## http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
UJI HAYATI LIMA JENIS MINUMAN KEMASAN GELAS DENGAN HEWAN UJI Daphnia Magna DAN MENCIT JANTAN ( Mus musculus )
Hertien Koosbandiah Surtikanti 1 , Hernawati 2 , Diah Frisda 3 , Muhamad Taufiq Hidayah 4

## 1,2,3,4 Program Studi Biologi, Departemen Pendidikan Biologi FPMIPA Universitas Pendidikan Indonesia
Diterima : 23 April 2018 Disetujui : 21 Mei 2018 Publish : 31 Mei 2018
Jalan Dr. Setiabudi no 229 Ban- dung/telp/fax. 022 2001937 e-mail : 1 hertiensurtikanti@yahoo.com , 2 hernawati_hidayat@yahoo.co m , 3 diahfrisda@yahoo.com , 4 taufiqhdyh27@gmail.com
e-ISSN : 2541-4208 p-ISSN : 2548-1606
Abstrak. Lima  jenis  minuman  yang  terpilih  yaitu  panther,  meico,  teh zeggar, degan, dan teh bukit sudah dilakukan uji hayati. Salah satu untuk pengujian  kualitas  minuman  tersebut,  yaitu  uji  hayati  dengan menggunakan  neonate  Daphnia  magna  (berumur  <24  jam)  dan  mencit jantan  (Mus  musculus).  Pengujian  menggunakan  D.  magna,  dilakukan dalam  dua  tahap  yaitu  Range  Finding  test  (RFT)  dan  Range  Definitive Test  (RDT),  sementara  uji  hayati  mencit  jantan  galur    Deutschland Denken  Yoken  ( DDY) dilakukan  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap,  dua faktorial  dengan  18  kelompok  perlakuan.  Pengambilan  sampel  darah mencit  jantan  diambil  pada  bagian  ekor  hewan  dan  diperiksa  dengan menggunakan metode strip dan glucometer autocheck. Hasil RFT menun- jukan  50%  kematian  neonate  D.  magna  terdapat  pada  pengenceran  10- 100%. Hasil analisis menunjukkan nilai LC 50 -24h untuk minuman Panther (P),  Meico  (M),  Teh  Bukit  (B),  Teh  Zegar  (Z)  dan  Degan  (D).  berturut- turut  adalah  39,99;  51,5;  40,9;  40,93;  dan  49,74%.  Hasil  uji  hayati menggunakan mencit jantan, terjadi kenaikan berat badan yang signifikan pada  saat  diberi  Z,  D  dan  B.  Kenaikan  kadar  gula  darah  mencit  jantan signifikan  pada  waktu  perlakuan  selama  dua  dan  tiga  minggu  dengan  P, M, B, Z dan D. Hal ini disebabkan kadar gula minuman dapat meningkat- kan kadar gula darah. Dapat disimpulkan bahwa kelima sampel minuman tersebut  bersifat  toksik,  karena  nilai  LC 50 kurang  dari  50%  (hasil  uji  D. magna) dan dapat meningkatkan kadar gula darah pada mencit jantan. Kata kunci : Daphnia magna, kadar gula darah, LC 50 , mencit jantan (Mus musculus), minuman kemasan.
Abstract. Five  types  of  drinks  selected  are  panther,  meico,  zeggar  tea, degan, and tea hill is conducted in biological tests. In testing the quality of the beverage, the biological test using neonate Daphnia magna is carried out  (aged  <24  hours)  and  male  mice  (Mus  musculus).  Tests  using  D. magna  are  performed  in  dua  stages  of  Range  Finding  test  (RFT)  and Range  Definitive  Test  (RDT),  while  the  biological  test  using  mice  male Deutschland Denken Yoken (DDY) strain was done  with Completely Ran- domized  Design,  two  factorials  with  18  treatment  groups.  Sampling  of mice mile blood samples taken at the tail of the animal and examined us- ing the strip method and Autocheck Glucometer.  RFT results showed  that the mortality 50%  neonate  D.  magna is presented  at  10-100%  dilution.

## http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
The result of analysis showed that the value  of LC 50 -24h for the consecu- tive  drinks Panther  (P),  Meico  (M),  Teh  Bukit  (B),  Teh  Zegar  (Z)  and Degan (D), were 39.99; 51.5; 40.93; 40.93; and 49.74%. While the results of  biological  tests  using mice  male ,  there  was  a  significant  weight  gain when given Z, D and B. Increase in blood sugar levels of mice male signif- icantly at treatment time for two and three weeks with P, M, B, Z and D . It is  due  to  the  content  of  sugar  in  the  beverages  may  increase  the  blood glucose.  It  can  be  concluded  that  the  five  beverage  samples  are  toxic, since  LC 50 values are  less  than  50%  (D.  magna  test  result)  and  may  in- crease blood sugar levels in mice male.
Key  words :  Daphnia  magna,  blood  sugar  level,  LC 50 ,,  mice  male  ( Mus musculus), beverage packaging,

## Cara Sitasi
Surtikanti,  H.  K.,  Hernawati,  Frisda,  D. &  Hidayah,  M. T.  (2018). Uji Hayati Lima Jenis Minuman Ke- masan Gelas dengan Hewan Uji Daphnia magna dan Mencit Jantan ( Mus musculus ). Jurnal Biodjati , 3 (1), 79-89.

