## Original Article
DOI : 10.35311/jmpi.v10i1.518
Evaluasi Morfologi Organ Pankreas Tikus Wistar Model Diabetes Melitus oleh Ekstrak Purifikasi Daun Galing ( Cayratia trifolia L. Domin) Sebagai Antidiabetes
Muhammad Ilyas Y 1,2* , Bambang 1 , Apriyanto 1 , Adriatman Rasak 1 , Asriullah Jabbar 2 , Nasrudin 2 , Wahyuni 2 , Fadhliyah Malik 2 , Halik 2 , Sri Susanty 3 , Mubarak 3 , Zulkifli Halid 4
1 Politeknik Bina Husada Kendari
2 Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Halu Oleo Kendari
3 Program Studi Keperawatan, Fakultas Kedokteran, Universitas Halu Oleo Kendari
4 Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Makassar

## ABSTRAK
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan  kelainan  sistem  endokrin  ditandai  dengan  kadar glukosa darah melebihi normal akibat kekurangan hormon insulin yang disekresi sel beta  pangkreas  yang  mengalami  kerusakan,  sehingga  perbaikan  sel  beta  pangkreas menjadi  alternatif  penting  dalam  terapi  penderita  DM.  Tumbuhan  galing  ( Cayratia trifolia L. Domin) dilaporkan terbukti menurunkan kadar glukosa darah pada hewan coba DM tipe 2, sehingga  berpotensi dalam memperbaiki fungsi dan regenerasi sel beta pancreas pada penderita DM. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi perbaikan morfologi  organ  pankreas    tikus  putih  jantan  galur wistar  DM  setelah  diberi  ekstrak purifikasi daun galing. Jenis penelitian ini adalah eksperimen  dengan rancangan post test  with  control  group  design ,  sebanyak  20  ekor  tikus  wistar  jantan  dibagi  dalam kelompok  kontrol  normal  (non  DM),  kontrol  negatif  (DM+Na.CMC),  kontrol  positif (DM+glibenklamid 0,09 mg/gBB) dan perlakuan sampel (DM+ekstrak purifikasi daun galing  0,4  mg/g  BB).  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  pemberian  ekstrak terpurifikasi daun galing dosis 0,4 mg/g BB terbukti memiliki efek perbaikan morfologi dan  regenerasi  sel  endokrin  pulau  langerhans  organ  pankreas  tikus  wistar  yang mengalami  DM,  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  tumbuhan  galing  berpotensi untuk  dikembangkan  sebagai  antidiabetes  oral  untuk  alternatif  penaganan  penyakit DM tipe 2.
Kata Kunci : Ekstrak Purifikasi, Daun Galing, Histotologi Pankreas, Antidiabetes

## ABSTRACT
Diabetes mellitus (DM) is an endocrine system disorder characterized by blood glucose levels  exceeding  normal  due  to  a  lack  of  insulin  hormone  secreted  by  damaged pancreatic  beta  cells,  so  pancreatic  beta  cell  repair  is  an  important  alternative  in  the therapy of DM patients. The galing plant ( Cayratia trifolia L. Domin) is reportedly proven to reduce blood glucose levels in type 2 DM experimental animals, so it has the potential to improve the function and regeneration of pancreatic beta cells in DM patients. This study aims to evaluate the improvement of pancreatic organ morphology of DM Wistar male white rats after being given a purified extract of galing leaves. This type of research is an experiment with a post-test with a control group design, as many as 20 male Wistar rats were  divided  into  normal  control  groups  (non-DM),  negative  control  (DM  +  Na. CMC), positive control (DM + glibenclamide 0,09 mg/g BW) and treatment samples (DM +  purified  extracts  of  galing  leaves  0,4  mg/g  BW).  The  results  showed  that  the administration of purified extracts of galing leaves at a dose of 0,4 mg/g BW was proven to affect morphological improvement and regeneration of endocrine cells of the islets of Langerhans pancreas organs of Wistar rats experiencing DM, so it can be concluded that galing plants have the potential to be developed as an oral antidiabetic for alternative management of type 2 DM disease.
Keywords : Purified Extract, Galing Leaf, Pancreatic Histotology, Antidiabetes
Sitasi: Ilyas Y, M., Bambang, B., Apriyanto, A., Rasak, A., Jabbar, A., Nasrudin, N., Wahyuni, W., Malik, F., Halik, H., Susanty, S., Mubarak, M., & Halid, Z. (2024). Evaluasi Morfologi Organ Pankreas Tikus Wistar Model Diabetes
Melitus oleh Ekstrak
Purifikasi Daun Galing (Cayratia trifolia L. Domin) Sebagai Antidiabetes . Jurnal
Mandala Pharmacon
Indonesia, 10(1), 280–289. https://doi.org/10.35311/jmpi .v10i1.518
Submitted: 17 April 2024 Accepted: 31 Mei 2024 Published: 30 Juni 2024
*Penulis Korespondensi: Muhammad Ilyas Y Email:
ilyasyusufmuhammad.apt
@gmail.com
Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License

## PENDAHULUAN
Diabetes melitus (DM) adalah penyakit pada  sistem  ekskresi  yang  ditandai  dengan kadar  glukosa  darah  melebihi  normal  karena kekurangan  hormon insulin  dimana  kelebihan glukosa  darah  akan  dikeluarkan  bersama  urin (Yusuf  et  al.,  2018).  Menurut World  Health Organization (WHO) prevalensi diabetes melitus  di  Indonesia  pada  tahun  2015, menempati  peringkat  ketujuh  di  dunia  untuk prevalensi penderita diabetes tertinggi bersama dengan  China,  India,  Amerika  Serikat,  Brazil, Rusia,  dan  Meksiko  dengan  jumlah  estimasi orang  dengan  diabetes  sebesar  10  juta  (WHO, 2016).
