Jurnal Pharmascience, Vol. 10, No.2, Oktober 2023, hal: 357-368 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article

## Potensi Antijamur Ekstrak Etanol Kulit Buah Kakao (Theobroma cacao L.) terhadap Trichophyton mentagrophytes
Subaryanti*, Feby Ramdhony, Desy Muliana Wenas
Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Institut Sains dan Teknologi Nasional, Jagakarsa, Jakarta Selatan, Indonesia Email: subaryanti@istn.ac.id

## ABSTRAK
Dermatofitosis  adalah  suatu  infeksi  pada  jaringan  berkeratin  yang  disebabkan oleh adanya kolonisasi dari jamur jenis dermatofita Trichophyton mentagrophytes. Kulit buah kakao (Theobroma cacao L.) merupakan limbah hasil olahan industri kakao dari sisa  biji  dan  daging  buahnya  yang  mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  tanin, antosianidin,  dan  katekin.  Tujuan  penelitian  adalah  mengidentifikasi  kandungan senyawa  metabolit  sekunder  serbuk  dan  ekstrak  etanol  kulit  buah  kakao,  menguji potensi  antijamur  terhadap  pertumbuhan  T.  mentagrophytes,  dan  menentukan  nilai konsentrasi hambat minimum (KHM). Kulit buah kakao diperoleh dari Citayam, Kota Depok,  Jawa  Barat.  Ekstrak  etanol  dibuat  secara  maserasi  dengan  etanol  96%. Pengujian  aktivitas  antijamur  dilakukan  dengan  mengukur  diameter  daya  hambat (DDH)  menggunakan  metode  difusi  cakram  dan  mengukur  konsentrasi  hambat minimum  (KHM)  menggunakan  metode  dilusi  agar  padat.  Konsentrasi  ekstrak  yang digunakan pada pengujian DDH yaitiu 25, 50, 75, dan 100%. Kontrol positif digunakan ketokonazol. Kontrol negatif digunakan DMSO 10%. Pengujian KHM dilakukan pada konsentrasi  25,  20,  15,  10,  dan  5%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  serbuk  dan ekstrak etanol kulit buah kakao mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin.  Diameter daerah hambat tertinggi (20,68 mm) diperoleh dari konsentrasi 100% dengan  kategori  sangat  kuat.  Konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  terhadap  T. mentagrophytes adalah 10%.  Kesimpulannya adalah  senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada kulit buah kakao yaitu alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin. Konsentrasi ekstrak  etanol  kulit  buah  kakao  yang  menghambat  T.  mentagrophytes  adalah  100% (20,68 ± 0,40 mm) dan KHM untuk T. mentagrophytes adalah 10%.
Kata Kunci: Antijamur, Ekstrak Etanol, Kulit Buah Kakao, Metabolit Sekunder, KHM

## ABSTRACT
Dermatophytosis is an infection of keratinized tissue caused by colonization of the dermatophyte fungus Trichophyton mentagrophytes. Cacao pod skin (Theobroma cacao L.) is a waste product processed by the cocoa industry from the remaining seeds and fruit p ulp which contains alkaloids, flavonoids, tannins, anthocyanidins, and catechins. The aims of the research were to identify the content of secondary metabolites of powder and ethanol extract  of  cocoa  pod  shells,  to  test  their  antifungal  potential  on  the  growth  of  T. mentagrophytes, and to determine the value of minimum inhibitory concentration (MIC). Cocoa pod skin is obtained from Citayam, Depok City, West Java. The ethanol extract was prepared  by  maceration  with  96%  ethanol.  Antifungal  activity  testing  was  carried  out  by measuring  the  inhibition  zone  diameter  (DDH)  using  the  disc  diffusion  method  and measuring  the  minimum  inhibitory  concentration  (MIC)  using  the  dilution  method  to solidify. The concentration of the extract used in the DDH test was 25, 50, 75 and 100%. The positive control used Ketoconazole. The negative control used 10% DMSO. MIC testing was carried out at concentrations of 25, 20, 15, 10, and 5%. The results showed that the powder and  ethanol  extract  of  cocoa  pod  shells  contained  alkaloids,  flavonoids,  saponins  and tannins. The diameter of the highest inhibition area (20.68 mm) was obtained from 100% concentration  with  very  strong  category.  The  minimum  inhibitory  concentration  (MIC) against T. mentagrophytes is 10%.  The conclusion is that secondary metabolites found in cocoa pod skin are alkaloids, flavonoids, saponins, and tannins. The concentration of the ethanol extract of cocoa pod husk that inhibited T. mentagrophytes was 100% (20.68 ± 0.40 mm) and the MIC for T. mentagrophytes is 10%.
Keywords: Antifungal, Cocoa Rind, Ethanol Extract, Secondary Metabolites, MIC

