## PEMANFAATAN EKSTRAK JINTAN HITAM UNTUK MENURUNKAN KADAR ENZIM LP-PLA 2 SEBAGAI KANDIDAT PENGOBATAN ATEROSKLEROSIS
Retno Susilowati 1 , Evika Sandi Savitri dan Kholifah Holil Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN Malang Jl. Gajayana 50 Malang E-mail: 1 susilowatiretno _ pd@yahoo.com

## ABSTRAK
Ox-LDL deposits in the sub-endothelial easily occur in individuals who have hyperlipidemia accompanied with oxidative stress. The enzyme Lp-PLA2 is an enzyme marker of three proaterogenik conditions, those are hyperlipidemia, oxidative stress and in fl ammation. Black cumin seeds (Nigella sativa L.) have antioxidants ingredient that can inhibit lipid peroxidation, and expected to inhibit atherosclerosis through decreased levels of the enzyme Lp-PLA 2 and F 2 -Isp. This study used posttest only control group design using experimental animals Rattus norvegicus Wistar males. The study analysied the number of foam cells, lipid pro fi le, Lp-PLA 2 and F 2- Isp plasma levels in hyperlipidemia rats were given extracts of black cumin seeds with 3 different doses (0; 3.6 and 7.2 mg / kg). The results showed that the extract of black cumin seeds can decrease serum levels of Lp-PLA2, tend to reduce the formation of foam cells, but not signi fi cant to decreasing levels of F2-Isp. Black cumin seeds extract can decrease cholesterol, TG, LDL and increase HDL in the blood serum. The extract of black cumin seeds is anti atherogenic by reducing the enzyme Lp-PLA2 and improve lipid pro fi les.
Key words: Black cumin seeds, Lp-PLA2 enzyme, atherosclerosis

## PENGANTAR
Aterosklerosis adalah penyakit in fl amasi kronik dan sering terjadi pada individu hiperkolesterol yang mengalami stress oksidasi yang ditunjukkan oleh peningkatan kadar F 2 -Isp. Enzim Lp-PLA 2 merupakan enzim marker tiga kondisi proaterogenik yaitu hiperlipidemi, stress oksidasi dan in fl amasi proaterogenik. Aterosklerosis merupakan etiologi primer penyakit kardiovaskuler telah menjadi penyebab kematian terbesar di dunia (WHO, Mendis et al. , 2011). Sebanyak 30–40% penderita CVD memiliki kadar kolesterol normal (Winkler et al ., 2007; Davidson , 2008). Paparan diet hiperkolesterol selama 4 minggu pada babi diabetes mampu meningkatkan enzim Lp-PLA 2 dalam plasma hampir maksimal dan tidak berbeda nyata dengan paparan 3 dan 6 bulan (Shi et al ., 2007), namun potensinya menghambat pembentukan sel busa masih perlu dibuktikan. Hal ini menunjukkan bahwa Lp-PLA 2 merupakan biomarker risiko aterosklerosis yang akurat, namun penurunan Lp-PLA 2 plasma sampai saat ini belum dimanfaatkan sebagai indikator keberhasilan pengobatan.
Jintan hitam merupakan sumber antioksidan mampu meningkatkan SOD, GSH dan katalase sebagai antioksidan sehingga mampu menurunkan stress oksidasi dan menurunkan peroskidasi lipid (Kanter et al. , 2005; Al-Makki, 2006; Hakim, 2007). Jintan hitam mampu menurunkan MDA di liver yang diinduksi oleh CCl 4 (Kanter et al. , 2003). Ekstrak etanol jintan hitam telah menunjukkan fungsinya sebagai
antiin fl amasi pada ginjal yang diinduksi oleh etilen glikol (Hadjzadeh et al. , 2007). Pemberian jintan hitam dapat menurunkan kadar glukosa darah mencit yang diinduksi oksidan STZ, namun tidak menurunkan kadar glukosa darah mencit normal (Susilowati, 2006) serta meningkatkan kadar GOT dan GPT hepar mencit yang dipapar oksidan CCl 4 (Susilowati, 2009). Hal ini menunjukkan bahwa jintan hitam dapat menghambat peroksidasi lipid, sehingga diduga mampu menurunkan kadar enzim Lp-PLA 2 dan F2-Isp dalam plasma darah sehingga mampu menghambat aterosklerosis. Keseimbangan oksidasi yang baru terbentuk akibat pemberian jintan hitam dapat meningkatkan e fl uk kolesterol dari sel busa di sub intima pembuluh darah diduga diperankan oleh peningkatan HDL sehingga diharapkan dapat dimanfaatkan pada pengobatan aterosklerosis. Penelitian ini mengungkap potensi ekstrak jintan hitam untuk menghambat dan mengobati aterosklerosis melalui potensinya menurunkan stres oksidasi yang dilihat dari penurunan kadar Lp-PLA 2 dan F 2 -Isp serta menghambat pembentukan sel busa.

