## SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SENYAWA 3-(4-METOKSI- FENIL)-5-NAFTALEN-1-IL-1-FENIL-4,5-DIHIDRO-PIRAZOL

## Aisyah, Jasril, Hilwan Yuda Teruna
Laboratorium Kimia Organik Sintesis, Jurusan Kimia, FMIPA Universitas Riau. Jl. HR. Subrantas KM 12,5 Pekanbaru 28193 e-mail: aisyah.mukra85@gmail.com

## ABSTRACT
A pyrazoline analog,  3-(4-methoxy-phenyl)-5-naphtalen-1-yl-1-phenyl-4,5-dihydro-pyrazole (PF CA-4OMe) has been synthesized via intermolecular cyclization between substituted chalcones and phenylhydrazine using glacial acetic acid as a catalyst under microwave irradiation. The structure of the compound was characterized based  on  the  interpretation  of  UV,  FTIR,  HRMS, 1 H-NMR, 13 C-NMR,  HSQC  and  HMBC  spectra.  The antioxidant test was carried out by 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) method. The result show that PF CA-4OMe was proved to have antioxidant activity with IC 50 387,64 µg/mL.
Key words: Pyrazoline, microwave irradiation, DPPH and antioxidant.

## 1. PENDAHULUAN
Antioksidan  merupakan  zat  yang  dapat mencegah  atau  menghambat  terjadinya  reaksi oksidasi  berantai  pada  suatu  molekul  (Patil et
al ., 2009). Antioksidan
mempunyai kemampuan untuk menstabilkan atau mendeaktivasi radikal bebas sebelum menyerang  sel  hingga  zat  ini  sangat  berperan penting  untuk  melindungi  sel  dari  kerusakan. Adanya  radikal  bebas  dapat  menginisiasi timbulnya berbagai macam penyakit (Leong & Shui,  2001;  Lobo et  al ., 2010) seperti  kanker, liver ,  alzheimer,  penuaan  dini, arthiritis , inflamasi, diabetes, parkinson, atheroscloresis , AIDS (Moon & Shibatomo, 2009).
Tubuh  manusia  dapat  menetralisir  radikal bebas bila jumlahnya tidak berlebihan melalui mekanisme  pertahanan  antioksidan  endogen. Bila  antioksidan  endogen  tidak  mencukupi maka tubuh memerlukan antioksidan dari luar. Berbagai  tanaman  obat  maupun  obat  sintesis berperan sebagai antioksidan.
Pencarian  molekul  baru  yang  bertindak sebagai antioksidan memberi kontribusi penting dalam  perkembangan  molekul  obat.  Pirazolin termasuk  kedalam  golongan  alkaloid  namun senyawa  ini  jarang  ditemukan  di  alam (Sakthinathan et al ., 2012). Beberapa penelitian pirazolin  yang  mengandung  gugus  fungsional seperti  kloro,  fluoro,  bromo  dan  metoksi menunjukkan  aktivitas  farmakologi  beragam seperti  antijamur  dan  antibakteri  (Karthikeyan
et al , 2007), antitumor dan antimalaria (Insuasty et  al .,  2013),  antikanker  dan  antiinflamasi (Bashir et  al .,  2011)  serta  antioksidan
(Sapnakumari et al ., 2014).
Berdasarkan  paparan  diatas,  maka  pada penelitian  ini  dilakukan  sintesis  senyawa pirazolin  3-(4-metoksi-fenil)-5-naftalen-1-il-1- fenil-4,5-dihidro-pirazol (PF CA-4OMe) dengan mereaksikan senyawa kalkon ( E ) - 1-(4- metoksi-fenil)-3-naftalen-1-il-propenon  (CA- 4OMe) dengan fenilhidrazin dengan menggunakan  katalis  asam  asetat  glasial  dan metode iradiasi gelombang mikro. Selanjutnya senyawa hasil sintesis dikarakterisasi dan diuji aktivitas  biologisnya  melalui  uji  aktivitas antioksidan menggunakan DPPH.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  oven microwave (Samsung ME109F),  neraca  analitik,  tabung  reaksi bertutup, satu s et alat destilasi, neraca analitik, pompa  vakum,  corong buchner ,  bejana, Ultrasonik  (Ney  ),  lampu  UV  (Camag  254 dan  366  nm),  alat  penentu  titik  leleh Fisher John (SMP 11-Stuart  ), spektrofotometer UV- Visible  (Genesys  10S  UV-VIS  v4.002 2L9N175013), HPLC (Shimadzu LC Solution), spektrofotometer  FTIR  (FTIR  Shimadzu,  IR Prestige-21),  spektrometer  NMR  (Agilent  500 MHz dengan sistem konsol DD2), spektrometer
Massa  (Water  LCT  premier  XE  mode  positif) dan  peralatan  standar  lain  yang  digunakan dilaboratorium sesuai prosedur kerja.
