## Uji Toksisitas Subkronis Ekstrak Etanol
Daun Pucuk Merah ( Syzygium Myrtifolium Walp.) Terhadap Fungsi Hati Dan Ginjal
(Sub-Chronic Toxicity of Syzygium Myrtifolium Walp on Liver and Kidney Function)
SYILFIA HASTI 1 , MUSDALIFAH 1 , ASNILA 1 , LISA RENITA 1 , FERELINA SANTI 1 , SHELLA ANGGRAINI 1 , NOVIA SINATA 1 , RAHMAYATI RUSNEDY 1 *
1 Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru, 28293, Indonesia.
Diterima 7 Juli 2021, Disetujui 17 Maret 2022
JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, April 2022,  hlm. 30-37 ISSN 1693-1831, E-ISSN 2614-6495
Abstract: For the development of natural medicines from the ethanolic extract of Syzygium myrtifolium Walp leaves it is necessary to know the pre-clinical safety test so that its safety if used in the long term. The subchronic toxicity test of the ethanolic extract of Syzygium myrtifolium Walp leaves l was carried out by assessing the kidney and liver function of the test animals given after 60 days of test preparation, in  the  form  of  blood  biochemical  examination  using  the  Mindray®BA-88A  device  and  histological examination of the kidneys and liver. The results showed that the administration of ethanol extract of Syzygium myrtifolium Walp  leaves at doses of 300, 600 and 900 mg/kgBW did not signiﬁ cantly aﬀ ect the activity of SGOT, SGPT, serum creatinine levels (p>0.05). Microscopically on the percentage of damage to the glomerulus of the right and left kidneys. at doses of 600 and 900 mg/kgBW there was a signiﬁ cant diﬀ erence to the control group (p<0.05). For qualitative microscopic examination, namely observation of sinusoids and hepatocyte cells at each level, there were abnormal changes. Meanwhile, quantitative  microscopic  examination  at  doses  of  600  and  900  mg/kgBW  caused  an  increase  in  the percentage of central vein damage (p<0.05). From the research, it was found that the ethanolic extract of Syzygium myrtifolium Walp leaves of white mice was safe for liver and kidney function at a dose of 300 mg/kgBW, but the doses group of 600 and 900 mg/kgBW gave a toxic eﬀ ect on the kidneys and liver when compared to the control group.
Keywords : sub-chronic toxicity, Syzygium myrtifolium Walp., SGOT, SGPT, creatinine.
Abstrak: Untuk  pengembangan  obat  bahan  alam  dari  ekstrak  etanol  daun  pucuk  merah  ( Syzygium myrtifolium Walp)  harus  dilakukan  serangkaian  uji  keamanan  secara  praklinik  agar  diketahui keamanannya  jika    digunakan  jangka  panjang.  Uji  toksisitas  subkronis  ekstrak  etanol  daun  pucuk merah dilakukan dengan menilai fungsi ginjal dan hati hewan uji setelah diberikan sediaan uji yang diberikan selama 60 hari, berupa pemeriksaan biokimia  darah  menggunakan  alat Mindray®BA-88A dan  pemeriksaan  histologi  organ  ginjal  dan  hati.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pemberian ekstrak  etanol  daun  pucuk  merah  dosis  300,  600  dan  900  mg/kgBB  tidak  mempengaruhi  aktivitas SGOT,  SGPT,  kadar  kreatinin  serum  secara  signiﬁ kan  (p>0,05).  Secara  mikroskopis  terhadap persentase kerusakan glomerulus ginjal kanan dan ginjal kiri pada dosis 600 dan 900 mg/kgBB terdapat perbedaan yang signiﬁ kan terhadap kelompok kontrol (p<0,05). Untuk pemeriksaan mikroskopis secara kualitatif yakni pengamatan sinusoid dan sel hepatosit pada tiap pemberian tingkatan dosis mengalami perubahan abnormal. Sedangkan pemeriksaan mikroskopis secara kuantitatif  pada dosis 600 dan 900 mg/kgBB menyebabkan kenaikan persentase kerusakan vena sentralis (p<0,05). Dari  penelitian dapat disimpulkan pemberian ekstrak etanol daun pucuk merah  pada mencit putih  aman terhadap fungsi hati dan ginjal pada dosis 300 mg/kgBB tetapi kelompok dosis 600 dan 900 mg/kgBB memberikan efek toksik terhadap organ ginjal dan hati bila dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Kata kunci: toksisitas sub-kronis, Syzygium myrtifolium Walp., SGOT,SGPT, kreatinin .
31  HASTI ET AL.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
isolasi dari daun pucuk merah juga didapatkan kristal dimethoxychalcone (DMC) dan ekstrak etanol daun pucuk merah memiliki aktivitas antikanker pada sel kanker  kolon  manusia  (HT-29) (10) .  Sedangkan  buah pucuk  merah  diisolasi  mengandung  antosianin  dan memiliki  aktivitas  antioksidan dan aplikasi sebagai pewarna alami (11) .
Penelitian  toksisitas  akut    telah  dilakukan sebelumnya  bahwa  ekstrak  etanol  dari  daun pucuk merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp)  memiliki  nilai LD 50 >16000  mg/kg  BB  di  golongkan  praktis  tidak toksik  dan  aman (12) .  Kemudian  dapat  dilanjutkan dengan uji toksisitas subkronik untuk melihat pengaruh paparan zat yang berulang-ulang dengan dosis yang tidak mematikan atau dosis yang kemungkinan akan diberikan pada manusia (2) .
