ANALISIS FRAKSI AKTIF EKSTRAK DAUN GEDI HIJAU  ( Abelmoschus manihot L.) DALAM MENANGKAL RADIKAL BEBAS DPPH
Maria Tilda Atuani 1) , Sri Sudewi 1) , Defny S. Wewengkang 1)

## Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Gedi  (Abelmoschus  manihot  L.)  is  a  tropical  plant  of  family  malvaceae,  traditionally  known  in  North Sulawesi  as  a  vegetable  plant.  Gren  gedi  leaves  from  Bitung  are  known  to  have  activity  as  free  radical scavenging at extract level but have not been tested at the fraction level. This study aims to determine the free radical  scavenging  activity  of  the  green  gedi  leaf  fractions  in  counteraction  DPPH  (1,1-diphenil-2- picrylhydarzyl) free radical. Extraction was done by maceration method using ethanol solvent. The preliminary test of free radical scavenging was carried out by thin layer chromatography (TLC) using the stationary phase of silica gel F 254 with the mobile phase of n-hexane : chloroform (1:2) and sprayed with DPPH 0,08 mM. Then it was fractionated using vacuum liquid chromatography (VLC) with the mobile phase based on its polarity, such as  combination  of  n-hexane  and  ethyl  acetate.  Each  fraction  obtained  was  tested  for  free  radical  scavenging activity showed whitish yellow patches on a purple background, which indicates that extracts have free radical scavenging activity. The spectrophotometer measurement results showed that each leaf of green gedi leaves had weak free radical scavenging activity, but still was a free radical scavenger, ie fraction I had an IC 50 value of 169,69 μg/mL; fraction II was 826,52 μg/mL; fraction III was 311,13 μg/mL; and fraction IV was 246,80 μg/mL. Fraction  V  has  an  IC 50 value  of  2294,64  μg/mL,  this is indicates that the fraction  V  has  no activity  as  a free radical scavenging compound, because it has very large IC 50 value. While vitamin C as a comparison has very strong free radical scavenging activity with IC 50 of 3,22 μg/mL.
Keywords : Fraction, Extract, Abelmoschus manihot L., DPPH Method.

## ABSTRAK
Gedi  ( Abelmoschus  manihot L.)  merupakan  tumbuhan  tropis  family  malvaceae,  secara  tradisional  telah lama  dikenal  di  Sulawesi  Utara  sebagai  tanaman  sayuran.  Daun  gedi  hijau  yang  berasal  dari  Bitung  diketahui memiliki aktivitas sebagai penangkap radikal bebas pada tingkat ekstrak namun belum diuji pada tingkat fraksi. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  penangkap  radikal  bebas  dari  fraksi-fraksi  daun  gedi  hijau dalam  menangkal  radikal  bebas  DPPH ( 1,1-diphenil-2-picrylhydarzyl ).  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol.  Uji  pendahuluan  aktivitas  penangkap  radikal  bebas  dilakukan  secara kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan fase diam silika gel F 254 dengan fase gerak n-heksana : kloroform (1:2)  dan  disemprot  DPPH  0,08mM.  Kemudian  difraksinasi  menggunakan  kromatografi  cair  vakum  (KCV) dengan fase gerak berdasarkan kepolarannya, yakni kombinasi n-heksana dan etil asetat. Hasil uji pendahuluan aktivitas penangkap radikal bebas secara KLT menunjukkan adanya bercak kuning keputih-putihan dengan latar belakang ungu, yang menandakan ekstrak memiliki aktivitas penangkap radikal bebas. Hasil pengukuran secara spektrofotometer menunjukkan bahwa setiap fraksi daun gedi hijau memiliki aktivitas penangkap radikal bebas yang  lemah,  namun  tetap  bersifat  sebagai  penangkap  radikal  bebas,  yakni  fraksi  I  memiliki  nilai  IC 50 sebesar 169,69 μg/mL; fraksi II 826,52 μg/mL; fraksi III 311,13 μg/mL; dan fraksi IV 246,80 μg/mL. Fraksi V memiliki nilai  IC 50 sebesar  2294,64  μg/mL,  menandakan  fraksi  V  tidak  memiliki  aktivitas  sebagai  senyawa  penangkap radikal bebas, karena memiliki nilai IC 50 yang sangat besar. Sedangkan vitamin C sebagai pembanding memiliki aktivitas penangkap radikal bebas sangat kuat dengan IC 50 sebesar 3,22 μg/mL.
Kata Kunci : Fraksi, Ekstrak, Abelmoschus manihot L., Metode DPPH.

