OPTIMASI KONSENTRASI SUBSTRAT XILAN AMPAS TAHU DENGAN ENDO- β -1,4-D-XYLANASE UNTUK MEMPRODUKSI XILOOLIGOSAKARIDA
Anak Agung Istri Ratnadewi*, Wuryanti Handayani, Agung Budi Santoso, Siti Nur Avida
Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Jember E-mail: istri_dewi.fmipa@unej.ac.id
Received June 10  2016 Accepted 30 November 2016

## Abstrak
Ampas  tahu  merupakan  limbah  samping  dari  proses  pengolahan  tahu  dan  susu kedelai.  Ampas  tahu  berpotensi  sebagai  sumber  xilan.  Xilan  digunakan  sebagai  substrat endo- β -1,4-D-xilanase  untuk  menghasilkan  xilooligosakarida.  Penelitian  ini  digunakan xilan ampas yang telah dihilangkan lemak dan protein tanpa penghilangan lignin (X1nD). Xilan  ampas  tahu  tanpa  penghilangan  lemak  dan  protein  tetapi  dilakukan  penghilangan lignin (X2D). Enzim yang digunakan adalah endo- β -1,4-D-xilanase dari isolat Bacillus sp. asal abdomen  rayap.  Optimasi  variasi  konsentrasi  substrat  bertujuan  untuk  mengetahui konsentrasi  optimum  dalam  menghasilkan  xilooligosakarida.  Produk  hidrolisis  yang dihasilkan dianalisis menggunakan metode Miller untuk mengetahui total gula pereduksi. Produk hidrolisis konsentrasi optimum dianalisis menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) untuk mengetahui komponen penyusun xilooligosakarida. Substrat X1nD dan X2D optimum pada konsentrasi 6% dan 5% dengan total gula pereduksi sebesar 0,196 mg/mL dan  0,211  mg/mL.  Komponen  penyusun  xilooligosakarida  ampas  tahu  berupa  xilotriosa (X3), xilotetraosa (X4), dan xilopentaosa (X5).
Kata kunci: Ampas tahu, endo- β -1,4-D-xilanase, xilan, xilooligosakarida.

## Abstract
Okara is a waste byproduct of the processing of tofu and soy milk. Okara potential as  a  source  of  xylan.  Xylan  is  used  as  the  substrate  endo-1,4- β -D-xylanase  to  produce xyloologosaccharide. This study used okara xylan had eliminated fat and protein without removal of lignin (X1nD). Okara xylan out without the removal of fat and protein but do removal  of  lignin  (X2D).  The  enzyme  used  is  endo-1,4- β -D-xylanase  of  isolates  of Bacillus  sp.  From  abdominal  termites.  Optimization  of  substrate  concentration  variation aims  to  determine  the  optimum  concentration  in  generating  xyloologosaccharide. Hydrolysis  products  were  analyzed  using  Miller  method  to  determine  total  reducing sugars.  The  optimum  concentration  of  hydrolysis  products  were  analyzed  using  Thin Layer  Chromatography  (TLC)  to  determine  the  components  of  xyloologosaccharide. X1nD and X2D optimum substrate at a concentration of 6% and 5% to the total reducing sugars of 0.196 mg/mL and 0.211 mg/mL. Xyloologosaccharide of okara components of the pulp out the form xylotriose (X3), xylotetraose (X4), and xylopentaose (X5)
Keywords: Okara, endo-1,4- β -D-xylanase, xylan, xyloologosaccharide

## Pendahuluan
Ampas tahu merupakan limbah kedelai hasil  samping  dari  pengolahan  tahu  dan susu  kedelai  (Li et  al., 2012).  Komposisi ampas  tahu  terdiri  dari  serat  kasar, protein,  lemak,  dan  sedikit  karbohidrat. Serat  kasar  ampas  tahu  mengandung selulosa  5,6%,  hemiselulosa  12,1%,  dan lignin  11,7%    (Quitain et  al., 2004). Komponen penyusun utama hemiselulosa yaitu  xilan.  Hal  ini  mengindikasikan bahwa  ampas  tahu  berpotensi  sebagai sumber xilan.
