BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 2 (2020): 174 - 180 E-ISSN: 2714-8564
Aktivitas Enzimatik Isolat Trametes spp. dari Kebun Raya Baturraden dalam Pewarna Batik dengan Variasi Konsentrasi
Indigosol Blue Glukosa
Mutia Syarifah Adrir 1* , Ratna Stia Dewi 1 , Ajeng Arum Sari 2
1 Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman
2 Pusat Penelitian Kimia, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI)
Email: mutiasyarifah19@gmail.com
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 23/09/2019 Disetujui  : 25/07/2020

## Abstract
Indigosol Blue is one of Antraquinone synthetic dyes which is used as a blue dye in the textile industry  and  is  recalcitrant  and  non-biodegradable,  so  it  is  not  easily  damaged  by  chemical  or photolytic  treatments.  Trametes  sp.  isolate  is  believed  to  have  the  ability  to  transform  dye components through an enzymatic degradation mechanism. This ability is due to the fungus able to  produce  ligninolytic  extracellular  enzymes  that  can  degrade  xenobiotic  components  in indigosol  dye  waste  into  non-toxic  forms  in  the  environment.  The  study  aims  to  determine  the ability  of  three  test  isolates  to  produce  enzymes  in  Indigosol  Blue  dyes  at  different  glucose concentrations and to determine isolate with optimum glucose concentrations that have the best enzyme  activity in Indigosol Blue dyes. Measurement of  enzymatic activity  was carried out by the spectrophotometric method. The results showed that the test isolates could produce enzymes in Indigosol Blue dyes at different glucose concentrations. Enzyme activity in each treatment is different  and  shows  significant  results.  Further  test data  showed  that  Trametes  sp.  strain  A  has the  best  enzyme  activity  in  the  Indigosol  Blue  dye  with  a  glucose  concentration of  0.5%.  This research  also  showed  that  glucose  concentrations  above  0.5%  could  inhibit  lacase  activity,  so that lacase activity in dyes is low.
Key Words : ligninolytic enzymes, fungi, glucose, Indigosol Blue, Trametes sp.

## Abstrak
Indigosol  Blue merupakan  salah  satu  zat  warna  sintetik  Antraquinon  yang  digunakan  sebagai pewarna  biru  pada  industri  pencelupan  tekstil  dan  bersifat  rekalsitran  dan non-biodegradable , sehingga tidak mudah rusak oleh perlakuan kimia maupun fotolitik. Isolat Trametes sp. diyakini memiliki  kemampuan  mentransformasi  komponen  pewarna  melalui  mekanisme  degradasi enzimatik. Trametes sp.  mampu  menghasilkan  enzim  ekstraseluler  ligninolitik  yang  dapat mendegradasi komponen xenobiotik dalam limbah pewarna indigosol menjadi bentuk yang tidak toksik  di  lingkungan.  Penelitian  bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  tiga  isolat  uji  dalam menghasilkan  enzim  dalam  pewarna Indigosol  Blue pada  konsentrasi  glukosa  berbeda  serta mengetahui  isolat  dengan  konsentrasi  glukosa  optimum  yang  memiliki  aktivitas  enzim  terbaik dalam  pewarna Indigosol  Blue .  Pengukuran  aktivitas  enzimatik  dilakukan  dengan  metode spektrofotometri.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  isolat-isolat  uji  dapat  menghasilkan enzim  dalam  pewarna  Indigosol  Blue  pada  konsentrasi  glukosa  berbeda.  Aktivitas  enzim  pada masing-masing perlakuan berbeda-beda dan menunjukkan hasil yang signifikan. Data uji lanjut memperlihatkan  bahwa  isolat Trametes sp.  strain  A  memiliki  aktivitas  enzim  terbaik  dalam pewarna Indigosol Blue dengan konsentrasi glukosa 0,5%. Penelitian juga menunjukkan bahwa konsentrasi  glukosa  di  atas  0.5%  dapat  menghambat  aktivitas  lakase,  sehingga  aktivitas  lakase dalam zat pewarna rendah.
Kata kunci : enzim ligninolitik, fungi, glukosa, Indigosol Blue , Trametes sp.

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  kepulauan  yang kaya  akan  sumber  daya  dan  aneka  ragam  warisan budaya, salah satunya adalah batik yang merupakan karya  seni  bernilai  tinggi  (Mahfudloh  &  Lestari, 2017).  Selain  sebagai  komoditi  ekspor  yang memberikan  dampak  positif  pada  devisa  negara, industri  batik  juga  memberikan  dampak  negatif berupa  limbah  cair  batik  yang  menyebabkan penurunan  kualitas  lingkungan  dan  kesehatan
(Sumarko et  al .,  2013).  Limbah  zat  warna  yang dihasilkan  dari  industri  tekstil  setelah  proses pewarnaan  umumnya  merupakan  senyawa  organik berbahan  sintetik  yang  sukar  larut  dan non- biodegradable , sehingga dapat menyebabkan pencemaran lingkungan (Suprihatatin, 2014).
