Uji Efek Antidiabetik Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Stevia ( Stevia Rebaudiana Bert. ) Dan Daun Sambiloto ( Andrographis folium ) Pada Tikus Jantan Galur Wistar Yang Diinduksi Aloksan The Effect Antidiabetik A Combination Of Extracts Ethanol Leaves Stevia ( Stevia Rebaudiana Bert. ) And Leaves Bitter ( Andrographis folium ) In Male Mice Wistar Strain Induced Alloxan
Sepgiarno Ambar Pradini 1 , Petrus Rizky Pambudi 2 , Farah Ayu Dinah 3 1,2,3 STIKES NASIONAL SURAKARTA s.ambar.pradini@gmail.com; petruzzrizky@gmail.com; farahayud@gmail.com
Abstract : Diabetes mellitus (DM) is one of non-communicable diseases who became a public health problem the world with prevalence increasing every year. Research now develops natural ingredients as a diabetes drug that has the effect of decreases blood glucose levels. The study was conducted to determine  the  combination  of  extracts  ethanol  leaves  stevia  and  leaves  bitter  a  more  effective decrease  of  blood  glucose  levels  in  male  mice  wistar  strain  induced  alloxan  as  compared  to  the provision  of  a  single.  This  research  uses  experimental  research  with  pre  and  post  test  randomized controlled  group  design. 40  test  animals  were  divided  into  8  groups  :  normal,  negative  (CMC-Na), positive (glibenklamid a dose of 1, 26mg/kgBB), bitter dose of 20, 5mg/kgBB (SA 100), stevia dose of 100mg/kgBB  (ST  100),  STSA  75:25,  STSA  50:50  and  STSA  25:75.  All  groups  except  the  normal group  induced  alloxan  dose  of 175mg  /  kgBB  on  day  0, followed  by  animal  testing  until  day  14. The data  obtained  were  blood  glucose  on  day  0,  day  7  and  day  14  and  measured  using  GOD-PAP method.  The  data  collected  were  tested  normalitasnya  to  use  Shapiro-Wilk  Test  on  the  ANOVA (An alysis of Varians) with (α = 0, 05). The combination of ethanol extract of stevia leaf and bitter leaf can decrease blood  glucose level significantly (p  <0,05), for optimum dose ie STSA 75:25 dose  with hypoglycemic power percentage of 23%. The combination of extracts ethanol leaves stevia and leaves bitter more effectively decreasing blood glucose levels compared to the provision of a single . Key word : Antidiabetes, Leaf Stevia, Leaves Bitter, Extracts Ethanol
Abstrak  : Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan  salah  satu  penyakit  tidak  menular  yang  menjadi masalah kesehatan masyarakat dunia dengan prevalensi yang meningkat setiap tahunnya. Penelitian sekarang  mengembangkan  bahan  alam  sebagai  obat  diabetes  yang  mempunyai  efek  menurunkan kadar glukosa darah. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui kombinasi ekstrak etanol daun stevia dan daun sambiloto yang lebih efektif menurunkan kadar glukosa darah pada tikus jantan galur wistar yang diinduksi aloksan  dibandingkan dengan  pemberian secara tunggal. P enelitian  ini  menggunakan penelitian  eksperimental  dengan  rancangan  pre  and  post  test  randomized  controlled  group  design. Hewan  uji  sebanyak  40  ekor  dibagi  menjadi  8  kelompok  yaitu:  normal,  negatif  (CMC-Na),  positif (glibenklamid dosis 1,26mg/kgBB), sambiloto dosis 20,5mg/kgBB (SA 100), stevia dosis 100mg/kgBB (ST  100),  STSA  75:25,  STSA  50:50  dan  STSA  25:75.  Semua  Kelompok  kecuali  kelompok  normal diinduksi aloksan dosis 175mg/kgBB pada hari ke-0, dilanjutkan dengan perlakuan hewan uji dari hari ke-1  sampai  hari ke-14.  Data  yang  diperoleh  berupa  kadar  gula  darah  pada  hari  ke-0, hari  ke-7  dan hari  ke-14  dan  diukur  menggunakan  metode  GOD-PAP.  Data  yang  diperoleh  diuji  normalitasnya menggunakan  Shapiro- Wilk  Test  dilanjutkan  uji  ANOVA  (Analysis  of  Varians)  dengan  (α=0,05). Kombinasi  ekstrak  etanol  daun  stevia  dan  daun  sambiloto  dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah secara  signifikan  (p<0,05),  untuk  dosis  optimalnya  yaitu  dosis  STSA  75:25  dengan  persentase  daya hipoglikemik  sebesar  23%.  Kombinasi  ekstrak  etanol  daun  stevia  dan  daun  sambiloto  lebih  efektif menurunkan kadar glukosa darah dibandingkan dengan pemberian secara tunggal.
