## Bioeksperimen
Volume 2 No.2, (September 2016) ISSN 2460-1365
PENGARUH CAHAYA DAN TEMPERATUR TERHADAP PERTUMBUHAN TUNAS DAN PROFIL PROTEIN TANAMAN ANGGREK Phalaenopsis amabilis TRANSGENIK PEMBAWA GEN Ubi pro ::PaFT
Effect of Light and Temperature on Shoot Growth and Protein Profile of Transgenic PhalaenopsisamabilisOrchid Carrying Ubi pro ::PaFT Gene
Rinaldi Rizal Putra 1) , Ixora Sartika Mercuriani 2) , Endang Semiarti 3) 1) Jurusan Pendidikan Biologi FKIP Universitas Siliwangi, Jl. Siliwangi No. 24 Kota Tasikmalaya46115
2) Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Negeri Yogyakarta Kampus Karangmalang, Jl. Colombo No. 1 Yogyakarta 55281
3) Laboratorium Bioteknologi Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada, Jl. Teknika Selatan, Sekip Utara, Yogyakarta 55281 rinaldi.rizalputra@gmail.com, endsemi@ugm.ac.id
Abstract– This research aimed to analyze the influence of light and temperature on morphology growth, to analyze protein profiles, and to determine the right condition of flowering acceleration of trasgenic Phalaenopsisamabilis withdeterminant gene of flowering time, Ubipro::PaFT, inserted. The method used was transgenic plants carrying the Ubipro::PaFT gene aged of 18 months after sowing. Plants were grown in incubators with certain lighting conditions using white LED light and combination of white and blue LED lights with an intensity mean of 1780 lm, photoperiod of 8-hour light phase and 16-hour dark phase, and temperature of 25ºC (light phase) and 20ºC (dark phase) for 20 weeks. After 20 weeks of plant growth, protein profiles of transgenic plants were analyzed by SDS-PAGE method to determine protein product in each of observed growth phase.The results showed that a  combination  of  white  and  blue  light  increases  the  number  of  leaves  by  60.00%  and  leaf  length  by  70.58%, respectively, but there was no significant effect on the increase of number of roots, and appearances of inflorescence observed. Analysis resultson protein profiles suggestedthe establishment of proteins with sizes of108.57; 71.30; 56.16; 40.85; 26.79; 13.27;and 13.12 kDa in transgenic plants. The presence of 19,65-kDa proteinmatched to the molecular weight of PaFT protein was not detected, while protein with a molecular weight approximately 56,16 kDa suited to POH1 (Phalaenopsis Orchid Homeobox1) protein was found. It could be explained that the POH1 vegetative gene can be inhibit the activation of PaFT gene in P. amabilis transgenic plants age of 20 weeks, until the plant are still in juvenile phase and can’t be inducible to flowering activities.
Keywords: Phalaenopsis amabilis, light and temperature, PaFT, POH1, protein profile
Abstrak– Penelitian ini bertujuan untuk mencari kondisi yang tepat dalam percepatan pembungaan tanaman Phalaenopsis amabilis transgenik yang telah disisipi gen penentu waktu pembungaan Ubi pro:: PaFT . Metode penelitian ini menggunakan tanaman transgenik pembawa gen Ubi pro:: PaFT umur 18 bulan setelah penanaman. Tanaman ditumbuhkan pada inkubator dengan pencahayaan menggunakan lampu LED putih dan kombinasi LED putih biru, dengan fotoperiodisitas 8 jam terang 16 jam gelap, suhu 25ºC pada fase terang dan 20ºC pada fase gelap selama 20 minggu. Setelah 20 minggu pertumbuhan tanaman, dilakukan analisis profil protein dengan metode SDS-PAGE untuk mengetahui protein yang diproduksi pada setiap fase pertumbuhan yang diamati.Hasil penelitian menunjukkan kombinasi cahaya LED putih dan biru meningkatkan pembentukan daun sebesar 60%, panjang daun  70,58%,  tetapi  belum  diperoleh  kemunculan  infloresen.  Analisis  profil  protein  menunjukkan terbentuknya protein dengan ukuran 108,57; 71,30; 56,16; 40,85; 26,79; 13,27; dan 13,12 kilodalton pada

## PENDAHULUAN
Anggrek Bulan Phalaenopsis amabilis merupakan salah satu dari sekian banyak jenis anggrek alam yang menjadi kebanggaan Indonesia (Indrianto, 2002) dan terpilih sebagai salah satu Puspa Pesona Indonesia pada tahun 1990 (Sulistianingsih et al. , 2006) karena memiliki keindahan dan nilai kultural yang tinggi (Badriah dan Sutater, 1996). Bentuk dan warna bunga yang sangat indah menjadi daya tarik tersendiri bagi para pecinta anggrek yang membuat nilai jualnya tinggi di pasaran, sehingga diperlukan suatu usaha memuliakan tanaman ini seperti frekuensi berbunga yang tinggi (Sulistianingsih et al. , 2006) dan proses pembungaan yang cepat (Jumani, 2010)
Pertumbuhan anggrek yang optimal akan berdampak positif pada proses pembungaannya. Hal tersebut didukung oleh dua faktor utama, yaitu faktor intrinsik dan faktor ekstrinsik. Faktor intrinsik yang berpengaruh pada proses pembungaan antara lain: gen, hormon endogen, dan umur tanaman. Sedangkan faktor ekstrinsik yang berpengaruh pada proses pembungaan antara lain: cahaya, temperatur, kelembaban, ketersediaan nutrisi,  dan  induksi  fitohormon  secara eksternal (Hew and Yong, 2004). Semua faktor tersebut saling berhubungan untuk mendukung pertumbuhan tanaman secara optimal.
