Perubahan Kadar Estradiol dan Histologi Uterus Mencit ( Mus musculus ) Betina dengan Induksi Progesteron Sintetik
Erlia Narulita 1 , Jekti Prihatin 1 , Khoirul Anam 1 , Fikri Ainur Risma Hardiyanti Oktavia 1
1 Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Jember Email : erlia.fkip@unej.ac.id

## Abstract
The purpose of this research was to determine the effect of progesterone to estradiol levels and histology of uterus, to test the effect of estrous cycle to uterus histology of females’ mice after treated by progesterone in birth control pills. This  research  used  Completely  Randomized  Design  (CRD).  Females Mus  musculus Balb-C  and  synthetic progesterone  (cyproterone  acetate) contained  in ‘Diane-35’ birth control pills were used in this study. The research consisted of two treatment groups, i.e. group K had no treatment and group P treated by a solution of Diane-35 at a dose of 2.6 mg per 5 mL distilled water. Results on the effects of progesterone on endometrial thickness suggested that there were significant differences between treatment groups. Meanwhile, the effect of progesterone on estradiol levels indicated that there were no significant differences among treatment groups. This means that the thickness of the  endometrium  was  strongly  influenced  by  the  presence  of  a  synthetic  progesterone  hormone  and  induced endometrium  growth  thicker.  The  levels  of  estradiol  are  not  significantly  different  due  to  a  negative  feedback mechanism  of  Follicle  Stimulating  Hormone  (estrogen  effect)  and  Luteinizing  Hormone  (progesterone  effect).  The greatest thickness of endometrium of estrous cycle was treated by progesterone, which was 0.2500 mm 2 .
Key Words : Progesterone, endometrial thickness, estradiol levels.

## Abstrak
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  mengetahui  pengaruh  hormon  progesteron  terhadap  kadar  estradiol  dan  histologi uterus mencit ( Mus Musculus ) betina dan menguji adanya pengaruh siklus estrus terhadap kondisi histologis uterus mencit  ( Mus  musculus )  betina  setelah  pemberian  hormon  progesteron  dalam  pil  KB.  Penelitian  ini  menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Hewan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Mencit  ( Mus  musculus ) betina  varietas  Balb-C  sedangkan  hormon  progesteron  yang  digunakan  hormon  progestin  sintetik  ( Cyproteron Acetate ) yang terkandung dalam pil KB dengan merk Diane-35. Penelitian ini terdiri atas 2 kelompok perlakuan yaitu kelompok K tanpa pemberian pil dan kelompok P pemberian larutan pil KB merk Diane-35 dengan dosis 2,6 mg per 5 mL  aquades.  Hasil  penelitian  tentang  pengaruh  hormon  progesteron  terhadap  tebal  endometrium  menunjukkan bahwa  terdapat  perbedaan  yang  nyata  antara  kelompok  perlakuan,  penelitian  tentang  pengaruh  hormon progesterone  terhadap  kadar  estradiol  menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  yang  nyata  antar  kelompok perlakuan. Hal ini berarti bahwa tebal endometrium sangat dipengaruhi oleh adanya hormone progesterone sintetik yang  diinduksikan  ke  dalam  tubuh  sehingga  memicu  endometrium  untuk  tumbuh  semakin  tebal.  Adapun  kadar estradiol yang tidak berbeda nyata disebabkan karena adanya mekanisme umpan balik negatif dari hormon-hormon FSH  (pengaruh  estrogen)  dan  LH  (pengaruh  progesteron).  Fase  siklus  estrus  yang  paling  besar  ketebalan endometriumnya adalah fase estrus perlakuan progesteron yaitu rerata tebal endometriumnya sebesar 0,2500 mm 2 .
Kata kunci : hormon progesteron, ketebalan endometriosis, kadar estradiol.

