## PENGEMBANGAN ELEKTRODA PASTA KARBON TERMODIFIKASI MOLECULARLY IMPRINTED POLYMER SEBAGAI SENSOR POTENSIOMETRI UNTUK ASAM URAT

## Miratul Khasanah*, Handoko Darmokoesoemo, Nesti Widayanti
Department of Chemistry, Faculty of Science and Technology, Airlangga University *email: miratulkhasanah@gmail.com
Received June 12  2016
Accepted 30 November 2016

## Abstrak
Pengembangan  elektroda  pasta  karbon/ molecularly  imprinted  polymer (MIP)  sebagai sensor  untuk  analisis  asam  urat  secara  potensiometri  telah  dilakukan.  MIP  dibuat  dari monomer  metil  metakrilat, cross-linker etilen  glikol  dimetakrilat,  dan  asam  urat  sebagai template . Elektroda yang memberikan kinerja optimum dibuat dengan komposisi karbon, MIP,  dan  parafin  40:25:35(%b/b).  Pengukuran  larutan  asam  urat  dilakukan  pada  pH optimum  5.  Kinerja  elektroda  dinyatakan  dengan  nilai  faktor  Nernst  sebesar  30,19 mV/dekade  dengan  jangkauan  pengukuran  10 -6 -10 -3 M,  koefisien  variasi  1,36-2,03%, akurasi 63,9-166,0 % dan batas deteksi bawah sebesar 3,03x10 -6 M. Pengukuran asam urat dengan elektroda ini tidak diganggu oleh keberadaan urea yang ditunjukkan dengan nilai koefisien selektivitas (Kij) kurang dari satu. Elektroda ini memiliki waktu respon kurang dari dua menit dan waktu hidup selama delapan minggu dengan 104 kali pemakaian.
Kata kunci: elektroda pasta karbon, MIP, potensiometri, asam urat

## Abstract
Carbon  paste  electrode  modified  molecularly  imprinted  polymer  (MIP)  as  a  sensor  to analyze uric acid by potentiometry has been developed. MIP was synthesized by mixing methyl  methacrylate  as  monomer,  etylene  glycol  dimethacrylic  acid  as  cross-linker,  and uric acid as template. The electrode which showed the best performance was manufactured by ratio of carbon, MIP, and paraffin of 40:25:35 (w/w). The developed electrode showed the optimum performance on the uric acid pH 5. The performances of carbon paste/MIP electrode was expressed by Nernst factor of 30.19 mV/decade, measurement range of 10 -6 - 10 -3 M, the coefficient of variation (CV) of 1.36-2.03% and accuracy of 63.9-166.0%. The detection limit of this method was 3.03x10 -6 M. Analysis of uric acid using the electrode was not interfered by urea. The developed electrode showed the response time less than 2 minutes, while lifetime of the electrode was 8 weeks (104 times usage).
Keywords: carbon paste electrode, MIP, potentiometry, uric acid

## Pendahuluan
Asam  urat  merupakan  produk  akhir metabolisme purin dalam tubuh manusia. Kadar normal asam urat dalam darah pria
berada  pada  kisaran  3,4-7,0  mg/dL, sedangkan  pada  wanita  berada  pada kisaran  2,4-5,7  mg/dL.  Kadar  asam  urat yang  melebihi  batas  normal  di  dalam
tubuh  dapat  menyebabkan  berbagai penyakit diantaranya hiperurisemia, gout, leukimia,  dan  pneumonia  (Ren et  al ., 2006), sehingga pengontrolan kadar asam urat harus dilakukan sejak dini agar dapat dilakukan pencegahan timbulnya
penyakit  berbahaya  tersebut.  Dalam bidang kedokteran, penentuan kadar asam urat  umumnya  dilakukan  dengan  metode kolorimetri  menggunakan  pereaksi  kimia atau  melalui  reaksi  enzimatik  (Chen et al .,  2005) ,  high  performance  liquid chromatography (HPLC)  (George et  al .,
2006),  dan  voltammetri  (Chen et  al ., 2010;  Khasanah et  al .,  2013).  Metode analisis  secara  kolorimetri  memerlukan sekitar  2-3  mL  sampel  darah,  memiliki sensitivitas rendah, dan limit deteksi yang relatif  tinggi  yaitu  skala  mM).  Metode HPLC  memerlukan  waktu  analisis  yang lama,  preparasi  sampel  rumit  dan  biaya operasional  instrumen  yang  mahal. Sedangkan kelemahan metode voltammetri  untuk  analisis  asam  urat adalah  adanya  gangguan  dari  senyawa lain  yang  memiliki  potensial  oksidasi sangat  dekat  dengan  asam  urat  pada berbagai  jenis  elektroda  yang  digunakan (Prekumar and Khoo, 2005).
