ISSN: 2623-0321
Doi: https://doi.org/10.56013/bio.v11i2.1644 http://ejurnal.uij.ac.id/index.php/BIO
Skrining Fitokimia dan Uji Antibakteri Senyawa Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Lemon ( Citrus limon (L.) Osbeck)Terhadap Staphylococcus aureus
1 Reza Anindita * , 2 Helmi Yolanda 3 Maulin Inggraini
* Coresponding Author : Reza Anindita
rezaaninditaa@gmail.com
1,2,3 STIKes Mitra Keluarga Bekasi Timur

## Article History
Reviced: September 2022 Accepted: Oktober 2022 Published: Oktober 2022 Corresponding Author * Reza Anindita, E-mail :
rezaaninditaa@gmail.com No. HP/WA: 087887890529

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui  gambaran  skrining  fitokimia  dan mengevaluasi  kembali  kemampuan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  kulit buah  jeruk  lemon  terhadap  pertumbuhan S.  aureus dengan  konsentrasi 20%,40%,60%,80%,  dan  100% . Desain  penelitian  ini  adalah  eksperimental dengan  sampel  penelitian  berupa  kulit  buah  jeruk  lemon  sebanyak  10  kg  dari Pasar  Bantar  Gebang,  Bekasi,  Jawa  Barat.  Prosedur  penelitian  ini  meliputi penyiapan sampel, ekstraksi dengan metode maserasi, skrining fitokimia secara kualitatif,  dan  uji  senyawa  antibakteri  ekstrak  etanol  kulit  buah  jeruk  lemon 20%,  40%,  60%,  80%,  dan  100%  dengan  metode Kirby  Baeur .  Pada  penelitian digunakan  kontrol  positif  berupa  antibiotic  vankomisin  30  µg  dan  kontrol negatif  berupa  aquades  steril.  Analisis  data  dilakukan  dengan  pendekatan deskriptif  kuantitatif.  Hasil  rendemen  ekstrak  kental  etanol  kulit  buah  jeruk lemon menghasilkan warna cokelat kekuningan dengan bau khas aromatik. Uji skrining  fitokimia  ekstrak  etanol  kulit  buah  jeruk  lemon  menunjukkan  positif tanin,  fenolik  (fenol),  flavonoid,  saponin,  terpenoid,  dan  negatif  alkaloid. Adapun  pemberian  ekstrak  etanol  kulit  buah  lemon  dengan  konsentrasi  20%, 40%,  60%,  80%,  100%  mampu  menghambat S.aureus dengan  diameter  zona hambat secara berurutan sebesar  1.5 mm, 1.8 mm, 2.3 mm, 2.8 mm, dan 3.5 mm dengan  kategori  resisten.  Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  pemberian ekstrak etanol kulit buah lemon tidak efektif dalam menghambat pertumbuhan S.aureus .
Kata kunci : jeruk, lemon, kulit, Citrus limon, skrining, fitokimia

## ABSTRACT
The purpose of this study was to determine the description of phytochemical screening and evaluate the antibacterial activity of the ethanolic extract of lemon peel against the growth  of  S.  aureus  with  a  concentration  of  20%,  40%,  60%,  80%,  and  100%.  The design of this research is experimental with the research sample in the form of 10 kg of lemon  peel  from  Bantar  Gebang  Market,  Bekasi,  West  Java.  The  procedure  of  this research  includes  sample  preparation,  extraction  by  maceration  method,  qualitative phytochemical screening, and antibacterial test by Kirby Bauer method.  In this study, a positive control was used in the form of the antibiotic vancomycin 30 g and a negative control  in  the  form  of  sterile  distilled  water  Data  analysis  was  carried  out  with  a quantitative descriptive approach. The result of immersion of thick ethanolic extract of
lemon  peel  produces  a  yellowish-brown  color  with  a  distinctive  aromatic  odor. Phytochemical  screening  of  ethanolic  extract  of  lemon  peel  showed  positive  tannins, phenolics  (phenols),  flavonoids,  saponins,  terpenoids,  and  negative  alkaloids.  The administration of ethanol extract of lemon peel with concentrations of 20%, 40%, 60%, 80%, and 100% was able to inhibit S. aureus with inhibition zone diameters of 1.5 mm, 1.8 mm, 2.3 mm, 2.8 mm, and 3.5 mm. with resistance category. This study concluded that the administration of ethanolic extract of lemon peel was not effective in inhibiting the growth of S. aureus.Keywords:  STH, basil, cabbage, hookworm, sedimentation
Keyword : citrus, lemon, peel, Citrus limon, screening, phytochemical

## I. PENDAHULUAN
Staphylococcus  aureus termasuk  jenis bakteri gram positif dan bersifat oportunistik  yang  berpotensi  patogen pada  manusia  (Li,  2018).  Bakteri  ini mampu membentuk koloni pada kulit dan membran nasofaring manusia sehat. Selain itu,  bakteri  ini  mampu  membentuk  flora normal  dan  tidak  menyebabkan  infeksi pada  status  imunitas  normal.  Namun dalam  beberapa  kasus S.  aureus dapat memicu  infeksi  pada  integumen  dan histologi  internal  sehingga  memicu penyakit  sistemik  yang  berbahaya  bagi manusia   (Cong et al ., 2020). Apabila tidak diobati  secara  efektif  maka  dapat menimbulkan  infeksi  sekunder  yang berdampak  pada  peningkatan  angka mortalitas  dan  morbiditas  (kesehatan) (Turner et al. , 2019)
Saat ini terapi pengobatan infeksi akibat S. aureus dilakukan menggunakan antibiotik.  Tetapi  penggunaan  antibiotik seringkali
menyebabkan masalah resistensi  dan  menimbulkan  fenomena MRSA atau Methicillin-Resistant S. aureus yang  menyebabkan  bakteri S. aureus tidak  dapat  diatasi  dengan berbagai  golongan  antibiotik  (Garoy et al. , 2019).
