Abstrak — Padi  ( Oryza  sativa L.)  merupakan  tanaman  pangan pokok  lebih dari separuh penduduk dunia. Padi varietas Lallodo merupakan  padi  lokal  dataran  tinggi  Toraja  dengan  nilai produksi  gabah  giling  tertinggi.  Salah  satu  upaya  mendapatkan varietas  unggul  demi  memenuhi  kebutuhan  pangan  adalah induksi  mutagen  kimia,  salah  satunya Ethyl Methane Sulphonate (EMS). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mempelajari efek EMS  pada  morfologi  akar.  Parameter  yang  diamati  pada penelitian  ini  adalah  daya  kecambah,  panjang  akar  dan  bentuk rambut  akar  kecambah  padi  Lallodo  yang  dipapar  dengan larutan  EMS  pada  konsentrasi  0%;  0.25%;  0.5%;  0.75%;  1%; 1.25%;  1.5%,  dan  2%.  Selanjutnya  nilai  daya  kecambah  dan panjang  akar  dianalisis  dengan  menggunakan  ANOVA  oneway dengan  dilanjutkan  uji  Duncan.    Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  perlakuan  EMS  berpengaruh  terhadap  panjang  akar kecambah  padi  dimana  perlakuan  EMS  0%;  0,25%;  dan  0,50% mempengaruhi  panjang  akar  secara  tidak  signifikan.  Perlakuan EMS juga berpengaruh pada daya kecambah pada hari 1 hingga 3,  tetapi  tidak  berpengaruh  pada  daya  kecambah  hari  4. Pengamatan visual morfologi rambut akar dengan mikroskop dan SEM  ( Scanning  Electron  Microscope )  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  EMS  maka  rambut  akar  semakin pendek dan kerapatannya semakin jarang.
Kata Kunci — EMS, Padi, Rambut Akar, var. Lallodo.

## I. PENDAHULUAN
ANAMAN  padi  ( Oryza  sativa L.)  merupakan  tanaman pangan  penting  yang  telah  menjadi  makanan  pokok lebih dari  setengah  penduduk  dunia.  Di  Indonesia,  padi  merupakan komoditas  utama  dalam  menyokong  pangan  masyarakat. Indonesia sebagai negara dengan jumlah penduduk yang besar menghadapi  tantangan  dalam  memenuhi  kebutuhan  pangan penduduk.  Oleh  karena  itu,  kebijakan  ketahanan  pangan menjadi  fokus  utama  dalam  pembangunan  pertanian. Kebutuhan  akan  beras  terus  meningkat  seiring  dengan  laju pertumbuhan  penduduk  yang  lebih  cepat  dari  pertumbuhan produksi pangan yang tersedia[1].
Padi  varietas  Lallodo  merupakan  salah  satu  padi  lokal dataran tinggi khas Tanah Torajayang memiliki nilai produksi gabah kering giling tertinggi dengan usia panen 155,4 hari [2]. Padi  varietas  ini  mengandung  pigmen  paling  baik  dari  padi putih,  warna  pada  perikarpnya,  aleuron,  dan  endospermnya seragam yaitu merah, biru, dan ungu pekat yang menunjukkan kandungan  antosianin  [3][4],  dan  [5].  Padi  varietas  Lallodo memiliki  beberapa  keunggulan  diantaranya  tekstur  nasi  yang
pulen dengan kadar amilosa 0,260%, kadar protein tinggi yaitu 10,635%,  kadar  glukosa  rendah  yaitu  1,113%,  kadar  serat tinggi  yaitu  1,49%,  kandungan  vitamin  B  yang  tinggi,  tahan terhadap  OPT,  serta  kemampuan  adaptasi  yang  baik  pada dataran dengan ketinggian 700-2000 mdpl [2][6].  Namun padi hitam varietas Lallodo memiliki umur panen lebih lama yakni ±  155  hari,  dibandingkan  dengan  varietas  padi  hitam  lainnya seperti pae Ambo dan melik hitam (umur panen ± 130 dan 120 hari)  [2][7].  Perbedaan  usia  panen  dipengaruhi  oleh berbedanya  kemampuan  penyerapan  nutrisi  yang  dibutuhkan untuk memproduksi biji [8].
Salah  satu  organ  yang  berperan  penting  dalam  penyerapan nutrisi adalah akar. Pada permukaan akar terdapat rambut akar yang merupakan sel epidermis khusus dengan luas permukaan besar  yang  terpapar  langsung  dengan  tanah  dam  berfungsi dalam  penyerapan  hara  dan  mineral  [9][10].  Semakin  banyak rambut  akar  maka  luas  permukaan  akar  akan  semakin  besar dan memungkinkan tumbuhan untuk menjangkau  air dan hara mineral    di  tempat  yang  jauh  dari  tumbuhan  tersebut  tumbuh. Dengan  demikian  pertumbuhan  suatu  tanaman  diharapkan dapat  mengalami  peningkatan  jika  terdapat  peningkatan pertumbuhan rambut akar.
Senyawa  EMS  merupakan  senyawa  alkil  yang  mengubah guanin  menjadi  7-etilguanin  yang  berpasangan  dengan  timin dan banyak digunakan untuk menuningkatkan keanekaragaman genetik tanaman [11][12]. Penelitian mutasi pada rambut akar tanaman  padi  dengan  menggunakan  EMS  ( Ethylene  Methane Sulfonat )  telah  dilakukan  oleh  [13],  dan  menunjukkan  terjadi pengurangan panjang dan kerapatan rambut akar. Namun pada penelitian  tersebut  belum  dapat  ditentukan  konsentrasi  EMS manakah  yang  bersifat  menguntungkan  dengan  meningkatkan jumlah rambut akar tanaman padi. Berdasarkan uraian di atas, maka penelitian ini akan melakukan uji pemberian EMS pada berbagai  variaasi  konsentrasi  terhadap  bentuk  dan  jumlah rambut akar kecambah padi varietas Lallodo.

