Vol.2 (2), November 2019, pp. 52-57

## belantika Pendidikan

## Hubungan Testosteron dengan Motilitas Spermatozoa Tikus Putih Jantan (Ratus Norwegicus ) Setelah Diberi Senyawa Aktif Daun Beluntas untuk Penyusun Buku Antifertilitas
Eko Susetyarini 1 , Duran Corebima A 2 , Moh. Amin 2 , Trinil Susilawati 3
1 Pendidikan Biologi-Universitas Negeri Malang,
2 Jurusan Biologi-Universitas Negeri Malang
3 Fakultas Peternakan-Universitas Brawijaya

## INFO ARTIKEL
ABSTRAK Riwayat Artikel: Diterima: 6 juni 2019 Disetujui: 2 Oktober 2019 Abstract: This research helps study the combination of active combination of  beluntas  leaf  (tannin  fraction;  combined  alkaloid  +  flavonoid  +  tannin fraction)  with  various  doses  of  spermatogenic  cell  counts,  spermatozoa quality, testosterone levels, damage to liver cells and black and white skin. This study is an experimental study, using RAK experimental design with a combination of  types  of  active  composition  of beluntas  leaves  Based  on  the results of the study, it can be concluded that there is a combination of active combinations  of  beluntas  leaves  (tannin  fraction;  combined  alkaloid  + flavonoid  +  tannin)  fractions  with  various  benefits  on  the  number  of spermatogenic  cells,  individual  motility,  abnormalities,  power  live  in  male white  rats;  there  is  no  combination  for  spermatozoa  concentration  and number of motile spermatozoa, and testosterone levels.
Abstrak:  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  kombinasi pemberian jenis senyawa aktif daun beluntas (fraksi tanin; fraksi gabungan alkaloid+flavonoid+tanin)  dengan  berbagai  dosis  terhadap  jumlah  sel spermatogenik, kualitas spermatozoa, kadar testosteron, kerusakan sel hati dan  ginjal  tikus  putih  jantan,  Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimen,  menggunakan  rancangan  percobaan  RAK  dengan  kombinasi perlakuan  antara  jenis  senyawa  aktif  daun  beluntas  Berdasarkan  hasil penelitian, dapat disimpulkan ada pengaruh kombinasi pemberian senyawa aktif daun beluntas (fraksi tanin; fraksi gabungan alkaloid+ flavonoid+tanin) dengan berbagai dosis terhadap jumlah sel spermatogenik, motilitas individu, abnormalitas, daya hidup pada tikus putih jantan; tidak ada  pengaruh  kombinasi  untuk  konsentrasi  spermatozoa  dan  jumlah spermatozoa motil, dan kadar testosterone.

## Kata kunci:
Senyawa aktif
Kombinasi pemberian Percobaan RAK
Motilitas Individu
Alamat Korespondensi:
Eko Susetyarini
Pendidikan Biologi Universitas Negeri Malang Jalan Semarang 5, Malang 65145 E-mail: niniek08@gmail.com
Penggunaan  tanaman  obat  tradisional  belum  banyak  digunakan  sebagai  obat  antifertilitas  oral  pada  pria. Salah satu tanaman tradisional yang termasuk kelompok obat antifertilitas, adalah beluntas (Pluchea indica). Beluntas  biasa  ditanam  oleh  masyarakat  sebagai  tanaman  pagar,  berkhasiat  sebagai  penghilang  bau badan. Penelitian  yang  pernah  dilakukan  adalah  merebus daun  beluntas,  air  rebusan  (dekok)  tersebut  diberikan ke tikus putih jantan yang berakibat pada spermatogenik, kadar testosteron, jumlah anakan tikus betina. Hasil penelitian yang dilakukan, yaitu pemberian dekok daun beluntas pada tikus putih jantan secara per oral. (E.
Susetyarini,  2005),  menyampaikan  bahwa  pemberian    0,5g  dekok  daun  beluntas  berpengaruh  terhadap jumlah sel spermatogenik tikus putih jantan.  Dekok dosis 0,5g daun beluntas juga berpengaruh pada  kadar testosteron  tikus  putih  jantan  (E.  Susetyarini,  2003).  Tikus  putih  jantan  yang  diberi  dosis  0,5g  dekok  daun beluntas mempengaruhi jumlah anakan  tikus putih betina setelah dikawinkan dengan tikus putih jantan (E. Susetyarini, 2004).