## I. PENDAHULUAN
Jamur (fungi) adalah
mikroorganisme golongan eukariotik
(Sutanto et  al., 2008)  yang  dapat menyebabkan  dermatofitosis  (Brutel  & Morse,  2008).  Dermatofitosis  adalah infeksi  yang  disebabkan  oleh  adanya kolonisasi jamur dermatofita pada jaringan berkeratin (rambut, kulit, kuku, dan selaput lendir). Salah satu spesies dermatofita yang paling banyak menginfeksi adalah
Trichophyton  mentagrophytes .  Penularan jamur  ini  terjadi  secara  langsung  lewat orang-orang  atau  hewan  yang  terinfeksi (Roosheroe et al., 2014).
Obat  yang  sering  digunakan  untuk kasus  tersebut  adalah  ketokonazol,  namun obat  ini  memiliki  efek  samping  seperti gatal,  iritasi,  kering,  dan  rasa  panas  pada kulit  (IONI,  2014).  Banyaknya  resistensi dan  efek  samping  yang  disebabkan  oleh obat  sintetik  membuat  masyarkat  mulai mencoba obat-obat tradisional dari tumbuhan.  Nursetiani  &  Herdiana  (2018) menyebutkan  bahwa  berbagai  tumbuhan memiliki potensi sebagai obat dengan efek samping lebih ringan dibandingkan dengan obat  sintetis,  sehingga  penggunaannya semakin  diminati  ( back  to  nature ).  Salah satu  tumbuhan  yang  dapat  digunakan sebagai  obat  tradisional  adalah  kulit  buah
kakao  ( Theobroma  cacao L.)  seperti ditunjukkan pada Gambar 1.
Kulit buah kakao diketahui mengandung  senyawa  metabolit  sekunder yang  dapat  di  manfaatkan  sebagai  obat, namun  penggunaannya  kurang  maksimal sehingga  hanya  berakhir  sebagai  limbah.
Penelitian  terkait  manfaat  dan  kandungan senyawa kimia dari tumbuhan kakao antara lain  diungkapkan  oleh  Masro’atun et  al.
(2017),  bahwa  ekstrak  etanol  daun  kakao memiliki  aktivitas  dalam  menghambat pertumbuhan Phytophthora palmivora pada  konsentrasi  100%  (8,20  ±  1,483).
Kulit  buah  kakao  mengandung  senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, antosianidin dan katekin  yang  diketahui  memiliki  sifat sebagai antimikroba (Witri, 2013).
Gambar 1. Tumbuhan kakao (A); buah kakao (B) (dokumen pribadi)
Ayoola et al. (2008) juga melaporkan  bahwa  senyawa  saponin, alkaloid, kumarin, xanton, flavonoid, asam lemak,  senyawa  fenol,  terpen,  minyak atsiri, lektin dan polipeptida dapat digunakan  sebagai  antijamur.  Menurut Kayaputri et al. (2014), kulit buah kakao
mengandung  alkaloid,  flavonoid,  tanin,
saponin, dan triterpenoid. Kulit buah kakao juga  mengandung  lignin  (Mensah et  al.,
2012),  tanin,  pirogalol,  epikatekin-3-galat, kuersetin, resorsinol (Fapohunda &
Afolayan,  2012)  dan  dilaporkan  sebagai antiseptik dan antijamur (Panganiban et al.,
2012).

## II. METODE

## A. Bahan
Bahan  uji  yang  digunakan  antara lain  kulit  buah  kakao  dari  Citayam,  Kota Depok,  Jawa  Barat.  Kulit  buah  kakao berwarna kuning dan sudah masak. Jamur uji  yang  digunakan  yaitu Trichophyton mentagrophytes dari Laboratorium
Mikrobiologi  Program  Studi  Farmasi, Fakultas  Farmasi,  Institut  Sains  dan Teknologi Nasional (ISTN), Jakarta.

## B. Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Buah Kakao
Pembuatan ekstrak dilakukan
dengan  metode  maserasi,  yaitu  dengan perendaman  menggunakan  etanol  96%. Sebanyak  500  g  serbuk  kering  simplisia kulit  buah  kakao  dimasukkan  ke  dalam bejana  maserasi,  ditambahkan  5000  mL etanol 96% (1:10) lau direndam dan ditutup dengan  aluminium  foil  lalu  didiamkan selama 1x24 jam dengan sesekali dilakukan pengadukan.  Proses  penyarian  diulang sekurang-kurangnya  dua  kali  atau  sampai pelarut kembali jernih. Maserat dipisahkan dengan  cara  filtrasi  menggunakan  kertas
A B
saring. Selanjutnya filtrat diuapkan menggunakan vacuum  rotary  evaporator
(R-300  Buchi,  Switzerland,  Swiss)  pada suhu  ±  50 o C  hingga  dihasilkan  ekstrak kental.  Selanjutnya  dilakukan  skrining fitokimia dan aktivitas antijamurnya
(Siregar et al., 2009).

## C. Skrining Fitokimia

## 1. Identifikasi Golongan Alkaloid
Serbuk dan ekstrak kulit buah kakao diambil  sebanyak  0,5  g  ke  dalam  tabung reaksi terpisah, lalu ditambahkan 1 mL HCl 2 N dan 9 mL akuades, dipanaskan di atas water bath selama 2 menit, didinginkan dan disaring menggunakan kertas saring. Filtrat yang  diperoleh  dibagi  ke  dalam  3  tabung reaksi.  Tabung  1  dimasukan  2  tetes pereaksi Meyer, hasil positif jika terbentuk endapan putih hingga kekuningan. Tabung 2  dimasukkan  pereaksi  Bouchardart,  hasil positif  jika  terbentuk  endapan  cokelat.
Tabung 3 dimasukkan pereaksi
Dragendorf,  hasil  positif  jika  terbentuk endapan merah bata (Depkes, 2000).

