## ANALISIS KUANTITATIF ANDROGRAFOLID DALAM EKSTRAK
SAMBILOTO ( Andrographis paniculata Ness) SECARA KLTKT- DENSITOMETRI
Awal P, Mujahid R, Yuli W. Balai Besar Litbang Tanaman Obat dan Obat Tradisional Badan Litbang Kesehatan Kem Kes RI

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  penetapan  kadar  andrografolide  dalam  ekstrak sambiloto  ( Andrographis  paniculata Ness).  Penelitan  ini  bertujuan  untuk  mengetahui kadar  andrografolide  dalam  ekstrak  sambiloto  dengan  menggunakan  metode  KLTKT- Densitometri.
Proses  ekstraksi  dilakukan  menggunakan  etanol  90%.  Ekstrak  etanol  dan  baku senyawa  andrografolide  ditotolkan  pada  plat  KLTKT  Silika  gel-F 254 ,  dengan menggunakan  Linomat  5,  kemudian  dieluasikan  dalam  chamber  yang  berisi  campuran CHCl 3 :  MeOH  (9:1),  sebagai  fase  geraknya.  Setelah  proses  eluasi,  plat  kemudian dikeringkan.  Deteksi  noda  serta  kuantifikasi  dilakukan  dengan  Densitometer  Scanner Camag- Wincat 4.
Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa panjang gelombang serapan maksimal antara  noda  ekstrak  dan  larutan  baku  adalah  sama,  yaitu  pada  panjang  gelombang  230 nm. Kadar andrografolide pada ekstrak adalah 15,54 + 0,16 % b/b dengan KV 1,01%.
Kata kunci: Ekstrak sambiloto, KLTKT-Densitometri, adrografolid

## PENDAHULUAN
Sambiloto  merupakan salah satu bahan penyusun ramuan jamu antidiabetes, dan dibuat  sediaan  bersama-sama  simplisia  yang  lain  dalam  bentuk  serbuk  simplisia,  pil, kapsul ataupun kaplet (Anonim, 2008).  Sambiloto memiliki rasa yang sangat pahit. Rasa pahit  ini  disebabkan  oleh  senyawa  andrografolid  (Arshia  dkk.,  2007).  Rasa  pahit sambiloto 2,8 kali rasa pahit dari kuinin HCl (Ameh dkk. , 2007). Andrografolid merupakan senyawa aktif utama dalam sambiloto, dan berkhasiat sebagai  antidiabetes  (Subramanian  dkk.,  2008).    Andrografolid  ditemukan  pada  bagian akar  (Kardono  dkk.,  2003),  batang  dan  daun  (Farnsworth  &  Bunyapraphatsara,  1992) serta  herba  (Kulyal  dkk.,  2010).    Andrografolid  merupakan  kristal  tidak  berwarna  larut dalam  metanol,  etanol,  aseton,  piridine,  etil  asetat,  kloroform  dan  asam  asetat,  namun sedikit larut dalam air dan tidak larut dalam dietil eter (Qiang, 2007).
Uji  kualitatif  andrografolid  dalam  ekstrak  dilakukan  dengan  jalan  melarutkan andrografolid  ataupun  ekstrak  dalam  etil  asetat  (Chao  &  Lin,  2010).  Hal  ini  dilakukan karena  etil  asetat    mampu    melarutkan  andrografolid,  namun  tidak  melarutkan  klorofil yang  masih  tersisa  dalam  ekstrak,  sehingga  dapat  meminimalisir  kemungkinan terganggunya  pengamatan  karena  adanya  klorofil.  Uji  kualitatif  selanjutnya  dilakukan dengan jalan membandingkan nilai Rf kromatogram dari andrografolid baku dan ekstrak, serta mengamati panjang gelombang maksimumnya.
