## IDENTIFIKASI DAN PENETAPAN KADAR SENYAWA TANIN
PADA EKSTRAK DAUN BIDURI ( Calotropis gigantea ) METODE

## SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
Submitted : 24 September 2019 Edited : 15 Juni 2020 Accepted : 25 Juni 2020
Yuska Noviyanty 1 , Hepiyansori 2 , Yudan Agustian 1
1 Akademi Farmasi Al-Fatah Bengkulu
2 Akademi Analis Kesehatan Harapan Bangsa Bengkulu Email : yuskanoviyanty@gmail.com

## ABSTRACT
Calotropis gigantea (Biduri)  are plants that are widely used as herbal medicines by the community. Calotropis gigantea (Biduri) is used as a medicine for coughing, hives, medication for  toothache,  medicine  for  ear  pain,  epilepsy,  wounds,  sprains  and  diarrhea.  The  chemical content  of    Calotropis  gigantea  (Biduri)    is  in  the  form  of  glycosides,  saponins,  alkaloids, flavonoids, and tannins. The purpose of this study was to determine the presence or absence of tannin  compounds  and  levels  of  tannin  compounds  in    Calotropis  gigantea  (Biduri).  The identification  test  used  FeCl 3 and  gelatin  reagent.  Extraction  was  carried  out  by  maceration using  ethanol  96%  solvent.  Determination  of  tannin  levels  of.  Calotropis  gigantea  (Biduri)  by Uv-vis spectrophotometry method. The results of the identification test showed that  Calotropis gigantea  (Biduri)    positively  contained  tannins  with  FeCl 3 resulting  in  a  blackish  green  color and gelatin  causing  deposits.  The  results  of  the  average  level  of  tannins  in  biduri  leaf  extract Calotropis gigantea (Biduri) at a concentration of 100 ppm of 1.16 µg / ml, a concentration of 200 ppm of 3.53 μg / ml and a concentration of 300 ppm of 7.12 μg / ml.
Keywords : Calotropis gigantea , Tanin, Uv-Vis Spectrophotometry

## PENDAHULUAN
Indonesia  sebagai  negara  tropis memiliki  keanekaragaman  hayati  yang tinggi  dengan  berbagai  macam  tumbuhan yang dapat dibudidayakan berupa tanaman obat (1) .
Penggunaan  obat  tradisional  atau obat herbal  di Indonesia saat ini mengalami peningkatan, baik untuk pemeliharaan  kesehatan  tubuh  maupun
untuk pengobatan penyakit-penyakit tertentu. Salah  satu  tanaman  yang  banyak digunakan  di  masyarakat  yaitu  tanaman biduri ( Calotropis gigantea ).
Berdasarkan hasil penelitian menyatakan adanya manfaat dari tanaman
biduri  antara  lain  sebagai  obat  batuk, gatal-gatal,  obat  sakit  gigi,  obat  sakit telinga,  epilepsi,  luka,  keseleo  dan  juga diare. Kandungan  kimia pada daun  biduri diantaranya  senyawa  glikosida,  saponin, alkaloid, flavonoid, dan tanin (2) . Tanin merupakan polifenol tanaman yang berfungsi mengikat dan mengendapkan protein. Tanin juga dipakai untuk menyamak kulit (3) . Dalam  dunia  pengobatan,  tanin berfungsi untuk mengobati diare,
menghentikan pendarahan, dan mengobati ambeien (4) .
Berdasarkan  uraian  diatas  peneliti tertarik  untuk  melakukan  penelitian  yang
berjudul Identifikasi dan Penetapan Kadar
Senyawa Tanin pada Ekstrak Daun Biduri ( Calotropis gigantea ) Metode Spektrofotometri Uv-Vis .  Metode  ini diharapkan  dapat  menunjukkan  senyawa golongan fenolik yang diharapkan adanya senyawa  tanin  dan  kadar  tanin  yang terdapat  pada  daun  biduri  ( Calotropis gigantea ) sebagai  alternatif  obat  dari pengobatan tradisional.

