## JIUBJ
Jurnal Ilmiah Universitas Batanghari Jambi, 20(3), Oktober 2020, 807-813 Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat universitas Batanghari Jambi
ISSN 1411-8939 (Online), ISSN 2549-4236 (Print) DOI 10.33087/jiubj.v20i3.1023
Uji Potensi Epigallocatechin Gallate Kulit Pisang Raja (Musa paradisiaca var. Raja) terhadap Caspase 3 melalui Granzyme B Pathway pada Mencit (Mus musculus) Model Sepsis Berbasis in Silico
Lisa Savitri 1* , Elfred Rinaldo Kasimo 2 , Lian Pandu Farendra 3 , Iza Dwi Muslikha 4 1,2,3,4 Program Studi Teknologi Laboratorium Medis, Universitas Kadiri, Jalan Selomangleng no. 1 Kota Kediri
* Correspondence email: lisasavitri@unik-kediri.ac.id
Abstrak. Kulit  buah  pisang  masak  yang  berwarna  kuning  kaya  akan  senyawa  flavonoid,  serta  mengandung  senyawa  fenolik lainnya.  Adanya  flavonoid  dan  senyawa  fenolik  lainnya  pada  kulit  pisang  perlu  diidentifikasi  dan  diuji  aktivitasnya,  sehingga dapat meningkatkan pemanfaatan limbah buah pisang lebih optimal. Selain itu pisang juga memiliki kandungan epigallocatechin gallate (EGCG) yang tinggi. EGCG terkenal dengan spektrum yang luas dari aktivitas biologis sebagai agen anti-oksidatif, anti- inflamasi, dan anti-tumor. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi EGCG kulit pisang raja (Musa paradisiaca var. Raja)  terhadap  caspase  3  melalui  granzyme  B  pathway  pada  mencit  (Mus  musculus)  model  sepsis  berbasis  in  silico.  Analisis potensi EGCG terhadap mencit dilakukan dengan menggunakan aplikasi http://stitch.embl.de/. STITCH adalah database interaksi yang  diketahui  dan  diprediksi  antara  bahan  kimia  dan  protein.  Interaksi  meliputi  asosiasi  langsung  (fisik)  dan  tidak  langsung (fungsional), data STITCH berasal dari prediksi komputasi, dari transfer pengetahuan antara organisme, dan dari  interaksi  yang dikumpulkan dari database (primer) lainnya. Analisis mekanisme epigallocatechin gallate kulit pisang raja terhadap capase 3 pada mencit  model  sepsis  menggunakan  aplikasi  bioinformatika  https://www.kegg.jp/.  Berdasarkan  hasil  analisis  dapat  diketahui bahwa  EGCG  dapat  dijadikan  sebagai  kandidat  target  agen  yang  menjanjikan  untuk  protein  membran  plasma,  seperti  reseptor faktor  pertumbuhan  epidermal.  Selain  itu,  telah  ditunjukkan  mekanisme  aksi  yang  mengandalkan  penghambatan  ERK1/2,  p38 MAPK, NF-κB, dan  faktor pertumbuhan endotel  vaskular. Selanjutnya, EGCG dan turunannya digunakan dalam penghambatan proteasome dan mereka terlibat dalam mekanisme epigenetik.
Kata kunci : caspase 3; epigallocatechin gallate; granzyme B pathway ; sepsis
Abstract.  Yellow  ripe  banana  skin  is  rich  in  flavonoid  compounds,  and  contains  other  phenolic  compounds.  The  presence  of flavonoids and other phenolic compounds in banana peels needs to be identified and tested for their activities, so as to increase the utilization of banana  waste  more  optimally. Besides bananas also contain high epigallocatechin gallate (EGCG). EGCG is well known for its wide spectrum of biological activity as an anti-oxidative, anti-inflammatory and anti-tumor agent. The purpose of this study  was to  determine the potential  of EGCG of plantain (Musa paradisiaca var. Raja) peel  against  caspase 3 through granzyme B pathway in mice (Mus musculus) sepsis model based on silico. Analysis of the potential of EGCG on mice was carried out using the application http://stitch.embl.de/. STITCH is a database of known and predicted interactions between chemicals and proteins. Interactions include direct  (physical) and indirect  (functional) associations, STITCH data derived from computational predictions, from the transfer of knowledge between organisms, and from interactions collected from other (primary) databases. Analysis  of  the  mechanism  of  epigallocatechin  gallate  of  plantain  peel  against  capase  3  in  sepsis  mice  using  bioinformatics application https://www.kegg.jp/. Based on the results of the analysis it can be seen that EGCG can be used as a promising target agent candidate for plasma membrane proteins, such as epidermal growth factor receptors. In addition, action mechanisms have been demonstrated that rely on inhibition of ERK1 / 2, p38 MAPK, NF-κB, and vascular endothelial growth factors. Furthermore, EGCG and its derivatives are used in proteasome inhibition and they are involved in epigenetic mechanisms.
Keywords: caspase 3; epigallocatechin gallate; granzyme B pathway; sepsis

## PENDAHULUAN
Sepsis  adalah  disfungsi  organ  yang  mengancam jiwa  yang  terjadi  dari  respons  tubuh  terhadap  infeksi. Sepsis membutuhkan penggunaan antibiotik yang sesuai untuk mengendalikan sumber infeksi. Dengan manajemenyang sesuai dengan perawatan protokol yang mendukung  perawatan  biasa  yang  tepat,  pemahaman fisiologi  sepsis  dan  pedoman  praktik  terbaik  sangat penting  (Dugar, et  al .,  2020).  Sepsis  memiliki  tingkat kejadian  yang  tinggi,  hal  tersebut  didukung  oleh penelitian  mengenai  tingkat  penyebaran  sepsis  di  ICU RSUP  Prof.  Dr.  R.  D.  Kandou  Manado  yang mendapatkan  hasil  bahwa  terdapat  27,08%  penderita
sepsis  berat,  14,58% penderita  syok  septik,  dan  58,33% penderita sepsis (Tambajong, et al ., 2016).
