## LACTIC ACID BACTERIA FROM CINCALUK AND THE ACTIVITY AGAINST Vibrio alginolyticus AND Aeromonas hydrophila
Nursyirwani, Valentina Dian BP, Irwan Effendi*
1 Faculty of Fishery and Marine Sciences, University of Riau, Indonesia. * helpingirwan@gmail.com

## Abstract
Lactic acid bacteria (LAB) has been applied as probiotic mainly to prevent pathogens. This group of bacteria can be found in marine fish products including fermented, shrimp product, cincaluk. The objective  of  this  research  was  to  isolate  LAB  from  cincaluk,  and  examined  the  activity  against pathogen V. alginolyticus and A. hydrophila. The research was conducted on March-Juny, total of 12 isolates were obtained from cincaluk survey method. The result of research showed that all isolates round, creamy white, smooth-edged, raised surface, and the size is 1.0 to 3.0 mm. The physiological and biochemical test showed that get all isolates had a Gram-positive, catalase positive and are indole negative, 10 isolates were motile, as many as five isolates have citric positive, 10 isolates is Methyl Red (+), all isolates ferment sucrose and lactose, while only 9 isolates ferment glucose, and as much as 6 isolates that produce sulfide. All isolates were found to have inhibitory effects against bacteria V. alginolyticus and A. hydrophila. The highest antimicrobial activity is indicated by B isolates with an average diameter of 12.3 mm and inhibition zone antivibrio activity of 6.3 units. Isolates B with an average diameter of inhibition zone of 9.7 mm and 3.7 units antiaeromonas activity.
Keywords: Isolation, Lactic Acid Bacteria, Cincaluk, V. alginolyticus, A. hydrophila

## 1. PENDAHULUAN
Usaha  budidaya  perikanan  laut  dan  air tawar  semakin  berkembang  sejalan  dengan tingginya  konsumsi  ikan  sebagai  salah  satu sumber protein hewani. Namun, sering dijumpai masalah  seperti  serangan  penyakit  yang ditimbulkan  bakteri  atau  virus  dan  lambatnya pertumbuhan  ikan.  Berbagai  usaha  telah dilakukan  untuk  mencegah  terjadinya  serangan penyakit  seperti  dengan  penggunaan  antibiotik, pemberian  imunostimulan,  pemberian  pakan berprotein  tinggi  dan  pemberian  vitamin  untuk meningkatkan pertumbuhan ikan dan ketahanannya terhadap berbagai serangan penyakit.  Namun,  penggunaan  antibiotik  secara terus  menerus  juga  akan  menimbulkan  dampak negatif  terhadap  ikan  dan  juga  perairan budidaya.  Akumulasi  residu  antibiotik  pada daging  ikan  dapat  membahayakan  kesehatan konsumen  dan  penggunaan  antibiotik  secara kontiniu juga dapat menimbulkan mikroba yang resisten dan pencemaran di lingkungan perairan. Oleh  karena    itu,  salah  satu  alternatif  untuk mengatasi  masalah  tersebut  adalah  dengan pemberian probiotik.
Probiotik  merupakan  salah  satu  dari kelompok bakteri asam laktat. Probiotik telah
banyak  diaplikasikan  pada  budidaya  perikanan dan  memberi  efek  positif  terhadap  kesehatan, dapat  menekan  pertumbuhan  bakteri  patogen dan meningkatkan pertumbuhan ikan.
Bakteri  asam  laktat  adalah  bakteri  yang mampu  menghasilkan  asam  laktat,  hidrogen peroksida,  antimikrob  dan  hasil  metabolisme lain  yang  memberikan  pengaruh  positif  bagi produktivitas  (Indriati,  2010).  Sifat  yang terpenting  dari  BAL  ini  adalah  mempunyai kemampuan untuk merombak senyawa kompleks menjadi senyawa yang lebih sederhana sehingga dihasilkan asam laktat. BAL juga dapat menghasilkan senyawa yang bersifat antibakteri (Ruzana, 2011).
