BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 2 (2020): 248 - 254 E-ISSN: 2714-8564

## Toksisitas Subletal Limbah Cair Batik hasil Biosorpsi terhadap Ikan Mas
( Cyprinus carpio L.) ditinjau dari Differensial Leukosit

## Hana Agustiana, Sri Lestari, Eko Setio Wibowo
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman Jalan dr Suparno 63 Purwokerto 53122 Email: hana.agustiana@gmail.com

## Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 23/09/2019 Disetujui  : 22/06/2020

## Abstract
Research  on  the  differential  leukocyte  of  fish  exposed  to  waste  from  biosorption  needs  to  be done because the differential leukocyte is one indicator of the presence of contaminants that enter the body of fish and to check the health status of fish immunity. This research aims to determine the effects of batik wastewater biosorption results expose on Carp ( Cyprinus carpio ) differential leukocyte and determine the concentration that has the most effect on it. The results showed that the  mean  differential  percentage  of  leukocytes,  for  the  highest  monocytes,  neutrophils,  and eosinophils  were  found  in  the  treatment  of  3.96  %  v.v -1 respectively  7.50  ±  1.04%;  11.50  ± 1.64%; 2.83 ± 0.17% and the lowest were shown in the treatment of 0 % v.v -1 , respectively 3.50 ± 0.083%; 7 ± 1.26%; 0.66 ± 0.08%, and the highest average percentage of lymphocytes from the 0 % v.v -1 treatment was 81.50 ± 1.87% and the lowest from the 3.96 % v.v -1 treatment was 74.5 ± 3.33%.  This  study  concludes  that  batik  liquid  waste  resulted  from  biosorption  affected  the differential  leukocytes;  the  increase  in  monocytes,  neutrophils,  eusinophils  and  the  decrease  in lymphocytes.  In  addition,  the  concentration  of  batik  liquid  waste  from  biosorption  that  major influences the differential leukocytes was the concentration of 3.96 % v.v -1 . Key Words : batik waste water, biosorption, differential leucocyte, carp

## Abstrak
Penelitian  tentang  diferensial  leukosit  ikan  yang  terpapar  limbah  dari  biosorpsi  perlu  dilakukan karena  diferensial  leukosit  merupakan  salah  satu  indikator  keberadaan  kontaminan  yang  masuk ke  dalam  tubuh  ikan  dan  untuk  memeriksa  status  kesehatan  imunitas  ikan.  Tujuan  penelitian adalah  mengetahui  pengaruh  pemaparan  dan  mengetahui  konsentrasi  limbah  cair  batik  hasil biosorpsi yang paling berpengaruh terhadap differensial leukosit Ikan Mas ( Cyprinus carpio L.). Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  rerata  persentase  diferensial  leukosit,  untuk  monosit, neutrofil,  dan  eosinofil  tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  3,96  v.v -1 yaitu  berturut-turut    7,50  ± 1,04%;  11,50  ±  1,64  %;  2,83  ±  0,17  %  dan  terendah  terdapat  pada  perlakuan  0    v.v -1 yaitu berturut-turut  3,50 ± 0,083%; 7± 1,26 %; 0,66  ± 0,08%, serta  rerata  persentase limfosit   yang tertinggi dari perlakuan 0 v.v-1 yaitu 81,50 ± 1,87% dan terendah dari perlakuan 3,96 v.v -1 yaitu 74,5  ±  3,33  %.  Kesimpulan  dari  penelitian  yaitu  limbah  cair  batik  hasil  biosorpsi  berpengaruh terhadap  differensial  leukosit  yaitu  terjadi  peningkatan  pada  monosit,  neutrofil,  dan  eusinofil serta  penurunan  pada  limfosit.  Selain  itu,  konsentrasi  limbah  cair  batik  hasil  biosorpsi  yang paling berpengaruh terhadap differensial leukosit adalah konsentrasi 3,96  v.v- 1. Kata kunci : biosorpsi, differensial leukosit, limbah batik, ikan mas,

