Journal of Holistics and Health Sciences Vol. 4, No. 2 September 2022

## Perbandingan Kadar Flavonoid Total dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Labu Kuning dengan Variasi Pelarut
Anasthasia Pujiastuti 1 , Agitya Resti Erwiyani 2 , Istianatus Sunnah 3 1,2,3 Program Studi Farmasi, Universitas Ngudi Waluyo Korespondensi Email: thasia_anas@yahoo.com

## ABSTRAK
Labu kuning ( Cucurbita maxima D.) memiliki banyak senyawa bioaktif, terutama pada  daging  buahnya.  Senyawa  bioaktif  dalam  buah  labu  kuning  antara  lain flavonoid.  Ekstraksi  flavonoid  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  metode maserasi. Proses ekstraksi memerlukan pelarut yang dapat menyari senyawa aktif yang terdapat dalam suatu tanaman. Pelarut yang dapat digunakan untuk ekstraksi antara lain etanol 96%, etanol 70%, etil asetat dan n-heksan. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan kadar flavonoid total dan aktivitas antioksidan ekstrak buah labu kuning dari 4 jenis pelarut. Metode ekstraksi pada penelitian ini yaitu maserasi menggunajan  4  variasi  pelarut.    Uji  kualitatif  dilakukan  dengan  menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Uji kuantitatif untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstark labu kuning menggunakan metode ABTS. Hasil penelitian pada uji kualitatif menghasilkan retensi faktor (Rf) berkisar antara 0,3 – 0,82 yang berarti ekstrak buah labu kuning mengandung flavonoid. Hasil pengujian kuantitatif kadar flavonoid total dalam ekstrak buah labu kuning dengan pelarut etanol 96% (93,017 mgQE/g), etanol 70% (29,799 mgQE/g),  etil asetat (135,546 mgQE/g), n-hexana (125,833 mgQE/g). Aktivitas antioksidan dengan parameter nilai IC 50 pada ekstrak buah labu kuning dengan pelarut etanol 70% (67,85 ppm), etanol 96% (69,00 ppm), etil asetat (84,79 ppm) dan n-hexana (99,81 ppm) termasuk kategori kuat. Kadar flavonoid total ekstrak buah labu kuning tertinggi yaitu dengan pelarut etil asetat. Aktivitas  antioksidan  terbaik  ditunjukkan  oleh  ekstrak  buah  labu  kuning  dengan pelarut etanol 70% menghasilkan nilai IC 50 sebesar 67,85 ppm.
Kata Kunci: Labu Kuning, Variasi Pelarut, Flavonoid, Antioksidan

## ABSTRACT
Comparison  of  Total  Flavonoid  Levels  and  Antioxidant  Activity  of  Pumpkin Extract with Solvent Variations
Pumpkin (Cucurbita maxima D.) has many bioactive compounds, especially in the flesh.  Bioactive  compounds  in  pumpkin  fruit  include  flavonoids.  Extraction  of flavonoids  can  be  done  using  the  maceration  method.  The  extraction  process requires  a  solvent  that  can  extract  the  active  compounds  contained  in  a  plant. Solvents that can be used for extraction include 96% ethanol, 70% ethanol, ethyl acetate, and n-hexane. This study aimed to compare the total flavonoid content and antioxidant  activity  of  pumpkin  extract  from  4  types  of  solvents.  The  extraction method in this study is maceration using 4 variations of solvents. The qualitative test  was  carried  out  using  the  Thin  Layer  Chromatography  (TLC)  method. Quantitative test to determine the antioxidant activity of pumpkin extract using the ABTS method. The results of the qualitative test resulted in the retention factor (Rf) ranging from 0.3 to 0.82, which means that pumpkin extract contains flavonoids.
Vol. 4, No. 2 September 2022
Quantitative  test  results  of  total  flavonoid  content  in  pumpkin  extract  with  96% ethanol (93.017 mgQE/g), 70% ethanol (29.799 mgQE/g), ethyl acetate (135.546 mgQE/g), n-hexane (125.833 mgQE/g) . Antioxidant activity with parameter IC50 value on pumpkin extract with 70% ethanol (67.85 ppm), 96% ethanol (69.00 ppm), ethyl  acetate  (84.79  ppm),  and  n-hexane  (99.81  ppm)  as  solvent  included  in  the strong category. The highest total flavonoid content of pumpkin fruit extract was ethyl  acetate  solvent.  The  best  antioxidant  activity  was  shown  by  pumpkin  fruit extract with 70% ethanol solvent yielding an IC50 value of 67.85 ppm.
Keywords: Pumpkin, Variation Solvent, Flavonoid, Antioxidant
PENDAHULUAN Labu kuning ( Cucurbita maxima Duchesne.) diketahui mengandung  nutrisi  dan  senyawa bioaktif  seperti  fenolat,  vitamin (termasuk vitamin β-karoten, vitamin
A,  vitamin  B2,  vitamin  C,  dan vitamin E), asam amino, karbohidrat,
mineral (terutama kalium) dan flavonoid (Noelia et.al , 2011). Flavonoid  merupakan  salah  satu senyawa fenol terbesar dalam tanaman yang tersusun oleh 15 atom karbon sebagai inti dasarnya (Parwata,  2016).  Senyawa  flavonoid memiliki aktivitas antioksidan. Senyawa  flavonoid  dapat  ditemukan pada  tanaman  yang  menghasilkan pigmen  berwarna  kuning,  merah, oranye,  biru,  dan  ungu  dari  buah, bunga,  dan  daun  (Arifin  &  Ibrahim, 2018).
Berdasarkan  struktur  dasarnya aglikon  flavonoid  dibagi  dalam beberapa  golongan  yaitu  flavon, flavonol, isoflavon, katekin, flavanon,  leukoantosianin,  auron, kalkon dan dihidroflavonol. Banyaknya  golongan  pada  senyawa flavonoid  memungkinkan  adanya beragam sifat kepolaran dari flavonoid.  Senyawa  flavonoid  yang bersifat  polar  dapat  larut  dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, butanol,  aseton,  dimetilformamida dan  lain-lain  (Arifin  &  Ibrahim, 2018).  Senyawa  flavonoid  yang
bersifat  non  polar  atau  semi  polar dapat diekstraksi dengan pelarut non polar dan semi polar.
