PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF BELIMBING BOTOL LEAF EXTRACT (Averrhoa bilimbi L.) AGAINST THE GROWTH OF Propionibacterium acne, AN ACNE-CAUSING

## BACTERIA
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN BELIMBING BOTOL (Averrhoa bilimbi L. ) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Propionibacterium acne PENYEBAB JERAWAT
Widya Hana Putri Gerung 1)* , Fatimawali 1) ,  Irma Antasionasti 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *hanaptr89@gmail.com

## ABSTRACT
Acne (acne vulgaris) is an inflammatory condition that commonly occurs on the skin. Acne can be caused by the bacteria  Staphylococcus aureus, Propionibacterium acnes, and Staphylococcus epidermidis. This study aims to determine the antibacterial activity of belimbing botol leaves against the bacteria Propionibacterium acne. Extraction was carried out by maceration using ethanol 95% solvent. Antibacterial activity testing was carried out using the well agar diffusion method. The results of the antibacterial activity test were analyzed using One Way Anova followed Tukey test. Inhibition of the ethanol extract of belimbing botol leaves at 24 hours and 72 hours with the concentrations used in this study were 10% (13.9 mm and 14.3 mm), 20% (17.7 mm and 17.6 mm), 40%. (18.3 mm and 18.1 mm), and 60% (22.2 mm and 23.1 mm). The Inhibition zone with very  strong  antibacterial  activity  against  bacteria  Propionibacterium acne  at intervals  of  24  hours  and  72 hours is the concentration of 60% (22.2 mm and 23.1 mm).
Keywords : Antibacterial activity, Leaves of belimbing botol (Averrhoa bilimbi L.), Propionibacterium acne, Well diffusion method

## ABSTRAK
Jerawat (acne  vulgaris) merupakan  suatu  kondisi  inflamasi  yang  secara  umum  terjadi  pada  bagian  organ kulit.  Jerawat  dapat  disebabkan  oleh  bakteri Staphylococcus  aureus,  Propionibacterium  acnes  dan Staphylococcus  epidermidis .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  daun  belimbing  botol sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri Propionibacterium  acne .  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  etanol  95%.  Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  metode difusi  agar  dengan  cara  sumuran.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dianalisa  dengan  metode One  Way  Anova dilanjutkan  uji  Tukey.  Daya  hambat  ekstrak  etanol  daun  belimbing  botol  pada  waktu  24  jam  dan  72  jam dengan konsentrasi yang digunakan dalam penelitian yaitu 10% (13,9 mm dan 14,3 mm), 20% (17,7 mm dan 17,6  mm),  40%  (18,3  mm  dan  18,1  mm),  dan  60%  (22,2  mm  dan  23,1  mm).  Zona  hambat  yang  memiliki aktivitas antibakteri sangat kuat terhadap bakteri Propionibacterium acne pada selang waktu 24 jam dan 72 jam yaitu konsentrasi 60% (22,2 mm dan 23,1 mm).
Kata  kunci :  Aktivitas  antibakteri,  Daun  belimbing  botol  ( Averrhoa  bilimbi L.), Propionibacterium  acne , Metode difusi sumuran
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Wajah  yang  kurang  bersih  rentan  terhadap gangguan  kesehatan,  baik  yang  disebabkan  oleh produksi  kelenjar  minyak  berlebihan,  faktor hormonal  maupun  aktivitas  sehari-hari.  Jerawat biasanya  rentan  terkena  pada  usia  remaja  dan dewasa  muda.  Meskipun  jerawat  bukan  penyakit infeksi  serius  namun  banyak  remaja  yang mengalami  depresi,  kecemasan  dan  putus  asa dikarenakan  jerawat  yang  berpotensi  merusak penampilan.
Jerawat  dapat  disebabkan  oleh  bakteri staphylococcus  aureus , propionibacterium  acnes
dan
staphylococcus
epidermidis . Propionibacterium  acne dan Staphylococcus epidermidis merupakan  mikroba  pembentuk nanah yang bertanggung jawab untuk pengembangan  berbagai  bentuk acne  vulgaris . Propionibacterium  acne adalah  bakteri  gram positif  dan  merupakan  salah  satu  flora  normal pada  kulit  manusia,  rongga  mulut,  usus  besar, konjungtiva  dan  saluran  telinga  luar.  Bakteri  ini mendominasi  di  daerah  folikel  sebasea  kulit  dan dapat  menyebabkan  jerawat  ketika  menginfeksi kulit  (Mollerup et  al .,  2016).  Mekanisme
terjadinya
jerawat adalah bakteri Propionibacterium acne merusak stratum corneum dan stratum  germinat dengan  cara mensekresikan sebum yang menghancurkan dinding  pori.  Kondisi  ini  dapat  menyebabkan inflamasi,  asam  lemak,  kelenjar  minyak  kulit tersumbat  dan  mengeras  (Miratunnisa et  al ., 2015).
Salah satu tumbuhan yang dapat dimanfaatkan sebagai  obat  tradisional  yaitu  belimbing  botol ( Averrhoa  bilimbi L ) .  Ekstrak  etanol  daun belimbing  botol  memiliki  kandungan  flavonoid dan  tanin  yang  terdapat  dalam  daun  belimbing berpotensi sebagai antibakteri (Yusriani, 2017).
Berdasarkan  penelitian  sebelumnya  maka peneliti  tertarik  untuk  melakukan  pengujian aktivitas antibakteri dari belimbing botol ( Averrhoa  bilimbi L ) dengan  menggunakan metode sumuran (difusi agar) karena lebih mudah untuk mengukur luas zona hambat yang terbentuk akibat  isolat  yang  beraktivitas  tidak  hanya  di permukaan agar tetapi juga sampai kebawah agar.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Peneliatian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari 2021  sampai  bulan  Maret  2021  di  Laboratorium Mikrobiologi  Farmasi  Program  Studi  Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi Manado.

