Syahrial, Rimbawan, Evy Damayanthi, Dewi Apri Astuti, Pipih Suptijah
Pengaruh  pemberian  nano  daun  kelor  ( moringa oleifera )  terhadap  kadar mineral serum dan tulang pada tikus sprague dawley jantan tumbuh
Syahrial 1* , Rimbawan 1 , Evy Damayanthi 1 , Dewi Apri Astuti 2 , Pipih Suptijah 3,4

## ABSTRACT
Background :  One  of  the  important  minerals  for  growth  is  calcium  to  build  new  bone. Moringa  oleifera  has  been  known  as high  nutritional  content  and  bioactive  compound  tree  that  could  act  as  antioxidant  and  improved  several  diseases  like diabetes, arthritis, cardiovascular. Phytochemical analyses have shown that Moringa oleifera contain of high macro minerals like calcium, potasium, magnesium, and phosphor. Several previous studies have shown that mineral nanoparticle have higher bioavailability than natural compounds..
Objectives :  The  purpose  of  this  study  was  to  analyze  the  effect  of  moringa  oleifera  nanoparticle  leaf  on  mineral  serum  and bone at growth stage of Sprague Dawley male rats.
Methods : In this study, the pre and post controlled group design and complete random design was used. The subjects were 27 growing male Sprague dawley rats aged 2 month were devided into three group which received standard feed contain CaCO3 (control group), intervention feed contained 450nm and 750nm nano Moringa oleifera for 60 days. The data of the experiment was analyzed by paired T-test and Duncan test at 95% confidence level.
Results :  The  result  showed  that  there  was  no  significance  different  for  both  of  intervention  group  for  mineral  serum  and fermur bone. While for the tibia bone, the result showed that the calcium, phosphor and magnesium were significantly increase (p<0.05).  The  intervention  group  received  450nm  showed  more  effective  improvement  of  magnesium  level  (p<0.05)  than intervention group received 750nm.
Conclusion : The intervention of moringa oleifera nanoparticle leaf had a positive effect in decreasing serum and bone mineral levels  in  male  rats.  There  were  significant  increased  at  magnesium  level  measured  in  tibia  bones  after  intervention,  with higher increasing at group received 450nm nanoparticle.
Keywords : Moringa oleifera; nanoparticle; bone mineral level; serum mineral level

## ABSTRAK
Latar  Belakang: Salah  satu  mineral  penting  untuk  pertumbuhan  adalah  kalsium  untuk  membangun  tulang  baru.  Moringa oleifera  yang  telah  dikenal  sebagai  tanaman  yang  mempunyai  kandungan  nutrisi  tinggi  dan  senyawa  pohon  bioaktif  yang dapat  digunakan  sebagai  antioksidan  dan  menyembuhkan  beberapa  penyakit  seperti  diabetes,  arthritis,  kardiovaskular. Analisis fitokimia menunjukkan bahwa daun dari moringa oleifera mempunyai kandungan mineral seperti kalsium, potasium, magnesium, dan fosfor dengan kandungan tinggi. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa nanopartikel mineral memiliki bioavailabilitas lebih tinggi daripada senyawa alami.
Tujuan: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menganalisis pengaruh dari moringa oleifera nanoparticle yang berasal dari daun terhadap serum mineral dan tulang pada tikus Sprague Dawley jantan tumbuh.
Metode: Penelitian  ini  menggunakan  pre  and  post  controlled  group  design  dan  metode  rancangan  acak  lengkap  (RAL). Sampel yang digunakan di dalam penelitian adalah 27 tikus Sprague dawley jantan tumbuh usia 2 bulan yang dibagi menjadi tiga  kelompok  yang  akan  mendapatkan  perlakuan  pakan  standar  yang  mengandung  CaCO3  (kelompok  kontrol),  umpan intervensi  mengandung  450nm  dan  750nm  nano  Moringa  oleifera  selama  60  hari.  Data  hasil  penelitian  akan  dianalisia dengan menggunakan paired T-test dan Duncan test pada tingkat kepercayaan 95%.
Hasil: Hasil penelitian menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan yang signifikan untuk kedua kelompok intervensi terhadap mineral serum dan tulang femur. Sedangkan untuk tulang tibia, hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar kalsium, fosfor dan magnesium  meningkat  secara  signifikan  (p  <0,05).  Kelompok  intervensi  yang  menerima  pakan    450nm  menunjukkan peningkatan kadar magnesium yang lebih efektif (p <0,05) dibandingkan kelompok intervensi yang menerima pakan 750nm. Simpulan: Intervensi  nanopartikel  dari  daun  moringa  oleifera  memiliki  efek  positif  dalam  menaikkan  kadar  mineral  serum dan  tulang  pada  tikus  jantan  tumbuh.  Terdapat  peningkatan  yang  signifikan  terhadap  kadar  magnesium  yang  diukur  pada tulang  tibia  setelah  intervensi,  dengan  peningkatan  yang  tertinggi  terdapat  pada  kelompok  yang  menerima  nanopartikel 450nm.
