## ALCHEMY : JOURNAL OF CHEMISTRY

## Artikel Penelitian
Penentuan Aktivitas Antioksidan Senyawa Kuersetin dan Ekstrak Lengkuas Menggunakan HPLC dan UV-Vis
Bambang Cahyono*, Christiana Suci Prihantini, Meiny Suzery, Damar Nurwahyu Bima
Departemen Kimia Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro, Semarang, Indonesia, 50275
INFO ARTIKEL ABSTRAK Riwayat Artikel Diterima 30 November 2020 Direvisi 2 Desember 2020 Tersedia online 30 Januari 2021 * Email penulis korespondensi: cahyono@live.undip.ac.id The radical scavenging activity of 1,1-diphenyl-2-picrylhidrazyl (DPPH) is generally carried  out  using  a  spectrophotometric  method.  In  this  study,  the  value  of  the antioxidant activity was compared to the HPLC method. Samples used were pure quercetin  and  extracts  of  red  galangal  (Alpinia  purpurata)  and  white  galangal (Alpinia galanga). Analysis of antioxidant activity using a UV/Vis spectrophotometer was carried out at a wavelength of 515 nm. Analysis by HPLC method was carried out using an inverse phase with a UV/Vis detector at 515 nm. The results showed that the radical scavenging activity (IC 50 ) of the pure quercetin produced was nearly the  same  value  for  the  spectrophotometric  method  (16.24  ppm)  dan  the  HPLC method (15.24 ppm). Even though, the antioxidant activity of pure quercetin was different from the extract. The red galangal extract gave IC 50 of 488.43±1.13 ppm (spectrophotometric method) and IC 50 of 68.12±10.19 ppm (HPLC method). The radical  scavenging  activity  (IC 50 )  of  white  galangal  extract  using  the spectrophotometric method and HPLC method was 462.47±2.98 and 62.17±3.87 ppm,  respectively. The  allegation  of  other  molecular  interference  in  the  radical reduction of the extract resulted in a conclusion that the HPLC is better than the spectrophotometric method for determining antoxidant activity of extract sample.
Keywords: Antioxidant, Alpinia purpurata, Alpinia galanga, DPPH
Aktivitas peredaman radikal 1,1-diphenyl-2-picrylhidrazyl (DPPH) pada umumnya dilakukan  menggunakan  metode  spektrofotometer.  Dalam  penelitian  ini,  nilai aktivitas antioksidan tersebut telah dibandingkan dengan metode HPLC. Sampel ujinya  adalah  senyawa  kursetin  murni  dan  ekstrak  lengkuas  merah  (Alpinia purpurata)  dan  lengkuas  putih  (Alpinia  galanga).  Analisis  aktivitas  antioksidan dengan  spektrofotometer  UV/Vis  dilakukan  pada  panjang  gelombang  515  nm. Analisis  dengan  metode  HPLC  dilakukan  menggunakan  fasa  inverse  dengan detektor  UV/Vis  pada  515  nm.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  aktivitas peredaman radikal senyawa murni kuersetin menghasilkan nilai yang hampir sama untuk kedua metode yaitu IC 50 sebesar 17,05 ppm untuk metode spektrofotometer dan  IC 50 sebesar  15,74  ppm  untuk  metode  HPLC.  Akan  tetapi,  nilai  aktivitas antioksidan  kuersetin  jauh  berbeda  untuk  ekstrak.  Ekstrak  lengkuas  merah memberikan  IC 50 sebesar  488,43±1,13  ppm  (metode  spektrofotometer)  dan 68,12±10,19 ppm (metode HPLC). Aktivitas peredaman radikal ekstrak lengkuas putih  dengan  metode  spektrofotometer  dan  HPLC  dengan  IC 50 sebesar 462,89±5,38  dan  62,17±3,87  ppm,  berturut-turut.  Dugaan  adanya  interferensi molekul lain dalam analisis peredaman radikal terhadap ekstrak ini menghasilkan suatu  kesimpulan  bahwa  metode  HPLC  lebih  baik  digunakan  dalam  analisis antioksidan dibandingkan metode spektrofotometer untuk sampel berupa ekstrak.
Kata kunci: Antioksidan, Alpinia purpurata, Alpinia galanga, DPPH