## Alat dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  timbangan  analitik,  tabung  reaksi,  rak tabung reaksi, cawan petri ( Pyrex ), blender , gelas kimia  ( Pyrex ),  gelas  ukur,  batang  pengaduk, kertas saring, toples, Erlenmeyer ( Pyrex ), bunsen, jarum ose, pipet tetes, autoklaf , pinset, aluminium foil ,  jangka  sorong,  inkubator,  kertas  label, Laminar  air  flow ,  spidol, hot  plate ,  mikropipet, plastik wrap, ayakan mesh dan alat fotografi.

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun belimbing botol, etanol 95%,  aquades,  NaCl  0,9%, H 2 SO 4 , BaCl 2 . 2H 2 O , Nutrient Agar (NA), biakan bakteri Propionibacterium  acne ,  dan  Clindamycin  300 mg.

## Jenis Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium. Uji aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  daun  belimbing  botol terhadap bakteri Propionibacterium acne dilakukan  secara in  vitro menggunakan  metode difusi sumuran dengan analogi penentuan diameter zona hambat.

## Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  belimbing  botol (Averrhoa  bilimbi L. ) yang diambil dari Kota Bitung, Sulawesi Utara.

## Prosedur Penelitian Persiapan Sampel
Pengambilan  daun  belimbing  botol  yang dipilih  harus  daun  yang  segar  dan  sehat.  Pada tahap  awal  sampel  daun  belimbing  botol dikumpulkan,  selanjutnya  dicuci  di  bawah  air mengalir  sampai  bersih  kemudian  ditiriskan,  lalu dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. Sampel  yang  telah  kering  dibuat  serbuk menggunakan blender ,  serbuk  yang  dihasilkan diayak dengan menggunakan ayakan mesh hingga diperoleh  serbuk  yang  halus  dan  homogen.  Hasil yang  telah  didapatkan  dimasukkan  kedalam wadah tertutup (Gunawan dan Mulyani, 2004).
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  daun  belimbing  botol dilakukan  dengan  menggunakan  metode  maserasi dengan pelarut etanol 95%. Simplisia kering daun belimbing  botol  ditimbang  sebanyak  400g kemudian  direndam  dengan  pelarut  etanol  95% sampai  simplisia  terendam  seluruhnya.  Wadah maserasi  ditutup  dan  dibiarkan  selama  5  hari sambil sesekali dialakukan pengadukan dan harus terlindungi dari sinar matahari langsung. Hasilnya disaring dengan kertas saring dan diperoleh filtrat dan  residu.  Remaserasi  dilakukan  selama  3  x  24 jam. Filtrat yang diperoleh kemudian di oven dan diuapkan sehingga diperoleh ekstrak etanol kental. Ekstrak  kental  yang  telah  dihasilkan  ditimbang dan disimpan dalam wadah gelas tertutup sebelum digunakan dalam pengujian.