Pengaruh Ekstrak Etanol 96% Akar Saluang Belum ( Luvunga Sarmentosa ) Terhadap Integritas Membran Spermatozoa In Vitro
Effect of Ethanol Extract of Saluang Belum ( Luvunga Sarmentosa ) on Spermatozoa Membrane Integrity In Vitro
Silvani Permatasari 1
Zoelva Oktaviannur 2*
Septi Handayani 1
Nawan 3
Dewi Klarita Furtuna 3
1 Departemen Biokimia dan Biologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Palangka Raya, Kota Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia
*2 Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Palangka Raya, Kota Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia
3 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Palangka Raya, Kota Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia *email: zoelva14@gmail.com

## Abstrak
Akar  Salung  Belum  ( Luvunga  sarmentosa )  mengandung  antioksidan  yang  dapat mencegah  kerusakan  sel  akibat  radikal  bebas.  Pengujian  efek  senyawa  terhadap spermatozoa  untuk  menilai  kemampuan  viabilitas  dapat  dilakukan  melalui  analisis integritas  membran  dengan  pendekatan in  vitro. Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  pengaruh  ekstrak  etanol  96%  Saluang  Belum  ( Luvunga  sarmentosa ) terhadap  integritas  membran  spermatozoa  secara in  vitro. Penelitian  spermatozoa manusia in vitro yang dicuci dan ditambahkan medium BWW kemudian diinkubasi pada suhu 37 ℃ selama 1 jam dengan ekstrak etanol 96% akar saluang belum pada perlakuan konsentrasi, 100 ng/mL, 200 ng/mL, 400 ng/mL, 800 ng/mL serta kelompok kontrol (hanya BWW). Integritas membran dinilai pada masing-masing 100 uL yang telah ditambahkan 1 mL HOST ( Hypo-osmotic swelling test ) di inkubasi 37°C selama 30 menit dan diamati menggunakan mikroskop cahaya dengan perbesaran 400x untuk melihat  integritas  membran  spermatozoa  dari  ekor  yang  menggembung.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa yang terdapat di dalam ekstrak etanol 96% akar  Saluang  Belum  (Luvunga  Sarmentosa)  adalah  terpenoid,  flavonoid,  steroid, fenolik  dan  alkaloid.  Jumlah  viabilitas  sperma  meningkat  secara  signifikan  dari konsentrasi  100  ng/mL  (68  ±3,99)  ,  200  ng/mL  (72,2  ±4,26)  ,  400  ng/mL  (77± 4,76),dan  800  ng/mL  (80±4,87).  Meningkat  jika  dibandingkan  dengan  kontrol (63±3,81).  Ekstrak  etanol  96%  akar  Saluang  Belum  ( Luvunga  sarmentosa )  yang diberikan secara invitro memiliki pengaruh untuk meningkatkan integritas membran spermatozoa.

## Kata Kunci:
Ekstrak Etanol
Saluang Belum Integritas Membran Spermatozoa
Keywords :
Ethanol Extract Saluang Belum Root Spermatozoa Membrane Integrity

## Abstract
Good sperm quality is characterized by adequate number, motility and viability. Saluang Belum  root  contains  antioxidants  that  can  prevent  cell  damage  due  to  free  radicals.  to observe the effect of compounds on spermatozoa to assess viability can be done through membrane integrity analysis with an in vitro approach. This study aims to determine the effect of 96% ethanol extract of Saluang Belum  (Luvunga  sarmentosa) on spermatozoa membrane integrity in vitro. Human sperm cleaned and added with BWW medium, then incubated at 37 ℃ within 1 hour with 96% ethanol extract of Saluang Belum roots in the concentration  treatment,  100  ng/mL,  200  ng/mL,  400  ng/mL,  800  ng/mL.  Membrane integrity of sperm was assessed after incubated with HOST (Hypo-osmotic swelling test) solution for 30 minutes and observed using a light microscope with a magnification of 400x to analyzed sperm tail swelling.  In the first group (concentration 100 ng/ml), the membrane integrity value was 68 ± 3.99 (%), the second treatment (concentration 200 ng/ml) was 72.2 ± 4.26 (%), the third treatment concentration (400 ng/ml) was 77 ± 4.76 (%) and the fourth treatment concentration (800 ng/ml) was 80 ± 4.87 (%), and the control group was 63 ± 3.81 (%). The 96% ethanol extract of Saluang Belum root (Luvunga sarmentosa) has the effect of improving spermatozoa membrane integrity.
