Modifikasi Media MS Dengan Penambahan Air Kelapa Untuk Subkultur I Anggrek Cymbidium
Joe  Pratama, Nilahayati
Email : Joeapra@gmail . com

## ABSTRAK
Anggrek Cyimbidium adalah  jenis anggrek yang sangat popular di Indonesia dengan ciri khas  bunganya  yang  menyerupai  perahu.  Optimalisasi  budidaya  anggrek  dengan  teknik kultur jaringan dapat dilakukan dengan metode modifikasi media MS. Penggunaan jenis zat  pengatur  tumbuh  alami  dengan  konsentrasi  yang  tepat  merupakan  salah  satu  kunci keberhasilan  dalam  kultur  jaringan  serta  dapat  menekan  biaya  untuk  kultur  jaringan anggrek.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  modifikasi  media  MS dengan penambahan air kelapa terhadap subkultur  anggrek Cymbidium secara in vitro. Penelitian  Menggunakan  Rancangan  acak  lengkap  faktorial  dengan  6  ulangan  yaitu modifikasi media MS; media MS penuh (M1), media ½ MS (M2), dan media ¼ MS (M3) dan  konsentrasi air kelapa, yaitu 0 ml air kelapa (K1), 100 ml air kelapa (K2), 200 ml air kelapa (K3), dan 300 ml air kelapa (K4). Variable pengamatan meliputi waktu persentase tumbuh tunas, jumlah tunas, jumlah akar, dan tinggi tunas. Hasil penelitian menunjukkan bahwa  terjadi  interaksi  antara  perlakuan  modifikasi  media  MS  dengan  penambahan  air kelapa untuk subkutur I anggrek Cymbidium terhadap peubah persentase tumbuh tunas di 2-8 MST, jumlah tunas di 4, 6, dan 8 MST, jumlah akar di 2-8 MST, dan tinggi tunas di 8 MST. Namun tidak berbeda nyata terhadap peubah jumlah tunas di 2 MST.
Kata kunci : modifikasi MS, anggrek Cymbidium, in vitro, air kelapa.

## ABSTRACT
Cyimbidium  orchids  are  a  type  of  orchid  that  is  very  popular  in  Indonesia  with  the characteristic flower that resembles a boat. Optimization of orchid cultivation with tissue culture  techniques  can  be  carried  out  using  MS  media  modification  method.    Using natural  growth  regulators  with  the  right  concentration  is  one  of  the  keys  to  success  in tissue culture and can reduce costs for orchid tissue culture. This study aims to determine the effect of MS media modification by adding coconut water to the Cymbidium orchid subculture  in  vitro.  Research  using  factorial  complete  randomized  design  with  6 replications.  The  first  factor  is  the  modification  level  of  MS  media,  namely:  full  MS medium  (M1),  medium  ½  MS  (M2),  and  media  ¼  MS  (M3).  The  second  factor  is  the level of concentration of coconut water, which is namely as  0 ml of coconut water (K1), 100 ml of coconut water (K2),
200 ml of coconut water (K3), and 300 ml of coconut water (K4). Observation variables include time of shoot growth, number of shoots, number of roots, and shoot height. The results showed that there was an  interaction between MS media modification treatment with  the  addition  of  coconut  water  for  subculture  I  of  Cymbidium  orchid  to  the percentage  of shoot  growth  at  2-8  MST, the  number  of  shoots  at  4,  6, and  8  MST,  the number  of  roots  in  2-8  MST,  and  shoot  height  at  8  MST.  However,  it  was  not significantly different from the number of shoots at 2 MST.
Keywords: MS modification, Cymbidium orchids, in vitro, coconut water.

## Pendahuluan
Tanaman  anggrek  ( Orchidaceae ) termasuk  tanaman  hias  yang  mempuyai nilai keindahan (artistik) pada bunganya. Tanaman anggrek memiliki nilai ekonomis  yang  tinggi  karena  bentuknya unik  dan  warnanya  menarik,  sehingga membuat tanaman ini disebut “ Queen of flower ”.  Daya  tahannya  lebih  lama  dari pada  bunga  potong  komersial  lainnya seperti  mawar,  anyelir,  dan gladiol (Widiastoety et al., 2010).
Budidaya tanaman anggrek dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu dengan cara  konvensional  dan  kultur  jaringan. Kultur  jaringan  tanaman  merupakan teknik  menumbuh  kembangkan  bagian tanaman,  baik    berupa  sel,    jaringan, atau  organ  dalam kondisi aseptik secara in vitro. Penyediaan bibit  yang bermutu, massal  dan  seragam  maka  perbanyakan anggrek, mutlak dilakukan melalui kultur jaringan (Yusnita, 2003).
Keberhasilan  kultur  jaringan tanaman  dalam  perbanyakan  tanaman tergantung  pada  media  yang  digunakan. Media Murashige and Skoog (MS) dicirikan  dengan  kandungan  garam- garam anorganik  yang tinggi. Media MS
merupakan media  yang  sangat    luas pemakaiannya karena mengandung unsur hara  makro  dan  mikro  yang    lengkap sehingga dapat digunakan untuk berbagai spesies tanaman (Mardin,   2002). Media MS    sering  digunakan  karena  cukup memenuhi  unsur hara makro, mikro dan vitamin  untuk  pertumbuhan  tanaman (Marlina, 2004).  Wetherell  (1982)
menyatakan bahwa untuk tujuan tertentu komposisi  media  dapat  dimodifikasi lebih lanjut. Air  kelapa merupakan  senyawa organik
yang mengandung
1,3 diphenilurea,  zeatin,  zeatin  gluoksida, zeatin  ribosida,  kadar  K  dan  Cl  tinggi, sukrosa,  fruktosa,  glukosa,  protein, karbohidrat,  mineral,  vitamin,  sedikit lemak,    Ca    dan    P    (Yunita,    2011). Zeatin,  zeatin  gluoksida,  zeatin  ribosida
merupakan  ZPT    yang    dapat meningkatkan    pembelahan  sel  dan perpanjangan sel.  Asam amino,  gula dan vitamin dapat meningkatkan metabolisme sel  dan  berperan  sebagai  energi,  enzim dan co-faktor.
Perlakuan  air  kelapa  secara tunggal pada  konsentrasi 250 ml/l mampu menghasilkan pembentukan daun dan akar lebih cepat  pada kultur in vitro anggrek  ( Phalaenopsis    amabilis BL.) (Bey et   al ., 2006).
Tujuan  akhir  dari  penelitian  ini adalah  untuk  melihat  pengaruh  dari modifikasi  media  MS  dan  beberapa komposisi  penambahan  air  kelapa terhadap  pertumbuhan  tanaman  anggrek Cymbidium secara in vitro.
Bahan Dan Metode
Tempat dan Waktu  Penelitian.
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium  Kultur  Jaringan  Fakultas Pertanian  Universitas  Malikussaleh, AcehUtara.  Penelitian  ini  berlangsung pada bulan Maret- Mei 2018.
Alat dan Bahan Penelitian.
