## POTENSI  ANTIBAKTERI  EKSTRAK  ETANOL  DAUN  KECIPIR
( Psophocarpus  tetragonolobus (L.)  DC)  TERHADAP  PERTUMBUHAN Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus IN VITRO
Adudin H. Henaulu 1) , Martha Kaihena 2*)
1,2*, Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pattimura, Ambon
2* Corresponding Author e-mail : makaihena@gmail.com
Informasi.
Abstrak. Kata kunci . Antibakteri, Escherichia coli,
Psophocarpus tetragonolobus (L.) DC) , Staphylococcus aureus,
Kecipir ( Psophocarpus tetragonolobus (L.) DC)  merupakan tanaman  polong- polongan (fabaceae)  yang sudah lama di kenal masyarakat Indonesia. Buahnya dimanfaatkan  oleh  masyarakat  sebagai  sayuran  dan  pengobatan  seperti  obat bisul, daunnya secara empiris digunakan sebagai obat tradisional. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  dari  daun  kecipir  ( P.tetragonolobus (L.) DC))  sebagai  antibakteri  terhadap  pertumbuhan Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus. Penelitian  ini  menggunakan  daun  kecipir  segar  yang dikeringanginkan  dan  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  96%.  Uji  aktivitas  antibakteri  terhadap E.  coli dan S.  aureus menggunakan  metode  difusi  agar  dengan  pembandingceptazidine  30 μg.Penelitian  terdiri  dari  6  perlakuan  dan  3  kali  ulangan    yaituP0 (menggunakan  aquades  steril  sebagai  control  negatif),P1    (konsentrasi  EEDK 20%),  P2  (konsentrasi  EEDK  40%),  P3  (konsenterasi  EEDK  60%),K4 (konsenterasi    EEDK  80%),  P5  (konsentrasi    EEDK100%)  dan  P6 (menggunakan  ceptazidime  30  μg)  sebagai  kontrol  positif.  Hasil  penelitian menunjukkan  ekstrak  etanol  daun  kecipir  berpotensi  sebagai  antibakteri terhadap E. coli dan St. aureus , hal ini dibuktikan  dengan adanya zona  bening yang dihasilkan EEDK dengan konsentrasi 20;40;60,80 dan 100% untuk E.coli berturut turut dari P0 sampai P6 sebesar0,00; 3.83; 9.86; 12,17;15,63;17;17 dan 17.69.  sedangkan  besar  zona  hambat  untuk St.aureus berturut  turut  dari  P0 sampai  P6  sebesar  0,00;  0,00;  3,67;  4,55;  5,33;  6.17  dan  13.83dimana  EEDK lebih berpotensi menghambat E. coli dibandingkan St. aureus
Received: 7Mei2020 Accepted: 18 Mei 2020 © 2020 Jurusan Biologi FMIPA Unpatti, IAIFI Cabang Ambon

## A. PENDAHULUAN
Penyakit      pada      manusia      dapat      ditimbulkan      oleh  berbagai      macam  penyebab, salahsatunya      adalah    karena    infeksi      mikroorganisme.  Dewasa  ini,  penyakit  yang  disebabkan karena  infeksi  mikroorganisme  telah  menjadi  permasalahan  yang  sangat  serius  di  tengah masyarakat  luas.  Mikroorganisme  yang  dapat  menyebabkan  infeksi  pada  manusia  dapat  berupa bakteri,  jamur,  virus  dan  lain  sebagainya.  Bakteri  merupakan  jenis  mikroorganisme  penyebab infeksi  paling  umum  pada  manusia.  Infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri  mendominasi  potensi terjadinya infeksi berat, sepsis, syok septik dan disfungsi multiorgan (Nasroruddin, 2007). Bakteri yang  dapat  menyebabkan  infeksi  pada  manusia  diantaranya Escherichia  coli dan St.  aureus . Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif yangdapat mengakibatkan infeksi klinis apabila mencapai  jaringan  di  luar  intestinal  normal  atau  tempat  flora  normal  yang  kurang  umum. Escherichia coli merupakan penyebab paling banyak untuk infeksi saluran kencing terutama pada wanita  muda. Escherichia  coli juga  sering  menyebabkan  diare  yang  sering  terjadi  di  seluruh dunia (Jawettz et al., 2005), Sedangkan bakteri Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif  yang  dapat  menjadi  penyebab  infeksi  baik  pada  manusia  maupun  pada  hewan.
Staphyloccocus  aureus dapat  mengakibatkan  infeksi  kerusakan  pada  kulit  atau  luka  pada  organ tubuh  jika  bakteri  ini  mengalahkan  mekanisme  pertahanan  tubuh  (Anwar,  1994 dalam Melki et al ., 2011). Dalam   dunia   kedokteran   pengobatan terhadap penyakit infeksi digunakan berbagai macam antibiotik yang spesifik membunuh kuman tertentu. Antibiotik yang  banyak dipakai dan digunakan   untuk   pengobatan   penyakit   infeksi   yaitu:   penisilin,   ampisilin,     streptomisin, aureomisin   (klortetrasiklin), kloromisetin (kloramfenikol), teramisin (oksitetrasiklin), akromisin (tetrasiklin),   Eritromisin,   basitramisin,   polimiksin, Neomisin, Novobiosin, nistatin dan masih banyak lagi obat-obat antibiotik baru yang ditemukan (Prabu, 1996).  Pemakaian antibiotik secara berlebihan  dan  kurang  terarah  dapat  mengakibatkan  terjadinya  resistensi.  Timbulnya  resistensi pada  beberapa  antibiotik  tertentu  dapat  mengakibatkan  kegagalan  dalam  pengobatan  berbagai jenis  penyakit  infeksi,  sehingga  untuk  mengatasinya  diperlukan  pencarian  bahan  alami  sebagai alternatif pengobatan (Josodiwondo, 1996 dalam Poeloengan et al., 2007).
Saat  ini,  obat-obatan  yang  bersumber  dari  bahan    alam    kian    marak.  Masyarakat  kota mulai  beralih  dari  obat-obatan  kimia  ke  obat-obatan    herbal.    Salah    satu    alasan  beralihnya prefensi  tersebut  karena  efek  samping dari obat  herbal  tidak  berbahaya  seperti  obat-obatan kimia  (Wiryowidagdo  1995 dalam Sabir  2005,  Dewoto  2007).Pemanfaatan  tanaman  obat tradisional  untuk  mengobati  berbagai  penyakit  merupakan  warisan  turun-temurun  berdasarkan pengalaman  dan  kemudian  dikembangkan  melalui  pembuktian-pembuktian  ilmiah.  Penelitian mengenai  obat  tradisional  dibutuhkan  untuk  memberikan  bukti  ilmiah  mengenai  suatutanaman yang dapat berkhasiat sebagai obat dan juga dapat digunakan sebagai sumber senyawa penuntun untuk  sintesis  senyawa  obat  baru.  Pengembangan  obat  tradisional  dimaksudkan  agar  diperoleh obat tradisional yang bermutu tinggi, aman, memiliki khasiat nyata yang teruji secara ilmiah dan dapat  dimanfaatkan  secara  luas  baik  untuk  pengobatan  sendiri  ataupun  digunakan  dalam pelayanan kesehatan formal.
Salah  satu  tanaman  yang  dapat  digunakan  untuk  pengobatan  tradisional  adalah  tanaman kecipir.Penjelasan Djatmiko (1986) dalam Handayani (2013) bahwa bagian daun tanaman kecipir dapat  digunakan  sebagai  obat  penyakit  mata  dan  telinga  serta  obat  bisul.  Tanaman  kecipir  ini mengandung senyawa metabolit sekunder seperti saponin, flavonoida, dan tannin (Jhonny, 1993). Wijayakusuma  (2006)  menjelaskan  bahwa  senyawa  flavonoid,  saponin  dan  tanin  memiliki kemampuan  untuk  menghambat  pertumbuahan  bakteri.  Tujuan  dari  penelitian  ini  ingin mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun kecipir ( P.tetragonolobus (L.) DC) terhadap pertumbuhan E.coli dan St. aureus.

