Identifikasi Senyawa Flavonoid dan Efek Terapi Ekstrak Etanol 70 % Umbi Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Terhadap Kadar Glukosa Darah dan Aktifitas SOD ( Superoksida dismutase ) Jantung Tikus yang Diinduksi Aloksan
Andrieyani, Ahmad Hanapi, A.Ghanaim Fasya, Hafidatul Hasanah
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang
Email: ndrieyanni@gmail.com

## Abstract
The  aims  of  this  research was to identify the flavonoid content in binahong tuber and determine the effect  of  70  %  ethanol  extract  of  binahong  tuber  on  blood  glucose  level  and  SOD  activity  in  rats  ( Rattus norvegicus )  induced  alloxan.  The  extract  was  maceration  and  then  used  to  test  the  classes  of  its  compound content using phytochemical test, the flavonoid compound contained in the extract was separated by analytic thin layer chromatography (TLC) and antidiabetic effect against rats induced alloxan with dose of alloxan was 32 mg / 200 g BW. The results showed that the 70 % ethanol extract of binahong tuber contains flavonoids, alkaloids, tannins,  saponins  and  terpenoids.  Butanol:  acetic  acid:  water  (4:  1:  5)  was  the  best  eluent  for  separation  of flavonoid compound in extract and binahong tuber extracts treatment with variation of extract dose, 25, 60 and 75 mg/kg BW, reduced the blood glucose levels and increased the SOD ( Superoxide dismutase ) activity of rat, that are 5,511 ; 5,217 and 4,942 u/mL respectively.
Keywords : alloxan, antidiabetic, flavonoids, binahong tubers, SOD

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi flavonoid serta mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol 70 % umbi binahong terhadap kadar glukosa darah dan aktifitas SOD pada  jantung tikus yang diinduksi aloksan.  Ekstraksi  didapatkan  dari  hasil  maserasi  yang  dilanjutkan  dengan  uji  fitokimia  reagen,  pemisahan flavonoid  dengan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  analitik  dan  dilakukan  pengujian  antidiabetes  terhadap  tikus yang terinduksi aloksan dengan dosis 32 mg/200 g BB. Hasil penelitian didapatkan golongan senyawa aktif yaitu senyawa  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  saponin  dan  terpenoid.  Eluen  terbaik  dari  pemisahan  senyawa  flavonoid adalah butanol: asam asetat: air (4:1:5) dan pengujian  antidiabetes setelah diterapi menggunakan ekstrak etanol 70 % umbi binahong dosis 25, 50 dan 75 mg/kg BB telah memberikan pengaruh penurunan kadar glukosa darah dan peningkatan aktifitas SOD ( Superoksida dismutase) pada jantung tikus berturut-turut sebesar 5,511; 5,217 dan 4,942 u/ml dengan dosis terbaik yaitu 25 mg/kg BB.
kata kunci : aloksan, antidiabetes, flavonoid, umbi binahong, SOD

## I. PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus  merupakan  suatu sindrom yang ditandai hiperglikemia kronis dengan gangguan metabolisme karbohidrat, lemak,  dan  protein  yang  disebabkan berkurangnya  sekresi  insulin  oleh  sel-sel  β pulau  langerhans  atau  karena  kerusakan jaringan  akibat  stres  oksidatif  yang  timbul bila  kecepatan  pembentukan  radikal  bebas
melebihi kapasitas sel untuk menetralkannya (Gustaviani, 2006). Salah satu kerusakan jaringan tersebut  adalah  jantung,    dimana  kerja jantung  sebagai  pemompa  darah  keseluruh tubuh  dapat  terganggu  akibat  tingginya kadar  glukosa  darah  sehingga  dapat meningkatkan  kerja  jantung  4-8  kali  dari keadaan normal (Supriono, 2008).

