .  Penghitungan  leukosit  dilakukan  dengan  bantuan  mikroskop  pada pembesaran 10 kali. Jumlah sel leukosit yang dihitung diambil secara acak dari empat kotak.

## Kelulushidupan (SR)
Kelulushidupan  atau survival  rate (SR)  dihitung  untuk  mengetahui  tingkat  kematian  udang  uji  selama penelitian, kelulushidupan dapat dihitung menggunakan rumus Effendie dan Tang (2002), sebagai berikut:
Keterangan:
SR = Tingkat kelangsungan hidup (%) Nt = Jumlah ikan yang hidup pada akhir pengamatan (ekor) No = Jumlah ikan yang hidup pada uji tantang (ekor)

## Pengamatan Gejala Klinis
Pengamatan abnormalitas ikan dicatat gejala klinisnya baik secara tingkah laku ikan amupun  morfologi ikan  selama  penginfeksian,  saat  pemberian  pakan  dengan  kandungan  ekstrak  bawang  putih,  dan  selama pemeliharaan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL Total Perhitungan Leukosit
Hasil perhitungan total leukosit ikan nila salin ( O.niliticus ) selama penelitian dapat dilihat pada grafik yang tersaji pada Gambar 1.
Gambar 1. Hasil perhitungan total leukosit ikan nila salin ( O.niliticus ) 0 10000 20000 30000 0 2 4 6 8 10 12 T o ta l leuk o sit ( Sel/m m 3 ) Total leukosit 0 ppm (A) 50 ppm (B) 100 ppm (C) 150 ppm (D) Hari ke- SR  = Nt x 100 % N 0
Dari  hasil  (Gambar  1),  dengan  penambahan  ekstrak  bawang  putih  pada  pakan  dapat  memberikan  efek peningkatan dari leukosit darah ikan. Total leukosit darah ikan yang tertinggi terlihat pada pakan yang ditambah oleh ekstrak bawang putih sebanyak 150 ppm. Penambahan ekstrak bawang putih sebanyak  50 ppm, pada akhir pengamatan total leukosit tidak  memeberikan pengaruh  yang nyata pada total leukosit darah ikan. Penghitungan total leukosit penting dilakukan untuk mengetahui status kesehatan ikan.

## Kelulushidupan (SR)
Tingkat kelulushidupan ikan nila salin ( O.niloticus ) sebelum uji tantang dan pasca  uji tantang tersaji pada Tabel 1.
T abel 1. Hasil Tingkat kelulushidupan (SR) ikan nila salin
Perlakuan Nilai Tingkat Kelushidupan (SR) (Rerata±SD) Sebelum Uji Tantang Pasca Uji Tantang A (0 ppm) 83,33±5,77 a 47,69±3,21 a B (50 ppm) 90,00±0,00 b 63,06±6,42 b C (100 ppm) 90,00±0,00 b 66,67±0,00 b D (150 ppm) 93,33±5,77 b 67,78±8,98 b
Hasil tingkat kelulushidupan (Tabel 1) diperoleh dari pemeliharaan ikan  nila salin selama 14 hari dengan perlakuan penambahan ekstrak bawang putih yang berbeda-beda pada pakan dan pengamatan salama 7 hari pasca penginfeksian  bakteri V.harveyi .  Nilai  SR  ikan  nila  salin  yang  tinggi  terlihat  pada  perlakuan  D  (150 ppm)  yaitu hingga 93,33±5,77 dan setelah uji tantang  menjadi 68,15±8,98. Hal itu  menjelaskan bahwa dengan penambahan ekstrak bawang putih pada pakan yang diberikan dapat meningkatkan kelulushidupan ikan nila salin. Hal tersebut terlihat berbeda nyata pada perlakuan A (0 ppm) terhadap perlakuan B (50 ppm), C (100 ppm) dan D (150 ppm), dimana pada perlakuan A (0 ppm) pasca uji tantang nilai SR yang diperoleh adalah 48,15%.  Gambar pola kematian dan kelushidupan ikan nila salin ( O.niloticus ) tersaji pada Gambar 2
Gambar 2. Pola kematian dan kelushidupan Ikan Nila Salin ( O.niloticus )
Dari hasil (Gambar 2.), tingkat kelulushidupan ikan nila salin dari awal pemeliharaan sampai uji tantang dengan  penginfeksian  menggunakan  bakteri V.harveyi mengalami  penurunan  persentase  kelulushidupan  yang drastis  pada  perlakuan  A  (0  ppm)  disbanding  dengan  perlakuan  B  (50  ppm),  C  (100  ppm)  dan  nilai  persentase kelulushidupan tertinggi pada perlakuan D (150 ppm). Pola kematian terendah terlihat pada ikan  nila salin  yang diberi perlakuan tanpa penambahan ekstrak bawang putih pada pakan. Berbeda dengan ikan nila salin yang diberi perlakuan  dengan  penambahan  ekstrak  bawang  putih  150  ppm  dapat  menekan  angka  kematian  baik  selama pemeliharaan  maupun  selama  uji  tantang  dengan  penginfeksian  menggunakan  bakteri V.harveyi .  Ikan  nila  salin yang dipelihara selama 21 hari dilakukan penginfeksian bakteri V.harveyi pada hari ke-14. Diagram Kelulushidupan Ikan nila salin ( O.niloticus ) pasca uji tantang tersaji pada Gambar 3.