Penelitian  bertujuan  untuk  mengisolasi bakteri  asam  laktat  dari  cincaluk  yang  dapat menekan  pertumbuhan  bakteri  patogen,  serta sebagai  referensi  dan  data  bagi  pihak-pihak terkait.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  pada bulan  Maret  sampai  Juni  2016.  Isolasi  dan identifikasi  BAL  dilakukan  di  Laboratorium Mikrobiologi  Laut  Jurusan  Ilmu  Kelautan
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Riau. Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah metode survei, dimana produk makanan yaitu cincaluk segar dijadikan objek pengamatan  dalam  isolasi  bakteri  dan  hasil isolasi  bakteri  diuji  aktivitasnya  terhadap bakteri  patogen V.  alginolitycus dan A. hydrophila .
Pertama  dilakukan  pengambilan  sampel, penanganan  sampel  dengan  cara  mengisolasi, meremajakan  dan  memperbanyak  isolat  BAL dari  sampel  cincaluk,  setelah  itu  dilakukan identifikasi  BAL  berdasarkan  pengamatan morfologi  koloni,  uji  sifat  fisiologis  dan  uji biokimia. Uji sifat fidiologi dan biokimia yang dilakukan  adalah  uji  pewarnaan  Gram,  uji katalase,  uji  motilitas,  uji  indol,  uji  citrat,  uji Methyl  Red,  uji  penggunaan  gula  dan  uji sulfida.  Selanjutnya,  dilakukan  uji  antagonis terhadap  bakteri V.  alginolyticus dan A. hydrophila .  Tujuan  dilakukan  uji  ini  adalah untuk  mengetahui  apakah  isolat  BAL  yang diisolasi  dari  cincaluk  tersebut  bisa  menekan pertumbuhan bakteri patogen seperti bakteri V. alginolyticus dan A. hydrophila .
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  isolasi  dan identifikasi  isolat  BAL  dan  uji  aktivitasnya terhadap  bakteri  patogen  disajikan  dalam bentuk  tabel  dan  gambar.  Selanjutnya  data dianalisis  secara  deskriptif,  didukung  dengan studi  literatur  dan  hasil-hasil  penelitian terdahulu.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolat Bakteri Asam Laktat. Hasil isolasi bakteri  dari  cincaluk  pada  media  agar  MRS setelah  dilakukan  pemurnian  sebanyak  4  kali ditemukan  sebanyak  12  isolat  kandidat  bakteri asam laktat dengan ukuran, warna, bentuk yang hampir sama dari setiap bakteri. Penambahan 1 gr  CaCO3  kedalam  media  tumbuh  bakteri bertujuan dalam seleksi tahap awal pada isolasi dan  pemurnian  BAL  karena  CaCO3  (Kalsium karbonat) yang bersifat basa memiliki kemampuan  untuk  menetralkan  produksi  asam yang  dihasilkan  oleh  BAL,  sehingga  terbentuk zona  jernih  di  sekitar  koloni  BAL  akibat penetralan  oleh  CaCO3  terhadap  asam  yang dihasilkan oleh BAL (Gambar 1).
Gambar 1. Hasil positif pada media MRS Agar + CaCO3
Pada  Gambar  1  dapat  dilihat  adanya  zona jernih di sekitar koloni bakteri, sehingga diduga isolat-isolat tersebut termasuk kedalam kelompok  BAL.  Bakteri  tersebut  tumbuh  pada pH  5-7.  Bakteri  yang  tumbuh  pada  pH  3-8 merupakan  salah  satu  ciri  bakteri  dari kelompok  BAL  yang  sering  dimanfaatkan sebagai  probiotik.  Untuk  memastikan  apakah isolat-isolat  bakteri  tersebut  termasuk  BAL, maka  dilakukan  identifikasi  secara  morfologi, sifat fisiologi dan biokimia sel.