Xilan  merupakan  komponen  penting dalam  biomasa  pertanian  yaitu  yang mengandung  hemiselulosa  pada  dinding sel tanaman (Kumar et al., 2012). Polimer xilan  terdiri  rantai  utama  residu  D-xilosa dengan ikatan β -1,4 dan memiliki cabang, seperti  L-arabinosa,  D-glukosa,  D- galaktosa, D-manosa, asam D-glukoronik, dan  residu  asam  4-O-metil  glukoronik (Sun et  al., 2000).  Xilan  digunakan sebagai  substrat  endo- β -1,4-D-xilanase untuk  menghasilkan  xilooligosakarida. Endo- β -1,4-D-xilanase  tergolong  sebagai enzim  xilanolitik.  Endo- β -1,4-D-xilanase memutuskan  ikatan  glikosida  dengan posisi β -1 → 4  secara  acak  pada  rantai utama xilan. Endo- β -1,4-D-xilanase mampu  mengkatalisis  reaksi  hidrolisis ikatan β -1,4-D-xilanase  dengan  substrat xilan oat untuk
menghasilkan xilooligosakarida dan xilosa.
Penelitian  ini  menggunakan  ampas tahu  sebagai  substrat  endo- β -1,4-D- xilanase.  Substrat  xilan  ampas  tahu  telah diisolasi dan diuji reaktivitasnya terhadap endo- β -1,4-D-xilanase  (Baedho’,  2016). Disisi lain, endo- β -1,4-D-xilanase bersumber  dari  isolat Basillus  sp. asal abdominal  rayab  yang  telah  diisolasi, dimurnikan,  dan  dikarakterisasi.  Hasil karakterisasi  diperoleh  kondisi  hidrolisis optimum  pada  suhu  40,  pH  5  dan  waktu inkubasi 15 jam (Ratnadewi et al., 2007). Tujuan  penelitian  ini,  antara  lain: untuk mengetahui aktivitas endo- β -1,4-D-
xilanase  dari  isolat Basillus  sp .  asal abdominal  rayab,  konsentrasi  substrat optimum untuk menghasilkan xilooligosakarida dan mengetahui komponen  penyusun  xilooligosakarida. Hasil  penelitian  diharapkan  memberi informasi  tentang  pemanfaatan  ampas tahu  dan  meningkatkan  nilai  ekonomis biomassa xilan pada produksi xilooligosakarida  yang  bermanfaat  untuk kesehatan.
Metode Penelitian Penelitian ini dilakukan di laboratorium  Biokimia  Jurusan  Kimia FMIPA  dan  Laboratorium  CDAST ( Center  of  Development  for  Advances Science  and  Technology )  Universitas Jember.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  xilan  ampas  tahu, isolat Basillus  sp .  asal  abdominal  rayab, triptopan, yeast , bacto agar,  natrium klorida,  reagen  Miller,  reagen  Bradford, buffer  fosfat  sitrat  pH  5,  ammonium sulfat,  xilan  oat,  xilosa,  etanol  95%,  1- butanol, asam asetat dan asam sulfat.
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  cawan  petri,  kawat ose ,  bunsen,  lemari  pendingin,  neraca analitik,  magnetik  stirer,  anak  stirer, autoclave ,  inkubator  kering  ( shaker ),  alat sentrifugasi,  spektrofotometer  Hitachi  U- 2900, dry  blok ,  laminar, water  bath , hairdryer ,  oven,  pH  meter, stopwatch , dan kamera digital.
Peremajaan,  Inokulasi,  dan  Produksi Endo- β -1,4-D-xilanase dari Isolat Basillus sp. asal Abdominal Rayab Isolat Basillus  sp. asal  abdominal rayab  diremajakan  dengan  menggoreskan kawat ose. Koloni  bakteri  digoreskan pada  media  LB  padat,  selanjutnya diinkubasi  dengan  suhu  37 0 C  selama  16 jam. Isolat bakteri yang telah diremajakan diinokulasi  ke  dalam  media  LB  cair inokulum.  Media  digojok  menggunakan
shaker dengan kecepatan 150 rpm selama 16 jam pada suhu 37 0 C. Inokulan diambil 1%  dan  dimasukkan  ke  dalam  media  LB cair produksi dan diinkubasi pada kondisi yang  sama.  Campuran  bakteri  dalam media  LB  cair  produksi  diisolasi  dengan cara disentrifugasi pada kecepatan 10.000 rpm,  suhu  4 0 C  selama  10  menit. Supernatan  digunakan  sebagai  ekstrak kasar endo- β -1,4-D-xilanase untuk pengujian selanjutnya.