Penelitian dengan anggrek P. amabilis telah dilakukan sebelumnya oleh Mercuriani et al. (2014) berkaitan dengan
pembungaan anggrek melalui penyisipan gen Ubi pro:: PaFT , induksi hormon Benziladenin  (BA),  dan  perlakuan  fisik dengan cara pemotongan akar. Gen Ubi pro:: PaFT telah berhasil disisipkan pada genom tanaman anggrek P. amabilis yang dibuktikan dengan munculnya fragmen DNA pada ukuran 531 bp. Namun, anggrek transgenik yang disisipi gen Ubi pro:: PaFT ini belum berbunga baik secara in vitro maupun ex vitro . Teknik induksi pembungaan dengan menggunakan hormon bensiladenin (BA) konsentrasi 22,2 µM dan pemotongan akar pada medium New Phalaenopsis (NP – half strength )  yang  telah  dimodifikasi berhasil  memunculkan  infloresen  pada tanaman P. amabilis non-transgenik. Berdasarkan hasil tersebut, Mercuriani et al. (2014), menyimpulkan kombinasi perlakuan dengan pemberian hormon BA 22,2 µM, kandungan unsur P tinggi (3 µM), dan pemotongan akar mampu mempercepat pembungaan in vitro anggrek P. amabilis asli Indonesia pada umur 18 bulan setelah tanam. Hal ini karena perlakuan pemotongan akar dapat meningkatkan penyerapan BA oleh tanaman yang kemudian menginduksi pembentukan tunas. Selain itu, pemotongan akar sangat berpengaruh terhadap peningkatan diameter batang yang berhubungan dengan akumulasi cadangan makanan sebagai sumber energi untuk pembentukan tunas daun dan bunga (Mercuriani et al. , 2014).
Keberhasilan pembungaan in vitro yang telah dilakukan oleh Mercuriani
tanaman transgenik, tetapi tidak terdeteksi protein dengan ukuran 19,65 kDa yang sesuai dengan berat molekul protein PaFT, sementara protein dengan ukuran sekitar 56,16 kDa sesuai dengan berat molekul protein POH1( Phalaenopsis Orchid Homeobox1). Hal ini menunjukkan bahwa gen vegetatif POH1 mampu menghambat aktivasi gen PaFT pada tanaman P. amabilis transgenik umur 20 minggu, sehingga tanaman masih dalam fase juvenil dan belum mampu diinduksi untuk berbunga.
Kata kunci : Phalaenopsis amabilis, cahaya dan temperatur, PaFT, POH1, profil protein

## Bioeksperimen
Volume 2 No.2, (September 2016) ISSN 2460-1365
et al ., (2014) pada tanaman anggrek P. amabilis non-transgenik ingin dibuktikan juga pada tanaman anggrek P. amabilis transgenik pembawa gen Ubi pro:: PaFT dengan pemberian perlakuan lainnya, yaitu dengan perlakuan warna cahaya dan temperatur terkontrol secara terus menerus. Warna cahaya yang digunakan dalam penelitian ini antara lain cahaya putih dan kombinasi cahaya putih dan cahaya biru dengan jenis lampu light- emitting diodes (LED). Penggunaan sistem pencahayaan LED pada penelitian ini karena didasarkan berbagai faktor, yaitu menghasilkan spektrum cahaya yang spesifik,  massa  dan  volume  yang  kecil, daya tahan yang relatif lama, lifetime operasi yang relatif panjang, kekhususan panjang gelombang, suhu pancaran permukaan relatif dingin, pemanasan minimum, dan output foton yang linier dengan arus input listrik (Lin et al ., 2013;
Johkan et al. 2010; Hew and Yong, 2004). Sedangkan temperatur yang digunakan dalam penelitian ini meliputi 25ºC secara terus menerus dan 20ºC (fase gelap), 25ºC (fase terang).
Tujuan penelitian adalah menganalisis pengaruh cahaya dan temperatur terhadap pertumbuhan morfologi dan profil  protein  yang  terbentuk  pada tanaman anggrek P. amabilis non- transforman dan transforman yang membawa gen Ubi pro ::PaFT .

