## JKP

## JURNAL KESEHATAN PRIMA
http://jkp.poltekkes-mataram.ac.id/index.php/home/index p-ISSN: 1978-1334 (Print); e-ISSN: 2460-8661 ( Online)
Pemberian Ekstrak Cacao (Theobroma Cacao  L) Pada Model Huvecs Preeklampsia Terhadap Kadar Interleukin 8
Budi Rahayu  , Liberty Barokah
Program Studi DIII Kebidanan, Universitas Jenderal Achmad Yani Yogyakarta  budiayu88@gmail.com, Tlp: +285726449644

## Genesis  Naskah:
Diterima 16  April 2019; Disetujui 14 Mei 2019; Di Publikasi 9 Agustus 2019

## Abstrak
Preeklampsia  dan  eklampsia  adalah  penyakit  pada  kehamilan  yang  menjadi  salah  satu  penyumbang  angka kematian Ibu khususnya di Indonesia. Tahapan pertama dari preeklampsia ini adalah terjadi abnormalitas dalam remodelling  vaskular  trofoblastik  mengakibatkan  disfungsi  endotel,  tahap  kedua  pelepasan  faktor  plasenta kedalam sirkulasi darah seperti soluble fms-like tyrosine kinase (sFlt-1), TNF-α, IL-6, IL-8, angiotensin II tipe 1 reseptor antibodies (AT1-AA), dan thromboxan (TX) menyebabkan respon inflamasi dan peningkatan aktivasi sel  endotel.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  ekstrak  kakao  terhadap kadal IL-8 pada model HUVECs Preeklampsia. Penelitian true experimental dengan pendekatan yang digunakan post  test  only  control  group  design yang  dikerjakan  dilaboratorium  dengan invitro .  Kultur  HUVECs  dibagi menjadi  5  kelompok  masing-masing  dilakukan  replikasi  5x.  Pengukuran  kadar  IL-8  menggunakan  ELISA (Enzyme-Linked  Immunosorbent  Assay ).  Analisis  data  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  dengan uji Anova  one  way pada  kadar  IL-8,  selanjutnya  dilakukan  uji  perbandingan  berganda  ( Multiple Comparisons ) dengan uji Beda Nyata Terkecil/BNT ( Least Significant Difference / LSD ) Hasil penelitian pemberian  ekstrak  kakao  pada  kelompok  kontrol  positif  dan  3  dosis  kelompok  perlakuan  ternyata  dapat menurunkan secara bermakna (p-value 0.000< α 0.05, Anova One way) kadar IL-8.
Kata Kunci : Pre Eklampsia; Model HUVECs Preeklampsia; Interleukin 8

## The Effect Of Giving The Cacao (Theobroma Cacao L) Extract On Huvecs Preeclampsia Models To The Level Of Interleukin 8

## Abstract
Preeclampsia and eclampsia are diseases in pregnancy  which are one of the contributors to maternal mortality, especially  in  Indonesia.  The  first  stage  of  preeclampsia  is  abnormalities  in  trophoblastic  vascular  remodeling resulting  in  endothelial  dysfunction,  the  second  stage  of  release  of  placental  factors  into  the  blood  circulation such  as  soluble  fms-like  tyrosine  kinase  (sFlt-1),  TNF-α,  IL-6,  IL-8,  angiotensin  II  type  1  receptor  antibodies (AT1-AA), and thromboxan (TX) cause an inflammatory response and increase endothelial cell activation. The purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  of  giving  cocoa  extract  to  IL-8  lizards  on  the  HUVECs Preeclampsia model. True experimental research with an approach used in the post test only control group design was carried out in the laboratory with invitro. HUVECs cultures were divided into 5 groups each replicating 5x. Measuring  IL-8  levels  using  ELISA  (Enzyme-Linked  Immunosorbent  Assay).  The  data  analysis  used  in  this study  was  an  one  way  Anova  test  on  IL-8  levels,  then  multiple  comparisons  were  conducted  with  the  Least Significant  Difference  (LSD).  The  results  of  the  study  were  cacao  extract  in  the  control  group.  positive  and  3 doses  of  the  treatment  group  turned  out  to  significantly  reduce  (p-value  0.000  <α  0.05, Anova  One  way)  IL-8 levels.
Keywords: Preeclampsia; HUVECs Preeclampsia Model;  Interleukin 8

