ANALISIS KANDUNGAN SENYAWA FENOLIK EKSTRAK ALGA Sargassum polycystum DARI PANTAI SELATAN, GUNUNG KIDUL, YOGYAKARTA
PHENOLIC CONTENT ANALYSIS OF ALGAE EXTRACT Sargassum polycystum FROM SOUTH BEACH, GUNUNG KIDUL, YOGYAKARTA
Radipta Lailatussifa 1* , Maria Madalena Pereira 2
1 Program Studi Teknik Pengolahan Produk Perikanan, Politeknik KP Sidoarjo, Sidoarjo
2 Graduate Student of Fisheries Science Department, Pukyong National University, Busan, Korea *E-mail: rr.radipta@gmail.com

## ABSTRACT
Sargassum sp. is one of the abundant brown algae on the South Coast of Yogyakarta. This algae has  pharmacological  activity  in  the  form  of  metabolite  biological  activity,  one  of  which  is  as  an antioxidant.  Regarding  its ability  as  an  antioxidant, information is needed regarding  the polyphenol content in the algae S. polycystum. The aims from this research were to determine of phenolic content analysis  of  Sargassum  polycystum  brown  algae  from  South  Beach,  Gunung  Kidul,  Yogyakarta quantitatively  related  to  its  total  phenolic  content  and  qualitatively  consisting  of  Thin  Layer Chromatography (TLC) and HPLC (High Performance Liquid Chromatography) tests. Polyphenol was extracted with ethanol 96% and calculated the yield. The yield from fresh algae to powdered algae was 9%,  while  the  yield  from  fresh  algae  to  ethanolic  extract  was  5.1%.  The  value  of  the  total  phenolic content extract at a concentration of 1000 ppm was 59.30±0,58 g GAE/100 g dried extract. The TLC test was performed using gallic acid and phloroglucinol standard, while the HPLC test was performed using  gallic  acid,  phloroglucinol  and  phenol  standard.  The  TLC  dan  HPLC  results  showed  that ethanolic  extract  of  Sargassum  polycystum  was  suspected  to  contain  polyphenols  that  resembled  of gallic acid and phenol standards.

## Keywords: ethanolic extract, High Performance Liquid Chromatography, Sargassum polycystum, Thin
Layer Chromatography, Total Phenolic Content

## ABSTRAK
Sargassum sp. merupakan salah satu alga cokelat yang melimpah di Pantai Selatan Yogyakarta. Alga ini mempunyai aktivitas farmakologi berupa aktivitas biologis metabolit, salah satunya sebagai antioksidan.  Terkait  kemampuannya  sebagai  antioksidan,  diperlukan  informasi  terkait  kandungan polifenol pada alga S. polycystum . Tujuan dari penelitian ini untuk menganalisis kandungan senyawa fenol  dari  alga  cokelat S.  polycystum yang  berasal  dari  Perairan  Pantai  Selatan,  Gunung  Kidul, Yogyakarta, secara kuantitatif terkait kandungan total fenolnya dan secara kualitatif yang meliputi uji Kromatografi Lapis Tipis dan HPLC (High Performance Liquid Chromatography). Polifenol diekstrak dengan etanol 96% dan dihitung rendemennya. Rendemen yang dihasilkan dari alga segar menjadi alga bubuk sebesar 9%, sedangkan rendemen dari alga segar menjadi ekstrak etanolik alga sebesar 5,1%. Nilai kandungan total fenol ekstrak sebesar 59,30±0,58 g GAE/100 g ekstrak kering. Uji KLT dilakukan dengan standar asam galat dan floroglusinol, sedangkan uji HPLC dilakukan dengan standar asam galat, floroglusinol dan fenol. Hasil Uji KLT dan HPLC menunjukkan bahwa ekstrak etanolik dari Sargassum polycystum mengandung polifenol yang menyerupai standar asam galat dan fenol.
Kata  Kunci: ekstrak  etanolik,  High  Performance  Liquid  Chromatography, Sargassum  polycystum , Kromatografi Lapis Tipis, Kandungan Total Fenol
Chanos chanos
Vol. 20 No. 1, Hlm. 17 – 27, Juni 2022
p-ISSN      : 1693-6299                                         http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/chanos2 e-ISSN      : 2808- 1145                                                                       DOI:10.15578/chanos.v20i1.10532

## I. PENDAHULUAN
Organisme  laut  merupakan  suatu sumber yang secara struktur dan biologisnya menyediakan metabolit sekunder aktif. Alga laut  mempunyai  banyak  fitokimia  dengan variasi  bioaktivitas  meliputi  antioksidan, antiinflamasi, dan antikanker (Lordan et al. , 2011).  Alga  laut  juga  diketahui  kaya  akan vitamin,  mineral,  polisakarida,  protein,  dan polifenol (Kuda et al. , 2005). Sargassum sp. merupakan alga coklat yang kaya kandungan polifenol,  seperti fucol,  fucophlorethol, fucodiphloroethol  G,  ergosterol, serta florotanin (Heo et al ., 2005).
