## KAJIAN BIOAKTIFITAS DAN ANALISA KANDUNGAN SENYAWA
METABOLIT SEKUNDER DARI TUMBUHAN Hornstedtia scyphifera var. fusiformis DENGAN HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
STUDY OF BIOACTIVITY AND ANALYSIS OF SECONDARY METABOLITE COMPOUNDS FROM THE PLANT Hornstedtia scyphifera var. fusiformis With HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
Adlis Santoni, Mai Efdi,  Akmel Suhada
Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Andalas, Padang, Indonesia
Email korespondensi: adlis_1962@yahoo.com

## Abstrak
Hornstedtia  scyphifera  var.  fusiformis merupakan  tumbuhan  endemik  dari  famili  Zingiberaceae  yang tersebar di Sumatera. Tumbuhan ini  mengandung beberapa metabolit sekunder seperti fenolik, flavonoid, saponin, triterpenoid, steroid dan alkaloid. Pengujian Bioaktifitas meliputi uji antioksidan dan antibakteri. Aktivitas  antioksidan  ditentukan  dengan  metoda  DPPH.  Sedangkan  aktivitas  antibakteri  diuji  dengan metode difusi cakram terhadap bakteri Staphylococcus aureus (bakteri gram positif) dan Escherichia coli (bakteri  gram  negatif).  Hasil  analisa  aktitifitas  antioksidan  dari  ketiga  ekstrak,  diperoleh  bahwa  ekstrak metanol menunjukkan aktifitas antioksidan yang paling aktif dengan IC 50 = 51,8943 mg/L dibandingkan dua  ekstrak  lainnya.  Ketiga  esktrak Hornstedtia  scyphifera  var.  fusiformis memberikan  aktivitas antibakteri, selanjutnya esktrak n-heksan dan etil asetat pada konsentrasi 500 ppm memiliki zona hambat 10 mm terhadap bakteri  Escherichia coli  dan Staphylococcus aureus memiliki zona hambat 10,3 mm. Untuk mengetahui jumlah senyawa metabolit sekunder  yang terkandung dalam  tumbuhan ini dilakukan analisa dengan HPLC.
Kata Kunci : Hornstedtia scyphifera var. fusiformis , antibakteri, antioksidan, HPLC.

## PENDAHULUAN
Penggunaan tumbuhan sebagai pilihan obat herbal telah menjadi fenomena yang universal. Sekarang ini, sebanyak 80% dari  populasi  dunia  telah  memilih  obat tradisional  sebagai  kebutuhan  perawatan kesehatan  primer.  Kemajuan  penelitian  di lapangan  yang  terus  berkelanjutan  telah memperjelas bahwa banyak spesies tanaman yang  dimanfaatkan  oleh  masyarakat  adat menjadi  pilihan  dalam  dunia  industri  obat. Baru-baru  ini,  kebanyakan  dari  penelitian yang telah dilakukan terhadap obat tradisional  menunjukkan  bahwa  beberapa obat  yang  diperoleh  dari  penyembuhan tradisional sangat efektif dan ini diperlukan pembenaran  ilmiahnya.  Sebagian  besar terapi tradisional juga melibatkan penggunaan  ekstrak  tanaman  sebagai  dasar
penyembuhan. (S,  Karumaran,    et  al  ,2016  ; Julie J. and Ernest TJ. 2012 )
Penelusuran  literature  ditemukan  bahwa tanaman  family  Zingiberaceae  atau  lebih dikenal sebagai keluarga rimpang- rimpangan  terdiri  dari  52  genus  dan  1300 spesies banyak dimanfaatkan sebagai bahan obat. Tanaman ini pada umumnya mengandung minyak atsiri dan dari hasil uji fitokimia  tanaman  ini  memiliki  aktivitas biologis  seperti  antimikroba,  antiokisidan, antikanker  dan  efek    stimulan  terhadap sistem  imun.  ( ( Tg.  Kamazeri,  T.S.A., et  al 2012 ; Natta, L., Orapin, K ., Krittika, N. and Pantip,  B. 2008 ; . Hashim,  S .E.,  Sirat,  H.M. and Yen, K.H. 2014).
