## Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan
UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK ETANOL BIJI KOPI LAMPUNG (Coffea canephora var.Robusta) PADA TIKUS WISTAR
(ACUTE TOXICITY TEST OF LAMPUNG COFFEE BEAN (Coffea canephora var.Robusta) ETHANOL  EXTRACT ON WISTAR RATS)
Dewi Ratih Handayani 1 , Maman Djamaludin 2 , Adrian Mohammad Prayoga 3
1 Departemen Biokimia, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
2 Departemen Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
3 Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia

## Email Korespondensi: derayani@yahoo.com

## ABSTRAK
Kopi  Lampung  ( Coffea  canephora  var.  Robusta )  digunakan  sebagai  alternatif  dalam mengobati penyakit karena memiliki efek sebagai antioksidan, antiinflamasi, dan antidiabetes hingga  menurunkan  risiko  kanker.  Uji  keamanan  terhadap  obat  herbal  dilakukan  untuk mengetahui  dosis  aman  untuk  dikonsumsi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek toksisitas  akut  ekstrak  etanol  biji  kopi  Lampung  (EBKL)  terhadap  tikus  wistar  berdasarkan jumlah  kematian,  perubahan  berat  badan,  dan  indeks  organ  relatif.    Penelitian  ini menggunakan  metode  eksperimental  pada  25  ekor  tikus  Wistar  jantan  yang  dibagi  5 kelompok,  yaitu  kelompok  kontrol,  dan  kelompok  perlakuan  EBKL  dosis  625  mg/KgBB, EBKL dosis 1250  mg/KgBB, EBKL dosis 2500  mg/KgBB, dan EBKL dosis 5000  mg/kgBB. Pengamatan  penelitian  berupa  jumlah  kematian,  perubahan  berat  badan,  dan  indeks  organ tikus.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  biji  kopi  Lampung  menyebabkan kematian pada hewan coba, yaitu pada EBKL dosis 2500 mg/Kg BB dan 5000 mg/Kg BB dan nilai  LD 50 pada  dosis ≥2500  mg/kgBB  (p<0.05).  Dari  hasil  penelitian    terdapat  perubahan berat  badan  yang  signfikan  pada  dosis  5000  mg/kgBB  (p<0.05),  dan  perbedaan  signifikan indeks  organ  relatif    hati  pada  dosis  5000  mg/kgBB  (p<0.05)  serta  indeks  organ  relatif jantung  pada  dosis  2500  mg/kgBB  dan  5000  mg/kgBB  (p<0.05).  Ekstrak  etanol  biji  kopi lampung  memiliki  manfaat  untuk  kesehatan  karena  kandungan  antioksidannya.  Namun demikian,  keamanan  untuk  digunakan  sebagai  terapi  tetaplah  harus  memperhatikan  dosis efektif dan  batas keamanannya karena terdapat perubahan  indeks organ relatif pada  hati dan jantung setelah pemberian EBKL. Pada penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol biji kopi Lampung tergolong dalam kategori sedikit toksis.
DOI DOI
ARTIKEL PENELITIAN
Kata kunci: antioksidan, kopi, tikus, uji toksisitas

## ABSTRACT
Lampung  coffee  (Coffea  canephora  var.  Robusta)  is  used  as  an  alternative  in  treating diseases because it has antioxidant, anti-inflammatory, and anti-diabetic effects to reduce the risk of cancer. The safety test of herbal medicines is carried out to determine the safe dosage for consumption. This study aims to determine the effect of acute toxicity of Lampung coffee bean ethanol extract (EBKL) on Wistar rats based on the number of deaths, changes in body weight,  and  relative  organ  index.  The  study  was  an  experimental  study  using  25  male  rats divided  into  5  groups  namely  control  group,  EBKL  dosage  625  mg/Kg  BW,  EBKL dosage 1250  mg/Kg  BW,  EBKL dosage  2500 mg/Kg  BW,  dan  EBKL dosage 5000  mg/kg  BW. Observations  of  the  study  included  the  number  of  deaths,  changes  in  body  weight,  and  the relative  organ  index  of  rats.  The  results  showed  that  the  ethanol  extract  of  Lampung  coffee beans caused death in experimental animals, namely at EBKL doses of 2500 mg/Kg BW and 5000 mg/Kg BW and LD50 values at doses 2500 mg/kg BW (p<0.05). From the results of the study, there  was a significant change  in  body  weight  at  a dose of 5000 mg/kg BW (p<0.05) and a significant difference in  the relative organ  index of the liver at  a dose of 5000 mg/kg BW (p<0.05) and the relative organ index of the heart at a dose of 2500 mg/kg BW. and 5000 mg/kg BW (p<0.05). The ethanol extract of Lampung coffee beans has health benefits due to its  antioxidant  content.  However,  safety  for  use  as  therapy  must  still  pay  attention  to  the effective  dose  and  safety  limit  because  there  are  changes  in  the  relative  organ  index  in  the liver  and  heart  after  EBKL  administration.  Based  on  the  BPOM  classification  of  mortality results, changes in body weight and enlargement of the liver and heart organ indexes.
