Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat Daun Tanaman Bandotan ( Ageratum conyzoides L )
Anti Bacteria Activity of Ethyl Acetate Fraction Bandotan leaf
( Agerantum conyzoides L )
Taufan H. Sugara * , Tun Tedja Irawadi, Irma Herawati Suprapto,
Muhammad Hanafi
Dosen Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Mataram, Dosen Departemen Kimia IPB,
Peneliti Kimia, LIPI.
taufan_sehab@yahoo.com

## Abstrak
Pemanfaatan  tanaman  bandotan  (Ageratum  conyzoides  L.)  untuk penyembuhan luka dan gangguan pencernaan seringkali dikaitkan dengan aktivitas antibakteri yang dimiliki. Namun demikian, informasi tentang aktivitas antibakteri tanaman ini masih  sebatas  pada fraksi  polar dan non polar saja. Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri fraksi semi polar  daun  tanaman  bandotan  terhadap  bakteri  Staphylococcus  aureus  and Eschirichia  coli.  Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil  asetat  daun tanaman  bandotan  mengandung  senyawa  flavonoid,  steroid,  p-hidrokuinon  dan terpenoid.  Fraksinasi  ekstrak  etil  asetat  dengan  eluen  kloroform  :  metanol  (9:1) menghasilkan  8  fraksi  dengan  jumlah  rendemen  berturut-turut  sebanyak  15,14g; 22,21g; 21,19g; 20,44g; 5,79g; 4,50g; 1,40g; 1,43g; dan 0,93g. Ekstrak etil asetat dan seluruh fraksi yang terkandung di dalamnya menunjukkan aktivitas antibakteri berspektrum luas dengan daya hambat yang tergolong dalam kategori kuat.  Rata- rata daya hambat ekstrak etil asetat dan fraksi 1-8 terhadap S. aureus berturut-turut sebesar 14mm; 12mm; 12,5mm; 15,5mm; 16mm; 12mm; 11,5mm; 10mm; 9,5mm. Sedangkan rata-rata daya hambat ekstrak etil asetat dan fraksi 1-8 terhadap E. coli berturut-turut sebesar 11mm; 11,5mm; 11mm; 11,5mm; 13mm; 14mm; 10,5mm; 10mm; 9,5mm.
Kata kunci : Daun tanaman bandotan, ekstrak etil asetat, antibakteri.

## Abstract
Utilization of Ageratum conyzoides L. leaf for wound healing and digestion disorders  are  often  associated  with  its  antibacterial  activities.  However, informastion of this plant as antibacterial agent still limited on the polar and non polar fraction. Therefore, the objective of this study was to identify the antibacterial activity  of  semipolar  fraktion  extract  of  Ageratum  conyzoides  L.  leaves  to Staphylococcus aureus and Eschirichia coli. Phytochemical test results showed that the  ethyl  acetate  extract  of  bandotan  leaves  contains  flavonoids,  steroids,  p- hydroquinone  and  terpenoids.  Fractionation  of  ethyl  acetate  extract  with  eluent chloroform: methanol (9:1) produced 8 fractions by the number of consecutive yield as much 15,14g; 22,21g; 21,19g; 20,44g; 5,79g; 4,50g; 1,40g; 1,43g; and 0,93g. Overal antibakterial activity result of ethyl acetat extract and fraction 1-8 showed broad-spectrum  antibacterial  activity  with  inhibition  of  belonging  to  the  strong category. The average inhibition of ethyl acetate extracts and fractions 1-8 against S. aureus in a row amounted to 14mm; 12mm; 12,5mm; 15,5mm; 16mm; 12mm; 11,5mm; 10mm; 9,5mm. While, the average inhibition of ethyl acetate extracts and fractions 1-8 against E. coli in a row amounted to 11mm; 11,5mm; 11mm; 11,5mm; 13mm; 14mm; 10.5 mm; 10mm; 9,5mm.
Keywords : Ageratum conyzoides leaf, ethyl acetat fraction, antibacterial.