Uji  kuantitatif  andrografolid  dapat  dilakukan  secara  titrimetri,  spektrofotometri, HPLC maupun KLTKT (Mamatha, 2011). Namun metode penetapan kadar andrografolid secara spektrofotometri, memiliki kelemahan yaitu pada saat penambahan KOH etanolat
pada larutan andrografolid akan terbentuk warna merah, tetapi warna merah tersebut tidak stabil,  cepat  memudar  (Maiti  dkk.,  1959).  Pada  penetapan  kadar  andrografolid  secara HPLC  memakan  waktu  relative  lama,  serta  memerlukan  banyak  tahap  ekstraksi  dan purifikasi  (Saxena,  dkk.,  1998;  Sharma,  dkk.,  1992).    KLTKT  merupakan  salah  satu metode  penetapan  kadar  yang  cukup  luas  digunakan  dengan  hasil  yang  cukup memuaskan.  Metode  ini  sederhana,  mudah  dilakukan,  cukup  teliti  dan  sensitive,  serta dapat diterapkan untuk ekstrak kasar (Bhutani, 2000; Srivasta dkk., 2004), sehingga dapat diterapkan  untuk  penetapan  kadar  andrografolid  dalam  ekstrak.  KLTKT  dimaksudkan untuk  mendapatkan  pemisahan  dan  hasil  analisis  yang  lebih  baik  dibandingkan  KLT biasa.  Fase  diam    pada  KLTKT  memiliki  ukuran  pori-pori  yang  sangat  halus,  serta seragam  dengan  ketebalan  0,1  mm.  Ukuran  partikel  fase  diam  yang  lebih  kecil  ini menyebabkan  semakin  banyak  jumlah  lempeng  pemisah,  sehingga  pemisahan  menjadi lebih efisien (Gandjar & Rohman, 2008). Pada analisis kuantitatif, bercak pada fase diam dapat  langsung  diukur  menggunakan  ukuran  luas  atau  dengan  teknik  densitometri. Densitometri  dapat  bekerja  secara  serapan  atau  fluoresensi.  Sistem  fluoresensi  biasanya lebih  disukai  karena  kelinieran  respon  dan  selektifitasnya  lebih  tinggi  serta  gangguan fluktuasi latar belakang lebih rendah (Gandjar dan Rohman, 2008).  Bercak yang diukur dengan  system  fluoresensi,  serapan  ultraviolet  atau  sinar  tampak  dapat  ditetapkan  lebih teliti  daripada  bercak  yang  disemprot  dengan  pereaksi  warna  (Gandjar  dan  Rohman, 2008).

## METODOLOGI

## Bahan dan Alat Penelitian
Penelitian dilakukan di Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan  Obat  Tradisional,  Tawangmangu-Jawa  Tengah,  dari  bulan  Juni  2010  hingga November 2010. Baku andrografolid (Sigma-Aldrich), Plat Silikagel F 254 KLTKT, 20x5, aluminium  sheet  (E-Merck),    CHCL 3 (E-Merck),  Metanol  (E-Merck),  Etil  asetat  (E- Merck), KLT-Densitometri, Wincat 4, Linomat 5.

## Jalannya Penelitian
1. Penyiapan larutan baku andrografolid.
Larutan  baku  dibuat  dengan  melarutkan  2,1  mg  andrografolid  dalam  50  ml  etil asetat, sehingga larutan baku andrografolid memiliki konsentrasi 0,042 µg/µL.
2. Penyiapan fase diam dan fase gerak .
Fase diam menggunakan plat KLTKT Silikagel F 254 , aluminium sheet 20x5. Fase gerak  menggunakan  campuran  CHCL 3 :MeOH  (9:1).  Penjenuhan  chamber  dilakukan selama 20 menit, jarak eluasi 3,5 cm, deteksi kromatogram dilakukan pada 230 mn.
3. Uji Kualitatif andrografolid dalam Ekstrak Sambiloto .
Uji  kualitatif  andrografolid  dalam  ekstrak  dilakukan  dengan  jalan  melarutkan andrografolid ataupun ekstrak dalam etil asetat, ditotolkan pada plat KLTKT, dieluasikan pada fase gerak, diamati harga Rf kromatogram, dibandingkan dengan standar.