## 1. Pendahuluan
Radikal  bebas  adalah  atom  atau  molekul yang  memiliki  elektron  bebas  tidak  berpasangan.  Radikal  bebas  dapat menginisiasi terjadinya reaksi rantai radikal. Radikal bebas dalam tubuh dapat merusak berbagai macam sel yang terdapat di dalam tubuh. Hal ini menyebabkan terjadinya stres oksidatif dan memicu timbulnya penyakit degeneratif yang berbahaya seperti kanker, diabetes dan komplikasi [1]. Untuk menetralisir senyawa radikal bebas dibutuhkan senyawa antioksidan. Senyawa antioksidan merupakan senyawa yang memiliki mekanisme untuk menangkap radikal bebas (radical scavenger) sehingga reaksi radikal berantai dapat diputus [2]. Molekul 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) merupakan radikal bebas yang stabil dan sering digunakan untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan beberapa senyawa atau ekstrak bahan alam [3].
Senyawa DPPH radikal dapat dianalisis dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 515 nm. Ketika larutan DPPH  dicampurkan  dengan  senyawa  yang  dapat  mendonorkan  atom  hidrogennya,  maka  akan  terjadi  reaksi  reduksi membentuk senyawa difenilpikrihidrazin. Terbentuknya senyawa ini ditunjukkan dengan berkurangnya warna violet pada larutan atau larutan menjadi kuning pucat [3]. Pengukuran DPPH radikal juga dapat dilakukan melalui metode HPLC untuk analisis antioksidan ekstrak bahan alam dan produk poliherbal.
Kuersetin merupakan salah satu senyawa flavonol yang merupakan turunan flavonoid yang memiliki kerangka 3- hidroksiflavon.  Adanya  gugus  hidroksil  (-OH)  pada  struktur  senyawa  kuersetin  membuat  senyawa  kuersetin  memiliki banyak  bioaktivitas,  salah  satunya  sebagai  antioksidan  [4].  Mekanisme  reaksi  peredaman  radikal  (radical  scavenging) dapat berlangsung dengan didonorkannya atom hidrogen yang terdapat pada gugus hidroksil,  sehingga senyawa yang memiliki gugus hidroksil memiliki bioaktivitas sebagai antioksidan [5]. Struktur kuersetin dapat dilihat pada Gambar 1.

## Gambar 1. Struktur senyawa kuersetin
Lengkuas adalah tanaman asli yang tumbuh subur di Asia Tenggara, termasuk Indonesia. Lengkuas merupakan rempah-rempah yang terkenal dan sudah lama sekali digunakan untuk menambah aroma dan cita rasa makanan. Budidaya lengkuas  banyak  dilakukan  di  Indonesia,  sehingga  keberadaan  lengkuas  di  Indonesia  sangat  melimpah.  Kelimpahan lengkuas  di  Indonesia  membuat  penelitian  mengenai  lengkuas  terus  berkembang  terutama  mengenai  kemampuan bioaktivitasnya. Pada penelitian sebelumnya, lengkuas diketahui memiliki aktivitas sebagai antibakteri  terhadap bakteri Escherichia coli. Ekstrak lengkuas diduga juga memiliki aktivitas antioksidan karena mengandung senyawa flavonol yang terdapat pula pada kuersetin [6]. Oleh karena itu, pada penelitian ini akan dilakukan analisis bioaktivitas antioksidan dengan metode  spektrofotometer  UV-Vis  dan  HPLC  untuk  ekstrak  kental  lengkuas  merah  (Alpinia  purpurata  K.  Schum.)  dan lengkuas putih (Alpinia galanga Linn.).

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1. Bahan
Rimpang lengkuas merah dan lengkuas putih berasal dari Kabupaten Semarang. DPPH dan kuersetin dari Sigma- Aldrich (Steinheim, Germany) dan metanol pro analisis dari Merck (Darmstadt, Germany). Pelarut yang digunakan pelarut khusus HPLC. Bahan yang digunakan untuk penapisan fitokimia adalah ammonia 30%, asam klorida, kloroform, serbuk magnesium, amil  alkohol, besi (III) klorida 1%, natrium hidroksida 1 N, anhidrida asam asetat,  asam sulfat pekat,  dan petroleum eter.