## METODE PENELITIAN Tempat dan Waktu
Penelitian ini dilakukan di
laboratorium  Farmakognosi    dan  Kimia Akademi  Farmasi  Al-Fatah  Bengkulu pada bulan Februari - April 2019.

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  adalah timbangan  analitik, rotary  evaporator, tabung  reaksi,  spatel,  pipet  tetes,  batang pengaduk, kertas saring, Spektrofotometer Uv-Vis , mikropipet, labu  ukur, krus  porselen, pipet  volume, aluminium foil , buret dan hotplate.
Bahan
Bahan yang digunakan adalah
etanol  96%,  aquades,  asam  galat, Folin Ciocalteu ,  larutan  FeCl 3 1%,  larutan Na 2 CO 3 15%, larutan Gelatin 1% .

## Prosedur Kerja
Konfirmasi  Identitas  jenis  tanaman Biduri.
Konfirmasi  identitas  daun  biduri dilakukan di Laboratorium Biologi Universitas Bengkulu dengan cara membawa  bagian-bagian  dari  tanaman
Biduri  mulai  dari  daun,  batang  dan  akar,
kemudian diserahkan
kebagian
laboratorium.  Hasil  Identifikasi  daun biduri ( Calotropis gigantea ) di laboratorium Biologi Universitas Bengkulu ditetapkan dengan surat
keterangan
No.390/UN30.28.LAB.BIOLOGI/PM/201
8.

## Pembuatan Simplisia
Pengambilan daun biduri ( Calotropis  gigantea) dilakukan  pada pagi  hari.  Daun  biduri  kemudian  dicuci dengan  air  mengalir  agar  bersih  dari kotoran  yang  melekat  lalu  dilakukan perajangan  untuk  memperluas  permukaan bahan  agar  mudah  kering,  selanjutnya dikeringkan dengan cara diangin- anginkan  pada  suhu  kamar  15-30 ℃ hingga kering lalu disimpan dalam wadah tertutup rapat (5) .

## Pembuatan Ekstrak
Menggunakan simplisia daun biduri sebanyak 600 gram dalam 6000 ml etanol 96%  selama  7  hari  dengan  metode maserasi ,  lalu  disaring  dan  diuapkan menggunakan rotary  evaporator dan dipekatkan  dengan waterbath .  Ekstrak kental ditimbang beratnya dalam gram (6) .

## Evaluasi Ekstrak Organoleptis
Ekstrak  daun  biduri  yang  telah
dalam bentuk kental dilakukan pemeriksaan  dengan  cara  diamati  dari warnanya,  bau,  dan  rasa  menggunakan panca indra.

## Rendemen
Nilai  rendemen  didapatkan  dalam bentuk persentase dengan membandingkan berat ekstrak yang didapat  dengan  berat  simplisia  yang digunakan. Semakin tinggi nilai
rendemen  yang didapatkan  maka  semakin tinggi nilai ekstrak (7) .

## Kelarutan
Dilakukan  evaluasi  kelarutan  dari ekstrak  kental  daun  biduri  untuk  melihat
kemampuan  dari  suatu  zat  kimia  terlarut ( solute )  untuk  larut  dalam  suatu  pelarut ( solvent )  yang  digunakan.  Penelitian  ini menggunakan pelarut Aquades dan Etanol 96%.
Susut Pengeringan Ekstrak kental daun biduri dilaksanakan pengukuran susut pengeringan,  untuk  memberikan  batasan maksimal  (rentang)  tentang  besarnya senyawa  yang  hilang  selama  proses pengeringan. Penetapan susut pengeringan standar yaitu ≤11,0% (7) .

## Kadar Abu Total
Pada  ekstrak  kental  daun  biduri dilakukan  penetapan  kadar  abu  total untuk  mengetahui  jumlah  bahan  organik atau mineral yang tersisa setelah pengabuan.  Penetapan  kadar  abu  total standar yaitu ≤16,6% (7) .