## PENDAHULUAN
Pemenuhan konsumsi minuman dan pen- ingkatan daya saing  jual, banyak ditemukan di berbagai  jenis  minuman  dalam  kemasan  yang menarik.  Minuman  kemasan  tersebut  siap dikonsumsi dan mudah diperoleh dengan harga yang relatif murah. Sehingga banyak dikonsumsi  oleh  manusia  pada  usia  muda maupun  dewasa.  Walaupun  minuman  tersebut merupakan  salah  satu  sumber  energi  bagi manusia, tetapi tidak semua  minuman tersebut aman  bagi  kesehatan  manusia.  Kadangkala minuman  tersebut  diberi  bahan  pengawet, perwarna  dan  pemanis  buatan,  agar  menarik dan  membutuhkan  biaya  produksi    yang rendah.
Kandungan dalam minuman kemasan be- lum  diuji  tingkat  toksisitas  secara  hayati.  Per- syaratan  minuman  air  dari  aspek  kimia  ber- dasarkan  SNI  01-3553  1996  antara  lain  tidak berbau,  batasan  kandungan  zat  organik  1,0 mg/L,  khlorida  250  mg/l,  sulfat  200  mg/l,  dan ammonium  0,15  mg/L  (BSN,  2015).  Kriteria tidak  berbau  merupakan  indikator  yang  bersi- fat  kualitatif,  sehingga  sulit  untuk  dijadikan indikator yang akurat. Kandungan glukosa be-
lum  dicantumkan  dalam  daftar  ambang  batas air  yang  layak  dikonsumsi.  Kandungan  glu- kosa apabila melebihi batas konsumsi gula per hari  akan  menyebabkan  hiperglikemia.  Glu- kosa  merupakan  prekursor  untuk  sintesis semua  karbohidrat  lain  di  dalam  tubuh  manu- sia  (Murray,  2003),  sehingga  akan  men- imbulkan  masalah Diabetes mellitus (DM) pa- da manusia.
Pengujian  tingkat  toksisitas  dapat  dil- akukan  secara  analisa  biologi  (uji  hayati).  He- wan uji coba yang digunakan harus memenuhi persyaratan  diantaranya:  memiliki  tingkat  sen- sitifitas  terhadap  bahan  kimia;  mudah  dikultur dalam laboratorium; memiliki distribusi habitat luas  (Surtikanti,  2012;  Surtikanti  et  al.,  2017); dan  sudah  diuji  dalam  tingkat  Internasional. Daphnia  magna termasuk  ke  dalam  golongan udang-udangan  banyak  ditemukan  di  habitat air tawar (Pangkey, 2009). Neonates D. magna (berumur  <24  jam)  merupakan  hewan  standar Internasional  yang  layak  digunakan  dalam pengujian  kualitas  air  dan  sudah  banyak digunakan  dalam  pengujian  kualitas  air (Surti- kanti & Priyandoko, 2005; Effendi et al., 2012; Le et al., 2016)

## http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
Selain D.  Magna ,  pada  penelitian  ini digunakan  mencit  jantan  ( Mus  musculus ) sebagai hewan uji . Menurut Arrington, (1972), Surtikanti  &  Priyandoko (2005),  mencit  meru- pakan  hewan  yang  paling  umum  digunakan pada  penelitian  uji  hayati  Hal  ini    karena hewan  tersebut  merupakan  hewan  mamalia yang  memiliki  karakteristik  fisiologi  dan  bio- kimia  yang  hampir  menyerupai  manusia  teru- tama  dalam  aspek  metabolisme  glukosa  me- lalui  perantaraan  hormon  insulin  (Ngatidjan, 2006).  Kadar  glukosa  dalam  darah  normal mencit  adalah  62,8  -  176  mg/dL  (Mitruka  & Rawnsey, 1977). Apabila kadar glukosa dalam darah  melebihi  angka  tersebut  maka  mencit dalam  keadaan  hiperglikemia.  Hiperglikemia dapat  menyebabkan  gangguan  metabolisme karbohidrat,  protein,  dan  lipid  (Malole  & Pramono,  1989).  Oleh  sebab  itu  dalam penelitian  ini,  dua  hewan  uji D.  magna dan mencit digunakan dalam  mengevaluasi toksisi- tas minuman kemasan.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  experimental  terdiri  dari  dua uji  hayati  yang  menggunakan  dua  jenis  hewan berbeda  yaitu D. magna dan  mencit  jantan ga- lur  Deutschland  Denken  Yoken  (DDY). Penelitian  ini  berlangsung  selama  lima  bulan yang dilakukan dalam lima tahap yaitu: analisa kimia,  seleksi  sampel  minuman,  kultur D. magna ,  uji  toksisitas D.  magna ,  uji  toksisitas mencit dan analisa data.
Pengujian  analisa  kimia  terhadap  sampel minuman  dilakukan  di  Balai  Laboratorium Pengembangan Kesehatan Provinsi Jawa Barat Bandung  berupa  kadar  glukosa,  siklamat,  dan benzoat. Pengujian kadar gula darah menggunakan  Photometer  dengan  metode  Ti- trimetri.  Pengujian  BTP  berupa  pemanis  yaitu siklamat menggunakan Spektrofotometer dengan metode Gravimetri.
