DOI: 10.26874/kjif.v6i1.144
Penetapan kadar sediaan multikomponen obat batuk dan flu menggunakan metode zero-crossing
Athina Mardatillah, Mira Andam Dewi, Anggi Gumilar Kelompok Keahlian Kimia Farmasi Analisis, Fakultas Farmasi, UNJANI Corresponding author : athinamardha@gmail.com

## Abstrak
Salah  satu  cara  untuk  memastikan  mutu  sediaan  farmasi  adalah  dengan  analisis  kadar  zat aktif.  Obat  flu  dan  batuk  yang  di  pasaran  adalah  dalam  bentuk  sirup  maupun  tablet multikomponen mengandung parasetamol (PAR), gliserilguaiakolat (GG), fenilpropanolamin HCl  (PPA),  dan  Klorfeniramin  maleat  (CTM),  dan  penetapan  kadar  zat  aktifnya  dilakukan dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT), akan tetapi memerlukan biaya yang mahal  dan  waktu  relatif  lama.  Untuk  itu  dilakukan  pengembangan  metode  spektrofotometri UV-Visibel  sehingga  dapat  menjadi  metode  alternatif  dalam  penetapan  kadar  tablet multikomponen.  Penelitian  dimulai  dengan  pembuatan  kurva  kalibrasi  masing-masing komponen  menggunakan  standar  BPFI  dan  dihitung  linieritas  menggunakan  persamaan regresi linier. Kecermatan masing-masing komponen dilakukan dengan metode spike placebo recovery,  dan  diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang  zero  crossing.  Kecermatan diperiksa  dengan  menghitung  persen  perolehan  kembali.  Tablet  multikomponen  yang  telah dihomogenkan dilarutkan dalam air kemudian diukur pada spektum derivatif dengan panjang gelombang  zero  crossing  PAR,  GG,  CTM  dan  PAR.  Dari  hasil  penelitian  diperoleh  bahwa nilai  linieritas  yang diperoleh baik  dari keempat  zat  aktif dengan nilai  ≥  0,997 dan rentang pengukuran  dilakukan  diatas  batas  deteksi  serta  batas  kuantisasi  masing-masing  zat  aktif. Akan  tetapi  nilai  akurasi  dan  presisi  yang  diperoleh  dari  penelitian  ini  tidak  menunjukkan hasil  yang  memuaskan  dikarenakan  perbedaan  konsentrasi  setiap  zat  aktif  jauh.  Dapat disimpulkan  bahwa  preparasi  kurva  kalibrasi  tidak  dapat  digunakan  untuk  penetapan  kadar campuran  PAR,  GG,  CTM,  dan  PPA  dalam  sediaan  tablet  multikomponen  dengan menggunakan zero crossing
Kata kunci :  Spektrofotometri UV-Vis, Derivatif, Zero Crossing, Tablet Multikomponen,

## Determination of multicomponent drug in cough and flu tablet
using zero-crossing method

## Abstract
One  way  to  ensure  the  quality  of  pharmaceutical  preparations  is  to  analyze  the  levels  of active  substances.  The  drugs  for  flu  and  cough  that  are  on  the  market  are  in  the  form  of multicomponent syrups and tablets containing paracetamol (PAR), glycerylguaiakolate (GG), phenylpropanolamine  HCl  (PPA),  and  Chlorpheniramine  maleate  (CTM),  and  the concentration of active substances is carried out by high performance liquid chromatography (HPLC),  but  it  requires  expensive  fees  and  a  relatively  long  time.  For  this  reason,  the  UV- Visibel spectrophotometry method was developed so that it could be an alternative method in determining  the  content  of  multicomponent  tablets.  The  study  began  with  making  a calibration curve for each component using the BPFI standard and calculated linearity using a  linear  regression  equation.  The  accuracy  of  each  component  was  carried  out  using  the placebo  recovery  spike  method,  and  its  absorption  was  measured  at  a  zero  crossing
