Rusli et al.;Penentuan Kadar Vitamin C Menggunakan…..Pharmacoscript Volume 5 No. 2, Agustus 2022

## PENENTUAN KADAR VITAMIN C MENGGUNAKAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT) TERHADAP EKSTRAK BONGGOL NANAS
( Ananas comosus (L.) Merr) DENGAN PERBEDAAN METODE EKSTRAKSI
Zaldy Rusli * , Yulianita, Bela Rahmawati Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Pakuan *Email: zaldy.rusli@unpak.ac.id
Received: 02/03/2022 , Revised: 23/07/2022 , Accepted: 04/08/2022, Published: 31/08/2022

## ABSTRAK
Buah-buahan  mengandung  berbagai  macam  vitamin  yang  sangat  diperlukan  oleh  tubuh,  salah satunya yaitu vitamin C. Contoh buah yang mengandung vitamin C adalah nanas. Namun buah nanas  memiliki  bagian  yang  bersifat  buangan  seperti  bonggol  nanas  yang  belum  dimanfaatkan secara  optimal,  padahal  bonggol  nanas  mengandung  vitamin  C  yang  bermanfaat  sebagai antioksidan.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menentukan  kadar  vitamin  C  dari  hasil metode ekstraksi digesti dan Ultrasonic Assisted Extraction (UAE) pada ekstrak bonggol nanas serta menganalisis pengaruh perbedaan metode ekstraksi bonggol nanas terhadap kadar vitamin C.  Penentuan  kadar  vitamin  C  dilakukan  menggunakan  metode  Kromatografi  Cair  Kinerja Tinggi (KCKT) fase terbalik dengan kecepatan alir 1 mL/menit yang dideteksi dengan panjang gelombang 254 nm.  Fase gerak  yang digunakan  yaitu  amonium  dihidrogen fosfat  (NH 4 H 2 PO 4 ) 0,01 mol/L dan asam ortofosfat 0,1% (80:20). Hasil kadar vitamin C yang diperoleh dari metode digesti  yaitu  sebesar  117,479  mg/100g  sedangkan  hasil  kadar  vitamin  C  yang  diperoleh  dari metode UAE yaitu sebesar 98,487 mg/100g. Perbedaan kadar vitamin C dalam ekstrak bonggol nanas dapat  terjadi karena adanya perbedaan pada metode ekstraksi,  dimana ekstraksi  senyawa vitamin  C  menggunakan  pemanasan  yang  disertai  dengan  pengadukan  (digesti)  lebih  baik dibandingkan ekstraksi menggunakan gelombang ultrasonik.
Kata kunci: Bonggol Nanas, Vitamin C, KCKT, UAE

## ABSTRACT
Fruits contain various kinds of vitamins that are needed by the body, one of which is vitamin C. An example of a fruit that contains vitamin C is pineapple.  However, the pineapple fruit has a waste part such as the hump pineapple that have not been used optimally, even though the hump pineapple also contains  vitamin C which is useful as an antioxidant. The purpose of this study was  to  determine  the  content  of  vitamin  C  from  the  results  of  the  digestion  extraction  method and Ultrasonic Assisted Extraction (UAE) on hump pineapple extract and to analyze the effect of different hump pineapple extraction methods on vitamin C content. Determination of vitamin C content  was  carried  out  using  the  reverse-phase  High  Performance  Liquid  Chromatography (HPLC) method with a flow rate of 1 mL/min which was detected with a wavelength of 254 nm. The mobile phase used was ammonium dihydrogen phosphate (NH 4 H 2 PO 4 ) 0.01 mol/L and 0.1%
Rusli et al./Pharmacoscript, Volume 5, No,2, Agustus 2022, 105-118 Safitri.,et al./Pharmacoscript, Volume 1, No. 2, Februari 2019, 1-12

## Pharmacoscript Volume 5 No. 2 Agustus 2022
orthophosphoric  acid  (80:20).  The  results  of  vitamin  C  content  obtained  from  the  digestion method  are  117.479  mg/100g  while  the  results  of  vitamin  C  content  obtained  from  the  UAE method  are 98.487 mg/100g.  Differences in  vitamin C content in hump pineapple extract may occur due to differences in the extraction, the extraction method of vitamin C compounds using ultrasonic is better than heating accompanied by stirring (kinetic digestion).
Keywords: Hump pineapple, Vitamin C, High Performance Liquid Chromatography (HPLC), Different Extraction Methods

