EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr
Efek Sitotoksisitas dan Genotoksisitas dari Fraksi-Fraksi Ekstrak Etanol Daun Rhizopora stylosa Griff. terhadap Pembelahan Sel Dan Kromosom pada Akar Allium cepa L.

## Sri Rejeki Rahayuningsih*, Tri Mayanti, Fathia Azzahra
Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Padjadjaran Jl. Raya Bandung Sumedang Km. 21 Jatinangor, Sumedang, Jawa Barat, 45363 Indonesia *Corresponding author, e-mail: sri.rejeki@unpad.ac.id
ABSTRAK: Rhizopora  stylosa ,  yang  dikenal  sebagai  bakau  merah,  merupakan  salah  satu  jenis tanaman  bakau  yang  dapat  ditemukan  melimpah  di  Indonesia.  Masyarakat  secara  tradisional memanfaatkan tanaman ini sebagai sumber pewarna dan obat tradisional. R. stylosa juga terbukti mengandung  zat  bioaktif  dan  metabolit  sekunder  yang  memiliki  nilai  penting  bagi  manusia  dan organisme  lain.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menguji  tingkat  sitotoksisitas  dan genotoksisitas senyawa metabolit sekunder dalam fraksi-fraksi ekstrak etanol R. stylosa terhadap akar  dan  kromosom  tanaman  bawang Allium  cepa .  Penelitian  ini  menggunakan  metode eksperimental  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL),  melibatkan  sebelas  fraksi  dengan konsentrasi  seragam  (125  ppm),  serta  kontrol  negatif  berupa  larutan  akuades  dan  kontrol  positif berupa larutan EMS, dengan dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan. Parameter yang diobservasi meliputi  indeks  mitosis,  pertumbuhan  akar  bawang,  dan  aberasi  kromosom.  Hasil  pengamatan dianalisis  menggunakan  ANOVA  Ft(α.05)  dan  uji  lanjutan  Duncan  Ft  (α.05).  Hasil  pengujian sebelas  fraksi  dengan  konsentrasi  125  ppm  menunjukkan  penurunan  nilai  indeks  mitosis  yang bervariasi, serta terdeteksi adanya aberasi kromosom dengan frekuensi yang beragam. Meskipun demikian,  sebelas  fraksi  tidak  menunjukkan  sifat  subletal  maupun  letal  terhadap  indeks  mitosis. Jenis  aberasi  kromosom  yang  teramati meliputi anaphase  spindle  break,  ball  metaphase,  break, bridge, c-mitosis, delayed anaphase, diagonal anaphase, disorder of chromosome kinetic, double bridge,  double  lesion,  fragment,  giant  cell  showing  polyploidy,  laggard,  micronucleus,  nuclear erosion, nuclear extrusion, ring, star, stickiness , dan vagrant .
Kata kunci: Fraksi; genotoksisitas; sitotoksisitas; R. stylosa
Cytotoxicity And Genotoxicity Effects of Fractions of Ethanol Extract from Rhizopora stylosa Griff. Leaves on Cell Division and Chromosomes in Allium cepa L. Roots
ABSTRACT: Rhizopora stylosa (red mangrove) is one species of mangrove that is easily found in large quantities in Indonesia. This plant is widely used traditionally by the community as dyes and herbal medicine. R. stylosa is also known to contain valuable bioactive substances and secondary metabolites  for  humans  and  other  organisms.  This  study  aims  to  examine  the  cytotoxicity  and genotoxicity of secondary metabolite compounds from fractions of R. stylosa ethanolic leaf extract on the roots and chromosomes of A. cepa onions. The study was conducted using an experimental method with a Completely Randomized Design (CRD), the treatment of eleven fractions with one 125  ppm  for  all  fractions,  and  negative  control  of  distilled  water  solution  and  positive  control  of EMS solution, with 3 repetitions for each treatment. The parameters observed were mitotic index, onion root growth and chromosomal aberration. The observations were analyzed with ANAVA Ft (α.05) and followed by Duncan Ft test (α.05). The results of eleven frac tions with a concentration of 125  ppm  showed  a  decrease  in  the  value  of  various  mitotic  indices  and  the  discovery  of chromosome aberrations with varying frequencies. However, eleven fractions did not show a sub- lethal or lethal effect onf the mitotic index. Among the types of chromosomal aberrations observed were  anaphase  spindle  break , ball  metaphase , break , bridge , c-mitosis , delayed  anaphase , diagonal anaphase , disorder of chromosome kinetic , double bridge , double lesion , fragment , giant cell  showing  polyploidy , laggard , micronucleus , nuclear  erosion , nuclear  extrusion , ring , star , stickiness , and vagrant .
Keywords : Fractions; genotoxicity; cytotoxicity; R. stylosa

## PENDAHULUAN
Rhizopora  stylosa ,  yang  lebih  dikenal  sebagai  bakau  merah,  merupakan  salah  satu  jenis tanaman  bakau  yang  dapat  ditemukan  secara  melimpah  di  Indonesia.  Penelitian  fitokimia  pada daun  R.  stylosa  telah  mengidentifikasi  keberadaan  senyawa  bioaktif  seperti  fenolik,  terpenoid, steroid,  dan  flavonoid  (Rahatyuningsih et  al .,  2021).  Meskipun R.  stylosa sering  dimanfaatkan dalam  konteks  pengobatan,  informasi  terkait  potensi  sitotoksik  dan  genotoksik  dari  tanaman  ini masih terbatas hingga saat ini. Bawang bombay ( Allium cepa ) merupakan salah satu biondikator yang digunakan dalam penelitian ini.
Tanaman  bawang  bombay  ( Allium  cepa L.)  memiliki  potensi  sebagai  bioindikator  dalam penelitian  tentang  sifat  sitotoksik  dan  genotoksik  berbagai  jenis  zat. A.  cepa terbukti  sangat responsif terhadap keberadaan senyawa kimia (Cabuga Jr. et al ., 2017). Sejumlah uji yang telah dilakukan  menegaskan  bahwa A.  cepa lebih  peka  dalam  mendeteksi  tingkat  toksisitas  dan genotoksisitas dibandingkan dengan metode uji lainnya. Dalam pengujian aktivitas antigenotoksik ekstrak  tanaman,  dapat  diamati  melalui  evaluasi  aberasi  kromosom  pada  akar A.  cepa . Pengukuran  indeks  mitosis  menjadi  penanda  penting  untuk  mengamati  peningkatan  dan penurunan sel selama proses mitosis (Kumari et al ., 2012). Hasil  penelitian  Rahayuningsih et  al .  (2021a)  mengindikasikan  bahwa  ekstrak  kasar  etanol dari  daun R.  stylosa memiliki  dampak  pada  peningkatan  frekuensi  aberasi  kromosom  dan penurunan nilai indeks mitosis. Efek ini sejalan dengan peningkatan konsentrasi ekstrak, dan pada konsentrasi  125  ppm,  ekstrak  tersebut  menunjukkan  sifat  subletal  terhadap  sel  akar  bawang A. cepa .  Hasil  serupa  juga  diamati  dalam  penelitian  yang  melibatkan  ekstrak  etanol  dari  daun Rhizophora apiculata dan Bruguiera gymnorrhiza .
Namun, penggunaan ekstrak kasar suatu tumbuhan menimbulkan beberapa kendala dalam upaya  pemanfaatannya.  Tantangan  utama  yang  muncul  dalam  pemanfaatan  ekstrak  kasar melibatkan  tingginya  kandungan  padatan,  aktivitas  yang  rendah,  dan  potensi  sifat  toksik (Windarwati, 2011). Oleh karena itu, diperlukan proses fraksinasi atau pemisahan dengan maksud untuk memperoleh fraksi ekstrak yang lebih murni dengan tingkat aktivitas yang lebih tinggi.
