Hasil Penelitian                                                      J. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XXIII No. 2 Th. 2012
AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK TUMBUHAN LUMUT HATI ( Marchantia paleacea )

## TERHADAP BAKTERI PATOGEN DAN PERUSAK PANGAN
[ Antibacterial Activity of Liverwort (Marchantia paleacea) Extract on Pathogenic and Food Spoilage Bacteria ]
Reza Fadhilla 1) *, Eka Aditya Putri Iskandar 2) dan Harsi Dewantari Kusumaningrum 3)
1) Program Studi Ilmu Pangan, Institut Pertanian Bogor, Bogor
2) UPT Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Cibodas, Bogor
3) Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor
Diterima 02 Agustus 2010 / Disetujui 26 Juli 2012

## ABSTRACT
Liverwort (Marchantia paleacea) from Cibodas Botanical Garden Bogor Indonesia was used as raw materials in this research. The objective of this  research  was  to  assess  the  potential  of  antibacterial  activity  of  liverwort  (M.  paleacea).  Maceration  using  4  different  solvents  i.e  ethanol, methanol, ethyl acetate, and hexane was used to extract the active compound. The potential of antibacterial activity of the extracts was assesed by agar diffusion method and direct-contact test by determining the minimum inhibitory concentration (MIC). The data showed that the ethanol extract had the biggest inhibition zone on three test bacteria. The inhibition zone and MIC were 10.8 mm and 0.7 mg/ml for S. aureus; 4.5 mm and 8.0 mg/ml for S . Typhimurium; 5.8 mm and 5.9 mg/ml for P. aeruginosa, respectively. The total phenol content of the extract was 22 mg/g. Phenolic, triterpenoid and flavonoid were positively detected in the extracts.
Keywords: antibacterial, Marchantia paleacea, minimum inhibitory concentration, solvent

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini adalah menguji aktivitas antibakteri ekstrak lumut hati ( Marchantia paleacea ) asal Kebun Raya Cibodas, Bogor, Indonesia. Ekstrak  senyawa  aktif  lumut  dilakukan  secara  maserasi  menggunakan  4  macam  pelarut,  meliputi  etanol,  metanol,  etil  asetat,  dan  heksana. Selanjutnya, pengujian aktivitas antibakteri ekstrak dilakukan dengan metode difusi agar terhadap masing-masing bakteri uji, dan hanya ekstrak terbaik yang diuji lanjut dengan uji kontak langsung. Hasil pengujian menunjukkan bahwa ekstrak etanol adalah ekstrak terbaik. Data zona hambat dan konsentrasi hambat minimal (MIC) ekstrak etanol masing-masing terhadap bakteri uji adalah S. aureus ; sebesar 10,8 mm dan 0,7 mg/ml, S. Typhimurium sebesar 4,5 mm dan 8,0 mg/ml, dan P. aeruginosa sebesar 5,8 mm and 5,9 mg/ml. Kandungan senyawa fenolik, triterpenoid, dan flavonoid diketahui positif ada, dengan analisis fenol total sebesar 22 mg/gr.
Kata kunci: antibakteri, Marchantia paleacea , konsentrasi hambat minimal (MIC), pelarut
PENDAHULUAN 1
Penggunaan  lumut  hati Marchantia ,  khususnya  jenis Marchantia polymorpha sebagai tumbuhan obat tradisional telah lama  diterapkan  di  Cina,  Eropa,  dan  Amerika  Utara.  Beragam aktivitas  biologis  yang  teramati  dari  ekstrak  lumut  tersebut meliputi antibakteri, antikapang, antipiretik, antitoksin, antiseptik, diuretik,  dan  antihepatitis  (Asakawa,  2007).  Komponen-kom- ponen bioaktif yang berperan penting dalam beragam aktivitas tersebut  adalah  senyawa  terpenoid  (monoterpenoid,  sesquiter- penoid,  diterpenoid,  triterpenoid),  dan  fenolik  sederhana (Asakawa et  al., 2009;  Ilhan et  al., 2006;  Xiao et  al .,  2006). Lebih  rinci  Asakawa et  al. (2009)  menyatakan  bahwa kandungan  fenolik  sederhana  pada M.  polymorpha sejumlah besar  dikarakteristik  dalam  bentuk  lipofilik  dan  hidrofilik, termasuk  flavon  dan  flavon  glikosida  yang  diekstrak  dengan menggunakan pelarut polar metanol.
*Korespondensi Penulis : Email : microzaster@gmail.com
Pemanfaatan  ekstrak  tumbuh-tumbuhan  sebagai  alternatif untuk  bahan  pengawet  pangan  telah  sejak  lama  diterapkan, salah  satunya  adalah  ekstrak  sirih.  Ekstrak  dari  daun  sirih mengandung komponen bioaktif golongan terpenoid dan fenolik yang  berfungsi  sebagai  antibakteri  terhadap  beberapa  bakteri patogen dan pembusuk pangan (Suliantari et al ., 2008). Untuk itu  ekplorasi  terhadap  senyawa  antibakteri  baru  sejenis  terus dilakukan,  salah  satunya  yaitu  menggali  potensi  kandungan aktivitas  dari  tumbuhan  lumut  sebagai  sumber  alternatif  baru antibakteri untuk pangan.
