UJI EFEK ANTIINFLAMASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ALFAFA
( Medicago sativa ) PADA TIKUS PUTIH JANTAN YANG DIINDUKSI

## KARAGENIN
Lia Kusmita*, Wahyuning Setyani, Ika Puspitaningrum STIFAR “Yayasan Pharmasi” Semarang
*Email: lia_kusmita@yahoo.com

## ABSTRAK
Inflamasi  (radang)  adalah  reaksi  setempat  dari  jaringan  hidup  atau  sel  terhadap  suatu rangsang atau injury (cidera atau jejas). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi  fraksi  etil  asetat  ekstrak  herba  alfafa  (Medicago  sativa)  terhadap  salah  satu parameter  inflamasi  yaitu  pembengkakan  pada  kaki  tikus  dengan  induksi  karagenin  1%. Selain itu, penelitian ini juga bertujuan untuk mengetahui dosis efektif dari fraksi etil asetat ekstrak herba alfafa sebagai antiinflamasi.
Penelitian ini menggunakan hewan uji tikus jantan galur Wistar sebanyak 25 ekor dibagi 5 kelompok. Kelompok I (kontrol negatif) Na CMC 0,5%, kelompok II (kontrol positif) natrium diklofenak 6,3 mg/kgBB tikus, serta kelompok III, IV dan V suspensi fraksi etil asetat ekstrak alfafa  6,3;  12,6  dan  25,2  mg/kgBB  tikus.  Inflamasi  (radang)  pada  tikus  dengan  cara diinduksi karagenin 1% sebanyak 0,10 ml.  Volume udema setiap jam diketahui dari selisih volume telapak kaki pada jam-jam tertentu dengan volume kaki normal. Nilai AUC volume udema dihitung dengan metode trapezoid tiap satu jam dan dihitung % daya anti inflamasi (DAI).  Nilai  AUC  volume  udema  yang  diperoleh  dianalisa  statistik  dengan  uji  Kruskal- Wallis dan Mann-Whitney menggunakan SPSS release 16.
Hasil  penelitian  menunjukkan  fraksi  etil  asetat  ekstrak  alfafa  dapat  menurunkan  volume udema  kaki  tikus  putih  jantan  galur  Wistar  yang  diinduksi  karagenin  dengan  dosis  efektif sebesar 6,3 mg/ kgBB tikus dan daya antiinflamasi sebesar 20,95%.
Kata kunci: alfafa, antiinflamasi, fraksi etil asetat

## 1. PENDAHULUAN
Radang  tenggorokan  merupakan  penyakit  yang  banyak  diderita  oleh  masyarakat sekarang ini. Salah satu faktor penyebab terjadinya radang tenggorokan adalah makanan dan minuman  yang  dikonsumsi.  Kebanyakan  masyarakat  Indonesia  menyukai  makanan  yang pedas  dan  gorengan  penyebab  utama  timbulnya  radang.  Untuk  mengatasi  masalah  tersebut diperlukan  suatu  senyawa  antiinflamasi.  Tanaman  yang  dapat  berfungsi  sebagai  senyawa antiinflamasi  adalah  alfafa  ( Medicago  sativa )  (Hong  dkk.,  2009).  Alfafa  dikenal  sebagai “bapak makanan’ di dunia karena mempunyai kandungan gizi yang tinggi.
Alfafa  merupakan  tumbuhan  yang  berasal  dari  daerah  subtropis,  tapi  sekarang  ini alfafa  dapat  juga  ditumbuhkan  di  daerah  tropis  yang  disebut  alfata  (alfafa  tropis).  Secara kualitas  dan  kuantitas  alfafa  tropis  mempunyai  kengunggulan  dibandingkan  dengan  alfafa subtropis.  Keunggulan  rumput  alfata  yang  lain  adalah  dapat  digunakan  sebagai  makanan kesehatan  bagi  manusia  (Widiasmadi,  2011).  Alfata  mempunyai  kandungan  protein  yang cukup  tinggi,  selain  itu  juga  alfata  mempunyai  kandungan  senyawa  aktif  diantaranya klorofil,  alkaloid  (Bo-Ping  dkk.,  2010),  coumestrol  (Hong  dkk.,  2011),  saponin (Colodny,2001), dan lain-lain. Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan oleh Hong, dkk (2011)  senyawa  aktif  dari  herba  alfafa  banyak  ditemukan  dalam  fraksi  etil  asetat.  Hidayati dkk., telah meneliti uji sitotoksisitas fraksi etil asetat ekstrak etanol herba alfafa terhadap sel kanker payudara dan leher rahim.
