## EKSPLORASI BAHAN AKTIF RUMPUT LAUT COKLAT (Phaeophyceae) SEBAGAI BIOLARVASIDA Aedes aegypti
EXPLORATION OF BROWN SEAWEED (Phaeophyceae) ACTIVE SUBTANCE AS Aedes aegypti BIOLARVICIDES
Ike Nur Firdhayani, Moch. Amin Alamsjah dan Sri Subekti
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Exploration of seaweed on pharmacy has been developed. The recent studies found its capacity as  biolarvacidal.  The  expert  cited  Manilal et  al., (2010)  explained  that  seaweed  secondary  metabolites has  a  complex  chemical  structures  with    a    different    bioactivity    capabilities.    It    also    has    varied capabilities,  for pharmacy field, ecologic and as a toxic source.
This    study    aim    are    to    determined    the    capabilities    of    brown    seaweed  extracts P. gymnospora, S. filipendula, S. duplicatum, and S. polycystum as an Ae. aegypti larvicides and optimum dose for 50% mortality (LC50 ) of Ae. aegypti larvae. The research methods is experimental  with 50% Ae. aegypti larvae mortality (LC50 ) or probit analyzis. The treatment research are P.gymnospora as E1, S. filipendula as E2, S. duplicatum E3, and S. polycystum as E4. The concentration of each 20 ppm (D1),
40 ppm (D2) , 60 ppm (D3), 80 ppm (D4) and 100 ppm (D5). Repetitions of each treatment three times. The  results  showed  that  extracting  of P.  gymnospora,  S.  filipendula,  S.  duplicatum, and S. polycystum have capability as Ae. aegypti larvicide. The optimum dose of the extract with the number of deaths is 50 % or LC50 P. gymnospora (40.19 ppm ± 0.21), S. duplicatum , S. Fillipendula, S. Polycystum more  than  100  ppm.  The  discussion  about  active  substance  of  brown  seaweed, saponins,  terpenoids, flavonoids and polivenol showed positive result and its dominance founded in P. gymnospora extract that is the best efficiency of LC50
Keywords : Extract, Padina  gymnospora,  Sargassum    filipendula,  Sargassum  duplicatum,  Sargassum polycystum, Biolarvicides , Aedes aegypti

## Pendahuluan
Eksplorasi  terhadap  kemampuan  dan kegunaan rumput laut  telah banyak dilaporkan. Chanda et  al., (2010)  menyebutkan  beberapa jenis  rumput  laut  telah  banyak  dilaporkan berdasarkan kemampuannya sebagai antibakteri dan  manfaat  yang  dikandungnya  sebagai produk  kefarmasian.  Salah  satu  penemuan terbaru adalah kemampuan sebagai biolarvasida.  Biolarvasida  adalah  suatu  bahan yang  memiliki  kemampuan  baik  secara  biologi maupun  kimiawi,  mengontrol  perkembangan larva insekta dengan cara membunuhnya (EPA, 2010). Panghiyangani et al ., (2012) menyebutkan penggunaan larvasida telah
banyak menyebabkan
polutan yaitu
pencemaran terhadap lingkungan dan kontaminasi  yang  menimbulkan resistensi pada larva  nyamuk.  Penggunaan  biolarvasida  alami yang    mudah    didapat,    aman    bagi    manusia serta    lingkungan    digunakan.  Biolarvasida aman  digunakan  karena  mudah  terdegradasi  di alam  sehingga  tidak  meninggalkan    residu    di
lingkungan (Sari, 2012). Penggunaan
sumberdaya  kelautan  sebagai  bahan  larvasida juga  telah  banyak  dilaporkan.  Ali et  al., (2013) menyebutkan rumput
laut coklat
(Phaeophyceae) Caulerpa  racemosa dengan senyawa  metabolit  sekunder  yang  dikandung saponin  dan  terpenoid  secara  signifikan  dapat berperan sebagai larvasida nyamuk Ae. aegypti, Culex quinquefasciatus dan Anopheles stephensi. Berdasarkan  latar  belakang  tersebut mendasari indikasi bahwa senyawa biolarvasida pada  rumput  laut  coklat  berbeda  jenis  dapat dimanfaatkan  sebagai  larvasida Ae.  aegypti , vektor  utama  penyakit  Demam  Berdarah Dengue (DBD).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  mengetahui kemampuan  larvasida Ae.  aegypti dari  ekstrak rumput  laut  coklat  (Phaeophycae)  yaitu Padina gymnospora, Sargassum filipendula, Sargassum duplicatum, dan Sargassum  polycystum serta mengetahui    dosis    optimum    ekstrak    rumput laut  coklat  (Phaeophycae) sebagai larvasida Ae. aegypti. Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat
memberikan    informasi    tentang  sumber  bahan alami baru larvasida yang aman bagi lingkungan serta  referensi  di  bidang  kesehatan  guna pengembangan ilmu pengetahuan.

