## PENGARUH EKSTRAK KASAR YANG MENGANDUNG ENZIM
PEROKSIDASE DARI SAWI HIJAU ( Brassica juncea ) TERHADAP AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK TONGKOL JAGUNG ( Zea mays L.)
Wowor Patricia Walanda 1) , Edi Suryanto 1) , Jemmy Abidjulu 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
The  objective  of  this  research  was  to  study  the  effect  of  peroxidase  enzymes  in  the  greens mustard of the antioxidant activity extract corn cobs. Corn cobs extracted using reflux method for 2 hours. Peroxidase enzyme extraction of green mustard made in 4 comparison for further mixing with the corn cobs extract. The best results from the mixing, are added to the (NH 4 ) 2 SO 4 . Determination of phytochemical  content  is  done  by  calculating  the  total  phenolic  and  flavonoid.  Tests  using  the antioxidants  counteract  free  radical  DPPH  and  hydroxyl  radical  scavengers  TBA  at  the  Wistar  rat liver  homogenates. The  Result  snow  that  the  extract  corn  cob  with  the  addition  of  a  peroxidase enzyme  extract  green  mustard  increased  total  phenolic  and  flavonoid  content.  Similarly,  the antioxidant activity with DPPH and free radical hydroxyl scavengers Wistar rat liver homogenates, had an increase in free-radical scavengers. Conclusion of the research is  the addition of peroxidase enzyme  extract  contained  in  greens  mustard  provide  increased  content  of  total  phenolics  and flavonoids, also increases the antioxidant activity of the corn cob extract.
Keywords : corn cobs, green mustard, antioxidant, peroxidase enzymes.

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini adalah untuk  mempelajari pengaruh enzim peroksidase dari sawi hijau ( Brassica juncea ) terhadap aktivitas antioksidan dari ekstrak tongkol jagung ( Zea mays L . ) . Tongkol jagung  diekstraksi  menggunakan  metode  refluks  selama  2  jam.  Ekstraksi  Enzim  Peroksidase  dari Sawi Hijau dibuat dalam 4 perbandingan untuk selanjutnya di lakukan pencampuran dengan ekstrak tongkol  jagung.  Hasil  terbaik  dari  pencampuran,  ditambahkan  dengan  (NH 4 ) 2 SO 4 .  Penentuan kandungan fitokimia dilakukan dengan menghitung total fenolik dan flavonoid. Pengujian antioksidan menggunakan penangkal radikal bebas DPPH dan penangkal radikal hidroksil TBA pada homogenat hati  tikus  wistar.  Ekstrak  tongkol  dengan  penambahan  ekstrak  enzim  peroksidase  dari  Sawi  hijau mengalami  peningkatan  kandungan  total  fenolik  dan  flavonoid.  Sama  halnya  dengan  aktivitas penangkal  radikal  bebas  DPPH  dengan  penangkal  radikal  hidroksil  homogenat  hati  tikus  wistar, memiliki  peningkatan  penangkal  radikal  bebas.  Hasil  penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa penambahan ekstrak enzim peroksidase yang terkandung dalam sawi hijau memberikan peningkatan kandungan total fenolik dan flavonoid, juga meningkatkan aktivitas antioksidan pada ekstrak tongkol jagung.
Kata kunci :  tongkol jagung, sawi hijau, antioksidan, enzim peroksidase.