Analisis asam urat secara voltammetri menggunakan sensor HMD termodifikasi molecularly imprinting  polymer (HMD- MIP)  telah  dikembangkan  sebelumnya (Chen et  al .,  2010;  Khasanah et  al.,
2010). Dengan sensor berbasis imprinting polimer  ini  diperoleh  peningkatan selektivitas dan sensitivitas lebih dari 100 kali  dibandingkan  sensor  HMD  tanpa modifikasi  (Khasanah et  al .,  2010 a,b ). Penggunaan imprinting zeolit  sebagai material modifier pada pembuatan sensor voltammetrik  berbasis glassy  carbon (GC)  untuk  analisis  asam  urat  juga  telah dipelajari.  Metode  yang  dikembangkan memiliki  batas  deteksi  0,0454  ppb
(2,7.10 -10 M).  Nilai  batas  deteksi  ini sekitar  10 4 kali  lebih  rendah  jika dibandingkan menggunakan metode spektrofotometri  yang  umum  digunakan di  bidang  medis  yaitu  1,2x10 -5 M.
Keberadaan  asam  askorbat,  kreatin, kreatinin,  glukosa  dan  urea  relatif  tidak mengganggu  analisis  asam  urat.  Sensor GC-IZ  memiliki  waktu  hidup  yang pendek  yaitu  hanya  sekali  pakai  karena zeolit  tidak  dapat  menempel  permanen pada  permukaan  elektroda  GC  (tidak dapat  membentuk  komposit)  (Khasanah et al ., 2013).
Metode elektrometri lain yang dikembangkan untuk mendeteksi senyawa  elektroaktif  dalam  cairan biologis  adalah  potensiometri.  Ali et  al . (2011)  telah  mengembangkan  metode penentuan asam urat secara potensiometri menggunakan elektroda kawat nano ZnO. Waktu respon dan jangkauan pengukuran yang  dihasilkan  adalah  6,25  detik  dan 1,0x10 -6 -  6,5x10 -4 M.  Ali et  al .  (2012) juga  telah  mengembangkan  sensor berbasis  ZnO nanoflakes terimobilisasi enzim  uricase  untuk  analisis  asam  urat. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa sensor  yang  dikembangkan  memiliki jangkauan pengukuran 5,0x10 -7 – 1,5x10 - 3 M  dan  batas  deteksi  5x10 -7 M.  Sensor tidak  diganggu  oleh  keberadaan  asam askorbat, glukosa dan urea Pada penelitian ini dilakukan pengembangan metode sederhana dengan selektivitas  dan  sensitivitas  yang  tinggi yaitu  metode  potensiometri  melalui modifikasi elektroda menggunakan molecularly  imprinted  polymer (MIP). MIP  dibuat  dari  metil  metakrilat  sebagai monomer,  asam  urat  sebagai template , etilen  glikol  dimetakrilat  sebagai cross- linker ,  dan  benzoil  peroksida  sebagai inisiator.  Perbandingan  mol  antara template ,  monomer, cross-linker ,  dan inisiator  adalah  1:1:3  (Khasanah et  al ., 2012). Diharapkan dengan teknik MIP ini akan  diperoleh  suatu  elektroda  dengan cetakan  yang  hanya  selektif  terhadap asam urat
.

## Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  asam  urat,  metil
metakrilat,  etilen  glikol  dimetakrilat, benzoil  peroksida,  kloroform,  natrium hidroksida,  asam  asetat  glasial,  metanol,
natrium asetat trihidrat, natrium hidrogenfosfat dihidrat, natrium dihidrogenfosfat  dihidrat,  urea,  serbuk karbon, kawat perak, parafin padat, asam klorida,
n-heksana, etanol, dan ammonium  asetat.  Semua  bahan  kimia yang digunakan memiliki derajat kemurnian  pro  analisis  (p.a).  Air  yang digunakan adalah akuades.
Peralatan  yang  digunakan  adalah seperangkat
alat potensiometer
Cyberscan 510,  elektroda  pembanding Ag/AgCl,  pH-meter  tipe  744, corong Buchner, mikropipet, hotplate - magnetic stirrer , tube /tip mikropipet, serta peralatan pendukung lain.
Prosedur Penelitian Pembuatan Molecularly Imprinted Polymer (MIP) Molecularly Imprinted Polymer (MIP) dibuat  dengan  mencampurkan  monomer, inisiator, cross-linker dan template dengan perbandingan mol hasil penelitian sebelumnya (Khasanah et al ., 2012). Pada campuran metil metakrilat dan asam urat ditambahkan  campuran cross-linker dan inisiator, kemudian dipanaskan pada suhu 60 o C tanpa pengadukan hingga terbentuk padatan. Padatan yang terbentuk kemudian  dikeringkan  pada  udara terbuka.  Padatan  ini  disebut  NIP  ( non imprinted  polymer ).  Padatan  selanjutnya digerus dan diayak dengan ayakan ukuran 200  mesh.  Serbuk  hasil  sintesis  dicuci menggunakan  campuran  asam  asetat  dan metanol  dengan  perbandingan  1:1. Setelah  itu  molekul  template  diekstraksi melalui  sentrifugasi  selama  15  menit menggunakan 10 mL ammonium asetat 1 M (dalam pelarut etanol, asam asetat dan air  dengan  perbandingan  40:  25:  35) (Moral  and  Mayes,  2004)  sehingga diperoleh  MIP.  MIP  dicuci  dengan  air kemudian disaring dan dikeringkan dalam oven.  Polimetil  metakrilat  (PMMA) sebagai polimer kontrol disintesis dengan
cara yang sama namun tanpa penambahan template (asam urat).

## Pembuatan elektroda pasta karbon/MIP
Elektroda  dibuat  dengan  mengisi ¾ bagian tube mikropipet  (yang  di dalamnya  telah  dipasang  kawat  Ag) dengan  lelehan  parafin.  Bagian  yang tersisa pada tube mikropipet diisi dengan campuran yang terdiri atas parafin padat, karbon,  dan  MIP.  Campuran  tersebut sebelumnya  telah  dipanaskan  terlebih dahulu agar membentuk pasta, selanjutnya  pasta  dimasukkan  ke  dalam bagian yang tersisa pada tube mikropipet dan dibantu dengan penekanan agar padat dan  terisi  penuh.  Permukaan  elektroda digosok dengan kertas HVS agar rata dan halus.  Elektroda  yang  telah  dibuat digunakan  untuk  mengukur  potensial larutan  asam  urat  10 -8 -10 -2 M.  Elektroda yang menghasilkan
jangkauan pengukuran  yang  luas  dan  faktor  Nernst yang  bagus  merupakan  elektroda  dengan komposisi optimum.

## Optimasi pH larutan asam urat
Ke  dalam  sederetan  larutan  asam  urat konsentrasi  tertentu  ditambahkan  larutan bufer  asetat  atau  fosfat  dengan  pH  4-8. Kemudian masing-masing larutan dianalisis secara potensiometri menggunakan  sensor  pasta  karbon/MIP yang disintesis dengan komposisi optimum.  pH  larutan  yang  memberikan sinyal  potensial  yang  besarnya  konstan disebut sebagai pH optimum.