© 2024 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v10i2.7738

## PENDAHULUAN
Spermatozoa adalah sel yang terdiri dari kepala sperma dan  ekor  sperma.  Fungsi  utama  sperma  adalah  untuk melakukan  fertilisasi.  Proses  spermatozoa  menuju tempat  fertilisasi  yang  dapat  terjadi  diukur  dengan kualitas  sperma  yang  baik.  (Melani  Cintia  Dewi et  al , 2022)  Sebagai  dasar  analisis  spermatozoa  yang berkualitas  adalah  spermatozoa  dengan  jumlah, motilitas, dan viabilitas baik. (Brenda C, 2022) Kualitas sperma  yang  buruk  merupakan  penyebab  utama infertilitas pada pria. Faktor-faktor yang mempengaruhi kualitas  sperma  yaitu  gaya  hidup  seperti  makanan rendah  nutrisi,  kebiasaan  merokok,  alkohol,  obat- obatan,  Serta  faktor  lingkungan  seperti  polutan  yang mengakibatkan  kualitas  sperma  buruk  dan  mampu menurunkan  konsentrasi  dan  motilitas  spermatozoa hingga 50%. (Puspitaningrum et al., 2022)
Preservasi merupakan penerapan teknologi reproduksi khususnya  IVF (in  vitro  fertilisasi )  menggunakan  semen cair  atau  beku  yang  diperoleh  dari  hasil  donor spermatozoa.  Penyimpanan  spermatozoa  telah  sejak lama  digunakan  dalam  praktik  klinis  reproduksi berbantu,  yang  tujuan  utamanya  yaitu  saat  proses penyimpanan semen dapat menjaga viabilitas.(Fabozzi et al ,  2016)  Proses  preservasi  dapat  merusak  sperma dengan berbagai cara seperti kerusakan ultra struktural, stres  oksidatif  dan  osmotik.  Hal  ini  mengubah konfigurasi  lipid  dan  protein,  mengurangi  gerakan  dan daya  hidup  sperma  serta  menyebabkan  cedera  pada mitokondria dan ekor spermatozoa. Selain itu, proses ini  juga  meningkatkan  fragmentasi  DNA  sperma,  yang mengakibatkan  penurunan  kualitas  sperma  setelah dibekukan  dan  dicairkan.  Spermatozoa  terdiri  dari beberapa membran, seperti membran plasma, membran mitokondria,  dan  membran  akrosomal.  Membran- membran ini sebagai pelindung fisioloogi yang tetap utuh supaya  memastikan  daya  hidup  sperma,  terutama setelah proses preservasi. (Khan et al , 2021)
Pembekuan  merupakan  suatu  fenomena  pengeringan fisik  terkait  dengan  perubahan  fase  dalam  lipid  dan merubah  kondisi  membran.  Pada  keadaan  pembekuan membran  terjadi  perubahan  temperatur  menunjukkan peristiwa  beberapa  fase  kondisi  membran  yaitu sebelum, selama dan setelah pembekuan semen dimana terbentuk kristal-kristal, terjadi penumpukan elektrolit dan bahan terlarut lainnya di dalam larutan atau di dalam sel. Kristal sel intraseluler dapat merusak sperma secara mekanik.  Konsentrasi  elektrolit  yang  berlebihan  akan melarutkan  selubung  lipoprotein  dinding  sel  sperma pada  waktu  thawing,  permeabilitas  membran  sel  akan berubah dan menyebabkan kematian sel. Proses pencairan  menghasilkan  tingkat  ROS  ( Reactive  Oxygen Species ) yang tinggi dan merusak sel sperma, mengubah potensi reproduksi sperma dan mengurangi kemampuan untuk pembuahan. Selain itu, ketidakseimbangan  ROS  berdampak  penurunan viabilitas sperma, disfungsi mitokondria, dan kerusakan DNA, antara lain. Disfungsi mitokondria menghasilkan peroksidasi  lipid  dan  penurunan  Potensial  membran mitokondria,  yang  mana  sebagai  prediktor  kapasitas fertilisasi  sperma.  Kerusakan  sperma  akibat  stres oksidatif  yang  tinggi  berdampak  negatif  pada keberhasilan ART ( Assisted Reproductive Technology ) dan berhubungan  dengan  tingkat  kehamilan  yang  rendah. Oleh  karena  itu,  diperlukan  intervensi  untuk mengurangi kerusakan akibat proses kriopreservasi dan meningkatkan  kualitas  sperma  setelah  dibekukan. (Kumar et al ., 2019)