## PENDAHULUAN
Seiring  majunya  kehidupan  manusia dan  populasi  manusia  yang  semakin bertambah dari tahun ke tahun, lingkungan sekitar  tempat  manusia  hidup  menjadi tercemar dan pencemaran disebabkan oleh aktivitas  manusia  sendiri.  Lingkungan yang mulai rusak ini dapat membahayakan kesehatan manusia, salah satu penyebabnya  ialah  terbentuknya  radikal bebas yang berbahaya (Halliwell, 1991).
Antioksidan  ialah  molekul  yang dengan mudah dapat memberikan elektronnya  ke  molekul  radikal  bebas sehingga  dapat  menstabilkan  molekul radikal  bebas  dan  mencegah  proses oksidasi  yang  tidak  diinginkan  dalam  sel. Antioksidan  dapat  diperoleh  secara  alami yang  banyak  terdapat  dalam  tanaman  dan juga  dapat  dibeli,  umumnya  berupa antioksidan  sintetik  (Jadhav et  al .  1996).
Penggunaan  senyawa  antioksidan  semakin berkembang  baik  untuk  makanan  maupun untuk  pengobatan  seiring  bertambahnya pengetahuan tentang radikal bebas (Trilaksani, 2003).
Jagung  merupakan  bahan  alam  yang banyak  dikonsumsi  masyarakat  sehingga menghasilkan limbah tongkol jagung yang banyak pula.Tongkol jagung hanya dianggap  sebagai  sesuatu  yang  tidak berguna.Kebanyakan  masyarakat  hanya mengambil  biji  jagung  yang  menempel  di tongkol  jagung,  kemudian  tongkol  jagung dibuang  atau  dibakar.Padahal  tongkol jagung  merupakan  simpanan  makanan untuk  pertumbuhan  biji  jagung  selama melekat  pada  tongkol , maka  dari  itu tongkol  jagung  diduga  memiliki  senyawa- senyawa  aktif  yang  dapat  berpotensi sebagai antioksidan.
Berbagai  penelitian  telah  dilakukan untuk  melihat  potensi  dari  tongkol  jagung diantaranya  Lumempow et  al (2012)
menyatakan bahwa tongkol jagung berpotensi  sebagai  bahan  aktif  tabir  surya karna memiliki kandungan senyawa fenolik. Saleh et al (2012), ekstrak tongkol jagung  memiliki  potensi  sebagai  fitokimia antioksidan  karena  di  dalam  ekstrak terdapat  senyawa  yang  berfungsi  sebagai antioksidan  yaitu  fenolik.  Wungkana et  al (2013) juga mengungkapkan bahwa tongkol  jagung  memiliki  potensi  sebagai antioksidan dan tabir surya dengan adanya kandungan  fenolik  dari  fraksi  etil  asetat.
Dari  penelitian  yang  di  lakukan  oleh Suryanto et  al (2013)  ekstrak  tongkol jagung  memiliki  potensi  sebagai  fitokimia dengan  adanya  senyawa  fenolik  sebagai oksigen  singlet  dan  senyawa  aktif  tabir surya.
Sawi  merupakan  salahsatu  tanaman yang kaya anti-oksidan flavonoid, indoles, sulforaphane, karoten, lutein dan zeaxanthin.  Indoles,  terutama  di-indolyl- metana  (DIM)  dan  sulforaphane  memiliki manfaat  nyata  dalam  melawan  prostat, kanker  usus,  kanker  payudara,  dan  kanker ovarium berdasarkan penghambatan pertumbuhan  sel  kanker,  efek  sitotoksik pada sel kanker, daun sawi segar juga kaya akan vitamin C dan vitamin A (Kloppenburg, 2009).
Dari  penelitian  sebelumnya  diketahui bahwa enzim peroksidase mampu memodifikasi  senyawa  fenolik  guaiakol (Rien, 2005), dan sekaligus dapat meningkatkan kemampuan bioaktivitasnya sebagai  zat  antioksidan.  Dengan  melihat adanya  potensi  yang  terkandung  pada tongkol  jagung  dan  sawi  hijau,  pada penelitian  ini  hendak  diteliti  aktivitas antioksidan  pada  tongkol  jagung  dengan enzim peroksidase dari sawi hijau

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  adalah erlenmeyer,  vacum  rotary  evaporator, oven,  kain  katun,  kertas  saring,  alat sentrifugasi, blender, kulkas, corong pisah, spektrofotometer, waterbath, magnetic stirrer dan alat-alat gelas lainnya.