34 | Jurnal Zarah , Vol. 5 No. 2 (2017)
Hornstedtia merupakan salah satu genus dari family Zingiberaceae yang memiliki aktivitas biologis antimikroba dan antijamur.  Beberapa  spesies  Hornstedtia yang  telah  diteliti  seperti  Hornstedtia scyphifera, Hornstedtia
ophiuschus,
Hornstedtia striolata, Hornstedtia havilandii dan Hornstedtia phaeochana  aktif terhadap bakteri  Staphylococcus  aureus,  Escherichia coli,  dan  jamur  Candida  albican.  Beberapa ekstrak Hornstedtia leonurus. Retz juga telah dilaporkan  memiliki  aktivitas  antioksidan. ( Jani, Nor Akmalazura., Ibrahim, Nordiana., dkk, 2016 ; Jani, Nor Akmalazura., Ibrahim,
Nordiana., dkk, 2016, ;  Lestari Titi., dkk. 2016)
Hornstedtia sciphyfera var
fusiformis merupakan salah satu varian dari Hornstedtia  sciphyfera  yang  ditemukan  di Sumatera Barat, Sumatera Selatan, Sumatera Utara  dan  Riau  dalam  jumlah  yang  cukup banyak 9 .Skrining aktivitas antioksidan terhadap esktrak Hornstedtia sciphyfera var fusiformis menunjukkan bahwa Hornstedtia sciphyfera var fusiformis memiliki aktivitas antioksidan.  Namun  tingkat  kemampuan antikosi  dan  dan  antibakteridari  ektrak tanaman  ini  belum  ada  yang  melaporkan termasuk  identifikasi  metabolit  sekunder yang ada dalam tanaman tersebut.
Oleh karena itu perlu diteliti apa saja kandungan metabolit sekunder yang terdapat pada  bagian  akar  gantung    tumbuhan Hornstedtia  scyphifera  var  fusiformis  dan bagaimanakah aktivitas ekstrak metanol, etil asetat  dan  n-heksan  dari  akar  gantung Hornstedtia scyphifera var fusiformis terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli  dan  aktivitas  antioksidan dari  ekstrak  metanol,  etil  asetat,  dan  n- heksan  dari  akar  gantung  Hornstedtia scyphifera  var  fusiformis  serta  berapa jumlah  senyawa  metabolit  sekunder  yang dominan  terkandung  pada  akar  gantung Hornstedtia scyphifera var fusiformis.
Tujuan penelitian ini adalah
menentukan metabolit sekunder yang terkandung  pada  bagian  akar  gantung Hornstedtia  scyphifera  var  fusiformis. menguji  aktivitas  ekstrak  akar  gantung Hornstedtia scyphifera var fusiformis terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli  dengan  metode  difusi cakram,  menentukan  aktivitas  antioksidan dengan  menggunakan  metode  DPPH  dari ekstrak-ekstrak  akar  gantung  Hornstedtia
scyphifera  var  fusiformis  dan  menentukan jumlah  senyawa  metabolit  sekunder  yang dominan  terkandung  pada  akar  gantung Hornstedtia scyphifera var fusiformis dengan HPLC. Hasil penelitian ini diharapkan  dapat  memberikan  informasi mengenai  hasil  fitokimia  dari  akar  gantung Hornstedtia  scyphifera  var  fusiformis, aktivitas  antimikroba,  antioksidan  dan jumlah  senyawa  metabolit  sekunder  yang dominan  terkandung  dari  ekstrak-ekstrak akar  gantung    Hornstedtia  scyphifera  var fusiformis sehingga  dapat  dimanfaatkan dalam    dibidang  kesehatan  yang  bernilai ekonomis dan mudah didapat.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  corong,  rotary  evaporator,  botol reagen,  botol  vial,  neraca  analitik,  cawan petri,  micropipette, gelas piala, erlenmeyer, tabung  effendorf,  microplate,  labu  ukur  10 mL, labu ukur 100 mL, pipet gondok 2 mL, pipet gondok 5 mL, pipet takar, Lampu UV (λ  254  dan  356  nm),  laminar  flow,  dan
HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  sampel  Hornstedtia  scyphifera  var fusiformis Holttum, pelarut teknis yang telah didistilasi  yaitu  heksana,  etil  asetat,  dan metanol.  Aluminium  foil,  akuades,  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus, dimetilsulfoksida,    gentamicyn,    media Muller-Hilton  agar,  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil),  Whatman  No.  40,  alkohol 75%,  asam  askorbat,  pereaksi,  pereaksi Lieberman  Burchard  (asam  asetat  anhidrat dan asam sulfat pekat), sianidin test (bubuk magnesium  dan  asam  klorida  pekat),  besi (III)  klorida,  plat  KLT  dan  natrium hidroksida Bahan tumbuhan Hornstedtia scyphifera var fusiformis Holttum diperoleh dari Kawasan Padang Lua, Sumatera Barat dan Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium
Universitas Andalas.

