Pengaruh ekstrak tempe kacang tunggak ( vigna unguiculata (l.) walp) terhadap kadar malondialdehid pada tikus putih yang diinduksi karbon tetraklorida
Effect of vigna unguiculata (l.) walp tempeh extract against malondialdehyde on carbon tetrachloride- induced toxicity in white rats
Lola Ayu Istifiani 1* , Irma Sarita Rahmawati 2 , Rahma Micho Widyanto 3 , Rahmi Nimas Sabrina 4

## Abstract
Background: Free radicals that accumulate in the body can cause degenerative diseases, causing oxidative stress. One of the most damaging impacts of ROS is lipid peroxidation, which produces malondialdehyde (MDA). Consuming foods substantial in antioxidant content, such as Vigna unguiculata (L.) Walp tempeh, which contains antioxidants such as phenolics and flavonoids, can help to reduce MDA levels.
Objectives: The aim of this study is to determine the effects of Vigna unguiculata (L.) Walp tempeh extract to reduce MDA levels in rats induced by carbon tetrachloride (CCl 4 ). Methods: This study used a post test only control group design on male white rats (Rattus norvegicus) on male white rats (Rattus norvegicus) induced by CCl 4 . The research was conducted at the Biosciences Institute Laboratory and the Dietetics and Culinary Laboratory at Brawijaya University from September to October 2022. A sample of 25 male rats was divided into 5 groups, namely negative control, positive control, and the group induced by CCl 4 with variations in the administration of cowpea tempeh ethanol extract, namely 3, 6, and 9% for 7 days. After that, the rats blood was taken to analyzed the rats MDA level using a spectrophotometer at a wavelength of 532 nm. Data analysis used One Way ANOVA and continued with post hoc Dunnett t (2-sided) test at 95% CI.
Results: There  were  significant  differences  in  MDA  level  between  groups  (p=0,04).  MDA  levels  were  significantly ( p =0,04) higher in the K+, T1, and T3 groups than in the control group (2,227±0,595). Furthermore, the MDA level in the T2 group (2,838±0,076) was not statistically different from the normal group ( p >0,05). Conclusion: This  study  has  shown  that  administering  rats  with Vigna unguiculata (L.)  Walp  tempeh  extract  has  the potential to decrease MDA levels in rats induced by CCl 4 .

## Keywords
Vigna unguiculata (L.) Walp Tempeh, Oxidative stress, Carbon Tetrachloride, Malondialdehyde

## Abstrak
Latar  Belakang: Radikal  bebas  yang  menumpuk  di  dalam  tubuh  dapat  menyebabkanpenyakit  degeneratif  sehingga menimbulkan  stres  oksidatif.  Salah  satu  dampak  paling  merusak  dari  ROS  adalah  peroksidasi  lipid,  yang  menghasilkan malondialdehid (MDA). Kandungan antioksidan (fenolik dan flavonoid) pada tempe kacang tunggak ( Vigna unguiculata (L.) Walp) dipercaya dapat membantu menurunkan kadar MDA. Tujuan: Tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui efek  ekstrak  tempe  kacang  tunggak  dalam  menurunkan kadar MDA pada tikus yang diinduksi karbon tetraklorida (CCl 4 ). Metode: Penelitian ini merupakan post test only control group design pada tikus putih jantan (Rattus norvegicus) yang diinduksi  CCl 4 .  Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Institut  Biosains  serta  Laboratorium  Dietetik  dan  Kulinari Universitas Brawijaya pada bulan september sampai oktober 2022. Sampel 25 ekor tikus dibagi menjadi 5 kelompok yaitu  kontrol  negarif,  kontrol  positif,  dan  kelompok  yang  diinduksi  CCl 4 dengan  variasi  pemberian  ekstrak  etanol
1 Department of Nutrition, Faculty of Health Sciences, Universitas Brawijaya, Indonesia.
2 Department of Nutrition, Faculty of Health Sciences, Universitas Brawijaya, Indonesia.
3 Department of Nutrition, Faculty of Health Sciences, Universitas Brawijaya, Indonesia.
4 Department of Nutrition, Faculty of Health Sciences, Universitas Brawijaya, Indonesia.
Penulis Koresponding:
Lola Ayu Istifiani : Department of Nutrition, Faculty of Health Sciences, Universitas Brawijaya, Indonesia. E-mail: istifiani@ub.ac.id

## Original Research
SAGO: Gizi dan Kesehatan 2024, Vol. 5(2) 336-343
© The Author(s) 2024
DOI: http://dx.doi.org/10.30867/sago.v5i2.1500 https://ejournal.poltekkesaceh.ac.id/index.php/ gikes Poltekkes Kemenkes Aceh
Pengaruh ekstrak tempe kacang tunggak....
tempe  kacang tunggak  yaitu  3,  6 dan  9%  selama  7  hari.  Setelah  itu,  darah tikus  diambil  untuk  dianalisis  kadar  MDA tikus menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 532 nm. Analisis data menggunakan One Way ANOVA, dilanjutkan dengan post hoc Dunnett t (2 sided) pada CI 95%.).
Hasil: Terdapat perbedaan yang signifikan pada kadar MDA antar kelompok perlakuan (p = 0,04). Kadar MDA secara signifikan (p=0,04) lebih tinggi pada kelompok K+, T1, dan T3 dibandingkan kelompok kontrol (2,227±0,595). Selain itu, kadar MDA pada kelompok T2 secara statistik tidak berbeda signifikan dengan kelompok normal (p>0,05). Kesimpulan: Pemberian ekstrak tempe kacang tunggak berpotensi menurunkan kadar MDA pada tikus yag diinduksi CCl 4 .
Kata Kunci : Tempe Vigna unguiculata (L.) Walp, Stres Oksidatif, Karbon Tetraklorida, Malondialdehid

