## DAMPAK PERBEDAAN SALINITAS TERHADAP VIABILITAS BAKTERI Vibrio fluvialis
1 Apri Arisandi, 2 Maulinna Kusumo Wardani, 3 Kaswan Badami, 4 Garina Dyah Araninda Program Studi Ilmu Kelautan Fakultas Pertanian Universitas Trunojoyo Madura JL. Raya Telang PO.BOX 2 Kamal-Bangkalan 69162 E-mail: apri_unijoyo@yahoo.com

## Abstract
Seaweed can not be differentiated between root, leaves and trunk. Fluktuate and extreame of sea water condition cause Kappaphycus alvarezii seaweed susceptible to get ice-ice disease. Appearing of white patches at thallus of infected seaweed. Suspected ice-ice disease is caused by pattogen bacteria namely Vibrio fluvialis. Vibrio fluvialis is patogen bacteria that cause ice-ice disease seaweed, gram negative bacteria that has body shape like steam and bend. This bacteria can grow in the aquatic ecosystem that is influenced by abudance of nutrient availability, pH, temperature, hardness and salinity. The purpose of this research is to know the viability of Vibrio bacteria at difference salinity. This research is started by identify bacteria until spesies level through biochemical test whit reference SNI 01-2332-4-2006 and identification book (Cowan 2003). Viability is observed three time repetition at TCBS palte media with salinity 30, 32, and 34 ppt, and confirmation test. Bacteria is planted at oblique TSA media with salinity levels 0 ppt, 20 ppt, 40 ppt, 60 ppt, 80 ppt and 100 ppt . the results obtained shows the bacteria grow normally at all test medias except at 100 ppt media. This shows that Vibrio fluvialis bacteria is a bacteria that can grow well at high salinity levels (halofilik).
Keyword : Kappaphycus alvarezi, Ice-ice, Vibrio fluvialis, Viability

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan salah satu negara eksportir rumput laut di Asia dan tersebar keseluruh wilayah perairan Indonesia. Rumput laut mempunyai manfaat yang besar dalam kehidupan sehari-hari, sebagai pangan, obat-obatan dan bahan industri. . Namun permasalahan yang sering terjadi pada budidaya rumput laut yaitu adanya serangan penyakit ice-ice salah satunya disebabkan oleh bakteri patogen Vibrio fluvialis , gejala yang umum ditandai dengan memutihnya bagian tallus baik pada tallus pangkal, tallus tengah serta tallus muda (DKP 2004). Penyebaran penyakit ice-ice terjadi akibat perubahan iklim yang ekstrim, perubahan suhu serta adanya perubahan kualitas air seperti salinitas, pH, DO dan kecerahan. Penyakit ice-ice menyebar sangat cepat dan merata pada musim kemarau. Ini disebabkan karena pada bulan tersebut terjadinya musim kemarau. Parameter kualitas air yang berperan penting sebagai pendukung kehidupan dan pertumbuhan bakteri diantaranya adalah pH, suhu, sumber nutrisi, zat kimia, zat sisa metabolisme dan kandungan garam (Kusuma 2014). Perubahan salinitas atau kadar garam dapat mempengaruhi kadar air dalam  tumbuh mikroba (Agustono et  al. 2012). Oleh sebab itu penelitian ini bermaksud untuk menguji dan membuktikan viabilitas bakteri Vibrio fluvialis pada salinitas yang berbeda dengan
harapan setelah diketahui tingkat pertumbuhan bakteri dengan perbedaan salinitas petani rumput laut bisa mengatasi masalah penyakit ice-ice .

## METODOLOGI

## Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan pada tanggal bulan Mei 2017. Sampel rumput laut di peroleh dari Desa Aeng Dake Kecamatan Bluto Kabupaten Sumenep, Madura. Proses isolasi bakteri dilakukan di Laratorium Balai Karantina Ikan Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan Kelas 1 Surabaya II, Sidoarjo.