Zat  warna  yang  digunakan  dalam  proses pembatikan  contohnya  yaitu  Indigosol  (Kartikasari et  al .,  2012). Indigosol  Blue merupakan  salah  satu zat  warna  sintetik  Antraquinon  yang  digunakan sebagai  pewarna  biru  pada  industri  pencelupan
tekstil  dan  bersifat  tidak  mudah  rusak  oleh perlakuan  kimia  maupun  fotolitik.  Bila  air  limbah tekstil yang mengandung zat warna sintetik terbuang ke  lingkungan,  maka  dapat  bertahan  lama  dan mengalami akumulasi sampai pada tingkat konsentrasi  tertentu  sehingga  dapat  menimbulkan dampak  negatif  terhadap  daya  dukung  lingkungan (Herfiani et al ., 2017).
Penghilangan  warna  dan  senyawa  organik yang  ada  dalam  limbah  zat  warna  industri  batik telah  banyak  dilakukan,  yaitu  dengan  metode  fisika dan  kimia  melalui  filtrasi  membran,  adsorbsi, pertukaran  ion,  ozonasi,  flokulasi-koagulasi,  dan oksidasi  (Ngieng et  al .,  2013).  Metode  ini  dapat memperbaiki  kualitas  air  dalam  waktu  singkat, namun  metode  ini  memerlukan  biaya  yang  mahal, aplikasinya  terbatas  area,  dan  dapat  menimbulkan polusi  sekunder  karena  menggunakan  bahan-bahan kimia  dalam  prosesnya  (Salleh et  al .,  2011; Turhan et  al .,  2012).  Oleh  karena  itu,  metode  biologi menggunakan  jamur  menjadi  alternatif,  karena kemampuannya dalam proses adsorbsi dan degradasi  berbagai  polutan  kimia  kompleks  (Wang et al ., 2017).
Jamur jenis Basidiomycota diketahui memiliki kemampuan dalam mendegradasi atau menghilangkan  zat  pewarna  (Munir et  al .,  2018). Terutama  kelompok white  rot  fungi adalah organisme  yang  paling  efisien  dalam  dekolorisasi dan  degradasi  pewarna  (Yesilada et  al .,  2018). Spesies white  rot  fungi dari  genus  Trametes  telah diteliti  mampu  mendekolorisasi  pewarna  tekstil seperti Orange  II (Yesilada et  al .,  2018), Remazol Brilliant  Blue  R (RBBR)  (Mechichi et  al .,  2006), dan Malachite  Green (Maalej-Kammoun et  al ., 2009).  Sari  &  Dewi  (2019)  melaporkan  tiga  isolat yang teridentifikasi sebagai Trametes spp. terseleksi untuk  dekolorisasi  limbah Indigosol  Blue ,  namun belum  dilakukan  uji  aktivitas  enzim  ketiga  isolat tersebut,  sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut.  Proses  dekolorisasi  pewarna  tekstil  oleh Trametes sp.  diketahui  melibatkan  beberapa  enzim ligninolitik  ekstraseluler  yang  dihasilkan  selama metabolisme  seperti  lakase  (Zapata-Castillo et  al ., 2015).  Lakase  mampu  mendekolorisasi  berbagai jenis  pewarna  sintetik  seperti Acid  Blue , Reactive Black  5 , Basic  Red  9 , Remazol  Brilliant  Blue  R , Indigo ,  dan  sebagainya  (Castillo et  al .,  2012; Abadulla et al ., 2000). Enzim ini mampu mengubah komponen  xenobiotik  dalam  limbah  pewarna menjadi  bentuk  yang  tidak  toksik  di  lingkungan sehingga dapat digunakan sebagai alternatif bioremediasi pewarna tekstil (Yesilada et al ., 2018). Aktivitas  enzim  lakase  dalam  zat  warna dipengaruhi oleh beberapa faktor lingkungan seperti sumber  karbon,  nitrogen,  fosfor,  pH,  suhu, konsentrasi  zat  warna,  konsentrasi  inokulum,  dan aerasi atau statis (Martina et al ., 2015). Sintesis dan sekresi  enzim  lakase  terutama  dipengaruhi  oleh ketersediaan  sumber  karbon  (Senthilkumar et  al .,
2014).  Sumber  karbon  utama  yang  digunakan  oleh sebagian  besar  jamur  adalah  glukosa  (Kaushik  & Malik,  2009).  Pengujian  dengan  variasi  konsentrasi glukosa  sebagai  sumber  karbon  menghasilkan aktivitas  enzim  yang  berbeda.  Aktivitas  enzim optimal  dengan  konsentrasi  glukosa  0,5%,  namun semakin  menurun  dengan  konsentrasi  glukosa  yang semakin  tinggi  (Senthilkumar et  al .,  2014).  Oleh karena  itu,  diperlukan  penelitian  variasi  konsentrasi glukosa  untuk  mengetahui  aktivitas  enzim  dalam pewarna Indigosol Blue yang optimum.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  kemampuan  tiga  isolat  uji  dalam menghasilkan enzim dalam pewarna Indigosol Blue pada konsentrasi glukosa berbeda, serta mengetahui isolat  dengan  konsentrasi  glukosa  optimum  yang memiliki  aktivitas  enzim  terbaik  dalam  pewarna Indigosol Blue .  Hasil  dari  penelitian  ini  diharapkan dapat  memberikan  informasi  ilmiah  mengenai kemampuan  enzimatis  tiga  isolat  uji  dan  isolat dengan konsentrasi glukosa optimum yang memiliki aktivitas enzim terbaik untuk mendegradasi Indigosol Blue .

