ISSN: 1410-8917 e-ISSN: 2597-9914
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (1) (2019): 11 – 16

## Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi
Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa

## Synthesis of Alginate-Chitosan Polyelectrolyte Complex (PEC) Membrane and Its Physical-Mechanical Properties
Dhony Hermanto a,b,* , Mudasir b , Dwi Siswanta b , Bambang Kuswandi c
a Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, University of Mataram, Mataram, Indonesia b Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Gadjah Mada University, Yogyakarta, Indonesia c Chemo and Biosensor Group, Faculty of Pharmacy, University of Jember, Jember, Indonesia
* Corresponding author: dhony.hermanto@unram.ac.id
https://doi.org/10.14710/jksa.22.1.11-16
A r t i c l e   I n fo

## A b s t r a c t
Article history: Received: 30 September 2018
Revised: 4 January 2019 Accepted: 7 January 2019 Online: 31 January 2019
Keywords: membrane; alginate – chitosan; polyelectrolyte; physical – mechanical properties
Synthesis  of  alginate-chitosan  polyelectrolyte  membrane  and  the  determination  of the  physical-mechanical  properties  were  carried  out.  Alginate-chitosan polyelectrolyte  complex  membrane  can  be  made  by  mixing  hydrosol  alginate  and chitosan  hydrosol  with  a  ratio  of  1:  1  at  pH  5.28.  Membranes  of  alginate-chitosan polyelectrolyte  complexes  produced  have  physical-mechanical  properties  including load,  elongation  and  elasticity,  water  absorption  and  resistance  better  than  the constituent polymers. The results of FTIR spectroscopy analysis showed that there was an electrostatic interaction between alginate and chitosan through protonated amine groups  of  chitosan  and  carboxylic  groups  from  alginate.  Surface  analyses  by  SEM showed that morphology of alginate-chitosan polyelectrolyte complex membrane was different with single membrane morphology

## A b s t r a k
Kata Kunci: membran; alginat – kitosan; polielektrolit;
sifat fisik – mekanik Pembuatan  membran  kompleks  polielektrolit  alginat – kitosan  dan  penentuan  sifat fisik-mekaniknya telah dilakukan. Membran kompleks polielektrolit alginat – kitosan dapat dibuat melalui pencampuran hidrosol alginat dan hidrosol kitosan dengan ratio 1:1 pada pH 5,28. Membran kompleks polielektrolit alginat – kitosan yang dihasilkan memiliki sifat fisik – mekanik meliputi kekuatan tarik (load), elongation (regangan), dan elastisitas (modulus young) serta daya serap dan resistensi yang lebih baik dari pada  polimer  penyusunnya.  Hasil  analisis  spektroskopi  FTIR  menunjukkan  bahwa terjadi  interaksi  elektrostatik  antara  alginat  dengan  kitosan  melalui  gugus  amina terprotonasi  dari  kitosan  dan  gugus  karboksilat  dari  alginat.  Analisis  permukaan melalui SEM menunjukkan bahwa membran kompleks polielektrolit alginat-kitosan memiliki morfologi permukaan yang berbeda dengan membran tunggalnya.