Alat  yang    digunakan  dalam penelitian    ini adalah  timbangan analitik,    pipet    ukur,    gelas    ukur,  labu takar, beaker   glass ,   erlenmeyer,   pH meter, autoclave ,  oven,  panci, hot  plate , spatula, magnetic  stirrer ,  kompor  dan tabung gas, botol      kultur,  rak  kultur, pengaduk, kulkas, Laminar      Air Flow   ( LAF) , pisau scalpel , petri  dish , bunsen,    kertas    buram,  kertas  label, tissue , karet gelang, hand sprayer , plastic  wrap 0,03  mm,  pinset,  gunting, kamera dan alat tulis.
Bahan  yang  digunakan  dalam pelaksanaan  penelitian  ini  adalah  planlet dari  tanaman  anggrek  yang  berumur  12 bulan, media dasar Murashige dan Skoog (MS),  air  kelapa, aquadest ,  gula  pasir, alkohol  70%  dan  96%, aquadest  steril ,
deterjen, dan agar-agar.
Metode Penelitian. Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  menggunakan  rancangan lingkungan  berupa  Rancangan  Acak Lengkap (RAL) faktorial. Faktor pertama adalah modifikasi media MS, terdiri dari 3 taraf M1 (MS penuh), M2 (½ MS) dan M3 (¼  MS).  Faktor  kedua  adalah penambahan  konsentrasi    air    kelapa, terdiri  dari  4  taraf  K1  (0  ml),  K2  (100 ml),  K3  (200  ml),  K4  (300  ml).  Oleh karena  itu  diperoleh  12    kombinasi perlakuan  dan    masing-masing  diulang sebanyak  6  kali,  sehingga  diperoleh 72 satuan percobaan.
Pembuatan media.
Pembuatan media ms ditambahkan air kelapa dengan konsentrasi  yang  berbeda-beda,  yakni 0 ml/l (tanpa  air  kelapa),  100  ml/l,  200 ml/l,  300 ml/l. Media dibagi menjadi 3 taraf,  untuk  pembuatan  media  masing- masing  larutan stok dipipet  berdasarkan volume  yang  diperlukan  untuk  media MS  penuh  dan  modifikasi  (MS½  dan MS  ¼).  Larutan  stok  kemudian dituangkan  kedalam  gelas  ukur,  dan ditambah  air  kelapa  sesuai  perlakuan dan  ditera  dengan  air    steril  sampai  1 liter,  selanjutnya  larutan dituangkan ke dalam  wadah panci  lalu  ditambahkan gula  sebanyak  30  g/L      dan  diaduk sampai    larut.    Larutan    dikondisikan pada  pH  5,7-5,8  dengan  menambahkan NaOH untuk  menaikkan  pH  dan  HCL untuk  menurunkan  pH.    Larutan ditambahkan  agar  agar  6,5  g/l,  diaduk dan dimasak di atas kompor  sampai  mendidih.  Larutan media  dimasukkan  ke  dalam  botol kultur  kira-kira 20 ml/botol.  Botol kultur  ditutup  rapat  dengan  penutup plastik.      Botol    yang      sudah    berisi media  disterilisasi  dalam autoclave selama  12  menit  dengan  suhu  121°C. Botol  yang  sudah  steril    diletakkan
pada    rak    kultur    di    ruang  inkubasi, dengan suhu ruang diatur 24-26°C.

## Hasil Dan Pembahasan
Hasil
Pertumbuhan  subkultur  tanaman anggrek  menunjukkan  hasil  yang baik sejak awal penanaman sampai 8 minggu setelah tanam (MST). Terjadi interaksi terhadap perlakuan modifikasi media MS dan  penambahan  air    kelapa    pada semua    peubah  yang  diamati.  Selama penelitian  tidak  ada  eksplan  yang terkontaminasi pada tiap botol. Rekapitulasi hasil analisis ragam terhadap  beberapa  peubah  yang  diamati akibat  modifikasi  media  MS  dan penambahan air kelapa untuk subkultur I tanaman  anggrek Cymbidium disajikan pada Tabel 1.
Tabel  1.  Rekapitulasi  hasil  analisis  ragam  pada  peubah persentase  tumbuh  tunas,  jumlah  tunas, jumlah akar dan tingggi tunas tanaman subkultur I anggrek Cymbidium .
Ket  :  *  =  berbeda  nyata,  **  =  berbeda  sangat nyata, tn  = tidak berbeda  nyata,  KK = Koefisien Keragaman, M = Media MS, K = Konsentrasi air kelapa
Peubah Faktor M K M x K KK (%) Persentase  Tumbuh Tunas 2 MST ** ** * 8,53 4 MST ** ** ** 5,68 6 MST ** ** ** 5,04 8 MST ** ** ** 3,32 Jumlah Tunas 2 MST * ** tn 1,72 4 MST * ** ** 1,58 6 MST * ** ** 2,58 8 MST ** ** ** 3,54 Jumlah Akar 2 MST * * ** 1,54 4 MST tn ** ** 0,86 6 MST tn ** ** 0,97 8 MST ** ** ** 1,29 Tinggi Tanaman 8 MST ** ** ** 1,79
Persentase Tumbuh Tunas .
Hasil  analisis  ragam  terhadap persentase  tumbuh  tunas  menunjukkan adanya  pengaruh  sangat  nyata  akibat modifikasi media MS pada umur 2, 4, 6 dan  8  MST.  Pada  pemberian  air  kelapa juga  menunjukkan  adanya  pengaruh sangat nyata terhadap persentase tumbuh tunas  pada  umur  2,  4,  6  dan  8  MST. Terdapat  interaksi  yang  sangata  nyata antara  modifikasi  media  MS  dan pemberian  air  kelapa  pada  umur  2,  4,  6 dan  8  MST  (Tabel  2).  Data  hasil  uji lanjut  pada  peubah  persentase  tumbuh tunas dengan menggunakan  DMRT  taraf  5%disajikan pada Tabel 2.
Tabel  2.Persentase  tumbuh  tunas  akibat    I nteraksi  antara  perlakuan  modifikasi media  MS    dan      penambahan  air kelapa   terhadap sub kultur I tanaman anggrek Cymbidium . Perlakuan Persentase  Tumbuh Tunas (%) 2 MST 4 MST 6 MST 8 MST M1K1 25.00 (1.11) bcd 79.17 (1.32) ab 83.33 (1.34) ab 95.83 (1.39) a M1K2 20.83 (1.09) cd 62.50 (1.27) b 75.00 (1.32) b 75.00 (1.32) b M1K3 0.00 (1.00) d 0.00 (1.00) d 0.00 (1.00) d 0.00 (1.00) e M1K4 8.03 (1.03) d 62.50 (1.27)b 75.00 (1.32) b 75.00 (1.32) b
M2K1 45.83 (1.20) abc 100.00 (1.41) a 100.00 (1.41) a 100.00 (1.4)1 a
M2K2 66.67 (1.28)
a 100.00 (1.41) a 100.00 (1.41) a 100.00 (1.41) a M2K3 0.00 (1.00) d 4.17 (1.01) d 12.50 (1.05) d 20.83 (1.09) d M2K4 50.00 (1.22) ab 100.00 (1.41) a 100.00 (1.41) a 100.00 (1.41) a M3K1 54.17 (1.23) ab 100.00 (1.41) a 100.00 (1.41) a 100.00 (1.41) a M3K2 25.00 (1.11) bcd 83.33 (1.35) ab 100.00 (1.41) a 100.00 (1.41) a M3K3 0.00 (1.00) d 33.33 (1.15) c 41.66 (1.18) c 41.66 (1.18) c M3K4 12.50 (1.05) d 33.33 (1.15) c 70.83 (1.30) b 70.83 (1.30) b
Ket  :  Angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama pada  kolom  yang  sama  tidak  berbeda  nyata berdasarkan  uj i DMRT  pada  0,05.  Angka  dalam kurung  adalah  data  hasil  transformasi  =  x(x0,01)  dan =SQRT(x+1)
Tabel  2 menunjukkan bahwa persentase tumbuh    tunas    tertinggi    terletak  pada kombinasi  perlakuan  M2K2  (media  ½ MS  +  100  ml  air  kelapa)  yaitu  sebesar 100%  pada  umur  8  MST.  Sedangkan persentase  tumbuh  tunas  terendah
terletak  pada kombinasi
perlakuan  M1K3  (media  MS  penuh    + 200    ml    air    kelapa)  yaitu    sebesar 0.00% pada umur 8 MST.

