This is an open-access article distributed under the term of the Creative Commons Attribution License ( http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0 ), which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work id properly credited

## JOURNAL OF AGROMEDICINE AND MEDICAL SCIENCES
(AMS) ISSN: 2460-9048 (Print), ISSN: 2714-5654 (Electronic) Available online at http://jurnal.unej.ac.id/index.php/JAMS
Efektifitas Teh Kombucha Bunga Rosella terhadap Peningkatan Kadar Hemoglobin Pada Mencit ( Mus musculus) Anemia
The Effectiveness of Roselle Kombucha Tea in Increasing Hemoglobin Levels In Mice (Mus musculus) with Anemia
i Tut i Rayani i Aksohini i Wijayanti 1*) , i Reny i Retnaningsih 2
1,2 i Midwifery Department, Faculty of Health Science, Institute of Science and Technology of dr. Soepraoen Malang Hospital, Malang, Indonesia

## Article Info
Article History:
Received: January 25, 2023
Accepted: February 22, 2023 Published: June 30, 2023
*) Corresponding author:
tutrayani@itsk-soepraoen.ac.id
How to cite this article: Wijayanti, T.R.A. dan  Retnaningsih,  R.  (2023).  The Effectiveness of Roselle Kombucha Tea in Increasing  Hemoglobin  Levels  In  Mice (Mus  musculus)  with  Anemia.  Journal of Agromedicine and Medical Sciences. 9(2), 90-95.
https://doi.org/10.19184/ams.v9i2.3748 1

## Abstrak
Anemia terkait kekurangan zat besi juga dipengaruhi oleh vitamin C. Vitamin C mengubah besi  ferri  (Fe3+)  menjadi  besi  ferro  (Fe2+)  di  usus  kecil  sehingga  mudah  diserap.Teh kombucha  bunga  rosella  merupakan  minuman  fungsional  populer  yang  memberikan manfaat  bagi  kesehatan  dan  dikenal  luas  oleh  masyarakat.  Tujuan  penelitian  adalah untuk  mengetahui  apakah  teh  kombucha  bunga  rosella  dapat  meningkatkan  kadar hemoglobin  pada  mencit  ( Mus  musculus )  anemia.  Bentuk  penelitian  ini  bersifat eksperimental, menggunakan pre-post test, randomized control group design . Terdapat empat  kelompok  perlakuan  dengan  dilakukan  tiga  kali  pengulangan.  Tikus  (Mus musculus),  betina,  berumur  2  sampai  3  bulan,  dengan  berat  antara  20  dan  25  sampai maksimal  24  tikus,  merupakan  populasi  sampel  penelitian.  Pemberian  teh  kombucha bunga rosella  pada mencit  anemia  dengan  dosis  yang  berbeda  (0,36 ml/20 g BB,  0,55 ml/20 g BB dan 0,73 ml/20 g BB) dilakukan selama 14 hari. ANOVA (nilai p 0,05) dan uji Post-Hoc Tukey digunakan untuk menentukan kelompok mana yang memiliki variasi data yang  signifikan.  Hasilnya  pemberian  teh  kombucha  bunga rosella  dapat  meningkatkan kadar  hemoglobin  dalam  darah  mencit  ( Mus  musculus )  anemia.  Dosis  optimal penggunaan  teh  kombucha  bunga  rosella  terhadap  peningkatan  kadar  hemoglobin dalam  darah  mencit  anemia  adalah  0,73  ml/20  g  BB.  Manfaat  teh  kombucha  bunga rosella  sebagai  terapi  pengobatan  memerlukan  penelitian  tambahan  pada  subjek manusia yang menggunakan teh kombucha bunga rosella sebagai pengobatan.
Kata kunci : anemia, mencit ( Mus musculus ), teh kombucha bunga rosella

## Abstract
Anemia related to iron deficiency is also affected by vitamin C. Vitamin C converts ferrous iron  (Fe3+)  into  ferrous  iron  (Fe2+)  in  the  small  intestine  so  that  it  is  easily  absorbed. Rosella flower kombucha tea is a popular functional drink that provides health benefits and is widely known by the public. The study aimed to determine whether rosella flower kombucha  tea  could  increase  hemoglobin  levels  in  anemic  mice  (Mus  musculus).  This research was experimental, using a pre-post test, randomized control group design. Four treatment groups with three replications were done. Female Mice (Mus musculus), 2 to 3 months old, weighing between 20 and 25 to a maximum of 24 rats, constitute the study sample  population.  Administration  of  rosella  flower  kombucha  tea  to  anemic  mice  at different doses (0.36 ml/20 g BW, 0.55 ml/20 g BW and 0.73 ml/20 g BW) were given for 14 days. ANOVA (p-value 0.05) and Tukey's Post-Hoc test were used to determine which group had significant data variation. As a result, giving rosella flower kombucha tea can

