## PEMANFAATAN UREA SEBAGAI SUMBER NITROGEN PADA BIOSOLUBISASI BATUBARA OLEH Trichoderma sp.
Novi Mulyawati 1 , Megga Ratnasari Pikoli 1 , Irawan Sugoro 2* dan Pingkan Aditiawati 3
1 Prodi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2 Pusat Aplikasi Teknologi Isotop dan Radiasi, BATAN Pasar Jumat
3 Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati, Institut Teknologi Bandung
*Corresponding author: irawansugoro@gmail.com

## Abstract
Lignite  coal  was  found  abundant  in  Indonesia,  but  usage  for  this  type  of  coal  was  still  relatively low. Economic value of coal increases when it is solubilized. Biosolubilization of coal by utilize of microbes produces compounds equivalent to petroleum. In this research, effect of urea on lignite biosolubilization  by  Trichoderma  sp.  was  examined.  Method  of  this  research  consisted  of  spore inoculum  preparation,  biosolubilization  lignite  coal  with  a  variety  of  treatment  that  consists  of treatment A (MSS + sucrose  1% + coal 5% + urea), and treatment B (MSS + sucrose  1% + coal 5%).  Results  showed  that  the  addition  of  urea  supported  lignit  coal  biosolubilization  by Trichoderma  sp.  based  on  increase  in  medium  pH,  concentration  of  phenolic  and  conjugated aromatic  compounds,  and  activity  of  extracellular  enzyme.  In  addition,  result  of  product characterization  using  GCMS  revealed  compounds  equivalent  to  13,60%,  26,20%  and  90,8% respectively for gasoline, kerosene and diesel components. Those confirmed that urea can be used as an alternative nitrogen source to support Trichoderma sp. in lignit biosolubilization producing petroleum compounds.
Keywords : Biosolubilization, lignite, urea, Trichoderma sp.
________________________________________________________________________________

## PENDAHULUAN
Semakin beragamnya kebutuhan energi  yang  dibutuhkan  untuk  mendukung aktivitas  kehidupan  modern  yang  semakin kompleks,  maka  kebutuhan  akan  energi cenderung terus meningkat. Batubara merupakan  sumber  energi  penting  di  dunia selain  gas  alam  dan  minyak  bumi . Saat  ini batubara  menjadi  sumber  energi  alternatif yang  potensial,  khususnya  di  wilayah Indonesia.  Oleh  karena  itu, peran  batubara sebagai  sumber  energi  terus  mengalami peningkatan  dari  41  juta  ton  di  tahun  2005 menjadi  67  juta  ton  di  tahun  2010. Berdasarkan  data  struktur  energi  nasional, porsi  batubara  pada  tahun  2005  sebesar  19% dan  naik  menjadi  23%  pada  tahun  2010. Tahun  2025  porsi  itu  ditargetkan  terus meningkat  hingga  mencapai  33%,  namun cadangan  batubara  Indonesia  diperkirakan
habis  dalam  80  tahun  ke  depan  (ESDM,
2012). Cadangan batubara Indonesia
didominasi  oleh  jenis  lignit  sebesar  59%, subbituminus  sebesar  27%,  dan  bituminus mencapai  14%,  sedangkan  antrasit  kurang dari  0,5% (ESDM,  2010) .  Batubara  lignit banyak  digunakan  untuk  pembangkit  tenaga listrik dan panas. Akan tetapi, emisi gas yang dihasilkan  dari  pembakaran  batubara  lignit secara  langsung  menghasilkan  senyawa berbahaya bagi lingkungan seperti terbentuknya  gas sulfur  oksida  (SOx), nitrogen oksida  (NOx),  karbon  dioksida (CO 2 )  dan  logam  berat  (Xu et  al., 2000). Oleh karena itu, dibutuhkan satu penanganan teknologi  yang  dapat  menghasilkan  produk bersih  dari  pengolahan  batubara  lignit  yang tidak mencemari lingkungan.
Biosolubilisasi merupakan suatu teknologi pencairan batubara dengan memanfaatkan  mikroba  sehingga  diperoleh sumber  energi  dengan  produk  bersih.  Produk biosolubilisasi  yang  berupa  cairan  hitam menyimpan 97,5% dari nilai pemanasan lignit mentah  (Shi et  al .,  2009).  Biosolubilisasi memiliki keuntungan yang lebih dibandingkan dengan proses liquifaksi termal.
