ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN ALGA Turbinaria ornata (Turner) J. Agardh SERTA IDENTIFIKASI SECARA BIOKIMIA .
Cicilia Kosasi 1) ,Widya A. Lolo 1) , Sri Sedewi 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Algae are a place to live for various microorganisms’ symbiosis with them, and some of them were known  to  be  used  as  antibacterial.  This  study  aims  to  determine  the  antibacterial  activity  of  associated bacteria  isolates  from  Turbinaria  ornata  algae  obtained  from  the  Bay  of  Manado  against  Staphylococcus aureus  and  Escherichia  coli  bacteria.  In  the  course  of  testing  the  isolation  and  purification  of  symbiotic bacteria from Turbinaria ornata algae, then antibacterial activity was testing using agar diffusion method, then  gram  staining  and  biochemical  tests  were  carried  out  including  motility  test, tets,  carbohydrate fermentation test, citrate test, lysine test, indole test and catalase test. The result showed  that there were 3 bacterial isolates, which had antibacterial activity in medium category against S.aureus and E.coli bacteria. Based on the results of biochemical identification, the isolates that have the greatest inhibitory power, they were thought to belong to genus Bacillus and the genus Yersinia.
Keywords : Antibacterial, Symbionic bacteria, Turbinaria ornata (Turner) J.   Agardh.

## ABSTRAK
Alga merupakan tempat hidup berbagai mikroorganisme yang bersimbiosis dengannya, dan beberapa dari  spesies  alga  diketahui  sering  dimanfaatkan  salah  satunya    sebagai  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  adanya  aktivitas  antibakteri  dari  isolat  bakteri  yang  berasosiasi  dengan  alga Turbinaria ornata yang  diperoleh  dari  Teluk  Manado  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia  coli. Dalam  pengujian dilakukan  isolasi  dan  purfifikasi  bakteri  simbion  dari  alga Turbinari  ornata ,  kemudian dilakukan pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi agar, selanjutnya silakukan pewarnaan gram dan uji biokimia meliputi uji motilitas, uji H 2 S, uji fermentasi karbohidrat, uji sitrat, uji lisin, uji indol dan  uji  katalase. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  terdapat  3  isolat  bakteri  yang  mempunyai  daya aktivitas  antibakteri  dalam  kategori  sedang  terhadap  bakteri S.  aureus dan E.  coli. Berdasarkan  hasil identifikasi secara biokimia isolat yang mempunyai daya hambat paling besar diduga termasuk dalam genus Bacillus dan genus Yersinia.
Kata kunci : Antibakteri, Bakteri simbion, Turbinaria ornata (Turner) J. Agardh.

## PENDAHULUAN
Salah  satu  makhluk  hidup  yang tumbuh  dan  berkembang  di  laut  adalah  alga. Ditinjau  secara  biologi,  alga  merupakan kelompok  tumbuhan  berklorofil  yang  terdiri dari satu atau banyak sel dan berbentuk koloni (Satari,  1996).  Obat  baru  yang  berasal  dari biota  laut,  saat  ini  menjadi  perhatian  para pengembangan peneliti dikarenakan tingginya keanekaragaman  hayati  laut  serta  keunikan struktur metabolit sekunder yang dihasilkannya. Senyawa bioaktif yang berasal dari  laut  dapat  menjadi  alternatif  dalam pengembangan  obat  antibakteri  yang  baru (Harmawan et al ., 2012).
Turbinaria  ornata (Turner)  J.  Agardh adalah  salah  satu  jenis  rumput  laut  cokelat yang  menghasilkan  alginat  (Laksanawati  et al., 2017). Ekstrak rumput laut dari Turbinaria  ornata (Turner)  J.  Agardh memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  berbeda dan  menunjukkan  metabolit  sekunder  yang bervariasi  dalam  melawan  bakteri  gram negative  dan  bakteri  gram  positif  jika dibandingkan  dengan  standar  ampisilin.  Alga coklat  seperti Turbinaria  ornata (Turner)  J. Agardh  aktif  terhadap  beberapa  bakteri patogen  antara  lain  seperti Bacillus  subtilis, Escherichia  coli,  Klebsiella  pneumoniae, Proteus  vulgaris,  Pseudomonas  aeruginosa, Shigella  flexneri dan Staphylococcus  aureus. (Vijayabaskar et al., 2011).
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas maka  perlu  dilakukan  penelitian  untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  simbion isolat  dari  alga Turbinaria  ornata (Turner)  J. Agardh terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .  Selain  itu,  untuk mengetahui  spesies  bakteri  endofit  yang memiliki  daya  antibakteri  terbesar  maka dilakukan analisis secara biokimia.