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Kimia  Pusat  Penelitian  Kimia  LIPI,  Serpong. Sampel  berupa  koleksi  isolat  Basidiomycota  dari kawasan  Kebun  Raya  Baturraden.  Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  medium  Potato Dextrose  Agar  (PDA),  medium  Malt  Extract  (ME), crude  enzyme  Mangan  Peroksidase  (MnP),  Lignin Peroksidase  (LiP),  dan  Lakase,  larutan  2,6- dimethylphenol  (2,6-DMP),  larutan  buffer  malonat pH  4,5,  mangan  sulfat  (MnSO4),  H2O2  30%, larutan  buffer  sodium  tartrat  pH  2,9,  buffer  LiP, syringaldazine,  larutan  buffer  NaH2PO4,  larutan buffer  sodium  asetat  pH  5,3,  limbah  pewarna Indigosol Blue.
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  eksperimental  dengan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL). Variabel bebasnya adalah tiga jenis isolat  dan  konsentrasi  glukosa  (0,  0,5,  1,  dan  2%), sedangkan  variabel  terikatnya  adalah  kemampuan isolat  dalam  menghasilkan  enzim.  Parameter  utama yang  diamati  adalah  aktivitas  enzim  lakase. Parameter  pendukung  yang  diamati  adalah  nilai bobot kering miselium.
Pembuatan
Medium Pertumbuhan dan Sterilisasi Alat
Medium  pertumbuhan  yang  digunakan  adalah medium  PDA  dan  medium malt  extract .  Alat-alat gelas  dan  medium  pertumbuhan  (PDA  dan malt extract )  disterilisasi  menggunakan  autoklaf  dengan suhu  121 o C  dan  pada  tekanan  2  atm  selama  15 menit.
Peremajaan Isolat Isolat Trametes spp. Isolat Trametes spp.  koleksi  Pusat  Penelitian Kimia  LIPI  yang  diisolasi  dari  Kebun  Raya
Baturraden  diremajakan  di  medium  PDA  untuk diperbanyak dan ditumbuhkan selama 5 hari.
Kultivasi Isolat Trametes spp. pada Medium Malt Extract (Sari et al. , 2012)
Glukosa  ditimbang  untuk  pembuatan  medium malt extract dengan konsentrasi 0%, 0,5%, 1%, dan 2% (w/w). Medium malt extract disiapkan sebanyak 100  mL  pada  labu  Erlenmeyer  250  mL  dengan penambahan  glukosa  sesuai  konsentrasi.  Sebanyak lima  plug  koloni  miselium  isolat Trametes spp. dengan  diameter  sebesar  5  mm  dari  medium  PDA diinokulasikan  ke  dalam  medium malt  extract . Medium  yang  telah  diinokulasikan  kemudian ditutup  menggunakan  kapas  dan  diinkubasi  pada shaker dengan  kecepatan  150  rpm  selama  7  hari pada suhu ruang o C.
Uji  Aktivitas  Enzimatik (Senthilkumar et  al ., 2014; Zavarzina & Zavarzin, 2006; Zahra, 2017) Sebanyak  10  mL  larutan  pewarna Indigosol Blue ditambahkan  ke  dalam  kultur Trametes spp. Kultur  ditutup  menggunakan  kapas  dan  diinkubasi dalam shaker dengan kecepatan 150 rpm selama 24 jam  pada  suhu  25  ºC.  Sampel  diambil  sebanyak  1 mL  dan  diukur  aktivitas  enzimnya  menggunakan spektrofotometer.