wavelength. Accuracy is checked by calculating the percent recovery. Multicomponent tablets that  have  been  homogenized  dissolved  in  water  are  then  measured  on  a  spectral  derivative with  a  wavelength  zero  crossing  PAR,  GG,  CTM  and  PAR.  From  the  results  of  the study  it was found that the linearity value obtained from the four active substances with a value of ≥ 0.997  and  the  measurement  range  was  carried  out  above  the  detection  limit  and  the quantization  limit  of  each  active  substance.  However,  the  accuracy  and  precision  values obtained from this study did not show satisfactory results due to differences in concentration of  each  active  substance  away.  It  can  be  concluded  that  the  preparation  of  the  calibration curve  cannot  be  used  to  determine  the  mix  content  of  PAR,  GG,  CTM,  and  PPA  in multicomponent tablet preparations using zero crossing
Keywords: Spectrophotometri  UV-Vis,  Derivative,  Zero  Crossing,  multicomponent tablets

## Pendahuluan
Flu  biasa  ( common-cold ),  salesma  atau batuk pilek adalah infeksi saluran pernapasan akut (ISPA) yang sangat sering diderita oleh masyarakat  Indonesia.  Berdasarkan  data Riskesdas 2007 menunjukkan bahwa prevalensi  ISPA  di  Indonesia  adalah  25,5% atau  berkisar  antara  17,5  –  41,4%.(Gitawati, 2014)  Saat  ini  sangat  banyak  beredar  obat batuk  pilek  dengan  berbagai  merk  dagang. Obat  batuk  pilek  yang  beredar  merupakan suatu bentuk sediaan multikomponen. Sediaan  multikomponen  merupakan  sediaan obat  yang  terdiri  dari  beberapa  zat  aktif. Sediaan kombinasi dengan beberapa zat aktif ini  dimaksudkan  untuk  memudahkan  pasien dalam meminum obat dan dapat meningkatkan  efek  dari  masing-masing  zat aktif.  (Gitawati,  2014)  Salah  satu  contoh sediaan  tablet  yang  ada  di  pasaran  adalah tablet  obat  batuk  dan  flu  yang  mengandung parasetamol  (PAR),  gliserilguaiakolat  (GG), fenilpropanolamin HCl (PPA), dan Klorfeniramin maleat (CTM).
Untuk  menjaga  mutu  dari  sediaan  tablet maka  perlu  dilakukan  penetapan  kadar terhadap  sediaan.  Berdasarkan  Farmakope Indonesia  edisi  V  penetapan  kadar  masing- masing tablet parasetamol, gliserilguaiakolat, fenilpropanolamin, dan klorfeniramin maleat menggunakan  metode  kromatografi  cair kinerja  tinggi  (KCKT)  sehingga  penetapan kadar  untuk    sediaan  kombinasi  juga dilakukan  dengan  metode  tersebut.(Ditjen POM, 2014)
Kombinasi berbagai zat aktif dalam suatu sediaan  menimbulkan  permasalahan  dalam penetapan  kadarnya.  Hal  ini  dikarenakan adanya  dua  zat  aktif  yang  dapat  saling mengganggu  dalam  penetapan  kadarnya, sehingga harus dilakukan pemisahan terlebih dahulu  tiap  komponen  zat  aktifnya.  Metode yang  umum  digunakan  dalam  penetapan kadar  sediaan  campuran  zat  aktif  adalah kromatografi  cair  kinerja  tinggi  (KCKT), karena  dengan  metode  tersebut  senyawa- senyawa dapat terpisah  dan dianalisis secara tunggal.(Gandjar,  2007)  Namun    metode KCKT dalam segi pengoperasiannya memerlukan  biaya  yang  besar,  sehingga perlu  dikembangkan  metode  alternatif  yaitu spektrofotometri derivatifyang dapat menetapkan  kadar  campuran  tanpa  harus dilakukan pemisahan terlebih dahulu dengan biaya yang digunakan relatif lebih murah dan waktu  analisisnya  lebih  cepat  (Nurhidayati, 2007).