## PENDAHULUAN
Buah-buahan  mengandung  berbagai macam vitamin yang sangat diperlukan oleh tubuh,  salah  satunya  yaitu  vitamin  C. Contoh  buah  yang  mengandung  vitamin  C adalah nanas. Namun dalam proses pengolahannya  nanas  memiliki  bagian  yang bersifat  buangan  seperti  bonggol  nanas, bagian  ini  kerap  disisihkan  atau  dibuang begitu  saja  sebagai  limbah  karena  memiliki tekstur  yang  keras dan  sulit  untuk dikonsumsi  sehingga  belum  dimanfaatkan secara  optimal,  padahal  menurut  penelitian Sumiati, dkk (2020) bonggol nanas mengandung  berbagai  senyawa  fitokimia seperti  flavonoid,  saponin  dan  tanin. Bonggol  nanas  juga  mengandung  enzim bromelin  dan  juga  vitamin  C  yang bermanfaat bagi tubuh.
Berdasarkan  hasil  penelitian  Titin,  dkk (2011)  bonggol  nanas  mengandung  vitamin C  sebesar  68,563  mg/100  gram,  sedangkan berdasarkan  hasil  penelitian  Nurminabari, dkk  (2019)  bonggol  nanas  mengandung vitamin  C  sebesar  55,73  mg/100  gram. Untuk dapat memanfaatkan limbah bonggol
nanas,  maka  diperlukan  suatu  teknik  atau cara  yang  dapat  memisahkan  senyawa bioaktif  yang  bermanfaat.  Salah  satu caranya  yaitu  dengan  metode  ekstraksi. Terdapat  berbagai  macam  metode  ekstraksi diantaranya  yaitu  metode  konvensional  dan non  konvensional.  Contoh  metode  ekstraksi konvensional yaitu  digesti,  sedangkan contoh  metode  ekstraksi  non  konvensional yaitu Ultrasonic Assisted Extraction (UAE). Dengan  adanya  perkembangan  metode ekstraksi  dari  konvensional  ke  arah  yang lebih  modern,  maka  perlu  dilakukan penelitian  mengenai  pengaruh  perbedaan metode  ekstraksi  terhadap  kadar  vitamin  C. Penelitian  tentang  analisis  kadar  vitamin  C pada  umumnya  lebih  banyak  menggunakan metode  spektrofotometer  dan  iodimetri, namun pada penelitian kali ini analisis kadar vitamin  C  dilakukan  dengan  metode Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  (KCKT) karena metode ini dapat melakukan pemisahan  dan  juga  pengukuran  secara bersamaan,  selain  itu  hasil  yang  diperoleh jauh  lebih  akurat  dibandingkan  metode spektrofotometer  dan  iodimetri  karena
memiliki  sensitivitas  dan  spesifitas  yang lebih tinggi (Rusli, dkk., 2020).
Berdasarkan  uraian  tersebut,  maka perlu dilakukan penentukan kadar vitamin C dari hasil metode ekstraksi digesti dan UAE pada ekstrak bonggol nanas serta menganalisa  pengaruh  perbedaan  metode ekstraksi  bonggol  nanas  terhadap  kadar vitamin  C  dengan  metode  KCKT  sehingga dapat diperoleh hasil ekstraksi dengan kadar vitamin C yang lebih optimal.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas (Pyrex®), hotplate  magnetic  stirrer ,  oven (Memmert®),  seperangkat  alat  KCKT (Jasco®) dengan kolom C 18 (Inertsil® ODS- 3),  sonikator  (Sonica®),  tanur  (Daihan Scientific®), timbangan analitik (LabPro®).
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  bonggol  nanas, amonium  dihidrogen  fosfat  (NH 4 H 2 PO 4 ) (Merck®), asam ortofosfat (H 3 PO 4 ) (Merck®),  etanol  70%,  L-Ascorbic  Acid (Merck®),  metanol  pro  KCKT  (Merck®), pereaksi Benedict, pereaksi Iodium.
Jalannya Penelitian
1. Pembuatan Serbuk Simplisia Bonggol
Nanas
Bonggol  nanas  dipisahkan  dari  bagian- bagian yang tidak diperlukan, lalu dibersihkan  dengan  air  yang  bersih  dan mengalir,  kemudian  dirajang  dan  dioven dalam  suhu  55 o C  selama  15  jam  (Verdiana, dkk.,  2018).  Simplisia  yang  telah  kering ditimbang  lalu  di  grinder.  Serbuk  yang diperoleh  diayak  dengan  mesh  no.  40  lalu ditimbang  untuk  mendapatkan  bobot  akhir serbuk.  Serbuk  yang  diperoleh  disimpan didalam  wadah,  kemudian  dilapisi  dengan aluminium foil dan disimpan pada suhu 4°C sampai analisis lalu dihitung nilai rendemen serbuk simplisia yang diperoleh.
2. Karakteristik Serbuk Simplisia
Bonggol Nanas
2.1. Pengujian Kadar Air
Pengujian  kadar  air  dilakukan  dengan metode  gravimetri,  dengan  cara  cawan porselin  dikeringkan  di  dalam  oven  pada suhu  105˚C  selama  30  menit,  selanjutnya didinginkan  di  dalam  desikator  selama  15 menit  lalu  ditimbang  bobotnya.  Kemudian sebanyak  2  gram  sampel  ditimbang  dalam cawan  porselin  tersebut,  lalu  dikeringkan dalam  oven  dengan  suhu  105˚C  selama  5 jam.  Setelah  itu,  diangkat  lalu  didinginkan di  dalam  desikator  selama  15  menit, kemudian ditimbang bobotnya secara berulang sampai bobot konstan (Rusli, dkk., 2020).