Aktivitas  lakase  diukur  dengan  mengamati oksidasi  syringaldazine  menjadi  quinone  dalam larutan buffer NaH 2 PO 4 0,1 M. Uji ini menggunakan larutan  syringaldazine  dan  buffer  sodium  asetat Larutan  dimasukkan  ke  dalam  kuvet  dan  dilakukan pembacaan absorbansi pada panjang gelombang 525 nm  menggunakan  UV-vis  spektrofotometer  dengan suhu  20  ºC.  Akuades  digunakan  sebagai  larutan blanko.
Pengukuran  Berat  Kering  Miselium  isolat Trametes spp. (Sulistyaningtyas & Suprihadi, 2017) Pengukuran  berat  kering  dilakukan  setelah melakukan  pengukuran  berat  basah  miselium. Kertas  saring  yang  digunakan  untuk  menyaring miselium kemudian dikeringkan menggunakan oven dengan  suhu  60  ºC  selama  2  hari.  Kertas  saring ditimbang.  Berat  kering  miselium  ditentukan  dari hasil  pengurangan  antara  kertas  saring  yang digunakan  untuk  menyaring  dengan  berat  kering kertas saring sebelum digunakan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolat Trametes spp.  yang  diuji  merupakan hasil  seleksi  tiga  puluh  sampel  yang  diisolasi  dari beberapa titik di kebun raya Baturraden, diantaranya adalah Trametes sp. strain A, Trametes sp. strain B, dan Trametes sp.  strain  C.  Ketiga  isolat  merupakan isolat  terseleksi  yang  mempunyai  kemampuan dekolorisasi tertinggi dalam pewarna Indigosol Blue pada  penelitian  sebelumnya  oleh  Sari  &  Dewi (2019).  Tiga  isolat  tersebut  dilakukan  pengujian aktivitas  enzim  untuk  mengetahui  kemampuan enzimatik yang dimiliki dengan perlakuan konsentrasi  glukosa.  Nilai  aktivitas  enzim  lakase Trametes sp. strain A dengan konsentrasi glukosa 0; 0,5;  1;  dan  2%  berturut-turut  adalah  41,69;  203,23; 31,57; dan 17,74 U/L, Trametes sp. strain B dengan konsentrasi glukosa 0; 0,5; 1; dan 2% berturut-turut adalah  28,42;  28,39;  24,48;  dan  36,49  U/L, Trametes sp. strain C dengan konsentrasi glukosa 0; 0,5;  1;  dan  2%  berturut-turut  adalah  33,34;  32,55; 32,57;  dan  32,60  U/L.  Data  aktivitas  enzim  lakase dicantumkan dalam Gambar 1.
Gambar 1. Data aktivitas enzim lakase isolat Trametes spp. (strain A, strain B, strain C) yang diisolasi dari Kebun Raya Baturraden dalam pewarna batik Indigosol Blue dengan variasi konsentrasi glukosa
Konsentrasi  glukosa  yang  bervariasi  dalam pewarna Indigosol  Blue mengakibatkan  aktivitas enzim  lakase  tiap  perlakuan  berbeda-beda.  Hal  ini sesuai  degan  penelitian  Babic et  al .  (2012)  yang melaporkan  bahwa  perlakuan  dengan  konsentrasi glukosa  bervariasi  menghasilkan  aktivitas  enzim lakase  yang  berbeda-beda.  Konsentrasi  glukosa
2,824  g/L  dan  8,176  g/L  menunjukkan  aktivitas enzim  lakase  berbeda,  yaitu  32,02  U/L  dan  20,67 U/L. Schneider et al . (2018) juga melaporkan bahwa dengan  glukosa  5  g/L,  10  g/L,  20  g/L,  dan  30  g/L menunjukkan  aktivitas  lakase  berbeda-beda,  yaitu secara  berurutan  3219  U/L,  3420  U/L,  1783  U/L, dan 2163 U/L.
