## JBIO: JURNAL BIOSAINS
(The Journal of Biosciences)
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains@unimed.ac.id

## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BIOKIMIA BAKTERI ASAL SUNGAI BATANG GADIS SUMATERA UTARA
Mhd. Yusuf Nasution, Ahmad Shafwan S. Pulungan, Fitri Chairani, Wulandari Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Medan email korespondensi : yusufnasution1963@gmail.com
Diterima:  Oktober 2020; Direvisi: November 2020; Disetujui: Desember 2020

## ABSTRAK
Penelitian ini dilakukan di laboratorium mikrobiologi Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Medan. Waktu penelitian dari  bulan Juni – Oktober 2020. Populasi dalam  penelitian  ini  adalah  semua  bakteri  yang  diperoleh  dari  tanah  dan  air  dari  lokasi  tambang  emas Mandailing Natal, Sumatera Utara. Sampel dalam penelitian ini adalah sampel total, yaitu semua bakteri yang diperoleh  dari  lokasi  tambang  emas  Mandailing  Natal,  Sumatera  Utara.  Penelitian  dilakukan  dengan pengambilan  sampel,  isolasi  bakteri  yang  meliputi  penanaman  sampel  pada  media  perkaya,  penanaman sampel  pada  berbagai  media  tanam,  pemurnian  koloni  bakteri,  pengamatan  morfologi  koloni  bakteri, identifikasi bakter dan uji sensitivitas bakteri. Hasil penelitian menunjukkan bahwa didapatkan 3 spesies bakteri yaitu 3 spesies Escherich ia coli, 1 spesies Klebsiella pneumonia, dan 2 spesies Aeromonas sobria dari hasil uji Viteks. Dalam pengujian biokimia terhadap 47 aktivitas biokimia, dari semua isolate yang diujikan mendapatkan hasil yang beragam dengan ditandai dengan positif dan negative.
Kata Kunci: Isolasi Bakteri, Air Sungai, biokima, uji

## ISOLATION AND IDENTIFICATION OF BIOCHEMICAL BACTERIA ORIGIN OF GADIS RIVER NORTH SUMATRA

## Abstract
This  research  was  conducted  in  the  microbiology  laboratory,  Department  of  Biology,  Faculty  of Mathematics  and  Natural  Sciences,  Medan  State  University.  The  research  time  was  from  June  to  October 2020. The population in this study were all bacteria obtained from soil and water from the Mandailing Natal gold mine, North Sumatra. The sample in this study was a total sample, which is all bacteria obtained from the Mandailing Natal gold mine, North Sumatra. The research was conducted by taking samples, isolating bacteria which included planting samples on enriched media, planting samples on various growing media, purifying bacterial colonies, observing bacterial colony morphology, identifying bacteria and testing bacterial sensitivity. The results showed that 3 species of bacteria were obtained, namely 3 species of Escherich ia coli, 1  species  of  Klebsiella  pneumonia,  and  2  species  of  Aeromonas  sobria  from  the  Viteks  test  results.  In biochemical testing of 47 biochemical activities, of all tested isolates got mixed results, marked as positive and negative.

## Keywords : Bacteria Isolation, River, Biochemistry, test
Pendahuluan Sungai merupakan temapt hidup yang baik bagi  beberapa  jenis  bakteri.  Kualitas  pasokan  air yang  berasal  dari  daerah  tangkapan  di  pengaruhi oleh  aktifitas  manusia  yang  ada  didalamnya.  Salah satu  faktor  yang  mempengaruhi  adalah  aktivitas
pertambangan  yang  dilakukan  disekita  daerah aliran  sungai.  Sektor  pertambangan  khususnya pertambangan emas, perlu mendapatkan perhatian khusus  oleh  publik  karena  mempunyai  resiko kerusakan  lingkungan  yang  tinggi.  Salah  satu
Jurnal Biosains Vol. 6 No. 3 Desember 2020                                                                 ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v6i3.21826
masalah  yang  sampai  saat  ini  masih  menjadi permasalahan adalah banyaknya kegiatan pertambangan liar (tanpa ijin).