Pengujian  toksisitas  subkronik  meliputi pemeriksaan hematologi, pemeriksaan biokimia klinis, dan histopatologi. Menurut WHO (2000) pemeriksaan biokimia klinis meliputi: fungsi hati yakni Glutamat Oksaloasetat Transminase (GOT), Glutamat Piruvat Transaminase (GPT), Gamma GT dan fungsi ginjal meliputi Nitrogen Urea, Kreatinin, Total-Bilirubin). Pada  pemeriksaan  biokimia  klinis  telah  dilakukan penelitian pengaruh ekstrak etanol daun pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp) terhadap  kadar bilirubin total serum dimana hasilnya menunjukan bahwa pada dosisi 300, 600 dan 900 mg/kgBB tidak mempengaruhi kadar bilirubin total serum setelah diberikan selama 60 hari (13) dan pada penelitian yang telah dilakukan oleh  Permadi  (2016)  dengan  pemberian  dosis  300, 600 dan 900 mg/kgBB selama 60 hari, untuk dosis 600 dan 900 mg/kgBB  tidak mempengaruhi kadar trigliserida pada serum hewan uji (14) .
Penelitian ini bertujuan untuk melihat pengaruh pemberian ekstrak etanol daun pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp)  selama  60  hari  pada  dosis  300 mg/kgBB,  600  mg/kgBB  dan  900  mg/kgBB. Parameter yang diamati pada uji toksisitas subkronis ini  adalah  pemeriksaan  biokimia  darah,  histologi organ  hati  dan  ginjal.  Untuk  menilai  fungsi  hati dilakukan pemeriksaan kadar Glutamat Oksaloasetat Transminase (GOT), Glutamat Piruvat Transaminase (GPT)  dan  untuk  menilai  fungsi  ginjal  dilakukan pemeriksaan kadar kreatinin urin dan kreatinin serum.

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. Daun pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp.)  (diperoleh  di  lingkungan  Universitas  Riau Pekanbaru),  formalin  10%,  etanol  96%,  NaCMC, akuadest, alkohol  70%, alkohol  80  %,  etanol 96%, alkohol absolut, xilol, paraﬁ n, meyer albumin (putih telur+gliserin),  canada  balsem,  air  suling,  eosin,

## PENDAHULUAN
MASYARAKAT    Indonesia  telah  lama  mengenal serta  menggunakan  obat-obatan  alami  atau  yang dikenal  dengan  obat  tradisional.  Obat  tradisional sangat mudah diterima oleh masyarakat serta obat ini lebih murah dan  mudah didapat. Terdapat berbagai macam  obat  tradisional  yang  berasal  dari  tanaman dan telah banyak diteliti kandungan kimia dan khasiat yang  berada  di  dalamnya.  Namun  masih  banyak tanaman yang belum diketahui tingkat toksisitasnya, sehingga perlu diteliti lebih lanjut agar obat tradisional tertentu aman dikonsumsi baik dalam jangka pendek maupun jangka panjang (1) . Dalam hal pengembangan obat tradisional perlu diketahui efek pengunaannya terhadap  keamanan  tubuh.  Pendekatan  penilaian keamanan obat dapat dilakukan dengan uji toksisitas. Pengujian terhadap keamanan toksisitas yang harus dilakukan  meliputi  uji  toksisitas  akut,  toksisitas subkronik, dan toksisitas kronik (2) .
Tanaman  daun  pucuk  merah  ( Syzygium myrtifolium Walp) merupakan famili myrtaceae . Daun pucuk merah merupakan tanaman hias yang  berpotensi dijadikan bahan obat alam.  Telah dilaporkan ekstrak metanol  daun  pucuk  merah  mengandung  senyawa fenolat,  antioksidan  ﬂ avonoid,  dan betunilic  acid dan  digunakan  sebagai  penghambat  angiogenesis dan  tumor  pada  tikus (3) .  Selain  itu,  tingginya  total fenolik  dan  ﬂ avonoid  dari  ekstrak  etanol  dan  etil asetat daun pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp) menunjukan memiliki aktivitas antoksidan (4) . Sebelum suatu obat digunakan haruslah menjalani serangkaian  uji  untuk  memastikan  keamanan, efektivitas dan mutunya, uji diawali dengan skrining untuk mencari senyawa aktif dan dilanjutkan dengan aktivitas, lalu dilanjutkan dengan uji efektivitas atu selektivitas  dan  mekanisme  kerjanya  pada  hewan coba  atau  mikroba,  salah  satunya  adalah  aktivitas farmakologi (2) .
Beberapa  penelitian  aktivitas  farmakologi ekstrak tanaman pucuk merah yang  telah dilakukan, diantaranya memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri, antijamur  dan  antivirus (5) .  Ekstrak n -heksan  dan etil  asetat  pucuk  merah    memberikan  efek sebagai antiinflamasi (6) dan  mempunyai  efek  antidiabetes dari ekstrak etil asetat daun pucuk merah pada dosis 100 mg/kgBB, 200 mg/kgBB, 400 mg/kgBB (7) serta ekstrak n -heksan pada dosis 100 mg/kgBB, 200 mg/ kgBB,  400  mg/kgBB  yang  telah  dilaporkan  juga mempunyai efek antidiabetes (8) .
