## ANALISA METODE FIKSASI KERING MENGGUNAKAN GIEMSA DAN FIKSASI BASAH MENGGUNAKAN PAPANICOLAOU PADA PEMERIKSAAN PAP SMEAR
Indah Sari, Bastian, Try Era Realita IKesT Muhammadiyah Palembang iindahsari1917@gmail.com

## ABSTRAK
Kanker serviks adalah penyakit yang ditandai dengan pertumbuhan sel yang tidak terkontrol dan  penyebaran  sel  abnormal  yang  terjadi  di  serviks. World  Health  Organization (WHO) menjelaskan  bahwa  kanker  serviks  merupakan  penyebab  kematian  nomor  dua  pada perempuan dari seluruh penyakit kanker yang ada. Pap smear merupakan pemeriksaan yang dilakukan  untuk mendeteksi  kanker  serviks.  Pemeriksaan  pap  smear  menggunakan  bahan pemeriksaan  swab  vagina  yang  harus  dilakukan  fiksasi  basah  sebelum  pewarnaan papanicolaou  dan  fiksasi  kering  sebelum  pewarnaan  giemsa.  Penelitian  bertujuan  untuk menganalisa metode fiksasi basah menggunakan pewarnaan papanicolaou dan fiksasi kering menggunakan  pewarnaan  giemsa  pada  pemeriksaan  pap  smear  yang  dilakukan  di Laboratorium Patologi Anatomi Dyatnitalis Palembang. Jenis penelitian menggunakan cross sectional dengan  rancangan  penelitian  menggunakan intact  group  comparison .  Sampel terdiri  atas  8  responden  masing-masing  dilakukan  fiksasi  basah  diwarnai  dengan papanicoloau  dan  fiksasi  kering  diwarnai  dengan  giemsa.  Penelitian  dilakukan mulai  dari persiapan pasien, pengambilan bahan pemeriksaan, pengolahan bahan pemeriksaan, analisis dan  hasil  pemeriksaan.  Hasil  uji Chi-Square diketahui  bahwa  nilai  signifikan  adalah p = 0,064.  Nilai p yang  didapatkan  adalah p ˃0,05. Hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa tidak  terdapat  perbedaan  antara  metode  fiksasi  kering  menggunakan  giemsa  dan  fiksasi basah menggunakan papanicolaou pada pemeriksaan pap smear.

## Kata Kunci: Fiksasi Basah, Fiksasi Kering, Pemeriksaan Pap Smear

## ABSTRACT
Cervical  cancer  is  a  disease  characterized  by  uncontrolled  cell  growth  and  abnormal  cell spread  that  occurs  in  the  cervix.  The  World  Health  Organization  (WHO)  explains  that cervical cancer is the number two cause of death in women of all cancers. Pap smear is an examination  done  to  detect  cervical  cancer.  Pap  smear  examination  using  vaginal  swab examination material that must be done wet fixation before staining papanicolaou and dry fixation  before  coloring  giemsa.  The  study  aims  to  analyze  wet  fixation  methods  using papanicolaou  coloring  and  dry  fixation  using  giemsa  coloring  on  pap  smear  examination conducted at Dyatnitalis Anatomy Pathology Laboratory Palembang. This type of research uses  cross  sectional  with  research  design  using  intact  group  comparision.  The  sample consisted of 8 respondents each performed a wet fixation colored with papanicolaou and dry fixation  colored  with  giemsa.  Research  is  conducted  starting  from  patient  preparation, examination material retrieval, examination material processing,  analysis and examination result. Chi-Square test resukt are known that the significant value is p = 0.064. The p value obtained is p ˃ 0.05. the results can be concluded that there is no difference between dry fixation  method  using  giemsa  and  wet  fixation  using  papanicolaou  on  pap  smear examination.