Keywords : antioxidants, coffee, rat, toxicity test

## PENDAHULUAN
Kopi mengandung banyak senyawa seperti polisakarida, saponin, tanin, polifenol, alkaloid, flavonoid, dan melanoidins,  yang  merupakan  senyawa antioksidan  dan  kaya  akan  manfaat. Kandungan  utama  pada  biji  kopi  yaitu senyawa  kafein  dan  asam  klorogenat memiliki kemampuan sebagai antioksidan. 1,2,3,4 Kopi  Robusta  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  jenis  kopi  Arabica. Kafein adalah suatu senyawa alkaloid putih yang  bersifat  hidrofobik  sehingga  dapat
dengan mudah memasuki membran plasma, 5,6 sedangkan  asam  klorogenat merupakan  golongan  ester  berbentuk antara  asam  trans  dan  asam  guinik  yang merupakan  senyawa  fenolik  penting  di dalam  kopi. 7 Kopi  yang  kaya  akan  kafein dan asam klorogenat, berkhasiat antara lain sebagai antivirus hepatitis B, antihipertensi, antidiabetes, bahkan sebagai antikanker. 1,6,8 Banyak  penelitian  untuk mengetahui    manfaat  kopi    dalam mengobati penyakit, namun belum diketahui batas keamanan dosis kopi untuk
terapi sehingga diperlukan uji toksisitasnya.
Dalam menilai keamanan suatu zat baik zat  kimia,  makanan,  kosmetik,  obat- obatan.  dan  produk  industri  lain  tidak berbahaya  maka  perlu  dilakukan  suatu  uji toksisitas sebelum digunakan oleh manusia.  Uji  toksisitas  adalah  suatu  uji untuk  mendeteksi  efek  toksik  suatu  zat pada sistem biologi dan untuk memperoleh data  dosis-respons  yang  khas  dari  sediaan uji.  Data  yang  diperoleh  dapat  digunakan untuk memberi informasi mengenai derajat bahaya  sediaan  uji  tersebut  bila  terjadi pemaparan  pada  manusia,  sehingga  dapat ditentukan  dosis  penggunaannya  demi keamanan  manusia. 9,10 Takaran  dosis  yang dianjurkan  setidaknya  terdiri  dari  empat peringkat  dosis,  berkisar  dari  dosis terendah  yang  tidak  atau  hampir  tidak mematikan  seluruh  hewan  uji  sampai dengan  dosis  tertinggi  yang  diperkirakan dapat  mematikan  seluruh  atau  hampir seluruh  hewan  uji.  Pada  penelitian  ini diambil  dari  batas  dosis  dari  BPOM  yaitu 625mg/kgBB, 1250 mg/kgBB, 2500 mg/kgBB,  dan  5000  mg/kgBB.  Dosis  ini diambil  dengan  kelipatan  2  dosis  agar memudahkan saat perhitungan LD 50 . 9
Dalam  uji  toksisitas  akut,  penentuan Lethal  Dose 50  (LD 50 )  dilakukan  dengan cara  menghitung  jumlah  kematian  hewan uji  yang  terjadi  dalam  24  jam  pertama sesudah  pemberian  dosis  tunggal  bahan
yang  diuji. Lethal  Dose 50 merupakan tolak ukur kuantitatif yang sering digunakan untuk menyatakan kisaran dosis letal.  Pengujian  LD 50 dilakukan  untuk menentukan  efek  toksik  suatu  senyawa yang  akan  terjadi  dalam  waktu  yang singkat  setelah  pemajanan  dengan  takaran tertentu.  Pada  pengujian  toksisitas  akut LD 50 akan  didapatkan  gejala  ketoksikan yang  dapat  menyebabkan  kematian  hewan percobaan.  Gejala  ketoksikan  yang  timbul berbeda  dalam  tingkat  kesakitan  pada hewan.  Secara  umum,  semakin  kecil  nilai LD 50 semakin  toksik  senyawa  tersebut. Begitu pula sebaliknya, semakin besar nilai LD 50 semakin  rendah  toksisitasnya. 9-  13
Kematian  dapat  terjadi  sesudah  24  jam pertama  karena  proses  keracunan  dapat berjalan  lambat.  Gejala  keracunan  yang muncul  sesudah  24  jam  menunjukkan bahwa  bahan  obat  atau  bahan  itu mempunyai titik tangkap kerja pada tingkat yang lebih rendah sehingga gejala keracunan dan kematian seolah-olah tertunda (delayed toxicity). 9
Telah  banyak  penelitian  dilakukan untuk  mengetahui  efek  antioksidan  kopi dalam mencegah maupun mengobati penyakit,  namun  belum  diketahui  batas dosis  yang  aman  untuk  digunakan  sebagai terapi.  Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji toksisitas  akut  ekstrak  etanol  biji  kopi Lampung  berdasarkan  jumlah  kematian,
berat  badan,  dan  berat  organ  relatif  pada tikus Wistar.

