## VALIDASI METODE ANALISIS SIKLAMAT SECARA SPEKTROFOTOMETRI DAN TURBIDIMETRI

## VALIDATION OF CYCLAMATE ANALYSIS METHOD WITH SPECTROPHOTOMETRY AND TURBIDIMETRY
Regina Tutik Padmaningrum * dan Siti Marwati
Jurusan Pendidikan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Negeri Yogyakarta, Karangmalang, Yogyakarta, 55281
* email: regina_tutikp@uny.ac.id
diterima 30 November 2014, disetujui 3 Maret 2015

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk memvalidasi metode analisis siklamat secara spektrofotometri dan turbidimetri dalam sampel minuman jelly drink rasa mangga secara spektrofotometri dengan pereaksi hipoklorit, spektrofotometri ultra violet (tanpa pereaksi) dan turbidimetri. Kurva kalibrasi larutan standar natrium siklamat pada metode spektrofotometri dengan pereaksi hipoklorit, spektrofotometri UV (tanpa pereaksi), dan turbidimetri berbentuk linier. Daerah kerja masing-masing metode secara berturut-turut pada konsentrasi (211,36-747,08); (16,000–146,434); dan (1,852-6,172) ppm. Batas deteksi masing-masing metode secara berturut-turut  sebesar  53,6028; 0,5833; dan  0,2723 ppm.  Batas kuantitasi masing-masing metode secara berturut-turut  sebesar 66,9948; 1,9443; dan 0,8068 ppm. Metode analisis siklamat secara spektrofotometri dengan  pereaksi  hipoklorit  mempunyai  presisi  dan  akurasi  yang  baik,  sementara  metode  analisis  siklamat  secara spektrofotometri  UV  mempunyai  presisi  baik  dan  akurasi  kurang  baik.  Sedangkan  metode  analisis  siklamat  secara turbidimetri mempunyai presisi dan akurasi kurang baik.
Kata kunci:  validasi metode, spektrofotometri, turbidimetri, siklamat

## Abstract
This research aims to validate methods of analysis by spectrophotometry and turbidimetry cyclamate in the sample drink mango-flavored jelly drink  by spectrophotometry with hypochlorite reagent, ultraviolet spectrophotometry (without reagent) and turbidimetry. The object of research was the validity parameters spectrophotometric method were linearity, linear  range,  the  limit  of  detection,  limit  of  quantitation,  precision,  and  accuracy.  The  calibration  curve  of  standard solution  of  sodium  cyclamate  in  the  spectrophotometric  method  with  hypochlorite  reagent,  UV  spectrophotometry (without reagent), and turbidimetry are linear. Linear range each method respectively at a concentration were (211.36- 747.08);  (16.000-146.434);  and  (1.8521-6.1717)  ppm.  The  detection  limit  of  each  method  successively  were  53.6028; 0.5833;  and  0.2723  ppm.  Limit  of  quantitation  each  method  successively  were  66.9948;  1.9443;  and  0.8068  ppm. Spectrophotometric analysis method cyclamate with hypochlorite reagent had good precision and accuracy. Ultra violet spectrophotometric  analysis  method of  cyclamate  have  a  good  precision  but  the  accuracy  was  not  good.  Turbidimetric methods  analysis of cyclamate had  precision and accuracy were not good.
Keywords:  method validation, spectrophotometry, turbidimetry, cyclamate

## Pendahuluan
Siklamat  cyclohexylsulfamic  acid  (C 6 H 13 NO 3 S) merupakan salah satu jenis pemanis buatan yang memiliki tingkat kemanisan 30 kali daripada sukrosa  [1].  Pemanis  buatan  ini  banyak menimbulkan kontroversi karena aspek keamanan jangka  panjangnya.  Penggunaanya  sebagai  zat tambahan makanan dilarang pada tahun 1969 saat ditemukan bahwa campuran sakarin dan siklamat meningkatkan insiden tumor kandung kemih pada tikus  [2].  Menurut  Peraturan  Menteri  Kesehatan RI  No722/Menkes/Per/1X/88,  kadar  maksimum asam siklamat yang diperbolehkan dalam
makanan  berkalori  rendah  dan  untuk  penderita diabetes melitus adalah 3 g/kg bahan makanan/minuman  [3].  Menurut  Badan  POM,  di Indonesia  pemakaian  siklamat  dilaporkan  sering disalahgunakan  dan  penggunaannya  melebihi batas  yang  diijinkan  [4].    Siklamat  dalam  bentuk garam  kalsium  dan  natrium  siklamat  mempunyai kelarutan  tinggi  dalam  air  (1  g/4-5  ml),  bersifat elektrolit  kuat,  terionisasi  kuat  dalam  larutan encer,  serta  mempunyai  sedikit  kapasitas  bufer [5].
