40 Jurnal Agrotek Tropika 5(1): 40-45, 2017 J.  Agrotek    Tropika.    ISSN  2337-4993 Vol. 5,  No. 1: 40 – 45,  Januari 2017

## PENGARUH EKSTRAK GULMA SIAM, KEMUNING DAN SALIARA TERHADAP  PENGHAMBATAN  PERTUMBUHAN  BAKTERI LAYU PISANG SECARA IN VITRO
Nova Adelina  Lubis, Titik Nur Aeny, Joko  Prasetyo &  Radix  Suharjo
Jurusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Lampung Jl. Prof. Soemantri Brodjonegoro, No.1, Bandar Lampung 35145 E-mail: adelina.nova27@gmail.com

## ABSTRAK
Salah satu penyakit penting pada tanaman pisang adalah penyakit layu bakteri, yang disebabkan oleh Blood Disease Bacterium (BDB).  Beberapa jenis tanaman telah dilaporkan mengandung senyawa antibakteri yang dapat menjadi alternatif pengendalian penyakit tanaman yang disebabkan oleh bakteri.  Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak Chromolaena odorata, Murraya paniculata dan Lantana camara terhadap penghambatan perrtumbuhan BDB secara in vitro.  Penelitian dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Lampung pada Maret hingga Juli 2016.  Perlakuan disusun menggunakan Rancangan Acak Lengkap dalam faktorial. Faktor pertama adalah lama perendaman bahan tanaman sebelum  diekstrak  dan  faktor  kedua  adalah  tingkat  konsentrasi  ekstrak.    Pengamatan  dilakukan  terhadap  diameter  zona penghambatan pada 24 jam setelah aplikasi.  Data diuji dengan analisis ragam dan nilai tengah antar perlakuan diuji dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) pada taraf 5%.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada perlakuan ekstrak kemuning, interaksi antara lama perendaman dan tingkat konsentrasi berpengaruh nyata terhadap diameter zona penghambatan BDB sedangkan pada ekstrak gulma siam dan saliara interaksinya tidak nyata.  Diameter zona penghambatan paling tinggi ekstrak gulma siam, kemuning dan saliara dalam menghambat pertumbuhan BDB secara berurutan adalah 85%, 55% dan 95%.
Kata kunci: Blood Disease Bacterium, Chromolaena odorata, ekstrak, konsentrasi, Lantana camara, Murraya paniculata, penghambatan

## PENDAHULUAN
Pisang  (Musa  paradisiaca L.)  adalah  tanaman buah  berupa  herba  yang  berasal  dari  kawasan Asia Tenggara tetapi penyebarannya telah hampir merata di seluruh  dunia.    Tanaman  pisang  dapat  dimanfaatkan secara luas oleh masyarakat Indonesia karena beragam manfaat yang dimilikinya (Triyono, 2010).
Salah satu penyakit pada tanaman pisang yaitu penyakit layu yang disebabkan oleh bakteri.  Penyebab penyakit layu bakteri pada pisang ini dikenal dengan berbagai  nama  antara  lain Pseudomonas  celebensis (Hartati dkk., 1989 dalam Suharjo dkk., 2008), Blood Disease Bacterium (Eden-Green, 1994), Ralstonia sp. (Mujim  dkk.,  1999 dalam  Aeny,  2001), Ralstonia haywardii (Remenant dkk.,  2011 dalam CABI 2016) dan Ralstonia  syzygii  subsp. celebensis (Safni  dkk., 2014). Menurut Aeny dkk. (2007),  penyakit layu bakeri pisang  memiliki  gejala  yang  ditunjukkan  dengan menguningnya  daun  ketiga  atau  keempat  yang kemudian  menyebabkan  seluruh  daunnya  kering  dan akhirnya  tanaman  mati.    Bagian  dalam  buah  tampak berwarna coklat kehitaman disertai cairan agak kental
yang  berwarna  coklat  kekuningan. Apabila  dibuat potongan melintang bagian batang, maka akan terlihat adanya perubahan warna kecoklat-coklatan pada batang aslinya dan setelah beberapa saat akan muncul eksudat bakteri berwarna putih kotor atau coklat kehitaman pada permukaan irisan.
Saat ini, upaya pengendalian penyakit layu bakteri sudah banyak dilakukan termasuk penggunaan bahan kimia yang ternyata menimbulkan dampak negatif bagi lingkungan.  Untuk mengatasi masalah tersebut maka perlu  alternatif  pengendalian yang  efektif dan ramah lingkungan,  misalnya  penggunaan  pestisida  nabati (Trisnadi, 2016).  Beberapa tanaman yang telah diteliti sebagai pestisida nabati antara lain adalah gulma siam (Chromolaena  odorata)  (Ulpa,  2008),  kemuning (Murraya paniculata) (Raharja dkk., 2004) dan saliara (Lantana camara) (Lestari dkk., 2013).
Menurut Dharmautama (2014) selain konsentrasi, tingkat toksisitas pestisida nabati juga dipengaruhi oleh lama  perendaman  bahan  tanaman.    Tetapi  belum diketahui  pengaruh  lama  perendaman  ekstrak  gulma siam,  kemuning  dan  saliara  dalam  mengendalikan patogen layu bakteri (Blood Disease Bacterium).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh lama perendaman dan taraf konsentrasi ekstrak gulma  siam,  kemuning  dan  saliara  terhadap penghambatan pertumbuhan Blood Disease Bacterium secara in  vitro  dan  mengetahui  interaksi  antara  lama perendaman dan taraf konsentrasi ekstrak gulma siam, kemuning  dan  saliara  terhadap  penghambatan pertumbuhan Blood Disease Bacterium secara in vitro.