Berdasarkan  penelitian  yang telah  dilukan  sebelumnya,  diketahui bahwa  senyawa  flavonoid  dari  buah labu  kuning  ( Cucurbita  maxima D.) dapat diekstrak menggunakan metode maserasi  (Ayu,  2020).  Maserasi merupakan  metode  penyarian  yang paling  sederhana  dengan  merendam simplisia  atau  bahan  yang  akan  di ekstrak  dalam  pelarut  yang  sesuai, dilakukan  beberapa  kali  pengadukan dan  disimpan  pada  suhu  kamar. Penelitian  yang  dilakukan  oleh (Pratama, 2019) melakukan ekstraksi buah  labu  kuning  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96% tetapi tidak melakukan penetapan kadar flavonoid total serta aktivitas  antioksidan.  Pelarut  yang digunakan  untuk  proses  maserasi disesuaikan dengan tingkat kepolaran senyawa  yang  akan  di  ekstrak  dari suatu  simplisia.  Pelarut  yang  dapat digunakan  untuk  proses  maserasi antara  lain  etanol  (etil-alkohol),  etil asetat dan n-heksan.
Berdasarkan  latar  belakang tersebut  diketahui  bahwa  belum pernah  dilakukan  penelitian  tentang kadar  flavonoid  total  dan  aktivitas antioksidan  ekstrak  labu  kuning dengan berbagai variasi pelarut. Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian tentang perbandingan kadar flavonoid
total dan aktivitas antioksidan ekstrak
labu  kuning  ( Cucurbita  maxima D.) dengan menggunakan 4 jenis pelarut.
Penggunaan  pelarut  yang  berbeda dalam  proses  ekstraksi  diharapkan dapat  diketahui  pengaruh  pelarut terhadap  kadar  flavonoid  total  dan aktivitas antioksidan yang dihasilkan.

## METODE
1. Desain Penelitian Metode penelitian yang dilakukan adalah eksperimental laboratorium  dengan  rancangan Post Test  Control  Group  Design .  Tahap pertama  dilakukan  ekstraksi  buah labu  kuning  ( Cucurbita  maxima D.) untuk  menghasilkan  ekstrak  kental.
Tahap kedua adalah pengujian kadar flavonoid total dan aktivitas antioksidan  dalam  buah  labu  kuning ( Cucurbita maxima D.).
2. Alat dan Bahan Alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah loyang, blender, gelas  ukur, beaker  glass ,  neraca
analitis, kain flannel, rotary evaporator,  panci  stainless  steel, spektrofotometer,  pipet  tetes,  batang pengaduk, sendok tanduk, yellow tip , micropipette, oven, almari es, Moisture  Ballance, pH  meter,  pH universal.  Bahan  yang  digunakan yaitu  buah  labu  kuning,  etaol  p.a., etanol 96%, etanol 70%, etil asetat, n- heksan,  aquadest,  plat  silica  gel GF 254 ,  H 2 SO 4 pekat,  CH 3 COOH, methanol, kuersetin, vitamin C, 2,2’- azino-bis(3etilbenzotiazolin)-6- asamsulfonat (ABTS).
3. Prosedur kerja
a. Pembuatan ekstrak labu kuning
Buah labu kuning ( Cucurbita maxima D.)  diperoleh  dari daerah  Kopeng,  Kabupaten
Semarang. Buah labu kuning dikupas,  daging  buahnya
dicuci,  dipotong  kecil  dan tipis,  kemudian  dikeringkan dalam  oven  pada  suhu  40  - 50ºC.  Buah  labu  kuning  di blender menjadi serbuk simplisia.  Serbuk  simplisia diekstraksi menggunakan cara maserasi dengan 4 jenis pelarut  yaitu  etanol  70%, etanol 96%, etil asetat dan n- heksan. Proses maserasi pada tiap  pelarut  dilakukan  secara terpisah  dan  tiap  prosesnya dilakukan  selama  5x24  jam. Filtrat yang diperoleh dipekatkan  dengan rotary evaporator pada  suhu  50 ° C
dan dilanjutkan dengan waterbath hingga menghasilkan  ekstrak  kental buah labu kuning. b. Uji  bebas  etanol  ekstrak  labu kuning
Uji  bebas  etanol  dilakukan dengan cara ekstrak buah labu kuning ditambah dengan H 2 SO 4 pekat kemudian ditambah  dengan  CH 3 COOH lalu  dipanaskan.  Hasil  uji menunjukkan  bebas  etanol apabila tidak tercium bau ester (Kurniawati, 2015). c. Uji kualitatif Identifikasi senyawa flavonoid  dilakukan  dengan metode  Kromatografi  Lapis
Tipis  (KLT)  menggunakan fase diam silika gel GF 254 dan fase  gerak  butanol  :  asam asetat : air (4:1:5). Fase diam sebelum digunakan diaktivasi  terlebih  dahulu pada  suhu  105 ° C  selama  30
menit.  Ekstrak  kental  buah labu kuning sebelum ditotolkan, dilarutkan menggunakan  etanol  96% supaya  konsistensi  ekstrak
Vol. 4, No. 2 September 2022
menjadi  sedikit  cair,  setelah itu  ditotolkan  pada  plat  fase diam menggunakan pipa kapiler. Fase diam selanjutnya dimasukkan dalam chamber yang  berisi fase gerak yang sudah dijenuhkan. Fase diam selanjutnya dielusi kemudian dikeringkan dan diamati timbulnya  bercak  totolan sampel  pada  cahaya  tampak, UV  254  nm  dan  366  nm. Penampak bercak yang digunakan adalah uap ammonia dan FeCl 3 5%. d. Uji kuantitatif Uji kuantitatif kadar flavonoid total dilakukan dengan menggunakan pembanding kuersetin. Flavonoid total dinyatakan  sebagai  kuersetin equivalen per 100 gram bahan
(mg  QE/100  g)  (Sudarmanto dan  Suhartati,  2015).  Uji kuantitatif  dilakukan  dengan cara: i. Pembuatan  larutan  induk kuersetin Pembuatan  larutan  induk kuersetin dilakukan dengan cara  menimbang  secara seksama  lebih  kurang  10 mg  kuersetin  kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL dan dilarutkan  dengan  etanol p.a  sampai  tanda  batas sehingga dihasilkan konsentrasi 100 ppm. ii. Pembuatan  larutan  baku kuersetin Larutan  baku  kuersetin dibuat  dari  larutan  induk kuersetin  konsentrasi  100 ppm. Larutan induk kuersetin diambil 2,5 mL, 5 mL  dan  7,5  mL,  masing-
masing  ditambah  dengan etanol  p.a  hingga  10  mL. Seri  pengenceran  larutan baku  kuersetin  dihasilkan dengan kadar berturut-turut
25, 50, 75 ppm.