Penelitian  tersebut  di  atas    masih  menggunakan  rebusan  daun  beluntas.  Dekok  daun  beluntas  masih mengandung  berbagai  senyawa  aktif  dan  belum  diketahui  jenis  senyawa  aktif    yang  berpengaruh  pada antifertilitas  tersebut.  Pemberian  senyawa  aktif  daun  beluntas  segar  berupa  ekstrak  cair (R.  E.  Susetyarini, 2015)  dan  bubuk  berpengaruh  pada  histologi  testis  tikus  putih  jantan  (E.  Susetyarini  &  Wahyuni,  2008). Isolasi  fraksi  senyawa  aktif  pada  daun  beluntas  kering  berupa  tanin,  alkaloid  dan  flavonoid  belum  pernah dilakukan.
Senyawa  aktif  yang  sangat  penting  pada  tumbuhan,  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  tanin  dan  komponen  fenol (Edeoga, Okwu, & Mbaebie, 2005). Kandungan senyawa aktif pada daun beluntas berupa tanin, alkaloid dan flavonoid  (Dalimartha,  2008).  Alkaloid  merupakan  senyawa  bersifat  basa  yang  mengandung  satu  atau  lebih atom  nitrogen,  biasanya  dalam  gabungan  sebagai  bagian  dari  sistem  siklik.  Alkaloid  mempunyai  aktivitas fisiologi yang  menonjol  sehingga  digunakan  secara luas  dalam  pengobatan.  Flavonoid  merupakan  salah  satu golongan  fenol.  Flavonoid  saat  ini  banyak  mendapat  perhatian  karena  mempunyai  berbagai  aktivitas farmakologis.  Tanin  senyawa  aktif  yang  terkandung  pada  tumbuhan  yang  bersifat  fenol,  mempunyai  rasa sepat (Harborne, 2005; Markham, 1988).
Fertilisasi  adalah  peleburan  satu  spermatozoa  dengan  sel  telur,  perkembangan  berikut  membentuk  zigot, berkembang  menjadi  janin  atau  embrio  sebagai  suatu  sosok  kehidupan  individu  baru.  Hewan  coba  jantan sebagai salah satu penentu keberhasilan keturunan sangat berperanan dalam mendukung program penelitian obat alami antifertilitas.  Parameter antifertilitas yang diamati, adalah motilitas spermatozoa.  Spermatozoa diambil  dari  cauda  epididimis  karena  di  dalam  proses  fertilisasi  diperlukan  konsnetrasi  spermatozoa  yang baik untuk dapat memfertilisasi sel telur. (Khaki et al., 2009; Salman & Adesokan, 2008; Shittu et al., 2008). Proses  maturasi  di  dalam  epididimis  spermatozoa  mengalami  perubahan  struktural  maupun  fungsional (Orgebin-Crist,  Danzo,  &  Davies,  1975).  Banyak  komponen  cairan  epididimis  yang  berpengaruh  selama maturasi,  antara  lain  protein,  karnitin,  gliserilfosforilkolin,  masitol,  natrium,  kalium,  dan  kalsium.  Sekresi bahan-bahan  tersebut  oleh  sel  epitel  epididimis  sangat  tergantung  testosteron,  khususnya  5- dehidrotestosteron  (Cornwall  et  al.,  1986;  Robaire  &  Viger,  1995).  Selama  ini  gerakan  pengembangan pengobatan  tradisional  berbasis  tumbuhan  untuk  antifertilitas  pada  pria  belum  banyak  diungkap  di masyarakat  dan  dibukukan.  Hal  tersebut  sesuai  pendapat  seorang  ahli  Theophratus,  beliau  mengamati karakterisasi individu tanaman obat dan menulisnya dalam suatu buku. Materi yang dituliskan dalam buku sebaiknya  berdasarkan  dari  bahan-bahan  yang  berakar  di  bumi  Indonesia,  yaitu  hasil  penelitian  dari cendikiawan di Indonesia (Rifa’i, 2017)
