Kadar Emestrin Emericella nidulans yang Dikultivasi.............................................................................(M. Nursid et al.)

## KADAR EMESTRIN Emericella nidulans YANG DIKULTIVASI PADA MEDIA DAN WAKTU YANG BERBEDA
Concentration of Emestrin from Emericella nidulans Cultivated in Different Medium and Cultivation Time
Muhammad Nursid 1* , Nurrahmi Dewi Fajarningsih 1 , Endar Marraskuranto 1 , Sujuliyani 2 , dan Ekowati Chasanah 1
1 Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan, Balitbang KP, KKP. Jl. KS.Tubun Petamburan VI Jakarta 10260.
2 Sekolah Tinggi Perikanan, Kampus STP Pasar Minggu Jakarta * Korespondensi Penulis: muhammadnursid@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian untuk mengetahui pengaruh jenis media dan waktu kultivasi terhadap kadar senyawa emestrin dari kapang Emericella nidulans telah dilakukan.  Kapang dikultivasi dalam 2 jenis media yaitu malt extract broth (MEB) dan soluble starch-water-soytone (SWS) dalam waktu 1, 2, 3, 4, dan 5 minggu. Kadar emestrin dianalisis dengan menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT). Hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah biomassa dan kadar emestrin tertinggi dihasilkan E.nidulans yang dikultivasi dalam media SWS selama 5 minggu.
KATA KUNCI: Emericella nidulans , emestrin, konsentrasi

## ABSTRACT
Research to investigate the effects of medium and cultivation time of Emericella nidulans on the emestrin concentration yielded has been done. The fungal was cultivated in two different mediums ie. malt extract broth (MEB) and soluble starch-water-soytone (SWS) for 1, 2, 3, 4 and 5 weeks. The concentration of emestrin was analyzed using high performance liquid chromatography (HPLC).  The highest biomass and concentration of emestrin was resulted from 5 weeks cultivation in SWS medium.
KEYWORDS: Emericella nidulans , emestrin, concentration

## PENDAHULUAN
Kapang yang berasal dari lingkungan laut dikenal sebagai mikroba yang potensial sebagai sumber senyawa bioaktif. Senyawa bioaktif dari kapang memiliki bioaktivitas yang beragam (Jang et al., 2006, Kralj et al ., 2006 ). Antara tahun 2002-2006, lebih dari 330 senyawa baru ( novel compound ) berhasil ditemukan dari kapang laut (Kjer et al ., 2010). Beberapa metabolit dari kapang seperti fumagilin dan illudin S sedang dalam tahap uji klinis sebagai senyawa antitumor (Kralj et al ., 2006).  Banyak ulasan yang sudah dipublikasikan menunjukkan pentingnya mikroorganisme laut sebagai sumber senyawa bioaktif yang dapat digunakan sebagai penuntun penemuan senyawa-senyawa bioaktif baru (Bugni & Ireland, 2004).
Dalam penelitian terdahulu, telah dilakukan penapisan aktivitas sitotoksik terhadap isolat-isolat
kapang laut yang diisolasi dari beberapa wilayah perairan di Indonesia. Hasil penelitian tersebut memperlihatkan bahwa kapang Emericella nidulans yang diisolasi dari ascidia Aplidium longithorax yang diambil dari perairan Taman Nasional Laut Wakatobi, Sulawesi Tenggara, mengandung senyawa sitotoksik yang potensial untuk dikembangkan lebih lanjut (Nursid et al ., 2011 a ). Hasil analisis spektroskopis memperlihatkan bahwa senyawa sitotoksik tersebut merupakan senyawa makrosiklik yang bernama emestrin.  Emestrin memiliki aktivitas sitotoksik yang kuat terhadap sel T47D (sel kanker payudara), HepG2 (sel kanker hati) dan HeLa (sel kanker serviks) dengan nilai IC 50 berturut-turut sebesar 1,8; 4,2; dan 13,8 µg/ ml (Nursid et al ., 2011 b ).
Emestrin merupakan suatu senyawa yang termasuk dalam golongan epithiodioxopiperazine (ETP), dicirikan oleh adanya jembatan disulfida atau polisulfida yang memiliki 6 cincin.
Epithiodioxopiperazine menarik banyak perhatian karena memiliki bioaktivitas yang luas terutama sebagai antitumor, antimikrobial, antiviral, imunosupresif dan inhibitor aktivitas enzim (Jiang & Guo, 2011).  Bioaktivitas senyawa yang tergolong dalam ETP termasuk emestrin disebabkan oleh adanya jembatan disulfida. Kehadiran jembatan disulfida merupakan hal yang sangat esensial, penghilangan atom S menyebabkan hilangnya aktivitas. Aktivitas sitotoksik diperkirakan terjadi melalui reaksi antara protein dengan gugus tiol yang akan menghasilkan spesies oksigen reaktif melalui siklus redoks (Gardiner et al ., 2005).
Berdasarkan hal tersebut, maka senyawa emestrin dari kapang E. nidulans memiliki potensi yang besar untuk dieksplorasi lebih lanjut khususnya yang berkaitan dengan faktor-faktor yang mempengaruhi produksi emestrin oleh kapang E. nidulans di antaranya jenis media dan waktu kultivasi kapang. Apabila rendemen emestrin dapat ditingkatkan, maka hal tersebut dapat mendorong riset pemanfaatan emestrin dalam bidang pengobatan, misalnya untuk keperluan uji pra klinis dan klinis yang membutuhkan senyawa dalam jumlah besar. Diperkirakan pertumbuhan kapang E.nidulans dan produksi emestrin dipengaruhi oleh komposisi media kultivasi sebagai sumber atom C, H, O, atau N. Selain itu waktu kultivasi yang berbeda juga kemungkinan mempengaruhi kadar senyawa emestrin yang dihasilkan.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jenis media dan waktu kultivasi terhadap kandungan senyawa emestrin pada kapang E. nidulans .