## B. METODE PENELITIAN
Penelitian  bersifat      eksperimen  laboratotrik  dengan    menggunakan  rancangan  acak lengkap  yang terdiri dari 6 perlakuan dan 3 kali ulangan.
Alat dan bahan yang digunakan :
Alat. Peralatan yang digunakan antara lain: seperangkat alat soxchlet, evaporator, blender, autoklaf,  oven,  LAF  ( Lamina  Air  Flow ),  inkubator,  timbangan  analitik,  gunting,  cawan  petri, tabung  reaksi,  rak  tabung,  labu  erlenmeyer,  gelas  ukur,  beaker  gelas,  mikropipet  dan  tip,  pipet volume,  pinset,  pipet  ukur,  jarum  ose  bulat  dan  lurus,  spatula,  silinder  logam,  lampu  bunsen, mistar,  hot  plate  stirrer  +  magnetic  stirrer,  alat  tulis  menulis  dan  Kamera.Semua    alat    yang digunakan  harus bersih dan alat alat tertentu harus disterilkan.
Bahan. Bahan  yamg  digunakan  antara  lain:  Daun  tanaman  kecipir,  etanol  70%,  Alkohol 70%, spirtus, kapas, cling wrap, aluminium foil, kertas kopi, kertas label, kertas saring, aquades,
media  Nutrien  Agar  (NA),  media  Nutrien  Broth  (NB),  biakan  murni E.  coli, biakan  murni St. aureus dan ceptazidime 30 μg.

## Prosedur Kerja
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kecipir
1. Daun kecipirsebanyak 1 kg dibersihkan dibawah  air mengalir dan dikeringanginkan .
2. Daun kecipir  kering, kemudian dijadikan serbuk menggunakan blender.
3. Sebanyak  400  gram  serbuk  daun  kecipir  dimaserasi  dengan  cara  dimasukkan  kedalam erlenmeyer  dan  di  tambahkan  pelarut  etanol  70%  sebanyak  1  liter  dan  dibiarkan  selama  2 hari.
4. Selanjutnya, ekstrak dipekatkan dengan rotary evaporator
5. Dari hasil pemekatan tersebut, maka diperoleh ekstrak etanol pekat daun kecipir.

## Penentuan Stok Variabel Konsentrasi
Stok konsentrasi ekstrak daun kecipir yang digunakan divariasikan mulai dari 100%, 80%, ,  60%    40%    20%    (b/v),  aquades  steril  sebagai  kontrol  negatif  dan  ceftazidine  30  μg  sebagai kontrol positif .

