Uji Aktivitas Penghambatan Enzim Alfa Amilase Ekstrak dan Fraksi Daun Binahong Merah (anredera cordifolia (ten.) Steenis)

## Normaita Latiefah Dinnar
Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Duta Bangsa Surakarta, Indonesia Email: normaita15@gmail.com
Artikel info Artikel history Diterima : 22-09-2022 Direvisi : 12-09-2022 Disetujui   : 20-10-2022
Kata Kunci: Diabetes Mellitus; Alfa Amilase; Binahong Merah.

## Keywords: Diabetes
Mellitus; Alfa Amilase; Red Binahong.

## Abstrak
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan  penyakit  gangguan  metabolisme kronis,  ditandai  dengan  tingginya  kadar  glukosa  dalam  darah (hiperglikemia)  yang  disebabkan  karena  penurunan  sekresi  insulin. Salah satu cara mengobati diabetes mellitus dengan menurunkan kadar glukosa post  prandial ,  yaitu  memperlambat  penyerapan  glukosa melalui  penghambatan  enzim  alfa  amilase.  Inhibitor  alfa  amilase adalah  senyawa  yang  dapat  mengambat  pemecahan  karbohidrat menjadi  glukosa  oleh  enzim  alfa  amilase.  Salah  satu  tanaman  yang memiliki  efek  hiperglikemia  adalah  binahong  merah  ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui aktivitas  penghambatan  enzim  alfa  amilase  oleh  ekstrak  etanol  dan fraksi n -heksan,  etil  asetat,  etanol-air  dari  daun  binahong  merah ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis)  secara in  vitro dengan  inhibitor standar  acarbose  sebagai  pembanding.  Acarbose  dapat  menunda hidrolisis karbohidrat dan disakarisa, absorbsi gula dan menghambat metabolisme  sukrosa  menjadi  glukosa  dan  fruktosa.    Dari  hasil pengujian yang telah dilakukan, diketahui bahwa daun binahong merah ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) mengandung senyawa metabolit sekunder meliputi flavonoid, alkaloid, tannin dan steroid/triterpenoid. Sementara itu hasil pengujian penghambatan enzim alfa amilase oleh ekstrak  etanol  dan  fraksi  diperoleh  nilai  IC 50 berturut-turut  sebesar 113,926  mg/mL,  159,042  mg/mL,  23,609  mg/mL,  31,704  mg/mL. Berdasarkan hasil tersebut, dapat disimpulkan bahwa fraksi etil asetat daun  binahong  merah  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis)  pada konsentrasi  200  ppm  mempunyai  aktivitas  tertinggi  dalam menghambat enzim alfa amilase dengan persen penghambatan sebesar 84,650% dan IC 50 sebesar 23,609 mg/mL.

## Abstract
Diabetes mellitus (DM) is a chronic metabolic disorder, characterized by  high  levels  of  glucose  in  the  blood  (hyperglycemia)  caused  by decreased  insulin  secretion.  One  way to  treat  diabetes  mellitus is to reduce  postprandial  glucose  levels,  which  is  to  slow  down  glucose absorption through the inhibition of the alpha amylase enzyme. Alpha amylase inhibitors are compounds that can inhibit the breakdown of carbohydrates into glucose by the enzyme alpha amylase. One of the plants  that  have  a  hyperglycemic  effect  is  red  binahong  (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). This study aimed to determine the inhibitory activity of the alpha amylase enzyme by ethanol extract and n-hexane, ethyl  acetate,  and  ethanol-water  fractions  from  the  leaves  of  red binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) in vitro with a standard inhibitor  of  acarbose  as  a  comparison.  Acarbose  can  delay  the hydrolysis  of  carbohydrates  and  disaccharides,  absorption  of  sugar and inhibit the metabolism of sucrose into glucose and fructose. From
the results of the tests that have been carried out, it is known that the leaves  of  red  binahong  (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis)  contain secondary  metabolites  including  flavonoids,  alkaloids,  tannins,  and steroids/triterpenoids.  Meanwhile,  the  results  of  the  alpha  amylase inhibition test by ethanol extract and fractions obtained IC 50 values of 113.926 mg/mL, 159.042 mg/mL, 23,609 mg/mL, and 31.704 mg/mL. Based  on  these  results,  it  can  be  concluded  that  the  ethyl  acetate fraction of red binahong leaves (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) at a concentration of 200 ppm had the highest activity in inhibiting the alpha amylase enzyme with a percentage of inhibition of 84.650% and IC 50 of 23.609 mg/mL.
Koresponden author: Normaita Latiefah Dinnar Email: normaita15@gmail.com artikel dengan akses terbuka dibawah lisensi CC BY SA
2022