Kata Kunci : Kelor; nano partikel; kadar mineral tulang; kadar mineral serum
1 Departmen Gizi, Fakultas Ekologi Manusia, Institut Pertanian Bogor. Jl. Raya Dramaga Kampus IPB Dramaga, Bogor, Jawa Barat 16680
2 Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor. Jl. Raya Dramaga Kampus IPB Dramaga, Bogor, Jawa Barat 16680
3 Department Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan, Institut Pertanian Bogor. Jl. Raya Dramaga Kampus IPB Dramaga, Bogor, Jawa Barat 16680
4 Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Andalas. Jl. Perintis Kemerdekaan No.94, Jati, Padang Tim., Kota Padang, Sumatera Barat 25128
* Korespondensi : E-mail: abilwawa@gmail.com, Telp/HP: +6281275689274
Jurnal Gizi Indonesia (The Indonesian Journal of Nutrition) Vol. 7, No. 2, Juni 2019 (114-120) Submitted: 30 Agustus 2018, Accepted: 30 Januari 2019 Tersedia Online di https://ejournal.undip.ac.id/index.php/jgi/

## Jurnal Gizi Indonesia

## PENDAHULUAN
Pada  awal  masa  pertumbuhan,  setiap  individu memerlukan  asupan  gizi  yang  cukup  agar  proses pertumbuhan dapat berjalan dengan baik dan sempurna. 1,2 Salah  satu  unsur  terpenting  dalam membantu  proses  pertumbuhan  adalah  zat  mineral kalsium. 3,4 Kalsium  merupakan  mineral  paling  banyak terdapat dalam tubuh dengan berat sebesar 1,5-2% dari berat badan orang dewasa yang mempunyai peran untuk mengatur  pekerjaan  hormon-hormon  dan  faktor pertumbuhan.  Berdasarkan  jumlah  yang  ada,  99% kalsium berada didalam jaringan keras, yaitu tulang dan gigi. 5 Kalsium  dalam  bentuk  garam  fosfat  (yaitu hidroksiapatit) menjaga  integritas  struktur  kerangka selama  masa  pertumbuhan  tulang  dan  pematangannya, yang  terakumulasi  dalam  kerangka  pada  tingkat  rata- rata 150 mg/hari. 6
Fosfor  dan  magnesium  merupakan  salah  satu mineral yang memiliki peran penting dalam metabolisme  tulang.  Fosfor,  seperti  fosfat  bersama dengan  ion  kalsium  akan  membentuk  hidroksiapatit yang  merupakan  molekul  anorganik  utama  pada  gigi dan  tulang.  Sedangkan  magnesium  berfungsi  untuk meningkatkan pembentukan Kristal tulang dan kepadatan  tulang  dengan  cara  asimilasi  kalsium  ke dalam jaringan tulang. Magnesium juga mempengaruhi konsentrasi  dari  kedua  hormon  paratiroid  dan  bentuk aktif  dari  vitamin  D,  yang  merupakan  regulator  utama homeostasis tulang. 7
Salah  satu  tanaman  yang  dikenal  sebagai tanaman  serbaguna  adalah  tanaman  kelor  ( Moringa Oleifera )  yang  merupakan  spesies  dari  famili Monogenerik Moringaceae . Tanaman Moringa oleifera atau  kelor  merupakan  tanaman  yang  berasal  dari Himalaya,  dan  tersebar  di  beberapa  negara  seperti Afrika, Amerika Tengah dan Selatan, Sri Lanka, India, Meksiko,  Malaysia,  Indonesia  dan  Filipina.    Beberapa bagian  dari  tanaman  kelor  seperti  daun  telah  diketahui menunjukkan efek antitumor, antiinflamasi, antibakteri, antihelmintik, antioksidan, hipotensif, cardioprotective , efek okular, antiurolitiatik, antipasmodik, hepatoprotective ,  dan  antipiretik. 7-10 Beberapa  mineral yang  terdapat  di  dalam  tanaman  kelor  ini  adalah kalsium,  magnesium,  fosfor. 11,12 Tanaman  kelor mengandung  kalsium  sebesar  440  mg  per  100  g  daun segar  dan  2003  mg  per  100  g  daun  kering. 13,14
Kandungan  kalsium  per  100  g  daun  kelor  dapat mencapai  17  kali  lebih  banyak  dan  mempunyai bioavaibilitas  8,79 kali lebih baik dibandingkan dengan susu.  Selain  itu  bubuk  daun  kelor  dalam  bentuk  kering juga  memiliki  kadar  air  sebesar  3,06–3,34%,  lemak 10,2–10,31%,  serat  7,29  –  9,46%,  protein  10,74– 11,48%, dan karbohidrat 54,6–57,61%. 11 Beberapa  penelitian  sebelumnya  menunjukkan bahwa  tanaman  kelor  memiliki  efek  positif  pada
tulang. 15,16 Ekstrak  dari  bunga  tanaman  kelor  telah dibuktikan dapat meningkatkan jumlah sel-sel osteoblastik;  sedangkan  ekstrak  dari  buah  kelor  dapat meningkatkan    pembentukan  tulang  yang  diinduksi, kandungan hydroxyproline dan  pembentukan  mineral tulang. 15 Sedangkan  ekstrak  dari  daun  kelor  dapat meningkatkan  kandungan  kalsium  pada  tulang  tikus wistar. 16