## ALCHEMY , Vol. 4 No. 1 Maret 2015, hal 73-78
Untuk  dapat  memperbaiki  serta mengurangi kerusakan sel maka diperlukannya  antioksidan  alami  dalam tubuh  untuk  melawan  radikal  bebas  yaitu Superoksida  dismutase (SOD),  namun kondisi diabetes melitus
dapat mengakibatkan  penurunan  SOD  sehingga perlu  antioksidan  dari  luar  tubuh  untuk meningkatkan  aktifitas  SOD  serta  dapat menurunkan  kadar  glukosa  darah  seperti tumbuhan  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis). Selawa (2013), menyatakan kandungan  flavonoid  dalam  ekstrak  etanol binahong berpotensi sebagai antioksidan.
Penelitian Saleh dkk (2012), menggunakan  ekstrak  umbi  binahong dengan  dosis  25 mg/kg  BB  dapat menurunkan  glukosa  darah  dengan  induksi glukosa  50  %,  dimana  golongan  senyawa flavonoid yang diduga
dapat mengembalikan  sensitifitas  reseptor  insulin pada sel  sehingga dapat  menurunkan kadar gula darah pada penderita diabetes mellitus.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengidentifikasi flavonoid
serta
mengetahui  pengaruh  pemberian  ekstrak etanol  70  %  umbi  binahong  ( Anredera cordifolia (Ten.)  Steenis)  terhadap  kadar glukosa darah dan aktifitas SOD
( Superoksida  dismutase) pada  tikus  yang terinduksi aloksan.

## II. METODE PENELITIAN Pelaksanaan Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan Februari  2014  sampai  Juni  2014  di laboratorium Kimia Organik Jurusan Kimia,  laboratorium  Fisiologi  Hewan Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi  UIN  Maulana  Malik  Ibrahim
Malang  serta  laboratorium  Faal  Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  eperangkat  alat  gelas, rotary  evaporator ,  neraca  analitik,  kertas saring,  plat  KLT  silika  gel  60  F 254 ,  bejana pengembang,  lampu  UV,  pipa  kapiler, penyaring buchner, shaker, vortex, kandang hewan  coba  (baki  plastik),  kawat,  botol minum  mencit,  pinset,  mikropipet,  spuit  1 mL,  sonde  lambung  dan  gunting  steril, glucometer ,  spektrometer,  dan  tabung ependorff .
Bahan  yang  digunakan  meliputi umbi  binahong,  etanol  70  %,  kloroform, aloksan,  NaCl  fisiologis  (0,9  %),  PBS (phosphate  buffer  saline), CMC-Na  0,5  %, aquades, Xantine , Xantin  oksidase ,    NBT, alkohol 70 %.

## PROSEDUR PENELITIAN Preparasi Sampel
Seluruh  bagian  dari  umbi  binahong dicuci dengan air, kemudian dipotong kecil- kecil,  sampel  dipanaskan  dengan  terik matahari  secara  tidak  langsung  selama  ±  5 hari. Setelah itu, diblender sampai berbentuk serbuk. Analisis Kadar Air Serbuk umbi binahong yang didapatkan  kemudian  ditimbang  dalam cawan konstak dan dimasukkan dalam oven dengan suhu 100 - 105 o C.

## Ekstraksi Maserasi
Serbuk  ditimbang  sebanyak  500 gram  dan  5  bagian  lalu  masing-masing diekstraksi  maserasi  dengan  etanol  70  % 300  mL  (setiap  hari  dikocok  dengan menggunakan shaker selama  3  jam) kemudian diekstraksi kembali
menggunakan  etanol  70  %    300  mL (Makalalag dkk., 2013).
Masing-masing ekstrak yang dipekatkan  dengan rotary  evaporator , ekstrak  kemudian  dialiri  gas  N 2 sampai diperoleh  ekstrak  pekat  etanol  70  % (dengan berat konstan).

## Uji Fitokimia dengan Uji Reagen
Ekstrak hasil maserasi diambil sedikit  kemudian  dimasukkan  dalam  tabung reaksi  dan  dilakukan  uji  golongan  senyawa flavonoid,  tanin,  alkaloid,  terpenoid  dan saponin  dengan  menggunakan  reagen  yang sesuai.

## Pemisahan Senyawa Flavonoid
Ekstrak  pekat  sebanyak  6  gram dihidrolisis  dengan  12  mL  HCl  15  %,  dan dipartisi  dengan  air  :  kloroform  (1:1), ekstraksi dilakukan secara bertahap (3 × 35 mL), masing-masing fase dipisahkan
kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator. Kemudian  ekstrak  digunakan KLT Analitik dengan eluen butanol – asam asetat - aquades (BAA) (4:1:5), Etil asetat - metanol  (9:1)  dan  metanol  –  kloroform (1:39) ;(1:9); (2:3).

