Jurnal Nukleus Peternakan (Desember 2020) Volume 7, No. 2:130-138                     pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Blegur et  al .: Pengaruh Penambahan Virgin Coconut Oil.........................

## PENGARUH PENAMBAHAN VIRGIN COCONUT OIL DALAM PENGENCER TRIS KUNING TELUR TERHADAP KUALITAS SPERMATOZOA SAPI BALI SELAMA PRESERVASI
(INFILUENCE ADDITION VIRGIN COCONUT OIL IN TRIS EGG YOLK ON THE QUALITY OF BALI BULL SPERMATOZOA DURING PRESERVATION)
Jernih Blegur * , Wilmientje M. Nalley, Thomas Mata Hine Fakultas Peternakan - Universitas Nusa Cendana Kupang – Jln. Adisucipto, Penfui *Correspondence author, email: jernihblegur21@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk menguji pengaruh penambahan berbagai dosis virgin coconut oil terhadap kualitas spermatozoa  sapi  bali  selama  preservasi.  Semen  ditampung  dua  kali  seminggu  menggunakan  metode  vagina buatan dari  dua  ekor  sapi  bali  jantan  berumur  3-4  tahun  dengan  kondisi  tubuh  dan  organ  reproduksi  yang normal.  Semen  yang  memiliki  motilitas  >  70%,  konsentrasi  >  1000×10 6 ,  dan  abnormalitas  <  15%  diencerkan dengan  pengencer  Tris-kuning  telur  (T-KT)  yang  ditambahkan  dengan  virgin  coconut  oil  (VCO)  pada konsentrasi: 0 % (P0), 2% (P1), 4% (P2), dan 6% (P3). Semen yang telah diencerkan di simpan pada suhu 3-5ᶱ C.  dievaluasi  setiap  24  jam  terhadap  motilitas,  viabilitas,  abnormalitas  dan  daya  hidup  spermatozoa  hingga motilitas minimal 40%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa semen yang diencerkan dengan Tris-kuning telur pada  perlakuan  P3  (VCO  6%)  mempunyai  kualitas  yang  lebih  tinggi  (P<0,05)  dibandingkan  dengan  ketiga perlakuan  lainnya,  yaitu  motilitas  mencapai  (43,10±2,83%),  viabilitas  (48,68±1,59%),  abnormalitas (5,92±0,90%) dan daya tahan hidup (6,00±0,00 hari). Kesimpulan dari penelitian ini adalah penambahan virgin coconut oil 6% dalam pengencer Tris- kuning telur lebih efektif dalam mempertahankan kualitas semen cair sapi bali.
Kata kunci: tris kuning telur, virgin coconut oil, sperma, sapi bali

## ABSTRACT
The purpose of this study was to examine the effect of adding various doses of virgin coconut oil to the quality of bali bull spermatozoa during preservation. Semen is accommodated twice a week using an artificial vaginal method  from  two  3-4  year  old  bali  bull  with  normal  body  condition  and  reproductive  organs. Semen  with motility>  70%,  concentration>  1000  ×  10 6 ,  and  abnormality  <15%  was  diluted  with  Tris-egg  yolk  (T-KT) diluent added with virgin coconut oil (VCO) at a concentration of: 0% (T0), 2 % (T1), 4% (T2), and 6% (T3). The  diluted  semen  was  stored  at  3-5ᶱC.  Evaluated  every  24  hours  for  motility,  viability,  abnormalities  and vitality of spermatozoa up to a motility of at least 40%. The results showed that semen diluted with T-EY with 6%  VCO  (T3)  had  a  higher  quality  (P  <0.05)  compared  to  the  other  three  treatments,  with  motility  reaching (43.10 ± 2 , 83%), viability (48.68 ± 1.59%), abnormalities (5.92 ± 0.90%) and survival (6.00 ± 0.00 days). The conclusion of  this study is the addition of  6% virgin coconut oil  in Tris-egg  yolk diluent is  more effective in maintaining the quality of bali cattle liquid semen.
Keywords : tris egg yolk, virgin coconut oil, spermatozoa, bali bull.

## PENDAHULUAN
Spermatozoa  yang  berada  diluar  tubuh ternak  aktivitas  metabolismenya  mencapai maksimum  jika  disimpan  pada  suhu  37 o C, namun  dapat  dipertahankan  pada  suhu  3-5 o C. Selama penyimpanan spermatozoa akan mengalami kerusakan membran yang disebabkan oleh Reactive oxygen species (ROS ) dan  stress  oksidatif.  Stress  oksidatif  merupakan penyebab  utama  kerusakan  dari  spermatozoa sehingga menghambat proses fosforilasi.
Oksidasi fosforilasi yang terganggu menyebabkan  peningkatan  ROS,  kadar  ROS yang tinggi dalam sel dapat mengoksidasi lipid, protein dan DNA. Membran plasma spermatozoa  memiliki  fosfolipid  kadar  yang tinggi  menyebabkan  sperma  sangat  rentan terhadap ROS (Sanoeka dan Kurpisz, 2004).
Untuk  mengurangi  kerusakan  sel  selama penyimpanan,  maka  diperlukan  penambahan antioksidan,  yang  dapat  menghambat  reaksi
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember 2020) Volume 7, No. 2:130-138                     pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Blegur et  al .: Pengaruh Penambahan Virgin Coconut Oil.........................
peroksidasi  lipid,  dan  dapat  mengikat  senyawa radikal  bebas.  Virgin  coconut  oil  (VCO) merupakan  produk  olahan  asli  Indonesia, dengan  kandungan  antioksidan  yang  sangat tinggi 0,5 mg/ 100 g minyak kelapa murni yang bersifat  sebagai  antioksidan  untuk  mengurangi tekanan oksidatif yang toksik melebihi pertahanan  antioksidan  endogen  (Hernanto et al., 2008).
Spermatozoa sapi umumnya dapat diencerkan  dengan  Tris  yang  dikombinasikan dengan  kuning  telur,  dengan  fungsi  utamanya sebagai buffer untuk mempertahankan pH, serta sebagai  sumber  energi,  meminimalkan  kejutan
dingin  selama  penyimpanan  (Nalley et  al., 2007).  Penambahan  VCO  kedalam  pengencer Tris- kuning telur diharapkan dapat meminimalkan  kerusakan  sperma  akibat  radikal bebas  dan  dengan  cara  demikian  meningkatkan kualitas  spermatozoa  baik viabilitas,  daya  tahan hidup  dan  terutama  motilitasnya.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  menguji  pengaruh  penambahan berbagai  dosis  virgin  coconut  oil  terhadap kualitas spermatozoa sapi bali serta mendapatkan  dosis  terbaiknya  dalam  pengencer Tris-kuning telur.

