POTENSI EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Callyspongia aerizusa YANG DIPEROLEH DARI PERAIRAN PULAU MANADO TUA TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Eka Laurensi Awaeh 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Julianri Sari Lebang 1) *Program Studi Farmasi, FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *18101105019@student.unsrat.ac.id

## ABSTRACT
Callyspongia aerizusa has several compounds with high activity and has a porous body surface structure so that it is included in the phylum porifera. Callyspongia aerizusa produces secondary metabolites in the form of steroids, flavonoids and terpenoids which may be used as raw materials for drugs in the future. This study aims to determine the antibacterial activity of the extract and fraction of Sponge Callyspongia aerizusa  obtained  from  the  waters  of  Manado  Tua  Island  against  Escherichia  coli  and  Staphylococcus aureus.  Samples  were  extracted  by  maceration  method  using  ethanol  and  fractionated  using  methanol, chloroform  and  n-hexane  as  solvents.  Testing  of  antibacterial  activity  was  carried  out  using  the  disc diffusion agar method by Kirby and Bauer with slight modifications. The results showed that the sponge Callyspongia  aerizusa  had  strong  and  moderate  inhibition  against  the  antibacterial  activity  of Escherichia  coli  and  Staphylococcus  aureus  with  an  average  of  8,99;  9,68;  10,19;  13,50  mm  in Escherichia coli and 6,88; 6,52; 8,74; 6,67 mm in Staphylococcus aureus bacteria.
Keywords : Callyspongia aerizusa, Antibacterial, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

## ABSTRAK
Callyspongia  aerizusa memiliki  beberapa  senyawa  dengan  aktivitas  tinggi  dan  memiliki  struktur permukaan tubuh yang berpori-pori sehingga dimasukkan kedalam filum porifera. Callyspongia aerizusa menghasilkan  metabolit  sekunder  berupa  steroid,  flavonoid  dan  terpenoid  yang  mungkin  kedepannya dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku obat. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  dan  fraksi  Spons Callyspongia  aerizusa yang  diperoleh  dari  perairan  Pulau Manado  Tua  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Sampel  diekstraksi  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  dan  difraksinasi  menggunakan  pelarut  metanol,  kloroform  dan  n- heksan. Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode disc diffusion agar oleh Kirby dan Bauer dengan  sedikit  modifikasi.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  Spons Callyspongia  aerizusa memiliki daya  hambat  kuat  dan  sedang  terhadap  aktivitas antibakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus dengan rata-rata 8,99; 9,68; 10,19; 13,50 mm pada Escherichia coli dan 6,88; 6,52; 8,74; 6,67 mm pada bakteri Staphylococcus aureus .
Kata Kunci : Callyspongia aerizusa , Antibakteri, Escherichia coli , Staphylococcus aureus.

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara dengan  keanekaragaman  hayati  (biodiversitas) laut  terbesar  di  dunia,  karena  memiliki ekosistem pesisir yang  khas, salah satunya yaitu ekosistem terumbu karang ( coral refs )
(Rumampuk  dkk,  2017).  Hal  ini  menjadikan Indonesia  sebagai  negara  yang  memiliki  potensi yang tinggi untuk
mengembangkan keanekaragaman  hayati  laut  untuk  diteliti  dan dikembangkan sebagai bahan dasar obat (Korompis  dkk,  2017).  Di  Sulawesi  Utara tercatat  ada  1,33%  spons  laut  yang  menutupi terumbu  karang  (Suraji et  al .,  2015). Spons  laut menjaga  kelangsungan  hidup  dan  pertahanan dirinya  dengan  menghasilkan  metabolit  primer dan  metabolit  sekunder,  dimana  metabolit sekunder  ini  berfungsi  untuk  menangkal  dan menghambat  bakteri  pathogen  pengganggunya (Liem et  al .,  2019) .  Callyspongia  aerizusa memiliki  beberapa  senyawa  dengan  aktivitas tinggi  dan  memiliki  struktur  permukaan  tubuh yang berpori-pori sehingga dimasukkan kedalam filum  porifera  (Sari et  al., 2014) .  Callyspongia aerizusa menghasilkan  metabolit  sekunder berupa  steroid,  flavonoid  dan  terpenoid  yang mungkin kedepannya dapat dimanfaatkan sebagai  bahan  baku  obat  (Manggalea et  al., 2015).  