## UJI EFEK ANTIBAKTERI JAMUR ENDOFIT PADA TUMBUHAN
SEREH ( Cymbopogon citratus) PADA BAKTERI UJI
Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Fathia Falugah 1) , Jimmy Posangi 1) , Paulina Yamlean 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Endophytic  fungi  are  fungi  that  live  in  plant  tissues  and  do  not  harm  these  plants.  Endophytic  fungi  can produce  compounds  that  have  the  potential  as  antibacterial.  This  study  aimed  to  examine  the  antibacterial effects of endophytic fungi isolated from the lemongrass (Cymbopogon citratus) against Staphylococcus aureus and  Escherichia  coli  bacteria.  Lemongrass  is  used  to  inhibit  or  kill  pathogenic  bacteria  because  it  contains essential  oils  that  function  as  an  antifungal  and  antibacterial  against  several  pathogenic  bacteria  such  as Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli.  The  laboratory  experiment  method  tested  the  antibacterial activity of endophytic fungi isolates obtained from lemongrass (Cymbopogon citratus) against Staphylococcus aureus and Escherichia coli using hole / well method. From the results of the study, four endophytic fungi were isolated  from  the  roots  and  leaves  of  lemongrass  (Cymbopogon  citratus).  Antibacterial  results  showed  that endophytic  fungi  extract  isolated  from  lemongrass  plants  was  more  effective  in  inhibiting  Staphylococcus aureus compared to Escherichia coli bacteria. In Staphylococcus aureus bacteria the average inhibitory value is 5-9 mm while in Escherichia coli bacteria the average inhibitory value is only 3 mm. Endophytic fungi from lemongrass  roots  have  a  better  antibacterial  effect  compared  to  endophytic  fungi  from  lemongrass  leaves. Conclusion, endophytic fungi isolated from the roots and leaves of lemongrass (Cymbopogon citratus) have an antibacterial  effect  on  the  growth  of  S.  aureus  bacteria  and  are  not  effective  against  E.  coli  bacteria.  This endophytic  fungus  isolate  is  more  active  against  Gram  positive  (+)  bacteria  and  less  active  against  Gram negative (-) bacteria.
Keywords : Lemongrass plants, Endophytic Fungi, Antibacterial Activity, Staphylococcus aureus, Escherichia coli .

## ABSTRAK
Jamur endofit ialah jamur yang hidup di dalam jaringan tumbuhan dan tidak membahayakan tumbuhan tersebut. Jamur endofit dapat menghasilkan senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk menguji efek antibakteri jamur endofit yang diisolasi dari akar,batang dan daun tumbuhan sereh (Cymbopogon citratus) terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Sereh  digunakan  untuk  menghambat atau  membunuh  bakteri  patogen  karena  mengandung  minyak  atsiri  yang  berfungsi  sebagai  antijamur  dan antibakteri  terhadap  beberapa  bakteri  patogen  seperti Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .    Metode penelitian secara eksperimen laboratorium menguji aktivitas antibakteri dari isolat jamur endofit  yang diperoleh dari  tumbuhan  sereh  ( Cymbopogon  citratus) pada  bakteri Staphylococcus  Aureus dan Escherichia  Coli menggunakan  metode  lubang/sumuran.  Dari  hasil  penelitan  diperoleh  empat jenis jamur  endofit  yang  diisolasi dari  akar  dan  daun   tumbuhan  sereh (Cymbopogon citratus) .   Hasil  penelitian  antibakteri  menunjukkan  bahwa ekstrak  jamur  endofit  yang  diisolasi  dari  tumbuhan  sereh  lebih  efektif  menghambat    bakteri Staphylococcus aureus dibandingkan dengan bakteri Escherichia coli. Pada bakteri Staphylococcus aureus nilai rata-rata daya hambat  yaitu  5-9  mm  sedangkan  pada  bakteri Escherichia  coli nilai  rata-rata  daya  hambat  yaitu  hanya  3  mm. Jamur endofit dari akar sereh memiliki efek antibakteri yang lebih baik dibandingkan dengan jamur endofit dari daun sereh. Kesimpulan, Jamur endofit yang diisolasi dari akar  dan daun sereh (Cymbopogon citratus) memiliki efek antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri S. aureus dan tidak efektiv terhadap bakteri E. coli . Isolat jamur endofit ini lebih aktif pada bakteri Gram positif (+) dan kurang  aktif pada bakteri negatif (-).
Kata Kunci : Tumbuhan Sereh, Jamur Endofit, Aktivitas Antibakteri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli.