## Pendahuluan
Diabetes melitus merupakan penyakit atau gangguan metabolisme kronis yang ditandai dengan tingginya kadar gula darah disertai dengan gangguan metabolisme karbohidrat, lipid dan protein sebagai akibat dari kelainan sekresi insulin ( WHO , 1999). Tingkat prevalensi penderita diabetes di dunia pada tahun 2017 sebanyak 425 juta penduduk, diperkirakan pada tahun 2045 jumlah tersebut akan meningkat sebesar 48% menjadi 629 juta penduduk ( Carracher et al ., 2018). Pada tahun 2015 Indonesia menempati peringkat ke tujuh dunia untuk prevalensi penderita diabetes tertinggi di dunia bersama dengan China, kedua  India,  Amerika  Serikat,  Brazil,  Rusia,  dan  Meksiko  dengan  jumlah  estimasi  orang  dengan diabetes sebesar 10 juta ( Roglic , 2016).
Terapi  yang  diberikan  pada  penderita  diabetes  melitus  salah  satunya  menggunakan  strategi menghambat penyerapan gula ke dalam tubuh dengan melibatkan enzim pencernaan. Salah satu enzim yang berperan adalah enzim alfa amilase. Enzim ini merupakan produk yang dihasilkan oleh kelenjar pankreas dan saliva, memecah molekul besar polisakarida yang tidak terlarut menjadi molekul yang dapat diserap tubuh seperti maltosa, dekstrin, dan glukosa ( Ariandi , 2017).
Dalam  pengobatan  tradisional,  tanaman  binahong  memiliki  banyak  khasiat  diantaranya  dapat menyembuhkan penyakit diabetes mellitus, disentri, maag, asam urat, ambeien, menyembuhkan luka, sesak napas, batuk, patah tulang, menambah stamina dan dapat menyembuhkan  jerawat ( Marzuki & Nova , 2018). Menurut ( Sumayyah & Salsabila , 2017), penggunaan obat tradisional dinilai lebih aman daripada obat modern. Hal ini disebabkan karena obat tradisional memiliki efek samping yang relatif lebih  sedikit  daripada  obat  modern.  Namun,  tetap  diperlukan  ketepatan  dalam  penggunaan  obat tradisional untuk meminimalisir efek sampingnya. Sementara itu, penggunaan tanaman binahong untuk ramuan cukup menggunakan daun tanaman binahong saja tanpa harus memakai bahan tambahan lain. Biasanya daun binahong diramu dengan cara direbus, diseduh seperti teh, ditumbuk, bahkan ada yang mengonsumsinya sebagai lalapan saja sesuai keinginan  (Zulaeha & Hakim, 2015)
Berdasarkan penelitian ( Ardiani et al ., 2020), ekstrak daun binahong dapat menurunkan  kadar gula darah pada mencit diabetes akibat induksi aloksan. Dosis optimal ekstrak daun binahong sebagai antidiabetes adalah 400 mg/KgBB. Dalam penelitian lain yang dilakukan oleh ( Sukandar et al ., 2011), pemberian ekstrak metanol daun binahong dosis 50, 100 dan 200 mg/kgBB dapat menurunkan kadar glukosa darah berbeda bermakna (p<0,05) terhadap kontrol setelah pemberian ekstrak 7 dan 14 hari, dan secara histologi dapat meningkatkan jumlah sel dan memperbaiki kerusakan sel β–pankreas akibat pemberian  aloksan.  Sementara  itu,  menurut  penelitian  ( Makalalag  &  Wullur ,  2013)  menunjukkan
bahwa ekstrak daun binahong ( Anredera cordifolia Steen.) 1,8 g/KgBB dapat menurunkan kadar gula darah pada tikus putih jantan galur wistar yang diinduksi dengan sukrosa.
Mengingat  semakin  meningkatnya  angka  penderita  diabetes  melitus  di  Indonesia  sehingga menjadi permasalahan serius dalam bidang kesehatan, dan juga makin banyak pengobatan herbal yang dipercaya masyarakat sebagai salah satu pengobatan alternatif, maka peneliti tertarik untuk melakukan penelitian “Uji Aktivitas Penghambatan Enzim Alfa Amilase Ekstrak Etanol dan Fraksi Daun Binahong Merah ( Anredera cordifolia (Ten,) Steenis) Secara In Vitro ”.
Berdasarkan latar belakang, maka tujuan dalam penelitian adalah untuk mengetahui aktivitas penghambatan  enzim  alfa  amilase  oleh  ekstrak  etanol  dan  fraksi  n-heksan,  etil asetat,  etanol-air  dari daun  binahong  merah  (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis)  secara  in  vitro  dengan  inhibitor  standar acarbose sebagai pembanding.
Ada  pun  manfaat  dalam  penelitian  ini  adalah  dapat  dijadikan  salah  satu  upaya  dalam mengembangkan  daun  tanaman  binahong  menjadi  salah  satu  tanaman  yang  memilki  khasiat  sebagai antidiabetes.

## Metode Penelitian
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  metode  penelitian  eksperimental  dimana penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder ekstrak etanol dan fraksi daun binahong merah ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) dan aktivitas penghambatan enzim α- amilase ekstrak etanol dan fraksi daun binahong merah ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). Penelitian ini  dilakukan  di  Laboratorium  Kimia  Prodi  S-1  Farmasi  Fakultas  Ilmu  Kesehatan  Universitas  Duta Bangsa Surakarta. Penelitian dilakukan selama 2 bulan dari Juni-Agustus 2022.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain corong pisah, timbangan analitik, penangas air, mikropipet, kuvet, spektrofotometri UV-Vis ( Shimadzu UV mini-1240 ), rotary evaporator (IKA HB 10  Basic) , timbangan  analitik (Ohaouse EP  214 sensitivitas 0,1  mg ) ,  blender  ( Philips ), corong  pisah ( Pyrex ), chamber ( CAMAG ), sinar UV 254 dan 366 nm ( CAMAG ), waterbath , labu takar serta alat-alat yang berupa gelas.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari etanol 70%, n -heksan, etil asetat, aquadest , serbuk simplisia daun binahong merah ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), enzim alfa amilase (Sigma Aldrich), tablet acarbose 50 mg (Glucobay), amilum, larutan iodine 1%, buffer fosfat pH 6,9, DMSO (Dimethyl sulfoxide) 1%, HCL 1 N.

## Hasil dan Pembahasan

## A. Determinasi dan Preparasi Sampel
Tanaman binahong merah dideterminasi dengan cara mengidentifikasi seluruh bagian tanaman yang  dilakukan  di  Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan  Tanaman  Obat  dan  Obat  Tradisional (B2P2TOOT) Tawangmangu, Karanganyar, Jawa Tengah. Determinasi tanaman telah dilakukan sesuai literatur dengan nomor KM.04.02/2/1408/2022 (Lampiran 1). Hasil determinasi menunjukkan bahwa sampel  tanaman  merupakan  tanaman  binahong  merah  (Gendola)  yang  termasuk  dalam family Basellaceae .
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini yaitu tanaman binahong merah ( Anredera cordifolia (Ten.)  Steenis)  yang  diperoleh  dari  Dusun  Ngepet,  Kalurahan  Srigading,  Kapanewon  Sanden, Kabupaten Bantul, Yogyakarta. Bagian tanaman binahong merah yang digunakan untuk penelitian yaitu daun. Daun binahong merah dipetik dan dilakukan sortasi basah untuk memisahkan antara daun hijau yang segar dan tidak terdapat kapang. Setelah dilakukan sortasi basah daun kemudian ditimbang dan didapatkan hasil sebanyak 5,3 kg sampel daun basah.
Daun yang telah ditimbang kemudian dicuci dengan air yang mengalir untuk memisahkan daun dari pengotor (debu, hama, dan bahan asing lainnya). Setelah bersih, daun binahong merah ditiriskan
lalu dikeringkan di dalam lemari pengering pada suhu 40-60 ºC sampai kering. Prosentase bobot kering terhadap bobot basah dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1 Hasil Perhitungan Presentase Simplisia Daun Binahong Merah Daun Basah (g) Daun Kering (g) Presentase (%) 5300 945 17,83
Berdasarkan  tabel  1  dapat  diketahui  bahwa  daun  binahong  merah  sebanyak  5300  gram  yang dikeringkan dan diperoleh bobot kering sebesar 945 gram. Simplisia daun binahong merah kemudian dihitung  prosentasenya  terhadap  berat  awal  daun  basah  dan  diperoleh  hasil  17,38  %.  Selanjutnya simplisia diserbuk dan diayak menggunakan ayakan mesh 40 .
Tabel 2
Hasil Perhitungan Presentase Serbuk Simplisia Terhadap Simplisia Kering Daun Binahong
Daun Kering (g) Serbuk Simplisia (g) Presentase (%) 945 540 57,14
Berdasarkan tabel 2 dapat diketahui bahwa hasil presentase serbuk simplisia terhadap daun kering binahong merah sebesar 57,14%.

