## CHEESA: Chemical Engineering Research Articles
Available online at: http://e-journal.unipma.ac.id/index.php/cheesa Copyright © 2018
Tempe sebagai Pengganti Hormon Estrogen pada Reseptor Estrogen α dengan Metode Autodock Vina

## Budi Mulyati
Jurusan Teknik Industri, Fak. Teknik, Universitas Nurtanio, Jl. Pajajaran No. 219 Bandung b.mulyati@yahoo.com
Received: 14/04/2018; Revised: 13/05/2018; Accepted: 13/05/2018

## Abstrak
Reseptor  Estrogen  (RE)    α  akan  berinteraksi  dengan  estrogen  dalam  tubuh  manusia. Bila  kadar Estrogen  berkurang  akan  menyebabkan  menopause.  Isoflavon  merupakan  fitoestrogen  yang  dapat terikat  pada  kedua  jenis  estrogen  reseptor.Tempe  merupakan  makanan  yang  mengandung  isoflavon yaitu faktor II (6,7,4-trihidroksi isoflavon). Isoflavon bermanfaat antara lain untuk mencegah penyakit tulang,  menurunkan  kolesterol  jahat,  dan  mencegah  kanker.  RE  α  merupakan  target  penting  dalam dunia  pengobatan  untuk  mencari  hormon  pengganti  pada  wanita  menopause  dan  obat  kemoterapi melawan  kanker.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah menentukan  urutan  ligan  yang  berinteraksi  lebih kuat terhadap RE α serta menentukan gugus fungsi yang berperan aktif dan jenis interaksi yang terjadi antara  ligan  dan  reseptor.  Penelitian  diawali  dengan  optimasi  struktur  RE  α  (PDB  kode 2OUZ) , kemudian  disimulasikan docking dengan  ligan  menggunakan autodock  Vina, dan  ditentukan  energi afinitasnya . Ligan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  faktor  II,  daidzein,  genistein,  glisitein dan  biochanin  A  dengan  estrogen  sebagai  pembanding.  Hasil    penelitian  ini  menunjukkan  energi afinitas RE α berturut-turut adalah -6,3 kkal/mol; -6,2 kkal/mol;  -6,1 kkal/mol; -5,9 kkal/mol; dan -5,7 kkal/mol.
Kata Kunci : Reseptor Estrogen α, Isoflavon, Autodock Vina, Faktor II, Genestein

## Abstract
Estrogen  receptor  (RE)  α  will  interact  with  estrogen  in  the  human  body.  When  estrogen  levels decrease will cause menopause. Isoflavones are phytoestrogens that can bind to both types of estrogen receptors.  Tempe  is  a  food  containing  isoflavone  that  is  factor  II  (6,7,4-trihydroxy  isoflavones). Isoflavones  are  useful,  among  others,  to  prevent  bone  disease,  lower  bad  cholesterol,  and  prevent cancer.  RE  α  is  an  important  target  in  the  world  of  treatment  for  seeking  hormone  replacement  in menopausal women and chemotherapy drugs against cancer. The purpose of this study is to determine the order of ligands that interact more strongly against the RE α and determine the functional groups that  play  an  active  role  and  the type  of  interaction  that  occurs  between the ligand  and  receptor. The research begins with optimization of structure RE α (GDP code 2OUZ), then simulated docking with ligand using autodock  Vina, and determined its affinity energy. The ligands used in this study were factor II, daidzein, genistein, glycinein and biochanin A with estrogen as a comparison. The results of this study show that the energy affinity of RE α is -6,3 kcal / mol; -6.2 kcal / mol; -6.1 kcal / mol; -5.9 kcal / mol; and -5.7 kcal / mol .
Keywords : Estrogen Receptor α, Isoflavones, Autodock Vina, Factor II, Genestein