Analisis  kadar  siklamat  dalam  suatu  sampel tertentu  memerlukan  metode-metode  analisis yang  valid.    Metode  analisis  penentuan  kadar siklamat  dapat  digunakan  untuk  analisis  rutin apabila telah tervalidasi. Validasi metode analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu, berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa parameter  tersebut  memenuhi  persyaratan  untuk penggunaannya [6]. Laboratorium harus merekam hasil  yang  diperoleh,  prosedur  yang  digunakan untuk  validasi  dan  pernyataan  bahwa  metode tersebut  tepat  untuk  penggunaan  yang  dimaksud. Rentang  ukur  dan  akurasi  nilai  yang  diperoleh dari metode yang divalidasi misalnya ketidakpastian  hasil,  batas  deteksi  (limit  of detection), selektivitas metode, linearitas (linearity), keterulangan (repeatability) dan ketangguhan  (ruggedness)  terhadap  pengaruh eksternal  dan  atau  sensitivitas  silang  terhadap gangguan  dari  matriks  sampel  yang  diuji,  harus relevan dengan kebutuhan.
Analisis  siklamat  dalam  minuman  serbuk dengan  pereaksi  HCl  pekat,  BaCl 2 ,  dan  NaNO 3 telah dilakukan oleh Frieda Nurlita (1997) secara turbidimetri [7] dan dalam minuman jajanan oleh Nurai  A.  Hadju  (2012)  secara  spektrofotometri [8].  Budi  Wibowotomo  [5]  meneliti    kadar siklamat  dengan  metode  Kromatografi  Cair Kinerja  Tinggi  yang  menggunakan  detektor  UV- Vis  pada  panjang  gelombang  200  nm.  Scotter  et al.  (2009)  menentukan  kadar  siklamat  dalam makanan  secara  kromatografi  cair  kinerja  tinggi [9].  Myra  Merrya  (2005)  menganalisis  kadar pemanis sintetik sakarin dan siklamat dalam sirup berbagai  merk  [10].  Penentuan  kadar  natrium siklamat dalam minuman ringan secara spektrofotometri  UV-Vis  dilakukan  oleh  Darlina BR  Tarigan  (2009)  diukur  pada  panjang gelombang  314  nm  [11].  Penelitian  tentang penentuan  kadar  asam  siklamat  dalam  minuman ringan  ion  tubuh  sweat  secara  spektrofotometri oleh  Apriyana  BR  Purba  (2009)  juga  dilakukan pada  panjang  gelombang  314  nm  [12].  Beberapa penelitian  tersebut  belum  memvalidasi  metode analisis siklamat dalam sampel jelly.
Penulis  telah    melakukan  validasi  metode spektrofotometri  dan  turbidimetri  untuk  analisis siklamat dalam minuman jelly drink rasa mangga kemasan  yang  beredar  di  pasar.    Parameter  yang divalidasi  adalah  linearitas,  daerah  kerja,  batas deteksi,  batas  kuantitasi,  presisi,  dan  akurasi . Metode  yang  digunakan  untuk  analisis  siklamat dalam  konsentrasi  yang  sangat  kecil    antara  lain
adalah  metode  spektrofotometri  dan  turbidimetri. Metode  ini  dipilih  karena  mempunyai  beberapa kelebihan  antara  lain  alatnya  cukup  sederhana, mudah dioperasikan, cepat dan biaya tidak mahal, sedangkan  kelemahan  metode  ini  karena  sifatnya multi  unsur  sehingga  faktor  interferensi  dari unsur-unsur lain sangat berpengaruh. Oleh karena itu, diperlukan perlakuan awal terhadap sampel.