0 5 10 15 20 25 30 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Ju m lah ik an (Ek or ) Pola Kematian 0 ppm (A) 50 ppm (B) 100 ppm (C) 150 ppm (D)
Hari ke-
Gambar 3. Diagram Kelulushidupan Ikan Nila Salin (O.niloticus) Pasca Uji Tantang
Dari hasil (Gambar 3) juga dapat dilihat nilai kelulushidupan ikan nila salin pasca dilakukan uji tantang mengalami penurunan yang drastis, dimana tingkat kelulushidupan yang tertinggi terlihat pada perlakuan D (150 ppm) yang hanya mendapatkan nilai kelulushidupan sebesar 67,78±8,98, diikuti oleh perlakuan C (66,67±0,00) dan B yaitu (63,06±6,42) dan terendah terlihat pada perlakuan A (47,69±3,21). Dari hasil tersebut dapat dilihat bahwa selama 7 hari pengamtan pasca uji tantang, ikan nila salin yag diberi pakan tanpa penambahan ekstrak bawang putih (A 0 ppm) memiliki tingkat kematian yang paling tinggi.

## Pengamatan Gejala Klinis
Pengamatan  gejala  klinis  tingkah  laku  ikan  nila  salin,  diperoleh  ciri-ciri  morfologi  ikan  nila  salin  yang terserang bakteri V.harveyi yang tersaji pada Tabel 2. Tabel 2. Hasil Uji Gejala Klinis Morfologi Ikan Nila Salin ( O.niloticus )
No Gejala klinis morfologi ikan nila salin yang terinfeksi V.harveyi Hasil penelitian (Perlakuan) Pustaka (Gejala Klinis) 1 Terdapat Luka + Ikan yang terinfeksi V.harveyi adalah anorexia  atau  hilang  nafsu  makan yang  disertai  dengan  warna  tubuh menghitam).  Ikan  yang  terinfeksi juga  akan  mengalami  kehilangan keseimbangan  dan  menunjukkan perilaku berenang yang tidak normal.  (Tendencia  dan  Lavilla- Pitogo, 2004.* 2 Warna tubuh/overculum gelap/menghitam + 3 Produksi lendir berlebih + 4 Sirip punggung dan ekor gripis +
Keterangan : *Tendencia dan Lavilla-Pitogo (2004) penyakit infeksi pada budidaya laut di Indonesia
Dari  hasil  (Tabel  2),  ikan  nila  salin  yang  terserang  baketri V.  harveyi memiliki  gejala  klinis  secara morfologi yaitu ikan terdapat luka pada bagian punggung, sirip dan ekor terlihat geripis. Pada saat ikan mati dapat dilihat overculum menghitam dan produksi lender berlebih. Hasil gejala klinis tingkah laku ikan juga diamati, dan diperoleh hasil bahwa ikan nila salin kehilangan nafsu makan, terlihat lemas dan ikan berenang dengan tidak normal yaitu berenang miring.

## Kualitas air
Hasil monitoring kualitas air selama penelitian tersaji pada Tabel 4. Tabel 4. Hasil Pengukuan Parameter Kualitas Air pada Media Pemeliharaan Ikan Nila Salin ( O.niloticus ) Selama Penelitian Perlakuan Rata-rata DO (mg/L) Salinitas (ppt) Suhu ( o C) pH A 2,9-3,3 10 25-28 6,7-7,4 B 2,9-3,1 10 26-28 6,8-7,3 C 3-3,3 10 27-29 6,8-7,3 D 2,9-3,1 10 26-29 6,7-7,3 Pustaka (Kelayakan) ≥3 a 10-20 ppt a 25 – 32 a 6,5-8,5 a
Keterangan: a SNI 7550:2009
47,69±3,21 a 63,06±6,42 b 66,67±0,00 b 67,78±8,98 b 0,00 20,00 40,00 60,00 80,00 A B C D K elu lu sh id u p an (% ) Perlakuan
Berdasarkan hasil (Tabel 4) monitoring kualitas air yang dilakukan selama penelitian dapat dilihat bahwa salinitas dijaga untuk selalu berada pada nilai 10 ppt. Kadar salinitas air pemeliharaan dimulai dengan persiapan air pada bak stok air didalam bak fiber. Hasil pengukuran parameter kualitas air menunjukkan bahwa kualitas air yang diukur masih layak berdasarkan pustaka untuk budidaya ikan nila salin ( O.niloticus ).

