## ANALISIS AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK
ETANOLIK DAUN YODIUM (Jatropha multifida L.) DENGAN METODE CUPRIC ION REDUCING ANTIOXIDANT CAPACITY (CUPRAC)
St. Maryam *) , Randi Pratama *) , Nurmaya Effendi *) , Tadjuddin Naid *)
*) Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia, Makassar Email: st.maryam_apt@yahoo.com

## ABSTRACT
The  research  had  been  conducted  about  the  analysis  of  antioxidant  activity  of  yodium (Jatropha  multifida L.)  leaves  using  cupric  ion  reducing  antioxidant  capacity  to determine the existance of antioxidant activity and to measure the antioxidant capacity in yodium  (Jatropha multifida L.)  leaves  ethanolic  extract  using  CUPRAC  method.  It  was experimental  research  using  CUPRAC  method  to  prove  the  existance  of  antioxidant activity of yodium (Jatropha multifida L.) leaves. It was started by extracting the leaves using  maseration  using  ethanol  96%  solvent.  The  resulted  extracts  were  analyzed quantitatively  and  qualitatively  by  adding  CuCl2  solution,  neucuproin,  NH4Ac  buffer system  which  were  measured  in  UV-Visible  spectrophotometer  and  analyzed  at  a wavelength  of  450  nm.  Based  on  data  analysis,  it  was  found  that  the  askorbat  acid equivalent  (AAE)  presentage  of  yodium  (Jatropha  multifida L.)  leaves  was  0.7385  ± 0.0521 mg L-1 AA g-1 extract.
Keywords : Antioxidant activity, Yodium (Jatropha multifida L.), cupric ion reducing antioxidant capacity (CUPRAC)

## I. PENDAHULUAN
Latar Belakang Tubuh  manusia  tidak  mempunyai cadangan antioksidan dalam jumlah berlebih,  sehingga  jika  terjadi  paparan radikal  berlebih,  maka  tubuh  membutuhkan antioksidan  yang  berasal  dari  luar  tubuh. Adanya  kekhawatiran  akan  kemungkinan efek  samping  yang  belum  diketahui  dari antioksidan sintetik menyebabkan
antioksidan  alami  menjadi  alternatif  yang sangat potensial untuk dikembangkan.
Antioksidan alami mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan yang disebabkan senyawa oksigen
reaktif, mampu menghambat terjadinya penyakit degeneratif serta  mampu  menghambat  peroksida  lipid pada  makanan  (Winarsi,  2007). Salah  satu tumbuhan obat yang ada di indonesia adalah daun  yodium  (Jatropha  multifida L.).
Setelah  dilakukan  uji  fitokimia  yodium (Jatropha multifida L.) memiliki kandungan kimia  berupa  alkaloid,  saponin,  flavonoid, dan tanin. Sedangkan khasiat yang
terkandung dalam yodium (Jatropha multifida L.)  antara  lain,  getah  dan  daunnya dapat  dipakai  sebagai  obat  luka  baru (Depkes,  2000).  Pada  pengujian  CUPRAC (Cupric  ion  reducing  antioxidant  capacity), reangen  Cu(II)-neokuproin  (Cu(II)-(Nc)2) digunakan sebagai agen pengoksidasi kromogenik karena reduksi ion Cu(II) dapat diukur.  Pereaksi  CUPRAC  merupakan pereaksi  yang  selektif  karena  memiliki  nilai potensial  reduksi  yang  rendah.  metode pengukuran  kapasitas  antioksidan  dengan menggunakan  metode  CUPRAC  memiliki kelebihan  jika  dibandingkan  dengan  metode pengukuran  antioksidan  yang  lain  yaitu reagen  CUPRAC  cukup  cepat  untuk mengoksidasi tiol jenis antioksidan, pereaksi CUPRAC  merupakan  pereaksi  selektif karena  potensi redoksnya  lebih  rendah. Reagen  CUPRAC  lebih  stabil  dan  dapat diakses  dari  reagen  kromogenik  lainnya (mis., ABTS, DPPH). Metode ini mudah dan berlaku dilaboratorium konvensional menggunakan  standar  kolorimeters  tidak
peralatan  memerlukan  canggih  dan  operator yang  memenuhi  syarat.  Metode  ini  dapat mengukur  hidrofilik  dan  lipofilik  dari antioksidan  (misalnya,  β -kar oten  dan  α - tokoferol)  (Apak et  al, 2007).  Berdasarkan kajian  diatas,  perlu  dilakukan  penelitian untuk  menganalisis  aktivitas  antioksidan daun yodium (Jatropha multifida L.) dengan metode  CUPRAC  (Cupric  Ion  Reducing Antioxidant Capacity).
