## AKTIFITAS ANTIBAKTERI DAN KARATERISTIK GUGUS FUNGSI DARI TUNIKATA POLYCARPA AURATA.
Andrio Rainhard Kumayas 1) , Defny Silvia Wewengkang 1) , Sri Sudewi 1)
Program Studi Farmasi, FMIPA UNSRAT, MANADO

## Abstrak
Tujuan penelitian ini untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol, fraksi methanol, n-heksan dan kloroform dari tunikata Polycarpa aurata terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escericia  coli. Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96% . Fraksinasi dilakukan menggunakan metode partisi dengan pelarut n-heksan, kloroform dan methanol serta pengujian antibakteri  dengan  menggunakan  metode  difusi  agar Kirby  Bauer .  Karakterisasi  fraksi  terbaik  terhadap Tunikata Polycarpa  aurta dilakukan  dengan  menggunakan  Spektrofotometri  UV-Vis  dan Spektrofotometri IR. Aktivitas antibakteri paling baik terdapat pada fraksi kloroform dengan daya hambat bakteri Staphylococcus  aureus sebesar  8,90  mm, dan Escericia  coli sebesar  7,03  mm.  Hasil Spektrofotometri  UV-Vis  menunjukkan  dua  pita  yaitu  pada  panjang  gelombang  348,50  nm  dengan absorbansi  0,141,  dan    pada  panjang  gelombang  259,00  nm  dengan  absorbansi  0,624.  Data  didukung dengan  menggunakan  FTIR,  muncul  serapan  pada  bilangan  gelombang  3120,82  cm -1 yang  merupakan karakteristik  gugus  fungsi  N-H.  Hasil  penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa  fraksi  kloroform  Tunikata Polycarpa aurata memiliki kemampuan untuk menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Escericia coli dengan kategori sedang.
Kata  kunci  :  Tunikata Polycarpa  aurata, antibakteri, Staphylococcus  aureus dan Escericia  coli, Spektrofotometer UV-Vis, Spektrofotometer IR.

## Abstract
The purpose of this study to determine the antibacterial activity of ethanol extract, fraction of methanol, n-hexane and chloroform from Tunicates Polycarpa aurata on the growth of Staphylococcus aureus and Escericia coli . Extraction was done by maceration using ethanol 96 %. Fractionation was performed using solvent  partition  method  with  n-hexane,  chloroform  and  methanol  as  well  as  antibacterial  testing  using agar diffusion method of Kirby Bauer. Characteristics fraction of the Tunicates Polycarpa aurta best done using  Spectro  UV-Vis  and  IR  spectrophotometry.  Most  excellent  antibacterial  activity  present  in  the chloroform  fraction  inhibition  of Staphylococcus  aureus by  8.90  mm,  and  7.03  mm  for Escericia  coli . UV-Vis spectrophotometry results indicate that there are two bands at a wavelength of 348.50 nm with 0.141 absorbance, and at a wavelength of 259.00 nm with 0.624 absorbance. Data is supported by using FTIR,  appears  uptake  wave  number  3120.82  cm -1 which  is  characteristics  N-H  functional  groups.  The results  of  this  study  concluded  that  chloroform  fraction  Tunicates Polycarpa  aurata has  the  ability  to inhibit Staphylococcus aureus and Escericia coli with moderate category.
Keywords  :  Tunicates Polycarpa  aurata ,  antibacterial, Staphylococcus  aureus and Escericia  coli , Spectrophotometer UV-Vis , IR spectrophotometer.