Merujuk  pada  masalah  dan  dampak dari S.  aureus, khususnya  dampak  dari
penggunaan  antibiotik  untuk  pengobatan infeksi  akibat S.  aureus, maka  perlu dilakukan  upaya  pengganti  antibiotik berupa  pencarian  bahan  baku  alternatif yang  berpotensi  sebagai  antibakteri. Adapun  salah  satu  tumbuhan  yang memiliki kemungkinan untuk dikembangkan    sebagai  bahan  baku antibakteri jeruk lemon ( Citrus limon ).
Beberapa  penelitian  sebelumnya  yang melandasi  peneliti  dalam  melakukan  uji kandungan  antibakteri  pada    jeruk  lemon terhadap S.  aureus antara  lain  penelitian (Hindi  and  Chabuck,  2013)  ;  (Saeb et  al ., 2016)  ;  (Aburowais et  al .,  2017);  (  Hojjati and  Barzegar,  2017);  (Asker et  al. ,  2020); (PRO et  al .,  2019)  ;  (Galgano et  al. ,  2022) yang  melaporkan  bahwa  pemberian minyak  atsiri  daun  dan  buah  jeruk  lemon mampu  menghambat  bakteri S.  aureus. Penelitian  lain  yang  dilakukan  Nurdianti et  al .  (2016)  ;  Harfouch et  al .  (2019); Margareth et  al .  (2022)  menyebutkan bahwa  ekstrak  kulit  buah  lemon dapat menghalangi  pembelahan  biner S.  aureus dan S. mutans
Ajithkumar  and  Panneerselvam  (2012) menambahkan  bahwa  pemberian  ekstrak metanol kulit pohon ( bark ), daun, dan kulit buah ( peel ) efektif menghalangi perbanyakan  sel S.  aureus dengan  daerah
hambat  tertinggi  ditunjukkan  pada pemberian kulit buah jeruk lemon.  Astuti et  al .  (2021)  menyatakan  beberapa kandungan  senyawa  fitokimia  yang terkandung  di  dalam  kulit  jeruk  buah lemon  antara  lain  flavonoid,  alkaloid, saponin, dan tanin.
Berdasarkan  penelitian  sebelumnya belum  pernah  ada  data  penelitian mengenai  uji  senyawa  antibakteri  ekstrak etanol  kulit  jeruk  buah  lemon  dengan konsentrasi 20%, 40%, 60%, 80%, dan 100%
pada S.  aureus sehingga  peneliti  tertarik untuk  melakukan  penelitian  mengenai skrining fitokimia dan evaluasi kemampuan  ekstrak  kulit  jeruk  lemon dengan konsentrasi bertingkat terhadap S. aureus .  Hasil  riset  ini  diharapkan  dapat dijadikan  acuan  pencarian  informasi tentang  kemampuan  daya  hambat  kulit jeruk  buah  lemon  terhadap S.  aureus sebagai bahan baku yang dapat dikembangkan sebagai obat antibakteri.

## II. METODOLOGI PENELITIAN
Desain penelitian ini adalah eksperimental
dengan perlakuan ( treatment )  berupa  ekstrak  etanol  kulit buah  jeruk  lemon  20%,  40%,  60%,  80%, 100%, antibiotik vankomisin 30 µg (kontrol positif),  dan  aquades  steril  (kontrol negative).  Semua  perlakuan  diberikan pada S.  aureus dengan  tiga  kali pengulangan. Alat yang digunakan antara lain autoklaf automatic (Hirayama HG-80, 76L,  Jepang),  cawan  petri  (Pyrex,  USA), gelas  kimia  (Pyrex,  USA),  tabung  reaksi (Pyrex, USA), mikropipet
P100 (Socorex,Swiss),  hot  plate  dan  Stirer  (IKA C-MAG HS7,Jerman), inkubator (Memmerth  IN-30,  Jerman),  jarum  ose (ROFA,  Indonesia),  Laminar  Air  Flow (LAF) (ESCO,
Singapura), rotary evaporator (IKA-RV-3 V, Jerman) waterbath 6 Hole (HH, China), timbangan digital
analitik (Acuplus,
China), micropipette  dan  vortex  mixer  VM  300 (Gemmy, Taiwan).
Bahan  yang  digunakan  antara  lain Kulit  jeruk lemon, biakan murni S . aureus ATCC  :  6538  (laboratorium  mikrobiologi
Universitas Indonesia), vancomycin antimicrobial  susceptibility  discs (oxoid,
Jerma), Blank Disk
Antimicrobial Susceptibility (Oxoid,  jerman), Cotton  swab steril  (One  Med,  Indonesia),  Media Nutrient  Agar (NA)  (Merck,  Indonesia), Mueller  Hinton  Agar  (MHA)  (Merck, Indonesia), Etanol 70% Pro Analis (Merck, Indonesia,  NaCl  0,9%  Pro  Analis  (Merck, Indonesia)  dan  Aquades  Teknis  (ROFA, Indonesia)
Prosedur  penyiapan  sampel  bahan alam  meliputi  :  pemilihan  sampel  kulit jeruk  lemon  yang  dideterminasi  di Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia (LIPI),  Bogor,  Jawa  Barat,    pengambilan sampel  sebanyak  10  kilogram  (Kg)  jeruk lemon  dari  pasar  Bantar  Gebang  Bekasi, Identifikasi  secara  organoleptik  yang meliput  bentuk,  bau,  warna,  rasa  dan karakteristik  lainnya,  Sortasi  basah, perajangan, dan pengeringan
Serbuk  simplisia  kering  diekstraksi secara  maserasi  dengan  cara  ditimbang sebanyak  100  gr,  kemudian  dimasukkan dalam  erlenmeyer  yang  berisi  500  ml
etanol
70% lalu ditutup rapat menggunakan  alumunium  foil.  Rendam selama  3  hari  dengan  sesekali  dilakukan pengadukan  sampai  pelarut  tercampur sempurna  lalu  cairan  filtrat  disaring dengan  kertas  whatman  No.  1.  Proses maserasi  diulang  kembali  (remaserasi) selama  3  hari  dengan  cara  yang  sama sampai  diperoleh  ekstrak  cair  tidak berwarna.