Penelitian  aktivitas  antibakteri  ekstrak    etanol daun  pucuk  merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp) dilaporkan  memiliki  efek  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli (9) . Hasil
hematoksilin,  reagen  kreatinin  (Mindray ® ),  reagen SGOT,  SGPT  dan  larutan  Preci  Control  Clinchem Multi 1 (Mindray ® ).
Alat. Alat  yang  digunakan  antara  lain: rotary evaporator , tabung reaksi, fotometer (Mindray ® BA- 88A), mikroskop.
METODE.  Identifikasi  dan  Pembuatan Ekstrak Daun Pucuk Merah ( Syzygium myrtifolium Walp.). Identifikasi  tanaman  daun  pucuk  merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) dilakukan di Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam  (FMIPA) Universitas Andalas Kampus Limau Manih Padang, Sumatra Barat.
Pembuatan ekstrak daun pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) dimulai dengan membuat simplisia kering  terlebih  dahulu  dan  selanjutnya  diserbukan. Kemudian dimaserasi sebanyak 3 kali dengan  pelarut etanol 96% dengan pengadukan kontinyu  selama 5 hari. Maserat yang diperoleh dikentalkan dengan alat rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental etanol  daun  pucuk  merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp.) (14) .
Pengamatan  Organoleptik  Ekstrak  Etanol Daun Pucuk Merah ( Syzygium myrtifolium Walp.). Parameter organoleptik ekstrak meliputi penggunaan panca  indera  mendeskripsikan  bentuk,  warna,  bau, rasa guna pengenalan awal yang sederhana se-objektif mungkin  terkait  karakteristik  ekstrak  etanol  daun pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) (15) .
Uji Toksisitas Subkronik Ekstrak Etanol Daun Pucuk  Merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp.) (16) . Penelitian  ini  sudah  lolos  kaji  etik  dari  Unit  Etik Penelitian  Kedokteran  dan  Kesehatan    Fakultas Kedokteran,  Universitas  Riau,  ( Ethical  Clearance No.  B./148/UN19.5.1.1.8/UEPKK/2020).  Hewan uji yang digunakan adalah mencit putih jantan ( Mus musculus L.) usia 6-8 minggu dengan berat 20-30 g. Hewan uji dibagi dalam 1 kelompok kontrol dan 3 kelompok perlakuan. Kelompok kontrol yakni hewan percobaan diberikan suspensi NaCMC sebanyak 1% dari bobot badan mencit.
Dosis sediaan uji yang diberikan kepada hewan uji ditentukan berdasarkan penelitian sebelumnya (17) . Dosis  sediaan  uji  yang  diberikan  kepada  hewan uji adalah 300, 600 dan 900 mg/kgBB. Sediaan uji diberikan  secara  oral  dengan  frekuensi  pemberian 1  kali  sehari  selama  60  hari.  Pemeriksaan  hasil  uji toksisitas subkronis dilakukan pada hari ke-61. Pada hari ke-61 semua darah mencit diambil dengan secara intrakardiak, darah ditampung dengan tabung reaksi dan  dibiarkan  selama  30  menit.  Darah  disentrifus selama 10 menit dengan kecepatan 3000 rpm, serum dipisahkan kemudian dilakukan pemeriksaan biokimia darah dan terhadap organ ginjal dan hati dilakukan
pengamatan histologi.
Pemeriksaan  Biokimia Darah untuk Menilai Fungsi Organ Ginjal dan Hati. Pemeriksaan Klirens Kreatinin. Untuk  menentukan  klirens  kreatinin terlebih dahulu dilakukan tahapan pengukuran volume urin  yang  dilakukan  pada  hari  ke-60  dengan  cara meletakkan  mencit  dalam  kandang  metabolit.  Urin yang  diekskresikan  selama  24  jam  ditampung  dan diukur volumenya.
Pengukuran kreatinin urin dilakukan pada hari ke- 61 dengan cara urin diencerkan lebih dahulu dengan akuades (1:49) v/v dalam labu ukur, dipipet sebanyak 18 μL masukkan ke dalam tabung reaksi kemudian dicampur dengan reagen kreatinin (Mindray ® ) yaitu 180 μL reagen 1, lalu homogenkan, kemudian diamkan selama  1  menit  pada  suhu  37 o C.  Tambahkan  180 μL  reagen  2  lalu  homogenkan,  kemudian  diamkan selama  30  detik  pada  suhu  37 o C.  Ukur  absorban menggunakan  alat  fotometer  (Mindray ® BA-88A) pada panjang gelombang 510 nm, sehingga didapatkan kadar kreatinin urin.  Sedangkan untuk menentukan kadar kreatinin serum dilakukan dengan cara yakni sebanyak 18 μL serum dipipet masukkan ke dalam tabung  reaksi  dan  dilanjutkan  dengan  prosedur yang  sama  dengan  tahapan  pemeriksaan  kreatinin urin  sehingga  didapatkan  kadar  kreatinin  serum. Perhitungan klirens kreatinin dengan menggunakan rumus (Kaplan and Szabo, 1979) (17) .
