## UJI EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN SAMBILOTO (Andrographis paniculata Nees) TERHADAP BAKTERI  Staphylococus aureus
Yuska Novi Yanti, Sucia Mitika Akademi Farmasi Yayasan Al-Fatah Bengkulu
Email : yuskanoviyanty@gmail.com

## ABSTRAK
Tumbuhan  memiliki  zat  kimia  aktif  yang  memiliki  potensi  besar  salah satunya  adalah  membunuh  atau  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Salah  satu tanaman  yang  digunakan  sebagai  obat  tradisional  adalah  tanaman  sambiloto (Andrographis paniculata Nees ) yang mempunyai berbagai macam manfaat bagi kesehatan  manusia,berbagai  aktivitas  farmakologi  dari  sambiloto  adalah antiinflamasi,antibakteri,antipiretik  dan  antioksidan.Sampel  dalam  penelitan  ini adalah  koloni Staphylococcus  aureus dan  ekstrak  kental  tanaman  sambiloto (Andrographis paniculata Nees ) . Ekstraksi dengan metode maserasi Salanjutnya di  rotary  dengan  menggunakan Rotary  evaporator dan  dilakukan  uji  susut pengeringan. Kemudian ekstrak dibagi menjadi lima perlakuan yaitu 10 µg/ml, 50 µg/ml, 100 µg/ml, 500 µg/ml, 1000 µg/ml dibuat kontrol posistif dan negatif lalu dilakukan  pembuatan  media  NA  dan  NB.  Selanjutnya  dibuat  peremajaan  bakteri dan  pembuatan  larutan  uji  lalu  dilalukan  pengujian  daya  hambat  dengan  metode cakram  lalu  diikubasi  dan  diukur  diameter  zona  hambat.Dari  hasil  pengujian menunjukan  bahwa  semua  konsentrasi  ekstrak  sambiloto  memiliki  daya  hambat terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus .  Daya  hambat  ekstrak sambiloto  ditunjukkan  dengan  adanya  zona  bening  disekitar  cakram.  Diketahui bahwa  pada  dosis  100  µg/mL,  1000  µg/mL  memiliki  daya  hambat  lemah  dan dilanjutkan  dengan  analisa  SPSS  diperoleh  hasil  yang  tidak  berbeda  secara signifikan.
Kata kunci : Sambiloto, Staphylococcus aureus , daya hambat

## ABSTRACT
Plants have active chemicals that have great potential one of them is to kill or inhibit the growth of bacteria. One of the plants used as traditional medicine is bitter  plant  (AndrographispaniculataNees)  that  have  various  benefits  for  human health,  various  pharmacological  activity  of  bitter  is  anti-inflammatory, antibacterial, antipyretic and antioxidant.The sample in this research was a colony of Staphylococcus Aureus and viscous plant extracts bitter (AndrographispaniculataNees).  Extraction  by  maceration  method  using  a  rotary next in Rotary evaporator and drying shrinkage test. Then extract is divided into five treatments, 10 µg/mL, 50 µg/mL, 100 µg/mL, 500 µg/mL, 1000 µg/mL created positive  and  negative  controls  and  conducted  media  creation  NA  and  NB.
Subsequently made rejuvenation of bacteria and manufacturing test solution and the test is passed inhibition with discs and incubations method and measured the diameter of inhibition zone.
Test results showed that all concentrations of bitter extracts have inhibitory effect  on  the  growth  of  Staphylococcus  aureus.  Paniculata  extract  inhibitory indicated by a clear zone around the disc. It is known that at a dose of 100 µg/mL, 1000 µg/mL had  a  weak  inhibitory  and  continued  with  SPSS  analysis  obtained results that did not differ significantly.
Keywords:Sambiloto,Staphylococcus aureus, inhibition

