Volume 8, Nomor 1 Halaman 67-72

## Daya Antimikrobia Sarang Lebah Madu
Trigona spp terhadap Mikrobia Patogen
RENITA YULIANA 1* , ENDANG SUTARININGSIH 2 , HARRY BUDI SANTOSO 3 , KRESNO AGUS HENDARTO 3 , SEPTIANTINA DYAH RIENDRASARI 3
1,2 Program Pascasarjana Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada
2 Professor Mikrobiologi Universitas Gadjah Mada
3 Balai Penelitian Teknologi Hasil Hutan Bukan Kayu Mataram *email: tata_renjuly@ymail.com
Manuscript received: 14 Desember 2014 Revision accepted: 25 Januari 2015

## ABSTRACT
Potensi  sarang  lebah  madu Trigona spp untuk  menghasilkan  antimikrobia  sangat  tinggi,  tidak  hanya  pada  bagian propolis,  melainkan  keseluruhan  bagian  dari  sarang  yang  terdiri  dari  kantong  madu,  kantong  polen,  kantong  telur,  dan penutup  sarang.  Sarang  lebah  madu Trigona spp  berfungsi  sebagai  tempat  perlindungan  lebah  dari  predator  maupun parasit  seperti  fungi,  jamur  dan  virus.  Sarang  lebah  madu Trigona spp dapat  dijadikan  alternatif  sumber  antimikrobia alami sehingga  diperlukan  penelitian  untuk  mendeteksi  aktivitas  tersebut.  Tujuan  dari  penelitian  ini  meneliti  daya antimikrobia  yang  dilepaskan  sarang  lebah  madu Trigona spp  terhadap  pertumbuhan  mikrobia  dan  meneliti  komponen kimia  utama  yang  terkandung  dalam  sarang  lebah  madu Trigona spp.  Metode  untuk  ekstraksi  sarang  menggunakan ethanol  70%  secara  maserasi  dan  uji  antimikrobia  yang  terdiri  dari  antibakteri  dan  antifungi  dilakukan  dengan  metode difusi sumur. Rancangan penelitian yang digunakan dalam bentuk rancangan acak lengkap (RAL). Data yang diperoleh dari hasil pengamatan di laboratorium dianalisis dengan menggunakan statistik parametrik yaitu One way  ANOVA. Hasil penelitian  menunjukkan  aktivitas  antimikrobia  sarang  lebah  madu Trigona spp  berpengaruh  menghambat  pertumbuhan mikrobia patogen uji dengan konsentrasi hambat minimal 1% (v/v). Senyawa kimia utama sebagai antimikrobia berasal dari asam lemak dan fenol.
Keywords : antimikrobia, sarang lebah, Trigona spp, mikrobia patogen

## LATAR BELAKANG
Produk  peternakan Trigona spp  yang  telah  banyak dimanfaatkan  adalah  madu  dan  propolis.  Propolis merupakan  bagian  dari  sarang  lebah  madu Trigona spp yang  terdiri  dari  senyawa  yang  merupakan  bahan  resin komplek  yang  dihasilkan  oleh  lebah  madu  dari  eksudat tanaman  (Selvan&Prabhu,  2010).  Penelitian  sebelumnya tentang  propolis  atau  penutup  sarang  yang  merupakan bagian dari sarang lebah madu Trigona spp membuktikan bahwa  propolis  memiliki  potensi  sebagai  sumber antimikrobia seperti aktivitas antibakteri mampu menghambat  pertumbuhan Campylobacter spp  (Fatoni et al ., 2008).
Berbagai penelitian telah dilakukan untuk mendapatkan  antimikrobia  alami    dari  hasil  peternakan Trigona spp  selain  propolis,  salah  satunya  adalah  sarang lebah. Sarang lebah  merupakan tempat perlindungan bagi koloni  lebah  dari  serangan  bakteri,  jamur,  virus  maupun predator, serta sebagai tempat produksi madu, bee pollen , dan  tempat  tumbuh  kembang  telur  lebah.  Kondisi  sarang lebah  sangat mempengaruhi  kualitas  madu  dan  yang dihasilkan.  Madu  pada  umumnya  terbebas  dari  mikrobia patogen. Penurunan kualitas madu dan bahkan tidak layak untuk  dikonsumsi  disebabkan  oleh  keberadaan  bakteri tertentu dan didominasi oleh Bacillus sp pada sarang lebah (Perez et al ., 2013).
