## Journal of Agromedicine and Medical Sciences
. 2022. 8(1): 39-45
JOURNAL OF AGROMEDICINE AND MEDICAL SCIENCES (AMS) ISSN: 2460-9048 (Print), ISSN: 2714-5654 (Electronic)
Available online at http://jurnal.unej.ac.id/index.php/JAMS
Uji In silico Potensi Proteolitik Enzim Papain dan Enzim Zingibain Terhadap Protein Pembentuk Katarak Kongenital dan Senilis
In silico Test Proteolytic Potential of Papain and Zingibain Enzymes

## Against Protein Forming Congenital and Senilis Cataracts
Gangsar Lintas Damai 1 , Nugraha Wahyu Cahyana 2*) , Ayu Munawaroh Aziz 3
1 Undergraduate Program of Medical Faculty, University of Jember
2 Ophthalmology Department, Medical Faculty, University of Jember
3 Histology Department, Medical Faculty, University of Jember

## Article Info
Article History: Received: February 24, 2021
Accepted: February 20, 2022 Published: February 28, 2022
*)Corresponding author:
E-mail: nugraha.nwc@gmail.com

## How to cite this article:
Damai  G.L.,  Cahyana,  N.W.,  Aziz,  A.M. (2022). In silico Test Proteolytic Potential of Papain and Zingibain Enzymes. Journal of  Agromedicine  and  Medical  Sciences, 8(1): 39-45.
https://doi.org/10.19184/ams.v8i1.2332 4

## Abstrak
Fakoemulsifikasi  adalah  metode  baku  emas    terapi  katarak  dengan  angka  komplikasi terendah  dan  angka  visual  outcome  terbaik.  Namun,  fakoemulsifikasi  membutuhkan biaya  yang  mahal  sehingga  sulit  digunakan  secara  luas.  Patogenesis  katarak  terkait dengan pembentukan protein Crystalline P23T γD pada katarak kongenital dan protein β - amyloid (Aβ) pada katarak senilis. Enzim papain dan enzim zingibain  menjadi alternatif terapi  katarak  dengan  efek  proteolitik  yang  berpotensi  melisiskan  protein  tersebut. Injeksi  proteolitik  dengan  30-gauge  needle  menyebabkan  luka  insisi  yang  kecil  dan bersifat aman. Enzim papain berasal dari tanaman Carica Papaya dan enzim zingibain berasal  dari  tanaman  Zingiber  Officinale  yang  banyak  tumbuh  di  Indonesia  sehigga menjadi  sumber  proteolitik  yang  murah.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  membandingkan probabilitas binding energy berdasarkan Model Interaksi Pengikatan (MIP) antara enzim papain dan zingibain terhadap protein Crystalline P23T γD dan protein β - amyloid (Aβ) dengan molecular docking. Penelitian ini menggunakan situs https://cluspro.bu.edu./login.php . MIP dengan binding energy terendah memiliki ikatan paling  stabil.  Hasil  docking  menunjukkan  probabilitas  interaksi  antara  enzim  papain dengan protein P23T crystalline γD memiliki nilai binding energy terendah sebesar -730.4 kJ/mol pada MIP 1. Probabilitas Interaksi antara enzim papain dengan protein β -amyloid memiliki nilai binding energy terendah sebesar  -697.2 kJ/mol pada MIP 1. Probabilitas interaksi antara enzim zingibain dengan protein P23T crystalline γD memiliki nilai binding energy terendah sebesar -890.5 kJ/mol pada MIP 2. Probabilitas Interaksi antara enzim zingibain  dengan  protein  β -amyloid  memiliki  nilai  binding  energy  terendah  sebesar  - 873.5  kJ/mol  pada  MIP  0.  Diperoleh  kesimpulan  bahwa  enzim  zingibain  memiliki probabilitas membentuk ikatan paling stabil terhadap protein P23T crystalline γD dan protein β -amyloid.
Kata Kunci : In silico, papain, zingibain, katarak.

## Abstract
Phacoemulsification is cataract therapy’s gold standard with lowest complication rate and best visual outcome. However, phacoemulsification is expensive and difficult to use widely.  Pathogenesis  of  cataract  related  to  Crystalline  P23T  γD  protein  in  congeni tal cataracts  and  β -amyloid  protein  in  senile  cataract.  Papain  enzymes  and  zingibain enzymes are cataract’s alternatives therapy with proteolytic effects that potentially lyse these proteins. Proteolytic injection with 30-gauge needle results in small, safe incision. Papain enzyme from Carica Papaya plant and zingibain enzyme from Zingiber Officinale

