## BIOEDUSAINS:Jurnal Pendidikan Biologi dan Sains
Volume 6, No 1, Januari - Juni 2023 e-ISSN : 2598-7453 DOI: https://doi.org/10.31539/bioedusains.v6i1.5775

## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI Clostridium botulinum PADA MINYAK JELANTAH
Asti Hanipah 1 , Kartika Manalu 2 , Rizki Amelia Nasution 3
Universitas Islam Negeri Sumatera Utara 1,2,3
hastihanipah@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian  bertujuan  untuk  mengetahui  adakah  bakteri Clostridium  botulinum yang  terdapat  pada  minyak  jelantah,  dan  untuk  melihat  karakteristik  bakteri Clostridium botulinum pada minyak jelantah. Pada penelitian ini dilakukan isolasi bakteri dari minyak jelantah menggunakan media blood agar, identifikasi bakteri menggunakan pewarnaan gram dan uji biokimia seperti uji gelatin, uji triple sugar iron  agar  (TSIA),  uji  simon  sitrat,  dan  uji  motility.  Hasil  penelitian  diperoleh  2 sampel  dari  3  sampel  yang  terdapat  bakteri Clostridium  botulinum .  Bakteri  ini lebih  banyak  terdapat  pada  minyak  jelantah  yang  warnanya  lebih  coklat kehitaman,  banyak  remahan  sisa  makanan,  dan  suhu  sekitar  30-55℃.  Simpulan, terdapat  bakteri Clostridium  botulinum yang  terdapat  pada  minyak  jelantah. Koloni  bakteri Clostridium  botulinum berwarna  abu-abu,  alpha  hemolitik, berbentuk  melingkar  hingga  tidak  teratur  dengan  tepi  bergigi  atau  rizoid,  dan permukaan datar hingga menonjol.
Kata kunci: Clostridium botulinum , Isolasi, Identifikasi, dan Minyak Jelantah

## ABSTRACT
The aims of this study were to determine whether Clostridium botulinum bacteria were present in used cooking oil, and to look at the characteristics of Clostridium botulinum  bacteria  in  used  cooking  oil.  In  this  study,  isolation  of  bacteria  from used  cooking  oil  using  blood  agar  media,  identification  of  bacteria  using  gram staining and biochemical tests such as gelatin test, triple sugar iron agar (TSIA) test, simon citrate test, and motility test were carried out. The results of the study obtained  2  out  of  3  samples  containing  Clostridium  botulinum  bacteria.  These bacteria are more common in used cooking oil, which has a more blackish brown color,  lots  of  crumbs  left  over  from  food,  and  temperatures  around  30-55℃.  In conclusion,  there  is  Clostridium  botulinum  bacteria  found  in  used  cooking  oil. Clostridium botulinum colonies are grey, alpha hemolytic, circular to irregular in shape with scalloped edges or rhizoids, and flat to raised surfaces.
Keywords: Clostridium botulinum, Isolation, Identification, Cooking Oil