## Pendahuluan
Berdasarkan  data  BKKBN,  penggunaan  pil KB  menduduki  posisi  kedua  setelah  metode kontrasepsi  suntikan,  dengan  kata  lain  metode kontrasepsi  oral  /  pil  KB  banyak  digunakan  oleh masyarakat  Indonesia.  Pil  KB  yang  digunakan umumnya mengandung kombinasi antara hormon estrogen  dan  progesteron.  Kontrasepsi  oral dengan  merek  dagang  Diane-35  merupakan  pil kotrasepsi kombinasi yang mengandung ethinylestradiol (35  μg)  and cyproterone  acetate (2  mg)  (Canadian  Medical  Association,  2003). Pemberian  estrogen  saja  pada  pil  KB  akan menyebabkan  penyakit  hyperplasia  sehingga untuk  mencegah  hal  itu  terjadi  maka  estrogen
dalam pil KB dikombinasikan dengan progesteron (Herman, 1996).
Pemberian  progesteron  eksogenous  dapat mengganggu  kadar  puncak follicle-stimulating hormone (FSH)  dan Luteinizing  hormone (LH), sehingga  meskipun  terjadi  ovulasi,  produksi progesteron  yang  berkurang  dari  korpus  luteum menyebabkan  penghambatan  dari  implantasi. Pemberian progesteron secara sistemik dan untuk jangka waktu yang lama menyebabkan endometrium  mengalami  keadaa n  “istirahat” (Hartanto, 2004).
Progesteron dalam dosis  yang  besar dapat menghambat  sekresi  LH,  jadi  bertanggung  jawab pada  penghambatan  ovulasi  serta  pada  sekresi estrogen  (estradol)  (Nalbandov,  1990).  Pengaruh hormon  progesteron  terhadap  kondisi  uterus
dapat
ditunjukkan dengan melakukan pengamatan  histologi  uterus,  yaitu  dengan pembuatan  preparat    awetan  uterus.  Progesteron yang  disuntikkan  pada  tikus  dan  mencit  yang dikastrasi  menimbulkan  perubahan  endometrium uterus  yang  spesifik,  persis  seperti  yang  terjadi pada  mamalia  lain.  Ukuran  maupun  histologi uterus tidak pernah statis, perubahan yang sangat nyata  terjadi  di  endometrium  dan  kelenjarnya. Meski  demikian,  dengan  segala  keterbatasannya, histologi  uterus  dapat  dijadikan  petunjuk  yang baik terhadap aktivitas ovarium sistik atau korpora lutea fungsional (Nalbandov, 1990).
Pemberian    hormon  eksogenous  pada wanita  sangat  erat  kaitannya  dengan  perubahan fisiologi reproduksinya. Perubahan tersebut dapat dilihat  pada  pola  siklus  menstruasi.  Pada mammalia  selain  primata  tidak  mengalami  haid, dan  daur  seksual  mereka  disebut  siklus estrosa . Daur  ini  diberi  nama  demikian  karena  adanya periode    “panas”  (estrus)  yang  mencolok  pada saat  ovulasi,  yang  biasanya  merupakan  satu- satunya  waktu  dimana  terjadi  peningkatan keinginan  seksual  pada  hewan  betina.  Pada spesies-spesies  yang  mengalami        ovulasi spontan    dengan  siklus estrosa, misalnya tikus, tidak  terdapat  perdarahan  vagina  episodik  tetapi proses-proses  endokrin  yang  mendasari  pada prinsipnya  sama  seperti  proses  pada  daur  haid (Ganong, 2003).
Periode  estrus  pada  hewan  terjadi  secara berulang  dan  membentuk  suatu  siklus  yang disebut  siklus  estrus.  Siklus  estrus  merupakan salah satu aspek reproduksi yang menggambarkan  perubahan  kandungan  hormon reproduksi yang disebabkan oleh aktivitas ovarium dibawah pengaruh hormon gonadotrophin.  Perubahan  kandungan  hormon reproduksi  selanjutnya  menyebabkan  perubahan struktur pada jaringan penyusun saluran reproduksi.  Siklus  estrus  pada  mencit  terdiri    dari 4  fase  utama,  yaitu  proestrus,  estrus,  metestrus dan  diestrus  (Taylor,  1994).  Siklus  ini  dapat dengan mudah diamati dengan melihat perubahan sel-sel penyusun lapisan epitel  vagina yang dapat dideteksi dengan metode apus vagina pewarnaan Giemsa (Brancroft and Steven,1999).
Beberapa penelitian terkait pengaruh pemberian hormon reproduksi eksogeneous telah dilakukan.  Sitasiwi  (2008)  membuktikan  bahwa hormon  Estradiol  17- β  menyebabkan  proliferasi jaringan  penyusun  lapisan  endometrium  uterus. Hasil  penelitian  Rasad  (2008)  menunjukkan bahw a  pemberian  GnRH  dan  atau  PGF2α  dapat memperpendek  interval  partus-estrus  pertama pasca beranak dan meningkatkan ekspresi estrus selama  60  hari  awal  pasca  beranak.  Shaw, et  al . (2010)  menyatakan  jika  umpan  balik  negatif estrogen  terjadi  secara  langsung  pada  hipofisis dan berkontribusi pada regulasi diferensial sekresi FSH  dan  LH.  Sedangkan  Narulita et  al. (2016)
membuktikan  bahwa  induksi  hormon  estrogen sintetik meningkatkan kadar estradiol dan mempengaruhi  penebalan  endometrium  pada fase diestrus secara signifikan.

