## UJI KEPEKAAN BAKTERI YANG DIISOLASI DAN DIIDENTIFIKASI DARI URIN PENDERITA INFEKSI SALURAN KEMIH DI RSUP PROF. DR. R. D. KANDOU MANADO TERHADAP ANTIBIOTIK AMOKSISILIN, GENTAMISIN DAN SEFTRIAKSON
Florecia Angela Sondakh 1) , Fatimawali 1) , Defny Silvia Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Urinary tract infection is one of the most infectious diseases, which are found after a respiratory tract infection. Urinary Tract Infection is the state of where the microorganisms was discover in human urine within a certain amount. The use of antibiotics is the main choice in the treatment of urinary tract infections. The purpose of this study were to isolated and identified the bacteria from the urine of patients with  urinary  tract  infection  and  to  test  the  sensitivity  of  the  bacteria  against  the  antibiotic  Amoxicillin, Gentamicin and Ceftriaxone. Bacteria were obtained from the urine sample of three patents with urinary tract infection and sample were identifying using biochemical test and Gram staining. Susceptibility test of  bacteria  was  performing  using  disc  diffusion  with  the  antibiotic  amoxicillin,  gentamicin,  and ceftriaxone.  The  result  obtained  three  types  of  bacteria  such  as  Escherichia  coli,  Klebisella  sp.  and Proteus mirabillis, which the highest sensitivity shown to gentamicin (100%) and the highest resistence was to ceftriaxone (100%).
Keywords : Urinary tract infection, Sensitivity, Bacteria, Antibiotic

## ABSTRAK
Infeksi  saluran  kemih  merupakan  salah  satu  penyakit  infeksi  kedua  terbanyak  yang  sering ditemukan  setelah  infeksi  saluran  napas.  Infeksi  Saluran  Kemih  adalah  keadaan  ditemukannya mikrorganisme  di  dalam  urin  dalam  jumlah  tertentu.  Penggunaan  antibiotik  ialah  pilihan  utama  dalam pengobatan  infeksi  saluran  kemih.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melakukan  isolasi  dan  identifikasi bakteri  dari  urin  pasien  penderita  infeksi  saluran  kemih  dan  melakukan  uji  kepekaan  bakteri  tersebut terhadap antibiotik Amoksisilin, Gentamisin dan Seftriakson. Bakteri yang didapatkan dari 3 sampel urin infeksi  saluran  kemih  dilakukan  identifikasi  menggunakan  uji  biokimia  dan  pewarnaan  gram.  Uji kepekaan bakteri menggunakan difusi cakram dengan antibiotik amoksisilin, gentamisin dan seftriakson. Hasil  penelitian  didapatkan  3  jenis  bakteri  yaitu Escherichia  coli , Klebisella sp.  dan Proteus  mirabillis dengan  sensitivitas  tertinggi  terhadap  gentamisin  (100%)  dan  resisten  tertinggi  terhadap  seftriakson (100%).
Kata kunci : Infeksi Saluran Kemih, Kepekaan, Bakteri, Antibiotik

