## ________________________________________________________________
Efektivitas Ekstrak Daun Pepaya (Carica papaya L.) sebagai Wound Healing Menggunakan  Ikan  Zebra  Danio  rerio  Hamilton,  1822  Yang  Diinduksi Hiperglikemia sebagai Model
Falihah Nur Aini 1 , Lina Elfita 1* , Narti Fitriana 2 1. Department of Pharmacy, Faculty of Health Sciences, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2. Department of Biology, Faculty of Science and Technology, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
*Corresponding author: lina.elfita @ uinjkt.ac.id
Received: 22 May, 2024; Accepted: 28 June, 2024
Abstract: Papaya  leaves  are  known  to  have  antidiabetic  and  wound-healing  activities  because  they  contain  flavonoids, alkaloids, tannins, and saponins. Tests of the activity of papaya leaf extract in mouse models have been widely conducted. In this study, the wound healing activity of papaya leaves was carried out using zebrafish as a model, because of their ability to regenerate and 70% similarity to human glucose metabolism. This study aimed to analyze the potential of zebrafish as a model for healing diabetic wounds using 96% ethanol extract from papaya leaves. Zebrafish were divided into six groups, namely normal control, negative control, positive, and papaya leaf extract 125, 187.5, and 250 ppm. The parameters observed were a decrease in blood sugar levels, regeneration of the zebrafish caudal fin, and survival rate of the fish. The results showed that there was an effect of administering papaya leaf extract at doses of 125, 187.5, and 250 ppm respectively to reduce blood sugar levels by an average of 42.67; 44.33; and 72 mg/dL, an increase in fin length of 1; 1.3; 1 mm, and survival rate with a percentage of 91%, 91%, 64%. It was concluded that zebrafish could be used as a test model for diabetic wound healing. Apart from that, the use of 96% ethanol extract from papaya leaves affects the healing of diabetic wounds. Of the 3 doses given with 96% ethanol extract of papaya leaves, the best dose for healing diabetic wounds was 187.5 ppm.
Keywords: Animal model, diabetic wound healing, papaya leaves, zebrafish
Abstrak :  Daun  pepaya  diketahui  memiliki  aktivitas  antidiabetes  dan  penyembuhan  luka  karena  kandungannya  berupa flavonoid,  alkaloid,  tanin, dan  saponin.  Uji  aktivitas  ekstrak daun  pepaya  pada  model  tikus  sudah banyak  dilakukan.  Pada study  ini,  pengujian  aktivitas  penyembuhan  luka  daun  pepaya  dilakukan  menggunakan  ikan  zebra  sebagai  model,  karena kemampuannya  dalam  beregenerasi  dan  memiliki  kemiripan  70%  dengan  metabolisme  glukosa  manusia.  Penelitian  ini bertujuan untuk menganalisis potensi ikan zebra sebagai model pada penyembuhan luka diabetes menggunakan ekstrak etanol 96% daun pepaya. Ikan zebra dibagi menjadi 6 kelompok, yaitu kontrol normal, kontrol negatif, positif, ekstrak daun pepaya 125, 187,5 dan 250 ppm. Parameter yang diamati adalah penurunan kadar gula darah, regenerasi sirip ekor kaudal ikan zebra dan survival rate ikan. Hasil penelitian menunjukkan adanya pengaruh pemberian ekstrak daun pepaya pada dosis 125, 187,5 dan 250 ppm berturut-turut menurunkan kadar gula darah rata-rata sebesar 42,67; 44,33; dan 72 mg/dL, memiliki pertumbahan panjang sirip sebesar 1; 1,3; 1 mm, dan survival rate dengan persentase 91%, 91%, 64%. Disimpulkan bahwa ikan zebra dapat dijadikan model uji penyembuhan luka diabetes. Selain itu, penggunaan ekstrak etanol 96% daun pepaya memiliki pengaruh terhadap  penyembuhan  luka  diabetes.  Dari  3  dosis  pemberian  ekstrak  etanol  96%  daun  pepaya,  dosis  terbaik  untuk penyembuhan luka diabetes adalah 187,5 ppm
Kata Kunci: Daun papaya, ikan zebra, hewan model, penyembuhan luka diabetes
DOI: 10.15408/pbsj.v6i1.38957

## 1. PENDAHULUAN
Penyembuhan luka diabetes lebih rumit dan persisten dibandingkan  penyembuhan  pada  luka  normal.  Luka diabetes  dapat  mempengaruhi  kualitas  hidup  pasien, deformitas  permanen,  risiko  sepsis,  morbiditas,  dan mortalitas  (Oliver  &  Mutluoglu,  2022).  Menurut Internasional  Diabetic  Federation  (IDF),  komplikasi
diabetik dan ekstremitas bawah dapat mempengaruhi 40 sampai 60 juta orang dengan diabetes secara global.
Pengobatan luka diabetes sudah dikembangkan seperti penggunaan  antiseptik  dan  antibiotik,  terapi  oksigen, serta  pembalutan  luka  modern.  Namun,  pengobatan

