## UJI TOKSISITAS  DAN IDENTIFIKASI  AWAL  GOLONGAN  SENYAWA  AKTIF EKSTRAK  ETANOL  DAN N-HEKSANA
TERIPANG  PASIR  ( Holothuria scabra ) KERING

## PANTAI  KENJERAN SURABAYA
Nurul Inayah, Rachmawati Ningsih, Tri Kustono Adi
UIN  Maulana Malik  Ibrahim  Malang , Jurusan Kimia,  Fakultas Sains dan Teknologi

## ABSTRACT
Sea  cucumber (H.Scabra) is  a  species of marine biota providing high economical and medical values. It has been hundreds years consumed for drug to cure  various diseases in China. The aim of this research was to determine  the  level  of  the  toxicity  against  brine  shrimp  larvae A.salina Leach  in  each  dried  sea  cucumber (H.scabra) extract  collected  from Kenjeran Coast, Surabaya. The information would be beneficial for anticancer drug discovery .
The  research  was  conducted  by  extracting  samples  using  both  ethanol  and  n-hexane  solvents.  The concentrated  extract obtained then were used for the toxicity test against brine shrimp larvae of A.salina Leach (BSLT). The mortality data of A.salina Leach was analysed using probit analysis to determine the value of LC 50 on  each  extract.  The  phytochemical  assay  and  thin  layer  chromatography  (TLC)  was  also  apllied  for  both extracts.
The  result  showed  that  both  ethanol  and  n -hexane  exctracts  performed  toxicity  level  against  brine shrimp  larvae  of A.salina Leach  with  LC 50 less  than  1000  ppm.The  n-hexane  extract  indicated  LC 50 of 189.093 ppm, higher than the ethanol extract, 286.031 ppm. The presence of steroids were detected in both extract whilst the  alkaloids  were  only  detected in the ethanol extract. Further separation of the n -hexane exctrat using TLC in n-hexane;ethyl  acetate;amonia  (66:33:0.8)  yielded  5  spots  with  the  Rf  of  0.3;0.44;0.54;0.72  and  0.78, respectively.
Keywor ds : sea cucumber (holothuria scabra), artemia salina leach, toxicity test, phytochemical test

## ABSTRAK
Teripang  pasir (H.Scabra) merupakan  salah  satu  jenis  biota  laut  yang  memiliki  nilai  ekonomis  tinggi. Sudah  ratusan  tahun  Cina  menggunakan  teripang  pasir  sebagai  obat  yang  mampu  menyembuhkan  berbagai penyakit.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui tingkat toksisitas masing-masing ekstrak teripang pasir (H.scabra) dari  pantai  Kenjeran  terhadap  larva udang A.Salina Leach dan Untuk mengetahui kandungan senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak  teripang  pasir (H.scabra) dari  pantai  Kenjeran  yang  memiliki potensi bioaktifitas paling optimal.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  mengekstraksi  sampel  dengan   pelarut  etanol  dan  n-heksana.  Ekstrak pekat  yang  diperoleh  digunakan  untuk  uji  toksisitas  terhadap  larva  udang A.salina Leach  (BSLT)  dan  uji fitokimia  dengan  reagen.  Ekstrak  yang  memiliki  toksisitas  paling  tinggi  dilanjutkan  dengan  kromatografi  lapis tipis  eluen  n-heksana:etit  asetat:amoniak  (66:33:0,8).  Data  kematian A.salina Leach  dianalisis  dengan  analisis probit untuk mengetahui nilai  LC 50 pada masing-masing ekstrak.
Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  masing -masing  ekstrak  teripang  pasir (H.scabra) memiliki  tingkat toksisitas terhadap larva udang A.salina Leach, ditunjukkan dengan nilai LC 50 kurang dari 1000 ppm.  Nilai  keaktifan  tertinggi  diperoleh  ekstrak  n-heksana  dengan  nilai  LC 50 sebesar  189,093  ppm  dan  286,031 ppm  untuk  ekstrak  etanol.  Kandungan  senyawa  aktif hasil uji reagen menunjukkan adanya potensi bioaktivitas dalam  ekstrak  teripang  pasir  ( H.scabra )  yaitu  adanya  golongan  senyawa  alkaloid  (dalam  ekstrak  etanol)  dan steroid  (dalam  ekstrak  etanol  dan  n-heksana).  Hasil  KLT  diperoleh  5  noda  dengan  nilai  Rf= 0,3;0,44;0,54;0,72;0,78.
Kata  kunci : teripang pasir (holothuria scabra), artemia salina leach, uji tok sisitas, uji fitok imia.