Penelitian  terhadap  suatu  kandungan senyawa  pada  spons  laut  menjadi  suatu  langkah awal  untuk  dapat  mengetahui  adanya  potensi aktivitas  senyawa  tersebut,  salah  satunya  yaitu untuk  mengetahui  adanya  aktivitas  antibakteri. Dihasilkannya senyawa aktif antibakteri dibidang  kesehatan  merupakan  informasi  yang sangat  penting  karena  dapat  membantu  untuk pengembangan  obat  untuk  mengatasi  penyakit yang  disebabkan  oleh  adanya  bakteri  dan organisme (Dwijendra et al., 2014). Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri  gram positif  yang  sering  muncul  pada  kulit  manusia. Bakteri  tersebut  bisa  menyebabkan  berbagai macam  infeksi  kronik  dan  akut  (Fetsch , 2017). Escherichia  coli merupakan  bakteri  Gram negative  yang  terdapat  pada  usus.  Bakteri tersebut  dibutuhkan  manusia  dalam  jumlah tertentu,  tetapi  bisa  juga  menimbulkan  penyakit dalam  jumlah  besar.  Bakteri  tersebut  dapat menyebabkan  infeksi  saluran  kemih,  diare
khususnya pada bayi dan anak-anak,  meningitis, dan ada juga luka didalam abdomen (Manggalea et al., 2015).
Melihat  komponen  bioaktifnya  maka  peneliti tertarik  untuk  melakukan  penelitian  bermaksud untuk  menguji  adanya  aktivitas  antibakteri  dari ekstrak  dan  fraksi  spons  laut Callyspongia aerizusa yang sudah diambil dari Perairan Pulau Manado Tua.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Oktober 2021  sampai  dengan  selesai  di  Laboratorium Farmasi Lanjut, Program Studi Farmasi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam,  Universitas  Sam  Ratulangi  Manado. Sampel  tersebut  diambil  dari  Perairan  Pulau Manado Tua.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  scuba  diving,  sarung  tangan,  masker, pisau,  talenan,  kertas  label,  spidol  permanen, tissue  kering,  cool  box,  kamera  underwater, zipper  lock  bag,  labu  ukur  10  mL  (pyrex), Erlenmeyer  200  mL,  wadah  botol,  timbangan analitik,  spektrofotometer  UV-Vis,  aluminium foil,  corong,  mikro  pipet,  tabung  reaksi,  rotary evaporator.

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Spons Callyspongia aerizusa, bakteri uji Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia  coli, alcohol  95%,  metanol,  n-heksan,  kloroform, etanol,  akuades,  nutrient  agar,  pepton  natrium klorida,  media agar B1 (beef  extract), kapas,dan kloramfenikol
Pengambilan Sampel Sampel  Spons Callyspongia  aerizusa diambil dari  perairan  Pulau  Manado  Tua  dengan menggunakan  alat  bantu  (masker,  tabung  udara, fins  dan  snorkel).  Sampel  difoto  kemudian diambil,  lalu  dimasukkan  kedalam zipper  lock bag dan  disimpan  didalam cool  box. Kemudian sampel  langsung  dibawa  ke  Laboratorium Penelitian  Lanjutan  Program  Studi  Farmasi Universitas Sam Ratulangi.
Ekstraksi Sampel Sampel Spons Callyspongia aerizusa diekstraksi dengan  cara  maserasi.  Sampel  dipotong  kecil-
kecil  lalu  dimasukkan  kedalam  botol  dan direndam  dengan  etanol  95%  sampai  sampel terendam secara keseluruhan selama 24 jam dan dilakukan pergantian pelarut Fraksinasi Sampel Ekstrak  etanol  Spons Callyspongia  aerizusa dimasukkan  kedalam  Erlenmeyer,  kemudian dilarutkan  dengan  metanol  80%  sebanyak  100 mL.  Setelah  sampel  larut,  sampel  dimasukkan kedalam  corong  pisah  lalu  ditambahkan  pelarut n-heksan  sebanyak  100  mL  setelah  itu  dikocok berulangkali sampai homogen. Kemudian dibiarkan  sampai  terbentuk  lapisan  MeOH  dan heksan.  Masing-masing  lapisan  ditampung dalam wadah yang berbeda

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian aktivitas  antibakteri  ini  disterilkan  terlebih dahulu.  Kemudian  alat-alat  gelas  disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121˚C dan tekanan 1 atm  selama  15  menit,  pinset  dibakar  dengan pembakaran  diatas  api  langsung  dan  media disterilkan  diautoklaf  pada  suhu  121˚C  dan tekanan 1 atm selama 15 menit (Ortez, 2005)

## Pembuatan Media Cair
Ekstrak  daging  (beef  extract)  0,3  g,  100  ml aquadest,  natrium  klorida  0,3  dan  0,5  g  pepton diaduk  sampai  rata  kemudian  dibuat  homogen menggunakan  magnetic  stirrer  lalu  diautoklaf pada  suhu  121℃  selama  15  menit,  ukur  pH dengan  menggunakan  kertas  pH.  Dipipet  1  mL media  cair  kemudian  dimasukkan  dalam  tabung reaksi dan ditutup dengan aluminium foil. Media cair siap digunakan sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).