Penatalaksanaan diabetes melitus dikenal empat pilar penting dalam mengontrol perjalanan  penyakit  dan  komplikasi.  Empat pilar  tersebut  adalah  edukasi,  terapi  nutrisi, aktifitas  fisik  dan  farmakologis  dengan  obat hiperglikemik oral dan/atau suntikan (Perkeni, 2015).  DM  disebabkan  karena  berkurangnya produksi  insulin  atau  terjadinya  gangguan fungsi  insulin  dalam  tubuh.  Kekurangan insulin  disebabkan  karena  kerusakan  sel-sel beta pulau langerhans dalam kelenjar pankreas yang  berfungsi  menghasilkan  insulin.  Oleh karena  itu  diperlukan  alternatif  upaya pengobatan dalam memperbaiki fungsi dari sel beta pankreas (A. Fristiohady et al., 2021).
Salah  satu  upaya  dalam  memperbaiki fungsi  sel  beta  pankreas  yaitu  dengan penggunaan tanaman herbal yang mengandung  senyawa  flavonoid,  diketahui senyawa tersebut merupakan senyawa antioksidan kuat berefek meregenerasi sel beta pangkreas  dan  memiliki  efek  hipoglikemik pada  penderita  DM  (Adjie,  2015).  Kandungan flavonoid inilah yang diduga memiliki aktivitas antidiabetes  dengan  meregenerasi  kerusakan sel  beta  pankreas  dan  merangsang  sel  beta pankreas untuk memproduksi insulin (Batra & Nagori,  2013).  Salah  satu  tumbuhan  yang berpotensi  dalam  memperbaiki fungsi  sel beta pankreas  adalah  tumbuhan  galing  ( Cayratia trifolia L. Domin) (Yusuf et al., 2018).
Penelitian sebelumnya melaporkan seluruh  bagian  tumbuhan  galing  ( Cayratia trifolia )  telah  dilaporkan  mengandung  minyak
lilin  kuning,  steroid,  terpenoid,  flavonoid  dan tannin. Daunnya mengandung stilbenes, piceid, viniferin  dan  ampelopsin.  Batang,  daun  dan akar dilaporkan memiliki asam hidrosianat dan delphinidin. Beberapa flavonoid seperti cyanidine  dilaporkan  dalam  daun  galing (Jabbar et al., 2022; Yusuf et al., 2018; Perumal et al., 2012). Penelitian yang dilakukan oleh Yusuf (2018)  menjelaskan  daun  tumbuhan  galing mengandung  senyawa  flavonoid,  alkaloid, tannin.
Berdasarkan studi yang dilakukan oleh Batra  (2013)  terhadap  akar  tumbuhan  galing dosis  200  mg/kgBB  dan  400  mg/kgBB  secara signifikan  menurunkan  kadar  glukosa  darah tikus  model  diabetik  (Batra  et  al.,  2013). Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Ilyas  (2016) diketahui  bahwa  kandungan  flavonoid  dan saponin  dalam  ekstrak  daun  galing  dosis  400 mg/kg  BB  efektif  menurunkan  kadar  glukosa darah  mencit  DM.  Dalam  penelitian  yang dilakukan oleh Yusuf et al. (2018) menunjukkan ekstrak  etanol  daun  galing  berpotensi  sebagai antidiabetik  pada  mencit  yang  diinduksi Streptozotocin  dengan  dosis efektif  400  mg/kg BB  dan  memiliki  aktivitas  anti  oksidan  yang kuat (Ilyas Y., 2016; Yusuf et al., 2018).
Peningkatan aktivitas kandungan senyawa  aktif  dapat  dilakukan  dengan  cara purifikasi untuk mendapatkan efek farmakologi yang optimal. Ekstrak terpurifikasi merupakan ekstrak yang telah dipisahkan dari komponen zat ballast yang dapat mengganggu zat aktif dalam bahan alam dalam menghasilkan  aktivitas  biologi,  sehingga pengguanaan  ekstrak  purifikasi  diharapakan lebih baik aktivitas farmakologi yang diperoleh (Widyaningtias,  2014;  Rissa  Laila  Vifta  et  al., 2019).
Informasi ilmiah dari ekstrak purifikasi daun  galing  belum  diketahui  terhadap  efek perbaikan  organ  pankreas  pada  diabetes mellitus,  sehingga  penelitian  ini  dapat mengungkap  peran  ekstrak  purifikasi  daun galing  terhadap  perbaikan  morfologi  organ pankreas pada tikus DM, dan dapat dikembangkan sebagai alternatif obat antidiabetes yang potensial.

## METODE PENELITIAN Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  lemari  freezer  -20°C  (GEA  AB ® ), mesin  blocking  (Leica ® ),  mesin  mikrotom (Leica ® ),  mesin  processor  otomatis (Antiteck ® ), mesin  vacuum/  konsol  cryo  embedding  tisu ES500  (Cryo ® ),  mikroskop  (Olympus ® ),  oven (Memmert ® ), sentrifus
(Oregon ® ), rak pewarnaan, water bath (Thermo®).

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  ekstrak  daun  galing,  alkohol  70%, 80%,  90%,  96%,  akuades,  kaca  objek,  kaca penutup,  microtube,  pisau  mikrotom,  pisau scalpel, talenan, dapar formalin 10%, etanol 96% (teknis),  kaset  tissue,  kloroform,  NaCl  0,9%, parafin, pewarna Hematoxilin-Eosin, xylol dan hewan uji tikus putih jantan galur wistar.

## Preparasi Sampel
Sampel  daun  galing  diambil  di  Desa Penanggootu, Kecamatan Lambandia,
Kabupaten Kolaka Timur, selanjutnya disortasi basah  kemudian  dicuci  dengan  air  mengalir lalu  diangin-anginkan.  Daun  selanjutnya dirajang  menjadi  bagian-bagian  yang  kecil kemudian  dikeringkan  dan  disortasi  kering kemudian  sampel  daun  diserbukkan  dan  siap diekstraksi.