## B. Ekstraksi dan Fraksinasi
1. Ekstraksi
Ekstrak etanol daun binahong merah dibuat dengan metode maserasi. Metode maserasi dipilih karena prosedur dan peralatan yang digunakan sederhana dan tidak dipanaskan sehingga memungkinkan banyak senyawa terekstraksi ( Nurhasnawati et al ., 2017).
Proses maserasi dilakukan dengan menimbang sebanyak 300 gram serbuk simplisia daun binahong  merah  kemudian  direndam  menggunakan  2100  ml  etanol  70%  (1:7)  selama  3  hari sambil  sesekali  diaduk.  Untuk  remaserasi  dilakukan  dengan  merendam  ampas  hasil  maserasi dengan  900  mL  selama  2  hari  dengan  2  kali  pengulangan.    Penggunaan  etanol  70%  sebagai pelarut maserasi karena etanaol 70% merupakan  pelarut  yang  lebih polar dari etanol 96% dan lebih non polar dari etanol 50% sehingga senyawa flavonoid yang sifatnya polar akan cenderung terlarut lebih banyak dalam etanol 70% ( Riwanti et al ., 2020).
Filtrat maserasi dan remaserasi kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator lalu  diuapkan  menggunakan waterbath sampai  dieroleh  ekstrak  kental.  Dari  serbuk  simplisia daun binahong merah ( Anredera cordiolia (Ten.) Steenis) sebanyak 300 gram didapatkan hasil ekstrak  kental  sebanyak  58  gram.  Hasil  perhitungan  rendemen  ekstrak  etanol  daun  binahong dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3 Hasil Rendemen Eksrak Etanol Daun Binahong Merah Serbuk Simplisia (g) Ekstrak Kental (g) Rendemen Ekstrak (%) 300 58 19,33
Berdasarkan  tabel  3  perhitungan  hasil  rendemen  ekstrak  etanol  daun  binahong  merah tersebut  dapat diketahui bahwa  ekstrak  kental  yang  dihasilkan  sebanyak  58  gram  dengan rendemen sebesar 19% dari serbuk simplisia sebanyak 300 gram. Hasil rendemen   ekstrak daun binahong  pa`  penelitian  ( Zulfa et  al .,  2018)  menunjukkan  rendemen  ekstrak  daun  binahong
sebesar  55,72%  dari  serbuk  simplisia  sebanyak  987  gram.  Adanya  sedikit  perbedaan perbandingan hasil rendemen karena disebabkan oleh banyaknya sampel serbuk simplisia yang digunakan.  Rendemen  ekstrak  menunjukkan  keefektifan  pada  saat  ekstraksi.  Karena  semakin besar nilai rendemennya maka semakin efektif proses ekstraksinya.
2. Fraksinasi
Fraksinasi  merupakan  teknik  pemisahkan  senyawa  kimia  berdasarkan  tingkat kepolarannya. Pada prinsipnya, suatu senyawa akan terlarut pada pelarut yang memiliki tingkat kepolaran  sama  ( Harborne ,  1987).  Pada  penelitian  ini,  ekstrak  etanol  daun  binahong  merah difraksinasi dengan metode partisi cair-cair (corong pisah) menggunakan pelarut n- heksan, etil asetat dan etanol-air.
Menurut ( Putri et al ., 2020), fraksinasi dengan pelarut n- heksan bertujuan untuk menarik senyawa non polar seperti steroid/triterpenoid. Pelarut etil asetat merupakan pelarut semi polar yang dapat memisahkan senyawa golongan polifenol, sedangkan pelarut etanol-air bersifat polar yang dapat menarik senyawa polar dalam ekstrak etanol daun binahong merah seperti alkaloid, flavonoid dan golongan fenol lainnya. Masing-masing pelarut dilakukan fraksinasi sebanyak 3 kali  pengulangan.  Hal  tersebut  bertujuan  agar  senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol dapat  larut  dengan  maksimal.  Fraksi  yang  didapatkan  kemudian  dikentalkan  menggunakan waterbath .  Fraksi  kental  lalu  dihitung  beratnya  dan  didapatkan  hasil  bobot  fraksi.  Setelah  itu dilakukan perhitungan rendemen fraksi yang dapat dilihat pada tabel 3.
Proses fraksinasi ekstrak menghasilkan bobot fraksi pekat n- heksan sebesar 2,520 gram fraksi etil asetat 3,291 gram dan fraksi etanol-air 2,984 gram. Perhitungan rendemen dilakukan berdasarkan  pada  perbandingan  antara  berat  masing-masing  fraksi  dengan  berat  ekstrak  pekat yang telah didapatkan. Presentase rendemen masing-masing fraksi dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel 4

## Hasil Rendemen Fraksi
Pelarut Bobot Ekstrak (g) Bobot Fraksi (g) Rendemen (%) n-heksan 10 2,520 25,2 Etil asetat 10 3,291 32,91 Etanol-air 10 2,984 29,84

