http://ejournal.ihdn.ac.id/index.php/jyk
Uji Teratogenik Ekstrak Etanol Biji Beligo (Benincasa Hispida (Thunb.) Cogn.) Pada Mencit  Betina (Mus Musculus)
Nur Alim 1 , Mustainah 2 , Sri Sulistyawati Anton 3 , Rusman Hasanuddin 4 , Muhammad Ihsan 5 , Ni Ketut Sinarsih 6
1,2,4,5 Universitas Islam Makassar 3,6 Universitas Hindu Negeri I Gusti Bagus Sugriwa Denpasar
Diterima 19 September 2023, direvisi 29 September 2023, diterbitkan 30 September 2023
e-mail: nuralim.dty@uim-makassar.ac.id

## ABSTRAK
Selama kehamilan, janin dapat mengalami efek yang tidak dikehendaki dari penggunaan obat herbal dan kimia, terutama pada fase embrionik organogenesisTujuan penelitian ini adalah untuk  mengetahui  bagaimana  biji  beligo  ( Benincasa  hispida (Thunb.)  Cogn.)  mempengaruhi mencit betina ( Mus musculus ). Penelitian ini melibatkan pengujian teratogenik menggunakan 16 ekor mencit sebagai hewan uji dan ekstraksi melalui maserasi dengan pelarut etanol 70%. Hewan- hewan ini dibagi menjadi 4 kelompok. Pada kelompok perlakuan, ada tiga betina dan satu jantan dalam setiap kelompok. Kelompok 1 kontrol negatif diberi Na-CMC 1%, kelompok II, III, IV diberi ekstrak etanol biji beligo dengan dosis masing-masing 140 mg/kgBB, 280 mg/kgBB dan 420  mg/kgBB.  Semua  kelompok  diberikan  sediaan  selama  hari  ke-6  sampai  ke-15  masa kebuntingan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji beligo memberikan efek penuh pada fetus mencit. Hasilnya menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji beligo dengan dosis 140  mg/kgBB,  280  mg/kgBB,  dan  420  mg/kgBB  tidak  memiliki  efek  teratogenik  pada  fetus mencit.
Kata Kunci : Beligo Benincasa hispida (Thunb.) Cogn; Teratogenik; Obat herbal
Jurnal Yoga dan Kesehatan, Vol. 6 No. 2 (September, 2023) : 243-253

## ABSTRACT
Using  pharmaceutical  and  herbal  medications  while  pregnant  can  have  negative consequences on the fetus, especially at the embryonic organogenesis stage. This study aims to determine the teratogenic effect of beligo seeds (Benincasa hispida (Thunb.) Cogn.) on female mice (Mus musculus). 16 mice were separated into 4 groups for the teratogenic testing, which involved extraction by maceration using 70% ethanol. Each group consists of 3 females and 1 male in the treatment group. Negative control group I was given 1 % Na-CMC, groups II, III, IV were given ethanol extract of beligo seeds at doses of 140 mg/kgBB, 280 mg/kgBB and 420 mg/kgBB, respectively. All groups were given preparations during days 6-15 of pregnancy. The results  showed  that  the  ethanol  extract  of  beligo  seeds  in  mice  fetuses  was  100%  complete. Conclusion,  Beligo  seed  ethanol  extract  at  doses  of  140  mg/kgBB,  280  mg/kgBB  and  420 mg/kgBB does not cause teratogenic effects.
Keywords : Beligo Benincasa hispida (Thunb.) Cogn; Teratogeni; Herbal medicine