## Ekstraksi
Serbuk  simplisia  daun  galing  2  kg diekstraksi dengn metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96% selama 3 x 24 jam sambil diaduk setiap 1x24 jam, lalu disaring untuk  memisahkan  residu  dan  filtratnya. Remaserasi dilakukan selama 3 x 24 jam dengan pelarut yang sama, kemudian filtrat dikumpulkan dan dipekatkan dengan vacuum rotary  evaporator  pada  suhu  50ºC  hingga diperoleh ekstrak kental (Parawansah, 2015; M. Ilyas, 2019; Malik, 2023).

## Pembuatan Ekstrak Terpurifikasi
Ekstrak  etanol  kental  daun  galing ditimbang  sebanyak  100  gram  kemudian dilarutkan  dengan  50  mL  etanol  96%  dan dimasukkan ke dalam corong pisah, ditambahkan  100  mL  N-heksan  setelah  itu
digojog selama 10 menit dan didiamkan selama 15 menit, diambil fase bawah dan dimasukkan kembali  ke  dalam  corong  pisah  kemudian ditambahkan  100  mL  N-heksan  dan  fase  atas ditampung  diwadah.  Dilakukan  pengulangan hingga  fase  atas  berwarna  bening  kemudian diuapkan  dalam water  bath hingga  diperoleh ekstrak  kental sebanyak  50  gram  (Yusuf et  al., 2018; (Jabbar et al., 2022; Yusuf, 2017).

## Pemodelan Hewan Uji DM
Sebanyak  15  ekor  tikus  jantan  wistar diambil darahnya melalui vena ekor, kemudian diukur kadar glukosa darah awal pada masing- masing  tikus  dengan  menggunakan  fotometer 5010  V5+.  Masing-masing  tikus  diberi  larutan STZ  150  mg/kgBB  sebanyak  0,2  mL  melalui intra peritonial dan dibiarkan selama 18-48 jam, lalu  diberikan  larutan  sukrosa  selama  24  jam, setelah  18  jam  diukur  kadar  glukosa  darah setelah  diinduksi  dengan  STZ  (Qinna  & Badwan, 2015; (Yusuf et al., 2018; A. Fristiohady et al., 2021).

## Perlakuan Hewan Uji
Tiap  kelompok  tikus  diberi  sediaan sesuai kelompok perlakuan melalui oral dengan menggunakan  sonde  oral  sesuai  volume pemberian  1  kali  sehari  selama  7  hari  sebagai berikut:
a. Kelompok  I  (kontrol  normal)  :  tanpa perlakuan  (hanya  diberi  pakan  satandar+ tidak DM)
b. Kelompok  II  (kontrol  negatif)  :  DM  + diberikan suspensi Na.CMC 0,5%
c. Kelompok  III  (Kontrol  positif)  :  DM  + diberikan glibenklamid 0,09 mg/g BB
d. Kelompok  IV:  DM  +  diberikan  ekstrak terpurifikasi dosis 0,4 mg/g BB.
Tikus terlebih dahulu diautanasi dengan  kloroform,  selanjutnya  dilakukan pengambilan organ pangkreas dengan nekropsi yang  dilakukan  dengan  menyayat  kulit  dan otot  abdominal  hingga  rongga  perut  terbuka (Ilyas Y., 2016; Yusuf et al., 2018; A. Fristiohady et al., 2021).

## Pemeriksaan Histologi
Organ  pankreas  dicuci  dengan  NaCl 0,9%, selanjutnya dilakukan pembuatan preparat histologi. Pembuatan preparat
histologi  dilakukan  dengan  prosedur  fiksasi jaringan  dimana  jaringan  yang  akan  dibuat sediaan  histopatologinya  difiksasi  dalam larutan Buffer  Neutral  Formalin (BNF)  10%. Tujuan  jaringan  direndam  dalam  larutan  BNF yaitu  untuk  mengawetkan  jaringan  agar terhindar dari pencernaan jaringan oleh enzim- enzim  (otolisis)  atau  bakteri  dan  untuk melindungi struktur fisik sel.
Setelah jaringan organ terfiksasi sempurnah,  jaringan  ditiriskan  pada  saringan selanjutnya  dipotong  menggunakan  pisau scalpel  dengan  ketebalan  0,5  mm  dan  disusun kedalam  tissue  cassette  untuk  dimasukan  ke dalam automatic tissue processor umtuk selanjutnya  dilakukan  proses  dehidrasi (Yusuf et al., 2018; Jabbar, A., et al., 2019).
Proses  dehidrasi  dilakukan  untuk menarik  air  dari  jaringan  dan  mencegah terjadinya  pengerutan  sampel  yang  diuji. Sampel yang telah dimasukkan ke dalam tissue cassette  kemudian  direndam  dengan  alkohol konsentrasi bertingkat (70%, 80%, 90%, 95% dan absolute) masing-masing selama 2 jam dengan menggunakan  mesin  otomatis  yaitu automatic tissue processor , selanjutnya jaringan dijernihkan ( clearing )  dengan  menggunakan  xylol  I  dan xylol  II.  Xylol  berfungsi  untuk  melarutkan alkohol dan parafit.
Proses selanjutnya dilakukan perendaman ( embeding ) dan pencetakan ( blocking ). Embedding atau blocking adalah proses penanaman  jaringan  dalam  blok  paraffin. Jaringan  selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam paraffin cair selama 2 jam. Selanjutnya jaringan diambil dengan pinset, dilanjutkan pemblokkan  dengan  menggunakan  paraffin blok. Setelah dilakukan pemblokkan kemudian dilanjutkan dengan proses pemotongan ( sectioning ) jaringan.
Proses  pemotongan  jaringan  dilakukan menggunakan  mikrotom  dengan  ketebalan  5 µm.  Sediaan  diletakkan  pada  gelas  objek  dan dikembangkan diatas air dalam waterbath untuk selanjutnya  dilakukan  proses  pewarnaan. Pewarnaan  pada  jaringan  dilakukan  dengan menggunakan-hematoxyllin-eosin.