## PENDAHULUAN
Tempe  adalah  makanan  yang  dibuat dari  fermentasi  biji  kedelai  atau  beberapa bahan  lain  yang  menggunakan  kapang rhizopus, seperti Rhizopus oligosporus , Rh. oryzae,  Rh.  stolonifer (kapang  roti),  atau
Rh. arrhizus . Sediaan fermentasi ini secara umum  dikenal  sebagai  "ragi  tempe". Kapang  yang  tumbuh  pada  kedelai menghidrolisis senyawa-senyawa kompleks  menjadi  senyawa  sederhana yang  mudah  dicerna  oleh  manusia.  Tempe

## Budi Mulyati
Tempe Sebagai Pengganti Hormon Estrogen pada Reseptor Estrogen α Dengan Metode Autodock Vina
kaya  akan  serat  pangan,  kalsium,  vitamin B dan zat besi. Berbagai macam kandungan  dalam  tempe  mempunyai  nilai obat, seperti antibiotika untuk menyembuhkan  infeksi  dan  antioksidan pencegah  penyakit  degeneratif.  Secara umum,  tempe  berwarna  putih  karena pertumbuhan miselia kapang yang merekatkan  biji-biji  kedelai  sehingga terbentuk tekstur yang memadat. Degradasi komponen-komponen kedelai pada fermentasi  membuat  tempe  memiliki  rasa dan aroma khas. Tempe banyak dikonsumsi  di  Indonesia,  tetapi  sekarang telah  mendunia.  Kaum  vegetarian  di seluruh dunia banyak yang telah menggunakan  tempe  sebagai  pengganti daging. Akibatnya sekarang tempe diproduksi di banyak tempat di dunia, tidak hanya di Indonesia.
Hormon  adalah  senyawa-senyawa kimia  alami  dan  dikeluarkan  oleh  kelenjar endokrin  ke  dalam  sirkulasi  darah.  Salah satu  contoh  hormon  pada  manusia  adalah estrogen. Estrogen mempengaruhi pertumbuhan,  merangsang  perkembangan ciri kelamin sekunder wanita dan berfungsi pada  berbagai  macam  target  di  jaringan, termasuk  jaringan  sistem  reproduktif  pria dan  wanita  seperti  payudara,  uterus, ovarium, testis serta prostat. Estrogen juga berperan  penting  dalam  pemeliharaan tulang  dan  sistem  kardiovaskular  dimana estrogen  mempunyai  efek  kardioprotektif tertentu (Clark et al. , 1992).
Reseptor  estrogen  merupakan  salah satu anggota reseptor inti yang memperantarai  aksi  hormon  estrogen didalam tubuh. Estrogen bekerja meregulasi  pertumbuhan  dan  diferensiasi sel-sel  sistem  reproduksi  baik  pada  wanita dan  pria.  Dapat  juga  meningkatkan  kadar kolesterol  HDL  dan  menurunkan  LDL, sehingga  berpotensi  mengurangi  resiko
penyakit kardiovaskuler. Estrogen berperan penting pada perkembangan otak, penyakit  autoimun,  metabolisme  tulang dan  pada  sisi  lain,  estrogen  dapat  memicu pertumbuhan, proliferasi serta metastase kanker payudara (Prawiroharsono, 2001).
Reseptor  estrogen  terdiri  dari  2 subtipe  yaitu,  reseptor  estrogen  α  (RE  α) dan  reseptor  estrogen  ß  (RE  ß).  Kedua reseptor  ini  dibentuk  oleh  rantai  tunggal polipeptida dengan 565  asam  amino untuk RE α dan 530 asam amino pada RE β.
Proses  pengikatan  hormon  pada reseptor  estrogen  di  membran  sel,  dan berikatan  dalam  bentuk  dimer.  Setelah hormon  berikatan  dengan  reseptornya, reseptor  berpindah  ke  inti  sel  kemudian berikatan  dengan ERE ( estrogen  response element )  selanjutnya  kompleks  tersebut akan berikatan dengan koaktivator sehingga  faktor  transkripsi  menjadi  aktif yang  dapat  mengubah  ekspresi  gen. Kemudian  regulasi  transkripsi  gen  akan menghasilkan  suatu  protein  spesefik  yang terlibat dalam fungsi biologis tertentu.
Isoflavon  adalah  sejenis fitonutrien , yang  kaya  dalam  kacang  kedelai  dan produk kacang kedelai itu sendiri. Isoflavon  terdiri  dari  empat  jenis,  yaitu daidzein,  genestein,  glisitein  dan  faktor  II. Struktur  dari  isoflavon  sama  dengan struktur  kimia  dari  estrogen.  Estrogen  itu sendiri memiliki peran yang sangat penting dan  aktif  didalam  proses  penyembuhan penyakit  yang  disebabkan  oleh  hormon. Menurut  Allred et  al (2004)  bangsa  Asia, khususnya  Jepang,  memiliki  resiko  yang lebih  rendah  untuk  terserang  penyakit kanker  payudara  serta  gejala  menopause, dibanding  dengan  bangsa  Eropa  dan sekitarnya.  Ini  disebabkan  oleh  banyaknya konsumsi  Kacang  kedelai  di  Kalangan Asia.  Isoflavon  dapat  mengurangi  kadar kolesterol,  yang  dapat  mengakibatkan

