P P PP PENELITIAN
Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Kulit Batang Kelor (Moringa oleifera
Lam.) sebagai Hepatoprotektor
Studi eksperimen pada Tikus Wistar yang Diinduksi CCl 4
Nabella Meriem Annisa Fitri 1 , Linlin Haeni 2 , Emma Mardliyah 3
1 Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani,
Cimahi
2 Bagian Histologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi
3 Bagian Parasitologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi

## ABSTRAK
Pendahuluan: Uji  fitokimia  terhadap  kulit  batang  kelor  ( Moringa  oleifera Lam.) mengandung  flavonoid,  steroid,  dan  alkaloid,  yang  berfungsi  sebagai  hepatoprotektor. Tujuan : Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol kulit batang  kelor  terhadap  gambaran  mikroskopis  hepar  tikus  wistar  yang  diinduksi  CCl 4 . Metode: Penelitian ini menggunakan 25 ekor tikus yang dibagi atas 5 kelompok. Perlakuan terdiri dari: kontrol negatif (K1), kontrol positif (K2), perlakuan dosis ekstrak 100 mg/Kg BB (K3), dosis ekstrak 250 mg/Kg BB (K4) dan dosis ekstrak 500 mg/Kg BB (K5). Perlakuan diberikan setiap hari selama 7 hari. Pada hari ke 8 tikus dimatikan, dibedah, dan diambil organ hepar untuk dibuat sediaan histopatologi dengan pewarnaan HE.
Hasil: Hasil penelitian menunjukkan terdapat degenerasi dan nekrosis pada K2, K3, K4, K5, dengan derajat kerusakan yang bervariasi.
Simpulan: Dari  hasil  uji Post  Hoc Tukey menunjukkan  bahwa  baik  degenerasi  maupun nekrosis dari kelompok perlakuan berbeda secara signifikan (p<0,05). Hal ini berarti bahwa pemberian  ekstrak  kulit  batang  kelor  dosis  100  mg/KgBB,  250  mg/KgBB,  dan  500 mg/KgBB berpengaruh terhadap gambaran mikroskopik hepar tikus wistar yang diinduksi CCl 4 .  Peneliti  selanjutnya  dapat  meneliti  dosis  efektif  untuk  penggunaan  ekstrak  kulit batang kelor sebagai hepatoprotektor.
Kata Kunci: Kulit batang kelor, CCl 4 , hepatoprotektor

## ABSTRACT
Phytochemical  tests  of  moringa  stem  bark  (Moringa  oleifera  Lam.)  have  shown  that  it contains  flavonoids,  steroids,  and  alkaloids  which  function  as  hepatoprotectors.  The purpose of this research was to know the effect of moringa stem bark ethanol extract on the microscopic image of CCI 4 - induced wistar rat’s liver. This study used 25 rats that were divided into 5 groups. The treatment groups consisted of a negative control group (K1), a positive control group (K2), treatment group using an extract dose of 100 mg/kgBW (K3), 250 mg/kgBW (K4), and 500 mg/kg BB (K5). These doses were given daily for 7 days. On the 8 th day, the rats were euthanized and dissected to remove the liver for histopathologic
preparations  with  HE  staining.  The  results  showed  that  there  was  degeneration  and necrosis  in  K2,  K3,  K4,  K5,  with  varying  degrees  of  damage.  The  Post  Hoc  Tukey  test results  showed  that  both  the  degeneration  and  necrosis  of  the  treatment  group  were significantly  different  (p  <0.05).  Based  on  these  results,  the  stem  extract  doses  of  100 mg/kgBW, 250 mg/ kgBW and 500 mg/kgBW have an effect on the microscopic  image of wistar rat liver induced with CCI 4 . Further research can search the effective dose for the use of kelor bark extract as hepatoprotector.