## PENDAHULUAN
Infeksi  Saluran  Kemih  (ISK)  adalah keadaan  ditemukannya  mikrorganisme  di dalam  urin  dalam  jumlah  tertentu.  Dalam keadaan normal, urin mengandung mikroorganisme, umumnya sekitar 100 bakteri/mL  urin.  Pasien  didiagnosis  infeksi saluran kemih bila urinnya mengandung lebih dari  100.000  bakteri/mL  (Coyle  dan  Prince., 2005).
Penyakit infeksi saluran kemih merupakan  masalah  kesehatan  masyarakat  di Indonesia  yang  perlu  mendapatkan  perhatian yang serius. Diperkirakan 8% anak wanita dan 2% anak laki-laki pernah mengalami ISK pada masa kanak-kanaknya (Travis  LB dkk, 1996). Sekitar  150  juta  penduduk  di  seluruh  dunia tiap  tahunnya  terdiagnosis  menderita  infeksi saluran kemih. Prevalensinya sangat bervariasi berdasarkan  umur  dan  jenis  kelamin,  dimana infeksi saluran kemih lebih sering terjadi pada wanita  dibandingkan  dengan  pria  karena perbedaan anatomis antara keduanya (Rajabnia  dkk,  2012).  Total  penderita  infeksi saluran  kemih  di  Kota  Manado  pada  tahun 2013-2014  sebanyak  773  penderita  (Anonim, 2015).
Penggunaan  antibiotik  ialah  pilihan utama  dalam  pengobatan  infeksi  saluran kemih.  Pemakaian  antibiotik  secara  efektif dan  optimal  memerlukan  pengertian  dan pemahaman  mengenai  bagaimana  memilih dan memakai antibiotik secara benar. Antibiotik yang biasa digunakan dalam infeksi saluran kemih ialah kotrimoksasol, fluorokuinolon,  penisilin,  sefalosporin  dan aminoglikosida (Syarif A dkk,2007). Penggunaan  antibiotik  yang  tidak  tepat  dapat menimbulkan masalah resistensi dan efek obat yang tidak dikehendaki (Lestari dkk., 2011).

## METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian yaitu:  jarum  ose,  cawan  petri  ( Normax ), Bunsen,  tabung  reaksi  ( Pyrex ),  rak  tabung, pinset,  pipet  tetes, laminar  air  flow  (Biotek) , autoklaf  ( ALP ), baker  glass  (Approx) , hot plate dan stirrer ,  timbangan  analitik  ( Kern ), gelas ukur ( Pyrex ), kapas, mikropipet ( Ecopipette ),  Erlenmeyer  ( Approx ),  inkubator ( Incucell ),  batang  pengaduk,  mistar  berskala, plasticwrap dan aluminium  foil .  Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian:  sampel  urin, cakram  antibiotik  amoksisilin  25µg  ( Oxoid ), cakram  antibiotik  gentamisin  10µg  ( Oxoid ), cakram  antibiotik  sefadroksil  30µg  ( Oxoid ), aquades,  Kristal  violet,  alkohol,  nutrient  agar ( Oxoid ),  nutrient  broth  ( Oxoid ),  NaCl  0,9%, safranin,  Lugol,  reagen  kovac,  H 2 O 2 ,  Minyak Imersi, simon  citrate  agar  (Oxoid) , triple sugar  iron (TSI)  Agar  ( Oxoid ),  tripton ( Oxoid ), yeast extract ( Oxoid ), Agar bacteriological  ( Oxoid )  dan  Lisin  iron  agar ( Oxoid )

## Prosedur Kerja

## A. Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  disterilkan terlebih  dahulu  sebelum  penelitian.  Sterilisasi alat  dilakukan  menggunakan  autoklaf  dengan cara  alat-alat  gelas  yang  akan  digunakan dalam  penelitian  dibungkus  menggunakan aluminium foil kemudian dimasukkan kedalam autoklaf, kemudian autoklaf dihidupkan  pada  suhu  121 0 C  selama  15-20 menit.  Alat-alat  yang  sudah  disterilkan kemudian  ditunggu  hingga  mencapai  suhu kamar dan kering (Lay dan Hastowo, 1992).