Kata kunci : Antidiabetes, Daun Stevia, Daun Sambiloto, Ekstrak Etanol

## I. PENDAHULUAN
Diabetes mellitus (DM) merupakan salah satu  penyakit  tidak  menular  yang  menjadi masalah  kesehatan  masyarakat  dunia  dengan prevalensi  yang  meningkat  setiap  tahunnya. Secara  global,  prevalensi  DM  pada  orang dewasa  di  tahun  2010  mencapai  angka  6,4% dan  diperkirakan  pada  tahun  2030  akan
meningkat  menjadi  7,7%.  Antara  2010  dan 2030  akan  terjadi  peningkatan  69%  di  negara berkembang dan 20% di negara maju (Shaw et al,  2010).  Di  Indonesia,  prevalensi  diabetes DM tipe 2 tercatat sebanyak 4,6% pada tahun 2007 dan diperkirakan prevalensi akan meningkat  mencapai  6,0%  pada  tahun  2030 (Widyahening dan Soewondo, 2012).
Diabetes Melitus mengakibatkan glukosa  dalam  darah  tidak  terkontrol  sehingga terjadi  hiperglikemia.  Hiperglikemia  dalam darah
akan menyebabkan terjadinya autooksidasi glukosa, glikasi
protein
nonenzimatik  dan  mempercepat  terjadinya senyawa  oksigen  reaktif  (ROS)  (Setiawan  & Suhartono,  2005).  Salah  satu  tanda  dari penyakit diabetes melitus (DM) yaitu hiperglikemi  yang  sampai  sekarang  masih diderita oleh masyarakat di Indonesia. Hiperglikemia  juga  terlibat  dalam  proses pembentukan  radikal  bebas.  Radikal  bebas dapat  menjadi  faktor  penyebab  berbagai macam  penyakit  misalnya,  kanker,  jantung koroner,  arterosklerosis,  dan  penuaan  dini. Tingginya  kadar  glukosa  di  dalam  tubuh  juga menjadi  faktor  meningkatnya  radikal  bebas didalam  tubuh.  Oleh  sebab  itu  tubuh  kita memerlukan  suatu  substansi  penting,  yakni antioksidan  yang  dapat  membantu  melindungi tubuh  dari  serangan  radikal  bebas  dan meredam dampak negatifnya (Winarsih, 2003).
Salah  satu  obat  diabetik  oral  yang banyak  dipakai  dalam  terapi  Diabetes  Mellitus adalah  glibenklamid  yang  merupakan  suatu derivat  sulfonilurea.  Glibenklamid  bekerja dengan  merangsang  sekresi  insulin  oleh  sel beta  pankreas  (Handoko  &  Suharto,  2005). Para ahli mengembangkan sistem pengobatan tradisional  untuk  diabetes  melitus  yang  relatif aman  karena  obat  tradisional  bekerja  dengan beberapa kandungan senyawa yang memberikan keseimbangan dalam tubuh.