4. Pembuatan kurva linearitas .
Ditimbang  seksama  2,1  mg  baku  andrografolid,  dilarutkan  dalam  50  ml  etil asetat.  Larutan  baku  andrografolid  dalam  etil  asetat  (larutan  1)  ditotolkan  pada  Plat KLTKT ukuran 5 x 20 cm, menggunakan Linomat-5. Penotolan larutan standart sebanyak 5, 10,15,20,25,30 dan 35 µL, dan dieluasikan dalam fase gerak CHCl 3 :MeOH (9:1). Jarak
eluasi 3,5 cm. Deteksi dilakukan pada λ 230 nm (Aulia, 2008). Dibuat grafik konsentrasi vs  luas  area.  Data  yang  ada  kemudian  dimasukkan  dalam  persamaan  regresi  hingga diperoleh nilai slope (b), intersep (a) dan koefisien korelasi (r). Sebagai parameter adanya hubungan  linier,  digunakan  koefisien  korelasi (r)  pada  analisis  regresi linier  Y=  a  +  bx. Hubungan linier ideal dicapai jika a = 0 dan r = +1 atau r = -1, bergantung pada arah garis persamaan. Rentang konsentrasi sampel menunjukkan batas terendah dan tertinggi analit yang dapat ditetapkan dengan ketepatan, ketelitian dan linearitas yang dapat diterima.

## 5. Penentuan Akurasi dan Presisi Abdrographolide.
Uji  akurasi  dilakukan  dengan  menghitung  perolehan  kembali  analit  dalam rentang konsentrasi 80-120% (Harmita, 2004).  Uji presisi dilakukan dengan menghitung nilai  standar  baku  relatif  atau  koefisien  variasi  (KV).  Syarat  akseptabilitas  akurasi  dan presisi  adalah  nilai  perolehan  kembali  98-102%  dan  KV=  2%  (Nash  &  Wachter,  2003; Harmita,  2004).  Perolehan  kembali  baku  andrografolid  dalam  etil  asetat  setelah diekstraksi  dengan  dapar  asetat  pH  4,5,  menunjukkan  efisiensi  proses  ekstraksi  yang dilakukan.  Semakin  tinggi  prosen  perolehan  kembali,  semakin  efektif  proses  ekstraksi. Ditimbang baku andrografolid dengan konsentrasi 80-120%, dilarutkan dalam 50 ml etil asetat  (larutan  1). Dipipet  1  ml  larutan  1,  dimasukkan  dalam  labu  takar  5  ml,  ditambah dengan 1,5 ml etil asetat, ditambah larutan dapar asetat pH 4,5, divorteks selama 3 menit, kemudian didiamkan hingga kedua lapisan memisah. Dipipet fraksi etil asetat, kemudian ditotolkan  pada  plat  KLTKT  silikagel  GF 254 ,  sebanyak  15  µL. Dihitung  perolehan kembali andrografolid.
6. Penetapan Kadar Andrografolid dalam ekstrak sambiloto .
Ditimbang  ekstrak  sambiloto  +  80,0  mg.  Ekstrak  dimasukkan  dalam  labu  takar
200 ml, ditambah dengan 1 ml SLS 0,1, ditambah dengan dapar asetat hingga garis tanda (larutan 1), dihomogenkan. Dipipet 2,5 ml larutan 1, dimasukkan dalam labu takar 5 ml, ditambah  dengan  2,5  ml  etil  asetat,  divorteks  selama  3  menit,  kemudian  didiamkan hingga  kedua  lapisan  memisah. Dipipet  fraksi etil asetat,  kemudian  ditotolkan  pada  plat KLTKT silikagel GF 254 , Dihitung perolehan kembali andrografolid .

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Hasil  analisa  kualitatif  andrografolid  dalam  ekstrak  sambiloto  ditampilkan  pada gambar 1 sebagai berikut: S1   S2   E1   E2
Pada  gambar  1  terlihat  bahwa  pengamatan  KLTKT  dibawah  sinar  UV 254 nm, menunjukkan  adanya  pemadaman  noda.  Hal  ini  terjadi,  karena  adanya  senyawa  seng silikat  yang  ditambahkan  pada  fase  diam  KLTKT.  Seng  silikat  ini  akan  berfluoresensi saat  terpapar  sinar  UV  254  nm  (Gandjar  &  Rohman,  2008).    Sedangkan  senyawa  yang ditotolkan  di atas  plat,  akan  menghalangi  masuknya  sinar  UV  menembus  plat, sehingga akan  tampil  sebagai  bercak-bercak  berwarna  gelap,  dengan  latar  belakang  pendar  hijau muda  dari  cahaya  UV 254 nm  (Sherma  &  Fried,  2003).    Hasil  pengamatan  spectrum panjang  gelombang  maksimal  antara  baku  andrografolid  dan  ekstrak  sambiloto, ditampilkan pada Gambar 2.
