## Keragaman Gen Calpastatin pada Ayam Kampung

## Calpastatin Gene Diversity in Native Chicken
Saifullah 1 *, Wempie Pakiding 2 , Muh. Ihsan A. Dagong 2 dan Hikmawaty 3

## ABSTRAK
Gen  calpastatin  (CAST)  berperan  dalam  mengontrol  sifat  kualitas  daging. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  keragaman  gen  calpastatin  tiga jenis  ayam  kampung  yang  berbeda.  Penelitian  ini  menggunakan  motode PCR-RFLP  untuk  mengamplifikasi  fragmen  DNA  genom  gen  CAST. Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Kandang  Peternakan  CV.  Bittara  Wanua  di Kabupaten  Soppeng  dan  Laboratorium  Bioteknologi  Terpadu  Universitas Hasanuddin.  Jumlah  sampel  yangg  digunakan  sebanyak  45  ekor  dari  tiga jenis ayam kampung yang berbeda,  yaitu Ayam KUB, ayam  Merawang, dan ayam kampung in ovo feeding. Hasil penelitian menunjukkan bahwa genotipe ayam  kampung  berupa  AA  dan  AG,  dengan  frekuensi  alel  dominan  A.  Gen CAST pada ayam kampung in ovo feeding bersifat polimorfik (frekuensi alel A  =  0,93;  G  =  0,07),  sedangkan  ayam  KUB  dan  ayam  Merawang  bersifat monomorfik (frekuensi alel A = 0,97; G = 0,03 pada ayam KUB dan frekuensi alel  A  =  1,00;  G  =  0,00  pada  ayam  Merawang).  Nilai  Ho  dan  He  ayam kampung in  ovo  feeding masing-masing  sebesar  0,133  dan  0,1289.  Ayam kampung in  ovo  feeding berada  dalam  keseimbangan  Hukum  Herdy- Weinberg dengan nilai X2 = 0,0370.
Kata kunci: ayam kampung, KUB, in ovo feeding , Calpastatin

## ABSTRACT
The  calpastatin  gene  (CAST)  plays  a  role  in  controlling  meat  quality  traits. This  study  aims  to  determine  the  diversity  of  the  calpastatin  gene  in  three different  types  of  local  chickens.  This  study  used  the  PCR-RFLP  method  to amplify  CAST  gene  genomic  DNA  fragments.  This  research  was  conducted at the CV. Bittara Wanua in Soppeng Regency and Integrated Biotechnology Laboratory  at  Hasanuddin  University.  The  number  of  used  samples  was  45 from three different types of local chickens, namely KUB chicken, Merawang chicken  and  in  ovo  feeding  native  chicken.  The  results  showed  that  the genotypes  of  local  chickens  were  AA  and  AG,  with  the  frequency  of  allele dominant  A.  The  CAST  gene  in  local  chickens  in  ovo  feeding  was polymorphic (allele frequency A = 0.93; G = 0.07), while KUB and Merawang chickens monomorphic (allele frequency A = 0.97; G = 0.03 in KUB chickens and A allele frequency = 1.00; G = 0.00 in Merawang chickens). Ho and He values of native chickens in ovo feeding were 0.133 and 0.1289, respectively. Free-range  chicken  in  ovo  feeding  is  in  balance  with  the  Herdy-Weinberg Law with a value of X2 = 0.0370.
Keywords: local  chicken, KUB, in ovo feeding, Calpastatin
1 Program  Studi Peternakan, Fakultas Peternakan dan Perikanan, Universitas Tadulako, Jl. Soekarno Hatta No. KM. 9, Tondo, Kec. Mantikulore, Kota Palu, Indonesia, 94148
2 Program Studi Produksi Ternak, Fakultas Peternakan, Universitas Hasanuddin, Jl. Perintis Kemerdekaan KM. 10, Makassar, Indonesia, 90245
3 Program Studi Peternakan, Fakultas Peternakan dan Perikanan, Universitas Sulawesi Barat, Jl. Prof. Dr. Baharuddin Lopa, S.H., Talubung, Majene, Indonesia, 91412
*Corresponding Author: Saifullah , Program Studi Peternakan, Fakultas Peternakan dan Perikanan, Universitas Tadulako; saifullahalfarizi @ymail.com
Diterima: 10-10-2023 Disetujui: 22-11-2023
Diterbitkan: 23-12-2023
Kutipan: Saifullah, S., Pakiding, W., Dagong, M. I. A., & Hikmawaty, H. (2023). Keragaman Gen Calpastatin pada Ayam Kampung. Jurnal Ilmiah AgriSains , 24(3), 129 –137. https://doi.org/10.22487/jiagrisains.v24i3.2023.129 –137

