## UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA FRAKSI DAUN JERUK LEMON
( Citrus limon (L.) Osbeck) TERHADAP Stapylococcus aureus DAN Escherichia coli
Siti Rachmawati 1 , Winda Oktima 2 , Pangeran Andareas 3* 1 Program Studi S1 Farmasi STIKes Bani Saleh, Bekasi 2 Program Studi S1 Farmasi STIKes Bani Saleh, Bekasi
3 Program Studi S1 Farmasi Universitas Pelita Harapan, Karawaci *Corresponding author: pangeran.andreas@uph.edu

## Abstract
Infection is a condition where the entry of microorganisms into the body's tissues, multiplies and causes disease in  the  form  of  disruption  of  body  functions.  Lemon  leaves  (Citrus  limon (L.)  Osbeck )  are  plants  that  have  the potential to have antimicrobial power in the presence of bioactive compounds. The purpose of this study was to determine the antimicrobial activity of lemon fraction against Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Ethyl acetate  fraction  is  more  effective  in  inhibiting  bacteria,  compared  to  ethanol  and  n-hexane  extract  based  on preliminary tests conducted. Disk diffusion antimicrobial activity test (Kirby-Bauer) was used at a concentration of  5%  the  ethyl  acetate  fraction  effectively  inhibited  Staphylococcus  aureus  bacteria  with  a  diameter  of inhibition  zone  was  12.3  mm  while  the  Escherichia  coli  bacteria  was  8.7  mm  at  a  concentration  of  25%.  The results of data analysis using One-Way ANOVA (analysis of variance) showed a significant difference based on variations in concentration in inhibiting Staphylococcus aureus and Escherichia coli .
Keywords : Lemon leaves, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, antimicrobial

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  menjadi  salah  satu penyebab kematian utama di seluruh dunia. Menurut  WHO  (2011),  tahun  2011 terdapat  25  juta  kasus  kematian  di  dunia dan sepertiganya disebabkan oleh penyakit infeksi.  Penyakit  infeksi  juga  masih merupakan  penyakit  yang  paling  banyak diderita oleh negara berkembang, termasuk Indonesia.  Berdasarkan  survei  DepKes  RI (2007), penyebab utama kematian manusia antara lain 28,1% disebabkan oleh penyakit  infeksi  dan  parasit,  18,9% disebabkan  oleh  vascular,  dan  15,7% disebabkan  oleh  penyakit  pernafasan. Beberapa mikroorganisme yang menyebabkan  penyakit  infeksi  merupakan flora  normal  yang  ada  di  dalam  tubuh makhluk hidup,  yang bisa bersifat patogen
ketika  berada  diluar  habitat  normalnya, mikrooganisme  demikian  disebut patogen opurtunistik (Diba, 2015).
S.  aureus dan E.  coli merupakan beberapa  jenis  flora  normal  yang  ada  di dalam  tubuh  manusia  yaitu  pada  kulit, mukosa,  hidung,  mulut,  dan  usus  besar. S. aureus adalah  bakteri  Gram  Positif  yang dapat  menyebabkan  infeksi  pada  kulit, keracunan makanan, pneumonia, meningitis,  dan  edokarditis. E.  coli adalah bakteri Gram Negatif yang bersifat anaerob fakultatif  dan  dapat  menyebabkan  infeksi saluran  kemih,  diare, gastroenteritis , meningitis  neonates ,  dan  sindrom uremik hemolitik .  Penanganan  penyakit  infeksi dapat  diobati  menggunakan  antimikroba salah  satunya  adalah  antibiotik  (Radji, 2018).
