Unpad Press Available online at http://jurnal.unpad.ac.id/jurnalilmuternak
Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Oregano  terhadap  Bakteri Escherichia coli dan Stapylococcus aureus sebagai Alternatif Feed additive Unggas
Mulqiama Sarmira 1 , Sri Purwanti 2a , Faridah Nur Yuliati 3
1 Alumni Prodi Peternakan Fakultas Peternakan (Universitas Hasanuddin)
2 Staf Pengajar Departemen Nutrisi dan Makanan Ternak Fakultas Peternakan (Universitas Hasanuddin)
3 Staf Pengajar Departemen Produksi Ternak Fakultas Peternakan (Universitas Hasanuddin)
a) email: sripurwanti@unhas.ac.id

## Abstrak
Gangguan  kesehatan  pada  ternak  unggas  biasanya  diberikan  Antibiotics  Growth  Promoters  (AGPs).  Pelarangan penggunaan AGPs menjadikan perlu untuk dilakukannya pencarian alternatif herbal yang dapat digunakan sebagai pengganti  antibiotik.  Tanaman  oregano  berfungsi  sebagai  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun oregano terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Penelitian ini terdiri dari 5 perlakuan dan 3 ulangan. Perlakuan P1 (kontrol (+) kloramfenikol 30 µg), P2 (kontrol (-) aquades), P3 (ekstrak daun oregano 5%), P4 (ekstrak daun oregano 10%) dan P5 (ekstrak daun oregano 15%) disusun berdasarkan rancangan acak lengkap. Parameter yang diukur yaitu zona hambat pada bakteri Escherichia coli dan Stahylococcus aureus .  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  perlakuan  berpengaruh  nyata  (P<0,05)  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Uji  kontras  ortogonal  menunjukkan  bahwa  bakteri  Escherichia  coli  perlakuan  kontrol  (+) dengan  perlakuan  5%,  10%  dan  15%  ekstrak  daun  oregano  berpengaruh  nyata  (P<0,05)  tetapi  pada  bakteri Staphylococcus aureus tidak berpengaruh nyata (P>0,05). Uji kontras polinominal memperlihatkan bahwa aktivitas antibakteri  ekstrak  oregano  pada  level  15%  maksimum  menghambat  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .  Kesimpulan  bahwa  ekstrak  daun  oregano  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus sehingga dapat digunakan sebagai feed additive pakan. Kata kunci: Ekstrak daun oregano , Escherichia coli , Staphylococcus aureus

## Antibacterial Activity Test of Oregano Leaf Extract against Escherichia coli and Staphylococcus Aureus as an Alternative to Poultry feed Additive

## Abstract
Health problems in poultry are usually given Antibiotics Growth Promoters (AGPs). The use of AGPs is prohibited, therefore,  looking  for  herbal  alternatives  that  can  be  used  to  replace  antibiotics.  The  oregano  plant  acts  as  an antibacterial. This study aims to determine the antibacterial activity of oregano leaf extract against Escherichia coli and Staphylococcus aureus . This study consisted of 5 treatments and 3 replications. The treatments P1 (control (+) 30 µg chloramphenicol), P2 (control (-) aquades), P3 (5% oregano leaf extract), P4 (10% oregano leaf extract) and P5 (15% oregano leaf extract) were arranged based on a randomized design complete. The parameters measured were the inhibition zone in Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacteria. The results showed that the treatment had a significant effect (P<0.05) on Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacteria. Orthogonal contrast test showed that  the Escherichia  coli bacteria  with  control  (+)  treatment  with  5%,  10%  and  15%  oregano  leaf  extract  had  a significant effect (P <0.05) but the Staphylococcus aureus bacteria had no significant effect (P> 0.05). Polynomial contrast  test  showed  that  the  antibacterial  activity  of  oregano  extract  at  the  maximum  level  of  15%  inhibited  the bacteria Escherichia coli and Staphylococcus aureus . The conclusion is that oregano leaf extract can inhibit the growth of Escherichia  coli and Staphylococcus  aureus bacteria  so  that  it  can  be  used  as  a  feed  additive.  05)  but  the Staphylococcus  aureus bacteria  had  no  significant  effect  (P>0.05).  Polynomial  contrast  test  showed  that  the antibacterial activity of oregano extract at the maximum level of 15% inhibited the bacteria Escherichia  coli and Staphylococcus aureus . The conclusion is that oregano leaf extract can inhibit the growth of Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacteria so that it can be used as a feed additive Keywords: Escherichia coli, Oregano leaf extract, Staphylococcus aureus.

