DOI: 10.24198/jit.v17i1.15138 Unpad Press                                                                                                            Available online at http://jurnal.unpad.ac.id/jurnalilmuternak

## Identifikasi  Morfometrik  Sperma  Domba  Lokal  sebagai  Dasar  Aplikasi Sexing Sperma
N. Solihati 1a , S. D. Rasad 1 , A. Yusrina 1 , Y. I. Dimyati 1
1 Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran Bandung a email: nurcholidah@unpad.ac.id

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengidentifikasi  ukuran-ukuran  sperma  berdasarkan  metode morfometrik sebagai dasar untuk aplikasi sexing sperma pada Domba Lokal. Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan 20 ekor Domba Lokal umur lebih dari satu tahun, yang ditampung semennya dan  dibuat  preparat  differensial.  Pengamatan  morfometrik  sperma  dilakukan  di  bawah  mikroskop cahaya  pembesaran  10x100  menggunakan  aplikasi  DP2BSW.  Parameter  yang  diamati  meliputi ukuran  panjang,  lebar  dan  luas  kepala  sperma  serta  panjang  ekor  sperma.  Pengukuran  dilakukan terhadap 70 sd 200 sel sperma untuk setiap parameter. Data yang diperoleh dihitung nilai minimum, maksimum  dan  standar  deviasi  dari  setiap  parameter.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kepala sperma memiliki rataan panjang minimum 6,85±0,40 µm dan maksimum 10,27± 0,51µm; rataan lebar kepala  sperma  minimum  3,76±0,43  µm  dan  maksimum  6,71±0,43  µm;  rataan  luas  kepala  sperma minimum  23,28±2,90  µm 2 dan  maksimum  59,30±4,33  µm 2 ;  rataan  panjang  ekor  sperma  minimum 36,74±6,73 µm dan maksimum 69,53±3,42 µm. Berdasarkan hasil-hasil penelitian tersebut, diketahui bahwa  sperma  Domba  Lokal  memiliki  ukuran  minimum  dan  maksimum  yang  selanjutnya  dapat diidentifikasi  sperma  pembawa  kromosom  X  dan  Y  serta  proporsinya.  Disimpulkan  bahwa  hasil morfometrik sperma Domba Lokal dapat digunakan sebagai dasar untuk sexing sperma pada Domba Lokal.
Kata kunci :  panjang, lebar, luas kepala sperma, panjang ekor

## Morfometric Identification of Local Ram Sperm for Sexing Sperm Aplication

## Abstract
This  research  aim  to  identified  the  sizes  of  sperm  base  on  morfometric  methode  as  basic  for aplication  of  sperm  sexing  on  Local  Ram.  This  research  was  done  by  deskriptip  methode  used  20 Local  Ram  that  was  collected  their  semen  and  were  made  the  differential  preparate.  Evaluation  of sperm  morfometric  was  done  using  light t microscope  with  magnification  10x40  used  DP2BSW aplication. Parameters were observed consist of length, width, wide of sperm head, and tail length. Evaluation was done for about 70 until 200 sperm cells for each parameters. Data collection base on the minimun, maksimum and standar deviation value off each paramater. The result showed that the average  minimum  length  sperm  length  is  6,85±0,40  µm  and  maksimum  10,27±  0,51µm;  average  of minimum  width  of  sperm  head  is  3,76±0,43  µm  and  maksimum  6,71±0,43  µm;  The  average  of minimum  wide  of  sperm  head  is  23,28±2,90  µm 2 and  maksimum  59,30±4,33  µm 2 ;  the  average  of minimum  of  tail  length  36,74±6,73  µm  and  maksimum  69,53±3,42  µm.  Base  on  this  result,  Local Rams sperm have minimum and maksimum sizes and then could be identified as Xand Y chromosome bearing sperm and its proportion. It is concluded that morphometric result of Local Ramsperm could be used base for sperm sexing on Local Ram.
