Ulfah Juniarti Siregar et al.
Studi Alfa-Amylase Inhibitor Pada Pohon Sengon ( Paraserianthes falcataria (L) Nielsen) Provenan Kediri,  Solomon Dan Subang
Study on Alfa-Amylase Inhibitor in Sengon (Paraserianthes falcataria ( L ) Nielsen ) Trees, of Kediri, Solomon and Subang Provenances
Ulfah Juniarti Siregar 1 dan Puti Awali Saimima 1
1 Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan, Institut Pertanian Bogor

## ABSTRACT
Sengon (Paraserianthes  falcataria  ( L ) Nielsen ) is  one  of  potential  tree  to  develop  because  of its  diverse benefits.  At present, sengon plantation suffer from serious attack by stem borer (Xystrocera festiva Pascoe), known as boktor. It was known that boktor digestive tract contains α-amylase enzyme, sengon trees have α-amylase inhibitor. It is necessary to study the nature of α-amylase inhibitor in sengon tree to produce superior clone of sengon, which contains highest  α- amylase inhibitor activity and resistant to stem borer.
The  purpose  of  this  study  is  to  determine  different  level  of  α-amylase  inhibitor  activity  from three  provenances  of Kediri,  Solomon  and  Subang,  both  in  the  bark  and  stem  of  healthy  and  heavily  attacked  trees.  It  also  compared  the activity  of  α-amylase  inhibitor  using  synthetic  and  natural  enzymes  from  the  digestive  gut  of  boktor  larvae.  Plant materials were  woods  and  barks  of  sengon trees  from provenances  of  Kediri,  Solomon,  and  Subang,  which  were  made into powder. Two types of tree were selected, i.e. healthy and severely attacked trees. Observation of α-amylase inhibitor activity  was  carried  out  using  the  α-amylase  synthetic  enzyme  (SIGMA,  320  U/mg)  and  natural  enzymes  from  the digestive  tract  of  boktor  larvae,  size  3.5  cm.  The  data  were  analyzed  in  a  Complete  Randomized  Factorial  Design (CRFD) with three factors, i.e. provenance, condition of the tree, and different tree tissue, using SPSS 18.0 software.
Analysis of variance using synthetic enzymes showed that tree conditions and tissues have highly significant influence on  the  activity  of  α-amylase  inhibitor,  while  in  the  other  hand  provenance  factor  did  not.  The  trees  stem  (29,4751 AUI/mg)  had  a  higher  α-amylase  inhibitor  activity  than  in  trees  bark  (41.932  AUI  /  mg).  The  average  of  α-amylase inhibitor  activity  in  healthy  trees  (28,5689  AUI/mg)  higher  than  in  the  attacked  trees  (25,6894  AUI/mg).  Analysis  of variance  using  natural  enzymes  showed  that  tree  conditions  and  provenance  have  highly  significant  influence  on  the activity of α-amylase inhibitor. Subang provenances had a highest average of α-amylase inhibitor activity compared to other provenances that is equal to 55.2956 AUI / mg. Then the average α-amylase inhibitor activity in healthy trees stem (59.7946  AUI  /  mg)  was  higher than  the activity  of  α-amylase  inhibitor  on  severely  attacked  trees  stem (41.932  AUI  / mg).
Keyword :  enzim alfa-amylase,  inhibitor, Paraserianthes falcataria

## PENDAHULUAN
Sengon ( P. falcataria (L) Nielsen) merupakan salah satu jenis pohon yang diprioritaskan untuk pengusahaan hutan tanaman  industri  karena  manfaatnya  yang  sangat beragam,  berserat  halus,  serta  memiliki  warna  kayu yang  indah  (Atmosuseno  1998).  Namun  dalam perkembangannya,  penanaman  jenis  sengon  menemui beberapa hambatan berupa hama dan penyakit. Masalah yang  paling  umum  dihadapi  adalah  serangan  hama penggerek  batang  ( X.  festiva Pascoe)  atau  yang  lebih sering dikenal sebagai boktor. Boktor mulai menyerang tanaman  umur  3  tahun  dan  apabila  dibiarkan,  dalam waktu 2-5 tahun seluruh tanaman akan punah (Siregar et al.  2008).  Pada  saat  boktor  mencapai  stadium  larva, boktor  akan  mengkonsumsi  permukaan  batang  yang berkayu dan permukaan kulit batang bagian dalam. Pada tahap inilah ancaman boktor yang paling berbahaya bagi perkembangan tanaman sengon.
Mengacu  dari  Prasetya  (2007),  disebutkan  bahwa dalam pencernaan boktor terdapat enzim trypsin dan α- amylase . Di sisi lain juga diketahui bahwa dalam pohon sengon  terdapat  senyawa  yang  bersifat  inhibitor terhadap  enzim trypsin dan α-amylase yang  terdapat pada pencernaan boktor (Winarni 2003). Oleh karena itu diperlukan  suatu  studi  mengenai  aktivitas trypsin inhibitor  dan α-amylase inhibitor  Informasi  yang diperoleh  akan  digunakan  untuk  menghasilkan  bibit sengon  yang  unggul,  yaitu  memiliki  kandungan aktivitas trypsin dan α-amylase inhibitor  tertinggi sehingga dapat menghambat kerja enzim trypsin dan α- amylase dari pencernaan boktor.