Lipopolisakarida  (LPS)  terdiri  dari  polisakarida hidrofilik  dan  komponen  hidrofobik  yang  dikenal sebagai lipid A yang bertanggung jawab atas bioaktivitas utama  endotoksin.  LPS  dapat  dikenali  oleh  sel-sel  imun sebagai  molekul  yang  berhubungan  dengan  patogen melalui  reseptor  seperti Toll  Like  Receptors (TLR)  4. Sebagian  besar  enzim  dan  gen  yang  berkaitan  dengan biosintesis dan ekspor lipopolisakarida telah diidentifikasi dalam Escherichia coli , dan mereka terbagi oleh  sebagian  besar  bakteri  Gram-negatif  berdasarkan pada  informasi  genetik  yang  tersedia.  Namun,  struktur terperinci  dari  LPS  berbeda  dari  satu  bakteri  ke  bakteri
Lisa  Savitri  et  al,  Uji  Potensi  Epigallocatechin  Gallate  Kulit  Pisang  Raja  (Musa  paradisiaca  var.  Raja)  terhadap  Caspase  3 melalui Granzyme B Pathway pada Mencit (Mus musculus) Model Sepsis Berbasis in Silico
lain,  menunjukkan  bahwa  enzim  tambahan  yang  dapat memodifikasi  struktur  dasar  LPS  ada  pada  bakteri, terutama  beberapa  patogen.  Modifikasi  struktural  LPS ini  kadang-kadang  diatur  dengan  ketat.  Mereka  tidak diperlukan  untuk  bertahan  hidup  tetapi  terkait  erat dengan virulensi bakteri (Wang dan Quinn, 2010).
Pengenalan  LPS  oleh  TLR4  memulai  respons inflamasi  yang  menginduksi  imunitas  antimikroba  yang kuat. Namun, tidak terkendali respons peradangan  dapat merusak.  Untuk  mencegah  perkembangan  syok  septik selama  infeksi  dengan  Bakteri  Gram-negatif,  sistem kekebalan  tubuh  telah  mengembangkan  mekanisme untuk  menetralisir  LPS  oleh  protein  khusus.  Dalam penelitian ini yang telah dilakukan oleh Wittmann, et al . (2020)  dilaporkan  bahwa  ekspresi  rekombinan  dan karakterisasi  fungsional  homolog  tikus  peningkatan Bactericidal/Permeability-Increasing Protein (BPI). BPI tikus  rekombinan  yang  dimurnikan  mampu  menetralkan aktivasi  makrofag  yang  dimediasi  LPS  dan  memblok pematangan  sel  dendritik  bergantung  pada  LPS.  BPI tikus  rekombinan  menetralkan  kapasitas  bakteri  Gram- negatif  mengaktifkan  sel-sel  kekebalan,  tetapi  tidak mempengaruhi sifat stimulasi bakteri Gram-positif.
Gambar  mikroskop  elektron  menunjukkan  bahwa peptida  menghancurkan  struktur  LPS.  Penghambatan aktivitas antibakteri defensin asli dan analog di hadapan LPS  menunjukkan  bahwa  interaksi  awal  dengan permukaan bakteri serupa. Urutan atau struktur defensin asli  juga  tidak  penting,  meskipun  muatan  kationik diperlukan untuk mengikat  ke  LPS.  Interaksi hidrofobik adalah  kekuatan  pendorong  utama  untuk  asosiasi polimiksin  B  non-ribosom  yang  disintesis,  alamethicin, gramicidin  A,  dan  gramicidin  S  dengan  LPS.  Sangat mungkin  bahwa  peptida  ini  dengan  cepat  memasukkan ke  dalam  membran  dan  tidak  berinteraksi  dengan permukaan  sel  bakteri,  sedangkan  peptida  kationik seperti  β-defensin  dan  analognya,  melittin  dan  LL37, pertama-tama berinteraksi dengan permukaan sel bakteri dan  kemudian  membran.  Hasil  kami  menunjukkan bahwa  mengevaluasi  interaksi  peptida  antibakteri  dan hemolitik  dengan  LPS  adalah  cara  yang  meyakinkan untuk menjelaskan mekanisme pembunuhan bakteri atau hemolisis (Krishnakumari, et al ., 2020)
Apoptosis umumnya terlibat dalam infeksi bakteri dan  patogenesis.  Selama  infeksi  bakteri,  faktor  virulen (kebanyakan  endotoksin)  diproduksi  dan  disekresikan dari patogen dan memicu sinyal apoptosis. Secara umum sel  mengalami  apoptosis  melalui  dua  jalur  utama,  yaitu jalur  ekstrinsik  (jalur  reseptor  kematian)  dan  jalur intrinsik  (jalur  mitokondria).  Diperkirakan  bahwa penghambatan  sinyal  apoptosis  dapat  memberikan perlindungan  terhadap  infeksi  bakteri  yang  disebabkan sepsis.  Jalur  ekstrinsik  umumnya  diprakarsai  oleh aktivasi  reseptor  kematian  melalui  interaksi  antara  ligan alami  atau  dengan  menginduksi  klusterifikasi  reseptor kematian. Reseptor kematian adalah reseptor permukaan yang  menjadi  anggota  keluarga Tumor  Necrosis  Factor
(TNF)  dan  berinteraksi  dengan  ligannya  untuk membentuk  kompleks  reseptor  kematian  (Lin, et  al ., 2010).  Reseptor  kematian  memainkan  peran  penting dalam apoptosis dan dapat mengaktifkan sebuah cascade caspase  dalam  beberapa  detik  dari  ikatan  ligan.  Oleh karena  itu,  induksi  apoptosis  melalui  mekanisme  ini berlangsung sangat cepat (Ghatage, et al ., 2013).
