## UJI AKTIVITAS BAKTERI PENAMBAT NITROGEN DAN PENGHASIL IAA DARI
RIZOSFER TANAMAN KEDELAI ( Glycine max L.)
Activity Test of Nitrogen Stocking-Bacteria and IAA Produsing from Soybean Plants Rizosphere (Glycine max L.)
Saida 1 , Puspitasari 2 , dan Aminah 1
1 Dosen Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Muslim Indonesia
2 Alumni Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Muslim Indonesia e-mail: saida.saida@umi.ac.id aminah.muchdar@umi.ac.id

## ABSTRACT
This  study  aims  to  examine  the  activities  of  nitrogen-fixing  bacteria  and  Indole  Acetic  Acid (IAA)-producing bacteria  from  the  soybean  plant  rhizosphere.  This  research  was  conducted  at  the  Laboratory  of  Plant  Pests  and Diseases,  Faculty  of  Agriculture,  Universitas  Muslim  Indonesia  (UMI),  Makassar.  Analysis  of  the  sample  N fastening test was carried out at the Laboratory of Soil and Conservation, Faculty of Agriculture, UMI, Makassar. Analysis  of  the  IAA  test  sample  was  carried  out  at  the  Laboratory  of  Plant  Pests  and  Diseases,  Faculty  of Agriculture, Hasanuddin University, Makassar, from May to July  2021. This study used a Completely Randomized Design (CRD) method. The isolates tested were isolates obtained from soybean roots, namely isolate 2.2, isolate 2.3 and isolate 3.2.  Of  the  three  isolates,  each  was  replicated  three  times,  so  that  there  were  nine  rep lications.  The obtained  data  was  then  analyzed  using  the  Anova  test.The  results  showed  that  isolate  3.2  had  a  higher  nitrogen fixation ability, which was 20.31% compared to isolate 2.2 and isolate 2.3. The density level of isolate 2,3 tended to be higher, with an absorbance of 0.43 and the ability to produce IAA at 6.61 ppm.
Keywords: Plant Rhizosphere; IAA; Nitrogen; Soybean Plants

## PENDAHULUAN
Kedelai  merupakan  tanaman  legum yang dapat menambat nitrogen secara mandiri, namun  masih  membutuhkan  pupuk  nitrogen pada awal fase pertumbuhannya. Bradyrhizobium adalah  rhizobium  yang  dapat berperan  sebagai  agen  pupuk  hayati  dengan bersimbiosis dengan akar kedelai. Penggunaan bakteri  ini  adalah  solusi  dalam  mengurangi penggunaan  pupuk  anorganik,  selain  itu memberikan beberapa keuntungan antara lain : meningkatkan  ketersediaan  unsur  hara,  tidak memiliki  efek  samping  yang  membahayakan, efisien  dalam  penggunaannya  karena  tidak mahal  serta  ramah  lingkungan  (Novriani, 2011).
Data dari Badan Pusat Statistik Sulawesi Selatan  menunjukkan  bahwa  pada  tahun  2015 luas  panen  tanaman  kedelai  38.036  hektar dengan  produksi  kedelai  sebesar  67.192  ton dan  produktivitas  perhektar  yaitu  1,77  ton perhektar.  Tahun  2014  luas  panen  tanaman kedelai 36.390 hektar dengan produksi kedelai
54.606  ton  dan  produktivitas  yaitu  1,50  ton perhektar.
Salah satu cara budidaya  yang baik bagi tumbuhan ialah dengan menggunakan mikroba yang mampu menghasilkan metabolit sekunder sebagai faktor pendukung pertumbuhan. Rizosfer  adalah  mikroba  yang  ada  disekitar akar tanaman yang secara langsung dipengaruhi  oleh  mikroba  tanah  dan  eksudasi perakaran  tanaman  (Sukmadi,  2012). Mikroba rizosfer  seperti Azospirillum sp., Azotobacter sp.  dan Enterobacter sp.,  dapat  memberikan efek menguntungkan bagi pertumbuhan tanaman karena kemampuannya menghasilkan hormon IAA (Sukmadi, 2012).
IAA endogen merupakan hormon pertumbuhan  yang  dihasilkan  oleh  tanaman, sedangkan  IAA  eksogen  merupakan  hormon yang  diproduksi  oleh  bakteri  yang  mampu mempercepat  pertumbuhan  tanaman  dengan memacu  proses  differensiasi  pada  2  akar dalam  membentuk  rambut  akar.  Konsentrasi IAA  rendah  dapat  menstimulasi  pemanjangan akar  utama,  sedangkan  konsentrasi  tinggi
dapat  menstimulasi  pembentukan  akar  lateral dan  akar  adventif.  Pertumbuhan  akar  lateral dan akar adventif berperan pada tanaman yang masih  muda  dalam  hal  menyerap  unsur  hara (Astriani, 2015).
Sumber  hormon  IAA  yang  alami  tidak hanya  dihasilkan  oleh  tumbuhan  saja  tetapi juga  dihasilkan  oleh  rhizobakteri.  Pemakaian supernatan  dari  kultur  rhizobakteri  yang mengandung  IAA  mampu  memberikan  efek fisiologis  pada  suatu  tanaman.  Hormon tumbuh  yang  dihasilkan  oleh  mikroorganisme rhizosfer mampu meningkatkan perkecambahan biji, pembentukan rambut akar serta  meningkatkan  transpor  ion  sehingga pengangkutan  air  oleh  akar  meningkat (Pamungkas et al., 2009).
Pemanfaatan  kelompok  PGPR  yang dapat  menambat  nitrogen  dan  penghasil  IAA diharapkan mampu mempengaruhi pertumbuhan  kedelai.  Berdasarkan  uraian tersebut  maka  dalam  upaya  memenuhi meningkatkan  produktivitas    tanaman  kedelai yang  akan  memenuhi  kebutuhan    masyarakat maka    perlu  dilakukan  penelitian  tentang  uji aktivitas  bakteri  penambat  nitrogen  dan penghasil  auksin  IAA  dari  rizosfer  tanaman kedelai.

