## Pengaruh Penambahan Vitamin B  pada Media Blotong
12 Kering terhadap Pertumbuhan Populasi Dunaliella salina
Effect of Adding Vitamin B on Blotong Dry Media 12 Againts Population Growth Dunaliella salina
Rahayu Kusdarwati, Mustofin Akhyar dan Boedi S. Rahardja
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031 - 5911451

## Abstract
Dunaliella salina is one natural food that is good enough for the larvae of sea urchins and also can be used as food Brachionus plicatilis and Artemia in aquaculture feed Artemia . Blotong is precipitated in the process of purification juice before cooking and crystallized into sugar. Purification is a process to separate the juice from dirt or fibers. Sugarcane is used as fertilizer by using oven dried first. Vitamin B  is needed some algae to build 12 proteins and essential as a coenzyme necessary for DNA synthesis in the formation of new cells. Vitamin B  is a
12
coenzyme  B -dependent  methionine  synthase  and  vitamin  B -dependent  ribonucleotide  reductase.  Vitamin  B -
12 12 12
dependent  methionine  synthase  function  for  synthesis  methionin  (essential  amino  acids),  whereas  vitamin  B -
12
dependent ribonucleotide reductase functions to DNA synthesis.
This study aims to determine the effect of vitamin B  in dry blotong media on the growth of D. salina 12 population and to determine the optimal dosage of vitamin B  in dry blotong media which can produce the highest 12 population growth of D. salina . This research used Completely Randomized Design (CRD) with seven treatments and three replications. The study used namely: Fertilizer blotong dried with the addition of vitamin B  10 g / L (A), dose of 12
12 ug / L (B), the dose of 14 ug / L (C), a dose of 16 ug / L (D), dose 18 ug / L (E), a dose of 20 ug / L (F) and control treatment of dry sugarcane fertilizer without adding vitamin B12 or dose 0 g / L (G).
The main parameter used is the population of D. salina , while supporting the water quality parameters (salinity,  pH  and  water  temperature).  Data  were  analyzed  with ANOVA  (analysis  of  variants)  and  to  know  the differences among the treatments performed Duncan's Multiple Range Test. The results showed that the addition of vitamin B  in dry blotong media had no effect on the growth of population D. salina (p> 0.05).
12
Keywords: Dunaliella salina , vitamin B , blotong dry, population growth 12

## Pendahuluan
Dunaliella  salina merupakan  salah  satu pakan  alami  yang  cukup  baik  untuk  larva  teripang. Fitoplankton ini juga dapat digunakan sebagai pakan Brachionus  plicatilis dan  pakan Artemia pada budidaya Artemia (Isnansetyo  dan  Kurniastuty, 1995). D.  salina mendapat  perhatian  besar  di beberapa negara seperti Australia, Amerika dan Israel karena  dapat  menghasilkan  -karoten,  –karoten, gliserol  dan  zat  anti  oksidan  (El  Baz et  al .,  2002).
Kandungan nutrisi D. salina yang ditunjukkan dalam bahan  kering  adalah  protein  (57%),  karbohidrat (32%)  dan  lemak  (6%)  (Bekker,  1994 dalam Putranto, 2007).
Isnansetyo  dan  Kurniastuty  (1995)
b e r p e n d a p a t   b a h w a   k u l t u r   f i t o p l a n k t o n membutuhkan unsur hara makro yang terdiri dari N, P,  K,  S,  Si,  Na,  Ca  maupun  unsur  hara  mikro  yang terdiri  dari  Fe,  Zn,  Mn,  Cu,  Mg,  Co,  B.  Pemenuhan kebutuhan  unsur  hara  dalam  kultur  fitoplankton umumnya diperoleh dari pupuk. Selain dari senyawa kimia,  pupuk  untuk  kultur  fitoplankton  juga  dapat berasal  dari  senyawa  organik  yang  berasal  dari limbah  pertanian  maupun  berasal  dari  limbah
pengolahan  pabrik.  Salah  satunya  adalah  blotong yang berasal dari limbah pabrik gula. Hamawi (2005) menyatakan bahwa blotong merupakan hasil endapan dalam  proses  pemurnian  atau  penampisan  nira sebelum dimasak dan dikristalkan menjadi gula pasir. Vitamin  B   diperlukan  beberapa  alga  untuk 12 membangun  protein  essensial  dan  sebagai  koenzim penting  untuk  sintesis  DNA  dalam  pembentukan  sel baru.  Vitamin  B   merupakan  koenzim
12 12
dependent  methionine  synthase dan vitamin  B - 12 dependent  ribonucleotide  reductase . Vitamin  B - 12 dependent  methionine  synthase berfungsi  untuk sistesis methionin (asam amino essensial) (Matthews and  Banerjee,  1990)  sedangkan vitamin  B - 12 dependent  ribonucleotide  reductase berfungsi  untuk sintesis  DNA  (Croft ,  2006).  Berdasarkan  hal inilah  maka  perlu  dilakukan  penelitian  tentang pengaruh  penambahan  vitamin  B   pada  media 12
blotong  kering  terhadap  pertumbuhan  populasi D. salina.