iii. Penentuan operating  time (OT)
Larutan baku kuersetin 100 ppm  diambil  sebanyak  1 mL ditambahkan dengan 1 mL  AlCl 3 2%  dan  8  mL asam  asetat  5%.  Larutan tersebut diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum teoritis 413 nm hingga diperoleh absorbansi  yang  stabil. Diamati  kurva  hubungan absorbansi,  waktu,  dan ditentukan operating time.
iv. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum (λ maks) Larutan baku kuersetin 100 ppm  diambil  sebanyak  1
mL  ditambahkan  dengan 1mL  AlCl 3 2%  dan  8  mL asam asetat 5%. Dilakukan pembacaan dengan spektrofotometri Uv-Vis pada  panjang  gelombang 370-450 nm. Hasil panjang gelombang maksimum tersebut  digunakan  untuk mengukur  serapan  dari sampel  ekstrak  buah  labu kuning.
v. Penentuan kurva baku
kuersetin Larutan  baku  kuersetin dihasilkan  dengan  kadar berturut-turut  25,  50,  75 dan  100  ppm  diambil sebanyak 1 mL tiap konsentrasi dan dimasukkan  dalam  tabung
Perbandingan Kadar Flavonoid … Anasthasia Pujiastuti, Agitya Resti Erwiyani, Istianatus Sunnah Journal of Holistics and Health Sciences Vol. 4, No. 2 September 2022
reaksi. Selanjutnya ditambahkan dengan 1 mL AlCl 3 2%  dan  8  mL  asam asetat  5%  dan  didiamkan selama 19 menit berdasarkan hasil operating  time .  Dilakukan pengukuran  absorbansinya pada  panjang  gelombang yang  telah  diperoleh  yaitu pada 413 nm. vi. Penentuan kadar flavonoid total Penetapan  kadar  flavonoid total dimulai dengan membuat larutan uji dengan  cara  menimbang secara seksama lebih kurang  0,8  g  ekstrak  buah labu  kuning,  dimasukkan ke  dalam  Erlenmeyer  dan ditambahkan 25 mL etanol 70%.  Campuran  tersebut selanjutnya  di  ekstraksi selama  30  menit  dengan pengaduk magnetik. Campuran yang telah diaduk  disaring  ke  dalam labu  ukur  25  mL  dan ditambahkan  etanol  70% melalui  penyaring  sampai tanda  batas.  Larutan  uji pada  tiap  ekstrak  dengan pelarut  etanol  96%,  etanol 70%,  etil  asetat  dan  N- Hexana dibuat dengan cara yang sama.
Prosedur  pengujian  kadar flavonoid total dengan mengambil  1  mL  larutan uji  tiap  ekstrak  buah  labu kuning  ke  dalam  tabung reaksi secara terpisah. Setiap larutan dalam tabung reaksi ditambahkan 1  mL  AlCl 3 2%  dan  8 mL asam  asetat  5%.  Setiap campuran  larutan  dalam
tabung  reaksi  dikocok  dan didiamkan selama 19 menit pada  suhu  ruang  sesuai operating time . Selanjutnya  setiap  larutan diukur  serapannya  pada panjang gelombang serapan maksimum. Larutan  blangko  dibuat dengan cara mencampurkan 1 mL AlCl 3 2%  dan  8  mL  asam asetat 5% hingga homogen. Pengukuran panjang gelombang blangko dilakukan dengan cara yang sama. Penentuan nilai flavonoid  total  dihitung berdasarkan rumus (Mukhriani et al ., 2019):
Flavonoid  total  =

## ………………..(1)
Keterangan : c = konsentrasi sampel v  =  volume  ekstrak yang digunakan
fp = factor pengenceran g = berat sampel e. Uji aktivitas antioksidan dengan metode ABTS
i. Pembuatan Larutan ABTS Sejumlah  36  mg  ABTS ditimbang, dilarutkan dalam  10  mL aquadest . Diinkubasi selama 12 jam. Sebanyak  5,4  mg  K 2 S 2 O 8 ditimbang  dan  dilarutkan dalam  10  mL aquadest . Diinkubasi  dalam  ruangan gelap suhu 22-24°C selama 12  jam  –  16  jam  sebelum digunakan.  Larutan  ABTS dan K 2 S 2 O 8 dicampur dalam  ruang  gelap  dan
Vol. 4, No. 2 September 2022
dicukupkan volumenya dengan methanol pa sampai 50 mL (Mistriyani, et al ., 2018). ii. Pengujian ABTS Larutan ABTS dipipet sebanyak 1 mL dan dicukupkan volumenya sampai  5  mL  dengan methanol  pa  dalam  labu ukur. Larutan ini kemudian diukur dengan spektrofotometri pada panjang  gelombang  700- 800  nm  (Serlahwaty  & Sevian,  2016).  Penentuan operating  time dilakukan dengan  cara  1  mL  larutan ABTS dicukupkan volumenya  sampai  5  mL dengan metanol pa. Larutan tersebut kemudian di  homogenkan  dengan divortex  1  menit  dan dibaca absorbansinya pada menit  ke-1  sampai  menit ke-30  menit  pada  panjang gelombang maksimal. iii. Pengujian vitamin C Sebanyak  2,5  mg  vitamin C dilarutkan dalam 25 mL methanol p.a sehingga diperoleh  konsentrasi  stok 100 ppm. Dilakukan pengenceran larutan dengan konsentrasi 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm dan 5 ppm.  Pembuatan  larutan tersebut pada labu ukur 10 mL dan diencerkan dengan metanol  p.a  hingga  tanda batas.  Diambil  3  mL disetiap konsentrasi larutan sampel (vitamin C) dimasukan  dalam  tabung reaksi  dan  ditambah  3  mL ABTS  dan  dicukupkan dengan  methanol  pa  pada
labu  ukur  5  mL.  Larutan dihomogenkan,  kemudian ditunggu operating  time .