## Pendahuluan
Menurut Depkes RI, 2012 menunjukkan angka Kematian  Ibu  di  Indonesia  (AKI)  mengalami peningkatan  dari  228  per  100.000  kelahiran  hidup menjadi  359  per  100.000.  Penyebab  dari  jumlah kematian  ibu  tersebut  menurut  analisis  kematian    ibu di  Indonesia  tahun  2010  adalah  50%  kematian maternal disebabkan oleh pendarahan dan preeklampsia/ eklampsia (Depkes RI, 2012).
Preeklampsia  merupakan “the  disease  of theories” , di mana patofisiologinya masih belum jelas diketahui (Chuningham, 2010). Preeklampsia merupakan  karakteristik  penyakit  yang  ditandai dengan  kenaikan  tekanan  darah  disertai  dengan proteinuria pada wanita hamil dengan umur kehamilan setelah 20 minggu yang sebelumnya tidak mengalami hipertensi (Wang et al. , 2009).  Sindrom preeklampsia merupakan  kelainan  dua  tahap  yaitu  tahap  pertama bersifat  preklinis  ditandai  dengan  kelainan  dalam proses  remodelling  vaskular  trofoblastik  pada  arteri uterinae yang akan mengakibatkan terjadinya hipoksia plasenta.  Tahap  kedua,  pelepasan  faktor  plasenta  ke dalam  sirkulasi  maternal  seperti  soluble  fms-like tyrosine kinase (sFlt-1), TNF-α, IL-6,  IL-8, angiotensin  II  tipe  1  reseptor  antibodies  (AT1-AA), dan  thromboxan  (TX)  menyebabkan  respon  inflamasi dan  peningkatan  aktivasi  sel  endotel  (Borzychowski, 2006; Gilbert et al ., 2008; Redman,  2010).
Kondisi  preeklampsia  atau  eklampsia merupakan  kondisi  terjadinya  kenaikan  tekanan dan hipoksia pada endotel, akibat ketidakseimbangan substansi dari vasokonstriktor dan  vasodilasator  karena  disfungsi  endotel (Dharma  dkk.,  2005;  Susianto  dkk.,  2009). Kondisi disfungsi endotel menyebabkan peningkatan respon sitokin proinflamasi sehingga dibutuhkan antiinflamasi untuk merespon keadaan tersebut.
Biji  kakao (Theobroma  cacao  L) salah  satu yang  memiliki  potensi  sebagai  antiinflamasi  dan antioksidan  yang  banyak  mengandung  polifenol  (Hii et  al ,  2009).  Tiga  kelompok  utama  polifenol  kakao dapat dibedakan yaitu katekin (37%), antosianin (4%) dan proantosianidin (58%) (Hii et al , 2009). Selain itu penelitian  sebelumnya  menjelaskan  bahwa  kakao berfungsi sebagai antiinflamasi dan mampu menghambat  ekspresi  sel  adhesi  molekul  dan  matrik protease  sehingga  meneka  terjadinya  pengeluaran faktor proinflamasi (Choi et al. , 2004)
Biji  kakao  (Theobroma  cacao  L)  salah  satu yang  memiliki  potensi  sebagai  antiinflamasi  dan antioksidan  yang  banyak  mengandung  polifenol  (Hii et al , 2009). Ekstrak biji kakao (Theobroma cacao L) yang  banyak  mengandung  epikatein  tersebut  diduga dapat menurunkan faktor proinflamatori pada disfungsi endotel.

