Jurnal : Jurnal Kesehatan Prima Volume
: 9, No.2, Agustus 2015, Halaman : 1478-1485
ISSN Print
: 1978 – 1334, ISSN Online : 2460 – 8661

## ___________________________________________________________________________
Fihiruddin, Nurul Inayati: Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Mataram, Jl. Prabu Rangkasari Dasan Cermen Sandubaya Mataram

## KONSENTRASI CARBOL FUCHSIN DAN WAKTU PENYIMPANAN SEDIAAN  HAPUSAN SPUTUM +2 HASIL PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN

## Fihiruddin, Nurul Inayati
Abstract :  Tuberculosis  (TB)  is  an  infectious  disease  caused  by  Mycobacterium  tuberculosis.  Laboratory diagnosis  of  TB  disease  can  be  confirmed  by  microscopic  examination  using  the  Ziehl  Neelsen  Methode  by carbol  fuchsin  dye  with  concentration  is  0.3%  which  it  is  the  standard  prosedure.  to  reduce  the  error  rate  of performed  sputum  smear  examination    must  be  carried  out  by  laboratories  established  in  a  network  of  TB laboratory services. This study aims to determine the concentration of carbol fuchsin and time effective storage of  performed  sputum  smear  that  show  2+  Ziehl  Neelsen  staining,  and  analyze  the  differences  of  each  carbol fuchsin  concentration  and  storage  time.  This  study  was  an  experimental  study.  The  result  showed  the  average number  of  acid-resistent  bacteria  with  carbol  fuchsin  concentration    0.3%  is  as  much  as  23,  the  concentration 1%  carbol  fuchsin  is  as  much  as  54    and  the  concentration    2%  carbol  fuchsin  is  as  much  as  2.  Based  on  the average  amount  of  storage  time,  Acid-resistent  bacteria  (BTA)  that  storage  under  1  month  (0  mounth)  was available as  many as 34, storage  for 1  month as  many as  28 and stored for 2  months as  many as 23,  whereas stored for 3 months as  many  as 18. Based on the survey results know that the concentration of carbol fuchsin that provide maximum results for Ziehl Neelson staining is concentrations 1% and the storage time of performed sputum  smear    2+  is  not  more  than  1  month.  Results  of  statistical  analysis  indicating  that  there  is  significant different at each concentration carbol fuchsin and storage time with of  p value  <0.05.
Kata Kunci: Concentration Carbol Fuchsin, Storage Time, Color Smear.

## LATAR BELAKANG
Tuberkulosis  (TB)  merupakan  penyakit menular  langsung  yang  disebabkan  oleh  bakteri berbentuk basil yang dikenal dengan nama Mycobacterium tuberculosis dan menyerang berbagai organ  atau  jaringan  tubuh. Penyakit  TB  menjadi masalah kesehatan masyarakat yang penting di dunia karena  menyebabkan  kematian  terbesar,  dengan angka kematian sebanyak 8.000 orang setiap hari dan 2-3  juta  orang  setiap  tahunnya,  sehingga  pada  tahun 1992  WHO  mencanangkan  tuberkulosis  sebagai Global  Emergency (Perhimpunan  Dokter  Paru Indonesia, 2006; Soedarto, 2009).
Penularan  penyakit  TB  paru  melalui perantaraan ludah atau dahak penderita TB paru yang
mengandung BTA. Bakteri Mycobacterium tuberculosis masuk  ke  paru  secara  inhalasi  udara melalui  sistem  pernafasan,  melalui  hidung  masuk  ke laring  kemuadian  ke  trahea  dan  masuk  ke  paru melalaui  percabangan  bronkiolus  hingga  ke  alveolu, sehingga  bakteri  menetap  secara  dorman  di  jaringan alveolus karena mengandung banyak oksigen sebagai bahan dalam perkembangbiakan bakteri Mycobacterium  tuberculosis dan  sebagai  akibatnya bila bakteri Mycobacterium tuberculosis menimbul di paru  maka  penderita  reflex  untuk  batuk  dan  bakteri terseprot  keluar  dari  mulut  akibat  batuk  dan  bersin. Hal  ini  yang  menyebabkan  penyebaran  TB  paru kepada  orang  lain  disekitar  penderita  tidak  dapat dihindarkan  (Depkes RI. 1995; Kusnindar, 1990).