## II. METODE PENELITIAN

## A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Desember  2018 hingga  bulan  Januari  2019  di  Laboratorium  Biosains  dan Teknologi  Tumbuhan  Departemen  Biologi  Fakultas  Sains, Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya.

## Pengaruh Ethyl Methane Sulphonate (EMS) terhadap Morfologi Akar Kecambah Padi

## ( Oryza sativa ) Varietas Lallodo
Retty Asti Ogtavia Pratiwi dan Dini Ermavitalini Departemen Biologi, Fakultas Sains, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
e-mail : dinierma@bio.its.ac.id
T
Gambar 1.  Grafik prosentase perkecampahan biji padi Lallodo selama 4 hari.
Gambar 2.  Pertukaran Grafik Panjang Akar Kecambah Padi varietas Lallodo.

## A. Persiapan Benih
Benih yang akan digunakan sebagai bahan penelitian dipilih terlebih  dahulu  dengan  cara  direndam  didalam  air.  Apabila benih  tenggelam  maka  benih  tersebut  yang  akan  digunakan. Benih  dicuci  dengan  deterjen  (merk  Sunlight)  dan  direndam selama 15 menit, Pencucian ini digunakan untk membersihkan kotoran  pada  benih.  Kemudian  benih  dibilas  dengan  akuades. Setelah itu benih direndam dalam fungisida 2 % (merk DuPont Acapela  system  280  SC)  selama  15  menit.  Selanjutnya  benih ditiriskan dan dicuci dengan akuades steril untuk menghilangkan  sisa  larutan  fungisida  [14].  Pada  bilasan terakhir, benih direndam dengan akuades selama 24 jam untuk meningkatkan kemampuan imbibisi benih.

## B. Perendaman Biji Padi dengan EMS
Benih  padi  direndam  ke  dalam  100  ml  aquadest  di  dalam gelas  beker  pada  suhu  ruangan  selama  24  jam.  Benih  yang telah  direndam  dikeringkan  diatas  kertas  saring.  Benih  yang digunakan  untuk  kontrol  hanya  direndam  dengan  akuades. Sedangkan  pada  perlakuan  menggunakan  EMS,  benih direndam  dalam  50  ml  EMS  konsentrasi  0.25  %;  0.5  %; 0.75%; 1 %; 1.25 %; 1.5 % dan 2% selama 4 jam. Benih yang telah  direndam  kemudian  dibilas  dengan  akuades  steril  untuk menghilangkan sisa mutagen [15] dengan modifikasi.