Beberapa  keuntungan  yang  diperoleh  dari proses biosolubilisasi yaitu prosesnya dilakukan  dalam  kondisi  suhu  dan  tekanan atmosfer,  mikroba  dapat  menggunakan hidrogen  dari  air  dan  tidak  membutuhkan energi  eksternal  hidrogen  untuk  membentuk lignit tersolubilisasi (Fakoussa, 1999).
Hasil  solubilisasi  yang  rendah  dan dibutuhkannya  waktu  konversi  yang  lama menjadi  hambatan  dalam  mengembangkan biosolubilisasi  batubara.  Selain  itu,  jenis batubara  yang  berbeda  untuk  setiap  lokasi menjadi  salah  satu  faktor  lama  atau  tidaknya proses biosolubilisasi berlangsung. Salah satu cara untuk mengatasi masalah tersebut adalah dengan  memanfaatkan  kapang  indigenus  di pertambangan  batubara  karena  secara  alami telah  teradaptasi  dengan  substrat  batubara (Sugoro et  al .,  2011).  Jenis  kapang  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu Trichoderma sp.  yang  merupakan  koleksi laboratorium Mikrobiologi BATAN.
Berdasarkan  penelitian  Sugoro et  al., (2011)  telah  diketahui  bahwa  kapang Trichoderma sp.  memiliki  kemampuan tertinggi  dalam  mengsolubilisasi  batubara. Selain  itu,  menurut  Erida  (2010)  kapang Trichoderma sp.  mampu  mensekresikan enzim lakase dan mangan peroksidase selama proses  biosolubilisasi.  Hal  tersebut  didukung pula  dari  hasil  isolasi  dan  seleksi  pada penelitian  Yuslida  (2011)  yang  menunjukkan bahwa  telah  diperoleh  isolat  kapang Trichoderma sp.  yang  berpotensi  sebagai agen  biosolubilisasi  batubara  lignit.  Namun, produk  yang  dihasilkan  masih  dalam  jumlah yang sangat kecil.
Proses  biosolubilisasi  batubara  lignit dengan  menggunakan  kapang  bergantung pada kandungan nitrogen yang terdapat dalam medium. Oleh karena itu, dalam penelitian ini
digunakan sumber nitrogen anorganik berupa urea  sebagai  sumber  nitrogen  untuk menunjang  proses  biosolubilisasi  tersebut. Jenis sumber nitrogen urea digunakan karena mudah didapatkan dengan kondisi harga yang relatif lebih terjangkau, Selain itu,
penambahan  sumber  nitrogen  urea  juga dimaksudkan untuk membantu proses biosolubilisasi  batubara  sehingga  dapat menghasilkan  produk  biosolubilisasi  yang lebih bersih dan lebih tinggi.

## MATERIAL DAN METODE
Alat  utama  yang  digunakan  adalah, Spektrofotometer UV-Vis , mikroskop berkamera Novel, Laminar Air Flow Cabinet (LAFC),  pH  meter dan Gas  Chromatograph Mass  Spectrometer (GCMS)  untuk  analisa senyawa    hidrokarbon  hasil biosolubilisasi. Bahan yang  digunakan  adalah  batubara  jenis lignit dengan ukuran 100 mesh, isolat kapang Trichoderma sp.  koleksi  Laboratorium Mikrobiologi BATAN, medium MSS ( Minimal Salt Solution : 0,52 g MgSO4.7H2O,  5  g  KH2PO4,  0,005  g
FeSO4.7H2O,  0,003  g  MnCl2.4H2O  dan 0,003  g  ZnSO4.7H2O  lalu  ditambah akuades hingga volumenya mencapai 1000 ml dan pH 5,5),  medium SDMA  ( Sabouraud  Dextrose Agar : MSS (1 : 1) + serbuk batubara 0,1%), medium  MSS+ (MSS  +  sukrosa  0,1  %  + batubara  5%),  urea,  benzena, heksana,  dietil eter dan aseton proanalis.