## PENDAHULUAN
Ayam kampung adalah salah satu sumber kekayaan genetik ternak lokal Indonesia. Ayam  kampung  memiliki  kelebihan  yaitu  mudah  beradptasi  dengan  lingkungan  dan  dapat dipelihara dengan modal yang sedikit. Selain itu, ayam kampung juga memiliki kekurangan seperti pertumbuhan yang lambat (Tamzil et al. , 2014), bobot badan rendah (Aryanti et al. , 2013)  dan  konversi  pakan  yang  tinggi  (Iriyanti et  al .,  2014).  Pertumbuhan  yang  lamban pada ayam kampung menyebabkan umur potong yang tertunda dan akan berdampak pada kualitas daging yang rendah.
Peningkatan  performa  dan  kualitas  daging  dapat  dilakukan  melalui  pemuliaan  dan seleksi  pada  tingkat  DNA  (Saifullah,  2021).  Terknologi  seleksi  pada  tingkat  DNA  disebut Marker  Assisted  Selection  ( MAS).  MAS  bergantung  pada  identifikasi  hubungan  antara penanda  genetik  dan  lokus  sifat  kuantitatif  terkait  (QTL)  (Wakchaure  dan  Ganguly,  2015) . Salah  satu  marker  gen  yang  bisa  digunakan  adalah  gen calpastatin . Gen calpastatin (CAST)  merupakan  gen  yang  berhubungan  dengan  sifat  kualitas  daging  khususnya keempukan (Biswas et al ., 2016; Yuliati et al ., 2019).
Penelitian  ini  menggunakan  beberapa  jenis  ayam  kampung,  salah  satunya  adalah ayam  kampung  hasil in  ovo  feeding ,  ayam  kampung  hasil in  ovo  feeding memiliki pertumbuhan  yang  cepat  dibandingkan  dengan  ayam  kampung  lainnya,  dengan pertumbuhan  yang  cepat  maka  akan  mempengaruhi  keempukan  daging.  Olehnya  itu, diperlukan penelusuran gen CAST pada ayam kampung khususnya ayam kampung in ovo feeding .  Penelitian  ini  juga  menggunakan primer CAST  yang  berbeda  dengan  penelitian lainnya.
Biswas et al. (2016) pada penelitiannya menemukan hubungan antara gen CAST dan perubahan  otot  yang  berefek  pada  keempukan  daging  ayam.  Gen  CAST  ditemukan  pada ayam kampung merawang di daerah intron 11 dengan panjang produk  482  pb (Harahap et al., 2017).  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengidentifikasi  keragaman  gen  CAST pada  beberapa  jenis  ayam  kampung  dan  diharapkan  dapat  digunakan  sebagai  salah  satu penciri  pada  program  seleksi  dan  pemuliabiakan  untuk  menghasilkan  ayam  kampung dengan kualitas daging yang baik.

## MATERI DAN METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  Agustus –  Oktober  di  kandang  peternakan  CV. Bittara Wanua  di  Kabupaten  Soppeng  dan  Laboratorium  Bioteknologi  Terpadu  Universitas Hasanuddin, Makassar.

## Materi
Penelitian  ini  menggunakan  45  ekor  ayam  kampung  yang  terdiri  dari  ayam  KUB, Merawang, dan ayam kampung in ovo feeding yang berumur 10 minggu. Ayam kampung in ovo  feeding adalah  ayam  kampung  yang  telah  mengalami  perlakuan  penyuntikan  nutrien kedalam telur pada masa inkubasi.