Upaya untuk menjaga kualitas sperma pada saat kondisi stres  oksidatif  adalah  dengan  pemberian  antioksidan. Antioksidan  merupakan  jenis  senyawa  alami  dengan mudah  didapatkan  pada  kandungan  tanaman  herbal. Antioksidan  seperti  alkaloid,  flavonoid,  terpenoid  dan senyawa  fenolik  dapat  secara  langsung  mereduksi, menangkal,  menekan  reaksi  ROS  dan  memperbaiki kerusakan  akibat  dari  efek  radikal  bebas.  Menurut penelitian Derbak et al (2021) efek kandungan alkaloid terbukti meningkatkan kualitas sperma domba. Alkaloid
bisa  melindungi  sperma  dengan  meningkatkan ketahanan  integritas  membran  sperma  domba. Penelitian selanjutnya harus dilakukan untuk memahami mekanisme biologis dan biokimia yang mendasari efek menguntungkan tersebut.(Derbak et a l, 2021) Menurut penelitian  Sari et  al pada  tahun  (2023)  flavonoid termasuk antioksidan yang mengontrol peroksidasi lipid dengan  menghalangi  oksidasi.  Senyawa  flavonoid menyediakan donor hidrogen dan mengikat radikal lipid menjadi  radikal  lipid  yang  stabil  dan  akhirnya menghentikan reaksi berantai peroksidasi lipid, sehingga meningkatakan  viabilitas  dan  motilitas  pada  sperma tikus. ( Sari et al, 2023)
Senyawa-senyawa  antioksidan  tersebut  terdapat  pada tanaman  herbal  salah  satunya  adalah  Saluang  Belum ( Luvunga  sarmentosa ).  Saluang  belum  adalah  tanaman endemik  di  masyarakat  Kalimantan  Tengah.  Pada umumnya  masyarakat  mengolah  tanaman  herbal  ini menjadi  bahan  konsumsi  contohnya  sebagai  obat  atau ramuan  tradisional  untuk  meningkatkan  kesuburan pria.(Noh et al., 2020) Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh Islamiati et al pada tahun 2022 melalui uji skrining  fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol 70%  akar  Saluang  Belum  ( Luvunga  sarmentosa )  secara empiris mengandung steroid dan flavonoid.(Islamiati et al.,  2022)  Pemberian  ekstrak  etanol  70%  akar  Saluang Belum  ( Luvunga  sarmentosa )  dapat  meningkatkan kualitas  sperma  yang  diukur  dari  jumlah  dan  motilitas sperma  pada  mencit.(Musfirah  et  al.,  2016)  Penelitian ekstrak  saluang  belum  ini  belum  banyak  dilakukan kepada  manusia  sehingga  peneliti  tertarik  untuk melakukan  eksperimen  mengenai  pengaruh  ekstrak etanol  96%  Saluang  Belum  ( Luvunga  sarmentosa ) terhadap  membran  spermatozoa  menggunakan hypo- osmotic swelling test.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah rotary evaporator,  waterbath,  inkubator, kolom  vacum  tabung eppendorf 1,5  mL centrifuge ,  tabung  falcon  15  mL, micropipet ,  tabung  falcon  50  mL, neubauer  chamber , mikroskop  cahaya.  Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini adalah  sampel  sperma  manusia,  medium BWW  ( Biggers,  Whitten,  and  Whittingham ), medium percoll 50%,  larutan  hipoosmotik,  etanol  96%,  akar saluang belum ( Luvunga sarmentosa ), sperm diluting fluid.

## Metode Pelaksanaan
Sebanyak  5000  gram  akar  Saluang  Belum  ( Luvunga sarmentosa )  dicuci  dan  dikeringkan  selama  tujuh  hari untuk membuat simplisia dengan menggunakan blender, kemudian  diayak  dengan  menggunakan  saringan berukuran  60  mesh.  Simplisia  sebanyak  1000  g dimaserasi  dengan  etanol  96%  selama  3  x  24  jam. Maserat yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator .
Penelitian ini menggunakan sampel sperma dari donor dengan  kriteria  umur  20-30  tahun.  Semen  ditampung dalam  wadah  steril  dan  dibiarkan  pada  suhu  ruangan selama  30  menit  untuk  proses  pencairan,  kemudian dicuci  menggunakan  gradien  percol  50%.  Kemudian disentrifugasi  dengan  kecepatan  1900  rpm  selama  30 menit.  Supernatan  dibuang,  pelet  dicuci  dengan  3  ml medium  BWW.  Kemudian  tabung  disentrifugasi kembali dengan kecepatan 1900 rpm selama 15 menit. Supernatan dibuang, pelet murni diberikan 1 ml BWW lalu dihomogenkan. Setelah itu, konsentrasi spermatozoa diukur dengan memberikan 95 μ L cairan pengencer  sperma  dan  5 μ L  spermatozoa  yang  telah dicuci dalam tabung 1,5 ml lalu dihomogenkan. Ambil 10 μ L  sampel  dan  letakkan  di  dalam  ruang  Neubauer. Selanjutnya,  perhitungan  konsentrasi  perhitungan konsentrasi  dilakukan  di  bawah  mikroskop  dengan
perbesaran 400x menggunakan metode analisis semen standar menurut WHO (Permatasari et al , 2023).
Spermatozoa  dibagi  menjadi  lima  kelompok,  masing- masing  berisi  ±10  juta  sel,  yaitu  kontrol    (tanpa perlakuan),  pemberian  ekstrak  etanol Luvunga sarmentosa dengan konsentrasi  100, 200, 400, dan 800 ng/mL. Kelima kelompok tersebut kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 1 jam. Selanjutnya, dilakukan uji HOS  pada  sampel  semen  dan  diamati  ekor  yang melengkung/menggulung  pada  mikroskop  cahaya dengan perbesaran 400x.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Hasil Pengaruh Ekstrak
Kelompok Mean ± SD (%) Kontrol Negatif 63,87 ± 3,81 a,b,c,d,e P1 (100 ng/mL) 68,80 ± 3,99 b,c,d,e P2 (200 ng/mL) 72,20 ± 4,26 c,d,e P3 (400 ng/mL) 77,07 ± 4,76 d,e P4 (800 ng/mL) 80,87 ± 4,87 e
Keterangan: superskrip ( a,b,c,d,e ) menunjukkan perbedaan nyata (p<0.05) ± SD = merupakan standar deviasi data
Dari data hasil penelitian, menunjukan adanya pengaruh ekstrak  akar Luvunga  sarmentosa terhadap  integritas membran  yang  dilihat  dari  jumlah  ekor  sperma  yang menggulung/melengkung  secara in  vitro. Hal  ini dipengaruhi oleh peranan senyawa yang terdapat pada ekstrak  etanol  96%  akar  saluang  belum  ( Luvunga sarmentosa ).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan Permatasari et al (unpublished), didapatkan hasil uji fitokimia pada ekstrak akar  saluang  belum  terdapat  kandungan  senyawa terpenoid,  flavonoid,  steroid  fenolik  dan  alkaloid. Senyawa terpenoid memiliki peran sebagai antioksidan dengan  mengurangi  pembentukan  radikal  bebas  yang dengan  cara  memutuskan  reaksi  berantai  dan mengubahnya  menjadi  produk  yang  lebih  stabil (Permatasari et  al,2023 ).  Senyawa  terpenoid  terhadap
sperma memiliki aktivitas sebagai antioksidan dan dapat menghambat peroksidasi lipid. (Furi et al., 2020) Mekanisme antioksidan dalam proses pengenceran/pembekuan  ( thawing/  freeze )  pada penyimpanan  sperma  normal  (preverasi),  dapat digunakan  untuk  meminimalkan  kerusakan  akibat aktivitas  radikal  bebas.  Pada  penelitian  sebelumnya Ozimic et  al (2023),  senyawa  terpenoid  mampu memberikan  atom  hidrogen  kepada  radikal  bebas. Sehingga  membran  sperma  tetap  terjaga  dari  paparan ROS. Terpenoid termasuk dalam senyawa  antioksidan yang kuat.(Ozimic et al, 2023)
Kandungan  flavonoid  dalam Luvunga  sarmentosa memiliki  peran  penting  dalam  menekan  sintesis  ROS dengan  menghalangi  pembentukan  enzim  prooksidan atau menghilangkan berbagai elemen yang dapat memicu pembentukan radikal bebas. Selain itu, flavonoid dapat mencegah  radikal  hidroksil  dengan  mengikat  ke nitrat oksida (NO),  sehingga  pembentukan peroxynitrite tidak terjadi dan kerusakan sel dapat dihindari.(Suryadinata et al, 2021) Pada penelitian sebelumnya Wirenviona et al (2021) terbukti senyawa flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder yang berperan sebagai antioksidan karena  bermanfaat  dalam  mencegah  kerusakan  sel akibat stres oksidatif. (Wirenviona et al., 2021)
Steroid yang terkandung dalam ekstrak etanol Luvunga sarmentosa bertindak  sebagai  antioksidan  yaitu  dengan cara menangkap/ scavenging ROS, misalnya superoksida, dan  mengkelat  logam  (Fe2+  dan  Cu2+)  (Ayu  et  al., 2021). Bedasarkan penelitian yang telah dilakukan Akar et  al (2021) penggunaan  antioksidan  dapat  mencegah terbentuknya  oksidasi  selama  pembekuan  sperma, mengurangi dampak buruk dari ROS, dan meningkatkan kualitas  sperma  setelah  dicairkan  (proses thawing . ).