## PENDAHULUAN
Gedi ( Abelmoschus manihot L.) merupakan tumbuhan  tropis  family  malvaceae,  secara tradisional telah lama dikenal di Sulawesi Utara sebagai tanaman sayuran. Masyarakat mengenal dua jenis ( Abelmoschus manihot L.), yaitu gedi merah  dan  gedi  hijau.  Daun  gedi  hijau  dapat dimanfaatkan oleh masyarakat Manado sebagai bahan  makanan  yang  dikenal  sebagai  Bubur Manado (Tinutuan) khas dari Manado, sedangkan  untuk  gedi  merah  secara  tradisional dapat menyembuhkan beberapa penyakit (Mamahit dan Soekarno, 2010).
Kemampuan  ekstrak  daun  gedi  dalam menangkap  radikal  bebas  juga  dilakukan  oleh Sudewi et  al (2017),  aktivitas  penangkap radikal bebas didaerah Bitung sebesar
(23,823%),  dan  kandungan  total  fenol  dan flavonoid masing-masing sebesar 22,38 mGAE/g  dan  89,640  mg/g  QE.  Senyawa flavonoid  mempunyai  berbagai  fungsi  penting untuk kesehatan, antara lain dalam menurunkan risiko serangan penyakit kardiovaskuler, tekanan  darah,  aterosklerosis,  dan  sebagai antioksidan (Hodgson et al ., 2006).
DPPH ( 1,1-diphenil-2-picrylhydarzyl ) adalah suatu senyawa organik yang mengandung  nitrogen  tidak  stabil  dengan absorbansi  kuat  pada  panjang  gelombang  517 nm  dan  berwarna  ungu  gelap.  DPPH  telah digunakan secara luas untuk mengukur kemampuan  suatu  senyawa  untuk  menghambat radikal  bebas  atau  sebagai  pendonor  hydrogen (Burda and Oleszek, 2001). Kendala
pemanfaatan  ekstrak  kasar  seperti  kandungan padatan yang tinggi, aktivitas rendah serta sifat toksik  perlu  diwaspadai.  Oleh  karena  itu,  perlu dilakukan proses fraksinasi.
Fraksinasi merupakan teknik
pemisahan dan
pengelompokan  kandungan  kimia  ekstrak berdasarkan kepolaran.

## METODE PENELITIAN Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  timbangan  analitik  (KERN  AC  22  – 4M),  Spektrofotometer  UV-Vis,  (Shimadzu 00780), Komputer pengola data (Acer Aspie ES 11),  lampu  UV  254  dan  366  nm,  peralatan Kromatografi  Cair  Vakum  (KCV),  Vortex Mixer  (Hwashin),  Oven  (Ecocell),  Blender (Phillips), dan alat-alat gelas (pirex).

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  Simplisia  Kering  daun Gedi  Hijau,  etanol  96%,  etil  asetat,  dan  n- heksana  berderajat  teknis  (General  Labora, Indonesia), kloroform, n-heksana dan methanol berderajat  pro  analisis  (E.  Merck),  Vitamin  C pro  analisis,  Plat  KLT  silika  gel  60  GF 254 (E. Merck),  silika  gel  60  F 254 (E.  Merck) dan 1,1- diphenil-2-picrylhydarzyl (DPPH) (Aldrich).

## Prosedur Kerja Pengambilan Sampel
Sampel  daun  Gedi  Hijau  diambil  dari  kota bitung,  selanjutnya  dibersihkan  kemudian  di potong  kecil-kecil,  lalu  dikering  anginkan. Daun  yang telah kering dihaluskan dengan cara diblender, kemudian diayak dengan menggunakan  ayakan  60  mesh  sehingga diperoleh simplisia daun gedi.

