Jurnal Farmasi Sains dan Terapan (Journal of Pharmacy Science and Practice) pISSN 2338-8404 and eISSN 2657-2311 Journal Homepage: http://journal.wima.ac.id/index.php/JFST/ DOI: 10.33508/jfst.v10i2.4931
Uji  Aktivitas  Antikolesterol  Ekstrak  Kale  ( Brassica  oleracea var. acephala DC) secara In Vitro
In Vitro Anticholesterol Activity of Kale ( Brassica oleracea var. acephala DC) Extract
Angelina Divanny Amalia, Devina Ingrid Anggraini* Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional, Jl. Solo Baki, Kwarasan, Grogol, Sukoharjo
Article info: Received Date : 25/08/2023 Revised Date   : 22/10/2023 Accepted Date : 17/11/2023 Abstrak
Kadar  kolesterol  dalam  tubuh  yang  berlebih  memiliki  dampak  yang buruk  bagi  kesehatan  sehingga  perlu  dikontrol  untuk  menghindari risiko  yang  membahayakan  tubuh.  Alternatif  pengobatan  kolesterol selain  dengan  obat-obat  sintetis  dapat  juga  dengan  memanfaatkan kandungan senyawa dalam tumbuhan seperti sayuran, buah, dan lain sebagainya.  Kale  ( Brassica  oleracea var. acephala DC)  merupakan salah satu sayuran mengandung senyawa seperti flavonoid, tannin dan fenol yang dapat menurunkan kadar kolesterol dalam darah. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  ekstrak  kale  dalam menurunkan  kadar  kolesterol.  Analisis  kualitatif  ekstrak  kale menunjukkan  positif  mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  dan saponin. Analisis kuantitatif aktivitas antikolesterol dilakukan dengan menggunakan  metode Lieberman-Burchard dengan  seri  konsentrasi ekstrak  15,  20,  25,  30,  35,  dan  40  ppm.  Hasil  penelitian  ini  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  kale  yang  didapatkan  dari  metode maserasi  memiliki  aktivitas  antikolesterol  dengan  nilai  EC 50 sebesar 32,350 ppm.

## Abstract
Excess cholesterol levels in the body have a bad impact on health, so they need to be controlled to avoid risks that harm the body. Alternative cholesterol  treatment  apart  from  synthetic  drugs  can  also  utilize  the compounds  contained  in  plants  such  as  vegetables,  fruit,  etc.  Kale ( Brassica  oleracea var.  acephala  DC)  is  a  vegetable  containing compounds such as flavonoids, tannins, and phenols which can reduce blood cholesterol levels. This study aims to determine the activity of kale in  reducing  cholesterol  levels.  Qualitative  analysis  of  kale  extract showed  positive  compounds  containing  alkaloids,  flavonoids,  and saponins. Quantitative analysis of anti-cholesterol activity was carried out using the Lieberman-Burchard method  with  extract  concentration series of 15, 20, 25, 30, 35, and 40 ppm. The results of this research can be concluded that the kale extract obtained from the maceration method has anticholesterol activity with an EC 50 value of 32,350 ppm.
Keywords: EC 50
Kale Extract Lieberman Burchard Cholesterol Corresponding Author*: Devina Ingrid Anggraini Sekolah  Ilmu  Kesehatan  Nasional,  Jl.  Solo Baki, Kwarasan, Grogol, Sukoharjo
e-mail: devina.ia@gmail.com

