## KUALITAS SEMEN SEGAR KAMBING BOER PADA TEMPERATUR
PENYIMPANAN 4 O C DENGAN MENGGUNAKAN PENGENCER SITRAT DAN SUPLEMENTASI SUSU KEDELAI BUBUK
Winda Rahayu 1 , Agung Pramana W.M 1 , Gatot Ciptadi 2
1 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
2 Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya
Email : windarahayu50@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pengencer  susu  kedelai  bubuk  berdasarkan konsentrasinya  F1(2%),  F2  (4%)  dan  F3  (6%)  dalam  pengencer  sitrat  terhadap  motilitas,  viabilitas, abnormalitas  dan  integritas  membran  spermatozoa  berdasarkan  lama  penyimpanan  (0  jam,  24  jam,  72 jam,  120  jam).  Penelitian  ini  menggunakan  media  pengencer  berbasis  media  nabati  (lesitin)  yaitu Andromed®  (K+),  susu  kedelai  dalam  pengencer  sitrat  dengan  konsentrasi  0%  (K-),  2%  (F1),  4%  (F2) dan 6% (F3). Pengamatan dilakukan sebelum pengenceran yaitu pengamatan volume, warna, konsistensi, pH,  motilitas  massa,  motilitas individu, viabilitas,  konsentrasi, dan abnormalitas. Selanjutnya dilakukan pengenceran  berdasarkan  perlakuan  dengan  masing-masing  tiga  ulangan  dan  dilakukan  penyimpanan pada  suhu  4 o C,  lalu  pengamatan  pasca  penyimpanan  yaitu  motilitas,  viabilitas,  abnormalitas,  dan integritas  membran.  Penelitian  ini  menggunakan  RAL  faktorial  dan  dianalisis  menggunakan  two  way ANOVA  dengan  program  SPSS  versi  16.0  dan  dilanjutkan  dengan  uji  Tukey.  Hasil  penelitian  secara umum  menunjukkan  adanya  beda  nyata  (P<0,05)  untuk  pengencer  K+,  F1,  dan  F2  terhadap  pengencer K- dan F3. Adanya kandungan lesitin pada susu  kedelai  mampu  melindungi spermatozoa dari cekaman dingin  (cold  shock)  selama  penyimpanan  pada  suhu  4 o C.  Konsentrasi  susu  kedelai  bubuk  yang  terlalu tinggi kemungkinan menyebabkan perubahan pH pada media dan mempengaruhi tekanan osmotik pada membran spermatozoa sehingga menurunkan kualitas spermatozoa selama penyimpanan.

## Kata kunci : Lesitin, membran plasma, susu kedelai

## ABSTRACT
The objective of this research was to know the influence of soybean milk powder diluents based on concentration (2%, 4%,6%) in citrate diluent to motility, viability, abnormality and membrane integrity of  spermatozoa  based  on  long  duration  storage  (0  hours,  24  hours,  72  hours,  120  hours).  This  research using  diluent  medium  based  on  vegetable  medium  (lechitin)  is  andromed  (K+),  soybean  milk  in  diluent citrate  with  concentrations  of  0%  (K-),  2%  (F1),  4%  (F2),  and  6%  (F3).  The  characterization  of predilution  were  observed  such  as  volume,  color,  consistency,  pH,  mass  motility,  individual  motility, viability,  concentration,  and  abnormality.  Next  step  dilution  based  on  treatment  with  each  of  the  three recurrence and performed storage at temperature of 4˚C. The next of post storage were observed such as sperm  viability,  motility,  abnormality  and  membrane  integrity.  Data  were  analyzed  using    two  way ANOVA in factorial completely randomized design with SPSS version 16.0 and continued with Tukey test. The results showed that a significant difference (P<0.05)  to K+, F1, and F2 diluent to K- and F3 diluent. The presence of lechitin content of soybean milk can protect spermatozoa from cold shock during storage at a temperature of 4˚C. The concentration of soy milk powder high possibility changes to pH of the media and influenced of osmotic presure on sperm membrane decrease of the sperm quality during storage.