Tujuan dari penelitian ini adalah :
1. Mengetahui perbedaan aktivitas α-amylase inhibitor pohon  sengon  provenan  Kediri,  Solomon,  dan Subang.
2. Mengetahui  besarnya  aktivitas α-amylase inhibitor pada  bagian  kulit  dan  batang  pohon  sengon provenan Kediri, Solomon, dan Subang.

## JURNAL SILVIKULTUR TROPIKA
Vol. 02 No. 01 April 2011, Hal. 52 – 58 ISSN: 2086-8227
3. Mengetahui perbedaan aktivitas α-amylase inhibitor pohon  sengon  yang  terserang  hama  boktor  dengan pohon  yang  tidak  terserang  pada  provenan  Kediri, Solomon, dan Subang.
4. Membandingkan  aktivitas α-amylase inhibitor pohon  sengon  provenan  Kediri,  Solomon,  dan Subang  dengan  menggunakan  enzim  sintetis  dan enzim alami dari pencernaan larva boktor.

## BAHAN DAN METODE
Waktu dan Tempat. Penelitian ini  dilaksanakan di laboratorium  Mikrobiologi  dan  Biokimia,  Pusat Penelitian  Bioteknologi,  Institut  Pertanian  Bogor. Penelitian  ini  dilakukan  selama  ±  10  bulan  yaitu Agustus 2009 – Juni 2010.
Alat  dan  Bahan. Alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  tabung  kaca,  gelas  ukur,  erlenmeyer, eppendorf, spektrofotometer, Refrigirated Micro Centrifuge MRX-152, Centrifuge Microfuge
BECKMAN,  shaker  bath, Orbital  Shacking  Incubator ROSI 1000, pH meter, refrigerator , freeze dryer , pipet, stopwatch, mortar, vortex, hotplate stirer , neraca digital, cutter, label, sudip, magnetic stirer , alumunium foil dan alat tulis.
Bahan  yang  digunakan  dalam  pengamatan  studi α- amylase inhibitor adalah larutan soluble  strach ,  larutan enzim α-amylase (SIGMA, 320 U/mg), air detilata, HCl, NaOH,  buffer  phospat  0,1  M  pH  7,  DNS  (3,5-Dinitro Salycilyc  Acid,  serta  serbuk  batang  dan  serbuk  kulit sengon  yang  masih  segar  dari  provenan  Solomon  dan Kediri dalam  bentuk freeze  dry . Sebagai  sumber enzim α-amylase dipakai  larva  yang  berukuran  3,5  cm  yang diduga mengandung aktivitas α-amylase tertinggi.
Metode Penelitian Pembuatan  ekstrak  batang  dan  kulit. Sebelum melakukan  analisis  terhadap  aktivitas  enzim α-amylase inhibitor,  terlebih  dahulu  disiapkan  ekstrak  batang  dan kulit dari pohon sengon provenan Kediri, Solomon, dan Subang. Pembuatan ektstrak batang dan kulit dilakukan dengan tahap-tahap sebagai berikut : a. Tepung  sengon  dari  batang  dan  kulit  ditimbang sebanyak 2 gram. Kemudian disuspensikan kedalam 10 ml air destilata.
b. Suspensi tepung sengon dikocok dengan menggunakan  orbital  shaker  selama  2  jam  dengan suhu ruangan.
c. Setelah  2  jam  kemudian  sarinya  dipindahkan kedalam eppendorf dan disentifuse dengan kecepatan 10.000 rpm suhu 4 o C selama 10 menit.
d. Supernata yang diperoleh diatur pHnya menjadi 4,0 dengan  menambahkan  larutan  HCl  1N.  Hasilnya kemudian  diinkubator  selama  30  menit  pada  suhu 70 o C  dengan  tujuan  menonaktifkan  enzim  α- amilase.
e. Setelah  didinginkan,  apabila  larutan  terlihat  keruh maka  larutan  disentrifuse  sekali  lagi  dengan kecepatan 10.000 rpm selama 10 menit.
f. Supernatan  yang  diperoleh  dinetralkan  hingga mencapai  pH  7  dengan  menambahkan  larutan NaOH 1M.
g. Hasilnya  dapat  langsung  digunakan  untuk  proses penetapan aktivitas α-amylase inhibitor.
Penetapan aktivitas α-amylase inhibitor. Aktivitas α-amylase inhibitor  ditetapkan  berdasarkan  daya penghambat  terhadap  aktivitas  enzim α-amylase dalam menghidrolisis  pati.  Adapun  bahan  yang  harus disiapkan  antara  lain  adalah  ekstrak  larva  dan  larutan pereaksi.