Pemanfaatan  alfata  untuk  pengobatan  di  Indonesia  masih  belum  banyak,  apalagi dikemas dalam suatu sediaan farmasi. Suatu  sediaan farmasi harus sesuai dengan  keinginan masyarakat  agar  dapat  diterima  dengan  baik.  Bentuk  sediaan  yang  dapat  diterima  untuk mengobati  radang  tenggorokan  adalah  tablet  hisap.  Berdasarkan  latar  belakang  diatas diperlukan penelitian tentang manfaat  herba  alfafa dalam fraksi  etil  asetat  yang akan dibuat sediaan tablet hisap.

## 2. METODOLOGI 2.a. Bahan
Bahan  utama  adalah  simplisia  Alfafa  ( Medicago  sativa )  tropis  yang  diperoleh  dari perkebunan Selopass Boyolali, larutan etanol 70%, KLT adalah  Lempeng silika Gel GF 254 nm,  ammonia,  AlCl 3 ,  anisaldehid,  asam  sulfat,  butanol,  asam  asetat,  kloroform,  methanol, natrium  diklofenak,  karagenin,  tikus  putih  jantan  galur  wistar,  metinol,  mentol,  aspartame, gelatin, FDC green, talk, Mg stearat, natrium benzoate.
2.b. Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  blender,  seperangkat  alat  gelas, waterbath,  batang  pengaduk,  kertas  saring,  cawan  poselin,  rotary  evaporator,  pipa  kapiler, chamber,  papan  penyemprot,  lampu  UV,  botol  semprot,  Spektrovotometer  UV-VIS timbangan hewan uji, spuit injeksi, sonde tikus, pletismometer, stopwatch, almari pengering, mesin cetak tablet single punch, corong alir 2.c. Penyiapan Simplisia
Sampel  herba  alfafa  yang  berasal  dari  Boyolali  ditimbang  dan  dilakukan  sortasi basah. Sortasi basah bertujuan memisahkan bagian tanaman yang digunakan dengan bagian tanaman  lain  atau  bagian  tanaman  yang  tidak  digunakan.  Selanjutnya,  ditimbang  kembali dan  diperoleh  persen  pengotor.  Herba  alfafa  yang  telah  disortasi,  dicuci  bersih  dan dikeringkan  dibawah  sinar  matahari  dengan  ditutup  akin  hitam  agar  tidak  terkena  langsung sinar  matahari.  Setelah  kering,  simplisia  disortasi  kering  dengan  ditimbang  kembali. Simplisia diserbukkan dan diayak dengan ayakan no.30/40. Simplisia yang digunakan adalah simplisia yang lolos pada ayakan no.30 dan tidak lolos pada ayakan no.40. serbuk simplisia selanjutnya diekstraksi dengan metode maserasi.

## 2.d.  Ekstraksi
Ditimbang  200  gram  serbuk  herba  alfafa,  dimaserasi  dengan  menggunakan  pelarut etanol 96% selama 5 hari dan diaduk dengan bantuan shaker rotator selama 2 jam kemudian didiamkan  selama  24  jam.  Dilakukan  penyarian  setelah  24  jam  sehingga  terpisah  antara filtrate  (ekstrak  etanol)  dengan  residu.  Residu  yang  didapat  ditambah  lagi  dengan  500  ml etanol  96%  dan  dilakukan  proses  yang  sama  selama  5  hari.  Semua  filtrat  dicampur  dan dipekatkan dengan rotary evaporator .