## Metode

## Persiapan hewan percobaan
Hewan  percobaan  yaitu  mencit  ( Mus musculus )  betina  dipelihara  dalam  kandang berupa  ember  plastik  (37cm  x  30cm)  dengan tutup  kawat  dan  alas  kandang  dilapisi  sekam secukupnya,  sekam  kering  diganti    setiap  3  hari sekali  agar  kebersihannya  terjaga  Pemberian makan  dan  minum  setiap  hari    dengan menggunakan  pakan  pelet  merk  Turbo  dan  air minum PAM secara ad libitum.

## Perhitungan konversi dosis progesteron
Dosis pil KB dengan merk dagang Diane-35 yang  biasa  digunakan  adalah  100mg  per  hari. Adapun  konversi  dosis  pada  manusia  dengan berat  70kg  ke  mencit  20g  adalah  0,0026 (Laurence  and  Bacharach,  1964).  Dosis  yang diberikan  untuk  mencit  (20g)  adalah  0,26mg. Dosis  yang  diberikan  pada  kelompok  perlakuan akan  diencerkan  0,5ml  aquades  sesuai  dengan kapasitas lambung mencit (Narulita, 2016).

## Induksi hormon progesteron
Hormon progesteron yang digunakan berasal  dari  pil  KB  kombinasi  dengan  merk dagang  Diane-35.  Setiap  mencit  pada  kelompok perlakuan  akan  diinduksi  pil  KB  sebanyak  0,26 mg  yang  dilarutkan  dalam  0,5  ml  aquades  setiap harinya.  Sedangkan  setiap  mencit    pada kelompok kontrol akan diinduksi aquades sebanyak  0,5  ml,  agar  mengalami stressing gavage yang sama.