## 2.2. Preparasi Sampel
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah rimpang lengkuas merah dan lengkuas putih. Rimpang dipotong kemudian  diangin-anginkan,  dan  dihaluskan  menjadi  serbuk  menggunakan  blender.  Ekstraksi  lengkuas  merah  dan lengkuas putih dilakukan dengan metode maserasi. Maserasi dilakukan dengan menggunakan metanol. Hasil maserasi berupa  larutan  berwarna  coklat  dipekatkan  menggunakan  rotary  evaporator.  Pemekatan  bertujuan  untuk  menguapkan metanol sehingga diperoleh ekstrak kental lengkuas merah dan lengkuas putih [7].

## 2.3. Penapisan Fitokimia
Setiap  tahap  penapisan  fitokimia  dilakukan  berdasarkan  Harborne  [8].  Penapisan  fitokimia  yang  dilakukan  pada sampel meliputi uji alkaloid, saponin, flavonoid, tanin, kuinon, dan steroid/triterpenoid.
Uji  Alkaloid.  Sebanyak  2  g  serbuk  simplisia  dilembabkan  dengan  5  mL  amonia  30%  dan  digerus  dalam  mortar. Kemudian, ditambahkan 20 mL kloroform dan digerus dengan kuat. Campuran tersebut disaring dengan kertas saring dan filtrat yang diperoleh diekstraksi dengan larutan HCl (1:10) sebanyak 10 mL, lalu dikocok perlahan dan didiamkan sampai terbentuk lapisan atas dan bawah. Larutan pada lapisan atas diambil dan dibagi dalam dua tabung reaksi. Masing-masing tabung ditambahkan pereaksi Mayer dan Dragendroff. Terbentuknya endapan merah bata dengan pereaksi Dragendroff dan endapan putih dengan pereaksi Mayer menunjukkan adanya senyawa alkaloid.
Uji Saponin. Sebanyak 2 g serbuk simplisia dididihkan dalam 100 mL air panas selama 10 menit. Campuran kemudian disaring hingga diperoleh filtrat dan dibagi menjadi 4 bagian (larutan A, B, C dan D). Sebanyak 10 mL larutan A dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dikocok dengan kuat secara vertikal selama 10 detik, kemudian didiamkan selama 10 menit. Keberadaan saponin ditunjukkan dengan terbentuknya busa yang stabil pada larutan.
Uji Flavonoid. Sebanyak 5 mL larutan B dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan serbuk magnesium secukupnya, 1 mL asam klorida pekat dan 2 mL amil alkohol, kemudian dikocok kuat dan dibiarkan memisah. Terbentuknya warna kuning hingga jingga menunjukkan keberadaan senyawa golongan flavonoid.
Uji Tanin. Sebanyak 10 mL larutan C dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan dengan larutan besi (III) klorida 1%. Terbentuknya warna biru tua atau hijau kehitaman menunjukkan adanya senyawa golongan tanin.
Uji Kuinon. Sebanyak 5 mL larutan D dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan beberapa tetes natrium hidroksida 1 N. Terbentuknya warna merah menunjukkan adanya senyawa golongan kuinon.
Uji  Steroid/Triterpenoid.  Sebanyak  2 g  serbuk  simplisia  dimaserasi  dengan  20  mL  petroleum  eter  selama 2  jam, kemudian disaring dan 5 mL filtrat yang diperoleh diuapkan dalam cawan penguap hingga diperoleh residu. Dua tetes anhidrida asam asetat dan 1 tetes asam sulfat pekat ditambahkan ke dalam residu tersebut. Terbentuknya warna biru menunjukkan adanya steroid, sedangkan warna merah atau ungu menunjukkan adanya senyawa triterpenoid.