WHO  melaporkan  bahwa  jumlah  kematian terbesar  akibat  TB  paru  berada    di  Asia  tenggara yaitu  sebanyak  625.000  orang  atau  angka  kematian sebesar  39  orang  per  100.000  penduduk  dan  pada tahun  2002  WHO  melaporkan  bahwa  terdapat  3,9 juta  kasus TB paru dengan BTA (Basil Tahan Asam) positif.    Pada  tahun  2006  WHO  menetapkan Indonesia  sebagai  negara  dengan  kasus  TB  terbesar nomor  tiga  di  dunia  setelah  India  dan  Cina,  dengan jumlah  kasus  baru  sekitar  539.000  jiwa  per  tahun, sedangkan  pada  tahun  2009  Indonesia  menduduki peringkat  kelima  di  dunia  setelah  India,  Cina,  South Afrika  dan  Nigeria,  dengan  jumlah  prevalensi 285/100.000 penduduk (Depkes R.I, 2002).
Di provinsi Nusa Tenggara Barat ditemukan sebanyak  3.000  kasus  kasus  TB  paru  dengan  BTA positif  setiap  tahunnya,  dengan  angka  kematian sebanyak  130  orang.  Sesuai  hasil  survei  prevalensi TB  paru  dengan  estimasi  insidensi  kasus  TB  paru BTA positif adalah 210 kasus per 100.000 penduduk (Dikes Provinsi NTB, 2010).
Diagnosis  penderita  yang  terindikasi  TB paru dapat dilakukan melalui pemeriksaan laboratorium dengan pemeriksaan mikroskopis sediaan sputum, dimana pemeriksaan sediaan sputum untuk TB paru harus dilaksanakan oleh laboratorium yang  terjalin  dalam  suatu  jejaring  pelayanan laboratorium  TB  paru.  Pemeriksaan  mikroskopis sediaan sputum penderita TB dapat dilakukan dengan metode  Ziehl  Neelsen  menggunakan  pewarna  carbol fuchsin  konsentrasi  0,3%,  dimana  konsentrasi tersebut  merupakan  standar  untuk  pemeriksaan mikroskopis  TB.  Kriteria    penilaian  sediaan berdasarkan  rekomendasi  WHO  dengan  menghitung
jumlah  BTA  yang  meliputi  :  negatif,  scanty,  1+,  2+ dan  3+  menggunakan  skala  IUATLD  (International Union  Againt  Tuberculosis  And  Lung  Disease), sedangkan  khusus  sediaan  2+  harus  diperiksa sebanyak  50  kali  dan  setiap  ditemukan  1-10  BTA (Depkes  RI,  2001;  Dirjen  Pelayanan  Medik  2004; IUATLD, 1998; Ricard, 2004).
Mycobacterium tuberculosis merupakan bakteri berbentuk batang lurus atau sedikit melengkung,  tidak  berspora  dan  tidak  berkapsul. Dinding  sel Mycobacterium  tuberculosis sangat kompleks,  terdiri  dari  lapisan  lemak  yang  cukup tinggi (60%) dan polisakarida seperti arabinogalaktan  dan  arabinomanan.  Struktur  dinding sel  yang  kompleks  tersebut  menyebabkan  bakteri Mycobacterium  tuberculosis bersifat  tahan  asam, yaitu  apabila  sekali  diwarnai  maka  zat  warna  tetap tahan  terhadap  upaya  penghilangan  zat  warna tersebut  dengan  larutan  asam-alkohol.  Intensitas warna  merah  yang  tetap  tahan  menjadi  penyebab utama error  rate yang  tinggi pada  laboratorium pemeriksa sediaan hapusan sputum ditingkat kecamatan  yaitu  laboratorium  puskesmas  dan  juga ditingkat  kabupaten  yaitu  laboratorium  rumah  sakit. Untuk uji ketepatan dan ketelitian mutu pemeriksaan, maka  sediaan  hapusan  sputum  tersebut  harus  di periksa  ulang  oleh  laboratorium  yang  ditunjuk pemerintah. Penurunan intensitas warna atau hilangnya  warna  merah  hasil  pewarnaan  Ziehl Neelsen  pada  sediaan  hapusan  sputum  dapat disebabkan  karena  lamanya  waktu  pengiriman sediaan  sputum  ke  laboratorium  yang  ditunjuk  oleh pemerintah  untuk  melakukan  pemeriksaan  ulang sehingga  sesuai  dengan  program  pemerintah  dalam
penanggulangan  TB  paru  yang  menetapkan  bahwa kesalahan  pemeriksaan  laboratorium  tidak  boleh lebih  dari  5%  (Aditama  T.Y  and  Luthni  E.  2002; Depkes R.I, 2002; GERDUNAS TB, 1999).