## METODE PENELITIAN
Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  gunting,  alat Diving,  cooling  box , zipper  bag ,  kamera  bawah  laut  ( Xiomi ), erlenmeyer  ( Iwaki  ST  Pyrex) ,  gelas  ukur  mL ( Iwaki  ST  Pyrex) ,  tabung  reaksi,  raktabung reaksi, pipet tetes, timbangan analitik
( ADAM) , lumpang dan alu, cawan petri ( Iwaki ST  Pyrex) ,  jarum  ose,  pinset, rotary  shaker incubator  (Infors  HT) ,  bunsen,  lemari pendingin, laminar air flow (Biotek) , autoklaf (ALP),  mikropipet (Ecopipette) ,  tip, L-glass, jangka  sorong,  kertas  label,plastik wrap , aluminium  foil ,  tisu,kapas,  kasa,  mikroskop cahaya, kaca objek, alat fotografi.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  alga Turbinaria ornata (Turner) J. Agardh bakteri uji Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus ,  aquades,  etanol  70%,  etanol  95%, NaCl  0.9%,  Natrium  Hipoklorit  (NaOCl) 5,25%,  media Nutrient  Agar ,  media Nutrient Broth ,  media Simmons  citrate Agar ,  media Lysin  Iron  Agar ,  media Triple  Sugar  Iron Agar , paper  disc Kloramfenikol,  kristal violet, lugol, larutan safranin, reagen Covac’s, masker dan sarung tangan.
Prosedur Penelitian

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  disterilkan  dengan autoklaf pada suhu 121˚C selama ± 15 menit pinset, L-glass, dan jarum ose di bakar di atas api langsung (Pembakar spritus) (Waluyo,2014).

## Pengambilan Sampel
Sampel  alga  diambil  dari  perairan Teluk  Manado  menggunakan  alat  bantu (Masker  dan  Snorkel).  Sampel  difoto  dengan kamera bawah laut, diambil, lalu dimasukkan ke  dalam zipper  bag, kemudian  dibawa langsung  ke  Laboratorium  Mikrobiologi Farmasi  Program  Studi  Farmasi  dan  untuk identifikasi  sampel,  sampel  dibawa  ke laboratorium  Taksonomi  Biologi  Universitas Sam Ratulangi.
Pembuatan Media 1.Media Pertumbuhan
Media  dibuat  dengan  menimbang sebanyak 6,16 gram NA kemudian dimasukkan  ke  dalam  Erlenmeyer  dan dilarutkan  dengan  aquades  sebanyak  220  mL (28 gram/ 1000 mL). Selanjutnya,
dihomogenkan  dengan magnetic  stirrer di atas hot  plate .  Media  yang  telah  homogen kemudian  disterilkan  dalam  autoklaf  pada suhu  ±121°C.  Media  kemudian  dituang kedalam  11  cawan  petri  masing-masing
sebanyak  20  mL  dan  untuk  tabung  reaksi (sebagai  agar  miring)  dimasukkan  pada  9 tabung reaksi masing-masing sebanyak 10 mL media    NA.  Media  yang  telah  padat  ditutup dengan  kapas  agar  bebas  dari  kontaminan. Media ini digunakan untuk beberapa keperluan  yaitu  penanaman  awal  bakteri simbion  dari  sampel  yang  telah  diencerkan secara  berseri,  isolasi  bakteri,  kultur stock isolat  bakteri  simbion  endofit,  dan  pengujian aktivitas  antibakteri  (Volk  dan  wheeler, 1993).

## 2. Media Pembenihan
Media  dibuat  dengan  menimbang  NB sebanyak 0,72 gram kemudian dimasukkan ke dalam  Erlenmeyer  dan  dilarutkan  dengan aquades  hingga  90  mL  (8  gram/  1000  mL). Selanjutnya,  dihomogenkan  dengan  magnetic stirrer  diatas hot  plate .  Media  yang  telah homogen kemudian disterilkan dalam autoklaf  pada  suhu  121ºC  selama  15  menit, kemudian  dibiarkan  hingga  sedikit  dingin. Media kemudian dituang ke dalam Erlenmeyer  sebanyak  10  mL.  Media  ini digunakan  untuk  inokulasi  bakteri  simbion untuk pengujian aktivitas antibakteri (Hudayanti, 2004).
3. Isolasi Dan Purifikasi Bakteri Simbion Penanaman  bakteri  simbion  yang bersimbiosis  dengan  alga  dilakukan  dengan metode  sebaran  menurut  Madigan  (2012).  1 gram  sampel  alga  yang  telah  disterilisasi permukaannya  dihancurkan  dengan  cara digerus  dengan  lumpang  dan  alu  sampai halus.  Selanjutnya,  kedalam  1  gram  sampel ditambahkan NaCL sampai 10 mL yang akan digunakan  untuk  pengenceran  bertingkat sehingga  diperoleh  pengenceran  sampel sebesar .  Pengenceran  bertingkat selanjutnya  dilakukan  untuk  seri , , dan Dari  masing-
masing  seri  kemudian  diambil  100  μL  dan disebarkan  ke  dalam  cawan  petri  steril  yang berisi  media  NA  dan  diinkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  37ºC  selama  1x24  jam. Koloni  bakteri  simbion  yang  tumbuh  diamati warna,  bentuk,elevasi,  tepian  dan  ukurannya. Koloni-koloni  bakteri  dipisahkan  dengan jarum ose berdasarkan perbedaan karakteristik
makroskopik dan
mikroskopiknya  pada  media  NA  baru  dalam cawan  petri  dan  diinkubasi  pada  suhu  37°C selama  24  jam.  Isolat  yang  telah  murni diambil  menggunakan  jarum  öse  untuk dipindahkan  ke  media  agar  miring  untuk mendapatkan isolat bakteri dengan membentuk garis zig-zag selanjutnya diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  37°C selama ± 1x24 jam (Vandepitte, 2010).
