## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI SENYAWA HASIL EKSTRAKSI DAUN NYAMPLUNG (Calophyllum inophyllum Linn.)
(ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF EXTRACT NYAMPLUNG (Calophyllum inophyllum Linn.) LEAVES)
Mutiara Novianti * , Qurrotul Aini, Irma Fadhila Putri, Triana Kusumaningsih
Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret, Jl. Ir. Sutami No. 36A, Kentingan Surakarta
* email: mutiaranovianti@gmail.com
Received 08 June 2015, Accepted 15 October 2015, Published 01 September 2015

## ABSTRAK
Telah dilakukan skrining fitokimia dan uji aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol daun nyamplung  (Callophylum  inophyllum Linn.) dari  Indonesia terhadap  pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Ekstraksi dilakukan dengan ekstraksi soklet menggunakan pelarut etanol. Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode Optical Density pada λmax 600 nm. Hasil pemeriksaan skrining fitokimia ekstrak etanol daun nyamplung menunjukan adanya senyawa  golongan  flavonoid,  saponin,  tanin  dan  fenol  serta triterpenoid. Uji  aktivitas antibakteri  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  paling  besar  pada  waktu inkubasi 3 jam dengan persentase inhibisi 59,03 %.

## Kata Kunci: aktivitas antibakteri, daun nyamplung, senyawa metabolit sekunder

## ABSTRACT
Phytochemical  screening and antibacterial  activity from ethanol  extract  of nyamplung  (Callophylum inophyllum Linn.) leaves from  Indonesia against Escherichia coli has  been done. The extraction was done  by soklet extraction using  ethanol. Antibacterial activity test using the Optical Density method at λmax 600 nm. The result of phytochemical  screening from ethanol  extract showed that  there  were flavonoid compounds, saponins, tannins, phenols and triterpenoids. The result of antibacterial activity  test showed that the optimum activity  occurs at incubation  time of  3  hours with percentase inhibition persentase i.e. 59.03 %.

## Keywords: antibacterial activity, nyamplung leaves, secondary metabolite compound

## PENDAHULUAN
Negara  Indonesia  merupakan  salah  satu negara  tropis  yang  memiliki keanekaragaman  flora hayati  yang  dapat  diamanfaatkan untuk  pengobatan  tradisional. Salah satunya berasal dari genus Calophyllum. Genus Calophyllum merupakan tumbuhan
tropis  yang terdiri dari 180 - 200 spesies berbeda  yang terkenal dengan senyawa bioaktif (Su et  al.,  2008).  Salah satu  spesies  dari  genus Calophyllum adalah Calophyllum inophyllum Linn. yang lebih dikenal dengan nama nyamplung.
Penelitian  komponen  kimia  dari  tumbuhan  nyamplung  telah  banyak  dilakukan  di luar  negeri  namun  penelitian  mengenai  kandungan  kimia  tumbuhan nyamplung yang tumbuh  di  Indonesia  belum  banyak  dilaporkan  padahal  tumbuhan  ini  banyak  tumbuh di berbagai daerah di Indonesia, seperti: Sumatera, Jawa, Nusa Tenggara, Sulawesi, dan Bali (Heyne, 1987). Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan diluar negeri dari bagian daun, akar,  dan  kayu  bila  diisolasi  terdapat  senyawa  yang  mempunyai  aktivitas  biologi  seperti anti  HIV  (Patil et al.,  1993),  anti  kanker  (Yimdjo et  al.,  2004),  anti  malaria  (Hay et  al., 2004), anti bakteri (Cottiglia et al., 2004), dan anti tumor (Itoigawa et al., 2001).
Bakteri Escherichia  coli ialah  sebuah  bakteri  gram  negatif yang  bersifat  aerobik dan  anaerobik  fakultatif dan  sering  dijumpai  di  dalam  usus  bagian  bawah. Penyebaran Escherichia coli adalah melalui air yang tercemar tinja atau air seni orang  yang memiliki infeksi  pada  pencernaannya. Mikroorganisme  dalam  spesimen  tinja  diperkirakan  10 12 organisme per gram (Irianto, 2006). Infeksi yang timbul pada pencernaan akibat serangan Escherichia  coli pada  dinding  usus menyebabkan  terjadinya  diare akibat  penyerapan  air pada  dinding  usus  berkurang. Masyarakat  Indonesia  sudah  mengenal  dan  menggunakan tanaman  untuk  mengobati  berbagai  macam  infeksi  yang  disebabkan  oleh  mikroba.  Oleh sebab  itu, pada  penelitian  ini  akan  dilakukan isolasi  senyawa  bahan  alam  dari  daun nyamplung yang  kemudian  isolatnya  akan  diuji  aktivitas  antibakterinya  terhadap  bakteri patogen Escherichia coli.