## Uji validitas metode
Dibuat  sederetan  larutan  standar asam  urat  dengan  konsentrasi  10 -8 –  10 -3 M dan pH optimum, kemudian dianalisis secara potensiometri menggunakan sensor pasta karbon/MIP dengan komposisi  optimum.  Dilakukan  replikasi sebanyak  3  kali.  Dibuat  kurva  hubungan antara  log  konsentrasi  asam  urat  dan besarnya  potensial  yang  teramati  untuk masing-masing  konsentrasi  asam  urat yang  dianalisis.  Selanjutnya  data  hasil
pengukuran  larutan  standar  tersebut digunakan  untuk  menguji  validitas metode  meliputi  jangkauan  pengukuran, linieritas  kurva  kalibrasi,  faktor  Nernst, akurasi, presisi dan batas deteksi.
Selektivitas  sensor  dipelajari  melalui penambahan  komponen  yang  umum terdapat  dalam  sampel  serum  yaitu  urea. Ke dalam larutan asam urat ditambahkan larutan  urea  dengan  perbandingan konsentrasi asam urat dan urea bervariasi, kemudian respon potensial yang diperoleh  dibandingkan  dengan  respon potensial  hasil  analisis  asam  urat  tanpa penambahan urea dan dilakukan
penghitungan  koefisien  selektivitas  (Kij) untuk masing-masing penambahan konsentrasi urea.
Uji  waktu  respon  dan  waktu  hidup  (life time) sensor
Waktu respon sensor diamati dari 1-30 menit. Ketahanan dan waktu hidup sensor dipelajari  melalui  penyimpangan  kinerja elektroda (terutama
jangkauan pengukuran  dan  factor  Nernst)  yang dihasilkan setelah sensor digunakan untuk analisis  sederetan  larutan  standar  asam urat  secara  berulang-ulang  dan  dalam rentang waktu yang lama.
Tabel 1   Nilai  faktor  Nernst,  jangkauan  pengukuran,  dan  linieritas  pada  pengukuran larutan asam urat pada berbagai komposisi pembuatan elektroda elektroda C:MIP:parafin (%b/b) jangkauan pengukuran (M) faktor Nernst (mV/dekade) linieritas (r) E1 65:0:35 10 -6 – 10 -3 14,66 0,9946 E2 60:5:35 10 -6 – 10 -3 14,18 0,9932 E3 58:7:35 10 -6 – 10 -3 13,90 0,9682 E4 55:10:35 10 -6 – 10 -3 14,35 0,9774 E5 50:15:35 10 -6 – 10 -3 15,16 0.9853 E6 45:20:35 10 -6 – 10 -2 18,94 0,9975 E7 40:25:35 10 -6 – 10 -3 19,33 0,9960 Hasil dan Pembahasan Elektroda kerja adalah bagian terpenting dari potensiometer dan berfungsi  sebagai  sensor  dari  analit  yang akan  dianalisis.  Sebelum  dilakukan pengukuran dengan potensioemeter, terlebih  dahulu  dilakukan  optimasi parameter analitik untuk memaksimalkan kinerja  elektroda.  Pada  penelitian  ini dilakukan  dua  macam  optimasi,  yaitu optimasi  komposisi  material  penyusun elektroda  dan  optimasi  pH  larutan  asam urat.
Optimasi komposisi
elektroda dilakukan  untuk  mendapatkan  elektroda yang  mampu  bekerja  secara  optimum. Pemilihan  komposisi  elektroda  yang optimum  didasarkan  pada  nilai  faktor Nernst  yang  bagus,  nilai  linieritas mendekati satu serta jangkauan pengukuran  yang  luas.  Menurut  Cattrall (1997),  metode  potensiometri  memenuhi
persamaan  Nernst  apabila  faktor  Nernst bernilai (59,2/n ±2) mV, dimana n adalah valensi  molekul.  Asam  urat  yang merupakan  molekul  divalen  sehingga faktor Nernst yang dihasilkan seharusnya adalah  29,6  mV/dekade.  Berdasarkan pada  Tabel  1  dapat  dilihat  bahwa elektroda  yang  menghasilkan  faktor Nernst  paling  mendekati  teoritis  adalah E7  dengan  jangkauan  pengukuran  10 -6 – 10 -3 M dan nilai linieritas 0,9906.