## Metode
Sampel  darah  dikoleksi  dari  15  ekor  ayam  jenis  kelamin  campuran  disetiap  jenis ayam kampung. Pengambilan darah sebanyak 1 ml melalui vena brachialis dilakukan pada tiap  ekor  ayam  yang  ditampung  pada  tabung vacutainer yang  telah  berisi  antikoagulan heparin  untuk  mencegah  penggumpalan  darah.  Sampel  darah  diekstrasksi  DNA  secara modifikasi dan selanjutnya dilakukan teknik PCR.
Ekstraksi  DNA  modifikasi  dilakukan  dengan  cara  berikut,  sebanyak  20  μl  sampel darah ditambahkan 200 μl buffer GA dan 20 μl proitenase K (10 mg/ml), kemudian di vortex dan  diinkubasi  pada  suhu  56 o C  selama  45  menit  di  dalam waterbath  shaker .  Setelah  itu larutan  yang  telah  diinkubasi  ditambahkan  200  μl buffer GB  dan  di vortex kemudian diinkubasi  lagi  pada  suhu  70 o C  selama  10  menit  untuk  menghasilkan  larutan  yang homogen.  Setelah  itu,  larutan  yang  telah  diinkubasi  ditambahkan  lagi  200  μl Ethanol absolute 96% dan di vortex selama 15 detik dan disentrifugasi singkat.
Larutan  dipindahkan  ke  Spin  column  CB3  dan  disentrifugasi  dengan  kecepatan 12.0 00 rpm selama 30 detik dan supernatannya dibuang. Selanjutnya, ditambahkan 500 μl buffer GD dan sentrifugasi dengan kecepatan 12.000 rpm selama 30 detik dan supernatan yang terbentuk dibuang. Kemudian ditambahkan 600 μl buffer PW dan sentrifugasi dengan kecepatan 12.000 rpm selama 30 detik dan buang supernatannya.
Tahapan  selanjutnya  sentrifugasi  kering  dengan  kecepatan  12.000  rpm  selama  2 menit  dan  mengganti Spin  Column CB3  dengan microcentrifugasi  tube ukuran  1,5  ml  dan ditambahkan 200 μl buffer TE, kemudian inkubasi pada suhu ruangan (15-25 o C) selama 2- 5 menit. Selanjutnya sentrifugasi dengan kecepatan 12.000 rpm. Pengecekan kualitas DNA hasil  ekstraksi  dilakukan  dengan elektroforesis pada gel  agarose 1,5%  dengan buffer 1  × TBE  (89  mM  Tris,  89  mM  asam  borat,  2  mM  Na2EDTA)  yang  mengandung  100  mg/ml ethidium bromide lalu divisualisasi pada UV transiluminator ( gel documentation system ). Teknik PCR yang dilakukan mengacu pada Zhou et al . (2017) dengan menggunakan primer CAST forward
5’-CCAAAAGTAGATGAACATTCT-3’ dan reverse 5’- GCTTCTATTAATTCCTACT- 3’.  Sampel  DNA  sebanyak  45  yang  didapat  dari  tiga  jenis ayam  kampung  di sequencing dengan  menggunakan  mesin  sekuenser  (ABI  Prims  3100- Avant  Genetic  Analyzer )  pada fragmen  primer  forward dan reverse .  Hasil sequencing dirunutkan  dan  disejajarkan  dengan  runutan  baku  yang  diperoleh  dari  GenBank  dengan menggunakan aplikasi MEGA7.