Untuk  ekstraksi  enzim α-amylase dari  larva  boktor, bagian kepala larva dipotong hingga yang tersisa hanya bgian  badannya  saja.  Kemudian  larva  dimasukkan dalam mortar yang terendam air es, lalu digerus. Cairan yang  diperoleh  disuspensikan  ke  dalam  larutan  HCl 0.001  M  dan  diaduk  dengan  menggunakan magnetic stirer .  Suspensi  kemudian  disentrifugasi  dengan kecepatan  10.000  rpm  selama  10  menit  pada  suhu  5 o C dan supernatannya diambil untuk digunakan.
Larutan  pereaksi  dibuat  dengan  komposisi  sebagai berikut:
a. Larutan HCL 1 N
b. Larutan NaOH 1 M
c. Larutan  enzim α-amylase (SIGMA,  320  U/mg) dalam  berbagai  konsentrasi,  dalam  buffer  Na- Phospat 0,1 M pH 7,0
d. Larutan soluble strach
e. Pereaksi  dinitrosalisilat;  1  gram  3,5-dinitrosalisilat, 30  gram  Na-K-tartarat  dan  1,6  gram  NaOH  dalam 100 ml air destilata.
Analisis  aktivitas α-amylase inhibitor  dilakukan dengan prosedur sebagai berikut:
a. Suspensi  pati  terlarut  1%  (dalam  air  destilata) dipanaskan  dalam  penangas  air  selama  30  menit hingga mencapai suhu 90 o C, kemudian didinginkan.
b. Sebanyak  2  ml  larutan  pati  dalam  tabung  reaksi ditambah 3 ml  air destilata  dan 5 ml larutan buffer Na-Phospat  0,1  M  pH  7,0.  Kemudian  diinkubasi dalam  penangas  air  selama  15  menit  pada  suhu 37 o C.
c. Ke  dalam  larutan  ditambahkan  5  ml  larutan  enzim dan diinkubasi  kembali selama 30 menit  pada  suhu 37 o C.
d. Ke  dalam  tabung  reaksi  lain  ditempatkan  1  ml larutan hasil  inkubasi, kemudian ditambahkan 2 ml pereaksi  dinitrosalisilat  (DNS).  Vortex  hingga homogen,  lalu panaskan dalam  penangas air 100 o C selama 10 menit.
e. Setelah  didinginkan  campuran  reaksi  diencerkan dengan menambahkan 10 ml air destilata.
f. Warna  merah-orange  yang  terbentuk  dari  hasil reaksi diukur dengan menggunakan spektofotometer pada panjang gelombang 520 nm.
g. Kurva  maltosa  dari  campuran  reaksi  dihitung dengan  menggunakan  kurva  standar maltosa  murni yang  diperoleh  dengan  cara  mereaksikan  larutan maltosa  standar  dengan  pereaksi  dinitrosalisilat menggunakan prosedur seperti diatas.
h. Aktivitas α-amylase inhibitor  dihitung  berdasarkan jumlah maltosa yang dibebaskan. Satu unit aktivitas enzim ( α-Amylase Unit Inhibited /mg) di definisikan sebagai  jumlah enzim yang dapat dibebaskan 1 mg maltosa dalam kondisi seperti percobaan diatas.
Ulfah Juniarti Siregar et al.
54
i. Aktivitas  inhibitor α-amylase ekstrak  sampel ditetapkan  dengan  cara  menginkubasikan  2,5  ml ekstrak  sampel  dengan  2,5  ml  larutan  enzim α- amylase (1  mg/ml  buffer  Na-Phospat)  dalam penangas  air  37 o C  selama  10  menit,  sebelum dilakukan hidrolisis  pati  seperti di  atas.  Hasil  yang diperoleh  dibandingkan  dengan  aktivitas  enzim α- amylase dalam  jumlah  yang  diencerkan  dengan air destilata.
j. Blanko sampel dipersiapkan dengan cara mendidihkan ekstrak sampel selama 10 menit untuk melenyapkan aktivitas α-amylase inhibitor, kemudian  dilanjutkan  dengan  prosedur  seperti  di atas.
k. Aktivitas  inhibitor α-amylase dihitung  berdasarkan perbedaan aktivitas enzim prosedur nomor 9.
Rumus  perhitungan  unit  aktivitas α-amylase inhibitor yang digunakan adalah  sebagai berikut: a. Konsentrasi sampel
=    standar – (sampel – kontrol) [A]
b. Unit sampel =  Konsentrasi sampel BM x 0,1
c. Konsentrasi Amilase
=  Standar + [B]
[A]
d. Unit Amilase
=  Konsentrasi Amilase BM x 0,1
e. AUI
=  (Unit Amilase – Sampel)
Keterangan  :  [A]  dan  [B]  diperoleh  dari  kurva  standar maltosa.
Analisis Data. Data aktivitas alfa-amylase inhibitor dianalisis  menggunakan  software  SPSS  18.0,  dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dan 10 kali ulangan.