## Uji perlakuan dan konsentrasi estradiol
Mencit  yang  digunakan  sebanyak  32  ekor, terdiri  atas    kelompok  perlakuan  dan  kontrol masing-masing 16 ekor. Selain itu juga digunakan dua  ekor  mencit  jantan  dalam  pengamatan tingkah  laku.  Pada  tahap  pemeliharaan,  untuk memudahkan  maka  masing-  masing        kelompok dibagi  menjadi  dua  kelompok  terdiri  atas  8  ekor, yaitu sebagai berikut :
K1  :  tanpa perlakuan (di gavage dengan
aquades) unt
K2  :  tanpa perlakuan (di gavage dengan aquades)
P1  :  digavage  dengan  hormon  progesteron berupa  pil  kontrasepsi  oral  merk  dagang Diane-35
P2  :  digavage  dengan  hormon  progesteron berupa  pil  kontrasepsi  oral  merk  dagang Diane-35
K1 dan P1 untuk kadar estradiol, K2 dan P2 untuk tebal endometrium.
Selama 7 hari masa aklimasi semua mencit diberi  makanan  berupa  pakan  tikus  sintesis. Selanjutnya diberi induksi pil kontrasepsi kombinasi  merk  Diane-35  mulai  hari  ke-8  sampai hari ke-12. Pada hari ke-13 mencit dianastesi dan dilakukan  pengambilan  uterus  untuk  mengamat histologi  dan  mengukur  tebal  endometriumnya. Pengambilan  sampel  darah  di  jantung  dan dilakukan  uji  estradiol  dengan  metode  ELISA menggunakan prinsip competitive binding (Kricka, 1999 dan Asihara, 2001).

## Konsentrasi hormon estradiol
Mencit  dieksekusi  saat  berada  pada masing-masing  siklus  estrus,  yaitu  4  ekor dieksekusi pada fase proestrus, 4 ekor pada fase estrus,  4  ekor  pada  fase  metestrus,  dan  4  fase diestrus.  Kemudian  abdomen  dibuka,  diambil uterus-nya secara hati-hati dengan cara menggunting  tepat  pada  bagian  istmus  tuba fallopi  kiri  dan  kanan  (yaitu  bagian  yang  paling dekat  dengan  uterus),  dan  pada  bagian  ekor (batas antara cervix dan uterus). Kemudian uterus dibersihkan  dari  seluruh  ligamen  yang  melekat padanya. Selanjutnya berat uterus utuh ditimbang dengan  menggunakan  timbangan  analitik  dan dipisahkan  antara  tanduk  uterus  kiri  dan  kanan, segera  dimasukkan  kedalam  botol  yang  berisi larutan fixative  buffer formalin  10%,  direndam selama  12-24  jam  (Cromay,  2012).  Botol  yang berisi  larutan  fiksatif  sebelumnya  sudah  diberi label untuk kedua kelompok pada setiap fase nya dan antara uterus kiri dan kanan. Setelah  24  jam dalam    larutan  fixative      buffer  formalin  10%, uterus  memasuki  tahapa-tahapan  pembuatan preparat permanen.

## Analisis data
Untuk  menguji  perbedaan  rerata  tebal endometrium  dan  rerata  kadar  estradiol  antara kontrol dan perlakuan progesteron, maka digunakan uji Independent Samples T-Test untuk. Analisis One  Way  Anova digunakan  untuk menguji  pengaruh  fase  penyusun  siklus  estrus terhadap  tebal  endometrium  antara  kontrol  dan perlakuan  progesteron  dan  apabila  terdapat perbedaan  maka  dilakukan  uji  Duncan  dengan tingkat  kepercayaan  95%  menggunakan  SPSS versi 17.0.