## Metode Penelitian
Alat  yang  digunakan  meliputi  peralatan gelas, turbidimeter HACH model 2100N, spektrofotometer UV-VIS  2450,  dan  neraca analitik.  Bahan  yang  digunakan  adalah  larutan siklamat  10.000  ppm,  akuades,  HCl  pekat,  BaCl 2 10%,  NaNO 3 10%,  sampel  (minuman    kemasan jelly  drink  rasa  mangga),  serbuk    natrium siklamat, larutan asam sulfat 30%, larutan natrium hipoklorit  1%  klor  bebas,  larutan  natrium hidroksida 10 N dan pelarut sikloheksana.
Analisa Kualitatif Siklamat. Penentuan kadar siklamat  dalam  sampel  dilakukan  menurut prosedur  sebagai  berikut :  penambahan  HCl, BaCl 2 dan  NaNO 3 ke  dalam  sampel  dilanjutkan dengan pemanasan dalam penangas air selama 20 menit  dan  didinginkan  sampai  suhu  ruang. Adanya  siklamat  dalam  sampel  ditandai  dengan terjadinya endapan dalam sampel.
Analisa  Kualitatif  Siklamat  dengan  pereaksi hipoklorit.  Kurva  standar  dibuat  terlebih  dahulu dengan prosedur :
1. Delapan  buah  labu  takar  50  mL    masing- masing  diisi  dengan  larutan  standar  siklamat 1000 ppm dengan variasi volume : 0 (blanko); 5;  10;  15;  20;  25;  30  dan  35  mL  sehingga konsentrasi  siklamat  dalam  larutan  blanko adalah  0  (blangko);  100;  200;  300;  400;  500; 600  dan  700  ppm,  dan  diencerkan  sampai tanda batas.
2. Larutan tersebut dipindahkan ke dalam corong pemisah,  ditambah  2,5  mL  asam  sulfat  pekat, didinginkan. Setelah dingin, campuran ditambahkan  50  mL  etil  asetat  dan  dikocok selama 2 menit.
3. Lapisan etil asetat dipisahkan dan dimasukkan ke  dalam  corong  pemisah  kedua,  dikocok  3 kali, setiap kali dengan 15 mL akuades.
4. Lapisan  air  dikumpulkan  dan  dimasukkan  ke dalam corong pemisah ketiga, ditambah 1 mL larutan  NaOH  10  M,  5  mL  sikloheksana  dan dikocok selama 1 menit.
5. Lapisan  air  dikumpulkan  dan  dimasukkan  ke dalam  corong  pemisah  ke-4,  ditambahkan  2,5 mL asam sulfat 30%, 5 mL sikloheksana dan 5 mL  larutan  Na-hipoklorit  1%  dan  dikocok selama 2 menit.
6. Lapisan  sikloheksana  akan  berwarna  kuning kehijauan,  bila  tidak  berwarna  ditambahkan  5 mL larutan Na-hipoklorit 1%.
7. Lapisan  sikloheksana  dicuci  dengan  25  mL NaOH  0,5  M,  dikocok  selama  1  menit  dan lapisan bawah dibuang.
8. Lapisan  sikloheksana  dikocok  dengan  25  mL akuades,  diambil  lapisan  sikloheksana  dan lapisan air dibuang.
9. Lapisan  sikloheksana  diukur  serapannya  pada panjang  gelombang  314,40  nm  dan  larutan bangko sebagai pembanding. ndarD
10. Kurva  standar  dibuat  antara  konsentrasi terhadap serapan sehingga diperoleh
persamaan  regresi  yang  dipergunakan  untuk perhitungan pada analisis selanjutnya.