Faktorial yang dianalisis terdiri dari tiga faktor yaitu:
1. Provenan; Kediri, Solomon dan Subang
2. Kondisi pohon; sehat dan sakit
3. Bagian pohon; kulit dan batang
Untuk  mengetahui  pengaruh  perlakuan,  dilakukan sidik  ragam  dengan  uji  F.  Data  diolah  dengan menggunakan perangkat lunak statistika SPSS 18.0, jika :
a. F  hitung  <  F  tabel,  maka  perlakuan  tidak memberikan  pengaruh  nyata  terhadap  parameter provenan, kondisi pohon dan bagian pohon.
b. F  hitung  >  F  tabel,  maka  perlakuan  memberikan pengaruh  nyata  terhadap  parameter  provenan, kondisi pohon dan bagian pohon.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Aktivitas α-amylase Inhibitor  Menggunakan Enzim Sintetis pada Pohon Sengon Provenan Kediri, Solomon,  dan  Subang. Pengujian  aktivitas α-amylase inhibitor dilakukan dengan menggunakan enzim sintetis
dan  enzim  alami  yang  berasal  dari  pencernaan  larva boktor.  Hasil  pengujian  aktivitas α-amylase inhibitor dengan  menggunakan  enzim  sintetis  disajikan  pada Tabel 1.
Tabel 1.  Rekapitulasi  hasil  sidik  ragam  aktivitas α- amylase inhibitor  menggunakan  enzim α- amylase sintetis Faktor Sidik Ragam Provenan 0,976 tn Bagian Pohon 13,174 ** Kondisi Pohon 9,106 ** Provenan x Kondisi Pohon 1,554 tn Provenan x Bagian Pohon 2,706 tn Kondisi Pohon x Bagian Pohon 0,001 tn Provenan  x  Kondisi  Pohon  x Bagian Pohon 1,939 tn Keterangan : x : Interaksi antarfaktor ** : Berpengaruh nyata tn
: Tidak berpengaruh nyata
Tabel  diatas  menunjukkan  bahwa  aktivitas α- amylase inhibitor  dengan  menggunakan  enzim α- amylase sintetis  dipengaruhi  secara  nyata  oleh  bagian dan  kondisi  pohon.  Sedangkan  faktor  provenan  serta interaksinya dengan faktor lain tidak berpengaruh nyata terhadap  aktivitas α-amylase inhibitor.  Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Djati  (2009)  bahwa  berdasarkan rekapitulasi  hasil  sidik  ragam  aktivitas α-amylase inhibitor  menggunakan  enzim  sintetis,  kondisi  pohon dan bagian pohon berpengaruh nyata  terhadap  aktivitas α-amylase inhibitor,  tetapi  faktor  provenan  tidak berbeda nyata.
Gambar 1.  Histogram  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  bagian  kulit  dan  batang  pohon sengon menggunakan enzim sintetis.
Pada  provenan  Kediri,  Solomon,  dan  Subang (Gambar  1),  seluruhnya  menunjukkan  aktivitas α- amylase inhibitor  pada  batang  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  bagian  kulit.  Jika  dirata-ratakan dari  seluruh  provenan,  aktivitas α-amylase inhibitor
menggunakan  enzim  sintetis  pada  bagian  batang mencapai  29,4751  AIU/mg.  Bagian  kulit nilainya  lebih rendah,  yaitu  26,4971  AIU/mg.  Hal  ini  dikarenakan pada  saat  larva  boktor  mencapai  ukuran  3,5  cm,  larva sedang  aktif  menggerek  batang  pohon  sengon  yang berkayu.  Selain  itu  bagian  batang  mengandung  banyak karbohidrat  sehingga  boktor  mensintesa  enzim α- amylase untuk  mencerna  karbohidrat  tersebut  (Djati 2009). Nilai rata-rata aktivitas α-amylase inhibitor pada batang  sengon  tertinggi  terdapat  pada  provenan Solomon  dengan  nilai  31,979  AUI/mg  dan  yang terendah  terdapat  pada  provenan  Kediri  dengan  nilai 27,693  AUI/mg.  Sedangkan  pada  bagian  kulit,  nilai tertinggi  ditunjukkan  oleh  provenan  Kediri  (27,391 AUI/mg) dan yang terendah ditunjukkan oleh provenan Solomon (25,169 AUI/mg).
Selain  bagian  pohon,  faktor  lain  yang  berpengaruh nyata  terhadap  aktivitas α-amylase inhibitor  adalah kondisi  pohon,  yaitu  sehat  dan  sakit.  Kondisi  sakit dinyatakan pada  pohon yang terserang hama boktor ( X. festiva ).  Sebaliknya,  pohon  dinyatakan  dalam  kondisi sehat apabila tidak terkena serangan hama boktor.
Gambar 2.  Histogram  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  pada  pohon  sengon  kondisi  sehat dan sakit menggunakan enzim sintetis.
