EFEK  ANTI  DIABETES  EKSTRAK  DAUN  MAJA  ( Aegle  marmelos L.)  PADA
ZEBRAFISH ( Danio rerio )
Anti Diabetes Effect Of Maja (Aegle marmelos L.) Leaf Extract On Zebrafish (Danio rerio)
Penulis / Author (s) Putri Damayanti Syahrir 1
1 Poltekkes Kemenkes Makassar, Makassar, Indonesia Hendra Stevani 1 Sisilia Teresia R. Dewi 1
Penulis Koresponden: Hendra Stevani e-mail korespondensi: hendra@poltekkes-mks.ac.id
DOI: https://doi.org/10.32382/mf.v20i1.567 ARTICLE INFO ABSTRACT / ABSTRAK Keywords: Several studies show the effectiveness of Maja leaves in Diabetes mellitus,  however  further  proof  is  still  needed  to  confirm  the effectiveness of Maja leaves, one of which is by using experimental animals that are more similar to humans such as Zebrafish (Danio rerio).  This  research  aims  to  determine  the  anti-diabetic effectiveness of maja leaf extract (Aegle marmelos L.) on Zebrafish (Danio  rerio)  after  being  induced  by  Aloxan.  Maja  leaves  (Aegle marmelos  L.)  were  extracted  using  the  maceration  method.  This research  was  carried  out  using  Aloxan  and  0.1%  glucose  as inducers, and Metformin as a positive control, with extract doses of 200  mg/2L,  300  mg/2L,  and  400  mg/2L.  The  results  of  the observations showed that the average decrease for each treatment group was that the negative control group given Aloxan and 0.1% glucose had an average decrease of 130 ± 15.6 mg/dL, the group given 200 mg maja leaf extract had an average decrease was 62.33 ± 15 mg/dL, for the group given 300 mg maja leaf extract had an average decrease of 68 ± 15 mg/dL, the group given 400 mg maja leaf  extract  had  an  average  decrease  of  67±11.5mg/dL  and  the positive control group given Metformin had an average reduction of 57.66±12.7mg/dL. So it can be concluded that maja leaf extract 200 mg, 300 mg, and 400 mg has been proven to significantly reduce blood glucose levels in zebrafish (p<0.05).
Terdapat beberapa penelitian yang menunjukkan efektivitas Daun Maja pada Diabetes melitus, namun pembuktian lebih lanjut masih
Aegle marmelos L Danio rerio Anti Diabetes Effect

## Kata Kunci:
Aegle marmelos L Danio rerio Efek anti diabetes

## Media Farmasi
https://ojs3.poltekkes-mks.ac.id/index.php/medfar/

## Open access article
diperlukan untuk memastikan efektivitas daun Maja, salah satunya dengan menggunakan hewan coba yang lebih memiliki kemiripan dengan  manusia  seperti  Zebrafish  (Danio  rerio).  Tujuan  dari Penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efektivitas  anti  diabetes esktrak  Daun  maja  (Aegle  marmelos  L.)  pada  Zebrafish  (danio rerio)  setelah  diinduksi  Aloxan.  Daun  maja  (Aegle  marmelos  L.) diekstraksi  dengan  menggunakan  metode  maserasi.  Penelitian  ini dilakukan dengan menggunakan Aloxan dan glukosa 0,1% sebagai penginduksi,  Metformin  sebagai  kontrol  positif,  dengan  dosis ekstrak 200 mg/2L, 300 mg/2L, dan 400 mg/2L. Hasil pengamatan menunjukkan  bahwa  rata-rata  penurunan  untuk  setiap  kelompok perlakuan yaitu pada kelompok kontrol negatif yang diberi Aloxan dan glukosa 0,1% memiliki rata-rata penurunan sebesar 130 ±15,6 mg/dL, kelompok yang diberi ekstrak daun maja 200 mg memiliki rata-rata penurunan sebesar 62,33±15 mg/dL, untuk kelompok yang diberi  ekstrak  daun  maja  300  mg  memiliki  rata-rata  penurunan sebesar 68 ± 15 mg/dL, kelompok yang diberi ekstrak daun maja 400  mg  memiliki  rata-rata  penurunan  sebesar  67±11,5mg/dL  dan untuk  kelompok  kontrol  positif  yang  diberi  Metformin  memiliki rata-rata  penurunan  sebesar  57,66±12,7mg/dL.  Sehingga  dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun maja 200 mg, 300 mg, dan 400 mg terbukti  dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah  pada  Zebrafish secara signifikan (p<0,05).