## B. Pembuatan Media
Medium  yang digunakan dalam  penelitian ini  adalah  medium  Nutrient  Agar  (NA). Medium  ini  digunakan  sebagai  media  agar miring  untuk  inokulasi  bakteri,  media  dasar dan media pembenihan. Adapun cara pengerjaan sebagai berikut:
a. Pembuatan agar miring
Nutrient  agar  (NA)  sebanyak  2,3  gram dilarutkan  dalam  100  mL  aquades  (23 g/1000  mL)  menggunakan  Erlenmeyer. Setelah  itu,  dihomogenkan  dengan  stirrer diatas  penangas  air  sampai  mendidih. Sebanyak  20  mL  dituangkan  masing- masing  pada  tabung  reaksi  steril  dan ditutup  dengan  aluminium  foil.  Media tersebut  disterilkan  dalam  autoklaf  pada suhu  121 0 C  selama  15  menit,  kemudian biarkan  pada  suhu  ruangan  ±  30  menit sampai  media  memadat  pada  kemiringan 30 0 C.  Media  agar  miring  untuk  inokulasi bakteri (Lay dan Hastowo, 1992).
b. Media pertumbuhan
Nutrient  agar  (NA)  sebanyak  2,3  gram dilarutkan  dalam  100  mL  aquades  (23 g/1000  mL)  menggunakan  Erlenmeyer. Setelah  itu,  dihomogenkan  dengan  stirrer diatar  penangas  air  sampai  mendidih. Media yang sudah homogen ini disterilkan dalam  autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama 15  menit,  kemudian  didinginkan  sampai suhu  ±  45-50 0 C.  Media  pertumbuhan digunakan dalam pertumbuhan dan isolasi bakteri yang berasal dari urin.
c. Media Luria Bertani (LB)
Media  LB  dibuat  dengan  menimbang tripton sebanyak 2 gram, NaCl sebanyak 2 gram,  yeast  extract  sebanyak  1  gram  dan agar  bacteriological  sebanyak  3  gram, kemudian dimasukkan kedalam
Erlenmeyer dan dilarutkan bersama aquades  sebanyak  200  mL.  Setelah  itu, dihomogenkan dengan stirrer diatas penangas  air  sampai  mendidih.  Media yang sudah homogen ini disterilkan dalam autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15 menit, kemudian didinginkan sampai suhu ±  45-50 0 C.  Media  ini  digunakan  sebagai media pengujian kepekaan antibiotik.

## C.Isolasi urin
Sampel urin sebanyak 1 mL dicampurkan  dengan  NaCl  0,9%  sebanyak  9 mL  hingga  homogen  didalam  tabung  reaksi, kemudian dimasukkan kedalam media Nutrien Agar  pada  cawan  petri,  kemudian  diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 24 jam.

## D.Identifikasi Bakteri

## a. Uji Morfologi
Uji  morfologi  dilakukan  dengan pewarnaan Gram. Pewarnaan Gram dilakukan  dimana  kaca  objek  dibersihkan dengan  kapas  yang  telah  diberi  alkohol  lalu diberi  label.  Biarkan  bakteri  pada  nutrient agar  miring  di  ambil  dengan  menggunakan jarum  ose,  kemudian  di  totol  pada  bagian tengah  kaca  objek  sampai  merata,  Preparat selanjutnya  difiksasi  di  atas  lampu  spritus dan  diberikan  larutan  Cristal  violet  dan dibiarkan  selama  60  detik,  lalu  di  cuci dengan  aquades  lalu  dikeringkan  dengan kertas  tisu,  Kemudian  diberikan  larutan lugol  dan  di  biarkan  selama  60  detik, kemudian dibilas dengan alkohol, lalu dicuci ulang  dengan  aquades  dan  dikeringkan dengan kertas tisu (jangan digosok), Setelah itu  diberikan  larutan  safranin  selama  60 detik  dan  di  cuci  kembali  dengan  aquades dan dikeringkan dengan kertas tisu, Preparat
yang  telah  ditutup  cover  glass  diberikan minyak  imerasi  lalu  diperiksa  dibawah mikroskop pada pembesaran 400 kali.

## E. Uji Biokimia
Identifikasi bakteri secara uji biokimia menggunakan  uji  indol,  uji  katalase,  uji  H2S, uji fermentasi karbohidrat, uji lysine, uji sitrat, dan uji motilitas.