## Pendahuluan
Vitamin  C  mempengaruhi  anemia  akibat  defisiensi  besi. Vitamin C membantu mengubah besi Ferri(Fe3+) menjadi besi Ferro  (Fe2+)  di  usus  kecil,  sehingga memfasilitasi  penyerapan zat  besi.  Vitamin  C  juga  dapat  mencegah  pembentukan hemosiderin,  sehingga  tubuh  sulit  memobilisasi  zat  besi  saat dibutuhkan. Ketika vitamin C hadir, zat besi non-heme diserap empat kali lebih efisien (Asmitra Sembiring, 2013). Pada negara maju  maupun  berkembang,  masalah  gizi  yang  sering  terjadi adalah masalah anemia.
Di negara maju, angka kejadian anemia diperkirakan 9 persen, sementara mengalami kenaikan menjadi 43% di negara-negara berkembang.  Anak-anak  dan  wanita  usia  subur  berada  pada risiko tertinggi untuk anemia, dengan kejadian 47% pada anak di bawah usia lima tahun, 30% pada wanita tidak hamil berusia 15  sampai  49  tahun,  dan  42%  pada  wanita  hamil.  Angka kejadian  pada  kasus  anemia  defisiensi  zat  besi  di  Indonesia mencapai 25,2% yang terdiri dari 28,1% pada anak balita, 29% pada  anak  yang  berusia  5-12  tahun  dan  22,7%  pada  remaja putri serta wanita usia subur. Hal ini merupakan dasar bahawa anemia  tidak  dapat  dihindarkan  lagi  dan  wajib  menjadi perhatian khusus karena merupakan masalah kesehatan yang terdapat dalam lingkup masyarakat di Indonesia (Emy Noviana Sandy, 2021).
Anemia  diakibatkan  karena  rendahnya  dalam  mengkonsumsi zat besi (Fe). Beberapa tanda dan gejala anemia meliputi lesu, sering  lelah,  malaise,  vertigo,  sakit  kepala,  lidah  lunak,  kulit pucat, konjungtiva pucat, dasar kuku pucat, kurang lapar, mual, dan pendarahan. Dalam proses pembentukan hemoglobin, zat besi dan protein berfungsi sebagai pemicu, sedangkan proses absorbsi  zat  besi  dalam  tubuh  dipengaruhi  oleh  vitamin  C. Remaja  dengan  anemia  dapat  mengalami  penurunan  belajar dan  konsentrasi,  gangguan  dalam  proses  pertumbuhan  yang mencegah mereka mencapai tinggi badan optimal, penurunan kemampuan fisik dan mental, serta peningkatan risiko menjadi ibu yang melahirkan anak dengan berat lahir rendah dan tidak cukup bulan.(Agnis Sabat Kristiana, 2019).
Teh  kombucha  bunga  rosella  ini  merupakan  minuman  yang cukup  dikenal  oleh  masyarakat.  Banyak  sekali  manfaat  dari minuman  ini  terutama dalam  kesehatan.  Minuman ini  sangat membantu dan menurunkan oksidasi in vitro LDL ( Low Density Lipoprotein )  dan  kadar  kolesterol  serum,  juga  membantu pencernaan,  menstabilkan  kadar  gula  darah,  meningkatkan sistem kekebalan tubuh dan bertindak sebagai agen pelindung dengan  membersihkan  tubuh  dari  racun.  (Mukhani  Dwi Hidayanti, 2014).
Menggunakan  kultur  mikroba  “Kombucha”,  teh  kombucha bunga  rosella  dihasilkan  dari  kelopak  bunga  rosella  dan  gula (sukrosa)  ( Acetobacter  xylinum dan  beberapa  jenis  ragi). Formulasi  ini  dapat  menjaga  dan  mengoptimalkan  senyawa antosianin.  Hal  ini  dikarenakan  dalam  kombucha  mengandung
asam yang  dihasilkan  dari  proses  fermentasi.  Kandungan  asam ini  dapat  menstabilkan  antosianin  dengan  pH  yang  rendah (Srinivasan Damodaran, 2017). Tanaman rosella ini asli India dan Afrika dan menawarkan berbagai manfaat kesehatan, termasuk mengandung kalsium, vitamin C, D, B1, B2, magnesium, omega- 3, beta-karoten, dan 18 asam amino esensial, termasuk lisin dan agrin.  Vitamin  C  tiga  kali  lebih  banyak  ditemukan  pada  bunga rosella  seperti  pada  anggur  hitam,  sembilan  kali  lebih  banyak pada  jeruk  sitrus,  dan  sepuluh  kali  lebih  banyak  pada  buah belimbing (Kholish, 2011). Tujuan penelitian untuk mengetahui efektivitas  teh  kombucha  bunga  rosella  terhadap  peningkatan kadar hemoglobin pada mencit ( Mus musculus ) anemia.