## BAHAN DAN CARA KERJA
Obyek dalam penelitian ini adalah tikus menggunakan hewan coba tikus ( Rattus norvegicus ) Wistar Jantan yang diperoleh dari Pusvetma Surabaya. Penelitian ini dilakukan menggunakan rancangan penelitian post test only control group design . Biji jintan hitam dalam penelitian ini diperoleh
40
dari Balai Materia Medika Batu-Malang. Pembuatan ekstrak jintan hitam dilakukan menggunakan metode maserasi dengan pelarut alkohol dan penguapan pelarut dilakukan menggunakan vacum rotary evaporator pada suhu 40° C hingga diperoleh ekstrak kental.
Variabel bebas penelitian ini adalah pemberian ekstrak jintan hitam dengan 3 dosis berbeda (0; 3,6 dan 7,2 mg/kgbb) yang diberikan kepada tikus diet normal maupun hiperkolesterol. Terdapat 5 variasi perlakuan yaitu Diet Hiperkolesterol + JH Dosis 0 mg/kgbb (HK-JH0); Diet Hiperkolesterol + JH Dosis 3,6 mg/kgbb (HK-JH1); Diet Hiperkolesterol + JH Dosis 7,2 mg/kgbb (HK-JH2); Diet Normokolesterol + JH Dosis 0 mg/kgbb (NK-JH0) dan Diet Normokolesterol + JH Dosis 7,2 mg/kgbb ((NK-JH2). Pemberian ekstrak jintan hitam dilakukan selama 1 bulan. Pemberian ekstrak jintan hitam dengan dosis 7,2 mg/ekor pada tikus normokolesterol dilakukan untuk mengetahui gambaran efek jintan hitam dosis tinggi pada individu normal yang melakukan pencegahan aterogenesis.
Variabel tergantung penelitian ini adalah profil lipid plasma (total kolesterol, trigliserida, LDL, HDL), kadar Lp-PLA 2 dan F 2 -isoprotan dalam plasma, serta jumlah sel busa pada jaringan aorta yang diamati pada akhir perlakuan.
Kadar Lp-PLA 2 dan F2-Isp diukur menggunakan metode Elisa. Jumlah sel busa diamati pada irisan beku aorta dengan pewarna oil red O. Kadar kolesterol, TG, LDL dan HDL diukur menggunakan metode enzimatik.
Untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan kadar Lp- PLA 2 dan F2-Isp dan pro fi l lipid (Tc, TG, LDL, HDL) serum diantara dosis ekstrak nigella yang berbeda dilakukan analisis ANOVA. Jika terdapat perbedaan yang signi fi kan maka untuk mengetahui perlakuan mana yang berbeda nyata, dilakukan uji lanjut LSD. Untuk mempermudah analisis data, pada penelitian ini digunakan software SPSS dengan output data berupa tabel hasil analisis.

## HASIL
Kadar Lp-PLA 2 dalam serum darah
Pada penelitian ini, untuk mempercepat peningkatan enzim Lp-PLA 2 , setelah diberi pakan kolesterol selama 30 hari, tikus hiperkolesterol ini diinduksi diabetes dengan induktan STZ yang disuntikan secara intraperitoneal dengan multiple dosis sebanyak 30 mg/kgBB sebanyak 3 kali dengan selang pemberian 5 hari. Pada hari ke 15 dilakukan pengukuran kadar glukosa darah. Hasil pengukuran kadar glukosa darah tikus normal adalah berkisar antar 80–110 mg/dl sedangkan kadar glukosa tikus hiperkolesterol cukup variatif, sehingga untuk kelompok perlakuan digunakan
tikus hiperkolesterol dengan kadar gula sebesar minimal 130 mg/dl.
Dari hasil ekstraksi jintan hitam dengan pelarut alkohol diperoleh rendemen rata-rata sebesar 40%. Berdasarkan penelitian sebelumnya dosis jintan hitam untuk manusia adalah 1 g per hari. Melalui nilai konversi untuk tikus sampai akhir penelitian diperkirakan memiliki rata-rata berat badan 100 g, maka dosis untuk masing-masing tikus sebesar 3,6 mg untuk dosis 1 dan 7,2 mg untuk dosis 2 yang dilarutkan dalam CMC 0,1%. Ekstrak diberikan setiap hari dengan cara disonde dan tikus dosis 0 diberi CMC 0,5 ml CMC 0,1%.