## PENDAHULUAN
Makanan  gorengan  merupakan  salah  satu  jenis  makanan  yang  banyak disukai  oleh  masyarakat  di  Indonesia.  Walaupun  gorengan  sering  dianggap sebagai  makanan  yang  kurang  sehat,  penggemar  makanan  ini  tidak  berkurang. Makanan yang digoreng lebih gurih dan lezat, tanpa ditambahkan bumbu apapun (Anwar, 2020).
Salah  satu  media  memasak  yang  terkenal  di  masyarakat  adalah  minyak goreng. Menurut Badan Standarisasi Nasional SNI (2016), minyak goreng berasal dari  bahan  nabati  yang  mengandung  trigliserida  dan  telah  melewati  proses pemurnian yang digunakan untuk menggoreng. Ada banyak macam tanaman yang digunakan  sebagai  sumber  pembuatan  minyak  goreng,  salah  satunya  adalah kelapa sawit.
Produksi  minyak  goreng  di  Indonesia  mengalami  peningkatan  hingga 11,6%  (sekitar  6,43  juta  ton),  sedangkan  konsumsi  per  kapita  minyak  goreng sekitar  16,5  kg/tahun,  khusus  konsumsi  minyak  goreng  kelapa  sawit  per  kapita sebesar  12,7  kg/tahun.  Semakin  bertambahnya  produksi  dan  konsumsi  minyak goreng, jumlah minyak jelantah juga semakin meningkat (Susilawaty et al., 2017).
Berdasarkan  observasi  peneliti,  banyak  pedagang  yang  menggoreng makanan menggunakan  minyak jelantah  yang telah mengalami perubahan warna menjadi coklat kehitaman. Ketika minyak jelantah telah digunakan berulang kali untuk  penggorengan,  dan  dikonsumsi  secara  terus  menerus  akan  menyebabkan berbagai macam penyakit, misalnya infeksi bakteri (Kurniasih, 2020).
Salah satu bakteri yang terdapat pada minyak jelantah adalah Clostridium botulinum ,  yang  menyebabkan  penyakit  botulisme  (Kurniasih,  2020)  Bakteri  ini memakan  remah-remah  sisa  gorengan  yang  terdapat  pada  minyak  (Kurniasih, 2020) Clostridium  botulinum adalah  bakteri  berbentuk  batang  gram  positif  yang motil, anaerob, dan membentuk endospora. Sporanya berbentuk oval, subterminal, dan  menggembungkan  sel.  Bakteri  ini  biasanya  terdapat  di  tanah,  sporanya tersebar di lingkungan, dan terdapat di beberapa makanan kaleng (Leboffe et al., 2011). Dari pemaparan diatas, penulis tertarik untuk melakukan penelitian tentang isolasi dan identifikasi bakteri Clostridium botulinum pada minyak jelantah yang telah digunakan berkali-kali.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  laboratorium  mikrobiologi  FMIPA  USU pada bulan november sampai dengan desember 2021. Bahan yang digunakan pada penelitian ini antara lain minyak jelantah, media Blood Agar (Agar darah), media gelatin, Simon Citrat, Triple Sugar Iron Agar (TSIA), Semi solid, gentian violet, lugol, alkohol, safranin dan minyak imersi.
Alat yang digunakan pada penelitian ini antara lain botol steril, ose jarum, ose  cincin,  lampu  bunsen,  pipet  tetes,  objek  glass,  mikroskop,  inkubator,  rak
tabung  reaksi,  tabung  reaksi,  cawan  petri,  kertas  label,  kapas  steril,  alumunium foil, plastik wrap, alat tulis, dan kamera.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat laboratorium yang terbuat dari kaca harus dicuci terlebih dahulu, kemudian  dikeringkan  dan  dibungkus  menggunakan  kertas,  serta  pada  bagian mulut  wadah  ditutup  menggunakan  kapas.  Selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam autoclave untuk di sterilisasi pada suhu 121°C, dengan tekanan 1 atm selama 15 menit.

## Pengambilan Sampel
Sampel  minyak  jelantah  diambil  dari  3  pedagang  gorengan  di  pinggir jalan.  Kemudian  sampel  dimasukkan  kedalam  botol  gelap  steril  hingga  ¾  botol, dan masing-masing botol diberi label.

## Isolasi Bakteri
Sampel  minyak  jelantah  diinokulasikan  ke  dalam  media  agar  darah menggunakan  metode  spread  plate  (cawan  sebar),  yaitu  dengan  menyebarkan  1 mL  sampel  pada  media  agar  darah  padat  dalam  cawan  petri.  Kemudian,  media diinkubasi di dalam inkubator dengan suhu 37°C selama 24-48 jam.

## Pengamatan Morfologi
Pengamatan  morfologi  dilakukan  dengan  mengamati  koloni  bakteri  yang tumbuh pada media agar darah setelah diinkubasi. Bagian  yang diamati meliputi bentuk  koloni,  permukaan,  tepi,  dan  warna  koloni.  Pengamatan  morfologi  sel dilakukan  dengan  mengambil  koloni  dari  media  agar  darah  sebanyak  1  ose, kemudian dilakukan pewarnaan gram.

## Pemurnian Bakteri
Koloni  yang  tumbuh  pada  media  agar  darah,  masing-masing  dilakukan pemurnian  ke  dalam  media  nutrient  agar  menggunakan  metode  streak  kuadran untuk  mendapatkan  koloni  tunggal.  Media  nutrient  agar  kemudian  diinkubasi  di dalam inkubator dengan suhu 37°C selama 24 jam.

## Uji Biokimia Uji Degradasi Gelatin
Uji  degradasi  gelatin  menggunakan  media  gelatin  pada  tabung  reaksi. Koloni  pada  media  nutrient  agar  diambil  sebanyak  1  ose  dan  diinokulasikan kedalam  media  gelatin.  Kemudian  diinkubasi  kedalam  inkubator  dengan  suhu 37°C selama 24-48 jam. Hasil positif ditandai dengan adanya pencairan gelatin.