## Materi dan Metode
Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Fakultas Perikanan dan
Kelautan,  Universitas  Airlangga,  Surabaya. Ekstraksi minyak atsiri daun bandotan dilakukan  di  Laboratorium  Fitokimia  Fakultas Farmasi Universitas Airlangga  Surabaya. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Oktober-November 2013.
Metode Penelitian Penelitian menggunakan
metode eksperimental.    Perlakuan      penelitian  adalah Ekstrak    ke-1    ekstrak    etanol    rumput    laut coklat P.    gymnospora (E1),  ekstrak  ke-2 ekstrak S. filipendula (E2) , ekstrak ke-3 ekstrak S.  duplicatum (E3) , dan  ekstrak  ke-4  ekstrak S. polycystum (E4).  Konsentrasi  setiap  ekstrak adalah  20  mg/ml  (D1),  40  mg/ml  (D2),  60 mg/ml  (D3),  80  mg/ml  (D4)  dan  100  mg/ml (D5).  Replikasi  setiap  konsentrasi  ekstrak sebanyak tiga kali.

## Prosedur Kerja
Persiapan Alat dan Bahan
Persiapan    alat    adalah    kegiatan persiapan  meliputi  pencucian  bersih terhadap alat yang dibutuhkan. Persiapan bahan meliputi pembuatan simplisia dan ekstraksi.
Pembuatan Simplisisa Simplisia  adalah  produk  pertanian yang  setelah  melalui  proses  panen  dan  pasca panen  menjadi  sediaan  produk  kefarmasian yang  siap  pakai  atau  proses  lebih  lanjut (Manalu,  2011).  Pada  tahapan  ini  keempat spesies  rumput  laut  dicuci  terlebih  dahulu menggunakan air tawar sampai bersih. Pencucian  bertujuan  untuk  menghilangkan kotoran dan kontaminan jenis lain. Rumput laut yang  telah  dicuci  dikeringkan  dengan  ditata  di atas  waring  dan  diangin-anginkan  dengan kisaran  suhu  ruang.  Suhu  pengeringan  yang tinggi akan menyebabkan zat aktif dalam bahan berkurang  bahkan  hilang.  Farmakope  Herbal Indonesia  menyatakan pengeringan  sebaiknya dilakukan    pada  suhu    kurang    dari    60°C (Depkes,  2008 dalam Manalu, 2011).
Ekstraksi Bahan Menurut  Harboune  (1984),  senyawa kimia  alam  yang  terkandung  di  dalam
tumbuhan  berupa  senyawa  metabolit  sekunder triterpen atau steroid, flavonoid, tanin, saponin, kumarin,  alkaloid,  dan  glikosida.  Senyawa flavonoid  dan  tanin  dapat  larut  dalam  pelarut polar seperti metanol, etanol, atau etilasetat.
Sampel  dimaserasi  menggunakan  pelarut polar    etanol    dengan  perbandingan  bahan ekstrak dan pelarut 1:3 selama 24 jam kemudian disaring.  Hasil  akhir  berupa  ampas  dan  filtrat dipekatkan  dengan rotary  vacum  evaporator pada suhu 30° C sampai diperoleh ekstrak pekat etanol. Ekstrak yang telah dipekatkan selanjutnya dilakukan pengujian potensi larvasida.
