Aktivitas  Protease dan  Komposisi Proksimat Tubuh  Ikan Sidat ( Anguilla bicolor Mcclelland) pada Kondisi Puasa dan Pemberian Pakan Kembali

## Untung Susilo, Nuning Setyaningrum dan Farida Nur Rachmawati
Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto Jl. Dr. Soeparno No. 63 Telp. (0281) 638794, Grendeng Purwokerto 53122 Email: susilo.utg@gmail.com

## Diterima Oktober 2012 disetujui untuk diterbitkan Mei 2013

## Abstract
Protease  activity  and  body  proximate  composition  of  eel, Anguilla  bicolor McClelland., under  starvation  and  refeeding  conditions  with  three  treatments  and  four  replications  in randomized completely design has been evaluated. The result showed that the protease activity of  eel  was  no  significant  different  (P>.05)  between  treatment,  but  body  proximate  compositio n has  significant  differences  (P<.05),  especially  in  protein  and  lipid  contents  at  starvation condition. It can be concluded that the eel protease activity did not change under starvation and refeeding condition, but the lipid content decreased at starvation condition.
Key words : eel, protease, proximate, starvation

## Abstrak
Aktivitas protease dan komposisi proksimat tubuh ikan sidat, Anguilla bicolor McClelland., dibawah kondisi pemuasaan dan pemberian pakan kembali telah dievaluasi menggunakan tiga perlakuan  dan  empat  ulangan  dalam  rancangan  acak  lengkap.  Hasil  penelitian  menunjukka n bahwa  aktivitas  protease  ikan  sidat  tidak  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  diantara perlakuan  (P>.05), namun  komposisi proksimat tubuh menunjukkan perbedaan yang signifikan (P<.05)  terutama  kadar  protein  dan  lemak  pada  kondisi  pemuasaan.  Kesimpulan,  aktivitas protease tidak mengalami perubahan pada kondisi pemuasaan dan pemberian pakan kembali, namun  kadar  lemak  tubuh  ikan  sidat  mengalami  penurunan  ketika  berada  pada  kondisi pemuasaan.
Kata kunci : ikan sidat, protease, proksimat, pemuasaan

## Pendahuluan
Kondisi  perubahan  keberadaan pakan  sering  dihadapi  oleh  hewan, termasuk ikan, selama  siklus  hidupnya. Kondisi  ini  dapat  terjadi  baik  di lingkungan alami maupun pada  kondisi budidaya.  Pada kondisi budidaya, perubahan  keberadaan  pakan  terjadi karena diterapkannnya strategi pemuasaan  dan  pemberian  pakan. Beberapa  penelitian  berkaitan  dengan pemuasaan dan pemberian pakan telah membuktikan  bahwa  pemuasaan  dan pemberian pakan kembali dapat memicu munculnya pertumbuhan kompensatori seperti yang terjadi diantaranya  pada  ikan  gibel  carp  (Zhu et  al. ,  2004),  ikan  gurami  (Yuwono et al. ,  2008),  kerapu  bebek  (Yuwono et al. ,  2007)  dan  perubahan  komposisi
proksimat  tubuh  pada  ikan  lele  kanal, Ichtalurus  punctatus (Li et  al. ,  2005) dan  ikan Paralichthyes  olivaceus (Cho et al. , 2006; Cho et al. , 2007) Pertumbuhan  komponsatori  yang dipicu  oleh  pemuasaan  dan  pemberian pakan  kembali,  seringkali  juga  selaras dengan  perubahan  fisiologi  pada  ikan yang mengalami pertumbuhan kompensatori. Perubahan fisiologi yang dimaksud  adalah  perubahan  aktivitas enzim  digesti  ikan.  Beberapa  studi aktivitas enzim digesti berkaitan dengan  penerapan  pemuasaan  dan pemberian  pakan  kembali  juga  telah dilakukan.  Pada  ikan  lele, Clarias gariepinus, yang  tidak  diberi  pakan memperlihatkan  perubahan  yang  tidak signifikan  dalam aktivitas enzim digesti, baik protease gastrik, protease pankreas  dan amilase, tetapi ikan yang
