BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 6, Nomor 2 (2024): 95-102 DOI. 10.20884/1.bioe.2024.6.2.10706

## Uji Efektivitas Antibakteri Sediaan Gel Pembersih Tangan Berbahan Aktif Water kefir Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus
Antibacterial Effectiveness Test of Hand Sanitizer Gel Preparation with Active Water kefir Ingredients Against Escherichia coli and Staphylococcus aureus

## Sharfina Maulidayanti*, Musliha Octaviana, Ing Mayfa Br Situmorang
Teknologi Laboratorium Medis, STIKes Prima Indonesia, Bekasi 17121, Indonesia * Corresponding author , Email: ajalilfina@gmail.com
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 01/12/2023 Disetujui  : 03/06/2024

## Abstract
Water  kefir is  a  probiotic drink, the  antibacterial  properties  of kefir  are  due  to  the  content  of compounds such as lactic acid produced from the sucrose fermentation process. Water kefir can be used as an active ingredient of hand sanitizer which is an antiseptic in the form of a gel that is often used by the public as a practical hand washing media. This study aims to make a hand sanitizer  gel  with  the  addition  of water  kefir and  then  test  the  inhibitory  power  of  the  hand sanitizer. This research method begins with the fermentation of water kefir, water kefir which becomes  the  active  ingredient  of  hand  sanitizer  and  then  tested  using  disc  diffusion  with  a concentration of 3%, 4%, and 5%. Based on the results of the inhibition test, the hand sanitizer gel preparation made from water kefir with a concentration of 3% has an average diameter of 12.3 mm (intermediate), 4% has a diameter of 15 mm (intermediate) and 5% has a diameter of 18.3 mm (intermediate) on E.coli bacteria. 3% had a diameter of 12.6 mm (intermediate), 4% had a diameter of 14 mm (intermediate) and 5% had a diameter of 17.5 mm (intermediate) on S.aureus bacteria. The conclusion of this study is that the concentration that is more effective for inhibiting the growth of E.coli and S.aureus bacteria is at a concentration of 5% Key Words : water kefir, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, inhibiton

## Abstrak
Kefir air adalah minuman probiotik. Sifat antibakteri kefir disebabkan oleh senyawa seperti asam laktat, yang dihasilkan selama fermentasi sukrosa. Kefir air dapat digunakan sebagai bahan aktif dalam pembersih tangan, antiseptik seperti gel yang sering digunakan sebagai pencuci tangan yang nyaman. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menghasilkan gel pembersih tangan yang telah ditambahkan air kefir untuk menguji kekuatan penghalang pembersih tangan. Metode penelitian ini diawali dengan pembuatan fermentasi water kefir, water kefir yang menjadi bahan aktif hand sanitizer kemudian diuji menggunakan cara difusi cakram dengan konsentrasi 3%, 4%, dan 5%. Berdasarkan hasil penelitian uji daya hambat sediaan gel hand sanitizer berbahan aktif water kefir dengan konsentrasi 3% yaitu berdiameter rerata 12,3 mm (intermediet), 4% berdiameter 15 mm (intermediet) dan 5% berdiameter 18,3 mm (intermediet) pada bakteri E.coli . 3% berdiameter 12,6 mm (intermediet),4% berdiameter 14 mm (intermediet) dan 5% berdiameter 17,5 mm (intermediet) pada bakteri S.aureus . Kesimpulan pada penelitian ini adalah konsentrasi yang lebih efektif untuk menghambat pertumbuhan dari bakteri E.coli dan S.aureus yaitu pada konsentrasi 5% Kata kunci: water kefir, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, daya hambat