vitamin  B -
et  al .

## Metodologi
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  pada tanggal  10  Oktober  sampai  dengan  tanggal  20 November 2010 di Laboratorium Fakultas Perikanan dan  Kelautan,  Universitas  Airlangga.  Penelitian  ini menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  tujuh  perlakuan  dan  tiga  ulangan.  Perlakuan vitamin  B   yaitu  :  Pupuk  blotong  kering  dengan 12 penambahan  vitamin  B   10 ì g/L  (A),  dosis  12 ì g/L 12 (B),  dosis  14 ì g/L  (C),  dosis  16 ì g/L  (D),  dosis  18 ì g/L  (E),  dosis  20 ì g/L  (F)  dan  perlakuan  kontrol yaitu  pemberian  pupuk  blotong  kering  tanpa penambahan Vitamin B  atau dosis 0 ì g/L (G). 12 Prosedur kerja penelitian meliputi persiapan alat  dan  bahan,  sterilisasi  alat  dan  bahan  kemudian persiapan  pembuatan  stok  blotong  kering  dan vitamin  B .  Sterilisasi  alat  dan  air  laut  merupakan 12 tahap  awal  kultur  skala  laboratorium  karena  kultur skala  laboratorium  merupakan  kultur  monospesies dan  dimaksudkan  untuk  menghindari  adanya kontaminasi  oleh  mikroorganisme  lain.  Peralatan yang akan digunakan dicuci sampai bersih kemudian dibilas  dengan  air  tawar.  Peralatan  berukuran  besar yang  sudah  bersih  direndam  dengan  larutan  klorin 150  ppm  selama  24  jam.  Setelah  itu,  peralatan dikeringkan di bawah sinar matahari. Peralatan yang tidak  tahan  panas  seperti  selang  aerasi  disimpan  di tempat  yang  steril,  sedangkan  botol  plastik  ditutup dengan  sterofoam  yang  steril.  Peralatan  berukuran kecil  dan  terbuat  dari  kaca  tahan  panas  yang  akan digunakan  untuk  kultur  disterilkan  dengan
o menggunakan autoclave dengan  suhu  121 C  selama 15  menit.  Peralatan  ini  harus  ditutup  dengan  kapas dan  kasa  kemudian  dibungkus  dengan  aluminium foil.
Air  laut  yang  digunakan  sebagai  media kultur  bersalinitas  32  ppt.  Sterilisasi  air  laut dilakukan  dengan  menggunakan  larutan  klorin.  Air laut  terlebih  dahulu  disaring  dengan  kapas  yang diletakkan  dalam  corong  air  lalu  disterilkan  dengan memberikan  klorin  sebanyak  60  ppm  dan  diaerasi selama  24  jam  lalu  Na  Thiosulfat  20  ppm  diberikan untuk  menghilangkan  sisa–sisa  bau  klorin.  Menurut Ekawati  (2005),  air  laut  yang  telah  steril  disimpan dalam wadah yang tidak tembus cahaya dan tertutup. Hal  ini  dimaksudkan  agar  tidak  tumbuh  lumut  atau mikroorganisme lain.
Blotong  dikeringkan  menggunakan  oven o dengan suhu berkisar antara 60-70 C selama 24 jam.