Setiap  konsentrasi  larutan diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum (Sami dan Rahimah, 2016). iv. Aktivitas antioksidan ekstrak buah labu kuning Ekstrak  buah  labu  kuning ( Cucurbita  moschata D.) sebanyak 10 mg dilarutkan dalam metanol pro analisis ad 10 mL dalam labu ukur sehingga  diperoleh  larutan stok 1000 ppm dan kemudian dibuat seri kadar dengan konsentrasi 60 ppm,  70  ppm,  80  ppm,  90 ppm dan 100 ppm. Pembuatan larutan tersebut sebanyak  masing-masing konsentrasi, dimasukkan pada labu ukur 10 mL dan diencerkan dengan metanol p.a  hingga  tanda  batas. Larutan  uji  dengan  seri konsentrasi  60  ppm,  70 ppm, 80 ppm, 90 ppm dan
100  ppm  dimasukkan  ke dalam tabung reaksi masing-masing 1 mL, kemudian larutan uji ditambahkan  3  mL  larutan ABTS  lalu  dicukupkan volumenya  sampai  5  mL dengan metanol pa. Campuran didiamkan selama  waktu operating time yang  diperoleh  dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum (Sami dan Rahimah, 2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Buah  labu  kuning  yang  telah melalui  tahap  pembuatan  simplisia dan menjadi serbuk buah labu kuning ( Cucurbita  maxima  D. )  selanjutnya diekstraksi  menggunakan  metode maserasi  dengan  berbagai  pelarut
yaitu  etanol  96%,  etanol  70%,  etil asetat  dan  N-Hexana.  Hasil  ekstrak buah  labu  yang  diperoleh  memiliki konsistensi  kental,  berwarna  coklat kemerahan, bau khas manis buah labu kuning.  Hasil  ekstrak  buah  labu kuning dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Ekstrak Buah Labu Kuning Bobot Simplisia (g) Pelarut Bobot Ekstrak (g) Rendemen (%b/b) Karakteristik Konsistensi Warna Bau 250 Etanol 96% 91 36,4 Kental Coklat kehitaman Bau Khas 250 Etanol 70% 76 30,4 Kental Coklat kehitaman Bau Khas 250 Etil asetat 54 21,6 Kental Coklat kehitaman Bau Khas 250 N- Hexana 39 15,6 Kental Coklat kehitaman Bau Khas Berdasarkan tabel 1. diketahui bahwa  semua  ekstrak  buah  labu kuning yang dihasilkan nilai rendemennya  lebih  dari  10%.  Hasil rendemen  ekstrak  buah  labu  kuning berturut-turut dari yang paling tinggi yaitu  menggunakan  pelarut  etanol 96%,  etanol  70%,  etil  asestat  dan  n- hexana.
Ekstrak  buah  labu  kuning dengan pelarut etanol 96% dan etanol 70% selanjutnya dilakukan uji bebas etanol,  untuk  memastikan  bahwa ekstrak  yang  dihasilkan  tidak  lagi mengandung  pelarut. Berdasarkan hasil  uji  bebas  etanol  menggunakan H 2 SO 4 pekat dan CH 3 COOH
diketahui  bahwa ekstrak  telah  bebas
etanol. Pengujian bebas etanol menggunakan  K 2 Cr 2 O 7 dan  H 2 SO 4 pada  ekstrak  etanol  96%  dan  etanol 70% dinyakan kedua ekstrak menunjukkan  tidak  terbentuk  warna kuning  yang  berarti  ekstrak  tidak mengandung etanol. Uji kualitatif merupakan identifikasi  senyawa  flavonoid  pada ekstrak  buah  labu  kuning  yang dilakukan dengan metode Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT) menggunakan  fase  diam  silika  gel
GF 254 dan  fase  gerak  butanol  :  asam asetat : air (4:1:5). Hasil uji kualitatif dengan  KLT  dapat  dilihat  pada gambar 1.
Perbandingan Kadar Flavonoid … Anasthasia Pujiastuti, Agitya Resti Erwiyani,
Vol. 4, No. 2 September 2022
Perbandingan Kadar Flavonoid … Anasthasia Pujiastuti, Agitya Resti Erwiyani,
Journal of Holistics and Health Sciences Vol. 4, No. 2 September 2022 Gambar 1. Hasil Uji Kualitatif Ekstrak Buah Labu Kuning Berdasarkan  hasil  uji  KLT bercak yang muncul dilakukan perhitungan  nilai  faktor  retensi  (Rf). Nilai Rf hasil elusi ekstrak buah labu kuning dengan berbagai pelarut dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Nilai Rf Hasil KLT Ekstrak Buah Labu Kuning
Sampel Nomor Bercak Nilai Rf Warna Bercak UV 254 nm UV 366 nm Baku Kuersetin 1 0,9 Ungu muda Berfluoresensi biru muda Ekstrak  dangan  pelarut etanol 96% 1 0,3 Ungu muda Berfluoresensi biru muda 2 0,7 3 0,74 Ekstrak  dangan  pelarut etanol 70% 1 0,4 Ungu muda Berfluoresensi biru muda Ekstrak  dangan  pelarut etil asetat 1 0,34 Ungu muda Berfluoresensi biru muda 2 0,72 3 0,74
Vol. 4, No. 2 September 2022
Ekstrak  dangan  pelarut n-Hexana 1 0,32 Ungu muda Berfluoresensi biru muda 2 0,76 3 0,82 Berdasarkan tabel 2. hasil KLT
diketahui bahwa pada keempat ekstrak buah labu kuning menghasilkan nilai Rf  flavonoid  berkisar  antara  0,28-
0,83 sehingga dapat dipastikan bahwa ekstrak buah labu kuning mengandung flavonoid.  Bercak  yang dihasilkan  pada  ekstrak  dengan pelarut etanol 96%, etil asetat dan n- Hexana  yaitu  3  bercak,  sedangkan pada pelarut 70% hanya menghasilkan 1 bercak. Nilai Rf baku kuersetin  yaitu  0,9  dengan  warna bercak  yang  dihasilkan  yaitu  ungu muda  saat  dilihat  dibawah  sinar  UV 254 nm dan berfluoresensi biru muda pada  UV  366  nm.  Nilai  Rf  ekstrak buah  labu  kuning  yang  paling mendekati  dengan  nilai  Rf  baku kuersetin  yaitu  pada  ekstrak  dengan pelarut N-Hexana pada bercak ketiga yaitu sebesar 0,82.