Data kadar enzim Lp-PLA 2 serum diantara 4 perlakuan yang berbeda memiliki nilai statistik Levene 1,938 dengan nilai signi fi kansi p > 0,05 dan nilai Z Kolmogorov-Smirnov 0,463 dengan nilai Z > 0,05 sehingga data memenuhi kaidah parametrik homogenitas dan distribusi normal. Hasil uji One Way ANOVA menunjukkan bahwa perlakuan berpengaruh sangat nyata terhadap kadar enzim Lp-PLA 2 (F hitung 63,364; F < 0,01). Hasil uji lanjut menggunakan LSD menunjukkan bahwa kadar enzim Lp-PLA 2 perlakuan HK-JH0 berbeda signifikan dengan kadarnya pada HK-JH1 dan HK-JH2. Pemberian ekstrak jinten hitam dosis 1 dapat menurunkan kadar enzim Lp-PLA 2 serum seiring meningkatnya dosis meskipun pemberian dosis 2 belum bisa menurunkan kadar Lp-PLA 2 hingga kembali normal (NK-JH0). Pemberian ekstrak jintan hitam pada tikus normal tidak mempengaruhi kadar enzim Lp-PLA 2 dalam serum (Tabel 1).
Kadar F 2 -Isp dalam Serum Darah
Data kadar F 2 -Isp serum diantara 4 perlakuan yang berbeda memiliki nilai statistik Levene 0,751 dengan nilai signi fi kansi p > 0,05 dan nilai Z Kolmogorov-Smirnov 1,034 dan signi fi kansi Z > 0,05 sehingga data memenuhi kaidah parametrik homogenitas dan distribusi normal. Hasil uji One Way ANOVA menunjukkan bahwa perlakuan berpengaruh tidak nyata terhadap kadar F 2 -Isp (F hitung
Tabel 1. Hasil uji LSD Kadar Enzim Lp-PLA 2 dalam Serum Darah
Tikus Hiperkolesterol yang diberi esktrak biji jinten hitam Perlakuan Rerata ± Std (ng/mL) Notasi HK-JH0 562,22 ± 63,91 A HK-JH1 467,39 ± 55,50 B HK-JH2 351,39 ± 45,35 C NK-JH0 170,28 ± 11,66 D NK-JH2 208,50 ± 38,62 D
Keterangan:  Nilai rata-rata yang diikuti dengan notasi berbeda menunjukkan berbeda signifikan pada taraf kesalahan 0,05
0,325; F > 0,05). Kadar F 2 -Isp diantara 5 perlakuan yang berbeda memiliki rerata kadar F 2 -Isp yang sama (Tabel 2).

## Kadar Kolesterol dalam Serum Darah
Data kadar kolesterol serum diantara 4 perlakuan yang berbeda memiliki nilai statistik Levene 1,415 dengan nilai signi fi kansi p > 0,05 dan nilai Z Kolmogorov-Smirnov 0,463 dan nilai signi fi kansi p > 0,05 sehingga data memenuhi kaidah parametrik homogenitas dan distribusi normal. Hasil uji One Way ANOVA menunjukkan bahwa perlakuan berpengaruh sangat nyata terhadap kadar kolesterol dalam serum darah tikus (F hitung 294,390; F < 0,01). Hasil uji lanjut menggunakan LSD menunjukkan bahwa kadar enzim Lp-PLA 2 perlakuan HK-JH0 berbeda signi fi kan dengan kadarnya pada HK-JH1 dan HK-JH2. Pemberian ekstrak jinten hitam dosis I dapat menurunkan kadar kolesterol serum seiring meningkatnya dosis meskipun pemberian dosis II belum bisa menurunkan kadar kolesterol hingga kembali normal (NK-JH0). Pemberian ekstrak jinten hitam pada tikus normal tidak mempengaruhi kadar enzim Lp-PLA 2 dalam serum (Tabel 3).

## Kadar Trigliserida dalam Serum Darah
Data kadar trigliserida serum diantara 4 perlakuan yang berbeda memiliki nilai statistik Levene 1,496 dengan nilai signi fi kansi p > 0,05 dan nilai Z Kolmogorov-Smirnov Z < 1,96 dengan signi fi kansi p > 0,05 sehingga data memenuhi kaidah parametrik homogenitas dan distribusi normal.
Hasil uji One Way ANOVA menunjukkan bahwa perlakuan berpengaruh sangat nyata terhadap kadar trigliserida serum (F hitung 84,52; F < 0,01). Hasil uji lanjut menggunakan LSD menunjukkan bahwa kadar trigliserida perlakuan HK-JH0 berbeda signi fi kan dengan kadarnya pada HK-JH1 dan HK-JH2. Pemberian ekstrak jintan hitam dosis 1 dapat menurunkan kadar trigliserida serum seiring meningkatnya dosis meskipun pemberian dosis 2 belum bisa menurunkan trigliserida hingga kembali normal (NK-JH0) (Tabel 4).