Ekstrak  cair  hasil  maserasi  diuapkan dengan rotary  evaporator (suhu  40  ºC, tekanan  200  Mbar  ;  kecepatan  60  rpm) selama  ±  3  hari.  Setelah  3  hari,  dilakukan pemanasan  di  atas waterbath dengan suhu 60  ºC  untuk  memperoleh  ekstrak  kental yang  optimal.    Hasil  ekstrak  kental kemudian dilakukan uji skrining fitokimia yang  meliputi  uji  tanin,  fenolik  (fenol), flavonoid, saponin, terpenoid, dan alkaloid.
Variasi  konsentrasi  ekstrak  etanol buah belimbing wuluh pada penelitian ini sebesar  20  %,  40%,  60%,  80%  dan  100% (g/ml). Larutan kontrol terdiri dari kontrol positif berupa cakram antibiotik vankomisin  30  µg,  sedangkan  kontrol negatif  berupa  aquades  steril  yang  di teteskan  sebanyak  30  µl  pada blank  disc steril berdiameter 6 mm.
Pembuatan  suspensi  bakteri  uji dilakukan dengan cara mengambil beberapa  ose  kultur  murni  sub-biakan bakteri  uji  kemudian  dimasukkan  ke dalam  NaCl  0.9  %  lalu  divortex  hingga homogen kemudian hasilnya dibandingkan kekeruhannya dengan
larutan Mc  farland 0.5  (setara  dengan suspensi bakteri 1.5  x 10 8 CFU/ml)
Uji  daya  hambat  bakteri  dilakukan dengan metode Kirby-Bauer menggunakan teknik streak  plate 4  kuadran,  kemudian diapus  merata  pada  permukaan  media MHA  dengan  menggunakan  cotton  swab steril  dan  dibiarkan  selama  ±  5  menit. Selanjutnya  tempelkan blank  disc berisi ekstrak  etanol  kulit  lemon  sebanyak  30  µl dengan  konsentrasi  20%,  40%,  60%,  80%, 100%,  kontrol  positif,  kontrol  negatif,  dan didiamkan  ±  15  menit.  Masing  masing cawan  petri  memiliki  3  ulangan.    Semua Cawan petri diinkubasi 24 jam, suhu 37 ◦C.
Pengukuran  diameter  zona  hambat dilakukan  setelah 1x24 jam masa inkubasi dengan  mengukur  ada/tidaknya  zona bening  yang  terbentuk  disekitar  cakram perlakuan  menggunakan  penggaris.  Hasil pengukuran  diameter  zona  hambat kemudian dibandingkan dengan pedoman CLSI  (2020)  untuk  melihat  kategori sensitivitas  bakteri  uji  dalam  merespon setiap cakram perlakuan.
Analisis data pada penelitian dilakukan dengan uji deskriptif kuantitatif dengan  melihat  kategori  sensitivitas respon bakteri uji dalam merespon cakram perlakuan yang telah diolah dalam bentuk tabel. Data dalam bentuk tabel berisi rata- rata ukuran diameter zona hambat bakteri uji  dari  ketiga  bakteri  dengan  berbagai perlakuan.  Hasil  tersebut  kemudian diinterpretasikan  berdasarkan  kategori respon  sensitifitas  bakteri  yang  telah disesuaikan dengan standard CLSI (2020).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  persentase  rendemen  ekstrak kental kulit buah jeruk lemon yaitu 8.36 %. Hasil persentase  rendeman ekstrak kental
kulit buah jeruk lemon diperlihatkan pada tabel 1.
Tabel 1. Persentase Rendemen Ekstrak Kental Kulit Buah Lemon Bobot simplisia kering (gram) Bobot ekstrak kental (gram) Rendemen (%) 250 20.9 8.36
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  nilai rendemen  ekstrak  etanol  kuit  buah  lemon telah  memenuhi  persyaratan  Farmakope Herbal  Indonesia,  yaitu  rendemen  tidak kurang dari 7,2% (Depkes RI, 2000).  Hasil penelitian  ini  melengkapi  hasil  penelitian Lase  (2019)  yang  melaporkan  bahwa  nilai rendemen  ekstrak  kulit  buah  jeruk  lemon dari 30 gram berat ekstrak kental dan 300 gram  berat  simplisia  kering  sebesar  10  %. Persentase rendemen di atas nilai standard disebabkan  penggunaan  etanol  70%  yang bersifat  polar  sesuai  dengan  senyawa metabolit sekunder kulit buah jeruk lemon yang  dominan  bersifat  polar,  seperti alkaloid, flavonoid, tannin, dan terpenoid. Menurut Sudarsono dan Purwantini (2021) adanya  sifat  polar  dari  etanol  dapat melarutkan  senyawa  fitokimia  dengan polaritas  tinggi,  menengah  dan  rendah. Kesamaan  polaritas  menyebabkan  etanol mudah  memasuki  membran  sel  simplisia dan  menarik  senyawa  metabolit  sekunder di dalamnya sehingga mempengaruhi nilai rendemen  yang  diperoleh  selama  proses ekstraksi. Hal  ini dibuktikan  dengan  hasil
pada gambar 1. berupa banyaknya ekstrak kental  kulit  buah  jeruk  lemon  yang berwarna cokelat kekuningan dengan bau khas aromatik.