Gambar 2. Spektrum baku Andrografolid dan ekstrak sambiloto pada  230 nm
Dari  gambar  2  terlihat  bahwa  panjang  gelombang  maksimal  baku  andrografolid dan  ekstrak  sambiloto  berimpit  pada  panjang  gelombang  230  nm.  Adapun  hasil pencatatan Rf  kromatogram  ditampilkan pada Gambar 3.
4    Rf =   0,82
3    Rf = 0,51
2    Rf = 0,38 (Andrografolid)
1    Rf = 0,11
Gambar 3.  Nilai Rf baku Andrografolid dan ekstrak sambiloto.
Berdasarkan  data scanning panjang  gelombang  larutan  baku  andrografolid  dan ekstrak sambiloto yang berhimpit pada λ 230 nm, serta harga Rf spot yang sama antara baku andrografolid dan ekstrak sambiloto pada nilai Rf = 0,38, maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak sambiloto positif mengandung senyawa  andrografolid.
Keterangan: S1 & S2     =  Standar andrografolid E1 & E2     =  Ekstrak sambiloto
S2
S1
E2 E1
Hubungan  linier  antara  konsentrasi  andrografolid  baku  dengan  luas  area ditentukan  dengan  membuat  seri  pengenceran  baku  andrografolid  hingga  diperoleh rentang  konsentrasi  0,2058  µg/µL  sampai  1,  4406  µg/µL.  Hasil  yang  diperoleh  berupa konsentrasi vs luas  area  dan  selanjutnya  dibuat  persamaan  garis  regresi  linier  serta ditentukan  koefisien  korelasinya.  Dengan  nilai  koefisien  korelasi  tersebut,  dapat ditentukan, apakah linearitasnya memenuhi syarat atau tidak, yang didasarkan pada nilai r hitung  hasil  regresi  dibandingkan  dengan  r  tabel    pada  taraf  kepercayaan  dan  derajat bebas  tertentu.  Jika  r  hitung  lebih  besar  dari  r  tabel  pada  p  dan  db  tertentu,  maka dikatakan  bahwa  linearitasnya  baik  dan  dapat  digunakan  untuk  perhitungan  selanjutnya (Miller & Miller, 1988).  Hasil terlihat pada Tabel I.
Tabel I.   Hasil uji linearitas metode densitometri berdasarkan luas area untuk pembuatan kurva baku Andrografolid (0,258-1,4406 µg/µL), setelah dieluasikan dengan CHCl 3 :MeOH (9:1) C  andrografolid (µg) Luas Area Luas area/10000 Persamaan Regresi 0,2058 1653 0,1653 Y = 0,4195X + 0,1194 r   = 0,9901 0,4116 3009 0,3009 0,6174 4055 0,4055 0,8232 4881 0,4881 1,0290 5568 0,5568 1,2348 6461 0,6461 1,4406 6906 0,6906
Persamaan  garis  regresi  (konsentrasi  vs  luas  area)    Y  =  0,4195X  +  0,1194 menunjukkan korelasi yang baik, dilihat dari nilai r hitung lebih besar dari r tabel pada p = 0,05, db = n-2 = 5 yaitu r = 0,754 (Muhidin & Abdurahman, 2007).
Tabel II. Hasil uji akurasi dan presisi baku Andrografolid
Konsentrasi Replikasi Luas Area teoritis/1 0000 Kadar tesoritis (µg) Kadar pengamatan (µg) Perolehan kembali (%) KV (%) 80% 1 0,3305 1666 1677,15 100,67 1,07 2 0,3288 1666 1663,93 99,98 3 0,3333 1666 1699,44 102,01 Rata-rata   +  SD     =  100,85 +1,08 100% 1 0,3832 2058 2095,98 101,01 1,38 2 0,3837 2058 2100,11 102,05 3 0,3772 2058 2048,50 99,54 Rata-rata + SD    = 101,14+1,39 120% 1 0,4281 2450 2452,78 100,11 0,95 2 0,4244 2450 2423,61 98,92 3 0,4302 2450 2469,80 100,81
Rata-rata +  SD   = 99,95+0,95
Hasil akurasi & presisi dapat dilihat pada Tabel II. Uji akurasi (ketepatan) dalam penelitian  ini  digunakan  untuk  mengetahui  efektifitas  proses  ekstraksi  yang  dilakukan. Baku  andrografolid  konsentrasi  80-120%,  dilarutkan  dalam  etil  asetat,  kemudian
ditambah  dengan  dapar  asetat  pH  4,5  divorteks  3  menit.,  didiamkan  hingga  terpisah  2 lapisan  Selanjutnya lapisan etil asetat ditetapkan kadarnya. Jika etil asetat tidak mampu melarutkan  andrografolid,  maka  kedekatan  nilai  analisis  kadar  andrografolid  dalam  etil asetat  setelah  proses  ekstraksi  akan  berbeda jauh  dengan  kadar  andrografolid  dalam  etil asetat  sebelum  proses  ekstraksi.  Namun,  jika  nilai  perolehan  kembali  andrografolid mendekati nilai sebenarnya, maka proses ekstraksi berjalan efektif.