Steroid dapat meningkatkan transkripsi gen antiapoptosis,  seperti  Bcl-2,  Bcl-XL,  dan  Mcl-1,  yang dapat  menghambat  aktivasi  kaspase  untuk  apoptosis. Steroid  juga  dapat  menghambat  ekspresi  dan  aktivitas gen proapoptosis, seperti Fas, FasL, Bax, Bak, dan Bok,
yang  dapat  memicu  jalur  ekstrinsik  dan  intrinsik apoptosis.  Jalur  intrinsik  apoptosis  dipicu  oleh  sinyal stres  intraseluler,  seperti  kerusakan  DNA,  oksidasi, atau  kekurangan  nutrisi.  Sinyal  ini  menyebabkan pelepasan sitokrom c dari mitokondria, yang kemudian berikatan  dengan  protein  Apaf-1  dan  membentuk kompleks  yang  disebut  apoptosom.  Apoptosom mengaktifkan  kaspase-9,  yang  kemudian  mengaktifkan kaspase-3 dan kaspase-7.(Akar et al., 2021) Ekstrak akar Luvunga sarmentosa juga mengandung fenolik yang memiliki  mekanisme  sebagai  antioksidan  yaitu  melalui kemampuan  dari  gugus  fenol  untuk  mengikat  suatu radikal bebas dengan mendonorkan atom hidrogennya melalui proses transfer elektron.(Kisiriko et al., 2021) Pada penelitian sebelumnya Tvrdá et al. (2020) struktur fenolik  dalam  aksi  antioksidan  biologis  dengan menghilangkan superoksida, oksigen tunggal, peroksida, hidrogen  peroksida,  dan  radikal  hidroksil.  Fenolik penting  untuk  pertahanan  sel  normal  selama  stres oksidatif  molekul  fenolik  dengan  memberikan perlindungan pada sperma terhadap serangan oksidatif dan/atau  kemungkinan  kontaminasi  bakteri,  yang mengakibatkan  pemeliharaan  viabilitas  dan  aktivitas fungsional sperma mamalia yang lebih tinggi. (Tvrdá et al., 2020)
Ekstrak  etanol  96%  akar  Luvunga  sarmentosa mengandung  alkaloid  sebagai  antioksidan  dengan mendonorkan hidrogen atom pada objek radikal bebas (Ayu  et  al,  2021). Alkaloid  penyerap  radikal  bebas merupakan  mekanisme  pencegahan  oksidasi  amin biogenik dengan menghambat monoamine oxidase , yang bertanggung  jawab  atas  produksi  zat  beracun  seperti hidrogen  peroksida,  yang  menginduksi  stres  oksidatif mempertahankan kualitas sperma terkait dampak total alkaloid pada semen domba. Penelitian Rahimi-Madiseh et  al (2020)  alkaloid  dapat  melindungi  sperma  dari kerusakan  oksidatif  dan  meningkatkan  integritas membran  sperma  epididimis  domba  dapat  bermanfaat dalam IVF ( in vitro fertilization ). Alkaloid dapat berfungsi dalam beberapa cara penyerapan langsung radikal bebas,
mencegah  pembentukan  radikal  bebas  dengan menghambat  enzim-enzim  spesifik  yang  menghasilkan radikal  bebas  atau  menjaga  integritas  rantai  transpor elektron mitokondria selama kondisi stres, mengaktifkan sejumlah enzim antioksidan seperti GST, GSH-Px,  GR,  SOD.  (Rahimi-Madiseh  et  al.,  2020) Penyimpanan  sperma  untuk  ART  ( Asisted  Reproductive Technology )  menyebabkan  kerusakan  pada  tingkat molekuler  seperti  fragmentasi  DNA  akibat  proses freeze  dan  thawing  berdampak  pada  kerusakan  lebih lanjut  ditingkat  struktural  yaitu  pada  membran spermatozoa(Rophi  et  al,  2021).  Preservasi  ini bertujuan melindungi keutuhanan spermatozoa sebelum proses  IVF  ( In  Vitro  Fertilization )  yang  mana  sangat berdampak pada plasma membran spermatozoa sebagai prediktor  kapasitas  fertilisasi  sperma.  Kerusakan spermatozoa  akibat  stres  oksidatif  yang  tinggi berdampak  negatif  pada  keberhasilan  ART  yang seharusnya preservasi ini berperan dalam terlindunginya membran  sperma  dari  ROS  serta  mencegah  proses kematian sel. (Panjaitan, 2022)