## 1. Pendahuluan
Pada  dekade  terakhir,  studi  tentang  pembuatan membran  kompleks  polielektrolit  sebagai  material pendukung  (matriks)  telah  banyak  dilakukan  [1]. Kompleks  polielektrolit  merupakan  kompleks  asosiasi yang  terbentuk  antara  polimer  yang  memiliki  poliion
dengan muatan yang berlawanan karena adanya interaksi elektrostatik  antara  polimer  ionik  yang  bermuatan berlawanan tersebut. Polielektrolit yang digunakan untuk mempersiapkan  kompleks  inter-polimer biasanya  poli- asam dan poli-basa lemah [2].
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (1) (2019): 11 – 16 12
Kompleks polielektrolit yang telah dibuat sebelumnya menggunakan poli allilamin (PAA), poli-L- lisin (PLL), poli-L-arginin (PLA), poli-L-histidin (PLH), dan polietilen imina (PEI) sebagai polikation, sedangkan poli (stirenesulfonat, PSS), poli (vinil sulfonat, PVS), poli (asam  akrilat,  PAC),  poli  (asam  maleat,  PMA),  asam deoksiribonukleat  (DNA),  asam  ribonukleat  (RNA),  dan turunannya  sebagai  polianion  [3].  Pada  kajian  ini polielektrolit  kompleks  dibuat  dengan  menggunakan alginat dan kitosan.
Alginat merupakan polisakarida linier yang disusun oleh  residu  asam  b-D-manuronat  dan  a-L-guluronat yang dihubungkan melalui ikatan 1,4. Alginat berasal dari alga coklat yang merupakan tumbuhan laut [4]. Kitosan merupakan  polisakarida  yang  terdapat  dalam  jumlah melimpah di alam. Kitosan adalah poli [b-(1,4)-2 amino- 2  deoxy-D-glukopiranosa]  dan  merupakan  produk deasetilasi  kitin  [5].  Sebagai  polimer  alami,  alginat mempunyai  sifat  aman,  sederhana,  murah  dan mempunyai kekuatan mekanik yang baik, porositas yang tinggi  bagi  substrat  dan  produk  untuk  berdifusi.  Begitu pula kitosan mempunyai sifat yang menarik diantaranya inert,  hidrofilik,  biokompatibel,  afinitas  tinggi  pada protein  dan  karena  adanya  gugus  hidroksil  dan  amino. Karena  sifat  larut  kitosan  dalam  asam  organik  encer, kitosan  bisa  dibentuk  menjadi  berbagai  konfigurasi geometri yang berbeda: membran, serat, serat berongga, kapsul  dan  butiran  [6].  Alginat  yang  merupakan polianionik dan kitosan polikationik bila dilarutkan pada kondisi  yang  tepat  dapat  berinteraksi  satu  sama  lain melalui gugus karboksil dari alginat dan gugus amino dari kitosan membentuk kompleks polielektrolit [7].
Pada  kajian  ini  membran  kompleks  polielektrolit alginat – kitosan dapat dipreparasi secara mudah dengan tanpa crosslinker. Hal  ini  berbeda  dengan  sintesis sebelumnya  yang  menggunakan cosslinker seperti glutaraldehid  [8]  dengan  metode  preprasi  yang  lebih kompleks. Keberadaan cosslinker juga akan mempengaruhi  jenis  ikatan  dan  pori  membran  yang terbentuk.  Pembentukan  kompleks  polielektrolit  tanpa crosslinker  juga  mengurangi  kemungkinan  keracunan dan efek tidak diinginkan lainnya dari reagen dan dapat dimanfaatkan  pada  rekayasa  jaringan  organ,  transport obat  [9]  dan  sebagai  membran  hemodialisis  [10]. Berdasarkan pada uraian diatas akan disintesis membran kompleks polielektrolit kitosan-alginat dengan mencampurkan polimer alginat dan kitosan pada kondisi tertentu  dan  membran  terbentuk  akan  diuji  sifat  fisik- mekaniknya  seperti  kekuatan  tarik  ( load ), elongation (regangan),  elastisitas  ( modulus  young )  serta  uji kemampuan mengembang.

## 2. Metode Penelitian
Peralatan yang digunakan antara lain: spektrofotomer USB Ocean Optic 2000 UV – VIS auto, SEM model Joel LV 5600 USA, FT ‐ IR spectrophotometer 1600 Perkin Elmer Co Japan, neraca analitik (Mettler AE 200), pengaduk  magnet  dan  pemanas  (IKA  Combimag-RET motor), pH dan ion meter (TOA Electronic Ltd model IM- 20E)  dan  peralatan  gelas  (Pyrex)  yang  biasa  digunakan dilaboratorium. Sedangkan bahan-bahan yang
digunakan  antara  lain:  sodium  alginat  (sigma),  kitosan (sigma),  asam  asetat  glasial,  asam  klorida,  sodium hidroksida ( analytical  grade )  (merck),  kertas  saring Whatman no.41 dan aquabides.

## 2.1. Pembuatan Larutan Hidosol Alginat dan  Kitosan
Ditimbang  1  gr  kitosan,  didispersikan  ke  dalam  25 mL aquadest kemudian dilarutkan dengan menambahkan 5  mL  asam  asetat  glasial  sambil  diaduk  dengan menggunakan  pengaduk  magnit  sehingga  terbentuk campuran  homogen.  Selanjutnya ditimbang 1  gr  alginat dan  dilarutkan  dalam  25  mL  aquadest.  Kedua  larutan dibiarkan satu malam untuk menghilangkan gelembung.