Siti Rachmawati et al. : Uji Aktivitas Antimikroba Fraksi Daun Jeruk Lemon ( Citrus limon (L.) Osbeck) terhadap Stapylococcus aureus dan Escherichia coli
Upaya  pencarian  antimikroba  yang aman  dan  alami  dapat  dilakukan  dengan memanfaatkan bahan bioaktif dan senyawa antimikroba  alami  yang  terkandung  dalam tanaman.  Salah  satu  tanaman  yang  sering digunakan  adalah  jeruk  lemon  ( Citrus limon (L.)  Osbeck). C.  limon (L.)  Osbeck sering  digunakan  masyarakat  sebagai bahan masakan, selain itu juga bermanfaat sebagai  obat  nyeri,  menurunkan  demam, dan  obat  saluran  pencernaan  (Batubara, 2017).  Penelitian  Maya et  al .,  (2017), melaporkan  bahwa  ekstrak  daun  jeruk sambal  memiliki  aktivitas  antimikroba terhadap  bakteri S.  aureus , Salmonella thypi , Bacillus  subtilis, dan E.  coli pada konsentrasi 50%. Berdasarkan latar belakang yang dikemukakan diatas, penulis tertarik  untuk  meneliti  lebih  lanjut  tentang aktivitas  antimikroba  dari  fraksi  ekstrak daun C.  limon (L.)  Osbeck  terhadap pertumbuhan S. aureus dan E. coli .

## METODE PENELITIAN
Ekstraksi Sampel
Simplisia  daun C. limon (L.)  Osbeck ditimbang  sebanyak  1300  gr,  kemudian dimasukkan ke dalam Erlenmeyer, kemudian  ditambahkan  etanol  sebanyak 13  L  ke  dalam  toples  kaca  dan  tertutup rapat. Lalu diaduk dan didiamkan selama 3 hari dan sehari sekali dilakukan pengocokan.  Setelah  3  hari  kemudian
disaring  dengan  menggunakan  kertas saring  dan  diuapkan  menggunakan rotary evaporator pada  suhu  40 o C  sampai didapatkan  ekstrak  kental  (Mayasari  dan Laoli, 2018).

## Uji Penapisan Fitokimia
1. Pemeriksaan Alkaloid
Ekstrak  daun C.  limon (L.)  Osbeck ditimbang  sebanyak  0,5  gr  kemudian ditambahkan  1  ml  HCl  2  N  dan  9  ml  air suling,  setelah  itu  dipanaskan  diatas penangas  air  selama  2  menit,  lalu didinginkan  dan  disaring.  Filtrat  yang diperoleh  kemudian  dimasukkan  ke  dalam 3  tabung  reaksi  yang  berbeda  masing- masing sebanyak 0,5 ml untuk uji alkaloid. Pada  tabung  pertama  ditambahkan  2  tetes pereaksi  Mayer,  pada  tabung  kedua ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Wagner  dan pada  tabung  ketiga  ditambahkan  2  tetes pereaksi
Dragendorff.
Alkaloid
menunjukkan  hasil  positif  ketika  terjadi endapan  atau  kekeruhan  pada  paling sedikit  dua  dari  tiga  percobaan  diatas (Depkes RI, 1995.
2. Pemeriksaan Fenol
Ekstrak  daun C.  limon (L.)  Osbeck diambil  sebanyak  3  tetes,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  lalu ditambahkan  dengan  metanol  kemudian diaduk  dan  ditambahkan  5  tetes  pereaksi FeCl 3 3%.  Hasil  positif  menunjukkan adanya senyawa fenol jika terjadi
perubahan  warna  menjadi  warna  hijau kebiruan atau biru gelap (Khoirani, 2013).
3. Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak  1  ml  ekstrak  daun C.  limon (L.) Osbeck, dimasukkan ke dalam tabung reaksi  dan  ditambahkan  2  ml  etanol  70% kemudian diaduk. Setelah itu ditambahkan 0,1 gr serbuk magnesium dan 3 tetes HCL pekat. Flavonoid menunjukkan hasil positif jika  terjadi  perubahan  warna  merah  atau kuning atau jingga (Khoirani, 2013).
4. Pemeriksaan Saponin
Ekstrak  daun C.  limon (L.)  Osbeck diambil sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan  air  panas  sebanyak  10  ml, didinginkan lalu dikocok kuat-kuat  selama ± 10 detik. Jika terbentuk busa setinggi  1- 10 cm yang stabil dan tidak kurang dari 10 menit  dan  busa  tidak  hilang  dengan penambahan 1 tetes HCl 2 N menunjukkan hasil  positif  adanya  saponin  (Depkes  RI, 1995).
