## PENENTUAN KADAR FENOLIK TOTAL EKSTRAK ETANOL DAUN
NILAM ( Pogostemon cablin Benth . ) DENGAN METODE

## SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
Masdiana Tahir, A.Muflihunna, Syafrianti Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
1 masdiana.tahir@umi.ac.id

## ABSTRACT
One of the plants that is well known in the community and is used as a traditional medicine is patchouli (Pogostemon  cablin  Benth.).  It  contains  essential  oils,  flavonoids,  saponins,  tannins,  glycosides,  terpenoids  and steroids. The alcohol content, such as patchouli alcohol and its derivatives, phenol, and a group of terpenoids in patchouli oil has antibacterial activity. The aim at this research to determine the total phenolic condition the ethanol extract from the patchouli leaves. The extract obtained was analyzed ist content using UV-Vis spectrophotometer. The measurements were done at the maximum wavelength of 662,85 nm. The result showed that the total phenolic in patchouli leave is 327,84 mgGAE /gram of extract.
Keywords: Phenol, Patchouli Leaves (Pogostemon cablin Benth.), UV-Vis Spectrophotometry

## I. PENDAHULUAN
Salah  satu  tanaman  yang  sudah  dikenal dalam  masyarakat  dan  digunakan  sebagai  obat tradisional adalah nilam ( Pogostemon cablin Benth.) (Wijayakusuma  dkk,  1992).  Nilam  ( Pogostemon cablin Benth.)  merupakan  tanaman  yang  sudah banyak dikenal oleh masyarakat luas Tanaman nilam banyak  ditanam  untuk  diambil  minyaknya.  Minyak nilam  banyak  dibutuhkan  untuk  industri  kosmetik, parfum, antiseptik, dan lain-lain (Mangun, 2009).
Daun  nilam  ( Pogostemon  cablin Benth.) memiliki  kandungan  minyak  atsiri,  flavonoid, saponin,  tanin,  glikosida,  terpenoid  dan  steroid. Kandungan alkohol seperti patchouli alcohol beserta turunannya,  fenol  dan  golongan  terpenoid  pada minyak nilam memiliki aktivitas antibakteri (Mangun, 2009).
Senyawa fenolik di alam terdapat sangat luas mempunyai  variasi  struktur  yang  luas,  mudah ditemukan di semua tanaman, daun, bunga dan buah. Ribuan  senyawa  fenolik  di  alam  telah  diketahui strukturnya  antara  lain  flavonoid,  fenol  monosiklik sederhana, fenil propanoid, polifenol (lignin, melanin, tanin), dan kuinon fenolik (Fauziah, 2008).
Tanaman nilam telah banyak dimanfaatkan sebagai  obat  tradisional.  Akar  dari  tanaman  ini digunakan  untuk  pencahar,  bagian  daun  sebagai deodoran,  obat  luka,  wasir,  disentri,  penyakit empedu,  gangguan  haid  dan  obat  peluruh  haid. Semua  bagian  dari  tumbuhan  ini  juga  dapat dimanfaatkan  sebagai  obat  sakit  kepala,  dan  obat diare  (Halimah,  2010).  Minyak  nilam  juga bermanfaat  dalam  pembuatan  obat  antiradang, antifungi,  antiserangga,  afrodisiak,  antiinflamasi, antidepresi dan dekongestan (Mangun, 2009).
Secara  umum  senyawa  fenol  memiliki  sifat bakteriosid,  antimetik,  antihelmintik,  antiasmatik, analgetik,  antiinflamasi,  meningkatkan  mortilitas usus, antimikroba, dan masih banyak lagi (Andarwulan, 2012).
Berdasarkan  hal  tersebut  diatas  maka dilakukan  penelitian  penentuan  kadar  fenolik  total yang terkandung pada daun nilam ( Pogostemon cablin Benth. ) dengan metode spektrofotometri UV-Vis.