## PENDAHULUAN
Industri di Indonesia  sangat berkembang pesat baik  industri  modern  maupun  industri  rumahan. Salah  satu  industri  rumahan  yaitu  Sentra  Batik Sokaraja  di  Kabupaten  Banyumas  yang  berpotensi mencemari lingkungan karena limbahnya dibuang ke Kali  Wangan.  Industri  batik  merupakan  penghasil limbah  cair  organik  dengan  volume  yang  besar, warna  yang  pekat  dan  berbau  menyengat  serta memiliki suhu, pH basa, Biological Oxygen Demand (BOD), Chemical  Oxygen  Demand (COD), Total Suspended  Solid (TSS)  yang  tinggi.  Industri  batik pada umumnya akan menghasilkan limbah cair yang dibuang  ke lingkungan  sekitar (Sumarni, 2012). Air limbah yang  dibuang  ke  lingkungan tanpa pengolahan terlebih dahulu maka dapat
menyebabkan  pencemaran  lingkungan  terutama ekosistem perairan (Kurniawan et al., 2013) Limbah  cair  batik  mengandung  logam  berat yang    berbahaya    karena    sifatnya    tidak    dapat dihancurkan  ( nondegradable )  oleh  organisme  hidup yang  ada  di  lingkungan.  Logam  berat  masuk  ke dalam organisme melalui berbagai cara yaitu saluran pernafasan  (insang),  saluran  pencernaan  (usus,  hati, ginjal),  melalui  rantai  makanan,  dan  melalui penetrasi kulit. Logam berat masuk ke dalam sel dan ikut  didistribusikan  oleh  darah  keseluruh  jaringan tubuh  sehingga  dapat  terakumulasi  pada  organ tubuh.  Sirkulasi  darah  menyebabkan  logam  berat terakumulasi  di  dalam  dinding  pembuluh  darah  dan jaringan  ikat.  Salah  satu  komponen  sel  darah  yang sangat berpengaruh terhadap penyakit akibat polutan
atau  benda  asing  adalah  sel  darah  putih  ( leukosit ). Sel  darah  putih  ( leukosit )  terbagi  atas  dua  bagian yaitu  agranulosit  ( limfosit dan monosit )  dan granulosit  ( neutrofil , eosinofil ,  dan basofil ).  Setiap ikan  memiliki  kondisi  haematologi  yang  sangat spesifik  dan  bervariasi  mulai  dari  jenis,  umur  serta jenis kelamin ikan tersebut.
Kromium  merupakan  salah  satu  logam  yang berbahaya bagi lingkungan karena bersifat persisten, bioakumulatif,  toksik,  dan  tidak  mampu  terurai  di dalam lingkungan, serta terakumulasi di dalam tubuh manusia  atau  hewan  melalui  rantai  makanan. Akumulasi  kromium  ditemukan  di  berbagai  organ seperti  hati,  kulit,  dan  ginjal.  Daya  toksisitas  logam kromium sangat tergantung pada kestabilan kimianya. Kestabilan kromium berurutan  mulai dari tingkat toksisitas terendah  yaitu  Cr, Cr (III), dan Cr (VI)  (Destiany,  2007).  Krom  hexavalent  (Cr  VI) mudah  menembus  ke  dalam  membran  sel  melalui sistem  transportasi  anion,  contohnya  ion  chromate (CrO 4 -2 )  adalah  salah  satu  ion  krom  heksavalen  (Cr VI) dalam larutan dengan mudah melewati membran seluler.  Dampak  kromium  yang  ditimbulkan  bagi organisme  akuatik  yaitu  terganggunya  metabolisme tubuh akibat terhalangnya kerja enzim dalam proses fisiologis.  Krom  diabsorpsi  di  dalam  darah, berikatan  dengan  protein  darah  kemudian  masuk  ke dalam  organ  secara  sistemik  melalui  peredaran darah. Krom akan menumpuk dalam tubuh sehingga bersifat  kronis  yang  berakibat  terjadi  kematian organisme akuatik (Andriani & Hartini, 2017).
Adanya  dampak  dari  logam  krom  maka  perlu dilakukan  pengolahan  limbah  cair  industri  batik sebelum  masuk  ke  badan  air  untuk  mengurangi tingkat  pencemaran  air  sungai.  Upaya  untuk menekan  logam  berat  krom  bisa  dilakukan  dengan metode  pengolahan  limbah  yang  mudah  dan  ramah lingkungan  yaitu  metode  biosorpsi  (Natalina  & Firdaus, 2017).  Biosorpsi merupakan proses pengikatan  logam  pada  permukaan  biosorben menggunakan  oragnisme  yang  diinaktifkan.  Hasil penelitian  dari  Lestari et  al. (2017)  menggunakan biosorben terdiri dari campuran Sargassum cinereum dan limbah baglog P. ostreatus yang dikemas dalam kantung  teh  celup  cukup  efektif  menurunkan senyawa  krom  pada  limbah  batik.  Biosorben S.cinereum memilki  kandungan  zat  alginat  sebagai situs  aktif  pengikat  logam  berat,  sedangkan kandungan  dari  limbah  baglog P.  ostreatus yaitu miselium  jamur,  lignin,  hemiselulosa  dan  selulosa yang  mampu  digunakan  sebagai  adsorpsi  logam (biosorben).
Diferensial  leukosit  merupakan  gambaran kondisi  dari  kompenen  darah  yang  dapat  digunakan menemukan  status  fisiologis  ikan.  Pengamaan differential  leukosit  meliputi  peresentase  rata-rata limfosit,  monosit,  neutrofil, dan eusinofil. Ikan  Mas digunakan sebagai hewan uji pada penelitian karena bersifat  sensitive  terhadap  linkungan  dan  banyak
dibudidayakan  oleh  masyarakat  di  sekitar  Kali Wangan.
Tujuan  penelitian  ini  yaitu  mengetahui pengaruh  pemaparan  limbah  cair  batik  hasil biosorbsi  terhadap  differensial  leukosit  pada  ikan mas ( Cyprinus carpio L.) dan mengetahui konsentrasi  limbah  cair  batik  hasil  biosorpsi  yang paling  berpengaruh  terhadap  differensial  leukosit ikan mas ( Cyprinus carpio L).