## Metode

## Desain Penelitian
Bentuk  penelitian  ini  bersifat  eksperimental,  menggunakan pre-post  test, randomized  control  group  design .  Terdapat empat  kelompok  perlakuan  dengan  dilakukan  tiga  kali pengulangan

## Prosedur Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  24  ekor  mencit  betina  ( Mus musculus )  yang  diadaptasikan  selama  satu  minggu  sebelum dibagi  secara  acak  menjadi  empat  kelompok,  masing-masing dengan enam hewan coba.
Kelompok 1: kontrol diberi aquades 0,73 ml/20gBB selama 14 hari
Kelompok 2: diberi teh kombucha bunga rosella dengan dosis 0,36 ml/20 gBB selama 14 hari
Kelompok 3: diberi teh kombucha bunga rosella  dengan dosis 0,55 ml/20 gBB selama 14 hari
Kelompok 4: diberi teh kombucha bunga rosella  dengan dosis 0,73 ml/20 gBB selama 14 hari (Mukhani Dwi Hidayanti, 2014).
Mencit betina ( Mus musculus ) berumur 2-3 bulan dengan berat 20-25gram  digunakan  sebagai  subjek  penelitian.  Hewan tersebut diperoleh dari Laboratorium Sains dan Teknologi UIN Maulana  Malik  Ibrahim  Malang  sejumlah  24  ekor.  Variabel bebas  penelitian  adalah  pemberian  teh  kombucha  bunga rosella  tikus  yang  anemia  dengan  dosis  yang  berbeda  (0,36 ml/20 g BB, 0,55 ml/20 g BB, dan 0,73 ml/20 g BB) selama 14 hari.  Jumlah  hemoglobin  dalam  darah  mencit  anemia  yang dikumpulkan  setelah  hari  ke-14  berfungsi  sebagai  variabel dependen yang akan diuji.
Pemeriksaan  dilakukan  di  Laboratorium  Farmasi  Institut Teknologi, Sains, dan Kesehatan RS Dr. Soepraoen. Setelah lolos kajian  etik  Komisi  Etik  Kesehatan  Politeknik  Kesehatan Kemenkes Malang Nomor 384/KEPK-POLKESMA/2022, penelitian akan dilakukan selama 24 hari.
increase hemoglobin levels in the blood of anemic mice (Mus musculus). The optimal dose of rosella flower kombucha tea to increase hemoglobin levels in the blood of anemia mice is 0.73 ml/20 g BW. The benefits of rosella flower kombucha tea as a treatment require additional research on human subjects who use rosella flower kombucha tea.
Keywords : anemia, mice (Mus musculus) , Rosella flower kombucha tea,

## Prosedur Pembuatan Larutan NaNO 2
Untuk membuat mencit anemia, disiapkan larutan NaNO2 dosis 2,5 mg/mL. 62,5 miligram bubuk NaNO2 digunakan, dan 25 mL air suling digunakan untuk melarutkannya (Hamidah, 2017).