## Pharmacoscript Volume 5 No. 2 Agustus 2022

## 2.2. Pengujian Kadar Abu
Pengujian  kadar  abu  dilakukan  dengan cara  sampel  ditimbang  sebanyak  2  gram  ke dalam krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara  kemudian  diratakan.  Selanjutnya, dipijarkan  secara  perlahan-lahan  dalam tanur  pada  suhu  600 o C  sampai  arang  habis dan  terjadi  perubahan  warna  menjadi  abu, lalu  didiamkan  sampai  dingin,  kemudian ditimbang  sampai  bobot  konstan  (DepKes RI, 2000).
3. Pembuatan Ekstrak Bonggol Nanas
3.1. Metode Digesti Serbuk simplisia bonggol nanas sebanyak  30  gram  dimasukan  ke  dalam erlenmeyer bertutup, kemudian ditambahkan  pelarut  etanol  70%  sebanyak 150  mL  lalu  diekstraksi  dengan  metode digesti  dengan  cara  dipanaskan  diatas hotplate  magnetic  stirrer pada  temperatur 30ºC  selama  15  menit.  Setelah  itu,  filtrat dan  residu  dipisahkan  dengan  kain  saring. Residu  yang  dihasilkan  diekstraksi  kembali dengan  pelarut  kedua  dan  ketiga  sebanyak 75  mL.  Ketiga  filtrat  yang  diperoleh disatukan dan ditepatkan hingga volume 300 mL dan dihomogenkan. Ekstraksi dilakukan dengan 3 kali pengulangan.
3.2. Metode Ultrasonic Assisted Extraction (UAE)
Serbuk simplisia bonggol nanas sebanyak  30  gram  ditempatkan  ke  dalam erlenmeyer lalu ditambahkan pelarut pertama  sebanyak  150  mL,  kemudian ditutup  dengan  aluminium  foil.  Setelah  itu, dimasukan  ke  dalam  sonikator  untuk diekstraksi  dengan  frekuensi  gelombang  40 kHz selama 15 menit pada suhu 30ºC. Hasil ekstraksi  didiamkan  sampai  menjadi  suhu kamar  lalu  disaring  dengan  kain  saring untuk  memisahkan  filtrat  dan  residunya. Residu  hasil  sonikasi  pertama,  diekstraksi kembali  dengan  pelarut  kedua  dan  ketiga sebanyak  75  mL  menggunakan  perlakuan yang  sama  sampai  warna  filtrat  menjadi konstan. Masing-masing filtrat yang diperoleh  dikumpulkan  dan  ditepatkan menjadi  300  mL.  Ekstraksi  dilakukan dengan 3 kali pengulangan.
4. Analisis Kualitatif Vitamin C

## 4.1. Pereaksi Iodium
Sampel  dimasukan  ke  dalam  tabung reaksi  lalu  ditambahkan  dengan  larutan pereaksi  iodium.  Hasil  positif  akan  ditandai dengan  perubahan  warna  iodium  menjadi hilang  jika  sampel  mengandung  vitamin  C (Tahir, dkk., 2016).

## 4.2. Pereaksi Benedict
Sampel  dimasukan  ke  dalam  tabung reaksi  lalu  ditambahkan  15  tetes  pereaksi Benedict.  Selanjutnya,  dipanaskan  kurang
lebih  selama  2  menit.  Hasil  positif  akan ditandai  dengan  terbentuknya  warna  hijau kekuningan  sampai  merah  bata  yang menandakan bahwa sampel uji mengandung vitamin C (Techinamuti dan Pratiwi, 2018). 5. Analisis Kuantitatif Vitamin C

## 5.1. Pembuatan Fase Gerak
Fase  gerak  yang  digunakan  yaitu campuran  dari  NH 4 H 2 PO 4 0,01  mol/L  dan asam  ortofosfat  0,1%  dengan  perbandingan 80:20 (v/v) (Sulastri et al .,  2020).
Pembuatan NH 4 H 2 PO 4 0,01 mol/L
dilakukan dengan cara ditimbang NH 4 H 2 PO 4 sebanyak 0,5753 g lalu dilarutkan  dalam  500  mL  aquabidest sehingga  diperoleh  konsentrasi  NH 4 H 2 PO 4 0,01  mol/L.  Pembuatan  asam  ortofosfat 0,1%  dilakukan  dengan  cara  dipipet  larutan asam  ortofosfat  85%  sebanyak  0,588  mL lalu  dilarutkan  dalam  500  mL  metanol  pro KCKT sehingga diperoleh konsentrasi asam ortofosfat  0,1%.  Campuran  fase  gerak kemudian  disaring  dengan  membran  filter 0,2 µm, lalu dilakukan degassing selama 15 menit.

