## ANALISIS METODE PRESERVASI SUBKULTUR BERKALA DAN DENGAN AIR STERIL
UNTUK JAMUR Aspergillus sp. DAN Candida albicans
ANALYSIS OF PERIODIC SUBCULTURE AND WITH STERILE WATER METHODS FOR Aspergillus sp. AND Candida albicans
Gabi Vania Sally 1 , Sandy Vitria Kurniawan 2, * , Sem Samuel Surja 3
1 Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Unika Atma Jaya, Jl. Pluit Raya no. 2, Jakarta, 14440
2 Departemen Farmakologi – Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Unika Atma Jaya, Jl. Pluit Raya no. 2, Jakarta, 14440
3 Departemen Parasitologi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Unika Atma Jaya, Jl. Pluit Raya no. 2, Jakarta, 14440
* Korespondensi: sandy.vitria@atmajaya.ac.id

## ABSTRACT
Introduction:  A  good  and  proper  preservation  can  maintain  all  collection  of  culture.  Periodic  subculture preservation is an old technique that is less able to guarantee the genetic characteristic for a long time. Sterile water is an alternative method in various studies to ensure the genetic characteristic for a long time and can be done in a simple laboratory concept. This study aimed to examine the method of periodic subculture and with sterile water
Methods: This research  was a  descriptive study with an experimental  laboratory design  on  Aspergillus sp. and  Candida  albicans.  This  study  examined  at  periodic  subculture  methods  and  with  sterile  water  in maintaining viability, level of contamination, morphology, and antifungal resistance after six months Results:  The  fungus  had  lived  after  being  preserved  with  periodic  subcultures  without  contamination, morphological changes, and resistance. Aspergillus sp. and Candida albicans also lived after being preserved with sterile water for six months with the same morphology and without contamination. The zone of inhibition of Aspergillus sp. had decreased but in Candida albicans remains the same.
Conclusion: Preservation with periodic subculture and with sterile water can be applied to Aspergillus sp. and Candida albicans.
Key Words: Aspergillus sp., Candida albicans, periodic subculture, sterile water

## ABSTRAK
Pendahuluan: Preservasi  yang  baik  dan  tepat  dapat  mempertahankan  koleksi  kultur  dengan  baik.  Teknik preservasi  subkultur  berkala  merupakan  teknik  lama  yang  kurang  dapat  menjamin  sifat-sifat  genetik  jamur dalam  jangka  waktu  lama.  Air  steril  adalah  salah  satu  metode  alternatif  dalam  berbagai  penelitian  dalam menjamin  sifat-sifat  genetik  jamur  dalam  waktu  lama  dan  dapat  dilakukan  pada  konsep  laboratorium sederhana. Penelitian ini bertujuan untuk melihat metode preservasi berkala dan dengan air steril.
Metode: Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif dengan desain eksperimental laboratorium pada jamur Aspergillus  sp. dan Candida  albicans .Penelitian  ini  melihat  metode  subkultur  berkala  dan  dengan  air  steril dalam menjaga viabilitas, tingkat kontaminasi, morfologi dan resistensi terhadap antijamur setelah enam bulan. Hasil: Jamur  dapat  hidup  setelah  dipreservasi  dengan  subkultur  berkala  tanpa  kontaminasi,  perubahan morfologi dan resistensi. Aspergillus sp. dan Candida albicans juga hidup setelah dipreservasi dengan air steril selama  enam  bulan  dengan  morfologi  yang  sama  dan  tanpa  kontaminasi.  Zona  inhibisi Aspergillus  sp. mengalami penurunan namun pada Candida albicans tetap sama. Simpulan: Preservasi jamur dengan subkultur berkala dan dengan air steril dapat diterapkan pada Aspergillus sp. dan Candida albicans. Kata Kunci: air steril, Aspergillus sp., Candida albicans, subkultur berkala