Uji kuantitatif flavonoid total pada  ekstrak  buah  labu  kuning
dimulai  dengan  pengukuran  panjang gelombang maksimum kuersetin menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis  dimulai  dari  panjang  gelombang 350  –  450  nm.  Hasil  pengukuran panjang gelombang maksimum kuersetin diperoleh 413,50 nm. Hasil pengukuran  senyawa  flavonoid  pada kuersetin  stabil  pada  menit  ke  19 hingga  30.  Hal  ini  berarti  larutan sampel  dapat  dilakukan  pengujian pada menit ke 19 setelah pencampuran  karena  pada  waktu  itu proses reaksi telah mencapai kestabilan.  Hasil  absorbansi  kurva baku kuersetin
menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  dengan panjang  gelombang  413,50  nm dengan seri larutan 25, 50 dan 75 ppm dari larutan induk kuersetin 100 ppm. Grafik  kurva  baku  kuersetin  dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 2. Grafik Kurva Baku Kuersetin
Berdasarkan gambar 2 diketahui bahwa konsentrasi keempat larutan baku kuersetin telah memenuhi  persyaratan  pada  rentang 0,2-0,8. Hasil regresi linier diperoleh nilai r 2 = 0,9997, nilai r = 0,9998 dan persamaan  garis  y  =  0,0058x  – 0,0195. Hasil kadar flavonoid ekstrak
buah  labu  kuning  dengan  berbagai pelarut dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Kadar Flavonoid Ekstrak Buah Labu Kuning dengan Berbagai Pelarut Sampel Absorbansi Rata-rata Absorbansi ± SD Flavonoid Total (mgQE/g) Rata-rata Flavonoid Total (mgQE/g) ± SD Ekstrak dangan pelarut etanol 96% 0,519 0,520 ± 0,0046 92,845 93,017 ± 0,79* 0,525 93,879 0,516 92,327 Ekstrak dangan pelarut etanol 70% 0,152 0,153 ± 0,0032 29,569 29,799 ± 0,55* 0,157 30,431 0,151 29,397 Ekstrak dangan pelarut etil asetat 0,760 0,767 ± 0,0065 134,397 135,546 ± 1,12* 0,767 135,603 0,773 136,638 Ekstrak dangan pelarut N- Hexana 0,706 0,710 ± 0,0059 125,086 125,833 ± 1,01* 0,708 125,431 0,717 126,983 Keterangan : SD = Standar Deviasi
*  = nilai signifikansi < 0,05 (p < 0,05)
Berdasarkan  tabel  3  dapat diketahui  bahwa  rata-rata  flavonoid total tertinggi berturut-turut dihasilkan  oleh  ekstrak  dengan pelarut  etail  asetat,  n-hexana,  etanol
96%  dan  etanol  70%.  Data  kadar flavonoid  total  dari  semua  ekstrak kemudian dilakukan analisis statistik menggunakan SPSS 25. Uji normalitas  dan  homogenitas  kadar flavonoid  total  ekstrak  buah  labu kuning dengan variasi pelarut menghasilkan  nilai  signifikansi  >
0,05  yang  berarti  data  terdistribusi normal  dan  homogen sehingga dilanjutkan  dengan  uji  Anova.  Hasil uji  Anova  kadar  flavonoid  total ekstrak  buah  labu  kuning  diperoleh
nilai  signifikan  0,000  (p  <  0,05). Analisis  dilanjutkan  dengan  uji  Post Hoc  dan  dihasilkan  nilai  signifikan 0,000  (p  <  0,05).  Hal  ini  berarti terdapat  perbedaan  yang  signifikan antar  kadar  flavonoid  total  ekstrak buah  labu  kuning  dengan  4  jenis pelarut yang digunakan. Penentuan aktivitas antioksidan pada penelitian ini dilakukan  dengan  metode  ABTS dengan mekanisme kerja menstabilkan  senyawa  radikal  bebas dengan mendonorkan radikal proton. Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak  buah  labu  kuning  dengan berbagai pelarut menggunakan kontrol  positif  vitamin  C.  Hasil
penentuan aktivitas antioksidan ekstrak buah labu kuning dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel 4. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Buah Labu Kuning Sampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi IC 50 (ppm) Kategori Vitamin C 1 0,308 29,19
4,88 Sangat kuat 2 0,287 34,02 3 0,265 39,08 4 0,234 46,20 5 0,216 50,34 Ekstrak dangan pelarut etanol 96% 60 0,316 42,34
69,00 Kuat** 70 0,267 51,28 80 0,224 59,12 90 0,185 62,24 100 0,146 73,36 Ekstrak dangan pelarut etanol 70% 60 0,294 46,91
67,85 Kuat** 70 0,266 49,11 80 0,214 57,45 90 0,176 65,01 100 0,133 73,56 Ekstrak dangan pelarut etil asetat 60 0,216 34,55
84,79 Kuat** 70 0,193 41,52 80 0,171 48,18 90 0,149 54,85 100 0,122 56,97 Ekstrak dangan pelarut n-Hexana 60 0,295 25,31 99,81 Kuat* 70 0,281 28,86 80 0,267 32,40 90 0,220 44,30 100 0,191 51,65
Keterangan : IC 50 = inhibitory concentration 50 *   = nilai signifikansi < 0,05 (p < 0,05) ** = nilai signifikansi > 0,05 (p > 0,05)
Berdasarkan tabel 4 dapat diketahui  bahwa  konsentrasi  sampel yang  semakin  tinggi  menghasilkan nilai  absorbansi  yang  semakin  kecil dan % inhibisi semakin besar. Kontrol positif vitamin C dengan konsentrasi yang jauh lebih kecil daripada ekstrak labu  kuning  menghasilkan  nilai inhibitory  concentration (IC 50 )  yang
lebih  kecil.  Nilai  IC 50 yang  semakin kecil  berarti  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  semakin  besar. Ekstrak  buah  labu  kuning  dengan pelarut  etanol  70%  menghasilkan nilai  IC 50 yang  paling  kecil  tetapi memiliki aktivitas antioksidan paling besar  dibandingkan  etanol  96%,  etil asetat  dan  N-Hexana.  Data  aktivitas
Vol. 4, No. 2 September 2022
antioksidan  dari  semua  ekstrak  buah labu kuning dilakukan analisis statistik  menggunakan  SPSS  25.  Uji normalitas dan homogenitas aktivitas antioksidan ekstrak buah labu kuning dengan  variasi  pelarut  menghasilkan nilai  signifikansi  >  0,05  yang  berarti data terdistribusi normal dan homogen sehingga dilanjutkan dengan  uji  Anova.  Hasil  uji  Anova aktivitas  antioksidan  ekstrak  buah labu kuning diperoleh nilai signifikan 0,017 (p < 0,05). Analisis dilanjutkan dengan uji Post Hoc untuk mengetahui perbedaan aktivitas antioksidan  ekstrak  antar  pelarut. Hasil  uji  Post  Hoc  diketahui  bahwa terdapat perbedaan aktivitas antioksidan  yang  signifikan  antar ekstrak  buah  labu  kuning  pelarut  n- hexana  dengan  etanol  96%  dengan nilai  signifikansi  0,007  (p  <  0,05) serta  dengan  pelarut  etanol  70%  p  = 0,006 (p < 0,05).