## 2.e. Fraksinasi
Ekstrak  kental  herba  alfalfa  yang  diperoleh  dilarutkan  ke  dalam  campuran  air  dan etanol  dengan  perbandingan  9:1.  Selanjutnya,  difraksinasi  dengan  menggunakan  corong pisah berturut-turut dengan pelarut n-heksan, kloroform, dietil eter dan etil asetat. Proses ini dilakukan    hingga    cairan    jernih.    Jumlah    pelarut    yang    digunakan    untuk    fraksinasi sebanding    dengan    jumlah    air-etanol    yang    ditambahkan    ke    dalam    ekstrak    etanol (perbandingan 1:1). Fraksi etil asetat ditampung dan dipekatkan dengan rotary evaporator . 2.f. Uji Antiinflamasi
Dua  puluh  lima  ekor  tikus  dibagi    dalam  lima  kelompok,  masing-masing  kelompok terdiri  dari  lima  ekor  tikus.  Sebelum  tikus  mendapatkan  perlakuan  sediaan  uji,  terlebih dahulu  tikus  diadaptasikan  dengan  lingkungan  penelitian,  kemudian  dipuasakan  18  jam dengan tetap diberi minum sebelum diberi perlakuan sediaan uji.
Proses pengujian aktivitas antiinflamasi sebagai berikut :
1. Tikus  masing-masing  kelompok  ditandai  telapak  kaki  kanan  belakang  sebatas  mata kaki dengan menggunakan spidol permanen.
2. Masing-masing  kelompok,  diukur  volume  normal  kaki  kanan  belakang  (Vn)  dengan mencelupkannya ke dalam cairan raksa sampai batas tanda pada alat plestismometer.
3. Semua hewan uji diberi perlakuan secara oral sehari sekali sesuai kelompoknya Kelompok I
: natrium diklofenak 6,3 mg/kg BB tikus (kontrol positif) Kelompok II : CMC Na 0,5% (kontrol negatif) Kelompok III : fraksi etil asetat ekstrak Alfafa 6,3 mg/kgBB tikus Kelompok IV : fraksi etil asetat ekstrak Alfafa 12,6 mg/kgBB tikus Kelompok V
: fraksi etil asetat ekstrak Alfafa 25,2 mg/kgBB tikus
4. Tiga puluh menit setelah perlakuan, diberikan injeksi karagenin 1% sebanyak 0,10 ml secara subplantar pada kaki kanan belakang tikus yang diukur volumenya tadi.
5. Masing-masing  kelompok,  diukur  volume  kaki  kanan  belakang  (Vt 0 )  dengan mencelupkannya ke dalam cairan raksa sampai batas tanda pada alat plestismometer.
6. Selanjutnya  setiap  ½  jam,  diukur  volume  kaki  kanan  belakang  dengan  cara mencelupkannya  ke  dalam  cairan  raksa  sampai  batas  tanda  pada  alat  plestismometer. Pengukuran dilakukan selama 3 jam. Volume kaki dibaca pada pipet ukur 1 ml dengan 1 skala pada pipet ukur sebesar 0,1 ml.
7. Volume  edema  pada  setiap  jam  diketahui  dari  selisih  volume  telapak  kaki  pada  jam- jam tertentu ( Vt 0 , Vt 1 , Vt 2 , Vt 3 , Vt 4 , Vt 5 ) dengan volume telapak kaki normal (Vn)

## 2.g. Analisa Data
Analisa  data  dilakukan  dengan  menghitung  selisih  antar  volume  kaki  tikus  setelah diinjeksi dengan karagenin 1% dengan volume kaki tikus normal (awal).