Pengukuran  Aktivitas  SGOT  dan  SGPT. Metoda penentuan SGOT dan SGPT yang digunakan berdasarkan metoda dari International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC). Pengukuran menggunakan alat fotometer (Mindray® BA-88A)  pada  panjang  gelombang  340  nm  suhu 37°c, sehingga didapat aktivitas (U/L) kadar SGOT dan SGPT.
Pemeriksaan SGOT dan SGPT memiliki prosedur pengerjaan yang sama yakni dengan terlebih dahulu membuat  larutan  reagen  1  sebanyak  1000  µL dimasukkan ke dalam tabung, tambah serum sampel sebanyak  100  µL  dan  diamkan  selama  5  menit kemudian tambah reagen 2 sebanyak 250 µL. Setelah itu campuran serum sampel dan reagen dimasukkan pada alat penghisap fotometer (Mindray® BA-88A) dan dibaca hasil yang tertera pada layar (U/L).
Pemeriksaan Histologi Organ Ginjal dan Hati. Pemeriksaan  ini  dilakukan  dengan  cara  pembuatan preparat    dengan  metoda  paraﬁ n.  Organ    hati  dan ginjal  dari mencit  dipotong potong dan dimasukkan ke  dalam  larutan  NaCl  ﬁ siologis  selama  30  menit. Objek  dipindahkan  ke  dalam  larutan  ﬁ ksatif  Bouin selama maksimal 22 jam. Jaringan organ didehidrasi dengan  larutan  alkohol  konsentrasi  50,  70,  80,  90, 96%,  dan  alkohol  absolut  masing-masing selama 1
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
33  HASTI ET AL.
massa per satuan volume yang merupakan parameter khusus  ekstrak  cair  sampai  ekstrak  pekat  (kental) yang  masih  dapat  dituang.  Memberikan  gambaran kandungan kimia terlarut. Kedua parameter tersebut termasuk parameter standar umum Non spesiﬁ k untuk persyaratan mutu bahan baku ekstrak (15) .
Pemeriksaan Biokimia Darah untuk Menilai Fungsi  Organ  Ginjal  dan  Hati. Pemeriksaan biokimia  klinis  sebagai  bagian  dari  uji  toksisitas subkronis meliputi: fungsi hati (SGOT, SGPT, Gamma GT)  dan  fungsi  ginjal  (Nitrogen  Urea,  Kreatinin, Total-Bilirubin) (17) .  Parameter  yang  diukur  pada penelitian ini adalah: SGOT, SGPT dan Kreatinin.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan diperoleh nilai  kreatinin  urin  rata-rata mencit putih kelompok kontrol adalah 5,82 mg/dL. Kreatinin urin rata-rata  mencit  putih    setelah  pemberian  ekstrak etanol daun pucuk merah selama 60 hari pada dosis 300,  600  dan  900  mg/kgBB  berturut-turut  adalah 14,91;  12,92  dan  14,00  mg/dL  dan  dari  hasil  uji statistik ANOVA  satu  arah  terhadap  kreatinin  urin terdapat perbedaan yang signiﬁ kan (p<0,05) dengan kelompok kontrol  (Tabel 1.), data ini memperlihatkan terjadinya kenaikan kadar kreatinin yang dikeluarkan melalui urin dibandingkan pada kelompok kontrol.
jam.  Penjernihan  dilakukan  dengan  memindahkan objek  ke  dalam  larutan  alkohol  absolut:xylol  (1:1) dan xylol, masing-masing selama 1 jam. Kemudian objek  dimasukkan  ke  dalam  larutan  inﬁ ltrasi  yang dilakukan  dalam  inkubator  pada  suhu  56-60 ° C, selanjutnya  dilakukan  penanaman  ( embedding ), objek dimasukkan ke dalam cetakan logam atau kotak kertas yang sudah berisi paraﬁ n cair yang dipanaskan dalam  inkubator,  selanjutnya  dibiarkan  dingin dan  membeku,  penyayatan  ( section ),  penempelan ( aﬁ niting ), pewarnaan dengan zat warna Hematoksilin Erlich  dan  Eosin  alkohol,  penutupan  ( mounting ). Terakhir  preparat  diberi  label  sebelah kanan  objek, kemudian  diperiksa  secara  mikroskopis  dan  dibuat foto mikroskopisnya.
Preparat yang telah selesai diberi label diperiksa secara mikrokopis dengan perbesaran 400X. Untuk data kuantitatif jumlah vena sentralis hati dihitung dan jumlah glomerulus ginjal yang rusak pada satu lapang pandang saja sebanyak 5 sayatan. Untuk data kualitatif yang diamati pada preparat hati adalah bentuk vena sentralis  (lingkaran  utuh/putus),  sinusoid  (utuh/ membesar), hepatosit (teratur membentuk lempeng/ tidak  teratur),  dan  nucleus  (bulat/mengecil/pecah/ hilang). Sedangkan pada ginjal untuk data kualitatif yang diamati adalah ruang  Bowman/ruang urinarius (sempit/tidak sempit),  tubulus proksimal (utuh lisis), tubulas distal (utuh/lisis).  Pengamatan kualitatif pada ginjal dilakukan dengan melihat foto jaringan.