## Parameter Penelitian

## Identifikasi Bakteri
Identifikasi bakteri  dilakukan melalui seragkaian pengujian dan pengamatan. pengujian yang dilakukan melalui uji biokimia diantaranya yaitu pewarrnaan gram bertujuan untuk mengetahui struktur dan bentuk bakteri, uji  oksidase, uji sensitifitas terhadap 0/129 vibriostat, uji TSI, uji ONPG, uji Oksidatif-Fermentatif (OF),  dan uji biokimia lanjutan yaitu uji hidrolisis urea, uji fermentatif karbohidrat, uji voges-proskauer (VP), uji arginin, lysin dekarboksilase, dan ornitin dekarboksilase sesuai dengan SNI 01-2332.4-2006.

## Viabilitas Bakteri
Viabilitas bakteri dilakukan melalui pengamatan keadaan pertumbuhan bakteri terhadap perbedaan salinitas pada media TSA ( Tryptic Soya Agar) . pengamatan
dilakukan 48 jam setelah penanaman bakteri.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi Bakteri Uji presumtif Uji presumtif bakteriyang di lakukan bertujuan untuk memudahkan dalam tahap identifikasi sampai tingkat genus, uji yang
dilakukan meliputi uji gram, uji katalase, dan uji oksidase. Hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel 1
Dari hasil yang didapat dapat disimpulkan bahwa bakteri Vibrio fluvialis mempunyai sifat gram negatif, ini dilihat dari uji gram yang didapatkan hasil negatif dengan ditandainya koloni mengental karena terdapat dinding sel pada bakteri bersifat gram negatif, ini akan memecahkan dinding sel tersebut yang diakibatkan oleh reaksi dengan larutan KOH. Sedangkan untuk uji katalase dan uji oksidase didapatkan hasil positif, menurut Cowan et. al (2003) menyebutkan bahwa pada buku identifikasi bakteri yang didapat adalah bakteri dari genus Vibrio , sama halnya
dengan pengujian sampel pada penelitian ini. Untuk mengetahui lebih lanjut apa benar bakteri yang didapat adalah bakteri genus Vibrio maka dilakukan uji lanjutan yaitu dengan uji biokimia.

## Uji Biokimia
Uji biokimia lanjutan dilakukan untuk mengetahui spesies dari bakteri yang
ditemukan. Hasil dari uji biokimia dapat membuktikan bahwa spesies bakteri Vibrio adalah Vibrio fluvialis yang dikaitkan dengan hasil buku Holt et. al (1994).
Hasil identifikasi bakteri dari penelitian yang telah dilakukan menunjukkan bahwa bakteri yang terdapat pada sampel rumput laut yaitu bakteri jenis Vibrio fluvialis . Ini dilihat dari karakteristik morfologi bakteri yang memiliki bentuk koloni bulat dan berwarna kuning pada media TCBS, gram negatif. Pada uji biokimia ini menunjukkan hasil TSIA A/A tanpa ada gas dan tidak menghasilkan H 2 S, uji O/F negatif atau Fermentatif, pada uji karbohidrat seperti glukosa, laktosa, sukrosa, manitol dan arabinosa didapat hasil
Tabel 1 Hasil Uji Presumtif No. Pengujian Hasil Holt et al 1994 1. Uji Gram - - 3. Uji Katalase + + 3. Uji Oksidase + +
positif (+) sedangkan uji sorbitol hasilnya negatif (-), uji ketahanan NaCl 1,5 %, NaCl 4%, NaCl 6%, NaCl 8% hasilnya positif (+), dan NaCl 10% negatif (-), uji minnitol dan moltility posotif (+), uji indol negatif (- ), Chirstensen’s Urease negatif (-), Methyl Red (MR) positif (+), Voges Proskaeur (VP) negatif (-), Arginin Dihydrolase positif (+), Lysine Decarboxylase negatif (- ), Ornithin Decarboxylase negatif (-), ONPG negatif (-), O/ 129 Disc 150 sensitif, TCBS 42 O C positif (+), O/ 129 Disc 10 resisten.Hasil uji biokimia yang diperoleh tidak jauh berbeda dengan hasil Holt et. al (1994) dengan hasil spesies bakteri yaitu bakteri Vibrio fluvialis .