## 3.1.2.  Jumlah Tunas.
Hasil  analisis  ragam  terhadap jumlah  menunjukkan  adanya  pengaruh sangat  nyata  akibat  modifikasi  media MS  pada  umur 2, 4, 6 dan 8 MST. Pada pemberian  air  kelapa  juga  menunjukkan adanya  pengaruh  sangat  nyata  terhadap jumlah  tunas  pada  umur  2,  4,  6  dan  8 MST.
Terdapat    interaksi  yang    sangat nyata antara  modifikasi  media  MS  dan pemberian air  kelapa  pada  umur  4,  6, dan    8    MST  terhadap    jumlah  tunas kecuali  pada  umur    2  MST  (Tabel  2). Data hasil uji lanjut  pada peubah jumlah tunas dengan menggunakan DMRT taraf 5% disajikan pada Tabel 4.
Tabel  4   menunjukkan  bahwa   jumlah tunas tertinggi terletak  pada  kombinasi perlakuan  M3K1  (media  ¼  MS  +  0 ml  air  kelapa)  yaitu  sebanyak  4.79 tunas  pada  umur  8  MST.  Sedangkan jumlah  tunas  terendah  terletak  pada kombinasi perlakuan M1K3 (media MS penuh  +  200  ml  air  kelapa)  yaitu sebanyak 0.00 tunas pada umur 8 MST.
Tabel  3.Jumlah  tunas  akibat  interaksi  antara perlakuan  modifikasi  media  MS  dan penambahan air kelapa terhadap subkultur I tanaman anggrek Cymbidium . Perlakuan Jumlah Tunas (tunas) 2 MST 4 MST 6 MST 8 MST M1K1 1.66 (1.03) abc 2.08 (1.08) ab 3.62 (1.13) a 4.50 (1.15) a M1K2 0.83 (1.02) abc 1.08 (1.04) d 1.24 (1.05) cd 1.60 (1.06) cd M1K3 0.00 (1.00) d 0.00 (1.00) e 0.00 (1.00) f  0.00 (1.00) e M1K4 0.33 (1.01) cd 1.08 (1.04) d 1.38 (1.05) cd 1.68 (1.06) cd M2K1 1.12 (1.03) abc 1.66 (1.06) bc 2.16 (1.08) bc 3.41 (1.12) ab M2K2 1.20 (1.04) ab 1.54 (1.06) bcd 2.58 (1.09) b 3.66 (1.13) ab M2K3 0.16 (1.00) d 0.16 (1.00) e 0.50 (1.02) ef 0.83 (1.03) de M2K4 1.80 (1.04) a 2.00 (1.07) ab 2.83 (1.10) ab 4.54 (1.15) ab M3K1 1.70 (1.04) ab 2.50 (1.09) a 3.75 (1.13) a 4.79 (1.16) a
M3K2 1.04 (1.02) bcd 1.19 (1.04) cd 2.00 (1.07) bcd 2.91 (1.10) bc M3K3 0.66 (1.00) d 1.00   (1.04) d 1.41 (1.05) cd 1.91 (1.07) cd M3K4 1.00 (1.02) bcd 1.00 (1.04) d 1.08 (1.04) de 1.22 (1.04) d
Ket  :  Angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang sama  pada  kolom  yang  sama  tidak  berbeda nyata  berdasarkan  uji DMRT pada 0,05. Angka dalam  kurung  adalah  data  hasil  transformasi  = Log(x+10).

## Jumlah Akar.
Hasil  analisis  ragam  terhadap jumlah  akar  menunjukkan  adanya pengaruh  sangat    nyata    akibat modifikasi    media    MS  pada  umur  pada umur 2 dan 8 MST, namun tidak berbeda nyata  pada  umur  4  dan  6  MST.  Pada pemberian air kelapa menunjukkan adanya  pengaruh sangat
nyata terhadap jumlah akar pada umur 2, 4, 6 dan 8 MST MST. Terdapat interaksi antara  modifikasi  media    MS    dan pemberian    air    kelapa    pada  umur
tanaman  2,  4,  6  dan  8  MST  terhadap jumlah  akar  untuk  subkultur  anggrek secara in vitro (Tabel 2).
Data  hasil  uji  lanjut  pada peubah jumlah akar dengan menggunakan DMRT taraf 5% disajikan  pada  Tabel  4.  Tabel  4 menunjukkan    bahwa    jumlah  akar tertinggi  terletak  pada  kombinasi perlakuan  M2K2  (media  ½  MS  +  100 ml  air  kelapa)  yaitu  sebanyak  2.55 helai  pada  umur  8  MST.  Sedangkan jumlah  akar  terendah  terletak  pada kombinasi  perlakuan  M2K3  (media  ½ MS + 200 ml air kelapa) yaitu sebanyak 0.87 helai pada umur 8 MST.
Tabel  4.  Jumlah  akar  akibat  interaksi  antara perlakuan  modifikasi  media  MS  dan penambahan air kelapa terhadap    sub kultur I tanaman anggrek Cymbidium .
Perlakuan Jumlah Akar (helai) 2 MST 4 MST 6 MST 8 MST M1K1 0.66 (1.02) ab 1.17 (1.04) a 1.76 (1.07) ab 2.26 (1.08) ab M1K2 0.16 (1.01) bc 1.00 (1.04) ab 1.04 (1.04) de 1.04 (1.04) de M1K3 0.66 (1.02) ab 1.00 (1.04) ab 1.45 (1.05) bc 1.45 (1.05) cd M1K4 0.33 (1.01) bc 1.00 (1.04) ab 1.18 (1.04) cd 1.18 (1.04) de M2K1 1.00 (1.04) a 1.04 (1.04) ab 1.20 (1.04) cd 1.86 (1.07) bc M2K2 1.00 (1.04) a 1.13 (1.04) a 1.41 (1.05) c 2.55 (1.09) a M2K3 0.00 (1.00) c 0.33 (1.01) c 0.83 (1.03) e 0.87 (1.03) e M2K4 1.00 (1.04) a 1.09 (1.05) a 1.90 (1.07) a 2.47 (1.09) a M3K1 1.00 (1.04) a 1.05 (1.04) a 1.47 (1.05) bc 2.15 (1.08) ab M3K2 0.66 (1.02) ab 1.00 (1.04) ab 1.34 (1.05) cd 1.48 (1.05) cd M3K3 0.66 (1.02) ab 1.00 (1.04) ab 1.16(1.040) cd 1.16 (1.04) de M3K4 0.66 (1.02) ab 0.83 (1.04) ab 1.05 (1.04) de 1.25 (1.05) de Ket  :  Angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang sama  pada  kolom yang  sama  tidak  berbeda  nyata  berdasarkan  uji  DMRT  pada 0,05.  Angka  dalam  kurung  adalah  data  hasil  transformasi  = Log(x+10).

