## INDUKSI MUTASI DENGAN IRADIASI SINAR GAMMA DAN SELEKSI IN VITRO UNTUK MENDAPATKAN EMBRIO SOMATIK KACANG TANAH YANG TOLERAN POLIETILENA GLIKOL

## A. Farid Hemon
Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Mataram Korespondensi: email: faridhemon_l963@yahoo.com

## ABSTRACT
INDUCTION  OF  MUTATION  USING  GAMMA  RAYS  AND  IN  VITRO  SELECTION  TO  DEVELOP SOMATIC EMBRYOS OF PEANUT TOLERANT TO POLYETHYLENE GLYCOL. The objectives of this experiment were to evaluate effectiveness of Gamma ray to somatic embryos culture to increase frequency of obtaining  polyethylene  glycol  (PEG)  insensitive  somatic  embryos  (SE)  of  cv.  Local  Bima  peanut.  The experiment  was  inisiated  with  induction  of  peanut  SE.  Mutation  induction  was  done  on  SE culture.  Somatic embryos that have been irradiated with Gamma ray were selected in medium containing polyethylene glykol 15%  (PEG  6000).  Results  of  the  experiment  achieved,  namely:  1)  Gamma  ray  dosage  affected  peanut  SE growth. Higher Gamma ray dosage used, it was more inhibited peanut SEs growth. Use of IS Gy dosage gave SEs  growth  better  than  up  dosage,  2)  embriogenic  calli  irradiated  with  Gamma  ray  dosage  15  and  20  Gy showed  high  SE  proliferation,  high  number  of  SE  per  explant,  high  SE  total  when  selected  in  medium containing PEG 15%, and lower SE growth occured on SE calli without irrardion and dosage 25 Gy. Key words: Mutation, Gamma ray

## PENDAHULUAN
Salah satu program pemuliaan tanaman kacang tanah adalah meningkatkan keanekaragaman genetik. Plasma  nutfah  kacang  tanah  di  Indonesia  sangat terbatas  dibanding  jenis  tanaman  lain.  Upaya  yang mungkin  dilakukan  untuk  memperluas  variasi genetik tanaman adalah hibridisasi, mutagenesis, dan induksi  variasi  somaklonal  dalam  kultur  in  vitro (Pattee dan Stalker 1995).
lnduksi  mutasi  dapat  terjadi  secara  alamiah atau  melalui  teknik  kimia  atau  fisik.  lnduksi  mutasi secara  kimia  atau  fisik  juga  dapat  memperluas keragaman  genetik  tanaman  melalui  perubahan susunan  gen  yang  berasal  dan  tanaman  itu  sendiri. Mutasi  spontan  (alamiah)  tidak  mampu  memberikan keragaman  genetik  secara  cepat  dan  akurat.  Oleh karena  itu,  metode  untuk  menginduksi  mutasi merupakan  masalah  yang  penting  untuk  diketahui dalam  upaya  perbaikan  tanaman  dan  meningkatkan produktivitas tanaman (Ahloowalia dan Maluszynsky 2001).
Kultivar  kacang  tanah  yang  biasa  ditanam  di daerah  Bima  adalah cv.  Lokal  Bima.  Penanamannya dilakukan  setelah  padi  yaitu  pada  musim  menjelang kcmarau dengan kondisi air tanah yang sangat minim yang  berpotensi  menimbulkan  cekaman  kekeringan. Air.    Merupakan  pembatas  utama  untuk  produksi tanaman  kacang  tanah  di  lahan  kering.  Untuk  itu, salah  satu  upaya  untuk  mengatasi  masalah  cekaman kekeringan  adalah  penggunaan  kultivar  yang  toleran terhadap  cekaman  kekeringan.  Untuk  mendapatkan cv.  Lokal  Bima  yang  toleran  terhadap  cekaman kekeringan  dan  berdaya  hasil  tinggi  dapat  dilakukan
dengan menggunakan mctode induksi mutasi melalui iradiasi sinar Gamma.
