## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI YANG TERDAPAT PADA SALURAN
PENCERNAAN IKAN GURAMI ( Osphronemus gouramy ) DENGAN PEMBERIAN PAKAN KOMERSIL YANG BERBEDA
ISOLATION AND IDENTIFICATION OF BACTERIAL IN THE DIGESTIVE ORGAN OF GURAMI FISH ( Osphronemus gouramy ) WITH DIFFERENT COMMERCIAL FEED
Franch Dalahi, Sri Subekti dan Agustono
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Based on the food habits, gurami is omnivorous fish that feed herbivorous carp tend consists of natural food and artificial feed (pellets). The feed is needed to support the growth and survival of Gurami. If feed is given in accordance with the eating habits of Gurami and contain high nutritional Gurami can then  growth  accelerated  faster.  Some  types  of  bacteria  found  in  the  digestive  tract  of  animals  has  an important  role  in  order  to  improve  feed  utilization,  fish  health,  and  environmental  quality  improvement and microorganisms. In addition, some bacterial flora in the gastrointestinal tract plays an important role and produce several types of enzymes in the digestive tract may contribute to the metabolism of the host.
The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  bacteria  in  the  digestive  tract  of  Gurami (Osphronemus  gouramy)  were given  three different types  of commercial  feed. This study begins  with a sampling  of  Gurami  (Oshpronemus  gouramy)  of  maintenance  in  the  Faculty  of  Fisheries  and  Marine  at Airlangga University in Surabaya and then do stage isolation and identification of bacteria in laboratory bacteria  and  Microbiology,  Faculty  of  Veterinary  Medicine,  Airlangga  University  Surabaya.  This  study was conducted in July 2013. This research is a descriptive study, the method of  solving the problem by describing the subject matter into a form that is easy to understand and based on facts.
Results of research on gurami fish that given by three different types of commercial feed, there are two types of bacteria that dominate in the digestive tract of carp, the Pseudomonas sp. and Serratia sp. Both types of bacteria has the potential to help the digestive system of gurami fish.
The  result  of  this  research  are  need  for  further  research  using  the  bacterium Pseudomonas sp. and Serratia sp. as probiotics.
Keywords : Gurami, Identification, Isolation, Digestive Organ, Pseudomonas sp., Serratia sp.

## Pendahuluan
Ikan  gurami  ( Osphronemus  gouramy ) merupakan  salah  satu  komoditas  unggulan  ikan air  tawar  yang  mudah  dibudidayakan  serta mempunyai nilai  ekonomis yang  tinggi. Perikanan  budidaya,  khususnya  ikan  gurami, selain  berperan  dalam  pemenuhan  kebutuhan gizi masyarakat, peningkatan pendapatan petani dan  negara,  juga  penting  dalam  perluasan kesempatan kerja dan pertumbuhan agroindustri (Mahyuddin, 2009).
Tillman et  al .  (1998)  menyatakan bahwa faktor-faktor yang mempengaruhi kecernaan  pakan  antara  lain  komposisi  pakan dan jumlah pakan yang diberikan.Pakan gurami terdiri  dari  pakan  alami  dan  pakan  buatan (pellet).  Pakan  tersebut  dibutuhkan  untuk menunjang  pertumbuhan  dan  kelangsungan hidup  ikan  gurami.  Jika  pakan  yang  diberikan sesuai  dengan  kebiasaan  makan  gurami  dan mengandung gizi yang tinggi maka
pertumbuhan  ikan  gurami  dapat  terpacu  lebih cepat.
Beberapa  jenis  bakteri  yang  terdapat dalam  saluran  pencernaan  hewan  memiliki peran  penting  dalam  rangka  meningkatkan pemanfaatan  pakan,  kesehatan  ikan,  dan perbaikan
mutu
lingkungan dan mikroorganisme  (Watson et  al. 2008).  Selain itu,  beberapa  bakteri  flora  pada  saluran pencernaan  memainkan  peran  yang  cukup penting dan menghasilkan beberapa jenis enzim dalam  saluran  pencernaan  yang  kemungkinan turut berperan dalam metabolisme inang.