Gambar 1. Ekstrak kental kulit lemon
Hasil ekstrak kental kemudian dilakukan skrining fitokimia yang meliputi  uji  flavonoid,  terpenoid,  tannin, saponin,  fenolik,  dan  alkaloid.  Skrining fitokimia  dilakukan  secara  kualitatif dengan  memberikan  penambahan  reagen warna.  Hasil  positif  menggambarkan keberadaan  dengan  senyawa  metabolit sekunder  yang  terkandung  di  dalam ekstrak  etanol  kulit  buah  lemon  Hasil  uji skrining fitokimia secara kualitatif diperlihatkan pada tabel 2.

## Tabel 2. Skrining fitokimia ekstrak etanol kulit buah lemon
Metabolit sekunder Reagen Hasil Keterangan Tannin HCL pekat +FeCl 1% + Hijau kehitaman Fenolik Etanol 96% + FeCl 3 1 % + Hitam Flavonoid Etanol 96% + Mg + Merah tua Saponin Aquadest + Terbentuk  busa  yang stabil Terpenoid Kloroform+H 2 SO 4 +  Asam  asetat anhidrat + Cincin kecoklatan Alkaloid Mayer - Tidak terbentuk endapan putih
Sumber   : diolah dari data primer
Hasil  tabel  2  menunjukkan  bahwa hasil skrining fitokimia ekstrak etanol kulit jeruk lemon positif mengandung senyawa tannin,  fenol,  flavonoid,  saponin,  dan terpenoid.  Namun  untuk  uji  alkaloid menunjukkan  hasil  negatif.  Hasil  ini berbeda  dengan  penelitian  Lase  (2019) yang  membuktikan  bahwa  hasil  skrining fitokimia  ekstrak  etanol  kulit  buah  lemon yang  diambil  dari  perkebunan  Berastagi, Karo,  Sumatera  Utara  menunjukkan  hasil positif  flavonoid  dan  alkaloid,  tetapi negatif  untuk  terpenoid,  saponin  dan tannin.  Perbedaan juga ditunjukkan pada hasil  penelitian  Sari  dan  Laoli,  2018) Margareth et al . (2022) yang membuktikan bahwa  skrining  fitokimia  ekstrak  etanol buah  jeruk  lemon  yang  diambil  dari Medan,  Sumatera  Utara  menunjukkan positif alkaloid, flavonoid, triterpenoid/steroid  dan  negatif  saponin, tanin, dan antrakuinon. Pandey et al ., 2011) yang  menunjukkan  positif  tanin  dan flavonoid,  tetapi  negatif  untuk  saponin dan phlobatanin.
Menurut Mulyani dkk (2020) keragaman  metabolit  tumbuhan  sejenis,
tetapi  tumbuh  di  habitat  yang  berbeda disebabkan  oleh  faktor  luar  seperti  iklim, suhu,  jenis  tanah,  curah  hujan,  faktor dalam  seperti  genetis,  dan  proses  panen dan  saat  panen.  Keberadaan  profil senyawa  aktif  metabolit  tumbuhan  secara lengkap  dapat  dijadikan  faktor  penentu efek antimikroba suatu simplisia tumbuhan.  Oleh  sebab  itu  aspek  habitat tempat  tumbuh  dapat  dijadikan  kriteria standarisasi kandungan metabolit sekunder jeruk lemon. Skrining fitokimia merupakan prosedur yang dilakukan untuk mendeteksi keberadaan kandungan senyawa metabolit sekunder dalam bahan alam. Deteksi tersebut ditunjukkan melalui reaksi  warna  antara  reagen  dengan senyawa  uji.  Adanya  reaksi  warna  akan memberikan  gambaran  prediksi  awal suatu senyawa bahan alam (Hanani, 2016). Pada  penelitian  ini  skrining  fitokimia memperlihatkan  hasil  positif  pada  tanin (hijau kehitaman), fenolik (hitam), flavonoid  (merah tua),  saponin  (terbentuk busa), dan terpenoid (cincin kecoklatan).
Pada  tanin  dilakukan  penambahan HCL  pekat  untuk  menghidrolisis  tanin menjadi  molekul  asam  fenolat  berupa asam  galat  dan  heksahidroksidifenat (galotanin  dan  elagitanin)  sebagai  tanin terhidrolisis.  Kedua  kelompok  tersebut dapat  mengendap  dengan  penambahan FeCl  (logam  berat)  yang  ditunjukkan dengan endapan biru kehitaman, sedangkan  tanin  terkondensasi  akan memberikan  warna  hijau  kecoklatan (Sukma et al. ,  2018).  Senyawa  kedua  yang diuji  adalah  senyawa  fenolik  (fenol). Senyawa  ini  memiliki  cincin  aromatik yang  mengandung  1  atau  2  gugus hidroksil  (OH).  Seringkali  senyawa  fenol gagal  diekstraksi  karena  kompleks  ikatan hidrogen  senyawa  fenol  dengan  protein (khusunya  enzim  oksidase)  sulit  untuk dipisahkan  Fenol  bebas  jarang  terdapat dalam  tumbuhan,  umumnya  senyawa fenol  berikatan  dalam  glikosida  sehingga mudah  larut  dalam  air  dan  etanol. Penambahan  FeCl 3 1%  dalam  etanol  96% dibutuhkan  untuk  membentuk  reaksi antara FeCl 3 dengan gugus –OH (hidroksil) aromatis. Kedua reaksi tersebut akan  memberikan  warna  merah,  ungu, biru dan hitam pekat (Wahid dan Safwan, 2020). Senyawa  ketiga  adalah  flavonoid. Senyawa ini merupakan senyawa polifenol dengan  dua  atau  lebih  gugus  hidroksil, bersifat  agak  asam,  dapat  larut  dalam basa,  dan  bersifat  polar.  Umumnya flavonoid  didapati  berangkaian  dengan gula  membentuk  glikosida  sehingga  pada penelitian  ini  perlu  ditambahkan  reagen etanol  96%  untuk  melarutkan  flavonoid. Polaritas  flavonoid  meningkat  dengan adanya  ikatan  gula  berbentuk  glikosida
( C -glikosida  atau O -glikosida)  sehingga mudah larut dalam air. Untuk mendeteksi keberadaan flavonoid maka perlu direduksi  menggunakan  reagen  Mg. Senyawa  flavonoid  yang  tereduksi  oleh Mg  akan  menghasilkan  warna  merah, kuning,  dan  jingga  (Wahid  dan  Safwan, 2020). Adapun untuk saponin hasil positif ditunjukkan  dengan  terbentuknya  busa dalam  jangka  waktu  lama.  Saponin memiliki sifat larut dalam air, tidak  dapat larut  dalam  eter,  dan  termasuk  senyawa glikosida  dengan  molekul  gula  yang berikatan dengan aglikon triterpen/steroid,  aglikon  yang  terdapat pada  kulit  buah  jeruk  lemon  adalah limonin  yang  memiliki  rasa  pahit. Hidrolisis  saponin  akan  menghasilkan glikosida  yang  bersifat  polar  dan  aglikon memiliki  steroid  atau  triterpenoid  yang bersifat non polar. Adanya sifat polar dan non polar menyebabkan saponin membentuk  struktur  misel  ketika  dikocok dengan  air  yang  menyebabkan  rangkaian non  polar  mengarah  ke  dalam  dan rangkaian polar mengarah ke luar (Habibi et  al. ,  2018).  Hal  ini  dibuktikan  dalam bentuk busa yang terlihat stabil.
