## SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK BIJI
ADAS ( Foeniculum vulgare ) MENGGUNAKAN METODE DPPH
Idza N. Sastrawan 1) , Meiske Sangi 1) , Vanda Kamu 1)
1) Program Studi Kimia FMIPA Universitas Sam Ratulangi Jl. Kampus Unnsrat, Manado 95115 e-mail: dhiya_28@ymail.com ; meiskesangi@gmail.com ; vandakamu05@gmail.com

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  skrining  fitokimia  dan  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  biji adas. Tujuan dari penelitian ini yaitu melakukan skrining fitokimia untuk  mengetahui kandungan senyawa  alkaloid,  triterpenoid  dan  steroid,  flavonoid,  tannin,  saponin  dan  menetukan  aktivitas antioksidan  dari  ekstrak  biji  adas.  Skrining  Fitokimia  untuk  alkaloid  ditentukan  dengan menggunakan  pereaksi  Mayer,  Dregendorff,  Wagner.  Triterpenoid  dan  steroid  ditentukan menggunakan Mg bubuk. Senyawa tannin ditentukan dengan larutan FeCl 3 1%. Senyawa saponin ditentukan  menggunakan  aquades.  Ekstrak  biji  adas  diperoleh  dengan  metode  soxhletasi menggunakan  pelarut  petroleum  eter  dan  uji  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode 1-1-difenil-2-pikrihidrazil  (DPPH).    Hasil  penelitian  menunjukan  kandungan  senyawa  kimia  biji adas  positive  mengandung  senyawa  falvonoid,  tannin  dan  saponin,  sedangkan  untuk  senyawa alkaloid,  triterpenoid  dan  steroid  memberikan  hasil  yang  negatif.  Aktivitas  antioksidan  dengan 1000;  2000;  3000;  4000;  5000  ppm,    memberikan  hasil  berturut-turut  yaitu  48.99  %,  33.92  %, 5.93  %,  21.23  %,  6.40  %.  Aktivitas  antioksidan  biji  adas  tertinggi  terdapat  pada  konsentrasi 1000  ppm  dengan  hasil  48.99  %.  Biji  adas  memiliki  persen  aktivitas  antioksidan  yang  baik, sehingga dapat didigunakan sebagai salah satu sumber antioksidan alami.
Kata kunci : Antioksidan, Biji adas, DPPH
PHYTOCHEMICAL SCREENING AND ANTIOXIDANT ACTIVITY TESTING OF FENNEL SEED EXTRACT ( Foeniculum vulgare ) USING THE DPPH METHOD

## ABSTRACT
Has done research on phytochemical screening and testing fennel seed extract antioxidant activity. The  purpose  of  this  study  is  to  determine  the  phytochemical  screening  compounds  content  of alkaloids,  triterpenoids  and  steroids,  flavonoids,  tannins,  saponins  and  determine  the  antioxidant activity  of  extracts  of  fennel  seeds.  Phytochemical  screening  for  alkaloids  was  determined  using reagent  Mayer,  Dregendorff,  Wagner.  Triterpenoids  and  steroids  were  determined  using  Mg powder.  Tannin  compounds  determined  with  1%  FeCl3  solution  and  saponin  determined  using distilled  water.  Fennel  seed  extract  obtained  by  the  method  soxhletasi  using  petroleum  ether solvent  and  antioxidant  activity  assay  using  method  1-1-diphenyl-2-pikrihidrazil  (DPPH). Research  has  been  done  showing  the  chemical  content  of  fennel  seeds  contain  compounds falvonoid  positive  ,  tannins  and  saponins  .  Antioxidant  activity  with  1000  ppm  ,  2000  ppm, 3000 ppm , 4000 ppm , 5000 ppm , respectively yield is 48.99 % , 33.92 % , 5.93 % , 21.23 %, 6.40 %. The highest antioxidant activity of fennel seeds contained 1000 ppm with 48.99 % result. Fennel seeds have a good percent antioxidant activity , so it can didigunakan as a source of natural antioxidants.
Keywords : Antioxidants, Fennel seeds, DPPH