## Key word: Lechitin, plasma membrane, soybean milk

## PENDAHULUAN
Kambing  Boer  merupakan  salah  satu  jenis kambing  yang  memiliki  potensi  pertumbuhan dan  bobot  hidup  yang  tinggi,  serta  memiliki sifat  fertilitas  yang  baiK  [3].  Pemuliaan kambing Boer saat ini banyak dilakukan dengan sistem  inseminasi  buatan  (IB)  namun  program ini  belum  sepenuhnya  berhasil  karena  terdapat beberapa  faktor  yang  mempengaruhi  salah satunya adalah kualitas semen kambing Boer.
Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi kualitas  semen  kambing  Boer  adalah  sistem penyimpanan semen kambing Boer. Penyimpanan  semen  segar  banyak  dilakukan pada  peternakan  kambing  yang  memiliki keterbatasan  alat  penyimpanan.  Penyimpanan segar  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan media  pengencer  yang  mendukung  sperma supaya tetap hidup tanpa mengurangi kemampuannya  untuk  fertilisasi.  Salah  satu
faktor  pembatas  dalam  penyimpanan  segar semen adalah kapasitasi spermatozoa.
Berdasarkan  hal  tersebut  diperlukan  media yang  baik  untuk  melindungi  sperma  supaya tetap  mampu  berkapasitasi  pada  waktu  dan tempat yang tepat. Sumber lesitin nabati banyak ditemukan pada berbagai tanaman salah satunya adalah  kacang  kedelai.  Keunggulan  lesitin kacang kedelai memiliki kandungan phospolipid  antara  lain  fosfatidil  choline 17,50%  dan  23,00%,  fosfatidil  ethanolamine 15,00%  dan  20,00%,  glikolipid  13-16%, phospolipid  lainnya  14-18%  dan  trigliserida  2- 4% [11].
Berdasakan  hal  tersebut  penelitian  ini menggunakan  sumber  lesitin  nabati  yang berasal  dari  kacang  kedelai  dalam  bentuk  susu kedelai  bubuk  sebagai  media  penyimpanan sementara  semen  segar  sehingga  diharapkan sumber lesitin nabati ini dapat mempertahankan viabilitas  dan  kemampuan  spermatozoa  dalam berkapasitasi sehingga tetap mampu melakukan fertilisasi secara in vitro.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  mulai Bulan  Januari-Maret  2014  di  Laboratorium Sumber Sekar, Batu dan Laboratorium Fisiologi Hewan,  serta  Laboratorium  Biologi  Molekuler, Universitas  Brawijaya,  Malang  pada  Bulan Januari-Maret  2014.  Materi  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  kambing  Boer berumur 4 tahun dan berat badan 75 kg dengan kondisi sehat dan normal, semen kambing Boer. Pengencer  yang  digunakan  sebagai  perlakuan yaitu  Andromed®  (K+)  yang  diencerkan dengan  aquabidest  adalah  1:4.  Pengencer  sitrat dan  susu  kedelai  dibuat  dengan  susu  kedelai bubuk  yang  dilarutkan  sesuai  konsentrasi masing-masing 0% (K-), 2% (F1), 4% (F2) dan 6%  (F3).  Selanjutnya  ditambahkan  asam  sitrat, fruktosa,  penicillin,  dan  streptomycin  dan gliserol secara berurutan dan setiap penambahan  dilakukan  apabila  zat  sebelumnya sudah  terlarut.  Larutan  dipindahkan  ke  dalam tabung  propilen  15ml  dan  sentrifugasi  selama 10  menit  dengan  kecepatan  2000  rpm  untuk pengencer  F1,  F2  dan  F3,  lalu  diambil supernatannya  dan  dimasukkan  dalam  tabung propilen,  lalu  ditutup  dengan  alumunium  foil dan  disimpan  dalam  lemari  es.  Selanjutnya pengencer    di  hangatkan  terlebih  dahulu  pada waterbath  suhu 36-38 o C jika akan digunakan.
