UJI EFEKTIVITAS INFUSA DAUN INSULIN ( Thitonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray ) TERHADAP PENURUNAN KADAR GLUKOSA DARAH PADA MENCIT ( MUS MUSCULUS ) PUTIH JANTAN
Andy Brata * , Yossie Bella Pratiwi
Jurusan Farmasi Poltekkes Kemenkes Jambi, Indonesia
* Korespondensi penulis: andybrata@poltekkesjambi.ac.id

## ABSTRAK
Latar Belakang: Daun insulin merupakan salah satu tumbuhan yang memiliki kegunaan dari daunnya. Daun insulin memiliki  kandungan  flavonoid  yang  diduga  bisa  menurunkan  kadar  glukosa  darah.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui efektivitas infusa daun insulin terhadap penurunan kadar glukosa  darah pada mencit putih  jantan yang diinduksi glukosa..
Metode: Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimen  dengan  rancangan Pretest-Postest  with  Control  Group . Hewan uji yang digunakan adalah 25 ekor mencit putih jantan yang dibagi dalam 5 kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif (Na-CMC), kelompok kontrol positif (Glibenklamid),  kelompok infusa daun insulin 420 mg, 840 mg, dan 1260 mg. Dilakukan pengamatan dan pengecekkan kadar glukosa darah mencit pada menit ke-30, 60, 90, dan 120. Hasil: Hasil  uji statistik  One-Way  ANOVA  menunjukkan  hasil signifikan pada  menit ke-90 dan  120.  Dilanjutkan dengan uji Post Hoc Duncan yang menunjukan dosis terbaik, yaitu dosis 420 mg yang memiliki efek sebanding dengan Glibenklamid 5 mg, kemudian diikuti dengan dosis 1260 mg dan 840 mg yang sudah memiliki efek antihiperglikemia tetapi belum terlihat perbedaan.
Kesimpulan: Dosis infusa yang dapat menurunkan kadar glukosa darah adalah dosis 420 mg dengan penurunan kadar glukosa darah maksimal pada menit ke-90 dan menit ke120.
Kata Kunci: daun insulin; Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray ; glibenklamid; kadar glukosa darah

## EFFECTIVENESS TEST OF INSULIN (Thitonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) LEAF INFUSION ON DECREASING BLOOD GLUCOSE LEVELS IN MALE WHITE MICE (MUS MUSCULUS)

## ABSTRACT
Background: Insulin leaf is one of the plants that has the use of its leaves. Insulin leaves contain flavonoids that are thought  to  reduce  blood  glucose  levels.  This  study  aims  to  determine  the  effectiveness  of  insulin  leaf  infusion  on decreasing blood glucose levels in male white mice.
Methods: This study was an experimental study with a Pretest-Posttest with Control Group design. Test animals used were 25 male white mice which were divided into 5 groups, namely the negative control group (Na-CMC), positive control group (Glibenklamid), insulin leaf infusion group 420 mg, 840 mg, and 1260 mg. Observation and checking of blood glucose levels in mice in the 30th, 60th, 90th, and 120th minutes.
Results: One-Way ANOVA statistical test results showed significant results in the 90th and 120th minutes. Followed by the Duncan Post Hoc test which showed the best dose, ie a dose of 420 mg which had an effect comparable to Glibenclamide 5 mg, then followed by a dose of 1260 mg and 840 mg which already have antihyperglycemic effects but no difference has been seen.
Conclusion: The dose of infusion that can reduce blood glucose levels is a dose of 420 mg with a decrease in maximum blood glucose levels in the 90th minute and 120th minute.