Ekstrak daun stevia (Stevia rebaudiana) merupakan  salah  satu  bahan  pemanis  alami rendah  kalori  yang  berasal  dari  tumbuhan (Abou-arab  AE  et  al,  2010).  Daun  stevia mengandung  steviosida  yang  merupakan komponen utama pemberi rasa manis. Kandungannya  antara  4 –20  %  dari  berat kering  daun  stevia  (tergantung  dari  kondisi penanaman dan pertumbuhannya) (Goyal dkk, 2010).  Penelitian  efek  ekstrak  etanol  daun stevia  terhadap  penurunan  kadar  gula  darah secara  dosis  tunggal  pernah  dilakukan  oleh Fathimah (2012). Hasil penelitian menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  daun  stevia  berpotensi menurunkan kadar gula darah pada dosis 100 mg/kgBB tikus.
Tanaman sambiloto (Andrographis
paniculata Nees ) merupakan  salah  satu tanaman yang  digunakan sebagai obat tradisional. Ekstrak sambiloto telah lama diteliti dan  digunakan  secara  tradisional  sebagai obat,  salah  satunya    untuk  menurunkan  kadar gula darah. Daun sambiloto memiliki kandungan
kimia diantaranya
deoksiandrografolid,
andrografolid, noeandrografolid,  12  didehidroandrografolid , dan homoandrografolid (Hariana, 2006).
Penelitian efek ekstrak daun sambiloto terhadap  penurunan  kadar  gula  darah  secara dosis  tunggal  pernah  dilakukan  oleh  Rosnaeni dkk  (2010).  Hasil  penelitian  menunjukkan ekstrak  etanol  daun  sambiloto  dosis  20,5 mg/kgBB tikus berefek menurunkan kadar gula darah.
Penelitian  tentang  ekstrak  etanol  daun stevia  dan  daun  sambiloto    pada  tikus  jantan galur  wistar  yang  diinduksi  aloksan  sudah diteliti  secara  dosis  tunggal,  tetapi  untuk penelitian  tentang  kombinasi  keduanya  belum pernah  dilakukan.  Berdasarkan  latar  belakang tersebut,  maka  dilakukan  penelitian  uji  efek antidiabetik  kombinasi  ekstrak  etanol  daun stevia  dan  daun  sambiloto  pada  tikus  jantan galur wistar yang diinduksi aloksan.

## II. METODE PENELITIAN
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  adalah Timbangan  analitik,  mortir  dan  stamfer, ayakan, beaker glass, batang pengaduk, rotary evaporator,  waterbath,  cawan  porselin,  gelas ukur,  pipa  kapiler,  tabung  reaksi,  Spuit,  Labu ukur,  mikrometer  pipet,  pipet  tetes,  tabung reaksi,  allumunium  foil,  spektrofotometer, kapas,  sarung  tangan,  masker,  kandang hewan  uji,  nampan,  kompor,  alat  sentrifuge, inkubator,  daun  stevia (Stevia  rebaudiana Bert. ) ,  daun  sambiloto (Andrographis  folium), tikus jantan berat 100 – 200 gram galur wistar, aloksan,  glibenklamid,  CMC-Na.,  etanol  70%, aquadest, reagen GOD-PAP, pakan hewan uji. Daun stevia dan daun sambiloto didapat selanjutnya  daun  stevia  dan  daun  sambiloto masing-masing  dikeringkan  kemudian  daun stevia  dan  daun  sambiloto  yang  sudah  kering masing-masing  dihaluskan  dan  ditimbang sebanyak  500  g.  Sebanyak  500  g  masing- masing  serbuk  kering  daun  dan  daun sambiloto
masing-masing diekstraksi menggunakan  etanol  70%  dengan  metode maserasi.  Setelah  didapatkan  ekstrak  etanol, kemudian  dipekatkan  diatas  rotary  evaporator dan  dilanjutkan  menggunakan  waterbath. Selanjutnya dihitung randemen masing-masing ekstrak yang diperoleh.