## C. Standarisasi Simplisia dan Ekstrak
Pada penelitian ini dilakukan standarisasi parameter non spesifik. Penentuan parameter non spesifik yaitu penentuan aspek kimia, mikrobiologi dan fisik yang akan menjamin mutu sehingga keamanan konsumen dan stabilitas suatu produk dapat terjamin ( Saifudin et al ., 2017). Standarisasi susut pengeringan dilakukan terhadap serbuk simplisia, sementara itu ekstrak etanol daun binahong merah dilakukan standarisasi berupa kadar air.
1. Susut Pengeringan Simplisia
Susut pengeringan merupakan salah satu parameter non spesifik yang bertujuan untuk memberikan  batasan  maksimal  (rentang)  tentang  besarnya  senyawa  yang  hilang  pada  proses pengeringan.  Parameter  susut  pengeringan  pada  dasarnya  pengukuran  sisa  zat  setelah pengeringan pada temperatur 105ºC sampai berat konstan, yang dinyatakan sebagai nilai persen ( Depkes RI , 2000). Susut pengeringan serbuk simplisia daun binahong merah dapat dilihat pada tabel 5.
Hasil Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Simplisia Daun Binahong Merah Replikasi Berat Awal (g) Berat Akhir (g) Susut Pengeringan (%) 1 1 0,918 8,2 2 1 0,907 9,3 3 1 0,905 9,5 Rata-rata 9
Dari  hasil  tabel  5  tersebut,  diketahui  bahwa  susut  pengeringan  serbuk  simplisia  daun binahong merah sebesar 9%. Nilai acuan kadar susut pengeringan menurut Farmakope Herbal Indonesia adalah <10%.
2. Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong Merah
Kadar air merupakan parameter standarisasi ekstrak yang bertujuan untuk menetapkan residu air setelah proses penguapan dari filtrat hasil maserasi menjadi ekstrak kental ( Utami et al., 2017). Parameter kadar air merupakan banyaknya kadar air yang terkandung dalam sebuah simplisia atau ekstrak yang dihitung setelah pengeringan pada suhu 105 ºC dalam rentang waktu tertentu.  Hasil  penetapan  kadar  air  ekstrak  etanol  daun  binahong  merah  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis) dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5 Hasil Penetapan Kadar Air Ekstrak Etanol Daun Binahong Merah Berat Awal (g) Berat Akhir (g) Kadar Air (%) 1 0,903 9,7
Dari hasil tabel 5 tersebut dapat diketahui bahwa kadar air ekstrak etanol daun binahong merah sebesar 9,7%. Syarat mutu kadar air dari suatu bahan berupa ekstrak kental adalah 5-30%, ekstrak  cair  >30%,  dan  ekstrak  kering  <10%  ( Voight ,  1994).  Semakin  besar  persentase kandungan air dalam suatu bahan maka semakin mudah suatu ekstrak mengalami kerusakan  dan pembusukan  yang  disebabkan  oleh  adanya  pertumbuhan  mikroba.  Kadar  air  yang tinggi juga  dapat  menyebabkan  terjadinya  dekomposisi  senyawa  aktif  dalam  ekstrak  akibat  dari adanya  aktivitas  reaksi  enzimatis.  Oleh  sebab  itu,  kadar  air  sangat  menentukan  kualitas  dan stabilitas  suatu  ekstrak  maupun  pembentukan  suatu  sediaan  ekstrak  tersebut  ( Saifudin et  al ., 2017).

## D. Skrining Fitokimia Ekstrak dan Fraksi Daun Binahong Merah
Skrining fitokimia yang dilakukan dalam penelitian ini menggunakan metode kromatografi lapis  tipis  (KLT).  Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk  mengidentifikasi  kandungan  senyawa fitokimia dalam ekstrak etanol dan fraksi daun binahong merah. Metode KLT merupakan pemisahan komponen kimia berdasarkan prinsip adsorbsi dan partisi yang ditentukan oleh fase diam (adsorben) dan  fase  gerak  (eluen).  Komponen  kimia  bergerak  naik  mengikuti  fase  gerak  karena  daya  serap adsorben terhadap komponen-komponen kimia tidak sama sehingga komponen kimia dapat bergerak dengan jarak yang berbeda berdasarkan tingkat kepolarannya ( Ashworth & Stahl , 2013). Fase gerak yang digunakan dalam skrining fitokimia ini adalah plat silika gel GF 254 dengan ukuran  1×5  cm  yang  telah  diaktivasi  dengan  dipanaskan  pada  suhu  105ºC  selama  10  menit.  Hal tersebut bertujuan untuk mengurangi kadar air agar plat silika dapat menyerap senyawa yang akan dipisahkan ( Wulandari , 2011). Bejana yang digunakan dan berisi eluen dijenuhkan terlebih dahulu agar  seluruh  permukaan  bejana  terisi  uap  dari  eluen  sehingga  mendapatkan  hasil  yang  baik. Penjenuhan bejana bertujuan supaya mendapatkan homogenitas di dalam bejana dan meminimalkan penguapan pelarut di lempeng KLT ( Devi , 2017).
Golongan senyawa fitokimia yang akan dideteksi antara lain flavonoid menggunakan pereaksi
semprot  sitroborat,  alkaloid  menggunakan  pereaksi  semprot  dragendroff  ( Saifudin ,  2014),  tannin menggunakan pereaksi semprot FeCl 3 1% ( Wardhani & Sulistyani , 2012) dan steroid menggunakan pereaksi semprot liebermann-burchard ( Hidayah et al ., 2016).
1. Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong Merah
Sinar UV 366 nm (a1), (b1),
(d1) & Sinar Tampak (c1) Sinar UV 254 nm (a1) (b1) (c1) (d1) (a2) (b2) (c2) (d2)
Gambar 1 Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol. (a1) Hasil positif flavonoid, (b1) Hasil positif alkaloid, (c1) Hasil positif tanin, (d1) Hasil positif steroid/triterpenoid.
Keterangan:  (a)  peraksi  sitroborat,  (b1)  pereaksi  dragendroff,  (c)  pereaksi  FeCl 3 ,  (d) pereaksi libermann-burchard .
Dalam  skrining  fitokimia  ekstrak  etanol  daun  binahong  dengan  metode  kromatografi lapis tipis (KLT), fase gerak yang digunakan adalah campuran n- heksan dan etil asetat dengan perbandingan  5:5.  Hasil  skrining  fitokimia  dengan  metode  KLT  dapat  dilihat  pada  tabel  5. didapatkan hasil bahwa ekstrak etanol daun binahong merah mengandung senyawa flavonoid, alkaloid, tannin dan steroid/triterpenoid.
Tabel 6 Hasil KLT Ekstrak Etanol Daun Binahong Merah Senyawa yang Diuji Pereaksi Fase Gerak Hasil Rf Rf Acuan Flavonoid Sitroborat n -heksan : etil asetat (5:5) Adanya flouresensi berwarna biru kehijauan 0,425 0,8 0,84 ( Samirana et al ., 2017) Alkaloid Dragendroff n -heksan : etil asetat (5:5) Adanya flouresensi berwarna jingga kemerahan 0,75 0,82 ( Titis et al ., 2013) Tannin FeCl 3 1% n -heksan : etil asetat (5:5) Adanya spot berwarna biru kehitaman/hitam di bawah sinar tampak 0,375 0,25 ( Samirana et al ., 2017) Steroid/ Triterpenoid Liberman Buchard n -heksan : etil asetat (5:5) Adanya flouresensi berwarna hijau kekuningan 0,825 0,68 ( Samirana et
al ., 2017)
Berdasarkan  tabel  6  hasil  positif  flavonoid  ditunjukkan  pada  bercak  berwarna  biru kehijauan  setelah disemprot menggunakan pereaksi sitroborat di bawah sinar UV 366 nm, hal ini menunjukkan  kemungkinan  kandungan  golongan  senyawa  flavonoid  pada  bercak  tersebut ( Samirana et al ., 2017). Adanya spot berwarna biru di bawah sinar UV 366 nm pada Rf 0,425 dan 0,8 diduga menandakan adanya kandungan senyawa flavonoid pada ekstrak etanol daun binahong merah ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). Adanya spot berwarna jingga di bawah sinar tampak UV 366 nm pada Rf 0,75 diduga merupakan senyawa alkaloid pada ekstrak etanol daun binahong merah ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). Hasil positif tannin ditunjukkan dengan pereaksi FeCl 3 yang memberikan noda warna biru kehitaman, hijau atau biru kehijauan ( Wardhani & Sulistyani , 2012).
2. Skrining Fitokimia Fraksi Daun Binahong Merah
Uji  skrining  fitokimia  dengan  metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dilakukan  pula terhadap  fraksi  dari  ekstrak  etanol  daun  binahong  merah  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  steenis). Digunakan  fase  diam  plat  silika  gel  GF 254 dengan  ukuran  1×5  cm  yang  telah  diaktivasi  dengan dipanaskan pada suhu 105ºC selama 10 menit. Fase gerak yang digunakan untuk fraksi n- heksan menggunakan campuran antara n -heksan dan etil asetat dengan perbandingan 2:8, sedangkan fraksi etil  asetat  dan  etanol-air  menggunakan  fase  gerak  antara  etil  asetat  dan n -heksan  dengan perbandingan 7:3 ( Pamungkas & Indrayudha , 2019).
a. KLT fraksi n- heksan
Sinar UV 366 nm (a1), (b1), (d1) & Sinar Tampak (c1) Sinar UV 254 nm (a1) (b1) (c1) (d1) (a2) (b2) (c2) (d2)
Gambar 2. Hasil skrining fitokimia fraksi n -heksan. (a1) Hasil positif flavonoid, (b1) Hasil negatif alkaloid, (c1) Hasil negatif tanin, (d1) Hasil negatif steroid/triterpenoid.
Keterangan:  (a)  peraksi  sitroborat,  (b)  pereaksi  dragendroff,  (c)  pereaksi  FeCl 3 ,  (d) pereaksi libermann-burchard .
Pada  fraksi n- heksan  hasil  positif  yang  ditunjukkan  diduga  merupakan  senyawa steroid/triterpenoid dengan spot berwarna hijau kekuningan (a1) setelah disemprot menggunakan pereaksi liberman burcard pada Rf 0,575 dan 0,875 di bawah sinar tampak UV 366 nm. Dari hasil tersebut  dapat  diketahui  bahwa  fraksi n -heksan  ekstrak  etanol  daun  binahong  merah  ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) mengandung senyawa fitokimia steroid/teriterpenoid.

