e-issn: 2716-4608 p-issn: 2655-366X

## EFFECT OF NITRATE AND PHOSPATE CONCENTRATION ON Spirulina platensis WITH INDOOR SCALE
Safira Mutia 1 *, Syahril Nedi 1 , Elizal 1
1 Department of Marine Science, Faculty of Fisheries and Marine Universitas Riau, Pekanbaru *smutialatief@gmail.com

## ABSTRACT
One  of  the  microalgae  that  are  widely  used  in  the  industrial  world  is Spirulina platensis which has high nutritional content of protein, fatty acids, vitamins and antioxidants. In its  growth, this microalgae requires media and the addition of macronutrients nitrate and phosphate  which  greatly  affect  the  growth  and  productivity  of S.  platensis biomass.  This study  aims  to  determine  the  effect  of  nitrate  and  phosphate  concentrations  on S.  platensis biomass on an indoor scale and to determine the optimal nitrate and phosphate concentrations to  achieve  maximum  biomass.  This  research  was  conducted  in  August  2020  as  an experimental method, with culturing S. platensis with the addition of different concentrations of nitrate and phosphate. The design used in this study was a Completely Randomized Design consisting  of  5  treatments  that  are  0  ppm,  10  ppm,  20  ppm,  30  ppm,  and  40  ppm,  each treatment with 3 repetitions. The source of nitrate and phosphate used is NPK. Water quality parameters  during  culture  with  temperatures  ranging  from  29-30 o C,  salinity  25-26  ppt,  and pH 8. The optimal concentrations of nitrate and phosphate to achieve the maximum biomass is in treatment C (30 ppm) with a total of biomass 0,43 g. Whereas in treatment D (40 ppm) the biomass did not show a significant increase because the dose was too high with a total of biomass only 0,299 g
Keywords: Spirulina platensis , Nitrate, Phosphate, Biomass, Indoor

## I. PENDAHULUAN
Pemanfaatan  mikroalga  khususnya
Spirulina  platensis selama  ini  secara komersial banyak digunakan untuk memproduksi  suplemen  makanan  karena memiliki  kandungan  protein  yang  cukup tinggi dan sudah banyak digunakan sebagai sumber  pakan  alami  untuk  pembenihan larva  ikan  dan  udang  karena  memiliki nutrisi  yang  tinggi.  Kandungan  proteinnya yang tinggi, dapat dicerna dengan baik, dan lemaknya  yang cukup rendah juga menjadi kelebihan mikroalga  ini  [1].  Selain  sebagai pakan alami mikroalga ini banyak digunakan  sebagai  imunostimulan,  obat- obatan,  kosmetik  dan  pewarna  alami maupun makanan.
Biomassa  merupakan  salah  satu sumber  energi  yang  bersumber  pada  bahan biologis  dari  organisme  yang  belum  lama mati  (dibandingkan  dengan  bahan  bakar fosil).  [2]  menjelaskan  bahwa  nutrien (karbon,  nitrogen  dan  fosfor)  merupakan faktor  utama  yang  dapat  mempengaruhi pertumbuhan  dan  kandungan  biomassa mikroalga.  Nitrogen  merupakan  salah  satu elemen penting untuk pertumbuhan, perkembangan,  reproduksi,  dan  kegiatan fisiologis Spirulina . Sumber nitrogen mempengaruhi kegiatan fotosintesis sehingga  peningkatan  proses  fotosintesis akan  berpengaruh  terhadap  peningkatan biomassa  mikroalga  [3].  Sedangkan  fosfat sangat  diperlukan  sebagai  transfer  energi
p-issn: 2655-366X
dari luar ke dalam sel organisme, sehingga fosfat  merupakan  salah  satu  unsur  utama yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroalga maupun meningkatkan biomassa mikroalga [4-5].
Sedangkan  kalium  merupakan  unsur terpenting  ketiga  bagi  biomassa  mikroalga setelah  nitrat  dan  fosfat  yang  berfungsi memperkuat organ mikroalga, unsur K juga berfungsi  dalam  metabolisme  karbohidrat dan  sebagai  kofaktor  untuk  beberapa koenzim  [6].  Fungsi  kalium  tidak  terlalu berpengaruh  terhadap  biomassa  mikroalga apabila  dibandingkan  dengan  fungsi  nitrat dan fosfat.
