## GAMBARAN DARAH DAN HISTOPATOLOGI INSANG, USUS DAN OTAK IKAN KOI
( Cyprinus carpio koi ) YANG DIINFEKSI SPORA Myxobolus koi SECARA ORAL
HAEMATOLOGY AND HISTOPATOLOGY OF GILLS, INTESTINE AND BRAIN KOI FISH ( Cyprinus carpio koi ) Myxobolus koi ORALLY INFECTED
Era Insivitawati 1 , Gunanti Mahasri 2 dan Kusnoto 3
1 Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga Kampus B Jl. Airlangga 4-6 Surabaya, 60286 Telp. 031-5041566
2 Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo – Surabaya, 60115 Telp. 031-5033710
3 Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo – Surabaya, 60115

## Abstract
Koi fish ( Cyprinus carpio koi ) is one of the ornamental fish are preferred. One of the obstalces in the  koi  fish  is  a  disease  caused  by  infection  myxobollus.  This  research  to  determine  the  effect  of  the infection myxobollus by oral in  blood picture and histopathology. Haematology and histopathology is an indicator of the health of the fish to diagnose disease and to determine changes in the fish tissue. The  research  was  conducted  in  Politeknik  Kelautan  dan  Perikanan,  dan  Balai  Karantina  Ikan  Kelas  I, Juanda Surabaya  from October to December 2014.  This study uses the 5 treatments and 5 replications with  different  doses  of  infection  (0,60,80,100  and  120  spora/fish).  Data  were  analyzed  with  Annova haematology, followed by Duncan 5%. While histopathology were analyzed by semiquantitative scoring mothod  used  to  determine  the  degree  of  histology  Kluschal  Wallis.  The  result  showed  that  the haematology has significant result, white histopathology signify the presence of significant damage.
Keywords : Koi Fish ( Cyprinus carpio koi ), Myxobolus , Haematology and Histopatology
Pendahuluan Perkembangan usaha perikanan di Indonesia  saat  ini  semakin  pesat,  hal  ini ditunjukkan  dengan  semakin  meningkatnya usaha  perikanan,  baik  dari  usaha  budidaya, penangkapan hingga industri pengolahan produk  perikanan.  Koi  merupakan  salah  satu jenis  ikan  hias  yang  memiliki  potensi  untuk dikembangkan  dan  memiliki  jenis  dan  warna- warni  yang  menarik  sehingga  menjadi  daya tarik bagi penggemar ikan hias.
Dayat dan Sitanggung, (2004)
menyatakan  bahwa  peluang  pasar  ikan  hias  , khususnya  pemintaan  konsumen  terhadap  koi lokal tidak pernah sepi sehingga para pembudidaya  koi  di  jawa  timur  terus-menerus melakukan  pembudidayaan,  bahkan  hingga kesulitan  dalam  memenuhi  permintaan  pasar. Tingginya permintaan pasar tersebut meningkatkan harga ikan di pasaran. (Dinas Perikanan dan Kelautan
Kabupaten  Blitar,  2012)  Produksi  ikan  koi  di kabupaten  Blitar  mencapai  647.000  ekor.  Saat ini  pembudidayaan  ikan  koi  tidak  hanya  di kecamatan Nglegok saja, namun mulai menyebar  di  kecamatan  Sanankulon,  Selopuro, Gandusari, Ponggok dan Wlingi.
Usaha budidaya memiliki banyak kendala  dalam  memenuhi  kebutuhan  pasar. Kendala yang utama umumnya disebabkan oleh ancaman  hama  dan  penyakit.  Salah  satu penyakit  yang  banyak  ditemukan  pada  ikan  koi adalah myxobolusis yang  disebabkan  oleh Myxobolus sp. Penyakit ini merupakan penyakit yang  berbahaya,  karena  dapat  mengakibatkan kematian  ikan.  Sampai  saat  ini  belum  ada  obat yang  efektif untuk ikan yang terinfeksi species ini.
Myxobolusis merupakan  penyakit  yang mengancam  keberhasilan  budidaya  ikan  koi. Menurut  Mulyana  et  al.  (1990)  dikutip  oleh Irianto  dan  Madya  (2012),  infeksi Myxobolus koi dapat  menyebabkan  kematian  sekitar  50% dari populasi. Hal tersebut menunjukkan bahwa Myxobolus  sp. dapat  merugikan  dan  berbahaya bagi usaha budidaya ikan koi. Gejala klinis yang terjadi  pada  ikan  terserang Myxobulus  sp. adalah  adanya  benjolan  (bisul)  pada  bagian insang dan mengeluarkan cairan keruh berwarna kemerahan  seperti  nanah  (Bachtiar,  2002). Nodul  yang  terdapat  pada  insang  akan mengganggu  suplai  oksigen  ke  dalam  darah, kondisi  ikan  akan  semakin  parah  ketika  nodul pecah  sehingga  menyebabkan  nekrosis  pada
jaringan  karena  fungsi  pernafasan  terganggu. Tahun  2012  pernah  terjadi  kematian  masal  di daerah  Sleman  dan  Kulon  Progo  yang disebabkan  oleh  infeksi  Myxobolus.  Infeksi Myxobolus  koi dapat  menyebabkan  kematian sekitar 50% dari populasi (Irianto, 2012).
Darah merupakan salah satu bagian yang terdapat  pada  ikan  yang  dapat  digunakan sebagai  indikator  untuk  mengetahui  tingkat kesehatan  ikan.  Sesuai  dengan  pernyataan Salasia et  al .  (2001)  bahwa  gambaran  normal darah  ikan  diperlukan  untuk  menentukan  status kesehatan  dan  membantu  diagnosis  penyakit pada ikan.
Pemeriksaan  histopatologi  merupakan teknik pemeriksaan dengan mempelajari perubahan  abnormal  sel    atau  jaringan  yang digunakan untuk menentukan diagnosis penyakit  pada  ikan  (Mohammadi et  al .,  dikutip oleh Sudaryatma et al ., 2012).