Oleh  karena  itu,  pada  penelitian  ini  akan dilakukan penetapan kadar campuran parasetamol, gliserilguaiakolat, fenilpropanolamin, dan klorfeniramin maleat dalam  matriks  tablet  menggunakan  metode spektrofotometri derivatif, dengan menentukan panjang gelombang zero crossing .

## Metode
Alat. Spektrofotometer  UV  (Shimadzu UV-1700),  timbangan  analitik  (Sartorius, D=0,1  mg),  mortir-stamper,  spatel,  kertas
timbang,  dan  alat-alat  gelas  laboratorium (labu  ukur,  gelas  ukur,  erlenmeyer,  gelas piala,  pipet  ukur,  pipet  tetes,  pipet  mikro, batang pengaduk dan corong).
Bahan. Bahan baku parasetamol, gliserilguaiakolat,  ctm,    aquadest  P,  laktosa, magnesium stearat, amilum, talk, , magnesium stearat 1%, talk 1%, amilum 5%, dan  laktosa,  sukrosa,  pharmacoat  904, maltodekstrin  DE  10-15  dan  PEG  6000, CaCO 3 , TiO dan sediaan tablet di pasaran. Pemeriksaan  Bahan  Baku. Bahan  baku yang digunakan diperiksa berdasarkan monografi yang tercantum dalam Farmakope Indonesia edisi V.
Penentuan  Panjang  Gelombang Zero Crossing pada  Spektrum  Derivatif. PAR, GG,  PPA  dan  CTM  BPFI  masing-masing ditimbang  seksama  50  mg  kemudian dilarutkan  sedikit-sedikit  dengan  aquadest dalam  labu  takar  50  mL  sehingga  diperoleh konsentrasi 1000 µg/mL. Langkah selanjutnya  adalah  dilakukan  pengenceran sampai  diperoleh  konsentrasi  100  µg/mL, kemudian diukur pada spektrofotometer UV- Vis hingga diperoleh spektrum.
Pembuatan  Kurva  Kalibrasi. PAR,  GG, PPA  dan  CTM  BPFI  masing-masing ditimbang  seksama  50  mg  kemudian dilarutkan  sedikit-sedikit  dengan  aquadest dalam  labu  takar  50  mL  sehingga  diperoleh konsentrasi  1000 µg/mL. Untuk PAR dibuat larutan  dengan  konsentrasi  10;  20;  30;  40; 50; dan 60 µg/mL. Untuk GG dibuat larutan dengan  konsentrasi  2;  4;  6;  8;  10;  dan  12 µg/mL.  Untuk  PPA  dibuat  larutan  dengan konsentrasi 1; 2; 3; 4; 5; dan 6 µg/mL. Untuk CTM  dibuat  larutan  dengan  konsentrasi  0,2; 0,4;  0,6;  0,8;  1,0;  dan  1,2  µg/mL.  Masing- masing larutan diukur dengan spektrofotometer UV-Vis.
Pengujian  Validasi  Metode  Analisis Spektrofotometri Derivatif.
Selektivitas . Selektivitas ditentukan dengan  membandingkan  spektrum  yang dihasilkan  antara  larutan  dari  campuran larutan induk.
Linieritas . Linieritas dihitung berdasarkan persamaan  regresi  linier  dari  kurva  kalibrasi masing-masing  larutan  standar.  Uji  ini
dilakukan  dengan  menggunakan  satu  seri larutan campuran dengan berbagai konsentrasi.  Sebagai  parameter  linieritas, digunakan koefisien korelasi (r) pada analisis regresi  linier  y  =  bx  +  a,  hubungan  linier yang  ideal  dicapai  jika  harga  a=0  dan  r=1. Nilai  koefisien  korelasi  yang  dapat  diterima adalah  r  ≥  0,98  (cemaran)  dan  r  ≥  0,997 (bahan aktif obat).