Masyarakat  akademisi  belum  banyak  mengetahui  tentang  tanaman  yang  dapat  digunakan  sebagai  obat antifertilitas.  Gerakan  penyebarluasan    promosi  alat  kontrasepsi  sering  menggunakan  strategi  pendidikan, seperti pendidikan nonformal bagi masyarakat. Media yang strategis dan efektif digunakan untuk mengubah pola  pikir  masyarakat  tentang  antifertilitas  disajikan  dalam  bentuk  media  cetak,  yaitu  buku  obat antifertilitas  alami.  Buku  bacaan  ini  disusun  berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  tentang antifertilitas  dari  daun  beluntas.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  (Rifa’i,  2017)  yang  menyatakan  bahwa kebijakan DIKTI, yaitu hasil kegiatan kecendekiaan para pengajar perguruan tinggi di Indonesia dijuruskan untuk  dimuarakan  dalam  bentuk  penerbitan  artikel  ilmiah,  pendaftaran  hak  paten  dan  penerbitan  buku ilmiah.  Penulisan  buku,  secara  tegas  dicanangkan  harus  berdasarkan  pada  hasil  penelitian  pengajar  yang bersangkutan  sehingga  pembahasannya  membumi  pada  persolaan  yang  ada  di  Indonesia.  Buku  ilmiah didefinisikan sebagai buku yang dipakai dalam mempelajari atau mendalami suatu subjek pengetahuan, ilmu, dan  teknologi  sehingga  mengandung  penyajian  asas-asas  tentang  subjek  tersebut,  termasuk  karya-karya ilmiah.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh  data  tentang  hubungan  testosteron  dengan  motilitas spermatozoa individu spermatozoa tikus putih jantan setelah diberi jenis senyawa aktif daun beluntas dengan berbagai dosis serta untuk penyusunan buku antifertilitas alami.

## METODE
Jenis  penelitian  ini  adalah  eksperimen  dengan  rancangan  percobaan  RAK.  Jenis  senyawa  aktif  daun beluntas berupa bubuk, yaitu tanin dan gabungan flavonoid+alkaloid+tanin. Dosis yang digunakan, yaitu 4,7 mg;  9,4  mg  dan  14,1  mg  dan  kontrol  (dosis  0  mg).      Populasi  yang  digunakan  tikus  putih  jantan  (Ratus norwegicus)  umur 2-3 bulan strain Wistar dengan berat badan rata-rata 150-175 g. Sampel yang diperlukan sebanyak  21  ekor  tikus  putih  jantan  untuk  melihat  kadar  testosterone  dan  motilitas  spermatozoa. Pengambilan sampel secara random.Tempat penelitian di laboratorium Biomedik FK UMM dan laboratorium SIMA.    Kandang  tikus  ukuran  panjang  45  cm,  lebar  35  cm,  tinggi  18  cm,  seperangkat  tempat  makan  dan minum.  Spuit  disposable,  seperangkat  alat  bedah,  tabung  plastik,  mikroskop  cahaya  binoculer  (Olymphus CH21)  Japan,  kamera  digital  Olymphus,  appendorf.  Bahan  yang  digunakan  alkohol  absolut,  NaCl  Fisiologis 0,9%,  TRIS.  Variabel  bebas  dalam  penelitian  ini,  adalah  senyawa  aktif  daun  beluntas  (tanin  dan  gabungan tanin+alkaloid+flavonoid);  variabel  terikat,  adalah  kadar  testosterone  dan  motilitas  spermatozoa.  Variabel yang dikendalikan oleh peneliti, adalah suhu, kandang, pakan, minum tikus putih, pencahayaan 12 jam pada waktu malam hari.
Cara  kerja:  sebelum  diberi  perlakuan,  hewan  coba  diaklimatisasi  selama  1  minggu  dalam  kondisi laboratorium.  Perlakuan  yang  diberikan  berupa  bubuk    tanin  daun  beluntas  dan  gabungan  bubuk  senyawa aktif daun beluntas yang diberikan secara oral pada tikus putih jantan dengan dosis 4,7 mg; 9,4 mg dan 14,1 mg  dengan  menggunakan  sonde  (Dalimartha,  2008);  pemberian  bubuk    senyawa  aktif  tersebut  dilakukan setiap  hari  sekali  selama  7 hari  pada  tikus  putih jantan;  sedangkan kelompok kontrol diberi  aquades  secara oral  setiap  sehari  sekali  selama  7  hari.  Selama  percobaan  pakan  dan  air  minum  PDAM  diberikan  secara ad libitum. Pakan yang diberikan adalah  berupa pelet pakan (Br2).