Komponen fenolik merupakan salah satu  antioksidan  paling  efektif  yang terkandung  pada  alga  coklat  (Nagai  and Yukimoto,  2003).  Menurut  Zubia et  al. (2007), senyawa fenol digolongkan menjadi senyawa  fenolik  sederhana  dan  polifenol. Polifenol  meliputi  tanin,  flavonoid,  dan florotanin. Tanin digolongkan menjadi asam galat,  katekin,  dan  epikatekin.  Beberapa aktivitas  polifenol  bagi  kesehatan  tubuh manusia  adalah  antioksidan,  antimikroba, anti  hipertensi,  dan  efek  hipoglikemik. Polifenol digunakan dalam bidang farmakologi  dan  kosmetik  dikarenakan aktivitas  antioksidan  tinggi,  antibiotik, antidiabetik  dan  dapat  digunakan  sebagai pelindung radiasi (Holdt and Stefan, 2011).
Analisis  kadar  total  fenol  dilakukan dengan menggunakan metode folin- ciocalteau .  Pengukuran  dilakukan  dengan cara  melihat  kemampuan  reduksi  dari komponen  fenol  dengan  standar  yang digunakan  adalah  asam  galat.  Kerja  dari polifenol sebagai antidiabetes serupa dengan acarbose,  yaitu  memperpanjang  waktu perombakan  karbohidrat  dan  menghambat absorpsi  glukosa  (You  and Barnett,  2004). Polifenol  berperan  sebagai  antioksidan karena  senyawa  ini  mempunyai  sifat pereduksi  yakni  agen  pendonor  atau penyumbang  hydrogen, scavenger radikal, serta  pengkelat  logam  besi  dan  tembaga sehingga  dapat  menghambat  pembentukan
radikal  bebas  yang  dikatalisis  oleh  logam (Firdaus, 2011).
Berbagai  manfaat  yang  terdapat dalam  senyawa  polifenol,  maka  dilakukan penelitian  tentang  analisis  kandungan polifenol  yang  terdapat  dalam  alga  cokelat Sargassum  polycystum secara  kuantitatif melalui  kadar  total  fenol  maupun  kualitatif melalui  uji  Kromatografi  Lapis  Tipis  dan High  Performance  Liquid  Chromatography (HPLC).

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1.Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  alga  coklat S. polycystum yang  diperoleh  dari  pantai  Pok Tunggal  Gunungkidul  Yogyakarta,  ethanol 96%,  HCl  1  N,  asam  galat,  floroglusinol, fenol,  reagen  Follin  Ciocalteau,  natrium karbonat  (Na 2 CO 3 )  7,5%,  kloroform  (pro analis),  methanol  (pro  analis),  akuades  dan asam asetat (pro analis).
Alat  yang  digunakan  meliputi  plat silika  (TLC  Silica  Gel  60  F 254 E-Merck) untuk  KLT  (Kromatografi  Lapis  Tipis), HPLC Shimadzu, detector UV ( Ultra Violet Product 3  UV Lamp ), microplate  reader Japan, microplate  96-well  plate ,  baskom, blender,  timbangan  analitik  (Shimadzu  BX 6000 dan Shimadzu BX320D), saringan 40 mesh,  kertas  lakmus  pH,  pH  meter,  botol vial, white  tip , yellow  tip , blue  tip , mikropipet  Dragon  Lab  ukuran  0,5-10  µl dan  20-200  µl,  mikropipet  Socorex  ukuran 100-1000  µl,  hematokrit,  mortar,  hot  plate stirrer (Thermolyne Nouva  Stir  Plate) , magnet  stirrer,  pengaduk,  alumunium  foil, corong plastik, rotary evaporator (IKA RV 10 basic ),    dan freeze  dryer ( Virtis  SP Scientific ).