## PENDAHULUAN
Di  Indonesia  tanaman  adas  telah dibudidayakan  sebagai  tanaman  bumbu  dan tanaman  obat.  Adas  menghasilkan  minyak
adas,  yang  merupakan  hasil  sulingan  dari serbuk  buah  adas  yang  masak  dan  kering, sedangkan  untuk  daun  adas  kebanyakan dimasak  untuk  dijadikan  sayur.  Minyak atsiri  yang  terkandung  dalam  biji  adas
merupakan  salah  satu  senyawa  aktif  bahan dasar pembuatan obat, disamping itu minyak atsiri  adas  juga  dapat  dijadikan  sebagai bahan  baku  industry  minyak  telon.  Aroma wangi  yang  dihasilkan  digunakan  sebagai bahan yang memperbaiki rasa, mengharumkan  ramuan  obat  dan  makanan (Kridati, et al., 2012) .
Dari pengujian  yang telah  dilakukan oleh  Suhendra  dan  Arnata  (2009),  skrining fitokimia  kadar  total  fenol  ekstrak  bubuk adas  ditentukan  dengan  metode folin CiocalteuPhenol memberikan  hasil  positif dengan  2  jenis  pelarut.  Dimana  total  fenol yang  diperoleh  menggunakan  etil  asetat lebih  besar  dibandingkan  dengan  pelarut etanol.  Penelitian  terhadap  kandungan  dari minyak  biji  adas  menurut  Inneke  (1995), dari  kromatogram  kromatografi  gas  (GC) telah  diidentifikasi  14  macam  komponen penyusun  minyak  biji  adas,  yaitu  golongan monoterpen,  phenol,  dan  golongan  keton. Yang  termasuk  golongan  phenol  adalah anetol  dan  iso  anetol  58.52%;  golongan monoterpen  terdiri  dari -pinen  3%, camphene 0.33%, α-limonene 3.5%;
sedangkan  golongan  keton  adalah            d- camphore 0.39%, fenchone 26.7%.
Komponen  kimia  yang  berperan sebagai  antioksidan  adalah  senyawa  fenolik dan polifenolik. Senyawa-senyawa golongan tersebut  banyak  terdapat  di  alam,  terutama pada buah-buahan dan rempah yang memiliki  kemampuan  menangkap  radikal bebas.  Salah  satu  metode  yang  digunakan dalam  menguji  aktivitas  antioksidan  yaitu metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Metode  pengujian  ini  merupakan  metode yang  konvensial  dan  telah  lama  digunakan untuk penetapan aktivitas senyawa antioksidan.  Menurut  Widyastuti  (2010), metode  DPPH  mudah  digunakan,  cepat, cukup  teliti  dan  baik  digunakan  dalam pelarut organik.
Reaksi  oksidasi  terjadi  setiap  saat, ketika  manusia  bernapas  terjadi  reaksi oksidasi. Reaksi ini mencetuskan terbentuknya  radikal  bebas  yang  sangat aktif,  yang  dapat  merusak  struktur  serta fungsi  sel.  Namun,  reaktivitas  radikal  bebas itu  dapat  dihambat  oleh  sistem  antioksidan yang  melengkapi  sistem  kekebalan  tubuh (Winarsi, 2007).
Radiasi  ionisasi  merupakan  salah satu  penyebab  terbentuknya  radikal  bebas,
baik  secara  langsung  atau  akibat  cedera  sel dan  peradangan.  Radikal  bebas  adalah  suatu atom  atau  molekul  yang  sangat  reaktif dengan  elektron  yang  tidak  memiliki pasangan.  Radikal  bebas  mencari  reaksi- reaksi  agar  dapat  memperoleh  kembali elektron  pasangannya.  Selain  itu,  radikal bebas dapat mengalami tubrukan kaya energi dengan  molekul  lain,  yamg  merusak  ikatan didalam  molekul,  sehingga  radikal  bebas dapat  merusak  membran  sel  atau  DNA  sel yang rentan (Corwin, 2009).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka dianggap  perlu  untuk  melakukan  skrining fitokimia  untuk  mengetahui  kandungan senyawa alkaloid, triterpenoid/steroid, flavonoid, tannin, dan saponin dalam ekstrak biji adas dan pengujian  aktivitas antioksidan dari ekstrak biji adas.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  selama 1  bulan  (Agustus  -  September  2013  di Laboratorium  Kimia  Jurusan  Kimia  FMIPA UNSRAT Manado.