Gambar  2  menunjukkan  rata-rata  aktivitas α- amylase inhibitor yang lebih tinggi pada pohon dengan kondisi  sehat,  baik  provenan  Kediri,  Solomon,  maupun Subang.  Pada  provenan  Kediri  rata-rata  aktivitas α- amylase inhibitor  pohon  sehat  adalah  28,249  AUI/mg, sedangkan  untuk  pohon  sakit  hanya  26,183  AUI/mg. Provenan  Solomon  memiliki  rata-rata  aktivitas α- amylase inhibitor  sebesar  28,799  AUI/mg untuk  pohon sehat  dan  25,652  AUI/mg  untuk  pohon  sakit.  Hal  yang sama  juga  terjadi  pada  provenan  Subang  yang mempunyai  nilai  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor sebesar  28,696  AUI/mg  pada  pohon  sehat  dan  22,516 AUI/mg  pada  pohon  sakit.  Berdasarkan  provenannya, aktivitas α-amylase inhibitor  tertinggi  dicapai  oleh provenan  Solomon  dengan  nilai  28,5739  AUI/mg. Sedangkan  aktivitas α-amylase inhibitor  terendah
dicapai  oleh  provenan  Kediri  dengan  nilai  27,5421 AUI/mg.
Apabila  digabungkan,  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  pada  pohon  sehat  mencapai  nilai  28,5689 AUI/mg,  sedangkan  pohon  sakit  hanya  25,6894 AUI/mg. Aktivitas α-amylase inhibitor yang lebih tinggi pada  pohon  sehat  menunjukkan  bahwa  pohon  sehat memiliki  kemampuan  untuk  menghambat  serangan hama boktor yang lebih besar. α-amylase inhibitor akan menghambat  proses  degradasi  pati  (karbohidrat)  dalam pencernaan  larva  boktor  sehingga  larva  tidak  dapat mengubahnya  menjadi  energi.  Diduga  dengan  adanya mekanisme  ini,  larva  boktor  akan  menghindari  pohon sengon  dengan  aktivitas α-amylase inhibitor  yang tinggi.
Aktivitas α-amylase Inhibitor  pada  Bagian Batang  Pohon  Sengon  Menggunakan    Enzim  Alami dari  Pencernaan  Larva  Boktor. Pada  pencernaan larva  boktor  terjadi  suatu  proses  pemecahan  molekul nutrien  kompleks  menjadi  molekul-molekul  yang  lebih sederhana sehingga mudah untuk dicerna. Salah satunya adalah  pemecahan  pati  atau  karbohidrat  menjadi molekul  yang  lebih  sederhana  oleh  enzim α-amylase (Muchtadi  1993).  Oleh  karena  itu  selain  menggunakan enzim α-amylase sintetis,  pengujian  juga  dilakukan dengan  menggunakan  enzim α-amylase alami  yang berasal dari pencernaan larva  boktor. Namun pengujian hanya dilakukan pada bagian batang pohon saja, karena pada  penelitian  sebelumnya  diketahui  bahwa  aktivitas α-amylase tertinggi  terdapat  pada  bagian  batang  (Djati 2009).  Berikut  adalah  rekapitulasi  hasil  sidik  ragam aktivitas α-amylase inhibitor  pada  batang  sengon menggunakan  enzim α-amylase alami  dari  pencernaan larva boktor.
Tabel 2.  Rekapitulasi  hasil  sidik  ragam  aktivitas α- amylase inhibitor  menggunakan  enzim α- amylase alami dari pencernaan larva boktor Faktor Sidik Ragam Provenan 6,851 ** Kondisi Pohon 45,414 ** Provenan x Kondisi Pohon 6,851 ** Keterangan : x : Interaksi antarfaktor
**
: Berpengaruh nyata tn
: Tidak berpengaruh nyata
Rekapitulasi  hasil  sidik  ragam  aktivitas α-amylase inhibitor  menggunakan  enzim α-amylase alami  dari pencernaan  larva  boktor  menunjukkan  bahwa  faktor provenan memberikan pengaruh yang nyata. Perbedaan ini  dapat  disebabkan  oleh  beberapa  faktor,  diantaranya ukuran  boktor  yang  tidak  tepat,  penggunaan  enzim alami α-amylase dari  pencernaan  boktor  dan  jumlah sampel yang tidak berimbang.
Sesuai  dengan  Prasetya  (2007)  yang  diacu dalam Djati  (2009),  aktivitas  enzim α-amylase tertinggi diperoleh  pada  larva  berukuran  3,5  cm.  Pada  saat berukuran  3,5  cm,  larva  sedang  dalam  kondisi  banyak mencerna pati yang terdapat pada batang pohon sengon. Namun aktivitas α-amylase akan mengalami penurunan
Ulfah Juniarti Siregar et al.
pada panjang larva 4 cm hingga 5 cm karena larva tidak melakukan  aktivitas  memakan  kayu  secara  kontinyu. Dan  dalam  Marta  (2005)  disebutkan  bahwa  pada  saat larva berukuran 4 cm sampai 5 cm, larva sedang dalam masa  transisi  antara  stadium  larvadan  stadium  pupa sehingga  makanan  yang  dimakan  hanya  sedikit.  Pada saat  proses  ekstraksi  enzim α-amylase dari  pencernaan boktor, ukuran larva seringkali tidak tepat 3,5 cm, tetapi berkisar  antara  3  cm  hingga  4  cm.  Ketersediaan  larva boktor  yang  terbatas  menyebabkan  sulitnya  untuk mendapatkan larva dengan ukuran yang sesuai.