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  1- naftaldehid  (Merck),  4-metoksi  asetofenon (Merck),  kalium  hidroksida  (KOH)  (Merck), fenilhidrazin  (Merck),  asam  asetat  glasial (Merck),  etanol  absolut  (Merck),  DPPH (sigma),  indikator  universal,  plat  KLT  GF 254 (Merck),  etanol  absolut  (Merck),  n-heksana, etilasetat dan diklorometana.

## Sintesis Senyawa Pirazolin PF CA-4OMe
Sintesis  senyawa  berlangsung  dua  tahap. Tahap  pertama  dilakukan  sintesis  senyawa kalkon  CA-4OMe  dengan  bahan  baku  4- metoksi  asetofenon  (0,75  gram)  dan  1- naftaldehid  (0,78  gram)  menggunakan  katalis KOH  3N  (7,5  mL)  dan  metode  iradiasi gelombang mikro selama 1 menit. Selanjutnya pada tahap kedua, kalkon yang dihasilkan pada tahap  pertama  sebanyak  0,288  g  direaksikan dengan 1,08 g fenilhidrazin dalam 10 mL etanol absolut  dan  ditambahkan  5  tetes  katalis  asam asetat glasial. Sintesis senyawa dengan metode iradiasi  gelomb  ang  mikro  selama  4  menit menghasilkan  campuran  reaksi.  Campuran reaksi  didiamkan  hingga  terbentuk  endapan yang  maksimum.  Padatan  yang  terbentuk disaring  menggunakan  corong buchner dan dicuci  dengan  n-heksana  dingin  kemudian dikeringkan  pada  suhu  ruang.  Selanjutnya senyawa  yang  diperoleh  diuji  kemurniannya dengan KLT, pengukuran titik leleh dan HPLC.
Skema  reaksi  sintesis  ditunjukkan  pada Gambar 1 .
H 3 CO O H O + O H 3 CO EtOH KOH 3N EtOH CH 3 COOH Keton Aldehid Kalkon Pirazolin H N NH 2 N N H 3 CO Fenilhidrazin +
Gambar 1.
Skema sintesis senyawa pirazolin Uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH
Uji aktivitas antioksidan dilakukan menggunakan  metode  DPPH (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl) menggunakan microplate reader .  Senyawa  uji  dibuat    dibuat  dengan melarutkan sampel sebanyak 2 mg dalam 2 mL metanol  (1000  µg/mL).  Selanjutnya  larutan induk  diencerkan  hingga  konsentrasi  nya menjadi  31,25;  62,5;  125;  250;  500  dan  1000 µg/mL.  Sebagai  standar  digunakan  asam askorbat. Masing-masing larutan uji ditambahkan 50 µL metanol dan 80 µL DPPH. Kemudian  diinkubasi  selama  30  menit. Aktivitas penangkapan radikal diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  520 nm.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Senyawa  murni  pirazolin  PF  CA-4OMe yang  diperoleh  berupa  padatan  jingga  dengan berat 0,1222  g (rendemen 32,33%). Titik leleh senyawa 137-139 o C. Kromatogram HPLC: t R = 20,114 menit (λ = 224 dan 261 nm) menunjukan adanya  puncak  tunggal.  Analisa  spektroskopi UV  menunjukkan  adanya  serapan  maksimum pada λ 224 nm (ε = 33.793 L.mol -1 .cm -1 ) yang menunjukkan  adanya  transisi  elektron  dari orbital  ikatan  π π * pada  ikatan  rangkap terkonjugasi pada cincin fenil yang terikat pada atom  N1  pada  cincin  pirazolin,  sedangkan serapan maksimum pada λ 261 nm (ε = 9.261 L.mol -1 .cm -1 )  menunjukkan  adanya  transisi elektron dari orbital ikatan π π * pada cincin fenil  yang  tersubstitusi p- metoksi  yang berkonjugasi  dengan  C=N  pada  cincin pirazolin.  Analisis  spektrum  IR  menunjukkan munculnya beberapa puncak yang menunjukkan  vibrasi  ikatan  yang  khas  untuk senyawa pirazolin.  Spektrum  IR (KBr) (cm -1 ): 3048  (C-H  aromatik),  2931  dan  2834  (C-H alifatik), 1595 (C=N), 1388 (C-N), 1497 (C=C aromatik)  dan  1226  (C-O).  Spektrum  HRMS ( m/z )  hasil  perhitungan  sebagai  [M+H] + = 379,1810 dan ditemukan pada m/z = 379,1818 (100%).