Pemurnian Endo- β -1,4-D-xilanase Ekstrak  kasar  endo- β -1,4-D-xilanase dimurnikan menggunakan metode fraksinasi  ammonium  sulfat  dan  dialisis. Fraksinasi  ammonium  sulfat  dilakukan pada  fraksi  tingkat  kejenuhan  50%  (b/v), hasil  optimasi  konsentrasi  ammonium sulfat  40-70%  (b/v)  secara  bertingkat. Pellet hasil fraksinasi dilarutkan menggunakan  buffer  fosfat-sitrat  pH  5 setengah dari volume ekstrak kasar. Hasil fraksinasi dimurnikan lebih lanjut dengan metode dialisis. Dialisis dilakukan selama 24  jam  pada  suhu  4 0 C.  Larutan  buffer fosfat-sitrat  pH  5  diganti  secara  kontinyu selama  2,  4,  8,  dan  12  jam.  Masing- masing  fraksi  ekstrak  kasar,  hasil fraksinasi dan dialisat akan diuji aktivitas enzim dan kadar protein.
Penentuan Aktivitas
Endo- β -1,4-D- xilanase Satu
unit endo- β -1,4-D-xilanase didefinisikan  sebagai  kemampuan  enzim untuk menghasilkan 1 µ mol produk (gula pereduksi)  dari  substrat  dalam  1  waktu menit pada kondisi optimum (Wrolstad et al., 2005). Sebelum dilakukan pengukuran aktivitas enzim harus di buat kurva  standar  xilosa.  Aktivitas  enzim dapat  ditentukan  melalui  persamaan  1, dengan  konsentrasi  sampel  [ S ]  (mg/mL), konsentrasi  kontrol  [ k ]  (mg/mL),  faktor pengenceran f p ,  volume  total V total ( µ L), volume  enzim V enzim ( µ L),  waktu hidrolisis  subtrat  oleh  enzim  (waktu
inkubasi) t (menit)  dan  berat  molekul xilosa (g/mol) BM.
[ ] [ ] ( ) total P enzim V S k f V U Aktivitas mL t BM ⎛ ⎞ − × × ⎜ ⎟ ⎛ ⎞ ⎝ ⎠ = ⎜ ⎟ × ⎝ ⎠ (1)
Larutan  ekstrak  kasar  endo- β -1,4-D- xilanase  ditambahkan  subtrat  xilan oat 0,8%  dalam micro  tube ,  kemudian diinkubasi  selama  60  menit  pada  suhu 40 0 C.  Campuran  ditambahkan  reagen Miller  dan  dipanaskan  pada  suhu  100 0 C selama  15  menit,  kemudian  didinginkan pada air es selama 20 menit. Sampel dan kontrol  diukur  absorbansinya  pada panjang  gelombang  550  nm.  Komposisi kontrol adalah enzim inaktif, subtrat xilan oat  0,8%,  dan  reagen  Miller  yang diperlakukan  seperti  prosedur  sampel. Perbandingan  larutan  ekstrak  kasar  endo- β -1,4-D-xilanase:  substrat  xilan  oat: reagen Miller adalah 1: 1: 6 (v/v).

## Penentuan Kadar Protein
Kadar  protein  endo- β -1,4-D-xilanase diukur  berdasarkan  metode  Bradford. Pertama  dibuat  kurva  standar Bovine Sweum  Albumin (BSA).  Kadar  protein dapat  ditentukan  melalui  persamaan  2, dengan nilai absorbansi pada λ 595 nm Abs , nilai intercept dari  persamaan  kurva standar BSA C , faktor pengenceran f p dan nilai kemiringan ( gradient ) dari persamaan kurva standar m .