Blotong  yang  sudah  kering  kemudian  digiling  dan disaring  untuk  memisahkan  dari  kotoran  dan  serat. Selanjutnya,  blotong  tersebut  dilarutkan  dalam
aquades.  Larutan  blotong  kemudian  disaring  dengan kertas  saring  dan  disterilkan  menggunakan autoclave .  Dosis  blotong  kering  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  0,5  mg/L.  Pembuatan larutan  pupuk  blotong  untuk  kultur D.  salina dapat menggunakan  rumus  (Satyantini  dan  Masithah, 2008) :
Keterangan: Q = berat bahan yang dilarutkan (mg, gram) V = volume pelarut/ aquadest (ml, L) P = volume penggunaan dalam media kultur (ml/L) K = konsentrasi pupuk yang diketahui (ppm, mg/L)
Vitamin B  yang digunakan adalah vitamin 12 B   murni  yang  berbentuk  serbuk.  Vitamin  B 12 12
kemudian  dilarutkan  dalam  aquades  200  ml  yang sudah  disterilkan  terlebih  dahulu  dengan  dosis penggunaan  2  ml/L  media  kultur.  Pembuatan  stok larutan  vitamin  B   menggunakan  rumus  yang  sama 12 dengan  pembuatan  larutan  blotong.  Lingkungan kultur  dapat  mempengaruhi  pertumbuhan D.  salina , oleh karena itu lingkungan dikondisikan sama untuk setiap  perlakuan.  Lingkungan  kultur D.  salina yang o diharapkan  dalam  penelitian  adalah  suhu  25  –  30 C, salinitas  30  -  32  ppt,  intensitas  cahaya  1300  –  2300 lux, pH 7 – 9 dan photoperiod 18 jam dalam keadaan terang  dan  6  jam  dalam  keadaan  gelap  (Borowitzka, 1990). D.  salina yang  digunakan  untuk  penelitian diperoleh  dari  Balai  Budidaya  Air  Payau  Jepara. Media kultur yang telah siap selanjutnya dimasukkan ke  dalam  botol  kultur,  diaerasi  dan  ditambahkan nutrient. Bibit D. salina murni kemudian dimasukkan ke  dalam  botol  sesuai  dengan  jumlah  kepadatan sebesar 500.000 sel/ml. Penghitungan jumlah bibit D. salina yang  diperlukan  untuk  kultur,  dapat menggunakan  rumus  sebagai  berikut  (Ekawati, 2005):
Keterangan:
V1 = Volume bibit untuk penebaran awal (ml) N1 = Kepadatan bibit/ stock Dunaliella salina
(sel/ ml)
V2 = Volume media kultur yang dikehendaki (ml) N2 = Kepadatan bibit Dunaliella salina yang dikehendaki (sel/ ml)
Pengaruh Penambahan Vitamin ......
K P V Q × = (Satyantini dan  Masithah, 2008) 1 2 2 1 N V N V × = (Ekawati, 2005)
Pengamatan  pertumbuhan D.  salina dilakukan setiap hari selama 8 hari setelah penebaran awal.  Penghitungan  dilakukan  dengan  menggunakan h a e m o c y t o m e t e r d a n   u n t u k   m e m u d a h k a n penghitungan  digunakan handcounter .  Penghitungan menggunakan metode “ Big Block ” karena ukuran sel D. salina lebih dari 6 ì m.
Cara penghitungan sebagai berikut, terlebih dahulu  menghitung  sel  fitoplankton  mulai  dari  sisi kiri  kotak  ke  arah  kanan  kotak  dan  menghitung  sel yang  berada  di  dalam  garis  atau  yang  mendekati garis batas bagian dalam kotak. Langkah selanjutnya menjumlahkan  penghitungan  pada  blok  A,  B,  C,  D pada  bidang  penghitungan  bagian  atas  dan  bagian bawah pada haemocytometer . Langkah yang terakhir menghitung kepadatan fitoplankton (sel/mL) dengan menggunakan  rumus  penghitungan  “Big  Block” (Satyantini dan Masithah, 2008):
Keterangan : nA, nB, nC, nD = jumlah sel fitoplankton pada blok A, B, C, D 4 =  jumlah blok yang dihitung
Parameter  utama  dalam  penelitian  adalah kepadatan populasi D. salina . Perhitungan kepadatan populasi D.  salina dilakukan  setiap  hari.  Parameter pendukung  dalam  penelitian  adalah  suhu,  pH, salinitas.  Penghitungan  terhadap  suhu,  pH,  salinitas dilakukan  setiap  hari.  Parameter  pendukung digunakan  untuk  melengkapi  data  dari  parameter utama.

## Hasil dan Pembahasan
Pengamatan  jumlah  populasi D.  salina dilakukan setiap hari mulai dari hari pertama sampai dengan  hari  keempat.  Berikut  adalah  tabel  rata-rata pertumbuhan  populasi D.  salina (sel/ml)  masing- masing perlakuan selama penelitian ditampilkan pada Tabel 1.
Dari  data  Tabel  1.  dapat  dijadikan  grafik untuk  melihat  peningkatan  pertumbuhan D.  salina .