## Prosedur Penelitian
Penelitian  kandungan  metabolit  sekunder tumbuhan Hornstedtia scyphifera var fusiformis  Holttum  meliputi  beberapa tahapan :
Jurnal Zarah , Vol. 5 No. 2 (2017) | 35 Tahap  survey  fitokimia  untuk  memperoleh sampel 1. Tahap  pengujian  profilfitokimia  untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder, meliputi pemeriksaan senyawa metabolit sekunder dari golongan:
1) Steroid, Triterpenoid dengan pereaksi  Lieberman  Burchard (asam  asetat  anhidrat  dan  asam sulfat pekat). 2) Saponin dilakukan pengujian busa dengan air.
3) Flavonoid dengan pereaksi sianidin  test  (bubuk  magnesium dan asam klorida pekat) 4) Fenolik,    dengan  pereaksi  besi (III) klorida 5) Kumarin diuji dengan menggunakan  plat  KLT  dan natrium hidroksida 6) Alkaloid  diuji  dengan    pereaksi Mayer 2. Tahap  pengekstraksian  dengan  pelarut heksan,  etilasetat  dan  metanol  untuk memperoleh kelompok senyawa metabolit sekunder berdasarkan kepolaran. 3. Tahap pengujian antibakteri dari
masing-masing  ekstrak  dengan  metode difusi  cakram  untuk  mengetahui  fraksi aktif sebagai antibakteri 4. Tahap pengujian antioksidan dari masing-masing  ekstrak  dengan  metode
DPPH  untuk  mengetahui  fraksi  aktif sebagai antioksidan.
5. Tahap  penentuan  jumlah  senyawa metabolit  sekunder  dari  masing  fraksi aktif  dengan  mengunakan  metoda kromatography  cair  bertekanan  tinggi
(HPLC).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium  Universitas  Andalas  (ANDA) Padang melalui surat Nomor 98/K- ID/ANDA/I/2017.  Berat  sampel  yang diperoleh seberat 3 kg. Uji  profil  fitokimia  dilakukan  pada bagian akar gantung Hornstedtia scyphifera var. fusiformis Holttum diketahui
mengandung  beberapa  golongan  metabolit sekunder seperti fenolik, flavonoid,saponin, triterpenoid, steroid dan alkaloid.
Hasil  ekstraksi  sebanyak  120  gram sampel  kering  akar  gantung  Hornstedtia scyphifera  var.  fusiformis  Holttum  dengan pelarut  metanol  diperoleh  massa  ekstrak 2,040  g  (1,7  %),  massa  ektrak  etil  asetat 1,000 g (0,833 %) dan massa ekstrak heksan 1,955 (1,629 %). Dari data tersebut diketahui bahwa  senyawa  yang  bersifat  polar  paling banyak terdapat pada akar gantung Hornstedtia  scyphifera  var.  fusiformis Holttum.  Hal  ini  dapat  dilihat  dari  massa ekstrak metanol yang memiliki massa paling besar dibandingkan esktrak lainnya.
Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan terhadap bakteri gram positif yaitu Staphylococcus  aureus  dan  bakteri  gram negatif  yaitu  Escherichia  coli.  Sebagai pembandingnya digunakan gentamicyn dengan  konsentrasi  10  μg  sebagai  kontrol positif  dan  DMSO  0,1%  sebagai  kontrol negatif.  Pengukuran  dilakukan  tiga  kali ulangan  untuk  masing-masing  konsentrasi dan  masing-masing  esktrak.  Hasil  uji aktifitas terhadapa bakteri dapat dilihat pada tabel 1.

