## UJI AKTIVITAS LARVASIDA DARI BEBERAPA EKSTRAK SPONGE
TERHADAP  LARVA NYAMUK Aedes aegypti
(Test of Larvacide Activity from Some Sponge Extracts to Aedes aegypti Larvae)
Efra D. L. Wantah 1 , R. E. P. Mangindaan 2 , Fitje Losung 2
1 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi Manado e-mail: efrawantah@gmail.com
2 Staf Pengajar Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Univesitas Sam Ratulangi Manado

## ABSTRACT
Marine organisms have been known produce certain compounds those could lead for medicine purposes. Sponges are one and the most studied for this aim. oneof the important biological activities which expected from sponge are larvacide activity. The aims this research was to test the larvacide activity aagainst Aedes aegypti  larvae  from  some  of  sponge  extract.  Sponge  samples  were  taken  from Malalayang Waters,  (N 01  °  27'37 "E  124  °  47'30")  on  November  2014  with  the depth varies from 2-15 m  with SCUBA. The extraction, preparation of the larvae and  activity  testing  was  performed  on  Biomolecular  and  Marine  Pharmacy Laboratory  Faculty  Fisheries  and  Marine  Science.  The  sponge  samples  were cutted  and  soaked  in  95%  Ethanol  for  over  night  with  3  repetitions  to  obtain ethanolic extracts. The extract were filtered and evaporated using freeze dryer then tested onto 10 instars 3 instars m larvae that had been previously maintained. the test  was  made  in  triplowith  24  hours  observation.  abate  was  used  as  positive control while negative control clean water was used.The test results showed that of  11  Sponge  tested,  10  species  showed  larvacidal  activity  and  marine  sponge extract Tedania sp.  has  the  highest  activity  compared  to  9  extracts.  As  a suggestion of this research the further purification of Tedania sp. extract is needed to know the structure of active compound.
Keywords: Aedes aegypti, Larvacide, Sponge extract

## ABSTRAK
Organisme laut yang dapat dikembangkan menjadi bahan sediaan obat antara lain  sponge,  dan  merupakan  salah  satu  organisme  laut  yang  banyak  diteliti. Beberapa  aktivitas  biologis  penting  yang  diharapkan  dari  ekstrak  sponge  salah satunya adalah aktivitas larvasida. Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas larvasida nyamuk Aedes aegypti dari beberapa ekstrak Sponge. Sampel sponge diambil  di  perairan  Malalayang,  tepatnya di koordinat  N  01°27’37”  E  124°47’30” pada  bulan  November  2014  di  kedalaman  2-15  m.  Sedangkan  untuk  tahap ekstraksi,  penyiapan  larva  uji  dan  pengujian  aktivitas  larvasida  di  lakukan  di laboratorium  Biomolekular  dan  Farmasitika  Laut  program  studi  Ilmu  Kelautan, FPIK  UNSRAT.  Dalam  penelitian  yang  dilakukan,  sampel  diambil  di  perairan menggunakan peralatan SCUBA. Setelah itu diekstrak dengan larutan etanol 95% dan direndam selama 24 jam dan dilakukan 3 kali pengulagan untuk mendapatkan ekstrak  etanolik.  Sampel  dikeringkan  dengan  menggunakan  alat  freeze  dryer kemudian  diujikan  ke  10  ekor  larva  nyamuk  fase  instar  3  yang  telah  dipelihara sebelumnya.  Pengujian  dilakukan  sebanyak  3  kali  pengulangan  dengan  lama pengamatan 24 jam pengamatan. Sebagai kontrol positif digunakan bubuk abate
yang  biasa  dijual  di  pasaran  sedangkan  kontrol  negative  atau  tanpa  perlakuan digunakan  air  bersih.  Data  hasil  pengamatan  diolah  menggunakan  Microsoft excel.Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  Dari  11  Sponge  yang  diuji,  10  jenis menunjukan aktivitas larvasida dengan persentase mortalitas yang bervariasi dan ekstrak sponge laut Tedania sp. memiliki aktivitas tertinggi dibandingkan dengan 10 jenis ekstrak sponge lain dalam pengujian. Sebagai saran dalam penelitian ini yaitu  Perlu  dilakukan  pemurnian  lanjut  ekstrak  lebih  lanjut  dari  ekstrak  sponge Tedania sp.  yaitu  ke  tahap  partisi  dan  Perlu  adanya  variasi  konsentrasi  dalam pengujian.