## Pharmaceutical and Biomedical Sciences Journal
Volume 6 (1), 2024, 46-54
tersebut  memiliki  kendala  pada  biaya  yang  tinggi, terjadinya  resistensi  mikroba,  efek  samping  dalam penggunaan jangka panjang, dan reaksi alergi. Saat ini sudah  banyak  penelitian  dan  pengembangan  terkait tanaman  herbal  yang  bisa  dijadikan  alternatif  yang efektif  dan  aman,  serta  memiliki  efek  toksik  yang minimal.  Salah  satu  pengembangan  pengobatan tradisional ini adalah penggunaan ekstrak pucuk daun mangga  (Darniwa et  al .,  2021),  daun  binahong (Karimatulhajj et al ., 2017), dan daun pepaya (Nayak et al ., 2007) sebagai penyembuhan luka.
Penelitian  penyembuhan  luka  diabetes  menggunakan model  uji  tikus  sudah  banyak  digunakan.  Namun, dalam  beberapa  tahun  terakhir  ikan  zebra  menjadi model  uji  yang  populer  dalam  bidang  biomedis, toksikologi, dan farmakologi. Keuntungan menggunakan ikan zebra sebagai hewan model adalah karena  kemampuannya  dalam  bereproduksi  yang tinggi,  biaya  rendah,  dan  waktu  generasi  pendek (Naomi et al ., 2021).
Selain itu, ikan zebra juga memiliki prinsip yang sama dalam menutupi luka pada kulit atau re-epitelisasi dan 70% memiliki kemiripan dalam metabolisme glukosa manusia.  Kemampuan  untuk  meregenerasi  dirinya sendiri  terutama  organnya,  menjadikan  ikan  zebra sebagai  hewan  model  yang  memiliki  potensi  baik untuk  pengembangan  obat  terkait  regenerasi  (Lin et al ., 2023).
Penelitian yang dilakukan oleh Darniwa et.al . (2021), melaporkan bahwa penyembuhan luka diabetes dapat dilakukan menggunakan ekstrak pucuk daun  mangga dengan  menggunakan ikan zebra sebagai model. Ikan zebra  diinduksi  dengan  0,04%  aloksan  dan  0,2% glukosa  untuk  mendapatkan  keadaan  hiperglikemi. Berdasarkan potensi  yang dimiliki ikan zebra sebagai model untuk drug screening , maka kami tertarik untuk menggunakan  ikan  zebra  sebagai    model  untuk
penyembuhan luka diabetes ( diabetic wound healing ) yang  diintervensi  dengan  ekstrak  daun  papaya.  Pada penelitian  ini,  ikan  zebra  dipaparkan  dengan  ekstrak etanol 96% daun pepaya dan diinduksi dengan 0,05% aloksan serta 2% glukosa untuk mendapatkan keadaan hiperglikemia.  Parameter  yang  diamati  adalah penurunan  kadar  gula  darah,  regenerasi  sirip  ekor kaudal  ikan  zebra  dan survival  rate hidup  ikan. Paramater tersebut diukur dengan individu ikan yang sama dari awal hingga akhir penelitian.

## 2. METODE PENELITIAN
2.1   Alat dan Bahan
a. Alat
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  berupa akuarium  kaca  6L  (20x20x15),  seperangkat  filter dan  media  filtrasi,  pisau  bedah,  glukometer Autocheck  3in1  Multi  Monitoring  System , spuit 0,5cc  dengan needles 30G, ultrasonic  cleaner (Elmasonic), rotary  evaporator (Eyela),  dan peralatan gelas.

## b. Bahan
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah daun pepaya tua ( Carica papaya L., var. California), etanol  96%,  metformin,  aloksan  monohidrat,  dan glukosa .

## 2.2   Model Uji
Model  uji  berupa  ikan  zebra Danio  rerio (Hamilton, 1822) jantan dengan umur 4-6 bulan dengan ukuran 1- 1,5 inci sebanyak 90 ekor yang didapatkan dari Pasar Ikan  Hias  Parung,  Kabupaten  Bogor.  Dilakukan pemberkasan  kode  etik  untuk  perlakuan  terhadap hewan  model  di  Universitas  Negeri  Jakarta  No. 017/KEH-BIO/UNJ/2023.
Kriteria  inklusi  adalah  ikan  dengan  usia  4-6  bulan (Hardianti et  al .,  2021),  sehat  berdasarkan  keadaan
fisik dan aktivitas berenang, dan ikan jantan. Ikan yang digunakan  jantan,  untuk  menghindari  variasi  yang dapat  terjadi akibat perbedaan hormonal  (Istriningsih & Solikhati, 2021). Kriteria eksklusi adalah ikan yang sakit atau mati saat penelitian.