Keywords: Bark of moringa, CCI 4 , hepatoprotector

## 1.  PENDAHULUAN
Sirosis  hepar  ditandai  dengan adanya  perubahan  sel  hepar  yang normal  menjadi abnormal diikuti dengan pembentukan  jaringan ikat. [1] Kerusakan sel  dapat  disebabkan  oleh  mekanisme apoptosis  dan/atau  nekrosis.  Nekrosis adalah kematian sel yang tidak terprogram  yang  salah  satu  prosesnya melalui mekanisme oksidasi. [1,2]
Kerusakan  sel  hepar  akibat  mekanisme oksidasi  dapat  dihambat  menggunakan antioksidan.  Sejumlah  penelitian  telah menunjukkan berbagai antioksidan pada tanaman  untuk  memperbaiki  kerusakan sel  hepar. [3] WHO  merekomendasikan untuk  peneliti-peneliti  selanjutnya  agar meneliti pemakaian herbal dalam pemeliharaan  kesehatan  masyarakat baik untuk pencegahan maupun pengobatan. [4,5] Salah satu tanaman yang memiliki kandungan  antioksidan  adalah  tanaman kelor  yang  memiliki  nama  latin Moringa oleifera Lam. Kelor  merupakan  salah satu  dari  14  spesies  dari  keluarga Moringaceae  yang  termasuk  dalam genus Moringa. [3] Pada  percobaan  Kumar,  dkk. ekstrak metanolik daun kelor dan bunga kelor  menunjukkan  hasil  yang  signifikan sebagai  hepatoprotektor  pada  hepar tikus yang diinduksi oleh karbon tetraklorida  (CCl 4 ).  Hal  ini  disebabkan kemampuan  ekstrak  bunga  kelor  untuk menghambat  mediator  inflamasi  dan mencegah  sel  hepar  menjadi  rusak karena  dapat  menormalkan  perubahan enzim hepar yang dihasilkan oleh CCl 4 . [6] Penelitian Hugar dan Nanjappaiah menunjukkan adanya efek hepatoprotektor pada tikus yang
diberikan  ekstrak  kulit  polong  kelor.
Kandungan  flavonoid  pada  kulit  polong kelor diyakini dapat menghambat aktifitas sitokrom  P-450  aromatase  sehingga dapat mendukung regenerasi sel hepar. [3]
Pada  tahun  2012,  Hugar  dan Nanjappaiah  telah  melakukan  penelitian pada  tikus  yang  diberikan  ekstrak  kulit polong  kelor  dengan  pemberian  dosis sebesar  100  mg/kg  BB,  250  mg/kg  BB, dan 500 mg/kg BB secara peroral untuk melihat  apakah  ekstrak  tersebut  dapat mencegah  kerusakan  sel  hepar  yang dirusak  oleh  CCl 4 . [3] Pemberian  ekstrak kulit  polong  kelor  dengan  dosis  sebesar 500  mg/kg  BB  menunjukkan  gambaran histopatologi  yang  menyerupai  kontrol normal dibandingkan dengan pemberian dosis  sebesar  100  mg/kg  BB  dan  250 mg/kg  BB. [3] Ekstrak  kulit  batang  kelor dengan  dosis  100  mg/KgBB,  200 mg/KgBB,  dan  400  mg/KgBB  tidak berpengaruh terhadap gambaran mikroskopik  ginjal  tikus  wistar  yang diinduksi  aloksan,  namun  belum  ada penelitian sebelumnya yang
menggunakan ekstrak etanol kulit batang kelor sebagai hepatoprotektor pada tikus yang diinduksi dengan CCl 4 . [7]
Kulit  batang  kelor  yang  memiliki kandungan antioksidan seperti flavonoid, alkaloid,  dan  steroid  diduga  dapat mencegah kerusakan sel hepar. [8] Pemberian CCl 4 diharapkan dapat memberikan  gambaran  kerusakan  sel hepar  seperti  pada  penderita  sirosis hepatis. Pada penelitian Ruqiah, terbukti dengan  pemberian  CCl 4 secara  injeksi intraperitoneal  sebanyak  1  ml/kg  BB selama  24  jam  dapat  memberikan kerusakan  hepar. [9] CCl 4 merupakan  zat xenobiotik  yang  dapat  merusak  sel
hepar. [10] CCl 4 berubah  menjadi  radikal bebas terlebih dahulu untuk menyebabkan  peroksidasi  lipid  pada membran dan organel sel hepar sehingga  terjadi  nekroris,  pada  sel hepar. [11]
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  efek  pemberian  ekstrak etanol  kulit  batang  kelor  terhadap penurunan  jumlah  sel  hepar  yang mengalami  nekrosis  pada  tikus  wistar yang  diinduksi  CCl 4 sebesar 1  ml/kg  BB selama 24 jam dengan membandingkan dosis  yang  telah  digunakan  oleh  Hugar dan  Nanjappaiah  yaitu  100  mg/kg  BB, 250 mg/kg BB, dan 500 mg/kg BB.