## Pembahasan

## Total Leukosit
Berdasarkan penelitian tentang perhitungan total leukosit yang telah dilakukan, diperoleh hasil yaitu  total leukosit yang tinggi dilihat pada perlakuan  D yaitu pakan dengan konsentrasi 150 ppm dengan total leukosit adalah 20.200-27.000  sel/mm 3 ,  diikuti  dengan  perlakuan  C  (100  ppm),  memiliki  total  leukosit  20.600-26.500  sel/mm 3 , sedangkan pada perlakuan B  (50 ppm)  memiliki total  leukosit 20.600-25.000 sel/mm 3 ,  dan total leukosit terendah terlihat  pada  perlakuan  A  (0  ppm)  yaitu  20.200-21.600  sel/mm 3 .  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  penambahan ekstrak  bawang  putih  dapat  memicu  pertumbuhan  sel  leukosit  pada  ikan  nila  salin  yang  diperlihara.  Peningkatan jumlah sel leukosit pada ikan nila salin akan meningkatkan nilai kelulushidupan ikan nila salin yang diinfeksi dengan bakteri V. harveyi . Sel leukosit dalam darah memiliki peranan terhadap kekebalan seluler dari ikan, sehingga ikan nila salin memiliki daya tahan tubuh  terhadap serangan patogen berbahaya yang dapat menyebabkan kematian pada ikan nila salin. Jumlah total leukosit yang diperoleh yang tertinggi terlihat pada perlakuan D (150 ppm) yaitu 20.200- 27.000 sel/mm 3 . Menurut Lagler et al. (1977) kisaran normal leukosit ikan nila 20.000 sel/mm 3 -150.000 sel/mm 3 . Faktor-faktor yang mempengaruhi jumlah leukosit adalah kondisi dan kesehatan tubuh ikan. Leukosit merupakan sel darah  yang  berperan  dalam  sistem  kekebalan  tubuh.  Leukosit  membantu  membersihkan  tubuh  dari  benda  asing, termasuk invasi patogen melalui sistem tanggap kebal dan respon lainnya. Ikan yang sakit akan menghasilkan banyak leukosit untuk memfagosit bakteri dan mensintesa antibodi (Moyle and Cech 2004).
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini,  pertumbuhan  sel  leukosit  dalam  darah  ikan  dapat  memicu  tingkat kelulushidupan ikan nila salin yang dipelihara terhadap serangan penyakit, sehingga dapat meningkatkan nila SR ikan nila salin yang dipelihara. Hal itu terlihat saat ikan  nila salin diuji tantang dengan penginfeksian bakteri V.harveyi pada ikan nila salin yang dipelihara. Hasil ini menunjukkan bahwa dengan meningkatnya total leukosit pada ikan nila salin, sehingga ikan yang diinfeksi oleh bakteri V.harveyi memliki angka kematian yang kecil. Perlakuan D (150 ppm) menunjukkan nila SR tertinggi yaitu hingga 67,78% dan juga dengan nilai total leukosit tertinggi pada perlakuan D (150 ppm)  yaitu 48.300-56.600 sel/mm 3 . Berdasarkan fungsi dari sel leukosit didalam tubuh, penambahan  ekstrak bawang putih ke pakan ikan nila salin dapat meningkatkan sel darah putih pada tubuh ikan, sehingga ikan nila salin yang dipelihara  memiliki daya tahan tubuh tinggi terhadap serangan berbagai macam penyakit. Leukosit  memiliki peranan penting terhadap serangan patogen berbahaya dari lingkungan budidaya ikan, jika total leukosit pada tubuh ikan nila salin yang dipelihara tinggi, maka ikan nila salin tersebut akan memiliki sistem imun yang baik terhadap serangan bakteri yang diberikan. Hal ini diperkuat oleh Lengka (2013) yang menyatakan bahwa jumlah leukosit yang ada pada suatu jenis ikan tertentu dapat berubah sesuai dengan tingkat kesehatan ikan yang bersangkutan. Apabila ikan  terinfeksi  oleh  suatu  bakteri  patogen  tertentu  maka  yang  akan  terjadi  selanjutnya  pada  ikan  tersebut  adalah meningkatnya  jumlah  total  leukosit  atau  menurunnya  jumlah  leukosit.  Ikan  yang  kekurangan  jumlah  leukosit menjauhi batas normalnya akan menderita penyakit leucopenia.

