Daya Hambat Ekstrak Minyak Atsiri Kulit Buah Jeruk Siam ( Citrus nobilis L.) terhadap Pertumbuhan Candida albicans

## (The Inhibition of Essential Oil Extract from Siam Orange Peel (Citrus nobilis L.) against Candida albicans)

## Oksalani Cahaya Rana, Ayu Mashartini Prihanti,  Purwanto
Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Jember Jl. Kalimantan 37, Jember 68121 e-mail: oksalanicahaya@gmail.com

## Abstract
The  high  prevalence  of  oral  candidiasis  needs  special  attention.  Candida  albicans  (C.  albicans) play  a  critical  role  in  the  progression  of  deeper  oral  candidiasis.  An  effective  and  safe  strategy  to control C. albicans activity was needed. The essential oil from siam orange peel has been shown to have antifungal properties. This study aimed to determine the optimal concentration of the essential oils  of  siam  orange  peel  to  inhibit  the  growth  of  C.  albicans.  This  is  experimental  laboratory research with a posttest-only control group design. The water stream was used to get essential oil extract  from  siam  orange  peel  and  made  in  several  concentrations  25%,  50%,  75%,  and  100%. The  disk  diffusion  method  was  applied  to  determine  the  inhibition  of  essential  oil  extract  of  siam orange peel to the C. albicans. Nystatin and DMSO 10% plus tween 80 0,5% were used as positive and  negative  control  groups.  The  results  found  that  the  essential  oil  extract  of  siam  orange  peel concentration of 50% and above showed an inhibitory effect  on the growth of C. albicans with the most  optimal  is  75%.  The  essential  oil  extract  of  Siam  Orange  Peel  would  be  useful  as  a therapeutic agent to control oral candidiasis.
Keywords: antifungal, C. albicans, essential oil, siam orange peel, oral candidiasis.

## Abstrak
Tingginya  prevalensi  kandidiasis  oral  merupakan  masalah  kesehatan  rongga  mulut  yang membutuhkan  perhatian  khusus. Candida  albicans  (C.  albicans) merupakan  berperan  penting dalam  perkembangan  kandidiasis oral  yang  lebih  dalam.  Dibutuhkan  suatu cara  yang  efektif  dan aman dalam upaya pengendalian aktivitas C.  albicans .  Ekstrak minyak atsiri kulit buah jeruk siam telah dilaporkan memiliki khasiat antijamur Penelitian ini bertujuan untuk  menentukan konsentrasi optimal minyak atsiri kulit buah jeruk siam dalam menghambat pertumbuhan C. albicans . Penelitian ini  adalah  penelitian eksperimental  laboratori  dengan  rancangan  penelitian posttest  only  control group  design .  Metode  destilasi  uap  air  digunakan  untuk  mendapatkan  ekstrak  minyak  atsiri  kulit buah jeruk siam dan dibuat dalam konsentrasi 25%, 50%, 75%, 100%.  Daya hambat terhadap C. albicans ditentukan  menggunakan  metode  difusi  cakram.  Nistatin  dan  DMSO  10%  plus  tween  80 0,5%  digunakan  sebagai  kontrol  positif  dan  control  negatif.  Hasil  menunjukkan  bahwa  ekstrak minyak  atsiri  kulit  buah  jeruk  siam  konsentrasi  50%  ke  atas    mempunyai  daya  hambat  terhadap pertumbuhan C. albicans dengan konsentrasi paling optimal adalah 75%. Ekstrak minyak atsiri kulit buah  jeruk  siam  dapat  dimanfaatkan  sebagai  bahan  terapetik  untuk  mengendalikan  oral candidiasis.
Kata Kunci : antijamur, C.albicans, minyak atsiri, kulit buah jeruk siam, oral candidiasis

## Pendahuluan
Candida  albicans  (C.  albicans) adalah mikroorganisme  normal  dalam  rongga  mulut yang  bersifat  oportunistik  patogen,  yaitu  dapat berubah  menjadi  mikroorganisme  yang  bersifat patogen apabila terdapat faktor yang mendukungnya meliputi kebersihan rongga mulut yang  buruk,  pemakaian  antibiotik  spektrum  luas dan  jangka  panjang,  pemakaian denture, merokok, gangguan sistem imun, obat imunosupresif,  kemoterapi,  endokrin  disorder, malnutrisi,  dan  penderita  imunosupresif  seperti HIV  dan  AIDS  [1,2]. C.  albicans menyebabkan sebagian  besar  kasus  infeksi  jamur  di  rongga mulut  yaitu  kandidiasis  oral  dengan  insiden sekitar 85-95% [3].
