## KARAKTERISTIK EKSOPOLISAKARIDA MIKROALGA Porphyridium cruentum YANG BERPOTENSI UNTUK PRODUKSI BIOETANOL

## Alwahidul Mubarok*, Iriani Setyaningsih, Uju
Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, Kampus IPB Darmaga, Jalan Agatis, Bogor 16680 Telepon (0251) 8622915 Faks.(0251) 8622916
*Korespondensi: aal.surplus@gmail.com Diterima: 28 Desember 2017/ Disetujui: 21 Maret 2018
Cara sitasi: Mubarok A, Setyaningsih I, Uju. 2018. Karakteristik eksopolisakarida mikroalga Porphiridium cruentum yang berpotensi untuk produksi bioetanol. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 21(1): 24-34.

## Abstrak
Porphyridium cruentum merupakan salah satu mikroalga yang memiliki kandungan polisakarida yang tinggi dan mampu menghasilkan polisakarida ekstraseluler dengan jumlah mencapai 19,7 g/L. Mikroalga tidak mengandung lignin sebagai pelindung dinding selnya, sehinggaberpotensi sebagai bahan produksi bioetanol. Kendala yang dihadapi untuk mendapatkan eksopolisakarida P. cruentum yaitu pada tahap pemanenan, pemisahan eksopolisakarida dari media kultivasi. Tujuan penelitian ini adalah membandingkan metode pemanenan eksopolisakarida P. cruentum dengan bahan presipitasi yang berbeda untuk mendapatkan metode alternatif yang lebih baik, serta menentukan metode hidrolisis terbaik untuk menghasilkan gula tertinggi. Penelitian dilakukan dengan tiga tahap terdiri dari kultivasi mikroalga, pemanenan dan karakterisasi eksopolisakarida, serta hidrolisis eksopolisakarida. Metode kultur menggunakan perlakuan fotoperiod 12 jam gelap 12 jam terang. Kultur P. Cruentum dipresipitasi dengan etanol 96% perbandingan 1:0,75 (v/v) dan KOH 5% perbandingan 1:1,5 (v/v).  Polisakarida dihidrolisis dengan HCl 2 N dan akuades (suhu 100 o C, selama 3 jam). Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar air eksopolisakarida presipitasi dengan etanol 96% yaitu 12,70%, abu 59,68%, viskositas 76,8 Cp, rendemen 1,4 g/L dan eksopolisakarida hasil presipitasi dengan KOH 5% dengan kadar air 5,28%, abu 78,61% viskositas 134,4 cP, rendemen 6,1 g/L. Monosakarida yang terdeteksi adalah fruktosa. Hidrolisis menggunakan HCl 2 N, suhu 100°C selama 3 hari  merupakan metode hidrolisis eksopolisakarida terbaik dengan kadar gula total tertinggi yaitu 24,31%
Kata kunci : bioetanol, eksopolisakarida, hidrolisis asam, Porphyridium cruentum

## Characterization of Exopolysaccharide from Microalgae Porphyridium cruentum which has Potential for Bioethanol Feedstock
Abstract
Porphyridium cruentum is one of the single cell microalgae which has high polysaccharide content and it can produce extracellular polysaccharides up to 19,7 g/L. Microalgae has no lignin covering of its cell wall, therefore it is potential as a bioethanol feedstock. The obstacle to obtain an exopolysaccharides from P.cruentum is harvesting stage,separating exopolysaccharides from culturing media. The purposes of this study were to compare harvesting of P.cruentum exopolysaccharide using different precipitant, to obtain the best precipitant, and to determine the best acid hydrolysis method to produce the highest sugar. This research was conducted in three stages, microalgae cultivation; harvesting and characterization of exopolysaccharides; and acid hydrolysis of exopolysaccharides. The cultivation method was carried out using photoperiod treatment 12 hours dark 12 hours light. P. cruentum exopolysaccharide was harvested by precipitation using 96% ethanol with a ratio of 1 : 0,75 v/v and 5% KOH with a ratio of 1 : 1,5 v/v.  The xopolysaccharide was hydrolyzed with 2 N of HCl  or distillated water (temperature 100 o C, for 3 hours). Precipitated exopolysaccharide using ethanol 96% and KOH 5% contained moisture of 12,70% and 5,28%; ash of 59,68% and 78,61%; viscosity of 76,8 and 134,4 cP, respectively. Monosaccharide detected was fructose. The exopolysaccharide yield precipitated with  KOH 5% (6,1 g/L) was higher than that of ethanol 96% (1,4 g/L). Hydrolysis using HCl 2 N (100 o C, for 3 hours) was the best method with total sugar content was 24,31%.
Keywords : bioethanol feedstock, exopolysaccharides, hydrolysis, Porphyridium cruentum
Karakteristik Eksopolisakarida Mikroalga, Mubarok et al.