Dengan  adanya  kelima  senyawa  tersebut,  dilakukan intervensi  agar    mengurangi  kerusakan  mekanik  atau kimia akibat proses preservasi pada sperma normal dan meningkatkan  kualitas  sperma  setelah  dibekukan. Berdasarkan penelitian sebelumnya Gualteri et al (2021) pemberian  antioksidan  dapat  menjaga  kualitas  sperma pada  saat  kondisi  stres  oksidatif  adalah  dengan pemberian  antioksidan,  yang  dapat  mereduksi, menangkal,  menekan  reaksi  ROS  dan  memperbaiki kerusakan  akibat  dari  efek  radikal  bebas  yang berdampak  penurunan  viabilitas  sperma,  disfungsi mitokondria, kerusakan DNA, dan disfungsi mitokondria  menghasilkan  peroksidasi  yang  berakibat rusaknya struktur membran spermatozoa. (Gualtieri et al., 2021)
Peningkatan jumlah ekor sperma yang melengkung/menggulung  sudah  dapat  dilihat  dari kelompok  perlakuan  pertama  dengan  konsentrasi  100
ng/ml  dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol. Perlakuan  pertama  dengan  konsentrasi  100  ng/ml  ini merupakan  konsentrasi  efektif  menurut  farmakologi merupakan  konsentrasi  paling  rendah  namun  dapat memberikan efek yang menguntungkan (Thomas & Ting, 2012).  Jumlah  ekor  sperma  yang  menggulung  atau melengkung  terus  mengalami  peningkatan  seiring dengan  peningkatan  konsentrasi  ekstrak  etanol    yang diberikan sehingga pemberian ekstrak etanol 96% akar saluang  belum  ( Luvunga  sarmentosa )  mempengaruhi integritas  membran  sperma  secara dose  dependent mengacu  pada  efeknya  yang  dapat  berubah  bila konsentrasi ekstrak diubah. Penelitian ini sejalan dengan penelitian  Leiva-Revilla et  al (2022)  bahwa  terjadi peningkatan viabilitas membran spermatozoa secara in vitro  untuk  perkembangan  preservasi  sperma  normal mencegah  kerusakan  mekanik  dan  kimiawi  pada  saat pross freeze atau thawing . (Leiva-Revilla et al., 2022)

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  96%  akar  saluang  belum  ( Luvunga sarmentosa ) berpengaruh terhadap integritas membran spermoatozoa  dengan  dosis  efektif  menurut farmakologi pada konsentrasi 100 ng/ml.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  serta  penghargaan  kepada  pihak-pihak yang telah berpartisipasi dalam kegiatan penelitian yang dilakukan.

## REFERENSI
Akar M, Kaya C, Çevik M. 2021. Evaluation of Current Antioxidant Profile in Semen. Journal Livestock Studies ; 61(1):37–45.
Ayu D, Kumaradewi P, Subaidah WA, Andayani. 2021. Phytochemical  Screening  And  Activity  Test of  Antioxidant  Ethanol  Extract  of  Buni Leaves ( Antidesma bunius L . Spreng ) Using DPPH  Method. Jurnal  Penelitian  Pendidikan IPA ; 7(2):276-280.
Brenda C., J. H. A. 2022. Peranan Suplemen dalam Tata Laksana Infertilitas. Cermin Dunia Kedokteran ,
49 (4),193–197. https://doi.org/10.55175/cdk.v49i4.217
Derbak, H., Moussaoui, M., Benberkane, A., & Ayad, A. 2021.  In-vitro  effect  of  Peganum  harmala total  alkaloids  on  spermatozoa  quality  and oxidative  stress  of  epididymal  ram  semen. Asian  Pacific  Journal  of  Reproduction , 10 (5),
232–238. https://doi.org/10.4103/2305- 0500.326721
Fabozzi, G., Starita, M. F., Rega, E., Alteri, A., Colicchia, A.,  Piscitelli,  C.,  &  Giannini,  P.  2016. Evaluation of the Efficiency of Two Different Freezing Media and Two Different Protocols to  Preserve  Human  Spermatozoa  from Cryoinjury. International Journal of Reproductive Medicine , 2016 , 1–6.