Keywords: Dry Fixation, Wet Fixation, Pap Smear Examination

## Latar Belakang
Kanker  serviks  merupakan  keadaan tumbuhnya sel-sel kanker yang ganas dalam jaringan  yang  menyerang  wanita  dimana jumlah  penderitanya  cenderung  meningkat beberapa  tahun  terakhir.  Sekitar  sepertiga dari  seluruh  penderita  kanker  di  Indonesia adalah  jenis  kanker  serviks. World  Health Organization (WHO) menjelaskan  490.000 wanita diseluruh dunia di diagnosa menderita  kanker  serviks  dan  rata-rata 240.000  kasus  kematian  wanita  terjadi akibat  kanker  serviks  dan  hampir  80%  di negara  berkembang  (Anonim,  2013 dalam Ramadini, 2018).
Pap  Smear yaitu  suatu  pemeriksaan dengan cara mengusap leher rahim ( scrapping ) untuk mendapatkan sel-sel leher rahim  kemudian  diperiksa  sel-selnya,  agar dapat  diketahui  terjadinya  perubahan  atau tidak. Dari pengertian diatas, dapat disimpulkan  bahwa  pap  smear yaitu pemeriksaan usapan pada leher rahim untuk mengetahui  adanya  perubahan  sel-sel  yang abnormal yang diperiksa dibawah mikroskop (Ayurai, 2009 dalam Anggraeni, 2017).
Tujuan fiksasi sitologi adalah mempenetrasi  sel  dengan  cepat,  minimal menjaga sel dari kerusakan atau kehilangan komponen  sel  layaknya  ketika  sel  masih dalam  kondisi  hidup,  menjaga  secara
struktur sel maupun komponen sel, menghentikan proses metabolisme autolisis, menghentikan  pertumbuhan  selular  dan mikroorganisme,  meningkatkan  pewarnaan struktur dan komponen sel (Khristian, 2017). Fiksasi basah pap smear dengan menggunakan alkohol 96% fiksasi dilakukan  segera  setelah  dibuat  apusan  dan direndam  minimal  30  menit  (KemenKes, 2015).  Fiksasi  kering  adalah  fiksasi  yang dilakukan  pada  sediaan  sitologi  yang dilakukan  dengan  mengeringkan  sediaan tersebut  di  udara  terbuka  atau  udara  kering (Khristian, 2017).
Pewarnaan Giemsa merupakan teknik pewarnaan untuk pemeriksaan mikroskopik yang namanya diambil dari seorang peneliti malaria  yaitu  Gustav  Giemsa.  Pewarnaan giemsa  yang  digunakan  untuk  pemeriksaan sitogenetik dan histopatologi parasit memperlihatkan  morfologi  sel  seperti nukleus  dan  sitoplasma,  pewarnaan  ini sangat  mudah  dilakukan,  murah  dan membutuhkan  waktu  25-30  menit  untuk proses pewarnaan (Andayani, 2016). Pewarnaan papanicolaou merupakan metode pengecatan  polikromatis  yang  merupakan kombinasi  pengecatan  hematoxilin  untuk mewarnai  inti  sel  dan  sitoplasma  pada bagian  pewarna  lainnnya  (Samari,  dkk 2018).
Penelitian yang telah dilakukan sebelumnya oleh Agrawal Apurva, et.al(2018)  dengan  judul  Studi  Analisis Perbandingan  Khasiat  Teknik  Sitologi Papanicolaou  smear  &  Leishman-Giemsa dalam Diagnosis Lesi Neoplastik Oral yaitu menggunakan fiksasi kering diwarnai dengan    Leisman  giemsa  dan  fiksasi  eter alkohol diwarnai dengan papanicolaou yang didapatkan  hasil  penelitian  tidak  ada perbedaan  yang  signifikan  secara  statistik yang diamati antara kemampuan diagnostik pewarnaan  papanicolaou  dan  Leishman- Geimsa  dalam  diagnosis  Lesi  Neoplastik Oral  sedangkan  penelitian  ini  dengan  judul Analisa
Metode Fiksasi Kering Menggunakan  Giemsa  dan  Fiksasi  Basah Menggunakan Papanicolaou Pada Pemeriksaan Pap Smear
yaitu menggunakan fiksasi kering diwarnai dengan  giemsa  dan  fiksasi  basah  alkohol 96% diwarnai dengan papanicolaou.