## 2. Identifikasi Golongan Tanin
Serbuk  dan  ekstrak  kulit  buah kakao  diambil  sebanyak  1  g  ke  dalam tabung reaksi terpisah, kemudian
ditambahkan  100  mL  akuades,  lalu dipanaskan  di  atas water  bath selama  3 menit, kemudian didinginkan dan disaring menggunakan  kertas  saring.  Filtrat  yang diperoleh  ditambahkan  1-3  tetes  pereaksi
FeCl 3 1%.  Hasil  dinyatakan  positif mengandung tanin apabila terbentuk warna hitam  kebiruan  atau  hijau  (Farnsworth, 1966).

## 3. Identifikasi Golongan Flavonoid
Serbuk dan ekstrak kulit buah kakao diambil  sebanyak  10  g  ke  dalam  tabung reaksi terpisah, kemudian ditambahkan 10 mL  air  panas,  dididihkan  selama  5  menit, didinginkan kemudian disaring menggunakan kertas saring. Diambil 5 mL filtrat kemudian ditambahkan 0,1 g serbuk Mg, 2 mL amilalkohol dan 1 mL HCl pekat, dikocok  dan  dibiarkan  hingga  memisah. Flavonoid dinyatakan positif jika terbentuk warna merah atau jingga atau kuning pada lapisan amilalkohol (Depkes, 2000).

## 4. Identifikasi Golongan Saponin
Serbuk dan ekstrak kulit buah kakao diambil  sebanyak  0,5  g  ke  dalam  tabung reaksi terpisah, kemudian ditambahkan 10 mL  air  panas.  Didinginkan  dan  dikocok kuat-kuat  secara  vertikal  selama  10  detik. Hasil  positif  saponin  jika  terbentuk  busa yang  stabil  setinggi  1-10  cm  dan  bila ditambahkan  1  tetes  HCl  2N,  maka  busa yang terbentuk tetap stabil (Depkes, 2000).
5. Identifikasi Golongan

## Steroid/Triterpenoid
Serbuk dan ekstrak kulit buah kakao diambil  sebanyak  1  g  ke  dalam  tabung reaksi  terpisah,  kemudian  dimaserasi dengan 20 mL n-heksana selama 2 jam dan di  tutup  dengan  rapat,  lalu  disaring
menggunakan.  kertas  saring.  Filtrat  yang diperoleh  dipindahkan  ke  dalam  cawan porselain untuk proses penguapan.
Selanjutnya,  sisa  filtrat  yang  sudah mengering  ditetesi  dengan  beberapa  tetes pereaksi  Liebermann-Bourchart.  Positif mengandung  steroid  jika  terbentuk  warna biru  atau  biru  hijau.  Positif  mengandung triterpenoid  jika  terbentuk  warna  merah atau  merah  muda  atau  ungu  (Harborne, 1987).

## D. Uji Aktivitas Antijamur
1. Pembuatan Media Kultur Jamur
Serbuk Saboraud  Dextrose  Agar
(SDA)  sebanyak  65  g  ditambahkan  1  L akuades.  Kemudian  dipanaskan  hingga mendidih dan jernih, selanjutnya dipindahkan  ke  dalam  botol schott  duran ,
lalu disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit dan dituang ke dalam  cawan  petri  steril  sebanyak  15–20 mL secara aseptis.
2. Pembuatan Stok Jamur dan

## Penyiapan Inokulum Jamur
Jamur T.
mentagrophytes
dipurifikasi  pada  media  cawan  dengan gores  kuadran  dan  diinkubasi  pada  suhu 37 o C  selama  48  jam.  Biakan  tersebut diambil  sebanyak  satu ose kemudian disuspensikan  ke  dalam  10  mL  larutan NaCl fisiologis 0,9%, selanjutnya kekeruhan  inokulum  jamur  disesuaikan dengan  larutan Mc  Farland sebagai
strandar kekeruhan untuk penentuan aktivitas  antijamur  yang  setara  dengan 9x10 8 CFU/mL,  lalu  diencerkan  sampai setara  dengan  10 6 CFU/mL  Larutan  uji dibuat  dengan  seri  konsentrasi  25,  50,  75, dan 100% (Putri & Habib, 2007).