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  dan  media  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  disterilkan  terlebih  dahulu menggunakan autoklaf pada  suhu  121°C  selama 15  menit  sedangkan  untuk  kawat  ose  dan  pinset disterilkan  dengan  cara  dibakar  menggunakan pembakaran di atas api langsung (Lay, 1994).

## Pembuatan  Larutan  Kontrol  Positif  Dan Negatif
Kontrol  negatif  menggunakan  aquades  steril. Pembuatan  larutan  kontrol  positif  dibuat  dari sediaan antibiotik Clindamycin 300 mg. Sebanyak 10 kapsul clindamycin dibuka kemudian ditimbang satu per satu dan dihitung rata-ratanya, kontrol  positif  diencerkan  menggunakan  aquades 10  ml  dan  diperlukan  sebanyak  20  mg  serbuk clindamycin.  Sehingga  dihitung  penimbangan clindamycin:
20 𝑚𝑔 300 𝑚𝑔 × 𝑟𝑎𝑡𝑎 − 𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑖𝑠𝑖 10 𝑘𝑎𝑝𝑠𝑢𝑙 𝑐𝑙𝑖𝑛𝑑𝑎𝑚𝑦𝑐𝑖𝑛

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat larutan uji 10%, 20%, 40%, dan 60% b/v dengan cara ditimbang 0,1 g; 0,2 g; 0,4 g; dan 0,6  g  ekstrak  daun  belimbing  botol  kemudian masing-masing  ditambahkan  aquades  hingga volume 1 ml.

## Pembuatan Media Media Agar Miring
Nutrient Agar ditimbang sebanyak 0,56 g dan dilarutkan  ke  dalam  20  ml  aquades (28g/1000ml) menggunakan erlenmeyer. Selanjutnya dihomogenkan dengan hot plate hingga mendidih. Sebanyak  5  ml  dituangkan  pada  2  tabung  reaksi
steril  dan  kemudian  ditutup  dengan aluminium foil .  Media  tersebut  disterilkan  dalam autoklaf pada  suhu  121°C  selama  15  menit,  dan  dibiarkan pada  suhu  ruangan  selama  ±  30  menit  hingga media  memadat  pada  kemiringan  ±  30°.  Media agar miring digunakan untuk inokulasi bakteri.

## Media Dasar Dan Media Pembenihan
Pembuatan  media  NA  ( Nutrient  Agar ) dilakukan  dengan  cara  menimbang  sebanyak  4,2 g.  Kemudian  dimasukkan  ke  dalam  labu erlenmeyer lalu dilarutkan dengan 150 ml aquades (28g/1000ml). Setelah itu media NA dihomogenkan  di  dalam  labu  erlenmeyer  dan dipanaskan  menggunakan hot  plate selama  ±10 menit  hingga  NA  larut.  Media  yang  telah homogen  disterilisasi  menggunakan autoklaf selama  15  menit  pada  suhu  121°C.  Setelah  itu media  NA  ditunggu  hingga  suhu  ±  40-45°C, media  NA  yang  telah  dituang  ke  dalam  cawan petri dibiarkan hingga memadat. Media dasar dan media  pembenihan  digunakan  dalam  pembuatan media pengujian sebagai lapisan dasar dan lapisan kedua.