## PENDAHULUAN
Penyakit  yang  banyak  diderita  oleh Masyarakat  Indonesia  salah  satunya  adalah penyakit diabetes melitus dengan angka kejadian yang terus meningkat dari tahun ke tahun. Kadar glukosa dalam darah pada orang yang mengidap penyakit  diabetes  melitus  melebihi  batas normalnya  (hiperglikemia).  Pada  penderita penyakit diabetes melitus umumnya mengalami gangguan  metabolisme  yaitu  pada  proses penyerapan  glukosa  oleh  tubuh.  Dikarenakan tidak  dapat  melepaskan  atau  menggunakan insulin secara normal ( Pitriya, & Mulyani, 2017 ). Negara  Indonesia  terletak  di  daerah Khatulistiwa,  mempunyai  iklim  tropis  dan memiliki sumber daya alam yang sangat beragam ragamnya. Sumber daya alam hayati inilah yang dapat  digunakan  untuk  kebutuhan  manusia, seperti  kosmetika,  insektisida,  obat-obatan,  dan sebagai  bahan  dasar  sintesis  senyawa  organik yang lebih bermanfaat. Pengobatan medis untuk penyakit  diabetes  masih  dianggap  mahal  oleh masyarakat,  sehingga  Masyarakat  mencari pengobatan alternatif yang berbasis bahan-bahan tradisional.  Asumsi  ini  erat  kaitannya  dengan faktor  ekonomi  penduduk  yang  masih  lemah, ( Gani, 2017 ).
Salah  satu  tanaman  yang  mempunyai aktivitas anti diabetes adalah Daun Maja ( Aegle Marmelos L.).  Menurut  penelitian  yang dilakukan  oleh  ( Darmiati  dkk,  2018 )  tentang Efek  anti  diabetes  ekstrak  Daun  Maja  ( Aegle Marmelos L.  Corr)  pada  tikus  putih  jantan (Rattus  norvegicus)  diabetes  melitus  tipe  2, menunjukkan bahwa ekstrak Daun Maja efektif dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah  pada
mencit karena mengandung alkaloid, flavonoid, terpenoid, saponin dan tanin dengan pemberian dosis  600  mg/kg  BB,  ( Dermiati,  2018 )  dan menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh  ( Diana dkk,  2019 )  terkait  uji  aktivitas  ekstrak  Daun Maja  terhadap  kadar  glukosa  darah  dan  profil lipid  tikus  diabetes  akibat  induksi  Aloxan menyatakan  bahwa  Daun  Maja  atau  ( Aegle Marmelos L.)  memiliki  kandungan  senyawa flavonoid  yang  berkhasiat  terhadap  penurunan kadar glukosa darah ( Diana et al., 2019 ).
Zebrafish ( Danio rerio ) adalah hewan uji yang akhir-akhir ini lebih sering digunakan untuk pengujian  pada  praklinik  karena  cepat dikembangkan  dan  memiliki  karakteristik  gen dan protein yang mirip dengan manusia ( Utami N,  2018 ).  Zebrafish  ( Danio  rerio )  merupakan jenis  ikan  tropis  berukuran  kecil  yang  dapat ditemukan  disungai-sungai  di  negara  India  dan Asia  Selatan.  Beberapa  tahun  terakhir, penggunaan Zebrafish sebagai model organisme untuk  pengembangan  genetik,  toksikologi, gangguan  metabolisme  serta  gangguan  tubuh manusia  lainnya.  Keuntungan  dari  penggunaan Zebrafish  adalah  proses  pembiakannya  yang cepat,  dan  satu  induk  Zebrafish  dapat menghasilkan  hingga  ratusan  keturunan. Keuntungan  lain  dalam  penggunaan  Zebrafish dibandingkan  model  organisme  lainnya  adalah adanya kesamaan gen yang menyerupai manusia atau  mamalia.  Pemahaman  terhadap  genom Zebrafish dan genom manusia sangat membantu dalam mengidentifikasi mutasi yang terjadi serta membantu memudahkan dalam mengidentifikasi gen-gen yang terlibat dalam menyebabkan suatu penyakit  pada  manusia  ( Yuniarto  et  al.,  2017 ).
Pengujian praklinik efek anti diabetes Daun Maja ( Aegle  Marmelos L.)  sudah  sering  dilakukan pada  hewan  uji  seperti  tikus  dan  mencit,  tetapi suatu obat sebelum dia melanjutkan pengujian ke manusia  sebaiknya  perlu  lagi  dipastikan efektivitasnya  dengan  menggunakan  berbagai macam hewan yang memiliki kesamaan karakter yang  lebih  mirip  dengan  manusia,  salah  satu hewan yang memiliki ciri gen dan protein yang mirip  dengan  tubuh  manusia  adalah  Zebrafish ( Danio rerio ).
Beberapa  jenis  penelitian  yang  terkait dengan  efek  anti  diabetes  dari  tanaman  obat sudah  sering  dilakukan  dengan  menggunakan hewan  uji  Zebrafish  ( Danio  rerio )  seperti rimpang kunyit ( Istriningsih & Ika, 2021 ). Dau murbei dengan dosis 200 mg/2L, 300 mg/2L, dan 400  mg/2L,  Penurunan  yang  paling  signifikan pada  dosis  400mg/2L  ( Burhan  &  Maulita,
2020 ).dan daun karamunting dengan dosis 1% ,
2%  dan  4%  penurunan  yang  paling  besar  pada dosis 4% ( Sudrajat et al., 2022 ).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  penulis tertarik  untuk  melakukan  penelitian  dengan menggunakan  bahan  alam  dari  ekstrak  Daun Maja  ( Aegle  marmelos L.)  karena  Daun  ini merupakan tanaman yang mudah ditemukan dan harganya  yang  terjangkau.  Maka  dari  itu dilakukan  penelitian  terkait  efektivitas  ekstrak Daun  Maja  ( Aegle  marmelos L.)  terhadap penurunan  kadar  glukosa  darah  pada  Zebrafish yang  diperlukan  untuk  melengkapi  efektivitas data  Ekstrak  Daun  Maja  dalam  menurunkan kadar  gula  darah  sebelum  dilanjutkan  ke pengujian klinik.