Spektrum 1 H-NMR  (500  MHz,  CDCl 3 ) senyawa  PF  CA-4OMe  pada  cincin  pirazolin mengikuti  pola spin sistem  ABX.  Terdapat kopling  geminal  (kopling  antara  proton  yang
terikat  pada  karbon  yang  sama)  dengan  besar kopling  15-18  Hz  (H a dan  H b )  dan  kopling visinal (kopling antara proton yang terikat pada karbon  berbeda)  dengan  orientasi  sudut tertentu.  Pergeseran  kimia  pada  3,14  dan  4,04 ppm  menunjukkan  dua  proton non  equivalent (H a dan  H b )  pada  metilen  di  cincin  pirazolin. Signal proton H a muncul pada δ 3,14 ppm ( J = 15,25  Hz)  menunjukkan  orientasi  berbentuk doublet sedangkan  proton  H b muncul  pada  δ 4,04  ppm  ( J ba =  15,25  dan J bx =  12,44  Hz) dengan  orientasi  berbentuk doublet  of  doublet (dd).  Proton  H a dan  H b menunjukkan  kopling germinal  ( J =  15,25  Hz)  dimana  poton  H a muncul  di  daerah upfield dibandingkan  H b ini disebabkan  proton  H b lebih  tidak  terlindungi ( deshielding ) dimana terjadi perbedaan lingkungan  kimia  kedua  proton.  Proton  H a memiliki  posisi  ekuatorial  terhadap  H x dan proton  H b memiliki  posisi  aksial  terhadap  H x sehingga  secara  ruang  interaksi  proton  H b dengan  dua  atom  nitrogen  pada  ikatan  N-N lebih besar.
Spektrum 13 C-NMR  menunjukkan  adanya signal karbon alifatik pada δ 42,9 dan 61,2 ppm yang  mengindikasikan  masing-masing  karbon
C4 dan C5 pada cincin pirazolin. Selain itu juga dikonfirmasi muncul signal karbon alifatik pada δ  53,6  ppm  yang  mengindikasikan  adanya karbon  primer  dari  gugus p -metoksifenil. Terdapat signal karbon C=N pada δ 147,3 ppm pada cincin pirazolin dari struktur senyawa PF CA-4OMe.