## Identifikasi Adanya Tanin
Dari  ekstrak  daun  biduri  yang didapat, dilakukan uji ekstrak daun biduri diambil  sebanyak  2  mg  ditambahkan  2-3 tetes  larutan  FeCl 3 1%  jika  larutan menghasilkan warna hijau kehitaman atau biru tinta, maka bahan tersebut mengandung  tanin , Dengan  penambahan larutan  gelatin  1  %  jika  timbul  endapan putih berarti mengandung tanin (8) .
Penetapan Kadar Tanin Secara Spektrofotometri Uv-Vis Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Ditimbang  asam  galat  sebanyak  10 mg,  dilarutkan  dan  ditambahkan  aquades sampai volume 100 ml sehingga didapatkan  baku  induk  100  ppm.  Pada hasil  percobaan  yang  telah  dilakukan, diperoleh  bahwa  panjang  gelombang maksimum  dari  baku  asam  galat  adalah 765 nm (9) .

## Penentuan Waktu Stabil
Waktu stabil didapat pada menit ke- 90  yang  ditunjukan  dengan  perubahan absorbansi  yang  sangat  kecil  pada  menit tersebut (9) .
Pembuatan  Kurva  Baku  Asam  Galat dengan Reagen Folin Ciocalteu
Larutan  baku  induk  asam  galat dipipet sebanyak 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm,  5  ppm,  6  ppm,  7  ppm  dan dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  ml, lalu  ditambahkan  1  ml  reagen Folin Ciocalteu , dikocok dan didiamkan selama 5  menit.  Ke  dalam  larutan  tersebut ditambah  2  ml  larutan  Na 2 CO 3 15%, dikocok  homogen  dan  didiamkan  selama 5  menit.  Lalu  ditambahkan  aquades sampai  tepat  volume  10  ml,  dikocok homogen dan didiamkan selama 90 menit. Lalu  amati  absorbansi  pada  panjang gelombang 765 nm. Dilakukan pengambilan  larutan  baku  induk  asam galat  sebanyak  tujuh  kali  sehingga didapatkan  tujuh  konsentrasi  dan  dibuat kurva baku standar asam galat (9) .

