## AKTIVITAS ANTIBAKTERI AIR REBUSAN DAUN MANGROVE Sonneratia alba
(Antibacterial Activity of Water Mangrove Sonneratia alba Leaf)
Toar Waraney Senduk 1 , Gisella Aisyah Linggama 1 , Meiliana Sembiring Kembaren 2 , Lita A. D. Y. Montolalu 2
¹Mahasiswa pada Program Studi Teknologi Hasil Perikanan FPIK UNSRAT Manado. ²Staf Pengajar pada Program Studi Teknologi Hasil Perikanan FPIK UNSRAT Manado.
E-mail: eghylinggama@gmail.com

## ABSTRACT
Mangrove  plants  have  long  been  known  to  have  properties  as  traditional  medicines  to  treat several diseases. The use of leaves, fruit, bark, stem, roots and fruit of several mangrove species and has antibacterial  compounds.  The  aim  of  the  study  was  to determine  the  antibacterial  activity  of Sonneratia alba mangrove leaf extract to inhibit S. aureus and E. coli bacteria. Using the infusion extraction method by boiling it for 10, 20, and 30 minutes after that it is boiled again with small fire water then dried  in an oven  with  a  temperature  of  75–80ºC  with  an  extract  concentration  of  50.000  and  10.000  ppm,  positive control  (chloramphenicol)  ,  and  negative  control  (aquades).  The  antibacterial  test  results  showed  that extracts  of Sonneratia  alba mangrove  leaves  boiled  water  had  the  greatest  activity  in  the  30  minute treatment  with  a  concentration  of  100,000  ppm  on E.  coli bacteria  and  obtained  an  average  inhibition zone  of  11.7  mm.  Whereas  in S.  aureus bacteria,  the  highest  treatment  at  30  minutes  concentration  of 50,000 gets an average inhibition zone of 7.5 mm.
Keyword: Mangrove Sonneratia alba, antibacterial, infusion.
Tanaman  mangrove  sejak  lama  sudah  diketahui  mempunyai  khasiat  sebagai  obat -obatan tradisional  untuk  mengobati  beberapa  penyakit.  Penggunaan  daun,  buah,  kulit  kayu,  batang,  akar  dan buah  dari  beberapa  spesies  mangrove  dan  memiliki  senyawa  yang  bersifat  anti bakteri.  Tujuan  dari penelitian  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  yang  terdapat  pada  ekstrak  daun  mangrove Sonneratia alba untuk menghambat bakteri S. aureus dan E. coli . Menggunakan metode ekstraksi infusa dengan  cara  direbus  selama  10,  20,  dan  30  menit  setelah  itu  direbus  kembali  dengan  air  api  kecil kemudian  dikeringkan  dalam  oven  dengan  suhu  75–80°C  dengan  konsentrasi  ekstrak  50.000  ppm  dan 10.000  ppm,  kontrol  positif  (kloramfenikol),  dan  kontrol  negatif  (akuades).  Hasil  pengujian  antibakter i menunjukkan  bahwa  ekstrak  air  rebusan  daun  mangrove Sonneratia  alba mempunyai  aktivitas  paling besar  pada  perlakuan  30  menit  konsentrasi  100.000  ppm  terhadap  bakteri E.  coli didapatkan  rata-rata zona hambat sebesar 11,7 mm. Sedangkan pada bakteri S. aureus , paling besar pada  perlakuan 30 menit konsentrasi 50.000 mendapatkan rata-rata zona hambat sebesar 7,5 mm.
Kata kunci: Mangrove Sonneratia alba, infusa, antibakteri.