P Abs C f mg Kadar protein mL m ± × ⎛ ⎞ = ⎜ ⎟ ⎝ ⎠ (2)
Sebanyak  100 µ L  larutan  protein dimasukan  dalam micro  tube dan ditambahkan  1000 µ L  reagen  kerja Bradford. Campuran dihomogenkan dengan  vortek  dan  didiamkan  2  menit. Campuran  diukur  absorbansinya  pada panjang  gelombang  595  nm.  Pengukuran juga  dilakukan  menggunakan  kontrol
protein  inaktif  berisi  buffer  fosfat-sitrat pH 5 dan reagen kerja Bradford.
Optimasi  Kondisi  Hidrolisis  Endo- β -1,4- D-xilanase  terhadap  Substrat  Xilan
Ampas Tahu (Variasi Konsentrasi Substrat) Optimasi ini bertujuan untuk menghasilkan konsentrasi optimum dalam menghasilkan  xilooligosakarida.  Pertama dilakukan optimasi variasi konsensentrasi substrat  yaitu  1-15%  dengan  rentang  1% pada  suhu,  pH  dan  waktu  inkubasi konstan.
Enzim  dilambahkan  substrat  xilan  ampas tahu  dengan  perbandingan  1:1  (v/v), kemudian  diinkubasi  pada  suhu  40 0 C selama  16  Jam.  Campuran  dipanaskan pada  suhu  100 0 C  selama  1  menit  untuk menghentikan reaksi enzimatis. Campuran disentrfugasi dengan kecepatan 10.000  rpm  dan  suhu  4 0 C  selama  10 menit. Produk hidrolisis dideteksi menggunakan  spektrofotometer  visible untuk  mengetahui  total  gula  pereduksi produk  hidrolisis.  Pengujian  dilakukan dengan  menambahkan  reagen  Miller seperti  pada  tahap  pengujian  uji  aktifitas enzim.  Perhitungan  total  gula  pereduksi dengan  membandingkan  standar  xilosa sesuai  persamaan  3,  dengan Abs adalah nilai absorbansi pada λ 550 nm.
P Abs C f mg Total Gula Pereduksi mL m ± × ⎛ ⎞ = ⎜ ⎟ ⎝ ⎠ (3)
Deteksi  Produk  Hidrolisis  Endo- β -1,4-D- xilanase  terhadap  Substrat  Xilan  Ampas Tahu
Produk  hidrolisis  yang  diperoleh kemudian  dideteksi  komponen  penyusun xilooligosakarida  yang  terbentuk  secara kromatografi lapis tipis (KLT). Kromatoplat  yang  akan  digunakan sebelumnya diberi tanda nomor serta garis batas atas dan batas bawah sebagai lokasi penotolan sampel hidrolisat lalu dipanaskan  dalam  oven  selama  30  menit.
40 µ L  hidrolisat  ditotolkan  pada kromatoplat dan dicelupkan dalam wadah yang  telah  berisi  fasa  gerak  n-butanol, asam  asetat,  dan  akuades  dengan perbandingan  2:1:1  (Ratnadewi et al., 2007).

## Hasil Penelitian dan Pembahasan
Aktivitas Endo- β -1,4-D-xilanase Murni Endo- β -1,4-D-xilanase berhasil diproduksi  dari  isolat Bacillus  sp. pensekresi  endo- β -1,4-D-xilanase  melalui tahap  isolasi  (peremajaan,  inokulasi, produksi)  dan  pemurnian  (fraksinasi ammonium sulfat dan dialisis). Peremajaan  isolat Bacillus  sp. untuk mengaktifkan  dan  memberikan  nutrisi saat  proses  pertumbuhan  bakteri  didalam media  LB  padat.  Inokulasi  bertujuan untuk  menumbuhkan  bakteri  pensekresi endo- β -1,4-D-xilanse  dengan  induser xilan oat 0,5%.  Proses  produksi  untuk mengembangbiakkan koloni bakteri pensekresi  endo- β -1,4-D-xilanase  dalam media  LB  cair  produksi  tanpa  xilan  oat. Hasil peremajaan, inokulasi dan produksi ditunjukkan pada Gambar 1.
