e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume III No 1 Oktober 2014 ISSN: 2302-3600
PROFIL HEMATOLOGI KAKAP PUTIH (Lates calcallifer) YANG DISTIMULASI DENGAN JINTAN HITAM (Nigela sativa) DAN

## EFEKTIFITASNYA TERHADAP INFEKSI Vibrio alginolyticus
Rahmat Hidayat *† , Esti Harpeni ‡ dan Wardiyanto ‡

## ABSTRAK
Vibrio alginolyticus merupakan bakteri yang paling sering menginfeksi kakap putih ( Lates  calcarifer )    sehingga  menyebabkan  kematian  massal.  Salah  satu  alternatif pencegahan  infeksi V.  alginolyticus yang  aman  baik  bagi  ikan,  manusia  dan lingkungan, yaitu dengan pemberian imunostimulan dari bahan alami seperti jintan hitam  ( Nigella  sativa ).  Penelitian  bertujuan  untuk  mempelajari  profil  hematologi dan  efektifitas  dosis  jintan  hitam  terhadap  daya  tahan  tubuh  kakap  putih  yang diinfeksi V.alginolyticus. Penelitian menggunakan 4 perlakuan (0,0%, 2,5%, 5,0%, dan  7,5%  ekstrak  jintan  hitam)  dicampur  dengan  pakan  sebanyak  1kg.  Data hematokrit,  jumlah  leukosit,  diferensiasi  leukosit,  dan  aktivitas  fagositosis dianalisis  secara  deskriptif.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  jintan hitam 7,5% merupakan yang paling efektif digunakan sebagai imunostimulan pada kakap putih. Ekstrak jintan dapat meningkatkan  nilai hematokrit, leukosit, limfosit, monosit, neutrofil, dan aktifitas fagositosis yang bermanfaat mengatasi  infeksi V. alginolyticus .
Kata kunci: kakap putih, immunostimulan, vibriosis, hematologi, jintan hitam.

## Pendahuluan
Vibrio adalah  agen  penyebab  penyakit vibriosis  yang  menyerang  hewan  laut seperti  ikan,  udang,  dan  kerang- kerangan. Vibrio alginolyticus merupakan  bakteri  yang  paling  sering menginfeksi  kakap  putih  sehingga menyebabkan kematian masal (Taslihan dkk. , 2000).  Salah  satu  alternatif pencegahan V. alginolyticus yang aman baik bagi ikan, manusia dan lingkungan, yaitu dengan pemberian imunostimulan
* Mahasiswa Jurusan Budidaya Perairan Universitas lampung
† Surel korespondensi :rahmat.rahmat069@gmail.com
‡ Dosen Jurusan Budidaya Perairan Universitas lampung Jurusan Budidaya Perairan, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung Jl. Soemantri Brojonegoro Gedong Meneng No. 1 Bandar Lampung 35145
dari  bahan  alami  mengunakan  jintan hitam  ( Nigella  sativa ).  Kandungan minyak dan bahan yang terdapat dalam biji  jintan  hitam  memiliki  potensi sebagai obat di dunia medis tradisional (Salem,  2005).  Kandungan  minyak atsiri  dan  volatil  pada  jintan  hitam efektif  melawan  bakteri  seperti V. cholera,  Escherichia  coli,  Shigella sp. (El-Dakhakhny et al. , 2002). Berdasarkan penelitian Ali et al. (2007) ekstrak jintan hitam dapat menghambat
bakteri S.  aureus dan M.  luteus yang menghasilkan zona daya hambat masing 15  dan  12  mm.  Salah  satu  cara pemeriksaan untuk mengantisipasi penyakit  adalah  dengan  pengamatan menggunakan metode pemeriksaan hematologi  sebagai  indikator  tingkat suatu  komponen  darah  pada  infeksi penyakit  (Bastiawan  dkk.,  2001). Penelitian bertujuan untuk mempelajari profil  hematologi  dan  efektifitas  dosis jintan  hitam  terhadap  respon  imun  non spesifik  kakap  putih  yang  diinfeksi V.alginolyticus.