## BAHAN DAN METODE

## Media Kultivasi Kapang
Kapang E. nidulans dari penelitian terdahulu (Nursid et al. , 2011 a ) dikultivasi pada 2 jenis media yaitu media malt extract broth (MEB), dan soluble starch-water-soytone medium (SWS). Komposisi media MEB terdiri dari 0,3% ekstrak malt, 0,3% ekstrak khamir, dan 0,5% pepton sedangkan media SWS mengandung 1% pati dapat larut, dan 0,2% pepton soya. Kedua media tersebut dilarutkan dalam air laut buatan dengan komposisi NaCl 70 g; KCl 3,0 g; Na 2 SO 4 1,1 g ; MgCl 2 20,4 g dan CaCl 2 0,6 g. Media- media tersebut kemudian disterilisasi pada suhu 121 o C dan tekanan 1 atm selama 15 menit.
Penyegaran Kapang E. nidulans
Spora E. nidulans diambil dari deep freezer bersuhu -73 o C lalu didiamkan beberapa saat dalam suhu kamar
hingga media dan gliserol yang ada dalam tabung mencair. Spora selanjutnya dipindahkan secara aseptis ke dalam media malt extract agar (MEA) (mengandung 0,3% ekstrak malt, 0,3% ekstrak khamir, 0,5% pepton, dan 1,5% agar) dengan menggunakan jarum tanam. Cawan petri dibungkus dengan kertas parafilm kemudian diinkubasi selama 3–7 hari pada suhu 27– 29 o C hingga biakan spora tumbuh dengan baik.
Kultivasi E. nidulans
Kapang E. nidulans yang tumbuh di dalam cawan petri selanjutnya dipindahkan ke dalam tabung reaksi yang mengandung 5 ml media MEB dan  SWS, biakan diinkubasikan selama 2 hari. Setiap biakan dalam tabung reaksi kemudian dipindah ke dalam labu erlenmeyer yang masing-masing mengandung 100 ml media MEB dan  SWS.  Kultivasi dilakukan selama 1, 2, 3, 4 dan 5 minggu pada suhu 27–29 o C dalam kondisi statis. Kultivasi dengan 3 jenis media tersebut dilakukan dengan 3 ulangan.