## Tabel 1. Hasil Uji Aktivitas terhadap
Bakteri Ekstrak Diameter Zona Bening (mm) pada Variasi Konsentrasi Konsentras i (ppm) Bakteri S. aureus E. coli Metanol 125 8,67 8,3 250 9,67 9 500 10 9,3 Etil Asetat 125 8,3 8,67 250 9 8,83 500 10,3 10 Heksan 125 9,3 8,67 250 10 9,67 500 10,3 10 Kontrol (+) 37 44 Kontrol (-) 1% 7 6
Hasil  pengukuran  zona  bening  terlihat bahwa  zona  hambat  paling  besar  untuk bakteri  Escherichia  coli  terdapat  pada konsentrasi 500 ppm 9,3 mm untuk ekstrak metanol, 500 ppm 10 mm untuk ekstrak etil asetat dan 500 ppm 10,3 mm untuk ekstrak heksan. Sedangkan terhadap bakteri
36 | Jurnal Zarah , Vol. 5 No. 2 (2017)
Staphylococcus aureus, zona hambat paling besar  terdapat  pada  konsentrasi  yang  sama yaitu  500  ppm  9,3  mm  untuk  ekstrak metanol,  500  ppm  10,3  mm  untuk  ekstrak etil  asetat  dan  500  ppm  10,3  mm  untuk esktrak heksan.
Hasil pengujian aktifitas antioksidan  dengan  menggunakan  metoda DPPH. Untuk  masing-masing ekstrak dapat dilihat pada Gambar 1
Gambar 1. Kurva Antioksidan dengan metode DPPH
Berdasarkan  grafik  dapat  dilihat, ektrak  metanol  mengalami  kenaikan% inhibisi yang dratis dari konsentrasi 25 ke 50 ppm. Sedangkan ekstrak etil asetat mengalami  kenaikan  yang  paling  stabil dengan  nilai  R 2 =  0,968  (mendekati  1) dibandingkan dengan ekstrak  yang lainnya. Meskipun ekstrak n-heksan tidak menunjukkan  kenaikan  yang  berpluktuasi seperti ekstrak metanol namun, pada esktrak n-heksan  nilai  R 2 =  0,676  sangat  jauh  dari nilai metanol yaitu R 2 = 0,915.
Ekstrak metanol memiliki aktivitas antioksidan  yang  paling  bagus  diantara ekstrak  yang  lainnya  dengan  nilai  IC 50 = 51,8943mg/L  dan  digolongkan  sebagai antioksidan  yang  kuat.  Sedangkan  ekstrak etil  asetat  dengan  IC 50 =  111,52217  mg/L
digolongkan  sedang  dan  esktrak  n-heksan dengan  IC 50 =  394,1463  mg/L  digolongkan lemah.
Pengukuruan    jumlah  senyawa metabolit  sekunder  yang  terdapat  di  fraksi metanol, fraksi etil asetat dan fraksi heksan dengan menggunakan metoda HPLC , belum dapat  dilaporkan  karena  dalam  proses pengerjaan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan dapat disimpulkan, bahwa golongan metabolit sekunder yang
terkandung  dalam  bagian  akar  gantung Hornstedtia  scyphifera  var.  fusiformis Holttum adalah fenolik, flavonoid, saponin, triterpenoid,  steroid  dan  alkaloid.  Semua ekstrak akar gantung Hornstedtia scyphifera var.  fusiformis  Holttum  memiliki  aktivitas terhadap Staphylococcus aureus dan
Escherichia  coli  dan  rata-rata  memberikan zona  hambat  paling  besar  pada  kosentrasi 500  ppm  untuk  masing-masing  ekstrak. Aktivitas  antioksidan  yang  paling  aktif diberikan oleh ekstrak metanol dengan IC 50 = 51,8943 mg/L diantara ekstrak lainnya.

## SARAN
Beberapa  saran  untuk  penelitian  lanjutan sebagai berikut :
1. Untuk melakukan isolasi dan karakterisasi senyawa metabolit sekunder  dari  ekstrak  metanol  karena ekstrak ini aktif sebagai antioksidan.
2. Untuk  melakukan  uji  aktivitas  lainya seperti  penentuan  total  fenolik  dan  uji toksisitas terhadap ekstrak akar gantung Hornstedtia  scyphifera  var.  fusiformis Holttum.
3. Untuk  melakukan  identifikasi  senyawa metabolit sekunder serta uji bioaktivitas terhadap  bagian  tumbuhan  Hornstedtia scyphifera var. fusiformis Holttum yang lainnya
y = 0.0414x + 33.848 R² = 0.6768 y = 0.3832x + 30.093 R² = 0.915 y = 0.1381x + 34.617 R² = 0.9685 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 50 100 150 % In h ib isi Konsentrasi ( mg/L ) Heksan

## DAFTAR RUJUKAN
Hartati,  Rika.  Suganda,  Asep  Gana.  Fidrianny,
Irda.  Ginting,  Theresia  Monica.  (2014). Total Flavonoid Content and Antimicrobial Properties Of Four Species Of Zingiberaceae. International Journal of
Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences. ISSN- 0975-1491 Vol 6, Issue 7.