Keyword: insulin leaves; Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray;  glibenclamide; blood glucose level

## PENDAHULUAN
Diabetes  Melitus    (DM)  adalah  suatu kelompok penyakit
metabolik dengan karakteristik  hiperglikemia  yang  terjadi  karena kelainan  sekresi  insulin,  kerja  insulin,  atau kedua-duanya,  ditandai  dengan  kadar  glukosa darah  yang  melebihi  normal  (hiperglikemia) akibat  tubuh  kekurangan  insulin,  baik  absolut maupun relatif. 1 DM dibagi menjadi 4 jenis yaitu DM  tipe  1  yang  merupakan  defisiensi  insulin akibat  kerusakan  sel  beta,  DM  tipe  2  yaitu berkurangnya produksi insulin dari sel beta, DM tipe lain,  dan DM gestasional. 2 Penatalaksanaan  DM  dapat  dilakukan melalui latihan jasmani dan terapi farmakologis yang terdiri dari obat oral, dan bentuk suntikan. 2 Kekurangan  dari  terapi  obat  oral  maupun suntikan yaitu harga obat yang tidak murah dan memiliki efek samping. Oleh karena itu banyak obat tradisional yang dipilih oleh penderita DM seperti  daun  insulin,  salah  satu  tanaman  obat yang  bisa  dimanfaatkan  untuk  mengobati penyakit diabetes. 3 Daun  insulin  ( Tithonia  diversifolia (Hems.)  A.Gray )  memiliki  berbagai  kandungan yang  berperan  dalam  melawan  radikal  bebas, menginduksi  sistem  pertahanan  stress  selular serta kandungan tannin, flavonoid dan saponins yang  banyak berpotensi  dalam  bidang farmakologi. 4 Mekanisme  kerja  saponin  yaitu dengan menghambat GLUT-1 sehingga menurunkan absorbsi glukosa. 5 Flavonoid  pada DM  dapat  menghindari  absorbsi  gula, menstimulasi  pengambilan  glukosa  pada jaringan  perifer,  juga  dapat  bertindak  seperti insulin  dengan  cara  mempengaruhi  mekanisme insulin  signaling. 6 Tannin  dapat  memicu metabolisme  glukosa  dan  lemak  sehingga timbunan  dari  kedua  sumber  kalori  ini  dapat dihindari.  Tannin  juga  memiliki  aktivitas hipoglikemik dengan meningkatkan glikogenesis. 7 Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan Mila Karmila Sri Setiomulyo 8 didapat hasil, air rebusan  daun  insulin  ( Tithonia  diversifolia (Hemsl.)  A.  Gray )  dapat  menurunkan  kadar glukosa darah pada tikus yang terbebani glukosa. Dosis  air  rebusan  daun  insulin  ( Tithonia diversifolia  (Hemsl.)  A.  Gray )  yang  dapat menurunkan kadar glukosa darah yaitu 3 g/kgBB tikus.
Berdasarkan penelitian tersebut disarankan untuk melakukan penelitian lanjutan tentang  pengaruh  infusa  daun  insulin  dengan dosis  yang  berbeda.  Sehingga  peneliti  tertarik untuk  melakukan  penelitian  ulang  dengan  cara memvariasikan dosis infusa daun insulin.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui uji  efektivitas  infusa  daun  insulin  ( Tithonia diversifolia (Hems.) A.Gray ) terhadap penurunan kadar glukosa darah pada mencit ( Mus musculus ) putih  jantan  dan  untuk  mengetahui  berapakah dosis  infusa  daun  insulin  ( Tithonia  diversifolia (Hems.)  A.Gray )  yang  efektif  sebagai  penurun kadar glukosa pada mencit ( Mus muculus ) putih jantan.

## METODE
Desain penelitian yang digunakan adalah metode  eksperimental  dengan  rancangan Pretest-Postest  with  Control  Group yaitu pengelompokkan  anggota-anggota  kelompok kontrol  dan  kelompok  eksperimen  dilakukan berdasarkan  acak  atau  random.  Kemudian dilakukan pretest pada kedua kelompok tersebut, dan diikuti intervensi pada kelompok eksperimen.  Setelah  beberapa  waktu  dilakukan Postest pada kedua kelompok tersebut. 9 Hewan  uji  menggunakan  mencit  ( Mus musculus )  jantan  dewasa  yang  mula-mula ditimbang  berat  badannya  supaya  diketahui apakah  sehat  dan  cocok  digunakan  sebagai hewan  uji atau tidak. Sebanyak 25 ekor mencit dengan  berat  badan  20-30  g  dipilih  dan  dibagi dalam  5  kelompok  yang  terdiri  dari  masing- masing  5  ekor  mencit  pada  tiap  kelompoknya. Kemudian diadaptasikan selama 5 hari. Setelah hewan  uji  diperiksa  dan  dikelompokkan kemudian  diberi  tanda  untuk  masing-masing kelompok.