Pengukuran  absorbansi  larutan  sampel. Sampel jelly drink ditimbang, diblender, kemudian  disaring  dengan  penyaring  vakum. Filtrat  yang  diperoleh  diukur  absorbansinya sesuai prosedur no 2-9 di atas.
Analisa Kualitatif
Siklamat secara turbidimetri. Kurva standar dibuat terlebih dahulu sesuai prosedur :
1. Larutan  standar  siklamat  100  ppm  diambil dengan  pipet,  variasi  volume: 0  (blanko);  0,5; 1,0;  1,5;  2,0;  2,5;  3,0;  3,5;  4,0;  dan  4,5  mL. Kemudian  dimasukkan  dalam  labu  takar  50 mL  dan  diencerkan  sampai  tanda  batas, diambil 25 mL larutan tersebut dan pindahkan ke dalam Erlenmeyer 100 mL.
2. Larutan  ditambah  10  mL  HCl  pekat,  dikocok, ditambah  masing-masing  10  mL  BaCl 2 10  % dan 10 mL NaNO 3 10 %.
3. Campuran dipanaskan di atas penangas selama 20 menit dan didinginkan.
4. Campuran  digojog  dan  diukur  turbiditasnya dengan  turbidimeter  dengan  larutan  blangko sebagai pembanding.
5. Dibuat  kurva  standar  antara  konsentrasi terhadap turbiditas sehingga diperoleh persamaan  regresi  yang  dipergunakan  untuk perhitungan pada analisis selanjutnya.

## Teknik analisis data
Uji  linearitas.  Uji  linearitas  ditentukan melalui persamaan regresi linear Y = aX ± b dan
nilai  r 2 dari  10  kali  pengulangan  pengukuran absorbansi  kurva  standar.  Korelasi  dinyatakan sangat kuat jika nilai r yang diperoleh di atas 0,9 tetapi kurang dari 1,0 sesuai dengan kriteria [13].
Penentuan  daerah  kerja.  Daerah  kerja adalah  pernyataan  batas  terendah  dan  tertinggi analit  yang  dapat  diterima  oleh  suatu  alat menggunakan  metode  yang  telah  ada.  Daerah kerja  ditentukan  dengan  cara  mengukur  beberapa konsentrasi  standar  berbeda  minimal  6  variasi konsentrasi  yang  kemudian  diplotkan  ke  dalam grafik absorbansi versus konsentrasi. Daerah kerja juga dapat ditetapkan dengan akurasi, presisi dan linearitas yang dapat diterima. Daerah kerja yang diterima dapat dilihat secara visual melalui kurva absorbansi  versus  konsentrasi  dari  beberapa konsentasi  standard  dengan  nilai  r  yang  masih menunjukkan  nilai  di  atas  0,9  dan  nilai transmitansi  20-65%  atau  nilai  absorbansi  antara 0,2-0,8 [14].
Uji  batas  deteksi  dan  kuantisasi.  Batas deteksi  (LOD,  Limit  of  Detection)  adalah  jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi yang  masih  memberikan  respon  signifikan dibandingkan  dengan  blangko  [14].  Batas kuantitasi Batas kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ)  adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat  diukur  secara  kuantitatif  dengan presisi  dan  akurasi  sesuai.  Uji  batas  deteksi  dan batas  kuantisasi    dilakukan  dengan  melakukan pengukuran absorbansi terhadap blangko sebanyak 7 kali pengulangan lalu dihitung deviasi standar  respon blangko.
LOD = nilai rata-rata blangko + 3SD LOD = nilai rata-rata blangko + 10SD
Uji  presisi.  Presisi  (keseksamaan)  meru- pakan  derajat    penyesuaian  antara  beberapa  hasil analisis yang diukur dengan cara yang sama [15]. Presisi  berhubungan  dengan  hasil  suatu  metode bila  pengukuran  itu  berulang-ulang  pada  sampel yang  homogen  pada  kondisi  terkontrol.  Presisi suatu  metode  dapat  diuji  dengan  pengulangan analisis,  apabila  variasi  hasilnya  kecil,  maka dikatakan bahwa kecermatan pengukuran tersebut tinggi  [16].  Presisi  dinyatakan  sebagai  deviasi standar  (SD)  atau  deviasi  standar  relative (koefisien  variansi,  RSD).  Presisi  dapat  diartikan pula sebagai derajat reprodulibilitas atau keterulangan  dari  prosedur  analisis.  Kriteria presisi  diberikan  jika  metode  memberikan simpangan baku relative atau koefisien variasi 2% atau kurang.