## METODE PENILITIAN

## Materi Penilitian
Ternak  yang  digunakan  sebagai  sumber semen  adalah  dua  ekor  sapi  bali  jantan  dengan umur  3  -  4  tahun  yang  berada  dalam  kondisi sehat,  mempunyai  organ  reproduksi  normal  dan telah  terlatih  untuk  ditampung  semennya. Ternak  tersebut  dipelihara  dalam  kandang individu  yang  dilengkapi  dengan  tempat  makan dan  minum.  Pakan  hijauan  diberikan  10%  dari berat  badan  dan  penambahan  0,5  kg  konsentrat dan air minum secara ad libitum .

## Metode Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimen dengan rancangan percobaan adalah Rancangan  Acak  Lengkap,  terdiri  dari  empat perlakuan dan enam ulangan sehingga terbentuk dua  puluh  empat  unit  percobaan.  Keempat perlakuan  tersebut  adalah:  Tris-kuning  telur  (T- KT)+ virgin coconut oil (VCO) 0 % (P0), T-KT
+ VCO 2 % (P1), T-KT + VCO 4 % (P2), T-KT + VCO 6 % (P3).

## Pembuatan Bahan Pengencer
Penyiapan  kuning  telur  yaitu  :  (1)  Telur dibersihkan  dengan  alkohol  70%,  agar  bersih dan  steril  lalu  dipecahkan  bagian  yang  lancip dan  pisah  kuning  telur  dengan  putih  telur.  (2) Kuning  telur  yang  terbungkus  selaput vitellin diletakkan pada kertas saring agar menyerap sisa putih telur. (3) Kuning telur dipecahkan dengan cara  menyobek  jaringan vitellin dengan  pisau steril,  lalu  kuning  telur  dituangkan  ke  dalam gelas ukur. (4) Kuning telur siap digunakan.
Tris  [ Tris  (hydroxymethyl)  aminomethane ] ditimbang  sebanyak  3,634  gram  dan  larutkan dengan  aquadest  hingga  100  mL,  dalam  tabung erlemeyer,  selanjutnya  ambil  80  mL  Tris  dan tambahkan  20  mL  kuning  telur  kemudian homogenkan Tabel 1.
Tabel 1. Komposisi bahan pengencer perlakuan (100 mL)
Bahan Pengencer P0 P1 P2 P3 Tris (ml) 80 80 80 80 Kuning telur (mL) 20 20 20 20 Penisilin (IU) 1000 1000 1000 1000 Streptomisin (mg mL-1) 1 1 1 1 VCO (%) 0 2 4 6

## Penampungan dan Evaluasi Semen
Penampungan semen menggunakan metode vagina  buatan , semen segar  yang  diperoleh segera  dilakukan  evaluasi  secara  makroskopis dan  secara  mikroskopis.  Evaluasi  secara makroskopis  meliputi:  Volume  semen  dapat
dibaca  secara  langsung,  dengan  melihat  pada tabung  penampung  berskala  dan  atau  dapat diukur menggunakan pipet berskala . Konsistensi atau  derajat  kekentalan  dapat  diketahui  dengan cara  memiringkan  tabung  yang  berisi  semen secara  perlahan-lahan  sambil  melihat  gerakan
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember 2020) Volume 7, No. 2:130-138                     pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Blegur et  al .: Pengaruh Penambahan Virgin Coconut Oil.........................
perpindahan  semen  ke  posisi  semula.  Jika pergerakan  semen  dalam  tabung  gerakannya lambat maka semen memiliki konsistensi kental, dan  jika  gerakannya  agak  cepat  maka  semen memiliki konsistensi sedang, sedangkan gerakannya  sangat  cepat  maka  semen  memiliki konsistensi  encer.  Derajat  keasaman  semen dapat  diketahui  dengan  cara  meneteskan  semen diatas  kertas  indikator  pH  berskala  1-14. Perubahan  warna  pada  kertas  pH  tersebut disesuaikan  dengan  standar  warna  pada  kertas indikator pH.
Evaluasi kualitas semen secara mikroskopis meliputi :Gerakan massa spermatozoa dikategorikan  dalam  3  golongan,  yaitu  gerakan cepat  berpindah,  awan  tebal  dan  gelap,  celah antara gumpalan awan satu dengan yang lainnya sedikit atau rapat (+++), gerakan cepat,terbentuk awan tetapi agak terang gumpalannya (++), dan terlihat  gerakan  sperma  sendiri,  tidak  ada gumpalan  awan  (+).  Konsentrasi  spermatozoa menunjukkan  jumlah  sel  spermatozoa  tiap satuan  volume  semen  dengan  cara  diamati dibawah  mikroskop  dengan  pembesaran  40×10. Konsentrasi spermatozoa dihitung dengan menggunakan haemocytometer . Perhitungan konsentrasi:
.  X  =
jumlah spermatozoa hasil perhitungan.
Persentase
motilitas spermatozoa ditentukan  melalui  pengamatan  spermatozoa  di bawah  mikroskop  cahaya  dengan  pembesaran lensa  objektif  40×10.  Penilaian  terhadap persentase spermatozoa motil adalah spermatozoa yang bergerak progresif ditentukan secara  subjektif  pada  sepuluh  lapang  pandang yang  berbeda,  nilai  yang  diberikan  berkisaran antara  0%  dan  100%  dengan  skala  5%. Viabilitas spermatozoa dilakukan dengan menggunakan  pewarnaan  differensial  eosin- nigrosin,  spermatozoa  hidup  ditandai  dengan spermatozoa  tidak  menyerap  warna  merah (bening  atau  putih),  sedangkan  spermatozoa mati akan terlihat penyerapan warna merah ungu dari  eosin-negrosin.  Pengamatan  dilakukan
menggunakan  mikroskop  dengan  pembesaran 40×10,  hitung  spermatozoa  dengan  total  200 spermatozoa atau pada 10 lapang pandang yang berbeda.  Perhitungan  nilai  viabilitas  diperoleh sesuai
rumus: . Abnormalitas spermatozoa sama dengan evaluasi  viabilitas  dapat  diketahui  dengan  cara semen diwarnai dengan melihat bentuk morfologi  spermatozoa  yang  tidak  normal  baik abnormalitas primer maupun sekunder.