## Kelulushidupan (SR)
Tingkat kelulushidupan ikan nila salin  yang dipelihara selama  penelitian  memiliki perbedaan pada setiap perlakuan. Tingkat kematian tertinggi terlihat pada perlakuan A (0 ppm), dimana ikan yang dipelihara mati sebanyak 22 ekor dari total awal ikan yang dipelihara sebanyak 30 ekor. Berbeda hal dengan perakuan D (150 ppm), dimana dapat meningkatkan tingkat kelulushidupan dari ikan yang dipelihara yaitu dari total ikan yang dipelihara 30 ekor dan  yang  mati  hanya  11  ekor.  Hal  itu  terbukti  dengan  panambahan  ekstrak  bawang  putih  pada  pakan  dapat meningkatkan sel leukosit dalam darah ikan, sehingga sel leukosit tersebut dapat melawan serangan infeksi bakteri yang diberikan. Menurut Mulyani (2014) menaytakan bahwa .nilai perbandingan antara jumlah organisme saat akhir pemeliharaan  dengan  jumlah  awal  saat  penebaran  dan  dinyatakan  dalam  bentuk  persen  disebut  dengan kelulushidupan. Semakin besar jumlah ikan yang hidup di akhir maka semakin besar juga nilai kelulushidupannya. Kelulushidupan  merupakan  parameter  keberhasilan  suatu  kegiatan  budidaya.  Parameter  ini  digunakan  untuk mengukur seberapa jauh kemampuan ikan nila salin ( O.niloticus ) untuk bertahan hidup.
Pengamatan  tingkat  kelulushidupan  dilakukan  selama  21  hari  dengan  2  tahap  pengamatan,  tahap  pertama ikan nila salin dipelihara selama 14 hari dengan pakan mengandung ekstrak bawang putih dan tahap kedua pasca uji tantang selama 7 hari, untuk mengetahui jumlah ikan nila salin yang hidup diakhir penelitian. Tahap pertama ikan nila salin dipelihara selama 14 hari dengan total ikan 10 ekor/akuarium, dan pengamatan SR dilakukan setiap hari  untuk  mengetahui  apakah  ikan  nila  salin  ada  yang  mati.  Hasil  yang  diperoleh  pada  ikan  nila  salin  yang dipelihara  dengan  pakan  konsentrasi  150  ppm  mendapatkan  nilai  SR  yang  tinggi  yaitu  93,33±5,77.  Tingkat kelulushidupan ikan nila salin yang dipelihara pada perlakuan B (50 ppm) dan C (100 ppm), memiliki nilai SR yaitu
90,00±10,00  dan  90,00±0,00,  sedangkan  pada  perlakuan  A  (0  ppm)  nilai  SR  yang  diperoleh  adalah  83,33±5,77. Nilai SR ikan nila salin yang diperlihara memiliki nilai SR diatas rata-rata 90% dan terendah pada perlakuan A (0 ppm)  yaitu  83,33%.  Hal  ini  juga  menunjukkan  bahwa  tingkat  kelangsungan  hidup  ikan  nila  salin  selama pemeliharaan tergolong baik. Hal ini dinyatakan oleh Mulyani (2014) bahwa tingkat kelangsungan ≥ 50% tergolong baik,  kelangsungan  hidup  30-50%  sedang  dan  kurang  dari  30%  tidak  baik.  Kelangsungan  hidup  ikan  sangat bergantung  pada  daya  adaptasi  ikan  terhadap  makanan  dan  lingkungan,  status  kesehatan  ikan,  padat  tebar,  dan kualitas air yang cukup mendukung pertumbuhan.
Tingkat kelulushidupan ikan nila salin juga diamati setelah proses penginfeksian atau dilakukan uji tantang dengan  penginfeksian  bakteri V.harveyi .  Dimana  setelah  diinfeksi  bakteri V.harveyi ,  ikan  nila  salin  selanjutnya diamati dan dipelihara selama 7 hari dan mencatat gejala klinis dan jumlah  kematian ikan. Hasil  yang diperoleh setelah penginfeksian dengan bakteri V.harveyi menunjukkan penurunan nila SR pada ikan yang dipelihara, pada perlakuan D (150 ppm) nila SR yang diperoleh yaitu 67,78%, perlakuan C (100 ppm) memperoleh hasil nilai SR yaitu 66,67%. Nilai SR pada perlakuan B (50 ppm), setelah diinfeksi oleh bakteri V.harveyi memperoleh nilai SR yaitu 63,06% dan nila SR terendah terlihat pada perlakuan A (0 ppm) yaitu 47,69%. Hal ini menunjukkan bahwa perlakuan  A  (0  ppm)  dalam  7  hari  pemeliharaan  pasca  penginfeksian  memiliki  persentase  kematian  yang  tinggi yaitu  sebesar  60%    dan  terendah  pada  perlakuan  D  (150  ppm)  yaitu  sebesar  33%.  Hal  itu  menunjukkan  bahwa kandungan  bawang  putih  yang  ditambahkan  pada  pakan  dapat  menekan  angka  kematian  akibat  infeksi  bakteri V.harveyi .  Banyak  sekali  zat  yang  terkandung  didalam  bawang  putih  sebagai  antibakteri,  salah  satu  kandungan bawang  putih  yang  dapat  mencegah  infeksi  bakteri  adalah  allicin.  Hal  ini  diperkuat  oleh  Lengka  (2013),  yang menyatakan  bahwa  allicin  merupakan  salah  satu  zat  aktif  yang  dapat  membunuh  patogen  (bersifat  antibakteri) seperti bakteri. Sedangkan alicin yang terkandung dalam bawang putih secara signifikan dapat meningkatkan sel leuokist dalam darah ikan, sehingga bawang putih dapat digunakan sebagai imunostimulan yang efesien.