Sebelum dilakukan pewarnaan, preparat histopatologi di deparafinisasi dengan
larutan  xylol  I  dan  xylol  II  selama  2  menit. Tujuannya deparafinisasi untuk menghilangkan atau melarutkan paraffin yang terdapat  pada  jaringan.  Kemudian  dilakukan proses  rehidrasi  dengan  mencelupkan  sediaan ke  dalam  alkohol  bertingkat  (alkohol  absolut, alkohol  95%  dan  alkohol  80%)  masing-masing selama  1  menit.  Kemudian  sediaan  dicuci dengan  aquadest  selama  1  menit.  Preparat kemudian dicelupkan ke dalam larutan Mayer’s Hematoxyllin selama 8 menit. Pewarna Mayer’s hematoxyllin  akan  memberikan  warna  biru pada inti sel. Kemudian preparat dicuci dengan akuades selama 30 detik.
Preparat  selanjutnya  direndam  dalam larutan  eosin  selama  2  menit.  Eosin  akan memberikan  warna  merah  muda  pada  butir- butir  sekresi  dan  bagian  sitoplasma  yang banyak  RNA,  kemudian  preparat  dicuci dengan aquadest selama 30 detik.  Selanjutnya preparat direndam dalam alkohol 70%, 80% dan alkohol  90%  selama  2  menit  dan  dijernihkan dalam  xylol  I  dan  xylol  II  selama  2  menit. Preparat dikeringkan dan dilakukan mounting dengan  menggunakan  entelan  kemudian sediaan ditetesi perekat permount dan ditutup dengan cover glass untuk selanjutnya dilakukan proses pengamatan jaringan pankreas.
Pengamatan preparat dilakukan dengan menggunakan mikroskop yang dihubungkan dengan komputer yang dilengkapi  dengan  piranti  lunak  khusus. Pengamatan  dimulai  dengan  perbesaran  lensa obyektif  100x  untuk  menentukan  seluruh lapangan  pandang  dan  untuk  menentukan daerah  yang  akan  diamati,  yaitu  daerah dominan  sel  asinar  (Nuralifah  et  al.,  2022; Beandrade et al., 2022).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan untuk mengungkap  efek  tumbuhan  galing  dalam regenerasi  kerusakan  sel  beta  pangkreas  pada DM,  yang  selanjutnya  dapat  dikembangkan sebagai  obat  antidiabetik  oral  yang  potensial dalam  menbantu  terapi  penderita  DM. Tumbuhan galing menurut beberapa penelitian sebelumnya dilaporkan mengandung senyawa stilbenes,  piceid,  viniferin,  ampelopsin,  asam
hidrosianat dan delphinidin, senyawa flavonoid  cyanidine,  alkaloid,  tannin  dan terbukti sebagai antioksidan kuat, antidiabetes dan  antiinflamasi  yang  diduga  kuat  berperan dalam  meregenerasi  kerusakan  sel  beta pangkreas  pada  DM    (Batra  et  al.,  2013; (Perumal  et  al.,  2012;  (Ilyas  &  Syaiful  Saehu, 2021; Yusuf et al., 2018).
Sampel  daun  galing  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  ekstrak  purifikasi dengan  menggunakan  pelarut  n-hexan  dan diperoleh ekstrak kental terpurifikasi sebanyak 50gram  dengan  rendemen  18.9%.  N-hexan memberikan  hasil  rendemen  yang  lebih  tinggi dibandingkan dengan pelarut lainnya, selain itu tujuan  penggunaan  pelarut  n-hexan  adalah untuk  menghilangkan  zat  pengotor  atau  zat ballas  yang  terdapat  pada  ekstrak  yang  dapat mengurangi  efek  terapi  dari  ekstrak  tersebut, sehingga  meningkatkan  efek  farmakologi  dari zat aktif (Widyaningtias, 2014; (Rissa Laila Vifta et al., 2019).
Selanjutnya dilakukan pengujian evaluasi morfologi perbaikan pangkreas hewan coba tikus putih jantan yang dibuat model DM dengan menginduksi diabetagenik streptozotosin  (STZ)  setelah  diberikan  ekstrak purifikasi  daun  galling.  Menurut  Szkudelski
(2001) STZ merupakan agen diabetogenik yang cukup  memadai  untuk  digunakan  sebagai penginduksi  diabetes  pada  hewan  percobaan, dan  menurut  Qinna  &  Badwan  (2015)  STZ merupakan  zat  diabetogenik  yang  efektik dengan  keberhasilan  yang  tinggi  dalam menginduksi  DM  pada  hewan  percobaan  di laboratorium.
Menurut  Yusuf  et  al.  (2018)  pemberian STZ dosis 150 mg/kgBB memberikan pengaruh yang  cepat  terhadap  peningkatan  kadar glukosa  darah  dan  merusak  sel-sel  penghasil insulin  yaitu  sel  β-pulau  langerhans.  Setelah induksi STZ, diberikan larutan sukrosa selama 24  jam  yang  bertujuan  untuk  menghindari terjadinya  hipoglikemik  pada  tikus  selama  24 jam  petama.  Tikus  DM  diperoleh  100%  pada hari ketiga (72 jam) setelah induksi STZ dengan rata-rata  kadar  glukosa  darah  376,86  mg/dL yang  menunjukkan  bahwa  hewan  uji  yang digunakan dalam penelitian ini sudah mengalami  DM  berdasarkan  kadar  glukosa darah  acak  setelah  dilakukan  pengukuran, dimana  rata-rata  kadar  glukosa  awal  berbeda signifikan dengan kadar glukosa darah setelah induksi STZ seperti data yang ditunjkkan pada Gambar 1 berikut.
