APLIKASI PROBIOTIK YANG DIISOLASI DARI USUS IKAN LELE ( Clarias batrachus ) UNTUK MENINGKATKAN PERFORMA PERTUMBUHAN
DAN RESISTENSI IKAN MAS (Cyprinus carpio) TERHADAP INFEKSI Aeromonas hydrophila
(Application of probiotic bacteria isolated from catfish ( Clarias batrachus ) intestine to enhance growth performance and resistance of carp ( Cyprinus carpio ) against Aeromonas hydrophila )
Febi S.D. Saragih 1 , Henky Manoppo 2 , Suzanne L. Undap 2 , Edwin L.A. Ngangi 3 , Sammy N.J. Longdong 2 , Diane J. Kusen 2 .
1 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia
2 Staf Pengajar Pada Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115, Sulawesi Utara, Indonesia e-mail: febysaragih28@gmail.com

## ABSTRACT
The  objective  of  research  was  to  isolate  probiotic  bacteria  from  catfish intestine and to examine its effects on the growth and resistance of carp against Aeromonas hydrophila. The probiotic isolated from intestine was grown on MRS agar.  Fish used in this research was juvenile of carp with an average weight of 5.5  g  obtained  from  Freshwater  Aquaculture  Board  at  Tatelu  Village,  North Sulawesi Province.  Before running the experiment, the juveniles were adapted for  one  weeks  in  15  glass  aquaria  at  a  density  of  15  individuals  each.    After acclimatization,  the  fish  were  fed  diet  supplemented  with  probiotic  at  different concentrations namely 1x10 9 , 1x10 8 , 1x10 7 ,  1x10 6 cfu/mL for three weeks. The fish were fed two times a dayat 08.00 am and 17.00 pm with a dose of 5% of body weight per day. At the end of feeding, the fish were challenged with A. hydrophila. Data  collected  included  average  growth  rate,  absolute  growth,  feed  efficiency, and food conversion ratio.  Research results found that the addition of probiotic into  feed  was    able  to  increase  growth  and  feed  efficiency  and  reduce  food conversion  ratio  as  well  (p<0.01).  The  best  growth,  feed  efficiency  and  food conversion  ratio  were  obtained  in  fish  fed  diet  added  with  probiotic  bacteria  at 1x10 8 cfu/mL.  The highest survival rate was also observed in fish probiotic diet containing 1x10 8 cfu/mL.  As conclusion, probiotic bacteria isolated from catfish intestine was potential to improve growth, feed efficiency, reduce food conversion ratio and increase resistance of fish against bacterial pathogen.
Keywords: probiotic,  carp, Aeromonas  hydrophila ,  feed  efficiency,  food conversion ratio

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  bakteri  probiotik  dari  usus  ikan lele  dan  menguji  pengaruh  pemberian  probiotik  dari  usus  ikan  lele  terhadap pertumbuhan  dan  resistensi  ikan  mas  terhadap  infeksi Aeromonas  hydrophilla. Sumber probiotik diisolasi dari usus ikan lele menggunakan media MRS (de Man Rogosa  Sharpe) dan  bakteri Aeromonas  hydrophilla ditumbuhkan  pada  media TSA (Tryptic Soy Agar). ikan uji diambil dari Balai Budidaya Air Tawar Tatelu , Provinsi  Sulawesi  Utara  .  ikan  diaklimatisasi  selama  seminggu  dalam  15 akuarium  dengan  kepadatan  15  ekor/akuarium  dan  berat  awal  rata-rata  5,5  g. Setelah  diaklimatisasi  ikan  diberi  pakan  yang  ditambahkan  bakteri  probiotik sebagai perlakuan dengan konsentrasi berbeda yaitu 1x10 9 , 1x10 8 , 1x10 7 ,  1x10 6 cfu/mL selama empat minggu sebanyak 5% /berat tubuh/hari dengan frekuensi
pemberian pakan dua kali sehari yaitu jam 08.00 pagi dan jam 17.00 sore. Setelah diberi perlakuan maka diuji tantang dengan bakteri Aeromonas hydrophilla. Data yang  dikumpulkan  terdiri  dari  laju  pertumbuhan  harian,  pertumbuhan  mutlak, efesiensi pakan, konversi pakan dan uji tantang terhadap bakteri patogen. Hasil penelitian  mendapatkan  bahwa  penambahan  bakteri  probiotik  dalam  pakan mampu meningkatkan pertumbuhan, efesiensi pakan dan menurunkan konversi pakan (p<0.01). Pertumbuhan, efesiensi pakan dan konversi pakan yang terbaik dicapai pada ikan yang diberi pakan dengan penambahan bakteri probiotik 1x10 8 cfu/mL.  Kelangsungan hidup ikan mas yang diuji tantang dengan bakteri patogen yang  paling  tinggi  dicapai  pada  ikan  yang  diberi  pakan  1x10 8 cfu/mL.  Sebagai kesimpulan bahwa bakteri probiotik yang diisolasi dari usus ikan lele berpotensi meningkatkan pertumbuhan, efesiensi pakan, menurunkan konversi pakan serta meningkatkan sistem kekebalan tubuh pada ikan mas.
Kata Kunci : Probiotik, Ikan Mas, Aeromonas hydrophilla , Pertumbuhan, Efesiensi Pakan, Konversi Pakan