## 2.2.Koleksi dan Identifikasi Sampel
Sampel S. polycystum (No: BF/220/Ident/Det/V/2014)  dikoleksi  dari Pantai  Selatan,  Gunungkidul,  Yogyakarta kemudian  dicuci  dan  ditimbang  berat
basahnya. Sampel dikering anginkan dalam ruangan selama 4-5 hari. Sampel yang sudah kering selanjutnya dipotong kecil-kecil (0,5- 1  cm)  dan  diblender  atau  dihaluskan, sedangkan  sampel  segar  yang  masih  utuh digunakan untuk identifikasi di Laboratorium Taksonomi Tanaman, Fakultas  Biologi,  UGM.  Rendemen  serbuk alga kering dihitung sebagai berikut.
Rendemen(%) = Berat serbuk Berat rumput laut segar 𝑥 100%

## 2.3. Ekstraksi Alga
Ekstrak  etanolik  dengan  metode Kang et al. (2010) yang telah dimodifikasi, yaitu  masing-masing  sebanyak  200  gram bubuk  rumput  laut  diekstrak  menggunakan ethanol 96% (1.875 ml) pada pH 4 dan diatur dengan HCl 1 N pada suhu ruang dan diaduk selama  4  jam.  Selanjutnya  dilakukan pengendapan selama 2x24 jam dan disaring dengan kertas Whatmann. Selanjutnya filtrat diambil  dan  dilakukan  evaporasi  dengan Rotary  Evaporator 60 o C,  135-150  rpm. Setelah itu dikeringbekukan, ditimbang dan disimpan  pada  suhu  -20 o C.  Rendemen polifenol dihitung sebagai berikut.
Rendemen polifenol (%) = Berat polifenol Berat rumput laut kering 𝑥 100%

## 2.4. Analisis Kandungan Total Fenol
Kandungan  total  fenol  dilakukan dengan  modifikasi  metode  Kang et  al.
(2010). Larutan standar asam galat konsentrasi 1 mg/ml dibuat seri pengenceran sebanyak  6x,  yaitu  konsentrasi  200  µg/ml; 100 µg/ml; 50 µg/ml; 25 µg/ml; 12,5 µg/ml; dan 6,25 µg/ml. Ekstrak polifenol sebanyak 5  mg  dilarutkan  dalam  1  ml  akuades  dan dilakukan  seri  pengenceran  sebanyak  6x, yaitu  konsentrasi  1000  µg/ml,  500  µg/ml, 250  µg/ml,  125  µg/ml,  62,5  µg/ml,  dan 31,25  µg/ml.  Kemudian  diambil  sebanyak 10  µl  masing-masing  konsentrasi  larutan standar  dan  ekstrak  polifenol,  dimasukkan ke dalam microplate 96-well plate . Selanjutnya  ditambahkan  sebanyak  50  µl reagen Folin-Ciocalteu 2 N (Merck, Sigma- Aldrich)  ke  dalam microplate dan  inkubasi selama 5 menit. Setelah 5 menit, ditambahkan  40  µl  7,5%  Na 2 CO 3 dan diinkubasi  selama  2  jam  pada  ruang  gelap dengan  suhu  ruang  (25 o C).  Absorbansi supernatan dibaca pada panjang gelombang 750  nm.  Kurva  dibuat  dengan  cara memplotkan  konsentrasi  (µg/ml) versus absorbansi  (nm).  Persamaan  regresi  dari kurva  standar  y=ax+b,  R 2 =c,  dimana  x adalah konsentrasi dan y adalah absorbansi.
Total  fenol  akan  dinyatakan  dalam  gram GAE  ( Gallic  Acid  Equivalents )  per  100 gram ekstrak.
2.5. Analisis  Kandungan  Polifenol  S.
polycystum dengan KLT (Kromatografi Lapis Tipis)
Uji KLT dilakukan dengan menggunakan  fase  diam  berupa  plat  silika gel GF 254 dan fase gerak berupa kloroform : metanol  :  air  :  asam  asetat  (65:25:4:3) (Shibata et  al .,  2004).  Hasil  ekstraksi polifenol S. polycystum diambil menggunakan pipa kapiler dan ditotolkan di bagian  bawah  plat  silika  lalu  direndam dalam  chamber  berisi  campuran  larutan pengembang. Selanjutnya dilakukan penentuan nilai Rf. Nilai Rf merupakan jarak yang ditempuh oleh senyawa dibagi dengan jarak  yang  ditempuh  oleh  pelarut.  Nilai  Rf sampel  dibandingkan  dengan  nilai  Rf standar.  Standar  yang  digunakan  berupa floroglusinol dan asam galat.