## Penetapan Kadar Tanin
Sebanyak  50  mg  ekstrak  daun biduri  dilarutkan  dengan  aquades  sampai volume  50  ml.  Larutan  ekstrak  yang diperoleh  kemudian dipipet  sebanyak 100 ppm,  200  ppm,  300  ppm  dan  ditambah  1 ml  reagen Folin  Ciocalteu ,  kemudian dikocok  dan  didiamkan  selama  5  menit. Ke  dalam  larutan  tersebut  ditambah  2  ml larutan  Na 2 CO 3 15%,  dikocok  homogen dan  didiamkan  selama  5  menit  kemudian ditambahkan  aquades  sampai  volume  10 ml, diamkan pada range waktu stabil yang diperoleh.  Absorbansi  larutan  ekstrak diamati pada panjang gelombang 765 nm. Konsentrasi  yang  didapatkan  dilakukan replikasi sebanyak tiga kali (9) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Pembuatan Ekstrak daun biduri .
Proses  pembuatan ekstrak daun biduri ( Calotropis gigantea ) menggunakan metode  maserasi,  dengan  pelarut  etanol 96%  selama  7  hari.  Hasil  yang  didapat adalah  102,57  gram  ekstrak  kental  ekstrak daun biduri, seperti tertera pada tabel 1.
Hasil Evaluasi Ekstrak Daun Biduri.
Evaluasi ekstrak daun biduri meliputi Pemeriksaan organoleptis terhadap ekstrak yaitu meliputi
konsistensi,  warna,  bau  dan  rasa.  Evaluasi selanjutnya adalah pemeriksaan rendemen,
pemeriksaan  kelarutan,  pemeriksaan  susut pengeringan  dan  pemeriksaan  kadar  abu total.  Hasil  dari  evaluasi ekstrak ini  untuk organoleptis  berwarna  hijau  kehitaman, berasa pahit, berbau khas dengan konsistensi  ekstrak  kental.  Hasil  evaluasi lainnya seperti yang tertera pada tabel 2.
Hasil  Uji  Identifikasi  Ekstrak  Daun Biduri ( Calotropis gigantea )
Uji identifikasi dilakukan untuk mengetahui  kandungan  kimia  tanin  pada ekstrak  daun  biduri  ( Calotropis  gigantea ), seperti tertera pada tabel 3.
Tabel 1. Hasil Ekstrak kental daun biduri ( Calotropis gigantea )
Simplisia Berat Simplisia (Gram) Pelarut etanol 96% (ml) Berat Ekstrak kental (Gram) Daun Biduri ( Calotropis gigantea ) 600 6.000 102,57
Tabel 2. Hasil Evaluasi Ekstrak Daun Biduri ( Calotropis gigantea) Pemeriksaan Ekstrak Hasil Organoleptis -Warna -Bau -Rasa -Konsistensi Warna Hijau Kehitaman Bau khas Rasa Pahit Ekstrak kental Rendemen (%) 17, 095% Kelarutan Aquadest     (mudah larut) Etanol 96% (mudah larut) Susut Pengeringan (%) 57% Kadar Abu Total (%) 1,872%
Tabel 3. Hasil Uji identifikasi Ekstrak Daun Biduri ( Calotropis gigantea)
Bahan Uji Penambahan  Reagen Reaksi Warna Hasil Ekstrak Kental FeCl 3 1% Hijau Kehitaman (+) Positif Mengandung tanin Gelatin 1% Terbentuk Endapan (+) Positif Mengandung tanin
Pada  percobaan  identifikasi  tanin menggunakan  pereaksi  Besi  (III)  Klorida dan  larutan  gelatin  1  %.  Pada  uji  pereaksi FeCl 3, hasil  yang  diperoleh  pada  ekstrak daun  biduri  ( Calotropis  gigantea )  positif mengandung senyawa tanin dengan memberikan warna hijau kehitaman (1),(2) . Pada ekstrak daun biduri ( Calotropis gigantea )  direaksikan  dengan  gelatin  1% dalam larutan NaCl menghasilkan endapan yang  menunjukan  positif  tanin.  Sifat  tanin dapat  mengendapkan  protein,  semua  tanin menimbulkan  endapan  sedikit  atau  banyak jika  ditambah  gelatin  karena  termasuk protein alami.
Terjadinya pembentukan warna hijau karena terbentuknya senyawa
kompleks  antara  logam  Fe 3+ dan  tanin.
Senyawa kompleks terbentuk karena adanya  ikatan  kovalen  koordinasi  antara ion  atom  logam  atau  non  logam (10) . Kecenderungan ion Fe 3+
dalam pembentukan  senyawa  kompleks  dapat mengikat  6  (enam)  pasang  elektron  bebas. Ion  Fe 3+ dalam  pembentukan  senyawa kompleks  akan  terhibridisasi  membentuk hibridisasi  d 2 sp 3 sehingga  akan  terisi  oleh 6  pasang  elektron  bebas  atom  O  pada tanin (10) .  Reaksi  tanin  dengan  FeCl 3 ditunjukan pada gambar 1.
Pada ekstrak daun biduri ( Calotropis gigantea )  direaksikan  dengan  gelatin  1% dalam larutan NaCl menghasilkan endapan yang menunjukan positif tanin. Identifikasi tanin  dengan  gelatin  digunakan  untuk memperkuat  dugaan  adanya  tanin  dalam ekstrak  dari  suatu  tanaman,  selain  itu, semua  tanin  menimbulkan  endapan  sedikit atau  banyak  jika  ditambahkan  dengan gelatin.  Gelatin  adalah  protein  yang  dapat larut  dalam  air  dan  dapat  dicernakan, berasal dari kolagen yang telah dipanaskan dalam  air  mendidih  oleh  larutan  asam  dan basa  encer,  terdiri  atas  25%  glisin  dan 25% prolin serta hidroksiprolin (12) .

## Pembuatan Kurva
Hasil  absorbansi  dan  pembuatan kurva  baku  asam  galat  dengan  reagen folin ciocalteu ,  seperti  tertera  pada  tabel  4  dan gambar 2.
Tabel 4. Hasil  Absorbansi  Baku  Asam Galat Konsentrasi (ppm) Absorbansi 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 0,163 0,206 0,253 0,273 0,337 0,398 0,430
Hasil  pengukuran  kurva  kalibrasi asam  galat  dengan  panjang  gelombang  765 nm  didapat  persamaan  regresi  linear  y =0,0453  x  +  0,113  dengan  nilai  koefisien determinasi  sebesar  0,9884.  Nilai  (r)  yang mendekati  1  menunjukan  bahwa  persamaan regresi tersebut adalah linear.