Pengujian Aktivitas Antibakteri 1.Pembuatan Larutan Mc. Farland 0.5 Larutan H 2 SO 4 1% sebanyak 9,95 mL dicampurkan  dengan  larutan  BaCl 2 .2H 2 O 1,75%  sebanyak  0,05  mL  dalam  erlenmeyer. Kemudian  dikocok  sampai  terbentuk  larutan yang  keruh.  Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai standar  kekeruhan  suspensi  bakteri  uji (Victor, 1980).

## 2. Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  berupa Eshcerichia  coli dan Staphylococcus aureus yang telah diinokulasi diambil  dengan  jarum  ose  steril  kemudian disuspensikan  kedalam  tabung  yang  berisi  5 mL  larutan  NaCl  0.9%  hingga  diperoleh kekeruhan yang sama dengan standar kekeruhan  larutan Mc.Farland 0.5.  Suspensi bakteri  kemudian  dipipet  sebanyak  100  µL dan  dituangkan  media  NA  yang  telah memadat (Ngajow et al,. 2013). 3. Penyiapan bakteri simbion Satu ose isolat bakteri alga diinokulasi  kedalam  10  mL  media  cair  NB dan  diinkubasi  selama  24  jam  dalam Incubator dengan  suhu  37ºC.  Masing-masing koloni  bakteri  simbion  dalam  media  cair kemudian  dipindahkan  ke  dalam  tabung sentrifuge dan disentrifugasi dengan kecepatan  3000  rpm  selama  30  menit. Supernatant  yang  terbentuk  diambil  untuk pengujian  aktivitas  antibakteri  (Hudayanti, 2004).

## 4. Pengujian aktivitas antibakteri
Metode  yang digunakan  yaitu Metode Difusi  ( Disc  Diffusion  Kirby  and  Bauer ). Pengujian  aktivitas  antimikroba  ini  cakram ( paper disc ) yang digunakan berukuran 6 mm dengan  daya  serap  50  µL  pada  tiap  cakram. Diinokulasi  suspensi  bakteri  uji  diatas  media yang  telah  memadat.  Kertas  cakram  yang telah  direndam  dengan  isolat  bakteri  alga diinokulasikan  diatas  media  yang  telah  berisi
bakteri  uji,  kemudian  diinkubasi  selama  1  x 24 jam (Fardiaz, 1987).

## 5. pengukuran zona hambat
Pengamatan  dilakukan  terhadap  zona bening yang terbentuk disekitar kertas cakram setelah  masa  inkubasi  yaitu  1x24  jam. Diameter  zona  bening  ini  kemudian  diukur dengan  menggunakan  jangka  sorong  dengan ketelitian  0,05  mm  (Ortez,  2005).  Diameter zona  bening  yang  terukur  dikategorikan kekuatan  daya  antibakterinya  berdasarkan penggolongan (Davis et al , 1971).
Uji Morfologi Uji morfologi dilakukan dengan pewarnaan  Gram.  Biakan  bakteri  pada  media miring  diambil  dengan  menggunakan  jarum ose,  kemudian  ditotol  pada  bagian  tengah kaca objek sampai merata. Preparat selanjutnya  difiksasi  diatas  lampu  bunsen. Selanjutnya  preparat  diwarnai  dengan  kristal violet  selama  1  menit.  Kristal  violet  dicuci pada  air  mengalir.  Preparat  kembali  diwarnai dengan larutan lugol dan didiamkan selama 1 menit.  Larutan  lugol  dicuci  dengan  alkohol 96% dan dicuci pada air mengalir. Selanjutnya preparat diwarnai dengan safranin  dan  didiamkan  selama  1  menit. Preparat dicuci pada air mengalir, dikeringkan dan  diperiksa  dengan  mikroskop  dengan menambahkan  minyak  imersi  (Macfaddin, 2000).

## Uji Fisiologi
Uji  fisiologi  dilakukan  dengan  uji motilitas  yang  bertujuan  untuk  mengetahui pergerakan  bakteri  uji.  Prosedur  kerja:  media nutrient  agar ditimbang  sebanyak  0,58  gram kemudian  dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer dan  dilarutkan  bersama  dengan  aquades sebanyak  21  mL.  Media  disterilisasi  pada suhu  121°C  selama  15  menit.  Selanjutnya media dituangkan pada masing-masing tabung  reaksi  sebanyak  7  mL  kemudian didinginkan.  Setelah  memadat,  kultur  bakteri diinokulasikan  dengan  tusukan  jarum  ose sampai  dasar  media.  Diinkubasi  pada  suhu 37°C selama 24 jam. Hasil positif bila terlihat adanya  pertumbuhan  melebar  dari  bekas tusukan jarum ose (Talaro, 2008).