## PENDAHULUAN
Salah  satu  tanaman  yang digunakan  sebagai  obat  tradisional adalah tanaman sambiloto ( Andrographis  paniculata Nees) kandungan utama dari daun sambiloto  adalah andrographolide ,
dan flavonoid .  Kandungan  yang dapat  dipercaya  melawan  penyakit adalah andrographolide. Disamping itu  daun  sambiloto  mengandung saponin,alkaloid,
dan tanin (Dalimunthe,2009) Tumbuhan sambiloto merupakan tumbuhan semusim,
dengan tinggi 50-90 cm, batang yang disertai  dengan  banyak  cabang berbentuk segi empat. Daun tunggal, bertangkai pendek, letak berhadapan bersilang,  bentuk  lanset,  pangkal runcing,  ujung  meruncing,  tepi  rata, permukaan atas daun berwarna hijau tua,  bagian  bawah  daun  berwarna hijau muda, panjang 2-8 cm, lebar 1- 3  cm.  Bunga  tumbuh  dari  ujung batang  atau  ketiak  daun,  berbentuk tabung,  kecil-kecil,  warnanya  putih bernuda ungu. Memiliki buah kapsul berbentuk jorong, panjang sekitar 1,5
cm, lebar 0,5 cm, pangkal dan ujung tajam,  bila  masak  akan  pecah membujur  menjadi  4  keping.  Biji gepeng, kecil-kecil, warnanya cokelat  muda.Tumbuhan  ini  dapat dikembangbiakkan  dengan  biji  atau stek batang (Yuniarti, 2008).
Kegunaan dari sambiloto yang didukung dari data klinis antara lain sebagai  profilaksis  dan  pengobtan gejala infeksi pernafasan atas, seperti flu  dan  sinusitis,  bronkitis,  dan faringotonsilits, infeksi saluran kemih,  dan  diare  akut.  Sedangkan penggunaan sambiloto untuk pengobatan tradisional meliputi pengobatan  disentri  basiler,  kolitus, batuk,  dispepsia,  demam,  hepatitis, malaria,  ulser  pada  mulut,  luka, tuberkulosis,  gigitan  ular  berbisa, otitis  media,  vaginitis,  penyakit radang panggul, cacar air, eksim, dan luka bakar (WHO, 2002).
Aktivitas  lain  dari  sambiloto antara  lain  sebagai  antimikroba, antifungi,antihipertensi,antiinflamas i,antirombin,analgesik,antipiretik,hi poglekemik,antispasmodik,antifertili tas,eratogenik,antitumor,hepatoprote ktif,  sitotoksik,  antileishmaniasis, stimulan  pertumbuhan  rambut,  anti
HIV,  pengobatan  sidrom  nefrotik, koleretik,  perlindungan  membran eritrosit,  aktivitas  kardiovaskuler, antialergi,  antiflu,  dan  industri fagositosis(Kardono,Artanti,Dewiya nti, & Basuki, 2003).
Staphylococus aureus merupakan  Gram  positif  berbentuk bulat biasanya tersusun dalam bentuk kluster yang  tidak  teratur  seperti anggur. Staphylococus aureus tumbuh dengan cepat pada beberapa tipe media dan dengan aktif melakukan metabolisme, melakukan fermentasi karbohidrat dan menghasilkan bermacam-macam pigmen  dari  putih  hingga  kuning gelap. Staphylococus  aureus yang patogen sering menghemolisa darah, mengkoagulasi plasma dan menghasilkan berbagai enzim ekstraseluler  dan  toksin  (Jawetz, dkk., 2005).
Staphylococus  aureus mudah tumbuh pada berbagai media bakteriologik  di  bawah  suasana aerobik atau mikroaerobik.
Stafilokokus  tumbuh  paling  cepat pada  suhu  kamar  37°C,  namun pembentukan  pigmen  yang  terbaik pada suhu kamar (20-35°C) dan pada
media  dengan  pH  7,2-7,4.  Koloni pada  media  padat  berbentuk  bulat, lembut, dan mengkilat (Jawetz , dkk.,
2001).
Salah satu infeksi yang
disebabkan oleh bakteri Staphylococcus  aureus yaitu  infeksi nosokomial. Infeksi nosokomial adalah  infeksi  yang  diperoleh  atau terjadi  di  Rumah  Sakit.  Dimana infeksi  ini  dapat  terjadi  pada penderita, tenaga kesehatan, dan juga setiap  orang  yang  datang  kerumah sakit.  Infeksi  yang  dapat  ditularkan atu diperoleh melalui petugas kesehatan,  orang  sakit,  pengunjung yang  berstatus  karier  atau  karena kondisi  rumah  sakit  ( Jawets et  al , 2005 ).