2.6. Analisis  Kandungan  Polifenol  S.
polycystum  dengan  HPLC  (High Performance Liquid Chromatography)
Uji HPLC dilakukan dengan metode Shibata et  al. (2008).  Sampel diuji  lebih
lanjut  dengan  HPLC  menggunakan  kolom ODS-3.  Larutan  sampel  dan  standar  dibuat sebanyak  1%  dan  dimasukkan  ke  dalam kuvet.  Elusi  HPLC  dilakukan  dengan  fase gerak  berupa  air  :  methanol  :  asam  asetat glasial  (69:28:3)  kecepatan  aliran  1,0 ml/menit.  Detektor  UV  diset  pada  panjang gelombang 290 nm. Standar tetap digunakan adalah floroglusinol, asam  galat, dan fenol. Waktu retensi dicatat untuk masing-masing puncak yang terbaca.

## 2.7. Analisis Data
Desain  penelitian  yang  digunakan adalah  analisis  Deskriptif.  Data  yang diperoleh  diplotkan  dalam  grafik  sehingga diperoleh persamaan regresi linier. Berdasarkan  persamaan  regresi  tersebut akan diperoleh nilai kadar total fenol dalam satuan  ekivalen  asam  galat  ( Gallic  Acid Equivalent atau GAE).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1. Rendemen Ekstrak S. polycystum Alga basah, alga yang telah berbentuk  serbuk  dan  ekstrak  etanolik  alga kemudian dihitung rendemennya.
Rendemen  menyatakan  nilai  efisiensi  dari proses pengolahan sehingga dapat diketahui ekstrak  yang  dihasilkan  dari  bahan  dasar awalnya.  Rendemen  pengeringan  alga diperoleh sebesar 9% dengan berat awal alga segar  20  kg  dan  berat  serbuk  alga  1.800  g. Rendemen  ekstrak  etanolik  alga  sebesar 5,1% dengan berat ekstrak 91,72 gram.
Rendemen ekstrak etanol S. polycystum lebih  tinggi dibandingkan dengan  rendemen  ekstrak  etanol Padina pavonica pada penelitian Husni et al. (2014) sebesar  2,77%,  rendemen  ekstrak  metanol Kappaphycus  alvarezii s ebesar  0,034% (Lantah et  al. ,  2017)  dan  lebih  rendah dibandingkan  rendemen  ekstrak  metanol S. hystrix sebesar  15%  (Husni et  al .,  2018).
Banyak  sedikitnya  persentase  rendemen yang  didapatkan  dari  hasil  ekstraksi dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  antara lain: jenis pelarut, rasio berat bahan dengan
volume  pelarut,  suhu,  pengadukan,  waktu ekstraksi,  ukuran  padatan,  dan  lamanya perendaman  (Gazali et  al .,  2018).  Semakin rendah persentase rendemen alga menunjukkan  semakin  rendah  komponen bioaktif  yang  terkandung  di  dalamnya  dan berbanding lurus dengan aktivitas antioksidannya (Lantah et al ., 2017).

## 3.2. Analisis Kandungan Total Fenol
Kandungan  total  fenol  dilakukan dengan  metode  Folin-Ciocalteu.  Prinsip metode Folin-Ciocalteu adalah  reaksi oksidasi  dan  reduksi  kolorimetrik  untuk mengukur  semua  senyawa  fenolik  dalam sampel uji (oksidasi gugus fenolik hidroksil). Pereaksi ini mengoksidasi fenolat (garam  alkali),  mereduksi  asam  heteropoli menjadi  suatu  kompleks  molibdenum- tungsten  (Mo-W).  Selama  berlangsungnya reaksi,  gugus  fenolik-hidroksil  bereaksi dengan pereaksi Folin-Ciocalteu
membentuk kompleks fosfotungsat- fosfomolibdat berwarna biru dapat dideteksi dengan  spektrofotometer  atau  microplate reader (Khadijah et al ., 2017).
Penetapan  kurva  standar  asam  galat dibuat  dengan  cara  memplotkan  hasil absorbansi asam galat pada berbagai variasi konsentrasi  yang  telah  dikurangi  dengan absorbansi larutan blanko (akuades). Persamaan  garis  kurva  regresi  linier  asam galat,  yaitu  y=  0,0014x  +  0,0045  dengan nilai  R 2 =  0,9956.  Nilai  R 2 yang  diperoleh mendekati 1, sehingga telah terjadi hubungan  linier  sempurna  antara  kenaikan konsentrasi  asam  galat  dengan  kenaikan nilai  Absorbansi  (A)  berupa  garis  lurus. Hasil  pengukuran  absorbansi  asam  galat sebagai  standar  dapat  dilihat  pada  kurva standar  asam  galat  yang  tertera  dalam Gambar 1.