Keterangan : Vu : Volume udema Vt : Volume kaki tikus pada waktu ke-t Vn : Volume kaki tikus normal (sebelum dinjeksi karagenin 1%)
Untuk mengetahui efek antiinflamasi, dilakukan perhitungan dalam persen (%) efek antiinflamasi dengan cara membandingkan volume udema dengan volume kaki normal pada hewan uji, dihitung dengan rumus :
Karena  pada  tiap  hewan  uji  mempunyai  pola  udema  yang  tidak  sama  di  dalam kelompok  maupun  antar  kelompok,  maka  perhitungan  DAI  dilakukan  berdasarkan  luas daerah di bawah kurva (AUC). Nilai AUC volume udema dihitung dengan metode trapezoid tiap satu jam. Data yang digunakan adalah persen volume udema dan waktu pengukuran.
Vu  =  Vt - Vn % Volume Udema (P) = Vn Vu x  100% (AUC) tn - tn-1 = 2 1 - Pn Pn  (tn – tn-1)
Keterangan : Pn : persentase volume udema jam ke-n Pn-1  : persentase volume udema 1/2 jam sebelumnya tn : waktu ke-n
tn-1  : waktu 1/2  jam sebelumnya Sehingga nilai DAI dihitung menggunakan rumus :
Keterangan :
AUCk  :  rata-rata    AUC  volume  udema  kaki  tikus  yang  hanya  diberikan  karagenin  1% subplantar saja (kontrol negatif)
AUCu  : rata-rata AUC volume udema kaki tikus yang diberi perlakuan obat
Daya  Anti  Inflamasi  (DAI)  menunjukkan  kemampuan  obat  dalam  menurunkan volume udema. Semakin besar nilai DAI maka semakin bagus efek antiinflamasinya. Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  Kolmogorov-Smirnov  untuk  melihat  distribusi  data. Karena  data tidak berdistribusi normal maka uji statistik yang digunakan adalah uji statistik non-parametik, yaitu uji Kruskal-Wallis dengan taraf kepercayaan 95%, dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney .

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antiinflamasi dan dosis efektif fraksi etil asetat ekstrak Alfafa ( Medicago sativa ) pada tikus putih jantan yang diinduksi karagenin. Alfafa  yang  digunakan  diperoleh  dari  daerah  Tlatar  Boyolali  Jawa  Tengah. Selanjutnya  alfafa  dideterminasi  untuk  memastikan  bahwa  sampel  yang  diperoleh  benar- benar  alfafa  seperti  yang  dikehendaki.  Determinasi  dilakukan  di  Bagian  Biologi  Farmasi, Fakultas  Farmasi,  Universitas  Gadjah  Mada  Yogyakarta.  Hasil  yang  diperoleh  alfafa memiliki nama latin Medicago sativa .
Alfafa  yang  diperoleh  diolah  menjadi  simplisia  dengan  langkah  awal  dilakukan sortasi basah. Sortasi basah bertujuan memisahkan bagian tanaman yang digunakan dengan bagian  tanaman  lain  atau  bagian  tanaman  yang  tidak  digunakan.  Herba  alfafa  yang  telah disortasi,  dicuci  bersih  dan  dikeringkan  dibawah  sinar  matahari  dengan  ditutup  akin  hitam agar tidak terkena langsung sinar matahari. Setelah kering, simplisia disortasi kering dengan ditimbang  kembali.  Simplisia  diserbukkan  dan  diayak  dengan  ayakan  no.30/40.  Simplisia yang digunakan adalah simplisia yang lolos pada ayakan no.30 dan tidak lolos pada ayakan no.40.  Serbuk  simplisia  selanjutnya  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  96%  selama  5  hari.  Filtrat  yang  diperoleh  dipekatkan  dengan rotary evaporator .
Ekstrak  kental  yang  diperoleh  difraksinasi    dengan    menggunakan    corong    pisah berturut-turut  dengan  pelarut  n-heksan,  kloroform,  dietil  eter  dan  etil  asetat.  Proses  ini dilakukan    hingga    cairan    jernih.    Jumlah    pelarut    yang    digunakan    untuk    fraksinasi sebanding    dengan    jumlah    air-etanol    yang    ditambahkan    ke    dalam    ekstrak    etanol (perbandingan  1:1).  Fraksi  etil  asetat  ditampung  dan  dipekatkan  dengan rotary  evaporator hingga diperoleh fraksi etil asetat kental.