## Budi Mulyati
Tempe Sebagai Pengganti Hormon Estrogen pada Reseptor Estrogen α Dengan Metode Autodock Vina
atherosclerosis dan
penyempitan pembuluh  darah.  Dengan  tujuan  untuk mengurangi  resiko  serangan  jantung  dan stroke.
Pada kacang kedelai banyak mengandung  genestein,  daidzein  dan glisitein  (Kuiper  &  George,  1998).  Pada tahun  1964,  Gyorgy dkk menemukan isoflavon  yang  diisolasi  dari  tempe tradisional yaitu faktor II (6,7,4’- trihidroksiisoflavon).
Menurut penelitian Kuiper & George ( 1998) fitoestrogen meliputi  genistein, coumestrol dan zearalenone menstimulasi aktivitas  transkripsi  kedua  tipe  estrogen reseptor  pada  konsentrasi  1-10  nM. Peringkat  potensi  estrogenik fitoestrogen terhadap  reseptor  estrogen  α  adalah sebagai berikut: estradiol >> zearalenone = coumestrol  >  genistein  >  daidzein  > apigenin  =  phloretin  >  biochanin  A  = kaempferol = naringenin > formononetin = ipriflavone = quercetin = chrysin.
Autodock Vina adalah sebuah program open  source untuk  melakukan docking molekul. Program ini didesain dan diterapkan oleh Dr. Oleg Trott
di Molecular Graphics Lab, Scripps Research  Institute. Proses  docking melibatkan  dua  langkah  dasar,  yaitu prediksi  konformasi  ligan  serta  posisi  dan orientasi  dalam  sisi-sisi  tersebut  serta penilaian afinitas ikatan. Dalam
menjalankan Autodock Vina, tidak
membutuhkan  pengetahuan  secara  detail, yang  dibutuhkan  adalah  struktur  molekul- molekul  yang  didocking  dan  spesifikasi dalam  mencari  sisi  pengikatan  (Trott, et al ., 2010)

## METODE PENELITIAN
Perangkat  Lunak  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah ACD/Chemsketch  (Advanced  Chemistry
Development/Chemsketch),
Avogadro, NAMD  (Nanoscale  Molecular  Dynamics), VMD (Visual Molecular Dynamics, Autodock Vina dan Ligplus . ACD/Chemsketch ini    digunakan  untuk membuat  struktur  dua  dimensi  seluruh ligan. Avogadro digunakan  untuk visualisasi tiga dimensi ligan dan reseptor. Sedangkan VMD digunakan untuk visualisasi  dan  preparasi  input  yang  akan digunakan  untuk  simulasi  pada  NAMD.
NAMD digunakan untuk  optimasi struktur protein. Autodock  Vina digunakan  untuk simulasi  docking  Reseptor  Estrogen  α dengan  seluruh  ligan  dengan  estrogen sebagai  pembanding.  Ligplus  digunakan untuk visualisasi hasil dari Autodock Vina, sehingga  diketahui  ikatan  antara  protein dengan ligan.