Rancangan yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola faktorial 5x4. Variabel yang diamati sebelum pengenceran  dan  penyimpanan  yaitu  yaitu pengamatan  volume,  warna,  konsistensi,  pH, motilitas  massa,  motilitas  individu,  viabilitas, konsentrasi,  dan  abnormalitas.  Selanjutnya dilakukan  pengenceran  berdasarkan  perlakuan dengan  masing-masing  tiga  ulangan  dan dilakukan  penyimpanan  pada  suhu  4 o C,  lalu pengamatan pasca penyimpanan yaitu motilitas, viabilitas, abnormalitas, dan integritas membran.  Selanjutnya  data  dianalisis  dengan uji ANOVA menggunakan dan SPSS versi 16.0 dan dilanjutkan dengan uji Tukey.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Evaluasi  makroskopis  terhadap  kualitas semen  kambing  Boer  antara  lain  volume, warna,  bau,  konsistensi,  dan  pH.  Selanjutnya evaluasi  mikroskopis  yang  meliputi  motilitas massa, motilitas individu, konsentrasi, viabilitas dan abnormalitas spermatozoa (Tabel 4.1).
Tabel  4.1.  Rataan  kualitas  semen  segar kambing Boer
Parameter Rataan Volume (ml) 0,63±0,15 Konsentrasi (juta/ml)  4546,67±611,01 Konsistensi Pekat Warna Putih susu-Putih kekuningan Bau Amis khas hewan pH 7 Motilitas massa 3+ Motilitas individu (%) 71,33±1,15 Viabilitas (%) 93,17±0,58 Abnormalitas (%) 3,67±0,76 Volume semen kambing Boer yang diperoleh dari hasil pengambilan memiliki rata- rata  adalah  0.63±0.15ml.  Volume  semen kambing  Boer  dewasa  di  Indonesia  seharusnya berkisar  antara  0,70-1,50  ml  [14]  sedangkan jumlah kisaran normal volume  semen kambing secara  umum  yaitu  antara  0,5-1,5  ml/ejakulat [8].  Jumlah  rata-rata  volume  semen  kambing Boer  pada  penelitian  ini  masih  normal  jika dibandingkan  dengan  volume  semen  kambing secara  umum.  Konsentrasi  sperma  tinggi  yaitu
4546,67±611,01  juta/ml,  Rata-rata  konsentrasi spermatozoa kambing Boer yang telah diperiksa pada penelitian ini masih dalam kisaran normal yaitu antara 2500-5000 juta/ml [2].
Warna semen kambing Boer pada penelitian ini  adalah  putih  susu-putih  kekuningan.  Selain konsistensi bau semen kambing juga amis khas hewan yang artinya bau tersebut sesuai dengan hewan  yang  diambil  semennya.  Umumnya  bau semen  dinyatakan  dengan  bau  khas  [5]. Selanjutnya  pemeriksaan  pH  menunjukkan bahwa  pH  semen  kambing  Boer  adalah  7,00 yang berarti netral, karena berdasarkan beberapa  penelitian  semen  kambing  memiliki pH antara 5,9-7,3 [4].
Motilitas massa yang teramati pada pemeriksaan  sebelum  perlakuan  adalah  3+. Hasil  motilitas  individu  juga  mendukung kualitas  motilitas  massa  dengan  rata-rata 71,33±1,15 yang menunjukkan bahwa spermatozoa  sangat  progesif  dan  didukung dengan  adanya  pergerakan  massa.  Kualitas semen  dapat  dikatakan  baik  apabila  memiliki motilitas  >50%  [7]  dan  kisaran  normalnya adalah  60-80%  [4].  Rata-rata  viabilitas  atau daya hidup spermatoza yaitu 93,17±0,58% yang menunjukkan  bahwa  kualitas  spermatoza  baik. Semen  normal  memiliki  presentase  hidup minimal 50% [15]. Abnormalitas pada pemeriksaan  ini  adalah  3,67±0,76%  sehingga semen  tersebut  masih  dapat  digunakan  untuk proses selanjutnya.