5. Pemeriksaan Tanin
Ekstrak  daun C.  limon (L.)  Osbeck diambil  sebanyak  1  ml,  dimasukkan  ke dalam  cawan,  ditambahkan  2  ml  etanol 70% kemudian diaduk, lalu ditambahkan 3 tetes FeCl 3 1%. Uji positif jika menghasilkan warna biru, biru-hitam, hijau kehitaman  atau  biru-hijau,  dan  endapan (Mandal dan Ghasal, 2012 dalam Khoirani, 2013).
6. Pemeriksaan Steroid dan Triterpenoid Ekstrak  daun C.  limon (L.)  Osbeck diambil  sebanyak  1  ml,  dimasukkan  ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 5 tetes CH 3 COOH dan 2 tetes H 2 SO 4 pekat  melalui  dinding  tabung,  lalu dikocok perlahan. Jika menunjukkan warna hijau atau kebiruan maka positif mengandung steroid dan jika menunjukkan berupa  cincin  kecoklatan  atau  violet  pada perbatasan  dua  pelarut  maka  positif mengandung triterpenoid (Khoirani, 2013).

## Fraksinasi Ekstrak
Fraksinasi  dilakukan  dengan  metode FCC (Fraksinasi Cair-Cair) dengan pelarut n- heksana  dan  etil  asetat.  Sebanyak  80  gr ekstrak etanol dilarutkan aquadest sebanyak  30  ml,  dimasukkan  ke  dalam corong  pisah  dengan  kran  tertutup, kemudian  ditambahkan  200  ml n -heksana kocok  secara  perlahan  hingga  homogen. Setelah  terlihat  lapisan  larutan  yang terpisah, kemudian fraksi n -heksana dipisahkan dari fraksi air dengan membuka kran  corong  pisah  dan  ditampung  dalam Erlenmeyer.  Fraksi n -heksana  kemudian diuapkan  dengan rotary  evaporator pada suhu  40 o C  sehingga  diperoleh  ekstrak n - heksana  kental.  (Marcelinda  dan  Ridhay, 2016).

## Pengujian Antimikroorganisme
Uji aktivitas antimikroba dalam penelitian  ini  menggunakan  metode Disc Diffusion ( Test Kirby-Bauer ). Sampel yang
Siti Rachmawati et al. : Uji Aktivitas Antimikroba Fraksi Daun Jeruk Lemon ( Citrus limon (L.) Osbeck) terhadap Stapylococcus aureus dan Escherichia coli
akan  diuji  adalah  ekstrak  kental  etanol, fraksi n- heksan  dan  etil  asetat  dengan konsentrasi  yang  telah  ditentukan  melalui uji  pendahuluan  pada  masing-masing sampel  uji.  Suspensi S. aureus dan E.  coli dimasukkan  pada  media MHA dalam cawan  petri,  kemudian  digoreskan  dengan kapas  ulas  steril  di  atas  media  uji.  Media yang  telah  berisi  bakteri  uji  kemudian dimasukkan  kontrol  positif, disk yang sebelumnya  telah  ditetesi  larutan  kontrol negatif,  sampel  uji  ekstrak  kental  etanol, fraksi n -heksan  dan  fraksi  etil  asetat dengan  cara  difusi  agar.  Kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Pengujian  aktivitas  antimikroba  dikatakan positif  ketika  terdapat zona  bening disekitar  kertas  cakram  yang  menandakan bebas  pertumbuhan  bakteri,  jika  dalam  uji pendahuluan disekitar cakram tidak menunjukkan  zona  bening,  maka  perlu ditingkatkan konsentrasinya hingga diperoleh  zona  bening  disekitar  cakram (Diba, 2015).