## 2.4. Analisis Spektrofotometer UV-Vis
Analisis kuantitatif sampel dihitung pada panjang gelombang 515 nm dengan menggunakan UV-Visible Spectroquant Pharo 300 (Merck). Aktivitas peredaman radikal ditentukan dengan cara menghitung perbedaan nilai absorbansi dari blanko dan sampel pada Persamaan 1.
Peredaman radikal (%) = A blanko -A sampel A blanko x 100%

## 2.5. Analisis HPLC
Sampel difilter menggunakan membran Bulk GHP Acrodisc® 25 mm Syringe Filter dan 20 µL sampel diinjeksi untuk analisis  HPLC.  Blanko  disiapkan  dengan  menambahkan  3,8  mL  larutan  DPPH  (50  µM)  dalam  0,2  mL  metanol  yang disiapkan sesaat sebelum analisis. HPLC yang digunakan adalah Shimadzu LC-20 Prominence dimana sistemnya terdiri dari auto-sampler (SIL-20A HT).
Data dianalisis dan diproses menggunakan software LabSolutions (Versi 5.54 SP5). Analisis menggunakan kolom Purospher®  STAR  RP-18e  (250  mm  x  4  mm,  5  µM)  (Merck,  Darmstadt,  Germany).  Eluen  yang  digunakan  adalah methanol/air  (80:20  v/v)  dengan  laju  alir  1  mL/menit.  Puncak  DPPH  dideteksi  pada  panjang  gelombang  515  nm. Kemampuan mereduksi DPPH dilihat dengan cara membandingkan luas puncak (PA) antara blanko dengan sampel yang ditulis dalam % peredaman radikal sampel [9] yang ditunjukkan pada Persamaan 2.
Peredaman radikal ( % ) = PA blanko - PA sampel PA blanko ×100 %

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Preparasi Sampel
Dari hasil maserasi dan penguapan menggunakan rotary evaporator diperoleh padatan ekstrak sebanyak 75,91 g untuk lengkuas merah dan 87,51 g untuk lengkuas putih. Rendemen ekstrak lengkuas merah yaitu 4,15% dan ekstrak
(1)
(2)
lengkuas putih 4,38%. Pada Farmakope Herbal Indonesia disebutkan bahwa rendemen ekstrak lengkuas tidak kurang dari 16% [10]. Perbedaan ini diduga karena adanya perbedaan asal sampel.

## 3.2. Penapisan Fitokimia
Uji penapisan fitokimia pada penelitian ini dilakukan terhadap serbuk dan ekstrak metanol rimpang lengkuas merah dan lengkuas putih. Hasil uji penapisan fitokimia serbuk dan ekstrak metanol rimpang lengkuas merah menunjukkan bahwa serbuk dan ekstrak lengkuas merah mengandung senyawa metabolit sekunder golongan alkaloid, flavonoid, triterpenoid, tanin dan kuinon (Tabel 1). Hal ini sesuai dengan penelitian sebelumnya yang menyatakan bahwa rimpang lengkuas merah mengandung alkaloid, flavonoid dan triterpenoid [11].

## Tabel 1. Hasil Penapisan Fitokimia Rimpang Lengkuas Merah
No Senyawa Metabolit Sekunder Serbuk Rimpang Ekstrak Metanol Rimpang 1 Alkaloid + + 2 Flavonoid + + 3 Saponin - - 4 Tanin + + 5 Kuinon + + 6 Steroid/triterpenoid + +
Hasil uji penapisan fitokimia serbuk dan ekstrak metanol rimpang lengkuas putih menunjukkan bahwa serbuk dan ekstrak  metanol  rimpang  lengkuas  putih  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  golongan  alkaloid,  flavonoid, triterpenoid, tanin dan kuinon (Tabel 2). Hal ini sesuai dengan penelitian sebelumnya yang menyatakan bahwa rimpang lengkuas putih mengandung alkaloid, steroid/triterpenoid, tanin dan flavonoid [12].

## Tabel 2. Hasil Penapisan Fitokimia Rimpang Lengkuas Putih
No Senyawa Metabolit Sekunder Serbuk Rimpang Ekstrak Metanol Rimpang 1 Alkaloid + + 2 Flavonoid + + 3 Saponin - - 4 Tanin + + 5 Kuinon + + 6 Steroid/triterpenoid + +