## Pendahuluan
Katarak  kongenital  adalah  kekeruhan  lensa  mata  yang ditemukan sejak lahir baik bersifat unilateral maupun bilateral (Tătaru et  al .,  2020).  Angka  kejadian  bergantung  pada perkembangan  sosial  ekonomi  suatu  daerah,  pada  negara industri terdapat 1 hingga 6 kasus per 10.000 kelahiran hidup, dan  5  hingga  15  kasus  per  10.000  di  wilayah  termiskin  dunia. Katarak senilis adalah kekeruhan pada lensa yang terdapat pada usia lanjut yaitu diatas 40 tahun. Katarak senilis adalah katarak yang paling sering (Nizami & Gulani, 2021).
Penyakit  katarak    kongenital  terkait  dengan  pembentukan Mutan P23T protein crystalline gamma lensa. protein mutan ini memiliki berat molekul yang semakin meningkat dan cenderung beragregasi    (Pande et  al .,  2005).  Sedangkan  pembentukan katarak  senilis  terkait  dengan  proses  agregasi  protein  melalui jalur  pembentukan  struktur  amyloid  (Fukumoto et  al .,  2004). Radiasi UV dapat menginduksi struktur β - amyloid (Aβ) dan dapat membuat endapan yang mengandung amyloid fibril dan agregat amorf  (Alperstein et  al .,  2019)  Pembentukan  amyloid  fibril cenderung  mengganggu  homogenitas  lensa.  Berkurangnya α - Crystalline seiring  bertambahnya  usia  juga  menyebabkan βγ - Crystalline yang rusak (mengalami misfolding ) menjadi agregat yang menyebabkan kekeruhan mata (Boatz et al ., 2017)
Saat  ini,  operasi  pengangkatan  lensa  mata  keruh  dan penggantian dengan lensa mata intraokular sintetis merupakan satu-satunya  pengobatan  katarak  yang  tersedia  (Sreelakshmi dan  Abraham,  2016).  Namun,  operasi  katarak  yang  ada membutuhkan luka insisi yang relatif besar dan tidak bebas dari kejadian  komplikasi.  Fakoemulsifikasi  dianggap  sebagai  baku emas  untuk  tata  laksana  katarak    (Haripriya et  al .,  2017). Fakoemulsifikasi  hanya  memerlukan  insisi  hingga  3  mm  dan bekerja  menggunakan  gelombang  ultrasonik  (Jin et  al .,  2017; Sengupta et  al .,  2016)Hal  ini  menyebabkan  fakoemulsifikasi memiliki  angka kejadian  komplikasi terendah  dan  angka visual outcome paling baik dibandingkan metode yang lain (Sen et al ., 2019). Kelemahan dari fakoemulsifikasi adalah biaya yang mahal sehingga tidak dapat digunakan di layanan kesehatan secara luas (Filho et al ., 2020). Oleh karena itu diperlukan upaya lain untuk mengobati  penyakit  katarak.  Penggunaan  enzim  proteolitik seperti enzim papain dari papaya dan enzim zingibain dari jahe
dapat  menjadi  alternatif  pengobatan  katarak  yang  aman  dan murah karena berasal dari sumber daya alam yang telah banyak tersedia.  Penggunaan  enzim  proteolitik  berpotensi  melisiskan protein  penyusun  katarak.  Pemilihan  30-gauge  needle  untuk menginjeksikan  proteolitik  dan  pemasangan  Intraocular  lens (IOL)  hanya  membutuhkan  insisi  kecil  sehingga  dapat menurunkan  angka  kejadian  komplikasi  dan  meningkatkan angka visual outcome (Kim & Kim, 2021).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui probabilitas binding energy dan model interaksi pengikatan antara enzim papain dan zingibain  terhadap  protein Crystalline P23T  γD  dan  protein β - amyloid (Aβ) sebagai protein pembentuk katarak kongenital dan senilis melalui uji in silico molecular docking