II. MATERIAL DAN METODE

## PENELITIAN
A. Material
Material  yang  digunakan  meliputi batang  pengaduk,  cawan  porselin,  corong, eksikator,  gelas  arloji,  gelas  kimia  (pyrex), gelas  ukur  (pyrex),  kamera,  pinset,  pipet tetes, pipet skala, rak tabung, sendok tanduk, seperangkat  alat  rotavapor,  seperangkat  alat maserasi, spektrofotometer  Ultraviolet  Visibel,  tabung reaksi,  dan  timbangan  analitik,  sedangkan bahan-bahan yang digunakan adalah aluminium  foil,  aquadest,  buffer  amonium asetat, CuCl2, ekstrak etanolik daun yodium (Jatropha  multifida L.),  etanol  96%, neokuproin dan tissue.

## B. METODE
1. Jenis Penelitian Penelitian  ini  dilakukan  secara eksperimental dengan  menggunakan  metode CUPRAC untuk membuktikan adanya aktivitas antioksidan daun yodium (Jatropha multifida L.)  di  Laboratorium Kimia Farmasi.
2. Populasi dan Sampel
Material  yang  digunakan  adalah daun  yodium  (Jatropha  multifida L.)  yang diperoleh langsung dari Kecamatan Biringkanaya (Daya) Kota Makassar,
Propinsi Sulawesi Selatan.
3. Cara Kerja
a. Pengambilan dan Pengolahan Sampel Pengambilan  sampel  daun  yodium
(Jatropha  multifida L.)  dilakukan  pada  pagi hari  sekitar  pukul  08.00 - 10.00  WITA  di kota  Makassar,  dengan  cara  mengambil daun  tua  atau  muda  (dekat  pucuk)  yang masih  segar  secara  manual  menggunakan tangan.  Daun  yang  telah  dipetik  kemudian dikumpulkan,  dicuci  dengan  air  mengalir, ditiriskan. Daun yodium kemudian
dikeringkan di bawah sinar matahari dengan ditutup kain hitam. Daun yang sudah kering kemudian
diserbukkan menggunakan blender.
b. Pembuatan  ekstrak  etanol  daun
yodium Seratus  lima  puluh  gram  (150  gr) serbuk daun yodium dimaserasi
menggunakan  etanol  96%  selama  tiga  hari, ditutup dan dibiarkan terlindung dari cahaya sambil  berulang-ulang  diaduk.  Setelah  tiga hari  sari  diserkai,  ampas  diperas  kemudian dilakukan  remaserasi,  diaduk  dan  diserkai. Kemudian wadah ditutup, dibiarkan ditempat  sejuk,  terlindung  dari  cahaya selama  tiga  hari,  setelah  itu  endapan dipisahkan. Ekstrak etanol kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator.
c. Penyiapan  Larutan  (Apak, etal.,
2007) Larutan CuCl2  1,0X10-2  M  dibuat dengan melarutkan 0,4262 gram
CuCl2.2H2O  dalam  air  dan  diencerkan sampai  250  mL.  Buffer  ammonium  asetat pada  pH  7  disiapkan  dengan  melarutkan 19,27  gram  NH4Ac  dalam  air  dan diencerkan sampai 250  mL. Larutan Neocuproine (Nc)  7,5X10-3 M,  disiapkan dengan  melarutkan  0,039  gram  Nc  dalam etanol  96%  dan  diencerkan  sampai  25  mL dengan etanol 96%.
d. Uji  Aktivitas  Antioksidan  dengan Metode  CUPRAC  (Widyastuti, et  al.
