## Studi Pengaruh Hipertiroidisme Terhadap Siklus Estrus Dan Gambaran Histologi Ovarium Pada Tikus Betina (Rattus Norvegicus)
Shinta Dwi Riestanti 1) , Agung Pramana Warih Marhendra 2) , Aris Soewondo 3)
1), 2), 3) Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya, Malang . Email : 1) shintadr92@gmail.com , 2) junstone21@yahoo.com & 3) soewondo@ub.ac.id

## ABSTRAK
Hipertiroidisme  merupakan  salah  satu  penyakit  yang  disebabkan  oleh  jumlah  hormon  tiroid yang  disekresikan  oleh  kelenjar  tiroid  terlalu  tinggi.  Hipertiroidisme  banyak  terjadi  pada  wanita  sebab selama  proses  kehamilan,  janin  yang  sedang  berkembang  membutuhkan  asupan  yodium  (iodin)  yang lebih.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  induksi  Natrium  iodin  sebagai penyebab Hipertiroidisme pada siklus estrus tikus betina (Rattus norvegicus) beserta gambaran histologi ovarium tikus betina (Rattus norvegicus). Metode yang dilakukan yaitu dengan melakukan induksi secara berlebih Natrium Iodin (NaI) yang menyebabkan Hipertirodisme kemudian dilakukan pengamatan siklus estrus  dan  pengamatan  secara  histologis  melalui  gambaran  histologi  ovarium.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa pengaruh Hipertiroidisme pada tikus betina menyebabkan siklus estrus tikus betina menjadi  tidak  normal  dan  berpengaruh  terhadap  fase  estrus  sedangkan  gambaran  histologis  ovarium pewarnaan  Hematoxylin-eosin  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  antara  tikus  kontrol  dengan  tikus hipertiroid.
Kata kunci :  Hipertiroidisme, siklus estrus, ovarium.

## ABSTRACT
Hyperthyroidism is a disease caused by the amount of thyroid hormone secreted by the thyroid gland  is  too  high.  Hyperthyroidism  more  common  in  women  because  during  pregnancy,  the  developing fetus requires the intake of iodine more. The purpose of this study was to determine the effect of induction sodium  iodine  as  a  cause  of  hyperthyroidism  on  the  estrous  cycle  and  histological  structure  of  ovary  of female  rats  (Rattus  norvegicus).  Hyperthyroid  of  female  rats  induced  by  excessive  sodium  iodine  which causes Hipertirodisme. Parameter observed estrus cycle and histological structure of ovary of female rats (Rattus norvegicus). Section of ovary was staining by Hematoxylin-eosin. The results showed that the effect of hyperthyroidism  in female rats  cause  estrous cycle  of  female rats  become abnormal  and influence the length  in  estrous  phase.  Histological  structure  of  ovary  of  female  rats  (Rattus  norvegicus)  showed  no difference between the control and hyperthyroid rats.
Keywords: Hyperthyroidism, estrous cycle, the ovary

## PENDAHULUAN
Hipertiroidisme  merupakan  penyakit  yang terjadi  akibat  adanya  gangguan  sistem  endokrin karena peningkatan produksi hormon tiroid yang berlebihan.  Penyakit  hipertiroidisme  banyak ditemukan  pada  seluruh  populasi  sebanyak  2% pada  wanita  dan  0,2%  pada  pria  melalui munculnya  kasus  pertahun  dengan  jumlah sebanyak  dua  puluh  orang  penderita  pada  tiap satu  juta populasi  [1].  Sistem  endokrin  di  dalam tubuh  memiliki  fungsi  mengatur  aktivitas  kimia yang  terjadi  didalam  tubuh.  Aktivitas  kimia  di dalam  tubuh  terjadi  pada  berbagai  organ endokrin  sebagai  respon  cepat  hubungan  antara kelanjar  hipofisis  dengan  hipotalamus  yang
memiliki  respon  dalam  penyesuaian  kondisi ekternal tubuh. Gangguan  sistem endokrin dapat disebabkan  oleh  defisiensi  salah  satu  hormon akibat  kurangnya  zat  perangsang  (release substance),  proses  jaringan  kelenjar  atau  organ sasaran  dalam  sistem  endokrin  tidak  memberi respon.  Sistem  endokrin  dalam  tubuh  manusia diantaranya  yaitu  kelenjar  tiroid,  paratiroid, kelenjar  adrenal,  pankreas  dan  kelenjar  gonad Delf dan Manning, 1996[2].