Berbagai  jenis  obat  telah  banyak digunakan sebagai  antijamur untuk infeksi C. albicans, antara  lain  adalah  golongan  poliene, imidazole,  triazole,  dan  echinocandins  [4]. Nistatin  merupakan  salah  satu  obat  yang  sering digunakan  untuk  terapi  kandidiasis  oral  dan merupakan  golongan  poliena  yang  mampu memberikan efek optimal menghambat pertumbuhan C. albicans dengan  tingkat keberhasilan  sebesar  79,6-87,5%  [5].  Pada penggunaan  nistatin  dalam  waktu  jangka panjang,  dapat  menunjukkan  efek  samping yakni mual,  diare,  sakit  perut,  dermatitis  kontak, dan  hipersensitivitas  [6].  Diperlukan  strategi  lain dalam  pengobatan  infeksi C.  albicans seperti penggunaan  obat  berbahan  alam  yang  efektif untuk infeksi C. albicans [7].
Salah satu tanaman obat yang diharapkan  dapat  digunakan  sebagai  tanaman obat  adalah  buah  jeruk.  Salah  satu  jenis  jeruk yang  paling  banyak  dibudidayakan  di  Indonesia dengan produktivitas sebesar 32,44 ton/Ha pada tahun 2012 adalah Jeruk Siam (Citrus nobilis L.) [8].  Masyarakat  biasanya  memanfaatkan  jeruk pada buahnya sedangkan kulitnya masih kurang dimanfaatkan.
Secara umum, ekstrak buah jeruk mengandung  asam  sitrat,  asam  amino,  dan minyak  atsiri.  Dari  ketiga  senyawa  di  atas, presentase kandungan minyak atsiri adalah yang tertinggi yaitu pada kulit buah dan helai daunnya [9,10]. Senyawa aktif antijamur yang terkandung dalam  minyak  atsiri  kulit  jeruk  siam  adalah limonene,  sesquiterpen,  terpenoid,  dan  polifenol dengan  senyawa  yang  paling  dominan  yaitu limonene yang berjumlah sekitar 70-92% [11,12]. Kandungan  limonene  memiliki  ativitas  dalam menghambat  pertumbuhan  atau  mematikan jamur dengan cara merusak struktur selnya [13]. Hasil  penelitian  dari  Chee  HY, et  al (2009)
sebelumnya  mengungkapkan  bahwa  komponen limonene  yang  ditemukan  dalam  minyak  atsiri memiliki  efek  anti-jamur  yang  kuat  terhadap jamur Trichophyton rubrum [14].
Penelitian  lain  telah  membuktikan  bahwa kulit  jeruk  siam  juga  memiliki  aktivitas  hambatan terhadap  pertumbuhan  jamur  anggota  spesies Phytophthora  sp .  Dari  hasil  penelitian  tersebut didapatkan  bahwa  pada  konsentrasi  50%  sudah mampu menghambat pertumbuhan jamur Phytophthora  sp dengan  aktivitas  kuat  dengan rerata  diameter  8,90  mm  [15].  Berdasarkan penelitian  Putri  (2016)  didapatkan  hasil  bahwa minyak  atsiri  kulit  jeruk  Siam  Gunung  Omeh dengan  konsentrasi  100%,  90%,  dan  80% berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  KHM  (Kadar Hambat  Minimal)  berkisar  antara  konsentrasi 90% dan 80% [16].
Hingga  saat  ini  belum  terdapat  penelitian yang  menguji  daya  antijamur  ekstrak  minyak atsiri  kulit  buah  jeruk  siam  terhadap C.  albicans. Berdasarkan  uraian  tersebut,  penulis  tertarik untuk menguji daya hambat ekstrak minyak atsiri kulit  buah  jeruk  siam  ( Citrus  nobilis  L.) terhadap pertumbuhan C.  albicans dalam  beberapa konsentrasi (100%, 75%, 50%, dan 25%).