Ekstrak polifenol Sargassum polycystum sebanyak  5  mg/ml  dibuat  seri pengenceran  sebanyak  6x  dengan  variasi konsentrasi  31,25  µg/ml;  62,5  µg/ml;  125 µg/ml;  250  µg/ml;  500  µg/ml;  dan  1000 µg/ml  lalu  diukur  absorbansinya  pada
panjang gelombang 750 nm. Nilai absorbansi polifenol Sargassum polycystum pada berbagai konsentrasi dibuat menjadi 3x ulangan,  selanjutnya  diplotkan  pada  kurva regresi linier sebagai nilai y dan dimasukkan ke  dalam  persamaan  garis  kurva  standar asam  galat  y=  0,0014x  +  0,0045.    Nilai  x diperoleh  sebagai  kandungan  total  fenol sampel  yang  dinyatakan  dalam  satuan ekivalen asam galat. Hasil pengukuran kadar total  fenol  ekstrak Sargassum  polycystum dalam ekivalen asam galat dapat dilihat pada Gambar 2.
Kandungan  total  fenol  ekstrak S. polycystum terjadi  kenaikan  nilai  pada konsentrasi sampel yang semakin meningkat. Nilai kandungan total fenol pada konsentrasi  1000  ppm  (1000  µg/ml  atau  1 mg/ml)  sebesar  59,30±0,58  g  GAE/100  g ekstrak. Hasil ini tergolong lebih tinggi jika dibandingkan dengan kandungan total fenol
pada S.  horneri yaitu  sebesar  12,2  g GAE/100  g  ekstrak  (Luo et  al. 2010); S. binderi sebesar  0,03  g  GAE/100  g  ekstrak (Boonchum et  al. ,  2011); S.  kjelmanianum sebesar  16,3  g  GAE/100  g  ekstrak  (Luo et al .,  2010); S.  thunbergii sebesar  11,5  g GAE/100 g ekstrak (Heo et al. , 2005); dan S. vulgare sebesar  7,09  g  GAE/100  g  ekstrak (Plaza et  al. ,  2010).  Kandungan  total  fenol ekstrak S. polycystum lebih rendah dibandingkan  kandungan  total  fenol  pada Sargassum  muticum sebesar  230,8  ±  17,1 mg/100 g berat kering (Farvin and Jacobsen, 2013).  Tinggi  rendahnya  kandungan  total fenol  dipengaruhi  oleh  faktor  intrinsik (spesies  sampel  dan  jenis  sampel,  umur sampel, tempat pengambilan sampel) maupun  faktor  ekstrinsik  (iklim,  suhu, salinitas,  kedalaman,  zona  tidal,  dan  siklus tidal) (Lann et al. , 2012).
Gambar 1. Kurva hubungan absorbansi dengan konsentrasi asam galat
Gambar 2. Kurva kandungan total fenol ekstrak Sargassum polycystum y = 0,0014x + 0,0045 R² = 0,9956 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0 25 50 75 100 125 150 175 200 225 Ab so rb an si ( λ =750 n m ) Konsentrasi Asam Galat (µg/ml) y = 0,5647x + 31,216 R² = 0,9816 0 100 200 300 400 500 600 700 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 To ta l Fe n o l (m g G AE /g eks trak ) Konsentrasi (ppm)
3.3. Uji  KLT  (Kromatografi  Lapis
Tipis)
Uji KLT dilakukan terhadap senyawa  polifenol  ekstrak S.  polycystum menggunakan  senyawa  standar  asam  galat dan  floroglusinol.  Uji  ini  dilakukan  untuk mengetahui  apakah  waktu  retensi  (Rf) senyawa  ekstrak  sama  dengan  Rf  senyawa standar  dan  mengetahui  standar  yang  lebih sesuai  dalam  menduga  adanya  senyawa polifenol  pada  ekstrak S.  polycystum .  Fase gerak  berupa  kloroform:metanol:air:asam asetat  dengan  perbandingan  65:25:4:3 (Shibata et al. , 2004), sedangkan fase diam digunakan plat silika gel GF 254 .