## Inokulasi Bakteri Uji
Bakteri  uji  diambil  dengan  jarum  ose  steril lalu  ditanamkan  pada  media  agar  miring  dengan cara  menggores.  Selanjutnya  diinkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  37°C  selama  24  jam. Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada  setiap  jenis bakteri uji.
Pembuatan  Standar  Kekeruhan  Larutan  ( Mc. Farland 0,5) Larutan H 2 SO 4 1%  sebanyak  9,95  ml dicampurkan dengan larutan BaCl 2 . 2H 2 O 1,175% sebanyak  0,05  ml  dalam  erlenmeyer.  Kemudian dikocok  sampai  terbentuk  larutan  yang  keruh. Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai  standar  kekeruhan suspense bakteri uji (Victor, 1980).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Pembuatan
suspensi bakteri Propionibacterium  acnes yaitu  dengan  cara biakan Propionibacterium  acnes diambil  dengan kawat  ose  steril,  kemudian  disuspensikan  ke dalam tabung reaksi yang berisi 10 ml NaCl 0,9% hingga  diperoleh  kekeruhan  sama  dengan  standar kekeruhan larutan Mc. Farland.

## Pembuatan Media Pengujian
Lapisan  dasar  dibuat  dengan  menuangkan masing-masing 65 ml NA ke dalam 3 cawan petri,
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
lalu dibiarkan hingga memadat. Setelah memadat, pada  permukaan  lapisan  dasar  diletakkan  6 pencadang  yang  diatur  sedemikian  rupa  jaraknya agar  daerah  pengamatan  tidak  saling  bertumpu. Selanjutnya  suspensi  bakteri  dicampurkan  ke dalam  media  pembenihan  NA.  Kemudian, tuangkan  65  ml  campuran  suspensi  dan  media pembenihan  tersebut  ke  dalam  tiap  cawan  petri yang diletakkan pencadang sebagai lapisan kedua. Selanjutnya,  pencadang  diangkat  secara  aseptik dari  cawan  petri  sehingga  akhirnya  terbentuklah sumuran  yang  akan  digunakan  dalam  pengujian antibakteri.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Larutan  uji  ekstrak  etanol  daun  belimbing botol  dengan  berbagai  konsentrasi  (10%,  20%, 40%  dan  60%),  aquades  steril  sebagai  kontrol negatif,  larutan  clindamycin  sebagai  kontrol positif  masing-masing  diteteskan  pada  sumur yang  berbeda  sebanyak  50  μl.  Kemudian  cawan petri  diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  37°C selama 1x24 jam.

## Pengamatan Dan Pengukuran
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24  jam masa  inkubasi.  Diamati  zona  bening  yang terbentuk  di  sekitar  sumuran  kemudian  diukur diameter  zona  hambat  secara  horizontal  dan vertikal.  Diameter  zona  hambat  diukur  dalam satuan  milimeter  (mm)  menggunakan  jangka sorong dengan cara diameter keseluruhan dikurangi  diameter  sumuran  7  mm.  Kemudian diameter  zona  bening  tersebut  dikategorikan kekuatan daya hambat antibakterinya berdasarkan penggolongan Davis dan Stout (1971).