## Peubah yang Diamati

## Frekuensi Genotipe
Frekuensi genotipe dihitung menggunakan persamaan seperti yang digunakan oleh Prastowo et al . (2021):
Xij = nii N × 100% Keterangan:
Xij = Frekuensi genotip homozigot (ii) Xij = Frekuensi genotip heterozigot (ij) nii  = Jumlah individu bergenotipe ii nij  = Jumlah individu bergenotipe ij N  = Jumlah individu sampel

## Frekuensi Alel
Frekuensi  alel  (Xi)  dihitung  menggunakan  rumus  sebagai  berikut  (Prastowo et  al. , 2021):
Xij = 2nii + ∑nij

## 2N
Keterangan: Xii = frekuensi alel i nii  = Jumlah individu yang mempunyai genotipe ii
nij  = Jumlah individu yangg mempunyai genotipe ij N  = Jumlah sampel

## Heterozigositas
Nilai heterozigositas dan  keseimbangan  Hardy-Weinberg  ditentukan  dengan menggunakan  aplikasi  PopGen32.  Nilai  heterozigositas dihitung  sesuai  persamaan Renwick et al . (2001):
H = n (n − 1) (1 − ∑ Pk 2 k k=1 )
Keterangan: H  = Heterozigositas n  = Jumlah individu sampel Pk = Frekuensi relatif alel ke-k k  = Jumlah alel yang diamati pada lokus

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Amplifikasi Gen CAST pada Ayam Kampung
Hasil  amplifikasi  PCR  gen  CAST  pada  ayam  KUB,  ayam  merawang  dan  ayam kampung in ovo feeding berhasil dilakukan dengan panjang produk 249 pasang basa (pb) dengan  suhu  annealing  48 o C  pada  daerah intron 11  (Gambar  1).  Hasil  yang  didapatkan berbeda dengan penelitian Harahap et al. (2017) yang berhasil melakukan amplifikasi PCR gen CAST pada ayam lokal dengan panjang produk 482 pb pada suhu annealing 57 o C.
Gambar 1. Visualisasi hasil amplifikasi gen CAST menggunakan gel agarose 1,5% pada (A) ayam kampung in ovo feeding , (B) ayam KUB, (C) ayam Merawang
100 pb 200 pb 300 pb 249 pb 249 bp B 100 pb 200 pb 300 pb 249 pb 249 bp C 200 pb 100 pb 300 pb 249 pb 249 bp A

## DNA Sequencing
Hasil  analisis  DNA sequencing diperoleh SNP A>G pada fragmen target gen CAST (Gambar 2)  yang  diperoleh  memperlihatkan adanya perubahan SNP dari  alel A ke alel G, ini menandakan adanya perubahan atau mutasi pada gen CAST ayam kampung KUB dan ayam  kampung in  ovo  feeding pada intron 11.  Jenis  mutasi  yang  didapatkan  pada  gen CAST adalah jenis mutasi transisi yaitu adanya perubahan basa A menjadi basa G.
Gambar 2. Visualisasi penentuan SNP dengan metode DNA sequencing

## Single Nucleotide Polymorphisms (SNP) Gen CAST
Hasil penelusuran dan pensejajaran hasil sequens gen CAST pada  daerah fragmen target  ditemukan  1  SNP  didaerah intron 11  (Gambar  3).  SNP  tersebut  ditemukan  pada ayam  KUB  dan  ayam  kampung in  ovo  feeding tetapi  tidak  ditemukan  pada  ayam Merawang. Jumlah genotipe yang ditemukan ada dua yaitu AA dan AG.
Pada penelitian Zhou et al. (2017) menemukan adanya SNP gen CAST pada intron 11  posisi  g.57042952G<A,  exon  11  posisi  g.37752A>T  dan intron 11  posisi  g.37868G>A. Sedangkan  penelitian  (Harahap et  al., 2017)  menemukan  1  SNP  gen  CAST  posisi g.42988G>T  pada  ayam  Merawang.  Menurut  (Asaf et  al., 2014)  perbedaan  letak  SNP memberikan  pengaruh  yang  berbeda  sehingga  memberikan  pengaruh  secara  lansung terhadap  terjemahan  protein.  Pada  posisi  promotor  berpengaruh  teradap  ekspresi  gen, sedankan pada daerah intron berpengaruh pada proses splicing.