## PENDAHULUAN
Mikroalga menjadi salah satu jenis bahan yang sangat potensial digunakan sebagai bioetanol, karena memiliki kemampuan untuk tumbuh dalam waktu yang relatif singkat, bisa dikembangbiakkan pada area yang terbatas, serta beberapa jenis mikroalga memiliki kandungan karbohidrat yang tinggi. Spolaore et al. (2006) menyatakan bahwa biomasa kering Porphyridium cruentum mengandung karbohidrat sebanyak 40-57%. Porphyridium cruentum juga menghasilkan polisakarida ekstraseluler hingga  19,7  g/L  (Kusmiati  dan  Agustini  2009). Patel et al. (2013) melaporkan bahwa polisakarida ekstraseluler P. cruentum mengandung empat monosakarida yaitu galaktosa 40%, xilosa 30%, glukosa 20%, dan asam glukoronik sebesar 10%. Bioetanol memiliki kegunaan yang cukup luas di bidang farmasi hingga bahan bakar, oleh sebab itu  bioetanol memiliki nilai guna yang sangat penting. Ketersediaan bioetanol saat ini belum optimal, terlebih untuk kebutuhan bahan bakar yang masih menggunakan sumber daya yang tidak dapat diperbaharui. Hal ini mengkhawatirkan, karena renstra Kementerian ESDM tahun 2015-2019 melaporkan bahwa bahan-bahan tersebut akan habis pada kurun waktu 10 hingga 20 tahun lagi (KESDM 2015). Sumber-sumber baru terus dicari dan dikembangkan guna menghasilkan bioetanol dari bahan-bahan alternatif yang mengandung karbohidrat, di antaranya bahan-bahan yang mengandung gula atau pati dan biomasa. Kebutuhan pangan yang tinggi, menjadikan bahan-bahan bergula atau berpati lebih diutamakan untuk kebutuhan pangan dari pada kebutuhan bahan bakar. Kendala yang dihadapi dalam penggunaan biomasa sebagai bahan untuk produksi bioetanol adalah biaya yang tinggi pada proses penghilangan lignin yang menjadi penghalang untuk hidrolisis dan fermentasi.
Porphyridium cruentum berpotensi sebagai sumber alternatif karena tidak mengandung lignin. Arad dan Levy-Ontman (2010) menyatakan bahwa P. cruentum merupakan salah satu mikroalga merah bersel tunggal yang tidak memiliki komponen selulosa
mikrofibril, namun dinding selnya dibungkus dengan polisakarida sulfat yang membentuk gel, serta memiliki polisakarida ekstraseluler yang mudah diekstrak.
Kendala yang dihadapi untuk mendapatkan eksopolisakarida P. cruentum yaitu pemisahan eksopolisakarida dari media. Pemisahan eksopolisakarida dari P. cruentum dapat dilakukan dengan menggunakan etanol (Patel et al. 2013;
Setyaningsih et al. 2013). Metode ini kurang efisien bila digunakan untuk produksi masal, karena biaya yang tinggi, sehingga perlu dicari bahan alternatif. Bahan yang bisa digunakan untuk memisahkan eksopolisakarida dari kultur antara lain menggunakan alkali, salah satunya KOH. Prasetyo et al. (2016) melaporkan bahwa KOH bisa digunakan untuk memisahkan eksopolisakarida. Produksi bioetanol menggunakan eksopolisakarida P. cruentum belum pernah dilakukan, oleh karena itu perlu dilakukan kajian awal mengenai karakteristik eksopolisakarida P. cruentum yang dipresipitasi dengan presipitan berbeda sebagai bahan untuk produksi bioetanol. Tujuan dari penelitian ini adalah membandingkan penggunaan bahan presipitasi yang berbeda  pada  pemanenan  eksopolisakarida P. cruentum untuk ditentukan karakteristik masing-masing, serta menentukan metode hidrolisis asam terbaik untuk menghasilkan gula tertinggi sebagai bahan baku produksi bioetanol.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian adalah mikroalga P. cruentum koleksi kultur Pusat Penelitian dan Pengembangan Oseanografi LIPI Ancol dan ditumbuhkan di Laboratorium Bioteknologi Hasil Perairan Departemen THP Institut Pertanian Bogor. Bahan-bahan kimia yang digunakan dalam pembuatan media kultivasi adalah media modifikasi Guilard F/2 yang terdiri atas NaNO3  (Merck), Na2HPO4 (Merck), FeCl2 (Merck), Na(II)-EDTA (Merck), CuSO4 (Merck), ZnSO4 (Merck), NaMoO4 (Merck), CoCl2 (Merck), MnCl2 (Merck) dan Vitamin B komplek Neurobion
5.000 (Merck), masing-masing bahan dilarutkan pada 100 mL akuades. Bahan kimia lain yang digunakan adalah etanol 96% (Merck), NaOH 2 N (Merck), HCl 2 N (Merck), KOH 5% (Merck), H2SO4 (Merck).
Alat yang digunakan meliputi  peralatan gelas (pirex), mikropipet 100-1.000 μL, toples kaca ukuran 500 mL, 2 L, dan 10 L, sentrifus,  lampu  TL40  watt  (Hannoch),  timer (24 Hour Time Switch Intra), spektrofotometer (Spectro UV-VIS 2500), aerator (AP 500), mikroskop cahaya (Olimpus), oven (Yamato DV 41) dan neraca (Sartorius TE214S), vortex , hot plate , otoklaf (Yamato SM 52), inkubator, oven (Yamato SH 62), furnace , desikator, ruang laminar, waterbath , spektrometer UV/VIS Perkin Elmer (Yamato), pH meter (Thermo), dan UFLC (Shimadzu).
Metode Penelitian Penelitian ini dilakukan dalam tiga tahap, yaitu 1) kultivasi mikroalga, untuk menghasilkan biomasa dengan kandungan eksopolisakarida terbanyak; 2) pemanenan dan karakterisasi eksopolisakarida, untuk mendapatkan eksopolisakarida tertinggi menggunakan bahan presipitasi berbeda;
3) hidrolisis eksopolisakarida, untuk mendapatkan hidrolisat dengan kandungan gula tertinggi.
Kultivasi Porphyridium cruentum Kultivasi dimulai dari tahap penyegaran kultur selama 7 hari dalam erlemenyer menggunakan media Guillard . Volume kultur untuk penyegaran adalah 500 mL dengan inokulum sebanyak 20% (v/v). Penyegaran stok mikroalga dilakukan dalam keadaan aseptik pada suhu ruang menggunakan lampu neon dengan intensitas cahaya 2.000–2300 lux sebagai sumber cahaya, dan dilengkapi dengan aerasi terus-menerus. Tahap kultivasi diperbesar dengan menggunakan toples kaca kapasitas 2 L selama 7 hari, kemudian dilakukan scale up dari kultur  2 L menjadi 10 L selama 40 hari dengan perlakuan fotoperiod  12  :  12  jam  (terang  :  gelap)
(Prasetyo et al . 2016) dan dilakukan pengukuran kepadatan sel menggunakan spekrofotometer λ760 serta penghitungan jumlah sel menggunakan haemositometer.