## PENDAHULUAN
Budidaya  ikan  secara  intensif dapat  berdampak  negatif  terhadap usaha  budidaya  apabila  tidak  ditangani dengan baik khususnya terhadap kesehatan ikan yang dipelihara.Kepadatan  ikan  yang  tinggi dapat menyebabkan ikan stres sehingga cenderung  mudah  terserang  patogen bahkan dapat mengakibatkan kematian pada  ikan  yang  dipelihara.  Aktivitas pemberian  pakan  yang  berlebihan dalam budidaya intensif akan menimbulkan  penurunan  kualitas  air sehingga memudahkan terjadinya penyebaran  penyakit(Komarudin  dan Slembrouck,  2005 dalam Pasaribu, 2015).  Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan penanggulangan  penyakit  agar  tidak terjadi wabah penyakit yang mengakibatkan kerugian secara ekonomi. Penanggulangan agar tidak
terjadinya  penyebaran  penyakit  dapat dilakukan dengan cara pencegahan dan pengobatan.  Upaya  pencegahan  dapat dilakukan  melalui  karantina,  vaksinasi dan desinfeksi sedangkan upaya pengobatan  dapat  dilakukan  dengan menggunakan  antiobiotik.  Pengobatan menggunakan  antibiotik  belum  terlalu efektif digunakan dalam menanggulangi penyebaran  penyakit  karena  adanya residu antibiotik dan bahan-bahan kimia yang  menyebabkan  patogen  kebal antibiotik  atau Antibiotic  Resistant
Pathogen , bioakumulasi, polusi (Babu et al .,  2013).  Tanaman  obat  juga  sudah dilaporkan  sangant  efektif  mencegah serangan penyakit pada usaha budidaya  seperti  jahe  (Payung et  al., 2017),  bawang  putih  (Manoppo et  al., 2016) dan tanaman kemangi (Sambuanga dkk ., 2018). Probiotik juga sangat  efektif  dalam  penanggulangan penyakit  dengan  berbagai  keuntungan seperti tidak meninggalkan residu pada ikan, manusia, mengatur keseimbangan mikroba  intestinalnya  (Fuller,  1987), serta  merupakan  metode  yang  aman bagi lingkungan akuakultur (Environment friendly aqauculture)  yaitu menggunakan probiotik.Probiotik merupakan suplemen tambahan berupa sel-sel  mikroba  hidup,  yang  memiliki pengaruh  menguntungkan  bagi  hewan, inang yang mengonsumsinya Iribarren et al. (2012) juga menyatakan penggunaan bakteri probiotik  juga  merupakan  salah  satu solusi  internal  untuk  menghasilkan pertumbuhan dan efesiensi pakan yang optimal,  mengurangi  biaya  produksi sehingga pada akhirnya dapat mengurangi  beban  lingkungan  karena akumulasi limbah di media pemeliharaan. Penelitian ini akan mengkaji potensi  probiotik  yang  di  isolasi  dari usus  ikan  lele  sangkuriang (Clarias sp ) untuk  meningkatkan  pertumbuhan  dan resistensi  terhadap  patogen.  Ikan  lele
sangkuriang (Clarias sp ) dipilih  sebagai sumber probiotik karena adanya beberapa  kelebihan  diantaranya  ikan lele dapat hidup dalam kondisi lingkungan  yang  ekstrim  dengan  kadar oksigen  yang  rendah,  memiliki  sifat pertumbuhan yang relatif cepat, membutuhkan waktu yang cukup pendek  untuk  mencapai  ukuran  yang maksimal  serta  rasa  daging  yang  khas dan dapat dibudidayakan dengan kepadatan  yang  tinggi  (Dinas  Kelautan dan Perikanan, 2008).
Diduga  kemampuan  tumbuh  baik tersebut  ditunjang  oleh  asupan  nutrisi yang  sangat  baik  sebagai  hasil  kerja mikroba  probiotik  yang  terdapat  dalam organ  pencernaan  ikan  lele.  Sejauh  ini belum  adanya  informasi  untuk  uji resistensi  ikan  yang  diberi  probiotik terhadap bakteri Aeromonas hydrophila terutama  terhadap  ikan  mas  sehingga perlu  dilakukan  penelitian  untuk  hal tersebut.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  di Laboratorium Teknologi Akuakultur
untuk  pemeliharaan    ikan  mas  secara terkontrol  dan  pemberian    perlakuan, sedangkan  untuk  pemeliharaan  bakteri dan  pencampuran  probiotik  ke  dalam pakandilakukan di Laboratorium Kesehatan Ikan, Lingkungan dan Toksikologi,  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu Kelautan.Waktu pelaksanaan penelitian  ini  berlangsung  dari  bulan Oktober sampai Desember 2018.

