## UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA DARI JAMUR LAUT YANG BERASOSIASI DENGAN ORGANISME LAUT SPONS

## Callyspongia aerizusa
Fransisca Macpal 1) , Adithya Yudistira 1) , Defny Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Sponge  is  the  lowest  level  hollow  animal  without  a  spine.  Sponges  are  one  of  the components of coral reef biota that have bioactive potential that has not been widely used. This  study  aims  to  determine  whether  there  is  antimicrobial  activity  of  marine  fungi associated with sponge Callyspongia aerizusa obtained from Southeast Minahasa Regency, North Sulawesi, against the growth of microbes such as Staphylococcus aureus, Escherichia coli  and  Candida  albicans.  Samples  were  obtained  then  extracted  by  maceration  using acetone  and  fractionated  using  liquid-liquid  fractionation  with  ethyl  acetate  solvents.  The results  of  this  study  indicate  that  the  extract  from  the  fungus  associated  with  the Callyspongia aerizusa sponge has activity against Escherichia coli and Candida albicans.
Keywords : Antimicrobials, Callyspongia aerizusa, Candida albicans, Escherichia coli,
Marine fungi, Staphylococcus aureus.

## ABSTRAK
Sponge  (spons  laut)  adalah  hewan  berongga  tanpa  tulang  belakang  yang  paling  rendah tingkatannya. Spons merupakan salah satu komponen biota penyusun terumbu karang yang mempunyai  potensi  bioaktif  yang  belum  banyak  dimanfaatkan.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  apakah  terdapat  aktivitas  antimikroba  dari  jamur  laut  yang  berasosiasi dengan  spons Callyspongia  aerizusa yang  di  peroleh  dari  Kabupaten  Minahasa  Tenggara, Sulawesi Utara, terhadap pertumbuhan mikroba seperti Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Candida albicans . Sampel diperoleh kemudian diekstraksi secara maserasi dengan aseton  dan  difraksinasi  dengan  menggunakan  fraksinasi  cair-cair  menggunakan  pelarut  etil asetat. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak dari jamur yang berasosiasi dengan spons Callyspongia  aerizusa memiliki  aktivitas  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan bakteri Candida albicans.
Kata kunci : Antimikroba, Callyspongia aerizusa, Candida albicans Escherichia  coli, .Jamur laut, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Perairan laut Indonesia kaya akan berbagai  biota  laut  baik  flora  maupun fauna.  Demikian  luas  serta  keragaman jasad–jasad  hidup  yang  kesemuanya membentuk  dinamika  kehidupan  di  laut yang berkesinambungan (Nybakken, 1988). Provinsi Sulawesi Utara merupakan salah satu provinsi di Indonesia  yang  memiliki  kondisi  alam yang unik dengan keanekaragaman hayati yang  tinggi.  Provinsi  Sulawesi  Utara merupakan  wilayah  yang  potensial, strategis  dan  memiliki  garis  pantai  yang panjang  kurang  lebih  sekitar  1.985km (Ruyitno, 2002).
Sponge  (spons  laut)  adalah  hewan berongga  tanpa  tulang  belakang  yang paling  rendah  tingkatannya.  Dikatakan hewan  tingkat  rendah  karena  struktur tubuhnya  hanyalah  suatu  benda  seperti jelly  (mesohyl)  yang  ditutup  oleh  2 lapisan.  Epidermisnya  adalah Pinakosit dan  Endodermisnya  adalah Koanosit. Spons  merupakan  salah  satu  komponen biota  penyusun  terumbu  karang  yang mempunyai  potensi  bioaktif  yang  belum banyak  dimanfaatkan.  Hewan  laut  ini mengandung senyawa aktif yang persentase  keaktifannya  lebih  besar dibandingkan  dengan  senyawa-senyawa yang  dihasilkan  oleh  tumbuhan  darat (Bugni,2004).
Potensi  jamur  yang  berasal  dari biota  laut  ( marine-derived  fungi )  sebagai antibiotika sudah dikenal seja ditemukannya  cephalosporin  C,  yang diisolasi dari jamur Acremonium
chyrsogenum pada tahun 1946 di perairan Sardinia.  Namun,  penelitian  terhadap marine-derived  fungi baru  berkembang sejak  10  tahun  terakhir  (Suciati et  al ., 2014).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan Mei 2019 sampai bulan September 2019  di  Laboratorium  Farmasi  Lanjut Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam
Ratulangi