## Metode Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  September- Oktober  2013  di  Laboratorium  Balai Besar  Pengembangan  Budidaya  Laut
Lampung  dan  Laboratorium  Budidaya Perikanan, Universitas Lampung.
Penelitian  ini  terdiri  dari  4  perlakuan yaitu perlakuan A (0,0 g jintan hitam/kg
pakan), perlakuan B (2,5 g jintan hitam /kg  pakan),  perlakuan  C  (5,0  g  jintan hitam  /kg  pakan)  perlakuan  D  (7,5  g jintan  hitam  /kg  pakan).  Kakap  putih dengan  bobot  sekitar  ±15  gr  sebanyak 60 ekor lalu diadaptasikan selama 7 hari dan  diberi  pakan  berupa  pelet.  Ekstrak jintan hitam ditimbang sesuai dosis lalu dicampurkan pada pakan sebanyak 1 kg dengan  bantuan  spatula,  ditambahkan dua  putih  telur  sebagai  binder  dan diaduk  dengan  spatula,  lalu  pellet dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan. Pengambilan darah dilakukan setiap seminggu sekali, sebelum pengambilan darah kakap putih terlebih dahulu  dibius  mengunakan  minyak cengkeh dengan dosis 0,04 ppm. Darah diambil  pada  bagian  vena  caudalis kemudian  darah  ditempatkan  ke  dalam eppendorf .  Waktu  pengambilan  darah sampai uji tantang (Gambar 1).
Gambar 1. Waktu pengambilan darah kakap putih, 0 (hari ke-0), 7 (hari ke-7), 14 (hari ke-4), 21 (hari ke-21), 38 (hari ke-38), 45 (hari ke-45).
Penghitungan nilai hematokrit dan total leukosit  dihitung  menurut  (Tambur, 2006).  Diferensiasi  leukosit  dihitung paling  sedikit  100  sel  dan  dilakukan perhitungan  persentase  jenis  leukosit (Tambur. 2006).  Indeks  fagositosis dihitung  dengan  menggunakan  metode Salasia (2001) yang dimodifikasi.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  pengamatan  nilai  hematokrit setelah  dilakukan  pemberian  pakan ekstrak jintan hitam  pada  perlakuan A, B,  dan  D  menunjukan  peningkatan
dihari  ke-21  dan  penurunan  dihari  ke- 45.  Peningkatan  dihari  ke-45  hanya terjadi  pada  perlakuan  C,  peningkatan diduga  terjadinya  lisis  pada  darah (Gambar 2). Menurunnya nilai hematokrit  menandakan  jumlah  sel darah  merah  dalam  tubuh  menurun dikarenakan  jumlah  sel  darah  putih dalam darah sedang diproduksi banyak untuk  membersihkan benda asing  yang masuk ke dalam tubuh. Nilai hematokrit tertinggi  pada  perlakuan  D  sebesar 55,58% dan terendah pada perlakuan A sebesar 36,38%.
Gambar  2.  Nilai  persentase  hematokrit  kakap  putih  ( Lates  calcarifer )  dengan penambahan jintan hitam ( Nigella sativa ) yang berbeda.
Perubahan  tingkah  laku  kakap  putih pasca  infeksi  terjadi  pada  perlakuan kontrol, yaitu berupa penurunan respon terhadap  rangsang,  dan  cenderung bergerak  lamban.  Gejala  klinis  hanya pada  perlakuan  B  yaitu  terdapat  luka pada  tubuh  kakap  putih,  serta  geripis pada  bagian  sirip.  Gejala  klinis perubahan  morfologi  dilaporkan  pula oleh  Sarjito  dkk.  (2007)  perubahan warna  yang  terjadi  dapat  dipicu  oleh infeksi yang diakibatkan bakteri sehingga menyebabkan terjadinya infiltrasi sel radang meluas pada lapisan epidermis.
Hasil perhitungan total leukosit menunjukan  peningkatan  pada  semua perlakuan dari hari ke-0, 7, 14, 21 terus meningkat  pasca  infeksi  pada  hari  ke- 45.  Peningkatan  total  leukosit  hingga sebesar 26.308 sel/mm 3 pada perlakuan D  dari  hari  ke-21  sampai  hari  ke-45 (Gambar 3) peningkatan jumlah leukosit  terjadi  oleh  infeksi  patogen yang masuk kedalam tubuh.
Gambar 3. Jumlah total leukosit kakap putih ( Lates calcarifer ) dengan penambahan jintan hitam ( Nigella sativa ) yang berbeda. Adanya infeksi V.alginolyticus menyebabkan kakap putih memproduksi sel leukosit lebih banyak kedaerah infeksi sebagai upaya pertahanan. Sel-sel leukosit (Gambar 4), tersebut  bekerja  sebagai  sel  yang
memfagosit bakteri yang ada agar tidak dapat  berkembang  dalam  tubuh  inang sehingga sering ditemukan jumlah total leukosit  mengalami  peningkatan  pasca infeksi oleh bakteri. Peningkatan aktifitas  fagositosis  tertinggi  terjadi pada  perlakuan  D  sebesar  77.360 sel/mm 3 , sedangkan yang terendah pada kontrol sebesar 25.289 sel/mm 3 . Nilai diferensial sel limfosit pada setiap pengamatan berbeda-beda yaitu
berkisar  antara  73–81%.  Pasca  infeksi pada  hari  ke-38  terjadi  penurunan jumlah  sel  limfosit,  pada  perlakuan yang  diberi  ekstrak  jintan  hitam (perlakuan B, C, dan D) maupun tanpa pemberian ekstrak jintan hitam (perlakuan  A)  (Gambar  5).  Hal  ini terjadi  dikarenakan  antibodi  didalam darah  yang  terbentuk  digunakan  untuk menyerang bakteri V.alginolitycus , perlawanan tersebut menyebabkan jumlah sel limfosit berkurang.
Penurunan jumlah limfosit juga diduga, saat terjadi infeksi neutrofil dan monosit yang  bekerja  paling  aktif  karena merupakan  pertahanan  terdepan  tubuh dalam  melawan  infeksi  (Alamanda dkk.,  2007).  Setelah  terjadinya  infeksi neutrofil  akan  lebih  aktif  dibanding
limfosit  karena  antibodi  dari  limfosit akan teraktifasi setelah neutrofil bekerja.  Hasil  pengamatan  persentase sel  limfosit  lebih  tinggi  dibandingkan neutrofil  dan  monosit.  Hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Moyle  and  Cech (2004), bahwa jumlah sel limfosit pada ikan lebih banyak dibandingkan dengan neutrofil dan monosit.
Hasil  pengamatan  yang  dilakukan  baik sebelum dan sesudah infeksi jumlah sel monosit  pada  ikan  uji  yaitu  4-8%. Persentasi jumlah sel monosit bervariasi pada setiap perlakuan, dan peningkatan pasca injeksi tertinggi dihari ke-45 pada perlakuan  A,  sedangkan  pada  semua perlakuan  yang  diberi  ekstrak  jintan hitam  menurun  (Gambar  6).  Hal  ini diduga  bahwa  monosit  meninggalkan pembuluh  darah  menuju  daerah  yang terinfeksi  dan  memfagosit  bakteri (Affandi  dan  Tang,  2002).  Monosit mempunyai siklus hidup singkat dalam sirkulasi darah yakni sekitar 2,5-3 hari.
Monosit juga mensekresikan kolagenase,  elastase,  dan  aktivator plasrninogen  yang  berguna  dalam proses penyembuhan luka dan fagositosis (Kresno, 2001).