## Frekuensi Genotipe Gen CAST
Frekuensi genotipe  adalah persentase genotipe tertentu dalam suatu populasi. Nilai frekuensi  genotipe  menentukan  keragaman  gen  CAST  pada  ayam  (Tabel  1).  Gen  CAST ditemukan  2  genotipe  yaitu  AA  dan  AG.  Hasil  analisis  frekuensi  genotipe  memperlihatkan bahwa genotipe yang dominan pada semua jenis ayam kampung adalah genotipe AA. Hasil yang  didapatkan berbeda  dengan hasil penelitian  Harahap et  al . (2017)  yang  menemukan genotipe dominan adalah GG. Adanya perbedaan disebabkan oleh perbedaan primer yang digunakan.  Menurut  Rezaei  dan  Hedayat  (2013) perubahan  frekuensi  genotipe
SNP A>G Mutasi Normal
menggambarkan adanya evolusi, berupa seleksi alam, penyimpangan genetik, mutasi, dan aliran gen yang bekerja pada kumpulan gen tertentu dari waktu ke waktu.
Gambar 3. SNP gen CAST pada (A) ayam in ovo feeding, (B) ayam KUB, dan (C) ayam Merawang
Tabel 1. Frekuensi genotipe gen CAST tiga jenis ayam kampung

## Frekuensi Alel Gen CAST
Gen  CAST  posisi  ditemukan  2  alel  yaitu  alel  A  dan  alel  G  (Tabel  2).  Hasil  analisis frekuensi alel  memperlihatkan bahwa alel  yang dominan  pada ketiga jenis ayam kampung adalah  alel  A.  Tingginya  alel  A  pada  semua  jenis  ayam  kampung  menjadikan  nilai  alel  A sebagai patokan untuk penentuan sifat monomorfik dan polimorfik pada ketiga jenis  ayam kampung.
Nilai  frekuensi  alel  A  menunjukkan  bahwa  ayam in  ovo  feeding bersifat  polimorfik, sedangkan  pada  ayam  KUB  dan  kampung  Merawang  bersifat  monomorfik  (Tabel  2).  Nei dan  Kumar  (2000)  menyatakan  bahwa  polimorfik  terjadi  karena  adanya  viariasi  alel  yang muncul  pada  populasi  dengan  nilai  yang  dihasilkan  kurang  dari  atau  sama  dengan  nilai
Jenis Ayam Kampung N (ekor)
Frekuensi Genotipe AA N (ekor) AG N (ekor) KUB 15 0,93 14 0,07 1 Merawang 14 1,00 14 0,00 0 In ovo feeding 15 0,87 13 0,13 2 A B C
0,95.  Allendorf  dan  Luikart  (2006)  menyatakan  bahwa  suatu  alel  dikatakan  monomorfik apabila memiliki nilai frekuensi salah satu alel mencapai 1,00.
Tabel 2. Frekuensi alel gen CAST tiga jenis ayam kampung
Jenis Ayam Kampung N Frekuensi Alel A N G N KUB 30 0,97 29 0,03 1 Merawang 28 1,00 28 0,00 0 In ovo feeding 30 0,93 28 0,07 2
Frekuensi  alel  ayam  kampung in  ovo  feeding yang  bersifat  polimorfik, mengindikasikan adanya perbedaan variasi alel ayam kampung in ovo feeding dengan jenis ayam kampung lainnya, sehingga dapat menjadi informasi penting untuk dilakukan seleksi yang  berhubungan  dengan  gen  CAST.  Selain  memiliki  variasi  alel  yang  berbeda,  ayam kampung in  ovo  feeding juga  memiliki  daging  dengan  tingkat  keempukan  yang  lebih  baik dibanding ayam lokal dan ayam KUB (Saifullah et al ., 2021).