## Ekstraksi
Sebanyak    250  g  simplisia  kering dimasukkan  ke  dalam  bejana  maserasi  dan ditambahkan  pelarut  etanol  800  mL  sampai semua sampel terendam  oleh pelarut. Ekstraksi dilakukan  dengan  cara  maserasi  selama  3x24
jam dengan beberapa kali pengocokan. Ekstrak hasil  maserasi  kemudian  disaring  sehingga diperoleh  filtrat  dan  residu.  Filtrat  yang diperoleh  kemudian  dievaporasi  pada  suhu 40 o C sampai diperoleh ekstrak kental.
Uji Pendahuluan Aktivitas Penangkap Radikal Bebas Uji pendahuluan di awali dengan memanaskan plat KLT pada oven dengan suhu 105ºC  selama  10  menit.  Fase  diam  yang digunakan adalah silika gel F 254 dengan luas 1 x 10 cm dengan jarak elusi 8 cm. Fase gerak yang digunakan untuk mengelusi yaitu, n - heksana:kloroform  p.a  (1:2)  sebanyak  2  mL. Bercak  yang  terbentuk  diamati  dengan  sinar tampak, lampu UV 254 dan 366 nm, kemudian disemprotkan dengan larutan DPPH 0,08 mM.

## Fraksinasi
Sebanyak  2  g  ekstrak  yang  dihasilkan difraksinasi  dengan  metode  Kromatografi  Cair Vakum  (KCV).  Ekstrak  sebanyak  2  g dilarutkan  dengan  pelarut    kloroform  p.a  dan diimpregnasikan  dengan  silika  gel  4  g  sampai menjadi  serbuk  kering.  Kolom  kemudian  diisi dengan serbuk fase diam silika gel sebanyak 12 g  sambil  divakum.  Serbuk  sampel  kemudian ditaburkan  diatasnya  kemudian  permukaannya ditutup  lagi  dengan  kertas  saring.  Elusi dilakukan  dengan  fase  gerak  n-heksana:etil asetat  dengan  total  volume  100  mL,  yakni pelarut  n-heksana  100%  (F1),  9:1  (F2),  8:2 (F3), 7:3  (F4), 6:4  (F5),  1:1  (F6), 4:6  (F7), 3:7 (F8), 2:8 (F9), 1:9 (F10), 100% etil asetat (F11) sambil  divakum.  Hasil  fraksinasi  kemudian dikeringkan,  selanjutnya  diuji  secara  KLT untuk  melihat  pola  spot  atau  bercaknya disemprot  dengan  DPPH  0,08  mM.  Fraksi- fraksi yang terbentuk dikumpulkan berdasarkan
noda  yang  terbentuk  dan  nilai  Rf  yang diperoleh.
Uji  Aktivitas  Penangkap  Radikal  Bebas Metode DPPH
1. Pembuatan Larutan DPPH 0,08 mM
Serbuk  DPPH  ditimbang  sebanyak  3,154 mg,  kemudian  dimasukkan  kedalam  labu  ukur 100  mL  dan  dilarutkan  dengan  metanol  p.a hingga mencapai tanda batas.

## 2. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH
Larutan  DPPH  0,08  mM  sebanyak  2  mL dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi,  lalu ditambahkan  dengan  1  mL  metanol  p.a. Campuran  DPPH  kemudian  divorteks  dan diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  30  menit dalam keadaan gelap. Larutan tersebut kemudian diukur dengan spektrofotometer UV- Vis  pada  panjang  gelombang  400-800  nm dengan blanko metanol p.a.
3. Pembuatan Larutan Fraksi dan Pembanding
Masing-masing  fraksi  dan  pembanding vitamin  C  dibuat  larutan  induk  konsentrasi 1000  ppm.  Ditimbang  10  mg  fraksi,  dilarutkan dengan  metanol  p.a  lalu  dimasukkan  kedalam labu ukur 10 mL, volume ditambahkan dengan metanol  p.a  sampai  tanda  batas.  Kemudian dibuat  seri  konsentrasi  masing-masing,  yaitu 15, 30, 60, dan 120 ppm untuk fraksi dan 2, 4, 6, dan 8 ppm  untuk vitamin C. Masing-masing konsentrasi  dipipet  dan  dimasukkan  kedalam labu  ukur  5  mL,  volume  dicukupkan  dengan metanol p.a hingga tanda batas.
Diambil masing-masing larutan sebanyak 1 mL  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi, ditambahkan  dengan  2  mL  larutan  DPPH  0,08 mM,  kemudian  di  vorteks  dan  diinkubasi  pada suhu  kamar  selama  30  menit  dalam  keadaan
gelap.  Larutan  tersebut  kemudian  diukur  pada panjang gelombang maksimum yang diperoleh.