## I. PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara
kepulauan  terbesar  yang  memiliki  17.504 pulau  dan  garis  pantai  lebih  dari  81.000 Km 2 dengan  luas  perairan  laut  sekitar  5,8 juta  Km 2 (Reina,  2004).  Hal  ini  juga berimplikasi  pada  kepemilikan  sumber  daya laut  Indonesia  yang  melimpah  yang  dapat dimanfaatkan untuk kehidupan.
Pemanfaatan  biota  laut  saat  ini  bukan  hanya sekedar  konsumtif  saja,  tetapi  mengarah kepada  penelitian  yang  lebih  lanjut  seperti obat-obatan dalam dunia medis yang tujuannya  untuk  mengangkat  nilai  ekonomi biota  laut.
Salah  satu  potensi  biota  laut  adalah teripang  dengan  nama  lain teat  fish,  sea cucumber ,  dan  ginseng  laut.  Teripang merupakan salah satu anggota hewan berkulit duri (Echinodermata) , yang memiliki tubuh lunak, berdaging, dan berbentuk  silindris  memanjang  (Martoyo, dkk.,  2006).  Teripang  dapat  ditemukan hampir diseluruh perairan, mulai dari daerah  pasang  surut  yang  dangkal  sampai perairan  yang  lebih  dalam.  Teripang  lebih menyukai  perairan  yang  jernih  dan  airnya relatif tenang. Umumnya masing-masing jenis memiliki habitat yang spesifik. Misalnya  teripang  putih  banyak  ditemukan di daerah yang berpasir atau pasir bercampur  lumpur  pada  kedalaman  1-40  m, penyebarang  teripang  di  Indonesia  sangat luas.  Beberapa  daerah  penyebaran  antara lain  meliputi  perairan  pantai  Madura,  Jawa timur, Bali, Sumba, Lombok, Aceh,
Bengkulu,  Bangka,  Riau  dan  sekitarnya, Belitung,  Kalimantan,  Sulawesi,  Maluku, Timor,  dan  kepulauan  seribu  (Martoyo, 2006).
Teripang umumnya menempati ekosistem  terumbu  karang  dengan  perairan yang  jernih,  bebas  dari  polusi,  air  relatif tenang  dengan  mutu  air  cukup  baik.  Habitat yang  ideal  bagi  teripang  adalah  air  laut dengan  salinitas  29-33  ‰  yang  memiliki kisaran  pH  6,5-8,5,  kecerahan  air  50-150 cm,  kandungan  oksigen  terlarut  4-8  ppm dan  suhu  air  laut  20-25ºC  (Wibowo  dkk, 1997).
Menurut  Matraga  (2005)  teripang sudah  ratusan  tahun  digunakan  sebagai obat-obatan  di  Cina.  Menurut  Wibowo  dkk, (1997)  teripang  mengandung  bahan  bioaktif (antioksidan) yang  berfungsi  mengurangi kerusakan sel jaringan tubuh. Hasil penelitian Kaswandi dkk, (2000)
menunjukkan  bahwa  ekstraksi  komponen antibakteri dari teripang (H.acabunda) cukup efektif  menghambat  pertumbuhan bakteri Escherichia  coli,  Vibrio  amsela . Ekstrak teripang juga menunjukkan aktifitas  antiprotozoa  dan  menghambat  sel tumor.  Serta  juga  sebagai  penyembuh  luka dan  antithrombotic  yaitu  untuk  mengurangi pembekuan  darah  didalam  saluran  darah sehingga  dapat  mengurangi  resiko  penyakit stroke  dan  jantung  (Farouk et  al. ,  2007). Bagian  hewan  yang  digunakan  mencakup seluruhnya.
Jenis  teripang  yang  paling  banyak ditemukan  di  Indonesia  adalah  teripang pasir (Holothuria  scabra) dengan  tingkat penyebaran  mencapai  38,86  %.  Penelitian ilmiah  mengenai  teripang  pasir (H.scabra) khususnya  teripang  dari  pantai  Kenjeran Surabaya  belum  dilakukan  secara  meluas, sehingga  dalam  penelitian  ini  dilakukan pengujian  awal  untuk  mengetahui  adanya potensi bioaktivitas dan kandungan kimianya  melalui  uji  senyawa  aktif.  Pelarut yang  digunakan  pada  proses  ekstraksi dalam  penelitian  ini  yaitu  etanol  dan  n- heksana.  Pelarut-pelarut  tersebut  memiliki titik  didih  yang  cukup  rendah  agar  pelarut dapat  mudah  diuapkan  tanpa  menggunakan suhu  yang  tinggi,  bersifat  inert,  dapat melarutkan  senyawaan  yang  sesuai  dengan cukup  cepat  serta  memiliki  harga  yang terjangkau.  Titik  didih  pelarut  n-heksana dan  etanol,  berturut-turut  yaitu  68,7  ºC  dan 78,3 ºC (Sudarmadji dkk., 2003). LC 50 ( Lethal Concentration-50 ) adalah  kadar  atau  konsentrasi  suatu  zat, yang  dinyatakan  dalam  miligram  bahan kimia  per  meter  kubik  media  uji  ( part  per million /  ppm),  yang  dapat  menyebabkan  50 %  kematian  pada  binatang  percobaan  dari suatu  kelompok  spesies  setelah  binatang
percobaan  tersebut  terpapar  dalam  waktu tertentu  (Cahyono,  2004).
Brine  shrimp  lethality  test (BSLT) merupakan pengujian senyawa secara umum  yang  dapat  mendeteksi  beberapa bioaktivitas  dalam  suatu  ekstrak.  Beberapa kelebihan dari uji bioaktivitas dengan BSLT  menggunakan  larva  udang Artemia salina adalah  cepat  waktu  ujinya,  sederhana (tanpa  teknik  aseptik),  murah  (tidak  perlu serum  hewan),  jumlah  organisme  banyak, memenuhi kebutuhan validasi statistik dengan  sedikit  sampel  (Meyer et a.l , 1982).
Artemia  salina sering  digunakan sebagai  hewan  uji  toksisitas.  Telur A.  salina dapat  bertahan  dalam  kondisi  kering  dan dapat  disimpan  cukup  lama.  Telur  ini  bila diberi  air  laut  pada  suhu  23º  C  maka ia akan menetas  dalam    1-2  hari  dan  dapat  langsung digunakan  dalam  uji  toksisitas. A.  salina diperdagangkan  dalam  bentuk  telur  istirahat yang  disebut  kista.  Kista  ini  dilihat  dengan mata telanjang berbentuk bulat-bulatan kecil  berwarna  kelabu  kecoklatan  dengan diameter  sekitar  300  mikron  (Farihah, 2008).
Pengujian  terhadap  kadar  toksisitas ekstrak hewan dilakukan dengan mengamati tingkat kematian (mortalitas) yang  ditimbulkan  oleh  ekstrak  terhadap larva  udang  jenis A.  salina Leach  setelah dilakukan  pengujian  selama  24  jam.  Batas aktivitas  biologi  adalah  dengan  nilai  LC 50 < 1000  μg/mL  (Meyer et  al ,.  1982).  Semakin kecil  nilai  LC 50 yang  dimiliki  ekstrak hewan  maka  akan  semakin  toksik  dan semakin berpotensi untuk memiliki aktivitas  biologi/efek  farmakologi. Bioaktivitas hewan
sangat dipengaruhi  oleh  kandungan  senyawa  kimia yang  terdapat  di  dalamnya,  sedangkan untuk  mendapatkan  senyawa  kimia  yang bersifat  aktif  tersebut  dipengaruhi  oleh metode  pemisahan  meliputi  cara  ekstraksi dan  pelarut  yang  digunakan.  (Albuntana dkk.,  2011)  dengan  menggunakan  pelarut  n- heksana,  etil  asetat  dan  air    pada  4  jenis teripang Actinopyga  miliaris , Bohadschia argus , Bohadschia marmorata , dan Holothuria  leucospilota didapatkan H.
leucospilota dalam fraksi  air  yang  memiliki sifat  toksisitas  paling  besar  dengan  nilai LC 50 sebesar  50,  968  μg/ml.  Pada umumnya teripang  yang  termasuk  dalam  satu  genus Holothuria mempunyai anatomi dan morfologi  yang  mirip  sehingga  diduga H. scabra juga  memiliki  nilai  LC 50 yang tinggi.