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  masker,  sarung tangan,  gunting, scuba  diving ,  kantong plastik,  kamera  bawah  laut,  wadah  kaca, pisau, erlenmeyer ( pyrex ), corong, rotary evaporator, timbangan digital, gelas ukur ( pyrex ), gelas kimia ( pyrex ), cawan petri, corong  pisah  ( pyrex ),  autoklaf,  pinset, spatula,  pembakar  spritus, magnetic stirrer ,  pipet  tetes,  mikro  tub,  batang pengaduk, laminar  air  flow, rak  tabung reaksi,  tabung  reaksi,  lemari  pendingin, inkubator, cakram ( paper disc) , mikropipet,  vial,  jangka  sorong,  jarum ose.
Bahan-bahan yang digunakan yaitu  bakteri  uji Staphylococcus  aureus ATCC  25923, Escherichia  coli ATCC 25922,  jamur  uji Candida  albicans ATCC 1231 , etanol, aquadest, etil asetat, aseton, Potato  Dextro  Agar , Nutrient Agar , Glukosa ,
Polypeptone,
MgSO 4 .7H 2 O, Yeast  Extract ,  KH 2 PO 4 , Sukrosa, Starch,  Malt  Extract,  Ebios, larutan  H 2 SO 4 1%,  larutan  NaCl  0,9%, kloramfenikol paperdisc ,  label,  spidol permanen, tissue,  aluminium  foil ,  kertas saring, kapas.
Pengambilan Sampel dan Persiapan Sampel
Sampel  spons Callyspongia aerizusa diambil  dari  perairan  desa Tumbak  kecamatan  Pusomaen  Minahasa Tenggara  Sulawesi  Utara  menggunakan alat  bantu (Scuba  Diving), diambil kemudian dimasukan ke dalam ziper bag dan disimpan dalam cooling box berisi es batu  untuk  dibawah  ke  Laboratorium Farmasi  Lanjut  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam  Universitas Sam Ratulangi.

## Isolasi dan purifikasi jamur yang berasosiasi dengan spons
Isolasi  jamur  dilakukan  dengan cara sampel dibersihkan dengan  aquades kemudian dipotong kecil-kecil menggunakan  gunting  dan  pinset  dan dimasukkan  ke  dalam  media  PDA  yang telah  disiapkan.  Sampel  ditanam  di  atas media  PDA  dengan  tiga  titik  pusat  yang berbentuk  segitiga.  Cawan  petri  yang berisi  sampel  ditutup  dan  direkatkan menggunakan parafilm, kemudian diinkubasi  pada  suhu  ruangan  selama 7x24  jam.  Setelah  didapatkan  isolat jamur,  dilakukan  pemurnian  dengan  cara isolat  jamur  diinokulasikan  ke  media PDA  yang  baru,  kemudian  diinkubasi pada  suhu  ruangan  selama  14x24  jam. Selanjutnya diidentifikasi morfologi secara  makroskopik  untuk  menghasilkan isolat jamur murni.

## Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan pada campuran  miselium  jamur  dan  broth dengan  menggunakan  200  mL  aseton.
Ekstraksi
dilakukan dengan
menggunakan shaker pada  suhu  ruangan dengan  kecepatan  150  rpm  selama  5 menit. Selanjutnya dipisahkan antara fase air dan aseton menggunakan corong pisah dan  kertas  saring.  Setelah  didaptkan filtrat  dari  hasil  penyaringan  kemudian diuapkan dengan rotary evaporator.

## Fraksinasi
Ekstrak  cair  dari  hasil  evaporasi, dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  pelarut  etil  asetat  sebanyak 200 mL setelah itu dikocok dalam corong pisah sampai homogen. Dibiarkan sampai terbentuk  dua  lapisan.  Masing-masing lapisan  ditampung  pada  wadah  yang berbeda.  Lapisan  H 2 O  (air)  kemudian difraksinasi lagi menggunakan pelarut etil asetat  sebanyak  200  mL.  Hal  ini dilakukan sebanyak tiga kali. Selanjutnya fraksi  etil  asetat  dikumpulkan  kemudian pelarut  diuapkan  menggunakan rotary evaporator sampai  diperoleh  ekstrak kasar  yang  akan  digunakan  untuk  uji aktivitas antimikroba.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  akan  digunakan dalam penelitian uji aktivitas antimikroba harus  disterilkan  terlebih  dahulu.  Alat- alat gelas disterilkan menggunakan autoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  ±  15 menit  pinset,  gunting,  dan  jarum  ose direndam  dengan  alkhohol  dan  dibakar dengan  pembakaran  di  api  langsung  dan media  disterilkan  menggunakan  autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit.