## Hasil dan Pembahasan

## 1.  Pengaruh  Hormon  Progesteron    terhadap Kadar Estradiol dan Tebal Endometrium
Pengukuran kadar estradiol pada kelompok perlakuan  progesteron  menunjukkan  nilai  yang lebih  besar  dari  pada  kadar  estradiol  perlakuan
kontrol (Tabel 1). Hasil t-test menunjukkan bahwa tidak  terdapat  perbedaan  yang  nyata kadar estradiol  antara  perlakuan  kontrol  dan  perlakuan progesteron. Hal ini dapat diasumsikan kemungkinan  disebabkan karena hormon estradiol  (estrogen)  dan  progesteron  bekerja secara  umpan  balik  negatif  untuk  menghentikan pelepasan GnRH oleh hipotalamus, serta pelepasan  FSH  (pengaruh  estrogen)  dan  LH (pengaruh  progesteron)  oleh  pituitari.  Dengan kata  lain  dengan  menghambat  pelepasan  LH, progesteron  akan  mencegah  ovulasi,  adanya progesteron  sintetik  yang  diinduksi  ke  dalam tubuh dapat mengakibatkan konsentrasi progesteron  dalam  tubuh  meningkat,  sehingga tingkat  estradiol  dalam  tubuh  tidak  dapat meningkat  secara  signifikan.  Selama  siklus menstruasi  yang  normal,  konsentrasi  FSH  akan mulai  meningkat  pada  hari-hari  pertama.  FSH merangsang    folikel  tersier  pada  ovarium  untuk tumbuh  menjadi  folikel  de  Graaf,  lapisan  sel  teca interna  dan  sel  granulose  pada  folikel  de  graaf menghasilkan  estrogen.  Semakin  masak  atau semakin  besar  diameter  folikel  de  graaf  semakin tinggi pula produksi estrogen. Estrogen mempunyai  daya  mencegah  produksi  FSH  dan daya  perangsang  terhadap  produksi  LH.  Kadar estrogen  mencapai  derajad  ketinggian  tertentu maka  terjadi  pelepasan  LH  dari  hipofisa  anterior, kadar  LH  dalam  darah  mendadak  meningkat hingga  terjadilah  ovulasi.  Setelah  ovulasi  terjadi, kadar  LH  menurun  dengan  cepat  namun  tidak sampai  batas  minimum,  melainkan  cukup  untuk merangsang  sel  teca  interna  untuk  membentuk corpus  luteum.  Korpus  luteum  memproduksi hormon  progesteron  yang  meredakan  aktivitas estrogen (Shaw, et al., 2010).

## Tabel 1. Perbedaan kadar estradiol antara kontrol dan perlakuan progesteron
Perlakuan Kadar Estradiol (pg/mL) Kontrol 44,59 ± 3,97023 Progesteron 50,38 ± 1,70063 *Signifikansi 0,084 (P>0,05) Tabel  2. Perbedaan  tebal  endometrium  antara kontrol dan perlakuan progesteron Perlakuan Tebal Endometrium (mm) Kontrol 0,2032 ± 0,02364 Progesteron 0,2324 ± 0,02141 *Sigifikansi 0,004 (P<0,05)