## PENDAHULUAN
Salah satu tanaman obat yang cukup  dikenal  di  masyarakat  adalah
tanaman bandotan ( Ageratum
conyzoides  L ).  Tanaman  bandotan umumnya digunakan oleh masyarakat untuk  obat  luka  dan  gangguna pencernaan.  Khasiat  herba  bandotan antara  lain  untuk  pengobatan  luka, gatal-gatal, flu, demam, diare, radang usus,  dan  rematik  (Sukamto,  2007; Hasim,  2005).  Penggunaan  daun tanaman ini pada luka dipercaya dapat
menghentikan pendarahan dan mempercepat  proses  penyembuhan. Oladejo et al. (2003) mengemukakan bahwa salah satu cara untuk
mempercepat proses penyembuhan  pada  luka  adalah dengan  mencegah  terjadinya  infeksi yang disebabkan oleh bakteri.
Tanaman  bandotan  mengan- dung  senyawa-senyawa  metabolit sekunder  seperti  terpena,  sterol, flavonoid, alkaloid, benzofuran, chromen, chromon, kumarin, minyak atsiri, dan tanin sehingga tanaman ini dipercaya  memiliki  banyak  manfaat dan  salah  satunya  adalah  sebagai antibakteri  (Ming,  1999;  Kamboj  & Saluja, 2008). Kajian aktivitas antibakteri dari ekstrak polar dan non
polar tanaman bandotan telah
dilaporkan  oleh  beberapa  peneliti sebelumnya.  Ekstrak  polar  dari seperti  ekstrak  metanol  (Almagboul et  al .,  1985;  Oladejo et  al. ,  2003),
ekstrak etanol (Widodo et al. , 2007),
dan  ekstrak  air  (Yamamoto et  al. ,
1991; Okwori et al. , 2007; Mustafa et al. , 2005) diketahui memiliki
aktivitas sebagai antibakteri terhadap bakteri yang diujikan. Sedangkan dari ekstrak  non  polar,  Okwori et  al. ,
(2007)  melaporkan  bahwa  ekstrak heksana  tanaman  bandotan  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri uji.
Pengembangan penelitian tentang  aktivitas  antibakteri  dari tanaman  bandotan  sangatlah  penting dan dapat dikaitkan dengan pemanfaatannya  sebagai  obat  luka secara  tradisional.  Sampai  saat  ini, pencarian  senyawa  aktif  antibakteri dari tanaman bandotan hanya terbatas pada  fraksi  polar  dan  non  polar  saja sehingga pencarian senyawa aktif dari fraksi  semipolarnya  perlu  dilakukan. Secara  ilmiah,  fraksi  semipolar  juga mengandung senyawa-senyawa metabolit  sekunder  yang  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri.  Etil asetat  adalah  salah  satu  pelarut
semipolar yang paling sering
digunakan  dan  diketahui  mampu memisahkan senyawa-senyawa metabolit  sekunder  yang  tidak  dapat larut  dalam  pelarut  polar  dan nonpolar.  Tujuan  dari  penelitian  ini adalah  mengetahui  aktivitas  anti- bakteri  senyawa  aktif  yang  terdapat pada ekstrak etil asetat daun tanaman bandotan ( Ageratum conyzoides L ).

## METODOLOGI PENELITIAN
Sebanyak  1,5  kg  simplisia daun  tanaman  bandotan  dimaserasi dengan pelarut  heksana untuk  meng- hilangkan  kandungan  lemak  dan minyak  yang terdapat  dalam sampel. Setelah dilakukan penyaringan, residu  yang  dihasilkan  dimaserasi kembali  dengan  pelarut  etil  asetat sehingga diperoleh ekstrak etil asetat. Daun  tanaman  bandotan  dan  ekstrak kasar  yang  diperoleh  kemudian  diuji aktivitas  antibakteri  dan  kandungan fitokimianya. Ekstrak kasar etil asetat kemudian ditentukan eluen terbaiknya  yang  akan  digunakan dalam  proses  fraksinasi.  Setelah penentuan  eluen  terbaik  dengan metode  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT).  Ekstrak  etil  asetat  kemudian difraksinasi     dengan     kromatografi
kolom  sehingga  diperoleh  beberapa fraksi.  Masing-masing  fraksi  diuji
aktivitas antibakterinya dengan metode (tripton Soy Agar) TSA untuk mendapatkan  fraksi  yang  memiliki aktivitas antibakteri paling tinggi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi  maserasi  simplisia daun tanaman bandotan
menggunakan  pelarut  heksana  dan etil  asetat  diperoleh  ekstrak  heksana sebanyak  75,95  g  dan  ekstrak  etil asetat  sebanyak  71,50  g.  Simplisia dan ekstrak etil asetat yang diperoleh kemudian  dillakukan  uji  fitokimia untuk  membandingkan  kandungan senyawa metabolit sekunder sebelum dan setelah proses ekstraksi maserasi dilakukan.  Hasil  uji  fitokimia  daun tanaman  bandotan  dan  ekstrak  etil asetat disajikan pada Tabel  1 berikut ini.