## PENDAHULUAN
Kontaminasi  mikroba  pada  saat  ini adalah  salah  satu  masalah  yang  dihadapi dalam  kehidupan  manusia  yang  berkaitan dengan penyebab penyakit infeksi. Beberapa jenis  mikroba  kontaminan,  diketahui  bahwa bakteri  merupakan  salah  satu  jenis  mikroba yang tidak kalah penting dalam menyebabkan penyakit infeksi bagi manusia dalam  kondisi  tertentu.  Karena  salah  satu sifatnya  sebagai  penyebab  penyakit  infeksi, maka  beberapa  jenis  bakteri  digolongkan dalam  jenis  bakteri  patogen.  Misalnya bakteri Escherichia  coli , Staphylococcus aureus, dan  bakteri  penyebab  infeksi penyakit  lainnya.  Jenis  penyakit  yang disebabkan  oleh  bakteri-bakteri  patogen tersebut  sangat  beragam,  sesuai  dengan organ  yang  diserang  atau  diinfeksi  (Brooks et all . 2001).
Penggunaan  antibiotika  merupakan salah satu cara yang dilakukan oleh manusia untuk  mengobati  penyakit  akibat  infeksi bakteri.  Akan  tetapi  perlu  diketahui  bahwa penggunaan antibiotika yang berlebihan dan pemberian  antibiotika  dalam  jangka  waktu yang  lama  dapat  menyebabkan  terjadinya resistensi pada bakteri (Maryuni, 2008). Hal tersebut dapat menyebabkan bahan antibiotika sintesis menjadi tidak efektif lagi dan  bahkan  terkadang  memberikan  efek samping dalam penggunaanya (Nwinyi et al. 2009). Sebagai contoh bakteri S. epidermidis umumnya  telah  resisten  terhadap  antibiotik penisilin dan metisilin (Brook et all . 2001).
Salah satu pilihan alternatif pengganti  antibiotika  dengan  menggunakan obat  tradisional  yang  berasal  dari  tanaman sebagai  obat  alternatif  terhadap  infeksi
bakteri.  Penggunaan  tanaman  dalam  terapi berbagai penyakit memiliki berbagai keuntungan diantaranya mengenai keamanan dan keefektifannya (Heyne,1987). Efek samping dari  penggunaan  obat  herbal  yang  relatif lebih  kecil  dibanding  penggunaan  obat-obat kimia.    Berbagai  hasil  penelitian  yang mengkaji  tentang  penggunaan  tanaman sebagai  bahan  obat  telah  banyak  dilaporkan termasuk  diantaranya  sebagai  antibakteri (Sudewo,2005).
Sereh  digunakan  untuk  menghambat atau  membunuh  bakteri  patogen  karena mengandung  minyak  atsiri  yang  berfungsi sebagai  antijamur  dan  antibakteri  terhadap beberapa bakteri patogen, seperti Staphylococcus  aureus , Bacillus  cereus , Bacillus  subtilis , Klebsiella  pneumonia , Pseudomonas  aeruginosa dan Escherichia coli yang  telah  diuji  pada  penelitian sebelumnya ( Heyne,1987).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan April    sampai  Juni  2019  di  Laboratorium Biologi  Molekukuler  dan  Farmasetika  Laut Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  dan Laboratorium  Farmasi  Lanjutan  Devisi Mikrobiologi Farmasi Program Studi Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam    Universitas  Sam Ratulangi Manado. Bentuk Penelitian
Bentuk penelitian ini ialah eksperimental  laboratorium  yang  akan menguji  aktivitas  antibakteri  dari  isolat jamur endofit  yang diperoleh dari tumbuhan
Sereh  ( Cymbopogon  citratus) pada  bakteri Staphylococcus Aureus dan Escherichia Coli menggunakan metode lubang/sumuran. Pengambilan sampel tumbuhan Sereh dilakukan diperkebunan pribadi di kelurahanan Maasing Kecamatan Tuminting Kota Manado Sulawesi Utara dengan ukuran 300 m².
Alat dan Bahan a. Alat
Alat-alat  yang  digunakan  yaitu cawan petri,Erlenmeyer,  autoklaf,  gunting,  pinset, kertas  label,  pemanas  (kompor),  oven, lampu spritus, kawat ose,timbangan analitik,gelas  ukur, Laminar  air  flow, pecandang baja. batang  pengaduk , rak  tabung  reaksi,  tabung reaksi, lemari pendingin, inkubator, mikropipet, digital  caliper ,  kertas  label, spidol permanen.
b. Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu, tumbuhan sereh,mikroba uji Staphylococcus aureus , Escherichia  coli ,  PDA  ,  Nutrient Agar (NA), alkohol 95%, aquades, kloramfenikol  kapsul  250  mg,  beras,  etil asetat,  ekstrak  jamur  endofit  dari  tumbuhan Sereh, alumunium  foil, kertas  saring,  kapas, NaCl.

## Prosedur Penelitian Preparasi Sampel
Tanaman  Sereh  yg  sudah  diambil kemudian dibersihkan terlebih dahulu dilakukan proses sterilisasi permukaan  yang diawali  dengan  pencucian  sampel  dibawah air  mengalir  kemudian  perendaman  dalam alkohol. Tujuan proses ini untuk menghilangkan mikroorganisme yang
berada  pada  permukaan  tumbuhan  sehingga jamur  yang  tumbuh  pada  media  isolasi merupakan  jamur  endofit  (Resmi,  2011). Daun,batang  dan  akar  Sereh  yang  diambil kemudian  dipotong-potong  dengan  ukuran sekitar  1  cm  menggunakan  gunting  steril (Michelle S, et al .2014).