## 3. Pengujian Antijamur
Pengujian aktivitas antijamur dilakukan untuk mempelajari potensi kulit
buah kakao dalam menghambat pertumbuhan T.  mentagrophytes. Metode yang digunakan adalah difusi kertas cakram Kirby-Bauer .  Aktivitas  antijamur  ekstrak etanol  kulit  buah  kakao  diuji  pada  empat macam  konsentrasi  yakni  25,  50,  75,  dan
100% dengan DMSO 10% sebagai pelarut.
Sebanyak 10 mL media  SDA dimasukkan ke  dalam  botol  steril,  lalu  ditambahkan  1 mL  inokulum  jamur  uji  dengan  kerapatan sel  10 6 CFU/mL,  kemudian  digoyang hingga  homogen,  selanjutnya  dituang  ke cawan  petri  steril  dan  didiamkan  hingga memadat. Kertas cakram yang telah berisi 20  µL  ekstrak  etanol  kulit  buah  kakao dengan  konsentrasi  25,  50,  75,  dan  100% selanjutnya diletakkan di permukaan media cawan  SDA.  Kontrol  negatif  dan  kontrol positif dibuat dengan menggunakan media SDA.  Kontrol  negatif  yang  digunakan adalah  kertas  cakram  yang  berisi  DMSO
10%  sebanyak  20  µL  dan  kontrol  positif yang  digunakan  adalah  ketokonazole ketokonazol 15 µg. Masing-masing cawan petri kemudian diinkubasi pada suhu 25 o C
selama  24-48  jam.  Aktivitas  antijamur diamati berdasarkan diameter zona hambat atau  daerah  bening  yang  terbentuk  di sekeliling  kertas  cakram.  Zona  hambat yang  terbentuk  kemudian  diukur  dengan menggunakan  jangka  sorong.  Pengujian dilakukan 3 kali pengulangan ( triplo ) (Putri & Habib, 2007).
4. Penentuan Konsentrasi Hambat