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia Daun Bandotan dan Ekstrak etil Asetat Jenis Metabolit Sekunder Daun Bandotan Ekstrak Etil Asetat Alkaloid Flavonoid p -hidrokuinon Terpenoid Steroid Saponin Tanin - ++ ++ ++ ++ - ++++
- ++
++
+ ++++
-
-
Hasil analisis fitokimia terhadap daun bandotan menunjukkan adanya  senyawa-senyawa  flavonoid, steroid, p -hidrokuinon, terpenoid dan tanin.  Senyawa-senyawa  tersebut juga terdapat pada ekstrak etil asetat, kecuali senyawa tanin yang menunjukkan  hasil  negatif.  Senyawa tanin  merupakan  senyawa  polifenol yang  bersifat  polar  dan  hanya  dapat larut  dalam  pelarut  dengan  tingkat kepolaran  yang  sesuai.  Perbedaan tingkat  kepolaran  etil  asetat  dan senyawa tanin menyebabkan senyawa ini tidak dapat larut dalam pelarut etil asetat.
Sebelum fraksinasi dilakukan, terlebih dahulu ditentukan eluen yang menghasilkan pola pemisahan terbaik untuk digunakan dalam proses fraksinasi.  Kombinasi  pelarut  yang digunakan  sebagai  eluen  adalah kloroform : asam asetat : air (90:45:6) dan  kloroform  :  etanol  (9:1).  Hasil pengamatan  penentuan  eluen  terbaik dengan  metode  KLT  disajikan  pada Gambar 1 berikut ini.
Gambar  1.  Hasil  Analisis  KLT  (a) kloroform : asam asetat : air (90:45:6) dan (b) kloroform : etanol (9:1)
Hasil pengamatan bahwa eluen  kloroform  :asam  asetat  :  air
(90:45:6)  hanya  menghasil  6  spot
dengan  pola  pemisahan  yang  kurang baik.  Eluen  kloroform  :  etanol  (9:1) menghasil pola pemisahan yang lebih baik  dengan  jumlah  spot  yang dihasilkan  sebanyak  8.  Jumlah  dan pola  pemisahan  yang  dihasilkan dipengaruhi  oleh  sifat  kepolaran senyawa-senyawa  yang  terkandung dalam  ekstrak  etil  asetat  daun
bandotan. Senyawa tersebut kemungkinan memiliki tingkat
kepolaran  yang  tidak  terlalu  tinggi
sehingga  sesuai  dengan  tingkat kepolaran yang dihasilkan oleh eluen kloroform : etanol (9:1). Setelah diketahui eluen terbaiknya,  proses  selanjutnya  yaitu fraksinasi dengan metode
kromatografi  kolom.  Fraksi-fraksi yang keluar dari kromatografi kolom ditampung pada tabung reaksi dengan jumlah  5  ml  untuk  masing-masing tabung  reaksi.  Jumlah  tabung  yang diperoleh  dari  hasil  kromatografi kolom  adalah  sebanyak  150  tabung. Tabung-tabung yang memiliki kesamaan pola spot kemudian digabungkan sehingga diperoleh total
8 fraksi. Masing-masing fraksi
kemudian diuapkan pelarutnya
dengan rotary  evaporator .  Nilai  Rf, warna  dan  jumlah  rendemen  yang dihasilkan  dari  masing-masing  spot untuk  eluen  kloroform  :  etanol  (9:1) disajikan pada Tabel 2 berikut ini.