Kata Kunci : Aedes aegypti, Larvasida, ekstrak Sponge

## PENDAHULUAN
Penelitian mengenai ilmu kelautan mengalami  banyak  perkembangan  dan kemajuan seiring dengan berkembangnya teknologi dan
kebutuhan  manusia  akan  sumber  daya laut. Berbagai penelitian terus dilakukan terutama  penelitian  mengenai  bahan baku  obat-obatan  yang  berasal  dari bahan hayati laut.
Organisme laut yang dapat dikembangkan  menjadi  bahan  sediaan obat antara lain sponge, dan merupakan salah satu organisme laut yang banyak diteliti. Sponge termasuk biota
multiselular  yang  sangat  primitif  dari filum  porifera  yang  menarik  banyak peminat  industri  farmasi  (Hooper  dan Soest, 2002). Berbagai  penelitian yang pernah  dilakukan  terhadap  ekstrak sponge  antara  lain  sponge  jenis
Lamellodysidea herbacea untuk
pengobatan  diabetes  (Yamazaki et  al ., 2013), spone jenis Leucetta microraphis sebagai  antimikroba  (Nagasawa et  al. , 2011). Aktivitas antikanker juga ditemukan  pada  ekstrak  sponge  jenis Lissodendryx  fibrosa (Ushiyama et  al ., 2012), Xestospongia cf. vansoesti (Nagasawa et al ., 2011), Stylissa massa (Yamaguchi et  al .,  2013)  Beberapa aktivitas biologis penting yang diharapkan  dari  ekstrak  sponge  salah satunya  adalah  aktivitas  larvasida. Penggunaan Larvasida merupakan usaha yang dilakukan untuk mengendalikan penyebaran hewan yang dianggap merugikan dengan cara membunuh  larvanya.  Nyamuk  dikenal sebagai  hewan  yang  menjadi  vektor berbagai  jenis  penyakit.  Salah  satu
penyakit  yang  penyebarannya  melalui nyamuk adalah penyakit demam berdarah atau demam berdarah dengue (DBD). Sponge hidup di ekosistem terumbu karang (Allen dan Steen, 2000 dalam  Ghufran, 2010). Di dunia diduga terdapat sekitar 10.000 spesies sponge dan diperkirakan 2.000 spesies hidup di ekosistem  terumbu  karang  di  Asia tenggara dan jumlah spesies sponge di perairan Indonesia sekitar 700 spesies.
Sponge  diklasifikasikan  pada filum  porifera.  Organisme  ini  termasuk hewan  multiseluler  (Metazoa)  yang sangat  sederhana  atau  primitif  dengan bagian  tubuh  berpori.  Organisme    ini berhasil beradaptasi dan bertahan hidup lebih  lama  daripada  hewan  multiseluler lainnya  (Collin  dan  Anerson,  1995). Pada  umumnya  sponge  hidup  di perairan dangkal, sampai pada kedalaman ratusan meter dan biasanya menempel pada substrat batuan, karang, kayu yang tergenang dalam air, bahkan dapat hidup pada dasar berpasir atau berlumpur (Hooper, 2004). Bentuk sponge  juga  ada  bermacam-macam, seperti  mangkuk,  jambangan,  bunga, kipas,  bercabang  dan  bentuk  lain  yang tidak  beraturan  (Hooper  dkk,  2002). Kebanyakan sponge kerangkanya terdiri  dari  bahan  mineral  keras  yang disebut  spikula  (Sumich  dan  Duedley,
1992).  Sumber  makan  utama  dari sponge adalah bakterio plankton dengan  tambahan  organik  dari  hasil fotosintesis alga simbiotan dan subtstan organis  terlarut  yang  diserap  oleh bakteri  yang  bersimbiosis  dengannya (Sorokin,  1989).  Sponge  mengambil
makanan dengan cara menyaring (filter feeder) kemudian dicerna secara intraseluler (Barnes dan Rupert, 1994).

## METODE PENELITIAN
Sampel  sponge  yang  digunakan berasal  dari  perairan  Malalayang  pada kedalaman 2-15 meter dengan menggunakan peralatan menyelam SCUBA. Sebelum diambil sampel difoto di dalam air, dipotong sesuai kebutuhan kemudian  dimasukan  di  dalam  plastik yang  sudah  diberi  label  sebagai  kode pengambilan sampel sponge. 11 sampel yang  diambil  dibersihkan  dan  segera dibawa ke Laboratorium untuk ditimbang dan difoto. Hasil dokumentasi sponge  digunakan  untuk  keperluan identifikasi.