## Pendahuluan
enderita  penyakit  degeneratif  atau  biasa disebut  penyakit  tidak  menular  pada  era global  saat  ini  terus  menerus  meningkat.
Pada tahun 2 023 diperkirakan penyakit degeneratif menyebabkan  74%  kematian  secara  global  (WHO, 2023).  Di  negara  maju  dan  berkembang  seperti Indonesia  juga  menghadapi  beban  ganda  yaitu penyakit  menular  dan  tidak  menular  (Boutayeb, 2010).  Hasil  Riskesdas  tahun  2018  menunjukkan bahwa prevalensi penyakit tidak menular mengalami  kenaikan  jika  dibandingkan  dengan Riskesdas  2013.  Prevalensi  diabetes  mellitus mengalami  peningkatan  dari  6,9%  menjadi  8,5%. Sedangkan  penderita  hipertensi  meningkat  dari 25,8% menjadi 34,1% (Kemenkes RI, 2018).
Penyakit  tidak  menular  atau  biasa  disebut penyakit  degeneratif  seringkali  dipengaruhi  oleh radikal bebas yang menumpuk di dalam tubuh dan mengakibatkan  fenomena  yang  disebut  stres oksidatif (Amanda et al., 2019). Stres oksidatif  juga disebabkan oleh ketidakseimbangan dalam pembentukan reactive  oxygen  species (ROS)  dan ketidakmampuan  tubuh  dalam  menetralisirnya (Vona  et  al.,  2021).  Selain  itu,  juga  dapat  dianggap sebagai ketidakseimbangan antara pro-oksidan  dan antioksidan dalam tubuh (Rahal et al., 2014).  Lebih lanjut,  stres  oksidatif  dapat  bermanifestasi  dan meyebabkan  peroksidasi  lipid  yang  menghasilkan malondialdehyde  (MDA).  Peningkatan  kadar  MDA mengindikasikan  adanya  proses  oksidasi  dalam membran sel tubuh (Situmorang & Zulham, 2020).
Antioksidan  merupakan  kelas  molekul  kimia yang  dikaitkan  dengan  manfaat  kesehatan.  Fungsi dari antioksidan adalah membantu mencegah efek berbahaya  dari  ROS  (Pruteanu  et  al.,  2023).  Di dalam  tubuh  manusia  terdapat  mekanisme pertahanan  dalam  menetralisir  ROS  untuk menghindari  kerusakan  oksidatif  akibat  radikal bebas.  Kecukupan  antioksidan  dalam  tubuh
manusia dapat dipertahankan dengan mengonsumsi makanan yang mengandung antioksidan  seperti  senyawa  fenolik,  karotenoid, antosianin,  dan  tokoferol  yang  ditemukan  dalam buah-buahan dan sayuran (Chaudhary et al., 2023).
Selain  itu,  proses  fermentasi  juga  dapat meningkatkan aktivitas antioksidan dengan mendorong  pemecahan  dinding  sel  tanaman, sehingga membantu melepaskan atau menghasilkan berbagai senyawa antioksidan (Zhao et al., 2021). Sebagai hasil dari berbagai perubahan biokimia  yang  terjadi  selama  fermentasi,  maka terjadi  perubahan  rasio  komponen  nutrisi  dan antinutrisi yang mempengaruhi kualitas bioaktivitas dan daya cerna produk (Hur et al., 2014). Salah satu produk hasil fermentasi adalah tempe yang memiliki nilai gizi, daya cerna dan antioksidan yang baik bagi kesehatan (Sari & Mardhiyyah, 2020).
Tempe merupakan produk fermentasi tradisional yang menjadi menu sehari-hari masyarakat  Indonesia  (Sari  &  Mardhiyyah,  2020). Rata-rata  konsumsi  tempe  di  Indonesia  antara tahun  2021  dan  2023  diperkirakan  sebesar  7,13  kg per  kapita  per  tahun.  Pada  umumnya  tempe diproduksi  dengan  menggunakan  kedelai  sebagai bahan  baku  utama  pembuatannya.  Akan  tetapi peningkatan  konsumsi  tempe  tersebut  berbanding tebalik  dengan  penurunan  produksi  kedelai  di Indonesia.  Produksi  kedelai  nasional  mengalami penurunan  3,05%  pada  tahun  2022  dibandingkan dengan tahun 2021 (Kementerian Pertanian, 2021). Di  Indonesia,  terdapat  beberapa  jenis  tanaman polong-polongan  yang  kandungan  proteinnya sebanding  dengan  kedelai,  misalnya  saja  kacang tunggak  ( Vigna unguiculata (L.)  Walp)  khususnya varietas  KT  1  yang  mempunyai  kandungan  protein yang  tinggi  (22,5%)  dibandingkan  varietas  lainnya (Sari & Mardhiyyah, 2020).
Total fenol merupakan senyawa antioksidan yang  umumnya  terdapat  pada  kacang-kacangan.
P
Selama  fermentasi,  kandungan  total  fenolik  tempe mengalami  peningkatan,  hal  ini  disebabkan  adanya bakteri yang mensintesis senyawa antioksidan (Dewi et  al.,  2010).  Adanya  aktivitas  fenol,  flavonoid,  dan antioksidan  yang  terkandung  dalam  tempe  kacang tunggak memberikan  potensi  dalam pengembangan produk  pangan  yang  dapat  mencegah  penyakit kanker  dan  penyakit  degeneratif  (Astawan,  2013). Kandungan antioksidan pada kacang tunggak antara lain  seperti  fenolik  (43,94  mg  GAE/100  g)  dan flavonoid (4,25 mg GAE/100 g) (Arinanti, 2018).
Beberapa penelitian terkait dengan antioksidan menunjukkan bahwa antioksidan dapat mencegah terjadinya peroksidasi lipid (Harun et al., 2017).  Berdasarkan  hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  ekstrak  kacang  tunggak  berpotensi  sebagai antioksidan  untuk  menurunkan  kadar  MDA  pada serum dan otak, serta mencegah penurunan jumlah sel endotel aorta (Haryati et al., 2021).
Pemilihan  tempe  kacang  tunggak  dalam penelitian ini adalah karena kandungan lemak dan aktivitas antioksidan yang terkandung pada kacang tunggak.  Kacang  tunggak  memiliki  kandungan lemak 0,67% dan aktivitas antioksidan 59,6% yang mana lebih tinggi jika dibandingkan dengan tempe kedelai yang memiliki kandungan lemak 8,20% dan aktivitas  antioksidan  56,66%  (Dewi  et  al.,  2010). Aktivitas  antioksidan  yang  terkandung  dalam ekstrak  tempe  kacang  tunggak  diyakini  mampu memperlambat  atau  mencegah  proses  oksidasi dalam tubuh (Maryawati et al., 2014).
Pada  umumnya  pemberian  obat-obatan merupakan penanganan yang umum bagi penderita penyakit  degeneratif.  Akan  tetapi  pengobatan tersebut  dapat  memberikan  efek  samping  bagi penderita.  Sehingga  perlu  dilakukan  penelitian sebagai  alternatif  lain  yang  dapat  digunakan  untuk pengobatan  pada  penderita  penyakit  degeneratif. Salah  satu  alternatif  pengobatan  yang  dapat dilakukan  adalah  dengan  mengkonsumsi  makanan yang  mengandung  antioksidan  seperti  yang terkandung  pada  tempe  kacang  tunggak.  Sehingga tujuan  dari  penelitian ini  adalah  untuk  mengetahui efek  pemberian  ekstrak  tempe  kacang  tunggak terhadap kadar MDA pada tikus dengan pemberian stres oksidatif berupa induksi CCl 4 .