Pembuatan Konsentrasi Larutan Konsentrasi  larutan  diperoleh  dengan cara  melarutkan  ekstrak  rumput  laut  coklat (Paeophycae)  pada  100  ml  air,  dengan konsentrasi  masing-masing  ekstrak  20    mg/ml, 40    mg/ml,    60    mg/ml,    80    mg/ml    dan    100 mg/ml    (ppm).    Setiap  konsentrasi    kemudian direplikasi sebanyak tiga kali.
Metode Larvasida Pada  tahapan  ini  larva  dipindahkan daan  dimasukkan  ( dropping) kedalam  tiap kontainer  berukuran  240  ml  yang  telah  berisi 100  ml  larutan  uji.  Pengamatan  akan  kematian larva  menurut  Manilal, et  al .,  (2011)  adalah dengan    mengamati  kebiasaan  gerak  larva. Larva  yang  mati  akan  tenggelam  ke  dasar kontainer,  tidak  bergerak  dan  tidak  memiliki respon terhadap rangsang.
Analisis Skrining Fitokimia Metode uji skrining fitokimia menurut Marliana (2005) dibagi
berdasarkan penggolongan  struktur  kimia  yang  ada  pada tumbuhan.  Skrining  fitokimia  kemudian  dibagi berdasar  pengamatan  uji,  yaitu  uji  alkaloid, tannin, saponin (steroid  dan  titerpenoid),  dan flavonoid.  Uji  skrining  kemudian  dilanjutkan dengan  pengamatan  kromatografi  lapis  tipis (KLT).
Analisa Data Efektivitas  ekstrak  terhadap  larva nyamuk A.  aegypti dinyatakan  dalam  LC50 (ppm)  enam  belas  jam  pencatatan  berdasarkan hasil  pengamatan  pada  penelitian  pendahuluan. Ali et  al., (2013)  menyebutkan,  data  rata-rata kematian  larva  menjadi  sasaran  analisis  probit untuk  menghitung  LC50,  LC90  dengan  selang kepercayaan  95%  dan  mengetahui  batas  atas kepercayaan    atau upper  concentration  level (UCL) dan batas bawah kepercayaan atau lower concentration level (LCL).

## Hasil dan Pembahasan
Hasil Kematian Larva Ae. aegypti
Pengamatan kematian larva Ae. aegypti
dilakukan selama 16 jam. Pengamatan kematian  dilakukan  terhadap  kebiasaan  gerak larva Ae.    aegypti .  Larva  yang  mengalami kematian  akan  tenggelam  dan  berada  di  dasar kontainer,  tidak    bergerak    atau    tidak menunjukkan    respon    saat    dilakukan perangsangan.  Grafik  total  kematian  larva Ae. aegypti pada  empat  ekstrak  rumput  laut  yang berbeda ditunjukkan pada Gambar 1.
Berdasarkan  data  primer  kematian larva data selanjutnya diolah untuk mengetahui probit  kematian  dari  empat  ekstrak  rumput laut    coklat  (Phaeophyceae)  yang  berbeda. Probit kematian larva dengan lethal concentration 50%  atau  LC50,  menggunakan program  SPSS  ver.  16 for  windows. Tabel kematian  50%    atau    LC50,    pada    empat ekstrak    rumput    laut    coklat    (Phaeophyceae) yang berbeda ditunjukkan pada Tabel 1.
Berdasarkan hasil probit analisis lethal concentration 50%  atau  LC50  dengan  selang kepercayaan  95%  terhadap  empat  ekstrak rumput  laut  coklat  (Phaeophyceae)  yang berbeda  tersebut,  dapat  dianilisis  bahwa  empat ekstrak  rumput  laut  coklat  (Phaeophyceae) yaitu P.  gymnospora,  S.  duplicatum,  S.
fillipendula dan S.    polycystum memiliki kemampuan    sebagai    larvasida Ae.  aegypti. Ekstrak      dengan      efisiensi      konsentrasi terbaik      adalah      ekstrak P.  gymnospora sebesar  40,  19  ppm  ±  0,21 . Ekstrak S. duplicatum,  S.  fillipendula dan S.  polycystum memiliki kemampuan sebagai larvasida dengan rentangan peningkatan konsentrasi LC50 cukup  tinggi,  yaitu  berturut  -  turut S. duplicatum sebesar  110,71  ppm  ±  0,29, S. fillipendula 150,92  ppm  ±  0,39  dan S. polycystum sebesar  125,73  ppm  ±  0,32. Pengaruh empat estrak terhadap probit kematian LC50  menunjukkan  signifikasi sebesar P < 0,01 atau berbeda nyata.