## Optimasi  Struktur  Ligan  dan  Reseptor Estrogen α
Ligan yang digunakan pada penelitian  ini  sebanyak  enam  buah  yaitu estrogen,  genistein,  daidzein,  glisitein, biochanin  A  dan  faktor  II.  Struktur  ligan digambar menggunakan ACD /
Chemsketch kemudian dibuat tampilan tiga dimensi. Input dibuat menggunakan Avogadro untuk  selanjutnya  dilakukan simulasi  optimasi  geometri  menggunakan Gaussian-09. Optimasi  geometri  di  atur pada  temperatur  310  K  dengan  basis  6-31 G (d) dan teori B3LYP.
Simulasi Docking Reseptor Estrogen α – Ligan dan Penentuan Residu Aktif
Program Autodock  Vina digunakan untuk  menggabungkan  setiap  ligan  ke  RE α.  Autodock  dapat  menggabungkan molekul  ligan  ke  molekul  protein  globular yang rigid berdasarkan algoritma
Lamarkian genetic . Model
ini mengkombinasikan kecepatan evaluasi

## Budi Mulyati
Tempe Sebagai Pengganti Hormon Estrogen pada Reseptor Estrogen α Dengan Metode Autodock Vina
energi  menggunakan  prekalkulasi  kisi ( grid )  energi  afinitas  atomik  setiap  tipe atom  dalam  molekul  reseptor  dengan variasi algoritma pencarian untuk menemukan  posisi  pengikatan  yang  sesuai untuk  ligan  dimana  pada  penelitian  ini digunakan genetic algorithm (GA).
Model  estrogen  reseptor  digunakan sebagai  molekul  target.  Program Autodock Vina 4.0  digunakan  untuk  menghitung muatan parsial atom dalam molekul target. Kisi  kubus  ( grid  box )  (18  x  18  x  18)  dari interaksi  karbon,  hidrogen  dan  oksigen. Dilakukan  penambahan  hidrogen  polar pada  RE  α  menggunakan AutoDock  Vina . Proses  docking  RE  α  –  ligan  juga dilakukan  menggunakan AutoDock  Vina . RE  α  yang  digunakan  adalah  RE  α  dalam bentuk  kristalnya  sebelum  dioptimasi  dan RE  α  dalam  bentuk  solvasi  setelah optimasi. Hasil docking dianalisis menggunakan  Pymol.  Untuk  menentukan residu  asam  amino  yang  aktif  yang berikatan  langsung  dengan  ligan  maka digunakan software Ligplus dengan memasukkan data PDB hasil dari autodock Vina.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Optimasi Struktur Ligan
Komputasi
kimia dapat menjelaskan  dengan  teliti  sifat  dan parameter  yang  ada  dalam  sistem  kimia. Beberapa  diantaranya  yaitu  penentuan struktur/geometri,  frekuensi  vibrasi  dan spektra berbagai molekul. Tahap awal dari studi komputasi adalah menentukan optimasi  geometri.  Optimasi  geometri bertujuan  untuk  mendapatkan  struktur molekul  tiga  dimensi  dengan  energi minimum (keadaan paling stabil).
Penentuan  optimasi  geometri  molekul diawali  dengan  perkiraan  awal  struktur yang dinyatakan dalam Z-matrik.
Ligan  adalah  senyawa  organik  atau anorganik  yang  berperan  dalam  interaksi pada domain  pengikatan protein  dan dapat mempengaruhi  aktivitas  pada  protein tersebut.  Ligan  dapat  berupa  substrat, regulator,  inhibitor,  kofaktor,  maupun efektor  lain.  Dalam  penelitian  ini,  ligan berupa  senyawa  organik  yang  berinteraksi dengan  sisi  aktif  protein  sebagai  molekul pembawa  pesan  dalam  mengaktifkan reseptor untuk melakukan tahap transkripsi.  Ligan  ini  dioptimasi  agar didapat energi elektronik seminimal mungkin. Perhitungan ini dilakukan dengan pendekatan DFT ( Density Functional Theory ) yaitu pendekatan untuk menghitung  atau  menentukan  geometri struktur  optimal  pada  molekul  dengan banyak  atom  secara  Quantum  Mechanics (QM).  Perhitungan  ini  juga  dilakukan dengan  pendekatan  Born-Oppenheimer yaitu  inti  atom  dianggap  diam  pada  saat meninjau  gerak  elektron.  Sehingga  energi elektronik yang dihitung merupakan penjumlahan dari energi  potensial elektron dan energi kinetik elektron. Ketika didapat geometri  molekul  berada pada posisi  jarak dan  sudut  yang  paling  stabil.  Molekul  ini merupakan  bentuk  yang  paling  optimal pada  simulasi  yang  menyerupai  sistem yang  sebenarnya.  Pada  penelitian  ini seluruh  ligan  fitoestrogen  dan  estrogen dioptimasi menggunakan Gaussian-09.
Struktur  protein    RE  α  diambil  dari Bank Data Protein dengan kode 2 OUZ. RE α ini merupakan struktur kristal berupa monomer  dengan  satu  rantai.  RE  α  yang terikat kompleks dengan lasofixene. Namun selanjutnya dalam penelitian lasofixene dihilangkan keberadaannya.
Struktur  RE  α  sesudah  dioptimasi  dapat dilihat pada Gambar 1.