Berdasarkan  uraian  diatas,  bertujuan untuk  menganalisa  metode  fiksasi  kering menggunakan  giemsa  dan  fiksasi  basah menggunakan papanicolaou pada pemeriksaan pap smear.

## Metodologi Penelitian
Jenis  penelitian  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah cross  sectional dengan  desain  penelitian  menggunakan
Intact  Group  Comparison yaitu  setengah kelompok  untuk  ekperimen  (fiksasi  kering dengan  pewarnaan  giemsa)  dan  setengah untuk  kelompok  kontrol  (fiksasi  basah dengan  pewarnaan  papanicolaou)  dengan membandingkan  analisa  metode  fiksasi kering  menggunakan  giemsa  dan  fiksasi basah  menggunakan  papanicolaou  pada pemeriksaan pap smear (Sugiyono, 2018).
Populasi dalam penelitian ini adalah pasien wanita yang melakukan pemeriksaan pap  smear.  Teknik  sampling  menggunakan Cluster  sampling, besar  sampel  ditentukan berdasarkan  pasien  yang  datang  selama  1 bulan  yang  berjumlah  8  responden  yang masuk kedalam kriteria inklusi dan eksklusi.
Analisa  data  dilakukan  dalam  dua tahap yaitu dengan uji normalitas menggunakan  uji Shapiro-wilk karena jumlah  data  <  50.  Bila  skala  dua  variabel adalah nominal dan apabila dari dua variabel ada  satu  variabel  dengan  skala  nominal dilakukan dengan menggunakan uji komparatif  non  parametris  yaitu  uji  Chi Square.  Jika  syarat  uji  chi  square  tidak terpenuhi, maka dipakai uji alternatif, yaitu untuk tabel 2×2 adalah uji Fisher dan untuk tabel 2×k adalah uji Kolmogrorov-Smirnov (Dahlan, 2014).

## Hasil Penelitian
Gambar 1. Grafik Metode Fiksasi Kering Menggunakan Giemsa
Berdasarkan  gambar  1  mendapatkan  hasil  pemeriksaan  tersebut  dilakukan  uji hipotesis yaitu uji Chi-Square , nilai signifikan yang didapatkan adalah p = 0,064 artinya tidak terdapat perbedaan antara metode fiksasi kering menggunakan giemsa dan fiksasi basah menggunakan papanicolaou pada pemeriksaan pap smear.
Gambar 2. Grafik Metode Fiksasi Basah Menggunakan Papanicolaou
75% 25% 37.50% 62.50% 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% Fiksasi Kering Menggunakan Giemsa Inti Sel Terlihat Jelas Inti Sel Terlihat Kurang Jelas Sitoplasma Terlihat Cerah Sitoplasma Terlihat Kurang Cerah Fiksasi Kering Menggunakan Giemsa K ua nt it as I nt erpre ta si H as il P re pa ra t A pus an P ap S m ea r 100% 0% 87.50% 12.50% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 120% Fiksasi Basah Menggunakan Papanicolaou Inti Sel Terlihat Jelas Inti Sel Terlihat
Kurang Jelas
Sitoplasma Terlihat Cerah Sitoplasma Terlihat Kurang Cerah Fiksasi Basah Menggunakan Papanicolaou K ua nt it as I nt erpre ta si H as il P re pa ra t A pus an P ap S m ea r
Berdasarkan  gambar  2  mendapatkan  hasil  dari  gambar  diatas  dapat  dilihat  bahwa metode fiksasi kering menggunakan giemsa dan fiksasi basah menggunakan papanicolaou mendapatkan  hasil  yang  berbeda,  namun  hasil  pemeriksaan  tersebut  harus  dilanjutkan dengan analisis menggunakan uji Chi Square yang diolah menggunakan program Statistical Product and Service Solution (SPSS) 22.00. Hasil uji hipotesis yaitu uji Chi-Square , nilai signifikan yang didapatkan adalah p = 0,064 artinya tidak terdapat perbedaan antara metode fiksasi  kering  menggunakan  giemsa  dan  fiksasi  basah  menggunakan  papanicolaou  pada pemeriksaan pap smear

## Pembahasan
Penelitian menggunakan sampel swab  vagina  yang  didapatkan  dari  8 responden  wanita. Pengambilan  sampel pap  smear  dilakukan  oleh  dokter.  Bahan pemeriksaan yang telah diambil diapuskan di  kaca  objek  dan  masing-masing dilakukan  fiksasi  kering  diudara  terbuka sebelum pewarnaan giemsa dan dilakukan fiksasi menggunakan alkohol 96% sebelum  pewarnaan  papanicolaou  dan dilakukan pengamatan secara mikroskopis .