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan adalah alat soxhlet,  evaporator,  timbangan  digital,  pipet mikro,  desikator,  oven,  spektrofotometer UV-Vis,  ayakan,  kertas  saring,  alat-alat gelas lainnya.
Bahan-bahan  yang  digunakan dalam penelitian  ini  adalah  biji  adas,  pelarut petrolium  eter,  etanol,  aquades,  magnesium bubuk,  asam  klorida,  besi(III)klorida 1%, DPPH (1-1-difenil-2-pikrihidrazil).

## Prosedur Penelitian
1. Preparasi Sampel
Sampel dari penelitian ini adalah biji tanaman  adas  yang  diperoleh  dari  pasar bersehati  kota  Manado.  Biji  adas  dalam keadaan  kering,  dibersihkan  dan  dibuat serbuk.
2. Ekstraksi
Serbuk  biji  adas  diekstraksi  dengan menggunakan metode soxhletasi. Mula-mula 50  g  serbuk  biji  adas  dimasukan  ke  dalam alat soxhletasi  yang  telah  dibungkus  dengan kertas saring. Ekstraksi menggunakan pelarut  petroleum  eter  500  mL  sampai pelarut  berwarna  bening  dengan  waktu  4-5 jam.  Filtrat  dikumpulkan  lalu  diuapkan
dengan  evaporator  hingga  diperoleh  ekstrak kental.
3. Penentuan  Kadar  Air  (Sudarmadji,
1989)
Kadar air ditentukan dengan menimbang  3  g  sampel.  Sampel  dimasukan ke  dalam  oven  pada  suhu  105 o C  selama 3-5  jam,  kemudian  dikeluarkan  dari  oven dan  didinginkan  dalam  desikator  selama 30  menit,  setelah  itu  sampel  ditimbang.
Perlakuan ini dilakukan beberapa kali hingga berat  sampel  konstan.  Kadar  air  dihitung berdasar rumus:
% Kadar air = ×100 %
4. Skrining  Fitokimia  (Sangi, et  al., 2008)

## Senyawa flavonoid :
Sebanyak  200  mg  sampel  biji  adas yang telah  diekstrak dengan 5 ml etanol dan dipanaskan  selama  lima  menit  di  dalam tabung reaksi. Selanjutnya ditambahkan HCl pekat, kemudian ditambahkan 0.2 g bubuk  Mg,  hasil  positif  ditunjukkan  dengan timbulnya warna merah tua (magenta) dalam waktu 3 menit.

## Senyawa saponin :
Sebanyak  2  g  sampel  biji  adas  yang telah dihaluskan dimasukan ke dalam tabung reaksi,  ditambahkan  air  suling  sehingga seluruh cuplikan terendam, dididihkan selama 2-3 menit, dan selanjutnya didinginkan,  kemudian  dikocok  kuat-kuat. Hasil  positif  ditunjukan  dengan  terbentuk buih putih yang stabil.