Senyawa  kelima  yang  diuji  adalah terpenoid.  Senyawa  ini  tersusun  dari molekul    isoprene  (C 5 H 8 ).  Pemberian kloroform  (non  polar)  digunakan  untuk mengekstraksi  senyawa  terpenoid  (non polar) dari simplisia. Asam asetat anhidrat ditambahkan untuk menghasilkan turunan asetil dalam kloroform, sedangkan  pemberian  H 2 SO 4 pekat melalui dinding tabung reaksi menyebabkan  pembentukan  reaksi  asetat anhidrida  dan  asam  sehingga  atom  C
anhidrida menciptakan karbokation. Karbokation  menyebabkan  terbentuknya reaksi  dengan  atom  O  pada  gugus  –OH terpenoid.  Reaksi  ini  disebut  esterifikasi yang diartikan sebagai reaksi pembentukan  ester  oleh kombinasi senyawa  terpenoid  dan  anhidrida  asetat. Hal  ini  dibuktikan  melalui  terlihatnya cincin kecoklatan diantara perbatasan dua pelarut atau dapat diartikan sebagai positif terpenoid (Sholikhah, 2016)
Pada    penelitian  ini  hasil  negatif diperlihatkan  pada  uji  alkaloid  dengan indicator  tidak  terbentuknya  endapan putih meskipun telah ditambahkan reagen mayer  (larutan  kalium  merkuri-iodida). Alkaloid  merupakan  senyawa  yang mengandung  atom  nitrogen  dan  bersifat basa.  Alkaloid  pada  tanaman  banyak terdapat  dalam  bentuk  turunan  amin primer, sekunder, tersier maupun kuartener.  Pemberian  HCL  (asam)  pada
penelitian ini bertujuan untuk membebaskan alkaloid yang bersifat basa. Hasil positif senyawa alkaloid pada reagen mayer  ditunjukkan  dengan  terbentuknya endapan putih hingga kekuningan. Hal ini disebabkan  senyawa  alkaloid  mampu bereaksi dengan ion tetraiodomerkurat (II) yang  ditunjukkan  dengan  terbentuknya endapan  putih.  Namun,  pereaksi  ini memiliki  kelemahan,  yaitu  mampu berikatan  dengan  senyawa  non-alkaloid seperti protein, kumarin, α-piron, hidroksi flavon serta tannin. Ikatan ini menyebabkan  hasil  yang  disebut  reaksi positif  palsu  ( false  positive ).  Selain  itu, senyawa alkaloid memiliki bentuk kuarterner  yang  tidak  dapat  diganti menjadi  alkaloid  basa  dan  tetap  berada dalam  sel,  sehingga  tidak  mampu terdeteksi  dengan  pereaksi  mayer.  Hasil ini  disebut  negatif  palsu  ( false  negative ) (Marliana et al., 2005).
Tabel 3. Hasil uji senyawa antibakteri ekstrak etanol kulit buah lemon
Zona Hambat (mm)
Perlakuan
Cawan I Cawan II Cawan III Rerata (mm) keterangan 20% 1 mm 1.5 mm 2 mm 1.5 mm Resistan 40% 1.5 mm 2 mm 2 mm 1.8 mm Resistan 60% 2.5 mm 1.5 mm 3 mm 2.3 mm Resistan 80% 3 mm 3 mm 2.5 mm 2.8 mm Resistan 100% 3 mm 4 mm 3,5 mm 3,5mm Resistan Kontrol (+) 31 mm 31 mm 31 mm 31 mm Sensitif Kontrol (-) 0 mm 0 mm 0 mm 0 mm Resistan Sumber : diolah dari data primer Tabel 3 menunjukkan bahwa
pemberian  ekstrak  etanol  kulit  buah lemon  dengan  konsentrasi  20%,  40%, 60%,
80%,
dan 100% mampu
menghambat  pertumbuhan S.  aureus dengan  rata-rata  diameter  zona  hambat
secara berurutan sebesar 1.5 mm, 1.8 mm, 2.3  mm,  2.8  mm,  dan  3.5  mm.  Adanya zona  hambat  di  sekitar  cakram  uji  dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 2. Zona penghambatan disekitar cakram uji Gambar  2  membuktikan  bahwa peningkatan  konsentrasi  ekstrak  etanol kulit buah lemon menyebabkan terjadinya  peningkatan  diameter  zona hambat.  Hal  ini  disebabkan  semakin banyak  konsentrasi  ekstrak  kulit  buah jeruk  lemon  maka  semakin  tinggi kecepatan  difusi  ekstrak  pada  media MHA  sehingga  berpengaruh  terhadap besarnya  luas  diameter  zona  hambat yang terbentuk disekitar daerah pertumbuhan S.aureus.