## PENDAHULUAN
Kolesterol  adalah  senyawa  lemak  dalam tubuh  manusia  yang  seperempatnya  diproduksi oleh  hati.  Tubuh  yang  memiliki  kadar  kolesterol melebihi batas normal disebut hiper- kolesterolemia  yang  dapat  menaikkan  risiko berbagai  penyakit.  Kadar  kolesterol  darah  total
normalnya berkisar antara 150 hingga 200 mg/dl (Ekayanti, 2020). Jika kandungan kolesterol darah total melebihi nilai tersebut, maka harus dikontrol untuk menghindari resiko bahaya bagi tubuh.
Menurut World  Health  Organization (WHO)  pada tahun 2018, terdapat lebih dari 160
juta  jiwa  mengalami  hiperkolesterolemia  dengan kadar  kolesterol  total  lebih  dari  200  mg/dl  yang bisa dikatakan tinggi. Negara berkembang seperti Indonesia akan meningkat sebesar 137%.
Obat-obat sintetik lebih banyak digunakan pasien  yang  mengalami  hiper-kolesterolemia untuk  menurunkan  kadar  kolesterol.  Namun penggunaan  obat  sintetik  memiliki  efek  samping ketika dikonsumsi secara terus-menerus. Alternatif lain yang dapat dilakukan yaitu dengan pemanfaatan  bahan  alam  dalam  menurunkan kadar  kolesterol.  Selain  itu  pemanfaatan  bahan- bahan  alam  memiliki  efek  samping  lebih  ringan dibandingkan  dengan  penggunaan  obat-obat sintetik.  Berdasarkan  penelitian,  senyawa  aktif seperti alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin yang terkandung  pada  daun  cincau  hijau  mampu membantu  menurunkan  kadar  kolesterol(Tandi, Tibe and Rimpa,  2018).  Senyawa  metabolit sekunder  tersebut  dapat  digunakan  sebagai sumber  referensi  untuk  dapat  dimanfaatkan potensinya.
Kale  ( Brassica  oleracea var. acephala ) merupakan jenis tanaman  sayur daun dari famili Brassicaceae yang  bentuk  daunnya  menyerupai daun selada. Sayuran ini diduga memiliki aktivitas antikolesterol dengan kandungan flavonoid, hal ini dibuktikan  dengan penelitian  Kusumawar- dianingrum and Lindawati  (2022)  bahwa  kale memiliki  kandungan  flavonoid,  tanin,  fenol,  dan steroid.  Flavonoid  bertujuan  untuk  menekan aktivitas enzim 3-hidroksil-3-metilglutaril koenzim  A  reduktase  (HMG  Co-A  reduktase) dalam  menurunkan  kadar  kolesterol  darah. Berdasarkan hal tersebut, penelitian ini dilakukan untuk  menguji  aktivitas  antikolesterol  ekstrak etanol kale secara in vitro . Penelitian ini digunakan sebagai  alternatif  penemuan  bahan  alam  yang dapat  digunakan  sebagai  penurun  kolesterol sehingga  dapat  meminimalisir  efek  samping  dari penggunaan  obat  sintetik  jika  dikonsumsi  dalam jangka waktu lama.

## METODE

## Alat dan Bahan
Dalam  studi  ini,  diperlukan  instrumen seperti  spektrofotometer  UV-Vis  (Shimadzu  UV mini-1240), kuvet, rotary evaporator (IKA RV 10 basic),  neraca  analitik  (Ohaus  Pioneer  dengan sensivitas  1,0001g  dan  minimal  penimbangan 0,1000g),  oven  (Memmert  UN55),  labu  ukur (Iwaki),  tabung  reaksi  (iwaki),  blender  (Philips), pipet ukur (Iwaki), push ball , pengaduk kaca, dan cawan porselen.
Bahan yang dipergunakan dalam penelitian ini  terdiri  dari  1  kg  kale,  etanol  96%,  kloroform, asam  asetat  anhidrat,  asam  sulfat  pekat,  baku kolesterol,  reagen  M ayer,  FeCl₃,  magnesium bubuk,  HCl  pekat,  reagen Lieberman-Burchard ,
dan HCl 2N.

## Penyiapan Simplisia
Bahan baku yang digunakan diperoleh dari Pasar  Gede  Surakarta.  Daun  kale  segar  dipilah, dicuci  dengan  air  bersih  lalu  dikeringkan menggunakan oven pada suhu 40°C. Daun kering dihaluskan  kemudian  diayak  dengan  ayakan  40 mesh.