## Uji Citrat
Koloni  pada  media  nutrient  agar  diambil  sebanyak  1  ose  dan diinokulasikan  pada  permukaan  media  Simon  Citrat.  Kemudian  diinkubasi kedalam inkubator dengan suhu 37°C selama 24 jam.

## Uji Triple Sugar Iron Agar (TSIA)
Koloni  pada  media  nutrient  agar  diambil  sebanyak  1  ose  dan diinokulasikan  pada  permukaan  media  TSIA.  Diinkubasi  kedalam  inkubator dengan suhu 37°C selama 24 jam.

## Uji Motilitas
Uji  ini  digunakan  untuk  melihat  pergerakan  bakteri.  Koloni  pada  media nutrient  agar  diambil  sebanyak  1  ose  dan  diinokulasikan  pada  media  semisolid. Diinkubasi kedalam inkubator dengan suhu 37°C selama 24 jam.
Analisis Data
Data  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  akan  dianalisis  secara  deskriptif kuantitatif  dengan  melampirkan  tabel,  dan  gambar.  Kemudian  membaca  jenis bakteri  hasil  pengujian  biokimia  dengan  berpedoman  pada  buku  Bergey’s Determinative Bacteriology Volume 3.

## HASIL PENELITIAN
Hasil  penelitian  yang  di  dapat  berupa  pengamatan  morfologi  secara makroskopik pada tabel  1, pengamatan morfologi secara mikroskopik pada tabel 2, dan pengamatan uji biokimia pada tabel 3.
Tabel 1 . Pengamatan morfologi secara makroskopik No. Sumber isolat Kode isolat Ukuran Bentuk Permukaan Warna Tepi 1 Sampel 1 (S1) S1 SP1 Sedang Irregular Datar Abu- abu Rhizoid 2 Sampel 1 (S1) S1 SP2 Sedang Irregular Datar Abu- abu Rhizoid 3 Sampel 1 (S1) S1 SP3 Kecil Irregular Datar Abu- abu Rhizoid 4 Sampel 2 (S2) S2 SP1 Besar Irregular Datar Abu- abu Rhizoid Tabel 2. Pengamatan Morfologi secara Mikroskopik No. Kode isolat Bentuk sel Sifat gram Spora 1 S1 SP1 Basil Positif - 2 S1 SP2 Basil Positif - 3 S1 SP3 Basil Positif + 4 S2 SP1 Basil Positif +

## Tabel 3. Pengamatan Uji Biokimia
No Jenis uji biokimia Kode isolat S1 SP1 S1 SP2 S1 SP3 S2 SP1 1 Gelatin - - + + 2 TSIA K/A H 2 S - A/K H 2 S - K/A H 2 S + K/A H 2 S + 3 Simon Citrat - - - - 4 SIM + - - - Jenis bakteri - - Clostridium botulinum Clostridium botulinum Keterangan reaksi biokimia : 1. Uji gelatin: (+) Mencair, (-) Beku 2. Uji TSIA: (A) Kuning, (K) Merah,  (H2S+)  Endapan  hitam,  (H2S-)  Tidak  terbentuk  endapan  hitam  3.  Uji  Sitrat:  (+)  Warna biru, (-) Selain warna biru 4. Uji Motility: (+) Menyebar, (-) Tidak menyebar.