## METODE PENELITIAN
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah tanaman anggrek P. amabilis transgenik pembawa gen Ubi pro:: PaFT dan non-transgenik umur 18 bulan. Tanaman anggrek diperoleh dari hasil penelitian sebelumnya yang ditanam pada medium NP + 150 mL.L-1 air kelapa (Islam et al ., 1998). Medium dasar
yang digunakan adalah medium ½ NP, yaitu medium NP dengan kandungan N konsentrasi rendah (1/2 dari konsentrasi N pada medium NP).
Tanaman anggrek transgenik pembawa gen Ubi pro:: PaFT dan non-transgenik diinkubasi sesuai dengan variasi perlakuan pada Tabel 1. Fotoperiodisasi pada cahaya menggunakan sistem Short-day  plant , dengan panjang periode terang selama 8 jam dan periode gelap selama 16 jam.
Analisis molekular meliputi analisis DNA  dan  analisis  profil  protein.  Isolasi DNA genom menggunakan metode CTAB 3% berdasarkan metode Doyle and Doyle (1987; 1990) yang telah domodifikasi (Paquet et al ., 2005). Deteksi keberadaan T-DNA pembawa transgen di dalam genom tanaman dilakukan dengan metode Polymerase Chain Reaction (PCR) menggunakan primer spesifik untuk gen PaFT dengan kombinasi sebagai berikut: DegPaFT F1 (5’-GAK ATG AAT AGA GAG ASR GAC-3’) dan Tnos-R yang menghasilkan fragmen DNA sepanjang 1030 bp, dan kombinasi primer DegPaFT F1 (5’-GAK ATG AAT AGA GAG ASR GAC-3’) dan DegPaFT R1 (5’-TCA ATC YTG CAT YCT TCT TCC-3’) yang menghasilkan fragmen DNA sepanjang 531 bp. Reaksi PCR yang berlangsung terdiri dari 30 siklus.
Analisis  profil  protein  didahului dengan isolasi protein dari sampel daun tanaman anggrek, kemudian pada tahapan berikutnya sampel siap di elektroforesis dengan SDS-PAGE.
Penelitian ini dilaksanakan di laboratorium Bioteknologi Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada pada bulan Mei 2014 sampai dengan Januari 2015.
ISSN 2460-1365

## Tabel 1. Variasi Perlakuan
Kode Perlakuan Warna Cahaya LED Suhu Inkubator Terang Gelap T1 Putih
25 o C 20 o C T2
Putih + Biru
25 o C 20 o C T3 Putih 25 o C 25 o C
T4 Putih + Biru
25 o C 25 o C
Tabel 2. Pertumbuhan tanaman anggrek P. amabilis transgenik (Tr) dibandingkan dengan non-transgenik (NT)
Keterangan: T1 (Cahaya LED Putih dengan fase terang: 8 jam pada temperatur 25 o C dan fase gelap: 16 jam pada temperatur 20 o C); T2 (Cahaya kombinasi LED Putih + LED Biru dengan fase terang: 8 jam pada temperatur 25 o C dan fase gelap: 16 jam pada temperatur 20 o C); T3 (Cahaya LED Putih dengan fase terang 8 jam  dan fase gelap 16 jam pada temperatur 25 o C secara terus menerus); T4 (Cahaya kombinasi LED Putih dan LED Biru dengan fase terang 8 jam dan fase gelap 16 jam pada temperatur 25 o C secara terus menerus). Standar deviasi tanaman transgenik dan non-transgenik masing-masing dihitung dari 5 sampel dan 2 sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1.  Peningkatan  Jumlah  dan  Ukuran Daun
Peningkatan jumlah daun pada tanaman Phalaeopsis amabilis transgenik yang diberi perlakuan T2 dan T4 menunjukkan penambahan jumlah daun yang lebih tinggi dibandingkan dengan tanaman yang diberi perlakuan lainnya (Tabel 2). Penambahan jumlah daun pada tanaman transgenik dibandingkan dengan tanaman non-
transgenik pada perlakuan T2 tidak memiliki perbedaan. Namun, bila dibandingkan dengan perlakuan lainnya (T1, T3, dan T4), perlakuan T2 memberikan pengaruh terbaik dalam penambahan jumlah daun baik untuk tanaman transgenik maupun non- transgenik (Tabel 2). Hal tersebut mengindikasikan bahwa kombinasi cahaya putih dan biru dengan pemaparan temperatur 25ºC pada fase terang dan 20ºC dapat meningkatkan jumlah daun pada tanaman. Hal ini

## Bioeksperimen
Volume 2 No.2, (September 2016) ISSN 2460-1365
menunjukkan bahwa kondisi semua tanaman yang diberikan perlakuan apapun tetap menunjukkan kenaikan dalam jumlah daun, ukuran daun, dan jumlah akar walaupun tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan.