## Metode
Desain  penelitian  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah true  experimental dengan pendekatan  yang  digunakan post  test  only  control group  design dikerjakan  di  laboratorium  dengan invitro (Zainudin,  2011).  Kelompok  penelitian  terdiri dari  5  bagin  dan  masing-masing  akan  dilakukan replikasi  sebanyak  5  kali  (Solimun,  2002).  total keseluruhan  jumlah  sampel  dengan  masing-masing  5 replikasi adalah 30 sampel.
Kultur  HUVECs  setelah  konfluent  80%  pada hari  ke  5  kemudian  ditambahkan  dengan  plasma penderita  preeklampsia  2%  inkubasi  overnigt  dan lakukan  pengkoleksian  supernatan  untuk  pengukuran ELISA.
Bahan untuk kultur sel endotel tali pusat steril, Media  pengambilan  umbilikus  :  delonized  water, HEPES solution 2 ml, gentamycine, sodium hydrogen bicarbonat  dan phenol red 4 ml,  Hank’s Balance Salt Solution  (HBSS)  100  ml.  Pencucian  umbilikus  untuk menghilangkan eritrosit menggunakan PBSA ready to
use. Bahan  isolasi  sel  endothel  :  medium  serum  free, filer 0,2 μm, collagenase solution (SIGMA TYPE HA, C-6885).  Bahan  medium  serum  free  :  L-glutamin  2 mM  1,25  ml,  medium  199  (SIGMA,  M-5017),  nabic, antibiotik  menggunakan  penisilin  streptomisin  1  % dari  volume  total  medium  free.  Bahan  kultur  sel endhotel : gelatin 0.2 % (SIGMA, G1393), endhotelial complete  Medium  2  %  (Serum  free  medium  80  ml ditambah  FBS  (Fetal  Bovine  Serum)  sebanyak  10-15 %).
Bahan  Plasma  preeklampsia  2%  adalah medium  preeklampsia    yang  terdiri  dari    ½  medium komplit  ditambah  dengan  FBS  ( Fetal  Bovine  Serum )
5-7.5%,  kemudian  ditambahkan  plasma  penderita preeklampsi  sebanyak  2%  dari  total  medium preeklampsia yang dibutuhkan pada kultur HUVECs.
Bahan  pemeriksaan  kadar  IL-8  mengunakan supernatan  HUVEcs  diukur  dengan  menggunakan metode  ELISA.  Siapkan  reagen  dalam    suhu  ruang, atur  elisa  reader  dengan  panjang  gelombang  450  nm- 570  nm,  membuat  standart  dilution  sebanyak  7, membuat  PBS,  menyiapkan  microplate  dan  lakukan pencucian dengan wash buffer, tambahkan asay buffer 50  μL,  tambahkan  standard  dilution  50  μL  pada  well
standar  dan  sampel  50  μL  kemasing-masing  well sampel,  tutup  dengan  perekat  plate,  inkubasi  2  jam, pencucian  dengan  wash  soluttion  4x,  tambahkan Human  IL-8  Detection  Antibodi  kedalam  masing- masing  well  inkubasi  30  menit,  lakukan  pencucian dengan  wash  solution  4x,  tambahkan  100  μL Avidin HRP-A Solution well tutup dengan perekat inkubasi 30 menit, pencucian 5x dengan wash solution, Tambahkan 100 μL Substrate Solution F inkubasi 15 menit,  tambahkan  menambahkan  100  μL  Stop Solution  F  pada  masing-masing  well,  pembacaan dengan elisa reader, hitung OD.

## Hasil Penelitian dan Pembahasan
Data  hasil  uji Anova  one  way pada  kadar  IL-8 diperoleh  ada  perbedaan  yang  bermakna  rerata  kadar IL-8  kelima  kelompok  sampel  pengamatan,  hal  ini ditunjukkan dengan nilai p-value 0.000< . Selanjutnya pada uji perbandingan berganda ( Multiple Comparisons )  dengan  uji  Beda  Nyata  Terkecil/BNT ( Least  Significant  Difference / LSD )  diperoleh  hasil sebagai  berikut.  berdasarkan  hasil  uji  perbandingan berganda dengan uji LSD .
Tabel  1.  Hasil  Pengukuran  kadar  IL-8  (pg/mL)  pada  HUVEC  Model  Preklampsia  dan  HUVEC  Model Preeklampsia diberi Perlakuan Ekstrak Kakao
Kelompok pengamatan Rerata ± stan.dev p-value Kontrol Normal tanpa perlakuan (K1) 173.3 ± 52.78 0.000< 0.05 Model HUVECs preeklampsia (K2) 2225.7±863.3 a HUVECs+ 25 ppm kakao (K3) 1760.7±1374 a HUVECs+ 50 ppm kakao (K4) 238.3±19.8 b HUVECs+ 100 ppm kakao (K5) 161.3±12.6 b

