Potensi  Antibakteri Daun Nanas Kerang  terhadap Escherichia coli dan Shigella dysenteriae Antibacterial Potentional of Nanas Kerang Leaves against Escherichia coli dan Shigella dysenteriae
Tiana Milanda, 1* Moelyono Muktiwardojo 1 , Firda Aryanti Widyana 1
1 Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jawa Barat, Indonesia

## A B S T R A K
Nanas  kerang  ( Tradescantia  spathacea Swartz)  merupakan  tanaman  yang  digunakan  sebagai  obat tradisional  di  berbagai  negara  dan  telah  diketahui  memiliki  berbagai  aktivitas  farmakologi,  termasuk antibakteri. Untuk  mengetahui  aktivitasnya  terhadap Shigella  dysenteriae dan Escherichia  coli ,  maka dilakukan pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nanas kerang dan berbagai fraksinya terhadap kedua  bakteri  tersebut serta  penentuan  golongan  senyawa  yang  terkandung  di  dalamnya.  Penelitian dilakukan melalui ekstraksi simplisia, fraksinasi ekstrak, pengujian aktivitas antibakteri ekstrak dan fraksi, penetapan nilai KHTM dan KBM dan penentuan golongan senyawa dalam fraksi teraktif. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak etanol daun nanas kerang memiliki aktivitas terhadap S. dysenteriae dan E. coli isolat klinik sampai konsentrasi 200 mg/mL, dengan  aktivitas terbesar terhadap E.coli isolat klinis. Fraksi air, etil asetat asam dan n-heksan dari ekstrak ini juga memiliki aktivitas terhadap S. dysenteriae dan E. coli isolat klinik sampai konsentrasi 300 mg/mL.  Pada konsentrasi yang sama, fraksi etil asetat basa hanya memiliki aktivitas terhadap E. coli isolat klinis. Fraksi etil asetat sebagai fraksi teraktif memiliki  KBM 37,5 dan 11,8 mg/mL berturut-turut  terhadap S. dysenteriae dan E. coli isolat klinis. Pada fraksi etil asetat asam terdeteksi senyawa flavonoid dan kuinon, yang diduga merupakan senyawa antibakteri  dalam fraksi tersebut.

## A B S T R A C T
Nanas kerang is a plant commonly used as traditional medicine in various countries and has been known to have various pharmacological activities, including antibacterial properties. To determine the activity against  Shigella  dysenteriae  and  Escherichia  coli,  the  antibacterial  activity  of  ethanol  extract  of nanas kerang  leaves  and  its  various  fractions  against  these  bacteria  and  the  determination  of  the  class  of compounds contained them were carried out. The research was carried out by simplicia extraction, extract fractionation, antibacterial activity testing of these extracts and fractions, determining of the MIC and MBC values, and determining group of compounds in the most active fraction. The results showed that the ethanol extract of nanas kerang leaves shown activity against clinical isolates of S. dysenteriae and E. coli up to 200 mg/mL, with the greatest activity against clinical isolates of E.coli. The water, ethyl acetic acid and n- hexane fractions of this extract also shown activity against clinical isolates of S. dysenteriae and E. coli up to  300  mg/mL.  At  the  same  concentration,  the  basic  ethyl  acetate  fraction  only  shown  activity  against clinical isolates of E. coli. The ethyl acetate fraction as the most active fraction shown MBC as 37.5 and 11.8 mg/mL against clinical isolates of S. dysenteriae and E. coli, respectively. Flavonoids and quinones were detected in the ethyl acetic acid fraction, which were expected to be antibacterial compounds in this fraction.

## I N F O    A R T I K E L
Received: 10 Jun 2021; Revised: 12 Jul 2021; Accepted: 20 Aug 2021
* coresponding author: tiana.milanda@unpad.ac.id DOI: https://doi.org/10.22437/jisic.v13i2.14504

## Vol. 13

## No. 2

## DEC 2021
Kata kunci/keyword : Diare,  Flavonoid,  Kuinon,  Shigellosis,  Tradescantia  spathacea,  Diarrhea, Flavonoids, Quinones .