## 2.2. Pembuatan Membran Kompleks Polielektrolit

## Alginat – Kitosan
Kedua  larutan  polimer  kemudian  dicampur  dan ditambahkan  2  mL  HCl  32%.  Selanjutnya  ditambahkan larutan  NaOH  10%  (w/v)  sampai  diperoleh  pH=  5,28. Polimer  terbentuk  adalah  hidrosol.  Hidrosol  yang terbentuk kemudian dicetak di atas plat kaca, kemudian dikeringkan pada suhu kamar selama 72 jam.
2.3. Uji Sifat Fisik – Mekanik Membran Kompleks Polielektrolit Alginat – Kitosan
Pada  tahap  ini  membran  yang  telah  dicetak  akan dikarakterisasi dengan  beberapa  uji  sifat fisik – mekanik meliputi  kekuatan  tarik  ( load ), elongation (regangan), dan  elastisitas  ( modulus  young ).  Membran  alginat – kitosan  dipotong  dengan  ukuran  1x10  cm 2 ,  selanjutnya membran  dijepit  pada  alat autograph .  Selanjutnya membran   diamati  sampai putus  kemudian dicatat  nilai load dan elongation yang dihasilkan.
Uji  swelling  membran  alginat – kitosan  dilakukan dengan  memotong  dengan  ukuran  2x2  cm 2 ,  kemudian ditimbang  beratnya  sebagai  berat  awal  (w i /gr). Selanjutnya  membran  alginat – kitosan  direndam  dalam 50 mL aquades selama waktu tertentu. Setelah direndam permukaan  membran  alginate – kitosan  dikeringkan dengan  tisu  kertas  dan  kemudian  ditimbang  beratnya sebagai berat akhir (w f /gr).
% kemampuan swelling = wf- wi wi x 100%

## 2.4. Analisis Morfologi Permukaan Membran
SEM ( Scanning Electron Microscopy ) digunakan untuk mengetahui morfologi membran yaitu mengenai struktur membran dan penampang lintang, serta pori membran. SEM  membran  kompleks  polielektrolit  alginat – kitosan dipelajari  menggunakan  metode  pelapisan  membran pada  gold ‐ palladium  untuk  ditentukan  morfologi permukaan membran tersebut.