Pelczar dan
Chan
(1988)
mengemukakan  bahwa  bakteri  asli  saluran pencernaan  mempunyai  hubungan  mutualisme dengan  inangnya,  yaitu  memanfaatkan  inang sebagai  tempat  hidupnya.  Keuntungan  bagi inang  adalah  umumnya  bakteri  memakan  sisa atau  menggunakan  bahan  buangan,  banyak bakteri usus dapat mensintesis vitamin,
mensekresi  enzim,  dan  membantu  pencernaan nutrien,  dan  kehadiran  bakteri  asli  cenderung menekan pertumbuhan bakteri patogen sehingga dapat  melindungi  inang  terhadap  penyakit  serta merangsang fungsi kekebalan tubuh.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  bakteri  dalam  saluran  pencernaan ikan  gurami  ( Osphronemus  gouramy )  yang diberi tiga jenis pakan komersial  yang berbeda. Hasil  dari  penelitian  ini  diharapkan  dapat memberikan  informasi  tentang  bakteri  dalam saluran  pencernaan  ikan  gurami  ( Osphronemus gouramy ) yang diberi tiga jenis pakan komersial yang berbeda.

## Materi dan Metode
Penelitian ini dimulai dengan pengambilan  sampel  gurami  ( Oshpronemus gouramy )  dari  pemeliharaan  di  Fakultas Perikanan dan Kelautan di Universitas Airlangga  Surabaya  kemudian  dilakukan  tahap isolasi  dan  identifikasi  bakteri  di  Laboratorium Bakteri  dan  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya. Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Juli
2013.
Alat-alat  yang  digunakan  untuk  isolasi dan  identifikasi  antara  lain,    inkubator, autoclave,  pipet,  erlenmeyer, alumunium  foil , pembakar  Bunsen,  cawan  Petri,  neraca  dengan ketelitian  0,1  g,  gelas  ukur,  kapas,  mikroskop binokuler, gelas objek, jarum ose.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah organ pencernaan lambung, usus  halus,  usus  besar,  ikan  gurami  yang  di ambil  dari  pemeliharaan  di  Fakultas  Perikanan dan Kelautan di Universitas Airlangga Surabaya, media agar NA ( Natrium Agar ), SCA ( Simmon’s  Citrate  Agar ),  TSI  ( Triple  Sugar Iron ) agar,bahan untuk uji gula (glukosa,manitol,  maltose,  sukrosa,  laktosa), bahan untuk uji pewarnaan Gram (crystal violet, lugol  iodine,  safranin,  etil  alkohol  95%,  dan aquades), NaCl fisiologis dan imersi.
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian deskriptif,  yaitu  metode  pemecahan  masalah dengan menggambarkan obyek permasalahan ke dalam suatu bentuk yang mudah dimengerti dan berdasarkan  fakta  –  fakta  yang  ada  (Rosidi, 2005).
