Jurnal Nukleus Peternakan (Juni 2015), Volume 2, No. 1:1 - 7                                               ISSN : 2355-9942

## PENGARUH PENGGUNAAN KULIT BUAH KOPI TERFERMENTASI

## Trichoderma reesei YANG DITAMBAH Zn-Cu ISOLEUSINAT TERHADAP PRODUKSI AMONIA DAN VOLATILE FATTY ACIDS SECARA IN VITRO
(THE EFFECT OF USING  COFFEE HUSK FERMENTED WITH Trichoderma reesei PLUS Zn- Cu ISOLEUSINAT TO WARD PRODUCTION OF AMMONIA AND VOLATILE FATTY ACIDS FOR IN VITRO)

## Lusia Wea, Erna Hartati, Ahmad Saleh
Fakultas Peternakan, Universitas Nusa Cendana, Jln Adisucipto Penfui, Kupang 85001 Email:Lussy.Lussya@gemail.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  di  Laboratorium  Kimia  Makanan  Fakultas  Peternakan  Universitas Nusa Cendana Kupang selama dua bulan. Penelitian ini terdiri dari tiga tahap yaitu: persiapan alat dan bahan, pelaksanaan dan analisis data. Tujuan penelitian adalah untuk  mengetahui pengaruh penggunaan  kulit buah kopi  terfermentasi Trichoderma  reesei dengan  penambahan  Zn-cu  isoleusinat  terhadap  produksi amonia (NH3) dan Volatile Fatty Acids (VFA) in vitro . Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan  tiga  perlakuan  P1  kulit  buah  kopi  tanpa  fermentasi,  P2  kulit  buah  kopi  terfermentasi Trichoderma reesei, P3  kulit  buah  kopi  terfermentasi Trichoderma  reesei dengan  penambahan  Zn-Cu  Isoleusina pada setiap perlakuan diulang lima kali. Hasil penelitian  menunjukkan penggunaan kulit buah kopi terfermentasi jamur Trichoderma  Reesei dengan  penambahan  Zn-Cu  Isoleusinat  berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap produksi  NH3  dan  VFA.  Pada  perlakuan  P3  mampu  meningkatkan  kualitas  kulit  buah  kopi  yang  ditandai dengan  peningkatan  produksi  NH3  sebesar  6,6  mM/l  dan  VFA  sebasar  98,08  mM/l.  Berdasarkan  hasil penelitian  disimpulkan  bahwa  penggunaan  kulit  buah  kopi  terfermentasi Trichodrma  reesei dengan penambahan Zn-Cu isoleusinat dapat meningkatkan produksi NH3 dan VFA dibandingkan dengan kulit buah kopi tanpa fermentasi dan kulit kopi terfermentasi Trichoderma reesei . ____________________________________________________________________ Kata kunci : kulit buah kopi, fermentasi, Trichoderma reesei. NH3, VFA

## ABSTRACT
The purpose of the study was to know the influence of fermented coffee husk Trichoderma reesei with addition of Zn-cu isoleusinat on the production of Ammonia (NH3) and Volatile Fatty Acids (VFA) in vitro. This  study  was  conducted  at  the  Laboratory  of  Food  Chemistry  Faculty  of  Animal  Husbandry  University Nusa Cendana Kupang for two months. This study used a completely randomized design (CRD) with three treatments and five replications. The results showed that the used of fermented coffee husk with Trichoderma reesei and  also  addition  of  Zn-Cu  Isoleusinat  improved  coffee  husk  quality  which  was  characterized  by increasing  of    production  of  NH3  and  VFA  significantly  (P  <0.05).  Based  on  the  results  of  the  study,  it  is concluded that  the use of  fermented coffee  husk  with Trichodrma reesei and addition of  Zn-Cu isoleusinat improves  NH3 and VFA. ______________________________________________________________ Key words : coffee  huks, fermentation, Trichoderma reesei , NH3, VFA