## Uji Antidiabetes
Digunakan  tikus  sebanyak  24  ekor kemudian  di  bagi  menjadi  6  kelompok meliputi  kontrol  nol  tanpa  perlakuan  (KO), kontrol  positif  yang  diinduksi  aloksan dengan  dosis  32  mg/200  g  BB  (K+), kontrol  negatif  (kontrol  pelarut/CMC-Na 0,5%) (K-), kelompok  dosis 25 mg/kg  BB( D1), dosis 50 mg/kg BB (D2)  dan dosis 75 mg/kg BB (D3) + CMC-Na 0,5 %.
Tikus diterapi umbi binahong selama  14  hari  dan  diukur  kadar  glukosa darah  pada  hari  ke-1,  7  dan  14  dengan glukometer.  Setelah  hari  ke-14  tikus dibedah untuk diambil organ jantungnya.

## Uji Aktifitas SOD Preparasi Sampel
Organ  jantung  direndam  dengan PBS  selama  5  menit  dan  ditimbang sebanyak  100  mg  lalu  dihaluskan  dan ditambah  1000  µL  pH  7,4  divortex  selama 5 detik dan diambil supernatannya.

## Penentuan Aktivitas SOD
Supernatan jantung diambil sebanyak  100µL  ditambahkan Xantine 100 µL, Xantine oksidase 100 µL, NBT 100 µL dan  PBS  sebanyak  1600  µL  lalu  divortex selama 5 detik dengan kecepatan 2600 rpm. Setelah itu diinkubasi 30 menit, disentrifugase  selama  10  menit.  Blanko yang  digunakan  adalah  PBS  pH  7,4. Setelah  itu  sampel  dan  blanko  diukur absorbansinya  dengan  spektofotometer  UV pada  panjang  gelombang  580  nm  (Sherly dkk., 2013).
Kurva standar dibuat dengan melarutkan  SOD  murni  komersial  dengan konsentrasi 5, 10, 20, 40, 80, 160 u/ml, lalu diukur  absorbansinya  dengan  panjang gelombang  580  nm  dan  dibuat  kurva standar  untuk  menghitung  aktifitas  SOD pada sampel tersebut.

## Analisis Data
Menggunakan  analisis  uji  ANOVA pada  tingkat  kepercayaan  95  %  kemudian uji Duncan pada taraf nyata 0,05.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Analisis Kadar Air
Kadar  air  yang  diperbolehkan  pada serbuk  umbi  binahong  adalah  sebesar  5,38 %.

## Uji Fitokimia
Golongan  senyawa  yang  dihasilkan
meliputi flavonoid, alkaloid, tannin, terpenoid dan saponin sebagaimana ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1 Hasil pengamatan uji fitokimia
Ket: ++    =  Kandungan  senyawa  lebih  banyak  (warna sangat pekat) +  =Mengandung senyawa (berwarna)