## 2.5. Analisis Gugus Fungsi
Penentuan  gugus  fungsi  membran  alginat – kitosan yang  dihasilkan  digunakan  spektrofotometer  FTIR. Absorpsi  FTIR  dari  membran  kompleks  polielektrolit alginat – kitosan diukur menggunakan metode pellet KBr pada tekanan kompresi 2500 Ib/m 2 .
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (1) (2019): 11 – 16 13 3. Hasil dan Pembahasan 3.1. Pembuatan Membran Kompleks Polielektrolit
Alginat – Kitosan
Membran  kompleks  polielektrolit  alginat-kitosan dapat  dibuat  dengan  mencampurkan  larutan  natrium alginat dan kitosan. Perbandingan massa Na alginat dan kitosan  yang  digunakan  adalah  1:1  sehingga  dapat membentuk membran. Kondisi pH dan suhu pengeringan mempengaruhi  kualitas  membran.  Membran  alginat- kitosan dihasilkan dengan kualitas stabil dan kuat (tidak mudah  koyak)  pada  pH  campuran  berkisar  5,28  dan kondisi pengeringan yang pada suhu kamar selama ± 72 jam. Sedangkan pada pH 5, membran tidak terbentuk, dan pada  kondisi  pengeringan  60 o C,  membran  yang dihasilkan menjadi sangat rapuh dan mudah koyak.
3.2. Hasil Karakterisasi Sifat Fisik – Mekanik Membran Kompleks Polielektrolit Alginat – Kitosan
Nilai kuat tarik dan elongasi membran pada Tabel 1 menunjukkan  bahwa  membran  alginat-kitosan  cukup elastis karena tidak mudah putus walaupun mempunyai kekuatan  tarik  yang  lemah.  Interaksi  alginat-kitosan tersebut  menghasilkan  perpaduan  karakter  kekuatan mekanik polimer alginat dan kitosan, sehingga memiliki kekuatan mekanik yang lebih baik. Interaksi dua polimer ini  menyebabkan  peningkatan  kuat  tarik  dan  elongasi membran.  Peningkatan  elongasi  ini  dimungkinkan  oleh karena  efek  plastisisasi  membran  akibat  interaksi  ionik alginat – kitosan tersebut.
Kekuatan mekanik membran memberikan gambaran karakter  fisik  membran  mengenai  kekuatan  renggang putus  ( tensile  strength )  dan  pemanjangan  (elongasi).  Uji kekuatan mekanik membran dilakukan untuk membran dalam keadaan kering dan dalam keadaan basah (setelah difusi).  Kekuatan  mekanis  membran  dalam  keadaan basah  penting  untuk  diketahui  dalam  kaitannya  untuk aplikasi  biomaterial  [11].  Berkurangnya  kuat  tarik membran  dalam  keadaan  basah  ini  dimungkinkan berkaitan  dengan  terbentuknya  interaksi  antara  air dengan membran. Semakin banyak gugus-gugus hidrofil per  satuan  luas  permukaan  membran,  semakin  kuat interaksi  air  dengan  membran  sehingga  memberikan kekuatan mekanik yang semakin berkurang.
Nilai modulus  young membran  pada  Tabel  2 menunjukkan membran kompleks polielektrolit alginat- kitosan  memiliki  nilai modulus  young yang  lebih  besar daripada  membran  single  (alginat  dan  kitosan).  Sifat mekanik membran campuran semakin baik, hal tersebut dikarenakan strukturnya yang rapat menyebabkan jarak antara molekul dalam membran semakin rapat. Semakin besar  nilai modulus  young maka  membran  mempunyai kemampuan yang lebih baik untuk mencegah terjadinya kerusakan yang disebabkan oleh gaya  (tarik, tekan atau gesekan) yang berasal dari luar, sehingga menghasilkan membran  kompleks  polielektrolit  alginat-kitosan  yang kuat.