Bakteri uji yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya adalah Salmonella Typhimurium ATCC 14028, Staphylococcus aureus ATCC  5923,  dan Pseudomonas  aeruginosa . S. Typhimurium ATCC  14028  dan S.  aureus ATCC  5923  me- rupakan bakteri patogen yang sering menyebabkan kontaminasi pangan.  Diperkirakan  lebih  dari  1/3  kasus Foodborne  disease yang terjadi di dunia disebabkan oleh S. Typhimurium (Antunes et al ., 2003).
S. Typhimurium  dapat  mengakibatkan  penyakit  salmo- nelosis  pada  manusia,  sedangkan S.  aureus dikenal  sebagai
Hasil Penelitian                                                      J. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XXIII No. 2 Th. 2012
Zona Penghambatan (Z’) Pertumbuhan Mikroba (Z) Z Z”
bakteri  penyebab  keracunan  pangan  ( food  poisoning )  karena menghasilkan  enterotoksin  tahan  panas  (100  C  selama  30 menit) (Heredia et al ., 2009). Sebagai bakteri perusak pangan, dominasi P.  aeruginosa dalam  menimbulkan  kerusakan dikarenakan  oleh  kemampuan  bakteri  ini  menghasilkan  enzim yang  dapat  memecah  komponen  lemak  dan  protein  dalam pangan.  Oleh  karena  itu,  penggunaan  ekstrak  lumut  hati  jenis Marchantia paleacea diharapkan nantinya dapat menginaktifkan ketiga jenis bakteri tersebut.
Di  Indonesia  lumut  jenis Marchantia tumbuh  banyak  di dataran tinggi beriklim sejuk, terutama jenis M. paleacea yang selama ini pemanfaatan terhadap kandungan senyawa bioaktif- nya  belum  tereksplorasi  dengan  baik.  Lumut  jenis  ini  tumbuh dengan cepat dan mendominasi diantara tumbuhan lumut jenis lainnya sehingga dikategorikan sebagai tumbuhan gulma.
Tujuan  penelitian  adalah  memanfaatkan  ekstrak M. paleacea sebagai  sumber  antibakteri  baru  asal  Indonesia  dan diharapkan isolat ekstrak ini nantinya mempunyai aktivitas luas terhadap bakteri patogen dan perusak pangan.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah lumut  hati  jenis Marchantia  paleacea koleksi  Taman  Lumut Kebun  Raya  Cibodas  Kabupaten  Bogor.  Bakteri  referensi  uji yang digunakan adalah bakteri patogen pangan Staphylococcus aureus ATCC 5923 , dan Salmonella Typhimurium ATCC 14028 , serta  isolat  lokal  bakteri  perusak  pangan Pseudomonas aeruginosa koleksi  Laboratorium  Seafast  Center.  Media  dan bahan  kimia  yang  digunakan  di  antaranya Tryptic  Soy  Agar (TSA), Tryptic Soy Broth (TSB), Plate Count Agar (PCA), pelarut alkohol  etanol,  metanol,  heksana,  dan  etil  asetat  serta  NaCl 0,85%.

## Ekstraksi komponen antibakteri
Proses ekstraksi dilakukan menurut (Kumar dan Chaudhary, 2010) dilakukan bertahap secara maserasi dengan menimbang sebanyak  10  gram  bubuk  lumut  kering,  dan  dicampur  dengan pelarut etanol secara bertahap (100 ml/24 jam) sebanyak 3 kali atau  selama  3  hari.  Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan  cara digoyang  dengan  penggoyang  ( shaker ),  kemudian  disaring menggunakan  kertas  saring.  Keseluruhan  hasil  ekstraksi  di- campur kembali setelah 3x24 jam proses ekstraksi. Selanjutnya pelarut diuapkan dengan alat Rotavapor (EL 131) dengan water bath. Alat ini memiliki kapasitas suhu water bath yang dapat di- sesuaikan  antara  20–100°C  dan  kecepatan  rotasi  antara  30– 220  rpm.  Residu  yang  tertinggal  dihilangkan  dengan  gas nitrogen  sehingga  didapat  padatan  terlarut,  dan  dihitung  total rendemen.  Proses  ekstraksi  serupa  juga  dilakukan  terhadap pelarut metanol, etil asetat, dan heksana.
Awal  penelitian  dilakukan  persiapan  terhadap  bahan  baku lumut  hati  jenis M.  paleacea meliputi  proses  sortasi,  pe- ngeringan  suhu  ruang  (tidak  terpapar  sinar  matahari  secara langsung), analisis kadar air (AOAC, 2007). Proses pengeringan dilakukan  sampai  didapat  kadar  air  konstan,  yaitu  dilakukan selama  14  hari  dengan  kadar  air  lumut  kering  akhir  sebesar
17,47%.  Selanjutnya  sebelum  diekstraksi,  lumut  kering dihancurkan  menjadi  bentuk  bubuk  dengan  menggunakan blender .

## Uji aktivitas antibakteri
Ekstrak dari masing-masing pelarut kemudian diuji aktivitas antibakteri  dengan  metode  agar  difusi  sumur  (Bodade et  al., 2008), terhadap bakteri S. aureus ATCC 5923 , S. Typhimurium ATCC  14028  dan isolat  lokal P.  aeruginosa. Pengujian  di- lakukan dengan cara memasukkan ekstrak dengan konsentrasi awal  (100  mg/ml)  sebanyak  60  µl  ke  dalam  sumur  (  6  mm) dalam  media  agar  yang  telah  diinokulasi  bakteri  uji.  Inkubasi selanjutnya  menggunakan  suhu  37  C  selama  24  jam  untuk mendapatkan  ekstrak  terbaik.  Ekstrak  terbaik  diperoleh  dari pengukuran  zona  penghambatan  terbesar  (mm)  yang  di- hasilkan. Zona penghambatan tersebut ditunjukkan dari daerah bening yang terbentuk, dan diukur dari tepi sumur (Z ’ ) (Gambar 1).  Ekstrak  ini  kemudian  diuji  lanjut  dengan  uji  kontak  untuk menentukan  nilai  MIC  ( Minimum  Inhibitory  Concentration ) ekstrak.