Analisis  Data. Data  uji  toksisitas  subkronis dinyatakan  sebagai  rata-rata±SD  meliputi  kadar kreatinin  serum,  kreatinin  urin,  klirens  kreatinin, aktivitas  SGOT,  SGPT,  rasio  berat  relatif  organ ginjal  dan  hati  dan  gambaran  histologi  ginjal  dan hati yang dianalisa secara deskriptif dan ditampilkan dalam bentuk foto mikroskopis, persentase kerusakan glomerulus dan vena sentralis hati yang diperoleh dari hasil pengamatan dan diolah menggunakan analisis statistik ANOVA ( Analysis of Variance ) satu arah dan dilanjutkan dengan uji Tukey dengan menggunakan program SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Organoleptik Ekstrak Etanol Daun Pucuk Merah. Hasil pemeriksaan standardisasi terhadap parameter organoleptis,  didapatkan  bentuk  ekstrak  kental, memiliki  warna  coklat  hijau  kehitaman,  rasa  yang pahit  serta  bau  yang  khas,  hasil  susut  pengeringan yaitu 0,534% dan hasil dari bobot jenis yaitu 0,0673. Susut  pengeringan  bertujuan  memberikan  batasan maksimal  tentang  besarnya  senyawa  yang  hilang pada  proses  pengeringan  sedangkan  bobot  jenis bertujuan  memberikan  batasan  tentang  besarnya
Tabel  1.  Pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  daun  Pucuk Merah ( Syzygium myrtifolium Walp) terhadap kreatinin urin.
Pemeriksaan biokimia darah berikutnya adalah pemeriksaan  nilai  kreatinin  serum  rata-rata  mencit putih  jantan  dari  kelompok  kontrol  adalah  0,589 mg/dL. Sedangkan kreatinin serum rata-rata mencit putih  jantan  setelah  pemberian  ekstrak  etanol  daun pucuk  merah  selama  60  hari  pada  dosis  300,  600 dan  900  mg/kgBB  adalah  0,798;  0,775;  0,778  mg/ dL  (Tabel  2.)  dan  dari  hasil  uji  statistik ANOVA satu  arah  terhadap  kreatinin  serum  tidak  terdapat perbedaan yang signiﬁ kan (p>0,05) dengan kelompok kontrol/normal.  Nilai  kreatinin  serum  yang  didapat pada penelitian ini juga masih dalam rentang normal kreatinin serum untuk mencit yaitu 0,2-0,9 mg/dL (17) . Dari  data  diatas  terlihat  kreatinin  serum  kelompok kontrol dan kelompok perlakuan masih dalam range normal menunjukkan tidak ada gangguan pada fungsi ginjal mencit.
Klirens  kreatinin  rata-rata  mencit  putih  jantan kelompok kontrol adalah 0,0018 mL/menit. Klirens kreatinin  rata-rata  mencit  putih  jantan  setelah
Kelompok Kreatinin urin (mg/dL) Kontrol 5,82±0,046 Dosis 300 mg/kgBB 14,91±0,120 Dosis 600 mg/kgBB 12,92±0,017 Dosis 900 mg/kgBB 14,00±0,350
Vol 20, 2022
pemberian ekstrak etanol daun pucuk merah selama 60 hari pada dosis 300, 600 dan 900 mg/kgBB berturut- turut adalah 0,0078; 0,0085; 0,0262 mL/menit dan dari hasil uji statistik ANOVA satu arah terhadap klirens kreatinin  tidak  terdapat  perbedaan  yang  signiﬁ kan (p>0,05)  dibandingkan  kelompok  kontrol,  artinya tidak  terjadi  perubahan  fungsi  glomerulus  ginjal setelah  diberikan  ekstrak  etanol  daun  pucuk  merah pada  dosis  300,  600  dan  900  mg/KgBB. Kreatinin dieliminasi  hanya  melalui  ﬁ ltrasi  glomelurus  yang sangat sedikit dieksresikan melalui tubulus sehingga klirens kreatinin dapat digunakan untuk menghitung laju  ﬁ lttasi  glomelurus  untuk  mengetahui  kapasitas ﬁ lter  ginjal (18) .  Hasil  klirens  kreatinin  diperlihatkan pada Tabel 3.
Tabel  2.  Pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  daun  Pucuk Merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) terhadap kreatinin serum.
Tabel  3.  Pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  daun  Pucuk Merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) terhadap klirens kreatinin.
Hasil pemeriksaan biokimia  darah yang diperoleh untuk menilai fungsi organ hati yaitu nilai  aktivitas SGOT mencit kontrol, dosis 300, 600 dan 900 mg/ kgBB  secara  berturut-turut  adalah  128,89;  132,23; 123,35  dan 125,75  U/L.  Berdasarkan  hasil  analisis statistik ANOVA satu arah terhadap aktivitas SGOT menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun pucuk  merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp.)  pada dosis  300,  600  dan  900  mg/kgBB  terlihat  tidak berbeda signiﬁ kan (p>0,05) dibandingkan kelompok kontrol.  Sedangkan  untuk  hasil  nilai  aktivitas SGPT  mencit  kontrol,  dosis 300, 600 dan  900  mg/ kgBB  secara  berturut-turut  adalah  35,618;  27,019; 40,245  dan 28,329  U/L.  Berdasarkan  hasil  analisis statistik ANOVA satu arah terhadap aktivitas SGPT menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp) pada dosis 300, 600 dan 900 mg/kgBB tidak berbeda signiﬁ kan (p>0,05) terhadap kelompok kontrol/normal. Kadar SGOT  normal  dalam  darah  mencit  adalah  54-298
IU/L    dan  kadar  SGOT  yang  didapatkan  yaitu 109,719-126,166 IU/L, sedangkan untuk nilai SGPT normal adalah 17-77 IU/L(19) dan kadar SGPT yang didapatkan  yaitu  33,3486-42,3928  IU/L.  Hal  ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun pucuk  merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp)  pada dosis 300, 600 dan 900 mg/kgBB dengan mengukur aktivitas  SGOT  dan  SGPT  masih  masuk  ke  dalam kadar normal. (Gambar 1.)