Kualitas Air Pengukuran  kualitas  air  dilakukan terhadap  suhu  dan  pH  media.  Pengukuran dilakukan selama 16 jam. Pengukuran suhu dan pH  dilakukan  pada  dua  puluh  perlakuan ekstrak  rumput  laut  coklat  (Phaeophyceae) P. gymnospora, S. duplicatum, S. fillipendula, dan S. polycystum. Kisaran data kualitas air selama penelitian ditunjukkan pada Tabel 2.
Gambar 1. Grafik Kematian Larva Ae. aegypti pada ke-empat Ekstrak Rumput Laut Coklat (Phaeophyceae) yang Berbeda.
Tabel  1.  LC50  ±  SD  pada  ke-empat  ekstrak  rumput  laut  coklat  (Phaeophyceae) yang berbeda.
No. Ekstrak
rumput laut
coklat
(Phaeophyceae) LC50  (ppm) 1. Padina gymnospora 40, 19 2. Sargassum duplicatum > 100 3. Sargassum fillipendula > 100 4. Sargassum polycystum > 100
Tabel 2.  Kisaran Pengukuran Parameter Kualitas Air Selama Penelitian. Parameter Kisaran Suhu(°C) 29-31 pH 7,5-8,3
Hasil  kisaran  suhu  yaitu  29-31°C terjadi  konstan  tanpa  peningkatan  suhu  yang berarti  selama  16  jam  pengamatan.  Peliza, et al., (2007) menyebutkan bahwa dalam   sebuah kejadian      infeksius      oleh Leptolegnia chapmanii pada   larva Ae.aegypti, larva yang terinfeksi L. chapmanii menunjukkan penurunan  kematian  pada  stadium  instar  IV sebesar  35,6%  pada  rentang  suhu  ≥  35°C dengan  rentang  pH  4-10.  Kisaran  suhu  hasil pengamatan  yang  menunjukkan  29-31°C  dan nilai  kisaran  pH  sebesar  7,5-8,3.  Kisaran  nilai suhu  dan  pH  tersebut  menunjukkan  bahwa media  bahan  ekstrak  pada  kondisi  yang optimum.
Senyawa Metabolit Sekunder Skrining  fitokimia  dilakukan  pada ekstrak P. gymnospora sebagai ekstrak dengan efisiensi  konsentrasi  terbaik.  Uji  fitokimia dilakukan  secara  kualitatif  di  Unit  Layanan Pengujian Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga.  Hasil  uji  skrining  fitokimia P. gymnospora terdapat pada Tabel 3.
Uji  skrining  fitokimia  pada  terpenoid, flavonoid  dan  polivenol  secara  kromatografi lapis  tipis  menggunakan  Kiesel  gel  GF:  254 sebagai  media  baca  fase  diam  dengan penambahan  n-heksan-etil  asetat  pada  fase gerak  uji  terpenoid,  kloroform-aseton-asam formiat  pada  fase  gerak  uji  flavonoid,  dan  etil asetat-  methanol-asam  formiat  pada  fase  gerak uji  polifenol  atau  tannin.  Penampak  noda pada uji  terpenoid  menggunakan  anisaldehida  asam sulfat,  uap  ammonia  untuk  uji  flavonoid  dan pereaksi  FeCl3    sebagai  penampak  noda dalam  uji  polivenol  atau tannin.
Hasil  penampak  noda  pada  uji terpenoid ekstrak P. gymnospora menunjukkan adanya  noda  berwarna  ungu  kehitaman.  Noda ungu menunjukkan adanya kandungan senyawa metabolit sekunder terpenoid , sedangkan dominasi  kandungan  yang  tinggi  ditunjukkan dengan  adanya  kepekatan  warna  yaitu  ungu kehitaman.