Mekanisme  lain  dari  apoptosis  yang  tergantung caspase adalah jalur intrinsik. Apoptosis melalui jalur ini diinduksi  oleh  sinyal  intraselular,  seperti  hipoksia, radiasi,  infeksi  virus,  dan  terutama  adalah  kerusakan DNA.  Keluarga  protein  Bcl-2  adalah  mediator  utama proses  ini.  Setelah  mengeluarkan  protein  spesifik proapoptosis,  seperti  sitokrom  c,  smac/DIABLO,  AIF, dan  Endo  G,  jalur  eksekusi  diakhiri  dengan  aktivasi caspase 3 (Ghatage, et al ., 2013).
Semua  caspases  disintesis  dalam  sel  sebagai zymogens  yang  tidak  aktif  secara  katalitis  dan  harus menjalani  proses  aktivasi.  Aktivasi  efektor  caspase seperti caspase 3 atau caspase 7, dilakukan oleh inisiator caspase,  seperti  caspase  9.  Inisiator  caspase  adalah autoactivated  di  bawah  kondisi  apoptosis,  yaitu  proses yang  biasanya  membutuhkan  dan  difasilitasi  oleh kompleks  multi  komponen,  misalnya  apoptosome  yang bertanggung  jawab  untuk  aktivasi  caspase  9.  Penelitian mengenai  caspase 3 dianggap penting,  karena caspase 3 merupakan efektor caspase terpenting yang bertanggungjawab  atas  morfologi  dan  perubahan biologis yang terlihat pada sel apoptosis (Ghatage, et al ., 2013),  walaupun  caspase  6  dan  7  merupakan  efektor caspase,  namun  letak  jalur  caspase  tersebut  berada  di awal,  sehingga  masih  terdapat  kemungkinan  walaupun caspase  tersebut  teraktivasi,  namun  akhirnya  apoptosis gagal  terjadi  dikarenakan  rilisnya  protein  Bcl-2 antiapoptosis yang dapat menghambat apoptosis.
Sepsis  merupakan  masalah  klinis  yang  penting meskipun  telah  terjadi  kemajuan  terapi.  Sepsis  dapat diperberat  oleh  peningkatan  kuman  yang  multiresisten terhadap bermacam antibiotik, sehingga sangat diperlukan  kombinasi  antibiotik  dalam  penatalaksanaan sepsis.  Adanya  perkembangan  ilmu  pengetahuan menyebabkan  manusia  mampu  mengisolasi  senyawa kimia  dari  tumbuhan  untuk  keperluan  pengobatan. Faktor  ini  yang  mendorong  orang  untuk  mencari  obat alternatif  yang  lebih  aman,  yaitu  kembali  ke  alam dengan memanfaatkan tumbuhan sebagai obat tradisional  yang  secara  empirik  dapat  menurunkan terjadinya apoptosis. Indonesia merupakan salah  satu  negara  yang  memiliki  potensi  dalam  bidang pertanian.  Banyaknya  potensi  dalam  bidang  pertanian menyebabkan  banyaknya  limbah  yang  dihasilkan  baik pada  saat  panen  maupun  pascapanen.  Limbah  secara umum  yang  sering  di  hasilkan  dalam  bidang  pertanian antara  lain  cangkang  pala,  daun  cengkeh,  kulit  durian, kulit kacang, kulit pisang, sabut  kelapa, dan  sekam padi (Dawanaka, et al ., 2015).
Lisa  Savitri  et  al,  Uji  Potensi  Epigallocatechin  Gallate  Kulit  Pisang  Raja  (Musa  paradisiaca  var.  Raja)  terhadap  Caspase  3 melalui Granzyme B Pathway pada Mencit (Mus musculus) Model Sepsis Berbasis in Silico
Tanaman pisang ( Musa sp.), merupakan salah satu jenis tanaman yang paling banyak terdapat di Indonesia, tetapi  masih  belum  memiliki  acuan  informasi  yang lengkap,  baik  dari  segi  fitokimia  maupun  dari  segi farmakologi guna dimanfaatkan secara optimal. Penelitian  terdahulu  terhadap  pisang Musa  cavendish dari  Filipina,  telah  berhasil  diisolasi  salah  satu  jenis antioksidan  yaitu  gallokatekin  yang  kandungannya ternyata  lebih  banyak  terdapat  dalam  kulit  daripada buah.  Senyawa  antioksidan  yang  terdapat  pada  kulit pisang  yaitu  katekin,  gallokatekin,  dan  epikatekin  yang merupakan  golongan  senyawa  flavonoid.  Hasil  uji pendahulian  tentang  aktivitas  antioksidan  pada  kulit buah  pisang  mas,  pisang  raja,  dan  pisang  ambon menunjukkan bahwa  kulit pisang raja memiliki aktivitas antioksidan yang paling kuat (Pane, 2013). Ekstrak kulit pisang  mengandung  21,33  mg  asam  galat/kg  sampel (Dawanaka, et al. , 2015).
Berdasarkan  fenomena  tersebut,  maka  perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui potensi epigallocatechin  gallate  kulit  pisang  raja  ( Musa paradisiaca var.  Raja)  terhadap  caspase  3  melalui granzyme  B pathway pada  mencit  ( Mus  musculus ) model sepsis berbasis in silico .

## METODE
Populasi dalam penelitian ini adalah epigallocatechin  gallate  kulit  pisang  raja  ( Musa paradisiaca var.  Raja).  Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah epigallocatechin gallate kulit pisang raja ( Musa paradisiaca var. Raja) berbasis in silico .

## Mencari  Zat  yang  Terkandung  dalam  Kulit  Pisang Raja
Pencarian zat yang terkandung dalam kulit pisang raja  dilakukan  secara  in  silico,  yaitu  menggunakan aplikasi bioinformatika https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/, kemudian dipilih salah  satu  zat  yang  memiliki  kandungan  tinggi  dan secara tinjauan pustaka dapat berperan dalam penghambatan apoptosis yang terjadi pada sepsis.