## II. METODE PENELITIAN

## Pelaksanaan Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan  Oktober  sampai  dengan  bulan  Juni 2012  di  Laboratorium  Kimia, Jurusan Kimia  UIN  Malang  dan  Balai  Penelitian Kacang-Kacangan dan Umbi-Umbian
(BALITKABI).

## Alat dan  Bahan  Penelitian
Alat  yang  digunakan  adalah  oven, timbangan  analitik,  seperangkat  alat  gelas, penyaring buchner , shaker, rotary evaporator ,  desikator,  tabung  reaksi,  lampu
UV, vortex , aerator dan botol  vial.
Bahan yang digunakan adalah
teripang pasir  ( H.scabra) kering  yang diperoleh  dari  pantai  Kenjeran  Surabaya dan  larva  udang A.salina sebagai  hewan  uji. Bahan  kimia  yang  digunakan  untuk  pelarut adalah  etanol  dan n-heksana
Prosedur  Penelitian Preparasi  Sampel Sampel yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  teripang  pasir  kering yang  didapatkan  dari  petani  teripang  pantai Kenjeran Surabaya. Teripang tersebut berwarna  hitam  dan teksturnya  keras.
Sampel teripang kering ditumbuk menggunakan  mortar  sampai  menjadi  kecil- kecil tujuannya untuk mempermudah proses penghalusan. Setelah ditumbuk, teripang  dihaluskan  menggunakan  blender kemudian  diayak  menggunakan  saringan teh.