## BAHAN DAN METODE

## Subjek Penelitian
Penelitian  yang  dilakukan  merupakan penelitian  eksperimental,  menggunakan rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan posttest  design .  Subjek  pada  penelitian adalah tikus  jantan galur  Wistar  sebanyak 25 ekor  yang dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu  kelompok  kontrol,  dan  kelompok perlakuan  EBKL  dosis  625  mg/KgBB, EBKL dosis 1250  mg/KgBB,  EBKL dosis 2500  mg/KgBB,  dan  EBKL dosis 5000 mg/kgBB.  Tikus  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  yang  sesuai  dengan kriteria  inklusi    yaitu  tikus  sehat,  aktif bergerak,  memiliki  berat  badan  150–200 gram,  dan  berusia  8-10  minggu.  Kriteria eksklusi  tikus  dalam  penelitian  yaitu  tikus yang  mengalami  penurunan    berat  badan saat  aklimasi.  Selama  masa  aklimasi  tikus diberi  pakan  berupa  pelet  dan  minum standar.  Penelitian  ini    dilakukan  di Laboratorium Hewan  Fakultas  Kedokteran Unjani.

## Alat dan Bahan
Alat yang dipakai pada uji toksisitas  yaitu  kandang  tikus,  botol minum  tikus,  alat  bedah  minor, kapas, CO 2 chamber dan disposable syringe 3 ml,  timbangan  digital,  sonde  oral. Alat
untuk  membuat  ekstraksi: beaker  glass, gelas ukur, corong, hand glove , mikropipet,  maserator.  Bahan  penelitian yaitu  ekstrak  kopi  lampung  didapat  yang diperoleh dari EKL coffee Lampung,  yang di  ekstraksi  dengan  pelarut  etanol  96%  di Laboratorium  Riset  dan  Inovasi  ITB Bandung.  Hewan  uji  yang  dipakai  pada penelitian  adalah  tikus  jantan  galur  wistar yang diperoleh dari PT Biofarma Bandung.

## Prosedur Penelitian
Cara  Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Biji Kopi Robusta
Pembuatan serbuk simplisia merupakan proses awal pembuatan ekstrak. Serbuk simplisia dibuat dari simplisia utuh atau  potongan-potongan  halus  simplisia yang  sudah  dikeringkan  melalui  proses pembuatan  serbuk  dengan  suatu  alat  tanpa menyebabkan  kerusakan  atau  kehilangan kandungan  kimia  yang  dibutuhkan  dan diayak  hingga  diperoleh  serbuk  dengan derajat kehalusan tertentu.
Buat  ekstrak  dari  serbuk  kering simplisia dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 70%.
Masukkan  satu  bagian  serbuk  kering simplisia  ke  dalam  maserator,  tambahkan 10  bagian  pelarut.  Rendam  selama  6  jam pertama  sambil  sesekali  diaduk,  kemudian diamkan  selama 18  jam. Pisahkan  maserat dengan  cara  sentrifugasi,  dekantasi  atau filtrasi.  Ulangi proses penyarian sekurang-
kurangnya  satu  kali  dengan  jenis  pelarut yang  sama  dan  jumlah  volume  pelarut sebanyak  setengah  kali  jumlah  volume pelarut pada penyarian pertama.
Kumpulkan  semua  maserat,  kemudian uapkan  dengan  penguap  vakum  atau penguap  tekanan  rendah  dapat  juga menggunakan “rotavapor” hingga diperoleh ekstrak
kental.