Teknik  induksi  mutasi  sangat  baik  digunakan untuk tanaman yang mengalami masalah karena tidak tersedianya  sumber  tetua  (land  race)  untuk hibridisasi.  Khususnya  di  Indonesia,  kacang  tanah termasuk tanaman yang sumber keragaman genetiknya  kurang  sehingga  untuk  mendapatkan karakter  baru  unggul  dengan  teknik  hibridisasi menjadi sulit dilakukan (Micke dan Donini 1993).
lnduksi  mutasi  secara  in  vitro  pada  kacang tanah telah juga dilakukan (Hemon 2006). Mutasi in vitro  dilakukan  dengan  melakukan  induksi  variasi somaklonal  dan  diikuti  dengan  seleksi  in  vitro. lnduksi variasi somaklonal dan diikuti seleksi in vitro dimungkinkan  masih  dijumpai  banyak  galur  yang peka  terhadap  cekaman  kekeringan.  Hal  ini  terjadi karena  masih  kurangnya  keragaman  genetik  yang ditimbulkan  dan  mutasi  in  vitro,  sehingga  dalam penelitian  ini,  selain  mutasi  in  vitro  juga  dilakukan dengan  induksi  mutasi  melalui  sinar  Gamma  pada kultur  embrio  somatik.  Menurut  Maluszynski  dkk. (1995),  untuk  mendapatkan  mutan  solid,  iradiasi dapat dilakukan pada kalus, embrio somatik, suspensi sel atau protoplast.
Untuk meningkatkan Efektivitas iradiasi terhadap  kultur  embrio  somatik  perlu  ditentukan dosis optimum. Dosis yang terlalu rendah menyebabkan  berkurangnya  mutan  yang  terbentuk sedangkan  dosis  yang  terlalu  tinggi  akan  mematikan bahan  yang  dimutasi  atau  mengakibatkan  sterilitas (Anonimous  1997).  lnduksi  mutasi  dengan  aplikasi dosis  iradiasi  sinar  Gamma  yang  tepat  diharapkan
dapat  meningkatkan  keragaman  genetik  tanaman kacang  tanah  dan  melalui  metode  seleksi  in  vitro akan  diperoleh  galur  kacang  tanah  yang  toleran cekaman kekeringan. Teknik indukisi mutasi dengan sinar  Gamma  untuk  mendapatkan  variasi  embrio somatis (ES) perlu dievaluasi. Mempelajari pengaruh iradiasi sinar Gamma terhadap keberhasilan mengisolasi  ES  yang  insensitif  polietilena  glikol (PEG)  merupakan  langkah  awal  yang  harus dilakukan.  Berdasarkan  uraian  tersebut.  maka penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efektivitas iradiasi sinar Gamma dalam meningkatkan keberhasilan  frekuensi  ES  kacang  tanah  cv.  Lokal Bima yang toleran terhadap cekaman media PEG

## BAHAN DAN METODE
Induksi  kalus  embriogenik  dan  eksplan  leaflet embrio aksis kacang tanah
Iradiasi  sinar  Gamma  dilakukan  pada  jaringan tanaman  kacang  tanah  yang  bersifät  embriogenik. Untuk itu sejumlah besar ES perlu disiapkan sebagai bahan  yang  diperlukan  untuk  kegiatan  penelitian selanjutnya. Benih kacang tanah dikupas dari polong kacang  tanah  tua  yang  telah  dipanen  minimal  dua bulan sebelumnya dan disterilkan dengan perendaman  dalam  larutan  NaOCl  (Clorox)  25% selama 20 menit.
Poros  embrio  kacang  tanah  cv.  Lokal  Bima diisolasi  dari  benih  kacang  tanah  yang  telah disterilkan  dan  digunakan  sebagai  sumber  eksplan. Bagian  leaflet  dan  poros  emhrio  diisolasi  dan digunakan  sebagai  eksplan  untuk  menginduksi pembentukan embrio somatik.
Media induksi ES terdiri atas media dasar MS (Murashige  dan  Skoog,  1962),  vitamin  135 (Gamborg dkk., 1968), gula sukrosa (30 g/l), agar (8 g/l),  dan  pikloram  Media  diatur  dengan  pH  5,6 sebelum disterilisasi. Setelah agar-agar terlarut dalam media  dengan  pemanasan,  media  dituangkan  dalam botol kultur ukuran 150 ml masing-masing sebanyak 25  ml  dan  ditutup  dengan  plastik.  Media  yang  telah disiapkan  disterilkan  dengan  pemanasan  autoklaf pada suhu l2l°C dan tekanan 15 psi selama 20 menit.