Beberapa  tahun  terakhir,  perkembangan  produk- produk  nanoteknologi  terus  meningkat. 16 Nanopartikel yang  secara  definisi  adalah  struktur  yang  memiliki dimensi  ukuran  dalam  kisaran  1-100  nm  semakin  hari semakin  diakui  dalam  aplikasi  perawatan  kesehatan medis. 17,18 Ukuran  nanometer  secara  signifikan  juga dapat  meningkatkan  bioavailabilitas  dari  kalsium  dan juga memiliki manfaat gizi. 19 Tingginya bioavailabilitas dari nano kalsium memberikan banyak keuntungan bagi manusia.  Nano  kalsium  dapat  difortifikasikan  pada bahan  pangan  sehingga  dapat  memenuhi  kebutuhan kalsium  harian  orang  dewasa  sekitar  800  mg/hari  dan dapat  dikonsumsi  oleh  segala  usia. 20,21 Penelitian  lain menyebutkan  bahwa  isolasi  dan  karakterisasi  nano kalsium  dari  cangkang  kijing  lokal  ( Pilsbryoconcha exilis )  dengan  metode  prespitasi  dapat  menghasilkan partikel  nano  kalsium  dengan  ukuran  120-573  nm. 22 Kalsium tidak akan dapat diserap tubuh apabila berada dalam  bentuk  molekul  yang  besar.  Oleh  sebab  itu diperlukan bentuk ukuran nano pada kalsium agar dapat terserap oleh tulang dengan baik. 20
Pengolahan  daun  kelor  dalam  bentuk  serbuk sudah  banyak  diteliti,  akan  tetapi  penelitian  yang mengkaji  hubungan  antara  ukuran  partikel  daun  kelor dan pengaruhnya terhadap absorpsi kalsium pada hewan model  dalam  masa  pertumbuhan  masih  belum dilakukan.  Berdasarkan  uraian  tersebut  diperoleh informasi  bahwa  kelor  ( Moringa  oleifera )  memiliki kadar  kalsium  (60225  ppm),  fosfor  (4558  ppm)  dan magnesium  (765  ppm)  yang  tinggi.  Dengan  teknologi nano  ukuran  partikel  serbuk  daun  kelor  dapat diperkecill  sehingga  diharapkan  dapat  meningkatkan penyerapan zat gizi terutama kalsium dengan lebih baik. Oleh  sebab  itu  peneliti  tertarik  untuk  melakukan penelitian  yang  berjudul  “Pengaruh  Pemberian  Nano Daun Kelor (Moringa oleifera) terhadap Kadar Mineral Serum  dan  Tulang  pada  Tikus Sprague  Dawley Jantan tumbuh (dalam masa pertumbuhan).

## BAHAN DAN METODE
Desain  eksperimental  yang  digunakan  di  dalam penelitian  ini  adalah, pre  and  post  controlled  group design .  Rancangan  yang  digunakan  adalah  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  3  perlakuan.  Penelitian dilakukan  pada  bulan  Maret  2017  hingga  November 2017, bertempat di Laboratorium Percobaan Hewan dan Laboratorium  Analisis  Zat  Gizi,  Departemen  Gizi
Masyarakat,  FEMA  IPB,  serta  Laboratorium  Nutrisi ternak daging Fakultas Peternakan IPB. Taraf perlakuan yang diberikan untuk masing-masing kelompok adalah: K-standar  yaitu  pakan  standar  didalamnya  terdapat  0.5 g CaCO3/ 100 g  pakan ukuran >1000 nm,  K-750 yaitu pakan  standar  didalamnya  terdapat  23  g  daun  kelor ukuran  750  nm/  100  g  pakan,  dan  K-450  yaitu  pakan standar didalamnya terdapat 23 g daun kelor ukuran 450 nm/100 g pakan.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah pakan tikus yang terdiri atas pakan standar yang mengandung  CaCO3  sebagai  sumber  kalsium,  pakan perlakuan  (mengandung  nano  daun  kelor  450  nm  dan 750  nm).  Hewan  model  tikus  jantan  Rattus  novergicus dari  galur sprague  dawley umur  2  bulan  pada  masa pertumbuhan.  Bahan  yang  digunakan  untuk  membuat pakan  perlakuan  standar adalah  CaCO 3 (0.5 %)  tepung beras  (25  %), casein (18  %r),  minyak  (3  %),  glukosa (49 %), DL-metionin (0,3 %), CMC (3 %),  mineral mix (0,5 %), vitamin mix (0,5 %) dan NaCl (0,2 %). Pakan perlakuan  dibuat  dengan  mengganti  CaCO3  dan glukosa dengan nano daun kelor ukuran (K-450nm) dan (K-750nm). Peralatan yang digunakan dalam penelitian dibedakan  menjadi  4  kelompok,  1)  peralatan  untuk perawatan tikus, seperti  kandang ukuran 36 x 28 x 12 cm yang dilengkapi dengan kawat kasa yang bisa buka tutup serta wadah tempat makan dan botol minum, serta seperangkat  pembersih  kandang  2)  pembuatan  pakan tikus    seperti  blender  dan  mixer  3)  pengambilan spesimen  darah  dan  organ  tikus  seperti  kapas,  alcohol, jarum  spuit  5ml  dan  peralatan  bedah  serta  tabung EDTA,  4)  analisis  di  laboratorium  seperti particle  size analyzer (PSA),  termometer, spektrofotometer dan atomic absorption spectroscopy (AAS).
Pembuatan Pakan Standar dan Pakan Perlakuan Nano  Daun  Kelor  adalah  sebagai  berikut  :  Daun  kelor segar  yang  masih  muda  (tangkai  bagian  atas  dan  tidak termasuk  pucuk)  dipetik  dan  dilakukan  perontokan, kemudian  dilakukan  pencucian  dengan  menggunakan air  mengalir,  setelah  itu  disaring  dan  dikeringkan dengan cara dianginkan pada suhu 30°C selama 3 hari. Daun  kelor  yang  sudah  kering  kemudian  dihancurkan dengan  menggunakan disc  mill sehinggga  menjadi serbuk  atau  tepung  daun  kelor.  Serbuk  daun  kelor tersebut  kemudian  di  proses  dengan  metode  HEM ( High  Energy  Milling )  selama  30  menit,  dan  diukur partikelnya dengan metode particle size analyzer (PSA) masing  masing  dengan  ukuran  750  nm  dan  450  nm. Setelah  bahan  tersedia  semua  kemudian  dibuat  pakan sesuai jenis pakan.