## Metode
Penelitian  ini  menggunakan  metode Blind  Docking. Proses docking ligan  dilakukan  ke  seluruh  permukaan  protein  tanpa mengetahui  lebih  dahulu  tentang  situs  pengikatan  dalam protein.  Kode Protein  Data  Bank (PDB)  struktur  enzim  papain (9PAP),  enzim  zingibain  (1CQD),  protein Crystalline P23T  γD (2KFB),  dan  protein β -amyloid (2BP4)  diperoleh  dengan mengakses situs https://www.rcsb.org/ . Kode yang didapatkan kemudian  digunakan  untuk  proses molecular  docking di  situs http://cluspro.bu.edu/ . Kode PDB enzim papain dan zingibain kemudian  dimasukkan  pada  kolom receptor sedangkan  kode protein Crystalline P23T  γD  (2KFB)  dan  protein β -amyloid digunakan untuk mengisi kolom ligand . Setelah proses docking dilakukan,  didapatkan  berbagai  probabilitas  Model  Interaksi Pengikatan  (MAP)  dan binding  energy tiap  interaksi  antara reseptor dan ligan.
Analisis data hasil docking dari aplikasi Cluspro berdasarkan nilai binding energy . Probabilitas model interaksi pengikatan dengan nilai binding  energy terendah  menunjukkan  interaksi  yang bersifat  stabil  sehinga  berpotensi  untuk  digunakan  sebagai proteolitik.  Oleh  karena  itu,  probabilitas  model  interaksi  yang memiliki binding  energy paling  rendah  adalah  yang  akan digunakan.
plant which grows plentifully in Indonesia that becomes cheap source of proteolytic. This study’s purpose is to compare probability of binding energy based on Binding Interaction Model (BIM) between papain and zingibain enzymes against Crystalline P23T γD protein and β -amyloid protein with molecular docking. This research uses https://cluspro.bu.edu./login.php. BIM with lowest binding energy has most stable bond. Docking  results  show  interaction  probability  between  papain  enzyme  and  Crystalline P23T  γD  protein  has  lowest  binding  energy  of -730.4  kJ/mol  at  BIM  1.  Probability  of interaction between papain enzyme and β -amyloid protein has lowest binding energy of -697.2 kJ/mol at BIM 1. Probability of interaction between the enzyme zingibain and the crystalline  P23T  protein  γD  has  lowest  binding  energy  of -890.5  kJ/mol  at  BIM  2. Probability of interaction between the enzyme zingibain and the β -amyloid protein has lowest  binding  energy  of  -873.5  kJ/mol  at  BIM  0.  It  was  concluded  that  the  zingibain enzyme has the most stable probability of forming a stable bond to Crystalline P23T γD protein and β -amyloid protein.
Keywords : In silico, papain, zingibain, cataract

## Hasil
Nilai binding energy terendah dan model interaksi pengikatan setiap enzim terhadap target docking ditampilkan pada tabel 1. Hasil docking menunjukkan probabilitas interaksi antara enzim papain dengan protein P23T crystalline γD memiliki nilai binding energy terendah sebesar -730.4 kJ/mol pada MIP 1 (Gambar 1). probabilitas  interaksi  antara  enzim  papain  dengan  protein Β - amyloid memiliki nilai binding energy terendah sebesar -697.2 kJ/mol  pada  MIP  1  (Gambar  2).  Probabilitas  interaksi  antara enzim  zingibain  dengan  protein  P23T crystalline γD  memiliki nilai binding energy terendah sebesar -890.5 kJ/mol pada MIP 2 (Gambar  3).  Probabilitas  interaksi  antara  enzim  zingibain dengan  protein Β -amyloid memiliki  nilai binding  energy terendah sebesar -873.5 kJ/mol pada MIP 0 (Gambar 4.)