## Perlakuan Patologis Anemia
Mencit  (Mus  musculus)  diadaptasikan  selama  tujuh  hari sebelum penelitian dimulai. Secara khusus, pembuatan larutan NaNO2  untuk  anemia  patologis  dengan  catatan  bahwa  LD 50 rata-rata NaNO2 pada mencit diberikan 250 mg/kg berat badan secara oral. Karena berat masing-masing tikus dalam penelitian ini  adalah  20  g,  maka  konsentrasi  NaNO2  yang  efektif  untuk menyebabkan  anemia  patologis  adalah  2,5  mg/mL  air  suling. Kemudian,  62,5  miligram  serbuk  NaNO2  digunakan  untuk membuat larutan NaNO2 dalam 25 mL air suling. Dosis harian 0,3 mL/20 g BB NaNO2 diberikan (Afreni Hamidah, 2017)

## Pengambilan Bahan Uji
Teh  kombucha  berbahan  dasar  bunga  rosella  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  diproduksi  dan  dijual  secara  komersial. Sebelum  penelitian  dimulai,  mencit  ( Mus  musculus )  akan diadaptasikan selama 7 hari di dalam kandang dengan suhu 20- 25°C. Setiap mencit ( Mus musculus ) akan diberikan kode 1, 2, 3,  4,  5,  dan  6.  Perlakuan  akan diberikan  selama  14  hari  pada mencit  yang  mengalami  anemia.  Jarum  injeksi  oral  3  mililiter dengan kanula digunakan untuk memberikan terapi ketika teh kombucha bunga rosella digunakan.

## Metode pengambilan darah mencit
Mencit  dikeluarkan  dari  kandang  dan  dimasukkan  dalam sungkup.  Ekor  mencit  diolesi  air  hangat  dan  lidi  usap  alkohol
70%, darah diambil dari vena ekor dengan syringe dan dihisap dengan menggunakan mikropipet. Darah kemudian dimasukkan dalam apendorf sampai mencukupi.

## Pemeriksaan Kadar hemoglobin.
Teknik Sahli digunakan untuk menganalisis kadar hemoglobin. Larutan  HCl  0,1  N  dituangkan  ke  dalam  tabung  Sahli  Sampai atau  kurang dari  angka  10.  Sampel  darah  dikumpulkan  dalam jumlah 20 mm3 (0,02 cc). Setelah dimasukkan ke dalam tabung, sampel  darah  kemudian  didiamkan  selama  tiga  menit,  atau sampai  warnanya  berubah  dari  coklat  kemerahan  menjadi coklat kehitaman. Asam hematin terbentuk ketika HCl bereaksi dengan  hemoglobin,  menyebabkan  perubahan  warna  ini. Kemudian  sambil  diaduk,  larutan  hematin  ini  ditambahkan sedikit  demi  sedikit  ke  dalam  tabung  sahli.  Akuades ditambahkan  sampai  warna  larutan  sesuai  dengan  standar hemoglobinometer. Tingkat hemoglobin kemudian ditampilkan dalam g/100 ml pada tabung sahli.
Kadar  hemoglobin  dalam  darah  mencit  ( Mus  musculus )  diukur sebelum  dan  sesudah  terapi,  dan  dimasukkan  ke  dalam grafik. Setelah pengambilan sampel darah, jumlah dalam tabung Sahli dapat diukur dalam satuan g/100 ml.

## Analisa Data
One-Way  Analysis  of  Variance (ANOVA)  digunakan  untuk membandingkan rata-rata variabel terukur antar kelompok, dan ditemukan  bahwa  setidaknya  dua  kelompok  bervariasi  secara signifikan  (nilai  p<0,05)  satu  sama  lain.  Uji Post-Hoc  Tukey digunakan untuk menentukan perbedaan kelompok mana yang signifikan secara statistik.