diberi pakan merespon dengan meningkatkan  level  enzim  digesti  (Uys et  al. ,  1987).  Pada  ikan sturgeon , Acipenser naccarii , dan trout , Onchorhynchus myskiss , memper- lihatkan respon berbeda, sebab setelah pemuasaan  aktivitas  protease  dan lipase  menurun  lambat,  namun  tidak untuk  amilase  (Furne et  al. ,  2008). Pada  ikan sea  bream , Sparus  aurata , pembatasan  pakan hingga  50  % selama  dua  hari  dan  pemberian  pakan lagi selama dua hari, juga menunjukkan aktivitas  protease  total  lebih  tinggi  dari pada  ikan  yang  tidak  memperoleh pembatasan  pakan  (Eroldoğan et  al. ,
2008).  Respon  berbeda  dijumpai  baik pada ikan gurami, Osphronemus gouramy Lac.,  maupun  ikan  patin, Pangasius sp. Pada kedua spesies ikan ini  yang  memperoleh  daur  pemuasaan satu  dan  dua  hari  dalam  seminggu menghasilkan  aktivitas  enzim  digesti baik  protease  maupun  amilase  yang tidak  berbeda  dengan  ikan  yang  diberi pakan setiap  hari (Yuwono et al. , 2008;
Susilo et  al. ,  2009).  Studi  aktivitas enzim pada berbagai metode pembatasan  pakan  ini  menunjukkan bahwa perubahan keberadaan pakan di lingkungan hidupnya juga menyebabkan perbedaan respon
aktivitas  enzim  yang  berkaitan  dengan proses  digesti.  Oleh  karena  itu  tujuan penelitian  ini  adalah  ingin  mengetahui aktivitas protease dan komposisi proksimat  tubuh  ikan  sidat  ( Anguilla bicolor McClelland) pada  kondisi puasa dan pemberian pakan kembali.

## Materi dan Metode
Objek  penelitian  yang  digunakan adalah  ikan  sidat  sejumlah  56  ekor dengan berat tubuh rata-rata
30,9±11,61  g/ekor  yang  diperoleh  dari pengepul  ikan  sidat  di  Kemranjen Banyumas. Penelitian dilakukan selama empat  bulan  dari  bulan  Juni  2012 hingga September 2012 di Laboratorium  Fisiologi  Hewan  fakultas Biologi Unsoed dan Laboratorium Riset
Unsoed, Purwokerto.
Penelitian dilakukan secara eksperimental  menggunakan  ranca- ngan  dasar  berupa  rancangan  acak lengkap  (RAL)  dengan  3  macam perlakuan  dan  4  ulangan.  Perlakuan yang dicobakan meliputi: (1.)  ikan sidat yang  tidak  dipuasakan;  (2.)  ikan  sidat yang  dipuasakan  selama  tujuh  hari  ; (3.) ikan sidat yang memperoleh pakan kembali setelah sebelumnya di- puasakan  selama  tujuh  hari.    Pada penelitian  ini  aktivitas  enzim  protease diukur  pada  hari  ketiga  dan  ketujuh ketika ikan dipuasakan serta hari ketiga dan  ketujuh  saat  pemberian  pakan kembali.  Komposisi  proksimat  tubuh ikan sidat juga diukur pada hari  ketujuh ketika  ikan  dipuasakan  dan  diberi pakan kembali.
Sebelum digunakan untuk
penelitian  ikan  sidat  diaklimasi  selama dua  minggu  di  laboratorium  Fisiologi Hewan Fakultas Biologi, Unsoed.
Percobaan  perlakuan  pemuasan  dan pemberian  pakan  kembali  dilakukan selama  tiga  minggu,  dan  selama percobaan  ikan  kontrol  dan  yang berada pada pemberian pakan  kembali diberi  pakan  ikan  rucah  pada  jam 07.00-08.00  wib  dan  jam  17.00-18.00 wib.  Jumlah  pakan  diberikan  sebanyak 3 % dari berat  biomasa ikan uji.