## PENDAHULUAN
Kulit  buah  kopi  adalah  limbah  hasil sampingan  pengolahan  buah  kopi  yang proporsinya cukup besar yaitu berkisar antara 40-45  %  dari  hasil  panen.  Di  Nusa  Tenggara
Timur  (NTT)  pada  Tahun  2011  lahan  yang ditanami  kopi  seluas  88.603  ha  dengan  total produksi  sebesar  25.079  ton.  Apabilah produksi  kulit  buah  kopi  40-45  %  dari  total
produksi  maka  jumlah  limbah  sebanyak 10.031-11.285  ton.  Akan  tetapi  limbah  kulit buah  kopi  yang  cukup  potensial  ini  belum banyak  dimanfaatkan  oleh  petani  sebagai sumber  bahan  pakan,  dan  baru  digunakan sebagai  bahan  dasar  pembuatan  pupuk kompos,  dilihat  dari  kualitasnya  nutrisi  kulit buah  kopi  mengandung  protein  kasar  sebesar 10,  4  %,  serat  kasar  33,17  %  dan  energi metabolis  14,34  MJ/kg  serta  kecernaan protein  sebesar  65  %,  (Azmi  dan  Gunawan, 2006).
Permasalahan  lain  yang  dihadapi  adalah kulit kopi dalam keadaan segar mengandung zat anti  nutrisi  berupa  kafein  dan  tannin  yang cukup  tinggi  yaitu  sebesar  2,8  %  dari  bahan kering  (Guntoro dkk., 2008)  sehingga  mudah rusak,  kurang  disukai  ternak  dan  dapat mengganggu  kecernaan  jika  diberikan  dalam jumlah  banyak.  Untuk  mengatasi  hal  tersebut perlu  terobosan  teknologi  sehingga  kulit  buah kopi  dapat  dimanfaatkan  sebagai  bahan  pakan secara optimal. Salah satu cara untuk mengatasi masalah  diatas  adalah  dengan  teknologi fermentasi  menggunakan  kapang Trichoderma reesei . Trichoderma  reesei merupakan  jamur berfilamen  yang  bersifat  mesofilik,  tidak patogen, mempunyai kemampuan menghidrolisis selulosa dan hemiselulosa menjadi  glukosa.  Kemampuan Trichoderma reesei memproduksi  enzim  dipengaruhi  oleh kondisi  pertumbuhannya  seperti:  pH,  suhu, pengadukan  dan  aerasi.  Aerasi  merupakan faktor  yang  sangat  penting  pada  semua  fase oleh karena oksigen diperlukan untuk metabolis energi  agar  produk  fermentasi  yang  dihasilkan maksimal (Juhasz et al., 2003).
Disamping  mengandung  zat  anti  nutrisi pakan  ruminansia  di  daerah  tropis  umumnya mengandungan  Zinc  (Zn)  dan  Cuprum  (Cu) rendah. Beberapa hasil penelitian memperlihatkan  kandungan  Zn  dan  Cu masing-masing  20-38  mg/kg  dan  8-10  ppm.
Sementara kebutuhan Zn untuk ternak ruminansia adalah 33-50 mg/kg dan membutuhkan Cu sebesar 10-12 ppm (Underwood,  1977  dalam Tanuwiria  dkk., 2008 ).  Pemberian  mineral  Zn  dapat  memacu pertumbuhan mikroba rumen (Putra 1999 yang dikutip  Tanuwiria  2004).  Mikromineral  Zn berperan  sebagai  katilisator  bagi  enzim mikroba  sehingga  proses  degredasi  dalam rumen dapat tercapai dengan baik. Hartati dkk. (2009) menyatakan bahwa selain mikromineral Zn  ternak  ruminansia  juga  membutuhkan  Cu karena  terlibat  dalam  beberapa  fungsi  enzim diantaranya  untuk  sintesis  hemoglobin  yang normal.  Selanjutnya  McDowel  (1992)  dalam Hartati dkk. (2009)  melaporkan  bahwa  ternak ruminansia hanya mampu menyerap Cu 1-3 %. Karena  Cu  sulit  diserap  maka  Tanuwiria (2004)  telah  melakukan  penelitian  secara in vitro menggunakan kombinasi Zn-Cu proteinat dan  Hartati dkk. (2009)  Zn-Cu  isoleusinat  dan ZnSO4  dan  hasilnya  menunjukan  bahwa suplementasi  Zn-Cu  proteinat  atau  Zn-Cu isoleusinat dalam ransum menurunkan produksi NH3 akan tetapi terjadi peningkatkan produksi VFA.
Amonia (NH3) merupakan salah satu hasil fermentasi  pakan  dalam  rumen  yang  berasal dari degradasi protein dalam rumen (Dewhurst dkk., 2000). Volatil  Fatty  Acid (VFA) merupakan  produk  akhir  pencernaan  mikroba (karbohidrat  dan  protein)  dan  metabolisme bahan  makanan  dalam  rumen  yang  terdiri  dari asetat  (C2),  propionate  (C3),  butiran  (C4)  dan asam-asam lemak lainya.
Pemenfaatan kulit buah kopi terfermentasi dengan  menggunakann Trichoderma  reesei dengan  penambahan  Zn-Cu  isoleusinat  belum pernah  diteliti,  oleh  sebab  itu  telah  dilakukan penelitian dengan judul “Pengaruh Penggunaan Kulit  Buah  Kopi  Terfermentasi Trichoderma reesei yang  Ditambah  Zn-Cu  Isoleusinat terhadap  Produksi Amonia (NH3)  dan Volatile Faty Acids (VFA) In Vitro.”