## I. PENDAHULUAN
Teratogenik  merupakan  suatu  sifat  yang  mengganggu  proses  reproduksi  dengan mempengaruhi genetik (DNA atau kromosom), dan menyebabkan gangguan pertumbuhan dan perkembangan  embrio  atau      janin  sehingga  dapat      terjadinya  kelainan  kongenital  (cacat bawaan).  Trimester  pertama  kehamilan  memiliki  risiko  janin  yang  paling  tinggi.  Periode sepuluh minggu pertama, yang merupakan tahap perkembangan seluruh tubuh utama, dikenal sebagai organogenesis. Paparan obat selama masa organogenesis dapat berisiko mengganggu pembentukan  organ-organ  pada  janin  sehingga  mengakibatkan  kecacatan  pada  janin  seperti bibir sumbing atau malformasi jantung (Nelly, 2015; Anita, 2021).
Selama kehamilan, penggunaan obat herbal dan kimia dapat memiliki efek yang tidak dikehendaki pada janin. Ini terutama berlaku pada fase embrionik dan organogenesis, di mana risiko kecacatan pada janin dapat meningkat. Selama kehamilan, ibu dan janin selalu terhubung satu sama lain. Ibu hamil harus berhati-hati saat mengonsumsi obat karena dapat menembus plasenta.  Plasenta  obat  dapat  mengalami  biotransformasi  dan  menghasilkan  senyawa  reaktif yang bersifat teratogenik. Obat-obatan ini dapat merusak janin selama perkembangan (Depkes RI, 2006). Penggunaan obat berulang dapat menyebabkan akumulasi pada janin, terutama pada janin  yang  belum  memiliki  sistem  metabolisme  yang  berfungsi  secara  sempurna.  Ini  dapat menyebabkan masalah bagi janin ibu hamil (Mulyadi dkk.,2020).
Tanaman  yang  sering  digunakan  di  Indonesia  sebagai  bahan  obat  adalah  beligo  yang secara empiris digunakan sebagai obat untuk mengatasi demam, tipes, dan aprodisiak. Daging buah dan biji tanaman adalah bagian tanaman yang paling sering digunakan.  Ekstrak biji beligo mengandung flavonoid, terpenoid dan alkaloid.   Secara farmakologi, telah terbukti berfungsi
sebagai  laksatif,  diuretik,  dispepsia,  dan  antiinflamasi.  Selain  itu,  mereka  memiliki  efek hipoglikemik,  hipolipidemik,  dan  antikanker  (Chen  and  Huang,  2019;  Kumar et  al., 2020; Rusdi, 2017).
Ibu  hamil  sering  kali  mengalami  kondisi  stres  tinggi  secara  psikologis.  Peristiwa psikologis seperti tingkat stres yang tinggi, kecemasan atau depresi dapat secara langsung atau tidak  langsung  mempengaruhi  kehamilan  sehingga  dapat  menyebabkan  pre-eklamsia  serta meningkatkan  tekanan  darah  dan  kelebihan  protein  dalam  urine.  Ibu  hamil  juga  sering mengalami  sakit  kepala,  pengelihatan  yang  kabur  atau  berbayang  secara  mendadak,  serta bengkak di wajah dan jari-jari tangan, sehingga Ibu hamil merasa kesulitan untuk mengonsumsi obat kimia sintetik dan memilih obat tradisional untuk dikomsumsi (Sulistyawati, 2011; Viana, 2011).
Menurut  penelitian  Qadrie  (2009),  ekstrak  etanol  biji  buah  beligo  memiliki  efek analgesik (antinosiseptif) dan antipiretik yang kuat pada dosis 250 dan 500 mg/kg BB.    Dalam penelitian tambahan yang dilakukan oleh Gill et al. (2010), ekstrak etanol biji beligo pada dosis 100,  200,  dan  300  mg/kg  BB  memiliki  efek  analgesik  dan  antiinflamasi,  dengan  penurunan volume kaki yang signifikan dibandingkan dengan obat sintetik morfin dan natrium diklofenak. Studi Alim (2022) menunjukkan bahwa ekstrak biji buah beligo (Benincasa hispida (Thunb.) Cogn.) memiliki efek antihipertensi pada dosis 100 mg/kg BB, 200 mg/kg BB, dan 300 mg/kg BB berdasarkan pengukuran tekanan darah, ekspresi mRNa gen nitrat oksida (NO) Angiotensin II, Endotelin-1 pada tikus putih ( Rattus novergicus ) yang diinduksi L-NAME.
Berdasarkan penjelasan ini, masalah penelitian ini adalah Apakah ada hubungan antara ekstrak etanol biji beligo (Benincasa hispida (Thunb.) Cogn.) dan efek toksik pada mencit ( Mus musculus ). Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui efek teratogenik biji beligo ( Benincasa hispida (Thunb.)  Cogn.)  terhadap  mencit  ( Mus  musculus). Manfaat  penelitian  ini  untuk menambah pengetahuan tentang efek teratogenik ekstrak etanol biji beligo ( Benincasa hispida (Thunb.) Cogn.) terhadap mencit ( Mus musculus ) dan menjadi referensi untuk penelitian yang akan datang.