Uji  pendahuluan  dimulai  dengan  melakukan  skrining  fitokimia  untuk  mengetahui senyawa-senyawa  yang  ada  di  dalam  fraksi  etil  asetat  ekstrak  Alfafa  yang  diduga  sebagai antiinflamasi. Skrining fitokimia meliputi uji fenolik, alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, dan
% DAI  = AUCk AUCu - AUCk x 100% AUCk
triterpenoid.  Apabila  hasilnya  positif  maka  dilanjutkan  uji  penegasan  menggunakan  KLT untuk  memastikan  benar  terdapat  zat  yang  positif  di  uji  skrining  fitokimia.  Hasil  yang diperoleh  baik  skrining  fitokimia  maupun  uji  penegasan  menunjukkan  fraksi  etil  asetat ekstrak  alfafa  mengandung  metabolit  sekunder  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  dan triterpenoid/steroid.
Selanjutnya  perlakuan  senyawa  uji  pada  tikus  putih  jantan  galur  Wistar  2-3  bulan untuk  melihat  efek  antiinflamasi  dari  fraksi  etil  asetat  Alfafa.  Parameter  inflamasi  yang diamati  adalah  udema  pada  kaki  tikus  dengan  pemberian  karagenin  1%  secara  subplantar. Karagenin  tidak  menimbulkan  kerusakan  jaringan  lainnya  dan  tidak  menimbulkan  bekas luka,  serta  memberikan  respon  yang  lebih  peka  terhadap  obat  antiinflamasi.  Waktu  laten karagenin dimulai 1 jam dan pembentukan udema maksimal terjadi 3 jam setelah pemberian karagenin  (Vogel,  2002;  Gryglewski,  1976).  Data  yang  diamati  adalah  persentase  volume udema,  nilai Area  Under  Curve (AUC)  yang  menggambarkan  besarnya  udema,  serta persentase daya antiinflamasi (% DAI). Hasil pengamatan ini dapat dilihat pada tabel I.
Tabel I. Rata-rata % Volume udema, AUC Total, dan % DAI berbagai kelompok perlakuan
Kelompok % Volume Udema AUC Total (ml.jam ) % DAI 0 menit 30 menit 60 menit 90 menit 120 menit 150 menit 180 menit Positif Na- Diclofenak 121,33 113,27 112,32 109,95 104,27 102,84 102,84 69,08 a 20,4 Negatif CMC- Na 0,5% 125,12 137,91 130,81 136,97 142,18 140,76 143,13 86,83 b 0 Alfafa 6,3 mg/KgBB 121,27 109,50 109,95 107,24 104,07 103,17 102,26 68,63 a 21 Alfafa 12,6 mg/KgBB 120,51 118,97 116,92 112,31 111,79 109,74 107,69 66,63 a 23,3 Alfafa 25,2 mg/KgBB 118,27 117,31 110,10 106,25 101,92 100,00 100,00 67,04 a 22,8
Keterangan:
a: berbeda bermakna (p<0,05) terhadap kelompok negatif dengan uji Mann-Whitney b: berbeda bermakna (p<0,05) terhadap kelompok positif dengan uji Mann-Whitney
Berdasarkan  tabel  I,  puncak  terjadinya  udema  yang  disebabkan  oleh  karagenin  terjadi  pada menit  ke  30.  Selanjutnya  dengan  adanya  pemberian  Alfafa  baik  dosis  6,3,  12,6,  dan  25,2 mg/kgBB  serta  natrium  diklofenak,  persentase  volume  udema  semakin  turun.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  Alfafa  dapat  menurunkan  volume  udema  atau  sebagai  antiinflamasi. Sedangkan  kelompok  kontrol  negatif  dengan  pemberian  pembawa  fraksi  etil  asetat  yaitu CMC  Na  0,5%  %  volume  udema  tetap  bahkan  menaik.  Grafik  mengenai  gambaran persentase volume udema semua kelompok perlakuan dapat dilihat pada gambar 1.