## .

## Pengenceran dan Penyimpanan Semen
Semen  segar  yang  digunakan  harus memiliki  motilitas  >  70%,  konsentrasi  > 1000×10 6 ,  dan  abnormalitas  <  15%  (Jahnson et al., 2000),  selanjutnya  diencerkan  menggunakan Tris-KT dengan suplementasi virgin coconut oil pada  berbagai  konsentrasi.  Semen  yang  telah diencerkan,  disimpan  pada  suhu  3-5 o C  dan dilakukan  evaluasi  setiap  24  jam    terhadap motilitas, viabilitas, abnormalitas,dan daya tahan hidup (DTH) spermatozoa.

## Variabel Penelitian
Variabel  yang  diukur  dalam  penelitian adalah:  (1)  motilitas  spermatozoa  (%),  (2) Viabilitas  spermatozoa  (%),  (3)  Abnormalitas spermatozoa  (%),  (4)  Daya  tahan  hidup spermatozoa (hari) diukur dengan lama spermatozoa dapat bertahan dalam penyimpanan,  dengan  presentase  motilitas minimal 40%.

## Analisis Data
Keseluruhan data yang terkumpul dianalisis dengan Analysis  of  variance (anova)  dan  jika terdapat perbedaan dari perlakuan maka dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  dengan  program software SPSS 22.0 for windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Semen Segar Sapi Bali
Karakteristik  semen  segar  yang  diperoleh selama penelitian ini ditampilkan pada Tabel  2. Rerata  volume  semen  segar  pejantan  sapi  bali dalam penelitian adalah 4,00 ± 0,79 mL dengan kisaran  3-5  mL.  Hasil  ini  sesuai  dengan
pendapat  Garner  and  Hafez  (2000)  yang melaporkan bahwa volume semen sapi bervariasi  setiap  penampungan  antara  1-15  mL atau  5-8  mL  per  ejakulasi.  Volume  semen  per ejakulasi  berbeda-beda,  hal  ini  bisa  disebabkan
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember 2020) Volume 7, No. 2:130-138                     pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Blegur et  al .: Pengaruh Penambahan Virgin Coconut Oil.........................
oleh  umur,  suhu,  bangsa,  tingkatan  makanan, frekuensi penampungan.
Warna  semen  segar  sapi  bali  hasil penelitian  adalah  krem,  hasil  ini  sesuai  dengan pendapat  Feradis,  (2010)  yang  menyatakan bahwa semen sapi normal berwarna seperti putih susu  atau  krem,  keputih-putihan  dan  keruh. Kira-kira  10%  sapi  menghasilkan  semen  yang
normal  dengan  warna  kekuning-kuningan,  yang disebabkan  oleh  riboflavin  yang  dibawa  oleh satu  gen  autosom  resesif  dan  tidak  mempunyai pengaruh  terhadap  fertilitas.  Semen  sapi mempunyai  volume  rendah  tetapi  konsentrasi spermanya  tinggi  sehingga  memperlihatkan warna krem atau warna putih susu.
Tabel 2. Karakteristik semen segar sapi bali
Karakteristik semen Rerata Makroskopis : Volume (mL) 4,00±0,79 Warna krem Konsistensi Sedang - Kental pH 6,58±0,16 Mikroskopis : Gerakan Massa ++-+++ Konsentrasi ( x 10 6 sel/mL) 994,20±105,02 Motilitas (%) 76,00±4,18 Viabilitas (%) 81,07±3,23 Abnormalitas (%) 2,19±1,63 Konsistensi semen hasil penelitian termasuk kategori sedang  - kental, Suyadi et al. (2012)  menjelaskan  bahwa  warna,  konsistensi dan konsentrasi spermatozoa mempunyai hubungan  yang  sangat  erat  satu  dengan  yang lain,  artinya  jika  semen  semakin  encer  maka konsentrasi  spermatozoa  semakin  rendah  dan warnanya  semakin  pucat.  Konsentrasi  semen segar  dalam  penelitian  ini  sebanyak  994,20  ± 105,02  juta/mL.  Hasil  ini  berbeda  dengan  hasil penelitian  Ismaya  (2014)  menjelaskan  bahwa konsistensi  spermatozoa  juga  berkaitan  dengan warna spermatozoa yang dapat digunakan untuk memprediksi  konsentrasi  spermatozoa.  Ketika konsistensinya sedang hingga kental atau warna krem  maka  konsentrasi  spermatozoa  berkisar 1.000-2.000  juta  spermatozoa/mL.  Derajat keasaman  semen  sapi  bali  hasil  penelitian  yaitu 6,5±  0,16,  sedikit  berbeda  dengan  pendapat Nursyam  (2007)  yang  melaporkan  bahwa  pH semen  6,0-6,5  tidak  dipengaruhi  oleh  musim baik  musim  kemarau  ataupun  musim  hujan. Perbedaan  ini  didukung  oleh  Feradis  (2010) bahwa  setiap  bangsa  sapi  mempunyai  nilai  pH semen  segar  yang  berbeda  -  beda.  Gerakan massa  semen  segar  sapi  bali  yang  diperoleh memiliki nilai ++ - +++. Hasil ini tidak berbeda dengan  hasil  penelitian  Arifiantini et  al. (2006)
yang  menyatakan  bahwa  gerakan  massa  pada sapi  lokal  lainnya  seperti  sapi  bali  diperoleh rataan sebesar 2,7 setara dengan (++/+++) yang disebabkan  karena  kondisi  ternak  maupun lingkungan.