2010)
Dimasukkan kedalam tabung reaksi sebanyak 1 mL larutan CuCl2 (1.0x10-2 M), 1 mL larutan neocuproin (7.5x10-3 M) dan 1 mL  larutan  penyangga  NH4Ac  pH  7  dan campurkan 0,5 mL ekstrak tanaman
(sebelumnya  dilarutkan  dengan  etanol  96% dengan volume perbandingan 0,3:20)
kemudian cukupkan volume dengan menambahkan  0,6  mL  aquadest  (volume total = 4.1 mL) dan campuran dalam tabung reaksi  ditutup.  Kemudian  larutan  didiamkan selama  30  menit  dan  diukur  absorbansinya pada 450 nm.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Tabel 1. Hasil uji aktivitas antioksidan
Tabel  2. Hasil pengukuran  absorbansi ekstrak  etanol  daun  yodium  (Jatropha multifida L.)  pada  panjang  gelombang  450 nm
B. Pembahasan Metode Cuprac (Cupric Ion Reducing  Antioxidant  Capacity)  adalah salah  satu  metode  yang  digunakan  untuk menentukan  adanya aktivitas  dan  mengukur kapasitas  antioksidan  dari daun  yodium terhadap  radikal  bebas  yang  absorbansinya diukur pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 450 nm.
Penetapan aktivitas antioksidan dari tanaman  menggunakan  metode  Cupric  ion reducing  antioxidant  capacity  (CUPRAC) karena pereaksi CUPRAC merupakan pereaksi  yang  selektif,  yang  memiliki  nilai potensial  reduksi  yang  rendah.  metode  ini memiliki kelebihan jika dibandingkan dengan  metode  pengukuran  antioksidan yang  lain  yaitu  reagen Cupric  ion  reducing antioxidant  capacity (CUPRAC)  cukup cepat untuk mengoksidasi tiol jenis antioksidan,  pereaksi Cupric  ion  reducing antioxidant capacity (CUPRAC) juga merupakanpereaksi  selektif  karena  potensi
redoksnya  lebih  rendah.  Reagen Cupric  ion reducing  antioxidant  capacity (CUPRAC) lebih  stabil  dan  dapat  diakses  dari  reagen kromogenik  lainnya  (mis.  ABTS,  DPPH).
Metode ini mudah dan berlaku dilaboratorium  konvensional  menggunakan standar  kolorimeters  tidak  memerlukan peralatan  canggih  dan  operator  yang memenuhi syarat. Metode ini dapat mengukur  hidrofilik  dan  lipofilik  dari antioksidan  misalnya,  β - karoten  dan  α - tokoferol (Apak et al, 2007). Secara  kualitatif  ekstrak  etanolik daun  yodium  (Jatropha  multifida L.) menunjukkan  adanya  aktivitas  antioksidan dengan adanya perubahan pada saat penambahan  1  mL  CuCl2  terjadi  perubahan warna  campuran  larutan  yang  awalnya berwarna  hijau  pekat  menjadi  hijau  toska, kemudian  ditambah  1  mL  Neocuproin  peda saat  penambahan  juga  terjadi  perubahan warna pada campuran larutan menjadi warna merah violet, selanjutnya ditambahkan 1 mL buffer  amonium  asetat  (NH4Ac)  pH  7  yang memberikan perubahan warna pada campuran  larutan  menjadi  warna  kuning coklat. Perubahan warna pada saat penambahan  pelarut  yang  dapat  dilihat secara  visual  ini  sesuai  dengan  teori  yang yang  menyatakan  secara  visual  perubahan warna  dapat  dilihat  dari  perubahan  warna kompleks  larutan  hal  ini  dikarenakan CUPRAC  merupakan  pereaksi  yang  selektif yang  memiliki  nilai  potensial  reduksi  yang rendah,  yaitu  sebesar  0,17  V  (Apak et  al, 2007).
