UJI FITOKIMIA DAN AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI ETIL ASETAT, KLOROFORM DAN PETROLEUM ETER EKSTRAK METANOL ALGA COKLAT
Sargassum vulgare DARI PANTAI KAPONG PAMEKASAN MADURA

## Siti Khoiriyah, Ahmad Hanapi, A. Ghanaim Fasya
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
Based on the Allah’s decree in surah An Nahl verse 14, Allah SWT given His pleasants such seas and its contents for human being so as to thankfully for His sakes. Biological varieties like algae need to be used by its  existences.  One  kind  of  algae  species  was  brown  algae  called  Sargassum  vulgare.  The  purposes  of  this research  were to conduct fraction  which  given highest antibacterial activity  toward Staphylococcus aureus and Escherichia  coli  bacteria.  Besides  that,  this  study  attempt  to  identify  the  active  compound  that  contained  in fraction which gives the highest antibacterial activity.
Kind  of  brown  algae  Sargassum  vulgare  is  macerated  to  methanol  then  the  methanol  extract  is hydrolyzed  with  HC1  2  N  catalyst  and  neutralized  to  NaHCO3.  The  result  of  hydrolyze  partitioned  to  etil acetate, chloroform and petroleum ether. The chosen organic layer is tested its antibacterial activities using disk diffusion methods toward Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria with extract concentration 0,5; 1; 2,5;  5:  7,5  and  10  %.  The  fraction  which  gives  highest  antibacterial  activity  will  be  identifying  its  compound category using reagent test (phytochemical) then separated with thick layer of chromatography analytic (TLC).
The result of this research showed that  fraction  which can bring highest antibacterial activity  was etil acetate.  The  highest  antibacterial  activity  obtained  by  the  most  high  concentration  10  %,  with  zone  of inhibitionare 8,5 mm towards Staphylococcus aureus and 6 mm towards Escherichia coli bacteria. According to phytochemical  test  result,  it  showed  the  active  compound  group  that  already  existed  in  etil  acetate  fraction  is steroid.  Based  on  segregation  using  thick  layer  chromatography  analytics,  it  is  acquired  6  spots  which categorized in steroid compound.
Keywords : Antibacterial, fraction, brown algae Sargassum vulgare .

## ABSTRAK
Berdasarkan firman Allah SWT QS an Nahl ayat 14, Allah SWT telah memberikan nikmatNya berupa lautan beserta isinya agar manusia dapat bersyukur. Keragaman hayati dari laut berupa alga perlu dimanfaatkan keberadaannya.  Salah  satunya  adalah  alga  coklat  jenis Sargassum  vulgare .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  fraksi  pelarut  yang  memberikan  aktivitas  antibakteri  tertinggi  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli serta untuk mengidentifikasi golongan senyawa aktif yang terkandung dalam fraksi pelarut yang memberikan aktivitas antibakteri tertinggi.
Alga  coklat S.  vulgare dimaserasi  dengan  metanol  kemudian  ekstrak  metanol  yang  diperoleh dihidrolisis  dengan  katalis  HCl  2  N  dan  dinetralkan  dengan  NaHCO 3 .  Ekstrak  hasil  hidrolisis  dipartisi  dengan etil  asetat,  kloroform,  dan  petroleum  eter.  Lapisan  organik  yang  diperoleh  kemudian  diuji  aktivitas antibakterinya  menggunakan  metode  difusi  cakram  terhadap  bakteri S.  aureus dan E.  coli dengan  konsentrasi ekstrak 0,5; 1; 2,5; 5; 7,5 dan 10 %. Fraksi pelarut yang memberikan aktivitas antibakteri tertinggi diidentifikasi golongan senyawanya menggunakan uji reagen (fitokimia) kemudian dipisahkan dengan kromatografi lapis tipis analitik.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  fraksi  pelarut  yang  memberikan  aktivitas  antibakteri  tertinggi adalah  etil  asetat.  Aktivitas  antibakteri  terbaik  diperoleh  pada  konsentrasi  ekstrak  paling  tinggi  yaitu  10  % dengan  zona  hambat  8,5  mm  terhadap  bakteri S.  aureus dan  6  mm  terhadap  bakteri E.  coli .  Berdasarkan  uji fitokimia  diketahui  bahwa  golongan  senyawa  yang  terkandung  dalam  fraksi  etil  asetat  adalah  steroid. Berdasarkan pemisahan menggunakan KLTA diperoleh 6 spot yang merupakan golongan senyawa steroid.
Kata Kunci: Antibakteri, fraksi, alga coklat Sargassum vulgare .