Uji  akurasi.  Akurasi  dinyatakan  sebagai persen  perolehan  kembali  (%  recovery)  dari bahan  baku  (spike  recovery)  dan  metode panambahan  bahan  baku  (standard  addition method).  Persen  perolehan  kembali  seharusnya tidak  melebihi  nilai  presisi  RSD.  Rentang kesalahan  yang  diijinkan  pada  setiap  konsentrasi analit  pada  matriks  yaitu  80-120%  [15]. Perhitungan  perolehan  kembali  dapat  ditetapkan dengan rumus sebagai berikut:
Cv  = konsentrasi total sampel yang diperoleh dari pengukuran C A = konsentrasi sampel sebenarnya C * A = konsentrasi analit yang ditambahkan

## Hasil dan Pembahasan
Analisis siklamat secara spektrofotometri dengan pereaksi hipoklorit.
Penentuan  panjang  gelombang  maksimum menggunakan  larutan  natrium  siklamat  dalam akuades yang telah direaksikan H 2 SO 4 menghasilkan  larutan  jernih  tidak  berwarna  dan panas.  Penambahan  H 2 SO 4 bertujuan  untuk mengubah  natrium  siklamat  menjadi  asam siklamat.  Larutan  asam  siklamat  didinginkan, diekstrak  dengan  etil  asetat  membentuk  asam siklamat  dalam  fase  organik.  Selanjutnya  asam siklamat  diekstraksi  ke  dalam  akuades.  Hasil ekstrak  tersebut  berupa  larutan  jernih  tidak berwarna  yang  kemudian  ditambah  NaOH  dan sikloheksana. NaOH berfungsi untuk memberikan suasana  basa.  Pada  tahap  ini  yang  diambil merupakan  lapisan  air  yang  jernih  dan  tidak berwarna.  Lapisan  air  tersebut  ditambah  dengan H 2 SO 4 , sikloheksana dan hipoklorit membentuk 2 lapisan,  lapisan  atas  (larutan  sikloheksana  jernih berwarna  sedikit  kuning)  dan  lapisan  bawah jernih  tidak  berwarna.  Lapisan  sikloheksana diambil  dan  dilakukan  pencucian  dengan  NaOH dan  akuades  membentuk  larutan  jernih  tidak berwarna. Sikloheksana berfungsi sebagai pengekstrak  siklamat.  Pada  lapisan  sikloheksana ini  siklamat  telah  terekstrak  di  dalamnya  dan diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang 200-400 nm. Blanko yang digunakan mengandung  semua  pereaksi  kecuali  natrium siklamat. Spektrum absorbsi larutan siklamat 100 ppm  dapat dilihat pada Gambar 1.
Panjang gelombang maksimal hasil pengukuran  adalah  221,40  nm  dengan  nilai
absorbansi  1,699  dan  314,4  nm  dengan  nilai absorbansi  0,150.  Sikloheksana  mengabsorbsi cahaya  pada  panjang  gelombang  210  nm  [18], sehingga  221,40  nm  merupakan  puncak  dari pelarut sikloheksana. Panjang gelombang maksimal  ditetapkan  pada  314,40  nm.  Hasil  ini hampir sama dengan hasil penelitian sebelumnya, yaitu  Darlina  BR  Purba  [11]    dan  Apriyana  BR Purba [12] dan  Nurain A. Hadju [8].
Reaksi  antara  siklamat  dengan  hipoklorit dalam suasana asam dan reaksi setelah penambahan NaOH dapat dilihat pada Gambar 2. Kurva  kalibrasi  mengikuti  persamaan  garis Y=0,00112X  –  0,03673,  dan  nilai  koefisien korelasi  sebesar  0,99824. Nilai  koefisien  korelasi ini    menyatakan  korelasi  antara  absorbansi  (Y) dan  konsentrasi  (X)  sangat  kuat.  Berdasarkan hasil  perhitungan  diperoleh  nilai  parameter validasi seperti pada Tabel 1.