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  masih  merupakan jenis  penyakit  yang  paling  banyak  diderita oleh  penduduk  di  negara  berkembang, termasuk  Indonesia.  Salah  satu  penyebab penyakit  infeksi  adalah  bakteri.  Bakteri merupakan  mikroorganisme  yang  tidak dapat  dilihat  dengan  mata  telanjang,  tetapi hanya dapat dilihat dengan bantuan mikroskop ( Radji, 2011 ).
Dewasa  ini,  penggunaan  antibiotik sangat  banyak  terutama  dalam  pengobatan yang  berhubungan  dengan  infeksi,  namun kenyataannya masalah infeksi terus berlanjut (Depkes,  2008).  Hal  ini  karena  pengobatan dengan antibiotik dapat menyebabkan resistensi sehingga memerlukan produk baru yang  memiliki  potensi  sebagai  antibakteri yang dapat mengatasi masalah infeksi (Volk dkk, 1990).
Berbagai  penelitian  menunjukkan bahwa organisme laut memiliki potensi yang sangat besar, dalam menghasilkan senyawa- senyawa aktif yang dapat digunakan sebagai bahan baku obat-obatan. Beberapa organisme  laut  yang  diketahui  dapat menghasilkan senyawa aktif antara lain ialah spons,  moluska,  bryozoa,  tunikata  dan  lain-
lain.  Organisme-organisme  ini  diketahui dapat  menghasilkan  sejumlah  besar  produk laut  yang  bersifat  alami,  juga  mampu menunjukkan    keragaman    senyawa    kimia yang    sangat    besar    (Thakur    dan  Muller, 2004).
Tunikata  merupakan  invertebrata  di ekosistem  terumbu  karang  yang  banyak menghasilkan  senyawa  seperti,  antibakteri, antitumor dan antikanker. Dilaporkan bahwa bakteri yang bersimbiosis dengan invertebrata karang dapat mensintesis senyawa  yang  sama  dengan  inangnya. Resistensi bakteri patogen terhadap antibiotik  telah  menjadi  masalah  di  dunia kesehatan,  Selain  itu  hewan  laut  seperti tunikata Polycarpa  aurata yang  ada  di terumbu karang, diketahui memiliki senyawa yang berguna untuk bahan antibiotik,  anti  radang,  dan  anti  kanker (Lambert 2004).
Peningkatan resistensi bakteri terhadap  antibiotik  memberikan  peluang besar untuk mendapatkan senyawa antibakteri  dengan  memanfaatkan  senyawa bioaktif  dari  kekayaan  keanekaragaman hayati.

## METODOLOGI PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  ialah  Penelitian ini  menggunakan  metode  eksperimental
laboratorium yang menguji aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  etanol  dan  terdiri dari organisme Polycarpa aurata .
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu Masker, gunting, sarung tangan, pisau, shorkel, fins, tabung oksigen, Erlenmeyer,  gelas  ukur,  Gelas  kimia, tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi, Beaker glass , pipet tetes, micro tubes , cawan petri, timbangan  analitik highland  HCB  302 , corong  pisah,  batang  pengaduk, rotary evaporator steroglass strike 300 , ultrasonic ultra  8060  D-H ,  jarum  ose,  pinset, inkubator incucell ,  autoklaf,  pipet  tetes, mikropipet, Laminar . Bahan yang digunakan yaitu Tunikata Polycarpa aurata ,  bakteri  uji staphylococcus aureus dan Escherichia  coli ,  aquades,  etanol, metanol,  n-heksan,  kloroform, Nutrient agar , pepton, ekstrak daging ( beef extract ), natrium  klorida,  cakram  ( paper  disc ) ukuran  6  mm,  kertas  label,  tissue  dan aluminium foil.
Ekstraksi dan Fraksinasi Pembuatan Ekstrak
Ekstrak  Tunikata Polycarpa  aurata Sebanyak  1100  gram  dibuat  dengan  cara maserasi.  Sampel  yang  dipotong  kecil-kecil dimasukan  kedalam  Erlenmeyer,  kemudian direndam  dengan  larutan  etanol  dengan perbandingan  1:3  (b/v)  ditutup  dengan aluminium  foil  selama  1x24  jam.  Sampel yang direndam disaring menggunakan kertas saring  menghasilkan  filtrat  1  dan  debris  1.
Debris 1 kemudian ditambah dengan larutan etanol  dengan  perbandingan  1:3  (b/v), ditutup dengan aluminium foil dan dibiarkan selama  1x24  jam,  sampel  tersebut  disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2  kemudian ditambah  dengan  larutan  etanol  dengan perbandingan  1:3  (b/v),  ditutup  dengan aluminium  foil  selama  1x24  jam,  sampel tersebut  lalu  disaring  menggunakan  kertas saring  menghasilkan  filtrat  3  dan  debris  3. Filtrat  1,  2,  dan  3  dicampur  menjadi  satu kemudian disaring, lalu dievaporasi menggunakan  rotary  evaporator,  sehingga diperoleh ekstrak kasar etanol sebanyak 7,69 gram. Sebelum difraksinasi, diambil sebanyak  3,2  gram  ekstrak  kasar  etanol untuk uji aktivitas antibakteri.