Berikut  adalah  grafik  pertumbuhan  populasi D. salina masing-masing  perlakuan  selama  penelitian ditampilkan pada Gambar 6.
(sel/ml) 5
Tabel 1. Rata-rata pertumbuhan populasi D. salina (sel/ml) x 10
Perlakuan Hari ke-0 Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 Hari ke-4 A B C D E F G (kontrol) 5 5 5 5 5 5 5 17,16 16,5 18 9,5 19,33 15,16 17 0 ,00 0 0 ,00 14,5 15 13,67 12,67 14,16 14,33 15,16 0 ,00 0 0 0
,00 0 0 0 7,3 9,67 11,16 11 8,5 8,67 10,16 0 0 0 0 ,00 0 0 ,00 0 5,16 9,33 9,33 7 6,16 8 8,33
Keterangan :
A = dosis blotong kering 0,5 ppm + vitamin B  10  g/L
12 B = dosis blotong kering 0,5 ppm + vitamin B  12 ì g/L
12
C = dosis blotong kering 0,5 ppm + vitamin B  14 ì g/L
12 D = dosis blotong kering 0,5 ppm + vitamin B  16 ì g/L 12 E = dosis blotong kering 0,5 ppm + vitamin B  18 ì g/L
12 F = dosis blotong kering 0,5 ppm + vitamin B  20 ì g/L 12
G = dosis blotong kering 0,5 ppm (tanpa penambahan vitamin B )
12 ì
Gambar 6. menunjukkan pada hari pertama setelah penebaran awal seluruh perlakuan mengalami peningkatan  jumlah  populasi.  Perlakuan  E menempati  urutan  tertinggi  dan  yang  menempati urutan terendah perlakuan D. Walaupun perlakuan E tertinggi  dan  perlakuan  D  terendah  pada  hari pertama, akan tetapi pada hari kedua jumlah populasi perlakuan  D  mengalami  peningkatan  dibandingkan keenam  perlakuan  lainnya  yang  mengalami penurunan.  Pada  hari  ketiga  sampai  hari  keempat seluruh  perlakuan  mengalami  penurunan  dan  pada akhirnya  fase  kematian  terjadi  pada  hari  keempat. Pada  Hasil  ANAVA  dapatdilihat  bahwa  perlakuan dosis  vitamin B12  tidak memberikan pengaruh yang nyata dari hari pertama sampai dengan hari keempat. Pada  hasil  ANAVA  tidak  terdapat  perbedaan  yang nyata  di  antara  hasil  perlakuan  terhadap  hasil pengamatan (F Hitung < F Tabel).
Pada  penelitian  ini  dilakukan  pengukuran kualitas air setiap hari. Kualitas air merupakan faktor penunjang  untuk  pertumbuhan  populasi Dunaliella salina .  Kualitas  air  yang  diukur  adalah  salinitas,  pH dan  suhu  air.  Nilai  salinitas  selama  penelitian berkisar antara 32-41 ppt, pH berkisar antara 8-9 dan o suhu air berkisar antara 28-30 C.
Coutteau  (1996)  mengungkapkan  bahwa fase pertumbuhan plankton ada empat fase yaitu fase adaptasi,  fase  eksponensial,  fase  stasioner  dan  fase kematian.  Berdasarkan  hasil  penelitian  di  atas,  fase adaptasi  pada  hari  pertama  seluruh  perlakuan termasuk  kontrol  mengalami  peningkatan  populasi. Fase  adaptasi  adalah  fase  fitoplankton  akan mengalami  proses  sintesis  protein  baru  dan umumnya  kepadatan  sel  akan  meningkat  (Coutteau, 1996).  Sehingga  pada  fase  ini  sel  fitoplankton  akan mulai  mengalami  peningkatan.  Pada  fase  adaptasi,
perlakuan  E  dengan  dosis  vitamin  B   18 ì g/L 12 memberikan  pertumbuhan D.  salina yang  tertinggi pada  hari  pertama  dibandingkan  dengan  perlakuan lainnya.
Pada  hari  kedua  seluruh  perlakuan mengalami  penurunan.  Lain  halnya  dengan perlakuan  D  pada  hari  kedua  masih  mengalami peningkatan  populasi.  Hal  ini  diduga  karena  pada p e r l a k u a n   D ,   f i t o p l a n k t o n   m a s i h   d a p a t memanfaatkan  nutrisi  yang  terkandung  pada  media.