## Analisa Data
Data  hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri ekstrak  daun  belimbing  botol  ( Averrhoa  belimbi L. ) terhadap pertumbuhan
bakteri
propionibacterium  acne  dianalisa  secara  statistik menggunakan analisa varians satu arah (One Way Anova) dan dilanjutkan uji tukey dengan program Statistical  Product  Service  Solution (SPSS) dengan taraf kepercayaan 95% atau α=0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Ekstraksi  yang  dilakukan  menggunakan metode secara dingin yaitu maserasi menggunakan 2000 ml pelarut etanol 95%, selama 5  hari  sambil  sesekali  diaduk  dan  di  remaserasi selama  3  hari.  Hasil  maserasi  kemudian  disaring
menggunakan  kertas  saring.  Semua  maserat  yang diperoleh  kemudian  dikumpulkan  dan  diuapkan dengan  oven  hingga  diperoleh  ekstrak  kental berwarna  hijau  kehitaman  yang  akan  digunakan dalam  pengujian  aktivitas  antibakteri.  Metode maserasi  dipilih  karena  cara  pengerjaan  yang sederhana,  cepat  menarik  senyawa  kimia  yang terdapat  dalam  sampel,  peralatan  yang  digunakan mudah  didapat  dan  tidak  memerlukan  peralatan khusus (Sa’adah dan Nurhasnawati, 2015). Proses ekstraksi  dilakukan  menggunakan  pelarut  etanol 95%  karena  lebih  selektif,  etanol  juga  memiliki sifat toksisitas yang rendah sehingga tidak mudah merusak  sampel,  absorbsinya  baik  dan  dapat mencegah  pertumbuhan  bakteri  dan  jamur (Saifudin et al , 2011).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun belimbing  botol  ( Averrhoa  bilimbi L .) terhadap bakteri Propionibacterium  acne menggunakan metode difusi sumuran. Metode ini dipilih karena cara  pengerjaan  yang  sederhana,  peralatan  yang mudah  didapat  dan  tidak  memerlukan  alat-alat khusus.  Pada  metode  sumuran  yaitu  membuat lubang  pada  media  agar  padat  yang  telah diinokulasi dengan bakteri. Kemudian tiap lubang diisi  dengan  konsentrasi  ekstrak  yang  akan digunakan.  Setelah  diinkubasi  pada  suhu  dan waktu yang sesuai dengan mikroba uji, dilakukan pengamatan  dan  pengukuran  dengan  melihat  ada atau  tidaknya  zona  hambat  yang  terjadi  di sekeliling sumuran (Prayoga, 2013).
Prinsip metode difusi agar yaitu terbentuknya diameter  zona  hambat  disekitaran  lubang  yang telah  diisi  dengan  larutan  uji  setelah  media  agar ditanami  bakteri  diinkubasi  pada  suhu  37 ֠ C selama 1 x 24 jam, besar atau kecilnya nilai daya hambat  dilihat  dari  daerah  jernih  yang  terbentuk. Untuk  mengetahui  ada  atau  tidaknya  pengaruh ekstrak daun belimbing botol terhadap pertumbuhan  bakteri,  diameter  zona  hambat diukur menggunakan jangka sorong dalam satuan milimeter (mm) dengan cara mengukur total zona hambat yang terjadi.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol daun  belimbing  botol  dengan  konsentrasi  10%, 20%,  40%  dan  60%  dan  kontrol  positif membentuk  zona  bening  disekitaran  sumuran (Gambar  1)  membuktikan  bahawa  ekstrak  daun belimbing  botol  memiliki  sifat  antibakteri terhadap bakteri Propionibacterium acne.
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Gambar 1 . Hasil Uji Aktvitas Antibakteri Ekstrak Daun Belimbing Botol
Tabel 1. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Ekstrak Daun Belimbing Botol (Averrhoa bilimbi L .)
Terhadap Bakteri Propionibacterium acne Menggunakan Metode Sumuran Dalam Waktu 24 jam Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) I II III Rata-Rata Kontrol (-) 0 0 0 0 Kontrol (+) 31 36,6 41,1 36,2 Konsentrasi 10% 13,8 16 12 13,9 Konsentrasi 20% 16,8 18 18,5 17,7 Konsentrasi 40% 20,9 15,7 18,5 18,3 Konsentrasi 60% 19,2 21,8 25,6 22,2 Berdasarkan hasil penelitian aktivitas antibakteri ekstrak daun belimbing botol terhadap Propionibacterium  acne pada  hari  pertama  (24 jam) didapatkan  zona  hambat  pada  konsentrasi 10%,  20%,  40%  dan  60%  rata-ratanya  sebesar 13,9 mm, 17,7 mm, 18,3 mm, dan 22,2 mm (Tabel 1).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun belimbing botol memiliki aktivitas antibakteri dan
mampu menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium acne. Dan terdapat kecenderungan  bahwa  konsentrasi  ekstrak  daun belimbing  botol  yang  berbeda  memberi  pengaruh terhadap diameter zona bening dalam menghambat