## METODE PENELITIAN
Penelitiaan ini dilaksanakan di
Laboratorium  Hama  dan  Penyakit  Tanaman,
Fakultas Pertanian, Universitas Muslim Indonesia,  Makassar.  Analisis  sampel  uji Penambat  N  dilaksanakan  di  Laboratorium Tanah  dan  Konservasi,  Fakultas  Pertanian, Universitas  Muslim  Indonesia,  Makassar  dan Analisis sampel uji  Auksin IAA dilaksanakan di Laboratorium Hama dan Penyakit Tanaman, Fakultas  Pertanian,  Universitas  Hasanuddin, Makassar.  Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan Juli sampai September 2021.
Penelitian ini dirancang dengan
menggunakan metode Rancangan Acak Lengkap  (RAL).  Perlakuan  yang  diujicobakan yaitu  jenis  isolat  yang  diisolasi  dari  akar
tanaman  kedelai  (koleksi  Laboratorium  Tanah dan Konservasi Tanah) yaitu isolat 2.2 (IB-1), isolat  2.3  (IB-2)  dan  isolat  3.2  (IB-3).  Dari ketiga isolat tersebut dilakukan 3 kali ulangan setiap  isolat  sehingga  ada  9  ulangan.  Data yang diperoleh kemudian dianalisis dengan uji Anova.
Adapun  Isolat  yang  digunakan  pada peneilitian  ini  yaitu  isolat  yang  dikoleksi  di Laboratorium Konservasi Tanah dan Lingkungan  Fakultas  Pertanian,  Universitas Muslim  Indonesia  yang  berhasil  diisolasi  oleh Adriantama  (2021).  Isolat  bakteri  ini  diisolasi dari  rizosfer  tanaman  kedelai  sebanyak  23 isolat  yang  berpotensi  dalam  pelarutan  P. Maka  dalam  penelitian  ini  untuk  melakukan uji  aktivitas  bakteri  penambat  nitrogen  dan penghasil  auksin  IAA  menggunakan  3  isolat yang  unggul  dari  23  isolat  yang  berpotensi dalam  pelarutan  P.  Dari  isolat  yang  unggul yaitu isolat dengan kode Iso 2-2 (IB-1), iso 2-3 (IB-2) dan iso 3-2 (IB-3).