Metode menggunakan uji efek antidiabetes  tipe  II  yang  diinduksi  aloksan pada  tikus  putih  jantan  galur  wistar  (100-200 gram) sebanyak 40 ekor dibagi dalam delapan kelompok. Kelompok I (normal) diberi aquades,  kelompok  II  (kontrol  negatif)  diberi CMC-Na,  kelompok  III  (kontrol  positif)  diberi glibenklamid,  kelompok  IV  (SA  100)  diberi
dosis  ekstrak  etanol  daun  sambiloto  100%, kelompok  V  (ST  100)  diberi  dosis  ekstrak etanol  daun  stevia  100%,  kelompok  VI  (STSA 75:25)  diberi  dosis  kombinasi  ekstrak  etanol daun  stevia  dan  daun  sambiloto  dengan perbandingan  75%:25%,  kelompok  VII  (STSA 50:50)  diberi  dosis  kombinasi  ekstrak  etanol daun  stevia  dan  daun  sambiloto  dengan perbandingan  50%:50%  dan  kelompok  VIII (STSA  25:75)  diberi  dosis  kombinasi  ekstrak etanol daun stevia dan daun sambiloto dengan perbandingan 25%:75%.
Semua  kelompok  hewan  uji  dinduksi dengan aloksan 175mg/kgBB kecuali kelompok 1 (kontrol normal) secara intraperitoneal  pada  hari  ke-0,  dilanjutkan dengan  perlakuan  hewan  uji  dari  hari  ke-1 sampai  hari  ke-14  (Yasmiwar  dkk,  2016). Pengambilan  sampel  darah  untuk  mengukur kadar  glukosa  darah  dilakuan  pada  hari  ke-0 (sebelum  induksi  aloksan),  ke-7  dan  ke-14. Pengambilan darah
dilakukan dengan menggunakan  pipa  kapiler  pada  vena  mata tikus.  Sampel  darah  diukur  menggunakan metode  GOD-PAP  untuk  dianalisa  kadar glukosa darah.

## III. HASIL
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  stevia dan  daun  sambiloto  dilakukan  dengan  teknik maserasi  Maserasi  dilakukan  dengan  cara perendaman sampel dalam larutan etanol 70% sebanyak 7,5 kali dari bobot sampel. Maserasi dilakukan  selama  7  hari  dan  dilakukan pengadukan  setiap  hari.  Hasil  dari  proses ekstraksi  diperoleh  randemen  ekstrak  etanol daun  stevia  sebanyak  9,76%  dan  randemen ekstrak  etanol  daun  sambiloto  sebanyak 9,76%.
Perlakuan  pada  hewan  uji  dilakukan selama  14  hari  untuk  semua  kelompok.  Hasil dari pengujian kadar glukosa darah dari hari ke nol sampai hari ke 14 seperti pada gambar 1.
Gambar  1.  Grafik  kadar  glukosa  darah  (mg/dl) hewan uji masing-masing kelompok perlakuan.
Pada  hari  ke  0  sampai  ke  7  semua kelompok  mengalami  kenaikan  kadar  glukosa
darah  terutama  untuk  kelompok  negatif mengalami  kenaikan  yang  paling  tinggi. Sedangkan  pada  hari  ke  7  sampai  ke  14 semua kelompok mengalami penurunan kadar glukosa  darah  kecuali  untuk  kelompok  negatif tetap  mengalami  kenaikan  kadar  glukosa darah.  Kelompok  negatif  tidak  diberikan perlakuan obat tetapi hanya diberikan CMC-Na yang  tidak  memiliki  efek  pengobatan.  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  efek  pemberian aloksan  yang  dapat  meningkatkan  kadar  gula darah.Selanjutnya  data  yang  didapat  dihitung nilai AUC, hasilnya sebagai berikut :
Gambar  2.  Data  AUC  masing-masing  kelompok uji setelah dilakukan perlakuan.
Nilai  AUC  menunjukkan  kandungan kadar  glukosa  dalam  darah,  jika  nilai  AUC tinggi  maka  kandungan  glukosa  dalam  darah juga  besar.  Dari  data  tersebut  dapat  dilihat bahwa  kontrol  negatif  mempunyai  nilai  AUC paling  tinggi  (p<0,05).  Hal  ini  menunjukkan pada  kelompok  kontrol  negatif  mempunyai kadar  glukosa  darah  terbesar.  Jika  dilihat dalam data diatas kelompok kontrol positif dan semua perlakuan menunjukkan nilai AUC lebih kecil  dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol negatif  (p<0,05)  artinya  ada  efek  penurunan glukosa darah.