## Hasil
Deskripsi Kadar Hemoglobin (g/dl) Dalam Darah mencit ( Mus musculus )
Tabel 1. Data Kadar Hemoglobin (g/dl) sebelum diberi NaNO2 dan teh kombucha bunga rosella
Dosis (ml/20 g BB) Kelompok Rerata X1 X2 X3 X4 X5 X6 Kontrol 18 14 14 15 18 16 15.8 P1 0,36 14 12 18 14 13 18 14.8 P2 0,55 14 15 13 11 14 13 13.3 P3 0,73 18 15 15 12 18 12 15.0 rerata 14.75 Berdasarkan Tabel 1, diketahui bahwa rerata kadar hemoglobin mencit sebelum diberi NaNO2 dan sebelum diberi teh kombucha
bunga rosella  adalah  14.75 g/dl.  Data  kadar  hemoglobin  (g/dl) setelah diberi NaNO2 dapat dilihat di Tabel 2.
Tabel 2. Data Kadar Hemoglobin (g/dl) setelah diberi NaNO2 dan sebelum teh kombucha bunga rosella
Dosis (ml/20 g BB) Kelompok Rerata X1 X2 X3 X4 X5 X6 Kontrol 11 12 10 10 10 12 10.8 P1 0,36 9 7 11 11 10 13 10.2 P2 0,55 10 13 10 8 10 9 10.0 P3 0,73 11 14 10 10 9 10 10.7 rerata 10.43
Berdasarkan Tabel 2, diketahui bahwa rerata kadar hemoglobin mencit setelah diberi NaNO2 dan sebelum diberi teh kombucha bunga rosella adalah 10.43 g/dl.Data kadar hemoglobin mencit
setelah  diberi  teh  Kombucha  bunga  Rosella  dapat    dilihat  di Tabel 3.
Tabel 3. Data Kadar Hemoglobin (g/dl) mencit anemia setelah diberi teh kombucha bunga rosella
Dosis (ml/20 g BB) Kelompok Rerata X1 X2 X3 X4 X5 X6 Kontrol 13 13 12 12 12 13 12.5 P1 0,36 16 11 13 17 14 18 14.8 P2 0,55 17 18 14 16 14 13 15.3 P3 0,73 18 17 16 18 17 18 17.3 rerata 14.98
Berdasarkan Tabel 3, diketahui bahwa rerata kadar hemoglobin mencit anemia dan setelah diberi teh kombucha  bunga rosella adalah  14.98  g/dl.  Data  rerata  kadar  hemoglobin  mencit
sebelum  dan  setelah  diberi  teh  kombucha  bunga  rosella  dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Data Peningkatan Kadar Hemoglobin (g/dl) mencit anemia sebelum dan setelah diberi teh kombucha bunga rosella
Dosis (ml/20 g BB) Kadar hemoglobin (g/dl) Rerata Sebelum Rerata Sesudah Kontrol 10.8 12.5 P1 0,36 10.2 14.8 P2 0,55 10.0 15.3 P3 0,73 10.7 17.3
Berdasarkan  Tabel  4,  rerata  kadar  hemoglobin  mencit  anemia setelah  diberi  teh  kombucha  bunga  rosella  selama  14  hari tertinggi dengan dosis 0,73 ml/20 g BB, yakni sebesar 17.3 gr/dl, sedangkan terendah dengan dosis 0,36 ml/20 g BB yakni sebesar 14.8  g/dl.  Sehingga  kisaran  rerata  kadar  hemoglobin  mencit
anemia setelah diberi teh kombucha bunga rosella, yakni antara 15 g/dl – 17 g/dl. Pada kelompok perlakuan yang mendapat teh kombucha  bunga  rosella  dengan  dosis  0,73  ml/20  g  BB mengalami peningkatan kadar hemoglobin yang cukup tinggi.

## .
Analisis Data Efektivitas teh kombucha bunga rosella terhadap peningkatan kadar hemoglobin pada mencit ( Mus musculus ) anemia
Tabel 5. Efektivitas teh kombucha bunga rosella terhadap peningkatan kadar hemoglobin pada mencit ( Mus musculus ) anemia Perlakuan Mean ± SD p-value Kontrol 12.5 ± 0.5 P1 0,36 14.8 ± 2.6 P2 0,55 15.3 ± 2.0 0,005 P3 0,73 17.3 ± 0.8
Pada Tabel 5 didapatkan nilai p pada kelompok 0,36, 0,55, dan 0,73 ml/20 g BB kurang dari 0,05 (p=0,005). Hal ini menunjukkan bahwa  terdapat  minimal  satu  pasang  kelompok  yang  berbeda
signifikan  perubahan  kadar  hemoglobinnya.  Hasil  uji  post  hoc kelompok perlakukan bisa dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6. Post Hoc Test Perlakuan N Subset for alpha = 0.05 1 2 Kontrol 6 13.6667 P1 0,36 6 14.3333 P2 0,55 6 15.0000 15.0000 P3 0,73 6 16.8333 Sig. .356 .127
Rata-rata  kadar  hemoglobin  pada  kelompok  perlakuan  yang diberikan teh kombucha bunga rosella dosis 0,36 ml/20 g BB dan 0,55 ml/20 g BB tidak berbeda secara statistik jika dibandingkan antar kelompok perlakuan. Hal ini ditunjukkan dengan mean dan standar  deviasi  kelompok  terapi  P1  dan  P2,  dengan  standar deviasi masing-masing 14,8 ± 2,6 dan 15,3 ± 2,0.  Pada tabel 6 didapatkan subset 1 rata-rata kelompok control, P1 0,36 ml/20 gBB dan P2 0,55 ml/20 gBB tidak mempunyai perbedaan kadar
Hb yang signifikan. Kemudian pada subset 2 P2 0,55 ml/20 gBB dan P3 0,73 ml/20 gBB tidak mempunyai rerata kadar Hb yang signifikan. Dengan demikian perlakuan yang berpengaruh secara signifikan  terhadap  perbedaan  rata-rata  kadar  Hb  adalah kelompok  kontrol  dan  P3  0,73ml/20  gBB.  Dapat  dikatakan bahwa  pada  penelitian  ini  pemberian  teh  kombucha  bunga rosella dengan dosis 0,73 ml/20 g BB diduga dapat meningkatkan kadar hemoglobin mencit anemia paling cepat.