## Metode Penelitian
Jenis  peneilitan  yang  digunakan  adalah experimental laboratories. Peneilitan ini dilaksanakan  pada  bulan  November  2019, dilakukan  di  Laboatorium  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran  Gigi  Universitas  Jember  dan  di Laboratorium Teknik Pertanian Politeknik Jember.
Kriteria  kulit  jeruk  buah  siam  yang digunakan  meliputi  kulit  jeruk  yang  segar  dan berwarna  kehijauan.  Sampel  yang  digunakan berjumlah  24  sampel  terbagi  dalam  6  kelompok perlakuan yaitu kelompok (K+)  nistatin, kelompok (K-)  DMSO  10%  +  tween  80  0,5%,  ekstrak  kulit buah  jeruk  siam  25%(E25),  50%  (E50),  75% (E75), dan 100% (E100).
Kulit  jeruk  siam  yang  digunakan  berupa Citrus  nobilis  L. dan  telah  dilakukan  identifikasi oleh  UPT  Balai  Konservasi  Tumbuhan  Kebun Raya  Purwodadi,  Pasuruan,  Jawa  Timur.  Pada pembuatan  ekstrak  minyak  atsiri  kulit  buah  jeruk siam peneliti menggunakan metode destilasi uap- air  ( water  steam ).  Pembuatan  ekstrak  minyak atsiri  kulit  buah  jeruk  siam  dilakukan  di Laboratorium  Teknik  Mesin  Pertanian,  Politeknik Negeri  Jember.  Pertama-tama,  buah  jeruk  siam sebanyak 40kg di kupas dan dicuci hingga bersih dengan menggunakan air mengalir dan dipotong
kecil-kecil, kemudian dikeringkan atau dianginkan  ditempat  yang  teduh  selama  24  jam sehingga  didapatkan  kulit  kering  sebanyak 3,3kg.  Setelah  itu,  tabung  destilasi  diisi  air sebanyak  3 ⁄4 tinggi tabung destilasi yaitu 6 liter. Kulit buah jeruk siam diletakkan di atas saringan berlubang  dalam  tabung  destilasi  yang  telah berisi  air,  Selanjutnya  tabung  ditutup  rapat  agar menghidari kebocoran. Kemudian tabung destilasi  dihubungkan  dengan  kondensor  dan tabung  pendingin  balik.  Lalu  kompor  dinyalakan dan diatur besar kecilnya api pemanasan. Proses destilasi  ini  berjalan  selama  2  sampai  3  jam. Setelah  itu,  hasil  minyak  atsiri  diambil  dan dimasukkan  ke  tabung  corong  pemisah,  Air berada pada bagian bawah dan minyak berada di bagian atas.  Selanjutnya  air dikeluarkan  terlebiih dahulu  sehingga  tersisa  minyak  atsiri  100% sebanyak  30ml  atau  0,03  kg  lalu  ditampung dalam botol gelap yang tertutup rapat. Kemudian dilakukan pengenceran dari ekstrak minyak atsiri kulit buah jeruk siam 100% sehingga didapatkan ekstrak  minyak  atsiri  kulit  buah  jeruk  siam  25%, 50%, dan 75%.
Pengujian     daya     hambat     dilakukan dengan  memasukkan  20  μl  bahan  uji  ke  dalam kertas cakram dengan  menggunakan mikropipet dengan  tip  yang  berbeda  pada  setiap  bahan. Perlakuan  tersebut  dilakukan  pengulangan sebanyak  4  kali  pada petridish yang  berbeda. Empat  petridish  yang  telah  diberi  perlakuan, selanjutnya  dimasukkan  kedalam  desicator  dan diinkubasikan  ke  dalam  inkubator  pada  suhu 37°C selama 48 jam. Setelah dilakukan inkubasi selama  48  jam,  kemudian  zona  hambat  yang terbentuk  diukur  dengan  menggunakan  jangka sorong digital. Pengukuran dilakukan  3 kali oleh orang  yang  berbeda  yang  sebelumnya  telah dilakukan penyamaan persepsi, kemudian diambil rata- ratanya.