Tabel 1. Uji Beda Nyata Jujur (BNJ) pengaruh antar perlakuan konsentrasi  glukosa pada kultur Trametes spp. terhadap aktivitas enzim lakase dalam pewarna Indigosol Blue
No. Perlakuan Rata-rata (U/L) 1. Trametes sp. strain A dengan konsentrasi glukosa 0% (A1) 41,69 b 2. Trametes sp. strain A dengan konsentrasi glukosa 0.5% (A2) 203,23 a 3. Trametes sp. strain A dengan konsentrasi glukosa 1% (A3) 31,57 d 4. Trametes sp. strain A dengan konsentrasi glukosa 2% (A4) 17,74 g 5. Trametes sp. strain B dengan konsentrasi glukosa 0% (B1) 28,42 e 6. Trametes sp. strain B dengan konsentrasi glukosa 0.5% (B2) 28,39 e 7. Trametes sp. strain B dengan konsentrasi glukosa 1% (B3) 24,48 f 8. Trametes sp. strain B dengan konsentrasi glukosa 2% (B4) 36,49 c 9. Trametes sp. strain C dengan konsentrasi glukosa 0% (C1) 33,34 d 10. Trametes sp. strain C dengan konsentrasi glukosa 0.5% (C2) 32,55 d 11. Trametes sp. strain C dengan konsentrasi glukosa 1% (C3) 32,57 d 12. Trametes sp. strain C dengan konsentrasi glukosa 2% (C4) 32,60 d
Keterangan:  angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNJ 5%
Berdasarkan  hasil  uji  BNJ,  aktivitas  enzim lakase  pada  perlakuan  A2  menunjukkan  pengaruh yang nyata terhadap perlakuan lainnya dan memiliki nilai  tertinggi.  Perlakuan  konsentrasi  glukosa  0,5% pada isolat Trametes sp. strain A memiliki nilai rata- rata  tertinggi.  Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa isolat Trametes sp.  strain  A  memiliki  aktivitas enzim  lakase  optimum  dalam  pewarna Indigosol Blue dengan konsentrasi glukosa 0,5%.
Berdasarkan  data  uji  lanjut,  aktivitas  enzim optimum  dalam  pewarna Indigosol  Blue adalah dengan  penambahan  konsentrasi  glukosa  0,5%. Ottoni et al . (2016) melaporkan konsentrasi glukosa optimum yang baik bagi pertumbuhan miselium dan aktivitas lakase T. versicolor adalah 0,5%. Aktivitas enzim lakase T. versicolor oleh Ottoni et al . (2016) adalah sebesar 80,2 U/L, sementara dalam penelitian ini  adalah  sebesar  203,23  U/L.  Data  tersebut menunjukkan  aktivitas  enzim  isolat Trametes yang lebih tinggi.
Berdasarkan  data,  aktivitas  lakase  menurun ketika  penambahan  glukosa  di  atas  0,5%,  yaitu konsentrasi  glukosa  1%  dan  2%.  Hal  ini menunjukkan bahwa peningkatan konsentrasi glukosa  menyebabkan  aktivitas  lakase  menurun. Penambahan  glukosa  pada  konsentrasi  tertentu menurut  Li et  al .  (2011)  dapat  mengakibatkan
produksi  lakase  terhambat.  Konsentrasi  glukosa  di atas  0,5%  dapat  menghambat  ekspresi  lakase, sehingga aktivitas lakase dalam zat pewarna rendah.
Konsentrasi glukosa yang baik untuk degradasi  enzimatik  zat  pewarna  adalah  0,5%,  di atas  konsentrasi  tersebut  akan  menyebabkan produksi  lakase  menurun.  Ado et  al .  (2018)  juga melaporkan bahwa produksi lakase menurun dengan meningkatnya  konsentrasi  glukosa,  sementara  itu aktivitas  lakase  maksimum  pada  saat  kondisi glukosa  terbatas.  Menurut  Kapdan et  al .  (2000), glukosa  berperan  sebagai  sumber  karbon  utama pada fase pertumbuhan awal  jamur (fase lag) untuk pertumbuhan  miselium,  kemudian  pada  fase selanjutnya  menghasilkan  metabolit  sekunder  dan enzim-enzim ekstraseluler untuk melakukan biodegradasi zat-zat pewarna  dalam kondisi sumber karbon  rendah.  Oleh  karena  itu,  penambahan konsentrasi glukosa yang semakin tinggi mendorong fase pertumbuhan awal jamur berkepanjangan.
Supernatan  dari  masing-masing  perlakuan ditunjukkan  pada  Gambar  4.2.  Gambar  4.2 menunjukkan  supernatan  yang  diperoleh  dari perlakuan  masing-masing  konsentrasi  glukosa. Berdasarkan  data,  pada  perlakuan  A2  terjadi perubahan  warna  menjadi  paling  jernih,  serta mengalami aktivitas enzim terbaik.