Hasil  KLT  ekstrak  sebelum  dan setelah  penyemprotan  FeCl 3 1%  dapat dilihat  pada  Gambar  3.  Ekstrak  etanolik S. polycystum diduga  mengandung  polifenol ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna kehitaman  pada  noda  setelah  disemprot dengan pereaksi
FeCl 3 1%. Jika dibandingkan dengan standar phloroglucinol, nilai Rf ekstrak S. polycystum agak  berbeda  yang  ditunjukkan dengan nilai Rf phloroglucinol sebesar 0,63 sedangkan  nilai  Rf  ekstrak S.  polycystum sebesar 0,77. Hal ini disebabkan phloroglucinol  merupakan  salah  satu  jenis florotannin  yang  merupakan  sebagian  kecil dari polifenol, sehingga dimungkinkan jenis senyawanya  tidak  begitu  sama  dengan polifenol yang masih mengandung berbagai senyawa lain selain florotannin. Akan tetapi, jika  dibandingkan  dengan  standar  asam galat,  nilai  Rf  ekstrak S.  polycystum tidak begitu  berbeda  yang  ditunjukkan  dengan nilai  Rf asam  galat sebesar 0,60 sedangkan nilai Rf ekstrak S. polycystum sebesar 0,67. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak S. polycystum diduga  mengandung  senyawa polifenol  yang  menyerupai  standar  asam galat.

## A B
Gambar 3 . Hasil KLT ekstrak sebelum (A) dan sesudah (B) disemprot larutan FeCl 3 1% dari kiri  ke  kanan:  Po  (Polifenol  ekstrak S.  polycystum ),  AG  (Asam  Galat),  dan  Phl (floroglusinol)
3.4. Uji  HPLC  (High  Performance
Liquid Chromatography) Prinsip kerja HPLC adalah pemisahan analit-analit berdasarkan kepolarannya.  Analit  merupakan  senyawa
kimia  hasil  dari  pemisahan  sampel  yang diinjeksikan  ke  dalam  kolom.  Pemisahan analit  sesuai  dengan  perbedaan  afinitasnya (Sorban et  al .,  2013).  Pengujian  HPLC dilakukan  pada  senyawa  sampel  (ekstrak
Po Po Phl AG Po Phl Po AG
etanolik S.  polycystum ),  senyawa  standar (asam  galat,  floroglusinol  dan  fenol),  dan senyawa  sampel  yang  ditambah  dengan senyawa  standar  (asam  galat,  floroglusinol dan  fenol).  Hasil  HPLC  senyawa  standar floroglusinol dapat dilihat pada Gambar 4.
Senyawa standar floroglusinol mempunyai  tingkat  kemurnian  yang  cukup tinggi,  meskipun  masih  terdapat  1  puncak
lainnya  yang  diduga  sebagai  senyawa pengotor. Puncak analit dominan mempunyai  luas  area  sebesar  94,587% dengan  waktu  retensi  3.123.  Hasil  HPLC ekstrak S.  polycystum dapat  dilihat  pada Gambar  5  (A)  dan  hasil  HPLC  ekstrak S. polycystum yang  ditambah  floroglusinol dapat dilihat pada Gambar 5 (B).
Gambar 4. Hasil HPLC senyawa standar floroglusinol
A B
Gambar 5. (A) Hasil HPLC ekstrak S. polycystum (a), (B) Hasil HPLC ekstrak S. polycystum (a) di-spiking dengan floroglusinol
Hasil  HPLC  ekstrak S.  polycystum yang  telah  dicampur  dengan  floroglusinol, terdapat  1  puncak  dengan  waktu  retensi sebesar 3.190 yang mendekati waktu retensi senyawa  standar  floroglusinol  (3.123) (Gambar  5B).  Akan  tetapi  puncak  yang terbentuk menjadi 3 macam. Selain itu, luas area  yang  terbentuk  pada  puncak  dengan waktu  retensi  3.190  sebesar  39.0607% menunjukkan terjadinya penurunan luas area
jika dibandingkan dengan luas area ekstrak S.  polycystum sebelum  dilakukan spiking pada  waktu  retensi  2.913  yakni  46.4827%. Dengan  demikian,  sampel  ekstrak S. polycystum tidak  mengandung  senyawa floroglusinol (salah satu monomer florotannin)  yang  merupakan  bagian  dari senyawa polifenol.
Hasil  HPLC  senyawa  standar  asam galat  dapat  dilihat  pada  Gambar  6  (A),
sedangkan  senyawa  standar  fenol  dapat dilihat  pada  Gambar  6  (B).  Puncak  analit senyawa standar asam galat mempunyai luas area sebesar 100% dan waktu retensi 3.113, sedangkan  puncak  analit  senyawa  standar fenol  mempunyai  luas  area  sebesar  100% dengan  waktu  retensi  3.383.  Hasil  HPLC ekstrak S.  polycystum dapat  dilihat  pada Gambar  7.  Ekstrak S.  polycystum memiliki dua puncak analit pada waktu retensi 3.153 dengan  luas  area  69,1846%  dan  waktu retensi  3.693  dengan  luas  area  30.8154%. Terdapat  1  puncak  dengan  waktu  retensi yang  mendekati  waktu  retensi  senyawa standar  asam  galat  dan  fenol,  yakni  pada puncak analit dengan waktu retensi 3.153.