Pada  hari  ketiga  dan  ketujuh pada  ikan    dipuasakan  dan  yang berada  pada  fase  pemberian  pakan kembali,  disampling  untuk  memperoleh saluran  digesti  ikan.  Saluran  digesti ikan  didapat  dengan  cara  melakukan pembedahan  pada  ikan  uji.  Saluran digesti  yang  diperoleh  selanjutnya dihancurkan menggunakan homo- geniser  listrik  dalam  larutan    50    mM Tris-HCl  dingin  dengan  rasio  1  :  4. Homogenat  yang  diperoleh  kemudian disentrifugasi  menggunakan  sentrifuse bersuhu  4 o C  pada  kecepatan  10000 rpm  selama  10  menit,  dan  supernatan yang diperoleh siap digunakan untuk uji aktivitas  enzim  (Natalia et  al. ,  2004).
Kadar  protein  supernatan  ditentukan dengan  metode  Lowry et  al. ,  (1951 dalam Furne et al. , 2005),
menggunakan kasein sebagai standard. Aktivitas protease diukur menggunakan  metode  hidrolisis  kasein
(metode Walter, 1984 dalam Hidalgo et al. ,  1999).  Uji  dilakukan  menggunakan buffer  0,1  M  Glisin-HCl  (pH  2-3)  dan Na2HPO4 (pH 8-9) pada 25 o C. Reaksi enzim  dimulai  dengan  mencampurkan 1  %  (w/v)  kasein  dalam  air  (0,3  ml), buffer  (0,35  ml)  dan  sampel  enzim (0,10  ml)    dan  diinkubasi  selama  60 menit  pada  37 o C.  Reaksi  dihentikan dengan  penambahan  0,75  ml  dari  8  % (w/v) asam trichloroacetat (TCA). Setelah  disimpan  dalam  refrigerator selama  minimal  satu  jam  campuran reaksi  disentrifugasi  pada  kecepatan 6.000 rpm selama 10 menit. Absorbansi dicatat  pada  panjang  gelombang  280 nm.  Tirosin  digunakan  sebagai  standar dan satu unit aktivitas enzim didefinisikan  sebagai  jumlah  enzim yang  diperlukan  untuk  mengkatalisa pembentukan  1  µ  g  tirosin  permenit. Untuk  kontrol,  TCA  ditambahkan  ke ekstrak  sebelum  ditambah  substrat. Jumlah tirosin yang dilepas pada  uji ini ditentukan dengan kurva standar tirosin.  Aktivitas  protease  didefinisikan sebagai jumlah µg tirosin yang diproduksi  permenit  per  mg  protein ekstrak (Natalia et al. , 2004). Pengukuran  komposisi  proksimat tubuh  ikan  uji    dilakukan  pada  hari ketujuh  untuk  ikan  kontrol,  dipuasakan dan pemberian pakan kembali. Komposisi proksimat tubuh yang diukur meliputi  parameter  kadar  air,  protein, lemak,  BETN,  kadar  abu.  Kadar  air diukur  dengan  cara  pemanasan  dalam oven  pada  suhu  105 o C  selama  30 menit  (AOAC,  1970),  kadar  protein diukur  dengan  metode  semi-mikro Kjedahl  (AOAC,  1970),  kadar  lemak diukur  dengan  metode Soxhlet (AOAC, 1970),  kadar  abu  ditentukan  dengan metode  pamanasan  pada  suhu  500  – 600 o C (AOAC, 1970).
Data aktivitas protease dan komposisi  proksimat  tubuh  ikan  sidat yang  diperoleh  pada  penelitian  ini dianalisa  dengan one  way  analysis  of
variance  (ANOVA) (Steel  and  Torrie, 1981)

## Hasil dan Pembahasan
Hasil pengukuran aktivitas protease  ikan  sidat  yang  memperoleh perlakuan  pemuasaan  dan  pemberian pakan  kembali  tertera  pada  Gambar  1. Pada  Gambar  1.  terlihat  bahwa  pada ikan  yang  diberi  pakan  terus  menerus (kontrol)  aktivitas  protease    sebesar 19,52  U/menit  pada  buffer  Glisin-HCl (pH  2-3)  hingga  26,70  U/menit  pada buffer  Na2HPO4  (pH  8-9).  Pada  ikan yang  dipuasakan  selama  tiga  hari, aktivitas  proteasenya  sebesar  17,06 U/menit pada buffer Glisin-HCl (pH 2-3) hingga  23,75  U/menit  pada  buffer Na2HPO4  (pH  8-9),  sedangkan  pada ikan  yang  dipuasakan  selama  tujuh hari,    aktivitas  proteasenya  15,48 U/menit pada buffer Glisin-HCl (pH 2-3) hingga  22,04  U/menit  pada  buffer Na2HPO4  (pH  8-9).  Pada  ikan  yang berada  pada  fase  pemberian  akan kembali atau refeeding tiga hari memiliki  aktivitas  protease  sebesar 14,05  U/menit  pada  buffer  Glisin-HCl (pH  2-3)  hingga  22,00  U/menit  pada buffer  Na2HPO4  (pH  8-9),  sedangkan pada  kondisi refeeding tujuh  hari memiliki  aktivitas  protease  sebesar 17,33  U/menit  pada  buffer  Glisin-HCl (pH  2-3)  hingga  20,07  U/menit  pada buffer Na2HPO4 (pH 8-9).