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  Sayuran  sawi (bagian  bawah),  tongkol  jagung,  etanol 80%,  larutan  bufer  fosfat  pH  7,0  dan  ph 3,0  ,  garam  ammonium  sulfat  50  %,  n- butanol,  hydrogen  peroksida,  methanol  10 %,  reagen  Folin  Ciocalteu  50%,  Natrium Karbonat  2%,  aluminium  klorida  2%, reagen 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH),  natrium  klorida,  Besi  (II)  Sulfat, Tiobarbiturat, Trikloroasetat.

## Prosedur Kerja Persiapan Sampel
Sampel  tongkol  jagung  yang  diambil di pasar traditional Karombasan, dibersihkan kemudian dipotong kecil-kecil lalu  dihaluskan  dengan  cara  diblender, selanjutnya  dikering  anginkan  selama  4-5 hari.

## Ekstraksi Tongkol Jagung
Sebanyak  200  gr  serbuk  tongkol jangung  jenis sweet  corn dimasukan kedalam labu destilat . Kemudian direfluks dengan  etanol  80%  sebanyak  1500  mL selama  2  jam.  Filtrat  hasil  penyaringan dikeringkan  dalam  oven  hingga  diperoleh ekstrak kering tongkol jagung.
Ekstraksi  Enzim  Peroksidase  dari  Sawi Hijau (Thongsook, 2005)
Enzim peroksidase diambil dari sawi segar dibuat dalam 4 pebandingan
sebanyak  250  g  tambahkan  dengan  250 mL  larutan  bufer  fosfat  pH  7,  250  g tambahkan  dengan  500  mL  larutan  bufer fosfat pH 7, 250 g tambahkan dengan 750 mL  larutan  bufer  fosfat  pH  7,  250  g tambahkan  dengan  1000  mL  larutan  bufer fosfat  pH  7,  dihancurkan  dengan  cara diblender pada suhu 5 . Homogenat yang diperoleh  disaring  dengan  kain  katun,  dan filtrat yang diperoleh disentrifugasi dengan kecepatan  5000  rpm  selama  10-15  menit untuk  memisahkan  enzim  kasar  dari serpihan-serpihan. Supematan yang diperoleh disebut ekstrak enzim peroksidase.

## Pencampuran  Ekstrak  Tongkol  Jagung dengan Ekstrak Enzim Peroksidase dari Sawi Hijau
Sebanyak 1 gr ekstrak tongkol jagung ditambah  dengan  0,5  peroksida  kemudian dilarutkan lalu ditambahkan dengan enzim dari  sawi  sebanyak  20  mL,  setelah  itu ditambahkan  dengan  20  mL  buffer  fosfat (pH  3)  dan  20  mL  metanol  10%  lalu diaduk selama 1 jam kemudian di ekstaksi dengan  menggunakan  BuOH  sebanyak  50 mL,  dikocok  dalam  labu  pemisah  dan didiamkan  selam  10-15  menit  hingga terdapat 2 lapisan (enzim peroksidase pada lapisan  bawah  dan  BuOH  pada  lapisan atas).  Kedua  lapisan  yang  terbentuk kemudian  dipisahkan.  Proses  penambahan BuOH  pada  lapisan  bawah  (enzim peroksidase) yang sudah dipisahkan diulang  sekali  lagi.  Lapisan  atas  BuOH yang terbentuk selama dua kali pengulangan  digabungkan  dan  disebuk sebagai  ekstrak  partisi  butanol.  Hasil ekstraksi  dari  n-butanol  dan  enzim peroksidase dari sawi diuapkan pelarutnya dan  dikeringkan  dalam  oven  hingga diperoleh ekstrak kering.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Kandungan  total  fenolik  ekstrak tongkol  jagung  ( Zea  mays L.)  ditentukan menggunakan  metode  Folin  Ciocalteu (Conde et  al .,  1997).  Sebanyak  0,1  mL larutan  ekstrak  1000  ppm  dimasukkan dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan 0,1 mL reagen Folin Ciocalteu 50%. Campuran tersebut divortex, lalu ditambahkan  2  mL  larutan  natrium karbonat 2%. Selanjunya campuran
diinkubasi  dalam  ruang  gelap  selama  30 menit. Absorbansinya dibaca pada panjang gelombang 750
nm dengan spektrofotometer.  Kandungan  total  fenol dinyatakan  sebagai  mg  ekivalen  asam galat/kg ekstrak.
Penentuan  Penangkal  Radikal  Bebas DPPH
Aktivitas antioksidan dilakukan
dengan  metode  DPPH  (Molyneux,  2004) dengan sedikit modifikasi, yaitu mereaksikan reagen 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH)  sebanyak  5  mL dengan  masing-masing  sampel  tongkol jagung  yang  diencerkan  terlebih  dahulu sebanyak  1000  kali,  dengan  enzim peroksidase  dari  sawi  sebanyak  1  mL. Larutan  diukur  dengan  spektrofotometri pada  panjang  gelombang  517  nm,  diamati selama  selang  waktu  5  menit  selama  30 menit.  Kemampuan  aktivitas  antioksidan dihitung dengan persamaan :
Aktivitas  penangkal  radikal  bebas  (%)  =