Hasil  data  yang  diperoleh  kemudian dilakukan  tabulasi  data,  kemudian  dilakukan  uji normalitas  ( Kolmogorov-smirnov  test )  dan  uji homogenitas ( Levene test). Kemudian dilanjutkan  dengan  uji  statistik  non  parametrik dengan uji Kruskal Wallis dan dilanjutkan uji beda antar kelompok dengan uji Mann-Whitney.
Gambar 1. Pengukuran Zona Hambat dengan menggunakan jangka sorong digital

## Hasil
Hasil  penelitian  menunjukan  adanya zona  hambat  yang  ditunjukkan  oleh  ekstrak minyak  atsiri  kulit  buah  jeruk  siam  konsentrasi 50%,  75%  dan  100%.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  minyak  atsiri  kulit  jeruk  siam konsentrasi  50%  ke  atas  mempunyai  daya hambat  terhadap C.  albicans .  Ekstrak  minyak atsiri  kulit  jeruk  siam  konsentrasi  25%  tidak menunjukkan daya hambat terhadap C. albicans . Daya  hambat  ekstrak  minyak  atsiri  kulit  jeruk siam  konsentrasi  100%  menunjukkan  daya hambat  terbesar  yaitu  15,946  mm,  sedangkan konsentrasi  50%  menunjukkan  daya  hambat terkecil yaitu 7.739 mm (Gambar 2).
Gambar  2 .   R ata-rata  diameter  zona   hambat
pertumbuhan C.albicans oleh ekstrak minyak atsiri kulit buah jeruk siam 2 0 1 5 1 0 Rata-rata diameter zona hambat (mm) SD K+ K - E2 5 E5 0 E7 5 E1 0 0
Berdasarkan  teori  dari  David  dan  Stout, diameter  ekstrak  minyak  atsiri  kulit  buah  jeruk siam  konsentrasi  100%  dan  75%  mempunyai efek  antijamur  kriteria  kuat,  konsentrasi  50% termasuk  kriteria  sedang  dan  kelompok  kontrol positif  yaitu  Nistatin  masuk  kriteria  sedang (10,368 mm).
Hasil
uji Kolmogrov- smirnov menunjukkan  data  penelitian  bersif at  normal (p >0,05)  dan  hasil  uji Levene menunjukkan  data hasil penelitian tidak homogen (p<0,05) sehingga dilanjutkan  dengan  uji  non  parametrik Kruskal- wallis. Hasil uji  Kruskal-Wallis menunjukkan adanya  perbedaan  antar  kelompok  (p<0,05). Selanjutnya  untuk  mengetahui  perbedaan  antar kelompok  penelitian  maka  dilakukan  uji  beda Mann-Whitney dengan  hasil  terdapat  perbedaan yang signifikan antara kelompok 50%, 75%,100% dengan  kelompok  kontrol  negatif  (p<0,05).  Tidak ada  perbedaan  yang  bermakna  antara  kelompok konsentrasi 25% dengan kelompok kontrol negatif (p>0,05).  Kelompok  konsentrasi  25%  berbeda signifikan dengan kelompok 50%, 75% dan 100% (p<0,05).  Kelompok  konsentrasi  50%,  75%  dan 100%  tidak  berbeda  secara  signifikan  dengan kelompok kontrol positif. Demikian juga tidak ada perbedaan  yang  signifikan  antara  kelompok  75% dengan 100% (p>0,05).

## Pembahasan
Pada  penelitian  ini  pengujian  daya hambat  menggunakan  metode  difusi  cakram Kirby  Bauer .  Metode  difusi  cakram  digunakan dalam  penelitian  ini  karena  metode  ini  mudah dilakukan,  tidak  memerlukan  peralatan  khusus, dan  relative  murah  [17].  Daya  hambat  terhadap pertumbuhan C.  albicans diketahui  dengan adanya wilayah jernih disekeliling paper disk atau yang  disebut  dengan  zona  hambat.  Semakin besar  diameter  zona  hambat,  berarti  semakin besar pula daya hambatnya.