## Metode Analisis
Data  yang  diperoleh  dari  penelitian dilakukan  analisis  parametrik One-Way ANOVA ( Analysis  of  Variance )  dengan tingkat  kepercayaan  95%.  Metode One- Way ANOVA digunakan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh perbedaan konsentrasi terhadap diameter zona hambat dilihat  dari  nilai  signifikan  pada  output
dengan  menggunakan Microsoft  excel 2010.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Daun C. limon (L.) Osbeck Hasil  ekstraksi  diperoleh  ekstrak kental berwarna hijau pekat dan aroma dari daun  jeruk  lemon  yang  khas  dengan  berat ekstrak  sebesar  111,31  g,  dan  rendemen ekstrak yang diperoleh sebesar 8,5%. Hasil persentase  rendemen  ekstrak  daun  jeruk lemon  lebih  besar  dibandingkan  dengan hasil  daun  jeruk  purut  dari  penelitian  Sari dan  Ayati  (2018)  dengan  persentase rendemen  5,38%.  Perbedaan  persentase rendemen  ini  diduga  disebabkan  oleh beberapa  faktor  antara  lain  jenis  spesies yang berbeda, lamanya proses perendeman saat  ekstraksi,  partikel  simplisia  yang terlalu  besar  atau  jenis  pelarut  yang digunakan. Peramawati (2008) menyatakan bahwa  besar  kecilnya  nilai  persentase rendemen menunjukkan keefektifan proses ekstraksi.  Efektivitas  proses  ekstraksi dipengaruhi  oleh  jenis  pelarut  yang digunakan sebagai penyari, ukuran partikel simplisia,  metode  dan  lamanya  ekstraksi (Diba, 2015).
Uji  Penapisan  Fitokimia  Daun C.  limon

## (L.) Osbeck
Uji  skrining  fitokimia  merupakan  uji yang dilakukan untuk mengetahui senyawa metabolit  yang  ada  di  dalam  ekstrak  daun
C.  limon (L.)  Osbeck.  Berdasarkan  hasil
skrining fitokimia senyawa yang terkandung  dalam  ekstrak  daun C.  limon (L.)  Osbeck  meliputi  alkaloid,  flavonoid, fenol, saponin, tanin, dan triterpenoid/steroid.  Hal  ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Sapra et al .,
(2018)  menyatakan  bahwa C.  limon (L.) Osbeck  mengandung  senyawa  alkaloid, flavonoid,  glikosid,  triterpenoid/steroid, dan karbohidrat.

## Fraksinasi Ekstrak Daun Jeruk Lemon
Hasil  fraksinasi  dari  80  gr  ekstrak daun jeruk lemon diperoleh berat n- heksan sebanyak  6,83  gr,  lebih  besar  dibandingan fraksi  etil  asetat  sebanyak  2,03  gr.  Proses fraksinasi  menyebabkan  senyawa  pada ekstrak  akan  terikat  dengan  pelarut  yang sesuai dengan tingkat kepolarannya. Semakin  polar  sifat  pelarutnya,  makan akan  semakin  besar  jumlah  fraksi  yang didapat (Hashim et al ., 2012).
Uji  Aktivitas  Antimikroba  Fraksi  Etil Asetat  Daun C.  limon (L.)  Osbeck terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli .
Berdasarkan  uji  pendahuluan  yang telah dilakukan, fraksi etil asetat lebih aktif dalam  menghambat  bakteri S.  aureus dan E.  coli .  Fraksi  etil  asetat  kemudian dilakukan penentuan seri konsentrasi untuk bakteri S.  aureus sebesar  5%,  10%,  15%, 20%, dan 25%, sedangkan untuk bakteri E.
coli sebesar  25%,  30%,  35%,  40%,  dan 50%.
Hasil uji aktivitas antimikroba menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat mempunyai diameter zona hambat terbesar pada  konsentrasi  25%  dengan  rata-rata diameter  zona  hambat  yang  diperoleh sebesar 16,16 mm pada S. aureus dan zona hambat  terkecil  pada  konsentrasi  5% dengan diameter zona hambat sebesar 12,3 mm,  sedangkan  pada  bakteri E.  coli zona hambat  terbesar  pada  konsentrasi  50% dengan  rata-rata  diameter  zona  hambat sebesar  10,57  mm  dan  zona  hambat terkecil  diperoleh  sebesar  8,7  mm  pada konsentrasi 25%. Semakin kecil konsentrasi,  semakin  kecil  zona  hambat yang  terbentuk.  Sesuai  dengan  pendapat (Salni et  al .,  2013)  menyatakan  bahwa daya  aktivitas  fraksi  menurun  seiring dengan  penurunan  konsentrasi,  sehingga diameter yang terbentuk semakin kecil.