Kultur Bakteri Media cair B1 yang sudah disiapkan sebelumnya,  ditambahkan dengan masing- masing bakteri yang sudah  dikultur (Escherichia coli  dan  Staphylococcus  aureus)  kemudian dipipet  sebanyak  100µL  kedalam  tabung  reaksi yang  berbeda.  Tutup  tiap  tabung  reaksi  dengan aluminium  foil  dan  dimasukkan  kedalam inkubator  selama  1x24  jam  pada  suhu  37  ˚C (Ortez, 2005).

## Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian  aktivitas antibakteri  menggunakan  kloramfenikol  paper disc.  Sedangkan  kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan  pelarut metanol,  dengan  cara  membuat  larutan  stok metanol  dengan  mengambil  sebanyak  200  μL metanol kemudian ditotolkan pada paper disc.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara  1  mg  ekstrak kasar  Spons  Callyspongia  aerizusa  dilarutkan dalam  200  μL  metanol  dan  dikocok  hingga homogen  menggunakan  vortex.  Perlakuan  yang sama  dilakukan  pada  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform dan fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar
Ekstrak  daging  (beef  extract)  0,3  g,  0,5  pepton, 0,45 g agar, dan aquades 100 ml, diaduk sampai rata  kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121℃ selama 15 menit. Lakukan pengujian pH dengan kertas  pH. Media  agar  siap  digunakan  untuk  uji aktivitas antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  metode  difusi  agar  (disc  diffusion  Kirby and  Bauer).  Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri ini,  cakram  (paper  disc)  yang  digunakan berukuran  6  mm  dengan  daya  serap  50  μL  tiap cakram. Sampel yang telah ditentukan konsentrasinya  (250  μg/50  μL)  ditotolkan  pada masing-masing  cakram  dengan  menggunakan mikropipet.  Untuk  media  cair  agar  yang  sudah diautoklaf  pada  suhu  121℃  selama  15  menit, kemudian didinginkan sampai suhu 40℃.
Pengamatan dan Pengukuran Diameter Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam  masa inkubasi. Daerah pada sekitaran cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau bahan antibakteri yang digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan diameter zona bening.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Rendemen ekstrak dan fraksi Callyspongia aerizusa
No Sampel Berat (g) Rendemen (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 10 2,81 Cokelat pekat 2 Fraksi n-Heksan 0,022 0,44 Putih keruh 3 Fraksi Kloroform 0,05 1 Putih keruh 4 Fraksi Metanol 3 60 Kuning Setelah  dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  dan  fraksi  spons Callyspongia  aerizusa terhadap bakteri
Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus didapati hasil yang dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil pengukuran diameter zona bening ekstrak dan fraksi Spons Callyspongia aerizusa terhadap
Escherichia coli dan Staphylococcus aureus Diameter Zona Hambat (mm) EtOH     ChCl3    n-HxnMe     OH          C+                  C- Ec 8,19 9,34 10,85 15,48 9,32 9,75 9,42 8,99 27,58 - 9,46 9,96 10,30 16,04 ∑ 𝑿 26,97 29,05 30,57 40,51 8,99 9,68 10,19 13,50 Sa 6,69 7,25 6,31 6,96 7,59 6,23 6,87 6,77 27,98 - 6,38 6,09 6,73 6,28 ∑ 20,66 19,57 26,22 20,01 𝑿 6,88 6,52 8,74 6,67