Gambar  3.  Data  rata-rata  daya  hipoglikemik  (%) masing-masing kelompok perlakuan.
Persentase daya hipoglikemik
menunjukkan adanya kemampuan untuk menurunkan kadar glukosa darah dalam suatu penelitian.  Semakin  besar  persentase  daya hipoglikemik maka semakin besar pula kemampuan untuk menurunkan glukosa darah. Dari  data  tersebut  dapat  dilihat  untuk  %DH yang paling  tinggi  yaitu kelompok STSA 75:25 sebesar  23%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa pemberian  kombinasi  ekstrak  etanol  daun stevia  dan  daun  sambiloto  lebih  efektif menurunkan  kadar  glukosa  darah  pada  tikus jantan  galur  wistar  yang  diinduksi  aloksan daripada pemberian secara tunggalnya.

## IV. PEMBAHASAN
Dalam  penelitian  ini  digunakan  daun stevia  dan  daun  sambiloto.  Daun  stevia  dan sambiloto  yang  didapat  kemudian  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan.  Pengeringan bertujuan  untuk  menurunkan  kadar  air  dalam sampel, mencegah
tumbuhnya
mikroorganisme  (jamur),  dan  menghentikan proses enzimatik yang dapat memicu pembusukan  sampel.  Kadar  air  yang  baik adalah  kurang  dari  10%  (Winarno,  1997).  Hal tersebut  dimaksudkan  agar  simplisia  tidak ditumbuhi  jamur  sehingga  dapat  disimpan dalam jangka waktu yang cukup lama. Sampel dikeringkan dengan cara diangin-anginkan dan dihindari  pengeringan  terpapar  sinar  matahari langsung  dengan  tujuan  mencegah  kerusakan kandungan  metabolit  terutama  andrografolida dan steviosida dalam sampel. Proses elanjutnya adalah sortasi kering yang dilakukan  untuk  memisahkan  bagian  yang tidak  diinginkan  atau  ada  cemaran.  Proses selanjutnya dilakukan pengecilan ukuran sampel  menggunakan  alat  blender  berfungsi untuk  memperluas  area  kontak  antara  sampel dengan  pelarut  pada  saat  proses  ekstraksi, sehingga  hasil  yang  didapat  lebih  maksimal. Semakin  luas  bidang  kontak  antara  bahan dengan  pelarutnya, maka dapat meningkatkan efektivitas  ekstraksi.  Setelah  dilakukan  proses pengecilan ukuran  selanjutnya ditimbang masing-masing  sebanyak  500  g  serbuk  kering sampel untuk dilakukan proses ekstraksi.
Ekstraksi  dimaksudkan  untuk  menarik senyawa metabolit sekunder dari sampel, serta menghilangkan  zat-zat  pengotor  yang  tidak dikehendaki  dalam  sampel.  Ekstraksi  sampel dilakukan  dengan  metode  maserasi  karena prosesnya  yang  cukup  sederhana,  banyak digunakan serta tidak memerlukan pemanasan
yang  dapat  merusak  kandungan  metabolit terutama  andrografolida  dan  steviosida  dalam sampel.  Maserasi  dilakukan  dengan  cara perendaman sampel dalam larutan etanol 70% sebanyak 7,5 kali dari bobot sampel. Pemilihan cairan  penyari  harus  memenuhi  beberapa kriteria  antara  lain  murah  dan  mudah diperoleh,  stabil  secara  fisika  dan  kimia, bereaksi  netral,  selektif,  tidak  mempengaruhi zat  yang  berkhasiat,  dan  yang  diperbolehkan dalam  peraturan.  Etanol  70%  dipilih  karena lebih bersifat universal untuk menarik senyawa target  yang  ingin  diambil  dari  daun  stevia  dan daun sambiloto yaitu steviosida dan andrografolid.  Maserasi  dilakukan  selama  7 hari  dan  dilakukan  pengadukan  setiap  hari untuk  menjaga  agar  pelarut  yang  digunakan tidak  mengalami  kejenuhan,  sehingga  hasil yang tersari lebih maksimal.