Potensi  sarang  lebah  madu Trigona spp  sebagai sumber antimikrobia  sangat menarik untuk diteliti, karena
sebagai  akibat  dari  keberadaan  antimikrobia    tersebut kualitas  madu  dan  kesterilan  sarang  dapat  terjaga. Kandungan  senyawa  pada  sarang  lebah  madu  berfungsi sebagai  pelindung  dan  penentu  kualitas  madu  antara  lain flavonoid  yang  merupakan  senyawa fenol alami dan bees wax (Ra’ed  J et  al .,  2008).  Berdasar  kandungan  senyawa tersebut,  bagian  sarang  lebah  madu Trigona spp  telah diteliti  dan  digunakan  sebagai  antibakteri Streptococcus mutans (Sabir, 2005). Bagian sarang lebah  madu Trigona spp yang  berpotensi  sebagai  antimikrobia  tidak  hanya terdapat  pada  bagian  penutup  sarang  atau  propolis, melainkan  terdapat  pula  pada  bagian  kantong  polen, kantong  madu,  dan  kantong  telur.  Bagian  dari  sarang lebah  madu  memiliki  komponen  senyawa  yang  berbeda sebagai agen antimikrobia.
Jenis antimikrobia  yang dihasilkan sarang lebah madu termasuk  kelompok  antibiotik  tetrasiklin,  streptomisin, sulfonamid, tylosin, erytromisin, lincomisin, dan kloramfenikol  (Reybroeck et  al., 2012).  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  sarang  lebah  madu  berpotensi digunakan  sebagai  antibiotik  untuk  menekan  sampai mematikan  berbagai  macam  bakteri  patogen  sehingga kualitas  madu terjaga. Senyawa agen antimikrobia sarang lebah  madu Trigona spp  dapat  dijadikan  sebagai  sumber antimikrobia alami yang berasal dari alam.
Keunikan  dari  sarang  lebah  madu Trigona spp  adalah selalu  dalam  kondisi  steril.  Hal  ini  disebabkan  karena adanya senyawa antimikrobia yang terkandung didalamnya.  Senyawa-senyawa  yang  terkandung  dalam
sarang  lebah  madu Trigona spp  yang  berpotensi  sebagai antimikrobia  alami  dapat  digunakan  sebagai  bahan pengobatan  alternatif  alami  disamping  adanya  jenis  obat antibiotik komersial yang beredar dipasaran. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  daya  antimikrobia  yang dilepaskan  sarang  lebah  madu Trigona spp  terhadap pertumbuhan  mikrobia  dan  meneliti  komponen  kimia yang  terkandung  dalam  sarang  lebah  madu Trigona spp sebagai sumber agen antimikrobia.
Perbedaan penelitian ini dengan penelitian sebelumnya,  misalnya  yang  dilakukan  oleh  Sabir  (2005) dan  Fatoni et  al (2008)  yang  memfokuskan  pada  bagian propolis  atau  penutup  sarang  yang  merupakan  salah  satu bagian  dari  sarang  lebah  madu Trigona spp serta Andualem (2013) yang  memfokuskan  madu sebagai agen antimikrobia.  Penelitian  ini  memfokuskan  pada  bagian keseluruhan  sarang  lebah  madu Trigona spp  yang  terdiri dari  kantong  madu,  kantong  polen,  kantong  telur,  dan penutup  sarang  sebagai  agen  antimikrobia.  Penelitian  ini juga  memfokuskan  pada  mikrobia  yang  mendominasi sarang lebah madu Trigona spp.

## METODE
Sampel  yang  digunakan  untuk  penelitian  adalah  sarang lebah Trigona spp yang  terdiri  dari  kantong  madu, kantong  polen,  kantong  telur  dan  penutup  sarang  diambil saat panen madu sebagai sumber antimikrobia. Pengambilan sampel dilakukan secara purposive sampling dengan  kriteria  jumlah  stup  lebih  dari  100,  produksi tinggi, dan budidaya yang dilakukan lebih dari 10 tahun.
Lokasi  pengambilan  sampel  di  Kabupaten  Lombok Barat,  Kabupaten  Lombok  Timur,  dan  Kabupaten Lombok  Utara.  Sampel  diambil  pada  bulan  November 2014.  Kondisi  lingkungan  tempat  pengambilan  sampel, sarang  lebah  madu Trigona spp  ternaungi  dari  paparan sinar  matahari  dengan  suhu  antara  30-32 o C  dan kelembaban antara 63-65%.
Sample  Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah:  sarang  lebah Trigona spp , mikrobia  uji  yang digunakan  adalah  kultur  murni Staphylococcus  aureus , Pseudomonas  aeruginosa ,  dan Candida  albicans yang berasal dari Rumah Sakit Provinsi Nusa Tenggara Barat.