Penanaman  eksplan  dilakukan  dalam  media induksi dengan 8 eksplan/botol. Kultur yang ditanam diinkubasikan dalam ruang kultur dengan temperatur konstan  24  °C  siang  dan  malam.  Ruangan  tetap dijaga dalam kondisi gelap selama 24 jam.
Kalus  embriogenik  dan  embrio  somatik  yang didapat  selanjutnya  diisolasi  dan  ditanam  kembali dalam  media  induksi  yang  masih  segar  selama  3-4 periode sub-kultur. Kalus embriogenik yang diiradiasi dengan sinar Gamma berumur 4 bulan.

## Iradiasi  sinar  Gamma  pada  kultur  embrio somatik
Embrio somatik sekunder yang telah disiapkan diperlakukan  dengan  iradiasi  sinar  Gamma.  Jumlah kalus  embriogenik  yang  diperlukan  untuk  iradiasi yaitu  400  kalus  tiap  dosis.    Kultur  ES  diiradiasi dengan dosis 0, 5, 10, 15, dan 20 Gray (Gy). lnduksi mutasi  dilakukan  dengan  iradiasi  Gamma  pada iradiator  Gamma  Chamber  4000  A  (sumber 60 Co). Laju dosis 91,3786 kradljam (pada Juni, 2009).
Kalus  embriogenik  dan  ES  yang  telah diiradiasi diproliferasi kembali dalam media MS-P16 untuk  meningkatkan  biomasa  ES.  Penanaman dilakukan  3  kali  sub-kultur.  Selama  periode  sub- kultur  diamati  kemampuan  kalus  embriogenik  untuk proliferasi  dengan  mengamati  pertumbuhan  kalus embriogenik.
Seleksi  in  vitro  populasi  ES  hasil  iradiasi  sinar Gamma  untuk  mengidentifikasi  ES  insensitif PEG .
Perlakuan  PEG  15%  dalam  media  in  vitro dapat menghambat pembentukan embrio somatik dan kalus embriogenik dan dalam waktu yang lama akan mematikan  sel/jaringan  tanarnan  yang  dikulturkan. PEG  yang  digunakan  adalah  dengan  berat  molekul 6000. Konsentrasi PEG yang digunakan adalah 15 % yang setara dengan tekanan osmotik sebesar  — 0,41 Mpa  (PEG  15%)  (Mexal  et  al.,  1975  dan  Rahayu et  al.,  2005).  Media  selektif  yang  mengandung  PEG disiapkan  sebagaimana  penyiapan  media  induksi pembentukan  embrio  somatik.  Selain  komponen yang  diperlukan  untuk  membuat  media  induksi  juga ditambahkan  PEG  yang  telah  disiapkan  sehelumnya dengan konsentrasi seperti di atas.
Kalus  embriogenik  dan  embrio  somatik sekunder  basil  iradiasi  sinar  Gamma  ditanam  dalam media  selektif  PEG  15%  sebanyak  8  eksplan  per botol.  Untuk  mencegah  agar  eksplan  yang  ditanam tidak  tenggelam,  busa  dan  satu  lapis  kertas  saring diletakkan  dalam  media  cair  selektif  dan  eksplan yang  ditanam  ditebarkan  di  atas  kertas  saring. Eksplan  yang  telah  ditanam  dalam  media  selektif disub-kultur  dalam  media  selektif  yang  sama  yang masih  segar  setiap  empat  minggu  sekali.  Subkultur dilakukan  sampal  dengan  terbetuknya  embrio somatik  sekunder  yang  dapat  tumbuh  dalam  media selektif.  Selanjutnya,  embrio  somatik  sekunder  yang berkembang  dalam  media  selektif  dipindahkan  ke media  selektif  kembali  sebanyak  dua  kali  sebelum penentuan  dan  isolasi  embrio  somatik  yang  toleran dilakukan.
Kultur embrio somatik sekunder yang ditanam diinkubasikan dalam ruang kultur dengan temperatur. yang diatur konstan 24 °C siang dan malam Ruangan dijaga  dalam  kondisi  gelap  selama  24  jam.    Kalus embriogen dan ES yang telah diseleksi dalam  media sclektif PEG diproliferasi kembali dalam media MS- P 16 untuk meningkatkan biomasa ES.