## Analisis Kadar  Air
Teripang  kering  ditimbang  sebanyak 5  g  dan  dimasukkan  dalam  cawan  yang
telah diketahui berat
konstannya, selanjutnya  dikeringkan  didalam  oven  pada suhu  100-105  ºC  selama  1  jam.  Sampel kering  didinginkan  dalam  desikator  dan ditimbang.  Perlakuan  ini  diulangi  sampai tercapai  berat konstan.

## Ekstaksi Maserasi
Serbuk teripang pasir ditimbang sebanyak  60  g  dan  dilarutkan  dengan pelarut  etanol  sebanyak  300  mL  selama  24 jam  sambil  dishaker  selama  5  jam.  Filtrat yang  diperoleh  disaring  dan  ampasnya dilarutkan lagi dengan pelarutnya. Perlakuan  ini  dilakukan  sampai  terjadi perubahan  warna  pada  filtrat  dari  warna pekat menjadi  tak  berwarna  (bening). Ketiga  filtrat  yang  diperoleh  selanjutnya digabung  menjadi  satu.  Pada  tahap  ini dilakukan ekstraksi maserasi dengan
perlakuan  yang  sama  dengan  menggunakan pelarut  n-heksana.
Ekstrak  etanol  dan  n-heksan  yang
diperoleh dipekatkan
dengan rotary evaporator pada  suhu  40 o C sampai diperoleh  ekstrak  pekat  etanol  dan  n- heksana.
Uji  Toksisitas  dengan  Larva  Udang A.salina Leach

## Penetasan Telur
250  mL  air  laut  dimasukkan  dalam botol  penetasan,  dimasukkan  2,5  mg  telur A.salina Leach.  Selanjutnya  diaerasi  selama ±  48  jam  dan  larva  udang  yang  menetas siap  digunakan  untuk  uji  toksisitas.
Uji  Toksisitas Perlakuan uji toksisitas dilakukan sebanyak  3  kali  ulangan  pada  masing- masing  ekstrak  sampel.  Ekstrak  kasar etanol  dan  n-heksana  ditimbang  sebanyak 100 mg dan dilarutkan dengan menggunakan pelarutnya masing-masing sebanyak  10  mL.  Larutan  yang  diperoleh selanjutnya
dipipet masing-masing sebanyak  500  μL,  250  μL,  100  μL,  50  μL dan  25  μL,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam botol  vial  dan  pelarutnya  diuapkan  hingga
kering  ±  24  jam  di  dalam  suhu  ruang. Selanjutnya  dimasukkan  100  μL  dimetil sulfoksida,  setetes  larutan  ragi  roti,  2  mL  air laut,  kemudian  dikocok  sampai  ekstrak dapat  larut  dalam  air  laut  dengan  bantuan vortex. Larutan  dipindahkan  dalam  labu ukur  10  mL,  kemudian  dimasukkan  10  ekor larva  udang A.salina dan  ditambahkan  air laut  sampai  volumenya  menjadi  10  mL, sehingga konsentrasinya masing-masing larutan  menjadi  500,  250,  100,  50  dan  25 ppm. Kontrol digunakan sebagai pembanding  yang  dibuat  dengan  cara  yang sama kecuali penambahan ekstrak. Pengamatan  dilakukan  selama  24 jam terhadap  kematian  larva  udang.
Perhitungan  LC 50 dilakukan  dengan menggunakan  analisis  probit  menggunakan program  MINITAB  14  dengan  tingkat kepercayaan  95 %.

## Uji  Senyawa  Aktif dengan  Uji  reagen

## Uji  Flavonoid
Ekstrak  teripang  pasir  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  dan  dilarutkan  dalam 1-2  mL  metanol  panas  50  %.  Kemudian ditambah  logam  Mg  dan  0,5  mL  HCl  pekat. Larutan  berwarna  merah  atau  jingga  yang terbentuk,  menunjukkan  adanya  flavonoid.

## Uji  Alkaloid
Ekstrak  teripang  pasir  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  ditambah  0,5  mL  HCl 2  %  dan  larutan  dibagi  dalam  dua  tabung. Tabung  I  ditambahkan  0,5  mL  reagen Dragendroff,  tabung  II  ditambahkan  0,5  mL reagen  Meyer.  Jika  tabung  I  terbentuk endapan jingga dan pada tabung II terbentuk endapan kekuning-kuningan, menunjukkan  adanya  alkaloid.