Media  pertumbuhan  mikrobia  uji.  Media Nutrient Agar (NA)  untuk  pertumbuhan  isolat  bakteri  uji,  yaitu Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa dengan komposisi (g/L) berupa beef extract 3 g, pepton 5 g,  dan  agar  15  g.  Media Peptone  Glucose  Yeast  Extract Agar (PGYA),  dengan  komposisi  (g/L)  berupa  pepton (Oxoid)  5  gram/L, yeast  extract (Oxoid) 5  gram/L, glukosa  (Difco)  5  gram/L,  dan  agar  16  gram/L.  Media dasar  untuk  uji  antimikrobia  adalah Mueller  Hinton  Agar (MHA)  dengan  pH  7,3  ±0,1  pada  suhu  25 o C,  dengan komposisi  (g/L)  berupa beef  extract (300  g), casein hidrolysate (17,5  g),  amilum  (1,5  g),  dan  agar  (17  g). Media  untuk  uji  antifungi  adalah  media Peptone  Glucose Yeast  Extract  Agar (PGYA),  dengan  komposisi  (g/L) berupa pepton 5 gram/L, yeast extract 3 gram/L, glukosa 5 gram/L,  dan  agar  20  gram/L.  Sterilisasi  media  dengan
autoclave pada suhu 121 0 C selama 15 menit (Atlas, 2010). Antimikrobia  pembanding  yang  digunakan  untuk  uji antibakteri  adalah  tetrasiklin  500  mg.  Antimikrobia pembanding  yang  digunakan  untuk  uji  antifungi  adalah ketoconazole 200 mg.
Senyawa kimia yang dibutuhkan untuk ektraksi adalah etanol  70%  sebanyak  2  L  dan  propilen  glikol  (Merck) sebanyak 50 mL. Senyawa uji C total 10 mL K2Cr2O7 1 N,    H 2 SO 4 96%  7,5  mL,  dan  akuades  200  mL.  Senyawa uji  fenol  adalah  acetonitril  70%  14  mL  dan  standar  fenol 0,25%.  Senyawa  uji  komponen  kimia  sebagai  agen antimikrobia  alkohol  99%,  gas  helium,  crossbond  5% dyhenyl, 95% dimethyl polysiloxane.
Prosedur  kerja  dalam  penelitian  di  Laboratorium meliputi:  ekstraksi  Sarang  lebah  Madu Trigona spp dengan  metode  maserasi.  Sarang  lebah  yang  masih  segar terdiri  dari  kantong  madu,  kantong  polen,  kantong  telur, dan  penutup  sarang  masing-masing  sebanyak  25  g  dan sarang lebah madu utuh terdiri dari kantong madu, kantong polen,  kantong  telur,  dan  penutup  sarang  dicampur sebanyak  25  g. Bagian  masing-masing  sarang  lebah dipotong-potong, kemudian dihaluskan dengan penambahan  pelarut  etanol  70%  sebanyak  250  ml (perbandingan antara sampel:pelarut yaitu, 1:10) (Pujirahayu, et  al., 2014).  Sarang  lebah  yang  sudah dihaluskan  dengan  pelarut  ethanol  70%  disimpan  selama 24  jam  (Selvan  dan  Prabhu,  2010)  dengan  diletakkan diatas shaker pada suhu 40 o C dan dihindarkan dari cahaya. Campuran  sarang  lebah  dengan  ethanol  70%  yang  sudah didiamkan  selama  24  jam  disaring  dengan  penyaring  dan corong steril untuk memisahkan filtrat dari endapan/ampas ke dalam erlenmeyer, kemudian diuapkan hingga  mengering.  Sisa/  ampas  sarang  lebah  madu Trigona spp  diekstraksi  kembali  sampai    pelarut  alkohol tidak  berwarna  (bening).  Ekstrak  sarang  lebah  madu Trigona spp  yang  telah  diperoleh  ditambahkan  propilen glikol  dengan  perbandingan  1:1  yang  akan  digunakan sebagai sampel uji antimikrobia.
Analisis Kimia Sarang Lebah Madu Trigona spp yaitu, menguji  pH  sampel  sarang  lebah  madu Trigona spp diukur  menggunakan  pH  meter.  Analisis  karbon  (C)  total Sarang  Lebah  Madu Trigona spp  menggunakan  metode Walkley & Black (Rahmayanti et al., 2013). Sarang lebah madu  sebanyak  0,05  gram  dicampur  dengan  10  mL K 2 Cr 2 O7  1  N  dan  7,5  mL  H 2 SO 4 96%,  kemudian dipanaskan  diatas waterbath selama  2  jam.  Campuran tersebut diencerkan menggunakan akuades sampai dengan tanda  batas  labu  100  mL,  mendiamkan  campuran  selama 24 jam. Pengukuran dilakukan menggunakan spektrofotometer pada  λ 561 nm. Blangko dibuat  dengan reagen yang sama tanpa penambahan sampel.