Pemeriksaan  histopatologi  pada  ikan dapat memberikan gambaran perubahan jaringan  ikan  yang  terinfeksi  penyakit.  Dalam penentuan  penyakit  pada  ikan,  diagnosis penyakit  merupakan  langkah  awal  yang  perlu diterapkan (Asniatih, 2013), oleh sebab itu perlu dilakukan  penelitian  mengenai  gambaran  darah dan  histopatologi  ikan  untuk  mengetahui kondisi kesehatan ikan.

## Materi dan Metode
Penelitian ini
dilaksanakan di Laboratorium  Pembenihan  dan  Laboratorium Hama  dan  Penyakit  Ikan  Akademi  Perikanan Sidoarjo  (APS)    dan  di  Laboratoriun  Histologi Balai  Karantina  Ikan  dan  Pengendalian  Mutu Kelas  I  Juanda,  Surabaya  pada  September hingga Oktober 2014.
Peralatan
yang digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain: akuarium, gelas ukur, bak ember plastik, sechio set,  obyek  glass,  pipet  tetes,  haemocytometer, tabung sahli, mikroskop,  obyek  glass,  cover glass, srynge (suntikan), kantong plastik, selang dan  batu  aerasi,  termometer  air,  DO  meter,  pH meter,    mikrotome,  Lieca  biosystem  tissue processor, wax dispenser, wadah Plastik. Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain:  Ikan  mas  ( Cyprinus carpio )  sehat,  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio ) terinfeksi Myxobollus ,  antikoagulan EDTA, etanol  70%,  etanol  80%,  etanol  85%,  etanol 100%,  Xylene,  parafin  cair,  Formalin  10%, alkohol  95%,  alkohol  100%,  Acid  alkohol, Hematoxylin, Eosin, Larutan Davidson, aquadest, giemsa.
Penelitian ini adalah jenis true eksperimental dengan  menggunakan post  test only  control  group  design .  Penelitian  ini
dilakukan  dengan  menggunakan  5  perlakuan dan  masing-masing  perlakuan  dilakukan  5 ulangan, perlakuan dilakukan dengan pemberian dosis  infeksi  Myxobollus  koi  yang  berbeda, antara lain:
1. Perlakuan  A  dengan  Tanpa  pemberian infeksi Myxobollus koi (kontrol)
2. Perlakuan B dengan pemerian dosis infeksi Myxobollus koi 60 spora/ikan.
3. Perlakuan C dengan pemerian dosis infeksi Myxobollus koi 80 spora/ikan.
4. Perlakuan  D  dengan  pemerian  dosis infeksi Myxobollus koi 100 spora/ikan.
5. Perlakuan E dengan pemerian dosis infeksi Myxobollus koi 120 spora/ikan.

## Pelaksanaan Penelitian
Persiapan dan Perlakuan Ikan Selama Penelitian Sebelum  digunakan  akuarium  dicuci dan  diberi  KmnO4  0,125  ppm  sebagai desinfektan, selanjutnya masing-masing akuarium  diisi  dengan  air  PDAM  yang  sudah dilakukan penyaringan sebanyak 3 liter.
Ikan mas yang telah didapat dari kolam di  Desa  Kemloko,  Kecamatan  Nglegok, Kabupaten  Blitar,  Jawa  Timur,  dibawa  ke laboratorium  pembenihan  Akademi  Perikanan Sidoarjo  menggunakan  kantong  plastik  tertutup dengan  penambahan  oksigen  sebanyak  2  kali dari  tinggi  air  di  dalam  plastik.  Sebelum  ikan mas  digunakan  untuk  penelitian  dilakukan aklimatisasi selama 3 hari.
Ikan yang terinfeksi Myxobolus diperiksa  nodul  pada  insangnya  dan  diambil nodul  tersebut  dan  diletakkan  pada  wadah.
Selanjutnya
nodul dipecah dengan menggunakan  pinset,  ditambahkan  dengan aquadest  dan  dilakukan  pengenceran  dan diamati  dibawah  mikroskop  untuk  mengetahui jumlah  yang  akan  diberikan  sesuai  dosis  yang diinginkan,  kemudian  nodul  yang  tidak langsung  digunakan  direndam  dalam  larutan buffer Phosphat dan disimpan dalam freezer.
Selanjutnya dilakukan perlakuan dengan menginfeksi ikan yang sehat menggunakan  paparan  Myxobolus  infeksi buatan  dengan  dosis  60  spora/ikan,  80 spora/ikan, 100 spora/ikan, 120 spora/ikan dan tanpa  pemberian  spora  Myxobollus  sebagai kontrol.  Spora  Myxobollus  diberikan  secara oral  dan dilakukan selama 7 hari, dan  kontrol kualitas air dilakukan setiap hari, pagi dan sore.
Pemeriksaan Gambaran Darah Pengambilan Darah Pengambilan  darah  ikan  dilakukan dengan cara Spuit diisi dengan EDTA ( Etylene Diamine  Tetraacetic  Acid )  agar  darah  yang
diambil  tidak  membeku.  Selanjutnya  ikan disiapkan  dan  diambil  darahnya  dengan  cara pengambilan darah  yaitu spuit ditusukkan pada bagian  linea  lateralis  dengan    kemiringan  45 o , lalu  darah  diambil  dengan  spuit  secara perlahan,  sehingga  didapatkan  darah  yang diinginkan.  Tempat  pengambilan  darah  ikan dapat  dilakukan  pada  daerah  Linea  Lateralis, dorsal ventralis, caudal peduncle dan jantung. ( Rahmatullah, 2010).