Hal tersebut menjadi dasar pentingnya dilakukan penelitian lanjutan mengenai kemungkinan jenis  senyawa  apa  saja  yang  terkandung  dalam  ekstrak  yang  dapat  berperan  dalam  aktivitas tersebut.  Hingga  saat  ini,  belum  ada  laporan  mengenai  penelitian  terkait  efek  sitotoksik  dan genotoksik  dari  kelompok  metabolit  sekunder  yang  berasal  dari  ekstrak  etanol  daun R.  stylosa . Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  potensi  sitotoksik  dan  genotoksik  dari sebelas  fraksi  yang  berasal  dari  ekstrak  etanol  daun R.  stylosa .  Hal  ini  dilakukan  untuk mengevaluasi  risiko  potensial  penggunaan  tanaman  obat R.  stylosa ,  mengingat  pengetahuan masyarakat tentang efek sitotoksik dan genotoksik dari tanaman obat masih terbatas.

## METODE PENELITIAN
Pada  penelitian  ini  digunakan  metode  deksriptif  eksploratif  dan  eksperimental.  Proses fraksinasi  dilakukan  melalui  metode  kromatografi  kolom  cair  vakum  (KCV).  Identifikasi  senyawa dilakukan  menggunakan  metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT).  Desain  penelitian  yang  diadopsi adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang melibatkan sebelas perlakuan fraksi ekstrak etanol dengan  konsentrasi  seragam  (125  ppm).  Kontrol  negatif  menggunakan  akuades  dengan penambahan  CMC  sebanyak  1000  µg/ml,  sementara  kontrol  positif  melibatkan  larutan  akuades dan  CMC  yang  ditambahkan  dengan  etil  metana  sulfat  (EMS)  sebanyak  1000  µg/ml.  Setiap perlakuan  dilakukan  tiga  kali  pengulangan.  Proses  perendaman  dilakukan  dalam  akuades  dan ekstrak selama 96 jam.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  alumunium  foil,  botol  kaca,  botol  reagen cokelat,  botol  semprot,  botol  vial, chamber , counter ,  gelas  beaker  1000  mL  dan  500  mL,  gelas plastik, gelas ukur, gunting, kaca preparat, kaca penutup, kamera, kertas saring, labu evaporasi, lampu  UV  λ  254nm  dan  365nm, magnetic  stirrer ,  mikroskop  cahaya,  mortar,  oven,  penggaris,
pinset,  pipet  tetes, rotary  evaporator ,  serangkaian  alat  destilasi,  serangkaian  alat  kromatografi kolom cair vakum, silet, sonikator,  dan zip lock .
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah akuades, aseto karmin 2%, aseton, CMC ( sodium  carboxymethyl  cellulose ),  daun  bakau  merah  ( Rhizophora  stylosa ) , EMS,  etanol  teknis, etil asetat, kutek bening, larutan fiksatif Carnoy , larutan McClintock, larutan, metanol , n -heksana, pereaksi  AlCl 3 ,  pereaksi  Dragendorff,  pereaksi  H 2 SO 4 10%  dalam  etanol,  pereaksi  Liebermann- Burchard,  silika  gel  G 60 ,  silika  gel  GF 254 ,  silika  impreg,  dan  umbi  bawang  bombay  ( Allium  cepa ). Sampel  daun R.  stylosa diambil  di  Arboretum  Hutan  Mangrove  Pantai  Lestari  Karangsong, Indramayu, Jawa Barat. Sampel daun yang dipilih berasal dari daun muda dengan diameter 5-10 cm pada posisi 1 hingga 5 dari plumula, sebanyak 5 kg (Kasitowati et al ., 2017).
Sampel  daun  dikeringkan  di  udara  terbuka  selama  3-4  hari.  Daun  kemudian  dikeringkan pada oven bersuhu 50  C. Daun yang telah kering selanjutnya dihaluskan dengan blender . Proses ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  ekstraksi  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol.  Daun R. stylosa kering  yang  telah  dihaluskan  menjadi  bubuk  dimasukkan  ke  dalam  botol  reagen  cokelat dan  direndam  dengan  etanol  teknis  selama  24  jam.  Kemudian  larutan  disaring  menggunakan kertas  filter Whatman No.  1  dan  hasil  penyaringan  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator pada suhu 40  C hingga diperoleh ekstrak pekat. Perendaman dengan etanol dilakukan sebanyak 3 kali (Dharmautama et al ., 2017 dengan modifikasi).
Ekstrak  pekat  etanol  dipisahkan  menggunakan  metode  kromatografi  kolom  cair  vakum (KCV)  dengan  fasa  diam  berupa  silika  gel  G 60 ,  dan  pelarut  dengan  elusi  yang  meningkatkan kepolaran secara bertahap, yaitu n-heksana, etil asetat, dan metanol. Fraksi yang dihasilkan dari proses  KCV  selanjutnya  dianalisis  menggunakan  metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT).  Fraksi- fraksi yang menunjukkan pola noda yang serupa digabungkan, kemudian diuapkan dan ditimbang untuk dilakukan identifikasi senyawa yang terkandung di dalamnya.
Identifikasi  kandungan  senyawa  dilakukan  dengan  metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT) berdasarkan Wulandari (2011). Lempeng KLT yang digunakan sebagai fasa diam adalah silika gel GF 254 .  Eluen  dimasukkan  ke  dalam  chamber  dan  dibiarkan  jenuh  selama  ±15  menit.  Visualisasi noda dilakukan dengan cara menyemprotkan pereaksi penampak noda seperti H 2 SO 4 10% dalam etanol,  AlCl 3 ,  Dragendorff,  dan  Libermann-Burchard  pada  lempeng  KLT.  Deteksi  noda  dilakukan menggunakan  cahaya  normal  dan sinar  UV  gelombang pendek  256nm  atau  gelombang  panjang 365nm.  Perhitungan  nilai  Rf,  yang  menggambarkan  jarak  yang  ditempuh  suatu  komponen terhadap jarak keseluruhan, dapat dilakukan dengan rumus tertentu.
Rf = 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑒𝑙𝑢𝑒𝑛 = 𝑍𝑠 𝑍𝑓
Pembuatan  berbagai  konsentrasi  larutan  uji  dari  setiap  fraksi  etanol  daun R.  stylosa , digunakan akuades dan CMC sebagai pelarut. Konsentrasi yang digunakan adalah 125 ppm untuk semua  fraksi.  Pembuatan  konsentrasi  berdasarkan  Lapham  (2015)  bahwa  125  ppm  berarti melarutkan 125 mg sampel dalam 1000 mL pelarut.

## 125 ppm = 125 𝑚𝑔 1000 𝑚𝐿
Umbi bawang Bombay ( Allium cepa ) berukuran ± 50gram disiapkan. Bagian akar kering pada cakram  bawah  umbi  dibersihkan  dengan  hati-hati  tanpa  merusak  bagian  primordial  akar.  Bagian cakram  umbi  kemudian  direndam  dalam  akuades  selama  sekitar  48  jam  di  dalam  gelas  plastik untuk  merangsang  pertumbuhan  akar  dengan  panjang  sekitar  0,5-1  cm.  Setelah  itu,  bawang ditanam  sesuai  dengan  perlakuan  yang  sesuai  dengan  masing-masing  fraksi  ekstrak  etanol, dengan  konsentrasi  seragam  sebesar  125  ppm.  Sebagai  kontrol,  digunakan  akuades  dengan penambahan  CMC  untuk  kontrol  negatif,  dan  kontrol  positif  menggunakan  etil  metana  sulfat (EMS). Proses perendaman umbi A. cepa dalam akuades+CMC, fraksi ekstrak etanol R. stylosa , dan EMS dilakukan selama 96 jam (Priyanka et al ., 2019 dengan modifikasi).
Pembuatan  preparat  akar  bawang  dilakukan  menggunakan  metode squash. Akar  yang muncul pada setiap umbi dipotong sepanjang 0,5 cm. Potongan ujung akar ditempatkan ke dalam botol vial. Potongan akar difiksasi dengan McClintock (campuran 3 etanol : 1 asam asetat glasial) selama 24 jam. Akar kemudian dipotong sebanyak 2 mm dan dihidrolisis menggunakan HCl 1 N selama  15  menit  setelahnya  dicuci  dengan  akuades.  Selanjutnya  akar  direndam  dalam  larutan Carnoy selama  20  menit.  Proses  pewarnaan  dilakukan  menggunakan  aseto  karmin  2%  dan dibiarkan  selama  ±  2,5  jam  agar  warna  menyerap.  Potongan  akar  dipindahkan  ke  atas  kaca preparat. Potongan akar ditetesi kembali dengan larutam aseto karmin 2% sebanyak 2 tetes. Kaca preparat selanjutnya ditutup dengan kaca penutup secara hati-hati, dan metode squash dilakukan menggunakan  telapak  tangan  bagian  bawah.  Terakhir,  kaca  penutup  dan  kaca  preparat  disegel menggunakan kutek bening (Tedesco and Laughinghouse, 2012).