## PENDAHULUAN
Nanas kerang ( Tradescantia spathacea Swartz) atau Rhoeo discolor atau Rheo  spathacea merupakan  tanaman  yang berasal  dari  Teluk  Meksiko,  daerah  Karibia dan  pesisir  Amerika  Tengah  (Tan et  al. , 2015; Garcia-Varela et al. ,  2015; Shinde et al. ,  2021).  Di  beberapa  negara  Barat,  daun, bunga  dan  batang  tanaman  ini  digunakan sebagai teh (Pulipaka, 2020). Infus, rebusan, atau rendaman daun nanas kerang digunakan secara  tradisional  untuk  mengobati  demam, batuk, asma, bronkhitis, tuberkulosis, bahkan kanker  (Yasurin  &  Piya-Isarakul,  2015). Gerusan daunnya dapat ditempelkan langsung  ke  kulit  untuk  mengobati  luka, bisul,  radang,  rinitis  alergi,  psoriasis  dan mikosis superfisial (Luciano-Montalvo et al. , 2013; Gutierrez et al. , 2014, Garcia-Varela et al. , 2015).
Berbagai penelitian sebelumnya menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  nanas kerang  memiliki  aktivitas  antiinflamasi, antifertilitas dan sebagai insektisida (Yasurin & Piya-Isarakul, 2015; Shinde et al. , 2021). Penelitian  lainnya  menunjukkan  daun tanaman  ini  memiliki  aktivitas  antitumor, kemoprevensi  dan  antimalignansi  (Rosales- Reyes et  al. ,  2008),  kemampuan  mengikat oksigen reaktif dan antimutagenik (Gonzalez-Avila et  al. ,  2003),  kemampuan menstimulasi  respon  poliferatif  limfosit (Pulipaka et al. , 2007), antimikroba (Garcia- Varela et  al. ,  2015;  Aswani et  al. ,  2015), antioksidan  (Tan et  al. ,  2015),  antivirus (Chan et  al. ,  2016)  dan  antituberkulosis (Radji et al. , 2015).
Daun nanas kerang diketahui mengandung berbagai senyawa fenolik, tanin dan  flavonoid  (Tan et  al. ,  2015).  Garcia- Varela et  al. ,  (2015)  membuktikan  bahwa daun  tanaman  ini  mengandung  senyawa flavonoid,  saponin,  karotenoid,  antosianin, terpenoid,  asam  ferulat,  asam  klorogenat, asam  vanilat,  asam  p-kumarat  dan  steroid. Kebanyakan  senyawa  tersebut  diketahui memiliki  berbagai  aktivitas  farmakologi, khususnya  sebagai  senyawa  antimikroba (Mujeeb et al. , 2014).
Yasurin  &  Piya-Isarakul  (2015) menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  dan kloroform  daun  nanas  kerang  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia coli ATCC25822, Salmonella  enterica , Bacillus cereus dan Listeria monocytogenes . Shinde et  al. (2015)  menunjukkan  adanya aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  dan ekstrak  air  daun  tanaman  ini  terhadap S. aureus dan E.  coli .  Garcia-Varela et  al. (2015)  membuktikan  adanya  aktivitas antibakteri  berbagai  ekstrak  daun  nanas kerang    terhadap  bakteri  Gram-negatif  ( E. coli dan P. aeruginosa ), bakteri Gram positif ( Listeria innocua dan Streptococcus mutans ) serta  jamur  ( Candida  albicans ).  Dekok  dan infus daun juga diketahui memiliki aktivitas terhadap  berbagai  bakteri,    termasuk Methicillin  Resistance  S.  aureus dan Neissseria gonorrhoea e (Tan et al., 2015). Sampai saat ini, belum ada informasi aktivitas  antibakteri  daun  nanas  kerang terhadap Shigella  dysenteriae, yaitu  bakteri Gram negatif  penyebab disentri basiler atau shigellosis.    Penyakit  ini  ditularkan  melalui rute  feses-oral  melalui  air  dan  makanan. Patogenisitas S.  dysenteriae disebabkan kemampuannya  menghasilkan  toksin  dan protease ekstraseluler. Protease ini bertanggung  jawab  terhadap  penguraian lapisan  glikokogen  pada  usus  inang, penyerangan  antibodi  dan  zimogen  inang, memfasilitasi  penempelan,  integrasi,  invasi dan  kolonisasi  bakteri  pada  sel  inang. Antidiare seperti loperamid, difenoksilat dan beberapa  antibiotik  dengan  mekanisme serupa  sudah  tidak  mampu  mengatasi shigellosis. Resistensi bakteri ini hanya dapat diatasi  antibiotik  dengan  mekanisme  yang berbeda (Segun et al., 2015). Beberapa  jenis E.  coli juga menyebabkan  diare  yang  ditularkan melalui air atau makanan terkontaminasi atau melalui kontak dengan hewan dan manusia (Yasurin & Piya-Isarakul, 2015). Untuk
mengetahuinya  perlu  dilakukan  pengujian aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun nanas kerang dan berbagai fraksinya terhadap S. dysenteriae dan E. coli ,  menentukan fraksi antibakteri  teraktif,  menetapkan  nilai Konsentrasi  Hambat  Tumbuh  Minimum
(KHTM) serta Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM)  fraksi  teraktif  serta  mengetahui golongan  senyawa  yang  terkandung  di dalamnya.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Tanaman nanas kerang diperoleh dari Perkebunan Manoko, Lembang, Jawa Barat. Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah S. dysenteriae isolat  klinis  dari  Laboratorium Mikrobiologi  Farmasi,  Fakultas  Farmasi, Universitas  Padjadjaran,  Sumedang,  Jawa Barat,  sedangkan E.  coli isolat  klinis diperoleh  dari  Laboratorium  Mikrobiologi, Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Achmad Yani,    Cimahi,  Jawa  Barat.  Medium pertumbuhan  yang  digunakan  adalah Mueller-Hinton  Agar/ MHA  (Oxoid)  dan Mueller-Hinton Broth /MHB (Oxoid).
Bahan  lain  yang  digunakan  adalah etanol  70%  (Agung  Menara  Abadi),  n- butanol  (Agung  Menara  Abadi),  n-heksan (Bratachem),  etil  asetat  (Bratachem), kloroform  (Quadrant),  eter  (Merck),  toluen (Bratachem),  asam  klorida  (Bratachem), asam  sulfat  (Bratachem),  asam  asetat (Merck),  natrium  hidroksida  (Merck), natrium  klorida  (Merck),  amonia    (Merck), pereaksi  Mayer  (Bratachem),  pereaksi Dragendorf
(Bratachem),
pereaksi Liebermann-Burchard  (Bratachem),  amil alkohol  (Merck),  pelat  silika  gel  GF  254 (Merck), dimetil sulfoksida/DMSO (Merck), serbuk  magnesium  (Agung  Menara  Abadi), besi (III) klorida (Merck), gelatin (Medilabs),
vanilin (Bratachem), larutan standar McFarland 0,5 dan air suling.
Alat
Alat-alat  yang  digunakan  adalah maserator, rotary evaporator (Buchi Rotavapor  R-300,  Swiss),  neraca  analitik (Mettler Toledo AL204, Swiss), penangas air (Memmert,  Jerman),  destilator  toluen (Barstead,  USA),  otoklaf  (Hirayama, Jepang), oven (Memmert 400-800, Jerman), inkubator  (Sakura  IF-4,  Jepang), vacuum freeze  dryer (Scientz-12N,  Jerman),  corong pisah,  bejana  kromatografi,  lampu  UV  254
nm dan 366 nm (Camag, Inggris), lemari es, mikropipet  volume  10-100  µL  (Biohit Proline, Finlandia), mikropipet volume 100- 1000  µL  (Socorex  Acura  825,  Swiss),  tip mikropipet  kuning  dan  biru, vortex (Health H-VM-300,  Afrika  Selatan),  96 wells- microplates (Iwaki,  Jepang),  perforator, jangka  sorong  dan  alat-alat  yang  umum digunakan  di  Laboratorium  Mikrobiologi Farmasi  dan  Laboratorium  Farmasi  Bahan Alam.

