## Agrokompleks Vol. 21 No. 2 Juli 2021

## Laman Jurnal: https://ppnp.e-journal/agrokompleks
Kajian perubahan sifat fisika kimia bakteri Vibrio harveyi di berbagai jenis media pada suhu penyimpanan -20°C
Study of changes in the physical and chemical properties of Vibrio harveyi bacteria in various types of media at a storage temperature of -20°C
Fauziah Nurdin 1* , Bustamin 1 , Ridwan 1 dan Seniati 1
1 Jurusan Budidaya Perikanan, Politeknik Pertanian Negeri Pangkajene Kepulauan *Corresponding author : uci_nurdin@yahoo.com
Diterima Tanggal 15 Juni 2021, Disetujui Tanggal 29 Juli 2021

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui metode penyimpanan yang tepat, sifat dan karakteristik V. harveyi selama masa penyimpanan, dan waktu penyimpanan yang aman bagi V. harveyi. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium  Kesehatan  Ikan  dengan  menggunakan V.  harveyii yang  bersumber  dari  BBRBAP Maros.  Penelitian ini berlangsung selama 3 bulan, menggunakan 4 jenis media penyimpanan yaitu aquades steril,   media  TSB,,  media  solid,  dan  gliserol  pada  suhu  -20  °C.   Pengamatan  perubahan  sifat  fisika V. harveyi dilakukan pada minggu ke-2, minggu ke-4, minggu ke-6 dan minggu ke-8  masa penyimpanan  Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada minggu ke-2 masa penyimpanan tidak terjadi perubahan bentuk koloni, koloni  tampak  tetap  tunggal  dan  menyebar.   Namun  pada  minggu  ke-4  hingga  minggu  ke-8  masa penyimpanan  terjadi  perubahan  bentuk  penyebaran  koloni.   Koloni  tampak  bersatu,  melebar  dan menebal.   Pengamatan  selanjutnya  adalah  sifat  dan  karakteristik  sel.  Penyimpanan  yang  berbeda  tidak memberi  pengaruh  pada  bentuk  dan  serapan  warna  sel V.  harveyi selama  masa  penyimpanan.   Sel V. harveyi tetap berbentuk batang halus menyerupai koma dan menyerap warna pink muda sehingga tampak bentuk  sel  yang  sangat  halus.   Pengamatan  tipe  penggandengan  sel  di  semua  media  penyimpanan  pada minggu ke-2, tidak terdapat perbedaan mencolok.  Sel bakteri V harveyi tetap menyebar tunggal merata di slide pewarnaan, akan tetapi pada minggu ke-4 tampak beberapa sel mulai berikatan dua (diploid) dan pada minggu  ke-8  sel V  harveyi sebagian  besar  bergerombol  pada  media  penyimpanan  TSB,  media  solid  dan gliserol, sedangkan pada media penyimpanan aquades steril tampak sebagian kecil yang bergerombol dan sebagian besar masih menyebar tunggal.
Kata Kunci : bakteri, media, metode, penyimpanan, V.harveyi

## Abstract
This  study  determines  the  appropriate  storage  method,  the  nature  and  characteristics  of V.  harveyi during storage, and the safe storage time for V. harveyi . This research was conducted at the Fish Health Laboratory using  V.  harveyii  sourced  from  BBRBAP  Maros.  This  study  lasted  for  3  months,  using  4  types  of  storage media,  namely,  sterile  distilled  water,  TSB  media,  solid  media,  and  glycerol  at  -20°C.  Observations  of changes in physical properties of V. harveyi were carried at the 2 nd week, 4 th week, 6 th week and 8 th week of storage.  The  results  showed  that  in  the  2 nd week  of  storage  there  was  no  change  in  the  shape  of  the colonies, the colonies looked stable. single and diffuse. However, in the 4th to 8th week of storage there was a change in the shape of the spread of the colony. Colonies appear united, widen and thickened. The next observation is the nature and characteristics of the cells. Different storage conditions did not affect the shape and color absorption of V. harveyi cells during storage. Cells of V. harveyi remain in the form of smooth rods resembling commas and absorb the light pink so that they appear very fine cell shapes. Observation of the type of cell coupling in all storage media at 2 nd week, there was no significant difference. V harveyi bacterial
Fauziah Nurdin et al. | Agrokompleks Vol. 21 No.2 Edisi Juli 2021
cells remained uniformly  distributed on the staining slide, but at  4 th week, some cells began to bind in two (diploid) and at  8 th week the V harveyi cells were mostly clustered in TSB storage media, solid media and glycerol, whereas in sterile aquadest storage media, few they were seen in clusters and most of them were still scattered singly.