## Pengukuran Biomassa
Biomassa E.nidulans yang dihasilkan dari setiap perlakuan dihitung berdasarkan berat kering miselium. Miselium yang diperoleh dipisahkan dengan broth melalui penyaringan lalu dikeringbekukan dengan freeze dryer (Labconco).  Miselium yang sudah kering tersebut lalu ditimbang beratnya.
Ekstraksi Metabolit dan Pengukuran Rendemen ( yield ) Ekstrak Kasar
Metabolit yang dihasilkan oleh E.nidulans dalam waktu dan media yang berbeda diekstraksi dengan etil asetat pro analisis.  Etil asetat yang terdapat dalam ekstrak lalu diuapkan dengan rotavapor vakum (Buchi). Pelarut yang masih tersisa selanjutnya dikeringkan dengan bantuan gas nitrogen. Ekstrak kering yang diperoleh kemudian ditimbang beratnya untuk mengetahui rendemennya.

## Isolasi Emestrin dan Pembuatan Kurva Standar
Emestrin diisolasi dari kapang E.nidulans yang dikultivasi pada 1 L media SWS sebanyak 30 tabung selama 4 minggu dan suhu 27–29 o C dalam kondisi statis. Tahapan ekstraksi, fraksinasi dan isolasi emestrin dilakukan menurut metode Nursid et al . (2011 b ). Emestrin hasil isolasi dilihat kemurniannya dengan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dan 1 H-NMR. Senyawa emestrin yang diperoleh selanjutnya digunakan sebagai standar untuk menentukan kadar emestrin pada ekstrak kasar yang dihasilkan oleh kapang E.nidulans dalam media dan waktu kultivasi yang berbeda. Pembuatan kurva
Kadar Emestrin Emericella nidulans yang Dikultivasi.............................................................................(M. Nursid et al.)
Gambar 1. Biomassa kapang E.nidulans yang dikultivasi pada media yang berbeda.
standar dilakukan dengan KCKT. Penentuan kadar emestrin dilakukan dengan menggunakan luas area di bawah puncak ( peak area ) berdasarkan garis regresi yang dibuat dengan serial konsentrasi 1,25; 2,5; 5; 10; 20; dan 40 ppm.  Kondisi KCKT yang digunakan adalah sebagai berikut: instrumen LC Shimadzu, kolom Water Xselect CSH TM 2 x 100 mm, sistem elusi 15% asetonitril (dalam H 2 O)  100% asetonitril secara gradien (40 menit), 100% asetonitril (5 menit) dan kembali ke 15% asetonitril secara gradien (15 menit), laju air 0,2 ml/menit serta suhu oven 30 o C. Pengkuran spektra 1 H-NMR, dilakukan dengan instrumen JEOL JNM ECA 500 MHz. Nilai geseran kimia (  ) dilakukan dalam satuan part per million (ppm) dengan menggunakan tetrametilsilana (TMS) sebagai standar. Pelarut yang digunakan adalah kloroform terdeuterasi (CDCl 3 ).  Pengukuran NMR dilakukan di Pusat Penelitian Kimia Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (Puslit Kimia LIPI) Serpong, Banten.

## HASIL DAN BAHASAN

## Berat Kering Miselium (biomassa)
Pengukuran berat kering miselium kapang laut E. nidulans bertujuan untuk mengetahui pertumbuhan dan biomasa kapang laut E. nidulans selama proses kultivasi dari minggu ke-1 hingga minggu ke-5. Jumlah biomassa E.nidulans yang dikultivasi pada media SWS lebih tinggi daripada yang dikultivasi pada media MEB (Gambar 1). Biomassa paling tinggi dihasilkan pada minggu ke-5 dalam media SWS. Biomassa
tertinggi yang dihasilkan dalam media MEB diperoleh pada minggu ke-1. Perbedaan biomassa yang dihasilkan dari kapang laut E. nidulans dalam media MEB dan SWS diduga terjadi karena adanya perbedaan komposisi nutrien pada kedua medium tersebut. Medium SWS memiliki kandungan karbohidrat yang tinggi dengan komposisi utama yaitu : 1% pati larut air ( soluble starch ) dan 0,2 % pepton soya. Pati terutama berperan sebagai sumber karbon, hidrogen dan oksigen sedangkan pepton sebagai sumber nitrogen. Menurut Dharmaputra et al . (1989), pada umumnya kapang dapat tumbuh dengan baik pada medium yang mengandung karbohidrat tinggi.