## Pembuatan Media
Medium  Nutrien  Agar  (NA). Timbang  10,8  gram  medium  NA  dan  masukan  kedalam labu  erlenmeyer.  Kemudian  larutkan  dengan  aquades  steril  sebanyak  540  ml  dan  dipanaskan sambil  diaduk  hingga  larut  diatas  hotplate stirrer.  Ukur  nilai  pH  dengan  menggunakan  indikator universal pada 7,0. Medium yang sudah dipanaskan dibiarkan dingin sebentar dan ditutup dengan alumunium  foil  kemudian  disterilkan  dalam  autoklaf  selama  15  menit,  pada  tekanan  1  atm  dan suhu  121 o C.  Tuangkan  masing-masing  20  ml  medium  yang  sudah  disterilkan  ke  dalam  2  cawan petri  untuk  dibuat  peremajaan  kultur  murni  bakteri.  Medium  yang  tersisah  sebanyak  500  ml digunakan dalam pengujian aktivitas antibakteri.
Media  Nutrien  Broth  (NB). Timbang  0,08  gram  medium  NB  masukan  kedalam Erlenmeyer,  kemudian  dilarutkan  dalam  aquades  10  ml,  dan  dipanaskan  sambil  diaduk  diatas hotplate stirrer. Ukur nilai pH dengan menggunakan indikator universal pada 7,0. Kemudian pipet masing-masing  5  ml  ke  dalam  2  tabung  reaksi  untuk  dibuat  suspensi  bakteri  uji  dari  masing- masing bakteri uji. Setelah itu medium disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit, pada tekanan 1 atm dan suhu 121 o C.

## Penyiapan Bakteri
Peremajaan  Kultur  Murni  Bakteri. Masing-masing  bakteri  uji  berupa  biakan  murni Escherchia  coli dan Staphylococcus  aureus ,  diambil  satuose  kemudian  diinokulasi  pada  media NA dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam.
Pembuatan Suspensi Bakteri Uji. Kedua bakteri uji yang sudah diremajakan di ambil 1 ose dan  disuspensikan dengan cara di masukkan ke dalam media NB sebanyak 10 ml kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Jumlah bakteri pada suspensi yang disesuaikan dengan tingkat kekeruhan pada larutan standar Mc Farland 0,5 adalah 10 6

## Tahapan Pengujian
Penentuan  diameter  zona  hambat  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  menggunakan teknik sumuran.
Langkah-langkahnya sebagai berikut:
1. Sebanyak  20  ml  media  NA  steril  yang  telah  didinginkan  hingga  suhu  50 o C,  kemudian dituangkan  ke  dalam  cawan  petri  steril  dan  dicampur  dengan  0,2  ml  suspensi  bakteri  dari media NB secara aseptis didalam Lamina Air Flow (LAF).
2. Kemudian campuran tersebut dihomogenkan dan dibiarkan hingga memadat
3. Gunakan silinder logam dengan diameter 6  mm dan tinggi 10  mm,  untuk  membuat sumuran pada media-media tersebut.
4. Pada  setiap  cawan  petri  yang  telah  berisi  media,  dibuat  3  sumuran  dengan  jarak  yang  sama untuk  tiga  kali  ulangan.  Tiap  sumuran  ditetesi  dengan  larutan  ekstrak  yang  telah  disiapkan konsentrasinya  sebanyak  0,1  ml.  Sumuran  yang  berfungsi  sebagai  kontrol  negatif    hanya ditetesi aquades dan untuk

## Tahapan Pengujian
Penentuan  diameter  hambat  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  dengan  menggunakan teknik sumuran. Langkah-langkahnya sebagai berikut:
1. Sebanyak  20  ml  media  NA  steril  yang  telah  didinginkan  hingga  suhu  50 o C,  kemudian dituangkan  ke  dalam  cawan  petri  steril  dan  dicampur  dengan  0,2  ml  suspensi  bakteri  dari media NB secara aseptis didalam Lamina Air Flow (LAF).
2. Kemudian campuran tersebut dihomogenkan dan dibiarkan hingga memadat
3. Gunakan silinder logam dengan diameter 6 mm dan tinggi 10 mm, untuk membuat sumuran pada media-media tersebut.
4. Pada  setiap  cawan  petri  yang  telah  berisi  media,  dibuat  3  sumuran  dengan  jarak  yang  sama untuk tiga kali ulangan.
5. Tiap  sumuran  ditetesi  dengan  larutan  ekstrak  yang  telah  disiapkan  konsentrasinya  sebanyak 0,1  ml.  Sumuran  yang  berfungsi  sebagai  kontrol  negatif    hanya  ditetesi  aquades  dan  untuk kontrol positif digunakan disk  antibiotik ceftazidim 30 μg. perlakuan ini dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan.
6. Kemudian kultur diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam dalam inkubator.
7. Ukur  diameter  zona  hambat  menggunakan  mistar  dengan  skala  milimeter  (mm).  Setelah diameter  zona  hambat  diukur  maka  dapat  ditentukan  sensitivitas  klinik  dari  bakteri berdasarkan klasifikasi respon hambat pertumbuhan bakteri.
8. Penentuan zona hambat menggunakan rumus:
Diameter zona hambat =
Keterangan:  D1: Diameter Vertikal, D2: Diameter Horizontal, DS: Diameter Sumur.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat  tersebut,  kemudian  ditentukan sensivitas  dari  bakteri  dengan  menggunakan  klasifikasi  respon  hambatan  pertumbuhan  bakteri. Menurut  Davis  dan  Stout  (1971) dikutip Kumesan et  al .,  (2013),  klasifikasi  daya  hambat pertumbuhan dibagi atas: sangat kuat (>20 mm), kuat (10-20 mm), sedang (5-10 mm) dan lemah (<5 mm).