## Maturasi dan perkecambahan
ES  yang lolos  dari  tekanan  media  seleksi cekaman  PEG  perlu  diregenerasikan  menjadi tanaman  kacang  tanah  lengkap.  Proses  regenerasi tanaman  lengkap  dan  embrio  somatik  biasanya melalui beberapa tahapan: maturasi ES, pengecambahan  ES  dan  tahapan  regenerasi  planlet (tanaman  lengkap).  Embrio  somatik  yang  toleran PEG  15%  ditanam  dalam  media  MS  dengan penambahan  arang  aktif  (1  g/l)  agar  ES  yang terbentuk berkembang sempurna ( mature ).
Embrio  somatik  hasil  seleksi in  vitro pada media  PEG  15%  yang  telah  melewati  tahapan maturasi  dikecambahkan  dalam  media  MS  dengan penambahan  BAP  (22  μM).  Penanaman  ES  dalam media perkecambahan dilakukan sampai terbentuknya  tunas  yang  berkembang  dan  embrio somatik.  Hal  mi  hiasanya  memerlukan  waktu  1-2 bulan dalam media perkecambahan (tergantung pada perkembangan embrio somatik yang dikecambahkan).
Embrio  somatik  yang  ditanam  dalam  media pengecambahan  diinkubasikan  dalam  ruang  kultur dengan  temperatur  yang  diatur  konstan  24  °C  siang dan  malam.  Ruangan  dijaga  dalam  kondisi  dengan penyinaran  (1000  lux)  menggunakan  lampu  TL selama 24 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh  dosis  iradiasi  sinar  gamma  terhadap pertumbuhan ES kacang tanah
Kalus  embriogenik  yang  digunakan  untuk iradiasi  yaitu  embrio  somatik  sekunder  yang  telah berumur  4  bulan.  Gambar  1  menunjukkan  kalus embriogenik siap untuk diiradiasi pada chamber sinar Gamma.  Kalus  embriogenik  yang  telah  diiradiasi diproliferasi untuk menambah biomassa sel-sel kalus. Kemampuan kalus embriogenik yang diiradiasi untuk membentuk  embrio  somatik  kacang  tanah  dapat dilihat pada Tabel 1.
Pada  Tabel  1  terlihat  bahwa  dosis  sinar Gamma  dapat  mempengaruhi  pertumbuhan  embrio somatik  kacang  tanah.  Semakin  tinggi  dosis  sinar Gamma yang digunakan maka semakin menghambat pertumbuhan  ES  kacang  tanah.  Penggunaan  dosis mulai  20  Gy  masih  memberikan  jumlah  eksplan hidup  80.3%  dan  jumlah  eksplan  yang  membentuk ES 74.5%. Namun pada dosis 20 Gy juga telah dapat menurunkan  jumlah  ES  per  eksplan  melebihi  dari 50%  dibandingkan  dengan  dosis  0  Gy.  Walaupun peningkatan  dosis  sinar  Gamma  telah  menurunkan
Tabel 1. Pengaruh dosis sinar Gamma terhadap induksi embrio somatik kacang tanah cv. Lokal Bima
Dosis Sinar Gama (Gy) Jumlah Eksplan Hidup (%) Ekasplan yang Membentuk ES (%) Jumlah ES/ Eksplan Penurunan Jumlah Eksplan ES/ (%)*) 0 100.0 100.0 16.0 0 10 100.0 95.0 14.4 23.4 15 85.7 80.9 8.5 24.5 20 80.3 74.5 5.6 65.5 25 65.4 60.3 3.2 66.5
*)    Penurunan  jumlah  ES  dihitung  dengan  persamaan  =  1(XoYo-X t Y t )  /  X 0 Y 0 )  x  100%.  X 0 dan  Y 0 adalah persentase eksplan yang ada ES dan jurnlah ES per eksplan (kontrol = tanpa iradiasi) sedangkan X t dan Y t adalah ES yang diiradiasi dengan sinar Gamma
(a)                            (b)
(c)
Gambar  1. Kalus  embriogenik  umur  4  bulan.  (a)  Embrio sornatik  sekunder  (b) kalus  embriogenik  sebelum diiradiasi (c) kalus embriogenik siap untuk diiradiasi
pertumbuhan  ES,  namun  yang  lebih  perlu  adalah sampai  seberapa  besar  pengaruh  dosis-dosis  tersebut untuk  menghasilkan  variasi  genetik  pada  lanaman kacang  tanah  terutama  untuk  sifat  toleran  terhadap cekaman kekeringan dan daya hasilnya.
