DOI: http://dx.doi.org/10.29244/jhi.11.1.13-23
Tersedia online di http://journal.ipb.ac.id/index.php/jhi

## Cekaman Kekeringan Berat Mempengaruhi Keberhasilan Induksi Bunga Jeruk Keprok Madura
Severe Drought Stress Influences the Success of Madura Tangerine Flower Induction
Resa Sri Rahayu 1 , Roedhy Poerwanto 2* , Darda Efendi 2 , dan Winarso Drajad Widodo 2
Diterima 01 Agustus 2019/Disetujui 05 Februari 2020

## ABSTRACT
Off-season  tangerines  flower  induction  through  drought  stress  is  one  of  the  efforts  to  meet  the availability of tangerines throughout the year. The level of drought stress that can induce flowering has a certain threshold so that severe stress can affect the success of flower induction. This study aims to prove that severe  drought  stress  can  affect  the  success  of  induction  of  Madura  lowland  tangerines.  The  study  was conducted in the PKHT-IPB Tajur Experimental Field with  300 meter above sea level from March-October 2017. The experiment used a Randomized Block Design (RBD) with one factor, namely the level of drought stress with three levels: without drought stress as control (routine irrigation with 100% field capacity water content), 50% field capacity water content drought stress (no irrigation to 50% field capacity water content) and 40% field capacity water content drought stress (no irrigation to 40% field capacity water content). The results showed that the water content of 50% and 40% of the field capacity did not induce Madura tangerine flower as evidenced by very high levels of gibberellins. 50% and 40% field capacity water content is too low that caused the plants experienced a severe drought stress and disrupted the flower induction process. The severe  drought  stress  is  characterized  by  high  leaf  and  soil  water  potential,  high  leaf  proline  content, decreased stomata density, and leaf rolling.
Keywords:  field  capacity  water  content,  lowland  tangerine,  off-season,  Randomized  Block  Design (RBD), rewatering

## ABSTRAK
Induksi bunga jeruk keprok di luar musim melalui cekaman kekeringan merupakan salah satu upaya memenuhi  ketersediaan  buah  jeruk  keprok  sepanjang  tahun.  Tingkat  cekaman  kekeringan  yang  dapat menginduksi  bunga  memiliki  ambang  batas  tertentu  sehingga  cekaman  yang  terlalu  berat  dapat mempengaruhi  keberhasilan  induksi  bunga.  Penelitian  ini  bertujuan  membuktikan  bahwa  cekaman kekeringan yang terlalu berat dapat mempengaruhi keberhasilan induksi bunga jeruk keprok dataran rendah varietas Madura. Penelitian dilaksanakan di Kebun Percobaan Tajur PKHT-IPB dengan ketinggian  300 mdpl dari bulan Maret-Oktober dan dirancang dengan Rancangan Acak Kelompok (RAK) satu faktor yaitu tingkat cekaman kekeringan dengan tiga taraf: tanpa cekaman kekeringan sebagai kontrol (pengairan rutin dengan  100%  kadar  air  kapasitas  lapang),  cekaman  kekeringan  50%  kadar  air  kapasitas  lapang  (tanpa pengairan sampai 50% kadar air kapasitas lapang) dan cekaman kekeringan 40% kadar air kapasitas lapang (tanpa pengairan sampai 40% kadar air kapasitas lapang). Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar air 50% dan 40% dari kapasitas lapang tidak menginduksi bunga jeruk keprok Madura yang dibuktikan dengan kadar giberelin yang sangat tinggi. Kadar air 50% dan 40% dari kapasitas lapang terlalu rendah sehingga tanaman mengalami cekaman kekeringan berat dan mengganggu proses induksi bunga. Cekaman kekeringan berat tersebut ditandai dengan potensial air daun dan tanah yang tinggi, kadar prolin daun tinggi, kerapatan stomata menurun, dan daun menggulung.
Kata kunci:   jeruk keprok dataran rendah, kadar air kapasitas lapang, luar musim, Rancangan Acak Kelompok (RAK), rewatering
1 Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia Jl. Raya Jakarta – Bogor, KM. 46 Cibinong, Bogor 16911, Indonesia
2 Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor Jl. Meranti Kampus IPB Darmaga, Bogor 16680, Indonesia E-mail : roedhy8@yahoo.co.id (*penulis korespondensi)

## PENDAHULUAN
Jeruk keprok dataran rendah merupakan salah satu komoditi yang perlu dikembangkan untuk  substitusi  jeruk  impor  di  pasar  buah nasional  karena  memiliki  dua  keunggulan, yaitu  merupakan  jenis  keprok  ( Citrus reticulata Blanco) seperti sebagian besar jeruk impor yang didominasi jenis keprok dan dapat ditanam  di  dataran  rendah  yang  ketersediaan lahannya  lebih  luas  dibandingkan  dengan dataran tinggi di Indonesia. Jeruk keprok lokal Indonesia  merupakan  salah  satu  jenis  jeruk yang  memiliki  karakter  unggul  yaitu  ukuran buah besar, aroma buah khas, kulit buah tebal, warna  kulit  buah  sebagain  besar  kuning- oranye,  kulit  dan  juring  buah  mudah  dilepas (Balitjestro,  2016)  sehingga memiliki  potensi besar  untuk  dikembangkan  dengan  baik  dan menjadi pesaing jeruk impor. Salah satu jenis jeruk  keprok  dataran  rendah  yang  dapat dikembangkan  untuk  subtitusi  jeruk  impor adalah jeruk keprok varietas Madura.