Sebanyak  27  ekor  tikus  jantan  tumbuh diadaptasikan  dengan  pemberian  pakan  standar  dan perlakuan  serta  minum  secara ad  libitum selama  tujuh hari. Setelah masa adaptasi tikus dimasukkan ke dalam kandang,  ditempatkan  ke  dalam  ruang  dengan  masa terang  dan  gelap  masing-masing  12  jam,  suhu  berkisar
antara  23,9-26,6 o C    rata  rata  (25,5 o C)  dan  kelembaban udara  67-88%  persen  (rata-rata  81%).  Perlakuan diberikan  kepada  tiga  kelompok  (masing-masing kelompok  terdiri  atas  9  ekor  tikus),  yaitu  kelompok pakan  standar  mengandung  CaCO 3 dan  kelompok perlakuan (pakan mengandung nano daun kelor dengan ukuran  450nm  (K-450)  dan  750nm  (K-750)  selama  60 hari.  Pemeriksaan  serum  mineral  (Ca,  P,  dan  Mg) dilakukan sebelum dan setelah perlakuan pada hari ke- 60.
Di akhir intervensi, tikus diambil sample darah dari  vena  kemudian  dilakukan  operasi  pengambilan tulang  femur  (tulang  paha)  dan  tulang  tibia  (tulang kering)  untuk  dianalisis  kadar  mineralnya  (Ca,  P  dan Mg) di tulang. Tulang yang sudah preparasi dari hewan model  di  keringkan  pada  suhu  60 O C  selama  24  jam kemudian  dibersihkan.  Tulang  yang  sudah  bersih direndam  dengan  larutan hydraziniumhydoxid (100% N 2 H 3 OH)  selama  6  hari,  kemudian  tulang  direndam menggunakan  alcohol  50%  selama  1  jam,  lalu  dibilas menggunakan  aquades  sebanyak  dua  kali  dan dikeringkan dengan oven 60 O C. Analisis kadar mineral serum  kalsium  (Ca),  fosfor  (P)  dan  magnesium  (mg) dengan alat s pectrofotometer (menggunakan kit. dengan nomor  katalog  10027  (P),  10010  (Mg)  dan  3-249,3- 250,3-251-3-252  (Ca).  Analisis  kadar  mineral  tulang femur dan tibia dengan alat AAS (AOAC 2007).
Seluruh  data  dari  hasil  pengamatan  ditabulasi dan  dibuat  dalam  bentuk  rata-rata  dan  standar  deviasi jika  data  terdistribusi  normal  (statistik  parametrik)  dan median  jika  data  tidak  terdistribusi  normal  (non parametrik).  Data  untuk  parameter  mineral  serum  dan tulang  sebelum  dan  setelah  intervensi  diuji  dengan paired  T-test  sedangkan  pengaruh  intervensi  terhadap antar  kelompok  perlakuan  dianalisis  dengan  analisis ragam dengan tingkat kepercayaan 95 persen pada taraf α  =  0,05,  dan  jika  terdapat  hasil  yang  signifikan dilanjutkan  dengan  uji  Duncan.  Pengolahan  data dilakukan  dengan  microsoft  excel  dan  program  SPSS 23.  Penelitian  ini  sudah  mendapat  persetujuan Ethical Approval ( ethical  clearance )  dari  komite  etik  hewan penelitian badan penelitian dan pengabdian masyarakat Institut  Pertanian  Bogor  (IPB)  dengan  nomor  54-2017 IPB.

## HASIL
Perubahan Kadar Mineral Serum (Ca, P, Mg) Tikus Jantan Setelah Perlakuan dengan Nano Daun Kelor Selama 60 Hari
Hasil  penelitian  pada Tabel  1 menunjukkan bahwa  seluruh  perlakuan  dapat  meningkatkan  kadar kalsium  (Ca),  fosfor  (P)  dan  magnesium  (Mg)  dalam serum  darah  tikus  jantan  tumbuh.  Selisih  peningkatan kadar  Ca  serum  darah  tikus jantan  tumbuh  lebih  tinggi pada  perlakuan  K-450  dibandingkan  K-750  dan  K-
standar  meskipun  secara  statistik  tidak  signifikan. Perbedaan yang signifikan untuk kadar mineral sebelum dan  sesudah  perlakuan  diperoleh  pada  perlakuan  K-
standar  untuk  P  dan  Mg  ( p =0,04)  dan  pada  perlakuan K-450 untuk Mg ( p =0,01).
Tabel 1. Perubahan Kadar Mineral Serum (Ca, P, Mg), pada Tikus Jantan Setelah Perlakuan dengan Nano Daun Kelor Selama 60 Hari .