Perhitungan Kadar Hemoglobin
Pengukuran  kadar  Hemoglobin  (Hb)
dilakukan dengan metode Sahli yang mengkonversi  darah  ke  dalam  bentuk  asam hematin  setelah  darah  ditambah  dengan  HCl. Pertama  darah  dihisap  dengan  pipet  sahli sampai  skala 20  mm 3 atau pada skala 0.02  ml, kemudian  darah  dipindahkan  ke  dalam  tabung Hb-meter  yang  telah  diisi  HCl  0.1  N  sampai skala 10, aduk dan dibiarkan selama 3- 5 menit. Setelah  itu  aquades  ditambahkan  sampai warna  darah  dan  HCl  tersebut  seperti  warna larutan  standar  yang  ada  dalam  Hb  meter tersebut. Skala dibaca dengan melihat
permukaan  cairan  dan  dicocokkan  dengan skala tabung sahli yang dilihat pada skala jalur gr% (kuning) yang berarti banyaknya hemoglobin  dalam  gram  per  100  ml  darah (Maswan, 2009).
Perhitungan Kadar Hematokrit Darah dihisap dengan tabung
mikrohematokrit  sampai  mencapai  ¾  bagian tabung. Kemudian ujung tabung ditutup dengan crytoseal sedalam  1  mm,  sehingga  terbentuk sumbat crytoseal . Selanjutnya tabung mikrohematokrit  disentrifus  dengan  kecepatan 5000 rpm selama 5 menit dengan posisi tabung yang bervolume sama berhadapan agar putaran sentrifuse  seimbang.  Nilai  kadar  hematokrit ditentukan  dengan  persentase  panjang  bagian darah  yang  mengendap  (a)  dan  panjang  total volume  darah  yang  terdapat  di  dalam  tabung (b).  Sehingga  kadar  Hematokrit  =    (a/b)  x 100%  (Chinabut et  al .  1991  dikutip  oleh Maswan, 2009)
Penghitungan Total Eritrosit Darah dihisap dengan pipet yang berisi bulir pengaduk  warna  merah  sampai  skala 0,5). Lalu  tambahkan  larutan  Hayem’s  (berfungsi untuk  mematikan  sel-sel  darah  putih)  sampai skala  1:1,  pengadukan  darah  di  dalam  pipet dilakukan  dengan  mengayunkan  tangan  yang memegang  pipet  seperti  membentuk  angka delapan  selama  3  –  5  menit  sehingga  darah tercampur  rata.  Setelah  itu  tetesan  pertama
larutan  darah  dalam  pipet  dibuang,  selanjutnya teteskan  pada  haemacytometer  tipe Neubauer kemudian ditutup dengan gelas penutup. Jumlah sel  darah  merah  dengan  bantuan  mikroskop dengan  perbesaran  400  x.  Menurut  Nabib  & Pasaribu  (1989) dikutip  oleh Maswan  (2009), jumlah eritrosit total dihitung pada 5 kotak kecil haemacytometer  dan  jumlahnya  di  hitung dengan rumus : Jumlah eritrosit = (A/N) x (1/V) x  Fp;  Keterangan  :  A  =  Σ  sel  terhitung,  V  = volume  kotak  haemacytometer,  N  =  Σ  kotak haemacytometer  yang  diamati,  Fp  =  Faktor pengenceran
Penghitungan Total Leukosit Darah dihisap dengan pipet yang berisi bulir  pengaduk  warna  putih  sampai  skala  0,5. Lalu tambahkan larutan Turk’s (berfungsi untuk mematikan  sel-sel  darah  merah)  sampai  skala 11, pengadukan darah di dalam pipet dilakukan dengan  mengayunkan  tangan  yang  memegang pipet  seperti  membentuk  angka  delapan  selama 3  –  5  menit  sehingga  darah  tercampur  rata. Setelah  itu tetesan pertama  larutan darah dalam pipet  dibuang,  selanjutnya  teteskan  pada haemacytometer tipe Neubauer kemudian ditutup dengan  gelas penutup. Jumlah  sel darah putih  dengan  bantuan  mikroskop  dengan perbesaran  400  x.  Menurut  Svobodova  & Vyukusova (1991) dikutip oleh Mazwan (2009), jumlah leukosit total dihitung sebanyak 5 kotak besar dan dan jumlahnya dihitung dengan rumus :  Total  Leukosit  =  jumlah  sel  terhitung  x  50 sel/mm 3 .
Histopatologi
Preparasi sampel Ikan dimatikan dengan menusuk bagian  otak,  kemudian  operkulum  digunting dan  diambil  insangnya,  kemudian  dibedah  dan diambil  usus  dan  otaknya  diambil  sehingga didapatkan 3 organ dari ikan yang akan diamati secara  histopatologi  Organ-organ  tersebut selanjutnya  difiksasi  dengan  buffer  formalin 4%  atau  dengan  larutan  davidson  dan selanjutnya dibuat preparat sediaan histologis.
Pembuatan Sediaan  Histopatologi Sampel  insang  yang  telah  difiksasi dalam  buffer  formalin  4%,  kemudian  dibuat sediaan histologis (metode parafin dan pewarnaan  Hematoksilin-Eosin  (HE)  dengan tahapan  yang  dapat  Teknik  Pemeriksaan Histopatologi  Organ  Ikan  dengan  Pewarna Hematoxylin-Eosin  menurut  Mahasri  (2007) dikutip  oleh    Amalisa  (2012),  adalah  sebagai berikut: Tahap pertama adalah Fiksasi , dimana organ Ikan dipotong kecil-kecil dan difiksasi ke
dalam  larutan  10%  Neutral  Buffered  Formalin selama  24  jam.Selanjutnya  dehidrasi  dan clearing,  yaitu  organ  yang  telah  difiksasi dimasukkan  kedalam cassete dan  didehidrasi dengan  menggunakan  alkohol  bertingkat:  70%, 80%,  85%,  90%,  95%,  alkoho;  absolut  I  dan  II masing-masing  selama  2  jam.  Clearing  dengan menggunakan  Xylene  I,  II  dan  III.  Kemudian Tahap  Impregnasi,  organ  dimasukkan  ke  dalam paraffin  cair  I,  II,  dan  III  masing-masing  30 menit.