Hasil analisis statistik juga menunjukkan  tidak  adanya  perbedaan yang siginfikan (P>.05) diantara perlakuan  stres  nutrisi  dan  buffer  yang digunakan.  Makna  biologis  yang  dapat disimpulkan  adalah  aktivitas  protease pada  kondisi  tidak  diberi  pakan  dan pemberian pakan kembali tidak berbeda dengan aktivitas protease ikan yang  diberi  pakan  secara  normal (kontrol).  Namun,  aktivitas  protease ikan pada kondisi basa (buffer Na2HPO4)  relatif  lebih  tinggi  dari  pada aktivitas  protease  pada  kondisi  asam (buffer  Glisin-HCl),  jadi  tampaknya aktivitas  tripsin like lebih  tinggi  dari pada  aktivitas  pepsin like. Secara
umum hasil pengukuran aktivitas protease  pada  penelitian  ini  juga  lebih tinggi  dari  pada  yang  dijumpai  pada belut  sawah, Monopterus  albus Zuiew (Susilo et al. , 2012), benih ikan gurami, Osphronemus  gouramy Lac.  (Susilo et al. ,  2012),  ikan carp dan goldfish (Hidalgo et  al. ,  1999),  arwana  (Natalia
et  al. ,  2004),  karnivora Acipenser accarii dan Oncorhynchus  mykiss (Furne et al. , 2005), namun masih lebih rendah  dari  aktivitas  protease  yang dijumpai  pada  ikan  gurami  dengan berat  tubuh  rata-rata  170,17  g/ekor (Susilo et al. , 2012).
Gambar 1. Aktivitas protease ikan sidat yang dipaparkan pada kondisi pemuasaan dan pemberian pakan kembali.
Figure  1. Protease activity of eel under starvation and refeeding
Respon  aktivitas  protease  pada ikan sidat  ketika dipuasakan dan diberi pakan  kembali  pada  penelitian  ini berbeda  dengan  respon  ikan  lele  ikan seabrem,  Sparus  aurata  dan belut sawah terhadap pemuasaan. Pada ikan lele, Clarias  gariepinus ,  pemberian pakan  kembali,  setelah  sebelumnya mengalami  kondisi  ketiadaan  pakan, menyebabkan peningkatan aktivitas protease  (Uys et  al. ,  1987).  Pada  ikan seabream ,  pemuasaan  selama  satu hari  kemudian  refeeding  selama  dua hari  menghasilkan  penurunan  aktivitas protease (Eroldogan et al. , 2008). Pada belut sawah, Monopterus albus Zuiew., kondisi ketiadaan pakan tidak menyebabkan penurunan aktivitas protease,  namun  pemberian  pakan kembali menghasilkan aktivitas protease yang lebih tinggi (Susilo et al. , 2012),    namun  hasil  penelitian  pada ikan  sidat  ini  tidak  berbeda  dengan yang  diteliti  oleh  Susilo et  al. ,  (2009) pada ikan patin dan Aliyah et al. (2012)
pada ikan lele dumbo, Clarias gariepinus .  Perbedaan  spesies  dan strategi  pemuasaan  dan  pemberian pakan  kembali  pada  penelitian  ini dengan  penelitian  sebelumnya  diduga menjadi  penyebab  perbedaan  hasil yang diperoleh.