Akar yang telah tumbuh pada umbi bawang yang telah diberi perlakuan diukur panjangnya kemudian  dihitung  rata-ratanya.  Pertumbuhan  panjang  akar  dihitung  menggunakan  rumus (Timothy et al ., 2014):
% Pertumbuhan Panjang Akar = jumlah rata−rata panjang akar perlakuan jumlah rata−rata panjang akar Kontrol × 100%
Masing-masing preparat akar bawang diamati di bawah mikroskop cahaya pada perbesaran 400x.  Sel  yang  diamati  berjumlah  1000  sel  untuk  setiap  perlakuan.  Sel-sel  diamati  pada  tahap interfase  dan tahap  pembelahan  sel,  yaitu  profase, metafase,  anafase  dan telofase.  Perhitungan nilai indeks mitosis dilakukan berdasarkan rumus (Tedesco and Laughinghouse, 2012):
% IM = jumlah sel pada tahap mitosis jumlah sel yang diamati × 100%
Frekuensi  aberasi  kromosom  sel  (%)  dihitung  berdasarkan  jumlah  sel  yang  mengalami aberasi  pada  sel  yang  mengalami  mitosis  dibagi  dengan  total  sel  yang  diamati  (100  sel)  pada setiap perlakuan. Rumus frekuensi aberasi kromosom Timothy et al . (2014):
% Sel Aberasi = jumlah sel aberasi jumlah sel yang diamati × 100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  ekstraksi  maserasi  diperoleh  ekstrak  pekat  etanol  sebanyak  90,2  g.  Ekstrak  pekat tersebut  kemudian  difraksinasi  dengan  menggunakan  metode  kromatografi  cair  vakum  (KCV). Sebelas fraksi yang dihasilkan dari proses KCV selanjutnya dianalisis menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) untuk mengidentifikasi jenis metabolit sekunder yang terkandung dalam masing- masing  fraksi,  berdasarkan  pola  nodanya.  Analisis  profil  KLT  fraksi  dilakukan  dengan menggunakan  empat  pereaksi  semprot,  yaitu  H 2 SO 4 10%  dalam  etanol,  AlCl 3 ,  Dragendorff,  dan Libermann-Burchard  (LB).  Dengan  menggunakan  metode  ini,  dapat  dilakukan  identifikasi  dan karakterisasi  lebih  lanjut  terhadap  komponen-komponen  kimia  yang  terdapat  dalam  fraksi-fraksi tersebut.
Pereaksi  asam  sulfat  (H 2 SO 4 )  digunakan  dalam  deteksi  umum  keberadaan  metabolit sekunder.  Pereaksi  ini  dapat  mendeteksi  keberadaan  senyawa  steroid,  terpen,  dan  kelompok fenolik (Stahl, 1969).
Berdasarkan hasil KLT ( Gambar 1 ), fraksi 1 menunjukkan satu noda oranye dengan nilai Rf 0,67 dan tiga nodanya berwarna hijau dengan nilai Rf masing-masing 0,95, 0,87, dan 0,82. Fraksi 2  memiliki  tiga  nodanya,  yaitu  warna  oranye  dengan  Rf  0,67,  hijau  dengan  Rf  0,63,  dan  biru dengan  Rf  0,50.  Fraksi  3  menunjukkan  satu  noda  oranye  dengan  Rf  0,70  dan  dua  nodanya berwarna hijau dengan nilai Rf berturut-turut 0,63 dan 0,55. Fraksi 4 menunjukkan pola noda yang lebih bervariasi, terdiri dari satu noda oranye (Rf 0,7), dua nodanya berwarna hijau (Rf 0,63 dan
0,55),  dan  satu  noda  merah  (Rf  0,43).  Fraksi  5  dan  6  menunjukkan  satu  noda  berwarna  merah muda  (nilai  Rf  0,43)  dan  satu  noda  hijau  (Rf  0,23).  Hasil  noda  berwarna  merah  muda  juga ditemukan pada fraksi 7, 8, dan 9 dengan nilai Rf 0,78. Sementara itu, pada fraksi 10 dan 11 tidak terdeteksi  warna  noda  setelah  disemprot  dengan  reagen  asam  sulfat,  namun  pada  sinar  UV 365nm menunjukkan adanya nodanya berwarna oranye dan kuning.
Warna  yang  muncul  pada  masing-masing  fraksi  (Fraksi  1-10)  menunjukkan  bahwa  fraksi- fraksi tersebut mengandung senyawa golongan fenolik (flavonoid, tannin), terpen, dan steroid. Jork et al . (1990) menyatakan bahwa penampak noda asam sulfat digunakan untuk deteksi kelompok fenolik,  gula,  steroid,  dan  terpen.  Menurut  Reich and Schibli  (2006),  noda  berwarna  biru  dan oranye-cokelat menunjukkan golongan steroid atau terpenoid, merah-merah muda untuk golongan lignan  atau  diterpen,  dan  hijau  untuk  derivat  monoterpen  setelah  dipanaskan.  Pada  penyinaran unltraviolet, kelompok furanokumarin akan menunjukkan warna kuning, hijau-kebiruan (Harborne, 1987).
Gambar 1. Kromatogram  Fraksi  1-6  dengan  eluen  n-heksan:etil  asetat  (7:3)  (a)  dan  Fraksi  7-11 dengan  eluen  MTC:aseton  (8:2),  fasa  diam  silika  gel  GF 254 ,  pereaksi  semprot  asam sulfat 10% dalam etanol, dan jarak elusi 5 cm
Gambar  1 Kromatogram  Fraksi  1-6  dengan  eluen  n-heksan:etil  asetat  (7:3)  (a)  dan  Fraksi  7-11 dengan  eluen  MTC:aseton  (8:2),  fasa  diam  silika  gel  GF 254 ,  pereaksi  semprot  AlCl 3 , dan  jarak  elusi    5  cm.  Keterangan:  Noda  berwarna  kuning  yang  tampak  setelah penyemprotan menggunakan AlCl 3 tidak ditemukan pada hasil penyemprotan dengan H 2 SO 4 yang menandakan bahwa penampak noda AlCl 3 lebih spesifik dalam identifikasi flavonoid dibandingkan dengan H 2 SO 4 . d c Di bawah sinar UV 365nm a b Di bawah sinar UV 254nm Setelah disemprot AlCl 3 e d d d
d d d d
Senyawa  fenolik  merupakan  senyawa  yang  dihasilkan  oleh  tumbuhan  sebagai  respon terhadap  stres  lingkungan.  Komponen  pada  senyawa  ini  diketahui  memiliki  peranan  penting sebagai  agen  pencegah  dan  pengobatan  beberapa  gangguan  penyakit  seperti  arteriosklerosis, disfungsi otak, diabetes dan kanker (Garg et al. , 2016).
Penampak Noda AlCl 3
Pereaksi semprot AlCl 3 merupakan pereaksi yang digunakan untuk mendeteksi keberadaan flavonoid. Pereaksi ini dibuat dengan melarutkan larutan alumunium klorida 1% dalam etanol. Hasil positif  keberadaan  flavonoid  diamati  di  bawah  sinar  UV  365nm  dan  akan  menghasilkan  warna kuning (Stahl, 1969). Hasil positif keberadaan senyawa flavonoid menggunakan pereaksi semprot AlCl 3 ditandai  dengan  munculnya  warna  kuning  pada  gelombang  panjang  360nm  (Harborne, 2006).  Berdasarkan  hasil  pengamatan  (Gambar  2),  noda  berwarna  kuning  pada  UV  365nm ditemukan pada fraksi 6 (c) dengan nilai Rf 0,33, 7 (d) dengan nilai Rf 0,33, dan pada fraksi 8 (e) ditemukan 2 noda kuning dengan nilai Rf 0,33 dan 0,15.