## Uji Kemampuan Bakteri dalam Menambat Nitrogen
Isolat yang telah dimurnikan diinokulasikan  pada  media  NA  semi  padat. Inkubasi  dilakukan  pada  suhu  ruang  selama  2 hari  dan  diamati  pelikel  yang  terbentuk. Setelah  itu  dilakukan  uji  lanjut  dengan  cara membuat media baru lalu menggoreskan untuk mendapatkan isolat tunggal.
Sebelum  media  di  tumbuhkan  mikroba penambat  nitrogen  terlebih  dahulu  melakukan analisis  kadar  nitrogen.  Setelah  itu  Isolat bakteri ditumbuhkan pada medium JNFB semi padat dan diinkubasi selama 10 hari pada suhu ruang. Setelah ada perubahan warna menganalisis  kembali  kandungan  N  pada media,  jumlah  N  yang  di  fiksasi  oleh  bakteri adalah  selesih  antara  kadar  N  dalam  media setelah  ditumbuhkan  bakteri  dan  sebelum ditumbuhkan bakteri.
Uji  Kemampuan  Bakteri  Menghasilkan IAA
Pengujian  kemampuan  bakteri  dalam menghasilkan  IAA  diuji  menggunakan  media nutrien nutrien  broth dan reagen  salkowski . Biakan  isolat  bakteri  dikulturkan  pada  media NB yang dilengkapi dengan L-triptophan (0,1 g  l -1 )  pada  suhu  28 o C  dalam  kondisi  gelap selama  5  hari,  dan  supernatan  diambil  setelah sentrifugasi.  Kemudian  4  ml  supernatan ditambahkan  ke  dalam  1  ml reagen  salkowski (12  g  l -1 FeCl 3 dalam  429  l -1 ml  H 2 SO 4 ). Campuran disimpan selama 24 jam pada suhu 28 o C pada kondisi gelap dan absorbansi diukur
pada  535  nm  pada  spekrofotometer  UV-VIS. Perubahan  warna  pink  dalam  tabung  reaksi menunjukkan produksi IAA.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kemampuan
Bakteri dari Rizosfer Tanaman Kedelai dalam Menambat N
Hasil  analisis  sidik  ragam  menunjukkan bahwa jumlah N yang di fiksasi oleh tiga isolat bakteri  rizosfer  tanaman  kedelai berpengaruh sangat nyata. Adapun rata-rata jumlah nitrogen yang  difiksasi  oleh  ke  tiga  bakteri  tersebut disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Rata-rata jumlah N yang Difiksasi Oleh Bakteri Perlakuan Rata-Rata N yang Difiksasi (%) NP BNT 5% IB-1 (Iso 2.2) 16.67 b 0.80 IB-2 (Iso 2.3) 17.33 b IB-3 (Iso 3.2) 20.31 a
Keterangan : Angka yang diikuti huruf yang tidak sama berbeda sangat nyata menurut uji BNT 5%
Berdasarkan  Tabel  1 menunjukkan bahwa  kemampuan  memfiksasi  nitrogen  yang lebih tinggi yaitu IB-3 (isolat 3.2) dengan rata- rata 20,31% berbeda nyata dengan IB-1 (isolat 2.2)  dan  IB-2  (isolat  2.3).  Dan  isolat  yang memfiksasi  nitrogen  paling  rendah  yaitu  IB-1 (isolat 2.2) dengan rata-rata 16,67%.

## Kepadatan Bakteri Penghasil IAA
Hasil  analisis  sidik  ragam  menunjukkan bahwa kepadatan bakteri penghasil IAA antara ketiga isolat bakteri yang diisolasi dari rizosfer tanaman  kedelai  tidak  berpengaruh  nyata terhadap kepadatan bakteri yang ditumbuhkan. Adapun  rata-rata  kepadatan  bakteri  penghasil IAA oleh ketiga bakteri tersebut disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1 Rata-Rata Kepadatan Bakteri Penghasil IAA
Berdasarkan  Gambar  1,  menunjukkan bahwa IB-2 (isolat 2.3) merupakan isolat yang memiliki rata-rata kepadatan bakteri penghasil IAA  cenderung  lebih  tinggi  yaitu  0,43
0,10 0,43 0,35 0,00 0,10 0,20 0,30 0,40 0,50 Iso 2.2 Iso 2.3 Iso 3.2 K ep ad atan (ab so b an )
absorban  dan  IB-3  (isolat  3.2)  adalah  isolat yang  memiliki  rata-rata  kepadatan  bakteri penghasil IAA yaitu 0,35 absorban. Sedangkan IB-1  (isolat  2.2)  merupakan  isolat  yang memiliki rata-rata kepadatan bakteri penghasil IAA  cenderung  lebih  rendah  yaitu  0,10 absorban.