Hewan uji dipuasakan selama 8 jam dan diukur  kadar  glukosa  darahnya  sebagai  kadar glukosa  awal  mencit.  Setiap  pengukuran  kadar glukosa  darah  mencit  dilakukan  menggunakan glukometer. Kemudian mencit diinduksi larutan glukosa  15%  untuk  menaikkan  kadar  glukosa darahnya  dengan  volume  0,13  ml/20  g  BB mencit.  Setelah  30  menit  lakukan  pengecekan kembali kadar glukosa darah mencit.
Tahap  selanjutnya  setiap  kelompok mencit  mendapatkan  perlakuan.  Kelompok  I sebagai kontrol diberikan air suling, kelompok II sebagai pembanding diberikan suspensi glibenklamid, kelompok III, IV, dan V diberikan Infusa  daun  insulin  dengan  dosis  420  mg,  840 mg,  dan  1260  mg.  Pengamatan  dinilai  setelah pemberian  perlakuan,  dengan  mengukur  kadar gula darah pada menit ke 0, 30, 60, 90,dan 120.
Data  yang  diperoleh  dari  penelitian dianalisis  secara  statistik  dengan  uji  ANOVA dan  dilanjutkan  dengan  uji Post  Hoc  Duncan , yaitu  untuk  mengetahui  perbedaan  rata-rata antara dua variabel atau lebih dari dua variabel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  skala rata-rata uji penurunan kadar glukosa  darah  didapat  data  seperti  tabel  1. Penurunan  kadar  glukosa  darah  masing-masing mencit pada tiap kelompok didapatkan hasil yang bervariasi. Data penurunan kadar glukosa darah mencit  diolah  menggunakan  uji One-way ANOVA dengan tahap uji reabilitas, uji validitas, dan uji normalitas.
Data  dikatakan  reabilitas  jika  nilai  pada kolom Cronbach’s  Alpha ≥  0,6. 9 Hasil  uji realibilitas didapatkan Cronbach’s Alpha 0,923 sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  data  tersebut realibel.  Setelah  itu  dilakukan  uji  validitas,  uji validitas dilihat pada kolom Corrected Item Total Correlation ,  jika  nilai  pada  kolom  tersebut    ≥ 0,396 maka dapat dikatakan bahwa data tersebut valid.  Pada  uji  validitas  semua  data  mendapat hasil  ≥ 0,396, ini berarti semua data valid dan bisa dilanjutkan ke uji berikutnya. 9
Hasil  uji  normalitas  dapat  dilihat  pada kolom Asymp.Sig. (2-tailed) , jika nilai p ≥ 0,05 maka  sudah  normal.  Berdasarkan  data  yang didapat, data tersebut sudah normal karena nilai p ≥  0,05  dan  bisa  dilanjutkan  dengan menggunakan One-Way ANOVA dan
dilanjutkan dengan uji post hoc Duncan . 9 Hasil uji menggunakan One-Way
ANOVA dapat dilihat dari nilai signifikan. Jika nilai p ≤  0,05  maka  hasil  dapat  dikatakan signifikan  atau  berbeda  nyata.  Tetapi  dari percobaan yang dilakukan hanya ada 2 data yang memiliki nilai p ≤ 0,05, yaitu data pada menit ke - 90  dan  data  pada  menit  ke-120  (tabel  1).  Pada menit  ke-30  dan  menit  ke-60  belum menunjukkan  hasil  yang  signifikan  atau  dapat dikatakan bahwa pada menit ke-30 dan menit ke- 60  sudah  ada  penurunan  kadar  glukosa  darah, tetapi belum terlihat berbeda nyata.