## PEMBAHASAN
Berdasarkan  tabel  1,  koloni  yang  tumbuh  pada  media  agar  darah  setelah diinkubasi  selama  24  jam  terdapat  empat  jenis  koloni  pada  dua  sampel  minyak jelantah  yang  di  ambil  dari  pedagang  gorengan.  Untuk  dua  sampel  lainnya  tidak ada koloni yang tumbuh. Koloni pada sampel 1, isolat (S1 SP1) memiliki ciri-ciri makroskopik  yaitu ukuran sedang, bentuk irreguler (tidak beraturan), permukaan datar,  warna  abu-abu  dan  tepi  rhizoid  (tepi  bergerigi).  Koloni  pada  sampel  1, isolat  (S1  SP2)  mempunyai  ciri-ciri  makroskopik  dengan  ukuran  sedang,  bentuk irreguler (tidak beraturan), permukaan datar, warna abu-abu dan tepi rhizoid (tepi bergerigi).  Koloni  sampel  1,  pada  isolat  (S1  SP3)  dengan  ciri-ciri  makroskopik yaitu  ukuran  yang  kecil,  bentuk  irreguler  (tidak  beraturan),  permukaan  datar, warna abu-abu dan tepi rhizoid (tepi bergerigi). Sedangkan pada koloni sampel 2, isolat  (S2  SP1)  memiliki  ciri-ciri  makroskopik  dengan  ukuran  besar,  bentuk irreguler (tidak beraturan), permukaan datar, warna abu-abu dan tepi rhizoid (tepi bergerigi). Untuk gambar pengamatan morfologi secara makroskopik dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Hasil Pengamatan Morfologi Koloni secara Makroskopik pada Media Blood Agar
Hasil  pengamatan  morfologi  secara  makroskopik  sesuai  dengan  buku Bergey’s  Manual  of  Systematic  Bacteriology  edisi  kedua  volume  ketiga  tahun 2009,  yaitu  koloni  berwarna  abu-abu,  berbentuk  melingkar  hingga  tidak  teratur dengan  tepi  bergigi  atau  rizoid,  permukaan  koloni  datar  hingga  menonjol,  dan koloni bersifat hemolitik. Pada penelitian Toelle et al. (2015), koloni pada media blood agar menghasilkan alpha hemolitik.
Berdasarkan  tabel  2,  setelah  dilakukan  pewarnaan  gram  untuk  melihat bentuk dan sifat gram pada bakteri diperoleh isolat S1 SP1 dan S1 SP2 memiliki bentuk basil gram negatif, dan tidak memiliki spora pada ujungnya, isolat ini tidak termasuk  bakteri Clostridium  botulinum .  Isolat  S1  SP3  dan  S2  SP1  berbentuk basil gram positif, dan terdapat spora pada salah satu ujungnya, isolat ini termasuk bakteri Clostridium botulinum . Berikut ini adalah pengamatan bakteri Clostridium botulinum secara mikroskopik setelah dilakukan pewarnaan gram. Untuk gambar hasil pengamatan morfologi secara mikroskopik dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 2. Pengamatan Morfologi Bakteri Clostridium Botulinum secara Mikroskopik
Hasil  pengamatan  mikroskopik  sesuai  dengan  buku  Bergey’s  Manual  of Systematic  Bacteriology  edisi  kedua  volume  ketiga  tahun  2009,  yaitu  bakteri berbentuk batang (basil) gram positif, dan membentuk endospora oval atau bulat yang biasanya menggembungkan sel. Pada penelitian Toelle et al. (2015), bakteri Clostridium botulinum berbentuk batang berspora dan gram positif.
Berdasarkan  tabel  3,  setelah  dilakukan  penanaman  pada  media  uji biokimia yaitu gelatin, triple sugar iron agar (TSIA), simon sitrat, dan sulfie indol motility  (SIM),  diperoleh  hasil  pada  isolat  S1  SP1:  uji  gelatin  negatif  yang ditandai  dengan  tidak  mencairnya  gelatin,  uji  simon  sitrat  negatif  yang  ditandai dengan  warna  hijau,  uji  TSIA  K/A  H2S  (-)  yang  berarti  bakteri  hanya memfermentasikan glukosa dan tidak menghasilkan H2S, uji motility positif yang ditandai dengan menyebarnya bakteri pada media SIM. Berdasarkan pengamatan uji biokimia ini, bakteri yang di identifikasi dari isolat S1 SP1 bukan Clostridium botulinum .  Pada  isolat  S1  SP2:  uji  gelatin  negatif  karena  media  tetap  beku,  uji simon  sitrat  negatif  yang  ditandai  dengan  warna  hijau,  uji  TSIA  A/K  H2S  (-) artinya bakteri bersifat basa dan tidak menghasilkan H2S, uji motility positif yang
ditandai dengan menyebarnya bakteri pada media. Berdasarkan hasil pengamatan uji  biokimia  ini,  bakteri  yang  di  identifikasi  dari  isolat  S1  SP2  bukan  bakteri Clostridium botulinum .