Keywords: bacteria, media, method, storage, V.harveyi

## PENDAHULUAN
Posisi  Indonesia  yang  terletak  di daerah  tropis  merupakan  sumber  biodiversitas yang  sangat  luas,  termasuk  mikroba  jenis bakteri.    Disamping  beragam  jenisnya,  bakteri juga sangat mudah mengalami perubahan sifat dan karakteristik sehingga dapat memunculkan strain baru yang berbeda dengan aslinya.  Hal ini  menjadi  salah  satu  penyebab  yang mempercepat  tumbuh  dan  berkembangnya biodiversitas  tersebut.    Oleh  karena  itu  perlu melakukan koleksi, penyimpanan dan memelihara  bakteri  dengan  tepat,  baik  untuk kebutuhan sehari-hari, untuk jangka menengah maupun  untuk  jangka  panjang  sehingga kemungkinan  untuk  munculnya  strain  baru lebih kecil (Hidayat, et al. 2006)
Penyimpanan  bakteri  dengan  metode yang  tepat  dapat  menjaga  biakan  tetap  hidup, ciri-ciri  genetiknya  tetap  stabil  dan  tidak berubah  serta  hemat  biaya  dan  tenaga. Metode  yang  dipilih  sangat  tergantung  pada sifat  mikroba  dan  tujuan  preservasi  (Elliot, 1975).  Sifat bakteri dapat diketahui melalui ciri- ciri  morfologi,  fisiologi  dan  biokimia  serta kemampuan bakteri dapat bertahan hidup pada lingkungan  alaminya  maupun  pada  lingkungan buatan.
Tujuan  koleksi  dan  preservasi  bakteri mencakup jangka pendek dan jangka panjang. Preservasi  jangka  pendek  dilakukan  untuk keperluan  rutin  sehari-hari  misalnya  untuk kegiatan  praktikum  mahasiswa  dan  kegiatan penelitian.    Preservasi  jangka  panjang dilakukan dalam kaitannya dengan koleksi dan konservasi  jangka  panjang  plasma  nutfah bakteri, sehingga apabila suatu saat diperlukan dapat  diperoleh  kembali  sesuai  dengan  sifat dan karakteristik semula ( http://hg.wustl.edu/hdk_lab_
manual/plasmid/plsmid02.html ).
Penentuan  metode  yang  tepat  untuk penyimpanan  dan  pengawetan  bakteri  baik jangka  pendek,  menengah  maupun  jangka panjang  memerlukan  penelitian  yang  rumit,
jangka  waktu  yang  lama,  pemantauan  serta dana yang besar.  Hal ini sangat terkait dengan tujuan  utama  preservasi,  yaitu  (1)  mereduksi atau  mengurangi  laju metabolisme  dari  bakteri hingga sekecil mungkin dan dapat mempertahankan  viabilitas  (daya  hidupnya) dan  (2)  memelihara  sebaik  mungkin  biakan bakteri,  sehingga  didapatkan  angka kehidupan (survival)  yang  tinggi  dengan  perubahan  sifat dan karakteristik yang minimum.
Saat  ini  berbagai  metode  preservasi bakteri  secara  umum  telah  tersedia  dalam berbagai buku referensi, namun referensi untuk setiap  spesies  bakteri  masih  sangat  terbatas. Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian/kajian  metode  yang  tepat  untuk penyimpanan  bakteri  tertentu  baik  jangka pendek,  menengah  maupun  jangka  panjang, misalnya bakteri V. harveyi. Bakteri ini paling sering dijumpai dalam dunia perikanan, baik di perikanan air tawar, air payau maupun  air asin. Bahkan bakteri ini merupakan salah satu bahan yang sering digunakan dalam dunia pendidikan baik  sebagai  bahan  praktikum  maupun  bahan penelitian, sehingga intensitas kebutuhannya di laboratorium  sangat  tinggi.    Oleh  karena  itu perlu dilakukan kajian metode penyimpanan V. harveyi yang  tepat  sehingga  ketersediaannya di laboratorium selalu berkesinambungan serta ciri-ciri genetiknya selalu terjaga.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  metode  penyimpanan  yang  tepat bagi bakteri V. harveyi pada jenis media yang berbeda,  mengetahui  sifat  dan  karakteristik bakteri V. harveyi selama masa penyimpanan, dan  mengetahui  lama  waktu  penyimpanan yang  aman  bagi  bakteri V.  harveyi dari perubahan sifat, ciri-ciri genetik serta viabilitasnya.