## b. KLT Fraksi Etil Asetat
Sinar UV 366 nm (a1), (b1), (d1) Sinar UV 254 nm
& Sinar Tampak (c1)
(a1) (b1) (c1) (d1) (a2) (b2) (c2) (d2)
Gambar 3. Hasil skrining fitokimia fraksi etil asetat. (a1) Hasil positif flavonoid, (b1) Hasil positif alkaloid, (c1) Hasil positif tanin, (d1) Hasil negatif steroid/triterpenoid.
Keterangan:  (a)  peraksi  sitroborat,  (b)  pereaksi  dragendroff,  (c)  pereaksi  FeCl 3 ,  (d) pereaksi libermann-burchard .
Pada fraksi etil asetat hasil positif ditunjukkan adanya spot berwarna biru kehijauan (a1), jingga  kemerahan  (b1)  dan  hitam  (c1).  Spot  berwarna  biru  kehijauan  setelah  disemprot menggunakan pereaksi sitroborat dengan Rf 0,575 dan 0,825 di bawah sinar UV 366 nm diduga merupakan senyawa flavonoid. Spot berwarna jingga kemerahan setelah disemprot menggunakan pereaksi dragendrof pada Rf 0,75 dan 0,9 di bawah sinar UV 366 nm diduga merupakan senyawa alkaloid  dan  spot  berwarna  hitam  setelah  disemprot  dengan  pereaksi  FeCl 3 1%  di  bawah  sinar tampak  dengan  Rf  0,45  diduga  merupakan  senyawa  tannin.  Dari  hasil  tersebut  dapat  diketahui bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanol daun binahong merah ( Anredera cordifolia (Ten.) steenis) mengandung senyawa fitokimia flavonoid, alkaloid dan tannin.
c. KLT Fraksi Etanol-air
Sinar UV 366 nm (a1), (b1), (d1) & Sinar Tampak (c1) Sinar UV 254 nm (a1) (b1) (c1) (d1) (a2) (b2) (c2) (d2)
Gambar 4. Hasil skrining fitokimia fraksi etanol-air. (a1) Hasil positif flavonoid, (b1) Hasil positif alkaloid, (c1) Hasil negatif tanin, (d1) Hasil positif steroid/triterpenoid.
Keterangan:  (a)  peraksi  sitroborat,  (b)  pereaksi  dragendroff,  (c)  pereaksi  FeCl 3 ,  (d) pereaksi libermann -burchard .
Pada KLT fraksi etanol-air menunjukkan adanya spot berwarna biru kehijauan (a1), jingga kemerahan  (b1)  dan  biru  kekuningan  (d1).  Spot  berwarna  biru  kehijauan  setelah  disemprot
menggunakan  pereaksi  sitroborat  pada  Rf  0,55  dan  0,825  di  bawah  sinar  tampak  UV  366  nm diduga  merupakan  senyawa  flavonoid.  Spot  berwarna  jingga  kemerahan  setelah  disemprot pereaksi dragendrof pada Rf 0,85 di bawah sinar tampak UV 366 nm diduga merupakan senyawa alkaloid. Sementara itu spot berwarna hijau kekuningan setelah disemprot menggunakan pereaksi liberman  burcard pada  Rf  0,55  ;  0,  625  dan  0,85  di  bawah  sinar  tampak  UV  366  nm  diduga merupakan senyawa steroid/triterpenoid. Dari hasil tersebut dapat diketahui bahwa fraksi etanol- air ekstrak etanol daun binahong merah ( Anredera cordifolia (Ten.) steenis) mengandung senyawa fitokimia flavonoid, alkaloid dan steroid/triterpenoid.
Tabel 7