## 3.3. Analisis Aktivitas Peredaman Radikal dengan HPLC dan UV-Vis
Senyawa DPPH digunakan untuk uji antioksidan dan merupakan senyawa radikal yang stabil, dimana elektron yang tidak berpasangan terdelokalisasi di seluruh molekulnya. Keuntungan  dari uji antioksidan menggunakan DPPH adalah mudah, ekonomis dan cepat sebagai metode untuk menentukan aktivitas peredaman radikal dari antioksidan non-enzimatik [13].  Untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  pengukuran  dapat  dilakukan  dengan  membandingkan  kadar  DPPH  pada panjang  gelombang  maksimal  sebelum  dan  sesudah  direaksikan  dengan  senyawa  antioksidan.  Pada  penelitian  ini ditentukan terlebih dahulu panjang gelombang maksimal dari DPPH menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Spektrum panjang gelombang maksimal DPPH dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Spektrum radikal DPPH pada analisis spektrofotometer UV-Vis
Panjang Gelombang (nm) A bs or ba ns i
Panjang gelombang maksimum radikal DPPH yang diperoleh adalah 515 nm (Gambar 2). Hal ini diperkuat dengan penelitian Fadda dkk [3], dimana radikal DPPH memiliki serapan maksimum pada panjang gelombang sekitar 515 nm. Kemudian, diukur pula panjang gelombang maksimum dari kuersetin dengan menggunakan kuersetin 10 ppm diperoleh panjang gelombang maksimal pada 370 nm. Hal ini sesuai dengan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Dehghan dan Khoshkam [14] dan Iacopini dkk [15].
Dari pengukuran HPLC larutan blanko DPPH yang dibandingkan dengan pengukuran HPLC larutan DPPH + kuersetin 30 ppm, terlihat pada Gambar 3 bahwa puncak spektrum pada waktu retensi 8,62 menit telah hilang. Hal ini menandakan bahwa aktivitas radikal DPPH telah berhasil diredam dengan senyawa kuersetin dengan hilangnya puncak spektrum pada waktu retensi sekitar 8,62 menit. Sementara, penentuan aktivitas inhibisi DPPH menggunakan spektrum UV-Vis dimana digunakan kuersetin sebagai senyawa kontrol menunjukkan puncak pada panjang gelombang 515 nm juga menghilang ketika larutan DPPH sudah ditambahkan dengan kuersetin. Hal ini menandakan berlangsungnya aktivitas inhibisi DPPH.

## Gambar 3. Kromatogram larutan blanko DPPH (atas) dan kromatogram larutan DPPH + kuersetin 30 ppm
Pada  Gambar  4  terlihat  adanya  pergeseran  puncak  panjang  gelombang  maksimum  kuersetin  pada  campuran kuersetin + DPPH dari 370 nm menjadi 327 nm. Hal ini disebabkan adanya perubahan struktur pada kuersetin akibat dari proses inhibisi DPPH. Kuersetin yang kaya akan gugus hidroksil akan mendonorkan sebagian atom H untuk diberikan ke atom N radikal pada DPPH sehingga gugus hidroksil yang kehilangan atom H tersebut menjadi atom O radikal. Sedangkan DPPH yang sudah menerima atom H akan menjadi senyawa yang stabil. Proses donor atom H berlangsung secara reaksi radikal sehingga akan terbentuk kuersetin radikal. Kuersetin radikal yang terbentuk akan relatif lebih stabil karena adanya gugus-gugus  fenolik  yang  bisa  menstabilkan  keberadaan  atom O  radikal  sehingga  reaksi  rantai  radikal  dapat  diputus. Adapun mekanisme reaksi peredaman DPPH oleh kuersetin tersebut dapat dilihat pada Gambar 5 [16].
Aktivitas antioksidan merupakan kemampuan suatu senyawa atau ekstrak untuk menghambat reaksi oksidasi yang dapat  dinyatakan  dengan  presentase  penghambatan  atau  presentase  inhibisi.  Parameter  yang  digunakan  untuk menunjukkan  aktivitas  antioksidan  adalah  inhibition  concentration  (IC 50 )  yaitu  konsentrasi  suatu  zat  antioksidan  yang memberikan presentase penghambatan sebesar 50% [17]. Zat yang memiliki aktivitas antioksidan tinggi memiliki nilai IC 50 yang sangat rendah. Pada percobaan ini, aktivitas antioksidan diuji pada ekstrak lengkuas merah dan ekstrak lengkuas putih serta senyawa kuersetin sebagai kontrol positif. Ketiga sampel tersebut ditentukan IC 50 menggunakan metode UV- Vis dan HPLC. Hasil pengujian aktivitas antioksidan menggunakan UV-Vis diperoleh data kurva inhibisi DPPH dari ekstrak
Blanko DPPH
DPPH + Kuersetin 30 ppm
lengkuas putih lebih linier dibandingkan kurva antioksidan dari ekstrak lengkuas merah. Kurva aktivitas antioksidan ekstrak lengkuas merah dan lengkuas putih dapat dilihat pada Gambar 6.