Kultur  dilakukan  pada  skala  indoor yaitu  di  dalam  ruangan  tertutup  dan  diatur suhu  serta  dijaga  parameter  kualitas  airnya agar sesuai dengan standar kualitas air yang baik bagi pertumbuhan mikroalga. Kelimpahannya  di  alam  di  sebagian  besar perairan Indonesia terbatas namun
penggunaannya  cukup  luas  maka  perlu dilakukan kultur secara berkesinambungan. Kegunaannya  yang  beragam  menjadikan mikroalga ini berpotensi untuk dikembangkan.  Kegiatan  kultur  mikroalga merupakan salah satu upaya pengembangan dan pemenuhan kebutuhan dari S. platensis sehingga pasokannya tidak hanya bergantung pada alam.
Berdasarkan hal itu dilakukan penelitian  pengaruh  konsentrasi  nitrat  dan fosfat  terhadap  biomassa S.  platensis pada skala indoor.

## 2.   METODE PENELITIAN
Bahan dan Alat Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  bibit Spirulina platensis yang  didatangkan  dari  Surabaya, dan  untuk  mendukung  pertumbuhannya digunakan  media  Zarrouk  [7],  pupuk  NPK (Nitrat,  Posfat,  Kalium)  sebagai  sumber nutrien  nitrat  dan  sumber  nutrien  fosfat pada  kultur,  alkohol,  klorin,  dan  kertas saring  GF/C  (mesh  size  1,2  μm)  untuk menyaring S. platensis .
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  thermometer,  hand refractometer,  botol  plastik  1  liter,  aerator, oven,  timbangan,  gelas  ukur,  pipet  tetes, dan vacuum pump.

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  metode  eksperimen dengan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL). Terdiri dari 4 perlakuan penambahan nitrat dan  fosfat  dalam  bentuk  NPK  yang mengandung 16% N (Nitrogen), 16%  P 2 O 5 (Phospate), dan 16% K 2 O (Kalium) dengan konsentrasi  berbeda  yaitu  A  (10  ppm),  B (20  ppm),  C  (30  ppm),  D  (40  ppm),  dan  1 kontrol  dengan  masing  masing  3  kali pengulangan.

## Prosedur Penelitian Sterilisasi Alat dan Media
Sterilisasi  alat  digunakan  untuk menghindari  terjadinya  kontaminasi  oleh mikroorganisme lain  yang tidak diinginkan tumbuh  dalam  kultivasi.  Sebelum  proses sterilisasi,  peralatan  berupa  botol  kultur 1000  ml,  selang  aerasi,  dan  batu  aerasi dicuci  bersih  menggunakan  detergen  dan air  mengalir,  kemudian  alat  –  alat  tersebut disterilisasi menggunakan alkohol. Alkohol yang umum dipakai untuk sterilisasi adalah alkohol  konsentrasi  70%  karena  efektif memecah protein yang ada dalam mikroorganisme  [8].  Adapun  keunggulan alkohol  ini  adalah  sifatnya  yang  stabil, tidak merusak material, dan dapat dibiodegradasi [9].
Sterilisasi  media  air  laut  dilakukan untuk  menghindari  terjadinya  kontaminasi oleh  mikroorganisme  lain  yang  tidak diinginkan  yang  berasal  dari  air  laut. Sterilisasi  dilakukan  dengan  memanaskan air  laut  sampai  dengan  suhu  100 o C  untuk mematikan  mikroorganisme  yang  dapat mengganggu  proses  kultur  Spirulina.  Air laut terlebih dahulu disterilisasi menggunakan  klorin.  Setelah  sterilisasi menggunakan  klorin,  air  laut  kemudian
dipanaskan  sampai  dengan  suhu  100 o C selama    15  menit,  lalu  air  laut  didinginkan hingga  menjadi  suhu  ruangan  setelah  itu dapat digunakan [10].

## Pembuatan Media
Air  laut  yang  telah  disterilisasi dimasukkan  ke  dalam  wadah  kultur  1000 ml  dan  diatur  salinitasnya  menggunakan handrefractometer  menjadi  25‰,  sesuai dengan  hasil  penelitian  sebelumnya  bahwa kadar salinitas S. platensis yang baik adalah 25‰  [11].  Media  Zarrouk  dimasukkan sebanyak  1  ml  (dosis  1ml/L).  Lalu dilakukan  perlakuan  penambahan  sumber nutrien nitrat dan fosfat dengan konsentrasi 0  ppm,  10  ppm,  20  ppm,  30  ppm,  dan  40 ppm  yang  diberikan  dalam  bentuk  pupuk NPK  ke  dalam  media.  Masing  –  masing perlakuan mempunyai tiga kali ulangan.