Keterangan: SD= Standar Deviasi; * Signifikan pada p ≤0,05; a )Huruf yang sama pada baris yang sama menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh signifikan ( p >0.05); b ) Signifikan dengan p ≤0,05  ( Paired-samples Ttest ); p 1 ) Anova antara kelompok; p 2 ) Paired-samples Ttest antara sebelum dan setelah intervensi;
Tabel 2. Perubahan Kadar Mineral Kalsium (Ca), Fosfor (P) Dan Magnesium (Mg) Pada Tulang Femur Dan Tulang Tibia Tikus Sebelum Setelah Perlakuan Selama 60 Hari
Parameter Tulang femur Tulang tibia K-Standar ±SD K-750 K-450 p 1 K-standar K-750 K-450 p 1 ±SD ±SD ±SD ±SD ±SD Kalsium (%) Sebelum 32,52±0,04 a 32,52± 0,04 a 32,52±1,04 a 1 34,39±0,67 a 34,39±0,67 a 34,39±0,67 a 1 Setelah 33,31±0,48a  34,71±1,76 a 34,45±1,59 a 0,47  36,75±2,00 a 35,87±0,75 a 37,13±1,40 a 0,6 Selisih 0,78±1,25 a 2,18±2,17a 1,93±2,30 a 0,67 2,35±2,66 a 1,47±1,42 a 2,73±1,64 a 0,74 p 2 0,39 0,22 0,29 0,27 0,22 0,1 Phospor (%) Sebelum 19,41±0,51 a 19,41±0,51 a 19,41±0,51 a 1 19,66±0,53 a 19,66±0,53 a 19,66±0,53 a 1 Setelah 19,67±0,56 a 19,16±0,09 a 19,62±0,37 a 0.21  20,42±0,44 a 20,02±0,07 a 20,32±0,05 a 0,24 Selisih 0,25±0,50 a 0,25±0,59 a 0,20±0,50 a 0.49 0,75±0,54 a 0,36±0,46 a 0,65±0,51 a 0,64 p 2 0,47 0.54 0,56 0,14 0,32 0,18 Magnesium (%) Sebelum 0,25±0,06 a 0,25±0,06 a 0,25±0,06 a 1 0,31±0,01 a 0,31±0,01 a 0,31±0,01 a 1 Setelah 0,32±0,01 a 0,35±0,03 a 0,43±0,11 a 0.27 0,34±0,01 a 0,41±0,01 b 0,58±0,03 c 0,00 Selisih 0,07±0,07 a 0,10±0,09 a 0,17±0,18 a 0.63 0,03±0,01 a 0,09±0,01 b 0,26±0,03 c 0,00* p 2 0,23 0,23 0,24 0,01* 0,01* 0,01*
Keterangan: SD= Standar Deviasi; * Signifikan pada p ≤0.05; a,b,c )Huruf yang berbeda pada kolom menunjukkan ada pengaruh yang signifikan ( p >0.05); p 1 ) Anova antara kelompok; p 2 ) Paired-samples Ttest antara sebelum dan setelah intervensi;
Perubahan Kadar Mineral Tulang Femur dan Tibia (Ca, P, Mg) Tikus Jantan Setelah Perlakuan Selama 60 Hari dengan Nano Daun Kelor
Analisis  mineral  selain  dilakukan  pada  serum darah,  juga  dianalisis  pada  tulang  femur  dan  tibia
hewan  coba  karena  tulang  femur  dan  tibia  merupakan tempat  deposit  mineral.  Tabel  2  berisi  rerata  kadar mineral  tulang  femur  dan  tibia  dari  ketiga  kelompok perlakuan  sebelum  dan  sesudah  perlakuan.  Hasil penelitian pada tikus jantan memperlihatkan
Parameter Kelompok` p 1) K-standar±SD K-750±SD K-450±SD Kalsium (mg/dL) Sebelum 10,19±1.48 a 9,60±1,06 a 10,33±1,21 a 0,76 Setelah 11,01±1.18 a 11,71±1,43 a 11,71±1,43 a 0,18 Selisih 0,81±2,59 a 2,11±2,39 a 2,77±2,14 a 0,62 p 2) 0,64 0,26 0,16 Phospor (mg/dL) Sebelum 2,51±0,89 a 3,91±2,37 a 3,95±2,26 a 0,62 Setelah 5,03±0,15 a 4,93±0,14 a 5,15±0,19 a 0,32 Selisih 2,52±0,89 b 1,02±2,50 a 1,20±2,25 a 0,63 p 2) 0,04* 0,55 0,46 Magnesium (mg/dL) Sebelum 1,85±0,21 a 2,16±0,52 a 1,94±0,09 a 0,54 Setelah 2,83±0,16 a 2,73±0,21 a 2,82±0,25 a 0,81 Selisih 0,99±0,36 b 0,57±0,72 a 0,87±0,16 b 0,57 p 2) 0,04* 0,31 0,01*
peningkatan  kadar  mineral  Ca  dan  Mg  tulang  femur sebelum dan setelah perlakuan.
Peningkatan  mineral  Ca  tulang  femur  tertinggi terdapat pada perlakuan K-750 (selisih 2,18), mineral P tulang femur lebih tinggi pada perlakuan standar ( nilai selisih 0,25), sedangkan mineral Mg tulang femur lebih tinggi  pada  perlakuan  K-450  (selisih  0,17  ). Berdasarkan  hasil  uji pared  t-test tidak  terdapat perbedaan yang signifikan terhadap kadar mineral Ca, P Mg  pada  tulang  femur  sebelum  dan  setelah  perlakuan pada  semua  kelompok  perlakuan  ( p >0,05).  Hasil analysis  of  variance juga  menunjukkan  tidak  ada perbedaan kadar mineral Ca, P, Mg tulang femur antar perlakuan  baik  sebelum  maupun  setelah  perlakuan ( p >0,05).  Artinya  status  mineral  Ca,  P,  Mg  di  serum yang  tidak  berbeda  nyata  ternyata  berdampak  pada status mineral Ca, P, Mg di tulang femur.
Peningkatan kadar mineral Ca, P dan Mg tulang tibia  setelah  perlakuan,  peningkatan  kadar  mineral  Ca tulang  tibia  tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  K-450 (selisih  2,73),  mineral  P  tulang  tibia  lebih  tinggi  pada perlakuan  standar(  nilai  selisih  0,75),  sedangkan mineral Mg tulang tibia lebih tinggi pada perlakuan K- 450 nilai selisih 0,26. Berdasarkan hasil uji paired t-test terdapat perbedaan signifikan  kadar  mineral  Mg  tulang tibia sebelum dan setelah perlakuan pada kelompok K- 450  ( p <0,05).  Hasil analysis  of  variance juga menunjukkan  perbedaan  kadar  mineral Mg  tulang tibia pada perlakuan 450 nm ( p <0,05).