Metode  yang  digunakan  untuk mengekstraksi  sponge  adalah  metode yang  biasa  digunakan  di  laboratorium Biomolekuler  dan  Farmasitika  Laut. Sampel  sponge  dipotong  kecil-kecil kemudian direndam dalam etanol selama  24  jam.  Selanjutnya  sampel disaring  dan  filtrat  I  dikumpulkan  pada satu wadah, sedangkan debris direndam kembali dalam etanol dengan periode  perendaman  sama  dengan tahap  sebelumnya.  Hasil  perendaman disaring  dan  filtrat  II  digabungkan dengan filtrat terdahulu (filtrat I). Debris II  direndam  kembali  dengan  etanol selama  24  jam  disaring  dan  diperoleh filtrat  III  dan  debris  III.  Filtrat  I –  III digabung  lalu  disaring  menggunakan kertas saring. Hasil saringan dievaporasi dalam vaccum rotary
evaporator  pada  suhu  40ºC  sampai etanol  menguap.  Ekstrak  etanolik  yang diperoleh kemudian dikeringkan dengan menggunakan  peralatan  freeze  dryer, ditimbang  dan  ekstrak  kasar  disimpan. Sebelum  dilakukan  pengujian,  ekstrak sponge diencerkan ke dalam konsentrasi 1000 ppm. Larva nyamuk A. aegypti dikumpulkan dari ember-ember berisi air jernih  dan  bersih  yang  sengaja  di letakan  di  tempat  bernyamuk  dengan tujuan menjadi tempat nyamuk bertelur. Setelah larva terkumpul, larva
dimasukkan  ke  dalam  toples  yang ditutupi dengan kain kasa dan dibawa ke laboratorium  untuk  dipelihara.  Larva yang  dipelihara  dalam  toples  diberi makan  pelet  ikan  yang  dihaluskan.
Selanjutnya  larva  berkembang  menjadi pupa. Pupa dimasukkan dalam bekerglas yang berisi air dan pindahkan pada  kotak  kaca  yang  didesain  untuk memelihara  nyamuk.  Di  dalam  kotak kaca pupa kemudian dipelihara sampai menjadi  nyamuk  dewasa.  Dalam  kotak kaca  disiapkan  sumbu  yang  ujungnya terendam dalam larutan glukosa sebagai  makanan  nyamuk  jantan, sedangkan nyamuk betina diberi makan darah  manusia  atau  hewan.  Nyamuk betina dewasa mereka akan menempelkan telur-telurnya pada kertas saring  yang  diletakan  di  dalam  kotak kaca.  Telur  nyamuk  ditetaskan  dengan merendam kertas saring pada air bersih, dengan demikian diperoleh larva nyamuk  yang  seragam.  Larva  nyamuk yang digunakan dalam pengujian adalah larva  nyamuk  instar  3  dimana  pada tahap  ini  larva  nyamuk  paling  aktif makan.
Ekstrak kasar hasil evaporasi dan pengeringan diencerkan dalam konsentrasi 1000 ppm. Sebagai pembanding  kontrol  positif  digunakan abate  yang  diencerkan  juga  ke  dalam konsentrasi  1000  ppm  dan  sebagai kontrol  negatif  digunakan  air  bersih. Setiap  perlakuan  dilakukan  3  kali pengulangan.
Sebanyak  10  ekor  larva  nyamuk A.  aegypti instar  3  yang  telah  siap  uji dipindahkan dari wadah penampung ke dalam tabung reaksi yang berisi ekstrak (sesuai konsentrasi), abate dan kontrol. Setiap tabung berisi 10 ml campuran air dan ekstrak ataupun abate dengan total konsentrasi  dalam  tabung  reaksi  10  ml adalah 1000 ppm setiap bahan uji.
Aktivitas  larvasida  yang  diamati yaitu selama 24 jam. Perhitungan waktu dimulai  setelah  pemasukkan  larva  ke dalam  tabung  reaksi.  1  jam  pertama setelah  larva  dimasukan  dilakukan pengamatan, setelah itu pada
pengamatan berikutnya dilakukan setiap 2 jam sekali sampai batas waktu 24 jam pengamatan.