## PENDAHULUAN
Tangan  merupakan  bagian  tubuh  yang  sangat sensitif  terhadap  kontaminasi  dan  menjadi  tempat berkembang  biaknya  virus  dan  bakteri  dalam berbagai  aktivitas.  Tangan  mengandung  berbagai macam  bakteri  gram  positif  dan  gram  negatif,  baik patogen maupun non patogen (Afriani et al., 2021). Hand  sanitizer merupakan  antiseptik  berbentuk  gel yang  banyak  digunakan  oleh  masyarakat  sebagai pencuci  tangan  yang  nyaman.  Menggunakan hand sanitizer lebih  efektif  dan  efisien  daripada menggunakan sabun dan air, sehingga banyak orang yang tertarik untuk menggunakannya (Asngad et al., 2018). Mencuci tangan adalah tindakan perlindungan yang penting untuk melindungi kulit dari mikroorganisme berbahaya dan mencegah
penyebaran banyak penyakit menular (Dhamankar et al ., 2022).
Banyak  sediaan  antibakteri  bersifat  sintetik. Dalam  hal  ini,  penggunaan  agen  antibakteri  sintetik ini  dapat  menyebabkan  resistensi  dari  waktu  ke waktu,  yang  mencegah  bakteri  menjadi  resisten terhadap  sediaan  sintetik. Hand  sanitizer antiseptik dikembangkan menggunakan ekstrak atau fermentasi yang  mengandung  sifat  antibakteri  (Zakaria et  al., 2022). Pada konsentrasi rendah, beberapa antiseptik menghambat  aktivitas  biokimia  membran  bakteri tetapi  tidak  membunuh  bakteri.  Pada  konsentrasi tinggi,  komponen  antiseptik  menembus  sel  dan mengganggu  fungsi  normal  sel.  Efek  antibakteri water kefir sejalan dengan hasil penelitian (Afriani et al .,  2021)  yang  mendapati  kefir  memiliki  aktivitas antimikroba terhadap berbagai jenis bakteri.
Kefir  air  memiliki  keunggulan  dibandingkan kefir  susu  karena  memiliki  kandungan  lemak  yang lebih rendah (Anggoro et al., 2022). Monoasilgliserol dari  asam-asam  lemak  rantai  sedang  terbukti memiliki  daya  antibakteri,  monoasilgliserol  dalam bentuk monolaurin dan monokaprin memiliki daya 2 antibakteri yang kuat terutama terhadap S. aureus, B. cereus, dan B.  subtilis (Murhadi,  2009).  Sifat antibakteri kefir disebabkan oleh kandungan senyawa seperti asam laktat yang terbentuk selama fermentasi sukrosa.  Pada  proses  fermentasi,  kefir  difermentasi dengan  bantuan  bakteri  asam  laktat  seperti Lactobacillus  lactis,  Lactobacillus  delbrueckii, Lactobacillus bulgaricus dan spesies yeast sehingga menghasilkan asam dan alkohol (Afriani et al ., 2021). Golongan bakteriostatik mencegah pertumbuhan  dan  perkembangan  bakteri  seperti bakteriosin yang dapat berasal dari bakteri baik yaitu bakteri  asam  laktat.  Kemampuan  bakteriosin  untuk menghambat bakteri patogen dapat menjadi alternatif pengganti  antibiotik  (Mastuti,  2022).  Metabolit utama  dari  proses  fermentasi water  kefir adalah etanol, asam laktat, gliserol, asam asetat dan manitol juga terbentuk dalam konsentrasi rendah (Ali et al ., 2018).
Kefir  dimanfaatkan  sebagai  bahan  pembersih, salah  satunya  penelitian  Putri  &  Dwi  (Wulansari  & Wijayanti,  2020)  menggunakan  susu  kefir  sebagai sabun  pembersih  yang  memiliki  daya  hambat terhadap  bakteri  pada  kulit.  Kefir  air  juga dimanfaatkan sebagai bahan aktif hand sanitizer yang memiliki daya antibakteri pada penelitian Kartini & Puspita (Afriani et al., 2021). Penelitian ini dilakukan dengan menyiapkan hand sanitizer yang ditambahkan  air  kefir  dengan  konsentrasi  berbeda yaitu 3%, 4% dan 5% untuk menguji lebih lanjut daya hambatan hand  sanitizer terhadap  pertumbuhan Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus menggunakan  metode  difusi  cakram.  Dengan  latar belakang  diatas,  peneliti  tertarik  untuk  mengetahui tentang gel hand sanitizer yang ditambahkan pada air kefir dalam berbagai konsentrasi sebagai antibakteri dan menguji keefektifannya.

## MATERI DAN METODE

## Steriisasi alat
Semua peralatan gelas seperti alat ukur, cawan petri,  labu  erlenmeyer  dan  tabung  reaksi  terlebih dahulu  dicuci  dengan  sabun  antiseptik  dan dikeringkan.  Wadah  ukur,  labu  erlenmeyer  dan tabung  reaksi  kemudian  ditutup  dengan  kapas kemudian  dibungkus  dengan  kertas  roti.  Sementara cawan  Petri,  pinset  dan  binder  cukup  dibungkus dengan  kertas  roti.  Kemudian  sterilkan  dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 25-30 menit..

## Pembuatan fermentasi
Starter  kefir  juga  dikenal  sebagai  biji  kefir, adalah  bahan  ragi  yang  digunakan  dalam  proses fermentasi  untuk  membuat  kefir  air.  Butir  kefir berbentuk tidak beraturan dan berukuran 2-3 cm atau
menyerupai butiran gandum dan berwarna putih atau kekuningan. Fermentasi pada suhu kamar selama satu hingga  dua  hari  menghasilkan  minuman  keruh, berkarbonasi,  berwarna  seperti  jerami  yang  bersifat asam,  bebas  gula,  dan  rendah  alkohol.  (R.  W.  A. Putri,  2016).  Kefir  grains  sebanyak  50  g  direndam dalam 500 ml air matang yang sudah dingin dengan perbandingan  1:10,  lalu  diinkubasi  selama  24  -  48 jam (Anggoro et al., 2022).

## Pembuatan sediaan gel pembersih tangan
Pembuatan  sediaan  gel  dengan  melarutkan  0,5 gram karbomer dalam 15 mL akuades panas (70˚C), diaduk hingga larut dengan bantuan magnetic stirer . Ditambahkan  1  ml  propilen  glikol  dan  1  tetes trietanolamin  (TEA)  ke  dalam  campuran  karbomer dan akuades disertai pengadukan hingga menjadi gel yang  homogen.  Ditambahkan  75  ml  etanol  96% sedikit  demi  sedikit  dan  dilanjutkan  penambahan water  kefir (3%;  4%;  5%).  Tahap  terakhir ditambahkan  akuades  hingga  mencapai  volume  100 ml. Larutan diaduk hingga homogen dan didiamkan selama  semalam  untuk  mendapatkan  hasil  yang maksimal (Afriani et al., 2021).