Gambar 1.  Pengukuran  zona  penghambatan  dengan  metode  difusi agar nilai  MIC  dinyatakan  sebagai  konsentrasi  terendah ekstrak  lumut  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  sebanyak  90%  atau  menurunkan  sebanyak  1  log koloni dari jumlah koloni awal (Hancock et al ., 2008)
Dalam  penelitian  ini,  nilai  MIC  diperoleh  dari  perhitungan selisih  antara  jumlah  bakteri  inokulum  awal  dengan  hasil  uji kontak,  sedangkan  konsentrasi  0,0  mg/ml  berfungsi  sebagai kontrol  (tanpa  ekstrak),  dan  hanya  digunakan  untuk  melihat kemampuan  tumbuh  dari  bakteri  inokulum  awal.  Uji  kontak dilakukan  dengan  cara  memasukkan  ekstrak  dengan  konsen- trasi 0,1 sampai 10 mg/ml ke dalam tabung reaksi. Konsentrasi tersebut  diperoleh  dengan  cara  mengencerkan  konsentrasi ekstrak  pekat  (100  mg/ml)  menggunakan  pelarut  etanol. Dengan  memakai  persamaan  V 1 N 1 =  V 2 N 2 ,  dapat  diketahui berapa  jumlah  ekstrak  (ml)  yang  harus  dimasukkan  ke  dalam campuran TSB (ml) dan bakteri uji. Diketahui bahwa V 1 adalah volume ekstrak (ml) yang akan dimasukkan, V 2 adalah volume akhir  yang  ingin  dicapai  (2  ml),  N 1 adalah  konsentrasi  ekstrak pekat,  dan  N 2 adalah  konsentrasi  ekstrak  yang  ingin  dimasuk- kan.  Inokulasi  bakteri  uji  yang  digunakan  adalah  umur  24  jam dengan jumlah bakteri 10 6 sampai 10 7 koloni/ml.
Penentuan  nilai  konsentrasi  ekstrak  tersebut  didasarkan pada tingkat sensitivitas dari bakteri uji, dengan asumsi bahwa tingkat  sensitivitas S.  aureus ATCC  5923  lebih  tinggi  di- bandingkan S. Typhimurium ATCC  14028  dan P.  aeruginosa .
Hasil Penelitian                                                      J. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XXIII No. 2 Th. 2012
Inkubasi dilakukan secara  goyang pada suhu 37  C selama 24 jam, dan diplating dalam cawan petri untuk menentukan jumlah bakteri pada setiap seri tabung pengujian. Selanjutnya kembali dilakukan inkubasi terhadap cawan pada suhu 37  C selama 48 jam.

## Uji fitokimia kualitatif
Ekstrak terbaik yang diperoleh dari uji difusi sumur selanjut- nya dianalisis komponen fitokimianya secara kualitatif (Harbone, 1996).  Pengujian  dilakukan  terhadap  beberapa  senyawa meliputi  senyawa  fenolik,  steroid,  triterpenoid,  tanin,  dan flavonoid. Analisis terhadap senyawa fenolik dilakukan dengan mengambil  sebanyak  1  ml  ekstrak,  lalu  diteteskan  pada spot plate dan ditambahkan NaOH 10%. Terbentuknya warna merah menandakan  uji  positif  adanya  kandungan  senyawa  fenol hidrokuinon. Analisis senyawa steroid dan triterpenoid dilakukan dengan menimbang sebanyak 1 mg ekstrak kering dan dilarut- kan ke dalam 2 ml kloroform. Selanjutnya ditambahkan 10 tetes asam  asetat  anhidrida  dan  3  tetes  asam  sulfat  pekat.  Larutan dikocok  perlahan  dan  dibiarkan  beberapa  menit.  Uji  positif ditandai  dengan  terbentuknya  warna  hijau  (senyawa  steroid) dan  warna  merah  atau  ungu  (triterpenoid).  Analisis  senyawa tanin  dilakukan  dengan  menimbang  sebanyak  1  gram  ekstrak yang  telah  dikeringkan  dan  dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala, selanjutnya  ditambahkan  12  ml  air  panas,  dan  dididihkan selama  15  menit  lalu  disaring.  Filtrat  kemudian  ditambah  be- berapa  ml  larutan  FeCl 3 1%.  Timbulnya  warna  biru  tua  atau hijau kehitaman menunjukkan tanin positif.
Analisis  senyawa  flavonoid  dilakukan  dengan  mengambil ekstrak  sebanyak  1  ml  dan  dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala serta  ditambahkan  100  ml  air  panas,  kemudian  dididihkan selama 5 menit. Selanjutnya disaring, filtrat sebanyak 10 ml di- tambah 0,5 gram serbuk magnesium dan 2 ml alkohol klorhidrat (campuran  HCl  37%  dan  etanol  95%  dengan  volume  yang sama)  dan  20  ml  amil  alkohol.  Campuran  kemudian  dikocok dengan  kuat.  Terbentuknya  warna  merah,  kuning  dan  jingga pada lapisan amil alkohol menunjukkan adanya flavonoid.