Key words: length, width, sperm head wide, tail long
Pendahuluan Aplikasi teknologi reproduksi merupakan  salah  satu  pendekatan  untuk meningkatkan  populasi  ternak  khususnya Domba  Lokal.  Penelitian  mengenai  performa reproduksi  Domba  Lokal  telah  dilaporkan sebelumnya  diantaranya  yang  berkaitan
dengan  kualitas  semen  Domba  Lokal  umur pubertas  (Solihati et  al ,  2015),  umur  Domba Lokal  yang  menghasilkan  kualitas  semen terbaik  (Solihati et  al .,  2016a),  penggunaan krioprotektan untuk semen beku Domba Lokal (Solihati et al ,
2016b;  Solihati et  al ,  2016c).  Peningkatan populasi  Domba  Lokal  dibutuhkan  berkaitan dengan  penyediaan  daging  sebagai  sumber
protein  hewani. Berkaitan  dengan  hal  tersebut diperlukan
percepatan peningkatan populasi Domba Lokal jantan yang dapat diupayakan melalui aplikasi teknologi  reproduksi  melalui  metode  sexing sperma.
Metode sexing sperma dapat dilakukan dengan  beberapa  cara,  salah  satunya  dengan metode kolum albumin. Prinsip dari media ini adalah  adanya  perbedaan  kecepatan  motilitas antara  spermatozoa  X  dan  Y  serta  perbedaan konsentrasi pada media separasi. Spermatozoa Y  memiliki  motilitas  lebih  tinggi  dibanding dengan  X.    Adanya  perbedaan  konsentrasi pada  media  albumin  yang  digunakan menyebabkan  spermatozoa  dengan  motilitas tinggi  diperkirakan  akan  mampu  menembus lapisan  media  konsentrasi  yang  lebih  tinggi sedangkan  spermatozoa  yang  motilitasnya rendah  akan  tertinggal  pada  media  dengan konsentrasi  rendah.  Dengan  demikian  pada lapisan  bawah  dengan  konsentrasi  lebih tinggiakan  ditemukan  mayoritas  spermatozoa Y,  sedangkan  pada  lapisan  atas    dengan konsentrasi  lebih  rendah  akan  diperoleh spermatozoa X. Penentuan spermatozoa X dan Y  secara  morfometrik  yaitu  berdasarkan temuan  bahwa  spermatozoa  X  memiliki ukuran  lebih  besar  dibanding  spermatozoa  Y. Berdasarkan  prinsip  kerja  metode  tersebut maka  perlu  diketahui  informasi  dasar mengenai ukuran-ukuran sperma pada Domba Lokal  sebagai  dasar  aplikasi  sexing  sperma dengan  metode  kolom  albumin.  Berdasarkan ukuran-ukuran  sperma  dapat  diidentifikasi sperma  X  dan  sperma  Y  sehingga  dapat diketahui proporsi kedua jenis sperma tersebut. Penelitian sebelumnya telah dilaporkan bahwa proporsi  alamiah  antara  sperma  pembawa kromosom  X  dan  Y  pada  Domba  Lokal  yaitu 50,70% X : 49,30% Y (Solihati et al ., 2017).

## Materi dan Metode
Materi  penelitian  berupa  semen  yang berasal  dari  20  ekor  pejantan  Domba  Lokal umur  lebih  dari  satu  tahun.  Penelitian dilakukan di Laboratorium Reproduksi Ternak dan  Inseminasi  Buatan  pada  bulan  April sampai  Mei  2017.  Koleksi  semen  dilakukan dengan metode vagina buatan untuk selanjutnya  dibawa  ke  laboratorium  untuk dibuat  preparat  differensial  untuk  pengukuran panjang, lebar, luas kepala sperma dan panjang
ekor sperma. Setiap ekor Domba Lokal dibuat satu preparat, setiap preparat dihitung minimal 70  sel  sperma.  Pengukuran  panjang  dan lebarsperma  dilakukan  terhadap  sperma  yang memiliki  bentuk  utuh  dan  tidak  bertumpul dengan  sperma  yang  lain  pada  setiap  preparat yang  diamati,  sehingga  jumlah  sperma  yang diukur  pada  setiap  preparat  memiliki  jumlah yang  tidak  sama  yaitu  berkisar  antara  70 sampai 200 sel sperma.
Pengukuran  ukuran-ukuran  sperma dilakukan dengan menggunakan aplikasi DP2- BSW dengan pembesaran 10x100. Luas kepala sperma  dihitung  melalui  metode  integral Riemann  (Purcell  and  Varberg,  1987)  dan metode analisis regresi (Steel and Torie 1995) untuk  menguji  hubungan  antara  panjang  dan lebar kepala sperma.