Kemudian  saat  proses  ekstraksi  enzim α-amylase dari  pencernaan  boktor  berlangsung,  enzim  tidak  di purifikasi terlebih dahulu. Sedangkan dalam pencernaan boktor  masih  terdapat  enzim  lain  yang  ikut  bereaksi dengan α-amylase inhibitor dan menyebabkan penurunan  aktivitas α-amylase inhibitor.  Selain  itu jumlah  sampel  yang  tidak  berimbang  antara  sampel batang  yang  sehat  dengan  sampel  batang  sakit  juga dapat  mempengaruhi  hasil  sidik  ragam  aktivitas α- amylase inhibitor.  Pada  penelitian  ini,  jumlah  total sampel  batang  yang  sehat  adalah  30  sampel,  masing- masing 10 sampel dari tiap provenan. Sedangkan jumlah sampel  batang  yang  sakit  hanya  10  sampel,  yaitu  dari provenan  Kediri.  Sampel  sulit  didapatkan  karena  pada saat  pengambilan  sampel  dilapangan  pohon  yang  sakit sudah  banyak  ditebangi  oleh  masyarakat  agar  tidak menulari pohon disekitarnya.
Gambar 3.  Histogram  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  pada  batang  pohon  sengon provenan Kediri, Solomon, dan Subang.
Dari  Gambar  di  atas  dapat  dilihat  bahwa  masing- masing  provenan  memiliki  nilai  rata-rata  aktivitas α- amylase inhibitor yang berbeda-beda. Provenan Subang memiliki rata-rata aktivitas α-amylase inhibitor tertinggi yaitu  sebesar  55,2956  AUI/mg.  Sedangkan  Kediri  dan Solomon  memiliki  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  masing-masing  sebesar  53,2695  AUI/mg  dan 44,0244 AUI/mg.
Selain  faktor  provenan,  dari  hasil  rekapitulasi  pada tabel  2  diperoleh  bahwa  faktor  kondisi  pohon  juga berpengaruh  nyata  terhadap  aktivitas α-amylase inhibitor.  Begitu  pula  dengan  interaksi  antara provenan dengan kondisi pohon yang memberikan pengaruh nyata terhadap aktivitas α-amylase inhibitor (Gambar 4).
Gambar 4.  Histogram  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor pada batang pohon sengon kondisi sehat dan sakit.
Ketiga  provenan  menunjukkan  nilai  rata-rata aktivitas α-amylase inhibitor  yang  lebih  tinggi  pada batang  pohon  dengan  kondisi  sehat  yaitu  64,607 AUI/mg  untuk  provenan  Kediri,  46,117  AUI/mg  untuk provenan Solomon, dan 68,659 AUI/mg untuk provenan Subang.  Dan  jika  data  dari  ketiga  provenan digabungkan,  maka  didapatkan  rata-rata  aktivitas α- amylase inhibitor  pada  batang  pohon  dengan  kondisi sehat  adalah  59,7946  AUI/mg.  Sedangkan  rata-rata aktivitas α-amylase inhibitor  pada  batang  pohon  yang sakit hanya 41,932 AUI/mg.
Hal  ini  sejalan  dengan  pernyataan  sebelumnya bahwa pohon dengan kondisi sehat memiliki aktivitas α- amylase inhibitor tertinggi  sehingga  dapat  menghambat serangan  hama  boktor.  Dalam  Bahagiawati  (2005) disebutkan  bahwa  inhibitor α-amylase adalah  protein yang  menghambat  enzim  amylase  di  dalam  saluran pencernaan (midgut) serangga. Enzim amilase diperlukan  serangga,  terutama  serangga  pemakan  biji- bijian  dan  ubi  yang  kaya  akan  pati.  Pati  ini  harus dihidrolisis  menjadi  molekul  karbohidrat  yang  lebih sederhana  (kecil)  seperti  disakarida  dan  monosakarida, agar  dapat  digunakan  dalam  sistem  metabolisme serangga.  Dengan  dihambatnya  pemecahan  pati  oleh inhibitor α-amylase maka  serangga  tidak  mendapatkan kebutuhan karbohidratnya, sehingga berakibat fatal bagi serangga tersebut.