## BAHAN  DAN  METODE
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Lampung. Pelaksanaan penelitian dimulai dari Maret 2016 hingga Juli 2016. Pada penelitian ini dilakukan penyiapan isolat Blood  Disease  Bacterium (BDB),  penyiapan  ekstrak gulma  siam  (C.  odorata),  kemuning  (M.  paniculata) dan Saliara (L. camara), penyiapan medium berisi Blood Disease Bacterium , pengujian penghambatan ekstrak gulma siam, kemuning dan saliara terhadap pertumbuhan Blood  Disease  Bacterium  secara in  vitro  serta pengamatan dan pengumpulan data.
Penelitian terdiri dari tiga subpercobaan.  Pada masing-masing  subpercobaan  perlakuan  disusun menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dalam faktorial, dengan empat ulangan.  Faktor pertama adalah lama  perendaman  dan  faktor  kedua  yaitu  tingkat konsentrasi.  Data yang diperoleh diuji dengan analisis ragam dan nilai tengah antar perlakuan diuji dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) pada taraf 5%.
Isolat Blood Disease Bacterium diperoleh dengan cara  mengisolasi  patogen  dari  buah  pisang  yang terinfeksi  dari  daerah  Gedung  Meneng,  Bandar Lampung. Setelah itu dilakukan uji hipersensitif pada daun tembakau dan uji patogenisitas pada bibit pisang terhadap bakteri yang diduga Blood Disease Bacterium. Uji hipersensitif dilakukan dengan cara menginjeksikan suspensi bakteri yang sebelumnya telah diisolasi dari pisang yang terserang layu bakteri ke daun tembakau (Wahyudi dkk., 2011).  Uji patogenisitas pada bibit pisang berumur 3 bulan yang dilakukan dengan cara merendam akar tanaman  pisang  dalam  suspensi bakteri  patogen selama 15 menit.  Kemudian tanaman pisang ditanam lagi pada polybag dan sisa suspensi disiramkan di sekitar tanaman pisang (Devi dkk., 2013).
Ekstrak gulma siam diambil dari bagian bunga, kemuning dan saliara diambil dari bagian daun masing- masing sebanyak 100 gram.  Kemudian, masing-masing bagian  tanaman  dirajang  lalu  direndam  dalam  air sebanyak 100 ml selama 0, 12 dan 24 jam.  Selanjutnya, bagian tanaman yang telah direndam, dihaluskan dengan mortar  dan  disaring  dengan  kain  sifon.    Tingkat
konsentrasi  yang  digunakan  untuk  ekstrak  kemuning yaitu 35%, 40%, 45%, 50%, 55% , ekstrak gulma siam yaitu 65%, 70%, 75%, 80% dan 85% dan ekstrak saliara yaitu 75%, 80%, 85%, 90% dan 95%.
Penyiapan medium BDB dilakukan dengan cara mengambil  1  tabung  reaksi  biakan  murni  BDB  dan dimasukkan dalam 5 ml air steril lalu dihomogenkan dengan  rotamixer.    Selanjutnya  5  ml  suspensi ditambahkan  dalam  100  ml  media  NA  kemudian dicampur dan diratakan serta dituang ke dalam cawan petri sebanyak ± 10 ml per cawan.
Pengujian  penghambatan  ekstrak  gulma  siam, kemuning dan  saliara  terhadap  pertumbuhan Blood Disease  Bacterium  secara in  vitro  dilakukan  dengan menggunakan  metode  difusi  agar.    Potongan  cakram kertas  saring  berdiameter  0,5  cm  direndam  dalam ekstrak gulma siam, kemuning dan saliara sesuai dengan konsentrasi  perlakuan  selama  2  menit  agar  meresap sampai  jenuh.    Kemudian,  cakram  kertas  yang  telah direndam tersebut ditiriskan lalu diletakkan pada media NA  yang  sebelumnya  telah  dicampur  dengan  biakan BDB.
Pengamatan  dan  pengumpulan  data  dilakukan pada  ketiga  subpercobaan  untuk  mengukur  diameter zona penghambatan yang terbentuk di sekeliling cakram kertas.  Pengamatan dilakukan selama 24 jam.  Zona penghambatan ditandai dengan adanya daerah bening di sekitar potongan kertas saring.