Adapun sesuai dengan hasil skrining fitokimia, kemampuan daya hambat kulit buah lemon terhadap S. aureus disebabkan  dalam  kulit  buah  lemon terkandung  senyawa  flavonoid,  fenol, dan alkaloid yang berfungsi sebagai agen antibakteri  atau  mampu  menghambat perbanyakan S.aureus yang  ditunjukkan dengan  terciptanya  zona  bening  di sekitar  pertumbuhan  koloni S.aureus dalam  cawan  petri.  Pembentukan  zona bening  disebabkan  ekstrak  etanol  kulit buah jeruk  lemon  yang tersuspensi  pada paper disk berdifusi ke media MHA dan menghambat pertumbuhan S.aureus (Margareth et al ., 2022)
Song et  al .  (2020)  menambahkan bahwa  dampak  aktivitas  antibakteri
metabolit  sekunder  pada  genus Citrus
terhadap pertumbuhan S.aureus
dibuktikan  dengan  hasil  mikroskop electron  berupa  kerusakan  membran  sel S.aureus, perubahan  potensial  membran yang menyebabkan keluarnya komponen sitoplasma  berupa  protein  dan  asam nukleat,  terhambatnya  sintesis  ATP  dan Protein  yang  berakhir  dengan  kematian sel S.aureus.
Namun  interval  rata-rata  diameter zona  hambat  pertumbuhan S.  aureus setelah  pemberian  ekstrak  etanol  kulit buah  lemon  sebesar  1.5  mm  -  3.5  mm dengan  kategori  respon  sensitifitas termasuk  kategori  resisten    Pada penelitian  ini  penggolongan  kategori respon  sensitivitas S.aureus terhadap ekstrak  etanol  kulit  buah  lemon ditentukan  berdasarkan  standard  CLSI (2020)  sesuai  dengan  efek  antibiotik vankomisin  sebagai  kontrol  positif terhadap  sensitivitas  bakteri S.  aureus , yaitu apabila diameter zona hambat ≥ 18 mm termasuk kategori sensitif, 13-17 mm kategori  intermediet,  dan  ≤  12  mm termasuk  kategori  resisten.  Kategori respon  sensitif  mengindikasikan  bahwa ekstrak  etanol  kulit  buah  jeruk  lemon efektif dalam menghambat pertumbuhan S.aureus ,  kategori  intermediet  memiliki efektifitas  sedang  dan  kategori  resisten menggambarkan  bahwa  ekstrak  etanol kulit  buah  lemon  tidak  efektif  dalam menghambat pertumbuhan S.aureus.
Hasil kategori resisten yang ditunjukkan  pada  tabel  3  sesuai  dengan penelitian  Shakya et  al .  (2019)  yang melaporkan  bahwa  pemberian  ekstrak kulit  jeruk  lemon  terhadap S.aureus
menghasilkan  rata-rata  diameter  zona hambat  sebesar  7-9  mm.  Hasil  penelitian ini  berbeda  dengan  penelitian  Pandey  et al  (2011)    ;  Hindi  and  Chabuck  (2013)  ; Ajithkumar  and  Panneerselvam  (2012) yang  menghasilkan  rata-rata  diameter zona  hambat  masing-masing  sebesar  21 mm, 30 mm, dan 19 mm dengan kategori sensitif. Lase (2019) ; Harfouch et al (2019) ;  Margareth  et  al  (2021)  dengan  hasil diameter zona hambat antara 16 mm dan 10.26 mm-12.57 mm. Menurut Ajithkumar  and  Panneerselvam  (2012) perbedaan  kategori  sensitivitas  zona hambat  pertumbuhan S.aureus antar berbagai penelitian kemungkinan disebabkan  oleh  jumlah  komposisi senyawa  fitokimia,  metode  ekstraksi, faktor  lingkungan,  dan  perbedaan genetik tanaman lemon yang digunakan.
Adapun kontrol positif pada penelitian ini yaitu antibiotik vankomisin
30 µg yang dapat menghalangi pembelahan sel S.aureus dengan diameter area  hambat  sebesar  31  mm  dengan kategori  sensitif.    Menurut    Li  (2018)  ; Cong et al. (2020) vankomisin merupakan antibiotik yang dihasilkan dari
Streptomyces  orientalis    dan  memiliki spektrum  sempit  yang  hanya  mampu menghambat bakteri gram positif, seperti S.  aureus  . Umumnya  antibiotik  ini digunakan  untuk S. aureus yang  resisten terhadap  penisilin  dan  metisilin  (Foster, 2017)  Vankomisin bekerja  dengan berikatan  pada  ribosom  bakteri  dan menghambat  sintesis  protein  bakteri S. aureus (Garoy et al. , 2019)
Kelebihan  penelitian  ini  adalah penggunaan konsentrasi 20%,40%,60%,80%, dan 100%, pemakaian sampel kulit buah lemon dari kota Bekasi yang  belum  pernah  diuji  oleh  periset sebelumnya.  Namun  penelitian  ini memiliki keterbatasan antara lain penggunaan metode Kirby baeur untuk uji antibakteri  yang  belum  dapat  dijadikan pedoman  bagi  klinisi,  belum  dilakukan identifikasi  minyak  atsiri  baik  secara kualitatif maupun kuantitatif dan skrining  fitokimia  senyawa  metabolit sekunder  secara  kuantitatif,  serta  belum dilakukan pemeriksaan kerusakan struktur  bakteri  dengan  mikroskop elektron.