Selanjutnya  tahap  Embedding,  organ dimasukkan  ke  dalam  cetakan-cetakan  besi (base  mold  yang  telah  dipanaskan  diatas hot plate dan  sudah  diisi  dengan  paraffin  cair, biarkan  hingga  paraffin  membeku  (mengeras. Kemudian  tahap  Sectioning  yaitu  Blok  paraffin yang telah mengeras
diiris
dengan menggunakan  microtome  dengan  ketebalan  2-3 µm,  hasil  irisan  dicelupkan  kedalam  air  hangat dengan suhu 42-45 O C sampai jaringan mengembang. Kemudian diletakkan diatas gelas obyek  glas  dan  dikeringkan.  Selanjutnya  tahap Staining,  jaringan  yang  telah  tertempel  pada obyek glas dimasukkan kedalam xylene I dan II masing-masing  selama  5  menit,  alcohol  absolut I,  II  dan  95%  selama  1  menit.  Kemudian diwarnai dengan Hematoxylin selama 10 menit, ke  dalam  akuades  4  celupan,  acid  alcohol  4 celupan  dan  air  mengalir  10  menit.  Kemudian diwarnai dena Eosin selama 2 menit, dimasukkan  kedalam  alcohol  95%  I  dan  II masing-masing 2 celupan, alcohol absolut I dan II  masing-masing I, II dan III  masing-masing 2 Menit.
Selanjutnya  tahap  Pengamatan  yang dilakukan  dibawah  mikroskop  cahaya  dengan perbesaran  100  x  dan  400x.4.5.3  Pemeriksaan
Histopatologi Insang, Usus dan Otak
Pengamatan  secara  mikroskopis  preparat  irisan histologi  insang  dan  usus  diamati  dengan menggunakan mikroskop dengan perbesaran 40- 100 kali, dan diamati perubahan  dan kerusakan jaringan pada insang, usus dan otak ikan koi. Parameter
Parameter  utama  dalam  penelitian  ini adalah  profil  darah  ikan  meliputi  nilai haemoglobin,  leukosit,  eritrosit,  hematokrit, limfosit  dan  gambaran  histopatologi  insang, usus dan otak. Sedangkan parameter pendukung adalah kualitas air.

## Analisis Data
Data  pemeriksaan  gambaran  darah  ikan berupa  nilai  kadar  haemoglobin,  leukosit, eritrosit, hematokrit, limfosit dengan uji F yang dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  5%.  Sedangkan histopatologi dianalisis dengan metode semiquantitative scoring perubahan histopatologi,  yaitu  scoring  yang  digunakan untuk menentukan
tingkat kerusakan histopatologi  Kluschal  wallis  yang  dilanjutkan dengan uji T untuk perbandingan.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil penelitian
didapatkan data perhitungan  gambaran  darah  yang  dapat  dilihat pada Tabel 1.
Leukosit Hasil analisa data perhitungan leukosit yang  dianalisis  dengan  Anova  dapat  diketahui bahwa  terdapat  perbedaan  yang  signifikan (p<0,05)  terhadap  perlakuan  pemberian  dosis infeksi  yang  berbeda.  Berdasarkan  uji  Duncan 5%, diketahui bahwa limfosit ikan  koi tertinggi didapatkan  dari  ikan  yang  diinfeksi  dengan dosis  120  spora/ikan  yaitu  sebesar  188800  + 8500. Jumlah leukosit perakuan D dengan dosis 100  spora/ikan  menunjukkan  hasil  yang  tidak signifikan  dengan  perlakuan  C  yang  diinfeksi dengan  dosis  80  spora/ikan.  Sedangkan  jumlah leukosit  terendah  adalah  ikan  yang  tanpa pemberian  infeksi  spora  myxobollus  yang menunjukkan  hasil  yang  tidak  signifikan terhadap  perlakuan  B  yaitu  ikan  yang  diinfeksi dengan dosis 60 spora/ikan.
Nilai kadar leukosit dalam darah dapat digunakan  untuk  mengetahui  sistem  pertahanan tubuh  ikan  dari  gangguan  luar,  termasuk pathogen.  Dari  penelitian  ini  diketahui  hasil
Tabel 1. Data Gambaran Darah Ikan Koi
Perlakuan Gambaran Darah Ikan Koi Rata-rata + SD Leukosit Eritrosit Hematokrit Trombosit Haemoglobin A 4,0600  + 2,090 B 3,8500  + 1,250 C 3,6000  + 0,300 D 3,3000  + 1,150 E 3,7000  + 1,250 63500 a + 29089 0,502 a, + 0,46143 2,254 a + 0,816 17100 a + 60725 109650 ab + 44750 0,690 ab + 0,37000 3,133 b + 0,903 39000 ab + 8000 167900 bc + 71700 1,335 ab + 0,30500 4,627 bc + 0,651 65000 bc  + 13000 158050 bc + 39150 1,130 ab + 0,64000 4,007 bc + 1,458 108500 bc  + 12500 188800 c + 8500 1,275 b + 0,02 4,764 c  + 0,045 110500 c  + 28500
pengujian  kandungan  leukosit  pada  darah  ikan pada  perlakuan  A  dan  B  enunjukkan  nilai leukosit berkisar antara 20.000-150.000 sel/mm3,  sedangkan  perlakuan  C  dan  D  terus meningkat,  hingga  didapatkan  nilai  leukosit tertinggi  pada  perlakuan  E  dengan  rata- rata174.500.  Menurut  Moyle  dan  Chech  (1988) dikutip  oleh  Sarjito,  dkk  (2013),  bahwa  kan yang  normal  memiliki  jumlah  leukosit  normal sebanyak  20.000  –  150.000  sel/mm3.  (Moyle dan Chech 1988 dikutip oleh Sarjito, dkk 2013)
Jumlah leukosit yang meningkat sesuai dengan  meningkatnya  dosis  infeksi  ikan menunjukkan bahwa semkin besar dosis infeksi myxobollus,  maka  akan  semakin  menurunkan tingkat  kesehatan  ikan.  Leukosit  digunakan sebagai  indikator  kesehatan    ikan  karena leukosit  sebagai  system  pertahanan  tubuh  ikan dari  gangguan  luar,  termasuk  pathogen,  stress, leukemia  atau  parasit.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Anderson  dan  Siwicki  (1993) dikutip  oleh Syawal  et  al.  (2008),  bahwa terjadinya  peningkatan  jumlah  leukosit  dapat dijadikan  sebagai  tanda  adanya  infeksi,  stres maupun  leukimia.  Respon  tersebut  juga  akan muncul  akibat  adanya  beberapa  faktor  seperti trauma,  bahan  kimia,  toksin,  parasit,  bakteri, dan virus.