## Pembahasan
Hibiscus  Sabdariffa  L atau  yang  biasa  dikenal  dengan  bunga rosella  merupakan  tanaman  hias  yang  tumbuh  subur  di  iklim tropis  seperti  Indonesia.  Tanaman  ini  terkenal  karena  bisa dijadikan  minuman  kesehatan  untuk  mengobati  berbagai kondisi,  antara lain  anemia,  hipertensi,  diabetes,  dan  diuretik (M. Djaeni, 2017).
Anemia  adalah  masalah  kesehatan  yang  tersebar  luas  yang memengaruhi negara-negara maju dan berkembang, termasuk Indonesia. Rendahnya kadar hemoglobin normal dalam darah akibat  kekurangan  nutrisi  yang  berfungsi  membentuk hemoglobin dapat mengindikasikan anemia (E Yuniarti, 2019). Molekul  yang  mengandung  besi  disebut  dengan  hemoglobin mengangkut oksigen dari paru-paru ke berbagai organ tubuh. Itu terdiri dari empat kelompok heme, apoprotein, dan globin.
Vitamin C dalam darah sangat berperan penting dalam proses absorbsi  dan  pengangkutan  zat  besi  dari  mukosa  usus  ke sumsum  tulang  sehingga  dapat  digunakan dalam  membentuk hemoglobin  (Siti  Setianingsih,  2018).  Mengingat  begitu pentingnya  peran  vitamin  C  dalam  proses  hemoglobin  maka tubuh  manusia  membutuhkan  200-500  mg/hari  vitamin  C. Bunga  rosella  kaya  akan  kandungan  vitamin  C.  Asam  organik (asam  hidroksitat,  asam  kembang  sepatu),  antosianin, polisakarida  (pektin),  flavonoid,  dan  polisakarida  (antosianin) adalah beberapa zat aktif yang terdapat pada bunga rosella.
(Yang  Xu,  2011)  dalam  penelitiannya  menuliskan  bahwa  teh yang  difermentasi  akan  lebih  tinggi  kemampuannya  untuk menghambat  produksi  Nitric  Oxide  (NO)  dalam  sel.  Nitrit Oksida  terlibat  dalam  sitotoksisitas makrofag dan  pengaturan tekanan  darah.  Regulasi  proses  fisiologis  seperti  vasodilatasi dan  pertahanan  inang  sangat  penting,  tetapi  tidak  ada keseimbangan. Selain kandungan vitamin C-nya yang tinggi, teh kombucha bunga rosella mengandung vitamin B1, B2, dan B3 yang dibutuhkan tubuh sebagai katalisator. Dengan membantu aksi  katalitik  enzim  dalam  pencernaan  karbohidrat,  lipid,  dan protein,  vitamin  ini  berfungsi  sebagai  cikal  bakal  kofaktor enzim.
Hasil  penelitian  tersebut  ditunjukkan  pada  Tabel  4,  di  mana peningkatan kadar hemoglobin pada tikus yang diinduksi oleh pengobatan  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  bahan  aktif  teh kombucha  bunga  rosella,  yang  terkait  dengan  produksi  sel darah  merah  (eritrosit).  Warna  merah  pekat  pada  teh kombucha  bunga  rosella  ini  menunjukkan  tingginya  kadar antosianin. Dimana dengan kadar antosianin yang tinggi maka memiliki pH yang rendah (asam) (Srinivasan Damodaran, 2017). Selain  tingginya  antosianin  yang  dapat  mengakibatkan  pH rendah,  proses  fermentasi  kombucha ini  juga  membuat  asam organik  seperti  glukuronat,  glukonat,  dan  asam  asetat  (Liu, 2000).
Bakteri dan khamir menghasilkan asam organik selama proses fermentasi,  yang  meningkat  seiring  bertambahnya  waktu fermentasi. Semakin besar kandungan asam organik kombucha maka semakin besar kandungan asam totalnya. Pelarutan asam organik  pada  kombucha mengakibatkan  pelepasan  proton H+ yang mengakibatkan penurunan pH (Nofiyanto Pratama, 2015).
Bunga rosella tidak dapat diisolasi dari aktivitas
mikroorganisme  pada  teh  kombucha.  Pada  awal  fermentasi, khamir Saccharomyces cerevisiae berperan karena bertanggung jawab dalam penguraian sukrosa. Menurut (Abdul Rohman, 2019) dengan mengoksidasi sukrosa menjadi CO2 dan H2O selama proses fermentasi yang melibatkan Saccharomyces cerevisiae, CO2 dan H2O bereaksi menghasilkan asam askorbat atau  vitamin  C  dan  alkohol.  Sedangkan  Acetobacter  sp. mengubah  alkohol  menjadi  asam  asetat  dan  menutupi kombucha dengan lapisan  selulosa  atau  nata,  ragi membantu dalam proses fermentasi (Ovi Prasetya Winandari, 2022).
Dalam  penelitian  (Inês  Da-Costa-Rocha,  2014)  tentang penggunaan  ramuan  bunga  rosella  sebagai  sumber  alternatif zat  besi  untuk  pengobatan  anemia  dan  beberapa  penyakit lainnya  seperti  defisiensi  mineral.  Menunjukkan  hasil fermentasi  bunga  rosella  yang  memiliki  pH  rendah.  Hal  ini dapat  berfungsi  dalam  peningkatan  ketersediaan mineral  dan untuk  meningkatkan  jumlah  zat  besi  dalam  sirkulasi, meningkatkan  bioavailabilitas  nutrisi  seperti  zat  besi,  seng, kalsium, dan magnesium.