Isolat kapang Trichoderma sp. koleksi Laboratorium
Mikrobiologi
BATAN
ditumbuhkan  pada  medium  yang  terdiri  dari SDMA, MSS dan batubara 1% dalam tabung reaksi untuk memperbanyak spora. diinkubasi pada  suhu  ruang  selama  7  hari  sampai menghasilkan  spora.  Selanjutnya  spora kapang  dilepaskan  dengan  menggunakan NaCl  0,85%  dan  diinokulasikan  ke  dalam medium  MSS+  dengan  jenis  perlakuan  A (MSS++Urea)  dan  B  (MSS+).  Kemudian medium kultur diinkubasi dengan menggunakan shaking incubator dengan agitasi  120  rpm  dan  disimpan  pada  suhu kamar  selama  21  hari.  Proses  pencuplikan dilakukan pada hari ke-0, 3, 6, 9, 13, 15, 17, dan  21  untuk  dilakukan  pengukuran
parameter  pH,  kolonisasi,  kadar  senyawa fenolik  dan  aromatik  terkonjugasi,  kadar protein ekstraseluler, aktivitas enzim ekstraseluler  serta  analisis  produk  hasil biosolubilisasi dengan menggunakan GCMS.
Pengukuran  kadar  senyawa  fenolik dan  aromatik  terkonjugasi  dilakukan  dengan menyaring medium kultur sehingga didapatkan supernatan yang selanjutnya diuku menggunakan
Spektrofotometer UV-Vis dengan  panjang  gelombang  250  nm  untuk senyawa  fenolik  dan  450  nm  untuk  senyawa aromatik  terkonjugasi.  Pengukuran  kadar protein  dan  aktivitas  enzim  ekstraseluler digunakan supernatan dengan waktu pencuplikan  yang  memiliki  nilai  kadar senyawa  fenolik  dan  aromatik  tinggi. Selanjutnya  untuk  pengukuran  kadar  protein dan  aktivitas  enzim  ekstraseluler,  supernatan yang  diperoleh  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi  sebanyak  1  mL  untuk  direaksikan dengan  reagen  Lowry  dan  FDA.  Kemudian diukur dengan
menggunakan
Spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang  750  nm  dan  490  nm (Breeuwer, 1996).
Analisis  produk  hasil  biosolubilisasi batubara  oleh  kapang Trichoderma sp. dilakukan  dengan  menggunakan  GCMS. Pelarut  yang  digunakan  adalah  campuran benzena:heksana:dietil eter dengan perbandingan 3:1:1. Supernatan hasil biosolubilisasi  ditambahkan  pelarut  dengan perbandingan  1:1.  Selanjutnya  campuran dikocok dan didiamkan beberapa saat sampai terbentuk  fase  atas  dan  bawah. Fase  atas dipakai untuk mengidentifikasi jenis senyawa dan  menetukan  kadar  hasil  solubilisasi batubara  dengan  menggunakan  GCMS. Adapun  tujuan  dilakukannya  analisis  ini diantaranya  untuk  memisahkan  senyawa kimia produk biosolubilisasi dan menentukan struktur kimianya (Silva et al., 2007).
HASIL DAN PEMBAHASAN pH  Medium  dan  Kolonisasi  Miselium Kapang Trichoderma sp.
Berdasarkan  data  pH,  biosolubilisasi yang  telah  dilakukan  dari  kedua  medium perlakuan menghasilkan nilai pH yang relatif
asam. Nilai pH awal yang terukur pada waktu inkubasi  hari  ke-0  yaitu  4,40  dan  4,46. Selanjutnya  nilai  pH  mengalami  peningkatan dari  kedua  perlakuan  ini  hingga  hari  ke-3 menjadi 5,56 dan 4,48. Kemudian pada waktu inkubasi  hari  ke-6  hingga  akhir  waktu inkubasi,  nilai  pH  dari  kedua  medium perlakuan  cenderung  stasioner  (Gambar  1.). Hal  tersebut  didukung  pula  dengan  hasil pengamatan  mikroskopis  yang  menunjukkan terjadinya  kolonisasi  miselium  kapang ditandai  dengan  adanya  potensi  untuk mengikat  batubara  (Gambar  2).  Kolonisasi miselium  kapang  yang  terjadi  selama  masa inkubasi  21  hari  menunjukkan  hasil  yang berbeda  dari  kedua  medium  perlakuan.  Hasil terbaik  terlihat  pada  medium  perlakuan  B (kontrol) pada hari ke-9 dengan nilai pH 4,41.