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi Tongkol Jagung
Tongkol  jagung  diekstaksi  dengan pelarut  etanol  80%  dengan  cara  refluks yang  biasanya  umum  dilakukan  untuk mengekstaksi  sampel  tumbuhan.  Tongkol
Jagung  ditimbang  sebanyak  200  g  lalu direfluks  dengan  menggunakan  pelarut etanol 80%, setelah itu  selama 2 jam pada suhu  78-90  °C,  sampel  disaring  dengan menggunakan vacuum. Kemudian filtratnya  dievaporasi  untuk  memisahkan ekstak  dan  pelarutnya.  Ekstrak  yang  telah terpisah  dari  pelarut  dikeringkan  dalam oven  pada  suhu  40°C  sampai  ekstrak kering. Setelah kering ekstrak dikeruk dan ditempatkan didalam wadah.
Rendemen  yang  diperoleh  dari  hasil ekstraksi  200  g  tongkol  jagung  dengan pelarut  etanol  80%  sebanyak  1500  mL dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Rendemen hasil ekstrak kering tongkol jagung Sampel Berat (g) Rendemen (%) 200 200 7,21 6.21 3.61 3.11
Berdasarkan  Tabel  1,  dapat  diketahui bahwa  rendemen  pada  ekstrak  tongkol jagung  dengan  pelarut  etanol  80  % sebanyak  (3.61%)  dan  (3,11%).  Harborne (1983)  menyatakan  bahwa  komponen fenolik  dapat  diekstraksi  dari  bahan tumbuhan  dengan  menggunakan  pelarut polar  seperti  air,  etanol,  metanol  dan aseton.  Penggunaan etanol sebagai pelarut membuat  senyawa  fenolik  dalam  tongkol jagung  terekstraksi,  karena  senyawa  polar melarutkan yang polar.