Pembungaan  pada  tanaman  jeruk,
termasuk  jeruk  keprok,  dibagi  ke  dalam  tiga tahapan  besar,  yaitu  induksi  kuncup  bunga (induksi bunga), transisi dari induksi bunga ke diferensiasi  bunga,  dan  perkembangan  organ bunga (Albrigo et al ., 2002). Tahapan pertama dalam  pembungaan  yaitu  induksi  bunga dipengaruhi  oleh  cekaman  kekeringan  di lingkungan  tropika  (Moss,  1969)  dan  oleh suhu  rendah  di  wilayah  subtropika  (Valiente dan Albrigo, 2004). Jeruk keprok yang tumbuh di  Indonesia  yang  merupakan  lingkungan tropika,  secara  umum  berbuah  satu  kali setahun karena induksi pembungaan dipengaruhi  oleh  periode  kering  yang dirasakan tanaman sebagai cekaman kekeringan  (Takeno,  2016).  Hal  tersebut menjadi  kendala  karena  buah  jeruk  keprok segar  hanya  akan  tersedia  di  pasaran  selama periode  panen  yaitu  selama  2-3  bulan  dalam satu  tahun  sehingga  tidak  dapat  memenuhi permintaan konsumen sepanjang tahun. Cekaman  kekeringan  merupakan  salah satu metode induksi bunga di luar musim yang telah banyak diteliti dan mudah diaplikasikan di  dataran  rendah  Indonesia.  Beberapa penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan cekaman  kekeringan  mampu  menginduksi bunga jeruk dengan jumlah yang lebih banyak dibandingkan  dengan  kontrol  dan  perlakuan lainnya.  Penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh
Koshita  dan  Takahara  (2004)  dengan  hasil yang menunjukkan bahwa cekaman kekeringan  ringan  dan  berat  meningkatkan persentase  tunas  generatif  lebih  besar dibandingkan dengan tunas vegetatif.
Cekaman  kekeringan  dapat  menjadi salah  satu  upaya  membungakan  jeruk  keprok di  luar  musim  sehingga  dapat  menjaga ketersediaan  buah  jeruk  keprok  di  pasar sepanjang  tahun.  Aplikasi  teknik  cekaman kekeringan  harus  memperhatikan  ambang batas tingkat cekaman kekeringan yang dapat menginduksi bunga untuk menghindari penurunan  produksi  bunga,  pengaruh  negatif akibat cekaman kekeringan, kegagalan induksi bunga dan kematian tanaman akibat cekaman kekeringan.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini bertujuan  membuktikan  bahwa  cekaman kekeringan yang telah melewati ambang batas tingkat  cekaman  yang  dapat  menginduksi bunga  atau  cekaman  kekeringan  yang  terlalu berat  dapat  mempengaruhi  keberhasilan induksi  bunga  jeruk  keprok  dataran  rendah variteas Madura.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilaksanakan  di  Kebun Percobaan  Tajur,  Pusat  Kajian  Hortikultura Tropika  Institut  Pertanian  Bogor  (PKHT  IPB) Kota Bogor dengan ketinggian ± 300 meter di atas  permukaan  laut  (mdpl)  dari  bulan  Maret sampai Oktober 2017.
Bahan  yang  digunakan  pada  percobaan adalah  tanaman  jeruk  keprok  dataran  rendah varietas  Madura  ( Citrus  reticulata Blanco  cv. Madura)  hasil  okulasi  dengan  batang  bawah Japanche citroen (JC) umur satu tahun dengan tinggi ± 80 cm dan memiliki 2-4 cabang primer. Tanaman  tersebut  diperoleh  dari  kebun  bibit Balai  Penelitian  Tanaman  Jeruk  dan  Buah Subtropika  (Balitjestro).  Tanaman  jeruk  hasil okulasi  merupakan  tanaman  yang  sudah melewati  fase  juvenil  (muda)  dan  siap berbunga.  Tanaman  jeruk  ditanam  dalam polibag ukuran 30 x 15 x 40 cm dan diletakkan di dalam screenhouse.
Percobaan dilakukan dengan menggunakan  Rancangan  Acak  Kelompok (RAK)  satu  faktor  yaitu  tingkat  cekaman kekeringan.  Faktor  tersebut  terdiri  atas  tiga taraf:  tanpa  cekaman  kekeringan  sebagai kontrol  (irigasi  rutin  dengan  100%  kadar  air
kapasitas  lapang,  K1),  cekaman  kekeringan hingga  50%  kadar  air  kapasitas  lapang  (tidak diirigasi sampai kadar air mencapai 50% kadar air  kapasitas  lapang,  K2)  dan  cekaman kekeringan  hingga  40%  kadar  air  kapasitas lapang  (tidak  diirigasi  sampai  kadar  air mencapai 40% kadar air kapasitas lapang, K3). Masing-masing taraf diulang sebanyak tiga kali dengan  empat  tanaman  per  ulangan  sehingga total  terdapat  36  tanaman  atau  36  satuan percobaan  (1  tanaman  setiap  satu  satuan percobaan).  Data  yang  diperoleh  dianalisis menggunakan  uji  F  dan  uji  lanjut  Beda  Nyata Terkecil  (BNT)  pada  taraf  5%  dengan menggunakan  perangkat  lunak Statistical Analysis  System 9.1  (SAS  9.1)  (Mattjik  dan Sumertajaya, 2013).