## 2.  METODE
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental dengan  metode post  test  only .  Subjek pada  penelitian  ini  menggunakan  tikus putih  ( Rattus  norvegicus )  galur  wistar dengan  jumlah  25  ekor  yang  diperoleh dari satu sumber yaitu Biofarma Bandung dengan berat badan dan usia yang sama sehingga mempunyai homogenity . Untuk dapat  dilakukan  penelitian,  tikus  harus memenuhi kriteria inklusi yaitu tikus yang berjenis  kelamin  jantan,  berusia  2-3 bulan,  memiliki  berat  badan  150-200 gram, coba bergerak aktif, nafsu makan baik,  dan  tidak  ditemukan  kelainan anatomi.
Tikus yang memiliki kriteria eksklusi tidak  dapat  diteliti.  Kriteria  eksklusi berupa hewan coba yang sakit dan mati pada masa adaptasi. Pada saat percobaan  terdapat  kriteria drop  out , yaitu tikus mati pada saat perlakuan.
Variabel-variabel  yang  digunakan
dalam  penelitian  ini  terdiri  atas  dua kelompok variabel, yaitu variabel independen  dan  variabel  dependen. Yang  termasuk  variabel  independen adalah  ekstrak  etanol  kulit  batang  kelor ( Moringa  oleifera Lam.)  dan  CCl 4 , sedangkan  yang  termasuk  variabel dependen  atau  variabel  terikat  yaitu kerusakan  sel  hepar  tikus  yang  dilihat secara mikroskopik.
Pada  penelitian  ini,  alat  yang digunakan untuk membuat ekstrak etanol kulit batang kelor berupa maserator dan
rotary evaporator . Kemudian alat-alat lain dibagi menjadi dua, yaitu alat untuk tikus dan  pembuatan  sediaan.  Alat  yang digunakan  untuk  tikus  berupa  kandang tikus  serta  tempat  makan  dan  minum tikus.  Alat  yang  digunakan  untuk pembuatan  sediaan  berupa  talenan, pisau  scalpel,  pinset,  saringan, tissue cassetes ,  mesin processor otomatis, mesin vaccum ,  mesin  bloking,  mesin mikrotom,  pisau  mikrotom, water  bath 46 o C, freezer (-20 o C), rak khusus untuk pewarnaan,  oven  60 o C ,  slide  holder , object glass , dan cover glass. Bahan  yang  dibutuhkan  adalah batang  kelor  yang  didapatkan  dari pekarangan  warga  di  Gunung  Bohong,
Cimahi, Jawa Barat yang sudah dideterminasi di Institut Teknologi
Bandung,  CCl 4 yang  didapatkan  dari Fakultas  MIPA  Unjani,  air  minum,  dan pelet  sebagai  pangan  tikus.  Bahan- bahan  untuk  membuat  preparat  adalah Buffer  Neutral  Formalin (BNF)  10%, alkohol 70%, alkohol 80%, alkohol 90%, alkohol  absolut  I,  alkohol  absolut  II, formalin, paraffin cair, dan bahan lainnya yang diperlukan untuk pembuatan Hematoksilin-Eosin (HE) seperti pewarna hematoksilin dan eosin. Proses  pembuatan  ekstrak  kulit batang kelor yaitu dengan mengeringkan kulit  batang  kelor  pada  suhu  50°C selama 24 jam menggunakan oven. Kulit batang  yang  telah  kering  kemudian dihancurkan menjadi serbuk dan dimaserasi dengan menggunakan etanol 96%  yang  didiamkan  selama  24  jam.
Selanjutnya hasil dari maserasi etanol ini disaring  dengan  menggunakan  kertas saring sehingga didapat maserat. Maserat yang telah didapat lalu dievaporasi menggunakan rotary vacuum evaporator . Ekstrak kulit batang kelor  yang  diperoleh  disimpan  di  dalam kulkas.