## METODE PENELITIAN
Penelitian dilakukan pada bulan Januari – Mei 2016 yang bertempat di Laboratorium Farmakognosi dan Mikrobiologi  Akademi  Farmasi  Al- Fatah Bangkulu.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  cawan  petri, kertas saring, kapas, batang pengaduk, tabung reaksi, pipet volume,  mikro  pipet, inkubator
(memmert) ,  autoklaf, botol  gelap,
oven,  rotary  evavorator, lampu spritus, erlemeyer (pirex), beker gelas (pirex), gelas ukur (pirex), dan jarum ose.
Bahan-bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  daun sambiloto (Andrographis  paniculata Nees ) , etanol 70%, Aquades, Nutrien Agar (NA), Nutrien  Broth (NB),
biakan  murni Staphylococus  aureus, pembuatan Dimetil Sulfoksida (DMSO), kapas, aluminium foil, dan kloramfenikol sebagai kontrol positif. Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun Sambiloto
Dalam  metode  ini,  peneliti menggunakan metode ekstraksi dengan cara maserasi yang kemudian dievaporasikan  dengan  alat rotary evaporator. Serbuk  daun  sambiloto (Andrographis paniculata Nees ) ditimbang kemudian direndam dalam botol  kaca  berwarna  gelap  dengan menggunakan  pelarut  etanol  70%, lalu tutup botol dan lakukan sesering mungkin pengocokan atau pengadukan  pada  suhu  ruangan selama  7  hari,    kemudian  ekstrak dikumpulkan  dan  dievaporasikan dengan  rotary  evaporator  dengan tekanan 70 rpm dan suhu 60°C.  Hasil
ekstraksi  disimpan  dalam  lemari pendingin (Voight, 1994).

## Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dicuci bersih dengan menggunakan detergen dan dibilas dengan aquadest. Alat-alat yang  tahan  terhadap  pemanasan tinggi  disterilkan  dengan  autoklaf selama  15  menit  pada  suhu  121°C pada tekanan 2 atm (FI ED IV). Alat- alat logam disterilkan dengan pemanasan  langsung  pada  lampu spritus  hingga  memijar.  Sedangkan alat-alat  yang  tidak  tahan  terhadap pemanasan  tinggi  disterilkan  dengan menggunakan etanol 70%.

## Pembuatan Larutan Uji
Pada  penelitian  ini  konsentrasi ekstrak etanol daun sambiloto (Andrographis paniculata Nees ) yang digunakan  adalah  10  µg/mL,  50 µg/mL, 100 µg/mL, 500 µg/mL, dan 1000  µg/mL  dalam  pelarut  DMSO. Kontrol  negatif  dibuat  dari  DMSO
10% dan pembanding yang digunakan adalah kloramfenikol 0,3%.
Pembuatan  Media  Nutrien  Agar (NA)
Media  pembenihan Nutrient Agar (NA)  dibuat  dengan  cara
Nutrient Agar (NA) dilarutkan dalam aquadest  dan  dimasukkan  kedalam Erlenmeyer  dan  panaskan  sampai mendidih. Selanjutnya media tersebut disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit pada tekanan 2 atm.
Pembuatan  Media  Nutrien  Broth

## (NB)
Media  agar  cair  (NB) Nutrien Borth digunakan  untuk  pembuatan larutan inokulum  bakteri. Media cair dibuat  dengan  cara  NB  dilarutkan dalam  aquadest,  lalu  di  masukkan dalam erlemeyer dan di tutup dengan kapas.Kemudian suspensi dipanaskan sampai  mendidih  lalu  didinginkan dalam suhu ruangan, media disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit  dengan  suhu  121°C  dan tekanan 2 atm.