Penentuan  tingkat  cekaman  kekeringan dilakukan  dengan  menentukan  kadar  air kapasitas  lapang  dari  volume  tanah  dalam polibag. Tanah dalam polibag disiram air secara perlahan  sampai  air  keluar  dari  ujung  polibag (air  perkolasi  keluar  dari  polibag).  Tanah tersebut  didiamkan  selama  12  jam  untuk memastikan  air  perkolasi  habis  dan  air  yang tersisa  hanya  air  yang  dipegang  oleh  tanah. Nilai kadar air tanah didapatkan dari persentase bobot kering terhadap bobot basah tanah. Nilai kadar  air  tanah  yang  didapatkan  merupakan nilai  kadar  air  kapasitas  lapang.  Nilai  100% kadar  air  kapasitas  lapang  pada  percobaan  ini adalah  31.34%  kadar  air  aktual.  Pada  awal percobaan,  36  tanaman  jeruk  keprok  Madura memiliki nilai kadar air yang sama yaitu kadar air  kapasitas  lapang.  36  tanaman  tersebut kemudian  dibagi  ke  dalam  tiga  perlakuan dengan masing-masing perlakuan terdiri atas 12 tanaman  (3  ulangan  x  4  tanaman/ulangan). Perlakuan  pertama  (K1)  merupakan  perlakuan tanpa  cekaman  kekeringan  sebagai  kontrol, dimana  kadar  air  tanahnya  dijaga  tetap  dalam keadaan  100%  kadar  air  kapasitas  lapang sampai akhir percobaan dengan cara menyiram tanaman setiap hari sampai air perkolasi keluar dari polibag. Perlakuan kedua (K2) merupakan perlakuan  cekaman  kekeringan  hingga  50% kadar  air  kapasitas  lapang.  Kondisi  tersebut diperoleh  dengan  cara  tidak  melakukan penyiraman  pada  tanah  (media  tanam  dalam polibag) sampai kadar air tanah mencapai nilai 50%  kadar  air  kapasitas  lapang  yaitu  15.67% kadar  air  aktual.  Kondisi  cekaman  kekeringan tersebut diperoleh setelah 72 hari tanaman tidak mendapat  pengairan.  Perlakuan  ketiga  (K3)
merupakan  perlakuan  cekaman  kekeringan hingga 40% kadar air kapasitas lapang. Kondisi tersebut diperoleh dengan cara tidak melakukan penyiraman  pada  tanah  (media  tanam  dalam polibag) sampai kadar air tanah mencapai nilai 40%  kadar  air  kapasitas  lapang  yaitu  12.54% kadar  air  aktual.  Kondisi  cekaman  kekeringan tersebut  diperoleh  setelah  141  hari  tanaman tidak mendapat pengairan. Tanaman yang telah mengalami  cekaman  kekeringan  (K2  dan  K3) kemudian diberi pengairan kembali ( rewatering )  sampai  air  perkolasi  keluar  dari polibag untuk memulihkan kondisi tanaman.
Parameter  pengamatan  yang  diamati pada  percobaan  ini  dibagi  ke  dalam  dua kelompok. Kelompok pertama adalah parameter  yang  mengindikasikan  keberhasilan induksi  bunga  jeruk  keprok  Madura  melalui cekaman kekeringan yaitu kandungan giberelin daun,  kandungan  C-organik  daun,  kandungan N-total  daun,  dan  C/N  rasio  daun.  Parameter pengamatan  pada  kelompok  pertama  diamati pada  hari  ketiga  setelah  tanaman  mendapat pengairan kembali ( rewatering ) setelah mengalami  cekaman  kekeringan  (K2  dan  K3) serta pada minggu ke-10 setelah pengairan rutin pada  tanaman  K1.  Kelompok  kedua  adalah parameter  yang  menentukan  kondisi  cekaman kekeringan tanaman jeruk keprok Madura yaitu potensial  air  daun,  potensial  air  tanah, persentase  gulung  daun,  kandungan  prolin daun, kandungan klorofil, ukuran stomata, dan kerapatan stomata. Parameter pengamatan pada kelompok  kedua  diamati  pada  saat  tanaman mengalami  cekaman  kekeringan  (K2  dan  K3) serta pada minggu ke-10 setelah pengairan rutin pada  tanaman  K1.  Metode  pengambilan  data setiap  parameter  pada  percobaan  ini  adalah sebagai berikut.
1)  Hormon Giberelin
Analisis kandungan giberelin mengacu pada metode  yang  dilakukan  oleh  Barendse  dan Werken  (1980)  dengan  menggunakan  alat High Performance Liquid Chromatography (HPLC).
2)  C-Organik, N-Total, dan C/N Rasio Analisis  C-organik  dan  N-total  mengacu pada metode yang dilakukan oleh Eviati dan Sulaeman  (2009)  dengan  menggunakan spektrofotometer.  C/N  rasio  merupakan nilai dari C-organik dibagi dengan N-total.
3)  Potensial Air Tanah dan Daun
Pengukuran  potensial  air  tanah  dan  daun dilakukan  menggunakan  alat Dewpoint Potential Meter WP4.
4)  Gulung Daun Persentase  gulung  daun  dihitung  dengan menghitung  selisih lebar  daun  saat menggulung dengan lebar daun saat normal menggunakan rumus (Dn - Dg) / Dn x 100% dengan Dn = lebar daun saat normal; Dg = lebar daun saat menggulung.
5)  Prolin Analisis  kandungan  prolin  mengacu  pada metode  yang  dilakukan  oleh  Bates et  al . (1973) dengan menggunakan spektrofotometer. Konsentrasi prolin dihitung dengan rumus : [(µg prolin ml -1 x ml toluene) / 115.5 µg µmol -1 ] / [(g sampel)
/ 5]= µmol prolin g -1 berat segar daun.
6)  Klorofil
Analisis kandungan klorofil  mengacu pada metode  yang  dilakukan  oleh  Mackinney (1941) dengan menggunakan spektrofotometer. Kandungan klorofil
dihitung  dengan  persamaan  Lichtenthaler (1987) untuk aseton 100% sebagai berikut. C a+b = 7.05 (A662) + 18.09  (A645) dengan C a+b = klorofil total; A662 = absorban pada λ662; A645 = absorban pada λ645.
7)  Ukuran dan Kerapatan Stomata Pengamatan  ukuran  dan  kerapatan  stomata mengacu pada metode yang dilakukan oleh Moore et  al .  (2008)  yaitu  dengan  metode sederhana  pengolesan  cat  kuku  akrilik. Ukuran  stomata  dihitung  menggunakan rumus perhitungan luas elips yaitu r(p) x r(l) x π dengan r(p) = jari-jari panjang stomata, r(l)  =  jari-jari  lebar  stomata,  π  =  3.14. Kerapatan  stomata  dihitung  menggunakan rumus  jumlah  stomata  dibagi  luas  bidang pandang  dengan  perbesaran  40  kali  (luas bidang pandang = 0.196 mm 2 ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Perlakuan  cekaman  kekeringan  tidak memunculkan tunas generatif dan bunga, baik pada  tanaman  kontrol  (K1)  maupun  pada tanaman yang mendapatkan cekaman kekeringan (K2 dan K3). Tunas yang muncul pada  tanaman  K1  dan  K2  adalah  tunas
vegetatif,  sementara  tanaman  K3  mengalami layu  permanen  pada  bagian  batang  atas sehingga  tidak  menghasilkan  tunas  baru setelah rewatering (Gambar 1). Induksi bunga diharapkan  terjadi  pada  saat  tanaman  jeruk mengalami  cekaman  kekeringan  sebagai respon  pertahanan  diri  dan rewatering (pengairan kembali setelah perlakuan cekaman kekeringan) menjadi modal awal untuk proses pembungaan  selanjutnya  setelah  induksi bunga.