Furi, M., Basit, N. Al, Ikhtiarudin, I., & Utami, R. 2020. Penentuan  Total  Fenolik  ,  Flavonoid  dan  Uji Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  dan  Fraksi  Daun Kedabu  (Sonneratia  ovata  Backer)  Artikel Penelitian . 12 , 48–59.
Gualtieri, R., Kalthur, G., Barbato, V., Longobardi, S., Di Rella, F., Adiga, S. K., & Talevi, R. 2021. Sperm oxidative stress during in vitro manipulation and its  effects  on  sperm  function  and  embryo development. Antioxidants , 10 (7), 1–24.
Islamiati, U., Nisa, H. K., Ilmi, H., Tumewu, L., Adianti, M.,  Wahyuni,  T.  S.,  Widyawaruyanti,  A.,  & Hafid, A. F. 2022. Free Radical Scavenging and Analgesic Activities of 70% Ethanol Extract of Luvunga sarmentosa (BI.) Kurz from Central Kalimantan. Borneo Journal of Pharmacy , 5 (1), 63–70. https://doi.org/10.33084/bjop.v5i1.2983
Khan, I. M., Cao, Z., Liu, H., Khan, A., Rahman, S. U., Khan, M. Z., Sathanawongs, A., & Zhang, Y. 2021.  Impact  of  Cryopreservation  on Spermatozoa  Freeze-Thawed  Traits  and Relevance  OMICS  to  Assess  Sperm  Cryo- Tolerance  in  Farm  Animals. Frontiers  in Veterinary  Science , 8 (February),  1–14. https://doi.org/10.3389/fvets.2021.609180
Kisiriko,  M.,  Anastasiadi,  M.,  Terry,  L.  A.,  Yasri,  A., Beale, M. H., & Ward, J. L. 2021. Phenolics from  medicinal  and  aromatic  plants:
Characterisation and potential as biostimulants and bioprotectants. Molecules ,
26 (21).
https://doi.org/10.3390/molecules26216343
Kumar, A., Prasad, J. K., Srivastava, N., & Ghosh, S. K. 2019. Strategies to Minimize Various Stress-
Related  Freeze-Thaw  Damages  during Conventional Cryopreservation of Mammalian Spermatozoa. Biopreservation and
Biobanking , 17 (6), 603–612. https://doi.org/10.1089/bio.2019.0037
Leiva-Revilla, J., Rolón, M., Siyadatpanah, A., De Lourdes Pereira,  M.,  &  Nissapatorn,  V.  2022.  First study of in vitro protective effect of Lepidium meyenii  (Maca)  on  frozen-thawed  bovine spermatozoa. Veterinary World , 15 (6), 1481– 1488. https://doi.org/10.14202/vetworld.2022.148 1-1488 .
Melani  Cintia  Dewi,  N.  L.  P.,  Lindayani,  I.  K.,  &  Yuni Rahyani,  N.  K.  2022.  Gambaran  Faktor- Faktor  Penyebab  Infertilitas  Dan  Tingkat Keberhasilan  Program  Bayi  Tabung  Yang Diikuti  Oleh  Pasangan  Usia  Subur. Jurnal Ilmiah  Kebidanan  (The  Journal  Of  Midwifery) , 10 (1),
1–8. https://doi.org/10.33992/jik.v10i1.1557
Musfirah, Y., Saiful Bachri, M., Nurani, L. H., Farmasi, S.
T.,  Lestari,  B.,  Farmasi,  F.,  Ahmad,  U.,  &
Yogyakarta,  D.  2016.  Efek  Ekstrak  Etanol 70%  Akar  Saluang  Balum  (Lavanga sarmentosa, Blume kurz) Terhadap Spermatogenesis dan Gambaran Histopatologik Testis Mencit. Jurnal Pharmascience , 03 (02), 131–141. http://jps.unlam.ac.id/ Niken Meyliana Sari, M. Gandul Atik Yuliani, Eduardus Bimo Aksono Herupradoto, Nanik Hidayatik,  Nurhusien  Yimer,  &  Tatik Hernawati.  2023.  Red  dragon  (Hylocereus polyrhizus)  fruit  peel  extract  increased  the motility  and  viability  of  spermatozoa  of hypercholesterolemic rats (Rattus norvegicus). Ovozoa:  Journal  of  Animal Reproduction , 12 (1), 33–41. https://doi.org/10.20473/ovz.v12i1.2023.33-
41
Noh, S., Go, A., Kim, D. Bin, Park, M., Jeon, H. W., & Kim,  B.  2020.  Role  of  antioxidant  natural products  in  management  of  infertility:  A review  of  their  medicinal  potential.