## METODE PENELITIAN
Alat  yang digunakan sebagai  berikut: serangkaian  alat  soklet, rotary  evaporator vacuum, neraca  analit, hotplate, autoclave, incubator shaker, Spektrofotometer  UV-Vis, statif dan klem, jarum ose, spatula logam, botol vial, tabung reaksi, lemari pendingin dan peralatan gelas.
Bahan  yang  digunakan: daun nyamplung, kertas  saring,  karet  gelang, tisu, alumunium foil, kapas, plastik wrap, etanol p.a, Si-gel F 254 , heksana, etil asetat, kloroform, asam  asetat  anhidrat,  H 2 SO 4 pekat,  HCl 2  M,  reagen Dragendorf, reagen Mayer, reagen Wagner, NH 3 10 %,  metanol  50 %,  FeCl 3(aq) , NaCl (s) , Mg (s) , Luria  Bertani  Agar,  Miller
(Merck 37 g/L), Luria Bertani Broth, Miller (Merck 25 g/L), bakteri Eschericia coli ATCC 25922, akuades, amoxycilin.

## Ekstraksi Sampel Daun Nyamplung
Sebanyak  50 gram  serbuk  kering daun Callophyllum  inophyllum Linn. yang  telah dideterminasi  sebelumnya  di  Laboratorium  Biologi  FMIPA  UNS diisolasi  dengan  alat soklet menggunakan 250 mL etanol selama 20 siklus. Selanjutnya hasil ekstrak dievaporasi sampai  dihasilkan  ekstrak  pekat. Pada  ekstrak etanol dilakukan  KLT untuk  mengetahui jumlah senyawa yang terdapat dalam ekstrak etanol dilihat dari jumlah spot yang terbentuk menggunakan eluen heksana : etil asetat (6 : 4), analisis ini untuk memprediksikan jumlah senyawa yang terdapat dalam ekstrak etanol daun nyamplung.

## Skrining Fitokimia (Uji Tabung)
Pemeriksaan kualitatif penggolongan senyawa dilakukan dengan skrining fitokimia menggunakan uji  tabung  (Indrayani et  al.,  2006).  Pengujian  yang  dilakukan  meliputi pengujian golongan  steroid, triterpenoid, alkaloid, kumarin, flavonoid, tannin, saponin. a. Steroid dan Triterpenoid
Ekstrak daun nyamplung diuapkan sampai kering, kemudian residu yang dihasilkan dilarutkan  dalam  0,5 mL kloroform,  lalu  ditambah  dengan  0,5 mL asam  asetat  anhidrat. Selanjutnya  campuran  ini  ditetesi  dengan  1 - 2 mL H 2 SO 4 pekat  melalui  dinding  tabung tersebut.  Jika  hasil  yang  diperoleh  berupa  cincin  kecoklatan  atau  violet  pada  perbatasan dua pelarut menunjukkan adanya triterpenoid, sedangkan munculnya warna hijau kebiruan menunjukkan adanya steroid.
b. Alkaloid
Ekstrak daun nyamplung diuapkan sampai kering, kemudian residu ditambah 1,5 - 2 %  HCl  dan  larutan  dibagi  dalam  tiga  tabung.  Tabung  1 ditambah  0,5 mL larutan  asam encer  sebagai  pembanding,  tabung  2  ditambah  2 - 3  tetes  reagensia  Dragendorff,  dan tabung 3 ditambah 2 - 3 tetes reagensia Mayer. Jika tabung 2 terbentuk endapan jingga dan pada tabung 3 terbentuk endapan kekuning-kuningan menunjukkan adanya alkaloid. c. Kumarin
Ekstrak  daun  nyamplung  diuapkan  sampai  kering,  kemudian  dilarutkan  dalam  air panas, setelah dingin, larutan dibagi dalam 2 tabung reaksi, yaitu tabung 1 sebagai blanko,
dan tabung 2 ditambah  0,5 mL NH 3 10 %. Adanya pijaran  yang kuat di bawah sinar UV menunjukkan adanya kumarin dan turunannya.
d. Flavonoid
Ekstrak daun nyamplung diuapkan sampai kering, kemudian dilarutkan dalam 1 - 2 mL metanol  panas  50 %.  Setelah  itu  ditambahkan  logam  Mg  dan  4 - 5  tetes  HCl  pekat. Larutan berwarna merah atau jingga yang terbentuk menunjukkan adanya flavonoid. e. Tanin dan Fenol
Ekstrak  daun  nyamplung  dilarutkan  dalam  1 - 2 mL air  dan  ditambahkan  2  tetes larutan FeCl 3 , timbulnya warna biru kehitaman  menunjukkan adanya senyawa tanin galat dan jika warnanya hijau kehitaman menunjukkan adanya senyawa tanin katekol.
f. Saponin
Ekstrak  daun  nyamplung  dalam  tabung  reaksi  ditambah  air  (1:1)  sambil  dikocok selama 5 menit. Adanya busa  yang dapat bertahan selama 30 menit menunjukkan adanya senyawa saponin.