## ARTIKEL PENELITIAN

## PENDAHULUAN
World  Data  Centre  of  Microorganism (WDCM) menyatakan bahwa ada sekitar 585 koleksi kultur  yang tercatat  di  68  negara  dan koleksi  tersebut  meliputi  jamur  yang  jum- lahnya  mencapai  506.333  spesies. 1 Teknik preservasi  (penyimpanan)  dan  pemeliharaan yang baik serta sesuai dengan sifat kultur dan tujuan  preservasi  diperlukan  agar  dapat menjaga  biakan  jamur  tetap  hidup  dan terjaga. 2 Metode  preservasi  diperlukan  untuk menjaga  viabilitas,  morfologi,  fisiologi,  pato- genik dan genetik jamur dari waktu ke waktu. 3
Teknik  subkultur  berkala  merupakan  cara tradisional  yang  masih  digunakan  sampai sekarang.  Namun,  teknik  tersebut  memiliki beberapa kelemahan, yaitu berisiko terjadinya perubahan  genetik,  kontaminasi  dan  keke- liruan  dalam  pemberian  label,  sehingga  ku- rang  cocok  apabila  digunakan  untuk  preser- vasi  jangka  panjang. 2 Beberapa  teknik  pre- servasi untuk keperluan jangka panjang yang dapat digunakan ialah dengan menggunakan minyak mineral, air steril, gel silika, dan kering beku. 4,5 Preservasi  dengan  air  steril  meru- pakan pilihan yang baik karena mudah untuk dilakukan,  tidak  mahal  serta  dapat  diaplika- sikan  pada  laboratorium  skala  kecil  dengan tujuan pengajaran. 6
Preservasi  dengan  menggunakan  air steril pernah dilakukan oleh Suciatmih dengan angka survival 100%,  dan  McGinnis  dengan angka survival 92-94%. 6-7 Namun,  dari penelitian-penelitian  sebelumnya  belum  ada studi  yang  mengukur  dengan  parameter resistensi  terhadap  antijamur.  Penelitian  ini menilai  viabilitas,  morfologi,  tingkat  konta-
minasi,  dan  resistensi  terhadap  antijamur pada metode preservasi subkultur berkala dan dengan  air  steril  untuk  jamur Aspergillus  sp. dan Candida albicans .

## METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian deskriptif  dengan  desain  eksperimental  labo- ratorium dan dilakukan di Laboratorium Para- sitologi  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kese- hatan Universitas Katolik Indonesia Atma Jaya (FKIK  UAJ) selama  6  bulan  dari  April  hingga Oktober  2019.  Sampel  yang  akan  digunakan pada  penelitian  ini  ialah Aspergillus  sp. dan Candida  albicans. Penelitian  ini  melakukan pengujian  viabilitas,  morfologi,  tingkat  konta- minasi, dan resistensi.
Penelitian ini menggunakan dua metode preservasi.  Pada  sampel  dengan  metode subkultur  berkala  dilakukan  pemindahan  kul- tur  setiap  dua  bulan.  Pada  sampel  dengan metode  air  steril,  jamur  terlebih  dahulu dibiakkan  pada  agar.  Air  steril  sebanyak  6-7 ml dimasukkan ke dalam biakan dengan pipet, kemudian  jamur  digoreskan  secara  perlahan dengan  pipet  tips  yang  sama.  Campuran  air steril dan jamur ini selanjutnya dipindahkan ke dalam tabung McCartney.
Pengujian dilakukan dengan pemindah- an  kultur  pada  tabung  agar  miring.  Pemin- dahan  dilakukan  setiap  dua  bulan  baik  pada jamur  dengan  subkultur  berkala  dan  dengan air  steril.  Viabilitas  dari  jamur  yang  dipreser- vasi  dengan  air  steril  dilakukan  dengan memindahkan  0,2-0,3  ml  inokulum  ke  dalam tabung  agar.  Apabila  setelah  dua  minggu jamur  tidak  tumbuh,  dilakukan  kembali  hal
yang  sama  dan  apabila  tidak  tumbuh  jamur maka dinyatakan tidak viable .
Pemeriksaan  morfologi  dilakukan  de- ngan teknik slide culture pada Aspergillus sp. dan  penanaman  pada rice  cream  agar pada Candida albicans. Teknik slide culture meng- inokulasi jamur pada keempat sisi SDA ukuran ±7 mm 2 dan meletakkannya di atas kaca pre- parat.  Morfologi  diperiksa  setelah  inokulasi hari kedua dengan mewarnai spesimen kultur yang tumbuh dengan lactophenol cotton blue.
Rice cream agar dibuat dengan bahan beras, akuades dan bacto agar. Campuran akuades dan beras dididihkan, disaring dengan kertas saring,  kemudian  dicampurkan  kembali  de- ngan  akuades  dan  bacto  agar.  Setelah  dila- kukan autoklaf, agar ini siap digunakan seba- gai media pertumbuhan C. albicans .
Pemeriksaan  resistensi  terhadap  anti- jamur  menggunakan  teknik  cakram  difusi. Teknik ini dilakukan dengan cara meletakkan cakram  antijamur  pada  SDA  dan  mengukur diameter  zona  inhibisinya.  Pada Aspergillus sp. menggunakan  cakram  vorikonazol  dan cakram flukonazol pada C.albicans.