## Persiapan Inokulasi
Penebaran  bibit  pada  media  kultur sebanyak  100  ml  dalam  media  1  liter (maksimal  10-20%  dari  volume  media). Bibit yang dalam kondisi bagus dilihat dari segi warna dan juga kepadatannya. Inokulasi sampel dilakukan dengan kepadatan  kultur  awal  sekitar  0,05  g/L. Penebaran  bibit  dilakukan  dengan  cara memasukkan  secara  langsung  bibit  dengan volume  100  ml  ke  dalam  botol  kultur dengan  menggunakan  pipet  tetes.  Wadah berisi  alga  ini  diletakkan  pada  kondisi ruangan,  diaerasi  lemah  suhu  ruang  diatur pada kisaran 19-23°C

## Penyaringan  dan  Pengukuran  Biomassa
S. platensis
Konsentrasi biomassa sel S. platensis dianalisis menggunakan metode [5]. Sampel  mikroalga  yang  digunakan  diambil pada  H 0 ,  H 2 ,  H 4 ,  H 6 ,  H 8 dan  H 10 .  Kertas saring GF/C (mesh size 1,2 μm) dikeringkan pada suhu 105 o C selama 2 jam hingga  beratnya  konstan  [A].  Sampel mikroalga  50  ml  difilter  menggunakan vacuum  pump  melalui  kertas  saring  dan
dicuci dengan air tawar untuk menghindari kontaminasi  garam  yang  tidak  larut  pada media.  Kemudian  kertas  saring  diletakkan di  oven  pada  suhu  105 o C  selama  2  jam hingga  beratnya  konstan.  Setelah  dingin, beratnya ditimbang kembali [B].
iomassa  g l) [ ] [ ] x 1 volume sampel
Pengukuran  biomassa S.  platensis dilakukan  dua  hari  sekali  selama  10  hari untuk  melihat  pengaruh  konsentrasi  nitrat dan fosfat terhadap biomassa S. platensis

## 3.  HASIL DAN PEMBAHASAN Parameter Kualitas Air
Pengukuran  parameter  kualitas  air dilakukan  setiap  hari  dengan  3  kali pengulangan,  rata  –  rata  dari  pengukuran parameter  kualitas  air  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1. Rata – rata Pengukuran Parameter

## Kualitas Air
Perlakuan Parameter Suhu ( o C) pH Salinitas (ppt) Kontrol 29.5 8 25 A 29.9 8 26 B 30.1 8 26.1 C 29.9 8 25.8 D 29.7 8 25.5
Berdasarkan  Tabel  1  dapat  dilihat bahwa  suhu  selama  proses  kultur  berkisar antara  29,5  –  30,1 o C  yang  berarti  suhu perairan  tersebut  dalam  kondisi  yang  baik bagi  pertumbuhan S.  platensis sesuai dengan  [12]  yang  mengatakan  kisaran temperatur  optimal  bagi  pertumbuhan Spirulina  platensis  yaitu  antara  20°C  - 30°C.  Dari  hasil  pengukuran  pH  diperoleh nilai  pH  8.  Nilai  pH  yang  diperoleh  pada penelitian ini merupakan pH optimal untuk pertumbuhan S. platensis . [13] mengatakan sebagian  besar  sel,  termasuk  fitoplankton sangat  peka  terhadap  derajat  keasaman cairan  yang  mengelilinginya.  Nilai  pH
optimal  untuk Spirulina adalah  7,2  –  9,5 dan maksimal pada pH 11.
Pengukuran  salinitas  juga  dilakukan selama  proses  kultur  dan  salinitas  diatur pada  saat  awal  kultur  yaitu  25  ‰  dan didapatkan  hasil  salinitas  yang  diukur  per hari  berkisar  25  –  26,1  ‰.  Hal  ini mendukung  pendapat  dari  [14]  yang mengatakan umumnya fitoplankton air laut hidup  normal  pada  salinitas  optimum  25  – 35 ‰.