(a) (b) (c)
Gambar 1. Pengaruh pemberian ekstrak etanol daun Pucuk Merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp.)  terhadap  nilai  (a) SGOT,  (b) SGPT, dan (c) rasio berat organ hati.
Kelompok Klirens  kreatinin (ml/menit) Kontrol 0,0018 ± 0,0011 Dosis 300 mg/kgBB 0,0078 ± 0,0009 Dosis 600 mg/kgBB 0,0085± 0,0003 Dosis 900 mg/kgB 0,0262±0,0016 Kelompok Kreatinin Serum (mg/dL) Kontrol 0,58 ± 0,241 Dosis 300 mg/kgBB 0,79 ± 0,096 Dosis 600 mg/kgBB 0,77 ± 0,022 Dosis 900 mg/kgBB 0,77 ± 0,087
Pemeriksaan  Histologi  Organ  Ginjal  Dan Hati. Pengamatan Mikroskopis Ginjal. Pada ginjal mencit putih ( Mus musculus L.) jantan  pada kelompok kontrol terlihat bahwa glomerulus dikelilingi kapsula bowman membentuk ruang bowman tidak mengalami perubahan.  Pada  kelompok  dosis  300  mg/kgBB glomerulus  mengalami pembesaran sehingga ruang bowman  menyempit  (Gambar  2a).  Pada  kelompok dosis 600 mg/kgBB beberapa glomerulus mengalami nekrosis  dan  glomerulus  mengalami  pembesaran sehingga  ruang  bowman  mengalami  penyempitan (Gambar 2b) dan pada kelompok dosis 900 mg/kgBB
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
35  HASTI ET AL.
beberapa glomerulus mengalami mengalami nekrosis dan glomerulus mengalami kerusakan terlihat ruang bowman menjadi sempit dan kongesti pada pembuluh darah (Gambar 2c).
Dari  pengamatan  secara  mikroskopis  ginjal mencit putih  ( Mus musculus L.)  terlihat tidak ada perubahan yang terjadi pada tubulus proksimal dan tubulus  distal  pada    jaringan  ginjal  mencit  putih kelompok  yang diberi dosis  300 mg/kgBB, 600 mg/ kgBB,  900  mg/kgBB  dibandingkan  dengan  mencit kelompok  kontrol  yang  tak  mengalami  perubahan (Gambar 2a, 2b dan 2c).
13,17%  (ginjal  kanan)  dan  13,80%  (ginjal  kiri); kelompok  dosis  300  mg/kgBB  rata-rata  kerusakan glomerulus 18,88% (ginjal kanan) dan 24,29% (ginjal kiri); kelompok dosis 600 mg/kgBB dengan persentase kerusakan 33,31% (ginjal kanan) dan 35,06% (ginjal kiri)  dan  kelompok  dosis  900  mg/kgBB  persentase kerusakan  glomerulus  48,01%  (ginjal  kanan)  dan 51,46% (ginjal kiri).
(a) (b)
Gambar 2. Foto mikroskopis organ ginjal pada kelompok (a) 300, (b) 600, dan (c) 900 mg/kgBB (pewarnaan H-E, perbe- saran 400x).
Keterangan: (1) Glomerulus terlihat mengalami pembesaran, (2). Ruang bowman mengalami penyempitan, (3).Tubulus proksimal normal, (4).Tubulus distal normal dan (5). Kongesti dipembuluh darah.
Gambar  3.  Persentase  kerusakan  glomerulus  pada  ginjal mencit putih jantan ( Mus musculus L.).
(c)
Persentase  kerusakan  glomerulus  pada  ginjal mencit putih jantan ( Mus musculus L. ) yang diberikan ekstrak  etanol  Daun  Pucuk  Merah  ( Syzygium myrtifolium Walp.)  disajikan  pada  Gambar  3.  Pada kelompok  kontrol  rata-rata  kerusakan  glomerulus
Dari data analis statistik ANOVA satu arah dan dilanjutkan uji tukey terhadap persentase kerusakan glomerulus    ginjal  kiri  dan  ginjal  kanan  kelompok dosis  300  mg/kgBB    tidak    berbeda  signifikan dibandingkan  dengan    kelompok  kontrol  (p>0,05), pada dosis 600 mg/kgBB dan 900 mg/kgBB terdapat perbedaan yang signiﬁ kan pada persentase kerusakan glomerulus  ginjal  kiri  dan  kanan  dibandingkan dengan kelompok kontrol  (p<0,05). Hal ini berarti ekstrak etanol daun pucuk merah dapat meningkatkan persentase  kerusakan  glomerolus  pada    kelompok dosis  600  mg/kgBB  dan  900  mg/kgBB.  Sehingga dapat dikatakan  bahwa semakin meningktanya dosis maka persentase kerusakan juga meningkat.