## Karakterisasi sediaan gel pembersih tangan
Karakterisasi  yang  dilakukan  meliputi  uji organoleptik  (warna,  bau,  dan  padat),  derajat keasaman (pH), viskositas, homogenitas, dan uji daya antiseptik  terhadap  sediaan  gel  pembersih  tangan (Afriani et al., 2021).
a) Uji organoleptik Uji organoleptik gel dilakukan dengan mengamati secara visual bentuk, warna dan  bau hand  sanitizer.  Water  kefir memiliki aroma yang khas, konsentrasi water kefir yang digunakan dalam komposisi hand sanitizer gel adalah 3%, 4% dan 5%.
b) Uji  derajat  keasaman  (pH)  Uji  pH  dilakukan dengan  tujuan  untuk  mengetahui  derajat keasaman  (pH)  sediaan  gel  pembersih  tangan. Pada  pengujian  pH  diperoleh  hasil  formula tanpa water kefir, sediaan I, II, dan III.
c) Uji  viskositas  Uji  viskositas  dilakukan  untuk mengetahui  kekentalan  gel  yang  dihasilkan dengan  menggunakan  viskometer  brookfield yang  bekerja  berdasarkan  gesekan  dari  sampel dengan luas area spindle yang digunakan.
d) Uji  homogenitas  Homogenitas  sediaan  dapat mempengaruhi  dosis  zat  aktif  dalam  sediaan gel, yang berujung pada efektifitas sediaan. Uji homogenitas dapat dilakukan dengan pemeriksaan  keseragaman  warna  dan  substrat secara  visual.  Jika  warna  dan  alasnya  merata tanpa butiran kasar, kita dapat berbicara tentang produk yang homogen.

## Pembuatan media Nutrient Agar (NA)
Media NA disiapkan untuk peremajaan bakteri dengan menimbang 2,8 gram, kemudian ditambahkan 100 mL akuades, kemudian dipanaskan larutan di atas hot plate dan diaduk dengan magnetic stirrer hingga  homogen  kemudian  diautoklaf  pada
suhu 121 °C selama 15 menit. Media dituang secara aseptis  ke  dalam  cawan  petri  kemudian  dibiarkan pada  suhu  kamar  hingga  media  memadat  (Juariah, 2021).

## Pembuatan medua Mueller Hinton Agar (MHA)
Menguji  keefektifannya,  dibuat  media  MHA dengan menimbang 38 g kemudian dilarutkan dalam 1  L  air  suling  dengan  cara  dipanaskan.  Media kemudian  disterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu 121°C  selama  20  menit.  Media  MHA  dituang  ke dalam  cawan  Petri  steril  dan  dibiarkan  pada  suhu kamar  hingga  mengeras.  Kemudian  disimpan  pada suhu 4 °C (dingin) (Utomo et al., 2018).
Pembuatan suspensi bakteri Pembuatan suspensi bakteri E.coli dan S.aureus dengan  larutan McFarland 0,5  biasa  digunakan sebagai pembanding kekeruhan biakan bakteri dalam medium  cair  (Aviany  &  Pujiyanto,  2020).  Teknik pengenceran serial (serial dilution). Tujuan pengenceran  multifase  adalah  untuk  meminimalkan atau  mengurangi  jumlah  mikroba  yang  tersuspensi dalam  cairan.  Penentuan  jumlah  atau  banyaknya langkah  pengenceran  tergantung  dari  perkiraan jumlah mikroba dalam sampel. Gunakan perbandingan  1:9  untuk  pengenceran  awal  dan selanjutnya  dan  sampel  sedemikian  rupa  sehingga pengenceran berikutnya mengandung 1/10 sel (Majid et al., 2020).

## Peremajaan bakteri E. coli
Peremajaan bakteri dilakukan dengan menginokulasi  bakteri E.  coli dalam  cawan  Petri dengan  media  NA  steril.  Kemudian,  isolat  bakteri disepuh pada media yang tersedia, yang dibuat dalam biosafety cabinet (BSC) untuk menghindari kontaminasi. Hasil peremajaan kemudian diinkubasi dalam  inkubator  selama  24  jam  (Oktavia  & Pujiyanto, 2018).

## Peremajaan bakteri S. aureus
Bakteri  diremajakan  dengan  metode  cawan. Kultur murni bakteri S. aureus dibuang dalam alikuot dan diinokulasi secara aseptik pada media NA yang dibuat  dalam biosafety  cabinet (BSC)  untuk menghindari  kontaminasi.  Inkubasi  pada  suhu  37°C selama 24 jam (Noviyanti & Sumiati, 2016).

## Uji daya hambat
Uji  daya  hambat  dilakukan  dengan  metode difusi  lempeng. Disk  paper steril  dibasahi  dengan sediaan  gel  pembersih  tangan  berbahan  dasar  air- kefir dengan perbandingan konsentrasi yang berbeda, kemudian  diletakkan  pada  media  benih  yang  telah ditutup 19 dengan bakteri kemudian diinkubasi. Jika pengamatan  mengungkapkan  area  yang  jelas  di sekitar  area  terlarang.  Uji  daya  hambat  dilakukan sebanyak  3  kali  ulangan  (Ni  &  Suryanti,  2017). Meggunakan kontrol positif hand sanitizer berbahan alkohol  70%  yang  komersial  dan  aquadest  sebagai kontrol negatif. Interpretasi daya hambat dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Klasifkasi penghambat antibakteri bersumber pada diameter zona hambat (CLSI, 2020)
Diameter Zona Hambat (mm) Daya Hambat Pertumbuhan ≤ 12 mm Lemah (Resisten) 13-31 mm Sedang (Intermediet) ≥32 mm Kuat (Sensitive)