Etil asetat merupakan senyawa semipolar,  senyawa  yang  tertarik  oleh fraksi  etil  asetat  kemungkinan  senyawa yang  bersifat  semipolar.  Berdasarkan penelitian  yang  dilakukan  Diba  (2015) dalam  uji  aktivitas  antibakteri  fraksi  dan senyawa  aktif  dari  kulit C.  limon (L.) Osbeck  terhadap  bakteri S.  aureus dan E. coli ,  mengatakan  bahwa  fraksi  etil  asetat melalui  metode  bioautografi  mengandung senyawa aktif flavonoid. Flavonoid merupakan golongan mengandung
Siti Rachmawati et al. : Uji Aktivitas Antimikroba Fraksi Daun Jeruk Lemon ( Citrus limon (L.) Osbeck) terhadap Stapylococcus aureus dan Escherichia coli
senyawa  fenol  yang  sangat  berpotensi sebagai antimikroba dengan cara mendenaturasi  protein  pada  dinding  sel bakteri  sehingga  merusak  dan  merubah mekanisme pertumbuhan bakteri.
Sedangkan  berdasarkan  penelitian  yang dilakukan  Maulida et  al .,  (2016)  dalam isolasi dan identifikasi senyawa kimia dari ekstrak n -heksan  batang  benalu  tanaman jeruk  mengatakan  bahwa  fraksi  etil  asetat batang  benalu  tanaman  jeruk  mengandung senyawa  steroid  dan  tanin.  Steroid  juga termasuk  ke  dalam  antimikroba  yang  kuat dimana  mekanisme  kerja  steroid  dalam menghambat  mikroba  adalah  dengan merusak  membran  plasma  sel  bakteri, sehingga menyebabkan bocornya sitopasma  keluar  sel  yang  selanjutnya menyebabkan  kematian  (Halimah et  al ., 2019).  Sedangkan  tanin  bekerja  sebagai antimikroba  dengan  cara  mengendapkan protein  dan  dapat  merusak  membran  sel sehingga  pertumbuhan  bakteri  terhambat, kerusakan  tersebut  meyebabkan  kematian bakteri (Fitriahani, 2017).
Kontrol  positif  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  amoxicillin  dan gentamicin.  Adanya  uji  kontrol  positif bertujuan  untuk  membandingkan  antara diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  dari fraksi  etil  asetat  dengan  amoxicillin  dan gentamicin. Diameter zona hambat amoxicillin  yang  terbentuk  pada S.  aureus
sebesar  42,6  mm  sedangkan  pada E.  coli sebesar 25.83 mm. Amoxicillin merupakan antibiotik  spektrum  luas  yang  dapat menghambat bakteri gram positif dan gram negatif.  Antibiotik  ini  biasanya  menjadi pilihan pada kelasnya karena penyerapannya  yang  lebih  baik.  Beberapa bakteri  gram  positif  yang  peka  terhadap amoxicillin  yaitu Streptococcus  spp., Streptococcus  pneumonia,  Staphylococcus aureus , dan Enterococcus faecalis , sedangkan  bakteri  gram  negatif  yang  peka yaitu Escherichia coli , Neisherihia gonorrhoeae, dan Salmonella spp (Sumampouw,  2018).  Mekanisme  kerja dari amoxicillin yaitu dengan menghambat enzim transpeptidase dalam sintesis dinding sel bakteri, proses sintesis dinding sel yang tidak sempurna dapat menyebabkan lisis sel dan kematian bakteri (Radji, 2017).