## Pemisahan Eksopolisakarida
Pemisahan eksopolisakarida dilakukan dengan cara dipresipitasi menggunakan 2  bahan  presipitasi  berbeda.  Kultur P. cruentum dipresipitasi menggunakan  etanol 96%(1:0,75 v/v) (Setyaningsih et al. 2013) dan KOH 5% (1:1,5 v/v) (Prasetyo et al. 2016).
Eksopolisakarida disaring dan dikeringkan menggunakan oven pada suhu 50 o C  selama 12 jam. Eksopolisakarida kering  dianalisis kadar air (AOAC 2007),  kadar abu (BSN 1992), kadar gula total (Dubois et al. 1965), viskositas (Garesh 2002), rendemen, gugus fungsi (ASTM 2013), dan jenis monosakarida (Arad et al. 1985).

## Eksopolisakarida hidrolisis
Proses hidrolisis eksopolisakarida menggunakkan 2 bahan penghidrolisis berbeda,  yaitu    HCl  2  N  dan  akuades (Patel et al. 2013). Eksopolisakarida sebanyak 1 mg ditambahkan 10 mL asam, kemudian dipanaskan pada suhu 100 o C selama 3 jam. Hidrolisat eksopolisakarida dianalisis kandungan gula total menggunakan metode fenol sulfat, bertujuan untuk mengetahui kemampuan masing-masing asam dalam menghidrolisis substrat.

## Pengukuran viskositas
Eksopolisakarida dilarutkan dalam akuades dengan konsentrasi 0,25% (b/v), kemudian diaduk menggunakan magnetic stirrer plus heater dengan suhu
50 o C selama 30 menit hingga larutan homogen. Viskositas diukur menggunakan viskometer Toki Sangyo TV-10 dengan spindle M2  no  18  pada  kecepatan  50  rpm (modifikasi Geresh et al. 2002). Nilai viskositas yang terukur dinyatakan dalam satuan cP (Centipoise).
Penentuan kandungan gula total metode fenol sulfat Penentuan gula total didasarkan pada metode fenol sulfat (Dubois et al. 1956),
sebelum melakukan pengujian sampel maka perlu diketahui kurva standar fenol yang digunakan. Kurva standar fenol disiapkan dengan melarutkan 2 mL larutan glukosa standar pada konsentrasi 0, 10, 20, 30, 40, 50
Karakteristik Eksopolisakarida Mikroalga, Mubarok et al.
dan 60 mg/L. Larutan glukosa dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 1 mL larutan fenol 5%, kemudian dikocok.
Asam sulfat (H2SO4) pekat sebanyak 5 mL ditambahkan dengan cepat, dibiarkan selama 10 menit, kemudian dikocok lalu tempatkan dalam penangas air selama 15 menit. Pengukuran absorban dilakukan pada panjang gelombang 490 nm dengan menggunakan spektrofotometer. Tahapan yang dilakukan pada pengujian sampel sama dengan pembuatan kurva standar fenol, dengan cara menggantikan 2 mL larutan glukosa dengan 2 mL sampel.
Analisis gugus fungsi Gugus fungsi dari eksopolisakarida dideteksi dengan Fourier Transformed Infrared (FTIR) mengacu pada (Mishra dan Jha 2009). Pelet untuk analisis FTIR diperoleh dengan memasukkan 200 mg Kbr dan2 mg sampel ke dalam mortar serta dicampurkan sampai homogen. Sampel dipadatkan dan dimasukkan ke dalam Tensor 37. Pengukuran sampel uji dilakukan pada bilangan gelombang antara 4.000-500 cm -1 . Spektra FTIR yang dihasilkan menunjukkan puncak-puncak serapan bilangan gelombang dari sampel uji. Gugus-gugus fungsi sampel uji ditentukan berdasarkan puncak serapan bilangan gelombang yang terdeteksi.

