Indonesian Journal of Chemical Science and Technology

## State University of Medan
e-ISSN : 2622-4968, p-ISSN : 2622-1349
IJCST-UNIMED, Vol. 05, No. 2, Page ; 88 – 93
Received : June 23 th , 2022 Accepted :  July 25 th , 2022             Web Publised ; July 30 th , 2022
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Toxicity Test of Windu Shrimp ( Penaeus monodon ) Skin Chitosan

## With Brine Shrimp Lethality Test Method
Dina Sucita Saragih 1 , Ridwanto 1 *, Anny Sartika Daulay 1 , Haris Munandar Nasution 1 , Dikki Miswanda 1 .
1 Department of Pharmacy, Universitas Muslim Nusantara Al Washliyah., Jalan Garu II Medan Amplas 20147,
North Sumatera, Indonesia
*Email : ridwanto@umnaw.ac.id

## ABSTRACT
Chitosan  is  a  modification  of  chitin  compounds  that  are  widely  found  in  the  outer  skin of  crustacean  animals such  as  shrimp  and  crabs.  This  research  includes  isolation  of  chitin  and  chitosan:  deproteination, demineralization,  depigmentation  and  deacetylation  namely  transformation  of  chitin  into  chitosan, characterization  of  chitosan,  FTIR,  and  chitosan  toxicity  test  with  five  concentrations  of  test  solution,  namely 100  g/ml,  250  g/ml,  500  g/ml,  750  g/ml  and  1000  g/ml  using  the  BSLT  method  by  looking  at  the  number  of deaths of Artemia salina L larvae (LC 50 ). The results of tiger prawn shell chitosan (Penaeus monodon) obtained the  %  degree  of  deacetylation  of  60%.  The  results  of  the  toxicity  test  showed  that  chitosan  was  not  toxic  to Artemia salina Leach, indicated by the LC 50 value > 1000µg/ml. chitosan windu 4994.16 g/ml, chitosan is not toxic.
Keywords : Isolation, chitin, chitosan, toxicity test, Brine Shrimp Lethality Test.

## I. Pendahuluan
Udang  banyak  dimanfaatkan  dalam    industri ekspor  terutama  dalam  bentuk  beku,  usaha  lokal, maupun  konsumsi  rumahan.  Konsumsi  dan produksi  uang  yang  tinggi  menghasilkan  limbah yang  banyak.  Limbah  ini  yang  akan  menimbulkan dampak  terhadap  pencemaran  lingkungan  yang merusak lingkungan 1 . Limbah kulit udang memiliki kandungan  senyawa  kitin,  terdapat  tiga  komponen utama  dari  limbah  kulit  udang  yaitu    protein sebanyak  25-44%,  kalsium  karbonat  45-50%,  dan kitin  15-20%.  Jumlah  kitin  yang  melimpah memungkinkan  dimanfaatkan  secara  luas  dalam berbagai  bidang 2 . Kitosan  merupakan  senyawa polimer  turunan  dari  hasil  deasetilasi  kitin,  dan banyak  dimanfaatkan  di  berbagai  bidang  industri. Kitosan  banyak  terkandung  didalam  cangkang
hewan  laut  seperti  kepiting,  udang,  kerang,  dan lainnya 3 .
Uji  Toksisitas  dilakukan  untuk  mengetahui adanya  efek  toksik  dan  menilai  batas  keamanan dalam  penggunaan  suatu  senyawa.  Uji  toksisitas merupakan  uji    untuk  mengetahui  kemampuan racun  yang  dapat  menimbulkan  kerusakan  ketika masuk  kedalam  tubuh  dan  organ  yang  rentan terhadapnya 4 . Uji toksisitas yang dilakukan dengan menggunakan  metode  BSLT  ( Brine  Shrimp Lethality Test ) ditujukan untuk menentukan potensi suatu  senyawa  bersifat  racun  dengan  mengetahui tingkat toksisitasnya.
Uji  toksisitas  dengan  metode  BSLT  dapat dilakukan  dengan  cepat,  murah  dan  mudah, sehingga  sering  digunakan  untuk  mengetahui tingkat  toksisitas  suatu  senyawa 5 .  Parameter  dari metode  BSLT  yaitu  nilai  mortalitas  yang
ditentukan  dengan  menggunakan  analisa  probit untuk  menentukan  nilai  toksisitas  menggunakan Lethal  Consentration (LC 50 ) 6 .  Tujuan  penelitian untuk  mengetahui  tingkat  toksisitas  kitosan  kulit udang  windu  ( Penaeus  monodon )  menggunakan metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT) terhadap larva udang Artemia salina .
II. Metodologi Penelitian
2.1. Bahan kimia, peralatan dan instrumentasi Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  :  limbah  kulit  udang  dari  Belawan,
Kabupaten  Deli  Serdang,  Telur A.  Salina Leach,
NaOH,  HCl,  NaOCl,  NaCl  ,  dan  Asam  Asetat. Alat-alat  yang  digunakan  meliputi  :  Beaker  glass, gelas  ukur,  corong,  ayakan,  magnetik  stirrer,  Hot Plate,  Oven,  Gelas  ukur,  Batang  pengaduk,  pH Meter,  Tanur,  Deksikator,  Cawan  Porselin,  tang krus, Cawan krus,
Neraca analitik,
Spektrofotometri FT-IR.
2.2. Prosedur penelitian
2.2.1 Pengolahan Sampel Limbah  kulit  udang  windu  dicuci  dengan  air sampai  bersih  dari  zat  pengotor.  Kemudian dikeringkan dibawah sinar matahari sampai kering. Setelah  kering,  sampel  dihaluskan  dan  diayak hingga mendapatkan serbuk halus.
2.2.2 Proses Deproteinasi Sampel  yang  sudah  dihaluskan  dimasukkan ke  dalam  beaker  glass  lalu  ditambahi  dengan larutan  NaOH  3,5  %  dengan  perbandingan  1:10 (b/v)  antara  sampel  dan  pelarut.  Kemudian dipanaskan  dengan  suhu  60-70 o C  selama  4  jam sambil dilakukan pengadukan dengan kecepatan 50 rpm  menggunakan  magnetic  stirrer.  Residu  yang diperoleh  selanjutnya  dicuci  dengan  aquades hingga  pH  netral  kemudian  dikeringkan  dengan menggunakan  oven  pada  temperatur  80oC  selama 24 jam 7 .
2.2.3 Proses Demineralisasi
Hasil  dari  proses  deproteinasi  dimasukkan kedalam  beaker  lalu  ditambah  larutan  HCL  1,5  M dengan  perbandingan  1:15  (b/v)  antara  pelarut dengan  sampel,  kemudian  dipanaskan  pada  suhu 60-70 o C selama 4 jam sambil dilakukan pengadukan dengaan kecepatan 50 rpm menggunakan  magnetic  stirrer.  Residu  yang diperoleh  dicuci  dengan  aquades  hingga  pH  netral
lalu  dikeringkan  dengan  menggunakan  oven  pada temperatur 80 o C selama 24 jam 7 .

## 2.2.4 Proses Depigmentasi
Hasil  dari  proses  demineralisasi,  dimasukan kedalam  beaker  lalu  ditambah  larutan  NaOCl 0,315%  dengan  perbandingan  1:10  (b/v)  antara sampel  dan  pelarut,  selanjutnnya  dipanaskan  pada suhu  40 o C  selama  1  jam,  kemudian  residu  yang diperoleh  dicuci  dengan  aquades  hingga  pH  netral lalu  dikeringkan  dalam  oven  dengan  susu  80 o C, kemudian didinginkan dalam deksikator, setelah itu hasil ditimbang 8 .
2.2.5 Proses Deasetilasi
Pembuatan  kitosan  diperoleh  melalui  proses deasetilasi  kitin.  Hasil  yang  diperoleh  dari  proses depigmentasi  dimasukkan  kedalam  gelas  kimia kemudian  ditambah  larutan  NaOH  60%  dengan perbandingan  antara  pelarut  dengan  sampel  yaitu 1:20  (b/v)  kemudian  dipanaskan  dengan  suhu  80- 100 o C  selama  1  jam,  residu  yang  didapat dinetralkan  dengan  aquades,  lalu  dikeringkan dalam  oven  dengan  suhu  80 o C  selama  24  jam, kemudian didinginkan dalam deksikator, setelah itu hasil ditimbang 8 .
2.3. Karakterisasi Kitosan
2.3.1 Kadar Air
Kitosan  ditimbang  sebangak  0,5  g  lalu dimasukkan  kedalam  cawan  porselin  yang  telah diketahui  beratnya.  Sampel  dipanaskan  dioven pada  suhu  100-105 o C  selama  2  jam.  Kemudian didinginkan  dalam  deksikator  selama  ±  30  menit dan ditimbang hingga diperoleh berat konstan 9 .
2.3.2 Kadar Abu
Sampel  ditimbang  sebanyak  0,5  g  lalu dimasukkan  kedalam  cawan  krush  yang  telah diketahui  beratnya,  kemudian  sampel  diabukan dalam  tanur  dengan  suhu  600 o C  sampai  diperoleh abu  berwarna  putih,  setelah  itu  cawan  tersebut didinginkan dalam deksikator dan ditimbang 9 .
2.3.4 Kelarutan Kitosan Kelarutan kitosan merupakan suatu parameter yang  dapat  dijadikan  sebagai  acuan  standar  mutu dari  kitosan.  Semakin  tinggi  kelarutan  kitosan maka  mutu  kitosan  semakin  baik.  Kitosan dilarutkan  dalam  asam  asetat  dengan  konsentrasi 2% dengan perbandingan 1:100 (g/ml) 7 .
© 2022 State University of Medan
2.4  Uji  Toksisitas  Dengan  Metode  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT) 2.4.1 Pembuatan Air Laut Buatan
Air laut buatan dibuat dengan cara melarutkan 38  g  garam  dalam  1  L  air.  Kemudian  disaring dengan kertas Whatman 10 .
2.4.2 Penetasan Telur Artemia Salina Leach Telur  udang  ditetaskan  dalam  bejana  gelap dan  terang.  Zona  gelap  diletak  telur  dan  aerator, sedangkan  zona  yang  lainnya  diletakkan  lampu sebagai sumber pencahayaan dalam penetasan telur udang 6 .  Bejana  diberi  sekat  berlubang  yang menjadi jalan untuk larva yang telah menetas untuk bergerak  secara  alamiah  ke  arah  yang  terang. Wadah  diisi  satu  liter  air  laut  buatan.  Kemudian pada bagian gelap dimasukkan satu sendok (sendok teh)  telur  yang  sebelumnya  telah  dicuci  dengan cara direndam dengan aquadest selama 1 jam. Pada wadah bagian gelap ditutup dengan aluminium foil. Pada  wadah  bagian  terang  diberi  penerangan cahaya  lampu  neon    40  Watt  agar  suhu  penetasan 25-30 o C  tetap  terjaga.  Telur  udang  dibiarkan terendam  selama  48  jam  sampai  telur  nemetas. Telur  akan  menetas  dalam  waktu  18-48  jam  dan akan  bergerak  secara  alamiah  menuju  daerah  yang terang  sehingga  larva  udang  terpisah  dari  bagian telur  atau  kulit  telur.  Larva  yang  telah  aktif bergerak  siap  digunakan  sebagai  hewan  uji  dalam penelitian 11 .
2.4.3 Pembuatan Larutan Uji Pengujian  dilakukan  dengan  menggunakan larutan  uji  yang  dibuat  menjadi  5  konsentrasi  0 µg/ml (kontrol negatif), 100 µg/ml, 250 µg/ml, 500 µg/ml,  750  µg/ml  dan  1000  µg/ml  dalam  air  laut buatan, masing-masing dengan tiga kali pengulangan.
2.4.4 Uji Toksisitas Pada  uji  toksisitas  dengan  metode  BSLT digunakan  larva Artemia  salina Leach  yang berumur  48  jam.  Disiapkan  vial  untuk  tiap konsentrasi  dan  replikasi  sebanyak  3  kali  dengan ukuran  10  ml.  Setiap  vial  diisi  larutan  sampel sebanyak  10  ml,  selanjutnya  dimasukkan  10  ekor larva A. salina Leach kedalam masing-masing  vial yang  berisi  senyawa  uji.  Kontrol  negatif  (blanko) diberi  perlakuan  sama  seperti  larutan  uji  tanpa penambahan  sampel 12 .  Jumlah  larva  yang  mati
dalam tiap vial selama 24 jam dihitung dengan cara manual.  Pengamatan  dilakukan  selama  24  jam, tingkat  toksisitas  diperoleh  dengan  menghitung jumlah larva yang mati, yaitu bila larva udang tidak menunjukkan  pergerakan  selama  beberapa  detik observasi 11 .

## Analisis Data
Uji  toksisitas  sampel  ditentukan  dengan melihat  besarnya  nilai  dari  LC 50 yang  dapat mematikan  Artemia  salina  Leach  sampai  50%  dan dilakukan  perhitungan  dengan  analisa  probit ( probability  unit ),  efek  toksisitas  dapat  dianalisis dari persen kematian 5 .

## III. Hasil dan Diskusi
3.1.  Isolasi Kitosan Dari Kulit Udang Windu
Isolasi  kitin  dari  limbah  udang  bertujuan memisahkan  kitin  dari  protein  dan  kalsium karbonat.  Pada  tahap  deproteinasi,  protein  yang terkandung  dalam  limbah  kulit  udang  akan  larut dalam  basa  sehingga  protein  yang  terikat  secara kovalen  pada  gugus  fungsi  kitin  akan  terpisah. Tahap  deproteinasi  dilakukan  dengan  mereaksikan kitin  dengan  basa  kuat  NaOH  dalam  dalam  beaker yang  dipanaskan  pada  suhu  70 o C  selama  4  jam. Pada reaksi deproteinasi terbentuk sedikit gelembung  dipermukaan  larutan  dan  larutan menjadi agak mengental dan bewarna kemerahan 8 . Proses selanjutnya yaitu tahap demineralisasi, pada  tahap  ini  hasil  dari  proses  deproteinasi ditambahkan  dengan  larutan  HCl  1,5  N  ,  terjadi reaksi yang cukup sigifikan, yaitu terbentuk banyak buih  dan  gelembung-gelembung  dengan  volume yang  cukup  besar,  dan  hal  ini  berlangsung  selama kurang  lebih  5-10  menit.  Hal  ini  disebabkan  oleh terbentuknya  gas-gas  CO 2 dan  H 2 O  di  permukaan. Terbentuknya  CO 2 dalam  produksi  merupakan sebuah  indikator  berlangsungnya  reaksi  asam klorida dengan garam mineral yang terdapat dalam limbah kulit udang. Proses demineralisasi bertujuan untuk  menghilangkan  garam-garam  organik  atau kandungan  mineral  yang  ada  pada  kulit  udang. Kandungan mineral utamanya adalah CaCO 3 7 . Tahap  berikutnya  yaitu  dilanjutkan  dengan proses  depigmentasi.  Sampel  ditambahkan  dengan larutan  natrium  hipoklorit  dengan  konsentrasi 0,315%.  Tujuan  dari  proses  ini  adalah  untuk menghilangkan  warna  pada  kitin 13 .  Penghilangan pigmen  bertujuan  untuk  memberikan  penampakan yang menarik pada kitosan yang dihasilkan.
Senyawa kitosan diperoleh dengan melakukan proses  reaksi  deasetilasi  pada  kitin.  Pada  proses deasetilasi  dilakukan  dengan  penambahan  NaOH 60%  dan  dipanaskan  pada  suhu  80-100 o C.  Tujuan dari  proses  ini  adalah  untuk memecah gugus  asetil (-CH 3 CO)  pada  kitin  menjadi  gugus  amina  (NH 2 ) dengan penambahan basa kuat NaOH. Penambahan NaOH  menyumbangkan  gugus  hidroksil  yang tersedia untuk terjadinya proses hidrolisis, sehingga memperbesar  kemungkinan  terjadinya  eliminasi pada  gugus  karbonil  yang  disebabkan  terjadinya adisi  oleh  hidroksil,  sehingga  terbentuklah  gugus amina hidrogen 13 .
3.2. Pengujian Kemurnian Kitosan Isolasi
Meenggunakan FTIR Uji  kemurnian  kitosan  hasil  isolasi menggunakan spektrofotometri
Inframerah menunjukkan  adanya  serapan  pada  bilangan gelombang  3400-2400  cm -1 (rentang  O-H)  yaitu 3116,97cm -1 dan  2954,95  cm -1 .  Adanya  serapan pada bilangan 1640-1550 cm -1 (rentang N-H) yaitu pada  bilangan  gelombang  1641,42  cm -1 dan 1546,91  cm -1 .  Selanjutnya  adanya  serapan  pada bilangan gelombang 1350-1000 cm -1 (rentang C-N) yaitu 1315,45 cm -1 , 1261,45 cm -1 dan 1159,22 cm -1 . Kemudian terdapat serapan pada bilangan gelombang  1000-650  cm -1 (rentang  C-H)  yaitu pada serapan gelombang 806,90 cm -1 .
Gambar  1 .    Hasil  Analisa  FTIR  Kitosan  Windu ( Penaeus monodon )
Kualitas  kitosan  dapat  diketahui  juga  dari besarnya persen derajat deasetilasi. Pada penelitian ini  diperoleh  persen  derajat  deasetilasi  sebesar 60%,  pada  kitosan  kulit  udang  windu.  Rendahnya DD  kitosan  hasil  penelitian  disebabkan  oleh beberapa  faktor  diantaranya  faktor  pengadukan,
suhu  serta  jenis  habitat  atau  pemeliharaan  udang yang digunakan.
3.3. Karakterisasi Kitosan
Kitosan  yang  diperoleh  dikarakterisasi  untuk mengetahui mutu kitosan yang dihasilkan. Karakterisasi yang dilakukan meliputi pemeriksaan organoleptis (tekstur, warna, dan bau), uji kadar air, uji  kadar  abu,  kelarutan  dalam  asam  asetat  2%. Hasil  karakterisasi  kitosan  yang  diperoleh  dari penelitian  dibandingkan  dengan  mutu  SNI  No. 7949 Tahun 2013.
Tabel 1 . Karakterisasi Kitosan Parameter SNI (No. 7949, Tahun 2013) Kitosan Kulit Udang Windu Pemeriksaan Organoleptis (Tekstur, Warna, Bau) Coklat muda sampai putih Serbuk, putih kekuningan, tidak berbau Kadar Air ≤ 12 % 5,596% Kadar Abu ≤ 5% 0,3% Kelarutan kitosan dalam asam asetat 2% - Larut Derajat Deasetilasi ≥ 75 % 60%,

## 3.4.  Hasil  Uji  Toksisitas  Kitosan  Dengan  Metode
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Uji  toksisitas  ini  dilakukan  dengan  metode BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality  Test )  dengan menggunakan  hewan  uji Artemia  salina Leach karena  cara  pengerjaannya  yang  cukup  mudah, murah  dan  tidak  memerlukan  waktu  yang  lama untuk memperoleh hasilnya.
Artemia salina L . yang dapat digunakan untuk uji  toksisitas  adalah  yang  berbentuk naupli atau larva.  Larva  yang  digunakan  berumur  48  jam karena  larva  pada  usia  ini  berada  dalam  keadaan peka.  Pada usia  48 jam,  organ-organ  pada Artemia salina L. sudah terbentuk dengan lengkap. Dengan terbentuknya  mulut, Artemia  salina L.  dapat meminum air laut buatan yang sudah diberi sampel uji dengan berbagai konsentrasi, sehingga kematian benar  adanya  disebabkan  karena  perlakuan  dari
kitosan  kulit  udang  yang  ditambahkan  dalam berbagai konsentrasi 14 .
Kitosan yang telah dilarutkan menjadi larutan induk  baku  dibuat  menjadi  5  konsentrasi,  yaitu konsentrasi 100 µg/ml, 250 µg/ml, 500 µg/ml, 750 µg/ml dan 1000 µg/ml. Di samping itu, dibuat juga kontrol  negatif  yang  hanya  berisi  air  garam  dan larva udang Artemia salina L.. Penambahan kontrol negatif  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh penambahan  kitosan  terhadap  tingkat  kematian larva  uji.  Pada  uji  BSLT  ini  dilakukan  masing- masing replikasi sebanyak 3 kali untuk meminimalisir  kesalahan  data.  Pengamatan  pada larva  dilakukan  24  jam  setelah  perlakuan konsentrasi.  Perhitungan  kematian  larva  dilakukan dengan  cara  mengamati  larva  selama  beberapa detik. Kematian pada larva dihitung pada saat tidak ada  lagi  pergerakan  larva  dalam  waktu  beberapa detik 12 .
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  diperoleh kematian  larva  berbeda  disetiap  konsentrasi. Berdasarkan  data  pada  tabel  2  jumlah  larva  yang digunakan  tiap  perlakuan  adalah  10  ekor  larva dengan  3  kali  pengulangan,  sehingga  total  30  ekor untuk  satu  konsentrasi.  Dari  data  diketahui konsentrasi  terendah  yaitu  100  µg/ml  dan konsentrasi yang tertinggi yaitu 1000 µg/ml dengan persentase  mortalitas  sebesar  3,3%  –  26,7%. Sedangkan  pada  blanko  tidak  memberikan  efek mortalitas  terhadap  larva.  Konsentrasi  yang bervariasi  pada  setiap  vial  uji  memiliki  jumlah kematian Artemia salina yang beragam jumlahnya. Hal tersebut menunjukkan bahwa setiap konsentrasi  memiliki  pengaruh  yang  berbeda  pada kematian  larva Artemia  salina, semakin  tinggi konsentrasi yang dibuat maka tinggi pula kematian larva 12 .
Tabel 2. Hasil Pengujian uji toksisits kitosan kulit udang windu ( Penaeus monodon )
Setelah  mengetahui  %  Mortalitas  larva A. salina, kemudian  dicari  nilai  probit  melalui  tabel probit dan diregresikan secara linier.
Y= a + bX Keterangan: Y  = Nilai probit a = Konsentrasi regresi
b = Slope/kemiringan regresi
X = Logaritma10 konsentrasi uji
Data  yang  diperoleh  dari  tabel  2,  kemudian dianalisis dengan menggunakan tabel analisa probit untuk  mendapatkan  nilai Lethal  concentration  50 (LC 50 ). LC 50 merupakan besarnya konsentrasi yang
dapat  membunuh  hewan  percobaan  sebanyak  50% dari  keseluruhannya.  Nilai  LC 50 dapat  dihitung dengan  persamaan  regresi  garis  lurus  dengan
memasukkan  nilai  (probit  50%  kematian  hewan
uji)  sebagai  y  sehingga  dihasilkan  x  sebagai  nilai log konsentrasi.
Tabel 3. Perhitungan nilai LC 50
Antilog  nilai  x  yang  nantinya  menjadi parameter  nilai  LC 50 yang  ditunjukkan  untuk mengetahui    adanya  aktivitas  biologis  pada  suatu senyawa terhadap hewan uji ialah degan menghitung  jumlah  larva  yang  mati  karena pengaruh  pemberian  senyawa  dengan  konsentrasi yang telah ditentukan 6 . Analisa probit pada kitosan kulit  windu  diperoleh  grafik persamaan  garis  lurus y = 1,0472 x + 1,1268.
No Konsentrasi (µg/ml) Perlakuan 1 Perlakuan 2 Perlakuan 3 Jlh larva yang mati Rata-rata %mortalitas Larva mati % Mortalitas Larva mati % Mortalitas Larva mati % Mortalitas 1 Blanko 0 0 0 0 0 0 0 0,0 % 2 100 0 0 1 10 0 0 1 3,3 % 3 250 1 10 1 10 1 10 3 10,0 % 4 500 2 20 1 10 2 20 5 16,7 % 5 750 1 10 2 20 2 20 5 16,7 % 6 1000 2 20 2 20 3 30 7 23,3 %
Gambar  3  menunjukkan  log  konsentrasi terhadap  nilai  probit  yang  didapat  dari  persentase kematian  larva.  Setelah  itu  dimasukkan  nilai  y yakni  nilai  probit  50%  hewan  uji  dan  didapatkan nilai  x  =  3,369846  maka  nilai  LC 50 antilog    yaitu 4994,16 µg/ml.
Suatu  senyawa  dikatakan  bersifat  toksik apabila  nilai  LC 50 <  1000µg/ml.  dan  apabila  suatu senyawa  memiliki  nilai  LC 50 >  1000  µg/ml,  maka senyawa tersebut tidak berpotensi toksik 15 . Nilai  LC 50 yang  tinggi  dan  bersifat  tidak toksik  ini  dikarenakan  rendahnya  mortalitas  larva A.  salina pada  tiap  konsentrasi,  yaitu  pada konsentrasi  ini  mortalitas  tidak  mencapai  sebesar 50 % dari jumlah larva yang ujikan 5 .
Gambar  3. Grafik  Regresi  Linear  Konsentrasi Kitosan  Windu  ( Penaeus  monodon ) Terhadap Nilai Probit

## IV. Kesimpulan
Hasil  kitosan  kulit  udang  windu  ( Penaeus monodon )  didapat  %  Derajat  Deasetilasinya sebesar  60%,  yang  menyatakan  bahwa  hasil  tidak memenuhi  peryaratan  Standart  Nasional  Indonesia yaitu  %DD  kitosan    ≥  75%.  Nilai  LC 50 yang diperoleh  dari  kitosan  kulit udang  windu  ( Penaeus monodon )  yaitu  4897,79  µg/ml  membuktikan bahwa  kitosan  tidak  bersifat  toksik  pada Artemia salina Leach.

## Referensi
1. Ridwanto,  Daulay,  A.  S.,  &  Gurning,  K. (2022, Apr). Isolation and Characterization of Chitosan  From  Sea  and  Freshwater  Waste, North Sumatera Province, Indonesia. Rasayan Journal  of  Chemistry , 15 (2),  780–785. https://doi.org/10.31788/RJC.2022.1526721
2. Sari,  N.  A.,  Nurhamidah,  I.  S.,  Mulyana,  S.
A.,  &  Rohyami,  Y.  (2019,  Aug).  Preparasi Dan  Karakterisasi  Kitosan  Dari  Limbah Pengolahan Udang. Khazanah: Jurnal
Mahasiswa, 11(1).
3. Rochmawati, Z. N., Nabila, F., & Ainurrohmah, C. (2018). Karakterisasi Kitosan  Yang  Diisolasi  Dari  Cangkang Internal  Cumi-cumi.  Sainteknol:  Jurnal  Sains dan Teknologi, 16(1), 105-112.
4. Juniarti.,  D.,  &  elvi  Osmeli.,  Y.  (2010,  Apr). Kandungan  Senyawa  Kimia,  Uji  Toksisitas (Brine Shrimp Lethality Test) Dan Antioksidan (1,1-diphenyl-2-pikrilhydrazyl)
Dari  Ekstrak  Daun  Saga  ( Abrus  precatorius L.). Makara Journal of Science, 13(1), 50–54.
5. Puspitasari,  E.,  &  Rozirwan,  M.  H.  (2018,
Jun).  Uji  Toksisitas  Dengan  Menggunakan Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT) Pada  Ekstrak  Mangrove  ( Avicennia  marina, Rhizophora  mucronata,  Sonneratia  alba dan Xylocarpus  granatum )  yang  berasal  dari Banyuasin,  Sumatera  Selatan.  Jurnal  Biologi Tropis, 18(1), 91-103. 6. Ningdyah,  A.  W.,  Alimuddin,  A.  H.,  & Jayuska,  A.  (2015).  Uji  Toksisitas  Dengan Metode  BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality  Test )
Terhadap Hasil Fraksinasi Ekstrak Kulit Buah Tampoi  ( Baccaurea  macrocarpa ).  Jurnal Kimia Khatulistiwa, 4(1).
7. Agustina, S., Swantara, I. M. D., & Suartha, I. N.  (2015,  Jul).  Isolasi  Kitin,  Karakterisasi, dan Sintesis Kitosan Dari Kulit Udang. Jurnal Kimia, 9(2), 271-278.
8. Dompeipen, E. J., Kaimudin, M., & Dewa, R. P.  (2016).  Isolasi  Kitin  Dan  Kitosan  Dari Limbah  Kulit  Udang.  Majalah  Biam,  12(1), 32-39.
9. Fadli,  A.,  Drastinawati,  Alexander,  O.,  & Huda,  F.  (2017).  Disintesis  Dari  Limbah Industri  Udang  Kering.  Jurnal  Sains  Materi Indonesia, 1, 61–67.
10. Djamil,  R.,  &  Anelia,  T.  (2009,  Sep). Penapisan  Fitokimia,  Uji  BSLT,  Dan  Uji Antioksidan Ekstrak Metanol Beberapa Spesies Papilionaceae. Jurnal Ilmu
Kefarmasian Indonesia, 7(2), 65-71.
11. Lestari, D., Kartika, R., & Marliana, E. (2019, Jan). Uji Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT) Umbi  Bawang  Tiwai  ( Eleutherine  bulbosa (Mill.)  Urb)  dan  Uji  Toksisitas  Akut  Fraksi Aktif.  Jurnal  Riset  Kefarmasian  Indonesia, 1(1), 1-10.
12. Supriningrum,  R.,  Sapri,  S., &  Pranamala,  V. A. (2017). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Akar KB (Coptosapelta tomentosa Valeton ex K.  Heyne)  Dengan  Metode  Brine  Shrimp
Lethality Test (BSLT). Jurnal ilmiah manuntung, 2(2), 161-165. 13. Mardiana, U. (2021). Isolasi Dan Karakterisasi  Kitosan  Pada  Kerang  Darah  (
Anadara  granosa  ).  Jurnal  Program  Studi Analis  Kesehatan,  Sekolah  Tinggi  Ilmu Kesehatan  Bakti  Husada.  Tasikmalaya.,  1(1), 1–9.
14. Panjaitan,  R.  B.  (2011,  Jul).  Uji  Toksisitas
Akut  Ekstrak  Kulit  Batang  Pulasari  ( Alyxiae cortex )  Dengan  Metode Brine  Shrimp Lethality  Test (BSLT). Skripsi .  Yogyakarta: Universitas Sanata Dharma.
15. Mayer,  B.N.,  Ferrigni,  N.R.,  Putnam,  J.E., Jacobsen,  D.E.,  dan  C.Laughlin,  J.  .  (1982). Brine  Shrimp:  A  Conveint  General  Bioassay for  Active  Plant  Constituents.  Journal  of Medicinal Planta Medica, 45(5), 31–34.