## Gambar 1. Spektrum absorbsi larutan siklamat
Tabel 1. Nilai parameter validasi metode spektrofotometri dengan pereaksi hipoklorit.
Parameter Nilai Daerah kerja (ppm) 211,36-747,08 Batas deteksi (ppm) 53,602826 Batas kuantitasi (ppm) 66,99475 Presisi (RSD, %) 4,60 Akurasi (galat relatif, %) 8,8.
Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  nilai  terkecil yang  dapat  dideteksi  dan  memberi  respon  yang sangat signifikan dengan metode ini yaitu sebesar 53,602826  ppm.  Kuantitasi  terkecil  pada  analit dalam  sampel  yang  masih  dapat  memenuhi kriteria  cermat  dan  seksama  sebesar  66,99475 ppm.
S O O NH OH + OCl S O O N OH Cl + H 2 O S O O N OH Cl + OCl + 2 H + S O O N O Cl Cl + H 2 O S O O N O Cl Cl + 2 NaOH S O O N O Na Cl + NaOCl  + H 2 O
Gambar 2.  Reaksi antara siklamat dengan hipoklorit dalam suasana asam dan reaksi setelah penambahan NaOH [19]
Daerah  kerja  metode  pengukuran  ini  pada jangkauan konsentrasi relatif besar yaitu (211,36- 747,08) ppm sehingga tidak baik digunakan untuk mengukur analit dalam sampel dengan konsentrasi  kurang  dari  211,36  ppm  meskipun pada  konsentrasi  53,602826  ppm  masih  dapat terdeteksi  oleh  alat  ukur.  Pengukuran  pada konsentrasi  sangat  rendah  (dalam  satuan  ppm) memerlukan  proses  pemekatan  sampel  atau ekstraksi  terhadap  analit  terlebih  dahulu.  Hal  ini selain  tidak  efisien  juga  memerlukan  tambahan tahapan prosedur  sehingga juga akan menambah kesalahan  pengukuran.  Metode  analisis  siklamat secara spektrofotometri dengan pereaksi hipoklorit  mempunyai  presisi  dan  akurasi  yang baik (valid).
Analisis  siklamat  secara  spektrofotometri  tanpa pereaksi
Panjang gelombang maksimal hasil pengukuran larutan siklamat 100 ppm adalah  200 nm  dengan nilai absorbansi 0,560 dan 268,5 nm dengan  nilai  absorbansi  0,015.  Pengukuran absorbansi  selanjutnya  dilakukan  di  daerah serapan  ultra  violet  200  nm.  Kurva  kalibrasi mengikuti persamaan regresi linier Y=0,0046X + 0,1264  dan  nilai  koefisien  korelasi  sebesar 0,9938.  Nilai  koefisien  korelasi  ini  menyatakan korelasi antara absorbansi (Y) dan konsentrasi (X)
sangat  kuat.    Berdasarkan  hasil  perhitungan diperoleh  nilai  parameter  validasi  seperti  pada Tabel  2.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  nilai terkecil yang dapat dideteksi dan memberi respon yang  sangat  signifikan  dengan  metode  ini  yaitu sebesar  0,5833  ppm.  Kuantitasi  terkecil  pada analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama sebesar 1,9443 ppm. Metode  analisis  siklamat  secara  spektrofotometri UV  mempunyai  presisi  baik  namun  akurasi kurang  baik  (tidak  valid).  Akurasi  metode  ini kurang  baik  dikarenakan  pengukuran  dilakukan pada  panjang  gelombang  200  nm  (daerah  ultra violet)  dan  tanpa  penambahan  pereaksi  yang selektif.  Hal  ini  memungkinkan    matriks  dalam larutan  sampel  terukur  absorbansinya  sehingga nilai absorbasi terukur lebih besar dari seharusnya, lebih besar 41,28% dari seharusnya.