## Minimum (KHM)
Pengujian  KHM dilakukan  dengan
metode dilusi agar padat, terhadap konsentrasi terendah dari pengujian diameter daya hambat (DDH) yakni dengan konsentrasi  25,  20,  15,  10,  dan  5%.
Pengujian  KHM  dilakukan  dengan  cara memipet  sebanyak  1  mL  ekstrak  dengan berbagai  konsentrasi  ke  dalam  suspensi jamur  dalam  cawan  petri  dan  dituangkan ±10 mL medium Saboraud Dextrose Agar
(SDA)  dengan  suhu  25 o C  dicampurkan hingga merata. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37 o C selama 48 jam.  Kontrol negatif digunakan media yang ditambahkan ekstrak etanol kulit buah kakao dan kontrol positif  adalah  media  yang  di  tambahkan inokulum jamur. Nilai KHM dicatat dengan mengamati  ada  tidaknya  pertumbuhan jamur  pada  media  dengan  konsentrasi tertentu yang dibandingkan dengan kontrol positif (Komala et al., 2012).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pembuatan  ekstrak  etanol  kulit buah kakao menggunakan metode maserasi.  Cara  maserasi  dipilih  karena memiliki banyak keuntungan dibandingkan metode  lainnya.  Maserasi  merupakan  cara sederhana  yang  dapat  dilakukan  dengan cara merendam serbuk simplisia ke dalam pelarut  yang  cocok.  Keuntungan  utama metode  ini  adalah  prosedur  dan  alat  yang digunakan  sederhana,  cukup  efektif  untuk menarik zat yang diinginkan dan tidak ada proses pemanasan, sehingga kerusakan zat- zat aktif akibat suhu tinggi dapat dihindari (Rasyadi et  al., 2019).  Pelarut  akan
menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga  sel  yang  mengandung  zat-zat  aktif sehingga akan larut. Pelarut yang digunakan adalah etanol 96% karena dapat menarik  senyawa-senyawa  baik  polar maupun  non  polar  seperti  alkaloid, flavonoid,,  tannin,  saponin,  dan  steroid (Liling et al., 2020).
Hasil  proses  ekstraksi  kulit  buah kakao  didapatkan  total  ekstrak  sebanyak 84,7  g  dengan  rendemen  sebesar  14,1%. Rendemen  tersebut  sudah  memenuhi persyaratan  secara  umum  yaitu  >  10% (Wardaningrum, 2020). Hal ini menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  nilai rendemen  menandakan  jumlah  ekstrak yang dihasilkan semakin banyak (Hasnaeni et  al., 2019).  Nilai  rendemen  yang  tinggi dapat  dipengaruhi  oleh  bobot  serbuk
simplisia  yang  digunakan  (Egra et  al.,
2019),  juga  menunjukkan  banyaknya kandungan senyawa aktif yang terkandung di dalam sampel (Harborne, 1987).
Hasil skrining fitokimia pada Tabel I  menunjukkan  bahwa  serbuk  dan  ekstrak kulit  buah  kakao  mengandung  senyawa alkaloid,  tanin,  flavonoid  dan  saponin. Senyawa-senyawa tersebut merupakan senyawa  metabolit  sekunder  yang  bersifat polar,  sehingga  mampu  tertarik  dengan pelarut etanol 96% yang bersifat polar juga. Hal ini sesuai dengan prinsip like dissolved like, yaitu senyawa metabolit akan terlarut dengan  pelarut  yang  memiliki  tingkat kepolaran  yang  sama  (Puspitasari et  al.,
2013).
Tabel I. Hasil skrining fitokimia serbuk dan ekstrak kulit buah kakao Golongan senyawa Pereaksi Hasil Alkaloid Mayer + Buchardart + Dragendorf + Tanin FeCl 3 3% + Flavonoid Mg+HCl+amilalkohol + Saponin Akuades panas + Steroid Lieberman-Bourchart - Triterpenoid Lieberman-Bourchart - Keterangan: +    =  mengandung  senyawa
dimaksud;  -  =  tidak  mengandung  senyawa dimaksud Pengujian
aktivitas antijamur
ekstrak etanol kulit buah kakao terhadap T.
mentagrophytes dilakukan dengan menggunakan  metode  difusi  cakram  dan hasil pengujian dilihat berdasarkan terbentuknya zona bening yang
menunjukkan adanya penghambatan pertumbuhan jamur. Metode difusi cakram dipilih karena merupakan salah satu metode yang  mudah  dilakukan  yaitu  kemampuan daya  hambat  dapat  diamati  dengan terbentuknya zona bening di sekitar kertas cakram.  Zona  bening  yang  terbentuk  di sekitar kertas cakram kemudian dilakukan pengukuran  menggunakan  jangka  sorong dengan  satuan  millimeter  (mm).  Daya hambat  ini  menunjukkan  adanya  aktivitas antijamur  dari  ekstrak  kulit  buah  kakao. Pengujian  dilakukan  dengan  tiga  kali pengulangan dan menggunakan konsentrasi 25, 50, 75 dan 100%, diperoleh nilai DDH berturut-turut  sebesar  15,05  ±  0,75  mm; 16,85  ±  0,52  mm;  18,08  ±  0,54  mm;  dan 20,68 ± 0,40 mm dikatagorikan kuat sampai sangat  kuat.  Menurut  Alfiah  et  al.  (2015), jika  diameter  zona  hambat  ≤  5  mm  maka dikategorikan  lemah,  zona  hambat  6‒10 mm  dikategorikan  sedang,  zona  hambat 11‒20  mm  dikategorikan  kuat,  dan  zona hambat ≥ 20 mm dikategorikan sangat kuat.
Konsentrasi  tertinggi  ekstrak  etanol  kulit buah  kakao  memberikan  daya  hambat terhadap T.  mentagrophytes yaitu  pada konsentrasi 100% (20,68 ± 0,40 mm). Hal ini disebabkan oleh beberapa faktor, antara lain besarnya inokulum yaitu
mikroorganisme  yang  diinokulasikan  ke dalam  medium,  dimana  mikroorganisme tersebut masih hidup dan berada pada fase pertumbuhan  eksponensial.  Makin  besar inokulum  maka  semakin  kecil  zona  yang terbentuk.  Waktu  inkubasi  yaitu  proses pemeliharaan fungi dengan suhu dan waktu yang sesuai yang bertujuan untuk memantau perkembangan dan pertumbuhan  fungi.  Konsentrasi  ekstrak juga  mempengaruhi  perbedaan  luas  zona hambat dimana semakin tinggi konsentrasi, maka  semakin  cepat  difusi  akibatnya semakin besar pula daya hambat antifungi dan makin luas daya hambat yang terbentuk (Hardy,  2013).  Hasil  uji  diameter  daerah hambat  (DDH)  ektrak  etanol  kulit  buah kakao terhadap T. mentagrophytes dapat di lihat pada  Tabel II.