Permasalahan utama dalam pertambangan emas tanpa izin adalah penggunaan bahan dan zat berbahaya  dalam  pengolahannya.  Limbah  yang dihasilkan  umumnya  masih  mengandung  merkuri (Esdaile,  2018).  Merkuri  yang  sering  digunakan dalam  penambangan  bijih  emas  adalah  merkuri elemental  yaitu  merkuri  dalam  bentuk  aslinya (Marrugo, 2017).
Kandungan  mineral  logam  (khususnya emas)  sudah  sejak  lama  tersimpan  di  daerah Kabupaten  Mandailing  Natal.  Cadangan  bahan tambang  emas  yang  terdapat  di  Kabupaten Mandailing  Natal  (Madina),  Provinsi  Sumatera Utara cukup besar dan mencapai 1,5 juta ounce (Au) dengan kadar 2,2 gram ton Au.
Pertambangan emas di Madina sudah ada sejak 2008. Maraknya penambangan liar yang menggunakan  bahan  berbahaya  menjadikan munculnya  berbagai  penyakit  yang  ditimbulkan akibat  buangan  limbah  logam  berat  berbahaya  ke lingkungan.  Salah  satu  alternatif  penanggulangan lingkungan tercemar merkuri adalah dengan Teknik bioremediasi,  yang  merupakan  salah  satu pemanfaatan  mikroorganisme  untuk  memperbaiki lingkungan yang tercemar.
Dangi  (2019)  menjelaskan  bahwa  peran mikroba  dalam  pengolahan  air  limbah  sudah banyak  memberikan  hasil  yang  menggembirakan. Senyawa-senyawa organik yang terdapat dalam air limbah  merupakan  sumber  nutrisi  bagi  mikroba. Mikroba akan mengurai senyawa-senyawa tersebut menjadi  bentuk  yang  lebih  sederhana  dan  stabil sehingga  kadar  zat  pencemar  yang  terkandung dalam  limbah  tersebut  menjadi  turun.  Reaksi enzimatis oleh bakteri merupakan kunci terselenggaranya  proses  transformasi  bertahap dalam  pengelolaan  air  limbah  dari  substrat  yang umumnya  berupa  bahan  organik  dengan  susunan molekul  kompleks,  menjadi  unsur-unsur  yang sederhana.
Beberapa  jenis  bakteri  diketahui  mempunyai kemampuan mereduksi atau menyerap logam berat. Bakteri  yang  tahan  terhadap  cekaman  merkuri disebut bakteri resisten merkuri (BRM). Mekanisme yang terdapat dalam BRM untuk mereduksi merkuri salah satunya dengan mengubah Hg2+ menjadi Hg0 dengan enzim merkuri  reductase yang dikode gen merA (Iftita, ,et al. 2014).
Potensi  yang  dimiliki  oleh  bakteri  dalam mereduksi logam berat (merkuri) merupakan suatu Teknik yang ramah lingkungan dalam memperbaiki lingkungan  tersebut.  Sebagai  upaya  awal  dalam mengetahui  jenis  bakteri  yang  mampu  mereduksi merkuri,  maka  perlu  dilakukan  penelitian
pendahuluan  untuk  mengetahui  jenis  bakteri  yang resisten  terhadap  kandungan  merkuri  di  lahan tambang emas di Mandailing Natal, Sumatera Utara.

## Bahan Dan Metode
Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium mikrobiologi  Jurusan Biologi,  Fakultas Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Negeri Medan.  Waktu  penelitian  ini  direncanakan  mulai bulan  Juni – Oktober  2020.  Populasi  dalam penelitian ini adalah semua bakteri yang diperoleh dari  tanah  dan  air  dari  lokasi  tambang  emas Mandailing  Natal,  Sumatera  Utara.  Sampel  dalam penelitian ini adalah semua bakteri yang diperoleh dari  lokasi  tambang  emas  Mandailing  Natal, Sumatera Utara.