## Pemisahan Senyawa Flavonoid
Pada  KLTA,  senyawa  flavonoid didapatkan  satu  eluen  menunjukkan  hasil pemisahan  baik  yaitu  menggunakan  eluen butanol - asam asetat - air (4:5:1).
Gambar 1. KLTA BAA (4:1:5)
Hasil  elusi  membentuk  6  spot dengan Rf (0,4-0,91). Spot yang
mempunyai  Rf  terkecil  (0,4)  menunjukkan adanya  senyawaan  flavonoid  yang  bersifat seperti  sifat  kepolaran  fase  diamnya sedangkan  nilai  Rf  yang  diatasnya  (0,55- 0,91) senyawa flavonoid juga bersifat polar
namun  lebih  mirip  kepolarannya  dengan fase geraknya.
Tabel 2 Hasil KLTA eluen BAA (4:1:5)
Rf Warna UV 254 nm Warna  UV 366 nm Dugaan Senyawa Sebelu m Setelah 0,4 Hijau kehitaman Hijau Hijau tua Flavonoid 0,55 Hijau kehitaman Merah muda Hijau tua Flavonoid 0,71 - - Merah Flavonoid 0,81 - - Merah muda Flavonoid 0,97 Hijau - Hijau Flavonoid 0,91 Hijau muda - Hijau Flavonoid Uji Antidiabetes Hasil penelitian menunjukkan bahwa  tikus  dengan laik  etik 221-KEP-UB
yang  diinduksi  aloksan  dosis  32  mg/200g BB secara intraperitonial dapat menyebabkan  tikus  menjadi  diabetes,  hal ini karena Aloksan menyebabkan hiperglikemia dengan diawali oleh pembentukan ROS ( reaktif oksigen spesies)
yang  bersifat  toksik,  berkurangnya  jumlah insulin  tersebut  kemudian  menghambat transportasi  glukosa  ke  sel-sel  tubuh sehingga menimbulkan
penimbunan glukosa dalam darah (Lenzen, 2008).
Gambar 2 Diagram batang nilai rerata kadar glukosa darah H 0 dan H 1 Keterangan:
(KO) : tanpa perlakuan injeksi dan terapi (K-) : pemberian pelarut Kontrol positif (K+) : injeksi aloksan dosis 32mg/200g BB 0 100 200 300 400 500 KO  K- K+ D1 D2 D3 Rerata Kadar Glukosa Darah (mg/dL) Sebelum Perlakuan Sesudah Perlakuan
Dosis 1  (D1): pemberian terapi dosis 25 mg/Kg BB Dosis 2  (D2): pemberian terapi dosis 50 mg/Kg BB Dosis 3  (D3): pemberian terapi dosis 75 mg/Kg BB
Kemampuan ekstrak umbi binahong dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah tikus  diabetes  berkaitan  dengan  aktivitas biologis  senyawa  dalam  umbi  binahong. Salah satunya adalah flavonoid yang diduga mengembalikan  sensitifitas  reseptor  insulin pada  sel  sehingga  menurun  kadar  glukosa tersebut,  selain  itu  flavonoid  sebagai antioksidan  yang  dapat  memperbaiki  sel  β pankreas  yang  telah  rusak  akibat  radikal bebas  (Saleh,  2012).  Umbi  binahong  juga mengandung senyawa saponin yang dimungkinkan berperan dalam menghambat aktivitas  enzim  α-glukosidase,  yaitu  enzim yang  bertanggung  jawab  pada  pengubahan karbohidrat  menjadi  glukosa  sehingga menurunkan  kadar  glukosa  darah  (Manoi, 2009).
Berdasarkan hasil uji Duncan diperoleh  dosis 25  mg/kg  BB  yang  bekerja secara  maksimal  dalam  menurunkan  kadar glukosa darah sehingga dosis 25 mg/kg BB memperlihatkan  efek  hipoglikemik  yang paling baik.

## Aktifitas SOD
Pengujian  pada  aktifitas  SOD  ini radikal  superoksida  (O 2 - )  terbentuk  selama aktifitas fisik berat, dimana radikal tersebut bersifat  reaktif  dan  berbahaya  bagi  tubuh, sehingga radikal tersebut dinetralisir dengan enzim SOD dalam  jaringan jantung dan  akan  mengoksidasi  garam  tetrazolium (berwarna  kuning)  yang  terdapat  dalam NBT  menjadi  formazan  yang  berwarna ungu.  Adapun  reaksi  yang  terjadi  sebagai berikut pada Gambar 3.
Pada analisis ini enzim SOD
( Superoksida dismutase) dalam sampel
jantung  akan  berlomba  dengan  NBT  untuk bereaksi dengan radikal superoksida sehingga menghambat pembentukan zat warna ( dye ).
Gambar 3.Reaksi radikal superoksida dan NBT menghasilkan formazan (Ukeda et al , 1999)
Hasil  pengujian  aktifitas  SOD  ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel  3  Rerata  aktivitas  SOD  ( Superoksida dismutase) Perlakuan Aktivitas SOD (u/ml) K O 5,386 ± 0,28 K - 5,219 ± 0,2 K+ 4,358 ± 0,27 D1 5,511 ± 0,12 D2 5,247 ± 0,37 D3 4,942 ± 0,28 Tiga  kelompok  terapi  ekstrak  umbi binahong
mengalami peningkatan dibandingkan  dengan  kelompok  positif yang  lebih  rendah.  Hal  tersebut  terjadi karena  kandungan  aktif  dalam  umbi binahong  bertindak  sebagai  antioksidan alami  yang  menghambat  radikal  bebas sehingga terjadi peningkatan aktivitas SOD. Salah  satu  golongan  senyawa  antioksidan tersebut adalah flavonoid. Flavonoid tersebut berperan sebagai scavenger radikal karena  mampu  menangkap  radikal  bebas dalam tubuh dengan adanya ikatan rangkap terkonjugasi dan atom H sebagai donor dari gugus  hidroksil  (-OH)  fenolik  pada  saat bereaksi  dengan  radikal  bebas  (Retno, 2013).