Gambar 2. Supernatan perlakuan aktivitas enzimatik isolat Trametes sp. strain A, strain B, dan strain C dengan konsentrasi glukosa berbeda
Selain aktivitas lakase, parameter pendukung berupa  berat  kering  miselium  diukur  untuk mengetahui adanya hubungan antara berat miselium dengan  aktivitas  lakase.  Berat  kering  miselium setelah  perlakuan  ditimbang  dan  diperoleh  hasil dalam  Gambar  4.3.  Berdasarkan  data,  miselium dengan  berat  paling  tinggi  adalah  perlakuan  A1, yaitu  isolat Trametes sp.  strain  A  dengan konsentrasi  glukosa  0%.  Hal  ini  menunjukkan
bahwa berat miselium tidak mempengaruhi aktivitas enzim.  Aktivitas  enzim  yang  ditandai  dengan penurunan warna tidak dipengaruhi oleh pertumbuhan  miselium.  Pertumbuhan  miselium tidak  mempengaruhi  perubahan  warna  larutan. Sesuai penelitian Al-Jawhari (2015) yang menyatakan  bahwa  pertumbuhan  miselium  tidak selalu sesuai dengan penurunan warna yg melibatkan aktvitas enzim.
Gambar 3. Data berat kering biomassa Trametes spp. dalam pewarna Indigosol Blue
Lakase  merupakan  enzim  oksidoreduktase yang mengkatalisis reaksi oksidasi berbagai senyawa  aromatik  (terutama  senyawa  fenolik) dengan  menggunakan  oksigen  sebagai  akseptor elektron  dengan  hasil  akhir  berupa  air  (H 2 O) (Mishra et  al .,  2019).  Lakase  mengkatalisis  reaksi oksidasi  substrat  empat  elektron,  menghasilkan pembelahan  reduktif  ikatan  dioksigen.  Atom  Cu pada sisi aktif lakase memainkan peran kunci dalam mereduksi  oksigen  menjadi  H 2 O.  Atom  Cu penyusun  lakase  yaitu  satu  atom  tembaga  tipe  1 (Cu 1 ),  satu  tembaga  tipe  2  (Cu 2 ),  dan  dua  tipe tembaga  3  (Cu 3 )  (Gambar  4.3).  Cu 1 berperan sebagai  akseptor  elektron  utama  dalam  proses oksidasi yang dikatalisis lakase. Elektron selanjutnya  ditransfer  melalui  tripeptida  His-Cys- His  ke Tri-nuclear  cluster (TNC)  yang  mencakup
atom  Cu 2 dan  Cu 3 .  Kemudian  elektron  mereduksi oksigen menjadi H 2 O (Su et al ., 2018).
Lakase  banyak  dimanfaatkan  dalam  proses degradasi  lignin.  Lakase  mempunyai  spesifitas substrat yang rendah, sehingga mampu mengkatalisis  reaksi  oksidasi  berbagai  substrat kompleks,  seperti  dekolorisasi  pewarna  tekstil (Yesilada et  al .,  2018).  Tiga  isolat Trametes spp. yang  diuji  diketahui  mampu  menghasilkan  enzim lakase  dan  memperlihatkan  aktivitas  enzim  yang berbeda-beda  dalam  pewarna Indigosol  Blue . Indigosol  Blue (C 28 H 14 N 2 O 4 ) merupakan  salah  satu zat warna sintetik Antraquinon, dan memiliki ikatan molekul  -NH  dan  C=C  (Gambar  4.4).  Zat  warna sintetik ini tidak  mudah rusak oleh perlakuan kimia maupun fotolitik (Herfiani et al ., 2017).
Gambar 4. Struktur molekul Indigosol Blue (Worlddyevariety.com)
Lakase  dalam  larutan Indigo berperan  untuk melakukan  pemutusan  ikatan  senyawa  kompleks  di dalamnya. Proses pemutusan ikatan ini mengakibatkan struktur kompleks Indigo pecah dan menghasilkan senyawa yang lebih sederhana seperti ditunjukkan  pada  bagan  berikut  (Gambar  4.5). Lakase  mengoksidasi  indigo  menjadi  senyawa intermediet  isatin  menggunakan  senyawa  O 2 . Setelah  isatin  terbentuk,  degradasi  lebih  lanjut berlangsung  secara  hidrolitik  tanpa  mediasi  lakase. Asam  isatin  intermediet  yang  terbentuk  tidak  stabil dan akan terurai secara spontan melalui dekarboksilasi  yang  menghasilkan  asam  antranilat sebagai  produk  degradasi  akhir  (Campos et  al ., 2001).
Gambar 5. Mekanisme degradasi pewarna Indigo oleh lakase (Campos et al ., 2001)

## SIMPULAN
Tiga  Isolat Trametes sp.  yang  diuji  mampu menghasilkan enzim dalam pewarna Indigosol Blue pada  konsentrasi  glukosa  berbeda.  Isolat Trametes sp.  strain  A  memiliki  aktivitas  enzim  terbaik  dalam pewarna Indigosol Blue dengan konsentrasi glukosa 0,5%.