## C. Perkecambahan Benih Padi
Perkecambahan  dilakukan  dengan  menyemai  benih  padi yang  telah  direndam  di  atas  kertas  saring  yang  telah  dibasahi dengan  aquades  steril  di  dalam  cawan  petri.  Pada  tiap  cawan petri  diletakkan  10  benih  padi.  Perkecambahan  dilaksanakan sampai  akar  muncul.  Pengamatan  pada  akar  dilakukan  pada akar yang berusia 4 hari dihitung dari hari pertama munculnya akar.  Banyaknya  biji  yang  berkecambah  dihitung  setiap harinya.  Pada  hari  keempat  panjang  akar  kecambah  dihitung dengan menggunakan penggaris.

## D. Pengamatan  menggunakan  SEM  (Scanning  Electron Microscope)
Bagian akar umur 4 hari yang akan diamati secara hati hati dipindah dengan menggunakan pinset dari media
perkecambahan  untuk  segera  diletakkan  dalam  larutan glutaraldehyde 2.5 % selama semalam dalam suhu 4 ˚C sampai dengan  dilakukan  analisa  menggunakaan  SEM.  Pada  saat dilakukan analisa SEM, akar apikal dipotong sepanjang 0.5 cm yang  terdiri  dari  bagian  ujung  akar,  zona  pemanjangan  dan zona  rambut  akar  dewasa.  Pada  sampel  dilakukan  dehidrasi pada  seri etanol bertingkat dengan konsentrasi 50, 70, 95 dan 100  %.  Selanjutnya  sampel  dilapisi  oleh  Pt  dan  2  nm  lapisan karbon. Selanjutnya sampel siap dilakukan pengamatan dengan SEM  type  Zeiss  1555  VP-FESEM  dengan  sinyal  sekunder electron sebesar 5 Kv. Sebanyak 3 area pengamatan dilakukan pada masing masing perlakuan [16].

## E. Analisis Data
Penelitian  ini  dianalisa  secara  deskriptif    dan  kuantitatif. Analisa  secara  dekriptif  memberikan  deskripsi  pengamatan SEM pada panjang dan kerapatan rambut akar masing masing perlakuan  konsentrasi  EMS.  Sedangkan  analisa  kuantitatif dilakukan  dengan  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  terhadap  persentase  daya  kecambah  dan  panjang  akar. RAL  terdiri  dari  satu  faktor  yakni  konsentrasi  mutagen  EMS (8 taraf; 0%, 0.25 %; 0.5 %; 0.75%; 1 %; 1.25 %; 1.5 % dan 2%).  Pengulangan  dalam  penelitian  ini  dilakukan  sebanyak  4 kali, dimana setiap ulangan terdiri dari 10 benih padi sehingga didapatkan 32 unit percobaan dengan total 320 benih biji uji.
Data  panjang  dan  jumlah  rambut  akar  kecambah  padi dianalisis  dengan  menggunakan  ANOVA Oneway taraf kepercayaan  95%.  Analisis  dilakukan  dengan  menggunakan software SPSS.
Adapun hipotesa analisa sebagai berikut:
1. H 0 :  Tidak  ada  pengaruh  penambahan  EMS  terhadap jumlah  dan  panjnag  rambut  akar  kecambah  benih  padi ( Oryzae sativa ) varietas Lallodo
2. H 1 :    Ada  pengaruh  penambahan  EMS  terhadap  jumlah dan  panjang    rambut  akar  kecambah  benih  padi ( Oryzae sativa ) varietas Lallodo
3. Jika  H 1 diterima  maka  dilanjutkan  dengan  uji  Duncan dengan tingkat kesalahan 5%.
Gambar  3.  Bentuk  rambut  akar  kecambah  padi  Lallodo  menggunakan  SEM (a) EMS 0% (b) EMS 0.25% (c) EMS 0.5% (d) EMS 0.75%  (e) EMS 1%  (f) EMS 1.25%  (g) EMS 1.5% dan (h) EMS 2%. Perbesaran 500x