## Konsentrasi IAA yang Dihasilkan
Hasil  analisis  sidik  ragam  menujukkan bahwa  kemampuan  bakteri  menghasilkan auksin  antara  ketiga  isolat  bakteri  yang diisolasi  dari  rizosfer  tanaman  kedelai  tidak berpengaruh  nyata  terhadap  kemampuan bakteri menghasilkan auksin yang ditumbuhkan.  Adapun  rata-rata  kemampuan bakteri  menghasilkan  auksin  oleh  ketiga bakteri disajikan pada Gambar 2.
Gambar 2 Rata-Rata Kemampuan Bakteri Menghasilkan IAA.
Berdasarkan  Gambar  2  menunjukkan bahwa IB-2 (isolat 2.3) merupakan isolat yang memiliki rata-rata kemampuan bakteri menghasilkan  auksin  cenderung  lebih  tinggi yaitu  6,61  ppm  dan  IB-3  (isolat  3.2)  adalah isolat yang memiliki nilai rata-rata konsentrasi IAA  yaitu  5.35  ppm.  Sedangkan  IB-1  (isolat 2.2)  merupakan  isolat  yang  memiliki  rata-rata kemampuan  bakteri  menghasilkan  auksin cenderung lebih rendah yaitu 1,35 ppm.

## PEMBAHASAN
Kemampuan
Bakteri dari Rizosfer Tanaman Kedelai dalam Menambat N
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  dalam menyeleksi  bakteri  penambat  nitrogen  yang telah dilakukan dengan metode rancangan acak kelompok  didapatkan bahwa  IB-3 (isolat 3.2) memiliki  kemampuan  paling  tinggi  dalam menambat  nitrogen  sebesar  20,31%,  diikuti
oleh IB-2 (isolat 2.3) sebesar 17,33% dan IB-1 isolat  2.2)  sebesar  16,67%.  Hasil  penelitian Firrani (2011), menyatakan bahwa kemampuan  isolat  bakteri  tertinggi  dalam menambat  nitrogen  hanya  menghasilkan  3.13 ppm  yaitu  bakteri  yang  diisolasi  dari  akar kelapa sawit. Hal tersebut menunjukkan bahwa isolat  penambat  nitrogen  yang  diiolasi  dari rizosfer kedelai memiliki kemampuan penambat nitrogen yang lebih baik. Hasil  pengujian  secara  kuantitatif  yang dilakukan dengan metode pengukuran kemampuan bakteri dalam menambat N diukur berdasarkan  kemampuan  enzim  nitrogenase dalam  mereduksi  asetilen  (C 2 H 2 )  menjadi etilen  (C 2 H 4 )  (Firrani,  2011).  Hal  ini menunjukkan bahwa IB-3 (isolat 3.2) memiliki kemampuan  yang  paling  potensial  sebesar 20,31%.
IB-1  (isolat  2.2)  merupakan  isolat  yang memiliki  rata-rata  kemampuan  memfiksasi
1,35 6,61 5,35 0 1 2 3 4 5 6 7 Iso 2.2 Iso 2.3 Iso 3.2 K o se n tr as i IA A (p p m )
nitrogen cenderung lebih rendah yaitu 16,67%. Hal  ini  dipengaruhi  oleh  faktor  kandungan nitrogen  yang  lebih  rendah  dalam  memfiksasi nitrogen.  Menurut  Hindersah  &  Simarmata (2004)  mengatakan  bahwa  fiksasi  nitrogen biologis  sebagai  bagian  dari  input  nitrogen untuk mendukung pertumbuhan tanaman telah menurun  akibat  intensifikasi  pemupukan anorganik.