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  dari  pemberian  nano  daun  kelor ( Moringa Oleifera )  pada  tikus sprague dawley jantan tumbuh  membuktikan  bahwa  kandungan  mineral (kalsium  (Ca),  fosfor  (P),  dan  magnesium  (Mg)  )  dari daun kelor yang telah di modifikasi dalam bentuk nano partikel  dapat  mengoptimalkan  kinerja  dari  kandungan mineral  khususnya  kandungan  kalsium  (Ca)  dan magnesium  (Mg)  yang  terdapat  di  dalam  daun  kelor tersebut, sehingga kandungan mineralnya menjadi lebih mudah  terserap  oleh  tubuh  apabila  di  bandingkan dengan  kadar  mineral  yang  terdapat  di  dalam  pakan yang  tidak  dalam  bentuk  nano  partikel. Dari  hasil penelitian  pada  Tabel  2  menunjukkan  bahwa  secara perlakuan pakan dengan daun kelor dalam bentuk nano mampu meningkatkan kadar mineral kalsium (Ca), dan magnesium  (Mg)  lebih  besar  pada  tulang  femur  dan tibia tikus jantan tumbuh apabila di bandingkan dengan pakan  yang  tidak  di  tambahkan  dengan  daun  kelor dalam  bentuk  nano.  Meskipun  demikian  peningkatan kadar  mineral  secara  signifikan  hanya  terjadi  pada kadar  Mg  pada  tulang  tibia.  Bila  dibandingkan  antar perlakuan,  maka  perlakuan  K-450  memberikan  selisih peningkatan  kadar  Mg  tulang  tibia  yang  paling signifikan ( p =0,00) dibandingkan K-750 dan K-standar.
Hasil  yang  ditunjukkan  pada  Tabel  2  sejalan dengan penelitian Toba et al. (1999) yang menggunakan tikus jantan  dengan perlakuan berbagai tingkatan kadar kalsium  dan  magnesium.  Hasil  penelitian  tersebut menunjukkan  bahwa  magnesium  dan  kalsium  saling berkompetisi  dalam  proses  penyerapan  di  dalam  usus. Magnesium  memberikan  efek  yang  lebih  besar  pada metabolisme  kalsium  tulang  dibandingkan  dengan absorbsi  kalsium.Sedangkan unsur  fosfor  berperan dalam  menjaga  keseimbangan  kadar  kalsium  dalam darah  maupun  laju  penyimpanan  kalsium  dalam  usus pakan  dengan  fosfor  berlebihan  akan  dapat menurunkan  absorbsi  kalsium. Dari  data  yang diperoleh dari penelitian ini terlihat bahwa bahwa peran Mg  lebih  nyata  terlihat  pada  tulang  tibia. 23 Dua  proses penyerapan  utama  ada  di  usus,  yaitu  aktif  dan  pasif transpor aktif pada dasarnya terjadi pada duodenum dan sebagian  kecil  terjadi  di  usus  besar.  Konsentrasi  Ca rendah dan dimediasi melalui produk metabolic vitamin D 1,25- dihidroksikolekalsiferol . 24 Total efisiensi penyerapan  Ca  dengan  kondisi  fisiologis  (lebih  tinggi selama  pertumbuhan  dan  masa  remaja  serta  kehamilan tetapi  lebih  rendah  setelah  50  tahun).  Biasanya  sekitar 30-35%  dari  Ca  dalam  makanan  diserap  tetapi  bisa lebih  tinggi  atau  lebih  rendah,  tergantung  pada komposisi  makanan  tetapi  juga  mungkin  pada  faktor genetik. 25
Selain interaksi magnesium dan kalsium, terdapat interaksi  antara  fosfor  dan  kalsium.  Fosfor  berperan dalam  menjaga  keseimbangan  kadar  kalsium  dalam darah  maupun  laju  penyimpanan  kalsium  dalam  usus pakan dengan fosfor berlebihan akan dapat menurunkan absorbsi kalsium. Kalsium dan fosfor saling berinteraksi  dalam  proses  penyerapan,  dimana  kalau kondisi  kalsium  tinggi  maka  fosfor  harus  rendah sehingga  proses  metabolism  berjalan  dengan  optimal, kalau  seandainya  terjadi  sama-sama  tinggi  maka  akan terjadi  reabsorpsi,  dimana  cadangan  yang  ada  pada tulang  akan  dipakai.  Keseimbangan  antar  kalsium  dan fosfor  ini    diatur  melalui    sistem  fisiologis  kompleks yang  terdiri  dari  interaksi  hormon  kalsitropik  seperti hormon  paratiroid  1.25- dihydroxycholecalciferol (atau 1.25-dihidroksi-vitamin  D3),  dan  kalsitonin,  dengan jaringan  target  tertentu  (ginjal,  tulang,  dan  usus)  yang berfungsi  untuk  meningkatkan  atau  mengurangi masuknya  Ca  ke  dalam  ruang  ekstraseluler. 26 Sekresi hormon  ini  diatur  sepenuhnya,  atau  sebagian  dengan konsentrasi plasma terionisasi Ca, sehingga membentuk sistem  umpan  balik  negatif.  Hormon  paratiroid  dan 1.25- dihydroxycholecalciferol disekresikan  ketika  Ca plasma rendah, sementara kalsitonin disekresikan ketika Ca plasma tinggi. 27
Selanjutnya  Tongchan  et  al.  (2009)  yang melakukan  penelitian  tentang  efek  pemberian  kalsium dari  tulang  ikan  Priacanthu  tayenus  pada  tikus  Wistar jantan  yang  diberi  pakan  standar  dengan  kandungan