## Budi Mulyati
Gambar 1. Reseptor Estrogen α (2OUZ) dari Protein Data Bank (PDB)
Proses Docking dilakukan pada RE α yang  sudah  dioptimasi  dengan  ligan  yang sudah  dioptimasi  pula.  Pada  proses docking,  protein  reseptor  diasumsikan sebagai  molekul  yang  kaku  sedangkan ligan  diasumsikan  sebagi  molekul  yang memiliki  beberapa  derajat  kebebasan, terutama  dalam  sudut  torsional,  karena beberapa parameter lainnya seperti panjang ikatan  dan  sudut  ikatan  memiliki  nilai konstan  untuk  konformasi  molekul  yang berbeda.  Oleh  karena  itu,  hasil  yang diperoleh  setelah  tahap docking adalah berbagai  energi  afinitas  interaksi  ligan yang dapat terikat pada domain pengikatan ligan RE α (Tabel 1) .
Tabel  1. Energi  Afinitas Ligan  terhadap  RE  α
Hasil docking Autodock Vina Nama Ligan Energi Afinitas (Kkal/mol) Estrogen -6,7 Faktor 2 -6,3 Daidzein -6,2 Genistein -6,1 Glisitein -5,9 Biochanin A -5,7 Bila dianggap interaksi pembentukan kompleks  estrogen  dengan  RE  α  yang sudah  dioptimasi  dalam  kondisi  berair adalah 100% maka dapat dilihat persentasi
interaksi pembentukan  reseptor estrogen α dapat dilihat pada Tabel 2 di bawah ini:
Tabel 2. Perbandingan Persentase Estrogenik dari Isoflavon terhadap Estrogen berdasarkan Binding Energi pada Reseptor Estrogen α Nama Ligan Persentasi Interaksi Estrogen 100% Faktor II * 94,52% Daidzein 92,53 % Genistein 91,04% Glisitein 88,06 % Biochanin A 85,07 % Keterangan:  Untuk  ligan  yang  bertanda*
belum ada data eksperimen.
Pada uji transaktivasi secara eksperimen  oleh  Kuiper, et  al (1998) estrogen dan berbagai fitoestrogen dicampurkan  ke  dalam  larutan  protein  ER α,  kemudian  dilihat  inhibisi  fitoestrogen tersebut dalam interaksinya terhadap ER α. Urutan  potensi  estrogenik  fitoestrogen adalah  sebagai  berikut:  Estradiol  >> zearalenone  =  coumestrol  >  genistein  > daidzein  >  apigenin  =  phloretin  > biochanin  A = kaempferol  = naringenin  > formononetin  =  ipriflavone  =  quercetin  = chrysin. Sedangkan berdasarkan komputasi urutan potensi estrogenik adalah sebagai berikut : estrogen >  faktor 2  >  daidzein  >  genestein  >  glisitein> biochanin A. Dari urutan potensi estrogenik  yang  tidak  sama  menunjukkan bahwa  hasil  pemodelan  struktur  reseptor- ligan  secara  komputasi  tidak  sejalan dengan  hasil  eksperimen  yang  dilakukan oleh  Kuiper  &  George,  tapi  perbedaannya hanya  terletak  pada  urutan  daidzein  dan genestein,  hal  ini  dikarenakan  adanya gugus  OH  yang  lebih  elektronegatif  pada gugus  aromatik  pada  ligan  daidzein menyebabkan  adanya  ikatan  hidrogen