## 5.2. Pembuatan  Larutan  Stok  Asam

## Askorbat 500 µg/mL
Ditimbang  standar  L-Ascorbic  Acid sebanyak  50  mg  lalu  dilarutkan  dalam  100 mL etanol 70% sehingga diperoleh
konsentrasi  500  µg/mL  (Jubahar,  dkk., 2015).
5.3. Pembuatan  Larutan Intermediate

## Asam Askorbat 100 µg/mL
Larutan stok  asam  askorbat  500 µg/mL dipipet  sebanyak  10  mL  lalu  dilarutkan dalam  50  mL  etanol  70%  sehingga diperoleh  konsentrasi  100  µg/mL  (Jubahar, dkk., 2015).
5.4. Pembuatan Kurva Baku dan
Linieritas Asam Askorbat
Dibuat kurva baku dari larutan intermediate dengan  cara  dipipet  masing- masing sebanyak 2,5 mL, 5 mL, 7,5 mL, 10 mL  dan  12,5  mL  lalu  masing-masing dilarutkan  dalam  50  mL  etanol  70% sehingga diperoleh konsentrasi 5 µg/mL, 10 µg/mL, 15 µg/mL, 20 µg/mL dan 25 µg/mL. Masing-masing  larutan  disaring  dengan membran  filter  0,2  µm,  lalu  dilakukan degassing  selama  15  menit.  Selanjutnya, diinjeksikan  ke  dalam  sistem  KCKT  fase terbalik.  Sehingga  diperoleh  luas  area, kemudian  ditentukan  persamaan  regresi linier y = bx + a dan nilai korelasi.
5.5. Validasi Metode Analisis
5.5.1. Akurasi dan Presisi
Dilakukan  dengan  metode  standar  adisi dengan  membuat  3  tingkat  konsentrasi standar  dan  sampel  dengan  cara  larutan intermediate dipipet masing-masing
sebanyak  4  mL,  5,5  mL,  dan  6,5  mL  lalu masing-masing  ditambahkan  larutan  sampel sebanyak  2  mL,  2,5  mL,  dan  3  mL kemudian  dilarutkan  dalam  50  mL  etanol 70%  sehingga  diperoleh  konsentrasi  8 µg/mL,  11  µg/mL,  dan  13  µg/mL. Selanjutnya  dibuat  3  tingkat  konsentrasi sampel  dengan  cara  larutan  sampel  dipipet masing-masing sebanyak 2 mL, 2,5 mL, dan 3  mL  kemudian  masing-masing  dilarutkan dalam  50  mL  etanol  70%.  Setelah  itu, masing-masing  larutan  disaring  dengan membran  filter  0,2  µm,  lalu  dilakukan degassing  selama  15  menit.  Selanjutnya, dilakukan  pengukuran  luas  area  dengan sistem  KCKT  fase  terbalik.  Pengukuran setiap  masing-masing  larutan  dilakukan dengan 3 kali pengulangan.
5.5.2. Selektivitas dan Spesifisitas Larutan intermediate dipipet  sebanyak 5  mL  lalu  dilarutkan  dalam  50  mL  etanol 70%  sehingga  diperoleh  konsentrasi  10 µg/mL.  Selanjutnya,  larutan  sampel  ekstrak cair  bonggol  nanas  dipipet  sebanyak  5  mL lalu  dilarutkan  dalam  50  mL  etanol  70%. Setelah  itu,  masing-masing  larutan  disaring dengan  membran  filter  0,2  µm,  lalu dilakukan  degassing  selama  15  menit. Selanjutnya, dilakukan pengukuran luas area dengan sistem KCKT fase terbalik.
Pengukuran  setiap  masing-masing  larutan dilakukan dengan 3 kali pengulangan.
5.6. Penentuan  Kadar  Vitamin  C  Dalam Ekstrak Bonggol Nanas
Larutan  sampel  ekstrak  cair  bonggol nanas dipipet sebanyak 5 mL lalu dilarutkan dalam  50  mL  etanol  70%.  Setelah  itu, masing-masing  larutan  sampel  disaring dengan  membran  filter  0,2  µm,  lalu dilakukan  degassing  selama  15  menit. Selanjutnya, dilakukan pengukuran luas area dengan sistem KCKT fase terbalik. Pengukuran  setiap  masing-masing  larutan dilakukan dengan 3 kali pengulangan.
5.7. Prosedur Analisa Kadar Vitamin C Larutan  standar  dan  larutan  sampel  uji masing-masing diinjeksikan sebanyak 20  L dengan  menggunakan  syringe  ke  dalam sistem  KCKT  fase  terbalik.  Kondisi  alat KCKT  pada  saat  analisa  diatur  sebagai berikut:
Kolom :  C18 Fase Gerak :  NH 4 H 2 PO 4 0,01 mol/L dan asam ortofosfat 0,1% (80:20) (v/v) Kecepatan Alir :  1 mL/menit Waktu Elusi :  5 menit Detektor :  UV dengan panjang gelombang 254 nm (Sulastri et al ., 2020).