Adanya  warna  kuning  keruh  pada media LB padat, media LB cair inokulum, dan media LB cair produksi menunjukkan bahwa  bakteri Basillus  sp. Pensekresi endo- β -1,4-D-xilanase berhasil diproduksi. Isolasi dilakukan menggunakan  sentrifugasi.  Prinsip  dasar sentrifugasi adalah pengendapan
berdasarkan  gaya  sentrifugal.  Senyawa dengan  berat  molekul  yang  lebih  besar akan  mengendap  terlebih  dahulu  pada kecepatan yang sama (Skoog et al., 2004). Supernatan  mengandung  endo- β -1,4-D- xilane. Pelet mengandung protein berukuran  besar  dan  sisa  inti  sel  bakteri. Supernatan  memiliki  warna  kuning kecoklatan  sebagai  ekstrak  kasar  endo- β - 1,4-D-xilanase. Ekstrak kasar endo- β -1,4- D-xilanase selanjutnya dimurnikan secara parsial  dan  diuji  aktivitas  enzim  serta
kadar  proteinya  untuk  mengetahui aktivitas spesifik.
Gambar  1. Hasil  peremajaan,  inokulasi dan  produksi  bakteri Basillus  sp. pensekresi endo- β -1,4-D-xilanase
Aktivitas  enzim  dinyatakan  dengan satuan  U/mL,  sedangkan  kadar  protein dinyatakan  dengan  mg/mL.  Pengujian aktivitas enzim bertujuan untuk mengetahui  kemampuan  endo- β -1,4-D- xilanase  menghidrolisis  xilan  menjadi xilooligosakarida  dan  sedikit  xilosa. Produk  hidrolisis  ditambahkan  dengan reagen  Miller  yang  mengandung  asam 3,5-dinitrosalisilat
(DNS). Produk hidrolisis akan bereaksi dengan asam 3,5- dinitrosalisilat  (DNS)  berwarna  kuning
dan membentuk asam 3-amino-5-
nitrosalisilat  (ANS)  berwarna  coklat.
Reaksi  kimia  yang  terjadi  saat  pengujian aktivitas enzim ditunjukkan pada Gambar 2.
Kadar  protein  dideteksi  menggunakan metode  Bradford. Coomassie G-250 dalam  reagen  kerja  Bradford  akan berikatan  dengan  protein. Coomassie G- 250  yang  bermuatan  negatif  akan berikatan  dengan  muatan  positif  protein. Ikatan  kimia  tersebut  akan  mengubah warna  larutan  protein  (kemerahan) menjadi warna kebiruan (Bradford, 1976). Aktivitas enzim dan kadar protein ekstrak kasar endo- β -1,4-D-xilanase, hasil fraksinasi  dan  dialisis  ditunjukkan  pada Tabel  1.  Peningkatan  aktivitas  spesifik yang  terjadi  pada  ekstrak  kasar  endo- β - 1,4-D-xilanase,  hasil  fraksinasi  50%,  dan dialisat  menunjukkan  bahwa  kemurnian endo- β -1,4-D-xilanase
semakin meningkat.
Tabel  1. Aktivitas  dan  kadar  protein  endo- β -1,4-D-xilanase  pada  ekstrak  kasar,  hasil fraksinasi 50% dan dialisat
Sampel Volume (mL) A. (Unit/mL) A.T. (Unit) K.P. (mg/mL) P.T. (mg) A.S. (Unit/mg) F.K. Ekstrak Kasar  95 0,272 25,884  0,083 7,904 3,275 1 Fraksi 50% 45 0,199 8,947 0,046 2,088 4,285 1,308 Dialisis 43 0,236 10,129  0,031 1,329 7,623 2,328
V:  volume,  A:  aktivitas,  AT:  aktivitas  total,  KP:  kadar  protein,  KPT:  kadar  protein  total,  AS:  aktivitas spesifik, FK : faktor kemurnian.