## Alat dan Bahan
Peralatan  yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  Akuarium,  pompa, sibu-sibu,  selang,  timbangan  analitik, autoklaf, laminar flow, inkunator, cawan petri,  alat  bedah,  Bunsen,  jarum  ose, suntik,  sentrifuge,  mortar,  gelas  ukur. Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu benih ikan mas, usus ikan lele, media MRS, media TSA, stok bakteri Aeromonas  hydrophila pakan komersil.
Rancangan Percobaan Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 5 perlakuan dan setiap perlakuan memiliki 3 ulangan. Probiotik sebagai perlakuan terdiri atas 5 konsentrasi probiotik berbeda table 1.
Table 1. Perlakuan dan Konsentrasi pakan dalam Rancangan percobaan
Perlakuan Konsentrasi A Pakan + 0 ml probiotik+ putih telur B Pakan +  1 x 10 9 cfu/ml probiotik C Pakan +  1 x 10 8 cfu/ml probiotik D Pakan +  1 x 10 7 cfu/ml probiotik E Pakan +  1 x 10 6 cfu/ml probiotik

## Persiapan Pakan Uji
Pakan  uji  dibuat  dengan  cara mencampurkan  probiotik  yang  sudah dimurnikan  ke  dalam  pakan  secara merata. Caranya pertama-tama
probiotik  yang  sudah  diperbanyak diencerkan sesuai dengan dosis kepadatan  yang  akan  di  uji  cobakan. Selanjutnya  diambil  sebanyak  100  mL dari tiap-tiap kepadatan, dimasukkan ke dalam  sprayer  dan  di  semprotkan  ke dalam  pakan  secara  merata.  Pakan yang  sudah  mengandung  probiotik
dikering  anginkan  kemudian  dilapisi (coating) dengan  putih  telur  sebanyak 2%  kemudian  di  kering  anginkan  dan dimasukkan  dalam  kantong  plastik  dan disimpan dalam lemari pendingin
sampai saat digunakan. Sebagai kontrol, pakan tidak ditambahkan probiotik  namun  di  lapisi (coating) dengan putih telur.

## Prosedur Penelitian
Sebelum  penelitian  dilaksanakan, terlebih  dahulu  dilakukan  aklimatisasi
selama  2  minggu.  Caranya,  benih  ikan mas  yang  diambil  dari  Balai  Perikanan Budidaya  Air  Tawar  (BPBAT)  Tatelu, ditebar  ke  dalam  15  akuarium  dengan kepadatan  15  ekor/akuarium  masing- masing  berukuran  60  x  40  x  40  cm dengan  ketinggian  air  30  cm.  Selama proses  aklimatisasi  ikan  diberi  pakan komersil  yang  belum  di  tambah  bakteri probiotik  dengan  dosis  pemberian pakan  5%  dari  berat    awal  tubuh  ikan dan diberikan dua kali sehari yaitu pukul 09.00  WITA    dan  pukul  17.00  WITA. Setelah proses aklimatisasi selesai, ikan selanjutnya  diberi  pakan  yang  sudah ditambahkan  bakteri  probiotik  dengan dosis    pemberian  5%/berat  tubuh/hari dengan  frekuensi  pemberian  dua  kali sehari yaitu jam 09. 00 dan 17.00 WITA.