## Uji Kepekaan Antibiotik
A.  Pembuatan  Standrar  Kekeruhan  (Larutan Mc Farland 0,5)
Larutan H2SO4 1% sebanyak 99,5 mL dicampurkan  dengan  larutan  BaCl2.2H2O 1,175%  sebanyak  0,5  mL  dalam  erlenmeyer. Kemudian  dikocok  sampai  terbentuk  larutan yang  keruh.  Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai standar  kekeruhan  suspensi  bakteri  uji (Victor,1980).
B. Pembuatan Suspensi Bakteri Uji Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi diambil  dengan  jarum  ose  steril  lalu disuspensikan  ke  dalam  tabung  yang  berisi  5 ml  larutan  NaCl  0,9%  hingga  diperoleh kekeruhan yang sama dengan standar kekeruhan  larutan  Mc.  Farland.  Perlakuan yang sama dilakukan pada setiap jenis bakteri uji (Davis dan Stout, 1971).
C. Penanaman cakram antibiotik Uji  kepekaan  antibiotik  dilakukan dengan  menggunakan  cakram  antibiotik, pengujian  dapat  dilakukan  dengan  cara sebagai berikut:
a.  Membuat  media  LB  (Luria  bertani  agar) sebagai media pengujian antibiotik
b.  Suspense  bakteri  yang  telah  ditambahan aquades sebanyak 200 µl kedalam cawan petri c. Masukkan cakram antibiotik kedalam media pengujian yang telah disuspensikan bakteri d. Kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 370C selama 24 jam
e.  Pengamatan  dilakukan  24  jam  masa inkubasi.  Daerah  bening  merupakan  petunjuk kepekaan  bakteri  terhadap  antibiotik  atau bahan  antibiotik  lainnya  yang  digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan lebar  diameter  zona  hambat  (Vandepitte, 2005).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel  urin  didapatkan  dari  tiga pasien  penderita  infeksi  saluran  kemih  di RSUP  Prof.  Dr.  R.  D.  Kandou  Manado. Kemudian  hasil  dari  isolasi  urin  didapatkan  7 isolat  bakteri.  Ketujuh  isolate  bakteri  yang diperoleh dilakukan uji biokimia dan pewarnaan Gram untuk diidentifikasi dan hasil dari  identifikasi  tersebut  didapatkan  3  bakteri Escherichia  coli ,  2  bakteri Proteus  mirabillis dan 2 bakteri Klebsiella sp.
Pada pengujian kepekaan antibiotik dilakukan  dengan  menggunakan  media  LB (Luria  Bertani  Agar)  yang  kemudian  media disuspensikan  dengan  bakteri  dari  masing- masing  isolat  yang  kemudian  tiga  buah antibiotik  yaitu  amoksisilin,  gentamisin  dan seftriakson  dimaksukkan  kedalam  media  dan diinkubasi selama 24 jam. Berikut merupakan table  hasil  uji  kepekaan  bakteri  terhadap antibiotik Amoksisilin, Gentamisin dan Seftriakson.