Tabel 2.   Nilai Rf, warna jumlah rendemen yang dihasilkan dari masing-masing spot pada eluen kloroform : etanol (9:1)
No  Warna pada cahaya tampak  Warna pada UV (λ = 254 nm) Rf Rendemen (g)
1 2 3 4 5 6 7 8 Hijau kehitaman Hijau tua Hijau muda Hijau muda Kuning muda Tidak berwarna Hijau muda Hijau muda Merah kehitaman Merah kehitaman Hijau tua Hijau tua Hijau muda Kuning Kuning muda Kuning muda 0,95 0,84 0,73 0,59 0,44 0,33 0,23 0,10 15,14 22,21 21,19 20,44 5,79 4,50 1,43 0,93
Fraksi  1-4  memiliki  jumlah rendemen yang lebih tinggi dibandingkan dengn 4 fraksi lainnya.
tingginya rendemen fraksi 1-4
menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil asetat  lebih  banyak  mengandung senyawa-senyawa  dengan  tingkat kepolaran  yang  cenderung  rendah. Fraksi 1-4 memiliki tingkat kepolaran yang  lebih  rendah  dibandingkan dengan fraksi 5-8. Tingkat kepolaran yang  rendah  menyebabkan  senyawa
tersebut  terabsorbsi lebih lemah oleh absorben  sehingga  akan  keluar  lebih dahulu dari kolom kromatografi.
Uji aktivitas antibakteri dilakukan terhadap pelarut etil asetat, ekstrak etil asetat, serta 8 fraksi yang diperoleh  dari  proses  fraksinasi.
Sebagai antibakteri standar, digunakan kloramfenikol dengan konsentrasi  0,4  mg/ml.  Hasil  uji aktivitas  antibakteri  disajikan  pada Tabel 3 berikut ini.
Tabel 3. Hasil uji aktivitas antibakteri
Sampel Zona Hambat (mm) S. aureus E. coli Pengulangan Rata-rata Pengulangan Rata-rata 1 2 1 2 Pelarut etil asetat Ekstrak etil asetat Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi 5 Fraksi 6 Fraksi 7 Fraksi 8 Kloramfenikol (0,4 mg/ml) - 14,0 12,0 13,0 15,0 16,0 12,0 11,0 10,0 10,0 18,0 - 14,0 12,0 12,0 16,0 16,0 12,0 12,0 10,0 9,0 19,0 - 14,0 12,0 12,5 15,5 16,0 12,0 11,5 10,0 9,5 18,5 - 11,0 11,0 11,0 11,0 13,0 14,0 11,0 10,0 10,0 20,0 - 11,0 12,0 11,0 12,0 13,0 14,0 10,0 10,0 9,0 20,0 - 11,0 11,5 11,0 11,5 13,0 14,0 10,5 10,0 9,5 20,0
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar etil  asetat  dan  fraksi-fraksi  yang terkandung  di  dalamnya  memiliki aktivitas  antibakteri  seperti  ekstrak polar  dan  non  polarnya.  Diameter zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh ekstrak  kasar  etil  asetat  terhadap bakteri S. aureus sebesar 14 mm dan
terhadap E.  coli sebesar  11  mm.
Besarnya  diameter  zona  hambat ekstrak  etil  asetat  hampir  sama dengan diameter zona hambat ekstrak air,  metanol  dan  heksana.  Okwori et al. ,  (2007)  menyebutkan  bahwa diameter zona hambat yang
dihasilkan  oleh  ektrak  air,  metanol dan  heksan  daun  tanaman  bandotan
terhadap S.  aureus berturut-turut dalam  kisaran  7-15  mm,  10-14  mm,
9-16 mm, sedangkan terhadap E. coli
sebesar  6-12  mm,  10-16  mm,  7-16 mm.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri juga  menunjukkan  bahwa  rata-rata zona hambat yang dihasilkan
terhadap S.  aureus cenderung  lebih
besar  dibandingkan  dengan E.  coli .