## I. PENDAHULUAN
Allah  SWT  menciptakan  segala sesuatu  di  bumi  ini  dengan  manfaatnya masing-masing,  salah  satunya  adalah  laut dan  segala  sesuatu  yang  ada  di  dalamnya. Pemanfaatan  hasil  laut  tidak  hanya  berupa ikan,  namun  masih  banyak  mahluk  hidup lainnya yang dapat dimanfaatkan keberadaannya. Sebagaimana firman Allah SWT dalam surat an Nahl ayat 14 :
ْحَل ُهْنِم ا ْوُلُكْأَتِل َر ْحَبْلا َرَّخَس ْيِذَّلا َوُهَو
ا ْوُجِرْخَتْسَتَو اً يِرَط اًم ْنِم  ا ْوُغَتْبَتِلَو  ِهْيِف  َرِخاَوَمَكْلُفْلا  ىَرَتَواَهَنْوُسَبْلَت  ًةَيْلِح  ُهْنِم ﴿  َن ْوُرُكْشَت ْمُكَّلَعَلَو ِهِلْضَف
۱٤ ﴾ .
“Dan
Dia-lah, Allah yang menundukkan  lautan  (untukmu),  agar kamu dapat memakan daripadanya daging yang segar (ikan), dan kamu mengeluarkan  dari  lautan  itu  perhiasan yang  kamu  pakai,  dan  kamu  melihat bahtera  berlayar  padanya,  dan  supaya kamu mencari (keuntungan) dari karuniaNya, dan supaya kamu bersyukur”
(QS. an Nahl : 14).
Makna sakhkhara al-bahra
menjelaskan  bahwa  Allah  SWT  telah memberikan  nikmatNya  yang  ada  di  laut kepada hamba-hambaNya, sehingga memungkinkan  bagi  hamba-hambaNya untuk  mengambil  manfaat.  Sebagaimana dalam  ayat  tersebut  Allah  SWT  telah memerintahkan untuk memakan ( lii ta’kulu ), mengeluarkan ( tastakhriju ), melihat  ( wa  taraa )  dan  mencari  ( li tabtaghu )  keuntungan  dari  karuniaNya yang  sudah  ada  di  laut  agar  dapat mensyukuri  segala  nikmat  dan  karunia berupa luasnya lautan beserta isinya.
Salah  satu  potensi  biota  laut perairan Indonesia adalah rumput laut yang secara taksonomi dikelompokkan ke dalam divisi Thallophyta .Berdasarkan penelitian sebelumnya diketahui bahwa alga berpotensi  sebagai  antivirus,  antibakteri, antijamur, antitumor dan antioksidan.
Adanya  penelitian  yang  menguji bioaktivitas suatu bahan alam sebagai obat khususnya  antibakteri  mempunyai  tujuan
penting, yaitu untuk mengurangi
penggunaan  bahan  kimia  yang  berakibat pada  resistensi  obat.  Penggunaan  suatu bahan  alam  sebagai  obat  antibakteri  alami memiliki  kelebihan  dibandingkan  dengan obat antibakteri sintesis. Hal ini dikarenakan  mudah  didapat  dan  efek samping yang ditimbulkan terhadap kesehatan umumnya relatif kecil. Ekstrak alga coklat jenis Sargassum menunjukkan kemampuan menghambat  pertumbuhan  yang  maksimal terhadap  beberapa  jenis  bakteri  patogen seperti Pseudomonas aeruginosa, Sthapylococcus  aureus,  Salmonella  typhii , dan Escherichia  coli ,  dimana  hal  tersebut dapat  diketahui  setelah  dilakukan  suatu percobaan secara in  vitro (Sastry dan Rao, 1994  dalam  Alamsjah,  2011).  Alga  coklat Sargassum sp.  memiliki  kandungan  Mg, Na,  Fe,  tanin,  iodin  dan  fenol  yang berpotensi  sebagai  bahan  antimikroba terhadap  beberapa  jenis  bakteri  patogen yang dapat menyebabkan diare (Sastry dan Rao, 1994 dalam Bachtiar, dkk., 2012).
Salah  satu  jenis  bakteri  yang merugikan  manusia  adalah  bakteri E.  coli dan S. aureus . Bakteri E.coli adalah kuman yang  banyak  ditemukan  di  usus  besar manusia, akan tetapi kontaminasinya dapat menyebabkan diare. Organisme ini menjadi patogen bila mencapai jaringan di luar  saluran  pencernaan  (usus)  khususnya saluran  air  kemih,  saluran  empedu,  dan paru-paru  (Jawetz, et al ., 1996). Bakteri S. aureus dapat  mengakibatkan  infeksi  pada kulit  atau  luka  pada  organ  tubuh  jika bakteri inimengalahkan mekanisme pertahanan tubuh. Beberapa penelitian tentang
pengujian aktivitas antibakteri telah banyak  dilakukan.  Uji  antibakteri  alga merah jenis
Eucheuma spinosum
menghasilkan daya hambat tertinggi sebesar  6  mm  dan  5,5  mm  pada  pelarut petroleum  eter,  4  mm  dan  3  mm  pada pelarut etil asetat, 3 mm dan 2,5 mm pada pelarut  kloroform  terhadap  bakteri E.  coli dan S.  aureus (Miftahurrohmah,  2012).
Penggunaan pelarut metanol menghasilkan zona hambat 3,5 mm dan 1,3 mm terhadap bakteri  yang  sama  pada  alga  jenis Eucheuma cottoni (Muhimmah, 2013).
Adanya  aktivitas  antibakteri  dari suatu  bahan  alam  tentunya  dipengaruhi oleh kandungan senyawa metabolit sekunder  yang  berada  di  dalamnya. Senyawa  metabolit  sekunder  yang  diduga mempunyai  aktivitas  antibakteri  adalah golongan steroid (Alfiyaturohmah, 2013).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan  oleh  Alfiyaturohmah  (2013), diketahui  bahwa  ekstrak  kasar  alga  coklat S. vulgare mempunyai aktivitas antibakteri tertinggi  pada  pelarut  kloroform  dengan konsentrasi  ekstrak  1  %  dan  10  %.  Zona hambat  yang  dihasilkan  sebesar  1,6  mm pada  bakteri E.  coli dan  1,8  mm  pada bakteri S. aureus . Aktivitas tersebut masih tergolong lemah karena  zona hambat  yang dihasilkan  kurang  dari  5  mm  (Yuningsih, 2007).
Miftahurrahmah  (2012)  melakukan uji aktivitas antibakteri alga merah jenis E. spinosum dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol dan hidrolisis kemudian dipartisi dengan variasi pelarut yang berbeda kepolarannya. Dari  penelitian  tersebut  diketahui  bahwa aktivitas  antibakteri  ekstrak  yang  telah dihidrolisis  lebih  besar  dibandingkan dengan  ekstrak  kasar  sebelum  dihidrolisis. Zona hambat ekstrak hasil hidrolisis fraksi petroleum  eter  terhadap  bakteri E.  coli adalah 6 mm dan ekstrak metanol (sebelum dihidrolisis)  adalah  3  mm.  Sedangkan aktivitas  terhadap  bakteri S.  aureus adalah 5,5 mm untuk fraksi petroleum eter  dan 4 mm  untuk  pelarut  metanol  (sebelum dihidrolisis).
Menurut  Tensiska,  dkk.  (2007) pada reaksi hidrolisis akan terjadi pemutusan  hemiasetal  dalam  komponen glikon  (polar/terikat  gula)  sehingga  gugus gula  dalam  komponen  glikon  terlepas  dan akhirnya komponen glikon berubah struktur menjadi komponen aglikon (nonpolar).  Hidrolisis  dapat  dilakukan
dengan cara merendam ekstrak kental hasil maserasi dengan HCl 2 N selama 2-3 jam. Penambahan  asam  kuat  seperti  HCl  pada sistem  reaksi  hidrolisis  akan  berpengaruh terhadap  kekuatan  pelepasan  proton  (H + ) yang  berpengaruh  terhadap  pemutusan ikatan glikosida (Handoko, 2006).
Berdasarkan beberapa hasil penelitian  di  atas,  maka  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  mengenai  aktivitas antibakteri  ekstrak  alga  coklat  jenis S. vulgare dengan  adanya  hidrolisis  dan partisi. Pentingnya penelitian ini dikarenakan  pada  penelitian  sebelumnya ditemukan  potensi  antibakteri  dari  alga coklat  jenis S.  vulgare .  Penelitian  ini  akan dilakukan dengan metode ekstraksi maserasi  dan  hidrolisis  kemudian  dipartisi menggunakan variasi pelarut organik  yaitu etil asetat, kloroform dan petroleum eter.