Batas  Deteksi  dan  Batas  Kuantisasi. Batas deteksi dan batas kuantisasi ditentukan dengan  cara  mengukur  larutan  blanko  dan dilakukan  sebanyak  enam  kali  pengukuran. Kemudian  dihitung  simpangan  baku  dari respon yang diberikan. Simpangan baku (sb) yang  diperoleh  dikalikan  dengan  faktor  3 menunjukkan  batas  deteksi  dengan  nilai  a merupakan arah garis kurva regresi linier
BK  ditentukan  dengan  cara  yang  sama dengan  BD,  tetapi  simpangan  baku  dari pengukuran  blangko  tersebut  dikalikan dengan faktor 10.
Kecermatan dan Keseksamaan.
Kecermatan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil analisis dengan  kadar  yang  sebenarnya. Kecermatan dilakukan  dengan  metode  spike  placebo recovery yaitu menentukan perolehan kembali  (%)  sejumlah  analit  tertentu  bahan pembantu  yang  ditambahkan  ke  dalam  basis tablet  (dibuat  serbuk  simulasi). Kemudian diukur serapannya pada panjang gelombang zero crossing kedua zat tersebut. Pengukuran dilakukan  sebanyak  tiga  kali  pada  masing- masing  rancangan  serbuk  simulasi  yang berbeda. Kecermatan  diperiksa  dengan membandingkan  persentase  jumlah  analit yang  diperoleh  kembali  (Xr)  terhadap  nilai sebenarnya  (Xa),  yang  dinyatakan  sebagai persen  perolehan  kembali (% Rec )  dengan 80-120 % untuk obat bentuk ruahan, dan 95- 105 % untuk obat jadi.
% Perolehan kembali
Sedangkan  keseksamaan  diukur  sebagai simpangan  baku  relatif  (koefisien  variasi). Persyaratan  keseksamaan,  harga  KV-nya tidak boleh melebihi 2% untuk sediaan obat.
̅
Penetapan Kadar Tablet Metode Spektrofotometri Derivatif dalam Sediaan
Tablet  Merk  Dagang. Ditimbang  10  tablet dengan  nama  dagang  A,  kemudian  dihitung bobot  rata-rata  per  tablet.  Tablet  yang  telah ditimbang kemudian digerus hingga homogen,  serbuk  tablet  ditimbang  sejumlah bobot rata-rata tablet. Setelah itu dimasukkan dalam  6  buah  labu  takar  100  mL  kemudian masing-masing  dilarutkan  dengan  aquadest. Dari  labu  ukur  dipipet  1,0  mL,  dimasukkan ke  dalam  labu  takar  10,0  mL,  diencerkan dengan aquadest hingga tanda batas. Kemudian  dipipet  1,0  mL,  dimasukkan  ke dalam  labu  takar  25,0  mL.  Masing-masing larutan diukur pada spektum derivatif dengan panjang gelombang zero crossing PAR, GG, CTM dan PAR.

## Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan  hasil  spektrum  serapan ultraviolet  PAR  –  GG  –  CTM  –  PPA  dalam pelarut  air  suling  dengan  kadar  masing- masing  10  µg/mL  (Gambar  1),  hasil  uji selektifitas  dapat  diterima.  Hal  ini  sesuai dengan  persyaratan  uji  selektivitas  dimana tidak  adanya  interaksi  antar  analit  (ICH, 2005).
Data  spektrum  masing-masing  analit dijelaskan  sebagai  berikut.  Pada  penentuan parasetamol  didapat  panjang  gelombang 313,6  nm,  dari  pengukuran  derivatif  ke  tiga yang  dilakukan  terhadap  larutan  PAR,  GG, CTM,  dan  PPA  yang  dicampur  dan  diukur pada  ∆  16  dan scalling  factor 100  (Gambar 2).
Pada  penentuan  gliseril  guaikolat  didapat panjang gelombang 289,4 nm, dari pengukuran  derivatif  ke  dua  yang  dilakukan terhadap  larutan  PAR,  GG,  CTM,  dan  PPA yang  dicampur  dan  diukur  pada  ∆  8  dan scalling factor 1 (Gambar 3).