## METODE Desain, tempat dan waktu
Jenis  penelitian  yang  digunakan  adalah penelitian eksperimental dengan desain post test control only , memakai 20 ekor Zebrafish (Danio rerio) yang  terdiri  dari  5  macam  kelompok perlakuan  yang  dilakukan  di  laboratorium farmakologi Poltekkes Kemenkes Makassar.
Pembuatan  Simplisia  Daun  Maja (Aegle Marmelos L.)
Daun Maja ( Aegle marmelos L.) diambil di  kelurahan  Rajaya  Kabupaten  Takalar, Sulawesi  Selatan.  Daun  yang  diambil  masih hijau  dan  tidak  rusak.  Daun  maja  yang  telah dipanen  di  sortasi  basah  dengan  cara  di  cuci dengan  air  yang  mengalir  untuk  memisahkan kotoran-kotoran  atau  bahan-bahan  asing  seperti debu  yang  mengandung  bermacam-macam mikroba  dalam  jumlah  yang  tinggi.  Kemudian dilakukan  pengeringan  dengan  cara  diangin- anginkan  dan  terhindar  dari  paparan  sinar
matahari.  Lalu  disortasi  kering  dengan  cara memisahkan  kotoran-kotoran  yang  menempel pada daun maja saat proses pengeringan. Setelah tahap  pengeringan  dan  sortasi  kering  selesai maka simplisia dideterminasi setelah mendapatkan  hasil  determinasi  selanjutnya diekstraksi.
Pembuatan  Simplisia  Daun  Maja (Aegle Marmelos L.)
Pembuatan  ekstrak  simplisia  Daun  Maja diekstraksi dengan metode maserasi
menggunakan  pelarut  etanol  70%.  Maserasi dilakukan  dengan  cara  Daun  Maja  yang  sudah kering ditimbang sebanyak 100 gram dimasukkan  ke  dalam  bejana  maserasi  dan ditambahkan etanol 70% hingga semua simplisia terendam. Kemudian proses maserasi dilakukan selama 5 hari sambil sekali-kali diaduk dan pada hari  kelima  disaring  serta  diganti  pelarutnya. Lalu filtrat dikumpulkan dan dipekatkan dengan cara diuapkan hingga didapatkan ekstrak kental.

## Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan  larutan  uji  diawali  dengan menimbang  ekstrak  kental  Daun  Maja  ( Aegle marmelos L.)  sesuai  dengan  dosis  (200  mg/L; 300 mg/L; 400 mg/L), kemudian masing-masing ekstrak yang telah ditimbang dimasukkan dalam labu  ukur  200  mL  dikocok  sampai  homogen. Setelah  homogen,  masing-masing  dosis  ekstrak dicukupkan  hingga  2  liter  dan  diberi  label ( Nathaniel et al ., 2019 ).

## Pembuatan Larutan Aloxan 0,1%
Sebanyak  1  gram  Aloxan  dilarutkan dengan 200 ml air dalam labu ukur, lalu dikocok sampai  larut  dan  dicukupkan  hingga  1  liter ( Burhan & Maulita, 2020 ).

## Pembuatan Larutan glukosa 1%.
Sebanyak  10  gram  glukosa  dilarutkan dengan 200 ml air dalam labu ukur lalu dikocok sampai  larut  dan  dicukupkan  hingga  1  liter ( Burhan & Maulita, 2020 ).