## II. METODE PENELITIAN Pelaksanaan Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan Februari sampai dengan Mei 2014 di Laboratorium Kimia Organik dan Bioteknologi Jurusan Kimia Fakultas Sains dan  Teknologi  Universitas  Islam  Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang.

## Alat Dan Bahan
Alat  yang  digunakan  blender, gunting,  pisau,  oven,  neraca  analitik, seperangkat  alat  gelas, rotary  evaporator vacumm , hot  plate , magnetic  stirer , spektrofotometer,  spatula,  gelas  arloji, cawan  petri,  cawan  penguap,  tabung reaksi, kertas saring, kertas cakram, kapas, shaker ,  botol  media,  jarum  ose,  inkubator, pinset,  autoklaf,  bunsen,  mikro  pipet,  plat KLT silika gel F 254 dan penggaris.
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  alga  coklat  jenis Sargassum  vulgare .  Bahan  kimia  yang digunakan  adalah  metanol,  etil  asetat, kloroform,  petroleum  eter,  HCl  2  N,  Na- bikarbonat,  standar  glukosa,  reagen  DNS, reagen  Dragendorf,  reagen  Mayer,  serbuk logam Mg, metanol 50 %, kloroform, HCl 2 %, HCl 1 N, asam asetat anhidrat, larutan
gelatin, asam sulfat pekat,
n - heksana,aseton  dan  reagen  Lieberman- Buchard.  Uji  antibakteri  menggunakan bahan-bahan sebagai berikut: media nutrien  agar  padat  (NA),  media  nutrient cair  (NB),  etanol,  kertas  saring  Wathman, aquades  steril,  alumunium  foil,  biakan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia
coli , penisilin dan
streptomisin.

## PROSEDUR PENELITIAN Preparasi Sampel
Alga coklat S. vulgare segar dicuci, kemudian dipotong kecil-kecil dan dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  37-38 ºC.  Sampel  yang  telah  kering  dihaluskan menggunakan  blender  sampai  diperoleh serbuk  yang  selanjutnya  serbuk  diayak menggunakan ayakan ukuran 60-100 mesh.

## Analisa Kadar Air
Sebanyak  5  gram  serbuk  sampel pada  cawan  konstan  dipanaskan  dalam oven  pada  suhu  100-105 0 C  sekitar  15 menit.  Cawan  disimpan  dalam  desikator sekitar  10  menit  selanjutnya  ditimbang. Dilakukan  pengulangan  sampai  diperoleh berat konstan.

## Analisa Kadar Garam
Sebanyak  5  gram  serbuk  sampel diekstrak  menggunakan  aquades  panas sebanyak  10  mL  dan  diaduk  selama  10 menit. Ekstraksi diulangi sebanyak 10 kali. Kemudian  filtrat  diukur  kadar  garamnya menggunakan alat salinometer Atago PAL- 06S refraktometer.

## Ekstraksi
Sebanyak  200  gram  serbuk  sampel diekstraksi  menggunakan 600 mL metanol p.a  dan  diaduk  menggunakan shaker selama 24 jam dengan kecepatan 120 rpm. Ekstraksi  maserasi  diulangi  sebanyak  3 kali  dan  seluruh  filtrat  yang  diperoleh selanjutnya digabung menjadi satu kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporatorvacuum sehingga diperoleh ekstrak pekat. Ekstrak pekat yang diperoleh  selanjutnya  dibagi  menjadi  dua bagian.  Bagian  I  untuk  diuji  aktivitas
antibakteri  dan  analisis  gula  reduksi (ekstrak  metanol  kasar)  dan  bagian  II untuk dihidrolisis.

## Hidrolisis dan Partisi
Hidrolisis  dilakukan  dengan  cara menyiapkan  3  wadah,  yaitu  A,  B  dan  C kemudian  masing-masing  wadah  diisi dengan  ekstrak  pekat  sebanyak  7  gram. Kemudian  setiap  ekstrak  ditambah  14  mL larutan HCl 2 N dan diaduk menggunakan magnetic  stirer pada  suhu  ruang  selama  1 jam. Hidrolisat yang
diperoleh ditambahkan  NaHCO 3 sampai  pHnya netral  (pH  7),  kemudian  dipartisi  dengan variasi  pelarut  organik  yaitu:  etil  asetat, kloroform  dan  petroleum  eter  masing- masing sebanyak 25 mL. Dari hasil partisi akan diperoleh dua lapisan, lapisan organik digunakan  untuk  uji  antibakteri  dan identifikasi  golongan  senyawa  sedangkan lapisan  air  digunakan  untuk  uji  kadar  gula reduksi.