## 2.3   Pemeliharaan Ikan Zebra
Ikan  zebra  hidup  di  air  tawar,  siklus  gelap  terang 12:12, jumlah pemberian pakan 2-3 kali sehari berupa flakes  pellet (Khotimah et  al .,  2020).  Kondisi akuarium dijaga pada suhu 24-30 ℃ (Muchdar et al .,
2020), pH 6,5-8,0 (Indriyanti, 2020), dan kualitas air akuarium  baik.  Saat  aklimatisasi  ikan  ditaruh  dalam akuarium 60L. Air akuarium untuk aklimatisasi harus dikuras sebanyak 20% air setiap 3 hari sekali.

## 2.4   Ekstrak Daun Pepaya
Ekstrak  dibuat  dengan  metode  ultrasonik.  Daun pepaya  dikeringkan  dan  dihaluskan.  Serbuk  daun pepaya  sebanyak  40  g  dimasukkan  ke  dalam  labu erlenmeyer  yang  diisi  dengan  200  ml  etanol  96%. Lalu,  diekstraksi  dengan  menggunakan ultrasonic cleaner dengan suhu 60 ℃ selama 30 menit (Fauziah & Wakidah, 2019); (Gede Wiranata & Malida, 2022). Hasil  ekstraksi  selanjutnya  dilakukan  skrining fitokimia  untuk  membuktikan  adanya  kandungan senyawa metabolit sekunder. Skrining fitokimia yang dilakukan  berupa  uji  alkaloid,  uji  steroid,  uji flavonoid, dan uji saponin.

## 2.4 Uji Aktivitas Penyembuhan Luka Diabetes

## a. Perlakuan Kelompok Kontrol
Setiap  kelompok  perlakuan  berisikan  15  ekor  ikan, yang  terdiri  dari  kontrol  normal,  negatif,  dan  positif. Kontrol  normal  [KN]  adalah  kelompok  ikan  tidak diinduksi  hiperglikemia.  Kontrol  negatif  [K(-)] merupakan  kelompok  ikan  diinduksi  hiperglikemia dan  tidak  diberikan  intervensi  berupa  metformin ataupun  ekstrak  daun  pepaya.  Kontrol  positif  [K(+)]
adalah  kelompok  ikan  yang  diinduksi  hiperglikemia dan  diberikan  intervensi  berupa  metformin  20  µM (Darniwa, et al ., 2021).

## b. Perlakuan Kelompok Uji
Hewan  uji  dibagi  dalam  3  pemberian  dosis  ekstrak yang berbeda, setiap kelompok berisikan 15 ekor ikan dengan setiap kelompok diberikan induksi hiperglikemia  dan  intervensi  dengan  ekstrak  daun pepaya  sesuai  dengan  dosisnya.  Dosis  1,  2,  dan  3 diberikan ekstrak daun pepaya dengan dosis berturut- turut 125, 187,5, dan 250 ppm. Pada setiap kelompok, dilakukan pengecekan kadar gula darah dan amputasi.

## c. Pembuatan Larutan Induksi Hiperglikemia
Larutan  terbagi  menjadi  dua,  yaitu  aloksan  dan glukosa.  Larutan  aloksan  0,05%  dibuat  dengan  cara melarutkan  500  mg  aloksan  ke  dalam  1  L  air. Sebanyak 100 g glukosa dilarutkan ke dalam 5L air.

## d. Induksi Hiperglikemia
Kelompok  ikan  yang  diinduksi  hiperglikemia  akan dipaparkan  dengan  0,05%  aloksan  selama  1  jam  dan glukosa dengan konsentrasi 2% selama 23 jam, yang dilakukan  berulang  hingga  3  hari.  Setelah  3  hari, dilakukan  pengukuran  kadar  gula  darah,  dikatakan ikan  hiperglikemia  apabila  berada  diatas  kadar  gula darah normal (50-75 mg/dL) (Hayati et al ., 2017).

## e. Pengukuran Kadar Gula Darah
Ikan  dianestesi  dengan  memasukkan  ikan  pada  air dengan temperatur 17 ℃ , temperatur akan diturunkan perlahan  menuju  12 ℃ .  Sebelum  pengambilan  darah mula-mula  harus  disiapkan  spuit  0,5  cc  yang  sudah dibilas dengan Na-EDTA. Setelah ikan pingsan, badan ikan  dikeringkan  dengan  tisu  perlahan.  Lalu,  bagian badan  hingga  kepala  ditutup  dengan  kapas  tanpa ditekan. Ambil darah menggunakan spuit pada bagian dorsal  aorta.  Jika  darah  sudah  terlihat  ada  bagian pangkal needle , maka darah tersebut diletakkan di atas
sudip untuk mempermudah penyerapan darah ke strip tes. Selanjutnya kadar gula darah dapat terbaca di alat.