## Metode
Penelitian ini merupakan eksperimen in vivo dengan menggunakan  metode true  eksperimental .  Tikus
wistar  jantan  ( Rattus  norvegicus )  dengan  berat  150- 200  g  digunakan  sebagai  hewan  percobaan  dalam penelitian  ini.  Penelitian  dan  pengumpulan  data dilakukan  pada  bulan  September  2022  sampai dengan Oktober 2022. Penelitian ini mendapat Surat Etik No. 105-KEP-UB-2022 dari Universitas Brawijaya pada tanggal 13 Agustus 2022.

## Produksi Tempe Kacang Tunggak
Tempe dan tepung tempe kacang tunggak diproduksi selama dua hari di Laboratorium Dietetik dan Kulinari, Departemen  Gizi,  Fakultas  Kesehatan  Universitas Brawijaya.  Kacang  tunggak  dibersihkan  dan  direbus selama 15 menit kemudian dinginkan. Setelah dingin, kacang  tunggak  diinokulasi  dengan  ragi  tempe, ditutup  dengan  daun  pisang,  dan  difermentasi  pada suhu kamar selama 35 hingga 45 jam.

## Produksi Tepung Tempe Kacang Tunggak
Untuk  mempercepat  proses  pengeringan,  tempe kacang tunggak yang sudah jadi kemudian dipotong kecil-kecil.  Tempe  kacang  tunggak  kemudian dikeringkan dalam food dehydrator pada suhu 60°C selama  1,5  jam.  Untuk  memperoleh  tepung  tempe kacang  tunggak,  tempe  kering  kemudian  digiling menjadi  tepung  dengan  menggunakan  penggiling dan diayak menggunakan ayakan 80 mesh. Hasilnya kemudian dimasukkan ke dalam plastik vacuum dan disimpan untuk pengujian laboratorium.