Pengukuran  Biomassa S.  platensis pada Skala Indoor
Perhitungan  biomassa S.  platensis dilakukan  untuk  mengetahui  pertumbuhan S.  platensis dalam  bentuk  berat  keringnya pada  skala  indoor  dan  dihitung  setiap  dua hari sekali  agar terlihat perbedaannya yang lebih jelas. Hasil rata – rata perhitungannya pada hari ke-0, hari ke-2, hari ke-4, hari ke- 6,  hari  ke-8  dan  hari  ke-10  dapat  dilihat pada Gambar 1.
Gambar  1. Pengukuran  Biomassa S. platensis pada Skala Indoor
Gambar  1  dapat  dilihat  bahwa  pada perlakuan  Kontrol  yang  tidak  diberi tambahan  nitrat  dan  fosfat  mengalami pertumbuhan  biomassa  dimulai  dari  0,17  g menjadi  0,255.  Perubahan  yang  terjadi sangat sedikit apabila dibandingkan dengan sampel  yang  diberi  tambahan  nitrat  dan fosfat.  Lalu  pada  perlakuan  A  yang  diberi tambahan nitrat dan fosfat dengan konsentrasi  10  ppm  jumlah  biomassa  pada hari ke-0 yaitu 0,187 g dan bertambah pada hari  ke-10  menjadi  0,361  g.  Akan  tetapi
dosis  ini  tidak  menunjukkan  perbedaan signifikan jika dibandingkan dengan perlakuan  B  dengan  dosis  nitrat  fosfat  20 ppm  jumlah  biomassa  di  hari  ke-0  yaitu 0,189  g  dan  hari  ke-10  yaitu  0,425  dan perlakuan  C  dengan  dosis  nitrat  fosfat  30 ppm  pada  hari  ke-0  jumlah  biomassa  nya 0,189  g  lalu  pada  hari  ke-10  jumlah biomassanya  meningkat  menjadi  0,43  g. Sedangkan perlakuan D dengan dosis nitrat fosfat  40  ppm  jumlah  biomassa  pada  hari ke-0  yaitu  0,191  g  menjadi  0,299  g  pada hari ke-10, pada dosis ini tidak menunjukkan  perbedaan  signifikan  apabila dibandingkan  dengan  perlakuan  A,  B,  dan C.  Hasil  data  yang  didapatkan  selama penelitian  menunjukkan  bahwa  puncak kepadatan  populasi S.  platensis dari masing-masing  perlakuan  berada  pada  hari ke  empat  (Gambar  1).  Fase  pertumbuhan pada Spirulina sp. terdiri atas fase adaptasi, fase  eksponensial,  fase  stasioner  dan  fase kematian  [15].  Laju  pertumbuhan  spesifik tertinggi dan konsentrasi biomassa tertinggi 0,43 g diperoleh pada dosis nitrat dan fosfat 30 ppm, yaitu perlakuan C.
Hasil  ini  sesuai  dengan  studi  [16]
yang menemukan bahwa peningkatan dosis sodium  nitrat  dari  0,01  M  ke  0,03  M mampu  meningkatkan  laju  pertumbuhan spesifik  sebesar  23,8%  dan  biomassa S. platensis sebesar  21,7%.  Hasil  yang  sama juga  dijelaskan  oleh  [17]  menyatakan bahwa peningkatan dosis kalium nitrat dari 0,2  mM  ke  3,2  mM  mampu  meningkatkan biomassa Spirulina sebesar 2 kali lipat. [18] menambahkan  bahwa  pemberian  sodium nitrat pada dosis 2,5 g/l mampu meningkatkan produksi biomassa
S. platensis sebesar 2,626 g/l.
Maka  dapat  diketahui  bahwa  jumlah biomassa S. platensis semakin hari semakin bertambah seiring dengan adanya penambahan  konsentrasi  nitrat  dan  fosfat yang  berbeda,  hal  ini  sesuai  dengan  [19] menyatakan  bahwa  peningkatan  biomassa mikroalga bertambah seiring dengan penambahan  konsentrasi  nitrat  dan  fosfat.
Penambahan  nitrat  dan  fosfat  pada  kultur mikroalga  yang  telah  dikondisikan  akan menunjukkan peningkatan jumlah biomassa yang  signifikan  pada  hari  ke-6,  hari  ke-8, dan hari ke-10.