## Senyawa tannin :
Sebanyak  20  mg  sampel  biji  adas yang  telah  dihaluskan,  ditambah  etanol sampai sampel terendam semuanya.
Kemudian sebanyak 1 ml larutan dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  2-3  tetes  larutan  FeCl 3 1%.
Hasil positif ditunjukan dengan terbentuknya warna hitam kebiruan atau hijau.
5. Uji  Aktivitas  Antioksidan  dengan Metode DPPH
Uji aktivitas antioksidan dari ekstrak biji  adas  diukur  dengan  metode  Gaulejac et al. dalam  Kiay et  al. (2011).  Sebanyak 0.005; 0.01; 0.015; 0.02; dan 0.025 g ekstrak biji  adas  metode ekstraksi  soxhletasi ditambahkan  5  mL  etanol  untuk  hasil konsentrasi  1000,  2000,  3000,  4000, 5000  ppm,  ditambahkan  masing-masing
dengan  1.5  mL  larutan  1,1-difenil-2- pikrilhidrazil  (DPPH)  dan  divortex  selama 2  menit.  Tingkat  berkurangnya  warna  dari larutan  menunjukkan  efisiensi  penangkap radikal. Absorbansi dibaca dengan spektrofotometer  pada  λ  517  nm  setelah diinkubasi  selama  30  menit.  Aktivitas penangkap  radikal  bebas  dihitung  sebagai persentasi berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan persamaan:
( )

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Penentuan Kadar Air
Penentuan  kadar  air  merupakan pengukuran  banyaknya  air  yang  masih terdapat  dalam  sampel  biji  adas.  Penentuan kadar air dilakukan sebelum proses ekstraksi.  Hasil  penelitian  menunjukan bahwa  kadar  air  dalam  sampel  biji  adas 14.09%.  Kadar  air  dalam  bahan  akan mempengaruhi ketahanan dalam penyimpanan  dan  aktivitas  dari  mikroba. Sehingga  kadar  air  yang  rendah  akan membuat penyimpanan bahan lebih lama.

## 2. Skrining Fitokimia
Hasil  skrining  fitokimia  biji  adas dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia biji adas
Golongan Senyawa Hasil uji Keterangan Alkaloid : Mayer Dragendorff Wagner - - - Tidak terbentuk endapan Triterpenoid / steroid - Tidak terjadi perubahan warna Flavonoid + Merah tua Tannin + Biru kehitaman Saponin + Buih
Berdasarkan hasil skrining fitokimia biji  adas  yang  terdapat  pada  Tabel  1, menunjukan  bahwa  biji  adas  mengandung flavonoid, tannin dan saponin. Ini membuktikan biji adas mengandung senyawa  aktif  metabolit  sekunder.  Pada pengujian flavonoid menunjukan hasil positif  dengan  perubahan  warna  merah  tua, untuk  uji  tannin  hasil  positif  ditunjukan dengan perubahan warna biru kehitaman dan
untuk  uji  saponin  hasil  positif  ditunjukan dengan  adanya  busa  yang  terbentuk.  Untuk uji alkaloid, triterpenoid dan steroid memberikan  hasil  negatif  karena  tidak adanya  endapan  maupun  perubahan  warna yang terjadi pada saat penambahan pereaksi. Kandungan  flavonoid  dan  tannin  yang terkandung didalam biji menunjukan bahwa, biji adas berpotensi sebagai antioksidan. Senyawa  kimia  yang  bermanfaat  dari tumbuhan  adalah  hasil  dari  metabolit sekunder yang berupa alkaloid, steroida/terpenoida,  flavonoid  atau  fenolik. Senyawa  ini  diantaranya  berfungsi  sebagai pelindung  terhadap  serangan  atau  gangguan yang  ada  disekitar,  sebagai  antibiotik  dan juga  sebagai  antioksidan  (Atmoko  dan Ma’ruf, 2009).