## Analisis Data
Perhitungan  statistik  dilakukan  dengan menggunakan  SPSS  26  untuk  perangkat Windows.  Untuk  perbandingan  nilai  rata- rata,  digunakan  uji  ANOVA  dengan  cara membandingkan  satu  variabel  yang  saling terikat  sehingga  menghasilkan  nilai  P-value (sig).  Perbedaan  dapat  dianggap  signifikan jika P-value (sig) < 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Hasil  Pembuatan  Serbuk  Simplisia Bonggol Nanas
Serbuk  simplisia  bonggol  nanas  yang diperoleh  yaitu  berbentuk  serbuk,  berwarna coklat,  berbau  khas  aromatis,  dan  memiliki rasa  asam  manis.  Pembuatan  serbuk simplisia  bonggol  nanas  dibuat  dari  bahan baku  sebanyak  5000  gram  dengan  hasil pembuatan  serbuk  simplisia  yang  diperoleh yaitu  sebanyak  686,91  gram  dan  rendemen simplisia sebesar 13,74%.
2. Karakteristik Serbuk Simplisia

## Bonggol Nanas
2.1. Hasil Pengujian Kadar Air
Pengujian  kadar  air  bertujuan  untuk mengetahui  jumlah  kandungan  air  di  dalam simplisia.  Hasil  rata-rata  dari  pengujian kadar  air  dalam  serbuk  simplisia  bonggol nanas  yaitu  sebesar  8,06%,  hasil  yang diperoleh  telah  sesuai  dengan  persyaratan
secara  umum,  dimana  kadar  air  simplisia yaitu  tidak  lebih  dari  10%  (DepKes  RI, 2013).

## 2.2. Hasil Pengujian Kadar Abu
Pengujian  kadar  abu  bertujuan  untuk memberikan  gambaran  kandungan  mineral internal  dan  eksternal  yang  berasal  dari proses  awal  sampai  terbentuknya  simplisia. Hasil  rata-rata  dari  pengujian  kadar  abu dalam serbuk simplisia bonggol nanas  yaitu sebesar  2,076%,  hasil  yang  diperoleh  telah sesuai  dengan  persyaratan  secara  umum, dimana  kadar  abu  simplisia  yaitu  tidak boleh lebih dari 15% (DepKes RI, 2000).

## 3. Hasil  Pembuatan  Ekstrak  Bonggol Nanas
Hasil  ekstrak  cair  bonggol  nanas diperoleh  dari  hasil  perbandingan  metode digesti dan UAE. Hasil ekstrak cair bonggol nanas  yang  diperoleh  dari  kedua  metode ekstraksi  yaitu  berwarna  coklat  dan  berbau khas aromatis.
4. Hasil  Analisis  Kualitatif  Vitamin  C Serbuk Simplisia dan Ekstrak

## Bonggol Nanas
Analisis  kualitatif  vitamin  C  bertujuan untuk  mengidentifikasi  ada  atau  tidaknya kandungan  senyawa  vitamin  C  yang terdapat  di  dalam  serbuk  simplisia  dan ekstrak  bonggol  nanas.  Hasil  identifikasi senyawa vitamin C dengan pereaksi  iodium
akan  menunjukan  hasil  yang  positif  jika warna  iodium  menjadi  hilang,  karena terjadinya  reaksi  reduksi  oksidasi  antara vitamin  C  sebagai  zat  pereduksi  yang  kuat dengan iodium sebagai oksidator. Selain itu, hasil identifikasi senyawa vitamin C dengan pereaksi  Benedict  akan  menunjukan  hasil yang positif jika ditandai dengan terbentuknya warna hijau kekuningan sampai merah bata, hal ini karena vitamin C akan  mereduksi  ion  Pb 2+ pada  pereaksi
Benedict  menjadi  Pb + .  Hasil  analisis kualitatif vitamin C dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Analisis Kualitatif Vitamin C
Pada  Serbuk  dan  Ekstrak  Bonggol Nanas Pereaksi Serbuk Simplisia Ekstrak Digesti Ekstrak UAE Iodium + + + Benedict + + +
Keterangan: (+) : Mengandung vitamin C (–) : Tidak mengandung vitamin C
Berdasarkan  hasil  analisis  kualitatif dapat  diketahui  bahwa serbuk simplisia dan ekstrak  bonggol  nanas  dari  hasil  metode ekstraksi digesti dan UAE positif mengandung senyawa vitamin C.
5. Hasil  Pembuatan  Kurva  Baku  dan Linieritas Asam Askorbat
Tujuan  dilakukannya  pembuatan  kurva baku  yaitu  untuk  melihat  kesesuaian  antara respon  detektor  yang  terukur  dengan
konsentrasi  analit.  Hasil  grafik  kurva  baku vitamin C dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Kurva Baku Vitamin C
Berdasarkan  hasil  data  kurva  baku, maka  diperoleh  hasil  persamaan  regresi linier  yaitu  y  =  36232,64  x  –  91634,8 dengan  nilai  R²  =  0,9996.  Nilai  koefisien korelasi  (R²)  yang  diperoleh  telah  sesuai dengan syarat parameter linieritas yang baik yaitu ≥ 0,99 (AOAC, 2012).
6. Hasil Validasi Metode Analisis