## Kadar LDL dalam Serum Darah Tikus
Data kadar LDL serum diantara 4 perlakuan yang berbeda memiliki nilai statistik Levene 7,214 dengan nilai signi fi kansi p < 0,05 dan nilai Z Kolmogorov-Smirnov 0,500 sehingga data tidak memenuhi kaidah parametrik homogenitas, tetapi data memiliki distribusi normal. Hasil uji non papametrik menunjukkan bahwa perbedaan perlakuan menimbulkan perbedaan kadar LDL (nilai statistik Welch sebesar 1,074 dan Statistik Brown-Forsythe sebesar 446,214 keduanya memiliki signi fi kansi p < 0,01). Hasil uji lanjut non parametrik menggunakan Tamhene menunjukkan bahwa kadar LDL perlakuan HK-JH0 berbeda signi fi kan dengan kadarnya pada HK-JH1 dan HK-JH2 Pemberian ekstrak jinten hitam dosis I dapat menurunkan kadar LDL serum seiring meningkatnya dosis dan pemberian dosis II belum bisa menurunkan kadar LDL hingga kembali normal (belum sama dengan NK-JH0). Pemberian ekstrak jinten hitam pada tikus normal tidak mempengaruhi LDL dalam serum (Tabel 5).
Tabel 2. Rerata Kadar F 2 -Isp dalam Serum Darah Tikus
Hiperkolesterol yang diberi esktrak biji jintan hitam Perlakuan Rerata ± STD (ng/mL) HK-JH0 5332,6 ± 393,26 HK-JH1 5436,2 ± 359,54 HK-JH2 5369,2 ± 158,79 NK-JH0 5198,8 ± 341,21 NK-JH2 5332,6 ± 393,26
Tabel 3. Hasil uji LSD Kadar Kolesterol dalam Serum Darah Tikus
Hiperkolesterol yang diberi esktrak biji jinten hitam Perlakuan Rerata ± STD (mg/dL) Notasi HK-JH0 235,49 ± 6,73 A HK-JH1 180,62 ± 6,26 B HK-JH2 143,27 ± 7,40 C NK-JH0 122,39 ± 2,33 D NK-JH2 139,2,33 ± 5,33 C
Keterangan: Nilai rata-rata yang diikuti dengan notasi berbeda menunjukkan berbeda signifikan pada taraf kesalahan 0,05
Tabel 4. Hasil uji LSD Kadar Trigliserida dalam Serum Darah Tikus yang diberi Ekstrak Jintan Hitam Perlakuan Rerata ± STD (mg/dL) Notasi HK-JH0 176,12 ± 5,28 A HK-JH1 149,77 ± 7,88 B HK-JH2 124,13 ± 3,08 C NK-JH0 113,07 ± 8,27 D NK-JH2 125,06 ± 4,88 C
Keterangan: Nilai rata-rata yang diikuti dengan notasi berbeda menunjukkan berbeda signifikan pada taraf kesalahan 0,05
Tabel 5. Hasil uji Tamhene LDL dalam Serum Darah Tikus
Perlakuan Rerata ± STD (mg/dL) Notasi HK-JH0 158,45 ± 4,25 A HK-JH1 88,32 ± 6,10 B HK-JH2 46,66 ± 7,07 C NK-JH0 23,00 ± 0,93 D NK-JH2 35,51 ± 7,95 D
Keterangan: Nilai rata-rata yang diikuti dengan notasi berbeda menunjukkan berbeda signifikan pada taraf kesalahan 0,05

## Kadar HDL dalam Serum Darah
Data kadar HDL serum diantara 4 perlakuan yang berbeda memiliki nilai statistik Levene 0,885 dengan nilai signi fi kansi p > 0,05 dan nilai Z Kolmogorov-Smirnov 0,886 dengan signi fi kansi p > 0,05 sehingga data memenuhi kaidah parametrik homogenitas dan distribusi normal. Hasil uji One Way ANOVA menunjukkan bahwa perlakuan berpengaruh sangat nyata terhadap kadar HDL (F hitung 208,174; F < 0,01). Hasil uji lanjut menggunakan LSD menunjukkan bahwa kadar HDL perlakuan HK-JH0 berbeda signi fi kan dengan kadarnya pada HK-JH1 dan HK-JH2. Pemberian ekstrak jinten hitam dosis 1 dapat meningkatkan kadar HDL serum seiring meningkatnya dosis, pemberian dosis 2 bisa meningkatkan kadar HDL hingga kembali normal (sama dengan NK-JH0). Pemberian ekstrak jintan hitam pada tikus normal meningkatkan kadar HDL dalam serum melebihi normal (Tabel 6).