## III. HASIL DAN DISKUSI
A. Pengaruh  Konsentrasi  EMS  terhadap  Daya  Kecambah Benih Padi Varietas Lallodo
Data  persentase  perkecambahan  pada  Gambar  4.1 menunjukkan  bahwa  biji  padi  hitam  Lallodo  yang  diberi perlakuan perendaman dengan EMS dengan konsentrasi 0.25% hingga  2%  memiliki  prosentase  perkecambahan  diatas  90% pada  hari  keempat.  Nilai  prosentase  perkecambahan  tertinggi terdapat  pada  perlakuan  kontrol  (EMS  0%)  yaitu  sebesar 100%  yang  dicapai  pada  hari  kedua,  sedangkan  persentase terkecil  pada  hari  keempat  terdapat  pada  biji  yang  direndam dengan  EMS  konsentrasi  2%.  Secara  umum  jumlah  biji  yang berkecambah  meningkat  setiap  harinya.  Namun  peningkatan persentase perkecambahan yang paling besar terjadi  pada hari kedua  dan  ke  tiga  pada  biji  dengan  perendaman  EMS konsentrasi > 0.25%.
Hasil statistik menggunakan ANOVA oneway menunjukkan bahwa  daya  kecambah menunjukkan nilai signifikansi sebesar >  0.05  pada  hari  ke  1 – 3,  kecuali  pada  hari  ke  4.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  konsentrasi  EMS  berpengaruh  signifikan terhadap  daya  kecambah  padi.  Hal  ini  didukung  dari  hasil  uji lanjutan  menggunakan  uji  Dunnet  yang  menunjukkan perlakuan  EMS  1.5%  dan  2%  memiliki  nilai  signifikan >0.05 pada  hari  ke  1-3.  Menurunnya  kecepatan  perkecambahan
merupakan  dampak  dari  pemberian  mutagen  pada  proses metabolisme  sel  yang  berdampak  pada  perubahan  pada fisiologis sel [17]. Pada saat perkecambahan kelompok protein yang  mengalami  peningkatan  regulasi  adalah  protein  yang berhubungan  dengan  katabolisme  [18].  Hasil  penelitian  [19], menyebutkan  bahwa  EMS  dapat  menurunkan  aktivitas  enzim α -amilase  pada  saat  perkecambahan  padi  hitam  varietas Cempo Ireng. Penurunan aktivitas enzim α -amilase dikarenakan  adanya  perubahan  struktur  pada  sisi  aktif  yang menyerupai substrat. Enzim α -amilase merupakan enzim yang berperan untuk memecah ikatan α -1,4 glikosidik pada amilum sehingga  dapat  menghasilkan  monomer  glukosa  [20]. Terganggunya aktivitas enzim amilase menyebabkan penyediaan energi untuk perkecambahan menjadi terganggu.

## B. Pengaruh  Konsentrasi  EMS  Terhadap  Panjang  Akar Kecambah Padi varietas Lallodo
Perlakuan  EMS  pada  dosis  rendah  yakni  EMS  0.25%  dan 0.5% menunjukkan nilai rata-rata panjang akar sebesar  6,153 cm dan 6,320 cm (Gambar 2). Kedua konsentrasi EMS rendah tidak  berbeda  signifikan  dengan  panjang  akar  EMS  kontrol (nilai  sign  >  0.05).  Hal  ini  disebabkan EMS pada konsentrasi rendah merubah gen yang mempengaruhi biosintesis beberapa hormon  pertumbuhan  yang  berakibat  dalam  pembelahan  dan pemanjangan  sel.  Menurut  hasil  penelitian  [21],  menyatakan bahwa semakin rendah konsentrasi EMS yang digunakan maka EMS  dapat  berfungsi  menjadi  auksin.  Panjang  akar  paling rendah ditunjukkan pada perlakuan EMS 2% dengan rata-rata panjang  akar  1.26  cm.  Hal  ini  disebabkan  sifat  racun  EMS yang  mengganggu  fisiologis  kecambah.  Penurunan  sifat kuantitatif  tanaman  seperti  panjang  akar  disebabkan  mutasi acak  akibat  aksi  mutagen.  EMS  menyebabkan  mutasi  titik melalui  transisi  DNA,  melalui  perubahan  pasangan  basa nukleotida yang mengakibatkan perubahan asam amino [11].