## Uji Gula Reduksi Metode DNS
Standar  glukosa  10  ppm  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang 500-600  nm  untuk  mendapatkan  panjang gelombang optimum. Kurva standar dibuat dengan  mengukur  absorbansi  glukosa standar  10,  20,30,40  dan  50  ppm  pada panjang  gelombang  optimum.  Masing- masing lapisan air hasil partisi dan ekstrak pekat metanol sebelum dihidrolisis diambil 1 mL dan ditambahkan 1 mL reagen DNS. Kemudian larutan divorteks dan dipanaskan  dalam  air  mendidih  selama  15 menit.  Dalam  keadaan  panas  ditambah  1 mL larutan KNa-Tartrat dan
ditandabataskan  dalam  labu  ukur  10  mL.
Didinginkan  hingga  mencapai  suhu  ruang dan diukur absorbansinya dengan spektrofotometer  pada  panjang  gelombang optimum. Nilai pengukuran yang diperoleh diplot ke dalam kurva standar.
Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  dengan  metode  difusi cakram.  Kertas  cakram  5  mm  diresapkan pada masing-masing fraski dengan konsentrasi 10 %, 7,5 %, 5 %, 2,5 %, 1 % dan 0,5 %. Kertas cakram yang
mengandung  ekstrak  diletakkan  di  atas permukaan  media  agar  padat  yang    telah ditanami  dengan  0,1  mL  biakan  aktif bakteri.  Diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu  37 0 C  dan  diamati  terbentuknya  zona bening disekitar kertas cakram.
Uji Fitokimia
Fraksi  pelarut  yang  memberikan aktivitas antibakteri tertinggi diuji golongan  senyawanya  dengan  uji  reagen (fitokimia).

## Alkaloid
Ekstrak  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi,  ditambah  0,5  mL  HCl  2  % dan  larutan  dibagi  ke  dalam  dua  tabung. Tabung  I  ditambahkan  2-3  tetes  reagen Dragendorff,  tabung  II  ditambahkan  2-3 tetes reagen Mayer. Jika tabung I terbentuk endapan  jingga  dan  pada  tabung  II terbentuk  endapan  kekuning-kuningan, maka menunjukkan adanya alkaloid (Indrayani, dkk., 2006).

## Flavonoid
Ekstrak  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  kemudian  dilarutkan  dalam 1-2  mL  metanol  panas  50  %.  Setelah  itu ditambah  serbuk  logam  Mg  dan  4-5  tetes HCl  pekat.  Larutan  berwarna  merah  atau jingga yang terbentuk menunjukkan adanya flavonoid (Indrayani, dkk., 2006).

## Saponin
Ekstrak  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  ditambah  air  (1:1)  sambil dikocok selama 1 menit, apabila menimbulkan  busa  ditambahkan  HCl  1  N. Jika  busa  yang  terbentuk  dapat  bertahan selama  10  menit  dengan  ketinggian  1-3 cm,  maka  menunjukkan  adanya  golongan senyawa saponin.

## Triterpenoid
Ekstrak  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi,  dilarutkan  dalam  0,5  mL kloroform.  Selanjutnya  ditambahkan  0,5 mL  asam  asetat  anhidrida.  Kemudian, ditambahkan  1-2  mL  larutan  H 2 SO 4 pekat melalui  dinding  tabung  reaksi.  Jika terbentuk  cincin  kecoklatan  atau  violet pada  pembatas  dua  pelarut  menunjukkan
adanya  golongan  senyawa  triterpenoid (Indrayani, dkk., 2006).

## Steroid
Ekstrak  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi,  dilarutkan  dalam  0,5  mL kloroform.  Selanjutnya  ditambahkan  0,5 mL  asam  asetat  anhidrida.  Kemudian ditambahkan  1-2  mL  larutan  H 2 SO 4 pekat melalui  dinding  tabung  reaksi.  Jika terbentuk warna hijau kebiruan menunjukkan  adanya  golongan  senyawa steroid (Indrayani, dkk., 2006).

## Tanin
Uji  tanin  dilakukan  dengan  dua cara  yaitu  uji  FeCl 3 dan  uji  gelatin.  Uji FeCl 3 dilakukan  dengan  memasukkan ekstrak  ke  dalam  tabung  reaksi,  kemudian ditambahkan  dengan  2-3  tetes  larutan FeCl 3 1  %.  Jika  larutan  menghasilkan warna  hijau  kehitaman  atau  biru  tinta, maka mengandung tanin.Uji gelatin dilakukandengan  memasukkan  ekstrak  ke dalam  tabung  reaksi  kemudian  ditambah dengan  larutan  gelatin.  Jika  terbentuk endapan putih, menunjukkan adanya tanin

## Pemisahan Golongan Senyawa Aktif
Pemisahan  dengan  kromatografi lapis  tipis  analitik  dilakukan  terhadap golongan senyawa  yang  dinyatakan positif dari  hasil  uji  fitokimia  melalui  uji  reagen. Pemisahan dengan kromatografi lapis  tipis analitik dilakukan menggunakan plat silika gel F 254 .

## Analisa data
Data  yang  diperoleh  kemudian dianalisis  dengan  uji  ANOVAdua  arah untuk  menguji  adanya  pengaruh  antar perlakuan  variasi  konsentrasi  dan  variasi pelarut  terhadap  zona  hambat  yang dihasilkan. Apabila terdapat adanya pengaruh,  maka  dilanjutkan  dengan  uji beda  nyata  terkecil  (BNT)  dengan  tingkat signifikansi  5  %  untuk  mengetahui perlakuan  yang  berpengaruh  atau  berbeda nyata di antara perlakuan yang lain.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Preparasi Sampel Preparasi sampel meliputi pencucian,  pengeringan,  penghalusan  dan pengayakan.  Sampel  dicuci  sampai  bersih menggunakan air mengalir untuk menghilangkan  kotoran  yang  melekat. Pengeringan sampel bertujuan untuk menurunkan  kadar  air  dan  mempermudah proses  penyimpanan  sampel.  Pengeringan dilakukan  menggunakan  oven  pada  suhu 35-38 ο C  untuk  menghindari  kerusakan atau  hilangnya  senyawa  aktif yang diinginkan.  Penghalusan  dilakukan  agar luas  permukaan  sampel  semakin  besar sehingga  kontak  sampel  dengan  pelarut semakin maksimal. Selain itu, penghalusan juga  memungkinkan  pecahnya  sel-sel, sehingga mempermudah pengambilan senyawa  aktif  oleh  pelarut.  Setelah dilakukan  penghalusan  sampel  diayak menggunakan  ayakan  dengan  ukuran  60- 100 mesh.