Menurut  hasil  penelitian,  ekstrak  minyak atsiri  kulit  buah  jeruk  siam  ( Citrus  nobilis  L.) memiliki  daya  hambat  terhadap  pertumbuhan C. albicans yang  dimulai  dari  konsentrasi  50%, konsentrasi  75%  dan  konsentrasi  terbesar  yaitu konsentrasi  100%.  Hal  ini  sesuai  dengan hipotesis  bahwa  ekstrak  minyak  atsiri kulit  buah jeruk siam ( Citrus nobilis L.) memiliki kemampuan daya hambat  terhadap pertumbuhan C. albicans . Diduga  hal  ini  dikarenakan  senyawa  aktif  yang terdapat dalam minyak atsiri, diantaranya limonene,  α-pinene,  β- pinene,  dan  γ-terpinene [18].
Senyawa anti-jamur yang paling banyak terkandung  dalam  minyak  atsiri  kulit  jeruk  siam adalah  senyawa  limonene.  Limonen  merupakan senyawa aktif  yang termasuk golongan terpenoid yang  memiliki  kegiatan  antijamur  yang  kuat terhadap C.  albicans dengan  cara  menghambat sintesis ergosterol yang terjadi pada membran sel C.  albicans, akibatnya  sintesis  asam  nukleat terganggu,  dan  mengakibatkan  peningkatan permeabilitas membran sel sehingga mengganggu  keseimbangan  organel  kemudian membuat  komponen  intraseluler  organel  bocor serta memicu kerusakan DNA sehingga mengakibatkan kematian sel. Limonen juga dapat menghambat perubahan morfologi jamur dari ragi menjadi  hifa  dengan  cara  menghambat  sintesis dari  pektin,  yang  merupakan  komponen  utama dari  dinding  sel  jamur,  sehingga  menyebabkan pembentukan  dinding  sel  jamur tidak  sempurna dan  mudah  terjadi  kerusakan  sel, dan  sel  jamur menjadi  lisis.  Perubahan  tersebut  terkait  dengan perubahan saat proses adhesi sel sehingga terjadi gangguan pada integritas membran, dan permeabilitasnya [13].
Senyawa  lain  yang  terkandung  dalam minyak  atsiri  kulit  jeruk  siam  yaitu α-pinene  dan β-pinene  juga  dapat  mempengaruhi  perubahan koloni dan morfologi sel C. albicans dengan cara menurunkan aktivitas enzimatiknya dan menghasilkan efek toksik pada struktur membrane C.  albicans .  Dalam  sel  jamur,  α- pinene  dan  β-  pinene  dapat  mengganggu integritas  sel,  menghambat  proses  respirasi  dan transportasi ion H+ dan K+ dalam sel C. albicans , serta  meningkatkan  permeabilitas  membrane [19,20].  Aktivitas  dari  senyawa γ-terpinene  juga dapat  menghambat  pertumbuhan  jamur  melalui interaksi  dengan  membran  sel  yang  dapat menyebabkan gangguan pada fungsi mitokondria dalam menyediakan energi bagi sel dalam bentuk ATP [21].
Pada  penelitian  ini,  konsentrasi  25% tidak  menunjukkan  zona  hambat  terhadap  jamur C. albicans , sama  dengan kontrol  negatif (DMSO 10%  +  Tween  80  0,5%),  yang  berarti  tidak memiliki  aktivitas  antijamur  Hal  ini  diduga dikarenakan beberapa faktor, diantaranya adalah jumlah  kandungan  senyawa  aktif  yang  lebih rendah,  perbedaan  kecepatan  tumbuh  jamur  di setiap  sampel  penelitian,  kondisi  lingkungan mikro in  vitro ,  serta  faktor  teknis  seperti pemipetan  dan homogenitas suspensi juga dapat mempengaruhi  diameter  zona  hambat  yang dihasilkan.
Kontrol negatif DMSO 10% dan Tween 80 0,5%  tidak  menunjukkan  adanya  zona  hambat dikarenakan  bahan  tersebut  tidak  memiliki  sifat antibakteri  dan  antijamur,  dan  DMSO  baru  akan memiliki  daya  antibakteri  dan  antijamur  pada konsentrasi  lebih  dari  10%  sehingga  bahan tersebut  dapat  digunakan  sebagai  kontrol negatif [22].