Setiap  kelompok  perlakuan  masing- masing terdiri dari 5 ekor tikus, sehingga jumlah  hewan  coba  pada  penelitian  ini sebanyak  25  ekor.  Setiap  kelompok diaklimatisasi selama 7 hari dan diberikan  makanan  sebanyak  15-20 g/ekor/hari  dan  air  minum  sebanyak  10 ml/100 grBB/hari dengan cara ad libitum .
Selanjutnya dilakukan penimbangan berat  badan  untuk  memastikan  tikus sudah  masuk  dalam  kriteria  inklusi. Kelompok  1  sebagai  kontrol  negatif hanya  diberikan  pakan  dan  minum selama  9  hari.  Kelompok  2  sebagai kontrol  positif  pada  hari  ke-8  diinjeksi CCl 4 dosis  1  ml/kgBB.  Kelompok  3 sebagai  perlakuan  1  (K3)  diberikan ekstrak  kulit  batang  kelor  dosis  100 mg/kgBB  pada  hari  ke-1  sampai  ke-7, dan pada hari ke-8 diinjeksi CCl 4 dosis 1 ml/kgBB.  Kelompok 4 sebagai perlakuan 2  (K4)    diberikan  ekstrak  kulit  batang kelor dosis 250 mg/kgBB pada hari ke-1 sampai ke-7, dan pada hari ke-8 diinjeksi CCl 4 dosis  1  ml/kgBB.    Kelompok  5 sebagai  perlakuan  3  (K5)  diberikan ekstrak  kulit  batang  kelor  dosis  500 mg/kgBB. Pakan diberikan sebanyak 15- 20 g/ekor/hari dan minum ad libitum.
Ekstrak  kulit  kelor  diberikan  secara peroral  dengan  sonde  oral  dan  CCl 4 diberikan secara intraperitoneal menggunakan disposable syringe . Tikus diperlakukan  dengan  prinsip  3R  dan  5F selama perlakuan.
Tikus dimatikan menggunakan teknik  inhalasi  dengan  gas  karbon dioksida (CO 2 ) dan dilakukan laparotomi untuk diambil organ heparnya. Kemudian dilanjutkan pembuatan preparat histologi.  Tikus  diterminasi  dengan insinerator berdasarkan AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals. [12] Pengamatan sediaan dilakukan dengan menggunakan mikroskop cahaya  pada  pembesaran  400x  dalam lima  pandang.  Pengamatan  dilakukan pada  lima  lapang  pandang  secara  acak pada  setiap  preparat  dan  diteliti  di  tepi vena  sentralis  (zona  3)  pada  setiap kelompok.  Di  setiap  lapangan  pandang, dihitung secara acak dan dinilai skor tiap sel dengan model histopathology scoring Manja Roenigk sesuai Tabel 1. Pengukuran  selanjutnya  dilakukan dengan  cara  menghitung  jumlah  sel normal (A), sel degenerasi parenkim (B), degenerasi hidropik (C), dan sel nekrosis (D) dari setiap lapang pandang preparat. Hasil pengukuran didapat dari (Ax1)+(Bx2)+(Cx3)+(Dx4) kemudian
hasil tersebut dibagi dengan (A+B+C+D) untuk  memperoleh  nilai  rata-rata  pada satu kelompok perlakuan maka nilai rata- rata  pada  setiap  lapang pandang  dibagi dengan  jumlah  sampel  dari  setiap perlakuan. [13]
Penilaian  histopatologi  dilakukan menggunakan  sistem  skoring  Manja Roenigk.  Sel  normal  diberikan  skor  1 poin,  sel  yang  mengalami  degenerasi parenkimatosa  diberik  skor  2  poin,  sel yang  mengalami  degenerasi  hidropik diberikan  skor  3  poin,  dan  sel  yang nekrosis diberikan skor 4 poin. [13]
Data  yang  dihasilkan  dianalisis secara  statistik  menggunakan  program SPSS  25  dengan  uji  normalitas  dan homogenitas.  Data  yang  didapatkan berdistribusi  normal  dan  homogen  lalu dilanjutkan  dengan  uji One  Way  Anova untuk  membandingkan  satu  kelompok dengan  kelompok  yang  lainnya  dan dilanjutkan Post  Hoc  Test  Tukey untuk mengetahui kelompok mana yang paling bermakna  dalam  menurunkan  kerjadian kerusakan hepar.