Hasil  pengukuran    komposisi proksimat tubuh ikan sidat tertera pada Gambar  2.  Kadar  protein  tubuh  pada ikan  sidat  yang  diberi  pakan  secara normal  adalah  49,97  %,  pada  kondisi puasa  kadar  protein  tubuhnya  adalah 56,32  %,  sedangkan  pada  kondisi pemberian pakan kembali kadar protein tubuhnya adalah 48,39 %. Kadar lemak tubuh  ikan  yang  diberi  pakan  secara normal  adalah  37,90  %,  pada  kondisi puasa  kadar  lemak  tubuhnya  adalah 25,41  %,  sedangkan  pada  kondisi pemberian  pakan  kembali  kadar  lemak tubuhnya  adalah  37,36  %.  Kadar  serat tubuh  ikan  yang  diberi  pakan  secara normal  adalah  1,08  %,  pada  kondisi puasa  kadar  lemak  tubuhnya  adalah
1,20  %,  sedangkan  pada  kondisi pemberian  pakan  kembali  kadar  lemak tubuhnya  adalah  2,79  %.    Kadar  abu tubuh  ikan  yang  diberi  pakan  secara normal  adalah  6,41  %,  pada  kondisi puasa  kadar  lemak  tubuhnya  adalah 7,54  %,  sedangkan  pada  kondisi pemberian  pakan  kembali  kadar  lemak
tubuhnya adalah  4,48 %.   Kadar BETN tubuh  ikan  yang  diberi  pakan  secara normal  adalah  6,07  %,  pada  kondisi puasa  kadar  lemak  tubuhnya  adalah 9,53  %,  sedangkan  pada  kondisi pemberian  pakan  kembali  kadar  lemak tubuhnya adalah 6,74 % (Gambar 2.).
Gambar  2.  Komposisi  proksimat  tubuh  ikan  sidat  yang  dipaparkan  pada  kondisi pemuasaan dan pemberian pakan kembali.
Figure    2.    Body  proximate  composition  of  eel  under  starvation  and  refeeding conditions.
Hasil analisis statistik juga menunjukkan  adanya  perbedaan  yang signifikan  (P<.05)  diantara  perlakuan yang  diterapkan  terutama  untuk  kadar protein, lemak, serat dan abu, sedangkan kadar BETN
tidak menunjukkan  adanya  perbedaan  yang signifikan  (P>.05)  diantara  perlakuan yang diterapkan. Fenomena perubahan komposisi  proksimat  yang  sama  juga dijumpai pada ikan lele kanal , Ictalurus punctatus (Li et  al. ,  2005), juvenile flounder,  Paralichthys  olivaceus (Cho, 2005),  ikan Cirrhinus  mrigala (Iqbal et al. ,  2006)  dan  GET  Excel  Tilapia, Orechromis niloticus (Roa dan Vicente, 2009).Perlakuan pemuasaan dan pemberian  pakan  kembali  tampaknya menyebabkan perubahan berupa peningkatan  kadar  protein  ketika  ikan sidat dipuasakan, namun menyebabkan penurunan  kadar  lipid.  Kadar  protein dan lipid ikan sidat mengalami pemulihan ketika ikan berada pada fase pemberian pakan kembali. Jadi tampaknya ikan sidat melakukan
mobilisasi cadangan makanannya, terutama lipid, selama periode pemuasaan  untuk  digunakan  sebagai sumber energi penyokong metabolisme dasar  dan  pemeliharaan  tubuh.  Hal  ini terlihat  dari  menurunnya  kadar  lipid selama  periode  pemuasaan,  namun demikian kadar lipid mengalami pemulihan ketika ikan berada pada fase pemberian pakan kembali.

## Simpulan
Aktivitas protease ikan sidat tidak mengalami  perubahan  ketika  berada pada  kondisi  puasa  dan  pemberian pakan kembali, namun kadar lipid tubuh mengalami  penurunan  ketika  berada pada  kondisi  puasa  dan  mengalami pemulihan  ketika  berada  pada  kondisi pemberian pakan kembali.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terimakasih  disampaikan kepada Lembaga Penelitian dan Pengabdian  Masyarakat  Unsoed  yang
telah  membantu  pendanaan  penelitian ini melalui
proyek kompetitif Fundamental  tahun  II  DIPA  Unsoed untuk tahun anggaran 2012.