Dari data ini dapat diketahul bahwa penggunaan  dosis  mulal  20  Gy  ke  atas  telah  dapat mengganggu  proliferasi  sel-sel  kalus  embriogenik. Gaul (1977) menyatakan bahwa kerusakan fisiologis yang  disebabkan  oleh  pengaruh  iradiasi  sinar Gamma,  seperti  pertumbuhan  yang  terhambat  dan letalitas  hanya  terjadi  pada  generasi  M 1 ,  sedangkan pada  generasi  selanjutnya  adalah  perubahan  genetik saja.
Seleksi in vitro mutan ES kacang tanah terhadap media selektif PEG
Embrio  somatik  kacang  tanah  hasil  iradiasi sinar  Gamma  yang  telah  diproliferasi,  selanjutnya diseleksi  dalam  media  selektif  yang  mengandung polietilena  glikol  (PEG).  Penggunaan  PEG  adalah sebagai  selective  agent  untuk  mendapatkan  ES  yang insensitiv terhadap PEG dan diharapkan ES insensitif mi akan berkembang  menjadi tanaman kacang tanah
yang  toleran  cekaman  kekeringan.  Hasil  seleksi mutan ES kacang tanah dapat dilihat pada Tabel 2.
Pada  Tabel  2  terlihat  bahwa  kemampuan proliferasi  ES,  rataan  ES  per  eksplan,  dan  total  ES tertinggi  terjadi  pada  dosis  sinar  Gamma  15  dan  20 Gy  dan  terendah  pada  kalus  Embriogenik  tanpa iradiasi  dan  dosis  tertinggi  (25  Gy).  Dilihat  pada persentase  penurunan  total  ES  temyata  penurunan terbesar  teramati  pada  kalus  embriogenik  tanpa perlakuan  (0  Gy).  Data  ini  menunjukkan  bahwa iradias  sinar  Gamma  telah  mampu  menghasilkan mutan  ES  yang  insensitif  PEG.  Dosis  25  Gy  diduga menyebabkan  letal  pada  sebagian  ES,  sehingga menyebabkan  hilangnya  beberapa  mutan  yang insensitif  PEG,  sedangkan  dosis  0  Gy  menghasilkan mutan ES hanya dan kultur in vitro, sehingga jumlah mutan  ES  insensitif  juga  terbatas.  Gustafson  dan Ekberg  (1977)  menyatakan  bahwa  iradiasi  sinar Gamma  akan  menyebabkan  mutasi  genom,  mutasi kromosomal  (termasuk  mutasi  gen)  dan  mutasi sitoplasma.  Selanjutnya  Mohr  dan  Schopfer  (1995) menyatakan  bahwa  radiasi  pengion  (iradiasi  sinar Gamma)  akan  menghasilkan  ion  dan  radikal  dalam bentuk  hidroksi  (OH).    Jika  radikal    hidroksi menempel   pada    rantai   nukleutida   dalam   DNA,
Tabel 2. Pertumbuhan ES kacang tanah cv. Lokal Bima hasil iradiasi sinar Gamma dalam media selektif PEG 15%
ES hasil iradiasi sinar Gamrna(Gy) pada dosis Pertumbuhan Embrio Somatik Proliferasi ES(%) Rataan ES/eksplan Total ES PP total ES* 0 65.0 c 6.7 c 36.6 c 45.5 10 72.3 b 8.4 b 43.3 ab 39.5 15 87.1 a 10.4 a 42.4 ab 32.4 20 85.5 a 9.7 a 45.6 a 25.3 25 73.0 b 6.4 c 40.4 b 30.4
*)   Persentase penurunan (PP) total ES dihitung dengan persamaan PP = [(X 0 -Xt)/X 0 ]x 100%. X 0 adalah total ES pada media tanpa seleksi dan X t = total ES dalam media dengan penambahan agens penyeleksi (PEG 15%). Angka-angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada masing-masing peubah tidak berbeda nyata bcrdasarkan uji jarak Duncan pada  = 5%.