## Kepadatan Bakteri Penghasil IAA
Kepadatan  bakteri  dapat  diukur  dengan menggunakan  spektrofotometer  berdasarkan absorbansinya dengan panjang gelombang 535 nm. Kerja spektrofotometer yakni dengan cara melewatkan cahaya dengan panjang gelombang  tertentu  sesuai  jenis  atom  pada suatu obyek kaca yang disebut kuvet. Sebagian cahaya  akan  diserap  dan  sisanya  akan dilewatkan.  Semakin  kental  larutan  dalam kuvet  maka  semakin  banyak  cahaya  yang terserap dan pembacaannya dimonitor semakin tinggi  nilai  absorbannya.    Keuntungan  utama metode spektrofotometer adalah bahwa metode  ini  memberikan  cara  sederhana  untuk menetapkan  kuantitas  zat  yang  sangat  kecil. Selain  itu,  hasil  yang  diperoleh  cukup  akurat, dimana  angka  yang  terbaca  langsung  dicatat oleh detector dan tercetak dalam bentuk angka digital ataupun grafik yang sudah diregresikan (Seniati, dkk.,2019)
Demikian halnya dengan bakteri, kepadatan  populasi  akan  terbaca  berdasarkan kekeruhannya,  Mikroba  dalam  suatu  bahan cair dapat dideteksi berdasarkan kekeruhannya.  Pertumbuhan  sel  bakteri  di dalam  suatu  medium  cair  akan  meningkatkan kekeruhan  media,  yang  akan  mempengaruhi jumlah  sinar  yang  dapat  ditransmisikan menembus medium (Widi, 2012)
Hasil  penelitian  absorban  dari  ketiga isolat terdeteksi dengan baik, interval kenaikan absorban  juga  tidak  berbeda  nyata  yakni bahwa  absorban  dari  IB-1  (isolat  2.2)  yaitu 0,10  absoban  yang  paling  rendah.  Kemudian IB-2  (isolat  2.3)  nilai  absorban  0,43  yang
paling  tinggi  dan  IB-3  (isolat  3.2)  yaitu  0,32 absorban.  Semakin  banyak  jumlah  bakteri maka  warnanya  semakin  keruh  atau  pekat maka  semakin  banyak  cahaya  yang  diserap dan absorbannya semakin tinggi. Dimana IB-2 (isolat  2.3)  menunjukkan  pertumbuhannya yang  lebih  tinggi  atau  kepadatannya  lebih tinggu  dibandingkan  dari  kedua  isolate lainnya.

## Konsentrasi IAA yang Dihasilkan
Uji  kuantitatif  terhadap  ketiga  isolat bakteri dengan menggunakan spektrofotometer, menunjukkan bahwa konsentrasi  IAA  bervariasi  dari  masing- masing  isolat.  Pada IB-2  (isolat  2.3) menghasilkan konsentrasi IAA tertinggi sebanyak  6,61  ppm,  diikuti  IB-3  (isolat  3.2) menghasilkan IAA sebanyak 5,35 ppm dan IB- 1 (isolat 2.2) menghasilkan IAA terendah yaitu 1,35  ppm.  Oleh  karena  itu  IB-2  (isolat  2.3) menghasilkan  isolat  yang  dianggap  paling potensial dalam menghasilkan IAA dibandingkan kedua isolat lainnya.
Variasi  konsentrasi  hormon  IAA  yang dihasilkan  oleh  masing-masing  isolat  diduga karena  perbedaan  kemampuan  kecepatan bakteri  dalam  mensintesis  triptofan  menjadi IAA.  Biosintesis  IAA  oleh  mikroba  dapat ditingkatkan  dengan  penambahan  triptofan sebagai precursor .  Menurut  Bric  (1991), bakteri yang menghasilkan IAA dapat ditumbuhkan  di  dalam  media  pertumbuhan yang  mengandung  triptofan  yang  penting dalam  pembentukan  IAA.  IAA  atau  Auksin disintesis  sebagai  metabolit  sekunder  yang dihasilkan dalam kondisi pertumbuhan bakteri suboptimal  atau  saat  tersedia  prekursor  asam amino triptofan.
Bakteri  IB-1  (isolat  2.2)  menghasilkan IAA yang rendah hal ini diduga karena bakteri menggunakan  nutrisi  yang  terkandung  di dalam  media  hanya  untuk  pertumbuhan  saja, tidak  digunakan  untuk  menghasilkan  senyawa metabolit sekunder yaitu IAA. Menurut Lestari (2007),  semakin  lama  umur  bakteri,  produksi
IAA cenderung menurun. Hal ini kemungkinan  besar  disebabkan  oleh  turunnya kandungan  nutrisi  sedangkan  di  lain  pihak IAA  yang  dihasilkan  dikonsumsi  kembali untuk  pertumbuhan.  Perbedaan  kemampuan bakteri  dalam  menggunakan  nutrisi  yang terdapat di dalam media untuk mendukung laju metabolismenya  akan  mempengaruhi  laju pertumbuhan bakteri tersebut. Selain pengaruh nutrisi,  juga  dipengaruhi  jenis  mikroba  dan keadaan mikroba