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  sampel  tanah  dan  air  limbah  yang diperoleh  dari  lokasi  tambang  emas  Mandailing Natal,  Sumatera  Utara,  tisu,  kertas  payung,  karet, kapas, plastik wrap, aluminium foil, masker, sarung tangan,  spidol  marker,  larutan  standar  merkuri, aquades,  spiritus,  alkohol  70%,  plastik  tebal berperekat,  HCl,  NaOH,  HNO3.  Selain  itu,  bahan media  yang  dibutuhkan  adalah  Media  BHI  ( Brain Heart Infusion ), LDS ( Lactosa Double Streng ), EMBA ( Eosin Methylen Blue Agar ), Cled Agar, MSA ( Manitol Salt  Agar ),  MCA  ( Mac  Conkey  Agar ),  Blood  Agar, NaCl,  HgCl2  produksi  Merck  Jerman,  serta  reagen untuk uji Gram positif dan negatif.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  antara lain Laminar  Air  Flow dengan  merk  lokal,  autoklaf dengan merk Hirayama HVE50, oven dengan merk Memmert, cawan Petri dengan merek pyrex, tabung reaksi dengan merek pyrex, inkubator dengan merk Memmert  Churt,  pipet  ukur  dengan  merk  pyrex, lemari  es  dengan  merk  LG,  mesin  PCR,  jarum  ose, neraca digital dengan merk sartorius, Beaker glass dengan  merk  pyrex,  spatula,  Erlenmeyer  dengan merk  pyrex,  gelas  ukur  dengan  merk  pyrex,  labu ukur dengan merek pyrex, mikropipet dengan merk Accumax pro, aplikasi Bioedit dan Mega.

## Pengambilan Sampel
Sampel  diambil  dari  lokasi  tambang  emas Mandailing  Natal,  Sumatera  Utara.  Sampel  dari masing-masing  tempat  penampungan  diambil sebanyak  250  ml  kemudian  dimasukkan  ke  dalam botol reagen gelap dan dibawa menggunakan media transport. Selanjutnya, 50 ml sampel dari tiap botol diambil dan dicampur ke dalam botol yang masing- masing  telah  berisi  450  ml  Nutrient  Broth. Campuran  tersebut  kemudian  dipropagasi  pada suhu  kamar  selama  5  hari.  Propagasi  bertujuan untuk memperbanyak kultur bakteri.
Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri Pengamatan morfologi koloni bakteri yang telah  murni  dilakukan  dengan  melihat  bentuk koloni,  bentuk  tepian  koloni,  dan  warna  koloni. Koloni  tunggal  pada  media  tanam  selanjutnya diteruskan pada uji identifikasi bakteri menggunakan Vitek 2 Compact .
Identifikasi bakteri dengan Viteks Compact 2 Identifikasi  menggunakan  alat  Viteks Compact 2 dengan mengambil tabung Polystyren 75 mm  lalu  isi  dengan  3  mm  larutan  NaCl  fisiologis. Lalu  ambil  satu  koloni  bakteri  murni  yang  sudah diisolasi  dengan  cutton  bud  steril.  Masukkan kedalam  larutan  NaCl  fisiologis,  aduk  sampai larutan  homogen  lalu  ukur  kekeruhan  larutan sampai  0.54  McF  dengan  alat  Densicheck.  Ambil card Vitex Compact 2 dan tempatkan transfer tube ke dalam larutan suspense. Lakukan hal yang sama untuk  sampel  yang  lain  dan  beri  sampel.  Lalu masukkan data suspensi sampel ke computer vitex compact  2  dan  scan  card  vitex  dengan  barcode. Masukkan card vitex ke dalam mesin Vitek Compact 2 yaitu pada ruang pengambilan data. Tekan enter pada  mesin  Vitex  dan  tunggu  sampai  bunyi  alarm pada  mesin  Vitek.  Selanjutnya  pindahkan  sampel pada  ruang  inkubator  pada  mesin  Vitek.  Tunggu sampai  hasil  identifikasi  bakteri  keluar  pada  layar komputer  Vitek.  Identifikasi  bakteri  telah  selesai dan hasilnya bisa di print.