Berdasarkan  Tabel II dapat dilihat bahwa prosen perolehan kembali dari proses ekstraksi  pada  rentang  98,92  -102,05%  dengan  nilai  KV  berkisar  pada  rentang  0,95- 1,07% masuk dalam rentang penerimaan data akurasi dan presisi, yaitu untuk konsentrasi analit  >10%,  nilai perolehan  kembali  98-102%,  nilai KV=  2% (Nash  & Watcher,  2003; Harmita,  2004).  Nilai  perolehan  kembali  yang  relatif  tinggi  ini,  menunjukkan  bahwa proses ekstraksi yang dilakukan berjalan efektif.
Pada  penetapan  kadar andrografolid  dalam  ekstrak,  dilakukan  9  replikasi,  untuk memastikan  nilai  presisinya.  Profil  kromatogram  pada  sinar  UV  366  dan  UV  254  dapat dilihat  pada  Gambar  4,  sedangkan    profil  kromatogram  hasil  scanning  menggunakan densitometri ditampilkan pada Gambar 5.
Gambar 4. Profil kromatogram baku andrografolid dan ekstrak pada λ 254 nm dan 366 nm
Gambar 5. Profil kromatogram baku andrografolid dan ekstrak berdasarkan densitometry
Dari  hasil  pengamatan  diatas  diperoleh  persamaan  regresi  sbb:  Y  =  0,3794X  + 0,1318  ,  dengan  nilai  r  =  0,9830,  menunjukkan  korelasi  yang  baik,  dilihat  dari  nilai  r hitung  lebih  besar  dari  r tabel  pada  p =  0,05,  db  =  n-2  =  5  yaitu  r  = 0,754 (Muhidin  & Abdurahman, 2007), sedangkan hasil penetapan kadarnya ditampilkan pada Tabel 3.
Tabel III. Hasil penetapan kadar Andrografolid dalam ekstrak sambiloto
Replikasi Bobot ekstrak (µg) Luas area/10000 Kadar (%) Rata- rata (%) KV (%) 1 80200 0,4613 15,47 15,54 1,01 2 80100 0,4626 15,55 3 80100 0,4605 15,45 4 80000 0,4562 15,27 5 79000 0,4625 15,76 6 80100 0,4631 15,57 7 80200 0,4608 15,45 8 79000 0,4621 15,74 9 80000 0,4640 15,64
Berdasarkan Tabel III, terlihat bahwa kadar andrografolid dalam sampel memiliki nilai presisi yang tinggi, ditunjukkan dengan nilai KV < 2%, yang berarti bahwa sebaran data hasil analisis tidak saling berjauhan.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitan  yang    diperoleh  menunjukkan  bahwa  nilai  Rf  noda  ekstrak  dan larutan  baku  adalah  sama    yaitu  0,38,  dengan  panjang  gelombang  serapan  maksimal adalah    230  nm,  serta    kadar  andrografolid  pada  ekstrak  adalah  15,54  +  0,16  %  b/b dengan KV 1,01%.