## Uji Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  OD λ max 600 nm (Sezonov et al., 2007 dan Matlock et al., 2011) terhadap bakteri Escherichia coli ATCC 25922, meliputi 3 tahap sebagai berikut:
a. Persiapan Media
Media pertumbuhan bakteri Escherichia coli yang digunakan adalah Luria Bertani (LB)  (Lahmer et  al.,  2012;  Matlock et  al.,  2011;  Sezonov et  al.,  2007  dan  Tang et  al., 2010).  Sterilisasi  alat  dan  bahan  dilakukan  pada  suhu  121 o C  selama  15  menit menggunakan  autoklaf. Hal  tersebut  bertujuan  untuk  membunuh  mikroorganisme  yang terdapat  pada  alat  dan  bahan  yang  dapat  mengganggu  pengujian. Pembuatan Media  LB Broth  2,5 % (b/v) dengan  melarutkan  1,25  gram  LB  Broth ke  dalam  50 mL akuades, kemudian disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit.
b. Persiapan Inokulum.
Sebanyak  1  ose  bakteri  uji  ditumbuhkan  dalam  LB  Broth,  kemudian  diinkubasi pada suhu 37 o C selama 18 - 24 jam dengan kecepatan 150 rpm (Lahmer et al., 2012 dan Tang et al., 2010).

## c. Uji Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  untuk  pengujian  aktivitas  antibakteri  adalah  metode OD λ max 600 nm (Sezonov et al., 2007 dan Matlock et al., 2011). Sebanyak 0,05 gram sampel ekstrak etanol dilarutkan ke dalam 40 mL akuades dan ditambahkan 1 gram LB Broth 2,5 %  (b/v),  kemudian  disterilkan  menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121 o C  selama  15 menit. Campuran yang terbentuk didinginkan dan ditambahkan 0,5 mL inokulum bakteri 1 % hasil inkubasi. Sampel uji diinkubasi pada 37 o C dengan kecepatan 150 rpm (Lahmer et al., 2012).
Pengujian  antibakteri  dilakukan  dengan  mengukur  adsorbansi  larutan sampel  jam ke-0, 3, 6, 9, 12, dan 24 menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada λmax 600 nm secara duplo (Sezonov et al., 2007 dan Matlock et al., 2011).

## PEMBAHASAN

## Ekstraksi Daun Callophyllum inophyllum Linn.
Hasil  ekstraksi soklet 50 gram daun  nyamplung dengan  200 mL etanol diperoleh ekstrak encer  berwarna  hijau  tua.  Ekstraksi  ini dilakukan untuk  mengambil komponen kimia dari  sampel daun  nyamplung. Ekstrak etanol  ini  selanjutnya  digunakan  untuk analisis berikutnya. Hasil ekstraksi daun nyamplung dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Ekstraksi Daun Nyamplung dengan Metode Sokletasi
Bahan Berat (gram) Volume Etanol p.a (mL) Warna Daun Nyamplung 50 200 Hijau tua