## IV. KESIMPULAN
Hasil  uji  fitokimia  umbi  binahong meliputi  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  saponin
Keterangan:  R 1 = H  R 2 = I

## ALCHEMY , Vol. 4 No. 1 Maret 2015, hal 73-78
dan  terpenoid,  dimana  eluen  terbaik  yang dihasilkan dari KLT analitik pada pemisahan senyawa flavonoid adalah butanol–  asam  asetat  –air  (4:1:5).  Umbi binahong  ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)  memiliki  aktivitas  antidiabetes yaitu  mampu  menurunkan  kadar  glukosa darah  serta  pada  peningkata  aktifitas  SOD ( Superoksida dismutase) jantung tikus yang diterapi ekstrak dosis 25, 50, 75 mg/kg  BB berturut-turut 5,511 u/ml ;  5,217 u/ml  dan 4,942  u/ml.  Dosis  terbaik  adalah  25  mg/kg BB.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  S.M.  2011.  Skrining  Fitokimia  dan Uji  Aktifitas  Antibiotika  Ekstrak Etanol  Daun,  Batang,  Bunga  dan Umbi  Tanaman  Binahong (Anredera cordifolia (Ten)  Steenis ) .  Fakultas Kejuteraan Kimia. Malaysia: Universitas Malaysia Pahang. Gustaviani,  R.  2006. Buku  Ajar  penyakit
Dalam  Jilid  III  Edisi  IV:  Diagnosa dan  Klasifikasi  Diabetes  Mellitus.
Jakarta: FKUI.
Lenzen, S. 2008. The Mekanism of alloxan and streptozotocin-induced diabetes .Diabetologia Makalalag,  I.W.  Wullur,  A.  Adeanne  dan
Wiyono, W. 2013. Uji Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia ( Ten) Steenis) Terhadap Kadar Gula Darah Pada  Tikus  Putih  Jantan  Galur Wistar (  Rattus  norvegicus) yang diinduksi  Sukrosa .  Jurnal  Ilmiah farmasi- UNISRAT. Vol 2. No. 01.
Manoi,  Feri.  Dan  Ballitro,  2009.  Binahong (Anredera  cordifilia) sebagai  obat.
Warta Penelitian dan Pengembangan . Jurnal. Vol.15 No.1.hlm: 3-6.
Retno, A., Aulanni’am dan Prasetyawan, S.
2013. Potensi  Ekstrak  Rumput  Laut
Coklat (Sargassumprismaticum) untuk Meningkatkan Aktivitas Superoksida  Dismase  (SOD) dan gambaran  Histoplogi  jaringan  Hepar pada  Tikus (Rattus  norvegicus)
Diabetes  Melitus  Tipe  1. Kimia Student Journal. Vol 2.No 1.hlm:414-420. Saleh,  C.,  Sitorus,  dan  Nursanti.  2012.  Uji Hipoglikemik Ekstrak Etanol Umbi .
Anredera  cordifolia  [Ten.]  Steenis. Jurnal .  Samarinda:  Jurusan  Kimia Fakultas MIPA Universitas Mulawarman.Vol 11. hlm: 96-99 Selawa, W., Runtuwene, M.R dan Citraningtyas, G.  2013. Kandungan Flavonoid dan Kapasitas Antioksidan  Total  Ektrak  Etanol Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten)  Steenis). Jurnal Ilmiah  farmasi –  UNSRAT.  Vol  2. No.1.
Sherly  R,  Barlianto  W  dan  Setyohadi  R.
2013. Pengaruh Selenium (Se) Pada Model Tikus Putih ( Rattus Norvegicus ) dengan Pajanan Ovalbumin-Induced Allergic Asthma (OVA). Tugas Akhir , Fakultas  Kedokteran  Universitas
Brawijaya Malang.
Szkudelski,  k  and  Szkudelska.  2001.
Streptozotocin  Induces  Lipolysis  in Rat Adipocytes in Vitro . Department of Animal Physiology and Biochemistry, University of Agriculture, Poznań, Poland. Physiol. Res.51: 255-259. Ukeda  H,  Kawana  D,  Maeda  S  dan Sawamura M. 1999. Spestrophotometric Assay for Superoxide Dismutase Based on the Reduce  of  Highly  Water-soluble Tetrazolium  Salts  by  Xanthine- Xanthine Oxidase. Biosci Biotechnol,  Biochem .,  63  (3),  485- 488.