Gambar  1.  Penampang  membujur  uterus  mencit  ( Mus musculus ).  (a)  perlakuan  progesteron,  (b) perlakuan control. e= endometrium. Perbesaran 10x10.
Gambar 2. Preparat apusan vagina siklus estrus mencit ( Mus musculus ). (a) Diestrus; (b) Proestrus; (c) Estrus; (d) Metestrus. 1=sel epitel berinti; 2=leukosit; 3=lendir; 4=sel epitel menanduk. Perbesaran 10x10.
Kadar  FSH  akan  lebih  cepat  meningkat dibandingkan  LH  dan  akan  mencapai  puncak pada  fase  folikular,  tetapi  akan  menurun  sampai kadar yang terendah pada fase preovulasi karena pengaruh  peningkatan  kadar  progesteron  lalu akan  meningkat  kembali  pada  fase  ovulasi. Regulasi  LH  selama  siklus  menstruasi,  kadarnya akan meninggi di fase folikular dengan puncaknya pada  pertengahan  siklus,  bertahan  selama  1-3 hari, dan menurun pada fase luteal (Anwar, 2005).
Pemberian progesteron sintetik memberikan  pengaruh  perbedaan  yang  sangat nyata  terhadap  tebal  endometrium  uterus  mencit antara perlakuan kontrol dan perlakuan progesteron.  Dari  Tabel  2  dapat  diketahui  bahwa rerata  tebal  endometrium  kelompok  perlakuan progesteron lebih besar dari pada tebal endometrium
kelompok kontrol
(0,2324
mm 2 >0,2032 mm 2 ).
Hormon
progesteron mengatur pertumbuhan  lapisan  endometrium  pada  fase luteum,  progesteron  yang  disekresikan  oleh korpus  luteum  merangsang  perkembangan  dan pemeliharaan  berkelanjutan  dari  endometrium, yang meliputi perbesaran arteri  yang mengalirkan darah  ke  dinding  uterus  dan  pertumbuhan kelenjar endometrium yang mensekresikan cairan nutrient  yang  dapat  menyokong  embrio  sebelum embrio  terimplantasi  dalam  dinding  rahim.  Jadi ketika  progesteron  diinduksi  ke  dalam  tubuh mencit  hal  ini  akan  merangsang  penebalan  pada bagian  endometrium  uterus  mencit  sehingga endometrium  menjadi  semakin  tebal  (Gambar  1). Organ target progesteron yang lain adalah uterus, dimana  progesteron  membantu  implantasi  ovum (Anwar,  2005).  Penebalan  endometrium  pada uterus  terutama  pada  luteal  (estrus)  disebabkan
karena  adanya  pengaruh  progesteron  terhadap sel-sel epitel endometrium.