Jenis penelitian uji hayati D. magna yang digunakan dalam penelitian ini adalah penelitian  eksperimental  uji  hayati  statis (APHA,  1995).  Kriteria  jenis  minuman  yang diseleksi  untuk  pengujian  hayati  yaitu:  tidak memiliki  tanggal  kadaluarsa;  tidak  memiliki izin  BPOM;  tidak  memiliki  label  halal;  warna minuman  bening;  jumlah  dominan  di  pertoko- an.  Berdasarkan  kriteria  tersebut  maka  dipilih Panther  (P),  Meico  (M),  Teh  Bukit  (B),  Teh Zegar (Z) dan Degan (D).
Kultur D.  magna dewasa  dan  aklima- tisasi  dilakukan  di  Laboratorium  Riset  Ling- kungan Departemen Pendidikan Biologi Fakultas  Pendidikan  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  (FPMIPA)  Universitas Pendidikan  Indonesia  (UPI)  selama  satu minggu.  Media  kultur  dilakukan  dengan menggunakan  air  sumur  di  dalam  beker  gelas volume 3 liter yang dilengkapi dengan aerator. Pemberian  pakan  fermipan  dilakukan  dua  kali sehari.  Gravid  D.  magna  dipisahkan  dalam gelas beker untuk memperoleh neonate.
Masing-masing minuman P, M, B, Z dan D  tersebut  dimasukkan  ke  dalam  vial  botol yang berukuran 10 mL dengan masing-masing tiga kali pengulangan. Kemudian 10 neonate di masukan secara perlahan dengan menggunakan  pipet  ke  dalam  masing-masing botol vial yang berisi medium minuman kema- san  termasuk  kontrol medium  freshwater . Pengamatan  jumlah  neonate  hidup  dan  mati dihitung setiap 24 dan 48 hari sejak perlakuan. Neonate  yang  mati  dibuang  untuk  menjaga agar  media tidak terkontaminasi. Uji  hayati D. magna dilakukan  dan  diulang  tiga  kali  untuk mendapatkan data yang konsisten. Nilai toksis- itas  yang  akurat  dari  uji  hayati D.  magna dil- akukan dalam dua tahap yaitu uji  Range Find- ing  Test  (RFT)  dan  Range  Definitive  Test (RDT)  (Surtikanti,  2012).  Uji  toksisitas  RFT menggunakan konsentrasi perlakuan 0,01;  0,1; 1; 100  dan kontrol 0%.  Kontrol menggunakan

## http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
medium  freshwater (NaHCO 3 ,  CaCl 2. 2H 2 O, MgSO 4 .7H 2 O,  KCl).  Apabila  rentang  konsen- trasi  kritis  terletak  antara  10  sampai  dengan 100 %  maka konsentrasi  yang digunakan pada uji RDT dipersempit menjadi 15; 22; 32; 46; dan 68% (EPS, 1990).
Uji hayati mencit dengan berat badan 25- 30  gr/ekor  (Kusumawati  2004),  dilakukan secara eksperimental menggunakan Rancangan Acak  Lengkap  dan  terdapat  18  kelompok  per- lakuan,  yaitu  minuman  ringan  kemasan  M,  P, B,  Z,  D  dan  akuades  (control)  sebanyak  8 mL/ekor.  Pemberian  minuman  dilakukan  se- tiap  pagi  hari  secara  adlibitum  (Smith  & Mangkoewidjojo,  1988;  Malole  &  Pramono, 1989)  dengan  waktu  perlakuan  selama  1,  2, dan  3  minggu  yang  terdiri  dari  lima  ekor perkelompok  perlakuan.  Pemeliharaan  dil- akukan  di  rumah  mencit  Kebun  Botani  UPI Bandung.  Pemeriksaan  gula  darah  dan  pen- gukuran  berat  organ  mencit  dilakukan  di  La- boratorium  Riset  Lingkungan  Departemen Pendidikan Biologi FPMIPA UPI.
Pemeriksaan gula darah mencit menggunakan  metode  strip  dengan  alat  glu- kometer autocheck . Alat pemeriksaan labora-
torium  sederhana  ini  dirancang  hanya  untuk penggunaan  sampel  darah  kapiler,  sehingga strip  katalisator  ini  spesifik  untuk  pengukuran glukosa  dalam  darah  kapiler  (Suryaatmadja  & Hardjasudarma, 2006).
Analisis  data  menggunakan  program SPSS  17  for  Windows.  Tahap  pertama  pen- gujian  dilakukan  uji  normalitas  Kolmogorov- Smirnov setelah itu dilakukan uji homogenitas Levene . Jika data yang diperoleh homogen dan normal  maka  dilakukan  uji  parametrik Two Ways Anova ( Analysis of Variance ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian uji  hayati  ini terdiri dari analisa  kimia,  uji  toksisitas D.  magna ,  dan mencit.  Analisis  kimia  lima  jenis  minuman (Tabel  1)  menunjukkan  kadar  gula,  siklamat, asam benzoat dan pewarna, dimana kadar kan- dungan  bahan  tambahan  pangan  pada  setiap sampel  minuman  ringan  kemasan  gelas  yang telah diuji relatif  berbeda. Hal  ini  menunjukan bahwa setiap sampel minuman kemasan mem- iliki  kandungan  yang  berbeda-beda  dan masing-masing memiliki kadar ambang batas.