Motilitas  adalah  daya  gerak  spermatozoa yang  dapat  dijadikan  sebagai  acuan  dalam penilaian kualitas spermatozoa untuk inseminasi buatan (Bintara, 2011). Motilitas sangat penting bagi  spermatozoa  untuk  melewati  cervix  uteri dan uterotubal  junction ,  dan  lebih  penting  lagi untuk  menembusi  sel-sel  kumulus  dan  zona pelusida  sel  telur.  Oleh  karena  itu,  motilitas sangat penting untuk dievaluasi demi keberhasilan  dari  suatu  perkawinan.  Motilitas spermatozoa  sapi  bali  adalah  76,00  ±  4,18  % hasil  ini  sedikit  berbeda  dengan  pendapat (Ratnawati et al . 2008) yang melaporkan bahwa motilitas individu  spermatozoa sapi bali mencapai  88,7%,  menurut  Garner  and  Hafez (2000)  motilitas  spermatozoa  sapi  berkisar antara  40-75%,  untuk  dapat  dilakukan  proses pengenceran  dan    pembekuan  ,  semen  segar harus memenuhi syarat minimal 70%.
Viabilitas  spermatozoa  semen  segar  sapi yang diperoleh rata-rata 81,07 ± 3,23 % hasil ini tidak  jauh  berbeda  dengan  hasil  penilitian (Rizal, 2009), yang melaporkan bahwa viabilitas
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember 2020) Volume 7, No. 2:130-138                     pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Blegur et  al .: Pengaruh Penambahan Virgin Coconut Oil.........................
spermatozoa sapi bali sebesar 86,75%, (Ratnawati dkk. 2017) sapi madura 85% (Pratiwi et  al. 2007)  dan  sapi  Peranakan  Ongole  97%. Viabilitas  spermatozoa  untuk  pembuatan  semen yang  diencerkan  atau  semen  beku  minimal memiliki  60  %  sampai  75%  spermatozoa  hidup (Garner  dan  Hafez,  2000).  Nilai  spermatozoa abnormal  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini rata-rata  2,19  ±  1,63  %.  Semen  yang  diperoleh
masih  berada  dalam  kisaran  normal  sesuai pernyataan  Garner  dan  Hafez  (2000)  dimana abnormalitas  spermatozoa  tidak  boleh  melebihi 20%.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Motilitas
Spermatozoa .
Rerata  nilai  motilitas  semen  cair  sapi  bali masing-masing perlakuan tertera pada Tabel 3.
Tabel 3. Pengaruh perlakuan terhadap motilitas spermatozoa
Hari ke Perlakuan T-KT-VCO0 T-KT-VCO2 T-KT-VCO4 T-KT-VCO6 0 75.10 ± 3.72 a 75.10 ± 3.72 a 75.10 ± 3.72 a 75.10 ± 3.72 a 1 62.20 ± 3.01 a 64.00 ± 2.24 a 70.20 ± 3.20 b 72.10 ± 2.88 b 2 55.20 ± 3.71 a 56.40 ± 3.92 a 63.10 ± 5.74 b 68.40 ± 4.21 b 3 42.24 ± 3.06 a 48.00 ± 4.47 b 55.10 ± 4.87 c 61.40 ± 3.50 d 4 35.90 ± 2.01 a 40.10 ± 3.54 a 46.10 ± 4.30 b 55.62 ± 4.58 c 5 25.00 ± 3.53 a 33.50 ± 4.82 b 40.15 ± 3.55 c 50.28 ± 4.92 d 6 15.00 ± 5.00 a 21.60 ± 4.96 b 34.80 ± 3.19 c 43.10 ± 2.83 d
Superskrip yang sama pada baris yang sama menunjukan perbedaan yang tidak nyata(P<0,05)
Spermatozoa  sapi  bali  dalam  pengencer T-
KT yang ditambahkan VCO mampu mempertahankan motilitas spermatozoa sapi bali selama  penyimpanan.  Hasil  terbaik  teramati pada  perlakuan  T - KT-VCO6  dengan  motilitas 43.10  ±  2.83%  dengan  lama  penyimpanan selama  6  hari  dibandingkan  dengan  kontrol  T - KT-VCO0  dengan  motilitas  42.24  ±  3.06% dengan  lama  penyimpanan  hanya  tiga  hari. Perbedaan  ini  kemungkinan  adanya  sifat antioksidan  yang  terdapat  pada  VCO  sebagai substrat sumber energi dan sebagai krioprotektan ekstraseluler mampu untuk menurunkan  stres  oksidatif  (Dosumo et  al., 2010).  Pada  perlakuan  T-KT-VCO0  penurunan terjadi,  diduga  bahwa  T-KT  hanya  sebagai penyangga untuk mempertahankan pH sehingga spermatozoa  yang  mati  dan  menjadi  toksik terhadap  spermatozoa  lain  yang  masih  hidup sebelum  penambahan  VCO.  Rizal et  al. (2004) melaporkan bahwa penurunan kualitas spermatozoa  selama  penyimpanan,  terutama nilai motilitas progresif diduga akibat banyaknya  spermatozoa  yang  mati  dan  menjadi toksik  terhadap  spermatozoa  lain  yang  masih
hidup,  sehingga  secara  umum  kualitasnya menjadi menurun.
Hasil  analisis  statistik  terhadap  motilitas pasca  pengenceran  menunjukkan  perbedaan yang  tidak  nyata  (P>0,05)  antara  perlakuan. Namun setelah penyimpanan 1-6 hari menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  antara perlakuan  (P<0,05).  Hal  ini  berarti  perlakuan memberikan respon yang baik terhadap spermatozoa, karena VCO mengandung vitamin E  dan  polifenol  yang  mampu  meningkatkan enzim-enzim  antioksidan  berperan  sebagai antioksidan,  sedangkan  polifenol  mempunyai kemampuan  melawan  pembentukan  radikal bebas dalam tubuh (Putri et al., 2014).