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan  pada  penelitian  ini adalah  hasil  skrining  fitokimia  ekstrak etanol kulit jeruk  lemon yang diambil di Pasar Bantar Gebang, Bekasi menunjukkan positif tanin, fenol, flavonoid,  saponin,  terpenoid,  dan negatif  alkaloid.  Adanya  senyawa fitokimia yang terkandung dalam ekstrak etanol  kulit  buah  jeruk  lemon  dengan
konsentrasi  20%,  40%,  60%,  80%,  dan 100%  hanya  mampu  menghasilkan diameter  zona  hambat  terhadap S.aureus sebesar 1.5 mm, 1.8 mm, 2.3 mm, 2.8 mm, dan 3.5 mm dengan kategori resisten atau pemberian  ekstrak  etanol  kulit  buah lemon  tidak  efektif  sebagai  agen antibakteri S.aureus.

## DAFTAR PUSTAKA
Aburowais,  A.,  Banu,  A.,  and  Nisha,  M. (2017).  Activity  of  Orange  ( Citrus Sinensis )  and  Lemon  ( Citrus  Limon )
Juice  and  Oil  on  Different  Bacteria That Cause Wound Infection. International Conference on Advances in Engineering  and  Technology  (RTET-
2017) ,
176–181.
https://doi.org/10.17758/eirai.f0217
715
Ajithkumar, I. N. P., and Panneerselvam,
R.  (2012).  Effect  of Citrus hystrix and Citrus limon Extracts on Antibacterial Activity  Against  Human  Pathogens. Asian  Pacific  Journal  of  Tropical Biomedicine ,
1–4. www.elsevier.com/locate/apjtb Asker,  M.,  El-Gengaihi,  S.  E.,  Hassan,  E. M.,  Mohammed,  M.  A.,  and Abdelhamid, S. A. (2020).
Phytochemical  Constituents  and
Antibacterial  Activity  of Citrus Lemon Leaves. Bulletin of the National Research Centre , 44 (1), 1–7. https://doi.org/10.1186/s42269-020- 00446-1.
Astuti,  M.  T.,  Retnaningsih,  A.,  and
Marcellia,  S.  (2021).  Uji  Aktivitas Ekstrak  Etanol  Kulit  Jeruk  Lemon ( Citrus  limon L.)  terhadap  Bakteri
Salmonella  typhi dan Escherichia  colli . Jurnal  Mandala  Pharmacon  Indonesia ,
7 (2),
143–154. https://doi.org/https://doi.org/10. 35311/jmpi. v7i2.84 CLSI.  (2020).  CLSI  M100-ED29:  2021 Performance Standards for
Antimicrobial  Susceptibility  Testing,
30th Edition. In Clsi (Vol. 40, Issue 1). Cong,  Y.,  Yang,  S.,  and  Rao,  X.  (2020).
Vancomycin  Resistant Staphylococcus aureus Infections:  A  Review  of  Case Updating  and  Clinical  Features.
Journal of Advanced Research , 21 ,  169– 176.https://doi.org/10.1016/j.jare.20 19.10.005.
Foster, T. J. (2017). Antibiotic resistance in Staphylococcus  aureus .  Current  status and future prospects. FEMS Microbiology  Reviews , 41 (3),  430–449. https://doi.org/10.1093/femsre/fux 007.
Galgano,  M.,  Capozza,  P.,  Pellegrini,  F., Cordisco, M., Sposato, A., Sblano, S., Camero,  M.,  Lanave,  G.,  Fracchiolla, G.,  Corrente,  M.,  Cirone,  F.,  Trotta, A.,  Tempesta,  M.,  Buonavoglia,  D. and Pratelli, A. (2022). Antimicrobial Activity  of  Essential  Oils  Evaluated In  Vitro  against Escherichia  coli and Staphylococcus  aureus . Antibiotics , 11 (7), 1–13. https://doi.org/10.3390/antibiotics1 1070979.
Garoy, E. Y., Gebreab, Y. B., Achila, O. O., Tekeste,  D.  G.,  Kesete,  R.,  Ghirmay, R.,  Kiflay,  R.  and  Tesfu,  T.  (2019). Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA):  Prevalence  and Antimicrobial  Sensitivity  Pattern among  Patients  -  A  Multicenter Study  in  Asmara,  Eritrea. Canadian Journal  of  Infectious  Diseases  and Medical  Microbiology , 2019 ,  1–9. https://doi.org/10.1155/2019/83218 34.
Habibi,  A.  I.,  Firmansyah,  R.  A.,  & Setyawati,  S.  M.  (2018).  Skrining Fitokimia  Ekstrak  n-Heksan  Korteks Batang Salam ( Syzygium polyanthum ).
Indonesian  Journal  of  Chemical  Science ,
7 (1),
1–4. https://doi.org/http://journal.unne
s.ac.id/sju/index.php/ijcs.
Hanani,  E.  2015. Analisis  Fitokimia .
Penerbit  Buku  Kedokteran  EGC  :
Jakarta
Harfouch, R. M., Janoudi, H., Muhammad, W., Hammami, A., and Chouman,  F.  (2019).  In  Vitro Antibacterial  Activity  of Citrus limon Peel Extracts against Several Bacterial Strains. Available Online Www.Jocpr.Com  Journal  of  Chemical and Pharmaceutical Research , 11 (7), 48– 51.  https://doi.org/Available  online www.jocpr.com Journal.
Hojjati,  M.,  &  Barzegar,  H.  (2017).
Chemical
Composition and
Biological Activities of Lemon ( Citrus limon )  Leaf  Essential  Oil. Nutrition and Food Sciences Research , 4 (4), 15–24. https://doi.org/10.29252/nfsr.4.4.3.
Kadhim Hindi, N. K., & Ghani Chabuck, Z.  A.  (2013).  Antimicrobial  Activity of Different Aqueous Lemon Extracts. Journal of Applied
Pharmaceutical  Science , 3 (6),  74–78.
https://doi.org/10.7324/JAPS.2013.3
611.
Lase,  N.  T.  (2019).  Skrining  Dan  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Kulit Buah  Jeruk  Lemon  ( Citrus  limon (L.) Burm.  fil.)  terhadap Staphylococcus aureus .