## C. Pengaruh  Konsentrasi  EMS  Terhadap  Bentuk  Rambut Akar Kecambah Padi varietas Lallodo
Bentuk  rambut  akar  pada  pengamatan  dibawah  mikrokop menunjukkan  hasil  yang  berbeda  pada  setiap perlakuan EMS. Perlakuan  EMS  konsentrasi  0.5%;  0.75%;  1%  dan  1.25% secara  visual  menunjukkan  bentuk  rambut  akar  yang  panjang dan lebih rapat dibandingkan kontrol. Berbeda dengan bentuk rambut  akar  pada  perlakuan  EMS  1.5% dan 2% secara visual bentuk  rambut  akarnya  lebih  pendek  dan  kerapatannya  lebih jarang.
Menurut  [21],  semakin  rendah  konsentrasi  EMS  yang digunakan  maka  EMS  dapat  berfungsi  menjadi  auksin. Pendapat  [22],  juga  menjelaskan  bahwa  penggunaan  mutagen kimia  dengan  konsentrasi  rendah  dapat  merangsang  atau menstimulasi pertumbuhan tanaman dan menginduksi fisiologi tanaman. Peningkatan panjang akar dan kecambah diharapkan mampu  meningkatkan  daya  serap  hara  untuk  proses metabolisme dan fotosintesis [23].