## HASIL  DAN  PEMBAHASAN

## Reaksi  Hipersensitif  Tanaman  Tembakau
Berdasarkan uji hipersensitif yang telah dilakukan diketahui bahwa bakteri yang telah diinjeksikan tersebut menimbulkan reaksi hipersensitif pada daun tembakau yang ditunjukan dengan adanya  gejala nekrotik yang terjadi  pada  daun  tanaman  tembakau.    Gejala  yang terlihat pada daun tembakau dimulai dengan terjadinya klorosis 1 hari setelah inokulasi (Gambar 1a) dan nekrosis yang terjadi sekitar 15 hari setelah inokulasi (Gambar 1b).
Gambar  1.  Gejala  klorosis  dan  nekrosis  pada  daun tembakau : 1 hari setelah inokulasi (a) dan 15 hari setelah inokulasi (b)

## Uji Patogenisitas pada Tanaman Pisang
Berdasarkan hasil pengamatan diketahui bahwa tanaman pisang yang telah diinokulasi menampakkan gejala  layu  bakteri  pisang.    Pada  awalnya  daun  layu dan menguning yang dimulai dari titik tumbuh kemudian terjadi nekrosis atau kematian jaringan (Gambar 2).
Pengaruh  Aplikasi  Ekstrak  Gulma  Siam  (C. odorata)  terhadap  Penghambatan  Pertumbuhan Blood  Disease  Bacterium  secara In  vitro
Tidak terdapat interaksi antara lama perendaman dengan tingkat konsentrasi ekstrak gulma siam dalam mempengaruhi  penghambatan  pertumbuhan Blood Disease Bacterium.  Semua tingkat konsentrasi dapat meningkatkan zona penghambatan dan konsentrasi 85% mempunyai diameter zona penghambatan yang tertinggi (Tabel 1).  Lama perendaman tidak berpengaruh nyata terhadap diameter zona penghambatan Blood Disease Bacterium (Tabel 2).
Pengaruh  Aplikasi  Ekstrak  Kemuning  (M. paniculata) terhadap Penghambatan Pertumbuhan Blood  Disease  Bacterium  secara In  vitro
Terdapat  interaksi  antara  lama  perendaman dengan  konsentrasi  ekstrak  kemuning  dalam menghambat pertumbuhan Blood Disease Bacterium. Pada perlakuan lama perendaman selama 24 jam dan 12 jam konsentrasi 55% cenderung paling menghambat pertumbuhan Blood  Disease  Bacterium (Tabel  3). Pada  perlakuan  tanpa  perendaman  (24  jam)  tingkat konsentrasi 45% mempunyai diameter penghambatan yang  paling  besar  tetapi  tidak  berbeda  nyata  dengan tingkat konsentrasi 50% dan 55% (Tabel 3).
Pengaruh Aplikasi  Ekstrak  Saliara  (L. camara) terhadap  Pertumbuhan Blood  Disease  Bacterium secara In vitro
Lama  perendaman  tidak  berpengaruh  nyata terhadap diameter zona penghambatan Blood Disease Bacterium (Tabel 5).  Tidak terdapat interaksi antara lama  perendaman  dengan  konsentrasi  ekstrak  saliara dalam  mempengaruhi  penghambatan  pertumbuhan Blood Disease Bacterium.  Semua tingkat konsentrasi dapat meningkatkan zona penghambatan dan konsentrasi 95%  mempunyai  diameter  zona  penghambatan  yang tertinggi (Tabel 4).
Senyawa khas yang terdapat pada bunga gulma siam yaitu flavonoid ( Collinz dan Franzblau, 1997 dalam Ulpa,  2008).    Senyawa  flavonoid  dilaporkan  dapat bersifat  sebagai  koagulator  protein.    Protein  yang mengalami  koagulasi  akan nonfungsi    menyebabkan kerusakan dinding sel bakteri (Sulastrianah dkk., 2014). Selain itu, flavonoid juga bekerja langsung pada membran
Gambar 2. Hasil inokulasi tanaman pisang : 7 hari setelah inokulasi (a2) dan 14 hari setelah inokulasi (b2) dan kontrol (a1 & b1)
Tabel 1.  Pengaruh taraf konsentrasi ekstrak gulma siam terhadap  diameter  zona  penghambatan pertumbuhan BDB
Konsentrasi (%) Diameter zona penghambatan (mm) 0 0,0  c 65 4,48 b 70 5,44 ab 75 5,52 ab 80 5,96 a 85 6,40 a BNT (0,05) 0,31