## Penetapan Kadar Tanin.
Hasil  penetapan  kadar  tanin  pada ekstrak  daun  biduri  ( calotropis  gigantea )
menggunakan spektrofotometer Uv-Vis memiliki  kadar  tertinggi  rerata  7,12  μg/ml pada konsentrasi 300 ppm, rerata kadar 3,53 μg/ml  pada  konsentrasi  200  ppm  dan  rerata kadar  terendah  adalah  1,16  μg/ml  pada  100 ppm,  seperti tertera pada tabel 5.
Penetapan  kadar  tanin  dengan  cara
spektrofotometri Uv-Vis menggunakan reagen Folin Ciocalteu . Reaksi pembentukan  yang  terjadi  adalah  reduksi oksidasi  dimana  tanin  sebagai  reduktor  dan Folin  Ciocalteu sebagai  oksidator.  Hasil oksidasi  akan  membentuk  warna  biru  yang dapat  dibaca  panjang  gelombang  maksimal. Reagen Folin  Ciocalteu digunakan  karena senyawa fenolik dapat bereaksi dengan folin
membentuk  larutan  berwarna  yang  dapat diukur absorbansinya.
Prinsip  dari  metode Folin  Ciocalteu adalah  terbentuknya  senyawa  kompleks berwarna  biru  yang  dapat  diukur  pada panjang  gelombang  765  nm.  Pereaksi  ini mengoksidasi  fenolat  (garam  alkali)  atau gugus  fenolik-hidroksi  mereduksi  asam heteropoli ( Fosfomolibdat-fosfotungstat ) yang terdapat dalam pereaksi Folin ciocalteu menjadi  suatu  kompleks Molibdenum- tungsten .  Senyawa  fenolik  bereaksi  dengan reagen Folin Ciocalteu hanya dalam suasana basa  agar  terjadi  disosiasi  proton  pada senyawa  fenolik  menjadi  ion  fenolat.  Untuk membuat  kondisi  basa  digunakan  Na 2 CO 3 15%. Gugus hidroksil pada senyawa fenolik bereaksi  dengan  reagen Folin  Ciocalteu membentuk  kompleks molibdenum-tungsten
berwarna  biru  yang  dapat  banyak  dideteksi dengan  spektrofotometer.  Semakin  besar konsentrasi  senyawa  fenolik  maka  semakin banyak  ion  fenolat  yang  akan  mereduksi asam heteropoli ( fosfomolibdat- fosfotungstat ) menjadi kompleks molibdenum-tungsten sehingga  warna  biru yang dihasilkan semakin pekat. Dan sebagai standar pembanding adalah asam galat (13) .
Pengukuran  serapan  sampel  dari  hasil yang  didapat  pada  penetapan  kadar  tanin pada  ekstrak  daun  biduri  ( Calotropis gigantea )  dengan  cara  spektrofotometri  Uv- Vis  yaitu  pada  konsentrasi  100  ppm diperoleh  kadar  sebesar  1,16  μg/ml,  pada konsentrasi 200 ppm diperoleh kadar sebesar 3,53  μg/ml,  pada  konsentrasi  300  ppm diperoleh kadar sebesar 7,12 μg/ml.
Gambar 1. Reaksi dugaan senyawa Tanin dengan FeCl 3 (11)
Gambar 2 . Grafik kurva baku asam galat
y = 0,0453x + 0,113 r = 0,9884 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0 2 4 6
8
Abs or b an si Konsentrasi (ppm) Grafik Kurva Baku Asam Galat Absorbansi Linear (Absorbansi)
Tabel 5. Hasil Penetapan Kadar Tanin Ekstrak Daun Biduri ( Calotropis gigantea ) Bobot Ekstrak (mg) Konsentrasi (ppm) Replikasi Absorbansi Kadar Tanin(X) (μg/ml) Rerata (μg/ml) 50 mg 100 ppm I 0,167 1,192 1,16 II 0,168 1,214 III 0,162 1,082 200 ppm I 0,258 3,090 3,53 II 0,292 3,951 III 0,274 3,554 300 ppm I 0,452 7,483 7,12 II 0,432 7,042 III 0,423 6,843
Gambar 3. Reaksi Senyawa Fenol dengan Pereaksi Folin Ciocalteu (13)