## Analisa Kadar Air
Prinsip  analisis  kadar  air  adalah adanya  pemanasan  dan  penimbangan ( Thermogravimetri )  menggunakan  oven pemanas  pada  temperatur  105 o C  sampai diperoleh  berat  konstan.  Selisih  berat sampel  antara  sebelum  dan  sesudah pemanasan  menunjukkan  jumlah  air  yang terkandung  dalam  sampel.  Berdasarkan penelitian  diketahui  bahwa  kadar  air  pada sampelbasah S.  vulgare sebesar  77,625  %, kadar  air  tersebut  cukup  tinggi  karena sampel S.  vulgare diambil  dari  habitat perairan.  Sedangkan  kadar  air  sampel setelah dikeringkan sebesar 9,352 %.
Hasil  analisis  kadar  air  sampel kering alga coklat S. vulgare menghasilkan nilai  yang  cukup  baik  karena  kurang  dari 10  %.  Menurut  Cahyono  dkk.  (2011)  jika kadar air bahan lebih besar dari 10 % maka akan tumbuh mikroorganisme dan mempengaruhi  reaksi  enzimatis  sehingga mempercepat pembusukan sampel.
Penentuan  kadar  air  juga  berpengaruh terhadap  proses  ekstraksi  zat  aktif.  Kadar air  yang  rendah  dapat  mempermudah
proses  penarikan  zat  aktif  dalam  sampel karena  pelarut  mudah  menembus  dinding sel  sampel  tanpa  adanya  gangguan  dari molekul air.

## Analisa Kadar Garam
Penentuan  kadar  garam  dilakukan untuk mengetahui kadar salinitas dari suatu sampel,  karena  beberapa  mikroorganisme sensitif  terhadap  kadar  salinitas  yang tinggi.  Analisis  kadar  garam  ini  dilakukan dengan Salinometer Atago PAL-06S Refractometer .  Prinsip  alat  ini  adalah dengan  memanfaatkan  indeks  bias  cahaya untuk  mengetahui  tingkat  salinitas  dari sampel  yang  berupa  cairan.  Berdasarkan perhitungan diperoleh kadar garam sebesar 15,6  %.  Menurut  Hudaya  dan  Derajat (1980) kadar garam pada konsentrasi 10-15
%  dapat  membunuh  sebagian  besar  jenis bakteri,  kecuali  bakteri  jenis  “halofilik” yaitu  jenis  bakteri  yang  tahan  terhadap konsentrasi  garam  26,6  %.  Bakteri E.  coli dapat  dihambat  pertumbuhannya  pada konsentrasi garam 13 % sedangkan bakteri S. aureus dapat  dihambat  pertumbuhannya pada konsentrasi garam 15-20 %.

## Ekstraksi
Ekstraksi maserasi dilakukan untuk mengambil  atau  mengekstrak  zat  aktif yang  terkandung  dalam  sampel  melalui perendaman.  Adanya  sistem  perendaman ini  maka  pelarut  akan  menembus  dinding sel  dan  masuk  ke  dalam  sel  yang mengandung  zat  aktif.  Dengan  demikian maka zat aktifnya akan larut dalam pelarut. Berdasarkan  perhitungan,  sebanyak  200 gram  serbuk  alga  coklat S.  vulgare diperoleh  ekstrak  pekat  metanol  sebanyak 29,654  gram  dengan  rendemen  ekstrak metanol sebesar 14,8 %.

## Hidrolisis
Tujuan  dilakukan  hidrolisis  adalah untuk  memisahkan  glikon  (gugus  gula) dengan aglikon (senyawa metabolit sekunder)  pada  suatu  senyawa  glikosida. Dengan adanya pemutusan ikatan glikosida ini,  maka  senyawa  metabolit  sekunder yang  diperoleh  menjadi  lebih  maksimal.
Dugaan  reaksi  pemutusan  ikatan  glikosida ditunjukkan pada Gambar 1:
O OH H H HO HO H O H HO H HO Gambar 1 Dugaan reaksi hidrolisis
Berdasarkan  Tabel  1.1,  diketahui bahwa  rendemen  ekstrak  fraksi  kloroform lebih  besar  dari  pada  rendemen  fraksi lainnya.  Hasil  rendemen  ini  diduga  bahwa kandungan golongan senyawa yang bersifat  semi  polar  dalam  alga  coklat S. vulgare lebih  banyak  dari  pada  senyawa polar dan non polar.

## Uji Gula Reduksi
Setelah  dilakukan  hidrolisis,  maka gugus  gula  (glikon)  akan  terputus  dari ikatan  glikosida.  Glukosa  dalam  ekstrak akan  bereaksi  dengan  reagen  DNS  dan ditunjukkan  dengan  perubahan  warna. Intensitas warna yang terbentuk
menunjukkan  konsentrasi  atau  banyaknya gula  yang  mereduksi.  Data  yang  diperoleh ditunjukkan dalam Tabel 2.
Tabel 2 Kadar  gula  reduksi  ekstrak methanol tiap fraksi