## Pendahuluan
Ternak  Unggas  merupakan  salah  satu komoditi  peternakan  yang  menjadi  sumber protein  hewani  bagi  masyarakat  Indonesia. Penanganan  terhadap  gangguan  kesehatan  pada ternak  unggas  biasanya  diberikan  Antibiotics Growth  Promoters  (AGP)  (Firmansyah  et  al., 2017).  Penggunaan  AGP  telah  dilarang  oleh karena itu, dicarilah alternatif herbal yang dapat digunakan untuk menggantikan antibiotik.
Tanaman  oregano  merupakan  tanaman herbal  yang  berasal  dari  keluarga  tanaman  mint ( Lamiaceae ).  Tanaman  oregano  mengandung karvacrol  dan  timol.  kandungan  karvakrol  dan timol  yang  terdapat  pada  tanaman  oregano berfungsi  sebagai  antibakteri  (Stefanaki et  al ., 2016). Daun oregano telah banyak diteliti sebagai salah  satu  rempah  penghambat  paling  ampuh yang  diuji  pada  berbagai  jenis  bakteri  seperti Salmonella enteritidis ( S. enteritidis ), Salmonella typhimurium ( S.  typhimurium ), Salmonella choleraesuis ( S.  choleraesuis ), Escherichia  coli ( E.  coli ), Klebsiella  pnemoniae , Streptococcus suis ( S.  suis ),  dan Staphylococcus  aureus ( S. aureus ) (Koppien-Fox et al ., 2011).
Aktivitas antibakteri adalah senyawa aktif atau  bahan  yang  dapat  membunuh  atau menghambat  aktivitas  bakteri.  Senyawa  aktif yang  dapat  menghambat  aktivitas  antibakteri terdiri  dari  beberapa  kelompok,  salah  satunya yaitu  senyawa  karvakrol  dan  timol.  Senyawa tersebut dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram  positif  ( S.  aureus )  dan  Gram  negatif  ( E. coli ) selain itu juga sebagai antijamur (Memar et al ., 2017).
Bakteri E.  coli merupakan  salah  satu bakteri Gram negatif. Bakteri tersebut mempunyai inang yang khas yang berkaitan erat dengan  penyakit  tertentu  pada  berbagai  spesies hewan,  pada  ternak  unggas  menimbulkan penyakit  kolibasilosis  yang  dapat  menyerang semua  tipe  ayam  dan  segala  umur  tetapi,  anak ayam lebih rentan terserang dibandingkan dengan ayam dewasa (Wibowo et al ., 2008). Bakteri S. aureus merupakan bakteri Gram positif. Bakteri tersebut  dapat  menyebabkan  penyakit  pada unggas yaitu radang pusar, radang sendi, radang pada ruas tulang belakang, peradangan tulang dan sumsung serta radang yang terjadi pada membran
jantung (Fadilah & Polana, 2011). Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  adanya  senyawa bioaktif dalam ekstrak daun oregano yang dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus .  Berdasarkan uraian tersebut, maka perlu dilakukan penelitian uji  efektivitas  antibakteri  ekstrak  daun  oregano terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus secara in vitro .

## Materi dan Metode Waktu dan tempat penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan
Januari-Februari 2021 di Laboratorium
Teknologi  Hasil  Perikanan,  Fakultas  Ilmu Kelautan  dan  Perikanan  dan  Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran,  Universitas Hasanuddin, Makassar.

## Materi Penelitian
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu:  neraca  analitik,  blender,  erlenmeyer, autoklaf,  inkubator,  cawan  petri,  tabung  reaksi, rak tabung reaksi, toples, jarum ose, gelas ukur, bunsen,  jangka  sorong  elektrik,  corong  kaca, batang  pengaduk,  pompa  vakum,  rotary evaporator, dan mikropipet, pinset dan labu ukur. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu: bubuk oregano, bakteri E. coli, S. aureus , paper disk,  etanol  96%,  kloramfenikol  30µg,  dimetil sulfoksida  (DMSO),  akuades,  Mueller-Hilton Agar (MHA), kertas saring, label dan spidol.

## Metode Penelitian
Metode  penelitian  yang  digunakan  yaitu metode  difus  dengan  cara  Kirby-Bauer. Rancangan penelitian ini terdiri dari 5 perlakuan dengan  3  kali  ulangan.  Penelitian  ini menggunakan  racangan  acak  lengkap  (RAL). Perlakuan  yang  digunakan  yaitu  P1:  Antibiotik kloramfenikol  (kontrol  positif),  P2:  Akuades (kontrol negatif), P3: Ekstrak daun oregano 5%, P4: Ekstrak daun oregano 10%, P5: Ekstrak daun oregano 15%.

## Tahapan Penelitian Pembuatan Ekstrak Daun Oregano
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  yaitu maserasi,  metode  ini  yang  paling  sederhana
dilakukan  dengan  memasukkan  serbuk  tanaman pada  pelarut  yang  sesuai  pada  wadah  yang tertutup  rapat  pada  suhu  kamar  (Mukhriani, 2014).  Daun  oregano  kering  umur  8  (delapan) bulan  diblender  kemudian  disaring  sehingga mendapatkan  serbuk  daun  oregano  yang  sama ukurannya.  Serbuk  daun  tersebut  ditimbang sebanyak 100 gram kemudian direndam dengan 500 mL etanol 96% dengan perbandingan (w/v) 1:5 di wadah tertutup dibiarkan selama 1 x 24 jam dengan  sesekali  diaduk.  Kemudian  larutan ekstrak disaring menggunakan kertas saring dan pompa vakum kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50°C dengan  kecepatan  rotasi  90  rpm  selama  1  jam sehingga di dapatkan ekstrak dengan konsentrasi murni.