Flavonoid  adalah  jenis  senyawa  yang  mengandung  dua  cincin  aromatik  dan  memiliki  lebih dari satu gugus hidroksil. Senyawa ini menonjol karena aktivitas antioksidan yang dimilikinya, yang mampu  meningkatkan  sistem  pertahanan  tubuh  terhadap  penyakit  yang  disebabkan  oleh  radikal bebas. Selain itu, flavonoid juga terbukti memiliki potensi untuk mengurangi risiko penyakit jantung dan kanker (Hanin dan Pratiwi, 2017).

## Penampak Noda Dragendorff
Pereaksi  Dragendorff  adalah  suatu  pereaksi  penyemprot  yang  digunakan  untuk mengidentifikasi  senyawa  alkaloid  pada  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT).  Setelah  penyemprotan, plat  KLT  akan  menunjukkan  bercak  berwarna  cokelat-jingga/oranye-merah/cokelat  dengan  latar belakang  berwarna  kuning.  Pereaksi  ini  disiapkan  dengan  mencampurkan  bismut  nitrat,  asam tartarat, kalium iodida, dan air (Harborne, 1987).
Berdasarkan hasil pengamatan (Gambar 3), pada plat KLT setelah diberi pereaksi semprot Dragendorff  tidak  ditemukan  kemunculan  warna  noda  oranye-merah  maupun  cokelat.  Hasil  ini mengindikasikan  bahwa  fraksi-fraksi  yang  diperoleh  tidak  mengandung  senyawa  alkaloid  di dalamnya.  Hal  ini  sesuai  dengan  uji  yang  sebelumnya  telah  dilakukan  oleh  Rahayuningsih et  al . (2021b)  berdasarkan  uji  fitokimia  ekstrak  etanol  daun R.  stylosa tidak  menunjukkan  hasil  positif pada uji alkaloid.
Gambar 2. Kromatogram  Fraksi  1-6  dengan  eluen  n-heksan:etil  asetat  (7:3)  (a)  dan  fraksi  7-11 dengan  eluen  MTC:aseton  (8:2),  fasa  diam  silika  gel  GF254,  pereaksi  semprot Dragendorff, dan jarak elusi 5 cm
Di bawah sinar UV 365nm
Di bawah sinar UV 254nm
b a
Setelah disemprot Dragendorff

## Penampak Noda Liebermann-Burchard
Pereaksi  semprot  Liebermann-Burchard  digunakan  untuk  mendeteksi  keberadaan  sterol (seperti kolesterol dan ester) serta beberapa senyawa steroid dan triterpen. Pada proses deteksi senyawa  steroid  dan  terpen,  penampakan  noda  berwarna  hijau  menunjukkan  keberadaan senyawa  steroid,  sementara  warna  merah  muda-ungu  mengindikasikan  keberadaan  senyawa terpen  (Stahl,  1969).  Profil  noda  yang  tampak  menggunakan  pereaksi  ini  dapat  dilihat  pada Gambar 4.
Steroid  adalah  terpenoid  lipid  yang  dikenal  dengan  empat  cincin  kerangka  dasar  karbon yang  menyatu.  Dalam  bidang  farmakologi,  steroid  memiliki  peran  yang  signifikan,  diharapkan dapat menjadi komponen kimia yang memberikan nilai terapeutik pada suatu tumbuhan (Nasrudin et  al .,  2017).  Steroid  juga  memiliki  manfaat  sebagai  antibiotik,  antikanker,  dan  antiinflamasi. Sebagai  senyawa  nonpolar,  steroid  bersifat  lipofilik  sehingga  larut  dalam  pelarut  n-heksana. Meskipun demikian, fitosterol yang merupakan subkelas steroid dapat larut dalam air dan alkohol karena adanya gugus hidroksil (OH) pada strukturnya (Sultan and Raza, 2015).

## Pengaruh  Fraksi-Fraksi  dari  Ekstrak  Etanol  Daun  Rhizophora  stylosa  Terhadap  Indeks Mitosis Akar Bawang Bombay (Allium cepa)
Data  hasil  pengamatan  fase-fase  pembelahan  mitosis  berupa  profase,  metafase,  anafase, dan telofase digunakan untuk perhitungan indeks mitosis. Berdasarkan hasil, didapatkan nilai rata- rata indeks mitosis tertinggi sebesar 71,13% pada fraksi 10 dan 70,86% pada fraksi 7. Nilai rataan indeks mitosis terendah terdapat  pada  perlakuan  fraksi  2  dengan  nilai  indeks mitosis  63,6%  dan pada  fraksi  4  dengan  nilai  rataan  indeks  mitosis 64,46%.  Fraksi  lainnya memberikan  nilai  rataan indeks mitosis yang beragam. Data lengkap nilai indeks mitosis setiap perlakuan dapat dilihat pada Tabel 1.
Berdasarkan hasil pengamatan, nilai indeks mitosis mengalami penurunan yang beragam seiring dengan pemberian perlakuan fraksi yang berbeda. Variabilitas ini mungkin disebabkan oleh perbedaan kandungan metabolit  sekunder  pada  setiap fraksi.  Fraksi-fraksi  tersebut mengandung berbagai golongan senyawa yang sulit untuk dijelaskan terkait dengan bioaktivitas atau aplikasinya terhadap A.  cepa. Menurut  Mesi and Koplikua  (2013),  penurunan  indeks  mitosis  di  bawah  50% menandakan  efek  subletal,  sementara  penurunan  di  bawah  22%  menunjukkan  efek  letal.  Dalam konteks ini, hasil menunjukkan bahwa nilai indeks mitosis dari semua perlakuan fraksi tidak turun di  bawah  50%,  yang  mengindikasikan  bahwa  fraksi  dari  ekstrak  etanol R.  stylosa tidak memberikan efek subletal terhadap nilai indeks mitosis A. cepa .
Gambar 3 . Kromatogram  Fraksi  1-6  dengan  eluen  n-heksan:etil  asetat  (7:3)  (a)  dan  Fraksi7-11 dengan  eluen  MTC:aseton  (8:2),  fasa  diam  silika  gel  GF 254 ,  pereaksi  semprot Liebermann- Burchard, dan jarak elusi 5 cm
Setelah disemprot Liebermann-Burchard Di bawah sinar UV 365nm Di bawah sinar UV 254nm
a b
Tabel 1. Pengaruh  Fraksi-Fraksi  dari  Ekstrak  Etanol  Daun  Rhizophora  stylosa  Terhadap Indeks Mitosis Akar Bawang Bombay (Allium cepa)
Perlakuan Total Sel Indeks Mitosis Total Sel Membelah Rata – Rata IM±SE (%) Penurunan (%) P M A T KN 3000 2222 41 23 43 2329 77,63±0,82 - Fraksi 1 3000 1935 65 24 35 2059 68,63±0,83 88,4 Fraksi 2 3000 1805 35 31 37 1908 63,6±0,70 81,9 Fraksi 3 3000 1853 30 43 32 1958 64,46±0,62 84,0 Fraksi 4 3000 1834 27 35 38 1934 64,46±0,28 83,0 Fraksi 5 3000 1941 39 49 46 2075 69,16±1,29 89,0 Fraksi 6 3000 1915 41 30 19 2005 66,83±2,58 86,0 Fraksi 7 3000 2044 29 25 28 2126 70,86±0,06 91,2 Fraksi 8 3000 1835 30 33 45 1943 64,76±0,47 83,4 Fraksi 9 3000 1921 25 34 46 2026 67,53±0,48 87,0 Fraksi 10 3000 2028 29 29 48 2134 71,13±0,35 92,0 Fraksi 11 3000 1950 38 26 34 2048 68,27±0,78 88,0 KP 3000 548 10 8 13 579 19,30±0,12 24,8
Keterangan: P = Profase     M = Metafase     A= Anafase    T=Telofase
Hasil  perhitungan  Anava  menunjukkan  bahwa  perlakuan  sebelas  fraksi  dengan konsentrasi 125 ppm berpengaruh nyata terhadap indeks mitosis. Hal ini dapat diketahui dengan nilai  F  hitung  yang  lebih  besar  dibanding  F  tabel  (214,556>2,15).  Untuk  mengetahui  perlakuan yang berpengaruh terhadap nilai indeks mitosis, maka dilakukan Uji Jarak Berganda Duncan. Hasil uji Duncan dapat dilihat pada Tabel 2.