## 3.  HASIL PENELITIAN
3.2  Pengamatan Histologi secara

## Kualitatif dan Kuantitatif
Pengamatan  secara  mikroskopis didapatkan hasil yang berbeda-beda dari setiap  kelompok  perlakuan.  Gambar  1
(A)  adalah  gambaran  histopatologis kelompok kontrol negatif yang
menunjukkan gambaran sel hepar normal.  Sel  hepar  yang  terlihat  pada kelompok  ini  umumnya  memiliki  ciri-ciri: inti  yang  bulat,  berbatas  jelas,  dan sinusoidnya teratur. Gambar 1 (B) adalah gambaran histopatologis kelompok kontrol positif yang menunjukkan kerusakan-kerusakan pada sel hepar.
Gambar 1. Gambaran mikroskopis kelompok K1 (A), K2 (B), K3 (C), K4 (D), dan K5 (E) terdapat sel hepar normal (panah hitam), degenerasi hidropik (panah merah), nekrosis (panah putih), dan degenerasi parenkim (panah hijau) pada perbesaran 400x. Kerusakan  sel  hepar  yang  terlihat adalah degenerasi parenkimatosa (sitoplasma  mulai  keruh),  degenerasi hidropik  (sel  membengkak  dengan gambaran  yang  khas  berupa  vakuola kecil  hingga  besar),  dan  sel  nekroris seperti  piknotik  (inti  berwarna  ungu sampai  hitam  dengan  ukuran  yang mengecil  akibat  pemadatan  inti  sel), ataupun kariolisis yang memiliki gambaran  sel  kosong  tanpa  inti  sel. Gambaran mikroskopis kelompok ekstrak  etanol  kulit  batang  kelor  100 mg/KgBB/hari (Gambar 1A) sudah terlihat memiliki sel yang relatif lebih baik dibandingkan dengan kontrol positif. Hal ini terlihat dari gambaran sel hepar yang
masih mengalami degenerasi parenkimatosa  yang  merupakan  derajat degenerasi paling ringan dengan ukuran sel yang membesar dan sitoplasma yang keruh.  Selain  itu  masih  terlihat  adanya sel  hepar  yang  mengalami  degenerasi hidropik dengan gambaran vakuola pada sitoplasmanya  dan  nekrosis  dengan  inti sel  yang  mengalami  kariolisis  dengan gambaran  kromatin  inti  menjadi  pucat atau  seperti  menghilang  namun  jumlah yang  lebih  sedikit  dibandingkan  dengan kontrol positif. Gambaran  mikroskopis  kelompok ekstrak  etanol  kulit  batang  kelor  250
mg/KgBB/hari  (Gambar  1D)  terlihat memiliki sel yang lebih baik dibandingkan dengan  kelompok  kontrol  positif  dan kelompok  ekstrak  etanol  kulit  batang kelor  100  mg/KgBB/hari.  Pada  Gambar 1E  terlihat  adanya  gambaran  sel  hepar yang mengalami degenerasi parenkimatosa,  nampak  juga  sel  hepar yang mengalami degenerasi hidropik dan nekrosis  dengan  jumlah  yang  lebih sedikit  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol  positif  dan  kelompok  ekstrak etanol kulit batang kelor 100 mg/KgBB/hari.
Pengukuran  selanjutnya  dilakukan secara kuantitatif. Pengukuran dilakukan dengan  cara  menghitung  jumlah  sel hepar  yang  normal  (A),  sel  degenerasi parenkim  (B),  degenerasi  hidropik  (C), dan sel nekrosis (D) di setiap preparatnya.  Hasil  perhitungan  dapat dilihat pada Tabel 1. Pada Tabel 1 terlihat nilai  kelompok  dosis  ekstrak  etanol  kulit batang kelor 250 mg/KgBB memiliki nilai terendah  yaitu  1.12  diikuti  dengan kelompok kontrol negatif, kelompok dosis 500  mg/kgBB,  kelompok  kontrol  negatif, kelompok  dosis  100  mg/kgBB,  dan kelompok kontrol positif.