Gambar 1.   Spektrum serapan ultraviolet PAR – GG – CTM – PPA dalam pelarut air suling  dengan  kadar  masing-masing 10 µg/mL
Gambar 2.   Turunan  derivatif  ke  tiga  yang diukur  pada  ∆  16  dan scalling factor 100  untuk  (a)  PAR  10  g/mL, (b) GG 10  g/mL, (c) CTM 10  g/mL, dan (d) PPA 10  g/mL
DOI: 10.26874/kjif.v6i1.144
Gambar 3.   Turunan  derivatif  ke  dua  yang diukur pada ∆  8 dan scalling factor
1 untuk (a) PAR 10  g/mL, (b) GG
10  g/mL, (c) CTM 10  g/mL, dan
(d) PPA 10  g/mL
Pada  penentuan  klorfeniramin  maleat didapat  panjang  gelombang  262  nm,  dari pengukuran derivatif ke empat yang dilakukan  terhadap  larutan  PAR,  GG,  CTM, dan  PPA  yang  dicampur  dan  diukur  pada ∆  8 dan scalling factor 1 (Gambar 4).
Gambar 4.   Turunan  derivatif  ke  empat  yang diukur pada ∆  8 dan scalling factor 1 untuk (a) PAR 10  g/mL, (b) GG
10  g/mL, (c) CTM 10  g/mL, dan (d) PPA 10  g/mL
Pada  penentuan  PPA  didapat  panjang gelombang  256,4  nm,  dari  pengukuran
derivatif  ke  empat  yang  dilakukan  terhadap larutan  PAR,  GG,  CTM,  dan  PPA  yang dicampur  dan  diukur  pada  ∆  8  dan scalling factor 1 (Gambar 5).
Gambar 5.   Turunan  derivatif  ke  empat  yang diukur pada ∆  8 dan scalling factor 1 untuk (a) PAR 10  g/mL, (b) GG 10  g/mL, (c) CTM 10  g/mL, dan (d) PPA 10  g/mL
Hasil  uji  linearitas  digunakan  untuk mengevaluasi masing-masing zat pada konsentrasi  yang  berbeda  dengan  kisaran konsentrasi  pada  pembuatan  kurva  kalibrasi. Masing-masing zat diperoleh garis lurus dan hasil  analisis  ini  menunjukkan  linearitas yang  baik  dari  grafik  kalibrasi  dan memenuhi  hukum Lambert  Beer (ICH, 2005).  Berikut  adalah  hasil  kurva  kalibrasi masing-masing zat:
a) parasetamol  pada  313,6  nm  memberikan persamaan  regresi  y  =  -0.00019x  + 0.00017;  koefisien  korelasi  R  =  0.999
(≥0,997);  batas  deteksi  6,25  µg/mL  dan batas kuantifikasinya 20,85 µg/mL.
Pengukuran kecermatan dan keseksamaan diukur  pada  level  konsentrasi  100% dengan  6  kali  pengukuran  (ICH,  2005). Kecermatan  dan  keseksamaan  analisis campuran  PAR,  GG,  CTM,  dan  PPA dengan  menggunakan  spektrofotometri derivatif  ketiga  menghasilkan  perolehan kembali  parasetamol  dalam  campuran adalah  99,70–109,09  %  (98-102  %)
dengan  simpangan  baku  3,74%  dan koefisien variasinya 3,59% (< 2 %).
Tabel 1.   Hasil  Perhitungan  Nilai  Akurasi  dan Presisi Parasetamol
Level Penimbangan Teoritis (mg) Kadar Perolehan (mg) Perolehan (%) 100 % 500,46 512,47 102,40 500,46 499,00 99,70 500,69 546,21 109,09 500,69 515,78 103,01 500,69 544,05 108,66 500,69 515,31 102,92 Perolehan Rata-rata 104,29  3,74 Simpangan Baku 3,74 Koefisien Variasi (%) 3,59 b) GG pada 289,4 nm memberikan persamaan  regresi  y  =  0.000085x  + 0.0000027;  koefisien  korelasi  R  =  0.998
(≥0,997);  batas  deteksi  21,4  µg/mL  dan batas kuantifikasinya 71,4 µg/mL.