## Gambar 1. Histogram Rerata kadar IL-8
Gambar  diatas    menunjukkan  histogram rerata  kadar  IL-8  pada  kelompok  kontrol  normal (K1),  kelompok  kontrol  model  (K2)  dan  3 kelompok HUVEC model yang dipapar ekstrak biji kakao  dosis  25  ppm,  50  ppm,  dan  100  ppm. Tampak  ada  penurunan  rerata    kadar  IL-8  seiring dengan  pertambahan  dosis  ekstrak  biji  kakao. Adapun  nilai  rerata    kadar  IL-8  terendah  sekaligus terdekat  dengan  rerata  kadar  IL-8  pada  kelompok kontrol  normal  tanpa  perlakuan  (173.3  ±  52.78 pg/ml) adalah pada kelompok perlakuan pemberian ekstrak  biji  kakao  dosis  100  ppm  (161.3±12.6 b pg/ml).
Hal  ini  dapat  dikatakan  bahwa  dalam penelitian  ini  dosis  ekstrak  biji  kakao  yang dianggap  paling  menurunkan    kadar  IL-8  dan optimum  adalah  dosis  100  ppm.  Jadi  dengan  kata lain  dosis  optimum  ekstrak  biji  kakao  100  ppm mampu  menurunkan  kadar  IL-8  yang  sangat bermakna.
Penelitian  ini  menunjukkan  hasil  pemberian ekstrak  biji  kakao  mampu  menurunkan  kadar  IL-8 pada  kultur  HUVECs  model  preeklampsia  seperti kadar  IL-8  pada  kelompok  HUVECs  normal  yang ditunjukkan  pada  tabel1.  Pada  penelitian  ini  dosis ekstrak  kakao  yang  dianggap  sudah  mampu
menurunkan kadar IL-8 kelompok model HUVECs preeklampsia  seperti  kadar  IL-8  pada  kelompok HUVECs  normal  adalah  dosis  ekstrak  kakao  50 ppm  dan  100  ppm.  Akan  tetapi  dosis  yang  paling rendah  menurunkan  kadar  IL-8  kelompok  model HUVECs  preeklampsia  seperti  kadar  IL-6  pada HUVECs  normal  adalah  dosis  ekstrak  biji  kakao 100 ppm.  Penelitian  secara invitro memperlihatkan bahwa  pemberian  ekstrak  kakao antara  2  jam-20 jam  pada  kultur  HUVECs  yang  diinduksi  LPS dengan  dosis  ekstrak  kakao  yang  berbeda  antara 0,05-50 μg/mL mampu secara signifikan mencegah kerusakan  sel  endotel  (Rusconi et  al., 2010).
Penelitian  yang  dilakukan  pada  manusia  dengan kondisi  yang  mengalami  stres  oksidatif  dengan mengkonsumsi  kakao  mampu  secara  signifikan meningkatkan  produksi  NO  dan  menekan  faktor proinflamasi seperti IL-8 (sies et al., 2005; Rusconi et al., 2010).
Hasil  menunjukkan  bahwa  tidak  ada perbedaan  yang  bermakna  rerata  kadar  IL-8  antara kelompok  kontrol  model  HUVECs  preeklampsia (K3)  (2225.7±863.3 a pg/mL)  dengan  kelompok perlakuan  pemberian  ekstrak  biji  kakao  25  ppm (K4) (1760.7±1374 a pg/mL L). Hasil berbeda pada dosis  kakao  50  ppm  yaitu  ada  perbedaan  yang