Pengamatan alur hidup yaitu larva uji  yang  diberikan  ekstrak  mampu bertahan  hidup  pada  jangka  waktu tertentu  namun  tidak  dapat  mencapai tahap selanjutnya. Efek kematian dimaksud  yaitu  larva  uji  mengalami mortalitas akibat adanya aktifitas ekstrak larvasida yang diberikan. Untuk memastikan  bahwa  larva  nyamuk  telah mati dilakukan pengamatan
menggunakan mikoskop Olimpus. Data yang  didapat  diolah  menggunakan Microsoft Excel 2007.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel  sponge  yang  diperoleh diamati  dan  dididentifikasi  berdasarkan ciri-ciri/morfologinya
sesuai
dokumentasi  di  dalam  air  maupun  di darat. Sponge  nomor  01  diidentifikasi menurut  Collin  dkk,  2005  adalah  jenis
Svenzea Sp.,  Sponge  nomor  02 diidentifikasi menurut Collin dan Anerson, 1995 adalah jenis
Acanthodendrilla sp., Sponge nomor 03 diidentifikasi menurut Collin dan Anerson,  1995  Jenis Chelonaplysilla sp.,  Sponge  nomor  04  diidentifikasi menurut  Collin dkk, 2005 adalah Jenis Tedania sp.,  Sponge  nomor  05  tidak teridentifikasi, Sponge nomor 06
diidentifikasi  menurut    Longakit  dkk,
2005  adalah  jenis Paratetilla sp., Sponge nomor 07 diidentifikasi menurut
Collin  dan  Anerson,  1995  adalah  jenis Callyspongia sp.,  Sponge  nomor  08 diidentifikasi menurut Collin dan Anerson,  1995  adalah  jenis Haliclona sp.,  sponge  nomor  09  diidentifikasi menurut Putchakarn, 2010 adalah jenis Spheciospongia sp.,  sponge  nomor  10 diidentifikasi menurut Collin dan
Anerson,  1995  adalah  jenis Plakortis sp.,  sponge  nomor  11  diidentifikasi menurut Putchakarn, 2010 adalah Jenis Lamellodysidea sp .
Pada  pengujian  larvasida  dari beberapa  jenis  ekstrak  sponge  yang dilakukan,  menunjukan  perbandingan aktivitas  antara  11  ekstrak  sponge, abate  dan  air  sebagai  kontrol  (Gambar 1).
Gambar 1. Persentase Mortalitas Larva
Sponge Svenzea sp. menunjukan adanya  aktivitas  larvasida  pada  jam ke 20 dengan mortalitas 13,3% dan jam ke 22 sampai 24 mortalitas mencapai 20%. Sponge Acanthodendrilla sp. menunjukan  aktivitas  larvasida  pada jam  ke  22  mortalitas    6,7%  dan
meningkat  pada  jam  ke  24    mortalitas 13,3%.
Aktivitas  larvasida  dari  sponge jenis Chelonaplysilla s p. pada jam ke 2 sampai  ke  4  mortalitas  20%.  Pada  jam ke  6  mortalitass  26,7%,    jam  ke  8 mortalitas  33,3%,  jam  ke  10  mortalitas 46,7%,  pada  jam  ke  12  sampai  16 mortalitas larva mencapai 66,7%. Pada jam ke 18 mortalitas mencapai 80% dan pada  jam  ke  20  sampai  jam  ke  24 mortalitas larva mencapai 86.7%.
Sponge jenis Tedania
sp. menunjukan  aktivitas  larvasida  sejak pengamatan  jam  pertama  mortalitas larva  mencapai  20%,  Pada  jam  ke  2 mortalitas  66,7%,  Pada  jam  ke  4 mortalitas  larva  73,3%,  pada  jam ke  6 mortalitas sebanyak 93,3%, pada jam ke 8  ekstrak  membunuh  larva  nyamuk keseluruhan (mortalitas 100%).
Sponge  nomor  05  yang  tidak teridentifikasi menunjukan aktivitas larvasida  pada  jam  ke  20  sampai  22 mortalitas larva 6,7%, dan pada jam ke 22  mortalitas  larva  13,3%.  Aktivitas larvasida  sponge Paratetilla sp.  pada jam ke 12 sampai jam ke 22  mortalitas 6,7%  dan  pada  jam  ke  24    mortalitas larva  13,3%.  Sponge Callyspongia sp. aktivitas larvasida teramati pada jam ke 20 sampai 22  mortalitas larva 6,7% dan pada  jam  ke  24  mortalitas  larva mencapai  20%.  Sponge Haliclona sp. menunjukan  aktivitas  larvasida  pada jam  ke  24  mortalitas  6,7%.  Sponge Spheciospongia sp.  tidak  menunjukan adanya  aktivitas  hingga  pada  jam terakhir  pengamatan.  Sponge Plakortis sp.  menunjukan  aktivitas  di  jam  ke  14 mortalitas  13,3%,  Pada  jam  ke  16 sampai 22 mortalitas 20%, Pada jam ke 24  mortalitas  33,3%.  Pada  sponge Lamellodysidea sp. menunjukan aktivitas  pada  pengamatan  jam  ke  24 mortalitas 6,7% .
abate  yang  digunakan  sebagai kontrol  positif  mampu  membunuh  larva uji  100%  pada  jam  ke  2,  sedangkan sedangkan air yang digunakan sebagai kontrol negativ tidak mampu membunuh larva  uji  sampai  pada  akhir  waktu pengamatan.