Berdasarkan uraian tersebut, untuk mengurangi error rate yang tinggi pada laboratorium pemeriksa  sediaan  hapusan  sputum  baik  ditingkat Kecamatan maupun ditingkat Kabupaten, maka perlu dilakukan  penelitian  tentang    konsentrasi  carbol fuchsin  dan  waktu  penyimpanan  sediaan  sputum  2+ hasil  pewarnaan    Ziehl  Neelsen,  dimana  konsentasi yang  digunakan  adalah  0,3%,  1%  dan  2%,  sehingga didapatkan  formula    pewarna  Ziehl  Neelsen  yang tepat  untuk  mempermudah  interprestasi  mikroskopis BTA ()RNTCP, 1997). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  konsentrasi  carbol  fuchsin  dan  waktu penyimpanan  yang  efektif  pada  sediaan  hapusan sputum  2+  hasil  pewarnaan  Ziehl  Neelsen,  serta menganalisis  perbedaan  masing-masing  konsentrasi dan  waktu penyimpan, sehingga penelitiaan ini dapat bermanfaat  bagi  laboratorium  pemeriksa  TB  untuk mengurangi kesalahan-kesalahan petugas laboratorium  pada    pemeriksaan  sampel  sputum penderita TB.

## METODE
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  dilaboratorium,  yang  dilakukan  pada bulan  Januari  sampai  Juni  2010.  Pada  penelitian  ini zat  warna  carbol  fuchsin  yang  digunakan  pada pewarnaan  Ziehl  Nellsen  yang  digunakan  untuk mewarnai sediaan hapusan sputum 2+ konsentrasinya dibedakan  menjadi tiga konsentrasi  yaitu  konsentrasi 0,3%, konsentrasi 1% dan konsentrasi 2%, sedangkan
pembacaan hasil sediaan hapusan sputum 2+ tersebut dibedakan menjadi  sediaan hapusan sputum 2+ yang disimpan    selama  0  bulan,  1  bulan,  2  bulan  dan  3 bulan.
Sampel  dari  penelitian  ini  adalah  sputum penderita  TB  yang  menunjukkan  hasil  BTA  2+ berdasarkan  pemeriksaan  mikrokopis  di  Puskesmas Kediri  tahun  2010.  Pengambilan  sampel  sputum dilakukan pada pagi hari selama 2 hari dan  sewaktu. Dipilih  sputum  yang  mucopurulen.  Sampel  sputum yang  sudah  terkumpul  disimpan  pada  suhu  2-8ᵒC. Bahan  dan  alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah    pewarna  Ziehl  Neelsen  yang  terdiri  dari Carbol  Fuchsin,  asam  alkohol  3%,  methilene  blue 0,3%, obyek glass, ose, botol kaca transparan tempat pasir alkohol sebagai densifektan,  pot sputum, lampu spiritus dan  mikroskop cahaya.