## Pembuatan Larutan Metformin 100µM
Sebanyak 15,6 mg Metformin dilarutkan dengan 200 ml air dalam labu ukur lalu dikocok sampai  larut  dan  dicukupkan  hingga  1  liter ( Hasanah et al ., 2016 )

## Penyiapan Hewan Uji
Zebrafish  ( Danio  rerio )  yang  digunakan adalah  Zebrafish  dewasa,  diatur  dengan pencahayaan  terprogram  14  jam  terang  dan  10 jam gelap, air yang digunakan adalah air jernih dengan  temperatur  26°C,  pH  air  harus  dalam kisaran  6,0-8,1.  Jika  pH  larutan  tidak  sesuai
dengan pH tersebut maka dilakukan penyesuaian pH  dengan  penambahan  HCl  dan  NaOH  pada larutan ( Burhan & Maulita, 2020 ).

## Perlakuan Terhadap Hewan Uji
Tahap  penelitian  ini  meliputi  masa adaptasi  selama  1  minggu  dengan  pemberian pakan pelet. Hewan uji dibagi dalam 6 kelompok. Tiap  perlakuan  terdiri  dari  3  ekor  Zebrafish ( Danio  rerio ),  dan  diatur  dengan  pencahayaan terprogram  14  jam  terang  –  10  jam  gelap. Zebrafish  dipelihara  setidaknya  satu  minggu sebelum dilakukan percobaan. Ikan dimasukkan ke  dalam  akuarium  dengan  suhu  ruangan.  Ikan diberi makan dua kali sehari lalu dibagi ke dalam 6 kelompok, setiap kelompok terdiri dari 3 ekor ikan. Sebelum diinduksi ikan dipuasakan selama 24 jam. Sebanyak 15 ekor ikan diinduksi dalam satu  wadah  kecuali  kelompok  normal  (tanpa perlakuan), kelompok yang diinduksi terdiri dari kelompok  kontrol  negatif,  kelompok  kontrol positif,  kelompok  perlakuan  yang  terdiri  dari ekstrak Daun Maja 200 mg/2L, 300 mg/2L, dan 400  mg/2L.  Pada  hari  pertama  Zebrafish  di induksi  dengan  Aloxan  0,1%  selama  10  menit kemudian  dilanjutkan  dengan  perendaman larutan  glukosa  1%  selama  10  menit,  Larutan glukosa 1% dibuat dengan melarutkan D-glukosa anhidrat  sebanyak  10  gram  ke  dalam  1  L  air. Kemudian  dibiarkan  selama  5  hari.  selanjutnya
diambil  3  ekor  ikan  sebagai  sampel  untuk mengetahui Zebrafish sudah mencapai hiperglikemik. Kadar glukosa darah normal ikan zebra sebesar 50-75 mg/dL ( Hayati et al ., 2017 ). Setelah Zebrafish mencapai kadar hiperglikemik kemudian  kontrol  positif  diberikan  Metformin 100 µM dan kelompok perlakuan diberi sampel Ekstrak  Daun  Maja  (EDM)  dengan  dosis  200 mg/L, 300 mg/2L, dan 400 mg/2L. Pengambilan darah  Zebrafish  dilakukan  dengan  cara dekapitasi pada ekor Zebrafish, lalu diukur kadar glukosa  darahnya.  Selanjutnya  dilakukan pemeriksaan kadar glukosa darah menggunakan alat glukometer.

## Pengolahan dan analisis data
Data  penelitian  ini  diperoleh  dari  kadar glukosa darah ekstrak etanol Daun Maja (Aegle marmelos L . )  pada  Zebrafish  ( Danio rerio ) kemudian  data  diolah  secara  statistik  dengan menggunakan  uji  ANOVA.  Dengan  variabel bebas  adalah  Ekstrak  Daun  Maja  sedangkan variabel terikat dalam penelitian ini adalah kadar gula darah Zebrafish.

## Etik penelitian
Persetujuan    etik    untuk    penelitian    ini diperoleh dari Komisi Etik Penelitian Kesehatan Politeknik      Kesehatan      Makassar  No.:
902/KEPK-PTKMS/I/2023 HASIL Tabel 1 Hasil Ekstraksi Daun Maja ( Aegle Marmelos L .) Sampel Jenis Pelarut Metode Ekstraksi Berat sampel kering Berat ekstrak Rendemen Daun Maja (Aegle Marmelos L.) Etanol 70% Maserasi 100g 8,30g 8,3% Tabel 2 Hasil Pengukuran Kadar Glukosa Darah pada Zebrafish yang Diinduksi Aloxan Zebrafish Normal Kontrol (-) Kontrol (+) Kelompok Ekstrak Daun Maja (mg/2L) 200 mg 300 mg 400 mg 1 54 140 43 45 65 74 2 43 112 65 73 65 74 3 65 138 65 69 74 54 Rata-rata 54 ± 11 130 ± 15,6 57.66 ± 12,7 62.33 ± 15 68 ± 5 67  ± 11,5 Tabel 3 Nilai p hasil uji statistik Kelompok 1 2 3 4 5 6 1 - 0,001 0,637 0,242 0,105 0,178 2 0,001 - 0,046 0,003 0,046 0,046 3 0,637 0,046 - 0,268 0,197 0,261 4 0,242 0,003 0,268 - 0,825 0,268 5 0,105 0,046 0,197 0,825 - 0,814 6 0,178 0,046 0,261 0,268 0,814 -
Keterangan: Kelompok 1 : Normal (Tanpa Perlakuan) Kelompok 2 : Kontrol (-) Induksi Aloxan dan Glukosa Kelompok 3 : Kontrol (+) Metformin Kelompok 4 : Ekstrak Daun Maja 200 mg Kelompok 5 : Ekstrak Daun Maja 300 mg Kelompok 6 : Ekstrak Daun Maja 400 mg