Hitung  rendemen  yang  diperoleh  yaitu persentase  bobot  (b/b)  antara  rendemen dengan  bobot  serbuk  simplisia  yang digunakan dengan penimbangan. 14

## Perlakuan Hewan Coba
Semua  tikus  dilakukan  masa  adaptasi selama  7  hari  dengan  cara  ditempatkan  di kandang  tikus  dengan  suhu  ruangan  22°  ± 3°  C,  ventilasi  terdapat  pada  sekeliling kandang dengan harapan tikus mendapatkan rasa nyaman selama penelitian  dan  diberi  pakan  (pelet)  dan  air minum  (akuabides)  serta  diperhatikan kesehatannya.  Berdasarkan  hasil  rumus Federer jumlah tikus yang digunakan pada penelitian  berjumlah  25  ekor.  Tikus  yang dibagi  menjadi  5  kelompok  diberikan perlakuan  sebagai  berikut:  Kelompok  K sebagai  kelompok  kontrol,  dimana  hewan coba  tidak  diberikan  perlakuan  apapun kecuali air dan pellet; kelompok perlakuan yaitu  kelompok  EBKL  dosis  625  mg/Kg BB,  kelompok  EBKL  dosis  1250  mg/Kg BB,  kelompok    EBKL  dosis  2500  mg/Kg
BB,  kelompok  EBKL  dosis  5000  mg/Kg BB.
Pada semua kelompok perlakuan, ekstrak etanol biji  kopi lampung diberikan secara peroral dengan dosis tunggal. Mulai hari  pertama  sampai  hari  ke-14  diamati kematian dan ditimbang berat badan tikus. Apabila  tikus  masih  hidup  sampai  akhir masa  perlakuan  akan  dilakukan eutanasia tikus  dengan  menggunakan  CO 2 chamber lalu  organ  tikus  yaitu  jantung,  paru,  hati, ginjal,  dan  limpa  diambil  untuk  dilakukan penimbangan.

## Analisis Data
Analisis univariabel bertujuan untuk  menggambarkan  toksisitas  akut berupa kematian hewan percobaan, perubahan  berat  badan,  dan  indeks  organ, setelah  pemberian  ekstrak  etanol  biji  kopi robusta Lampung (Coffea canephora) pada dosis  625  mg/Kg  BB,  1250  mg/kg  BB, 2500 mg/Kg BB dan 5000 mg/Kg BB yang disajikan  dalam  rerata,  standar  deviasi, median,  nilai  minimum,  dan  maksimum. Analisis  berat  badan  dan  indeks  organ relatif  tikus  dilakukan dengan uji analysis of  variance (ANOVA)  dan  uji  lanjut Tukey . Derajat kepercayaan pada penelitian adalah  95%.  Analisis  tersebut  diproses menggunakan  program statistical  product and service solutions versi 17.0.

## Etika Penelitian
Penelitian ini telah mendapat persetujuan  dari  Komisi  Etik  Penelitian Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas  Jenderal  Achmad  Yani  No 023/UH2.11/2020 dengan menerapkan prinsip daras 3R ( Replacement, Reduction, and  Refinement )  dan  5  F  ( freedom  from: hunger  or  thrist,  discomfort  and  pain, injury  or  diseases,  freedom  to  express normal behavior, fear and distress ) karena penelitian  ini  menggunakan  hewan  uji sebagai subjek penelitian.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji Toksisitas Akut  terhadap Kematian Tikus
Pengamatan  kematian  hewan  coba selama empat belas hari perlakuan mendapatkan hasil sebagai berikut, Tabel 1 menunjukkan jumlah kematian hewan coba pada  kelompok  kontrol  dan  empat  variasi
dosis  kopi  Lampung  selama  14  hari. Kematian  total  diperoleh  sebanyak  6  ekor dengan 1 kematian pada kelompok  EBKL 1250 mg/kgBB), 2 kematian pada kelompok  EBKL  2500  mg/kgBB  dan  3 kematian  pada  kelompok  EBKL  5000 mg/kgBB).
Data kematian tikus memperlihatkan kenaikan kumulatif kematian  tikus  bergantung  pada  kenaikan dosis yang diberikan. Lama waktu pengamatan  juga  menunjukkan  bahwa semakin lama pengamatan semakin meningkat  jumlah  kematian  hewan.  Data pada Tabel 1 menunjukkan hubungan yang segaris  antara  peningkatan  dosis  dan peningkatan  jumlah  kematian.  Kematian tikus  pada  Tabel  1  belum  bisa  langsung untuk menentukan LD 50 , perhitungan LD 50 diperlukan dengan metode limit test .