Berdasarkan  hasil  Uji  Jarak  Berganda  (Duncan),  nilai  indeks  mitosis  perlakuan  sebelas fraksi uji dari ekstrak etanol daun R. stylosa dengan konsentrasi 125 ppm menunjukkan pengaruh pada level yang beragam, namun tidak ada fraksi yang menunjukkan pengaruh yang sama dengan kontrol  positif.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sebelas  fraksi  uji  memiliki  level  sitotoksisitas  yang berbeda  dan  tidak  ada  yang  sama  dengan  kontrol  positif.  Level  sitotoksisitas  yang  mendekati kontrol  positif  terdapat  pada  fraksi  2,  3,  4,  dan  8.  Fraksi  dengan  level  sitotoksisitas  yang  sama dengan kontrol negatif terdapat pada fraksi 1, 5, 7, 10, dan 11.
Berdasarkan  Tabel  1,  penurunan  indeks  mitosis  pada  fraksi  2,  3,  dan  4  mencerminkan penurunan  yang  lebih  mencolok  jika  dibandingkan  dengan  fraksi  lainnya.  Penurunan  ini kemungkinan  disebabkan  oleh  adanya  metabolit  sekunder,  seperti  terpenoid  dan  steroid,  yang terdapat  dalam  fraksi  tersebut.  Triterpenoid  yang  berasal  dari  ekstrak  akar Trichosanthes  dioica telah  terbukti  memiliki  efek  penghambatan  terhadap  pertumbuhan  akar  dan  mitosis  sel (Bhattacharya and Haldar, 2011).
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Liu et  al .  (2012),  senyawa  terpenoid  yang terdapat  dalam Zingiber  officinale juga  dapat  memicu  terjadinya  apoptosis  pada  sel  kanker endometrium  Ishikawa  dan  ECC-1.  Senyawa  bioaktif  lainnya,  seperti  steroid  dan  alkaloid, menunjukkan  aktivitas  sitotoksik  dan  antitumor  (anti-kanker),  serta  memiliki  sifat  antimikroba (antibakteri  dan  antijamur).  Selain  itu,  senyawa  tersebut  juga  menunjukkan  sifat  antiplasmodial, menghambat  in-vitro  agregasi  trombosit  manusia,  dan  menyebabkan  hemolisis  eritrosit  manusia (Mioso et al ., 2017).
Fraksi-fraksi  yang  mengandung  flavonoid  terdapat  pada  fraksi  6,  7,  dan  8.  Ketiga  fraksi tersebut  menunjukkan  nilai  indeks  mitosis  yang  berbeda.  Fraksi  6  dan  7  mengalami  penurunan nilai indeks mitosis yang tidak terlalu tinggi terhadap kontrol apabila dibandingkan dengan fraksi 8. Hal  ini  menunjukkan  adanya  potensi  sitotoksik  dari  flavonoid  yang  terkandung  pada  fraksi  8. Menurut  Ismaryani et  al .  (2018),  flavonoid  dapat  menstimulasi  aktivitas  enzim  sehingga
menginduksi  apoptosis,  menghambat  siklus  sel,  mengatur  fungsi  dari  imun  tubuh  dan menghambat inflamasi, antiproliferasi, dan angiogenesis sel kanker. Berdasarkan penelitian yang dilakukan  oleh  Zhang et  al .  (2018),  tiga  jenis  flavonoid  yang  berasal  dari Tephroseris  kirilowii mampu  menghambat  proliferasi  sel  pada  sel  kanker  manusia.  Flavonoid  aktif  tersebut menyebabkan cell cycle arrest pada fase M/G2 dan menginduksi apoptosis dan autofagi pada sel kanker payudara manusia.
Fraksi-fraksi  yang mengandung  metabolit  kelompok  fenolik,  seperti  fraksi  5,  9,  10,  dan  11, menunjukkan  penurunan  nilai  indeks  mitosis  yang  tidak  begitu  signifikan  dibandingkan  dengan kontrol.  Penurunan  ini  dapat  diatribusikan  kepada  hambatan  yang  disebabkan  oleh  senyawa fenolik,  yang  mungkin  memperlambat  fase  I  dalam  enzim  metabolit.  Selain  itu,  senyawa  fenolik juga  dapat  menyebabkan  sel  mengalami  hambatan  pada  berbagai  fase  sel,  termasuk  pada  fase G1,  S,  S-G2,  dan  G2,  dengan  cara  langsung  menurunkan  regulasi  siklin  dan cyclin-dependent  kinases (CDKs), atau secara tidak langsung menginduksi ekspresi gen p21, p27, dan p53 (Dai and Mumper, 2010). Belum  ada  publikasi  yang  melaporkan  mengenai  potensi  sitotoksik  dari  fraksi-fraksi  yang berasal  dari  ekstrak  etanol  daun R.  stylosa .  Namun,  pada  penelitian  sebelumnya,  berdasarkan perhitungan  indeks  mitosis,  ekstrak  kasar  etanol  daun R.  stylosa pada  konsentrasi  125  ppm bersifat subletal terhadap sel akar bawang A. cepa dan mengalami penurunan nilai indeks mitosis seiring  dengan  kenaikan  konsentrasi.  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Haryoto  dan Putri  (2019)  terhadap  tiga  fraksi    ( n -heksana,  etil  asetat,  dan  air)  yang  berasal  dari  tumbuhan sefamilia Bruguiera gymnorrhiza menunjukkan bahwa ketiga fraksi tersebut tidak memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker payudara T47D. Penelitian yang dilakukan oleh Diastuti et al . (2008) menunjukkan bahwa fraksi kloroform yang berasal dari R. mucronata memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel Myeloma yang lebih tinggi dibandingkan dengan fraksi etil asetat dan fraksi metanol dengan nilai IC 50 28,72µg/mL.
Pengaruh  Fraksi-Fraksi  dari  Ekstrak  Etanol  Daun  Rhizophora  stylosa  Terhadap  Panjang Akar Bawang Bombay ( Allium cepa )
Akar  yang  tumbuh setelah  perendaman  dalam masing-masing  fraksi  selama  96 jam  diukur dan  dihitung  rata-rata  pertumbuhan  panjangnya.  Hasil  menunjukkan  bahwa  fraksi  1  dan fraksi  2 menghasilkan pertumbuhan akar tertinggi, dengan panjang rata-rata masing-masing sebesar 2,02
Tabel 2. Hasil  Uji  Jarak  Berganda  (Duncan)  Indeks  Mitosis  Akar  A.  cepa  dengan  Pemberian Fraksi Uji (125ppm)
Perlakuan N (α 0.05) Kontrol Negatif 3 77,63 a Fraksi 1 3 68,63 ab Fraksi 2 3 63,60 e Fraksi 3 3 65.27 cde Fraksi 4 3 64,47 de Fraksi 5 3 69,17 ab Fraksi 6 3 66.83 bcd Fraksi 7 3 70.87 a Fraksi 8 3 64.77 de Fraksi 9 3 67,53 bcd Fraksi 10 3 71,13 a Fraksi 11 3 68,27 abc Kontrol Positif 3 19,30 f
Keterangan:  Rataan  hasil  yang  diikuti  huruf  yang  sama  menunjukkan  perlakuan  tersebut memberikan pengaruh yang sama dengan taraf nyata α =0,05
Journal of Marine Research Vol 12, No. 4 November 2023, pp. 701-716
Tabel 3 Rata-rata Pertumbuhan Panjang Akar A. cepa dengan Pemberian Fraksi Uji (125ppm)
Rata-rata panjang akar ± SE (cm) Pertumbuhan akar terhadap kontrol Penurunan/ penambahan pertumbuhan (%) KN 2,22±0,33 100 0 F1 2,02±0,11 91 -9 F2 2.01±0,02 96,5 -3.5 F3 1,25±0,10 56,5 -43.5 F4 1,12±0,22 50,5 -49.5 F5 1,56±0,25 70,5 -29,5 F6 1,73±0,27 78 -22 F7 1,72±0,04 77,5 -22,5 F8 1,78±0,52 80,5 -19,5 F9 1,55±0,69 70 -30 F10 1,75±0,60 79 -21 F11 1,07 ±0,29 48,5 -51,5 K P 0,37±0,14 17 -83
Keterangan: P=perlakuan, KN=Kontrol negatif, KP=kontrol positif
cm  dan  2,20  cm.  Sementara  itu,  fraksi  lainnya  menunjukkan  variasi  nilai  rata-rata  pertumbuhan panjang  akar,  dan  fraksi  11  dan  4  memiliki  rata-rata  panjang  akar  terendah,  yakni  1,07  cm  dan 1,12 cm. Data secara keseluruhan dapat dilihat pada Tabel 3.