## PEMBAHASAN
Daun  Maja  ( Aegle  marmelos L . )  yang sebelumnya di sortasi basah kemudian di sortasi kering  sehingga  menghasilkan  simplisia  kering kemudian  diekstraksi  dengan  tujuan  untuk menarik  dan  memisahkan  berbagai  komponen kimia  yang  terdapat  dalam  bahan  alam  dengan menggunakan  pelarut  etanol  70%.  Alasan pemilihan pelarut etanol 70% yaitu karena etanol dapat menarik senyawa aktif yang lebih banyak dibandingkan  dengan  jenis  pelarut  organik lainnya Etanol memiliki titik didih yang rendah yaitu  79ºC  sehingga  memerlukan  panas  yang lebih sedikit untuk proses pemekatan. Selain itu, etanol merupakan satu-satunya jenis pelarut yang aman  atau  tidak  bersifat  beracun  apabila dikonsumsi  karena  rendahnya  tingkat  toksisitas dibanding  pelarut  lain.  Alasan  lain  pemilihan pelarut  etanol  70%  yaitu  karena  senyawa flavonoid  umumnya  dalam  bentuk  glikosida yang  bersifat  polar  sehingga  harus  dilarutkan dengan  pelarut  yang  bersifat  polar,  dan  etanol 70% adalah pelarut yang bersifat polar, Tingkat polaritasnya  lebih  tinggi  dari  etanol  96%
( Hasanah & Novian, 2020 ). Ekstraksi yang digunakan pada penelitian ini yaitu dengan menggunakan metode maserasi. Pemilihan metode maserasi ini karena metode ini merupakan metode ekstraksi dengan cara dingin sehingga senyawa-senyawa metabolit  yang  terkandung  dalam  Daun  Maja ( Aegle  Marmelos L . )  tetap  stabil  terutama senyawa  yang  mudah  rusak  pada  suhu  panas. Selain  itu  maserasi  merupakan  ekstraksi sederhana ( Badaring et al ., 2020 ). Proses  maserasi  dilakukan  selama  15 hari,  dan  setiap  5  hari  dilakukan  penggantian pelarut  etanol  70%  yang  baru  agar  dapat memaksimalkan  proses  penarikan  senyawa metabolit  sekunder  serta  dapat  meminimalkan adanya  senyawa  metabolit  sekunder  yang tertinggal  dalam  sel  simplisia.  Filtrat  yang diperoleh  selanjutnya  disaring  menggunakan kasa.  Untuk  memperoleh  ekstrak  kental  filtrat dipekatkan  dengan  cara  diuapkan.  Rendemen ekstrak  kental  yang  diperoleh  sebesar  8,3%. Sesuai  dengan  hasil  rendemen  yang  dihasilkan bahwa semakin besar rendamen yang dihasilkan, maka  semakin banyak komponen bioaktif  yang
terkandung dalam Daun Maja ( Aegle Marmelos L.) ( Waraney et al ., 2020 ) Desain penelitian ini adalah eksperimental posttest only control group design dikarenakan kondisi Zebrafish yang tidak cukup besar sehingga tidak bisa dilakukan pretest dan post test . Menurut penelitian yang dilakukan oleh ( Istriningsih & Ika 2021 ). Tentang Aktivitas Anti diabetes  Ekstrak  Rimpang  Kunyit  ( Curcuma Domestica Val.)  Pada  Zebrafish  ( Danio rerio ), menggunakan  metode post  test only  control group  design dimana  Hewan  uji  hanya  diukur sekali setelah dilakukan pemejanan senyawa uji dan digunakan kelompok kontrol negatif sebagai pembandingnya dengan menggunakan Zebrafish sebagai  hewan  uji,  karena  Zebrafish  memiliki model Metabolisme glukosa yang sama dengan manusia.