Pada  hari  kedua  selain  perlakuan  D,  perlakuan lainnya mengalami penurunan. Hal ini diduga proses penyerapan  nutrisi  yang  berasal  dari  pupuk  blotong dan  vitamin  B   tidak  dimanfaatkan  seluruhnya  oleh 12 D.  salina karena  metabolisme  sel  nya  terganggu
akibat  dari  faktor  lingkungan  yang  kurang mendukung (Borowitzka, 1990).
Pada  hari  ketiga  dan  keempat  terjadi  fase penurunan  jumlah  populasi D.  salina pada  seluruh perlakuan,  seharusnya  pada  hari  ketiga  dan  keempat pertumbuhan D.  salina berada  dalam  fase eksponensial.  Pada  penelitian  Chilmawati  dan Suminto  (2008),  menunjukkan  bahwa  Chlorella  sp. yang  dikultur  menggunakan  media  pupuk  komersil selama  10  hari  mengalami  fase  eksponensial  pada hari  keempat  dan  terus  mengalami  peningkatan sampai  hari  keenam  dan  ketujuh.  Dari  penelitian  di atas dapat disimpulkan bahwa pertumbuhan D. salina terhambat.  Fase  eksponensial  yaitu  fase  fitoplankton mengalami  perkembangan  sel  yang  cepat  dan konstan.  Pada  kondisi  kultur  yang  optimum,  laju pertumbuhan  sel  pada  fase  ini  mencapai  maksimal (Coutteau,  1996).  Hal  ini  diduga  adanya  faktor lingkungan  yang  mempengaruhi  pertumbuhan D. salina .  Menurut  pendapat  Ekawati  (2005), pertumbuhan D.  salina dipengaruhi  oleh  beberapa faktor  lingkungan  antara  lain  :  suhu,  salinitas,  pH, cahaya.  Pertumbuhan D.  salina yang  tidak  optimal ini  diduga  karena  nilai  salinitas  yang  berfluktuasi. Sutomo  (1991)  menyatakan  bahwa  naik  atau turunnya  salinitas  sangat  berpengaruh  terhadap tekanan  osmose  dan  mekanisme  osmoregulasi  yang dapat mempengaruhi proses metabolisme yang dapat mengakibatkan  penurunan  pertumbuhan  populasi. Selain  itu,  Mironyuk  dan  Einor  (1986) dalam Sutomo  (1991)  berpendapat  bahwa  salinitas  yang cenderung  meningkat  akan  menghambat  proses fotosintesis.  Soeder  dan  Stengel  (1974) dalam Sutomo  (1991)  mengemukakan  bahwa  naiknya salinitas  dapat  menghambat  proses  respirasi  dan pembentukan sel baru.
Pada Gambar 6. dapat dilihat bahwa adanya pengaruh penambahan vitamin B  pada media kultur. 12 Jika  dibandingkan  dengan  kontrol  terbukti  bahwa vitamin  B   mampu  meningkatkan  pertumbuhan D. 12 salina .  Namun  pada  perlakuan  kontrol  pertumbuhan
D.  salina cukup  bagus  karena  mampu  mengimbangi pertumbuhan  pada  perlakuan  lainnya  dan  penurunan populasi cukup stabil. Jadi dapat disimpulkan bahwa tanpa  penambahan  vitamin  B   pada  media  kultur,
12 fitoplankton  masih  dapat  tumbuh.  Karena  pada pupuk  blotong  kering  terdapat  unsur  hara  yang dibutuhkan  fitoplankton  untuk  pertumbuhan, sehingga  penambahan  vitamin  B   tidak  begitu 12 diperlukan.  Namun  penambahan  vitamin  B   juga 12 dapat  dijadikan  alternatif  lain  untuk  peningkatan jumlah populasi fitoplankton.
Suhu air pada penelitian ini berkisar antara o 28-30 C,  sedangkan  menurut  pendapat  Ekawati (2005)  suhu  air  yang  baik  untuk  pertumbuhan D.
o salina berkisar antara 20-40 C. Jadi, dapat dikatakan bahwa  suhu  air  pada  penelitian  ini  masih  dalam kondisi  optimal.  Suhu  air  juga  dapat  dipengaruhi oleh  intensitas  cahaya  yang  berasal  dari  lampu  dan juga radiasi oleh sinar matahari.
Borowitzka  (1990)  menyatakan  bahwa D. salina dapat  tumbuh  baik  pada  pH  antara  8-9, sedangkan  pada  penelitian  ini  pengukuran  pH  air menunjukkan  bahwa  pH  air  berkisar  8-9.  Hal  ini dapat  dilihat  bahwa  pH  dalam  penelitian  ini  baik untuk pertumbuhan D. salina .