## Pembuatan Konsentrasi Ekstrak
Metode pengenceran yaitu proses penurunan konsentrasi zat yang terlarut di dalam sebuah larutan (Rusman dkk., 2018). Pengenceran dibuat sebanyak 10 mL dari setiap konsentrasi  menggunakan  DMSO  yaitu  dengan penambahan  0,5  mL  ekstrak  daun  oregano  dan 9,5 mL DMSO didapatkan konsentrasi 5%, 1 mL ekstrak  daun  oregano  dengan  9  mL  DMSO didapatkan  konsentrasi  10%,  1,5  mL  ekstrak oregano  dengan  8,5  mL  DMSO  didapatkan konsentrasi 15%.

## Penyiapan Mikroorganisme Uji
Bakteri uji yang telah diinokulasi diambil dengan  kawat  ose  steril  lalu  disuspensikan kedalam  tabung  yang  berisi  2  ml  larutan  NaCl 0,9%  hingga  diperoleh  kekeruhan  yang  sama dengan  standar  kekeruhan  larutan  Mc.  Farland. Perlakuan yang sama dilakukan pada setiap jenis bakteri uji.

## Tahap Perlakuan
Muller Hilton Agar (MHA) sebanyak 7,6 g dilarutkan  ke  dalam  200  mL  akuades.  Media MHA  harus  benar-benar  homogen  terlihat  dari
warna kuning bening yang menunjukkan bahwa MHA  telah  tercampur  secara  baik  dengan akuades kemudian dimasukkan ke dalam autoklaf dengan  suhu  121ºC  selama  15  menit.  Sebelum digunakan  media  disterilisasi  terlebih  dahulu menggunakan autoklaf pada suhu 121ºC dengan tekanan  1  atm  selama  15  menit.  Memasukkan MHA kedalam cawan petri dengan menggunakan metode tuang, setiap cawang petri berisi ± 15 mL. Setelah agar memadat, dimasukkan cotton bud ke dalam tabung reaksi yang berisi suspensi bakteri. Kemudian  cotton  bud  diusapkan  pada  seluruh permukaan agar secara merata.
Masing-masing  cawan  petri  terdapat  5 paper  disk  yang  terdiri  dari  konsentrasi  ekstrak daun  oregano  5%,  10%,  15%,  kloramfenikol 30µg dan akuades. Kemudian ditempelkan pada media MHA yang telah disuspensi bakteri E. coli dan  S.  aureus .  Kemudian  diinkubasi  selama  24 jam  pada  suhu  37ºC.  Diamati  dengan  cara mengukur diameter zona hambat yang terbentuk. Kekuatan  aktivitas  antibakteri  ditentukan berdasarkan  (Davis  dan  Stout,  1971)  Aktivitas sangat kuat : Diameter Daya Hambat (DDH) ≥ 20 mm,  aktivitas  kuat  :  DDH  10–20  mm,  aktivitas sedang  :  DDH  5–10  mm  dan  aktivitas  lemah  : DDH < 5 mm.

## Pengolahan Data
Data  yang  diperoleh  diolah  dengan menggunakan  sidik  ragam  sesuai  dengan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  5 perlakuan  dan  3  ulangan.  Perbedaan  antar perlakuan diuji lebih lanjut dengan menggunakan uji  kontras  ortogonal  dan  polinomial  Gasperzs (1991).

## Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan hasil penelitian ekstrak daun oregano  dengan  pemberian  konsentrasi  berbeda diperoleh  zona  hambat  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan  bakteri Staphylococcus aureus dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Zona hambat ekstrak daun oregano terhadap bakteri Escherichia coli dan Stapylococcus aureus
Berdasarkan Tabel 1 menunjukkan adanya pengaruh  yang  nyata  dengan  taraf  kepercayaan 95% (P<0,05) terhadap zona hambat pada bakteri Escherichia  coli dan  bakteri Staphylococcus aureus .  Hasil  pengukuran  menunjukkan  bahwa pengujian  pada  bakteri E.  coli dengan  diameter zona  hambat  terluas  yaitu  pada  kontrol  (+) dengan pemberian antibiotik kloramfenicol 30 µg (sangat  kuat)  sedangkan  pada  ekstrak  daun oregano  kriteria  kekuatan  antibakterinya  yaitu pada konsentrasi 5% (sedang), konsentrasi 10% dan  15%  (kuat).  Diameter  zona  hambat  pada bakteri S.  aureus yang  terluas  yaitu  pada penambahan  ekstrak  daun  oregano  konsentrasi 15%  dengan  kekuatan  aktivitas  antimikrobanya sangat kuat sedangkan pada perlakuan kontrol (+) dengan pemberian antibiotik kloramfenicol 30µg, ekstrak  daun  oregano  5%  dan  10%  kekuatan aktivitas antimikrobanya kuat.
Semakin  besar  konsentrasi  ekstrak  daun oregano  yang  digunakan  maka  semakin  besar pula  zona  hambat  yang  terbentuk  karena  zat antimikroba  ekstrak  daun  oregano  juga bertambah.  Menurut  Lingga et  al .  (2016) menyatakan  bahwa  semakin  besar  zona  hambat maka  semakin  besar  pula  kemampuan  untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri,  artinya  zat antimikroba  alami  pada  ekstrak  daun  oregano pada konsentrasi yang semakin tinggi mempunyai  daya  hambat  yang  kuat  dalam menghambat  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .
Perbedaan  diameter  zona  hambat  pada masing-masing  konsentrasi  disebabkan  karena perbedaan  besarnya  zat  aktif  yang  terkandung pada  konsentrasi  tersebut  dan  jenis  bakteri  uji yang  digunakan.  Ekstrak  daun  oregano menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus lebih baik dibandingkan dengan E. coli . Pendapat Sari et al . (2014) yang menyatakan bahwa salah satu faktor  yang  mempengaruhi  besarnya  diameter daya hambat adalah konsentrasi dari ekstrak uji yang digunakan. Selain itu perbedaan sensitivitas bakteri  terhadap  antibakteri  dipengaruhi  oleh struktur dinding sel bakteri.
Bakteri  Gram  positif  cenderung  lebih sensitif  terhadap  antibakteri,  karena  struktur dinding sel bakteri Gram positif lebih sederhana dibandingkan  struktur  dinding  sel  bakteri  Gram negatif sehingga memudahkan senyawa antibakteri  untuk  masuk  ke  dalam  sel  bakteri Gram  positif  (Kusmayati  &  Agustini,  2007). Bakteri  Gram  negatif  mempunyai  struktur  yang berlapis-lapis serta kandungan lemak yang relatif lebih  tinggi  (11-12%),  sehingga  lebih  tahan terhadap perubahan lingkungan yang disebabkan oleh bahan kimia (Lingga et al ., 2016).
Zona  Hambat  Ekstrak  Daun  Oregano terhadap Bakteri Escherichia coli
Uji  lanjut  kontras  ortogonal  dilakukan untuk mengetahui perbandingan antar perlakuan. Uji  lanjut  kontras  ortogonal  dapat  dilihat  pada Tabel 2. Perlakuan Diameter Zona Hambat Pertimbuhan Bakteri Escherichia coli Kriteria kekuatan antibakteri Staphylococcus aureus Kriteria kekuatan antibakteri P1 (+) 21,4 ± 0,77 Sangat Kuat 18,6 ± 1,25 Kuat P2 (-) 0 Tidak Ada 0 Tidak Ada P3 9,3 ± 0,43 Sedang 17,4 ± 0,72 Kuat P4 11,2 ± 0,36 Kuat 19,3 ± 0,78 Kuat P5 12,4 ± 0,85 Kuat 20,8 ± 0,49 Sangat Kuat