LKS = (0,8988 x P x L ) – 1,63 Keterangan  :
LKS :   Luas Kepala Spermatozoa 0,8988           : faktor koreksi yang dibangkitkan  dari  data  yang  ada  dengan menerapkan
metode integral untuk
menentukan luas kepala spermatozoa dari setiap satuan ukuran  dan  metode  regresi untuk  menentukan  hubungan ukuran  panjang  dan  lebar dengan luas kepala spermatozoa P :  Panjang kepala spermatozoa L :  Lebar kepala spermatozoa 1,63 :  Nilai konstanta regresi

## Hasil dan Pembahasan
Hasil pengukuran
morfometrik terhadap  20  ekor  sperma  Domba  Lokal tercantum  pada  Tabel  1.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  kepala  sperma  memiliki rataan  panjang  minimum  6,85±0,40  µm  dan maksimum 10,27± 0,51µm; rataan lebar kepala sperma  minimum  3,76±0,43  µm  dan maksimum  6,71±0,43  µm;  rataan  luas  kepala sperma  minimum  23,28±2,90  µm 2 dan maksimum  59,30±4,33  µm 2 ;  rataan  panjang ekor  sperma  minimum  36,74±6,73  µm  dan maksimum  69,53±3,42  µm.  Berdasarkan  data yang  diperoleh  dapat  dilihat  bahwa  standar
deviasi  dari  ukuran  panjang,  lebar  dan  luas kepala sperma menunjukkan nilai yang rendah yang  berarti  bahwa  kisaran  nilai  ukuran- ukuran  tersebut  tidak  berbeda  jauh.  Namun pada  nilai  minimum  panjang  ekor,  standar deviasi cukup tinggi yang menunjukkan bahwa ukuran  minimum  panjang  ekor  memiliki kisaran yang cukup luas.
Berdasarkan data yang diperoleh dapat dilihat  bahwa  tidak  terdapat  hubungan  linear antara luas kepala sperma dengan panjang ekor sperma, dalam hal ini luas kepala sperma yang kecil  tidak  menunjukkan  ukuran  ekor  sperma yang  lebih  pendek,  demikian  pula  sebaliknya luas  kepala  sperma  yang  besar  tidak menunjukkan ekor sperma yang lebih panjang. Berdasarkan  hasil  pengukuran  ini  dapat diidentifikasi  pula  proporsi  sperma  X  dan sperma Y dengan cara membandingkan ukuran luas  kepala  sperma  setiap  individu  sel  sperma dengan  nilai  rataan  luas  kepala  sperma  dalam populasi sperma tersebut.
Achdiat  (2012)  melaporkan  bahwa pada  Domba  Lokal  memiliki  panjang  7,30  ± 0,23 µm, lebar 4,25 ± 0,13 µm dan luas 31.01 ±  2.00  µm 2 .    Pada  Domba  Garut,  telah dilaporkan  memiliki  rataan  panjang  kepala sperma 6.59 µm (6 - 7 µm), dan lebar 3.99 µm (3.5 - 4.5 µm) (Rizal et al ., 2003), dan menurut Takdir et  al .  (2016)  Domba  Lokal  memiliki panjang  kepala  6.59±0.14,  lebar  kepala 4.01±0.01 dan luas kepala sperma 22.01±0.67 µ m 2 .  Telah  dilaporkan  pula  pada  penelitian sebelumnya  bahwa  pada  Domba  Lokal memiliki panjang kepala sperma antara 8.14 - 9.31 µ m  dengan  rataan  8.66 µ m;  lebar  kepala sperma 4.50 - 5.39 µ m dengan rataan 4.93 µ m; luas kepala sperma berkisar antara 22.97-59.30 µ m 2 dengan  rataan  36.82 µ m 2 (Solihati et  al ., 2017).  Berdasarkan  hasil-hasil  penelitian peneliti  sebelumnya  maka  dapat  dikatakan bahwa  ukuran-ukuran  sperma  Domba  Lokal pada  penelitian  ini  berada  di  kisaran  ukuran- ukuran sperma yang dilaporkan peneliti lain.
Mohri et al . (1986) melaporkan bahwa berat dan ukuran kepala sperma X disebabkan adanya  kandungan  DNA  di  kepala  sperma  X sebanyak  3-4%  lebih  besar  dibanding  DNA yang terdapat di kepala sperma Y. Sumner dan Robinson (1976) melaporkan bahwa
kandungan  DNA  kepala  sperma  berkaitan dengan  berat  massa  kepala.  Ternak  mamalia memiliki kromosom X lebih besar daripada Y sehingga  mengandung  lebih  banyak  DNA. Derajat  perbedaan  tergantung  pada  spesies. Pada  sperma  manusia  rata-rata  2,9%, sedangkan  pada  sapi  rata-rata  3,8%  dan  pada chinchilla 7.5% (Johnson, 1992). Goodall dan Roberts  (1976)  melaporkan  bahwa  sperma  Y dengan  ukuran  yang  lebih  kecil  dan mengandung  lebih  sedikit  DNA,  memiliki motilitas lebih tinggi dibanding sperma X.