Kualitas motilitas individu setelah perlakuan  dan  penyimpanan  secara  umum menunjukkan  adanya  beda  nyata  (P<0,05) namun  jika  dibandingkan  secara  spesifik berdasarkan  jam  pengamatan  dan  perlakuan hanya terdapat kecenderungan peningkatan dan penurunan  kualitas  motilitas  (Gambar  4.1). Antara pengencer F1 dan F2 jika dibandingkan dengan  pengencer K+  memiliki  kecenderungan kualitas motilitas individu selama penyimpanan yang sama,  meskipun pada jam ke-72  motilitas individu  dengan  perlakuan  K+  menurun, sehingga kemungkinan adanya lesitin pada susu kedelai  bubuk  dengan  konsentrasi  yang  sesuai pada  pengencer  F1  dan  F2  tetap  mampu melindungi  spermatozoa  selama  penyimpanan suhu  4 o C.  Kualitas  motilitas  individu  dengan perlakuan  pegencer  F3  dan  K-    memiliki kecenderungan yang sama yaitu terjadi penurunan
kualitas motilitas individu
spermatozoa selama penyimpanan.
Tingginya  konsentrasi  susu  kedelai  yaitu
6% pada pengencer F3 dimungkinkan
mengakibatkan  banyaknya  gumpalan  susu kedelai  pada  medium  sehingga  mempengaruhi pergerakan  spermatozoa,  sedangkan  pengencer K-  tidak  mengandung  susu  kedelai  yang memungkinkan  membran  spermatozoa  tidak terlindungi  secara  maksimal  karena  tidak adanya  lesitin  untuk  mengurangi  cold  shock ketika penyimpanan suhu 4 o C.
Gambar  4.1.  Motilitas  individu  spermatozoa berdasarkan perlakuan dan waktu penyimpanan
Lamanya penyimpanan spermatozoa berpengaruh  terhadap  penurunan  motilitas spermatozoa,. Kualitas motilitas individu masih cukup  baik  pada  jam  ke-120  dengan  perlakuan F1,  F2  dan  K+  karena  masih  berada  pada kisaran  40%,  sedangkan  kisaran  40%  dengan perlakuan  F3  dan  K-  hanya  sampai  jam  ke-72. Standar motilitas yang banyak digunakan dalam program IB harus memiliki persentase motilitas paling sedikit sebesar 40% [15].
Evaluasi  terhadap  viabilitas  (daya  hidup) dari  spermatozoa  setelah  perlakuan  secara umum  menunjukkan  adanya  beda  nyata (P<0,05),  namun  jika  dibandingkan  secara spesifik  berdasarkan  jam  pengamatan  dan perlakuan hanya terdapat kecenderungan peningkatan  dan  penurunan  kualitas  viabilitas spermatozoa (Gambar 4.2).
Gambar 4.2. Viabilitas spermatozoa berdasarkan  perlakuan  dan waktu penyimpanan
Viabilitas  spermatozoa  dengan  perlakuan
F1
dan F2 memiliki persamaan mempertahankan kualitas viabilitas
spermatozoa,  namun  pada  jam  ke-72  viabilitas spermatozoa  dengan  perlakuan  F2  mengalami penurunan  dan  mengalami  peningkatan  lagi pada  jam  ke-120.  Viabilitas  spermatozoa dengan  perlakuan  K+  dan  K-  tidak  memiliki beda  nyata  meskipun  pada  pengencer  K-  tidak mengandung  lesitin.  Kemungkinan  adanya sitrat pada pengencer K- yang berfungsi sebagai buffer mampu menjaga konsentrasi ion kalsium pada  spermatozoa  sehingga  secara  fisiologis spermatozoa  tidak  memproduksi  ATP  secara berlebihan untuk menekan kinerja permeabilitas membran spermatozoa yang tinggi ketika harus berada  pada  lingkungan  yang  dingin  selama penyimpanan. Pengenceran dengan menggunakan  sitrat  mampu  meningkatkan perbaikan  daya  hidup  spermatozoa  dalam penyimpanan  selama  180  jam  pada  suhu  5 o C [10].