## METODE
Penelitian  dilaksanakan  pada  Maret  sampai April  2019  di  stasiun  percobaan  program  studi  D3 dan Laboratorium Fisiologi Hewan Fakultas Biologi Universitas Jendral Soedirman, Purwokerto. Penelitian  dilaksanakan  selama  2  bulan  dari  April- Mei  2019.Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  eksperimental  dengan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  pola  searah  menggunakan  empat perlakuan  dengan  enam  kali  ulangan.  sehingga didapat  24  unit  percobaan.  Penentuan  konsentrasi berdasarkan  nilai  LC50  limbah  cair  batik  hasil biosorpsi,  yaitu  sebesar  52,876v.v-1.  Konsentrasi yang diujikan adalah K0=  kontrol (0 %  v.v-1), K1= 25%  nilai LC50 (1,32 v.v-1), K2= 50% nilai LC50 (2,64  v.v-1)  dan  K3=  75%  nilai  LC50  (3,96  v.v-1). Ikan  dipaparkan  dengan  limbah  cair  batik  hasil biosorpsi selama 7 ahri.  Sampel darah  yang diamati pada  hari  ke-8.  Sampel  darah  diamati  untuk diperiksa  pengaruh  perlakuan  paparan  limbah  cair batik terhadap diferensial leukosit (limfosit, monosit, neutrofil, dan eusinofil).
Variabel  yang  digunakan  dalam  penelitian berupa  variabel  bebas  dan  variabel  terikat.  Variabel bebas  berupa  konsentrasi  limbah  cair  batik  hasil biosoprsi,  sedangkan  variabel  terikatnya  berupa diffrensial leukosit Ikan Mas. Parameter utama yang diamatiyaitu  persentase  diferensial  leukosit  pada ikan  mas  (leukosit,  neutrofil,  limfosit  dan  monosit) dalam  darah  (%).  Parameter  pendukung  yang diamati yaitu suhu, pH, dan DO.

## Persiapan Limbah Cair Batik
Limbah  cair  batik  diperoleh  dari  Sentra  Batik Sokaraja  di  Desa  Sokaraja  Kidul,  Kecamatan Sokaraja,  Kabupaten  Banyumas,  Jawa  Tengah. Limbah cair batik dibiosorpsi sebelum menggunakan campuran jerami padi dan limbah baglog P.ostreatus yang  dikemas  dalam  teh  celup  dengan  ukuran  6x6 cm.  Biosorben  ditimbang  dengan  bobot  300  mg dengan  komposisi  3:1  yaitu  75%  jerami  padi  dan 25% limbah baglog P.ostreatus . Biosorpsi dilakukan dengan  menggunakan  erlenmeyer  250  mL  diisi sebanyak  100  mL  limbah  cair  batik,  kemudian dimasukkan  satu  komposisi  kantung  teh  celup  ke dalam erlenmeyer. Setiap erlenmeyer diisi satu buah kantung teh (biosorben). Erlenmeyer ditutup dengan plastik  kemudiam  dihomogenkan  dalam shaker r dengan  kecepatan  175  rpm  dan  temperatur  25 selama 1 jam. Limbah hasil biosorpsi selanjutnya di
ektraksi  untuk  mengetahui  persen  penurunan  kadar Cr (Lestari et al., 2017).

## Ekstrasi Limbah Cair Batik Hasil Biosorpsi
Ekstrasi  limbah  cair  batik  hasil  biosorpsi dilakukan dengan mengambil 50 mL dan dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer  100  mL.  Larutan tersebut  dipanaskan  menggunakan hotplate dengan suhu  180  ºC  hingga  tersisa  20  mL.  Larutan kemudian ditambahkan 5 mL HNO 3 pekat dan 2 mL HCl  20%  dan  dipanaskan  diatas hotplate hingga larutan  berwarna  jernih.  Larutan  tersebut  disaring dengan kertas Whatmann No.42, larutan yang tersisa diencerkan dengan akuades  menggunakan labu ukut 50  mL  dan  dilakukan  pengukuran  absorbansi  Cr dengan  AAS  pada  panjang  gelombang  357,9  nm. Hasil  nilai  absorbansi  yang  didapat  kemudian dimasukkan  kedalam  rumus  untuk  mengetahui persen  penurunan  kadar  Cr  pada  limbah  batik  cair hasil biosorpsi.
Kadar Cr awal – kadar Cr akhir kadar Cr = X 100% kadar Cr akhir

## Persiapan Hewan Percobaan
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  ikan  mas  dengan  ukuran  20-25  cm  dan berat  90-160  gram  sebanyak  24  ekor.  Ikan diperoleh  dari  pembibitan  ikan  di  Desa  Beji, Purwokerto.Ikan  di  aklimasi  selama  7  hari  pada bak  fiber  yang  dilengkapi  dengan  aerator.  Selama di aklimasi ikan diberi pakan  pelet dua kali sehari yaitu  pagi  dan  sore  hari.  Pemberian  pakan dilakukan secara adlibitum.