Semakin  mendekati  nilai  1,  maka semakin  banyak  jumlah  sel  hepar  yang normal.  Semakin  mendekati  angka  2, maka  semakin  banyak  jumlah  sel hepar yang  mengalami  degenerasi  parenkim. Semakin  dekat  dengan  angka  3,  maka semakin  banyak  jumlah  sel  hepar  yang mengalami degenerasi hidropik.
A B C D E

## Tabel 1. Hasil Perhitungan Skoring
Histopatologi Mandja Roenigk Kelompok Jumlah Sampel (n)* Rerata SD Kontrol Negatif (K1) 5 1.18 0.06 Kontrol Positif (K2) 5 1.66 0.18 Dosis 100 mg/KgBB (K3) 5 1.21 0.10 Dosis 250 mg/KgBB (K4) 5 1.12 0.04 Dosis 500 mg/KgBB (K5) 5 1.15 0.03 Semakin  mendekati  angka  4,
maka  semakin  banyak  jumlah  sel hepar yang  mengalami  nekrosis.  Data  pada Tabel  1  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  kulit  batang  kelor  memiliki  nilai skor  yang  lebih  kecil  dibandingkan dengan skor kontrol positif. . 3.3  Pengaruh Pemberian Efek Ekstrak Etanol Kulit Batang Kelor terhadap  Penurunan  Jumlah  Sel Hepar yang Nekrosis dan Pengaruh Peningkatan Dosis Ekstrak Etanol Kulit Batang Kelor
Data perhitungan selanjutnya diolah secara statistik untuk melihat perbedaan secara bermakna. Pertama dilakukan uji normalitas  dan  homogenitas.  Hasil  uji tersebut  menunjukkan  bahwa  data berdistribusi normal (p>0,05) dan homogen. Data kemudian diolah dengan
One Way Anova , diolah dengan Post Hoc Test Tukey.
Dari hasil perhitungan pada Tabel 2 didapatkan
nilai p<0,001 yang menunjukan  adanya  perbedaan  yang bermakna.  Hasil  perhitungan  tersebut menunjukkan adanya perbedaan bermakna dari kerusakan sel hepar dari setiap
kelompoknya.
Dikarenakan adanya  perbedaan,  maka  dilanjutkan
dengan  uji Post  Hoc  Test  Tukey ,  yang dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 2. Pengaruh Pemberian
Efek Ekstrak Etanol Kulit Batang Kelor terhadap Penurunan Jumlah Sel Hepar yang Nekrosis Kelompok N Nilai p K1 5 < 0,001* K2 5 K3 5 K4 5
K5 5 Total 25 Keterangan: Uji One Way Anova
Tabel  2  menunjukkan  adanya perbedaan yang bermakna antara ketiga kelompok  jika  memiliki  nilai  p<0,05 seperti  pada  kelompok  kontrol  negatif terhadap kelompok kontrol positif dengan nilai  p<0,001  menunjukkan  adanya perbedaan bermakna dari kerusakan sel hepar  antara  kedua  kelompok  tersebut. Kelompok kontrol negatif terhadap kelompok  dosis  100  mg/KgBB  tidak menunjukkan adanya perbedaan
bermakna  dari  kerusakan  sel  hepar kelompok  tersebut.  Kelompok  kontrol positif  terhadap  kelompok  dosis  100 mg/KgBB,  250  mg/KgBB  maupun  500 mg/KgBB  dengan  nilai  masing-masing sebesar  p<0,001  menunjukkan  adanya perbedaan bermakna dari kerusakan sel hepar antara kelompok tersebut.
Tabel 3 Pengaruh Peningkatan Dosis Ekstrak Etanol Kulit Batang Kelor
Kelompok K 1 K 2 K 3 K 4 K 5 K1 K2 K3
K4 K5
Ket: Bagian yang diarsir menunjukkan perbedaan bermakna antara kedua kelompok. Diolah dengan Post Hoc Test Tukey
Kelompok  dosis  100  mg/KgBB dibandingkan  dengan  kelompok  dosis 250 mg/KgBB memiliki nilai p=1 menunjukkan  tidak  adanya  perbedaan bermakna  kerusakan  sel  hepar  dari kedua  kelompok  tersebut.  Kelompok dosis 250 mg/KgBB dibandingkan dengan  kelompok  dosis  500  mg/KgBB memiliki  nilai  p=1  menunjukkan  tidak adanya perbedaan bermakna kerusakan sel hepar dari kedua kelompok tersebut. Perbandingan  kelompok  kontrol  negatif dengan  kelompok  dosis  500  mg/KgBB dengan nilai p=1 menunjukkan kerusakan  sel  hepar  yang  tidak  jauh berbeda.