## Hasil Dan Pembahasan
Pengamatan Koloni Bakteri
Berdasarkan  hasil  pengamatan  koloni bakteri  pada  media  MCA,  Blood  Agar,  EMBA  dan Cled  Agar,  yang  sebelumnya  telah  ditanam  pada media  perkaya  BHI  dan  LDS,  terdapat  6  koloni bakteri  yang  berbeda  karakteristik.  Morfologi koloni  tersebut  berdasarkan  bentuk,  tepian  dan warna  yaitu, bulat, rata, abu-abu; bulat, rata, hijau metalik;  bulat,  rata,  merah  keunguan;  bulat,  rata, merah  pekat;  bulat,  rata,  merah  muda  dan  bulat, rata,  merah.  Dari  keenam  koloni  tersebut  sudah mencakup  semua  karakteristik  dari  koloni  yang berhasil ditanam pada berbagai media.
Hasil  pertumbuhan  bakteri  pada  media perkaya LDS dan BHI ditanam sebanyak 1 ose pada media umum yaitu Blood Agar dan Cled Agar, media selektif khusus gram negatif yaitu EMBA dan MCA, dan  media  selektif khusus  gram  positif  yaitu  MSA. Hasil  pertumbuhan  koloni  bakteri  setelah diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37 0 C menunjukkan pertumbuhan koloni dengan karakteristik yang beragam.
Pertumbuhan  bakteri  pada  media  umum yaitu  Blood  Agar  menunjukkan  koloni  dengan bentuk  bulat,  tepian  rata,  dan  berwarna  abu-abu
kering.  Media  Blood  Agar  mampu  membedakan bakteri  hemolitik  dan  non  hemolitik  berdasarkan kemampuan  mereka  melisiskan  sel-sel  darah merah.  Koloni  bakteri  yang  tumbuh  menunjukkan terbentuknya  alpha  hemolisis,  yaitu  lisis  sebagian sel darah merah dan hemoglobin pada media Blood Agar.  Kemudian  pada  media  Cled  Agar  didapatkan koloni  bakteri  dengan  bentuk  bulat,  tepian gelombang dan berwarna putih kekuningan. Adanya laktosa dan indicator pH yaitu bromtimol biru pada media  Cled  Agar  difermentasikan  oleh  bakteri sehingga terbentuk koloni berwarna kuning.
Selanjutnya  pada  media  selektif  khusus gram negatif yaitu EMBA didapatkan koloni dengan bentuk bulat, tepian rata dan berwarna merah tua. Media  EMBA  mengandung  laktosa,  pepton,  eosin dan methylen blue. Pertumbuhan koloni berwarna merah  tua  disebabkan  kemampuan  mikroba memfermentasikan  laksota.  Eosin  dan  methylen blue  berfungsi  untuk  mempertajam  perbedaan warna  koloni.  Sedangkan  pada  media  MCA didapatkan  koloni  bakteri  berbentuk  bulat,  tepian rata  dan  berwarna  merah  muda.  Media  MCA mengandung  pepton,  NaCl,  garam  empedu,  pH indikator  merah  netral  dan  kristal  violet. Pertumbuhan koloni berwarna merah menunjukkan kemampuan bakteri memfermentasi laktosa.
Setelah  itu,  pada  media  selektif  khusus gram  positif  yaitu  MSA  tidak  didapatkan pertumbuhan koloni bakteri. Media MSA mengandung NaCl, manitol dan indikator pH phenol red.  Koloni  bakteri  yang  tumbuh  mampu memfermentasi  manitol  menjadi  asam  sehingga merubah  warna  indicator  phenol  red  dari  merah menjadi  kuning.  Sedangkan  pada  sampel  ini  tidak ada didapatkan pertumbuhan bakteri.
Dari  semua  koloni  yang  tumbuh  pada berbagai  media  umum  dan  khusus,  diambil  isolat tunggal  dari  media  Blood  Agar,  EMBA  dan  MCA. Selanjutnya  masing-masing  koloni    yang  berbeda karakterstiknya ditanam kembali pada media tanam yang  sesuai  untuk  mendapatkan  koloni  murni dan tunggal,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C selama  24  jam.  Hasil  pertumbuhan  koloni  bakteri dilanjutkan dengan mengidentifikasi koloni bakteri tunggal menggunakan Vitek Compact 2.