## II. METODE
A. Bahan
Penelitian  ini  menggunakan  aquadest,  biji  beligo  (Benincasa  hispida  (Thunb.)  Cogn.), etanol 70%, eter, larutan Na-CMC 1%, dan mencit (Mus musculus).

## B. Pengambilan Sampel
Sampel  penelitian  berupa  buah  beligo  ( Benincasa  hispida (Thunb.)  Cogn.)  yang diperoleh  di  Dusun  Daulele  yang  terletak  di  Desa  Lembang  Lohe,  Kecamatan  Kajang, Kabupaten  Bulukumba,  Provinsi  Sulawesi  Selatan..  Titik  Koordinat:  Lintang  Selatan 5°36’21.06’’(S), Bujur Timur 120°35’70.87’’(E), Waktu 09:02 AM GMT +08:00.

## C. Pengolahan Sampel
Setelah  dicuci  dengan  air  mengalir,  buah  beligo  (Benincasa  hispida  (Thunb.)  Cogn.) dikupas,  dipisahkan  bijinya,  dan  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan,  diblender  dan diayak dengan ayakan mesh 40 kemudian ditimbang.

## D. Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Beligo
Ekstraksi  dilakukan  melalui  proses  maserasi  dengan  pelarut  etanol  70%,  serbuk simplisia  biji  beligo (Benincasa  hispida (Thunb.)  Cogn.)  ditimbang  sebanyak  332,39  g kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tempat  maserasi.  Terlebih  dahulu,  cairan  penyari  dengan etanol  70%  ditambahkan  ke  dalam  sampel  hingga  mengembang.  Setelah  itu,  etanol  70% ditambahkan lagi hingga simplisia terendam. ditutup dan dibiarkan selama tiga kali dua puluh empat jam dengan pengadukan sesekali dalam bejana yang tertutup dan tidak terpapar cahaya. Disaring untuk membedakan filtrat dan ampasnya. Setelah ampas diremaserasi kembali dengan pelarut  etanol  70%,  filtrat  dikumpulkan  dan  diuapkan  dengan  evaporator  rotasi  untuk mendapatkan ekstrak kental. Timbang, hitung rendamennya.

## E. Pembuatan  Na-CMC 1% b/v
Na-CMC  sebanyak  1  gram  dimasukkan  sedikit  demi  sedikit  ke  dalam  lumpang  yang berisi air panas sambil diaduk hingga terbentuk larutan yang homogen. Larutan ini kemudian ditambahkan  volumenya  hingga  100  mL,  kemudian  didinginkan  dan  dimasukkan  ke  dalam botol.

## F. Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Biji  Beligo
Dosis ekstrak biji beligo adalah 140 mg/kg BB, 280 mg/kg BB, dan 420 mg/kg BB. Dosis 140 mg/kg BB dibuat dengan cara ekstrak etanol biji beligo yang di timbang  0,42 g, dosis 280 mg/kg  BB  ekstrak  etanol  biji  beligo  yang  ditmbang  0,84  g,  sedangkan  dosis  420  mg/kg  BB ekstrak  etanol  biji  beligo  yang  ditimbang  1,26  g,  Setelah  itu,  1%  Na-CMC  dimasukkan  ke
dalam lumpang. Kemudian, masukkan ke labu tentukur 100 mililiter dan cukupkan volumenya sampai ada tanda batas. Kemudian, kocok sampai homogen.