Peningkatan ukuran panjang daun terbesar secara berturut terdapat pada perlakuan T3, T2, dan T4, sedangkan pertambahan panjang daun terlecil terdapat pada perlakuan T1. Pada perlakuan T3, tanaman transgenik menunjukkan pertumbuhan panjang daun yang lebih besar dibandingkan dengan tanaman non-transgenik. Kemudian, pada perlakuan T2, tanaman transgenik tidak memiliki perbedaan  yang  signifikan  dengan tanaman non-transgenik. Namun, apabila dibandingkan dengan perlakuan lainnya tanaman non- transgenik pada perlakuan T2 memiliki panjang daun yang lebih besar.
Berdasarkan uji statistik meng- gunakan uji Anova menunjukkan bahwa perlakuan cahaya dan temperatur memengaruhi jumlah daun pada minggu ke-6 dan minggu ke-18, tetapi tidak berpengaruh pada minggu ke-12 dan ke-20. Setelah diuji lanjut dengan uji DMRT dengan taraf 5 % menunjukan bahwa pada minggu ke-6 perlakuan T1 menjukkan jumlah daun tertinggi dan berbeda nyata dengan perlakuan yang lainnya. Daun P. amabilis pada minggu ke-12 menunjukkan bahwa perlakuan T3 menunjukkan jumlah daun tertinggi dibandingan dengan perlakuan lainnya Setelah diuji lanjut dengan DMRT 5% menunjukkan bahwa perlakuan T3 tidak berbeda nyata dengan perlakuan T2 dan T1 tetapi berbeda nyata dengan perlakuan T4.
Adanya hal tersebut menunjukkan bahwa cahaya dan temperatur mempengaruhi jumlah daun P. amabilis . Perlakuan cahaya dan temperatur pada tanaman P. amabilis ternyata tidak berpengaruh pada jumlah akar dan pertambahan ukuran daun tanaman P. amabilis setelah diuji dengan anova dengan taraf 5% baik pada minggu ke-6, ke-12, ke-18, dan ke-20.
Kombinasi cahaya putih dan biru dalam meningkatkan jumlah daun pada tanaman berkaitan dengan fungsi induksi morfogenesis dan organogenesis pada cahaya biru. Penambahan cahaya biru menginduksi percepatan pembelahan sel di daerah SAM sehingga menginisiasi munculnya primordia daun. Hasil penelitian ini didukung oleh Muleo et al . (2001) yang menyatakan proliferasi pucuk tanaman Plum melibatkan dua proses berbeda, yaitu diferensiasi tunas aksiler dan perkembangan tunas aksiler, serta kualitas cahaya memengaruhi diferensiasi tunas dan interaksinya dengan dominansi apikal. Cahaya merah meregulasi dominansi apikal melalui reseptor fitokrom,  sedangkan  cahaya  biru meregulasi jumlah tunas aksiler melalui reseptor kriptokrom.
Hasil penelitian ini mendukung penelitian yang telah ada sebelumnya, yang dilakukan oleh Hunter dan Burritt  (2004)  pada  kultur  eksplan daun tanaman selada. Hasil penelitian  Hunter  dan  Burritt  (2004) membuktikan eksplan daun tanaman selada yang terpapar sinar merah dan sebelumnya terpapar sinar biru memproduksi lebih sedikit tunas dibandingkan dengan eksplan daun yang sebelumnya terpapar sinar merah kemudian ditransfer pada
Bioeksperimen Volume 2 No.2, (September 2016) ISSN 2460-1365
kultur dengan cahaya biru. Dengan demikian, dapat diambil kesimpulan sementara bahwa cahaya biru menginisiasi pembelahan sel pada daerah meristem, yang selanjutnya menginisiasi pembentukan primordia daun baru.
Peningkatan jumlah daun adalah salah satu indikator tanaman mencapai tahap dewasa. Dalam pendewasaan tanaman, faktor umur merupakan salah satu faktor yang memengaruhi transisi tanaman menuju tahap reproduktif secara umum, selain kesehatan tanaman. Dengan meningkatkan jumlah daun, tanaman mampu melakukan fotosintesis secara maksimal untuk mendukung proses transisinya menuju fase reproduktif (Glover, 2007), dan peningkatan nilai bersih fotosintesis bergantung pada kandungan klorofil yang terdapat pada daun (Xiaoying et al ., 2012). Penambahan cahaya biru dapat meningkatkan hasil bersih fotosintesis melalui peningkatan kandungan  klorofil  a,  dikarenakan klorofil  a  terlibat  langsung  dalam penentuan aktivitas fotosintesis. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa tanaman anggrek P. amabilis pembawa gen Ubi pro:: PaFT telah mencapai umur 23 bulan/92 minggu dan telah mencapai tahap dewasa/berbunga. Namun, secara morfologis belum terlihat adanya indikator terjadinya transisi dari fase vegetatif ke fase pembungaan, seperti munculnya infloresens, walaupun telah diinduksi dengan perlakuan cahaya biru. Hal yang sama juga ditunjukkan oleh Semiarti et al . (2007), bahwa anggrek P. amabilis memasuki fase reproduktif pada umur 53 minggu setelah penanaman yang ditandai dengan munculnya  infloresens,  kemudian
muncul bunga pada umur 130 minggu setelah tanam.