Tabel  1. Hasil  Pengukuran  Rata-Rata Kadar  Glukosa  Darah  dan  Uji  Penurunan  Kadar  Glukosa Darah Mencit
Kelompok Perlakuan Kadar Glukosa Darah Mencit (mg/dl) Puasa Setelah induksi Glukosa Menit ke-30 Menit ke-60 Menit ke-90 Menit ke-120 Kadar Gula Penurunan Kadar Gula Penurunan Kadar Gula Penurunan Kadar Gula Penurunan Kontrol Negatif (Na-CMC) 95,6 118,4 120,6 0 119,4 0 116,2 2,2 111 7,4 Kontrol Positif (Glibenklamid 5 mg) 122 138,4 120,4 18 106,8 31,6 91,6 46,8 64,2 74,2 Dosis 420 mg 98 137 128,2 8,8 116 21 101,6 * 35,4 88 * 49 Dosis 840 mg 126,2 150 144,4 5,6 139,2 10,8 132,2 17,8 109,6 40,4 Dosis 1260 mg 104,4 132,6 127 5,6 118,4 14,2 110,8 21,8 106,2 26,4
* p value ≤ 0,05
Setelah  itu  dilakukan  uji Post  Hoc Duncan untuk  mengetahui  dosis  terbaik  dari infusa  daun  insulin  terhadap  penurunan  kadar glukosa  darah  pada  mencit.  Hasil  uji Post  Hoc Duncan menunjukkan  bahwa  Infusa  Daun Insulin  420  mg  adalah  dosis  terbaik  yang memiliki  efek  penurunan  kadar  glukosa  darah, kemudian  diikuti  dengan  Infusa  Daun  Insulin 1260 mg dan 840 mg yang sudah memiliki efek antihiperglikemia tetapi belum terlihat perbedaan yang signifikan.
Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan  hasil yang diperoleh pada penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Stevani dkk 10 yang menunjukkan bahwa  rebusan  daun  kersen  atau  insulin  pada konsentrasi  10%  dan  15%  dapat  menurunkan kadar glukosa darah pada mencit dan penurunan kadar  glukosa  maksimal  terjadi  pada  menit  ke 120. Berdasarkan penelitian sebelumnya yang dilakukan  oleh  Mila  Karmila  S 8 menunjukkan
bahwa rebusan daun Insulin Pada dosis 3 g/kgBB tikus  dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah pada  tikus  dan  penurunan  kadar  glukosa maksimal terjadi pada menit ke-120.
Hasil  yang  diperoleh  dari  penelitian  ini sama  juga  menunjukkan  hasil  yang  serupa dengan penelitian sebelumnya, yaitu infusa daun insulin  yang  efektif  untuk  menurunkan  kadar glukosa  darah  pada  mencit  adalah  infusa  daun insulin 420 mg/kgBB mencit dari pengkonversian  dosis  tikus  ke  mencit,  serta penurunan  kadar  glukosa  yang  maksimal  pada menit ke-90 dan menit ke-120. 11,12,13
Sedangkan  pada  penelitian  yang  lain, yang dilakukan oleh Widihastuti 14 menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  daun  insulin  dapat digunakan  sebagai  antihiperglikemik  dengan dosis efektif  21 mg/20g BB.
Lalu pada penelitian Sari 15 menunjukkan bahwa infusa daun paitan atau insulin ( Tithonia diversifolia ( Hemsl.)  A.  Gray) 8%  dapat
memberikan  efek  antidiabetes  pada  tikus diabetes yang terinduksi Streptozotosin.