kalsium murni selama tujuh minggu menunjukkan hasil bahwa efek dari suplementasi kalsium dapat meningkatkan bioavailabilitas kalsium secara signifikan ( p <0,05)  dengan  peningkatan  suplementasi  kalsium akan  dapat  meningkatkan  panjang  dan  tebal  tulang femur  dengan  demikian  komposisi  penyusun  mineral juga  meningkat. 28 Tetapi  hasil  penelitian  yang dilakukan oleh Zvinorora et al. (2015) memperlihatkan bahwa  serbuk moringa  oleifera dalam  bentuk  pelet dengan  kalsium  yang  rendah  (0,2%)  yang  diberikan selama  5  minggu  tidak  berpengaruh  terhadap  massa tulang  tibia  dan  femur  tikus.  Intervensi  kalsium  yang rendah berdampak merugikan bagi pertumbuhan tulang, kekuatan tulang, arsitektur tulang, massa puncak tulang dan  material  tulang.  Hal  ini  disebabkan  karena perbedaan dosis, lama intervensi dan ukuran dari bahan yang diberikan. 23
Penelitian Carinet et al (2013) pada suplementasi pada  tikus  jantan  (usia  28  hari)  dengan  berbagai tingkatan  (tinggi  kalsium  (1,2%),  dan  (0,5%)  serta rendah  kalsium  (0,2%)  )  yang  diberikan  selama  4 minggu  didapatkan  bahwa    kalsium  yang  rendah memiliki  dampak  yang  merugikan  pada  pertumbuhan tulang, kekuatan tulang, arsitektur tulang, massa puncak tulang dan material tulang, berbeda dengan suplementasi  tinggi  kalsium  yang  menunjukkan  hasil bahwa  suplementasi  tinggi  kalsium  dapat  memperbaiki kekuatan,  pertumbuhan,  dan  arsitektur  tulang. 29 Penelitian  ini  menggunakan  berbagai  tingkatan  dalam pemberian intervensi, sehingga dapat dilihat dosis yang mana lebih baik, yang diberikan selama 4 minggu.

## SIMPULAN
Berdasarkan  dari  hasil  penelitian  ini,  intervensi dari  daun  kelor  ( moringa  oleifera )  dalam  bentuk  nano pada semua kelompok mempunyai dampat yang positif terhadap  peningkatan  kadar  mineral  serum  dan  tulang pada  tikus  jantan  tumbuh.  Dari  ketiga  perlakuan  yaitu pakan standar, pakan K-750 dan pakan K-450 diketahui bahwa perlakuan K-45 mempunyai efek yang signifikan terhadap  kadar  magnesium  (Mg)  dibandingkan  dengan perlakuan  pakan  standard  dan  pakan  K-750.  Kadar kalsium  (Ca)  paling  tinggi  secara  signifikan  (p˂0,05) didapatkan  pada  tulang  tibia  tikus  yang  diberikan perlakuan K-450 sedangkan peningkatan kadar mineral secara  signifikan  pada  tulang  tibia  juga  terjadi  pada mineral  magnesium  (Mg)  tikus  yang  diberi  perlakuan K-750  (p=0,02  dan  p  =0,01).  Perlakuan  K-450 memberikan  potensi  pemanfaatan  mineral  di  tulang yang lebih baik dibanding dengan perlakuan K-750 dan pakan standar.
Perlu  penelitian  lebih  lanjut  dengan  durasi intervensi lebih lama dengan tujuan agar proses deposit mineral  pada  tulang  dapat  terlihat  sempurna,  selain  itu variasi  ukuran  partikel  nano  daun  kelor  agar  lebih
berpariasi  sehingga  proses  pemanfaatan  oleh  tubuh lebih maksimal.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih diberikan kepada Kementrian  Ristek  DIKTI  melalui  program  Hibah penelitian disertasi doktor Fakultas kesehatan masyarakat Universitas Andalas, melalui dana penelitian fakultas.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Irnani  H,  Sinaga  T.  Pengaruh  pendidikan  gizi terhadap  pengetahuan,  praktik  gizi  seimbang  dan status gizi pada anak sekolah dasar. J Gizi Indones.
2017;6(1):58-64.
2. Nuryani,
Rahmawati. Kebiasaan jajan berhubungan dengan status gizi siswa anak sekolah di  Kabupaten  Gorontalo.  J  Gizi  Indones. 2018;6(2):114-22.
3. Komariah  A,  Alamsyah  N.  Pengaruh  pemberian nano  kalsium  dari  eksoskeleton  kepiting  bakau (Scylla  sp.)  selama  masa  kebuntingan  dan  laktasi terhadap  kekerasan  gigi  tikus  (F1).  Seminar Nasional  XII  Pendidikan  Biologi  2015:  Prodi Pendidikan Biologi FKIP UNS. Hal 948-952.
4. Dewi  NPPA,  Susanto  H,  Rosidi  A.  Hubungan tingkat  kecukupan  zat  gizi,  lean  body  mass,  dan aktivitas  fisik  dengan  kepadatan  tulang  pada mahasiswa  universitas  udayana  denpasar.  J  Gizi Indones. 2016;4(2):96 - 101.
5. Amir  LR,  Suniarti  DF,  Utami  S,  Abbas  B. Chitosan as a potential osteogenic factor compared with  dexamethasone  in  cultured  macaque  dental pulp stromal cells. Cell Tissue Res. 2014;358(2):407-15.
6. Almatsier S. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama; 2009.
7. Anwar F, Bhanger MI. Analytical Characterization of Moringa oleifera Seed Oil Grown in Temperate Regions  of  Pakistan.  J  Agric  Food  Chem. 2003;51(22):6558-63.