## Tinggi  Tunas.
Hasil  analisis  ragam  terhadap jumlah  menunjukkan  adanya  pengaruh sangat nyata akibat modifikasi  media MS pada umur 2, 4, 6 dan 8 MST. Pada pemberian  air  kelapa  menunjukkan adanya  pengaruh  sangat  nyata terhadap tinggi  tunas  pada  umur  2,  4,  6  dan  8 MST.
Terdapat interaksi antara modifikasi  media    MS    dan    pemberian air  kelapa  pada umur 2-8 MST
terhadap  tinggi  tunas  subkultur anggrek  secara in  vitro (Tabel  2).  Data hasil uji  lanjut  pada  peubah  tinggi tunas dengan  menggunakan DMRT taraf 5% disajikan pada Tabel 5.
Tabel  5  menunjukkan  bahwa tinggi  tunas  tertinggi  terletak  pada kombinasi  perlakuan  M2K4  (media  ½ MS  + 300 ml air kelapa)  yaitu  sebesar
2.10 cm  pada umur 8  MST.
Sedangkan tinggi tunas terendah terletak pada  kombinasi  perlakuan  M1K3 (media  MS  penuh +  200  ml  air  kelapa) yaitu sebesar 0.00 cm umur 8 MST.
Tabel  5.  Tinggi  tunas  akibat  interaksi  antara perlakuan  modifikasi  media  MS  dan penambahan air kelapa terhadap   sub kultur I tanaman anggrek Cymbidium . Perlakuan Tinggi Tunas (Cm) M1K1 1.75 (1.06) ab M1K2 0.76 (1.03) defg M1K3 0.00 (1.00) h M1K4 0.37 (1.01) fgh M2K1 1.23 (1.05) bcd M2K2 1.00 (1.04) cde M2K3 0.50 (1.02) efgh M2K4 2.10 (1.08) a M3K1 1.51 (1.06) abc M3K2 0.97 (1.03) cdef M3K3 0.36 (1.01) gh M3K4 0.56 (1.02) efgh
Ket  :  Angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang sama  pada  kolom  yang  sama  tidak  berbeda nyata  berdasarkan  uji  DMRT  pada  0,05.  Angka
dalam  kurung  adalah  data  hasil  transformasi  = Log(x+10).

## Pembahasan.
Hasil  pengamatan  menunjukkan bahwa  interaksi  perlakuan  modifikasi media  MS  dan    pemberian  air  kelapa memberikan  pengaruh  nyata  terhadap peubah  persentase  tumbuh      tunas, jumlah  tunas,  jumlah  akar  dan tinggi  tunas  tanaman  subkultur  anggrek secara in  vitro dari  umur  tanaman  2-8 MST.
Namun perlakuan
modifikasi media MS dan pemberian air kelapa tidak memberikan  pengaruh  nyata  terhadap peubah  jumlah  tunas tanaman  anggrek secara in vitro pada umur 2 MST.
Perlakuan modifikasi  media  MS
dengan penambahan air    kelapa berpengaruh  nyata  terhadap  persentase tumbuh tunas tanaman subkultur anggrek cymbidium secara in  vitro pada  masing- masing  faktor  kombinasi  pada  umur tanaman  2-8  MST.  Secara  rataan persentase  tumbuh  tunas  tertinggi terdapat pada perlakuan M2K2 (media ½ MS + air kelapa 100 ml), sedangkan yang terendah  terdapat  pada  perlakuan  M1K3 (media MS penuh + air kelapa 200 ml).
Semua perlakuan  telah  mampu mempengaruhi  persentase  tumbuh  tunas pada eksplan subkultur anggrek
Cymbidium , meskipun memiliki persentase  tumbuh  tunas  yang  berbeda- beda.  Perlakuan  M2K1  menunjukkan persentase  tumbuh  tunas  paling  tinggi. Perlakuan ini membuktikan bahwa dalam menumbuhkan  tunas  tidak  memerlukan konsentrasi  media  MS  yang  penuh  serta konsentrasi    air kelapa yang tinggi pada eksplan  subkultur  anggrek Cymbidium . Hal  ini  diduga  karena  media  ½  MS masih  sangat  baik  dalam  menumbuhkan tunas subkultur tanaman anggrek
Cymbidium meski  dalam  komposisi yang  dikurangi. Selain itu penambahan air kelapa dengan
konsentrasi  yang  rendah  lebih  efektif dalam persentase tumbuh tunas  tanaman subkultur  anggrek Cymbidium karena penambahan  air  kelapa  pada  konsentrasi ini  menyebabkan  pembelahan  dan pembentangan  sel  berlangsung  lebih optimal.
Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Annatje et  al., (2016)  bahwa  perlakuan media  ½  MS  menyebabkan  rata-rata persentase eksplan bertunas yang tertinggi  dan  berbeda  dengan  perlakuan lain.  Matatula  (2003)  menambahkan bahwa  penambahan  air  kelapa  dalam media tanam    dengan kadar yang rendah justru akan membantu proses
pertumbuhan  vegetatif  tanaman  karena kandungan N   serta  hormon  lain  yang dibutuhkan oleh tanaman anggrek cukup.
Air  kelapa  memiliki  kandungan yang  beragam  di  dalamnya.  Berdasarkan hasil  analisis  menggunakan  teknik High Performance Liquid Chromatografi ( HPLC)  air  kelapa  muda  mengandung ZPT  golongan  sitokinin    seperti    kinetin 273,62    mg/l    dan  zeatin  290,47  mg/l serta ZPT auksin 198,55 mg/l. Air kelapa juga  mengandung  vitamin  yang  dapat dijadikan subtitusi vitamin sintetik dalam media    MS  seperti  vitamin  C  8,9  mg/l, vitamin B5 0,60 mg/l, inositol 2,30 mg/l, thiamin  0,02    mg/l  dan  pridoksin  0,03 mg/l. Selain kandungan ZPT dan vitamin air  kelapa  juga      mengandung      unsur haro   makro   dan mikro  seperti N  43,00 mg/l,  P  13,17  mg/l,  K  14,11  mg/l,  Mg 9,11  mg/l,  Fe  0,2  mg/l,  Ca 24,67  mg/l dan  Zn  1,05  mg/l.  Selain  itu,  air  kelapa mengandung  sukrosa  4,89  mg/l  sebagai sumber  karbon  pertumbuhan  tanaman in vitro (Kristina dan Syahid, 2012).