Proses  isolasi  ini  telah  berhasil  dilakukan oleh  penelitian  sebelumnya  yang  memperoleh isolat dari produk perikanan lainnya. Dwi et al (2012) berhasil mengisolasi isolat dari fermentasi  kasava  pada  pembuatan  growol sebanyak  230  isolat  dari  genus Lactobacillus . Kivanc et  al (2011)  berhasil  mengisolasi  45 BAL dari 10 jenis boza (makanan di Turkey). Morfologi Koloni BAL. Hasil
pengamatan morfologi koloni bakteri menunjukkan  hampir  tidak  ada  perbedaan antara  ke-12  isolat  BAL  tersebut.  Berikut  ini merupakan  hasil  dari  pewarnaan  Gram  dan pengamatan  morfologi  dari  keduabelas  isolat bakteri (Tabel 1).
Berdasarkan Tabel 1 (sumber data primer) dapat  dilihat  bahwa  koloni  isolat  BAL  dari cincaluk  dapat  tumbuh  dengan  baik  pada medium MRS Agar, pada umumnya berbentuk bundar  dengan  diameter  1,0  –  3,0  mm,  dan berwarna  putih  susu.  Semua  isolat  memiliki pinggiran  licin  dan  permukaan  yang  timbul. Hasilnya  bersifat  Gram  positif  serta  katalase positif.
Tabel 1.Morfologi Koloni dan Uji Biokimia.
Hal  tersebut  hampir  sama  dengan  yang dilakukan  pada  penelitian  yang  sebelumnya yang  dilakukan  oleh  (Ilmiah et  al ,  2012) menjelaskan  penampilan  koloni  isolat  kandidat probiotik  memiliki  variasi  warna  koloni  terdiri dari  krem,  putih,  putih  susu,  putih  transparan, putih  kekuningan  dan  kuning.  Ukuran  dan bentuk  koloninya  juga  bermacam-macam  ada yang bulat besar dan bulat kecil.
Hasil  pengamatan  terhadap  karakteristik koloni  bakteri  menunjukkan  adanya  beberapa perbedaan  antara  ke-12  isolat  BAL  tersebut. Hasil  penelitian  menunjukkan  hampir  semua isolat bersifat motil, indol negatif, sitrat (+) dan (-)  uji  gula  (+)  menghasilkan  glukosa,  laktosa dan  sukrosa,  dan  menghasilkan  sulfid  (+)  dan tidak  menghasilkan  sulfid  (-).  Untuk  lebih jelasnya dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Uji Fisiologi dan Biokimia.
Pada  Tabel  2  didapatkan  hasil  dari pengamatan  uji  fisiologi  dan  uji  biokimia  dari BAL yang diisolasi dari cincaluk. Sebanyak 10 isolat  BAL  bersifat  motil  (+)  dan  2  isolat inmotil (-), semua isolat BAL memiliki indol (- ), 5 isolat BAL memiliki sitrat (+) dan 7 isolat memiliki  sitrat  (-),  10  isolat  BAL  dengan Methyl  Red (+)  dan  2  isolat  memiliki Methyl
Red (-),  semua  isolat  BAL  memfermentasi sukrosa dan laktosa dan 9 isolat memfermentasi glukosa,  6  isolat  BAL  menghasilkan  sulfida dan 6 isolat tidak menghasilkan sulfida.
Sifat  fisiologi  isolat  bakteri  yang  diuji meliputi sifat-sifat sebagai berikut: reaksi Gram dengan  pewarnaan  atau  dilakukan  dengan  uji kalium  hidroksida  (KOH  3%).  Isolat  bakteri bersifat  Gram  negatif  (-)  jika  berwarna  merah atau  terbentuk  benang  lendir  bakteri  (kira-kira 5-20  mm  panjangnya).  Gram  positif  (+)  jika berwarna  ungu  atau  tidak  terbentuk  benang lendir, kemampuan isolat memproduksi katalase,  kemampuan  isolat  menghidrolisis pati,  kemampuan  isolat  dalam  penggunaan gula,  kemampuan  isolat  dalam  penggunaan sitrat,  kemampuan  isolat  dalam  melakukan oksidasi, kemampuan motilitas isolat (Cappuccino dan Sherman, 1996).