Uji Biokimia 1.Uji H 2 S
Media triple  sugar  iron  agar (TSIA)  ditimbang  sebanyak  4,55  gram, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer dan  dilarutkan  bersama  dengan  aquades sebanyak  70  mL.  Media  disterilisasi  pada suhu  121°C  selama  15  menit.  Selanjutnya media dituangkan pada masing-masing tabung reaksi sebanyak 7 mL dan dimiringkan sampai  memadat  pada  kemiringan  30˚. Setelah  media  memadat,  secara  aseptik  isolat bakteri  diinokulasikan  dengan  jarum  ose dengan  cara  ditusuk  pada  bagian  tengah sampai  kedalaman  ¾  bagian  dari  permukaan media  dan  kemudian  digores  pada  bagian miring  dari  media.  Selanjutnya  diinkubasi pada  suhu  37°C  selama  1x24  jam.  Hasil positif bila terbentuk endapan berwarna hitam pada bagian bawah media yang berarti bakteri dapat membentuk H 2 S (Lay, 1994).
2.Uji Fermentasi Karbohidrat
Media  TSIA  dibuat  seperti  pada  uji H 2 S.  Media  disterilisasi  pada  suhu  121°C selama 15 menit. Selanjutnya media dituangkan pada masing-masing tabung reaksi sebanyak  7  mL  dan  dimiringkan  sampai memadat.  Setelah  media  memadat,  secara aseptik  isolat  bakteri  diinokulasikan  dengan jarum  ose  dengan  cara  ditusuk  pada  bagian tengah  sampai  kedalaman  ¾  bagian  dari permukaan media dan kemudian digores pada bagian  miring  dari  media.  Selanjutnya diinkubasi  pada suhu 37°C selama 1x24 jam. Hasil  positif  bila  terjadi  pembentukan  asam dan  pembentukan  gas.  Pembentukan  asam terlihat  sebagai  perubahan  warna  substrat karbohidrat  dari  warna  merah  menjadi  warna kuning.  Pembentukan  gas  terjadi  didasar media  yang  ditandai  dengan  adanya  ruang kosong  didasar  media  (Cappuccino  dan Sherman, 1992).
3.Uji Sitrat Media Simmons’s citrate agar ditimbang  sebanyak  0,50  gram  kemudian dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer  dan dilarutkan bersama dengan aquades sebanyak 21  mL.  Media  disterilisasi  pada  suhu  121°C selama 15 menit. Selanjutnya media dituangkan pada masing-masing tabung reaksi sebanyak  7  mL  dan  dimiringkan  sampai memadat pada kemiringan 30˚. Setelah media memadat,  secara  aseptik  isolat  bakteri
diinokulasikan dengan jarum ose dengan cara ditusuk pada bagian tengah sampai kedalaman ¾  bagian  dari  permukaan  media  dan kemudian  digores  pada  bagian  miring  dari media.  Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu 37°C  selama  1x24  jam.  Hasil  positif  bila terjadi  perubahan  warna  dari  warna  hijau  tua menjadi warna biru (Cappuccino dan Sherman, 1992).
4.Uji Lisin
Media lysine  iron  agar ditimbang sebanyak 0,72 gram kemudian dimasukkan ke dalam  erlenmeyer  dan  dilarutkan  bersama dengan  aquades  sebanyak  21  mL.  Media disterilisasi  pada  suhu  121°C  selama  15 menit.  Selanjutnya  media  dituangkan  pada masing-masing  tabung  reaksi  sebanyak  7  mL dan  dimiringkan  sampai  memadat  pada kemiringan  30˚.  Setelah  media  memadat, secara  aseptik  isolat  bakteri  diinokulasikan dengan  jarum  ose  dengan  cara  ditusuk  pada bagian  tengah  sampai  kedalaman  ¾  bagian dari  permukaan  media  dan  kemudian  digores pada  bagian  miring  dari  media.  Selanjutnya diinkubasi  pada suhu  37°C selama 1x24 jam. Hasil  positif  bila  terjadi  perubahan  warna pada  media  menjadi  warna  lembayung (violet) (Cappuccino dan Sherman, 1992).

## 5.Uji Indol
Media  dibuat  dengan  menimbang  NA sebanyak 0,59 g dan dilarutkan dalam 21 mL aquadest. Media yang telah homogen disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama  15  menit,  kemudian  dibiarkan  untuk mendinginkan  pada  suhu  ruangan  sampai beberapa  saat.  Media  kemudian  dituang  ke dalam tabung reaksi masing-masing sebanyak 7  mL.  Isolat  diinokulasikan  dengan  koloni biakan  yang  berasal  dari  masing-masing  agar miring dengan cara ditusukkan jarum sedalam 3 / 4 bagian. Diinkubasi pada suhu 37°C selama 1x24  jam,  dengan  menambahkan  0,2-0,3  ml reagen covac's. Hasil  positif  apabila  kultur bewarna merah pada saat penambahan reagen (Lay, 1994).