## Pembuatan Ekstrak Tempe Kacang Tunggak dengan Etanol
Timbangan  digital  digunakan  untuk  menimbang tepung  tempe  kacang  tunggak  sebanyak  150  g. Tempe  kacang  tunggak  yang  telah  dihaluskan kemudian  dimasukkan  ke  dalam  wadah  dan dimaserasi  dengan  cara  direndam  dalam  1.500  cc etanol dengan perbandingan 1:10 (b/v). Setelah itu wadah  ditutup  rapat  dan  disimpan  pada  suhu kamar  selama  5  hari.  Ekstrak  kemudian  disaring menggunakan kain kasa dan kertas saring sebelum dimasukkan  ke  dalam  botol.  Ekstrak  kasar  yang dihasilkan  kemudian  diuapkan  menggunakan rotary evaporator pada suhu 40°C.

## Perlakuan Hewan Coba
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Institut Biosains  Universitas  Brawijaya.  Pada  penelitian  ini menggunakan  25  ekor  tikus  putih  jantan  ( Rattus norvegicus strain  Wistar)  dengan  berat  200-300 gram. Kemudian hewan coba diaklimatisasi selama satu  minggu  setelah  mendapat  pakan  teratur.
Pengaruh ekstrak tempe kacang tunggak....
Setelah  satu  minggu  adaptasi,  hewan  percobaan dibagi  secara  acak  menjadi  lima  kelompok  (lima tikus  per  kelompok):  kontrol  negatif  (K-);  kontrol positif  yang  diinduksi  oleh  karbon  tetraklorida (CCl 4 )  1  ml/200g  BB  secara  intraperitoneal  (K+); kelompok  perlakuan  diinduksi  oleh  karbon tetraklorida  (CCl 4 )  1  ml/200g  berat  badan  +  3% ekstrak  tempe  kacang  tunggak  (T1);  kelompok perlakuan diinduksi oleh karbon tetraklorida (CCl 4 ) 1 ml/200g BB + 6% ekstrak tempe kacang tunggak (T2);  dan  kelompok  perlakuan  diinduksi  karbon tetraklorida  (CCl 4 )  1  ml/200g  BB  +  9%  ekstrak tempe kacang tunggak (T3). Tikus  diinduksi secara intraperitoneal  dengan  CCl 4 1  ml/200  g  BB  dan ekstrak tempe kacang tunggak diberikan secara  oral pada  kelompok  perlakuan  T1,  T2,  dan  T3  selama  7 hari. Dosis ekstrak tempe kacang tunggak didasarkan pada penelitian sebelumnya (Dewi et al., 2022).
Pemeriksaan  profil  kadar  MDA  dilakukan dengan memasukkan 100ul darah ke dalam tabung sentrifus  yang  diberi  label.  Pada  setiap  tabung ditambahkan  0,9  ml  aquabidest  ke  dalam  sampel. Kemudian ditambahkan 0,5 ml reagen TBA. Tabung yang  berisi  larutan  kemudian  dipanaskan  dalam penangas  air  pada  suhu  95°C  selama  1  jam. Kemudian  disentrifugasi  dengan  kecepatan  7000 rpm selama 10 menit. Absorbansi supernatan yang diperoleh  diukur  menggunakan  spektrofotometer pada panjang gelombang 532 nm.

## Analisis Data
Data  pengukuran  hasil  profil  MDA  dianalisis normalitasnya menggunakan uji Kolmogorov Smirnov .  Dari  analisa  tersebut  didapatkan  hasil  data berdistribusi  normal.  Selanjutnya  data  dianalisis dengan  menggunakan  uji One-Way  ANOVA .  Analisa dilanjutkan  dengan post  hoc  Dunnett  t (2  sided) untuk  mengetahui  perbedaan  efek  intervensi  pada kelompok dengan tingkat kepercayaan 95%.

## Hasil
Hasil  uji  statistik one  way  ANOVA (Tabel  1) menunjukkan  bahwa  kadar  MDA  pada  kelima kelompok  perlakukan  berbeda  signifikan  ( p <0,05). Hasil  uji  statistik post  hoc  Dunnett  t (2-sided) menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  signifikan ( p <0,05)  pada  kelompok  K+,  T1  dan  T3 dibandingkan dengan kelompok normal.
Kadar  MDA  pada  kelompok  K+,  T1  dan  T3 secara signifikan ( p <0,05) lebih tinggi dibandingkan
dengan  kelompok  normal  (2,227  ±  0,595).  Lebih lanjut,  kadar  MDA  pada  kelompok  T2  (2,838  ± 0,076) tidak berbeda signifikan ( p >0,05) dibanding dengan  kelompok  normal.  Akan  tetapi,  kelompok perlakuan ini memilik hasil yang hampir mendekati kelompok  normal  dibandingkan  dengan  kelompok perlakuan lainya.
Table 1. Kadar MDA pada hewan coba
f Kadar MDA (ng/100 μ l) Lower Bound Upper Bound Nilai P K- 2 2,227 ± 0,595 a 1,806 2,648 0,04 K+ 3 2,999 ± 0,200 b 2,502 3,496 T1 2 3,238 ± 0,089 b 2,435 4,040 T2 3 2,838 ± 0,076 a 2,649 3,026 T3 3 3,126 ± 0,295 b 2,392 3,858