Kelenjar  tiroid  mengeluarkan  hormon Triiodotironin  (T3)  dan  Tiroksin  (T4)  yang memiliki  fungsi  dalam  mengatur  metabolisme tubuh,  mengatur  sensitifitas  tubuh  terhadap hormon    lain,  memiliki  peran  penting  dalam
mengontrol  perkembangan  embrio/fetus,  otak, jantung, dan paru-paru. Hormon-hormon tersebut juga  memiliki  peran  aktif  yang  sangat  penting dalam  mekanisme  pencernaan,  termoregulasi, pertumbuhan,  fungsi  otot  dan  daya  tahan  tubuh [3].  Peningkatan  kadar  hormon  tiroid  dapat menyebabkan  paparan  berlebihan  pada  berbagai jaringan  tubuh  yang  berkaitan  dengan  fungsi hormon  tiroid  dalam  proses  metabolisme  tubuh salah  satunya  terhadap  reproduksi  [4][5]. Penderita  hipertiroid  banyak  ditemukan  pada wanita[1].  Oleh  sebab  itu  pada  penelitian  ini digunakan  tikus  betina  (Rattus  novergicus) dengan model hipertiroid

## METODE PENELITIAN
Pemberian Larutan Natrium Iodin pada Botol Minum
Larutan Natrium iodin dengan konsentrasi 0,05%  [6][7][8]  dilarutkan  dalam  botol  minum 250  ml  secara  ad  libitum  yang  kemudian diberikan  pada  tikus  setiap  hari.  Pengurangan dari  air  minum  larutan  Natrium  iodin  kemudian akan  diakumulasikan  sebagai  dosis  induksi terhadap  hewan  coba.  Selanjutnya  dilakukan pembedahan  terhadap  hewan  perlakuan  pada minggu  ke  2,4,6  dan  8  untuk  diambil  organ ovarium  dan  dilakukan  pengamatan  secara histologis.
Pengukuran Kadar Thyroid Stimulating
Hormone  (TSH)  dan  Hormon  Tiroksin  (T4)
menggunakan Metode ELISA
Pengukuran  kadar  Thyroid  Stimulating
Hormone (TSH) dilakukan menggunakan metode ELISA (Enzyme linked immunoabsorbant) dengan  Rodent  TSH  ELISA  kit  test  (lot.no. 030413)  dan  Rodent  T4  ELISA  kit  test  (lot.no. 030413). Tahapan ini dilakukan untuk mengetahui  kondisi  Hipertiroid  pada  hewan coba.
Pengamatan Siklus Estrus Pengamatan  siklus  estrus  dilakukan  setiap hari  dengan  menggunakan  cotton  bud  yang dibasahi dengan air kemudian diulaskan pada sel epitel  vagina  untuk  membuat  preparat  apusan. Pengamatan  siklus  estrus  bertujuan  untuk mengetahui panjang siklus estrus terhadap hewan perlakuan hipertiroidsme.
