## KUALITAS OOSIT KAMBING KACANG DARI STATUS REPRODUKSI YANG BERBEDA
Hermilinda Parera 1) , Victor Lenda 2) , Ryske M. Lusi 2) , Olivya A. Manoh 2) , Sirajuddin 2)
1,2) Jurusan Peternakan, Politeknik Pertanian Negeri Kupang Jl. Prof. Dr. Herman Yohanes, Lasiana, Kota Kupang P.O.Box. 1152, Kupang 85011 Korespondensi: milindaparera81@gmail.com

## ABSTRACT
This  research  was  aimed  to  determine  the  quality  of  oocytes  produced  by  Kacang goat  based  on  reproductions  cycle  per  ovary. Ovaries  were  obtained  from  the slaughterhouses in Kupang .  The oocytes were collected by aspiration method, then selected based on quality. The result showed that 300oocytes from 47 ovaries, then grouped into quality of A, B, C,  and  D, have  the  average  weight  with reproduction status  of1,56g  (+CL+FD),  1,50g  (+CL-FD),  1,45g  (-CL+FD),  1,45g(-CL-FD), respectively.  The  percentage  of  oocyte  with  quality  A,  B,  C,  and  D  between reproduction  status  (+CL+FD)(+CL-FD)(-CL+FD)(-CL-FD)  (7,3%,  21,05%,  13,6%, 32,63%);  (8,2%,  10,3%  20,6%,  53,6%);  (7,69%,  7,69%,  41,02%,  43,58%);  (7,2%, 10,14%,  33,3%,  49,2%,  recpectively).  There  is  no  significant  difference  (P>0,05) between the quality of oocytes from different ovarian status.It can concluded that the average  weight  of  Kacang  goat  ovaries  were  1,45-1,56g.The  ovarian  reproductive status does not affect the quality of the oocytes.
Key words: Reproduction cycle, oocytes quality, ovaryKacang goats, Kupang city.

## PENDAHULUAN
Kambing  kacang  merupakan  kambing  lokal  Indonesia    dengan  populasi yang  cukup  tinggi  termasuk  di  Nusa  Tenggara  Timur  dimana  tahun  2018 mencapai  693.577  ekor  dengan  angka  pertumbuhan  19,3%  (Dirjen  Peternakan dan  Kesehatan  Hewan,  2018).  Kambing  kacang  mampu  beradaptasi  dengan lingkungan  setempat,  sehingga  berpotensi  dikembangkan  dalam  rangka memenuhi kebutuhan protein hewani. Kambing kacang mempunyai kemampuan reproduksi yang cukup baik dengan litter sizenya adala 1,57 ekor (Setiadi, 2010). Kambing  kacang  mempunyai  daya  reproduksi  tinggi  dan  bersifat  prolifik  yaitu sering melahirkan anak kembar 2 (Sodiq dan Abidin, 2008).
Perkembangan  produksi  dan  populasi  kambing  saat  ini  beum  maksimal, peningkatan  produktivitas  ternak  salah  satunya  melalui  penerapan  bioteknologi reproduksi  dengan  memanfaatkan  ovarium  yang  diperoleh  dari  tempat  potong kambing, sebagai sumber sel gamet betina (oosit) melalui bioteknologi reproduksi dapat dijadikan produk yang sangat berharaga berupa produksi embrio secara in vitro . Proses produksi embrio in vitro melalui tiga tahapan yaitu maturasi in vitro ,
fertilisasi in vitro dan Kultur in vitro . Menurut Hafez (2000) salah satu faktor yang mempengaruhi keberhasilan fertilisasi in vitro adalah kuantitas dan kualitas oosit.
Di tempat potong kambing terdapat  variasi kondisi ovarium baik itu dari sisi  anatomis  maupun  fisiologi  (aktivitas  ovarium)  status  reproduksi  yang berbeda-beda, ada yang dalam fase folikuler, fase luteal kondisi ini mempengaruhi jumlah folikel  dan kualitas oosit  yang dihasilkan (Parker et al., 2002). Penelitian ini    bertujuan  melihat  pengaruh  aktivitas  ovarium  atau  status  reproduksi  per ovari  terhadap  kualitas  oosit  yang  dihasilkan  oleh  kambing  kacang  di  Kota Kupang.