## Pembuatan Media
1. Media Potato Dextros Agar (PDA)
Sebanyak  4,2  gram Potato  Dextros Agar (PDA) ditambahkan  air  laut
sampai  100  mL  diaduk  sampai homogen.  Media  tersebut  disterilkan di  dalam  autoklaf  pada  suhu  121˚C selama 15 menit, kemudian dipindahkan  pada  cawan  petri  dan didinginkan. Media tersebut
digunakan sebagai media isolasi jamur.
2. Media Nutrien Agar (NA)
Sebanyak  3,36  gram Nutrien  Agar ditambahkan  aquades  sampai  120  mL diaduk sampai homogen. Media tersebut  disterilkan  di  dalam  autoklaf pada  suhu  121˚C    selama  15  menit, kemudian  dipindahkan  pada  cawan petri dan didinginkan (Nuraina, 2015).

## 3. Media Agar Miring
Nutrien  agar (NA)  sebanyak  0,784 gram  dilarutkan  dalam  28  ml  aquades dan Potato  Dextros  Agar (PDA)
sebanyak 0,588 gram dilarutkan dalam 14 mL aquades menggunakan erlenmeyer dan diaduk sampai homogen.  Media  tersebut  disterilkan di  dalam  autoklaf  pada  suhu  121˚C selama  15  menit,  kemudian  dibiarkan pada  suhu  ruangan  sampai  media memadat pada kemiringan 300. Media agar miring digunakan untuk inokulasi mikroba (Lay, 1994).
4. Media Kultur Cair
1. Sebanyak 2 gram glukosa, 0,5 gram polypeptone , 0,05 gram MgSO 4 .7H 2 O,  0,2  gram yeast extract ,  0,1  gram  KH 2 PO 4 ,  0,1 gram agar dilarutkan dalam 100 mL aquades  menggunakan  erlenmeyer dan  diaduk  sampai  homogen  dan disterilkan.  Kemudian  isolat  jamur murni  diinokulasikan  ke  dalam
media  pembenihan  dan dishaker di dalam  inkubator shaker selama 3x24 jam (Yamazaki et al., 2012).
2. Sebanyak  4,5  gram  sukrosa,  4,5 gram starch , 1,5 gram extract malt , 0,45  gram ebios ,  0,75  KH 2 PO 4 ,
0,075  gram  MgSO 4 dilarutkan dalam 150 mL aquades menggunakan erlenmeyer dan diaduk sampai homogen dan disterilkan.
Kemudian diinokulasikan  bibit  kultur  dari media  pembenihan  dan dishaker di dalam  inkubator shaker selama 7x24 jam (Yamazaki et al., 2012).