## 4.  PEMBAHASAN

## 4.3  Pengaruh Ekstrak Etanol Kulit Batang Kelor
Sel  hepar  memiliki  kandungan lemak  sehingga  dapat  terjadi  kerusakan sel  hepar  akibat  adanya  peroksidasi lipid. [1] Salah  satu  penyebab  terjadinya peroksidasi  lipid  adalah  dengan  adanya paparan CCl 4 . [9] CCl 4 merusak sel hepar dengan  cara  merubah  CCl 4 menjadi triklorometil  (CCl 3 )  oleh  aktivasi  enzim sitokrom P450 yang akan menjadi radikal bebas  akan  berikatan  dengan  oksigen menjadi  triklorometil  peroksil  (CCl 3 O 2 )
yang  akan  menyebabkan  peroksidasi lipid. Produk peroksidasi akan mengganggu homeostatis Ca 2+
bersamaan  dengan  terjadinya  kematian sel hepar. [1]
Dari analisis data dan hasil skoring
Manja Roenigk dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol kulit batang kelor memiliki efek hepatoprotektor. Pernyataan tersebut  didukung  dengan  penelitian
Hugar  yang  mengatakan  bahwa  ekstrak etanol  kulit  polong  kelor  dengan  500 mg/KgBB  memiliki  efek  hepatoprotektor terhadap tikus yang diinduksi oleh CCl 4 . [3] Pada penelitian ini didapatkan nilai rerata  kelompok  kontrol  negatif  sebesar 1.18  yang  menunjukkan  rerata  nilai  dari sel  hepar  adalah  sel  yang  normal. Sedangkan  untuk  kelompok  kontrol positif  memiliki  nilai  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol negatif. Walaupun nilai kelompok kontrol
positif  masih  berkisar  1,  namun  hal tersebut  sudah  menunjukkan  adanya peningkatan  kerusakan,  di  mana  hal  ini terbukti  secara  mikroskopis  yang  yang ditunjukkan  dengan  adanya  berbagai tingkat  kerusakan  sel  hepar  pada sediaan.  Hal  ini  membuktikan  bahwa perbandingan  antara  kelompok  kontrol negatif  dengan  kelompok  kontrol  positif berbeda  secara  bermakna  dengan  nilai p<0,05.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan nilai  yang  berbeda  secara  bermakna antara  kelompok  kontrol  positif  dengan kelompok  dosis  100  mg/KgBB,  250 mg/KgBB maupun 500 mg/KgBB. Terbukti  bahwa  kelompok  dosis  100 mg/KgBB,  250  mg/KgBB,  dan  500 mg/KgBB tidak menunjukkan perbedaan yang bermakna dengan kelompok kontrol negatif.  Hal  tersebut  disebabkan  karena pada kelompok dosis 100 mg/KgBB, 250 mg/KgBB, dan 500 mg/KgBB mengandung  flavonoid,  steroid,  dan alkaloid yang diduga sebagai hepatoprotektor  sehingga  kandungan yang  bekerja  sebagai  antioksidan  dapat menurunkan radikal bebas yang mengakibatkan kerusakan pada hepar.
Kandungan flavonoid, steroid, dan alkaloid bekerja sebagai hepatoprotektor dengan mencegah terjadinya peroksidasi lipid  dengan  cara  membantu  aktivitas enzim-enzim  antioksidan  endogen. [14] Pernyatan tersebut didukung oleh penelitian  Robertino  bahwa  ekstrak etanol  kulit  batang  kelor  memiliki kandungan  aktif  yang  berperan  sebagai antioksidan  seperti  flavonoid,  steroid, dan alkaloid. [8]
Pada saat penelitian ini, ditemukan adanya  keterbatasan  penelitian  berupa adanya  kerusakan  sel  hepar  yang minimal  diakibatkan  pemberian  CCl 4 yang  kurang  optimal.  Maka  harus dilakukan  optimalisasi  dosis  CCl 4 agar mendapatkan hasil yang lebih baik.