## Eritrosit
Hasil  analisa  data  perhitungan  jumlah eritrosit  pada  ikan  koi  yang  dianalisis  dengan Anova  menunjukan  hasil  yang  tidak  signifikan terhadap  pemberian  dosis  infeksi  myxobollus yang berbeda tiap perlakuan.
Berdasarkan  hasil  uji  Duncan  5% diketahui bahwa jumlah eritrosit pada perlakuan A  yaitu  tanpa  pemberian  infeksi  spora menunjukkan  hasil  yang  signifikan  terhadap perlakuan  E  yang  diinfeksi  Myxobollus  dengan dosis 120 spora/ikan. Sedangkan Pada perlakuan B,C dan D menunjukkan hasil jumlah eritrosit yang tidak signifikan. Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa infeksi
myxobolus
berpengaruh
pada peningkatan kandungan eritrosit, dimana kandungan rerata eritrosit pada darah ikan yang terinfeksi  myxobolus  mengalami  peningkatan dibanding  dengan  yang  tidak  terinfeks.  Hasil menunjukkan  bahwa  semua  perlakuan  yang diinfeksi spora myxobolus mempunyai kandungan eritrosit pada darah lebih tinggi dari ikan  yang  tidak  terinfeksi  myxobolus.  Lebih jelasnya  diagram  kandungan  eritrosit  setiap perlakuan.
Dari  gambar  diatas  dapat  dijelaskan bahwa  setiap  ikan  yang  terinfeksi  Myxobolus akan  mengalami  peningkatan  jumlah  eritrosit
dalam  darah,  dan  peningkatan  eritrosit  ini tergantung dari dosis infeksi spora/ikan.  Jumlah kandungan    eritrosit  dalam  darah  akan meningkat  seiring  dengan  peningkatan  dosis infeksi  pada  ikan,  hal  ini  disebabkan  karena ikan  yang  mengalami  stress  akan  mempunyai kandungan  eritosit  lebih  tinggi.  Hal  tersebut sesuai  dengan  pernyataan  Wedemeyer,  (1997) yang  dikutip  oleh  Syawal  et  al.  (2008),  bahwa eritrosit  yang  terlalu  tinggi  mengindikasikan ikan dalam keadaan stres.

## Hematokrit
Setelah  data  di  transformasi  dan  di analisa  dengan  Anava,  hasil  menunjukkan bahwa  perbedaan  dosis  infeksi  myxobollus menunjukkan  perbedaan  yang  sangat  signifikan (<0,01).
Berdasarkan  hasil  uji  Duncan  5% diketahui  bahwa  jumlah  hematokrit  pada perlakuan A yaitu tanpa pemberian infeksi spora menunjukkan  hasil  yang  signifikan  terhadap perlakuan  E  yang  diinfeksi  Myxobollus  dengan dosis  120  spora/ikan.  Sedangkan  hematokrit pada  perlakuan  B,C  dan  D  menunjukkan  hasil yang signifikan.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa infeksi  myxobolus  berpengaruh  pada  nilai hematrokrit  dalam  darah  ikan,  seiring  dengan tingkatan  pada  perlakuan  dosis  infeksi  yang berbeda.  Data  menunjukkan  bahwa  semua perlakuan  yang  terinfeksi  spora  myxobolus mengalami  peningkatan  hematokrit,  tergantung dari  tingkat  stress  ikan.  Sedangkan  jumlah hematokrit  <  30  %  merupakan  defresiasi eritrosit,    oleh  sebab  itu  hasil  uji  hematokrit akan berkorelasi dengan hasil uji eritrosit.

## Trombosit
Hasil  analisa  data  perhitungan  jumlah trombosit  pada  ikan  koi  yang  dianalisis  dengan Anova  menunjukan  hasil  yang  signifikan (<0,05)  terhadap  pemberian  dosis  infeksi myxobollus yang berbeda tiap perlakuan.
Berdasarkan  hasil  uji  Duncan  5% diketahui bahwa jumlah trombosit pada perlakuan A yaitu tanpa pemberian infeksi spora menunjukkan  hasil  yang  signifikan  terhadap perlakuan  E  yang  diinfeksi  Myxobollus  dengan dosis 120 spora/ikan. Sedangkan pada perlakuan A  dan  B  menunjukkan  hasil  yang  tidak signifikan,  hasil  yang  tidak  signifikan  juga terdapat  pada  perlakuan  C  dan  D  menunjukkan hasil jumlah eritrosit yang tidak signifikan.