## BAHAN DAN METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian ini berlangsung selama 3 bulan yang dilaksanakan  di  Laboratorium  Kesehatan  Ikan
Fauziah Nurdin et al. | Agrokompleks Vol. 21 No.2 Edisi Juli 2021
Jurusan Budidaya Perikanan
Politeknik Pertanian Negeri Pangkep.

## Bahan  dan Alat
Bakteri  uji  adalah V.  harveyi merupakan koleksi  Balai  Besar  Riset  Budidaya  Air  Payau Maros.    Media  untuk  biakan  bakteri  adalah aquadest steril, TSB, media solid, dan gliserol. Media uji fisika dan kimia bakteri adalah media MIO,    OF,  oksidatif  disk,  H 2 O 2 ,  KOH,  safranin, kristal  violet,  lugol,  alkohol,  MR-Vp  dan  TSIA. Alat  dan  bahan  untuk  mengkultur/  mengisolasi bakteri  adalah  jarum  ose,  cawan  petri,  tabung reaksi,  bunsen,  eppendorf,  laminar  air  flow, inkubator, oven, shaker, refrigerator, microwave,  kapas,  tisu,  cling  wrap,  aluminium foil, label dan spidol permanen.
Prosedur Penelitian a.     Inokulasi   Bakteri V.  harveyi Langkah awal adalah menginokulasi bakteri V.  harveyi pada  media  TSA/TCBS selama  24-48  jam  yang  bertujuan  untuk meremajakan  bakteri.    Selanjutnya  biakan siap  untuk  dikultur  pada    media  sesuai dengan perlakuan.
Percobaan  penyimpanan  biakan bakteri V.  harveyi dilakukan  dengan metode  jangka  pendek  dan  menengah,  5 perlakukan  (jenis  media  berbeda)  yaitu  1) aquades  sterill,  2)  media  TSB,  3)  media solid,  dan  4)  gliserol.    Masing-masing perlakuan  dilakukan  pengulangan  5  kali dengan  waktu  pengamatan  hari  ke-0, minggu  ke-2,  minggu  ke-4,  minggu  ke-6, dan  minggu  ke-8,  pengamatan  populasi, parameter  sifat  fisika,  kimia  dan  viabilitas bakteri V. harveyi dilakukan disetiap waktu pengamatan.
b.  Penyimpanan  Jangka  Pendek  dan Menengah
Bakteri V.  harveyi yang  berumur 24-48  jam  disebar  pada  media  aquades steril,  media  TSB,  media  solid,  dan gliserol  dengan  bantuan  jarum  ose. Dilakukan pengulangan 5 kali setiap jenis media  penyimpanan.    Diinkubasi  selama 24-48  jam,  Populasi V.  harveyi dihitung sebelum penyimpanan
dengan
menggunakan metode TPC.  Selanjutnya semua perlakuan disimpan pada freezer - 20°C.    Pengamatan  dilakukan  pada minggu  ke-2,  minggu  ke-4,  minggu  ke-6, dan minggu ke-8 umur penyimpanan.

## c. Pengamatan Parameter  Uji Sifat fisika bakteri;
Pengamatan  sifat  fisika  bakteri  berupa morfologi bakteri yaitu pengamatan koloni (bentuk,  warna,  tepi  dan  elevasi),  bentuk sel  dan tipe  penggandengan  sel.    Tahap awal  yang  dilakukan  adalah  pewarnaan gram  bakteri  yang  kemudian  dilanjutkan dengan pengamatan secara mikroskopis.

## Sifat kimia bakteri;
Melakukan uji biokimia yakni : uji KOH, uji katalase, uji motil, uji indol, uji ornithin, uji oksidatif/fermentatif,  uji  gula-gula,  uji gelatinase, H2S.
Viabilitas bakteri; Mengkultur bakteri V. harveyi dari setiap perlakuan  pada  media  TSA/BHIA    untuk mengetahui daya tahan hidupnya dengan menghitung    jumlah  koloni  yang  tumbuh menggunakan metode TPC.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  perlakuan penyimpanan  jangka  pendek  dan  menengah, berupa sifat, karakteristik dan viabilitas bakteri . V  harveyi dianalisis  secara  deskriptif  dengan membandingkan  data  dari  setiap  tahap penelitian. Sedangkan data  populasi  bakteri pada setiap perlakuan dianalisis secara statistik dengan SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengamatan  tipe  penggandengan  sel dilakukan setiap 2 minggu masa penyimpanan. Pengamatan  ini  dilakukan  untuk  memantau penyebaran dan penggadengan sel V. harveyi . Hasil  pengamatan  tipe  penggandengan  sel V. harveyi selama  masa  penyimpanan  dapat dilihat pada Tabel 1 sebagai berikut.