Pengaruh  Konsentrasi  Nitrat,  Fosfat yang Berbeda terhadap Biomassa

## S. platensis
Gambar  1  dapat  dilihat  pada  grafik bahwa  pada  perlakuan  Kontrol  yang  tidak diberi  tambahan  nitrat  dan  fosfat  biomassa pada  hari  ke-0  yaitu    0,17  g  dan  hanya meningkat  menjadi  0,191  g  pada  hari  ke- 10.  Hal  ini  dikarenakan  fungsi  nitrat  yang sangat penting bagi pertumbuhan Spirulina sesuai  dengan  pernyataan  [3]  nitrogen merupakan salah satu elemen penting untuk pertumbuhan,  perkembangan,  reproduksi, dan  kegiatan  fisiologis Spirulina .  Sumber nitrogen mempengaruhi
kegiatan
fotosintesis  sehingga  peningkatan  proses fotosintesis  akan  berpengaruh  terhadap peningkatan  biomassa  mikroalga,  ia  juga menambahkan  bahwa  pemanfaatan  sumber nitrogen  dalam  bentuk  nitrat  mampu meningkatkan biomassa Spirulina .
Konsentrasi  nitrat  fosfat  yang  rendah tidak  dapat  mendukung  pertumbuhan  yang optimal bagi Spirulina.
Meskipun mengalami  pertumbuhan  biomassa  yang tidak  signifikan, Spirulina masih  tetap dapat  tumbuh.  Hal  ini  sejalan  dengan  hasil penelitian  sebelumnya  yang  melaporkan masih berlangsungnya pertumbuhan biomassa  kultur Spirulina hingga  40  jam setelah  ditransfer  ke  media  bebas  nitrogen, dengan  kompensasi  peningkatan  nilai  rasio C/N pada biomassanya [20]. [21]
mengaitkan  kemampuan  terus  tumbuh dengan adanya kumpulan pigmen fikosianin yang berfungsi sebagai cadangan nitrogen pada sel-sel Spirulina.
Dari jumlah biomassa yang dihasilkan tersebut diketahui bahwa konsentrasi  nitrat  dan  fosfat  yang  baik dalam bentuk pupuk NPK untuk peningkatan  jumlah  biomassa S.  platensis
terjadi  pada  perlakuan  C,  yaitu  dengan penambahan  konsentrasi  nitrat  dan  fosfat sebanyak  30  ppm,  hal  ini  terlihat  dari jumlah biomassa yang tertinggi terjadi pada perlakuan C yaitu 0,43 g, [3] menambahkan bahwa  nitrogen  merupakan  salah  satu elemen penting untuk pertumbuhan, perkembangan,  reproduksi,  dan  kegiatan fisiologis Spirulina . Sumber nitrogen mempengaruhi kegiatan
fotosintesis sehingga  peningkatan  proses  fotosintesis akan  berpengaruh  terhadap  peningkatan biomassa mikroalga.
Nitrat  adalah  sumber  nitrogen  utama yang  diasimilasi  oleh Spirulina sp.  untuk mendukung pertumbuhan selnya.
Pemanfaatan sumber nitrogen dalam bentuk nitrat  mampu  meningkatkan  biomassa Spirulina . Sedangkan fosfat sangat diperlukan sebagai transfer energi dari luar ke  dalam  sel  organisme,  sehingga  fosfat merupakan  salah  satu  unsur  utama  yang diperlukan  untuk  pertumbuhan  mikroalga maupun meningkatkan biomassa mikroalga [22].