Pembuatan Preparat Histologi Ovarium Pembuatan preparat diawali dengan melakukan  fiksasi  organ  dengan  menggunakan
formaldehyde  10%  selama  24  jam  kemudian dipindahkan  pada  etanol  70%  selama  24  jam, setelah itu pada etanol 80% selama 2 jam, etanol 90%  selama  20  menit,  etanol  95%  selama  20 menit,  dan  ethanol  absolut  selama  20  menit. Selanjutnya dimasukkan dalam xilol dengan suhu 60-63 o C selama 30 menit. Selanjutnya dilakukkan  embedding  dengan  menggunakan paraffin  cair  sehingga  didapatkan  blok  paraffin berisi  organ  ovarium.  Blok  paraffin  kemudian dipotong dengan menggunakan mikrotom dengan tebal 5µm. Setelah itu pita irisan diambil dengan  kuas  dan  dimasukkan  dalam  air  hangat dengan  suhu  sekitar  38-40 o C  agar  irisan mengembang.  Selanjutnya  irisan  yang  terentang sempurna diletakkan dalam objek glass kemudian dikeringkan diatas hot plate pada suhu 38-40 o C  dan  disimpan  dalam  incubator  selama 24 jam.
Pewarnaan Preparat dengan Metode Hematoxylin-eosin
Proses pewarnaan dilakukan  dengan memasukkan  preparat  dalam  proses  deparafinasi yaitu  menggunakan  xilol  bertahap  1-3  masing masing  selama  5  menit.  Selanjutnya  dilakukan rehidrasi dengan menggunakan alkohol bertingkat  menurun  yaitu  ethanol  absolut,  etanol 95%,  80%,  dan  70%  masing-masing  selama  5 menit. Preparat direndam dalam akuades 5 menit selanjutnya dilakukan pewarnaan dengan menggunakan  Hematoxylin  dengan  dilakukan perendaman  selama  10  menit  setelah  itu  dicuci dengan  tap  water.  Preparat  dimasukkan  dalam pewarna eosin selama 5 menit. Selanjutnya untuk menghilangkan pewarna eosin dilakukan dengan perendaman  apada  akuades  selama  2  menit selanjutnya  dilakukan  tahapan  dehidrasi  dengan menggunakan  alkohol  seri  bertingkat  yaitu  dari 60%, 70%, 80%, 90% dan ethanol  absolut tahap 1-3  masing  masing  selama  1  menit.  Tahapan berikutnya  dilakukan  tahap  clearing  dengan menggunakan  xilol:ethanol  absolut,  dan  xilol tahap  1-2  masing-masing  selama  5  menit. Selanjutnya dilakukan mounting dengan menggunakan entellan.
Analisa Data Menggunakan Software SPSS Data  yang  diperoleh  berupa  data kuantitatif  panjang  fase  estrus  diuji  dengan  Uji Kruskal-Wallis dan Mann-Whitney  dengan menggunakan software SPSS 16.0  for Windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengamatan  Hormonal  melalui  Kadar  TSH dan Tiroksin
Perhitungan  kadar  TSH  dan  tiroksin dengan  menggunakan  ELISA  bertujuan  untuk mengetahui perkembangan hormonal tikus betina sehingga berdasarkan metode ini dapat diketahui bahwa  tikus  perlakukan  hipertiroid  mengalami penurunan  kadar  TSH  sedangkan  pada  kadar tiroksin mengalami peningkatan. Perubahan pada setiap  minggu  yang  berbeda  ditunjukkan  oleh masing-masing  label  perlakuan  yaitu  M2,  M4, M6,  M8.  Label  perlakuan  tersebut  menunjukkan minggu  terhadap  kadar  TSH  dan  Tiroksin.  M2 menunjukkan  Kadar  TSH  dan  tiroksin  pada perlakuan minggu ke 2, M4 menunjukkan Kadar TSH  dan  tiroksin  pada  perlakuan  minggu  ke  4, M6 menunjukkan Kadar TSH dan Tiroksin pada perlakuan minggu ke 6, M8 menunjukkan Kadar TSH dan Tiroksin pada perlakuan minggu ke 8.