## Ekstraksi  ekstrak  enzim  peroksidase dari sawi hijau
Ekstrak  enzim  peroksidase  diperoleh dari sawi hijau dibuat dalam 4 pebandingan,  Bagian  yang  digunakan sebagai  sumber  enzim  peroksidase  adalah bagian bawah sawi yang tidak terpakai.
Tahap  pertama  yang  dilakukan  pada ekstraksi enzim peroksidase adalah menghancurkan  potongan  sawi  hijau  yang ditambahkan  dengan  larutan  buffer  fosfat
pH 7,0 dengan menggunakan blender. Hal ini dilakukan untuk mengekstrak peroksidase yang ada dalam sawi hijau. Homogenat  yang  diperoleh  kemudian disaring dan disentrifugasi dengan kecepatan  5000  rpm  selama  10  menit. Supernatan yang diperoleh dipisahkan dari endapannya.
Tahap  selanjutnya  di  lakukan  dengan mencampurkan  ekstrak  tongkol  jogung dengan  ekstrak  enzim  peroksidase  dari sawi  hijau,  1  g  ekstak  tongkol  jagung ditmbah  dengan  0,5  peroksida  30%  yang dilarutkan  kemudian  ditambahkan  dengan 20 mL enzim dari sawi hasil dari ekstraksi enzim  peroksidase  dari  sawi  hijau  setelah itu  didiamkan  selama  1  jam  di  dalam kulkas  /  pendingin.  yang  selanjutnya ditambahkan dengan 20 mL methanol 10% dan  20  mL  buffer  fosfat  (pH  3)  kemudian di ekstaksi lebih lanjut dengan menggunakan  butanol.  Rendemen  yang diperoleh dapat dilihat pada table 2.
Tabel. 2 Rendemen  hasil  ekstrak  kering enzim  peroksidase  dari  sawi  +  tongkol jagung
Perbandingan Berat (g) Rendemen (%) (P1) (P2) (P3) (P4) 2.06 1.43 1.41 2.47 0.83 0.57 0.56 0.99
Rendemen terbanyak terdapat pada perbandingan  1:4  dengan  penambahan 1000 mL Buffer fosfat, diikuti dengan 1:1, 1:2,  dan  selanjutnya  1:3.  Banyaknya rendemen  yang  didapatkan  dikarenakan peran enzim peroksidase yang meningkatkan  aktivitas  antioksidan  pada ekstrak  tongkol  jagung  dalam  n-butanol. Kinerja  enzimatis  juga  dipengaruhi  oleh bebeapa hal diantaanya konsentasi subtract,  konsentrasi  enzim,  suhu,  pH  dan inhibitor.

## Penentuan Kandungan total Fenolik dan Flavonoid
Hasil ekstraksi tongkol jagung dengan enzim  peroksidase  4  perbandingan  dibuat dalam  konsentrasi  1000  ppm  kemudian  di uji  kandungan  total  feolik.  Hasil  analisis kandungan  total  fenolik  yang  dieroleh pada peneltian ini dapat dilihat pada tabel3
Tabel 3 . Kandungan total fenolik
Ket :   ETJ = Ekstrak tongkol jagung,
1:1 = Perbandingan 1,
1:2 = Perbandingan 2,
1:3 = Perbandingan 3,
1:4 = Perbandingan 4,
Berdasarkan  tabel  3  diatas,  dapat diketahui  bahwa  ekstrak  tongkol  jagung dengan  enzim  peroksidase  dari  sawi memiliki  kandungan  total  fenolik  yang paling  tinggi  pada  perbandingan  4  (72,95 mg/kg),  diikuti  Perbandingan  1  (65,2 mg/kg),  Perbandingan  2  (63,16  mg/kg), Pembanding  3  (59,08  mg/kg).    Semua kandungan total fenolik dengan penambahan  enzim  lebih  tinggi  dari  pada kandungan total fenol pada tongkol jagung yaitu 41,32 mg/kg
Kandungan total fenolik dalam sampel ditentukan berdasarkan kemampuan senyawa fenolik dalam tongkol  jagung,  bereaksi  dengan  asam fosfomolibdat-fosfotungstat  dalam  reagen Folin-Ciocalteu yang berwarna kuning dan akan berubah menjadi warna biru. Semakin tua intensitas warnanya menandakan semakin tingginya kandungan Jenis Ekstrak 1000 ppm Fenolik (mg/kg) ETJ P1 P2 P3 P4 41,32 65,20 63,16 59,08 72,96
total  fenol  di  dalam  ekstrak  (Shahidi  dan Naczk, 1995).

## Aktivitas  Penangkal  Radikal  Bebas DPPH
Aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak tongkol  jagung  dilakukan  dengan  metode penangkal  radikal  bebas  DPPH.    Prinsip metode penangkapan radikal adalah pengukuran  penangkapan  radikal  bebas sintetik dalam pelarut organik polar seperti etanol  pada  suhu  kamar  oleh  suatu senyawa yang mempunyai aktivitas antioksidan.    Proses  penangkapan  radikal bebas ini melalui mekanisme pengambilan atom  hidrogen  dari  senyawa  antioksidan oleh  radikal  bebas  sehingga  radikal  bebas menangkap  satu  elektron  dari  antioksidan. Radikal  bebas  sintetik  yang  digunakan DPPH.    Senyawa  DPPH  bereaksi  dengan senyawa  antioksidan  melalui  pengambilan atom  hidrogen  dari  senyawa  antioksidan utnuk  mendapatkan  pasangan  elektron (Pokorny et al ., 2001).
Senyawa  yang  bereaksi  sebagai penangkal  radikal  bebas  akan  mereduksi DPPH  yang  dapat  diamati  dengan  adanya perubahan  warna  DPHH  dari  ungu menjadi  kuning  ketika  elektron  ganjil  dari radikal  DPPH  telah  berpasangan  dengan hidrogen  dari  senyawa  penangkal  radikal bebas  yang  akan  menbentuk  DPPH-H tereduksi (Molyneux, 2004).
Aktivitas  penangkal  radikal  bebas menggunakan  uji  DPPH  pada  konsentrasi 1000  ppm  dapat  dilihat  pada  gambar  1 dibawah :
Gambar  1.  Aktivitas  penangkal  radikal bebas DPPH
Berdasarkan  hasil  yang  dipeoleh pada  gambar  1,  maka  dapat  diketahui bahwa  ekstrak  tongkol  jagung  dengan penambahan  enzim  dari  sawi  dengan ammonium  sulfat  memiliki  kemampuan penangkal radikal bebas yang paling tinggi pada perbandingan 4 (76%), Perbandingan 3  (74%),  Perbandingan  2  (72,2%),  dan Perbandingan 1 (70,5%). Hal ini menunjukan  bahwa  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  ekstrak  tongkol  jagung memiliki  kemampuan  yang  baik  dalam menangkal radikal bebas.

## Fraksinasi    ekstrak  enzim  peroksidase dengan Ammonium sulfat
Berdasarkan semua pengujian yang telah dilakukan, didapatkan bahwa penambahan  ekstrak  enzim  peroksidase dari  sawi  hijau  pada  perbandingan  4 memiliki  hasil  yang  paling  baik,  untuk dilanjutkan  dengan  penggunaan  garam ammonium sulfat yang di tambahkan pada perbandingan  4.  Garam  ini  dipilih  karena memiliki beberapa kelebihan yaitu kelarutannya yang tinggi, memiliki kemampuan  pengendapan  yang  tinggi  dan juga  memiliki  efek  denaturasi  terhadap protein  yang  rendah.  Penambahan  garam ini  bertujuan  untuk  mengendapkan  enzim berdasarkan berat molekulnya.
Penambahan ammonium sulfat
dengan  jumLah  0-30%  akan  dapat mengendapkan protein enzim dengan berat
66 68 70 72 74 76 78 P1 P2 P3 P4 A kt iv itas Pen an gkal R ad ikal B e b as (% )
Jenis Ekstrak 1000 ppm
molekul  yang  besar.  Sehingga  dapat diperoleh  enzim  yang  murni.  Selanjutnya endapat  yang  deiperoleh  disuspensikan kembali dengan buffer fosfat pH 7,0 dan di ekstraksi  dengan  menggunakan  Butanol menghasilkan  rendemen  sebesar  0,84  %. Kemudian  diuji  kandungan  total  fenolik, flavonoid,  aktivitas  penangkal  radikal bebas dengan DPPH dan penangkal radikal hidroksil  pada  hati  tikus  wistar.  Hasil pengujian dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5 . Fraksinasi ekstrak enzim peroksidase dengan penambahan ammonium sulfat Ekstrak 1000 ppm Fenolik (mg/kg) DPPH (%) P4 FE 72,96 130,51 76 86,3 Ket : P4 = Perbandingan 4