## Sterilisasi Alat yang Digunakan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  uji  daya  hambat  ini  disterilkan terlebih  dahulu.    Alat  yang  digunakan  pada proses sterilisasi adalah oven dan autoclave. Oven  digunakan  untuk  mensterilisasi  alat- alat  untuk  pembuatan  media  (cawan  petri, ose,  dan  pinset).  Autoklaf  digunakan  untuk mensterilisasi bahan-bahan pembuatan media  dan  alat  gelas  (Erlenmeyer,  tabung reaksi, dan media).

## Pembuatan Media PDA dan PDA+AB
Media PDA  yang akan  dibuat sesuai dengan kebutuhan nanti pada saat penelitian. Pada saat akan membuat media sebanyak 15 media PDA ditimbang sebanyak 11,7 gr dan ditambahkan  NA  sebanyak  3,6  gr  dan dilarutkan kedalam 300 ml aquades, 1 media diperlukan  setidaknya  20  ml.  PDA  tadi dimasukan kedalam autoklaf untuk disterilisas  dengan  suhu  120ºc  selama  15 menit.  Selanjutnya  PDA  tersebut  kemudian dituangkan kedalam cawan petri yang sudah disterilisasi terlebih dahulu. Proses penuangan  PDA  dilakukan  didalam  alat luminar  airflow agar  tetap  steril.  Selama proses penuangan PDA, tangan harus  dalam keadaan bersih. Setelah dituang, cawan petri harus  langsung  ditutup  cawan  petri  agar tidak  terkontaminasi  oleh  organisme  dari luar. Proses pembuatan media PDA ini yaitu
untuk  digunakan  pada  saat  isolasi  jamur (miselia jamur) (Michelle et al .2014). Proses pembuatan  media  PDA+AB  juga  sama seperti pembuatan media sebelumnya hanya saja  disini  PDA  ditambahkan  dengan antibiotik  kloramfenikol  sebanyak  150  ml. Tujuan  penambahan  antibiotik  pada  media PDA  yaitu  agar  mencegah  terjadinya pertumbuhan bakteri endofit pada media.

## Penanaman Sampel
Sebelum ditanamkan kedalam media PDA+AB, direndam terlebih dahulu alat-alat dan  sampel  yang  akan  digunakan  dalam larutan  alkohol  95%  selama  30  detik  untuk menghindari  kontaminasi  silang  mikroba. Potongan sampel tersebut kemudian
diangkat  menggunakan  pingset  yg  sudah direndam didalam larutan alkohol dan sudah
dibakar selama 30 detik dengan
menggunakan  lampu  spritus.  Potongan  ini selanjutnya  ditanam  pada  media Potato Dextrose  Agar (PDA)+AB  di  dalam  cawan petri.  Tiap  cawan  berisi  empat  potongan sampel.  Cawan  petri  yang    berisi  sampel serai  tersebut  ditutup  agar  tidak  terjadi kontaminasi  oraganisme  lain  dari  luar, kemudian  disimpan  pada  suhu  kamar  25ºC selama 3 hari (Michelle et al .2014).

## Pemurnian Jamur Endofit
Pada  hari  ketiga  setelah  penanaman sampel  akan  diamati  jika  sudah  terlihat adanya  miselia  yang  tumbuh  dipermukaan media  PDA+AB.  Miselia  yang  sudah tumbuh  diambil  koloni  yang  terdapat  pada permukaan  media  dengan  kawat  ose  dan dipindahkan ke media PDA yang lain untuk ditumbuhkan kembali. Pemurnian ini bertujuan  untuk  mendapatkan  1  jenis  jamur
endofit  yang  murni.  Simpan  pada  suhu ruangan  selama  2  X  24  jam  (Michelle et al .2014).

## Pembuatan Media Kulturnasi
Pembuatan  media  ini  menggunakan beras  yang  ditimbang  sebanyak  40  gr  dan aquades  sebanyak  50  ml.  Di  masukkan kedalam Erlenmeyer untuk kemudian disterilisasikan  kedalam autoklaf. Proses ini bertujuan  juga  agar  beras  tersebut  bisa masak  seperti  memasak  nasi.  Autoklaf dilakukan selama 10-15 menit(hingga berasnya  menjadi  nasi)  pada  suhu  120ºc. Setelah  itu  didinginkan  untuk  dilakukan penanaman  miselia  pada  media    nasi (Yohanes et al. 2017).
Pemindahan miselia pada media kulturnasi
Diambil  miselia  yang  sudah  tumbuh sebagian  dari  permukaan  agar  dengan  cara dipotong  memanjang  dan  dipotong  lagi menjadi  bagian-bagian  kecil  berbentuk  segi empat.  Kemudian  dipindahkan  ke  media nasi.  Sebelumnya  alat  yang  akan  digunakan untuk  memotong  harus  disterilisasikan terlebih  dahulu  dengan  di  rendam    didalam alkohol,ini bertujuan untuk mencegah terjadinya  kontaminasi.  Miselia    didiamkan selama 7-14 hari untuk dilihat pertumbuhannnya (Yohanes et al. 2017).