## DAFTAR PUSTAKA
Abadulla,  E.,  Tzanov,  T.,  Costa,  S.,  Robra,  K.H., Cavaco-Paulo, A., Gu¨bitz, G. 2000.
Decolorization  and  Detoxification  of  Textile Dyes  with  a  Laccase  from Trametes  hirsuta . Applied  and  Environmental  Microbiology , 66(8), pp. 3357-3362.
Ado,  B.V.,  Onilude,  A.A.,  &  Amande,  T.  2018. Production  and  Optimization  of  Laccase  by Trametes sp.  Isolate  B7  and  Its’  Dye Decolourization Potential.
Journal of Advanced Microbiology , 13(1), pp.1-14.
Campos, R., Kandelbauer, A., Robra, K.H., Cavaco- Paulo,  A.,  &  Gubitz,  G.M.  2001.  Indigo Degradation  with  Purified  Laccases  from Trametes  hirsuta and Sclerotium  rolfsii . Journal of Biotechnology , 89, pp.131-139.
Castillo,
P.Z. 2012. Purification
and Characterization  of  Laccase  from Trametes hirsuta Bm-2 and Its Contribution to Dye and Effluent  Decolorization. African  Journal  of Biotechnology , 11(15), pp. 3603-3611.
Herfiani,  Z.H.,  Rezagama,  A.,  Nur,  M.  2017. Pengolahan  Limbah  Cair  Zat  Warna  Jenis Indigosol Blue (C.I Vat Blue 4) sebagai Hasil Produksi  Kain  Batik  Menggunakan  Metode Ozonasi  dan  Adsorpsi  Arang  Aktif  Batok Kelapa terhadap Parameter COD dan Warna. Jurnal Teknik Lingkungan , 6(3), pp.1-10.
Kapdan, I.K., Kargi, F., McMullan, G., & Marchant, R. 2000. Effect of Environmental Conditions on  Biological  Decolorization  of  Textile Dyestuff  by C.  versicolor . Enzyme  and Microbial Technology , 26(5), pp. 381-387.
Kartikasari,  T.H.,  Lestari,  S.,  &  Dewi,  R.S.  2012. Adsorpsi  Zn  dan  Dekolorisasi  Limbah  Batik Menggunakan  Limbah  Baglog Pleurotus ostreatus dengan  Sistem  Inkubasi  dan Volume  Limbah  Batik  Berbeda. Biosfera , 29(3), pp.168-174.
Kaushik,  P.,  Malik,  A.  2009.  Fungal  Dye
Decolourization: Recent Advances  and
Future  Potential. Environment  International , 35, pp. 127-141. Maalej-Kammoun, M., Zouari-Mechichi, H., Belbahri,  L.,  Woodward,  S.,  &  Mechichi,  T. 2009.  Malachite  Green  Decolourization  and Detoxification by The Laccase from a Newly Isolated  Strain  of Trametes sp. International Biodeterioration  &  Biodegradation ,  63(5), pp. 600-606.
Mahfudloh & Lestari, H. 2017. Strategi Penanganan Limbah  Industri  Batik  di  Kota  Pekalongan. Skripsi . Semarang: Universitas Diponogoro.
Martina,  A.,  Roza,  R.M.,  &  Sirait,  J.R.  2015. Biodegradasi  Pewarna  Azo  Mordant  Black 17  Oleh Ganoderma sp.  BTA1  Isolat  Lokal.
Prosiding Semirata 2015 bidang MIPA BKS- PTN Barat . Universitas Tanjungpura Pontianak.
Mechichi,  T.,  Mhiri,  N.,  &  Sayadi,  S.  2006.
Remazol Brilliant Blue R Decolourization by The Laccase from Trametes trogii . Chemosphere , 64(6), pp. 998-1005.
Mishra,  A.,  Kumar,  S.,  &  Bhatnagar,  A.  2019.
Potential of Fungal Laccase in Decolorization  of  Synthetic  Dyes. Microbial Wastewater Treatment , 7, pp. 127-151.
Munir,  E.,  Rahayu  V.,  Priyani,  N.,  &  Yurnaliza. 2018.  Decolorization  of  Batik  Naphthol  Dye by  Local  Ligninolytic  Fungal  Isolates. Journal  of  Physics:  Conference  of  Science and Technology , 1116, pp.1-7.