Gentamisin  memiliki  zona  hambat sebesar  29.1  mm  pada  bakteri S.  aureus dan  21.1  mm  pada  bakteri E.  coli . Gentamisin merupakan antibiotik golongan aminoglikosida  yang  banyak  digunakan pada  orang  yang  menderita  penyakit infeksius.  Gentamisin  dapat  diberikan secara  parenteral  pada  seseorang  yang terinfeksi  oleh  bakteri  gram  negatif sensitif,  antara  lain Pseudomonas  sp, Klebsiella  sp , Escherichia  coli ,  dan Enterobacter . Mekanisme kerja gentamisin
yaitu  menghambat  sintesis  protein  bakteri yakni  berikatan  secara irreversible dengan ribosom  30S,  menghambat  proses  inisiasi sehingga  terjadi  kesalahan  membaca  kode genetik mRNA dan  terminasi  prematur yang  menghasilkan  protein  yang defektif (Radji, 2017). Diameter zona hambat fraksi etil  asetat  pada E.  coli lebih  kecil dibandingkan  diameter  zona  hambat S. aureus ,  hal  ini  menunjukkan  bahwa S. aureus lebih  sensitif  terhadap  bahan bioaktif. Pernyataan ini diduga disebabkan adanya  perbedaan  komposisi  struktur
dinding sel pada masing-masing bakteri uji yang  menyebabkan  perbedaan  bahan bioaktif  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri  tersebut.  Lapisan  peptidoglikan  sel bakteri  gram  positif  relatif  lebih  tebal  dan struktur  dinding  sel  berlapis  tunggal, sedangkan bakteri gram negatif mempunyai  lapisan  peptidoglikan  yang lebih tipis dan dikelilingi lapisan lipoprotein,  lipopolisakarida,  fosfolipid, dan  protein,  serta  memiliki  dua  membran yakni  membran  sitoplasma  dan  membran luar (Radji, 2017).
Tabel  1. Hasil  Uji  Aktivitas  Antimikroba  Fraksi  Etil  Asetat  Daun C.  limon terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .
Bakteri Konsentrasi Sampel Rata-rata Daya Hambat Staphylococcus aureus Amoxycillin 42.6 Sangat Kuat Gentamisin 29.1 Sangat Kuat DMSO - - 5% 12.3 Kuat 10% 14.43 Kuat 15% 15.26 Kuat 20% 14.86 Kuat 25% 16.16 Kuat Escherichia Coli Amoxycillin 25.83 Sangat Kuat Gentamisin 21.1 Sangat Kuat DMSO - - 25% 8.7 Sedang 30% 9.07 Sedang 35% 9.63 Sedang 40% 9.53 Sedang 50% 10.57 Sedang
Gambar  1. Hasil  Uji  Aktivitas  Fraksi  Etil Asetat  Daun C.  limon (L)  Osbeck  terhadap S. aureus .
Sumber: Dokumen Penulis
Gambar  2. Hasil  Uji  Aktivitas  Fraksi  Etil Asetat  Daun C.  limon (L)  Osbeck  terhadap E. coli .
Sumber: Dokumen Penulis
Siti Rachmawati et al. : Uji Aktivitas Antimikroba Fraksi Daun Jeruk Lemon ( Citrus limon (L.) Osbeck) terhadap Stapylococcus aureus dan Escherichia coli
Tabel  2. Hasil  Analisis  Zona  Hambat  Fraksi  Daun C.  limon (L.)  Osbeck  terhadap  Pertumbuhan S. aureus menggunakan Anova Satu Arah.
Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 25.32666667  4 6.331666667  4.6037J2429 0.022891274    3.478049691 Within Groups 13.75333333  10 1.375333333 Total 39.08 14
Tabel 3. Hasil Analisis Zona Hambat Fraksi Daun C. limon (L.) Osbeck terhadap Pertumbuhan E. coli menggunakan Anova Satu Arah.
Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 5.953333333  4 1.488333333  5.228337237  0.01552384 3.478049691 Within Groups 2.846666667  10 0.284666667 Total 8.8 14
Kemampuan  daun C.  limon (L.)
Osbeck  sebagai  antimikroba  terhadap bakteri S. aureus dan E. coli terbukti dalam penelitian ini dengan terbentuknya diameter zona hambat pada media pertumbuhan  bakteri.  Kemampuan C. limon (L.)  Osbeck  telah  terlebih  dahulu diuji dengan bagian tanaman yang digunakan berbeda-beda. Menurut penelitian  yang  dilakukan  Nur et  al ., (2018)  menyatakan  bahwa  minyak  atsiri buah  lemon  dalam  sediaan  gel shampoo dengan  formula  yang  mengandung  basis HPMC (6%) mampu menghambat pertumbuhan jamur Malassezia sp . dengan zona hambat 29.4 mm. Menurut penelitian Newton et  al., (2012)  melaporkan    bahwa ekstrak metanol kulit buah jeruk purut dan C.  limon (L.)  Osbeck  memiliki  efek antimikroba  terhadap  bakteri  patogen seperti Staphylococcus  aureus,  Salmonella typhi, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, dan Proteus vulgarius .