## Jumlah sel busa
Data jumlah sel busa perluas bidang pandang mikroskop pada perbesaran 10 × 40 di antara 4 perlakuan yang berbeda memiliki nilai statistik Levene 0,877 dengan nilai signi fi kansi p > 0,05 dan nilai Z Kolmogorov-Smirnov 0,929 dengan signi fi kansi p > 0,05 sehingga data memenuhi kaidah parametrik homogenitas dan distribusi normal. Hasil uji One Way ANOVA menunjukkan bahwa perlakuan berpengaruh tidak nyata terhadap jumlah sel busa (F hitung 0,522; F > 0,05). Rerata jumlah sel busa di antara keempat perlakuan berbeda tersebut dapat dilihat pada tabel 7.

## PEMBAHASAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa diet hiperkolesterol yang diberikan telah dapat meningkatkan risiko aterosklerosis yang ditandai dengan meningkatkan kadar kolesterol total, trigliserida, LDL dan menurunkan HDL dalam serum darah tikus. Dibandingkan diet normokolesterol, diet hiperkolesterol memiliki kandungan tambahan utama berupa kolesterol, asam kolat dan lipid. Kolesterol dan lipid dalam diet pada umumnya meningkatkan masukan lipid ke dalam metabolism lipid. Asam kolat adalah komponen garam empedu primer yang berfungsi sebagai pengemulsi lemak. Sekresi garam empedu termasuk didalamnya asam kolat meningkatkan penyerapan lemak oleh usus. Dengan demikian tingginya kolesterol, lemak dan asam kolat bersinergi meningkatkan metabolism lemak jalur eksogenous. Tingginya absorpsi lemak meningkatkan pembentukan kilomikron dalam sirkulasi yang pada akhirnya meningkatkan pembentukan VLDL, LDL dalam sirkulasi disertai peningkatan kadar kolesterol total dan trigliserida tikus diet hiperkolesterol.
Peningkatan LDL, kolesterol dalam sirkulasi juga ditingkatkan lagi dengan menurunnya HDL yang mestinya berperan untuk mentransport balik kolesterol ke hepar agar dapat dieliminasi dari dalam tubuh. Teori menyebutkan bahwa HDL dapat terbentuk dari HDL diskoidal yang tersusun oleh ApoA-1 yang dihasilkan oleh hepar dan metabolisme VLDL dan kilomikron remnant dalam sirkulasi, dengan phospholipid transfer protein dan cholestreyl ester transfer protein yang mempertukarkan kolesterol dari HDL dengan trigliserida IDL membentuk HDL (Gotto, 2004). Dengan mendasarkan pada statemen tersebut semestinya peningkatan VLDL akan meningkatkan HDL. Namun pada kondisi hiperkolesterol biasanya disertai dengan stress oksidasi sehingga LDL akan terperangkap dalam jaringan sehingga tidak dapat ditransport balik ke hepar lewat HDL, sementara itu tahap esteri fi kasi kolesterol pada apoA-1 yang baru terbentuk merupakan tahap kritis perkembangan HDL dan hal ini sulit terbentuk pada individu hiperkolesterol.
Tingkat stress oksidasi mestinya dapat tercermin dari meningkatnya marker stress oksidasi seperti F 2 -Isp maupun Lp-PLA 2 . Pada penelitian ini kadar F 2 -Isp tidak berbeda signi fi kan diantara perlakuan yang berbeda hal ini disebabkan karena F 2 -Isp baru meningkat pada fase lebih lanjut dari tahap aterogenesis (Halliwell dan Gutteridge, 1999) yang belum terjadi pada penelitian ini. Namun demikian dengan mendasarkan pada peningkatan Lp-PLA 2 yang berbeda sangat signi fi kan pada penelitian, karena Lp-PLA 2 hanya terbentuk jika terjadi stress oksidasi (Manhein et al. , 2008; Wang et al. , 2009) maka dapat
Tabel 6. Hasil uji LSD Kadar HDL dalam Serum Darah Tikus yang diberi Ekstrak Jintan Hitam Perlakuan Rerata ± STD (mg/dL) Notasi HK-JH0 39,64 ± 6,79 A HK-JH1 63,18 ± 3,57 B HK-JH2 74,60 ± 3,49 C NK-JH0 78,23 ± 4,48 C NK-JH2 125,79 ± 5,29 D
Keterangan: Nilai rata-rata yang diikuti dengan notasi berbeda menunjukkan berbeda signifikan pada taraf kesalahan 0,05
Tabel 7. Rerata Jumlah Sel Busa dalam Pembuluh Darah Aorta Tikus yang diberi Ekstrak Jintan Hitam
Perlakuan Rerata ± STD (sel/bp) HK-JH0 3,67 ± 0,93 HK-JH1 3,1 ± 1,59 HK-JH2 3,42 ± 1,26 NK-JH0 1,85 ± 2,47 NK-JH2 2,32 ± 2,10
Keterangan: pengamatan sel busa dilakukan pada perbesaran mikroskop cahaya 10 × 40
dipastikan bahwa pada tikus hiperkolesterol tanpa pemberian jintan hitam mengalami peningkatan stress oksidasi.