(a) (b)
Gambar 2. Kondisi kalus embriogenik kacang tanah hasil iradiasi sinar Gamma pada  media selektif PEG. (a) diantara kalus masih ada ES yang hidup, (b) semua ES mati pada media PEG
maka  utas  tunggal  DNA  akan  patah,  sehingga  akan mengalami  perubahan  gen.  Van  Harten  (1998) menyatakan  kerusakan  DNA  akibat  iradiasi  sinar Gamma  dapat  berupa  transisi  atau  transversi  antara purin dan pirimidin, tali utas tunggal atau ganda akan menjadi patah.

## Regenerasi planlet
Embrio  somatik  yang  insensitif  pada  kondisi cekaman  PEG  diproliferasi  untuk  menambah biomassa sel-sel kalus embriogenik. Embrio somatik yang lolos dari tekanan media seleksi sires PEG perlu diregenerasikan  menjadi  tanarnan  kacang  tanah lengkap.  Proses  regenerasi  tanaman  lengkap  dan embrio  somatik  biasanya  melalui  beberapa  tahapan antara  lain:  tahapan  maturasi  embrio  somatik, tahapan pengecambahan embrio somatik dan tahapan regenerasi  planlet  (tanaman  lengkap)  dan  kecambah yang diperoleh.
Embrio  somatik  yang  insensitif  hasil  seleksi pada  media  selektif  PEG  dikulturkan  dalam  media maturasi  MS  dengan  penambahan  2  g/l  arang  aktif. Embrio  somatik  yang  telah  masak  ditandai  dengan terbentuknya  struktur  embrio  lengkap  dengan kotiledon  dan  radikula.  Embrio  somatik  yang  telah masak dikecambahkan terus dalam media perkecambahan MS  dengan  penambahan  2  g/l  arang
aktif.  Setelah  dikecambahkan  selama  satu  bulan dalam  media  perkecambahan,  ES  yang  telah  masak mengalami  pemanjangan  epikotil  dan  lebih  kurang tiga  bulan  kecambah  mulai  membentuk  akar  dan daun  primer.  Embrio  somatik  hasil  seleksi  dapat membentuk  kecambah  normal  antara  46  —  60%, kecambah  abnormal  30  —  42%,  dan  sisanya merupakan  kecambah  mati  (Tabel  3).  Kecambah abnormal  ditandai  dengan  ketidakmampuan  untuk membentuk  akar  atau  daun  primer.  Kecambah  yang ditanam  telah  berkembang  menjadi  planlet,  yang ditandai  dengan  semakin  memanjangnya  epikotil, terbentuknya  akar  dan  daun  baru.  Setelah  terbentuk sistem  perakaran  dan  daun  yang  baik,  plantet  akan diakilmatisasi pada media campuran tanah, pasir dan kompos  dan  disungkup  dengan  botol  untuk  menjaga kelembaban.
Pada  Tabel  3  terlihat  bahwa  semakin  tinggi dosis  iradiasi  sinar  Gamma  yang  diberikan  pada  ES cenderung  menghasilkan  kecambah  normal  lebih sedikit  dan  kecambah  abnormal  lebih  banyak. Gangguan  fisiologis  akibat  dosis  tinggi  diduga  ikut mempengaruhi  kemampuan  perkecambahan  ES. Kecambah yang telah dihasilkan inii akan berkembang  menjadi  planlet  dan akan  diaklimatisasi dan ditanam di Rumah Kaca untuk produksi bcnih R 1 dan R 2 . Populasi tanaman variasi somaklonal tersebut akan dievaluasi responnya pada cekaman kekeringan.