## Pembuatan Fraksinasi
Sebagian ekstrak kasar etanol Tunikata Polycarpa  aurata 3,2  gram dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah, kemudian  dilarutkan  dengan  metanol:air 8:2 (v/v) lalu ditambahkan pelarut n-heksan dengan perbandingan 4:1:5 (v/v) setelah itu dikocok  berulangkali  sampai  homogen. Dibiarkan sampai terbentuk lapisan metanol-air  dan  n-heksan.  Masing-masing masing  lapisan  di  tampung  dalam  wadah yang berbeda. Lapisan n-heksan selanjutnya dievaporasi menggunakan
rotary  evaporator hingga  kering,  lalu ditimbang dan hasil inilah yang dinamakan fraksi heksan. Selanjutnya lapisan methanol-air  ditambahkan  dengan  air dengan  perbandingan  5:5  (v/v)  dipartisi dengan  pelarut  kloroform  dalam  corong pisah  dengan  perbandingan  2:3:5  (v/v), setelah  itu  dikocok  berungkali  hingga homogen.  Dibiarkan  sampai  terbentuk  dua lapisan  yaitu  lapisan  methanol-air  dan kloroform. Masing-masing lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan kloroform dalam wadah selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga  kering  lalu ditimbang.  Hasil  inilah  yang  dinamakan fraksi kloroform. Lapisan metanol-air  yang ditampung pada wadah yang lain kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga  kering  lalu  ditimbang berat sampel. Inilah yang dinamakan fraksi metanol-air. Ketiga fraksi digunakan dalam pengujian antibakteri. Rendemen-rendemen fraksi  dihitung  dengan  persamaan  sebagai berikut :
Pembuatan Media dan Pengujian
Antibakteri Pembuatan media cair B1
Pepton  0,5  gram,  ekstrak  daging ( meat extract ) 0,3 gram, natrium klorida 0,3 gram, dan aquades sebanyak 100 mL diaduk sampai  rata  kemudian  dibuat  homogen menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  15 menit,  didinginkan.  Setelah  dingin  lakukan pengujian  pH  dengan  kertas  pH.  Dipipet  1 mL  media  cair  B1,  kemudian  masukkan dalam  tabung  reaksi  dan  tutup  dengan alminium foil. Media cair B1 siap digunakan sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Media  cair  B1  yang  sudah  disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  dengan  masing- masing bakteri yang sudah dikultur ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli )  sebanyak  100  µL  kedalam  tabung reaksi yang berbeda. Tutup dengan alminium  foil  tiap  tabung  reaksi  dan dimasukkan kedalam inkubator selama 1x24 jam pada suhu 37˚C (Ortez, 2005).
Pembuatan  larutan  uji  hasil  ekstraksi dan  fraksinasi  Tunikata Polycarpa  aurata dengan  kosentrasi  250µg/50µL    yaitu dengan  membuat  larutan  stok,  dengan  cara sebagai berikut :
a. Dibuat  larutan  stok  uji  ekstrak  kasar spons  dengan  cara  ditimbang  0,0250 gram  ekstrak  kasar  etanol,  kemudian dilarutkan dalam 5 mL metanol.
b. Dibuat  larutan  stok  uji  fraksi  n-heksan dengan  cara  ditimbang  0,0250  gram fraksi  heksan,    kemudian  dilarutkan dalam 5 mL metanol.
c. Dibuat  larutan  stok  uji  fraksi  kloroform dengan  cara  ditimbang  0,0250  gram fraksi  kloroform,  kemudian  dilarutkan dalam 5 mL metanol.
d. Dibuat larutan stok uji fraksi metanol-air dengan  cara  ditimbang  0,0250  gram fraksi  metanol-air,  kemudian  dilarutkan dalam 5 mL metanol.
Pembuatan Kontrol Negatif
Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini yaitu dengan menggunakan metanol, dengan cara membuat larutan stok metanol dengan mengambil sebanyak 5 mL metanol kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi, tutup dengan Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  dengan  menggunakan metanol,  dengan  cara  membuat  larutan  stok metanol  dengan  mengambil  sebanyak  5  mL metanol kemudian dimasukkan dalam tabung  reaksi,  tutup  dengan  alminium  foil. Kontrol negatif digunakan sebagai pembanding  dan  pelarut  untuk  pembuatan larutan  kontrol  positif  dan  pembuatan larutan uji.
Pembuatan Kontrol Positif
Kontrol positif dibuat dari sediaan obat kapsul kloramfenikol 250 mg. Satu kapsul kloramfenikol dibuka cangkang kapsulnya kemudian timbang serbuk dalam kapsul sebanyak 30 mg. Kemudian serbuk dilarutkan dalam metanol 5 mL untuk Kontrol  positif  dibuat  dari  sediaan  obat kapsul  kloramfenikol  250  mg.  Satu  kapsul kloramfenikol  dibuka  cangkang  kapsulnya kemudian  timbang  serbuk  dalam  kapsul sebanyak 30 mg. Kemudian serbuk dilarutkan  dalam  metanol  5  mL  untuk
memperoleh  larutan  stok  kloramfenikol 250µg/50µL
Pembuatan Larutan Uji