8. Singh  BN,  Singh  BR,  Singh  RL,  Prakash  D, Dhakarey  R,  Upadhyay  G,  et  al.  Oxidative  DNA damage  protective  activity,  antioxidant  and  anti- quorum  sensing  potentials  of  Moringa  oleifera. Food Chem Toxicol. 2009;47(6):1109-16.
9. Ndong  M,  Uehara  M,  Katsumata  S-i,  Suzuki  K. Effects of Oral Administration of Moringa oleifera Lam  on  Glucose  Tolerance  in  Goto-Kakizaki  and Wistar Rats. J Clin Biochem Nutr. 2007;40(3):229- 33.
10.  Verma AR, Vijayakumar M, Mathela CS, Rao CV. In  vitro  and  in  vivo  antioxidant  properties  of
different fractions of Moringa oleifera leaves. Food Chem Toxicol. 2009;47(9):2196-201.
11.  Gopalakrishnan L, Doriya K, Kumar DS. Moringa oleifera:  A  review  on  nutritive  importance  and  its medicinal  application.  Food  Sci  Hum  Wellness. 2016;5(2):49-56.
12.  Chumark  P,  Khunawat  P,  Sanvarinda  Y,
Phornchirasilp S, Morales NP, Phivthong-ngam L, et  al.  The  in  vitro  and  ex  vivo  antioxidant properties,  hypolipidaemic  and  antiatherosclerotic activities of water extract of Moringa oleifera Lam. leaves. J Ethnopharmacol. 2008;116(3):439-46.
13.  Oyeyinka AT, Oyeyinka SA. Moringa oleifera as a food  fortificant:  Recent  trends  and  prospects.  J Saudi Soc Agr Sci. 2018;17(2):27-36.
14.  Vongsak  B,  Sithisarn  P,  Gritsanapan  W.  HPLC quantitative  analysis  of  three  major  antioxidative components  of  Moringa  oleifera  leaf  extracts. Planta Med. 2012;78(11):15.
15.  Patel  C,  Rangrez  A,  Parikh  P.  The  anti- osteoporotic  effect  of  Moringa  oliefera  on osteoblastic  cells:  SaOS  2.  Int  J  Pharm  Biol  Sci. 2013;5(2):10 - 7.
16.  Ordzhonikidze  CG,  Ramaiyya  LK,  Egorova  EM, Rubanovich  AV.  Genotoxic  effects  of  silver nanoparticles  on  mice  in  vivo.  Acta  Naturae. 2009;1(3):99-101.
17.  Faedmaleki  F,  Shirazi  FH,  Salarian  A-A,  Ashtiani HA,  Rastegar  H.  Toxicity  effect  of  silver nanoparticles  on  mice  liver  primary  cell  culture and  HepG(2)  cell  line.  Iran  J  Pharm  Res. 2014;13(1):235-42.
18.  Chaloupka K, Malam Y, Seifalian AM. Nanosilver as a new generation of nanoproduct in biomedical applications.  Trends  Biotechnol.  2010;28(11):580- 8.
19.  Gao  H,  Chen  H,  Chen  W,  Tao  F,  Zheng  Y,  Jiang Y,  et  al.  Effect  of  nanometer  pearl  powder  on calcium  absorption  and  utilization  in  rats.  Food Chem. 2008;109(3):493-8.
20.  Suptijah P, Jacoeb AM, Deviyanti N. Karakterisasi dan  bioavabilitas  nano  kalsium  cangkang  udang vanamei  (Litopenaeus  vanamei).  J  Akuntika. 2012;3(1):63-73.
21.  Trilaksani  W,  Salamah  E,  Nabil  M.  Pemanfaatan limbah  tulang  ikan  tuna  (Thunnus  sp.)  sebagai sumbar  kalsium  dengan  metode  hidrolisis  protein. Buletin  Teknologi  Hasil  Perikanan.  2006;9(2):34- 45.
22.  Purwaningsih    SP,  dan  Khoerunisa.  Isolasi  dan karakterisasi  nano  kalsium  dari  cangkang  kijing lokal  (Pilsbryconcha  Exelis)  dengan  metode presipitasi.  Jurusan  teknik  hasil  perikanan  Institut Pertanian  Bogor.  Bogor:  Institut  Pertanian  Bogor. 2012.
23.  Toba Y, Masuyama R, Kato K, Takada Y, Aoe S, Suzuki  K.  Effect  of  dietary  magnesium  level  on calcium  abasorption    in  growing  male  rats.  Nutr Res. 1999;19(5):783-93.
24.  Dorinha  MSS,  Vitti  E,  Kebreab  E.  Phospaharus and  calcium  nutrition  metabolism  in:  phosparus utilization  ang  requirement  in  farm  animal. Wallingford, Oxfordshire, UK: CAB International; 2010.
25.      Roberfroid  MB.  Inuline-type  fructans  food ingredient. Washington (US): CRC. 2005
26.  Bronner  F,  Pansu  D.  Nutritional  Aspects  of Calcium Absorption. J Nutr. 1999;129(1):9-12.
27.  Cashman KD. Calcium intake, calcium bioavailability  and  bone  health.  Br  J  Nutr. 2002;87(S2):S169-S77.
28.  Tongchan  PP,  S.  ;    Niyomwas,  S.  ;    Thongraung, C. Effect of calcium compound obtained from fish by-product on calcium metabolism in rats.  Asian J Food Agro Ind. Bangkok2009. p. 669-76
29.  Viguet-Carrin  S,  Hoppler  M,  Membrez  Scalfo  F,
Vuichoud J, Vigo M, Offord EA, et al. Peak bone strength is influenced by calcium intake in growing rats. Bone. 2014;68:85-91.