## Pembahasan
Pemberian  CCl 4 diberikan  untuk  menghasilkan radikal  bebas  yang  mampu  menginduksi  stres oksidatif  pada  hewan  coba  (Ismail  &  Eassawy, 2016).  Level  dari  stres  oksidatif  dapat  diukur dengan menggunakan profil MDA yang merupakan hasil  akhir  dari peroksidasi lipid  akibat  pemutusan rantai asam lemak (Dewi et al., 2022). Peningkatan kadar  MDA  menunjukkan  status  antioksidan  yang rendah  di  dalam  tubuh,  sehingga  tidak  dapat mencegah  reaktivitas  senyawa  radikal  bebas  yang kemudian  masuk  ke  dalam  pembuluh  darah (Hardiany et al., 2019). ROS juga dapat diubah oleh lipid  peroksida  menjadi  bahan  kimia  reaktif  yang mampu  mengikat  silang deoxyribonucleic  acid (DNA)  dan  menginduksi  kematian  sel  (Haryati  et al., 2021).
Dari  hasil  uji  statistik  menunjukkan  adanya perbedaan yang signifikan (p<0,05) pada kelompok K+,  T1  dan  T3  dibandingkan  dengan  kelompok normal. Kadar MDA pada kelompok K+, T1 dan T3 secara signifikan (p<0,05) lebih tinggi dibandingkan dengan  kelompok  normal  (2,227  ±  0,595).  Hal  ini dapat disebabkan karena tingginya dosis CCl 4 yang diberikan  pada  tikus  (1ml/200  g  BB)  dalam  sekali injeksi.  Pemberian  dosis  ini  memiliki  tujuan  agar proses  terjadinya  stres  oksidatif  semakin  cepat. Akan  tetapi,  dampak  negatif  dari  tingginya  dosis pemberian  CCl 4 pada  tikus  dapat  mempercepat kerusakan  sel  hati  dan  berdampak  pada  kematian (Khan  et  al.,  2012).  Pemberian  CCl 4 dengan konsentrasi  tinggi  dapat  memberikan  gangguan fungsi  hati  yang  serius  pada  hewan  coba.  Pada
penelitian lain disebutkan bahwa  pemberian  dosis efektif  CCl 4 pada  tikus  adalah  sebanyak  0,1  ml/kg bb  dua  kali  seminggu  (Fahrudin  et  al.,  2020).  Selain dosis  CCl 4 yang  terlalu  tinggi,  lama  pemberian  CCl 4 juga berpengaruh pada kondisi tikus. Pada penelitian (Syahrin  et  al.,  2016),  pemberian  CCl 4 dengan  dosis 0,05cc/hari  selama  5  hari,  memperlihatkan  hasil histopatologik pada tikus mengalami peradangan dan perlemakan sel (Syahrin et al., 2016).
Enzim  alanine  aminotransferase  (ALT)  dan aspartate  aminotransferase  (AST)  merupakan enzim  yang  secara  umum  digunakan  sebagai penanda  adanya  kerusakan  hati  (Kendran  et  al., 2017).  Sehingga,  kerusakan  fungsi  hati  dapat menyebabkan  tingginya alanine  aminotransferase (ALT) dan aspartate aminotransferase (AST) dalam darah. Tingginya kadar ALP dalam darah merupakan indikasi  dari  kolestasis  dan  kerusakan  membran plasma  sel  hati.  Adanya  kolestasis  pada  tikus  yang diberikan  CCl 4 berakibat  pada  terganggunya  aliran empedu, sehingga mengganggu penyerapan kalsium  dan  vitamin  (Fahrudin  et  al.,  2020).  Selain itu,  kerusakan  hati  yang  terjadi  pada  tikus  akibat induksi  CCl 4 mengakibatkan  sekresi  hati  menurun dan  terganggunya  pencernaan  makanan  dan ekskresi zat-zat tidak berguna bagi tubuh (Hasan et al., 2018).
Tingginya kadar MDA pada kelompok K+, T1 dan T3 terjadi karena proses peroksidasi lipid pada tikus  yang  diberi  CCl 4 terus  berlanjut.  Disertai dengan  kemungkinan  adanya  kolestasis  yang menyebabkan  penyerapan  ekstrak  tempe  kacang tunggak  yang  mengandung  antioksidan  tidak optimal. Sehingga efek flavonoid yang terakandung dalam  ekstrak  tempe  kacang  tunggak  tidak  dapat memperbaiki  sel-sel  hati  melalui  kemampuannya dalam  mengeliminasi  radikal  bebas  (Sahlan  et  al., 2021).  Selain  itu,  Meningkatnya  kadar  MDA  pada tubuh  menyebabkan  salah  satu  antioksidan endogen  seperti  GSH  dalam  sel  akan  menurun (Sahlan  et  al.,  2021).  Penurunan  GSH  dalam  sel memiliki korelasi terhadap menurunnya detoksifikasi sel terhadap radikal bebas (Khan et al., 2012).
Kacang tunggak memiliki kandungan antioksidan  seperti  fenol  (43,94  mg  GAE/100  g) dan flavonoid (4.25 mg GAE/100 g) (Arinanti, 2018) Selain  itu,  kacang  tunggak  memiliki  aktifitas antioksidan  (59,6%)  yang  lebih  tinggi  dibanding dengan tempe kedelai (56,66%) (Dewi et al., 2010). Selain  itu  kacang  tunggak  merupakan  sumber berbagai  macam  isoflavon  seperti  genistein, quercetin,  dan  daidzein  yang  memiliki  fungsi
sebagai  anti-inflamasi  (Khusniyati  et  al.,  2014). Pada sebuah penelitian diketahui bahwa nilai rata- rata  kadar  MDA  pada  serum  dan  otak  menurun seiring  dengan  peningkatan  dosis  ekstrak  kacang tunggak.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  kacang  tunggak  dapat  menurunkan kadar MDA pada serum dan otak secara signifikan (Haryati et al., 2021). Selain itu, pemberian ekstrak kacang  tunggak  dengan  dosis  1,25  mg/kg  BB  tikus memberikan  hasil  positif  pada  penurunan  kadar MDA  tikus  yang  dilakukan  prosedur  ovariektomi (Setyarini et al., 2019).
Penelitian lain menyebutkan bahwa, perkecambahan  kacang  tunggak  berpengaruh signifikan  terhadap  kandungan  total  fenolik, kandungan total flavonoid, dan aktivitas antioksidan (Putri et al., 2021). Pada penelitian ini, kadar MDA pada kelompok T2 (2,838 ± 0,076) tidak berbeda  signifikan  (p>0,05)  dibanding  dengan kelompok normal. Akan tetapi, kelompok perlakuan  ini  memiliki  hasil  yang  hampir mendekati kelompok normal dibandingkan dengan kelompok  perlakuan  lainnya.  Lamanya  waktu pemberian  ekstrak  tempe  kacang  tunggak  yang singkat  (7  hari),  juga  dapat  menjadi  salah  satu faktor  yang  menyebabkan  penurunan  kadar  MDA yang kurang maksimal. Penelitian lain menunjukkan  bahwa  ekstrak  kacang  tunggak memberikan  dapak  positif  terhadap  penurunan kadar MDA pada serum and otak setelah diberikan selama  40  hari  (Haryati  et  al.,  2021).  Sedangkan pada penelitian lain menyebutkan bahwa pemberian isoflavon genistein dan daidzein selama 21  hari  dapat  menurunkan  kadar  MDA  tikus (Noviana  et  al.,  2022).    Sehingga  hasil  pada kelompok  T2  dapat  mengindikasikan  bahwa konstrasi  6%  ekstrak  tempe  kacang  tunggak berpotensi sebagai antioksidan untuk menurunkan kadar MDA.
Keterbatasan  pada  penelitian  ini  adalah, pemberian  ekstrak  tempe  kacang  tunggak  pada penelitian  ini  adalah  selama  7  hari,  sehingga  efek pemberian  dalam  jangka  panjang  masih  belum diketahui.  Selain  itu,  belum  diketahui  secara langsung dari nilai aktifitas antioksidan pada ekstrak kacang  tempe  tunggak,  sehingga  tidak  bisa menyimpulkan apakah masuk dalam jenis antioksidan  yang  kuat  atau  lemah.  Hal  lain  adalah pemberian  dosis  CCl 4 yang  tinggi  dan  juga  tidak dilakukan secara bertahap memungkinkan terjadinya  kekacauan  sistemik  pada  tubuh  tikus sebagai  hewan  model,  sehingga  mengakibatkan
Pengaruh ekstrak tempe kacang tunggak....
kurang  optimalnya  hasil  data  yang  diambil  sebagai parameter ukur.