## Metode

## Determinasi  Tanaman  dan  Penyiapan Simplisia
Tanaman nanas kerang dideterminasi di  Laboratorium  Taksonomi  Tumbuhan, Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas Padjadjaran,  Sumedang,  Jawa  Barat.  Daun nanas  kerang  segar  dikumpulkan,  dicuci, dipotong-potong  kecil  dan  dikeringkan, sehingga  diperoleh  simplisia  daun  nanas kerang  (Yasurin  &  Piya-Isarakul,  2015; Garcia-Varela et al., 2015).

## Ekstraksi Simplisia
Simplisia daun nanas kerang diekstraksi melalui metode maserasi menggunakan  berbagai  pelarut  dengan polaritas  yang  berbeda  (Yasurin  &  Piya- Isarakul,  2015;  Shinde et  al., 2015;  Garcia- Varela et  al., 2015).  Sebanyak  500  g simplisia  dimasukkan  ke  dalam  maserator, lalu direndam dalam 1,9 L etanol 70% selama 24  jam  pada  suhu  kamar.  Pelarut  dalam jumlah  yang  sama  diganti  setiap  24  jam sebanyak  tiga  kali  (3  x  24  jam).  Ekstrak dikumpulkan,  lalu  pelarutnya  diuapkan menggunakan rotary  evaporator pada  suhu 50 o C. Ekstrak dipekatkan di atas penangas air pada  suhu  60 o C.    Ekstrak  kental  diamati secara  organoleptik meliputi  bentuk,  warna, bau dan rasa, lalu ditentukan rendemennya.
Kadar  air  ekstrak  ditetapkan  dengan cara  destilasi  toluen  (Milanda et  al., 2021). Sebanyak 2 g ekstrak dimasukkan ke dalam labu, lalu dihubungkan dengan alat destilasi. Sebanyak  200  mL toluen  dituangkan  ke dalam  labu  melalui  alat  pendingin,  lalu dipanaskan selama 15 menit. Setelah toluen
mendidih,  penyulingan  dilakukan  dengan kecepatan  2  tetes  per  detik,  sehingga sebagian air
tersuling.
Kecepatan
penyulingan  dinaikkan  sampai  4  tetes  per detik.  Setelah  semua  air  tersuling,  tabung penerima  didiamkan  sampai  suhu  kamar. Setelah  air  dan  toluen  terpisah  sempurna, volume  air  dibaca  dan  kadar  air  ekstrak dihitung.

## Penyiapan Suspensi Bakteri Uji
S. dysentriae dan E. coli isolat klinis ditumbuhkan dalam 5 mL agar miring MHA, lalu  diinkubasi  dalam  inkubator  bersuhu 37 o C  selama  18-24  jam.  Biakan  bakteri disuspensikan  dalam  2  mL  larutan  natrium klorida    0,9%  b/v  dalam  tabung  reaksi. Kekeruhan  suspensi  bakteri  disesuaikan dengan larutan standar McFarland 0,5, yang setara dengan 1,5 x 10 8 CFU/mL (Yasurin & Piya-Isarakul,  2015;  Garcia-Varela et  al., 2015; Shinde et al., 2015).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Ekstrak  etanol  daun  nanas  kerang ditentukan  aktivitasnya        terhadap  kedua bakteri uji menggunakan metode difusi agar dengan teknik perforasi (Tannu et al., 2011). Sebanyak 1 g ekstrak dilarutkan dalam 2 mL DMSO  2%  v/v  untuk  mendapatkan  larutan stok    500  mg/mL.  Larutan  tersebut diencerkan  secara  bertingkat,  sehingga diperoleh variasi konsentrasi ekstrak sebesar 500, 400, 300 dan 200 mg/mL.
Sebanyak  20  µL  masing-masing suspensi  bakteri  uji  dimasukkan  ke  cawan petri,  lalu  ditambahkan  20  mL  MHA  yang masih cair. Setelah dikocok perlahan sampai homogen,  campuran  medium  dibiarkan memadat  pada  suhu  kamar.  Medium dilubangi
menggunakan perforator berdiameter 9 mm. Sebanyak 50 µ L masing- masing larutan ekstrak dimasukkan ke dalam lubang.  Sebagai  kontrol  negatif  disiapkan cawan  petri  berisi  MHA,  sedangkan  untuk kontrol  positif  disiapkan  cawan  petri  berisi MHA  yang  diinokulasi  bakteri  uji.  Semua cawan  diinkubasi  dalam  inkubator  bersuhu 37 o C selama 18–24 jam. Aktivitas antibakteri ekstrak  ditunjukkan  oleh  daerah  hambat  di
sekitar  lubang,  yang  diukur  menggunakan jangka sorong.