Trombosit  merupakan  sel  pembeku darah.  Dari  penelitian  ini  diperoleh  bahwa kandungan trombosit ikan pada setiap perlakuan menunjukan hasil yang berbeda. Data
menunjukkan  bahwa  pada  setiap  peningkatan dosis  infeksi  yang  diberikan  dari  setiap perlakuan (perlakuan B,C,D dan E) menunjukan kandungan trombosit dalam darah yang berbeda,  hal  ini  disebabkan  karena  adanya infeksi  ini,  darah  akan  berusaha  untuk membetuk  ketahanan  dengan  meningkatnya jumlah  trombosit  sebagai  sel  pembeku  darah. Namun demikian pada ikan yang tidak terserang infeksi  pathogen,  juga  dapat  mengalami  stress atau membentuk pertahanan dengan meningkatnya  kandungan  trombosit,  seperti halnya  perlakuan  A  (kontrol),    nilai  trombosit yang  tinggi  menandakan  ikan  dalam  kondisi stress.

## Haemoglobin
Hasil  analisa  data  perhitungan  jumlah haemoglobin  pada  ikan  koi  yang  dianalisis dengan  Anova  menunjukan  hasil  yang  tidak signifikan  (>0,05)  terhadap  pemberian  dosis infeksi myxobollus yang berbeda tiap perlakuan.  Berdasarkan  hasil  uji  Duncan  5% diketahui  bahwa  jumlah  haemoglobin  pada semua  perlakuan    menunjukkan  hasil  jumlah haemoglobin yang tidak signifikan.
Haemoglobin  sangat  berperan  dalam mengikat oksigen untuk katabolisme  yang akan menghasilkan energi, dengan demikian rendahnya haemogobin dapat menurunkan daya tahan ikan yang pada akhirnya dapat menyebabkan kematian.
Hasil pengukuran haemoglobin menunjukkan bahwa pada setiap perlakuan yang diberi infeksi spora myxobolus, akan menunjukan  kandungan  hemoglobin  yang  lebih rendah  dari    ikan  yang  tidak  terinfeksi.  Hal  ini menunjukan bahwa semakin tinggi dosis infeksi spora  pada  ikan  akan  semakin  banyak  tumbuh myxobolus  pada  bagian  insang,  yang  berakibat semakin  rendahnya  haemoglobin  pada  darah. Hal ini dikarenakan semakin rendah haemoglobin  pada  ikan,  berarti  insang  sedang terganggu, atau mengalami kerusakan.

## Histopatologi
Dari  hasil  penelitian  didapatkan  Nilai skoring  untuk  perubahan  histopatologi  insang, usus dan otak ikan koi dapat dilihat pada Tabel
2. Dari  hasil  penjabaran  pada  Tabel  2. diketahui bahwa kerusakan histopatologi terberat adalah pada bagian insang ikan koi dari perlakuan  E  yang  diberikan  dosis  tertinggi sebanyak  120  spora/ekor,yaitu  haemoragi, nekrosis,  dislokasi,  hipertropi,  dan  hiperplasia. Haemoragi  (pendarahan)  yang  ditandai  dengan keluarnya  darah  dari  vaskula  akibat  kerusakan dari  dinding  vaskula.  Sedangkan  nekrosis adalah  kematian  sel  yang  ditandai  dengan adanya  inti  sel  yang  tidak  tampak,  tidak  dapat diwarnai  atau  hilang.  Hasil  dari  histopatologi juga  menunjukkan  adanya  hipertropi  yaitu adanya  peningkatan  ukuran  sel  atau  sel  yang
Tabel 2. Nilai skoring histopatologi insang, usus dan otak
Keterangan  :  Nilai  Skoring  perubahan  Histopatologi  menurut  Pantung  (2002)  dikutip  oleh Abdulghani, dkk (2013), adalah sebagai berikut : Score 0 (normal)   : tidak ada sama sekali Score 1 (ringan)    : kurang dari 30% dari luasan pandang Score 2 (sedang)   : 30-70% dari luasan pandang Score 3 (berat)      : lebih dari 70% luasan pandang
membesar,  dan  hiperplasia  yaitu  penambahan jumlah sel.
Dari  hasil  histopatologi  diketahui bahwa  ikan  yang  dipapar  dengan  myxobolus menunjukkan  adanya  kerusakan  dalam  jaringan insang  dan  ususnya,  sedangkan  pada  otak  ikan tidak mengalami perubahan yang berarti. Hal ini menunjukkan  bahwa  inteksi  tersebut  telah membuat  ikan  mengalami  gangguan  dan perubahan
yang ditandai
adanya pembengkakan,  nekrosis, hipertropi, hiperplasia dan edema. Pembengkakan sel bersifat reversibel  sehingga  apabila  paparan  zat  toksik tidak  belanjut  maka  sel  dapat  kembali  normal, namun  jika  zat  tersebut  berlangsung  lama makan  sel  tidak  dapat  mentolerir  kerusakan yang diakibatkan oleh zat toksin tersebut.
Kualitas Air
Dalam penelitian ini dilakukan mengukuran kualitas air pada setiap hari, untuk mengetahui  apakah  ada  hal-hal  yang  bersifat ekstrim dan dapat  menyebabkan kematian ikan, sedangkan  kualitas  air    yang  diukur  adalah variable yang dimungkinkan berubah yaitu  DO, Suhu dan pH.
Dari data diatas dapat diketahui bahwa tidak  terdapat  DO  ekstrim  rendah,  karena selama  penelitian,  air  media  diberikan  aerasi yang cukup,  yaitu oksigen terlarut pada  kisaran 4  ppm,  sehingga  kematian  ikan  sepenuhnya akibat dari perlakuan infeksi spora myxobullus.