Kecermatan  dan  keseksamaan  analisis campuran  PAR,  GG,  CTM,  dan  PPA dengan  menggunakan  spektrofotometri derivatif  ketiga  menghasilkan  perolehan kembali  GG  dalam  campuran  adalah 105,38–118,02  %  (98-102  %)  dengan simpangan  baku  4,42%  dan  koefisien variasinya 3,94% (< 2 %).

## Tabel 2.   Hasil  Perhitungan  Nilai  Akurasi  dan Presisi GG
Level Penimbangan Teoritis (mg) Kadar Perolehan (mg) Perolehan (%) 100 % 50,04 52,74 105,38 50,04 58,03 115,96 50,06 59,09 118,02 50,06 55,80 111,44 50,06 55,44 110,74 50,06 55,80 111,44 Perolehan Rata-rata 112,16  4,42 Simpangan Baku 4,42 Koefisien Variasi (%) 3,94 c) CTM pada 262 nm memberikan persamaan  regresi  y  =  0.000058x  + 0.0000032;  koefisien  korelasi  R  =  0.997
(≥0,997);  batas  deteksi  0,43  µg/mL  dan batas kuantifikasinya 1,43 µg/mL.
Kecermatan  dan  keseksamaan  analisis campuran  PAR,  GG,  CTM,  dan  PPA dengan  menggunakan  spektrofotometri derivatif  ketiga  menghasilkan  perolehan kembali  CTM  dalam  campuran  adalah 89,91–539,25  %  (98-102  %)  dengan simpangan  baku  160%  dan  koefisien variasinya 61% (< 2 %).

## Tabel.3.   Hasil  Perhitungan  Nilai  Akurasi  dan Presisi CTM
Level Penimbangan Teoritis (mg) Kadar Perolehan (%) Perolehan (mg) 100 % 2,002 1,8 89,91 2,003 2,8 139,80 2,003 5,4 269,62 2,003 6,4 319,55 2,003 4,2 209,70 2,003 10,8 539,25 Perolehan Rata-rata 261,28  160 Simpangan Baku 160 Koefisien Variasi (%) 61 d) PPA pada 256,4 nm memberikan persamaan  regresi  y  =  0.0000086x  - 0.0000016;  koefisien  korelasi  R  =  0.997 (≥0,997);  batas  deteksi  0,48  µg/mL  dan batas kuantifikasinya 1,62 µg/mL.
Kecermatan  dan  keseksamaan  analisis campuran  PAR,  GG,  CTM,  dan  PPA dengan  menggunakan  spektrofotometri derivatif  ketiga  menghasilkan  perolehan kembali  PPA  dalam  campuran  adalah 97,54–1584,58  %  (98-102  %)  dengan simpangan  baku  588,16%  dan  koefisien variasinya 89,6% (< 2 %).
Tabel 4. Hasil  Perhitungan  Nilai  Akurasi  dan
Presisi PPA Level Penimbangan Teoritis (mg) Kadar Perolehan (%) Perolehan (mg) 100 % 15,01 237,90 1584,58 15,02 44,88 298,81 15,02 25,11 167,21 15,02 14,65 97,54 15,02 163,48 1088,41 15,02 105,34 701,35 Perolehan Rata-rata 656,32  588,16 Simpangan Baku 588,16 Koefisien Variasi (%) 89,6
Tabel 5. Hasil Perhitungan Nilai Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi Nama Zat Aktif λ (nm) Persamaan Regresi r Batas Batas Deteksi (µg/mL) Kuantifikasi (µg/mL) Parasetamol 313,6 y = -0.00019x + 0.00017 0,999 6,25 20,8 GG 289,4 y = 0.000085x + 0.0000027 0,998 21,4 71,4 CTM 262 y = 0.000058x + 0.0000032 0,997 0,43 1,43 PPA 256,4 y = 0.0000086x - 0.0000016 0,997 0,48 1,62
Tabel 6.   Penetapan  Kadar  PAR,  GG,  CTM,  dan  PPA  dalam  Tablet  A  dengan  Metode Spektrofotometri Zero Crossing Level Penim- bangan Kadar Teoritis (mg) Kadar Perolehan (mg) Perolehan (%) PAR GG CTM