## Heterozigositas dan Keseimbangan Hardy-Weinberg pada Gen CAST
Hasil analisis frekuensi genotipe ketiga jenis ayam kampung (Tabel 1)  menunjukkan bahwa  hanya  ayam  kampung in  ovo  feeding yang  memenuhi  kriteria  uji heterozigositas karena  mempunyai  dua  genotipe  heterozigot.  Sedangkan  ayam  KUB  dan  ayam  kampung Merawang tidak memenuhi kriteria. Hal ini disebabkan karena ayam KUB hanya memiliki 1 genotipe  heterozigot  dan  ayam  kampung  Merawang  tidak  memiliki  genotipe  heterozigot sama sekali.
Tabel 3. Nilai Heterozigositas dan Hardy-Weinberg gen CAST pada ayam kampung in ovo feeding Jenis Ayam Kampung Ho He H Rata-Rata X 2 F Tabel In ovo feeding 0,1333 0,1287 0,1244 0,0370 3,481
Hasil  analisis  nilai heterozigositas pengamatan  (Ho), heterozigositas harapan  (He), dan keseimbangan Hardy-Weinberg gen CAST pada ayam kampung in ovo feeding (Tabel 3)  menunjukkan  bahwa  ayam  kampung in  ovo  feeding memiliki  keragaman  yang  rendah karena nilai Ho dibawah 0,50. Allendorf dan Luikart (2006) mengatakan bahwa keragaman genetik tinggi jika memiliki nilai heterozigositas diatas 0,50. Nilai Ho dan He menjadi atribut acuan  tingkat  keragaman  genetik  dalam  suatu  populasi.  Semakin  tinggi  nilai  Ho  maka semakin  tinggi  tingkat  keragaman  dalam  populasi.  Sebaliknya,  semakin  rendah  nilai  Ho maka semakin rendah pula tingkat keragaman dalam populasi.
Pengujian  keseimbangan  Hukum  Herdy-Weinberg  pada  ayam  kampung in  ovo feeding dilakukan  dengan  menggunakan  uji  Chi-square.  Nilai  Chi-square  pada  ayam kampung in  ovo  feeding sebesar  0,0370  lebih  kecil  daripada  nilai  F  Tabel  3,481,  hal  ini mengindikasikan  bahwa  pada  populasi  ayam  kampung in  ovo  feeding berada  dalam keseimbangan  Hardy-Weinberg.    Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  populasi  ayam  kampung in ovo feeding memiliki frekuensi genotipe dan alel selalu konstan dan tidak ada perubahan dari  satu  generasi  ke  generasi  selanjutnya.  Populasi  yang  cukup  besar  tidak  akan mengalami perubahan dari satu generasi ke generasi berikutnya apabila terjadi perkawinan secara acak (Allendorf dan Luikart, 2006).

## KESIMPULAN
Gen CAST pada ayam kampung khususnya ayam KUB, ayam Merawang dan ayam kampung in  ovo  feeding memilki  dua  genotipe  yaitu  genotipe  AA  dan  AG  serta  memiliki frekuensi alel A yang tinggi dan alel G yang rendah. Ayam kampung in ovo feeeding bersifat polimorfik,  sedangkan  ayam  KUB  dan  ayam  Merawang  bersifat  monomorfik.  Ayam kampung in ovo feeding berada dalam keseimbangan Hukum Herdy-Weinberg.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  CV.  Bittara  Wanua  yang  telah  memberikan  fasilitas penelitian  serta  kepada  program  Prioritas  Riset  Nasional  (PRN)  Kemenristek/BRIN  yang telah memberikan bantuan dana.