## Uji total fenol
Analisis kandungan total fenol menggunakan metode Folin– Ciocalteu dimodifikasi  (Sanaka et  al .,  2005)  dilakukan  dengan menggunakan  alat  spektrofotometer.  Sebanyak  5  ml  ekstrak disentrifus  pada  kecepatan  3000  rpm  selama  15  menit, supernatan  yang  terbentuk  disaring  hingga  diperoleh  filtrat. Filtrat  kemudian  ditera  sebanyak  5  ml  dalam  labu  takar,  lalu dipipet 0,4 ml ke dalam tabung reaksi. Ke dalam tabung reaksi tersebut  ditambahkan  0,4  ml  reagen Folin–Ciocalteu dan divorteks,  selanjutnya  ditambahkan  4,2  ml  5%  larutan sodium karbonat. Sampel didiamkan selama beberapa menit pada suhu ruang  sebelum  dibaca  serapan  warnanya  pada  panjang gelombang  760  nm.  Kurva  standar  dibuat  dengan  melarutkan asam  galat  dalam  metanol  85%  dengan  berbagai  konsentrasi 10–100  mgL -1 .  Perhitungan  total  fenol  dihitung  menggunakan rumus persamaan regresi y = ax + b, dan dinyatakan sebagai total fenol/gram berat kering.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar air dan total rendemen ekstrak lumut
Hasil  pengukuran  kadar  air  lumut  segar  diketahui  sebesar 89,02%,  setelah  melalui  proses  pengeringan  maka  didapat lumut  kering  dengan  kadar  air  sebesar  17,47%.  Pengeringan yang  dilakukan  pada  suhu  ruang  bertujuan  untuk  menghindari terjadinya kerusakan kandungan senyawa bioaktif lumut akibat penggunaan panas.
Harborne (2006) menyatakan bahwa penggunaan panas di atas  suhu  50  C  akan  merusak  senyawa  volatil  dari  golongan terpenoid  dan  fenolik  dengan  berat  molekul  rendah.  Penelitian lainnya dari pengaruh panas yaitu pengujian aktivitas antibakteri kuersetin  dan  kaemferol  dari  golongan  flavonoid  menurun sebesar 48% dan 68% karena pengaruh pemanasan suhu 60°C selama 2 jam (Murcia et al ., 2009). Sebelum proses ekstraksi, lumut kering terlebih dahulu dihaluskan menjadi bentuk bubuk. Hal  ini  bertujuan  untuk  memperbesar  luas  permukaan  bahan dan  menyeragamkan  ukuran  partikelnya  agar  mempermudah kontak  antara  bahan  dengan  pelarutnya  selama  proses ekstraksi berlangsung.
Total  Rendemen  tiap  ekstrak  yang  didapat  berbeda-beda, ekstrak  metanol  menghasilkan  rendemen  ekstrak  paling  tinggi yaitu sebesar 15,57%, ekstrak etanol 5,98%, ekstrak etil asetat 2,30%,  dan  ekstrak  heksana  0,87%.  Data  rendemen  tersebut menunjukkan  bahwa  komponen-komponen  dari  ekstrak  lumut sebagian  besar  merupakan  senyawa  polar  yang  larut  dalam pelarut polar. Perbedaan rendemen tiap ekstrak ini disebabkan oleh adanya perbedaan kelarutan senyawa yang diekstrak pada tiap pelarut yang digunakan, sehingga turut mempengaruhi hasil dan  karakteristik  senyawa  kimia  yang  terekstrak  (Harborne, 2006).
Aktivitas  antibakteri  berbagai  ekstrak  lumut  hati M. paleacea
Hasil screening aktivitas antibakteri berbagai ekstrak lumut terhadap  bakteri  uji  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  lumut merupakan  ekstrak  dengan  aktivitas  paling  baik,  berdasarkan pengukuran terhadap zona hambat (Tabel 1). Data dari Tabel 1 juga menunjukkan bahwa S. aureus adalah bakteri yang paling sensitif  terhadap  semua  ekstrak  lumut  dibandingkan S. Typhimurium ATCC 14028, dan P. aeruginosa .