## Isolasi Bakteri Probiotik
Usus  ikan  dikeluarkan,  ditimbang sebanyak  1  g  kemudian  di  gerus menggunakan  mortar  selanjutnya  usus yang  sudah  dihaluskan  dimasukkan  ke dalam tabung dan ditambahkan dengan
9  ml  Nacl  sehingga  mendapatkan perbandingan 1:10. Supernatant selanjutnya  diencerkan  hingga  10 -2
sampai 10 -3 kemudian dituang sebanyak 1    mL  ke  dalam  media  MRS (de  Man Rogosa  Sharpe) menggunakan  batang L  hingga  rata  kemudian  di  inkubasi  di dalam inkubator pada suhu suhu 28 o C selama 24-48 jam.
Kultur Bakteri A. hydrophila Kultur  bakteri  dilakukan  dengan cara  menggores  menggunakan  jarum
ose yang dipanaskan diatas api bunsen. Bakteri  diambil  menggunakan    jarum ose  dan  di  gores  secara  aseptik    pada permukaan media kemudian di inkubasi dalam  inkubator  pada  suhu  28 o C selama  24-48  jam  kemudian  diamati pertumbuhan  koloni  bakteri.  Bakteri yang  sudah  tumbuh  di  simpan  dalam lemari pendingin dan siap digunakan.

## Uji Tantang
Setelah  pemberian  pakan  selama 21  hari  maka  selanjutnya  ikan  diuji tantang  dengan  bakteri A.  hydrophila melalui penyuntikan secara intraperitoneal. Sebelum setiap individu ikan disuntik dengan bakteri A. hydrophila dengan konsentrasi kepadatan  konsentrasi  1  x  10 6 cfu/mL yang ditetapkan melalui uji Ld50 yaitu uji patogenesitas yang memberikan
kematian 50%.

## Pengumpulan Data
Data yang dikumpulkan terdiri dari pertumbuhan mutlak, pertumbuhan harian, efisiensi pakan, nilai ubah pakan dan resistensi ikan. 

## Pertumbuhan mutlak
Pertambahan berat ikan di hitung menggunakan formula Effendie (1997) sebagai berikut :
Keterangan : G = Pertambahan Berat Ikan (g) Wo = Berat Ikan Pada Awal Penelitian (g) Wt = Berat Ikan Pada Akhir Penelitian (g).

##  Laju Pertumbuhan Harian
ADG (%) = ln(Berat akhir – Berat awal) X 100 Lama Waktu pemberian
Keterangan : ADG(%) =  Average Daily Growh (%)
 Efisiensi Pakan EP (%) = (Berat akhir – Berat awal) X 100
Jumlah pakan yang diberikan selama penelitian
Keterangan : EP (%) = Efesiensi Pakan (%) FCR = Total pakan yang diberikan/total pertambahan berat ikan

## G = Wt - Wo
 Kelangsungan Hidup Resistensi ikan diukur berdasarkan tingkat Kelangsungan hidup  setelah  diuji  tantang  dengan bakteri  A.  hydrophila  dengan  formula menurut Effendie (1979) sebagai berikut
Keterangan : SR = Kelangsungan Hidup (%) Nt  =  Jumlah  Ikan  Hidup  Pada  Akhir Penelitian No  =  Jumlah  Ikan  Hidup  Pada  Awal
Penelitian

## Analisis Data
Untuk mengkaji pengaruh pemberian  bakteri  probiotik  terhadap pertumbuhan,  efesiensi  pakan  dan resistensi  ikan  mas  dilakukan  analisis ragam (ANOVA). Jika perlakuan memberikan  pengaruh  nyata  maka dilanjutkan  dengan  uji  lanjut  Duncan untuk mengevaluasi perbedaan pengaruh antar perlakuan. Analisis data dikerjakan dengan menggunakan
program Statistical Product and Service Solutions (SPSS) untuk windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pertumbuhan Mutlak
Penambahan bakteri probiotik dengan  konsentrasi  yang  berbeda setiap perlakuan memberikan pengaruh yang sangat nyata
terhadap pertumbuhan  mutlak  benih  ikan  mas. Data  pertumbuhan  benih  ikan  mas setelah diberi perlakuan selama 21 hari dapat dilihat pada Gambar 1 sedangkan pertumbuhan mutlak  dapat  dilihat  pada Tabel 2.