Tabel 1 Data kumulatif kematian tikus Kelompok Jumlah kumulatif tikus yang mati/hari 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Kontrol 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 EBKL 625 mg/Kg BB 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 EBKL 1250 mg/Kg BB 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 EBKL 2500 mg/Kg BB 0 0 0 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 EBKL 5000 mg/Kg BB 0 0 1 1 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3
Pedoman  OECD  425: acute  oral
toxicity up and down procedure menyebutkan  bahwa  perhitungan  LD 50 dapat dilakukan dengan menggunakan limit test .  Limit  test  ini  dapat  untuk  melihat apakah  LD 50 dari  bahan  uji  berada  pada batas 2000–5000 mg/kgBB atau di atas itu. Pada  dosis  tertentu  yang  diberikan  pada  5
ekor  hewan  coba  dilihat  total  kematian tikus  yang  terjadi,  jika  terdapat  lebih  dari sama dengan 2 kematian maka LD 50 berada di  bawah  dosis  tersebut  dan  jika  terdapat kurang dari sama dengan 2 kematian maka LD 50 berada di atas dosis tersebut. 12, 13,15
Berdasarkan limit test yang diujikan diperoleh  bahwa LD 50 pada dosis EBKL  2500  mg/kgBB  sebanyak    2 kematian,  dan  pada  dosis  5000  mg/KgBB dengan    3  kematian.  Nilai  LD 50 dari  biji kopi  Lampung  diputuskan  sebesar  ≥2500 mg/kgBB, berdasarkan klasifikasi toksisitas.  Nilai LD 50 tersebut masuk pada rentang  500-5000  mg/kgBB  dan  dapat disimpulkan  tingkat  keamanan  ekstrak etanol  biji  kopi  lampung  adalah  sedikit toksik. 9
Salah  satu  efek  toksisitas  yang timbul  dapat  disebabkan  oleh  zat  aktif yang  terkandung  dalam  kopi,  antara  lain kafein.  Kafein  memberikan  efek  terhadap
metabolisme  tubuh  termasuk  efek  ke sistem  kardiovaskular.  Kopi  memiliki  zat kafein  yang  dapat  merangsang  saraf simpatis  pada  tubuh,  pada  dosis  tertentu kopi  dapat  menyebabkan  gangguan  irama jantung, gangguan terbanyak yang diakibatkan  oleh  kopi  adalah  ventrikular fibrilasi  diakibatkan  karena  peningkatan kadar  katekolamin  dan  vasokonstriksi arteri coroner. 16

## Uji  Toksisitas  Akut  terhadap  Berat Badan Tikus
Dari  hasil  pengamatan  perubahan berat  badan  tikus  tampak  pada  kelompok EBKL  5000  mg/kgB  dengan  rerata penurunan berat tikus sebesar 3 gram. Data berat  tikus  dicatat  setiap  hari  lalu perubahan  dapat  dilihat  dengan  cara mengurangi  berat  badan  tikus  setelah perlakuan  dengan  berat  badan  tikus sebelum perlakuan.
Tabel 2 data deskriptif perubahan berat badan tikus dalam gram Kelompok n Rerata Minimal Maksimal SD Kontrol 5 12,4 5,0 19,0 0,849 EBKL 625 mg/Kg BB 5 21,2 15,0 32,0 0,171 EBKL 1250 mg/Kg BB 5 9,4 4,0 18,0 0,297 EBKL 2500 mg/Kg BB 5 2,6 -2,0 6,0 0,603 EBKL 5000 mg/Kg BB 5 -3,0 24,0 17,0 0,942
Pada Tabel 2 tampak rerata perubahan  berat  badan  kelompok  EBKL 625  mg/Kg  BB  paling  besar  mengalami perubahan  berat  badan  sedangkan  pada
kelompok EBKL 5000 mg/Kg BB memiliki  nilai rerata terendah. Selanjutnya dilakukan  uji  normalitas  data  terhadap rerata  berat  badan  tikus  dengan  p>0,05.
Hasil  uji  normalitas  menunjukkan  bahwa data berdistribusi normal sehingga perbandingan nilai rerata perbedaan perubahan berat badan pada setiap
kelompok  dianalisis  dengan  menggunakan Oneway  Anova  test seperti  yang  terlihat pada Tabel 3.
Tabel 3 Pengaruh ekstrak etanol biji kopi lampung  terhadap perubahan berat badan
Perlakuan Sebelum Perlakuan  Setelah Perlakuan  Perubahan Nilai p Kontrol 158,4 ± 9,5 170,6 ± 11,2 12,4 ± 5,2 0,001 EBKL 625 mg/Kg BB 177,6 ± 8,4 198,6 ± 3,8 21,2 ± 6,4 EBKL 1250 mg/Kg BB 146,2 ± 4,1 155,4 ± 4,4 9,4 ± 5,2 EBKL 2500 mg/Kg BB   163 ± 1,4 165,6 ± 15,24 2,6 ± 3,1 EBKL 5000 mg/Kg BB   158,6 ± 17,1 155,60 ± 19,2 -3,0 ± 14,8 Keterangan:   Uji Oneway Anova , nilai p <0.05, dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tukey.
Berdasarkan hasil uji tersebut, perubahan berat badan pada setiap kelompok signifikan berbeda karena diperoleh nilai p< 0.05. Hal ini menunjukkan  bahwa    ekstrak  etanol  biji kopi  Lampung  menunjukkan  perbedaan perubahan berat badan pada setiap kelompok.  Selanjutnya  dilakukan  uji  P ost Hoc Tukey untuk mengetahui dosis ekstrak etanol  biji  kopi  Lampung  yang  paling signifikan  memberikan pengaruh terhadap perubahan berat badan.
Hasil  uji Post  Hoc  Tukey terhadap perubahan berat  badan menunjukkan
bahwa kelompok dosis EBKL
5000mg/kgBB adalah yang paling signifikan    mengalami  perubahan  berat badan dibandingkan dengan kontrol dengan  nilai p <0,05.    Namun  tidak menunjukkan perbedaan apabila
dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan yang  mendapat  EBKL.  Hal  tersebut  dapat disebabkan karena pengaruh senyawa yang terkandung di dalam kopi  yaitu kafein dan asam  klorogenat,  yang  dapat  memicu perubahan  berat  badan.  Kafein  bersifat mudah  diserap  di  usus  karena  hidrofobik dan sebagai antagonis adenosin yang dapat menyebabkan  peningkatan  metabolisme tubuh  dengan  cara  merangsang  glukagon sehingga  dapat  menurunkan  kadar  ATP dan  menyebabkan  lipolisis,  selain  itu kafein dapat merangsang sistem saraf pusat untuk  meningkatkan  laju  metabolisme dengan  meningkatkan  hormon  tiroksin. Sedangkan  Asam  klorogenat  pada  kopi memiliki fungsi sebagai antagonis terhadap transfer  glukosa  sehingga intake glukosa ke  sel  akan  menurun.  Kedua  mekanisme
senyawa  tersebut  dapat  menyebabkan penurunan berat badan pada tikus .   10, 2,16
Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Etanol  Biji Kopi  Lampung  terhadap  Indeks  Organ

## Tikus
Setelah 14 hari pengamatan, hewan uji dari  setiap  kelompok  dibedah  selanjutnya diambil  organ  untuk  diamati  diantaranya organ  jantung,  paru-paru,  hati,  ginjal,  dan lien  serta  dilakukan  penimbangan  berat organ. Hal ini dilakukan untuk mengetahui efek  toksik  sediaan  uji  ekstrak  etanol  biji kopi Robusta terhadap organ dalam hewan uji. Efek toksik yang ditimbulkan terhadap organ  dalam  biasanya  ditandai  oleh perubahan  warna,  ukuran,  dan  bentuk. 15,16
Pengukuran  indeks  organ  didapatkan  dari tikus yang mati selama perlakuan dan pada tikus  yang  di  eutanasia  pada  akhir  masa perlakuan.  Tikus  yang  hidup  hingga  akhir masa  perlakuan  dimasukkan  kedalam  CO 2 chamber untuk dilakukan eutanasia kemudian  diambil  bagian  organ  vital. Organ  diukur  menggunakan  timbangan digital,  organ  yang  diukur  yaitu  hepar, jantung, ginjal, limpa, dan paru.  Dari hasil pengukuran, data yang diperoleh kemudian dilakukan uji  normalitas dan  homogenitas. Hasil  uji  normalitas  dan  homogenitas menunjukkan  p>0,05  sehingga  dilakukan uji Oneway  Anova untuk  mengetahui perbedaan dari tiap kelompok.
Tabel 4 Perbedaan indeks organ tikus pada tiap kelompok Indeks Organ Perlakuan Nilai p Kontrol EBKL 625  mg/Kg BB EBKL 1250  mg/Kg BB EBKL 2500  mg/Kg BB EBKL 5000  mg/Kg BB Hati 3,95±0, 89 3,67±0,85 4,89±0,92 5,07±0,63 6,05±1,17 0,004* Jantung 0,51±0,077 0,41±0,07 0,47±0,02 0,71±0,05 0,76±0,08 0,00* Paru-Paru 1,18±0,27 1,18±0,21 1,10±0,30 1,46±0,52 1,29±0,13 0,465 Ginjal 0,97±0,17 0,78±0,08 1,01±0,03 0,96±0,22 0,99±0,23 0,349 Limpa 0,44±0,19 0,52±0,15 0,57±0,03 0,45±0,10 0,50±0,08 0,445
Keterangan Uji Oneway Anova ,  *nilai p <0.05.