## G. Penyiapan Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah  mencit  betina  (Mus-musculus)  usia  dua  hingga  tiga bulan dengan berat badan rata-rata dua puluh hingga tiga puluh gram. Hewan ini sehat dan telah dilatih untuk menyesuaikan diri dengan lingkungannya selama satu minggu. Mencit ditimbang satu per satu, lalu dibagi menjadi empat kelompok, dengan satu mencit jantan dan empat mencit betina di masing-masing.
Perlakuan Terhadap Hewan Uji
Enam  belas  mencit  yang  diuji  dibagi  menjadi  empat  kelompok  perlakuan,  masing- masing dengan satu mencit jantan dan tiga mencit betina. Setelah itu, mencit diberikan kepada empat kelompok sebagai berikut:
- Kelompok Pertama diberi Na-CMC 1% sebagai kontrol negatif
- Kelompok Kedua diberikan ekstrak etanol biji beligo 140 mg/kg BB
- Kelompok Ketiga diberikan ekstrak etanol biji beligo 280 mg/kg BB
- Kelompok Keempat diberikan ekstrak etanol biji beligo 420 mg/kg BB

## H. Pengawinan Hewan Uji
Mencit  betina  dan  jantan  dikawinkan  secara  alami  dalam  satu  kandang.  Setelah  itu,  mencit betina dikeluarkan dari kandang dan diamati untuk mengetahui apakah ada sumbat vagina atau tidak. Jika  ada bercak sumbat vagina, mencit dianggap kawin dan hari kebuntingan dihitung sebagai hari ke nol kebuntingan.

## I. Pemberian Dosis Sediaan Uji
Sediaan  uji  diberikan  pada  mencit  bunting  secara  oral  setiap  hari  selama  masa organogenesis, antara hari keenam dan lima belas dari kehamilan.

## J. Pembedahan Hewan Uji
Pada hari ke 18 mencit betina dibedah untuk pemeriksaan fetus. Mencit mula-mula di timbang (bobot akhir), dibius dengan eter, dan didiamkan selama beberapa menit lalu ditarik ekor  dan  kepala  secara  bersamaan.  Diletakkan  terlentang  diatas  papan  bedah.  Dada  mencit dioles dengan alkohol 70% sampai bagian perut. Ujung gunting digunakan untuk memotong
kulit pada bagian dada mencit sehingga isi perut dapat dilihat. Menggunting ujung uterus dan mengeluarkannya. Selanjutnya, uterus kemudian direndam dalam larutan natrium klorida 0,9%.

## K. Pemeriksaan Fetus
Setelah  menghitung  jumlah  fetus  yang  ada  di  dalam  rahim,  bagian  uterus  digunting perlahan.  Setelah  semua  fetus  dimasukkan  ke  dalam  botol  dan  larutan  bouin  ditambahkan hingga  batas  botol,  fetus  dibiarkan  selama  30  menit  sebelum  dibilas  dengan  air  dingin. Pemeriksaan fisik dilakukan pada bagian tubuh yang dianggap abnormal dibandingkan dengan kontrol negatif, seperti ruas jari, telinga, mata, dan lainnya.

## L. Tanda Hewan Uji yang Mengalami Kebuntingan
Sebelum  pengujian  dilakukan  terhadap  hewan  coba,  terlebih  dahulu  harus  diketahui apakah hewan tersebut sudah mengalami kebuntingan atau belum. Adapun ciri-ciri hewan yang sudah  mengalami  kebuntingan  dalam  hal  inimencit (Mus  musculus) memiliki  gerakan  yang agresif, puting susu mencit sangat jelas terlihat, apabila ditekan pada bagian vagina mencit akan mengeluarkan cairan, bobot badannya meningkat, perutnya agak membesar.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini menggunakan sampel biji beligo untuk mengetahui efek teratogenik biji beligo  terhadap  mencit.  Biji  beligo  dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  70%.  Metode  ekstraksi secara maserasi dipilih karena metode ini tidak menggunakan pemanasan sehingga aman untuk senyawa yang tidak tahan terhadap suhu tinggi  (Ditjen POM, 1979).