Evaluasi terhadap abnormalitas spermatozoa  setelah  perlakuan  secara  umum menunjukkan  adanya  beda  nyata  (P<0,05), namun  jika  dibandingkan  secara  spesifik berdasarkan  jam  pengamatan  dan  perlakuan hanya terdapat kecenderungan peningkatan dan penurunan  kualitas  abnormalitas  spermatozoa (Gambar  4.4).  Kualitas  abnormalitas  dengan perlakuan  pengencer  F3  rata-rata  hampir  sama dengan  pengencer  K-.  Kenaikan  abnormalitas yang  terjadi  pada  perlakuan  K+,  F1,  dan  F2 yang  terlihat  pada  jam  ke-72  dan  ke-120 kemungkinan karena terlalu padatnya spermatozoa yang masih hidup pada penyimpanan jam ke-72 menjadikan banyaknya gesekan  yang  terjadi  antar  spermatozoa  lalu menyebabkan  kerusakan  struktur  morfologi spermatozoa,  namun  hal  ini  perlu  dikaji  lebih lanjut.
Gambar 4.4. Abnormalitas spermatozoa berdasarkan perlakuan dan waktu penyimpanan
Lama  penyimpanan  juga  mempengaruhi kenaikan  abnormalitas  semakin  lama  masa penyimpanan  spermatozoa  maka  akan  memicu kenaikan  abnormalitas.  Hal  tersebut  terlihat
ketika  pengamatan  jam  ke-72  dan  ke-120 dengan perlakuan F1, F2 dan K+ karena adanya kenaikan  abnormalitas  yang  didukung  dengan tingkat  viabilitas  dan  motilitas  yang  masih cukup  baik  selama  penyimpanan  tersebut, namun  hal  ini  masih  perlu  di  kaji  lebih  dalam lagi.
Terdapat lima kategori spermatozoa abnormal  yang  harus  diperhatikan  dengan presentase  abnormalitas  yang  tidak  boleh  lebih dari  20%  antara  lain  tidak  ada  ekor,  abnormal kepala, bentuk ekor yang abnormal, bentuk ekor abnormal  dengan  adanya  sitoplasmic  droplet pada  bagian  proksimal,  lalu  abnormalitas  pada ekor  dengan  distal  droplet  [13].  Abnormalitas yang  ditemukan  pada  penelitian  ini  antara  lain kepala  yang  kecil  dan  ramping,  sehingga  dapat dikategorikan  sebagai  abnormalitas  primer  dan ekor yang melengkung, serta terputusnya kepala dari  ekor  sehingga  dikategorikan  sebagai abnormalitas sekunder spermatoza.
Evaluasi  terhadap  integritas  membran spermatozoa  setelah  perlakuan  secara  umum menunjukkan  adanya  beda  nyata  (P<0,05), namun  jika  dibandingkan  secara  spesifik berdasarkan  jam  pengamatan  dan  perlakuan hanya terdapat kecenderungan peningkatan dan penurunan kualitas integritas membran spermatozoa  (Gambar  4.6).  Kualitas  integritas membran  masih  cukup  baik  dengan  perlakuan F1,  F2,  dan  K+  ketika  penyimpanan  jam  ke-0 sampai  ke-120,  meskipun  selama  penyimpanan mengalami  penurunan.  Integritas  membran dengan  perlakuan  F3  dan  K-  memiliki  kualitas yang  sama  karena  adanya  penurunan  kualitas dibandingkan dengan perlakuan lainnya, namun pada  jam  ke-0  kualitas  integritas  membran dengan  perlakuan  F3  tidak  berbeda  nyata dengan perlakuan K+ dan F2.
Gambar  4.6.  Integritas  membran  spermatozoa berdasarkan  perlakuan  dan  waktu penyimpanan.
Kenaikan  konsentrasi  susu  kedelai  juga kemungkinan  menyebabkab  perubahan  pH
ketika  penyimpanan  dalam  waktu  yang  lama, perubahan  pH  akan  mengganggu  fungsi membran  dari  sel  spermatozoa  karena  harus menyeimbangkan  tekanan  osmotik  di  dalam dan  diluar  sel.  Konsentrasi  susu  kedelai  yang tinggi  pada  pengencer  F3  menyebabkan perubahan  tekanan  osmotik  yaitu  fenomena hipertonik,  ketika  konsentrasi larutan  diluar  sel tinggi  akan  menyebabkan  sel  mengeluarkan lebih  banyak  air  dan  akhirnya  mengkerut peristiwa  inilah  yang  mengindikasikan  bahwa terjadi  perubahan  fungsi  membran  ada  sel spermatozoa  ketika  disimpan  pada  suhu  4 o C dengan konsentrasi bahan terlarut yang tinggi.