## Uji  Triterpenoid/Steroid
Ekstrak  teripang  pasir  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  dilarutkan  dalam  0,5 mL  kloroform,    ditambah  dengan  0,5  mL asam  asetat  anhidrat,  kemudian  ditambah dengan  1-2  mL  H 2 SO 4 pekat  melalui dinding  tabung  tersebut.  Jika  hasil  yang diperoleh  berupa  cincin  kecoklatan  atau
violet pada perbatasan dua pelarut menunjukkan adanya
triterpenoid, sedangkan  jika terbentuk warna hijau kebiruan  menunjukkan  adanya  steroid.
Uji  Senyawa  Aktif dengan KLT
Uji  senyawa  aktif  dengan  KLT dilakukan  terhadap  golongan  senyawa  yang positif  dari  hasil  uji  senyawa  aktif  dengan uji  reagen  dan  memiliki  nilai  LC50  paling rendah berdasarkan uji toksisitas.
Identifikasi  dengan  KLT  digunakan  plat silika  gel  F 254 yang  sudah  diaktifkan  dengan pemanasan  dalam  oven  pada  suhu  60-80 ○ C selama 30 menit. Masing-masing plat dengan  ukuran  1x10  cm 2 .  Ekstrak  teripang pasir  ditotolkan  sebanyah  1  mL  pada  jarak ±  1  cm  dari  tepi  bawah  plat  dengan  pipa kapiler. Noda/bercak hasil pemisahan kemudian  diamati  di  bawah  sinar  UV  pada panjang  gelombang  254 nm  dan 366 nm.

## III. HASIL  DAN PEMBAHASAN

## Preparasi  Sampel
Teripang  kering  dihaluskan  sampai menjadi serbuk. Tujuannya
untuk memperbesar luas permukaan sehingga interaksi  zat  cairan  ekstraksi  semakin  besar. Serbuk  teripang  yang  sudah  dihaluskan berwarna  coklat  kehitaman.

## Analisis Kadar  Air
Pada  tahap  ini  sampel  dimasukkan dalam  cawan  yang  telah  diketahui  beratnya. Sampel  dilakukan  pemanasan  pada  suhu 100-105 o C  selama  30  menit  tujuannya untuk  menguapkan  air  dalam  sampel  karena air  akan  menguap  pada  suhu  100 o C, selanjutnya  ditimbang  dan  perlakuan  ini dilakukan berulang hingga beratnya konstan.  Selisih  berat  sebelum  dan  sesudah pengeringan  adalah  banyaknya  air  yang diuapkan (Winarno, 2002).  Dari  hasil perhitungan  diperoleh  kadar  air  teripang kering  sebesar 7,773 %.

## Ekstraksi Maserasi
Proses  perendaman  dilakukan  dalam waktu 24 jam dengan masing-masing
pelarut  sebanyak  300  mL.  Perendaman disertai pengadukan dengan shaker
kecepatan  120  rpm  selama  5  jam  untuk mempercepat  pelarutan  senyawa  kedalam pelarutnya dan memperbesar interaksi sampel  dengan  sampel.  Hasil  maserasi ditampilkan  pada Tabel  1.

## Tabel 1  Hasil Maserasi Serbuk Teripang Pasir
Pelarut Warna ekstrak pekat Rendemen (%) (b/b) Etanol Kuning  ada endapan 6,13 n-heksana Hitam kecoklatan 1,86 Albuntana, dkk., (2011) dengan menggunakan  pelarut  n-heksana,  etil  asetat dan air pada empat jenis teripang didapatkan  hasil  ekstrak  kasar  teripang paling  besar  pada  pelarut  polar  sebesar  95,6
%.  Senyawa  metabolit  sekunder  di  alam kebanyakan  di  dapat  dalam  bentuk  gulanya sehingga  larut  dalam  pelarut  polar.  Zhang, et al., (2006) menyatakan bahwa senyawaan yang dominan dihasilkan teripang berupa saponin yang apabila dihidrolisis akan menghasilkan suatu
senyawa  triterpenoid  dan  glikosida.  Hasil ekstrak  pekat  masing-masing  pelarut  yang diperoleh  selanjutnya  digunakan  untuk  uji toksisitas.