## Gambar 4. Perbandingan spektrum UV-Vis kuersetin dan kuersetin + DPPH
Gambar 5. Mekanisme inhibisi DPPH oleh kuersetin yang diusulkan oleh Foti dkk [16]
(b) Gambar 6. Kurva aktivitas antioksidan dari (a) lengkuas merah dan (b) lengkuas putih menggunakan UV-Vis y = 0,1221x + 2,6158 R² = 0,9489 0 20 40 60 80 0 100 200 300 400 500 600 In hib is i ( % ) Konsentrasi Ekstrak (ppm) y = 0,112x + 0,4272 R² = 0,9857 0 20 40 60 80 0 100 200 300 400 500 600 In hib is i ( % ) Konsentrasi Ekstrak (ppm)
Pada penentuan aktivitas antioksidan menggunakan HPLC juga diperoleh data bahwa kurva inhibisi DPPH ekstrak lengkuas  putih  memiliki  linieritas  yang  lebih  baik  dibandingkan  lengkuas  merah.  Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan menggunakan metode HPLC dapat dilihat pada Gambar 7.
(a)
(b)
Gambar 7. Kurva aktivitas antioksidan dari (a) lengkuas merah dan (b) lengkuas putih menggunakan HPLC
Dilakukan pengujian aktivitas antioksidan pula pada kuersetin sebagai senyawa kontrol dengan menggunakan HPLC dan UV-Vis. Pengujian aktivitas antioksidan kuersetin menggunakan HPLC dan UV-Vis diperoleh kurva yang cukup linier namun  linieritas  kurva  yang  lebih  baik  diperoleh  dengan  menggunakan  HPLC.  Hal  ini  dimungkinkan  karena  terjadi interferensi serapan dari campuran kuersetin dan DPPH ketika dilakukan pengukuran menggunakan spektrofotometer UV- Vis sehingga sedikit mengganggu linieritas absorbansi dari DPPH yang terinhibisi. Kurva aktivitas antioksidan dari kuersetin menggunakan HPLC dan UV-Vis dapat dilihat pada Gambar 8.
(a) (b)
Gambar 8. Kurva aktivitas antioksidan dari kuersetin menggunakan HPLC dan UV-Vis
Dari ketiga senyawa yang diuji aktivitas antioksidannya yaitu ekstrak lengkuas merah, ekstrak lengkuas putih dan kuersetin diperoleh data IC 50 untuk ketiga senyawa tersebut (Tabel 3). Dari nilai IC 50 kuersetin memiliki IC 50 yang paling rendah hal ini sesuai dikarenakan kuersetin sudah menjadi senyawa rujukan untuk uji aktivitas antioksidan [18]. Selain itu, ekstrak lengkuas merah dan lengkuas putih bukan senyawa murni sehingga terdapat kemungkinan adanya kandungan senyawa lain yang tidak memiliki aktivitas antioksidan. Antara ekstrak lengkuas merah dan ekstrak lengkuas putih, aktivitas antioksidan pada ekstrak lengkuas putih lebih baik dibandingkan ekstrak lengkuas merah. Hal ini memungkinkan bahwa di dalam ekstrak lengkuas putih memiliki kandungan senyawa fenolik yang lebih banyak dibandingkan pada ekstrak lengkuas merah. Senyawa fenolik memiliki peranan vital dalam proses antioksidan. Kandungan senyawa fenolik pada ekstrak suatu senyawa dapat dipengaruhi banyak hal, salah satunya teknik ekstraksi yang digunakan dan pemilihan pelarut ekstrak [19].
Tabel 3. Aktivitas Peredaman Radikal Kuersetin dan Ekstrak Lengkuas
Sampel Nilai IC 50 (ppm) Metode UV-Vis Metode HPLC Kuersetin 16,24 15,45 Ekstrak lengkuas putih 462,47 ± 2,98 62,17 ± 3,87 Ekstrak lengkuas merah 488,43 ± 1,13 68,12 ± 10,19
y = 0,715x + 3,0664 R² = 0,9729 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 In hib is i ( % ) Konsentrasi Ekstrak (ppm) y = 0,8766x - 1,4657 R² = 0,9625 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 In hib is i ( % ) Konsentrasi Ekstrak (ppm) y = 3,3051x - 3,6614 R² = 0,9873 0 20 40 60 80 100 120 0 5 10 15 20 25 30 % Inh ib is i Konsentrasi (ppm) y = 3,367x - 2,0217 R² = 0,9975 0 20 40 60 80 100 120 0 5 10 15 20 25 30 % Inh ib is i Konsentrasi (ppm)
Dari dua metode penentuan aktivitas antioksidan menggunakan HPLC dan spektrofotometer UV-Vis diperoleh data yang berbeda siginifikan. Hal ini dimungkinkan penentuan kadar menggunakan spektrofotometer UV-Vis memiliki ketelitian yang kurang akurat jika dibandingkan dengan HPLC. Adanya interferensi serapan sinar pada sistem campuran senyawa yang terjadi Ketika pengukuran menggunakan spektrofotometer UV-Vis menjadi faktor yang membuat HPLC lebih baik digunakan dalam menentukan konsentrasi suatu senyawa, terlebih didalam proses pengukuran tersebut melibatkan lebih dari  satu  senyawa  [20].  Pada  HPLC  terdapat  sistem  pemisahan  yang  ada  pada  kolom  HPLC  membuat  penentuan konsentrasi suatu senyawa dengan HPLC menjadi lebih baik.