## Budi Mulyati
Tempe Sebagai Pengganti Hormon Estrogen pada Reseptor Estrogen α Dengan Metode Autodock Vina
antara ligan dengan reseptor estrogen lebih stabil,  dan  menyebabkan  energi  afinitas antara  daidzein  dan  reseptor  estrogen menjadi rendah. Walaupun terdapat
perbedaan urutan potensi estrogenik antara daidzein
dan genestein, namun perbedaannya  hanya  1,49%,  sehingga perbedaannya tidak terlalu signifikan.
Dari penelitian dapat diambil kesimpulan  bahwa  dibandingkan  dengan isoflavon  lain,  faktor  II  memiliki  afinitas yang  paling  tinggi  hal  ini  dikarenakan struktur  faktor  II  mempunyai  tiga  gugus hidroksil  pada  posisi  C-6,  C-7  dan  C-4 sehingga  probabilitas  untuk  berinteraksi secara  ikatan  hidrogen  tinggi.  Ikatan hidrogen  penting  dalam  pengikatan  ligan dan  reseptor.  Struktur  dan orientasi docking dari  interaksi  secara  ikatan hidrogen  dari  faktor  II  menyebabkan banyak  terbentuknya  ikatan  hidrogen antara faktor II dan reseptor estrogen.

## Gugus  fungsi  yang  berperan  pada Reseptor Estrogen α
Dari  tabel  dapat  diketahui  bahwa energi afinitas estrogen yang paling rendah dibandingkan ligan lain. Hal ini disebabkan  karena  estrogen  mempunyai gugus  fenol  pada  posisi  C-3  dalam  cincin aromatik  A,  inti  hidrokarbon  yang  relatif kaku dan gugus fungsi alkohol pada posisi C-17. Hidroksil dari C-3 berfungsi sebagai donor  ikatan  hidrogen    dan  C-17  hidroksi berfungsi sebagai akseptor ikatan hidrogen.
Gambar 2. Hasil ligplot Interaksi RE α dengan Estrogen
Estrogen  adalah  ligan  alami  RE  α. Estrogen  yang  terikat  dengan  RE  α memiliki  energi  afinitas  paling  negatif yaitu  sebesar  -6,7  kkal/mol.  Interaksi  kuat yang  terbentuk  antara  ligan  dengan  asam amino  pada  protein  berjarak  antara  3,0 sampai  5,0  Å.    Jika  interaksi  antara  ligan dan  asam  amino  pada  domain  pengikatan ligan RE α berjarak lebih dari 5,0 Å, maka interaksi  tersebut  lemah  pada  sistem  RE  α – ligan. Gugus yang bersifat nonpolar pada estrogen juga berperan interaksinya dengan asam amino pada domain pengikatan ligan RE α.
Gugus  hidroksi  fenolik  pada  C-15 membentuk  ikatan  hidrogen  dengan  Thr 483  dengan  panjang  ikatan  2,73  Å  (pada Gambar  2).  Estrogen  mengikat  dengan energi  afinitas  yang  paling  negatif  karena mempunyai  konformasi  ligan  stabil  yang berinteraksi  kuat  dengan  tiga  asam  amino bersifat nonpolar.