Ket:  C+  =  Kontrol  positif,  C-  =  Kontrol  negatif,  Ec  =  Bakteri Escherichia  coli ,  Sa  =  Bakteri Staphylococcus aureus , ∑ = Total pengukuran , 𝑋 = Rata-rata pengukuran, mm= milimeter Determinasi Sampel Determinasi Spons Callyspongia aerizusa dilakukan  di  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Program  Studi  Farmasi Universitas Sam Ratulangi. Determinasi dilakukan  untuk  mengetahui  sampel  yang  di ambil dan dilakukan penelitian aktivitas antibakteri  merupakan  sampel  yang  sesuai  yaitu Spons Callyspongia aerizusa . Ekstraksi Dan Fraksinasi Sampel  Spons Callyspongia  aerizusa yang diambil  dari  Pulau  Manado  Tua,  diekstraksi
menggunakan metode maserasi. Ekstraksi menggunakan  metode  maserasi  dikarenakan pengerjaannya  mudah  dan  tidak  menggunakan panas  sehingga  kandungan  kimia  pada  sampel yang  tidak  tahan  akan  panas  tidak  rusak.  Pada proses  maserasi  kandungan  kimia  pada  sampel dapat  ditarik  oleh  pelarut  dikarenakan  adanya perbedaan  konsentrasi  di  dalam  dan  di  luar  sel, sehingga  menyebabkan  dinding  sel  sampel pecah  karena  tidak  dapat  menahan  tekanan  dari perbedaan konsentari  (Baud dkk, 2014).
Ekstraksi Spons
Callyspongia aerizusa menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut etanol  95%  dikarenakan  pelarut  etanol  dengan konsentrasi  95%  merupakan  konsentrasi  tinggi yang  dapat  menarik  kandungan  kimia  pada sampel  dengan  baik  dan  pelarut  etanol  juga bersifat  toksiksitas  rendah,  sehingga  kandungan kimia  pada  sampel  tidak  rusak.  Maserasi dilakukan  selama  3  x  24  jam  dengan  pelarut yang sama. Pengulangan maserasi atau remaserasi pada sampel bertujuan untuk memaksimalkan  penarikan  kandungan  kimia pada  sampel  oleh  pelarut  yang  akan  digunakan (Mujipradana  dkk,  2018).  Setelah  didapatkan adanya  filtrat  dari  hasil  maserasi,  filtrat  tersebut dievaporasi sehingga menghasilkan ekstrakkasar.  Penggunaan  evaporator  bertujuan untuk  menarik  pelarut  pada  hasil  maserasi dengan suhu 40 o C, karena suhu yang digunakan harus  dibawah  titik  didih  pelarut  sehingga  tidak dapat  merusak  kandungan  kimia  pada  sampel pada proses evaporasi.
Hasil  ekstrak  kasar  yang  diperoleh  dari proses  evaporasi,  selanjutnya  digunakan  ke tahap  fraksinasi.  Proses  fraksinasi  bertujuan untuk memisahkan kandungan kimia dari sampel sesuai  dengan  tingkat  kepolarannya.  Metode fraksinasi  yang  digunakan  yaitu  fraksinasi  cair- cair  dimana  disesuaikan  dengan  perbedaan tingkat  kepolaran  dari  tiap-tiap  pelarut.  Pelarut yang  digunakan  yaitu  pelarut  metanol  sebagai pelarut  polar,  pelarut  n-heksan  sebagai  pelarut non  polar  dan  pelarut  kloroform  sebagai  pelarut semi  polar.  Pada  proses  fraksinasi,  pengocokan dilakukan  karena  dapat  memaksimalkan  dan membantu penarikan dari setiap pelarut terhadap kandungan  kimia  yang  ada  pada  sampel.  Pada proses  fraksinasi  akan  terbentuk  2  lapisan dimana  merupakan  pemisah  antara  pelarut- pelarut  yang  digunakan  dan  juga  dapat membantu  dalam  memisahkan  pelarut  satu dengan  yang  lainnya  setelah  proses  fraksinasi.