Identifikasi  Koloni  Bakteri  menggunakan  Vitek Compact 2 Identifikasi  koloni  bakteri  hanya  dapat dilakukan  dengan  memasukkan  koloni  tunggal  ke dalam mesin vitek compact 2, agar hasil identifikasi dapat dibaca dengan baik. Terdapat 6 koloni tunggal bakteri  yang  siap  di  identifikasi.  Koloni  tunggal bakteri  diisolasi  dengan  cutton  bud  steril  dan disuspensikan ke dalam larutan NaCl fisiologis dan diukur  kekeruhannya  sampai  0,54  McF.  Kemudian
bakteri  yang  telah  disuspensikan  dimasukkan  ke dalam  ruang  pengambilan  data  dan  dilanjutkan pada  ruang  inkubasi.  Hasil  identifikasi  didapatkan
setelah beberapa jam dan akan muncul pada layar computer Vitek Compact 2.
Tabel 1. Hasil Identifikasi bakteri menggunakan Viteks Compact 2 No. Kode Sampel Nama Bakteri Waktu Analisis Tingkat Kepercayaan 1 27 Escherichia coli 3,85 jam 99% 2 28 Klebsiella pneumonia 4,82 jam 97% 3 29 Escherichia coli 4,80 jam 91% 4 30 Escherichia coli 4,32 jam 99% 5 31 Aeromonas sobria 5,82 jam 90% 6 33 Aeromonas sobria 5,82 jam 96%
Pada Tabel 1. menunjukkan kode sampel 27 merupakan  bakteri Escherichia  coli. Dianalisis selama 3,85 jam dengan tingkat kepercayaan 99%. Pada  kode  28  didapatkan  hasil  identifikasi  berupa bakteri Klebsiella pneumonia. Dianalisis selama 4,82 jam dengan tingkat kepercayaan 97%. Pada kode 29 didapatkan  hasil  identifikasi  berupa  bakteri Escherichia coli. Dianalisis selama 4,80 jam dengan tingkat  kepercayaan  91%.  Pada  kode  sampel  30 didapatkan  hasil  identifikasi  berupa  bakteri Escherichia coli. Dianalisis selama 4,32 jam dengan
tingkat  kepercayaan  99%.  Pada  kode  sampel  31 didapatkan  hasil  identifikasi  berupa  bakteri Aeromonas  sobria. Dianalisis  selama  5,82  jam dengan  tingkat  kepercayaan  90%.  Dan  pada  kode sampel  33  didapatkan  hasil  identifikasi  berupa bakteri Aeromonas  sobria. Dianalisis  selama  5,82 jam dengan tingkat kepercayaan 96%.
Berdasarkan  hasil  analisis  biokimia  yang dilakukan  terhadap  seluruh  isolate  bakteri diperoleh  data  terkait  aktivitas  biokimia  bakteri tersebut.
Tabel 2. Hasil analisis biokimia bakteri No Aktivitas Biokimia Jenis Bakteri Escherichia coli (27) Klebsiella pneumonia (28) Escherichia coli (29) Escherichia coli (30) Aeromonas sobria (31) Aeromonas sobria (33) 1 APPA - - - - + + 2 AD0 - + + - - - 3 PyrA - + - - + + 4 IARL - - - - - - 5 dCEL - + - - - - 6 BGAL + + + + + - 7 H2S - - - - - + 8 BNAG - + - - + + 9 AGLTp - - - - + - 10 dGLU + + + + + + 11 GGT - + - - - - 12 OFF + + + + + - 13 BGLU - + + - + - 14 dMAL + + + + + + 15 dMAN + + + + + - 16 dMNE + + + + + + 17 BXYL - + - - - - 18 BAlap - - - - - - 19 ProA - + + - + - 20 LIP - - - - - - 21 PLE - + - - - - 22 TyrA + + + + + + 23 URE - + - - + -
24 dSOR + + + + - - 25 SAC + + + + + - 26 dTAG - + - - - - 27 dTRE + + + + + + 28 CIT - + - - - - 29 MNT - + - - + - 30 5KG - - - - - - 31 ILATk - + + - + + 32 AGLU - - - - + + 33 SUCT - + + + + - 34 NAGA - - - - + - 35 AGAL + + + + - - 36 PHOS - + - - - - 37 GlyA - - - - - - 38 ODC + - + + - - 39 LDC + + + + - - 40 IHISa - - - - - - 41 CMT + - + + + + 42 BGUR + - + + - - 43 O129R - + + + + + 44 GGAA - - - - + - 45 IMLTa - - - - + - 46 ELLM - - - - + - 47 ILATa - - - - - -