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  kawasan  pesisir pantai  sangat  luas  yang  ditumbuhi  berbagai jenis  tumbuhan  pantai.  Salah  satu  contoh tumbuhan  pantai  yaitu  bakau  atau  mangrove Luas  hutan  mangrove  di  seluruh  Indonesia diperkirakan sekitar 4,25 juta hektar atau 3,98% dari  seluruh  luas  hutan  Indonesia.  Namun  luas tersebut  terus  mengalami  penurunan  karena konversi (Berwick, 1989).
Tanaman  mangrove  sejak  lama  sudah diketahui  mempunyai  khasiat  sebagai  obat- obatan  tradisional  untuk  mengobati  beberapa penyakit.  Penggunaan  daun,  buah,  kulit  kayu, batang,  akar  dan  buah  dari  beberapa  spesies mangrove (Bandaranayake, 1998). Secara umum,  mangrove  diklasifikasikan  ke  dalam
famili  Rhizophora,  Avicennia,  Sonneratia, Xylocarpus, Ceriops dan Bruguiera.
Sonneratia  alba (nama  daerah  bugis: kayu  Buli)  merupakan  salah  satu  spesies tumbuhan mangrove yang telah lama dimanfaatkan oleh masyarakat. Menurut Sukardjo 1984, daun muda S. alba dapat dibuat sayur  atau  dapat  dimakan  mentah  sebagai  lalap dan  seduhan  air  buahnya  dapat  digunakan sebagai obat untuk menghaluskan kulit.
Dari  penelitian  Wonggo et.al. (2017), bahwa  pada  daun  mangrove S.  alba terdapat senyawa  bioaktif  yaitu  flavonoid,  tannin, saponin,  dan  steroid.  Menurut  Kurniaji  (2014), menyatakan  bahwa  ekstrak  daun  mangrove S. alba mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Vibrio  harveyi secara in  vitro .  Berdasarkan
fakta  tersebut,  maka  diduga S.  alba mengan- dung  senyawa  aktif  yang  dapat  dimanfaatkan bagi kebutuhan manusia.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah laminar air flow, autoclave, Spektrofotometri  T60  UV-Vis  190-1100  nm, magnetic  stirrer ,  vortex,  cawan  petri,  tabung reaksi, erlenmeyer, gelas ukur, spatula, mikropipet  dan  tip,  pinset,  jarum  ose,  lampu bunsen,  botol  kaca,  kompor,  oven  Yenaco YNC-OV30L, penggaris, panci, wadah, saringan,  gunting,  timbangan,  kertas  cakram, alumunium foil, wrapping , kertas label, tissue. Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian adalah daun muda mangrove S. alba , Staphylococcus  aureus DSM ( Deutsche Sammlung  Von  Mikroorganisme  und  Zell kulturen GMBH), Escherichia  coli DSM  498 ( Deutsche  Sammlung  Von  Mikroorganisme  und Zell  kulturen GMBH),  akuades,  NB  ( Nutrient Broth ),  MHA  ( Mueller  Hinton  Agar ),  agar swallow, kloramfenikol 250 mg.

## Metode Penelitian
Perlakuan  yang  diberikan  dalam  peneli- tian  ini  adalah  lama  maserasi  dalam  air  mendi- dih  yaitu  10,  20,  30  menit  dengan  dilakukan  3 kali pengulangan. Data  dianalisis  secara deskriptif.

## Ekstraksi
Daun  dicuci  bersih  dengan  air  mengalir kemudian  digunting  kecil-kecil  dan  ditimbang sebanyak 1 kg (dalam satu perlakuan). Didihkan air  sebanyak  4  liter  (dalam  satu  perlakuan), setelah  air  mendidih  masukkan  daun  mangrove yang  sudah  digunting-gunting  dan  diirebus selama 10, 20  dan  30  menit  dengan suhu  97°C. Kemudian disaring dan air rebusannya dimasukkan  ke  dalam  panci  untuk  direbus kembali  dengan  menggunakan  api  kecil  selama 2  jam.  Setelah  itu  dikeringkan  di  dalam  oven selama  10–12  jam  dengan  suhu  80°C.  Setelah mendapatkan ekstrak kering, dihitung rendemennya  dan  kemudian  dibuat  larutan konsentrasi untuk pengujian antibakteri.

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  peneli- tian  ini  seperti  cawan  petri,  tabung  reaksi,  dan pinset  dicuci  bersih,  dikeringkan,  dibungkus
kemudian  disterilkan  dalam  oven  pada  suhu 150°C  selama  2  jam  (sterilisasi  kering).  Media untuk  pertumbuhan  mikroorganisme  disterilisa- si  dalam  autoklaf  pada  suhu  121°C  selama  15 menit (sterilisasi basah).