Penelitian yang dilakukan Dhavesia
(2017),  menyatakan  bahwa  ekstrak  daun jeruk  purut  efektif  menghambat  bakteri
Pseudomonas aeruginosa
dan Staphylococcus epidermidis pada konsentrasi 50%.
Perbedaan  besarnya  zona  hambat  dari masing-masing  penelitian  ini  disebabkan karena  perbedaan  bagian  tanaman  yang digunakan  serta  spesies  tanaman  yang berbeda,  akan  tetapi  memiliki  kekerabatan yang dekat  yakni sama-sama dari keluarga citrus  sehingga  kandungan  bahan  bioaktif yang  menghambat  pertumbuhan  bakteri tidak terlalu berbeda.
Berdasarkan  hasil  uji Anova pada diameter  zona  bening  yang  terbentuk terhadap  bakteri S.  aureus berdasarkan variasi konsentrasi diperoleh nilai F hitung > F tabel, maka H 0 ditolak dan H 1 diterima. Hal  ini  menandakan  ada  perbedaan  yang signifikan  terhadap  variasi  konsentrasi. Selanjutnya  pada  Tabel  2  terlihat  nilai P- value =  0,0228  <  0,05,  maka  disimpulkan terdapat  perbedaan  yang  bermakna  antara
serial  konsentrasi  fraksi  etil  asetat  dalam menghambat  bakteri S.  aureus .  Hasil Analisis  pada  bakteri E.  coli yang  terlihat pada  Tabel  3,  diperoleh  nilai P-value = 0,0155  <  0,05,  maka  terdapat  perbedaan bermakna  antara  serial  konsentrasi  fraksi etil  asetat  dalam  menghambat  bakteri E. coli.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat daun C.  limon (L.)  Osbeck  dengan  konsentrasi 5%  memiliki  aktivitas  antimikroba  paling efektif  terhadap  pertumbuhan S.  aureus, sedangkan  konsentrasi  antibakteri  paling efektik  terhadap  pertumbuhan E.  coli adalah sebesar 25%.

## DAFTAR PUSTAKA
Batubara  NA.  2017.  Efek  Air  Perasan Buah  Jeruk  Lemon  ( Citrus  Limon ) Terhadap  Laju  Aliran  dan  Nilai  pH Saliva dan Jumlah Koloni Staphylococcus  aureus ( In  Vivo ). Skripsi .  Universitas  Sumatera  Utara, Medan.
Departemen  Kesehatan  RI.  2007.  Survei
Kesehatan  Rumah  Tangga.  Badan penelitian dan pengembangan kesehatan, Jakarta. Depkes  RI.  1995. Farmakope  Indonesia
Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dhavesia V. 2017. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Jeruk Purut ( Citrus hystrix D.C) terhadap Pseudomonas
aeruginosa dan Staphylococcus  epidermidis . Skripsi . Universitas  Atmajaya  Yogyakarta, Yogyakarta.
Diba  MF.  2015. Senyawa  Aktif  dari  Kulit
Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Burm. F)  terhadap  Staphylococcus  aureus ATCC  25923  dan  Escherichia  coli ATCC 25922. Palembang: Universitas Sriwijaya.. Fitriahani F. 2017. Uji Aktivitas Antibakteri Etanol 70% Limbah Kulit
Pisang  ( Musa  acuminate  x  Musa balbisiana cv Candi) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli . Skripsi. UIN Maulana Malik Ibrahim, Malang.
Halimah H, Suci DM & Wijayanti,I. 2019.
Studi  Potensi  Penggunaan  Daun Mengkudu (Morinda  citrifolia  L.) sebagai Bahan Antibakteri Escherichia  coli dan Salmonella typhimurium . Jurnal  Ilmu  Pertanian Indonesia, 24 (1), 58–64.
Hashim NM, Rahmani M, Cheng G, Ee L,
Sukari MA, Yahayu M & Go R. 2012.