## Daftar Pustaka
Afiyah,  H.N.,  U.  Susilo  dan  F.  N.
Rachmawati, 2012. Aktivitas Enzim Digesti dan Efisiensi Pakan  pada  Ikan  Lele  ( Clarias gariepinus ) yang Diinduksi dengan  Daur  Pemuasaan  dan Pemberian Pakan Kembali. Makalah Seminar Nasional Taksonomi Fauna IV dan Konggres  MZI  I  di  Fakultas Biologi Unsoed Purwokerto, tgl 7-
8 November 2012.
AOAC,  1970.  Official  Methods  of Analysis  of  the  Association  of Official Analytical Chemist. Association  of  Official  Analytical Chemist, Washington, DC.
Cho, S.H., 2005. Compensatory growth of  juvenile  flounder,  Paralichthys olivaceus L.,and changes  in biochemical composition and body  conditions  indices  during starvation  and  after  refeeding  in winter  season. Journal  of  the World  Aquaculture  Society .  36, 4:508-514.
Cho, S. H., S. M.Lee; B. H. Park, , S. C.
Ji,  J.  Lee,;  J.  Bae,  and  S.  Y.  Oh, 2006.  Compensatory  growth  of Juvenile Olive Flounder, Paralichthys  olivaceus, L.,  and Changes in Proximate Composition  and  Body  Condition Indices  during  Fasting  and  after
Refeeding  in  Summer  Season. Journal  of  the  World  Aquaculture Society . 37, 2:168-174.
Cho, S.H., S.M. Lee, B.H. Park, S.C. Ji, C.Y.  Choi,  J.H.  Lee,  Y.C.  Kim, J.H.  Lee  &  S.Y.  Oh,  2007.  Effect of  Daily  Feeding  Ration  on Growth  and  Body  Composition  of Subadult Olive Flounder, Paralichthys  olivaceus, Fed  an
Extruded Diet during the Summer
Season, Journal  of  the  World
Aquaculture  Society .  38  (1):  68- 73.
Eroldoğan, O.T., C. Suzer, O.
Taşbozan,  and  S.  Tabakoğlu,
2008.  The  Effects  of  Rate- restricted  Feeding  Regimes  in Cycles  on  Digestive  Enzymes  of
Gilthead Sea-bream, Sparus aurata . Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 8
: 49 – 54.
Furne,  M.C.  Hidalgo,  A.  Lo´pez,  M. Garcı´a-Gallego,  A.E. Morales, A. Domezain,  J.  Domezaine´,  A. Sanz,  2005.  Digestive  Enzyme Activities  in  Adriatic  Sturgeon Acipenser  naccarii and  Rainbow Trout Oncorhynchus  mykiss .  A Comparative  Study, Aquaculture . 250: 391– 398
Furné, M. , G.M. Gallego, M.C. Hidalgo, A.E.  Morales,  A.  Domezain,  J. Domezaine,  and  A.  Sanz.  2008.
Effect of Starvation and Refeeding  on  Digestive  Enzyme
Activities  in  Sturgeon  ( Acipenser naccarii ) and Trout ( Oncorhynchus mykiss ).
Comparative  Biochemistry  and Physiology, Part A. 149(4); 420 – 425.
Hidalgo,  M.C.,  E.  Urea,  and  A.  Sanz, 1999.  Comparative  Study  of Digestive  Enzymes  in  Fish  with Different Nutritional Habits. Proteolytic and Amylase Activities. Aquaculture .  170  :  267 – 283.
Iqbal,  F.,  M.  Ali,  K.  Umer  and  S.A.
Rana,  2006.  Effect  of  Feed
Cycling  on  Specific  Growth  rate,
Condition Factor, Body Composition and Rna/Dna Ration of Cirrhinus  mrigala . J.  Appl.  Sci. Environ. Mgt . 10(2): 129-133.
Li,  M.  H.,  E.  H.  Robinson  &  B.  G.