## f. Amputasi Sirip Kaudal
Setelah didapatkan ikan dalam keadaan hiperglikemia, sirip  ikan  diamputasi  dari  dorsal  menuju  ventral dengan  setengah  dari  panjang  sirip  atau  0,3  cm  dari bagian  terluar  sirip.  Amputasi  dilakukan  dengan bisturi.  Lalu,  dibiarkan  ikan  di  akuarium  dengan temperatur normal (Darniwa et al ., 2021).

## g. Intervensi Kelompok Uji
Setelah  amputasi,  ikan  dibagi  kedalam  6  kelompok, yaitu  kontrol  normal,  kontrol negatif,  kontrol  positif, dan kelompok uji ekstrak daun pepaya 125 ppm, 187,5 ppm, dan 250 ppm. Setiap kelompok berisikan 15 ekor ikan.  Kelompok  kontrol  positif  diberikan  paparan metformin  20  µM  dan  kelompok  uji  ekstrak  daun pepaya diintervensi dengan pemaparan ekstrak selama 2 jam setiap harinya. Perlakuan ini dilakukan sampai hari kelima pasca amputasi (Darniwa et al ., 2021).

## h. Obeservasi Regenerasi Sirip dan Kadar Gula

## Darah
Observasi  regenerasi  sirip  diamati  pada  hari  ke-5 setelah diberikan metformin, dan ekstrak. Pengukuran dihitung dari pangkal sirip sampai bagian terluar sirip menggunakan  milimeter  blok  (Darniwa et  al .,  2021) dan  pengukuran  kadar  gula  darah  menggunakan glukometer.

## i. Pengamatan Survival Rate
Pengamatan survival  rate untuk  mengetahui  sintasan ikan  dilakukan  dengan  cara  membandingkan  jumlah ikan  yang  hidup  pada  akhir  pemeliharaan  dengan jumlah  ikan  pada  awal  pemeliharaan  menggunakan rumus Effendi (1997), dengan rumus sebagai berikut:
SR = Nt No x 100%
Keterangan: SR = survival rate/ kelangsungan hidup %
Nt = jumlah ikan pada akhir pemeliharaan (ekor) No = jumllah ikan pada awal pemeliharaan (ekor)

## 2.5 Euthanasia
Euthanasia  dilakukan  dengan  cara  memasukkan  ikan ke dalam air dengan suhu 4 ℃ selama kurang lebih 20 menit  hingga  tidak  ada  pergerakan  pada  sirip  dan insang,  lalu  dilanjut  dengan  pembekuan  ikan  dalam freezer , kemudian ikan dibakar (IACUC, 2021).