## Kesimpulan
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak  tempe  kacang  tunggak  secara  oral  pada tikus tidak memiliki efek perlindungan antioksidan. Keberadaan  antioksidan  berupa    fenol  dan flavonoid  pada  ekstrak  tempe  kacang  tunggak tidak  mampu  melindungi  tikus  dari  radikal  bebas dan stres oksidatif akibat induksi CCl 4 .
Saran,  dari  penelitian  selanjutnya  adalah perlu  dilakukan  identifikasi  senyawa  aktif  dan  uji aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  tempe  kacang tunggak  untuk  mengetahui  jenis  senyawa  aktif serta  seberapa  kuat  aktivitas  antioksidan  pada ekstrak tempe kacang tunggak.

## Deklarasi Konflik Kepentingan
Tidak ada konflik kepentingan dari penulis maupun instansi sehubungan dengan penelitian, kepengarangan, dan/atau publikasi pada artikel ini.

## Ucapan Terima Kasih
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih  kepada  BPPM Fakultas  Ilmu  Kesehatan  Universitas  Brawijaya,  atas dukungan  yang  diberikan  terhadap  penelitian  ini, laboratorium  dietetik  dan  kulinari,  laboratorium institut  biosains  Universitas  Brawijaya,  serta  pihak- pihak yang telah membantu proses dalam penelitian.