## Rendemen Metabolit Miselium Kapang Laut E. nidulans
Meskipun biomassa tertinggi dihasilkan oleh kapang yang dikultivasi pada media SWS, namun rendemen metabolit miselium tertinggi dihasilkan oleh kapang yang dikultivasi pada media MEB.  Rendemen ekstrak miselium (ekstrak kasar) pada media MEB paling tinggi diperoleh pada minggu ke-4 (42%), pada medium SWS diperoleh pada minggu ke-5 (30%) (Gambar 2). Tingginya rendemen ekstrak kasar miselium pada media MEB kemungkinan berhubungan dengan sumber karbohidrat MEB yang berupa ekstrak malt, sedangkan sumber karbohidrat media SWS adalah pati yang merupakan polisakarida kompleks. Sumber karbohidrat pada media MEB adalah ekstrak malt yang merupakan disakarida yang lebih mudah digunakan sebagai sumber C dan H dibanding pati dapat larut ( soluble starch ) yang digunakan pada
Waktu Fermentasi (minggu)/ Fermentation Time (weeks)
Biomassa/
Biomass (mg)
Gambar 2.  Rendemen ekstrak  miselium kapang E. nidulans. Figure 2.  Yield of E.nidulans mycelium extract.
media SWS. Hal ini yang menyebabkan E.nidulans lebih mudah dalam mengkonversi sumber nutrisi pada media MEB menjadi senyawa metabolit sekunder (dalam bentuk ekstrak kasar) sehingga rendemen yang dihasilkan lebih tinggi.

## Isolasi Emestrin
Isolasi emestrin dari miselium E.nidulans mulai dari proses ekstraksi, fraksinasi dan purifikasi berhasil
dilakukan.  Emestrin hasil isolasi  dicek kemurniannya dengan KCKT dan 1 H-NMR kemudian hasilnya dibandingkan dengan profil KCKT dan 1 H-NMR hasil penelitian Nursid et al . (2011 b ) (Gambar 3). Dalam penelitian ini emestrin terelusi pada menit ke-16,5 sedangkan dalam penelitian Nursid et al. (2011 b ) terelusi pada menit ke-14,9.  Perbedaan waktu retensi ini disebabkan oleh kolom yang digunakan berbeda. Berdasarkan profil 1 H-NMR, emestrin yang diisolasi
Waktu Fermentasi (minggu)/ Fermentation Time (weeks) Rendemen/ Yield (%)
Gambar 3. Kromatogram emestrin hasil penelitian ini (A) dan kromatogram emestrin hasil penelitian Nursid et al . (2011 b ) (B). Figure 3. Emestrin chromatogram resulted in this research (A) and emestrin chromatogram resulted by Nursid et al. (2011 b ) (B).
5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 min -250 0 250 500 750 1000 1250 1500 1750 2000 2250 2500 2750 3000 3250 3500 mAU 5. 684 10 .2 7 9 12 .1 3 4 13 .20 3 14 .66 0 16 .54 1 18 .1 5 4 19 .7 4 3 20 .8 9 9 22 .0 1 1 22 .91 0 24 .39 9 25 .38 4 26 .9 2 4 27 .8 1 0 31 .4 2 4 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 min 0 250 500 750 1000 1250 1500 1750 2000 mAbs 14 .9 0 5 A B
Kadar Emestrin Emericella nidulans yang Dikultivasi.............................................................................(M. Nursid et al.)
dalam penelitian ini memiliki kesamaan dengan emestrin hasil penelitian Nursid et al . (2011 b ) (Gambar 4). Berdasarkan profil KCKT dan 1 H-NMR tersebut maka dapat dipastikan bahwa senyawa yang diisolasi dalam penelitian ini adalah emestrin.