Pengukuran  aktivitas  antioksidan, sampel ditimbang sebanyak 0,3 gr dilarutkan dalam  20  mL  etanol  96%  kemudian  dipipet 0.5  mL  larutan  sampel  tersebut  dan dimasukkan kedalam tabung reaksi. Selanjutnya,  dimasukkan  kedalam  tabung reaksi  1  mL  larutan  CuCl2  0.01  M, kemudian  ditambahkan  1  mL  Neocuproin (7,5  x  10-3)  M,  ditambahkan  1  mL  buffer amonium  asetat  (NH4Ac)  pH  7  dan kemudian  dicukupkan  volumenya  dengan penambahan  aquadest  sebanyak  0,6  mL sehingga  volume  total  dari  campuran  4,1 mL. Setelah itu larutan didiamkan selama 30 menit  dan  diukur  absorbansi  larutan  pada serapan  maksimum  450  nm  yang  dilakukan sebanyak tiga kali replikasi terhadap ekstrak etanolik  daun  yodium  (Jatropha  multifida
L.) dengan spektrofotometri UV-Vis. Setelah  didapatkan  absrobansi  dari  sampel kemudian  dilakukan  penghitungan  nilai Asam Askorbat Equivalen (AAE). Pengukuran  aktivitas  antioksidan  pada penelitian ini ditentukan berdasarkan penentuan  absorbansi  sampel  dengan  tiga kali  replikasi  ekstrak  etanolik  daun  yodium (Jatropha multifida L.).  Replikasi  pertama yaitu  0,753  nm,  replikasi  kedua  yaitu  0,724 nm  dan  replikasi  ketiga  yaitu  0,864  nm dengan  menggunakan  nilai  asam  askorbat equivalen  (AAE)  dan  menghitung  standar deviasi  dari  sampel,  hal  ini  dilakukan  untuk melihat  perbedaan  data.  Hasil  penelitian analisis  pengukuran  sampel  menunjukkan ekstrak  etanolik  daun  yodium  (Jatropha multifida L.)  memiliki  kapasitas antioksidan dengan  nilai  AAE  sebesar  0,7385  ±  0,0521 mg L-1 AA g-1 ekstrak.
Dari data nilai AAE yang diperoleh dari sampel yang dibandingkan dengan nilai standar deviasi  menunjukan perbedaan yang tidak terlalu besar.

## IV. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan
bahwa
hasil analisis
kualitatifdari  ekstrak  etanolik  daun  yodium (Jatropha multifida L.) menunjukkan adanya aktivitas  antioksidan  pada  sampel  dengan nilai  Asam  Askorbat  Equivalen  (AAE) ekstrak  etanolik  daun  yodium  (Jatropha multifida L.)  yaitu  0,7385  ±  0,0521  mg  L-1 AA g-1 ekstrak.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Apak,  R.  Kubilay,G.  Mustafa,  O.  and Saliha  E.C.,  2007. Mechanism of antioxidant  capacity  assays  and  the CUPRAC (cupric ion reducing
antioxidant  capacity)  assay. Molecules 2007.
2. Depkes RI. (2000). Inventaris Tanaman Obat  Indonesia  Jilid  1. Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Sosial RI, Badan  penelitian  dan pengembangan
Kesehatan. Jakarta.
3. Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat dan  Makanan.  1986. Sediaan  Galenik. Departemen Kesehatan RI : Jakarta.
4. Gandjar,  I.G.,  dan  Rohman.  2007. Kimia Analisis Farmasi. Pustaka Pelajar. Yogyakarta.
5. Khopkar,  S.M.  2008. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI-Press. Jakarta.
6. Mustafa,  O.  Mustafa,  B.  and  Kubilay, G.  2011. Evalution  of  Antioxidant Activity of Creataegus Species
Collected  From  Different  Regions  of Turkey. Vol 6. No 3.
7. Rininta, N. 2008. KLT AUTOGRAFICUPRAC  sebagai  teknik cepat pendeteksian senyawa antioksidan. Skripsi.  Institut  Pertanian Bogor. Bogor.
8. Subeki. 1998.
Pengaruh cara pemasakan terhadap kandungan antioksidan  Beberapa  macam  sayuran serta  daya  serap  dan  retensinya  pada tikus percobaan. Tesis. Program Pascasarjana,  Institut Pertanian  Bogor. Bogor.
9. Sudjadi.  2010. Kimia  Analisis  Farmasi. Pustaka Pelajar. Yogyakarta.
10. Winarsi,  H.  2007. Antioksidan  alami dan Radikal Bebas.Kanisius.Yogyakarta.
11. Widyastuti, N. 2010. Pengukuran aktivitas  antioksidan  dengan  metode CUPRAC,  DPPH,  dan  FRAP  serta kolerasinya dengan fenol dan flavonoid pada  enam  tanaman.  Institut  Pertanian Bogor. Bogor.