## Skrining Fitokimia (Uji Tabung)
Hasil  uji  fitokimia  terhadap  ekstrak daun  nyamplung menunjukkan  bahwa  dalam ekstrak  tersebut  terdapat  beberapa  senyawa  metabolit  sekunder yang  disajikan  pada Tabel 2. Pengamatan kandungan senyawa kimia  pada ekstrak daun nyamplung dilakukan berdasarkan perubahan hasil reaksi.  Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak daun nyamplung mengandung senyawa triterpenoid, flavonoid, saponin, dan tannin.
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia pada Ekstrak Etanol Daun Nyamplung Kandungan Kimia Metode Pengujian Hasil Keterangan Alkaloid + Meyer + Wagner + Dragendorf Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan - - - Saponin + Aquades Membentuk buih +
Flavonoid
+ Metanol panas 50 % + Mg (s) + HCl pekat Jingga + Tanin dan Fenol + FeCl 3 (aq) Hijau kehitaman + (tanin katekol) Steroid dan Triterpenoid + Kloroform + as. asetat anhidrat + H 2 SO 4 pekat Coklat kehitaman dan cincin kecoklatan + (triterpenoid) Kumarin + Aquades + NH 3 10 % Tidak muncul
pijaran kuat di lampu UV -
Keterangan : (+) = Ada, (-) = Tidak ada.
Uji  steroid  dan triterpenoid  yang  menggunakan  metode  Lieberman-buchard. Ekstrak dilarutkan dalam kloroform lalu ditambahkan pereaksi  Lieberman-buchard (asam asetat  anhidrat-H 2 SO 4 pekat)  menunjukkan  hasil  positif triterpenoid pada  ekstrak  kasar etanol  dengan  terbentuknya  cincin  kecoklatan.  Perbedaan  warna  larutan  yang  terbentuk antara  steroid  dan triterpenoid disebabkan  gugus yang  dimiliki  keduanya  berbeda  pada atom C yang keempat (Marliana and Saleh, 2011).
Dari  hasil  percobaan  uji  flavonoid  penambahan  HCl  pekat  dan  logam  Mg menghasilkan  warna  jingga,  hal  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  estrak  mengandung flavonoid.  Reaksi  yang  terjadi  antara  logam  Mg  dan  HCl  pekat  adalah  sebagai  berikut reduksi  dengan  Mg  dan  HCl  pekat  ini  menghasilkan  senyawa  kompleks  yang  berwarna merah  atau  jingga  pada  flavonol,  flavanon,  dan  flavanonol. Mekanisme  uji  flavonoid dengan logam Mg dan HCl pekat dapat dilihat pada Gambar 1.
O OH HO O OH O O HO CH 2 OR OH OH O OH HO OH O OH O OH HO O O O Mg O HO CH 2 OR OH OH HO + H 2 O HCl Serbuk Mg
Gambar 1. Mekanisme Reaksi Mg dengan HCl (Harborne, 1987).
Pada uji tannin dan fenol yang menggunakan larutan FeCl 3 1 % menunjukkan hasil positif pada ekstrak kasar dengan terbentuknya warna hijau kehitaman hingga hitam pekat. Fe dapat  mengikat  6  pasang  electron  bebas.  Ion  Fe 3+ dalam  pembentukan  senyawa kompleks  akan  terhibridisasi  membentuk  hibridisasi  d 2 sp 3 ,  sehingga  akan  terisi  oleh  6 pasang  electron  bebas  atom  O  pada  tanin.  Kestabilan  dapat  tercapai  jika  tolakan  antara ligan minimal pada 3 tanin (Dewi, 2004). Mekanisme reaksi uji tannin dengan FeCl 3 dapat dilihat pada Gambar 2.
O HO OH OH OH OH FeCl 3 O O OH O O OH Fe 3+
Gambar 2. Reaksi Penambahan FeCl 3 (Dewi, 2004).
Pada  uji  saponin  timbulnya  busa  pada uji  Forth  menunjukkan  adanya  glikosida yang  mempunyai  kemampuan  membentuk  buih  dalam  air  yang  terhidrolisis  menjadi glukosa dan senyawa lainnya (Marliana, 2005). Mekanisme reaksi hidrolisis saponin dalam air dapat dilhat pada Gambar 3.
CO O OH OH OH CH 2 OH H 2 O CO 2 H 1-Arabinopiriosil-3 -asetil oleanolat  Aglikon + O OH OH OH CH 2 OH Glukosa O
Gambar 3. Reaksi Hidrolisis Saponin dalam Air (Marliana, 2005).