## Hasil KLT Fraksi n-Heksan, Etil Asetat dan Etanol-air
Fraksi Fase Gerak Senyawa Fitokimia Pereaksi Hasil Rf n -Heksan n -heksan : etil asetat
2:8
Flavonoid
Sitroborat Tidak terbentuk spot 0,575
0,875 Alkaloid Dragendroff  Tidak terbentuk spot Tannin FeCl 3 1% Tidak terbentuk spot Steroid/ Triterpenoid Liberman- Buchard Adanya flouresensi berwarna hijau kekuningan Etil Asetat etil asetat : n -heksan 7:3 Flavonoid Sitroborat Adanya flouresensi berwarna biru kehijauan 0,575 0,825 Alkaloid Dragendroff Adanya flouresensi berwarna jingga kemerahan 0,75 0,9 Tannin FeCl 3 1% Adanya spot berwarna hitam di bawah sinar tampak 0,45 Steroid/ triterpenoid Liberman- Buchard Tidak terbentuk spot Etanol-air etil asetat : n -heksan 7:3 Flavonoid Sitroborat Adanya flouresensi berwarna biru kehijauan 0,55 0,825 Alkaloid Dragendroff Adanya flouresensi berwarna jingga kemerahan 0,85 Tannin FeCl 3 1% Tidak terbentuk spot Steroid/ triterpenoid Liberman- Buchard Adanya flouresensi berwarna hijau kekuningan 0,55 0,625 0,85 E. Hasil Uji Penghambatan Enzim Alfa Amilase
Uji aktivitas penghambatan enzim alfa amilase dilakukan secara in vitro . Pada prinsipnya, pengujian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas  penghambatan  enzim  alfa  amilase  dengan
mengamati  intensitas  warna  biru  pada  kompleks  iodin-pati  karena  berkurangnya  substrat  pati akibat hidrolisis  yang  dilakukan  oleh  enzim  alfa amilase  menjadi  monosakarida (glukosa)  yang tidak bereaksi dengan iodine ( Wardani , 2017) .
Intensitas  warna  diukur  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis.  Pengukuran  dilakukan terhadap blanko, kontrol blanko, sampel dan kontrol sampel. Pengujian larutan blanko dan kontrol blanko  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  enzim  alfa  amilase  dalam  merubah  pati  menjadi glukosa.  Pengujian  juga  dilakukan  pada  kontrol  sampel  yang  berperan  sebagai  faktor  koreksi bahwa absorbansi yang diukur pada sampel merupakan absorbansi yang disebabkan oleh aktivitas enzim alfa amilase. Sampel pengujian terdiri dari acarbose, ekstrak etanol, fraksi n -heksan, fraksi etil  asetat  dan  fraksi  etanol-air.  Acarbose  digunakan  sebagai  pembanding  karena  memiliki mekanisme kerja sebagai inhibitor alfa amilase pankreas dan hidrolase alfa glukosida usus yang terkait membran. Dengan menunda pencernaan karbohidrat, acarbose memperlambat penyerapan glukosa yang mengakibatkan penurunan konsentrasi glukosa darah postprandial ( Rosak & Mertes , 2012).
Penggunaan  amilum  dalam  penelitian  ini  bertujuan  sebagai  substrat  dari  enzim  alfa amilase. Penggunaan DMSO sebagai pelarut karena DMSO memiliki sifat tidak mudah menguap ( non-volatile  solvents ).  Selain  itu  DMSO  merupakan  pelarut  organik  paling  kuat  yang  dapat melarutkan  berbagai  macam  bahan  organik  secara  efektif  ( Jacob  &  Jack ,  2015).  Larutan  HCl digunakan untuk menghentikan reaksi enzimatik, hal ini dikarenakan pH merupakan suatu faktor yang mempengaruhi aktivitas dan stabilitas enzim dalam suatu reaksi enzimatik yang melibatkan pelepasan  atau  penyerapan  proton  ( Gruber et  al .,  2017).  Larutan buffer  phosphate pH  6,9 digunakan untuk mempertahankan pH enzim alfa amilase sehingga selama proses berlangsungnya reaksi  enzim  tetap  bekerja  secara  optimal.  Reagen  iodine  digunakan  sebagai  indikator  warna karena pati bereaksi dengan reagen iodine membentuk warna biru kehitaman atau ungu ( Louis & Gabriel , 2014).
Sebelum pengujian perlu dilakukan pengukuran panjang gelombang maksimum. Tujuan penentuan  panjang  gelombang  maksimum  agar  mengetahui  daerah  serapan  dalam  kondisi optimum yang dihasilkan dari nilai absorbansi yang diukur menggunakan spektrofotometer UV- Vis ( Sudewi & Pontoh , 2018). Optimasi dilakukan pada rentang panjang gelombang 400-450 nm dan diperoleh panjang gelombang maksimum 410 nm dengan nilai absorbansi sebesar 0,174. Hasil penentuan panjang gelombang maksimum enzim alfa amilase dapat dilihat pada gambar 1.

## Gambar 5

## Grafik Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum Enzim Alfa Amilase
Setelah  pengukuran  panjang  gelombang  maksimum  kemudian  dilakukan  penentuan operating  time (OT). Operating  time merupakan  waktu  pengukuran  yang  dilakukan  untuk mengetahui  waktu  pengukuran  yang  stabil  ( Salamah  &  Widyasari ,  2015). Operating  time ditentukan  dengan  mengukur  absorbansi  pada  gelombang  maksimum  yang  telah  ditentukan
0,033 0,083 0,133 0,183 400 410 420 430 440 450 A bsorbansi Panjang Gelombang (nm) Panjang Gelombang Maksimum
sebelumnya  yaitu  410  nm,  selama  20  menit  dengan  interval  waktu  2  menit.  Hasil  pengukuran operating time didapatkan pada menit ke 18, dapat dilihat pada gambar 2.