Analisis        data  menunjukkan  ekstrak minyak  atsiri  kulit  jeruk  siam  konsentrasi  100%, 75%,  50%  mampu  melebihi  daya  antijamur  dari Nistatin  terhadap  pertumbuhan C.  albicans. Kemampuan tersebut diduga dikarenakan keduanya  memiliki  perbedaan  mekanisme  kerja sebagai  antifungi,  selain  itu  interaksi  dan  cara kerja  antara  senyawa-senyawa  kimia  aktif  yang terkandung dalam ekstrak minyak atsiri kulit buah jeruk  siam  mampu  berkerja  secara  sinergis dalam  menghambat  pertumbuhan C.  albicans , sedangkan  Nistatin  hanya  mempunyai  senyawa kimia tunggal.
Daya  hambat  terhadap C.albicans yang ditunjukkan  oleh  ekstrak  minyak  atsiri  kulit  buah jeruk  siam  konsentrasi  100%  tidak  berbeda secara  signifikan  dengan  konsentrasi  75%  dan termasuk  dalam  kategori  yang  sama  yaitu kategori  kuat dalam  menghambat  pertumbuhan jamur C. albicans . Hal ini menunjukkan kemampuan  yang  setara  antara  ekstrak  minyak atsiri  kulit  buah jeruk  siam  konsentrasi  75%  dan konsentrasi  100%,  sehingga  dapat  dikatakan bahwa  konsentrasi  75%  merupakan  konsentrasi optimal  dalam  menghambat  pertumbuhan C. albicans .

## Simpulan dan Saran
Ekstrak  minyak  atsiri  kulit  buah  jeruk siam  ( Citrus  nobilis  L.) memiliki  daya  hambat terhadap pertumbuhan C. albicans dan konsentrasi  paling  optimal  dalam  menghambat pertumbuhan C.  albicans adalah  konsentrasi 75%.
Perlu  penelitian  lebih  lanjut untuk mengetahui  kemampuan  ekstrak  minyak  atsiri kulit  buah  jeruk siam  (Citrus  nobilis  L.)  terhadap mikroflora  pathogen  lain  dalam  rongga  mulut, metode lain untuk membandingkan keefektifannya  dalam menghambat  pertumbuhan C.  albicans,  dan  uji  biokompatibilitas  sebelum digunakan  sebagai  bahan  alternatif  terapi kandidiasis  oral  secara  in vivo  untuk  mengetahui efek samping yang ditimbulkan.

## Daftar Pustaka
[1]  Febriani T. Hasmi Uji Daya Antifungi Jus Buah Pare
(Momordica  charantia  L)    Terhadap  Daya Hambat  Pertumbuhan  Candida  Albicans Secara In Vitro. Skripsi. Universitas Muhammadiyah Surakarta; 2014. [2]  Budiarto S, Subagyo G. Kandidiasis di Mulut Akibat Khemoterapi dan
Penatalaksanaannya.  Majalah  Kedokteran Gigi. 2011; 18(2): 173-177. [3]  Caranzza  FA,  Newman  MG,  Takei  HH, Klokkevold PR. Caranzza’s Clinical Periodontology 13 th end.
C h i n a : Saunders  Elsevier; 2019.
[4]  Rikhmasari  DN,  Susilo  DK.  Perbandingan kemampuan  ekstrak  kulit pisang        agung semeru  dan  pisang  mas  kirana  varietas lumajang  dalam  menghambat  pertumbuhan Candida albicans.  Jurnal Florea. 2017; 4(2): 31-38.
[5]  Lyu X, Chen Z, Zhi MY, Hong H. Efficacy of Nystatin  For  The  Treatment of  Oral Candidiasis:  A  Systematic  Review  and Meta-Analysis.  Drug  Des  Develop  Ther. 2016; 10: 1161 –1171.
[6]  Greenberg  MS.,  M.  Glick,  dan  J.A.  Ship. Burket’s  Oral  Medicine.  11 th Ed.  Canada: BC Decter Inc Hamilton; 2008.
[7]  Sanguinetti  M.  Posteraro  B.  Antifungal  drug resistance among Candida species: mechanisms  and  clinical  impact.  Mycoses. 2015; 58: 2 –13.
[8]  Wulandari M, Hartadi R, Agustina T. Analisis Produksi  Dan  Pendapatan  Serta  Strategi Pengembangan  Komoditas  Jeruk  Siam  Di Kecamatan Bangorejo
Kabupaten
Banyuwangi.  Berkala  Ilmiah  PERTANIAN. 2014; 1-12.