Tabel 1. Nilai Kuat Tarik dan Elongasi Membran Kompleks Polielektrolit Alginat – Kitosan Membran Membran Kering Membran Basah Kuat Tarik (MPa)  %Elongasi Kuat Tarik (MPa) %Elongasi Alginat  16,6 ± 2,34 2,87 ± 0,04 1,91 ± 0,17 12,28 ± 0,59 Kitosan 26,45 ± 0,92 4,81 ± 0,45 3,60 ± 0,24 24,30 ± 2,03 PEC 38,04 ± 0,66 8,13 ± 0,44 6,06 ± 0,67 35,12 ± 1,88
Pada  Tabel  2  diketahui  ketebalan  membran kompleks  polielektrolit  alginat-kitosan  lebih  tipis dibandingkan  membran  dalam  keadaan single (alginat dan  kitosan)  akan  tetapi  memiliki  nilai modulus  young yang lebih besar. Hal ini menunjukkan bahwa membran kompleks  polielektrolit  yang  terbentuk  memiliki keunikan  struktur  dan  sifatnya  sehingga  dapat dimanfaatkan dalam aplikasi sebagai material pendukung yang lebih baik.
Tabel 2 . Nilai Modulus Young Membran Kompleks Polielektrolit Alginat – Kitosan Membran Ketebalan Membran (mm) Modulus Young (N/mm 2 ) Alginat 0,0222 7,75 Kitosan 0,0218 16,12 PEC 0,0214 18,33
Daya  serap  air  pada  membran  secara  umum pengujiannya  mirip  dengan  pengembangan  ( swelling ) membran.  Daya  serap  air  memberikan  gambaran mengenai berat air yang dapat terserap pada membran, sedangkan swelling memberikan  gambaran  mengenai pengembangan volume membran akibat terperangkapnya air pada membran.
Nilai daya serap dan resistensi membran pada Tabel 3, menunjukkan bahwa membran kompleks polielektrolit alginat-kitosan  memiliki  nilai  daya  serap  air  dan resistensi  yang  lebih  besar  daripada  membran  single (alginat  dan  kitosan).  Daya  serap  air  atau swelling membran  dipengaruhi  adanya  keseimbangan  hidrofilik dan  hidrofobik  pada membran,  sambung  silang, derajat ionisasi  dan  interaksinya  dengan  counter  ion. Meningkatnya  hidrofobisitas  membran  akibat  dari terbentuknya  kompleks  polielektrolit  dan  diperkirakan akan  memiliki  resistensi  daya  tahan  yang  lebih  besar untuk  tidak  larut  dalam  air.  Adanya  reaksi  sambung silang  dapat  mempengaruhi  ukuran  pori  kaitannya dengan  ruang  kosong  diantara  struktur  membran tersebut.  Ruangan  kosong  dalam  membran  ini  dapat menjebak  larutan  yang  lebih  banyak.  Berhubung  sifat termodinamika  polimer  dalam  larutan  berbeda-beda, maka tidak ada teori yang bisa memprediksikan dengan pasti  tentang  sifat  pengembangan  Pengembangan  pada membran kompleks polieketrolit alginat-kitosan
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (1) (2019): 11 – 16
kemungkinan  disebabkan  masih  adanya  ion  COO - yang bersifat hidrofilik dalam membran.
Tabel 3 . Nilai Uji Swelling membran alginat – kitosan Membran % serapan % resistensi Alginat 94 95 Kitosan 98 99 PEC 104 105