Pengamatan kadar testosteron;  pembedahan tikus dilakukan pada malam hari, karena masa kawin tikus putih  jantan  malam  hari  (Sodersten,  Eneroth,  & Pettersson,  1983). Darah yang  diambil  menggunakan  spuit dari  aorta  jantung kemudian  darah  disentrifuge. Darah yang  telah  disentrifuge  diambil  serumnya (Winarni, 2007),  kemudian  ditentukan  kadar  testosteron  dengan  teknik  ELFA  (Enzyme  Linked  Flourencent  Assay). ELFA  adalah  suatu  teknik  deteksi  dengan  menggunakan  metode  serologis  yang  berdasarkan  atas  reaksi spesifik  antara  antigen  dan  antibodi,  mempunyai  sensitivitas  dan  spesifisitas  yang  tinggi  dengan menggunakan enzim sebagai indikator.
Pemeriksaan motilitas spermatozoa: motilitas individu spermatozoa, semen yang sudah diencerkan diambil sekitar  10-15µl  dengan  mikropipet  kemudian  diletakkan  di  atas  obyek  glass  lalu  ditutup  dengan  gelas penutup  dan  diamati  menggunakan  mikroskop  cahaya  dengan  pembesaran  400  kali. Perhitungan  dilakukan terhadap  100  ekor  spermatozoa  yang  tampak  pada  lapangan  pandang,  spermatozoa  dianggap  motil  jika bergerak  aktif  lurus  ke  depan,  kemudian  dihitung  persentase  spermatozoa  yang  motil  (Rosida,  2007). Penilaian  motilitas  ditetapkan  dengan  skor  0,  1,  5,  3,  4,  5  (BIB  Lembang,  1992).  0:  spermatozoa  imotif  atau tidak  bergerak;  1:  gerakan  berputar  di  tempat;  2:  gerakan  berayun  atau  melingkar,  kurang  dari  50  persen bergerak  progeresif  dan  ada  gelombang;  3:  antara  50-80  persen  spermatozoa  bergerak  progresif  dan menghasilkan gerakan  massa;  4:  gerakan  progresif yang gesit  dan  segera  membentuk gelombang  dengan  90 persen spermatozoa motif; 5: gerakan yang sangat progresif, gelombang yang sangat cepat, menunjukkan 100 persen spermatozoa motif aktif (Toelihere, 1993).

## HASIL
Gambar 1. Grafik Regresi antara Testosteron dengan Motilitas Individu Spermatozoa Tikus Putih Jantan setelah Diberi Senyawa Aktif Daun Beluntas
Hasil  analisis  regresi  antara  testosteron  dengan  motilitas  individu  spermatozoa,  disajikan  pada  Gbr  1. Pemberian  perlakuan  gabungan  (alkaloid+flavonoid+tannin)  dengan  dosis  4,7  mg,  9,4  mg  dan  14,1  mg menyebabkan kadar testosteron lebih tinggi dibanding pemberian senyawa aktif tannin dosis 4,7 mg; 9,4 mg dan dosis 14,1 mg.  Perlakuan tannin dengan dosis 4,7 mg menyebabkan kadar testosteron rendah. Perlakuan tannin  dengan  dosis  semakin  tinggi  menyebabkan  kadar  testosteron  meningkat.  Perlakuan  gabungan (alkaloid+flavonoid+tannin)  dosis  9,4  mg    menyebabkan  kadar  testosteron  rendah  dibanding  pemberian senyawa aktif alkaloid+flavonoid+tannin dosis 4,7 mg dan dosis 14,1 mg. Pemberian senyawa aktif gabungan (alkaloid+flavonoid+tannin) dosis 14,1 mg  menyebabkan kadar testosteron lebih tinggi dibanding pemberian senyawa  aktif  tannin+alkaloid+flavonoid  dosis  4,7  mg  dan  dosis  9,4  mg.  Kadar  testosteron  kelompok perlakuan (tannin dan gabungan) lebih rendah dibanding kelompok kontrol