Dari data tersebut diatas dapat diketahui  bahwa  suhu  air  media  cenderung konstan,  walaupun  ada  perubahan  harian  tetapi relatif  kecil,  karena  penelitian  ini  dilakukan
Gambar 1.   (A) Histopatologi Usus Ikan Koi yang Terinfeksi Myxobolus (Perbesaran 400X),
(B)Histopatologi Otak Ikan Koi yang Terinfeksi Myxobolus (Perbesaran 400X) Keterangan :  haemoragi,  dislokasi,  hiperplasia,  nekrosis,  hipertropi
Gambar 2.   (A) Histopatologi Insang Ikan Koi yang Terinfeksi Myxobolus (Perbesaran 400X), (B)Histopatologi Insang  Ikan Koi yang Terinfeksi Myxobolus (Perbesaran 1000X) Keterangan :  haemoragi,  dislokasi,  hiperplasia,  nekrosis,  hipertropi
didalam ruangan yang rapat sehingga perubahan suhu  luar  kecil  pengaruhnya  pada  air  media. Selama  penelitian  tidak  terdapat  suhu  ekstrim pada  air  media,  sehingga  kematian  ikan sepenuhnya  disebabkan  oleh  perlakuan  infeksi spora myxobolus.
Dari data diatas dapat diketahui bahwa tidak terdapat pH ekstrim yang dapat menyebabkan  kematian  ikan  pada  air  media penelitian,  sehingga  kematian  ikan  murni disebabkan  perlakuan  infeksi  spora  myxobolus. Namun demikian sama halnya dengan parameter  kualitas  air  yang  lain(  DO),  pH mengalami  penurunan  setelah  ada  kematian ikan,  hal  ini  menunjukan  adanya  penurunan kualitas  air  akibat  degradasi  protein  dari  Ikan yang mati.

## Kesimpulan
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa pemberian  infeksi  Myxobollus  secara  oral  pada ikan koi dapat memberikan perubahan gambaran darah dan histopatologi pada ikan koi ( Cyprinus  carpio  koi ).  Terjadi  Kerusakan jaringan  ikan  koi  ( Cyprinus  carpio  koi )  yang diinfeksi  Myxobollus  secara  oral,  kerusakan terparah  terdapat  pada  ikan  koi  dengan  dosis infeksi terbanyak yaitu 120 spora/ikan (perlakuan  E).  Kerusakan  jaringan  yang ditemukan  antara  lain  haemoragi,  hipertropi, hiperplasia, dislokasi dan nekrosis.
Hasil  gambaran  darah  menunjukkan terjadinya  peningkatan  jumlah  eritrosit  dan trombosit  pada  ikan  koi  yang  terinfeksi Myxobollus menunjukkan bahwa ikan mengalami  stres,  dan  terjadinya  peningkatan jumlah  leukosit  menunjukkan  ikan  mengalami stres dan terjadi infeksi.
Saran  yang  dapat  diajukan  dalam penelitian  ini  adalah  perlunya  informasi mengenai pengaruh pemberian infeksi myxobollus perlu dilanjutkan hingga didapatkan solusi  dalam  hal  pengobatan  yang  tepat, mengingat infeksi myxobollus dapat menyerang dengan  cepat  sehingga  perlu  penelitian  lebih lanjut  untuk  mendapatkan  solusi  penanganan Myxobollus  yang  cepat  dan  tepat. Masyarakat juga diharapkan mewaspadai serangan Myxobollus  koi  terharap  Ikan  Koi  ( Cyprinus carpio koi ), Myxobollus yang menginfeksi ikan koi  dapat  mengakibatkan  perubahan  gambaran darah dan kerusakan pada histopatologi ikan.

## Daftar Pustaka
Afrianto  dan  Liviawaty.,1992.  Pengendalian hama  dan  Penyakit  Ikan.    Kanisius. Yogyakarta. 89 hal.
Arie  U.,  dan  C.  Muharam.,  2009.  Panen  Ikan Mas  2,5  Bulan.  Penebar  Swadaya. Jakarta. 92 hal.
Amalisa, 2012. Perubahan Patologis Insang dan Usus  Ikan  Koi  (Cyprinus  carpio  koi)
Akibat Infeksi Myxobolus pada Derajat
Infeksi  Berbeda.  Skripsi.  Fakultas
Perikanan  dan  Kelautan.  Universitas Airlangga. Surabaya.61 hal. Andrianto T.T., 2005. Pedoman Praktis
Budidaya  Ikan  Mas  (Kiat  Merintis Usaha  Bermodal  Kecil).  Absolut. Yogyakarta.189 hal.
Asniatih,  Idris  M.,  dan  Sabilu  K.  2013.  Studi Histopatologi  pada  Ikan  Lele  Dumbo (Clarias  bgariepinus)  yang  Terinfeksi Bakteri Aeromonas Hydrophila . Universitas Halu Oleo. Kendari. Bastiawan,  D;  A.  Wahid;  M.  Alifudin,  dan  I.
Agustiawan.  2001.  Gambaran  Darah Lele  Dumbo  (Clarias  Spp.)  yang Diinfeksi Cendawan Aphanomyces Sp. pada pH yang Berbeda. Jurnal Penelitian Indonesia 7(3) 44-47.
Bachtiar  Y.,  2002.  Pembesaran  Ikan  Mas  di Kolam  Air  Deras.  Agromedia  Pustaka. Jakarta. 96 hal.
Cholik  M.F.,  A.G.  Jagatraya,  R.P.Poernomo, dan  A.  Jauzi.  2005.  Akuakultur Tumpuan Harapan Masa Depan
Bangsa.Taman  akuarium  Air  tawar Taman  Mini  Indonesia  Indah.  Jakarta. 415 hal.
Dayat  M.,  dan  Sitanggang  M.  2004.  Budidaya Koi  Blitar  Pengalaman  dari  Ciganjur. Agromedia Pustaka. Jakarta. 74 hal.
Dyah E.W., Aunurrohim, Nurlita A. 2011. Studi Histopatologi  Insang  Ikan  Mujair (Oreochromis mossambicus) pada
Konsentrasi  Sublethal  Air  Lumpur Lapindo.  Institut  Sepuluh  November. Surabaya. Fujaya Y. 2008. Fisiologi Ikan Dasar Pengembangan Teknik Perikanan. Rineka Cipta. Jakarta. 179 hal.