## II. METODE PENELITIAN

## A. Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  alat-alat  gelas  ( pyrex )  dan  spektrofotometer UV-Vis tipe evolution 201.
Bahan-bahan yang digunakan adalah aquabidestillata,  asam  galat  p.a,  besi  (III)  klorida (FeCl 3 ),  ekstrak  etanol  daun  nilam  ( Pogostemon cablin Benth.),  etanol  p.a,  etanol  96%,  natrium karbonat (Na 2 CO 3 p.a), dan reagen Folin-Ciocalteau .
B. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Pengambilan
sampel daun nilam ( Pogostemon cablin Benth.) dilakukan pada pagi hari sekitar pukul 10.00 WITA di desa Lawewe Kabupaten Palopo,  dengan  cara  mengambil  daun  yang  masih segar  secara  manual.  Kemudian  dibersihkan  dari kotoran-kotoran yang menempel dengan menggunakan  air  yang  mengalir  dan  dikeringkan dengan cara diangin-anginkan tanpa sinar matahari ± 1  minggu.  Setelah  kering  sampel  dipotong-potong kecil dan diserbukkan menggunakan blender .
C. Ekstraksi  daun  nilam  ( Pogostemon  cablin Benth.)
Sebanyak  300  gram  serbuk  daun  nilam ( Pogostemon  cablin Benth.)  dimasukkan  kedalam wadah  maserasi,  ditambahkan  pelarut  etanol  96% hingga  serbuk  simplisia  terendam,  dibiarkan  selama 3-4  hari.  Setelah  proses  ekstraksi  pertama  selesai, ampasnya dimaserasi kembali dengan cairan penyari yang  baru.  Ekstrak  kental  yang  telah  dikumpulkan lalu  diuapkan  dengan  menggunakan  alat Rotary Vacuum Evaporator hingga diperoleh ekstrak etanol kering (Ahmad dkk, 2015).

## D. Analisis Kualitatif Kandungan Fenolik
Senyawa  golongan  fenolik  dapat  dideteksi dengan menggunakan FeCl 3 1%. Pengujiannya yaitu sebanyak  1  gram  sampel  dilarutkan  dengan menggunakan  pelarut  etanol  96%  sebanyak  2  ml. Larutan  yang  dihasilkan  diambil  sebanyak  1  ml kemudian  ditambahkan  2  tetes  larutan  FeCl 3 . Terbentuknya  warna  hijau,  merah,  ungu,  biru,  atau hitam  yang  kuat  menunjukkan  adanya  senyawa fenolik dalam sampel (Harbone, 1987).