## Persiapan Tempat Percobaan
Media  pemeliharaan  yang  digunakan  adalah bak  plastik  dengan  ukuran  15  liter  ukuran 30x25x20  cm 3 sebanyak  24  buah.  Masing-masing bak diisi 1 ekor ikan. Bak diisi dengan volume 10 liter  berisi  campuran  limbah  cair  batik  hasil biosorpsi  yang  berasal  dari  Kauman,  Sokaraja, Banyumas dan air sumur.

## Pemeliharaan Hewan Percobaan
Ikan  Mas  ( C.  carpio )  dipelihara  dengan dipaparkan limbah cair batik hasil biosorpsi selama 7  hari  dan  pengambilan  sampel  darah  dilakukan pada hari ke-8.

## Pengambilan Sampel Darah
Pengambilan  darah  dengan  spuit  1  mL  yang telah  dibilas  dengan  EDTA  10%  sebagai antikoagulan.    Sampel  darah  menggunakan teknik punctie  cardiac (jantung  ikan).  Darah  yang telah  diambil  kemudian  dimasukkan  ke  dalam tabung vaccutainer utuk diuji differensial leukositnya.

## Pembuatan Apusan Darah
Preparat apus darah digunakan untuk pengamatan diferensial leukosit. Pengamatan diferensiasi  leukosit  dlakukan  untuk  menentukan presentase  setiap  jenis  leukosit  yang  terdapat  di dalam darah. Gelas objek yang digunakan disterilisasi  menggunakan  alcohol  70%.  Pembuatan preparat  apus  darah  dilakukan  dengan  cara menempatkan  setetes  darah  pada  gelas  objek. Tetesan  darah  ke-1  dan  ke-2  dibuang  terlebih dahulu, darah tetesan ke-3 langsung diteteskan pada object  glass  dan  dibuat  peparat  apus.  Gelas  objek kedua  diletakkan  dengan  sudut  45°  diatas  gelas objek  pertama,  lalu  digeser  ke  belakang  sampai menyentuh  darah  sehingga  darah  menyebar.  Gelas objek  kedua  kemudian  digeser  ke  arah  yang berlawanan  sehingga  membentuk  suatu  lapisan darah  tipis.  Preparat  ulas  darah  yang  terbentuk dibiarkan  kering.  Lalu  dilanjutkan  dengan  proses fiksasi  dengan  cara  merendam  preparat  di  dalam methanol selama 5 menit, lalu dikeringkan. Preparat kemudian  dimasukkan  kedalam  larutan  giemsa selama 30 menit, setelah itu dicuci dan dikeringkan. Mengacu pada Handari (1983) perbesaran mikroskop  40x10  dilakukan  untuk  mengamati  hasil ulasan darah.

## Perhitungan Persentase Diferensial Leukosit
Pengamatan  diferensial  leukosit  dilakukan untuk  menentukan  persentase  setiap  jenis  leukosit yang  terdapat  dalam  darah.  Persentase  differensial leukosit dihitung dengan cara mengamati jumlah sel limfosit, monosit, neutrophil, dan eusinofil. Masing- masing  jenis  leukosit  yang  terhitunh  dekelompokka dan  diresentasikan  menurut  jenisnya  (Santoso et al., 2013).  Cara  perhitungan  differensial leukosit sebagai berikut:

## Limfosit terhitung
% Limfosit = X 100%
100

## Jumlah monosit terhitung
% Monosit = X 100% 100

## Jumlah neutrofil terhitung
% Neutrofil = X 100%
100

## Jumlah eusofil terhitung
% Eusofil = X 100%
100

## Analisis Data
Data  hasil  penghitungan  diferensial  leukosit dianalisis  dengan  ANOVA  (Analysis  of  Variance) menggunakan  software SPSS  16.0 pada  tingkat kesalahan  5%.  Hasil  yang  diperoleh  berbeda  nyata dilanjutkan  dengan  Uji  Duncan  pada  tingkat kesalahan yang sama.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  limbah  cair  batik yang  dibiosorpsi  menggunakan  campuran  jerami ( Oryza sativa ) dan limbah baglog P.ostreatus dapat menurunkan  konsentrasi  krom  (Cr)  dari  0.0282 mg.L-1  menjadi  0.0045  mg.L-1  sehingga  diperoleh persentase  penurunan  sebesar  75,72%.  Hasil tersebut  sesuai  dengan  penelitian  yang  telah dilakukan  salah  satunya  oleh  Lestari et  al. (2017) menggunakan  biosorben  terdiri  dari  campuran biosorben Sargassum  cinereum dan  limbah  baglog P.ostreatus yang  dikemas  dalam  kantung  teh  celup cukup  efektif  menurunkan  senyawa  krom  pada limbah  batik  menunjukkan  bahwa  persentase adsorpsi  krom  total  tertinggi  sebesar  62,69%  dari konsentrasi  awal  0,744  mg/L  menjadi  0,156  mg/L. Proses  biosorpsi  terjadi  karena  adanya  pertukaran ion  seperti  NA+,  Mg  dan  Ca2+  serta  pembentukan ikatan  kompleks  dengan  formasi  fungsional  yang terletak  di  dinding  sel,  seperti  karbonil,  hidroksil, fosfat,  dan  karboksi-hidroksi.  Keunggulan  proses biosorpsi  adalah  proses  adsopsi  yang  berlangsung cepat  dan  selektif.  Proses  biosorpsi  tersebut  efekif menurunkan  kandungan  krom  (Cr)  dalam  limbah cair batik namun masih ada kandungan Cr, sehingga masih  memiliki  peluang  terakumulasi  dalam organisme (Lestari et al., 2017).
Limbah  hasil  biosorpsi  tidak  dapat  dibuang langsung  ke  lingkungan  karena  sifat  logam  dapat mengakumulasi  pada  biota  air,  sehingga  perlu dilakukan  uji  toksisitas  untuk  mengetahui  dampak yang  masih  ditimbulkan  dari  limbah  yang  telah diolah tersebut. Uji toksisitas subletal terhadap ikan mas  dapat  memberikan  gambaran  dampak  yang masih ditimbulkan dari limbah batik hasil biosorpsi. Hasil  penelitian  menunjukkan  limbah  cair  batik hasil  biosorpsi  berpengaruh  terhadap  peningkatan limposit  dan  penurunan  neutrofil,  monosit  dan eosinofil.
Hasil  perhitungan  persentase  limfosit  Ikan Mas  yang  dipaparkan  pada  limbah  cair  batik  hasil biosorpsi  menunjukkan  bahwa  rerata  tertinggi persentase  limfosit  yaitu  81,5  ±  1,87  %  pada konsentrasi 0 %v.v-1 diikuti konsentrasi 1,32 %v.v- 1  yaitu 78 ± 2,09 %, konsentrasi 2,64% v.v-1  yaitu 76  ±  3,03  %  dan  persentase  limfosit  terendah  yaitu 74,5  ±  3,33  %  pada  konsentrasi  3,96  %v.v-1 (Gambar 1).
Gambar 1. Rata-Rata Persentase Limfosit Ikan Mas
Berdasarkan  gambar  1  persentase  limfosit semakin  menurun  seiring  penambahan  konsentrasi limbah.  Penurunan  persentase  tersebut  masih  dalam kisaran rata-rata  limfosit normal ikan  mas. Sebagian besar limfosit ditarik dari sirkulasi dan berkonsentrasi  ke  dalam  jaringan  dimana  terdapat peradangan.  Jika  terjadi  penurunan  persentase limfosit  di  dalam  sirkulasi  pada  saat  terjadi peradangan  (inflamasi)  karena  aktifitas  limfosit  B dalam  memproduksi  antibodi  terganggu  (Berne  & Levy,  2001).  Menurut  Salasia  (2001)  nilai  limfosit normal  pada  ikan  berkisar  antara  60,20-81,00%. Hasil  tersebut  sesuai  dengan  penelitian  Uttamrao et.al (2017)  yang  menunjukkan  bahwa  percobaan terhadap C.carpio yang  dipaparkan  Krom  trivalent (Cr III) dengan konsentrasi 2 mg.L-1 selama 28 hari mengalami  penurunan  limfosit.  Penurunan  sel limfosit  adalah  reaksi  normal  terhadap  logam  berat atau  bahan  kimia  yang  menunjukkan  efek  dari sistem  kekebalan  dalam  kondisi  beracun.  Berbeda dengan  hasil  penelitian  Jyoti  &  Langer  (2014) menggunakan  spesies  lain  yaitu  dengan  ikan  G. gotyla gotyla dengan paparan Mn dengan konsentrasi  0,64;  1,28;  1,96  mg/l  menunjukkan bahwa nilai persentase limfosit mengalami peningkatan  dibanding  kontrol  (40±  0,63%)  dengan nilai berturut-turut yaitu 53,2 ± 1,76%; 55 ± 0,69%; 55,8  ±  0,39%.  Hal  tersebut  karena  faktor  jenis  ikan dan  logam  berat.  