Adanya  kandungan  protein  dan  lipid  yang sesuai  memungkinkan  membran  spermatozoa masih terlindungi secara utuh selama penyimpanan.  Fosfolipid  termasuk  lesitin  jika ditambahkan air maka molekul-molekul tersebut akan berkumpul dengan sendirinya dan akan  membentuk  agregat  yang  melindungi bagian  hidrofobiknya  [1].  Beberapa  laporan menunjukkan  bahwa  lesitin  pada  pengencer akan  berikatan  dengan  membran  plasma sehingga  mampu  mempertahankan  konsentrasi kalsium  saat  pendinginan.  Berdasarkan  hal tersebut apabila kandungan kalsium intraseluler dalam  sel  spermatozoa  tetap  stabil  maka permeabilitas  membran  sel  juga  akan  stabil, sehingga proses kapasitasi dini dapat diminimalisir [16].
Kandungan  asam  sitrat  pada  pengencer sitrat  juga berpengaruh positif  terhadap motilitas  spermatozoa.  Asam  sitrat  merupakan senyawa  kimia  yang  dapat  digunakan  sebagai buffer  yang  mampu  mempertahankan  tekanan osmotik  dan  keseimbangan  elektrolit,  karena mengandung  ion  yang  diperlukan  spermatozoa untuk  menjaga  kestabilan  membran  sel.  Ion sitrat  akan  mampu  berikatan  dengan  Ca  yang terdapat  pada  plasma  [10].  Berdasarkan  hal tersebut  adanya  pengikatan  Ca  oleh  ion  sitrat akan  menghambat  pembentukan  ATP  menjadi cAMP  yang  dikatalis  Adenosin  siklase  (AC) selama  penyimpanan  sehingga  menghambat produksi  energi  untuk  motilitas  spermatozoa yang  menyebabkan  proses  kapasitasi  dini  tidak akan  terjadi,  selain  itu  ketika  proses  thawing asam sitrat akan terurai menjadi karbondioksida dan  air  sehingga  ion  Ca  yang  berikatan  akan dilepaskan  dan  memodulasi  motilitas  sperma kembali.
Adanya  penurunan  viabilitas  spermatozoa dapat  disebabkan  oleh  tingginya  persentase campuran bahan pengencer yang akan
menimbulkan  peningkatan  asam  laktat  yang lebih besar sehingga terjadi perubahan keasaman dan menurunkan daya hidup spermatozoa  [12].  Saat  konsentrasi  kedelai dinaikkan  maka  akan  memiliki  efek  negatif terhadap  kualitas  spermatozoa  dan  motilitas spermatozoa  akan  menurun  ketika  konsentrasi lesitin  pada  pengencer  lebih  tinggi  [9].  Sel hewan  tidak  memiliki  dinding  sel  sehingga tidak dapat menerima penyerapan atau pelepasan  air  secara  berlebihan  ketika  dalam kondisi  lingkungan  hipotonik  atau  hipertonik harus memiliki adaptasi khusus untuk osmoregulasi [1].