## Analisis monosakarida
Analisis monosakarida mengacu pada Patel et al. (2013) yang dimodifikasi. Eksopolisakarida 0,1 g dihidrolisis dengan 2 N HCl10 mL selama 3 jam pada suhu 100°C. Hidrolisat eksopolisakarida dinetralkan dengan NaOH 2 N dan difiltrasi menggunakan sartorius single use filter unit dengan ukuran 0,45 nm. Komposisi monosakarida ditentukan dengan Ultra Fast Liquid Cromatography (UFLC). Area puncak diperkirakan sebagai komposisi monomer.
Analisis struktur partikel Analisis struktur partikel eksopoliskarida P. cruentum menggunakan metode Scanning Electron Microscopy (SEM). Sampel sebanyak 0,2 g disebar pada piringan metal- silinder dengan pita karbon dan dilapisi dengan emas dibawah vakum. Karakterisasi mikrograf dilakukan dengan menggunakan instrumen Scanning Electron Microscopy (SEM) yang dioperasikan pada 14 kV tegangan percepatan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik P. cruentum Porphyridium cruentum yang dikultur pada media Guillard dipanen pada umur 40 hari memiliki nilai pH 7,27, dengan nilai
OD 0,935. Djemai-Zoghlache et al. (2011) melaporkan kepadatan sel Porphyridium purpureum yang dikultivasi dengan fotoperiode 12:12 jam mencapai nilai OD hingga 1 pada umur 40 hari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sel P. cruentum berwarna merah terang. Kusmiyati dan Agustini (2006) menyatakan bahwa warna merah terang pada P.cruentum disebabkan oleh keberadaan fikoeritrin sebagai pigmen yang dominan. Sel berbentuk bulat dengan diameter mencapai 5,16 µm (Gambar 1), hasil ini identik seperti
Gambar 1 P. cruentum hari ke-40 kultur (Figure 1 Cells of P. cruentum at day 40)
yang dilaporkan oleh Prasetyo et al. (2016).
Nilai viskositas media kultivasi pada umur 40 hari adalah 7,83 cp. Hasanah (2016) melaporkan bahwa nilai viskositas P.cruentum pada umur 40 hari sebesar 7,97 cp.  Arad dan Levy-Ontman (2010) menyatakan bahwa nilai viskositas sangat dipengaruhi oleh jumlah eksopolisakarida yang dilepaskan ke medium, semakin banyak jumlah polisakarida yang dikeluarkan ke dalam medium, maka akan menghasilkan viskositas yang lebih tinggi, karena pembungkus dinding sel mikroalga merah merupakan polisakarida sulfat yang membentuk gel, polisakarida sulfat tersebut akan dikeluarkan ke dalam medium selama pertumbuhannya.