## Pembuatan larutan DMSO
Larutan  DMSO  dibuat  dengan konsentrasi 10% dengan cara melarutkan DMSO dengan aquadest.

## Peremajaan Bakteri
Peremajaan  bakteri  dilakukan dengan  menggunakan  metode  gores. Biakan  murni  bakteri Stapylococcus aureus diambil satu ose kemudian di inokulasikan dengan cara digoreskan
pada  media  NA  secara  aseptik. Kemudian di inkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam.
Pembuatan larutan Bakteri
Pembuatan  Larutan  Standar Suspensi  Bakteri  dilakukan  dengan cara  ambil  satu  ose  bakteri  hasil peremajaan lalu disuspensikan kedalam  media    NB  sampai  tingkat kekeruhannya  sama  dengan  standar. Kekeruhannya  dilihat  pada  latar belakang  kertas  putih  yang  digaris dengan  menggunakan  spidol.  Jika kurang keruh ditambah koloni bakteri dan  apabila  terlalu  keruh  maka ditambahkan media NB.
Satu  ose  hasil  peremajaan biakan murni  di  biakan  dalam 10 ml media  cair  NB  dan  di  homogenkan. Larutan  ini  berfungsi  sebagai  biakan aktif.
Pengujian Daya Hambat Ambil suspensi bakteri Stapylococcus aureus kemudian
masukkan    kedalam  cawan  petri  dan
ditambahkan NA steril. Lalu dihomogenkan  dan  dibiarkan  hingga memadat. Letakkan paper disc dengan menggunakan pinset.
Kontrol  Negatif  :  ditetesi  larutan DMSO 10 %
Kontrol Positif : Kloramfenikol 0,3% Ekstrak  Etanol  daun  sambiloto  10 μg/ml,  50  μg/ml,  100  μg/ml,  500 μg/ml, 1000 μg/ml.
Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu 37°C selama 18 – 24 jam dan amati pertumbuhan  bakteri  lalu  ukur  zona hambat dengan menggunakan jangka sorong ( Lay, 1994 ).

## Analisa Data
Data  dari  hasil  pengujian  daun sambiloto ( Andrographis paniculata Nees) terhadap diameter zona hambat pertumbuan  bakteri  S taphylococus aureus dianalisa  secara  statistik menggunakan  metode  One  Way Anova  pada  program  SPSS    dengan menggunakan tingkat kepercayaan 95 % atau α = 0,05
Tabel I . Diameter Zona Hambat
Sumber : Riska F dan Puguh S (2014). Diameter Zona Hambat Respon Hambat Pertumbuhan ≤ 5 mm Lemah 6-10 mm Sedang 11-20 mm Kuat ≥ 21 Sangat Kuat

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Verifikasi Tanaman
Hasil verifikasi  tanaman  yang dilakukan di  Laboratorium Fakultas
Biologi Universitas Bengkulu, menunjukan  bahwa  tumbuhan  uji
yang  digunakan  dalam  penelitian
adalah  sambiloto (Andrographis
paniculata Nees ). Verifikasi dilakukan agar tidak terjadi kesalahan dalam pengambilan bahan utama yang akan digunakan pada uji efektivitas antibakteri.
Tabel II. Hasil pemeriksaan karakteristik ekstrak etanol daun sambiloto
Karakteristik ekstrak Ekstrak etanol daun sambiloto a. Organoleptik • Konsistensi • Warna
• Bau
• Rasa Ekstrak Kental Hijau Pekat Khas
Pahit b. Rendemen 5,1% c. Susust Pengeringan 27%