Viabilitas bakteri terhadap salinitas yang berbeda
Pengamatan viabilitas bakteri Vibrio fluvialis pernah dilakukan oleh Kaligis (2015) yang menggunakan tiga macam salinitas yaitu 30 ppt, 35 ppt dan 40 ppt. Faturrahman dan Luluk (2012) juga mengamati viabilitas dengan berbagai salinitas yang berbeda yaitu 0 ppt, 20 ppt, 40 ppt, 60 ppt dan 80 ppt. Disini ditunjukkan bahwa pada salinitas 0 ppt dan 8 ppt (-) atau tidak ada bakteri yang tumbuh. Pertumbuhan bakteri optimum terdapat pada salinitas 20 ppt. Pada penelitian yang dilaksanakan ini tidak jauh
berbeda dengan penelitian terdahulu dengan rentan salinitas yaitu30 ppt, 32 ppt dan 34 ppt serta untuk uji konfirmasi menggunakan 0 ppt, 20 ppt, 40 ppt, 60 ppt, 80 ppt dan 100 ppt.
Pengamatan viabilitas bakteri ini dipastikan menggunakan bakteri Vibrio fluvialis maka dilanjutkan dengan kultur bakteri pada media TCBS yang sudah dimodifikasi salinitasnya dengan 30 ppt, 32 ppt, dan 34 ppt pada wadah cawan petri. Selanjutnya diinkubasi selama 24 jam kemudian diamati.
Uji konfirmasi dilakukan dengan media TSA miring pada tabung reaksi. Pada pengamatan viabilitas sebelunya menggunakan media plate ini dilakukan karena pada  plate digunakan untuk melihat morfologi pertumbuhan koloni bakteri yang tumbuh. Sedangkan Alasan mengguunakan tabung reaksi dikarenakan fungsi dari tabung reaksi hanya digunakan untuk menumbuhkan bakteri tanpa melihat morfologi bakteri.
Uji konfirmasi dilakukan untuk memperjelas tingkat ketahanan bakteri Vibrio fluvialis terhadap salinitas yang berbeda, sehingga pengujian ini dilakukan dengan rentan salinitas yang lebih tinggi untuk memperoleh batas atas dan batas bawah pertumbuhan bakteri Vibrio fluvialis.
Penanaman dilakukan pada media TSA miring dengan kadar salinitas sebesar 0 ppt, 20 ppt, 40 ppt, 60 ppt, 80 ppt dan 100 ppt Hasil diperoleh setelah inkubasi selama 24 jam yaitu bakteri pada salinitas 20 ppt-80 ppt bakteri Vibrio fluvialis tetap tumbuh  dengan baik dan banyak, untuk salinitas 0 ppt tetap tumbuh tetapi tidak banyak ini dikarenakan karena kadar salinitas tidak ada untuk menunjang pertumbuhan dari bakteri Vibrio fluvialis ,
sedangkan pada media dengan kadar salinitas 100 ppt bakteri tidak dapat tumbuh
atau tidak terdapat bakteri sama sekali (Tabel 2).
Berdasarkan gambar dan tabel diatas dapat dilihat bahwa bakteri Vibrio fluvialis tetap tumbuh normal pada rentan salinitas 20 sampai 60 ppt. Namun pertumbuhan mulai terhambat pada salinitas 0 ppt, dan sama sekali tidak tumbuh pada salinitas 100 ppt. Hal ini dipengaruhi oleh sifat bakteri Vibrio fluvialis yang merupakan bakteri halofilik.