## Fraksinasi Ekstrak
Fraksinasi ekstrak daun nanas kerang yang  dilakukan  dengan  metode  ekstraksi cair-cair (Milanda et al., 2021).  Sebanyak 15 g  ekstrak  dilarutkan  dalam  air  suling  dan etanol 70% hingga larut sempurna, kemudian ditambah air suling hingga 200 mL. Larutan ekstrak dimasukkan ke dalam corong pisah, lalu  ditambah  200  mL  n-heksan.  Campuran dikocok beberapa lama, lalu dibiarkan hingga kedua  fasa  memisah.  Fasa  n–heksan dipisahkan  dan  ditampung.  Proses  ini diulangi  hingga  diperoleh  fasa  n–heksan yang  tidak  berwarna. Fraksinasi  dilanjutkan dengan penambahan etil asetat dalam jumlah yang sama ke fasa air. Campuran ini dibagi menjadi  2  bagian.  Bagian  pertama ditambahkan    asam  klorida  sampai  pH  4,0, dikocok  dan  dibiarkan  sampai  kedua  fasa memisah.  Fasa  etil  asetat  asam  dipisahkan dan ditampung. Pada bagian kedua,  fasa air ditambahkan  etil  asetat  dan  natrium hidroksida  hingga  pH  8,0,    lalu  dilakukan pemisahan fasa etil asetat basa.
Pelarut  berberbagai  fraksi  diuapkan menggunakan rotary  evaporator pada  suhu 50 o C. Fraksi dipekatkan di atas penangas air pada suhu 60 o C, kecuali fraksi air dipekatkan menggunakan vacuum freeze dryer .   Seluruh fraksi  diamati  secara  organoleptik  meliputi bentuk, warna, bau dan rasa.  Masing–masing fraksi ditimbang, lalu dihitung rendemennya.

## Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak dan Fraksi
Pengujian aktivitas antibakteri ektrak dan  berbagai  fraksi  daun  nanas  kerang dilakukan  menggunakan  metode  yang  sama dengan  pengujian  aktivitas  antibakteri ekstrak  (Tannu et  al., 2011).  Ekstrak  dan berbagai fraksinya masing-masing dilarutkan dalam  DMSO  2  %  v/v,  sehingga  diperoleh konsentrasi  yang  sama,  yaitu  300  mg/mL. Aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi ditunjukkan  oleh  daerah  hambat  di  sekitar lubang.  Diameter  hambat  diukur,  lalu dibandingkan  untuk  menentukan  fraksi teraktif.

## Penetapan Nilai KHTM dan KBM Fraksi Teraktif
Penetapan  nilai  KHTM  dan  KBM fraksi  teraktif  terhadap S.  dysentriae dan E. coli isolat  klinis  dilakukan  menggunakan metode  mikrodilusi  (Milanda et  al., 2021). Larutan  stok  ekstrak  disiapkan  pada konsentrasi  600  mg/mL  dalam  DMSO  2% v/v. Suspensi  bakteri  uji  diencerkan  20  kali dengan penambahan larutan natrium klorida 0,9% b/v, sehingga diperoleh inokulum yang setara  dengan  5  x  10 6 CFU/mL.  Larutan kontrol  negatif  terdiri  dari  20  mL  MHB, sedang larutan kontrol positif berupa  20 mL MHB yang diinokulasi 20 µL masing-masing suspensi bakteri uji.
Kolom  ke-1  diisi  100  µL  kontrol negatif,  kolom  ke-2  diisi  100  µL  kontrol positif, sedang kolom ke-3 dan ke-4 diisi  100 µL  larutan  stok  fraksi  teraktif.  Kolom  ke-4 hingga  kolom  ke-12  diisi  masing-masing oleh  100  µL  MHB.    Proses  pengenceran dilakukan  dengan  cara  memipet  100  µL larutan  dari  kolom  ke-4  ke  kolom  ke-5. Proses ini dilakukan secara berulang sampai kolom ke-12, lalu 100 µL hasil pengenceran terakhir  dibuang.  Dengan  cara  ini,  maka larutan  pada  kolom  ke-4  merupakan konsentrasi  fraksi  teraktif  tertinggi  (300 mg/mL)  dan  pada  kolom  ke-12  merupakan konsentrasi  fraksi  teraktif  terendah  (1,2 mg/mL). Sebanyak 10 µL bakteri uji masing- masing  dimasukkan  ke  dalam  lubang. Mikroplat ditutup  plastik  selofan,  lalu diinkubasi  dalam  inkubator  bersuhu  suhu 37 o C  selama  18-24  jam.  KHTM  ditentukan dari  konsentrasi  fraksi  terkecil  yang  tidak menunjukkan  pertumbuhan  bakteri  uji (larutan  tampak  bening  dan  tidak  ada endapan).
Penetapan  KBM  dilakukan  dengan cara menggoreskan larutan dari yang terlihat bening  ke  5  mL  MHA  dalam  cawan  petri kecil.  Cawan-cawan  tersebut  diinkubasi dalam inkubator bersuhu 37 o C selama 18-24 jam.    KBM  ditentukan  dari  cawan  petri dengan konsentrasi fraksi terkecil  yang tidak menunjukkan pertumbuhan bakteri uji (tidak ada pertumbuhan koloni bakteri) (Yasurin & Piya-Isarakul (2015),
Penapisan  Fitokimia  Simplisia,  Ekstrak dan Fraksi Teraktif Penapisan fitokimia simplisia, ekstrak dan fraksi teraktif daun nanas kerang dilakukan dengan dengan metode Farnsworth (Milanda et al., 2021).  Penapisan fitokimia dilakukan  terhadap  senyawa  alkaloid, flavonoid,  polifenol,  tanin,  monoterpenoid, seskuiterpenoid, steroid, triterpenoid, kuinon dan saponin.