## Pembahasan
Pada  pembuatan  simplisia buah labu kuning ( Cucurbita maxima D.)  dilakukan  pengeringan  dengan cara  di  bawah  sinar  matahari  secara tidak  langsung  dengan  ditutup  kain berwarna  hitam  agar  kandungan senyawa  aktif  pada  buahnya  tidak rusak oleh sinar matahari. Pengeringan dilakukan agar simplisia awet,  dapat  digunakan  dalam  jangka waktu  yang  lama,  dan  tidak  terjadi kerusakan. Sampel yang telah dikeringkan dihaluskan sampai menjadi  serbuk  yang  halus.  Setelah itu dilanjutkan dengan proses pengilingan  dan  pengayakan.  Proses pengayakan dilakukan untuk menyeragamkan ukuran partikel sesuai  dengan  yang  diinginkan  yang mana ukuran partikel akan berhubungan dengan efek fisiologinya  (Desiari et  al. ,  2019).
Ukuran  partikel  serbuk  yang  dibuat menjadi lebih kecil akan mempermudah pelarut untuk berpenetrasi  mengikat  senyawa  aktif yang  terkandung  didalam  serbuk dengan  jumlah  yang  lebih  banyak. Ukuran partikel yang lebih kecil juga dapat  mempengaruhi  hasil  ekstraksi karena  laju  ekstraksi  juga  akan meningkat  apabila  ukuran  partikel semakin kecil yang akan mempengaruhi jumlah rendemen ekstrak yang diperoleh akan semakin banyak. Berdasarkan  tabel  1  diketahui bahwa  semua  ekstrak  buah  labu kuning yang dihasilkan nilai rendemennya lebih dari 10%.
Menurut  Handayani et  al .  (2016) rendemen  yang  dikatakan  baik  yaitu lebih  dari  10%  sehingga  dilihat  dari hasil  ekstraksi  buah  labu  kuning menandakan  ekstrak  yang  diperoleh sudah  optimal  dan  proses  ekstraksi telah  dilakukan  dengan  baik.  Hasil rendemen  dari  suatu  sampel  sangat diperlukan  karena  untuk  mengetahui banyaknya  ekstrak  yang  diperoleh selama proses ekstraksi. Hasil rendemen  ekstrak  buah  labu  kuning berturut-turut dari yang paling tinggi yaitu  menggunakan  pelarut  etanol 96%,  etanol  70%,  etil  asetat  dan  n- Hexana.  Hasil  rendemen  tersebut sesuai  dengan  penelitian  (Vifta  dan Advistasari,  2018)  yang  menyatakan bahwa  penggunaan  etanol  96% menghasilkan  kadar  total  flavonoid tertinggi.  Hasil  rendemen  ekstrak buah  labu  kuning  dipengaruhi  oleh tingkat kepolaran pelarut yang digunakan.  Senyawa  flavonoid  yang bersifat  polar  dapat  larut  dalam pelarut  polar.  Etil  asetat  memiliki sifat mudah terbakar dan mudah larut dalam air. Etil asetat dapat digunakan sebagai pelarut dalam proses ekstraksi  (Rowe, et  al. ,  2009).
Vol. 4, No. 2 September 2022
Konstanta  dielektrik  dari  etil  asetat yaitu 6,02 yang menunjukkan polaritasnya  lebih  rendah  daripada etanol, tetapi lebih tinggi dari pada n- heksana.  Konstanta  dielektrik  n- heksana  1,89  menunjukkan  tingkat kepolaran paling rendah yaitu bersifat non-polar.  Etanol  memiliki  nilai konstanta  dielektrik  sebesar  24,30, yang  berarti  memiliki  polaritas  lebih tinggi dibandingkan etil asetat dan n- heksana  (Sudarmadji, et  al .,  1989).
Polaritas  etanol  70%  lebih  tinggi dibandingkan etanol 96% dikarenakan  kandungan  H 2 O  pada etanol  70%  lebih  banyak.  Pelarut yang memiliki polaritas paling tinggi secara  berurutan  yaitu  etanol  70%, etanol 96%, etil asetat dan n-hexana.
Ekstrak  buah  labu  kuning dengan  pelarut  etanol  96%  dan  70% yang  dihasilkan  tidak  mengandung etanol  berdasarkan  hasil  pengujian bebas etanol. Hal tersebut dibuktikan dengan  tidak  terciumnya  bau  ester pada  ekstrak  yang  dihasilkan  dan tidak terbentuk warna kuning sehingga  dapat  dipastikan  bahwa ekstrak  buah  labu  kuning  yang dihasilkan tidak mengandung  etanol. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Ikhsanudin  and  Mardhiyah,  (2017) yang menyatakan bahwa jika larutan uji  tidak  mengandung  etanol  atau bebas  etanol  maka  akan  terbentuk warna  campuran  dari  larutan  ekstrak dan larutan kalium dikromat
(K 2 Cr 2 O 7 )  yang  ditambahkan  asam sulfat  (H 2 SO 4 ),  tetapi  jika  larutan mengandung  etanol  maka  akan terbentuk warna biru.
Uji kualitatif yaitu identifikasi senyawa  flavonoid  pada  ekstrak daging  buah  labu  kuning  dilakukan dengan  metode  Kromatografi  Lapis Tipis (KLT) menggunakan fase diam silika  gel  GF 254 dan  fase  gerak butanol  :  asam  asetat  :  air  (4:1:5).