PubChem adalah  koleksi informasi  kimia terbesar yang  dapat  diakses  secara  bebas  di  dunia.  Bahan  kimia dapat dicari berdasarkan nama, rumus molekul, struktur, dan  pengidentifikasi  lainnya.  Sifat  kimia  dan  fisik, aktivitas  biologis,  informasi  keselamatan  dan  toksisitas, paten,  kutipan  literatur,  dan  lainnya  juga  dapat ditemukan pada aplikasi ini.
PubChem  adalah  database  kimia  terbuka  di National  Institutes  of  Health  (NIH).  Sejak  diluncurkan pada  2004,  PubChem  telah  menjadi  sumber  informasi kimia  penting  bagi  para  ilmuwan,  mahasiswa,  dan masyarakat  umum.  Setiap  bulan  situs  web  dan  layanan terprogram  menyediakan  data  untuk  beberapa  juta pengguna di seluruh dunia.
PubChem  sebagian  besar  menjelaskan  mengenai molekul  kecil,  tetapi  juga  molekul  yang  lebih  besar
seperti  nukleotida,  karbohidrat,  lipid,  peptida,  dan makromolekul yang dimodifikasi secara kimia. PubChem  mengumpulkan  informasi  tentang  struktur kimia,  pengidentifikasi,  sifat  kimia  dan  fisik,  aktivitas biologis,  paten,  kesehatan,  keselamatan,  data  toksisitas, dan banyak lainnya.

## Mencari Potensi Epigallocatechin Gallate
Pencarian  potensi  epigallocatechin  gallate  pada kulit  pisang  raja  dilakukan  secara  in  silico  dengan menggunakan aplikasi bioinformatika http://www.pharmaexpert.ru/passonline/.  PASS  Online memprediksi  lebih  dari  4000  jenis  aktivitas  biologis, termasuk  efek  farmakologis,  mekanisme  aksi,  efek toksik  dan  merugikan,  interaksi  dengan  enzim metabolisme  dan  transporter,  pengaruh  pada  ekspresi gen, dan sebagainya.
Profil  aktivitas  biologis  yang  diprediksi  untuk senyawa  yang  dibutuhkan  dapat  didapatkan,  namun hanya  formula  struktural  yang  diperlukan.  Dengan demikian, prediksi dimungkinkan bahkan  untuk  struktur virtual  yang  dirancang  dalam  komputer  tetapi  belum disintesis.  Prediksi  didasarkan  pada  analisis  struktur dengan  hubungan  aktivitas  untuk  lebih  dari  250.000  zat aktif  biologis  termasuk  obat-obatan,  kandidat  obat, timbal, dan senyawa beracun.
Keakuratan  rata-rata  prediksi  yang  diperkirakan dalam  prosedur  validasi in  leave-one-out  cross (setiap senyawa  dikecualikan  dari  rangkaian  pelatihan  dan aktivitasnya  diprediksi  berdasarkan  model  SAR  yang diperoleh  pada  bagian  lain  dari  rangkaian  pelatihan) untuk  seluruh  rangkaian  pelatihan  PASS  adalah  tentang 95%.
Algoritma  Robustness  of PASS  telah  ditunjukkan dalam  percobaan  khusus  dengan  senyawa  utama  dari basis  data  MDDR  yang  terdiri  dari  18977  senyawa dengan 124 aktivitas. Himpunan senyawa adalah 50 kali dibagi  secara  acak  menjadi  dua  himpunan  bagian  yang sama.  Subset  pertama  digunakan  sebagai  set  pelatihan, yang kedua sebagai subset evaluasi dan sebaliknya (100 percobaan).  20,  40,  60,  80%  dari  informasi  (data aktivitas/struktur) secara acak dikeluarkan dari perangkat pelatihan.  Keakuratan  prediksi  rata-rata  (IAP)  dihitung untuk  setiap  jenis  kegiatan.  Itu  menunjukkan  bahwa, meskipun  penghapusan  hingga  60%  dari  informasi, PASS masih memberikan akurasi prediksi yang wajar.
Karena  layanan  PASS  digunakan  oleh  ahli  kimia obat,  farmakologis  dan  toksikologi  selama  beberapa tahun,  ada  banyak  publikasi  di  mana  prediksi  PASS dikonfirmasi  oleh  sintesis  selanjutnya  dan  pengujian biologis.  Untuk  memberikan  prediksi  yang  lebih  akurat untuk  senyawa  yang  termasuk  kelas  kimia  baru  dan untuk  memperluas  area  yang  dapat  diprediksi  ke aktivitas  biologis  baru,  PASS  secara  permanen  bekerja pada pembesaran set pelatihan PASS.
Lisa  Savitri  et  al,  Uji  Potensi  Epigallocatechin  Gallate  Kulit  Pisang  Raja  (Musa  paradisiaca  var.  Raja)  terhadap  Caspase  3 melalui Granzyme B Pathway pada Mencit (Mus musculus) Model Sepsis Berbasis in Silico
Menganalisis Potensi Epigallocatechin Gallate terhadap Mencit
Analisis  potensi  epigallocatechin  gallate  terhadap mencit dilakukan dengan menggunakan aplikasi http://stitch.embl.de/.  STITCH  adalah  database  interaksi yang  diketahui  dan  diprediksi  antara  bahan  kimia  dan protein.  Interaksi  meliputi  asosiasi  langsung  (fisik)  dan tidak  langsung  (fungsional);  data  STITCH  berasal  dari prediksi  komputasi,  dari  transfer  pengetahuan  antara organisme,  dan  dari  interaksi  yang  dikumpulkan  dari database (primer) lainnya.

## Menganalisis  Mekanisme  Epigallocatechin  Gallate
Kulit  Pisang  Raja  terhadap  Caspase  3  pada  Mencit Model Sepsis
Analisis  mekanisme  epigallocatechin  gallate  kulit pisang  raja  terhadap  capase  3  pada  mencit  model  sepsis menggunakan aplikasi bioinformatika https://www.kegg.jp/.  KEGG  adalah  sumber  daya  basis data  untuk  memahami  fungsi  dan  utilitas  tingkat  tinggi dari  sistem  biologis,  seperti  sel,  organisme  dan ekosistem,  dari  informasi  tingkat  molekuler,  terutama dataset  molekuler  skala  besar  yang  dihasilkan  oleh sekuensing  genom  dan throughput tinggi  lainnya teknologi eksperimental.