## 4. Penentuan  %Inhibisi  Radikal  Bebas

## DPPH
Aktivitas  penangkal  radikal  bebas  DPPH dinyatakan  sebagai  %inhibisi  yang  dapat dihitung menggunakan rumus sebagai berikut :
5. Penentuan Nilai IC 50 ( Inhibitory
Concentration )
Konsentrasi  sampel  dan  %inhibisinya diplot  masing-masing  pada  sumbu  x  dan  y menggunakan persamaan regresi linear.
Persamaan
tersebut digunakan untuk menentukan  nilai  IC 50 dari  masing-masing sampel. Nilai y dinyatakan sebesar 50 dan nilai x yang akan diperoleh sebagai IC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Proses  ekstraksi  dari  serbuk  daun  gedi hijau  dilakukan  dengan  menggunakan  metode maserasi.  Tujuan  digunakan  metode  maserasi, yaitu  untuk  menyari  zat-zat  aktif  yang terkandung  dalam  simplisia  daunn  gedi. Pengadukan  pada  proses  maserasi  dilakukan bertujuan  untuk  meningkatkan  kontak  antar serbuk  simplisia  dengan  pelarut  sehingga  zat- zat  aktif  dalam  serbuk  simplisia  banyak  yang tersari  dalam  larutan  penyari.  Pelarut  yang digunakan  dalam  penyarian  zat  aktif  adalah pelarut  etanol  96%  yang  bersifat  polar. Penggunaan etanol sebagai pelarut  dikarenakan etanol  juga  bersifat  universal  sehingga  dapat menarik  sebagian  besar  senyawa  kimia  yang terkandung  di  dalam  simplisia  (polar  dan  non polar) (Salamah, 2015).
Berdasarkan  hasil  ekstraksi,  di  peroleh berat  ekstrak  13,75  gr  dengan  nilai  rendemen
5,5  %.  Dari  hasil  yang  diperoleh,  dapat  dilihat bahwa  hasil  rendemen  ekstrak  daun  gedi  hijau yang  diperoleh  kecil.  Hal  ini  menunjukan bahwa  metode  ekstraksi  yang  digunakan berpengaruh  terhadap  nilai    rendemen  yang diperoleh.  Pada  metode  maserasi  dilihat  dari segi  waktu,  untuk  memperoleh  zat  aktif  yang lebih banyak dibutuhkan waktu dan proses yang lama  karena  ekstraksi  ini  tidak  menggunakan bantuan panas. Faktor lain yang memungkinkan dapat  mempengaruhi  nilai  rendemen  yang dihasilkan,  yaitu  metode  ekstraksi  yang digunakan, ukuran partikel sampel, kondisi dan waktu penyimpanan.
Uji Pendahuluan Aktivitas Penangkap Radikal Bebas Uji pendahuluan dilakukan untuk mengetahui ada atau tidaknya aktivitas penangkap radikal bebas dari ekstrak daun gedi hijau  terhadap  radikal  bebas  DPPH.  Uji pendahuluan  dilakukan  dengan  menggunakan metode  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT),  Fase gerak  yang  digunakan  pada  uji  pendahuluan secara  KLT  yaitu  n-heksana  :  kloroform  p.a dengan  perbandingan  1:2.  Spot  noda  yang terbentuk  dideteksi  menggunakan  sinar  UV dengan  panjang  gelombang  245  dan  366  nm juga  dilakukan  untuk  mengetahui  spot  yang dapat berfluoresensi (berpendar) sehingga dapat terlihat secara visual.
% 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 = 1 − 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑢𝑗𝑖 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑋 100%
Gambar  1.  Profil  KLT  hasil  uji  pendahuluan aktivitas
penangkap radikal bebas menggunakan fase gerak n-heksana : kloroform p.a  (1:2,  v/v).  (a)  telah  disemprot  dengan larutan  DPPH  0,08  mM;  (b)  dilihat  pada  sinar UV 254; (c) dilihat pada sinar UV 366.
Hasil  uji  pendahuluan  aktivitas  penangkap radikal  bebas  pada  Gambar  1,  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  gedi  hijau  mempunyai aktivitas  penangkal  radikal  bebas  DPPH.  Hal ini dapat dilihat dari perubahan warna spot noda menjadi kuning dengan latar belakang ungu dan mempunyai  intensitas  warna  yang  kuat  pada KLT  setelah  disemprot  dengan  larutan  DPPH 0,08 mM. Interaksi senyawa penangkap radikal bebas  pada  ekstrak  daun  gedi  hijau  dengan DPPH, yaitu senyawa penangkap radikal bebas mentransfer  elektron  atau  atom  hidrogen  pada DPPH  sehingga  mampu  menetralkan  karakter radikal bebas dari DPPH.