Hasil analisis Anava dengan taraf kepercayaan 95% menunjukkan bahwa perlakuan sebelas fraksi dari ekstrak etanol R. stylosa, kontrol positif, dan kontrol negatif tidak memberikan pengaruh yang  nyata  terhadap  pertumbuhan  panjang  akar.  Menurut  Koul et  al. (2005) dalam Nurulhaq (2018), pertumbuhan panjang akar yang tidak berbeda nyata disebabkan aktivitas senyawa kimia yang terkandung dapat bekerja secara sinergis sebagai efek terapeutik maupun antagonis sebagai toksikan sehingga efek yang ditimbulkan terhadap pertumbuhan akar tidak terlalu signifikan.
Penurunan  dalam  pertumbuhan  akar  dapat  dianggap  sebagai  indikasi  bahwa  larutan  uji mengandung senyawa yang menghambat pembelahan sel, khususnya pada bagian meristematik yang aktif dalam proses pembelahan. Menurut Konuk et al. (2007) menyatakan bahwa penurunan lebih  dari  45%  dalam  panjang  akar  dapat  diartikan  sebagai  adanya  senyawa  dalam  larutan  uji yang bersifat toksik, dan kemungkinan dapat menimbulkan efek subletal pada tanaman.
Berdasarkan hasil pada Tabel 3, penurunan pertumbuhan panjang akar di atas 45% diamati pada  fraksi  11  dan  4,  menandakan  bahwa  metabolit  sekunder  yang  ada  dalam  fraksi  tersebut bersifat  toksik  dan  dapat  berpotensi  subletal  terhadap A.  cepa .  Menurut  Sajitha  dan  Thoppil (2018),  senyawa  fenolik,  terpenoid,  dan  saponin  dalam  ekstrak Ghomphostemma  heyneanum dapat  menyebabkan  efek  sitotoksik  dan  apoptosis  pada  meristem  akar A.  cepa ,  yang  pada akhirnya  mengakibatkan  penurunan  panjang  akar.  Namun,  meskipun  terjadi  penurunan  panjang akar,  nilai  indeks  mitosis  pada  fraksi  tersebut  tidak  menunjukkan  penurunan  lebih  dari  50%, sehingga efek yang terjadi masih bersifat subletal. Barbério et al. (2009) menjelaskan bahwa hal ini mungkin disebabkan oleh senyawa dalam sampel hanya mengganggu siklus sel, menyebabkan efek mitodepresif terhadap A. cepa , tetapi tidak mencapai tingkat subletal.
Pengaruh  Fraksi-Fraksi  dari  Ekstrak  Etanol  Daun  Rhizophora  stylosa  Terhadap  Aberasi Kromosom Akar Bawang Bombay (Allium cepa)
Aberasi  kromosom  merupakan  perubahan  yang  terjadi  pada  struktur  kromosom  sehingga menghasilkan  kerusakan  ataupun  pertukaran  materi  kromosom  (Oyeyemi and Bakare,  2013).
Berdasarkan  hasil  pengamatan,  frekuensi  aberasi  kromosom  tertinggi  didapatkan  pada  fraksi  3 sebesar  16,3%  diikuti  dengan  fraksi  11  dan  fraksi  4  dengan  frekuensi  berturut-turut  sebesar 13,67% dan 13,3%. Fraksi lainnya memberikan hasil frekuensi aberasi kromosom yang beragam. Data  hasil  perhitungan  frekuensi  aberasi  kromosom A.  cepa secara  keseluruhan  disajikan  pada Tabel 4.
Berdasarkan hasil pengamatan, bahwa frekuensi aberasi kromosom tertinggi terdapat pada fraksi  3,  4,  dan  11.  Aberasi  kromosom  yang  beragam  tersebut  mungkin  disebabkan  oleh keberadaan  berbagai  kelompok  metabolit  sekunder  dalam  fraksi  tersebut.  Menurut  Silva  et  al. (2003),  senyawa  fenolik  yang  terkandung  dalam  fraksi  tersebut  dapat  menimbulkan  efek genotoksik, walaupun mekanisme prosesnya belum sepenuhnya dipahami.

## Tabel 4. Pengaruh Pemberian Fraksi Uji (125 ppm) Terhadap Frekuensi Aberasi Kromosom Akar A. cepa
Jenis Aberasi Jumlah Aberasi KN F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11 KP Anaphase Spindle Break 1 3 3 3 3 1 1 2 2 4 3 3 1 Ball Metaphase 1 2 Break 3 2 5 2 4 3 4 1 6 Bridge 1 1 2 1 1 2 4 5 C - Mitosis 6 5 7 14 13 8 7 3 5 11 7 6 21 Delayed Anaphase 1 5 2 3 3 1 3 6 3 8 2 Diagonal Anaphase 1 1 2 Disorder of Chromosome Kinetic 1 1 2 Double Bridge 1 1 1 Double Lesion 9 1 2 2 4 7 3 5 2 11 Fragmant 2 2 3 Giant cell showing polyploidy 5 6 15 Laggard 2 1 1 2 Lession 6 4 5 4 6 4 6 5 4 6 13 Micronucleus 2 1 2 Multipolar Nuclear Erosion 65 Nuclear Extrusion 3 Ring 1 2 1 3 Star 5 2 1 2 3 1 Stickiness 3 2 2 4 1 2 1 1 2 2 Vagrant 1 1 1 2 1 2 1 1 2 2 1 1 Total 19 24 25 49 40 25 29 28 27 35 22 41 157 Frekuensi 6,33 ± 1,2 8,0 ± 1,0 8,33 ± 0,3 16,3 ± 1,7 13,3 ± 0,8 8,33 ± 1,2 9,67 ± 0,8 9,33 ± 0,3 9,33± 0,6 11,67 ±1,4 7,33 ± 0,6 13,67 ±1,3 52,33 ±0,6
Tabel 5. Hasil  Uji  Jarak  Berganda  (Duncan)  Indeks  Mitosis  Akar A.  cepa dengan  Pemberian Fraksi Uji (125ppm)
Perlakuan N (α 0.05) Kontrol Negatif 3 6,33a Fraksi 1 3 8,00a Fraksi 2 3 8,33ab Fraksi 3 3 16,33d Fraksi 4 3 13,33cd Fraksi 5 3 8,33ab Fraksi 6 3 9,67ab Fraksi 7 3 9,33ab Fraksi 8 3 9,33ab Fraksi 9 3 11,67bc Fraksi 10 3 7,33a Fraksi 11 3 13,67cd Kontrol Positif 3 52,33e
Keterangan:  Rataan  hasil  yang  diikuti  huruf  yang  sama  menunjukkan  perlakuan  tersebut memberikan pengaruh yang sama dengan taraf nyata α =0,05
Selain kelompok senyawa fenolik, metabolit sekunder seperti tannin dan flavonoid juga dapat menimbulkan  efek  genotoksik  melalui  komposisi  kimia  dan  strukturnya.  Metabolit  sekunder tersebut  memiliki  potensi  untuk  menghasilkan  radikal  bebas  karena  mengurangi  ketersediaan sistem antioksidan, yang dapat mengakibatkan peroksidasi lipid, kerusakan pada DNA, dan pada akhirnya, kematian sel (Iwalokun et al ., 2011).