Pada  uji  flavonoid,  kenampakan  noda yang  ditunjukkan  adalah  adanya  warna  kuning berpenjar  pada  Kiesel  gel  GF:  254  saat dilakukan  penguapan  oleh  uap    ammonia. Berdasarkan  hasil   uji  penampak   noda,  noda kuning    berpenjar  terlihat  saat  dilakukan penguapan,  namun    noda  kuning  berpenjar tidak  berlangsung  lama,  sehingga  dominasi keberadaan senyawa metabolit sekunder flavonoid pada ekstrak P. gymnospora tergolong dalam rendah. Uji kandungan saponin menggunakan  uji  buih  atau  metode forth . Menurut  Marliana,  dkk.  (2005)  metode forth adalah  memasukkan  2  ml  sampel  ke  dalam tabung  reaksi  kemudian  ditambahkan  10  ml aquades  lalu  dikocok  selama  30  detik. Perubahan  yang  terjadi  adalah  terbentuknya busa  yang  bertahan  selama  30  detik  dan dilanjutkan  dengan  uji  penegasan.  Pada  uji  ini busa atau buih timbul saat dilakukan pengocokan  selama  30  detik  dan  bertahan selama  lebih  dari  30  menit  dengan  tinggi  buih tiga  sampai  lima  sentimeter.  Uji  penegasan dilakukan  dengan  menambahkan  asam  klorida 2N  sebanyak  dua  tetes.  Buih  tetap  bertahan dengan ketinggian yang sama.
Keberadaan beragam senyawa metabolit  sekunder  pada  beberapa  jenis tumbuhan,  dewasa  ini  telah  banyak  dilaporkan sebagai  sumber  bahan  larvasida  alami    (Rai and    Carpinella,    2006).    Terpenoid    pada tumbuhan    memiliki  kemampuan neurotoxicity dengan  senyawa  primernya  monoterponoid. Senyawa  monoterpenoid  carvheol,  menthol, gerniol, carvachrol, thymol dan thujon merupkan senyawa turunan yang secara khusus memiliki kemampuan sebagai larvasida
Tabel  3.   Hasil  uji  skrining  fitokimia  secara  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  pada sampel ekstrak rumput laut coklat Padina gymnospora.
No. Sampel Pengujian Saponin Terpenoid Flavonoid Polivenol 1. Ekstrak P. gymnospora ++ ++ + ++
Keterangan: (++) dominanasi kandungan kuat. (+) dominasi kandungan lemah.
dengan mekanisme kerja toksik. Mekanisme    kerja    toksik    secara  langsung (direct  toxicity  mechanism) oleh  senyawa monoterpenoid tersebut yang selanjutnya menyebabkan  gangguan  membran  sel  dan jaringan (Kuo and Gardner 2002).
Kandungan  lain  yang  dominan  dan berperan  sebagai  larvasida  pada  tumbuhan adalah saponin. Menurut Cheeke (1989), alfalfa saponin memiliki kemampuan inhibit enzymatis  dan  metabolisme.  Secara  langsung alfalfa  saponin  menunjukkan kemampuan inhibit  pada  proses  enzymatis in  vivo yaitu saponin  pada    ginseng    yang    secara    jelas menghambat   Na + ,   K + -ATPse   pada   cardiac sarcolemma yang kemudian berinteraksi dengan membrane-bone  enzyme .  Pada  larva kemampuan saponin ditunjukkan dengan proses  penghambatan  enzim  asetilkorinterase yang menyebabkan kelayuan otot atau paralysis.
Tanin  atau  asam  tanin  adalah  senyawa metabolit  sekunder  pada  tumbuhan  yang  telah lama diketahui kemampuannya sebagai larvasida.  Menurut  Shin et  al. (2005)  asam tanin memiliki kemampuan dalam menghambat perkembangan  morfologi  larva Ae.  albopictus dan  dalam  keadaan  konsentrasi  tinggi  asam tannin dapat mengakibatkan hambatan perkembangan  stadium  larva  yang  dapat berujung  pada  kematian.  Kemampuan  asam tannin dalam menghambat perkembangan larva menurut  Rai and  Carpinella  (2006)  disebabkan adanya  modifikasi  pada  asam  tannin  yang terekstrak oleh etanol, menyebabkan teroksidasinya senyawa quinon sebagai turunan pertama  hasil  oksidatif  ekstrak  etanol  asam tannin. Quinon menyebabkan terjadinya depletion  of  cytoplasmic atau  penipisan sitoplasma  dan  glutation  pada  mitokondria yang  berfungsi  mengiliminasi  proses reacting oxcygen  species (ROS).  Penipisan  sitoplasma menjadi  sebuah  interaksi  langsung  antara enonemoety  dengan  kelompok  sulfhydhryl glutathione  atau  asam  benzonic  2,4-  asam dyhydroxybenzonic (β-asam resorcylic). Keadaan  tersebut  menyebabkan  penghambatan pada  pertumbuhan  larva  (Elliger et  al., 1980 dalam Rai and Carpinella 2006).