Hasil  pemeriksaan  analisa  metode fiksasi  basah  menggunakan  pewarnaan papanicolaou  pada  pemeriksaan  pap smear yaitu inti sel terlihat jelas 100%, inti sel kurang jelas yaitu 0%  dan sitoplasma cerah 87,50%, Sitoplasma Terlihat Kurang  Cerah  12,50%,  hasil  analisa metode  fiksasi  kering  menggunakan pewarnaan giemsa pada pemeriksaan pap smear yaitu Inti sel terlihat jelas 75%, inti
sel  terlihat  kurang  25%  dan  sitoplasma cerah  37,50%,  sitoplasma  kurang  cerah 62,50%.
Hasil  uji  hipotesis  yaitu  uji Chi- Square ,  nilai  signifikan  yang  didapatkan adalah p =  0,064  artinya  tidak  terdapat perbedaan  antara  metode  fiksasi  kering menggunakan  giemsa  dan  fiksasi  basah menggunakan papanicolaou pada pemeriksaan pap smear.
Kemampuan  diagnostik  pewarnaan Papanicolaou dan Leishman-Geimsa pada smear  sitologi  yang  menunjukan  bahwa tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan secara  statistik  yaitu p =  0,8  ( p ≥  0,05) pada  penelitian  Apurva, et.al (2018).
Secara  statistik  didapatkan  kemiripan yang  signifikan  dapat  diamati  pada  dua kelompok,  antara  apusan  basah  diikuti dengan pewarnaan papanicolaou digunakan untuk melihat inti sel sedangkan  apusan  kering  udara  diikuti dengan pewarnaan romanowsky
digunakan untuk mengamati detail sitoplasma pada penelitian Bahadure, et.al (2020).
Fiksasi spesimen sitologi yang sempurna adalah prasyarat untuk diagnosis sitologi dengan benar. Hasil dari fiksasi  tersebut  akan  memungkinkan pewarnaan  menjadi  jelas  dan  tentunya menghasilkan  diagnosis  yang  benar. Fiksasi  pada  sediaan  sitologi  terbagi menjadi  beberapa  bagian  yaitu  fiksasi kering,  fiksasi  lembab  dan  fiksasi  basah (Khristian, 2017). Fiksasi basah pap smear dengan menggunakan alkohol 96% fiksasi dilakukan  segera  setelah  dibuat  apusan dan direndam minimal 30 menit (KemenKes, 2015).
Hasil  pemeriksaan  analisa  metode fiksasi  basah  menggunakan  pewarnaan papanicolaou  pada  pemeriksaan  pap smear  cenderung  baik  jika  dibandingkan dengan metode fiksasi kering menggunakan  pewarnaan  giemsa  pada pemeriksaan  pap  smear,  karena  metode fiksasi  basah  dengan  diikuti  pewarnaan papanicolaou  merupakan Gold  Standard dalam fiksasi dan pewarnaan sitologi pap smear  serta  dalam  praktik  prosedur pewarnaan  Geimsa  pada  apusan  kering udara tidak memerlukan fiksasi tambahan seperti  pada  Papanicolaou  dan  dapat diselesaikan dalam waktu kurang dari 10
menit, dengan pengeluaran paling sedikit. Teknik  pewarnaan  Geimsa  ditemukan memberikan hasil yang sebanding dengan Papanicolaou  dan  dengan  keuntungan prosedur  satu  langkah,  efektivitas  biaya dan  penghematan  waktu  (KemenKes, 2015 dan Apurva et.al , 2018).