Nilai  pH  tertinggi  terdapat  pada perlakuan  A  (urea)  dengan  hasil  laju peningkatan  pH  medium  sebesar  0,387/hari. Perubahan nilai pH pada medium perlakuan A (Gambar 1) terjadi karena adanya pertumbuhan  dan  aktivitas  metabolisme  dari kapang Trichoderma sp.  yang  dapat mendegradasi  senyawa  kompleks  batubara menjadi  senyawa  yang  lebih  sederhana.  Hal tersebut  didukung  dengan  adanya  hasil kolonisasi  miselium  kapang Trichoderma sp. (Gambar  2)  yang  mampu  tumbuh  dan mengkolonisasi  dengan  batubara.  Terjadinya peningkatan nilai pH pada perlakuan A terjadi karena  adanya  komposisi  senyawa  urea  yang memiliki 2 gugus amina dan berikatan dengan gugus  fungsi  karbonil  yang  memiliki  sifat alkali  (Gibb,  2009). Penurunan  pH  yang terjadi  pada  kedua  medium  dapat  disebabkan terbentuknya  asam-asam  organik  dan  juga telah  terjadinya  proses  desulfurisasi.  Dimana sulfur  dalam  batubara  terlarut  ke  dalam medium cair dalam bentuk ion sulfat sehingga terbentuk asam sulfat (Hammel, 1996).
Kadar  Senyawa  Fenolik  dan  Aromatik Terkonjugasi
Hasil  pengukuran  nilai  absorbansi senyawa  fenolik  dan  aromatik  terkonjugasi terlihat  pada  Gambar  2  dimana  dalam grafiknya  menunjukkan  terbentuknya  pola perubahan  yang  berbeda  antara  kedua medium perlakuan. Peningkatan nilai
absorbansi perlakuan A (urea) untuk senyawa fenolik  terjadi  dari  awal  waktu  inkubasi hingga  hari  ke-9,  selanjutnya  terjadi penurunan  hingga  akhir  waktu  inkubasi. Perlakuan  B  (kontrol)  memiliki  peningkatan nilai absorbansi pada hari ke-0 hingga hari ke- 6, selanjutnya terjadi penurunan hingga akhir waktu inkubasi seperti pada perlakuan A. Pola perubahan  yang  terjadi  pada  pengukuran kadar  senyawa  aromatik  terkonjugasi  untuk perlakuan A mengalami peningkatan dari hari ke-0  hingga  hari  ke-3,  sedangkan  untuk perlakuan B terjadi pada hari ke-0 hingga hari ke-9.  Selanjutnya  penurunan  nilai  absorbansi terjadi pada hari ke-6 hingga hari ke-21 untuk perlakuan A dan perlakuan B terjadi pada hari ke-13 hingga akhir waktu inkubasi.
Terjadinya  penurunan  pH  didukung pula  dengan  hasil  pengukuran  absorbansi senyawa  fenolik  dan  aromatik  terkonjugasi. Nilai  absorbansi  senyawa  fenolik  dan aromatik tertinggi  terdapat pada perlakuan A (urea)  berdasarkan  nilai laju  sebesar
0,133/hari  dan  0,237/hari  Adanya  aktivitas biosolubilisasi lignit oleh
kapang Trichoderma sp.  mengakibatkan  terlarutnya batubara yang bercampur dengan medium dan menyebabkan  terlepasnya  senyawa  yang mengandung gugus fenolik maupun aromatik. Batubara  yang  terlarut  mengakibatkan perubahan  warna  pada  medium.  Pengukuran kadar  senyawa  fenolik  memiliki  nilai absorbansi  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  pengukuran  senyawa  aromatik terkonjugasi  (Gambar  2).  Perbedaan  nilai
absorbansi  menunjukkan  adanya  perbedaan tingkat  biosolubilisasi  batubara  lignit  oleh kapang  melalui  aktifitas  enzim  ekstraseluler menjadi suatu produk yang dapat melarut atau mencair. Terjadinya  biosolubilisasi  batubara dapat  dilihat  dari  adanya  perubahan  gugus fungsi  batubara.  Menurut  Scott  &  Lewis (1990), perubahan ini disebabkan biosolubilisasi  yang  dilakukan  oleh  kapang terhadap  batubara  yang  merupakan  proses oksidatif.  Struktur  lignit  didegradasi  menjadi senyawa  fenolik  dan  alifatik  lignin  hasil degradasi cincin aromatik.