## Pembuatan Ekstrak Etanol Kale
Kale yang telah diayak ditimbang hingga 100 g  dan  ditempatkan  secara  tertutup  dalam  wadah untuk direndam, ditambahkan pelarut etanol 96% hingga  7,5  bagian  pelarut  yaitu  750  ml. Perendaman  dilakukan  selama  tiga  hari  dan sesekali diaduk, kemudian dilakukan penyaringan dengan kain flanel dan kertas saring. Ampas yang dihasilkan  direndam  kembali  dengan  etanol  96% 2,5 bagian pelarut yaitu 250 ml. Ampas direndam selama  2  hari  dengan  sesekali  pengadukan,  lalu disaring  menggunakan  kertas  saring  dan  kain flanel.  Kedua  filtrat  kemudian  dicampur  dan diuapkan  pada  suhu  50 o C  dengan  menggunakan rotary evaporator agar didapatkan ekstrak etanol, setelah  itu  dilakukan  penguapan  dengan waterbath sampai diperoleh ekstrak kental.

## Analisis Kualitatif Ekstrak Etanol Kale
Uji kandungan senyawa aktif ekstrak etanol kale  dilakukan  dengan  metode  kualitatif  meliputi uji  alkaloid,  uji  flavonoid,  uji  saponin,  dan  uji tanin.

## a.  Uji Senyawa Alkaloid
Ekstrak  etanol  kale  sebanyak  40  mg ditambahkan  3  tetes  HCl  1%,  kemudian ditambahkan  1  ml  pereaksi  Mayer.  Hasil  positif ditunjukkan  dengan  adanya  endapan  atau kekeruhan  larutan  (Mahmiah,  Sudjarwo and Mizni, 2017).
b.  Uji Senyawa Flavonoid
Ekstrak kale sebanyak 40 mg ditambahkan secukupnya  air  kemudian  ditambahkan  0,05  mg serbuk Mg dan 1 ml HCl pekat, lalu dikocok kuat. Hasil  positif  ditunjukkan  dengan  perubahan larutan menjadi warna merah, kuning, atau jingga (Wijaya, Paendong and Abidjulu, 2014). c.  Uji Senyawa Saponin
Ekstrak  etanol  kale  sebanyak  40  mg ditambahkan  dengan  air  kemudian  dikocok  kuat dan  ditambahkan  2  tetes  HCl  1  N.  Hasil  positif ditunjukkan  dengan  munculnya  busa  yang  stabil selama  kurang  lebih  7  menit  (Wijaya,  Paendong and Abidjulu, 2014). d.  Uji Senyawa Tanin
Ekstrak  etanol  kale  sebanyak  40  mg dilarutkan  dengan  air,  kemudian  ditambahkan  1 ml  FeCl 3 10%.  Hasil  positif  ditunjukkan  dengan munculnya  warna  biru  tua  atau  hitam  kehijauan (Simare, 2014).

## Analisis Kuantitatif Ekstrak Etanol Kale
a.  Pembuatan Larutan Baku Kolesterol Ditimbang  bubuk  kolesterol  sebanyak  10,8 mg lalu dilarutkan menggunakan  kloroform  pada labu ukur berukuran 10,0 ml, diaduk hingga larut untuk  mendapatkan  larutan  standar  kolesterol konsentrasi 1000 ppm.

## b.  Pembuatan Larutan Blanko dan Kontrol Positif
Larutan blanko dibuat dari 10 ml kloroform, direaksikan  dengan  2  ml  C 4 H 6 O 3 dan  0,1  ml H₂SO₄.  Sementara  itu,  kontrol  positif  adalah larutan  kolesterol  dengan  konsentrasi  175  ppm. Larutan  tersebut  dicampur  dengan  2  ml  C 4 H 6 O 3 dan 0,1 ml H₂SO₄, kemudian dicukupkan dengan kloroform  hingga  mencapai  volume  total  10,0  ml (Amin, 2015).
c.  Penentuan Operating Time
Penentuan operating time yaitu 1 ml larutan standar  kolesterol  100  ppm  ditambahkan  2  ml C 4 H 6 O 3 dan  0,1  ml  H₂SO₄  pekat,  kemudian diencerkan  dengan  kloroform  hingga  mencapai volume  10,0  ml.  Pengukuran operating  time dimulai pada menit awal hingga mencapai menit di mana nilai absorbansi stabil terlihat pada panjang gelombang deteksi kolesterol maksimum 668 nm. Pengukuran yang stabil dibuat dengan memperhitungkan  keterkaitan  antara  waktu pengukuran dan absorbansi larutan (Amin, 2015).
d.  Penentuan Panjang