bermakna rerata kadar IL-8 antara kelompok model HUVECs  preeklampsia  (K3)    (2225.7±863.3 a pg/mL)  dengan  kelompok  perlakuan  pemberian ekstrak  biji  kakao  50  ppm    (K5)  (238.3±19.8 b ).
Pada  dosis  100  ppm  juga  menunjukkan  ada perbedaan yang bermakna rerata kadar IL-8  antara kelompok kelompok model HUVECs preeklampsia (K3)    (2225.7±863.3 a pg/mL)  dengan  kelompok perlakuan  pemberian  ekstrak  biji  kakao  100  ppm (K6) (161.3±12.6 b ) .
Hasil  dari  penelitian  menunjukkan  ada perbedaan  yang  bermakna  rerata  kadar  IL-8  antara kelompok  perlakuan  pemberian  ekstrak  biji  kakao dosis  25  ppm  (K4)  (1760.7±1374 a )  dengan kelompok  perlakuan  pemberian  ekstrak  biji  kakao dosis  50  ppm  (K5)  (238.3±19.8 b pg/ml)  dan  ada perbedaan bermakna dengan pemberian ekstrak biji kakao  dosis  100  ppm  (K6)  (161.3±12.6 b pg/ml).
Berdasarkan  nilai  reratanya  tampak  ada  penurunan rerata kadar IL-8 seiring pertambahan dosis ekstrak biji kakao. Sedangkan nilai rerata kadar IL-8 antara kelompok  perlakuan  pemberian  ekstrak  biji  kakao 50 ppm (K5) (238.3±19.8 b pg/ml) dengan kelompok perlakuan  pemberian  ekstrak  biji  kakao  100  ppm (K6)  (161.3±12.6 b pg/ml)  menunjukkan  tidak  ada perbedaan  yang  bermakna  dan  menunjukkan  ada penurunan  kadar  IL-8  seiring  pertambahan  dosis ekstrak biji kakao
Penelitan  Balzer  menyebutkan  konsumsi flavonoid  yang  terkandung  pada  kakao  mampu meningkatkan  fase  dilatasi  pembuluh  darah  perifer dan  memperbaiki  fungsi  vaskuler  pada  pasien dengan  penyakit  jantung  dengan  cara  menurunkan faktor proinflamasi seperti IL-8 dan menaikkan NO untuk  dilatasi  vaskuler  (Balzer et  al., 2008). Pada penelitian Jenny menyebutkan bahwa ekstrak kakao secara signifikan mampu menekan faktor proinflamasi dikarenakan fungsi dari ekstrak kakao
adalah sebagai antiinflamasi dan antioksidan (Jenny et al., 2009).
Beberapa studi mengatakan bahwa mekanime  antiinflamasi  dari  diet  tinggi  poliphenol yang terkandung dalam kakao mampu menghambat molekul proinflamasi seperti CRP, IL-8 dan TNFα. Pada penelitian invitro mengatakan bahwa metabolism prosianidin  dan  polifenol  kakao mampu  memodifikasi  tranduksi  signal  pathway intraceluler, dengan demikian diduga dapat memodulasi sintesis sitokin proinflamasi seperti IL- 6, IL-8, IL-1β, atau -2 (Vazquez-Agell et al., 2011).
Pada  konsentrasi  58  μg/mL  konsentrasi  ekstrak kakao  mampu  menurunkan  ekspresi  TNFα  dan level  mRNA  IL-8  pada  kultur  IL  HUVECs  yang diinduksi LPS (Chen, 1996; Andujar et al., 2012).