Tabel 1.   Aktivitas antibakteri berbagai ekstrak lumut pada konsentrasi 100  mg/ml  terhadap  bakteri S.  aureus ATCC  5923 ,  P. aeruginosa, dan S. Typhimurium ATCC 14028 Ekstrak Zona Hambat terhadap Bakteri Uji (mm) S. aureus ATCC 5923 P. aeruginosa S. Typhimurium ATCC 14028 Etanol Metanol Etil Asetat Heksana 10,83 8,00 8,71 2,70 4,51 4,32 2,00 - 5,81 3,50 3,80 -
a b c c d e e 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0.0 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 5.0 Ju m la h Ba kt er i ( Lo g ko lo ni/ m l) Konsentrasi Ekstrak Lumut (mg/ml) a a a b b c d e f g 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0.0 5.0 6.0 6.3 6.6 6.9 7.0 8.0 9.0 10.0 15.0 Ju m la h Ba kt er i ( Lo g ko lo ni /m l) Kosentrasi Ekstrak Lumut (mg/ml)
Sensitivitas S.  aureus ATCC  5923  yang  tinggi  terhadap ekstrak etanol lumut disebabkan karena struktur dinding selnya. Bakteri  Gram  positif  seperti S.  aureus tidak  memiliki  membran luar  seperti  yang  dimiliki  kebanyakan  bakteri  Gram  negatif. Disamping  itu S.  aureus memiliki  dinding  sel  yang  bersifat hidrofobik  pada  bagian  luarnya,  sehingga  konsentrasi  rendah dari  ekstrak  lumut  (<1  mg/ml)  akan  dapat  membunuh  seluruh bakteri S. aureus (Madigan et al., 2009). Bachir et al . (2012) menyatakan bahwa bakteri Gram positif seperti S. aureus memiliki lapisan peptidoglikan yang lebih tebal tanpa adanya membran luar. Adanya aktivitas senyawa fenolik akan  dengan  mudah  menyebabkan  kerusakan  pada  dinding dan  membran  sel  sehingga  akan  menggangu  sistem  transpor aktif.  Peptidoglikan  yang  terdapat  pada  dinding  sel  terdiri  dari turunan  gula  yaitu  asam  N-asetilglukosamin  dan  asam  N- asetilmuramat serta asam amino L-alanin, D-alanin, D-glutamat, dan  lisin.  Dinding  sel  bakteri  Gram  positif  mengandung  90% peptidoglikan,  sedangkan  pada  bakteri  Gram  negatif  me- ngandung  hanya  5-20%  peptidoglikan,  tetapi  memiliki  lapisan luar kedua yang disebut lapisan lipopolisakarida (LPS) yang ter- susun  oleh  fosfolipid,  polisakarida  dan  protein  (Madigan et  al. 2009). Asakawa et al . (2009) melaporkan bahwa faktor penting dari aktivitas antibakteri ekstrak lumut M. polymorpha terutama disebabkan oleh komponen Marchantin A. Marchantin A adalah suatu senyawa fenolik sederhana yang dimiliki oleh semua jenis lumut Marchantia . Untuk mendapatkan 120 senyawa ini dalam bentuk murni dibutuhkan sebanyak  6,67 kg lumut M. paleacea kering.
Sebagian  besar  antibakteri  asal  tumbuhan  diketahui merupakan  metabolit  sekunder  yang  teridentifikasi  sebagai golongan  fenolik  dan  terpenoid  dalam  fraksi  minyak  atsiri (Harborne,  2006).  Mekanisme  antibakteri  senyawa  fenolik  dan terpenoid adalah merusak struktur dinding sel dan mengganggu kerja  transpor  aktif  dan  kekuatan  proton  di  dalam  membran sitoplasma  bakteri.  Selanjutnya  senyawa  tersebut  akan  men- denaturasi  dan  menginaktifkan  protein  seperti  enzim  sehingga mempengaruhi metabolisme sel (Ruiz et al., 2012).
Daya  hambat  ekstrak  etanol  lumut M.  paleacea terhadap bakteri uji
Berdasarkan data dari zona hambat (Tabel 1), maka hanya ekstrak  etanol  lumut  yang  digunakan  dalam  uji  lanjut  karena mempunyai  aktivitas  antibakteri  paling  baik  diantara  ekstrak lainnya.  Untuk  menentukan  nilai  MIC  maka  perhitungan  di- bandingkan berdasarkan inokulum awal bakteri uji (Hancock et al ., 2008). Gambar 2 menunjukkan pengaruh berbagai konsen- trasi  ekstrak  etanol  lumut  terhadap S.  aureus ATCC  5923, dengan  inokulum  awal  bakteri  sebesar  6,30  log  koloni/ml. Setelah  mengalami  pengontakkan,  maka  nilai  MIC  ekstrak etanol  lumut  terhadap S.  aureus ATCC  5923  didapat  pada konsentrasi  0,7  mg/ml,  dengan  jumlah  akhir  bakteri  5,29  log koloni/ml.
Beberapa  penelitian  serupa,  terhadap  pengujian  aktivitas antibakteri  ekstrak M.  polymorpha menunjukkan  hasil  yang beragam.  Asakawa  (2008),  Mewari  dan  Kumar  (2008)  dan Sabovljevi et al . (2010) dalam penelitiannya melaporkan bahwa nilai MIC dari ekstrak diperoleh  adalah sebesar  25 µm/ml, 0,3 mg/ml,  dan  2,0  mg/ml  terhadap S.  aureus .  Xiao et  al .  (2005)
juga  melaporkan  adanya  aktivitas  antibakteri  ekstrak  lumut M. Convoluta terhadap S.  aureus dengan  nilai  MIC  sebesar  0,63 mg/ml.  Ekstrak  etanol  mengandung  molekul-molekul  yang bersifat  hidrofilik  dibandingkan  hidrofobik.  Bakteri  Gram  positif seperti S.  aureus tidak  mempunyai  lapisan  lipopolisakarida (LPS)  sehingga  senyawa  antibakteri  yang  bersifat  hidrofilik maupun  hidrofobik  dapat  dengan  mudah  melewati  dinding  sel. Kerusakan  yang  terjadi  pada  dinding,  membran,  dan  bagian internal  sel  akan  menyebabkan  bakteri  tidak  dapat  menahan tekanan osmotik tinggi dari dalam sel sehingga mengakibatkan sel menjadi lisis (CDC, 2008).