## METODE PENELITIAN

## Koleksi Oosit
Oosit yang digunakan dalam penelitian ini berasal dari ovarium kambing yang  diperoleh  dari  tempat  potong  hewan  (TPH)  yang  ada  di  Kota  Kupang. Ovarium dipisahkan dari jaringan dan lemak dicuci menggunakan NaCl fisiologis 0,9%  dengan  tambahan    antibiotic  dan  dibawa  ke  laboratorium  dalam  termos yang berisi medium NaCl 0,9% dengan tambahan antibiotic padasuhu 25°C - 30°C tidak lebih dari 2 jam setelah pemotongan. Ovarium dikelompokkan berdasarkan status reproduksinya (I) ovarium ada corpus luteum (CL) dan ada folikel dominan (FD)  (+CL+FD);  kelompok  (II)  ovarium  ada  corpus  luteum  tanpafolikeldominan (+CL -FD); Kelompok (III) ovarium tidak ada corpus luteum, ada folike ldominan (- CL,+FD) dan kelompok (IV) ovarium tanpa corpus lutem dan tanpa folikel dominan (-CL,-FD).

## Prosedur Aspirasi
Koleksi oosit menggunakan tekni kaspirasi dari folikel yang berukuran 2-6 mm  dengan  mengunakan  jarum  18  G  yang  dihubungkan  dengan Syiringe disposable 5 ml yang berisi 0,5–1 ml. Cairan yang diperoleh dari folikel ditampung dalam  tabung  yang  terpisah  yang  telah  ditambahkan  PBS  5  mL,  endapkan didalam waterbath pada  suhu  30 ᴼ C  setelah  15  menit  supernatant  dibuang. Perlakuan  ini  sebanyak  dua  kali,  kemudian  dilakukan  pencarian  oosit  dengan menuangkan endapan tersebut pada cawan petri steril yang didasarnyasudahdiberigaris-gariskotak  (0,5  x  0,5  cm)  di  bawah  mikroskop stereokopis (Hirox K2700)

## Evaluasi Kualitas oosit
Oosit  diseleksi  berdasarkan  kondisi  sitoplasma  yang  homogeny  dan jumlah  lapisan  sel-sel  kumulus  yang  mengelilingi  oosit.  Oosit  dikelompokkan menjadi 4 kategori berdasarkan (Budiyanto et al ., 2013) yaitu:
Kategori A: ditandai dengan kumulus berlapis padat dengan lebih dari tiga lapisan dan ooplasma homogen
Kategori  B:  ditandai  dengan  lapisan  kumulus  padat,  satu  sampai  tiga  lapisan dengan  ooplasma  homogen,  memiliki  penampakan  kasar  dan  zona pelusida yang berwarna lebih gelap
Kategori C:  ditandai dengan lapisan kumulus tidak terlalu padat dengan bentuk ooplasma yang tidak beraturan dan memiliki lapisan gelap Kategori D: ditandai dengan penampakan gundul tanpa lapisan kumulus