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Viabilitas Spermatozoa
Persentase viabilitas spermatozoa merupakan  indikator  untuk  menilai  kualitas semen.  Semakin  tinggi  persentase  viabilitas semen  maka  semakin  baik  kualitas  semen tersebut  (Rizal et  al., 2004).  Nilai  viabilitas spermatozoa  hasil  penelitian  disajikan  pada Tabel 4.
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember 2020) Volume 7, No. 2:130-138                     pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Blegur et  al .: Pengaruh Penambahan Virgin Coconut Oil.........................
Tabel 4. Pengaruh perlakuan terhadap viabilitas spermatozoa
Hari ke Perlakuan T - KT-VCO0 T - KT-VCO2 T - KT-VCO4 T - KT-VCO6 0 80.42 ± 3.53 a 79.70 ± 4.01 a 79.99 ± 3.63 a 81.38 ± 3.99 a 1 67.33 ± 2.72 a 69.65 ± 2.34 a 74.42 ± 3.55 b 77.80 ± 4.26 b 2 59.75 ± 3.45 a 65.68 ± 5.48 ab 68.02 ±5.71 bc 73.51 ± 3.87 d 3 47.30 ± 2.48 a 53.05 ± 4.43 b 59.02 ± 4.94 c 67.27 ± 3.56 d 4 39.99 ± 1.68 a 45.03 ± 3.43 ab 50.46 ± 6.33 b 60.88 ± 4.26 c 5 33.86 ± 4.06 a 39.27 ± 4.34 ab 44.77 ± 3.81 b 55.64 ± 4.75 c 6 19.71 ± 4.66 a 26.31 ± 4.45 b 39.49 ± 3.34 c 48.68 ± 2.55 d
Superskrip yang sama pada baris  yang sama menunjukan perbedaan yang tidak nyata(P<0,05)
Spermatozoa  sapi  bali  dalam  perlakuan  T - KT-  VCO  mampu  mempertahankan  viabilitas spermatozoa  sapi  bali.  Hasil  terbaik  teramati pada perlakuan T - KT- VCO6 selama penyimpanan enam hari mampu bertahan karena pada  pemberian  vitamin  E  yang  terkandung dalam VCO memberikan presentasi spermatozoa hidup  tertinggi,  hal  ini  disebabkan  karena peranan  vitamin  E  yang  mampu  melindungi spermatozoa dari kerusakan akibat radikal bebas hasil  metabolisme  sel  spermatozoa  sehingga spermatozoa  bertahan  hidup  lebih  lama.  Hasil penelitian  dari  (Astuti et  al. 2008)  bahwa penambahan VCO mampu meningkatkan jumlah  spermatozoa  primer  diduga  karena memiliki  peran  penting  dalam  perbaikan kerusakan  testis  dengan  mengurangi  stress oksidatif  dan  melindungi  kerusakan  organ reproduksi selama toksisitas (Al-Ani, 2013).
Hasil  analisis  statistik  terhadap  viabilitas pada  penyimpanan  hari  ke  1  sampai  hari  ke  6
menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  (P<0,05) antara  perlakuan,  hal  ini  diduga  karena dipengaruhi  ketersediaan  antioksidan  yang cukup dalam pengencer, sehingga dapat mempertahankan  viabilitas  spermatozoa.  Nilai viabilitas  berhubungan  erat  dengan  kemampuan fertilisasi  spermatozoa,  apabila  nilai  viabilitas tinggi  maka  kemampuan  fertilitas  akan  tinggi. Menurut  Hidayahturrahmah  (2007)  viabilitas spermatozoa  dipengaruhi  oleh  kebutuhan  akan nutrisi. Nutrisi akan digunakan oleh spermatozoa  untuk  dijadikan  energi  sehingga apabila kebutuhan nutrisi spermatozoa berkurang  maka  akan  mengakibatkan  viabilitas spermatozoa menurun.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Abnormalitas Spermatozoa
Rerata
persentase abnormalitas spermatozoa  yang  diperoleh  pada  masing- masing perlakuan ditampilkan pada Tabel 5.
Tabel 5. Pengaruh perlakuan terhadap abnormalitas spermatozoa
Hari ke Perlakuan T-KT-VCO0 T-KT-VCO2 T-KT-VCO4 T-KT-VCO6 0 4.15 ± 0.74 a 4.14 ± 0.80 a 3.10 ± 0.86 a 3.84 ± 0 .81 a 1 4.11 ± 0.83 a 4.22 ± 0.97 a 4.17 ± 0.98 a 4.24 ± 0.87 a 2 4.47 ± 0.82 a 4.63 ± 0.93 a 4.85 ± 0.73 a 4.40 ± 0.86 a 3 5.06 ± 0.98 a 5.15 ± 0.87 a 5.19 ± 0.61 a 4.86 ± 0.77 a 4 5.24 ± 1.08 a 5.57 ± 1.05 a 5.22 ± 0.95 a 4.98 ± 0.75 a 5 5.97 ± 0.82 a 6.11 ± 0.86 a 5.65 ± 0.47 a 5.39 ± 0.63 a 6 6.47 ± 0.82 a 6.42 ± 0.70 a 6.09 ± 0.73 a 5.92 ± 0.90 a
Superskrip yang sama pada baris  yang sama menunjukan perbedaan yang tidak nyata (P<0,05)
Hasil analisis
statistik terhadap abnormalitas pada semua perlakuan menunjukkan  perbedaan  yang  tidak  nyata (P>0,05), dari hari ke 0 sampai dengan hari ke 6. Kondisi  tersebut  menunjukkan  bahwa  dosis VCO dalam pengencer T-KT tidak memberikan
pengaruh  terhadap  abnormalitas  spermatozoa. Hal  tersebut  diduga  karena  kerusakan  membran plasma  yang  terjadi  akibat cold  shock dan perubahan  tekanan  osmotik  tidak  menyebabkan perubahan  yang  signifikan  terhadap  bentuk morfologi spermatozoa.
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember 2020) Volume 7, No. 2:130-138                     pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Blegur et  al .: Pengaruh Penambahan Virgin Coconut Oil.........................