## METODE PENELITIAN

## Proses Pembuatan Zn-Cu Isoleusinat
Mineral  organik  Zn-Cu  isoleusinat  dibuat melalui proses fermentasi menggunakan media
dari  bahan  lokal,  yaitu  singkong.  Cara pembuatan  Zn-Cu  isoleusinat  yaitu:  pertama siapkan  600  g  singkong  dicacah  dan  dicampur
dengan masing-masing 200 ml larutan mineral ZnSO 4 dan CuSO 4 pada konsentrasi 3000 ppm untuk Zn dan 500 ppm untuk Cu dalam plastik tahan  panas  kemudian  campuran  singkong segar  dengan  mineral  tersebut  dikukus  hingga masak  dan  setelah  masak  diangkat,  disimpan dalam  wadah  plastik  dibiarkan  sampai  dingin lalu  taburkan  0,5  g  ragi  tape  komersial diatasnya. Kemudian tambahkan juga 100 ppm asam  amino  isoleusin  wadah  dibungkus  kertas dan  diinkubasikan  selama  tiga  hari  dan  pada hari  ke-4  Zn-Cu  isoleusinat  siap  dipanen. Setelah  dipanen  tambahkan  dedak  halus sebagai carrier dengan  ratio  2:1  dari  bahan kering  hasil  fermentasi  dan  keringkan  dalam oven  pada  suhu  42 0 C  atau  bila  dalam  skala besar  dijemur  1-2  hari  atau  sampai  kering dengan  kadar  bahan  kering  86%  selanjutnya Zn-Cu  isoleusinat  digiling  dan  siap  untuk digunakan.
Aktifasi Bibit Trichoderma Reesei.
Alat  yang  digunakan  yaitu  aerator, timbangan  analitik,  labu  ukur,  wadah  (bokor), Bahan  terdiri  dari  bibit trichodrma  reesei ,  air, gula  pasir,  urea,  NPK  Zn-Cu  isoleusinat. Aktifasi  bibit Trichoderma  reesei sebagai starter  untuk  perlakuan  P2  siapkan  1  liter aquades  dipanaskan  lalu  didinginkan  dan selanjutnya  ditambah  gula  pasir,  urea,  dan NPK masing-masing sebanyak 10 g selanjutnya    larutan  tersebut  diaduk  dan ditambah  10  g  bibit Trichoderma  reesei, perlakuan  P3  dilakukan  hal  yang  sama  pada perlakuan  P2  tapi  ditambah  kedalam  larutan Trichoderma  reesei  2  g  Zn-Cu  Isoleusinat. Kemudian bahan perlakuan P2 dan P3 diaerasi selama  24  jam.  Setelah  24  jam Trichoderma reesei yang sudah aktif  dan yang mengandung Zn-Cu  Isoleusinat  siap  digunakan  sebagai bahan starter untuk fermentasi kulit buah kopi.