Fauziah Nurdin et al. | Agrokompleks Vol. 21 No.2 Edisi Juli 2021
Tabel 1.  Tipe penggandengan sel bakteri V. harveyi
No. Kode perlakuan Waktu pengamatan hari ke-0 Minggu ke-2 Minggu ke-4 Minggu ke-6 Minggu ke-8 1 FA (aquadest steril) Menyebar tunggal (haploid) Menyebar tunggal (haploid) Menyebar tunggal (haploid) Beberapa sel berikatan dua (diploid) Sebagian kecil bergerombol 2 FB  (TSB) Menyebar tunggal (haploid) Menyebar tunggal (haploid) Menyebar tunggal (haploid) Beberapa sel berikatan dua (diploid) Sebagian besar bergerombol 3 FC  (media solid) Menyebar tunggal (haploid) Menyebar tunggal (haploid) Menyebar tunggal (haploid) Beberapa sel berikatan dua (diploid) Sebagian besar bergerombol 4 FD (gliserol) Menyebar tunggal (haploid) Menyebar tunggal (haploid) Menyebar tunggal (haploid) Beberapa sel berikatan dua (diploid) Sebagian besar bergerombol
Pengamatan  tipe  penggandengan  sel pada semua media penyimpanan pada minggu ke-0  hingga  minggu  ke-4,  tidak  banyak mengalami  perubahan.    Sel  bakteri V.  harveyi tetap  menyebar  tunggal  (haploid)  merata  di slide  pewarnaan,  namun  pada  minggu  ke-6 nampak beberapa sel mulai berikatan dua atau dikenal  dengan  istilah  diploid.    Pada  minggu ke-8  sel V.  harveyi sebagian  besar bergerombol  pada  media  penyimpanan  TSB, media  solid  dan  gliserol,  sedangkan  pada media  penyimpanan  aquadest  sterill  hanya sebagian kecil yang bergerombol dan sebagian besar  masih  menyebar  tunggal.    Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa semua jenis media  penyimpanan  mampu  mempertahankan tipe  penggandengan  sel  hingga  minggu  ke-4 masa  penyimpanan,  namun  pada  minggu selanjutnya  mulai  nampak  perubahan  besar yaitu sebagian besar sel V. harveyi bergerombol.
Gliserol  memiliki  daya  larut  yang  tinggi dengan  media  cair  tryptic  soy  broth  (TSB) walaupun  pada  kondisi  suhu  dingin,  memiliki daya  penetrasi  sampai  ke  dalam  sel  dan memiliki  daya  toksisitas  yang  rendah.  Menurut Herdis et al. (2003), gliserol mampu mencegah pengumpulan molekul-molekul air dan kristalisasi  es  pada  titik  beku  larutan.  Gliserol juga  akan  memodifikasi  kristal  es  yang terbentuk  di  dalam  medium  pembekuan sehingga  menghambat  kerusakan  sel  secara mekanis.
Penyimpanan bakteri V. harveyi selama 8 minggu pada suhu -20°C pada media
aquadest  steril,  media  TSB,  media  solid  dan gliserol  menunjukkan  bahwa  terdapat  korelasi antara satu parameter uji dengan parameter uji lainnya.    Misalnya tipe penggandengan  sel V. harveyi mengalami  perubahan  pada  minggu ke-6 hingga  ke-8 masa penyimpanan di semua jenis  media.    Sebagian  besar    mulai  berikatan dua  (diploid)  dan  bahkan  beberapa  yang membentuk  kelompok.    Hal  ini  berkaitan dengan  perubahan  yang  terjadi  pada  bentuk, tipe  pertumbuhan  dan  penyebaran  koloni V harveyi .    Pada  minggu  yang  sama  masa penyimpanan, koloni yang terbentuk mulai tidak menyebar secara haploid (tunggal), akan tetapi beberapa  koloni  berkumpul  dan  bahkan berkelompok  sehingga  koloni  membesar  dan menebal.      Hubungan  korelasinya  adalah,  sel bakteri V.  harveyi mulai  tidak  mampu  berdiri sendiri  setelah  disimpan  pada  suhu  -20°C minimal  6  minggu,  sehingga  sel  lebih  suka berkelompok untuk mempertahankan kehidupannya.    Dengan  kecenderungan  sel bakteri V.  harveyi berkelompok  menyebabkan penampakan  koloni  juga  secara  berkelompok. Hal  inilah  yang  menyebabkan  semakin  lama masa  penyimpanan V.  harveyi pada  suhu  - 20°C  maka  penyebaran  sel  semakin  sedikit dan  lebih  cenderung  untuk  berkelompok, sehingga  tampaklah  koloni  yang  tumbuh  juga cenderung  berkumpul  sehingga  membentuk koloni  yang  besar  dan  menebal  guna mempertahankan  keberlangsungan  hidupnya yang cenderung semakin menurun.