## Analisa Data
Data  hasil  penelitian  ini  dianalisis  secara  deskriptif  kuantitatif.  Dan  ditampilkan  dalam bentuk tabel dan hsytogram

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Penelitian
Hasil  uji  aktivitasa  antibakteri  ekstrak  etanol  daun  kecipir  ( P.  tetragonolobus (L.)  DC) terhadap pertumbuhan E. coli dan St. aureus menggunakan metode difusi agar, dilakukan dengan cara  mengukur  diameter  zona  hambat  Pertumbuhan  dari  kedua  bakteri  tersebut  pada  medium Nutrien  Agar  (NA)  dengan  7  perlakuan  yaitu  P0  (kontrol  negatifn  P1  (Konsentrasi  20%),  P2
(Konsentrasi 40%), P3 (Konsentrasi 60%) , P4 (Konsentrasi 80%), P5(Konsentrasi 100%) dan P6 (Kontrol  Positif    menggunakan  ceftazidime  30  μg),  dengan  3  kali  i  pengulangan.  Hasil pengukuran  rata-rata  diameter  zona  hambat  kemudian  ditentukan  sensitivitasnya  berdasarkan klasifikasi  daya  hambat  pertumbuhan  bakteri  (Davis  dan  Stouth,  1971 dikutip Kumesan et  al., 2013).
Hasil  pengukuran  rata-rata  diameter  zona  hambat  ekstrak  etanol  daun  kecipir ( P.tetragonolobus (L.) DC) terhadap pertumbuhan E. coli dan S.aureus dapat dilihat pada table 1 dan 2 berikut ini.
Table 1.  Rata-rata   diameter   zona   hambat   ekstrak   etanol daun kecipir ( P.tetragonolobus (L.) DC) terhadap pertumbuhan E. coli Perlakuan Konsentrasi (%) Rata-rata Diameter zona hambat (mm) Respon hambat pertumbuhan P0 P1 P2 P3 P4 P5 P6 Kontrol - 20 40 60 80 100 Kontrol 0 3,83 9,86 12,17 15,63 17 17,69 Tidak ada Sedang Kuat Kuat Kuat Kuat
Kuat
Berdasarkan tabel 1 diatas, terlihat bahwa pemberian ekstrak etanol daun kecipir (EEDK) terhadap E.  coli dengan  konsentrasi  20%  memiliki  respon  hambat  pertumbuhan  sedang  dengan rata-rata  diameter  zona  hambat  3,83  mm  atau  kurang  dari  5  mm  berdasarkan  klasifikasi  daya hambat.  Konsentrasi  40%,  60%,    80%,  dan  100%  termasuk  dalam  respon  hambat  pertumbuhan kuat  dengan  rata-rata  diameter  zona  hambat    masing-masing  yaitu  9.86  mm,  12,17  mm,  15.63 mm, dan 17 mm Sedangkan untuk perlakuan kontrol positip yaitu dengan pemberian  ceftazidine 30 μgmenunjukkan rata-rata zona hambat pertumbuhan E. coli sebesar 17,69 mm yang termasuk dalamrespon kuat sementara pemberian aquades sebagai kontrol negatif tidak menunjukan adanya respon  hambat  pertumbuhan,  sehingga  dikategorikan  dengan  angka  0  .  Zona  hambat  yang ditunjukkan ekstrak etanol daun kecipir terhadap Pertumbuhan E. coli dapat dilihat pada gambar 1.

## P0                              P1               P2                    P3

## P4                        P5                       P6
Gambar 1.   Zona  hambat  EEDK  ( P.tetragonolobus  ( L.)  DC)  terhadap  pertumbuhan E.  coli :  pada  kobsentrasi (P0),.(P1), (P2),(P3),(P4),(P5), dan (P6) dalam 3 kali ulangan yaitu (U 1 ), (U 2 ), dan (U 3 ).
Tabel  2  berikut  ini      ditampilkan  hasil  pengukuran  zona  hambat  ekstrak  daun  Kecipir (EEDK) terhadap S. aureus yang menunjukkan potensi EEDK  dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus
Table 2.  Rata-rata diameter zona hambat ekstrak etanol daun kecipir ( P.tetragonolobus ( L.) DC) terhadap pertumbuhan Staphilococcusaureus No Konsentrasi (%) Rata-rata Diameter zona hambat (mm) Respon hambat pertumbuhan P0 P1 P2 P3 P4 P6 P7
Kontrol - 20
40 60 80 100 Kontrol 0 0 3.67 4.55 5.33 6.17 13.83 Tidak ada Tidak ada Lemah Lemah Lemah Lemah
Kuat
Data yang ditampilkan pada table 2 diatas menunjukkan bahwaEEDK dengan konsentrasi 20%  tidak  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan S.aureus karena  tidak  memperlihatkan  adanya zona  bening  disekitar  plong  yang  berisi  ekstrak,  hal  yang  sama  terlihat  pada  kontrol  negative. Sedangkan pada konsentrasi 40% , 60% , 80% dan 100%  semuanya menunjukan adanya potensi penghambatam  pertumbuhan St.  aureus, walaupun    menurut  kriteria  termasuk  lemah  Yaitu berturut  -turut  3,67  ,4,55,5.33  dan  6.17  mm  yang  berbeda  dengan  kontrol  positif    yang menggunakan antibiotic ceftazidime sebesar 13,83 mm dengan kategori zona hamabt kuat, seperti yang dapat dilihat pada gambar  2 berikut:

## P0                        P1               P2               P3

## P4                  P5                 P6
Gambar 2.  Zona  hambat  ekstrak  etanol  daun  kecipir  ( P.  tetragonolobus L.)  terhadap  Pertumbuhan S. aureus :(P0).  kontrol  negatif,  (P1).  konsentrasi  20%,  (P2).  konsentrasi  40%,  (P3)  konsentrasi  60%, (P4)  konsentrasi  80%,  (P5)    konsentrasi  100%,  (P6)  kontrol  positif,    (U 1 ).  ulangan  ke-1,  (U 2 ), ulangan ke-2,  (U 3 ), ulangan ke-3
Pengukuran rata-rata diameter zona hambat pertumbuhan E colli dan S.aureus yang diberi EEDK dengan konsentrasi  20%, , 40%, , 60%, , 80%,  dan 100% seperti terlihat  pada table 3 dan 4  diatas,  menunjukkan  bahwa  EEDK  memiliki  zona  hambat  yang  lebih  kuat  terhadap pertumbuhan Escherichia  coli dibandingkan S.  aureus .  Perbandingan  rata-rata  diameter  zona hambat tersebut dapat dilihat pada gambar 3 berikut :
0 20 P0 P1 P2 P3 P4 P5 P6 Do si s Perlakuan Perbandingn Zona Hambat EEDK terhadap E.coli dan S.aureus
Gambar 3.   Diagram perbandingan rata-rata diameter zona hambat pertumbuhan E. coli dan S. aureus yang diberi ekstrak etanol  daun    kecipir  ( P.tetragonolobus (L.) DC).  Keterangan : P0.=  Kontrol  negatip, P1.= Konsentrasi EEDK 20%,  P2. = Konsentrasi  EEDK 40%, P3.= Konsentrasi EEDK  60%, P4.= Konsentrasi EEDK 80%, P5 = Konsentrasi EEDK 100%, P6.      = Kontrol Positip

