## UJI DAYA HAMBAT PERMEN JELI LIDAH BUAYA TERHADAP
Streptococcus mutans

## INHIBITORY POTENTIAL OF ALOE VERA JELLY CANDY TOWARDS Streptococcus mutans
Sayidati Mutiah 1 , Shanty Chairani 2 , Hema Awalia 3 1,2,3 Bagian Kedokteran Gigi dan Mulut, Fakultas Kedokteran, Universitas Sriwijaya Email korespondensi: shanty.c@fk.unsri.ac.id

## ABSTRAK
Latar belakang : Karies merupakan salah satu permasalahan rongga mulut yang sering terjadi, dengan bakteri utama penyebabnya adalah Streptococcus mutans . Lidah buaya sudah diketahui memiliki efek antibakteri terhadap S. mutans. Lidah buaya dapat dikembangkan menjadi berbagai sediaan, yang salah satunya dalam bentuk permen jeli.  Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui daya hambat permen jeli lidah buaya terhadap pertumbuhan bakteri S. mutans . Metode : Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratoris secara in vitro digunakan dalam  penelitian  ini.  Metode  difusi  sumuran  digunakan  untuk  menguji  aktivitas  antibakteri S. mutans , dan terdapat dua kelompok sampel yaitu permen jeli lidah buaya dan permen jeli tanpa lidah buaya. Aktivitas antibakteri permen jeli kemudian diukur dengan menghitung diameter zona hambat yang terbentuk dalam satuan milimeter menggunakan jangka sorong. Independent T-test digunakan untuk menganalisis hasil pengukuran zona hambat dan menilai perbedaan signifikansi antarkelompok uji.
Hasil :  Permen  jeli  lidah  buaya  dapat  menghambat  bakteri S.  mutans secara  signifikan dibandingkan dengan permen jeli tanpa lidah buaya (p<0,05). Kesimpulan :  Permen  jeli  lidah  buaya  berpotensi  mencegah  karies  karena  memiliki  aktivitas antibakteri terhadap bakteri S. mutans . Kata kunci : antibakteri, lidah buaya, S. mutans .

## ABSTRACT
Background:  The  bacteria  which  has  an  important  role  in  the  dental  cariess  process  is Streptococcus mutans. Antibacterial agent which can inhibit or kill Streptococcus mutans there was  aloe  vera  that  can  be  made  as  a  product  like  jelly  candy.  The  aim  of  this  study  was  to determined antibacterial activity of aloe vera jelly candy on the growth of  Streptococcus mutans. Methods: An in vitro experimental laboratory used in this study. Well diffusion method was used to determined antibacterial activity of Streptococcus mutans and there were two sample groups: aloe vera jelly candy and jelly candy without aloe vera. Antibactrial activity of jelly candy was measured by calculated zone of inhibiton in milimeter using caliper. Independent T-test was used to analyzed the mean zone of inhibiton and assess the difference in significance between the test groups.
Results: Aloe vera jelly candy could inhibit Streptococcus mutans significantly compared to jelly candy without aloe vera (p<0,05).
Conclusion: Aloe vera jelly candy had the potential to be used for prevention of dental caries because it had antibacterial activity against Streptococcus mutans.
Keywords: antibacterial, aloe vera , Streptococcus mutans .