Fauziah Nurdin et al. | Agrokompleks Vol. 21 No.2 Edisi Juli 2021
Bentuk, Tipe Pertumbuhan dan Penyebaran Koloni V. harveyi
Koloni  bakteri  merupakan  sekumpulan bakteri sejenis yang membentuk satu kesatuan. Koloni V.  harveyi yang  tumbuh  pada  media umum  TSA  plus  NaCl  umumnya  berbentuk bulat kecil-kecil berwarna kekuningan, cembung,  permukaan  mengkilap,  sedikit transparan  dan  menyebar  secara  merata (haploid)  di  seluruh  permukaan media.    Koloni V. harveyi mengalami perubahan pertumbuhan dan  penyebaran  di  akhir  masa  penyimpanan. Koloni  lebih  cenderung  berkumpul  atau berkelompok.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa bentuk dan tipe pertumbuhan koloni V. harveyi pada semua jenis media uji penyimpanan tetap berwarna  kuning  muda,  berbentuk  bulat  dan menyebar secara terpisah-pisah hingga minggu
ke-4  masa  penyimpanan.    Kemudian  pada minggu ke-6 dan seterusnya mulai terlihat ada perubahan  penyebaran  koloni.    Koloni  lebih cenderung  berkumpul  dan  menebal  sehingga tidak  nampak  jelas  bentuk  asli  dari  koloni V. harveyi .    Hal  ini  terjadi  kemungkinan disebabkan karena sel V. harveyi tidak mampu berdiri  sendiri  pada  suhu  dingin  lebih  dari  4 minggu.    Perubahan  penyebaran  koloni  yang terjadi  pada  minggu  ke-6  berkorelasi  dengan perubahan  yang  terjadi  pada  bentuk  dan  tipe penggandengan sel, dimana pada minggu ke-6 masa  penyimpanan,  sel V.  harveyi mulai berikatan dua dan bahkan cenderung berkumpul atau bergerombol. Hasil pengamatan  pertumbuhan  dan  penyebaran koloni  dapat dilihat pada Tabel 2 berikut ini.
Tabel 2.  Bentuk, tipe pertumbuhan dan penyebaran koloni V harveyi No. Kode perlakuan Waktu pengamatan Hari ke-0 Minggu ke-2 Minggu ke-4 Minggu ke-6 Minggu ke-8 1 FA (aquadest steril) Koloni bulat kecil berpisah Koloni bulat kecil berpisah Koloni bulat kecil berpisah Koloni berkumpul dan menebal Koloni berkumpul, melebar di permukaan cawan dan menebal 2 FB  (TSB) Koloni bulat kecil berpisah Koloni bulat kecil berpisah Koloni bulat kecil berpisah Koloni berkumpul dan menebal Koloni berkumpul, melebar di permukaan media dan menebal 3 FC  (media solid) Koloni bulat kecil berpisah Koloni bulat kecil berpisah Koloni bulat kecil berpisah Koloni berkumpul dan menebal Koloni berkumpul, tidak melebar dan menebal 4 FD  (gliserol)  Koloni bulat kecil berpisah Koloni bulat kecil berpisah Koloni bulat kecil berpisah Koloni berkumpul dan menebal Koloni berkumpul dan menebal
Sifat Kimia Sel V. harveyi
Pengamatan  sifat  kimia  selama  masa penyimpanan  perlu  dilakukan,  untuk  menjaga keutuhan sifat kimia dan karakteristik bakteri V. harveyi. Hasil  uji  biokimia  dari  bakteri V.
harveyi adalah  hasil  positif  pada  uji    katalase dan  oksidase,  bahkan    pada  penyimpanan aquadest  steril  menunjukkan  sifat  oksidase yang  sangat  kuat  yang  diberi  tanda  (++).    Uji KOH 3 memberi  hasil  negatif  yang memperkuat
hasil  uji  reaksi  gram      (-).  Pada  uji  indol menunjukkan  hasil  positif  dan  bersifat  motil yang  ditandai  dengan  pergerakan  bakteri secara  horizontal  dan  vertikal  ke  permukaan media  MIO.    Sementara  itu,  bila  diujikan  pada media Triple Sugar Iron Agar (TSIA), hasil yang muncul adalah bagian atas ( slant ) menunjukkan  warna  merah  yang  berarti
bersifat  basa,  dan  bagian  bawah  ( butt ) berwarna  kuning  yang  berarti  bersifat  asam, dan tidak  ada terbentuk gas dan H 2 S. Pada uji ornitin dekarboksilase V. harveyi memberi hasil positif.    Hasil  uji  kimia kemudian  dibandingkan dengan  sifat  kimia  bakteri  bakteri V.  harveyi berdasarkan Austin & Austin (1994).