## 3. Uji Aktivitas Antioksidan
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  biji adas metode soxhletasi dengan senyawa 1,1- difenil-2-pikrihidrazil  atau  DPPH  dapat dilihat pada Gambar 1 berikut :
Gambar 1. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak biji adas metode ekstraksi soxhletasi.
Kemampuan  penangkapan  radikal DPPH  oleh  suatu  antioksidan  dinyatakan dengan  nilai  persen  penangkapan  radikal. Nilai  yang  semakin  tinggi  menunjukkan bahwa  sampel  senyawa  yang  digunakan memang  berpotensi  sebagai  antioksidan (Ridwina,  2008).  Berdasarkan  penelitian yang  telah  dilakukan,  penambahan  larutan DPPH pada sampel ditandai dengan berubahnya  warna  ungu  menjadi  warna kuning yang berarti adanya proses penangkapan  radikal  bebas.  Gambar  1 menunjukkan  aktivitas  antioksidan  tertinggi
yaitu  pada  konsentrasi  1000  ppm  sebesar 48.99%,  sedangkan  untuk  konsentrasi  yang lebih tinggi aktivitas antioksidannya berkurang atau tidak ada aktivitas. Dari hasil yang  telah  diperoleh,  biji  adas  memiliki potensi  aktivitas  antioksidan  walaupun aktivitasnya  kurang  dari  50  %.  Untuk konsentrasi  yang  lebih  tinggi  yaitu  2000, 3000,  4000  dan  5000  ppm,  diharapkan memberikan  aktivitas  yang  tinggi  tetapi sebaliknya semakin tinggi, semakin berkurangnya  aktivitas  atau  tidak  adanya aktivitas.  Ini kemungkinan  disebabkan kandungan  minyak  atsiri  yang  tinggi, sedangkan  untuk  konsentrasi  3000  ppm kurva yang menurun kemungkinan diakibatkan karena tidak homogennya pengambilan ekstrak pada saat penimbangan pembuatan  konsentrasi  larutan.  Menurut Prakosa, et  al., (2013),  biji  adas  memiliki kandungan  minyak atsiri yang tinggi dengan penyusun  utama  yaitu  anetol  60  %.  Salah satu khasiat anetol adalah sebagai karminatif.  Sebelumnya  telah  dilakukan penelitian oleh Suhendra dan Arnata (2009), hasil aktivitas antioksidan dengan konsentrasi 1000
ppm kebawah, memberikan  hasil  yang  optimal  pada konsentrasi  975  ppm.  Ini  membuktikan bahwa  hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan tertinggi ada pada sekitaran 1000 ppm.
DPPH yang merupakan suatu molekul  radikal  bebas  dengan  warna  ungu dapat  berubah  menjadi  senyawa  yang  stabil dengan  warna  kuning  oleh  reaksi  dengan antioksidan, dimana antioksidan memberikan  satu  elektronnya  pada  DPPH sehingga  terjadi  peredaman  pada  radikal bebas DPPH. Elektron yang tidak berpasangan  pada  DPPH  memberikan  suatu absorbansi  yang  kuat  ,  maksimum  pada λ = 517 nm  dan berwarna ungu. Peredaman radikal  bebas  oleh  antioksidan  terjadi  ketika electron tidak berpasangan menjadi berpasangan dengan adanya donor hidrogen, sehingga  membentuk  DPPH  yang  stabil (Yuhernita dan Juniarti, 2011).
Struktur  DPPH  dan  reaksinya  dengan antioksidan ditunjukan pada Gambar 2.
0 10 20 30 40 50 60 1000 2000 3000 4000 5000 % a kt iv it as konsentrasi ppm
O 2 N N N RH NO 2 NO 2 NO 2 NO 2 N N O 2 N H R
DPPH Radikal (ungu) DPPH Stabil (kuning)
Gambar 2. Mekanisme DPPH Akseptor, (Yuhernita dan Juniarti, 2011)