## Pembuatan Suspensi Mikroba Uji
Mikroba  yang  telah  diinokulasi diambil dengan jarum ose steril kemudian disuspensikan  ke  dalam  tabung  reaksi yang  berisi  7  mL  larutan  NaCl  0.9%, setelah  itu divortex hingga  diperoleh kekeruhan yang sama dengan larutan Mc . Farland Perlakuan  yang  sama  dilakukan pada jamur uji (Dwyana et al ., 2012).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif
Kontrol  positif  yang  digunakan yaitu  antibiotik  kloramfenikol.  Kontrol negatif  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  menggunakan  metanol,  dengan cara  membuat  larutan  stok  metanol dengan  mengambil  sebanyak  200  μl metanol  kemudian  ditotolkan  pada paper disc.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat  larutan  uji  dengan  cara ditimbang ekstrak kasar jamur dari spons Callyspongia aerizusa. sebanyak  1  mg, kemudian dilarutkan dalam 200ml metanol sehingga menghasilkan
konsentrasi larutan uji sebesar 250 μg/50 μl (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu metode kertas cakram ( cara  Kirby  and  Bauer ).  Aktivitas penghambatannya diuji terhadap Staphylococcus  aureus ATCC  25923
(bakteri  Gram  positif), Eschrichia  coli ATCC  25922  (bakteri  Gram  negatif)  dan
Candida  albicans ATCC  1231  (jamur), yang  digunakan  sebagai  mikroorganisme uji.  Pada  pengujian  aktivitas  antimikroba ini,  cakram  ( paper  disc) yang  digunakan berukuran  6  mm.  Suspensi  mikroba kemudian diinokulasikan ke dalam media dan  dihomogenkan.  Kemudian  media yang telah diinokulasi mikroba dituangkan  ke  dalam  cawan  petri  dan tunggu  sampai  media  memadat.  Masing- masing  cawan  petri  diberi  label  dan nomor sampel yang sesuai.
Sampel  yang  telah  ditentukkan konsentrasinya  (250μg/50μL)  ditotolkan pada  masing-masing  cakram  dengan menggunakan mikropipet. Letakkan kertas  cakram  yang  telah  ditotolkan sampel  uji  dengan  pinset  kedalam  cawan petri  lalu  diinkubasi  selama  1  x  24  jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah 1x24  jam  masa  inkubasi.  Zona  bening merupakan  petunjuk  kepekaan  mikroba terhadap bahan antimikroba yang digunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan  dengan  lebar  diameter  zona hambat.  Diameter  zona  hambat  diukur kemudian  dikategorikan  kekuatan  daya
antimikrobanya berdasarkan penggolongan (Vandepite, 2005).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi dan Purifikasi Jamur yang Berasosiasi dengan Spons
Koloni  jamur  yang  yang  tumbuh diamati  perbedaan  karakteristik  secara mikroskopik. Dalam penelitian ini setelah 3x24  jam,  isolat  jamur  yang  tumbuh terlihat seperti benang-benang halus yang berwarna  putih.  Selanjutnya  isolat  jamur yang  tumbuh  dilakukan  dengan  cara diinokulasikan  ke  media  PDA  yang  baru dan  diinokulasikan  selama  14x24  jam pada  suhu  ruangan.  Hal  ini  bertujuan untuk  dapat  memisahkan  koloni-koloni jamur  agar  dapat  menghasilkan  isolat jamur yang karakteristik secara mikroskopik  yang  mempunyai  morfologi yang  sama  agar  dapat  disebut  isolat jamur murni.

## Kultur Cair
Dalam  penelitian  ini  isolat  jamur dikultivasi  sebanyak  dua  kali  dengan periode  yang  berbeda.  Kultivasi  yang pertama  dilakukan  selama  3x24  jam untuk menghasilakn bibit kultur.
Kultivasi  yang  kedua  dilakukan  selama 14x24  jam  untuk  menghasilkan  senyawa dari  bibit  kultur.  Kultivasi  dilakukan dengan  menggunakan  metode shaker pada  suhu  27 0 C  dengan  kecepatan  150 rpm,  hal  ini  bertujuan  agar  semua  nutrisi yang  dikandung  dalam  medium  dapat digunakan  oleh  jamur  secara  optimal sebagai  bahan  untuk  metabolismenya sehingga  senyawa  antimikroba  dapat dihasilkan dengan optimal.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Setelah  hasil  produksi  dari  kultur cair  didapatkan,  selanjutnya  tahap  yang dilakukan  adalah  ektraksi.  Hasil  dari kultur cair di ekstraksi dengan menggunakan  pelarut  aseton.  Pengunaan pelarut ini dikarenakan aseton merupakan pelarut  polar  dan  mudah  menguap. Aseton  yang  bersifat  polar  akan  menarik senyawa  yang  bersifat  polar  dan  non polar ( Sarastani  et  al.,  2002).  Proses ekstraksi  bertujuan  untuk  memisahkan senyawa aktif yang ada di dalam sampel, sehingga  adanya  suatu  proses  pemisahan dua atau lebih komponen yang terkandung  dalam  sampel  oleh  suatu pelarut  (Suryanto,  2012).  Proses  ektraksi tidak  dilakukan  dengan  proses  ekstraksi panas  karena  dikhawatirkan  adanya golongan  senyawa  yang  tidak  tahan panas.  Ekstraksi  yang  dilakukan  adalah dengan  menggunakan  metode  maserasi, proses maserasi dilakukan dengan perendaman  miselium  dan  broth  jamur dengan  menggunakan  pelarut  aseton. Setelah  maserasi  selama  6  jam,  disaring untuk  memisahkan  miselium  dan  filtrat. Hasil  dari  filtrat  kemudian  diuapkan menggunakan rotary evaporator.
Pengunaan  alat  ini  bertujuan  uuntuk menguapkan  pelarut  dan  menghasilkan senyawa ekstraksi yang diinginkan. Hasil dari proses ini adalah ekstrak kental yang kemudian  ditambahkan  pelarut  etil  asetat untuk dilakukan fraksinasi.