## Tabel 1. Hasil Zona Hambat Uji Kepekaan
Jenis Bakteri Uji Kepekaan Antibiotik Amoksisilin Gentamisin Seftriakson Zona Hambat Kepekaan Zona Hambat Kepekaan Zona Hambat Kepekaan Escherichia coli 13 mm Resisten 18,6 mm Sensitif 14 mm Resisten Proteus mirabillis 13 mm Resisten 15 mm Sensitif 12,3 mm Resisten Escherichia coli 13 mm Resisten 18 mm Sensitif 6,6 mm Resisten Proteus mirabillis 12,6 mm Resisten 16,3 mm Sensitif 10 mm Resisten Klebsiella sp. 14 mm Intermedian 16,3 mm Sensitif 10,6 mm Resisten Klebsiella sp. 14 mm Intermedian 15,6 mm Sensitif 10,6 mm Resisten Escherichia coli 5,6 mm Resisten 16,6 mm Sensitif 15 mm Resisten
Pada  hasil  uji  kepekaan  antibiotik terhadap  ketiga  bakteri  tersebut  didapatkan bahwa  antibiotik  seftriakson  telah  resisten terhadap  ketiga  jenis  bakteri  yang  diisolasi dari  urin  penderita  infeksi  saluran  kemih sebesar  100%.  Hasil  ini  lebih  besar  dari penelitian  Endriani  tahun  2009  dimana resistensi bakteri terhadap antibiotik seftriakson  sebesar  62,5  %  dan  hasil  dari Syafada  tahun  2013  memiliki  resistensi sebesar 55,5%.  Menurut Setiabudy dan Gan tahun  2002,  sefalosporin  generasi  ketiga (seperti  seftriakson)  aktif  dan  mempunyai spektrum yang luas terhadap Enterobacteriaceae .  Terjadinya  resistensi bakteri terhadap antibiotik ini dapat disebabkan  oleh  adanya  enzim  pengurai antibiotik pada mikroorganisme secara alami sehingga  beberapa  bakteri  resisten  terhadap seftriakson (Pratiwi, 2008).
Pada  pengujian  kepekaan  bakteri terhadap antibiotik gentamisin menunjukkan sensitivitas  sebesar  100%.  Sensitivitas adalah antibiotik yang memiliki kemampuan dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri bahkan mampu membunuh bakteri (Nelwan,
2002).  Mekanisme  kerjanya  gentamisin adalah bakterisid. Proses translasi (RNA dan DNA) diganggu sehingga biosintesis protein dikacaukan.  Untuk  menembus  dinding  sel bakteri  mencapai  ribosom,  aminoglikosida yang bermuatan kation positif akan berikatan secara pasif dengan membran luar dinding kuman gram negatif yang mengandung  muatan  negatif.  Terjadinya reaksi  kation  antibiotik  akibat  adanya potensial  listrik  transmembran  sehingga menimbulkan  celah  atau  lubang  pada membran  luar  dinding  sel  kuman  selain mengakibatkan  kebocoran  dan  keluarnya kandungan intraseluler kuman memungkinkan penetrasi antibiotik semakin dalam hingga menembus membran sitoplasma (Radigan dkk, 2009). Berdasarkan hasil yang didapatkan
Gentamisin  masih  dapat  digunakan  sebagai terapi namun tetap memperhatikan keamanan terapinya. Hasil  uji  kepekaan  bakteri  terhadap antibiotik amoksisilin menunjukkan resistensi  sebesar  71,5%.  Secara  umum isolat  bakteri  telah  banyak  yang  resisten
terhadap golongan penisilin. Sejak
golongan penisilin digunakan, jenis bakteri  yang  tadinya  sensitif  semakin banyak yang menjadi resisten. Mekanisme yang  terpenting  dalam  menyebabkan resistensi bakteri terhadap golongan penisilin  adalah  pembentukan  enzim betalaktamase oleh bakteri-bakteri (Setiabudy  dan  Gan  2002).  Ini  berarti secara  mikrobiologis  obat-obat  ini  perlu pertimbangan  yang  matang  jika  akan dipakai pada terapi empirik ISK. Hasil ini kurang  lebih  sama  dari  hasil  penelitian yang  dilakukan  oleh  Sjahrurachman  dkk., di  RSCM  Jakarta  pada  tahun  2004, didapatkan bahwa bakteri-bakteri penyebab ISK memiliki resistensi terhadap salah  satu  golongan  penisilin  yaitu amoksisilin sebesar 71,4%. Pola resistensi ini  juga  dapat  berubah  sesuai  dengan waktu  dan  tempat  penelitian  sehingga hasil  yang  didapatkan  lebih  tinggi  dari hasil penelitian yang dilakukan Noorhamdani dkk., (1996) bahwa
resistensi  bakteri  terhadap  amoksisilin  di RSUD Dr. Saiful Anwar Malang mencapai 70%.  Sehingga  dalam  hal  ini  antibiotik amoksisilin tidak dapat digunakan sebagai terapi  infeksi  saluran  kemih  berdasarkan kultur Escherichia  coli dan Proteus mirabillis dan  untuk  kultur Klebsiella sp. masih  dapat  digunakan  sebagai  terpai infeksi  saluran  kemih  dengan  menaikan dosis  terapi  namun  tetap  memperhatikan keamanan terapi.
Berdasarkan  persentasi  kepekaan bakteri  dari  isolat  urin  terhadap  antibiotik amoksisilin,  gentamisin  dan  seftriakson menunjukkan bahwa antibiotik seftriakson memiliki resistensi sebesar 100%,
antibiotik  amoksisilin  memiliki  resistensi 71,5% dan intermedian  28,5%, sedangkan antibiotik  gentamisin  memiliki  sensitifitas sebesar  100%.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  antibiotik  gentamisin  masih  dapat digunakan  dalam  terapi  infeksi  saluran kemih. Antibiotik amoksisilin dan seftriakson  perlu  diperhatikan  dengan cermat  karena  telah  intermediet  dan resisten.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  bakteri yang  teridentifikasi  dari  urin  infeksi  saluran kemih  di  RSUP  Prof.  Dr.  R.  D.  Kandou Manado  adalah  bakteri Escherichia  coli , Klebsiella sp. dan Proteus mirabillis . Ketiga jenis bakteri tersebut mempunyai sensitifitas terhadap  antibiotik  gentamisin  (100%), intermedian  28,5%  dan  resisten  71,5% terhadap amoksisilin serta resistensi tertinggi terhadap seftriakson (100%).