## Peremajaan Bakteri Uji
Bakteri S.  aureus dan E.  coli diambil sebanyak  1  ose  dari  stok  bakteri  dan dicampurkan  ke  media  cair  NB  5  ml  dalam tabung  reaksi,  kemudian  ditutup  dengan  kapas dan dibiarkan selama 24 jam.
Penentuan Optical Density (OD) Sediakan 3 kuvet, 1 kuvet dibuat blanko dengan cara masukkan 4 ml NB ke dalam kuvet dan  2  kuvetnya  lagi  masukkan  masing-masing bakteri  sebanyak  0,4  ml  dan  tambahkan  NB sebanyak  3,6  ml  (penghitungan  dalam  10  kali pengenceran  yang  diperkecil).  Setelah  itu diukur absorbansinya dengan menggunakan alat Spektrofotometri  UV-VIS  dengan  panjang gelombang 600 nm.

## Pembuatan Media Padat MHA
Pembuatan  media  ini  menggunakan metode  tuang  ( pour  plate ).  Ditimbang  MHA sebanyak  4,8  gram  dan  agar  swallow  2  gram kemudian dimasukkan ke dalam masing-masing erlenmeyer  dan  dilarutkan  dalam  akuades sebanyak 200 ml dan diaduk dengan menggunakan magnetic  stirrer .  Setelah  itu disterilisasi  pada  suhu  121°C  selama  15  menit kemudian campurkan bakteri S. aureus 24 µL di satu  erlenmeyer  dan  bakteri E.  coli 38  µL  di erlenmeyer  yang  satu  lagi  dan  diaduk  dengan magnetic  stirrer .  Setelah  itu  dituangkan  ke dalam cawan yang sudah diberi kode.

## Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif
Sebagai  tolak  ukur  untuk  melihat  ada atau  tidaknya  zona  hambat  atau  aktivitas antibakteri dari sampel yaitu dengan menggunakan obat kloramfenikol sebagai kontrol  positif  dengan  melarutkan  250  mg  obat kloramfenikol  ke  dalam  250  mL  akuades  dan akuades sebagai kontrol negatif.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  antibakteri  yang  digunakan adalah  cara  difusi  Kirby–Bauer  yang  telah dimodifikasi  dan  menggunakan  konsentrasi  5% dan 10%.
Teteskan  ekstrak  uji  10,  20,  dan  30 menit,  kontrol  positif  dan  negatif  sebanyak  50 µL  di  kertas  cakram  dan  dibiarkan  sampai meresap.  Setelah  meresap  letakkan  kertas cakram  di  atas  permukaan  media  yang  sudah dipadatkan  dalam  cawan.  Kemudian  dibungkus
dengan wrapping lalu diinkubasi selama 24 jam pada  suhu  ruangan.  Setelah  itu  dilakukan pengamatan dan diukur  zona beningnya  dengan menggunakan penggaris.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1.  Hasil diameter zona hambat bakteri Escherichia coli.
Perlakuan Konsentrasi 10% Konsentrasi 5% 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 10 menit 10,5 9,0 9,5 9,7 ± 0,8
8,5 8,0 8,0 8,2 ± 0,3 20 menit 10,5 8,5 8,0 9,3 ± 1,0
7,5 8,5 7,0 7,7 ± 0,8 30 menit 12,5 11,5 11,0
11,7 ± 0,8 9,5 8,0 9,0 8,8 ± 0,8 Kontrol (+) 27,0 28,5 27,5
27,7 ± 0,8 29,0 27,5 28,0 28,2 ± 0,8 Kontrol (-) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Tabel 2.  Hasil diameter zona hambat bakteri Staphylococcus aureus.
Perlakuan Konsentrasi 5% Konsentrasi 10% 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata 10 menit 0,0 0,0 0,0 0 0,0 0,0 0,0 0,0 20 menit 0,0 0,0 0,0 0 0,0 0,0 0,0 0,0 30 menit 8,0 7,0 7.5 7,5 ± 0,5
6,5 6,5 8,0 7,0 ± 0,9 Kontrol (+) 28,0 28,0 30,0
28,7 ± 1,2
28,5 29,5 28,5 28,8 ± 0,6 Kontrol (-) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Hasil  pengukuran  zona  hambat  pada  uji antibakeri  air  rebusan  daun  mangrove S.  alba terhadap bakteri S. aureus pada konsentrasi 5%, dan  10%  bahwa  pada  perlakuan  10  dan  20 menit  tidak  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri,  dan  pada  perlakuan  30  menit  (5%) didapatkan  rata-rata  zona  hambat  sebesar 7,5±0,5  mm.Sedangkan  pada  konsentrasi  10% perlakuan  30  menit  didapatkan  rata-rat  zona hambat sebesar 7,0±0,9 mm.
Hasil  pengukuran  zona  hambat  pada  uji antibakeri  air  rebusan  daun  mangrove S.  alba terhadap  bakteri E.  coli pada  konsentrasi  5% pada  perlakuan  10  menit  didapatkan  rata-rata zona hambat sebesar 8,2±0,3 mm, perlakuan 20 menit didapatkan rata-rata  zona hambat sebesar 7,7±0,8  mm,  dan  pada  perlakuan  30  menit didapatkan  rata-rata  zona  hambat  sebesar 8,8±0,8mm.  Sedangkan  pada  konsentrasi  10% pada  perlakuan  10  menit  rata-rata  zona  hambat sebesar  9,7±0,8mm,  perlakuan  20  menit  rata- rata zona hambat sebesar 9,3±1,0 mm, dan pada perlakuan  30  menit  rata-rata  zona  hambat sebesar 11,7±0,8 mm.
Menurut  Davis  dan  Stout,  1971  menje- laskan  bahwa  klasifikasi  respon  hambatan pertumbuhan  bakteri  terdiri  atas  4  kelompok yaitu:
- Lemah ( diameter ≤5 mm)
- Sedang (diameter 5-10 mm)
- Kuat (diamater 10-20 mm)
- Sangat kuat (diameter ≥20 mm)
Semakin  besar  diameter  zona  hambat terbentuk  maka  semakin  sedikit  bakteri  yang tumbuh.  Hal  ini,  menunjukkan  bahwa  ekstrak air  rebusan  mangrove S.  alba dengan  diameter zona  hambat  yang  besar  mempunyai  aktivitas hambatan  dengan  merusak  membran  dan  din- ding  sel  bakteri,  denaturasi  atau  menghambat sintesis  protein,  menghambat  sintesa  asam nukleat  dan  mengubah  permeabilitas  membran (Widyasanti et.al. , 2015).
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan, senyawa uji ekstrak air rebusan daun mangrove muda S.  alba hanya  mampu  menghambat  per- tumbuhan bakteri yang disebut (bakteriostatik).