## Kultivasi dan Ekstraksi Jamur pada Media Nasi
Kultur jamur pada media nasi secara statik  selama  10  hari  pada  suhu  ruang. Setelah  pertumbuhan  miselia  jamur  endofit mencapai bagian dasar dari labu erlenmeyer dilakukan ekstraksi. Proses ekstraksi
dilakukan  dengan  cara  maserasi  dengan menambahkan  larutan  etil  asetat  sebanyak 200  ml  sampai  semua  nasi  terendam  lalu diaduk  dengan  shaker  selama  24  jam. Setelah direndam dengan etil asetat selanjutnya  disaring  kemudian  di  evaporasi menggunakan Rotary  vacuum  evaporator pada suhu 40° C (Yohanes et al. 2017).

## Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukakan  dengan  cara maserasi yaitu jamur yang telah dikulturnasi direndam  dengan  cairan  etil  dan  diaduk diatas  alat  shaker  selama  24  jam.  Sampel yang  sudah  direndam  kemudian  disaring menggunakan  corong  dan  kertas  saring  dan menghasilkan  filtrat  1.  Filtrate  kemudian dimasukkan kedalam labu evaporator. Setelah  evaporator  dinyalakan  dan  semua alat terpasang atur suhu selama 40ºc, proses evaporasi kemudian dimulai. Setelah dilakukan evaporasi selama kurang lebih 20 menit  dan  didapatkannya  ekstrak  kemudian ditambahkan  kembali  dengan  sedikit  cairan alkohol  95%  untuk  pengenceran  ekstrak yang masih tersisa dan kemudian dievaporasi  kembali  agar  diperoleh  ekstrak kental.  Ekstrak  jamur  yang  didapatkan tersebut  digunakan  dalam  pengujian  daya hambat antibakteri (Michelle et al .2014).

## Pembuatan Larutan Suspensi Bakteri
Bakteri yang telah dikultur pada agar miring  diambil  koloni  dengan  kawat  ose steril  dan  dimasukkan  ke  dalam  larutan NaCl  5  ml.  Suspense  bakteri  dibuat  dua,
yang pertama Suspensi
bakteri Staphylococcus  Aureus dan  kedua  suspensi bakteri Escherechia  Coli. Kedua  suspense tersebut kemudian dituang kedalam masing-
masing  erlenmeyer  yang  telah  terdapat  NA yang sudah di autoklaf.

## Pembuatan Kontrol (Positif dan Negatif)
Kontrol positif yang digunakan disini adalah  kloramfenikol  dan    kontrol  negative yaitu  aquades.  Kloramfenikol  sebanyak  50 mg  dilarutkan  dalam  50  ml  aquades kemudian diencerkan hingga 10 ml.

## Pengujian aktivitas antibakteri
Penanaman      dilakukan  masing- masing 4 ekstrak sampel di 4 tempat pada 1 cawan  petri  dengan  jarak  yang  sama kemudian  ditambahkan  juga  dengan  kontorl positif  dan  kontrol  negative,  jadi  jumlah sampel yang ada dalam 1 cawan petri yaitu 6 dimana 4 sampel adalah ekstrak jamur dan 2 sampel  yaitu  control  postif  dan  kontrol negatif.
Kontrol positif yang digunakan disini adalah  koramfenikol  dan  kontrol  negatif yaitu aquades. Metode yang digunakan yaitu metode  lubang/sumuran  yaitu  membuat lubang  pada  agar  padat  yang  telah diinokulasi  dengan  bakteri.  Pada  lempeng agar  yang  telah  diinokulasikan  dengan bakteri  uji  dibuat  suatu  lubang  yang selanjutnya diisi dengan zat antimikroba uji. Kemudian setiap lubang itu diisi dengan zat uji. Setelah diinkubasi pada suhu dan waktu yang  sesuai  dengan  mikroba  uji,  dilakukan pengamatan  dengan  melihat  ada  atau tidaknya zona hambatan di sekeliling lubang (Prayoga, 2013).
Pengamatan Pengukuran Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  1x24  jam masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran sumuran  menunujukan  kepekaan  mikroba
terhadap  antibiotic  atau  bahan  antimikroba yang  dgigunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan  dengan  diameter  zoba  hambat atau zonqa bening.
Diameter  zona  hambat  diukur  dalam satuan  millimeter  (mm)  menggunakan jangka  sorong  dengan  cara  mengukur  jarak dari  tepi  sumur  uji  ke  batas  lingkaran  zona hambat.  Kemudian  diameter  zona  hambat tersebut  dikategorikan  kekuatan  daya  anti bakterinya berdasarkan penggolongan Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolat  Jamur  Endofit  Akar  dan  daun Tumbuhan Sereh ( cymbopogon citratus)
Jamur  endofit  yang  telah  tumbuh  di medium  PDA  kemudian  dimurnikan  ke dalam  medium  PDA  baru  dengan  cara menginokulasi sedikit hifa dengan ose steril dari  setiap  koloni  endofit  yang  berbeda. Media  PDA  bersifat  selektif  terhadap  jamur dan mengandung kentang sebagai karbohidrat  yang  merupakan  sumber  nutrisi bagi  pertumbuhan  jamur  (Ariyono et  al . 2014).  Kultur  jamur  endofit  diinkubasi selama 3-7 hari pada suhu ruang. Pemurnian ini  bertujuan  untuk  memisahkan  koloni endofit  dengan  morfologi  berbeda  untuk dijadikan  isolat  tersendiri  (Tilesky et al .2014).  Pengamatan  morfologi  dilakukan selama  3-7  hari  dan  apabila  masih ditemukan pertumbuhan koloni yang berbeda secara makroskopis, maka dilakukan pemurnian ulang hingga diperoleh isolate  murni.  Jamur  endofit  yang  berhasil diisolasi  dari  tanaman  inangnya  dapat menghasilkan  senyawa  metabolit  sekunder yang  sama  dengan  yang  dihasilkan  oleh
tanaman  inangnya.    Jamur  endofit  dikenal sebagai  sumber  metabolit  sekunder  berupa enzim  atau  senyawa  bioaktif  lainnya sehingga perlunya mengisolasi dan mengidentifikasi  jamur  endofit  tersebut  dari inangnya (Radji, 2010).