## Kadar Protein Ekstraseluler
Grafik  pada  gambar  menunjukkan adanya  pola  perubahan  yang  berbeda  antara perlakuan A (urea) dan perlakuan B (kontol). Nilai  kadar  protein  ekstraseluler  tertinggi  di peroleh  pada  perlakuan  B  dengan  nilai  0,291 mg/mL  pada  waktu  inkubasi  hari  ke-6. Perlakuan  A  mengalami  perubahan  yang cenderung  tidak  berfluktuatif  karena  antara peningkatan  dan  penurunan  nilai  absorbansi bersifat stabil.
Berbeda  halnya  dengan  pengukuran kadar  aktivitas  enzim  ekstraseluler,  nilai aktivitas  enzim  tertinggi  diperoleh  pada perlakuan  A  dengan  nilai  1,156 µ g/mL  pada waktu  inkubasi  hari  ke-15.  Pola  perubahan yang  terjadi  pada  Gambar  4  menunjukkan adanya  pola  yang  hampir  sama  antara medium perlakuan A dan B yaitu sama-sama mengalami peningkatan pada hari ke-0 hingga hari ke-9, akan tetapi nilai terus mengalami
Gambar  1 .  pH  medium    perlakuan  A  (medium  MSS+  +  urea)  dan  B  (Kontrol)  yang  diinkubasi pada suhu kamar dan agitasi 120 rpm
Gambar 2. Kolonisasi miselium kapang Trichoderma sp. pada harike-9 dalam medium perlakuan A  (medium  MSS+  +  urea)  dan  B  (Kontrol)  yang  diinkubasi  pada  suhu  kamar  dan agitasi 120 rpm. (spora: tanda panah hijau ; miselia; tanda panah biru; batubara: tanda panah  merah ;  perbesaran 400 x)
Gambar 3 . Pengukuran kadar senyawa fenolik dan aromatik terkonjugasi pada medium  perlakuan A (medium MSS+ + urea) dan B (Kontrol) yang diinkubasi pada suhu kamardan agitasi 120 rpm
Gambar 4 . Pengukuran kadar protein ekstraseluler dengan Lowry dan aktivitas enzim ekstraseluler dengan  FDA  terhidrolisis  pada  medium    perlakuan  A  (medium  MSS+  +  urea)  dan  B (kontrol) yang diinkubasi pada suhu kamar dan agitasi 120 rpm
peningkatan  pada  medium  A  hingga  hari  ke- 15  setelah  itu  terjadi  penurunan  hingga  akhir waktu  inkubasi.  Perlakuan  B  mengalami penurunan dari hari ke- A B
13  hingga  ke-15,  setelah  itu  terjadi  sedikit peningkatan  pada  hari  ke-17  dan  terjadi penurunan kembali di akhir waktu inkubasi. Perubahan  kadar  protein  ekstraseluler  dari kedua medium perlakuan memiliki nilai yang berbeda  (Gambar  3).  Kadar  protein  tertinggi terdapat  pada  perlakuan  B  (kontrol) berdasarkan nilai laju peningkatan di hari ke- 6  sebesar  0,257  mg/mL.  Penurunan  kadar protein  ekstraseluler  terjadi  akibat  adanya penggunaan  protein  sebagai  sumber  nutrisi bagi  kapang Trichoderma sp.  Protein ekstraseluler  yang  terdapat  dalam  medium perlakuan  didegradasi  oleh  kapang  sebagai sumber  nitrogen  yang  digunakan  untuk pertumbuhannya.  Terjadinya  penurunan  pH medium  juga  dapat  mempengaruhi  aktivitas enzim  yang  dihasilkan  dari  metabolisme kapang. Nilai absorbansi tertinggi terjadi pada perlakuan  A  yang  ditambahkan  sumber nitrogen  urea  berdasarkan laju  peningkatan aktivitas  enzim  ekstraseluler  1,079 µ g/hari . Meningkatnya  nilai  absorbansi  aktivitas enzim  ekstraseluler  dapat  pula  disebabkan oleh meningkatnya
jumlah enzim pendegradasi  lignin  yang  dihasilkan  oleh kapang Trichoderma sp.  Berdasarkan  grafik yang diperoleh pada Gambar 4 terlihat adanya pola  perubahan  yang  fluktuatif  dari  kedua medium  perlakuan.  Hal  ini  terjadi  karena komposisi  senyawa  batubara  yang  bersifat kompleks dan heterogen sehingga mengakibatkan  enzim  yang  diproduksi menjadi berbeda-beda (Laborda et al ., 1999). Analisis Produk Hasil Biosolubilisasi Sampel  yang  digunakan  pada  analisis dengan  GCMS  adalah supernatan  yang memiliki  nilai  hasil  absorbansi  senyawa fenolik terbesar yaitu masing- masing terletak pada  hari ke-9  dari  waktu  inkubasi.  Hasil identifikasi dengan GCMS menunjukkan pada perlakuan  A  (urea)  terdeteksi  18  senyawa hidrokarbon
sedangkan pada kontrol terdeteksi 16 senyawa.