2.  Analisis  DNA  Tanaman  Anggrek Pembawa Gen Ubi pro:: PaFT
Analisis DNA pada penelitian ini dilakukan untuk mengkonfirmasi apakah transgen Ubi pro:: PaFT telah terintegrasi ke dalam genom tanaman anggrek P. amabilis transgenik. Amplifikasi  fragmen  DNA  dan plasmid yang membawa gen Ubi pro:: PaFT dengan menggunakan primer DegPaFT F1R1 menghasilkan fragmen DNA berukuran 531 base pair (bp)(Gambar 1a) sesuai dengan ukuran gen PaFT yang disisipkan.
Keberadaan fragmen DNA berukuran 531 bp dari hasil amplifikasi  dengan  primer  DegPaFT F1R1 (Gambar 1b) tersebut menunjukkan stabilitas integrasi transgen PaFT di dalam genom tanaman selama pertumbuhan dan perkembangan tanaman transgenik. Tanaman-tanaman transgenik yang digunakan dalam penelitian ini telah dinyatakan positif sebagai transgen pada penelitian Mercuriani (2014) sebelumnya pada medium seleksi antibiotik Hygromisin.
Munculnya fragmen DNA berukuran 700 bp pada genom tanaman anggrek P. amabilis (Gambar 1b) baik transgenik maupun non- transgenik  hasil  amplifikasi  dengan menggunakan primer DegPaFT F1R1 disebabkan beberapa kemungkinan, antara lain adanya gen homolog pada genom anggrek P. amabilis Indonesia yang berukuran 700 bp terhadap PaFT pada anggrek P. amabilis Taiwan asal transgen tersebut diisolasi, dengan ukuran 531 bp. Pembuatan primer DegPaFT F1R1 didasarkan pada sekuen gen FT-Like tanaman

## Bioeksperimen
Volume 2 No.2, (September 2016) ISSN 2460-1365
anggrek P. amabilis asal Taiwan yang telah diklon dalam plasmid pGA3426 dalam bakteri Agrobacterium
tumefaciens strain LBA4404 (Semiarti et al. , 2007).
Gambar 1.  Pertumbuhan tanaman P. amabilis transgenik dimulai pada umur 18 bulan pada semua perlakuan (Bar = 1cm).
Gambar 2.  Elektroforegram  hasil  re-konfirmasi  keberadaan  transgen PaFT pada tanaman anggrek P. amabilis transgenik. ( a ) Konstruksi fragmen Ubi pro:: PaFT. ( b ) Hasil amplifikasi DNA menggunakan primer DegPaFT F1R1. M: Marka 1 kb DNA Ladder, lajur 1 – 5: Tanaman transgenik, lajur 6: Tanaman non-transgenik.
Bioeksperimen Volume 2 No.2, (September 2016) ISSN 2460-1365
3.  Analisis  Profil  Protein  Tanaman Anggrek Pembawa Gen Ubi pro:: PaFT
Analisis  profil  protein  dilakukan untuk mengetahui apakah telah terjadi ekspresi transgen Ubi pro:: PaFT di level translasi dengan pembentukan protein pada tanaman anggrek Phalaenopsis amabilis pembawa gen Ubi pro:: PaFT setelah pemberian perlakuan.
Profil  protein  pada  Gambar 3 berasal dari supernatan hasil isolasi daun. Ukuran berat molekul pita protein yang dihasilkan pada elektroforegram tersebut disajikan pada Tabel 3.
Elektroforegram pada Gambar 3 dan perhitungan berat molekul (kDa) sampel yang disajikan pada Tabel 3 menunjukkan bahwa terdapat protein yang terdeteksi pada semua tanaman, baik tanaman transgenik maupun non-transgenik, dan ada beberapa protein yang terdeteksi hanya pada tanaman tertentu. Protein dengan berat molekul 108,57 kDa merupakan protein dengan berat molekul terbesar yang terdeteksi pada sebagian besar tanaman, kecuali pada sampel tanaman di lajur G dan L. Kemudian, protein dengan berat molekul 71,30 kDa terdeteksi hampir diseluruh tanaman, kecuali pada sampel tanaman di lajur K. Selanjutnya, protein dengan berat molekul 56,16 kDa terdeteksi pada sebagian besar tanaman kecuali pada sampel tanaman di lajur G dan L. Protein dengan berat molekul 40,85 kDa terdeteksi pada semua tanaman dan protein dengan berat molekul 26,79 kDa hanya terdeteksi pada sampel tanaman di lajur J dan K saja. Kemudian, protein dengan berat molekul 13,27 kDa hanya terdeteksi
pada beberapa tanaman, kecuali sampel tanaman di lajur G, J, K, dan L, serta protein dengan berat molekul 13,12 kDa merupakan protein dengan berat molekul terkecil yang hanya terdeteksi pada sampel tanaman di lajur C, D, dan I.