Gambar 4. Diferensial leukosit dengan pewarnaan giemsa, pada perbesaran 100X mengunakan mikroskop Olympus BX-4, (M = monosit; L = limfosit; N = neutrofil; E = eritrosit) 1. M M N L E
Gambar  5.  Jumlah  limfosit  kakap  putih  ( Lates  calcarifer )  dengan  penambahan jintan hitam ( Nigella sativa ) yang berbeda.
Gambar  6.  Jumlah  monosit  kakap  putih  ( Lates  calcarifer )  dengan  penambahan jintan hitam ( Nigella sativa ) yang berbeda.
Hasil pengamatan persentase sel neutrofil  menunjukan  nilai  yang  tidak jauh berbeda dihari ke-0, 7, 14 dan 21.
Peningkatan  tertinggi  pasca  injeksi terjadi  di  hari  ke-45  pada  perlakuan  D sebesar  20%  (Gambar  7),  hal  ini menunjukan adanya aktivitas sel neutrofil  dalam  menyerang  antigen yang masuk ke dalam tubuh.
Peningkatan dihari ke-45 pada perlakuan B, C dan D juga menunjukan bahwa ekstrak jintan hitam yang masuk kedalam  tubuh  dapat  meningkatkan
persentase  neutrofil  dalam  darah.  Hal ini  didukung  oleh  pendapat  Fujaya (2004)  bahwa  keluarnya  sel  neutrofil pada saat terjadinya infeksi disebabkan oleh  adanya  pengaruh  rangsangan kimiawi eksternal
diantaranya distimulasi oleh imunostimulan. Brown
(2000)  sel  neutrofil  dalam  darah meningkat  dapat  diindikasikan  bahwa terjadi  peradangan  akibat  masuknya agen  penyakit  maupun  benda  asing dalam tubuh.

## 332                                                                           Profil Hematologi Kakap Putih
Gambar  7.  Jumlah  neutrofil  kakap  putih  ( Lates  calcarifer )  dengan  penambahan jintan hitam ( Nigella sativa ) yang berbeda.
Aktifitas  fagositosis  makrofag  terjadi apabila  adanya  benda  asing  termasuk patogen.  Proses  penelanan  bakteri terjadi  karena  fagosit  membentuk tonjolan pseudopodia, membentuk kantung  mengelilingi  bakteri  sehingga terperangkap  dalam  vakuola  fagosom. Patogen  masuk  ke  dalam  sel  dengan cara  endositosis  dan  oleh  proses pembentukan fagosom, patogen terperangkap  dalam  kantong  fagosom seolah-olah  ditelan  untuk  dihancurkan, baik  dalam  proses  oksidasi-reduksi maupun oleh derajat keasaman yang ada dalam fagosit (Anderson, 1992).
Pengamatan fagositosis
hanya dilakukan sekali untuk melihat
terjadinya  aktifitas  fagosit  sel  terhadap benda  asing  yang  masuk.  Aktifitas fagositosis  lebih  tinggi  terlihat  pada kakap  putih  yang  diberi  perlakuan dibandingkan  dengan  kakap  putih control. Seperti pada perlakuan D yaitu 74,34%  dimana  nilai  ini  lebih  tinggi dibandingkan  kontrol  yang  hanya 58,57%  (Gambar  8).  Peningkatan aktifitas  fagositosis  dapat  terjadi  pada awal respon dari
pemberian imunostmulan  atau  awal  terjadinya infeksi, sedangkan jumlah yang rendah diakibatkan  dari  ikan  yang  mengalami stres,  kekurangan  protein  dan  vitamin, serta infeksi kronis (Johnny dkk., 2005).
Gambar 8. Aktifitas fagositosis kakap putih ( Lates calcarifer ) dengan penambahan jintan hitam ( Nigella sativa ) yang berbeda.

## Kesimpulan
Pemberian pakan dengan ekstrak jintan hitam  7,5%  paling  efektif  digunakan sebagai  imunostimulan  pada  kakap putih. Ekstrak jintan hitam meningkatkan respon imun non-spesifik kakap  putih,  berupa  peningkatan  nilai hematokrit,  leukosit,  limfosit,  monosit,
neutrofil, dan  aktifitas  fagositosis  yang bermanfaat mengatasi infeksi V. alginolyticus .