## Resistensi ikan mas
Selain  meningkatkan  performa pertumbuhan  dan  efesiensi  pakan, probiotik Lactobacillus sp yang diisolasi
dari  usus  ikan  lele,  probiotik  juga mampu  meningkatkan  kelangsungan hidup ikan terhadap infeksi A.hydrophilla. Hasil  penelitian  yang  sama  juga telah  dilaporkan  oleh  beberapa  peneliti seperti Lakhsmi et al (2015), melaporkan  bahwa  probiotik  yang diisolasi dari ikan mas mampu membatasi  penyakit white  spot pada udang,  kemampuan  ini  terjadi  karena bakteri  probiotik  menghasilkan  bahan kimia  dan  bahan-bahan  biologi  yang bersifat antagonistik.
Karthik et al (2014), menggunakan probiotik Lactobacillus sp yang diisolasi dari  curd  sampel.  Hasil  penelitiannya mendapatkan  bahwa  udang  vannamei yang diberi pakan dengan penambahan probiotik dan di uji tantang dengan vibrio harveyi selama  10  hari    mengalami mortalitas  12%  sedangkan  udang  yang tidak diberi probiotik (kontrol) mengalami mortalitas 100%, sedangkan pada  udang Penaeus  monodon diberi probiotik    kematian  mencapai  6%  dan pada  udang  yang  tidak  diberi  probiotik mencapai  kematian 80% pada udang.
Hasil yang serupa juga dilaporkan oleh  Ravi et  al (2007),  dimana Lactobacillus yang diisolasi dari air laut, sedimen dan lambung ikan laut mampu menghambat  menghambat  penyakit pada  udang  yang  disebabkan  oleh patogen vibrio  harveyi dan vibrio spp pada  larva  udang.  Mulyasari et  al (2016), melakukan penelitian menggunakan  bakteri  probiotik  yang diisolasi  dari  organ  pencernaan  ikan gurami (Osphronimus  goramy) hasil penelitian  mandapatkan  bahwa  benih ikan  nila  (berukuran  rata-rata  0,85  ± 0,15  gram)    yang  diberi  pakan  dengan penambahan  probiotik  selama  40  hari memiliki  pertumbuhan  harian    dan efesiensi  pakan  yang  lebih  tinggi  dari ikan yang diberi probiotik.
SR (%) = Nt/No x 100
Gambar 1. Grafik pertumbuhan benih ikan mas setelah diberi pakan dengan penambahan probiotik selama 21 hari
Tabel 2. Pertumbuhan mutlak ikan uji yang diberi perlakuan probiotik selama 21 hari
Perlakuan Pertumbuhan mutlak (gram) A 5.56±1.23 ab B 7.47±0.96 c C 7.90±1.11 c D 6.52±0.31 bc E 3.82±0.90 a
Gambar 2. Grafik Kelangsungan Hidup ikan mas setelah diuji tantang dengan bakteri Aeromonas hydrophila

## KESIMPULAN
1.  Pemberian bakteri probiotik Lactobacillus sp  hasil  isolasi  dari usus  ikan  lele  secara  oral  pada benih  ikan  masmemberi  pengaruh yang  nyata  terhadap  performa pertumbuhan,  efesiensi  pakan,  nilai konversi  pakan  dan  resistensi  ikan mas terhadap infeksi bakteri Aeromonas hydrophilla. 2.  Pemberian  bakteri  probiotik  dapat meningkatkan performa pertumbuhan,  efesiensi  pakan  dan resistensi ikan terhadap infeksibakteri Aeromonas hydrophilla dengan  dosisi  terbaik dicapai pada perlakuan C (penambahan bakteri probiotik 1x10 8 cfu/mL).