Gambar 2. Reaksi kimia pada uji aktivitas enzim (Baum et al., 2003)
Xilooligosakarida Produk
Hidrolisis
Endo- β -1,4-D-xilanase Terhadap Substrat  Xilan  Ampas  Tahu  (Konsentrasi substrat optimum)
Produk  hidrolisis  yang  dihasilkan memiliki  total  gula  pereduksi  yang berbeda. Total gula pereduksi merupakan jumLah  gula  pereduksi  hasil  hidrolisis endo- β -1,4-D-xilanase  terhadap  xilan ampas  tahu. Total  gula  pereduksi  hasil variasi  substrat  dalam  hidrolisis  endo- β - 1,4-D-xilanase  terhadap  substrat  xilan ampas tahu (X1nD) dan (X2D)
ditunjukkan pada Gambar 3.
Gambar  3. Kurva  integral  total  gula pereduksi dalam berbagai variasi [S]
Gambar 4. Kromatogram produk hidrolisis  terhadap  X1nD  dan  X2D  (X1: Xilosa,  XO:  Xilooligosakarida,  S1:  Hasil hidrolisis  [E]  (0,236  U/mL)  terhadap  [S] optimum  (6%)  X1nD,  K1:  Kontrol substrat  optimum  X1nD,  SA:  Hasil hidrolisis  [E]  optimum  (0,236  U/mL) terhadap  [S]  optimum  (5%)  X2D,  KA: Kontrol enzim optimum X2D.
Gambar  3  menunjukkan  bahwa  profil peningkatan  total  gula  pereduksi  (X1nD) hampir  sama  dengan  (X2D).  Keduanya memiliki peningkatan total gula pereduksi sebanding dengan peningkatan
konsentrasi  substrat.  Peluang  interaksi antara  substrat  (S)  dengan  enzim  (E) membentuk kompeks enzim substrat (ES) lebih  sering  terjadi,  sehingga  xilan  akan lebih  banyak  terhidrolisis.  Peningkatan kadar  total  gula  pereduksi  substrat  xilan ampas tahu (X1nD) dan (X2D) meningkat mulai  dari  konsentrasi  1-5%  dan  1-6%. Peningkatan secara signifikan (X1nD) dan (X2D)  terjadi  pada  konsentrasi  6%  dan 5% dan kadar total gula pereduksi sebesar 0,196 mg/mL dan 0,211 mg/mL. Kromatogram  Xilooligosakarida  Hasil Hidrolisis Endo- β -1,4-D-xilanase Terhadap Xilan Ampas Tahu
Kromatogram  Kromatografi  Lapis Tipis  (KLT)  mengGambarkan  profil komponen  penyusun  produk  hidrolisis. Produk  hidrolisis  yang  terpisah  akan dihidrasi  oleh  asam  sulfat  menjadi senyawa  fulfural.  Senyawa  fulfural  yang terbentuk  akan  berinteraksi  dengan α - naftol membentuk senyawa yang berwarna  ungu.  Kromatogram  hasil hidrolisis  konsentrasi  substrat  optimum dan konsentrasi enzim optimum ditunjukkan pada Gambar 4. Gambar  4  menunjukkan  adanya  spot xilooligosakarida  hasil  hidrolisis  endo- β -
1,4-D-xilanase terhadap xilan ampas tahu (X1nD)  dan  (X2D).  Standar  xilosa terelusi sempurna dan memiliki Rf paling tinggi  dibandingkan  dengan  standar xilooligosakarida  dan  sampel.  Xilosa memiliki  Rf  paling  besar  dan  tidak  ada spot diarea penotolan. Pemisahan xilooligosakarida  ditunjukkan  adanya beberapa  spot  berupa  xilobiosa  (X2), xilotriosa  (X3),  xilotetraosa  (X4),  dan xilopentaosa (X5). S1 dan SA mengandung  xilotriosa  (X3),  xilotetrosa (X4) dan
xilopentosa(X5), jika
dibandingkan dengan standar xilooligosakarida.  Kontrol  juga  memiliki spot
xilooligosakarida.