Keterangan:
APPA = Ala-Phe-Pro-Arylamidase; AD0 = Adonitol; PyrA = L-Pyrrolydonyl-Arylamidase; IARL = L-Arabitol; dCEL = D-Cellobiose; BGAL = Beta-Galactosidase; H2S = H2S Production; BNAG = Beta-N-Acetyl-Glucosaminidase; AGLTp = Glutamyl Arylamidase Pna; dGLU = D- Glucose; GGT = Gamma-Glutamyl-Transferase; OFF = Fermentation/Glucose; BGLU = Beta Glucosidase; dMAL = D-Maltose; dMAN = D- Mannitol; dMNE = D-Mannose; BXYL = Beta-Xylosidase; BAlap = Beta-Alanine-Arylamidase Pna; ProA = L-Proline Arylamidase; LIP = Lipase; PLE = Palatinose; TyrA = Tyrosine-Arylamidase; URE = Urease; dSOR = D-Sorbitol; SAC = Saccharose/Sucrose; dTAG = D- Tagatose; dTRE = D- Trehalose; CIT = Citrate (Sodium); MNT = Malonate; 5KG = 5-Keto-D-Gluconate; ILATk = L-Lactate-alkalinisation; AGLU = Alpha-Glucosidase; SUCT = Succinate alkalinization; NAGA = Beta-N-Acetyl-Galactosaminidase; AGAL = Alpha-Galactosidase; PHOS = Phosphatase; GLyA = Glycine Arylamidase; ODC = Ornithine Decarboxylase; LDC = Lysine Decarbocylase; IHISa = L-Histidine assimilation;  CMT  =  Coumarate;  BGUR  =  Beta-Glucoronidase;  O129R  =  O/129  Resistance  (comp.Vibrio.);  GGAA  =  Glu-Gly-Arg- Arylamidase; IMLTa = L-Malate assimilation; ELLM = Ellman; ILATa = L-Lactate assimiliation.
Uji  biokimia  merupakan  salah  satu  cara dalam  melakukan  identifikasi  untuk  menentukan genus  atau  spesies  bakteri  tertentu.  Pada prinsipnya, uji biokimia dilakukan untuk mengetahui
kemampuan bakteri dalam mereaksikan senyawa kimia sehingga menghasilkan senyawa kimia yang lain yang dikaitkan dengan sifat bakteri  itu  sendiri.  Umumnya,  untuk  mengetahui adanya  reaksi  tertentu  diperlukan  suatu  senyawa indikator  atau  reagen  yang  berbeda-beda tergantung bahan kimia yang ditambahkan.
Uji  biokimia  dilakukan  untuk  mengetahui sifat-sifat  fisiologis  koloni  bakteri  hasil  isolasi. Biokimia  bakteri  berkaitan  dengan  proses metabolisme  sel  bakteri  (Gobbetti,  2005). Identifikasi  bakteri  tidak  dapat  dilakukan  dengan mengetahui  sifat  mofologinya  saja,  namun  harus mengetahui sifat fisiologis bakteri juga (Liempepas, 2019).  Sifat  fisiologis  bakteri  sangat  penting diketahui  apabila  melakukan  identifikasi  bakteri karena  sifat  morfologis  bakteri  dapat  tampak
serupa  bahkan  tidak  dikenal  sehingga  dengan melakukan  uji  biokimia  terhadap  koloni  bakteri dapat  mengetahui  sifat  dan  menentukan  spesies bakteri.
Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian didapatkan  6 spesies  bakteri  dari  air  sungai  Batang  Gadis, Mandailing  Natal,  Sumatera  Utara  yaitu  S27 ( Acinetobacter  baumannii strain  DSM  30007),  S28 ( Aeromonas veronii bv. veronii strain ATCC 35624), S29  ( Escherichia  fergusonii ATCC  35469  16S),  S30 ( Klebsiella quasipneumoniae subsp. similipneumoniae strain 07A044),  S31 ( Aeromonas veronii  bv.  veronii strain  ATCC  35624),  dan  S33 ( Bacillus paramycoides strain MCCC 1A04098).