Berdasarkan  hasil-hasil  pengukuran sperma  Domba  Lokal  pada  penelitian  ini, diketahui  bahwa  sperma  Domba  Lokal memiliki  ukuran  minimum  dan  maksimum. Ukuran-ukuran  panjang,  lebar,  luas  kepala sperma  dan  panjang  ekor  sperma  Domba Lokal  memiliki  kisaran  yang  panjang,  dengan panjang  kepala  minimum  6,852 µ m  dan maksimum 10,172 µ m; lebar kepala minimum 3,759 µ m  dan  maksimum  6,705 µ m;  luas kepala minimum 23,279 µ m 2 dan maksimum59,304 µ m 2 ; panjang ekor minimum  36,741 µ m    dan  maksimum  69,553 µ m.  Berdasarkan  hasil  morfometri  tersebut selanjutnya dapat diidentifikasi sperma pembawa kromosom X dan , sperma pembawa kromosom  X  memiliki  ukuranlebih  besar  dari rata-rata, sedangkan sperma pembawa kromosom Y memiliki ukuran yang lebih kecil dari  rata-rata  ukuran  luaskepala  sperma  pada masing-masing  domba,  selanjutnya  dapat dihitung proporsinya.

## Kesimpulan
Disimpulkan bahwa hasil morfometrik sperma  Domba  Lokal  dapat  dijadikan  dasar untuk sexing sperma pada Domba Lokal.

## Ucapan Terima Kasih
Penelitian  ini  terlaksana  atas  bantuan hibah  Penelitian  Unggulan  Perguruan  Tinggi (PUPT)  tahun  anggaran  2017,  untuk  itu penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Kementerian  Riset  dan  Pendidikan  Tinggi melalui  Direktorat  Riset  dan  Pengabdian Kepada  Masyarakat  dan  Inovasi  (DRPMI) Universitas
Padjadjaran
yang telah memberikan dana penelitian.
Tabel 1. Rataan ukuran-ukuran sperma Domba Lokal berdasarkan Morfometrik
No Domba Panjang Kepala ( µ m) Lebar Kepala ( µ m) Luas Kepala ( µ m 2 ) Panjang Ekor ( µ m) Min Max Min Max Min Max Min Max 1 6,852 9,243 3,759  5,131 23,279  40,783 36,741  60,450 2 6,905 9,282 3,785  5,298 24,228  40,928 40,661  62,278 3 6,992 9,284 4,045  5,298 25,039  40,997 42,684  62,867 4 7,163 9,334 4,045  5,442 25,407  42,232 43,909  63,199 5 7,166 9,339 4,057  5,518 26,281  42,762 45,837  63,640 6 7,263 9,463 4,057  5,539 26,483  43,352 47,024  63,743 7 7,392 9,463 4,092  5,570 27,070  43,357 47,767  63,880 8 7,470 9,483 4,110  5,609 27,169  43,412 48,594  64,557 9 7,474 9,483 4,203  5,639 27,425  43,863 48,809  65,821 10 7,480 9,524 4,203  5,707 28,702  44,316 49,115  65,912 11 7,493 9,690 4,232  5,712 29,069  44,657 49,588  66,653 12 7,599 9,690 4,232  5,712 29,430  46,260 50,118  66,889 13 7,700 9,702 4,322  5,720 29,612  46,469 50,628  66,964 14 7,778 9,745 4,339  5,787 30,179  46,838 51,398  67,381 15 7,803 9,888 4,367  5,808 30,380  48,924 51,523  67,440 16 7,947 9,922 4,400  5,944 30,915  49,442 52,063  68,107 17 7,969 9,949 4,400  6,254 31,389  50,322 52,249  68,335 18 8,089 10,122 4,434  6,406 31,688  55,263 52,630  68,901 19 8,152 10,130 4,535  6,615 31,837  56,491 53,159  68,956 20 8,267 10,272 4,625  6,705 35,089  59,304 55,150  69,533 Daftar Pustaka Akhdiat,  T.  2012.  Proporsi  Spermatozoa  Y Hasil  Pemisahan  Dengan  Fraksi Albumen Telur dan Lama Penyimpanan  Semen  Domba  Lokal. Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu PeternakanVol.XV(2).59-69.