## Proses Fermentasi
Alat  yang  digunakan  untuk  proses fermentasi  yaitu:  nyiru,  botol  sprayer,  dan plasik. Bahan yang digunakan: kulit buah kopi dan larutan Trichoderma reesei aktif.
Timbang kulit buah kopi sebanyak 100 g, tebarkan  secara  merata  dalam  wadah  dengan
ketebalan  3-5  cm,  kemudian  gunakan  spayer untuk menyemprot larutan Trichoderma reesei aktif  secara  merata.  Hal  yang  sama  dilakukan sampai  kulit  buah  kopi  habis  selanjutnya  kulit buah kopi tersebut ditutup dengan plastik untuk menjaga  kelembaban,  suhu  tetap  stabil  dan mencegah penguapan serta mengurangi masuknya  mikroba  pencemar  dari  udara, setelah 48 jam kulit buah kopi hasil fermentasi dikeringkan  lalu  dimol  siap  digunakan  untuk analisis  sampel  dilaboratorium  dan  percobaan in vitro

## Metode Pengambilan Cairan Rumen:
Cairan  rumen  diambil  dari  seekor  tenak sapi  dewasa  di  Rumah  Potong  Hewan  (RPH) Oeba  Kupang  dengan  menggunakan  termos, sampai  dilaboratorium  cairan  rumen  disaring dengan menggunakan saringan yang dilapiskan dengan  kain  kasa  dan  dipindahkan  ke  dalam beaker  ditempatkan  dalam  incubator  atau penangas  air  dengan  temperature  38 o c  dan selalu dialiri CO2
Prosedur Kerja InVitro
Timbang sampel sebanyak 0,5 g masukan dalam  tabung  sentrifuge  (untuk  satu  sampel diulang  5  kali),  tambahkan  50  ml  campuran larutan  buffer  dan  cairan rumen  (4:1)  kedalam setiap tabung.  Sebelum tabung ditutup dengan karet  dialiri  lebih  dahulu  dengan  CO2  agar kondisi  dalam  tabung  diusahakan  anaerob. Kemudian  tabung-tabung  diletakkan  dalam penangas  air  temperature  38 o c  selama  48  jam dan dikocok setiap 3 jam, tabung blangko juga dikerjakan  berisi  campuran  larutan  buffer  dan cairan  rumen.  Setelah  48  jam  tabung-  tabung diangkat dari penangas air lalu direndam dalam air  dingin.  Tabung  diputar  dalam  centrifuge pada  2500  rpm  selama  15  menit,  supernatant diambil  untuk  analisis  NH3  dan  VFA ( Stilley dan Terry 1963 ) .

## Produksi Amonia (NH3)
Pengukuran  konsentrasi  NH3  cairan rumen  dilakukan  dengan  metode  Mikrodifusi Conway  (General  Laboratory  Procedur,  1996) sebagai berikut:
N-NH3 (mM)=(ml titrasi x N H2SO4 x1 000)
Wea et al : Pengaruh penggunaan kulit buah kopi terfermentasi trichoderma reesei

## Produksi Volatile Fatty Acids (VFA)
Konsentrasi  asam  lemak  terbang  total (VFA total) ditentukan dengan cara penyulingan uap (General Laboratory
Procedure, 1996). Yaitu di hitung menggunakan rumus: VFAt = Asam lemak terbang total B = Volume Titrasi Blangko
S = Volume Titrasi Sampel N = Normalis Larutan HCL