Peningkatan kadar Lp-PLA 2 terjadi karena reaksi terhadap meningkatnya stres oksidasi sehingga mengoksidasi senyawa lipid termasuk fosfokolin. Kadar Lp-PLA 2 melebihi normal bersifat proin fl amasi karena enzim Lp-PLA 2 menghidrolisis fosfatidilkolin sebagai jenis fosfolipid yang banyak dijumpai dalam membran sel maupun lipoprotein sehingga menghasilkan lisoPC dan oxFA. LisoPC bersifat proinflamasi karena dapat menstimulasi jaringan endotel mengekspresi molekul adesi. Dengan demikian peningkatan Lp-PLA 2 disertai ataupun tidak dengan peningkatan LDL akan diikuti dengan reaksi in fl amasi yang dapat memfasilitasi pembentukan sel busa. Lipoprotein terdeposit dalam makrofag terjadi karena lipoprotein tersebut teroksidasi sehingga difagosit oleh makrofag tanpa disertai down regulasi.
Tikus hiperkolesterol yang mendapatkan ekstrak jintan hitam mengalami peningkatan HDL hingga normal, bahkan dapat meningkatkan kadar HDL melebihi tikus diet normokolesterol. Pemberian biji jintan hitam dapat meningkatkan kadar HDL darah kelinci hiperkolestreol (Khadiga et al ., 2009). HDL sangat berperan dalam transport balik kolesterol ke hepar. Di dalam hepar kolesterol dapat dieliminasi dalam bentuk empedu, sehingga pemberian jintan hitam dapat menurunkan kadar kolesterol, trigliserida dan LDL dari tikus hiperkolesterol.
Meskipun penurunan jumlah sel busa belum menunjukkan perbedaan yang signi fi kan secara statistik, kecenderungan penurunan jumlah sel busa terlihat dalam penelitian ini. Penurunan jumlah sel busa ini dimungkinkan karena peningkatan kadar HDL yang terjadi bersifat antiaterogenik. HDL memiliki sifat antiaterogenik melalui beberapa cara antara lain:
1.  HDL memiliki enzim hidrolisis peroksida seperti glutathione phospholipid peroxidase (Barter et al ., 2004), paraoxonase dan clustrin sebuah enzim esterase yang disintesis dan disekresi oleh hati yang berfungsi untuk menghidrolisis phospholipid teroksidasi dan lipid peroksida (Barter et al ., 2004; Krishaswamy, et al ., 2006), dengan demikian kadar fosfolipid teroksidasi dan lipid peroksida menurun. Kita ketahui bahwa membrane sel termasuk membran endotel sebagian besar tersusun oleh senyawa fosfolipid. Jika fosfolipid penyusun membran mengalami oksidasi maka fungsi membran terganggu dan senyawa maupun sel dalam sirkulasi mudah melintasi endotel dan terjadi reaksi in fl amasi. 2.  HDL sebagai mediator transport molekul oksidan. Kandungan ApoA-1 pada HDL dapat melepas LDL
lipid hydroperoksida (suatu oksidan). HDLCE-O-(O)-H ( Cholesteryester hydroperoxide ) secara cepat dilepas ke sel hati (Barter et al ., 2004).
3.  HDL juga menurunkan kemampuan oxLDL menginduksi interaksi monosit ke endotel (Krishaswamy, et al .,
2006), HDL menurunkan molekul adesi di endotel seperti VCAM dan ICAM sehingga menurunkan in fi ltrasi monosit ke sub endotel. HDL sebagian besar tersusun oleh ApoA-1 dan fosfatidil kolin. Secara invitro fosfatidil kolin mampu menghambat sitokin dalam mengekspresi VCAM dalam kultur HUVEC’s, karena itu HDL juga menghambat migrasi monosit ke sub endotel dan menghambat reaksi in fl amasi (Barter et al ., 2004; Hattori et al ., 2004).