Pada kontrol terdapat senyawa dengan rantai  karbon  panjang yang  tidak  terdapat pada  perlakuan  A  yaitu 1,2-Benzenadi carboxylic  acid,  butil  desil  ester  (C 22 H 34 O 4 ), n-Tetrakosana  (C 24 H 50 ),  dan  9-Oktilhepta dekana  (C 25 H 52 ). Senyawa  terdeteksi  dengan
luas  area  tertinggi  dengan  nilai  13,61%  pada perlakuan  A  yaitu  senyawa 1-Dokosana (C 22 H 44 ),  sedangkan  pada perlakuan  B  yaitu 1,2-Benzenadicarboxylic acid, butil desil ester (C 22 H 34 O 4 ) persentase  luas  area  15,43%. Berdasarkan  nilai  persentase  area  yang didapatkan dan
mengacu pada pengelompokan  jenis  bahan  bakar  dari American Testing Society (2009), dari kedua medium  perlakuan  menghasilkan  senyawa  – senyawa yang mirip dengan fraksi bensin (C 7 - C 11 ), fraksi kerosin (C 12 -C 15 )  dan fraksi solar (C 10 -C 24 ).  Hasil  tertinggi  diperoleh  pada perlakuan  A  dengan  nilai  13,60%  fraksi bensin,  26,20%  fraksi  kerosin,    dan  90,8% fraksi solar.
Peningkatan  kadar  senyawa  fenolik yang  terjadi  pada  Gambar  2  didukung  pula dari hasil analisis GCMS supernatan medium yang  menunjukkan  adanya  senyawa-senyawa baru  yang  berasal  dari  batubara.  Adanya penurunan komposisi dan konsentrasi senyawa mengindikasikan
terjadinya biosolubilisasi.  Proses  biosolubilisasi  ini menyebabkan  pemutusan  rantai  karbon  oleh kapang  menjadi  rantai  yang  lebih  sederhana dan  sebagian  digunakan  untuk  proses metabolisme  kapang  dimana  selama  masa inkubasi  kapang  menggunakan  sumber karbon pada senyawa batubara tersebut untuk proses metabolismenya. Terbentuknya senyawa  aromatik,  alifatik  serta  fenolik  yang dihasilkan pada biosolubilisasi ini merupakan indikasi adanya aktivitas metabolisme kapang Trichoderma sp. yang terdapat dalam medium perlakuan.  Hasil  analisis  dengan  GCMS menunjukkan  bahwa  medium  perlakuan  A memiliki  senyawa  yang  lebih  banyak  dari pada  perlakuan  B,  dan  memiliki  jumlah persentase  area  tertinggi  pada  jenis  senyawa yang setara dengan fraksi bensin, kerosin dan solar  yaitu  13,6%,  26,2%,  dan  90,2%. Berdasarkan  hasil  tersebut,  urea  dapat dijadikan  sumber  nitrogen  alternatif  untuk menunjang  proses  biosolubilisasi  batubara lignit oleh kapang Trichoderma sp.