Optimasi pH dilakukan untuk menentukan rentang pH yang
menghasilkan  nilai  potensial  yang  stabil.
Pengukuran  dilakukan  pada  larutan  asam urat  10 -8 -10 -3 M  dengan  rentang  pH  4-8 menggunakan  E7.  Berdasarkan  Tabel  2 dapat  dilihat  bahwa  larutan  standar dengan  pH  5  menghasilkan  nilai  faktor Nernst  yang  paling  bagus  yaitu  27,02 mV/dekade dengan jangkauan
pengukuran  10 -6 -10 -3 M  dan  linieritas 0,9745.
Hasil penentuan pH optimum menunjukkan  bahwa  perubahan  pH mempengaruhi  respon  potensial  yang dihasilkan.  Pada  pH  5  potensial  yang dihasilkan  relatif  konstan.  Pada  pH
tersebut  asam  urat  berada  dalam  bentuk molekul  (pKa  =  5,45).  pH  kerja  yang selanjutnya  digunakan  untuk  analisis asam  urat  menggunakan  elektroda  pasta karbon nanopori-MIP secara potensiometri adalah pH 5. Tabel 2  Nilai faktor Nernst, jangkauan pengukuran dan linieritas hasil pengukuran larutan asam urat menggunakan E7. pH jangkauan pengukuran (M) faktor Nernst (mV/dekade) linieritas (r) 4 10 -6 – 10 -3 19,42 0,9829 5 10 -6 – 10 -3 27,02 0,9745 6 10 -6 – 10 -3 20,51 0,9992 7 10 -6 – 10 -3 18,44 0,9970 8 10 -6 – 10 -3 17,40 0,8942
Selanjutnya  dilakukan  pembuatan elektroda  pasta  karbon  termodifikasi poliMMA  (EPMMA)  dan non  imprinted polimer (ENIP). Pembuatan EPMMA dan ENIP dilakukan dengan variasi perbandingan  massa  karbon  nanopori, PMMA atau NIP, dan parafin padat sama
dengan  E7.  Hal  ini  bertujuan  untuk mengetahui  pengaruh template asam  urat terhadap  sensitivitas  elektroda.  Pada penelitian  ini  didapatkan  faktor  Nernst, jangkauan  pengukuran,  dan  linieritas pada masing-masing elektroda yang dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Nilai  faktor  Nernst,  jangkauan  pengukuran,  dan  linieritas  pada  pengukuran larutan  standar  asam  urat  menggunakan  elektroda  termodifikasi  PMMA,  NIP, dan MIP elektroda faktor Nernst (mV/dekade) jangkauanpengukuran (M) linieritas (r) E7 27,02 10 -6 – 10 -3 0,9745 EPMMA 15,20 10 -6 – 10 -3 0,9907 ENIP 20,60 10 -6 – 10 -3 0,9846
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  kinerja E7  lebih  baik  dibandingkan  dengan EPMMA  dan  ENIP,  dikarenakan  E7 memiliki template yang  sesuai  dengan ukuran  pori  dan  bentuk  seperti  molekul asam urat. Teknik imprinting menghasilkan pori material
menyesuaikan  ukuran  analit  sehingga analit  dapat  terperangkap  ke  dalam  pori material,  yang  menyebabkan  analit  dapat dengan mudah terukur (Sellergren, 2001).

## Kinerja Sensor Pasta Karbon /MIP dan Validitas Metode
Kinerja  sensor  pasta  karbon/MIP dinyatakan dengan nilai waktu respon dan
waktu  hidup  ( lifetime )  sensor  tersebut. Suatu  sensor  dikatakan  semakin  sensitif apabila  waktu  yang  diperlukan  untuk merespon  analit  semakin  pendek  (Gea et al. ,  2005).  Pada  penelitian  ini  penentuan waktu respon dilakukan dengan menggunakan  konsentrasi  jangkauan pengukuran  yaitu  10 -6 M  sampai  10 -3 M. Kurva  standar  jangkauan  pengukuran asam urat ditampilkan pada Gambar 3.