## 3.3. Analisis Morfologi Permukaan Membran
Analisis  morfologi  permukaan  membran  dengan SEM (Scanning  Electron  Microscopy )  ini  didapatkan gambaran permukaan membran yang berwarna gelap dan terang.  Warna  terang  pada  gambar  hasil  SEM  EDX tersebut  merupakan  permukaan  yang  lebih  tinggi dibandingkan  yang  berwarna  gelap.  Bentuk  permukaan dari  membran  kitosan  diketahui  melalui  SEM  seperti terlihat  pada  Gambar  1.  Membran  kitosan  memiliki permukaan yang rapat dengan struktur fibril yang dapat dengan  mudah  dibedakan.  Sedangkan  morfologi membran alginat tidak teratur dan berpenampang kasar. Morfologi  membran  kompleks  polielektrolit  alginat- kitosan  memiliki  struktur  fibril  tidak  teratur,  memiliki permukaan  yang  rapat.  Perbedaan  morfologi  membran campuran  dan  membran single (alginat  dan  kitosan) menunjukkan  telah  terbentuknya  membran  kompleks polielektrolit alginat-kitosan.
a. b. c.
Gambar 1. SEM morfologi permukaan a) kitosan, b) alginat, dan c) PEC alginat-kitosan

## 3.4. Analisis Gugus Fungsi
Pada  Gambar  2(i)  dapat  diamati  spektra  FTIR hidrosol  kitosan.  Pita  pada  daerah  3459  cm -1 menunjukkan  regangan  gugus  N-H  dan  O-H,  serapan kuat dan lebar mengindikasikan adanya ikatan hidrogen terutama sampel kitosan berada dalam bentuk hidrosol. Keberadaan  gugus  hidroksil  diperkuat  dengan  adanya serapan  pada  daerah  1260  cm -1 [12].  Pita  absorpsi  di sekitar  2924  dan  2852  cm −1 merupakan  regangan  C-H simetri  dan  asimetri.  Serapan  pada  daerah  1589  cm -1 mengindikasikan  tekukan  N-H  amina  primer  [13]. Tekukan  CH 2 dan  deformasi  simetris  CH 3 ditunjukkan dengan adanya serapan pada daerah 1426 and 1375 cm -1 . Pita absorpsi pada 1325 cm -1 merupakan regangan C-N. Serapan di daerah 1157 cm -1 merupakan pita karakteristik amino. Pita pada daerah 1081 dan 1028 cm -1 (regangan C- O) terlihat melebar akibat ikatan hidrogen pada hidrosol kitosan. Serapan pada daerah 897 cm −1 mengindikasikan tekukan keluar bidang dari CH cincin monosakarida [14].
Spektra  FTIR  hidrosol  alginat  yang  terdapat  pada Gambar  2(ii)  menunjukkan  beberapa  serapan  pada panjang  gelombang  tertentu,  yaitu  di  daerah  3459  cm -1 yang  menandakan  vibrasi  peregangan  O-H,  2930  dan 2864  cm -1 merupakan  vibrasi  peregangan  C-H.  Pita  di daerah  1628  dan  1420  cm -1 merupakan  vibrasi peregangan  asimetris  dan  simetris  gugus  karboksilat. Serapan  di  daerah  1305  cm -1 mengindikasikan  adanya vibrasi  O-C-H.  Serapan  pada  1028  cm -1 terkait  dengan vibrasi  peregangan  C-O-C.  Pita  absorpsi  pada  950  cm -1 merupakan  getaran  peregangan  C-O  dari  residu  asam uronat, sedangkan pita pada 891 cm -1 adalah karakteristik untuk alginat yaitu residu asam manuronik [7].
Spektra  FTIR  membran  PEC  alginat-kitosan ditunjukkan  pada  Gambar  2(iii)  terdapat  absorpsi  pada bilangan  gelombang  3459  cm – 1 yang  mengindikasikan adanya  gugus – OH  dari  alginat  dan – NH 2 kitosan,  2924 dan  2870  cm – 1 adalah  serapan  dari  CH  (sp 3 ),  1578  cm – 1 adalah vibrasi gugus – COO – . Hilangnya pita serapan pada daerah  1157  cm -1 yang  mencirikan  gugus  amin menunjukkan  bahwa  gugus  amin  kitosan  telah terprotonasi  dan  berinteraksi  dengan  gugus  karboksilat alginat [15]. Hal ini diperkuat dengan munculnya puncak pada daerah 1550 cm -1 yang menunjukkan keberadaan ion NH 3 + [16].  Intensitas  puncak  pada  1398  cm – 1 juga menunjukkan  interaksi  elektrostatik  pada  membran polielektrolit  komplek  [7],  dengan  ratio  massa  alginat dan  kitosan  adalah  1:1.  Keberadaan  pita  serapan  yang telah  disebutkan  di  atas  menunjukkan  adanya  ikatan ionik  antara gugus amina  terprotonasi  dari  kitosan  dan gugus karboksilat dari alginat.
Gambar 2. Spektra FTIR membran i) kitosan, ii) alginat, dan iii) PEC alginat-kitosan

## 4. Kesimpulan
Kompleks  polielektrolit  alginate-kitosan  dapat dibuat menjadi membran pada kondisi ratio masa alginat dan  kitosan  adalah  1:1  pada  pH  =  5.28  dan  pengeringan pada suhu kamar. Membran kompleks polielektrolit yang dihasilkan  memiliki  sifat  fisik – mekanik  (meliputi kekuatan  tarik  ( load ), elongation (regangan),  dan elastisitas  ( modulus  young )  serta  uji  daya  serap  dan resistensi)  yang  lebih  baik  dibandingkan  membrane single (alginat  atau  kitosan). Hasil  analisis spektroskopi FTIR menunjukkan bahwa terjadi interaksi elektrostatik antara  alginat  dengan  kitosan  dalam  membentuk membran polielektrolit kompleks.

## Persantuanan
Penulis ucapkan
terima kasih
kepada KEMENRISTEKDIKTI  yang  telah  membiayai  penelitian ini  dalam  skim  hibah  disertasi  doktor  tahun  anggaran 2016, no: 65F /SPP-PDDI/UN.18.12/PL/2016.