Hewan yang digunakan pada penelitian ini  adalah  Zebrafish  ( Danio  rerio )  karena memiliki  kesamaan  genetik  dan  fisiologis dengan  manusia.  Zebrafish  ( Danio rerio ) memiliki  beberapa  keunggulan  sebagai  hewan model,  yaitu  mudah  ditangani  dan  dipelihara dalam  kondisi  laboratorium,  kemampuan reproduksi  yang  tinggi  membuat  Zebrafish ( Danio  rerio )  mudah  berkembang  biak,  dan perawatannya  relatif  lebih  murah  dari  pada mencit  ( Utami  2018 ).  Menurut  penelitian  yang dilakukan oleh ( Seth dkk, 2013) mengungkapkan bahwa Zebrafish dan mamalia termasuk manusia memiliki  kemiripan  dalam  perangkat  biologis yang  berkaitan  dengan  gangguan  metabolik diabetes mellitus/ hiperglikemia. Organ pankreas pada  Zebrafish  yang  terdiri  dari  kompartemen eksokrin  dan  endokrinnya  dihubungkan  oleh sistem  saluran  yang  bermuara  ke  saluran pencernaan sama seperti mamalia. Zebrafish juga mengalami  kesulitan  dalam  meregenerasi  sirip kaudalnya, hal tersebut mirip seperti komplikasi yang  dialami  pada  manusia  penderita  diabetes mellitus.  Penderita  diabetes  mellitus  terkadang dapat  mengalami  komplikasi  berupa  sulitnya proses penyembuhan luka ( Seth et al., (2013 )
Penelitian ini terlebih dahulu Zebrafish diinduksi  untuk  meningkatkan  kadar  glukosa darah dengan menggunakan penginduksi berupa Aloxan  0,1%  dan  glukosa  1%  pada  semua kelompok  perlakuan.  Pemberian  Aloxan bertujuan untuk merusak sel β pankreas sehingga
produksi  insulin  menurun  yang  menyebabkan hiperglikemia pemberian glukosa untuk mempertahankan  kadar  glukosa  darah  lebih stabil.  Zebrafish  yang  digunakan  adalah Zebrafish dengan umur 4-6 bulan atau Zebrafish dewasa,  dipelihara  setidaknya  satu  minggu sebelum  dilakukan  percobaan  ( Burhan et  al., 2020 ). Zebrafish dibagi kedalam 6 kelompok dan masing-masing  kelompok  terdiri  dari  tiga  ekor Zebrafish.  Kelompok  1  tanpa  perlakuan (Normal),  kelompok  2  sebagai  kontrol  negatif yang  diberi  larutan  Aloxan  0,1%  dan  glukosa 1%, kelompok 3 sebagai kontrol positif diinduksi dengan Aloxan 0,1% + glukosa 1% + Metformin 100  µM,  kelompok  4  diberi  ekstrak  daun  maja 200  mg,  kelompok  5  diberi  ekstrak  daun  maja 300  mg  dan  kelompok  6  diberi  ekstrak  Daun Maja 400 mg.
Berdasarkan tabel 2 menunjukkan data hasil  pengamatan  pengukuran  kadar  glukosa darah  pada  Zebrafish  dari  ke  enam  kelompok perlakuan. Dari data tersebut dapat dilihat bahwa kadar glukosa darah Zebrafishrata-rata 54 mg/dL sebelum  diinduksi.  Kadar  glukosa  darah Zebrafish setelah diinduksi Aloxan dan glukosa berkisar  rata-rata  130  mg/dL.  Hal  tersebut menunjukkan bahwa Aloxan telah merusak sel β pankreas  Zebrafish.  Pemberian  glukosa  1% setelah  diinduksi  Aloxan  bertujuan  untuk mencegah  terjadinya  fase  hipoglikemia  pada Zebrafish.