## KESIMPULAN
1. Hasil  skrining  fitokimia,  biji  adas mengandung  senyawa  aktif  flavonoid, tannin dan saponin.
2. Ekstrak  biji  adas  mengandung  aktivitas antioksidan  dengan  aktivitas  tertinggi pada  1000  ppm  yaitu  48.99  %.  Uji aktivitas  antioksidan  biji  adas  metode DPPH  menunjukkan  aktivitas  yang baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Atmoko,  T.  dan  A.  Ma’ruf.  2009.  Uji Toksisitas  dan  Skrining  Fitokimia
Ekstrak  Tumbuhan  Sumber  Pakan
Orangutan  Terhadap  Larva Artemia Salina L. Jurnal  Penelitian  dan Konservasi Alam. 6(1): 37-45.
Corwin,  E.J.  2009. Buku  saku  Patofisiologi. Edisi  ketiga.  Penerjemah:  Yudha, E.K.,  Wahyuningsi,  E.,  Yulianti,  D., dan  Karyuni,  P.E.  Jakarta:  Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Inneke.  1995. Karakterisasi  Sifat  Fisiko Kimia  dan  Analisa  Profil  Deskriptif Flavor  Minyak  Biji  adas ( Foeniculum Vulgare  Mill )  [Skripsi].  Fakultas
Teknologi Pertanian IPB, Bogor. Kiay, N., E. Suryanto dan L. Mamahit. 2011.
Efek  Lama  Perendaman  Ekstrak
Kalamansi ( Citrus microcarpa ) terhadap Aktivitas Antioksidan
Tepung  Pisang  Goroho  ( Musa  spp .). Chemistry Prog ress. 4 : 27-33.
Kridati,  E.  M.,  E.  Prihastanti  dan  S. Haryanti.  2012.  Rendemen  Minyak Atsiri  dan  Diameter  Serta  Ukuran  Sel Minyak  Tanaman  Adas  ( Foeniculum vulgare Mill)  yang  Dibudidayakan  di
Kabupaten Semarang dan Kota Salatiga. Buletin Anatomi dan Fisiologi. 20(1): 1-17.
Prakosa,  A.H.,  I.  D.  Pamungkas,    dan  D. Ikhsan.  2013.  Pengaruh  Waktu  Pada Penyulingan  Minyak  Adas  (Fennel Oil) Dari Biji dan Daun Adas Dengan Metode Uap dan Air. Jurnal Teknologi  Kimia  dan  Industri . 2(2):
14-17.
Ridwana, G. 2008. Perbandingan Pengukuran Aktivitas Antioksidan
Dari  Ekstrak  Etanol  Minyak  Atsiri Lempuyang  Gajah [Skripsi].  FMIPA IPB, Bogor.
Sangi,  M.,  M.  R.  J.  Runtuwene.,  H.  E.  I. Simbala dan  V. M. A. Makang. 2008. Analisa Fitokimia Tumbuhan Obat Di Minahasa  Utara. Chem.  Prog. 1(1): 47-53.
Sudarmadji,  S.  1989. Analisa  Bahan
Makanan  dan  Pertanian. Liberti.
Yogyakarta.
Suhendra,  L.,  dan  I.  W.  Arnata.  2009. Potensi  Aktivitas  Antioksidan  Biji Adas  Sebagai  Penangkap  Radikal Bebas. Jurnal  Agrotekno . 15(2):
66-71.
Widyastuti,  N.  2010. Pengukuran  Aktivitas Antioksidan Dengan Metode CUPRAC,  DPPH  dan  FRAP  Serta Kolerasinya Dengan Fenol dan
Flavonoid  Pada  Enam  Tanaman [Skripsi].  FMIPA  Institut  Pertanian
Bogor, Bogor.
Winarsi,  H.  2007. Antioksidan  Alami  dan Radikal Bebas. Cetakan kelima.
Yogyakarta: Penerbit Kanisus (Anggota IKAPI). Yuhernita  dan  Juniarti.  2011.  Analisa Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari Ekstrak  Metanol  Daun  Surian  yang Berpotensi sebagai Antioksidan. Makara, Sains. 15(1) : 48-52.