Pelarut  dengan  massa  jenis  yang  lebih  besar akan  berada  dibagian  bawah,  sedangkan  pelarut dengan  massa  jenis  kecil  akan  berada  dibagian atas.  Hasil  fraksinasi  yang  diperoleh  dari  ketiga pelarut  tersebut  kemudian  di  evaporasi  lagi sehingga  menghasilkan  ekstrak  kasar  masing- masing  yang akan digunakan  dalam uji aktivitas antibakteri.
Hasil  ekstrak  dari  fraksinasi  yang  di  evaporasi dapat dilihat pada Tabel 1. Jumlah ekstrak kasar memiliki  bobot  atau  berat  yang  berbeda dikarenakan  penggunaan  pelarut  yang  tingkat kepolarannya  berbeda,  sehingga  kandungan kimia  yang  tertarik  dalam  proses  fraksinasi tertarik  sesuai  tingkat  kepolarannya.  Hasil fraksinasi  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa fraksi  metanol  memiliki  kadar  rendemen  yang lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  fraksi  n- heksan  dan  fraksi kloroform,  yaitu 60%. Hal ini sesuai  dengan  yang  dikemukakan  oleh  Meldha (2021),  bahwa  terdapat  banyak  komponen senyawa yang bersifat polar dalam sampel Spons Callyspongia aerizusa.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  menggunakan bakteri Escherichia  coli sebagai  bakteri  Gram- negatif  dan  bakteri Staphylococcus  aureus sebagai bakteri Gram-positif, hal ini dikarenakan untuk  melihat  aktivitas  antibakteri  dari  sampel Spons Callyspongia  aerizusa dari  kedua  jenis gram  bakteri.  Metode  yang  digunakan  dalam pengujian  ini  yaitu  metode  difusi  agar. Pemilihan  menggunakan  metode  difusi  agar dikarenakan  metode  ini  mudah  dilakukan  dan peralatannya  mudah  didapatkan.  Pengujian aktivitas  antibakteri  bertujuan  untuk  melihat apakah  sampel  Spons Callyspongia  aerizusa dengan suatu konsentrasi yang  dipakai  memiliki aktivitas antibakteri untuk kedua baketri uji yang dipakai  (Sari  dkk,  2018).  Aktivitas  antibakteri dari sampel dapat dilihat dari zona hambat yang akan terbentuk disekitar cakram.
Gambar a . Escherichia coli
Gambar b . Staphylococcus aureus
Gambar  1.  Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri  dari Ekstrak dan Fraksi Spons Callyspongia aerizusa : (a) Escherichia
coli , (b)
Staphylococcus  aureus. Ket:  (1)  Ekstrak  Etanol,
(2) Fraksi  Kloroform,  (3)  Fraksi  n-Heksan,  (4) Fraksi  Metanol,  (5)  Kontrol  Positif,  (6)  Kontrol Negatif.
Hasil pengukuran diameter dan rata-rata diameter  pengamatan  daya  antibakteri  dari sampel spons Callyspongia aerizusa yang dibagi menjadi  ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform  dan  fraksi  metanol  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Syaphylococcus  aureus ditunjukkan pada Tabel 2.
Pengamatan  pada  pengujian  antibakteri  ini dilakukan  setelah  diinkubasi  selama  1  x  24  jam
pada  suhu  37℃  dengan  tiga  kali  pengulangan pada  masing-masing  ekstrak  dan  fraksi.  Kontrol positif yang digunakan yaitu antibiotik kloramfenikol  yang  dimana  telah  diketahui memiliki  spektrum  luas  terhadap  bakteri  Gram- positif  dan  negatif,  sedangkan  kontrol  negatif yang digunakan adalah larutan metanol. Penggunaan  kontrol  negatif  dan  kontrol  positif dalam  pengujian  antibakteri  ini  bertujuan  untuk membandingkan  zona  hambat  yang  terbentuk selama pengujian.