Analisis  hasil  pengujian  berbagai  parameter tersebut dilakukan dengan dua cara yaitu:
1. Pendekatan Teoritis
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  cara dibandingkan  dengan  tinjauan  teori  dan  penelitian sebelumnya yang mendukung hasil penelitian.
2. Pendekatan in Silico
Data  yang  diperoleh  dari  penelitian  ini  seluruhnya adalah berbasis in silico , aplikasi bioinformatika yang digunakan dalam penelitian ini adalah https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/, http://www.pharmaexpert.ru/passonline/, http://stitch.embl.de/, dan https://www.kegg.jp/.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Jumlah dari kulit pisang cukup banyak, yaitu kira- kira  1/3  dari  buah  pisang  yang  belum  dikupas. Kandungan  unsur  gizi  kulit  pisang  cukup  lengkap, seperti  karbohidrat,  lemak,  protein,  kalsium,  fosfor,  zat besi,  vitamin  B,  vitamin  C,  dan  air.  Unsur-unsur  gizi inilah  yang  dapat  digunakan  sebagai  sumber  energi  dan antibodi  bagi  tubuh  manusia.  Kulit  pisang  mengandung berbagai jenis komponen yang dapat dimanfaatkan yang dapat  dilihat  di  Tabel  1,  2,  dan  3.  Kulit  buah  memiliki kandungan  nonnutrisi,  termasuk  polifenol,  flavonoid (Lee, et.al. ,  2010).  Senyawa  polifenol  ditemukan  di sebagian besar jaringan buah (Baskar, et.al. , 2011). Pada sebuah penelitian, didapatkan kandungan polifenol  pada kulit  pisang  kering,  dengan  menggunakan  pelarut  air, metanol, aseton, dan etanol, di mana pelarut air memiliki efisiensi  paling  tinggi  sebagai  pelarut,  kemudian  diikuti dengan metanol, aseton, dan etanol.
Tabel 1. Komposisi Karbohidrat pada Kulit Pisang
Sumber Karbon Konsentrasi Glukosa (nmol L -1 ) 2,4 Fruktosa (nmol L -1 ) 6,2 Sukrosa (nmol L -1 ) 2,6 Maltosa (nmol L -1 ) 0 Pati (nmol L -1 ) 1,2 Selulosa (nmol L -1 ) 8,4 Gula total (nmol L -1 ) 29 Lignin (%) 6-12 Pektin (%) 10-21 Hemiselulosa (%) 6,4-9,4 Sumber: Jamal, et.al ., 2012
Tabel 2. Komposisi Mineral pada Kulit Pisang
Elemen Konsentrasi (mg g -1 ) Potasium 78.10 ± 6.58 Kalsium 19.20 ± 0.00 Sodium 24.30 ± 0.12 Besi 0.61 ± 0.22 Manganase 76.20 ± 0.00 Bromin 0.04 ± 0.00 Rubidium 0.21 ± 0.05 Strontium 0.03 ± 0.01 Zirkonium 0.02 ± 0.00 Niobium 0.02 ± 0.00 Sumber: Anhwange, 2008 Tabel 3. Komposisi Antinutrien dari Kulit Pisang Parameter Konsentrasi Moisture (%) 06.70 ± 02.22 Ash (%) 08.50 ± 1.52 Organic matter (%) 91.50 ± 0.050 Protein (%) 00.90 ± 0.250 Minyak mentah (%) 01.70 ± 0.100 Karbohidrat (%) 59.00 ± 1.360 Serat kasar (%) 31.70 ± 0.250 Hidrogen sianida (mg/ g) 01.33 ± 0.100 Oksalate (mg g -1 ) 00.51 ± 0.140 Fitat (mg g -1 ) 00.28 ± 0.06 Saponin (mg g -1 ) 24.00 ± 0.270
Sumber: Anhwange, 2008
Flavonoid  terdapat  dalam  berbagai  bagian  dari pisang  (Imam, et.al .,  2011).  Kulit  buah  pisang  masak yang  berwarna  kuning  kaya  akan  senyawa  flavonoid, serta  mengandung  senyawa  fenolik  lainnya.  Fenol merupakan  metabolit  sekunder  pada  tanaman  dan diketahui memiliki berbagai kegunaan terapeutik, seperti antioksidan, antimutagenik, antikarsinogenik, mengangkut  radikal  bebas,  dan  juga  menurunkan komplikasi  kardiovaskular  (Atun, et.al .,  2010;  Baskar, et.al .,  2011).  Adanya  flavonoid  dan  senyawa  fenolik lainnya  pada  kulit  pisang  perlu  diidentifikasi  dan  diuji aktivitasnya, sehingga dapat meningkatkan pemanfaatan limbah buah pisang lebih optimal.
Berdasarkan penelitian lain, komposisi antioksidan dan antinutrien dari kulit pisang (per 100 g), antara  lain  adalah:  karoten,  ß-karoten,  vitamin  C,  tanin, okslalat,  oksalat  yang  larut  dalam  air,  asam  fitat,  serat
Lisa  Savitri  et  al,  Uji  Potensi  Epigallocatechin  Gallate  Kulit  Pisang  Raja  (Musa  paradisiaca  var.  Raja)  terhadap  Caspase  3 melalui Granzyme B Pathway pada Mencit (Mus musculus) Model Sepsis Berbasis in Silico
diet tidak larut, serat diet larut (Nagarajaiah dan Prakash, 2011).  Kandungan  tanin  pada  kulit,  bertindak  terhadap ketersediaan  protein  yang  menurun  selama  pematangan sebagai  akibat  dari  migrasi  polifenol  dari  kulit  ke  buah dan  degradasi  fenol  oksidatif  olek  oksidase  dan peroksidase  polifenol  (Emaga, et.al .,  2011).  Sebuah penelitian oleh Okorondu, et al . (2010) yang melakukan skrining  fitokimia  pada  pisang  yang  menunjukkan bahwa kulit pisang mengandung  tanin,  alkaloid, steroid, saponin,  flavonoid,  dan  karbohidrat.  Selain  itu  pisang juga  memiliki  kandungan  Epigallocatechin  gallate (EGCG) yang tinggi.