## 2.6 Analisis Hasil
Hasil  dari  analisis  dilihat  dari  kadar  gula  darah, panjang  sirip,  dan survival  rate .  Pengukuran  kadar gula darah diproses dengan IBM SPSS Statistics versi 23 (Santoso, 2020). Data pengukuran kadar gula darah diproses  menggunakan  ANOVA  One-Way  untuk melihat  adanya  pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol 96% daun pepaya (Darniwa et al ., 2021). Hasil analisis ANOVA  yang  memberikan  hasil  berbeda  nyata dianalisis  lebih  lanjut  dengan  uji Least  Significant Difference (LSD).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  rendemen  ekstrak  daun  pepaya  yang  diperoleh yaitu  sebesar  15,5%  sehingga  memenuhi  syarat Farmakope  Herbal  Indonesia  (2017),  yaitu  nilainya tidak  kurang  dari  10%.  Berdasarkan  hasil  skrining fitokimia  yang  dilakukan,  ekstrak  etanol  96%  daun pepaya  mengandung  senyawa  flavonoid,  alkaloid, tannin, saponin, dan steroid.
Menurut Mahatriny (2017) ekstrak etanol daun pepaya yang diperoleh dari Daerah Ubud positif mengandung alkaloid,  flavonoid,  dan  tannin.  Penelitian  yang dilakukan  oleh  Ayun  (2017)  dengan  daun  pepaya  di Balai Penelitian Tanaman Kendalpayak menghasilkan hasil positif pada saponin, alkaloid, tannin, terpenoid, dan  steroid.  Menurut  Gogna  (2015),  flavonoid  yang terkandung dalam daun pepaya antara lain kaempferol, hesperidin, quercetin, naringenin, dan rutin.
Sejalan dengan penelitian tersebut, terdapat perbedaan kandungan  metabolit  sekunder  yang  terkandung. Banyak  faktor  yang  mempengaruhi  kandungan metabolit sekunder, yaitu kondisi lingkungan tanaman seperti  suhu,  ketinggian  daratan,  kandungan  unsur hara dalam tanah, pH, dan kelembaban tanah.
Studi pendahuluan induksi dilakukan untuk menentukan  konsentrasi  aloksan  dan  glukosa  yang dapat  menghasilkan  hiperglikemia  serta  mengetahui kelangsungan  hidup  ikan  selama  proses  induksi Menurut  Hardianti et  al .  (2021),  ikan  yang hiperglikemia  memiliki  perbedaan  fisik  dengan  ikan normal  yaitu  adanya  peningkatan  volume  jaringan adiposa  viseral,  akimulasi  lipid  di  hati,  dan meningkatkan bobot badan secara signifikan.
Gambar 1. Penampakan ikan normal (a); ikan diabetes (b). (Dokumentasi pribadi, 2023). Peningkatan volume jaringan adiposa  viseral  pada  ikan  diabetes  ditandai  dengan  lingkar merah. Gambar berskala 1:1,5 cm.
Setelah  pemberian  aloksan  0,05%  selama  1  jam  dan glukosa 2% selama 23 jam dalam 3 hari berturut-turut didapatkan  hasil  kadar  gula  darah  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
Merujuk pada Jörgens (2012), kadar gula darah normal pada  ikan  zebra  yaitu  sebesar  50-75  mg/dL.  Oleh karena itu, pemberian aloksan 0,05% dan glukosa 2% dapat membuat ikan hiperglikemia.
Gambar  2. Rata-rata  Kenaikan Kadar  Gula  Darah  Induksi Keterangan. KN = kontrol normal dan K(-) = kontrol negatif.
Gambar 3. Persentase Survival Rate Induksi.
Keterangan. KN = kontrol normal dan K(-) = kontrol negatif.
Selama  masa  induksi,  jika  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  normal,  kelompok  kontrol  negatif memiliki  persentase survival  rate 80%  ( Gambar  3 ). Berdasarkan  Darniwa et  al .  (2021),  kematian  pada ikan  dapat  disebabkan oleh  rendahnya  kadar oksigen dalam air, sehingga ikan sulit untuk bernapas. Selain itu,  faktor  yang  dapat  menyebabkan  kematian  pada ikan  adalah  toksisitas  dari  aloksan  0,05%  dan buruknya kualitas air saat pemaparan dengan glukosa 2%.