Sumber  inokulan  didapatkan  dari saluran pencernaan gurami dari pemeliharaan di Fakultas Perikanan dan  Kelautan di Universitas Airlangga  Surabaya  dengan  cara  mengeluarkan saluran pencernaan gurami  yaitu lambung, usus halus,  dan  usus  besar.  Saluran  pencernaan ditimbang  kemudian  digerus.  Setiap  1g  saluran
pencernaan  diencerkan  dengan  9  ml  larutan fisiologis  (NaCl  0,85%)  pada  pH  yang  sesuai dengan pH dalam saluran pencernaan gurami 7, dengan  tujuan  hanya  bakteri  yang  membantu pencernaan yang dapat tumbuh dan berkembang pada  pH  tersebut.  Sampel  hasil  pengenceran kemudian  ditumbuhkan  pada  media  agar  NA. Selanjutnya  isolat  diinkubasi  selama  24  jam dalam  inkubator  pada  suhu  35 o C.  Pada  hari berikutnya  dilihat  pertumbuhannya  dan  dipilih satu  koloni  yang  dominan  dan  letaknya  yang berjauhan dengan koloni lainnya untuk ditanam kembali  pada  media  NA  sampai  beberapa  kali ulangan  minimal  tiga  kali  ulangan,  kemudian ditemukan isolat murni
Metode identifikasi bakteri yang
dilakukan  adalah  dengan  cara  konvensional, dengan  membandingkan  bakteri  yang  sedang diidentifikasi dengan bakteri yang telah teridentifikasi  sebelumnya.  Bila  tidak  terdapat bakteri  yang  ciri-cirinya  100%  serupa,  maka dilakukan  pendekatan  terhadap  bakteri  yang memiliki ciri-ciri yang paling menyerupai. Hasil uji dalam identifikasi dibandingkan dengan ciri- ciri  bakteri  yang  diuraikan  oleh  Cowan  and Steel’s (1974). Serangkaian uji yang digunakan dalam identifikasi bakteri  meliputi pemeriksaan morfologi,  pewarnaan  gram,  dan  uji  biokimia antara  lain  :  uji  O/F,  uji  SCA,  uji  katalase,  uji motilitas,  produksi  indol,  uji  TSIA  dan  uji  gula (Beisher, 1991 dalam Kusdarwati dan Sudarno, 2011).

## Hasil dan Pembahasan
Secara  alamiah,  mikroba  terdapat dalam  bentuk  campuran  dari  berbagai  jenis. Untuk mempelajari sifat pertumbuhan, morfologi  dan  sifat  fisiologis  mikroba,  maka masing-masing mikroba tersebut harus dipisahkan  satu  dengan  yang  laimya,  sehingga terbentuk kultur murni, yaitu suatu biakan yang terdiri  dari  sel-sel  satu  spesies  atau  satu  galur mikroba  (Fardiaz  1989).  Setiap  koloni  yang tumbuh  secara  dominan  dari  setiap  sampel pencernaan ikan gurami diambil dan ditumbuhkan  kembali  pada  media  NA  untuk digunakan pada tahap identifikasi.
Pengamatan  ciri-ciri  tersebut,  dibandingkan dengan  ciri-ciri  bakteri  yang  diuraikan  oleh Cowan and Steel’s Manual for the Identification of Medical Bacteria . Berdasarkan dari
serangkaian pengamatan koloni bakteri, pewarnaan  Gram,  dan  uji  biokimia  didapatkan bakteri sebagai berikut:
Bakteri  yang  mendekati  genus  ini mempunyai  ciri-ciri  morfologi  yaitu:  warna koloni  agak  kekuningan,  termasuk  bersifat Gram  negatif,  dan  dalam  kelompok  sel
berbentuk  batang  dan  lurus  dengan  ukuran  0,5- 1,0 x 1,5-5,0 μm. Bersifat fakultatif, uji katalase positif, motil, suhu optimum  pertumbuhan pada 30-37 0 C  dan  tumbuh  baik  pada  NaCl  3-7%. Bakteri Pseudomonas sp.  ada  yang  bersifat patogen  dan  ada  yang  bersifat  menguntungkan bagi organisme lain. Effendi (2002) mengemukakan  bahwa  bakteri  dari  genus Pseudomonas sp  dari  spesies Pseudomonas bromoutilis ini  memproduksi  antibiotic  2,  3,  4 tribromo-5  (I,  hidroksi-2,  4,-dibromophenil)- pyrole. Zat ini bersifat menghambat perkembangan bakteri patogen seperti:
Staphylococcus
aureus , Streptococcus
pneumonia, Streptococcus pyogenes, dan Microbacterium tubercolosis . Serratia sp.  adalah  jenis  bakteri  Gram negatif,  dari  family  Enterobactericeae.  Bakteri ini berbentuk batang pendek dengan ukuran 0,5- 0,8  x  1,5-5,0  μm.  Uji  katalase  positif,  motil, suhu  optimum  pertumbuhan  pada  30-37 0 C. Bakteri  ini merupakan bakteri  fakultatif anaerobik  yang  tidak  terlalu  membutuhkan oksigen. Serratia marcescens dapat menghasilkan  beberapa  enzim  hidrolitik  seperti protease,  kitinase,  nuclease,  dan  lipase  (Flyg et al., 1983).  Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  oleh  Flyg  pada  tahun  1983  di
Universitas  Stockholm,  strain S.  marcescens
Tabel 1. Identifikasi pada lambung. Jenis Pengujian P1 P2 P3 Koloni: Warna Bentuk elevasi Motilitas Memproduksi: Indol Katalase O/F TSIA SCA UJI GULA: Glukosa Manitol Maltosa Sukrosa Laktosa Putih kekuningan Cembung + - + - K/K;-;- + - - - - - Krem Cembung + - + O A/A;-;- + + + + + +
Putih kekuningan Cembung
+ - + - K/K;-;- + - - - - - Tabel 2. Identifikasi pada usus halus Jenis Pengujian P1 P2 P3 Koloni: Warna Bentuk elevasi Motilitas Memproduksi: Indol Katalase O/F TSIA SCA UJI GULA: Glukosa Manitol Maltosa Sukrosa Laktosa Putih kekuningan Cembung + - + - K/K;-;- + - - - - - Putih kekuningan Cembung + - + - K/K;-;- + - - - - - Putih kekuningan Cembung + - + - K/K;-;- + - - - - -
yang  diisolasi  dari  serangga  sering  kali memproduksi  protease.  Berbagai  jenis  bakteri seperti Bacillus sp., Lactobacillus sp., Pseudomonas sp., Clostridium sp. dan Serratia sp. merupakan  penghasil  enzim  protease  yang berpotensi. (Rao et al ., 1998).
Pada  lambung  ikan  yang  diberi  pakan A dan C  hasil identifikasi terdapat jenis bakteri yang  sama  yaitu Pseudomonas sp,  pada lambung  ikan  yang  diberi  pakan  B  hasil identifikasi  terdapat  jenis  bakteri Serratia sp.. Pencernaan  pada  ikan  dimulai  pada  lambung, pakan  yang  masuk  melalui  mulut  ditampung pada  lambung  setelah  itu  diaduk  dan  dimulai proses  pencernaan  kimia  di  dalam  lambung. Menurut  Triastuti  dkk.  (2009)  bahwa  lambung merupakan  tempat  pengumpulan  makanan sebelum dicerna dengan sebenarnya. Pencernaan  kimiawi  dilakukan  di  lambung.
Pengadukan  makanan di dalam lambung terjadi dengan  adanya  gelombang-gelombang  kecil yang terjadi setiap 20 detik.
Bakteri Pseudomonas sp. dapat memproduksi  enzim  protease,  lipase,  dan amylase,  sehingga  dapat  membantu  proses pencernaan  yang  berlangsung  di  lambung. Seperti  yang  dikatakan  oleh  Hardianto  (2010) bahwa Pseudomonas sp. juga dapat menguraikan  protein,  karbohidrat  dan  senyawa organik  lain  menjadi  CO 2 ,  gas  amoniak,  dan senyawa lain yang lebih sederhana. Serratia sp. dapat  memproduksi  enzim  protease,  sehingga dapat  membantu  proses  pencernaan  di  dalam lambung  ikan.  Berdasarkan  penelitian  yang telah  dilakukan  oleh  Flyg  pada  tahun  1983  di Universitas  Stockholm,  strain S.  marcescens yang  diisolasi  dari  serangga  sering  kali memproduksi protease.