## Gambar 1. Grafik hubungan % volume udema terhadap waktu berbagai kelompok perlakuan
Selanjutnya  %  volume  udema  digunakan  untuk  menghitung  nilai  AUC.  AUC menggambarkan  besarnya  radang  yang  terjadi.  Setelah  itu,%  DAI  juga  dihitung  untuk menggambarkan  persentase  daya  antiinflamasinya.  Nilai  AUC  berbanding  terbalik  dengan %DAI.  Semakin  kecil  nilai  AUC  berarti  besarnya  radang  semakin  berkurang  sehingga semakin besar persentase daya antiinflamasi. Berdasarkan tabel I, nilai AUC total kelompok kontrol  negatif  paling  besar  dibandingkan  kelompok  lain.  Kelompok  kontrol  positif  Na Diklofenak  mempunyai  nilai  AUC  lebih  besar  daripada  kelompok  Alfafa  semua  dosis.  Hal ini  juga  ditunjukkan  dari  %  DAI  Alfafa  lebih  besar  daripada  obat  Na  Diklofenak.  Semakin tinggi  dosis  Alfafa  semakin  tinggi  pula  %  DAI.  Hal  ini  mebuktikan  bahwa  Alfafa  dapat berefek  mengurangi  udema  yang  merupakan  salah  satu  tanda  inflamasi  atau  disebut  juga sebagai  antiinflamasi.  Gambaran  nilai  AUC  total  dan  %  DAI  semua  kelompok  perlakuan dapat dilihat pada gambar 2.
Uji  statistika  dengan  SPSS  16.00  juga  dilakukan  untuk  mempertegas  efek antiinflamasi  Alfafa.  Hasil  yang  diperoleh  terdapat  perbedaan  signifikan  nilai  AUC  antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok Alfafa semua dosis. Hal ini membuktikan bahwa fraksi etil asetat herba Alfafa dapat berefek antiinflamasi. Selain itu hasil statistika diperoleh ada perbedaan tidak signifikan nilai AUC antara kelompok Na Diklofenak dengan kelompok Alfafa  semua  dosis.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  mempunyai  efek antiinflamasi  yang  sebanding  dengan  Na  Diklofenak.  Berdasarkan  hasil  uji  statistika,  dosis efektif fraksi etil asetat Alfafa sebesar 6,3 mg/kgBB.
Gambar 2. Diagram nilai AUC total (ml.jam) dan % DAI semua kelompok perlakuan
Fraksi  etil  asetat  Alfafa  dapat  berefek  antiinflamasi  diduga  disebabkan  oleh metabolit  sekunder  yang  terkandung  di  dalamnya,  yaitu  flavonoid,  saponin  dan  steroid. Beberapa  flavonoid  berperan  dalam  penghambatan  lipooksigenase  sedangkan  flavonoid lainnya  berperan  dalam  menghambat  sintesis  prostaglandin  (Robinson,  1995).  Flavonoid juga  mempunyai  pengaruh  terhadap  metabolisme  kolagen  dengan  beberapa  cara  antara  lain dengan berikatan  silang dengan  serat  kolagen sehingga ikatan silang  kolagen menjadi  kuat, dan  mampu  menghentikan  kerusakan  struktur  kolagen  yang  diakibatkan  adanya  enzim  dari sel darah putih proses ini timbul selama peradangan (Wirakusumah,2002).
Efek  flavonoid  sebagai  antioksidan  secara  tidak  langsung  juga  mendukung  efek antiinflamasi  flavonoid.  Adanya  radikal  bebas  dapat  menarik  berbagai  mediator  inflamasi (Halliwell,  1995  dalam  Nijveldt  et  al.,  2001).  Korkina  (1997)  dalam  Nijveldt  et  al.,  (2001) menambahkan bahwa flavonoid dapat menstabilkan Reactive Oxygen Species (ROS) dengan bereaksi dengan senyawa reaktif dari radikal sehingga radikal menjadi inaktif.