## E. Analisis Kuantitatif
1. Penentuan panjang gelombang maksimal (  maks) Penentuan  panjang  gelombang  maksimal asam galat dilakukan dengan mengukur larutan asam galat  konsentrasi  5  ppm  pada  range  panjang gelombang  400-800  nm  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  dan  diperoleh  panjang gelombang maksimal yaitu 662,85 nm.
2. Pengukuran Larutan Standar Asam Galat
Dibuat konsentrasi 3, 13, 23, 33, 43, dan 53 ppm  yang  dipipet  dari  larutan  standar  asam  galat konsentrasi 100 ppm, kemudian ditambahkan 0,4 ml reagen Folin  Ciocalteau, dikocok  dan  dibiarkan  4-8 menit. Ditambahkan 4,0 ml larutan Na 2 CO 3, dikocok hingga  homogen.  Kemudian  dicukupkan  dengan aquabidestillata hingga 10 ml dan didiamkan selama 2  jam  pada  suhu  ruangan.  Diukur  absorbansi  pada panjang  gelombang  maksimal  662,85  nm,  dibuat kurva  kalibrasi  hubungan  antara  konsentrasi  asam galat (µg/ml) dengan absorbansi (Ahmad dkk., 2015).
3. Penentuan kadar fenolik total ekstrak etanol daun nilam ( Pogostemon cablin Benth.)
Penentuan  kadar  fenolik  total  pada  ekstrak etanol  daun  nilam  ( Pogostemon  cablin Benth.) merujuk pada prosedur Chun dkk ., (2003) yaitu dibuat dengan  cara  menimbang  10  mg  ekstrak  etanol  daun nilam  kemudian  dilarutkan  dengan  10  ml  etanol  p.a dan dihomogenkan. Dipipet 1 ml dari larutan tersebut, kemudian  ditambahkan  dengan  0,4  ml  reagen Folin Ciocalteau dikocok  dan  dibiarkan  4-8  menit,
tambahkan  4,0  ml  larutan  Na 2 CO 3 kocok  hingga homogen.  Dicukupkan  dengan  aquabidestillata hingga  10  ml  dan  diamkan  selama  2  jam  pada  suhu ruangan.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  ekstraksi  daun  nilam  ( Pogostemon cablin Benth.)  diperoleh  sebesar  25,5312  gram  dari bobot serbuk kering sebanyak 300 gram. Sedangkan persen  rendamen  dari  ekstrak  etanol  daun  nilam ( Pogostemon  cablin Benth.)  sebesar  8,5104%. Penentuan  rendamen  berfungsi  untuk  mengetahui kadar  metabolit  sekunder  yang  terbawa  oleh  pelarut tersebut,  namun  tidak  dapat  menentukan  jenis senyawa yang terbawa (Ukieyanna, 2012).
Uji  kualitatif  dilakukan  untuk  mengetahui komponen  kimia  pada  tumbuhan,  untuk  senyawa fenolik digunakan FeCl 3 dan reagen Folin Ciocalteau . Hasil  pengujian  memberikan  reaksi  positif  yang membuktikan  adanya  kandungan  senyawa  fenolik dalam ekstrak etanol daun nilam ( Pogostemon cablin Benth.).
Tabel  1. Hasil  ekstraksi  rosella  merah  ( Hibiscus sabdariffa L.) Sampel Pereaksi Warna Ket. Ekstrak etanol daun nilam FeCl 3 Hijau tua (+) Ekstrak etanol daun nilam Folin Ciocalteau Kuning (+)
Keterangan: (+) mengandung senyawa fenolik
Untuk  uji  kuantitatif  dilakukan  penentuan kadar  fenolik  total  pada  ekstrak  etanol  daun  nilam ( Pogostemon  cablin Benth.)  yang  merujuk  pada prosedur  Chun  dkk ., (2003)  menggunakan  metode Folin Ciocalteau . Metode ini merupakan metode yang paling umum digunakan untuk menentukan kandungan  fenolik  total  dalam  tanaman  dengan pertimbangan bahwa dengan teknik ini pengerjaannya lebih  sederhana  dan  reagen Folin  Ciocalteau digunakan  karena  senyawa  fenolik  dapat  bereaksi dengan Folin membentuk  larutan  yang  dapat  diukur absorbansinya.
Sebagai  larutan  standar  atau  pembanding digunakan  asam  galat  yang  merupakan  salah  satu fenolik  alami  dan  stabil.  Menurut  Viranda  (2009) asam galat termasuk dalam senyawa fenolik turunan asam  hidroksibenzoat  yang  tergolong  asam  fenolik sederhana.  Asam  galat  direaksikan  dengan  reagen Folin  Ciocalteau menghasilkan  warna  kuning  yang menandakan bahwa mengandung fenolik, setelah itu ditambahkan dengan larutan Na 2 CO 3 sebagai pemberi suasana  basa.  Selama  reaksi  berlangsung,  gugus hidroksil  pada  senyawa  fenolik  bereaksi  dengan
y = 0.005x + 0.312 R² = 0.993 r = 0.996 0 0.2 0.4 0.6 0.8 0 20 40 60 Abs o rba ns i (λ 6 6 2 ,8 5 n m ) Konsentrasi asam galat Series1 Linear (Series1)