## Fraksinasi  dan  Uji  aktivitas  Penangkap Radikal Bebas
Berdasarkan hasil KLT fraksi ekstrak daun gedi  hijau  yang telah disemprot  dengan larutan DPPH  0,08  mM  menghasilkan  5  fraksi  aktif gabungan  dari  12  fraksi  pertama,  dapat  dilihat pada Tabel 1 dan Gambar 2.
Tabel 1. Fraksi dengan profil noda dan nilai Rf sama
No Fraksi (gabungan) Fraksi aktif 1 I dan II I 2 III dan IV II 3 V dan VI III 4 VII, VIII dan IX IV 5 X dan XI V
Gambar  2.  profil  KLT  hasil  fraksinasi  ekstrak daun  gedi  hijau  dengan  menggunakan  fase gerak n-heksana : kloroform p.a (6:12, v/v), dan disemprotkan  dengan  larutan  DPPH  0,08  mM. (a)  telah  disemprot  dengan  larutan  DPPH  0,08 mM; (b)dilihat pada sinar UV 366.
Dari  hasil  yang  diperoleh,  setiap  fraksi gabungan  memiliki  beberapa  spot  noda  yang terbentuk  dapat  dilihat  pada  Gambar  2. Komponen  kimia  yang  terdapat  dalam  fraksi akan bergerak naik mengikuti fase gerak karena daya  serap  adsorben  terhadap  komponen- komponen kimia tidak sama sehingga komponen  kimia  dapat  bergerak  dengan  jarak yang berbeda berdasarkan tingkat kepolarannya (Christian, 1994). Hal inilah yang menyebabkan  terjadinya  pemisahan-pemisahan komponen  kimia  dalam  ekstrak  akibat  adanya interaksi  antara  fase  diam  (silika  gel)  dan  fase gerak (eluen) sehingga menghasilkan noda.
Penentuan  Panjang  Gelombang  Maksimum (λ maks )
Tujuan dilakukan pengukuran pada panjang gelombang maksimum adalah perubahan  absorban  untuk  setiap  satuan konsentrasi  adalah  paling  besar  pada  panjang gelombang maksimum, sehingga akan diperoleh  kepekaan  analisis  yang  maksimum. Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  panjang gelombang  maksimum  untuk  pengukuran senyawa  penangkap  radikal  bebas  dengan metode  peredaman  DPPH  adalah  pada  panjang
gelombang  517  nm  dimana  serapan  DPPH maksimum  yang  ditandai  dengan  adanya puncak dengan nilai absorbansi 0,706.
Gambar 3. Kurva Penentuan Panjang Gelombang Maksimum (λ maks )  DPPH
Uji  Aktivitas  Penangkal  Radikal  Bebas DPPH
Pengujian  aktivitas  penangkap  radikal bebas  fraksi  daun  gedi  hijau  dilakukan  dengan menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-diphenil-2- picrylhydarzyl ).  Pertimbangan  dari  metode tersebut  karena  metode  DPPH  merupakan metode yang  relatif  mudah,  peka  dan memerlukan  sedikit  sampel  serta  proses pengerjaannya cukup sederhana. Hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel 2. Tabel 2. Konsentrasi dan absorbansi dari masing-masing Fraksi dan Pembanding (Vitamin C) No Sampel Konsentrasi Absorbansi Pengulangan I   Pengulangan II Rata-rata absorbansi ± SD 1 Fraksi I 15 0,586 0,579 0,582 ± 0,0049 30 0,572 0,527 0,549 ± 0,0318 60 0,475 0,469 0,472 ± 0,0042 120 0,438 0,433 0,435 ± 0,0035 2 Fraksi II 15 0,647 0,630 0,638 ± 0,0120 30 0,643 0,613 0,628 ± 0,0212 60 0,640 0,596 0,618 ± 0,0311 120 0,610 0,590 0,600 ± 0,0141 3 Fraksi III 15 0,624 0,617 0,620 ± 0,0049 30 0,614 0,612 0,613 ± 0,0014 60 0,579 0,558 0,568 ± 0,0148 120 0,556 0,503 0,529 ± 0,0374 4 Fraksi IV 15 0,640 0,634 0,637 ± 0,0042 30 0,637 0,607 0,622 ± 0,0212 60 0,616 0,559 0,587 ± 0,0403 120 0,556 0,462 0,509 ± 0,0664 5 Fraksi V 15 0,639 0,621 0,630 ± 0,0127 30 0,628 0,616 0,622 ± 0,0084 60 0,625 0,615 0,620 ± 0,0070 120 0,623 0,608 0,615 ± 0,0106 6 Vitamin C 2 0,409 0,467 0,438 ± 0,0410 4 0,246 0,401 0,323 ± 0,1096 6 0,136 0,105 0,120 ± 0,0219 8 0,103 0,096 0,099 ± 0,0049
Pada  metode  ini,  DPPH  bertindak  sebagai model  radikal  bebas  yang  akan  berikatan dengan  senyawa  penangkap  radikal  bebas.
Pengukuran  absorbansi  dalam  penelitian  ini dilakukan  panjang  gelombang  maksimum (λ maks )  DPPH  yang  diperoleh,  yaitu  517  nm