6.Uji Katalase Media nutrient broth ditimbang sebanyak 0,17 gram kemudian dimasukkan ke dalam  erlenmeyer  dan  dilarutkan  bersama dengan  aquades  sebanyak  21  mL.  Media disterilisasi  pada  suhu  121°C  selama  15
menit.  Selanjutnya  media  dituangkan  pada masing-masing tabung reaksi sebanyak 7 mL. Kemudian  secara  aseptik  isolat  bakteri diinokulasi  ke  dalam  media . Selanjutnya diinkubasi  pada suhu 37°C selama 1x24 jam. Kedalam  tabung  reaksi  ditambahkan  5  tetes H 2 O 2 .    Hasil  positif  bila  terjadi  pembentukan gelembung  udara  (Cappuccino  dan  Sherman, 1992).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1.Determinasi Sampel
Alga Turbinaria  ornata (Turner)  J. Agardh  yang  telah  diperoleh  dari  perairan Teluk  Manado,  Sulawesi  Utara.  Sampel dideterminasi  di  Laboratorium  Taksonomi Biologi Program Studi Biologi untuk mengetahui  jenis  sampel  yang  diambil.  Hasil identifikasi menunjukkan bahwa sampel yang digunakan  adalah  alga Turbinaria  ornata (Turner) J. Agardh.
2.Isolasi dan Purifikasi Bakteri simbion Pada  penelitian  ini,  Setelah  dilakukan penanaman  bakteri  yang  berasosiasi  dengan alga Turbinaria ornata pada media NA Plate , koloni  bakteri  yang  berasosiasi  dengan  alga yang tumbuh diamati perbedaan karakterisitik secara  makroskopik.  Kemudian  pengamatan setelah  dilakukan  penanaman  selama  1x24 jam, isolat bakteri dari alga Turbinaria ornata yang  tumbuh  terlihat  seperti  bercak-bercak halus  yang  berwarna  putih.  Selanjutnya pemurnian  isolat  bakteri  yang  tumbuh dilakukan dengan cara diinokulasikan kembali  menggunakan  jarum  ose  ke  media NA  yang  baru  dan  diinkubasi  selama  1x24 jam  pada  suhu  ruangan.  Hal  ini  bertujuan untuk  memisahkan  koloni-koloni  bakteri berdasarkan bentuk, warnah, dan ukuran agar didapatkan isolat  bakteri dengan karakteristik secara makroskopik yang mempunyai morfologi  yang  sama  sehingga  dapat  disebut sebagai isolat murni bakteri.

## Kultur Cair
Pada  penelitian  ini,  masing-masing isolat  bakteri  murni  dikultur  atau  dibiakkan pada  media  cair  menggunakan  media  NB (Nutrient  Broth), dengan metode shaker pada suhu 37 0 C dengan kecepatan 150 rpm, hal ini
bertujuan  agar  semua  nutrisi  yang  dikandung dalam  medium  dapat  digunakan  oleh  bakteri secara  optimal  sebagai  bahan  untuk  proses metabolismenya sehingga senyawa antibakteri dapat  dihasilkan  dengan  optimal.  Setelah dilakukan pengamatan, hasil dari pembiakkan bakteri  pada  media  cair  NB  yang  diinkubasi selama  1x24  jam,  terlihat  media  berubah menjadi keruh, hasil dari pembiakkan ini yang nantinya  akan  digunakan  dalam  pengujian aktivitas antibakteri.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pada  pengujian  ini  digunakan  kontrol positif  dan  negatif.  Penggunaan  kontrol positif  berfungsi  sebagai  kontrol  dari  zat  uji, dengan  membandingkan  diameter  daerah hambat  yang  terbentuk  (Dwijendra,  2014). Sedangkan tujuan penggunaan kontrol negatif agar dapat mengetahui ada tidaknya pengaruh pelarut  terhadap  pertumbuhan  mikroba  uji, sehingga  dapat  dipastikan  bahwa  aktivitas yang  ditunjukkan  oleh  ekstrak  ialah  senyawa yang terkandung dalam sampel bukan berasal dari pelarut yang digunakan. Dalam penelitian ini,  pelarut  NaCL  digunakan  sebagai  kontrol negatif.
Pada  pengujian  ini,  isolat  bakteri  dari sampel Turbinaria  ornata yang  akan  diuji aktivitas  antibakteri  ada  9  isolat  bakteri,  dari masing-masing isolat bakteri tersebut dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali,  dari pengulangan  ini  dilakukan  untuk  lebih mengakuratkan  hasil  yang  akan  diperoleh. Hasil  yang  diperoleh  ini  menunjukan  bahwa adanya  kepekaan  bakteri  terhadap  isolat  dari alga Turbinaria  ornata dan  antibiotik  yang digunakan  sebagai  kontrol  positif,  dari beberapa isolat bakteri yang diuji menunjukkan terbentuknya daya hambat/zona bening    disekeliling  kertas  cakram  ( paper disc )  yang  berukuran  5  mm,    Pengamatan dilakukan setelah di inkubasi pada suhu 37°C selam 1x24 jam.