EGCG  adalah  komponen  bioaktif  utama  katekin yang  sebagian  besar  hadir  dalam  berbagai  jenis  teh. EGCG terkenal dengan spektrum yang luas dari aktivitas biologis  sebagai  agen  anti-oksidatif,  anti-inflamasi,  dan anti-tumor.  Efek  EGCG  pada  mekanisme  kematian  sel melalui induksi apoptosis, nekrosis, dan autophagy telah dipublikasikan. Selain itu, tindakan  anti-proliferasi telah dibuktikan  dalam  banyak  garis  sel  kanker.  Itu  juga terlibat dalam modulasi siklooksigenase-2, stres oksidatif  dan  radang  berbagai  proses  seluler.  EGCG telah  dilaporkan  sebagai  target  agen  yang  menjanjikan untuk  protein  membran  plasma,  seperti  reseptor  faktor pertumbuhan  epidermal.  Selain  itu,  telah  ditunjukkan mekanisme  aksi  yang  mengandalkan  penghambatan ERK1/2,  p38  MAPK,  NF-κB,  dan  faktor  pertumbuhan endotel  vaskular.  Selanjutnya,  EGCG  dan  turunannya digunakan dalam penghambatan proteasome dan mereka terlibat  dalam  mekanisme  epigenetik.  Singkatnya, EGCG  adalah  konstituen  teh  yang  paling  dominan  dan bioaktif  dan  dapat  berperan  dalam  pencegahan  kanker (Kwon, et al ., 2020).
Nuclear  factor -κB  (NF-κB)  terlibat  dalam berbagai mekanisme seluler, seperti kematian, pertumbuhan,  peradangan,  dan  respons  imun.  NF-κB terutama  bertindak  sebagai  pengatur  transkripsi  gen dalam  menanggapi  stres  oksidatif.  Interaksi  dengan EGCG dijelaskan dalam berbagai model sel, baik in vivo dan in vitro . NF-κB adalah salah satu target yang paling banyak  diteliti  dalam  penelitian  kanker  dan  interaksi dengan  jalur  ini  harus  dianggap  sebagai  topik  yang relevan  dalam  desain  pengobatan  kanker.  Aktivitas penghambatan  EGCG  pada  NF-κB  telah  ditunjukkan dalam  sejumlah  besar  studi  independen.  Studi  yang dilakukan  dalam  keratinosit  epidermal  manusia  normal di  mana  EGCG  digunakan  pada  konsentrasi  yang berbeda  untuk  memodulasi  aktivitas  NF-κB,  yang mengarah ke efek perlindungan terhadap kaskade negatif yang  disebabkan  oleh  radiasi  UV.  Ini  dianggap  sebagai bukti  mekanisme  aksi  teh  hijau  sebagai  agen fotoprotektif. Selain itu EGCG telah terbukti mengurangi  secara  signifikan  peradangan  mukosa  usus dalam  menanggapi  cedera,  sehingga  menghambat produksi faktor inflamasi melalui modulasi ekspresi NF- κB dan gen lain yang terlibat (Bing, et al ., 2017).
Aktivasi  apoptosis  yang  dimediasi  caspase dilaporkan  menjadi  ciri  khas  dari  jalur  pembunuhan yang dimediasi oleh granzyme B dan Fas oleh Cytotoxic T  Lymphocytes (CTLs).  Namun,  kinetika  aktivasi caspase  tetap  tidak  terdefinisi  karena  ketidakmampuan untuk memantau sel target spesifik apoptosis secara real time.  Keterbatasan  ini  telah  diminimalisir  dengan mengembangkan  uji  biosensor  baru  yang  mendeteksi aktivitas  spesifik  protein  kontinyu  dalam  sel  target. Biosensor  direkayasa  dari  luciferase  yang  diijinkan secara  melingkar,  dihubungkan  secara  internal  oleh keduanya  caspase  3/7  atau  granzyme  B/caspase  8  situs pembelahan,  sehingga  memungkinkan  aktivasi  pada pembelahan  proteolitik  oleh  masing-masing  protease. Tingkat aktivasi biosensor caspase 3/7 secara tak terduga cepat  mengikuti  granzyme  B  dibandingkan  dengan sinyal yang diperantarai Fas. Dengan sangat baik, sinyal biosensor  caspase  3/7  yang  bergantung  pada  Fas  yang diinduksi  oleh  CTL  manusia  yang  kekurangan  perforin juga dapat dideteksi setelah 90 menit (Li, et al ., 2014).
Limfosit  T  sitotoksik  sangat  penting  untuk menghilangkan  sel  yang  terinfeksi  virus  dan  sel  ganas dalam  tubuh.  CTLs  membunuh  sel-sel  target  sebagian besar  dengan  salah  satu  dari  dua  metode:  1)  persalinan termediasi perforin setelah eksositosis sitotoksik butiran, dan/atau  2)  Fas  ligand  (FasL)  -  penengah  sasaran reseptor  kematian  sel  Fas.  Pembentukan  sinaps  imun antara  CTL  dan  sel  target  memicu  orkestrasi  granula yang  cepat  jalur  eksositosis  (Jenkins, et  al .,  2010; Dustin, et  al .,  2010;  de  Saint  Basile, et  al .,  2010).  Pada sinaps  imun,  granzymes  masuk  sel  target  mengikuti gangguan  membran  oleh  perforin.  Itu  mekanisme  yang tepat tentang bagaimana perforin mengirimkan granzymes ke dalam sel target masih dalam penyelidikan (Praper, et al ., 2011;  Thiery, et al ., 2011; Lopez, et al ., 2013).