## DAFTAR PUSTAKA
Ameh., Sunday., Obodozie., Obiageri., Inyang., Uford., Abubakar., Mujibata.,   Garba.,  Makaji.,
2007, A Normative Study of Nigerian Grown “Maha Tita” (King of Bitters) Andrographis paniculata Nees, Int.J.Drug Dev.&Res . Vol 2(2): 291-299. Anonim, 2008, Daftar Obat Alam (DOA) Ed.3, hal:43-45, Semarang Arshia, S., Manna,P.K., Paranjothy, K.L.K, Manjula, M, 2007, Entrapment of   Andrografolid  in Cross-Linked Alginate Pellet: 1. Formulation and evaluation  of  Associates  Release
Kinetic, Pak.J.Pharm. Sci , Vol 291 ): 1-9
Aulia, N., 2008, Penetapan Kadar Andrografolida dan Kurkumin dalam Ekstrak  campuran  Herba Sambiloto  dan  Rimpang  Kunyit  dengan  Metode  KLT-  Densitometri, Skripsi ,  Unair (ABSTRAK), http://210.57.222.58/go.php?id=gdlhub-gdl-S1-2008-nuraniaulia-9207 , disitasi: November 2009.
Bhutani KK. 2000. Fingerprintings of Ayurvedic drugs. Eastern Pharmacist ;5:21-24. Chao,  W,W  and  Lin,  B,F,  2010,  Isolation  and  Identification  of  Bioactive  compounds  in Andrographis paniculata (Chuanxinlian), Chin Med , Vo.13, 5:17. Farnsworth, N, R,  and Bunyapraphatsara, 1992, Thai Medicinal Plants , hal 57-62, Prachachon Co. Ltd. Gandjar, I.G., dan Rohman, A., 2008, Kimia Farmasi Analisis , Pustaka Pelajar,   Yogyakarta,  353- 377.
Harmita,  2004,  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi  Metode  and  Cara  Perhitungannya, Majalah  Ilmu Farmasi , Vol 1(3): 117-135
Kardono,L,B,S.,  Artanti,N.,  Dewiyanti,  I,D.,  Basuki,  T.,  2003,  Selected  Indonesian  Medicinal Plants: Monograph and Descriptions Vol.1, 117-153, Grasindo, Jakarta.
Kulyal,  P.,  Tiwari,  U.K.,  Shukla,  A.,  Gaur,A,K.,  2010,  Chemical  Constituent  isolated  from Andrographis paniculata, Indian Journal of Chemistry, Vol. 49B, hal 356-359.
Maiti,  P.C.,  Kanji,  S.K.,  Chatterje.,  1959.  Studies  in  Kalmegh  Extract, Indian  Journal  of Pharmacy , 21:169-171
Mamatha, A., 2011. Quantitative KLTKT Analysis of Andrografolid in Andrographis paniculata Obtained from Different Geographcal Sources (India), International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 3(2): 42-44
Miller, J.C. and Miller, J.N., 1988, 108-112, Statistics for Analytical Chemistry , 2nd Edition. Muhidin, S.A dan Abdurahman, M., 2007, Analisis Korelasi, Regresi and Jalur dalam 89-130,
Penelitian, Pustaka Setia Bandung
Nash., R, and Wachter, A., 2003, Pharmaceutical Process Validation , page 109-120, Marcel
Dekker, New York
Qiang,  Z.Z.,  2007,  Reactions  and  Computational  Studies  of  Andrografolid  Anagoues  with Glutathione and Biological Nucleophiles, Desertation , City University of Hong Kong
Saxena S, Jain DC, Gupta MM, Bhakuni RS, Hari O. 1998 . Analysis of
diterpenoid andrografolid from Andrografolid peniculata. J liq   chromatogr ; 27-123. Sharma,  A.,  lal,  K.,  handa,  S.S.,  1992.  Standardization  of  The  Indian  Crude  Drug  Kalmegh  by High  Pressure  Liquid  Chromatographic  Determination  of  Andrografolid.  Phytochemical Analysis, 3:129-131
Sherma,  J  and  Fried,B.,  2003,  Handbook  of  Thin-Layer  Chromatography  3 ed ,  Revised  & Expanded, 226-234, Marcel Dekker, New York
Srivasta,  A.,  Misra,  H.,  Verma,  R.K.,  Gupta,  M.M.,  2004.  Chemical  finger  printing  of Andrographis  paniculata  using  HPLC,  KLTKT  and  Densitometry.,  Phytochemical Analysis, 15: 280-285
Subramanian, R., Azmawi,M,Z., Sadikun, A., 2008, In vitro a-glucosidase and a-amylase enzyme inhibitory effects of Andrographis paniculata extract and andrografolid, Acta Biochimica Polonia, Vol.55, 2, hal 391-398.