Hasil  HPLC  ekstrak S.  polycystum yang ditambah asam galat dapat dilihat pada Gambar  8  (A)  dan  hasil  HPLC  ekstrak S. polycystum yang  ditambah  fenol  dapat dilihat  pada  Gambar  8  (B).  Puncak  analit ekstrak S.  polycystum sebelum  di- spiking dengan waktu retensi 3.153 mempunyai luas area  sebesar  69,1846%.  Setelah  dilakukan spiking ,  hanya  terbentuk  1  puncak  analit
dengan  peningkatan  luas  area  menjadi 100%.  Hal  ini  menunjukkan  ekstrak S. polycystum mengandung  senyawa  asam galat yang merupakan salah satu jenis tannin (salah satu jenis polifenol).
Puncak  analit  ekstrak S.  polycystum sebelum di- spiking terdapat 2 puncak analit, yakni  puncak  analit  dengan  waktu  retensi 3.153  mempunyai  luas  area  sebesar 69,1846%  dan  puncak  analit  dengan  waktu retensi  3.693  mempunyai  luas  area  sebesar 30,8154%.  Puncak  analit  sampel  yang mendekati  puncak  analit  standar  adalah puncak  analit  dengan  waktu  retensi  3.153 yang mempunyai luas area sebesar 69,1846%.  Puncak  analit  setelah  dilakukan spiking pada waktu retensi 3.366 mempunyai  luas  area  sebesar  98,8246%. Luas area sampel setelah dilakukan spiking meningkat  jika  dibandingkan  luas  area sampel  sebelum  dilakukan spiking .  Hal  ini menunjukkan ekstrak S. polycystum mengandung  senyawa  fenol  murni  yang merupakan monomer dari polifenol.
Gambar 6. (A) Hasil HPLC senyawa standar asam galat, (B) Hasil HPLC senyawa standar fenol
Gambar 7. Hasil HPLC Ekstrak S. polycystum (b)
Gambar 8. (A) Hasil HPLC ekstrak S. polycystum (b) yang di-spiking asam galat, (B) HPLC ekstrak S. polycystum yang di-spiking fenol

## IV. KESIMPULAN
1. Kandungan total fenol ekstrak etanolik S. polycystum pada  konsentrasi  1000  ppm sebesar 59,30±0,58 g GAE/100 g ekstrak.
2. Ekstrak etanolik S. polycystum mengandung  senyawa  polifenol  yang menyerupai standar asam galat berdasarkan uji KLT.
3. Ekstrak etanolik S. polycystum mengandung  senyawa  polifenol  dalam bentuk asam galat dan fenol berdasarkan uji HPLC.

## DAFTAR PUSTAKA
Boonchum,  W.,  Y.  Peerapornpisal,  D. Kanjanapothi,  J.  Pekkoh,  C.  Pumas,
U. Jamjai. 2011. Antioxidant
Activity of Some Seaweed from the Gulf of Thailand. Int. J. Agric. Biol.,
13: 95-99.
Farvin,  K.  H.  S.,  &  Charlotte  Jacobsen.
2013.  Phenolic  Compounds  and Antioxidant  Activities  of  Selected Species  of  Seaweeds  from  Danish Coast. Food Chem ., 138: 1670-1681. Firdaus,  M.  2011.  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Rumput Laut Coklat ( Sargassum  echinocarpum )  sebagai Pencegah Disfungsi Sel Endothelium  Aorta  Tikus  Diabetes Mellitus. Disertasi Institut Pertanian
Bogor. Bogor.
Gazali,  M.,  Nurjanah,  N.P.  Zamani.  2018.
The exploration of bioactive
compound to brown algae Sargassum sp. Agardh as antioxidant from west of Aceh Coastal. JPHPI , 21(1): 167- 178.
Heo, S. J., E.J. Park, K.W. Lee, Y. J. Jeon.
2005.  Antioxidant  Activities  of Enzymatic  Extracts  from  Brown Seaweed. Bioresour. Technol. , 96(14): 1613–1623.
Holdt, S. L. and K. Stefan. 2011. Bioactive
Compounds  in  Seaweed  :  Fuctional Food  Applications  and  Legislation. J. Appl. Phycol ., 23 : 543-597.