Maserat  diperoleh  pada  hari  ke-7 dengan cara menyaring hasil maserasi menggunakan kain flanel. Selanjutnya
dikentalkan dengan menggunakan rotary evaporator  dan  dilanjutkan  dengan  waterbath hingga  diperoleh  ekstrak  etanol  daun  stevia kental  dengan  randemen  9,76%  dan  ekstrak etanol daun sambiloto kental dengan randemen 9,76%.
Penelitian  ini  menggunakan  metode pengujian  efek  antidiabetes  tipe  II.  Hewan  uji berupa  tikus  jantan  galur  wistar  dengan  berat 100-200  g  yang  diinduksi  menggunakan aloksan  dengan  dosis  175  mg/KgBB  hingga kadar  glukosa  darah  mencapai  kadar  glukosa darah diabetes.
Untuk  mengetahui  kadar  gula  darah dilakukan  pengambilan  sampel  darah  pada hari ke-0, ke-7 dan ke-14. Sampel darah  yang didapat  kemudian  diukur  kadar  glukosanya menggunakan  metode  GOD-PAP.  Prinsip pemeriksaan dalam metode ini adalah glucose oxidase  mengkatalisis  reaksi  oksidasi  glukosa menjadi asam glukonat dan hidrogen peroksida.  Hidrogen  peroksida  yang  terbentuk bereaksi dengan phenol dan 4-amino phenazone
dengan bantuan enzim peroksidase  menghasilkan  quinoneimine  yang berwarna  merah  muda  dan  dapat  diukur dengan panjang gelombang 546 nm. Intensitas warna  yang  terbentuk  setara  dengan  kadar glukosa  darah  yang  terdapat  dalam  sampel (Baroroh et al , 2011).
Berdasarkan  data  tersebut  dapat  dilihat kelompok  positif  mengalami  kenaikan  kadar glukosa darah hari ke-7 tetapi terjadi penurunan  pada  hari  ke-14,  hal  tersebut disebabkan  karena  pemberian  glibenklamid dengan  dosis  1,26  mg/KgBB.  Glibenklamid
merupakan  Obat  Hipoglikemik  Oral  (OHO) golongan sulfonilurea. Mekanisme kerja glibenklamid yaitu merangsang sekresi hormon insulin  dari  ganul  sel-sel β  Langerhans pankreas.  Interaksinya  dengan  ATP- sensitive K  channel  pada  membran  sel –  sel  β menimbulkan depolarisasi membran dan keadaan ini akan membuka kanal Ca. Dengan terbentuknya  kanal  Ca,  maka  ion  Ca  ²+  akan masuk  ke  dalam  sel  β  kemudian  merangsang granula  yang  berisi  insulin  dan  akan  terjadi sekresi insulin.
Data  AUC  menunjukkan  besarnya  AUC yang  berbeda-beda  selama  14  hari  karena pengaruh perlakuan yang berbeda pada setiap kelompok.  Dari  data  diatas  kontrol  negatif memiliki  nilai  AUC  terbesar  sedangkan  kontrol positif  menunjukkan  nilai  AUC  terkecil.  Nilai AUC  menunjukkan  kandungan  kadar  glukosa dalam  darah,  jika  nilai  AUC  tinggi  maka kandungan  glukosa  dalam  darah  juga  besar. Nilai  AUC  berbanding  terbalik  dengan  persen daya hipoglikemik dari suatu zat/obat. Semakin kecil  nilai  AUC,  maka  semakin  besar  persen daya hipoglikemia suatu obat.