1 2 3 4 5 6

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Tabel 3. Kategori kekuatan daya antibakteri Diameter Zona Bening (mm) Kategori > 20 Sangat Kuat 10-20 Kuat 5-10 Sedang < 5 Lemah Dalam  pengujian  ini,  digunakan  kontrol positif  dan  kontrol  negatif  sebagai  pembanding. Kontrol positif yang digunakan adalah Kloramfenikol paper  disc karena  kloramfenikol merupakan  antibiotik  spektrum  luas  yang  dapat membunuh  bakteri  Gram  positif  maupun  Gram negative.  Kontrol  positif  berfungsi  sebagai kontrol  dari  zat  uji  dengan  membandingkan diameter  yang  ada  pada  daerah  hambat  yang akan terbentuk. Hasil yang diperoleh menunjukkan  Kloramfenikol  memiliki  aktivitas antibakteri  yang  lebih  besar  terhadap  bakteri  uji dibandingkan ekstrak dan fraksi Spons Callyspongia  aerizusa .  Diameter  zona  hambat yang  dihasilkan  kloramfenikol  pada  bakteri Staphylococcus  aureus yaitu  sebesar  27,98  mm dan  pada  bakteri Escherichia  coli yaitu  sebesar 27,58 mm.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  pada pengujian  ini  adalah  metanol.  Kontrol  negatif berfungsi  untuk  mengetahui  ada  atau  tidaknya pengaruh  pelarut  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus . Hasil  yang  diperoleh  dari  kontrol  negatif  tidak memiliki  daya  hambat  terhadap  bakteri  uji,  hal ini menunjukkan bahwa aktivitas yang ditimbulkan  oleh  ekstrak  dan  fraksi  Spons Callyspongia  aerizusa adalah  murni  dari senyawa  yang  terkandung  didalamnya  dan bukan dari pelarut yang digunakan.
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  pada ekstrak  etanol  terdapat  zona  bening  yang terbentuk  disekitar  cakram  baik  pada  bakteri Escherichia coli maupun bakteri Staphylococcus aureus masing-masing  dikategorikan  sedang dengan  rata-rata  8,99  mm  dan  6,88  mm.  Ini menunjukkan  bahwa  pada  ekstrak  etanol  Spons Callyspongia aerizusa memiliki aktivitas antibakteri.
Pada  fraksi  kloroform  menunjukkan adanya  zona  bening  yang  terbentuk  disekitar
cakram  pada  bakteri Escherichia  coli maupun bakteri Staphylococcus  aureus ,  masing-masing dikategorikan  sedang  dengan  rata-rata  diameter zona  bening  masing-masing  9,68  mm  dan  6,52 mm.
Pada  fraksi  n-heksan  menunjukkan adanya  zona  bening  yang  terbentuk  disekitar cakram  baik  pada  bakteri Escherichia  coli maupun  bakteri Staphylococcus  aureus .  Hal  ini menunjukkan  bahwa  senyawa  yang  terdapat dalam  fraksi  n-heksan  memiliki  aktivitas antibakteri,  masing-masing  dapat  dikategorikan sedang  dengan rata-rata diameter 10,19 mm  dan 8,74 mm.
Pada fraksi metanol menunjukkan adanya  zona  bening  yang  terbentuk  disekitar cakram  pada  bakteri Escherichia coli  maupun bakteri Staphylococcus  aureus ,  masing-masing dikategorikan  kuat  dan  sedang  dengan  rata-rata diameter  zona  bening  masing-masing  13,50  mm dan  6,67  mm.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa senyawa  yang  terdapat  dalam  fraksi  n-heksan memiliki  aktivitas  antibakteri  dan  memiliki spektrum  kuat  dan  sedang  karena  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram  negatif dan Gram.
Hasil  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini menunjukkan bahwa sampel Spons Callyspongia aerizusa memiliki aktivitas antibakteri pada Ekstrak etanol, fraksi kloroform,  fraksi  n-heksan,  dan  fraksi  metanol dengan  kategori  kuat  dan  sedang  yang  ditandai dengan  terbentuknya  zona  bening  disekitar cakram.  Terbentuknya  zona  bening  dipengaruhi oleh  kandungan  senyawa  aktif  yang  terdapat didalam Spons Callyspongia aerizusa.