Tabel 2. Uji lanjut kontras ortogonal ekstrak daun oregano terhadap bakteri Escherichia coli Sumber Ragam db JK KT F Hit F Tab (0.05) ket Perlakuan 4 704,28 176,06 550,18 3,47 * Kontrol (+) VS Ekstrak daun oregano 1 245,96 245,96 768,62 4,96 * 15% VS 10%,5% 1 9,53 9,53 29,78 4,96 * 10% VS 5% 1 5,41 5,41 16,90 4,96 * Kontrol (+) VS 15% 1 13,5 13,5 42,18 4,96 * Galat 10 3,29 0,32 Total 14 Ket: * berpengaruh nyata
Tabel  2  menunjukkan  bahwa  pada perbandingan  kontrol  (+)  dengan  konsentrasi ekstrak  daun  oregano  5%,  10%  dan  15%, konsentrasi 15% dibandingkan dengan 10%; 5%, konsentrasi 10% dibandingkan dengan 5% serta perlakuan kontrol (+) dibandingkan dengan 15% memiliki pengaruh yang sangat nyata. Perlakuan kontrol (+) menggunakan antibiotik kloramfenikol  yang  merupakan  antibiotik spektrum  luas  yang  efektif  terhadap  beberapa jenis  bakteri  seperti  bakteri E.  coli (Afnidar, 2014).  Mekanisme  kerja  antibiotik  antara  lain adalah menghambat sintesis dinding sel, merusak permeabilitas membran sel, menghambat sintesis RNA  (proses  transkripsi),  menghambat  sintesis protein  (proses  translasi),  dan  menghambat replikasi DNA (Dian et al ., 2015). Kloramfenikol merupakan  senyawa  murni  yang  mempunyai mekanisme sebagai pengganggu sintesis protein dari  bakteri  sehingga  dapat  mengakibatkan kematian bakteri (Sari et al ., 2014).
Ekstrak  daun  oregano  dapat  menghambat perumbuhan bakteri Escherichia coli mulai dari konsentrasi  ekstrak  5%  sampai  dengan  15%, setiap  penambahan  konsentrasi  ekstrak  daun oregano maka daya hambat pertumbuhan bakteri semakin  besar  disebabkan  oleh  semakin bertambahnya  kandungan  bioaktif  penghambat bakteri.  Lingga et  al .  (2016)  yang  menyatakan
bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin  banyak  kandungan  bahan  aktif antibakterinya. Penambahan konsentrasi senyawa antibakteri diduga dapat meningkatkan penetrasi senyawa antibakteri ke bagian dalam sel mikroba yang akan merusak sistem metabolisme sel  dan dapat  mengakibatkan  kematian  sel.  Rodriguez- Garcia et al . (2015) menyatakan bahwa besarnya penghambatan  pertumbuhan  mikroorganisme yang  diuji  sangat  tergantung  pada  konsentrasi ekstrak daun oregano yang digunakan.
Ekstrak  etanol  daun  oregano  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli disebabkan oleh adanya kandungan dari minyak atsiri.  Sakkas  &  Papadopoulou  (2017) menyatakan  bahwa  minyak  atsiri  tanaman oregano dapat dijadikan sebagai alternatif alami untuk menghambat pertumbuhan bakteri patogen. Martins et  al .  (2014)  menunjukkan  aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  herbal  oregano  pada konsentrasi  20  mg/mL  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif E. coli dan P. aeruginosa . Minyak atsiri oregano termasuk yang paling  aktif  melawan  galur  bakteri E.  coli dan juga sebagai antimikroba terhadap mikroorganisme  patogen  seperti Salmonella choleraesuis , S. typhi, S. typhimurium dan banyak strain lainnya (Penalver et al ., 2005). Uji lanjut kontras polinomial dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1  Grafik rata-rata zona hambat bakteri Escherichia coli Ket: P1 = Kontrol Positif Yaitu Kloramfenikol 30µg; P2= Kontrol Negatif Yaitu Aquades; P3 = Ekstrak Daun Oregano 5%; P4 = Ekstrak Daun Oregano 10%; P5 = Ekstrak Daun Oregano 15%.
Berdasarkan  Gambar  1  uji  lanjut  kontras polinomial  ekstrak  daun  oregano  terhadap  zona hambat pada bakteri E. coli diperoleh hasil dari data  regresi  kubik  dengan  hubungan  persamaan kubik yaitu y = -2,6167x 3 + 26,25x 2 – 78,633x + 75,76  dan  R²  =  0,87  dari  Persamaan  tersebut diperoleh  presentase  pengaruh  ekstrak  etanol daun  oregano  sebesar  87%  terhadap  bakteri E. coli . Bakteri Escherichia  coli merupakan bakteri yang dapat menyebabkan penyakit diare pada  ternak  unggas  jika  bakteri E  coli bersifat patogen. Haribi dan Yusron. (2010) menyatakan bahwa bakteri E.  coli merupakan bakteri normal pada usus besar. Namun, jika pada kondisi yang tidak  normal  dapat  menyebabkan  diare. Escherichia coli menjadi penyebab infeksi  dalam saluran  pencernaan, hal ini  disebabkan  karena keadaan  higienis  makanan,  air  minum  yang dikonsumsi  kurang  baik,  serta  dipengaruhi  oleh sanitasi lingkungan sekitarnya (Rahmawati et al ., 2014).  