Aktivitas dan Bakteri Patogen. Hasil uji aktivitas  BAL  terhadap  bakteri  patogen  dilihat dari  zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar cakram yang diletakkan pada permukaan media yang  berisi  bakteri  patogen.  Zona  bening diukur dengan menggunakan jangka sorong dan dirata-ratakan.  Hasil  pengukuran  rata-rata aktivitas  zona  bening  terhadap  bakteri V. alginolyticus dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Daya Hambat BAL Terhadap Bakteri V. alginolyticus
Berdasarkan Tabel 3 dapat dilihat nilai rata-rata daya hambat isolat yang diisolasi pada medium MRS  Agar  terhadap  bakteri V.  alginolyticus berkisar  antara  3,6  mm  sampai  6,3  mm.  Nilai daya hambat yang paling tertinggi ialah isolat B sebesar  6,3  mm,  dan  nilai  hambat  yang terendah  adalah  isolat  K  sebesar  3,6  mm, dimana nilai kontrol positif sebesar 10 mm dan nilai kontrol negatif 0 mm.
Setelah dilakukan  pengamatan juga  didapatkan hasil pengukuran rata-rata aktivitas zona bening terhadap  bakteri A.  hydrophila yang  dapat dilihat pada Tabel 4 dibawah ini.
Tabel  4.  Daya  Hambat  Terhadap  Bakteri A. hydrophila
Nilai rata-rata daya hambat isolat yang diisolasi pada  medium  MRS  Agar  terhadap  bakteri A. hydrophila berkisar  antara  0,3  mm  sampai  3,7 mm.  Nilai  daya  hambat  yang  paling  tertinggi ialah isolat B sebesar 3,7 mm dan nilai hambat yang terendah ialah isolat J dan isolat K sebesar 0,3  mm,  dimana  nilai  kontrol  positif  sebesar  6 mm dan nilai kontrol negatif 0 mm.
Hasil  yang  diperoleh  berupa  terbentuknya zona hambat sudah cukup membuktikan bahwa isolat  bakteri  asam  laktat  yang  diisolasi  dari cincaluk mempunyai kemampuan untuk menekan  pertumbuhan  bakteri  patogen  ( V. algynoliticus dan A.  hydrophila ).  Nilai  hambat isolat  BAL  rata-rata  diatas  6  mm,  ini disebabkan  oleh  ukuran  kertas  cakram  yang digunakan  sehingga  ukuran  luasan  usapan bakteri  pada  saat  uji  mencapai  6  mm.  Namun, itu  tidak  menjadi  alasan  utama  karena  masih ada  faktor  lain  yaitu  aktivitas  enzim  yang dihasilkan oleh bakteri asam laktat.
Pada  cincaluk,  semua  isolat  yang  diuji mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri V. alginolyticus dan A.  hydrophila yang  tumbuh pada  media  MRS  Agar.  Isolat  B  mempunyai kemampuan yang lebih besar untuk menghambat  dan  membunuh  bakteri V. alginolyticus dan  bakteri A.  hydrophila, dan bisa  diduga  Isolat  B  mampu  menghasilkan bakteriosin  yang  lebih  banyak  dibandingkan isolat  BAL  lainnya.  Munatin  dan  Khanifa (2012)  mengatakan  kemampuan  bakteri  asam laktat  untuk  menekan  pertumbuhan  bakteri patogen  disebabkan  karena  kemampuannya
untuk  memproduksi  senyawa  antimikroba seperti  asam  laktat  dan  asam  asetat,  hidrogen peroksida yang cukup besar dan bakteriosin. Isolat  BAL  yang  diisolasi  dari  cincaluk menunjukkan  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri  patogen  dan  bisa  berpotensi untuk  dikembangkan  sebagai  salah  satu alternatif  sumber  antibakteri  sehingga  dapat memberikan  nilai  tambah  terhadap  kegiatan budidaya ikan.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  Sebanyak  12  isolat  BAL telah  ditemukan  dari  cincaluk.  Semua  koloni isolat  BAL  yang  tumbuh  umumnya  berbentuk bulat,  berwarna  putih  susu,  bersifat  Gram  (+), memiliki  katalase  (+),  dan  bersifat  indol  (-). Sebanyak  10  isolat  bersifat  motil  (+),  dan  2 isolat  bersifat  inmotil  (-).  Sebanyak  5  isolat memiliki  sitrat  (+)  dan  7  isolat  memiliki  sitrat (-).  Sebanyak  10  isolat  memiliki Methyl  Red (+),  dan  2  isolat  memiliki Methyl  Red (-).  Ke- 12  isolat  memfermentasi  sukrosa  dan  laktosa, sedangkan yang mengalami fermentasi glukosa hanya  9  isolat.  Sebanyak  6  isolat  yang menghasilkan H2S dan gas.