Elektroforegram  profil  protein tanaman P. amabilis menunjukkan bahwa pita protein yang terbentuk cenderung memiliki keseragaman, walau terdapat beberapa protein dengan berat molekul yang kecil terdeteksi hanya di beberapa tanaman. Hal tersebut diindikasikan bahwa tanaman mengekspresikan beberapa protein yang sejenis dalam waktu yang bersamaan (ketika sampel tanaman diisolasi). Berdasarkan hasil elektroforegram yang dikaitkan dengan bukti morfologis, diduga bahwa protein yang dihasilkan adalah untuk pertumbuhan vegetatif, mengingat protein PaFT yang dikehendaki terdapat pada ukuran 19,647 kDa belum juga muncul.
Beberapa protein yang berperan dalam proses transisi dari fase vegetatif ke fase generatif pada tanaman Phalaenopsis yaitu CONSTANS-Like (CO-Like), yang memiliki berat molekul 28,514 kDa, SUPPRESSION OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS1 (SOC1) yang memiliki berat molekul 25,522 kDa, AGAMOUS-Like (AGL) yang memiliki berat molekul 27,731 kDa, dan FLOWERING LOCUS T-Like (FT-Like) yang memiliki berat molekul 19,809 kDa. Berdasarkan profil protein dalam SDS-PAGE pada Gambar 3, protein-protein tersebut belum terdeteksi pada semua tanaman perlakuan, sehingga diduga tanaman masih dalam fase vegetatif dan belum terjadi transisi ke generatif.

## Bioeksperimen
Volume 2 No.2, (September 2016) ISSN 2460-1365
Pada penelitian ini, perlakuan berupa  fotoperiode  dan  fluktuasi temperatur masih belum mampu menginduksi terjadinya proses transisi dari fase vegetatif ke fase generatif pada tanaman anggrek P. amabilis pembawa gen Ubi pro:: PaFT hingga umur 20 minggu setelah perlakuan, walaupun didukung dengan penambahan hormon benziladenin (BA) dengan konsentrasi 5 ppm. Fase pertumbuhan generatif
masih belum terlihat dengan indikator belum  munculnya  infloresen  pada semua tanaman. Hal tersebut diduga disebabkan beberapa faktor, antara lain gen-gen vegetatif masih aktif dan faktor mikroklimat yang belum sesuai untuk tanaman melakukan proses transisi ke fase generatif, sehingga protein yang dihasilkan diduga masih diperlukan untuk pertumbuhan vegetatif.
Gambar 3.  Profil  protein  tanaman P. amabilis umur 23 bulan setelah 20 minggu perlakuan. A, C: tanaman transforman; dan B: tanaman non-transforman, dengan perlakuan T1. D, F: tanaman transforman; dan E: tanaman non-transforman, dengan perlakuan T2. G: kontrol/ tanaman anggrek yang telah berbunga. H, J: tanaman transforman; dan I: tanaman non- transforman, dengan perlakuan T3. K, M: tanaman transforman; dan L: tanaman non- transforman, dengan perlakuan T4.

## Tabel 3. Hasil pengukuran berat molekul protein
Keterangan:  A, C: tanaman transforman; dan B: tanaman non-transforman, dengan perlakuan T1. D, F: tanaman transforman; dan E: tanaman non-transforman, dengan perlakuan T2. G: kontrol/ tanaman anggrek yang telah berbunga. H, J: tanaman transforman; dan I: tanaman non- transforman, dengan perlakuan T3. K, M: tanaman transforman; dan L: tanaman non- transforman, dengan perlakuan T4. Warna yang sama menunjukkan kesamaan ukuran berat molekul protein.

## Bioeksperimen
Berbagai macam faktor yang memungkinkan untuk terjadinya proses transisi dari fase vegetatif ke fase geberatif antara lain temperatur, fotoperiodisitas, vernalisasi, dan kualitas cahaya. Sinyal-sinyal lingkungan tersebut akan direspons oleh tanaman, dan apabila kondisinya menguntungkan untuk terjadinya proses pembungaan maka gen- gen yang berperan dalam inisiasi pembungaan akan segera diaktivasi. Salah satu gen yang berperan dalam menginduksi pembungaan tanaman yaitu gen FLOWERING  LOCUS  T ( FT ) yang berhasil diidentifikasi dari tanaman Arabidopsis thaliana .