Tabel II. Hasil uji aktivitas antijamur ekstrak etanol kulit buah kakao terhadap pertumbuhan T. mentagrophytes Konsentrasi k (%) Diameter Daerah Hambat (mm) Kategori 25 15,05 ± 0,75 Sedang 50 16,85 ± 0,52 Kuat 75 18,08 ± 0,54 Kuat 100 20,68 ± 0,40 Sangat kuat Ketokonazol 15 µg (kontrol +) 50,20 ± 0,96 Sangat kuat DMSO 10% (kontrol ˗) 0,00 ± 0,00 -
Keterangan:  ‒  =  Negatif,  tidak  ada  aktivitas antijamur Berdasarkan pengukuran zona hambat  dapat  dilihat  bahwa  zona  hambat ekstrak etanol kulit buah kakao terhadap T. mentagrophytes lebih  kecil  dibandingkan dengan  kontrol  positif  yaitu  ketokonazol. Hal  ini  disebabkan  karena  ketokonazol memiliki  aktivitas  antimikotik  yang  poten terhadap dermatofit ragi misalnya candida albicans (Hardy, 2013). Kandungan
metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada serbuk  dan  ekstrak  kulit  buah  kakao  hasil penelitian  di  atas  diduga  bahwa  aktivitas antijamur berkaitan dengan adanya metabolit  sekunder  yang  terkandung  di dalamnya  dimana  senyawa  tersebut  dapat mengganggu metabolisme sel jamur sehingga  pertumbuhannya  terhambat  atau mati.
Dimetilsulfoksida (DMSO)
digunakan  dalam  penelitian  ini  karena dapat  melarutkan  senyawa  polar  dan  non polar  serta  tidak  mengganggu  hasil pengamatan karena tidak memiliki aktivitas terhadap  pertumbuhan  jamur  (Reapina, 2007).  Senyawa  antijamur  mempunyai berbagai mekanisme penghambatan terhadap  sel  jamur.  Djunaedy  (2008) menyatakan  bahwa,  senyawa  antijamur memiliki  mekanisme  kerja  dengan  cara menetralisasi  enzim  yang  terkait  dalam invasi  dan  kolonisasi  jamur,  merusak
membran  sel  jamur,  menghambat  sistem enzim jamur sehingga mengganggu terbentuknya ujung hifa dan memengaruhi sintesis  asam  nukleat  serta  protein. Terbentuknya  zona  hambat  pada  jamur tersebut  diduga  karena  adanya  senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  di dalam ekstrak etanol kulit buah kakao yaitu alkaloid, tanin, flavonoid dan saponin.
Berbagai  metabolit  sekunder  yang terdapat  pada  kulit  buah  kakao  memiliki aktivitas  antijamur  yang  terlihat  dengan terbentuknya zona bening melalui berbagai mekanisme kerja yaitu flavonoid memiliki mekanisme kerja dengan cara menghambat sintesis  asam  nukleat  yaitu  penghambatan transkripsi  dan  replikasi  (Noor,  2017).
Tanin  memiliki  mekanisme  kerja  dengan cara  menghambat  sintesis  dinding  sel (Samputri et al., 2020). Saponin mempunyai  tingkat  toksisitas  yang  tinggi terhadap  fungi.  Mekanisme  kerja  saponin sebagai  antifungi  berhubungan  dengan interaksi saponin dengan ergosterol membran.  Senyawa  saponin  berkontribusi sebagai antifungi dengan mekanisme kerja menurunkan  tegangan  permukaan  pada membran  sterol  dan  dinding  sel  fungi sehingga  permeabilitasnya  meningkat  dan ini mengakibatkan cairan intraseluler yang lebih  pekat  tertarik  keluar  sel  sehingga nutrisi,  zat-zat  metabolisme,  enzim  dan protein dalam sel keluar dan pertumbuhan fungi terhambat atau mati (Julianto, 2019).
Uji  konsentrasi  hambat  minimum (KHM)  dilakukan  dengan  metode  dilusi padat  yang  bertujuan  untuk  mengetahui konsentrasi  terendah  dari  masing-masing ekstrak  yang  masih  dapat  menghambat pertumbuhan  mikroba.  Pengujian  KHM dilakukan dengan cara menurunkan konsentrasi  ekstrak  yang  didapatkan  dari uji DDH dengan konsentrasi terendah yang telah menunjukkan diameter daya hambat. Konsentrasi terendah yang diperoleh dalam penelitian  ini  adalah  25%,  sehingga perlakuan  konsentrasi  hambat  minimum (KHM) dilakukan dari konsentrasi 25, 20, 15,  10,  dan  5%  (Tabel  III).  Konsentrasi terendah dari ekstrak yang dapat menghambat pertumbuhan jamur ditetapkan  sebagai  konsentrasi  hambat minimum (KHM).
Tabel III . Uji konsentrasi hambat minimum (KHM) ekstrak etanol kulit buah kakao terhadap pertumbuhan T.
Mentagrophytes Konsentrasi ekstrak etanol kulit buah kakao (%) Pertumbuhan T. mentagrophytes 25 - 20 - 15 - 10 - 5 + Kontrol positif (media SDA + jamur uji) + Kontrol negatif (media SDA) -
Keterangan:  +  =  terjadi  pertumbuhan jamur;  - = tidak terjadi pertumbuhan jamur
Nilai  KHM  ekstrak  kulit  buah kakao terhadap T. mentagrophytes
diketahui  pada  konsentrasi  10%,  maka dapat  dikatakan  bahwa  ekstrak  kulit  buah kakao  dapat  digunakan  sebagai  antijamur tergolong kuat. Hal ini dapat dibandingkan dengan  nilai  KHM  ekstrak  etanol  umbi bawang  dayak  ( Eleutherine  americana
(Aubl.)  Merr.  Ex  K.  Heyne.)  dapat menghambat pertumbuhan
T.
mentagrophytes pada  konsentrasi  15%
(Christoper et al., 2017). Tanaman insulin
( Tithonia  difersifolia Helmsl.)  efektif
menghambat pertumbuhan jamur T. mentagrophytes pada  konsentrasi  4%
dengan nilai DDH 8,28 mm (Peres, 2019).
Ekstrak  etanol  daun  kesum  ( Polygonum minus Huds.)  menghasilkan  zona  hambat paling besar pada konsentrasi 80% dengan nilai  DDH  20,63  mm,  hal  ini  merupakan konsentrasi paling efektif dalam menghambat pertumbuhan T.
mentagrophytes (Melinda et al., 2019).