## Uji Aktivitas Antimikroba
Dalam  penelitian  ini  pengujian aktivitas  antimikroba  dari  jamur  yang berasosiasi  dengan  spons Callyspongia aerizusa .  Diuji  pada Staphylococcus aureus ATCC  25923  untuk  mewakili
bakteri golongan Gram positif,
Eschrichia  coli ATCC  25922  untuk mewakili  bakteri  golongan  Gram  negatif dan Candida  albicans ATCC  1231 mewakili  golongan  jamur.  Penggunaan mikroba uji ini untuk mengetahui apakah ekstrak  kasar  dari  jamur  berasosiasi memiliki  aktivitas  sebagai  antimikroba serta apakah mempunyai spektrum diperluas  yaitu  dapat  membunuh  bakteri Gram  positif,  Gram  negatif  dan  jamur atau  mempunyai  spektrum  sempit  yaitu hanya  dapat  membunuh  salah  satu  dari bakteri  Gram  positif,  Gram  negatif  atau jamur.
Pada  pengujian  ini  menggunakan metode  difusi  agar.  Metode  difusi dilakukan  dengan  cara disc  diffusion (difusi  cakram)  yaitu  kertas  yang  berisi agen  antimikroba  untuk  menentukan aktivitas  antimikroba.  Metode  difusi cakram dipilih karena memiliki kelebihan dapat  digunakan  untuk  senyawa  non polar,  cepat,  mudah  dan  sederhana (Valgas et al ., 2007). Kertas cakram yang berisi agen antimikroba diletakkan dipermukaan  media  agar  yang  sudah diinokulasikan mikroorganisme uji. Agen antimikroba  akan  berdifusi  dari  kertas cakram  menuju  ke  media  agar  dan melakukan  penghambatan  pertumbuhan mikroorganisme  yang  diuji.  Area  jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan  mikroorganisme  oleh  agen antimikroba  pada permukaan media agar. Pada  pengujian  ini,  hasil  yang diperoleh yaitu terbentuknya zona hambat disekeliling cakram yang ditandai dengan adanya area bening. Hal ini menunjukkan bahwa adanya kepekaan mikroba terhadap ekstrak jamur yang diisolasi dari spons Callyspongia  aerizusa .  Dalam
pengujian  ini  digunakan  kontrol  positif dan  negatif.  Penggunaan  kontrol  positif berfungsi  sebagai  kontrol  dari  zat  uji, dengan  membandingkan  diameter  daerah hambat  yang  terbentuk  (Dwijendra, 2014).  Sedangkan  tujuan  penggunaan kontrol  negatif  agar  dapat  mengetahui apakah  ada  atau  tidak  pengaruh  pelarut terhadap pertumbuhan mikroba uji, sehingga dapat dipastikan bahwa aktivitas yang  ditunjukkan  oleh  ekstrak  ialah senyawa yang digunakan. Dalam penelitian ini, kontrol negatif menggunakan pelarut metanol.
Tabel  1  Hasil  Pengukuran  rata-rata  zona hambat antimikroba ekstrak jamur yang  berasosiasi  dengan  spons Callyspongia  aerizusa terhadap bakteri S. aureus ATCC 25923, E. coli ATCC  25922  dan  jamur C. albicans ATCC 1231
Hasil yang didapat pada penelitian ini  yaitu  adanya  zona  bening  terbentuk disekitaran  kertas  cakram.  Pengukuran zona  hambat  dilakukan  dengan  cara mengukur  jarak  dari  tepi  ke  batas lingkaran  zona  hambat  menggunakan jangka  sorong  (0,01mm)  pada  beberapa isi  kertas  cakram  dan  dirata-ratakan. Menurut  Susanto  (2012),  Penilaian  zona hambat di golongkan berdasarkan kategori  diameter  zona  hambat  di  mana diameter ≤ 5 mm berarti daya hambatnya
lemah,  jika  6-10  mm  berarti  kekuatan daya  hambatnya  sedang,jika  11-20  mm berarti  daya  hambatnya  kuat,  dan  jika  di atas  21  mm  berarti  daya  hambatnya sangat kuat .
Dari pengukuran rata-rata
diameter  zona  hambat  (Tabel  1  ),  daya antimikroba dari sampel spons Callyspongia  aerizusa pada  bakteri S. aureus ATCC 25923 hasil yang diperoleh yaitu  tidak  terbentuknya  zona  hambat disekeliling cakram yang ditandai dengan tidak  terbentuk  area  bening.  Hal  ini menunjukkan tidak ada kepekaan mikroba terhadap sampel spons Callyspongia  aerizusa. Pada  bakteri E. coli ATCC  25922  hasil  yang  diperoleh sebesar  6,63  mm  hal  ini  termasuk  dalam kekuatan  sedang.  Dan  untuk  jamur C. albicans ATCC 1231 hasil yang diperoleh  6,78  mm  hal  ini  termasuk dalam kekuatan sedang. Kontrol positifnya digunakan antibiotik kloramfenikol,Kloramfenikol  digunakan untuk  melawan  infeksi  yang  disebabkan oleh  beberapa  jenis  bakteri  Gram  positif dan  bakteri  Gram  negatif.  Kloramfenikol mempunyai khasiat bakterisid (Sumardjo, 2009) . Penggunaan kontrol positif berfungsi  sebagai  kontrol  zat  uji,  dengan membandingkan  diameter  hambat  yang terbentuk.  Dari  hasil  pengujian  kontrol positif menghasilkan adanya zona hambat dari  bakteri S.  aureus ATCC  2592  26,2 mm  termasuk  sangat  kuat,  pada  bakteri  , E.  coli ATCC  25922  22,2  mm  termasuk sangat  kuat,  pada  jamur C.  albicans ATCC  1231  23,9  mm  termasuk  sangat kuat. Penggunaan metanol sebagai kontrol negatif diperkuat dengan penelitian  oleh  Ginting  (2010),  yang menyatakan  bahwa  kontrol  metanol  pada
uji  antibakteri  tidak  menunjukan  adanya aktivitas sehingga dapat dipastikan bahwa metanol  tidak  berpengaruh  terhadap aktivitas  yang  terbentuk.  Dari  hasil pengujian  diperoleh  kontrol  negatif  tidak terbentuk zona hambat . Hal ini membuktikan    bahwa  kontrol  yang digunakan  tidak  berpengaruh  pada  uji antimikroba,  sehingga  daya  hambat  yang terbentuk  tidak  dipengaruhi  oleh  pelarut methanol  melainkan  karena  aktivitas senyawa yang ada pada spons Callyspongia aerizusa.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa,  jamur  laut  yang  berasosiasi dengan spons Callyspongia aerizusa yang diperoleh  dari  Desa  Tumbak,  Kecamatan Pusomaen,  Minahasa  Tenggara  memiliki aktivitas menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia  coli dan  jamur Candida albicans yang memiliki kategori kekuatan daya hambat sedang.