Ekespresi gen FT pada tanaman terjadi di dalam daun yang dipengaruhi oleh faktor lingkungan seperti temperatur, fotoperiodisitas, vernalisasi, dan kualitas cahaya yang  spesifik  untuk  masing-masing tanaman. Faktor lingkungan tersebut memiliki jalur tersendiri dalam menginduksi terjadinya proses aktivasi gen-gen pembungaan. Secara molekular, pada jalur pembungaan yang diinduksi oleh cahaya/fotoperiodisitas, terdapat gen kunci yang teraktivasi melalui jalur ini, yaitu gen CONSTANS ( CO ) dan FT. Kedua gen ini merupakan elemen kunci yang memediasi efek panjang hari dalam pembungaan dan diekspresikan dalam sel-sel pendamping floem pada daun. Pada kondisi hari-panjang, ekpresi gen CO mengalami peningkatan regulasi kemudian proteinnya distabilkan.
Setelah protein dari gen CO diproduksi, maka akan menginduksi ekspresi gen FT . Ekspresi ektopik dari CO menyebabkan pembungaan lebih awal, tetapi tidak ketika diekspresikan dari promoter spesifik pada meristem
pucuk. Sebaliknya, overekspresi gen FT pada pucuk apeks saja dapat menginduksi pembungaan lebih awal, seperti halnya ekspresi gen CO dari  promoter  spesifik  pendamping sel (Zeevart, 2008).
Ekspresi gen CO terjadi pada floem daun yang meregulasi sintesis mobile signal untuk menginduksi pembungaan. Hal ini kemungkinan diperkuat oleh hasil percobaan grafting dengan tanaman yang mengekspresikan CO di bawah kontrol GALACTINOL SYNTHASE 1 (GAS1). Tanaman donor yang membawa gen GAS1::CO ini menginduksi pembungaan awal pada tunas reseptor tanaman mutan co-1 . Meski diproduksi di floem  daun,  FT  bertindak  di  daerah apeks pucuk, di mana ia akan membentuk kompleks dengan faktor transkripsi bZIP FLOWERING LOCUS  D ( FD ). Kompleks FT/FD heterodimer akan mendorong transisi tanaman ke pembungaan dengan mengaktifkan  gen SUPPRESSION OF  OVEREXPRESSION  OF  CO1 ( SOC1 ) dan gen identitas meristem pembungaan APETALA1 (AP1). Hal ini menjelaskan bahwa lokasi produksi mRNA FT di dalam daun jauh dari lokasi aksi FT yaitu di daerah apeks pucuk. Dengan demikian, produk FT (mRNA atau protein) adalah kandidat utama untuk sinyal florigen yang  ditranslokasikan  melalui  floem (Zeevart, 2008).
Ketidakmunculan protein PaFT pada elektroferegram hasil isolasi dari daun tanaman anggrek P. amabilis di atas dapat disebabkan oleh beberapa faktor, antara lain: tidak terekspresinya gen CO pada daun yang disebabkan kualitas cahaya yang tidak sesuai dan ekspresi

## Bioeksperimen
Volume 2 No.2, (September 2016) ISSN 2460-1365
protein PaFT pada daun bersifat sementara yang kemudian langsung ditranslokasikan ke meristem apikal pucuk  melalui  floem.  Walaupun berdasarkan  hasil  amplifikasi  DNA menggunakan primer DegPaFT F1R1, tanaman anggrek P. amabilis tersebut positif membawa gen Ubi pro:: PaFT . Oleh karena itu, diperlukan penelitian lebih lanjut untuk mendeteksi protein- protein yang telah diekspresikan oleh tanaman dan mengoptimalkan kembali faktor lingkungan seperti kualitas cahaya, iradiasi dengan cahaya tambahan lainnya, serta pemberian nutrisi dan zat pengatur tumbuh yang optimal sehingga dapat terjadi transisi dari fase vegetatif ke fase reproduktif

## SIMPULAN, SARAN, DAN REKOMENDASI
Simpulan yang dapat diambil dari hasil penelitian ini antara lain cahaya dan temperatur berpengaruh terhadap peningkatan tunas dan jumlah daun tanaman anggrek Phalaenopsis amabilis pembawa gen Ubi pro:: PaFT . Kombinasi cahaya putih dan cahaya biru merupakan kombinasi cahaya yang paling baik dalam meningkatkan jumlah daun. Kemudian, profil  protein  yang  dihasilkan  oleh tanaman anggrek P. amabilis pembawa gen Ubi pro:: PaFT setelah diberi perlakuan diduga masih mengekspresikan protein- protein untuk pertumbuhan vegetatif. Hal itu dikarenakan protein transgen PaFT tidak terdeteksi pada profil tanaman transgenik umur 23 bulan, sementara protein yang diduga POH1 terdeteksi. Hal ini menunjukkan bahwa gen vegetatif POH1 mampu menghambat aktivasi gen PaFT pada tanaman P. amabilis transgenik umur 20 minggu, sehingga tanaman masih dalam fase juvenil dan belum mampu diinduksi untuk berbunga.