Sampel  sputum  yang  sudah  diambil  dari penderita, kemudian dibuat sediaan dengan menggunakan  ose  dan  dikeringkan.  Sediaan  tersebut selanjutnya  ditetesi  dengan  carbol  fuchsin  dengan konsentrasi 0,3%, 1% dan 2%, kemudian dipanaskan diatas  nyala  api  spiritus  sampai  menguap  tetapi  zat warna  tidak  boleh  mendidih  atau  kering  dan didiamkan  selama  5  menit,  kemudian  dicuci  dengan air  kran.  Selanjutnya  sediaan  ditetesi  dengan  asam alkohol  sampai  warna  merah  hilang  dan  dibilas dengan  air  mengalir.  Selanjutnya  sediaan  ditetesi dengan  methylene  blue  0,3%  selama  15  detik, kemudian dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan.  Sediaan  hapusan  sputum  yang  sudah kering  dipemeriksa menggunakan mikroskop cahaya dengan  perbesaran  1000x  dan  ditambahkan  minyak imersi  tanpa  menyentuh  sediaan  untuk  mencegah
transfer  BTA  antar  sediaan.  Pembacaan  sediaan berdasarkan  Standart  Internasional    Unit  Against Tuberculosis  (IUAT),  dengan  cara  dilakukan pemeriksaan  BTA  bentuk  batang  dan  berwarna merah  sebanyak  100  lapang  pandang  mikroskop. Selanjutnya  sediaan  hapusan  sputum  yang  sudah diperiksa    disimpan  selama  1  bulan,  2  bulan  dan  3 bulan, dimana pada masing-masing waktu penyimpanan  sediaan  hapusan  sputum  2+  tersebut juga  diperiksa  secara  mikroskopis  untuk  melihat intensitas  warna BTA. Data  yang didapatkan selama penelitian  dianalisis  secara  statistik  menggunakan
Rancangan  Acak  Kelompok  dan  dilanjutkan  dengan uji beda rata-rata.

## HASIL PENELITIAN
Dari  hasil  pemeriksaan  sediaan  hapusan  sputum  2+ secara  mikroskopis  berdasarkan  masing-masing konsentrasi  carbol  fuchsin    yaitu  konsentrasi  0,3%, 1% dan 2% dan waktu penyimpanan sediaan hapusan sputum 2+, yang dikelompokkan menjadi penyimpanan selama 0 bulan, 1 bualn, 2 bulan dan 3 bulan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1.  Jumlah  BTA  Pada  Sediaan    Sputum  Berdasarkan  Konsentrasi  Carbol  Fuchsin  Dan  Lama Penyimpanan Sediaan Hapusan Sputum 2+.
Lama Penyimpanan (bulan) Sediaan Jumlah BTA yang didapat Pada konsentrasi carbol fuchsin (%) 0,3 1 2 0 1 40 73 8 2 35 67 3 3 33 63 2 4 34 53 3 Total 142 256 16 Rerata 35 64 4 1 1 32 64 2 2 27 50 1 3 26 39 2 4 26 66 1 Total 111 219 6 Rerata 28 55 2 1 18 66 0 2 2 20 59 0 3 17 46 0 4 15 38 0 Total 70 209 0 Rerata 18 52 0 1 10 39 0 3 2 8 48 0 3 9 40 0 4 9 49 0 Total 36 176 0 Rerata 9 44 0
Berdasarkan hasil pemeriksaan mikroskopis diketahui  bahwa  jumlah  rerata  BTA  berdasarkan konsentrasi carbol fuchsin yang digunakan pada saat pewarnaan  sediaan  hapusan  sputum  2+,  yaitu
konsentrasi  0,3%,  1%  dan  2%  dapat  dilihat  pada table 2.
Tabel  2.  Jumlah  Rerata  BTA  Pada  Sediaan Hapusan  Sputum  2+  Berdasarkan
Konsentrasi Zat Warna Carbol Fuchsin Konsentrasi carbol fuchsin (%) Jumlah  rerata BTA 0,3 23 1 54 2 2
Tabel  2  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  carbol fuchsin  yang  menunjukkan  jumlah  rerata  BTA tertinggi  yaitu konsentrasi 1  % dengan jumlah rerata
BTA  sebanyak  54,  sedangkan  jumlah  rendah  yaitu  2 BTA  yang  didapatkan  dari  hasil  pewranaaan menggunakan carbol fuchsin konsentrasi 2%.