PPA PAR GG CTM  PPA PAR GG CTM PPA 100 % 638.36  50.03  642.55  30.2  500.46  50.04  15.02  2.00  127.55 99.97 4277.79 1508.60 641.63  49.56  877.44 27 500.69  50.06  15.02  2.00  128.14 98.99 5841.52 1348.75 688.05  54.03  904.18  15.4  500.69  50.06  15.02  2.00  137.42  107.92 6019.57 768.93 623.21  48.50  598.37  15.2  500.69  50.06  15.02  2.00  124.46 96.87 3983.63 758.94 623.36  48.38  251.86 2.8 500.69  50.06  15.02  2.00  124.50 96.64 1676.74 139.80 621.36  49.56  377.44  16.6  500.69  50.06  15.02  2.00  124.10 98.99 2512.8 828.85 Perolehan rata-rata 127,63 ± 5,07 99,91 ± 4,14 4052,20 ± 1740,21 876,92 ± 499,65
Pada  analisis  PAR  dan PPA,  nilai  perolehan kembali  dan  koefisien  variasi  yang  tidak memenuhi  persyaratan  (98,0%  -  102%). (AOAC,  2002)  hal  ini  dapat  diakibatkan karena  galat  acak.  (IUPAC,  2002).  Akan tetapi  galat  acak  tidak  dapat  dihilangkan karena salah satu batasan analisis. Kemudian hasil perhitungan LOD dan LOQ menunjukkan bahwa rentang konsentrasi GG dan  CTM  tidak  terkuantitasi  dikarenakan konsentrasi  yang  digunakan  dalam  analisis terlalu kecil, sehingga menyebabkan ketidakmampuan  metode  analisis  mengukur analit  tersebut.(IUPAC,  2002)  Sedangkan berdasarkan  penelitian  lain  mengatakan bahwa  campurn  CTM  dan  PPA  dapat dianalisis dengan menggunakan metode zero crossing  dengan  hasil  yang  sensitif,  simpel dan  rapid.  (Arun,  2013)  Dengan  melihat hasil uji linearitas yang memenuhi persyaratan  r  >  0,997  (AOAC,  2002), sehingga  dapat  dibahas  bahwa  metode zero crossing masih  dapat  dilakukan  dengan syarat  konsentrasi  analit  yang  diukur  harus memenuhi  LOD  dan  LOQ,  dan  tetap  dalam konsentrasi  sampel  sediaan  yang  akan diukur.

## Kesimpulan
Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa dengan menggunakan preparasi kurva kalibrasi  tidak  dapat  digunakan  untuk penetapan kadar campuran PAR, GG, CTM, dan  PPA  dalam  sediaan  tablet  dengan menggunakan zero crossing . Perlu dilakukan pengujian ulang dengan menggunakan metode spektrofotometri manipulatif lainnya.

## Daftar Pustaka
Abdel-hay MH, Gazy A a, Hassan EM, Belal TS. 2008. Derivative and Derivative Ratio Spectrophotometric Analysis of Antihypertensive  Ternary  Mixture  of Amiloride Hydrochloride , Hydrochlorothiazide and Timolol
Maleate . J Chinese Chem Soc.:971-978.
Aberásturi F, Jiménez  a. I, Jiménez F, Arias JJ.  2001.  UV-Visible  First-Derivative Spectrophotometry Applied to an Analysis  of  a  Vitamin  Mixture.  J  Chem Educ.;78(6):793.
Ansel  CH.  2005. Pengantar  Bentuk  Sediaan Farmasi. 4th editio n. Universitas Indonesia, Jakarta.
AOAC. 2002. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical
Methods  for  Dietary  Supplements  and Botanicals. Hal:18-19.
British  Pharmacopoeia  Commission  Office. 2009. British Pharmacopoeia . 1983;39:418-420. Connors KA. 1982. A Textbook of Pharmaceutical  Analysis .  New  York:
Willey.