Histogram  diatas,  daya  hipoglikemik tertinggi (33%) dimiliki oleh kontrol positif.  Dari kelima  kelompok  yang  memiliki  persentase daya  hipoglikemik  tertinggi  yaitu  kelompok STSA  75:25  sebesar  23%,  kemudian  diikuti kelompok  STSA  50:50  sebesar  21%,  diikuti kelompok  STSA  25:75  yaitu  sebesar  20%, diikuti  kelompok  ST  100  sebesar  19%  dan persentase  terendah  pada  kelompok  SA  100 sebesar  18%.  Persentase  daya  hipoglikemik menunjukkan adanya kemampuan untuk menurunkan kadar glukosa darah dalam suatu penelitian.  Semakin  besar  persentase  daya hipoglikemik maka semakin besar pula kemampuan untuk menurunkan glukosa darah.
Data  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa pemberian kombinasi ekstrak daun stevia  dan daun sambiloto lebih efektif menurunkan kadar glukosa darah dibandingkan dengan pemberian  secara  tunggal  dengan  persentase daya  hipoglikemik  tertinggi  yaitu  kelompok STSA 75:25.
Bila  dilihat  dari  semua  dosis  yang mempunyai  efek  mendekati  dengan  kelompok positif  yaitu  STSA  75:25  yang  memberikan penurunan  kadar  glukosa  darah  tertinggi sebesar  23%  dengan  dosis  75  mg/KgBB ekstrak  etanol  daun  stevia  dan  5,1  mg/kgBB ekstrak  daun  sambiloto.  Bila  dikonversikan  ke dosis pemberian manusia  dosis ekstrak etanol daun stevia menjadi 840 mg dan dosis ekstrak etanol daun sambiloto menjadi 57,12 sehingga untuk  dosis  kombinasinya  menjadi  897,12  mg
setara  dengan  pemberian  dua  kali  sehari  dua kapsul  dengan  berat  per  kapsul  500  mg. Sehingga  dengan  ini  ekstrak  etanol  daun sambiloto  dan  daun  stevia  dapat  dilanjutkan dengan  pembuatan  formulasi  herbal  dengan penambahan  bahan  pengisi  yang  kemudian dibuat sediaan kapsul.
Ekstrak daun stevia dan sambiloto dapat menurunkan kadar glukosa darah karena daun stevia  mengandung  steviosida  dan  daun sambiloto mengandung andrografolida.
Beberapa  penelitian  menunjukkan  secara  in vivo  andrografolida  dan  steviosida  dapat menurunkan  glukosa  darah  pada  tikus  jantan galur wistar yang diinduksi aloksan. Mekanisme  kerja  dari  stevia  dengan  zat  yang disebut  diterpen  glikosida  steviosida  dan steviol  dapat  menstimulasi  sekresi  insulin melalui  aksi  langsung  pada  sel  beta  pankreas dan  dapat  memperbaiki  kerusakan  pada  sel beta  pankreas  yang  apabila  tidak  diperbaiki dapat  memberikan  efek  penurunan  insulin yang lebih jauh (Subroto, 2006).
Sambiloto mengandung zat aktif andrografolid  yang  dapat  menurunkan  kadar glukosa  darah.  Dari  uraian  ini  dinyatakan  ada mekanisme  kerja  sebagai  anti  diabetes.  Ada beberapa  dugaan  mekanisme  kerja  sambiloto menghambat  glukoneogenesis  (Zhang  X.F et al , 2000) menghambat alfa gukosidase di usus (Borhanuddin M, 1994; Husen dkk, 2004).

## V. SIMPULAN
Pemberian  kombinasi  ekstrak  etanol daun  stevia  dan  daun  sambiloto  lebih  efektif dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah  pada tikus jantan galur wistar yang diinduksi aloksan daripada  pemberian  secara  tunggal.  Dosis optimal  dari  kombinasi  ekstrak  etanol  daun stevia  dan  daun  sambiloto  yang  dapat menurunkan  kadar glukosa  darah tikus diabetes  melitus  yang  diinduksi  aloksan  yaitu 75%  :  25%  setara  dengan  dosis  75  mg/KgBB ekstrak  daun  stevia  dan  5,1  mg/kgBB  ekstrak daun sambiloto.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kemenristek  Dikti  melalui  Simbelmawa atas Program Kreatifitas Mahasiswa Penelitian Eksakta Tahun Pelaksanaan 2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Abou-Arab,  A.  E,  Abou-Arab,  A.  A.  dan  Abu- Salem,  M.  F.  2010.  Physico-Chemical Assessment  of  Natural  Sweeteners Steviosides  Produced From Stevia Rebaudiana Bertoni Plant . African Journal of Food Science ;4:269-281.