Tabel 2. Nilai parameter validasi metode spektrofotometri tanpa pereaksi
Parameter Nilai Daerah kerja (ppm) 16 –146,434 Batas deteksi (ppm) 0,5833 Batas kuantitasi (ppm) 1,9443 Presisi (RSD, %) 1,02145 Akurasi (galat relatif, %) 41,28
Penelitian  ini  menggunakan  sampel  jelly drink  yang  mengandung  pewarna  organik berwarna  kuning.  Akurasi  dapat  diperbaiki dengan  cara  mengekstrak  zat  warna  kuning (sebagai matriks) dengan cara adsorbsi.

## Analisis siklamat secara turbidimetri
Pada pengukuran dengan turbidimetri, dasarnya  adalah  pengukuran  cahaya  yang dihamburkan  oleh  partikel  dalam  campuran (suspensi).  Ukuran  partikel  berpengaruh terhadap intensitas  cahaya  yang  diserap,  dihamburkan maupun  diteruskan.  Pada  penelitian  ini,  natrium siklamat bereaksi dengan asam klorida menghasilkan
amin
alifatis
primer (sikloheksamina),  asam  sulfat,  dan  natrium klorida.  Asam  sulfat  yang  terbentuk  bereaksi dengan  barium  klorida  membentuk  endapan barium  sulfat  yang  tersuspensi  dalam  campuran. Reaksi yang terjadi pada penetapan kadar natrium siklamat  secara  turbidimetri  dapat  dilihat  pada Gambar  3.
N H S O O ONa + HCl H 2 O H 2 SO 4 + NaCl NH 2 (s) (aq) (aq) (aq)
H 2 SO 4 + +
BaCl 2 BaSO 4 HCl (aq) (s) (aq) (aq)

## Gambar 3. Reaksi Pembentukan BaSO 4 [20]
Pada  pengukuran  ini,  hasil  pengukuran sangat  dipengaruhi  oleh  kesempurnaan  reaksi antara  natrium  siklamat  dan  HCl  serta  reaksi antara  asam  sulfat  dengan  barium  klorida.  Selain itu,  juga  dipengaruhi  oleh  matriks  yang  terdapat dalam larutan sampel yang tidak dipisahkan. Oleh karena itu, presisi dan akurasi pengukuran secara turbidimetri ini kurang baik.
Kurva kalibrasi mengikuti persamaan regresi linear  Y=0,0926X  +  0,3285.  Nilai  koefisien korelasi  (r)  sebesar  0,99489  yang  menyatakan korelasi antara konsentrasi (X) dan turbiditas (Y) sangat  kuat.  Berdasarkan  hasil  perhitungan diperoleh  nilai  parameter  validasi  seperti  pada Tabel  3.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  nilai terkecil yang dapat dideteksi dan memberi respon
yang  sangat  signifikan  dengan  metode  ini  yaitu sebesar  0,272277  ppm.  Kuantitasi  terkecil  pada analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria  cermat  dan  seksama  sebesar  0,806797 ppm.

## Tabel 3. Nilai parameter validasi metode turbidimetri
Parameter Nilai Daerah kerja (ppm) 1,8521- 6,1717 Batas deteksi (ppm) 0,272277 Batas kuantitasi (ppm) 0,806797 Presisi (RSD, %) 7,74 Akurasi (galat relatif, %) 27,36

## Simpulan
Kurva  kalibrasi  larutan  standar  natrium siklamat  pada  metode  spektrofotometri  dengan pereaksi  hipoklorit,  spektrofotometri  UV  (tanpa pereaksi),  dan  turbidimetri  adalah  linier.  Daerah kerja  masing-masing  metode  pengukuran  pada konsentrasi (211,360-747,080); (16,000– 146,434); dan (1,852- 6,172) ppm.
Batas deteksi metode analisis siklamat secara spektrofotometri  dengan  pereaksi  hipoklorit adalah  53,602826  ppm,  metode  analisis  siklamat secara  spektrofotometri  UV    adalah  0,5833  ppm, dan turbidimetri adalah 0,272277 ppm.