## Tabel 1. Data Hasil Rendamen Ekstrak Etanol Biji Beligo
Berat sampel basah (g) Berat sampel kering (g) Jumlah Pelarut (ml) Berat ekstrak (g) % Rendamen 658,27 332,39 1600 7,5 2,25
Tabel 2. Hasil pengukuran bobot badan awal dan setelah pemberian ekstrak
Keterangan : EEBB (Ekstrak Etanol Biji Beligo)
Berat badan induk merupakan faktor dalam menentukan bagaimana suatu teratogen dapat mempengaruhi janin, oleh karena itu digunakan sebagai salah satu indikator gangguan. Selama fase organogenesis terjadi peningkatan berat badan induk mencit dapat dilihat pada (Tabel 2). Penurunan berat badan induk mencit merupakan tanda terhambatnya kemampuan janin untuk tumbuh dan berkembang, sehingga digunakan sebagai parameter teratogen pada mencit yang bunting (Santoso, 2006).
Bobot Badan Mencit (g)
Kelompok Perlakuan Mencit Awal Setelah Pemberian sediaan % kenaikan Kelompok I Kontrol (-) 1 2 3 28 27 26
41 40 38 31,70 32,50 31,57 Rata-rata 27 39,6 31,92 Kelompok II EEBB 140 mg/kg BB (6-15) 1 2 3 26 26 25
44 41 40 40,90 36,58 37,50 Rata-rata 25,6 41,6 38,32 Kelompok III EEBB 280 mg/kg BB (6-15) 1 2 3 23 28 26
42 41 41 45,23 31,70 36,58 Rata-rata 25,6 41,3 37,83 Kelompok IV EEBB 420 mg/kg BB (6-15) 1 2 3 25 27
24 36 43 40 30,50 37,20 40,00 Rata-rata 25,3 39,6 35,90

## Tabel 3. Jumlah Fetus dan Jumlah Kecacatan
Dosis Parameter Teratogenik Jumlah fetus tiap ekor Jumlah fetus Jumlah kecatatan Keterangan Kelompok I Na-CMC 1 % Mencit 1 =10 Mencit 2 = 8 Mencit 3 = 7 25 0 100% Lengkap Kelompok II EEBB 140 mg/kg BB Mencit 1 =12 Mencit 2 = 9 Mencit 3 = 8 29 0 100% Lengkap Kelompok III EEBB 280 mg/kg BB Mencit 1 =10 Mencit 2 = 9 Mencit 3 =10 29 0 100% Lengkap Kelompok IV EEBB 420 mg/kg BB Mencit 1 = 6 Mencit 2 =11 Mencit 3 = 8 25 0 100% Lengkap
Jumlah sepelahiran normal : 6-15 ekor (Malole dan Pramono, 1989)