## Partisi (Ekstraksi cair-cair)
Tujuan dari partisi ini adalah untuk melarutkan  senyawa  metabolit  sekunder yang terkandung dalam ekstrak
berdasarkan sifat kepolaran masing- masing.  Prinsip  ekstraksi  cair-cair  (partisi) yaitu proses pemisahan berdasarkan distribusi  suatu  zat  diantara  dua  larutan yang  tidak  saling  bercampur.  Hasil ekstraksi  dan  rendemen  masing-masing fraksi sebagaimana Tabel 1.
Berdasarkan  Tabel  2,  diketahui bahwa  ekstrak  kasar  metanol  sebelum dihidrolisis mempunyai  kadar gula reduksi lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  masing- masing  lapisan  air  hasil  hidrolisis.  Hal tersebut  dimungkinkan  karena  gugus  gula yang  berada  dalam  lapisan  (fase)  air  hasil hidrolisis  merupakan  gula  nonreduksi sehingga  tidak  dapat  dideteksi  dengan metode DNS. Hidrolisis yang kurangsempurna juga mempengaruhi pemutusan ikatan glikosida yang mengakibatkan  glikon  masih  terikat  pada aglikonnya. Dengan demikian, maka jumlah  gula  reduksinya  telah  tidak  dapat terdeteksi.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Prinsip  metode  difusi  cakram dalam pengujian antibakteri adalah terdifusinya  zat  antibakteri  yang  berada pada  kertas  cakram  menuju  permukaan media  agar  yang  telah  diinokulasi  atau ditanami bakteri uji. Bakteri akan terhambat pertumbuhannya dengan
pengamatan  terbentuknya  zona  bening disekeliling  kertas  cakram.  Hasil  uji aktivitas antibakteri ekstrak kasar metanol, fraksi  etil  asetat,  kloroform  dan  petroleum eter ditunjukkan pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas antibakteri  pada  Tabel  3  dan  Tabel  4 diketahui  bahwa  aktivitas  antibakteri  yang baik  diberikan  oleh  fraksi  etil  asetat. Dalam  fraksi  etil  asetat  dimungkinkan senyawa yang terkandung adalah golongan senyawa yang bersifat semipolar. Kemampuan  fraksi  etil  asetat  dalam Sampel Gula reduksi (ppm) Ekstrak metanol 26,1 etilasetat 11,3 Kloroform 16,4 Etroleum eter 13,8 Senyawa glikosida
+  H 2 O HCl + Glukosa (glikon) Fukosterol
menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli semakin  besar  dengan  bertambahnya konsentrasi  ekstrak.  Hal  ini  disebabkan oleh  kuantitas  komponen  aktif  yang
bersifat  antibakteri  akan  semakin  banyak dalam  konsentrasi  ekstrak  yang  kebih tinggi.
Tabel 3 Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak terhadap bakteri S. aureus Konsentrasi (%) Zona hambat (mm) Ekstrak Kasar Metanol Fraksi Etil Asetat Fraksi Kloroform Fraksi Petroleum Eter 0,5 - - - - 1 - 1 - - 2,5 - 3,67 - - 5 0,5 4 - - 7,5 1,67 4,5 - - 10 - 8,5 - 1,5 Kontrol positif (penisilin 2,5) 25 Kontrol negatif (pelarut) - - - - Total bakteri CFU/mL 2,88x10 8 Tabel 4 Hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri E. coli Konsentrasi (%) Zona hambat (mm) Ekstrak Metanol Kasar Fraksi Etil Asetat Fraksi Kloroform Fraksi Petroleum Eter 0,5 - - - - 1 - - - - 2,5 - 0,83 - - 5 - 2,17 - - 7,5 - 5,17 - - 10 - 6 - - Kontrol positif (Streptomisin 0,6) 13,5 Kontrol negatif (pelarut) - - - - Total bakteri CFU/mL 2,96x10 8
Aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak semipolar juga ditunjukkan pada penelitian Eom et  al .  (2011)  yang  mengekstrak  alga coklat Eisenia  bisiklis dengan  pelarut metanol  kemudian  dipartisi  menggunakan variasi  pelarut n -heksana,  diklorometana, etil  asetat  dan n -butanol.  Berdasarkan penelitian  tersebut,  fraksi  etil  asetat
mempunyai  aktivitas  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus dengan aktivitas yang paling besar. Didukung oleh penelitian
Reveny (2011) yang menginformasikan  bahwa  fraksi  etil  asetat memberikan  aktivitas  antibakteri  terbaik terhadap bakteri S. aureus dan E. coli .
Fraksi  etil  asetat  menunjukkan aktivitas  antibakteri  yang  cenderung  lebih kecil dibandingkan dengan senyawa dalam obat komersil seperti penisilin dan streptomisin. Pada penelitian ini digunakan kontrol positif yaitu penisilin untuk bakteri S.  aureus dengan  zona  hambat  25  mmdan streptomisin  untuk  bakteri E.  coli dengan zona hambat 13,5 mm. Menurut Davis dan Stout  (1971)  dalam  Yuningsih  (2007) daerah hambatan ekstrak kurang dari 5 mm tergolong  lemah,  antara  5  mm  sampai  8 mm tergolong lemah,  antara 10 sampai 20 mm  tergolong  kuat  dan  lebih  dari  20  mm tergolong sangat kuat. Berdasarkan pengujian aktivitas antibakteri
menghasilkan  zona  hambat  terbaik  yaitu 8,5  mm  terhadap  bakteri S.  aureus dan  6 mm  terhadap E.  coli .  Jika  dimasukkan  ke dalam rentang ketentuan kekuatan antibakeri,  maka  aktivitas  antibakteri  yang diberikan oleh fraksi etil asetat alga coklat
S. vulgare tergolong sedang.
Kontrol  negatif  yang  digunakan adalah  pelarut  dan  dari  hasil  pengujian diketahui  bahwa  kontrol  negatif  tidak memberikan  daya  hambat  terhadap  kedua bakteri  uji.  Sehingga  dapat  disimpulkan bahwa zona hambat ekstrak yang terbentuk adalah  murni  dari  aktivitas  ekstrak  dan tidak  dipengaruhi  oleh  pelarut  yang
digunakan. Selain itu, berdasarkan analisis kadar  garam  terhadap  sampel  diketahui bahwa  kadar  salinitas  sampel  juga  tidak memberikan pengaruh terhadap penghambatan  bakteri  uji.  Terhambatnya pertumbuhan bakteri uji cenderung disebabkan  oleh  senyawa  aktif  yang terkandung dalam ekstrak S. vulgare . Bakteri S.  aureus cenderung  dapat dihambat  oleh  konsentrasi  ekstrak  yang lebih  rendah  dibandingkan  dengan  bakteri E. coli. Hal tersebut diduga karena adanya perbedaan komponen penyusun dinding sel bakteri  gram  positif  ( S.  aureus )  dan  gram negatif  ( E.  coli ).  Dinding  sel  bakteri  gram positif  mengandung  lipid  yang  lebih rendah  daripada  bakteri  gram  negatif (Pelczar dan Chan, 1986). Diduga komponen  senyawa  aktif  yang  bersifat semipolar  cenderung  lebih  mudah  masuk ke  dalam  dinding  sel  bakteri  gram  positif dalam menghambat pertumbuhannya.