Husni,  A.,  R.  Wijayanti,  Ustadi.  2014.
Inhibitory  activity  of  α-amilase  and α-glucosidase  by  Padina  pavonica extracts. J. Biol. Sci. , 14(8): 515. Husni, A., T. Pratiwi, Ustadi, A.G. Samudra, A.E.  Nugroho.  2018.  In  vitro antidiabetic  activity  of Sargassum hystrix and Eucheuma  denticulatum
from Yogyakarta Beach of
Indonesia. Proc. of the PAS: B. Life and  Environmental  Sciences, 55(3): 1-8.
Kang, C., Y.B. Jin, H. Lee, M.Cha, E. Sohn, J. Moon, C. Park, S. Chun, E. Jung, J. Hong, S.B. Kim, J. Kim, E. Kim. 2010.  Brown  Alga Ecklonia  cava
Attenuates  Type  1  Diabetes  by Activating AMPK and Akt Signaling Pathways. Food Chem. Technol. , 48: 509-516.
Khadijah, A.M. Jayali, S. Umar, I. Sasmita. 2017.  Penentuan  total  fenolik  dan aktivitas antioksidan ekstrak etanolik daun samama ( Anthocephalus macrophylus ) Asal  Ternate, Maluku
Utara. JKM , 15(1): 11-18.
Kuda,  T.,  Tsunekawa,  M.  Goto,  H.  Araki. 2005. Antioxidant properties of four edible  algae  harvested  in  the  Noto Peninsula,  Japan. JFCA ,  18:  625– 633.
Lann,  K.  L.,  C.  Ferret,  E.  VanMee,  C. Spagnol,  M.  Lhuillery,  C.  Payri,  V. Stiger-Pouvreau.
2012. Total
Phenolic,  Size-Fractioned  Phenolics
and Fucoxanthin Content of Tropical
Sargassaceae (Fucales,
Phaeophyceae)  from  the  South Pacific  Ocean:  Spatial  and  Specific
Variability. J.  Phycol.  Res., 60:  37- 50.
Lantah,  P.L.,  L.A.D.Y.  Montolalu,  A.R.
Reo. 2017. Kandungan fitokimia dan aktivitas antioksidan ekstrak methanol  rumput  laut Kappaphycus alvarezii . JMTHP , 5(3): 73-79.
Lordan,  S.,  R.P.  Ross,  C.  Stanton.  2011. Marine  Bioactives  as  Functional Food Ingredients: Potential to Reduce  the  Incidence  of  Chronic Diseases. Mar. Drug, 9: 1056–1100. Luo, H. Y., B. Wang, C.G. Yu, Y.I. Qu, G.I. Su. 2010. Evaluation of Antioxidant Activities  of  Five  Selected  Brown Seaweeds from China. J. Med. Plant Res., 4: 2557-2565.
Nagai,  T.  and  T.  Yukimoto.  2003.
Preparation and functional
Properties  of  Beverages  Made  from Sea  Algae. Food  Chem., 81:  327- 332.
Plaza,  M.,  M.  Amigo-Benavent,  M.D.  del Castilo, E. Ibanez, M. Herrero. 2010. Facts  about  the  Formation  of  New Antioxidants  in  Natural  Samples after Subcritial Water Extraction. Int. Food Res. J. , 43: 2341-2348. Shibata,  T.,  S.  Kawaguchi,  Y.  Hama,  M. Inagaki,  K.  Yamaguchi,  and  T. Nakamura. 2004. Local and Chemical Distribution of
Phlorotannins  in  Brown  Algae. J.
Appl. Phycol., 16: 291-296.
Sorban,  C.,  Moldoveanu,  Victor  David. 2013.  Chapter  9-  HPLC  Analysis.
Essentials in Modern HPLC Separations. p. 465-519.
You, T., and S. M. Barnett. 2004. Effect of Light  Quality  on  Production  of Extracellular  Polysaccharides  and Growth  Rate  of Porphyridium cruentum . Biochem.  Eng.  J. ,  19  :
251–258.
http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/chanos2
Zubia,  M.,  D.  Robledo,  Y.  Freile-Pelegrin.
2007.  Antioxidant  Activities  in
Tropical  Marine  Macroalgae  from
Yucatan  Penisula,  Mexico. J.  Appl.
Phycol., 19: 449-458.
Received: 2021-11-05
Reviewed :2022-01-03 Accepted : 2022-04-24