Perbandingan  Aktivitas α-amylase Inhibitor  Bagian Batang  Menggunakan  Enzim  Sintetis  dan  Enzim Alami dari Pencernaan Larva Boktor
Tabel 3.  Rekapitulasi  hasil  sidik  ragam  aktivitas α- amylase inhibitor pada batang pohon menggunakan  enzim  sintetis  dan  enzim  alami
dari pencernaan larva boktor Faktor Sidik Ragam Provenan 2.999 tn Kondisi 46.542 ** Enzim 203.348 ** Provenan  x Kondisi 2.889 tn Provenan x Enzim 5.678 ** Kondisi x Enzim 19.782 ** Provenan  x Kondisi x Enzim 5.879 **
Keterangan : x : Interaksi antarfaktor ** : Berpengaruh nyata tn : Tidak berpengaruh nyata
Tabel  3  diatas  menunjukkan  bahwa  faktor  kondisi pohon  dan  enzim  memberikan  pengaruh  yang  nyata terhadap  aktivitas α-amylase inhibitor  pada  batang pohon  menggunakan  enzim  sintetis  dan  enzim  alami dari  pencernaan  larva  boktor,  sedangkan  faktor provenan  tidak  berpengaruh  nyata.  Kondisi  pohon memiliki  pengaruh  yang nyata  yang  konstan  baik  pada pengujian  menggunakan  enzim  sintetis,  enzim  alami dari  pencernaan  larva,  maupun  gabungan  keduanya. Kemudian  interaksi  antar  faktor  provenan  dan  kondisi pohon  tidak  berpengaruh  nyata,  tetapi  interaksi  antar faktor lainnya berpengaruh nyata.
Sampel yang digunakan dalam hal ini adalah sampel bagian  batang  pohon  saja,  karena  pada  pengujian menggunakan  enzim  alami  hanya  dilakukan  pada sampel  batang  pohon  saja  yang  memiliki  aktivitas α- amylase lebih  tinggi dibandingkan dengan bagian kulit. Berikut  adalah  histogram  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  pada  batang  pohon  menggunakan  enzim sintetis  dan  enzim  alami  dari  pencernaan  larva  boktor provenan Kediri, Solomon, dan Subang.
Gambar 5.  Histogram  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  menggunakan  enzim  sintetis  dan enzim alami dari pencernaan boktor.
Dari  Gambar  dilihat  bahwa  pada  ketiga  provenan rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  pada  batang pohon  dengan  menggunakan  enzim  alami  jauh  lebih besar jika dibandingkan dengan pengujian menggunakan  enzim  sintetis.  Setelah  digabungkan, didapatkan angka rata-rata aktivitas α-amylase inhibitor pada batang pohon menggunakan enzim sintetis sebesar 29,4751  AUI/mg.  Angka  ini  jauh  lebih  rendah  jika dibandingkan  dengan  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor pada batang pohon menggunakan enzim alami, yaitu sebesar 50,8632 AUI/mg.
Bergmeyer  (1974)  diacu  dalam  Pasaribu  (2008) menyatakan,    pada  proses  pengamatan  aktivitas inhibitor  dengan  menggunakan  enzim  alami  dari pencernaan  boktor,  ada  kemungkinan  nilai  yang dihasilkan lebih tinggi maupun lebih rendah dibandingkan dengan yang menggunakan enzim sintetis. Hal ini disebabkan 3 macam proses penghambatan yang mungkin terjadi:
1. Aktivitas  dari  proenzyme  dalam  serum,  sekresi, dan ekstrak dari pankreas.
2. Progressive  inhibition  ( slow  reacting  inhibitors ) dan  pe-nonaktifan  enzim  karena  senyawa  protein maupun autolysis.
3. Temporary  inhibition,  penghematan  kerja  enzim karena inhibitor atau karena protease lain.
Nilai  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  melalui pengujian  dengan  menggunakan  enzim  alami  dari pencernaan  boktor  yang  lebih  besar  diduga  disebabkan karena  proses  penghambatan  enzim  oleh inhibitor  pada bagian  batang    merupakan  proses  penghambatan  yang
Ulfah Juniarti Siregar et al.
58 bersifat progressive inhibition ( slow reacting inhibitors ),  dimana  selain  terjadi  penghambatan  oleh inhibitor  yang  berasal  dari  kayu,  juga  terjadi  pe- nonaktifan  enzim  oleh  senyawa  lain  dari  pencernaan boktor  yang  menyebabkan  nilai  aktivitas α-amylase inhibitor lebih tinggi.
Selain  itu,  dari  Gambar  5  dapat  pula  diketahui bahwa  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  pada batang pohon dengan kondisi sehat memang lebih tinggi dibandingkan  dengan  batang  pohon  dengan  kondisi sakit.  Untuk  pengujian  dengan  menggunakan  enzim sintetis,  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  tertinggi terdapat  pada  batang  pohon  sehat  provenan  Solomon sebesar  32,420  AUI/mg.  Dan  rata-rata  aktivitas α- amylase inhibitor  terendah  terdapat  pada  batang  pohon sakit  provenan  yang  sama  sebesar  26,256  AUI/mg. Sedangkan  untuk  pengujian  dengan  menggunakan enzim  alami  dari  pencernaan  larva  boktor,  rata-rata aktivitas α-amylase inhibitor  tertinggi  terdapat  pada batang  pohon  sehat  provenan  Subang  sebesar  68,659 AUI/mg.  Dan  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor terendah  terdapat  pada  batang  pohon  sakit  provenan Kediri sebesar 41,932AUI/mg.