Gambar  3  menunjukkan  nilai  faktor Nernst  sebesar  30,19  mV/dekade.  Asam urat merupakan molekul divalen (Gambar 4) dengan demikian seharusnya memiliki harga  faktor  Nernst  sebesar  (29,6  ±2) mV/dekade.
Gambar 3. Kurva standar asam urat
Kinerja suatu elektroda/sensor potensiometri dipelajari dengan menentukan jangkauan pengukuran, faktor  Nernst,  batas  deteksi  dan selektivitas. Pada penelitian ini dipelajari selektivitas  elektoda  terhadap  asam  urat dalam  larutan  yang  mengandung  urea. Kinerja  elektroda  secara  keseluruhan ditampilkan pada Tabel 3.
Nilai  presisi  (koefisien  variasi)  yang diperoleh  lebih  bagus  dari  batasan  yang ditetapkan  oleh  AOAC (Association  of Official    Analytical  Chemist) yaitu  3,7- 11,0% untuk konsentrasi 10 -6 hingga 10 -3
M  (Taverniers et  al .,  2004),  sedangkan nilai  akurasinya  masih  kurang  bagus. Nilai  batas  deteksi  metode  penentuan kadar  asam  urat  secara  potensiometri menggunakan  elektroda  pasta  karbon-
MIP  sekitar  lima  puluh  kali  lebih  rendah dibandingkan dengan metode spektrofotometri yang selama ini digunakan di bidang medis yaitu 1,54x10 - 4 M (Chen et al ., 2005). Dengan demikian penentuan  asam  urat  dalam  serum menggunakan metode yang dikembangkan  ini  membutuhkan  volume sampel serum yang lebih kecil dibandingkan  metode  spektrofotometri.
Gambar 4. Reaksi oksidasi asam urat (Huang et al ., 2006) Tabel 3 Kinerja elektroda
No Parameter Nilai 1 Jangkauan pengukuran 10 -6 - 10 -3 M
2 Linieritas kurva kalibrasi 0,9906 3 Faktor Nernst 30,19 mV/dekade 4 Waktu respon 32 – 60 detik 5 Batas deteksi (bawah) 3,03 x 10 -6 M 6 Koefisien variasi 1,36-2,03 % 7 Akurasi 63,9-166,0 % 8 Lifetime 104  kali pengukuran (8 minggu) 9 Selektivitas  (Kij) Selektif dlm matriks urea  (Kij<1)

## Kesimpulan
MIP yang terbuat dari monomer metil metakrilat  dapat  meningkatkan  kinerja elektroda  pasta  karbon  untuk  analisis asam urat secara potensiometri. Elektroda pasta  karbon-MIP  bekerja  optimum  pada pH 5 dengan waktu respon kurang dari 2 menit  dan  memiliki  selektivitas  yang tinggi  dalam  matriks  urea.  Elektroda memiliki waktu hidup 8 minggu (104 kali pemakaian)  dengan  batas  deteksi  sekitar 50  kali  lebih  rendah  dari  konsentrasi normal  asam  urat  dalam  darah,  sehingga
dapat  diaplikasikan  untuk  analisis  asam urat dalam sampel darah.

## Ucapan Terimakasih
Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada  Kementerian  Riset  dan  Dikti melalui  Lembaga  Penelitian  dan  Inovasi Universitas Airlangga yang telah memberikan pendanaan RUPT sesuai SK Rektor  No.    584/UN3/2016  dan
Departemen  Kimia  FST  Universitas Airlangga  yang  telah  memberikan fasilitas laboratorium.

## Daftar Pustaka
Ali,  S.M.  U.,  Alvi.,  N.H.,  Ibupoto,  Z.,
Nur,  O.,  Willander,  M.,  and
Danielsson,  B.,  2011,  Selective potentiometric  determined  nation  of uric  acid    with  uricase  immobilized on  ZnO  nanowires, Sens.  Actuators B-Chemical , 2 (152), 241-247. Ali,  S.U.,  Ibupoto,  Z.H.,  Kashif,  M, Hashim, U. and Willander, M, 2012, A  Potentiometric  indirect  uric  acid sensor based on ZnO nanoflakes and immobilized  uricase, Sensors, 12, 2787-2797.