## Karakteristik Eksopolisakarida
P. cruentum Rendemen, kadar abu dan air eksopolisakarida
Rendemen, kadar abu dan kadar air eksopolisakarida kering dapat dilihat pada (Tabel 1). Bahan presipitasi memengaruhi rendemen eksopolisakarida yang dihasilkan. Presipitasi dengan KOH 5% menghasilkan rendemen 4 kali lebih tinggi  dibandingkan  dengan  etanol  96%. Zulfriady dan Sudjatmiko (1995) melaporkan bahwa penggunaan KOH berpengaruh terhadap kenaikan rendemen dan mutu karaginan yang dihasilkan. Rendemen yang dihasilkan lebih tinggi dari hasil penelitian Prasetyo et al. (2016). Eksopolisakarida yang diproduksi oleh sel P. cruentum dipengaruhi faktor pertumbuhan dan lingkungan. Singh et al. (2000)  menyatakan  bahwa P. cruentum yang ditumbuhkan pada musim dingin akan memproduksi polisakarida berkisar 200 hingga 1.000 mg/L. Perlakuan penambahan alkali mampu meningkatkan ekstraksi polisakarida menjadi sempurna (Mustamin 2012). Kemampuan gugus H+ dari alkali yang bereaksi dengan gugus OH- eksopolisakarida membentuk polimer anhydrous galaktosa sehingga menghasilkan eksopolisakarida lebih banyak (Uy et al. 2005). Hal ini sesuai dengan pernyataan (Ega et al. 2016) bahwa perlakuan penambahan konsentrasi KOH berpengaruh nyata terhadap kadar karbohidrat rumput laut Euchema cottonni. Hasil eksopolisakarida kering dengan ekstraksi menggunakan
KOH  5%  dan  etanol  96%  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
Tabel 1 Kadar Air, abu dan rendemen eksopolisakarida kering P.Cruentum
( Table 1 Moisture, ash and yield of P. Cruentum exopolysaccharide ) Parameter Bahan precipitation/ Precipitation materials KOH 5% Ethanol 96% Kadar air/ Moisture (%) 5.28±0.28 12.70±1.02 Kadar abu/ Ash (%) 78.67±1.19 59.68±0.93 Rendemen/ Yield (g/L) 6.10±0.24 1.40±0.06
Gambar 2 Eksopolisakarida kering presipitasi etanol (a) dan presipitasi KOH (b).
(Figure 2 Dried exopolysaccharides with ethanol precipitation (a) and KOH precipitation (b)) (a)
(b)
Karakteristik Eksopolisakarida Mikroalga, Mubarok et al.
Kadar abu mengindikasikan adanya kandungan mineral pada bahan. Kadar abu pada eksopolisakarida P. cruentum adalah sebesar 78,67% (presipitasi  dengan  KOH  5%)  dan  59,68% (presipitasi dengan etanol 96%), hasil ini cenderung lebih tinggi dibandingkan dengan mikroalga air laut lainnya. Setthamongkol et al. (2015) melaporkan bahwa Caulerpa lentifiliera yang ditumbuhkan pada media F/2 dan dipanen dengan pencucian air tawar memiliki kadar abu yang lebih rendah yaitu sebesar 47,80%. P. cruentum dikultivasi menggunakan air laut yang diikuti dengan penambahan mineral tertentu, hal ini menyebabkan salinitas menjadi tinggi. Hal ini didukung dengan pernyataan Selco et al. (2003) bahwa air laut mengandung berbagai komponen mineral diantaranya Na + , K + , Mg 2+ , Ca 2+ , Cl - , (SO4 2- ), dan  Br - . Kadar air dalam bahan menunjukkan hasil yang berbeda antara eksopolisakarida presipitasi dengan KOH 5% dan etanol 96%. Presipitasi dengan KOH terdeteksi memiliki kadar air lebih sedikit dibandingkan presipitasi dengan etanol (Tabel 1). Hal ini disebabkan oleh KOH memiliki sifat higroskopi dan eksotermik, yaitu mampu mengeluarkan panas, sehingga menyebabkan  air  lebih  banyak  menguap (Romenda et al. 2013). Kadar air presipitasi dengan etanol 96% identik dengan hasil penelitian Hasanah (2016) yang melaporkan bahwa kadar air eksopolisakarida presipitasi dengan etanol 96% adalah sebesar 13,83 hingga 14,68 %.

## Struktur partikel eksopolisakarida
Hasil mikrograf eksopolisakarida P. cruentum menunjukkan bahwa permukaan pada masing-masing bahan pada perbesaran 100x dan 350x memiliki perbedaan (Gambar 3). Eksopolisakarida hasil presipitasi menggunakan etanol 96% memiliki kenampakan yang berbentuk batang, berbeda dengan eksopolisakarida hasil presipitasi dengan KOH 5% (a) (b) Gambar 3 Struktur partikel eksopolisakarida P. cruentum presipitasi dengan etanol 96% (a) dan KOH 5% (b).
(Figure 3   Structure of P. cruentum exopolysaccharide after precipitation with 96% ethanol (a) and KOH 5% (b))
yang sebagian besar memiliki ukuran lebih kecil dan lebih halus. Filamen pada hasil SEM eksopolisakarida hasil presipitasi dengan etanol 96% diduga sebagai campuran membran sitoplasma yang menyatu dengan dinding sel eksopolisakarida. Hal ini sesuai dengan pernyataan Juin et al. (2014) bahwa adanya perubahan pada morfologi sel P. cruentum sehingga berbentuk filamen tipis panjang,termasuk fusi sistematik dari dinding sel, yang disebabkan bercampurnya  membran sitoplasma dengan dinding sel eksopoliskarida.