## Analisis KCKT dan Kadar Emestrin
Analisis produksi emestrin oleh kapang E.nidulans dilakukan pada setiap periode kultivasi dalam media MEB dan SWS. Penelusuran emestrin dilakukan berdasarkan waktu retensi dan profil serapan UV yang dihasilkan. Emestrin yang telah diisolasi digunakan
sebagai standar. Senyawa yang terdapat dalam ekstrak kasar dari kedua jenis media tersebut dianggap sebagai emestrin jika memiliki waktu retensi dan serapan UV yang sama dengan emestrin hasil isolasi. Emestrin memiliki waktu retensi sekitar 16 menit dan memiliki serapan optimum (  max) pada panjang gelombang sekitar 210-215 dan 252 nm.
Berdasarkan kromatogram KCKT, emestrin terdeteksi pada media MEB yang dikultivasi pada minggu ke-1, 2, dan 3 serta pada media SWS pada minggu ke-1, 2, 3, 4, dan 5.  Waktu retensi dan profil serapan UV senyawa target yang dihasilkan dalam
Gambar 4. 1 H-NMR emestrin hasil penelitian ini (A) dan 1 H-NMR emestrin hasil penelitian Nursid et al . (2011 b ). Figure 4. 1 H-NMR of emestrin resulted in this research (A) and 1 H-NMR of emestrin resulted by Nursid et al. (2011 b ).
Gambar 5. Kurva standar emestrin. Figure 5. Standard curve of emestrin.
A B
Luas Puncak/ Peak Area Kadar Emestrin/ Emestrin Concentration (ppm) 1400000 1200000 1000000 800000 600000 400000 200000 0 0 10 20 30 40 50 60 70 y = 18945x + 32698 R 2 = 0.976
media SWS dan MEB dalam bentuk ekstrak kasar memiliki kesamaan dengan emestrin.
Kadar emestrin pada ekstrak miselium kapang E.nidulans pada media dan waktu kultivasi yang berbeda ditentukan dengan menggunakan kurva standar emestrin yang telah diisolasi. Kurva standar dibuat dengan membuat plot antara serial dosis emestrin versus luas puncak. Kurva linier standar emestrin (Gambar 5) memiliki  persamaan y=18945x + 32698 dan nilai R 2 sebesar 0,98 di mana y = luas puncak dan x = kadar emestrin.
Berdasarkan kurva standar tersebut kadar senyawa emestrin dalam ekstrak miselium E. nidulans dalam media dan waktu kultivasi yang berbeda dapat ditentukan. Kadar emestrin yang dihasilkan oleh E. nidulans pada media SWS paling tinggi pada minggu ke-5 yaitu sebesar 103,5 ppm dan terendah pada minggu ke-2 sebesar 22,5 ppm, pada media MEB tertinggi pada minggu ke-2 (42,2 ppm) dan terendah pada minggu ke-4 (5,8 ppm). Berdasarkan analisis KCKT, kadar emestrin pada minggu ke-4 dan ke-5 sangat kecil dibandingkan kadar emestrin pada minggu ke-1, 2, dan 3. Hal ini mungkin disebabkan pada minggu ke-4 dan ke-5 emestrin yang terdapat dalam miselium digunakan sebagai prekursor dalam biosintesis senyawa lain yang diperlukan sehingga kadarnya menyusut.  Kromatogram emestrin dalam ekstrak kasar miselium E. nidulans pada media SWS minggu ke-5 dan media MEB minggu ke-2 disajikan pada Gambar 6.