Perbandingan  jumlah    rerata  BTA  pada masing-masing  konsentrasi  carbol  fuchsin  yang digunakan  pada  waktu  pewaranaan  sediaan  hapusan sputum 2+ ,  yaitu  konsentrasi 0,3%, 1 dan 2% dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Grafik rerata jumlah BTA pada masing-masing konsentrasi carbol fuchsin
Untuk  mengetahui  kualitas  sediaan  hapusan  sputum, setelah dilakukan pemeriksaan mikroskopis, selanjutnya  sediaan  hapusan  sputum  2+  disimpan selama  1  bulan,  2  bulan    sampai  3  bulan,  sehingga didapatkan  jumlah  rerata  BTA    yang  berbeda-beda seperti terlihat pada  tabel 3
Tabel  3.  Jumlah  Rerata  BTA  Pada  Sediaan Hapusan  Sputum  2+  Berdasarkan
Waktu Penyimpanan Sediaan Hapusan Sputum Waktu penyimpanan (bulan) Jumlah rerata BTA 0 34 1 28 2 23 3 18
Pada    tabel  3  menunjukan  bahwa  penyimpanan sediaan sputum 2+ yang dilakukan selama tiga bulan menunukkan  jumlah  BTA  yang  berbeda-beda, dimana  jumlah  BTA  tertinggi  didapatkan  pada sediaan  hapusan  sputum  yang  disimpan  selama  nol bulan  yaitu  34  BTA  dan  jumlah    BTA  terendah didapatkan  pada  sediaaan  hapusan  sputum  yang disimpan selama 3 bulan.
Penyimpanan  sediaan  hapusan  sputum selama  tiga  bulan    untuk  semua  konsentrasi  carbol fuchsin,  yaitu  konsentrasi  0,3%,  1%  dan  2% berpengaruh  terhadap  jumlah  BTA,  seperti  yang
0 10 20 30 40 50 60 70 80 Konsentrasi 1 % KonsentrasI 2 % Konsentrasi 0,3 % Terendah Tertinggi Rerata Jumlah BTA
terlihat  paga  gambar  2,  dimana  pada  penyimpaanan sediaan  hapusan  sputum  selama  0  bulan  didapatkan hasil BTA tertinggi yaitu  34 BTA, sedangkan jumlah BTA  terendah  yaitu  18  BTA  yang  didapatkan  dari
sediaan  hapusan  sputum  yang  disimpan  selama  3 bulan.  Penurunan  jumlah  BTA  pada  masing-masing waktu penyimpanan dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 2. Grafik Rerata Jumlah BTA Pada Masing-masing Waktu Penyimpanan Sediaan Hapusan Sputum 2+

## PEMBAHASAN
Berdasarkan  Tabel  1,  diketahui  bahwa jumlah  BTA  pada  sediaan  hapusan  sputum  2+  yang diwarnai  menggunakan  carbol  fuchsin  dengan konsentrasi  0,3%,  1%  dan  2%  menunjukkan  jumlah yang  berbeda-beda.  Perbedaan  jumlah  BTA  pada masing-masing konsentasi carbol fuchsin menunjukkan  bahwa  jumlah  rerata  BTA  tertinggi didapatkan dari hasil pewarnaan menggunakan carbol fuchsin  konsentrasi  1%,  yaitu  54  BTA,  sedangkan jumlah  rerata  BTA  terendah  didapatkan  dari  hasil pewarnaan  dengan  carbol  fuchsin  konsentrasi  2%, yaitu antara 2 BTA.
Adanya  perbedaan  rerata  jumlah  BTA  yang diwarnai dengan carbol fuchsin konsentrasi 0,3%, 1% dan 2% tersebut dapat disebabkan oleh
Mycobacterium  tuberculosis mempunyai  dinding  sel yang sangat kompleks dan mempunyai lapisan  lemak yang  cukup  tinggi  (60%),  sehingga  pada  waktu dilakukan pewarnaan dengan carbol fuchsin konsentrasi  0,3%, Mycobacterium  tuberculosis tidak menyerap carbol fuchsin dan hasil pengamatan secara mikroskopis,  jumlah  BTA  mengalami  penurunan. Pada  konsentrasi  carbol  fuchsin  1%,  jumlah Mycobacterium tuberculosis tidak mengalami penurunan karena Mycobacterium tuberculosis menyerap  carbol  fuchsin    dengan  baik  dan Mycobacterium  tuberculosis juga  bersifat  tahan asam,  yang  berarti  jika  sekali  diwarnai  maka  zat warna    tetap  tahan  terhadap  upaya  penghilangan  zat warna  tersebut  dengan  larutan  asam-alkohol    (Jawet, 1996; IUATLD, 1998).