## Penentuan  Profil  Kromatografi  Lapis Tipis (KLT) Ekstrak dan Fraksi Teraktif
Penentuan  profil  KLT  ekstrak  dan fraksi  teraktif  dilakukan  untuk  menemukan keberadaan  sejumlah  senyawa.  Fase  diam berupa pelat silika gel GF 254 dan fase gerak berupa kombinasi n-butanol : asam asetat : air (4:1:5).  Ekstrak  dan  fraksi  teraktif diaplikasikan pada pelat KLT menggunakan pipa  kapiler,  lalu  ditempatkan  pada  bejana kromatografi  yang  telah  dijenuhkan  fase gerak.  Pola  kromatogram  diamati  di  bawah pada  sinar  tampak,  lampu  UV  254  dan  366 nm.  Setiap  bercak  yang  teramati  dihitung nilai Rf-nya (Shinde et al., 2021).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Determinasi Tanaman dan Penyiapan Simplisia Hasil determinasi menunjukkan bahwa  tanaman  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah nanas kerang ( Tradescantia spathacea ) dari divisi Tracheopyta,  kelas  Magnoliopsida,  ordo Commelinales, keluarga Commelinaceae dan genus Tradescantia ,  sesuai  penelitian Pulipaka et  al. 2020.  Proses  penyiapan simplisia  menghasilkan  simplisia  kering berwarna coklat kehitaman, berasa pahit dan berbau khas.
Hasil Ekstraksi Simplisia Proses
ekstraksi simplisia menghasilkan  ekstrak  kental,  berwarna coklat kemerahan, berasa pahit, berbau  khas. Dari 500 g simplisia diperoleh ekstrak kental sebanyak 53,48 g, dengan rendemen sebesar
10,69%  (b/b).  Dari  penentuan  kadar  air, diketahui  kadar  air  ekstrak  sebesar  9,8  % (b/v).  Hasil  ini  berbeda  dengan  penelitian Shinde et  al. (2015)  yang  menyebutkan kadar  air  ekstrak  etanol  daun  nanas  kerang sebesar 3,51% b/b,  namun masih memenuhi persyaratan  kadar  air,  yaitu  tidak  lebih  dari 10% (Depkes, 2000).

## Hasil  Pengujian  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun nanas kerang menunjukkan aktivitas terhadap kedua bakteri uji sampai konsentrasi 200  mg/mL.    Aktivitas  antibakteri  terbesar ditunjukkan ekstrak tersebut terhadap E.coli isolat klinis.
Tabel 1. Hasil pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nanas kerang terhadap S. dysenteriae dan E. coli isolat klinis.
Keterangan: diameter lubang = 9 mm

## Hasil Fraksinasi Ekstrak
Proses fraksinasi ekstrak
menghasilkan  empat  fraksi,  yaitu fraksi  air sebanyak  10  g  dengan  rendemen  66,7  % (b/b),  fraksi etil asetat basa sebanyak 0,104 g dengan rendemen 0,69% (b/b), fraksi etil asetat  asam  sebanyak  0,418  g  dengan rendemen  2,7  %  (b/b)  dan  fraksi  n-heksan sebanyak  2,01  g  dengan  rendemen  13,4  % (b/b).
Fraksi air berbentuk serbuk, berwarna  coklat,  berbau  khas,  dan  berasa pahit,  sedangkan  fraksi  etil  asetat  asam berupa  cairan  kental,  berwarna  coklat, berbau  khas,  dan  berasa  pahit.  Fraksi  etil asetat  basa  berupa  cairan  kental,  berwarna coklat,  berbau  khas  dan  berasa  pahit, sedangkan  fraksi  n-heksan  berupa  cairan kental,  berwarna  hijau  kehitaman,  berbau khas dan berasa pahit.