## Pembahasan
Penelitian  pada  tingkat  genetik  menunjukkan  setidaknya  15 mutasi  berbeda  pada  gen crystalline terlibat  dalam pembentukan  katarak  (Moore,  2004).  Namun  masih  sedikit penelitian penapisan sistematis dari semua gen crystalline pada populasi pasien yang besar. Sebuah penelitian melaporkan telah menggunakan analisis keterkaitan dan penapisan gen kandidat untuk  menyelidiki  patologi  molekuler  dari  katarak  yang diturunkan pada 38 keluarga di Australia Selatan. Hasil penelitian menujukkan hanya dua mutasi, yaitu mutasi missense (P23T) di CRYGD dan mutasi situs CRYBA1 / A3 yang teridentifikasi dalam 38  silsilah  keluarga  (Moore,  2004).  Mutan  P23T  protein crystalline gamma  lensa  berkaitan  dengan  katarak  kongenital. Protein mutan ini memiliki memiliki berat molekul yang semakin meningkat dan cenderung beragregasi (Pande et al ., 2005).
Sedangkan pembentukan katarak senilis terkait dengan proses agregasi  protein  melalui  jalur  pembentukan  struktur  amyloid (Fukumoto et al ., 2004). Radiasi UV dapat menginduksi struktur β - amyloid (Aβ) dan dapat membuat endapan yang mengandung amyloid  fibril  dan  agregat  amorf  (Alperstein et  al .,  2019). Pembentukan amyloid fibril cenderung mengganggu homogenitas  lensa.  Berkurangnya α -Crystalline seiring bertambahnya usia juga menyebabkan βγ -Crystalline yang rusak (mengalami misfolding )  menjadi  agregat  yang  menyebabkan kekeruhan mata (Boatz et al ., 2017).
Enzim  protease  yang  berasal  dari  tanaman  papaya  (enzim papain) maupun jahe (enzim zingibain) memiliki efek proteolitik yang memiliki probabilitas melisiskan protein Crystalline P23T γD dan  protein β -amyloid (Aβ)  sehingga  dapat  menjadi  alternatif penanganan dari katarak. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa penggunaan protease dari tanaman seperti enzim papain dapat menurunkan terjadinya opasitas vitreous mata (Takeuchi et al ., 2020). Namun, belum ada penelitian tentang probabilitas enzim papain dan zingibain terkait efek proteolitik pada protein Crystalline P23T γD dan protein β -amyloid.
Pepaya ( Carica papaya ) merupakan salah satu buah yang telah banyak  tumbuh  dan  dikenal  luas  di  Indonesia.  Papaya  banyak dimanfaatkan sebagai pelunak daging  (Anggraini, 2020). Enzim papain adalah enzim protease yang diisolasi dari lateks pepaya. Karena  aktivitas  proteolitik  papain  yang  kuat,  papain  telah dimanfaatkan tidak hanya dalam industri makanan, tetapi juga dalam  bidang  lain,  seperti  biomedis,  industri  gigi  atau  tekstil
(Shouket et al ., 2020). Karena jumlahnya yang melimpah Carica papaya dapat  dijadikan  sebagai  sumber  enzim  papain  yang melimpah dan murah.
Jahe ( Zingiber officinale ) berasal dari asia Pasifik yang tersebar dari India sampai Cina. Jahe telah banyak tumbuh dan tersebar luas di Indonesia  (Aidin et al ., 2016). Sumatra Utara, Bengkulu, Jawa Barat, Jawa Tengah dan Jawa Timur merupakan pusat jahe di Indonesia (Pairul et al ., 2017). Studi sebelumnya menunjukkan bahwa  protease  jahe  atau  enzim  zingibain  adalah  salah  satu protease  utama  yang  digunakan  untuk  melunakkan  daging (Gagaoua et  al .,  2021).  Karena  jumlahnya  yang  melimpah zingiber  officinale dapat  dijadikan  sebagai  sumber  enzim zingibain yang melimpah dan murah.
Diperlukan  penelitian  untuk  menilai  potensi  suatu  bahan  aktif dalam  menimbulkan  efek  obat  yang  diinginkan.  Salah  satu metode penelitian yang murah dan cepat untuk  membuktikan hal  tersebut  adalah  dengan  metode  in  silico. In  silico dapat memprediksi  efek  biologis  dari  suatu  bahan  aktif  melalui teknologi komputerisasi dengan tujuan untuk menemukan obat baru Molecular docking adalah salah satu metode in silico yang dapat  menggunakan  komputasi  yang  memprediksi  pengikatan molekul ligan ke reseptor tertentu  (Naqvi, et al ., 2018).
Enzim adalah jenis dari protein yang memiliki fungsi katalis reaksi kimia.  Enzim  memiliki  spesifisitas  molekul  yang  menjadi substratnya  untuk  dikatalis.  Pengujian  enzim  selektif  dapat dilakukan dengan motif detection dari enzyme (Rawlings et al ., 2002).  Enzim  papain  memiliki  spesifisitas  yang  luas,  lebih  luas dibanding enzim proetase hewani  (Tapal & Tiku, 2019). Dalam penelitian  ini,  dilakukan  peninjauan  probabilitas  kestabilan ikatan  dan  model  interaksi  antara  enzim  papain  dan  zingibain terhadap  protein  P23T crystalline γD  dan  protein β -amyloid sebagai protein pembentuk katarak.
Sifat  proteolitik  enzim  papain  dan  enzim  zingibain  terhadap protein  P23T crystalline γD  memilki probabilitas  mengurangi jumlah  protein  dengan  tingkat  kelarutan  yang  rendah,  berat molekul yang tinggi, dan rentan terjadi agregasi. Oleh karena itu enzim papain dan zingibain berpotensi untuk digunakan sebagai terapi  penyakit  katarak  kongenital.  Selain  itu,  sifat  proteolitik enzim  papain  dan  enzim  zingibain  terhadap  protein β -amyloid berpotensi  menurunkan  tingkat  stres  oksidatif  dan  mencegah terjadinya kerusakan protein crystalline penyusun struktur lensa mata.  Oleh  karena  itu,  enzim  papain  dan  zingibain  berpotensi menjadi  terapi  penyakit  katarak  senilis.  Potensi  enzim  papain dan  zingibain  dapat  diketahui  melalui  uji in  silico dengan molecular docking .
Analisis docking dilakukan  untuk  mengetahui  probabilitas interaksi paling stabil antara protein ligan dan protein reseptor yang  diproses  melalui docking .  Probabilitas  interaksi  dengan binding  energy rendah  memiliki  kemungkinan  untuk  mudah berikatan.  Hasil  analisis docking disajikan  dalam  berbagai probabilitas  model  interaksi.  probabilitas  Model  interaksi dengan binding energy terendah yang akan digunakan.
Binding  energy adalah  Energi  yang  diperlukan  untuk  interaksi antara  reseptor  dengan  ligan  (Yunta,  2016).  Energi  negatif menunjukkan  selama  proses  pembentukan  ikatan  tidak diperlukan  energi  dari  lingkungan  melainkan  ikatanlah  yang melepaskan energi ke lingkungan. Oleh karena itu, semakin kecil atau  negatif binding  energy maka  afinitas  ligan  dan  protein
semakin  baik  atau  ikatan  yang  dibentuk  semakin  stabil/kuat (Saâd, 2016).
Tabel 4.1. Perbandingan nilai binding energy setiap enzim terhadap target docking Target Docking Enzim Papain Enzim Zingibain Model Interaksi Pengikatan Nilai Binding energy (kJ/mol) Model Interaksi Pengikatan Nilai Binding energy (kJ/mol) P23T crystalline γD 1 -730.4 2 -890.5 Β -amyloid 1 -697.2 0 -873.5
Gambar  1. MIP  1  yang  menjelaskan  pengikatan  enzim  papain terhadap protein P23T crystalline γD
Gambar 2. MIP 1 yang menjelaskan pengikatan enzim papain terhadap protein Β -amyloid
Gambar 3. MIP 2 yang menjelaskan pengikatan enzim zingibain terhadap protein P23T crystalline
Gambar 4. MIP 2 yang menjelaskan pengikatan enzim zingibain terhadap protein P23T crystalline γD