## Ekstraksi dan Kulturnasi  Jamur Endofit
Kultur jamur pada media nasi secara statik  selama  10  hari  pada  suhu  ruang dilakukan  pada  sampel  dari  akar  dan  daun Sereh  dengan  nama  sampel  (S.A.1.1)  dan (S.A.2.1)  dari  sampel  akar  Sereh  (S.D.1.1) dan  (S.D.2.1)  dari  daun  Sereh.  Pada  saat pertumbuhan miselia jamur endofit mencapai bagian dasar dari labu erlenmeyer dilakukan  ekstraksi  dengan  cara  maserasi. Maserasi  merupakan  proses  perendaman sampel  menggunakan  pelarut  organik  pada temperatur  ruangan.  Proses  ini  sangat menguntungkan  dalam  isolasi  senyawa bahan  alam  karena  dengan  perendaman sampel  tumbuhan  akan  terjadi  pemecahan dinding  dan  membran  sel  akibat  perbedaan tekanan  antara  di  dalam  dan  di  luar  sel, sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut organik dan  ekstraksi senyawa  akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman  yang  dilakukan.  Pemilihan pelarut untuk proses maserasi akan memberikan  efektivitas  yang  tinggi  dengan memperhatikan  kelarutan  senyawa  bahan alam dalam pelarut tersebut.
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan cara maserasi  dengan menambahkan larutan etil  asetat  sebanyak  200  ml  sampai  semua nasi  terendam  lalu  diaduk  dengan  shaker selama  24  jam.  Metode  maserasi  digunakan karena  cara  pengerjaannya  yang  mudah
dikerjakan  dengan  menggunakan  peralatan yang sederhana, tidak menggunakan pemanasan  dan  dapat  menarik  senyawa- senyawa aktif dari sampel dengan maksimal. Perendaaman  sampel  dalam  maserasi  dapat membuat dinding sel dari sampel pecah dan membuat senyawa-senyawa yang ada dalam sampel yang terdapat dalam sitoplasma akan tertarik  oleh  pelarut.  Dinding  sel  pecah dikarenakan  adanya  perbedaan  konsentrasi di  dalam  dan  di  luar  sel.  Konsentrasi  diluar sel  lebih  tinggi  dibandingkan  konsentrasi  di dalam sel  yang rendah sehingga dinding sel pecah  karena  tidak  bisa  menahan  tekanan dari perbedaan konsentrasi (Ariyani,2018).
Pada  proses  maserasi  dilakukan pengocokan diatas alat shaker selama 24 jam agar pelarut dapat larut ke dalam sampel dan akan  masuk  ke  rongga-rongga  sampel karena    keadaan  diam  selama  maserasi menyebabkan  turunnya  perpindahan  bahan aktif.  Etil  asetat  adalah  senyawa  organik dengan rumus empiris CH 3 COOC 2 H 5 . Senyawa  ini  merupakan  ester  dari  ethanol dan  asam  asetat.  Senyawa  ini  berwujud cairan  tak  berwarna,  memiliki  aroma  khas. Etil  asetat  adalah  pelarut  polar  menengah yang  volatil  (mudah  menguap),  tidak beracun,  dan  tidak  higroskopis.  Setelah direndam  dengan  etil  asetat  selanjutnya disaring kemudian di evaporasi menggunakan Rotary  vacuum  evaporator pada  suhu  40°  C  (Yohanes et  al. 2017). Proses evaporasi bertujuan untuk menguapkan  ekstrak,  penguapan  ekstrak dimaksudkan  agar  air  dan  pelarut  yang tersisa  dalam  ekstrak  akan  menguap. Menggunakan  suhu  40ºC  bertujuan  untuk tetap  menjaga  senyawa  bioaktif  dalam filtrate  kerena  biasanya  senyawa-senyawa
bioaktif rentan terhadap suhu tinggi (Brooks et al. 2001).