## Daftar Rujukan
Amanda, K. A., Mustofa., S & Nasution S.H. (2019). Review  efek  antioksidan  pada  kemuning (Murraya  paniculata  (L.)  Jack). Medical Journal of Lampung University , 8(2), 265-272. Arinanti,  M.  (2018).  Potensi  senyawa  antioksidan alami  pada  berbagai  jenis  kacang. Ilmu  Gizi Indonesia , 1(2), 134-143.
Astawan,  M.  (2013). Jangan  takut  makan  enak: sehat  dengan  makanan  tradisional.  Jilid  2. Jakarta: PT Kompas Media Nusantara.
Balitkabi.  (2016).  Deskripsi  varietas.  Available  from https://balitkabi.litbang.pertanian.go.id/
Boutayeb, A. (2010). The burden of communicable and non-communicable diseases in developing  countries. Handbook  of  Disease
Burdens  and  Quality  of  Life  Measures ,  531 – 546. https://doi.org/10.1007/978-0-387- 78665-0_32
Chaudhary, P., Janmeda, P., Docea, A. O., Yeskaliyeva, B.,  Abdull  Razis,  A.  F.,  Modu,  B.,  Calina,  D.,  & Sharifi-Rad,  J.  (2023).  Oxidative  stress,  free radicals and antioxidants: potential crosstalk in the  pathophysiology  of  human  diseases. Frontiers in chemistry , 11, 1158198. https://doi.org/10.3389/fchem.2023.1158198
Dewi, I. P., Ulinnuha, J. U., & Holidah, D. (2022). The effect  of  sugarcane  leaf  extract  on malondialdehyde  plasma  levels  in  carbon tetrachloride-induced rats. Jurnal Farmasimed (JFM), 5(1), 99-106. https://doi.org/10.35451/jfm.v5i1.1340
Dewi,  I.  W.  R.,  Anam,  E.,  &  Widowati.  (2010).
Karakteristik  sensoris,  nilai  gizi  dan  aktivitas antioksidan  tempe  kacang  gude  (cajanus cajan (l.) millsp.) dan tempe kacang tunggak (vigna  unguiculata  (l.)  walp.)  dengan berbagai variasi waktu fermentasi.
Biofarmasi ,12,73-82.
https://doi.org/10.13057/biofar/f120204
Fahrudin,  F.,  Ningsih,  S.,  Wardhana,  H.  I.,
Hariwibowo,  D.  R.,  &  Hamida,  F.  (2020). Efektivitas  dosis  karbon  tetraklorida  (ccl4) terhadap  tikus  (rattus  norvegicus  l.)  sebagai hewan  model  fibrosis  hati. Berita  Biologi , 19(3), 411-422.
https://doi.org/10.14203/beritabiologi.v19i3 B.3961
Hardiany,  N.  S.,  Sucitra,  S.,  &  Paramita,  R.  (2019). Profile  of  malondialdehyde  (MDA)  and catalase specific activity in plasma of elderly woman. Health Science Journal of Indonesia , 10(2), 132-136. https://doi.org/10.22435/hsji.v12i2.2239.
Haryati,  N.  P.  S.,  Kurniawati,  E.  D.,  Lestary,  T.  T., Norahmawati,  E.,  Wiyasa,  I.  W.  A.,  Hidayati, D. Y. N., & Nurseta, T. (2021). Cowpea (Vigna unguiculata)  extract  reduce  malondialdehyde levels  and  prevent  aortic  endothelial  cell decline  in  ovariectomized  rats.  Medical Laboratory Technology Journal, 7(2), 132-143. https://doi.org/10.31964/mltj.v0i0.402
Hasan,  K.  M.  M.,  Tamanna,  N.,  &  Haque,  M.  A.
(2018).  Biochemical  and  histopathological profiling  of  wistar  rat  treated  with  brassica napus as a supplementary feed. Food science
Januari – April 2024 and human wellness , 7(1), 77-82. https://doi.org/10.1016/j.fshw.2017.12.002
Heegazy,  A.M.S.,  &  Fouad,  U.A.  2015.  Evaluation  of
lead hepatotoxycity: histological, histochemical  and  ultrastructural  study. Forensic Med Anat Res 2, 70-79. https://doi.org/10.4236/fmar.2014.23013 Hur, S. J., Lee, S. Y., Kim, Y. C., Choi, I., & Kim, G. B.
(2014).  Effect  of  fermentation  on  the antioxidant  activity  in  plant-based  foods.
Food chemistry , 160, 346-356.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2014.03 .112
Ismail, A. F., Salem, A. A., & Eassawy, M. M. (2016).
Hepatoprotective  effect  of  grape  seed  oil against carbon tetrachloride induced oxidative  stress  i n  liver  of  γ -irradiated  rat. Journal of Photochemistry  and Photobiology B: Biology , 160, 1-10. https://doi.org/10.1016/j.jphotobiol.2016.0 3.027.
Kemenkes  RI.  (2018).  Hasil  riset  kesehatan  dasar (Riskesdas)  2018.  Jakarta:  Badan  Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementerian RI. Available from: http://labdata.litbang.kemkes.go.id/
Kementerian  Pertanian.  (2021).  Proyeksi  luas panen  kedelai  ri  terus  menurun  sampai 2024. Available from:
https://www.pertanian.go.id/