## PENDAHULUAN
Karies adalah hilangnya mineral gigi karena asam yang dihasilkan dari fermentasi  gula  oleh  mikroorganisme. 1 Faktor utama etiologi karies yaitu permukaan  gigi,  bakteri,  diet,  dan  waktu. 2 Bakteri S.  mutans adalah  bakteri  yang
paling berperan dalam proses terbentuknya karies. 3
Bakteri S. mutans
dapat menghasilkan  enzim  glukosiltransferase
(GTF)  yang  dapat  mengubah  sukrosa menjadi  glukan  sehingga  bakteri  dapat melekat, berkoloni, dan terbentuklah plak. 3
Bakteri S. mutans dapat memproduksi asam laktat yang dapat menyebabkan terbentuknya karies pada gigi. 3
Pembentukan  karies  gigi  dapat  dicegah dengan melakukan kontrol plak yang dapat mencegah  dan  menghilangkan  akumulasi plak. 4 Kontrol  plak  secara  kimia  dapat dilakukan  dengan  menggunakan  obat kumur  dengan  bahan  alternatif  yang memiliki  kemampuan  antibakteri  salah satunya adalah lidah buaya ( aloe vera ). 5
Lidah  buaya  dapat  memberikan berbagai  manfaat  kesehatan  untuk  tubuh yang  diantaranya  terdapat  dalam  bentuk obat  kumur,  minuman,  pasta  gigi,  dan bahan kosmetik, serta dapat juga dijadikan produk  dalam  bentuk  permen  jeli  yang bertekstur  kenyal. 6-9 Permen  jeli  dengan menggunakan lidah buaya dan rumput laut telah  diteliti  oleh  Fitrina  dkk,  dan  telah memenuhi  mutu  berdasarkan  Standar Nasional  Indonesia  (SNI),  serta  secara keseluruhan  disukai  oleh  panelis  dari  segi rasa, tekstur, aroma dan warna. 9 Lidah buaya mengandung komponen aktif yang memiliki kemampuan antibakteri seperti glukomanan, antrakuinon,  asemanan,  dan  saponin  yang dilaporkan dapat menghambat dan membunuh  bakteri S.  mutans . 5,10 Zat  aktif antrakuinon (emodin) juga dilaporkan dapat menggangu  pembentukan  DNA  pada bakteri. 11 Glukomanan  dan  asemanan, dilaporkan  dapat  mengaktivasi  makrofag, sehingga bakteri S. mutans dapat difagositosis. 12 Penelitian Swastini,
menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  lidah buaya 100% efektif menghambat pertumbuhan S.  mutans secara in  vitro . 13 Chairani dkk, juga telah melaporkan bahwa anak dengan karies yang berkumur dengan jus  lidah  buaya  menunjukkan  penurunan jumlah koloni S. mutans dalam saliva. 14
Permen jeli pada umumnya
menggunakan  pemanis  berupa  sukrosa, padahal  bila  sukrosa  dikonsumsi  secara berlebihan  dapat  menyebabkan  karies. 9,15
Penelitian  Kartikasari  dkk,  menunjukkan bahwa  semakin  tinggi  jumlah  konsumsi makanan  kariogenik  maka  semakin  tinggi indeks  karies. 16 Sukrosa  pada  permen  jeli dapat  diganti  dengan  bahan  alternatif  lain salah satunya adalah dengan menggunakan stevia, yang memiliki 0 kalori dan rasanya 300 kali lebih manis dibandingkan sukrosa, dan  efek  antibakteri  terhadap S.  mutans . 17 Penelitian  Ajagannanavar  et  al,  yang menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  stevia pada  konsenrasi  12,5%,  25%,  dan  50% dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. mutans . 18
Permen  jeli  memiliki  tekstur  yang kenyal  karena  kandungan  gelatin  dan sukrosa di dalamnya. 19 Tekstur yang kenyal akan  menyebabkan  peningkatan  laju  alir saliva sehingga dapat mencegah pertumbuhan bakteri kariogenik. 20
Pertumbuhan  bakteri  kariogenik  yang tinggi  juga  dapat  dikendalikan  dengan mengonsumsi  makanan  yang  memiliki kandungan antibakteri salah satunya adalah lidah  buaya  yang  memiliki  kandungan antibakteri. 10,11,21 Tujuan  penelitian  ini adalah untuk mengetahui aktivitas
antibakteri  dari  permen  jeli  lidah  buaya terhadap pertumbuhan bakteri S. mutans .

## METODE
Komite  Etik  Penelitian  Kedokteran dan Kesehatan (KEPKK) FK UNSRI telah melakukan  uji  kelayakan  etik  ( ethical clearance )  pada  penelitian  ini  dengan nomor  sertifikat  kelayakan  etik  006-2023. Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan
Februari  2023  selama  kurang  lebih  1 minggu.
Lidah buaya didapatkan dari Pusat
Pertanian  BLK,  Jl.  R.  H.  Amaludin,  Suka Maju,  Palembang. Daun  lidah  buaya dipotong, dikupas, dan dibersihkan dengan air  bersih.  Potongan  daging  lidah  buaya sebanyak  100  gram  selanjutnya  dicampur dengan  150  ml  air,  kemudian  dihaluskan dengan  blender  sampai  halus,  lalu  filtrat lidah  buaya  disaring  menggunakan  kain saring.