## Budi Mulyati
Gambar  3. Hasil  Ligplot  Interaksi  RE  α dengan Faktor II.
Dari  hasil  pengamatan  interaksi antara  RE  α  dengan  faktor  II  (Gambar  3) merupakan  interaksi  dengan  tiga  ikatan hidrogen  yaitu  interaksi  antara  gugus hidroksi fenolik pada atom C4’ dengan Thr 431  Gugus  fungsi  yang  berperan  pada interaksi  antara  Reseptor  Estrogen  α dengan  faktor  II  adalah  gugus  fenolik  C4’ berinteraksi  kuat  asam  amino  polar  yaitu dengan  Thr  431.  Adanya  dua  ikatan hidrogen  ini  membuat  stabil  sehingga energi  afinitasnya  sangat  rendah.  Gugus hidroksi  fenolik    C6  berinteraksi  dengan asam  amino  yang  bermuatan  positif  Arg 434.
Gambar 4. Hasil Ligplot Interaksi RE α dengan Genistein
Dari  hasil  pengamatan  interaksi antara  RE  α  dengan  genistein  (Gambar  4) merupakan  interaksi  dengan  lima  ikatan hidrogen  yaitu  interaksi  antara  gugus hidroksi fenolik pada atom C6 dengan Thr 431  dengan  panjang  ikatan  2,85  Å,  gugus hidroksi fenolik pada atom C12
membentuk  ikatan  hidrogen  dengan    Arg 434  pada dua atom nitrogen yang berbeda dengan  panjang  ikatan  3,10  Å  dan  3,08  Å dan  gugus  fenolik  pada  atom  C13  yang membentuk  ikatan  hidrogen  dengan  Arg 434  dan  Gln  506.    Adanya  lima    ikatan hidrogen  ini  membuat  stabil  sehingga energi afinitasnya sangat rendah.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Isoflavon  yang  terdapat  pada  tempe terutama faktor II mempunyai potensi yang paling  baik  sebagai  hormon  pengganti estrogen    karena  mempunyai  energi afinitas  yang  paling  tinggi  diantara isoflavon  lain  terhadap  RE  α  dengan potensi estrogenik  94,52 % .
Perlu dilakukan penelitian pada skala laboratorium,    peran  faktor  II  sebagai pengganti  hormon  estrogen  pada  reseptor estrogen α.

## DAFTAR RUJUKAN
Allred, Craig, D., Brown, P., & Medina, D . (2004). The  origin  of  estrogen receptor  alpha-positive  and  estrogen alpha-negative  human  breast  cancer. Texas, USA . Breast Cancer Research , 6, 240-245. Clark,  J.H,  Schrader,  W.T,  &  O’Malley, B.W.  (1992). Mechanisms  of  action of  Steroid  hormones .  In  :  Wilson  J, Foster  DW  (eds)  Textbook  of
Endocrinology. WB Saunders
Company, Philadelphia, 35-90.

## Budi Mulyati
Gyorgy,  P.,  Murata,  K.,  &  Ikehata,  H.
(1964) . Antioxidants  isolated  from fermented  soybeans  tempeh. Nature .
203, 872-875.
Kuiper,  &  George  G.  J.  M.  (1998).
ENDOCRINOLOGY:  Interaction  of estrogenic chemicals and phytoestrogens with
estrogen
receptor  β. The    Endocrine  Society.
139, 4252-4263.
Prawiroharsono,  S.  (2001).  Prospek  dan Manfaat  isoflavon  untuk  kesehatan. http://www.tempo.co.id/medika/arsip /042001/pus-s.htm.
Trott  O.,  &  Olson  A.  (2010).  Autodock Vina:  Improving  the  speed  and accuracy  of  docking  with  s  new scoring function,
efficient optimization  and  multithreading. J Comp Chem , 31, 455-461.