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sampel yang  diujikan  memiliki  sensitivitas yang  lebih  baik  terhadap  bakteri  uji. Perbedaan  sensitivitas  bakteri  gram positif dan negatif diduga berasal dari perbedaan morfologi struktur dinding
sel keduanya. Hodges (2002)
menerangkan  bahwa  bakteri  gram negatif  memiliki  membran  fosfo- lipida  bagian  luar  yang  menjaga struktur  komponen  lipopolisakarida nya  sehingga  dinding  sel  menjadi impermeable terhadap senyawa
antibakteri.  Hal  ini  menyebabkan
dinding sel bakteri gram negatif dapat bertindak sebagai penghalang
terjadinya  difusi  dan  membuatnya
kurang  sensitif  terhadap  senyawa antibakteri dibandingkan bakteri gram positif.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil asetat  daun  bandotan  dan  semua fraksi didalamnya  memiliki spektrum luas  karena  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dan gram  negatif.  Dari  hasil  penelitian juga  diperoleh  informasi  bahwa ekstrak  etil  asetat  dan  fraksi  1-6 tergolong  sebagai  antibakteri  yang memiliki aktivitas kuat karena menghasilkan rata-rata diameter zona
hambat  diatas  10  mm.  Stout  dalam Maryuni (2008) menjelaskan pengelompokan anti-bakteri
berdasarkan  luasan  daya  hambatnya ke dalam 4 kelompok, yaitu antibakteri  dengan  aktivitas  rendah (<5  mm),  sedang  (6-10  mm),  kuat (11-20  mm)  dan  sangat  kuat  (>20 mm). Namun demikian, zona hambat yang  dihasilkan  oleh  ekstrak  etil asetat  dan  fraksi  yang  terkandung didalamnya tidak sebesar daya hambat yang dihasilkan oleh
kloramfenikol  sebagai  antibakteri
standar.  Kloramfennikol  merupakan antibiotik aminoglikosida yang bersifat bakteriostatik dan berspektrum luas dengan mekanisme kerja     yaitu     menggangu    sintesis
protein  pada  bakteri  (Schunack,
1990).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian yang  dilakukan,  diketahui  bahwa
ekstrak  etil  asetat  dan  fraksi-fraksi yang terkandung didalamnya memiliki aktivitas antibakteri
berspektrum  luas  namun  cenderung
lebih  sensitif  terhadap  bakteri  gram positif.  Meskipun  aktivitas  anti- bakteri yang ditunjukkan lebih rendah dari kloramfenikol sebagai antibakteri standar, namun demikian esktrak etil asetat dan sebagian besar fraksi-fraksi yang terkandung di dalamnya
termasuk sebagai anti-bakteri dengan kategori aktivitas kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
Almagboul et al ., 1985, antimicrobial activity  of  certain  sudanese plant used in forcloric medicine: screening for antibacterial  activity,  part  II, Fitoterapia 56:103-109. Hasim, 2005, Mengembangkan
potensial bakteri bandotan.
http://www.  kompas.com  [23 mei 2005].
Hodges  S,  2002, Pharmaceutical aplication  of  microbiological techniques  in:  Pharmaceutics:
The science of dosage desaign, Aulton  ME ,  Ed.  2nd.  Edn. Harcourt Publisher
Ltd. London.pp:606.
Kamboj  A,  Saluja  AK,  2008, Ageratum  conyzoides L:  A review  on  its  phytochemical and  pharmacological  profile. International  journal  of  green pharmacy : 59-68.
Maryuni  AE,  2008,  Isolasi  dan identifikasi senyawa antibakteri minyak atsiri daun zodia ( Evodia sp ) [tesis]. Bogor:
Program  Pascasarjana,  Institut Pertanian Bogor. Ming LC, 1999, Ageratum conyzoides : A trapical source of medicinal and agricultural product. J.Janick, ASHS  Press , Alexandria, VA .
Mustafa et  al. ,  2005,  Evaluation  of wound  healing  of Ageratum conyzoides L. Extratct in combination with honey in rats as  animal  model. International J  of  molecular  and  advance science (1):406-410.
Okwori et  al. ,  2007,  Antibacterial activities of Ageratum conyzoides  extract  on  selected baterial pathogens, The internet journal of microbiology TM
ISSN:1937-8289.
Oladejo OW et al., 2003, Enhancemen of cutaneous wound  healing  by  methanolic extract of Ageratum conyzoides in  the  wistar  rat, African Journal of biomedical research, vol 6:27-31.
Schunack  W et  al .,  1990, Senyawa Obat Ed.2, penerjemah: Watimena  Jr  &  Soebito  S, Yogyakarta: UGM Press. Sukamto,  2007,  Bandotan Ageratum conyzoides tanaman multi fungsi  yang  menjadi  inang potensial  virus tanaman, Warta Puslitbangbun  13:  Desember 2007. Widodo et  al. ,  2007,  Isolation  of antifungal  and  antibacterial compounds from etanol extract of Ageratum conyzoides Leaves ( Ageratum  conyzoides L), Acta pharmaceutica 31(2):86-88. Yamamoto et al. , 1991, Pharmacological  sreening  of Ageratum conyzoides L. (Mentrasto), Mem Inst Oswaldo Cruz (86):145-147.