Pada penelitian Faturrahman dan luluk 2012 menunjukkan hasil penelitiannya bahwa bakteri Vibrio fluvialis
Tabel 2 Hasil Penanaman Bakteri pada Media TSA
No. Jenis Media Salinitas (Ppt) Pertumbuhan Keterangan 1 TCBS Plate 30 Tumbuh Normal Tidak ada kontaminasi 2 TCBS Plate 32 Tumbuh Normal Ada kontaminasi 3 TCBS Plate 34 Tumbuh Normal Ada kontaminasi 4 TSA Miring 0 Tumbuh Sedikit Tidak ada kontaminasi 5 TSA Miring 20 Tumbuh Normal Tidak ada kontaminasi 6 TSA Miring 40 Tumbuh Normal Tidak ada kontaminasi 7 TSA Miring 60 Tumbuh Normal Tidak ada kontaminasi 8 TSA Miring 80 Tumbuh Normal Tidak ada kontaminasi 9 TSA Miring 100 Tidak Tumbuh Sama sekali tidak tumbuh Keterangan :
1. Normal : >30% koloni bakteri menutupi media
2. Sedikit : < 30% koloni bakteri menutupi media
3. Tidak tumbuh : tidak ada koloni bakteri yang tumbuh dan menutupi media
dapat  tumbuh pada berbagai kondisi salinitas yang berkisar 10-60 ppt. Salinitas optimum untuk pertumbuhan vibrio fluvialis yaitu pada kadar garam 20 ppt.
Kebanyakan bakteri Vibrio fluvialis membutuhkan garam untuk aktivitas metabolisme dan pertumbuhannya, ini merupakan penyebab bakteri tumbuh dengan baik pada salinitas 20 ppt. Umumnya kebutuhan garam bakteri Vibrio fluvialis berkisar 10-30 ppt.
Beberapa mikroorganisme dapat bertahan pada kadar garam atau kadar gula yang tinggi, yaitu ragi yang osmofil (tumbuh pada kadar gula tinggi) dan bakteri halofilik (tumbuh pada kadar garam tinggi), juga beberapa mikroorganisme dapat tahan di dalam substrat dengan kadar garam sampai 30 ppt, ini bersifat halodurik (Suriawiria 1996).
Bakteri halofilik merupakan jenis bakteri  yang dapat tetap hidup pada kadar salinita yang tinggi. Marihati et al. (2014) menyatakan bahwa bakteri halofilik merupakan jenis mikroorganisme yang dapat tumbuh secara optimal dilingkungan dengan konsentrasi garam tinggi dengan cara mempertahankan keseimbangan osmotik. Pada penelitian ini bakteri Vibrio fluvialis dapat tumbuh normal pada kadar garam 2%-6% atau setara dengan 20-60 ppt. Pada konsentrasi garam 05 dan 10% pertumbuhan Vibrio fluvialis mulai tidak normal ditandai dengan pertumbuhan nya
yang menurun atau sedikit. Pada konsentrasi100 ppt bakteri Vibrio fluvialis tidak dapat tumbuh sama sekali, dapat di artikan bahwa pada konsetrasi 0 ppt dan 100 ppt merupakan batas atas bagi pertumbuhan bakteri Vibrio fluvialis.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan tentang viabilitas bakteri terhadap salinitas yang berbeda pada kultur bakteri Vibrio fluvialis . maka dapat diambil kesimpulan sebagai berikut :
1. Hasil uji presumtif dan uji biokimia didapatkan hasil spesies bakteri Vibrio fluvialis
2. Tingkat viabilitas bakteri Vibrio fluvialis pada salinitas 0 ppt, 20 ppt, 40 ppt, 60 ppt dan 80 ppt masih tinggi dan bakteri Vibrio spp. masih dapat hidup atau tumbuh dengan baik. Pada salinitas 100 ppt tingkat viabilitasnya sudah rendah dan baketri sudah tidak dapat hidup pada kadar salinitas tersebut.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada Direktorat Pendidikan Tinggi Kementerian Riset Teknologi dan pendidikan Tinggi yang telah memberikan dana penelitian fundamental tahun 2017 sehingga artikel ini dapat terselesaikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina S,S. Dan Marlan. 2014 .