## 5.  SIMPULAN
Ekstrak  etanol  kulit  batang  kelor menurunkan  jumlah  sel  hepar  yang mengalami  nekrosis  dan  ekstrak  etanol kulit  batang  kelor  dengan  dosis  100
mg/KgBB,  250  mg/KgBB,  dan  500 mg/KgBB memiliki efek hepatoprotektor.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Dalam  penyusunan  naskah  ini, penyusun  mendapatkan  bantuan  dalam bentuk  bimbingan,  arahan,  dukungan dan doa dari berbagai pihak. Oleh karena itu,  penyusun  ingin  menyampaikan terima kasih kepada Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, Linlin Haeni, dr., M.Biomed.  sebagai  Dosen  Pembimbing Utama, Emma Mardliyah, dr., M.Kes.sebagai Dosen Pembimbing Pendamping,  tim  penguji,  keluarga, rekan-rekan  seperjuangan  di  bagian Histologi  dan  semua  pihak  yang  telah membantu, memotivasi
dalam
penyusunan  penelitian  ini  yang  tidak dapat disebutkan satu-persatu.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Schiff,E. Schiff’s  Diseases  of  the
Liver. Piladelphia: Lippincott Williams
& Wilkins; 2007.
2. Subowo.  Biologi  Sel.  Jakarta:  CV Sagung Seto; 2011.
3. Nanjappaiah,  Hugar. Prophylatic and  Curative  Effects  of  Moringa oleifera Lam Pods in CCl 4 Damaged Rat  Liver .  Indian  Journal  of  Natural Products and Resources 2012;3(4):541. 4. Kartno. Tingkat Manfaat, Keamanan, dan Efektifitas Tanaman Obat dan Obat Tradisional . Karanganyar: Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat  Tradisional,  Badan  Penelitian dan Pengembangan Kesehatan
Departemen Kesehatan RI; 2008; 5- 25. 5. World Health Organization. Traditional Medicine. < http://www.who.int/mediacentre /factsheets/2003/fs134/en/ > 6. Kumar,P. Hepatoprotective  Studies on  Aerial  Parts  of  Moringa  oleifera Lam. on Carbon tetrachloride induced  liver  cell  damage  in  albino rats .  Annals  of  Biological  Research
2010;1(1):27-35.
7. Putri,Y. Pemberian  Ekstrak  Kulit Batang  Kelor  Terhadap  Gambaran Mikroskopis  Ginjal  Tikus  yang diinduksi Aloksan . Indonesia Medicus Veterinus 2014 3(2) : 142- 146. 8. Extract Skin Stem Moringa (Moringa oleifera) . Indonesia Medicus Veterinus 2015;4(1):71-79. 9. Ruqiah,G. Pengaruh  Pemberian Karbon Tetraklorida Terhadap Fungsi  Hati  Dan  Ginjal  Tikus. Makara, Kesehatan, 2007;11(1):11- 16
10.  Department  Of  Health  and  Human Services.  Public  Health  Service. Agency  for  Toxic  Substances  and
Disease Registry . Toxicological Profile  for  Carbon  Tetrachloride.
U.S.
11.  Klaassen,C. Casarett  &  Doull’s Toxicology  The  Basic  Science  of Poisons  8 th edition .  China:  China Translation & Printing Services, Ltd;
2013. 12.  Leary,S. AVMA  Guidelines  for  the Euthanasia of Animals . Schaumburg:  American  Veterinary Medical Association; 2013.p. 49.
13.  Wojciech,P. Histology  A  Text  And Atlas .  7 th ed.  Philadelpia  Baltimore New  York  London  Buenos  Aires Hong  Kong  Sydney Tokyo: Wolters Kluwer.p.626-638. 14.  Nijveldt,J.  Flavonoids: A  Review  of Probable  Mechanism  of  Action  and Potential  Apliction  1’2’3 . The American Journal of Clinical Nutrition 2001;74(4): 418-425