[9]  Kartika  K,  Rizki  FA,  Amanatufahmi  EH, Lestari T, Sa’diah I. Pemanfaatan Limonene dari  Kulit  Jeruk  Nipis  dalam  Pembuatan Lilin Aromatik
Penolak Serangga. Conference paper. PKM-Penelitian; 2014.
[10]  Gunawan  D,  Mulyani  S.  Ilmu  obat  alam (farmakognosi),  jilid  I.  Jakarta:  Penerbit Penebar Swadaya; 2010.
[11]  Pasaribu  SMH,  Wardenaar  E,  Dina  W.  Uji Aktivitas  Anti  Jamur  Ekstrak  Minyak  Atsiri Kulit  Jeruk  Citrus  Nobilis  Var.Microcarpa Terhadap
Pertumbuhan Jamur Schizophyllum Commune  Fries.  Jurnal
Hutan Lestari. 2015; 3(2): 259 – 264.
[12]  Asgarpanah,  J,  Motamed  SM,  Tomraee  S. Volatile  composition  of  the  peel  and  leaf essential  oils  of  Citrus  nobilis  Lour.  var deliciosa  Swingle,  African  J  Biotechnology. 2012; 11(23): 6364-6367.
[13]  Prabajati  R,  Hernawan  I,  Hendarti  HT. Effects  of  citrus  limon  essential  oil  (Citrus limon  L)  on  cytomorphometric  changes  of Candida  albicans.  Dental  Journal.  2017; 50(1): 43 –48.
[14]  Chee HY, Kim H, Lee MH. Antifungal Activity of  Limonene  against Tricophytonrubrum.  J Microbiol. 2009; 37(3): 243-246.
[15]  Rahmawati  K,  Mukarlina.  Aktifitas  Antifungi Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah  Jeruk  Siam Terhadap Phytophthora sp. Im5 dari Pangkal Batang  Tanaman  Jeruk  Siam  (Citrus  nobilis var.  microcarpa).  Protobiont.  2017;  6(3): 188-193.
[16]  Putri OM. Pengaruh Minyak Atsiri  Kulit Jeruk Siam  Gunung  Omeh  (Citrus  nobilis  LOUR var  microcarpa  Hassk)  pada  Berbagai Konsentrasi  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri
Staphylococcus  aureus.  Skripsi.  Fakultas
Kedokteran Gigi Universitas Andalas Padang; 2016.
[17]  Prayoga  E.  Perbandingan  Efek  Ekstrak Daun  Sirih  (Piper  betle  L.)  dengan  Metode Difusi Disk dan Sumuran Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus. Skripsi. Jakarta:
Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah; 2013.
[18]  Cahyati  S,  Kurniasih  Y,  Khery  Y.  Efisiensi Isolasi Minyak  Atsiri  Dari Kulit  Jeruk Dengan Metode  Destilasi  Air-Uap  Ditinjau  Dari Perbandingan  Bahan  Baku  Dan  Pelarut
Yang Digunakan. H y d r o g e n - Jurnal Ilmiah  Pendidikan Kimia.    2017;  4(2):  103- 110.
[19]  Cox  SD,  Mann  CM,  Markham  JL,  Bell  HC, Gustafson  JE,  Warmington  JR,  et  al.  The mode of antimicrobial action of essential oils of Melaleucia alternifolia. J. Appl Microbiology. 2000; 88:170-175.
[20]  Hafedh H, Feti BA, Meidi S, Emira N, Emira B.  Pengaruh  minyak  essensial  Mentha longifolia  L  pada  morfologi  divisualisasikan oleh  kekuatan  atom  microskopi.  Jurnal Mikrobiologi  Penelitian.  2010;  4(11):  1122- 1127.
[21]  Custodio  JBA,  Ribeiro  MV,  Silva  FSG, Machado  M,  Souza  MC.  The  essential  oil component of p-cymere induced proton leak through  FoATP  synthase  and  uncoupling  of mitochondrial respiration. J. Exp. Pharmacol. 2011; 3: 69-76.
[22]  Rusli  MS.  Sukses  memproduksi  minyak atsiri. Surabaya: Argo Media Pustaka; 2010.