Keterangan:  Angka yang diikuti oleh huruf yang sama dalam  satu  kolom  tidak  berbeda  nyata pada uji BNT 5%. Lama perendaman (jam) Diameter zona penghambatan (mm) 0 4,39 12 5,23 24 4,28 Tabel 2.  Pengaruh lama perendaman bunga gulma siam terhadap  diameter  zona  penghambatan pertumbuhan BDB
barier  sel  bakteri  yang  menyebabkan  kebocoran  sel (Lamb, 2005).
Senyawa  yang  khas  terdapat  pada  daun kemuning antara lain terpenoid dan flavonoid (Dosoky, 2016).    Senyawa  yang  dapat  larut  dalam  air  yaitu flavonoid.   Menurut Arteel dan Sies (1999), senyawa flavonoid memiliki sifat khas pelarut organik, mudah terurai pada temperatur tinggi dan dapat larut dalam air. Flavonoid bekerja langsung pada membran barier sel bakteri yang menyebabkan kebocoran sel (Lamb, 2005).
Terpenoid umumnya larut dalam pelarut organik dan tidak larut dalam air (Ketaren 1987 dalam Ikawaty,
Konsentrasi (%) Diameter zona penghambatan (mm) 0 0,0  c 65 4,48 b 70 5,44 ab 75 5,52 ab 80 5,96 a 85 6,40 a BNT (0,05) 0,31 Lama perendaman (jam) Diameter zona penghambatan (mm) 0 4,39 12 5,23 24 4,28
Lama perendaman (jam) Konsentrasi (%) Diameter zona penghambatan (mm) 0 0 0,00 e 35 0,00 e 40 0,00 e 45 0,00 e 50 5,13 a 55 4,88 ab 12 0 0,00 e 35 1,25 de 40 0,00 e 45 2,94 cd 50 4,88 ab 55 6,06 a 24 0 0.00 e 35 3,19 bc 40 3,13 bcd 45 5,50 a 50 5,13 a 55 6,44 a BNT (0,05) 0,59
Tabel  3.  Pengaruh  lama  perendaman  dan  taraf konsentrasi ekstrak daun kemuning terhadap penghambatan pertumbuhan BDB
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama dalam  satu  kolom  tidak  berbeda  nyata pada uji BNT 5%.
Tabel  5.    Pengaruh  lama  perendaman  daun  saliara terhadap  diameter  zona  penghambatan pertumbuhan BDB Lama perendaman (jam) Diameter zona penghambatan (mm) 0 2,99 12 2,74 24 2,88 Tabel  4.  Pengaruh  taraf  konsentrasi  ekstrak  saliara terhadap  diameter  zona  penghambatan pertumbuhan BDB Konsentrasi (%) Diameter zona penghambatan (mm) 0 0,00 e 75 2,81 d 80 2,79 d 85 3,44 c 90 3,92 b 95 4,25 a BNT (0,05) 0,08
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama dalam  satu  kolom  tidak  berbeda  nyata pada uji BNT 5%.
2015).   Terpenoid mempunyai sifat anti bakteri yaitu bereaksi dengan porin pada membran luar dinding sel bakteri, membentuk ikatan polimer yang kuat sehingga mengakibatkan rusaknya porin. Rusaknya porin yang merupakan  pintu  keluar  masuknya  senyawa  akan mengurangi  permeabilitas  dinding  sel  bakteri (Sulastrianah dkk., 2014). Dengan demikian, diantara kedua  senyawa  aktif  hanya  salah  satu  senyawa  yang bekerja  dalam  menghambat  bakteri Blood  Disease Bacterium yaitu flavonoid.
Daun saliara memiliki senyawa yang khas antara lain tanin, terpenoid dan flavonoid  (Novianti,  2013). Senyawa kimia yang dapat larut dalam air dari ketiga senyawa tersebut antara lain tanin dan flavonoid.  Tanin dapat larut dalam air dan apabila dilarutkan dalam air panas kelarutannya akan bertambah besar (Rozanna dan Silvia, 2014).  Sedangkan flavonoid mudah terurai pada temperatur tinggi dan dapat larut dalam air (Arteel dan Sies,1999).  Senyawa flavonoid diduga menyebabkan terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel bakteri,
mikrosom, dan lisosom sebagai hasil interaksi antara flavonoid dengan  DNA bakteri.    Kemudian  senyawa tanin diduga berhubungan dengan kemampuannya dalam menginaktivasi  adhesin  mikroba,  enzim,  dan  protein transport pada membran sel (Novianti, 2013).  Kedua senyawa inilah yang diduga menghambat pertumbuhan Blood  Disease  Bacterium.