## Uji Antibakteri
Metode  pengujian  yang  digunakan  adalah  metode  dilu si  OD  λ max 600  nm  dengan waktu inkubasi 0, 3, 6, 9, 12, dan 24 jam. Bakteri yang digunakan yaitu Escherichia coli. Uji  antibakteri  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kemmpuan  menghambat  pertumbuhan bakteri  dengan  beberapa  waktu  inkubasi.  Pengujian  juga  dilakukan  pada  kontrol  negatif yang  berupa  pelarut  dari  sampel  yaitu  akuades  dan  juga  kontrol  positif  yaitu amoxycilin. Jumlah  sel  bakteri  dapat  diukur  dengan  cara  mengetahui  kekeruhan  (turbiditas)  kultur. Semakin  keruh  suatu  kultur,  semakin  banyak  jumlah  selnya. Cahaya  yang  dipancarkan pada  spektrofotometer  akan  mengenai  sel  sehingga  sebagian  cahaya  akan  diserap  dan sebagian diteruskan. Besarnya cahaya dalam spektrofotometer yang diserap oleh sel dalam kuvet  dihitung  sebagai  nilai  absorbansi.  Dari  data  absorbansi dihitung persentase daya hambat (% inhibisi) terhadap bakteri pada masing-masing sampel. Hasil pengujian aktvitas antibakteri ekstrak etanol daun nyamplung terhadap bakteri Escherichia coli menggunakan metode OD λ max 600 nm dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Persentase Inhibisi Ekstrak Etanol Daun Nyamplung terhadap E.coli.
Hasil pengujian menunjukkan waktu inkubasi untuk daya hambat antibakteri yang paling  optimum  adalah  pada  waktu  3  jam.  Pada  waktu  inkubasi  optimum  ini  persentase daya  hambat  ekstrak  etanol  pada  bakteri Escherichia  coli sebesar  59,03 %. Persentase inhibisi  yang  semakin  menurun  dari  ekstrak  etanol  menunjukkan  masih  terdapat pertumbuhan  bakteri  yang  berarti  komponen  kimia  dalam  ekstrak  belum  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Hasil uji  menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  daun nyamplung hanya memiliki aktivitas bakteriostatik yaitu hanya menghambat pertumbuhan Escherichia coli namun tidak dapat membunuh (bakterisidal) bakteri Escherichia coli.
Kinerja senyawa antibakteri dipengaruhi oleh struktur dinding sel bakteri (Jawetz et al.,  2005). Pada penelitian  ini,  pelarut  yang  digunakan  untuk  isolasi  adalah  etanol  yang bersifat  polar  sehingga  senyawa-senyawa  yang  bersifat  polar  banyak  yang  ikut  tertarik dalam  ekstrak.  Hal  ini  menyebabkan  aktivitas  antibakteri  yang  diinginkan  tidak  optimal karena bakteri Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif. Bakteri gram negatif lebih banyak  mengandung  lipid,  sedikit  peptidoglikan,  membran  luar  berupa  bilayer  (berfungsi sebagai  pertahanan  selektif  senyawa-senyawa  yang  keluar  atau  masuk  sel  dan menyebabkan efek toksik). Membran luar terdiri dari fosfolipid yang tersusun atas lipid A, yang  bersifat  nonpolar.  Sedangkan  senyawa antibakteri  dalam daun  nyamplung seperti flavonoid  dan saponin merupakan  senyawa  yang  bersifat  polar  sehingga  lebih  sulit menembus  lapisan  lipid  yang  nonpolar  untuk  masuk  ke  dalam  sel.  Hal  ini  yang menyebabkan aktivitas penghambatan pada bakteri gram negatif sangat lemah.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  nyamplung  mengandung  senyawa metabolit  sekunder golongan flavonoid,  saponin, triterpenoid,  dan  tanin. Potensi  aktivitas  antibakteri ekstrak etanol  daun  nyamplung  yaitu  tidak  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri (bakteriostatik) karena berdasarkan grafik nilai persensate inhibisi yang diberikan semakin menurun bila dibandingkan dengan amoxycilin. Aktivitas antibakteri terbesar terjadi pada waktu inkubasi 3 jam dengan persentase inhibisi yaitu 59,03 %.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada DIKTI yang telah membiayai penelitian Hibah PKM-P 2014.

## DAFTAR PUSTAKA
Cottiglia,  F.,  Dhanopal, B., Sticher, O., Helann,  J., 2004, New  Chromanone  Acids  with Anti  Bacterial  Activity  from Calophyllum  brasiliense, Journal  Natural  Product, vol. 67, pp. 537-541.
Dewi,  R.  C.,  2004, Uji  Aktivitas  Antijamur  Ekstrak  Buah  Pare  Belut (Trichosanthes anguina L.), Skripsi, Fakultas MIPA UNS, Surakarta.
Harborne,  J.  B.,  1987, Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis

## Tumbuhan, Penerbit ITB, Bandung.
Hay,  A.E.,  Helesbeux, J.  J., Duval, O., Labaied, M., Grellier, P.,  2004, Antimalarial xanthones  from Calophyllum  caledonicum and Garcinia  vieillardii, Journal Phytochemistry, vol. 75, pp. 3077-3085.
Heyne,  K., 1987. Tumbuhan  berguna  Indonesia, Jilid  3, Badan  Litbang  Kehutanan, Jakarta, pp. 1375-1378.
Indrayani,  L., Soetjipto,  H., dan Sihasale  L., 2006, Skrining Fitokimia dan Uji Toksisitas Ektrak  Daun  Pecut  Kuda  (Stachytarpheta  jamaicensis L.  Vahl)  terhadap  Larva Udang Artemia salina Leach, Berkeley Penel Hayati, vol 12, pp. 57-61.
Irianto,  K., 2006, Mikrobiologi:  Menguak  Dunia  Mikroorganisme,  CV.  Yrama  Widya,
Bandung.
Itoigawa, M.C., Ito, C., Tan, H.T.W., Kuchide, M., Tokuda, H., Nishino, H., Furukawa, H., 2001, Cancer  cheopreventive  agents,  4-phenylcoumarins  from Calophyllum inophyllum, Journal Natural Product, vol. 169, pp. 15-19.
Jawetz, E. J., Melnick, L., Adelberg, E. A., 2005, Microbiologi Untuk Profesi Kesehatan, Terjemahan Huriati dan Hartanto, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Surakarta.
Lahmer,  R.A.,  Williams, A.P.,  Townsend,  S.,  Baker,  S., Jones, D.L., 2012, Antibacterial Action of Chitosan-Arginine against Escherichia coli O157 in Chicken Juice, Food Control, vol. 26, pp. 206-211.
Marliana,  S.  D.,  Suryanti,  V.,  Suryono,  2005,  Skrining  Fitokimia  dan  Analisis Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimis Buah Labu Siam (Sechium edule Jacq. Swartz.) dalam Ekstrak Etanol, Biofarmasi, vol. 3, no. 1, pp. 26-31.
Marliana,  E.,  Saleh,  C.,  2011,  Uji  Fitokimia  dan  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Kasar Etanol,  Fraksi heksana,  Etil  Asetat  dan  Metanol  dari  Buah  Labu  Air  (Lagenari siceraria (Moliana) Standl), Jurnal Kimia Mulawarman, vol. 8, no. 2, pp. 63-69.
Matlock,  B.C.,  Beringer,  R.W.,  Ash,  D.L.,  Page,  A.F.,  Allen,  M.W., Scientific,  T.F., Walmington.,  D.E.  USA., Scientific,  T.F., Madison,  W.I.  USA, 2011, Differences in  Bacterial  Optical  Density  Measurements  between  Spectrophotometers, Thermoscientific.
Patil, A. D., Freyer, A. J., Eggleston, D. S., Haltiwanger, R. C., Bean, M. F., Taylor, P. B., Caranfa,  M.  J.,  Breen,  A.  L.,  Bartus,  H.  R.,  Johnson,  R.  K.,  Hetzberg,  R.  P., Westley,  J.  W., 1993, The  Inophyllums,  Novel  Inhibitors  of  HIV-1  Reverse Transcriptase  Isolated  from  the  Malaysian  Tree, Calophyllum  inophyllum Linn., Journal of Medicinal Chemistry, vol. 36, no. 26, pp. 4131-4138.
Sezonov,  G.,  Petit,  D.J., D’Ari,  R. , 2007, Escherechia  coli Physiology  in  Luria-Bertani Broth, Journal of Bacteriology, vol. 189, no. 23, pp. 8746-8749.
Su,  X.H.,  Zhang,  M.L., Li,  L.G., Huo, C.H., Gu, Y.C.,  Shi,  Q.  W., 2008, Chemical Constituent of the Plants of the Genus Calophyllum, Chemistry & Biodiversity, vol. 5, pp. 2579-2608.
Tang, H., Zhang, P., Kieft, T.L., Ryan, S.J., Baker, S.M., Wiesmann, W.P., dan Rogelj, S., 2010, Antibacterial  Action  of  a  Novel  Functionalized  Chitosan-Arginine  Against Gram-Negative Bacteria, Acta Biomaterialia, vol. 6, pp. 2562-2571.
Yimdjo,  M.C.,  Azebaze,  A.G., Nkengfack, A.E., Meyer,  A.M., Bodo, B.,  Fomum,  Z.  T., 2004, Antimicrobial  and  Cytotoxic  Agents  from Calophyllum inophyllum, Phytochemistry, vol. 65, pp. 2789-2795.