Bosworth, 2005. Effects of Periodic  Feed  Deprivation  on
Growth, Feed Efficiency, Processing Yield, and Body Composition  of  Channel  Catfish Ictalurus punctatus. Journal of the World Aquaculture  Society . 36, 4: 444-453.
Natalia,  Y.,  R.  Hashim,  A.  Ali,  dan  A. Chong,  2004.  Characterization  of Digestive Enzymes in a Carnivorous Ornamental Fish, the Asia  Bony  Tongoe, Scleropages formosus (Osteoglossidae). Aquaculture . 233 : 305 – 320. Roa,  R.L.  and  H.J.  Vicente,  2009. Compensatory  Weight  Gain  and Muscle Tissue Biochemical Composition of GET Excel Tilapia ( Oreochromis niloticus ) Juveniles. Journal of Environment and Aquatic  Resources.  1(1):  99  – 111.
Steel,  R.G.D.  and  J.H.  Torrie,  1981.
Principles  and  Procedures  of Statistic  a  Biometrical  Approach2 nd. Mc Graw Hill Book Company,
Singapore.
Susilo,  U.,  Yuwono,  E.  dan  F.N. Rachmawati, 2009. Status Fisiologi Pada Pertumbuhan Kompensatori yang Diinduksi dengan Pemuasaan Secara Periodik Untuk Optimasi  Produksi Ikan Patin, Pangasius sp.. Laporan Penelitian (tidak dipublikasi), Fakultas Biologi Universitas  Jenderal  Soedirman,
Purwokerto.
Susilo,  U.,  E.  Yuwono  dan  F.N. Rachmawati, 2012a. Aktivitas Protease  dan  Amilase  Digesti benih  ikan  urami, Osphronemus goura my Lac. Makalah Seminar Nasional Indo Aqua-Fita . 8-11 Juni 2012, Makasar, Indonesia. Susilo, U., E. Yuwono, F.N.
Rachmawati  and  S.  Priyanto, 2012b.  Protease  and  Amylase
Activities  in  Giant  Gouramy, Osphronemus gouramy Lac. With Different Size as Basic Information  to  Feed  Formulation. Proceding International Conference of Aquaculture Indonesia .  Pp.  157-161.  8-9 December 2012, Semarang, Indonesia.
Susilo,  U.,  N.  Setyaningrum  dan  F.N.
Rachmawati, 2012c. Aktivitas Protease  Digesti  Belut  Sawah,
Monopterus  albus Zuiew.,  Serta Responnya terhadap Stres Nutrisi. Prosiding Seminar Nasional Tahunan IX Hasil Penelitian Perikanan dan Kelautan  Tahun  2012 . Jilid  I. Budidaya  Perikanan. 14  Juli 2012, Jurusan Perikanan Fakultas  Pertanian,  UGM.  GN- 08: 1-6
Uys,  W.,  T.  Hecht,  and  M.  Walters, 1987. Changes in Digestive Enzyme  Activities  of Clarias gariepinus (Pisces  :  Claridae) after  Feeding. Aquaculture .  63(1- 4) : 243 -250.
Yuwono,  E.,  Sukardi,  P  &  Sulistyo,  I, 2007,  Compensatory  Growth  and Feed  Utilization  of  Humpback Grouper Cromileptes altivelis Receiving Preset Period of Unfed- Fed Cycle, Biosfera 24 (1): 1-9.
Yuwono,  E.,  Sukardi,  P  &  Susilo,  U., 2008.  Kondisi  Fisiologis  Pada Pertumbuhan  Kompensatori  yang Diinduksi  Dengan  Pembatasan Pakan  Sebagai  Upaya  Optimasi Produksi  Ikan  Gurami.  Tahun  I. Laporan  Penelitian  Insentif  Riset Dasar,  KNRT.  Fakultas  Biologi Universitas  Jenderal  Soedirman, Purwokerto.
Zhu, X., S.  Xie, Z.  Zou, W. Lei, Y. Cui, Y. Yang and R. J. Wootton, 2004. Compensatory  growth  and  food consumption in gibel carp, Carrassius  auratus  gibelio and Chinese longsnout catfish,
Leiocassis longirostris, experiencing cycles of feed deprivation and
re-feeding.
Aquaculture 241: 235-247.