Tabel 3. Identifikasi pada usus besar Jenis Pengujian P1 P2 P3 Koloni: Warna Bentuk elevasi Motilitas Memproduksi: Indol Katalase O/F TSIA SCA UJI GULA: Glukosa Manitol Maltosa Sukrosa Laktosa Putih kekuningan Cembung + - + - K/K;-;- + - - - - - Krem Cembung + - + O A/A;-;- + + + + + +
Putih kekuningan Cembung
+ - + - K/K;-;- + - - - - -
Keterangan tabel : TSIA = K/K;-;- = Alkalis/alkalis; tidak terdapat gas; tidak terdapat H 2 S TSIA = A/A;-;- = Asam/asam; tidak terdapat gas; tidak terdapat H 2 S O = Oksidatif (+) = Positif  ; (-) = Negatif P1, P2, P3 = Jenis pakan
Tabel 4. Jenis Bakteri di Dalam Saluran Pencernaan Ikan Gurami Dengan Pemberian Pakan Komersil yang Berbeda. Jenis pakan Bakteri pada lambung Bakteri pada usus halus Bakteri pada usus besar Pakan A Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. Pakan B Serratia sp Pseudomonas sp. Serratia sp. Pakan C Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. Pseudomonas sp.
Usus merupakan segmen yang
terpanjang dari saluran pencernaan dan berfungsi  untuk  penyerapan  nutrisi  pakan  yang telah  diolah  dilambung.  Pendapat  yang  sama dikatakan oleh Triastuti dkk. (2009) bahwa usus merupakan segmen yang terpanjang dari saluran pencernaan.  Usus  adalah  tempat  penyerapan utama  dari  makanan  yang  telah  diolah  di lambung.
Hasil  dari  identifikasi  bakteri  yang terdapat  pada  usus  halus  yang  diberi  pakan  A, B, dan C terdapat jenis bakteri yang sama yaitu Pseudomonas sp.. Usus besar yang diberi pakan A dan PCjuga terdapat jenis bakteri Pseudomonas sp., usus besar yang diberi pakan B  terdapat  jenis  bakteri Serratia sp.  Bakteri jenis Pseudomonas sp.  dan Serratia sp.  yang terdapat  pada  usus  membantu  penyerapan nutrisi,  karena Pseudomonas sp.  dan Serratia sp.  dapat menghasilkan  enzim  protease. Pendapat  ini  didukung  oleh  Rao et  al .  (1998) bahwa bakteri seperti Bacillus sp., Lactobacillus sp., Pseudomonas sp., Clostridium sp. dan Serratia sp. merupakan  penghasil  enzim protease yang berpotensi.
Dengan  adanya  bakteri Pseudomonas sp.  dalam  saluran  pencernaan  ikan,  dapat menekan pertumbuhan bakteri patogen.
Penelitian  sebelumnya  telah  dilakukan  oleh
Pradana dkk. (2010) bahwa aplikasi Pseudomonas sp . pada  pencernaan ikan bandeng  ( Chanos  chanos Forskal)  dapat menekan pertumbuhan bakteri patogen di dalam usus ikan.

## Kesimpulan
Kesimpulan pada penelitian ini adalah : terdapat jenis bakteri Pseudomonas sp. di dalam saluran pencernaan pada ikan yang diberi pakan A.  Terdapat  jenis  bakteri Pseudomonas sp.  dan Serratia sp.  di  dalam  saluran  pencernaan  pada ikan yang diberi pakan B. Terdapat jenis bakteri Pseudomonas sp.  di  dalam  saluran  pencernaan pada  ikan  yang  diberi  pakan  C.  Perlu  adanya penelitian  lebih  lanjut  untuk  menggunakan bakteri Pseudomonas sp.  dan Serratia sp. sebagai kandidat probiotik.

## Daftar Pustaka
Abbas, S. D. 1995. Pakan Ikan Alami. Kanisius. Yogyakarta. Hal 87. Anhar, M., Henry, K. S.,  Aradhita, D., Sari, S., Hazrina,  A.  2008.  Cara  Makan  Ikan Nila  ( Oreochromis  niloticus )  dan  ikan Nilem  ( Osteochilus  hasselti ).  Program Kreativitas Mahasiswa Istitut Pertanian Bogor. Bogor.
Aslamyah  S.  2006.  Penggunaan  Mikroflora Saluran  Pencernaan  Sebagai  Probiotik Untuk Meningkatkan Pertumbuhan dan Kelangsungan  Hidup  Ikan  Bandeng.
Disertasi : Institut Pertanian Bogor. Hal 31. Effendi,  I.  2002.  Probiotics  for  Marine Organism Disease Protection. Pekanbaru  :  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu kelautan Universitas Riau.