Gambar 2.  Pengaruh  berbagai  konsentrasi  ekstrak  etanol  lumut terhadap S.  aureus ATCC  5923  dengan  inokulum  awal 6,30 log koloni/ml. Huruf yang berbeda pada setiap faktor perlakuan menunjukkan perbedaan nyata pada taraf uji p = 0,05
Gambar  3  menunjukkan  pengaruh  berbagai  konsentrasi ekstrak  etanol  lumut  terhadap S. Typhimurium ATCC  14028 dengan  inokulum  awal  bakteri  sebesar  7,23  log  koloni/ml. Setelah  dikontakkan  dengan  ekstrak  maka  nilai  MIC  diperoleh pada konsentrasi 8,0 mg/ml dengan jumlah bakteri akhir adalah 5,29 log koloni/ml.
Gambar 3.  Pengaruh  berbagai  konsentrasi  ekstrak  etanol  lumut terhadap S. Typhimurium ATCC  14028 dengan  inokulum awal  7,23  log  koloni/ml.  Huruf  yang  berbeda  pada  setiap faktor perlakuan menunjukkan perbedaan nyata pada taraf uji p = 0,05
Pengujian  daya  hambat  ekstrak  etanol  lumut  terhadap S. Typhimurium ATCC  14028  dan P.  aeruginosa menggunakan konsentrasi  ekstrak  yang  lebih  tinggi  dibandingkan S.  aureus .
a a b c d e e f f g 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0.0 5.0 5.3 5.6 5.9 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 15.0 Ju m la h Ba kt er i ( Lo g ko lo ni /m l)
Konsentrasi Ekstrak Lumut (mg/ml)
Hal ini karena perbedaan tingkat sensitifitas dari masing-masing bakteri  disebabkan  oleh  perbedaan  pada  struktur  dinding  sel antara bakteri Gram negatif dan bakteri Gram positif. Pengaruh berbagai  konsentrasi  ekstrak  etanol  lumut  terhadap P. aeruginosa ditunjukkan pada Gambar 4, dengan inokulum awal bakteri  adalah  6,81  log  koloni/ml.  Setelah  dilakukan  uji  kontak dengan berbagai konsentrasi ekstrak maka diperoleh nilai MIC sebesar  5,9  mg/ml  dengan  jumlah  bakteri  akhir  5,61  log koloni/ml.  Data  MIC  antara  kedua  bakteri  uji  Gram  negatif menunjukkan  bahwa P.  aeruginosa lebih  sensitif  terhadap ekstrak  etanol  lumut  dibandingkan S. Typhimurium ATCC 14028.  Adanya  perbedaan  nilai  MIC  tersebut  diduga disebabkan  karena  perbedaan  spesifik  pada  kedua  membran luarnya,  seperti  ukuran  porin.  Porin  adalah  sebuah  molekul protein yang mengatur keluar masuk senyawa-senyawa tertentu ke dalam sel, serta memudahkan difusi pasif senyawa hidrofilik dengan berat molekul rendah seperti glukosa, asam amino, dan ion-ion tertentu (Moat et al ., 2002). Setiap bakteri Gram negatif mempunyai  porin,  tetapi  dengan  ukuran  dan  berat  porin  yang berbeda. S. Typhimurium  mempunyai  berat  molekul  protein porin  lebih  kecil  yaitu  600  kda  dibandingkan P.  aeruginosa sebesar  3000  kda.  Protein  porin  PAO1  pada P.  aureginosa berukuran  2  nm,  lebih  besar  dibanding  protein  porin  S. Typhimurium dengan diameter 1,4 nm (Benz, 2004).
Gambar 4.  Pengaruh  berbagai  konsentrasi  ekstrak  etanol  lumut terhadap P.  aeruginosa dengan  inokulum  awal  6,81  log koloni/ml. Huruf yang berbeda pada setiap faktor perlakuan menunjukkan perbedaan nyata pada taraf uji p = 0,05
Beberapa  penelitian  sebelumnya  juga  menunjukkan  hasil yang  beragam.  Asakawa  (2007)  melaporkan  nilai  MIC  ekstrak lumut Marchantia  sp .  terhadap P.  aeruginosa dan S. Typhimurium sebesar 0,1 mg/ml. Tetapi, Xiao e t al. (2005) me- laporkan  tidak  adanya  pengaruh  ekstrak  lumut M.  convoluta yang  diuji  terhadap P.  aeruginosa .  Komponen  penyusun membran  luar P.  aureginosa adalah  asam  lemak  tidak  jenuh, yang  dapat  berubah  bentuk  dari  trains  ke  bentuk  sis.  Apabila perubahan  ini  terjadi,  maka  senyawa  antibakteri  yang  bersifat hidrofilik  akan  lebih  mudah  masuk  ke  dalam  sel.  Senyawa hidrofilik golongan fenolik akan merusak sel bakteri dengan cara mengubah permeabilitas membran sitoplasma sehingga menye- babkan kebocoran bahan-bahan intraseluler, serta dapat meng- inaktifkan dan mendenaturasi protein seperti enzim. Terjadinya kerusakan pada membran berakibat terhambatnya aktivitas dan
biosintesis  enzim-enzim  spesifik  yang  diperlukan  dalam  reaksi metabolisme (Rehm, 2008).
Aktivitas  senyawa  antibakteri  ekstrak  etanol  lumut  diduga bereaksi  pada  dinding  sel  bakteri  dan  merusak  komponen fospolipid pada membran sel. Selanjutnya senyawa antibakteri akan berdifusi melalui membran sitoplasma dan mempengaruhi materi genetik dalam sel.