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  gram,  ekstrak  daging ( meat extract ) 0,3 gram, natrium klorida 0,3 gram, nutrient  agar 1,5  gram  dan  aquades sebanyak  100  mL  diaduk  sampai  rata kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic  stirrer lalu  diautoklaf  pada  suhu 121˚C selama 15 menit.  Lakukan pengujian pH  dengan  kertas  pH.  Media  agar  B1  siap digunakan  untuk  uji  aktivitas  antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  (disc diffusion  Kirby  and  Bauer).  Pada  pengujian aktivitas  antibakteri  ini,  kertas  cakram ( paper  disc )  yang  digunakan  berukuran  6 mm  dengan  daya  serap  50µL  tiap  cakram. Kosentrasi  yang  digunakan  pada  pengujian ini hanya satu kosentrasi  yaitu 250µg/50µL pada  setiap  sampel  yang  terdiri  dari  ekstrak kasar,  fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform, fraksi  metanol-air,  kontrol  positif  dan kontrol negatif. Sampel yang telah ditentukan kosentrasinya 250µg/50µL ditotolkan  pada  masing-masing  cakram dengan menggunakan mikropipet.
Untuk  media  agar  B1  yang  sudah diautoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  15 menit,  kemudian  dinginkan  sampai  suhu 40˚C.  Tuangkan  media  agar  B1  ke  cawan petri,  Ambil  sebanyak  100µL  bakteri  yang telah  di  kultur  dalam  tabung  reaksi,  dipipet dan  diinokulasi  pada  media  agar  B1  dan tunggu  sampai  media  agar  B1  mengeras. Masing-masing cawan petri diberi label dan nomor  sampel  yang  sesuai.  Letakkan  kertas cakram  yang  telah  ditotolkan  sampel  uji Tunikata Polycarpa aurata. Cawan petri lalu diinkubasi selama 1x24 jam (Ortez, 2005). Pengukuran  dan  Karakterisasi  Ffraksi