Sepuluh granzymes  telah diidentifikasi pada  tikus dan lima pada manusia genom, menunjukkan redundansi.  Target  granolyme  B  proteolysis  telah dipelajari  lebih  luas  daripada  granzymes  lainnya. Pembelahan langsung dan aktivasi caspase 3 selanjutnya oleh  granzyme  B  dianggap  sebagai  langkah  kritis pertama  yang  diinduksi  oleh  CTL  apoptosis.  Caspase  3 aktif  dapat  diukur  dalam  sel  target  dengan  aliran sitometri,  mewakili  satu  metode  dimana  fungsi  CTL dapat  dinilai.  Selain  itu,  fungsi  CTL  secara  rutin  diukur dengan  kehilangan  integritas  sel  membran  target  atau bukti  degranulasi  CTL  oleh  flowcytometry  dan/atau dengan  pengukuran  sitolisis  dengan  standar  emas,  uji lempeng  mikro  rilis  51Cr.  Setiap  pendekatan  ini menggunakan  uji  titik  akhir.  Tidak  ada  arus  metodologi memungkinkan evaluasi kinetotik kinetik, terus-menerus fungsi. Meskipun persalinan yang dimediasi oleh granfor perforin  dijelaskan  sebagai  kejadian  awal  dan  kematian yang  diinduksi  oleh  Fas/FasL  dijelaskan  seperti  yang terjadi  terlambat,  satu-satunya  teknologi  yang  tersedia untuk  mengevaluasi  kegiatan  ini  secara  real  time
Lisa  Savitri  et  al,  Uji  Potensi  Epigallocatechin  Gallate  Kulit  Pisang  Raja  (Musa  paradisiaca  var.  Raja)  terhadap  Caspase  3 melalui Granzyme B Pathway pada Mencit (Mus musculus) Model Sepsis Berbasis in Silico
membutuhkan microchip yang  canggih  teknologi (Hassin, et al ., 2011).

## SIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  yang  telah  dailakukan adalah epigallocatechin gallate (EGCG) kulit pisang raja ( Musa  paradisiaca var.  Raja)  dapat  dijadikan  sebagai kandidat  target  agen  yang  menjanjikan  untuk  protein membran  plasma,  seperti  reseptor  faktor  pertumbuhan epidermal. Selain  itu, telah ditunjukkan mekanisme  aksi yang  mengandalkan  penghambatan  ERK1/2,  p38 MAPK,  NF-κB,  dan  faktor  pertumbuhan  endotel vaskular. Selanjutnya, EGCG dan turunannya digunakan dalam  penghambatan  proteasome  dan  mereka  terlibat dalam mekanisme epigenetik.

## DAFTAR PUSTAKA
Anhwange, B.A. (2008) Chemical Composition of Musa sapientum (Banana) Peels. Journal Food Technol ,
6 (6): 263-6.
Atun, S., Arianingrum, R., Handayani, S., Rudyansah, &
Garson,  M,  (2007)  Identification  and  Antioxidant Activity  Test  of  Some  Compounds  From Methanol  Extract  Peel  of  banana  (Musa paradisiaca  Linn.) Indo. Journal Chem , 7 (1): 83- 87.
Baskar,  R.,  Shrisakhti,  S.,  Sathyapriya,  B.,  Shyampriya, R.,  Nithya,  R.,  dan  Poongodi,  P.  (2011) Antioxidant  Potential  of  Peel  Extracts  of  Banana Varieties  (Musa  sapientum). Food  and  Nutrition Science Journal , 2: 1128-1133.
Bing  X.,  Xuelei  L.,  Wanwei  D.,  Linlang  L.,  Keyan  C.
(2017)  EGCG  Maintains  Th1/Th2  Balance  and Mitigates  Ulcerative  Colitis  Induced  by  Dextran Sulfate  Sodium  through  TLR4/MyD88/NF-κB Signaling  Pathway  in  Rats.  Can. Journal Gastroenterol.  Hepatol. 2017;2017:1–9.  doi: 10.1155/2017/3057268.
Dawanaka,  M.,  Suryanto,  E.,  &  Wuntu,  A.  D.  (2015)
Efek  Ekstrak  Fenolik  dari  Beberapa  Limbah Tanaman  terhadap  Fotoreduksi  Fe3+  Menjadi Fe2+. Jurnal MIPA UNSRAT , 4 (1): 10-14. de  Saint  Basile,  G.,  G.  Me´nasche´,  and  A.  Fischer (2010)  Molecular  mechanisms  of  biogenesis  and exocytosis  of  cytotoxic  granules. Nat.  Rev. Immunol. Journal , 10: 568–579.
Dugar, S., Chirag Choudhary,and Abhijit Duggal (2020) Sepsis and septic shock: Guideline-based management. Cleveland  Clinic  Journal  of
Medicine , 2020, 87 (1) 53-64; DOI: https://doi.org/10.3949/ccjm.87a.18143.
Dustin,  M.  L.,  and  E.  O.  Long  (2010)  Cytotoxic immunological  synapses. Immunol.  Rev.  Journal . 235: 24–34.
Emaga, T.H., Brindelle, J., Agneesens, R., Buldgen, A., Wathelet,  B.,  &  Paquot,  M  (2011)  Ripening
Influences Banana and Plantain Peels
Composition and  Energy  Content. Trop.  Anim Health Prod Journal , 43 (1): 1-23.
Ghatage  DD,  Gosavi  SR,  Ganvir  SM,  and  Hazarey  VK (2013. Apoptosis: Molecular Mechanism. Journal of Orofacial Sciences , 4: 103-107.
Hassin,  D.,  O.  G.  Garber,  A.  Meiraz,  Y.  S. Schiffenbauer,  and  G.  Berke  (2011)  Cytotoxic  T lymphocyte  perforin  and  Fas  ligand  working  in concert  even  when  Fas  ligand  lytic  action  is  still not  detectable. Immunology  Journal ,  133:  190– 196.