Data  motilitas  individu  spermatozoa  tikus  putih  jantan  pada  kelompok  kontrol  (tanpa  diberi  perlakuan) menunjukkan  persentase  sebesar  43,33%.  Motilitas  individu  kelompok  perlakuan  pemberian  senyawa  aktif daun  beluntas  berupa  tannin  dengan  dosis  4,7  mg  menunjukkan  persentase  sebesar  33,33%.  Motilitas individu  kelompok  perlakuan  pemberian  senyawa  aktif  daun  beluntas  berupa  tannin  dengan  dosis  9,4  mg menunjukkan  persentase  sebesar  26,67%.  Motilitas  individu  kelompok  perlakuan  pemberian  senyawa  aktif daun  beluntas  berupa  tannin  dengan  dosis  14,1  mg  menunjukkan  persentase  sebesar  20,00%.  Motilitas individu  kelompok  perlakuan  pemberian  senyawa  aktif  daun  beluntas  berupa  tannin+alkaloid+flavonoid dengan  dosis  9,4  mg  menunjukkan  persentase  sebesar  10,67%.  Motilitas  individu  kelompok  perlakuan pemberian  senyawa  aktif  daun  beluntas  berupa  tannin+alkaloid+flavonoid  dengan  dosis  14,1  mg menunjukkan  persentase  sebesar  9,00%.  Motilitas  individu  kelompok  perlakuan  pemberian  senyawa  aktif daun beluntas berupa tannin+alkaloid+flavonoid dengan dosis 4,7 mg menunjukkan persentase sebesar 3,00%. Penurunan kadar testosterone seiring dengan penurunan motilitas spermatozoa tikus putih jantan
Hasil  analisis  korelasi  menunjukkan  bahwa  ada  hubungan  antara  kadar  testosteron  dengan  jumlah spermatozoa motil tikus putih jantan setelah diberi jenis senyawa aktif daun beluntas (tannin dan gabungan: alkaloid+flavonoid+  tannin)  dengan  berbagai  dosis  (4,1  mg;  9,4  mg  dan  14,1  mg),  dengan  r  square  sebesar 0,195.Hasil  analisis  regresi  antara  kadar  testosteron  dengan  motilitas  individu    spermatozoa  tikus  putih jantan  setelah  diberi  jenis  dan  dosis  senyawa  aktif  daun  menunjukkan  bahwa  persamaan  garis  regresi Y=18,365+4,203x.  Hasil  analisis  regresi  tersebut  menunjukkan  bahwa  motilitas  spermatozoa  dipengaruhi kadar testosteron sebesar 19,5%, dan  80,5% dipengaruhi oleh faktor yang lain.

## PEMBAHASAN
Motilitas  spermatozoa  dipengaruhi  oleh  hormon  dan  dipengaruhi  oleh  aktivitas  metabolisme  yang  ada dalam  spermatozoa.  Testosteron  berikatan  dengan  protein  reseptor  yang  ada  di  epididimis.  Protein  reseptor melakukan  tugas  transduksi  sinyal  di  dalam  sel.  Sinyal  kimiawi  terlebih  dulu  mengaktifkan  reseptor, kemudian  memicu  suatu  respon  dalam  sel  target  (Champbell,  2004).  Diduga  kadar  testosteron  pada  tikus putih  jantan  dapat  memacu  respon  pada  spermatozoa  yang  ada  di  epididimis.  Pematangan  spermatozoa  di epididimis dari spermatozoa non motil menjadi spermatozoa motil dipengaruhi oleh hormone testosteron serta faktor  lain,  yaitu  enzim,  nutrient  yang  disekresikan  dari  epitel  epididimis.  Zat-zat  yang  disekresikan,  yaitu protein,  karnitin,  gliserilfosforilkolin,  masitol,  natrium,  kalium,  dan  kalsium,  Robaire  dan  Viger,  dalam (Rosida,  2007).  Zat-zat  yang  disekresikan  dari  epitrl  epididimis  berperanan  dalam  menjaga  motilitas spermatozoa.
