Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)*
1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)

## EFEKTIVITAS CENDAWAN ENTOMOPATOGEN

## Paper submit: 7 Oktober 2019, Paper publish: September 2020
Abstract -The Musca domestica L. or house flies are considered as a nuisance insect in the health field and are mechanical vectors of several diseases in humans and livestock. This study aims to determine the effectiveness of the fungus Metarhizium anisopliae in killing the Musca domestica adult flies . The house fly used is the local population from the landfill in the city of Pontianak. The research method was designed using a completely randomized design consisting of five treatments and one control with three replications, namely: Control;(P1) 1,2x konidia /ml;(P2) 3,6x10 6 konidia / ml; (P3) 6x10 6 konidia / ml;(P4) 8,4x10 6 konidia/ml; and (P5) 10.8x10 6 konidia/ml given in the form of a suspension of 1 ml. The number of flies that showed paralysis was recorded from one day after treatment until the 14th day. Data on mortality of adult flies were analyzed probitly with the help of the Excel program to determine the death time of 50% (LT50) from each concentration of treatment. The results showed that M. anisopliae suspension with conidia density of 8x10 6 konidia / ml was more effective in killing M. domestica imago within 5.88 days with a 95% range of test fly mortality, ie 4.70-7.36 days. Treatment with the suspension of the lowest conidia density can kill the M. domestica L. imago by as much as 50% or more.
Keywords: Musca domestica L., Metarhizium anisopliae , Mortality.

## Pendahuluan
Musca domestica L. atau lalat rumah merupakan salah satu spesies serangga yang sering dijumpai di sekitar rumah, kadang ternak dan berbagai tempat lainya . Lalat ini dianggap sebagai serangga pengganggu di bidang kesehatan karena merupakan vektor mekanis beberapa penyakit dan penyebab myiasis pada manusia dan ternak (Lestari et al. 2005). Lebih dari 100 jenis patogen terhadap manusia dan hewan dibawa oleh lalat rumah yang diperoleh dari sampah, limbah buangan rumah tangga, dan sumber kotoran lainnya. Agens penyakit tersebut ditularkan dari mulut melalui muntah, feses, dan bagian tubuh lain yang terkontaminasi dan dipindahkan pada makanan manusia atau pakan hewan/ternak (Hastutiek & fitri 2007). Pengendalian lalat sudah ditempuh dengan berbagai cara seperti sanitasi lingkungan, pengendalian fisik, maupun
penggunaan insektisida kimiawi. Penggunaan insektisida kimiawi secara terus-menerus dapat  menimbulkan berbagai dampak negatif, diantaranya terbunuhnya musuh alami dan akumulasi residu pestisida (Hasnah et al., 2012).
Salah satu pengendalian yang dikembangkan saat ini menggunakan cendawan entomopatogenik seperti Beauveria bassiana , Duddingtonia flagrans, dan Metarhizium anisopliae . Dari ketiga jenis cendawan tersebut, M. anisopliae tergolong paling umum digunakan karena efektif dalam berbagai tingkat perkembangan serangga mulai dari telur, larva, pupa, dan imago (Herlinda et al., 2008). Cendawan ini memiliki aktifitas larvisidal karena menghasilkan cyclopeptida , destruxin A, B, C, D, E dan desmethyldestruxin B. Destruxin telah dipertimbangkan sebagai bahan insektisida generasi baru. Efek destruxin berpengaruh pada organella sel target (mitokondria, retikulum endoplasma, dan membran nukleus),
*E-mail: florifaizal@gmail.com Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak 78124 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Tanjungpura,
Florianus Flori*, Noni Yunizar, Linawati, Kustiati Musca domestica L. (DIPTERA: MUSCIDAE)

## METARHIZIUM ANISOPLIAE DALAM MEMBUNUH Imago
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
menyebabkan paralisa sel dan kelainan fungsi lambung tengah, tubulus malphigi, hemocyt, dan jaringan otot (Widiyanti & Muyadihardja 2004).
Hasil Penelitian Suprayogi et al., (2015) menunjukan bahwa dengan pemberian suspensi M. anisopliae dengan kerapatan konidia 10 9 /70 ml/air mampu membunuh Kepik Hijau ( Nezara viridula L.) sebesar 94,44%. Selanjutnya Amiruddin (2012) mencoba cendawan M. anisolpiae yang di infeksikan terhadap larva M. domestica dengan kerapatan konidia 5,1 x 10 10 konidia/ml mampu membunuh hingga mencapai 93,33 %. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui keefektivan cendawan entomopatogen M. anisopliae dalam membunuh imago M . domestica L.