## Uji  Toksisitas  dengan  Larva  Udang
A.salina Leach Pada  penelitian  ini  ekstrak  kasar etanol dan n-heksana dilakukan uji toksisitas dengan menggunakan metode BSLT  yaitu  dengan  melihat  kematian  dari larva udang setelah diberi perlakukan penambahan ekstrak dengan variasi konsentrasi  dalam  media  hidupnya  selama 24 jam.
Meyer, et  al., (1982)  menyatakan bahwa  senyawa  uji  dikatakan  toksik  jika harga  LC 50 lebih  kecil  dari  1000  µg/mL. Penentuan potensi bioaktif dilakukan dengan  membandingkan  nilai  LC 50 masing-
masing ekstrak dengan ketentuan McLaughin  (1991):
- LC 50 <  30  ppm  ekstrak  berpotensi sebagai  antikanker  (sitotoksik)
- LC 50 30-200  ppm ekstrak berpotensi sebagai  anti  mikroba
- LC 50 200-1000 ppm ekstrak berpotensi  sebagai  pestisida
Berdasarkan  analisa  data  dengan program  MINITAB  dengan  kepercayaan  95 %  dapat  dilihat  di  Gambar  1  dan  2  dari masing-masing  ekstrak  kasar  teripang  pasir dalam  pelarut  etanol  dan n-heksana.
Gambar 1  Kurva Mortalitas Ekstrak Etanol
Gambar 2  Kurva Mortalitas Ekstrak n-Heksana
Berdasarkan hasil uji toksisitas didapatkan nilai LC 50
masing-masing ekstrak pada Tabel  2.
Tabel 2 Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Teripang
Ekstrak LC 50 Potensi etanol 286,031  Pestisida n-heksana 189,093  Antimikroba
Dari  nilai LC 50 diketahui bahwa ekstrak  n-heksana  teripang  bersifat  lebih toksik  sehingga  dapat  dimanfaatkan  lebih lanjut  dalam  farmakologi.
Kandungan Senyawa Aktif dalam
Teripang  pasir (H.scabra)
Uji  senyawa  aktif  dilakukan  pada ekstrak  yang  memiliki  nilai  LC 50 <1000 ppm.  Hasil  identifikasi  golongan  senyawa aktif  yang  terdapat  dalam  ekstrak  dapat dilihat  pada Tabel  3.
Tabel 3  Hasil Pengamatan Uji Fitokimia Golongan senyawa Ekstrak etanol Ekstrak n-heksana Alkaloid, meliputi  : Reagen Dragendroff Reagen Meyer + + - - Flavonoid - - Steroid + ++ Hasil identifikasi senyawa aktif berdasarkan  uji  fitokimia  pada  masing- masing ekstrak ditunjukkan adanya senyawa  steroid  dan  alkaloid  pada  ekstrak etanol  dan steroid  pada ekstrak n-heksana.

## Flavonoid
Menurut  Robinson  (1995),  flavonoid akan menghasilkan senyawa kompleks yang  berwarna  merah  atau  jingga  ketika direduksi  dengan  logam  Mg  dan  HCl  pekat.
Uji flavonoid menunjukkan hasil yang negatif  yaitu  dengan  tidak  terbentuknya warna  merah  atau  jingga  pada  masing- masing  ekstrak  ketika  penambahan  Mg  dan HCl  pekat.
Alkaloid Pengujian alkaloid dengan menggunakan  dua  reagen  yang  berbeda yaitu Reagan Mayer dan reagen Dragendroff.  Hasil  pengujian  menunjukkan ekstrak polar teripang mengandung senyawa  alkaloid.
Konsentrasi (ppm) % m o rt a lit a s 500 250 0 -250 -500 90 80 70 60 50 40 30 20 10 5 1 0,1 Table of Statistics Mean 286,031 StDev 311,620 Median 286,031 IQ R 420,370 Probability Plot for Mortalitas Probit Data - ML Estimates Normal - 95% CI Konsentrasi (ppm) % M o rt a lit a s 500 250 0 -250 -500 90 80 70 60 50 40 30 20 10 5 1 Table of Statistics Mean 189,093 StDev 422,797 Median 189,093 IQ R 570,345 Probability Plot for Mortalitas Probit Data - ML Estimates Normal - 95% CI
Hasil  positif  pada  uji  Dragendroff ditandai dengan terbentuknya endapan jingga.  Endapan  tersebut  diduga  adalah kalium  alkaloid.  Pada  pembuatan  pereaksi Dragendroff
bismuth nitrat dilarutkan dengan  HNO 3 pekat  agar  tidak  terjadi reaksi hidrolisis karena garam-garam bismuth mudah  terhidrolisis.
Hasil positif golongan alkaloid dengan  reagen  Mayer  ditandai  dengan terbentuknya  endapan  putih  kekuningan. Pereaksi  Mayer  (kalium  tetraiodomerkurat) paling  banyak  digunakan  untuk  mendeteksi golongan  alkaloid  karena  pereaksi  ini  dapat mengendapkan hampir semua alkaloid (Robinson,1995).
Rodriguez et  al,. (2000)  menyatakan kandungan  senyawa  yang  terdapat  pada teripang  salah  satunya  adalah  asam  amino (aspartat,  glutamat,  histidin,  treonin,  alanin, arginin,  prolin,  tirosin,  valin,  serin,  glisin, sistein,  isoleusin,  leusin,  fenilalanin  dan lisin), dengan demikian memperkuat adanya  dugaan  senyawa  alkaloid  yang terkandung  dalam  ekstrak teripang.