## Daftar Pustaka
Affandi  R  dan  Tang  U.M.  2002. Fisiologi  Hewan  Air .  Unri  Press, Riau. hal. 32-47
Ali,  O.,  Basbulbul,  G.  and  Aydin  T. 2007. Antimitotic and antibacterial effects  of  the Nigella  sativa L.
Seed. Caryologia 3: 270-272. Alamanda,  I.E.,  Handajani,  N.S.,  dan Budiharjo,  A.  2007.  Pengunaan metode hematologi dan pengamatan  endoparasit  darah untuk  penetapan  kesehatan  ikan lele  dumbo  ( Clarias gariepinus ) di kolam budidaya desa mangkubumen  Boyolali.  Jurnal
Biodifersitas 8 : 34-38
Anderson,  1992.  Immunostimulants, ejduvants  and  vaccine  carrier  in fish:  Application  to  aquaculture. Ann. Rev. Fish Dis 2: 281-307.
Bastiawan,  D.A.  Wahid,  M.  Alifudin,
dan I. Agustiawan.
2001. Gambaran  darah  lele  dumbo ( Clarias gariepinus ) yang diinfeksi cendawan Aphanomyces spp.  pada  pH  yang  berbeda.  J. Pen. Per. Indonesia. 7:44-61.
Brown,  K.M.T.  2000. Applied  fish pharmacology . Kluwer Academic Publisher, The Netherland.
El-Dakhakhny  M,  Madi  N.J,  Lambert N,  and  Ammon  H.P.  2002. Nigella  sativa oil,  nigellone  and derived  thymoquinone  inhibit synthesis of 5-lipoxygenase products  in  polymorphonuclear leukocytes from rats. J. Ethnopharmacol 81:161-164. Fujaya, Y. 2004. Fisiologi Ikan. Proyek Peningkatan Penelitian Pendidikan Tinggi Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Departemen Pendidikan Nasional.
Johnny,  F.,  D.  Roza.,  K.  Mahardika.,
Zafran,  dan  A.  Prijono.  2005. Penggunaan imunostimulan untuk meningkatkan  kekebalan  non- spesifik benih ikan kerapu lumpur, Ephinephelus  coioides terhadap infeksi virus irido. Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia 11
: 27-42
Kresno, S.B. 2001. Imunologi Diagnosis dan Prosedur Laboratorium . Edisi ketiga.
Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia. Jakarta.
Moyle P.B and Cech J.J. 2004. Fishes ; An  Introduction  to  Ichthyology .
USA. Prentice Hall.
Sarjito, S.B. Prayitno, O.K. Radjasa dan S.  Hutabarat.  2007.  Causative agent vibriosis pada kerapu bebek (Cromileptes altivelis ) dari karimun  jawa  pathogenisitasnya terhadap  ikan  kerapu  macan ( Epinephelus fuscogutattus ). Ilmu Kelautan 12 : 173-180.
Salasia, S.I.O. 2001. Resistency Streptococcus Equi Subsp. Zooepidemicus  on  bactericidal activities  of    polymorphonuclear leucocyte. J. Saint. Vet. 29: 1-6.
Salem  M.L.  2005.  Immunomodulatory and  therapeutic  properties  of  the Nigella  sativa L.  seed.  Int. Immunopharmaco. 5 :1749-70
Tambur  Z.  2006.  White  blood  cell
differential count  in  rabbits
artificially infected with intestinal coccidia.  J.  Protozool.  Res  16  : 42-50. Taslihan, A., M. Murdjani, C. Purbomartono dan E. Kusnendar. 2000.  Bakteri  patogen  penyebab penyakit  mulut  merah  pada  ikan kerapu tikus ( Cromilepte s altivelis ). Jurnal Perikanan 2 : 57- 62
.