Pada penelitian ini, selain tingkat kelulushidupan, ikan nila salin juga diamati gejala klinis yang disebabkan infeksi bakteri V.harveyi . Ikan nila salin yang terserang penyakit bakteri V.harveyi akan menyebabkan kematian. Bakteri V.harveyi dapat menyerang ikan yang dihidup pada air bersalinitas, dan bakteri V.harveyi tergolong pada jenis bakteri Gram negatif. Ikan nila salin yang diinfeksi dengan bakteri V.harveyi , baru 2 hari pemeliharaan sudah menunjukkant gejala klinis yang disebebkan bakteri V.harveyi . Gejala klinis yang diperoleh yaitu pada bagian tubuh terlihat  seperti  luka  dan  pada  bagian  sirip  dan  ekor  yang  terlihat  geripis.  Ikan  nila  salin  yang  diinfeksi  bakteri V.harveyi juga  terlihat  berenang  lebih  lambat,  dan  menurunnya  nafsu  makan.  Ikan  juga  terlihat  sering  muncul kepermukaan untuk mengambil oksigen. Hal ini merupakan ciri-ciri ikan yang terinfeksi bakteri V.harveyi , dimana bakteri ini lebih sering dikenal dengan panyakit vibriosis, dan sangat berbahaya bagi kultivan budidaya khususnya buidaya ikan air bersalinitas. Hal ini diperkuat oleh Desrina et al ., (2006) yang menyatakan bahwa, gejala klinis awal  yang  terlihat  adalah  nafsu  makan  berkurang,  lesu,  berenang  miring,  ginjal  pucat.  Ikan  yang  sakit  dan  mati menunjukkan gejala ginjal pucat, borok pada tubuh, dan mulut merah. Luka pada tubuh terlihat setelah 6 hari pasca infeksi, yang makin lama makin besar dan menjadi borok berdiameter 2 cm.
Berdasarkan hasil uji tantang yang dilakukan, ikan nila salin yang tanpa diberi perlakuan atau pakan tanpa campuran  ekstrak  bawang  putih  lebih  rentan  terhadap  serangan  bakteri V.harveyi dan  lebih  cepat  mati.  Hal  itu berbeda dengan ikan nila salin yang diberi pakan dengan campuran ekstrak bawang putih. Hasil yang menunjukkan bahwa pakan yang mengandung ekstrak bawang putih yang tinggi yakni 150 ppm dapat menekan angka kematian pada ikan nila salin. Hal itu dapat dilihat bahwa nila SR ikan yang pada perlakuan D (150 ppm) adalah 67,78%. Hal itu menunjukkan bahwa ekstrak bawang putih yang dicampurkan ke pakan berpengaruh terhadap jumlah leukosit dalam  darah  ikan  sehingga  berpengaruh  terhadap  tingkat  kelulushidupan  ikan  nila  salin  yang  terserang  bakteri V.harveyi . Terdapat kandungan bawang putih yang dapat memicu pertumbuhan sel leukosit dalam darah ikan, yaitu zat allicin. Hal itu diperkuat oleh Prihandani (2015) yang menyatakan bahwa zat bioaktif yang berperan  sebagai antibakteri    dalam    bawang    putih  adalah  allicin  yang    mudah  menguap    (volatil)  dengan  kandungan  sulfur. Komponen  bioaktif  lainnya  adalah  dialildisulfida,  dan  dialiltrisulda  yang  juga  memiliki  aktivitas  antibakteri. Aktivitas  antibakteri  bawang  putih  dapat mengendalikan  bakteri-bakteri  patogen,  baik  Gram negatif  maupun positif .