Logam  Mn  kelompok  logam essensial,  logam  berat  yang  dalam  jumlah  tertentu dibutuhkan  tetapi  dapat  bersifat  racun  jika dikonsumsi  secara  berlebihan  (Irhamni et.al 2017). Penurunan  sel  limfosit  juga  terkait  dengan peningkatan  hormon  kortikosteroid,  sekresi  yang merupakan  respon  nonspesifik  terhadap  pemicu stress  lingkungan  (Srivastava  &  Punia,  2011). Peningkatan  limfosit  sesuai  dengan  penelitian Thatheyus  (2018),  pemaparan  Krom  hexavalent  (Cr IV)  pada  ikan  C.  carpio  selama  30  hari  dengan konsentrasi  60  ppm  mengalami  penurunan  leukosit. Pemaparan  pada  species  lain  yaitu Oreochromis mossambicus yang  terpapar  baik  Cr  (VI)  atau  Cr (III)  mengalami  limfosit  dan  jumlah  leukosit menurun di kedua  kelompok  tersebut (Velma et al., 2010).
Persentase  monosit  Ikan  Mas  ( Cyprinus carpio ) yang dipaparkan pada limbah cair batik hasil biosorpsi  berbeda  pada  tiap  perlakuan.  Rerata terendah persentase monosit yaitu 3,5 ± 0,83% pada konsentrasi 0 %v.v -1 diikuti konsentrasi 1,32 %v.v-1 yaitu 5 ± 1,67%, konsentrasi  2,64 %v.v -1 yaitu 5,83 ± 0,98 % dan persentase monosit tertinggi yaitu 7 ± 1,09%  pada  konsentrasi  3,96  %v.v -1 (Gambar  2). Persentase  rata-rata  monosit  berada  pada  kisaran normal kecuali perlakuan 3,96 %v.v -1 .
Gambar 2. Rata-Rata Persentase Monosit Ikan Mas.
Peningkatan  persentase  monosit  yang terpapar limbah  batik  merupakan  dampak  yang  ditimbulkan akibat  adanya  kandungan  logam  Cr  di  dalam limbah. Hasil tersebut menjelaskan bahwa peningkatan  konsentrasi  limbah  hasil  biosorpsi, mempengaruhi  peningkatan  jumlah  monosit.  Hal tersebut  sesuai  dengan  Moyle  &  Cech  (1989)  yang menyatakan  bahwa  jumlah  monosit  di  dalam populasi sel darah putih sedikit, namun jumlah akan meningkat  jika  ada  substansi  asing  pada  jaringan atau  sirkulasi.  Hasil  tersebut  sesuai  penelitian dilakukan  Hedayati  (2012)  menggunakan  Ikan Seabream yang dipaparkan K 2 CrO 7 dengan konsentrasi  berbeda,  persentase  rerata  monosit meningkat  seiring  bertambahnya  konsentrasi  yaitu sebesar  3,16  ±  0,75%  hingga  3,66  ±  0,61%. Peningkatan  monosit  menandakan  adanya  respon imunitas  ikan.  Peningkatan  persentase  monosit karena  monosit  memiliki  aktivitas  fagosit  yang menjelaskan  bahwa  terjadi  peradangan  akibat paparan  limbah.  Menurut  Moyle  dan  Cech  (1988), proporsi  monosit  di  dalam  populasi  leukosit  sedikit kecuali  ada  benda  asing  di  dalam  jaringan  atau aliran  darah.  Penurunan  jumlah  monosit  di  dalam populasi sel darah putih sedikit, namun jumlah akan meningkat  jika  ada  substansi  asing  pada  jaringan atau  sirkulasi.  Menurut  Utami et  al. (2013),  bahwa fungsi  monosit  sebagai  agen  makrofag  yang memfagosit  benda  asing  yang  masuk  ke  dalam tubuh.  Menurut  Asfari'ah et  al. (2015),  adanya inflamasi  kronis  atau  proses  peradangan  akan merangsang terjadinya monositosis.
Persentase neutrofil Ikan Mas yang dipaparkan pada  limbah  cair  batik  hasil  biosorpsi  terdapat perbedaan tiap perlakuan. Rerata tertinggi persentase  neutrofil  yaitu  11,5  ±  1,64%  pada perlakuan 3,96 %v.v- 1 diikuti perlakuan 2,64 %v.v -1 yaitu 8,5 ± 0,83%, perlakuan 1,32 %v.v -1 yaitu 7,83 ±  0,98%  dan  persentase  neutrofil  terendah  7  ± 1,26% pada perlakukan 0 %v.v -1 (Gambar 3).
Gambar 3. Rata-Rata Persentase Neutrofil Ikan Mas.
Berdasarkan  gambar  3  menunjukkan  bahwa persentase  neutrofil  Ikan  Mas  ( Cyprinus  carpio ) yang  dipaparkan  pada  limbah  cair  batik  hasil biosorpsi  terdapat  perbedaan  tiap  perlakuan.  Rerata tertinggi  persentase  neutrofil  yaitu  11,5  ±  1,64% pada  perlakuan  3,96  %v.v -1 diikuti  perlakuan  2,64 v.v -1 yaitu 8,5 ± 0,83%, perlakuan 1,32 %v.v -1 yaitu 7,83 ± 0,98% dan persentase  neutrofil terendah 7 ± 1,26%  pada  perlakukan  0  %v.v -1 .  Hasil  tersebut menunjukkan  bahwa  persentase  neutrofil  semakin tinggi  seiring  penambahan  konsentrasi  limbah. Peningkatan  persentase  neutrofil  yang  terpapar limbah  batik,  sehingga  terjadi  adanya  inflamasi akibat  paparan  krom  selama  7  hari  sehingga persentase  eosinofil  meningkat  dari  kadar  normal. Inflamasi  merupakan  suatu  respon  seluler  non- spesifik  terhadap  invasi  patogen  atau  toksin,  dalam hal  ini  terjadi  Inflamasi  akut  (jangka  pendek/tidak berlangsung lama.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  nilai  rata-rata persentase  eosinofil  gambar  4  pada  ikan  mas  yang dipaparkan limbah cair batik hasil biosorpsi berbeda pada masing-masing perlakuan. Rerata-rata persentase  eusinofil  tertinggi  hingga  terrendah berturut-turut  terdapat  pada  perlakuan  0;  1,32;  2,64 dan 3,96 %v.v -1 yaitu 2,83 ±0,17; 2,16± 0,16; 1,33± 0,08  dan  0,66±  0,05%  (Gambar  4).  Hal  tersebut secara  grafik  mengalami  pPeningkatan  tetapi tersebut  masih  dalam  kisaran  normal  pada konsentrasi  0  ;  1,32  ;  dan  2,64  %  v.v-1,  sedangkan konsentrasi 3,96% v.v-1 diatas nilai rata-rata.