Flavonoid merupakan golongan senyawa estrogenik, mampu merangsang pembentukan estrogen, Cambine dan  Brewis;  Robinson,  dalam  (Ashfahani  &  Wiratmini,  2010)  yang  akan  meningkatkan  kadar  estrogen. Peningkatan  kadar  estrogen  akan  memberikan umpan  balik negatif ke hipofisa  anterior, yaitu  FSH  dan  LH yang disekresikan sedikit. Penurunan kadar LH menyebabkan gangguan terhadap sekresi testosteron oleh sel leidig. Hormon testosteron berperanan dalam maturasi spermatozoa di epididymis, Robaire dan Herno, dalam (Ashfahani  &  Wiratmini,  2010).  Adanya  gangguan  terhadap  sekresi  testosteron  maka  kualitas  spermatozoa yaitu motilitas individu spermatozoa terganggu.
Penciptaan arus informasi secara kontinyu, peran langsung masyarakat, pembinaan serta koordinasi/peran bersama  yang dapat  menumbuhkan  kesadaran  peran  antar  instansi  maupun  masyarakat  secara  koordinatif dan  terintegrasi  dapat  dilakukan  melalui  penyampaian  dan  penyebarluasan  hasil-hasil  riset  dan  penelitian terapan  yang  dilakukan  oleh  instansi  pemerintah,  perguruan  tinggi,  industry  maupun  lembaga  swadaya masyarakat dan hasilnya dapat dimanfaatkan langsung oleh masyarakat. Penyampaian dan penyebarluasan
hasil riset atau penelitian tidak harus secara formal melalui sekolah, tetapi dapat melalui media masa yang diminati masyarakat, yaitu artikel dan bahan bacaan atau buku (Dahlia dalam Widowati, 2010).
Bahan  bacaan  memiliki  keunggulan  dibanding  media  lain,  yaitu:  1)  bahan  bacaan  relatif  murah,  biaya pemeliharaan relatif murah dan pemanfaatannya tidak memerlukan alat lain kecuali pencahayaan di malam hari,  2)  bahan  bacaan  dapat  dijangkau  seluruh  masyarakat  khususnya  yang  sudah  mampu  membaca,  3) bahan  bacaan  merupakan  sarana  demokratisasi  dan  pemerataan  ilmu  pengetahuan  dan  teknologi,  4)  ilmu pengetahuan  dan  informasi  dalam  bacaan  dapat  dibaca  berkali-kali  tanpa  alat  khusus  untuk  memantapkan pemahaman (Kartasasmita, 1995).
Naskah  buku  disusun  dengan  tampilan  yang  menarik,  bahasa,  visualisasi,  isi  yang  mencakup  konsep- konsep  pembelajaran  dalam  bentuk  kalimat  yang  motivasional,  sehingga  masyarakat  tidak  hanya mendapatkan  informasi  antifertilitas  alami  tetapi  juga  dapat  merubah  pola  pikir  masyarakat  tentang penggunaan antifertilitas alami.

## SIMPULAN
Ada  hubungan  antara  kadar  testosteron  dengan  motilitas  individu  spermatozoa  tikus  putih  jantan  setelah diberi jenis senyawa aktif daun beluntas (tannin dan gabungan: alkaloid+flavonoid+ tannin) dengan berbagai dosis (4,1 mg; 9,4 mg dan 14,1 mg), dengan r square sebesar 0,195. Motilitas spermatozoa dipengaruhi kadar testosteron sebesar 19,5%, dan  80,5% dipengaruhi oleh faktor yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Ashfahani,  E.  D.,  &  Wiratmini,  N.  I.  (2010).  Motilitas  Dan  Viabilitas  Spermatozoa  Mencit  (Mus  musculus  L.)  Setelah Pemberian Ekstrak Temu Putih (Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe.). Jurnal Biologi Udayana, 14(1).
BIB Lembang. (1992). Prosedur dan Tatacara Kerja Distribusi Semen Beku. Direktorat Jenderal Peternakan Departemen Pertanian. BIB Lembang, Bandung.
Champbell, R. M. (2004). Biology. Jakarta: Erlangga.
Cornwall, G. A., Smyth, T. B., Vindivich, D., Harter, C., Robinson, J., & Chang, T. S. K. (1986). Induction and enhancement of progressive motility in hamster caput epididymal spermatozoa. Biology of Reproduction, 35(4), 1065–1074.
Dalimartha, S. (2008). Atlas tumbuhan obat Indonesia (Vol. 2). Niaga Swadaya.