Hasil  dari  uji Oneway  Anova diperoleh  perbedaan  yang  signifikan  pada tiap kelompok terhadap  indeks organ   hati dan  jantung  sedangkan  pada  organ  Paru- paru,  ginjal  dan  limpa  tidak  menunjukkan adanya  perbedaan.  Mengetahui  dosis  yang
memberikan  efek  toksik berdasarkan indeks organ maka  dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tukey terhadap indeks organ hati dan jantung.
Berdasarkan  analisis Post  Hoc  Tukey Test ,  data  indeks  organ    hati    mengalami
perubahan  yaitu  pada  kelompok  EBKL dosis  5000  mg/kgBB  sedangkan  indeks organ  jantung  mengalami  perubahan  pada EBKL  dosis    2500  mg/kgBB  dan  5000 mg/kgBB.
Uji  toksisitas  akut  oral  adalah  suatu pengujian  untuk  mendeteksi  efek  toksik yang  muncul  dalam  waktu  singkat  setelah pemberian  sediaan  uji  yang  diberikan secara oral dalam dosis tunggal, atau dosis berulang  yang  diberikan  dalam  waktu  24 jam  pada  spesies  hewan  tertentu.    Dalam pengujian toksisitas akut, sediaan uji  yang diteliti  diberikan  pada  tingkat  dosis  yang berbeda,  dan  efeknya  diamati  selama  14 hari.  Semua  kematian  yang  disebabkan sediaan  uji  selama  periode  percobaan dicatat,  dan  dinilai  perubahan  morfologi, biokimia,  patologis,  dan  histologis  hewan coba.  Tujuan  uji  toksisitas  akut  adalah untuk  mengidentifikasi  bahan  kimia  yang toksik  dan  memeroleh  informasi  tentang bahaya terhadap manusia bila terpajan. Uji toksisitas akut digunakan untuk menetapkan nilai LD50 suatu zat. 9,17,13
Proses metabolisme berbagai senyawa,  termasuk  obat-obatan    terjadi  di dalam  hati.  Proses  metabolisme  tersebut bertujuan  antara  lain  untuk  mengurangi efek yang merugikan bagi tubuh, misalnya mengurangi  efek  toksik  suatu  senyawa. Walaupun demikian pada proses biotransformasi  ini  dapat  dihasilkan  zat reaktif  metabolit  hasil dari reaksi oksidasi,
sehingga  akan  terjadi  perubahan  biokimia pada  hati  setelah  terpapar  zat  toksik  yaitu berupa  sel injury .  Sel  yang  mengalami injury dapat  mengalami  perbaikan  apabila toksisitas  bersifat  reversibel,  akan  tetapi bila  sifat  toksisitas  adalah  irreversibel dapat  mengakibatkan  nekrosis  sel  sampai kematian sel. Oleh karena  itu apabila   hati terpapar  suatu    zat  toksik  maka  hati  akan mengalami  kerusakan  sehingga  terjadi gagal  fungsi  hati.  Pada  penelitian  ini ekstrak  etanol  kopi  Lampung  dapat memberikan  efek  toksik  apabila  diberikan pada  dosis  sebesar  5000  mg/kg  BB.  Pada dosis  tersebut  hati  mengalami  intoksikasi dan  tidak  mampu  untuk  melakukan fungsinya. 2,6,8,16,18 Selain  pada  organ  hati, efek  toksik  ekstrak  etanol  kopi  Lampung juga terjadi pada organ jantung. Perubahan indeks  organ  jantung  terjadi  pada  dosis 2500  mg/Kg  BB  dan  dosis  5000  mg/Kg BB.  Ketika  terpapar  zat  toksik  maka jantung akan mengeluarkan protein tertentu  yang  menjadi  tanda  bahwa  terjadi kerusakan  ( cardiac  marker ),  selain  itu potensi  gangguan  irama  jantung  sangat mungkin  terjadi  jika  jantung  terpapar  zat toksik.. 2,16,19,20,21

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  biji  kopi  lampung menimbulkan  efek  toksik  berdasarkan kematian  hewan  pada  kelompok  dosis 1250 mg/KgBB, 2500 mg/KgBB, dan 5000
mg/kgBB; Terdapat perubahan berat badan kelompok  dosis  5000  mg/kgBB  secara signifikan.  Terdapat  pembesaran  indeks organ  hepar  pada  kelompok    dosis  5000 mg/kgBB;  serta  pembesaran  indeks  organ jantung  pada  kelompok    dosis  2500 mg/KgBB dan  5000 mg/kgBB.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulisan  artikel  ini  tidak  memiliki konflik kepentingan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kami ucapkan kepada PT  Biofarma  yang  telah  membantu menyediakan hewan coba sesuai kebutuhan  penelitian  dan  juga    kepada Laboratorium Inovasi dan Terapi ITB yang telah  membantu  dalam  pembuatan  ekstrak etanol biji kopi Lampung.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Yashin A, Yashin Y, Wang JY, Nemzer B.  Antioxidant  and  antiradical  activity of  coffee.  Vol.  2,  Antioxidants.  MDPI; 2013. p. 230–45.