## 6.1. Akurasi
Parameter  akurasi  dapat  dinyatakan sebagai  persentase  perolehan  kembali  ( % recovery ).  Hasil  uji  akurasi  dapat  dilihat pada Tabel 2.
Berdasarkan hasil dari nilai % recovery yang  diperoleh  dapat  dinyatakan  bahwa metode  analisis  KCKT  yang  diujikan  telah memenuhi  syarat,  karena  berada  pada rentang antara 85-110% (AOAC, 2012).
94590 262882 450861 638188 812753 y = 36232,64x - 91634,8 R² = 0.9996 0 200000 400000 600000 800000 1000000 0 10 20 30 Lu as Are a Konsentrasi (µg/mL) Grafik Kurva Baku Vitamin C
Tabel 2. Hasil  Uji  Akurasi  dengan  Metode Adisi Pada Sampel Ekstrak Bonggol Nanas dan Larutan Standar Vitamin C Larutan Standar (µg/mL) Ulangan % Recovery (%) 8 1 96,48 2 95,64 3 98,73 11 1 89,84 2 95,76 3 100,22 13 1 92,57 2 99,15 3 98,24

## 6.2. Presisi
Hasil  pengukuran  dalam  uji  presisi digambarkan  dalam  bentuk  persentase Relative  Standar  Deviation (%  RSD).  Hasil uji presisi dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil  Uji  Presisi  Pada  Sampel Ekstrak Bonggol Nanas dan Larutan Standar Vitamin C Larutan Standar (µg/mL) Ulangan % RSD 8 1 1,64
2 3 11 1
5,46 2 3 13 1 3,69 2 3 Berdasarkan nilai % RSD yang diperoleh  menunjukan  bahwa  metode  uji yang  digunakan  pada  ketiga  konsentrasi
memiliki  ketelitian  yang  baik  karena memenuhi  syarat  nilai  %  RSD  yang diterima yaitu ≤ 7,3% (AOAC, 2016).

## 6.3. Selektivitas dan Spesifisitas
Penentuan uji selektivitas dinyatakan dengan  nilai  resolusi  (Rs).  Hasil  uji selektivitas dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil Uji Selektivitas Pada Sampel
Ekstrak Bonggol Nanas Ulangan Resolusi 1 2,47 2 2,47 3 2,49
Berdasarkan  hasil  nilai  resolusi  yang diperoleh dari sampel ekstrak bonggol nanas dengan  tiga  kali  ulangan,  menunjukan bahwa  metode  analisis  yang  digunakan memiliki selektivitas yang baik karena telah memenuhi  kriteria  resolusi  dengan  nilai  Rs ≥  1,5  (AOAC,  2012).  Sehingga  metode analisis  yang  digunakan  dapat  memisahkan senyawa  vitamin  C  dengan  baik  dari senyawa  lainnya  yang  terdapat  dalam ekstrak bonggol nanas.
Uji  spesifisitas  ditentukan  dengan mengamati  kromatogram  dan  waktu  retensi antara  larutan  baku  vitamin  C  dengan sampel  ekstrak  bonggol  nanas.  Hasil  uji spesifisitas dapat dilihat pada Tabel 5.