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan mendeteksi protein yang spesifik  untuk  memastikan  protein- protein yang terekspresi pada tanaman anggrek P. amabilis pembawa gen Ubi pro:: PaFT , serta mengoptimalkan faktor lingkungan seperti kualitas cahaya, fluktuasi temperatur yang lebih tepat, dan pemberian zat pengatur tumbuh yang tepat untuk terjadinya proses transisi dari fase vegetatif ke fase generatif.

## DAFTAR PUSTAKA
Badriah, D.S dan Sutater, T. 1996. Keragaman Phalaenopsis amabilis L . di Koleksi Sub Balihorti Cipanas. Prosiding Seminar Nasional Tanaman Hias 1996.
Glover, B. 2007. Understanding Flower and Flowering: An Integrated Approach . Oxford University Press Inc., New York.
Hew, C.S., and Yong, J.W.H. 2004. The Physiology of Tropical Orchids in Relation to the Industry 2 nd edition . World  Scientific  Publishing. Singapore. Pp. 1 – 161.
Hunter, D.C. and Burritt, D.J. 2004. Light Quality  Influences  Adventitious Shoot Production from Cotyledon Explants  of  Lettuce( Lactuca sativa (L.)). In Vitro Cell. Dev. Biol. – Plant , 40:215 – 220.
Indrianto, A. 2002. Peningkatan Mutu
Anggrek dengan Kultur Jaringan: Teknik Embriogenesis Mikrospora. Prosiding Seminar Nasional  Anggrek,  Universitas Gadjah Mada . Nomor 2: 35 – 43. Islam, M.O., Ichihahashi and S. Matsui. 1998. Control of Growth and Development of Protocorm Like- Body Derived from Callus by Carbon Source in Phalaenopsis . Plant Biotechnology 15 (4): 183 – 187.
Bioeksperimen Volume 2 No.2, (September 2016) ISSN 2460-1365
Jumani, M. 2010. Minat Anggrek Semakin Tinggi .  (http://indonesianorchids. wordpress.com/2010/10/03/ minat-anggrek-semakin-tinggi/). Diakses tanggal 10 Juli 2014.
Lin, K-Hung., Huang, M-Yuan., Huang, W-Dar., Hsu, M-Huang., Yang, Z-Wei., and Yang, C-Ming. 2013. The  Effect  pf  Red,  Blue,  and White  Light-Emitting  Diodes  on The Growth, Development, and Edible Quality of Hydroponically Grown  Lettuce( Lactuca sativa L. var. capitata ). Scientia Horticulturae , 150: 86 – 91.
Mercuriani, I., S., Slamet, A., Utami, B. S.,
Sasongko, A. B., Purwantoro, A., Moeljopawiro, S., dan Semiarti, E. 2014. Induksi Pembungaan In Vitro pada Tanaman Anggrek Bulan Phalaenopsis amabilis (L.) Blume Asli Indonesia. Jurnal Agros , 16(2): 273 – 277. Muleo, R., Morini, S., and Casano, S.
2001. Photoregulation of Growth and Branching of Plum Shoots: Physiological Action of Two Photosystems. In Vitro Cell. Dev. Bio. – Plant , 37:609 – 617. Paquet,  N.,  Bernadet,  M.,  Morin,  H., Traas, J., Dron, M., and Charon, C.  2005.  Expression  Patterns  of TEL Genes in Poaceae Suggest a Conserved Association with Cell Differentiation. Journal
Experimental Botany , 56(416): 1605 – 1614.
Semiarti, E., Indrianto, A., Purwantoro, A., Isminingsih, S., Suseno, N., Ishikawa, T., Yushioka, Y.,
Machida, Y., and Machida, C.
2007. Agrobacterium- Mediated Transformation of The Wild Orchid Species Phalaenopsis amabilis . Plant Biotechnology , 24: 265-272.
Sulistianingsih, R., Mangoendidjojo, W.,
Purwantoro, A., dan Semiarti, E. 2006. Pengaruh Irradiasi Sinar Gamma pada Pertumbuhan Plantlet Anggrek Bulan Phalaenopsis amabilis (L.) Bl. Risalah Seminar Ilmiah Aplikasi Isotop dan Radiasi . pp: 121 – 125.
Xiaoying, L., Shirong, G., Taotao, C., Zhigang, X., and Tezuka, T. 2012. Regulation of The Growth and Photosynthesis of Cherry Tomato Seedlings  by  Different  Light Irradiations  of  Light  Emitting Diodes (LED). African Journal of Biotechnology , Vol. 11(22), pp. 6169-6177. Zeevaart, J.A.D. 2008. Leaf-Produced Floral Signals. Current Opinion in Plant Biology , 11: 541 – 547.