Baroroh, F., Aznam, N., dan Susanti, H. 2011. Uji Efek Antihiperglikemik Ekstrak Etanol Daun  Kacapiring (Gardenia  augusta
Merr ) Pada  Tikus  Jantan  Galur  Wistar Yang Diinduksi Glukosa. Jurnal
Kesehatan Masyarakat. Indonesia, 7(1) : 43-50
Borhanuddin,  M.,  Shamsuzzoha,  M.  dan Hussain,  A.  H.  .1994. Hypoglycaemic effects of Andrographis  paniculata  Nees on non-diabetic
rabbits. Bangladesh  Med  Res  Counc Bull, 20, 24-6.
Fathimah,  S.  2012.  Perbedaan  Efek  Ekstrak Etanol  Stevia  ( Stevia  rebaudiana Bert) dibandingka  Madu  terhadap  Perubahan Kadar  Glukosa  Darah  Tikus  Wistar Model  Diabetik. SKRIPSI .  Surakarta  : UNS Goyal,  S.K.  Samsher  and  Goyal.  R.  K.  2010. Stevia (Stevia  rebaudiana) a  bio- sweetener: a review International Journal  of  Food  Sciences  and  Nutrition, 61(1): 1 –10 Handoko dan Suharto. 2005. Insulin, Glukagon dan
Antidiabetik
Oral. dalam : Farmakologi  dan  Terapi  edisi  4.  Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia
Hariana,  A.  2006. Tumbuhan  obat  dan khasiatnya .  Penebar  Swadaya  :  Jakarta Hlm 73-74 Husen,  R.,  Pihie,  A.  H.  &  Nallappan,  M. 2004. Screening for
antihyperglycaemic activity  in  several  local  herbs  of Malaysia. J Ethnopharmacol , 95, 205-8. Rosnaeni,  Hana  R,  dan  Sarah  K.  2010.  Effek
Ekstrak Etanol
Daun
Sambiloto ( Andrographis  folium )  Terhadap  Kadar Glukosa  Darah  Mencit  Jantan  Galur Swiss  Webster  yang  Diinduksi  Aloksan dan  Perbandingannya  Terhadap  Jamu D. Jurnal  Medika  Plant. Bandung  : Universitas Kristen Maranatha. Setiawan  B,  Suhartono  E.  2005. Stres Oksidatif  dan  Peran  Antioksidan  pada Diabetes Melitus . Kedokteran Indonesia; 62 Subroto . 2006. Ramuan Herbal untuk Diabetes Melitus . Penebar Swadaya. Yogyakarta. Widyahening  IS,  Soewondo  P.  2012. Capacity for  Management  of  Type  2  Diabetes Mellitus  (T2  DM)  in  Primary  Health
Centers in
Indonesia. Journal Indonesian Medical Association ;62 Winarno,  F.G.  1997. Kimia  Pangan  dan  Gizi . Gramedia; Jakarta.
Winarsih.,H., 2003, Pembentukan Senya
Oksigen  Reaktif  dan  Radikal  Bebas ,
Yogyakarta: Kansius.
Yasmiwar S, Ahmad  Muhtadi,  Moelyono Moektiwardoyo,  Putri  Churnia  Arifin 2016. Aktivitas  Antidiabetes  Ektrak Etanol Daun Iler ( Plectranhtus scutellarioide (L)  )  Pada  Tikus  Putih
Galur  Wistar  Dengan  Metode  Induksi Aloksan. Jurnal Farmaka Vol  14.  2 Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran. Sumedang Zhang,  X.  F.  &  Tan,  B.  K.  2000.  Anti-diabetic property of ethanolic extract of Andrographis paniculata in streptozotocin-diabetic rats. Acta
Pharmacol Sin, 21, 1157-64.