Tabel 1. Persentase kandungan kimia (mg/kg) dalam lima jenis minuman
No Sampel Minuman Kadar Gula Siklamat Natrium Benzoat Pewarna 1 P 5,6 1 1 Tartazin 2 M 7,82 2,25 1,2 - 3 B 6,23 2,1 0,3 Coklat 4 Z 7,21 1 0,8 Coklat 5 D 7,4 1,5 0,2 - Batas  maksimum  penggunaan  natrium benzoat menurut Permenkes RI No.
722/Menkes/Per/IX/88  adalah  1  g/kg,  se- dangkan batas maksimum penggunaan pewarna  tartrazin  adalah  200  mg/kg  (BPOM, 2012).  Batas  siklamat  yang  dianggap  aman oleh manusia adalah 11 mg/kg berat badan/hari (Astawan, 2004). Semua sampel tersebut tidak
memiliki  kandungan  bahan  makanan  yang melebihi  ambang  batas  yang  telah  ditentukan oleh Kementerian Kesehatan.
Berdasarkan  Surat  Keputusan  Kepala BPOM RI (204), siklamat merupakan pemanis sintetis  non-kalori  yang  diperbolehkan  untuk dikonsumsi  di  Indonesia.  Hasil  penelitian menunjukkan kandungan siklamat pada sampel
http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
minuman  tidak  melebihi  ambang  batas  yang telah  ditetapkan  oleh  Kementerian  Kesehatan. Di  Indonesia  penggunaan  bahan  pemanis  sin- tetis ditetapkan berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan  Republik  Indonesia  tentang  Bahan Tambahan  Makanan,  yaitu  1  g/kg  bahan (BPOM  RI,  2004).  Pemanis  buatan  siklamat hingga  saat  ini  penggunaannya  masih  banyak menimbulkan  kontroversi  karena  aspek  kea- manan  dalam  jangka  panjang  yang  berpotensi karsinogenik  jika  terkonversi  menjadi cyclo- hexylamine di  dalam  saluran  pencernaan  (Ca- hyadi, 2008).
Tidak  hanya  kandungan  gula  yang  ada pada  setiap  minuman  ringan  kemasan  gelas, ternyata  terdapat  juga  Bahan  Tambahan  Pan- gan (BTP) berupa siklamat dan natrium benzo- at.  Siklamat  (C 6 H 11 NHSO 3 Na)  umumnya  da- lam  bentuk  garam  kalsium,  kalium,  dan  natri- um siklamat. Garam siklamat berbentuk kristal putih, tidak berbau, tidak berwarna, dan mudah larut  dalam  air  dan  etanol,  intensitas  ke- manisannya ± 30 kali kemanisan sukrosa (Pin- heiro  et  al.,  2005).  Kombinasi  penggunaan  si- klamat  dengan  sakarin  bersifat  sinergis,  dan kompatibel  dengan  pencitarasa  dan  sebagai bahan  pengawet  (Pinheiro  et  al.,  2005). Menurut  peraturan  Menteri  Kesehatan  RI No.722/Menkes/Per/IX/88,  kadar  maksimum siklamat  yang  diperbolehkan  dalam  pangan dan minuman berkalori rendah dan untuk pen- derita Diabetes  mellitus adalah  3g/kg  bahan pangan  dan  minuman.  Menurut  Wibowotomo (2002),  kadar  maksimum  pengunaan  siklamat untuk  jenis  pangan  dan  minuman  adalah  3  g/ kg  berat  bahan.  Ketentuan  tersebut  dapat disimpulkan harga ambang batas siklamat ada- lah 3 g dalam 1 kg minuman (3.000 ppm). Jadi dalam  1  gram  minuman  serbuk  instan  harga ambang  batas  penggunaan  siklamat  adalah 0,003 g.
Menurut World  Health  Organization (WHO)  batas  konsumsi harian siklamat   yang
aman adalah 11 mg/kg berat badan. Kelompok perlakuan yang diberi minuman kemasan P, M, B, Z, dan D  memiliki kandungan siklamat da- lam  ambang  batas.  Akan  tetapi,  apabila pengkonsumsian  bahan  pemanis  berupa  si- klamat  berlebihan  secara  terus  menerus  dapat menyebabkan kanker kandung kemih, migrain, kehilangan  daya  ingat,  hipertensi,  dan  hiper- glikemia  (Irianto,  2004).  Siklamat  memuncul- kan  banyak  gangguan  bagi  kesehatan,  dian- taranya  tremor  (penyakit  saraf),  migrain,  dan sakit  kepala,  kehilangan  daya  ingat,  bingung, insomnia,  iritasi,  asma,  hipertensi,  diare,  sakit perut, alergi, impotensi, dan gangguan seksual, kebotakan,  dan  kanker  otak  (Lestari,  2011; Surtikanti, 2012).