Tabel 3.  Hasil uji kimia selama masa penyimpanan
No Kode perlakuan Waktu pengamatan Reaksi Gram KOH 3% Katal ase Oksida se Motil  Indol Orni thin OF  H 2 S  Gas Gel atin ase TSIA 1 FA 0  Minggu Gram - + + ++ + + + F - - + K/A 2  Minggu Gram - +
+ ++ + + + F K/A 4  Minggu Gram - +
+ ++ + + + F - - + K/A 6  Minggu Gram - +
+ ++ + + +
F (L) - - + K/A 8 Minggu Gram - +
+ ++ + + + F (L) - - + K/A 2 FB 0  Minggu Gram - + + + + + + F - - + K/A 2  Minggu Gram - + + + + + + F - - + K/A 4  Minggu Gram - + + + + + + F - - + K/A 6  Minggu Gram - + +
+  (L) + + + F (L) - - + K/A 8 Minggu Gram - +
+ ++ + + + F (L) - - + K/A 3 FC 0  Minggu Gram - + + + + + + F - - + K/A 2  Minggu Gram - +
+ + + + + F - - + K/A 4  Minggu Gram - + + + + + + F - - + K/A 6  Minggu Gram - + + + + + + F (L) - - + K/A 8 Minggu Gram - +
+ ++ + + + F (L) - - + K/A 4 FD 0  Minggu Gram - + + + + + + F - - + K/A 2  Minggu Gram - +
+ + + + + F - - + K/A 4  Minggu Gram - +
+ + + + + F - - + K/A 6  Minggu Gram - +
+ + + + + F (L) - - + K/A 8 Minggu Gram - +
+ ++ + + + F (L) - - + K/A
Fauziah Nurdin et al. | Agrokompleks Vol. 21 No.2 Edisi Juli 2021
Sifat  kimia  bakteri V.  harveyi selama penyimpanan tidak mengalami perubahan yang mendasar.    Hanya  pada  uji  O/F  sedikit mengalami  perubahan  pada  minggu  ke-6  dan ke-8,  dimana  hasil  uji  menunjukkan  sifat fermentasi  dari  bakteri V.  harveyi nampak lemah  yang  ditandai  dengan  warna  media  OF yang berwarna kuning lemah.
Tingkat Kelangsungan Hidup Bakteri V. harveyi
Tingkat  kelangsungan  hidup  bakteri V. harveyi merupakan  kemampuan  suatu V. harveyi untuk  mempertahankan  kelulusan hidupnya.    Karena  itu  viabilitas  erat  kaitannya dan  bergantung  pada  perjuangan/tindakan perjuangan  yang  dilakukan  oleh V.  harveyi
untuk  tetap  bertahan  hidup  dan  mampu bersaing hidup dengan bakteri lainnya.
Pengamatan  keberlangsungan  hidup bakteri V.  harveyi sangat  perlu  dilakukan  agar sifat  dan  karakteristiknya  tetap  terjaga. Parameter yang digunakan untuk mengukurnya  adalah  dengan  menghitung populasinya  menggunakan  metode  Angka Lempeng Total (ALT).     Perhitungan  dilakukan secara  berkala  yaitu  jangka  pendek  dan menengah.    Penyimpanan  jangka  pendek meliputi  2-4  minggu  sedangkan  jangka menengah  meliputi  4-8  minggu.    Setiap  2 minggu kembali dilakukan perhitungan populasi V. harveyi untuk melihat tingkat kemampuannya  bertahan  hidup  pada  suhu penyimpanan -20°C sebagaimana yang terlihat pada Tabel 4 berikut ini.
Tabel 4.  Keberlangsungan hidup bakteri V. harveyi selama masa penyimpanan pada suhu -20°C
No Perlakuan Pengamatan populasi sel bakteri (cfu/ml) 0 minggu 2 minggu 4 minggu 6 minggu 8 minggu 1 Fa 51,000,000 38,000,000 29,900,000 16,700,000        3,913,636 2 Fb 57,000,000 45,600,000 32,600,000 20,500,000   5,831,818 3 Fc 33,000,000 20,900,000 10,900,000 3,200,000        1,250,000 4 Fd 67,000,000 49,700,000 37,000,000 19,000,000        1,440,000
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa populasi V.  harveyi mengalami  penurunan selama  masa  penyimpanan.    Kepadatan populasi V. harveyi pada hari pertama berkisar pada  33-67  x10 7 cfu/mL.    Selanjutnya
mengalami penurunan hingga pada minggu ke- 8 masa  penyimpanan.   Kepadatan  populasi V. harveyi berkisar  pada  1,1-3,9  x10 6 cfu/mL.