Perhitungan kadar C-total=
𝐶 (%) = (( 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑒 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑟𝑎𝑡𝑎 − 𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑒 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟 ) 𝑥 𝑟𝑎𝑡𝑎 − 𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑃𝑃𝑀 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟)
Analisis  Fenol  Sarang  Lebah  Madu Trigona spp dengan  HPLC.  Sampel  sarang  lebah  madu  sebanyak  2  g ditambah 14 mL acetonotril 70%, kemudian didiamkan 24
jam.  Sampel  disaring  menggunakan  kertas  saring (Whatmann  No.41)  dan  penyaring  PVDF  (Milipore). Pengukuran kadar fenol menggunakan HPLC.
Perhitungan kadar fenol:
Kadar Fenol (%) = ( Luas area sampel
Luas area standar ) x % standar x 14 berat sampel
Analisis  komponen  sarang  lebah  madu Trigona  spp menggunakan metode gas chromatography-mass spectrometry (GCMS).  Sampel  sarang  lebah  madu sebanyak  1  g  diekstraksi  menggunakan  alkohol  absolut selama  24  jam.  Volume  sampel  yang  digunakan  untuk analisis GC-MS sebanyak 1 µL (Kumar et al., 2009). Fase gerak  yang  digunakan  berupa  gas  helium  dengan  eluen Crossbond 5% diphenyl, 95% dimethyl polysiloxone.
Deteksi  daya antimikrobia sarang lebah

## Pemurnian Kultur Bakteri
Biakan  murni Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa dari  Rumash  Sakit  Provinsi  Nusa  Tenggara Barat  sebagai  model  dimurnikan  dengan  cara  atau  teknik kultur  sel  tunggal  dengan  teknik  goresan  kembali  pada media  NA,  sedangkan Candida  albicans ditumbuhkan pada  media  PGYA,  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 37 o C.  Koloni yeast atau  bakteri    yang  tumbuh  terpisah diambil  1  ose  dan  dipindahkan  ke  media  NA  miring  dan PGYA miring sebagai kultur murni.
Uji Daya Antimikrobia Sarang Lebah Madu Trigona spp terhadap mikroba patogen
Preparasi  inokulan  uji  dengan  cara  menginokulasikan  1 ose kultur  murni  mikrobia kedalam  NaCl 0,9%  kemudian divortex  hingga  homogen.  Biakan  sebanyak  50  µl  diambil untuk  uji  antimikrobia.  Uji  daya  antimikrobia  sarang lebah  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  difusi (Jawetz et  al., 2010).  Suspensi  sel  mikrobia  uji  sebanyak 50  µl  diinokulasikan  pada  media  MHA  dan  PGYA (ketebalan  0,5  cm  (20  mL))  secara  taburan  ( pour  plate ). Media dilubangi untuk membuat sumuran dengan diameter 7  mm  sebagai  tempat  ekstrak  sarang  lebah.  Sebanyak  100 µl  sampel  sarang  lebah  dimasukkan  ke  dalam  masing- masing  sumuran, inkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C. Pertumbuhan  mikrobia  diamati  terutama  yang  tumbuh disekitar  sumuran,  apabila  terbentuk  zona  bening  disekitar sumuran  maka  hasil  dinyatakan  positif.  Pengamatan terbentuknya  zona  bening  diukur  menggunakan  jangka sorong.

## Analisis Konsentrasi Hambat dan Bunuh Minimum
Uji  konsentrasi  hambat  minimum  dan  uji  konsentrasi bunuh  minimum  menggunakan  metode difusi pada media MHA  dan  PGYA  dengan  ketebalan  0,5  cm  (20  mL).  Uji KHM  dan  KBM  dilakukan  menggunakan  ekstrak  yang telah diperoleh pada konsentrasi 1% sampai dengan 10%. Kontrol  positif  yang  digunakan  larutan  baku  tetrasiklin 500  mg  produksi  kimia  farma  untuk  bakteri  dan ketoconazole  200  mg  produksi  OGB  dexa  untuk  yeast. Isolat  uji  diinokulasikan  kedalam  media  sebanyak  50  µl secara pour  plate .  Media  yang  telah  diinokulasikan
suspensi  mikroba  dilubangi  dengan  diameter  7  mm. Sumuran  pada  media  digunakan  untuk  memasukkan sampel  sarang  lebah  dengan  konsentrasi  yang  berbeda sebanyak 100 µl. Inkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Pengamatan terbentuknya zona bening diukur menggunakan jangka sorong.