Air kelapa  yang ditambakan pada media MS akan meningkatkan pembentukan  tunas  tanaman  krisan  dan
anggrek  (Matatula,  2003).  Air    kelapa mengandung    zat-zat    aktif  untuk perkembangan  embrio  seperti  sitokinin yang berperan dalam  memacu pembelahan  sel  (Surachman,  2011). Pemberian  hormon  atau  zat  pengatur tumbuh  (ZPT)  sitokinin  berpengaruh terhadap  pertumbuhan  tunas  dan  dapat menyebabkan  tunas  tumbuh  lebih  cepat.
Hormon sitokinin berperan penting dalam merangsang  proses  pembelahan  sel tumbuhan sehingga mempercepat pertumbuhan  tunas  (Anisa,  2018).  Unsur hara  nitrogen  beserta  unsur  hara  lainnya dalam  air  kelapa  berperan  penting  untuk perturnbuhan  eksplan    dan  diferensiasi jaringan  protokorm  membentuk  tunas (Setiawati, 2010).
Perlakuan modifikasi  media  MS dengan penambahan air    kelapa berpengaruh  nyata  terhadap  jumlah  tunas tanaman  subkultur  anggrek cymbidium secara in vitro pada masing-masing faktor kombinasi pada umur tanaman 4, 6, dan 8 MST.  Secara  rataan  jumlah  tunas tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  M3K1 (media  ¼  MS  +  air  kelapa  0  ml), sedangkan  yang  terendah terdapat  pada perlakuan M1K3  (media  MS  penuh + air kelapa 200 ml).
Semua  perlakuan  berpengaruh pada jumlah   tunas  eksplan  subkultur anggrek Cymbidium ,  meskipun  memiliki jumlah tunas yang berbeda-beda.
Perlakuan  M3K1  menunjukkan  jumlah tunas  paling  tinggi.  Perlakuan  ini membuktikan  bahwa  media  ¼  MS  tanpa pemberian  air  kelapa  masih  sangat  baik dalam  menumbuhkan  tunas  tanaman subkultur  anggrek Cymbidium meski dalam  komposisi  yang  dikurangi  dan tanpa  adanya  penambahan  hormon eksogen.  Hal  ini  diduga  karena  pada media MS  terkandung  unsur-  unsur  hara, baik  makro  maupun  mikro  yang
merupakan unsur penting dalam
pertumbuhan  tanaman  secara in  vitro , meskipun  dikurangi  kandungan  tersebut masih berpengaruh terhadap jumlah tunas tanaman  subkultur  anggrek Cymbidium , sehingga  perlakuan  yang  tidak  ditambahi hormon  eksogen  dari  air  kelapa  masih menumbuhkan  tunas  karena  dibantu oleh hormon endogen pada eksplan.
Hal ini sesuai  dengan  penelitian Purwanto et al., (2007) bahwa modifikasi media  MS  sampai  ¼  MS  masih  cukup baik untuk pertumbuhan eksplan tanaman  kentang.  Pertumbuhan  dan morfogenesis  tanaman  secara in  vitro dikendalikan  oleh  keseimbangan  dan interaksi dari zat  pengatur tumbuh (ZPT) yang  berada  dalam  eksplan  dan  akan menentukan  arah  dari  pengembangan kultur  seperti  pertumbuhan  tunas.  ZPT pada  eksplan  tergantung  dari  ZPT endogen  di  dalamnya    dan    eksogen, yang    diserap  dari  media  tumbuh  dalam menumbuhkan  tunas  pada  eksplan (Tuhuteru et al ., 2012).
Gunawan (2007)  menambahkan pertumbuhan  dan  morfogenesis  tanaman secara in vitro  dikendalikan
oleh keseimbangan  dan  interaksi  antara  zat pengatur  tumbuh  baik  yang  terkandung dalam  eksplan  itu  sendiri  (endogen) maupun  yang  diserap  dari  media (eksogen).  Pembentukan  tunas  tidak terlepas  dari  pengaruh  dari  zat  pengatur tumbuh sitokinin yang terdapat dalam air kelapa antara  lain  9,8-D  ribofuronasil zeatin,  zeatin,  N-N-Diphenyl  urea,  2  (3- methyl butan-2 enylamino)-purin (Gamborg   dan   Phllips,   1995).   Selain itu  adanya  unsur  hara  makro  dan  mikro di  dalam  air  kelapa  seperti  unsur  hara nitrogen  beserta  unsur  hara  lainnya berperan  penting  untuk  perturnbuhan eksplan dan diferensiasi jaringan protokorm membentuk tunas.
Perlakuan
modifikasi  media MS  dengan  penambahan  air    kelapa
berpengaruh  nyata  terhadap  jumlah  akar tanaman  subkultur  anggrek cymbidium secara in  vitro pada  masing-masing faktor  kombinasi  pada  umur tanaman 2- 8  MST.  Secara  rataan  jumlah  akar tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  M2K2 (media  ½  MS  +  air  kelapa  100  ml), sedangkan  yang  terendah  terdapat  pada perlakuan  M2K3  (media  ½  MS  +  air kelapa 200 ml).
Semua perlakuan  telah  mampu menumbuhkan akar pada eksplan subkultur  anggrek Cymbidium ,  meskipun memiliki  jumlah    akar    yang    berbeda- beda.    Perlakuan  M2K2  menunjukkan jumlah  akar  paling  tinggi.  Perlakuan  ini membuktikan bahwa dalam pertumbuhan tunas  tidak  memerlukan  konsentrasi media  MS  yang  penuh  serta  konsentrasi air  kelapa  yang tinggi  pada  eksplan subkultur   anggrek Cymbidium .   Hal ini diduga karena media ½ MS masih sangat baik dalam menumbuhkan akar subkultur tanaman  anggrek Cymbidium meski dalam  komposisi  yang  dikurangi.  Selain itu  penambahan  air  kelapa  dengan konsentrasi yang rendah lebih berpengaruh  pada  jumlah  akar  tanaman subkultur  anggrek Cymbidium akibat adanya  pengaruh  dari  hormon  eksogen dari  air  kelapa  dengan  konsentrasi  yang tepat.
Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Purwanto et al ., (2007) bahwa modifikasi media ½ MS dan penambahan air kelapa merupakan  media  yang  baik  untuk induksi  akar.  Tuhuteru et  al., (2012) menambahkan bahwa pengaruh perlakuan  pemberian  konsentrasi  air kelapa  terhadap    jumlah  total  akar plantlet  anggrek  D.  anosmum,  yakni media  perlakuan  dengan  konsentrasi  50 dan 100 ml/l menghasilkan  jumlah akar terbanyak.
Air kelapa  mengandung  sitokinin, zeatin  dan  auksin  serta  vitamin  dan mineral yang  dapat meningkatkan multiplikasi  tanaman in  vitro .  Auksin yang  terkandung  di  dalam  air  kelapa
dapat  merangsang  pertumbuhan  akar tanaman  anggrek  apabila  sesuai  dengan konsentrasi  optimumnya.  Hal  ini sesuai dengan  penelitian  Armini et  al .,  (1991)
bahwa perbandingan auksi  dan  sitokinin yang digunakan mempengaruhi pembentukan tunas dan akar dalam kultur jaringan.  Perbandingan  antara  sitokinin dan  auksin  yang tinggi akan  mendorong pembentuka tunas, sedangkan perbandingan sitokinin dan auksin rendah akan  mendorong  pembentukan  akar, sebab air kelapa adalah endosperm  yang kaya  akan    makanan,    maka  jika  air kelapa  tersebut  ditambahkan  dalam media  kultur  jaringan,  eksplan  yang ditanam  dapat  tumbuh  dengan  baik. Menurut Hendaryono  dan Wijayani (1994) keseimbangan antara sitokinin dan auksin akan menghasilkan tunas dan akar.