Edeoga,  H.  O.,  Okwu,  D.  E.,  &  Mbaebie,  B.  O.  (2005).  Phytochemical  constituents  of  some  Nigerian  medicinal  plants.
African Journal of Biotechnology, 4(7), 685–688.
Harborne, I. B. (2005). Metode Fitokimia. Bandung: ITB. Kartasasmita, G. (1995). Pemberdayaan Masyarakat: Sebuah Tinjauan Administrasi. Universitas Brawijaya. Khaki, A., Fathiazad, F., Nouri, M., Khaki, A. A., Ozanci, C. C., Ghafari-Novin, M., & Hamadeh, M. (2009). The effects of Ginger on spermatogenesis and sperm parameters of rat. Iranian Journal of Reproductive Medicine, 7(1).
Markham, K. R. (1988). Cara mengidentifikasi flavonoid. Bandung: ITB, 1–3.
Orgebin-Crist,  M.  C.,  Danzo,  B.  J.,  &  Davies,  J.  (1975).  Endocrine control  of  the  development  and maintenance  of  sperm fertilizing ability in the epididymis.
Rifa’i, S. (2017). Media Pengajaran. Bandung: Sinar Baru Algensindo.
Robaire, B., & Viger, R. S. (1995). Regulation of epididymal epithelial cell functions.  Biology of Reproduction, 52(2), 226–
236.
Rosida,  L.  (2007).  Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Klroform  Akar  Pasak  Bumi  terhadap  Motilitas  dan  Viabilitas Spermatozoa Mencit Jantan. Jurnal Obat Bahan Alam, 6(1), 20–26.
Salman, T. M., & Adesokan, A. A. (2008). Sperm quality of male rats treated with aqueous extract of Enantia chlorantha stem bark. African Journal of Biotechnology, 7(7).
Shittu,  L.,  Shittu,  R.,  Adesite,  S.,  Ajala,  M.  O.,  Bankole,  M.,  Benebo,  A.  S.,  &  Ashiru,  O.  (2008).  Fitoestrógenos  Sesame radiatum  Estimulan  la  Actividad  Espermatogénica  y  Mejoran  la  Calidad  del  Esperma  en  el  Testículo  de  Ratas Sprague Dawley Adulto de Sexo Masculino. International Journal of Morphology, 26(3), 643–652.
Sodersten, P., Eneroth, P., & Pettersson, A. (1983). Episodic secretion of luteinizing hormone and androgen in male rats.
Journal of Endocrinology, 97(1), 145–153.
Susetyarini, E. (2003). Kadar Testosteron Pada Tikus Putih Jantan (Ratus norwegicus) Yang Diberi Dekok Daun Beluntas.

## Laporan Penelitian.
Susetyarini,  E.  (2004).  Jumlah  Anakan  Tikus  Putih  Betina  (Ratus  norwegicus)  Yang  Dikawinkan  Dengan  Tikus  Putih Jantan (Ratus norwegicus) Yang Diberi Dekok Daun Beluntas.[Number of Females Puppies Rats (Rattus norvegicus) The Mated With Male Rats (Rattus norwegicus) Which leaves. Laporan Penelitian.
Susetyarini, E. (2005). Antispermatogenik Dekok Daun Beluntas Pada Tikus Putih jantan (Ratus norwegicus).[Antispermatogenik  dekok  Beluntas  Leaves  On  White  male  rats  (Rattus  norvegicus)].  Laporan Penelitian.
Susetyarini, E., & Wahyuni, S. (2008). Pengembangan Senyawa Aktif Daun Beluntas Untuk Kontrasepsi per Oral Sebagai Upaya Pengembangan Bahan Anti fertilitas. Laporan Penelitian.
Susetyarini,  R.  E.  (2015).  Aktivitas  tanin  daun  beluntas  terhadap  konsentrasi  spermatozoa  Tikus  putih  jantan.  Jurnal Gamma, 8(2).
Toelihere, M. R. (1993). Fisiologi Reproduksi pada Ternak. penerbit Angkasa. Bandung.
Winarni, D. (2007). Efek ekstrak akar ginseng Jawa dan Korea terhadap libido mencit jantan pada prakondisi testosteron rendah. Berkala Penelitian Hayati, 12(2), 153–159.