## 4. Kesimpulan
Dari ketiga senyawa yang diuji aktivitasnya diperoleh data bahwa senyawa kuersetin memiliki nilai IC 50 yang paling rendah kemudian ekstrak lengkuas putih dan terakhir ekstrak lengkuas merah. Hasil analisis peredaman radikal senyawa standar kuersetin menggunakan metode spektrofotometer UV-Vis dan metode HPLC memberikan harga IC 50 yang tidak berbeda signifikan, tetapi untuk sampel ekstrak lengkuas memiliki harga IC 50 yang berbeda signifikan.

## Daftar Pustaka
[1] Z. Liu, Z. Ren, J. Zhang, C.-C Chuang, E. Kandaswamy, T. Zhou, & L. Zuo, “Role of ROS and Nutritional Antioxidants in Human Diseases,” Frontiers in Physiology, vol. 9, no. 477, pp. 1–14, 2018.
[2] S. B. Nimse, &  D. Pal, “Free Radicals, Natural Antioxidants, and Their Reaction Mechanisms,” RSC Advances, vol. 5, no. 35, pp. 27986–28006, 2015.
[3] A. Fadda, M. Serra, M. G. Molinu, E. Azara, A. Barberis, & D. Sanna, “Reaction Time and DPPH Concentration Influence Antioxidant Activity and Kinetic Parameters of Bioactive Molecules and Plant Extracts in the reaction with the DPPH Radical,” Journal of Food Composition and Analysis, vol. 35, no. 2, pp. 112–119, 2014.
[4] G.-J. Shi, Y. Li, Q.-H. Cao, H.-X. Wu, X.-Y. Tang, X.-H Gao, J.-Q. Yu, Z. Chen, & Y. Yang, “In vitro and in vivo Evidence that Quercetin Protects Against Diabetes and its Complications: A Systematic Review of the Literature,” Biomedicine & Pharmacotherapy, vol. 109, pp. 1085–1099, 2019.
[5] S. Ozgen, O. K. Kilinc, & Z. Selamoglu, “Antioxidant Activity of Quercetin: A Mechanistic Review,” Turkish Journal of Agricultural - Food Science and Technology, vol. 4, no. 12, pp. 1134–1138, 2016.
[6] P. W. Harlina, R. Shahzad, M. Ma, N. Wang, & N. Qiu, “Effects of Galangal Extract on Lipid Oxidation, Antioxidant Activity and Fatty Acid Profiles of Salted Duck Eggs,” Journal of Food Measurement and Characterization, vol. 13, no. 3, pp. 1820–1830, 2019.
[7] T. Chaweepack, B. Muenthaisong, S. Chaweepack, & K. Kamei, “The Potential of Galangal (Alpinia galanga Linn.) Extract against the Pathogens that Cause White Feces Syndrome and Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease (AHPND) in Pacific White Shrimp (Litopenaeus vannamei),” International Journal of Biology, vol. 7, no. 3, pp. 8–17, 2015.
[8] J. B. Harborne, Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Bandung: ITB, 1996.
[9] G. Miliauskas, P. R. Venskutonis, & T. A. van Beek, “Screening of Radical Scavenging Activity of Some Medicinal and Aromatic Plant Extracts,” Food Chemistry, vol. 85, no. 2, pp. 231–237, 2004.