## Pengujian aktivitas antibakteri dari ekstrak jamur endofit
Pengujian  aktivitas  antibakteri    dari ekstrak  jamur  endofit  tumbuhan  Sereh dilakukan  pada  bakteri Staphylococcus Aureus mewakili Gram postif dan Escherichia  Coli mewakili  gram  negatif. Pengujian aktivitas bakteri ini menggunakan metode  difusi  (sumuran).  Masing-masing ektsrak diujikan pada masing-masing bakteri.  Metode  difusi  digunakan  karena prosedurya  sederhana  mudah  dan  praktis untuk dikerjakan dan dapat melihat sensitivitas  berbagai  jenis  mikroba  terhadap antimikroba (Kowal
et al.,2018 ).Penggunaan  bakteri  ini  bertujuan melihat  apakah  ekstrak  jamur  endofit  yang diisolasi  dari  tumbuhan  Sereh  memiliki aktivitas antibakteri terhadap mikroba pathogen  pada  tubuh  manusia  dan  untuk mengetahui spectrum dari aktivitas antibakteri  ekstrak  jamur  endofit  tumbuhan Sereh  memiliki  spektrum  luas  (membunuh banyak jenis mikroba) atau spektrum sempit (membunuh salah satu mikroba).
Hasil  yang  diperoleh  dalam  uji aktivitas  antibakteri  dilakukan  pengamatan selama  1x24  jam  masa  inkubasi  dengan dilakukannya  3x  pengulangan  terhadapa bakteri S.Aureus dan  4x  pengulangan  untuk bakteri E.Coli. aktivitas  yang  terbentuk terlihat  dengan  adanya    zona  hambat  (zona bening)  disekitaran  sumuran  dengan  ukuran pecandang baja 7 mm, membuktikan bahwa ekstrak  jamur  endofit  yang  diambil  dari sampel akar yang diuji menunjukan kepekaan  terhadap  salah  satu  bakteri  yaitu
S.Aureus dan  antibiotik  yang  digunakan sebagai  kontrol  postif.  Hasil  uji  aktivitas antibakteri  dan  hasil  pengukuran  diameter zona hambat ekstrak jamur endofit terhadap bakteri S.Aureus. Konsentrasi yang
digunakan  yaitu  100%  dengan  banyaknya sampel yang diujikan yaitu 0,1 ml.