Gambar 1. Diagram rata-rata kadar glukosa darah awal dan setelah induksi streptozotocin (*p< 0.05=berbeda signifikan dengan kadar glukosa awal)
Selanjutnya  dilakukan  pengujian  efek antidiabetes  ekstrak  purifikasi  daun  galing pada  hewan  tikus  DM  dengan  perlakuan selama 7 hari pemberian ekstrak yang bertujuan untuk  mengevaluasi  adanya  efek  farmakologi
dari  sampel  terhadap  perbaikan regenerasi  sel beta  pangkreas  dan  penurunankadar  glukosa darah pada hewan uji.
Hasil  penelitian  menunjukkan  rata-rata pengukuran  kadar  glukosa  darah  pada
0 50 100 150 200 250 300 350 400 96,86 376.86 * K a da r G luk o sa Da ra h (m g /dL ) Pengukuran Kadar Glukosa Darah Tikus Kadar Glukosa Darah Awal (mg/dL) Kadar Glukosa Darah Setelah Induksi
Streptozotocin (mg/dL)
kelompok  tikus  yang  diberi  sampel  ekstrak purifikasi mengalami penurunan kadar glukosa darah  yaitu  128,6  mg/dL,  yang  menunjukkan ada efek penurunan kadar glukosa darah pada tikus  DM  setelah  diberi  ekstrak  terpurifikasi, karena adanya kandungan metabolit sekunder dari sampel seperti flavonoid, dimana mekanisme  kerja  dari  flavonoid  antara  lain mengurangi penyerapan glukosa, dan mengatur aktivitas ekskresi enzim yang terlibat dalam metabolisme karbohidrat (Brahmachari, 2011) serta meregenerasi sel beta pankreas dan membantu merangsang sekresi insulin (Dheer, R., & Bhatnagar P., 2010). Pada kelompok tikus kontrol positif yang diberikan sediaan pembanding obat glibekalmid juga mengalami penurunan kadar glukosa darah rata-rata 124,6 mg/dL,  hal  ini  karena  glibenklamid  sebagai antidibetik  oral  dengan  mekanisme  kerja merangsang  sekresi  insulin  dari  granul  sel-sel β-langerhans, sedangkan pada kelompok tikus kontrol negatif yang diberi Na. CMC 0,5% tidak mengalami  penurunan  kadar  glukosa  darah melainkan mengalami kenaikan kadar glukosa darah  dengan  rata-rata  yaitu  478,8  mg/dL,  hal ini  karena  sistem  pencernaan  hewan  uji  tikus putih  tidak  memiliki  enzim  selulosa  sehingga penggunaan Na.CMC tidak akan berpengaruh pada penurunan kadar glukosa darah (Hikmah et al., 2016; Yusuf et al., 2018)
Untuk mengetahui adanya efek sampel purifikasi  daun  galing  terhadap  perbaikan morfologi organ pangkreas selanjutnya dilakukan  pengamatan  preparat  histotologi organ pangkreas. Pembuatan preparat histotologi  pada  organ  pankreas  dilakukan dengan  prosedur  fiksasi  jaringan  dimana jaringan yang akan dibuat sediaan histopatologinya difiksasi dalam larutan Buffer Neutral  Formalin (BNF)  10%.  Tujuan  jaringan direndam  dalam  larutan  BNF  yaitu  untuk mengawetkan  jaringan  agar  terhindar  dari pencernaan jaringan oleh enzim-enzim (otolisis)  atau  bakteri  dan  untuk  melindungi struktur fisik sel (Beandrade et al., 2022). Setelah jaringan  organ  terfiksasi  sempurna,  jaringan ditiriskan  pada  saringan  selanjutnya  dipotong menggunakan  pisau scalpel dengan  ketebalan 0,5  mm  dan  disusun  kedalam tissue  cassette
untuk  dimasukan  kedalam automatic  tissue processor umtuk  selanjutnya  dilakukan  proses dehidrasi.
Proses  pemotongan  jaringan  dilakukan dengan  menggunakan  mikrotom  dengan ketebalan 5 µm.  Sediaan  kemudian  diletakkan pada gelas objek dan dikembangkan diatas air dalam  waterbath  untuk  selanjutnya  dilakukan proses  pewarnaan.  Pewarnaan  pada  jaringan dilakukan dengan menggunakan hematoxyllin- eosin. Sebelum dilakukan pewarnaan, preparat histopatologi  di  deparafinisasi  dengan  larutan xylol I dan xylol II selama 2 menit. Tujuannya deparafinisasi  untuk  menghilangkan  atau melarutkan  paraffin  yang  terdapat  pada jaringan. Kemudian dilakukan proses rehidrasi dengan mencelupkan sediaan ke dalam alkohol bertingkat  (alkohol  absolut,  alkohol  95%  dan alkohol  80%)  masing-masing  selama  1  menit. Kemudian  sediaan  dicuci  dengan  aquadest selama 1 menit. Preparat kemudian dicelupkan ke dalam larutan Mayer’s hematoxyllin selama 8  menit.  Pewarna  Mayer’s  hematoxyllin memberikan  warna  biru  pada  inti,  kemudian preparat  dicuci  dengan  akuadest  selama  30 detik.  Preparat  selanjutnya  direndam  dalam larutan  Eosin  selama  2  menit.  Eosin  akan memberikan  warna  merah  muda  pada  butir- butir  sekresi  dan  bagian  sitoplasma  yang banyak RNA (Alamudi et al., 2013).
Pengamatan preparat dilakukan dengan menggunakan  mikroskop  yang  dihubungkan dengan  komputer  yang  dilengkapi  dengan piranti  lunak  khusus.  Pengamatan  dimulai dengan  perbesaran  lensa  obyektif  100x  untuk menentukan  seluruh  lapangan  pandang  dan untuk menentukan daerah yang akan diamati, yaitu daerah dominan sel asinar (Beandrade et al., 2022).