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  pengamatan  di laboratorium  dianalisis  dalam  bentuk  Rancangan  Acak lengkap  (RAL).  Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan ANOVA ( Analysis of Variance ) dengan tingkat kepercayaan 95% dan taraf α 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Metode  ekstraksi  sarang  lebah  madu Trigona spp menggunakan  metode  maserasi.  Pelarut  yang  digunakan adalah  alkohol  70%  yang  merupakan  pelarut  semipolar yang  dapat  mengekstraksi  senyawa  dengan  kepolaran rendah.  Ekstraksi  propolis  menggunakan  alkohol  70% menghasilkan rendemen yang paling tinggi (Pujirahayu et al, 2014;  Selvan&Prabhu,  2010).  Alkohol  memiliki  titik didih  yang  rendah  dan  mudah  untuk  menguap,  sehingga dapat  memperkecil  tercampurnya  alkohol  dalam  ekstrak. Penggunaan  alkohol  70%  dapat  melarutkan  sarang  lebah madu Trigona spp, dan memperkecil terlarutnya lilin/ wax ( beeswax )  yang  merupakan  pengganggu  dalam  ekstraksi (Pujirahayu et  al, 2014).  Penggunaan  propilen  glikol sebagai  pelarut  ekstrak  karena  propilen  glikol  dapat melarutkan  ekstrak  sarang  lebah  madu Trigona spp  dan tidak memiliki kemampuan sebagai agen antimikrobia.
Ekstrak  sarang  lebah  madu Trigona spp  berwarna cokelat hingga cokelat tua dan berbentuk pasta (gambar 1) dengan  pH  antara  4-5.  Warna  ekstrak  dipengaruhi  oleh adanya  senyawa  fenolik  dan  flavonoid.  Rendemen  hasil ekstraksi  sarang  lebah  madu Trigona spp,  yaitu  kantong polen  47,8%,  kantong  madu  49,74%,  kantong  telur 40,92%,  penutup  sarang  39,05%,  dan  campuran keseluruhan  sarang  (mix)  42,74%.  Hasil  ekstraksi  sarang lebah  madu Trigona spp  tidak  lebih  dari  50%  karena kandungan  lilin/  wax  yang    tinggi  yang  memiliki  kadar karbon tinggi, yaitu kantong polen 29,54%, kantong madu 37,69%,  kantong  telur  18,85%,  penutup  sarang  26,56%, dan campuran keseluruhan sarang (mix) 33,33%.
Gambar  4.3  Ekstrak  Sarang  Lebah  Madu Trigona spp (a) Ekstrak  kantong  madu,  (b)  ekstrak  kantong  polen,  (c) ekstrak kantong  telur, (d) ekstrak penutup sarang, dan (e) ekstrak sarang lebah madu keseluruhan
Sarang lebah madu Trigona spp memiliki kemampuan dalam  menghambat  dan  membunuh  mikrobia  uji  yaitu Staphylococcus  aureus , Pseudomonas  aeruginosa ,  dan Candida albicans . Luas zona bening yang terbentuk dapat dilihat  pada  Gambar  1.  Aktivitas  antimikrobia  terbesar terdapat pada kantong polen dan aktivitas terkecil terdapat pada  penutup  sarang,  jika  dilihat  dari  terbentuknya  zona bening. Kantong polen memiliki daya penghambatan yang lebih  tinggi  terhadap Candida  albicans dibandingkan penghambatan  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa .
Gambar  1.  Luas  Zona  Bening  Uji  Antimikrobia  Sarang  Lebah Madu Trigona spp
Hasil  analisis  statistika  menunjukkan  sarang  lebah  madu Trigona spp berpengaruh terhadap pertumbuhan mikrobia uji  ( Staphylococcus  aureus , Pseudomonas  aeruginosa , dan Candida  albicans ).  Hasil  uji  konsentrasi  hambat minimum  sarang  lebah  madu Trigona spp  terhadap mikrobia  uji  yang  diperoleh  menunjukkan  nilai  KHM yang diperoleh  yaitu 1% (v/v), artinya konsentrasi sarang lebah  madu Trigona spp  1%  mampu  menghambat pertumbuhan mikrobia patogen uji. Penentuan nilai KHM berfungsi  untuk  menentukan  konsentrasi  terendah  dari ekstrak  sarang  lebah  madu Trigona spp  dalam menghambat pertumbuhan mikrobia patogen uji. Konsentrasi hambat minimum dipengaruhi oleh banyaknya  senyawa  aktif  sebagai  agen  antimikrobia. Bagian  sarang  lebah  madu Trigona spp  konsentrasi  1% yang  memiliki  luas  zona  hambat  terkecil  terdapat  pada penutup sarang, yaitu 63,16 mm.