## Pembahasan
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  EEDK  ( P  tetragonolobus( L.)  DC)terhadap pertumbuhan E. dan St.aureus menggunakan  metode  difusi  agar  menunjukkan  bawha  ekstrak etanol  daun  kecipir  mampu  menghambat  pertumbuhan Escherchiacoli dengan  kategori  respon hambat pertumbuhan kuat yang terjadi pada  konsentrasi diatas 40%, sedangkan pada konsentrasi 20%  termasuk  kategori  respon  hambat  lemah . Respon  hambat  EEDKterhadap  pertumbuhan S.aureus termasuk  dalam  kategori  lemah  sampai  sedang,  karena  pada  konsentrasi  40%  hanya mampu  manghambat  sebesar  3.67mm.  Pada  konsentrasi  60%  baru  EEDK  mampu  menghambat sebesar 4.5mm dan dikategorikan dalam zona hambat lemah.Sedangkan konsentrasi ekstrak diatas 80%, di kategorikan sedang karena mampu menghambat sebesar 5.33mm. Davis dan Stout (1971) dalam Kumesan  (2013)  menyatakan  bahwa  apabila  zona  hambat  yang  terbentuk  pada  uji  difusi agar  berukuran  kurang  dari  5  mm,  maka  aktivitas  penghambatannya  dikategorikan    lemah. Apabila  zona  hambat  berukuran  5-10  mm  dikategorikan  sedang,  10-20  mm  dikategorikan  kuat dan 20 mm atau lebih dikategorikan sangat kuat.
Perbedaan konsentrasi ektrak etanol daun kecipir yang diujikan terhadap pertumbuhan E. coli dan St.aureus menunjukkan hasil pengukuran zona hambat yang berbeda pula. Secara umum hasil  yang  ditunjukkan  dalam  penelitian  ini  yaitu  ukuran  zona  hambat  yang  dihasilkan  semakin kecil  seiring  menurunya  konsentrasi  ekstrak.  Pada  pengenceran  ekstrak  etanol  daun  kecipir dengan  aquadest  dari  konsentrasi  100%  menjadi  100%,80%,    60%,  40%,  20%  dan    terjadi pengurangan zat aktif yang terlarut dalam masing-masing konsentrasi tersebut, sehingga pengaruh ekstrak  semakin  berkurang  dengan  semakin  kecilnya  konsentrasi  ekstrak  yang  diuji.  Hal  ini sehubungan  dengan  penjelasan  Fraizer  dan  Westhop  (1979) dalam Suprianto  (2008),  bawa menurunnya  zona  hambat  dikarenakan  efektivitas  senyawa  antimikroba  dari  konsentrasi  ekstrak yang  digunakan.  Peningkatan  konsentrasi  ekstrak  meyebabkan  semakin  besar  jumlah  senyawa antimikroba  yang  berdifusi  dalam  medium  agar,  sehingga  zona  penghambatan  akan  meningkat seiring  peningkatan  konsentrasi  ekstrak.  Akan  tetapi  pada  pertumbuhan E.  coli diameter  zona hambat  ekstrak  etanol  daun  kecipir  mengalami  penurunan  pada  konsentrasi  ekstrak  100%  jika dibandingkan dengan konsentrasi  80%. Hal ini dikarenakan konsentrasi ekstrak  80% merupakan konsentrasi  optimum  EEDK  dalam  menghambat  pertumbuhan Escherichia  coli. Konsentrasi efektif suatu bahan tidak selalu  merupakan konsentrasi yang paling tinggi, karena bisa jadi pada konsentrasi tertentu yaitu bukan pada konsentrasi yang paling tinggi, ekstrak lebih efektif sebagai antibakteri.  Hal  tersebut  sehubungan  dengan  penjelasan  Irianto  (2007)  yang  mengemukakan bahwa  apabila  konsentrasi  senyawa  kimia  antibakteri  melewati  suatu  konsentrasi  tertentu  maka peningkatan daya disinfeksi akan berkurang.
Terbentuknya  zona  hambat  di  sekitar  sumuran  yang  ditetesi  EEDK  membuktikan  bahwa adanya  aktivitas  senyawa  antibakteri  dari  daun  kecipir  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan E.coli dan St.aureus . Senyawa antibakteri yang dimiliki merupakan hasil metabolit sekunder dari tanaman kecipir yang tersimpan pada organ tanaman tersebut seperti daun, batang, buah, biji dan lain-lain.  Menurut  Lakitan  (1993) dalam Hastari  (2012),  kandungan  metabolit  sekunder  suatu tanaman tergantung pada spesies dari tanaman tersebut dan kadarnya tergantung dari lingkungan tempat  tanaman  itu  hidup.  Tanaman  kecipir  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  seperti saponin, flavonoida dan tanin (Jhonny, 1993). Wijayakusuma (2006) menjelaskan bahwa senyawa saponin, flavonoida dan tanin memiliki kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri.
Saponin merupakan senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan tumbuhan dan diketahui mempunyai efek sebagai antimikroba (Suparjo, 2008). Saponin yang dihasilkan tumbuhan berupa
glukosida  yang  bekerja  sebagai  antibakteri  dengan  mengganggu  stabilitas  membran  sel  bakteri sehingga menyebabkan sel bakteri lisis. Jadi mekanisme kerja saponin termasuk dalam kelompok antibakteri  yang  menggangu  permeabilitas  membran  sel  bakteri  kemudian  mengakibatkan kerusakan  membran  sel  bakteri  dan  menyebabkan  keluarnya  berbagai  komponen  penting  dari dalam  sel  bakteri  yaitu,  protein,  asam  nukleat,  dan  nukleotida  (Ganiswara,  1995 dalam Nampasnea, 2014).
Flavonoid  umumnya  terdapat  dalam  tumbuhan  dan  berada  dalam  bentuk  aglikon  (tanpa gula  terikat)  maupun  terikat  pada  gula  sebagai  glikosida  (Harbone,  1987 dalam Leuhery,  2010). Adanya  gula  yang  terikat  pada  flavonoid,  menyebabkan  flavonoid  mudah  larut  dalam  pelarut polar  seperti  etanol,  methanol,  butanol,  dimetilformamida,  dimetilsulfoksida,  aseton,  dan  air. Flavonoid dalam tumbuhan berfungsi sebagai pengatur tubuh, pengatur fotosintesis serta memiliki aktivitas antibakteri dan antivirus (Robinson 1995). Flavonoid menyebabkan terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel bakteri, mikrosom, dan lisosom sebagai hasil interaksi antara flavonoid dengan  DNA  bakteri  (Gisvold,  1982 dalam Sabir,  2005).  Naim  (2004)  juga  menjelaskan  bawha flavonoid memiliki sifat lipofilik sehingga dimungkinkan akan merusak membran sel bakteri.
Senyawa  metabolit  sekunder  lain  dari  tanaman  kecipir  yang  merupakan  senyawa antimikroba  adalah  tanin.  Tanin  biasanya  berada  pada  bagian  spesifik  tumbuhan  seperti  daun, buah,  akar  dan  batang.  Tanin  merupakan  senyawa  polifenol  yang  memiliki  mekanisme  sama dengan  senyawa  fenolik  lainnya  dalam  menghambat  dan  membunuh  bakteri.  Kerusakan  dinding sel bakteri akibat mekanisme senyawa fenol disebabkan oleh gugus –OH yang dimiliki oleh fenol. Apabila terjadi ikatan hidrogen antara gugus –OH dalam senyawa fenol dengan dindig sel bakteri, maka  struktur  dinding  sel  bakteri  akan  mengalami  perubahan  sehingga  protein  struktural  pada dinding  sel  bakteri  dapat  terdenaturasi  (Montgomery,  1993 dalam Fariha  2010).      Hal  tersebut sehubungan  dengan  penjelasan  Harbone  (1987) dalam Rusyaid  (2012)  yang  menyatakan  bahwa tanin  memiliki  kemampuan  untuk  berikatan  dengan  protein  dan  mengendapkannya  dengan membentuk komplek protein  melaluiikatan hidrogen.  