Redjeki  dan  Ismail  (1993) dalam Tjahjo, dkk.  (2002)  menyatakan,  salinitas  yang  optimal untuk  kultur D.  salina berkisar  antara  30–38  ppt, tetapi  salinitas  selama  penelitian  berkisar  antara 32–41  ppt.  Dapat  disimpulkan  bahwa  nilai  salinitas selama penelitian tidak optimum untuk pertumbuhan D. salina .

## Kesimpulan
Penambahan  vitamin  B   pada  media 12 blotong  kering  tidak  berpengaruh  terhadap pertumbuhan populasi D. salina (p > 0,05) dan pada penelitian  ini,  tidak  ada  dosis  vitamin  B   terbaik 12 yang  dapat  menghasilkan  pertumbuhan  populasi D. Salina tertinggi.
D a l a m   k u l t u r   f i t o p l a n k t o n   p e r l u diperhatikan faktor lingkungan agar dapat menunjang keberhasilan dalam kultur fitoplankton. Penambahan vitamin  B   dapat  dijadikan  alternatif  untuk  memacu 12 pertumbuhan fitoplankton.

## Daftar Pustaka
Borowitzka,  M.  A.  1990.  The  Mass  Culture  of Dunaliella  salina. http://www.fao.org. 09/12/2009. 16 hal.
Chilmawati,  D.  dan  Suminto.  2008.  Penggunaan Media  Kultur  yang  Berbeda  terhadap Pertumbuhan Chlorella  sp. Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan.  Universitas Diponegoro. Semarang. 8 hal.
Coutteau,  P.  1996.  Manual  on  The  Production  and
Use  of  Live  Food  for  Aquaculture.  FAO
Fisheries  Technical  Paper  No.  361.  Roma. pp. 7-16
Croft,  M.  T.,  Martin  J.  W.,  and  Alison  G.  S.  2006. Algae  Need  Their  Vitamins.  American Society  for  Microbiology.  Vol  5  no.8.  p 1175-1183.
Ekawati, A. W. 2005. Diktat Kuliah Budidaya Pakan Alami.  Fakultas  Perikanan  Universitas Brawijaya. Malang. hal. 3 – 48.
El  Baz,  F.  K., Ahmed  M, Aboul  E,  Gamal  S.  2002. Accumulation  of  Antioxidant  Vitamins  in Dunaliella  salina.  www.sciencedirect.com. 24/02/2010. 4 pp.
Hamawi,  M.  2005.  Blotong,  Limbah  Busuk Berenergi. Majalah SALAM. Jakarta. 2 hal.
Isnansetyo, A.  dan  Kurniastuty.  1995. Teknik  Kultur Fitoplankton  dan  Zooplankton.  Penerbit Kanisius. Yogyakarta. hal. 46 – 85.
Matthews,  R.  G  dan  R.  V.  Banerjee.  1990. C o b a l a m i n - D e p e n d e n t   M e t h i o n i n e Synthase.  Biophysics  Research  Division and  Department  of  Biological  Chemistry, The  University  of  Michigan,  Ann  Arbor. USA. p 1450-1459.
Putranto,  A.  2007.  Menuju  Swasembada  Bahan Bakar Murah. http://ahmadsamantho.word p r e s s . c o m / 2 0 0 8 / 0 9 / 0 5 / m e n u j u - s w a s e m b a d a b a h a n - b a k a r - m u r a h . 14/04/2010. 14 hal.
Satyantini,  W.H  dan  E.  D.  Masithah.  2007.  Diktat Penuntun  Praktikum  Budidaya  Pakan Alami.  Program  Studi  Budidaya  Perairan Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas Airlangga. Surabaya. hal. 28.
Sutomo.  1991.  Pengaruh  Salinitas  dan  pH  Terhadap Pertumbuhan Chlorella sp .
Pusat  Penelitian  dan  Pengembangan  Oseanologi  – LIPI. Jakarta. 9 hal.
Tjahjo,  W.,  Lidia  E.  dan  Hanung,  S.  2002.  Biologi Fitoplankton. dalam Budidaya Fitoplankton dan  Zooplankton.  2002.  Balai  Budidaya Laut, Direktorat
Jenderal  Perikanan  Budidaya  Departemen  Kelautan dan  Perikanan.  Bandar  Lampung.  Hal.3  – 23.