## Pharmacoscript Volume 5 No. 2 Agustus 2022
Tabel 5. Hasil Uji Spesifisitas Pada Larutan
Baku  Vitamin  C  dan  Sampel Ekstrak Bonggol Nanas Ulangan Waktu Retensi (menit) Selisih Waktu Retensi (menit) Larutan Baku Vtamin C Ekstrak Bonggol Nanas 1 1,858 1,850 0,008 2 1,850 1,850 0,000 3 1,858 1,850 0,008
Berdasarkan  data  yang  diperoleh  dapat diketahui bahwa selisih waktu retensi antara larutan  baku  vitamin  C  dengan  sampel ekstrak  bonggol  nanas  telah  memenuhi syarat  variasi  waktu  retensi  yaitu  ≤  0,05
menit  (Snyder et  al .,  2010  dalam  Clara, 2018).  Hasil  ini  menunjukan  bahwa  dalam sampel  ekstrak  bonggol  nanas  terdapat kandungan senyawa vitamin C.
7. Hasil  Analisis  Kadar  Vitamin  C dalam Ekstrak Bonggol Nanas
Pengukuran  kadar  vitamin  C  dalam ekstrak  bonggol  nanas  yang  diperoleh  dari hasil  metode  ekstraksi  digesti  dan  UAE dilakukan  dengan  menggunakan  metode KCKT fase terbalik. Contoh hasil kromatogram kadar vitamin C dalam ekstrak bonggol  nanas  dengan  metode  digesti  dan UAE dapat dilihat pada Gambar 2.
(B) Gambar 2. (A)  Contoh  Hasil  Kromatogram  Kadar  Vitamin  C  dengan  Metode Digesti,  (B)  Contoh  Hasil  Kromatogram  Kadar  Vitamin  C  dengan Metode UAE
Berdasarkan  hasil  kromatogram  yang diperoleh,  maka  hasil  pengukuran  kadar vitamin  C  dalam  ekstrak  bonggol  nanas dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel  6. Hasil  Kadar  Vitamin  C  dalam Ekstrak  Bonggol  Nanas  dengan
Metode KCKT Metode Ekstraksi Kadar Vitamin C (mg/100g) Kadar Vitamin C (mg/100g) Digesti 114,558 117,479 ± 2,692 118,018 119,860 UAE 97,652 98,487 ± 0,724 98,919 98,891
Berdasarkan data yang diperoleh, adanya  perbedaan  kadar  vitamin  C  dalam ekstrak  bonggol  nanas  dapat  terjadi  karena
adanya  perbedaan  pada  metode  ekstraksi. Pada  proses  ekstraksi  dengan  metode  UAE, mekanisme  kerjanya  hanya  melibatkan getaran gelombang ultrasonik dengan sedikit  pemanasan  pada  suhu  30ºC  dan selama  15  menit.  Gelombang  ultrasonik  ini akan  memecahkan  dinding  sel  yang  akan membantu terlepasnya senyawa aktif keluar. Sedangkan  pada  proses  ekstraksi  dengan metode  digesti,  dengan  suhu  dan  waktu yang  sama  dengan  UAE,  mekanisme kerjanya melibatkan pemanasan dan pengadukan  dengan  bantuan hot  plate magnetic stirrer . Proses pemanasan berperan  dalam  pemecahan  dinding  sel, sedangkan  proses  pengadukan  berperan
dalam  mengurangi  tingkat  kejenuhan  dari pelarut sehingga pelarut dapat menarik lebih banyak senyawa. Hal  ini dibuktikan dengan hasil  senyawa  vitamin  C  pada  metode digesti  yang  melibatkan  proses  pemanasan dan  pengadukan  lebih  tinggi  dibandingkan dengan metode UAE yang hanya melibatkan proses pemanasan tanpa pengadukan.
Hasil  kadar  vitamin  C  yang  diperoleh dengan  metode  KCKT  memberikan  hasil kadar  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  hasil  penelitian  sebelumnya  yang telah  dilakukan  oleh  Nurminabari,  dkk (2019),  dimana  hasil  kadar  vitamin  C  yang diperoleh  dalam  ekstrak  bonggol  nanas dengan  metode  iodimetri  yaitu  sebesar 55,73  mg/100g.  Adanya  perbedaan  kadar vitamin  C  dalam  ekstrak  bonggol  nanas  ini dapat  terjadi  karena  adanya  perbedaan metode  analisis  pada  penentuan  kadar vitamin  C.  Perbedaan  ini  juga  dapat disebabkan  oleh  faktor  lingkungan  dan tempat  tumbuh  tanaman  yang  meliputi ketinggian,  cuaca,  keadaan  tanah  yang berbeda,  umur  tanaman,  dan  waktu  panen tanaman yang digunakan.
Pada  metode  analisis  dengan  metode KCKT  proses  analisisnya  dilakukan  dengan pemisahan  komponen  analit  berdasarkan kepolarannya,  sehingga  setiap  campuran yang keluar akan terdeteksi dengan detektor
dan akan direkam dalam bentuk kromatogram sehingga hasil analisis dengan metode  KCKT  akan  jauh  lebih  akurat dibandingkan  dengan  metode  iodimetri, karena metode KCKT ini memiliki sensitivitas  dan  spesifitas  yang  lebih  tinggi (Rusli, dkk., 2020).
Hasil  kadar  vitamin  C  yang  diperoleh dalam  penelitian  ini  juga  memberikan  hasil kadar  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  hasil  penelitian  sebelumnya  yang telah  dilakukan  oleh  Titin,  dkk  (2011) dengan  metode  KCKT,  dimana  hasil  kadar vitamin  C  yang  diperoleh  dalam  ekstrak bonggol nanas yaitu sebesar 68,563 mg/100g.  Adanya  perbedaan  kadar  vitamin C  dalam  ekstrak  bonggol  nanas  ini  dapat terjadi  karena adanya  pengaruh  dari perbedaan  jenis  ekstraksi  dan  dari  bonggol nanas  yang  digunakan,  perbedaan  ini  dapat dipengaruhi  oleh  faktor  lingkungan  dan tempat  tumbuh  tanaman  yang  meliputi ketinggian,  cuaca,  keadaan  tanah  yang berbeda,  umur  tanaman,  dan  waktu  panen tanaman yang digunakan.

## 8. Hasil Analisis Statistik
Berdasarkan  kriteria  keputusan  dari nilai  statistik  yang  diperoleh  yaitu  tolak  H 0 jika  nilai  P-value  (sig)  <  0,05,  sehingga perbedaan  metode  ekstraksi  memberikan pengaruh  yang  signifikan  terhadap  hasil
kadar  vitamin  C  yang  diperoleh  dalam ekstrak bonggol nanas.