## Gelombang Maksimum
Spektrofotometer  UV-Vis  digunakan  untuk melakukan  pemindaian  panjang  gelombang dengan  standar  konsentrasi  100  ppm  dari  stok 1000  ppm.  Diambil  1  ml  dari  larutan  standar kolesterol  dan  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur. Labu ditutup menggunakan aluminium foil untuk menghindari  paparan  cahaya.  Dimasukkan  2  ml C 4 H 6 O 3 dan 0,1 ml H₂SO₄ pekat ke dalam larutan, lalu  larutan  tersebut  dicukupkan  dengan kloroform hingga mencapai volume total 10,0 ml, dan  didiamkan  selama  waktu operating  time . Selanjutnya, dilakukan pengukuran pada panjang gelombang  rentang  600-750  nm  menggunakan spektrofotometri UV-Vis (Lindawati and Ningsih, 2020).

## e.  Penentuan Aktivitas Antikolesterol dari Ekstrak Etanol Kale
Ekstrak etanol kale dibuat seri konsentrasi 15, 20,  25,  30,  35,  dan  40  ppm  (Gambar  1).  Larutan sampel kerja 100 ppm sebanyak 0,15 ml; 0,20 ml; 0,25  ml;  0,30  ml;  0,35  ml;  0,40  ml  dipipet,  lalu dimasukkan ke dalam labu ukur berukuran 10,0 ml dan  dicampur  dengan  1,75  ml  kolesterol  standar yang  memiliki  konsentrasi  1000  ppm  dalam pelarut  kloroform.  Kemudian  ditambahkan
dengan 2 ml C 4 H 6 O 3 dan 0,1 ml H₂SO₄ pekat lalu dicukupkan dengan kloroform. Campuran disimpan  pada  area  yang  gelap  sepanjang  durasi waktu operating  time sampai  berubah  menjadi warna hijau. Setelah itu, dilakukan analisis dengan spektrometer  UV-Vis  dengan  panjang  gelombang maksimum sebesar 668,5 nm (Amin, 2015).
o ditambahkan kolesterol simulasi, o ditambahkan  2  ml  C 4 H 6 O 3 dan  0,1  ml H₂SO₄ o ditambahkan  kloroform  hingga  tanda batas 10,0 ml
didiamkan selama operating time diukur absorbansinya pada λ 668,5 nm
Gambar 1. Skema uji aktivitas antikolesterol

## Analisis Data
Nilai penurunan kadar kolesterol dihitung dengan perhitungan dibawah ini:

## 𝑨 = 𝑪 − 𝑩
𝑪 𝒙 𝟏𝟎𝟎%
Keterangan: A : % penurunan kolesterol B : Absorbansi baku dan sampel C : Absorbansi kontrol positif
Perhitungan  nilai  EC 50 dari  kurva  regresi linier  antara  konsentrasi  larutan  uji  dari  ekstrak etanol kale dengan % kadar penurunan kolesterol, yaitu :

## 𝒚 = 𝒃𝒙 + 𝒂
Keterangan : y = % Penurunan kolesterol x = Konsentrasi sampel a = Intercept b = Slope /harga kemiringan kurva