## Triterpenoid/Steroid
Senyawa triterpenoid/steroid akan mengalami  dehidrasi  dengan  penambahan asam  kuat  dan  membentuk  garam  yang memberikan  sejumlah  reaksi  warna.  Uji steroid  menunjukkan  hasil  yang  positif  pada kedua  ekstrak  yaitu  ekstrak  etanol  dan  n- heksana,  masing-masing  terbentuk  warna hijau kebiruan. Perubahan warna ini disebabkan  adanya  penambahan  asam  sulfat pekat  pada  dinding  tabung  reaksi.  Menurut Robinson  (1995),  triterpenoid  memberikan reaksi terbentuknya warna cincin kecoklatan  ketika  senyawa  ini  ditetesi  asam sulfat  pekat  melalui  dindingnya,  sedangkan steroid  akan  menghasilkan  warna  hijau kebiruan.
Kustiariyah (2006) berhasil
mengisolasi  steroid  dari  teripang  sebagai aprodisiaka  alami  dengan  pelarut  n-heksan, aseton,  etil  asetat  dan  metanol.  Teripang pasir (H.scabra) juga  mengandung  steroid yang  lebih  tinggi  (58,46  ±2,94  x  10 -4 ) dibandingkan teripang hitam (H.nobilis)
dan  teripang  gamat (S.variegatus) dalam pemanfaatannya sebagai sumber  steroid alami  (Nurjannah,  2008).
Pemisahan  dengan  KLT Uji senyawa
aktif dengan kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dilakukan pada  ekstrak  yang  memiliki  nilai  LC 50 paling  rendah  yaitu  ekstrak  n-heksana dengan  nilai  LC 50 sebesar  189,093  ppm.
Larutan pengembang (eluen) yang digunakan yaitu n-heksana:  etil  asetat:
amoniak (66:33:0,8). Fase  diam  yang digunakan  yaitu  silika  gel  GF 254 yang diaktifasi  pada  suhu  80  ºC  selama  30  menit untuk  menghilangkan  air  yang  terdapat pada  plat.  Pengamatan  dilakukan  dibawah sinar  UV  dengan  panjang  gelombang  254 nm  dan  356  nm.  Tabel  4  di  bawah  ini menampilkan  hasil  KLT  senyawa  steroid ekstrak n-heksan  teripang  pasir (H.scabra)
Tabel 4  Hasil KLT Ekstrak n-Heksana Rf Warna noda di bawah sinar UV 254 nm                         356 nm 0,3 Coklat Tidak berwarna 0,54 Coklat pudar Tidak berwarna 0,72 Coklat kehijauan Tidak berwarna 0,78 Coklat kehitaman Tidak berwarna 0,44 Tidak berwarna Biru muda kehijauan
Pada  tabel  di  atas  menunjukkan terbentuknya  5  noda  dengan  Rf  antara  0,3- 0,78.  Noda-noda  ini  terpisah  berdasarkan tingkat  kepolarannya.  Noda  yang  memiliki nilai  Rf  yang  kecil  0,3  diduga  cenderung bersifat  polar  dikarenakan  noda  tersebut lebih  terdistribusi  ke  fase  diam  yang cenderung bersifat polar. Noda yang memiliki  Rf  yang  tinggi  0,78  cenderung terdistribusi  ke  dalam  fase  gerak  yang kepolarannya lebih kecil dibandingkan dengan  fase  diamnya.