## 2.   Pengaruh  Fase  Siklus   Estrus  Terhadap Tebal Endometrium
Pengamatan apusan vagina mencit dilakukan  untuk  memastikan  tiap-tiap  fase  dalam siklus  estrus  (Gambar  2).  Berdasarkan  hasil analisis  yang  telah  dilakukan  rerata  tebal endometrium  perlakuan  progesteron  tiap  fase siklusnya  lebih  besar  dari  pada  rerata  tebal endometrium kontrol tiap fase siklus estrusnya.Tebal    endometrium    terbesar      yaitu fase  estrus  pada  perlakuan  progesteron,  rerata tebal  endometriumnya  sebesar  0,2500  mm 2 (P  = 0,031).  Sedangkan,  tebal  endometrium  terkecil yaitu  fase  diestrus  pada  perlakuan  kontrol,  rerata tebal  endometriumnya  sebesar  0,1733  mm 2 (P  = 0,013).
Pada  fase  diestrus  endometrium  berada pada  tahap  awal  persiapan  siklus  sehingga kondisi endometriumnya masih tipis lebih tipis dari pada  fase  yang  lain.  Siklus    estrus  sebenarnya mirip  dengan  siklus  menstruasi  dimana  ovulasi terjadi  pada  suatu  waktu  dalam  siklus  itu  setelah endometrium mulai  menebal  dan    teraliri    banyak darah,    karena  menyiapkan  uterus  untuk kemungkinan  implantasi  embrio.  Satu  perbedaan antara  kedua  jenis  siklus  itu  melibatkan  nasib lapisan  uterus  jika  kehamilan  tidak  terjadi.  Pada siklus  menstruasi,  endometrium  akan  meluruh dari  uterus  melalui  serviks  dan  vagina  dalam pendarahan  yang  disebut  sebagai  menstruasi. Pada  siklus  estrus,  endometrium  diserap  kembali oleh  uterus  dan  tidak  terjadi  pendarahan  yang banyak.  Pada  masa  diestrus  terjadi  regresi fungsional  korpus  luteum.  Uterus  kecil, anemic dan  hanya  agak  kontraktil.  Mukosa  vagina  tipis dan  leukosit  bermigrasi  melinasinya,  memberikan preparat  apusan  vagina  hamper  semata-mata terdiri atas sel-sel ini. Uterus menjadi sangat kecil dan anemic selama diestrus, menunjukkan bahwa sementara  korpus  luteum  tetap  ada,  organ  ini mensekresikan  progesteron  hanya  sebentar  saja selama siklus reproduksi.
Fase  estrus  pada  perlakuan  progesteron memiliki  rerata  tebal  endometrium  paling  tinggi sedangkan  fase  diestrus  pada  perlakuan  kontrol memiliki  rerata  tebal  endometrium  terendah.    Hal ini  dapat  disebabkan  karena  pada  fase  estrus endometrium berada pada kondisi siap implantasi
dengan  lapisan  endometrium  yang  paling  tebal dan  pada  fase  ini  betina  siap  menerima  jantan untuk melakukan perkawinan. Pada saat
progesteron
beraksi
terhadap uterus, endometrium  bertambah  tebal  secara  mencolok. Diameter dan panjang kelenjar  meningkat secara cepat,    menjadi    bercabang    dan  berkelok-kelok sehingga  kondisi  ini  dapat  digunakan  untuk mempersiapkan  implantasi  jika  terjadi  fertilisasi. Maka endometrium mempertebal lapisan fungsionalnya  mengakibatkan  kondisinya  menjadi lebih  tebal  dibandingkan  fase  yang  lain.  Tebal endometrium  meningkat  dari  3-5  mm  pada  fase proliferasi  menjadi  10  mm  pada  periovulasi  dan mencapai 13 mm  pada fase sekresi (Fleischer, et al. , 2003). Menurut Hartanto (2004) jika pada fase estrus tersebut diinduksi dengan hormon progesteron maka menyebabkan pola endometrium  yang  abnormal  sehingga  menjadi tidak  baik  untuk  implantasi.  Meskipun  terjadi ovulasi, produksi progesteron yang berkurang dari korpus luteum dapat menyebabkan penghambatan dari implantasi. Jadi dari penelitian ini  diperoleh  kadar  estradiol  pada  perlakuan kontrol  tidak  signifikan  terhadap  kadar  estradiol pada  perlakuan  progesteron.  Tebal  endometrium pada perlakuan kontrol berbeda signifikan terhadap kadar estradiol pada perlakuan progesteron. Rerata tebal endometrium perlakuan progesteron  tiap  fase  siklusnya  lebih  besar  dari pada  rerata  tebal  endometrium  perlakuan  kontrol tiap fase siklus estrusnya.

## Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disipulkan  bahwa:  (a).  Kadar  estradiol  pada perlakuan kontrol berbeda tidak signifikan (p=0,084) terhadap kadar estradiol pada perlakuan  progesteron.  Tebal  endometrium  pada perlakuan kontrol berbeda tidak signifikan (p=0,004) terhadap kadar estradiol pada perlakuan  progesteron,  dan  (b).  Rerata  tebal endometrium  perlakuan  progesteron  tiap  fase siklus  estrus  lebih  besar  dari  pada  rerata  tebal endometrium perlakuan kontrol. Tebal endometrium  terbesar  yaitu  fase  estrus  pada perlakuan  progesteron  dengan  ukuran  0,2500 mm2  (p=0,031).  Sedangkan,  tebal  endometrium terkecil yaitu fase diestrus pada perlakuan kontrol dengan ukuran 0,1733 mm2 (p=0,013).

## Daftar  Referensi
Adinegara,  R.  2006. Penambahan  Etinil  Estradiol pada Induksi Ovulasi
Menggunakan Klomifen  Sitrat .  Semarang:  Universitas Diponegoro. Anwar, R. 2005. Sintesis, Fungsi dan  Interpretasi Pemeriksaan Hormon Reproduksi. Bandung: Fakultas Kedokteran UNPAD.
BKKBN.  2012. Hasil  Pelaksanaan  Sub  Sistem Pencatatan  dan  Pelaporan  Pelayanan Kontrasepsi .  Dalam  www.  Bkkbn.go.id.
Diakses tanggal 9 februari 2016.
Brancroft, J.D. dan A. Stevens. 1999. Theory and Practise  of  Histological  Techniques .  Fourth Ed. Edinburg: Churchill Livingstone.
Cromey, Douglas W. 2012. Formaldehyde Fixatives . SWEHSC Cellular Imaging Core Newsletter.
Dellmann, H.D. dan E.M. Brown, 1992. Buku Teks Histologi Veteriner II . Third Edition. Jakarta: Universitas  Indonesia  Press.  Alih  bahasa: R. Hartono.
Departemen  Kesehatan  RI. Paduan  Pelayanan Keluaraga  Berencana .  Jakarta:  Dep.Kes, 2006.
Egging,  F.  D.  et  al.  2008.  Analysis  of  obstetric complications and uterine connective tissue in  tenascin-X-deficient  humans  and  mice. Cell Tissue Res , 332:523 –532.
Fleischer,  A.C.,  Vasquez,  J.M.,  Parsons,  A.K. 2003. Transvaginal sonography in gynecologic    infertility. In:  Fleischer  A.C, Manning F.A, Jeanty P, Romero R, editors. Sonography  in  obstetrics  and  gynecology. 6 th ed . Norwalk:Appleton & Lange:1047-76.
Ganong,  W.  F.  2003. Review  of  Medical Physiology . International Edition. San Fransisco: Mc Graw Hill Book.
Glasier,  A.  dan  Ailsa,  G.  2006. Keluarga Berencana  dan  Kesehatan  Reproduksi . Edisi  4.  Jakarta:  EGC.  Alih  bahasa:  Brahm U.
Hartanto,  H.  2004. Keluarga  Berencana  dan
Kontrasepsi . Jakarta: Pustaka Sinar Harapan.
Heffner, L. J. dan Schust, D. J. 2008. At a Glance Sistem  Reproduksi .  Jakarta:  Erlangga.  Alih Bahasa: dr. Vidhia Umami.
Mescher,  A.  L.  2010. Junqueira’s Basic Histology
Twelfth Edition. United States: The McGraw-Hill Companies, Inc.
Nalbandov, A. V. 1990. Fisiologi Reproduksi pada Mammalia dan Unggas . Jakarta: Universitas Indonesia Press.
Narulita,  E.  Prihatin,  J.  Dan  Dewi,  R.S.  2016.
Pemanfaatan Hasil Induksi Hormon Estrogen  terhadap  Kadar  Estradiol  dan Histologi  Uterus  Mencit  ( Mus  musculus ) Sebagai Buku Suplemen Sistem
Reproduksi  di  SMA. Jurnal  Bioedukatika , 4(2): 1-7.
Rasad,  S.D.  2008.  Pengaruh  Penyuntikan  GnRH dan  PGF2 α  Terhadap  Profil  Progesteron
Sapi Perah Pasca Beranak. Animal Production , 10(1): 16-21.
Shaw, N. D., Histed, S. N., Srouji, S. S., Yang, J., Lee,  H.,  &  Hall,  J.  E.  2010.  Estrogen Negative Feedback on Gonadotropin Secretion:  Evidence  for  a  Direct  Pituitary Effect  in  Women. The  Journal  of  Clinical Endocrinology  and  Metabolism , 95 (4),
1955 –1961.
Sitasiwi,  J.A.  2008.  Hubungan  Kadar  Hormon Estradiol  17- β  dan  Tebal  Endometrium Uterus  Mencit  ( Mus  musculus L.)  selama Satu  Siklus  Estrus. Buletin  Anatomi  dan Fisiologi , 16(2): 38-45.
Tagama,T. R. 2008. Pengaruh Hormon  Estrogen, Progesteron  dan  Prostaglandin  F2  alfa terhadap  Aktivitas  Birahi    Sapi  PO  Dara.
Purwokerto: Fakultas Peternakan Universitas Jenderal Soedirman. Taylor, P. 1994. Practical Teratology . London: WB Saunders Co.
Valentina,  C.  2009. Pengaruh    Pemajanan Medan Elektromagnetik terhadap Perubahan Siklus Estrus . Jakarta:
Universitas Indonesia.