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  maka  dapat disimpulkan bahwa:
1. Isolat 3.2 mempunyai kemampuan memfiksasi  nitrogen  yang  lebih  tinggi yaitu  20,31%  dibandingkan  dengan  isolat 2.2 dan isolat 2.3.
2. Isolat  2.3  cenderung  lebih  tinggi  tingkat kepadatannya dengan nilai absorban sebesar 0,43 dan
kemampuan menghasilkan IAA yaitu 6,61 ppm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  disampaikan  kepada  Yayasan Wakaf  UMI  dan  Lembaga  Penelitian  dan Pengembangan  Sumberdaya  (LP2S)  UMI  atas hibah dana Penelitian Unggulan  Fakultas T.A. 2021.

## DAFTAR PUSTAKA
Astriani,  M.  2015. Seleksi  Bakteri  Penghasil Indole-3-Acetic Acid (IAA) dan Pengujian  Pada  Bibit  Kelapa  Sawit (Elais guneensus Jacq.) . Thesis. Sekolah Pascasarjana,  Institut  Pertanian  Bogor. Bogor.
Bric,  J.M.,  Richard,  M.B.,  &  Sara,  E.S.  1991.
Rapid  In  Situ  Assay  for  Indoleacetic Acid Production by Bacteria Immobilized on a Nitrocellulose
Membrane.  Appli  Environ  Microbiol. 57: 535-538.
Firrani, M. 2011. Isolasi dan Uji Kemampuan Bakteri Endofit Diazotrof yang
Memfiksasi  Nitrogen  Bebas  pada  Akar Kelapa  Sawit  (Elaeis  guineensis Jaqc.). Skripsi.  Medan.  Universitas  Sumatera Utara.
Hindersah, R., & T. Simarmata. 2004 . Potensi Rhizobacteri Azotobacter Dalam Meningkatkan  Kesehatan  Tanah . J
Natura Indones . 5:127-133.
Lestari P, DN Susilowati and EI Riyanti. 2007.
Pengaruh  hormon  asam  indol  asetat yang dihasilkan Azospirillum sp. terhadap  perkembangan  akar  padi.
Jurnal AgroBio-gen 2, 66-72.
Novriani.  2011. Pernanan  Rhizobium  dalam Meningkatkan  Ketersediaan  Nitrogen bagi  Tanaman  Kedelai. Agronobis.  Vol. 3, No. 5.
Pamungkas, F. T., Sri, D1 & Raharjo, B. 2009.
Pengaruh Konsentrasi dan Lama Perendaman  dalam  Supernatan  Kultur Bacillus sp.2ducc-br-kl.3 Terhadap
Pertumbuhan  Stek  Horisontal  Batang Jarak  Pagar  (Jatropha  curcas L. ) . Artikel Penelitian. Universitas Diponegoro. Seniati,  Marbiah  dan  Irham  A.  2019. Pengukuran  Kepadatan  Bakteri  Vibrio Harveyi secara Cepat dengan
Menggunakan  Spectrofotometer.  Jurnal Agrokompleks 19 (2) : 12-19. Sukmadi,  R.  B.  2012. Aktivitas  Fitohormon Indole-3-Acetic-Acid (IAA) dari Beberapa  Isolat  Bakteri  Rhizosfer  dan Endofit. Jurnal  Sains  dan  Teknologi
Indonesia, 14 (3), 221-227.
Widi, I.K. 2012. Perhitungan Bakteri . Program Studi Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung.