Jurnal Pharmascience, Vol 3, No. 1, Februari 2016, hal: 93 - 100 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 http://jps.ppjpu.unlam.ac.id/

## Research Article

## Penentuan Kadar Flavonoid Total dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kajajahi
( Leucosyke capitellata Wedd.)
*Irvan Ipandi 1 , Liling Triyasmono 1 , Budi Prayitno 2
1 Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat Banjarmasin 2 Program Studi Biologi STKIP PGRI Banjarmasin *Email : irvani623@gmail.com

## ABSTRAK
Tumbuhan  kajajahi  ( Leucosyke  capitellata Wedd.)  merupakan  tumbuhan  yang berkhasiat  sebagai  obat  tradisional  seperti  penurun  panas  dan  anti  diare.  Tumbuhan kajajahi  telah  diketahui  mengandung  senyawa  flavonoid  dengan  sifat  sebagai penangkal  radikal  bebas.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  kadar  flavonoid total dan aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol daun kajajahi. Penelitian ini bersifat eksperimental.  Sampel  yang  digunakan  adalah  daun  kajajahi  yang  berasal  dari  desa Hulu  Banyu  Kecamatan  Loksado  Kabupaten  Hulu  sungai  Selatan.  Penentuan  kadar flavonoid  total  dilakukan  secara  spektrofotometri  didasarkan  pada  kemampuan flavonoid  membentuk  kompleks  dengan  AlCl 3 sedangkan  Aktivitas  antioksidan ditentukan  menggunakan  metode  DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil).  Hasil  penelitian diperoleh kadar flavonoid total ekstrak etanol daun kajajahi sebesar 6,14 ± 0,193 mg/g kuersetin  dan  aktivitas  antioksidan  sebesar IC 50 455,570  ppm.  Sehingga  dapat digolongkan sebagai antioksidan lemah.
Kata kunci : Leucosyke capitellata Wedd, Antioksidan, DPPH,Flavonoid Total

## ABSTRACT
Kajajahi  Plant  (Leucosyke  capitellata  Wedd.)  a  potent  plant  that  may  act  as  a traditional  medicine  such  as  antifever  and  anti-diarrhea.  Kajajahi  plant  known  contain flavonoid compounds that have properties as free-radical scavengers. The Purpose of this study  was  to  determine  the  total  flavonoid  content  and  antioxidant  activity  of  kajajahi leaves  ethanol  extract.  The  design  of  this  research  is  experimental.  The  sample  were kajajahi  leaves  from  Hulu  Banyu,  Loksado,  Hulu  sungai  Selatan.    The  determination  of total  flavonoids  done  by  spectrophotometry  based  on  the  ability  of  flavonoids  to  form complexes  with  AlCl 3 while  The  antioxidant  activity  determined  using  the  DPPH  (2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl) method. Results of this study showed the total flavonoid content of kajajahi leaves ethanol extract was 6.14  ± 0,193 mg/g of  quercetin and antioxidant of IC 50 455.570 ppm. Which, may be classified as weak antioxidant.
Keywords: Leucosyke capitellata Wedd, Antioxidant, DPPH, Total Flavonoids

## I. PENDAHULUAN
Bahan  obat  yang  berasal  dari  alam secara Obat modern (obat sintetik) saat ini banyak  digunakan  oleh  masyarakat  untuk menjaga kesehatan dan mengobati penyakit tertentu. Obat modern mempunyai  kekuatan  ilmiah  karena  sudah melalui uji klinis yang dilakukan bertahun- tahun.  Meskipun  begitu,  obat  modern mempuyai kekurangan  yaitu efek samping besar.  Oleh  karena  itu  banyak  masyarakat yang  beralih  ke  pengobatan  tradisional yang  dinilai  memiliki  efek  samping  yang lebih kecil dan dapat dimanfaatkan sebagai tanaman obat keluarga.
Salah satu tumbuhan yang berkhasiat sebagai obat yaitu daun Kajajahi.
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan oleh  Ling    (2008)  dan  Rahmi  (2013) diketahui bahwa daun
kajajahi
mengandung  senyawa  flavonoid  tanin  dan saponin. Tumbuhan kajajahi oleh masyarakat  setempat  digunakan  untuk mengatasi  keputihan,  penawar  racun, penurun panas (anti piretik)  dan antidiare. Flavonoid  merupakan  senyawa  golongan fenol  yang  tersebar  di  alam  dan  memiliki sifat  sebagai  penangkal  radikal  bebas (Pourmourad, 2006). Radikal bebas sangat berbahaya  bagi  tubuh  manusia  karena dapat  merusak  komponen-komponen  sel tubuh  seperti  lipid,  protein  dan  DNA (Oktarini, 2014).
Antioksidan berfungsi untuk menetralisir radikal bebas sehingga diharapkan  dengan  pemberian  antioksidan tersebut dapat mencegah terjadinya kerusakan  tubuh  dan  timbulnya  penyakit degeneratif.    Pemilihan  antioksidan  alami menjadi perhatian masyarakat karena telah ditemukannya efek samping pada antioksidan sintetik yang bersifat karsinogenik  jika digunakan dalam jangka waktu  yang  lama  dan  dalam  jumlah  yang berlebihan  (Zuhra  dkk,  2008).    Oleh karena itu senyawa antioksidan alami baru harus terus dicari atau setidaknya diperbaharui  agar  bisa  menjadi  penangkal radikal  bebas  yang  lebih  aman  bagi  tubuh manusia,  sehingga  untuk  memenuhi  hal tersebut  pencarian  senyawa  antioksidan alami diarahkan pada sumber daya alam.

## II. BAHAN DAN METODE

## A. Bahan
Bahan yang digunakan adalah daun kajajahi,  aquades,  etanol  teknis  70%, etanol  p.a,  kuersetin,  AlCl 3 2  %,  HCl pekat,  serbuk  Mg,  pereaksi  DPPH  (2,2- difenil-1-pikrilhidrazin),  aluminium  foil, plat KLT silika  gel 60 GF 254, n -butanol, asam asetat, air, dan kertas saring.
.
B. Pembuatan Ekstrak
Serbuk kasar daun Kajajahi ditimbang  sebanyak  480  g.  Serbuk  kasar daun  kajajahi  yang  telah  ditimbang
dimasukkan  ke  dalam  bejana  maserasi. Pelarut  etanol  70%  ditambahkan  sambil diaduk  hingga  seluruh  serbuk  kasar terbasahi  merata  dengan  pelarut.  Pelarut ditambahkan  dengan  perbandingan  1:15. Ekstraksi  dilakukan  selama  3x24  jam dengan pengadukan selama 1 jam menggunakan magnetic  stirrer .  Ekstrak disaring  hingga  diperoleh  filtrat.  Filtrat yang  telah  diperoleh  dimasukan  dalam rotary  evaporator pada  suhu 50 o C sehingga  didapat  ekstrak  kental.  Ekstrak kental  diuapkan  diatas waterbath sampai diperoleh  ekstrak  kering  dengan  bobot tetap  (BPOM RI, 2011).

## C. Identifikasi Flavonoid
Identifikasi flavonoid dilakukan reaksi  pembentukan  warna  dengan  sebuk Mg (Baud et a , 2014).  dan  uji kromatografi lapis tipis dilakukan menggunakan  fase  diam  silika  60  GF 254 dan  fase  gerak n -butanol:  asam  asetat:  air perbandingan  4:1:5  dengan    pembanding kuersetin (Marliana, 2007).

## D. Uji Kualitatif Antioksidan
Uji  kualitatif  amtioksidan  dilakukan dengan  teknik  kromatografi  lapis  tipis menggunakan  fase  diam  silika  60  GF 254 dan  fase  gerak n -butanol:  asam  asetat:  air perbandingan 4:1:5, kemudian hasil disemprot  menggunakan  pereaksi  semprot DPPH 0,4 mM (Utomo et al , 2011).
E. Penentuan Kadar Flavonoid Total
1. Penentuan panjang gelombang maksimun kuersetin
Panjang  gelombang  maksimum ditentukan dengan cara membuat kuersetin 60  ppm  kemudian  sebanyak  1  mL  larutan kuersetin  60  ppm  tersebut  direaksikan dengan  1  mL  AlCl 3 2%  di  dalam  tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 8 mL asam asetat  5%  ke  dalam  larutan  dan  dilakukan pembacaan pada rentang panjang gelombang 400-500 nm .
2. Penentuan operating time kuersetin
Penentuan operating time dilakukan  dengan  mengambil  sebanyak  1 mL larutan  kuersetin  60  ppm  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  lalu  direaksikan dengan 1 mL  AlCl 3 2%, dan ditambahkan 8  mL  asam  asetat  5%  ke  dalam  larutan . Larutan diukur absorbansinya pada panjang  gelombang maksimum  yang telah diperoleh  dengan  interval  waktu  2  menit sampai diperoleh absorbansi yang stabil.
3. Penentuan kurva baku kuersetin
Larutan  baku  dibuat  dengan  cara menimbang kuersetin secara seksama 10,0 mg  pada  neraca  analitik,  kuersetin kemudian dilarutkan dengan etanol add 10 mL  sehingga  diperoleh  konsentrasi  1000 ppm.  Larutan  baku  1000  ppm  kuersetin dibuat  dengan  variasi  konsetrasi  50,  60, 70, 80, 90   dan 100  ppm.  Sebanyak 1 mL larutan dari berbagai konsentrasi direaksikan  dengan  1  mL  AlCl 3 2%,
ditambahkan  8  mL  asam  asetat  5%  ke dalam larutan, kemudian didiamkan selama operating  time .  Kurva  standar diperoleh dari hubungan antara konsentrasi kuarsetin (mg/L) dengan absorbansi (Pratiwi et al , 2010).

## F. Penentuan Aktivitas Antioksidan
1. Penentuan panjang gelombang maksimum DPPH
Sebanyak  1,0  mL  larutan  DPPH 0,4  mM  ditambahkan  dengan  4,0  mL etanol p.a. kemudian didiamkan selama 30 menit  ditempat  gelap,  absorbansi  diukur dengan  Spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang gelombang 500-600 nm (Molyneux, 2004).
2. Penentuan operating time DPPH
Penentuan operating time dilakukan  dengan  cara  1,0  mL  larutan
DPPH  0,4  mM  ditambah  dengan  larutan uji  6  ppm  sebanyak  4,0  mL.  Larutan tersebut diukur absorbansinya pada panjang  gelombang maksimum  yang telah diperoleh  dengan  interval  pada  waktu  2 menit  sampai  diperoleh  absorbansi  yang stabil (Rastuti & Purwati, 2012).
3. Penentuan  aktivitas  antioksidan  ekstrak etanol daun kajajahi
Ekstrak kental daun kajajahi sebanyak 10,0 mg dilarutkan dalam etanol p.a  10  mL  sehingga  diperoleh  konsentrasi 1000 ppm, dan kemudian dibuat seri kadar dengan    konsentrasi  100  ppm,  200  ppm,
300 ppm, 500 ppm dan 600 ppm. Masing- masing  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi selanjutnya masing-masing 4,0 mL larutan uji  ditambahkan  dengan  1,0  mL  larutan DPPH  0,4  mM.  Campuran  didiamkan selama  waktu operating  time yang diperoleh  dan  diukur  absorbansinya  pada panjang gelombang maksimum.
Perhitungan  potensi  antioksidan dengan pereaksi DPPH dengan menghitung  IC 50 untuk  masing-masing sampel dengan menggunakan rumus persamaan  garis  regresi  linier  yang diperoleh  dari  grafik  hubungan  antara konsentrasi  dengan  %  peredaman  DPPH ekstrak  etanol.  Besarnya  %  peredaman DPPH dihitung dengan rumus :
% peredaman DPPH = [Absorban kontrol−Absorban sampel] Absorban  kontrol x 100 %

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi dilakukan untuk menarik  komponen  kimia  yang  terdapat dalam  suatu  bahan.  Proses  ekstraksi  yang dilakukan  menggunakan  metode  maserasi .
Ekstrak  kental  yang  diperoleh  berwarna hijau tua dengan persen  rendemen sebesar 5,304 %.
Identifikasi flavonoid dengan menggunakan  serbuk  mg,  menunjukan hasil  positif  dengan  terbentuknya  warna jingga  dan  uji  KLT  menunjukan  Nilai  R f yang  yang  dihasilkan  sebesar  0,938  untuk
ekstrak  dan  0,95  untuk  kuersetin  sebagai pembanding.  Hasil  Rf  yang  hampir  sama menandakan  bahwa  antara  ekstrak  dan pembanding  memiliki  karakteristik  yang sama  yaitu  kepolarannya  (Srivastava, 2010).
Uji kualitatif antioksidan menggunakan  KLT  yaitu  terbentuk  noda berwarna  kuning  dengan  latar  ungu.  Hal ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol daun  kajajahi  mengandung  senyawa  yang memiliki  aktivitas  antioksidan  (Siska  & Astuti,  2011).  Menurut Molyneux  (2004) adanya  aktivitas  antioksidan  disebabkan karena senyawa  yang  terdapat  pada tumbuhan  akan  melepaskan  atom  H  yang merupakan  salah  satu  radikal  bebas  dan kemudian  akan  berikatan  dengan  radikal DPPH  membentuk  senyawa  baru  yaitu difenil pikrilhidrazin yang stabil.
Penentuan flavonoid total dari ekstrak  etanol  daun  kajajahi  dilakukan dengan  prinsip  pengukuran  berdasarkan pembentukan  warna  dengan  pereaksi AlCl 3 . Kuersetin digunakan sebagai
pembanding  karena  kuersetin  merupakan flavonoid golongan flavonol yang mempunyai  gugus  keto  pada  C-4  dan memiliki  gugus  hidroksi  pada  atom  C-3 atau  C-5  sehingga  dapat  membentuk kompleks warna dengan
AlCl 3
(Desmianty,  2009).  Penambahan  asam asetat  agar  pada  C-4  keto  dan  3  atau  5  – OH  tetap  stabil.  Sebelum  dilakukan
penetapan  kadar  flavonoid  total,  terlebih dahulu  ditentukan  panjang  gelombang maksimum  dan operating  time yang  akan digunakan.
Panjang gelombang maksimum yang diperoleh  adalah  415  nm.  Hal  ini  sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Das et  al (2013)  yang  menentukan  flavonoid total  dengan  menggunakan  penambahan AlCl 3 yaitu  415  nm  dan Operating  time yang  diperoleh  adalah  22  menit  untuk waktu  inkubasi.  Hasil  ini  memiliki  selisih 1  menit  dengan operating  time yang didapat  oleh  Muhtadi et  al (2014)  yang menentukan flavonoid total dengan menggunakan  penambahan AlCl 3 yaitu 23 menit.
Penentuan  kurva  baku  kuersetin dilakukan  dengan  membuat  6  larutan  seri kadar  yang  dibaca  absorbansinya  pada panjang  gelombang  maksimum  415  nm dan  dengan  waktu  inkubasi  selama  22 menit.  Hasil  penentuan  kurva  baku kuersetin dapat dilihat gambar berikut.
Gambar 1. Persamaan kurva baku kuersetin
Penetapan  kadar  flavonoid  total dilakukan  dengan  standar  eksternal  yaitu
memasukan  nilai  absorbansi  dari  sampel ekstrak  etanol  daun  kajajahi  ke  dalam persamaan  kurva  baku  kuersetin.  Hasil yang  diperoleh  dapat  dilihat  pada  tabel berikut.
Tabel  I. Kadar  Flavonoid  Total  Ekstrak  Etanol Daun Kajajahi
Penentuan nilai aktivitas antioksidan pada penelitian
ini
menggunakan  metode  DPPH.  Metode  uji aktivitas  antioksidan  dengan  DPPH  (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil) dipilih karena metode  ini  adalah  metode  sederhana, mudah,  cepat  dan  peka  serta  hanya memerlukan sedikit sampel untuk mengetahui    aktivitas  antioksidan  dari senyawa bahan alam (Koleva et al , 2002).
Sebelum  dilakukan  pengujian  terhadap ekstrak, terlebih dahulu ditentukan panjang gelombang maksimum  dan operating time yang akan digunakan.
Hasil penentuan panjang gelombang  maksimum  dalam  penelitian ini sesuai dengan literatur yang disebutkan oleh Molyneux  (2004)  dimana  panjang gelombang  maksimum  DPPH  yaitu  518 nm  dan Hasil  penentuan operating  time adalah  10  menit  untuk  waktu  inkubasi. Hasil  penentuan operating  time dalam penelitian  ini  sesuai  dengan  literatur  yang
disebutkan  (Lachman et  al ,  2008)  dimana operating  time DPPH  yaitu  10  menit. Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  vitamin  C dan  ekstrak  etanol  daun  kajajahi  dapat dilihat pada tabel berikut.
Tabel II. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kajajahi
Flavonoid  merupakan  salah  satu metabolit sekunder yang memiliki aktivitas antioksidan (Chairul et al , 2003). Kemampuan  menghambat  radikal  bebas DPPH  ekstrak  etanol  daun  kajajahi berkaitan  dengan  senyawa  kimia  yang terkandung  didalamnya  yaitu  flavonoid. Flavonoid  memiliki  kemampuan  sebagai antioksidan  karena  mampu  mendonasikan atom  H  dari  gugus  hidroksi  kepada senyawa radikal bebas.

## IV. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian dapat diambil suatu kesimpulan bahwa :
1. Ekstrak etanol daun kajajahi memiliki kandungan flavonoid total yaitu sebesar 6,14 ± 0,193 mg/g kuersetin.
2. Nilai  IC 50 ekstrak etanol daun kajajahi memiliki aktivitas sebagai antioksidan yaitu  sebesar  455,570  ppm,  yang
termasuk  dalam  golongan  antioksidan lemah.

## DAFTAR PUSTAKA
Baud,  G.S.,  M.S.  Sangi  &  H.S.J.
Koleangan.
2014. Analisis Senyawa  Metabolit  Sekunder  dan Uji  Toksisitas  Ekstrak  Etanol
Batang  Tanaman  Patah  Tulang ( Euphorbia  tirucalli L.)  dengan
Metode Brine  Shrimp  Lethality Test (BSLT). 14 (2) : 106-110.
BPOM RI. 2011. Peraturan Kepala Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan Republik Indonesia Nomor Hk.03.1.23.06.11.5629 , Jakarta. Chairul,  S.  M.,  M.  Sumarny  &  Chairul.
2003. Aktivitas Antioksidan
Ekstrak  Air  Daun  Tempuyung ( Sonchus  arvensis L.)  secara in vitro . Majalah  Farmasi  Indonesia . 14 (4): 208-215.
Das,  A.,  A.  Mukherjee,  &  P.  Dhar.  2013.
Characterization  of  Antioxidants and  Antioxidative  Properties  of Various  Unifloral  Procured  from
West  Bengal,  India. IOSR  Journal of Environmental Science, Toxicology  and  Food  Tehcnology . 7 : 56-63.
Desmiaty,  Y.,    J.  Ratnawati,  &  P.  Andini. 2009. Penentuan Jumlah Flavonoid
Total  Ekstrak  Etanol  Daun  Buah Merah (Pandanus conoideus Lamk.) Secara Kolorimetri Komplementer . Dipresentasikan Pada Seminar Nasional POKJANAS TOI XXXVI 13 & 14 Mei  2009,  Universitas  Sanata
Dharma, Yogyakarta.
Koleva I. I., Van Beek T A, Linssen J P H,
Groot A De, Evstatieva L N. 2002.
Screening  Of  Plant  Extracts  For Antioxidant Activity: A Comparative  Study  On  Three Testing  Methods. Phytochemical Analysis. 13 : 8-17.
Lachman,  J.,  M.  Šulc  &  O.  Pavlíková, 2006.  Polyphenol  content  and antiradical  activity  in  different apple  varieties. Hort.  Science (Prague) . 3 : 95-102. Ling,  L.  2008. Evaluation  of  Anti- hiperglicaemic  Effect  of  Leucosyke capitellata  Leaf  in  Normal  and Streptozotocin  -  Induced  Diabetic Rats. Thesis. Program Pasca Sarjana. Universiti Malaysia Sabah, Malaysia.
Marliana,  S.D.,  V.  Suryanti  &  Suyono. 2005.  Skrining  Fitokimia  dan Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis Komponen Kimia Buah Labu Siam ( Sechium  edule Jacq.  Swartz.) dalam  Ekstrak  Etanol. Biofarmasi .
3 (1): 26-31.
Molyneux,  R.  2004.  The  Use  of  Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin  Journal of Sciences. 2 : 211-219.
Muhtadi,  Anggita  L.H,  A.  Suhendi,  Tanti A  &  Haryoto.  2014.  Pengujian Daya  Antioksidan  Dari  Beberapa Ekstrak  Kulit  Buah  Asli  Indonesia Dengan  Metode  Ftc. Simposium Nasional  Rapi  Xiii-2014  ft  Ums .
50-56.
Oktarini, N.W, A.C. Dewi, N.M. puspawati, I.M.D. Swantara,
L.A.R.A.  Asih  &  W.S.  Rita.  2014. Aktivitas  Antioksidan  Senyawa Flavonoid  Ekstrak  Etanol  Biji Terong Belanda ( Solanum betaceum, Syn ) Dalam Menghambat  Reaksi  Peroksidasi
Lemak  Pada  Plasma  Darah  Tikus Wistar. Cakra  Kimia  (Indonesian E-Journal  of  Applied  Chemistry ) 2 : 7-16.
Pratimasari,  D.  2009.  Uji  Aktifitas Penangkal  Radikal  Bebas  Buah Carica  Papaya  L  Dengan  Metode DPPH Dan Penetapan Kadar
Fenolik  Serta  Flavonoid  Totalnya. Skrips i. Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakata.
Pourmourad,  F.,  S.J  Hosseinimehr  &  N. Shahabimajd.  2008.  Antioxidant Activity,  Phenol  And  Flavonoid Contents Of Some Selected Iranian Medicinal  Plants .  African  journal of Biotechnology 5 : 43-49.
Rahmi, K.  I., Y. B. Paradina., & H.  Izma.
2013. Identifikasi Senyawa Fitokimia dan Kajian Farmakognostik Tanaman Kajajahi Asal  Loksado  Kalimantan  Selatan . PKM-Penelitian Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru.
Srivastava,  M.  2010. High-Performance Thin-Layer Chromatography (HPTLC) .Springer Science &
Business Media,New York.
Siska, K. R., & M. D. Astuti. 2011.  Isolasi senyawa  antioksidan  dari  kulit batang tumbuhan binjai ( Mangifera caesia).  Sains  dan  Terapan  Kimia . 5 ( 1) : 8-13.
Utomo, A. B., A. Suprijono, A. Risdianto. 2011.  Uji  Aktivitas  Antioksidan Kombinasi  Ekstrak  Sarang  Semut ( Myrmecodia  pendans )  &  Ekstrak
Teh  Hitam  ( Camellia  sinensis O.K.var.assamica  (mast.))  Dengan
Metode DPPH (1,1-Difenil-2- Pikrilhidrazil). STIF Yayasan
Pharmasi Semarang . 1 (1) :1-9.
Zuhran, C.T., J.B. Taringan & H.Sihotang.
2008. Aktivitas Antioksidan Senyawa  Flavonoid  Dari  Daun
Katuk  ( Sauropus  androgunus (L) Merr.) Jurnal Biologi Sumatera. 1 : 1907-5537.