Senyawa    metabolit    sekunder    lain yang    banyak    dilaporkan    berperan  sebagai larvasida adalah flavonoid. Golongan flavonoid memiliki  kemampuan  sebagai  sumber  bahan toksik  alami.  Kelompok  flavonoid  dengan kemampuan toksik adalah isoflavonoid. Isoflavonoid  menghambat  proses  penyerapan oksigen  atau  respirasi  sel  oleh  mitokondria
yaitu dehidrogenase NADH-dependent (Rosental and Barenbeum, 1991). Kemampuan toksisitas  yang  dimiliki  flavonoid  disebabkan oleh  kemampuan cytoprotective yang  juga dimilikinya.  Anzenbacher  and  Zanger  (2012) menyebutkan  flavonoid  dapat  dimanfaatkan sebagai sumber antioxidant karena kemampuannya dalam menjaga proses respirasi sel  oleh  mitokondria  pada  dosis  tertentu.  Pada dosis  tinggi  kemampuan  tersebut  berganti menjadi cytotoxic. Kelompok flavonoid quercetin  sebagai  sitotoksik  melibatkan  proses produksi  oksigen  secara  radikal  pada  dosis yang  tinggi  atau  dikenal  dengan auto- oxydation . Auto-oxydation menyebabkan kerusakan  sel  dan  berakibat  pada  kematian larva.  Beragam  fakta  tersebut  memperjelas bahwa  senyawa  metabolit  sekunder  seperti flavonoid,  phenol,  saponin,  titerpenoid  dan tanin  apabila  bekerja  secara  bersamaan  dapat berperan  sebagai larvicidal , insecticidal dan insect  repellent atau  obat  nyamuk  (Ravikumar et  al .,  2012).  Berbagai  fakta  tersebut  juga menjelaskan  bahwa  saat  ini      insektisida  atau larvasida  berbahan  dasar  alami  merupakan sumber    alami    baru    yang    modern    untuk mengatasi    permasalahan  lingkungan  yaitu pencemaran  dan  resistensi  terhadap  larvasida kimiawi  yang telah banyak digunakan (Rai and Carpinella, 2006).

## Kesimpulan
Kesimpulan yang diperoleh dari penelitian ini adalah ekstrak rumput laut coklat (Phaeophycae) P.  gymnospora,  S.  filipendula,
S.  duplicatum, dan S.  polycystum memiliki kemampuan   sebagai   larvasida Ae.   aegypti dan   dosis optimum ekstrak rumput laut coklat (Phaeophycae)  sebagai  larvasida Ae.  aegypti dengan  jumlah  kematian  50%  atau  LC50, ekstrak Padina  gymnospora sebesar  40,  19 ppm  ekstrak S.  duplicatum ,  ekstrak S. fillipendula dan  ekstrak S.  polycystum secara berturut-turut  dosis  optimum  dengan  jumlah kematian  50%  atau  LC50 adalah >100 ppm.
Perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut terkait  isolatif  komponen  bahan  aktif  atau senyawa metabolit sekunder alami lainnya yang memiliki  potensi  sebagai  biolarvasida,  serta kemampuan rumput laut jenis lain yaitu rumput laut  hijau  (Chlorophyceae),  rumput  laut  merah (Rodhophyceae)  dan  rumput  laut  hijau  biru (Cyanophyceae).