Gambar 4. Rata-Rata Persentase Eusinofil Ikan Mas
Adanya  inflamasi  menyebabkan  peningkatan eosinofil  akibat  paparan  krom  selama  7  hari sehingga  persentase  eosinofil  meningkat  dari  kadar normal.  Paparan  dengan  konsentrasi  yang  cukup lama  sehingga  terjadinya  inflamasi  akut,  tetapi persentase  tersebut  berada  dalam  kisaran  nilai  yang normal. Persentase eosinofil di dalam sirkulasi darah ikan  mas  normal  menurut  Affandi  dan  Tang  (2002) berkisar  antara  0,78-2,00%.  Hasil  tersebut  sesuai penelitian Hedayati (2012) pemaparan merkuri pada ikan  Bream  menyebabkan  penurunan  eosinofil seiring bertambahnya konsentrasi.
Peningkatan jumlah rata-rata eosinofil (eosinofilia)  secara  umum  karena  adanya  kondisi penyakit yang kronis, sedangkan penurunan persentase  rata-rata  eosinophil  (eosinopenia)  terjadi pada kondisi penyakit akut. Respon eosinofilia yang terjadi  bukan  merupakan  akibat  dari  kondisi  karena adanya  parasit  atau  respon  alergi,  tetapi  akibat adanya beragam penyakit kronis yang menyebabkan degranulasi  sel  mast  secara  terus  menerus.  Fungsi eosinofil  adalah  mensekresikan  isi  granularnya sebagai respon terhadap adanya infeksi parasit (Jain, 1993).
Hasil  pengujian  statistik  analisis  ragam (ANOVA)  terhadap  data  persentase  limfosit, monosit,  neutrofil  dan  eosinofil  terdapat  perbedaan nyata  dengan  nilai  signifikan  (p  <  0,05).  Hal  ini menjelaskan bahwa pemberian perlakuan konsentrasi  limbah  cair  batik  hasil  biosorpsi  selama 7  hari  berpengaruh  terhadap  rata-rata  limfosit, monosit, neutrofil dan eosinofil ikan mas, tetapi nilai rerata  limfosit  pada  setiap  kelompok  konsentrasi mengalami penurunan dibandingkan dengan kontrol. Persentase  rerata  limfosit  terus  menurun  seiring dengan  peningkatan  konsentrasi  yang  diberikan sedangkan  persentase  monosit,  neutrofil  dan eosinofil  meningkat  seiring  dengan  peningkatan konsentrasi.
Tabel 1. Kualitas air yang diamati dalam penelitian.
Parameter Lingkungan Konsentrasi (% v.v -1 ) K0 (0,00) K1 (1,32) K2 (2,64) K3 (3,96) Suhu 24 23,5 23 23 Ph 6 6 6 6 DO (mg/L) 6,8-7,6 6,8-7,6 6,2-7,4 6,8-8
Kualitas  air  yang  diamati  selama  penelitian berlangsung  adalah  suhu,  oksigen  terlarut  (DO)  dan pH  (Tabel  1),  suhu  selama  pemeliharaan  berkisar 23-24 ℃ .  Menurut  Rachmaningrum et  al. (2015), kisaran  suhu  air  yang  baik  dalam  kehidupan  ikan yaitu berkisar antara 23-32 ℃ . Suhu didalam perairan mempengaruhi  proses  kelarutan  logam  berat  yang masuk ke dalam suatau perairan. Jika semakin tinggi suhu  perairan  maka  kelarutan  logam  berat  akan semakin  tinggi  pula  (Wardhana,  2004).  Nilai  pH pada  media  pemeliharaan  yaitu  6,  nilai  tersebut dalam  penelitian  berada  pada  kisaran  yang  optimal untuk  pertumbuhan  ikan  mas  Tinggi  rendahnya  pH
sangat  berpengaruh  terhadap  kadar  kandungan logam.  Menurut  Effendi  (2003)  bahwa  toksisitas logam  memperlihatkan  peningkatan  pada  pH  yang rendah, sehingga pH yang rendah maka toksisitas Cr (krom) tinggi.
Hasil  pengukuran  oksigen  terlarut  memiliki kisaran  6,2  –  8,  kisaran  oksigen  terlarut  ini  masih optimal    untuk  kehidupan  ikan  mas.  Menurut Asmawi  (1984)  menyatakan  bahwa  kisaran  oksigen terlarut  tidak  boleh  <  4.  Kandungan  oksigen  yang rendah  menyebabkan  ikan  akan  bernafas  dengan cepat,  sehingga  menyebabkan  insang  membuka  dan menutup  lebih  cepat  dan  mengakibatkan  masuknya ion logam melalui insang (Kordi 2004). Kualitas air selama  penelitian  pada  tabel  1  menunjukkan  bahwa kondisi differensial leukosit bukan  dipengaruhi pH, suhu, dan DO melainkan krom (Cr).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan  dapat disimpulkan  limbah  cair  batik  hasil  biosorpsi berpengaruh  diferensial  leukosit  ikan  mas,  yaitu peningkatan  neutrofil,  monosit,  eosinofil  dan penurunan  limfosit.  Konsentrasi  limbah  cair  batik hasil  biosorpsi  yang  paling  berpengaruh  yaitu  75% nilai LC50 96 jam sebesar 3,96 %v.v -1