## Metode Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi dan Zoologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tanjungpura, Pontianak pada bulan April hingga Juni 2018. Bahan penelitian yang digunakan meliputi: media PDA ( Potato Dextrose Agar), Isolat cendawan M. anisopliae yang diperoleh dari Balai Proteksi Tanaman Perkebunan (BPTP) Pontianak, dan dan pakan lalat.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian adalah Autoclave , Biological Safety Cabinet
(BSC), cawan petri, erlenmeyer, haemositometer , mikroskop cahaya,  lampu bunsen, jarum preparat, kotak kasa berukuran 30 cm x 30 cm, ovitrap, tabung reaksi, vorteks, dan wadah lalat.
1.  Pelaksanan Penelitian
a. Pembiakan Isolat Cendawan Metarhizium anisopliae
Isolat cendawan M . anisopliae ditumbuhkan pada medium potato dextrose agar (PDA) dan inkubasi selama 14 hari pada suhu 26 o C. Setelah masa inkubasi, koloni berubah warna menjadi hijau gelap, menandakan bahwa isolat cendawan siap digunakan untuk pengujian lebih lanjut terhadap imago Musca domestica L.
b.  Pemeliharaan dan perbanyakkan lalat
Musca domestica L.
Lalat dipelihara dalam kotak kasa berukuran 30 cm x 30 cm x 30 cm pada suhu ruangan. Setiap populasi disediakan ovitrap yang digunakan sebagai media perkembangan untuk meletakkan telur lalat dengan menggunakan tisu yang telah dibasahi dengan susu 5%. Pakan imago terdiri atas campuran susu bubuk, ragi, dan gula. Setelah 24 jam, ovitrap yang telah mengandung telur lalat rumah dipindahkan ke medium larva hingga menjadi pupa. Medium larva yang digunakan terdiri atas campuran dedak dan pakan ayam dengan perbandingan 2:1 pada lapisan bawah dengan campuran 3 bagian air. Setelah itu, sekam padi diletakkan pada wadah dengan ketebalan kurang lebih 3 cm dari permukaan medium larva, adanya sekam bertujuan untuk mempercepat larva menjadi pupa. Pupa kemudian dipelihara dalam kurungan yang terpisah hingga menjadi imago lalat rumah yang selanjutnya digunakan sebagai percobaan (Kustiati et al., 2015)
c.   Pembuatan suspensi dan penghitungan konidia cendawan M. anisopliae Pembuatan suspensi dilakukan dengan cara mengambil koloni cendawan dari biakan murni, kemudian di masukan ke dalam tabung reaksi yang telah berisi 30 ml aquades steril, selanjutnya suspensi divorteks hingga homogeny dan digunakan sebagai larutan stok uji serta dihitung kerapatan konidianya dengan menggunakan haemositometer pada mikroskop.

## d.   Rancangan penelitian
Penelitian ini didesain dalam Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 5 perlakuan dan 1 kontrol dengan tiga ulangan sehingga diperoleh 18 unit percobaan. Susunan perlakuan suspensi kerapatan konidia Metarhizium anisopliae adalah sebagai berikut: P0 = akuades, tanpa suspensi konidia, P1 = 1,2 x konidia/ml, P2 = 3,6x10 6 konidia/ml, P3 = 6x10 6 konidia/ml, P4 = 8,4 x 10 6 konidia /ml, dan P5 = 10,8 x 10 6 konidia /ml.
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
e.   Uji hayati Pengujian dilakukan dengan menggunakan toples plastik yang berkapasitas 400 ml dengan penutup bahan stocking . Sebanyak 10 individu lalat berumur 3-5 hari dimasukkan ke dalam toples plastik yang telah diisi dengan pakan lalat berupa gula halus dan wadah suspensi cendawan. Suspensi cendawan dari setiap suspensi kerapatan perlakuan diambil sebanyak 3 ml dan diteteskan ke dalam wadah suspensi dalam toples yang telah berisi lalat rumah dengan menggunakan spuit.
Perlakuan setiap suspensi kerapatan konidia dilakukan tiga ulangan. Kontrol perlakuan hanya diberikan akuades. Parameter pengamatan dalam penelitian ini jumlah lalat yang mati. Pengamatan pertama kali dilakukan setelah 24 jam setelah aplikasi, selanjutnya pengamatan dilakukan setiap 24 jam selama 14 hari. Data hasil selanjutnya dikumpulkan dan dianalisa secara probit menggunakan program Excel.

## Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan hasil analisis probit pada LT ( lethal time ) 50 (Tabel 1) menunjukan bahwa kerapatan konidia yang diperlukan untuk membunuh hewan uji bervariasi. Lama waktu yang dibutuhkan oleh masing-masing kerapatan untuk membunuh lalat uji sebesar 50 % dapat dilihat pada nilai LT 50 .  Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa, pada kerapatan konidia 8 x 10 6 konidia/ml kematian imago M . domestica relatif lebih cepat dan efektif, terjadi dalam waktu 5,88 hari dengan kisaran waktu membunuh lalat uji sebesar 95% pada hari ke 4,70 hingga hari ke 7,36,  sedangkan pada kerapatan konidia terendah 1,2 x 10 6 konidia/ml, kemampuan cendawan membunuh lalat uji cenderung lebih lambat, yaitu dalam waktu  8,97 hari dengan kisaran waktu membunuh lalat uji 7,95–10,11 hari. Nilai slope yang ditunjukan pada (Tabel.
1) terhadap M. anisopliae berkisar dari 2,337 ± 0,43 hingga 7,103 ± 0,14, artinya bahwa semua perlakuan kerapatan bersifat homogen ditunjukan dari nilai slope lebih dari 2,00. Hal
ini sesuai dengan pernyataan Servin-Villagas et al . (2006), bahwa respon homogenitas pada populasi dapat dilihat dari nilai slope , yang juga berhubungan dengan tingkat resistensi terhadap insektisida. Hal ini membuktikan bahwa strain Musca domestic tersebut memiliki tingkat individu yang sama kerentanannya terhadap cendawan Metarhizium anisopliae
Tabel 1. Uji hayati Metarhizium anisopliae terhadap
imago Musca domestica Kerapatan konidia Strain M. domestica Ampas Tahu
LT 50 Slope/SD (P0) Kontrol P(1) 1,2x konidia/mL - 8,97 (7,95 – 10,11) - 5,028 ± 0,19 (P2) 3,6xkonidia/1mL 7,78 (6,65 – 9,10) 3,561 ± 0,28 (P3) 6xkonidia/1mL 7,58 (6,89 – 8,35) 7,103 ± 0,14 (P4) 8,4xkonidia/1mL 5,88 (4,70 – 7,36) 2,337 ± 0,43 (P5) 10,8xkonidia/1mL 4,53 (3,72 – 5,49) 2,888 ± 0,35 Hasil penelitian yang telah dilakukan membuktikan bahwa cendawan Metarhizium anisopliae mampu membunuh imago lalat M . domestica dengan berbagai tingkat kerapatan kondia. Namun dengan pemberian tingkat kerapatan konidia yang tinggi, kematian lalat uji cenderung lebih cepat dibandingkan dengan tingkat kerapatan konidia terendah. Hal ini sesuai dengan pernyataan Khairunnisa et al . (2014) yang menyatakan bahwa semakin tinggi tingkat kerapatan konidia yang diinfeksikan pada serangga uji dalam perlakuan, maka semakin tinggi peluang kontak antara patogen dengan inangnya, sehingga proses kematian serangga yang terinfeksi semakin cepat. Hal ini ditunjukan dari nilai LT 50 (Tabel 1) pada konsentrasi tinggi 10,8 x konidia/ml, kematian imago M . domestica cenderung lebih cepat terjadi yaitu dalam waktu 3,72 hari hingga 5,49 hari. Simamora et al . (2013) juga menyatakan bahwa penggunaan cendawan entomopatogen dalam pengendalian hama antara lain ditentukan oleh konsentrasi/kepadatan dan daya kecambah konidia.
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020) ISSN 2460-1365
Cendawan Metarhizium spp. dikenal memiliki kemampuan dalam menghasilkan toksin yaitu destruksin yang bisa membunuh serangga inang dengan merangsang atau memacu terjadinya kerusakan pada jaringan serangga (Tanada & Kaya 1993).
Gambar 1. Miselium cendawan M . anisopliae menyelimuti tubuh Imago M . domestica
Pada penelitian yang telah dilakukan selama proses aplikasi terjadi perubahan tingkah laku lalat yang ditandai dengan lambatnya pergerakan imago M . domestica , menurunnya aktivitas terbang dan makan, imago lalat cenderung menempel pada dinding toples sebelum akhirnya mati. Hal tersebut sesuai dengan pernyataan Gindin et al. (2000), bahwa aktivitas lalat yang terinfeksi cendawan entomopatogen akan menunjukan gejala berupa penurunan nafsu makan karena sistem syaraf serangga terganggu.
Sistem syaraf serangga memegang peranan penting dalam mengatur proses aktivitas dan bila
terjadi gangguan sistem maka akan mengacaukan semua perilaku termasuk bereproduksi dan memenuhi  kebutuhan makan. Imago Musca domestica yang telah terinfeksi, tubuhnya akan mengeras (Gambar 1), miselium cendawan yang berwarna putih selanjutnya menyelimuti tubuh imago hingga lama kelamaan warna tersebut akan berubah menjadi hijau tua. Cendawan patogen yang masuk ke dalam tubuh serangga tidak melalui saluran makanan tetapi langsung masuk ke dalam tubuh melalui kulit atau integumen. Konidia selanjutnya akan memperbanyak diri melalui pembentukan hifa dalam jaringan epicutikula, epidermis, hemocoel serta jaringan-jaringan lainnya hingga semua jaringan tubuhn lalat dipenuhi oleh miselia jamur (Agastya et al. 2018)