Hasil Anava frekuensi aberasi dengan taraf kepercayaan 95% menunjukkan bahwa sebelas fraksi  uji  dengan  konsentrasi  125  ppm  memberikan  pengaruh  yang  signifikan  terhadap  aberasi kromosom  akar A.  cepa .  Selanjutnya  dilakukan  uji  jarak  berganda  (Duncan)  untuk  melihat hubungan antar perlakuan. Hasil uji Duncan dapat dilihat pada Tabel 5.
Berdasarkan hasil uji Duncan, dapat disimpulkan bahwa fraksi 1 dan 10 memiliki pengaruh pada tingkat yang setara dengan kontrol negatif. Sementara fraksi lainnya menunjukkan pengaruh pada  tingkat  yang  bervariasi,  tetapi  tidak  ada  fraksi  yang  mencapai  tingkat  yang  sama  dengan kontrol  positif.  Fraksi  3,  4,  dan  11  terlihat  memiliki  pengaruh  pada  tingkat  yang  relatif  tidak  jauh berbeda dengan kontrol positif.
Beberapa  dari  jenis  aberasi  yang  teramati  merupakan  aberasi  yang  sebelumnya  teramati pada akar bawang A. cepa dengan perlakuan ekstrak etanol kasar daun R. stylosa (Rahayuningsih et  al .,  2021c).  Namun  beberapa  diantara  aberasi  yang  teramati  belum  pernah  teramati  pada penelitian sebelumnya. Gambar beberapa jenis aberasi yang terjadi dapat dilihat pada Gambar 5.
Seluruh fraksi uji mengalami aberasi kromosom jenis anaphase spindle break , c-mitosis , dan vagrant .  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sebagian  besar  kelainan  kromosom  yang  teramati disebabkan oleh kegagalan spindle . Hasil ini dapat berarti bahwa seluruh fraksi merupakan spindle inhibitor .  Menurut  Oyeyemi and Bakare  (2013),  senyawa  yang  mampu  menghambat  fungsi gelendong  mitosis  telah  terbukti  sangat  berhasil  di  klinik  sebagai  obat  anti-kanker  kemoterapi. Tanaman-tanaman  dengan  kandungan  senyawa  ini  digunakan  dalam  manajemen  kanker tradisional, namun tanaman tersebut juga mungkin bersifat genotoksik pada sel-sel normal.
Hingga  saat  ini,  belum  ada  laporan  mengenai  potensi  genotoksik  dari  fraksi-fraksi  ekstrak etanol  daun R.  stylosa terhadap  sel  akar A.  cepa .  Penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh Rahayuningsih et al . (2021a) terhadap ekstrak etanol kasar daun R. stylosa menunjukkan adanya aktivitas  genotoksik  ekstrak  tersebut  seiring  dengan  peningkatan  konsentrasi  ekstrak.  Efek genotoksik  dari  fraksi-fraksi  dalam  penelitian  ini  dapat  disebabkan  oleh  komponen-komponen  di dalam fraksi yang mungkin memiliki kemampuan untuk berinteraksi secara sinergis dan antagonis terhadap materi genetik A. cepa .
Gambar 4 Jenis-Jenis Aberasi Kromosom yang Teramati Keterangan:  a= interphase ,  b= prophase, c= metaphase ,  d= anaphase ,  e=t elophase ,  f= anaphase spindle break , g= ball metaphase , h= break , i= bridge , j= c-mitosis , k= delayed anaphase , l= diagonal anaphase ,  m= disorder  of  chromosome  kinetic ,  n= double  bridge ,  o= double  lesion ,  p= fragment , q= giant cell showing polyploidy , r= laggard , s=lesion, t= micronucleus , u= nuclear erosion , v= nuclear extrusion , w= ring , x= star , y= stickiness , z= vagrant

## KESIMPULAN
Sebelas  fraksi  dari  ekstrak  etanol  daun R.  stylosa menunjukkan  kemampuan  untuk menurunkan  nilai  indeks  mitosis  pada  konsentrasi  125  ppm.  Efek  ini  bervariasi  di  antara  fraksi- fraksi, tetapi secara keseluruhan tidak bersifat subletal atau letal terhadap akar bawang A. cepa. Selain  itu,  hasil  juga  menunjukkan  terjadinya  aberasi  kromosom  pada  akar  bawang A.  cepa , dengan fraksi 3, 4, dan 11 memiliki pengaruh pada tingkat yang relatif tidak jauh berbeda dengan kontrol positif.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  dapat  diselesaikan  dengan  baik  dengan  dana  hibah  RISTEK  DIKTI  dan  atas bantuan  dari  berbagai  pihak  dalam  hal  perizinan  maupun  tehnis  pengerjaan  di  lapangan  dan laboratorium.

## DAFTAR PUSTAKA
Barbério,  A.,  Barros,  L.,  Voltolini,  J.C.,  &  Mello,  M.L.S.,  2009.  Evaluation  of  the  cytotoxic  and genotoxic  potential  of  water from the  River  Paraíba  do  Sul,  in Brazil,  with the Allium  cepa L. Test. Brazilian Journal of Biology , 69(3):837-842. DOI: 10.1590/S1519-69842009000400010 Bhattacharya,  S.,  & Haldar,  P.K.,  2011.  Evaluation  of  antimitotic  and  genotoxic  effects  f  the triterpenoid  enriched  extract  from Trichosanthes  dioica root. American-Eurasian  Journal  of Toxicological Sciences, 4(1):20-23.
Cabuga  Jr.,  C.C.,  Abelada,  J.J.Z.,  Apostado,  R.R.Q.,  Hernando,  B.J.H.,  Lador,  B.J.E.,  Obenza, O.L.P., Presilda, C.J.R., & Havana, H.C., 2017. Allium cepa test: an evaluation of genotoxicity. Proceedings of the International Academy of Ecology and Environmental Sciences, 7(1): 12-19. Dai,  J.,  &  Mumper,  R.J.,  2010.  Plant  phenolic:  extraction,  analysis,  and  their  antioxidant  and anticancer properties. Molecules , 15:7313-7352. DOI: 10.3390/molecules15107313 Dharmautama,  M.,  Telelepta,  R.,  Ikbal,  M.,  &  Warti,  A.E.A.,  2017.  Effect  of  mangrove  leaves extract ( Avicennia marina ) concentration on the growth pf Streptococcus mutans and Candida albicans. Journal of Dentomaxillofacial Science , 2(3):155-159.  DOI: 10.15562/jdmfs.v2i3.648 Garg,  N.,  Abdel-Aziz,  S.M.,  &  Aeron,  A.,  2016. Microbes  in  Food  and  Health. Springer. Switzerland. DOI: 10.1007/978-3-319-25277-3
Hanin, N.N.F., & Pratiwi, R., 2017. Kandungan fenolik, flavonoid dan aktivitas antioksidan ekstrak daun  paku laut  ( Acrostichum  aureum L.) fertil  dan steril. Journal  of  Tropical  Biodiversity  and Biotechnology, 2:51-56.  DOI: 10.22146/jtbb.29819
Harborne, J.B., 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung.
Harborne,  J.B.,  2006.  Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan  (alih bahasa: Kosasih Padmawinata & Iwang Soediro). Penerbit ITB. Bandung.
Haryoto,  &  Putri,  S.P.,  2019.  Aktivitas  sitotoksik  ekstrak  etanol,  fraksi  heksan,  etil  asetat  dan etanol-air dari daun mangrove tancang (B ruguiera gymnorrhiza ) terhadap sel kanker payudara T47D. The  10th  University  Research  Colloqium  2019. Sekolah  Tinggi  Ilmu  Kesehatan Muhammadiyah Gombong.