## Interaksi Enzim Papain Terhadap Protein P23T crystalline γD
Hasil docking melalui  aplikasi  Cluspro  antara  enzim  papain dengan Protein P23T crystalline γD menunjukkan 30 probabilitas model  interaksi  pengikatan  dengan  nilai binding  energy yang beragam. Probabilitas model interaksi pengikatan 1 (gambar 4.1) memiliki binding energy atau energi paling rendah yaitu sebesar -730.4 kJ/mol dibandingkan dengan model interaksi lainya. Hal ini  menunjukkan  probabilitas  model  interaksi  1  memiliki
kekuatan  ikatan  paling  stabil  dan  paling  potensial  untuk berinteraksi di kondisi nyata.
Interaksi Enzim Papain Terhadap Protein β -amyloid
Hasil docking melalui  aplikasi  Cluspro  antara  enzim  papain dengan Protein Β -amyloid menunjukkan 18 probabilitas model interaksi pengikatan dengan nilai binding energy yang beragam. Probabilitas model interaksi pengikatan 1 (gambar 4.2) memiliki binding  energy atau  energi  paling  rendah  yaitu  sebesar  -697.2
kJ/mol  dibandingkan  dengan  model  interaksi  lainya.  Hal  ini menunjukkan probabilitas model interaksi 1 memiliki kekuatan ikatan  paling  stabil  dan  paling  potensial  untuk  berinteraksi  di kondisi nyata.

## Interaksi Enzim zingibain Terhadap Protein P23T crystalline γD
Hasil docking melalui  aplikasi  Cluspro  antara  enzim  zingibain dengan Protein P23T crystalline γD menunjukkan 30 probabilitas model  interaksi  pengikatan  dengan  nilai binding  energy yang beragam. Probabilitas model interaksi pengikatan 2 (gambar 4.3) memiliki binding energy atau energi paling rendah yaitu sebesar -890.5 kJ/mol dibandingkan dengan probabilitas model interaksi lainya.  Hal  ini  menunjukkan  probabilitas  model  interaksi pengikatan 2 memiliki kekuatan ikatan paling stabil dan paling potensial untuk berinteraksi di kondisi nyata.
Interaksi Enzim zingibain Terhadap Protein β -amyloid
Hasil docking melalui  aplikasi  Cluspro  antara  enzim  zingibain dengan Protein Β -amyloid menunjukkan 11  probabilitas model interaksi pengikatan dengan nilai binding energy yang beragam. Probabilitas model interaksi pengikatan 0 (gambar 4.4) memiliki binding  energy atau  energi  paling  rendah  yaitu  sebesar  -873.5 kJ/mol  dan  menunjukkan  ikatan  paling  stabil  dibandingkan dengan probabilitas model interaksi lainya. Hal ini menunjukkan probabilitas  model  interaksi  pengikatan  0  memiliki  kekuatan ikatan  paling  stabil  dan  paling  potensial  untuk  berinteraksi  di kondisi nyata.

## Perbandingan  Interaksi  Enzim  Papain  dan  Enzim  zingibain Terhadap Target Docking
Berdasarkan hasil yang telah disebutkan dalam tabel 4.5, dapat diketahui  bahwa  enzim  zingibain  memiliki  probabilitas  nilai binding energy yang lebih rendah atau ikatan yang lebih stabil ketika  diinteraksikan  dengan  protein  P23T crystalline γD  dan protein β -amyloid dibandingkan  dengan  enzim  papain.  Oleh karena itu, enzim zingibain menjadi pilihan yang lebih potensial untuk  dilanjutkan  pada  uji  laboratorium  untuk  mengukur reaksinya  terhadap  protein  P23T crystalline γD  dan  protein  β - amyloid.