Gambar 1. Kadar TSH tikus betina mengalami penurunan bila dibandingkan  dengan kadar awal tikus kontrol
Perlakuan  yang  dilakukan  menunjukkan kadar  TSH  pada  tikus  kontrol  sebesar  0,139 ng/dL,  tikus  M2  sebesar  0,062 ng/dL  sedangkan pada  tikus  M4  mengalami  penurunan  hingga 0,05ng/dL, pada tikus M6 mengalami penurunan kembali  menjadi  0,031  ng/dL  dan  pada  M8 menjadi  0,033  ng/dL.  Kadar  tiroksin  pada  tikus kontrol sebesar 2,9 ng/dL, pada tikus M2 sebesar 1,7  ng/dL  sedangkan  pada  tikus  M4  mengalami peningkatan  menjadi  3,3  ng/dL,  pada  tikus  M6 meningkat  menjadi  4,0  ng/dL  dan  meningkat kembali pada tikus M8 menjadi 4,8 ng/dL.
Hasil  penelitian  menunjukkan  pengukuran kadar  TSH  dan  tiroksin  (T4)  pada  minggu  ke  6 kadar  TSH  menurun  dibandingkan  minggu  ke  4 sedangkan  kadar  tiroksin  (T4)  mengalami peningkatan  dibandingkan  dengan  minggu  ke  4 dan  peningkatan  yang  terlihat  melebihi  kadar
tiroksin (T4) tikus perlakuan kontrol. Peningkatan  kadar  hormon  T3  dan  T4  di  dalam aliran darahnmampu mempengaruhi metabolisme tubuh [4].
Gambar  2  Kadar T4 tikus betina mengalami peningkatan bila dibandingkan dengan kadar awal tikus kontrol.
Perhitungan Total  Kadar Natrium Iodin Hasil  induksi  Natrium  Iodin  (NaI)  yang telah  dilakukan  selama  8  minggu  pada  tikus perlakuan hipertiroid dilakukan perhitungan total kadar  iodin    yang  masuk  kedalam  tubuh  tikus maka  diketahui  kadar  iodin  yang  dikonsumsi oleh tikus perlakuan rata-rata pada 15,8 mg/l atau 15800  µg/l  hingga  17,1  mg/l  atau  17100  µg/l. Jumlah  asupan  iodin  dalam  tubuh  manusia normal  hanya  0,1-1,5  mg  (100-150  mikrogram) perhari [9]. Penelitian yang dilakukan menunjukkan  pada  M4  tikus  perlakuan  minggu ke 4 memiliki kadar tiroksin (T4) yang melebihi normal,  tikus  minggu  ke  6  memiliki  kadar tiroksin  yang  lebih  tinggi  sehingga  hal  ini menunjukkan  tikus  telah  mengkonsumsi  iodin berlebih dan semakin meningkat setiap minggunya  kemudian  diamati  pengaruh  iodin sebagai penyebab hipertiroidisme tersebut terhadap  siklus  estrus  dan  gambaran  histologis ovarium tikus betina.
Perbandingan  Panjang  Siklus  Estrus  antara Kontrol dengan Hipertiroid
Penelitian  yang  dilakukan  berdasarkan siklus estrus normal dengan hipertiroid menunjukkan  tidak  terdapat  beda  nyata  namun pada  siklus  estrus  hipertiroid  lebih  panjang  dari siklus estrus normal karena panjang fase tertentu antar  siklus  berbeda.  Berdasarkan  uji  statistika fase  yang  berbeda  nyata  dengan  kontrol  yaitu fase proestrus dan estrus. Tikus normal memiliki siklus  estrus  yang  berlangsung  selama  4-5  hari yang dipengaruhi oleh hormon-hormon reproduksi [10].
Gambar 3 Perbandingan rata-rata panjang siklus estrus antara tikus kontrol dengan tikus hipertiroid
Gambaran Histologi Ovarium Tikus betina yang dipelihara dibedah pada minggu  ke  2,4,6  dan  8  untuk  mengetahui perbandingan  folikel ovarium pada  tikus  kontrol dan  tikus  perlakuan.  Gambaran  histologi  pada fase  luteal  (estrus  dan  metestrus)    menunjukkan tidak  terdapat  beda  nyata  pada  pertumbuhan folikel  pada  tikus  kontrol  dikarenakan  tahapan adanya  folikel  primer,  folikel  sekunder,  folikel tersier,  dan  korpus  luteum  berkembang  secara normal.