2.  Ludwig  IA,  Clifford  MN,  Lean  MEJ, Ashihara H, Crozier A. Coffee: Biochemistry  and  potential  impact  on health.  Food  Funct.  2014;5(8):1695– 717.
3.  Farhaty  N.  Tinjauan  Kimia  dan  Aspek Farmakologi
Senyawa Asam
Klorogenat  pada  Biji  Kopi:  Review.
Farmaka. 2012;14:214–27.
4.  Liang  N,  Kitts  DD.  Antioxidant property of coffee components: Assessment  of  methods  that  define mechanism of action. Vol. 19,
Molecules. MDPI AG; 2014. p. 19180– 208.
5.  Nieber  K.  The  Impact  of  Coffee  on Health.  Vol.  83,  Planta  Medica.  Georg Thieme Verlag; 2017. p. 1256–63.
6.  Cornelis  MC.  The  impact  of  caffeine and  coffee  on  human  health.  Vol.  11, Nutrients. 2019.
7.  Santos  RMM,  Lima  DRA.  Coffee consumption,  obesity  and  type  2 diabetes:  a  mini-review.  Eur  J  Nutr. 2016;55(4):1345–58.
8.  Martini D, Del Bo’ C, Tassotti M, Riso P, Rio D Del, Brighenti F, et al. Coffee consumption  and  oxidative  stress:  A review  of  human  intervention  studies. Molecules. 2016;21(8).
9.  BPOM. Pedoman Uji Toksisitas Nonklinis  Secara  In  Vivo.  Badan Pengawas Obat Dan Makanan Republik Indones. 2014;66–8.
10.  Lang  R,  Dieminger  N,  Beusch  A,  Lee YM,  Dunkel  A,  Suess  B,  et  al. Bioappearance and pharmacokinetics of bioactives  upon  coffee  consumption.
Anal Bioanal Chem. 2013;405(26):8487–503.
11.  Hodgson  E.  A  textbook  of  modern toxicology. Vol. 8, Trends in
Pharmacological Sciences. 2010. 408 p.
12.OECD.  OECD  Guideline  for  the Testing  of  Chemicals  OECD  105.
2008;(July):1–17.
13.  Chinedu  E,  Arome  D,  Ameh  FS.  A new  method  for  determining  acute toxicity  in  animal  models.  Toxicol  Int. 2013;20(3):224–6.
14.Courtney A. Formularies. Pocket Handb
Nonhum  Primate  Clin  Med.  2012;213–
8.
15. Erhirhie EO, Ihekwereme CP, Ilodigwe
EE.  Advances  in  acute  toxicity  testing:
Strengths,  weaknesses  and  regulatory acceptance. Interdiscip Toxicol.
2018;11(1):5–12.
16.  Willson  C.  The  clinical  toxicology  of caffeine:  A review and case study. Vol. 5,  Toxicology  Reports.  Elsevier  Inc.;
2018. p. 1140–52.
17. Ocde O. Panduan oecd untuk pengujian bahan kimia. 2018;
18. Saab S, Mallam D, Cox GA, Tong MJ.
Impact  of  coffee  on  liver  diseases:  A systematic review. Liver Int.
2014;34(4):495–504.
19.  Bravo  L,  Mateos  R,  Sarria  B. Preventive  Effect  of  Coffee  Against Cardiovascular Diseases L . Bravo ,* R .  Mateos  and  B  .  Sarriá  Department  of Metabolism  and  Nutrition  ,  Institute  of Food Science , Technology and Nutrition  (  ICTAN  ),  Spanish  National Research Council ( CSIC ) * Corres. :1– 59.
20.  Miranda  AM,  Steluti  J,  Fisberg  RM, Marchioni  DM.  Association  between coffee consumption and its polyphenols with  cardiovascular  risk  factors:  A population-based study. Nutrients.
2017;9(3).
21.  Beyer  LA,  Hixon  ML.  Review  of animal studies on the cardiovascular e ff ects of ca ff eine. 2018;118(February):566–71.