Berdasarkan  hasil  zona  bening/  zona  hambat  yang terbentuk,  dapat  disimpulkan  bahwa  sarang  lebah  madu Trigona spp  memiliki  potensi  sebagai  antimikrobia  alami untuk  menghambat  sekaligus  membunuh  mikrobia patogen.  Sifat  dari  antimikrobia  sarang  lebah  madu Trigona spp adalah bakteriosidal yang artinya antimikrobia  tersebut  memiliki  kemampuan  untuk membunuh  mikrobia  patogen  uji.      Senyawa  aktif  yang berperan  dalam  penghambatan  pertumbuhan  mikrobia patogen  adalah  gugus  hidroksil  yang  menyebabkan perubahan  komponen  organik  dan  transport  nutrisi sehingga  mengakibatkan  efek  toksik  pada  mikrobia patogen  (Cushnie&Lamb,  2005;  Carlo et  al, 1999),  selain itu juga menghambat spora patogen pada fungi.

## S. aureus              P. aeruginosa      C. albicans
Gambar 2. Hasil Uji Antimikrobia
Senyawa  antimikrobia  didominasi  oleh  asam  lemak, baik  asam  lemak  jenuh  maupun  asam  lemak  tak  jenuh. Senyawa  2-(9,12-octadecadienyloxy)  atau Cis-9,12-
Octadecadienyyloxy  ethanol  dalam  kantong  polen memiliki kemampuan sebagai
antimikrobia
(Lakshmi&Bai,  2015).  Senyawa lauric  acid dan myristic acid dalam  kantong  telur  dan oleic  acid yang  terdapat dalam  sarang  lebah  madu Trigona spp  merupakan antibakteri untuk  menghambat pertumbuhan bakteri  gram positif  seperti Staphylococcus  aureus (Batovska et  al.,
2009;  Desbois et  al, 2013).  Senyawa decanoic  acid (capric) dan  asam  palmitat yang  terdapat  dalam  semua bagian  sarang  lebah  madu Trigona spp serta  lauric  acid dan myristic  acid dalam  kantong  telur  merupakan  agen antifungi  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan Candida albicans, bakteri  Gram  positif  dan  bakteri  Gram  negatif (Pohl et  al., 2011;  Karlova et  al., 2010;  Karbara et  al., 1972).  Heptadecen-8-carbonic  acid  dalam  kantong  polen memiliki kemampuan sebagai agen antimikrobia. Kandungan coconut  oil murni dalam  sarang  lebah  madu Trigona spp  merupakan  kandungan  senyawa  lain  yang merupakan  agen  antimikrobia,  baik  bakteri  Gram  positif maupun Gram negatif (Sia et al ., 2010). Cococnut oil juga dapat  menghambat  pertumbuhan Candida  albicans dengan konsentrasi minimum 25% (Ogoblu et al., 2007). Kandungan senyawa fenolik ( Phenolic acid, flavonoid, dan  tanin)    yang  terdapat  dalam  sarang  lebah  madu Trigona spp  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Gram  positif  seperti Staphylococcus dan Enterococcus juga  bakteri  Gram  negatif  seperti Escherichia  coli dan Proteus  mirabilis (Alves et  al., 2013).  Senyawa  fenolik dapat  menghambat  pertumbuhan Escherichia  coli dengan konsentrasi  minimum  1,25  mg/ml  (Nitiema et  al., 2012). Kadar fenol dalam sarang lebah madu Trigona spp dalam sarang  yaitu;  kantong  polen  0%;  kantong  madu  0,22%; kantong  telur  0,87%;  dan  penutup  sarang  0,27%.  Kadar fenol tertinggi terdapat pada kantong telur. Hasil uji fenol menggunakan  HPLC  kantong  polen  menunjukkan  hasil 0%,  akan  tetapi  pada  uji  GC-MS  menunjukkan  bahwa senyawa  penol  terkandung  didalam  kantong  polen.  Hal tersebut  disebabkan  karena  pemisahan  kantong  polen dengan  polen  menggunakan  air  yang  menyebabkan sebagian besar fenol ikut terlarut didalam air. Hexatriocontane  merupakan  minyak  esensial  lain  dalam kantong  polen  erperan  sebagai  antimikrobia  dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif ( S.aureus ) dan Gram negatif ( Bacillus ) serta  fungi strain A.niger .