Pemberian  ekstrak  daun  maja  200  mg didapat  kadar  glukosa  darah  Zebrafish  berkisar rata-rata  62,33  mg/dL,  pemberian  ekstrak  daun maja  300mg  didapat  kadar  glukosa  darah Zebrafish berkisar rata-rata 68 mg/dL, pemberian ekstrak Daun Maja 400 mg didapat kadar glukosa darah  Zebrafish  berkisar  rata-rata  67  mg/dL, sedangkan pada perlakuan kontrol positif dengan pemberian Metformin didapatkan kadar glukosa darah Zebrafish berkisar rata-rata 57,66 mg/dL. Dari    hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  kelompok  Zebrafish  yang  diberi  ekstrak daun  maja  200  mg,  300  mg,  400  mg,  dan kelompok  kontrol  (+)  yang  diberi  Metformin menyebabkan  kadar  glukosa  darah  Zebrafish Kembali  menjadi  normal  atau  tidak  berbeda nyata  dengan  kadar  glukosa  Zebrafish  yang normal.  Penurunan  kadar  glukosa  yang  paling tinggi  adalah  dengan  pemberian  Metformin tetapi dari uji statistika walaupun kadar glukosa darah  Metformin  lebih  rendah  namun  tidak berbeda  nyata  dengan  kelompok  yang  diberi ekstrak Daun Maja.
Jika  dilihat  dari  pemberian  ekstrak dengan  berbagai  konsentrasi  yang  berbeda menunjukkan  penurunan  kadar  glukosa  darah yang  paling  rendah  adalah  Ekstrak  Daun  Maja
200  mg  tetapi  dari  uji  statistika  tidak  berbeda nyata  dengan  Ekstrak  Daun  Maja  300  mg  dan 400 mg. Ekstrak Daun Maja 200 mg lebih bagus menurunkan  kadar  glukosa  darah  karena  hanya dengan  konsentrasi  yang  kecil  sudah  mampu memberikan  efek  yang  tidak  berbeda  nyata dengan  konsentrasi  lainnya.  Seiring  dengan peningkatan konsentrasi yang diberikan Dimana semakin  tinggi  konsentrasi  Ekstrak  Daun  Maja semakin  besar  efek  yang  diberikan,  seperti penelitian  yang  dilakukan  oleh  ( Darmiati  dkk, 2018 )  tentang  Efek  anti  diabetes  ekstrak  Daun Maja ( Aegle Marmelos L . Corr ) pada tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ) diabetes melitus tipe 2,  menunjukkan  bahwa  ekstrak  Daun  Maja efektif  dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah pada  mencit  karena  mengandung  alkaloid, flavonoid,  terpenoid,  saponin  dan  tanin  dengan pemberian  dosis  200  mg/kg,  400  mg/kg,  600 mg/kg.  dan  yang  efektif  menurunkan  kadar glukosa  darah  pada  mencit  adalah  600  mg/kg. Berdasarkan  uji  statistika  menunjukkan  bahwa ekstrak  daun  maja  dosis  200  mg/2L  yang memiliki  kemampuan  menurunkan  kadar glukosa  darah  karena  memiliki  kemampuan menurunkan  kadar  glukosa  darah  yang menyerupai kadar glukosa darah tanpa perlakuan (kadar glukos darah normal) dengan penurunan kadar glukosa darah yang efektif pada Zebrafish yaitu  dengan  dosis  yang  paling  rendah merupakan  hal  yang  baru  dari  penelitian  ini dibandingkan dengan penelitian sebelumnya.
Penurunan  kadar  glukosa  darah Zebrafish menunjukkan adanya efek farmakologis  bahwa  Ekstrak  Daun  Maja mempengaruhi  kadar  glukosa,  walaupun  kadar glukosa  yang  diberi  Metformin  masih  lebih besar.  Namun  pada  penelitian  ini  masih  belum diketahui  pasti  penyebab  peningkatan  kadar glukosa  darah  seiring  dengan  peningkatan konsentrasi  Ekstrak  Daun  Maja  karena  batasan masalah penelitian ini berfokus pada penurunan kadar glukosa darah pada Zebrafish.