## Hasil  Pengujian  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak dan Fraksi
Hasil pengujian aktivitas ekstrak dan berbagai  fraksi  menunjukkan  bahwa  fraksi air, etil asetat asam, dan n-heksan dari ekstrak etanol daun nanas kerang memiliki aktivitas
terhadap S.  dysenteriae dan E.  coli isolat klinik sampai konsentrasi 300 mg/mL. Fraksi etil  asetat  basa  pada  konsentrasi  yang  sama hanya mempunyai aktivitas terhadap E. coli isolat klinis. Fraksi etil asetat asam, sebagai fraksi  teraktif,  memiliki    diameter  hambat terhadap S.  dysenteriae yang  lebih  besar dibanding ekstraknya.
Adanya informasi mengenai aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun nanas kerang dan  berbagai  fraksinya  terhadap S. dysenteriae isolat klinis merupakan informasi  baru,  sedangkan    hasil  pengujian aktivitas  antibakteri    ekstrak  tersebut terhadap E.  coli isolat  klinis  sesuai  dengan penelitian  sebelumnya.  Yasurin  &  Piya- Isarakul  (2015)  menunjukkan  adanya aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  dan kloroform daun nanas kerang terhadap E. coli ATCC25822.    Shinde et  al. (2015) menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri ekstrak  etanol  dan  ekstrak  air  daun  nanas kerang terhadap E. coli. Garcia-Varela et al. (2015)  juga    menunjukkan  adanya  aktivitas antibakteri  10  ekstrak  daun  nanas  kerang, terutama ekstrak polar,  terhadap E. coli.
Konsentrasi ekstrak (mg/m)
Rata-rata diameter hambat (mm) S. dysenteriae isolat klinis (cm) E. coli isolat klinis 200 12,4 13,0 300 14,7 16,9 400 15,8 18,2 500 16,8 19,6
Tabel  2. Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  dan  fraksi  daun  nanas  kerang  terhadap S. dysenteriae dan E. coli isolat klinis.

## Keterangan: diameter lubang = 9 mm

## Hasil Penetapan Nilai KHTM dan KBM Fraksi Teraktif
Nilai  KHTM  fraksi  etil  asetat  asam sulit ditentukan dengan metode mikrodilusi, karena  adanya  endapan  fraksi  yang menghalangi  pengamatan  pertumbuhan
bakteri.  Pertumbuhan  bakteri  hanya  dapat diamati  dengan  menggoreskan  larutan  ke MHA  dalam  cawan  petri,  sekaligus menentukan nilai KBMnya. KBM fraksi  etil asetat  asam  terhadap S.  dysenteriae dan E. coli isolat klinis  masing-masing sebesar 37,5 dan 11,8 mg/mL.
Tabel 3. Hasil Penentuan KBM Fraksi Etil Asetat Asam Daun Nanas Kerang terhadap S. dysenteriae dan E. coli isolat klinik
Konsentrasi fraksi (mg/mL)) Pertumbuhan S. dysenteriae i solat klinis Pertumbuhan E. coli isolat klinis 300,0 - - 150,0 - - 75,0 - - 37,5 - - 18,8 + - 9,4 + + 4,7 + + 2,3 + + 1,2 + + Keterangan : -  = tidak terdapat pertumbuhan bakteri + = terdapat pertumbuhan bakteri
Hasil  Penapisan  Fitokimia  Simplisia, Ekstrak dan Fraksi Teraktif
Hasil penapisan fitokimia
menunjukkan  bahwa  simplisia  daun  nanas kerang  mengandung  senyawa  flavonoid, kuinon,  monoterpenoid,  seskuiterpenoid, steroid  dan  saponin.  Hasil  ini  agak  berbeda dengan hasil penelitian Tan et al. (2015) yang menyebutkan daun nanas kerang mengandung berbagai senyawa fenolik, tanin dan  flavonoid.  Pulipaka et  al. (2020) menyatakan daun nanas kerang mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, senyawa fenolik,  glikosida,  terpenoid,  antosianin, karotenoid,  lilin,  kumarin  dan  steroid.
Garcia-Varela et  al. (2015)  menyebutkan daun  tanaman  ini  mengandung  berbagai senyawa  flavonoid,  saponin,  karotenoid, antosianin,  terpenoid,  asam  ferulat,  asam klorogenat,  asam  vanilat,  asam  p-kumarat dan  steroid.  Kebanyakan  senyawa  tersebut dilaporkan  mempunyai  berbagai  aktivitas farmakologi  (Garcia-Varela et  al. ,  2015), khususnya  sebagai  senyawa  antimikroba (Cisowska et al. , 2011, Mueller et al. , 2011, Mujeeb et al. , 2014; Kozyra et al. , 2015). Pada  ekstrak  etanol  daun  nanas kerang terdeteksi adanya senyawa flavonoid, kuinon, monoterpenoid, eskuiterpenoid, dan steroid. Pada fraksi etil asetat asam dari daun
Sampel Konsentrasi (mg/mL) Rata-rata diameter hambat (mm) S. dysenteriae i solat klinis E. coli isolat klinis Ekstrak  etanol 300 11,3 13,9 Fraksi etil asetat asam 300 19,1 23,8 Fraksi etil asetat basa 300 - 17,4 Fraksi n-heksan 300 11,9 17,1 Fraksi air 300 10,7 15,3
nanas kerang terdapat senyawa flavonoid dan kuinon. Dari  hasil  tersebut  dapat  diketahui bahwa  senyawa  aktif  antibakteri  dari  fraksi etil  asetat  asam  daun  nanas  kerang  diduga merupakan senyawa flavonoid dan kuinon.
Menurut Garcia-Varela et al. (2015), kebanyakan  senyawa  flavonoid  memiliki aktivitas antibakteri. Senyawa ini diproduksi oleh  tumbuhan  sebagai  respon  menghadapi infeksi mikroba. Senyawa flavonoid mampu berikatan  dengan  protein  ekstraselular  dan protein  terlarut  serta  membentuk  kompleks dengan  dinding  sel  bakteri,  yang    diikuti keluarnya  senyawa  intraseluler.  Semakin lipofilik  suatu  senyawa  flavonoid,    maka semakin tinggi kemampuan senyawa tersebut untuk  menganggu  stabilitas  membran  sel bakteri.  Senyawa  flavonoid  juga  berperan dalam  inhibisi  sintesis  DNA-RNA,  dengan cara  terinterkalasi  atau  membentuk  ikatan hidrogen  antar  basa  pada  asam  nukleat. Senyawa ini juga mengganggu metabolisme energi, dengan menghambat sistem respirasi.
Kuinon  adalah  senyawa  yang memiliki cincin aromatis dengan dua gugus keton tersubstitusi. Kuinon mampu membentuk  kompleks irreversibel dengan nukleofilik  asam  amino  pada  protein, sehingga  menyebabkan  inaktivasi  dan
hilangnya  fungsi  protein.  Efek  antimikroba kuinon  terjadi  melalui  penyerangan target surface-exposed adhesin , polipeptida dinding sel  dan membrane-bound  enzymes (Garcia- Varela et al. , 2015).
Hasil  Penentuan  Profil  Kromatografi Lapis  Tipis  (KLT)  Ekstrak  Etanol  dan Fraksi Teraktif
Dari  hasil  penentuan  profil  KLT diketahui  bahwa  ekstrak  etanol  daun  nanas kerang  menghasilkan  dua  bercak  yang teramati  di  bawah  sinar  tampak,  sinar  UV 254 nm dan 366 nm. Di bawah sinar UV  366 nm,  bercak  tersebut  menunjukan  warna merah  (Rf  0,75)  dan  biru  muda  (Rf  0,19). Fraksi  etil  asetat  asam  menghasilkan  empat bercak, satu teramati di bawah sinar tampak, dua teramati di bawah sinar UV 254 nm dan empat  teramati  d  bawah  sinar  UV  366  nm. Keempat  bercak  itu  berwarna  biru  tua  (Rf 0,7),  biru  muda  (Rf  0,38),  biru  muda  (Rf 0,31) dan coklat (Rf 0,25). Bercak-bercak ini diduga  berasal  dari  senyawa  golongan flavonoid  dan  kuinon.  Hasil  penelitian Shinde et  al. ( 2015)  menunjukkan  adanya bercak coklat Rf 0,74 yang teramati di bawah sinar UV, yang diduga berasal dari senyawa flavonoid.
Tabel 4. Hasil Penentuan Profil KLT Ekstrak Etanol Daun Nanas Kerang
No. bercak Rf Sinar tampak Sinar UV 254 nm 366 nm 1 0,74 Coklat Coklat Merah 2 0,19 Kuning Coklat Biru Muda Keterangan : + = terdeteksi - = tidak terdeteksi Tabel 5 . Hasil Penentuan Profil KLT Fraksi Etil Asetat Asam Daun Nanas Kerang
No. bercak Rf Sinar tampak Sinar UV 254 nm 366 nm 1 0,74 - Coklat Biru Tua 2 0,38 - - Biru Muda 3 0,31 - - Biru Muda 4 0,25 Coklat Coklat Kehitaman Coklat
Keterangan : + = terdeteksi - = tidak terdeteksi