Grafik  prosentase  penurunan  populasi  bakteri
V. harveyi dapat dilihat pada Gambar 1.
Fauziah Nurdin et al. | Agrokompleks Vol. 21 No.2 Edisi Juli 2021

## Gambar 1.  Grafik penurunan populasi bakter i V. harveyi
Populasi  bakteri V.  harveyi pada  minggu ke-2 mengalami penurunan  sekitar 20-30%  di semua  media  penyimpanan.    Kemudian  pada minggu  ke-4  masa  penyimpanan,  penurunan populasi  mikroba V.  harveyi sekitar  40-60% dan  pada  minggu  ke-6  sekitar  60-90%. Penurunan  tertinggi  terjadi  pada  media penyimpanan solid yaitu 67% pada minggu ke- 4 dan 90% pada minggu ke-6.  Kemudian pada minggu  ke-8  masa  penyimpanan,  penurunan mencapai  ±90%  pada  semua  jenis  media penyimpanan.  Prosentase penurunan dihitung dari  total  mikroba  pada  minggu  ke-0. Kepadatan  populasi  bakteri V.  harveyi pada minggu ke-0 berada pada 10 7 cfu/ml dan pada minggu  ke-8  masa  penyimpanan,  kepadatan bakteri V.  harveyi berada  pada  10 6 cfu/mL. Penurunan  yang  terjadi  pada  semua  jenis media  penyimpanan,  besar  kemungkinan disebabkan  oleh  ketidakmampuan  bakteri V. harveyi untuk mempertahankan hidupnya pada suhu  -20 ° C  dalam  jangka  waktu  yang  cukup lama.  Penurunan populasi dari kepadatan 10 7 cfu/ml  menjadi  10 6 cfu/mL  selama  8  minggu masa  penyimpanan,  masih  dianggap  berada pada  nilai  kewajaran.    Kepadatan  10 6 cfu/mL masih tergolong jumlah yang cukup tinggi untuk populasi bakteri secara umum.
Keberlangsungan hidup bakteri V. harveyi selama  masa  penyimpanan  terus mengalami  penurunan.    Pada  minggu  ke-8 masa  penyimpanan,  penurunan  mencapai  ±
90%  pada  semua  jenis  media.    Murwantoko (2008)  menyatakan  bahwa  tidak  ada  teknik penyimpanan  yang  bisa  merecovery  100% bakteri  yang  disimpan.  Metode  penyimpanan menghasilkan  tingkat  recovery  yang  berbeda- beda,  tergantung  pada  spesies  bakteri  yang disimpan.Rendahnya  viabilitas  bakteri  yang didapatkan pada penelitian ini dipengaruhi oleh faktor nutrisi, kadar/konsentrasi bahan preservasi  (penyimpanan)  dan  suhu.  Waluyo (2012),  menyatakan  bahwa  sel  sangat memerlukan nutrien untuk mensintesis protoplasma  sebagai  sumber  karbon,  sumber nitrogen,  metabolit  penting  (vitamin)  dan  juga asam  amino.  Bakteri  tumbuh  pada  lingkungan yang  sesuai,  apabila  lingkungannya  tidak optimal  maka  pertumbuhan  bakteri  akan berjalan  lambat,  tidak  tumbuh  atau  bahkan mati.
Persentase  viabilitas V.  harveyi tertinggi berada  pada  media  penyimpanan  TSB.Media TSB  mengandung  kasein  dan  pepton  kedelai yang  menyediakan  asam  amino dan  substansi nitrogen  lainnya  yang  membuat-nya  menjadi media bernutrisi untuk bermacam mikroorganisme.  Dextrosa  adalah  sumber energi  dan  natrium  klorida  mempertahankan kesetimbangan  osmotic  (Anonim,  2014 a ). Medium  Nutrient  Broth  merupakan  medium yang memiliki kegunaan sebagai medium untuk menumbuhkan  bakteri  sama  seperti  medium NA (Anonim, 2014 b ).