Hal  ini  terlihat  pada  hasil  kultur  dalam setiap  eksplan  mampu  membentuk  tunas dan akar hampir pada semua perlakuan.
Auksin sangat  berpengaruh dalam induksi akar. Auksin dan sitokinin yang  rendah,cenderung  akan  mendorong pertumbuhan tunas dan
daun. Sebaliknya,  apabila  auksin  dan  sitokinin tinggi,  maka  akan  menumbuhkan  akar, sedangkan  auksin  dan  sitokinin    yang seimbang    akan    mendukung  bagi pertumbuhan  tunas,  daun  dan  akar  yang berimbang pula. Konsentrasi zat pengatur  tumbuh  auksin  atau  sitokinin untuk  pertumbuhan  tunas  pada  setiap tanaman  tidak  selalu  sama.  Jenis  dan konsentrasi zat pengatur tumbuh untuk  memacu  pertumbuhan  tunas tergantung  beberapa  faktor,  antara  lain jenis  tanaman,  jaringan  atau  organ  yang digunakan,  keadaan  fisiologi  eksplan, serta  kandungan    sitokinin    dan  auksin endogen  di  dalam  jaringan  (Lestari, 2011).
Menurut  Mustakim et  al .,  (2015) pertumbuhan  akar  juga  tergantung  pada peran unsur   fosfor,   kalsium,   mangan, besi,   dan boron. Selain itu thiamin yang terkandung  dalam  media  MS  berfungsi
untuk mempercepat pembelahan sel pada meristem  akar,  serta  berperan  dalam koenzim dalam reaksi yang menghasilkan energi  dan  karbohidrat.  Di  dalam  air kelapa    terdapat  unsur      thiamin      yang merupakan   golongan vitamin   B1 yang berfungsi  mempercepat  pembelahan  sel pada  meristem  akar.  Selain  itu  unsur kalsium  yang  terdapat  dalam  air  kelapa juga  berperan  dalam pembentukan  bulu- bulu akar dan pemanjangan akar.
Perlakuan  modifikasi  media  MS dengan  penambahan  air    kelapa berpengaruh nyata terhadap tinggi tunas tanaman  subkultur  anggrek Cymbidium secara in  vitro pada  masing-masing faktor  kombinasi  pada  umur  tanaman 8  MST.  Tinggi  tunas  yang  baik  pada akhir   pengamatan   (8   MST).   Secara rataan  tinggi  tunas  tertinggi  terdapat pada  perlakuan  M2K4  (media  ½  MS  + air  kelapa  300  ml),  sedangkan  yang terendah terdapat pada perlakuan M1K3 (media MS penuh + air kelapa 200 ml).
Semua perlakuan telah berpengaruh  terhadap  tinggi  tunas  pada eksplan  subkultur  anggrek Cymbidium ,
meskipun  memiliki  tinggi  tunas  yang berbeda-beda. Perlakuan M2K4
menunjukkan  tinggi  tunas  paling  tinggi.
Perlakuan ini membuktikan bahwa dalam menumbuhkan  akar  tidak  memerlukan konsentrasi    media    MS    yang    penuh namu n memerlukan konsentrasi air kelapa yang  tinggi  pada  eksplan subkultur anggrek Cymbidium .  Hal  ini  diduga karena  media  ½  MS  masih  sangat  baik dalam pertambahan tingggi tunas subkultur  tanaman  anggrek Cymbidium meski  dalam  komposisi  yang  dikurangi. Selain itu penambahan air kelapa dengan konsentrasi  yang  tinggi  lebih  efektif berpengaruh pada tinggi tunas tanaman  subkultur  anggrek Cymbidium akibat  adanya  pengaruh  dari  hormon eksogen dari air kelapa.
Menurut  Pranata et  al., (2015) dalam  penelitiannya,  penambahan  air
kelapa  22,5%  memberikan  pertumbuhan tinggi tanaman  paling  baik,  kemudian diikuti dengan penambahan  air  kelapa 15%.  Hal  ini  membuktikan  bahwa pemberian  air  kelapa  dengan  konsentrasi lebih  tinggi  akan  berpengaruh  pada tinggi tunas tanaman secara in vitro .
Hal  ini  sesuai  dengan penelitian Armini et  al., (1991) bahwa  selain meningkatkan jumlah  tunas terbanyak penambahan  air  kelapa  juga  dapat meningkatkan   aktifitas
sitokinin endogen  yang  selanjutnya  meningkatkan efektifitas  pembelahan  sel  semakin tinggi.  Di  dalam  air  kelapa  terdapat  zat hara,  hormon,  dan  vitamin  yang  dapat merangsang pertumbuhan
plantlet. Selain  itu,  senyawa  nitrogen  (N)  yang terkandung      dalam      media  berperan dalam sintesis asam-asam amino dan  protein  secara  optimal  yang selanjutnya  digunakan  dalam  proses pertumbuhan dan perkembangan tanaman (Tuhuteru et al ., 2012).
Adanya  unsur  hara  makro  dalam air kelapa seperti kalium juga membantu dalam pemanjangan sel tanaman anggrek secara in  vitro .  Selain  itu  vitamin  C yang  terdapat  di dalam air kelapa dapat membantu  merangsang  pertumbuhan batang  tanaman.  Pemanjangan  batang terjadi karena adanya proses pembelahan sel, pemanjangan sel  dan pembesaran sel-sel  baru  yang  terjadi  pada  maristem ujung    batang    yang    mengakibatkan tanaman  bertambah tinggi (Widiastoety, 2003).
Perlakuan  modifikasi  media  MS dengan  penambahan  air  kelapa  tidak berpengaruh nyata terhadap jumlah tunas tanaman  subkultur  anggrek cymbidium secara in  vit ro    pada  umur  tanaman  2 MST  namun  berpengaruh  nyata  pada umur  tanaman  4  –  8  MST.  Hal  ini diduga  karena  pada  umur  tanaman  2 MST  tanaman  subkultur  anggrek  lambat dalam  penyerapan  unsur-unsur  yang terkandung  di  dalam  media  seperti sitokinin yang berfungsi untuk
pembelahan  sel  dalam  menumbuhkan tunas,  sehingga  pada  umur  tanaman  2 MST pertumbuhan tunas juga sedikit dan hanya  pada  faktor  kombinasi  tertentu. Selain  itu  konsentrasi  air  kelapa  yang berbeda  juga  akan  mempengaruhi kandungan  ZPT  yang  ada  di  dalamnya. Sehingga juga mempengaruhi cepat  atau lambatnya sel  membelah.  Hal  ini sesuai  dengan  peneletian  Hendaryono dan Wijayani   (1994)   bahwa kombinasi sitokinin aktif berperan dalam penggandaan  tunas  dan  tinggi  tunas sampai  jangka  waktu  akhir  pengamatan, meskipun  jumlah  dan  tinggi  tunas  yang terbentuk  pada  awal  pengamatan  masih rendah.