Hasil pengamatan mikroskopik morfologi organ pangkreas berdasarkan (gambar  2a)  penampakan  pulau  langerhans kelompok  normal  dapat  dilihat  adanya keteraturan  susunan  sel  endokrin  yang menyebar  di  pulau  langerhans  dengan  bentuk sel-sel  yang  seragam  serta  sel-sel  endokrinnya dalam  keadaan  rapat  dan  utuh  serta  tidak mengalami nekrosis dan degenerasi sel. Hal ini sejalan  dengan  penelitian  oleh  Goni  (2017)
dimana organ pankreas yang dikatakan normal apabila  dalam  pulau  langerhans  tidak  terjadi nekrosis  dan  degenerasi  dimana  dapat  dilihat pada  inti  selnya  yang  berwarna  ungu  serta tidak mengalami edema (pembengkakan) (Goni & Ticoalu, 2017) .
Pada kelompok kontrol negatif (gambar 2b)  tidak  terjadi  perbaikan  sel  pada  pulau langerhans dan sel endokrin masih mengalami nekrosis  yang  ditandai  dengan  adanya  ruang kosong pada pulau langerhans dan sel endokrin yang mengalami degenerasi serta susunan sel- sel  endokrinnya  yang  tidak  rapat.  Jika dibandingkan  dengan  kelompok  normal  tidak terjadi  perubahan  yang  signifikan  diamana dapat  dilihat  pada  inti  selnya  yang  tidak
berwarna ungu. Hal ini dikarenakan hewan uji diberikan  sukrosa  berlebih  tetapi  tidak diberikan terapi dan hanya diberikan Na.CMC 0,5%  sehingga  terjadi  resistensi  insulin  yang ditandai  dengan  berkurangnya  sel  endokrin dan secara morfologi terjadi kerusakan berupa nekrosis dan degenerasi pada pulau Langerhans.  Hal  ini  sejalan  dengan  beberapa penelitian  sebelummya  menjelaskan  bahwa kerusakan  organ  pangkreas  ditandai  dengan ditandai  dengan  berkurangnya  sel  endokrin dan  adanya  kerusakan  berupa  nekrosis  dan degenerasi pada pulau Langerhans(Ningrum et al., 2020; Nuralifah et al., 2022; Goni & Ticoalu, 2017).
Pada kelompok kontrol positif (gambar 2c)  masih  menunjukan  adanya  nekrosis  sel yang ditandai dengan adanya ruang kosong di dalam  pulau  langerhans,  meskipun  sel-sel didalamnya sudah utuh. Pemberian glibenklamid  sebagai  obat  antidiabetes  oral tidak menunjukan perubahan perbaikan morfologi  pankreas.  Hal  ini  dikarenakan
glibenklamid  hanya  untuk  memperbaiki  dan mengoptimalkan  fungsi  organ  pangkreas dalam  memproduksi  insulin  dan  tidak memperbaiki  kerusakan  morfologi  pulau langerhans  yang  mengandung  sel-sel  beta pankreas. Obat hipoglikemik oral kemungkinan  efektif  hanya  untuk  kontrol glikemik  terutama  pada  tahap  awal  diabetes,
Gambar 2. Hasil pengamatan morfologi pulau langerhans organ pankreas tikus pewarnaan HE,100x. Kelompok normal (2a), kelompok negatif (2b), kelompok positif (2c), kelompok ekstrak dosis 0.4 mg/gBB (2d)        = Pulau langerhans, = Sel endokrin,         =  Sel nekrosis
namun menjadi tidak sepenuhnya efektif dalam pencegahan  kerusakan  organ  pangkreas  yang diakibatkan oleh senyawa ROS ( Reactive Oxygen Species ) sebagai pemicu awal kerusakan sel-sel beta pangkreas (Hikmah et al., 2016 ; Liem et al., 2015; Ningrum et al., 2020).
Hasil pengamatan mikroskopik morfologi  oragan  pankreas  pada  kelompok tikus  yang  diberi  ekstrak  purifikasi  dosis  0,4 mg/gBB  (gambar  2d)  terjadi  perbaikan  sel endokrin  pada  pulau  langerhans  yang mengalami  perbaikan  dengan  bentuk  selnya yang  mulai  utuh  diduga  karena  adanya senyawa  boaktif  yaitu  flavonoid  (Batra  et  al., 2013;  (Perumal  et  al.,  2012;  Ilyas  &  Syaiful Saehu,  2021).  Senyawa  bioaktif  tersebut  dapat bertindak  sebagai  antioksidan  (Yusuf  et  al., 2018).  Aktivitas  antioksidan  yang  dimiliki dalam  ekstrak  purifikasi  daun  galing  ini mampu  memperbaiki  sel  beta  pankreas  yang rusak  dengan  cara  meregenerasi  sel  beta pankreas  serta  membantu  merangsang  sekresi insulin  (Brahmachari,  2011;  Batra,  &  Nagori, 2013).  Antioksidan  bertindak  dalam  proses perbaikan sel yang rusak yang diakibatkan oleh adanya  radikal  bebas.  Adanya  antioksidan berfungsi sebagai agen menurunkan oksidator dalam mencegah kerusakan sel dapat dikurangi,  serta  meningkatkan  regenerasi  sel yang  mengalami  kerusakan,  seperti  pada  sel imun dalam mencegah penderita DM mengalami komplikasi penyakit infeksi maupun  non  infeksi  (Sudiana  et  al.,  2019  ; (Jabbar et al., 2022 ; Yusuf et al., 2017; Ilyas et al. 2022; Diantini et al., 2021; M. Y. Ilyas et al., 2023) .

## KESIMPULAN
Ekstrak  purifikasi  daun  galing  ( Cayratia trifolia L. Domin) dosis 0,4 mg/g BB berpotensi sebagai  antidiabetes  berdasarkan  perbaikan morfologi  dan  regenerasi  sel  endokrin  pada pulau  langerhans  organ  pankreas  tikus  wistar model diabetes melitus.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada Laboratorium Farmasi Fakultas Farmasi dan Laboratorium
Biomedik Fakultas
Kedokteran  Universitas  Halu  Oleo,  serta Laboratorium  Farmakologi  Politeknik  Bina Husada Kendari.