Berdasarkan  penelitian  Novianti  dkk (2012),  didapatkan  adanya  kandungan  senyawa steroid,  alkaloid,  flavonoid  dan  terpenoid didalam Spons Callyspongia aerizusa.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  sampel  Spons Callyspongia  aerizusa yang  diambil  dari  perairan  Pulau  Manado  Tua memiliki  aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak etanol  dikategorikan  sedang  terhadap  bakteri Escherichia coli 7,25 mm dan pada Staphylococcus aureus 6,25 mm, pada fraksi n- heksan  dikategorikan  kuat  terhadap  bakteri Escherichia coli 10,19 dan pada Staphylococcus aureus dikategorikan  sedang  8,74  mm,  fraksi methanol  dikategorikan  kuat  terhadap  bakteri Escherichia coli 13,50 mm, pada
Staphylococcus  aureus dikategorikan  sedang 6,67 mm, dan pada fraksi kloroform dikategorikan sedang terhadap bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus 9,68  mm  dan  6,52  mm.  Hal  ini  dapat disimpulkan bahwa Spons Callyspongia aerizusa memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dengan kategori kuat dan sedang.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai senyawa  aktif  yang  terkandung  didalam  Spons Callyspongia  aerizusa serta  uji  aktivitas  lainnya untuk mengetahui manfaat lain selain antibakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Bhaskara, I., B., M., Ketut, B., dan Ketut, T., P.,
G.  2012.  Uji  Kepekaan Esherichia
coli Sebagai  Penyebap  Kolibasilasi
Pada  Babi  Muda      Terhadap Antibiotika, Oksitettra siklin, Streptomisin, Kenamisin, dan Gentamisin. Indonesia Medius Veterinus . 1(2) :186-201.
Dwijendra,  I.,  Made.,  Wewengkang,  D.,  S.,
Wehantou,  Frenly.  2014.  Aktivitas Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea  herbacea Yang Diperoleh  Dari  Teluk  Manado.
Pharmacon 3(4) .  Program  Studi Farmasi,  FMIPA:  Uinivesitas  Sam
Ratulangi.
Erlindawati,  A.,  Puji.,  dan  J.  A.  fsghani.  2015.
Identifikasi dan Uji Aktivitas Antibakteri  dari  Tiga  Isolat  Tanah
Gambut  Kalimatan  Barat. Jurnal Kimia dan Kemasan . 4(1 ):12-16. Fetsch,2017. Staphylococcus  aureus .  Germany:
Academic press.
Hanani,  2016.  Analisis  Fitokimia.  Jakarta:
Penerbit Buku Kedokteran EGC. Harti, 2012. Dasar-Dasar Mikrobiologi Kesehatan. Yogyakarta: Nuha Medica. Hemraj,2013. A  review  on  Commonly  Used Biochemical Test For Bacteria .India: Departemen Of Pharmahy Solam (H.P).
Irianto, Koes. 2014. Bakteriologi, Mikologi, dan Virologi.  Panduang  Medis  Dan Klinis Bandung Penerbit Alfabeta. Liem,  J.,  W.,  A.  B.  Robert.,  D.  A.  Sumilat.,  V. Warow.,  F.  Losung.,  A.  Wantasen. 2019. Bioprospeksi Antibakteri beberapa  jenis  Spons  dari  Perairan Pangalisang Bunaken. Jurnal
Pesisir dan Laut Tropis . 1(1) : 7-12.
Karsinah,  Lucky.,  Suharto,  H.,  M.,  Mardiastuti,
H., W. 2011. Buku Ajar Mikrobiologi  Kedokteran  Batang Negatif Gram Escherichia. Tanggerang: Binarupa Aksara Publisher. Pp. 195-8.
Korompis,  T.,  T.,  Mambo,  C.,  D.,  Edward, Nangoy.  2017.Uji  Daya  Hambat Ekstrak  Spons  Laut Callyspongia aerizusa Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Shigella dan Staphylococcus  epidermidis.  Jurnal e-Biomedik. Vol. 5 (2) .
Kristiani,  2014.  Pengaruh  Konsentrasi  Etanol
dan  Waktu  Maserasi  Terhadap Perolehan  Fenolik,  Flavonoid,  dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Rambut  Jagung.  Fakultas  Teknik Universitas Katolik Widya Mandala, Surabaya.
Lumempouwa.  L,  Surynto.  E,  Paendong.  J, 2012. Aktivitas Anti  UV-B Ekstrak Fenolik  dari  Tongkol  Jagung  ( Zea mays  L. ). Jurnal  MIPA    UNSRAT Online . 1(1) : 1-4.
Manggalea,  F.,  P.,  Posangi,  J.,  Wowor,  M.,  P., Bara, R. 2015. Uji Efek Antibakteri Jamur  Endosimbion  Spons  Laut
terhadap  bakteri Pseudomonas aeruginosa  dan  Escherichia  coli. Ebm. 3(1) : 277.