Kandungan  senyawa  bioaktif dan  total  fenol  lumut  hati M. paleacea
Senyawa fenolik dan terpenoid adalah komponen terpenting yang terkait dengan sifat antibakteri ekstrak lumut. Oleh karena itu,  uji  kualitatif  yang  dilakukan  merupakan  tahap  awal  untuk mengetahui  keberadaan  suatu  senyawa  antibakteri.  Tabel  2 menunjukkan  hasil  analisis  kualitatif  kandungan  ekstrak  etanol lumut.  Komponen-komponen  senyawa  kimia  seperti  fenolik, steroid,  triterpenoid,  tannin,  dan  flavonoid  diketahui  positif  ke- beradaannya.
Tabel 2. Komponen ekstrak etanol
Komponen Keberadaan Fenolik Steroid Triterpenoid Tanin Flavonoid + + + + +
Keterangan: + (positif) ada
Asakawa  (2007)  menyatakan  bahwa  aktivitas  antibakteri ekstrak Marchantia dipengaruhi  kuat  oleh  Marchantin  A,  yaitu suatu  senyawa  fenolik  sederhana.  Oleh  karena  itu,  dalam pengujian  kuantitatif  pengukuran  hanya  dilakukan  terhadap senyawa  fenolik.  Hasil  pengukuran  total  fenol  ekstrak  etanol lumut  adalah  sebesar  22  mg/g  berat  kering.  Senyawa  fenolik merupakan substansi yang mempunyai cincin aromatik dengan satu  atau  lebih  gugus  hidroksil  sehingga  sifatnya  mudah  larut dalam pelarut polar.
Asakawa  (2004)  melaporkan  bahwa  sebagian  besar  lumut Marchantia sp.  kaya  akan  senyawa  fenolik  dan  terpenoid,  ter- utama jenis mono-, sesqui-, dan diterpenoid, senyawa-senyawa lipofilik  aromatis  (bibenzil,  bisbibenzil,  benzoat,  sinamat,  alkil fenol  rantai  panjang,  naftalen,  isokumarin)  dan  asetogenin. Umumnya  senyawa-senyawa  tersebut  larut  dalam  pelarut organik  yang  bersifat  polar  (Niu et  al .,  2006).  Hal  ini  memberi dugaan bahwa kemungkinan ekstrak ini nantinya dapat diguna- kan  dalam  produk  olahan  minuman,  serta  dapat  digunakan sebagai bahan sanitaiser untuk pangan.

## KESIMPULAN
Aktivitas  ekstrak  etanol  lumut  hati  mempunyai  antibakteri tertinggi dibandingkan dengan ekstrak metanol, etil asetat, dan heksana. Pengukuran zona hambat ekstrak etanol terhadap S. aureus ATCC  5923, S. Typhimurium  ATCC  14028,  dan P. aeruginosa berturut-turut adalah 10,8 mm, 5,8 mm, dan 4,5 mm. Untuk nilai MIC ekstrak etanol terhadap S. aureus ATCC 5923, S. Typhimurium ATCC 14028, dan P. aeruginosa berturut-turut adalah  0,7  mg/ml,  8,0  mg/ml,  dan  5,9  mg/ml.  Ekstrak  etanol lumut  memiliki  kecenderungan  sifat  antibakteri  lebih  baik
Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip DOI: 10.6066/jtip.2012.23.2.126
Hasil Penelitian                                                      J. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XXIII No. 2 Th. 2012
terhadap S.  aureus ATCC  5923.  Kandungan  senyawa  fenolik, triterpenoid,  flavonoid  diketahui  positif  ada  dengan  kandungan total fenol sebesar 22 mg/g. Data hasil penelitian menunjukkan bahwa komponen antibakteri dari ekstrak lumut sebagian besar merupakan  senyawa  polar  yang  larut  dalam  pelarut  polar. Kemungkinan  aplikasi  ekstrak  pada  produk  pangan  dapat digunakan  dalam  produk-produk  olahan  minuman.  Tetapi  me- ngingat  belum  banyaknya  data  pendukung  yang  dibutuhkan, maka  perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai  kan- dungan senyawa kimia dan uji toksisitas ekstrak.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada  UPT  Balai Konservasi  Tumbuhan  Kebun  Raya  Cibodas,  Bogor,  atas penyediaan tumbuhan Lumut Hati ( Marchantia paleacea ).

## DAFTAR PUSTAKA
Antunes  P,  Réu  C,  Sousa  JC,  Peixe  L,  Pestana  N.  2003. Incidence  of Salmonella from  poultry  products  and  their susceptibility  to  antimicrobial  agents.  Inter  J  Food  Microb 82: 97-103. DOI: 10.1016/S0168-1605(02)00251-9.
[AOAC] Association of Official Analytical Chemists International. 2007.  Official  Methods  of  Analysis  of  AOAC  International. 18 th Edition. Arlington VA. USA.
Asakawa Y, Ludwiczuk A, Nagashima F, Toyota, M, Hashimoto T,  Tori  M,  Fukuyama  Y,  Harinantenaina  L.  2009. Bryophytes:  bio-  and  chemical  diversity,  bioactivity  and chemosystematics.  Int  J  for  Reviews  and  Communications in  Heterocyclic  Chem  77:  95-150. DOI:  10.3987/REV-08- SR(F)3.