Davies (1995)  menyatakan  bahwa pemberian  sitokinin  pada  media kultur menyebabkan  pembelahan  sel  pada permulaan  kultur  berjalan  lambat,  akan tetapi populasi sel  tetap  dijaga  dan kemudian  jumlahnya    ditingkatkan. Perbedaan    jumlah  tunas  yang  terbentuk pada  tiap  perlakuan  dipengaruhi  oleh sitokinin  pada  konsentrasi  yang  berbeda. Hal ini  sesuai  dengan  pendapat Wattimena et  al., (1988)  bahwa kecepatan  sel  membelah  diri  dapat dipengaruhi  oleh  adanya  kombinasi  ZPT tertentu dalam konsentrasi yang tertentu.
Menurut  Santoso  dan  Nursandi (2004) variasi data bisa terjadi dikarenakan  masing-  masing  eksplan memiliki kepekaan sel yang berbeda-beda terhadap rangsang yang diberikan, seperti raksang  hormon  eksogen yang diberikan. Lebih  lanjut  Indriani  (2014)  menyatakan bahwa  penambahan  konsentrasi  air kelapa  yang  berbeda  menunjukkan respon tumbuh yang berbeda pula.

## Kesimpulan
Kesimpulan  yang  diperoleh dari penelitian ini yaitu :
1.  Perlakuan  modifikasi  media  MS berpengaruh nyata terhadap pertumbuhan  tanaman anggrek
Cymbidium secara in  vitro .  Hal  ini
dapat  dilihat  pada  peubah  persentase tumbuh tunas pada  umur tanaman  2,  4,  6  dan  8  MST,  jumlah tunas  2,  4,  6  dan  8  MST,  jumlah akar  2  dan  8  MST  dan  tinggi  tunas pada  umur  tanaman  2,  4,  6  dan  8 MST.
2.  Perlakuan    penambahan    air    kelapa pada  media  MS  berpengaruh  nyata terhadap pertumbuhan tanaman anggrek Cymbidium secara in  vitro .
Hal  ini  dapat  dilihat  pada  peubah persentase  tumbuh  tunas,  jumlah tunas,  jumlah  akar,  dan  tinggi  tunas pada  umur  tanaman  2,  4,  6  dan  8
MST.
3.  Terdapat  interaksi  antara  kombinasi perlakuan modifikasi media MS dan
penambahan  air  kelapa  disemua peubah pada  umur  tanaman  2,  4,  6 dan    8    MST  kecuali    pada    peubah jumlah   tunas   pada umur  tanaman 2 MST.

## Daftar Pustaka
Annatje  E.B.,  Jeany  M,  dan  Semuel  R. 2016. Substitusi Media Murashige dan Skoog/MS dengan  Air  Kelapa  dan  Pupuk Daun Majemuk pada Pertumbuhan  Anggrek Dendrobium  secara  in  vitro. Jurnal Bioslogos . Vol: 6(1).
Anisa,  T.  2018. Pengaruh  lama perendaman  biji  dan  konsentrasi BAP  terhadap  perkecambahan biji jeruk manis  Berastagi local  (Citrus nobilis)  Brastepu secara in vitro . Fakultas Pertanian Universitas Malikussaleh: Aceh Utara. Anonymous .    2011. Buku    Seri Konservasi-1  “Keanekaragaman Hayati Jenis  Anggrek  Taman
Nasional  Bukit  Baka  Bukit Raya ”. Diakses dari
http://bukitbakabukitraya.org/w-
content/uploads/2012/09/Buku- seri-informasi-konservasi-1.pdf [diakses  tanggal  22  Januari 2018].
Arditti,  J.  1992. Fundamentals  of Orchids Biology . John Wiley  and Sons, Inc: New York. Armini, G.A. Wattiimena,  dan  L.W. Gunawan.  1991. Perbanyakan tanaman : Bogor. 307 hlm. Bey,    Y,    Syafii,    W.    dan   Sutrisna. 2006. Pengaruh Pemberian Giberelin (GA3) dan  Air  Kelapa Terhadap  Perkecambahan  Biji Anggrek  Bulan  (Phalaenopsis ambilis  BL)  Secara  In  Vitro. Jurnal  Biogenesis .  Vol:  2(2):41- 46.
Budiarta,  A.  2004. Dasar-  dasar  Kultur Jaringan .  Pusat  Pengembangan dan  Penataran  Guru  Pertanian: Cianjur.
Bhojwani,  S.S.  dan  M.K.  Razdan.  1996.
Plant Tissue Culture: Theory  and Practice. Elsevier:   Amsterdam. Comber, J.B. 1990. Orchids of Java . Bentham-Moxon Trust.   The  Royal Botanic Gardens, Kew. Davies, J.P. 1995.      Plant hormone: their nature, occurrence and  function. KluwerAcademic Publisher: Boston. Hendaryono,  D.P.S.  dan  A.  Wijayani. 1994. Kultur Jaringan (Pengenalan  dan Petunjuk Perbanyakan  Tanaman  Secara Vegetatif Media) . Kanisius: Yogyakarta.
Gamborg,  O.  L.,  G.  C.  Phillips.  1995.
Media Preparation and Handling . p 21-33. Springer-Verlag. Berlin Gunawan  H.  2007. Mikropropagasi
Tunas Stroberi dengan Pemberian
NAA dan BAP pada Media MS . Skripsi. Program Studi Pemuliaan Tanaman. Departemen  Budidaya  Pertanian.
Fakultas  Pertanian.  Universitas Sumatera Utara. Medan. 95 hlm. Indriani, B.S. 2014. Efektivitas Substitusi
Sitokinin dengan Air Kelapa pada Medium Multiplikasi  Krisan (Chrysanthemum    indicum    L.) secara In Vitro .  Skripsi, Jurusan Biologi FMIPA Universitas Negeri Semarang. Iswanto, H. 2002. Petunjuk Perawatan  Anggrek .  Agromedia Pustaka:  Jakarta.  Kasutjianingati dan  Irawan,  R.  2013.  Media alternative  perbanyakan  in  vitro anggrek bulan ( Phalaenopsis amabilis ). Jurnal . Vol: 3(  3):184-
189. Karjadi  dan Buchory. 2008.  Pengaruh Komposisi Media Dasar, Penambahan BAP, Dan Pikloram Terhadap Induksi Tunas  Bawang  Merah.  J.  Hort.
18(1):1-9
Kristina  N.N.  &  Syahid  F.A.  2012. Pengaruh Air  Kelapa Terhadap Multiplikasi  Tunas    In
Vitro,  Produksi  Rimpang, Dan Kandungan Xanthorrhizol  Temulawak Di Lapangan. Jurnal Littri . Vol: 18(3):125-126. Lestari, E G. 2011. Peranan Zat Pengatur Tumbuh dalam  Perbanyakan Tanaman melalui Kultur Jaringan. Jurnal AgroBiogen . Vol:7 (1).
Mardin,  S., 2002. Media Tumbuh Kultur Jaringan  Tanaman .  Makalah pada  Pelatihan  Kultur  Jaringan Tanaman  PS  Agronomi  Unsoed: Purwokerto.