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada LPPM Unsoed, yang telah membiayai penelitian ini dengan  dana  dari  Program  DIPA-BLU  Universitas Jenderal Soedirman dengan nomor kontrak 2461/UN23.14/PN/2018 pada tahun 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
Affandi,  R.  &  Tang,U.M.  2002. Fisiologi  Hewan Air . Riau: Uni press.
Andriani,  R.  &  Hartini.  2017.  Toksisitas  Limbah Cair Industri Batik Terhadap Morfologi Sisik Ikan  Nila  Gift  (Oreochomis  nilotocus). Jurnal SainHealth , 1(2), pp. 32-40.
Asfari'ah,  N.,  Alno,  M.  &  Ridwanto,  W.  2015.  Uji Toksisitas  Sublethal  dengan  menggunakan Piretroid  sintetik  0,10  ppm  terhadap  Benih Ikan  Mas  (C yprinus  carpio ). Ekotoksikologi Perairan , 1(1), pp. 1-17.
Asmawi, S. 1984. Pemeliharaan Ikan dan
Ekosikologi Pencemaran. Jakarta:
Universitas  Indonesia  Press.  Berne  &  Levy,
2001. Physiology . 6 Ed. Canada: Mosby.
Destiany,  M.  2007. Pengaruh  Pemberian  Merkuri Klorida  Terhadap  Struktur  Mikroanatomi Hati  Ikan  Mas .  Semarang:  Universitas Negeri Semarang.
Effendi,  H.  2003. Telaah  Kualitas  Air  bagi Pengelolaan  Sumber  Daya  dan  Lingkungan Perairan . Yogyakarta: Kanisius.
Handari  ,  S.S.  1983. Metode  Pewarnaan .  Jakarta:
Bhatara Karya Aksara.
Hedayati,  A.  2012.  Effect  of  Marine  Mercury
Toxicity  on  Immunological  Responses  of Seabream. Asian Journal of Animal Sciences , 6,pp.1-12.
Iman,  K.N.  Riauwaty,  M.  &  Syawal,  H.  2017. Leukocytes  Differentiation  of  Pangasius hypothalmus  that  were  Feed  with  Curcumin Extract  from  Curcuma  domestica  V. Jurnal Online Mahasiswa Faperika UNRI , 4(1), pp. 1-14.
Irhamni,  Pandia,  S.  Purba,  E.  &  Hasan,  W.  2017. Serapan  Logam  Berat  Esensial  dan  Non Esensial  pada  Air  Lindi  TPA  Kota  Banda Aceh  dalam  Mewujudkan  Pembangunan Berkelanjutan. Serambi  Engineering ,  II(3), pp. 2528-3561.
Jain,  N.,  1993.  Essential.  of  Veteriner  Hematology. USA: Lea and Febiger.
Jyoti,  S.  &  Langer,  S.,  2014.  Effect  of  Manganese on  haemotological  parameters  of  fish  Garra gotyla gotyla.
Journal  of  Entomology  and  Zoology  Studies,  2(3), pp. 77-81
Kurniawan, M.W.P. & S. 2013. Kajian Pengelolaan Air  Limbah  Sentra  Industri  Kecil  Dan Menengah  Batik  Dalam  Perspektif  Good Governance Di Kabupaten Sukoharjo. Semarang,  Prosiding  Seminar  Nasional Pengelolaan Sumberdaya Alam dan Lingkungan.
Kordi, K. 2004. Penanggulangan hama dan penyakit ikan. Jakarta :  Rineka Cipta  Bina  Adiaksara. Khairuman  &  Sudenda,  D.,  2002. Budidaya Patin  Secara  Intensif .  Jakarta:  Agro  Media Pustaka.
Lestari,  S.,  Sudarmadji,  Tandjung,  S.D.  &  Santosa, S.J.  2017.  Lethal  Toxicity  of  Batik  Waste Water  Bio-  Sorption  Result  in  Tilapia.
Advanced Science Letter , 23, pp. 2611-2613.