## Analsis Data
Data  dianalsis  dengan  analisis  sidik  ragam  (Anova)  dalam  bentuk rancangan  acak  lengkap  empat  perlakuan  dengan  ulangan  berbeda.  Apabila terdapat  perbedaan  diantara  perlakuan  dilanjutkan  dengan  uji  beda  Nyata Terkecil. Data  diolah dengan menggunakan program SPSS  versi 21 for  windows dan MS Office Execel 2007.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  pengamatan  morfologi  ovarium  kambing  Kacang  di  Kota  Kupang, berbentuk  oval  seperti  kacang  almond  dan  setiap  ovarium  memiliki  permukaan yang  tidak  teratur  disebabkan  karena  adanya  folikel  dengan  ukuran  yang berbeda-beda  (Haque et  al., 2016).  Berdasarkan  hasil  penelitian  tidak  terdapat perbedaan nyata (P>0,05) antara berat ovarium kambing pada kelompok ovarium dengan  status  reproduksi  yang  berbeda.  Ovarium  dengan  status  reproduksi (Gambar 1) memiliki berat rata-rata ovarium 1.56 gram dengan status reproduksi (+CL,+FD),  1,50  gram  ovarium  dengan  status  (+CL,-FD),  1,45  gram  ovarium dengan status (-CL,+FD) serta 1,43 gram pada  ovarium dengan status (-CL,-FD). Ovarium  yang  memiliki  corpus  luteum  cendrung  lebih  berat  dari  ovarium  tanpa corpus  luteum  disebabkan  adanya  vaskularisasi  yang  berkontribusi  pada peningkatan  ukuran  corpus  luteum  menyebabkan  sel  granulosa  luteinized
menjadi  hipertofi  dan  terjadi  hiperplasti  fibrolas  pada  jaringan  ikat  (Jablonka Shariff et al., 1993] .
Gambar 1. Status reproduksi ovarium: A) Ovarium (+CL+FD), B)Ovarium (+CL+FD); C) Ovarium (-CL +FD ); D) Ovarium (-CL-FD)
Pada  saat  memasuki  usia  pubertas,  pertumbuhan  folikel  atau folikulogenesis menjadi aktif membentuk folikel de graf yang siap untuk ovulasi. Oosit akan tumbuh dalam lingkungan folikel dan mengikuti siklus pertumbuhan tertentu.  Kualitas  oosit  merupakan  parameter  dalam  menentukan  tingkat keberhasilan  maturasi  oosit  dalam  pembentukan  embrio.  Oosit  dengan  kualitas yang  baik  akan  mencapai  angka  kebuntingan  yang  tinggi  (Toilehere,  1997). Jumlah  kualitas  oosit  perovari  dengan  status  reproduksi  yang  berbeda  dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Jumlah kualitas oosit kambing perovari dengan status reproduksi berbeda.
Status Ovarium Jumlah oosit Rata-rata Berat Ovarium (gr) Jumlah oosit terkoleksi dengan Kualitas (%) CL FD A B C D + + 95 1,57 7(7,3) a 20(21,05) b 13(13,6) a 31 (32,63) a + _ 97 1,50 8(8,2) a 10 (10,3) a 20(20,6) a 52 (53,6) b _ + 39 1,45 3(7,6) a 3(7,69) a 15(41,02) b 13 (43,58) b _ _ 69 1,43 5(7,2) a 7 (10,14) a 23 (33,3) b 34 (49,2) b
Keterangan: a,  b Superskrip  yang  berbeda  pada  kolom  yang  sama  menunjukan  perbedaan  yang sangat nyata (P<0,05)
Pada tabel 1 persentase jumlah oosit yang diperoleh dari kelompok ovarium dengan status reproduksi memiliki folikel dominan tanpa corpus luteum (+FD-CL) lebih  rendah  dari  kelompok  ovarium  yang  memiliki  corpus  luteum  dan  berada pada fase folikuler. Cairan folikel dominan memiliki konsentrasi homon  estradiol dan  inhibin  yang  tinggi  dibandingkan  progesteron ( Fortune et  al. 2001).  Sekresi Folicel  Stimulating  Hormon (FSH)  untuk  pertumbuhan  folikel  dipengaruhi  oleh estradiol  dan  inhibin  (Souza et  al. 1998).  Semakin  besar  ukuran  folikel  maka konsetrasi  estradiol  dan  inhibin  yang  dihasilkan  makin  tinggi.  Konstentrasi estradiol  dan  inibin  yang  tinggi  dalam  cairan  folikel  dominan  akan  memberikan efek  negatif  berupa  penurunan  konsentrasi  FSH  sehingga  pertumbahan  folikel subordinat  akan  terhambat    selanjutnya  mengalami  regersi  dan  atresi  (Mc  Gee and  Hsueh,  2000).  Ginther et  al. (1989) menyatakan  bahwa  folikel  dominan  (FD) memberikan efek terhadap folikel lain dengan menekan pelepasan FSH .
Dalam penelitian ini berdasarkan status reproduksi perovari kualitas oosit dengan grade A dan B terbanyak pada ovarium yang memiliki corpus luteum yaitu (+CL+FD)  (+CL-FD).  Kehadiran  corpus  luteum  pada  ovarium  akan  memberikan korelasi  positif  terhadap  jumlah  folikel  (Asad et  al. 2016).  Corpus  luteum menghasilkan progesteron yang dapat menghambat pertumbuhan folikel dominan mencapai  ovulasi  sehingga  akan  mengurangi  pengaruh  negatif  dari  inhibin  dan estradiol yang dihasilkan oleh folikel dominan dalam menghambat  pertumbuhan folikel subordinat, sehingga jumlah folikel subordinat yang tumbuh menjadi lebih banyak  dan  menghasilkan  oosit  dengan  kualitas  yang  lebih  baik (Taylor  dan Rajamahendran, 1991). Kualitas morfologi oosit kambing kacang dalam penelitian ini dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 2. Kualitas oosit Kambing kacang; A) Grade A; B) Grade B; C) Grade C dan D) Grade D