## IV. KESIMPULAN/RINGKASAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan  EMS berpengaruh  terhadap  panjang  akar  kecambah  padi  dimana
perlakuan  EMS  0%;  0,25%;  dan  0,50%  mempengaruhi panjang  akar  secara  tidak  signifikan.  Perlakuan  EMS  juga berpengaruh pada daya kecambah pada hari 1, 2, dan 3 tetapi tidak  berpengaruh  pada  daya  kecambah  hari keempat. Bentuk rambut  akar  diketahui  dengan  pengamatan  mikroskop  dan Scanning  Electon  Microscopy (SEM)  dimana  secara  visual hasil  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  EMS maka  bentuk  rambut  akar  semakin  pendek  dan  kerapatannya semakin jarang.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] F. A. Anggraini and N. A. Suryanto, “ Sistem tanam dan umur bibit pada tanaman padi sawah (Oryza sativa L.) varietas inspasri 13, ” J. Produksi Tanam. , vol. 1, no. 2, 2013.
[2] Y.  Limbongan  and  F.  Djufri., “ Karakterisasi  dan  Observasi  Lima Aksesi  Padi  Lokal  Dataran  Tinggi  Toraja,  Sulawesi Selatan, ” Bull. Plasma Nutfah , vol. 21, no. 2, pp. 61 – 70, 2015. [3]
D.  Suardi  and  I.  Ridwan., “ Beras  hitam,  pangan  berkhasiat  yang belum  populer, ” War.  Penelit.  dan  Pengemb.  Pertan. ,  vol.  31,  no. 2, pp. 9 – 10, 2009.
[4] T.  Kristantini,  P.  Basunanda,  R.  H.  Murti,  Supriyanta,  S. Widyayanti, and Sutarno., “ Morphological of Genetic Relationships Among  Black  Rice  Landraces  from  Yogyakarta  and  Surrounding Area, ” ARPN J. Agric. Biol. Sci. , vol. 7, no. 12, pp. 982 – 987, 2012.
[5]
R.  Sa ’ adah,  Supriyanta,  and  Subedjo, “ Keanekaragaman  warna gabah dan warna beras varietas lokal padi beras hitam (Oryza sativa L.) yang dibudidayakan oleh petani kabupaten Sleman, Bantul, dan Magelang, ” Vegetalika , vol. 2, no. 3, pp. 13 – 20, 2003.
[6] Pusat  Perindungan  Varietas  Tanaman, “ Berita  Resmi  PVT Tanaman  Padi  Varietas  Hitam  Melik  A3  No  publikasi 34/BR/PVL/11/2016, ” 2016.
[7] Pusat  Perindungan  Varietas  Tanaman, “ Berita  Resmi  PVT Tanaman Padi Varietas Lallodo. No publikasi 54/BR/PVL/02/2014, ” 2014.
[8] H.  Kim,  O.-W.  Kim,  A.  W.  Ha,  and  S.  Park., “ Determination  of Optimal  Harvest  Time  of  Chuchung  Variety  Green  Rice Ⓡ (Oryza sativa  L.)  with  High  Contents  of  GABA,  γ - Oryzanol,  and  α - Tocopherol, ” Preview  Nutr.  Food  Sci. ,  vol.  21,  no.  2,  pp.  97 – 103,
2016. [9]
N.  Tanaka et  al. , “ Characteristics  of  a  root  hair-less  line  of Arabidopsis  thaliana  under  physiological  stresses, ” J.  Exp.  Bot. , vol. 65, no. 6, pp. 1497 – 1512, 2014.
[10] N. A. Campbell, J. B. Reece, and L. G. Mitchell., Biologi Edisi ke 5 Jilid 2 . Jakarta: Erlangga, 2000.
[11] C.  VL.  Mutagenesis, “ Investigating  the  process and  processing  the outcome  for  crop  improvement, ” J.  Curr.  Sci. ,  vol.  89,  pp.  353 – 359, 2005.
[12] M.  Imelda,  P.  Deswina,  S.  Hartati,  A.  Estiati,  and  S.  Atmowijoyo, “ Chemical mutation by Ethyl Methane Sulfonate (EMS) for bunchy top  virus  resistence  in  Banana, ” Ann.  Bogor. ,  vol.  7,  pp.  19 – 25,
2000. [13] L.  Wang,  B.  Zhang,  L.  Jinrui,  Y.  Xiaoyu,  and  Z.  Ren, “ Ethyl
Methane Sulphonate (EMS) – Mediated Mutagenesis of Cucumber ( Cucumis sativus ), ” Agicultural Sci. , vol. 5, pp. 716 – 721, 2014.
[14] B.  S.  Putra  and  K.  I.  Purwani., “ Pengaruh  mutagen  kimia  EMS (Ethyl  Methane  Sulphonate)  terhadap  daya  kecambah  benih tanaman tembakau var. Marakot, ” J. Sains dan Seni POMITS , vol. 6, no. 2, pp. E89 – E92, 2017.
[15] A.  B.  Talebi,  A.  B.  Talebi,  and  B.  Shahrokhifar., “ Ethyl  Methane Sulphonate  (EMS)  Induced  Mutagenesis  in  Malaysian  Rice  (cv. MR219)  for  Lethal  Dose  Determination, ” Am.  J.  Plant  Sci. ,  vol. 2012, no. 3, pp. 1661 – 1665, 2012.
[16] C.  Martin,  J.  Statton,  D.  Gleeson,  and  A.  R.  Siebers, “ Low  Light Availability Alters Root Exudation and Reduces Putative Beneficial Microorganisms  in  Seagrass  Roots, ” Front.  Microbiol. ,  vol.  8,  pp. 1 – 16, 2018.
[17] A.  Sonavane., “ Effects  of  EMS  and  SA  on  seed  germination precentage  in  M1  generation  of  Psophocarpus  tetragonolobus  (L.) Dc, ” Int. J. Bioassays , vol. 5, no. 11, pp. 5056 – 5058, 2016.
[18] D.  He,  C.  Han,  and  P.  Yang, “ Gene  expression  profile  changes  in germinating  rice, ” J.  Intregative  Plant  Biol. ,  vol.  53,  no.  10,  pp. 835 – 844, 2011.
[19] N.  Pramadhita, “ Pengaruh  Etil  Metan  Sulfonat  (EMS)  dan Giberelin  Terhadap  Perkecambahan  Serta  Pertumbuhan  Awal  Padi Hitam (Oryza sativa L. ‘ Cempo Ireng ’ ), ” Yogyakarta, 2015.
[20] E.  McMurry, Organic  Chemistry  with  Biological  Application .
USA: Brooks/ Cole, 2011.
[21] W.  Agung  and  Priyono, “ Respon  regenerasi  in  vitro  eksplan  sisik mikro  Kerk  Lily  (Lilium  longiflorum)  terhadap  Ethyl  Methane Sulfonate  (EMS), ” Jurnal.  Ilmu  Dasar ,  vol.  3,  no.  2,  pp.  74 – 79,
2002. [22] R.  Potdukhe, “ Effect  of  Physical  and  chemical  mutagens  in  M1 generation in red gram (Cajanus cajan), ” Nat. J. Pl. Improv. , vol. 6, no. 2, pp. 108 – 111, 2004.
[23] S.  Arous,  M.  Boussaid,  and  M.  Marrakchi., “ Plant  regeneration from  zygotic  embryo  hypocotyls  of  Tunisian  chili  (Capsicum annum L.), ” J. Appl. Hort , vol. 3, pp. 17 – 22, 2001.