## Kualitas air
Kualitas air berpengaruh terhadap kelulushidupan ikan nila salin, maka dari itu perlu dilakukan monitoring kualitas air, agar kualitas air terjaga dan tidak menyebabkan ikan mati. Kualitas air dikontrol setiap hari, dan hasil pengamatan kualitas air meliputi suhu, DO, pH dan salinitas. Hasil pengamatan DO yang diperoleh selama proses pemeliharaan ikan nila salin yaitu berkisar 2,9-3,3; pH berkisar 7,3-7,5; suhu berkisar 25,9-27,1°C; dan salinitas 10 ppt. Salinitas air pada pemeliharaan ikan nila salin tetap dijaga 10 ppt karena apabila salinitas air tidak stabil maka akan  menyebabkan  ikan  nila  salin  yang  dipelihara  akan  mengalami  stres  bahkan  kematian.  Kualitas  air  selama penelitian tergolong baik, hal ini diperkuat oleh Effendi (2003), untuk kelayakan kelangsungan dan pertumbuhan ikan nila salin adalah suhu 27-30 0C, p H 7-8,5, salinitas 10 – 20 ppt, DO 6 – 8, amoniak 0,1, kecerahan 25 –30 cm. Menurut  Prayudi  (2015),  yang  menyatakan  bahwa  kualitas  air  merupakan  salah  satu  faktor  penting  yang
berpengaruh  pada  pertumbuhan  dan  keberlangsungan  hidup  ikan.  Adapun  data  kualitas  air  yang  diukur  dalam penelitian yakni Suhu, derajat keasaman (pH) dan oksigen terlarut (DO).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakuan, maka kesimpulan yang dapat diberikan adalah 1. Penambahan ekstrak bawang putih berpengaruh terhadap tingkat pertumbuhan leukosit yaitu yang tertinggi pada perlakuan D (150 ppm) sebanyak 20.200-27.000 sel/mm3, sehingga berpengaruh terhadap tingkat kelulushidupan ikan nila salin ( O. niloticus ) yaitu 93% dan pasca uji tantang dengan penginfeksian bakteri V.harveyi menjadi 67%. 2. Konsentrasi terbaik dan masih toleran terhadap tubuh ikan nila salin ( O.niloticus ) adalah pada perlakuan D (150 ppm)  dimana  nilai  kelulushidupan  ikan  yang  diinfeksi  dengan  bakteri V.  harveyi yaitu  67%,  diikuti  dengan perlakuan C (100 ppm) yaitu 66% dan B (50 ppm) yaitu 62% dan terendah pada perlakuan A (0 ppm) yaitu 48%.

## Saran
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan,  saran  yang  dapat  disampaikan  perlu  dilakukan  penelitian lanjutan dengan menggunakan konsentrasi yang lebih tinggi untuk mengetahui konsentrasi optimum penambahan ekstrak  bawang  putih  terhadap  tingkat  pencegahan  infeksi  bakteri V.harveyi dan  kelulushidupan  ikann  nila ( O. niloticus ).

## DAFTAR PUSTAKA
Agustinus, F., Widanarni, dan J. Ekasari. 2010. Kelimpahan dan Keragaman Jenis Bakteri dalam Air dan Parameter Imunitas Ikan Nila Merah yang Dipelihara dalam Sistem Bioflok dengan Kepadatan Ikan Yang Berbeda (25 ekor/m 3 , 50 ekor/m 3 , dan 100 ekor/m 3 ). Jurnal Akuakultur Indonesia. 9(2): 157-167. Aliah, R. S. 2017. Rekayasa Produksi Ikan Nila Salin Untuk Perairan Payau di Wilayah Pesisir. Jurnal Rekayasa Lingkungan. 10(1): 17-24.
Aniputri, F. D., J. Hutabarat dan Subandiyono. 2014. Pengaruh Ekstrak Bawang Putih ( Allium sativum ) terhadap Tingkat Pencegahan Infeksi Bakteri Aeromonas hydrophila dan Kelulushidupan Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ). Journal of Aquaculture Management and Technology. 3(2): 1-10. Ardita,  N.,  A.  Budiharjo,  A,  dan  S.  L.  A.  Sari.  2015.  Pertumbuhan  dan  Rasio  Konversi  Pakan  Ikan  Nila ( Oreochromis niloticus ) dengan Penambahan Prebiotik. Jurnal Bioteknologi. 12(1): 16-21. Aquarista,  F.,  Iskandar  dan  U.  Subhan.  2012.  Pemberian  Probiotik  dengan  Carrier  Zeolit  pada Pembesaran  Ikan Lele Dumbo (Clarias gariepinus). Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan. 3(4): 136-137.
Bintari. N. W. D, R. Kawuri, dan A. A. G. R. Dalem. 2016. Identifikasi Bakteri Vibrio Penyebab Vibriosis Pada Larva Udang Galah (Macrobrachium rosenbergi(de man)). Jurnal Biologi. 20(2) : 53-63 Bokau.  R.  JM,  Rakhmawati,  dan  Nur  Indaryanti.  2014.  Optimasi  Pengelolaan  Pakan  Untuk  Meningkatkan Pertumbuhan Ikan Nila Gesit Di Bak Terpal. Pengembangan Teknologi Pertanian. 585-592 Desrina, A. Taslihan, Ambariyanto, dan S. Suryaningrum. 2006. Uji Keganasan Bakteri Vibrio pada Ikan Kerapu Macan ( Epinephelus fuscoguttatus ). Ilmu Kelautan. 11 (3) : 119 – 125
Effendi, H. 2003. Telaah kualitas air. Kanisius. Yogyakarta. Hadi, S. 1985. Metodologi Research Jilid 4. Yogyakarta: Yayasan Penerbit Fakultas Psikologi UGM. 88 hlm. Hartika,  R.,  Mustahal  dan  A.  N.  Putra.  2014.  Gambaran  Darah  Ikan  Nila  ( Oreochromis  Niloticus )  dengan Penambahan Dosis Prebiotik yang Berbeda dalam Pakan. Jurnal Perikanan dan  Kelautan. 4(4): 259-267. Indriani. A. D, S. B. Prayitno, dan Sarjito. 2014. Penggunaan Ekstrak Jahe Merah ( Zingiber Officinale Var. Rubrum )
Sebagai  Alternatif  Pengobatan  Ikan  Nila  ( Oreochromis  Niloticus )  Yang  Diinfeksi  Bakteri Aeromonas Hydrophila . Journal Of Aquaculture Management And Technology 3(3):58-65 Jalaludin. 2014. Pengaruh Salinitas terhadap Fekunditas Fungsional, Daya Tetas Telur dan Benih Ikan Nila Salin ( Oreochromis niloticus Linn ). Jurnal Manajemen Perikanan dan Kelautan. 1(2): 17-32.