## Simpulan
Keefektifan cendawan M . anisopliae dalam membunuh imago M . domestica yaitu pada kerapatan 8,4 x 10 6 konidia/ml yakni sebesar 95 % pada LT 50 selama 5,88 hari.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Direktorat Jenderal Pembelajaran dan Kemahasiswaan, (Ristekdikti) yang telah membantu pendaan pada Program Kreativitas Mahasiswa (PKMP) tahun 2017)

## Daftar Pustaka
Amiruddin, M., Umrah, & Alwi M. 2012. Keefektivan Metarhizium anisopliae sebagai Agen Pengendali Hayati terhadap Larva Lalat Musca domestica L. J urnal Biocelebes, 6: 48-55.
Agastya, I.M.I., Ameliawati, P. & Fikrinda, W. 2018. Eksplorasi dan identifikasi Jamur Patogen serangga di Lahan kering  Serangga di Rhizosfer Lahan Kering Kabupaten Malang. Jurnal Penelitian Pertanian Terapan , 17 (3): 13-17. Hastutiek & Fitri, L. 2007. Potensi Musca domestica Linn. sebagai Vektor Beberapa Penyakit. Jurnal Kedokteran Brawijaya, 23: 125-136.
Hasnah, Susana & Husin, S. 2012. Keefektifan Cendawan Beauveria bassiana Vuill terhadap Mortalitas Kepik Hijau Nezara viridula L. pada Stadia Nimfa dan Imago. Jurnal Floratek , 7: 13-24.
Gindin, G., Geschtovt, N.U., Raccah, B., & Barash I. 2000. Pathogenicity of Verticillium Lecanii to different developmental stages of the silverleaf whitefly. Bemisi argentifolii Phytoparasitica,
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)*
1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi,
Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
28: 229-239.
Khairunnisa, Martina A., & Titrawani. 2014. Uji efektivitas jamur Metarhizium anisopliae cps.t.a Isolat Lokal terhadap Hama Rayap ( Coptotermes curvignathus ). Jom Fmipa, 1: 384-392.
Kustiati, Yusmalinar, S., Susanti, S, Rahayu R., Heriani N., Ahmad I. 2015. Resistensi Lalat Rumah Musca domestica L. (Diptera: Muscidae) dari Empat Kota di Indonesia terhadap Permetrin dan Propoksur. Jurnal Entomologi Indonesia , 12 (3): 123-124.
Lestari, Yuniar., Boewono, Damar T., & Iravati, S. 2005. Efektivitas Ekstrak Etanol Beberapa Jenis Tanaman terhadap Mortalitas Lalat Musca domestica di Laboratorium. Sains Kesehatan, 18: 115-125.
Servin-Villegas, R, Garcia, HJL., Murilo, AB., Tejas A., & Martinez, C.J.L. 2006. Stability of insecticides resistance of silverleaf whitefly (Homoptera: Aleyrodidae) in the absence of selection pressure. Folia Entomológica Mexicana, 45: 27–34.
Simamora, L, O, Bakti, D, Oemry, S, & Manik, F. 2013. Kajian epizootic Metarhizium anisopliae pada larva tritip ( Plutella xylostella L.) (Lepidoptera: Plutellidae) di rumah Kaca. Jurnal Online Agroekoteknologi 1:166-177.
Suryadi Y, & Kadir, ST. 2007. Pengamatan Infeksi Jamur Patogen Serangga Metarhizium anisopliae (metsch. sorokin) pada Wereng Coklat. Berita Biologi, 6: 489-495.
Suprayogi, Marheni, & Oemry, S. 2015. Uji Efektifitas Jamur Entomopatogen Beauveria bassiana dan Metarhizium anisopliae terhadap Kepik Hijau ( Nezara  viridula L.) (Hemiptera ; Pentatomidae) pada Tanaman Kedelai (Glycine max L.) di Rumah Kasa. Jurnal Online Agroekoteknolog i, 3 (1): 320-327.
Tanada Y, & Kaya HK.  1993. Insect Pathology . San Diego: Academic Press, INC. Harcourt Brace Jovanovich, Publisher.
Widiyanti, Ni Luh, P.M., & Muyadihardja, S. 2004. Uji Toksisitas Metarhizium anisopliae terhadap Larva Nyamuk Aedes Aegypti. Media Litbang Kesehatan, 14: 25-30.