Tabel  3 .  Perkecambahan  dan  regenerasi  planlet  dan  ES  kacang  tanah  hasil  iradiasi  sinar  Gamma  yang insensitif pada media PEG
ES hasil iradiasi sinar Gamma (Gy) pada dosis Jumlab ES yg dikecambahkan Persentase kecambah (%) Abnormal Normal 0 10 30 60 10 12 33 58 15 13 31 46 20 10 40 50 25 12 42 50 (a) (b) (c)
Gambar 3. Produksi planlet. (a) maturasi dan perkecambahan ES, (b) kecambah abnormal, dan (C) planlet normal membentuk akar batang dan daun

## KESIMPULAN
1.  Dosis  sinar  Gamma  dapat  mempengaruhi pertumbuhan  embrio  somatik  kacang  tanah. Semakin  tinggi  dosis  sinar  Gamma  yang digunakan maka semakin menghambat pertumbuhan  ES  kacang  tanah.  Penggunaan dosis mulai 15 Gy masih memberikan pertumbuhan ES yang balk dibandingkan dengan dosis di atasnya.
2.    Kalus  embriogenik  yang  diiradiasi  dengan  sinar Gamma  dosis  15  Gy  dan  20  Gy  menunjukkan kemampuan  proliferasi  ES,  rataan  ES  per eksplan.  dan  total  ES  tertinggi  ketika  diseleksi dalam  media  selektif  PEG  15%  dan  terendah pada  kalus  embriogenik  tanpa  iradiasi  dan  dosis tertinggi  (25  Gy).  Kalus  embriogenik  tanpa perlakuan  (0  Gy)  menunjukkan  persentase penurunan  total  ES  terbesar  ketika  dalam  media selektif PEG 15%.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahloowalia,  B.  S.  Maluszynsky  M.  2001.  Induce mutations  —  A  new  paradigm  in  plant breeding. Euphytica 118: 67-173.
Anonimous.  1997. Irradition of horticultural crops at Iowa  State  Univeristy.  Hort.  Sd  32(4):  582- 585.
Gamborg,  O.  L.,  Miller  R.  A.,  and  Ojima  K.  1968. Nutrient requirement of suspension cultures of soybean root cells. Exp. Cell Res. 50:15 1-158. Gaul, H. 1977. Mutagent effect in the first generation after  seed  treatment.  In:  Manual  on  Mutation Breeding,  Technical  Reporta  Series.  No  119, IAEA, Viena.
Gustafson  A,  Ekberg.  1979.  Type  of  mutation.  In: manual  on  Mutation  Breeding,  Technical Report Series. No. 119, JAEA. Viena.
Hemon,  A  F.  2006.  Efektivitas  seleksi  in  vitro berulang  untuk  mendapatkan  plasma  nutfah kacang  tanah  toleran  cekanian  kekeringan  dan resisten  terhadap  penyakit  busuk  batang Scierotium  rofsii.  Disertasi  Doktor  Sekolah Pascasarjana IPB, Bogor.
Maluszynski M, Ahlowalia B. S., Sigurbjornsson, B.
1995.  Application  of  in  vivo  and  in  vitro mutation  techniques  for  crop  improvement. Euphytica 85 : 303-315.
Mexal  J.  Fisher  iT,  Osteryoung  J.  Patric  RCP  1975.
Oxygen  availability  in  polyethylene  glycol solution  and  its  implications  in  plant-water relation. Plant Physiol. 55: 20-24.
Micke  A  and  Donini  B.  1993.  Induce  mutation.  In:
Plant  Breeding  Principle  and  Prospects  (Eds. MD Hasyward, NO Bosemark and I Romagosa). Chapmant and Hall London.
Murashige  T.  and  F.  Skoog.  1962.  A  revised  media for  rapid  growth  and  bioassay  with  tobacco tissue cultures. Physiol. Plant 15:473-493.
Mohr.  H,  Schopfer.  1995.  Plant  Physiology. Springer-Verlag. Berlin.
Pattee  H.  E.  and  Stalker  H.  T.  1995.  Advances  in peanut science. American Peanut Research and Education Society, Inc. Stiliwater, USA.
Rahayu  E.  S.,  E.  Guhardja,  S.  Ilyas,  dan  Sudarsono. 2005.  Seleksi  in  vitro  embrio  somatik  kacang tanah  pada  media  dengan  polietileria  glikol untuk  mensimulasikan  cekaman  kekeringan. Majalah llmiah Biologi BIOSFERA.
Van  Harten  A.  V.  1998. Mutation  Breeding.  Theory and Practical Application. Cambridge University Press. London.