## Perbandingan Hasil Nilai Binding energy Enzim Papain dengan Penelitian Sebelumnya
Penelitian  sebelumnya  yang  menguji  enzim  papain  dengan target docking lain mempunyai nilai binding energy yang lebih stabil. Penelitian membuktikan bahwa uji in silico enzim papain terhadap α -amilase menunjukkan nilai binding energy sebesar - 799,4  kJ/mol ,  sedangkan  interaksi  antara  Papain  terhadap  α - glukosidase  menunjukkan  nilai binding  energy sebesar  -934,7 kJ/mol  (Laily  &  Khoiri,  2016).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk menguji  potensi  enzim  papain  sebagai  antidiabetes.  Hasil penelitian menunjukkan  penghambatan  α -glukosidase  akan menunda  pencernaan  dan  penyerapan  karbohidrat  sehingga menekan hiperglikemia setelah makan (postprandial). Inhibitor α - glukosidase juga dapat menghambat aktivitas enzim α -amilase dalam menghidrolisis polisakarida dalam lumen  usus. Aktivitas enzim  α -glukosidase  seperti  maltase  dan  sukrase  dalam menghidrolisis  oligosakarida  menjadi  glukosa,  fruktosa  dan monosakarida lain pada dinding usus halus dapat dihambat oleh senyawa obat inhibitor α -glukosidase. Senyawa obat ini hanya berpengaruh terhadap penurunan kadar gula darah pada waktu makan  dan  tidak  memengaruhi  kadar  gula  darah  setelahnya.
Perbedaan  nilai binding  energy ini  dapat  disebabkan  oleh perbedaan struktur molekul antara protein P23T crystalline γD dan protein β -amyloid dengan protein α -glukosidase dan protein α -amilase.  Perbedaan  struktur  molekul  akan  menentukan jumlah ikatan hidrogen, interaksi elektrostatis, gaya hidrofobik dan Van der Waals yang terbentuk sehingga berpengaruh pada nilai binding energy (Zhang et al ., 2017).

## Enzim-enzim Lain yang Berpotensi sebagai Proteolitik terhadap
Protein P23T crystalline γD dan Protein β -amyloid
Sebenarnya  terdapat  berbagai  macam  proteolitik  lain  yang bersumber dari tanaman dan berpotensi sebagai terapi katarak senilis  maupun  kongenital.  Bromelain  dan  ficin  adalah  enzim proteolitik yang bersumber dari tanaman dan mungkin memiliki potensi proteolitik yang lebih tinggi dibanding enzim papain dan zingibain.
Bromelain adalah kompleks enzim proteolitik yang berasal dari nanas  (Ananas  cosmosus)  dan  memiliki  sifat  terapeutik  yang prominen.  Bromelain  telah  digunakan  selama  bertahun-tahun dalam  pengobatan  tradisional  untuk  berbagai  masalah kesehatan. Potensi nilai terapeutik bromelain adalah karena sifat biokimia  dan  farmakologisnya,  dan  bahan  utama  dalam bromelain mentah adalah enzim proteolitik  (Rathnavelu et al ., 2016) .
Ficin  adalah  ekstrak  enzim  yang  tersusun  oleh  beberapa protease  yang  berasal  dari lateks  buah  ara  (Ficus  carica).  Ficin telah  lama  digunakan  untuk  melunakkan  daging  karena  sifat proteolitiknya  (Morellon-Sterling et al ., 2020).
Enzim  proteolitik  bromelain  dan  ficin  tersebut  dapat  menjadi refrensi  penelitian  selanjutnya  sehingga  dapat  dilakukan perbandingan kemampuan proteolitik dengan enzim papain dan zingibain sebagai terapi katarak kongenital dan senilis.

## Kesimpulan
Diperoleh kesimpulan bahwa Enzim zingibain yang berasal dari tanaman Zingiber  officinale memiliki  probabilitas  membentuk ikatan yang lebih stabil terhadap protein P23T crystalline γD dan protein β -amyloid dibandingkan  dengan  enzim  papain  yang berasal  dari  tanaman Carica  papaya .  Oleh  karena  itu,  enzim zingibain potensial untuk dikembangkan sebagai proteolitik yang berguna  sebagai  terapi  berbagai  gangguan  lensa  mata  seperti katarak senilis dan kongenital.
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut baik secara in vivo maupun in  vitro untuk  memastikan  kemampuan  proteolitik  enzim zingibain  terhadap  protein  P23T crystalline γD  dan  protein  β - amyloid.  Selain  itu,  perlu  dilakukan  penelitian  dengan menggunakan enzim proteolitik yang berasal dari tanaman lain untuk  mengetahui  perbandingan  potensi  proteolitik  tiap enzimnya.