Pembungaan pada tanaman jeruk hanya akan terjadi pada tanaman yang telah melewati fase  juvenil  (muda)  atau  telah  dewasa  dan tanaman jeruk keprok Madura yang digunakan pada penelitian ini adalah tanaman yang telah dewasa  dan  siap  berbunga.  Tanaman  jeruk yang digunakan pada penelitian ini merupakan tanaman  hasil  okulasi,  yaitu  tanaman  yang dihasilkan  dari  sambungan  dua  jenis  jeruk. Batang bawah sambungan tersebut merupakan jenis  jeruk Japanche  citroen (JC)  yang ditanam  dari  biji,  sementara  batang  atasnya merupakan  jenis  jeruk  keprok  Madura  yang diambil  dari  cabang  pohon  induk  yang  telah dewasa.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa tanaman  jeruk  keprok  Madura  hasil  okulasi tersebut  merupakan  tanaman  dewasa  yang sama seperti pohon induknya.
Percobaan pendahuluan yang dilakukan terhadap  tanaman  jeruk  keprok  Madura  hasil okulasi  umur  1  tahun  setelah  okulasi  dengan aplikasi zat anti giberelin berupa paclobutrazol dengan  dosis  2  g  L -1 yang  disiramkan  pada media tanah dalam pot berhasil memunculkan bunga  pada  beberapa  tanaman.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  tanaman  jeruk  keprok Madura  hasil  okulasi  umur  1  tahun  setelah okulasi  merupakan  tanaman  yang  telah melewati  fase  juvenil  dan  dapat  berbunga. Menurut  Davenport  (1990),  induksi  bunga, termasuk  induksi  bunga  jeruk,  merupakan suatu  mekanisme  aktivasi  yang  terjadi  pada tunas  tanaman  setelah  berinteraksi  dengan kondisi  lingkungan  eksogen  atau  faktor endogen  tanaman  yang  dilanjutkan  dengan aktivitas  sel  meristem  untuk  berlanjut  ke tahapan  pembungaan  selanjutnya.  Kegagalan kemunculan  bunga  pada  tanaman  yang  telah diberi  perlakuan  cekaman  kekeringan  dapat terjadi  pada  setiap  tahapan  pembentukan bunga.
Gambar 1.  Kondisi tanaman jeruk keprok Madura selama perlakuan.
A=  tanpa  cekaman  kekeringan  (K1);  B=  cekaman  kekeringan  50%  kadar  air kapasitas lapang (K2); C= K2 setelah rewatering ; D= flushing (tanda ‘→’) pada K2 setelah rewatering ; E= flushing dewasa (tanda ‘←’) pada K2 setelah rewatering ; F=  cekaman  kekeringan  40%  kadar  air  kapasitas  lapang  (K3);  G=  K3  setelah rewatering ; H= batang utama mati (tanda ‘→’) dan batang bawah flushing (tanda ‘←’) pada K3 setelah rewatering .
Kegagalan  dapat  terjadi  karena  tidak terjadinya  induksi  bunga,  tidak  berhasilnya proses  transisi  dan  diferensiasi  tunas  serta dapat  terjadi  pada  tahapan  terakhir  yaitu kegagalan  pada  perkembangan  organ  bunga. Faktor-faktor  yang  diduga  menjadi  penyebab gagalnya  pembungaan  jeruk  keprok  Madura pada percobaan ini adalah kadar giberelin pada tanaman  menghambat  induksi  bunga  dan tanaman mengalami cekaman kekeringan yang terlalu  berat  ( over  stress )  melebihi  ambang batas  cekaman  kekeringan  yang  dapat menginduksi bunga.
1) Kadar Giberelin  pada Tanaman Menghambat Induksi Bunga
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa kandungan  giberelin  pada  daun  tanaman  K1 tidak  berbeda  nyata  dengan  K2,  namun berbeda  nyata  dengan  K3,  sementara  K2 berbeda  nyata  dengan  K3.  Nilai  kandungan giberelin  tersebut,  baik  yang  tidak  berbeda
nyata maupun yang berbeda nyata dengan K1, jauh  lebih  tinggi  daripada  nilai  kandungan giberelin  yang  dibutuhkan  untuk  induksi bunga  jeruk.  Kandungan  giberelin  yang dibutuhkan untuk induksi bunga jeruk adalah sekitar 0.1 ppm (Koshita dan Takahara, 2004), sementara pada penelitian ini mencapai 94.35 – 163.12 ppm (Tabel 1). Proses induksi bunga melibatkan  perubahan  fitohormon  dan  rasio karbon-nitrogen  (C/N  rasio)  pada  tanaman. Giberelin  merupakan  salah  satu  fitohormon yang  merupakan  hormon  penghambat  proses pembungaan pada tanaman jeruk (Davenport, 2000).  Kandungan  giberelin  yang  tinggi menunjukkan sebagai respon terhadap kekeringan dapat menghambat proses pembungaan,  sementara  kandungan  giberelin yang rendah menunjukkan proses pembungaan tidak terhambat dan dapat terjadi. Hal tersebut menunjukkan  bahwa  kandungan  giberelin pada  tanaman  di  penelitian  ini  menghambat terjadinya proses induksi bunga.