Pada pengujian aktivitas larvasida  dari  11  ekstrak  kasar  sponge ternyata 10 jenis ekstrak yaitu Svenzea sp., Acanthodendrilla sp., Chelonaplysilla  s p.,  sponge  yang  tidak teridentifikasi, Paratetilla sp., Callyspongia sp., Haliclona sp., Spheciospongia sp., Plakortis sp.  dan
Lamellodysidea sp. tidak memiliki substan  larvasida  karena  mortalitas larva  uji  tidak  mencapai  100%  hingga jam ke 24. Sponge Tedania sp. memiliki substansi  larvasida  yang  baik  karena dapat  mencapai  mortalitas  larvasida 100%  pada  jam  ke  8  walaupun  lebih panjang waktu yang diperlukan dibanding abate namun ekstrak sponge
Tedania sp.  masih  termasuk  ekstrak kasar.  Kemungkinan  ekstrak Tedania sp.  bila  dimurnikan  aktivitasnya  akan lebih  baik.  Aktivitas  larvasida  dari ekstrak Tedania sp. berdasarkan pengamatan  bersifat  racun  perut  atau racun  pernapasan  karena  anggota tubuh bagian luar larva tidak mengalami kerusakan seperti ciri-ciri larvasida yang bersifat racun kontak.

## KESIMPULAN
Berdasarkan uji aktivitas larvasida  dari  11  jenis  sponge  yang telah dilakukan, maka
dapat disimpulkan : Dari 11 jenis ekstrak sponge yang diuji,
10 jenis menunjukan aktivitas larvasida dengan  persentase  mortalitas  yang bervariasi. Ekstrak sponge laut Tedania sp. memiliki aktivitas tertinggi dibandingkan  dengan  10  jenis  ekstrak sponge lain dalam pengujian.

## DAFTAR PUSTAKA
Barnes,  R.  D.  dan  E.  E.  Rupert.  1994, Invertebrate  Zoology.  Sounders College Publishing. Hal 73-75.
Collin,  P.L  and  Anerson,  C.1995.
Tropical  Pasific  Invertebrates  :  A
Field Guide to the Marine Invertebrates Occuring on Tropical Pacific Coral Reef, Seagrass  and  Mangrove.  Coral
Reef  Press.  California  pp  :  173- 183.
Ghufran,  H.  Kordi.  K.,  M.  2010. Ekosistem  Terumbu  karang  : potensi,  fungsi  dan  pengelolaan. Jakarta : Rineka Cipta, 2010. Xvi,
212 hlm. ; 21 cm.
Hooper J. N. A dan Van Soest R. M. W. 2002.  Systema  Porifera:  A  Guide to  the  Classification  of  Sponges. Kluwer Academic/Plenum Publishers. New York Nagasawa,  Y.  et  al.  2011.  Isolation  of Salsolinol, a Tetrahydroisoquinoline  Alkaloid, from the Marine Sponge Xestospongia cf. vansoesti as  a Proteasome Inhibitor. Pharmaceutical Society of Japan. 59(2): 287-290. Nagasawa, Y. et al. 2011. Spironaamidine, a new spiroquinone-containing  alkaloid from  the  marine  sponge Leucetta microraphis .  Tetrahedron  Letters.
52: 5342-5344.
Sorokin, Y. L. 1989. Coral Reef Ecology.
Springerverlag. P 173-177.
Sumich,  J.  L.  dan  G.H.  Duedley.  1992. Laboratory And Field Investigation In Marine Biology. 5 th edition. Win. C Brown Publisher. Hal 3.
Ushiyama, S. et al. 2012. Manadosterol
A and  B,  Sulfonated  Sterol Dimers   Inhibiting the Ubc13- Uev1A   Interaction, Isolated from the Marine Sponge Lissodendryx fibrosa .   Journal  of Natural Products. 75:   1495- 1499. Yamaguchi, M. et al. 2013. Spongiacidin C, a  pyrrole  alkaloid  from the marine sponge Stylissa massa , functions as a USP7 inhibitor. Bioorganic &   Medicinal Chemistry Letters. 23:   3884- 3886. Yamazaki, H. et al. 2013. A polybromodiphenyl  ether  from  an Indonesian marine sponge Lamellodysidea  herbacea and  its chemical  derivates  inhibit  protein tyrosine  phosphatase  1B,  an important  target  for  diabetes treatment.  Journal  of  Natural Medicines. 67: 730-735.