Kendran, A. A. S., Arjana, A. A. G., & Pradnyantari, A.  A.  S.  I.  (2017).  Aktivitas  enzim  alanine- aminotransferase dan aspartate aminotransferase  pada  tikus  putih  jantan yang  diberi  ekstrak  buah  pinang.  Buletin Veteriner Udayana, 9(2), 132-138. https://doi.org/10.21531/bulvet.2017.9.2.13
2
Khan,  R.  A.,  Khan,  M.  R.,  Ahmed,  M.,  Sahreen,  S., Shah,  N.  A.,  Shah,  M. S.,  Bokhari,  J., Rashid, U.,  Ahmad,  B.,  &  Jan,  S.  (2012). Hepatoprotection  with  a  chloroform  extract of launaea procumbens against ccl4-induced injuries  in  rats. BMC  Complementary  and
Alternative Medicine , 12(1), 1-11. https://doi.org/10.1186/1472-6882-12-114
Maiti, K., Mukherjee, K., Gantait, A., Saha, B. P., & Mukherjee,  P.  K.  (2007).  Curcumin – phospholipid complex: preparation, therapeutic  evaluation  and  pharmacokinetic study  in  rats. International  journal  of pharmaceutics , 330(1-2), 155-163.
https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2006.09.025 Mayawati,  E.,  Pratiwi,  L.,  &  Wijianto.  (2014).  (Carica papaya  L.)  dalam  formulasi  krim  terhadap DPPH(2,2 - diphenyl - 1 - picrylhydrazil). Jurnal Mahasiswa  Farmasi  Universitas  Tanjungpura , 1(1), pp. 5–8.
Pruteanu,  L.  L.,  Bailey,  D.  S.,  Grădinaru,  A.  C.,  &
Jäntschi,  L.  (2023).  The  biochemistry  and effectiveness  of  antioxidants  in  food,  fruits, and  marine  algae. Antioxidants ,  12(4),  860. https://doi.org/10.3390/antiox12040860
Putri,  A.,  Wisaniyasa,  N.  W.,  &  Suparthana,  I.  P. (2021).  Pengaruh  lama  perkecambahan terhadap  total  fenol,  flavonoid,  dan  aktivitas antioksidan tepung kecambah kacang tunggak ( Vigna  unguiculata  L.  Walp .). Jurnal  Ilmu  dan
Teknologi Pangan , 10(1), 1-13. https://doi.org/10.24843/itepa.2021.v10.i01.p 04 Rahal, A., Kumar, A., Singh, V., Yadav, B., Tiwari, R., Chakraborty,  S.,  &  Dhama,  K.  (2014). Oxidative stress, prooxidants, and antioxidants: the interplay. BioMed research international , 2014;2014:761264. https://doi.org/10.1155/2014/761264
Sahlan,  M.,  Hapsari,  N.  R.  A.,  Pratami,  K.  D., Khayrani,  A.  C.,  Lischer,  K.,  Alhazmi,  A., Mohammedsaleh, Z. M., Shater, A. F., Saleh, F.  M.,  Alsanie,  W.  F.,  Sayed,  S.,  &  Gaber,  A. (2021). Potential hepatoprotective effects of flavonoids contained  in  propolis  from  South Sulawesi  against  chemotherapy  agents. Saudi  Journal  of  Biological  Sciences ,  28(10), 5461-5468.
https://doi.org/10.1016/j.sjbs.2021.08.022 Sari,  I.  P.,  &  Mardhiyyah,  Y.  S.  (2020).  Kajian literatur:  Potensi  pemanfaatan  protein tempe non-kedelai. Jurnal Teknologi Pangan , 14(2). https://doi.org/10.33005/jtp.v14i2.2457.
Sekunda,  K.  N.,  Ariosta,  A.,  Limantoro,  C.,  & Setiawan, A. A. (2021). Difference in profiles of  oxidative  stress  marker  (MDA)  in  STEMI and  NSTEMI. Jurnal  Kedokteran  Diponegoro (Diponegoro  Medical  Journal) ,  10(2),  145- 150. https://doi.org/10.14710/dmj.v10i2.29673
Situmorang, N., & Zulham, Z. (2020). Malondialdehyde  (MDA)  (zat  oksidan  yang mempercepat  proses  penuaan). Jurnal Keperawatan  Dan  Fisioterapi (JKF),  2(2),
117-123.
Pengaruh ekstrak tempe kacang tunggak....
https://doi.org/10.35451/jkf.v2i2.338 Venukumar,  M.  R.,  &  Latha,  M.  S.  (2002). Hepatoprotective  effect  of  the  methanolic extract  of  curculigo  orchioides  in  CCl4- treated  male  rats. Indian  Journal  of Pharmacology , 34(4), 269-275.
Vona,  R.,  Pallotta,  L.,  Cappelletti,  M.,  Severi,  C.,  & Matarrese,  P.  (2021).  The  impact  of oxidative  stress  in  human  pathology:  Focus on  gastrointestinal  disorders. Antioxidants , 10(2), 201.
https://doi.org/ 10.3390/antiox10020201. World Health Organization. (2021). Noncommunicable  diseases:  world  health organization.
Zhao, Y. S., Eweys, A. S., Zhang, J. Y., Zhu, Y., Bai, J., Darwesh, O. M., Hai, B. Z., & Xiao, X. (2021). Fermentation affects the antioxidant activity of  plant-based  food  material  through  the release  and  production  of  bioactive components. Antioxidants ,  10(12),  2004. https://doi.org/
10.3390/antiox10122004