Pengujian  aktivitas  antibakteri  untuk  setiap isolat  bakteri  dari  sampel Turbinaria  ornata menggunakan  kertas  cakram  ( paper  disc ), pengujian  dilakukan  terhadap  bakteri  uji Eschericia  coli dan Staphylococcus  aureus. Hasil  yang  didapat  dari  pengukuran  rata-rata diameter zona bening yang terbentuk disekitar cakram  dari  isolat  bakteri  sampel Turbinaria
ornata terhadap  bakteri  uji Staphylococcus aureus dan Eschericia  coli ditunjukan  pada Tabel dibawah ini.
Tabel1. Hasil uji aktivitas antibakteri
Pada  pengujian  ini,  kontrol  positif menggunakan antibiotik kloramfenikol dimana antibiotik adalah suatu senyawa kimia yang dapat menghambat proses penting dalam kehidupan  suatu  mikroorganisme  (Soekardjo dan  Siswandono,  2000).  Kloramfenikol  atau Kloramisetin adalah antibiotik yang mempunyai  spektrum  luas  yang  dapat digunakan  untuk  melawan  infeksi  yang disebabkan oleh beberapa jenis bakteri  gram- positif dan bakteri gram-negatif. Kloramfenikol  mempunyai  khasiat  bakterisid (Sumardjo,  2009) . Kontrol  positif  berfungsi sebagai  pembanding  antara  antibakteri  yang sudah terstandarisasi dengan sampel Turbinaria  ornata. Kemudian  kontrol  negatif yang  digunakan  yaitu  NaCL,  fungsi  dari kontrol negatif sendiri yaitu untuk mengetahui ada  tidaknya  pengaruh  pelarut  terhadap pertumbuhan bakteri, sehingga dapat diketahui  bahwa  aktivitas  antibakteri  yang dihasilkan  bukan  berasal  dari  pelarut  yang digunakan  melainkan  berasal    dari  aktivitas senyawa  yang  terdapat    dalam  sampel Turbinaria ornata (Turner) J. Agardh.

## Uji morfologi, fisiologi dan uji biokimia
Pengujian  ini,  dilakukan  dengan  uji morfologi  atau  identifikasi  bakteri  yang diawali dengan pewarnaan Gram. Pengamatan tentang karakteristik morfologi koloni bakteri perlu  dilakukan  agar  mempermudah  proses identifikasi  jenis  dari  isolate  bakteri  (lenni  et al.,2011).  Uji  pewarnaan  Gram  dilakukan pada  setiap  isolat  bakteri  dari  sampel Turbinaria  ornata yang  memiliki  daya hambat  terbesar,  dari  beberapa  isolat  bakteri tersebut  dilakukan  pengujian  morfologi  atau pewarnan  gram    yang  bertujuan  untuk mengetahui  bentuk-bentuk  bakteri  (basil, kokus  atau  spiril),  penentuan  bakteri  jenis
Bakteri Uji
Diameter Zona Bening (mm) K+ K- S. aureus 16,00  0 6,67 6,67 7,33 E. coli 15,00  0 6,67 6,33 6,67
Gram  positif  atau  Gram  negatif  pada  saat pengamatan di mikroskop.
Hasil pengujian morfologi atau pewarnaan  Gram  pada  setiap  isolat  bakteri bervariasi  dimana  untuk  isolat  bakteri diberikan kode , dan dari ketiga isolat bakteri  tersebut  untuk  kode  isolat menunjukkan hasil yang berwarna  ungu, dan untuk  kode  isolat menunjukkan  hasil yang  berwarna  merah  muda.  Beberapa  isolat bakteri  yang  diuji  menunjukkan  adanya bakteri  gram  negatif  dan  bakteri  gram  positif yang berperan dalam aktivitas antibakteri dari sampel Turbinaria ornata. Menurut Taslihan et  al. (2001),  bahwa  warna  bakteri  terlihat merah,  artinya  bakteri  bersifat  gram  negatif karena  sel  bakteri  tidak  menyerap  cat  utama (Gram’s iodin) dengan kuat sehingga terbilas dengan  alcohol  dan  terwarnai  dengan  cat pelawan.  Dan  bakteri  gram  positif  pada pewarnaan  gram    menunjukkan  hasil  yang berwarna  ungu  atau  birukarena  kompleks  zat warna Kristal violet-yodium tetap dipertahankan meskipun diberi larutan pemucat  aseton  alcohol  (lay,  1994).  Bakteri terdiri  dari  tiga  bentuk  dasar  yaitu  bentuk bulat  atau  kokus,  bentuk  batang  atau  basil, dan  bentuk  spiral  (Dwidjoseputro,  1985), dalam  penelitian  ini  ditemukan  1  bentuk bakteri  yaitu  bentuk  batang  atau  basil. Hasilnya dapat dilihat pada tabel dibawah ini. Tabel 2. Hasil Uji Morfologi dan fisiologi
Data  uji  biokimia,  uji  morfologi  dan uji  fisiologi  yang  diperoleh  dibandingkan dengan buku Bergey’s Manual Determinative of  Bacteriology .  Hasil  uji  biokimia  dapat dilihat pada Tabel dibawah ini.