## DAFTAR PUSTAKA
Alamudi, B., B., M. M. S., & Taufikurohmah, T.
(2013).  Pengaruh  Infiltrasi  Nano  Gold Terhadap Kualitas Jaringan Dan
Kuantitas  Merkuri  Pada  Otak  Mencit ( Mus musculus) Setelah Terpapar Merkuri The  Influence  Of  Nanogold  Infiltration For Tissue Quality And Mercury Quantity In  The  Mice  ( Mus  musculus )  Brain  Aft.
JUNESA  Journal  of  Chemistry,  2(3),  25– 31.
Adjie,  R.B.,  (2015).  White  Dragon  Fruith ( Hylocereus undatus ) Potential As Diabetes Melitus  Treatment,  International  Journal Of Biomedical and Pharmaceutical, Vol. 4, No. 1.
Batra,  S.,  Batra,  N.,  &  Nagori,  B.  P.  (2013).
Preliminary  phytochemical  studies  and evaluation of antidiabetic activity of roots of  cayratia  trifolia  (L.)  domin  in  alloxan induced  diabetic  albino  rats. Journal  of Applied Pharmaceutical Science , 3 (3), 97–100. https://doi.org/10.7324/JAPS.2013.30319
Brahmachari,  G.  (2011).  Bio-flavonoids  with promising  antidiabetic  potentials:  A critical survey. Research signpost, 661(2), 187-212.
Beandrade,  M.  U.,  Amelia,  R.,  &  ...  (2022). Gambaran  Histologi  Pankreas  Tikus dengan  Diabetes  Melitus  Tipe  2  yang Diberikan  Tablet  Kedelai  Detam  II. Jurnal Kedokteran Dan … , 240–248. https://jurnal.umj.ac.id/index.php/JKK/art icle/view/11046%0Ahttps://jurnal.umj.ac.i
d/index.php/JKK/article/viewFile/11046/7 313
Brahmachari,  G.  (2011).  Bio-flavonoids  with promising  anti-  diabetic  potentials :  A critical  survey. Opportunity,  Challenge  and Scope  of  Natural  Products  in  Medicinal Chemistry  -  Research  Signpost , 661 (2),  187–
212.
Dheer, R., & Bhatnagar, P. (2010). A study of the
antidiabetic activity of Barleria prionitisLinn. Indian journal of pharmacology, 42(2), 70–73. https://doi.org/10.4103/0253-7613.64493.
Diantini,  A.,  Halimah,  E.,  Amalia,  R.,  Ghozali, M.,  Julaeha,  E.,  &  Sahidin,  I.  (2021). Potential  Immunomodulator  Fraction Fruit  Of Etlingera  rubroloba AD  Poulsen Against  Macrophage  Phagocytosis  And Interleukin-12  Levels  In  BCG  Stimulated Balb/C  Mice.  International  Journal  of Pharmaceutical Research (09752366), 13(1).
Fristiohady, A., Leorita, M., & Malik, F. (2021).
Pancreatic  histological  profile  on  the efficacy of extract of Etlingera calophrys (K. schum)  AD  poulsen  stem  against streptozotocin-induced diabetes in diabetic model rats. Biointerface Research in Applied Chemistry, 11(2), 9209-9217.
Goni,  L.  R.,  Wongkar,  D.,  &  Ticoalu,  S.  H.  R.
(2017).  Gambaran  makroskopik  dan mikroskopik  pankreas  pada  hewan  coba postmortem.  Jurnal  E-Biomedik  (eBm), 5(1), 1–6.
Hikmah,  N.,  Yuliet,  Y.,  &  Khaerati,  K.  (2016). Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Salam (Syzygium polyanthum Wight.) Terhadap Glibenklamid  Dalam  Menurunkan  Kadar Glukosa  Darah  Mencit  (Mus  musculus) Yang  Diinduksi  Aloksan. Jurnal  Farmasi
Galenika  (Galenika  Journal  of  Pharmacy)  (e- Journal) , 2 (1), 24–30. https://doi.org/10.22487/j24428744.2016.v2.
i1.5300
Ilyas, Y. S., & Karmilah, U. E. A. E. E. (2016). Uji Efek  Antidiabetik  Ekstrak  Etanol  Daun Galing  ( Cayratia  trifolia L.  Domin)  Pada
Mencit  Jantan  (Mus  musculus).  Warta Farmasi, 5(1), 135-142.
Ilyas, M. Y., & Syaiful Saehu, M. (2021). Jurnal
Farmasi Sains dan
Praktis Efek
Antiinflamasi  Fraksi  Dari  Ekstrak  Etanol Batang Galing (Cayratia trifolia L. Domin) Secara  In  Vitro  Antiinflammatory  Effects
Of  Fraction  From  Galing  Stem  Ethanol Extract  (Cayratia  trifolia  L.  Domin)  IN
VITRO. Jfsp , 7 (3), 2579–4558. http://journal.ummgl.ac.id/index.php/pha rmacy
Jabbar,  A.,  Yusuf,  M.  I.,  Ramadhan,  M.  I.,
Farmasi, F., Halu, U., Hijau, K., Tridharma, B.,  Bina,  P.,  Kendari,  H.,  Sorumba,  J., Kendari,  N.,  Farmasi,  I.,  Bahteramas,  R., Kapten, J., & Tendean, P. (2022). Aktivitas Antihiperurisemia  Ekstrak  Etanol  Batang Galing ( Cayratia trifolia L . Domin ) pada Mencit Balb / CP Hyperpurisemic Activity of  Ethanol  Extract  of (  Cayratia  trifolia  L  . Domin  )  in  Balb  /  C  Mice . 8 (2),  17–20. https://doi.org/10.33772/pharmauho.v8i2.3
Liem, S., Yuliet, Y., & Khumaidi, A. (2015). Uji
Aktivitas
Antidiabetes
Kombinasi
Glibenklamid  Dan  Ekstrak  Daun  Salam (Syzygium  polyanthumWight.)  Terhadap Mencit  (Mus  musculus)  Yang  Diinduksi Aloksan. Jurnal  Farmasi  Galenika  (Galenika Journal of Pharmacy) (e-Journal) , 1 (1), 42–47. https://doi.org/10.22487/j24428744.2015.v1. i1.4831
Ningrum, E. W. C., Isdadiyanto, S., & Mardiati, S. M. (2020). Histopatologi Pankreas Tikus Putih  (Rattus  norvegicus  L.)  yang  Diberi Pakan Tinggi Lemak dan Paparan Ekstrak Etanol  Daun  Mimba  (Azadirachta  indica A. Juss). Buletin Anatomi Dan Fisiologi , 5 (2), 129–137.