A B C D E F G H
Tabel 1. Parameter keberhasilan induksi bunga jeruk keprok Madura a Perlakuan Giberelin (ppm) b),c) C-Organik (%) b) N-Total (%) b) C/N Rasio b),d) K1 94.35 b 40.62 a 2.34 b 17.40 a K2 95.71 b 40.71 a 3.98 a 10.23 b K3 163.12 a 37.03 b 3.83 a 9.67 b Keterangan : a) Data diambil pada hari ke-72 irigasi rutin untuk K1, hari ke-72 tanpa irigasi untuk K2 dan hari ke-141 tanpa irigasi untuk K3; b) Angka-angka pada kolom yang sama dan diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata sedangkan yang diikuti oleh huruf tidak sama berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji Beda Nyata Terkecil). c) ppm= part per million. d) C/N rasio= C-Organik/N-Total.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa C/N  rasio  pada  daun  tanaman,  baik  K1 maupun K2 dan K3, memiliki nilai yang tinggi dibandingkan dengan hasil penelitian sebelumnya  mengenai  induksi  bunga.  Hasil penelitian yang telah dilakukan oleh Phadung et  al .,  (2011)  menunjukkan  bahwa  nilai  C/N rasio  pada  tanaman  yang  diinduksi  bunganya melalui  perlakuan  stres  air  adalah  4  pada kontrol, 7 pada saat pra-rewatering dan after- rewatering ,  dan  4.5  pada  saat flushing , sementara pada hasil penelitian ini adalah 9.50 –  18.23  dengan  hasil  yang  berbeda  nyata antara  K2,  K3  dengan  K1,  namun  tidak berbeda nyata antar perlakuan. Kandungan C- organik pada penelitian ini juga menunjukkan hasil  yang  tinggi  dibandingan  dengan penelitian  sebelumnya  yang  telah  dilakukan oleh Gracia-Luis et al . (1995); Monerri et al .
(2011);  dan  Dovis et  al .  (2014)  dengan  nilai karbohidrat nonstruktural pada saat pembungaan  adalah  sekitar  8  –  25%, sementara  pada  penelitian  ini  mencapai  nilai 37.09 – 40.71% (Tabel 1). C/N  rasio  merupakan  rasio  kandungan karbon  organik  dan  nitrogen  total  pada tanaman.  C/N  rasio  pada  penelitian  ini difokuskan  pada  daun  tanaman  jeruk  keprok Madura.  Karbon  yang  tersimpan  pada  daun sebagain  besar  akan  ditraslokasikan  ke  tunas yang  sedang  mengalami  proses  pembungaan karena  proses  pembungaan  merupakan sink yang paling kuat pada tanaman (Dovis et al ., 2014)  sehingga  kadar  karbon  dalam  daun diharapkan berkorelasi positif dengan keberhasilan  proses  pembungaan,  sementara nitrogen  dalam  tanaman,  baik  yang  berasal dari tanah, penyimpanan di  batang maupun di daun, sebagian besar ditranslokasikan ke daun muda  dan  bagian  vegetatif  tanaman  lainnya yang sedang tumbuh (Dickson, 1989) sehingga nilai N yang tinggi akan memacu pertumbuhan vegetatif  dan  menghambat  pertumbuhan
generatif seperti pembungaan. Nilai C-organik dan  C/N  rasio  yang  tinggi  merupakan  modal untuk perkembangan generatif tanaman jeruk, namun  total  giberelin  tetap  menjadi  faktor penghambat dalam proses pembungaan tanaman jeruk. Hal tersebut didukung dengan hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh Goldschmidt et al . (1985) bahwa giberelin dan karbohidrat merupakan dua regulator pembungaan  yang  bekerja  secara  independen dan pengaruhnya tidak terkait satu sama lain. Hal tersebut juga sesuai dengan salah satu teori pembungaan  klasik  yang  dikemukanan  oleh Bernier et  al .  (1981)  bahwa  tanaman  tidak akan  pernah  berbunga  sampai  faktor  yang menghambatnya  dihilangkan.  Dalam  hal  ini, faktor  penghambat  pembungaan  tanaman jeruk adalah giberelin.
2) Tanaman Mengalami Cekaman
Kekeringan  yang  Terlalu  Berat  (Over Stress)
Kondisi  cekaman  kekeringan  pada tanaman jeruk keprok Madura ditentukan oleh beberapa parameter, yaitu potensial air tanah, potensial  air  daun,  persentase  gulung  daun, kandungan  prolin  daun,  kandungan  klorofil daun, serta ukuran dan kerapatan stomata.

## Potensial Air Tanah dan Daun
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa nilai  potensial  air  tanah  tanaman  K2  dan  K3 berbeda  nyata  dan  memiliki  nilai  yang  jauh lebih negatif daripada K1 (Tabel 2). Hal yang sama  terjadi  pada  nilai  potensial  air  daun. Potensial  air  daun  tanaman  jeruk  yang mengalami  cekaman  kekeringan  pada  K2 maupun K3 memiliki nilai yang lebih negatif dan  berbeda  nyata  daripada  K1  dan  K3 memiliki  nilai  potensial  air  daun  yang  lebih negatif daripada K2 (Tabel 2).
Tabel 2. Potensial air daun dan tanah jeruk keprok Madura a Perlakuan Potensial Air Daun (MPa) b),c) Potensial Air Tanah (MPa) b),c) K1 -4.19 c -0.12 b K2 -10.83 b -18.32 a K3 -42.71 a -23.55 a Keterangan : a) Data diambil pada hari ke-72 irigasi rutin untuk K1, hari ke-72 tanpa irigasi untuk K2 dan hari ke-141 tanpa  irigasi  untuk  K3; b) Angka-angka  pada  kolom  yang  sama  dan diikuti  oleh huruf  yang  sama  tidak berbeda nyata sedangkan yang diikuti oleh huruf tidak sama berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji Beda Nyata Terkecil); c) MPa= Megapascal.
Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan  bahwa  nilai  potensial  air  daun tanaman jeruk yang tercekam kekeringan dan dapat  menginduksi  bunga  adalah  -2.17  MPa (Phadung et  al .,  2011)  dan  sekitar  -1  MPa (Koshita  dan  Takahara,  2004).  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  nilai  potensial  air  tanah dan  daun  tanaman  pada  K2  dan  K3  pada penelitian  ini  telah  mengalami  cekaman kekeringan yang sangat berat (sangat tercekam)  melebihi  nilai  potensial  air  untuk induksi bunga.