Handajani  dan  Samsundari.  2005.  Parasit  dan
Penyakit.  UMM  Press.  Malang.  201 hal.
Hastuti,  Arisha  Miraka,  dan  Sarjito.  2012. Identifikasi  Agensia  Penyebab  dan Profil Darah Ikan Gurami ( Osphronemus gouramy ) yang Terserang Penyakit Bakteri.
Hilda  Lu'luin  N.D.  2011.  Hubungan  Derajat
Investasi  Myxobolus  Koi  terhadap
Jumlah  Spora  dan  Derajat  Kerusakan pada  Usus  Ikan  Mas  (Cyprinus  carpio L.). Universitas Airlangga. Surabaya.
Irawan  A.  2000.  Menanggulangi  Hama  dan Penyakit Ikan Pengendalian, Pencegahan dan Pemberantasan. Aneka. Solo. 82 hal.
Irianto  dan  Madya,  2012.  Waspada  Myxobolus
Sp.  Tipe  Baru  Parasit  Pada  Ikan  Mas (Cyprinus  carpo)  Di  Ngrajek  Jawa
Tengah.  www.badandiklat.jatengprov. go.id. Diakses 2 Januari 2015.
Khairuman, D. Sudenda, dan  B. Gunadi., 2008.
Budi  Daya  Ikan  Mas  Secara  Intensif. PT.Agromedia Pustaka. Jakarta. 99 hal.
Kordi.  2004.  Penanggulangan  Hama  dan
Penyakit  Ikan.  Rineka  Cipta  dan  Bina Adiaksara. 190 hal. Lesmana D.S. 2003. Mencegah dan Menanggulangi  Penyakit  Ikan  Hias.
Penebar Swadaya. Jakarta.
Mahasri, G. 2007. Protein Membran Imunogenik Zoothamnium penaei Sebagai Bahan Pengembangan Imunostimulan  pada  Udang  Windu terhadap Zoothamniosis. Disertasi
Program  Pasca  sarjana.  Universitas
Airlangga. 284 hal. Maswan N.A. 2009. Pengujian Efektivitas Dosis Vaksin DNS dan Korelasinya  terhadap Parameter Hematologi secara Kuantitatif.  Institut  Pertanian  Bogor. Bogor
Rahmatullah  Jefry,  2010.  Darah  Ikan.  Jefry- bp09.blogspot.com.  Diakses  2  Januari 2015.
Redaksi  Agromedia.  2002.  Koi  si  Ikan  Panjang
Umur.  Agromedia  Pustaka.  Jakarta.  74 hal. Rivai  Harrizul.  2013.  Macam-macam  Metode Penelitian. Universitas Andalas.
Padang.
Santoso  B.,  1992.  Petunjuk  Praktis  Budidaya Ikan  Mas.  Kanisius.  Yogyakarta.  83 hal.
Saputra H.M., Marusin N., dan Santoso P. 2013. Struktur  Histologis  Insang  dan  Kadar Haemoglobin Ikan Asang (Osteochillus hasseltii  C.V)  di  Danau  Singkarak  dan Maninjau,  Sumatera  Barat.  Universitas Andalas. Padang. Setiadi Hadi, 2013. Pengaruh Pendekatan Taktis Terhadap  Hasil  Belajar  Lay  Up  Shoot Dalam  Permainan  Bolabasket  (Stusi Eksperimen Di Kegiatan Ekstra
Kulikuler  Bolabasket  SMP  Negeri  2
Arjawinangun). Universitas Pendidikan Indonesia. Setiawan  W.,  1988.  Intisari  Biologi.  Ernesco.
Bandung. 400 hal.
Setiono K.L., 2010. Hakikat Penelitian. www.liliksetiono.wordpress.com. Diakses 30 November 2010. Setyowati  A.,  Hidayati  D.,  Awik  P.D.N.,  dan Abdulgani N. 2010. Studi Histopatologi Hati Ikan Belanak
(Mugil cephalus) si Muara Sungai Aloo Sidoarjo.  Institut  Teknologi  Sepuluh November. Surabaya.
Subandiyono  dan  Hastuti  Sri.  2011.  Performa Hematologis Ikan Lele Dumbo (Clarias gariepinus)  dan  Kualitas  Air  Media pada Sistim Budidaya dengan
Penerapan  Kolam  Biofiltrasi.  Jurnal
Saintek Perikanan Vol. 6 No.2 2011. 1-
5.
Surya  Rahardian,    2015.  Budidaya  Ikan  Koi,
Cara  Pemijahan  dan  Penetasan  Telur. www.bibitikan.net.  Diakses  2  Januari 2015.
Susanto  H,  2002.  Koi.  Penebar  Swadaya.
Jakarta. 78 hal.
Syahailatua  D.Y.,  2009.  Seleksi  Bakteri Probiotik  sebagai  Stimulator  Sistem Imun pada Udang Vaname ( Litopenaus Vannamei ).  Institut  Pertanian  Bogor. Bogor.
Syawal  H,  Syaifriadiman,  Syauqi  Hidayah. 2008.  Pemberian  Ekstrak  Kayu  Siwak (Salvadora Persica L.) untuk Meningkatkan  Kekebalan  Ikan  Mas (Cyprinus  Carpio  L.)  yang  Dipelihara dalam  Keramba.  ISSN  :  1412-033X Januari 2008. Wijoyo  P.M.  2012.  Rahasia  Sukses  Mencegah Kematian Koi. Pustaka Agro Indonesia. Jakarta. 97 hal. Yuniar  Irma,  2013.  Produksi  Ikan  Koi  di  Kab. Blitar Tahun 2013 Ditargetkan Mencapai 188 Juta Ekor. www.blitarkab.go.id. Diakses 2 Januari 2015.