Pada Gambar 4. dapat dilihat bahwa terjadi penurunan berturut-turut  dari  dosis  3,  dosis  2,  dosis  1  ekstrak, kontrol  positif.    Kelompok  kontrol  normal  memiliki rata-rata  kadar  gula  darah  55,33  mg/dL  dan  49,67 mg/dL, yang diketahui pada kadar gula darah tersebut berada  pada  rentang  normal  sesuai  dengan  literatur yaitu  50-75  mg/dL.  Kelompok  kontrol  negatif memiliki kadar gula darah di atas ambang kadar gula darah normal  sebesar 114 mg/dL setelah induksi dan
a
b
112  mg/dL  setelah  5  hari  tidak  diberikan  paparan apapun.
Pada kelompok kontrol positif mengalami penurunan dengan selisih rata-rata kadar gula darah sebelum dan sesudah  intervensi  42,66  mg/dL.  Sejalan  dengan kontrol  positif,  pada  dosis  1,  2,  dan  3  pemberian ekstrak etanol daun pepaya juga memiliki penurunan yang besar.  Rerata penurunan kadar gula  darah dosis 1, 2 dan 3 berturut-turut sebesar  42,67; 44,33 dan 72 mg/dL.
Hasil  Uji  ANOVA One-Way menunjukkan  adanya pengaruh  yang  signifikan  pemberian  ekstrak  daun pepaya terhadap penurunan kadar gula darah (p<0,05).
Lalu,  didapatkan  hasil  uji  LSD  yaitu  pemberian ekstrak  daun  pepaya  dosis  1,  dosis  2,  dan  dosis  3 memberikan pengaruh terhadap penurunan kadar gula
darah dan kadar gula darah kembali berada di rentang normal.
Ikan  yang  sudah  diamputasi  akan  beregenerasi sebagaimana normalnya. Namun, kondisi hiperglikemia  dapat  menyebabkan  terhambatnya proses  penyembuhan  luka  sehingga  memakan  waktu yang  lebih  lama.  Oleh  karena  itu, pada  penelitian  ini penyembuhan  luka  juga  didasarkan  pada  percepatan pertumbuhan panjang sirip. Pengukuran panjang sirip dilakukan  menggunakan  milimeter  block,  sehingga dalam perhitungannya hanya dapat dilihat sampai 0,1 cm  saja . Perbedaan  rata-rata  pertumbuhan  panjang
Gambar 4. Rata-rata Kadar Gula Darah Sebelum dan Setelah Intervensi dengan  Ekstrak Daun Pepaya.
Keterangan. KN = kontrol normal, K(-) = kontrol negatif, K (+) = kontrol positif, D1 = dosis 125 ppm, D2 = dosis 187,5 ppm, D3 = dosis 250 ppm.
Tabel 1 Hasil Pengukuran Pertumbuhan Panjang Sirip
Kelompok Uji Pertumbuhan panjang sirip (cm) Rata-rata ± SD Ikan 1 Ikan 2 Ikan 3 KN 0,1 0,1 - 1,00±0,00 K (-) 0,1 0,1 - 1,00±0,00 K (+) 0,1 0,1 0,1 1,00±0,00 Ekstrak Etanol Daun Pepaya D1 0,1 0,1 0,1 1,00±0,00 D2 0,1 0,2 0,1 1,33±0,577 D3 0,1 0,1 0,1 1,00±0,00
Keterangan. K(-) = kontrol negatif, K (+) = kontrol positif, D1 = dosis 125 ppm, D2 = dosis 187,5 ppm, D3 = dosis 250 ppm
sirip kaudal ikan pada masing-masing kelompok tidak jauh  berbeda.  Namun,  pada  dosis  2  pertumbuhan panjang sirip pada ikan kedua mencapai 0,2 sehingga rata-rata  pada  kelompok  tersebut  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  kelompok  uji  lainnya.  Ikan ketiga  pada  kelompok kontrol  normal  mati pada  hari kedua  pasca  amputasi.  Kematian  pada  ikan  kontrol normal  bisa  terjadi  karena  adanya  infeksi  setelah dilakukan  amputasi.  Kematian  juga  terjadi  pada  ikan ketiga  kelompok  kontrol  negatif  saat  hari  pertama pasca  amputasi.  Hal  ini  bisa  terjadi  karena  adanya infeksi pada ikan.
Menurut  penelitian  Meherunisa et  al .  (2018), metformin memiliki aktivitas antibakteri gram positif dan  negatif,  serta  memiliki  aktivitas  antijamur.  Oleh karena  itu,  pada  kelompok  kontrol  positif  tidak  ada kematian  pada  3  ikan  yang  diamputasi  dan  diukur kadar gula darah. Sejalan dengan hal tersebut, ekstrak etanol  daun  pepaya  juga  memiliki  efek  antimikroba. Ekstrak  etanol  daun  pepaya  mengandung  papain dengan  chymopapain  memiliki  aktivitas  sebagai antimikroba  dan  enzim  proteolitik  (Ramadhian  & Widiastini, 2018).