Antiproliferative Activity of
Xanthones  Isolated  from Artocarpus obtusus . Journal  of  Biomedicine  and Biotechnology , 1-9.
Khoirani  N.  2013.  Karakteristik  Simplisia dan Standarisasi Ekstrak Etanol Herba Kemangi  ( Ocimum  americanum L.). Skripsi .  UIN  Syarif  Hidayatullah,
Jakarta.
Marcelinda A & Ridhay A. 2016. Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Limbah  Kulit Ari Biji Kopi ( Coffea sp ) Berdasarkan Tingkat  Kepolaran  Pelarut. Online Jurnal  of  Natural  Science , 5 (1),  21–
30.
Maulida  R,  Hanif  A,  Kartika  R,  &
Simanjuntak. 2016. Isolasi dan Identifikasi  Senyawa  Kimia  dari Ekstrak  n-heksan  Batang  Benalu Tanaman Jeruk ( Dendrophtoe pentandra (  L  .)  Miq.). Jurnal  Kimia Mulawarman , 14(10), 36-41.
Maya  A,  Adam  R,  &  Laode  R.  2017.
Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun Jeruk  Sambal (Citrus  microcarpa) terhadap  Beberapa  Bakteri  Patogen. Proceeding  of  the  5  Mulawarman Pharmaceuticals  Conferences ,  23-24 April 2017, 157-164.
Siti Rachmawati et al. : Uji Aktivitas Antimikroba Fraksi Daun Jeruk Lemon ( Citrus limon (L.) Osbeck) terhadap Stapylococcus aureus dan Escherichia coli
Mayasari U & Laoli MT. 2018.
Karakterisasi  Simplisia  Dan  Skrining Fitokimia  Daun  Jeruk  Lemon ( Citrus limon (  L  .)  Burm). Klorofil ,  2(1),  7– 13.
Newton I, Ajithkumar P, & Panneerselvam R.  2012.  Effect  of Citrus  hystrix and Citrus limon Extracts on Antibacterial
Activity  Against  Human  Pathogens. Asian  Pacific  Journal  of  Tropical Biomedicine , 1-4.
Nur  A,  Ansori  M,  &  Hamidah.  2018.
Efektivitas Biolarvasida Ekstrak Fraksi  Polar  Daun Citrus  hystrix dan Citrus  aurantifolia terhadap Culex quinquefasciatus . Jurnal Vector Penyakit , 12(1), 33-38.
Peramawati M. 2008. Karakterisasi Ekstrak Air Daun Gandarusa (Justicia gendarussa Brum. F.) dan Pengaruhnya  Terhadap  Kadar  Asam
Urat Plasma Tikus Putih Jantan Yang Diinduksi  Kalium  Oksonat. Skripsi ,
Universitas Indonesia.
Radji M. 2017. Mekanisme Aksi Molekuler Antibiotik  dan  Kemoterapi .  Jakarta: EGC.
Radji  M.  2018. Buku  Ajar  MIkrobiologi . Jakarta: EGC.
Salni  Aminasih  N  &  Sriviona  R.  2013.
Isolasi Senyawa Antijamur dari Rimpang  Lengkuas  Putih  (Alpinia galangal  (L.)  Willd)  dan  Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum terhadap Candida albicans . Prosiding Semirata FMIPA, Universitas Lampung. Sapra P, Qureshi S, Mankad A, & Solanki
H.  2018. Phytochemical  Screening and  Evaluation  of  Citrus  limon Leaves, Gujarat University.
Sari  AK  &  Ayati  R.  2018.  Penentuan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol Daun Jeruk Purut ( Citrus hystrix D.C) dengan Metode  Dpph (1,1-diphenyl- 2- picrylhydrazyl). Journal of Current Pharmaceutical Science, 1 (2), 69–74. Sumampouw  OJ.  2018.  Uji  Sensitivitas
Antibiotik terhadap
Bakteri
Escherichia  Coli Penyebab  Diare Balita  di  Kota  Manado. Journal  of Current Pharmaceutical Science , 2(1),
104-110.
World  Health  Organization.  2011.  The World  Medicine  Situation  2011  3ed. Rational Use Medicine. Geneva.