## Pembahasan
Studi ini memanfaatkan penggunaan hewan uji mencit jantan dan betina berbobot 20– 30 gram. Empat mencit jantan sehat dan tidak cacat, dan dua belas mencit betina sehat, tidak bunting, dan telah melahirkan sebelumnya. Menggunakan mencit sebagai hewan laboratorium dan  dalam  penelitian  karena  siklus  hidupnya  yang  relatif  pendek,  mudah  dirawat,  memiliki banyak anak sepelahiran, dan memiliki sifat anatomis dan fisiologi yang jelas. Mencit memiliki tingkat kesuburan yang sangat tinggi karena dapat menghasilkan lebih dari satu juta keturunan dalam  waktu  kurang  lebih  satu  tahun.  Produksi  seksualnya  berlangsung  selama  7  hingga  8 bulan, dengan rata-rata 3 anak dilahirkan dan 6–12 anak per kelahiran (Priyambodo S, 2003).
Setelah  fase  estrus  ditemukan,  mencit  jantan  dan  betina  yang  merupakan  hewan nokturnal, dikawinkan pada sore hari dengan perbandingan 1:3 (1 jantan : 3 betina).  Setiap pagi, sumbat vagina diperiksa untuk memastikan apakah mencit telah mengalami kopulasi dan  berada  hari  kebuntingan  ke-0  (Almahdy,  2011).  Ciri-ciri  mencit  yang  telah  bunting memiliki gerakan yang agresif, puting susu yang sangat jelas terlihat, cairan yang dikeluarkan saat  ditekan  pada  area  vagina  mencit,  berat  badan  yang  meningkat,  dan  perut  membesar (Nugroho, 2018).
Dalam  penelitian  ini,  dua  belas  mencit  yang  telah  bunting  dibagi  menjadi  empat kelompok, masing-masing dengan tiga mencit betina. Kelompok Na-CMC 1% sebagai kontrol negatif  diberikan  pada  hari  6-15  kebuntingan,  kelompok  kedua  diberikan  dengan  dosis  140
mg/kg BB pada hari 6-15 kebuntingan, kelompok tiga diberikan dengan dosis 280 mg/kg BB pada hari 6-15 kebuntingan dan kelompok empat diberikan dosis 420 mg/kg BB diberikan pada hari 6-15 kebuntingan.
Hasil  pengukuran  bobot  badan  (Tabel  2)  menunjukkan  bahwa  kelompok  I  sebagai kontrol l negatif yang diberikan suspensi Na CMC 1% ekstrak biji beligo dan dengan presentasi rata-rata 31,92 %. Kelompok II yang diberikan suspensi ekstrak biji beligo dengan presentasi rata-rata  38,32%.  Kelompok  III  dengan  dosis  280  mg/kg  BB  dengan  presentasi  rata-rata 37,83%. Pada kelompok IV dengan dosis 420 mg/kg BB terjadii penurunan dengan presentasi rata-rata 35,9%.
Hasil  rata-rata  presentase  kenaikan  BB  mencit  betina  menunjukkan  bahwa  pada ekstrak  biji  beligo  dengan  dosis  140  mg/kg  BB,  280  mg/kg  BB  mencit  dan  420  mg/kg  BB mencit tidak memiliki efek teratogenik pada kelompok II, III dan IV dengan nilai presentase kenaikan  BB  mencit  betina  yang  dianalisis  dengan  rancangan  acal  lengkap  (RAL).  Hasil analisis dapat dilihat pada tabel ANAVA dimana nilai  F hitung <   F tabel 1% <  F tabel 5% (Tabel 5). Hal ini menunjukkan bahwa hasil statistik  yang diperoleh tidak signifikan  atau tidak ada perbedaan yang nyata pada kenaikan BB mencit betina setelah perlakuan pada  kelompok kontrol dan kelompok perlakuan dosis uji.
Hasil pengamatan secara langsung yang dilakukan secara morfologi dan visual (tabel 3) pada kelompok kontrol negatif Na-CMC 1% diperoleh jumlah fetus mencit sebanyak 25 fetus, kelompok  II  ekstrak  etanol  biji  beligo  dengan  dosis  140  mg/kg  BB  diperoleh  jumlah  fetus mencit sebanyak 29, Dalam kelompok III, ekstrak etanol biji beligo dengan dosis 280 mg/kg BB menghasilkan 29 fetus mencit, dan dalam kelompok IV, ekstrak etanol biji beligo dengan dosis  420  mg/kg  BB  menghasilkan  25  fetus  mencit.  Semua  kelompok  perlakuan  secara kelengkapan  organ  tidak  terjadi  kecacatan  dengan  persentase  organ  100%  lengkap  sehingga tidak dilakukan uji analisis data.  Meskipun jumlah setiap anakan induk berbeda-beda tetapi memiliki jumlah anakan yang normal. Hal ini sesuai dengan literatur yang mengatakan bahwa jumlah sepelahiran normal mencit yaitu 6-15 ekor anakan. Dalam penelitian lain, ekstrak biji beligo  tidak  berbahaya  pada  tikus  hingga  dosis  1  g/kg  BB  pada  metode  subkronis.  (Sugito, 2010).

## IV. PENUTUP
Hasil  penelitian  dan  pembahasan  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  biji  beligo ( Benincasa hispida (Thunb.) Cogn. ) yang diberikan pada mencit betina ( Mus Musculus ) dengan
dosis  140  mg/kgBB,  280  mg/kgBB,  dan  420  mg/kgBB  selama  masa  organogenesis  tidak memiliki efek teratogenik pada fetus mencit yang lengkap secara keseluruhan.