## Gambar 4.6. Hasil Penentuan Operating Time (OT)
Berdasarkan  gambar  Uji  penghambatan  aktivitas  enzim  alfa  amilase  dilakukan  terhadap sampel  acarbose,  ekstrak  etanol  dan  fraksi  daun  binahong  merah.  Acarbose  yang  digunakan sebagai pembanding dibagi menjadi lima konsentrasi yaitu 0,625 ppm, 1,25 ppm, 2,5 ppm, 5 ppm dan 10 ppm. Sedangkan konsentrasi ekstrak etanol dan fraksi yang digunakan adalah 12,5 ppm, 25 ppm, 50 ppm, 100 ppm dan 200 ppm. Hasil pengukuran sampel dapat dilihat pada tabel 8.
Tablel 8 Hasil Uji Aktivitas Enzim Alfa Amilase Sampel Konsentrasi (ppm) Penghambatan (%) IC 50 (mg/mL)
Acarbose
0,625
45,686
1,522 1,25 49,319 2,5 54,042 5 57,766 10 62,398 Ekstrak etanol 12,5
14,986
133,926 25 21,435 50 35,604 100 49,591 200 61,217 Fraksi n -heksan
12,5
13,896
159,042 25 18,347 50 22,797 100 41,144 200 57,584 Fraksi Etil Asetat 12,5 40,690 23,609 25 47,866 50 62,035 100 74,932 200 84,650 Fraksi Etanol-Air 12,5 37,239 31,704
0,133 0,143 0,153 0,163 0,173 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 A bsorbansi Waktu (menit) Operating Time (OT)
25 47,411 50 64,396 100 69,119 200 90,282
Berdasarkan tabel 8 hasil pengujian tersebut ekstrak etanol dan fraksi daun binahong merah memiliki aktivitas dalam menghambat enzim alfa amilase secara in vitro . Nilai IC 50 yang diperoleh dari sampel acarbose, ekstrak etanol, fraksi n -heksan, fraksi etil asetat dan fraksi etanol air berturut- turut sebesar 1,522 mg/mL, 133,926 mg/mL, 159,042 mg/mL, 23,609 mg/mL, 31;704 mh/mL. IC 50 merupakan konsentrasi dari senyawa atau ekstrak yang memiliki aktivitas penghambatan terhadap enzim  alfa  amilase  sebesar  50%.  IC 50 diperoleh  dari  suatu  persamaan  regresi  linier  yang menyatakan  hubungan  antara  konsentrasi  sampel  sebagai  variabel 𝑥 dengan  %  penghambatan sebagai variabel 𝑦 . Semakin kecil nilai IC 50 , maka aktivitas penghambatan senyawa atau ekstrak semakin baik ( Chang , 2020).
Dari hasil pengukuran % penghambatan menunjukkan bahwa fraksi etil asetat mempunyai aktivitas penghambatan enzim xantin oksidase tertinggi dengan nilai IC 50 sebesar 23,609 mg/mL. Hal ini dikarenakan etil asetat merupakan pelarut semi polar sehingga dapat menarik senyawa yang terkandung  dalam  ekstrak  seperti  fenolik  dan  flavonoid.  Flavonoid  juga  dapat  menghambat fosfodiesterase sehingga meningkatkan cAMP pada sel β pangkreas ( Puspati et al ., 2013).
Dalam penelitian ( Ramadhani , 2018) tentang Uji Aktivitas Penghambatan α-Amilase Secara In Vitro Ekstrak Akar Durian ( Durio zibethinus ) menunjukkan bahwa fraksi etil asetat dari ekstrak akar durian ( Durio zibethinus ) mempunyai aktivitas tertinggi untuk menghambat enzim α-amilase diantara ketiga fraksi (fraksi n -heksan, etil asetat dan methanol) ekstrak dengan nilai IC 50 10,46 bpj.  Adanya  perbedaan  nilai  IC 50 fraksi  etil  asetat  yang  dihasilkan  dengan  penelitian  ini  dapat disebabkan  oleh  perbedaan  sampel  tanaman  sehingga  senyawa  fitokimia  yang  terkandung  pun berbeda.

## Kesimpulan
Berdasarkan dari hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa Ekstrak etanol daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis)  mengandung  senyawa  fitokimia  antara  lain flavonoid, alkaloid, tannin dan steroid/triterpenoid. Fraksi n -heksan daun binahong merah (mengandung senyawa fitokimia steroid/triterpenoid. Fraksi etil asetat daun binahong merah mengandung senyawa fitokimia flavonoid, alkaloid dan tannin. Fraksi etanol-air daun binahong merah mengandung senyawa fitokimia flavonoid, alkaloid dan steroid. Fraksi etanol-air daun binahong merah mengandung senyawa fitokimia  flavonoid,  alkaloid  dan  steroid.  Ekstrak  etanol  dan  fraksi  daun  binahong  merah  ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) memiliki aktivitas penghambatan terhadap enzim alfa amilase secara in vitro . Fraksi  etil  asetat  dianggap  paling  efektif  dalam  menghambat  aktivitas  enzim  alfa  amilase  karena memiliki nilai IC 50 sebesar 23,609. Konsentrasi fraksi etil asetat 200 ppm mempunyai % penghambatan tertinggi dalam menghambat enzim alfa amilase secara in vitro .