Penggunaan  semen  cair  maupun  semen beku  dalam  program  inseminasi  abnnormalitas spermatozoa  sebaiknya  kurang  dari  20%  (BSN, 2017).  Persentase  abnormalitas  ini  lebih  kecil dibandingkan  dengan  Parera et  al .  (2009) dengan  hasil  yaitu  9,83%.  Perbedaan  ini mungkin  disebabkan  oleh  umur  dan  faktor kesuburan pejantan (Garner & Hafez, 2000).
Nilai  abnormalitas  semen  segar  sapi  bali yaitu  2,19±1,6%  dan  setelah  pengenceran  3,84- 5,92%  hal  ini  disebabkan  adanya  proses pengenceran  dan  disimpan  pada  suhu  5 o C diduga  meningkat  persentase  abnormalitasnya dipengaruhi  oleh  lipoprotein  yang  terdapat dalam kuning telur yang semakin lama semakin menurun fungsi perlindunganya terhadap spermatozoa
melawan dingin.
Selain
meningkatnya persentase abnormalitas spermatozoa  diduga  dipengaruhi  oleh  keadaan osmotik  disekitarnya  tidak  sesuai  (Damayanti, 1991). Hal ini sesuai dengan pendapat Kamal et al . (2005) dan Arifiantini et al . (2005) terjadinya peningkatan abnormalitas spermatozoa
disebabkan  oleh  efek  cekaman  dingin  ( cold shock ) dan ketidakseimbangan nutrisi. Abnormalitas  spermatozoa  dapat  disebabkan oleh  pengaruh  penurunan  pH  semen,  tekanan osmotik  dan  stres  dingin  yang  terjadi  selama penyimpanan.  Sesuai  dengan  pendapat  Solihati et  al .  (2008)  bahwa  abnormalitas  dapat disebabkan  karena  kejutan  suhu  dingin  dan ketidak seimbangan tekanan osmotik akibat dari proses metabolik yang terus berlangsung selama penyimpanan suhu 4-5 o C. Selanjutnya
dilaporkan bahwa semakin lama waktu penyimpanan,  maka  presentase  abnormalitas akan semakin tinggi.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Daya  Tahan Hidup Spermatozoa
Daya  tahan  hidup  spermatozoa  yang dimaksud  adalah  kemampuan  spermatozoa untuk  tetap  bertahan  hidup  dalam  kurun  waktu tertentu  setelah  penyimpanan in  vitro (Hine et al., 2014).
Tabel 6. Pengaruh perlakuan terhadap daya tahan hidup spermatozoa
Perlakuan Daya Tahan Hidup (Hari) T - KT-VCO0 3.00±0.00 a T - KT-VCO2 3.80±0.44 b T - KT-VCO4 4.80±0.44 c T - KT-VCO6 6.00±0.00 d
Superskrip yang sama pada baris yang sama menunjukan perbedaan yang tidak  nyata(P<0,05)
Spermatozoa  sapi  bali  yang  dipreservasi dalam  pengencer  T-KT+VCO memiliki  daya tahan  hidup  yang  lebih  lama  daripada  kontrol (Tabel  6).  Hasil  analisis  statistik  menunjukkan bahwa  perlakuan  berpengaruh  nyata  (P<0,05) terhadap daya tahan hidup spermatozoa. Hal ini semakin  memperkuat  fakta  bahwa  begitu pentingnya  pengencer  dalam  memperpanjang kehidupan  spermatozoa in vitro .  Dalam  kondisi spermatozoa  tidak  mendapat  suplementasi nutrisi  dan  bahan  pelindung  terhadap  kejutan dingin  (perlakuan  kontrol),  maka  spermatozoa akan  cepat  mengalami  kematian  oleh  karena kehabisan substrat energi, energi yang digunakan  hanya  mengandalkan  bahan-bahan yang  terdapat  dalam  pengencer  dan  plasma semen.
Perlakuan    pengencer  yang  ditambahkan VCO  mempunyai  fungsi  sebagai  antioksidan yang  dapat  melenturkan  membran  plasma spermatozoa. Marina et al. (2009)
mengemukakan  bahwa  VCO  mengandung senyawa  fenolik,  seperti  asam  ferulat  and p - coumarat  yang  memberikan  kontribusi  terhadap aktivitas antioksidan.
Hasil penelitian Hidayatin (2002)
menyatakan bahwa dibutuhkan 50% spermatozoa yang hidup dan motil untuk dipakai dalam  IB.  Jika  mengacu  pada  ketentuan  ini, maka  perlakuan  T-KT-VCO6 yang  dapat digunakan  untuk  IB  pada  hari  keenam penyimpanan.  Sedangkan,  untuk  perlakuan  T- KT-VCO2 dan  T-KT-VCO4  secara  berurutan hanya  bisa  dipakai  pada  hari  keempat  dan  hari ke tiga. Spermatozoa segar mengalami penurunan  kualitas  dan  jumlah  spermatozoa mati  lebih  banyak  setelah  penyimpanan  selama dua dan tiga hari (Yani et al., 2001).
Kehabisan  substrat  energi  yang  terjadi selama penyimpanan dapat menyebabkan proses glikolisis untuk menghasilkan energi tidak dapat berlangsung.  Dalam  kondisi  tanpa  oksigen,
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember 2020) Volume 7, No. 2:130-138                     pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Blegur et  al .: Pengaruh Penambahan Virgin Coconut Oil.........................
suplai  energi  bagi  spermatozoa  terutama disumbangkan melalui jalur glikolisis (Barbonetti et  al., 2010).  Suatu  eksperimen menunjukkan bahwa glikolisis dapat mengimbangi  kekurangan  produksi  ATP  oleh mitokondria  dalam  mempertahankan  motilitas sperma mencit, dan gangguan terhadap
mitokondria  dapat  menekan  motilitas  sperma hanya ketika proses glikolisis terhambat (Mukai dan Okuno, 2004). Dengan demikian, penghambatan proses glikolisis akan menyebabkan kematian spermatozoa.