Batas  maksimal  penggunaan  natrium benzoat  menurut  WHO  adalah  600  mg/kg. Semua  kelompok  perlakuan  yang  diberi  mi- numan P, M, B, Z, dan D memiliki kandungan natrium  benzoat  dalam  batas  aman.  Apabila pengkonsumsiannya  melebihi  batas  per  hari dan  secara  terus  menerus  akan  menurunkan fungsi  hati  karena  endapan  natrium  benzoat yang  menumpuk  di  jaringan  hati  (Surtikanti, 2012).  Lama-kelamaan  kondisi  tersebut  akan menyebabkan  pembengkakan  hati  hingga peradangan  yang  akan  mengganggu  fungsi hati. Semakin banyak endapan natrium benzoat yang  terdapat  di  dalam  jaringan  hati,  maka akan  semakin  menurunkan  juga  fungsi  dan kinerja  hati  (Irianto,  2004).  Menurut  Rohadi (2002),  apabila  tubuh  mengkonsumsi  bahan pengawet  ini  secara  berlebih,  dapat  meng- ganggu kesehatan, terutama menyerang saraf.
Hasil  uji D.  magna terdiri  dari  uji  RFT dan  RDT.  Uji  RFT  dilakukan  untuk  menen- tukan  konsentrasi  pengenceran  yang  akan digunakan  pada  uji  RDT,  dimana  konsentrasi pengenceran  yang  digunakan  dalam  RFT antara  lain  0;  0,01;  0,1;  1;  10  dan  100%. Berdasarkan  hasil  pengamatan  uji  RFT  dan RDT dari kelima sampel minuman ringan  ke-
http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
masan  gelas  dapat  dilihat  pada  Tabel  2  dan  3 uji RFT yang dilakukan selama 24 dan 48 jam rata-rata  tingkat  mortalitas D.  magna pada kontrol adalah <10%. Hal ini menunjukan
bahwa  pengujian  ini  valid  sehingga  dapat digunakan  untuk  dasar  uji  RDT.  Uji  RDT  dil- akukan  untuk  mempersempit  kembali  konsen- trasi yang akan dihitung nilai LC 50 .
Tabel 2. Persentase rerata mortalitas neonate uji RFT 24 jam pada lima pengenceran
Jenis minuman 0% 0,01% 0,1% 1% 10% 100% P ∑ 0/50 0/50 0/50 2/50 5/150 50/50 % 0 0 0 3,33 10 100 M ∑ 0/50 0/50 0/50 1/50 3/50 50/50 % 0 0,6 0 2,6 6 100 B ∑ 0/50 0/50 3/50 6/50 7/50 50/50 % 0 0 1,33 4 16 100 Z ∑ 0/50 9/50 0/50 7/50 15/50 50/50 % 0 6 0 4,6 10 100 D ∑ 0/50 0/50 0/50 1/50 7/50 50/50 % 0 0 0 0,6 4,6 100 Tabel 3. Persentase rerata mortalitas neonate uji RFT 48 jam pada lima pengenceran Jenis minuman 0% 0,01% 0,1% 1% 10% 100% P ∑ 0/50 0/50 0/50 1/50 5/50 50/50 % 0 0 0 0,25 10 100 M ∑ 0/50 0/50 0/50 1/50 9/50 50/50 % 0 0,6 0 0,25 6 100 B ∑ 0/50 0/50 3/50 3/50 10/50 50/50 % 0 0 1,33 1,33 20 100 Z ∑ 0/50 9/50 3/50 3/50 15/50 50/50 % 0 6 1,33 1,33 30 100 D ∑ 0/50 0/50 1/50 2/50 15/50 50/50 % 0 0 0,25 0,6 30 100
Berdasarkan  Tabel  2,  dapat  dilihat tingkat mortalitas selama 24 jam mulai muncul pada konsentrasi sampel minuman 1%. Pada konsentrasi tersebut semua sampel mengalami kematian dalam jumlah yang sedikit. Selanjut- nya, pada konsentrasi 100% semua sampel mengalami mortalitas atau kematian total, se hingga 50% mortalitas D. magna mati dalam waktu 24 jam berada pada rentang konsentrasi 10-100 %. Konsentrasi inilah yang nantinya akan digunakan pada uji RDT .
Uji  RDT  dilakukan  untuk  menentukan nilai  LC 50 dengan  menggunakan  seri  pengenc- eran  berdasarkan  hasil  uji  RFT.  Berdasarkan hasil RFT diketahui bahwa 50% mortalitas ter- jadi  pada  rentang  10-100%.  Oleh  karena  itu berdasarkan hitungan logaritma maka digunakan  nilai 15; 22; 32; 46 dan 68% untuk pengenceran.  Hasil  pengamatan mortalitas  D. magna pada uji RDT 24 jam dan 48 jam dapat dilihat pada Tabel 4 dan 5.