## KESIMPULAN
Kadar  vitamin  C  yang  diperoleh  dalam ekstrak  bonggol  nanas  dengan  metode digesti  yaitu  sebesar  117,479  mg/100g, sedangkan  kadar  vitamin  C  yang  diperoleh dalam  ekstrak  bonggol  nanas  dengan metode UAE yaitu sebesar 98,487 mg/100g. Perbedaan  metode  ekstraksi  memberikan pengaruh  yang  siginifikan  terhadap  hasil kadar  vitamin  C  dalam  ekstrak  bonggol nanas (P-value (sig) < 0,05).

## DAFTAR PUSTAKA
AOAC.  (2012).  Guidelines  for  Dietary Supplements and Botanicals.
Association  of  Official  Analytical Chemists . 1-9.
AOAC.  (2016).  Guidelines  for  Standard Method  Performance  Requirements.
Journal  of  AOAC  International  and Official Method of Analysis . 9.
Clara,  M.  (2018). Validasi  Metode  High Performance  Liquid  Chromatography (HPLC) Fase Terbalik Pada
Penetapan  Kadar  Kafein  Dalam  Kopi
Bubuk  Murni  Robusta  Merek  “X” .
Universitas Sanata Dharma.
Departemen Kesehatan RI. (2000). Parameter  Standar  Umum  Ekstrak
Tumbuhan  Obat .  Jakarta:  Direktorat
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. Departemen Kesehatan RI. (2013). Farmakope  Hebal .  Jakarta:  Direktorat
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.
Jubahar,  J.,  Astuti,  Y.,  dan  Suharti,  N.
(2015).  Penetapan  Kadar  Vitamin  C dari  Buah  Cabe  Rawit  ( Capsicum frutescens L.) dengan Metode
Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi (KCKT). Jurnal Farmasi Higea . 7 (2): 208-217.
Nurminabari,  I.  S.,  Cahyadi,  W.,  dan Ramadiansyah. (2019). Pengaruh Konsentrasi  Penstabil  dan  Sukrosa Terhadap  Karakteristik  Sari  Bonggol Nanas  ( Ananas  comosus L.  Merr) Instan  dengan  Metode  Kokristalisasi.
Pasundan  Food  Technology  Journal . 6 (2): 95-101.
Rusli, Z., Herlina, N., Sari, B. L., dan Ulfa,
S.  H.  (2020).  Optimisasi  Metode
Microwave-Assisted Extraction Terhadap Kadar Kuersetin dari Limbah  Kulit  Bawang  Merah  ( Allium cepa L.). Fitofarmaka:  Jurnal  Ilmiah Farmasi . 10 (2): 122-132.
Sulastri,  A.,  Maulana,  Y.  E.,  Amaliya,  A., Sukrasno,  S.,  and  Soemardji,  A.  A. (2020).  Development  and  Validation of  a  RP-HPLC  Method  For  a Simultaneous  Analysis  of  Quercetin and  Ascorbic  Acid  in  Psidium Guajava  Fruit  Extract  at  Different Ripening
Stages. Journal
of Engineering  Science  and  Technology . 15 (6): 3615-3624.
Sumiati,  T.,  Masaenah,  E.,  dan  Milasary,  I.
(2020).  Potensi  Ekstrak  Bonggol Nanas  ( Ananas  comosus (L.)  Merr.)
Sebagai Obat Kumur. Jurnal Katalisator . 5 (2): 215-223.
Tahir,  M.,  Hikmah,  N.,  dan  Rahmawati. (2016).  Analisis  Kandungan  Vitamin
C  dan  β-  Karoten  Dalam  Daun  Kelor
( Moringa oleifra Lam.) dengan
Metode  Spektrofotometri  UV-Vis.
Jurnal  Fitofarmaka  Indonesia .  3  (1):
135-140.
Techinamuti,  N.,  dan  Pratiwi,  R.  (2018). Review: Metode  Analisis  Kadar
Vitamin  C. Farmaka  Suplemen .  16
(2): 309-315.
Titin,  S.  F.  M.,  Kusrijadi,  A.,  dan  Amelia, M.  (2011). Pemanfaatan  Protease
Dari Ekstrak Nanas (Ananas comusus L.  Merry)  Sebagai  Koagulan  dalam Produksi  Keju  Cottage  Berkualitas . Seminar
Nasional Kimia dan Pendidikan  Kimia  III.  7  Mei  2011. Surakarta, Indonesia. 649-657.
Verdiana,  M.,  Widarta,  I.  W.  R.,  dan Permana,  I.  D.  G.  M.  (2018). Pengaruh Jenis Pelarut Pada Ekstraksi Menggunakan  Gelombang  Ultrasonik Terhadap Aktivitas Antioksidan
Ekstrak  Kulit  Buah  Lemon  ( Citrus limon (Linn.)  Burm  F.). Jurnal  Ilmu dan Teknologi Pangan (ITEPA) . 7 (4): 213-222.