Filtrat lidah buaya sebanyak 150 ml dicampur  dengan  ekstrak  stevia  sebanyak 30 ml dan dipanaskan pada suhu 80º-100ºC, kemudian  bubuk  gelatin  ditambahkan sebanyak 30 gram, lalu diaduk kurang lebih selama  15  menit  sampai  bahan  padat terlarut  dan  mulai  mengental.  Adonan permen  jeli  dituangkan  ke  dalam  cetakan silikon,  lalu  dibiarkan  dalam  suhu  ruang selama  1  jam.  Permen  disimpan  di  dalam kulkas  dengan  suhu  5ºC  selama  kurang lebih  24  jam,  dan  dibiarkan  dalam  suhu ruang  selama  1  jam,  setelah  itu  dilakukan pengemasan permen jeli dengan menggunakan plastik. Tampilan permen jeli ditunjukkan  pada  gambar  1.  Pembuatan permen  jeli  dilakukan  sebanyak  dua  kali, yakni  pembuatan  permen  jeli  yang menggunakan  lidah  buaya  dan  yang  tidak menggunakan lidah buaya. Semua prosedur pembuatan  permen  jeli  dilakukan  secara higienis serta permen jeli tidak mengandung zat yang bersifat toksik.
Gambar 1. Permen jeli lidah buaya dan permen jeli tanpa lidah buaya
Biakan  bakteri S.  mutans ATCC 25175  yang  telah  dikembangkan  dalam blood  agar  medium ,  kemudian  sebanyak satu  ose  bakteri S.  mutans diambil menggunakan jarum ose, lalu disuspensikan dengan NaCl 0,9% steril pada tabung reaksi dan  dibuat  homogen.  Kekeruhan  suspensi bakteri disesuaikan menggunakan densitometer  dengan  standar Mc  Farland 0,5 (1,5x108 CFU/ml). Pengujian pada penelitian ini menggunakan metode difusi sumuran untuk menguji  aktivitas  antibakteri  permen  jeli. Permen  jeli  sebanyak  2  gram  dihaluskan menggunakan  mortar  dan  stamper,  lalu dilarutkan  dengan  6  mL  air  suling  dengan menggunakan  vortex. 22 Sumuran  pada
media agar darah dibuat dengan
menggunakan  ujung  pipet  dan  masing- masing  sumuran  diisi  dengan  larutan permen  jeli  menggunakan micropipette sebanyak  20µL. 23 Cawan  petri  diinkubasi selama  24 jam  pada  suhu 37°C,  kemudian dilakukan pengukuran zona hambat berupa daerah bening di sekitar sumuran menggunakan  jangka  sorong. 24 Diameter zona  hambat  diukur  secara  vertikal  dan horizontal dengan hasil pengukuran dihitung  dalam  satuan  milimeter  (mm) seperti ditunjukkan pada gambar 2. 25
Data dianalisis dengan uji parametrik yaitu  uji  T  tidak  berpasangan  untuk membandingkan  rata-rata  diameter  zona hambat antara permen jeli lidah buaya dan permen  jeli  tanpa  lidah  buaya  terhadap pertumbuhan  bakteri S.  mutans .  Nilai signifikansi ditetapkan pada nilai p <0.05.

## HASIL
Gambaran
aktivitas antibakteri
permen jeli lidah buaya terhadap
pertumbuhan
bakteri
S.
mutans menggunakan  difusi  sumuran  ditunjukkan pada gambar 3. Penelitian ini menunjukkan data yang terdistribusi normal dan homogen dengan  nilai  p>0,05.  Data  kemudian dianalisis dengan menggunakan uji T tidak
berpasangan  untuk  mengetahui  aktivitas antibakteri permen jeli lidah buaya terhadap pertumbuhan  bakteri S.  mutans .  Hasil pengukuran diameter zona hambat permen jeli  lidah  buaya  terhadap  pertumbuhan bakteri S. mutans ditunjukkan pada Tabel 1.