## Tabel. 1. Aktivitas antibakteri pada bakteri
S.Aureus (mm)
Hasil pengamatan aktivitas antibakteri  pada  bakteri  uji S.Aureus memperlihatkan  ekstrak  jamur  dari  akar Sereh    (S.A.1.1)  tidak  menunjukkan aktivitas  antibakteri  atau  tidak  ada  zona hambat  pada  ketiga  pengulangan  sedangkan pada ektrak akar (S.A.2.1) terdapat aktivitas dengan  adanya  zona  hambat  disekitar bakteri uji dengan rata-rata ukuran sekitar 5- 9  mm  jumlah  ini  sudah  dikurangi  dengan besarnya pacandang yang digunakan yaitu 7 mm..  Pada  ektrak  jamur  dari  daun  Sereh (S.D.1.1)    pada  ulangan  1  terdapat  sedikit zona  hambat  yang  terlihat  yaitu  sekitar  2 mm,  sedangkan  pada  ulangan  dua  dan  tiga tidak ada aktivitas. Selanjutnya pada ekstrak jamur  dari  daun  Sereh  (S.D.2.1)  terdapat zona hambat  yang sangat  kecil  yaitu sekitar
1 mm. Pada kontrol positif yaitu kloramfenikol  juga  terdapat  aktivitas  yang bermakna yang terdapat disekitar bakteri uji sedangkan  pada  kontrol  negative  tidak terdapat aktivitas apapun pada ulangan 1-3.
Isolat jamur endofit yang berasal dari akar dan daun Sereh dan telah diujikan pada bakteri E.coli terdapat  zona  hambat  yang tidak  terlalu  bermakna  pada  sampel  akar
(S.A.1.2) dan sampel daun (S.D.1.1).
Tabel. 2. Aktivitas antibakteri pada
Escherichia Coli (mm)
Hasil  ekstrak  jamur  endofit  isolasi tumbuhan  Sereh  dari  bakteri  uji S.Aureus terlihat yang memberikan daya hambat yang paling  besar  terdapat  pada  ekstrak  jamur endofit yang berasal dari akar Sereh dengan jumlah  rata-rata    yaitu  5-9  mm  dengan kategori sedang. Hal ini menunjukan bahwa ekstrak  jamur  endofit  dari  akar  Sereh memilki  daya  hambat  yang  lebih  peka  pada S.Aureus.
Diameter  zona  hambat  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus lebih  besar dibandingkan  bakteri E.  coli .  Hasil  yang berbeda  ini  dikarenakan  adanya  perbedaan struktur  dinding  sel  kedua  bakteri,  dimana bakteri  Gram  negatif  lebih  kompleks dibandingkan  dengan  bakteri  gram  positif. Bakteri  Gram  negatif  memiliki  dinding  sel
Sampel Ulangan K (+) K(-) U1 U2 U3 S.A 1.1 - - - 7 - S.A 2.1 5 mm  7 mm 9 mm 10 - S.D 1.1 2 mm - - - - S.D 2.1 1 mm - - - -
Sampel Ulangan
K (+) K(-) U1 U2 U3       U4 S.A 1.1 - - -            - 6 - S.A 2.1 - - -          3 - - S.D 1.1 - - -            - - - S.D 2.1 - - -           - - -
yang terdiri dari 3 lapisan yaitu, lapisan luar, lapisan  tengah  dan  lapisan  dalam.    Uji aktivitas  penghambatan  antibakteri  terhadap bakteri  Gram  positif  ( S.Aureus) lebih  kuat dibandingkan bakteri Gram negatif ( E. coli ). Hal ini sesuai dengan sifat dinding sel  yang dimiliki bakteri tersebut. Gram positif hanya mempunyai  lapisan  tunggal  pada  dinding selnya (Sudewo, 2005).  Struktur dinding sel bakteri  Gram  negatif  yang  relatif  kompleks akan  menyebabkan  senyawa  antibakteri lebih  sukar  masuk  ke  dalam  sel  dan menemukan sasaran untuk bekerja (Ariyani,2018).
Kontrol negatif yang digunakan yaitu aquades,  terlihat  dari  hasil  yang  diperoleh aquades  tidak  menunjukan  adanya  zona hambat pada pengujian yang dilakukan pada masing-masing mikroba uji. Hal ini disebabkan karena aquades berfungsi mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh  pelarut terhadap  pertumbuhan  bakteri  sehingga dapat  diketahui  bahwa  yang  mempunyai aktivitas  antibakteri  adalah  zat  uji  bukan pelarut. Berbalik dengan hasil yang ditujukan  dari  kontrol  positif  dari  masing- masing  mikroba  uji  terlihat  kontrol  postif menghasilkan  aktivitas  daya  hambat  yang besar  dibandingkan  dengan  kontrol  negatif. Kontrol  postif  yang  digunakan  yaitu kloramfenikol.  Penggunaan  kloramfenikol dikarenakan kloramfenikol merupakan antibiotik  berspektrum  luas.  Hasil  yang diperoleh  bahwa  pada  bakteri S.Aureus menghasilkan  daya  hambat  yang  besar ditunjukan  dengan  hasil  yang  diperoleh yaitu  7  dan  10  mm  dibandingakan  denga bakteri E.Coli hal ini dikarenakan antibiotik kloramfenikol  lebih  peka  terhadap  bakteri S.Aureus (Gram  positif),  kloramfenikol
hanya  membutuhkan  konsentrasi  0,2-5 µg/ml,  sedangkan  pada  kebanyakan  bakteri gram positif bakteri dihambat pada konsentrasi  1-10  µg/ml  (Katzung,  2004). Cara  mengatasi  infeksi  bakteri  ialah  dengan antibiotik.  Penggunaan  antibiotik  yang  tidak rasional  di  berbagai  bidang  ilmu  kedokteran merupakan  salah  satu  penyebab  timbulnya resistensi yang didapat (Nwinyi et al . 2009). Di sisi  lain,  penggunaan  antibiotik  juga  sering menyebabkan efek samping seperti reaksi alergi, reaksi idiosinkrasi, reaksi toksik, serta perubahan  biologis  dan  metabolis  pada  hospes ( Prayoga,  2013 ).  Keadaan  tersebut  mendorong untuk mencari alternatif pengobatan yang relatif lebih  efektif  dan  aman,  antara  lain  dengan pemanfaatan obat dari bahan alam (Putri, 2014). Alasan inilah yang mendorong peneliti mengambil  bahan  alam  Sereh    sebagai  bahan yang  akan  diujikan  untuk  aktivitas  antibakteri. Tumbuhan  memiliki  senyawa-senyawa  aktif yang  dapat  digunakan  sebagai  antibiotik sehingga  eksplorasi  senyawa-senyawa  aktif tersebut  memiliki  relevansi  yang  besar  terkait penemuan  antibiotik  baru  untuk  mengatasi resistensi. Selain itu, penggunaan antibiotik dari senyawa  tumbuhan  dapat  lebih  aman  untuk tubuh pada penggunaan jangka panjang (Putri,2014).