## SIMPULAN
Ekstrak  daun  biduri  ( Calotropis gigantea )  positif  mengandung  senyawa tanin.  Pada  sampel  diperoleh  kadar  rata-rata tanin  dalam  ekstrak  daun  biduri  ( Calotropis gigantea )  yaitu  pada  konsentrasi  100  ppm sebesar  1,16  μg/ml,  pada  konsentrasi  200 ppm  sebesar  3,53  μg/ml,  pada  konsentrasi 300  ppm  sebesar  7,12  μg/ml.  Perlu dilakukan  untuk  penelitian  selanjutnya  agar mampu mengidentifikasi jenis-jenis senyawa tanin  dan  kadar  total  senyawa  tanin  ekstrak daun  biduri  ( Calotropis  gigantea )  dengan metode yang berbeda dan lebih spesifik lagi.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Nadziroh  M.,  2014, Uji  Sitotoksisitas Ekstrak  Daun  Biduri  (Calotropis gigantea)  Terhadap  Larva  Udang
Artemia Salina Leach Dan  Identifikasi Golongan Senyawa Aktifnya, Kimia J., Sains, F.,Teknologi, D.A.N., Islam, U., Maulana, N.,& Ibrahim, Malang.
2. Singh S., Mishra R M., and Shrivastava  M  P.,  2014, Preliminary Phytochemical Screening of Calotropis gigantea  leaf. International  Journal of Scientific  and  Research  Publications ,
4 (1),  2250–3153.  Retrieved  from www.ijsrp.org
3. Mustikasari  K.,  Ariyani  D.,    2010, Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Metanol
Biji  Kalangkala ( Litsea  angulata ), Sains Dan Terapan Kimia, 4, 131–136.
4. Mangan,  Yellia.,  2009, Solusi  Sehat Mencegah  dan  Mengatasi  Kanker , Jakarta: Agromedia Pustaka Senyawa Fenol Air Pereaksi Folin- Ciocalteu Kuinon Kompleks Blue Molybdenum
5. Anonim, 1985, Cara Pembuatan Simplisia , Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1-2.
6. Diniatik, 2015, Penentuan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Etanolik Daun
Kepel  (Stelechocarpus  burahol  (bi)
Hook  f.  &  th.),  dengan  metode Spektrofotometri ,  Kartika  Jurnal  Ilmiah Farmasi, ISSN 2354-6565. 7. Departemen Kesehatan Republik Indonesia,  2008, Farmakope  Herbal Indonesia , Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
8. Harborne  JB.,  1987, Metode  Fitokimia Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan , Bandung: ITB.
9. Amelia,  F  R.,  2015, Penentuan  Jenis
Tanin dan Penetapan Kadar Tanin dari Buah  Bungur  Muda  (Lagerstroemia speciosa  Pers.) Spektrofotometri  dan Permanganometri, Jurnal Ilmiah
Mahasiswa  Universitas  Surabaya,  4(2),
1–20. 10. Effendy,  2007, Perspektif  Baru  Kimia Koordinasi  Jilid  I ,  Malang:  Banyu Media Publishing.
11. Perron  R  N.,  and  Brumaghim  L  J., 2009, A  Review  of  the  Antioxidant Mechanisms of Polyphenol Compounds Related  to  Iron  Binding .  Cell  Biochem
Biophys, (53) : 75 – 100.
12. Mabruroh, Asasu Iqonil (2015) Uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  tanin  dari daun rumput bambu (lopatherum gracile brongn) dan identifikasinya. Undergraduate thesis,
Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim.
13. Sulistyani  S  A.,  2011, Ekstraksi Senyawa  Fenolik  dari  Limbah  Kulit ,
Surabaya.