Potensial air merupakan energi pendorong  pergerakan  air  dalam  tanah (potensial  air  tanah)  atau  tanaman  (potensial air  daun).  Nilai  potensial  air  menunjukkan tekanan  yang  dibutuhkan  untuk  mengalirkan sejumlah  volume  air  (Jarvis,  1976).  Nilai potensial  air  dipengaruhi  oleh  kandungan senyawa-senyawa  yang  terlarut  di  dalam  air. Semakin  tinggi  senyawa  yang  terlarut  maka nilai  potensial  air  semakin  negatif  dan hubungan  antara  kelarutan  senyawa  tersebut berkorelasi  negatif  dengan  kandungan  air. Semakin  tercekam  tanaman  maka  nilai potensial airnya semakin negatif.

## Kandungan Prolin Daun
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa tanaman  K2  dan  K3  mengakumulasi  prolin lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  K1. Kandungan  prolin  pada  K2  sebesar  18.57 µmol g -1 dan 13.27 µmol g -1 pada K3 (Tabel 3).  Tanaman  yang  mengalami  cekaman kekeringan akan mengalami perubahan fisiologi  dan  fungsi  biokimianya,  salah satunya  adalah  perubahan  kandungan  prolin. Prolin merupakan salah satu asam amino yang menjadi  indikator  respon  tanaman  terhadap cekaman kekeringan (Keyvan, 2010). Tanaman  yang  tercekam  kekeringan  akan mengakumulasi  prolin  dan  akumulasi  prolin tersebut  berkorelasi  positif  dengan  tingkat
beratnya  cekaman.  Semakin  berat  cekaman maka  akumulasi  prolin  akan  semakin  tinggi (Campos-Rivero et  al .,  2017).  Prolin  yang terakumulasi  pada  sitoplasma  sel  tanaman berfungsi  sebagai  pelindung  sel  dari  aktivitas yang  melibatkan  konsentrasi  air  yang  rendah (osmoprotektan)  dan  pelindung  sel  dari kerusakan  akibat  pembekuan  (krioprotektan) (Nolte  dan  Hanson,  1997).  Prolin  juga merupakan salah satu senyawa yang diakumulasi tanaman sebagai pengatur konsentrasi cairan dalam sel dan penyeimbang keluar masuknya cairan dalam sel (osmoregulator) yang dianggap sebagai mekanisme  toleransi  yang  penting  untuk pemeliharaan sel (Medeiros et al ., 2012).

## Kandungan Klorofil Daun
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa kandungan  klorofil  total  secara  umum berkorelasi negatif dengan cekaman kekeringan  (Tabel  3),  walaupun  kandungan klorofil pada tanaman K2 tidak berbeda nyata dengan  K1.  Hasil  tersebut  sejalan  dengan hasil-hasil penelitian sebelumnya yaitu cekaman  kekeringan  meyebabkan  penurunan kandungan  klorofil  total  pada  daun  tanaman (Xie et al ., 2016).
Klorofil merupakan salah satu komponen utama kloroplas untuk fotosintesis dan  kandungan  klorofil  relatif  berkorelasi positif  dengan  laju  fotosintesis  (Peiguo  dan Mingqi, 1996). Penurunan kandungan klorofil pada daun tanaman yang mengalami cekaman kekeringan dianggap sebagai gejala khas stres oksidatif  dan  diduga  merupakan  akibat  dari foto-oksidasi  pigmen  dan  degradasi  klorofil (Farooq et  al .,  2009).  Penurunan  kandungan klorofil  juga  dikaitkan  dengan  hilangnya membran  kloroplas,  pembengkakan  yang berlebihan,  distorsi  vesikula  lamela,  dan munculnya tetesan lipid (Kaiser et al ., 1981).

## Tabel 3. Peubah status cekaman kekeringan tanaman jeruk keprok
Perlakuan Prolin (µmol g -1 ) b) Klorofil (mg.g -1 ) b) Ukuran Stomata (mm 2 ) b) Kerapatan Stomata (stomata mm -1 ) -2 b) Gulung Daun (%) b) Visualisasi Gulung Daun K1 4.62 c 0.61 b 0.000297 a 438.78 a 23.95 c K2 1.57 a 1.83 a 0.000295 a 439.63 a 57.10 b K3 13.27 b 0.58 b 0.000264 a 187.07 b 76.98 a
Keterangan : a) Data diambil pada hari ke-72 irigasi rutin untuk K1, hari ke-72 tanpa irigasi untuk K2 dan hari ke-141 tanpa irigasi untuk K3; b) Angka-angka pada kolom yang sama dan diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata sedangkan yang diikuti oleh huruf tidak sama berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji Beda Nyata Terkecil).

## Ukuran dan Kerapatan Stomata
Ukuran  stomata  pada  penelitian  ini menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda  nyata antara  K1,  K2,  dan  K3.  Kerapatan  stomata menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda  nyata antara  tanaman  K1  dan  K2,  namun  berbeda nyata  dengan  K3.  Tanaman  K3  memiliki kerapatan stomata yang lebih rendah dibandingkan  K2  (Tabel  3).  Penelitian sebelumnya  menyebutkan  bahwa  kerapatan stomata  berkorealsi  negatif  dengan  ukuran stomata, semakin kecil nilai kerapatan stomata maka  ukuran  stomata  semakin  besar  dan sebaliknya (Zhao et al ., 2015). Hasil penelitian ini tidak menunjukkan korelasi antara ukuran stoma dan kerapatan stomata.