## KESIMPULAN
1. Berdasarkan  uji  sidik  ragam  aktivitas α-amylase inhibitor menggunakan enzim sintetis, faktor bagian dan  kondisi  pohon  berpengaruh  nyata  terhadap aktivitas α-amylase inhibitor,  sedangkan  faktor provenan tidak berpengaruh nyata.
2. Aktivitas tertinggi α-amylase inhibitor menggunakan enzim  sintetis  terdapat  pada  pengujian  dengan sampel  batang  pohon  sengon  kondisi  sehat  dengan nilai  rata-rata  28,5689  AUI/mg,  sedangkan  pada pohon  sakit  hanya  25,6894  AUI/mg.  Ketiga provenan menunjukkan aktivitas α-amylase inhibitor pada  batang  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan bagian  kulit,    yaitu  29,4751  AIU/mg  untuk  bagian batang dan 26,4971 AIU/mg untuk bagian kulit.
3. Berbeda  dengan  hasil  pengujian  dengan  enzim sintetis,  hasil  uji  sidik  ragam  aktivitas α-amylase inhibitor menggunakan enzim alami dari pencernaan boktor  menunjukkan  bahwa  faktor  provenan memberikan  pengaruh  yang  nyata.  Selain  itu  faktor kondisi  pohon  dan  interaksi  antara  faktor  provenan dengan  kondisi  pohon  juga  berpengaruh  nyata terhadap aktivitas α-amylase inhibitor.
4. Pada pengujian menggunakan enzim alami, provenan  Subang  memiliki  rata-rata  aktivitas α- amylase inhibitor  tertinggi  yaitu  sebesar  55,2956 AUI/mg.  Sedangkan  provenan  Solomon  memiliki rata-rata aktivitas α-amylase inhibitor terendah,yaitu 44,0244 AUI/mg.
5. Rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  pada  batang pohon  sengon  sehat  (59,7946  AUI/mg)  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  aktivitas α-amylase inhibitor
pada  batang  pohon  sengon  sakit  (41,932  AUI/mg) pada  pengujian  dengan  menggunakan  enzim  alami dari pencernaan larva boktor.
6. Hasil  perbandingan  antara  enzim  sintetis  dengan enzim  alami  menunjukkan  bahwa  faktor  kondisi pohon dan enzim memberikan pengaruh yang nyata, sedangkan faktor provenan tidak berpengaruh nyata. 7. Rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  pada  batang pohon menggunakan enzim alami (50,8632 AUI/mg)  mempunyai  nilai  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  rata-rata  aktivitas α-amylase inhibitor  pada  batang  pohon  menggunakan  enzim sintetis (29,4751 AUI/mg).

## DAFTAR PUSTAKA
Atmosuseno  BS.    1998. Budidaya,  Kegunaan,  dan Prospek Sengon . Jakarta: Penebar Swadaya.
Bahagiawati.  2005. Isolasi dan Purifikasi α-amilase dari Biji Kacang Phaseolus vulgaris.  Agrobiogen 1(1):7- 12. http://www.indobiogen.or.id/terbitan/ pdf/abgobiogen_1_1_2010_06-07. pdf [6 Juli 2010]
Djati  FDH.    2009.  Studi  trypsin  inhibitor  dan  alfa- amylase inhibitor pada pohon sengon ( Paraserianthes  falcataria (L)  Nielsen)  provenan Banjarnegara  dan Subang [skripsi]. Bogor:  Fakultas Kehutanan. Institut Pertanian Bogor.
Marta  AK.  2005. Pengaruh berbagai  jenis serbuk kayu sengon  ( Paraserianthes  falcataria )  pada  makanan buatan  (Artificial  Diet)  terhadap  pertumbuhan  larva boktor ( Xystrocera festiva Pascoe) [skripsi]. Bogor : Fakultas Kehutanan. Institut Pertanian Bogor. Tidak dipublikasikan.
Muchtadi  D.    1993.  Teknik  evaluasi  nilai  gizi  protein [disertasi].  Bogor  :  Program  Pascasarjana,  Institut Peranian Bogor.
Pasaribu  FA.    2008.  Studi trypsin inhibitor  dan α- amylase inhibitor pada  bagian daun,  kulit, dan kayu sengon  ( Paraserianthes  falcataria (L)  Nielsen) [skripsi].  Bogor:  Fakultas  Kehutanan.  Institut Pertanian Bogor.
Prasetya  A.    2007.  Studi  tentang  enzim trypsin dan α- amylase pada  hama  boktor  ( Xystrocera  festiva Pascoe)  serta  inhibitor trypsin pada  pohon  sengon [skripsi].  Bogor:  Fakultas  Kehutanan.  Institut Pertanian Bogor.
Siregar IZ, Yunanto T, Ratnasari J.  2008. Kayu Sengon . Jakarta: Penebar Swadaya.
Winarni I.  2003. Studi keragaman trypsin inhibitor dan keragaman  genetik  isoenzim  pohon  plus  sengon ( Paraserianthes  falcataria (L)  Nielsen)  pada  hutan rakyat  di  Jawa  Barat  [tesis].  Bogor:  Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.