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 Kantong Polen Kantong
Madu Kantong Telur Penutup Sarang
Mix Lu as Zo n a Be n in g (m m ) Sarang Lebah Madu Trigona spp Staphyllococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans
Mekanisme  asam  lemak  sebagai  antimikrobia  yang dapat  menghambat  atau  membunuh  dipengaruhi  oleh beberapa faktor seperti konsentrasi antimikrobia, mikrobia target, dan keadaan fisiologi mikrobia seperti suhu dan pH (Desbois,  2012).  Antimikrobia  asam  lemak  memiliki sebaran spektrum yang luas untuk menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram  positif,  bakteri  Gram  negatif maupun yeast .  Antimikrobia  asam  lemak  memiliki kelebihan  lain  seperti;  relatif  lebih  stabil,  tidak menimbulkan  korosi,  konsentrasi  yang  digunakan  sampai milimolar,  lebih  berpengaruh  besar  pada  pH  rendah,  dan toksisitasnya rendah terhadap sel non-mikrobia (Desbois,2012).

## KESIMPULAN
Rendemen hasil ekstraksi sarang lebah madu Trigona spp, yaitu  kantong  polen  47,8%,  kantong  madu  49,74%, kantong  telur  40,92%,  penutup  sarang  39,05%,  dan campuran  keseluruhan  sarang  (mix)  42,74%.  Analisis antimikrobia  menunjukkan  bahwa  sarang Trigona spp berpengaruh menghambat pertumbuhan mikrobia patogen uji  dengan  konsentrasi  hambat  minimal  1%  (v/v). Senyawa  kimia  utama  sebagai  antimikrobia  berasal  dari asam lemak dan fenol

## DAFTAR PUSTAKA
Alves,  M.,  Fereeira,  I.,  Froufe,  H.,  Abreu,  R.,  Martins, A&Pintado, M. (2013). Antimicrobial Activity of Phenolic Compound  Identified  in  Wild  Mushrooms,  SAR  Analysis and  Docking  Studies. Journal  of  Applied  Microbiology ISSN 1364-5072
Atlas,  R.  (2010). Handbook  of  Microbiological  Media  4th Edition .  Washington  DC:  CRC  press  Taylor  &  Francis Group
Batovska, D., Todorova, I., Tsvetkova, I.,&Najdenski, H. (2009).
Antibacterial Study of The Medium Chain Fatty Acids and Their 1-Monoglycerides: Individual Effects and Synergistic Relationships. Polish Journal of Microbiology, Vol 58, No 1, 43-47
Carlo,  G.,  Mascolo,  N.  &  Izzo,  A.  (1999). Flavonoids:  Old  and New Aspect of A Class of Natural Therapeutic Drugs. Life Science Vol. 65(4): 337-353 Elsevier Science Inc
Contrera,  F.,  Fonseca,  V.  &  Nieh,  J.  (2004).  Temporal  and Climatological  influences  on  Flight  Activity  in  the Stingless  bee  Trigona  hyalinata.  Rev  Technologia  e Ambiente, Criciuma Vol. 1(2): 35-43
Cushnie,  T.  &  Lamb,  A.  (2005).  Antimicrobial  Activity  of Flavonoids. International  Journal  of  Antimicrobial  Agent 26: 343-356 www.ischemo.org
Desbois,  A.  &  Lawlor,  K.  (2013).  Antibacterial  Activity  of Long-Chain Polyunsaturated Fatty Acids against Propionibacterium  acnes  and  Staphylococcus  aureus. Journal of Marine Drugs www.mdpi.com/journal/marinedrugs ISSN 1660-3397
Desbois,  A.  (2012).  Potential  Applications  of  Antimicrobial Fatty Acids in Medicine, Agriculture and Other Industries.
Recent  Patents  on  Anti-Infective  Drug  Discovery    Vol  7, No 2 Bentham Science Publisher
Fatoni,  A.,  Artika,  I.,  Hasan,  A.,  Kuswandi.  (2008).  Activity  of Propolis Produced by Trigona spp. Against Campylobacter spp. Journal of Biosciences ISSN: 1978-3019.