dengan  absorbansi  sebesar  0,706.  Pengujian dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dilakukan  untuk  mengetahui  absorbansi  DPPH yang  tersisa  setelah  ditambahkan  sampel  uji dengan  berbagai  konsentrasi.  Jika  suatu senyawa  memiliki  aktivitas  sebagai  penangkal radikal  bebas,  maka  akan  terjadi  penurunan nilai  absorbasi  DPPH pada panjang  gelombang maksimum 517 nm.
Hasil  yang  diperoleh  pada  Tabel  2, menunjukan  bahwa  setiap  sampel  larutan  uji mengalami  penurunan  nilai  absorbansi  ketika konsentrasi  sampel  uji  semakin  tinggi.  Hal  ini didukung  dengan  penelitian  Salamah et  al.,
(2015), yang menyatakan bahwa suatu senyawa yang  memiliki  aktivitas  penangkapan  radikal bebas  akan  mendonorkan  atom  hidrogennya untuk  berikatan  dengan  DPPH  membentuk DPPH  tereduksi  (DPPH-H).  Reaksi  radikal bebas  DPPH  dan  senyawa  penangkap  radikal bebas dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar  3.  Reaksi  Radikal  DPPH  dan Antioksidan (Prakash, 2001).
Penentuan % Inhibisi Radikal Bebas DPPH
Penentuan % inhibisi atau persen perendaman  radikal  bebas  digunakan  untuk membandingkan  aktivitas  penangkapan  radikal bebas DPPH larutan pembanding vitamin C dan larutan  uji  (Fraksi).  Data  hasil  yang  di  peroleh pada  gambar  4,  menunjukkan  adanya  aktivitas peredaman  radikal  DPPH,  yang  dilihat  dari adanya  penurunan  nilai  absorbansi  radikal DPPH  yang  disebabkan  oleh  larutan  uji  pada berbagai konsentrasi dan semakin meningkatnya nilai persen perendamam radikal bebas.
Gambar  4.  Diagram  %  Inhibisi  Radikal  Bebas DPPH dari tiap larutan uji dan pembanding.
Penentuan Nilai IC 50 Nilai  IC 50 didefinisikan  sebagai  besarnya konsentrasi  senyawa  uji  yang  dapat  meredam radikal  bebas  sebanyak  50%.  Semakin  kecil nilai  IC 50 maka  aktivitas  peredaman  radikal bebas semakin tinggi.  Nilai IC 50 diperoleh dari suatu persamaan regresi linier yang menyatakan hubungan  antara  konsentrasi  senyawa  uji dengan  persen  penangkapan  radikal  bebas.
Tabel 3. Hasil Perhitungan Nilai IC 50 dari masing-masing fraksi dan pembanding.
No Sampel Persamaan Regresi Nilai IC 50 (μg/mL) Kategori 1 Fraksi I y = 0,195x + 16,909 169,69 Lemah 2 Fraksi II y = 0,0492x + 9,3348 825,78 Sangat Lemah 3 Fraksi III y = 0,1274x + 10,361 311,13 Sangat Lemah 4 Fraksi IV y = 0,175x + 6,8087 246,80 Sangat Lemah 5 Fraksi V y = 0,017x + 10,991 2294,64 Tidak Aktif 6 Vitamin C y = 8,64x + 22,15 3,22 Sangat Kuat
Senyawa  dikatakan  memiliki  aktivitas penangkap  radikal  bebas  sangat  kuat  apabila nilai  IC 50 kurang  dari  50  μg/mL,  kuat  apabila nilai  IC 50 antara 50-100 μg/mL, sedang apabila nilai  IC 50 antara  100-  150  μg/mL,  dan  lemah apabila  nilai  IC 50 antara  150-200  μg/mL.  Nilai IC 50 200-1000  μg/mL  dinyatakan  masih berpotensi  sebagai  senyawa  penangkap  radikal bebas,  namun  memiliki  aktivitas  penangkap radikal  bebas  yang  sangat  lemah  (Molyneux, 2004).
Dari  hasil  perhitungan  nilai  IC 50 pada Tabel  3,  fraksi  I  memiliki  aktivitas  sebagai penangkap radikal bebas, namun bersifat lemah. Sedangkan  fraksi  II,  III,  dan  IV  memiliki aktivitas penangkap radikal bebas yang bersifat sangat  lemah,  Sedangkan,  pada  fraksi  V  tidak memiliki  aktivitas  sebagai  senyawa  penangkap radikal  bebas,  karena  memiliki  nilai  IC 50 yang sangat besar.
Vitamin C sebagai kontrol positif mempunyai aktivitas sebagai penangkap radikal bebas  yang  sangat  kuat  karena  memiliki  nilai IC 50 kurang  dari  50  μg/mL.  Perbandingan  nilai IC 50 dari  tiap  fraksi  ekstrak  daun  gedi  hijau dengan  nilai  IC 50 dari  vitamin  C  menunjukkan adanya  perbedaan  aktivitas  penangkap  radikal bebas. Perbedaan ini disebabkan karena vitamin C  mempunyai  gugus  hidroksil  bebas  yang bertindak sebagai penangkap radikal bebas.