## IV. KESIMPULAN
Senyawa  metabolit  sekunder  yang
terdapat  pada  serbuk  dan  ekstrak  etanol kulit  buah  kakao  antara  lain  alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin.  Konsentrasi ekstrak  etanol  kulit  buah  kakao  yang menghambat T.  mentagrophytes adalah 100%  (20,68  ±  0,40  mm).  Respon
pertumbuhan  terhadap T.  mentagrophytes
dalam kategori sedang sampai sangat kuat. Konsentrasi  hambat  minimum  (KHM) untuk T. mentagrophytes adalah 10%.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Seluruh penulis menyatakan bahwa tidak  ada  konflik  kepentingan  dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Alfiah, R. R., Khotimah, S., & Turnip, M. (2015).  Efektivitas  Ekstrak  Metanol Daun Sembung ( Mikania micrantha ) Terhadap Pertumbuhan Jamur Candida  albicans , Protobiont , 4 (1), 52-57.
Ayoola, G. A, Coker, H. A. B., Adsegun, S. A., Adepoju-Belaa, A. A., Obaweya, K., Azennia, E. C., & Atangbayila, T. O.  (2008).  Phytocemical  Screening and  Antioxidant  Actifities  of  Same Selected  Medicial  Plants  Used  for Malaria  Theraphy  in  Southwestern
Nigeria, Tropical Journal Pharmaceutical  Research , 3 ,  1019- 1024 Brutel , G.  F.,  &  Morse,  J.  S.  (2008). Mikrobiologi  Kedokteran (Edisi23).
EGC Press Jakarta.
Christoper, W., Natalia, D., & Rahmayanti, S.  (2017).  Uji  Aktivitas  Antijamur Ekstrak Etanol Umbi Bawang Dayak ( Eleutherine americana (Aubl.) Merr.  Ex.  K.  Heyne.)  Terhadap Trichophyton mentagrophytes Secara In  Vitro , Jurnal  Kesehatan  Andalas ,
6 (3), 685-689.
Depkes. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat .
Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia. Jakarta
Djunaedy,  A.  (2008).  Aplikasi  Fungisida Sistemik  dan  Pemanfaatan  Mikoriza dalam Rangka Pengendalian Patogen
Tular  Tanah  pada  Tanaman  Kedelai ( Glycine max L.), Embryo , 5 (2), 149- 157.
Egra,  S.,  Mardiana,  Roffin,  M.,  Adiwena, M.,  Jannah,  N.,  Kuspradini,  H.,  &
Mitsunaga,  T.  (2019).  Aktivitas Antimikroba Ekstrak Bakau ( Rhizophora mucronata ) dalam Menghambat Pertumbuhan Ralstonia solanacearum Penyebab  Penyakit Layu, Agrovigor: Jurnal Agroteknologi , 12 (1), 26-31. Fapohunda, & Afolayan. (2012).
Fermentation  of  Cocoa  Beans  and
Antimicrobial  Potentials  of  The  Pod Husk  Phytochemicals, Journal  of Physiology and Pharmocology Advances, 2 (3), 158-164.
Farnsworth,  N.  R.  (1966).  Biological  and Phytochemical  Screening  of  Plants, Journal of Pharmaceutical Sciences, 55 (3), 225-276.
Harborne, J. B. (1987). Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan , (Penerjemah Padmawita, K & Iwang,
S). ITB Press Bandung.
Hardy, S.P. (2013). Human Microbiology . USA: Taylor & Francis Inc.
Hasnaeni, Wisdawati, & Usman, S. (2019). Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap Rendemen dan Kadar Fenolik Ekstrak  Tanaman  Kayu  Beta-beta ( Lunasia  amara Blanco), Galenika Journal of Pharmacy, 5 (2): 175–182. IONI.  (2014). Anti  Jamur. Informatorium
Obat
Nasional
Indonesia. https://pionas.pom. go.id/ioni/bab-13-kulit/1310-
antiinfeksi-untuk-kulit/13102-anti- jamur
Julianto,  T.S.  (2019). Fitokimia  Tinjauan Metabolit  Sekunder  dan  Skrining Fitokimia .  Buku  Ajar.  Hlm  35-57. Bogor.
Kayaputri, I. L., Sumanti, D. M., Djali, M., Indiarto,  R.  &  Dewi,  D.  L.  (2014). Kajian  Fitokimia  Ekstrak  Kulit  Biji Kakao ( Theobroma cacao L.), Chimica et Natura Acta, 2 (1), 83-90.
Komala,  O.,  Sari,  D.  L.,  &  Sakinah,  N.
(2012).  Uji  Efektivitas  Ekstrak Etanol  Biji  Buah  Pare  ( Momordica charantia L.)  Sebagai  Antibakteri Salmonella  thypi , Jurnal  Ilmiah Farmasi, 2 (1), 36-40.
Liling, V.V., Lengkey, Y.K., Sambou, C.N.
& Palandi, R.R. (2020). Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Kulit Buah  Pepaya  ( Carica  papaya L.) terhadap  Bakteri  Penyebab  Jerawat
Propionibacterium acnes .
Biofarmasetikal  Tropis , 3 (1):  112  – 121.
Masro’atun,  Sari,  D.N.,  &  Hasanah,  H.U.
(2017).  Efektivitas  Ekstrak  Daun Kakao Terhadap Phytopthora palmivora . Jurnal Biologi dan Pembelajaran Biologi, 2 (1), 50-60. Melinda,  T.,  Asseggaf,  S.  N.  Y.  R.  S., Mahyarudin,  &  Natalia,  D.  (2019). Aktivitas  Antijamur  Ekstrak  Etanol Daun  Kesum  ( Polygonum  minus Huds.) Terhadap Jamur Trichophyton mentagrophytes,
Majalah
Kedokteran Andalas, 42 (35), 48-56. Mensah,  C.  A.,  Adamafio,  N.  A., Kwarteng, K. A. & Rodrigues, F. K. (2012).  Reduced  Tannin  Content  of Laccase-treated  Cocoa  ( Theobroma cacao )  Pod  Husk, International Journal  of  Biological  Chemistry,  6 (1), 31-36.
Noor, F. (2017). Uji Aktivitas Antibakteri
Ekstrak  Etanol  Rimpang  Kencur ( Kaempferia galanga L.) pada Bakteri Bacillus subtilis dan
Escherichia coli . Journal of Current Pharmaceutical  Sciences .  Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Banjarmasin.
Nursetiani,  A.,  &  Herdiana,  Y.  (2018).
Potensi  Biji  Klabet  ( Trigonella foenum-graecum L.) Sebagai Alternatif Pengobatan Herbal:
Review  Jurnal ,  Farmaka,  16 (2),  15- 23.
Panganiban, C. A., Reyes, R. B., Agojo, I., Armedilla, R., Consul, J. Z., Dagli, H. F., & Esteban, L. (2012).