Stomata  merupakan  pori-pori  yang ditemukan  pada  bagian  epidermis  daun  dan batang dan berperan dalam pertukaran gas dan air  tanaman  (Pirasteh-Anosheh et  al .,  2016) yang  selanjutnya  mempengaruhi  fotosintesis, transpirasi  dan  pengambilan  nutrisi  (Arve et al .,  2011).  Ukuran  dan  kerapatan  stomata merupakan  dua  dari  beberapa  ciri  morfologi stomata yang mempengaruhi hubungan antara tanaman  dengan  kondisi  lingkungan  seperti status  air  (Pirasteh  -  Anosheh et  al .,  2016). Penurunan  tingkat  kerapatan  stomata  dapat meningkatkan  toleransi  terhadap  cekaman kekeringan  pada  tanaman  barley  (Hughes et
al .,  2017).  Kerapatan  stomata  yang  rendah akan mengurangi transpirasi tanaman sebagai upaya  mencegah kehilangan air dari tanaman dan  menghemat  pengambilan  air  dari  tanah sehingga  kelembapan  tanah  masih  terjaga tanpa  merusak  pengaruh  pengambilan  nutrisi dari tanah serta menjaga ketersediaan air tanah (Caine et  al .,  2018).  Hasil-hasil  penelitian tersebut  beserta  hasil  pada  penelitian  ini menunjukkan bahwa kerapatan stomata merupakan  salah  satu  parameter  respon terhadap cekaman kekeringan, dimana semakin  tercekam  tanaman  maka  kerapatan stomata akan semakin rendah.

## KESIMPULAN
Kadar  air  50%  dan  40%  kapasitas lapang tidak menginduksi bunga jeruk keprok Madura  umur  1  tahun  setelah  okulasi  yang dibuktikan dengan kadar giberelin yang sangat tinggi. Kadar air 50% dan 40% dari kapasitas lapang  terlalu  rendah  sehingga  tanaman mengalami  cekaman  kekeringan  berat  dan mengganggu proses  induksi  bunga. Cekaman kekeringan  berat  tersebut  ditandai  dengan potensial air daun dan tanah yang tinggi, kadar prolin  daun  tinggi,  kerapatan  stomata menurun, dan daun menggulung.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  penulis  ucapkan  kepada Kementerian Riset, Teknologi dan Pendidikan Tinggi  yang  telah  membiayai  penelitian  ini melalui program Pendidikan Magister Menuju Doktor untuk sarjana Unggul (PMDSU) Batch
2 dan Pusat Penelitian Biologi-LIPI khususnya
Laboratorium Biak Sel dan Jaringan
Tumbuhan  yang  telah  memberikan  ijin  dan memfasilitasi  penulis  untuk  melaksanakan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Albrigo, L.G., J.I. Valiente, H.W. Beck. 2002. Flowering  expert  system  development for  a  phenology  based  citrus  decision support  system.  Proc.  6th  IS  on Modelling  in  Fruit  Ed.  T.M.  DeJong Acta Hort. 584. ISHS.
Arve, L.E., S. Torres, J.E. Olsen, K.K. Tanino.
2011.  Stomatal  responses  to  drought stress and air humidity. Abiotic stress in plants:  Mechanism  and  adaptations. 267-280.
[Balitjestro]  Balai  Penelitian  Tanaman  Jeruk dan  Buah  Subtropika.  2016  Tips membedakan jenis jeruk. http://balitjestro. litbang.pertanian.go.id/tips-membedakan- jenis-jeruk/. [13 Desember 2018]
Barendse,  G.W.M.,  P.H.V.D.  Werken.  1980. High-performance  liquid  chromatography of gibberellins. JournaI of
Chromatography. 198: 449-455.
Bates, L.S. 1973. Rapid determination of free proline  for  water-stress  studies.  Plant and Soil. 39: 205-207.
Bernier, G., J.M. Kinet, R.M. Sachs. 1981. The Physiology  of  Flowering,  Vol.  I.  Boca Raton (FL): CRC Press.
Caine, R.S., X. Yin, J. Sloan, E.L. Harrison, U. Mohammed, T. Fulton, A.K. Biswal, J. Dionora, C.C. Chater, R.A. Coe. 2018. Rice  with  reduced  stomatal  density conserves  water  and  has  improved drought  tolerance  under  future  climate
conditions. New Phytologist. 221: 371- 384. doi: 10.1111/nph.15344.
Campos-Rivero,  G.,  P.  Osorio-Montalvo,  R. S´anchez-Borges,  F.  Duarte-Ak´e  ,  R. Us-Camas, C. De-la-Pe˜na. 2017. Plant hormone  signaling  in  flowering:  an epigenetic point of view. Plant Physiology 214:16-27.
Davenport,  T.L.  1990.  Citrus  flowering. Hortic. Rev. 12: 349-408.
Davenport,  T.L.  2000.  Processes  influencing floral  initiation  and  bloom:  the  role  of phytohormones in a conceptual flowering model. HortTechnology. 10(4):733-739.
Dickson,  R.E.  1989.  Carbon  and  nitrogen allocation in trees. Ann. Sci. For. (46): 631-647.
Dovis,  V.L.,  E.C.  Machado,  R.V.  Ribeiro, J.R.M. Filho, P.E.R. Marchiori, C.R.G. Sales.  2014.  Roots  are  important sources of carbohydrates during floweringand  fruiting  in  ‘Valencia’ sweet  orange  trees  with  varying  fruit load. Scientia Horticulturae. 174: 87-95.
Eviati,  Sulaeman.  2009.  Analisis  Kimia Tanah,  Tanaman,  Air  dan  Pupuk.
Bogor: Balai Penelitian Tanah.
Farooq,  M.,  A.  Wahid,  N.  Kobayashi,  D. Fujita,  S.M.A.  Basra.  2009.  Plant drought stress: effects, mechanisms and management. Agronomy for Sustainable  Development.  29(1):  185- 212. doi: 10.1051/agro:2008021.
Goldschmidt,  E.E.,  N.  Aschkenazi,  Herzano, A.A. Schaffer, S.P. Monselise. 1985. A role  for  carbohydrate  levels  in  the control  of  flowering  in  citrus.  Scientia Horticulturae. 26: 159-166.