- 10.000.000 20.000.000 30.000.000 40.000.000 50.000.000 60.000.000 70.000.000 80.000.000 0 2 4 6 8 PENGAMATAN POPULASI BAKTERI (SEL/ML) FA FB FC FD P op ul as i v.ha rv ey ii (CP U/m l)
Fauziah Nurdin et al. | Agrokompleks Vol. 21 No.2 Edisi Juli 2021
Persentase  viabilitas  terendah  berada pada  media  penyimpanan  aquades  steril. Aquades  steril  tidak  mampu  menyediakan nutrisi  yang  cukup  bagi V.  harveyi dalam jangka  waktu  yang  lama.    Beberapa  jenis bakteri,  terutama  yang  berbentuk  batang  dan bereaksi  Gram  negatif  seperti  Pseudomonas dapat  disimpan  cukup  lama  dalam  akuades steril  pada  suhu  ruang  atau  suhu  10-15 ° C.
Tidak  semua  bakteri  dapat  disimpan  dengan baik  menggunakan  cara  ini,  misalnya  pada anggota  genus  Pseudomonas,  Agrobacterium, dan Curtobacterium. Pada kondisi penyimpanan  ini  bakteri  yang  disimpan  masih berpeluang  tumbuh  dengan  lambat,  sehingga tidak  dapat  dijamin  stabilitas  genetiknya  untuk jangka panjang.  Penyimpanan dengan  cara  ini juga  memungkinkan  terjadinya  kontaminasi. Oleh  karena  itu,  cara  ini  lebih  dianjurkan sebagai  alternatif  penyimpanan jangka sedang atau sebagai pendamping penyimpanan jangka panjang  (De  Vay  &  Schnathorst,  1963; McGinnis et al ., 1974).

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa terdapat  korelasi  antara  tipe  penggandengan sel,  type  penyebaran dan pertumbuhan koloni, serta  viabilitas V.  harveyi .    kecenderungan  sel untuk  berkelompok,  menyebabkan  koloni  yang tumbuh  juga  cenderung  berkumpul  sehingga membentuk  koloni  yang  besar  dan  menebal guna  mempertahankan  viabilitasnya  yang cenderung semakin menurun.
Sifat  kimia  bakteri V.  harveyi selama masa penyimpanan tidak mengalami perubahan  yang  mendasar.    Hanya  pada  uji O/F sedikit mengalami perubahan pada minggu ke-6  dan  ke-8,  dimana  hasil  uji  menunjukkan sifat fermentasi dari bakteri V. harveyi nampak lemah  yang  ditandai  dengan  warna  media  OF yang berwarna kuning lemah. Viabilitas  bakteri V.  harveyi mengalami penurunan  secara  linier  dengan  waktu penyimpanan.    Populasi  bakteri V.  harveyi pada awal penyimpanan sekitar 10 7 cfu/mL dan setelah disimpan selama 8 minggu pada suhu - 20°C populasi menurun menjadi 10 6 cfu/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim. (2014 a ). Media Pertumbuhan Mikroba. www.asalkamutahuaja . blogspot.com.Diakses tanggal 20
Februari 2014.
Anonim.  (2014 b ).  Komposisi  Nutrien  Agar  dan Nutrient Broth. www.dianaph.blogspot.com.Diakses tanggal 16 Januari 2014.Ariwulan, DR. 2013.  Metode  Penyimpanan  Mikroba. http://nightray13-kuro.blog- spot.com/2013/01/boiteknologireviewt ugas2.html.Diakses tanggal
4
Nopember 2013 .
Austin, B., & Austin, D.A. (1994). Bacterial fish pathogens: disease in farmed and wild fish. John Wiley and Sons. Chichester.
364 p.
De  Vay,  J.E.  &  Schnathorst,  W.C.  (1963). Single-cell  isolation  and  preservation of  bacterial  cultures.  Nature,  London 1999. p. 775-777
Elliot, R.F. (1975). Methods for preserving mini cultures  of  fungi  under  mineral  oil. Laboratory Practice. 24:751.
Herdis,  Kusuma  I.M.,  &  Surachman,  R.  E. (2003).  Optimalisasi  Kualitas  Semen Beku Domba Garut dengan Pemberian Glyserol. Prosiding Seminar  Teknologi  untuk  Negeri,  Vol II. Bogor. Hidayat,  N.,  Masdiana,  C.P,  &  Sri  Suhartini. (2006). Mikrobiologi Industri.
Yogyakarta: Andi Offset.
Machmud, M. (2001). Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Buletin AgroBio. (4): 24-32.
McGinnis,    M.R.,    Padhye,  A.A.,  &  Ajello,  L. (1974).    Storage    of    stock    culture    of filamentous    fungi,    yeast    and    some aerobic    actinomycetes    in    strerile distilled  water.  Applied  Microbiology 28:218-222
Murwantoko.  (2008).  Preservasi  Bakteri.
Pelatihan Metode Standar
Pemeriksaan  HPIK.  21-26  April  2008.
Yogyakarta
Waluyo,  L.  (2012).  Mikrobiologi  Umum.  UMM Press. Malang.