## Terbaik
Pengamatan  dapat  dilakukan  setelah 1x24  jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada
sekitaran  cakram  menunjukkan  kepekaan bakteri  terhadap  antibiotik  atau  bahan antibakteri  yang  digunakan  sebagai  bahan uji  yang  dinyatakan  dengan  diameter  zona hambat.  Diameter  zona  hambat  diukur dalam satuan millimeter (mm) menggunakkan  mistar  berskala  dengan  cara diukur  diameter  total  zona  bening  cakram. Kemudian  diameter  zona  hambat  tersebut dikategorikan  kekuatan  daya  antibakterinya berdasarkan  penggolongan  Davis  and  Stoud (1971). Fraksi terbaik selanjutnya dikarakterisasi  dengan  Spektro  UV-Vis  dan Spektro IR .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Uji Aktifitas Antibakteri Fraksi Tunikata Polycarpa aurta
Uji aktivitas antibakteri ekstrak kasar Fraksi metanol-air,  fraksi  heksan  dan  fraksi kloroform Tunikata Polycarpa aurata dilakukan  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dengan  metode difusi  agar,  Metode  difusi  agar  (difusi Kirby-Bauer yang telah dimodifikasi. Prinsip    dari  metode    Kirby    Bauer    adalah fraksi  metanol-air,  fraksi  heksan  dan  fraksi
kloroform Tunikata Polycarpa aurata yang diteteskan    pada    kertas  cakram    dapat berdifusi    dengan    baik    pada    permukaan media    padat    yang  sebelumnya    telah diinokulasi bakteri uji pada permukaannya.difikasi). Berikut adalah hasil uji aktivitas antibakteri dan hasil pengukuran  diameter  zona  hambat  ekstrak kasar,  Fraksi  metanol-air,  fraksi  heksan  dan fraksi kloroform Tunikata Polycarpa Aurata terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli.
4 3 1 5 2 6 A B
Gambar 1. Hasil uji aktivitas antibakteri Tunikata Polycarpa aurata. terhadap bakteri : (a) Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan (b) Escherichia coli ATCC 9027.
Keterangan gambar : 1. Ekstrak kasar 2. Fraksi n-heksan 3. Fraksi metanol-air 4. Fraksi kloroform 5. Kontrol positif (kloramfenikol)
6. Kontrol negatif (metanol)
Tabel 1. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak Kasar, Fraksi MeOH-air, fraksi heksan dan  fraksi  kloroform  Tunikata Polycarpa  aurata. terhadap  bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Ulangan Diameter Zona Hambat (mm) terhadap bakteri uji Staphylococcus aureus Ekstrak kasar Fraksi n-heksan Fraksi kloroform Fraksi metanol- air Kontrol (+) Kontrol (-) A1 A2 A3 7,20 5,25 8,00 0,00 0,00 0,00 8,38 10,00 8,30 0,7 2,5 1,5 27,00 30,30 25,35 0,00 0,00 0,00 Rata-rata 6,81 0,00 8,90 1,60
27,55 0,00 1 5 6 2 3 4
Tabel 2. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak Kasar, Fraksi MeOH-air, fraksi heksan dan  fraksi  kloroform  Tunikata Polycarpa  aurata. terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC 25922.
Dari hasil pengamatan yang dilakukan  dapat  dilihat  bahwah  fraksi heksan  tidak  memberikan  daya  hambat terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
Karena data yang diperoleh tidak menunjukan  senyawa  spesifik  terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, Sedangkan pada fraksi kloroform  menunjukan  adanya  aktifitas antibakteri pada pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
Hal  ini  ditunjukan  dengan  adanya  zona hambat  atau  clear  zone  yaitu  7,03  mm tergolong  sedang  pada  bakteri Escherichia coli dan 8,90 mm pada bakteri Staphylococcus  aureus tergolong  sedang .
Hasil  ini  menunjukan  bahwah  fraksi
kloroform  memiliki  daya  hambat  anti bakteri.
Pada  ekstrak  kasar  menunjukan adanya  daya  hambat  yang  lebih  lemah dibanding  dengan  fraksi  kloroform.  Hal  ini ditunjujan dengan adanya zona hambat yaitu 6,81  mm  pada  bakteri Staphylococcus aureus dan 6,34 mm pada Escherichia col.
Pada  fraksi  metanol-air  menunjukan adanya hambatan untuk aktifitas antibakteri, daya  hambat  yang  terjadi  tergolong  lemah. Daya  hambat  ini  hanya  terjadi  pada  bakteri uji Staphylococcus  aureus dengan  adanya zona  hambat  sebesar  1,60  mm.  Sedangkan pada  bakteri  uji Escherichia  coli dengan zona  hambatnya  hanya  sebesar  0,07  mm. (Menurut  Pelczar  dan  Chan  ,  1986)  Seperti terlihat pada tabel 3 dan tabel 4 Uji aktivitas
Ulangan Diameter Zona Hambat (mm) terhadap bakteri uji Escherichia coli Ekstrak kasar Fraksi n-heksan Fraksi kloroform Fraksi mrtanol- air Kontrol (+) Kontrol (-) B1 B2 B3 6,24 6,30 6,50 0,00 0,00 0,00 7,55 6,25 7,30 0,00 0,01 0,20 35,00 35,35 34,23 0,00 0,00 0,00 Rata-rata 6,34 0,00 7,03 0,07 34,86 0,00
fraksi  metanol-air  cenderung  tidak  dapat menghambat pertumbuhan atau daya hambat yang  kecil  pada    bakteri  Gram  negatif Escherichia  coli ,  tetapi  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif Staphylococcus  aureus ,  karena    Respon yang  berbeda  dari  dua  golongan  bakteri terhadap  senyawa  ini  disebabkan  karena adanya  perbedaan  kepekaan  pada  bakteri Gram  positif  dan  bakteri  Gram  negatif terhadap senyawa antibakteri yang terkandung dalam  metanol-air.  Gram  positif cenderung lebih sensitif  terhadap komponen antibakteri.
Dari  hasil  yang  ditunjukan  diatas, daya  hambat  bakteri  disebabkan  karena struktur  dinding  sel  bakteri  Gram  positif lebih    sederhana  sehingga  memudahkan senyawa  antibakteri  untuk  masuk  ke  dalam sel  dan  menemukan  sasaran  untuk  bekerja, sedangkan struktur dinding sel bakteri Gram negatif  lebih  kompleks  dan  berlapis  tiga, yaitu lapisan luar lipoprotein, lapisan tengah yang  berupa  peptidoglikan  dan  lapisan dalam  lipopolisakarida.  Sehingga  daya hambat bakteri yang terjadi lebih kuat terjadi pada bakteri golongan gram positif.
Kontrol negatif menunjukkan perbedaan  yang  nyata  terhadap  kontrol positif,  ekstrak  maupun  fraksi  bahan  uji.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  yaitu metanol,  menunjukkan  tidak  adanya  zona hambat  pada  pengujian  terhadap  bakteri gram positif Staphylococcus aureus maupun gram  negatif Escherichia  coli .  Hal  ini mengindikasikan bahwa kontrol yang digunakan  tidak  berpengaruh  pada  uji antibakteri,  sehingga  daya  hambat  yang terbentuk  tidak  dipengaruhi  oleh  pelarut melainkan  karena  aktivitas  senyawa  yang ada  pada  Tunikata Polycarpa aurat . Penggunaan metanol sebagai kontrol diperkuat  dengan  penelitian  sebelumnya oleh  Ginting  (2010)  yang  menyatakan bahwa  kontrol  metanol  pada  uji  antibakteri tidak menunjukkan adanya aktivitas sehingga  dapat  dipastikan  bahwa  metanol tidak  berpengaruh  terhadap  aktivitas  yang terbentuk.
Kontrol positif menunjukkan perbedaan  yang nyata, karena menghasilkan aktivitas  antibakteri  yang  paling  besar terhadap  bakteri  uji  dibanding  kontrol negatif,  ekstrak  ataupun  fraksi  bahan  uji. Untuk  pengujian  ini,  antibiotik  yang digunakan  yaitu  kloramfenikol.  Menurut Katzung  (2004),  kloramfenikol  merupakan antibiotik  bakteriostatik  berspektrum  luas. Hasil penelitian menunjukkan diameter zona hambat  kloramfenikol  yang  terbentuk,  lebih
besar pada bakteri gram negatif Escherichia coli (34,86  mm)  dibandingkan  bakteri  gram
positif Staphylococcus aureus (27,55 mm).