## Kesimpulan
Pemberian  ekstrak  biji  kakao  ( Theobroma cacao  L )  mampu  menurunkan  kadar  IL-8  pada HUVECs  model  Preeklampsia.  Dosis  ekstrak  biji kakao  25  ppm,  50  ppm,  100  ppm    mampu menurunkan  kadar  IL-8  seperti  kondisi  kultur HUVECs  normal.  Disarankan  penelitian  lanjutan untuk  menganalisis  pengaruh  ekstrak  biji  kakao dalam  kondisi  individu  yang  utuh  melalui  studi invivo pada  manusia  maupun  hewan  coba kemudian  dikonversikan  dengan  dosis  untuk manusia dan hewan.

## Daftar Pustaka
UNICEF.  KESEHATAN  IBU  DAN  ANAK.  2012. (Cited  1  November  2016)  Available  from (https://www.unicef.org/indonesia/id/A5_- _B_Ringkasan_Kajian_Kesehatan_REV.pdf.)
Departemen  Kesehatan  RI.    Profil  Kesehatan  RI 2012.  2012. (Cited 10 Oktober 2016)  available from(www.depkes.go.id/resources/download/.../ profil-kesehatan-indonesia-2012.pdf .)
Cunningham,  F.G.,  Mac  Donald,  P.C.,  Gant,  N.F., Leveno,  K.J.,  Gilstrap,  L.C.,  Hakins,  G.D. Williams  Obstetrics,  23th  ed.  London:  Pretice- Hall International. 2010.
Wang A., Rana S., Karumanchi A.S. Preeclampsia : The  Role  of  Angiogenic  Factors  in  Its Pathogenesis.Physiology, 2009, 24 : 147-158.
Borzychowski,  A.M.,  Sargent,  I.L.,  Redman,  C.W. Inflammation  and  Preeklampsia.  Semin  Fetal
Neonatal Med, 2006, 11 (5) : 309-316.
Gilbert,  J.S.,  Ryan  M.J.,  La  marca  Babbette  B,.
Sedeek  Mona,  Murphy  Sydeny  R.,  Granger,  J. P.  Pathophysiology  of  Hypertension  during Preeclampsia :  Linking Placental Ischemia  with Endothelial Dysfunction. Am J Obstet Gynecol,
2008, 294 :H541-H550.
Redman,  C.W.G.,  Sargent,    I.L,.Immunology  of Pre-Eclampsia. American Journal of Reproductive Immunology, 2010, 63 : 534-543.
Dharma,  R.,  Wibowo,  N.,  Raranta,  P.T.H.  2005 .
Disfungsi  Endotel  pada  Preeklampsia .    Makara Kesehatan . 9 (2) : 63-69.
Susianto,  I.A.,  Suharsono,  Hadijono  S.  2009 . Kadar  TNF-α,  IL-6  dan  Trofoblas  pada Preeklampsia  –  Eklampsia .  Medika  Media Indonesia .  43 (4): 166-173.
Choi  Jung-Suk,  Choi  Yean-Jung,  Park  Sung-Hee,
Kang  Jung-Sook,  Kang  Young-Hee.  2004. Flavones  Mitigate  Tumor  Necrosis  Factor-α- Induced  Adhesion  Molecule  Upregulation  in Cultured  Human  Endothelial  Cells  :  role Nuclear factor-kB. The Journal of Nutrition .
Solimun.  2002. Multivariate  Analisys  Structural Equation Modeling . Malang: Universitas Negeri Malang.
Hii,  C.L.,  Law,  C.  L.,  Suzannah,  S.,  Misnawi,  & Cloke,  M.  Polyphenol  in  Cocoa  (Theobroma cacao  L.).  Asian  Journal  of  Food  and  Agro- Industry, 2009, 2 (4) : 702-722.
Zainuddin, M. Metodologi Penelitian. Surabaya: Unair Press. 2011.
Rusconi,  M.,  Conti,  A.  Theobroma  cacao  L.,  The Foods of Gods : A Scientific Approach Beyond Myths  and  Claims.  Pharmacological  Research,
2010, 61 (2010): 5-13.
Sies,  H.,  Schewe,  T.,  Heiss,  C.,  Kelm,  M.  Cocoa Polyphenols  and  Inflamatory  Mediators.  Am  J Clin Nutr, 2005, 81 : 304S-12S.
Balzer,  J.,  Rassaf  T.,  Heiss,  C.,  Kleinbonggard,  P., Lauer,  T.,  Merx,  M.,  Heussen,  N.,  Gross,  H.B., Keen,  C.L.,  Schroeter,  H.,  Kelm,  M.  Sustained benefit in Vascular Function Through Flavanol- Containing  Cocoa  in  Medicated  Diabetic Patients,  Journal  of  the  American  College  of Cardiology, 2008, 51 (22): 2141-9.
Jenny,  M.,  Santer  E.,  Klein  A.,  Ledochowski  M.,
Schennach  H.,  Ueberall  F.,  Fuchs  D.  Cacao
Extracts  Suppress  Trytophan  Degradation  of
Mitogen Stimulated peripheral Blood Mononuclear Cells. Journal of
Ethnopharmacology, 2009, 122 : 261-267.
Chen,  C.,  Manning,  A.M.  TGF-β1,  IL-10  and  IL4 differentially  Modulate  The  cytokine-Induced Expression  of  IL-6  and  IL-8  in  Human Endothelial Cells. Cytokine, 1996, 8 (1): pp 58- 65.
Andujar,  Recio,  M.C.,  Giner,  R.M.,  Rios,  J.L. Cocoa  Polyphenols  and  Their  Potential  benefit for  Human  Health.  Oxidative  Medicine  and Cellular Longevity, 2012,  906352: 23.
Vazquez-Agell,M.,  Urpi-Sarda,M.,  Sacanella  E., Camino-Lopez,  S.,  Chiva-Blanch,  G.,  Llorente- Cortes,  V.,  Tobias,  E.,  Roura,  E.,  Andres- Lacueva, C., Lamuela-Raventos, R.M., Badimon,  L.,  Estruch  R.  Cocoa  Consumption Reduces  NF-kB  activation  in  Peripheral  Blood, 2011.