Kerusakan  glomerulus  diduga  karena  adanya kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  seperti ﬂ avonoid, fenolik, serta steroid yang kadarnya sudah melebihi  dosis  sehingga  mengakibatkan  kerusakan pada glomerulus. Dosis merupakan salah satu yang dapat  menyebabkan  efek  toksik  jika  diberikan secara berlebihan sehingga sel-sel pada ginjal akan mengalami  nefrotoksik,  karena  adanya  senyawa tersebut dibawa bersama aliran darah menuju ginjal (5) . Pengamatan  Mikroskopis  Hati. Pada pemeriksaan  histologi  hati  yang  telah  dilakukan didapatkan  hasil  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol daun  pucuk  merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp.) pada dosis 300 mg/kgBB tidak memperlihatkan efek toksik, ditandai dengan warna organ hati hanya sedikit pucat dan tidak berbeda bermakna jika dibandingkan kelompok kontrol, sedangkan pengamatan histologi makroskopik terhadap organ hati pada dosis 600 dan 900 mg/kgBB berwarna lebih pucat dengan tekstur organ hati semua licin dan terlihat bintik-bintik kecil pada hati.

## Vol 20, 2022
Pengamatan mikroskopis histologi preparat hati pada kelompok dosis 300 mg/kgBB dapat dilihat vena sentralis terlihat utuh dan relatif normal dengan sel endotelium yang masih tersusun rapi. Sinusoid mulai melebar serta ada kongesti sinusoid dan sebagian kecil sel-sel  hepatosit  mulai  mengalami  nekrosis.  Hasil dari kelompok Dosis 600 mg/kgBB memperlihatkan vena  sentralis  dan  sel  endotelium  mulai  rusak, terjadi pelebaran sinusoid dan ada kongesti sinusoid, hepatosit mengalami degenarasi melemak. Sedangkan pada  kelompok  Dosis 900  mg/kgBB  menunjukkan adanya vena sentralis dan sel endotelium yang rusak, terjadi pelebaran sinusoid dan ada kongesti sinusoid, hepatosit  terlihat  nekrosis  dan  inti  sel  mengalami piknosis  (Gambar  4a,  4b  dan  Gambar  4c). Adapun perhitungan  secara  kuantitatif  hanya  dilakukan terhadap persentase kerusakan vena sentralis.
Persentase  kerusakan  vena  sentralis  organ  hati mencit putih ( Mus musculus L.) jantan setiap perlakuan dapat  dilihat  pada  Gambar  5.  Hasil  perhitungan persentase kerusakan vena sentralis organ hati mencit kelompok kontrol dan dosis 300, 600, dan 900 mg/ kgbb  berturut-turut  adalah  18,084;  23,418;  42,836; 46,310%.  Berdasarkan  Statistik ANOVA  satu  arah diperoleh, persentase kerusakan vena sentralis tidak berbeda secara signiﬁ kan (p<0,05) antara kelompok kontrol dengan dosis  300 mg/KgBB tetapi berbeda signiﬁ kan antara kelompok kontrol dengan dosis 600 dan 900 mg/kgBb. Hal ini menunjukkan pada dosis 600 dan 900 mg/kgbb terjadi peningkatan jumlah vena sentralis yang mengalami kerusakan.
(a) (b)
Gambar  4.  Histologi  hati  mencit  putih  ( Mus  musculus L.) jantan  kelompok  dosis  (a)  300,  (b)  600,  (c)  900  mg/kgBB (pewarnaan H-E, perbesaran 400x).
Keterangan: (1). Vena sentralis, (2). Endotelium, (3). Sinusoid, (4). Hepatosit, (5). Inti sel dan (6). Inti sel mengalami piknosis.
Gambar 5. Persentase kerusakan  vena sentralis organ hati mencit putih ( Mus musculus L.) jantan setiap perlakuan.
(c)
Pembuluh  darah  berkaitan  dengan  perannya dalam  proses  sirkulasi,  dimana  vena  sentralis menerima  darah  dari  sinusoid-sinusoid.  Sebanyak 25% dari darah yang mengalir ke sinusoid berasal dari arteri hepatika, sedangkan 75% berasa dari vena porta yang mengalirkan darah dari saluran cerna. Jadi vena sentralis  akan  banyak  menampung  nutrien-nutrien dan zat-zat lain hasil metabolisme yang dapat bersifat toksik  maupun  nontoksik.  Banyaknya  darah  yang ditampung  oleh  vena  sentralis  akan  menyebabkan konsentrasi zat yang bersifat toksik jauh lebih besar, sehingga hal ini dapat menyebabkan kerusakan pada vena sentralis (20,21) .

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan pemberian ekstrak etanol daun pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp) pada uji toksisitas subkronik pada mencit putih ( Mus musculus L.)  aman terhadap fungsi hati dan ginjal pada dosis 300 mg/kgBB.  Sedangkan pemberian ekstrak etanol daun pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp) kelompok dosis 600 dan 900 mg/ kgBB memberikan efek toksik terhadap organ ginjal dan hati bila dibandingkan dengan kelompok kontrol.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  kepada  Sekolah Tinggi  Ilmu  Farmasi Riau  yang  telah  membiayai  penelitian  ini  melalui Hibah Penelitian Dosen Lanjutan tahun 2019 dan 2020.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
37  HASTI ET AL.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Hyeronimus  SB.  Ragam  dan  khasiat  tanaman  obat, Edisi 1. Jakarta: AgroMedia;  2006.