[10] Departemen Kesehatan RI, Farmakope Herbal Indonesia. Jakarta: Departemen Kesehatan RI, 2008.
[11] P. Mayachiew & S. Devahastin, “Antimicrobial and Antioxidant Activities of Indian Gooseberry and Galangal Extracts,” LWT - Food Science and Technology, vol. 41, no. 7, pp. 1153–1159, 2008.
[12] K. R. Lakshmi, M. Supraja, M. Mounika, & P. S. Babu, “A Review on Hypoglycemic Activity of Different Extracts of Various Medicinal Plants,” International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, vol. 7, no. 8, pp. 3173– 3184, 2016.
[13] I. Mirończuk-Chodakowska, A. M. Witkowska, & M. E. Zujko, “Endogenous Non-enzymatic Antioxidants in the Human Body,” Advances in Medical Sciences, vol. 63, no. 1, pp. 68–78, 2018.
[14] G.  Dehghan,  &  Z.  Khoshkam,  “Tin(II)-quercetin  Complex:  Synthesis,  Spectral  Characterisation  and  Antioxidant Activity,” Food Chemistry, vol. 131, no. 2, pp. 422–426, 2012.
[15] P. Iacopini, M. Baldi, P. Storchi, & L. Sebastiani, “Catechin, Epicatechin, Quercetin, Rutin and Resveratrol in Red Grape: Content, in vitro Antioxidant Activity and Interactions,” Journal of Food Composition and Analysis, vol. 21, no. 8, pp. 589–598, 2008.
[16] M.  C.  Foti,  C.  Daquino,  G.  A.  Dilabio,  &  K.  U.  Ingold,  “Kinetics  of  the  Oxidation  of  Quercetin  by  2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl (dpph•),” Organic Letters, vol. 13, no. 18, pp. 4826–4829, 2011.
[17] F. Martinez-Morales, A. J. Alonso-Castro, J. R. Zapata-Morales, C. Carranza-Álvarez, & O. H. Aragon-Martinez, “Use of Standardized Units for a Correct Interpretation of IC 50 Values Obtained from the Inhibition of the DPPH Radical by Natural Antioxidants,” Chemical Papers, vol. 74, no. 10, pp. 3325–3334, 2020.
[18] S. A. N. Aljadaan, R. S. Elias, & R. A. Al-Anssari, “Investigation of the Antioxidant and Antibacterial Activity of Novel Quercetin Derivatives,” Biointerface Research in Applied Chemistry, vol. 10, no. 6, pp. 7329–7336, 2020.
[19] X. Tang, C. Xu, Y. Yagiz, A. Simonne, & M. R. Marshall, “Phytochemical Profiles, and Antimicrobial and Antioxidant Activities of Greater Galangal [Alpinia galanga (Linn.) Swartz.] Flowers,” Food Chemistry, vol. 255, pp. 300–308, 2018.
[20] B. Cahyono, E. F. Hasanah, Judiono, M. Suzery, & Widayat, “Analysis of Piperine Content in Cabe Jawa Extracts (Piper  retrofractum  Vahl)  using  UV  spectrophotometry  and  HPLC,”  IOP  Conference  Series  Material  Science  and Engineering, vol. 509, no. 012025, 2019.