Pada  kelompok  obat  dapat  menurunkan kadar  glukosa  darah  karena  glibenklamid memiliki  mekanisme  kerja  merangsang  sekresi insulin dari pankreas, menghambat ATP sensitve potasium  channel di  sel  β  pankreas  sehingga membantu untuk mengurangi jumlah gula dalam darah  seseorang,  mengurangi  kadar  glukogen dalam  serum  dan  meningkatkan  pengikatan insulin  pada  jaringan  target  dan  reseptor. Sedangkan  pada  kelompok  ekstrak  dapat menurunkan kadar glukosa darah karena ekstrak etanol  daun  insulin  mengandung  flavonoid, saponin. 16,17,18
Flavonoid  pada  DM  dapat  menghindari absorpsi  gula,  menstimulasi  pengambilan glukosa  pada  jaringan  perifer,  juga  dapat bertindak seperti insulin dengan cara mempengaruhi  mekanisme insulin  signaling. Mekanisme  kerja  saponin  yaitu  dengan menghambat  GLUT-1  sehingga  menurunkan absorbsi glukosa. Flavonoid dapat meningkatkan penggunaan  glukosa  di  jaringan  perifer  dan mengurangi  resistensi  insulin,  inflamasi  serta stress  oksidatif  pada  otot  dan  lemak. 19,20
Senyawa saponin dapat meningkatkan sensitivitas insulin, menghambat
gluconeogenesis  dan  meningkatkan  ekspresi Glucose Transporter 4 (GLUT-4). 20

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan analisis data yang telah dilakukan pada penelitian tentang uji  efektivitas  infusa  daun  insulin  ( Tithonia diversifolia (Hems.) A.Gray ) terhadap penurunan glukosa  darah  pada  mencit,  dapat  disimpulkan bahwa  dosis  infusa  daun  insulin  ( Tithonia diversifolia (Hems.) A. Gray ) yang efektif dalam menurunkan  kadar  glukosa  darah  pada  mencit ( Mus  musculus )  adalah  pada  dosis  420  mg dengan penurunan kadar glukosa maksimal pada menit ke-90 dan  menit ke-120.  Dosis  1260 mg dan 480 mg sudah memiliki efek antihiperglikemia
tetapi belum
terlihat perbedaan yang signifikan.
Untuk peneliti
selanjutnya perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk  infusa daun insulin dengan menggunakan metode yang berbeda seperti metode ekstrak.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Katzung, Bertram G., and Anthony J. Trevor, 14 th eds. Basic  &  clinical  pharmacology.  Boston: McGraw-Hill Education. 2015.
2. American Diabetes  Association. 2. Classification and  diagnosis  of  diabetes:  standards  of  medical care  in  diabetes — 2019. Diabetes  Care.  2019;
42(Supplement 1): S13-S28
3. Rahmawati,  S.  Efektivitas Ekstrak  Kulit  Batang, Akar,  dan  Daun  Sirsak  (Annona  mucirata  L.) Terhadap  Kadar  Glukosa  Darah,  Skripsi,  3,
Universitas  Islam  Negeri  Sunan  Kalijaga,
Yogyakarta. 2013
4. Ejelonu  OC,  Elekofehinti  OO,  Adanlawo  IG. Tithonia diversifolia saponin-blood lipid interaction and its influence on immune system of normal wistar rats. Biomedicine & Pharmacotherapy. 2017 Mar 1;87:589-95.
5. Blasiak  J.,  et  al.  Free  Radical  Scavengers  Can Modulate the DNA-Damaging Action of Alloxan. Acta Biocem, 2003; 50 (1): 205-10.
6. Geethaa,  Saghal,  Ramanathan,  S.,  et  all.  Brine Shrimp Lethality and Acute Oral Toxicity Studies on  Swetenia  Mahagoni  (Linn)  Jacq.  Seed Methanolic  Extract.  Pharmacognosy  Research. 2010; 2 (4): 215-220.
7. Dalimartha,  S.  Ramuan  Tradisional  Untuk Pengobatan  Diabetes  Mellitus.  Penerbit  Penebar Swadaya, Bogor. 2005.
8. Mila  Karmila  Sri  Setiomulyo.  Pengaruh  Air Rebusan  Daun  Insulin  (Tithonia  diversifolia (Hemsl.) A. Gray) Terhadap Kadar Glukosa Darah Tikus  Jantan  Galur  Wistar  yang  Terbebani Glukosa.  Skripsi  Program  Stusi  Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 2016.
9. Sani  K,  Fathnur.  Metodologi  Penelitian  Farmasi Komunitas dan Eksperimental. Edisi 1 cetakan 1. Yogyakarta: Deepublish. 2016.