pertumbuhan bakteri
Propionibacterium acne yang terbentuk.
Tabel 2. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Ekstrak Daun Belimbing Botol (Averrhoa bilimbi L .)
Terhadap Bakteri Propionibacterium acne Menggunakan Metode Sumuran Dalam Waktu 72 jam
Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) I II III Rata-Rata Kontrol (-) 0 0 0 0 Kontrol (+) 31 28,5 37 32,1 Konsentrasi 10% 17 14 12 14,3 Konsentrasi 20% 21 17 15 17,6 Konsentrasi 40% 19 14 21,5 18,1 Konsentrasi 60% 24 16 29,5 23,1 Berdasarkan hasil penelitian aktivitas
antibakteri ekstrak daun belimbing botol terhadap Propionibacterium acne pada hari yang ketiga (72 jam) didapatkan  zona  hambat  dengan  konsentrasi 10%,  20%,  40%  dan  60%  dan  memiliki  rata-rata 14,3  mm,  17,6  mm,  18,1  mm,  dan  23,1  mm (Tabel 3). Dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun belimbing botol memiliki aktivitas antibakteri dan
mampu menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium acne. Semakin tinggi konsentrasi  ekstrak  daun  belimbing  botol  maka semakin  besar  pula  diameter  zona  hambat  yang terjadi.  Pada  Tabel  1  dan  Tabel  2  menunjukkan juga  bahwa  masing-masing  konsentrasi  memiliki respon  hambatan  yang  dikategorikan  sangat  kuat dan  kuat  berdasarkan  kriteria  David  dan  Stout
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
(1971),  zona  hambat  yang  lebar  dihasilkan  pada konsentrasi  60%  lalu  kemudian  diikuti  dengan 40%, 20% dan 10%.
Dilakukan pengamatan 3 x 24 jam yaitu ingin melihat apakah pada pengamatan hari pertama dan hari  ketiga  menghasilkan  data  yang  reliable  atau konsisten  dan  hasil  yang  diperoleh  bukan  karena faktor peluang melainkan pengaruh dari perlakuan ekstrak yang diberikan.
Diameter  zona  hambat  pada  kontrol  negatif yang menggunakan aquades pada semua sumuran tidak  terbentuk  (Tabel  1  dan  Tabel  2),  hal  ini menunjukan  bahwa  aktivitas  antibakteri  tidak dipengaruhi oleh faktor pelarut sehingga aktivitas antibakteri  yang  dilakukan  merupakan  potensi yang dimiliki oleh ekstrak daun belimbing botol.
Alasan  penggunaan  aquades  sebagai  kontrol negatif yaitu karena senyawa dari aquades bersifat netral  yang  tidakkan  memberikan  efek  terhadap pertumbuhan bakteri atau tidak memiliki aktivitas antibakteri.  Kontrol  positif  clindamycin  yang digunakan  diperoleh  zona  hambat  yang  terjadi dengan  rata-rata  36,2  mm  pada  24  jam  dan  32,1 mm pada 72 jam.
Clindamycin  bersifat  bakteriostatik,  dimana bakteriostatik merupakan aktivitas antibiotik yang bersifat menghambat pertumbuhan mikroba tetapi tidak  membunuh  mikroba  tersebut  (Madigan  dan Martinko,  2006).  Mekanisme  kerja  clindamycin adalah  dengan  menghambat  sintesis  protein mikroorganisme  dengan  mempengaruhi  subunit ribosom  50s,  sehingga  mengganggu  proses pembentukan rantai peptidoglikan bakteri (Katzung dan Trevor, 2009).
Kandungan daun belimbing botol menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri  karena mengandung  flavonoid,  tanin  dan  saponin  yang berperan  menghambat  bakteri  uji  yang  dimana kandungan  flavonoid  dapat  menghambat  DNA bakteri  sehingga  terjadi  hambatan  dalam  proses replikasi  dan  translasi  bakteri.  Kandungan  tanin dapat  merusak  sitoplasma  sehingga  bakteri  akan rusak  dan  mati.  Dan  kandungan  saponin  akan menurunkan tegangan permukaan sehingga terjadi kebocoran  sel  yang  mengakibatkan  senyawa intraseluler  keluar  (Yonanda et  al .,  2016).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan dapat disimpulkan bahwa :
1. Ekstrak etanol daun belimbing botol ( Averrhoa  bilimbi  L. )  memiliki  aktivitas sebagai penghambat terhadap bakteri propionibakterium acne penyebab jerawat.
2. Pada  masing-masing  konsentrasi  10%,  20%, 40% dan 60% pada waktu 24 jam dan 72 jam memiliki aktivitas sebagai antibakteri terhadap propionibakterium  acne dengan hasil  zona  hambat  yang  dikategorikan  kuat 10%, 20%, 40%  dan sangat kuat 60%.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengetahui  senyawa  spesifik  yang  berkhasiat sebagai antibakteri pada daun belimbing botol dan aktivitas  antibakteri  pada  bakteri  penyebab jerawat lainnya yaitu Staphylococcus epidermidis.