Asakawa  Y.  2004.  Chemosystematics  of  the  hepaticae. Tokushima  Japan.  Phytochem  65:  623–669. DOI: 10.1016/j.phytochem.2004.01.003.
Asakawa  Y.  2007.  Biologically  active  compounds  from bryophytes.  Pure  Appl  Chem  79:  557–580. DOI:  10.1351/ pac200779040557.
Asakawa  Y.  2008.  Liverworts-potential  source  of  medicinal compounds.  Curr  Pharm  Des  14: 3067-3088. DOI: 10.2174/138161208786404272.
Bachir GR, Benali M. 2012. Antibacterial activity of the essential oils  from  the  leaves  of Eucalyptus  globulus against Escherichia  coli and Staphylococcus  aureus .  J  of  Tropic Biomed 2: 739-742. DOI: 10.1016/S2221-1691(12)60220-2.
Benz  R.  2004.  Bacterial  and  Eukaryotic  Porins.  Structure, Function, Mechanism. Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. DOI: 10.1002/3527603875.
Bodade  RG,  Borkar  PS,  Arfeen  S,  Khobragade  CN.  2008. In vitro screening  of  bryophytes  for  antimicrobial  activity.  J  of Med Plants 7: 23-28.
[CDC]  Centers  for  Disease  Control  and  Prevention.  2008. Guideline  for  Disinfection  and  Sterilization  in  Healthcare Facilities.http://www.cdc.gov/hicpac/Disinfection_Sterilizatio n/4_0efficacyDS.html. [16 November 2012]
Harborne  JB.  2006.  Metode  Fitokimia.  Terjemahan:  Kosasih Patmawinata  dan  Iwang  Soediro.  Edisi  kedua.  Bandung: Penerbit ITB.
Heredia  N,  Wesley  I,  Garcia  S.  2009.  Microbiologically  Safe Foods.  New  Jersey.  John  Wiley  and  Sons. DOI: 10.1002/9780470439074.
Ilhan  S,  Savaroulu  S,  Colak  F,  Iscen  CF,  Erdemgil  ZF.  2006. Antimicrobial  activity  of  palustriella  commutata  (Hedw.) ochyra extracts (Bryophyta). J Biol 30: 149-152.
Kumar  P,  Chaudhary  LB.  2010.  Antibacterial  activity  of  moss Endoton  myurus (Hook)  Hamp.  against  some  pathogenic bacteria. The Bioscan. International J of Live Sci 5: 605-608. Madigan MT, Martinko JM, Dunlap VP, Clark PD. 2009. Biology of Microorganisms. 12 th Edition. Southern IIIinois University Carbondale.
Mewari  N,  Kumar  P.  2008.  Antimicrobial  activity  of  extracts  of Marchantia  polymorpha .  Pharma  Bio  46:  819–822 .  DOI: 10.1080/13880200802315725.
Moat AG, Foster JW, Spector MP. 2002. Microbiol Physiology.
Ed  4.  New  York:  John  Wiley  and  Sons. DOI: 10.1002/0471223867.
Murcia  MA,  Jiménez  AM,  Tomé  MM.  2009.  Vegetables antioxidant  losses  during  industrial  processing  and refrigerated  storage.  J  Food  Res  42:  1046-1052. DOI: 10.1016/j.foodres.2009.04.012.
Niu C, Qu BJ, Lou XL. 2006. Antifungal Bis[bibenzyls] from the Chinese  Liverwort Marchantia  polymorpha L.  School  of Pharmaceutical Sciences. Shandong University. China.
Rehm AHB. 2008. Pseudomonas: Model Organism, Pathogen, Cell factory. Wiley-VCH.
Ruiz  AG,  Cueva  C,  Rompinelli  EMG,  Yuste  M,  Torres  M,
Álvarez  PJM,  Bartolomé  B,  Arribas  MVM.  2012. Antimicrobial  phenolic  extracts  able  to  inhibit  lactic  acid bacteria  growth  and  wine  malolactic  fermentation.  J  Food Cont 28: 212-219. DOI: 10.1016/j.foodcont.2012.05.002.
Sabovljevi A, Sokovic M, Glamoclija J, Ciric A, Vujicic M, Pejin B, Sabovljevic M. 2010. Comparison of extract bio-activities of in-situ and in vitro grown selected bryophyte species. Afr Microb Research 4: 808-812.
Sanaka  S,  Tachibana  Y,  Okada  Y.  2005.  Preparation  and antioxidant  properties  of  extracts  of  Japanese  Persimmon Leaf Tea (kakinoha-cha). J Food Chem 89: 569–575. DOI: 10.1016/j.foodchem.2004.03.013.
Suliantari,  Jenie  BSL,  Suhartono  MT,  Apriyantono  A.  2008. Antibakteri  ekstrak  sirih  hijau  ( Piper  betle L)  terhadap bakteri patogen pangan. J Teknol dan Industri Pangan 19: 1–7.
Xiao  JB,  Jiang  X,  Chen  QX.  2005.  Antibacterial,  anti- inflammatory  and  diuretic  effect  of  flavonoid  from Marchantia convoluta . Afr J Trad Cam 2: 244–252.
Xiao  JB,  Chen  XQ,  Zhang  YW,  Jiang  XY,  Xu  M.  2006.
Cytotoxicity of Marchantia convoluta leaf extracts to human liver and lung cancer cells. Brazilian Med and Bio Research 39: 731–738. DOI: 10.1590/S0100-879X2006000600005.