Ngieng,  N.S.,  Zulkharnain,  A.,  Roslan,  H.A.,  & Husaini,  A.  2013.  Decolourisation  of Synthetic  Dyes  by  Endophytic  Fungal FloraIsolated from Senduduk Plant ( Melastoma malabathricum ). ISRN
Biotechnology , 2013(7), pp.1-7.
Ottoni,  C.,  Simoes,  M.E.,  Fernandes,  S.,  Santos, C.R.,  &  Lima,  N.  2016.  High  Laccase Expression  by Trametes  versicolor in  a Simulated  Textile  Effluent  with  Different Carbon  Sources  and  PHs. International Journal  of  Environmental  Research  and Public Health , 13(8), pp.778-787.
Salleh,  M.A.M.,  Mahmoud,  D.K.,  Karim,  W.A.,  & Idris,  A.  2011.  Cationic  and  Anionic  Dye Adsorption  by  Agricultural  Solid  Wastes:  A Comprehensive Review. Desalination , 280(1), pp.1-13.
Sari,  A.A.,  Tachibana,  S.,  &  Muryanto.  2012.
Correlation  of  Ligninolytic  Enzymes  from the Newly-Found Species Trametes versicolor U97  with  RBBR  Decolorization and  DDT  Degradation. Water  Air  Soil Pollution , 223, pp.5781-5792.
Sari,  A.A.  &  Dewi,  R.S.  2019.  The  Study  of
Basidiomycota
and Glomeromycota Biodiversity in Baturraden Botanical Garden,
Indonesia. Report  Research .  Research  Grant Programme, NEF.
Senthilkumar, S., Perumalsamy, M., & Prabhu, H.J. 2014.  Decolourization  potential  of  white-rot fungus Phanerochaete  chrysosporium on synthetic dye bath effluent containing Amido black  10B. Journal  of  Saudi  Chemical Society , 18, pp. 845-853.
Sulistyaningtyas,  A.R.  &  Suprihadi,  A.  2017.
Produksi Miselium Jamur Ling Zhi ( Ganoderma  lucidum )  dalam  Medium  Air Kelapa Tua dan Tauge Extract Broth dengan Metode  Kultur  Terendam  Teragitasi. Bioma , 19(1), pp. 58-81.
Sumarko,  H.G.,  Lestari,  S.,  &  Dewi,  R.S.  2013.
Dekolorisasi Limbah Cair Batik Menggunakan  Limbah  Baglog Pleurotus ostreatus Dengan  Kombinasi  Volume  Dan Waktu  Inkubasi  Berbeda. Molekul ,  8(2),  pp. 152-157
Suprihatatin,  H.  2014. Kandungan  Organik  Limbah Cair  Industri  Batik  Jetis  Sidoarjo  dan
Alternatif Pengolahannya . Riau: Pusat Penelitian  Lingkungan  Hidup  Universitas Riau.
Turhan, K., Durukan, I., Ozturkcan, S.A., & Turgut, Z. 2012. Decolorization of Textile Basic Dye in  Aqueous  Solution  by  Ozone. Dyes Pigments , 92(3), pp. 897-901.
Wang,  N.,  Chu,  Y.,  Wu,  F.,  Zhao,  Z.,  &  Xu,  X. 2017.  Decolorization  and  Degradation  of Congo  Red  by  A  Newly  IsolatedWhite  Rot Fungus, Ceriporia  lacerata ,  from  Decayed Mulberry Branches. International Biodeterioration & Biodegradation , 117(2017), pp. 236-244.
Yesilada,  O.,  Birhanli,  E.,  &  Geckil,  H.  2018.
Bioremediation and Decolorization of Textile
Dyes  by  White  Rot  Fungi  and  Laccase Enzymes.
In: Prasad R. (eds) Mycoremediation and
Environmental
Sustainability .  India:  Springer  International Publishing.
Zahra. 2017. Studi Dekolorisasi Lindi Hitam dengan Teknik  Ramah  Lingkungan  Menggunakan Jamur Trametes  versicolor F200  dan  Isolat Enzimnya yang Diimobilisasikan pada Natrium  Alginat. Thesis .  Depok:  Universitas Indonesia.
Zapata-Castillo,  P.,  Villalonga-Santana,  L.,  Islas- Flores,  I.,  Rivera-Mu~noz,  G.,  Ancona- Escalante,  W.,  &  Solis-Pereira,  S.  2015. Synergistic Action of Laccases from
Trametes
hirsuta
Bm2
Improves Decolourization  of  Indigo  Carmine. Applied Microbiology , 61, pp. 252-258.
Zavarzina,  A.G.,  &  Zavarzin,  A.A.  2006.  Laccase and  Tyrosinase  Activities  in  Lichens.
Microbiology , 75(5), pp. 546-556.