## SARAN
Berdasarkan penelitian  yang telah dilakukan  penulis  memberikan  saran bahwa  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  mengenai  uji  aktivitas  antimikroba terhadap  jamur  yang  berasosiasi  dengan spons,  dengan  beragam  metode  uji  dan tempat pengambilan sampel yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Bugni,  T.  S  and  Ireland,  C.  M.  2004.
Marine-derived fungi: A Chemically  and  Biologically Diverse Group of Microorganisms. Natural Production . 21 : 143-63. Dwijendra, I. M. 2014. Aktivitas Antibakteri  dan  Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea  herbacea  yang Diperoleh  dari  Teluk  Manado [skripsi]. Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Dwyana,  Z  dan  Johanes  E.  2012. Uji
Efektivitas  Ekstrak  Kasar  Alga Merah Eucheuma Cottoni Sebagai  Antibakteri  Terhadap Bakteri Patogen . [Skripsi]. Program Studi Biologi Universitas Hasanudin,
Makassar.
Ginting, E. L., Warouw, V., Suleman, R.
W.  2010. Aktivitas  Antibakteri Dari  Ekstrak  Kasar  Bakteri
Yang Berasosiasi Dengan Sponge  Acanthostrongylophora sp. [skripsi] . Fakultas  Perikanan dan  Ilmu  Kelautan  Universitas Sam Ratulangi, Manado.