## DAFTAR PUSTAKA
Allendorf,  F.  W.,  &  Luikart,  G.  H.  (2006). Conservation  and  Genetics  of  Populations . Blackwell Publishing. Oxford, UK.
Aryanti, F., Aji, M. B., & Budiono, N. (2013). Pengaruh Pemberian Air Gula Merah terhadap Performans Ayam Kampung Pedaging. Jurnal Sain Veteriner , 31 (2), 156 –165.
Asaf, V. N. M., Kumar, A., Rahim, A., Sebastian, R., Mohan, V., Dewangan, P., & Panigrahi, M.  (2014).  An  Overview  on  Single  Nucleotide  Polymorphism  Studies  in  Mastitis Research. Veterinary World , 7 (6), 416 –421.
https://doi.org/10.14202/vetworld.2014.416-421
Biswas,  A.  K.,  Tandon,  S.,  &  Beura,  C.  K.  (2016).  Identification  of  Different  Domains  of Calpain  and  Calpastatin  from  Chicken  Blood  and  Their  Role  in  Post-Mortem  Aging  of Meat during Holding at Refrigeration Temperatures. Food Chemistry , 200 , 315 –321. Harahap,  A.  S.,  Sumantri,  C.,  Ulupi,  N.,  Darwati,  S.,  &  Sartika,  T.  (2017).  Identifikasi Keragaman  Gen  Calpastatin  (CAST)  pada  Ayam  Lokal  Indonesia. Jurnal  Veteriner , 18 (2), 192. https://doi.org/10.19087/jveteriner.2017.18.2.192
Iriyanti,  N.,  Santosa,  R.  S.  .,  &  Rachmawati, W.  (2014).  Blood  Profile  and  Performance  of Native  Chicken  with  Functional  feed. International  Journal  of  Poultry  Science , 13 (11),
645 –651.
Nei,  M.,  &  Kumar,  S.  (2000). Molecular  Evolution  and  Phylogenetics .  Oxford  University Press, New York.
Prastowo,  S.,  Herowati,  N.,  Widyas,  N.,  Pambuko,  G.,  &  Vanessa,  R.  (2021).  Perubahan Frekuensi  Alel  Gen  Growth  Hormone  pada  Populasi  Kambing  Keturunan  Boer  dan Hubungannya  dengan  Ukuran  Tubuh. Jurnal  Ilmu  Ternak  Universitas  Padjadjaran , 21 (1), 18 –26.
Renwick,  A.,  Davison,  L.,  Spratt,  H.,  Patrick  King,  J.,  &  Kimmel,  M.  (2001).  DNA Dinucleotide  Evolution  in  Humans:  Fitting  Theory  to  Facts. Genetics , 159 ,  737 –747. https://doi.org/https://doi.org/10.1093/genetics/159.2.737 Rezaei, N., & Hedayat, M. (2001). Allele Frequency . In Brenner’s Encyclopedia of Genetics: Second  Edition (pp.  77 –78).  Elsevier  Inc.  https://doi.org/10.1016/B978-0-12-374984- 0.00032-2
Saifullah,  S.  (2021).  Keragaman  Gen  Calpastatin  dan  Hubungannya  dengan  Sifat Pertumbuhan, Kualitas Karkas, dan Kualitas Daging Tiga Jenis Ayam Kampung. Tesis tidak dipublikasikan. Makassar: Fakultas Peternakan Universitas Hasanuddin.
Saifullah, S., Dagong, M. I. A., & Pakiding, W. (2021). Physical Meat Quality Comparison of Selected  KUB  Chicken,  Original  Kampung  and  Improved  Kampung  Chicken  with  In Ovo  Feeding  Technology. IOP  Conference  Series:  Earth  and  Environmental  Science ,
Tamzil,  M.,  Noor,  R.,  Hardjosworo,  P.,  Manalu,  W.,  &  Sumantri,  C.  (2014).  Hematological Respone  of  Chicken  with  Different  Heat  Shock  Protein  70  Genotypes  to  Acute  Heat Stress. International Journal of Poultry Science , 13 (1), 14 –20.
Wakchaure, R., & Ganguly, S. (2015). Marker Assisted Selection (MAS) in Animal Breeding:
A Review. Journal of Drug Metabolism & Toxicology , 06 (05). https://doi.org/10.4172/2157-7609.1000e127
Yuliati,  S.,  Helmi,  T.  Z.,  Rinidar,  R.,  Balqis,  U.,  Erwin,  E.,  &  Rosmaidar,  R.  (2019).  Kajian Molekuler Karakteristik Gen Calpastatin (CAST) pada Kambing Boerka ( Capra hircus ). Jimvet , 3 (4), 206 –216.
Zhou, Y. G., Xiong, Y., Yang, C. W., Jiang, X. S., Ran, J. S., Jin, J., Wang, Y., Lan, D., Ren, P., Hu, Y. D., & Liu, Y. P. (2017). Experimental Verification of CAPN1 and CAST Gene Polymorphisms  in  Different  Generations  of  Da-Heng  Broilers. BioMed  Research International , 2017 . https://doi.org/10.1155/2017/7968450