## Daftar Pustaka
Ali,  M.  Y.  S.,  S.  Ravikumar  dan  J.  M.  Beula. 2013. Mosquito Larvacidal Activity of Seaweeds  Extracts  Against Anopheles
Stepehensi , Aedes  aegyptii, dan Culex quinquifasciatus .  Asian  Pac  J  Trop Dis, 3 (3): 196-201.
Anzenbacher,   B.  and   U.  M.   Zanger.   2012. Metabolism    of    Drugs    and    Other Xenobiotics. Wiley-VCH & Co. Bochster, Germany. pp. 121-126.
Chanda,  S.,  R.  Dave,  M.  Kaneria  and  K. Nagani.  2010.  Seaweeds:  A  Novel,
Untapped  Source  of  Drugs  From  Sea to Combat Infectious Diseases. Department of Biosciences, Saurashtra University. India. 8 p. (unpublished).
Cheeke,  P.  R.  1989.  Toxicants  of  Plant  Origin Volume  II:  Glycocides.  CRC  Pers,
Inc. Boca Roton, Florida. pp. 234-239
Environmental    Protection    Aggency  (EPA). 2010.    For    Your    Information Larvicides  for  Mosquito  Control.
Environmental  Protection  Aggency. United States. pp. 1-8 Harborne, J. B. 1984. Phytochemical Methods.
2 nd Edition. Terjemahan :  Kosasih Padmawinata. ITB Press. Bandung. Kuo,  T.  M.  and  H.  W.  Gardner.  2002.  Lipid
Biotechnology.  1 st Edition.  Marcell Decker, Inc. New York. pp. 86-88 Manalu,  L.  P.  2011.  Optimasi  Pengeringan Lapisan  Tipis  Simplisia  Temu  Putih dan  Temulawak  Berdasarkan  Analisis Eksergi.  Skripsi.  Institut  Pertanian Bogor, Bogor Manilal,  A.,  N.  Thajuddin,  J.  Selvin,  A. Idhayadhulla,  R.  S.  Khumar,  and  S. Sujith.  2011.  In  Vitro  Mosquito Larvacidal  Activity  of  Marine  Algae Aegainst  The  Human  Vectors, Culex quinquefasciatus and Aedes  aegypti. Int. J. Zool. Res., 7(3): 272-278.
Marliana,  S.D.  V.  Suryanti  dan  Suyono.  2005.
Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi  Lapis  Tipis  Komponen Buah Kimia Buah Labu Siam
(Sechuem  edule  Jacq.  Swartz) Dalam Ekstrak  Etanol.  Biofarmasi  3  (I):  26- 31
Panghiyangani,    R.,    L.    Marlinae    dan    F. Rahman.    2012.    Potential    of
Tumeric  Rhizome Essential Oils
Againt Aedes  aegyptii Larvae.  Univ Med,  31  (I):1-7 Pelizza,  S.  A.,  C.  C.  Lastra,  J.  J.  Becnel,  V. Bisaro and J. J. Garcia. 2007. Effect of Temperature,  pH  and  Salinity  on  the Infection  of Leptolegnia  chapmanii Seymour (Peronosporomycetes)  in Mosquito  Larvae.  I.  J.  Invertebratae Pathology, 96: 133-137
Rai,  S.  and  M.  C.  Carpinella.  2006.  Naturally Occuring  Bioactive  Compounds.  1 st Edition.  Elsevier.  Oxford,  UK.  pp. 360-369 Ravikumar, S., S. J.  Ibaneson dan  P. Suganthi. 2012.  In  Vitro  Antiplasmodial  of Ethanolic  Extracts  of  South  Indian Medicinal  Plants  Against  Plasmodium falciparum.  Asian  Pasific  J  Trop  Dis., 180-183.
Rosenthal, G. A., and M. R. Barenbaum. 1991. Herbivores  Their  Interactions  with
Secondary  Plant  Metabolites.  2 nd
Edition.  Academic,  Pers  Inc.  San Diego, California. pp. 306-401. Sari,  Y.  D.  A.  2012.  Efektifitas  Ekstrak  Biji
Bengkuang ( Pachyrrhizus erozus. Urb.) Sebagai Larvasida Nyamuk Aedes  aegyptii L.  Instar  III. Skripsi. UIN Sunan Kalijaga, Yogyakarta