## IV. KESIMPULAN
Masing-masing  ekstrak  teripang  pasir ( H.scabra )  memiliki  tingkat  toksisitas
terhadap  larva  udang A.salina Leach, ditunjukkan  dengan  nilai  LC 50 <1000 ppm.  Nilai  keaktifan  tertinggi  diperoleh ekstrak  n-heksana  dengan  nilai  LC 50 sebesar  189,093  ppm  dan  286,031 ppm untuk  ekstrak  etanol.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Albuntana,  Yasman,  W.,  Wisnu.  2001.  Uji
Toksisitas Ekstrak Empat Jenis Teripang  Suku  Holothuridae  Dari Pulau  Penjaliran  Timur,  Kepulauan Seribu,  Jakarta,  Menggunakan  Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) . Jakarta:  Universitas  Indonesia. Cahyono,  A.  B.  2004.  Keselamatan  Kerja Bahan Kimia di Industri. Yogyakarta:  UGM Press. Colegate,  S.  M.  dan  Molyneux,  R.  J.  2007. Bioactive Natural Products: Determination, Isolation and Structural Determination Second Edition.  Prancis:  CRC Press. Farihah.  2006. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Ficus benjamina L terhadap Artemia  salina  Leach  dan  Profil Kromatografi  Lapis Tipis. Skripsi Diterbitkan. Surakarta: Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah  Surakarta. Farouk  A.E.,  Ghouse  F.A.H.,  Ridzwan  B.H ,  2007.  New  Bacterial  Species Isolated from Malaysian Sea Cucumbers  with  Optimized  Secreted Antibacterial Activity. American Journal of Biochemistry and Biotechnology 3 (2):  60-65
Fieser,  F.L.  1961.  Advanced  Organic chemistry,  Reinhold  Publishing  Co. New York. hal  800-804.
Halimah,  N.  2010.  Uji  Fitokimia  dan  Uji Toksisitas  Ekstrak  Tanaman  Anting-
Anting      (acalypha  indica  linn.) Terhadap  Larva  Udang Artemia Salina Leach. Skripsi Tidak Diterbitkan.  Malang:  Jurusan  Kimia Fakultas  Sains  dan Teknologi,  UIN. Kaswandi  MA,  Lian  HH,  Nurzakiah  S, Ridzwan  BH,  Ujang  S,  Samsudin
MW,  Jasnizat  S  and  Ali  AM.  2000.
Crystal  Saponin  From  Three  Sea Cucumber Genus and Their Potential  As  Antibacterial  Agents. 9th  Scientific  Conference  Electron Microscopic  Society.  12-14  Nov. 2000,  Kota  Bharu,  Kelantan.  273— 276. Kurnia, H.D. 2008. Kajian Ekstraksi Steroid  Teripang  Pasir (Holothuria scabra) Sebagai Sumber Testosteron. Bandung: Institut Pertanian  Bogor. Kustiariyah.  2006.  Isolasi  dan  Uji  Aktivitas Biologis Senyawa dari Teripang Pasir (Holothuria  scabra) Sebagai Aproksida  Alami.  Thesis.  Sekolah Pasca Sarjana. Bogor: Insitut Pertanian  Bogor. Lenny, S. Senyawa  Flavonoida,  Fenil Propanoida,  dan  Alkaloida.  Sumut: USU Respository.
http://library.usu.ac.id/download/fmi pa/06003488.pdf-senyawa. Tanggal akses 5 Mei 2010.
Matraga,  V.  2005.  Echinodermata;  Progress
In Molecular and Subcellular Biology  Springer.  Jerman Martoyo  J,  Aji  N  dan  Winanto  Tj.  2000. Budidaya Teripang. Jakarta: Penebar  Swadaya. McLaughlin  JL,  Chang  C-J,  Smith  DL. Bench top bioassays for the discovery of bioactive natural products  An  update.  In:  Atta-ur- Rahman,  ed.  Studies  in  Natural Products Chemistry . Amsterdam:
Elsevier;  1991;9:388–409. Meyer, B.N., Ferrigni, Putnam, J.E.
Jacobsen, L.B. Nichols, and McLaughlin.  1982.  Brine  Shrimp:  A Convenient  General  Bioassay  for Active  Plant  Constituents .  Planta Medica 45: 31-34. Nurjannah. 2008. Identifikasi Steroid Teripang Pasir ( H.scabra ) dan
Pemanfaatannya sebagai sumber steroid alami . Disertasi.  Sekolah Pasca Sarjana. Bogor: Insitut
Pertanian  Bogor.
Reina,  A.  2004.  Sea  Cucumber  a  Promosing Mainstay Commodity . Program OGB Indonesia. http://www.oxfamgb.org/eastasia [26  Februari  2005]  diakses  tanggal 19 Juni  2011. Robinson. 1991. Kandungan
Organik
Tumbuhan  Tinggi.  Bandung:  Institut
Teknologi  Bogor.
Rodriguez  E.,  Gonzales  M.,  Caride  B., Lamas  M.A.,  Taboada  M.C.,  2000. Nutritional  Value  Of  Holothuria Forskali  Protein  And  Effects  On Serum  Lipid  Profile  In  Rats .  J.
Physiol.  Biochem.  58(1):39-44
Soemirat,  J.  2005.  Toksikologi  Lingkungan.
Gadjah Mada University Press, Yogyakarta
Sudarmadji,  S.,  Haryono  dan  Suhardi.
2003. Analisa  Bahan  Makanan  dan Pertanian . Yogyakarta:  Liberty. Wibowo, S. Yunizal.1997. Teknologi Penanganan dan Pengolahan Teripang  ( Holothuriadea ).  Jakarta:
IPPL Slipi.
Winarno,  F.  G.  2002.  Kimia  Pangan  dan Gizi.  Jakarta:  PT  Gramedia  Pustaka Utama.
Zhang,  Y..,  H.Y.  Yi,  and  H.F.  Tang.  2006. Cytotoxic Sulfated Triterpene Glycosides From The Sea Cucumber Pseudocolochirus Violaceus. Chemistry & Biodiversity,  hlm  807-817.