0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 bulan 1 bulan 2 bulan 3 bulan Terendah Tertinggi
Perbedaan  jumlah  BTA  yang  terlihat  pada masing-masing konsentrasi carbol fuchsin menunjukkan  bahwa  konsentrasi    carbol  fuchsin yang  paling efektif  dapat menunjukkan jumlah BTA lebih  tinggi  adalah  konsentrasi  carbol  fuchsin  1%, sedangkan  yang  digunakan  secara  nasional  adalah konsentrasi carbol fuchsin 0,3%.
Pada  Tabel.  3  terlihat  perbedaan  rerata jumlah  BTA  pada  sediaan  hapusan  sputum  2+  yang disimpan  selama  0  bulan,  1  bulan,  2  bulan  dan  3 bulan,  dimana  semakin  lama  waktu  penyimpanan, maka jumlah BTA pada sediaan hapusan sputum juga semakin  berkurang.  Hal  ini  disebabkan  oleh penyimpanan  yang  lama  membuat  mutu  sediaan hapusan  sputum  menjadi  rusak  atau  zat  warna menjadi  luntur,  sehingga  pada  saat  pemeriksaan jumlah  BTA  pada  sediaan  hapusan  sputum  2+  yang ditemukan menjadi berkurang.
Penyimpanan  sediaan  hapusan  sputum  yang dilakukan  selama  tiga  bulan    dengan  konsentasi carbol  fuchsin  yang  berbeda-beda  menunjukkan bahwa  jumlah  BTA  tertinggi  terlihat  pada  awal penyimpanan  dan  semakin  berkurang  pada  akhir penyimpanan  yaitu  sampai    tiga  bulan.  Hal  ini menunjukan  bahwa  jumlah  BTA  tidak  mengalami penurunan  yang  drastis,  sehingga  dalam  kondisi- kondisi  tertentu    laboratorium    dapat  menyimpan sediaan hapusan sputum dalam beberapa bulan, tetapi tidak boleh lebih dari tiga bulan.
Berdasarkan  hasil  analisis  statistik  metode perancangan  percobaan  Rancangan  Acak  Kelompok diperoleh  nilai  F  hitung  untuk  wkatu  penyimpanan BTA = 6.04 > 4.76 untuk α = 5% dengan p = 0.03 < 0.05 yang berarti bahwa waktu penyimpanan sediaan
hapusan  sputum  berpengaruh nyata terhadap jumlah BTA.    Untuk  konsentrasi  carbol  fuchsin  diperoleh  F hitung  =  110.24  >  5.14  untuk  α  =  5%    dan  10.92 untuk  α  =  1%  .  Hal  ini  berarti  faktor  konsentrasi carbol  fuchsin  berpengaruh  sangat  nyata  terhadap intensitas  warna  BTA  yang    diketahui  melalui  julah BTA  yang  diukur  selama  penelitian.  Konsentrasi carbol  fuchsin  yang  paling  tinggi  didapatkan  BTA adalah  konsentasi  1%,  sedangkan  jumlah  BTA terendah didapatkan dari hasil pewarnaan menggunkan carbol fuchsin konsentrasi 2%. Perbedaan  tersebut  seharusnya  menjadi  bahan pertimbangan  bagi  pihak  laboratorium  pemeriksaan TB  paru  untuk  meningkatkan  konsentrasi  carbol fuchsin  yang  digunakan  untuk  pewarnaan  sediaan sputum  sehingga  tidak  terjadi  kesalahan-kesalahan pada pemeriksaan mikroskopis.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  yang  didapat  pada    penelitian  ini, maka dapat disimpulkan :
1. Konsentrasi  carbol  fuchsin  yang  memberikan hasil pewarnaan BTA maksimal adalah konsentrasi  1%,  sedangkan  waktu  penyimpanan sediaan  sputum  yang  baik  adalah  kurang  dari  1 bulan.