## Uji Fitokimia
Fraksi S.  vulgare yang  mempunyai aktivitas  antibakteri  tertinggi  selanjutnya dilakukan uji fitokimia. Berdasarkan penelitian  dan  pengamatan  diperoleh  hasil uji  fitokimia  fraksi  etil  asetat S.  vulgare sebagaimana pada Tabel 5.
Tabel 5 Hasil uji fitokimia fraksi etil asetat alga coklat S. vulgare Uji Ekstrak S. vulgare Warna Standar warna Flavonoid − Hijau Merah/ jingga Tanin  FeCl 3 − Hijau kekuningan Hijau kehitaman/ biru tua  Gelatin − Hijau kecoklatan Endapan putih Alkaloid  Dragendrof − Merah kekuningan Endapan jingga, merah bata  Mayer − Hijau Endapan kekuning-kuningan Saponin − Hijau Terbentuk busa Steroid + Hijau kebiruan Hijau kebiruan Triterpenoid − Hijau kebiruan Terbentuk cincin kecoklatan
Hasil  uji  fitokimia  pada  Tabel  4.6 menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat S.
vulgare diduga  mengandung  golongan
senyawa steroid. Diduga aktivitas antibakteri disebabkan oleh adanya kandungan golongan senyawa yaitu
steroid.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Farouk et  al .  (2007)  yang  menyatakan bahwa metabolit sekunder  yang berpotensi sebagai senyawa antimikroba adalah golongan  atau  turunan  dari  senyawa terpenoid, diantaranya yaitu steroid.
Golongan
steroid
menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara mengganggu proses pembentukan membran  dan  dinding  sel  bakteri.  Pada keadaan tersebut fosfolipid yang merupakan  lapisan  tipis  yang  menyelimuti peptidoglikan tidak mampu mempertahankan bentuk membran sitoplasma. Akibatnya, membran sitoplasma  akan  mengalami  lisis  dan bakteri akan mengalami hambatan pertumbuhan  bahkan  kematian  (Robinson, 1995).  Didukung  oleh  penelitian  Morin
dan  Gorman  (1995)  yang  menyebutkan bahwa senyawa steroid mempunyai struktur  lipofilik  yang  akan  berinteraksi dengan  fosfolipid  pada  membran  sel bakteri.  Adanya  reaksi  ini  menyebabkan integritas membran menurun dan
morfologi membran berubah yang mengakibatkan  rapuhnya  membran  sel bakteri dan sel mengalami lisis.

## Pemisahan  Golongan  Senyawa  dengan KLTA
Pemisahan golongan senyawa steroid  menggunakan  larutan  pengembang campuran  yaitu n -heksana  :  etil  asetat (8:2).   Hasil pemisahan golongan senyawa steroid  pada  fraksi  etil  asetat S.  vulgare pada Tabel 6.
Tabel 6 Hasil pemisahan golongan senyawa steroid
No Rf (cm) Warna noda di bawah sinar UV pada λ 366 nm
Dugaan Senyawa Sebelum disemprot reagen Lieberman- Buchard Setelah disemprot reagen Lieberman- Buchard 1 0,05 Merah muda Merah muda - 2 0,11 Kuning Merah muda - 3 0,25 - Ungu Steroid 4 0,32 Ungu Merah muda - 5 0,38 Merah muda Ungu Steroid 6 0,53 Merah muda Ungu Steroid 7 0,58 Merah muda Ungu Steroid 8 0,62 Merah muda Merah muda - 9 0,68 Merah muda tengah ungu Merah muda tengah ungu Steroid 10 0,81 Merah muda tengah ungu Merah muda tengah ungu Steroid 11 0,91 Merah muda Merah muda - Identifikasi  spot  yang  merupakan golongan senyawa steroid diperoleh sebanyak 6 spot. Spot ke 3, 5, 6, 7, 9 dan 10 dinyatakan positif golongan senyawa
steroid yang ditunjukkan dengan terbentuknya warna ungu setelah disemprot dengan  reagen  Lieberman-Buchard  dan dideteksi di bawah sinar UV366.
Identifikasi  golongan  senyawa  steroid setelah disemprot
dengan reagen
Lieberman-Buchard dan dideteksi di bawah sinar UV366 akan menghasilkan warna spot di  antaranya  hijau,  biru,  ungu,  coklat  dan ungu. Analisis Data Berdasarkan analisis statistika
diketahui bahwa perlakuan variasi
konsentrasi  terhadap  bakteri S.  aureus dan
E.  coli diperoleh  F hitung <  F tabel .Dengan demikian  maka  H 0 diterima  yang  berarti
perlakuan  variasi  konsentrasi  ekstrak  tidak berpengaruh  nyata.  Sedang  pengambilan keputusan  untuk  perlakuan  variasi  pelarut terhadap  bakteri S.  aureus dan E.  coli diperoleh  F hitung >  F tabel .  Dengan  demikian maka  H 0 ditolak  dan  H 1 diterima,  yang berarti perlakuan variasi pelarut berpengaruh nyata.
Berdasarkan  uji  beda  nyata  terkecil diketahui  bahwa  rata-rata  zona  hambat S. aureus terhadap  perlakuan  variasi  pelarut metanol,  kloroform  dan  petroleum  eter tidak  berbeda  secara  signifikan.  Sedangkan pelarut  etil  asetat  merupakan  pelarut  yang lebih  baik  jika  direkomendasikan  sebagai pelarut  untuk  mengekstraksi  golongan senyawa  yang  berpotensi  sebagai  obat antibakteri.