Fiksasi kering digunakan dengan cara lakukan  apusan  tipis  pada  slide  dan keringkan,  berfungsi  pada  pemeriksaan Papsmear  konvensional,  aspirat  BAJaH dilakukan menggunakan pewarnaan giemsa.  Fiksasi  basah  pap  smear  dengan menggunakan alkohol 96% fiksasi dilakukan  segera  setelah  dibuat  apusan dan  direndam  minimal  30  menit  diikuti dengan pewarnaan papanicolaou (KemenKes, 2015).
Tidak  terdapat  perbedaan  antara metode  fiksasi  kering  menggunakan giemsa  dan  fiksasi  basah  menggunakan papanicolaou  pada  pemeriksaan  pap smear  karena  sampel  diambil  dari  sekret vagina yang sama dan dibuat dua preparat untuk dilakukan fiksasi kering dan fiksasi basah  serta  dilakukan  pewarnaan  giemsa untuk preparat fiksasi kering dan dilakukan pewarnaan papanicolaou untuk fiksasi  basah  dan  dilakukan  pengamatan menggunakan mikroskop.

## Simpulan Dan Saran
Berdasarkan  hasil  penelitian  analisa metode  fiksasi  kering  menggunakan giemsa  dan  fiksasi  basah  menggunakan papanicolaou  pada  pemeriksaan  pap smear maka diperoleh kesimpulan sebagai berikut:
1. Tidak  terdapat  perbedaan  metode fiksasi kering menggunakan pewarnaan  giemsa  pada  pemeriksaan pap smear
2. Tidak  terdapat  perbedaan  metode fiksasi basah menggunakan pewarnaan
papanicolaou  pada  pemeriksaan  pap
smear
3. Metode  fiksasi  kering  menggunakan pewarnaan  giemsa  pada  pemeriksaan pap smear didapatkan inti sel jelas yaitu 75%,  inti  sel  kurang  cerah  25%  dan sitoplasma  cerah  37,50%,  sitoplasma kurang  cerah  yaitu  62,50%  sedangkan metode  fiksasi  basah  menggunakan pewarnaan papanicolaou pada pemeriksaan pap smear didapatkan inti sel  jelas  yaitu  100%,  inti  sel  kurang jelas  yaitu  0%  dan  sitoplasma  cerah yaitu 87,50%, sitoplasma kurang cerah 12,50%.

## Saran
Berdasarkan  penelitian  ini,  penulis memberikan saran kepada peneliti selanjutnya yaitu sebagai berikut:
1. Perlu  dilakukan  pengaruh  lama pengeringan  di  udara  terbuka  dan mendapatkan lama pengeringan 2 jam dalam  fiksasi  kering  yang  diwarnai dengan pewarnaan giemsa.
2. Perlu dilakukan metode fiksasi kering sediaan  yang  dikeringkan  di  udara terbuka  dan  dimasukkan  ke  dalam pendingin  baru  kemudian  difiksasi dengan  alkohol  memberikan  hasil yang terbaik dalam pewarnaan giemsa.