Tabel 3. Hasil Uji Biokimia
Isolat  bakteri  dengan  kode  isolat dan menunjukkan  bakteri  yang  diduga  genus Yersinia sp., dan untuk kode isolat diduga termasuk dalam genus Bacillus sp. Identifikasi  bakteri  dilakukan terhadap isolat- isolat    yang  diperoleh  dengan  berpedoman pada buku Bergey’s Determinative Bacteriology (Holt et al, 1994).
Hasil  pengujian  ini,  untuk  uji  katalase menunjukkan adanya hasil yang positif  untuk ketiga  isolat  bakteri  tersebut,  uji  katalase bertujuan  untuk  menentukan  kemampuan bakteri dalam mendegradasi hidrogen peroksida  (H 2 O 2 )  melalui  produksi  enzim. Hasil  positif  ditandai  dengan  terbentuknya gelembung-gelembung okseigen yang menunjukkan bahwa organisme yang bersangkutan  menghasilkan  enzim  katalase yang  mengubah  hydrogen  peroksida  menjadi air dan oksigen (hadioetomo, 1993).
Pada hasil uji sitrat dengan menggunakan media Simmons Citrate dimana media  tersbut  merupakan  salah  satu  medium yang  digunakan  untuk  menguji  kemampuan bakteri dalam meggunakan sitrat sebagai satu- satunya  karbon  yang  digunakan,  ketiga  isolat menunjukkan  hasil  yang  positif.  Menurut Sudarsono,  (2008)  hasil  positif  ini  ditandai denga  adanya  perubahan  warna  medium  dari warna  hijau  menjadi  warna  biru.  Dan  untuk uji  lysin  pada  setiap  isolat  bakteri  dengan
Kode Isolat Uji Morfologi Uji Fisologi Pewarnaan Gram Bentuk Warna Uji Motilitas Basil Merah muda - Basil Merah muda - Basil Ungu -
Uji Biokimia
Uji H 2 S Uji TSIA Uji Sitrat Uji Lisin Uji Indol Uji Ktalase
G l u L a k - +  - + + - + - - +  + + - + + - +  + + - +
menggunakan media Lysin Iron Agar menunjukkan  adanya  hasil  yang  positif  hasil positif  terdapat  pada  media  yang  berwarna lembayung (ungu) (Sarah et al., 2014).
Pada  pengujian  fermentasi  Karbohidrat dengan  menggunakan  media Triple  Sugar Iron  Agar (TSIA),  media  TSIA  mengandung tiga  macam  gula  yaitu  glukosa,  laktosa  dan sukrosa.    pada  uji  ini  untuk  kode  isolat terjadi  perubahan  warnah  menjadi  warnah merah  isolat  ini  mampu  memfermentasikan glukosa,  dan  untuk  kode  isolat dan terjadi  perubahan  warnah  menjadi  kuning kedua  isolat  ini  mampu  memfermentasikan laktosa  dan  sukrosa.  Menurut  Sudarsono (2008),  uji  TSIA  ini  bertujuan  untuk nengetahui  kemampuan  dari  suatu  bakteri dalam memfermentasikan gula untuk menghasilkan  asam  atau  gas.  Warnah  merah pada agar menunjukkan reaksi basa, sedangkan warna kuning menunjukkan reaksi asam.  Warna  merah  pada  permukaan  agar menunjukkan  bahwa  terjadinya  fermentasi glukosa,  dan  warna  kuning  pada  bagaian permukaan  dan  bawah  tabung  menujukkan terjadinya fermentasi laktosa dan sukrosa.
Hasil dari pengujian S yaitu menggunakan  media  yang  sama  dengan pengujian Fermentasi Karbohidrat
sebelumnya  yaitu  Triple  Sugar  Iron  Agar (TSIA)  dimana  media  ini  mengandung  tiga macam  gula  yaitu  glukosa,  laktosa  dan sukrosa.  Hasil  pengujian  dari  ketiga  isolat bakteri tersebut dengan kode isolat dan menunjukkan  hasil  yang  negatif  dan  untuk isolat menujukkan hasil yang positif dilihat dari  penelitian  menurut  Sarah,  (2014),  hasil uji yang  positif  menujukkan  adanya endapan  berwarnah  hitam  pada  dasar  (butt) dari media yang digunakan.
Uji indol merupakan uji untuk menentukan  kemampuan  mikroorganisme dari  sampel  utnuk  menghasilkan  indol  dari triptofan.  Asam  amino  triptofsn  merupakan komponen  asam  amino  yang  lazim  terdapat dalam  protein,  sehingga  asam  amino  dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganisme akibat    penguraian  protein  (Sarah  et  al., 2014).  Hasil  dari  pengujian  ini  yaitu  dengan menggunakan media Nutrient Agar (NA) dari
ketiga  isolat  bakteri  yang  diuji  menunjukkan hasil  yang  negatif  karena  tidak  terbentuknya cincin  berwarna  merah  setelah  penambahan reagen  kovac’s,  sedangkan  hasil  yang  positif adalah sebaliknya.