## KESIMPULAN
Pengencer F1 dan F2 mampu mempertahankan  kualitas  motilitas  individu, viabilitas  dan  integritas  membran  spermatozoa selama  penyimpanan  jam  ke-0,  ke-24,  ke-72, dan  ke-120.  Adanya  kandungan  lesitin  pada susu  kedelai  mampu  melindungi  spermatozoa dari  cekaman  dingin  (cold  shock)  selama penyimpanan  pada  suhu  4 o C.  Kualitas abnormalitas  dengan  perlakuan  F1  dan  F2 cukup  tinggi  pada  penyimpanan  jam  ke-72 berkorelasi  dengan  tingginya  motilitas  dan viabilitas,  hal  ini  kemungkinan  menyebabkan gesekan antar spermatozoa sehingga mengakibatkan  kenaikan  abnormalitas  namun fenomena  ini  perlu  dikaji  lebih  lanjut. Kandungan  susu  kedelai  bubuk  dengan  tingkat konsentrasi tinggi pada pengencer F3 kemungkinan  menyebabkan  adanya  gumpalan lemak  susu  kedelai  bubuk  selama  peyimpanan sehingga  menyebabkan  perubahan  pH  pada media  dan  mempengaruhi  tekanan  osmotik pada membran spermatozoa, lalu menyebabkan penurunkan kualitas spermatozoa selama penyimpanan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Bapak  Dr.  Agung Pramana W. M. M.Si selaku pembimbing pertama dan  Bapak  Dr.  Ir.  Gatot  Ciptadi,  DESS  selaku pembimbing  kedua,  serta  Bapak  Dr.  Aris Soewondo  selaku  penguji.  Ibu  Setyawati,  mbak susi, dan Bapak Harmaji selaku laboran di Jurusan Biologi  Universitas  Brawijaya,  Malang.  Bapak Sumali selaku laboran di Laboratorium Sumbersekar, Batu.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Campbell,  N.A.,  J.B.  Reece,  dan  L.G. Mitchell.  2002. Biologi. Ed ke-5. Jilid I. Erlangga. Jakarta
[2]  Evans,  W.H.  dan  Maxwell,  J.M.  1987. Membran  Structure  and  Function.  IRL
Press.  Oxford  University.  Oxford:11-
28.
[3]  Greyling, J.P.C. 2000. Reproduction Traits in  the  Boer  Goat  Does.  Small  Rumin. Res. 36:171-177.
[4]  Hafez, E.S.E. 2000. X and Y Chromosome Bearing  Spermatozoa.  In  Reproduction in  Farm  Animal.  Lea  and  Febiger. Philadelphia.
[5]  Herdis  dan  M.  Rizal.  2008.  Inseminasi Buatan  pada  Domba.  Rineka  Cipta. Jakarta
[7]  Lopes,  F.P.  2002.  Semen  Collection  and Evaluation  in  RAM  ANS  33161. University of Florida.
[8]  Partodihardjo,  S.  1992.  Ilmu  Reproduksi Hewan. Mutiara Sumber Widya.
Jakarta.
[9]  Rehman,  F.U.,  M.S.  Qureshi  dan  R.U. Khan.  2014.  Effect  of  Soybean  Based Extenders  on  Sperm  Parameters  of Holstein-Friesian  Bull  Durung  Liquid Storage  at  4 o C.  Pakistan  J.  Zool. 46:185-189.
[10] Salisbury, G.W., N.L. Vandenmark, dan R. Djanuar.  1985.  Fisiologi  Reproduksi dan  Inseminasi  Buatan  pada  Sapi. Gdjah Mada University Press. Yogyakarta. [11] Shurtleff, W. Dan Aoyagi. 2004. Soyfoods Center: A Chapter From the
Unpublished  Manuscript  History  of Soybeans  and  Soyfoods.  Layalette.
California.
[12]  Situmorang,  P.  1992. Pengaruh  Pengencer Glucerol  dan  Toingkat  Kuning  Telur Terhadap  Daya  Hidup  Spermatozoa.
Ilmu dan Peternakan. 5:1.
[13]  Susilawati,  T.  2011.  Spermatologi.  UB Press. Malang
[14] Suyadi, Susilawati,T. Dan Isnaini, N. 2004. Uji  Coba  Produksi  Semen  Beku Kambing  Boer.  Fakultas  Peternakan
Universitas Brawijaya. Malang.
[15]  Toelihere,  M.R.  1993.  Inseminasi  Buatan Pada Ternak. Angkasa. Bandung
[16]  White,  I.G.  1993.  Lipid  and  Calcium Uptake  of  Sperm  in  Relation  to  Cold
Shock  and  Preservation  :  A  review. Reproduction and Fertility Development. 5:639-658.