Pada  isolat  S1  SP3:  uji  gelatin  positif  yang  ditandai  dengan  media  yang mencair, uji simon sitrat negatif yang ditandai dengan warna hijau, uji TSIA K/A H2S  (+)  yang  artinya  bakteri  dapat  memfermentasikan  glukosa  saja  dan menghasilkan H2S, uji motility positif karena bakteri menyebar pada media SIM. Berdasarkan  hasil  pengamatan  uji  biokimia  ini,  bakteri  yang  di  identifikasi  dari isolat S1 SP3 adalah Clostridium botulinum . Pada isolat S2 SP1: uji gelatin positif yang  ditandai  dengan  mencairnya  media  gelatin,  uji  simon  sitrat  negatif  karena warnanya  yang  hijau,  uji  TSIA  K/A  H2S  (+)  yang  berarti  bakteri  hanya memfermentasikan  glukosa  dan  menghasilkan  H2S,  serta  motility  positif. Berdasarkan hasil pengamatan uji biokimia ini, bakteri yang di identifikasi adalah Clostridium  botulinum .  Hasil  uji  biokimia  sesuai  dengan  buku  Bergey’s  Manual of  Systematic  Bacteriology  edisi  kedua  volume  ketiga  tahun  2009,  yaitu  bakteri Clostridium  botulinum dapat  mencerna  gelatin  dan  menghasilkan  H2S  (endapan hitam  pada  media  triple  sugar  iron  agar).  Bakteri  ini  dapat  memfermentasikan glukosa,  tidak  dapat  memfermentasikan  laktosa,  tidak  dapat  menghasilkan  sitrat, dan bersifat motil atau nonmotil.
Clostridium  botulinum merupakan  bakteri  berspora  berbentuk  batang (basil)  dan  bakteri  gram  positif.  Bakteri  ini  termasuk  kedalam  golongan  anaerob obligat,  yaitu  bakteri  yang  tidak  dapat  tumbuh  pada  kondisi  yang  terdapat oksigen. Dengan kata lain, bakteri ini dapat tumbuh pada kondisi lingkungan yang tidak  ada  oksigen.  Selama  sporulasi, Clostridium  botulinum menghasilkan neurotoxin yang terjadi pada lingkungan anaerob. Bakteri ini menghasilkan spora ketika  berada  dalam  kondisi  yang  tidak  menguntungkan  untuk  menjaga kelangsungan hidupnya (Setiarto & Marni, 2021).
Berdasarkan  suhu  pertumbuhan  bakteri  dibagi  menjadi  3,  yaitu  bakteri psikotropik (suhu optimum sekitar 14-20°C, dan dapat tumbuh lambat pada suhu 4°C),  bakteri  mesofilik  (suhu  optimum  sekitar  30-37°C),  dan  bakteri  termofilik (suhu  optimum  sekitar  45-60°C)  (Boing  et  al.,  2019).  Bakteri Clostridium botulinum tergolong  kedalam  bakteri  termofilik,  karena  bakteri  ini  mempunyai spora  yang  dapat  berkembang  pada  suhu  hangat  sehingga  dapat  menyebabkan kebusukan  pada  makanan  (Fatma  et  al.,  2021).  Dari  ketiga  sampel  minyak jelantah,  memiliki  suhu yang  berbeda.  Pada  sampel  1,  minyak  jelantah  memiliki suhu ruangan yaitu sekitar 30-37°C. Pada sampel 2, suhu minyak jelantah sekitar 45-55°C  (hangat).  Sedangkan  pada  sampel  3,  minyak  jelantah  memiliki  suhu diatas 60°C (masih panas).
Berdasarkan  hasil  penelitian  Derman  et  al.  (2011),  bakteri Clostridium botulinum dapat  hidup  pada  suhu  optimum  10°C  dan  suhu  maksimum  40°C, paling  banyak  terdapat  pada  suhu  sekitar  36-40°  (Derman  et  al.  2011).  Menurut UCBS Science  Line dalam buku Gabriela (2018), bakteri Clostridium botulinum
tidak mudah dimatikan jika hanya dilakukan proses pemanasan biasa. Efek racun yang  ada  pada  bakteri  akan  hilang  jika  didihkan  selama  10  menit,  akan  tetapi sporanya  belum  mati.  Spora  bakteri  ini  akan  mati  jika  dipanaskan  pada  suhu diatas 120°C selama 30 menit (Gabriela, 2018).
Spora  bakteri Clostridium  botulinum memiliki  daya  tahan  yang dipengaruhi  oleh  tingkat  keasaman  (pH),  NaCl,  antibiotik,  kondisi  lembab,  dan lingkungan berlemak. Tingkat keasaman minimum sekitar pH 4,9 dan maksimum sekitar  pH  6,3-6,9.  Penambahan  lemak  yang  terjadi  ketika  pemanasan,  dapat mempengaruhi daya tahan spora dan dapat menurunkan kelembaban. Oleh karena itu,  makanan  kaleng  dengan  minyak  akan  menyebabkan  spora  bakteri  ini  tahan lebih  lama  terhadap  pemanasan  karena  spora  akan  terselimuti  oleh  minyak. Minyak  jelantah  mengandung  asam  lemak  jenuh  yang  memiliki  ikatan  rantai panjang  yang  dapat  meningkatkan  daya  tahan  spora  bakteri Clostridium botulinum . Spora bakteri ini juga memerlukan suhu yang hangat, sumber protein, lingkungan  anaerob  dan  lembab  agar  spora  dapat  aktif  dan  memproduksi  toksin. Kondisi  seperti  ini  dapat  terbentuk  secara  alami  dengan  adanya  proses dekomposisi hewan dan tumbuhan (Murwani et al., 2017).

## SIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan,  dapat  disimpulkan  bahwa terdapat  bakteri Clostridium  botulinum yang  terdapat  pada  minyak  jelantah. Koloni  bakteri Clostridium  botulinum berwarn  abu-abu,  alpha  hemolitik, berbentuk  melingkar  hingga  tidak  teratur  dengan  tepi  bergigi  atau  rizoid,  dan permukaan datar hingga menonjol.

## DAFTAR PUSTAKA
Anwar, E., N. 2020. “Pemeriksaan Bilangan Peroksida pada Minyak Goreng yang Sudah  Dipakai  Beberapa  Kali  oleh  Penjual  Gorengan  di  Simpang  Empat Pagar Dewa Kota Bengkulu.” Jurnal Ilmiah Pharmacy 7(1): 45–58.
Badan  Standardisasi  Nasional.  2016.  Minyak  goreng  SNI  3741:2013.  http://lib. kemenperin.go.id/neo/detail.p hp?id=231088
Bergey’s  Manual  of  Systematic  Bacteriology  edisi  kedua  volume  ketiga  tahun 2009
Boing,  A.,  Dase,  H.,  Dede,  R.A.,  Eko,  H.P.,  Elvira,  S.,  Feri,  K.,  Nur,  W.,  & Purwiyatno, H. 2019. Landasan Teknik Pangan . Bogor: IPB Press.
Derman,  Yagğur,  Miia  Lindström,  Katja  Selby,  and  Hannu  Korkeala.  2011. “Growth  of  Group  II Clostridium  Botulinum Strains  at  Extreme Temperatures.” Journal of food protection 74(11): 1797–1804.
Fatma, F., Indah, N., Umar, H.A.H., Mila, S., Seri, A.M., Niken, B.A., Nila, P.S., dan  Ichsan.  2021. Sanitasi  Makanan  dan  Minuman .  Medan:  yayasan  kita menulis.
Gabriela, I. 2018. 100+ MPASI Hits Instagram Pilihan Mommy . Jakarta Selatan:
Visimedia Pustaka.
Kurniasih,  E.  2020. Merancang  Energi  Masa  Depan  Dengan  Biodiesel . Yogyakarta: ANDI.
Leboffe,  Michael,  J.,  dan  Burton,  E.P.  2011. A  Photographic  Atlas  for  the Microbiology Laboratory . Amerika: Morton Publishing.
Murwani,  S.,  Dahliatul,  Q.,  dan  Indah,  A.A.  2017. Penyakit  Bakterial  pada Ternak Hewan Besar dan Unggas . Malang: UB Press.
Setiarto,  H.B.,  dan  Marni.  2021. Pengantar  Kuliah  Mikrobiologi  Klinis .  Jawa Barat: Guepedia.
Susilawaty,  Andi,  Hasbi,  I.,  &  Ugi,  N,  T.  2017.  “Pemanfaatan  Minyak  Jelantah dengan Tambahan Ekstrak Daun Cengkeh (Zyzygium Aromaticum) sebagai Sabun Antiseptik dalam Menurukan Jumlah Kuman pada Telapak Tangan.” HIGIENE: Jurnal Kesehatan Lingkungan 3(1): 15–21.
Toelle,  Neliyani,  N.,  &  Rumlaklak,  Y,  Y.  2015.  “Karakteristik  Bakteri  yang  di Isolasi dari Darah Rusa Timor (Cervus Timorensis) di Kota Kupang.” Jurnal Kajian Veteriner 3(1): 71–75.