Pemilihan fase gerak yang digunakan disesuaikan  dengan  sifat  kepolaran dari  flavonoid  yang  terdapat  pada ekstrak daging buah labu kuning yaitu bersifat  polar  hal  ini  diketahui  dari jumlah  rendemen  yang  dihasilkan paling banyak dengan pelarut etanol, sehingga dengan polaritas yang sama dapat  memberikan  pemisahan  yang baik.  Fase  diam  sebelum  digunakan diaktivasi  terlebih  dahulu  pada  suhu 105 ° C  selama  30  menit  untuk menghilangkan kadar air yang terdapat  pada  silika  gel  GF 254 .  Nilai Rf  flavonoid  berkisar  antara  0,28- 0,83 yang menegaskan adanya kandungan flavonoid (Harborne, 1996). Berdasarkan hasil KLT diketahui bahwa pada keempat ekstrak buah labu kuning menghasilkan nilai Rf  flavonoid  berkisar  antara  0,28-
0,83 sehingga dapat dipastikan bahwa ekstrak buah labu kuning
mengandung flavonoid.  Bercak  yang dihasilkan  pada  ekstrak  dengan pelarut etanol 96%, etil asetat dan N-
Hexana  yaitu  3  bercak,  sedangkan pada pelarut 70% hanya
menghasilkan 1 bercak. Nilai Rf baku kuersetin  yaitu  0,9  dengan  warna bercak  yang  dihasilkan  yaitu  ungu muda  saat  dilihat  dibawah  sinar  UV 254 nm dan berfluoresensi biru muda pada  UV  366  nm.  Nilai  Rf  ekstrak daging buah labu kuning yang paling mendekati  dengan  nilai  Rf  baku kuersetin  yaitu  pada  ekstrak  dengan pelarut n-Hexana pada bercak ketiga yaitu sebesar 0,82. Nilai Rf menyatakan perbedaan jenis
flavonoid  yang  terkandung  dalam ekstrak  daging  buah  labu  kuning. Faktor  yang  dapat  mempengaruhi nilai  Rf  antara  lain  struktur  kimia senyawa  yang  dipisahkan,  polaritas fase  diam  dan  fase  gerak,  kejenuhan bejana,  suhu  dan  kesetimbangan (Rohman,  2009).  Hasil  KLT  pada
ekstrak  daging  buah  labu  kuning dengan semua pelarut setelah disemprot  ammonia  dan  FeCl 3 5% pada sinar UV 254 nm noda berwarna ungu  muda  dan  pada  pengamatan dibawah  sinar  UV  366  nm  noda berfluoresensi  biru  muda.  Menurut Rohman  (2009),  warna  bercak  yang termasuk  dalam  senyawa  flavonoid yaitu  apabila  diamati  di  bawah  sinar UV  366  nm  sebelum  disemprot dengan ammonia terdapat fluoresensi biru  muda  dan  setelah  disemprot dengan ammonia warna akan mengalami  perubahan  warna  sedikit atau tidak mengalami perubahan dan tetap  berfluoresensi  biru  muda. Berdasarkan  data  yang  diperoleh, dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak daging buah labu kuning ( Curcubitae moschata D.)  mengandung  senyawa flavonoid  yang  ditunjukkan  dengan nilai  Rf  0,8  dan  warna  bercak  di bawah sinar UV 366 nm berfluoresensi biru muda. Penentuan  kadar  flavonoid total  pada  ekstrak  buah  labu  kuning menggunakan pembanding kuersetin. Hasil  rata-rata  flavonoid  total  dari  4 jenis pelarut yang digunakan,
berturut-turut  yaitu  etil  asetat,  n- hexana, etanol 96% dan etanol 70%. Berdasarkan tabel 3 diketahui bahwa hasil  rata-rata  flavonoid  total  tidak sebanding  dengan  hasil  rendemen ekstrak buah labu kuning. Rendeman ekstrak  yang  semakin  tinggi  belum tentu  menghasilkan  flavonoid  total yang  semakin  besar.  Hal  ini  tidak sesuai dengan hasil penelitian
Hasnaeni et al. , 2019 yang menyatakan bahwa terdapat hubungan  antara  rendemen  dengan jumlah  senyawa  aktif  dari  suatu sampel  sehingga  apabila  jumlah rendemen  semakin  banyak  maka jumlah senyawa aktif yang
terkandung dalam sampel juga
semakin  banyak.  Hasil  tersebut dimungkinkan karena adanya perbedaan polaritas dari pelarut yang digunakan sehingga kemampuan mengekstrak  senyawa  aktif  dalam tanaman  juga  berbeda.  Berdasarkan hasil  analisis  statistik  diketahui bahwa  terdapat  perbedaan  yang signifikan antar kadar flavonoid total ekstrak  buah  labu  kuning  dengan  4 jenis pelarut yang digunakan.
Aktivitas  antioksidan  ekstrak buah  labu  kuning  ditentukan  secara kuantitatif menggunakan metode ABTS. Mekanisme kerja penghambatannya berdasarkan kemampuan ekstrak dalam mereduksi radikal  bebas  ABTS  yang  ditandai dengan menurunnya intensitas warna biru  larutan  ABTS  yang  telah mengandung ekstrak. Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan
parameter inhibitory  concentration (IC 50 ). Nilai IC 50 yang semakin kecil berarti memiliki aktivitas antioksidan yang semakin kuat. Berdasarkan hasil pengujian  pada  tabel  4  diketahui bahwa  aktivitas  antioksidan  paling tinggi  dihasilkan  oleh  control  positif vitamin  C  dengan  nilai  IC 50 sebesar 4,48  ppm  yang  termasuk  dalam kategori  sangat  kuat.  Vitamin  C menghasilkan  aktivitas  antioksidan yang paling kuat dikarenakan vitamin C  telah  terbukti  sebagai  antioksidan dan  telah  banyak  dimanfaatkan. Aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak buah  labu  kuning  secara  berurutan dari  yang  paling  kuat  yaitu  ekstrak dengan  pelarut  etanol  70%,  etanol 96%,  etil  asetat  dan  n-hexana. Aktivitas  antioksidan  pada  semua ekstrak  buah  labu  kuning  dengan berbagai  pelarut  termasuk  dalam kategori kuat. Hasil aktivitas antioksidan  tersebut  sesuai  dengan tingkat kepolaran pelarut yang digunakan. Ekstrak buah labu kuning
Perbandingan Kadar Flavonoid … Anasthasia Pujiastuti, Agitya Resti Erwiyani, Istianatus Sunnah Journal of Holistics and Health Sciences
Vol. 4, No. 2 September 2022
dengan tingkat polaritas pelarut yang semakin tinggi menghasilkan aktivitas  antioksidan  yang  semakin kuat.  Hal  ini  tidak  berbanding  lurus dengan  kadar  flavonoid  total  yang dihasilkan. Ekstrak buah labu kuning dengan pelarut etanol 70% menghasilkan rata-rata flavonoid total  yang  paling  rendah  tetapi memiliki  aktivitas  antioksidan  yang semakin  kuat.  Berdasarkan  hasil analisis  statistik  diketahui  bahwa terdapat  perbedaan  yang  signifikan antara  aktivitas  antioksidan  ekstrak pelarut  n-hexana  dengan  etanol  96% serta antara ekstrak pelarut n-hexana dengan etanol 70%. Aktivitas antioksidan  antar  ekstrak  pelarut etanol 96%, etanol 70% dan etil asetat terdapat perbedaan yang tidak bermakna.