Karbara,  J.,  Swieczkowski,  D.,  Conley,  A.  &  Truant,  J.  (1972). Fatty  Acids  and  Derivatives  as  Antimicrobial  Agents. Antimicrobal  Agent  and  Chemotherapy  American  Society for Microbiology
Karlova,  T.,  Polakova,  L.,  Smidrkal,  J.  &  Filip,  V.  (2010). Antimicrobial Effects of Fatty Acid Fructose Esters. Csech Journal Food Sci Vol 28 (2): 146-149
Kumar,  N.,  Mueen,  A.,  Dang,  R.,  Shivananda,  T.,  &  Das,  K. (2009).  GC-MS  Analysis  of  Propolis  of  Indian  Origin. Journal Young Pharm Vol.1 (1): 46-48
Lakshmi,  V.  &  Bai,  V.  (2015).  Determination  of  Biologically Active  Compound  in  iClerodendrum  phlomidis  (L.)  Leaf Extract Using GC/MS. International Journal of Multidisciplinary  Research  and  Development 2(1):  294- 300 www.allsubjectjournal.com
Nitiema, L., Savadogo, A., Simpore, J., Dianou, D. & Traore, A.
(2012).  In  Vitro  Antimicrobial  Activity  Some  Phenolic
Compounds (Coumarin and Quercetin) Against Gastroenteritis  Bacterial  Strains. International  Journal  of Microbiological Research 3(3): 183-187
Ogoblu,  D.,  Oni,  A.,  Daini,  O.  &  Oloko,  A.  (2007).  In  Vitro Antimicrobial  Properties  of  Coconut  Oil  on  Candida Species  in  Ibadan,  Nigeria. Journal  of  Medicinal  Food 10 (2): 384-387
Pérez-Pérez, E.M., Suárez, E., Peña-Vera, M.J., González, A.C., Vit, P. (2013). Antioxidant activity and microorganisms in nest  products  of  Tetragonisca  angustula  Latreille,  1811 from Mérida, Venezuela. pp. 1-8. In Vit P & Roubik DW, eds. Stingless  bees  process  honey  and  pollen  in  cerumen pots . Facultad de Farmacia y Bioanálisis, Universidad de Los    Andes; Mérida, Venezuela.
Pohl, C., Kock, K. & Thibane, V. (2011). Antifungal Free Fatty Acids: A  review.  Science  Againts  Microbial  Pathogens: Communicating  Current  Research  And  Technologi Advances
Pujirahayu, N., Ritonga, H. & Uslinawaty, Z. (2014). Properties and  Flavonoids  Content  In  Propolis  of  Some  Extraction Methode  of  Raw  Propolis. International  Journal  of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciencess 6  ISSN.0975- 1491
Ra'ed,  J.  A,  Ibrahim,  K.  N,    Rula,  M.  D.  &  Mosa,  A.  (2008).
Honey  Bee  Hive  Modification  for  Propolis  Collection. Jordan Journal of Agricultural Sciences , Vol 4(2)
Rahmayanti,  D.,  Dharma,  A.  &  Salim,  M.  (2013).  Fermentasi Anaerob  dari  Sampah  Pasar  Untuk  Pembentukan  Biogas. Jurnal Kimia Unand Vol. 2 (2) ISSN No.2303-3401
Reybroeck,  W.,  Daeseleire,  E.,  Barabander,  H  &  Herman,  L. (2012). Antimicrobials in Beekeeping. Veterinary Microbiology 158 1-11
Rodrigues,  M.,  Santana,  W.,  Freitas,  G&Soares,  E.  (2007). Flight  Activity  of  Tetragona  clavipes  at  The  Sao  Paulo
University  Campus  in  Ribeirao  Preto.  Biosci, J., Uberlandia vol 23, supplement 1, p. 118-124
Sabir,  A.  (2005).  Aktivitas  antibakteri  flavonoid  propolis Trigona  sp  terhadap  bakteri  Streptococcus  mutans  (in vitro). Makasar: Universitas Hasanudin. Majalah Kedokteran Gigi. (Dent. J.), Vol. 38. No. 3: 135–141
Selvan,  A  &  Prabhu,  T.  (2010).  Extraction  Of  Propolis  From Beehives  And  Characterization  Of  Its  Constituents  And Medicinal Properties :A Review. International Journal of Advanced  Engineering  Technology Vol.I/  Issue  III/Oct.- Dec.,2010/50-53 E-ISSN 0976-3945
Sia,  C.,  Yim,  H.,  Lai,  C.  (2010).  Commercial  Virgin  Coconut Oil:  Assesment  of  Antimicrobial  potential. Asian  Journal of Food and Agro-Industry 3(06),567-579 ISSN 1906-3040
Wahyuni,  N.,  Sari,  S.,  Kurniawan,  E.  (2013).  Teknik  Produksi Propolis Lebah Madu Trigona Spp di NTB. Laporan Hasil Penelitian  Balai  Penelitian  Teknologi  Hasil  Hutan  Bukan Kayu Mataram