Berdasarkan  gambaran  histologi  yang  telah diamati  tidak  terdapat  perbedaan  struktur  antara kontrol  dengan  hipertiroid.  Gambaran  histologis tikus  betina  fase  estrus  pada  kontrol  dan hipertiroid menunjukkan adanya folikel sekunder,  folikel  tersier  dan  corpus  luteum.  Hal ini  menunjukkan  bahwa  terjadi  perkembangan folikel  secara  normal  pada  tikus  perlakuan hipertiroid.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Dr.  Agung  Pramana W.M., M.Si atas bantuan dari payung penelitiannya,  Drs.  Aris  Soewondo,  M.Si  atas bimbingannya  selama  ini,  teman-teman  Biologi 2011 dan rekan-rekan yang belum saya sebutkan terima  kasih  atas  dorongan  semangatnya  selama ini hingga skripsi dan jurnal ini dapat selesai.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan  diketahui  bahwa  kondisi  hipertiroid berpengaruh  terhadap  panjang  fase  estrus. Gambaran  histologi  ovarium  menunjukkan  tidak ada  perbedaan  antara  tikus  kontrol  dengan  tikus hipertiroid.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Fumarola,A.,  A.  Di  Fiore,  M.Dainelli,  G. Grani., & A. Calvanese.2010.Medical
Treatment  of  Hyperthyroidsm:  State  of  Art.
Exp Clinical Endocrinol Diabetes
[2]  Delf,  M.H  &  Manning,  R.T.  1996.  Major’s
Physical Diagnosis 9 th ed. EGC.Jakarta [3]  Underwood, E.J.1999. The Mineral Nutrition  of  Livestock.  CABI  Publishing. New York [4]  Bartalena, L.2011. Antithyroid Drugs.
Thyroid International., 2:3-15
[5]  Norris,  D.O.2007.  Vertebrate  Endocrinology 4 th ed. Elsevier Academic Press. Burlington
[6]  Yu,  Shiguang.,  M.  Brad,  Y.  Hideo  &  B.M.
Helen.  2001.  Characteristic  of  Inflamatory Cells in Spontaneus Autoimmune Thyroiditis of NOD.H-2h4 Mice. Autoimmunity., 16: 37- 46
Gambar 4 Histologi Ovarium. Kontrol Estrus (A)  dan  Hipertiroid  Estrus  (B).
Perbesaran  200x  (30µm).  Pewarnaan Hematoxilin-Eosin. FS (Folikel Sekunder,  FT  (Folikel  Tersier),  CA (Corpus Luteum).
[7]  Nagayama, Y., H. Ichiro, S. Ohki, N. Mami,
&  A.  Norio.  2007.  CD4+  CD25+  Naturally
Occuring Regulatory T Cells and
Lymphopenia  Play  Role  in  the  Pathogenesis of  Iodin  e-Induced  Autoimmune  Thyroiditis in NOD.H2h4 mice. Autoimmunity., 29, 195- 202.
[8]  Morohoshi, K., Y. Katsumi, N. Yoshinori, H. Saeko,  O.  Hiroshi,  T.  Yurie,  I.  Sadayoshi, dan  M.  Kouki.  2011.  Effect  of  Synthetic Retinoid Am80 on Iodine Induced Autoimmune thyroiditis in Nonobese
Diabetic  Mice.  Cellular  Immunology.,  2710,
1-4
[9]  Permaesih,  D.,  Latinulu,S.,  Kartono,  D., Susanto, D.The Profile of Iodized Salt Use in The  District  Level  in  Indonesia.Gizi  Indon 2000.,14, 25-31
[10]Malole  M.B.M  dan  Pramono  C.S.U.1989. Penggunaan  Hewan-Hewan  Percobaan  di Laboratorium Pusat Antar Universitas Bioteknologi IPB.Bogor.