Ismaryani,  A.,  Salni,  Setiawan,  A.,  &  Triwani.,  2018.  Aktivitas  Sitotoksik,  Antiproliferasi  dan Penginduksi  Apoptoksis  Daun  Salung  ( Psychotria  viridiflora Reinw.  ex.  Blume)  terhadap  Sel Kanker  Serviks  HeLa. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia ,  16(2):206-213.  DOI: 10.35814/jifi.v16i2.528
Iwalokun,  B.A.,  Oyenuga,  A.O.,  Saibu,  G.M.,  &  Ayorinde,  J.,  2011.  Analysis  of  cytotoxic  and genotoxic  potentials  of Loranthus  micranthus using  the Allium  cepa test. Current  Research Journal of Biological Sciences , 3(5):459-467. Jork, H., Funk, W., Fischer, W., & Wimmer, H. 1990. Thin Layer Chromatography: Reagents and Detection Methods Vol 1a . VCH Verlagsgesellschaft. Germany.
Kasitowati,  R.D.,  Yamindago,  A.,  &  Safitri,  M.,  2017.  Potensi  antioksidan  dan  srining  fitokimia ekstrak daun mangrove Rhizophora mucronate , Pilang Probolinggo. Journal of Fisheries and Marine Science , 1(1):72-77. DOI: 10.21776/ub.jfmr.2017.001.02.4 Konuk, M., Liman, R., & Cigerci, L.H., 2007. Determination of genotoxic effect of boron on Allium cepa root meristematic cells. Pakistan Journal of Botany , 39(1): 73-79. Kumari, A., Sharma, S., & Vig, A.P., 2012. Antigenotoxic effects of Brassica oleracea L. Var. Italica aqueous  seed  extract  on Allium  cepa root  chromosomal  aberration  assay. International Journal of Genetics , 2(2):22-28.
Lapham,  R.,  2015.  Drug  Calculations  for  Nurses:  A  Step-By-Step  Approach,  Fourth  Ed.  CRC Press. New York. DOI: 10.1201/b18504
Liu, Y., Whelan, R.J., Pattnaik, B.R., Ludwig, K., Subudhi, E., Rowland, H., Claussen, N., Zucker, N., Uppal, S., Kushner, D.M., Felder, M., Patankar, M.S., & Kapur, A., 2012. Terpenoids from Zingiber officinale (Ginger) induce apoptosis in endometrial cancer cells through the activation of p53. PLOS One, 7(12):1-10. DOI: 10.1371/journal.pone.0053178 Mesi,  A.,  &  Koplikua,  D.,  2013.  Cytotoxic  and genotoxic  potency  screening  of  two pes-ticides  on Allium cepa L. Procedia Technology, 8:19 – 26. DOI: 10.1016/j.protcy.2013.11.005 Mioso,  R.,  Toledo  Marante,  F.J.,  Bezerra,  R.D.S.,  Borges,  F.V.P.,  Oliveira  Santos,  B.V.D.,  & Herrera  Bravo  de  Laguna,  I.,  2017.  Cytotoxic  compounds  derived  from  marine  sponges. Molecules , 22(208):1-34. DOI: 10.3390/molecules22020208
Nasrudin,  Wahyono,  Mustofa,  &  Susidarti  R.A.,  2017.  Isolasi  senyawa  steroid  dari  kulit  akar senggugu ( Clerodendrum serratum L. Moon). Pharmacon , 6(3):332-340.
Oyeyemi,  I.T.,  &  Bakare,  A.A.,  2013.  Genotoxic  and  anti-genotoxic  effect  of  aquous  extracts  of Spondias mombin L., Nymphea lotus L., and Luffa cylindrica L. on Allium cepa root tip cells. Carcyologia , 66(4):360-367. DOI: 10.1080/00087114.2013.857829 Priyanka,  Mohanka,  R.,  Kumari,  P.,  &  Kumar,  B.,  2019.  Cytotoxicity  Evaluation  of  Aqueous Extracts  of  Medicinal  Plants  on Allium  Cepa L. IOSR  Journal  of  Biotechnology  and Biochemistry, 5(2): 35-49
Rahayuningsih,  S.R.,  Anindyta,  A.,  &  Mayanti,  T.,  2021a.  Sitotoksisitas  Ekstrak  Etanol  dan    n- Heksana Daun Rhizopora Apiculata dengan Indikator Indeks Mitosis Allium Cepa. Journal of Marine Research, 10(4): 545-550. DOI : 10.14710/jmr.v10i4.3177
Rahayuningsih S.R., Mayanti T., & Nurulhaq Z., 2021c. Sitotoksisitas Dan Genotoksisitas Ekstrak Etanol  Dan  N-Heksana  Daun Rhizophora  stylosa Griff.  Terhadap  Pembelahan  Sel  Akar Bawang Bombay ( Allium cepa L .). Biotika, 19( 1):68-74, DOI : 10.24198/biotika.v19i1.33967 Rahayuningsih,  S.R.,  Mayanti,  T.,  &  Maudi  N.,  2021b.  Sitotoksisitas  Ekstrak  Etanol  Dan    N- Heksana  Daun  Bruguiera  gymnorrhiza  L.  Pada  Akar Allium  cepa L. Biotika ,  19(2):68-74. DOI: 10.24198/biotika.v19i2.35587
Reich,  E.,  &  Schibli,  A., 2006.  High-Performance  Thin-Layer  Chromatography  for  the  Analysis  of Medicinal Plant. Thieme. New York. DOI: 10.1055/b-002-66241
Sajitha,  M.K.,  &  Thoppil,  J.E.,  2018.  Screening  of  cytotoxicity,  metabolic  inhibition,  and  possible apoptotic cell death induced by Gomphostemma heyneanum Wall. Ex Benth. Var. Heyneanum using Allium  cepa root  tips. International  Journal  of  Pharmacy  and  Biological  Sciences , 8(2):56-64. DOI: 10.22270/jddt.v8i6-s.2074
Silva,  D.S.B.S.,  Garcia,  A.C.F.S.,  Mata,  S.S.,  de  Oliviera,  B.,  Estevam,  C.S.,  Scher,  R.,  & Pantaleao, S.M., 2003. Genotoxicity and cytotoxicity of Erythrina velutina Willd., Fabaceae, on the root meristem cells of Allium cepa. Revista Brasileira de Farmacognosia Brazilian Journal of Pharmacognosy , 21(1): 92-97. DOI: 10.1590/S0102-695X2011005000024 Stahl,  E.,  1969.  Thin-Layer  Chromatography:  A Laboratory  Handbook.  Springer.  New  York.  DOI:
10.1007/978-3-642-88488-7
Sultan,  A.,  &  Raza,  A.R.,  2015.  Steroids:  a  diverse  class  of  secondary  metabolites. Medical Chemistry . 5(7). DOI: 10.4172/2161-0444.1000279
Tedesco,  S.B.  &  Laughinghouse,  H.D.  2012.  Bioindicator  of  genotoxicity:  the Allium  cepa test. Environmental Contamination. p.137-158.
Timothy,  O.,  Olorunfemi,  D.I.  &  Ovuakporie-Uvo,  O.  2014.  Cytotoxic  genotoxic  properties  of  leaf extract  of Icacina  trichantha Oliv. South  African  Journal  of  Botany ,  91:71-74.  DOI: 10.1016/j.sajb.2013.11.008
Windarwati, S. 2011. Pemanfaatan fraksi aktif ekstrak tanaman jarak pagar ( Jatropha curcas Linn.) sebagai  zat  antimikroba  dan  antioksidan  dalam  sediaan  kosmetik. Tesis .  Program  Studi Teknologi Industri Pertanian. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Wulandari, L. 2011. Kromatografi Lapis Tipis. PT. Tanaman Kampus Presindo. Jember. Zhang, H.W., Hu, J.J., Fu, R.Q., Liu, X., Zhang, Y.H., Li, J., Liu, L., Li, Y.N., Deng, Q., Luo, Q.S., &
Ouyang,  Q.,  2018.  Flavonoids  inhibit  cell  proliferation  and  induce  apoptosis  and  autophagy through  downregulation  of  PI3K  mediated  PI3K/AKT/mTOR/p70S6K/ULK  signaling  pathway in human breast cancer cells. Scientific Reports , 8:1-13. DOI: 10.1038/s41598-018-29308-7