## KESIMPULAN
Simpulan yang diperoleh berdasarkan penelitian yang dilakukan yaitu pada percobaan dengan ekstrak gulma  siam,  interaksi  antara  lama  perendaman  dan tingkat konsentrasi tidak berpengaruh nyata terhadap penghambatan  pertumbuhan  BDB  secara in  vitro. Lama  perendaman  juga  tidak  meningkatkan penghambatan,  sedangkan  tingkat  konsentrasi  secara nyata meningkatkan penghambatan.  Tingkat konsentrasi 85% sudah efektif menekan pertumbuhan BDB secara in  vitro.
Pada percobaan dengan ekstrak daun kemuning, faktor  lama  perendaman  berinteraksi  secara  nyata dengan faktor tingkat konsentrasi dalam meningkatkan

## Jurnal Agrotek Tropika 5(1): 40-45, 2017
penghambatan pertumbuhan BDB.  Tingkat konsentrasi 45% sudah efektif menekan pertumbuhan BDB secara in  vitro.
Pada percobaan dengan ekstrak saliara, interaksi antara lama perendaman dan tingkat konsentrasi tidak berpengaruh  nyata  terhadap  penghambatan pertumbuhan BDB secara in vitro.  Lama perendaman juga  tidak  meningkatkan  penghambatan,  sedangkan tingkat  konsentrasi  secara  nyata  meningkatkan penghambatan.  Tingkat konsentrasi 95% sudah efektif menekan pertumbuhan BDB secara in vitro.

## DAFTAR  PUSTAKA
Aeny,  T.  N.  2001. Patogenisitas  bakteri  layu  pisang (Ralstonia  sp.) pada  beberapa  tanaman  lain. J. HPT Tropika. 1 (2): 60-62.
Aeny,  T. N., R. Suharjo, dan S. Mujim. 2007. Skrining bakteri  antagonis Ralstonia  sp.  penyebab penyakit layu bakteri pisang di Lampung. J. HPT Tropika 7 (2): 100-110.
Arteel  G.E.  dan  H.  Sies.  1999. Protection  against peroxynitrite  by  cocoa  polyphenol  oligomers. FEBS Letters. 462: 167-170
CABI. 2016. Ralstonia  solanacearum (bacterial wilt of  potato).  http://www.cabi.org/isc/datasheet/ 45009, [10 Februari 2015].
Dharmautama,  M.,  M.  Edi,  dan  S.A.  Mardi.  2014.