Day R., Underwood A. 1999. Analisis Kimia Kuantitatif: Terjemahan A.H. Pudjaatmaka. 5th edition . Jakarta: Erlangga.
Diani  Saraan  SM,  Sinaga  SM,  Muchlisyam. 2015. Development method for determination  of  ternary  mixture  of paracetamol,  ibuprofen  and  caffeine  in tablet  dosage  form  using  zero-crossing derivative spectrophotometric . Int J PharmTech Res;7(2):349-353. Ditjen  POM.2014. Farmakope  Indonesia Edisi  V.  Jakarta:  Departemen  Kesehatan R.I.
Gandjar, I.G. 2007. Kimia Farmasi Analisis . Yogyakarta : Pustaka Pelajar. Gitawati,  R.  2014. Bahan  Aktif  Dalam Kombinasi  Obat  Flu  Dan  Batuk-Pilek, Dan  Pemilihan  Obat  Flu  Yang  Rasional .
Pusat  Teknologi  Terapan  Kesehatan  dan Epidemiologi  Klinik,  Badan  Litbangkes, Kemenkes RI. Jakarta.
Hoan  Tjay  T,  Rahardja  K.  2007. Obat-Obat Penting . IV. PT.Gramedia.
ICH. 2005. ICH Topic Q2 (R1) Validation of Analytical
Procedures :
Text and Methodology . Int Conf Harmon;1994(November 1996):17. International  Union  Of  Pure  And  Applied Chemistry  (IUPAC).  2002. Harmonized Guidelines For Single Laboratory Validation  Of  Methods  Of  Analysis .  Pure Appl.  Chem.,  Vol.  74,  No.  5,  pp.  841– 842.
Kar A. 2005. Pharmaceutical Drug Analysis.
2nd  Editio n.  New  Age  International Publishers.
Kaura,  Arun,  Vikas  Gupta,  G.S.  Roy, Monika  Kaura.  2013. Spectrophotometric determination of chlorpheniramine maleate and phenylpropanolamine
hydrochloride in dosage forms . International Current Pharmaceutical Journal.
Munson,  JW.1991. Analisis  farmasi  metode modern .  Parwa  B.  Diterjemahkan  oleh Hajana.  Surabaya:  Airlangga  University
Press. Mycek  MJ,  Harvey  RA,  Champe  PC.  2001. Farmakologi Ulasan Bergambar , Terjemahan Prof.dr.H.Azwar Agoes. EGC.
Nurhidayati,  L.  2007. Spektrofotometri Derivatif  dan  Aplikasinya  Dalam  Bidang Farmasi . Jurnal Ilmu Kefarmasian
Indonesia 94 Owen T. 2000. Fundamental of Modern UV- Visible Spectroscopy :177-178. Roth J, Blaschke G. 1998. Analisis Farmasi : Terjemahan  Sarjono  Kisman  Dan  Slamet Ibrahim. Yogyakarta: Gajah Mada University Press. Rowe CR. 2003. Handbook
of
Pharmaceutical  Excipients .  4th  editio. Pharmaceutical  Press  and  American Pharmaceutical  Association,  London  and Chicago.
Siregar  CJP.  2010. Teknologi  Farmasi Sediaan  Tablet  Dasar-Dasar  Praktis .
Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran, EGC. Skujins S. 1986. Applications Of UV-Visible Derivative  Spectrophotometry  Part  I  A review  of  areas  of  application  and  the basic  principles  of  the  derivative .  Sci Tech  Appl  Notes  UV  instruments  Work UV31 Switz Varian:1-32.
Thompson  M,  Ellison  SLR,  Wood  R.  2002.
Quality Assurance Schemes For Analytical  Laboratories  *  Harmonized Guidelines For Single- Laboratory Validation  Of  Methods  Of  Analysis  (
IUPAC  Technical  Report  )  Harmonized guidelines  for  single-laboratory  (  IUPAC Technical Report ). Pure Appl Chem.;74(5):835-855.
Voight  R.  1994. Buku  Pelajaran  Teknologi Farmasi .  Penerjemah:  Soendani  Noerono Soewandhi. UGM Press.