2. Hasil  analisis  statistik  untuk  konsentrasi  carbol fuchsin  0,3%  dibandinkan  dengan  konsentasi  1% berbeda  nyata  dengan  nilai  p  <  0.05,  sedangkan pada  waktu  penyimpanan  sediaan  hapusan sputum 2+ selama 0 bulan, 1 bulan, 2 bulan dan 3 bulan terdapat perbedaan yang nyata dengan nilai p < 0.05.

## Saran
1. Untuk  pemeriksaan  mikroskopis  sediaan  hapusan sputum metode Ziehl Neelsen sebaiknya
menggunakan  carbol  fuchsin  konsentrasi  1%  dan penyimpanan sediaan hapusan sputum  tidak lebih dari 3 bulan.
2. Perlu  dilakukan  penelitian  lanjut  pada  sediaan hapusan  sputum  1+,  3+  dan  4+  dengan  jumlah sampel sputum yang lebih banyak.
3. Bagi  petus  laboratorium  :  untuk  menemukan jumlah BTA yang seharusnya supaya memperhatikan  bahan  baku  pewarna  Ziehl-
Neelsen,  cara  pembuatan  dan  pewranaan  sediaan hapusan sputum dan cara pembacaa hasil.
4. Untuk  diagnosis  penyakit  TB  paru  perlu dilakukan  pemeriksaan  penunjang  lain  selain pemeriksaan mikroskopis sediaan hapusan sputum.

## DAFTAR PUSTAKA
Bobak,  LM,  Lowdermilk,  DL,  &  Jensen,  M.D Aditama  T.Y  and  Luthni  E.  2002.  Buku petunjuk  teknik  pemeriksaan  laboratorium tuberkulosis, edisi 2. Laboratoirum Mikrobiologi  RS  Persahabatan  dan  WHO Center for Tuberculosis. Jakarta.
Depkes  RI.  1995.  Survei  Kesehatan  Rumah  Tangga (SKRT) .
Depkes RI. 2001. Buku Petunuj Praktis Bagi Petugas Dan  Pelaksana  Penanggulangan  TBC  Di
Unit Pelayanan Kesehatan. Jakarta. Depkes RI. 2002. Pedoman Nasional
Penanngulangan  Tuberkulosis ,  Cetakan  ke- 8. Jakarta.
Dinas  Kesehatan  Provinsi  NTB.  2010. Laporan Evaluasi  Kegiatan  TB  Paru  Provinsi  NTB . Bidang  P2  Dinas  Kesehatan  Provinsi  NTB. Mataram.
Direktorat Jendral Pelayanan Medik. 2004. Konsentrasi Reagen Ziehl Neelsen . Direktorat Jendral Pelayanan  Medik Depkes RI. Jakarta. Gerakan Terpadu Nasional Penanggulangan
Tuberculosis (GERDUNAS TB). 1999. Stop
TB Dengan DOTS. Jakarta.
International  Union  Againt  Tuberculosis  And  Lung
Disease,  1998. The  Public  Health  Service Nattional Tuberculosis Reference Laboratory  And  The  National  Laboratory Network , Minimum Requirements. Role and Operation    In  a  Low  Income  Country; IUATLD.
Jawet,  M  and    Adelberg,  1996. Mikrobiologi Kedokteran .  Penerbit  Buku  Kedokteran EGC. Jakarta.
Kusnindar,  1990.  Masalah  Penyakit  tuberkulosis  dan pemberantasannya  di  Indonesia.  Cermin Dunia Kedokteran, No. 63.
Perhimpunan Dokter Paru Indonesia, 2006. Tuberkulosis,  Pedoman  Diagnosis  Dan Penatalaksanaan Di Indonesia. Jakarta.
Revised  National  Tuberculosis  Control  Programe
(RNTCP).  1997.  Manual  For  Laboratoty Technicens, Central TB Division.
Directorated  General  Of  Health  Services Ministry  Of  Health  And  Family  Welfare Nirman, Bhavan New Delhi 110011.
Ricard  Lumb,  Gunawan  Yamin,  Ivan  Bastian,  2004.
Buku  Pedoman    Diagnosis  Tuberkulosis Secara  Laboratorium  Dengan  Pemeriksaan Mikroskopis  Dahak .  Australian  Government AUSAID.
Soedarto.  2009.  Penyakit  Menular  Di  Indonesia. Penerbit Sagung Seto. Jakarta.