2.  Priyanto. Toksikologi, mekanisme, terapi antidotum, dan  penilaian  resiko  dan  terapi  antidotum.  Jakarta: Lembaga Studi dan Konsultasi Farmakologi (Leskonﬁ ); 2009.
3.  Aisha AFA, Ismail Z, Salah KMA, Siddiqui JM, Ghafar G, and Majid AMSA. Syzygium campanulatum Korth methanolic  extract  inhibits  angiogenesis  and  tumor growth, in nude. BMC Complementary and Alternative Medicine. 2013.13:168- 78.
4.  Anggraini D. Uji aktivitas antioksidan, total ﬂ avonoid dan total fenolik dari ekstrak n -heksan, etil asetat dan etanol  Pucuk  Merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp.)
[Skripsi].  Pekanbaru:  Sekolah Tinggi  Ilmu  Farmasi Riau; 2015.
5.  Ahmad, M. A., Lim, Y.H., Chan, Y.S., Hsu, C.Y., Wu, T.Y., & Sit, N.W. Chemical composition, antioxidant, antimicrobial and antiviral activities of the leaf extracts of Syzygium myrtifolium . Acta Pharmaceutica, 2022. 72(2), 600-50.
6.  Sriwahyuni A. Uji efek antiinﬂ amasi ekstral n -heksan dan  etil  asetat  daun  Pucuk  Merah  terhadap  mencit putih ( Mus musculus L.) Jantan  [Skripsi]. Pekanbaru: Sekolah Tinggi Ilmu Famasi Riau; 2014.
7.  Sarjono. Uji aktivitas antidiabetes ekstrak etil asetat daun  Pucuk  Merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp.) terhadap  mencit  putih  ( Mus  musculus L.)  jantan [Skripsi].  Pekanbaru:  Sekolah Tinggi  Ilmu  Farmasi Riau;  2015.
8.  Syilfia  H,  Emrizal;  Susilawati,  F.  Uji  aktivitas antidiabetes  ekstrak n -heksana  daun  Pucuk  Merah
( Syzygium  Myrtifolium Walp.)  terhadap  mencit Putih  diabetes.  Pharmacy:  Jurnal Farmasi Indonesia ( Pharmaceutical Journal of Indonesia ), 2017. 13.02: 172-81.
9.  Haryati  NA,  Saleh  CE.  Uji  toksisitas  dan  aktivitas antibakteri  ekstrak  daun  Merah  tanaman  Pucuk Merah  ( Syzygium  myrtifolium Walp)  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Jurnal Kimia Mulawarman, 2016. 13.1.
10.  Memon AH,  Ismail  Z, Aisha AFA, Al-Suede  FSR, Hamil MSR, Hashim S, et al . Isolation, characterization,
crystal  structure  elucidation,  and  anticancer  study of  diethyl  cardamonin,    Isolated    from Syzygium campanulatum Korth. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2014. p:1-11.
11.  Santoni A, Darwis D, dan Syahri S. Isolasi antosianin dari  buah  Pucuk  Merah  ( Syzygium  campanulatum Kort.) serta pengujian antioksidan dan aplikasi sebagai pewarna alami. Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung, 2013.
12.  Pardila Y. Uji toksisitas akut ekstrak etanol daun Pucuk Merah ( Syzygium Myrtifolium Walp.) terhadap Mencit Putih ( Mus musculus L.) Jantan [Karya Tulis Ilmiah]. Pekanbaru: Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau; 2015.
13.  Novrita S. Pengaruh pemberian ekstrak etanol  daun Pucuk Merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) terhadap kadar bilirubin Mencit Putih ( Mus musculus L.) Jantan [Skripsi].  Pekanbaru:  Sekolah Tinggi  Ilmu  Farmasi Riau; 2016.
14.  Permadi I. Pengaruh pemberian ekstrak etanol daun Pucuk Merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) terhadap kadar  trigliserida  mencit  putih  ( Mus  musculus L.) jantan.  [Skripsi].      Pekanbaru:  Sekolah Tinggi  Ilmu Farmasi Riau; 2016.
15.  Direktorat  Pengawasan  Obat  Tradisional.  Parameter standar umum ekstrak tumbuhan obat, Edisi 1. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia; 2000.
16.  Badan Pengawas Obat dan Makanan, Peraturan kepala badan pengawas obat dan makanan Republik Indonesia nomor 7  tahun  2014  tentang  pedoman uji  toksisitas nonklinik secara in vivo , Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. 2014.
17.  Kaplan,  A.  dan  L.L  Szabo.  Clinical  chemistry: Interpretation  and  technique.  Philadelphia:  Lea  and Febiger. 1979.
18.  Anonim.  Reference  values  for  laboratory  animals, normal  hematology  values,  Research  Animals Resources, University of Minnesota. 2009.
19.  Bhagavan,N.V..Medical  Biochemistry.  4th  Ed.  ed. Harcourt Academic Press. Canada. 2002.
20.  Mescher, L.A.. Histologi dasar junqueira: Teks & Atlas Edisi  12.  Penerbit  Buku  Kedokteran  EGC.  Jakarta. 2011.
21.  Underwood, J.C.E. Patologi umum dan sistemik, Edisi 2. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.2002