Marlina,    N.  2004.  Teknik    modifikasi media  Murashige  dan  Skoog (MS)  untuk  konservasi  in  vitro mawar  (Rossa  sp.) .  Buletin Teknik Pertanian . Vol: 9(1):4-7.
Matatula,  A.  J.  2003.  Substitusi  media MS  dengan    air      kelapa      dan Gandasil-D pada kultur
jaringan krisan.
J.  Eugenia. Vol: 9(4): 203-211. Mustakim,   B.   F.   Wahidah1,   A.   Al- Fauzy. 2015. Pengaruh penambahan air kelapa terhadap pertumbuhan stek mikro tanaman krisan ( Chrysanthemum indicum ) secara  in  vitro .  Jurusan  Biologi,
Fakultas Sains dan
Teknologi,
UIN  Alauddin: Makassar.
Netty, W. 2002. Optimasi Medium untuk
Multiplikasi  Tunas
Kana  (Canna  hibryda  Hort.) dengan  Penambahan  Sitokinin.
J. Biosains dan Bioteknologi Indonesia . Vol: 2 (1):27–31. Pranata, M.G, Yunus ,A. dan
Pujiasmanto,  B.  2015.  Pengaruh konsentrasi  naa  dan  air  kelapa terhadap  multiplikasi  temulawak (curcuma  xanthorrizha  roxb.) secara  in  vitro.  UNS: Journal  of Sustainable  Agriculture .  Vol:
30(2) Purwanto, A.S.D. Purwantono, dan  S. Mardin.    2007.    Modifikasi Media  Ms dan Perlakuan Penambahan  Air  Kelapa  Untuk Menumbuhkan Eksplan Tanaman  Kentang.  Purwokerto: Jurnal  Penelitian    dan  Informasi Pertanian “Agrin” . Vol: 11(1).
Purwantoro,  A., Ambarwati,  dan Setyaningsih.  2005. Kekerabatan Antar Anggrek Spesies Berdasarkan Sifat Morfologi  Tanaman  Dan  Bunga. Ilmu Pertanian Vol: 12(1).Rahardja, P. C., dan Wahyu, W. 2003. Aneka Cara Memperbanyak Tanaman . Agromedia Pustaka: Jakarta.
Raynalta  E.,  dan  sukma  D. 2013.  Pengaruh komposisi  media dalam      perbanyakan  protocorm like  bodies,  pertumbuhan  planlet, dan  aklimatisasi  Phalaenopsis amabilis. Jurnal  hortikultura
Indonesia . Vol: 4(3):131-139 Rohayati,    E.    dan  N.    Marlina.    2009. Teknik Aklimatisasi Planlet Anyelir (Dianthus  caryophyllus L.) untuk  Tanaman Induk. Buletin Teknik  Pertanian .  Vol: 14(2): 72-75. Santoso,  U.  dan  Nursandi,  F.  2004. Kultur Jaringan Tanaman . Universitas Muhammadiyah Malang: Malang. Seswita,  D.  2010.  Penggunaan  Air Kelapa  Sebagai  Zat  Pengatur Tumbuh Pada Multiplikasi Tunas  Temulawak (Curcuma xanthhorrhiza roxb.)  in vitro . Jurnal    Littri .    Vol: 16(4):135-140.
Setiawati,  T.,  S.  Sanoesi.,  S.  Muliati. 2010.  Pupuk  Daun  dan  Air Kelapa Sebagai Medium Alternatif untuk  Induksi Tunas  Anggrek Dendrobium Whom Leng  in  vitro . Jurnal Biotika .  Vol: 8(1):4-54 Soedarjo M, H. Shintiavira, Y. Supriyadi  &  Y.  Nasihin.  2012 . Peluang Bisnis Inovasi Krisan Badan  LitbangPertanian . Agro  inovasi: Jakarta Selatan. Sudarmadji.  2003.  Penggunaan  Benzil Amino Purine  pada Pertumbuhan  Kalus Kapas Secara In  Vitro . Buletin  Teknik Pertanian . Vol: 8(1):28-30. Sukma,  D  dan  A.  Setiawati.  2010.
Pengaruh waktu   dan   frekuensi aplikasi  pupuk daun  terhadap pertumbuhan  dan  pembungaan anggrek Dendrobium ‘Tong Chai  Gold’. J.  Hort .  Indonesia.
Vol: 1(2): 97-104.
Surachman D. 2011. Teknik pemanfaatan air kelapa untuk perbanyakan  nilam secara  in vitro. Buletin Teknik  Pertanian .
Vol: 16(1):31-33. Sutiyoso,   Y.   2004. Hidroponik ala Yos . Penebar Swadaya: Jakarta.
Tuhuteru S.,  M. L. Hehanussa,S.H.T. Raharjo . 2012.Pertumbuhan  dan perkembangan anggrek Dendrobium  anosmum pada media  kultur    in  vitro  dengan beberapa konsentrasi air kelapa. Agrologia .  Vol:  1  (1):1-
12 Upreti,  K.K.  &  Sharma,  M.  (2016) Role  of Plant Growth Regulators in Abiotic Stress Tolerance . Abiotic Stress Physiology of Horticultural Crops: India, pp.19–46.  doi:10.1007/978-81- 322-2725-0. Vigliar,  R.,  V.L.  Sdepanian,  and  U. fagundes- neto. 2006. Biochemical  profile  of  coconut water from coconut palms planted in  an  inland  region. J.  de Pediatria . Vol: 82(4): 308-312.
Wattimena,  G.A.  1988. Zat  Pengatur Tumbuh Tanaman . Laboratorium  Kultur Jaringan. Tanaman PAU Bioteknologi IPB. Bogor. 145 hlm.
Wetherell,    D.F.    1982. Pengantar Propagasi  Tanaman  Secara  In Vitro .  Semarang:  IKIP  Semarang
Press. Widiastoety,  d.  dan  Purbadi.  2003. Pengaruh Bubur Ubi Kayu  dan Ubi Jalar terhadap Pertumbuhan Plantlet Anggrek Dendrobium. Jurnal Hortikultural . Vol: 13(1):1-6. Widiastoety,    D.,    N.    Solvia,    M. Soedarjo. 2010. Potensi anggrek Dendrobium dalam meningkatkan variasi dan kualitas anggrek bunga potong. Jurnal Litbang Pertanian . 29:101-106 Widyastuti,  N.  Dan  D.  Tjokrokusumo. 2001.Peranan beberapa zat pengatur  tumbuh  (ZPT)  tanaman
pada  kultur in  vitro . Jurnal
Sains  dan  Teknologi  Indonesia . Vol: (5):55-63. Yunita,  R.  2011. Pengaruh  Pemberian Urine  Sapi,  Air  Kelapa,  dan Rootone- F Terhadap Pertumbuhan  Setek Tanaman Markisa  (Passiflora  edulis  var. flavicarpa). Fakultas  Pertanian Universitas Andalas: Padang. Yusnita. 2003. Kultur  jaringan:
Cara Memperbanyak  Tanaman Secara  Efisien .  Agro  Media
Pustaka:  Jakarta. 105 hlm. Yusnita. 2010. Perbanyakan  In Vitro Tanaman Anggrek . Universitas Lampung. Lampung. 128 hlm.
Zulkarnain,  2011. Kultur  Jaringan Tanaman . Jakarta: Bumi Aksara