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN
Hasil hidrolisis ekstrak metanol alga coklat S.  vulgare yang  mempunyai  aktivitas antibakteri tertinggi adalah fraksi etil asetat dengan  zona  hambat  8,5  mm  terhadap bakteri S.  aureus dan  6  mm  terhadap bakteri e.  coli .  Golongan  senyawa  yang terdapat  dalam  fraksi  etil  asetat  alga  coklat S. vulgare diduga golongan senyawa steroid.
Saran Sebaiknya  pengujian  kadar  garam dilakukan  pada  ekstrak  hasil  maserasi, untuk  mengetahui  kadar  garam  yang terkandung dalam ekstrak setelah dilakukan ekstraksi.  Ekstraksi  menggunakan  variasi pelarut  organik  lain  perlu  dilakukan  untuk mengetahui  aktivitas  ekstrak  dalam  pelarut yang  berbeda.  Perlu  dilakukan  pengujian aktivitas  antibakteri  dengan  penggunaan bakteri uji dan metode uji yang lain, seperti metode dilusi cair.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Alamsjah,  M.A.,  Nurhayati,  D.  dan Thahjaningsih,  W.  2011.  Pengaruh Ekstrak  Alga  Cokelat  ( Sargassum sp .)  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Escherechia  coli Secara  In  Vitro. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan , Vol.3,No.1.
Alfiyaturohmah. 2013. Uji Aktivitas
Antibakteri  Ekstrak  Kasar  Etanol, Klorofom  dan n -heksana  Alga Coklat Sargassum  vulgare Asal Pantai Kapong Pamekasan Terhadap Bakteri S. aureus dan E. coli . Tugas Akhir Tidak  Diterbitkan.  Malang:
UIN Maulana Malik Ibrahim
Malang. Bachtiar,  S.Y.,  Tjahjaningsih,  W.  dan Sianita,  N.  2012.  Pengaruh Ekstrak
Alga Coklat ( Sargassum sp .) Terhadap Pertumbuhan Bakteri
Escherichia  coli.  Jurnal  of  Marine and  Coastal  Science ,  Vol.1,  No.1, 53-60.
Cahyono, B., Huda, M.D.K. dan Limantara,
L. 2011. Pengaruh Proses Pengeringan  Rimpang  Temulawak (Curcuma xanthorriza ROXB) Tehadap Kandungan Dan Komposisi  Kurkuminoid. Reaktor , Vol.13, No.3.
Eom, et al . 2011. Antimicrobial Activity of Brown Alga Eisenia bicylics against Methicillin-resistant Staphylococcus aureus . Fish  Aquat  Sci .  Vol.14, No.4.
Farouk,  A.E.,  Faizal  A.H.G.  dan  Ridzwan
B.H.  2007.  New  Bacterial  Species Isolated from Malaysian Sea Cucumbers with Optimized Secreted Antibacterial Activity.
American  Journal  of  Biochemistry and Biotechnology.
Handoko,  S.P.  2006.  Kinetika  Hidrolisis Maltosa  Pada  Variasi  Suhu  dan Jenis  Asam  Sebagai  Katalis. Sigma , Vol. 9, No. 1: 9-17. Hudaya,  S.  dan  Derajat,  S.  1980. Dasar- Dasar Pengawetan I . Jakarta: Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Indrayani, L., Soetjipto, H. dan Sihasale, L.
2006.  Skrinning  Fitokimia  dan  Uji Toksisitas Ekstrak Daun Pecut Kuda ( Stachytarpheta jamaicensis L. Vah l) Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach . Jurnal
Fakultas  Sains  dan  Matematika .
Salatiga:  Universitas  Kristen  Satya Wacana.
Jawetz,  E.,  Adelberg  E.A.  dan  Melniek  J.
1996. Mikrobiologi  Kedokteran .
Terjemahan Edi Nugroho dan
Maulana  R.F.  Jakarta:  Kedokteran EGC. Miftahurrahmah.  2012.  Ekstraksi,  Uji Aktivitas Antibakteri dan Identifikasi Golongan Senyawa Aktif Alga Merah Eucheuma spinosum Dari Pesisir Laut Banyuwangi. Skripsi Tidak Diterbitkan.  Malang:  UIN  Maulana Malik Ibrahim Malang.
Morin,  R.B  dan  Gorman,  M.  1995. Kimia dan  Biologi  Antibiotik  β-lactam
Edisi III . Semarang: IKIP Semarang Press.
Muhimmah, A.A. 2013. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol Dan N - Heksana Rumput Laut Merah
( Eucheuma  cottonii )  Pesisir  Pantai Lobuk  Madura  Terhadap  Bakteri
Escherichia  coli dan Staphylcoccus aureus . Skripsi Tidak  Diterbitkan.
Malang: UIN Maulana Malik
Ibrahim Malang.
Pelczar,  M.J.  dan  Chan,  E.C.S.  1986.
Dasar-Dasar  Mikrobiologi .  Jilid  1. Alih  Bahasa:  Hadioetomo,  R.  S., Imas,  T.,  Tjitrosomo,  S.S.,  dan
Angka, S.L., Jakarta: UI Press. Reveny,  J.  2011.  Daya  Antimikroba Ekstrak  dan  Fraksi  Daun  Sirih Merah ( Piper betle Linn.).
JurnalIlmu Dasar . Vol. 12, No.1. Robinson,  T.  1995. Kandungan  Organik Tumbuhan Tingkat Tinggi . Penerjemah:  Kosasih  Padmawinata. Bandung: ITB Press.
Tensiska,  Marsetio  dan  Yudiastuti,  S.O.N
2007. Pengaruh Jenis Pelarut Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Isoflavon Dari Ampas Tahu .Hasil Penelitian .Bandung: Universitas Padjadjaran.
Yuningsih,  R.  2007.  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Daun  Jawer  Kotok  ( Coleus scutellarioides [L.]  Benth.). Skripsi Tidak  Diterbitkan.  Bogor:  Institut Pertanian Bogor.