Gambar 3. Aktivitas antibakteri terhadap bakteri S. mutans (A) permen jeli lidah buaya, (B) permen jeli tanpa lidah buaya
Tabel 1. Hasil pengukuran diameter zona hambat permen jeli pada S. mutans
Pengulangan Diameter Zona Hambat (mm) p-value Permen jeli lidah buaya Permen jeli tanpa lidah buaya 1 3,70 2,15 0,02 * 2 5,60 4,45 3 4,80 2,60 4 6,35 1,80 Rata-rata 5,11 2,75 Keterangan: *signifikan (p<0,05), Uji T tidak berpasangan ( Independent T-test )
Tabel 1 menunjukkan bahwa nilai rata-rata diameter zona hambat permen jeli  lidah  buaya  lebih  besar  yakni  5,11 mm  dibandingkan  dengan  permen  jeli tanpa  lidah  buaya  yakni  2,75  mm. Analisis  statistik Independent  T-test menghasilkan nilai 0,02 yang
menunjukkan  bahwa  rata-rata  diameter zona  hambat  permen  jeli  lidah  buaya dan  permen  jeli  tanpa  lidah  buaya terhadap  bakteri S.  mutans memiliki perbedaan yang signifikan (p<0,05).

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  permen  jeli  lidah  buaya  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri S.
mutans . Hal ini sejalan dengan penelitian in vitro yang dilakukan Shakerian et al, yang melaporkan  bahwa  ekstrak  hidroalkoholik lidah  buaya  dengan  konsentrasi  100% memiliki  efek  antibakteri  dan  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri S. mutans . 5 Aldowsari et al, juga melaporkan bahwa  berkumur  dengan  obat  kumur  yang mengandung lidah buaya
dapat menurunkan  jumlah  bakteri S.  mutans dalam saliva dan memiliki efektivitas yang hampir  sama  dengan  klorheksidin. 26 Lidah buaya memiliki kandungan aktif yang dapat bekerja  sebagai  agen  antibakteri  seperti antrakuinon  (aloe  emodin  dan  aloin)  yang dapat  bekerja  sebagai  antibakteri  terhadap S. mutans . 12 Kandungan antrakuinon bersifat  bakterisidal  terhadap  bakteri S.
mutans . 11
Hal  tersebut  sesuai  dengan penelitian  Jain  S  et  al  yang  melaporkan bahwa,  gel  (lapisan mucilaginous )  lidah buaya  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri S. mutans pada konsentrasi 50% dan 100%. 10 Kelebihan produk lidah buaya dalam bentuk  permen  jeli  adalah  produk  permen jeli lebih diminati karena rasanya manis dan teksturnya  kenyal  sehingga  lebih  disukai oleh  anak-anak  maupun  orang  dewasa. Tekstur  yang  kenyal  dari  permen  jeli  dan kandungan  lidah  buaya  yang  banyak mengandung  air  dapat  meningkatkan  laju alir  saliva  sehingga  dapat  mencegah pertumbuhan bakteri
kariogenik. 20
Kelebihan permen  jeli  lidah  buaya dengan menggunakan stevia sebagai pemanis yakni permen jeli menjadi makanan rendah kalori, rasanya lebih  manis  300  kali  dari  sukrosa, serta menjadi makanan yang tidak kariogenik. 17 Hal  ini  dikarenakan  stevia memiliki  komponen  aktif  yang  dapat bekerja  sebagai  agen  antibakteri  seperti flavonoid, steviosida dan rebaudiosida. 17
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa permen jeli tanpa lidah buaya juga memiliki efek antibakteri terhadap bakteri S. mutans , namun  efeknya  lebih  kecil  dibandingkan permen jeli lidah buaya. Zona bening juga terbentuk  pada  permen  jeli  tanpa  lidah buaya karena bahan pemanis yang digunakan dalam formulasi permen jeli ini adalah  stevia  yang  juga  memiliki  zat  aktif antibakteri. 17 Priadarsini et al, juga melaporkan bahwa produk obat kumur yang mengandung  stevia  dapat  menurunkan indeks plak setelah digunakan selama 7 hari dan memiliki efektivitas sebagai antibakteri yang sama dengan
obat kumur klorheksidin. 27
Berdasarkan  hasil  yang  didapat pada penelitian ini, permen jeli lidah buaya memiliki potensi sebagai alternatif permen jeli  sehat  yang  dapat  dikonsumsi  sehari- hari.  Hal  tersebut  dikarenakan  permen  jeli lidah  buaya  memiliki  efek  antibakteri, bahan baku pembuatannya mudah didapat, dan  proses  pembuatannya  sederhana.