Bintara, S. 2011. Rasio Spermatozoa X:Y dan Kualitas Sperma pada Kambing Kacang dan Peranakan Ettawa. Sains Peternakan Vol. 9 (2). 65-71. Chaudhary  I,  M  .  Jain  and  A.  Halder.  2014. Sperm Sex Ratio (X: Y Ratio) and its
Variations. Austin Journal of Reproductive Medicine & Infertility. Austin Publishing Group. Garner DL, B.L. Gledhill, D. Pinkel, S. Lake, D. Stephenson, MA. Van Dilla, LA. Johnson.  1983. Quantification of the X- and Y- chromosome-bearing spermatozoa of domestic animals by flow cytometry. Biol Reprod. 28(2). 312-21. Goodall,  H.  and  A.M.  Roberts.  1976. Differences  in  motility  of  human  X-
and Y-bearing spermatozoa. Reprod. Fert. 48 : 433-436.
Johnson,  LA.  1992.  Gender  preselection  in domestic animals using flow cytometrically  sorted  sperm.  Journal of  Animal  Science  70  (Supplement 2) 8—18.
Mohri H, S.  Oshio, S. Kaneko, T. Kobayashi, R.  Lizuka.  1986.  Separation  and characterization  of  mammalian  X  – and Y – bearing sperm.
Development, growth and
differentiation. 28 (1): 35 – 36. Rizal,  M.,  M.R.  Toelihere,  T.L.  Yusuf,  B.
Purwantara dan P. Situmorang. 2003.
Karakteristik penampilan reproduksi pejantan domba  Garut.  Jurnal  Ilmu  Ternak dan Veteriner. 8: 134-140.
Solihati,  N.,  S.D.  Rasad,  R.  Setiawan  dan  T.
Kustini. 2015. Pengaruh Penambahan  Glutation  dan  Alfa Tokoferol  terhadap  Daya  Hidup Sperma Domba Lokal Umur Pubertas. Prosiding Seminar
Nasional  Peternakan  Berkelanjutan ke-7. Fakultas Peternakan Universitas  Padjadjaran  Bandung. 72-77.
Solihati  N.,  S.D.  Rasad,  R.  Setiawan,  and  C. Alvionita.  2016a.  Quality  and
Viability  of  Javanese  Local  Ram Semen  at  Different  Age.  Proceeding International on Livestock Production and Veterianry Technology. IAARD Press. 265-270. Solihati,  N.,  S.D.  Rasad,  R.  Setiawan  dan  S. Nurjanah. 2016b. Post-Thawed Semen  Quality  of  West  Java  Local Ram  at  Different  Level  of  Glycerol. Proceeding of 3rd Animal
Production  International  Seminar.
UB Press. 414-416.
Solihati,  N.,  S.D.  Rasad,  R.  Setiawan.  2016c. Pengaruh  Level  Giserol  Terhadap Keutuhan  Membran  dan  Tudung
Akrosom  Sperma  Domba  Lokal. Prosiding Seminar Nasional Peternakan Berkelanjutan ke-8. Fakultas  Peternakan  Universitas
Padjadjaran Bandung.
Solihati,  N.,  S.D.  Rasad,  A.  Yusrina.  2017. Evaluation  the  natural  proportion  of X-Y  chromosome  bearing  sperm  of West  Java  Local  Ram  using morfometric methode. Proceeding 7 th International  Seminar  on  Animal Production  (ISTAP).  Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Sumner,  AT.  and  JA.  Robinson.  1976.  A difference  in  Dry  Mass  between  the Head  of  X-andY-  Bearing  Human Spermatozoa. J. Reprod Fert ., 8 : 9 – 14.
Susilawati,  T.  2014.  Sexing  spermatozoa. Hasil  penelitian  laboratorium  dan aplikasi  pada  sapi  dan  kambing. Universitas  Brawijaya  (UB)  Press. Malang.
Takdir, M., Ismaya, S. Bintara dan M. Syarif. 2016.  Proporsi  X  dan  Y,  Viabilitas dan  Motilitas  Spermatozoa  Domba Sesudah Pemisahan dengan Albumin Putih  Telur.  Prosiding  Seminar
Nasional Inovasi Teknologi Pertanian.1333-1340.