pereaksi Folin  Ciocalteau ,  membentuk  kompleks molibdenum-tungsten berwarna biru dengan struktur yang  belum  diketahui  dan  dapat  dideteksi  dengan spektrofotometer.  Warna  biru  yang  terbetuk  akan semakin pekat, setara dengan konsentrasi ion fenolak yang  terbentuk,  artinya  semakin  besar  konsentrasi senyawa  fenolik  maka  semakin  banyak  ion  fenolak yang akan mereduksi asam heteropoli (fosfomolibdat- fosfotungstat)  menjadi  kompleks  molibdenum- tungsten  sehingga  warna  yang  dihasilkan  semakin pekat.
Untuk  menentukan  kadar  fenolik  totalnya, terlebih dahulu dilakukan running panjang gelombang larutan standar asam galat dari range 400- 800  nm  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis. Panjang  gelombang  maksimal  yang  diperoleh  yaitu 662,85  nm.  Selanjutnya  dilakukan  pengukuran absorbansi  larutan  standar  asam  galat  dari  beberapa konsentrasi  yang  diukur  pada  panjang  gelombang maksimal yang diperoleh.
Hasil pengukuran absorbansi larutan standar asam  galat  dibuat  kurva  kalibrasi  hubungan  antara konsentrasi (C) dengan absorbansi (A) dan diperoleh persamaan  garis  linear.  Adapun  syarat  kelayakan
untuk metode analisis yang diterima untuk koefisien korelasi  (r)  dari  range  0,996–1  yang  nantinya digunakan  untuk  penentuan  kadar  fenolik  total ekstrak  etanol  daun  nilam  ( Pogostemon  cablin Benth.). Berdasarkan hal tersebut diperoleh persamaan  regresi  linear  yaitu  y  =  0,005x  +  0,312 dengan  koefisien  korelasi  (r)  0,996  yang  memenuhi syarat  kelayanan  metode  analisis,  yang  dapat ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1 . Kurva kalibrasi asam galat pada panjang gelombang 662,85 nm
Tabel 2. Hasil penentuan kadar fenolik pada ekstrak etanol daun nilam ( Pogostemon cablin Benth.) Replikasi Absorbansi (Y) Kandungan Fenolik Awal (mg/L) Kandungan  Fenol (mg GAE/g ekstrak) Rata-rata Kandungan Fenolik (mg GAE/g ekstrak) R1 0,456 28,8 287,43 327,84 R2 0,406 18,8 187,62 R3 0,567 51 508,47
Pada  pengukuran  senyawa  fenolik  total dibuat sebanyak tiga replikasi untuk keperluan akurasi data. Berdasarkan hasil penelitian ini diperoleh kadar fenolik  total  ekstrak  etanol  daun  nilam  ( Pogostemon cablin Benth.) sebesar 327,84mgGAE/ gram ekstrak, artinya dalam setiap gram ekstrak  etanol daun nilam ( Pogostemon  cablin Benth.)  terdapat  fenolik  yang setara dengan 327,84 mg asam galat. Senyawa fenolik yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  daun  nilam ( Pogostemon  cablin Benth.)  merupakan  hasil metabolit  sekunder  yang  potensial  sebagai  sumber bahan baku obat yang berperan sebagai antioksidan.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  kadar fenolik total ekstrak etanol daun nilam ( Pogostemon cablin Benth.) sebesar 327,84 mgGAE/gram ekstrak.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad, A.R., Juwita., Ratulangi, S.A.D., dan Malik, A.,  2015,  Pharm  Sci  Res, Penetapan  Kadar Fenolik dan Flavanoid Total Ekstrak Metanol Buah  dan  daun  Patikala ( Etlingera  elatior (Jack) R.M.SM), 2 (1) : 1-10. Andarwulan,  N.,  dan  Faradilla.,  Fitri,  R.H.,  2012,
Senyawa  Fenolik  pada  Buah  Manggis  Dari Indonesia ,  Penerbit  SEAFAST  IPB,  Bogor Jawa Barat.
Chun, O.K., Kim, D.O., dan Lee, C, Y., 2003,J Agric Food  Chem, Superoxide  Radical  Scavenging Activity  of  The  Major  Polyohenols  in  Fresh Plums . Fauziah,  L.,  2008, Studi  Dimerisasi  Asam ,  FMIPA,
Universita Indonesia, Depok.
Halimah, P.P.D., dan Zetra, Y., 2010, Minyak Atsiri Dari  Tanaman  Nilam ( Pogostemon  cablin Benth.) Melalui  Metode  Fermentasi  Dan Hidrodistilasi  Serta  Uji  Bioaktivitasnya , Kimia FMIPA – ITS.
Harborne,  J.B.,  1987, Metode  Fitokimia:  Penuntun Cara  Modern  Menganalisa  Tumbuhan,
Terbitan Kedua , Terjemahan Kosasih Padmawinata  dan  Iwang  Soediro,  Bandung, ITB. Mangun, H. M.  S., 2009, Nilam , Penebar Swadaya, Jakarta. Ukieyana,  E.,  2012, Aktivitas  Antioksidan,  Kadar Fenolik  Dan  Flavanoid  Total  Tumbuhan Suruhan  (Peperomia  pellucid  L.  Kunth) .
Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor. Bogor. Viranda P.M, 2009, Pengujian kandungan Senyawa yang  terdapat  dalam  Tomat , Jurnal  P . Universitas Indonesia. Wijayakusuma,  K.M.H.,  Dalimanta  S.,  Yaputra  T., dan Wibawa B., 1992, Tanaman Berkhasiat Obat  Indonesia .  Jilid  I.,  Pustaka  Kartini, Jakarta: 1-5.