Skripsi . http://repository.helvetia.ac.id/id/e print/2729.
Li,  Z.  (2018).  A  Review  of Staphylococcus aureus and  The  Emergence  of  Drug-
Resistant  Problem. Advances  in Microbiology , 08 (01), 65–76. https://doi.org/10.4236/aim.2018.81 006.
Margareth,  E.,  Aritonang,  B.,  Florentina, N.,  and  Ritonga,  A.  H.  (2022).
Pembuatan  Sabun  Padat  Antiseptik Ekstrak  Etanol  Kulit  Jeruk  Lemon ( Citrus  limon (L.)  Burm.  f.). Jurnal Indah  Sains  Dan  Klinis , 2 (3),  17–24.
https://doi.org/10.52622/jisk.v2i3.3 4.
Marliana, S. D., Suryanti, V. dan Suyono. (2005).  Skrining  Fitokimia  dan Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis Komponen  Kimia  Buah  Labu  Siam  ( Sechium  edule Jacq.Swartz.)  dalam Ekstrak  Etanol. Biofarmasi , 3 (1),  26– 31.
Mulyani,  S.  dkk.  2020. Minyak  Atsiri Tumbuhan  Obat .  Gadjah  Mada University Press : Yogyakarta.
Nurdianti, L., Annissya, W. F., Pamela, Y. M.,  Novianti,  E.,  Audina,  M.  dan Kurniasari,  E.  (2016).  Formulasi Sediaan Pasta Gigi Herbal Kombinasi Ekstrak  Daun  Sirih  ( Piper  betle )  dan Kulit Buah Jeruk Lemon ( Citrus limon Burm  F.)  Sebagai  Pemutih  dan Antiseptik Pada Gigi. Jurnal Kesehatan Bakti  Tunas  Husada:  Jurnal  Ilmu-Ilmu Keperawatan,  Analis  Kesehatan  Dan Farmasi , 16 (1), 177. https://doi.org/10.36465/jkbth.v16i 1.181.
Pandey, A., Kaushik, A. and Tiwari, S. K. (2011).  Evaluation  of  antimicrobial activity  and  phytochemical  analysis of Citrus limon . Journal of Pharmaceutical and Biomedical Sciences ,
13 (17), 13. www.jpbms.info.
PRO,  E.,  MO,  S.,  JB,  O.,  &  IJ,  O.  (2019). Comparative Study on The
Antimicrobial  Effects  of  Essential Oils  From  Peels  of  Three  Citrus Fruits. MOJ Biology and Medicine , 4 (2), 49–54.
https://doi.org/10.15406/mojbm.20 19.04.00113.
Saeb, S., Amin, M., Seyfi Gooybari, R. and Aghel,  N.  (2016).  Evaluation  of Antibacterial  Activities  of Citrus limon , Citrus  reticulata ,  and Citrus grandis Against  Pathogenic  Bacteria. International Journal of Enteric
Pathogens , 4 (4), 11–15.
https://doi.org/10.15171/ijep.2016.1
3.
Sari,  P.  R.,  &  Laoli,  T.  M.  (2018).
Karakterisasi  Simplisia  Dan  Skrining Fitokimia  Daun  Jeruk  Lemon  ( Citrus limon (L.)  Burm.f.). Jurnal  Ilmiah Farmasi IMELDA , 2 (2), 82–93.
Shakya,  A.,  Luitel,  B.,  Kumari,  P.,
Devkota,  R.,  Dahal,  P.  R.,  &
Chaudhary,  R.  (2019).  Comparative Study  of  Antibacterial  Activity  of Juice  and  Peel  Extract  of  Citrus Fruits. Tribhuvan University Journal of
Microbiology , 6 , 82–88.
https://doi.org/10.3126/tujm.v6i0.2 6589
Sholikhah,  R.  M.  (2016).  Identifikasi Senyawa  Triterpenoid  Dari  Fraksi  n- Heksan  Ekstrak  Rumput  Bambu ( Lophantherum
gracile
Brongn.)
dengan  metode  UPLC-MS. Skripsi ,
61–62.
Song, X., Liu, T., Wang, L., Liu, L., Li, X., & Wu, X. (2020). Antibacterial Effects and  Mechanism  of  Mandarin  (Citrus reticulata  L.)  Essential  Oil  against Staphylococcus  aureus.
Molecules (Basel, Switzerland) ,
25 (21). https://doi.org/10.3390/molecules2
5214956.
Sudarsono  dan  Purwantini,  I.  2021.
Standardisasi  Obat  Herbal .  Gadjah Mada University Press : Yogyakarta. Sukma,  F.  F.,  Sahara,  D.,  Ihsan,  N.  F.,
Halimatussakdiah,
Pujiwahyuningsih,  &  Amna,  U.
(2018).  Skrining  Fitokimia  Ekstrak Daun  “Temurui”  ( Murraya  koenigii (L.)  Spreng)  Kota  Langsa,  Aceh. Jurnal Jeumpa , 5 (1), 34–39.
Turner,  N.  A.,  Sharma-Kuinkel,  B.  K., Maskarinec,  S.  A.,  Eichenberger,  E. M.,  Shah,  P.  P.,  Carugati,  M., Holland,  T.  L.  dan  Fowler,  V.  G.
(2019). Methicillin-Resistant Staphylococcus  aureus :  An  Overview of Basic and Clinical Research. Nature Reviews  Microbiology , 17 (4),  203–218. https://doi.org/10.1038/s41579-018- 0147-4.
Wahid,  A.  R.,  dan  Safwan,  S.  (2020). Skrining Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Terhadap Ekstrak  Tanaman  Ranting  Patah Tulang ( Euphorbia  tirucalli L.). Lumbung Farmasi: Jurnal Ilmu Kefarmasian , 1 (1), 24. https://doi.org/10.31764/lf.v1i1.120 8