Senyawa  PF  CA-4OMe  juga  dilengkapi dengan  analisis  2D  NMR  yaitu  HSQC  dan HMBC yang menunjukkan korelasi 1 H- 13 C dari struktur senyawa. Spektrum HSQC menunjukkan  korelasi  proton  dengan  karbon yang terikat secara langsung atau berjarak satu ikatan.  Spektrum  HSQC  menunjukkan  adanya korelasi  proton  H a (3,14  ppm)  dan  proton  H b
(4,04 ppm) dengan karbon C4 (42,9 ppm). Hal ini  mengindikasikan  bahwa  karbon  C4 merupakan  karbon  sekunder.  Kemudian  juga terdapat  korelasi  antara  tiga  proton  pada  3,84 ppm  dengan  karbon  pada  55,4  ppm mengindikasikan  adanya  substituen  gugus p - metoksifenil.  Karbon  C=N  (147,3  ppm)  pada cincin  pirazolin  tidak  menunjukkan  adanya korelasi  dengan  poton  manapun,  hal  ini mengindikasikan bahwa karbon C=N merupakan karbon kuartener. Tabel 1. Data spektroskopi NMR senyawa PF CA-4OMe (CDCl 3 ) Posisi δC (ppm) δH (ppm) HMBC 3 147,3 - - 4 42,9 Ha: 3,14 (d, J = 15,25 Hz) H b → C3, C1’’’ Hb: 4,04 (dd, J ba =15,25 dan J bx = 12,44 Hz) 5 61,2 Hx: 5,91 - 1’ 145,2 - - 2’ 113,2 7,06 (d, J = 8 Hz) H2’→ C1’, C4’, C6’ 3’ 129,0 7,18 (m) H3’→ C1’,C2’,C 5’ 4’ 118,8 6,79 (t, J = 7,5 Hz) H4’→ C2’, C3’, C5’, C6’ 5’ 129,0 7,18 (m) H5’→ C1’, C3’, C4’, C6’ 6’ 113,2 7,06 (d, J = 8 Hz) H6’→ C1’, C2’, C4’, C5’, OCH3 55,4 3,84 (s, CH3) 3H/OCH3 → C4’’ 1’’ 125,5 - - 2’’ 127,2 7,68 (dd, J = 8 dan J = 2 Hz) H2’’→ C3, C1’’, C3’’, C4’’ 3’’ 114,0 6,92 (dd, J = 8,5 dan J = 1,8 Hz) H3’’→ C1’’, C2’’, C4’’, C5’’ 4’’ 160,1 - - 5’’ 114,0 6,92 (dd, J = 8,5 dan J = 1,8 Hz) H5’’→ C1’’, C3”, C4’’ 6’’ 127,2 7,68 (dd, J = 8 dan J = 2 Hz) H6’’→ C3, C1’’, C4’’, C5” 1’’’ 136,8 - - 2’’’ 125,8 7,46 (d, J = 7,5 Hz) H2’’’→ C4’’’, C9’’’ 3’’’ 126,0 7,39 (t, J = 7,5 Hz) H3’’’→ C1’’’, C10’’’
Posisi δC (ppm) δH (ppm) HMBC 4’’’ 128,0 7,80 (d, J = 8 Hz) H4’’’→ C5’’’, C8’’’, C9’’’, C10’’’ 5’’’ 129,3 7,956(d, J = 10 Hz) H5’’’→ C4’’’, C6’’’, C7’’’, C9’’’, C10’’’ 6’’’ 126,4 7,60 (m) H6’’’→ C5’’’, C10’’’ 7’’’ 125,8 7,60 (m) H7’’’→ C8’’’, C10’’’ 8’’’ 123,0 8,11 (d, J = 8 Hz) H8’’’→ C1’’’, C6’’’, C7’’’, C9’’’, C10’’’ 9’’’ 129,9 - - 10’’’ 134,4 - -
Spektrum  HMBC  menunjukkan  bahwa kedua  proton  (H a dan  H b )  pada  atom  C4 memiliki korelasi dengan karbon C3 (2 ikatan) dan C1’ (3 ikatan). Ilustrasi korelasi proton dan karbon  dari  spektrum  HMBC  untuk  cincin pirazolin,  naftalen,  fenil  dan p -metoksifenil juga  dapat  dilihat  pada Gambar  2 sedangkan
intepretasi data 1 H-NMR, 13 C-NMR dan HMBC dapat dilihat pada Tabel 1.
Berdasarkan  hasil  dari  intepretasi  data spektroskopi  UV,  FTIR, 1 H-NMR, 13 C-NMR, HSQC,  HMBC  dan  HRMS  menunjukkan bahwa senyawa PH CA-4OMe yang disintesis sesuai dengan senyawa target yang diharapkan.