## References
Aidin,  A.,  Sahiri,  N.,  &  Madauna,  I.  (2016). PENGARUH  JENIS RIMPANG  DAN  KOMPOSISI  MEDIA  TANAM  TERHADAP PERTUMBUHAN  BIBIT  JAHE  MERAH  (Zingiber  officinale Rosc.) The Effect of Rhizome Types and The Composition of Planting  Media  on  The  Growth  of  Red  Ginger  (Zingiber
Officinale Rosc.) . 4 (4), 394 – 402.
Alperstein, A. M., Ostrander, J. S., Zhang, T. O., & Zanni, M. T. (2019).  Amyloid  found  in  human  cataracts  with  two- dimensional  infrared  spectroscopy. Proceedings  of  the National  Academy  of  Sciences  of  the  United  States  of America , 116 (14), 6602 – 6607. https://doi.org/10.1073/PNAS.1821534116
Anggraini, D. (2020). Efektifitas Krim Papain Kasar Getah Buah Pepaya  (Carica  Papaya.L)  yang  Diolah  Dengan  Metode Freeze  Drying  Terhadap  Penyembuhan  Penebalan  Kulit (Callus). Pharmauho: Jurnal Farmasi, Sains, dan Kesehatan , 6 (1),
1. https://doi.org/10.33772/PHARMAUHO.V6I1.10407
Boatz, J. C., Whitley, M. J., Li, M., Gronenborn, A. M., & Van Der Wel, P. C. A. (2017). Cataract- associated P23T γD -crystallin retains a native-like fold in amorphous-looking aggregates formed at physiological pH. Nature Communications 2017 8:1 , 8 (1), 1 – 10. https://doi.org/10.1038/ncomms15137
Filho, R. S., Moreto, R., Nakaghi, R. O., Haddad, W., Coelho, R. P.,
&  Messias,  A.  (2020).  Costs  and  outcomes  of phacoemulsification for cataracts performed by residents. Arquivos  brasileiros  de  oftalmologia , 83 (3),  209 – 214. https://doi.org/10.5935/0004-2749.20200059
Fukumoto, H., Rosene, D. L., Moss, M. B., Raju, S., Hyman, B. T., &  Irizarry,  M.  C.  (2004).  Beta-secretase  activity  increases with  aging  in  human,  monkey,  and  mouse  brain. The American  journal  of  pathology , 164 (2),  719 – 725. https://doi.org/10.1016/S0002-9440(10)63159-8
Gagaoua, M., Dib, A. L., Lakhdara, N., Lamri, M., Botineştean, C., & Lorenzo, J. M. (2021). Artificial meat tenderization using plant cysteine proteases. Current Opinion in Food Science , 38 , 177 – 188. https://doi.org/10.1016/J.COFS.2020.12.002
Haripriya, A., Sonawane, H., & Thulasiraj, R. D. (2017). Changing techniques  in  cataract  surgery:  how  have  patients benefited? Community  Eye  Health , 30 (100),  80.  Diambil dari /pmc/articles/PMC5820631/
Jin, C., Chen, X., Law, A., Kang, Y., Wang, X., Xu, W., & Yao, K. (2017). Different‐sized incisions for phacoemulsification in age‐related cataract. The Cochrane Database of Systematic Reviews , 2017 (9). https://doi.org/10.1002/14651858.CD010510.PUB2
Kim,  S.,  &  Kim,  J.  T.  (2021).  The  simply  modified  intrascleral fixation  using  round  flange  (SMURF)  technique  for intrascleral  intraocular  lens  fixation. Scientific  Reports , 11 (1), 3904. https://doi.org/10.1038/S41598-021-81924-Y
Laily,  A.  N.,  &  Khoiri,  A.  N.  (2016).  IDENTIFIKASI  SENYAWA ANTIDIABETES  SECARA  in  Silico  PADA  Carica  pubescens Lenne & K. Koch. El- Hayah : Jurnal Biologi , 5 (4), 135 – 142. https://doi.org/10.18860/ELHA.V5I4.3469
Moore,  A.  T.  (2004).  Understanding  the  molecular  genetics  of congenital  cataract  may  have  wider  implications  for  age related  cataract. British  Journal  of  Ophthalmology , 88 (1),
2 – 3. https://doi.org/10.1136/BJO.88.1.2
Morellon-Sterling,  R.,  El-Siar,  H.,  Tavano,  O.  L.,  Berenguer- Murcia,  Á.,  &  Fernández-Lafuente,  R.  (2020).  Ficin:  A
protease  extract  with  relevance  in  biotechnology  and biocatalysis. International journal of biological macromolecules , 162 , 394 – 404. https://doi.org/10.1016/J.IJBIOMAC.2020.06.144