## HASIL
Pada penelitian ini, baik Aspergillus sp. maupun C.  albicans viabel  pada  preservasi subkultur berkala dan dengan air steril (Tabel 1). Pada parameter kontaminasi tidak terlihat adanya  kontaminasi  pada  semua  sampel (Tabel  1).  Pada  parameter  morfologi  terlihat sesuai  dengan  karakteristik  dari  masing- masing  sampel,  baik  dengan  preservasi subkultur berkala maupun dengan air steril.
Tabel 1. Viabilitas, Kontaminasi, Morfologi dan Resistensi pada Aspergillus sp. dan Candida albicans Sebelum dan Sesudah Preservasi Parameter Jamur Bulan 0 Bulan 6 Subkultur Berkala Air Steril Viabilitas Aspergillus sp. + + + Candida albicans + + + Kontaminasi Aspergillus sp. - - - Candida albicans - - - Morfologi Aspergillus sp. Sesuai Sesuai Sesuai Candida albicans Sesuai Sesuai Sesuai Resistensi (Zona inhibisi rata-rata) Aspergillus sp. 34,5 mm 31,0 mm 28,5 mm Candida albicans 33,0 mm 32,5 mm 34,5 mm
Pada  parameter  resistensi  didapatkan adanya  sedikit  perubahan  pada  zona  inhibisi setelah  dipreservasi  selama  enam  bulan. Aspergillus  sp. yang  dipreservasi  dengan subkultur  berkala  memiliki  zona  inhibisi  rata-
rata 31 mm dan yang dipreservasi dengan air steril memiliki zona inhibisi rata-rata 28,5 mm. C. albicans pada preservasi subkultur berkala memiliki  zona  inhibisi  rata-rata  32,5  mm  dan pada air steril 34,5 mm.
Gambar 1. Viabilitas dan Kontaminasi (negatif) pada Aspergillus sp. (kiri) dan Candida albicans (kanan)
Gambar 2. Morfologi pada Aspergillus sp. (kiri) dan Candida albicans (kanan)
Gambar 3. Zona inhibisi pada Aspergillus sp. (kiri) dan Candida albicans (kanan)

## DISKUSI
Penelitian  ini  menggunakan  sampel Aspergillus  sp. yang  dapat  menyebabkan aspergilosis pada pasien imunokompromi ser- ta Candida  albicans yang  dapat  menginfeksi manusia  secara  oportunistik. 8-9 Setelah  6 bulan,  hasil  uji  viabilitas  pada  semua  jamur dengan  subkultur  berkala viable .  Selain  itu, hasil  uji  morfologi  menunjukkan  morfologi
jamur  sesuai  dengan  karakteristik  masing- masing yaitu kepala konidia yang dua per tiga bagiannya  terdapat  fialides  pada Aspergillus sp. dan  adanya  pseudohifa  serta  klamidio- spora pada C. albicans. Penelitian serupa per- nah  dilakukan  oleh  Capriles, et  al. yang mempreservasi  jamurnya  dengan  teknik  air steril yang memiliki nama lain teknik Castellani selama dua puluh tahun dengan survival rate
kurang  lebih  50%. 10 Guimaraes, et  al . mempreservasi  jamur  selama  delapan  bulan dengan survival  rate 100%  dan  menyatakan bahwa metode ini memiliki viabilitas dan dapat mempertahankan karakteristik dengan baik. 11
Hasil  morfologi  dari  kedua  jenis  jamur  tidak mengalami  perubahan  dan  sesuai  dengan karakteris-tiknya masing-masing. 12,13
Uji  resistensi Aspergillus  sp. dengan preservasi  air  steril  mengalami  penurunan zona  inhibisi  rata-rata  apabila  dibandingkan dengan  bulan  0.  Belum  ada  studi  yang  me- neliti perubahan resistensi terhadap antijamur yang  dipreservasi  dengan  air  steril  sebelum- nya.  Kondisi  kekurangan  atau  keterbatasan nutrisi  selama  enam  bulan  mungkin  menye- babkan  jamur  memiliki  mekanisme  perta- hanan  tersendiri  untuk  beradaptasi  pada lingkungan tersebut sehingga ketika dibiakkan pada  media  yang  baru  jamur  masih  memiliki mekanisme pertahanan tersebut dan menjadi lebih  resisten.  Namun Aspergillus  sp. masih dikategorikan  sebagai wildtype dan Candida albicans masih sensitif terhadap antijamur. 14,15
Keterbatasan  penelitian  ini  adalah pemantauan  yang  belum  dilakukan  pada jangka  panjang.  Pada  penelitian  selanjutnya perlu  ditambahkan  durasi  preservasi  jamur, terutama dalam air steril.