Oleh  sebab  itu  tanaman  oregano  dapat dijadikan  sebagai  zat  aktif  dalam  menghambat bakteri E.  coli. Ekstrak  daun  oregano  juga berpotensi  meningkatkan  kinerja  broiler  dan mengurangi  populasi  bakteri  dari  saluran  cerna, seperti Clostridium perfringens dan E. coli (Halle et al ., 2001).
Daun  oregano  mengandung  senyawa antibakteri berupa karvakrol, senyawa karvakrol
yang dapat menghambat pergerakan flagella pada bakteri E.  coli .  Shalihat  (2018)  menyatakan bahwa daun oregano selain mengandung minyak atsiri juga 77,9% senyawa karvakrol yang dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Patogenitas E.coli dapat dilihat dari kemampuannya bergerak dengan  flagela,  makin  baik  pergerakan  flagela akan makin patogen. Efek karvakrol pada E.coli ditunjukkan dengan kemampuannya menghambat  pergerakan  flagela  dan  mencegah sintesis flagela. Selain menghambat pergerakan, karvakrol  juga  mampu  menghambat  sintesis flagela, dimulai dari pembentukan kondisi yang mengganggu  enzim.  Kondisi  ini  muncul  akibat peningkatan  komposisi  asam  lemak  tidak  jenuh membran  sel.  Putri et  al .  (2016)  menyatakan bahwa  secara  umum  mekanisme  penghambatan mikroorganisme  yang  dilakukan  oleh  senyawa antimikroba  dapat  disebabkan  oleh  beberapa faktor  yaitu  mengganggu  senyawa  penyusun dinding  bakteri,  peningkatan  permeabilitas membran  sel  yang  dapat  menyebabkan kehilangan  komponen  penyusun  sel  dan menginaktivasi enzim.
Zona hambat ekstrak daun oregano terhadap bakteri Stapylococcus aureus Data hasil uji kontas ortogonal ekstrak daun oregano terhadap bakteri S. aureus dapat dilihat pada i Tabel i 3.
y = -2,6167x 3 + 26,25x 2 - 78,633x + 75,76 R² = 0,8774 0 5 10 15 20 25 0 1 2 3 4 5 Lu as Zo na H am ba t (m m ) Perlakuan P1 P2 P3 P4
P5
Tabel 3. Uji lanjut kontras ortogonal ekstrak daun oregano terhadap bakteri Staphylococcus aureus Sumber Ragam db JK KT F Hit F tab(0,05) Ket Perlakuan 4 889,07 224,8 50,74 3,47 * Kontrol (+) VS Semua Ekstrak 1 0,78 0,78 0,87 4,96 tn 15% VS 10%, 5% 1 12,66 12,66   14,20 4,96 * 10 VS 5% 1 5,41 5,41 6,08 4,96 * Konrol (+) VS 15% 1 0,85 0,85 0,96 4,96 tn Galat 10 8,90 8,90 Total 17 Ket: * berpengaruh nyata Tn: tidak berpengaruh nyata
Berdasarkan  data  uji  kontras  ortogonal menunjukkan bahwa pada perbandingan perlakuan  kontrol  (+)  antibiotik  kloramfenikol dengan  konsentrasi  15%;  10%;  5%,  konsentrasi 15% dibandingkan dengan 10%; 5%, konsentrasi 10% dibandingkan dengan 5% serta kontrol (+) dibandingkan  dengan  konsentrasi  ekstrak  daun oregano 15% menunjukkan bahwa tidak adanya pengaruh  yang  nyata  sehingga  kekuatan  daya hambat  pertumbuhan  bakteri S.  aureus pada perlakuan kontrol (+) antibiotik kloramfenikol 30 nanogram  (µg)    sama  dengan  kekuatan  daya hambat  konsentrasi  ekstrak  daun  oregano  5%, 10% dan i 15%.
Kekuatan  antibakteri  tanaman  oregano dipengaruhi  oleh  kandungan  minyak  atsiri  yang terdapat pada ekstrak daun oregano. Nostro et al . (2006)  menyatakan  bahwa  ekstrak  tanaman oregano  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Stapylococcus  aureus karena  oregano memiliki  daya  hambat  bakteri  dengan  spektrum aktivitas  antimikroba  yang  luas.  Minyak  atsiri merupakan  bahan  alami  antimikroba  dan antioksidan yang paling efektif (Benavides et al ., 2012).  Minyak  atsiri  memiliki  aktivitas antibakteri  yang  bekerja  pada  berbagai  tempat dalam  sel  bakteri,  antara  lain:  1)  degradasi