## Pertumbuhan  Bakteri  Plak  dan Candida Albicans Pada Basis Gigi Tiruan Lepasan Akrilik
Setelah  Perendaman  dalam  Infusa  Bunga Rosella. Research Report. Dipublikasikan oleh Bagian  Prostodonsia  Fakultas  Kedokteran Gigi.Universitas Hasanuddin. Makassar. Devi,
R.K.,  L.Q. Aini,  dan  A.L.  Abadi.  2013. Uji metode  inokulasi  dan  patogenisitas Blood Disease  Bacterium (BDB)  pada  buah  pisang (Musa sp.). Jurnal HPT. 1(1): 40-46.
Dosoky, N.S., P. Satyal, T.P. Gautam, dan W.N. Setzer.
2016. Composition and  biological activities  of Murraya paniculata (L.) jack essential oil from Nepal. Articles Medicines. 3(7): 1-10.
Edeen-green, S.J. 1994. Banana Blood Disease. Parc Scientifique Agropolis. France.
Ikawaty, A.  L.  2015. Ekstraksi  minyak  atsiri  bunga krisan  (Chrysanthemum  cinerariaefolium) dengan  pelarut    etanol  dan  n-heksana.  Tugas Akhir. Universitas Negeri Semarang. Semarang. hlm: 1-23.
Lamb, A. J. 2005. Antimicrobial activity of flavonoids.
International  Journal of Antimicrobial Agents.
26: 343-356.
Lestari, A., M. Jamhari, dan I.N. Kundera. 2013. Daya hambat  ekstrak  daun  tembelek  (Lantana camara  L.) terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli. e-Jipbiol.  1:  42-49.
Novianti.  2013. Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol daun  tembelekan  (Lantana  camara  L.) terhadap  Staphylococcus  aureus  dan Escherichia  coli  dengan  metode  mikrodilusi CLSIM07-A9.  Jurnal  Ilmiah  Farmako  Bahari 4(2): 5-15.
Raharja,  F.,  Rosnaeni,  dan  D.  Wardani.  2004. Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Kemuning (Murraya  Paniculata  (L.)  Jack) terhadap  Pertumbuhan  Escherichia  coli secara  In  Vitro.  Bagian  Mikrobiologi  dan Farmakologi  Fakultas  Kedokteran.  Universitas Kristen Maranatha.
Rozanna,  S.I.  dan  R.Y.  Silvia.  2014. Pengaruh perbandingan  pelarut  etanol-air  terhadap kadar  tanin  pada  sokletasi  daun  gambir (Uncaria gambir Roxb). SAGU. 13(1): 1-7.
Safni, I., Ilse, C., Paul, D.V., Mark, F., Lindsay, S. and Ulrike, K. 2014. Polyphasic taxonomic revision of the Ralstonia solanacearum species complex. International  Journal  of  Systematic  and Evolutionary  Microbiology  64:  3087-3103.
Suharjo,  R.,  S.  Subandiyah,  dan  E.  Martono.  2008.
Hubungan  antara  kedatangan  frekuensi imago  Erionata  thrax  pada  bunga  pisang  dan keterjadian  penyakit  layu  bakteri  pisang  pada lahan  sawah,  tegalan  dan  pekarangan. J. HPT Tropika. 8(1): 47-54.
Sulastrianah,  Imran,  dan  Fitria  E.S.  2014. Uji  Daya Hambat  Ekstrak  Daun  Sirsak  (Annona muricata L.)  dan  Daun  Sirih  (Piper  betle L.) terhadap  Pertumbuhan  Bakteri  Escherichia coli.  Bagian  Farmakologi  FK  UHO.  Kendari. Sulawesi Tenggara.
Trisnadi, R. 2016. Pestisida Ramah Lingkungan Untuk Mengendalikan  Hama  dan  Penyakit  Tanaman. Dinas Perkebunan dan Kehutanan. Probolinggo.
Triyono, A. 2010. Pengaruh konsentrasi ragi terhadap karakteristik  sari buah dari  beberapa varietas pisang  (Musa  paradisiaca  L.). Prosiding Seminar  Nasional  Teknik  Kimia  “Kejuangan”

## 26 Januari. Balai Besar Penggunaan Teknologi
Tepat Guna. Yogyakarta. Hlm: 1-7.
Ulpa,  M.  2008. Studi  habitat  dan  pengujian  ekstrak gulma  siam  (Chromolaena  odorata)  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  penyebab penyakit  layu  pisang  (Ralstonia  sp.) secara  in vitro. Skripsi.  Universitas  Lampung.  Bandar
Lampung. Hlm: 1-45.
Wahyudi, A.T., S. Meliah, dan A.A. Nawangsih. 2011.
Xanthomonas  oryzae  pv. oryzae  bakteri penyebab  hawar  daun  ada  padi:  isolasi, karakterisasi,  dan  telaah  mutagenesis  dengan transposon.  MAKARA.  15(1):  89-96.