## Kesimpulan
Pemberian  teh  kombucha  bunga  rosella  dapat  meningkatkan kadar hemoglobin dalam darah mencit ( Mus musculus ) anemia dengan dosis optimal penggunaan teh kombucha bunga rosella terhadap  peningkatan  kadar  hemoglobin  dalam  darah  mencit anemia adalah 0,73 ml/20 g BB.

## Konflik Kepentingan
Tidak ada konflik kepentingan dalam penelitian ini.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  banyak  kepada  tim  pendamping  Laboratorium Farmasi  Fakultas  Sains,  Teknologi  dan  Kesehatan  Institut Teknologi, Sains dan Kesehatan RS dr. Soepraoen Malang pada kegiatan penelitian ini.

## Kontribusi Penulis
Penulis  pertama  berkontribusi  pada  proposal  penelitian, perolehan  data,  analisis  data,  dan  komposisi  naskah  akhir. Penulis kedua berkontribusi dalam pengumpulan data, analisis, dan publikasi naskah.

## Daftar Pustaka
Abdul  Rohman,  B.  D.  (2019).  Pengaruh  Lama  Fermentasi Terhadap Total Asam, Total Bakteri Asam Laktat, Total Khamir dan Mutu Hedonik Kefir Air Kelapa Hijau (Cocos nucifera). Jurnal Teknologi Pangan , 127-133. doi: https://doi.org/10.14710/jtp.v3i1.23281
Afreni Hamidah, E. A. (2017). Biosaintifika Journal of Biology & Biology Education , 417-422. DOI: https://doi.org/10.15294/biosaintifika.v9i3.11427
Agnis  Sabat  Kristiana,  E.  D.  (2019).  Efektivitas  Seduhan  Teh Rosela Kering Terhadap Peningkatan Kadar
Haemoglobin Pada Remaja Putri Di Kota Malang. Jurnal
Wiyata , 6-12.
Asmitra  Sembiring,  M. T. (2013).  Pengaruh Ekstrak  Segar  Daun Rosela  ( Hibiscus  sabdariffa  L. )  Terhadap  Jumlah Eritrosit  Dan  Kadar  Hemoglobin  Mencit  Jantan  ( Mus musculus  L. )  Anemia  Strain  Ddw  Melalui  Induksi Natrium Nitrit (NaNO2) . Saintika Biologi , 60-65.
E  Yuniarti,  L.  H.  (2019).  Effect  of  wheat  grass  juice  (triticum aestivum l.) against the erythrocytes and hemoglobin in male mice (mus musculus l.) anemia induced by sodium nitrite. IOP Conf. Series: Journal of Physics: Conf. Series , 1-8.DOI: 10.1088/1742-6596/1317/1/012069
Emy Noviana Sandy, L. W. (2021). Pengaruh pemberian ekstrak rumput  laut  cokelat  ( Sargassum  duplicatum )terhadap peningkatan kadar hemoglobin pada darah tikus jantan ( Rattus norvegicus )galur wistar anemiayang  di  induksi NaNO2. Oceana Biomedicina Journal , 1-10. DOI Prefix: 10.30649
Hamidah,  A.  (2017).  Effect  of  Carica  papaya  Leaf  Juice  on Hematology  of  Mice  (Mus  musculus)  with  Anemia. Biosaintifika:  Journal  of  Biology  &  Biology  Education,