## Gugus fungsi
Gugus fungsi eksopolisakarida dari P. cruentum ditunjukkan dengan adanya puncak pita pada spektrum transmitan pada suatu bilangan gelombang, spektrum FTIR eksopolisakarida P. cruentum dapat dilihat pada Gambar 4. Gugus O-H eksopolisakarida P. cruentum terdeteksi pada 3647,48 cm -1 untuk KOH dan 3405,42 cm -1 untuk etanol.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Abdala-Diaz et al. (2010) yang menyatakan bahwa gugus fungsi hidroksi (O-H) dari
Bilangan gelombang/ Wave number (cm -1 )
Gambar 4 Spektrum IR eksopolisakarida P. cruentum yang dipresipitasi dengan KOH 5% (a) dan etanol 96% (b).
Figure 4   IR spectrum of precipitated P. cruentum exopolysaccharide with KOH 5% (a) and ethanol 96%  (b).
eksopolisakarida P. cruentum berada pada
3384 cm -1 . Serapan yang muncul pada daerah bilangan gelombang 3697,3 dan 3622,1 menunjukkan adanya vibrasi ulur dari –OH, sedangkan vibrasi pada 3431,1 cm -1 merupakan vibrasi H-O-H yang membentuk ikatan hidrogen dengan air. Hal ini juga ditegaskan oleh Madejova (2003) bahwa munculnya puncak pada bilangan gelombang 3669; 3653 dan 3620 cm -1 merupakan vibrasi ulur –OH dari silanol atau yang terdapat diantara lembaran tetrahedral dengan oktahedral.  Katti (2001) melaporkan serapan pada 3634 cm -1 adalah vibrasi tekuk O-H sedangkan pada bilangan gelombang 3433 cm -1 merupakan vibrasi HO-H yang membentuk ikatan hidrogen dengan air. Hasil analisis gugus fungsi P. cruentum menunjukkan adanya polisakarida, baik hasil presipitasi KOH maupun etanol, hal ini ditunjukkan dengan adanya penyerapan pada bilangan gelombang 1115,90 cm -1 pada KOH dan 1138,65 cm -1 pada  etanol (Tabel 2). Penyerapan 1200-800 cm -1 menunjukkan adanya ikatan polisakarida dengan komposisi dan struktur yang berbeda (Sood et al. 2013).
Tra nmi ta nsi (%)
Karakteristik Eksopolisakarida Mikroalga, Mubarok et al.
Senyawa-senyawa lain juga terlihat pada hasil analisa gugus fungsi, diantaranya senyawa sulfida pada bilangan gelombang 2361,05–2337,37 untuk eksopolisakarida hasil presipitasi dengan KOH 5% dan 2242,70–2118,60 pada eksopolisakarida hasil presipitasi dengan etanol 96%, hal ini sesuai dengan pernyataan Patel et al. (2013) yang melaporkan bahwa eksopolisakarida P. cruentum memiliki kandungan sulfat sebanyak 0,082 g/g. Senyawa lainnya yang terdeteksi adalah senyawa golongan O-H, dalam hal ini adalah senyawa KOH atau
EtOH (etanol) yang digunakan sebagai bahan untuk presipitasi eksopolisakarida. Senyawa golongan C-Cl juga terdeteksi yaitu senyawa garam pada media air laut yang digunakan.

## Viskositas eksopolisakarida
Presipitasi dengan etanol menghasilkan viskositas eksopolisakarida yang lebih tinggi dibanding dengan presipitasi KOH. Nilai viskositas eksopolisakarida P. cruentum pada konsentrasi 0,25% cukup tinggi yaitu sebesar 76,8 cP (presipitasi dengan KOH) dan 134,4 cP (presipitasi etanol 96%). Nilai viskositas semakin besar maka semakin besar kekentalan larutan. Jading et al. (2011) menyatakan bahwa nilai viskositas pati dipengaruhi oleh daya serap air, suhu dan pH. Suhu pengeringan oven yang tinggi dan perubahan pH pada presipitasi KOH diduga memengaruhi viskositas eksopolisakarida yang dihasilkan. Ginzberg et al. (2008) melaporkan viskositas eksopolisakarida P. cruentum pada konsentrasi 0,5% mencapai 1.000 cP. Bahan presipitasi yang berbeda diduga berpengaruh terhadap viskositas eksopolisakarida.