Fardiaz,  S.  1989. Petunjuk  Laboratorium. Analisis  Mikrobiologi  Pangan.  Bogor: Pusat  Antar  Universitas  Pangan  dan Gizi,  Direktorat  Jenderal  Pendidikan Tinggi,  Departemen  Pendidikan  dan Kebudayaan, Institut Pertanian Bogor.
Flyg,  C.  dan  Xanthopoulos,  G.  K.  1983.  Insect Phatogenic Properties of S. marcescens Passive and Active Resistance to Insect
Immunity  Studied with Protease- Deficient and Phage-Resistance Mutants. Journal of General Microbiology 129: 453-464.
Hardhianto,  M.  D.  2010.  Efektifitas  Bakteri Pseudomonas sebagai  Pengurai  Bahan Organik (Protein, Karbohidrat, Lemak) pada  Air  Limbah  Pembenihan  Ikan
Lele  Dumbo  ( Clarias sp.)  Sistem Resirkulasi Tertutup. Fakultas Perikanan  dan  Kelautan  Universitas Airlangga. Surabaya.
Irianto,  A.  2003.  Probiotik  Akuakultur . Gadjah Mada  University  Press.  Yogyakarta. Hal 125.
Khairuman.  dan  K.  Amri.  2002.  Membuat
Pakan  Ikan  Konsumsi.  Agromedia Pustaka. Jakarta. Hal 45.
Kusdarwati,  R  dan  Sudarno.  2011.  Petunjuk Pratikum  Analisis  Penyakit  Ikan  I. Budidaya Perairan. Fak. Perikanan dan Kelautan. Universitas Airlangga. Surabaya.
Mahyuddin  dan  Kholish.  2009.  Panduan
Lengkap  Agribisnis  Ikan  Gurami.
Depok. Penebar Swadaya. Hal 251.
Pelczar,  M.  J.  Jr.  and  Chan,  E.  C.  S.  1986.
Dasar-Dasar Mikrobiologi. (diterjemahkan dari bahasa Inggris oleh Hadioetomo,  R.S.,  T.  Imas,  S.S.
Tjitrosomo & S.L. Angka). Volume ke- 1,2. UI Press, Jakarta.
Pradana,  M.  S.;  Suprapto,  H.;  dan  Sasmita,  R.
2010.  Aplikasi Pseudomonas untuk Menekan Pertumbuhan Bakteri Patogen  di  dalam  Pencernaan  Juvenil Ikan Bandeng ( Chanos chanos Forskal)
dan Penguraian Bahan Organik.
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga. Surabaya.
Rao, M. B.; Tanksale, A. M.; Ghatge, M.S.; and Deshpande, V. V. 1998. Molecular and biotechnological  aspects  of  microbial protease. Microb.  Mol.  Biol.  Rev .  62: 1092-2172.
Rosidi,  I.  2005.  Sukses  Menulis  Karya  Ilmiah
Suatu  Pendekatan  Teori  dan  Praktik.
Pustaka Sidogiri. Pasuruan. Hal 128.
Tillman,  A.D.,  H.  Hartadi,  S.  Reksohadiprodjo,
S. Prawirokusumo, dan S. Lebdosukojo,  1998.  Ilmu  Makanan Ternak  Dasar.  Cetakan  ke-4.  Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
Triastuti, J., Sulmartiwi, L., dan Dhamayanti, Y. 2009.  Buku  Ajar  Ichtyologi.  Fakultas Perikanan  dan  Kelautan  Universitas
Airlangga. Surabaya. Watson,  K,  A.,  Kaspar,  H.,  Lategan,  M.J., Gibson, L. 2008. Probiotics in aquaculture:  The  need,  principles  and mechanisms of action and  screening processes. Aquaculture ,  Vol.  274.
No.1, pp.1-14.
Yasoda,  H,  N.,  Z.  Chi  and  Z,  K,  Ling.  2006.
Probiotics and Sea Cucumber Farming. SPC Beche-de-mer Information Bulletin 24:45-48