Antioxidants ,
9 (10), 1–65. https://doi.org/10.3390/antiox9100957 Ozimic, S., Ban-Frangez, H., & Stimpfel, M. 2023. Sperm Cryopreservation Today: Approaches, Efficiency,  and  Pitfalls. Current  Issues  in Molecular Biology , 45 (6), 4716–4734. https://doi.org/10.3390/cimb45060300
Panjaitan FRG., Biomedik, M., Kedokteran, F., Islam, U., &  Agung,  S.  2022. Pengaruh  Ekstrak  Seledri Terhadap  Kadar  Sod  Dan  Ekspresi  Caspase-3 Testis Pada Keracunan Timbal Studi in vivo Tikus Terpapar Timbal Asetat .
Permatasari  S,  Rahmatina  H,  Widayati  R,  Eka  A,  I.  G. 2023. Pengaruh Rebusan Akar Saluang Belum
(Lavanga  sarmentosa)  terhadap  jumlah spermatid  pada  gambaran  histologis  tubulus seminiferus mencit. Jurnal Surya
Medika ;9(2);69-73.
Permatasari  S,  Syarpin,  Pujianto  DA.  2023. Photochemical  and  bioactivity  examination of  fractionated  saluang  belum  root  extract (Lavanga  Sarmentosa)  on  in-vitro  human sperm  motility.  Jurnal Kedokteran  dan Kesehatan Indonesia ;14(2);128-34.
Permatasari, S. Alexandra, A.Z. Augustina, I. Handayani,
S.  Teresa,  A.  'Pengaruh  Ekstrak  Etanol  96% Akar  Saluang  Belum  Terhadap  Viabilitas Spermatozoa Secara In Vitro. ( Unpublished ) Puspitaningrum,  D,  Rahfiludin,  M.  Z,  Shaluhiyah,  Z,  & Winarni,  S.  2022.  the  Role  of  Health Workers  and  Support  System  Counselors for  Women  With  Primary  Infertility. Indonesian  Journal  of  Health  Administration ,
10 (2),
241–250. https://doi.org/10.20473/jaki.v10i2.2022.241-
250
Rahimi-Madiseh,  M.,  Mohammadi,  M.,  Hassanvand,  A., Ahmadi,  R.,  Shahmohammadi,  M.,  & Rostamzadeh,  A.  2020.  Assessment  of  the toxicity effects of nicotine on sperm and IVF and  the  potential  protective  role  of silymarin—an  experimental  study  in  mice. Middle  East  Fertility  Society  Journal , 25 (1). https://doi.org/10.1186/s43043-020-00025-4
Rophi, A. H., Rahayu, S., & Ciptadi, G. 2021. The Effect Of  Morinda  Citrifolia  L.  Fruit  Extract Supplemented  in  to  Diluent  Tris-Egg  Yolk Toward  the  Abnormality  of  Goat’s Spermatozoa After Freezing at -80 C. Journal Life Science , 3 (1), 143–153.
Suryadinata,  R.  V.,  &  Sukarno, D.  A.  2021. Antioxidant activity in red mulberries on sperm development exposed  by  cigarette  smoke . 10 (2),  583–586. https://doi.org/10.15562/bmj.v10i2.2329
Tvrdá,  E.,  Michalko,  J.,  Árvay,  J.,  Vukovic,  N.  L.,
Ivanišová, E., Ďuračka, M., Matušíková, I., & Kačániová, M. 2020. Characterization of the Omija (Schisandra chinensis) Extract and Its Effects  on  the  Bovine  Sperm  Vitality  and Oxidative  Profile  during  in  Vitro  Storage.
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine , 2020 .
https://doi.org/10.1155/2020/7123780
Wirenviona, R., I’tishom, R., Khaerunnisa, S., Riris, A. A.
I.  D.  C.,  Susanti,  N.  F.,  Wahidah,  N.  J.,  & Kustantina,  A.  Z.  2021.  Solanum  betaceum Extract  as  a  Protective  on  Spermatozoa Morphology  of  Mice  Exposed  to  Lead Acetate. Qanun  Medika  -  Medical  Journal Faculty of Medicine Muhammadiyah Surabaya ,

## 5 (1),87.
https://doi.org/10.30651/jqm.v5i1.4594