Selain  itu, Mekanisme kerja tanin sebagai antibakteri adalah menghambat enzim reverse transcriptase dan DNA topoisomerase sehingga sel bakteri  tidak  dapat  terbentuk  (Robinson,  1995).  Cowan  (1999) dalam Rijayanti  (2014)  juga menjelaskan  bahwa  Tanin  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  berhubungan  dengan  kemampuan untuk  menginaktifkan  adhesion  sel  mikroba,  menginaktifkan  enzim,  dan  menggangu  transport protein pada lapisan dalam sel. Selain  itu tanin juga  mempunyai daya antiseptik yaitu  mencegah kerusakan yang disebabkan bakteri atau jamur (Claus dan Tyler, 1965 dalam Rohmawati, 2008). Aktivitas  ekstrak  etanol  daun  kecipir  lebih  efektif  menghambat  pertumbuhan E.  coli dibanding St. aureus , hal tersebut berarti bahwa E. coli memiliki sensitivitas lebih tinggi terhadap ekstrak etanol daun kecipir  dibandingkan St. aureus . Perbedaan sensitivitas tersebut disebabkan karena  kemampuan  setiap  bakteri  dalam  melawan  aktivitas  antibakteri  berbeda-beda, tergantung ketebalan  dan  komposisi  dinding  selnya.Menurut  Radji  (2011)  hal  tersebut  dikarenakan  adanya perbedaan struktur dinding sel dari kedua jenis bakteri tersebut.
Escherichia  coli merupakan  golongn  bakteri  Gram  negatif.  Dinding  sel  bakteri  Gram negatif  terdiri  atas  satu  atau  lebih  lapisan  peptidoglikan  yang  tipis  dan  membran  di  bagian  luar lapisan  peptidoglikan,  sedangkan Staphylococcus  aureus merupakan  golongan  bakteri  Gram positif  yang dinding selnya terdiri atas beberapa  lapisan peptidoglikan  yang  membentuk struktur yang  tebal  dan  kaku  serta  mengandung  substansi  dinding  sel  yang  disebut  asam  teikoat  (Radji 2011).  Karena  hanya  mengandung  sedikit  lapisan  peptidoglikan  dan  tidak  mengandung  asam teikoat,  maka  dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  lebih  rentan  terhadap  perlakuan  fisik  seperti
pemberian  antibiotik  atau  bahan  antibakteri  lainnya  (Mpila et  al .,  2012).  Selain  itu,  tanaman kecipir  diduga  mengandung  senyawa  antibakteri  berupa  asam-asam  organik  yang  lebih  efektif dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram  negatif  seperti E.coli .  Hal  tersebut  sehubungan dengan  penjelasan  Davidson et  al .,  (2005)  yang  menyatakan  bahwa  senyawa  antibakteri  yang berupa asam-asam organik memiliki daya hambat yang lebih besar terhadap bakteri Gram negatif.
Berdasarkan pengukuran zona hambat yang terbentuk pada pertumbuhan Escherichia coli dan St.  aureus maka  dapat  diketahui  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  dari  konsentrasi ekstrak  etanol  daun  kecipir  yang  digunakan.  Konsentrasi  hambat  minimum  ekstrak  etanol  daun kecipir  terhadap  pertumbuhan Escherichia coli yaitu  20%  dengan  rata-rata  zona  hambat  sebesar 4,83  mm,  sedangkan  pada  pertumbuhan St.  aureus yaitu  pada  konsentrasi  30%  dengan  rata-rata zona hambat 2,83 mm. Perbedaan konsentrasi hambat minimum pada pertumbuhan kedua bakteri tersebut  menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  tersebut  pertumbuhan  bakteri  dapat  terhambat meskipun diameter zona hambat  yang dihasilkan kecil dan tergolong  lemah. Hal tersebut seperti dijelaskan  oleh  Ramadanti  (2008)  dalam  penelitiannya  bahwa  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM)  adalah  konsentrasi  terkecil  dimana  terdapat  perbedaan  bermakna  dalam  pertumbuhan bakteri  setelah  dibandingkan  dengan  kontrol  positif.  Konsentrasi  hambat  minimum  terhadap kedua bakteri tersebut yang berada pada konsentrasi yang  masih dikatakan rendah  menunjukkan keunggulan dari tanaman kecipir sebagai obat antibakteri tradisional yang bersifat alami.
Faktor lain dalam penelitian yang dapat berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri adalah pelarut  ekstrak.  Pelarut  ekstrak  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  etanol,  hal  tersebut dikarenakan  pelarut  tersebut  merupakan  pelarut  yang  mudah  didapat,  universal  dan  sering digunakan  dalam  melakukan  ekstraksi.  Etanol  merupakan  pelarut  yang  bersifat  polar  karena mudah  larut  dalam  air  dan  mempunyai  gugus  hidroksida  (OH),  sehingga  zat  aktif  lebih  mudah tersari dalam jumlah yang besar (Poelongan et al ., 2007).
Penelitian  ini  menggunakan  perlakuan  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif  sebagai pembanding  terhadap  respon  hambat  dari  EEDK.  Pada  perlakuan  kontrol  positif  digunakan ceptazidime  karena  merupakan  antibiotik  semisintetik  yang  bersifat  bakterisidal.  Ceptazidime adalah  golongan  ketiga  dari  sephalosporin  yang  memiliki  aktivitas  spektrum  antibakteri  paling luas  diantara  generasi-generasi  dari  sephalosporin  (Puspitasari  2011).  Mekanisme  kerja  dari antibiotik  ini  yaitu  dengan  menghambat  sintesis  dinding  sel  mikroba  dimana  yang  dihambat adalah  reaksi  transpeptidase  tahap  ketiga  dalam  rangkaian  reaksi  pembentukan  dinding  sel. Golongan sefalosporin umumnya aktif terhadap kuman Gram positif maupun Gram negatif, tetapi spektrum antimikroba masing-masing derivat bervariasi (Departemen Farmakologi dan Terapi FK UI,  2007).  Hal  tersebut  dibuktikan  dengan  hasil  penelitian  yang  menunjukan  respon  hambat pertumbuhan  kuat  pada  kedua  bakteri  uji.  Pada  pertumbuhan E  coli rata-rata  diameter  zona hambat yang ditunjukan ceptazidime adalah 17,6 mm, sedangkan rata-rata diameter zona hambat tertinggi  yang  ditunjukkan  ekstrak  etanol  daun  kecipir  adalah  17  mm  yaitu  pada  konsentrasi optimum  90%.  Berdasarkan  klasifikasi  daya  hambat  keduanya  tidak  memiliki  perbedaan  karena termasuk  dalam  kategori  respon  hambat  pertumbuhan  kuat.  Sementara  pada  pertumbuhan St. aureus, ceptazidine dan ekstrak etanol daun kecipir berbeda berdasarkan klasifikasi daya hambat. Hal tersebut ditunjukan dengan rata-rata diameter zona hambat dari ceptazidime adalah 11,83 mm yang  tergolong  respon  hambat  kuat,  sedangkan  rata-rata  diameter  zona  hambat  ekstrak  etanol daun  kecipir  tertinggi  adalah  7,5  mm  yaitu  pada  konsentrasi  100%  yang  menyatakan  respon hambat  sedang.  Sedangkan  perlakuan  kontrol  negatif  digunakan  aquades  karena  merupakan senyawa netral yang tidak berefek terhadap pertumbuhan bakteri. Hal tersebut dibuktikan dengan
tidak  adanya  respon  hambat  pertumbuhan E  coli dan S.  aureus yang  ditetesi  aquades.  Dengan demikian sehingga aquades dinyatakan aman sebagai pelarut pada pengencer konsentrasi ekstrak etanol daun kecipir.