Hashim,  S.E.,  Sirat,  H.M.  and  Yen,  K.H.

## (2014). “Chemical Compositions and
Antimicrobial Activity of the Essential Oils of Hornstedtia havilandii  (Zingiberaceae)”.  Natural Product  Communications.  9(1):  119- 120 Hashim. HM, Sirat. KH, Yen.
(  2015)Antioxidant  and  α-Glucosidase Inhibitory  Constituents  from  Hornstedtia
Species  of  Malaysia.  Natural  Product Community.Sep;10(9):1561-3.
Hassan,A.S.  (2014).  The  Antibacterial  Activity of Dimethyl Sulfoxide (DMSO) with and without  of  Some  Ligand  Complexes  of the  Transitional  Metal  Ions  of  Ethyl Coumarin  against  Bacteria  Isolate  from Burn  and  Wound  Infection.  Journal  of Natural  Science  Research.  Vol4,  No  19. Hal 106-111.
Jani, Nor Akmalazura., Ibrahim, Nordiana., dkk,  (  2016)  Antimicrobial  and Antioxidant Activities of Hornstedtia leonurus  Rezt.  Extract,  Journal  of
Science and Technology.
Julie J. and Ernest TJ. (2012). Evaluation of Antioxidant  Potential  of  Rhizome Extyracts  of  Two  Species  of  Alpinia Roxb.  (Zingiberacea).  International Research Journal of Pharmacy. 3(4) :
402-404. Kalita,  Sanjeeb,  Kumar,  Gaurav,  Karthik, Loganathan, Rao, Kokati Venkata Bhaskara. (2014)  In vitro antioxidant and
DNA  damage  inhibition  activity  of aqueous  extract  of  Lantana  camara  L. (Verbenaceae)  leaves.  Asian  Pacific Journal of Tropical Medicine. 1675-1679
Kamazeri,  T.S.A.,  Abd  Samah,  O.,  Taher, M.,  Susanti,  D.  and  Qaralleh,  H. (2012).  “Antimicrobial  Activity  and Essential Oils of Curcuma aeruginosa,
Curcuma  mangga,  and  Zingiber cassumunar  from  Malaysia”.  Asian
Pacific Journal of Tropical Medicine. 202-209 Karumaran.,  S,  Nethaji.,  R,  Rajakumar.,
(2016) Antimicrobial and antioxidant activity  of  leaf  extracts  of  Aegle marmelos,  Advances  in  Applied
Science Research, 7(3):205-208.
Khalaf,  N.  A.  (2008).  Antioxidant  Activity  of Some  Common  Plants,  Faculty  of Pharmacy  and  Medicinal  Sains,  Jordan, 32, Hal 51-55.
Lestari Titi., dkk. (2016) Studi Morfometrik Hornstedtia leonurus (J.Koenig) Retz. (Zingiberaceae) dan Kerabat Dekatnya  dalam  Tribe  Alpiniae  di Sumatera  Barat,  Jounal  Biologi Universitas Andalas,  (4). Molyneux, P.(2004) The use of stable free radical diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH) for estimazing antioxidant activity. Songklanakarin  J  Sci  Technol,  26:211-
219
Natta, L., Orapin, K., Krittika, N. and Pantip, B.  (2008).  “Essential  Oil  from  Five
Zingiberaceae  for  Anti  Food-borne Bacteria”. International Food Research Journal. 15(3): 337-346. Nurainas.,  Syamsuardi.,  Rabin,  Adrianis., Distribusi Hornstedtia Retz. (Zingiberaceae) di Sumatera, Universitas Andalas. Shekhar,  T,  C,  Anju,  G  (  2014).    Antioxidant activity  by  DPPH  Radical  Scavenging Method  of  Agretum  conyzoides  Linn. Leaves, American Journal of Ethnomedicine , Vol 1, No 4, 244-249 Wadhwani,T.  Desai,K.  Patel,D.  Lawani,D.
Bahaley,P.  Joshi,P.  Kothari,V.  (2008). Effect  of  various  solvents  on  bacterial growth  incontext  of  determining  MIC  of various  antimicrobials.  The  Internet
Journal of Microbiology. Vol 7, No 1, Hal 1-6. Wanjek,  C.  (2001).  Mixed  messages: antioxidants  may  in  some  cases  do more harm than good. The
Washington Post, 7 Aug, p HE01.