10. Stevani,  H.,  Nurul,  H.B.,  Husnul,  A.T. “Efektivitas  Rebusan  Daun  Kersen  (Muntingia calabura L.) Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah  Pada  Mencit  (Mus  musculus).  E-journal  : Poltekkes Kemenkes Makassar, Akademi Farmasi Yamasi Makassar. 2017. 11. Apriyanti, Erna. Efek Ekstrak Etanol Daun Kersen (Muntingia calabura L.) Terhadap Penghambatan Peningkatan Kadar Gula Darah Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar. Skripsi Progaram Studi Ilmu Farmasi,Sekolah  Tinggi  Ilmu  Kesehatan  Ngudi Waluyo, Ungaran. 2016.
12. Azmi  Agnia.  Efek  Ekstrak  Daun  Insulin (Smallanthus  sonchifolius)  Terhadap  Kadar
Glukosa  Darah,  Berat  Badan  dan  Low  Density Lipoprotein  Pada  Tikus  yang  Diinduksi Streptozotosin. Skripsi Program Studi
Kedokteran,  Universitas  Islam  Negeri  Syarif Hidayatullah, Jakarta. 2015.
13. Song, Y., Joann, E.M., Jullie E.B., Howard, D.S., Simin, L. Association of  Dietary Flavanoids with Risk of  Thype 2 Diabetes, and Markers of Insulin Resistance  and    Systemic  Inflammation  in Women: A Prospective Study and Cross-Sectional
2019
Analysis,  Journal  of  the  American  College  of
Nutrition. 2005; 24(5). 14. Widihastuti, Tantri. Uji Aktivitas Antihiperglikemik  Ekstrak  Etanol  Daun  Insulin (Tithonia  diversifolia  Gray)  Terhadap  Mencit
Putih  Jantan  (Mus  musculus)  Dengan  Metode Toleransi  Glukosa.  KTI  Program  Studi  Farmasi, Universitas Setia Budi, Surakarta. 2017. 15. Sari, Ajeng Dwi Kartika. Efek Antidiabetes Infusa Daun Paitan (Tithonia diversifolia) 8 % Terhadap Tikus  Putih  Jantan  Galur  Wistar  Terinduksi Streptozotosin.  Skripsi  Program  Studi  Farmasi,
Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 2017. 16. Prasetyo  A,  Denashurya  TG,  Putri  WS,  In'am Ilmiawan  M.  Perbandingan  Efek  Hipoglikemik Infusa Daun  Kembang  Bulan  (Tithonia diversifolia  (Hamsley)  A.  Gray)  dan  Metformin pada  Tikus  yang  Diinduksi  Aloksan.  Cermin Dunia Kedokteran. 2016 Feb 1;43(2):91-4.
17. Gbolade,  A.A.,  Biondi,  D.M.,  Ruberto,  G. Comparative Analysis of  The Essential Oil from Two  Asteraceous  Plants  Found  in  Nigeria, Acanthospermum hispidum and Tithonia diversifolia.  Nat.  Prod.  Commun.  2008;  3(10): 1735-1738.
18. Miura,  T.,  Nosaka,  K.,  Ishii,  H.,  and  Ishida,  T. Antidiabetic  Effect  of  Nitobegiku,  The  Herb Tithonia  diversifolia,  in  KK-Ay  Diabetic  Mice. Pharmaceutical  Society  of  Japan,  Japan.  2005;
28(11): 2152-2154. 19. Jadhav, R., and Puchchakayala, G. Hypoglycemic and  Antidiabetic  Activity  Flavonoids:  Boswellic Acid,  Ellagic  Acid,  Quercetin,  Rutin  on Streptozotocin-Nicotinamide  Induced  Type  2
Diabetic Rats. International Journal of Pharmacy and  Pharmaceutical  Sciences.  2012;  4(2):  251- 256. 20. Bhavsar, S.K., Singh, S., Giri, S., Jain, M.R., and
Santani, D.D. Effect of Saponins From Helicteres isora  on  Lipid  and  Glucose  Metabolism Regulating Genes Expression. Journal
Ethnopharmacol. 2009; 124(3): 426-433.