## Hasil pengujian efektivitas dan diameter daya hambat antibakteri
Penelitian ini dilakukan pada bulan Mei 2016 di Laboratorium Mikrobiologi Akademi  Farmasi  Al-Fatah  Bengkulu,  metode  yang  digunakan  adalah    Metode Difusi  Cakram.
Tabel III. Hasil Uji efektivitas Dan Diameter Daya Hambat Ekstrak daun sambiloto Terhadap Bakteri Staphylococus aureus
Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  daun  sambiloto (Andrographis paniculata Nees ) yang diambil  dikota  Bengkulu.  Verifikasi tanaman    dilakukan    di  Fakultas Biologi
Universitas
Bengkulu.
Verifikasi    dilakukan  agar  tidak terjadi kesalahan dalam pengambilan bahan  utama  yang  akan  digunakan pada uji efektivitas antibakteri.
Pengujian  aktivitas  antibakteri dilakukan dengan menggunakan metode  difusi  cakram.  Hal  ini  untuk mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh ekstrak daun sambiloto dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococus aureus.
Cara  pengujian  efektivitas  ini dilakukan dengan cara kertas cakram di  celupkan  ke  dalam  5  konsentrasi ekstrak  yaitu  (10  µg/mL,  50  µg/mL, 100  µg/mL,  500  µg/mL,  1000
µg/mL).  Selanjutnya  kertas  cakram ditempelkan  pada  media  bakteri dengan  pinset  kemudian  dilakukan inkubasi selama 24  jam pada suhu 37 °C.
Pembuatan  larutan  uji  ekstrak daun  sambiloto  dilarutkan  dengan Dimethyl-sulfoxide  (DMSO)  10% yang sekaligus sebagai kontrol negatif.  Penggunaan  DMSO  10% dipilih karena berdasarkan penelitian yang    telah  dilakukan  sebelumnya menunjukan  bahwa  DMSO  tidak menghambat  pertumbuhan  bakteri pada  konsentrasi  kurang  dari  15%. Sebagai  kontrol  positif  digunakan kloramfenikol karena antibiotik golongan  ini  berspektrum  luas  yaitu efektif  untuk bakteri gram positif dan negatif  mikroorganisme lain.
Berdasarkan  hasil  pengujian dengan  metode  difusi  kertas  cakram
terhadap bakteri menunjukan  bahwa konsentrasi  10 µg/ml,  50 µg/ml,  100 µg/ml,  500  µg/ml,  dan  1000  µg/ml ekstrak  daun  sambiloto  yang  diuji pada  bakteri Staphylococus  aureus memiliki pengaruh terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococus aureus yang  ditunjukan  dengan adanya  zona  bening  disekitar  kertas cakram.
Menurut  Riska  dan  Puguh (2014)    jika  zona  hambat  yang terbentuk  pada  uji  difusi  lempeng agar berukuran kurang dari ≤ 5  mm,
maka respon zona hambat dikategorikan  kedalam  lemah.  Jika zona  hambat  yang  terbentuk  6-10 mm, maka respon zona hambat masuk kedalam  kategori  sedang,  sedangkan 11-20 mm kuat, dan ≥ 20 mm sangat kuat.
Hasil pengukuran zona  hambat pada  Tabel  II  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  daun  sambiloto  10 µg/ml,  50  µg/ml,  100  µg/ml,  500 µg/ml,  1000  µg/ml  memiliki  respon penghambatan  yang  lemah  (≤5 mm)dan  kontrol  positif  memliki respon penghambatan yang kuat (11- 20  mm),  sedangkan  DMSO  10  % sebagai  kontrol  negatif  tidak  dapat
menghambat  pertumbuhan  bakteri Stapylococcus aureus baik pada awal hingga akhir perlakuan.
Pada  konsentrasi  100  µg/ml, 500  µg/ml  dan  1000  µg/ml  terjadi peningkatan  dan  penurunan  zona hambat hal ini dikarenakan kandungan bahan kimia dalam ekstrak daun sambiloto dapat dipengaruhi oleh beberapa hal antara lain  dalah  lokasi  tanaman,pemilihan bagian  tanaman  sambiloto  (akar, batang,  ranting,  daun,  bunga,  buah) memiliki kandungan yang tidak sama. Pada proses pengeringan derajat daun sambiloto dapat berpengaruh terhadap  kualitas  dan  kuantitas kandungan bahan kimia yang terdapat dalam  daun  (Cendranata  2012). Peneliti  mengambil  daun  sambiloto tidak  memperhatikan  usia  tanaman, ini  juga  memungkinkan  komponen zat yang terdapat pada tanaman daun sambiloto  tidak  optimal  seharusnya pengambilan  daun    sambiloto  pada saat  tanaman  akan  berbunga  (umur sambiloto 2-3 bulan).
Menurut  Dwidjoseputro  dan Hidayati  (dalam  Lamapaha  dan Rupilu,2008)  bahwa  pada  waktu pendedehan  medium  tertentu,  suhu
dan  temperatur  dapat  menurunkan
aktifitas konsentrasi
ekstrak.
Selanjutnya,  menurut  Elifah  (dalam
Ariyanti, 2012) bahwa diameter zona
hambat  tidak  selalu  naik  sebanding dengan naiknya konsentrasi
antibakteri, ini terjadi karena perbedaan  kecepatan  difusi  senyawa antibakteri pada media agar serta jenis dan  konsentrasi  senyawa  antibakteri yang  berbeda  juga  memberikan diameter zona hambat yang berbeda.
Secara  statistik  hasil  daya hambat  yang  diperoleh  terlebih dahulu  dilakukan  uji  normalitas menggunakan Kolmogorov-
Sminornov .  Dari  hasil  uji  normalitas menggunakan  uji  didapatkan  nilai signifikansi  7,93  yang  artinya  data terdistribusi  normal . Dari  hasil  uji homogenitas
didapat hasil
(0,041)<p(0,05)  yang  berarti  varians
data  tidak  bersifat  homogen,  maka dilanjutkan  dengan  analisis  non parametik Kruskal-Wallis , uji didapatkan nilai signifikan (0,02)<p(0,05)  yang  artinya  terdapat pengaruh ekstrak terhadap pertumbuhan bakteri. Namun
berdasarkan  uji  duncan  tidak  ada perbedaan  yang  bermakna  pada  tiap
konsentrasi  yang  digunakan  (p  > 0,05)  meskipun  dari  nilai  hambat terlihat  bahwa    100  µg/ml  adalah konsentrasi terbaik.
Hasil  analisa  data  kontrol positif  kloramfenikol  memiliki  sig (0,000)<p  (0,05)  terhadap  semua kontrol  uji.  Hal  ini  menunjukan bahwa kloramfenikol memiliki kemampuan daya hambat paling baik terhadap pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus, dan konsentrasi10  µg/ml,  50  µg/ml,  100 µg/ml,  500  µg/ml,  dan  1000  µg/ml ekstrak  etanol  daun  sambiloto  tidak berbeda secara signifikan.
Pada penelitian yang dilakukan oleh (Sikumalay dkk 2014) mengenai efek  antibakteri  dari  rebusan  daun sambiloto  ( Andrographis  paniculata Nees)  dan  produk  herbal  sambiloto terhadap Staphylococcus aureus , didapatkan hasil rebusan daun sambiloto  ( Andrographis  paniculata Nees)  dan  produk  herbal  sambiloto tidak  mempunyai  efek  antibakteri terhadap Staphylococcus aureus.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun sambiloto (Andrographis  paniculata Nees ) tidak  memiliki  kemampuan  dalam
menghambat    pertumbuhan  bakteri
Staphylococcus  aureus dengan  hasil uji data statistik dengan  (ρ>0,05).
Seluruh  konsentrasi  ekstrak etanol daun sambiloto (Andrographis paniculata Nees ) tidak memiliki daya hambat dengan hasil uji data statistik dengan    (ρ>0,05)  yang  artinya  tidak berbeda  secara  signifikan,  sehingga tidak dapat digunakan sebagai antibakteri dalam dunia pengobatan