Prosedur  aseptis  pada  proses  amputasi  maupun pengukuran  kadar  gula  darah  sangat  mempengaruhi kelangsungan hidup ikan. Prosedur ini dapat dilakukan dengan  cara  sterilisasi  meja  kerja,  pisau  bedah, suntikan,  penggunaan  sarung  tangan  untuk  peneliti, pembersihan  area  amputasi  dan  pengambilan  darah pada  ikan,  serta  memperhatikan  air  akuarium  yang digunakan. Pada tahapan intervensi banyak ikan yang mati, bisa disebabkan oleh kualitas air akuarium yang buruk.  Sebagaimana  dapat  dilihat  pada Gambar  5 . Kualitas  air  yang  baik  dapat  dilihat  dari  suhu  yang sesuai,  kandungan  oksigen  yg  baik  dalam  air,  kadar nitrat  dan  nitrit  dibawah  ambang  batas.  Selain  itu, kematian  juga  bisa  berasal  dari  infeksi  setelah diamputasi  dan  diukur  kadar  gula  darah  ataupun
kesalahan  saat  pengukuran  kadar  gula  darah  yang dapat melukai ikan.
Persentase survival  rate paling  rendah  berada  pada kelompok kontrol negatif, yaitu sebesar 50%. Hal ini bisa disebabkan oleh tingginya kadar gula darah ikan yang  tidak  diberikan  pengobatan  sehingga  ikan beresiko  mati.  Presentase  terendah  lainnya  yaitu kelompok pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 3  atau  250  ppm.  Kematian  pada  kelompok  tersebut bisa  diakibatkan  pekatnya  air  akuarium  yang dipaparkan ekstrak daun pepaya 250 ppm.
Gambar 5. Persentase Survival Rate Intervensi
Keterangan. KN = kontrol normal, K(-) = kontrol negatif, K (+) = kontrol positif, D1 = dosis 125 ppm, D2 = dosis 187,5 ppm, D3 = dosis 250 ppm.
Tabel 2 Pengukuran Kualitas Air Akuarium
Kelompok Uji Parameter Suhu ℃ pH Nitrat (mg/L) KN 26-27 7,03 5 K (-) 26-27 7,05 30 K (+) 26-27 7 10 Ekstrak Etanol Daun Pepaya D1 26-27 7,06 15 D2 26-27 7,02 15 D3 26-27 7,05 20
Keterangan.  Pengukuran  Kualitas  Air  Akuarium  pada  hari  ke-5 setelah amputasi. K(-) = kontrol negatif, K (+) = kontrol positif, D1 = dosis 125 ppm, D2 = dosis 187,5 ppm, D3 = dosis 250 ppm
Dalam  menunjang  efek  penyembuhan  luka  diabetes, senyawa  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin,  dan steroid  juga  bermanfaat  sebagai  agen  antiinflamasi (Putu et  al .,  2021).  Senyawa  tersebut  dapat menghambat enzim siklooksigenase atau lipooksigenase  dan  menghambat  akumulasi  leukosit sehingga  mengurangi  edema  atau  antiinflamasi (Karim,  2022).  Tannin  memiliki  khasiat  sebagai
antioksidan  dengan  cara  menghambat  produksi oksidan  oleh  neutrophil,  monosit,  dan  makrofag. Tannin  juga  menghambat  langsung  oksidan  relatif seperti  asam  hipoklorid  dan  radikal  hidroksi  (Putu et al ., 2021).
Pada  pasien  yang  terkena  luka  diabetes  mengalami ketidakseimbangan  redoks  yang  disebabkan  oleh berlebihnya  stres  oksidatif  pada  jaringan  dan penurunan  kemampuan  antioksidan  sehingga  luka diabetes  sulit  disembuhkan.  Jika  terdapat  efek antioksidan,  stres  oksidatif  akan  menurun  sehingga terjadi peningkatan proses perbaikan luka (Deng et al ., 2021).    Aktivitas  antimikroba  juga  berperan  penting dalam  proses  penyembuhan  luka  diabetes.  Daun pepaya  memiliki  kandungan  alkaloid,  saponin, fenolik,  flavonoid,  tanin,  steroid  yang  memiliki aktivitas sebagai antibakteri (Niza et al ., 2020).