Imam, M.Z., & Akter, S (2011) Musa paradisiaca L. and Musa  sapientum  L.:  A  Phytochemical  and Pharmacological  Review.  Journal  of  Applied Pharmaceutical Science Journal , 1(5): 14-20.
Jamal,  P.,  Saheed,  O.  K.,  &  Alam,  Z  (2012)  Bio- valorization  Potential  of  Banana  Peels  (Musa sapientum).  An  Overview  Asian Journal  of Biotechnology , 4 (1): 5.
Jenkins, M. R., and G. M. Griffiths (2010) The synapse and  cytolytic  machinery  of  cytotoxic  T  cells. Curr. Opin. Immunol. Journal . 22: 308–313. Krishnakumari,  V.  Taniya  Mary  Binny,  Harikrishna Adicherla, and Ramakrishnan Nagaraj (2020) Escherichia  coli  Lipopolysaccharide  Modulates Biological Activities of Human-β-Defensin Analogues but Not Non-Ribosomally Synthesized Peptides. ACS  Omega  Journal ,  2020,  5, 6366−6375
https://dx.doi.org/10.1021/acsomega.9b03770
Kwon,  Oh  Sung,  Ji  Hoon  Jung,  Eun  Ah  Shin,  Ji  Eon Park,  Woon  Yi  Park  and  Sung-Hoon  Kim  (2020) Epigallocatechin-3-Gallate Induces Apoptosis as a TRAIL Sensitizer via Activation of Caspase 8 and Death  Receptor  5  in  Human  Colon  Cancer  Cells. Biomedicines Journal , 2020, 8, 84; doi:10.3390/biomedicines8040084
Lee,  E.H.,  Yeom,  H.J.,  ha,  M.S.,  &  Bae,  D.H  (2010)
Development  of  Banana  Peel  Jelly  and  Its Antioxidant  and  Textural  Properties. Food  Sci. Biotechnol Journal , 19 (2): 449-445.
Li, Jinzhu Li, Sarah K. Figueira, Alexandra C. A. Vrazo, Brock F. Binkowski, Braeden L. Butler, Yasuhiro Tabata, Alexandra Filipovich,  Michael B. Jordan, Kimberly  A.  Risma  (2014)  Real-Time  Detection of  CTL  Function  Reveals  Distinct  Patterns  of Caspase  Activation  Mediated  by  Fas  versus Granzyme  B. Journal  Immunol 2014;  193:519- 528. doi: 10.4049/jimmunol.1301668
Lin  Chung-Wei  C,  Taylor  Deborah,  A  Sita  M,  Zeindra Bierma, Maher Christoper G (2010)  Exercise for Osteoarthritis  of  the  Knee,  Physical  Therapy. 2010. Journal  of  the  American  Physical  Therapy , 90, 8: 839-842.
Lopez, J. A., O. Susanto, M. R. Jenkins, N. Lukoyanova, V. R. Sutton, R. H. Law, A. Johnston, C. H. Bird, P.  I.  Bird,  J.  C.  Whisstock,  et  al.  (2013)  Perforin
Lisa  Savitri  et  al,  Uji  Potensi  Epigallocatechin  Gallate  Kulit  Pisang  Raja  (Musa  paradisiaca  var.  Raja)  terhadap  Caspase  3 melalui Granzyme B Pathway pada Mencit (Mus musculus) Model Sepsis Berbasis in Silico
forms  transient  pores  on  the  target  cell  plasma membrane  to  facilitate  rapid  access  of  granzymes during  killer  cell  attack. Blood  Journal ,  121: 2659–2668.
Nugrajaiah,  S.B.,  &  Prakash,  J.  (2011)  Chemical Composition  and  Antioxidant  Potential  of  Peel From Three Varieties of Banana. As Journal Food Ag-Ind , 4 (1): 31-46.
Okorondu,  S.I.,  Mepba,  H.D.,  Okorundu,  M.M.O.,  & Aririatu,  L.E.  (2010)  Antibacterial  Properties  of Musa paradisiaca Peel Extract. Durrent Trends in Microbiology Journal , 6: 21-26.
Pane,  E.  R.  (2013)  Uji  Aktivitas  Senyawa  Antioksidan dari  Ekstrak  Metanol  Kulit  Pisang    Raja  (Musa paradisiaca Sapientum). Jurnal Valensi , 3 (2): 76- 81. Praper, T., A. F. Sonnen, A. Kladnik, A. O. Andrighetti, G.  Viero,  K.  J.  Morris,  E.  Volpi,  L.  Lunelli,  M. Dalla  Serra,  C.  J.  Froelich,  et  al.  (2011)  Perforin activity  at  membranes  leads  to  invaginations  and vesicle  formation. Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA Journal. 108: 21016–21021.
Tambajong  RN,  Lalenoh  DC,  Kumaat  L.  (2014)  Profil penderita  sepsis  di  ICU  RSUP  Prof.  Dr.  R.  D. Kandou  Manado  periode  Desember  2014-2015. Jurnal e-Clinic (eCl), 4 (1).
Thiery, J., D. Keefe, S. Boulant, E. Boucrot, M. Walch, D.  Martinvalet,  I.  S.  Goping,  R.  C.  Bleackley,  T. Kirchhausen,  and  J.  Lieberman  (2011)  Perforin pores  in  the  endosomal  membrane  trigger  the release  of  endocytosed  granzyme  B  into  the cytosol of target cells. Nat. Immunol. Journal , 12: 770–777.
Wang,  Y.  and  Peter  J.  Quinn.  (2010)  Endotoxins: Lipopolysaccharides  of  Gram-Negative  Bacteria. Sub-cellular  Biochemistry  Journal ,  2010.  DOI: 10.1007/978-90-481-9078-2_1
Wittmann,  I.,  Schonefeld,  M.,  Aichele,  D.,  Groer,  G., Gessner,  A.,  Schnare,  M.  (2020)  Murine
Bactericidal/Permeability-Increasing Protein Inhibits the Endotoxic Activity of
Lipopolysaccharide  and  Gram-Negative  Bacteria. Journal Immunol , 2020, 180: 7546-7552.