Uji fi tokimia pada fraksi etanol jintan hitam mengandung senyawa fl avonoid, tanin dan alkaloid (Nickavar et al. , 2005). Analisis dengan GC-MS, menunjukkan bahwa minyak jintan hitam mengandung minyak esensial yang terdiri dari 30 senyawa dan sebanyak 92% atau 25 senyawa merupakan monoterpenoid. Kandungan senyawa dan kadarnya dalam prosen adalah sebagai berikut: terpenoid hidrokarbon alpha pinen 13,75%, limonen 2,25%, p-cymen 43,58%; terpenoid phenol carvacrol 2,53% dan terpenoid keton timoquinon 1,65% (Toma et al ., 2010). Jintan hitam juga mengandung mineral utama yaitu potassium, kalsium, fosfor dan magnesium, selain itu juga mengandung sodium, besi, mangan, seng dan tembaga (Sultan, et al ., 2009). Sementara itu, suplementasi fl avonoid dan Zn dapat meningkatkan aktivitas enzim antioksidan seperti SOD, katalase dan glutation peroksidase (Ardiani, 2011). Pemberian ekstrak jintan hitam maupun timoquinon terbukti mneingkatkan aktivitas SOD (Kanter et al. , 2005) dan katalase (Al-Makki, 2006). Dengan demikian, kandungan fl avonoid dan Zn dalam ekstrak jintan hitam akan meningkatkan aktivitas enzim SOD sehingga menurunkan stres oksidasi (ditandai penurunan F 2 Isp) sehingga akan menurunkan pembentukan oxLDL dan akhirnya menurunkan pembentukan sel busa dalam penelitian ini.
Enzim Lp-PLA 2 dihasilkan oleh makrofag sel busa yang terbentuk karena tikus mengalami peningkatan stress oksidasi. Tikus diet hiperkolesterol yang mendapatkan ekstrak jintan hitam dapat dipastikan mendapatkan tambahan kandungan antioksidan sehingga dapat menurunkan tingkat stress oksidasi. Penurunan tingkat stres oksidasi ini akan menurunkan terbentuknya senyawa fosfokolin teroksidasi yang merupakan stimulus terjadinya transkripsi gen Lp-PLA 2 . Dengan demikian pemberian ekstrak jintan hitam dapat menurunkan kadar Lp-PLA 2 dalam serum seperti terjadi pada penelitian ini.

## 44
Penelitian ini menunjukkan bahwa, pemberian ekstrak jintan hitam tidak berpengaruh signifikan menurunkan tetapi hanya cenderung menurunkan jumlah sel busa. Hal ini dimungkinkan karena 1) pembentukan sel busa memerlukan waktu cukup lama, sehingga pemberian diet hiperkolesterol selama 30 hari belum dapat menunjukkan peningkatan secara signi fi kan, 2) oxLDL yang terdeposit tidak dikenali lagi oleh reseptor ABCA-1 sehingga proses RCT tidak bisa berjalan, dan proses regresi sel busa tidak dapat terjadi, 3) bahan aktif dalam ekstrak jinten sebagai antioksidan berfungsi terbatas pada penghambatan perkembangan pembentukan sel busa.
Dari hasil penelitian ini dapat simpulkan bahwa pemberian ekstrak jinten hitam dapat menghambat pembentukan sel busa perkembangan aterosklerosis yang didukung oleh:
1.  Pemberian ekstrak jintan hitam dapat menurunkan kadar Lp-PLA 2 dalam serum.
2.  Pemberian ekstrak jintan hitam tidak nyata menurunkan terbentuknya F 2 -Isp dalam serum.
3.  Pemberian ekstrak jintan hitam belum nyata menurunkan pembentukan sel busa.
4.  Pemberian ekstrak nigella dapat menurunkan kadar kolesterol, TG, LDL dan meningkatkan HDL dalam serum darah

## KEPUSTAKAAN
Al-Makki, H.A. 2006. A Mechanistic Study of Protective Effect of Thymoquinone on Hepatotoxicity of Acetaminophen in Mice, Departement of Pharmacology College of Pharmacy, King Saud University: 1–3.
Ardiani, F., Wiryatun, L., dan Emy, H. 2011. Ekstrak air daun Ceplikan ( Rualia tuberose L) berpengaruh terhadap kadar SGOT dan SGPT dan Gambaran histologist Hepar Mencit DM. Jurnal Gizi Klinik Indonesia 8(2).
Barter, P.J., Nicholls, S., Rye, K.A., Anatharamaiah, G.M., Navab, M., dan Fogelmen, A.M. 2004. Antiin fl ammatory Properties of HDL, Circualtion Research 95: 764–772.
Davidson. 2008. Non Invasive Surrogate Markers in
Atherosclerosis. Feisnteian (ed). Non- Invasive Surrogate Markers of AStherosclerosis. Informa Health Care USA : 97–109.
Gotto AM. 2004. Contemporary Diagnosis and Management of Lipid Disorder, Handbooks in Health Care Co., Pennsylvanis, USA: 1–53.
Hadjzadeh, M., Khoei, A., Hadjzadeh, Z., dan Parizady, M. 2007. Ethanolic Extract of Nigella sativa L Seed on Ethylene Glycol-Induced Kidney Calculli in Rats, Urology Journal 4(2): 86–90.