## FE = Fraksi Enzim pada
perbandingan 4 + Ammonium sulfat
Berdasarkan  tabel  di  atas  dapat diketahui  bahwa  penambahan  ammonium sulfat  pada  perbandingan  4  mengalami peningkatan.  Peningkatan  tersebut  diduga karena  adanya  endapan  pada  garam ammonium  sulfat  dapat  menggandakan enzim peroksidase dalam sawi hijau.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  pada  hasil  penelitian yang  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa, penambahan  enzim  peroksidase  dari  sawi memberikan peningkatan aktivitas antioksidan  terhadap  ekstrak  tongkol jagung  yang  diuji  dengan  metode  DPPH dan  Penangkal  radikal  hidroksil  yang masing-masing  memberikan  hasil  P1 (70,5%), P2 (72,2%), P3 (74%), P4 (76%) dan  yang  tertinggi  Fraksi  Enzim  1:4 dengan  penambahan  ammonium  sulfat (86,3%) untuk DPPH sama halnya dengan
Penangkal Radikal Hidroksil yang memberikan  hasil  tertinggi  pada  Fraksi enzim 1:4 dengan penambahan ammonium
sulfat (67,2%), diikutioleh P4 (62,4%), P3 (55),  P2  (53),  dan  P1  (50,8)  peningkatan tersebut disebabkan meningkatnya kandungan  total  fenolik  dan  flavonoid yang terdapat dalam aekstrak.

## DAFTAR PUSTAKA
Conde,  E.E.,  M.C.  Cadahia,  G.  Vallejo, B.F.D.  Simon  and  J.R.G.  Adrados. 1997. Low Molecular Weight
Polyphenol  in  Cork  of  Querceus Suber .  J.  Agric  Food  Chem .  45:
2695-2700.
Halliwel  B  dan  Gutteridge  C.  1999. Free Radical  in  Biology  and  Medicine . Oxford University Press, New York.
Jadhav, S.J., Nimbalkar, S.S.,
Kulkarni,A.D  &  Mahdavi,  D.L. 1996.  Lipid  Oxidation  in  Biological and  Food  Systems.  Dalam  D.L. Madhavi,  S.S.  Deshpandeand  D.K Salunkhe  (eds). Food  Antioxidants Technological,  Toxicological,  and Healt,  drespectives .  Marcel  Dekker, Inc, New york.
Kloppenburg,  2009. Petunjuk  Lengkap mengenai
Tanam-tanaman di Indonesia  dan  Khasiatnya  sebagai Obat-obatan Tradisional . Yogyakarta : Yayasan Dana
Sejahtera.
Lomempuow, L.I., J. Paendong., L.I.Momuat., dan E. Suryanto. 2012.
Potensi  Antioksidan  dari  Ekstrak Etanol Tongkol Jagung ( Zea mays L.). Chem Prog . 5:  49-56.
Molyneux, P. 2004. The Use of The Stable Free  Radical  Diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH)  for  Estimating  Antioxidant
Activity. Songklanakarin  Journal  of Science  and  Technology. 26:  211-
219.
Pokorny,  J.,  N.  Yanishlieva,  and  M. Gordon. 2001. Antioxidant in Food : Practical  Application .  CRC  Pres. Boca  Raton,  Coston,  New  York,
Washington, Dc. Woodhead
Publishing Limited. Cambridge,
England.
Saleh,  L.P.,  E.  Suryanto.,  A.  Yudistira.
2012.  Aktivitas  Antioksidan  dari Ekstrak Tongkol Jagung ( Zea
mays L.). Pharmacon .1: 20-24.
Suryanto,  E.,  L.I.  Momuat.,  A.  Yudistira.,
F. Wehantouw.
2013. The Evaluation Of Singlet Oxygen Quenchingand  Sunscreen  Activity
Of  Corn  cob  Extract. Indonesian  J.
Pharm. 4:269-278
Thongsook,  T.,  dan  Barrett,  D.  M.  2005. Purification  and  Characterization  of
Broccoli  (Brassica  oleracea  Var. italica)  Peroxidases. J.  Agric.  Food
Chem ., 53, 3206-3214.
Trilaksani, W. (2003). Antioksidan : Jenis, sumber,  mekanisme  kerja  dan  peran terhadap  kesehatan .  Bogor  :  Institut Pertanian Bogor.