## Analisis Data
Data  hasil  pengamatan  yang  diperoleh dianalisis  dengan  analisis  ragam  atau  analysis of  varian  (ANOVA).  Untuk  mengetahui perbedaan  antar  perlakuan,  maka  dilanjutkan dengan  uji  Duncan  sesuai  petunjuk  (Steel et al., 1997).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Produksi Amonia
Amonia  (NH3)  merupakan  substrat yang  penting  bagi  pertumbuhan  mikroba  dan proses  pencernaan  dalam  rumen  karena  NH3 merupakan  sumber  nitrogen  yang  paling banyak dibutuhkan oleh mikroba rumen.  Hasil analisis  ragam  menjukkan  bahwa  perlakuan berpengaruh nyata (P<0,05), terhadap peningkatan  produksi  NH3  (Tabel  2).  Hal  ini terjadi  karena  proses  fermentasi  menggunakan Trichoderma  reesei yang  ditambah  Zn-Cu Isoleusinat telah berhasil melepaskan kandungan  tanin,  kafein  dan  ligning  sehingga sehingga  serat  kasar  muda  dicerna.  Selain sumber  kerangka  C  dan  energi  diduga  juga tersedia protein sebagai sumber N. Ketersediaan  kerangka  C  dan  yang  cukup tinggi dapat mengoptimalkan fermentasi dalam rumen. Uji jarak berganda Duncan menunjukan bahwa  produksi  NH3  antara  perlakuan  P1-P3 dan  P2-P3  terdapat  perbedaan  yang  nyata (P<0,05)  terhadap  peningkatan  produksi  NH3, sedangkan  antara  perlakuan  P1-P2  tidak memperlihatkan perbedaan yang nyata.
Hasil  penelitian  menggambarkan  bahwa telah  terjadi  peningkatan  produksi  NH3  pada
kulit  biji  kopi  yang  difermentasi Trichoderma reesei yang  ditambah  Zn-Cu  isoleusinat sebesar  2%  yaitu  6,16  Mm/l.  Diduga  hal  ini disebabkan karena penambahan Zn-Cu isoleusinat  sebagai  prekursor  pembentukan bakteri pencerna serat yang cukup memproduksi  enzim  pencerna  serat  dalam pakan,  sehingga  apabila  ketersedian  kerangka C  dan  energi  lebih  lanjut  dengan  ketersediaan sumber N yang cukup maka dapat mengoptimalkan sintesis mikroorganisme, yang  tercermin  dari  produksi  NH3  hasil fermentasi  meningkat.  Hasil  penelitian  ini sejalan  dengan  penelitian  Hartati  dkk,  (2009) pada  sapi  jantan  mudah  terjadi  peningkatan produksi  NH3  dan  VFA  sebesar  2,15  %  yang mengkonsumsi  standing  hay  rumput  kume amoniasi  dan  konsentrat  disuplementasi  150 mg ZnSO4 /kg BK konsentrat dan 2 % Zn - Cu isoleusinat pada 300 ppm Zn dan 500 ppm Cu dibandingkan tanpa suplementasi. Hasil penelitian  ini  sesuai  dengan  pernyataan Sutardi,  (1997)  bahwa  kadar  amonia  yang dibutuhkan  untuk  menunjang  sintesis  protein mikroba adalah antara 4-12 mM.
Tabel 2. Rataan produksi NH3 dan VFA (mM/L) pada berbagai perlakuan
Vriabel Produksi Perlakuan P1 P2 P3 Nilai P NH 3 (mM.) 5,58 a 5,59 a 6,6 b p<0.05 VFA  (mM) 96,27 a 97,01 a 98,08 b P<0,05
Superskrip yang sama pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang tidak nyata (P>0,05)
Produksi Volatile Fatty Acid Volatile  fatty  acid merupakan  produk utama  fermentasi  karbohidrat  oleh  mikroba rumen,  karbohidrat  akan  difermentasi  oleh mikroba  rumen  membentuk  VFA  yang merupakan  sumber  energi  siap  pakai  bagi mikroba  rumen.  Produksi  VFA  mencerminkan fermentabilitas  pakan  dan  merupakan  sumber kerangkah  karbon  (C)  dan  energi  utama  bagi ternak.  Hasil  analisis  ragam  menunjukan bahwa  perlakuan  berpengaruh  nyata  (P<0,05) terhadap peningkatan produksi VFA (Tabel 2). Hal  ini  terjadi  karena  adanya  degredasi  lignin pada  kulit  kopi  sehingga  dapat  meningkatkan jumlah  selulosa  dan  hemiselulosa  enzim  yang berpengaruh  terhadap  peningkatan  konsentrasi VFA  total  dari  kulit  buah  kopi  terfermentasi Trichiderma reesei yaitu enzim selulase karena enzim selulase dapat  menghidrolisis  selulosa dan  hemiselulosa  menjadi  glukosa,  sehingga karbohidrat yang lebih sederhana tersebut akan mudah difermentasi dalam rumen oleh mikroba menjadi VFA. Hasil uji jarak berganda Duncan menunjukkan bahwa pengaruh antara perlakuan  P1-P3,  P2-P3  berbeda  nyata, sedangkan  antara  perlakuan  P1-P2  tidak memperlihatkan  perbedaan  yang  nyata.  Hasil penelitian menggambarkan bahwa telah terjadi peningkatan produksi VFA pada kulit biji kopi
yang  difermentasi Trichoderma  reesei yang ditambah  Zn-Cu  isoleusinat  sebesar  2  % menjadi 6,16 Mm/l. Diduga hal ini disebabkan karena  penambaha  Zn-Cu  isoleusinat  sebagai prekursor  pembentukan  bakteri  pencerna  serat yang  dapat  cukup  memproduksi  enzim pencerna  serat  dalam  pakan.  Kerangka  C  dan energi lebih lanjut dengan ketersediaan amonia sebagai  sumber  N  yang  cukup  maka  dapat mengoptimalkan sintesis mikroorganisme,
yang  tercermin  pada  peningkatan  produksi VFA. Peningkatan konsentrasi VFA mencerminkan peningkatan kandungan
karbohidrat pakan yang mudah. Hal ini sejalan dengan  penelitian  Hartati  dkk,  (2009)  terjadi peningkatan  produksi  NH3  dan  VFA  sebesar 2,15  %  pada  sapi  jantan  muda  yang mengkonsumsi  “standing  hay”  rumput  kume amoniasi  dan  konsentrat  disuplementasi  150 mg  ZnSO4 /kg BK konsentrat dan 2 % Zn-Cu isoleusinat pada 300 ppm Zn dan 500 ppm Cu dibandingkan  tampa  suplementasi.  Produksi VFA hasil penelitian ini berkisar antara 96,27- 98,08  mM/l  sesuai  dengan  pernyataan  Sutardi, (1979) bahwa  VFA yang baik untuk pertumbuhan  optimum  mikroba  rumen  adalah 80-160 mM/l.