Jegede,  T.  2012.  Effect  of  Garlic  ( Allium  sativum )  on  Growth,  Nutrient  Utilization,  Resistance  and  Survival  of Tilapia zillii (Gervais 1852) Fingerlings. Journal of Agricultural Science. 4(2):269-274. Kusumaningrum.  H.  P,  Kusdiyantini.  E,  dan  Sri  Pujiyanto.  2015.  Tingkat  Cemaran  Mikrobia  pada  Tanaman Biofarmaka Curcuma domestica setelah Proses Pengeringan. 128-133.
Lagler KF, Bardach JE, RR Miller, Passino DRM. 1977. Ichthyology. New York-London: John Willey and Sons.
Inc. 506 hlm.
Lengka, K., H. Manoppo dan M. E. F. Kolopita. 2013. Peningkatan Respon Imun Non Spesik Ikan Mas ( Cyprinus carpio L) Melalui Pemberian Bawang Putih ( Allium Sativum ). Jurnal Budidaya Perairan. 1(2): 21-28.
Lingga, E. M  dan M. M. Rustama. 2005. Uji Aktivitas  Antibakteri  Dari Ekstrak  Air Dan Etanol Bawang Putih ( Allium Sativum L. ) Terhadap Bakteri Gram Negatif Dan Gram Positif Yang Diisolasi Dari Udang Dogol ( Metapenaeus Monoceros ), Udang lobster ( Panulirus Sp), Dan Udang Rebon ( Mysis Dan Acetes ).
Lukistyowati, I., Windarti, Morina, A. Isnansetyo, dan Kurniasih. 2008. Efektivitas Ekstrak Bawang Putih ( Allium Sativum ) Untuk Mencegah dan Mengobati Motile Aeromonas Septicemia (Mas) Pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio ). Jurnal Perikanan. X(1): 11-19. Majewski M. 2014. Allium sativum : Facts and Myths Regarding Human Health . J Natl Ins Public Health. 65 (1): 1- 8.
Mardiana  dan  S.  Budi.  2017.  Respon  Immun  Ikan  Nila Oreochromis  Niloticus dengan  Pemberian  Xanton  yang Diekstraksi dari Kulit Buah Manggis Garcinia Mangostana . 6 (1).
Maryono dan A. Sundana. 2002. Teknik Pencegahan dan Pengobatan Penyakit Bercak Merah Pada Ikan Air Tawar yang Disebabkan Oleh Bakteri Aeromonas hydrophila . Buletin Teknik Pertanian., 7(1): 33-36.
Mikaili  P,  Maadirad  S,  Moloudizargari  M.  2013. Therapeutic  uses  and  pharmacological  properties  of  garlic, shallot, and their biologically active compounds . Iran J Basic Med Sci. 16 (10): 1031-1048. Moyle P.B. dan Jr. J.J. Cech 2004. Fishes. An Introduction to Ichthyology. 5th ed. USA: Prentice Hall, Inc.
Mulyani, Y. S., Yulisman dan M. Fitrani. 2014. Pertumbuhan dan Efisiensi Pakan Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ) yang Dipuasakan Secara Periodik. Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia. 2(1): 1-12.
Muslim,  M.  P.  Hotly  dan  H.  Widjajanti.  2009.  Penggunaan  Ekstrak  Bawang  Putih  ( Allium  Sativum )  Untuk Mengobati  Benih  Ikan  Patin  Siam  ( Pangasius  Hypophthalmus )  yang  Diinfeksi  Bakteri Aeromonas Hydrophylla . Jurnal Akuakultur Indonesia. 8(1): 91-100
Nitimulyo,  K.  H.,  A.  Isnansetyo,  Triyanto,  I.  Istiqomah  dan  M.  Murdjani.  2005.  Isolasi,  Identifikasi  dan Karakterisasi Vibrio Spp.  Patogen  Penyebab  Vibriosis  pada  Kerapu  di  Balai  Budidaya  Air  Payau Situbondo. Jurnal Perikanan. VII(2): 80-94.