Naqvi,  A.  A.  T.,  Mohammad,  T.,  Hasan, G.  M.,  &  Hassan,  M.  I. (2018). Advancements in Docking and Molecular Dynamics Simulations  Towards  Ligand-receptor  Interactions  and Structure-function  Relationships. Current  topics  in medicinal chemistry , 18 (20), 1755 – 1768. https://doi.org/10.2174/1568026618666181025114157
Nizami, A. A., & Gulani, A. C. (2021). Cataract. StatPearls . Diambil dari https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK539699/
Pairul, P. P. B., Susianti, & Nasution, S. H. (2017). Jahe ( Zingiber Officinale ) Sebagai Anti Ulserogenik. Medula , 7 (5), 42 – 46.
Pande, A., Annunziata, O., Asherie, N., Ogun, O., Benedek, G. B.,
&  Pande,  J.  (2005).  Decrease  in  protein  solubility  and cataract formation caused by the Pro23 to Thr mutation in human  gamma  D-crystallin. Biochemistry , 44 (7),  2491 – 2500. https://doi.org/10.1021/BI0479611
Rathnavelu,  V.,  Alitheen,  N.  B.,  Sohila,  S.,  Kanagesan,  S.,  & Ramesh,  R.  (2016).  Potential  role  of  bromelain  in  clinical and  therapeutic  applications. Biomedical  Reports , 5 (3), 283. https://doi.org/10.3892/BR.2016.720
R awlings, N. D., O’Brien, E., & Barrett, A. J. (2002). MEROPS: the protease database. Nucleic acids research , 30 (1), 343 – 346. https://doi.org/10.1093/NAR/30.1.343
Saâd,  B.  (2016).  Why  Is  The  Nuclear  Binding  Energy  Negative? Aston’s  whole  number  rule,  mass -defect  and  binding energy. Journal  of  Multidisciplinary  Engineering  Science and  Technology , 3 (6),  2458 – 9403.  Diambil  dari www.jmest.org
Sen, S., Patil, M., Saxena, R., Kumar, A., Amar, S., Das, D., … Saini, P.  (2019).  Perceived  difficulties  and  complications  in learners  of  phacoemulsification:  A  principal  component analysis  model. Indian  journal  of  ophthalmology , 67 (2),
213 – 216. https://doi.org/10.4103/IJO.IJO_1133_18
Sengupta,  S.,  Venkatesh,  R.,  Krishnamurthy,  P.,  Nath,  M., Mashruwala, A., Ramulu, P. Y., … Lee, P. (2016). Intraocular Pressure  Reduction  after  Phacoemulsification  versus Manual  Small-Incision  Cataract  Surgery:  A  Randomized Controlled  Trial. Ophthalmology , 123 (8),  1695 – 1703. https://doi.org/10.1016/J.OPHTHA.2016.04.014
Shouket, H. A., Ameen, I., Tursunov, O., Kholikova, K., Pirimov, O., Kurbonov, N., … Mukimov, B. (2020). Study on industrial applications of papain: A succinct review. IOP Conference Series:  Earth  and  Environmental  Science , 614 (1),  012171. https://doi.org/10.1088/1755-1315/614/1/012171
Takeuchi, M., Shieh, P. C., & Horng, C. T. (2020). Treatment of Symptomatic  Vitreous  Opacities  with  Pharmacologic Vitreolysis Using a Mixure of Bromelain, Papain and Ficin Supplement. Applied  Sciences  2020,  Vol.  10,  Page  5901 , 10 (17), 5901. https://doi.org/10.3390/APP10175901
Tapal,  A.,  &  Tiku,  P.  K.  (2019).  Nutritional  and  Nutraceutical Improvement by Enzymatic Modification of Food Proteins. Enzymes  in  Food  Biotechnology:  Production,  Applications,
and Future Prospects , 471 – 481. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-813280-7.00027-X
Tătaru, C. I., Tătaru, C. P., Costache, A., Boruga, O., Zemba, M., Ciuluvică,  R.  C.,  &  Sima,  G.  (2020).  Congenital  cataract  – clinical  and  morphological  aspects. Romanian  Journal  of
Morphology and
Embryology , 61 (1), 105. https://doi.org/10.47162/RJME.61.1.11
Yunta, M. (2016). Docking and Ligand Binding Affinity: Uses and
Pitfalls. American Journal of Modeling and Optimization , 4 , 74 – 114. https://doi.org/10.12691/AJMO-4-3-2
Zhang, B. W., Li, X., Sun, W. L., Xing, Y., Xiu, Z. L., Zhuang, C. L., & Dong,  Y.  S.  (2017).  Dietary  Flavonoids  and  Acarbose Synergistically Inhibit α -Glucosidase and Lower
Postprandial  Blood  Glucose. Journal  of  agricultural  and food chemistry , 65 (38), 8319 – 8330. https://doi.org/10.1021/ACS.JAFC.7B02531