Pengujian  motilitas  dari  isolat    bakteri dengan  menggunakan  media Nutrient  Agar (NA),  Motilitas  bakteri  adalah  suatu  gerakan dari  bakteri  yang  disebabkan  adanya  gerakan aktif atau pasif tujuan dari uji ini  yaitu  untuk mengetahui pergerakan bakteri uji pada media yang  ditusuk,  dari  ketiga  isolat  bakteri  dari sampel Turbinaria ornata , menunjukkan hasil yang negatif. Menurut penelitian dari Sarah et al.,  (2014)  hasil  yang  negatif  dimana pertumbuhan  bakteri  tidak  menyebar  dan hanya  bertumbuh  lurus  di  daerah  tusukan sedangkan  hasil  yang  positif  menujukkan pertumbuhan penyebaran bakteri baik disekitar  daerah  penusukan  sampai  pada permukaan media.
Identifikasi  bakteri  pada  penelitian  ini menggunakan  perbandingan  pada    buku Bergey’s
Manual Determinative of Bacteriology dan  diperoleh  2  genus  bakteri yang  diduga  merupakan Bacillus  Sp .  dan Yersinia Sp.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa: 1. Hasil  yang  diperoleh  untuk  isolat  bakteri dari  alga Turbinaria  ornata (Turner)  J.
Agardh, memiliki daya aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.
2. Berdasarkan  hasil  identifikasi  secara biokimia isolat diduga termasuk dalam genus Bacillus sp., dan dan isolat dan diduga termasuk dalam genus Yersinia sp.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut pada  identifikasi  isolat  bakteri  secara molekuler menggunakan Gen 16S rRNA.

## DAFTAR PUSTAKA
Dwijoseputro. 1998. Dasar- Dasar
Mikrobiologi .  Penerbit  Djambatan, Jakarta. .
Cappucino,  J.  G.,  Sherman,  N.  1998. Microbiology:  A  laboratory  Manual 5 th Edition . California: Benjamin/cummings Science Publishing. P.94.
Davis,  W.  W.,  Stout,  T.  R.  1971.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Assay. Journal  of  Microbiology. 22:659- 665.
Dwijendra  I.  M.,  D.S  Mewengkang.,  F.S Mehantow. 2014. Aktivitas Antibakteri dan Karakterisktik Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea Herbacae Yang
Diperoleh  Dari  Teluk  Manado. Pharmacon  Jurnal  Ilmiah  Farmasi. 4:2302-2493.
Hadioetomo  R.  S.  1993. Mikrobiologi  Dasar Dalam  Praktek .  PT.  Gramedia, Jakarta.
Harmawan,  A.,  A,  ridho.,  D,  pringgenies. 2012.  Uji  Fitokimia  dan  Aktifitas
Anti Bakteri Ekstrak Media Supernatan  Bakteri  Simbion  Vibrio sp. Gastropoda Oliva vidua Terhadap Bakteri Multi Drug Resistant . Universitas Diponegoro Kampus Tembalang . Semarang. Hudayanti,  M.  2004. Aktivitas  antibakteri rimpang temulawak (Curcuma xanthorrihza  roxb) ,  Skripsi  jurusan kimia,  Institut  pertanian  bogor, Bogor. Hal: 6, 8-9, 21.
Laksanawati,  R.,  Ustadi.,  A.  Husni.  2017.
pengembangan metode ekstraksi alginat  dari  rumput  laut  turbinaria ornate.
Lay,  B.  W.  1994. Analisis  Mikroba  di laboratorium.Edisi  1 .  Raja  Grafindo Persada, Jakarta.
Lenni,  F.,  and  Yekki  Y.  2011.  Isolasi  dan Pengamatan Morfologi Koloni
Bakteri  Kinolitik. Jurnal  Ilmiah
Pendidikan Biologi. 3:2.
Ngajow,  M.,  Abidjulu,  J.,  Vanda  S.K.  2013.
Pengaruh  anntibakteri  ekstrak  kulit batang  matoa  (Pometia  pinnata) terhadap bakteri Staphylococcus aureus  secara  invitro. Jurnal  Mipa Unsrat 2(2) 128-132.
Sarah  M.P.,  Fatimawali.,  Aaltje  M.  2014 . Identifikasi Bkateri Resisten Merkuri Pada  Urine  Feses  dan  Kalkulus  Gigi Pada Individu Di Kecamatan Malalayang, Manado, Sulawesi
Utara .  Jurnal e-Biomedik. 2(2):  532- 540.
Satari, R. 1996. Potensi Pemanfaatan Rumput Laut  Indonesia. Pusat  Penelitian  dan Pengembangan  Oseanologi LIPI, Jakarta. 152–177.
Sudarsono  A.  2008.  Isolasi  dan  karakterisasi
Bakteri pada ikan laut dalam Spesies ikan Gindara (Lepidocibium Flavobronneum). Skripsi.  Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Sumardjo,  D.  2009. Pengantar  Kimia . Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Taslihan,  A.  2001 .  Cara  Isolasi  dan Identifikasi  Bakteri  dari  Air, Ikan  dan  Udang  di  Air  Payau . BBPBAP . Jepara.
Vijayabaskar  P.,  V.  Shiyamala.  2011. Antibacterial  Activities  of  Brown Marine  Algae  (Sargassum  wightii and Turbinaria ornata) from the Gulf of Mannar Biosphere Reserve.