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Preparasi Sampel
Daun  kale  dipilih  dengan  kriteria  daun berwarna  hijau  yang  diperoleh  dari  Pasar  Gede Harjonagoro  Surakarta.  Preparasi  sampel  yang dilakukan meliputi tahap sortasi basah, pencucian, perajangan,  dan  pengeringan.  Pengeringan  daun kale dilakukan menggunakan oven pada suhu 40°C untuk  mengurangi  kadar  airnya.  Semakin  kecil kadar  air  maka  sampel  akan  bertahan  lama  dan mencegah  dari  parasit  seperti  jamur,  kapang
Larutan sampel kerja
Larutan analit
Hasil
maupun dari  mikroorganisme lainnya. Daun  kale yang  telah  kering  kemudian  dilakukan  proses penyerbukan menggunakan blender. Hasil serbuk diayak  dengan  ayakan  40  mesh  untuk menghasilkan serbuk yang tidak terlalu besar dan mampu  menghasilkan  hasil  rendemen  yang  lebih besar.  Akan  tetapi,  kecilnya  ukuran  serbuk  dapat menyebabkan  kesulitan  pada  penyarian  senyawa yang  mana  semakin  halus  serbuk  akan mempersempit ruang antar sel.

## Ekstraksi
Pembuatan ekstrak kale dilakukan menggunakan metode ekstraksi secara dingin yaitu maserasi. Metode ekstraksi maserasi dipilih karena senyawa  yang  ditarik  tidak  tahan  terhadap  suhu pemanasan. Senyawa flavonoid, alkaloid, saponin dan  tanin  memiliki  sifat  tidak  tahan  pemanasan dan akan rusak pada suhu 50°C yang  mana akan terjadi  perubahan  struktur  serta  hasil  rendemen yang  rendah.  Penelitian  sebelumnya  menyatakan ekstraksi  senyawa  flavonoid  pada  daun  sirsak dengan perbedaan suhu ekstraksi yaitu 35, 45 dan 55ºC menghasilkan rendemen yang baik pada suhu 45ºC  dan  paling  rendah  hasil  rendemen  pada ekstraksi  suhu  55ºC  (Yuliantari,  Widarta and
Permana,  2017).  Sebanyak  100  g  serbuk  kale diekstraksi  dengan  etanol  96%  selama  5  hari. Etanol  96%  dipilih  karena  menurut  penelitian Islamiyati et al. (2018) memiliki tingkat penyarian senyawa yang baik dan memiliki kemudahan saat diuapkan  dengan  tingkat  toksisitasnya  yang rendah.
Prinsip  dari rotary  evaporator adalah memisahkan  cairan  dari  hasil  penguapan sedemikian  rupa  sehingga  cairan  menguap  lebih cepat  karena  penurunan  tekanan  atmosfer  dan meminimalkan  kerusakan  senyawa  akibat  suhu tinggi. Suhu rotary  evaporator yang  digunakan yaitu suhu 40°C. Setelah filtrat diolah menggunakan alat rotary evaporator , selanjutnya diuapkan  kembali  menggunakan waterbath pada suhu  50°C  sampai  menghasilkan  ekstrak  kental. Hasil  ekstraksi  yang  didapatkan  berupa  ekstrak kental bewarna hijau kecoklatan dengan rendemen sebesar 24,1%.

## Analisis Kualitatif Ekstrak Kale
Uji  fitokimia  pada  ekstrak  etanol  kale dilakukan  dengan  tujuan  untuk  mengetahui senyawa yang terkandung di dalam kale. Hasil uji disajikan pada Tabel 1.

## Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia

## Penentuan Operating Time
Tujuan  dari operating  time adalah  untuk menentukan  berapa  lama  senyawa  bereaksi dengan sempurna dengan pereaksi yang digunakan  yaitu  C 4 H 6 O 3 dan  H 2 SO 4 P,  sehingga diperoleh  senyawa  yang  stabil.  Waktu operating time yang didapatkan yaitu menit ke-12.

## Penentuan Panjang Gelombang
Berdasarkan puncak kurva yang mengalami serapan  maksimum  dari  pengukuran  absorbansi
larutan  baku  kolesterol  pada  daerah  rentang panjang  gelombang  yang  terlihat  pada  daerah visibel  diperoleh  panjang  gelombang  668,5  nm. Hasil ini sama dengan hasil penelitian sebelumnya yang  dinyatakan  bahwa  668  nm  merupakan maksimum panjang gelombang dari reaksi antara C 4 H 6 O 3 dan H 2 SO 4 Pekat (Lindawati and Ningsih, 2020).
Uji Reagen Hasil positif bedasarkan referensi Hasil penelitian Keterangan hasil Alkaloid Mayer Endapan putih atau larutan berubah menjadi keruh (Mahmiah, Sudjarwo and Mizni, 2017) Larutan berubah menjadi keruh Positif Flavonoid Serbuk Mg + HCl pekat Merah, kuning atau jingga (Wijaya, Paendong and Abidjulu, 2014) Jingga Positif Saponin Aquadest + HCl 1N Terbentuk busa yang stabil (Wijaya, Paendong and Abidjulu, 2014) Terbentuk busa Positif Tanin FeCl 3 Warna coklat kehijauan atau hitam kehijauan (Simare, 2014) Keruh Negatif