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  nanas  kerang menunjukkan aktivitas terhadap S. dysenteriae dan E.  coli isolat  klinik sampai konsentrasi  200  mg/mL,  dengan    aktivitas antibakteri  terbesar  terhadap E.coli isolat klinis. Fraksi  air,  etil  asetat  asam,  dan  n- heksan dari ekstrak etanol daun nanas kerang juga  memiliki  aktivitas  terhadap S. dysenteriae dan E.  coli isolat  klinik sampai konsentrasi  300  mg/mL.    Fraksi  etil  asetat basa  pada  konsentrasi  yang  sama  hanya mempunyai  aktivitas  terhadap E.  coli isolat klinis. Fraksi etil asetat asam, sebagai fraksi teraktif, memiliki  diameter hambat terhadap S.  dysenteriae yang  lebih  besar  dibanding ekstraknya.  KBM  fraksi    etil  asetat  asam
terhadap S.  dysenteriae dan E.  coli isolat klinis  masing-masing sebesar 37,5 dan 11,8 mg/mL.
Simplisia daun nanas kerang mengandung  senyawa  flavonoid,  kuinon, monoterpenoid, seskuiterpenoid, steroid dan saponin.  Pada  ekstrak  etanol  daun  nanas kerang terdeteksi adanya senyawa flavonoid, kuinon, monoterpenoid, eskuiterpenoid, dan steroid,  sedang  pada  fraksi  etil  asetat  asam dari  daun  nanas  kerang  terdapat  senyawa flavonoid  dan  kuinon.  Hasil  ini  diperkuat dengan  profil  KLT  yang  menunjukkan bercak dari senyawa golongan flavonoid dan kuinon.  Diduga  senyawa  aktif  antibakteri dalam  fraksi  etil  asetat  asam  daun  nanas kerang  merupakan  senyawa  golongan flavonoid dan kuinon.