## Antibacterial  Activity  of  Cacao
( Theobroma  cacao L.)  Pulp  Crude
Extract  Against  Selected  Bacterial Isolates, International  Journal  of Science  and  Clinical  Laboratory , 1 , 32-44.
Peres, E. V. (2019). Aktivitas Antifungi dari Fraksi  Ekstrak  Etanol  Beberapa Tanaman Famili Asteraceae Terhadap Jamur Trichophyton
mentagrophytes ,  [Universitas  Bhakti Kencana]. http://repository.bku.ac.id/xmlui/han dle/123456789/2704
Puspitasari, Ana, Y., & Nuria, M.C. (2013).
Aktivitas  Stimulasi  Ekstrak  Etanol Bunga dan Daun Cengkeh ( Syzygium aromaticum L.)  beserta  Identifikasi Golongan Senyawa Aktifnya. Jurnal Ilmiah Fakultas Farmasi Universitas Unwahas Semarang , 10 (1): 13-22.
Putri,  R.  K.,  &  Habib,  I.  (2007).  Daya Antifungi  Ekstrak  Etanol  Daun
Beluntas ( Pluchea indica L.) Terhadap Malassezia sp.  secara in vitro , Mutiara Medika, 7 (1), 7 - 17. Rasyadi,  Y.,  Yenti,  R.,  &  Jasril,  A.P. (2019).  Formulasi  dan  Uji  Stabilitas Fisik  Sabun  Mandi  Cair  Ekstrak Etanol  Buah  Kapulaga  ( Amomum compactum Sol ex Maton). Pharmaceutical Journal of Indonesia , 16 (2): 188–198.
Reapina  E.  (2007). Kajian  Aktivitas
Antimikroba  Ekstrak  Kulit  Kayu
Mesoyi (Cryptocaria massoia) Terhadap  Bakteri  Patogen  dan Pembusuk Makanan [Institut Pertanian Bogor]. http://repository.ipb.ac.id/handle/123 456789/11184
Roosheroe,  I.  G.,  Sjamsuridzal,  W.,  &
Oetari  ,  A.  (2014). Mikologi  Dasar dan Terapan . Yayasan Pustaka Obor Indonesia.
Samputri,  Revina,  D.,  Angeline,  N.,  & ratna,  W.  (2020).  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Biji Kamandrah  ( Croton  tiglium L.) terhadap  Pertumbuhan Salmonella typhi . Herb-Medicine  Journal,  3 (3): 19-33.
Siregar,  H.  M.,  Purwantoro,  R.  S.,
Sudarmono,  &  Agusta,  A.  (2009). Pengungkapan potensi obat pada tiga jenis  Begonia  terpilih  ( B.  muricata Blume.,  B.  multangula  Blume.,  B.
“Bacem Kebo” ) melalui uji antibakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus secara in vitro , Prosiding  Seminar  Nasional Sains  II:  Peningkatan  Peran  Sains dalam Pertanian dan Industri, Bogor,
14 (11), 543-551.
Sutanto,  I.,  Suhariah,  I.,  Pudji,  K.  S.,  & Saleha,  S.  (2008). Parasitologi
Kedokteran (Edisi  4).  FKUI  Press Jakarta Wardaningrum, R. Y. (2020).
Perbandingan  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Etanol  Terpurifikasi  Ubi Jalar  Ungu  (Ipomoea  batatas  L.) dengan  Vitamin  E .  [Universitas Ngudi Waluyo]. http:// http://repository2.unw.ac.id/696/1/ar tikel%20lia%20Universitas.pdf Witri, M. Y. (2013). Daya Hambat Perasan Daun Sambiloto Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Escherichia coli . Labolatorium Mikrobiologi Veteriner. Fakultas Kedokteran Hewan,  Universitas  Udayana,  Bali ,
2 (2), 142–150.