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  jamur  endofit yang  diisolasi  dari  akar  Sereh  memiliki aktivitas  antibakteri    pada  bakteri  uji S.Aureus dan  tidak  memiliki  aktivitas antibakteri  pada  bakteri E.Coli .  Dimana aktivitas  yang  dihasilkan  pada  bakteri Staphylococcus  aureus tergolong  aktivitas yang  sedang  dan  lemah,  sedangkan  untuk Escherichia  coli tidak  adanya  kepekaan
aktivitas  antibakteri  untuk  itu  tidak  terdapat zona bening pada saat pengujian.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan aktivitas  antibakteri  ekstrak  jamur  endofit yang  diisolasi  dari  tumbuhan  Sereh    maka dapat  diberikan  saran  yaitu  perlu  dilakukan penelitian lebih lanjut tentang uji antibakteri dengan metode pengujian yang berbeda atau dengan  menggunakan  bakteri  uji  yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Ariyani, F., Setiawan, L.E., dan F.E. Soetaredjo.  2008.  Ekstraksi  Minyak
Atsiri  dari  Tanaman  Sereh  dengan Menggunakan Pelarut Metanol Aseton dan N  Heksana. Widya
Teknik. Vol. VII (2) : 124-133.
Brooks, G.F., Janet, S.B., Stephen A.M. 2001. Jawetz, Melnick and Adelbergs,
Mikrobiologi Kedokteran , Alih Bahasa oleh Mudihardi, E., Kuntaman,
Wasito,  E.B.,  Mertaniasih,  N.M.,
Harsono, S., dan Alimsardjono, L.Jakarta : Penerbit Salemba Medika.
Heyne, K.,1987. Tumbuhan Berguna Indonesia, Volume II , Yayasan Sarana  Wana  Jaya  :  Diedarkan  oleh Koperasi  Karyawan,  Badan  Litbang Kehutanan, Jakarta.
Katzung,  B.  G.,  2004.  Farmakologi  Dasar dan  Klinik.  Edisi  XIII.  Buku  3. Translationof  Basic  and  Clinical Pharmacology  Eight  Edition Alih
bahasa oleh BagianFarmakologi
Fakultas kedokteran Universitas Airlangga. Jakarta: SalembaMedika
Michelle  Sumampouw, et  al. 2014.Uji  Efek Antibakteri  Jamur  Endofit  Akar Bakau Rhizophora  Stylosa Terhadap Bakteri Staphylococcus  Aureus Dan Escherichia  Coli. Jurnal  e-Biomedik. Vol(2) No (1)
Nwinyi,  Obinna  C.,  Chinedu,  Nwodo  S.,
Ajani, Olayinka, Chinwe I., Ogunniran  &  Kehinde,  O.  2009. Antibacterial  effects  of  extracts  of Ocimum  gratissimum  and  Piper guineense  on  Escherichia  coli  and Staphylococcus aureus . African Journal of Food Science. 3 (3) : 022-
025.
Prasetyono.D.S. 2012. A- Z Daftar Tanaman Obat Ampuh di Sekitar Kita.
Jogjakarta : FlasBooks.
Prayoga  E.  2013.  Perbandingan  Efek Ekstrak  Daun  Sirih  Hijau  ( Piper betle  L.) dengan Metode Difusi Disk dan Sumuran  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri
Staphylococcus
aureus . Universitas  Islam  Negeri  Syarif Hidayatullah. Skripsi. Jakarta.
Putriningtyas, D. 2014. Aktivitas Antibakteri Minyak  Atsiri  Daun  Sirih    Merah (Piper  crocatum  ruiz  &  pav.)  dan Minyak  Atsiri  Daun  Sereh  Wangi (Cymbopogon  nardus  (L.)  rendle)
Asal Tawangmangu Terhadap Bakteri  Staphylococcus  aureus  dan Escherichia coli . Univ. Muhamadyah. Surakarta.
Radji, Maksum. 2010. Buku Ajar Mikrobiologi  Panduan  Mahasiswa
Farmasi  dan  Kedokteran. Jakarta: EGC.
Resmi Mustarichie dkk.2011. Metode
Penelitian  Tanaman  Obat ,  Widya
Padjadjaran.   Bandung.
S udewo,  B.  2005. Basmi  penyakit  dengan sirih  merah .  Jakarta:  Agromedia Pustaka
Tilesky  Phoamda, et  al. 2014.  Uji  Efek Antibakteri  Jamur  Endofit  Akar
Bakau ( Bruguiera gymnorhiza)
Terhadap  Bakteri Staphylococcus Aureus Dan Escherichia  Coli. Jurnal e-Biomedik. Vol(2) No (1)
Yohanis  Nawea, et  al. 2017.  Uji  Antibakteri Jamur  Endofit  Dari  Tumbuhan Mangrove  Soneratia  alba Yang Tumbuh  Di  Perairan  Pantai  Tanah Wangko.  Jurnal  Pesisir  dan  Laut Tropis. Vol (1) No(1).