N N O 1 2 3 5 1''' 2''' 3''' 4''' 9''' 10''' 5''' 6''' 7''' 8''' 1'' 2'' 3'' 4'' 5'' 6'' 4 H H H H H H H H H 1' 2' 3' 4' 6' 5' H H H N N H 3 CO 1 2 3 5 1''' 2''' 3''' 4''' 9''' 10''' 5''' 6''' 7''' 8''' 1'' 2'' 3'' 4'' 5'' 6'' 4 Ha Hb H H H H H H 1' 2' H 3' 4' 5' 6'
(a) (b)
Gambar 2. Korelasi HMBC senyawa PF CA-4OMe pada cincin  p-metoksifenil dan fenil (a) dan cincin pirazolin dan naftalen (b).
Hasil uji antioksidan menggunakan metode DPPH  terhadap  senyawa  PF  CA-4OMe  yaitu 387,64  µg/mL,  hal  ini  menunjukkan  bahwa senyawa  PF  CA-4OMe  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  baik  dengan  nilai  IC 50 lebih kecil dari 1000 µg/mL dan daya hambat yang besar yaitu 15,28-63,54%.

## 4. KESIMPULAN
Sintesis  senyawa  pirazolin  3-(4-metoksi- fenil)–5-  naftalen-1-il-1-  fenill,  4,  5-  dihidro- pirazol (PF CA-4OMe) dari kalkon inti naftlen dengan  fenilhidrazin  menggunakan  katalis asam  asetat  glasial  menghasilkan  randemen 32,33%.  Hasil  karakterisasi  menggunakan spektroskopi  UV,  FT-IR,  HR-MS  dan  NMR menunjukkan  bahwa  senyawa  yang  diperoleh dari  hasil  penelitian  merupakan  senyawa
dengan  struktur  yang  sesuai  dengan  molekul target.  Uji  antioksidan  dengan  metode  DPPH menunjukkan bahwa senyawa pirazolin PF CA- 4OMe bersifat aktif sebagai antioksidan dengan IC 50 387,64 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Bashir,  R.,  Ovais,  S.,  Yaseen,  S.,  Hamid,  H., Alam,  M.  S.,  &  Samim,  M.  (2011).
Synthesis of some new 1,3,5- trisubstituted pyrazolines bearing benzene  sulfonamide  as  anticancer  and anti-inflammatory  agents. Bioorganic  & Medicinal  Chemistry  Letters,  21 ,  4301-
4305.
Insuasty,  B.,  Montoya,  A.,  Becerra,  D., Quiroga,  J.,  Abonia,  R.,  &  Robledo,  S. (2013). Synthesis of novel analogs of 2-
pyrazoline obtained from [(7- chloroquinolin-4-yl-amino]chalcones and hydrazine as potential antitumor and antimalarial agents. European Journal of Medicinal Chemistry, 67 , 252-262.
Karthikeyan, M. S., Holla, B. S., & Kumari, N. S.  (2007).  Synthesis  and  antimicrobial studies on novel chloro-fluorine containing hydroxy pyrazolines. European Journal of Medicinal Chemistry, 42 , 30-36.
Leong,  L.P.  &  Shui,  G.  (2002).  An investigationof  antioxidant  capacityof fruits  in  Singapore  markets. Food Chemistry . 76 , 69-75
Lobo,  V.,  Patil,  A.,  Phatak,  A  &  Chandra,  N.
(2010).  Free  radicals  antioxidants  and functional  foods:  impact  on  human health. Pharmacogn Rev , 4 (8), 118-126.
Moon, J.K. & Shiboto, T. (2009). Antioxindant assay  for  plant  and  food  component.
Journal  of  Agriculture  and  Food Chemistry , 57 (5), 1655-1666.
Patil, C.B, Mahajan, S.K, & Katti S.A. (2009). Chalcone:  a  versatile  molecule. Journal of  pharmateuceutical  Sciences  and Research , 1 (3), 11-12.
Sakthinathan,  S.  P.,  Vanangamudi,  G.,  & Thirunarayanan,  G.  (2012).  Synthesis, spectral  studies  and  antimicrobial activities of some 2-naphthyl pyrazoline derivatives. Spectrochimica Acta Part A:
Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 95 , 693-700. Sapnakumari, M., Narayana, B.,
Gurubasavarajswamy, P. M., & Sarojini,
B.  K.  (  2014).  Design,  synthesis,  and pharmacological  evaluation  of  new pyrazoline derivatives. Monatsh
Chemistry, 146 (6), 1015-1024.
.