## DAFTAR PUSTAKA
Dalimunthe,  A.  2009, Interaksi Sambiloto (Andrographis Paniculata Nees), Departemen Farmakologi Fakultas Universitas Sumatra Utara, Medan. Jawetz,  E., et  al 2005, Mikrobiologi
kedokteran . Buku 1. Salemba Medika. Jakarta. Kardono,  L.  B.  S.,  Artanti,  N., Dewiyanti,  I.  D.,  Basuki.  T. 2003, Selected  Indonesian Medicinal Plants Monographs and Description , V0l, I, Gramedia Widiasarana, Jakarta,  Indonesia. Hal  121- 152. Lamapha,  Yulia  F.  Dan    Rupilu Novie S.2008. potensi Lengkuas sebagai Antimikroba (Studi In Vitro pada Bakteri Gram Negatif) .
Riska F, Puguh S , Sarwiyono, 2014, Inhibition
Activityof
Moringa oleifera Leaf Juice to Growth of Streptococcus agalactiae and Streptococcus uberis Bacteris  Caused  Mstitisin Dairy Cows , Jurnal, Fakultas Pertanian Universitas Brawijaya,
Malang.
T.Tan Hoan, Raharjo K, 2002, Obat- obat Penting, Edisi 20, Hal 153,317-322, EGC, Jakarta.
Voigt,  1984, Buku  Ajar  Teknologi Farmasi , Diterjemahkan oleh Soewandi N. S, Edisi 5, Hal 202-211, 564-570, Gadjah  Mada  University
Press, Yogyakarta.
World  Health  Organization  (WHO). 2002. Guidelinesfor Drinking-water  Quality3rd
Edition. Geneva:WorldHealthOrgani zation) Yuniarti, T.2008, Ensiklopedia Tanaman  Obat  Tradisional Cetakan  Pertama ,  Jakarta.
Medpress