Hakim, A. 2005. Affecting Aging: Protection of SOD-de fi cient Drossophylla from Oxidative Stress, 1–5.
Hattori, H., Kujiraoka, T., Egashira, T., Saito, E., Fujioka, T., Takashashi, S., Ito, M., Coopper, J.A., Stepanova, I.P., Nanjee, N., dan Miller, N.E. 2004. Association of Coronary Heart Disese with Pre- β -HDL Consentrations in Japanese Men, Cinical Chemistry 50(3) 589–595.
Kanter, M., Coskun, O., dan Budancamanak, M. 2005.
Hepatoprotective effects of Nigella sativa L and Urtica dioica L on lipid peroxidation antioxidant enzyme systems and liver enzymes in carbon tetrachloride-treated rats. World J Gastroenter 11(42): 6684–6688.
Kanter, M., Meral, I., Yener, Z., Ozbek, H., dan Demir, H. 2003.
Partiel Regeneration Proliferation of the β -cella in the Islets of Langerhans by Nigella sativa L. In Sterptozotocin- Induced Diabetic Rats, Tohoku J. Exp. Med 201: 213–
219
Khadiga, A., Abdel, Ati, A.E., Mustafa, H.E., dan Mohamed. 2009. The effect of dietary Nigella sativa seeds on the blood cholesterol and lipoprotein levels of rabbits, Journal of Animal & Plant Sciences 3, Issue 3: 227–230.
Krishnaswamy, P.R., Rao, A., Murali, W., dan Ballal, H.S. 2006. Paraoxonase Activity and Antibodies to Oxidized-LDL in Chronic Renal Failure Patients or Renal Repalcement Therapy, Indian Journal of Clinical Biochemistry 21(2): 173–176.
Mannheim, D., Herrman, J., Versari, D., Gossl, M., Meyer, F.B., McConnell, J.P., Lerman, L.O., dan Lerman, A. 2008. Enhanced Expression of Lp-PLA 2 and Lysophosphatidylcholine in Symptomatic Caroteid Atherosclerotic Plaques. Stroke 39(5): 1448–1455.
Nickavar, B., Faraz, M., Katayoun, J., dan Mohammad, A.R.A.
2003. Chemical Composition of Fixed and Volatile Oils of Nigella sativa L. from Iran. Department of Pharmacognosy. School of Pharmacy. Shaheed Beheshti University of Medical Science.
Shi, Y., Zhang, P., Zhang, L., Osman, H., Mohler, E.R., Macphee, C., Zalewski, A., Postle, A., dan Wilensky. 2007. Role of Lipoprotein-associated Phospho-lipase A 2 in Leukocyte Activation and In fl ammatory Responses. Atherosclerosis 191: 54–62.
Sultan, M.T., Masood, S.B., Faqir, M.A., Amer, J., Saeed, A., dan Muhammad, N. 2009. Nutritional Pro fi le of Indigenous Cultivar of Black Cumin Seeds and Antioxidant Potential of Its Fixed and Essential Oil. Pakistan Journal Botani 41(3): 1321–1330.
Susilowati, R. 2006. Habbatus Sauda sebagai Ameliorant Fungsi Pankreas pada Mencit Diabetes. Jurnal El-Qudwah 1: 118–130.
Susilowati, R. 2009. Pengaruh Jinten hitam ( Nigela sativa L.) terhadap GPT dan GOT Mencit. Jurnal Hayati 3D: 27–30.
Wang, W.Y., Li, J.L., Yang, D., Xu, W., Zha, R., dan Wang, Y. 2009. oxLDL stimulates lipoprotein-associated phospholipase A2 expression in THP-1 monocytes via PI3K dan p38 MAPK pathways, Cardiovascular Research : 1–8.
Winkler, K., Hoffmann, M.M., Winklmann, B.R., Friedrich, I., Schafer, G., Seelhorst, U., Wellnitz, B., Wieland, H., Boehm, B.O., dan Marz, W. 2007. Lipoprotein-Associated Phospholipase A 2 Predicts 5-Year Cardiac Mortality Independently of Established Risk Factors and Adds Prognostic Information in Patients with Low and Medium
High-sensitivity C-Reactive Protein. Clinical Chemistry 53: 1440–1447.
Halliwell, B., dan Guteridge, J.M.C. 1999. Free Radicals in Biology and Medicine 3 rd ed., Oxford University Press, New York: 27–250.
WHO, Mendis, S,, Puska, P., dan Norrving, B. (editor). 2011. Global Atlas on Cardiovascular Disease Prevention and Control, Geneva.
Toma, C.C., Simu, G.M., dan Hanganu, D. 2010. Chemical Composition of the Tunisian Nigella sativa Essential Oil. Farmacia 58(4): 458–465.