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Fermentasi Kefir
Fermentasi  selama  48  jam  pada  suhu  kamar menghasilkan  minuman  yang  keruh,  berkarbonasi, yang  bersifat  asam,  sedikit  gula  dan  sedikit  alkohol (Afriani et  al .,  2021).  Hasil  pengamatan  dari fermentasi  selama  48  jam, water  kefir memiliki warna  putih  kekuningan  dan sedikit  keruh  (Gambar 1.).
Gambar 1. Water kefir yang sudah di fermentasi selama 48 jam.
Hasil pengamatan fermentasi 48 jam (Gambar) water  kefir berwarna  putih  kekuningan  dan  agak keruh. Proses fermentasi pada kefir dapat menghasilkan  rasa  asam  dan  sedikit  tajam.  Kristal ganggang  merupakan  bahan  utama  yang  digunakan sebagai  bahan  baku  dalam  produksi  kefir  air.  Alga berbentuk  seperti  kembang  kol,  berwarna  putih kekuningan,  setiap  butir  berdiameter  2-15  mm  dan beratnya  hanya  beberapa  gram.  Kristal  alga mengandung  bakteri  asam  laktat  yang  dapat menimbulkan rasa asam pada kefir air, dan ragi yang menghasilkan  alkohol  dan  karbon  dioksida.  Bakteri asam  laktat  (BAL)  dan  ragi  hidup  bersimbiosis  dan tumbuh  dalam  kristal  ganggang  dalam  rasio  yang seimbang  (Gulitz et  al. ,  2011).  Bakteri  dalam  biji kefir  berperan  untuk  menghasilkan  asam  laktat  dan membentuk  rasa.  Ragi  menghasilkan  gas  karbon dioksida dan sedikit alkohol sehingga menghasilkan rasa  asam  dan  kombinasi  dengan  rasa  alkohol (Anggoro et al. , 2022)

## Uji Organoleptik
Hasil  organoleptik  terhadap  ketiga  formula sediaan gel dengan perbedaan konsentrasi water kefir diperoleh  hasil  untuk  warna,  gel  pembersih  tangan tidak  berwarna,  bau  khas  alkohol  (etanol  96%)  dan bentuknya semi padat. Water kefir memiliki aroma
Tabel 2. Hasil pengujian organoleptik gel pembersih tangan dari water kefir
Formula Uji Organoleptik Bentuk Warna Bau Komersial Semi padat Tidak berwarna Bau khas alkohol Formula 3% Semi padat Tidak berwarna Bau khas alkohol Formula 4% Semi padat Tidak berwarna Bau khas alkohol Formula 5% Semi padat Tidak berwarna Bau khas alkohol Tabel 3. Hasil pengujian pH gel pembersih tangan dari water kefir
Formula Uji pH Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Rerata Komersial 6,0 6,0 6,0 6,0 Formula 3% 6,0 6,0 6,0 6,0 Formula 4% 5,0 5,0 5,0 5,0 Formula 5% 5,0 5,0 5,0 5,0
Tabel 4. Hasil hasil uji homogenitas gel pembersih tangan dari water kefir
Formula Uji Homogenitas Komersial Tidak terdapat butiran kasar Formula 3% Tidak terdapat butiran kasar Formula 4% Tidak terdapat butiran kasar Formula 5% Tidak terdapat butiran kasar
khas  tapai,  pada  formulasi  gel  pembersih  tangan konsentrasi water kefir yang digunakan 3%, 4%, dan 5% sehingga tidak mempengaruhi aroma sediaan gel pembersih  tangan.  Hasil  uji  organoleptik  terdapat pada Tabel 2.
Gambar 2. Gel pembersih tangan dari water kefir konsentrasi 3%, 4% dan 5%.
Uji  organoleptik  (Gambar  2.)  menghasilkan sediaan  gel  dengan  warna  putih  bening,  bau  khas alkohol, bentuk gel semi padat dan tidak mengandung butiran-butiran  kasar.  Kemudian  pengukuran  pH berfungsi untuk menentukan keasaman atau kebasaan  dari  suatu  larutan  (tabel)  pengukuran  pH dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan dengan hasil pH  sekitar  5-6.  Sesuai  dengan  standar  pH  yang ditetapkan (Kemkes, 2021). Dilanjutkan uji homogenitas  gel  (gambar)  dari  hasil  dapat  diamati susunannya yang homogen dan tidak terlihat adanya butiran  kasar.  Dilakukan  juga  uji  viskositas  dapat dilihat  (tabel)  hasil  menunjukkan  bahwa  semakin besar konsentrasi water kefir yang ditambahkan maka nilai viskositasnya akan menurun. Hal ini disebabkan water  kefir memberikan  pengaruh  pada  derajat keasamaan  dari  formula  gel  pembersih  tangan  yang dihasilkan (Afriani et al. , 2021).

## Uji Derajat Keasaman (pH)
Hasil  menunjukkan  bahwa  pada  sediaan  gel yang  ditambahkan water  kefir ,  pH  gel  pembersih tangan  yang  dihasilkan  menurun  (Tabel  3.).  Hal  ini disebabkan  oleh  sifat  asam  dari water  kefir yang memiliki  pH  sekitar  5-6.  Hasil  yang  diperoleh  gel pembersih tangan water kefir formula 3% memenuhi persyaratan  pH  untuk  digunakan  pada  kulit, berdasarkan syarat menurut SNI No. 02.02/1/1873/2021  dengan  nilai  pH  kisaran  6  –  9 (Kemkes, 2021).

## Uji Homogenitas
Berdasarkan tabel ketiga formula mendapatkan hasil  yang  homogen,  yaitu  tidak  terdapat  butiran kasar.  Hasil  uji  homogenitas  gel  pada  Gambar  5.3. Menunjukkan  bahwa  ketiga  formula  sediaan  gel pembersih  tangan  memiliki  warna  yang  tersebar merata
Gambar 3. Uji homogenitas sediaan gel pembersih tangan dari water kefir konsentrasi 3%, 4% dan 5%.
Tabel 5. Hasil uji viskositas gel pembersih tangan dari water kefir
Formula Uji Viskositas Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Rerata Komersial 5600 5600 5600 5,60 Formula 3% 5000 5000 5000 5,00 Formula 4% 3400 3400 3400 3,40 Formula 5% 3000 3000 3000 3,00

## Uji Viskositas
Berdasarkan Tabel 5 hasil menunjukkan bahwa semakin  besar  konsentrasi water  kefir yang ditambahkan maka nilai viskositasnya akan menurun. Hal ini disebabkan water kefir memberikan pengaruh pada  derajat  keasaman  dari  formula  gel  pembersih tangan yang dihasilkan.

## Peremajaan Bakteri E. coli dan S. aureus
Hasil  Peremajaan  kedua  bakteri  memiliki bentuk permukaan datar/flat, tepian menyeluruh/ entire dan  berwarna  putih  susu  dapat dilihat  (Gambar  4  dan  5)  untuk  bakteri E.  coli dan bakteri S.  aureus. Menurut  Lestari et  al. ,  (2020), tujuan  dari  peremajaan  bakteri  adalah  untuk mendapatkan biakan yang baru dan muda, sehingga dapat  berkembang  biak  dengan  baik  dan  dapat digunakan  sesuai  dengan  fungsinya.  Selain  itu, peremajaan  bakteri  juga  dapat  memperbarui  sel-sel bakteri  dengan  nutrisi  baru  yang  terkandung  dalam media.
Gambar 1. Peremajaan bakteri E. coli

## Pewarnaan Gram
Pewarnaan  Gram  membantu  mengidentifikasi sifat Gram dan morfologi bakteri. Bakteri diidentifikasi  dengan  teknik  pewarnaan  Gram.  Uji pewarnaan  Gram  bertujuan  untuk  mengamati morfologi sel bakteri. Uji pewarnaan Gram dilakukan untuk mendeteksi bakteri gram positif yaitu S. aureus yang  berwarna  bulat  dan  ungu,  sedangkan E.  coli berbentuk  batang  dan  berwarna  merah.  Hasil  yang diperoleh sesuai dengan literatur bahwa bakteri gram positif  berwarna  ungu  sedangkan  bakteri  gram negatif berwarna merah  (Putri et al ., 2016). S. aureus merupakan  bakteri  Gram  positif  dan  berbentuk kokkus  yang  menghasilkan  warna  ungu  pada pewarnaan  Gram.  Warna  ungu  disebabkan  karena bakteri mempertahankan warna pertama, yaitu kristal violet  dapat  dilihat  (Gambar  6.)  Bakteri E. coli merupakan  salah  satu bakteri  gram negatif, pada pewarnaan  Gram, bakteri  gram negatif  akan kehilangan  zat pewarna kristal  violet  setelah  dicuci dengan alkohol, dan sewaktu diberi
zat pewarna tandingannya yaitu dengan
zat pewarna safranin  akan  tampak  berwarna  merah dapat dilihat (Gambar 7.) (Jawetz et al. , 2008).
Gambar 6. Pewarnaan gram bakteri E. coli
Tabel 6. Hasil Uji daya hambat sediaan gel pembersih tangan berbahan aktif water kefir terhadap bakteri E.coli
Sampel Rerata daya hambat (mm) Kriteria Kontrol Positif ( Hand santizer komersial) 18,3 Intermediet Kontrol Negatif (Aquadest) 0 0 Formula 3% 12,3 Intermediet Formula 4% 15 Intermediet Formula 5% 18,3 Intermediet
Tabel 7. Hasil Uji daya hambat sediaan gel pembersih tangan berbahan aktif water kefir terhadap bakteri E.coli
Sampel Rerata daya hambat (mm) Kriteria Kontrol Positif ( Hand santizer komersial) 19,1 Intermediet Kontrol Negatif (Aquadest) 0 0 Formula 3% 12,6 Intermediet Formula 4% 14 Intermediet Formula 5% 17,5 Intermediet

## Pengujian Diameter Zona Hambat
Berdasarkan tabel 6 diameter zona hambat yang terbentuk di sekitar kertas cakram pada kontrol positif ( hand  sanitizer komersial  70%)  rerata  zona  hambat 18,3  mm,  dan  kontrol  negatif  (aquades)  tidak terbentuk adanya zona hambat, sedangkan pada hand sanitizer dengan water  kefir hadap  bakteri E.  coli dengan konsentrasi 3% yaitu rerata zona hambat 12,3 mm,  konsentrasi  4%  rerata  zona  hambat  15  mm, kemudian konsentrasi 5% adalah rerata zona hambat 18,3 mm.
Berdasarkan  Tabel  7  diameter  zona  hambat yang terbentuk di sekitar kertas cakram pada kontrol positif  (hand  sanitizer  komersial  70%)  rerata  zona hambat 19,1 mm, dan kontrol negatif (aquades) tidak terbentuk adanya zona hambat, sedangkan pada hand sanitizerter dengan water  kefir terhadap  bakteri S. aureus dengan  konsentrasi  3%  yaitu  rerata  zona hambat 12,3 mm, konsentrasi 4% rerata zona hambat 15 mm, kemudian konsentrasi 5% adalah rerata zona hambat 18,3 mm.
Aktivitas  antibakteri  ditentukan  oleh  diameter daerah  bening  yang  terbentuk  di  sekitar  lubang. Berdasarkan  penelitian  terdahulu  (Afriani et  al ., 2021).    Hasil  penelitian  menunjukkan  penurunan jumlah koloni terjadi pada aplikasi ketiga formula gel pembersih tangan. Pada ketiga formula menggunakan alkohol  70%  sejalan  dengan  penelitian  (Putri et  al. , 2016) yaitu hand sanitizer dengan kandungan alkohol minimal  70%  lebih  efektif.  Penggunaan water  kefir pada  gel  pembersih  tangan  dapat  membantu meningkatkan  efektivitas  antibakteri  gel  pembersih tangan, diduga karena kandungan asam organik pada water  kefir yang  merupakan  senyawa  antibakteri. Mendapatkan adanya pengaruh kandungan konsentrasi  asam  laktat  hasil  fermentasi  sukrosa terhadap  kemampuan  antibakteri  kefir  terhadap E. coli dan S.  aureus .  Komponen  antibakteri  yang dihasilkan  selama  fermentasi  kefir  yaitu  asam organik  (asam  laktat  dan  asetat),  karbon  dioksida, hidrogen  peroksida,  etanol,  diasetil,  dan  peptida (bakteriosin) (Putri et al ., 2016)
Berdasarkan hasil penelitian pembuatan sediaan gel  pembersih  tangan water  kefir didapatkan  gel
pembersih  tangan  yang  mempunyai  daya  antiseptik dan  mutu  fisik  yang  baik.  Hasil  penelitian menunjukkan  adanya  zona  hambat  pada  ketiga formula  gel hand  sanitizer. Sediaan  gel  pembersih tangan  dengan  daya  hambat  paling  baik,  yaitu  pada formula  III  penambahan  konsentrasi water  kefir sebesar  5%  dengan  rerata  daya  hambat  18.3  pada bakteri E.  coli dan  17.5  pada  bakteri S.  aureus. Sejalan  dengan  penelitian  terdahulu  Afriani et  al ., (2021)  hasil  penelitian  menunjukkan  penurunan jumlah koloni terjadi pada aplikasi ketiga formula gel hand sanitizer konsentrasi 1%, 1,5% dan 2% dengan daya hambat antiseptik paling baik pada konsentrasi 2% dengan jumlah koloni kurang dari 2. Kemampuan antibakteri  pada water  kefir ini  sejalan  dengan penelitian Kamila et al ., (2005) yang mendapati kefir memiliki aktivitas antimikrob terhadap berbagai jenis bakteri.  Ali et  al .,  (2018)  mendapatkan  adanya pengaruh  kandungan  konsentrasi  asam  laktat  hasil fermentasi sukrosa terhadap kemampuan antibakteri kefir terhadap E. coli. Farnworth (2005) menjelaskan komponen  antibakteri  yang  dihasilkan  selama fermentasi kefir yaitu asam organik (asam laktat dan asetat), karbon dioksida, hidrogen peroksida, etanol, diasetil, dan peptida (bakteriosin).

## SIMPULAN
Fermentasi water kefir dengan konsentrasi 3%,
4%  dan  5%  menghasilkan  minuman  yang  keruh kekuningan, berkarbonasi, bersifat asam, sedikit gula dan  sedikit  alkohol. Sediaan  gel  pembersih  tangan berbahan  aktif water  kefir sebagai  zat  antibakteri mampu  memenuhi  syarat  pengujian hand  sanitizer. Konsentrasi  sediaan  gel  berbahan  aktif water  kefir yang  lebih  efektif  untuk  menghambat  pertumbuhan bakteri E.coli dan S.aureus yaitu  pada  konsentrasi 5%.

## DAFTAR REFERENSI
Afriani,  K.,  Wardani,  V.  D.,  Agustin,  P.  A.,  & Ridwan,  M.  (2021).  Formulasi  Dan  Uji Efektivitas Antibakteri Sediaan Gel Pembersih Tangan  Berbahan  Aktif  Water  Kefir. Jurnal
Kimia  Riset , 6 (2),  123.  https://doi.org/ 10.20473/jkr.v6i2.22305
Agustina,  R.  P.  (2017).  Skrining  Fitokimia  dan  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Waru  Gunung  (Hibiscus  macrophyllus  Roxb. ex  Hornem)  terhadap  Bacillus  cereus.  In Skripsi .
Ali, M., Maruddin, F., & Hatta, M. (2018). Aktivitas antibakteri, nilai pH dan kadar asam laktat kefir dengan  penambahan  konsentrasi  sukrosa. Journal Sains & Teknologi , 18 (1), pp. 69–73
Asngad,  A.,  R,  A.  B.,  &  Nopitasari,  N.  (2018).
Kualitas Gel Pembersih Tangan (Handsanitizer)  dari  Ekstrak  Batang  Pisang dengan  Penambahan  Alkohol,  Triklosan  dan Gliserin yang Berbeda
Dosisnya. Bioeksperimen:  Jurnal  Penelitian  Biologi , 4 (2),  pp.  61–70.  https://doi.org/10.23917/ bioeksperimen.v4i2.6888
Aviany,  H.  B.,  &  Pujiyanto,  S.  (2020).  Analisis Efektivitas  Probiotik  di  Dalam  Produk Kecantikan  sebagai  Antibakteri  terhadap Bakteri  Staphylococcus  epidermidis. Jurnal Berkala Bioteknologi , 3 (2), pp. 24–31.
Cai,  Y.,  Sounderrajan,  A.,  &  Serventi,  L.  (2020). Water Kefir: A Review of its Microbiological Profile,  Antioxidant  Potential  and  Sensory Quality. Acta  Scientifci  Nutritional  Health , 4 (6),  pp.  10–17.  https://doi.org/10.31080 /asnh.2020.04.0706
CLSI. (2020). CLSI M100-ED29: 2021 Performance Standards  for  Antimicrobial  Susceptibility Testing, 30th Edition. In Clsi (Vol. 40, Issue 1).
Datta,  F.  U.,  Daki,  A.  N.,  Benu,  I.,  Detha,  A.  I.  R., Foeh, N. D. F. K., & Ndaong, N. A. (2019). Uji aktivitas antimikroba bakteri asam laktat cairan rumen  terhadap  pertumbuhan  Salmonella enteritidis,  Bacillus  cereus,  Escherichia  coli dan  Staphylococcus  aureus  menggunakan metode  difusi  sumur  agar. Prosiding  Seminar Nasional  VII  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas  Nusa  Cendana  Swiss  Bel-Inn Kristal Kupang , pp. 66–85.
Dhamankar, M. S. S., Dudhe, P. A. R., & Rathod, M. P.  I.  (2022). Preparation  of  Herbal  Hand Sanitizer .
7 (4), pp. 386–392. https://doi.org/10.35629/7781-0704386392
Diyantika, D., Mufida, D. C., & Misnawi, M. (2017). The Morphological Changes of Staphylococcus Aureus  Caused  by  Ethanol  extracts  of  Cocoa Beans  (Theobama  Cacao)  through  In  Vitro.
Journal  of  Agromedicine  and  Medical Sciences , 3 (1),  25.  https://doi.org/10.19184 /ams.v3i1.4094.
Gulitz, A., Stadie, J., Wenning, M., Ehrmann, M. A., & Vogel, R. F. (2011). The microbial diversity of  water  kefir. International  Journal  of  Food Microbiology , 151 (3), pp. 284–288.
https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2011.09. 016
Harahap, D. G. S. (2021). Dasar-Dasar Mikrobiologi Dan Penerapannya. In Widina Bhakti Persada Bandung (Vol. 1, Issue 69).
Hayati,  L.  N.,  Tyasningsih,  W.,  Praja,  R.  N., Chusniati, S., Yunita, M. N., & Wibawati, P. A. (2019). Isolasi dan Identifikasi Staphylococcus aureus pada Susu Kambing Peranakan Etawah Penderita  Mastitis  Subklinis  di  Kelurahan Kalipuro,
Banyuwangi. Jurnal Medik Veteriner , 2 (2),  76.  https://doi.org/10.20473/ jmv.vol2.iss2.2019.76-82
Indah Lestari, D., Leni Fibriarti, B., Program Studi, M. S., & Bidang Biodiversitas Jurusan Biologi, D.  (2020). Seleksi  Bakteri  Asam  Laktat  Lokal Penghasil  Eksopolisakarida  Dan  Optimasi Produksi  Pada  Variasi  Suhu,  Waktu  Inkubasi Serta Medium Fermentasi . pp. 1–14.
Jawetz, Melinick, & Aldeberg. (2008). Mikrobiologi Iftdokteran. Mikrobiologi  Kedokteran , 23 (1), pp. 251–257.
Juariah, S. (2021). MEDIA ALTERNATIF PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus DARI BIJI DURIAN (Durio Zibethinus murr). Meditory : The Journal of Medical Laboratory , 9 (1),  pp.  19–25.  https://doi.org/10.33992/ m.v9i1.1400
Karimela, E. J., Ijong, F. G., & Dien, H. A. (2017). Characteristics  of  Staphylococcus  aureus Isolated Smoked Fish Pinekuhe from Traditionally Processed from Sangihe District. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 20 (1), 188. https://doi.org/10.17844/ jphpi.v20i1.16506
Kemkes.  (2021). Pedoman  Standar  Produk  Hand Sanitizer  Berabasis  Alkohol (pp.  1–12). https://sertifikasialkes.kemkes.go.id/index.php /home/fileDownload/BERITA_FILE.pdf/115
Majid,  A.,  Ajizah,  A.,  &  Amintarti,  S.  (2020). Panduan  Mikrobiologi  Umum. Mikrobilogi Umum , pp. 1–41.
Mastuti, S. (2022). Potensi Bakteriosin pada Bakteri Asam  Laktat  terhadap  Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli. Jurnal Ilmiah Kesehatan Sandi Husada , 11 (1), pp. 25–30. https://doi.org/10.35816/jiskh.v11i1.650
Murhadi. (2009). Senyawa Dan Aktivitas
Antimikroba  Golongan  Asam  Lemak  Dan Esternya  Dari  Tanaman. Jurnal  Teknologi Industri  Dan  Hasil  Pertanian , 14 (ULASAN
ILMIAH: Senyawa dan Aktivitas), pp. 97–105.
Ni  Wayan  Martiningsih,  &  Ida  Ayu  Putu  Suryanti.
(2017). Jurnal 8-Martiningsih. Senari , pp. 631– 636.
Nisa,  N.  Z.,  Majidah,  L.,  &  Suhariati,  H.  I.  (2018). Daya Hambat Air Perasan Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Burm. f.) Pada Pertumbuhan Bakteri
Escherichia Coli. Studi
Laboratprium
Mikrobiologi STIKes ICMe Jombang , L .
Noviyanti,  Y.,  &  Sumiati,  S.  (2016).  Sensitifitas Bakteri Staphylococcus aureus terhadap Senyawa Alkaloid pada Daun Subang-Subang (Scaevola  taccada  L). Prosiding  Seminar Nasional  Ilmu  Kesehatan , 1 (1),  pp.  47–53. http://journal.umpalangkaraya.ac.id/index.php/ snik/article/view/1212
Nurfitri  Saridewi,  M.,  Bahar,  M.,  &  Anisah ,  A. (2017). Uji Efektivitas Antibakteri Perasan Jus Buah  Nanas  (Ananas  comosus)  Terhadap Pertumbuhan  Isolat  Bakteri  Plak  Gigi  di Puskesmas  Kecamatan  Tanah  Abang  Periode April 2017. Biogenesis: Jurnal Ilmiah Biologi ,
5 (2),  pp.  104–110.  https://doi.org/10.24252/ bio.v5i2.3532
Oktavia, N., & Pujiyanto, S. (2018). Isolasi dan Uji Antagonisme  Bakteri  Endofit  Tapak  Dara  ( Catharanthus  Roseus  ,  L  .)  Terhadap  Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. J.
Berkala Bioteknologi , 1 (1), pp. 6–12.
Oraldo  Emeraldi  Anggoro,  Ruth  Chrisnasari,  &
Ardhia Deasy Rosita Dewi. (2022). Pembuatan Water  kefir dengan  Memanfaatkan  Madu  dan Okra  (Abelmoschus  esculentus). KELUWIH: Jurnal  Sains  Dan  Teknologi , 3 (1),  pp.  10–23. https://doi.org/10.24123/saintek.v3i1.4903
Prasetya,  Y.  A.,  Winarsih,  I.  Y.,  Pratiwi,  K.  A., Hartono,  M.  C.,  &  Rochimah,  D.  N.  (2019). Deteksi  Fenotipik  Escherichia  coli  Penghasil Extended  Spectrum  Beta-lactamases  (ESBLs) pada Sampel Makanan di Krian Sidoarjo. Life
Science , 8 (1), pp. 95–105.
https://doi.org/10.15294/lifesci.v8i1.29995
Prayoga, E. (2013). Perbandingan Efek Ekstrak Daun Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.)  dengan  Metode Difusi Disk dan Sumuran Terhadap Pertumbuhan  Bakteri  Staphylococcus  aureus. Skripsi , pp.  =1–46.
Putri,  N.  M.,  Aprilia,  H.,  &  Arumsari,  A.  (2016). Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Minuman Kefir  terhadap  Bakteri Escherichia  coli dan
Staphylococcus aureus . Proseding Farmasi , 2 , pp. 272–279.
Putri,  R.  W.  A.  (2016).  Identifikasi  Bakteri Escherichia  coli  dan  Salmonella  sp.  Pada Makanan  Pada  Jajanan  Batagor  di  Sekolah Dasar Negeri Di Kelurahan Pisangan,
Cirendeu,  Dan  Cempaka  Putih  Kecamatan Ciputat  Timur.  In Skripsi.:  Vol.  Jakarta . https://repository.maranatha.edu/14733/3/0010 088_Chapter1.pdf
Rahayu,  W.  P.,  Nurjanah,  S.,  &  Komalasari,  E.
(2018).  Escherichia  coli:  Patogenitas,Analisis, dan  Kajian  Risiko. Journal  of  Chemical Information and Modeling , 1 (5), pp. 1–151.
Solikhah, A. M., Sri, D., & Muhammad, E. P. (2018). Analisis  Profil  Protein  Staphylococcus  aureus Multidrug  Resistance  (MDR)  dengan  SDS- PAGE. Jurnal  Universitas  Muhammadiyah
Semarang , pp. 1–8.
Sujaya,  I.  N.  (2016). Oleh:  Mikrobiologi,  Petunjuk Praktikum Penuntun, Praktikum Mikrobiologi,
Oleh . pp. 1–42.
Utomo,  S.  B.,  Fujiyanti,  M.,  Lestari,  W.  P.,  &
Mulyani, S. (2018). Antibacterial Activity Test of the C-4-methoxyphenylcalix
[4]resorcinarene  Compound  Modified  by Hexadecyltrimethylammonium- Bromide against Staphylococcus aureus and Escherichia coli  Bacteria. JKPK  (Jurnal  Kimia  Dan Pendidikan Kimia) , 3 (3), 201.
https://doi.org/10.20961/jkpk.v3i3.22742
Wahyuningtiyas,  A.  P.  (2020). (  Studi  di Laboratorium  Mikrobiologi  STIKes  ICMe Jombang ) . 87.
Wulansari,  P.  D.,  &  Wijayanti,  D.  (2020). KARAKTERISTIK  FISIK  ,  KIMIA  DAN MIKROBIOLOGI  SABUN  SUSU  KAMBING Physical  ,  Chemical  and  Microbiological Characteristic  of  Goat  Milk  Soap . 8 (3),  pp. 145–153.
Zakaria, I. H., Seumahu, C. A., & Killay, A. (2022). UJI  AKTIVITAS  SEDIAAN  SPRAY  HAND SANITIZER KOMBINASI EKSTRAK DAUN  KEMANGI  DAN  DAUN  JERUK NIPIS SEBAGAI
ANTIBAKTERI TERHADAP  Staphylococcus  aureus. Jurnal Biosilampari : Jurnal Biologi , 4 (2), pp. 87–96. https://doi.org/10.31540/biosilampari.v4i2.151 4