## Identifikasi  Senyawa  Fraksi  Terbaik

## Secara Spektrokopi UV-Vis
Analisis  dengan  spektrofotometer  UV-VIS selain menunjukkan ada atau tidaknya ikatan rangkap terkonjugasi, dapat juga menentukkan  jenis  inti  yang  terdapat  dalam senyawa metabolit sekunder. Hasil spektrofotometer  uv-vis  dapat  dilihat  pada gambar berikut
.
Gambar 2. Hasil Spektrum UV-Vis fraksi kloroform Tunikata Polycarpa aurta
Hasil  analisis  spektrofotometri  UV-Vis menunjukkan bahwa fraksi kloroform memberikan serapan pada pita pertama pada panjang  gelombang  384,50  nm  pada absorbansi  0,141  dan  pita  kedua  pada panjang gelombang 259 nm pada absorbansi
0,625  dan  pita  ketiga  pada  panjang gelombang  212,50  nm  pada  absorbansi 0,402.  Berikut  adalah  spektrum  UV-Vis fraksi Kloroform Tunikata Polycarpa aurata .
Tabel 5. Spektrum UV-Vis fraksi Kloroform Tunikata Polycarpa aurata No P/V Wavelength Abs 1 348.50 0,141 2 259.00 0,625 3 212.50 0,402
.