Novriadi, R. 2014. Penyakit Ikan Air Laut di Indonesia. Kementerian Kelautan dan Perikanan, Direktorat Jenderal Perikanan Budidaya, Direktorat Kesehatan Ikan dan Lingkungan. 28 Prihandani.  S.  S,  M.  Poeloengan,  S.  M.  Noor,  dan  Andriani.  2013.  Uji  Daya  Antibakteri  Bawang  Putih  ( Allium Sativum  L .)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli , Salmonella  typhimurium dan Pseudomonas aeruginosa Dalam Meningkatkan Keamanan Pangan.
Puspitasari. A. D, dan L. S. Proyogo. 2014. Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi Dan Sokletasi Terhadap Kadar Fenolik Total Ekstrak Etanol Daun Kersen ( Muntingia Calabura ). Jurnal Ilmiah Cendekia Eksakta. Rantetondok.  A.  2002.  Pengaruh  Immunostimulan  β-glukan  dan  Lipopolisakarida  terhadap  Respons  Imun  dan
Sintasan  Udang  Windu  ( Panaeus  monodon  fabricius ).  Disertasi.  Makassar.  Program  Pascasarjana Universitas Hasaniddin.
Sari.  D.  R,  S.  B.  Prayitno,  dan  Sarjito.  2016.  Pengaruh  Perendaman  Ekstrak  Bawang  Putih  ( Allium  Sativum ) Terhadap  Kelulushidupan  Dan  Histologi  Ginjal  Ikan  Lele  ( Clarias  Gariepinus )  Yang  Diinfeksi  Bakteri “ Edwardsiella Tarda ”. Journal of Aquaculture Management and Technology. 3(4) : 126-133. Sarjito.  2010.  Aplikasi  Biomolekuler  untuk  Deteksi  Agensia  Penyebab Vibriosis pada  Ikan  Kerapu  dan  Potensi Bakteri  Sponge  sebagai  Anti Vibriosis .  [Disertasi].  Program  Pasca  Sarjana,  Universitas  Diponegoro, Semarang.
Sarker,  D.,Satyajit.,  Latif,  Z.,  &  Gray,  I.A.,  2005,  Natural  Products  Isolation,  2nd  Ed,  283-  285,  New  Jersey,
Humana Press. Saptiani. G, S. B. Prayitno dan, Sutrisno Anggoro. 2012. Aktivitas Antibakteri  Ekstrak Jeruju ( Acanthus
ilicifolius ) terhadap Pertumbuhan Vibrio harveyi Secara in vitro. Jurnal Veteriner. 13(3) : 257-262 Saulnier, D., P. Haffner, C. Goarant, P Levy, and D. Ansquer, 2000. Eksperimental
Infection  Models  for
Shrimp Vibriosis Studies: a Review. Aquaculture. 191:133–144.
Soraya. C, Chismirina. S, dan Rizki Novita. 2018.  Pengaruh Perasan Bawang Putih ( Allium Sativum L .) Sebagai Bahan Irigasi Saluran Akar Dalam Menghambat
Pertumbuhan Enterococcus faecalis Secara In Vitro . Cakradonya Dent J. 10(1): 1-9
SNI. 2009. Produksi Ikan Nila ( Oreochromis niloticus Bleeker ) Kelas Pembesaran di Kolam Air Tenang. 01-7550- 2009.
Wahjuningrum,  D.,  E,H.  Solikhah.,  T.  Budiardi  dan  M.  Setiawati.  2010.  Pengendalian  Infeksi Aeromonas hydrophila Pada  Ikan  Lele  Dumbo  ( Clarias  sp .)  dengan  Campuran  Meniran  ( Phyllanthus  niruri )  dan Bawang Putih ( Allium sativum ) Dalam Pakan. J. Akuakultur Indonesia., 9 (2): 93-103.
Wahjuningrum,  Fauziah.  R.  N.  Sukenda,  dan  Ranta.  2015.  Campuran  Tepung  Bawang  Putih  -  Meniran  Untuk Pencegahan Infeksi Streptococcus agalactiae pada Ikan Nila. Jurnal Akuakultur Indonesia. 12(1): 79-89. Widanarni, D. Meha, S. Nuryati, Sukenda, dan A. Suwanto. 2004. Uji  Patogenisitas Vibrio  Harveyi Pada  Larva Udang  Windu  Menggunakan  Resisten  Rifampisin  Sebagai  Penanda  Molekuler.  Jurnal  Akuakultur Indonesia, 3(3): 23-27
Yanuhar, U. 2012. Pengaruh Pemberian Bahan Aktif Ekstrak Nannochloropsis  oculata terhadap  Kadar  Radikal Bebas pada Ikan Kerapu Tikus ( Cromileptes altivelis ) yang Terinfeksi Bakteri Vibrio alginolyticus . Jurnal Ilmiah  Perikanan dan Ilmu Kelautan. 1 (2) : 185-191