## Daftar Pustaka
Dangi, A.K., Sharma, B., Hill, R.T. and Shukla, P., 2019. Bioremediation through microbes: systems biology and metabolic engineering
approach. Critical reviews in biotechnology, 39(1), pp.79-98.
Esdaile,  L.J.  and  Chalker,  J.M.,  2018.  The  Mercury Problem in Artisanal and Small‐Scale Gold Mining.  Chemistry – A  European  Journal, 24(27), pp.6905-6916.
Gobbetti, M., De Angelis, M., Corsetti, A., & Di Cagno,
R.  (2005). Biochemistry  and  physiology of sourdough  lactic  acid  bacteria.  Trends  in Food Science & Technology, 16(1-3), 57-69.
Hadi, M.C., 2013. Bahaya merkuri di lingkungan kita. Skala Husada, 10(2), pp.175-183.
Hagstrom A. Pommier T. Rohwer F. Simu K. Stolte W. Svensson  D,  Zweifel  UI.  2002. Use  of  16S ribosomal  DNA  for  delineation  of  marine bacterioplankton  species.  Appl  Environ Microbiol . 68 (7): 3628-3633 Handelsman,  J.  2004. Metagenomics:  Aplication  of Genomics  to  Uncultured  Microorganisms. Microbiology and moleculer Biology , 68 (4),
hlm. 669-685 Iftita,  W.D.,  Shovitri,  M.  and  Zulaika,  E.,  2014. Pengaruh  HgCl2  terhadap  Viabilitas Bacillus S1 dan Potensi Enzim Pendegradasi  Senyawa  Organik.  Jurnal Sains dan Seni ITS, 3(1), pp.E26-E29. Liempepas,  A.,  Lolo,  W.  A.,  &  Yamlean,  P.  V.  2019. Isolasi  Dan  Uji  Antibakteri  Dari  Isolat
Bakteri  Yang  Berasosiasi  Dengan  Spons Callyspongia  aerizusa  Serta  Identifikasi Secara  Biokimia.  Pharmacon,  8(2),  380- 387.
Marrugo-Negrete,  J.,  Enamorado-Montes,  G.,
Durango-Hernández, J., Pinedo-Hernández,
J.  and  Díez,  S.,  2017.  Removal  of  mercury
from gold mine effluents using Limnocharis flava in constructed wetlands. Chemosphere, 167, pp.188-192. Nascimento,  A.M.A.  dan  Souza,  E.C.  2003.  Operon mer:  bacterial  resistance  to  mercury  and potential for bioremediation of contaminated  environments.  Genetics  and Molecular Research, 2: 92-101.
Pepi, M, Gaggi, C, Bernardini, E, Focardi, S, Lobianco, A,  Ruta,  M,  Nicolardi,  V,  Volterrani,  M,
Gasperini,  S,  Trinchera,  G,  Renzi,  P, Gabellini,  M,  Focardi,  S,  E.  2011. International Biodeterioration & Biodegradation. 65(1):85-91 Rojas, L.A., Yanez, C., Gonzalez, M., Lobos, S., Smalla, K. dan Seeger, M. 2011. Characterization of the  metabolically  modified  heavy  metal- resistant Cupriavidus metallidurans strains MSR33 generated for mercury bioremediation. PLoS ONE, 6: 1-10. Sakinah,  A.L.  and  Zulaika,  E.,  2014.  Resistensi Azotobacter terhadap HgCl2 yang Berpotensi  Menghasilkan  Enzim  Merkuri Reduktase. Jurnal Sains dan Seni ITS, 3(2), pp.E84-E86.
Suryani,  Y.,  2011.  Bioremediasi  Limbah  Merkuri dengan  Menggunakan  Mikroba  Pada Lingkungan  yang  Tercemar.  Jurnal  Istek, 5(1-2).
Zeyaullah, Md., Islam, B. dan Ali, A. 2010. Isolation, identification,  and  PCR  amplification  of merA  gene  from  highly  mercury  polluted Yamuna  River.  African  Journal  of Biotechnology, 9: 3510-3515.