## SIMPULAN
Penambahan  VCO  6%  dalam  pengencer Tris-kuning telur efektif dalam mempertahankan
kualitas dan daya tahan hidup spermatozoa  sapi bali hingga 6 hari penyimpanan

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Ani  NKH.  2013.  Protective  Influence  of Olive  Oil  on  Reproductive  Parameters  in Male  Rat  Treated  with  Cadmium. Global Journal  of  Bio-Science  and  Biotechnology 2 (4): 500-505.
Arifiantini  RI,  Wresdiyati  T,  dan  Retnani  EF.
2006. Kaji banding morfologi spermatozoa sapi  bali  (Bos  sondaicus)  menggunakan pewarnaan  Williams,  eosin,  eosin  nigrosin dan  formol-saline. Jurnal  Sains  Veteriner . 24(1): 65-70.
Arifiantini  RI,  Yusuf  TL,  dan  Yanti  D.  2005. Kaji  banding  kualitas  semen  beku  sapi Friesian  Holstein  menggunakan  pengencer dari  berbagai  balai  inseminasi  buatan  di Indonesia. Animal  Production 7(3):  168- 176.
Astuti  S,  Muchtadi  D,  Astawan  M,  Purwantara
B  dan  Wresdiyati  T.  2008.  Pengaruh Pemberian Tepung Kedelai Kaya Isoflavon,  Seng  ( Zn )  dan  Vitamin  E terhadap Kadar Hormon Testosteron Serum dan Jumlah Sel Spermatogenik pada Tubuli Seminiferi  Testis  Tikus  Jantan. JITV .  13 (4): 288-293.
BSN (Badan Standardisasi Nasional). 2017. SNI 4869-1:2017 .  Semen  Beku-Bagian  1:  Sapi . Badan Standarisasi Nasional. Jakarta.
Bintara S. 2011. Rasio X:Y dan kualitas sperma pada  kambing  kacang  dan  peranakan ettawa.  Fakultas  Peternakan  Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta. Sains Peternakaan , 9(2):65-71.
Barbonetti  A,  Vassallo  MRC,  Fortunato  D, Francavilla  S,  Maccarrone  M,  Francavilla F.  2010.  Energetic  metabolism  and  human sperm  motility:  impact  of  CB1  receptor activation. Endocrinology 151(12):  5882– 5892.
Damayanti  Y.  1991.  Pengaruh  Kadar  Fruktosa dalam  Pengencer  Air  Kelapa  Muda,  Aiar Siwalan dan Kombinasinya dengan Kuning Telur  terhadap  Kualitas  Air  Mani  Ayam Buras. Skripsi . Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya.
Dosumo  OO,  Duru  FIO,  Osinubi  AA,  Oremosu AA  and  Noronha  CC.  2010.  Influence  of Virgin  Coconut  Oil  (VCNO)  on  Oxidative Stress, Serum Testosterone and
Gonadotropic  Hormones  (FSH,  LH)  in Chronic Ethanol Ingestion. Agriculture and Biology  Journal  of  North  America .1  (6):
1126-1132.
Feradis.  2010. Bioteknologi  Reproduksi  pada Ternak . Alfabeta : Bandung. Garner  DL  and  Hafez  ESE.  2000. Spermatozoa and  seminal  plasma  in  reproduction  in farm animals . Edited by E. S. E. Hafez. 7 th edition.  Lippincott  Wiliams  and  Wilkins. Maryland, USA.
Hernanto  M,  Suswardana,  Saraswati  PDA  dan Radiono  S.  2008,  virgin  coconut  oil protection  against  uv  binduced  erithema and  pigmentation, BIKKK  (Berkala  Ilmu Kesehatan  Kulit  dan  Kelamin) 3(20),  208- 211
Hidayahturrahmah.  2007.  Waktu  motilitas  dan viabilitas  spermatozoa  ikan  mas (Cyprinus carpio  L) pada  beberapa  konsentrasi larutan  fruktosa .  Jurnal  bioscientiae 4(1): 9-18.
Hidayatin, D. 2002. Kaji banding kualitas semen beku  produk  bib  lembang  dan  singosari pada setiap jalur distribusi. Skripsi Fakultas Kedokteran  Hewan.  Institut  Pertanian Bogor, Bogor.
Ismaya.  2014. Bioteknologi  Inseminasi  Buatan pada  Sapi  dan  Kerbau .  Gadjah  Mada
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember 2020) Volume 7, No. 2:130-138                     pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Blegur et  al .: Pengaruh Penambahan Virgin Coconut Oil.........................
University  Press.  Yogyakarta.  ISBN  979- 420-848-5.
Johnson  LA,  Weitze  KF,  Fiser  P,  and  Maxwell WMC.  2000. Storage  of  boar  semen . J Anim Sci 62: 143-172
Kamal A, Gubartallah A, Ahmed Amel, Bakhiet