## Jenis monosakarida
Monosakarida yang terdeteksi pada eksopolisakarida hasil presipitasi KOH maupun etanol adalah fruktosa, pada waktu retensi menit ke 9,0–10,0, dengan jumlah sebanyak 18,3 g/L (presipitasi  KOH) dan 18,9 g/L (presipitasi etanol 96%). Waktu retensi menit ke 3,5–5,0 merupakan pelarut yang digunakan yaitu air (kontrol) (Gambar 5).  Menurut Markou et al. (2013) fruktosa merupakan isomer dari glukosa yang  dapat  difermentasi  menjadi  bioetanol.
Bai et al. (2008) melaporkan bahwa pada  jalur  metabolisme  fermentasi  oleh S. cerevisiae, fruktosa termasuk jenis gula yang bisa difermentasi oleh S. cerevisiae menjadi bioetanol (Gambar 5). Hasil ini berbeda dengan penelitian
Patel et al. (2013) yang menyatakan bahwa eksopolisakarida P. cruentum mengandung galaktosa 40%, xilosa 30%, glukosa 20%, dan asam glukoronik sebesar 10%. Eksopolisakarida
P. cruentum terdiri dari polisakarida tunggal dengan diversitas yang sangat besar, maka eksopolisakarida P. cruentum memiliki potensi kandungan monosakarida hasil degradasi  dari  polisakarida  yang  beragam. Hasanah (2016) melaporkan bahwa kandungan gula eksopolisakarida P. cruentum yang terdeteksi adalah maltoheptosa, maltoheptosa merupakan tujuh disakarida maltosa yang tersusun dari komponen glukosa.

## Kadar gula total hidrolisat eksopolisakarida
Kadar gula total dari esopolisakarida dengan presipitasi etanol 96% dan KOH 5% menggunakan bahan penghidrolisis HCl
Tabel 2  Bilangan gelombang dan gugus fungsi eksopolisakarida P.cruentum dipresipitasi dengan bahan presipitasi berbeda ( Table 2 The wave numbers and funtional groups of P. cruentum exopolysaccharide after precipitated with different precipitation agents )
Wave numbers (cm -1 ) Functional groups Wave numbers(cm -1 ) Compound EPS-KOH 5% EPS-ethanol 96% 3660-2990 O-H 3647.48 3405.42 Hydroxyl 1740-1610 C=O 1426.28 1686.67 Ketones 1330-1190 C-H 1115.90 1138.65 Polysccharides
2 N yaitu 24,81±1,07% dan 22,56±1,77%, sedangkan menggunakan akuades sebagai penghidrolisis yaitu 12,80±0,16 dan 9,43±1,61.
Kadar gula tertinggi dari eksopolisakarida dengan presipitasi etanol 96% diperoleh dari hidrolisis HCl 2 N. Menurut Iryani (2013) asam klorida efektif memecah molekul pati dan mampu menghasilkan sakarida berantai pendek. Penambahan HCl menyebabkan nilai konstanta reaksi hidrolisis terhadap konversi pati lebih cepat yaitu 0,0086/menit dengan
Gambar 5 Monosakarida eksopolisakarida hasil presipitasi dengan KOH 5% (a) presipitasi dengan etanol 96% (b), dan standar (c)
(Figure 5 Monosaccharide of exopolysaccharide precipitated with KOH 5% (a) 96% ethanol (b), and standard (c))
konversi sebesar 0,2884. Bailar et al. (1965) menyatakan bahwa larutan HCl memiliki reaktivitas lebih tinggi, sehingga menyebabkan lebih banyak polisakarida terdegradasi, hal ini umumnya ditandai dengan warna yang lebih pekat.

## KESIMPULAN
Eksopolisakarida hasil presipitasi etanol dan KOH memiliki perbedaan karakteristik pada hasil analisis kadar air, abu, struktur
Waktu retensi (menit) mV mV