Marzuki,  2018.  Eksplorasi  Spons  Indonesia Seputar Kepulauan Spermonde.
Nas Media Pustaka.Makassar. Abdullah,  S.S.,  Djide,  N.,  Natsir,  S.  (2021). KLT  Bioautografi  Hasil  Partisi Ekstrak  Etanol  Herba  Bandotan ( Ageratum conyzoides L. ) Terhadap Shigella  dysentriae . Chem.  Prog.
14(1) .15-17.
Legi,  A.P.,  Edy,  H.J.,  Abdullah ,  S.  S.,  (2021),
Formulasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri  Sediaan  Sabun  Cair Ekstrak Etanol Daun Sirsak ( Annona  Muricata Linn)  Terhadap Bakteri Staphylococcus , Pharmacon, 10(3) , 1058–1065.
Meldha.,  Wewengkang,  D.  S.,  Mansauda,  K.  L.
R.  2021.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak dan Fraksi Spons Callyspongia  aerizusa  dari  Perairan Pulau Mantehage Manado. 10(3):95961 Mopangga,  E.,  Yamlean,  P.  V.  Y., &  Abdullah, S.  S.  (2021).  Formulasi  Sediaan Sabun  Mandi  Padat  Ekstrak  Etanol Daun  Gedi  ( Abelmoschus  manihot L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis .
Pharmacon, 10(3) , 1017–1024. Ortez,  J.,  H.  2005. Disk  Diffusion  Testing  in Manual of Antimicrobial Susceptibility  testing. Marie  B. Coyle (Coord.Ed). American society for Microbiology Pelealu,  E.,  Wewengkang,  D.,  &  Sumantri,  S.
(2021).  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Dan  Fraksi  Spons Leucetta chagosensis dari  Perairan  Pulau Mantehage Sulawesi Utara Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli , Pharmacon, 10(2) ,
834–840 .
Purba,  I.  E.,  Wandra,  T.,  Nugrahini,  N.,
Nawawi,  S.,  &  Kandun,  N.  (2016). Program Pengendalian Demam
Tifoid  di  Indonesia:  tantangan  dan
peluang.  Media  Litbangkes, 26(2) , 99-108.
Rachmawaty,  2016.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol,  Etil  Asetat  dan Petroleum Eter Rambut Jagung Manis  ( Zea  mays  ssaccharata sturt ) Terhadap Bakteri Staphylococus aureus dan
Escherichia  coli .  Fakultas  Sains dan  Teknolog  Universitas  Islam Negeri Maulana Malik, Malang Radji, M. 201. Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahaisiwa  Farmasi  &  Kedokteran, Jakarta,  Penerbit  Buku  kedokteran EGC, 130-194.
Rumampuk,  Y.,  B., J.,  Wowor,  P., M.,  Mambo, C.,  D.  2017.Uji  Daya  Hambat Ekstrak  Spons  Laut  ( Callyspongia Aerizusa )  terhadap  Pertumbuhan Bakteri Salmonella  Typho  dan Streptococcus  Pyogenes.  Jurnal  e- Biomedik (Ebm). Vol. 5(2).
Sahuleka,  A.S.G.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.  S.,
(2021),  Formulasi  Sediaan  Krim Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Eceng Gondok ( Eichhornia crassipes ) Terhadap Bakteri
Staphylococcus aureus , Pharmacon,
10(4) , 1162–1168.
Sinrang,  V.N.S.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.S.,, (2022),  Formulasi  Sediaan  Obat Kumur  Ekstrak  Etanol  Biji  Pinang ( Areca  catechu  L. ),  Pharmacon, 11(1) , 1342–1349.
Suraji,  Rasyid,  N.,  Kenyo,  A.,  S.  2015.  Profil kawasan konservasi Provinsi
Sulawesi Utara . Jakarta:Kementrian Kelautan dan Perikanan.
Surjowardijo, P., Susilorini, E. T., dan Sirait, G. 2015.  Daya  Hambat  Dekok  Kulit Apel  Manalangi  ( Malus  sylvestrs Mill ) Terhadap Pertumbuhan Staphyloccus aureus dan Pseudomonas sp. Penyebab
Mastitis Pada Sapi Perah. J. Ternak Tropika. 16(2) :40-48.
Suryanto. 2012. Fitokimia Antioksidan. Penerbit Putra Media Nusantara, Surabaya