O  and  Babiker  A.  2005.  Comperative studies  on  reproduktif  performance  of nubian and saanen buck under the climatic conditions of Khartoum. Journal of Animal and Veterinary Advances 4(11) : 942-944.
Nursyam.  2007.  Perkembangan  iptek  bidang reproduksi  ternak  untuk  meningkatkan produktivitas ternak. JITV . 21(4):145-152. Marina  AM,  Che  Man  YB,  Nazimah  SAH, Amin  I.  2009.  Antioxidant  capacity  and phenolic  acids  of  virgin  coconut  oil. International Journal of Food Sciences and Nutrition 60(2):114-123.
Hine  TM,  Burhanuddin,  Marawali  A.  2014. Efektivitas air buah lontar dalam mempertahankan  motilitas,  viabilitas  dan daya  tahan  hidup  spermatozoa  sapi  bali.
Jurnal Veteriner 15 (2) : 263-273.
Mukai  C,  Okuno  M.  2004.  Glycolysis  plays  a major  role  for  adenosine  triphosphate supplementation  in  mouse  sperm  flagellar movement. Biology  of  Reprod 71(2):540- 547.
Nalley  WMM,  Handarin  R  dan  Purwantara  B.
2007.  Viabilitas  spermatozoa  rusa  timor ( Cervus  timorensis )  di  dalam  pengencer Tris kuning telur dengan sumber karbohidrat  berbeda  yang  disimpan  pada suhu ruang. JITV 12(4): 311-317. Partodihardjo  S.  1982 .  Ilmu  reproduksi  hewan . Penerbit Mutiara. Jakarta.
Parera F, Prihatiny Z, Souloka DF dan Rizal M.
2009.  pemanfaatan  sari  wortel  sebagai pengencer alternatif spermatozoa epididimis  sapi  bali. J.  Indon.  Trop.  Anim. Agric . 34(1): 50-56.
Pratiwi  WC,  Affandhy  L,  Situmorang  P.  2007.
Observasi kualitas semen cair sapi peranakan  ongole  terhadap  perbedaan waktu  inkubasi  pada  proses  pemisahan spermtozoa.  2007. Loka  Penelitian  Sapi Potong . Bogor. 195-200.
Putri  BE,  Soetjipto  H,  dan  Hartini  S.  2014. Kadar  polifenol  dan  efek  antioksidan ekstrak etanol buah sosis ( Kigelia Africana
(Linn.)  Benth.)  Serta  aplikasinya  dalam
sabun  transparan. Seminar  Nasional  Kimia dan Pendidikan Kimia VI . 326-331.
Ratnawati  D,  Affandhy  L,  Pratiwi  WC  dan Prihandini  PW.  2008.  Pengaruh  pemberian suplemen  tradisional  terhadap  kualitas semen  pejantan  sapi  bali. Loka Penelitian Sapi Potong. Semarang.
Ratnawati  D,  Isnaini  N,  Susilawati  T.  2017. Pemanfaatan casa dalam observasi motilitas  spermatozoa  semen  cair  sapi Madura  dalam  pengencer  yang  berbeda. Jurnal Ilmu-ilmu Peternakan, 27(1):80-95. Rizal  M,  Herdis,  dan  A  Boediono.  2004.  Daya hidup  sperma  epididimis  domba  setelah disimpan pada suhu rendah (5 o C). J. Anim. Prod. 6(1) : 30-36
Rizal  M.  2009.  Daya  hidup  spermatozoa epididimis sapi bali yang dipreservasi pada suhu  3-5 o C  dalam  pengencer  tris  dengan konsentrasi  laktosa  yang  berbeda.  Fakultas Peternakan  Universitas  Pattimura.  Ambon. JITV , 14(2):142-149.
Sanoeka  D  and  Kurpisz  M.  2004.  Reactive oxygen species and sperm cells.
Reproductive Biology  and  Endrocrilogy 2(12):1-7.
Solihati N, R Idi, S R Darojah, M  Rizal, dan M. Fitriati.  2008.  Kualitas  spermatozoa  cauda epididimis  sapi  Peranakan  Ongole  (PO) dalam  pengencer  susu,  tris  dan  sitrat kuning  telur  pada  penyimpanan  4-5 o C. Animal Production. 1 (10) : 22-29 Suyadi  A,  Rachmawati,  Iswanto  N.  2012.
Pengaruh α-tocopherol yang berbeda dalam pengencer  dasar  tris  aminomethane  kuning telur terhadap kualitas semen kambing boer yang  disimpan  pada  suhu  5 o C. Jurnal Ilmiah Ilmu-ilmu Peternakan. 22 (3): 1-8. Umar  SH,  Queljoe  ED,  dan  Tendean  L.  2015. Pengaruh  pemberian  ekstrak  kulit  buah manggis ( Garcinia mangostana L.) terhadap kualitas spermatozoa wistar jantan ( Rattus  norvegicus )  yang  diberi  paparan suhu panas. Jurnal e-Biomedik (eBm) . 3 (2)
: 670-675.
Yani A, Nuryadi, dan T Pratiwi. 2001. Pengaruh tingkat  substitusi  santan  kelapa  pada pengencer  tris  dan  waktu  penyimpanan terhadap kualitas semen kambing peranakan  ettawah  (PE). Jurnal  Biosain 1(1):23-29.