Harapan  kedepannya,  permen  jeli  lidah buaya ini dapat dimanfaatkan secara klinis untuk mengurangi resiko terjadinya karies.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Studi ini menunjukkan bahwa permen  jeli  lidah  buaya  memiliki  daya hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri S. mutans sehingga  dapat  digunakan  sebagai alternatif  permen  jeli  yang  bersifat  anti kariogenik. Kedepannya, formulasi permen jeli  lidah  buaya  sebaiknya  dikembangkan lebih  lanjut  seperti  dengan  penambahan bahan  pengawet  agar  permen  jeli  dapat memiliki daya simpan yang lama.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Ece  E,  editor.  Evidence-based  caries prevention.  Switzerland:  Springer; 2016. p.2,90
2. Akarslan  Z,  Tahir  L,  Nazir  R.  Dental caries,  etiology,  and  remedy  through natural  resources.  In:  Akarslan  Z, Gehreke  SA,  editors.  Dental  caries- diagnosis, preventation and management.  London:  IntechOpen; 2018. p.20-2
3. Nonong YH, Satari MH, Indriyanti R,
Patawulandari  S.  Antibacterial  test between  aloe  vera  and  chlorhexidine based  on  the  number  of  colony  of Streptococcus mutans ATCC 25 175 in vitro. Int J Sci Res. 2016; 5(1): 1379- 85. 4. Balagopal S, Arjunkumar R. Chlorhexidine:  the  gold  standard antiplaque agent. Journal of Pharmaceuical Sciences and Researces. 2013;5(12): 270-4. 5. Shakerian  M, Khorasani MMY, Doostaki  S.  In  vitro  effect  of hydroalcoholic extract of aloe vera and 0.2%  chlorhexidine  mouthwash  on Streptococcus sanguinis , Streptococcus salivarius , and Streptococcus  mutans .  Journal  Dental School. 2018;36(1): 18-22.
6. Kumar  GR,  Devanand  G,  John  BD, Ankit  Y,  Khursheed  O,  Sumit  M.
Preliminary antiplaque efficacy of aloe vera  mouthwash  on  4  day  plaque  re-
growth  model:  randomized  control trial. Ethiop J Health Sci. 2014;24(2):139-44. 7. Tiwari  M,  Upadhayay  M.  The medicinal  plant  components  and applications  (aloe  vera).  Journal  of Medical Plants Studies. 2018;6(3): 89- 95 8. Sayar  F,  Farahmand  AH,  Rezazadeh M.  Clinical  efficacy  of  aloe  vera toothpaste  on  periodontal  parameters of patients with gingivitis-a randomized, controlled, single- massked  clinical  trial.  The  Journal  of Contemporary Dental Practice. 2021;22(3):243-7 9. Fitrina F, Ali A, Fitriani S. Rasio lidah buaya  dan  rumput  laut terhadap mutu permen jelly. Sagu. 2014; 13(1): 14-21
10. Jain S, Rathod N, Nagi R, Sur J, Laheji A,  Gupta  N,  Agrawal  P,  Prasad  S. Antibacterial  effect  of  aloe  vera  gel against  oral  phatogens:  an  in-vitro study. J Clin Diagn Res. 2016;10(11):
ZC41-4. 11. Malmir  M,  Serrano  R,  Silva  O.