Gracia-Luis.  A.,  F.  Fornes,  J.L.  Guardiola. 1995.  Leaf  carbohydrates  and  flower formation in citrus. J. Amer. Soc. Hort. Sci.  120(2):  222-227.  doi:  https://doi. org/10.21273/JASHS.120.2.222.
Hughes,  J.,  C.  Hepworth,  C.  Dutton,  J.A. Dunn, L. Hunt, J. Stephens, R. Waugh, D.D.  Cameron,  J.E.  Gray.  2017. Reducing  stomatal  density  in  barley improves  drought  tolerance  without impacting  on  yield.  Plant  Physiology. (174): 776-787. doi: www.plantphysiol. org/cgi/doi/10.1104/pp.16.01844.
Jarvis,  P.G.  1976.  The  interpretation  of  the variations  in  leaf  water  potential  and stomatal conductance found in canopies in  the  field.  Phil.  Trans.  R.  Soc.  Lond. B.  (273):  593-610.  doi:  https://doi. org/10.1098/rstb.1976.0035.
Kaiser,  W.M.,  G.  Kaiser,  S.  Schöner,  S. Neimanis.  1981.  Photosynthesis  under osmotic stress. Planta. 153: 430-435.
Keyvan, S. 2010. The effects of drought stress on yield, relative water content, proline, soluble  carbohydrates  and  chlorophyll of  bread  wheat  cultivars.  Journal  of Animal  &  Plant  Sciences  8(3):  1051-
1060.
Koshita, Y., T. Takahara. 2004. Effect of water stress  on  flower-bud  formation  and plant  hormone  content  of  satsuma mandarin ( Citrus unshiu Marc.).
Scientia Horticulturae. (99): 301-307.
Lichtenthaler,  H.K.  1987.  Chlorophylls  and carotenoids:  pigments  of  photosynthetic biomembranes. Methods Enzymol. 148: 350-382.
Mackinney,  G.  1941.  Absorption  of  light  by chlorophyll  solutions.  J.  Biol.  Chem. 140: 315-322.
Mattjik,  A.A.,  I.M.  Sumertajaya.  2013. Perancangan  Percobaan  dengan  Aplikasi SAS dan Minitab Jilid 1. IPB Press.
Medeiros,  D.B.,  E.C.  Silva,  H.R.B.  Santos, C.M. Pacheco, R.D.S. Musser, R.J.M.C. Nogueira.  2012.  Physiological  and biochemical responses to drought stress in  Barbados  cherry.  Braz.  J.  Plant Physiol.  24(3):  181-192.  doi:  http://dx. doi.org/10.1590/S1677- 04202012000300005.
Monerri  C.,  A.  Fortunato-Almeida,  R.V. Molina,  S.G.  Nebauer,  A.  García-Luis, J.L.  Guardiola.  2011.  Relation  of carbohydrate reserves with the forthcoming crop, flower formation and photosynthetic  rate,  in  the  alternate bearing  ‘Salustiana’  sweet  orange ( Citrus sinensis L.). Scientia Horticulturae.  (129):  71-78.    doi: 10.1016/j.scienta.2011.03.009.
Moore,  G.W.,  J.R.  Cleverly,  M.K.  Owens.
2008. Nocturnal transpiration in riparian
Tamarix  thickets  authenticated  by  sap flux,  eddy  covariance  and  leaf  gas exchange measurements. Tree Physiology. 28:521-528.
Moss, G.I. 1969. Influence of temperature and photoperiod  on  flower  induction  and inflorescence  development  in  sweet orange  ( Citrus  sinensis L.  Osbeck). Journal of Horticultural Science.
44(4):311-320.
Nolte,  K.D.,  A.D.  Hanson.  1997.  Proline accumulation and methylation to proline betain in citrus: implication for genetics engineering of stress resostance.  J.  Amer.  Soc.  Hort.  Sci. 122(1): 8-13.
Peiguo,  G.,  L.  Mingqi.  1996.  Studies  on photosynthetic  characteristics  in  rice hybrid  progenies  and  their  parents.  I. chlorophyll content, chlorophyll-protein complex  and  chlorophyll  fluorescence kinetics.  Journal  of  Tropical  and Subtropical Botany 4(4): 60-65. https://europepmc.org/abstract/cba/296 564/feedback. [13 Agustus 2019].
Phadung, T., K. Krisanapook, L. Havaphutanon. 2011.  Paclobutrazol,  water  stress  and nitrogen  induced  flowering  in  ‘Khao Nam  Phueng’  pummelo.  Kasetsart  J. (Nat. Sci.) 45: 189-200.
Pirasteh ‐ Anosheh, H.H., A. Saed ‐ Moucheshi, H.  Pakniyat,  M.  Pessarakli.  2016. Stomatal  responses  to  drought  stress. Water  Stress  and  Crop  Plants:  A Sustainable Approach (1) First Edition. Edited by Parvaiz Ahmad. 24-40.
Takeno,  K.  2016.  Stress-induced  flowering: the third category of flowering response.
Journal of Experimental Botany. 67(17): 4925-4934.
Valiente, J.I., L.G. Albrigo. 2004. Flower bud induction of Sweet Orange trees ( Citrus sinensis (L.) Osbeck ):  effect  of  low temperature, crop load. and bud age. J. Amer.  Soc.  Hort.  Sci.  129(2):158-164. doi: 10.21273/JASHS.129.2.0158.
Xie, S., X. Zhao, X. Lu, C. Huang, Y. Xiao, J. Li. 2016. Effect of water stress on citrus
physiological  characteristics,  jasmine acid  biosynthesis  and  correlative  gene expression.  Acta  Hortic.  1112.  doi: 10.17660/ActaHortic.2016.1112.34.
Zhao, W., Y. Sun, R. Kjelgren, X. Liu. 2015. Response  of  Stomatal  Density  and Bound  Gas  Exchange  in  Leaves  of
Maize  to  Soil  Water  Deficit.    Acta Physiologiae Plantarum 37(1). https://digitalcommons.usu.edu/cgi/vie wcontent.cgi?article=1731&context=ps cfacpub.