## Penentuan  Potensi  Antikolesterol  dari Ekstrak Kale
Konsentrasi ekstrak kale dibuat 6 seri yaitu 15,  20,  25,  30,  35,  40  ppm  dengan  pelarut kloroform.  Pelarut  ini  dipilih  karena  standar kolesterol yang dapat larut dengan kloroform oleh karena itu sampel dapat bereaksi. Baku kolesterol yang  digunakan  yaitu  konsentrasi  175  ppm  yang telah  diukur  absorbansinya  dengan  hasil absorbansi  sebesar  0,749  sebagai  kontrol  positif. Penggunaan  konsentrasi  175  ppm  pada  kontrol positif  dikarenakan  hasil  absorbansi  yang  kecil untuk konsentrasi sebelumnya, yang mana kontrol positif  ini  sendiri  akan  digunakan  sebagai pembanding penurunan kolesterol. Setiap konsentrasi kemudian ditambahkan kolesterol 175 ppm  sebanyak  1,75  ml,  2  ml  C 4 H 6 O 3 serta  0,1  ml
H₂SO₄  lalu  di cukupkan  dengan  kloroform. Larutan  didiamkan  selama  waktu operating  time yaitu 12 menit pada tempat yang gelap karena sifat tidak  stabil  dengan  cahaya  yang  dapat  berubah menjadi kolestenon. Tujuan dari pendiaman dalam tempat  yang  gelap  adalah  waktu  yang  digunakan bagi  sampel  serta  reagen  dalam  bereaksi  penuh sehingga  terbentuk  kompleks  berwarna  hijau. Setelah  itu,  kompleks  tersebut  dibaca  oleh spektrofotometer visibel.
Pembacaan nilai absorbansi larutan sampel dilakukan pada panjang gelombang 668,5 nm pada menit  ke-12.  Aktivitas  antikolesterol  ditentukan dengan  membandingkan  absorbansi  senyawa berwarna pada larutan uji dengan larutan kontrol positif  kemudian  persentase  kolesterol  dihitung dan dianalisis pada Tabel 2.
Tabel 2. Data Penurunan Kolesterol Pada Ekstrak Kale Rep Persen penurunan kolesterol (%) EC 50 (ppm) % KV rata- rata 15 ppm 20 ppm 25 ppm 30 ppm 35 ppm 40 ppm 1 6,676 16,956 29,773 43,658 57,276 69,960 32,350 0,99 2 6,542 17,223 30,174 44,192 57,009  70,360 3 6,809 17,490 30,307  43,925  56,609  70,227
Nilai EC 50 ( Effective Concentration ) adalah suatu nilai yang menunjukkan konsentrasi di mana ekstrak etanol kale efektif menurunkan kolesterol hingga  50%.  Persamaan  regresi  linier  digunakan untuk  menghitung  nilai  EC 50 untuk  menyatakan kaitan  antara  (X)  konsentrasi  ekstrak  dan  (Y)  % penurunan  kolesterol  tiga  sampel  yang  diukur. Berdasarkan  gambar  2  terlihat  bahwa  terjadi hubungan  antara  konsentrasi  sampel  uji  dan  % penurunan  kolesterol  di  mana  jika  konsentrasi sampel  uji  ditingkatkan  maka  persen  penurunan kolesterol juga semakin tinggi. Hal tersebut dapat
dilihat dari nilai R 2 yang mendekati 1 yang berarti terdapat  korelasi  kuat  antara  kedua  variabel. Variasi konsentrasi ekstrak etanol kale diformulasikan  untuk  mendapatkan  aktivitas sebagai  antikolesterol  hingga  50%.  Hasil  yang didapatkan  dalam  penelitian  ini  menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak etanol kale yang dapat menurunkan  kolesterol  sebesar  50%  adalah sebesar 32,350 ppm. Aktivitas ekstrak kale sebagai antikolesterol  diduga  disebabkan  oleh  senyawa yang  terkandung  seperti  flavonoid,  alkaloid,  dan saponin.
Gambar 2. Kurva hubungan konsentrasi ekstrak etanol kale dengan % penurunan kolesterol
y = 2,5749x - 33,299 R² = 0,9986 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 10 20 30 40 50 % PE NU R U NAN KO LE STE R OL KONSENTRASI EKSTRAK (PPM)
Aktivitas  penurunan  kolesterol  dibuktikan dengan metode Lieberman-Burchard (Gambar 3). Metode  dianggap  sebagai  metode  spesifik  untuk menganalisis  senyawa  kolesterol  khususnya golongan  steroid.  Pereaksi  asam  asetat  anhidrat dan asam sulfat pekat digunakan dalam metode ini untuk  membentuk  senyawa  kompleks  berwarna. Penambahan  asam  asetat  anhidrat  bertujuan untuk  membentuk  produk  turunan  asetil  steroid dengan  mekanisme  asetilasi  dan  memastikan sistem  terhindar  dari  adanya  air.  Keberadaan  air pada  sistem  akan  mempengaruhi  reaksi  dan senyawa yang terbentuk menjadi tidak stabil. Asam
sulfat pekat berfungsi sebagai senyawa pembentuk kompleks berwarna. Metode ini melibatkan reaksi asetilisasi oleh asam asetat anhidrat di mana gugus hidroksil  yang  ada  pada  kolesterol  akan membentuk  ikatan  rangkap  dan  hidrogen  akan terlepas.  Hal  tersebut  akan  menyebabkan  ikatan rangkap  berpindah.  Dalam  sistem  akan  terjadi adisi  elektrofilik  dan  pelepasan  hidrogen. Perpanjangan  konjugasi  terjadi  ditunjukkan dengan  kompleks  warna.  Warna  yang  terbentuk diukur  absorbansinya  dengan  spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimal.
Gambar 3. Reaksi pembentukan komplek warna hijau antara kolesterol dengan pereaksi Lieberman- Burchard (Sahriawati, Sumarlin and Wahyuni, 2019).
Senyawa  flavonoid  yang  terkandung  pada ekstrak  kale  memiliki  peranan  penting  terhadap penurunan  kadar  kolestrol.  Flavonoid  bekerja dengan  meminimalisir  sintesis  kolesterol  dengan menghambat aktivitas HMG-CoA yang menyebabkan  penghambatan  sintesis  kolesterol (Gambar  4).  Senyawa  penurun  kolesterol  lainnya adalah  alkaloid  dan  saponin.  Alkaloid  memiliki
kemampuan  untuk  menghambat  aktivitas  lipase pankreas,  meningkatkan  ekskresi  lemak  melalui feses  dan  mengurangi  lemak  yang  terserap  oleh hati.  Hal  ini  mencegah  terbentuknya  kolesterol dari lemak yang diserap. Selain itu, saponin dapat mengendapkan  kolesterol  dan  mencampurnya dalam  sirkulasi  enterohepatik  empedu,  sehingga mengganggu penyerapan kolesterol di usus.
Gambar 4. Ikatan kimia antara kolesterol dengan senyawa flavonoid
(Anggraini and Fathrah, 2018)
Koefisien variasi merupakan sebuah indikator untuk menunjukkan seberapa dekat hasil analisis  dari  serangkaian  pengukuran  dengan standar  yang  telah  ditetapkan.  Metode  analisis
yang  menggunakan  senyawa  standar  untuk menentukan  presisi  harus  memiliki  koefisien variasi  (%KV)  kurang  dari  2%  untuk  dapat memenuhi  syarat  validitas.  Data  penelitian
menunjukkan  bahwa  nilai  %KV  dari  tiap konsentrasi  ekstrak  memiliki  %KV  di  bawah  2%, yang  menandakan  bahwa  akurasi  pengukuran baik.

## KESIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah bahwa ekstrak  etanol  kale  memiliki  potensi  dalam
menurunkan kolesterol dengan nilai EC 50 sebesar 32,350 ppm yang diujikan secara in vitro.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih sebesar-besarnya untuk dosen pembimbing serta dosen penguji yang telah memberikan  masukan  dan  kritik  sehingga terselesaikannya penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Amin,  M.S.,  2015,  Studi  In-vitro :  Efek  Antikolesterol  dari Ekstrak  Metanol  Buah  Parijoto  ( Medinilla  speciosa  Blume ) terhadap  Kolesterol  Total,  ' Skripsi' ,  Fakultas  Kedokteran  dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Anggraini, D. and Fathrah, L., 2018, Activity Test of Suji Leaf Extract ( Dracaena angustifolia Roxb . ) on in vitro cholesterol lowering, Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , 21(2):54 – 58.
Ekayanti, I.G.A.S., 2020, Analisis Kadar Kolesterol Total dalam Darah  Pasien  dengan  Diagnosis  Penyakit  Kardiovaskuler, International  Journal  of  Applied Chemistry  Research ,  1(1):6, doi: 10.23887/ijacr.v1i1.28709.
Kusumawardianingrum,  A.  and  Lindawati,  N.Y.,  2022, Antidiabetic  Activity  of  Ethanolic  Extract  of  Kale  ( Brassica oleracea var. sabellica ), Jurnal  Farmasi  dan  Ilmu Kefarmasian  Indonesia ,  9(1):92 – 100,  doi:  10.20473/jfiki. v9i12022.92-100.
Lindawati,  N.Y.  and  Ningsih,  D.W.,  2020,  Aktivitas Antikolesterol  Ekstrak  Etanol  Buah  Kiwi  Hijau  ( Actinidia deliciosa ), Jurnal  Ilmiah  Manuntung ,  6(2):183,  doi: 10.51352/jim.v6i2.344.
Mahmiah,  Sudjarwo,  G.W.  and  Mizni,  M.H.O.,  2017, Kandungan Senyawa Metabolit Sekunder dari Fraksi Etil Asetat Kulit  Batang Rhizospora  mucronata L., Seminar  Nasional
Kelautan XII , Fakultas Teknik dan Ilmu Kelautan Universitas Hang Tuah, pp. 52 – 57.
Sahriawati, Sumarlin, and  Wahyuni, S., 2019, Validasi Metode dan Penetapan Kadar Kolesterol Ayam Broiler dengan Metode Liebermann-Burchard, Lutjanus , 9(1):31 – 40.
Simare, E., 2014, Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Gatal ( Laportea decumana (Roxb.) Wedd ), Pharmacy , 11(01): undefined .
Tandi,  J.,  Tibe,  F.  and  Rimpa,  M.,  2018,  Uji  Aktivitas Antikolesterol  Ekstrak  Etanol  Daun  Cincau  Hijau  terhadap Tikus  Putih  Jantan  Galur  Wistar, Farmakologika  Jurnal Farmasi , 15(2):134 – 141.
Wijaya, D. P., Paendong, J. E. and Abidjulu, J., 2014, Skrining Fitokimia  dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  dari  Daun  Nasi ( Phrynium  capitatum )  dengan  Metode  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil), Jurnal  MIPA ,  3(1):11,  doi:10.35799/jm. 3.1.2014.3899.
Yuliantari, N. W. A., Widarta, I. W. R. and Permana, I. D. G. M., 2017,  Pengaruh  Suhu  dan  Waktu  Ekstraksi  terhadap Kandungan  Flavonoid dan  Aktivitas  Antioksidan  Daun  Sirsak ( Annona muricata L.) Menggunakan Ultrasonik, Media Ilmiah Teknologi Pangan , 4(1):35 – 42.