Saponin  sudah  banyak  dilaporkan  dapat  berefek  sebagai  antiinflamasi,  namun mekanismenya belum diketahui secara jelas. Saponin terdiri dari steroid atau gugus triterpen (aglikon) yang mempunyai aksi seperti detergen. Mekanisme antiinflamasi yang paling mungkin adalah diduga saponin mampu berinteraksi dengan banyak membran lipid (Nutritional  Therapeutics, 2003) seperti fosfolipid yang merupakan prekursor prostaglandin dan mediator-mediator inflamasi lainnya.
Steroid  dalam  tubuh  dapat  menghambat  enzim  phospolipase  A2  yaitu  enzim  yang bertanggungjawab  atas  pembebasan  asam  arakhidonat  yang  kemudian  dimetabolisme  oleh enzim  siklooksigenase  dan  lipooksigenase  yang  kemudian  akan  membebaskan  mediator- mediator radang (Katzung, 2002).

## 4. KESIMPULAN
Fraksi etil asetat ekstrak Alfafa ( Medicago sativa ) dapat berefek  antiinflamasi pada tikus putih jantan yang diinduksi karagenin dengan dosis efektif sebesar 6,3 mg/kgBB.

## 5. UCAPAN TERIMAKASIH
Diknas  Pendidikan  Provinsi  Jawa  Tengah  atas  dana  penelitian  melalui  Hibah Penelitian Dosen Muda tahun anggaran 2014.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
Bo-ping, W., Yong-mei, Z., Zhi-Zhong, C., and Yong-zhil, T., 2010, Study on Extraction of Flavonoids in Alfalfa Assisted With Ultrasonic Wave, Acta Agrestia Sinica , 6 Colodny  LR,  Montgomery  A,  Houston  M.,  2001,  The  role  of  esterin  processed  alfalfa saponins in reducing cholesterol, J Am Nutraceutical Assoc. 3.
Hong  YH, Huang  CJ,  Wang  SC,  Lin  BF.  2009.  Ethyl  acetate  extracts  of  alfalfa  ( Medicago sativa L.)  sprouts  inhibit  lipopolysaccharide-induced  inflammation in  vitro and in vivo . Journal of Biomedical Science . 16:64. doi:10.1186/1423-0127-16-64 Hong,  Y.,  Wang,  S.,  Hsu,  C.,  Lin,  B.,  Kuo,  Y.,  and  Huan,  C.,  2011,  Phytoestrogenic Compounds in Alfalfa Sprout ( Medicago Sativa ) Beyond Coumestrol, J. Agri. Food Chem , 59 , 131-137. Katzung, B.G. 2002. Farmakologi Dasar dan Klinik . Jakarta: Salemba Medika
Nijveldt,  R.  J.,  E.  van  Nood,  D.E.C.  van  Hoorn,  P.G. Boelens,  K.  van  Norren,  P.A.M.  van Leeuwen.  2001.  Flavonoids:  a  review  of  probable  mechanisms  of  action  and potential applications. American Journal of Clinical and Nutrition 74: 418-425.
Nutritional  Therapeutics.  2003.  NT  Factor:  Phosphoglycolipids-High  Energy  Potential. www.propax.com/FAQ/ soy_high_energy.html [2 Desember 2005]. Robbins SL, Kumar V. 1995. Buku Ajar Patologi I . Terjemahan Staf Pengajar Laboratorium Patologi Fakultas Kedokteran UNAIR , cetakan 2. Jakarta : EGC. Widiasmadi, N., 2011. Mengenal Alfafa Tropika . http://alfatrop.blogspot.com/ Wirakusumah, E.S. 2002. Buah dan sayur untuk terapu. Jakarta : Penebar Swadaya