## http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
Tabel 4. Persentase rerata mortalitas neonate uji RDT 24 jam pada lima pengenceran
Jenis minuman 0% 15% 22% 32% 46% 68% P ∑ 0/50 8/50 15/50 23/50 37/50 50/50 % 0 16 30 46 74 100 M ∑ 0/50 7/50 16/50 21/50 29/50 50/50 % 0 14 32 42 58 100 B ∑ 0/50 9/50 13/50 18/50 24/50 50/50 % 0 18 26 36 48 100 Z ∑ 0/50 7/50 13/50 18/50 25/50 50/50 % 0 14 26 36 50 100 D ∑ 0/50 6/50 16/50 17/50 24/50 50/50 % 0 12 32 34 48 100
Berdasarkan  hasil  uji  RDT  yang  dil- akukan selama 24 dan 48 jam rata-rata tingkat mortalitas D.   magna pada   kontrol   adalah <10%.  Hal  ini  menunjukan  bahwa  pengujian ini  valid  sehingga  data  dapat  digunakan  untuk penghitungan  LC 50 .  Hasil  pengamatan  RDT (24 jam)  di atas menunjukan bahwa   minuman
P  dan  M  lebih  toksik  dibandingkan  dengan minuman  B,  Z  dan  D  (Tabel  4).  Makin  lama D.  magna dalam  larutan  minuman  selama  48 jam,  maka  toksisitas  makin  tinggi  (Tabel  5). Toksisitas  kandungan  kelima  minuman  terse- but berada pada konsentrasi 22 – 32 %.
Tabel 5. Persentase rerata mortalitas neonate uji RDT 48 jam pada lima pengenceran
Jenis minuman 0% 15% 22% 32% 46% 68% P ∑ 0/50 14/50 24/50 37/50 49/50 50/50 % 0 28 48 74 98 100 M ∑ 0/50 12/50 25/50 36/50 40/50 50/50 % 0 24 50 72 80 100 B ∑ 0/50 18/50 23/50 36/50 43/50 50/50 % 0 36 46 72 86 100 Z ∑ 0/50 15/50 21/50 28/50 43/50 50/50 % 0 30 42 56 86 100 D ∑ 0/50 18/50 22/50 30/50 41/50 50/50 % 0 36 44 60 82 100
Hasil  ini  selanjutnya  di  analisis  probit menggunakan  software  IBM  SPSS  23  yang sebelumnya data telah di uji tes normalitas dan
homogenitasnya. Hasil nilai LC 50 yang di- peroleh dapat dilihat pada Tabel 6.

## http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
Tabel 6. Nilai toksisitas lima jenis minuman terhadap D. magna
Jenis minuman LC 50 24 jam Batas Rentang LC 50 48 jam Batas Rentang P 35,58 25,95-40,73 21,02 15,41-70,73 M 49,01 35,75-58,16 35,91 23,79-39,42 B 40,82 33,54-52,48 23,26 12,43-34,96 Z 48,72 38,91-54,27 34,23 20,01-41,98 D 40,84 28,73-50,66 35,21 25,07-41,45
Tabel  6  menunjukkan  bahwa  nilai LC 50 -24h  dan  LC 50 -48h  dalam  bentuk  rentang batas  rendah  dan  tinggi.  Nilai  toksisitas  LC 50 - 48h  pada  semua  minuman  lebih  toksik  dan lebih  kecil  dibandingkan  nilai  toksisitas  LC 50 - 24h  terhadap D.  magna .  Hal  ini  menunjukkan bahwa  semakin  lama D.  magna berada  dalam medium  minuman  yang  mengandung  bahan kimia,  maka  akan  semakin  toksik  bagi D. magna .  Diantara  jenis  minuman,    berturut- turut  P,  B,  D,  Z  dan  M  menunjukkan  tingkat toksisitas  yang  menurun  selama  24  jam, sedangkan  semakin  sempit  nilai  rentang  batas bawah  dan  atas,  maka  nilai  LC 50 -24h  dan LC 50 -48h semakin akurat.
Meskipun tidak ada BTP yang melebihi ambang  batas  yang  telah  ditentukan  oleh  Ke- menterian  Kesehatan,  akan  tetapi  tidak  me- nutup kemungkinan jika mengkonsumsi secara terus  menerus  dan  dalam  jangka  waktu  yang lama  dapat  menyebabkan  masalah  kesehatan tubuh.  Kemungkinan  aturan  nilai  baku  mutu dari  Kementerian  Lingkungan  Hidup  tidak berbasis  pada  uji  hayati D.  magna .  Hasil  pen- gujian toksisitas ini merupakan langkah awal
untuk  mengetahui  tingkat  toksisitas  minuman kemasan  terhadap  biota  air  tawar  dan  dapat pula dikatakan sebagai uji seleksi.
Hasil  uji  mencit  yang  terdiri  dari  efek minuman  terhadap  perubahan  berat  badan  dan kadar  gula  darah  dapat  dilihat  pada    Tabel  7 dan  8,  sedangkan  hasil  uji  signifikansi  uji statistik Tukey dapat dilihat pada Tabel 9.
Tabel 7. Rerata selisih kenaikan berat badan mencit (mg) setelah pemberian lima jenis minuman kemasan dalam tiga minggu perlakuan.