Identifikasi Tingkat Serangan
Bakteri yang Menginfeksi Komoditi Rumput Laut di Perairan Teluk Tolo dan Teluk Tomini Kabupaten Banggai Sulawesi Tengah . Jurnal Balik Diwa vol. 5 No 2 Agustono, Hari, S. dan Muhajir. 2012. Strategi Bakteri Probiotik untuk Menekan Pertumbuhan Bakteri Patogen didalam Pengenceran Kerapu Chromileptes altivelis dengan Memproduksi Beberapa Bakterial Substansi . Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan. Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga. Surabaya. Vol. 4 No. 2 : 199-205.
Cowan, S.T., John, G.H., Noel, R.K, Peter, H.A.S., James, T.S., Stanley, T.W. 1993. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology Ninth Edition . Cambridge University Press. London.
Dewi, E. R. S. 2014. Pertumbuhan Kultur Probiotik Hasil Isolat Bakteri Non Patogen dalam Berbagai Jenis Media . Jurnal Pendidikan Biologi FPMIPA IKIP PGRI. Semarang. Hal 53-65.
DKP.(2004). Profil  Rumput  Laut Indonesia .  Jakarta-
Indonesia:Direktorat Jendral Perikanan Budidaya.
Doty, M.S. 1986. Biotechnological and Economic Approaches to Industri Development Based On Marine Algae In Indonesia . University Of Hawaii.
Faturrahman dan Luluk D. 2012. Seleksi Parsial Vibrio spp.  Kandidat Probiotik : Viabilitas Pada Berbagai Kondisi Suhu, pH, dan Salinitas . Jurnal Biologi. XVI(2) :
36-40 ISSN : 14105292.
Holt, J.G., Krieg, N.R., Sneath, H.A.,
Stanley, J.T. dan William, S.T. 1994. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology 9th
Edition. Williams and Wilkins, Baltimor.
Kaligis, Erly V,. 2015. Viabilitas Rotifer Brachionus rotundiformis Strain Meras pada Suhu dan Salinitas Berbeda . Jurnal LPPM Bidang Sains dan Teknologi. Vol. 2No.1. Largo  D  B,  Fukami  K,  Adachi  M,
Nishijima  T.  2003. Immunofluorescent  detection  of Ice-ice Disease-Promoting Bacterial Strain Vibriosp. P11 of the Farmed Macro Alga, Kappaphycus  alvarezii  of Aquatic  Environmental  Science (LAQUES).Departement  of Aquaculture.  Faculty of Agriculture.  Kochi  University- Japan
Marihati., Nani, H., Muriyati., nilawati.,
Syarifudin, E., dan Danny, W, H., 2014. Penggunaan Bakteri Halofilik Sebagai Biokatalisator Untuk Meningkatkan Kualitas Dan Produktifitas Garam Nacl Di Meja Kristalisasi .  Jurnal Riset Industri. 8
(3) Hal. 191 – 196.
Moat, A. G., J. W. Foster, and M.P.Spector. 2002. Microbial Physiologi . New York : Wiley-Liss, Inc.
Parenrengi, A., dan Sulaeman. 2007.
Mengenal Rumput Laut, Kappaphycus alvarezii . Media Akuakultur. Volume 2 Nomor 1. Pelczar, M. J. dan Chan E. C. S. 1986.
Dasar-Dasar Mikrobiologi . Terjemahan : R. S. Hadioetomo, T. Imas, S. S. Tjitrosomo dan S. L. Angka. Edisi 1. Universitas Indonesia. Jakarta. Hal 100-106. Pratiwi, S. T. 2008. Mikrobiologi Farmasi .
Erlangga. Jakarta. Hal 111-117.
Santoso, L., Yudha, T, N. 2008.
Pengandalian Penyakit Ice-ice Untuk Meningkatkan Produksi Rumput Laut Indoonesia. Jurnal Saintek Perikanan. Vol. 3(2), hlm 37-43.