## KESIMPULAN
Urea  dapat  dijadikan  sumber  nitrogen alternatif untuk menunjang proses
biosolubilisasi  batubara  lignit  oleh  kapang Trichoderma sp.  berdasarkan  berdasarkan hasil  laju  peningkatan  pH  medium  sebesar 0,387/hari,  laju  absorbansi  senyawa  fenolik
0,133/hari dan aromatik terkonjugasi 0,237/hari,  laju  peningkatan  aktivitas  enzim ekstraseluler  1,079 µ g/hari,  serta  hasil karakterisasi produk GCMS yang menghasilkan produk setara dengan komponen  bensin,  kerosin  dan  solar  sebesar 13,60%, 26,20% dan 90,8% area.

## DAFTAR PUSTAKA
______.  (2012). Hand  Book  of  Energy  & Economic Statistics of Indonesia 2012 American Testing Society (ATS). 2009 . Coal . http://www.ats.org.
Breeuwer  P.  (1996).  Assesment  of  Viability of  Microorganism  Employing  Fluores cein  Techniques.  Germany:  Wage ningen.
Erida,  Y.  (2010).  Karakterisasi  Enzim Ekstraseluler  dan  Produk  Biosolubi lisasi  Batubara  Hasil  Iradiasi  Gamma Oleh  Kapang Pennicillium sp.  dan Trichoderma sp. Skripsi .  Jurusan Biologi  Fakultas  sains  dan  Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Erida,  Y.  (2010).  Karakterisasi  Enzim Ekstraseluler  dan  Produk  Biosolu bilisasi  Batubara  Hasil  Iradiasi Gamma Oleh Kapang Pennicillium sp. dan  Trichoderma  sp. Skripsi .  Jurusan
Biologi  Fakultas  sains  dan  Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. ESDM, (2010). Memanfaatkan batubara agar lebih  ramah  lingkungan .  [online] http://www.esdm.go.id. (7 April 2012)
Fakoussa,  R.  &  Hofrichter,  M.,  (1999).
Biotechnology and  Microbiology  of Coal  Degradation. Appl.  Microbiol. Biotech . 52, 25-40.
Gibb,  B.  C.  (2009).  Teetering  towards  chaos and complexity". Nature Chemistry , 1: 17- 18.
Hammel,  K.  E.  (1996).  Extracelluler  Free Radicalbiochemistry  of  Ligninolytic Fungi. New J Chem . 20, 195-198.
Laborda,  F.,  Monistrol,  I.  F.,  Luna,  M., Fernandez,  M.  (1999).  Process  of liquefaction  or  solibilization  of spanish  coal  by  microorganism. Appl. Microbiol. Biotechnol. 57, 49-56. Scott,  C.  D  &  Lewis,  S.N.  (1990).
Solubilization of  Coal  by  Microbial
Action. In:  Wise,  L..D.  (editor).
Bioprocessing and  Biotreatment  of Coal. Marcel Dekker Inc.New York Shi, K. Y., Tao, X. X., Yin, S.D. & Du, Z.P. (2009).  Bio-solubilization  of Fushun lignite. The 6th Proceeding Conference  on  Mining  Science  dan Technology in Procedia Earth Planet. Sci. I. 627-633.
Silva,  M.E.,  Vengadajellum,  C.  J.,  Janjua, H.A., Harrison, S. T. L., Burton, S.G. &  Cowan,  D.A.  (2007).  Degradation of  low rank  coal  by  Trichoderma atroviride ES11. J.  Indus.  Microbiol. Biotech. 34, 625-631.
Sugoro,  I.,  Sasongko,  D.,  Indriani  D.,  &  P Aditiawati,  P.  (2011). Isolasi  dan Seleksi  Fungi  dari  Pertambangan Batubara sebagai Agen Biosolubilisasi Batubara dalam Laporan  Penelitian  Hibah  Unggulan Strategis Nasional Tahap I. ITB.Bandung Xu,  X.H.,  Chen,  C.  H.,  &  Qi,  H.Y.  (2000). Development  of  Coal  Combustion
Pollution Control for SO2 and NOx in China. Fuel  Proces.  Tech. 62(2/3),
153-160.
Yuslida,  R.  (2011).  Biosolubilisasi  batubara
Lignit Hasil Interaksi Kapang Trichoderma sp.  dengan  mikroba indigenous. Skripsi .  Jurusan  Biologi Fakultas  Sains  dan  Teknologi  UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.