## mV
Karakteristik Eksopolisakarida Mikroalga, Mubarok et al.
partikel, viskositas, dan gugus fungsi, namun jenis monosakarida yang terdeteksi sama, yaitu fruktosa, yang bisa dimanfaatkan oleh kapang untuk proses fermentasi menjadi etanol. Hidrolisis terpilih adalah menggunakan HCl 2 N, 100 o C, selama 3 jam  dengan kadar gula total yang dihasilkan sebesar 24,31%.
Presipitasi dengan KOH menghasilkan rendemen eksopolisakarida kering 4 kali lebih tinggi daripada presipitasi dengan etanol, sehingga KOH bisa menjadi alternatif bahan presipitan pada pemanenan eksopoliskarida
P. cruentum.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC] Association of Official Analytical Chemist. 2007.Official of Analysis of the Association of Official Analytical of Chemist. Arlington (USA). The Association of Official Analytical of Chemist, Inc. Arad SM, Adda M, Cohen E. 1985. The potential of production of sulfated polysaccharides from Porphyridium.
Plant and Soil. 89: 117-127. Arad S, Levy-Ontman O. 2010. Red microalgal cell-wall polysaccharides: biotechnological aspect. Current Opinion in Biotechnology. 21: 358-364. [ASTM] American Society for Testing Material. 2013. ASTM E1252 : Standard Peactice for General Techniques for Obtaining Infrared Spectra for Qualitative Analysis. Pennsylvania (US): American Society for Testing Material. Bai FW, Anderson WA, Moo-Young M. 2008. Ethanol fermentation technologies from sugar and starch feedstocks. Biotechnology
Advances. 26: 89–105.
Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK, Rebers
PA, Smith F. 1956. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Analitic Chemical. 28: 350-
356.
Ega L, Lopulalan CGC, Meiyasa F. 2016.
Kajian mutu karaginan rumput laut
Euchema cottonii berdasarkan sifat fisiko kimia pada tingkat konsentrasi kalium hidroksida yang berbeda. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan. 5 (2) : 38-44. Geresh S, Mamontov A, Weinstein J. 2002. Sulfation of extracellular polysaccharides of red microalgae: preparation, characterization and properties. Journal Biochemichal Biophyscal Methods 50: 179- 187 Hasanah, Setyaningsih I, Uju. 2016. Teknik pemanenan dan pemisahan polisakarida Porphyridium cruentum dengan membran ultrafiltrasi. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 19 (2): 110- 120. Iryani AS. 2013. Pengaruh jenis katalis asam terhadap studi kinetika proses hidrolisis pati dlam ubi kayu. Ilmu Teknik. 8(15):
1078-1081. Jading A, Tethool E, Payung P, Gultom S. 2011. Karakteristik fisikokimia pati sagu hasil pengeringan secara fluidisasi menggunakan alat pengering cross flow fluidized bed bertenaga surya dan biomassa. Reaktor. 3(13): 155-164. Juin C, Cherouvrier JR, Thiery V, Gagez AL, Berard JB, Joguet N, Kaas R, Cadoret JP, Picot L. 2014. Microwave- Assisted extraction of phycobiliproteins from Porphyridium purpureum. Appied Biochemical Biotechnology. 175: 1-15. Katti K, Katti D. Effect of clay-water interactions on swelling in montmorillonite clay. 2001. Departement of Civil Engineering and Construction North Dakota State University, Fargo. [KESDM] Kementerian Energi dan Sumber Daya Mineral. 2015. Renstra Kementerian ESDM tahun 2015-2019. Jakarta (ID): KESDM. Kusmiati, Agustini SNW. 2010. Manfaat eksopolisakarida dari mikroalga Porphyridium cruentum sebagai obat luka terbuka. Prosiding Seminar Nasional Rumput Laut dan Minisimposium Mikroalgae II. Jakarta. 22-21 Juni 2010: hal. 261-271-ISBN 979-8105-87-7. Madejova J. 2003. FTIR techniques in clays mineral studies. Slovac Academy of Sciences. 31. 1 – 10. Markou G, Angelidaki I, Nerantzis E, Georgakakis D. 2013. Bioethanol production by carbohydrate-Enriched biomass of Arthrospira (spirulina)
platensis. Energies. 6: 3937-3950. Mishra A, Jha B. 2009. Isolation and characterization of extracellular polymeric substances from microalgae Dunaliella salina under salt stress. Bioresource Technology. 100 : 3382-3386. Patel AK, Laroche C, Marcati A, Ursu AV, Jubeau s, Marchal L, Petit E, Djelveh G, Michaud P. 2013. Separation and fractionation of exopolysaccharides from Porphyridium cruentum. Bioresources Technology. 145: 345-350. Prasetyo H, Setyaningsih I, Agungpriyono DR. 2016. Pertumbuhan dan produksi eksopolisakarida Porphyridium cruentum pada berbagai kondisi fotoperiode. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 18 (2): 220-230. Romenda AP, Pramesti R, Susanto AB. 2013. Pengaruh perbedaan jenis dan konsentrasi larutan alkali terhadap kekuatan gel dan viskositas karaginan Kappaphycus alverezii , Doty. Journal of Marine Research. 2(1): 127-133. Selco JI, Roberts JL, Jr Wacks DB. 2003.
The analysis of seawater: a laboratory
- centered learning project in general chemistry. Journal of Chemical Education
80 (1): 54-57.
Setthamongkol P, Tunkijjanukij S, Satapornanit K, Salaenol J. 2015. Growth and nutrient analysis in marine macroalgae. Kasetsart
Journal. 49:211-218. Setyaningsih I, Salamah E, Rahman DA. 2013. Komposisi kimia dan aktivitas antihiperglikemik biomassa dan polisakarida ekstraseluler dari mikroalga Porphyridium cruentum. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 16 (1): 79-85. Singh S, Arad SA, Richmond A. 2000. Extracellular polysaccharide production in outdoor mass cultures of Porphyridium sp. in flat plate glass reactors. Journal ofApplied Phycology. 12: 269-275. Sood G, Sharma S, Kapoor S, Khanna PK. 2013. Optimization of extraction and characterization of polysaccharides from medicinal mushroom Ganoderma lucidum using response surface methodology. Journal Medical Plants. 7 (31): 2323-2329. Spolaore P, Joannis-Cassan C, Duran E, Isambert A. 2006. Commercial applications of microalgae. Journal  of Bioscience Bioengineering. 101:87–96. Uy FS, Easteal AJ, Fard MM. 2005. Seaweed processing using industrial singlemode cavity microwave heating: a preliminary investigation. Carbohydrate Research.
340: 1357-1364.