## DAFTAR PUSTAKA
Babu,  D.T.,  S.P.Antony,  S.P.Joseph, A.R.  Bright,  R.  Philip.  2013. Marine yeast Candida aquaetexloris  S527  as  a  potential immunostimulant black tiger shrimp Penaus  monodon . Journal of  Invertebrate  Pathology  122:
243-252.
Dinas  Kelautan  dan  Perikanan.  2008. Produksi  Nasional  Perikanan  Air Tawar tahun 2008. Http://Www.dkp.Go.Id/Diakses tanggal 7 Oktober 2018.
Hemaiswarya S., Raja R, Ravikumar R,
Calvalho I. S. 2013 Mechanism of action  of  probiotics.  Brazillian archives of biology and technology 56 (1) : 113-119.
12.69 13.28 13.77 11.98 9.44 0 10 20 A B C D E P er tum b u h an Ik an (g) Perlakuan
Irribaren, D., P. Daga, M.T Moreira., G. Feijoo. 2012. Potential Enviromental  Effect  of  Probiotics used in Aqucuture. Aquacult Int 20 : 779-89. Karthik, R., A.J.Hussain, R.Muthezhilan. 2014. Effectiveness of Lactobacillus  sp (AMET1506)  as Probiotic  against  Vibriosis  in Penaeus monodon and Litopenaeus  vannamei Shrimp Aquaculture. Bioscience Biotechnology Research Asia Vol. 11:297-305. Lara-Flores  M.,  Olvera-Novoa  M.A.
2013.  The  use  of  lactic  acid bacteria  isolated  from  intestinal tract  of  Nile  Tilapia (Oreochromis niloticus) as  growth  promotor  in fish  fed  low  protein  diets.  Latin American  Journal  of  Aquatic Research 41 (3) : 490-497. Lakshmi B., Viswanath, B.Gopal. DVR.S., 2015. In vitro assessment of  antiviral  efficacy  of  probiotik bacteria  isolated  from  fish  prawn againts white spot syndrome virus (WSSV).  in  :  New  Horizons  in Biotechnology. (Eds. Viswanath B and  Indravathi  G)  Paramount Publishing House, India.
Manoppo  H.,  M.  E.F.  Kolopita,  R. Malatunduh.2016.  Dietary  ginger ( Zingiber officinale ) enhance resistance of Nile tilapia ( Oreochromis  niloticus )  against Aeromonas hydrophila. International Journal of PharmTech  Research.  vol  9  (4)  : 283-288 Mulyasari., Widanarni, A. Suprayudi, Jr. Zairin.,  M.T.D.  Sunarno.  2016.
Screening  of  Probiotics  From  the digestive tract of gouramy
( Osphronemus gouramy) and their potency to enhance the growth of tilapia  ( Oreochromis  niloticus) . AACC Bioflux 9 (5), Pp.1121-1132.
Novitarizky  I.,A.,  H.  Manoppo,  S.N.J Longdong.  2018.  Isolasi  bakteri
probiotik Lactobacillus sp dari usus ikan mas ( Cyprinus carpio ). Jurnal Budidaya Perairan. Vol. 6 (2) :17- 24
Novitarizky  I.,A.,  H.  Manoppo,  S.N.J Longdong.  2018.  Isolasi  bakteri probiotik Lactobacillus sp dari usus ikan mas ( Cyprinus carpio ). Jurnal
Budidaya Perairan. Vol. 6 (2) :17- 24 Pasaribu.W.  2015.  Efektivitas  Ekstrak Daun Pacar Air ( impatiens balsamina L) Untuk Meningkatkan Respon  Imun  Non  Spesifik  Ikan Nila ( Oreochromis niloticus). Skripsi.  Fakultas  Perikanan  Dan
Ilmu  Kelautan.  Universitas  Sam Ratulangi Manado.
Payung  C.  N.,  Tumbol  R.  A.,  Manoppo H.,  2017  Dietary  ginger  ( Zingiber officinale )  enhance  resistance  of Nile tilapia ( Oreochromis niloticus ) against Aeromonas  hydrophila . AACL Bioflux 10(4):962-968. Ravi, A.V., K.S. Musthafa, G. Jegathammbal,  K.  Kathiresan, S.K.  Pandian.,  2007.Screening and  evaluation  of  probiotics  as  a biocontrol agent againt pathogenic Vibrios  in  marine  aquaculture. Letter in Applied Microbiology 45 : 219-223
Sakai, M. 1999. Current research status of fish immunostimulants. Aquaculture 172 : 63-92 Sambuaga, M.E.,  S.N.J. Longdong,  H. Manoppo. 2018. Sensitivitas ekstrak tanaman kemangi (Ocimum sactum) terhadap bakteri Aeromonas  hydrophila.
Jurnal  budidaya  perairan.  Vol 6(1):1-7
Sumaraw  J.T,  H.  Manoppo,  R.A. Tumbol,  I.F.M.  Rumengan,  H.A. Dien, D.A. Sumilat. 2019. Evalution  of  the  effect  probiotik bacteria  on  growth  performance and survival rate of carp, Cyprinus carpio.  Jurnal  Ilmiah  Platax  Vol  7 (1) : 243-255.