## Identifikasi  Senyawa  Fraksi  Terbaik

## Secara Spektrokopi IR
Pancaran  Infra  Merah  pada  umumnya mengacu pada bagian spektro elekromagnetik yang terletak diantara daerah gugus-gugus atom tertentu memberikan pita-pita pada serapan tertentu
Letak pita-pita di dalam spektro infra merah ditampilkan  sebagai  bilangan  gelombang atau  panjang  gelombang.  Identifikasi  secara spektrokopi  IR  dapat  dilihat  pada  gambar berikut
Gambar 7. Spektrum IR fraksi Kloroform Tunikata Polycarpa aurat
Dari  hasil  penelitian  yang  sudah dilakukan  menunjukan  bahwa  kloroform memiliki  daya  hambat  yang  paling  baik untuk  bakteri  uji  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli .  Berdasarkan
Tabel    di  atas,  data  spektro  inframerah senyawa  fraksi  paling  baik    mengandung gugus  N-H    pada  bilangan  gelombang 3120,82  cm -1 dengan  intensitas  kuat  dan didukung  oleh  serapan  pada  bilangan
gelombang  1180,44  cm -1 yang  mencirikan ikatan  amina  dengan  intesitas  kuat.    Pada serapan    3319,49  cm -1 muncul  sebagai ikatan  O-H  dengan  intensitas  lemah,  pada serapan  2935  cm -1 merupakan  ikatan  CH2 dengan  intensitas  sedang,  dan  pada  serapan 2358,94  cm -1 muncul  sebagai  serapan  C=N dengan intensitas kuat.
Berdasarkan  hasil  atau  data  dari FTIR  diduga  fraksi  Kloroform  mengandung senyawa  golongan  alkaloid  dengan  gugus utama N-H.

## Kesimpulan dan Saran

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan
Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi Tunikata Polycarpa  aurata ,  maka  dapat disimpulkan sebagai berikut :
1. Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa aktifitas yang paling baik terjadi pada fraksi dengan daya hambat sebesar 8,90 mm menghambat bakteri Staphylococcus  aureus dengan kategori sedang. Sedangkan untuk bakteri
Escherichia  coli aktivitas  yang  paling baik  terjadi  pada    fraksi  kloroform dengan  daya  hambat  sebesar  7,03  mm menghambat  bakteri Escherichia  coli
dengan kategori sedang.
2. Karakteristik  senyawa  yang  terlihat pada fraksi Kloroform  yang merupakan fraksi  dengan  aktivitas  antibakteri paling  baik  menggunakan  spektrokopi UV-Vis  dengan  panjang  gelombang 348,50 nm, 259 nm, dan 212,50 nm dan Spektrokopi IR dengan gugus utama N- H,  yang  diduga  mengandung  senyawa golongan alkaloid.

## Saran
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi Tunikata Polycarpa  aurata ,  maka  dapat dikemukakan beberapa saran sebagai berikut :
1. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  mengetahui  kosentrasi  hambat minimum  maupun  kosentrasi  bunuh minimum pada fraksi Kloroform.
2. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  mengetahui  senyawa  apa  yang efektif menghambat bakteri Staphylococcus aureus
maupun Escherichia  coli yang  ada  pada  fraksi Kloroform.

## DAFTAR PUSTAKA
Colegate    SM,    Molyneux    RJ.    2008. Bioactive    Natural Products :
Detection,  Isolation,  and  Structural
Determination. California: CRC Pr.
Davis,  W.W  and  Stout,  T.R.  1971.  Disc Plate  Methods  of  Microbiological
Antibiotic Assay. Microbiology . 22(4): 659-665.
Depkes  R.I.,  2008. Profil  Kesehatan Indonesia . Jakarta.
Faulkner,    D.    J.,    1993, Marine    Natural Product ,  Natural  Product  Report,Vol
8, p.97.
Ginting,  E.L.,  Warouw,  V.,  Suleman,  R.W. Aktivitas  Antibakteri  Dari  Ekstrak
Kasar Bakteri Yang Berasosiasi Dengan Sponge Acanthostrongylophora  sp. [Skripsi]
Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan
Universitas Sam Ratulangi Manado.
Lambert,  G.  2004.  Relaxing,  and  fixing· ascidians  for  taxonomi.  washington.
Mpila,  D.A.  2012. Uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  etanol  daun  mayana  (Coleus atropurpureus benth) terhadap Staphylococcus aureus, echerichia coli dan  pseudomonas  aeruginosa  secara invitro . [Skripsi] Program Studi Farmasi  Fakultas  MIPA  Universitas Sam Ratulangi Manado.
Ortez,  J.H.  2005.  Disk Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed). American society for Microbiology.
Radji,  M.,  2011. Buku  Ajar  Mikrobiologi : Panduan  Mahasiswa  Farmasi  dan Kedokteran. EGC, Jakarta.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan .
Penerbit Putra  Media  Nusantara, Surabaya.
Todar,  K.  2009. Staphylococcus  aureus.
University  of  Wisconsin  –  Madison Department of Bacteriology.
Todar, K. 2009. Escherichia coli. University of  Wisconsin  –  Madison  Department of Bacteriology.