Namun,  pada  perlakuan  D  dengan konsentrasi  nitrat  dan  fosfat  40  ppm, jumlah  biomassa  nya  pada  hari  ke-0  yaitu 0,191  g  dan  hanya  meningkat  menjadi 0,299 g. Terjadi penurunan jumlah biomassa Spirulina dibandingkan  dengan perlakuan  A,  B,  dan  C.  Hal  ini  dapat disebabkan oleh dosis nitrat dan fosfat yang terlalu  tinggi.  Nitrogen  dalam  keadaan berlebih  maupun  rendah  pada  mikroalga dapat menghambat pertumbuhan sel mikroalga.  Penambahan  nitrogen  yang sesuai  serta  faktor  lingkungan  yang mendukung menghasilkan proses fotosintesis  yang  optimal  sehingga  dapat meningkatkan laju pertumbuhan dan menghasilkan  konsentrasi  biomassa  yang tinggi  [23].  Pemberian  dosis  pupuk  harus disesuaikan  dengan  skala  kultur Spirulina sp . Kandungan  pupuk  yang  terlalu  sedikit ataupun berlebih akan menghambat pertumbuhan Spirulina sp . Menurut  [24], pemberian  nutrien  pada  media  dalam
p-issn: 2655-366X
jumlah  berlebih  maka  akan  bersifat  racun yang dapat menghambat pertumbuhan. [25] menambahkan semakin tinggi dosis pemberian  pupuk  pada  media  kultur mikroalga  maka  tingkat  kekeruhan  juga semakin tinggi, dimungkinkan fosfat dalam media tidak termanfaatkan. Tingkat kekeruhan  yang  tinggi  dapat  menyebabkan rendahnya penetrasi cahaya dan menyebabkan terganggunya proses
fotoautotrofik dari mikroalga.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Penambahan  konsentrasi  nitrat  dan fosfat  yang  berbeda  berpengaruh  terhadap biomassa S.  platensi s.  Semakin  besar konsentrasi nitrat dan fosfat yang ditambahkan  maka  semakin  besar  jumlah biomassa yang dihasilkan, namun konsentrasi  nitrat  dan  fosfat  yang  terlalu
tinggi  dapat  menghambat  pertumbuhan serta  peningkatan  biomassanya.  Jumlah biomassa  tertinggi  dicapai  oleh  masing masing perlakuan pada hari ke-8. Konsentrasi  nitrat  fosfat  yang  baik  dalam bentuk  NPK  untuk  pertumbuhan  biomassa S.  platensis berada  pada  perlakuan  C dengan konsentrasi nitrat dan fosfat 30 ppm dan  biomassa  yang  dihasilkan  merupakan jumlah  tertinggi  yaitu  0,43  g.  Pada perlakuan  D  dengan  konsentrasi  40  ppm, pertumbuhan  biomassa S.  platensis tidak meningkat  dengan  baik  dikarenakan  dosis yang terlalu tinggi.
Saran Diharapkan untuk penelitian selanjutnya  mengenai  pemeliharaan S.
platensis menggunakan  jenis  pupuk  yang berbahan alami.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Cohen,  Z.,  M.  Reungjitchachawali,  W.  Siangdung,  dan  M.  Tanticharoen.  (1993). Production  and  partial  purification  of  γ-linolenic  acid  and  some  pigments  from Spirulina platensis . Journal of Applied Phycology , 5 (1):109-115.
2. Juneja, A., R.M. Ceballos, dan G.S. Murthy. (2013). Effects of environmental factors and  nutrient  availability  on  the  biochemical  composition  of  algae  for  biofuels production: A review, Energies, 6 : 4607-4638.
3. Nyabuto,  D.K.,  K.  Cao,  A.M.  Mariga,  G.W.  Kibue,  M.  He,  dan  C.  Wang.  (2015). Growth performance and biochemical analysis of the genus Spirulina under different physical  and  chemical  environmental  factors. African  Journal  of  Agricultural Research , 10 (36), pp. 3614-3624.
4. Natalia.,  B.  Amin,  dan  I.  Effendi.  (2019).  Effect  of  Addition  of  Different  Nitrate Concentration  on Spirulina  platensis Biomass  with  Semi  Outdoor  System. Asian Journal of Aquatic Sciences , 2(1): 127-131
5. Nainggolan, J.G.M., A. Tanjung, dan I. Effendi. (2018). Growth of Spirulina platensis in  Indoor  and  Semi  Outdoor  Culturing  Systems. Asian  Journal  of  Aquatic  Sciences , 1(1): 22-28
6. Isnansetyo,  A.  dan  Kurniastuty.  (1995). Teknik  Kultur  Phytoplankton  dan Zooplankton Pakan Alami untuk Pembenihan Organisme Laut . Kanisius. Yogyakarta 7. Borowitzka,  M.A.  (1994). Products  from  Algae. In  S.  M.  Phang,  L.  Y.  Kun,  M.  A. orowitzka,  and   .   .  Whitton  eds.  In.  Proc.  1st   sia‐Pacific  Conference  on   lgal Biotechnology. Kuala Lumpur. University of Malaya. Malaysia.