Batas  kuantitasi  metode  analisis  siklamat secara spektrofotometri dengan pereaksi hipoklorit  adalah  66,99475  ppm,  metode  analisis siklamat  secara  spektrofotometri  UV    adalah 1,9443  ppm,  dan  turbidimetri  adalah  0,806797 ppm.
Metode analisis siklamat secara spektrofotometri  dengan  pereaksi  hipoklorit mempunyai presisi dan akurasi yang baik (valid). Metode  analisis  siklamat  secara  spektrofotometri UV  mempunyai  presisi  baik  dan  akurasi  kurang baik  (tidak  valid).    Metode  analisis  siklamat secara  turbidimetri  mempunyai  presisi  dan akurasi kurang baik (tidak valid).

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Universitas Negeri Yogyakarta sebagai penyandang  dana  penelitian  dan  kepada  saudari Atikah Nindyasari dan Siti Fatimah serta saudara Inggit  Supranata  yang  membantu  pengambilan data penelitian di laboratorium .

## Pustaka
[1]   John,  M.  (1997).  Kimia  Makanan,  (alih bahasa  oleh  Kosasih  Padmawinata),  ITB, Bandung, 524.
[2]   Ratnani.  (2009).  Bahaya  Bahan  Tambahan Makanan bagi Kesehatan,  Momentum, 5 (1): 16- 22.
[3]   Depkes  RI,  Peraturan  Menteri  Kesehatan  RI No722/Menkes/Per/1X/88, Tahun 1988.
[4]  Badan  Pengawasan  Obat  dan  Makanan Direktorat  Surveilan  dan Keamanan  Pangan. (2004) Modul T.
[5]  Budi Wibowotomo. (2010). Jurnal Teknologi Kejuruan, 33(1): 82-87.
[6]   Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksaan Validasi  Metode  dan  Cara  Perhitungannya. Majalah  Ilmu Kefarmasian, 1(3): 117-135
[7]  Frieda Nurlita. (1997). Jurnal Gravi, 66
[8]   Nurai  A.  Hadju.  (2012).  Skripsi  Sarjana, Fakultas  Pertanian,    Universitas  Sam Ratulangi.
[9]  Scotter,  M.J.,  Roberts,  D.P.T.,  Castle,  L. (2009).  Food  Additives  &  Contaminants: Part A, 26(5): 614-622.
[10]    Myra  Merrya.  (2005).  Thesis,  UMM, Malang, 2005
[11] Darlina Br Tarigan. (2009). Skripsi, FMIPA, Universitas Sumatera Utara
[12]   Apriyana  Br  Purba.  (2009).  Skripsi,
FMIPA, Universitas Sumatera Utara [13]   Guilford, J.P. (1956). Fundamental Statistics in Psychology and Education, Mc Graw-Hill Book Company, New York.
[14]    Skoog,  Douglas  A.,  Holller,  F.J.,  and Stanley  R.  Crouch.  (2007).  Principles  of Instrumen Analysis, 20 .
[15]   John  Kenkel.  (2002).  Analytical  Chemistry for  Technicians,  Third  Edition,  Lewis Publisher, New York, 12.
[16]  Purwanto.  (2007).  Prosiding,  PPI-PDIPTN Yogyakarta, BATAN
[17]  Wood R., Nilsson A., and Wallin, H. (1998). Quality  in  the  Food  Analysis  Laboratory. Thomas Graham House, Science Park, US.
[18]    Day  Jr.,  R.A.,  dan  Underwood,  A.L. (2002).  Analisis  Kimia  Kuantitatif,  Edisi keenam, Erlangga, Jakarta, 416
[19]   Vogels. (1990). Analisis Anorganik Kualitatif  Makro  dan  Semimikro,  Kalman Media Pustaka, Jakarta
[20]   Cahyadi  W.  (2006).  Analisis  &  Aspek Kesehatan  Bahan  Tambahan  Pangan,  PT Bumi Aksara, Jakarta, 141- 142.