## SARAN
1. Berdasarkan penelitian yang dilakukan  perlu  dipertimbangkan lagi  dalam  menggunakan  antibiotik amoksisilin  dan  seftriakson  terhadap penderita  infeksi  saluran  kemih  di RSUP  Prof.  Dr.  R.  D.  Kandou Manado.
2. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  dengan  jumlah  sampel  yang lebih  banyak  dengan  penggunaan antibiotik yang berbeda untuk mengetahui  antibiotik  yang  tepat bagi  penderita  infeksi  saluran  kemih berdasaran  pola  kepekaan  bakteri terhadap antibiotik.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  2015. Angka  Kejadian  Infeksi Saluran  Kemih  di  Kota  Manado.
Dinkes Kota Manado.
Coyle,  E.  A.,  Prince,  R.  A.,  2005, Urinary Tract  Infection  and  Prostatitis ,  in  7 th Edition, The McGraw Hill
Comparies, Inc., USA.
Lay,  B.W.,  Hastowo,  S.1992. Mikrobiologi . IPB, Bogor. Nelwan RHH. 2002. Pemakaian antimikroba secara rasional di klinik .
Dalam: Noer S, editor. Buku ajar ilmu penyakit  dalam.Balai  penerbit  FKUI, Jakarta.
Noorhamdani,  Roekistiningsih,  Winarsih  S,
Islam S.Sumarno. 1996. Infeksi saluran kemih pola kuman isolat hasil biakan  urin  dan  pola  resistensinya terhadap  antibiotika  di  RSUD  Dr.
Saiful  Anwar  Malang  tahun  1995 . Majalah Kedokteran Unibraw.Malang.
Pratiwi,  S.2008. Mikrobiologi  Farmasi . Erlangga, Jakarta. Radigan EA, Gilchrist NA, Miller MA.2009.Management of aminoglycosides in the Intensive Care
Medicine. Journal  of  Intensive  Care Medicine . 25 :327-342 Setiabudy,  R.,  Gan,  V.  2002. Pengantar
Antibakteri .  Di  dalam:Farmakologi dan Terapi. Gaya Baru.Jakarta. Sjahrurachman, A.,
Mirawati, T.,
Ikaningsih., Warsa, U.C.2004. Etiologi dan resistensi bakteri penyebab infeksi saluran kemih di RSCM dan RS MMC Jakarta 2001-2003.Medika. 9 : 557-562. Syarif.A,  Ascobat.  P,  Estuningtyas.  A,
Setiabudy.  R,  Setiawati.  A,  Muchtar. A. 2007. Farmakologi dan
terapi .Edisi 5. Gaya Baru: Jakarta.
Vendepitte,  J.  2005. Prosedur  Laboratorium dasar untuk Bakteriologis Klinis. Edisi 2 . Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Victor,  L.  1980. Antibiotics  in  Laboratory Test .  The  Williams  and  Wilkins Company,USA