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian  yang diperoleh Fraksi I  bersifat  sebagai  penangkap  radikal  bebas, namun  aktivitasnya  bersifat  lemah,  sedangkan fraksi  II,  III,  dan  IV  dapat  bersifat  sebagai penangkap  radikal  bebas,  namun  memiliki aktivitas  penangkap  radikal  bebas  yang  sangat lemah, hal ini dikarenakan nilai IC 50 ( Inhibitory Concentration ), dari  tiap  fraksi  yang  diperoleh
cukup  besar.  Pada  fraksi  V,  tidak  memiliki aktivitas  sebagai    penangkap  radikal  bebas, karena  memiliki  nilai  IC 50 yang  sangat  besar. Oleh sebab itu, penelitian ini tidak direkomendasikan  sebagai  senyawa  penangkap radikal bebas.

## DAFTAR PUSTAKA
Burda,  S.,  and  Oleszek,  W.  2001.  Antioxidant and  Antiradical  Activities  of  Flavanoid. Journal  of    Agricultural  and  Food Chemistry. 49: 2774-2779.
Christian, Gary D. 1994. Analytical  Chemistry .
Fifth  Edition.  University  of  Washington. John Wiley & Sons, USA.
Hodgson,  J.M.,  and  Kevin  D.C.,  2006, Review Dietary  flavonoids:effects  on  endothelial function  and  blood  pressure, Journal Science Food Agriculture, 86 :2492-2498.
Mamahit, L.P., dan Soekarno, N. H. 2010. Satu senyawa  organic  yang  diisolasidari  daun gedi  ( Albemoschus  manihot L.  Medik) Asal Sulawesi utara. Chemistry Progress . Vol. 3 No. 1, P. 45.
Molyneux, P. 2004. The Use of The Stable Free Radical  Diphenylpicryl-hydrazyl  (DPPH) for  Estimating  Antioxidant  Activity. Songklanakarin  J.  Sci.  Technol . 26 (2): 211-219.
Prakash,  A.  2001.  Antioxidant  Activity, Medallion Laboratories Analytical
Progress . vol. 19 , No. 2.
Salamah,  N.,  Widyasari,  E.  2015.  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Metanol  Daun Kelengkeng  ( Euphoria  longan (L)
Steud.)  dengan  metode  Penangkapan Radikal 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil.
Pharmaҫiana, Vol. 5 (1): 25-34.
Sudewi, S., Lolo, W., Rifai, Y., Rante, H. 2017.
Analisis  Finger  Print  Tanaman  Gedi ( Abelmoschus Manihot L .) dengan Metode Spektroskopi FTIR dan Kemometrik  serta  Aktivitas  Penangkal Radikal Bebas. Laporan Penelitian
Kemenristekdikti 2017 . LPPM UNSRAT.