## 4. KESIMPULAN
Ikan  zebra  dapat  dijadikan  model  uji  penyembuhan luka  diabetes  dengan  melihat  penurunan  kadar  gula darah, pertumbuhan panjang sirip kaudal, dan survival rate .  Ekstrak  etanol  96%  daun  pepaya  memiliki pengaruh terhadap penyembuhan luka diabetes. Dari 3 dosis  pemberian  ekstrak  etanol  96%  daun  pepaya, dosis terbaik untuk penyembuhan luka diabetes adalah 187,5 ppm dengan persentase survival rate 91%, rata- rata  penurunan  kadar  gula  darah  44,33  mg/dL,  dan rata-rata pertambahan panjang sirip sebesar 0,13 cm.

## 5. REFERENSI
Darniwa, A. V., Cahyanto, T., & Hidayah, S. N. (2021).
Effect  of  Mango  Leaf  Shoot  Extract  (Mangifera indica  L.)  on  Zebra  Fish (Danio  rerio)  Cell
Regeneration Induced by Hyperglycemia. Jurnal Ilmu Hayat , 5 (2).
http://journal2.um.ac.id/index.php/jih/index
Effendi,  M.  (1997). Biologi  Perikanan .  Penerbit Yayasan Pustaka Nusantara.
Farmakope  Herbal  Indonesia.  (2017). Farmakope Herbal Indonesia (Edisi II) .
Fauziah,  L.,  &  Wakidah,  M.  (2019). Extraction  of Papaya  Leaves ( Carica  papaya L.) Using
Ultrasonic  Cleaner. EKSAKTA:  Journal  of Sciences and Data Analysis , 35–45. https://doi.org/10.20885/eksakta.vol19.iss1.art4
Gede Wiranata, I., & Malida, M. V. S. (2022). Pengaruh
Pelarut Dan Metode Ekstraksi Terhadap
Kandungan  Metabolit  Sekunder  Dan  Nilai  Ic50 Ekstrak  Umbi  Bit  (Beta  vulgaris  L.) Effect  Of Solvent  And  Extraction  Method  On  Secondary Metabolites  And  Ic50  Of  Beetroot  Extract  (Beta vulgaris L.). In Jurnal Integrasi Obat Tradisional
• (Vol. 2, Issue 1). https://usadha.unmas.ac.id
Hardianti,  M.,  Yuniarto,  A.,  &  Hasimun,  P.  (2021).
Review: Zebrafish (Danio Rerio) Sebagai Model Obesitas  dan  Diabetes  Melitus  Tipe  2. Jurnal Sains Farmasi & Klinis , 8 (2), 69. https://doi.org/10.25077/jsfk.8.2.69-79.2021
Hayati, F., Putri, C. A., Awaluddin, R., Maizulfiani, A., &  Dwi  Dharma,  D.  (2017).  Pengembangan Metode Uji Antihiperglikemia Dengan Zebrafish. Menuju Masyarakat Madani Dan Lestari .
IACUC. (2021). IACUC Policy 23: Use of Zebrafish for Research and Teaching .
https://oacu.oir.nih.gov/sites/default/files/uploads /arac-guidelines/zebrafish.pdf .
Indriyanti, N. (2020). Zebrafish (Danio rerio) Sebagai Model  Hewan  Coba  pada  Pengujian  Aktivitas Obat.
Proceeding of Mulawarman
Pharmaceuticals Conferences , 11 , 80–83.
Istriningsih, E., & Solikhati, D. I. K. (2021). Aktivitas antidiabetik  ekstrak  rimpang  kunyit  (Curcuma domestica  Val.)  pada  Zebrafish  (Danio  rerio). Parapemikir:  Jurnal  Ilmiah  Farmasi , 10 (1),  60– 65.
Jörgens,  K.,  H.  J.  L.  ,  H.  H.  P.  ,  &  K.  J.  (2012). 22402952. Zebrafish: A Model for Understanding Diabetic Complications. , 120 (4), 186–187.
Karim, S. F. (2022). Formulasi Dan Uji Aktivitas Gel Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Pepaya (Carica  PAPAYA  L.)  Pada  Mencit  Jantan  Putih (Mus  MUSCULUS).  Jurnal  Ilmiah  Farmasi Farmasyifa, 5(2),
112–121.
HTTPS://DOI.ORG/10.29313/JIFF.V5I2.8970
Karimatulhajj,  H.,  Yuni  Elfasyari,  T.,  Arviana  Ihsan, E.,  Adiyas  Putra,  T.,  Hariadi,  P.,  &  Ariani,  C. (2017). Effect  of  Diabetes  Condition  on  Topical Treatment  of  Binahong  Leaf  Fraction  in  Wound Healing Process Pengaruh Kondisi Diabetes pada Pemberian Topikal Fraksi Daun Binahong dalam
Proses Penyembuhan Luka. Traditional Medicine Journal , 22 (2).
Khotimah, H., Wari, F. E., Noviasari, D., Octaviana, A.,
Supriadi,  R.  F.,  Norisa,  N.,  Permata,  T.  R., Diestika,  Y.,  Ali,  M.  M.,  &  Kalsum,  U.  (2020). Centella  asiatica  alleviates  neurotoxicity  and development  of  lead-exposed  zebrafish  larvae.
Aquaculture, Aquarium, Conservation & Legislation , 13 (4), 1886–1898.
Lin, B., Ma, J., Fang, Y., Lei, P., Wang, L., Qu, L., Wu, W.,  Jin,  L.,  &  Sun,  D.  (2023 ).  Advances  in Zebrafish  for  Diabetes  Mellitus  with  Wound Model.
Bioengineering , 10 (3), 330.
https://doi.org/10.3390/bioengineering10030330
Meherunisa,  Jaiswal,  S.,  &  Seth,  V.  (2018).  Study  of Metformin  Effect  on  Antimicrobial  Property. International  Archives  of  BioMedical  And
Clinical Research , 4 . https://doi.org/10.21276/iabcr.2018.4.3.00 Muchdar,  F.,  Juharni,  J.,  &  Andriani,  R.  (2020). Utilization of Different Probiotics on Growth and Survival  Rate  of  Blacktail  Zebra  fish  ( Dascyllus melanurus ). Agrikan: Jurnal Agribisnis Perikanan , 13 (2),
222–231.
https://doi.org/10.29239/j.agrikan.13.2.222-231
Naomi,  R.,  Bahari,  H.,  Yazid,  M.  D.,  Embong,  H.,  & Othman, F. (2021). Zebrafish as a model system to  study  the  mechanism  of  cutaneous  wound healing  and  drug  discovery:  Advantages  and challenges .  In Pharmaceuticals (Vol.  14,  Issue 10). MDPI. https://doi.org/10.3390/ph14101058
Nayak, S., & Maureen Pinto Pereira, L. (2007). Wound healing  activity  of  Carica  papaya  L.  In experimentally induced diabetic rats Evaluation of  vitamin  D  relationship  with  type  2  diabetes and  systolic  blood  pressure  View  project Diabetes in primary care View project. In Article in Indian Journal of
Experimental
Biology. https://www.researchgate.net/publicatio n/5966189
Niza,  S.,  Khumala,  I.  P.,  Advina  Herdiyani,  D.,  & Pramuningtyas,  R.  (2020).  Efektivitas  Ekstrak Daun  Pepaya  (Carica  Papaya)  Terhadap  Luka Bakar  Terinfeksi  The  Efficacy  Of  Papaya  Leaf (Carica  Papaya)  Extract  On  Infected  Wound Burn.
Oliver,  T.  I.,  &  Mutluoglu,  M.  (2022). Diabetic  Foot Ulcer .  StatPearls  Publishing,  Treasure  Island (FL). http://europepmc.org/books/NBK537328
Putu, N., Sari, R., Bodhi, W., & Lebang, J. S. (2021). Anti-Inflammatory  Activity  Test  Of  Ethanol Extract  Of  Papaya  Leaf  (Carica  Papaya  L.)  In
White  Male  Rats  (Rattus  Norvegicus)  Uji  Efek Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Pepaya (Carica  Papaya  L.)  Pada  Tikus  Putih  Jantan (Rattus norvegicus) .
Ramadhian,  M.  R.,  &  Widiastini,  A.  A.  (2018). Kegunaan Ekstrak Daun Pepaya (Carica papaya) Pada Luka. J Agromedicine | , 5 , 513.
Santoso,  S.  (2020).  Panduan  Lengkap SPSS  26 .  Elex Media Komputindo.