## DAFTAR PUSTAKA
Alim, N., 2022. Uji efek antihipertensi ekstrak etanol biji beligo ( Benincasa hispida (Thunb.) Cogn.) berdasarkan ekspresi mRNA gen nitrat oksida Angiotensi II, Endotelin-1 pada tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  yang  diinduksi  L-NAME. Disertasi .  UNHAS. Makassar.
Almahdy,  Dillasamola  D,  Irene  O,  OKtomalio  PB.,  2016. The  effect  of  Radiation  Exposure From Smartphone to Fetus Mice . RJPBS.
Anita  Widiastuti.,  dkk.  2021. Epidemiologi  Kesehatan  Reproduksi .  Yayasan  kita  menulis. Sumatera Utara
Chen,  L.,  Huang,  G.,  2019.  Antioxidant  activities  of  sulfated  pumpkin  polysaccharides. International Journal Biol. Macromol . 126, 743–746.
Depertemen Kesehatan RI. 2006 . Pedoman pelayanan farmasi untuk ibu hamil dan menyusui.
Dillasamola, D., Almahdy, A., Desri, A., Diliarosta, S. 2018. Uji Efek Teratogenik dari Yoghurt Terhadap Fetus Mencit Putih ( Mus musculus) . Jurnal Sainsa Farmasi & Klinis . Vol. 5(1). Hal. 28-32.
Gill, K. Dhiman, J. Bajwa, P. Sharma, dan S. Sood. 2010. “Evaluasi pemulungan radikal bebas, potensi  antiinflamasi  dan  anal  gesik  dari  ekstrak  biji  Benincasa  hispida,” Jurnal Internasional Farmakologi . Vol. 6. Hal. 652–657.
Kumar,  K.,  Srivastav,  S.,  Sharanagat,  V.S.  2020.  Ultrasound  assisted  extraction  (UAE)  of bioactive  compounds  from  fruit  and  vegetable  processing  bypriducts : A  review. Ultrason. Sonochemistry 70, 1– 11.
Mulyadi,  T.,Ida  Julianti,  C.,&  Sihombing,  R.  2020.  Tinjauan  Pustaka :  Teknik  Pengujian Toksisitas Teratogenik Pada Obat Herbal. Jurnal Farmasi Udayana.
Malole,  M.  B.  M.  dan  C.  S.  U.  Pramono.  1989. Penggunaan  Hewan-hewan  Percobaan  di Laboratorium. Pusat Antar Universitas Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor: Bogor. Nelly Karlina, Efrida Yanti dan Nuriah Arma. 2015. Bahan Ajar  Embriologi manusia . Ed.1, Cet.1. Yogyakarta.
Nugroho, Rudy Agung. 2018. Mengenal Mencit Sebagai Hewan Laboratorium. Mulawarman University Press: Samarinda.
Priyambodo S. 2003. Pengendalian Hama Tikus Terpadu . Ed ke-3. Jakarta: Penebar Swadaya.
Qadrie, N. T. Hawisa, M. W. Khan, M. Samuel, and R. Anandan. 2009. “ Antinociceptive and anti-pyretic  activity  of  Benincasa  hispida  (thunb.)  cogn.  in  Wistar  albino  rats,” Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences . Vol. 22. Hal. 287–290,
Rusdi,  M.  ,  Sinta  &  Bariun,  H.  2017.  Uji  Aktivitas  Fraksi  Ekstrak  Biji  Beligo  ( Benincasa hispida (Thunb)  Cogn)  Terhadap  Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah  Mencit . Jurnal Farmasi UIN Alauddin Makassar . Vol. 8. No. 1.
Sugito., 2010. Uji Toksisitas Akut dan Subkronis Biji Buah Bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) secara In Vivo pada Tikus Sprague Dawley. [ Tesis ]. Program Pascasarjana IPB. Bogor
Santoso, H.B. 2006. Pengaruh Kafein terhadap Penampilan Reproduksi dan Perkembangan
Skeleton Fetus Mencit ( Mus musculus ). Jurnal Biologi X : 39-48.
Sulistyawati, A. D. 2011. Asuhan Kebidanan Pada Ibu Bersalin . Salemba Medika : Jakarta.