## DAFTAR PUSTAKA
Gunawan, D. & Mulyani, S. 2004. Farmakognosi . Swadaya, Jakarta.
Katzung,  G.  &  Trevor,  A.  J.  2009. Buku  Bantu Farmakologi. EGC, Jakarta.
Lay,  B.  W.  1994. Analisis  Mikroba  di
Laboratorium  Edisi  1 .  Raja  Grafindo Persada, Jakarta.
Madigan, M. T. & Martinko, J. M. 2006. Biology of  Microorganisms.  PrenticeHall .  New Jersey.
Miratunnisa,  L.  Mulqie,  &  S.  Hajar.  2015.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Kulit Kentang (Solanum Tuberosum L.) terhadap Propionibacterium . Prosiding  Penelitian SPeSIA Unisba. 1(2).
Mollerup,  S.,  J.  Friis-Nielsen., L.  Vinner., T.  A. Hansen., S.  R.  Richter., H.  Fridholm., J.  A. R.  Herrera., O.  Lund., S.  Brunak.,  J.  M.  G. Izarzugaza., T.  Mourier., L.  P.  Nielsen., & A.  J.  Hansen.  2016. Propionibacterium acnes :  Disease-Causing  Agent  or  Common Contaminant?  Detection  in  Diverse  Patient Samples  by  Next-Generation  Sequencing. Journal  Of  Clinical  Microbiology .  54(4): 980–987.
Prayoga,  E.  2013. Perbandingan  Efek  Ekstrak Daun  Sirih  Hijau  (Piper  betle L )  Dengan
Metode Difusi Disk dan Sumuran Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
aureus .  Universitas  Islam  Negeri  Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Sa’adah,  H.,  &  Nurhasnawati,  H.  2015. Perbandingan  Pelarut  Etanol  Dan  Air PadaPembuatan  Ekstrak  Umbi  Bawang Tiwai (Eleutherine Americana Merr)
Menggunakan  Metode  Maserasi. Jurnal Ilmiah Manuntung . 1(2): 149-153.
Saifuddin, A., V. Rahayu., & H. Y. Teruna. 2011. Standarisasi  Bahan  Obat  Alam .  Graha Ilmu, Jogjakarta.
Victor,  L.  1980. Antibiotics  in  Laboratory  Test . The Williams and Wilkins Company, USA.
Yonanda,  R,  C.,  Dwi  W.,  &  Siti  M.,  2016.
Pengaruh  Ekstrak  Etanol  Daun  Belimbing Wuluh  (Averrhoa  billimbi L.) Terhadap Daya Hambat Staphylococcus Epidermidis . Prodi Pendidikan Biologi FKIP Universitas Jember, Jember.
Yusriani.  2017.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Daun  Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  Terhadap  Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Propionibacterium  acnes . Jurnal Kesehatan Yamasi . 1(2).