## DAFTAR PUSTAKA
Andayani  G  A  S  dan  Sriasih  N  M. 2016. The  Quality  of  Colouring and  Time  Effectivity  of  Staining using Rapid ST Reagensia Compared to Giemsa Dye on The Identification  of  Malaria  Slide. Karya Ilmiah PLP pada SENASLAB. 225-231 Anggraeni  Suci.  2017. Self efficacy wanita usia subur untuk Melakukan  pap  smear  ditinjau dari  Pengetahuan  dan  dukungan suami .  Viva  Medika.  10(18):  86- 93
Apurva Agrawal, et.al . 2018. Comparative  Analysis  Study  of
Efficacy of Papanicolaousmear &
Leishman-Giemsa Cytological Technique in the Diagnosis of Oral Neoplastic  Lesions. International Journal  of  Science  and  Research
(IJSR). Vol 8(2)
Bahadure Shweta, et.al . 2020. Rehydration  of  Air-dried  Smears for  Papanicolaou  Staining  in Cytopathological Section of Department of Pathology . International  Journal  of  Current Research  and  Review    12(22)  ;
133-136
Dahlan, Muhammad Sopiyudin. 2014. Statistik  untuk  Kedokteran dan Kesehatan: deskriptif, bivariat dan multivariat, dilengkapi aplikasi  dengan  menggunakan SPSS . Jakarta. Epidemiologi Indonesia Damanik  E  M,  dkk .  2019. Prevalensi Risiko  Tinggi  Displasia  Cerviks Pada  Metode  Iva  Positif  dan Papsmear di Puskesmas Bakunase Kota  Kupang. Cendana  Medical Journal 18( 3): 394-402
Doddagowda,  Shilpa  Manigatta, et.al . 2017 .  Leishman-Giemsa Cocktail
-  Is  it  an  Effective  Stain  for  Air
Dried Cytology Smears. Journal of Clinical and Diagnostic Research. Vol-11(3): 16-18
Herlana F, Nur M I, dan Purbaningsih W.  2017. Karakteristik  Pasien Kanker  Serviks  berdasar  atas Usia,  Paritas,  dan  Gambaran Histopatologi  di  RSUD  Al-Ihsan Bandung. Artikel  Penelitian  01
(02): 138-142 Kementerian  Kesehatan  RI.  2015. Buku Pedoman Pelayanan Patologi Anatomi.
Kementerian  Kesehatan  RI.  2015.
Situasi  Penyakit  Kanker .  Buletin jendela pusat data dan informasi.
Khristian  E  dan  Inderiati  D.  2017.
Sitohistoteknologi. Bahan  Ajar Teknologi
Laboratorium Medis(TLM). Musyarifah  Z  dan  Agus  S.  2018.
Proses Fiksasi pada Pemeriksaan Histopatologik. Jurnal  Kesehatan Andalas.7(3): 443-453 Nefertiti Eva Pravitasari, 2018. Cervix carcinoma:  pathological  aspect .
Oceana Biomedicina Journal 1(2) : 103-115 Nindrea Ricvan Dana, 2017. Prevalensi dan  Faktor  yang  Mempengaruhi Lesi  Pra  Kanker  Serviks  Pada Wanita . Journal Endurance 2(1):53-61 Priyatno,  Duwi.  2016. Belajar  Alat Analisis Data dan Cara Pengolahannya dengan SPSS Praktis  dan  Mudah  Dipahami untuk Tingkat Pemula dan Menengah. Yogyakarta  :  Gava Media
Ramadini  Indri.  2017. Hubungan deteksi  dini  (pap  smear)  dengan kejadian  kanker  serviks  di  poli obgyn. Jurnal  Endurance  3(1):  7- 13
Safitri N dan Eriya, 2016. Animasi 3D untuk  Media  Sosialisasi  Kanker Serviks  pada  Kelurahan  Pekojan. Jurnal Multinetics 2(1): 69-83 Samari  H,  Dewi  S  S,dan  Iswara  A. 2018. Perbedaan hasil pengecatan papanicolaou  Pada preparat apus sitologi Dan sito blok . Manuscript Siswanto,  Susila,  Suyanto.  2013.
Metodelogi  Penelitian  Kesehatan dan Kedokteran . Yogyakarta:
Bursa Ilmu.
Sugiyono.  2018. Metode  Penelitian Kuantitatif,  Kualitatif  dan  R&D . Bandung: Alfabeta