8. Margono.  (2000). Buku  Panduan  Teknologi  Pangan .  Pusat  InformasiWanita  dan Pembangunan  PDII-LIPI  Bekerjasama  dengan Swiss  Development  Cooperation (1993). Jakarta
9. Rismana.  (2002). Sanitasi  dan  desinfektan,  langkah  awal  yang  efektif  mencegah penyakit . Infomedia, Jakarta, 169 hlm.
10. Soedarto.  (2015).  Perbandingan  Laju  Pertumbuhan Spirulina  platensis pada Temperatur yang  Berbeda  dalam Skala Laoratorium . Journal of Maquares , 4(1): 74- 81.
11. Sintya,  M. (2018).  Pengaruh  Perbedaan  Salinitas terhadap  Pertumbuhan  Biomassa Kultivasi  Mikroalga Spirulina  platensis pada  Skala  Semi  Outdoor  di  Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Riau. Skripsi . Program Studi Sarjana. Universitas Riau.
12. Hariyati,  R.  (2008).  Pertumbuhan  dan  Biomassa Spirulina sp . dalam  Skala Laboratoris. BIOMA, 10(1): 19-22.
13. Edhy, W., A.J. Pribadi, dan Kurniawan. (2003). Plankton di Lingkungan PT. Central Pertiwi  Bahari.  Suatu  Pendekatan  Biologi  dan  Manajemen  Plankton  dalam  budidaya Udang. Mitra Bahari. Lampung.
14. Rusyani,  E.  (2001).  Pengaruh  Dosis  Zeolit  yang  Berbeda  terhadap  Pertumbuhan Isochrysis galbana Klon Tahiti Skala Laboratorium dama Media Komersial. Skripsi. Program  Studi  Budidaya  Perairan.  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan.  Bogor: Institut Pertanian Bogor.
15. Sari,  L.A.,  E.D.  Masithah,  W.H.  Satyantini,  dan  A.T.  Mukti.  (2009).  Pengaruh Penambahan  FeCl3  Terhadap  Pertumbuhan  Spirulina  platentis  yang  Dikultur  pada Media Asal Blotong Kering. Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga, Surabaya. Skripsi: 14 hlm
16. Costa, J.A.V.,  K.L. Cozza,  L. Oliveira, and G. Magagnin. (2001). Different nitrogen sources and growth responses of Spirulina platensis . World Journal of Microbiology and Biotechnology , 17 (5): 439-442
17. Kumar, P., Shahi, S.K. and Sharma, P.K., (2012). Effect of various cultural factors on isolated Spirulina strain for lipid and biomass accumulation. Current Discovery , 1 (1), pp. 13-18.
18. Çelekli, A. And M. Yavuzatmaca. (2009). Predictive modeling of biomass production by Spirulina  platensis as  function  of  nitrate  and  NaCl  concentrations. Bioresource Technology , 100(5):1847–1851.
19. Viena,  V.  (2014).  Kultivasi  Mikroalga  Hijau  pada  Sumber  Nitrogen  Berbeda  untuk Ekstraksi Lipida. Jurnal Purifikasi , 14(2): 99 – 105
20. Tedesco,  M.A.,  and  E.O.  Duerr.  (1989).  Light,  temperature,  and  nitrogen  starvation effects on the total lipid and fatty acid content and composition of Spirulina platensis UTEX 1928. Journal of Applied Phycology 1:201-209
21. Richmond,  A.  (2003). Handbook  of  Microalgal  Culture  Biotechnology  and  Applied Phycology. Blackwell Publishing.
22. Effendi,  H.  (2003). Telaah  Kualitas  Air  bagi  Pengelolaan  Sumber  Daya  dan Lingkungan Perairan. Kanisius. Yogyakarta. 185 hlm.
23. Becker, E.W. (1994). Biotechnology and Microbiology. Cambridge University Press. New York.
24. Hastuti, D.S., dan H. Handajani. (2001). Budidaya Pakan Alami . Fakultas Peternakan- Perikanan. Malang: UMM
25. Subarijanti,  H.  (1990). Kesuburan  dan  Pemupukan  Perairan .  Malang:  Universitas Brawijaya Fakultas Perikanan.