## KESIMPULAN
Kedua ekstrak air rebusan daun mangrove  segar Sonneratia  alba mempunyai aktivitas  terbesar  pada  bakteri Escherichia  coli dengan  konsentrasi  10%  pada  perlakuan  30 menit  11,7±0,8  (tergolong  kuat)  dan  aktivitas terkecil ada pada bakteri Staphylococcus aureus dengan  konsentrasi  10%  pada  perlakuan  30 menit  7,0±0,9  (tergolong  sedang).  Ekstrak  ini hanya mampu menghambat pertumbuhan bakteri  (bakteriostatik)  dan  senyawa  tersebut berspektrum luas.

## DAFTAR PUSTAKA
Bandaranayake,  W.M.  1998.  Traditional  and  medicinal uses of mangroves. Mangroves and Salt Marshes.
Berwick,  N.L.  1989.  Guidelines  for  Analysis  of Biophysical  Impact  to  Tropical  Coastal  Marine
Resources.  The  bombay  natural  history  society centenary seminar conservation in developing countries-problems and prospects, Bombay.
Davis, W. W dan Stout, T. R. 1971. Disc Plate Method of
Microbiological Antibiotic Assay.
Applied Microbiology. 22 (4) : 659-665
Dirjen  POM.  2000.  Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
Kurniaji,  A.  2014.  Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Daun Mangrove Sonneratia  alba pada  Bakteri Vibrio
harveyi secara In  vitro .  Skripsi.  Fakultas  Perikanan dan Ilmu Kelautam. Universitas Halu Oleo, Kendari.
Widyasanti, A. Hajar, S dan Rohdiana, D. 2015. Aktivitas antibakteri  ekstrak  teh  putih  terhadap  bakteri  gram positif  dan  negatif.  Jurnal  Penelitian  Teh  dan  Kina, 18(1), 2015: 55-60.
Wonggo,  D.,  Berhimpon,  S.,  Kurnia,  D.,  Dotulong,  V. 2017.  Antioxidant  Activities  of  Mangrove  Fruit ( Sonneratia  alba )  taken  from  Wori  Village  North Sulawesi, Indonesia International Journal of ChemTech Research. Vol. 10. No. 12, pp.284-290.