Cattrall, R.W., 1997, Chemical Sensors , Oxford University Press, New York.
Chen, J.C., Chung, H.H., Hsu, C.T., Tsai,
D.M.,  Kumar,  A.S.,  and  Zen,  J.M., 2005,  A  disposable  single-use electrochemical  sensor  for  the detection of uric acid in human whole blood, Sens. Actuators B, 110, 364. Chen, P., Vittal, R., Nien, P., Liou, G. and Ho,  K.,  2010,  A  novel  molecularly imprinted  polymer    thin  film  as biosensor  for  uric  acid, Talanta ,  80, 1145-1151.
Gea,  S.,  Andriyani,  dan  Lenny,  S.,  2005, Pembuatan Elektroda Selektif Ion Cu (II)  dari  Kitosan-Polietilen  Oksida,
Jurnal Penelitian , Unviversitas Sumatera Utara
George,  S.K.,  Dipu,  M.T.,  Mehra,  U.R., Singh,  P.,  Verma,  A.K.  and Ramgaokar,  J.S.,  2006,    Improved HPLC  method  for  the  simultaneous determination of allantonin, uric acid, and creatinine in cattle urine, Journal of Chromatography B, 832: 134-137 Huang, X, Im H., Yarimaga, O., Kim, J., Lee, D., Kim, H. and Choi, Y., 2006, Direct  Electrochemistry  of  uric  acid at chemically assembled carboxylated single-walled carbon nanotubes netlike  electrode, J.  Phys.  Chem.  B , 110, 21850-21856
Khasanah,  M.,  Harsini,  M.,  and  Widati, A.A.,  2013,  Imprinting  zeolite modified  glassy  carbon  as  a voltammetric  sensor  for  uric  acid, Indo. J. Chem , 13 (2), 108-113. Khasanah, M., Mudasir, Kuncaka, A. and Sugiharto,  E.,  2012,  Development  of uric acid sensor based on molecularly imprinted polymethacrylic acid- modified  hanging  mercury  drop electrode , J.  Chem.  Chem.  Eng., 6,
209-214.
Khasanah, M., Supriyanto, G., Tambunan,
F.N.,  Mudasir,  Kuncaka,  A.  and Sugiharto,  E.,  2010 a ,  Molecularly imprinted polymethacrylic acid modified  glassy  carbon  as  a voltammetric  sensor  of  uric  acid analysis, Proceeding on the 2 nd ICCS, UGM, Yogyakarta, p.  457-460.
Khasanah,  M.,  Supriyanto,  G.,  Wafiroh, S.,  Kuncaka,  A.,  Sugiharto,  E,  and Mudasir,  2010 b ,  Enhancement  of  the sensitivity  and  selectivity  of  the voltammetric  sensor  for  uric  acid using molecularly imprinted polymer,
Indo. J. Chem. , 10 ( 3), 295-300. Moral,  N.P.  and  Mayes,  A.G.,  2004, Comparative  study  of  imprinted polymer  particles  prepared  by different  polymerisation  methods,
Anal. Chim. Acta, 504, 15-21.
Premkumar,  J.  and  Khoo,  S.B.,  2005,
Electrocatalytic oxidation of
biological  molecules  (ascorbic  acid and  uric  acid)  at  highly  oxidized electrodes, J.  Electroanal.  Chem. , 576, 105-112
Ren,  W.,  Luo,  H.  Q.  and  Li,  N.B.,  2006,
Simultaneous voltammetric
measurement  of  ascorbic  acid, epinephrine  and  uric  acid  at  glassy carbon  electrode  modified  with caffeic  acid, Biosens.  Bioelectron., 21, 1086-1092.
Sellergren,  B.  (Ed),  2001, Molecularly Imprinted Polymer: Man-made
mimics  of  antibodies  and  their applications  in  analytical  chemistry , Elsevier, Amsterdam.
Taverniers,  I.,  De  Loose,  M.,  and  Van Bockstaele,  E.,  2004,  Trends  in quality in the analytical laboratory. II. Analytical  method  validation  and quality  assurance, Trends  Anal. Chem. , 23 (8), 535-552