Tingginya kadar emestrin SWS berhubungan dengan komposisi media kultivasi yang digunakan. Pati dapat larut yang terdapat pada media SWS kemungkinan besar menjadi sumber C dan H yang baik sebagai bahan dasar biosintesis emestrin. Struktur emestrin disajikan pada Gambar 7. Biosintesis ETP termasuk emestrin terjadi dengan melibatkan asam-asam amino tertentu sebagai prekursornya, misalnya senyawa ETP gliotoksin yang membutuhkan asam amino fenilalanin dan serin dalam tahapan awal biosintesisnya. Kehadiran atom S (Gambar 7) kemungkinan berasal dari metionin, sistein dan sodium sulfat meskipun mekanisme atom S diintroduksi ke dalam struktur ETP  masih belum diketahui. Gen-gen yang bertanggungjawab terhadap biosintesis ETP secara khusus disintesis melalui modular enzim non-ribosomal peptide synthetases (NRPSs) yang secara umum terdapat dalam bentuk cluster (Gardiner et al ., 2005; Jiang & Guo, 2011).
Menurut Calvo et al . (2002) senyawa metabolit sekunder pada kapang pada umumnya berhubungan dengan proses sporulasi. Senyawa metabolit sekunder yang berasosiasi dengan proses sporulasi secara garis besar dapat dibagi menjadi 3 bagian yaitu: 1) metabolit yang berperan mengaktivasi proses sporulasi, misalnya derivat asam linoleat yang dihasilkan oleh Aspergillus nidulans , 2) pigmen yang dibutuhkan untuk pembentukan struktur sporulasi, misalnya melanin yang diperlukan untuk pembentukan dan integritas spora aseksual maupun seksual, dan
Tabel 1. Kadar emestrin (/1 mg) ekstrak kasar yang dihasilkan E. nidulans pada media dan waktu kultivasi yang berbeda
Table 1. Emestrin concentrations (/1 mg) of crude extract yielded from E. nidulans at different medium and cultivation time
Media/ M edia Waktu (minggu)/ Time (week) Luas Puncak/ Peak Area Kadar Emestrin/ Emestrin Concentration (ppm) 1 634983 31.8 2 496845 22.5 3 1775040 85.0 4 1400610 65.5 5 2124840 103.5 1 273522 30.2 2 262070 42.2 3 211451 32.4 4 142114 5.8 5 145072 5.9
SWS MEB
Kadar Emestrin Emericella nidulans yang Dikultivasi.............................................................................(M. Nursid et al.)
Gambar 6. Kromatogram KCKT emestrin (tanda panah) dan serapan UV yang dihasilkan (insert) E.nidulans pada media SWS minggu ke-5 dan MEB minggu ke-2.
Figure 6. HPLC chromatogram of emestrin (arrows) and UV absorbance (insert) produced by E.nidulans on the fifth week in SWS medium and second week in MEB medium.
3) metabolit toksik yang dihasilkan oleh koloni yang sedang tumbuh. Menurut Gandjar et al. (2006), selama pertumbuhannya, kapang menghasilkan senyawa-senyawa yang tidak diperlukan lagi dan dikeluarkan ke lingkungannya. Senyawa-senyawa tersebut digunakan sebagai sarana untuk
mempertahankan diri dari serangan organisme lain termasuk terhadap sesama mikroba. Dalam kaitannya dengan hasil penelitian ini maka produksi emestrin pada kapang E.nidulans berhubungan dengan sistem pertahanan diri dengan menghasilkan metabolit toksik untuk melindungi koloni yang sedang tumbuh. Dalam
MEB minggu ke-2/ MEB 2 nd week
SWS minggu ke-5/ SWS 5 nd week
kasus lain, produksi senyawa aktif emericellamide dari E.nidulans yang dikultivasi secara tunggal jumlahnya lebih sedikit bila dibandingkan dengan E.nidulans yang dikultivasi bersama ( co-culture ) dengan aktinomisetes Salinispora arenicola. Emericellamide kemungkinan besar diproduksi sebagai respon untuk menghambat pertumbuhan aktinomisetes tersebut (Oh et al ., 2007; Chiang et al ., 2008).