Minggu ke- Kontrol P M B Z D 1 0,74 1,36 0,82 7,92 8,32 5,68 2 2,3 3,22 3,16 7,76 7,1 8,28 3 4,52 3,38 6,06 6,32 6,06 2,88
Tabel 8. Rerata selisih kenaikan kadar gula darah mencit setelah pemberian lima jenis  minuman kemasan dalam tiga minggu perlakuan. Minggu ke- Kontrol P M B Z D 1 18,8 36,8 26,8 31,6 17,8 34,8 2 15,6 50,6 53,8 52 51,2 47 3 5,4 54,2 61,4 67 41 57,2
Tabel 9. Rerata selisih kenaikan berat badan dan kadar gula darah mencit selama  perlakuan
mencit Jenis minuman P M B Z D Akuades Berat badan 2.65 ± 0.67 a 3.34 ± 0.43 ab 7.33 ± 4.94 c 7.16 ± 1.32 c 5.61 ± 2.05 bc 2.52 ± 0.55 a Kadar gula darah 47.2 ± 13.88 b 43.73 ± 12.98 b 50.2 ± 14.44 b 36.66 ± 12.06 46.33 ± 12.93 b 13.26 ± 9.07 a
Keterangan : Nilai rerata kenaikan selisih berat badan dan kadar gula darah mencit ± SD. Notasi huruf kecil yang sama dibelakangnya menunjukkan nilai tersebut tidak berbeda signifikan pada derajat kepercayaan 95%.
http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
Berdasarkan hasil analisa (Tabel 8 dan 9) menunjukkan  bahwa  pemberian  minuman kemasan  berpengaruh  signifikan  terhadap kenaikan  berat  badan  dan  kandungan  gula darah  mencit.  Minuman  B,  Z  dan  D meningkatkan  berat  badan  mencit  secara signifikan dibandingkan dengan kontrol. Selain  itu  semua  jenis  minuman  kemasan  juga meningkatkan  kandungan  gula  darah  mencit secara  signifikan  dibandingkan    dengan kontrol.  Harkness  &  Wagne  (1989),  Nichols (2003),  dan  Kusumawati  (2004)  menyatakan bahwa  kadar  gula  darah  mencit  normal berkisar antara 62-176 mg/dL.
Kelompok  perlakuan  yang  diberi  minu- man  Z  mengalami  kenaikan  kadar  gula  men- capai 190,2 mg/dL, menandakan bahwa mencit tersebut mengalami hiperglikemia. Akan tetapi belum  dapat  dipastikan  bahwa  mencit  men- galami Diabetes  millitus .  Menurut American Diabetes  Association (ADA)  (2007),  mencit yang  memiliki  kadar  glukosa  darah  >200 mg/dL  termasuk  ke  dalam  kategori Diabetes millitus . Pada saat sebelum perlakuan, keadaan awal  kadar  gula  darah  kelompok  perlakuan tersebut  memang  sudah  besar,  akan  tetapi  jika melihat  selisih  kenaikannya  tidak  begitu  sig- nifikan  dibandingkan  dengan  yang  lain.  Ke- lompok  yang  diberi  akuades  (kontrol)  kadar gula  darah  awal  dari  101,6  mg/dL  menjadi 120,4 mg/dL, hal tersebut menandakan bahwa masih dalam ba- tas normal.
Kelebihan  mengkonsumsi  gula  dapat menimbun  lemak,  sehingga  dapat  menaikkan berat  badan.  Begitupun  dalam  penelitian  ini, pemberian  minuman  kemasan  yang  mengan- dung  kadar  gula  yang  melebihi  ambang  batas konsumsi  per  hari  dapat  menaikkan  berat  ba- dan  mencit.  Apabila  terjadi  kenaikkan  berat badan  yang  sangat  berlebihan  tidak  menutup kemungkinan  akan  menyebabkan  obesitas. Apabila disertai dengan kenaikan kadar gula
darah  yang  sangat  tinggi,  hal  ini  dikarenakan penderita  obesitas  mempunyai  resiko  tinggi terjadinya  resistensi  insulin  serta  peningkatan kadar glukosa darah (Felber, 1992).
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa kelima  minuman  kemasan  P,  M,  B,  Z  dan  D bersifat toksik, sebab nilai LC 50 -24h D. magna berada  dibawah  konsentrasi  50%.  Jika  minu- man  kemasan  ini  dikonsumsi  dalam  jangka waktu  yang  panjang  dan  secara  berlebihan akan  menimbulkan  masalah  kesehatan.  Hasil uji  hayati  dengan  menggunakan  mencit memberikan  respon  yang  berbeda  yaitu  terjadi kenaikan  berat  badan  dan  kadar  gula  darah mencit.  berdasarkan  hal  tersebut,  uji  hayati D. magna dan mencit merupakan uji seleksi untuk evaluasi toksisitas minuman kemasan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Rektor  dan  Ketua LPPM  Universitas  Pendidikan  Indonesia  yang telah  mendukung  dana  penelitian  melalui Hibah Penelitian PPKBK UPI. Dekan FPMIPA,  Ketua  Departemen  Pendidikan Biologi dan Tim peneliti yang telah membantu terlaksannya penelitian hingga selesai.

## DAFTAR PUSTAKA
ADA.  (2007).  American  Diabetes  Association Economic Costs of Diabetes in the U.S. in 2007, Diabetes Care., 26, 624.