https://doi.org/10.14710/baf.5.2.2020.129- 137
Perumal,  P.  C.,  Sophia,  D.,  Raj,  C.  A.,
Ragavendran, P., Starlin, T., &
Gopalakrishnan,  V.  K.  (2012).  In  vitro antioxidant activities and HPTLC analysis of ethanolic extract of Cayratia trifolia (L.). Asian  Pacific  Journal  of  Tropical  Disease , 2 (SUPPL2), S952–S956. https://doi.org/10.1016/S2222- 1808(12)60299-0
Qinna, N. A., & Badwan, A. A. (2015). Impact of streptozotocin on altering normal glucose homeostasis  during  insulin  testing  in diabetic  rats  compared  to  normoglycemic
rats. Drug Design, Development and Therapy ,
9 ,
2515–2525.
https://doi.org/10.2147/DDDT.S79885
Rissa  Laila  Vifta,  Istianatus  Sunnah,  Nurul Chanifah,  &  Yustisia  Dian  Advistasari. (2019). Purifikasi Buah Parijoto (Medinilla speciosa  Blume)  Dan  Uji  Bioaktivitasnya Sebagai  Alternatif  Pengobatan  Diabetes Mellitus. Media Informasi Penelitian Kabupaten Semarang , 2 (2), 185–199.
https://doi.org/10.55606/sinov.v2i2.92
Saehu, M. S., Ertin, E., Irma, I., & Nurhikma, N.
(2021).  Antiinflammatory  Effects  Of Fraction  From  Galing  Stem  Ethanol Extract  ( Cayratia  trifolia L.  Domin)  In Vitro.  Jurnal  Farmasi  Sains  dan  Praktis, 7(3), 289-297.
Sudiana,  I.  K.,  Sandika,  W.,  Fauziah,  D.,
Santoso, D., Suprabawati, D. G. A., Yusuf, M. I., & Efendi, F. (2019). Effect of cayratia trifolia ethanol extract on Bcl-2 expression and apoptotic cells in dmba-induced breast cancer  of  sprague  dawley  rats. Journal  of Global Pharma Technology , 11 (9), 405–413.
Szkudelski T. (2001). The mechanism of alloxan and streptozotocin action in B cells of the rat  pancreas.  Physiological  research, 50(6), 537–546.
Yusuf,  M.  I.,  Wahyuni,  Susanty,  S.,  Ruslan,  & Fawwaz,  M.  (2018).  Antioxidant  and antidiabetic  potential  of  galing  stem extract (cayratia trifolia domin).
Pharmacognosy Journal , 10 (4), 686–689. htt
Vifta,  R.  L.,  Sunnah,  S.,  Chanifah,  N.,  & Advistasari, Y. D. (2019). Purifikasi Buah Parijoto ( Medinilla Speciosa Blume) Dan Uji Bioaktivitasnya Sebagai Alternatif Pengobatan  Diabetes  Mellitus.  SINOV, 2(2), 185–199.
ps://doi.org/10.5530/pj.2018.4.113
World  Health  Organization  (WHO). (2016).  Global  Report  On  Diabetes  2016. Switzerland.
Wahyu,  E.,  Ningrum,  C.,  Isdadiyanto,  S.,  & Mardiati,  S.  M.  (2020).  Histopatologi Pankreas  Tikus  Putih  ( Rattus  norvegicus L.) yang Diberi Pakan Tinggi Lemak dan Paparan  Ekstrak  Etanol  Daun  Mimba ( Azadirachta  indica A.  Juss).  Buletin Anatomi Dan Fisiologi, 5(2), 129–137.
Widyaningtias, N. M. S. R., Ustiantara, P. S., & Paramita,  N.  L.  P.  .  (2014).  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Terpurifikasi  Daun sirih hijau ( Piper betle L.) Terhadap Bakteri Propionibacterium  acnes.  Jurnal  Farmasi Udayana, 3(1), 50–53.
Yusuf,  M.  I.,  Wahyuni,  Susanty,  S.,  Ruslan,  & Fawwaz,  M.  (2018).  Antioxidant  and antidiabetic  potential  of  galing  stem extract ( Cayratia trifolia Domin). Pharmacognosy Journal, 10(4). https://doi.org/10.5530/pj.2018.4.113.
Yusuf,  M.  I.  (2019).  Peningkatan  imunitas  non spesifik  (innate  immunity)  mencit  balb/c yang diberi ekstrak etanol daun tumbuhan  galing  ( Cayratia  trifolia L. Domin)  enhancement  of  non  specific immunity (innate immunity) mice balb/c given  ethanol  extract  of  galing  plant ( Cayratia trifolia L. Domin). Medical Sains: Jurnal Ilmiah Kefarmasian, 3(2), 83-92.
Yusuf,  M.  I.,  Marcellinda,  A.,  &  Saehu,  M.  S.
(2017).  Efek  Ekstrak  Etanol  Daun  Galing ( Cayratia  trifolia L.  Domin)  Terhadap Penurunan Kadar Kolesterol Total Darah Pada  Mencit  Hiperlipidemia.  Warta Farmasi, 6(2), 1-9.