## KESIMPULAN
Kapang E. nidulans yang dikultivasi pada media SWS selama 5 minggu menghasilkan jumlah biomassa yang paling banyak, tetapi rendemen ekstrak kasar yang terbanyak dihasilkan oleh kapang E. nidulans yang dikultivasi pada media MEB selama 5 minggu.
Kadar emestrin tertinggi dihasilkan oleh kapang E. nidulans yang dikultivasi di dalam media SWS selama 5 minggu dengan konsentrasi sebesar 103,5 ppm/1,0 mg ekstrak kasar dan pada media MEB kadar emestrin tertinggi dihasilkan pada minggu ke-2 dengan konsentrasi sebesar 42,2 ppm/1,0 mg ekstrak kasar.

## DAFTAR PUSTAKA
Bugni, T.S. and Ireland, C.M. 2004. Marine-derived fungi: a chemically and biologically diverse group of microorganisms. Nat. Prod. Rep. 21: 143–163. Calvo, A.M., Wilson, R.A., Bok, J.W., and Keller, N.P.  2002.
Relationship between secondary metabolism and fungal development. Microbiology and Molecular Biology Reviews . 66(3): 447–459.
Chiang, Y.M., Szewczyk, E., Nayak, T., Davidson, A.D., Sanchez, J.F., Lo, H.C., Ho, W.Y., Simityan, H., Kuo, E., Praseuth, A., Watanabe, K., Oakley, B.R., and Wang, C.C.C. 2008.  Molecular genetic mining of the Aspergillus secondary metabolome: discovery of the emericellamide biosynthetic pathway. Chemistry & Biology . 15:  527–532.
Dharmaputra, O.K., Gunawan, A.W., dan Nampian.  1989 . Penuntun Praktium Mikologi Dasar . Pusat Antar Universitas Ilmu Hayat, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Gandjar, I., Sjamsuridzal, W., dan Oetari, A. 2006. Mikologi Dasar dan Terapan. Yayasan Obor Indonesia, Jakarta.
Gardiner, D.M., Waring, P., and Howlett, B.J. 2005. The epipolythiodioxopiperazine (ETP) Class of Fungal Toxins: Distribution, Mode of Action, Functions and Biosynthesis. Microbiology . 151: 1021–1032. Jang, J.H., Kanoh, K., Adachi, K., and Shizuri, Y. 2006. Awajanomycin, a Cytotoxic d-Lactone- ä -lactam Metabolite from Marine-Derived Acremonium sp. AWA16-1. Journal of Natural Product . 69 : 1358-1360 Jiang, C.S. and Guo, Y.W. 2011. Epipolythio- dioxopiperazines from Fungi: Chemistry and Bioactivities. Mini-Reviews in Medicinal Chemistry. 11: 728-745
Kjer, J., Debbab, A., Aly, H., and Proksch, P.  2010. Methods for isolation of marine-derived  endophytic fungi and their bioactive secondary products. Nature Protocols . 5(3): 479–490.
Kralj, A., Kehraus, S., Krick, A., Eguereva, A., Kelter, G., Maurer, M., Wortmann, A., Fiebig, H.H., and Konig, M. 2006.  Arugosin G and H: prenylated polyketodes from marine-derived fungi Emericella nidulans var. acristata . Journal of Natural Products . 69: 995–2000.
Nursid, M., Chasanah, E., Murwantoko, dan Wahyuono,
S. 2011 a . Penapisan kapang laut penghasil senyawa
O N N O O O O O O OH S S OH OH 1 2 3 4 5 5a 6 8 10 10a 11 11a 7' 1' 5' 4' 3' 2' 1" 6" 5" 3" 2" 7"
Gambar 7. Struktur molekuler emestrin (Jiang & Guo, 2011). Figure 7. Molecular structure of emestrin (Jiang & Guo, 2011).
Kadar Emestrin Emericella nidulans yang Dikultivasi.............................................................................(M. Nursid et al.)
sitotoksik dari beberapa perairan di Indonesia. Jurnal Penelitian Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan . 6(1): 45–56.
Nursid, M., Chasanah, E., Murwantoko, and Wahyuono, S. 2011 b . Isolation and identification of emestrin from Emericella nidulans and investigations of its
anticancer properties. Microbiology Indonesia . 5(4): 160–169.
Oh, D.C., Kauffman, C.A., Jensen, P.R., and Fenical, W. 2007. Induced Production of Emericellamides A and B from the Marine-Derived Fungus Emericella sp. in Competing Co-culture. Journal of  Natural  Products . 70: 515–520.