APHA (1995). Standar Method for The Exam- ination of Water and Waste Water Ameri- can  Public  Health  Association,  American Water  Works  Association  and  Water  Pol- lution  Control  Federation  19th  edition. Washington DC.
Arrington,  L.  (1972).  Introductory  Laboratory Animal.The  Breeding,  Care,  and  Man- agement of Experimental Animal Science.

## http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
New  York:  The  Interstate  Printers  and Publishing.
Badan  Standarisasi  Nasional  (2015).  Air  Min- eral. SNI 3553:201. Jakarta.
BPOM  RI.  (2004).  Persyaratan  Penggunaan Bahan Tambahan Pangan Pemanis Buatan dalam  Produk  Pangan. Surat  Keputusan , No HK.00.05.5.4547.
Cahyadi, W. (2008). Bahan Tambahan Pangan. Jakarta: PT Bumi Aksara.
Effendi,  H.,  Emawan  A.H,  Wardiatno  Y. Krisanti  M.  (2012).  Toksisitas  akut (LC50)  serbuk  bor  (Cuttings)  terhadap Daphnia sp. Bumi Lestari, Vol.12. No 2
Felber, J.P. (1992). From Obesity To Diabetes: Pathophysiological  Considerations.  Int.  J. Obes. 16:937-952.
Harkness, J.E. & Wagner, J.E. (1989). The Bi- ology  and  Medicine  of  Rabbits  and  Ro- dents. London: Lea Febiger.
Irianto,  K.  (2004).  Struktur  dan  Fungsi  Tubuh Manusia  untuk  Paramedis.  Bandung: Yrama Widy.
Kusumawati,  D.  (2004).  Bersahabat  dengan Hewan  Coba.  Yogyakarta:  Gadjah  Mada University Press.
Le Q.V., Sekhon S.S., Lee L, Ko J.H. (2016). Daphnia  in  water  quality  biomonitoring- “omic”  approaches.  Toxicology  and  En- vironmental  Health  Sciences  vol  8,  issue 1, pp 1-6.
Lestari,  D.  (2011).  Analisis  Adanya  Kan- dungan  Pemanis  Buatan  (Sakarin  dan  Si- klamat)  pada  Jamu  Gendong  di  Pasar Gubug Grobogan. Jurnal Gizi dan Pangan, Vol 10, No.3: 44-47.
Malole, M. B. M & Pramono, C. S. U. (1989).
Penggunaan  Hewan-Hewan  Percobaan dilaboratorium.  Bogor:  Pusat  Antar  Uni- versitas Bioteknologi IPB.
Mitruka,  B.  M  &  Rawnsey,  H.  M.  (1977). Clinical  Biochemical  and  Hematological Reference Values in Normal Experimenal
Animal, Mas-son Publ., New York, 118- 119.
Murray,  R.  K.  (2003).  Biokimia  Harper,  edi- si25.  Penerbit  Buku  Kedokteran.  Jakarta: EGC.
Ngatidjan  (2006).  Metode  Laboratorium  Da- lam  Toksikologi.  Metode  Uji  Toksisitas: 86-135.
Nichols, J. B. (2003). The Laboratory Mouse.
University Veterinarian, Florida. Pangkey, H. (2009). Daphnia dan Penggunaannya.  Jurnal  Perikanan  Dan Kelautan, V (3), 33–36.
Shahab,  A.  (2006).  Diagnosis  dan  Pe- natalaksanaan  Diabetes  Mellitus  (disari- kan  dari  Konsensus  Pengelolaan  Diabetes Mellitus di Indonesia: Perkeni 2006).
Smith,  B.  J.  &  Mangkoewidjojo,  S.  (1988). Pemeliharaan Pembiakan dan Penggunaan Hewan  Percobaan  di  Daerah  Tropis.  Uni- versitas Indonesia Press, Jakarta.
Surtikanti,  H.  K.  (2012).  Toksikologi  Ling- kungan  dan  Metode  Uji  Hayati,  Penerbit Rizqi Press. Bandung
Surtikanti,  H.  K,  &  Priyandoko,  D.  (2005). Pengembangan Uji Toksisitas untuk Men- gevaluasi  Kualitas  Air  Sungai  Cikapun- dung.  Laporan  Penelitian  Hibah  PEKER- TI. Lembaga Penelitian UPI Bandung.
Surtikanti,  H.,  Juansah,  R.,  &  Frisda,  D.
(2017). Optimalisasi Kultur Daphnia yang Berperan  sebagai  Hewan  Uji  dalam Ekotoksikologi. Biodjati, 2(2), 5–10.
Suryaatmadja,  M.  &  Hardjasudarma,  I.  Y.
(2006). Uji Kinerja Glukosameter ACCU- CHEK  Advantage.  Indonesia:  Departe- men Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran Universitas  Indonesia  &  BLU  RS  Dr. Cipto Mangunkusumo, Jakarta.
Wibowoutomo. (2002). Pengembangan
Metode  Penetapan  Kadar  Siklamat  Kro- matografi  Kinerja  Tinggi  Guna  Diimple- mentasikan Dalam Kajian  Papa-
http://journal.uinsgd.ac.id/index.php/biodjati
ran.Teknologi dan Kejuruan, PT. Kalma Media, Jakarta.