## Daftar Pustaka
[1]  Mayur  G.  Sankalia,  Rajashree  C.  Mashru,  Jolly  M. Sankalia  and  Vijay  B.  Sutariya,  Reversed  chitosan – alginate  polyelectrolyte  complex  for  stability improvement  of  alpha-amylase:  Optimization  and physicochemical  characterization, European  Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics , 65, 2, (2007)
215-232 https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2006.07.014
[2]  J. Berger, M. Reist, J. M. Mayer, O. Felt, N. A. Peppas and  R.  Gurny,  Structure  and  interactions  in covalently  and  ionically  crosslinked  chitosan hydrogels  for  biomedical  applications, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics , 57, 1, (2004) 19-34 https://doi.org/10.1016/S0939-
6411(03)00161-9
[3]  Soichi  Yabuki,  Polyelectrolyte  Complex  Membranes for Immobilizing Biomolecules, and Their Applications to  Bio-analysis, Analytical Sciences , 27, 7, (2011) 695-695 http://doi.org/10.2116/analsci.27.695 [4]  Gerhard A. De Ruiter and Brian Rudolph, Carrageenan biotechnology, Trends in Food Science & Technology , 8,
12,  (1997)  389-395 https://doi.org/10.1016/S0924- 2244(97)01091-1
[5]  Magdolna  Bodnar,  John  F.  Hartmann  and  Janos Borbely,  Preparation  and  Characterization  of Chitosan-Based  Nanoparticles, Biomacromolecules , 6, 5, (2005) 2521-2527 http://doi.org/10.1021/bm0502258 [6]  Ping Li, Ya-Ni Dai, Jun-Ping Zhang, Ai-Qin Wang and Qin Wei, Chitosan-alginate nanoparticles as a novel drug  delivery  system  for  nifedipine, International journal of biomedical science (IJBS) , 4, 3, (2008) 221- 228
[7]  Dominika  Kulig,  Anna  Zimoch-Korzycka,  Andrzej Jarmoluk and Krzysztof Marycz, Study on Alginate – Chitosan  Complex  Formed  with  Different  Polymers Ratio, Polymers , 8, 5, (2016) 167
[8]  Chengling  Jiang,  Zhiliang  Wang,  Xueqin  Zhang, Xiaoqun  Zhu,  Jun  Nie  and  Guiping  Ma,  Crosslinked polyelectrolyte  complex  fiber  membrane  based  on chitosan – sodium  alginate  by  freeze-drying, RSC Advances , 4, 78, (2014) 41551-41560 http://doi.org/10.1039/C4RA04208E
[9]  Anurag  Verma  and  Ankita  Verma,  Polyelectrolyte complex – An  overview, International  Journal  of Pharmaceutical  Sciences  and  Research ,  4,  5,  (2013) 1684-1691
[10] Jamaran  Kaban,  Hakim  Bangun,  Asteria  K.  Dawolo and  Daniel,  Pembuatan  Membran  Kompleks Polielektrolit Alginat Kitosan, Jurnal Sains Kimia , 10, 1, (2006) 10-16
[11]  Xia  Wang,  Ke-Xue  Zhu  and  Hui-Ming  Zhou, Immobilization  of  glucose  oxidase  in  alginate- chitosan  microcapsules, International  journal  of molecular  sciences ,  12,  5,  (2011)  3042-3054 http://doi.org/10.3390/ijms12053042
[12] Chao  Song,  Hao  Yu,  Min  Zhang,  Yanyan  Yang  and Guren  Zhang,  Physicochemical  properties  and antioxidant  activity  of  chitosan  from  the  blowfly Chrysomya megacephala larvae, International Journal of  Biological  Macromolecules ,  60,  (2013)  347-354 https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2013.05.039
[13] Sang-Hoon  Lim  and  Samuel  M.  Hudson,  Synthesis and  antimicrobial  activity  of  a  water-soluble chitosan  derivative  with  a  fiber-reactive  group, Carbohydrate  Research ,  339,  2,  (2004)  313-319 https://doi.org/10.1016/j.carres.2003.10.024
[14] Moacir Fernandes Queiroz, Karoline Rachel Teodosio Melo,  Diego  Araujo  Sabry,  Guilherme  Lanzi  Sassaki and Hugo Alexandre Oliveira Rocha, Does the use of chitosan  contribute  to  oxalate  kidney  stone formation?, Marine  drugs ,  13,  1,  (2014)  141-158 http://doi.org/10.3390/md13010141
[15] Jing Han, Ziyou Zhou, Ruixue Yin, Dongzhi Yang and Jun Nie, Alginate – chitosan/hydroxyapatite polyelectrolyte complex porous scaffolds: Preparation  and  characterization, International Journal  of  Biological  Macromolecules ,  46,  2,  (2010) 199-205 https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2009.11.004
[16] Jin  Woo  Lee,  So  Yeon  Kim,  Seong  Soo  Kim,  Young Moo  Lee,  Kwang  Hyun  Lee  and  Seon  Jeong  Kim, Synthesis  and  characteristics  of  interpenetrating polymer network hydrogel composed of chitosan and poly(acrylic acid), Journal of Applied Polymer Science ,
73,  1,  (1999)  113-120  doi:10.1002/(SICI)1097- 4628(19990705)73:1<113::AID-APP13>3.0.CO;2-D