## KESIMPULAN
Ekstrak  Daun  Maja  ( Aegle  marmelos L.) pada semua konsentrasi mampu menurunkan kadar  glukosa  darah  pada  Zebrafish  ( Danio rerio ) yang diinduksi Aloxan. Ekstrak daun maja ( Aegle marmelos L.) dengan konsentrasi 200 mg memiliki  efek  penurunan  lebih  optimal dibandingkan  dengan  kelompok  konsentrasi yang lain.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  konsentrasi  Ekstrak  Daun  Maja  yang efektif Dalam Menurunkan kadar glukosa darah padan  Zebrafish.  Serta  penyebab  peningkatan
kadar  glukosa  darah  Zebrafish  seiring  dengan peningkatan konsentrasi Ekstrak Daun Maja.

## DAFTAR PUSTAKA
Badaring,  D.  R.,  Puspitha,  S.,  Sari,  M., Nurhabiba, S., Wulan, W., Anugrah, S., Lembang, R., & Biologi, J. (2020). Uji Ekstrak  Daun  Maja  (Aegle  marmelos L.)  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri
Escherichia  coli  dan  Staphylococcus aureus . Indonesian Journal of
Fundamental Sciences, 6(1).
Burhan,  &  Maulita  dkk.  (2020). Uji  Aktivitas Antihiperglikemia Ekstrak Etanol Daun
Murbei  (Morus  alba  L.)  Terhadap
Zebrafish (Danio rerio) . Media Kesehatan Politeknik Kesehatan Makassar. 17(1); 1-32. Dermiati T dkk. Efek Anti diabetes Ekstrak Daun Maja  (Aegle  marmelos  L.  Corr)  Pada Tikus Putih Jantan (Rattus Norvegicus) Diabetes Melitus Tipe 2 . Farmakologika Jurnal Farmasi. 15(1). Diana  Holidah,  Fifteen  Aprila  Fajrin,  Siti Muslichah.  (2019). Uji  Aktivitas Ekstrak  Daun  Maja  (Aegle  Marmelos L.)  Terhadap  Kadar  Glukosa  Darah Dan Propil Lipig Tikus Diabetes Akibat
Induksi Aloxan . LSP-Conference Proceeding. UPT Penerbitan & Percetakan Universitas Jember, Gani, A. n.d. (2017) Uji Aktivitas Ekstrak Daun Legundi  Terhadap  Penurunan  Kadar Glukosa Darah pada Mencit . In Jurnal Ilmiah  Mahasiswa  Pendidikan  Kimia (JIMPK). 2(2).
Hasanah,  N.,  &  Novian,  D.  R.  (n.d.).(2020). Analisis  Ekstrak  Etanol  Buah  Labu Kuning  (Cucurbita  Moschata  D.) . Parapemikir  :  Jurnal  Ilmiah  Farmasi. 9(1).
Hasanah, A. N., Martha, P. A., Saptarini, N. M., Aryanti, A. D., Aliya, K. :, & Hasanah, N. (2016). Optimasi Kondisi Pemisahan Glibenklamid  Kombinasi  Metformin dengan  KCKT-SPE  MIP  Akrilamid .  In IJPST. 3(2).
Hayati,  F.,  Putri,  C.  A.,  Awaluddin,  R., Maizulfiani,  A.,  &  Dwi  Dharma,  D.
(2017). Pengembangan Metode Uji Anti Hiperglikemia Dengan Zebrafish . Prosiding  Seminar  Nasional  seri  7.  In
Menuju  Masyarakat  Madani  dan Lestari.115 Istriningsih, E., & Ika Kurnianingtyas Solikhati, D.  (2021). Aktivitas  Anti  diabetes Ekstrak  Rimpang  Kunyit  (Curcuma Domestica Val.) Pada Zebrafish (Danio Rerio) .  Jurnal  Ilmiah  Farmasi.  10(1);
60-65.
Nathaniel  Nangoy,  B.,  de  Queljoe,  E.,  & Yudistira, A. (2019). Uji Aktivitas Anti diabetes Dari Ekstrak Daun Sesewanua (Clerodendron Squamatum Vahl.)
Terhadap  Tikus  Putih  Jantan  Galur Wistar  (Rattus  Norvegicus  L ).jurnal pharmacon 8(4). Pitriya, I. A., & Mulyani, S. (2017). Efek Ekstrak Buah  Kelor  (Moringa  oleifera  ) Terhadap  Penurunan  Kadar  Gula Darah  Mencit  (Mus  musculus) .  Jurnal Akademika Kimia. 6(1); 35 - 42. Seth,  A.,  Stemple,  D.  L.,  &  Barroso,  I.  (2013).
The emerging use of Zebrafish to model metabolic  disease.  In  DMM  Disease Models  and  Mechanisms .  Disease models & mecanisms. 6(5). Sudradjat, S. E., Rahayu, I. Evaluasi Antioksidan Dan  Anti  diabetes  Infusa  Daun Karamunting (Rhodomyrtus Tomentosa (Aiton) Hassk.) Pada Ikan Zebra (Danio Rerio) .In Herb-Medicine Journal. 5(2) Utami  N.  (2018). Zebrafish  (Danio  Rerio)
Sebagai  Hewan  Model  Diabetes Mellitus. Pusat Penelitian Bioteknologi LIPI. 9(1).
Waraney  T  dkk  (2020). Rendemen  Ekstrak  Air Rebusan Daun Tua Mangrove Sonneratia  Alba .  Jurnal  Perikanan  dan Kelautan Tropis. 11(1).
Yuniarto,  A.,  Yulinah  Sukandar,  E.,  Fidrianny,
I.,  &  Ketut  Adnyana,(2017). Aplikasi Zebrafish (Danio rerio) pada Beberapa Model  Penyakit  Eksperimental .  In Media  Pharmaceutica  Indonesiana. 1(3).
Open  Access  This  article  is  licensed  under  a  Creative  Commons Attribution  4.0  International  License,  which  permits  use,  sharing, adaptation, distribution, and reproduction in any medium or format, as long  as  you  give  appropriate  credit  to  the  original  author(s)  and  the source, provide a link to the Creative Commons license, and indicate if
changes were made. The images or other third-party material in this article are included in the article’s Creative Commons license unless indicated otherwise in a credit line to the material. If material is not included in the article’s Creative Commons license and your intended use is not permitted by statutory regulation or exceeds the permitted use, you will need to obtain permission directly from the copyright holder. To view a copy of this license, visit http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.