## D. KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan. Ekstrak  etanol  daun  kecipir  ( Psopocarpus  tetragonolobus (L.)  DC) berpotensi  sebagai    antibakteri  terhadap  pertumbuhan Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus ,  dimana  Dosis  yang  efektif  berpotensi  menghambat  pertumbuhan E.  coli adalah  80%, dibandingkan bakteri gram Staphylococcus aureus yaitu 100%.
Saran. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol  daun  kecipir  terhadap  jenis  bakteri  pathogen  selain Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus, menguji  potensi  antibakteri  dari  buah  maupun  biji  kecipir  dan  pengujian  secara In  Vivo untuk lebih memperjelas Potensi antibakterinya.

## E. DAFTAR PUSTAKA
Davidson  P.M.,  J.N.  Sofos,  A.I.  Branen.  2005 . Antimicrobial  in  Food  third  edition.New  York. Taylor and Francis Group.
Departemen Farmakologi dan Terapi FK UI. 2007.  Farmakologi dan Terap. Gaya Baru. Jakarta: Fariha,  Y.  2010.  Pengaruh  Konsentrasi  Ekstrak  Daun  Tempuyung  ( Sancusarvensis L.)  terhadap Daya  Hambat  Pertumbuhan  Bakteri Shigelladysenteriae dan Escherichia coli Secara  In Vitro.  [Skripsi]  Jurusan  Biologi.  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam. Universitas Negeri Malang. Malang.
Handayani,  T.  2013.  Kecipir (Psophocarpus  Tetragonolobus L .), Potensi  Lokal  Yang Terpinggirkan.  Kelompok  Peneliti  Pemuliaan  Dan  Plasma  Nutfah,  Balai  Penelitian Tanaman Sayuran.  Lembang: Bandung Barat.
Hastari,  R.  2012.  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  pelepah  dan  Batang  tanaman  pisang  Ambon
( musa paradisiaca var.sapientum) terhadap staphylococcus aureus. Laporan karya Tulis Ilmiah. Fakultas kedokteran, universitas Diponegoro. Semarang.
Irianto, K. 2007. Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme. Bandung: Cv Yarama Medium. Jawetz, Melnick, Adelberg, 2005. Mikrobiologi Kedokteran. Salemba Medika. Jakarta.
Jhonny,  R.H.  (1993).  Inventaris  Tanaman  Obat  Indonesia.  Jilid  II.  Badan  Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan. Departemen Kesehatan RI. Jakarta.
Kumesan, Paulina, Yamlean, Supriati. 2013. Formulasi dan Uji Aktifitas Gel Antijerawat Ekstrak
Umbi Bakung ( Crinum asiaticum L.) terhadap Bakteri Stafhylococcus aureus Secara in Vitro. Jurrnal Program Studi FMIPA. Unsrat. Manado.
Leuhery,  E.A.  2010.  Daya  Hambat  Ekstrak  Etanol  Alga  Merah Kappaphycus  alvarezi Doty Terhadap Bakteri Escherichia Coli Dan Stafhylococcus Aureus.
Melki,  Wike  Ayu,  E.P.,  Dan  Kurniati,  2011.  Uji  Antibakteri  Ekstrak Gracilaria  Sp. (Rumput Laut) Terhadap Bakteri Escherichia Coli Dan Stafhylococcus Aureus.
Mpila, D.A., Fatimawali, dan Wiyono, W.I., 2012. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mayana ( Coleusatropurpureus [L] benth ) terhadap Staphylococcusaureus , Escherichiacoli dan Pseudomonasaeruginosa Secara  In-Vitro.  [Skripsi]  Program  Study Farmasi Fakultas MIPA Universitas Samratulagi Manado.
Naim, R. 2004. Senyawa Antimikroba dari Tanaman.
Bakteri Escherichia  coli In  Vitro.  Artikel  Karya  Tulis  Ilmiah.  Fakultas  Kedokteran  Universitas Diponegoro. Semarang.
Rijayanti, R.P. 2014. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mangga Bacang ( Mangifera Foetida L.) terhadap Staphylococcusaureus Secara In Vitro. [Naskah Publikasi] Program Study Pendidikan Dokter. Fakultas Kedokteran. Universitas Tanjungpura.
Robinson,  T.  1995.  Kandungan  Organic  Tumbuhan  Tingkat  Tinggi  (Terjemahan  Kosasih Padmawinata). Institut Teknologi Bandung.
Rohmawati,  N.  2008.  Efek  Penyembuhan  luka  Bakar  dalam  Sediaan  Gel  Ekstrak  Etanol  70%
Daun Lidah Buaya ( Aloe vera L.) pada Kulit Punggung Kelinci New Zealand. Penelitian mandiri Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran Jatinangor.
Rusyaid,  M.  2012.  Efek  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Rambutan  ( Nepheliumlappaceum L.) terhadap Streptococcusmutans dan Escherichiacoli .  [Skripsi]  jurusan  Biologi  Fakultas MIPA Unpatti. Ambon.
Sabir,  A.  2005.  Aktifitas  Antibakteri  Flavonoid  Propolis Trigona  Sp. Terhadap  Bakteri Streptococcus mutans (In Vitro) . Jurnal Penelitian Fakultas Kedokteran Gigi. Universitas Hassanudin. Makasar.
Suparjo.  2008.  Saponin  Peran  dan  Pengaruhnya  bagi  Ternak  dan  Manusia.  Fakultas  Peternakan. Universitas Negeri Jambi. Jambi.
Suprianto.  2008.  Potensi  Ekstrak  Sereh  Wangi  ( Cymbopongon  nardus L.)  sebagai  Anti Streptococcusmutans .  [Skripsi]  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam.
Program Study Biokimia. Institut Pertanian Bogor.
Wijayakusuma,  H.  2006.  Ramuan  tradisional  untuk  pengobatan  darah  tinggi.  Penebar  Swadaya. Jakarta.