Semua  isolat  yang  diuji  memilki  daya  hambat terhadap  bakteri V.  alginolyticus dan A. hydrophila . Uji sensitivitas tertinggi ditunjukkan  oleh  isolat  B  dengan  rata-rata diameter  zona  hambat  12,3  mm  dan  aktivitas antivibrio  6,3  unit.  Isolat  B  dengan  rata-rata diameter  zona  hambat  9,7  mm  dan  aktivitas antiaeromonas  3,7  unit.  Daya  hambat  Isolat BAL  yang  ditemukan  dari  cincaluk  terhadap bakteri  patogen  ( V.  alginolyticus dan A. hydrophila) lebih  kecil  dari  pada  daya  hambat kontrol  positif  ( amoxilin ).  Diharapkan  dari hasil  penelitian  ini  bisa  dilanjutkan  untuk melakukan  penelitian  dengan  uji  biokimia lanjutan  dan  uji  genetik  untuk  memperoleh genus  dan  spesies.  Disarankan  juga  dilakukan uji  antagonis  terhadap  bakteri  lain  seperti: Pseudomonas  dan  Strepttococcus  agalactiae dan analisis metabolit sekunder yang dihasilkan oleh bakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Cappuccino,  J.G.,  and  N.  Sherman.  1996.  Microbiology  a  Laboratory  Manual.  The  Benjamin Cummings, California.
2. Dwiastuti, E.A,. 2012. Pengaruh Penambahan Serbuk Bawang Putih ( Allium sativum ) dan Serbuk Cabai  ( Capsium  Annuum  L .)  terhadap  Karakteristik  Cincalok.  Pontianak:  Jurusan  Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tanjungpura, (Skripsi).
3. Ilmiah,  Sukenda,Widanarni,  E.  Haris.  2012.  Seleksi  bakteri  probiotik  dari  terumbu  karang  dan lingkungan  budidaya  ikan  kerapu  macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus).Jurnal  Akuakultur Indonesia 11(2), Bogor.hal 109‒117.
4. Indriati,  N.,  Nandang  Priyanto,  dan  Radestya,  T.  2010.  Penggunaan  Dichloran  Rose  Bengal Chloramphenicol  Agar  (Drbc)  Sebagai  Media  Tumbuh  Kapang  Pada  Produk  Perikanan. Jurnal Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan . Vol 5, no.2.
5. Kivanc,  M.,  Meral  Yilmaz,  and  Erdogan,  C.  2011.  Isolation  and  Identification  of  Lactid  Acid Bacteria from Boza and their microbial activity Againts Several Reporter Strains. 35 (2001) 313- 324.
6. Munatin,  A  dan  Khanifa.  2012, Uji potensi  probiotik Lactobacillus  plantarium secara  in-vitr o , Malang. ALCHEMY , Vol. 2.
7. Ruzana.  2011.  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Asam  Laktat  Penghasil  Antibakteri  dari  Feses Bayi. [Tesis]. Universitas Brawijaya, Malang.
***