## Bibliografi
Ardiani, R., Nasution, H. M., & Tanjung, F. A. (2020). Uji Aktifitas Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia  (Ten.)  Steenis)  Terhadap  Kadar  Gula  Darah  Mencit. PROSIDING  SEMINAR NASIONAL HASIL PENELITIAN , 3 (1), 484–490.
Ariandi,  A.  (2017).  Pengenalan  Enzim  Amilase  (Alpha-Amylase)  Dan  Reaksi  Enzimatisnya Menghidrolisis Amilosa Pati Menjadi Glukosa. Dinamika , 7 (1), 74–82.
Ashworth,  M.  R.  F.,  &  Stahl,  E.  (2013). Thin-layer  Chromatography:  A  Laboratory  Handbook . Springer Science & Business Media.
Carracher, A. M., Marathe, P. H., & Close, K. L. (2018). International diabetes federation 2017 . Wiley Online Library. https://doi.org/10.1111/1753-0407.12644
Chang,  M.  J.  V.  (2020). Uji  Aktivitas  Penghambatan  Enzim  Alfa-Amilase  Oleh  Ekstrak  Air  Daun Sambiloto (Andrographis paniculata Nees.) Secara In Vitro.
DepKes, R. I. (2000). Parameter standar umum ekstrak tumbuhan obat. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia .
Devi,  E.  T.  (2017).  Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavanoid  pada  Ekstrak  Daun  Seledri  (Apium graveolens L.) dengan Metode Refluks. PSEJ (Pancasakti Science Education Journal) , 2 (1), 56– 67.
Gruber, P., Marques, M. P. C., Sulzer, P., Wohlgemuth, R., Mayr, T., Baganz, F., & Szita, N. (2017). Real‐time pH Monitoring of Industrially Relevant Enzymatic Reactions in a Microfluidic Side‐ entry Reactor (μSER) Shows Potential for pH Control. Biotechnology Journal , 12 (6), 1600475. https://doi.org/10.1002/biot.201600475
Harborne, J. B. (1987). Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan.(Terjemahan, Kosasih Padmawinata). ITB (Buku Asli 1984). Bandung .
Hidayah, W. W., Kusrini, D., & Fachriyah, E. (2016). Isolasi, Identifikasi Senyawa Steroid dari Daun Getih-getihan (Rivina humilis L.) dan Uji Aktivitas Sebagai Antibakteri. Jurnal Kimia Sains Dan Aplikasi , 19 (1), 32–37.
Jacob, S. W., & Jack, C. (2015). Dimethyl Sulfoxide (DMSO) in Trauma and Disease . CRC press.
Louis, M. N., & Gabriel, B. O. (2014). Colour of Starch-iodine Complex as Index of Retrogradability of Starch Pastes. African Journal of Pure and Applied Chemistry , 8 (5), 89–93.
Makalalag, I. W., & Wullur, A. (2013). Uji ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia Steen.) terhadap kadar gula darah pada tikus putih jantan galur Wistar (Rattus norvegicus) yang diinduksi sukrosa. PHARMACON , 2 (1). https://doi.org/10.35799/pha.2.2013.883
Marzuki, R. D., & Nova, A. (2018). Pembinaan Masyarakat Tentang Pemanfaatan Tanaman Binahong (Anredera  cordifolia)  Sebagai  Obat  Tradisional  Di  Gampong  Sidorejo  Langsa  Lama. Jurnal Jeumpa , 5 (2), 112–118.
Nurhasnawati, H., Sukarmi, S., & Handayani, F. (2017). Perbandingan metode ekstraksi maserasi dan sokletasi terhadap aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun jambu bol (Syzygium malaccense L.). Jurnal Ilmiah Manuntung , 3 (1), 91–95. https://doi.org/10.51352/jim.v3i1.96
Organization,  W.  H.  (1999). Definition,  diagnosis  and  classification  of  diabetes  mellitus  and  its
complications: report  of  a WHO  consultation.  Part  1,  Diagnosis  and  classification  of  diabetes mellitus . World health organization.
Pamungkas, A. R., &  Indrayudha, P. (2019). Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanol, Fraksi Etanol-Air, Etil Asetat Serta N-Heksana Buah Pare (Momordica charantia) Pada Sel MCF-7 Secara In-Vitro.
Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia , 16 (2), 73–82.
https://doi.org/10.23917/pharmacon.v16i2.9049
Puspati,  N.  K.  S.,  Anthara,  M.  S.,  &  Dharmayudha,  A.  (2013).  Pertambahan  Bobot  Badan  Tikus Diabetes Melitus dengan Pemberian Ekstrak Etanol Buah Naga Daging Putih. Indonesia Medicus Veterinus , 2 (2), 225–234.
Putri, E. E., Andriani, Y., Andriani, L., & Handharyani, E. (2020). Studi Gambaran Histopatologi Otak Mencit Pasca Pemberian Fraksi Daun Binahong (Basella alba) Sebagai Neuroprotektan. Jurnal Farmamedika (Pharmamedika Journal) , 5 (2), 38–44. https://doi.org/10.47219/ath.v5i2.94
Ramadhani,  F.  (n.d.). Uji  Aktivitas  Penghambatan  α-Amilase  Secara  In  Vitro  Ekstrak  Akar  Durian (Durio zibethinus) .
Riwanti, P., Izazih, F., & Amaliyah, A. (2020). Pengaruh Perbedaan Konsentrasi Etanol pada Kadar Flavonoid Total Ekstrak Etanol 50, 70 dan 96% Sargassum polycystum dari Madura. Journal of Pharmaceutical Care Anwar Medika (J-PhAM) , 2 (2), 82–95.
https://doi.org/10.36932/jpcam.v2i2.1
Roglic,  G.  (2016).  WHO  Global  report  on  diabetes:  A  summary. International  Journal  of Noncommunicable Diseases , 1 (1), 3.
Rosak,  C.,  &  Mertes,  G.  (2012).  Critical  Evaluation  of  the  Role  of  Acarbose  in  the  Treatment  of Diabetes:  Patient  Considerations. Diabetes,  Metabolic  Syndrome  and  Obesity:  Targets  and Therapy , 5 , 357.
Saifudin,  A.  (2014). Senyawa  Alam  Metabolit  Sekunder  Teori,  Konsep,  dan  Teknik  Pemurnian . Deepublish.
Saifudin, A., Teruna, H. Y., & Rahayu, V. (2017). Standardisasi Bahan Obat Alam . Graha Ilmu.
Salamah, N., & Widyasari, E. (2015). Aktivitas antioksidan ekstrak metanol daun kelengkeng (Euphoria longan  (L)  Steud.)  dengan  metode  penangkapan  radikal  2,  2’-difenil-1-pikrilhidrazil. Pharmaciana , 5 (1), 25–34.
Samirana, P. O., Swastini, D. A., Ardinata, I. P. R., & Suarka, I. (2017). Penentuan Profil Kandungan Kimia Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.). Jurnal Farmasi Udayana , 6 (1), 23–33.
Sudewi, S., & Pontoh, J. (2018). Optimasi dan Validasi Metode Analisis Dalam Penentuan Kandungan Total  Fenolik  pada  Ekstrak  Daun  Gedi  Hijau  (Abelmoschus  manihot  L.)  yang  Diukur  dengan Spektrofotometer UV-VIS. Pharmacon, 7 (3), 32–41 .
Sukandar, E. Y., Qowiyyah, A., & Larasari, L. (2011). Efek ekstrak metanol daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) terhadap gula darah pada mencit model diabetes melitus. J Med Planta , 1 (4), 1–10.
Sumayyah, S., & Salsabila, N. (2017). Obat Tradisional: Antara Khasiat dan Efek Sampingnya. Majalah Farmasetika , 2 (5), 1–4. https://doi.org/10.24198/farmasetika.v2i5.16780
Titis, M. B. M., Fachriyah, E., & Kusrini, D. (2013). Isolasi, Identifikasi dan Uji Aktifitas Senyawa Alkaloid Daun Binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steenis). Chem. Info , 1 (1), 196–201.
Utami, Y. P., Umar, A. H., Syahruni, R., & Kadullah, I. (2017). Standardisasi Simplisia dan Ekstrak Etanol Daun Leilem (Clerodendrum minahassae Teisjm. & Binn.). Journal of Pharmaceutical and Medicinal Sciences , 2 (1).
Voight, R. (1994). Buku Pengantar Teknologi Farmasi. Penerjemah N. Soedani. Universitas Gadjah Mada Pr Ess, Yogyakarta .
Wardani,  N.  A.  K.  (2017).  Enzim  α-Amilase  Inhibitor  pada  Ekstrak  Air  Kacang  Merah  (Phaseolus vulgaris L.) untuk Penanggulangan Diabetes Melitus. Jurnal Ilmu Pangan Dan Hasil Pertanian ,
1 (2), 50–59. https://doi.org/10.26877/jiphp.v1i2.1900
Wardhani, L. K., & Sulistyani, N. (2012). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong (Anredera  scandens  (L.)  Moq.)  Terhadap  Shigella  flexneri  Beserta  Profil  Kromatografi  Lapis Tipis. Jurnal Ilmiah Kefarmasian , 2 (1), 1–6.
Wulandari, L. (2011). Kromatografi Lapis Tipis .
Zulfa,  E.,  Lailatunnida,  L.,  &  Murukmihadi,  M.  (2018).  Formulasi  Sediaan  Krim  Daun  Binahong (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis):  Kajian  Karakteristik  Fisika  Kimia  dan  Uji  Iritasi  Kulit. Jurnal Inovasi Teknik Kimia , 3 (1). https://doi.org/10.31942/inteka.v3i1.2125