## SIMPULAN
Baik preservasi dengan subkultur berkala  maupun  air  steril  dapat  diterapkan dalam preservasi jamur pada jangka waktu 6 bulan. Namun diperlukan kehati-hatian dalam penggunaan jamur hasil preservasi dengan air steril  untuk  penelitian  uji  resistensi.  Peng-
gunaan air steril dalam preservasi jamur dapat menurunkan  zona  inhibisi  dalam  uji  cakram difusi.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Karaduman  AB,  Atli  B,  Yamaç  M.  An  example  for comparison  of  storage  methods  of  macrofungus cultures: Schizophyllum commune. Turk J Botany. 2012;36(2):205 –12.
2. Machmud  M.  Teknik  penyimpanan  dan  pemeliha- raan mikroba. Bul AgroBio. 2001;4(1):24 –32.
3. Boundy-Mills  KL,  Glantsching  E,  Roberts  IN, Yurkov  A,  Casaregola  S,  Daniel  H-M,  et  al.  Yeast culture  collections  in  the  twenty-first  century:  New opportunities and challenges. Yeast. 2016;33:243 –60.
4. Ryan MJ, Smith D, Jeffries P. A decision-based key to determine the most appropriate protocol for the preservation of fungi. World J Microbiol Biotechnol. 2000;16(2):183 –6.
5. Crahay C, Munaut F, Colpaert J V, Huret S. Genetic stability of Ectomycorrhizal fungi is not affected by cryopreservation  at  −130°C  or  cold  storage  with repeated sub-cultivations over a period of 2 years. Mycorrhiza  2017;27:595 –601.  https://doi.org/10.
1007/s00572-017-0770-3
6. Mcginnis MR, Padhye AA, Ajello L. Storage of stock cultures  of  filamentous  fungi,  yeasts,  and  some aerobic  Actinomycetes  in  sterile  distilled  water. Appl Microbiol. 1974;28(2):218 –22.
7. Suciatmih S, Rachmat R. Pengujian survival jamur yang  dipreservasi  dalam  air  dan  parafin  cair.  Ber Biol. 2005;7(5):241 –8.
8. Fang  W,  Latgé  JP.  Microbe  profile:  Aspergillus fumigatus: A saprotrophic and opportunistic fungal pathogen. Microbiol (United Kingdom). 2018;164(8):1009 –11.
9. Mutiawati  VK.  Pemeriksaan  mikrobiologi  pada Candida  albicans.  J  Kedokt  Syiah  Kuala. 2016;16(1):57 –62.
10.  de  Capriles  CH,  Mata  S,  Middelveen  M. Preservation of fungi in water (Castellani): 20 Years. Mycopathologia. 1989;106(2):73 –9.
11.  Guimarães  LC,  Fernandes  AP,  Chalfoun  SM,
Batista LR. Methods to preserve potentially toxigenic
fungi. Brazilian J Microbiol. 2014;45(1):43 –7.
12.  Surja  SS,  Wijaya  M,  Padmasutra  L,  Yolanda  H,
Joprang  FS,  Makimian  R,  et  al.  Atlas  parasitologi kedokteran.  1st  ed.  Jakarta:  Penerbit  Universitas Katolik Indonesia Atma Jaya; 2019.
13.  Kidd S, Halliday C, Alexiou H, Ellis D. Description of medical fungi. 2016. 145 – 7 p.
14.  Gupta P, Khare V, Kumar D, Ahmad A, Banerjee G, Singh M. Comparative evaluation of disc diffusion
and E-test with broth microdilution in susceptibility testing  of  amphotericin  B,  voriconazole  and caspofungin against clinical Aspergillus isolates. J Clin Diagnostic Res. 2015;9(1):DC04 –7.
15.  Alexander  BD,  Procop  GW,  Dufresne  P,  Fuller  J,
Ghannoum  MA,  Hanson  KE,  et  al.  M60 performance standards for antifungal susceptibility testing  of  yeasts.  1st  ed.  Clinical  and  Laboratory Standards Institute; 2017.