## SIMPULAN
Dari  hasil  dan  pembahasan  di  atas  dapat disimpulkan  bahwa:  pengaruh  kulit  buah  kopi yang  terfermentasi  jamur Trichoderma  reesei yang  ditambah  Zn-Cu  isoleusinat  mampu
memproduksi  NH3  dan  VFA  tertinggi  yaitu masing-masing  sebesar  6,6  mM/l  dan  98,08 mM/l.

## DAFTAR PUSTAKA
Dewhurst  RJ,  Davies  DR,  Merry  RJ.  2000. Microbial  protein supply  from  the  rumen. J Anim Feed Sci Technol 85: 1-21.
Guntoro  S,  Sriyanto  N,  Yasa  MRS.  2008. Pengaruh pemberian limbah kakao olahan terhadap pertumbuhan sapi bali ( feeding of processed  cacao  by-product  to  growing bali  cattle ).  Balai  Pengkajian  Teknologi Pertanian Bali, Ngurahrai, Denpasar.
Juhasz  T,  Kozma  K,  Szengyel  Z,  Reczey  K.
2003.  Production  of  â-glucosidase  in
mixed culture of Aspergillus niger BKMF 1305  and Trichoderma  reesei RUT  C30. Food Technol Biotechnol 41(1): 49-53.
Hartati  E,  Saleh  A,  Sulistidjo  ED.  2009.
Optimalisasi proses fermentasi rumen dan pertumbuhan sapi bali melalui suplementasi Zn-Cu isoleusinat dan ZnSO 4 pada  ransum  berbasis  standinghay rumput  kume  ( Andropogon  timorensis ) amoniasi. Animal  Production 11  (1): 59 ‐ 65.
Wea et al : Pengaruh penggunaan kulit buah kopi terfermentasi trichoderma reesei
Sutardi  T.  1997. Peluang  Dan  Tantangan Pengembangan  Ilmu-Ilmu  Nutrisi  Ternak . Fakultas Peternakan, IPB. Bogor Steel  RGD,  Torie  JH,  Dickey  DA.  1997.
Principles And Procedures of Statistics: A Biometrical  Approach  3 rd Editon .  Mc Graw-Hill. Book.
Stilley  JMA,  Terry.  1963.  A  Two  stage cechnique  for  the    in  vitro  digestion  or forage  crops . J  B  British  Grassi  Soc 18:104-114.
Tanuwiria  UH.  2004.  Efek  Suplementasi  Zn- Cu  proteinat  dalam  ransum  terhadap fermentabilitas  dan  kecernaan in-vitro . Jurnal Ilmu Ternak 4 (1): 7-12.
Tanuwiria UH, Ayuningsih B. 2008. Pengaruh suplemen  Zn-proteinat,  Cu-proteinat  dan kompleks  Ca-minyak  ikan  dalam  ransum berbasis  pucuk  tebu  amoniasi  terhadap performans  domba  jantan  persilangan priangan  X  barbados. Jurnal  Ilmu  Ternak 8(1):7-12.