## SIMPULAN (PENUTUP)
Berdasarkan  hasil  penelitian dapat  disimpulkan  bahwa  :  Kadar flavonoid total pada ekstrak buah labu kuning  dari  yang  tertinggi  yaitu dengan  pelarut  etil  asetat  (135,546 mgQE/g), n-hexana (125,833 mgQE/g), etanol 96% (93,017
mgQE/g)  dan  etanol  70%  (29,799 mgQE/g). Aktivitas antioksidan
berdasarkan  nilai  IC50  pada  ekstrak buah labu kuning dari  yang tertinggi yaitu  dengan  pelarut  etanol  70% (67,85  ppm),  etanol  96%  (69,00 ppm),  etil  asetat  (84,79  ppm)  dan  n- hexana (99,81 ppm).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih kepada Lembaga Penelitian  dan  Pengabdian  Kepada Masyarakat Universitas Ngudi Waluyo yang telah membiayai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin,  B.  &  Ibrahim,  S.,  (2018),
Struktur,  Bioaktivitas  dan Antioksidan Flavonoid, Jurnal  Zarah ,  Vol.  6  No.  1, halaman 21-29. Ayu, S.M., (2020), Pengaruh Formulasi Emulgel Buah Labu Kuning ( Cucurbita maxima D.) sebagai Pelembab Kulit, Skripsi ,  Universitas Ngudi Waluyo, Ungaran,
Jawa Tengah. Handayani,  H.,  Sriherfyna,  F.  H.,  & Yunianta.  (2016).  Ekstraksi Antioksidan Daun Sirsak Metode Ultrasonic Bath (Kajian Rasio Bahan : Pelarut dan Lama Ekstraksi). Jurnal Pangan  Dan  Agroindustri ,
4 (1), 262–272.
Harborne,  J,  P.  (1996). Metode Fitokimia  Penentuan  Cara Modern Menganalisis Tumbuhan (2nd  ed.),  Institut Teknologi Bandung, Bandung Hasnaeni,  Wisdawati,  &  Usman,  S. (2019).  Pengaruh  Metode Ekstraksi Terhadap Rendemen Dan Kadar Fenolik Ekstrak Tanaman Kayu Beta- Beta (Lunasia amara Blanco). Jurnal Farmasi Galenika , 5 (2), 175–
182.
https://doi.org/10.22487/j244 28744.2019.v5.i2.13149 Ikhsanudin,  Azis  and  Mardhiyah,  S. (2017)  ‘Formulasi  dan  Uji Anti  jerawat  Gel  Ekstrak Etanol  70%  Buah  Belimbing Wuluh (Averrhoa  Bilimbi Linn.) terhadap Bakteri Propionibacterium acnes ’, Medula , 5(1), pp. 416–426.
Kurniawati, E. (2015) ‘Daya Antibakteri  Ekstrak  Etanol
Perbandingan Kadar Flavonoid … Anasthasia Pujiastuti, Agitya Resti Erwiyani, Istianatus Sunnah Journal of Holistics and Health Sciences
Vol. 4, No. 2 September 2022
Tunas Bambu Apus Terhadap Bakteri Escherichia  coli dan
Staphylococcus aureus Secara In-vitro , Jurnal  Wiyata ,  2(2), pp. 193–199.
Mistriyani,  Riyanto,  S.,  &  Rohman.
(2018).  Antioxidant  activities
of Rambutan ( Nephelium  lappaceum L)
peel in vitro. Food Research ,
2 (1),
119–123. https://doi.org/10.26656/fr.20 17.2(1).150 Mukhriani, M., Rusdi, M., Arsul, M. I., Sugiarna, R., & Farhan, N. (2019). Kadar Fenolik  dan  Flavonoid  Total Ekstrak  Etanol  Daun  Anggur (Vitis vinifera L). Ad-Dawaa’ Journal of Pharmaceutical Sciences , 2 (2). Noelia,  Valenzuela,  Junior,  Morales,
Infante, J. A. (2011). Physicochemical, technological  properties,  and health  benefits  of  Cucurbita moschata Duchesne vs. Cehualca. A  Review.  Food Research International , 44 (9), 2587–2593 Parwata, I.M.O.A., (2016). Flavonoid, Diktat/Bahan Ajar Kimia  Organik ,  Universitas Udayana, Denpasar.
Pratama,  N.M.  (2019).  Optimasi
Formulasi  Dan  Uji  Iritasi Masker  Gel Peel-Off Nano Ekstrak Daging Labu Kuning ( Cucurbita  maxima  Durch ) . Skripsi .  Universitas  Ngudi Waluyo.
Rohman,  A.  (2009).  Kimia  Farmasi Analisis. In 1 . Pustaka Pelajar: Yogyakarta.
Rowe,  R.C.,  Sheskey,  P.J.,  Quinn, M.E.,(2009), Handbook  of
Pharmaceutical Excipients ,
sixth  edition,  Pharmaceutical Press and American Pharmacist Association, USA. Sami, F. J., & Rahimah, S. (2015). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Bunga Brokoli (Brassica oleracea L. var. Italica) dengan  Metode  DPPH  (2,2 diphenyl-1-picrylhydrazyl) dan  Metode  ABTS  (2,2 azinobis (3- etilbenzotiazolin)-6-asam sulfonat). Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 2 (2), 107–110. https://doi.org/10.33096/jffi.v 2i2.179 Serlahwaty,  D.,  &  Sevian,  A.  N. (2016). Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol 96% Kombinasi Buah Strawberry Dan Tomat Dengan Metode ABTS. Prosiding  Seminar  Nasional
Tumbuhan  Obat  Indonesia ,
50 , 20–21. Sudarmadji,  S.,  Haryono,  B.,  dan Suhardi, 1989, Prosedur Analisa untuk Bahan Makanan dan Pertanian, Liberty , Yogyakarta. Sudarmanto,  I.  dan  Suhartati,  T. (2015) ‘Aktivitas Antioksidan Senyawa Flavonoid Pada Kulit  Akar  Tanaman  Ara (Ficus  ) ’, Jurnal  Kesehatan , 6(2), pp. 137–141.
Vifta, Rissa Laila dan Advistasari.,Y.D (2018). Skrining Fitokimia, Karakterisasi,  dan  Penentuan Kadar Flavonoid Total Ekstrak  dan  Fraksi-Fraksi Buah  Parijoto  (  Medinilla speciosa  B  .). Prosiding Seminar  Nasional  Unimus ,
1 (1), 8–1