9 (3), 417-422. DOI: https://doi.org/10.15294/biosaintifika.v9i3.11427
Inês  Da-Costa-Rocha,  B.  B.  (2014).  Hibiscus  sabdariffa  L. – A phytochemical  and  pharmacological  review. Food Chemistry 165 , 424-443. doi: 10.1016/j.foodchem.2014.05.002
Liu,  C.  C.  (2000).  Changes  in  major  components  of  tea  fungus metabolites during prolonged fermentation. Journal of Applied  Microbiology ,  834-839.  doi:  10.1046/j.1365- 2672.2000.01188.x.
M. Djaeni, N. A. (2017). Ekstraksi Antosianin dari Kelopak Bunga Rosella  (Hibiscus  sabdariffa  L.)  Berbantu  Ultrasonik: Tinjauan  Aktivitas  Antioksidan. Jurnal  Aplikasi Teknologi Pangan 6 (3) , 148-151.
Mukhani  Dwi  Hidayanti,  S.  A.  (2014).  Pengaruh  Pemberian “Kombucha” Teh Rosella Terhadap Profil Darah Mencit ( Mus musculus L ). AGRITECH,  Vol.  34,  No.  4 ,  382-389.
DOI Prefix : 10.30595/agritech Munawaroh,  S.  (2009).  Pengaruh  Ekstrak  Kelopak  Rosela (Hibiscus  sabdariffa  L.) Terhadap  Peningkatan  Jumlah Eritrosit  dan  Kadar  Hemoglobin  Dalam  Darah  Tikus Putih (Rattus  norvegicus)  Anemia. Skripsi.  Malang: Fakultas  Sains  dan  Teknologi  Universitas  Islam  Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Nofiyanto  Pratama,  U.  P.  (2015).  Kajian  Pembuatan  Teh Kombucha  Dari  Kulit  Buah  Manggis  (Garcinia mangostana L.). JOM FAPERTA VOL 2 NO 2 .
Ovi Prasetya Winandari, N. W. (2022). Potential of Vitamin C and Total  Acid  as  Antioxidants  of  Rosella  Kombucha  With Different  Fermentation  Times. Jurnal  Pembelajaran Dan Biologi Nukleus , 141-148. DOI: https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2471
Rohman.  (2019).  Pengaruh  Lama  Fermentasi  Terhadap  Total Asam,  Total  Bakteri  Asam  Laktat,  Total  Khamir  dan Mutu  Hedonik  Kefir  Air  Kelapa  Hijau  (Cocos  nucifera). Jurnal Teknologi Pangan , 127-133.
doi: https://doi.org/10.14710/jtp.v3i1.23281 Siti  Setianingsih, L.  H. (2018). Effect  of  the ethanolic extract  of red roselle calyx (Hibiscus sabdariffa L.) on hematocrit, platelets,  and  erythrocytes  in  healthy  volunteers. Pharmaciana , 257-266.
DOI: http://dx.doi.org/10.12928/pharmaciana.v8i2.87 38
Srinivasan  Damodaran,  K.  L.  (2017).  Introduction  to  Food Chemisty  .  In  K.  L.  Srinivasan  Damodaran, Fennema's Food  Chemisty (pp.  1-19). London  New York: Taylor & Francis Group.
Yang Xu, H. Z.-J.-Z. (2011). Variations of Antioxidant Properties and NO Scavenging Abilities during Fermentation of Tea . Int. J. Mol. Sci , 12, 4574-4590;
doi:10.3390/ijms12074574.