Berdasarkan  Gambar  2  dapat  dilihat  jenis-jenis  kualitas  oosit  kambing kacang  di  Kota  Kupang.  Oosit  dengan  kualitas  baik  dan  layak  digunakan  untuk produksi  embrio in  vitro adalah  oosit  dengan  kualitas  A  dan  B  yang  ditandai dengan beberapa lapis sel kumulus yang kompak serta sitoplasma yang homogen (Manjunatha et  al, 2007).  Hasil  analisa  menunjukan  tidak  adanya  perbedaan nyata (P>0,05) persentase jumlah oosit kualitas A dan B yang dihasilkan oleh ke empat  kelompok  ovarium  dengan  status  reproduksi  yang  berbeda.  Rendahnya jumlah  oosit  kualitas  A  yang  dihasilkan  oleh  ovarium  dengan  status  memiliki folikel  dominan  dikarenakan  folikel  dominan  menghambat  perkembangan  folikel dan  mempengaruhi  kualitas  morfologi  oosit  yang  dihasilkan  (Parera  dan  Lenda, 2015).  Kehadiran  folikel  dominan  pada  salah  satu  atau  sepasang  ovarium memberikan  pengaruh  negatif  terhadap  kompetensi  perkembangan  oosit (Hagemann et  al .,  1999).  Adanya  folikel  dominan  pada  satu  atau  sepasang ovarium akan menghambat atau menekan sekresi Folicle stimulating hormon (FSH) sehingga  rendahnya  konsentrasi  FSH  menyebabkan  folikel-folikel  subordinat mengalami hambatan perkembangan dan mempengaruhi kompetensi oosit.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  disimpulkan  bahwa  berat  rata-rata ovarium kambing kacang 1,43-1,56 gram, dimana status reproduksi dari ovarium kambing  kacang  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  persentase  jumlah  oosit dengan kualitas yang baik (A dan B).
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  terkait  kemampuan  perkembangan oosit  secara in  vitro dari  oosit  yang  dihasilkan  oleh  ovrium  dengan  status reproduksi yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Fortune,  J.E.,  G.M.  Rivera,  A.C.O.Evans,  A.M.  Turzillo.  2001.  Differentiation  of dominant  versus  subordinate  follicles  in  cattle. Journal  Biological. Reproduction. 65: 648654.
Ginther,  O.J.,  M.C  Wiltbank,.,  P.M.  Fricke.,  J.R  Gibbons,  and  Kot,K.  1996. Selection of the dominant follicle in cattle. Journal Biological Reproduction. 55:1187-1194.
Hagemann,  L.J.,  Beaumont  S.E.,  Berg  M.,  Donnison  M.  J., Ledgard  A, Petersosn AJ, Schurmann  A, Tervit  HR.1999.  Development  during  single  IVP  of
bovine  oocytes  from  dissected  follicles:  interactive  effects  of  estrous  cycle stage, follicle size and atresia. PubMed .
Hafez, E.S.E., dan B. Hafez. 2000. Folliculogenesis, egg maturation and ovulation. In:  Hafez  B  and  Hafez  ESE.  Reproduction  in  Farm  Animals.  7th  Ed. Philadelphia: Lea and Febiger. pp 68-81.
Haque,  Z.;  Haque,  A.  and  Quasem,  M.  A.2016.    Morphologic  and  morphometric analysis of the ovary of black Bengal goat ( Capra hircus ). Int . J. Morphol., 34(1):13-16 .
Jablonka-Shariff  A,  Grazul-Bilska  AT,  Redmer  DA,  Reynold  LP.  Growth  and cellular  proliferation  of  ovine  corpora  lutea  throughout  the  estrous cycle. Endocrinology. 1993;133(4):1871–1879.doi: 10.1210/en.133.4.1871. [PubMed]
Manjunatha,  B.M.,  Gupta,  P.S.P., Ravindra,  J.P.,  Devaraj,  M.,  Ramesh  and  H.S., Nandi,  S.  2007.  In  Vitro  Developmental  Competence  of  Buffalo  oocyte Collecte at Various Stage of The Estrous Cycle. Theriogenology, 68:882-888
McGee, E.A. and Hsueh,A.J. 2000. Initial adn cyclic recruitment of ovary follicles. Endocrinol Rev. 21:200-214
Parera,  H  dan  Lenda  V.  2015.  Pengaruh  Corpus  Luteum  dan  Folikel  Dominan Terhadap  Kualitas  Morfologi  Oosit  Sapi  Bali  Timor.  Jurnal  Kajian Veteriner.Vol 3(1): 63-70
Sodiq  A,Abidin  Z.2008.  Meningkatkan  produksi  susu  kambing  Peranakan Etawa.Jakarta (ID):Agromedia Pustaka
Souza,  C.J.H.,  B.K.  Campbell,  D.T.  Baird.  1998.  Follicular  waves  and concentrations of steroid and inhibin A in ovarian venous blood during the luteal phase of the oestrous cycle in ewes  with an ovarianautotransplant. J. Endocrinology 156: 563-572.
Taylor,  C.,  Rajamahendran  R.  1991.  Follicular  dynamics  and  corpus  luteum growth  and  function  in  pregnant  versus  nonpregnant  dairy  cows. J.Dairy Sci. 74: 115-123.
Toileher M.R.1997. Fisiologi Reproduksi Pada Ternak. Angkasa
Zheng, Y.S., and M.A. Sirard.1992. The Effect of Sera, Bovine Serum Albumin  and Follicular Cell on In Vitro Maturation and Fertilization of Porcine Oocyte. 3 Theriogenology.