dinding  sel  bakteri;  2)  kerusakan  membran sitoplasmik; 3) kerusakan protein pada membran; 4)  kebocoran  isi  sel;  5)  koagulasi  sitoplasma. Karakteristik  terpenting  yang  dimiliki  minyak atsiri adalah hidrofobisitasnya yang memungkinkan  untuk    merusak  lipid  membran sel  bakteri,  mengganggu  strukturnya  dan membuat membran sel lebih permeabel sehingga terjadi kebocoran ion (Burt, 2004).
Tanaman  oregano  mampu  menghambat bakteri S.  aureus dengan  kriteria  luas  zona hambat  kuat  hingga  sangat  kuat  dikarenakan oregano  mengandung  beberapa  senyawa- senyawa yang dapat bersifat sebagai antibakteri. Jaber et  al .  (2012)  menyatakan  bahwa  aktivitas antimikroba bergantung pada senyawa antimikroba  dalam  ekstrak  oregano  termasuk limonene,  gamma-cariofilene,  rhocymenene, canfor,  linalool,  αlpha-pinene,  karvakrol  dan timol.  Timol  dan  karvakrol  adalah  komponen utama  dari  minyak  atsiri  oregano  yang  dapat memberikan  efek  antioksidan,  antimikroba,  dan antijamur.  Uji  kontras  polinomial  dilakukan untuk  mengetahui  titik  optimum  daya  hambat ekstrak  daun  oregano  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus disajikan pada Gambar 2.
Gambar 2. Grafik Rata-Rata Zona Hambat Bakteri Staphylococcus aureus
Ket: P1 = Kontrol Positif Yaitu Kloramfenikol 30µg; P2= Kontrol Negatif Yaitu Aquades; P3 = Ekstrak Daun Oregano 5%; P4 = Ekstrak Daun Oregano 10%; P5 = Ekstrak Daun Oregano 15%.
Uji lanjut polinomial ekstrak daun oregano terhadap zona
hambat pada bakteri Staphylococcus  aureus (Gambar  2)  diperoleh hasil  dari  bahwa  hubungan  persamaan  regresi kuartik yaitu y = 2,775x 4 – 35,333x 3 + 166,63x 2 – 305,77x  +  191,3  dan  R²  =  1  dari  persamaan tersebut  diperoleh  presentase  pengaruh  ekstrak etanol  daun  oregano  sebesar  100%  terhadap bakteri S.  aureus .
Bakteri Stapylococcus  aureus merupakan salah satu bakteri yang menyebabkan infeksi akut pada beberapa jenis unggas. Fadilah dan Polana (2011) bakteri Stapylococcus aureus merupakan bakteri  yang  dapat  menyebabkan  penyakit sistemik pada ayam dengan karakteristik adanya radang sendi ( arthritis) , radang selubung tendon ( tenosynovitis ) dan luka pada kaki ( bumblefoot) . Penyebaran penyakit ini telah meluas ke seluruh dunia dan telah menginfeksi semua kelas unggas. Gejala  penyakit bumblefoot yaitu  terjadi penebalan  kulit  ( hyperkeratosis) ,  luka  dan bernanah  pada  bantalan  kaki.  Diatasi  dengan menggunakan  adatif  alami  berupa  ekstrak tanaman  oregano  yang  memiliki  zat  bioaktif penghambat  bakteri S.  aureus .  Koppien-Fox et al. (2011)  daun  oregano  telah  banyak  diteliti sebagai  salah  satu  rempah  penghambat  paling ampuh  yang  diuji  pada  berbagai  jenis  bakteri seperti Salmonella  enteritidis,  Salmonella typhimurium,  Salmonella  choleraesuis,  E.  coli,
Klebsiella  pneumoniae,  Streptococcus  suis,  dan S. aureus.
Kandungan karvakrol dan timol pada daun oregano  menghambat  pertumbuhan  bakteri S. aureus yaitu dengan mengganggu fosfolipid pada dinding  sel  bakteri.  Govaris et  al .  (2010  ) komponen utama daun oregano adalah karvakrol dan timol, yang berfungsi sebagai antibakteri dan antioksidan.  Gumus et  al .  (2010)  membran  sel bakteri  merupakan  target  yang  sangat  penting untuk  komponen  ekstrak  daun  oregano  seperti terpenoid  yang  dapat  mengganggu  membran fosfolipid.  Guard et  al .  (2011)  timol  dan karvakrol mampu menghancurkan membran luar bakteri  Gram  negatif;  melepaskan  komponen lipopolisakarida dengan demikian meningkatkan permeabilitas  adenosin  trifosfat  ke  dalam membran  sitoplasma  sehingga  akan  mengubah permeabilitas sel.