## DAFTAR PUSTAKA
Aswani,  K.,  and  M.  Sabu.  2015. Reproductive  Biology  of Alpinia
mutica Roxb.  (Zingiberaceae)  with Special  Reference  to  Flexistyly Pollination Mechanism. The International Journal of Plant Reproductive Biology 7(1):48-58.
Chan, Y.K., K.S. Khoo and N.W. Sit. 2016.
Investigation  of  Twenty  Selected Medicinal  Plants  from  Malaysia  for Anti-Chikungunya  Virus  Activity, International Microbiology 19(3): 175- 182.
Cisowska,  A.,  D.  Wojnicz  and  A.B.
Hendrich.  2011.  Anthocyanins  as Antimicrobial Agents of Natural Plant Origin. Nat.  Prod.  Commun .  6:149– 156.
Depkes.  2000. Parameter  Standar  Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat .  Dirjen Pengawasan  Obat  dan  Makanan. Jakarta : 3-38.
García-Varela, R., R.M. García-García, B.A.
Barba-Dávila,  O.R.  Fajardo-Ramírez, S.O. Serna-Saldívar and G.A. Cardineau. 2015. Antimicrobial Activity  of Rhoeo  discolor Phenolic
Rich  Extracts  Determined  by  Flow Cytometry Molecules 20:18685-18703.
González-Ávila, M., M. Arriaga-Alba, M. De la  Garza,  M.C.  Hernández-Pretelín M.A.  Domínguez-Ortíz,  S.  Fattel- Fazenda S, et al. 2003. Antigenotoxic, Antimutagenic  and  ROS  Scavenging Activities  of  a Rhoeo  discolor Ethanolic Crude Extract. Toxicology In Vitro 17:77-83.
Gutierrez, L.G., R.R. Chilpa and H.B. Jaime. 2014.  Medicinal  Plants  for  The Treatment  of  “Nervios”,  Anxiety  and Depression  in  Mexican  Traditional Medicine. Revista  Brasileira  de
Farmacognosia 24(5):101-110. Kozyra, M., A. Biernasiuk, A. Malm and M. Chowaniec. 2015. Chemical Compositions and Antibacterial Activity of Extracts Obtained from The
Inflorescences  of Cirsium  canum (L.) all. Nat. Prod. Res 29:2059–2063. Luciano-Montalvo,  C.,  I.  Boulogne  and  J.
Gavillan-Suarez.  2013.  A  Screening for Antimicrobial Activities of Caribbean  Herbal  Remedies. BMC Complementary and Alternative
Medicine (ISCMR) 13:126.
Mueller, U., T. Sauer, I. Weigel, R. Pichner and  M.    Pischetsrieder.  2011. Identification  of  H2O2  as  A  Major Antimicrobial  Component  in  Coffee. Food Funct 2:265–272. Mujeeb,  F.,  P.  Bajpai  and  N.  Pathak.  2014. Phytochemical Evaluation, Antimicrobial Activity, and Determination of Bioactive Components  from  Leaves  of Aegle marmelos . Biomed. Res. Int 2014:497606. Milanda,  T.,  S.  Mustikawati  dan  A.Y. Chaerunisaa. 2021. Antibacterial Activity  of  The  Most  Active  Fraction of  Trengguli  Bark  ( Cassia  fistula L.) against Propionibacterium acnes
Clinical  Isolate  and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 in Ointment Preparation. Journal of The Indonesian Society  of  Integrated  Chemistry 13(1):1-13.
Pulipaka, S., A. Suttee, M.R. Kumar and P. Sriram. 2020. A Review on Phytopharmacological  Activities  of
Alpinia  mutica and Tradescantia spathacea . Plant Archives 20(2):9011- 9018.
Radji,  M.,  M.  Kurniati  and  A.  Kiranasari.
2015.  Comparative  Antimycobacterial Activity of Some Indonesian Medicinal Plants  against  Multi-drug  Resistant Mycobacterium  tuberculosis . Journal of Applied of Pharmaceutical Sciences 5(1): 019-022.
Rosales-Reyes, T., M. de la Garza, C. Arias- Castro,  M.  Rodríguez-Mendiola,  S. Fattel-Fazenda, E. Arce-Popoca, et al. 2008. Aqueous Crude Extract of Rhoeo
discolor ,  a  Mexican  Medicinal  Plant, Decreases  The  Formation  of  Liver Preneoplastic Foci in Rats. Journal of Ethnopharmacology, 115(3): 381–386.
Segun,  A.A.,  O.S.  Folorunso  and  A.T. Aminat. 2015. Assessment of Antibacterial Activity of Essential Oil Extracted from Leaves of Thaumatococcus danielli (Benn.)
Benth. In Light of Its Inhibitory Impact on  Extracellular  Protease  of Shigella dysenteriae.  International  Journal  of Biochemistry Research & Review 5(1): 9-19.
Shinde, P.R., P.V. Gujrani, A.R. Gupta, P.G. Dhondge  and  S.J.  Sangle.  2021. Exploration of Pharmacognostic, Phytochemical and Antibacterial
Potential  of Rhoeo  discolor Hance. Journal  of  Pharmacognosy  and Phytochemistry 10(1):1625-1630. Tannu, G., A. Gupta, S. Kumar and K. Singh. 2011.  Antimicrobial  Activity  of
Nerium  oleander Stem  Extract. International Journal of Pharmaceutical Professional Research 2(1):210-211. Tan,  J.B.L.,  Y.Y.  Lim  and  S.M.  Lee.  2015.
Antioxidant and Antibacterial Activity of Rhoeo  spathacea (Swartz)  Stearn Leaves. J  Food  Sci  and  Technol 52(4):2394-2400.
Yasurin  P.  and  S.  Piya-Isarakul.  2015.  In Vitro Antibacterial Activity Screening of  Herb  Extracts  against  Foodborne Pathogenic  Bacteria  from  Thailand. Journal  of  Pure  and  Applied Microbiology 9(3):2175-2184.