Anthraquinones as potential antimicrobial agents-A review. Spain: Formatex; 2017. p.55-61 12. Pareek S, Nagaraj A, Sharma P, Naidu S,  Yousuf  A.  Aloe  vera:  a  herb  with medicinal  properties.  Int  J  Ophtalmol Clin Res. 2013;1(1): 47-50
13. Swastini IGAAP. Daya hambat ekstrak daun lidah buaya (Aloe vera l) terhadap bakteri Streptococcus mutans penyebab dental plak. Jurnal Sangkareang  Mataram.  2017;3(2):  6- 10. 14. Chairani S, Rais SW, Purba R, Amalia
AH. Perbandingan efektifitas jus lidah buaya dan klorhexidin 0.06% terhadap jumlah  koloni Streptococcus  mutans saliva  anak  dengan  karies.  Odonto Dental Journal. 2018; 5(1): 54-9
15. Guo A, Wide U, Arvidsson L, Eiben G, Hakeberg M. Dietary intake and meal patterns among young adults with high caries activity: a cross-sectional study. BMC Oral Health. 2022;22(190): 1-9. 16. Kartikasari  HY,  Nuryanto.  Hubungan kejadian  karies  gigi  dengan  konsumsi makanan  kariogenik  dan  status  gizi
pada  anak  sekolah  dasar  (studi  pada anak kelas III dan IV SDN Kadipaten I dan  II  Bojonegoro).  Journal  of Nutrition College. 2014;3(3): 414-21. 17. Ijaz M, Pirzada AM, Saqib M, Latif M.
Stevia rebaudiana : an alternative sugar crop  in  Pakistan-  a  review.  Z  Arznei-
Gewurzpfla. 2015;20(2): 88-96. 18. Ajagannanavar  SL,  Shamarao  S,
Battur H, Tikare S, Al-Kheraif AA, Al- Sayed  MSA.  Effect  of  aqueous  and alcoholic  stevia  ( Stevia  rebaudiana ) extracts against Streptococcus mutans
and Lactobacillus  acidophilus in comparison  to  chlorhexidine:  An  in vitro study. J Int Soc Prev Community Dent. 2014;4(2):116-21 19. Jiamjariyatam  R.  Influence  of  gelatin and  isomaltulose  on  gummy  jelly properties. Int Food Res J. 2018;25(2):776-83. 20. Shinde MR, Winner J. Effects of stevia and xylitol chewing gums on salivary flow  rate,  pH,  and  taste  acceptance. Journal  of  Dental  Research  and Review. 2020;7(2):50-5 21. Mondal  P,  Sindhu  R,  Nimmy  P, Bharathwaj VV, Damodhar D, Sathiyapriya S, et al. Role of aloe vera and  its  clinical  efficiency  on  dental caries: A systematic review. International  Journal  of  Modern Developments  in  Engineering  and Science. 2022;1(6):85-9.
22. Kia  EM,  Ghaderzadeh  S,  Langroodi
AM,  Ghasempour  Z,  Ehsani  A.  Red beet  extract  usage  in  gelatin/gellan based  gummy  candy  formulation introducing Salix aegyptiaca distillate as  a  flavouring  agent.  J  Food  Sci Technol. 2020;57(9):3355-62. 23. Putra AH, Corvianindya Y, Wahyukundari  MA.  Uji  aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun
kamboja  putih  ( Plumeria  acuminata ) terhadap  pertumbuhan Streptococcus mutans .  Jurnal  Pustaka  Kesehatan.
2017;5(3):449-53
24. Rosdiana  N,  Nasution  AI.  Gambaran daya hambat minyak kelapa murni dan minyak kayu putih dalam menghambat pertumbuhan Streptococcus  mutans .
Journal  of  Syiah  Kuala  Dentistry Society. 2016;1(1):43–50.
25. Tjiptoningsih UG. Uji daya hambat air
perasan buah lemon ( Citurs limon (L.) Burm.F.) terhadap pertumbuhan bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans . Jurnal Ilmiah dan Teknologi. 2020;16(2):86-96.
26. Aldowsari  MK,  Salama  F,  Al-Agamy MH,  Alquraishi  SA,  Alsaif  FS, Aldossary  IB.  Clinical  efficacy  of single use of three different mouthrinses on the level of Streptococcus  mutans in  saliva.  J Contemp Dent Pract. 2021;22(7): 769- 73.
27. Priadarsini T, Jayashari P. Anti plaque and anti gingival effect of
chlorhexidine  (0,2%)  and  aqueous stevia mouth rinses-an in vivo clinical trial. International Journal of Scientific Development
and
Research. 2021;6(3):434-40.