## Kesimpulan
Konsentrasi  ekstrak  daun  oregano  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus secara maksimal pada konsentrasi 15%.

## Daftar Pustaka
Davis, W. W., & Stout, T. R. (1971). Disc plate method  of  microbiological  antibiotic assay.  II.  Novel  procedure  offering
y = 2,775x 4 - 36,333x 3 + 166,63x 2 - 305,77x + 191,3 R² = 1 -3 2 7 12 17 22 0 1 2 3 4 5 Lu as Zo na H am ba t (m m ) Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5
improved accuracy. Applied Microbiology ,
22 (4), 666–670. https://doi.org/10.1128/aem.22.4.666-
670.1971
Dian,  R.,  .  F.,  &  Budiarso,  F.  (2015).  Uji resistensi  bakteri Escherichia  coli yang diisolasi  dari  plak  gigi  terhadap  merkuri dan  antibiotik  kloramfenikol. Jurnal  E- Biomedik , 3 (1). https://doi.org/10.35790/ebm.3.1.2015.66 07
Fadilah,  R.  &  Polana,  A.  (2011).  ISBN. Patent No .  979-006.    Jakarta:  PT.  AgroMedia Pustaka.
Firmansyah,  W.,  Mahfudz,  L.  &  Wahyono,  F.
(2017).  Pengaruh  probiotik,  antibiotik, acidifier,  dan  kombinasinya  dalam  pakan terhadap  kecernaan  protein  pakan  pada ayam broiler. Buletin Sintesis , 21 (4), 1–20.
Gasperzs.  (1991).  Teknik  Analisis  dalam Penelitian Percobaan. Tarsito. Bandung Govaris,  A.,  Solomakos,  N.,  Pexara,  A.,  & Chatzopoulou,  P.  S.  (2010).  The antimicrobial  effect  of  oregano  essential oil,  nisin  and  their  combination  against Salmonella  enteritidis in  minced  sheep meat during refrigerated storage. International Journal of Food Microbiology , 137 (2–3), 175–180. https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2009
.12.017 Gumus, T., Demirci, A. S., Sagdic, O., & Arici,
M.  (2010).  Inhibition  of  heat  resistant molds: Aspergillus fumigatus and
Paecilomyces  variotii by  some  plant essential  oils. Food  Science  and Biotechnology , 19 (5), 1241–1244. https://doi.org/10.1007/s10068-010-0177- 9
Haribi,  R.,  &  Yusron,  K.  (2010).  Pemeriksaan Escherichia  coli pada  air  bak  wudhlu  10 masjid di Kecamatan Tlogosari Semarang. Jurnal Kesehatan Unimus , 3 (1), 105647.
Kusmiyati, K., & Agustini, N. W. S. (2007). Uji aktivitas senyawa antibakteri dari mikroalga Porphyridium cruentum .
Biodiversitas , 8 , 48–53.
Lingga, A, R., Pato, U., & Rossi, E. (2016). Uji antibakteri  ekstrak  batang  kecombrang ( Nicolaia  speciosa  horan )  terhadap
Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli . Jom Faperta . 3(1), 1-15. Mellencamp, M. A., Koppien-Fox, J., Lamb, R., &  Dvorak,  R.  (2018). Antibacterial  and antioxidant  activity  of  oregano  essential oil . 354–357.
https://doi.org/10.31274/safepork-180809- 673 Memar, M. Y., Raei, P., Alizadeh, N., Aghdam, M. A., & Kafil, H. S. (2017). Carvacrol and thymol:  Strong  antimicrobial  agents against  resistant  isolates. Reviews  in Medical  Microbiology , 28 (2),  63–68. https://doi.org/10.1097/MRM.000000000 0000100
Mukhtarini.  (2011).  “Ekstraksi,  pemisahan senyawa,  dan  identifikasi  senyawa  aktif.” Jurnal of Pharmacy , V , 361.
Nostro,  A.,  Roccaro,  A.  S.,  Bisignano,  G., Marino, A., Cannatelli, M. A., Pizzimenti, F. C., Cioni, P. L., Procopio, F., & Blanco, A. R. (2007). Effects of oregano, carvacrol and thymol on Staphylococcus aureus and Staphylococcus  epidermidis biofilms. Journal  of  Medical  Microbiology , 56 (4), 519–523.
https://doi.org/10.1099/jmm.0.46804-0
Peñalver, P., Huerta, B., Borge, C., Astorga, R., Romero,  R.,  &  Perea,  A.  (2005). Antimicrobial activity of five essential oils against origin strains of the Enterobacteriaceae family. Apmis , 113 (1), 1–6. https://doi.org/10.1111/j.1600- 0463.2005.apm1130101.x
Putra, I. M. A. S. (2020). Uji aktivitas antibakteri ekstrak  etanol  daun  sirsak  ( Annonae muricata  L .)  dengan  metode  difusi  agar cakram  terhadap Escherichia  coli . Jurnal Ilmiah Medicamento , 1 (1), 15–19. https://doi.org/10.36733/medicamento.v1i 1.721
Rahmawati,  N.,  &  Sudjarwo,  E.  (2011).  Uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  herbal terhadap  bakteri Escherichia  coli . Ilmu- Ilmu Peternakan , 24 (3), 24–31.
Rodriguez-Garcia,  I.,  Silva-Espinoza,  B.  A.,
Ortega-Ramirez,  L.  A.,  Leyva,  J.  M., Siddiqui, M. W., Cruz-Valenzuela, M. R., Gonzalez-Aguilar, G. A., & Ayala-Zavala, J.  F.  (2016).  Oregano  essential  oil  as  an antimicrobial  and  antioxidant  additive  in
food  products. Critical  Reviews  in  Food Science and Nutrition , 56 (10), 1717–1727. https://doi.org/10.1080/10408398.2013.80 0832
Rusman.,  Rahmadani  F.  I.,  &  Mukhlis.  (2018).
Buku  Ajar  Kimia  Larutan .  Fakultas Keguruan  Ilmu  Pendidikan.  Syiah  Kuala Universitas Press. Aceh.
Sakkas,  H.,  &  Papadopoulou,  C.  (2017).
Antimicrobial  activity  of  basil,  oregano, and  thyme  essential  oils. Journal  of Microbiology  and  Biotechnology , 27 (3),
429–438. https://doi.org/10.4014/jmb.1608.08024
Sari,  E.,  ruf,  W.,  &  Sumardianto,  S.  (2014).
Kajian  Senyawa  bioaktif  ekstrak  teripang hitam ( Holothuria edulis) basah dan kering
sebagai antibakteri
alami.
Jurnal
Pengolahan  dan  Bioteknologi  Hasil
Perikanan , 3 (4), 16–24. Shalihat, H. K. (2018). Potensi carvacrol dalam daun bangun-bangun sebagai antimikroba dan imunostimulator . 45 (11), 849–853.
Stefanaki,  A.,  Cook,  C.  M.,  Lanaras,  T.,  & Kokkini, S. (2016). The Oregano plants of Chios  Island  (Greece):  Essential  oils  of Origanum  onites  L.  growing  wild  in different  habitats. Industrial  Crops  and Products , 82 (January), 107–113. https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2015.11. 086
Wibowo, M. H., & Wahyuni, A. E. T. H. (2008). Studi  patogenitas  Escherichia  coli  Isolat Unggas  Pada  Ayam  Pedaging  Umur  15 hari. Jurnal Veteriner , 9 (2), 87–93.