Hal ini, disebabkan  karena  kontrol  juga  memiliki total gula pereduksi, namun nilainya lebih kecil dari total gula pereduksi sampel.

## Kesimpulan
Konsentrasi  substrat  ampas  tahu  yang telah dihilangkan lemak dan protein tanpa penghilangan  lignin  (X1nD)  optimum pada  konsentrasi  6%  dengan  total  gula pereduksi sebesar 0,196 mg/mL.
Konsentrasi  substrat  ampas  tahu  tanpa penghilangan  lemak  dan  protein  tetapi dilakukan  penghilangan  lignin  (X2D) optimum  pada  konsentrasi  5%  dengan
total gula pereduksi sebesar 0,196 mg/mL dan  0,211  mg/mL.  Komponen  penyusun xilooligosakarida  hasil  hidrolisis  kedua substrat  dengan  endo- β -1,4-D-xilanase, menghasilkan xilotriosa (X3), xilotetraosa (X4) dan xilopentaosa (X5).

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  disampaikan kepada  Agung  Budi  Santoso  S.Si.,  M.Si dan  Yudi  Aris  Sulistiyo,  S.Si.,M.Si  atas masukan  dan  saran  dalam  penelitian  ini. Pihak  laboratorium  CDAST  ( Center  of Development  for  Advances  Science  and Technology )  Universitas  Jember  sebagai tempat penelitian.

## Daftar Pustaka
Baum, S. J., Bowen, W.R., and Poulter, S. R.  (1981). Laboratory  Exercises  in Organic  and  Bioligical  Chemistry,
2 nd ed., Macmillan  Publishing  Co., Inc. New York.
Li,  B.,  Lu,  F.,  Nan,  H.,  and  Liu,  Y. (2012).  Isolations  and  Structural Characterisation of Okara Polysaccharides. Molecules .,  17,
753-761.
Quitain,  A.T.,  Ora,  K.,  Katoh,  S.,  and
Moriyoshi, T. (2004). Environmentally Benign Pressurized  Fluid  Technologies  for Recovery  of  Useful  Compounds from  Okara. Research  Institute  for Solvothermal Technology , 247, 1-8. Kumar, G. P., Pushpa, A., and Prabha, H.
(2012). A Review on Xyloolygosaccharides International Research  Journal  of  Pharmacy., 3, 71-74. Sun,  R.C.,  Tomkison,  J.,  and  Liang,  S.F. (2000).  Comparative  Study  of Hemicelluloses from Rice Straw by Alkali  and  Hydrogen  Peroxide
Treatmeants.
Carbohydrate Polymers . 42, 111-112
Baedho’,  W.  (2016).  Deteksi  Kandungan Xilan  Dari  Ampas  Kedelai  Dan Reaktivitasnya  Terhadap  Endo- β - 1,4-D-xilanase.  Tidak  Diterbitkan. Skripsi .  Jurusan  Kimia  Universitas
Jember, Jember
Ratnadewi,  A.A.I.,  Handayani,  W.,  and Puspitaningsih, N.N.T. (2007). Produksi  dan  Karakterisasi  Enzim β -Endoxilanase  dari  Bakteri  Sistem Intestinal  Rayap. Jurnal  Ilmu Dasar . Vol. 8(2): 110-117.
Wrolstad,  Acree,  Decker,  Penner,  Reid,
Schwartz,  Shoemaker,  Smith,  and Sporns.  (2005) .  Handbook  of  Food Analytytical Chemistry Water, Protein,  Enzymes,  Lipids,  and Carbohydrates. A  John  Wiley  and
Sons, Inc., Canada.
Skoog, West, Holler, and Crouch. (2004). Fundamental of Analitycal Chamistry. 8 th Ed. , Cegage
Learning. Canada
Bollang,  D.  M.,  Rozycki,  M.  D.,  and Edelstein,  S.  J.  (1996). Protein
Methods. 2 nd Ed .,  John  Wiley  and Sons, Inc. New York Bradford,  M.M.  (1976).  A  Rapid  and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities  of  Protein  Utilizing  the Principle  of  Protein-dry  Binding. Analitical  Biochemistry. 72,  248- 254.