## Pembuatan Bioetanol dari Pati Umbi Uwi ( Discorea alata ) melalui Proses Fermentasi dan Distilasi

## Hargono*
Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik Universitas Diponegoro Jl. Prof. H. Soedarto, SH., Tembalang, Semarang, 50275, Indonesia Email: hargono@che.undip.ac.id

## Abstrak
Bioetanol  adalah  nama  lain  etanol  yang  dapat  dibuat  dari    bahan  baku  biomasa.  Tanaman  Uwi  ( Discorea alata) mudah tumbuh di  lereng-lereng gunung, hutan sebagai tanaman liar, namun tanaman ini  ada  yang sengaja  ditanam  orang.  Tanaman  Uwi  mengandung  karbohidrat  cukup  tinggi  (32,64%)  sehingga  dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku pembuatan  bioetanol. Pada penelitian ini umbi Uwi  terlebih dulu dibuat pati  agar    memudahkan  terjadinya  proses  hidrolisis  dan  fermentasi.  Proses  pembuatan  pati  Uwi  adalah dengan  mengekstrak  bubur    (hasil  parutan)    Uwi  menggunakan  air.  Proses    hidrolisis  dan  fermentasi dilakukan secara serentak  atau Simultaneous Saccharification and Fermentation ( SSF ). Konsentrasi pati  Uwi 200 g/L, konsentrasi enzim (Stargen TM 002) 1,5% (w/w), konsentrasi yeast 1,10% (w/w) dan  pada suhu 30°C. Hasil proses SSF adalah konsentrasi bioetanol kadar rendah, sehingga agar kemurnian bioetanol meningkat perlu dilakukan distilasi. Proses distilasi menggunakan distilasi 2 tahap, terdiri dari 2 kolom, meliputi kolom 1 tanpa bahan  isian  dilengkapi pipa pendingin  yang berbentuk spiral, sedangkan  kolom 2 berisi bahan isian yaitu packing. Proses distilasi 2  tahap masing-masing  ini dioperasikan pada suhu 78°C. Tujuan penelitian ini adalah  mempelajari  pengaruh  waktu SSF terhadap  konsentrasi  bioetanol  dan    mempelajari  waktu  distilasi tahap 1 dan 2 terhadap konsentrasi bioetanol.  Proses SSF dilakukan selama 90 jam. Hasil terbaik proses SSF dicapai selama 72 jam  yang menghasilkan konsentrasi bioetanol 12,30%. Proses distilasi 1 dan 2 dilakukan masing-masing  selama  105  menit.  Hasil  terbaik  dari  distilasi  tahap  1  dan  tahap  2dicapai  selama  waktu masing-masing 90 menit, yaitu konsentrasi bioetanol  27,93% dan 85,30%. Perancangan alat distilasi 2 tahap ini layak digunakan sebagai alat pemunian bioetanol  hasil SSF .
Kata kunci : Pati Uwi, SSF,  distilasi dua tahap, bioetanol

## Abstract

## Making Bioethanol from Uwi Tuber Starch (Discorea alata) through Fermentation and Distillation Processes
Bioethanol is another name for ethanol which can be made from biomass feedstock. The Uwi (Discorea alata) plant  contains  quite  high  carbohydrate  (32,64%)  so  that  it  can  be  used  as  raw  material  for  bioethanol production. The Uwi tubers were made starch in order to facilitate the hydrolysis and fermentation processes. The  process  of  to  produce  Uwi  starch  is  to  extract  the  pulp  (grated)  Uwi  using  water.  The  hydrolysis  and fermentation processes are carried out simultaneously or Simultaneous Saccharification and Fermentation (SSF). Uwi starch concentration 200 g/L, enzyme concentration (1.5% (w/w), yeast concentration 1.10% (w/w) and at a temperature of 30° C. The result of the SSF process is a low concentration of bioethanol, so that in order to increase the purity of bioethanol, using distillation. The distillation process uses 2-stage distillation, consisting of 2  columns,  including  the  first  without  filling,  equipped  with  a  spiral  cooling  pipe,  while  the  second  column contains stuffing. The 2-stage distillation process each is operated at 78°C. The objective of this study was to
Metana: Media Komunikasi Rekayasa Proses dan Teknologi Tepat Guna Desember 2020 Vol. 16(2):81-86
study the effect of SSF time on bioethanol concentration and to study the distillation time of stages 1 and 2 on the concentration of bioethanol. The best result of SSF process was achieved for 72 hours which resulted in a bioethanol concentration  of 12.30%. The best results from the distillation stage 1  and stage 2 were achieved during each time of 90 minutes, namely the bioethanol concentration of 27.93% and 85.30%. The design of this 2-stage distillation apparatus is suitable for use as a means of abolishing the bioethanol produced by SSF.
Keywords : Uwi starch, SSF, two stage distillation, bioethanol.

## PENDAHULUAN
Tanaman  Uwi  ( Discorea  alata) banyak tumbuh  di  Indonesia,  terutama  di  lereng-lereng gunung, hutan sebagai tanaman liar. Tanaman ini menghasilkan  umbi.  Rakyat  Indonesia  jarang sekali  mengkonsumsi  umbi  ini  karena  cara pengolahan  umbi  ini  harus  berhati-hati  dan pencuciannya  membutuhkan  waktu  yang  lama. Pemanfaatan  umbi  ini    dapat  digunakan  sebagai makanan  alternatif  terutamama  bagi  orang  yang sedang  melalakukan  diet  karena  kandungan karbohidratnya  tidak  tinggi.  Umbi  tanaman  ini dapat  dikonversi  juga  menjadi  bahan  bakar alternatif,  sebagai  contoh  bioetanol.  Bioetanol merupakan  salah  satu  bahan  bakar  alternatif pengganti  bahan  bakar  fosil  yang  dapat diperbaruhi dan lebih ramah lingkungan (Farrell et al .,  2006)  dan  (Karagoz et  al .,  2012).  Bioetanol mudah dibuat dari bermacam-macam bahan baku yang berasal dari produk  pertanian  (Jørgensen et al. , 2007), berbasis pati:  singkong, umbi gadung, jagung,  gandum,  sagu  (Favaro et  al .,  2015) berbasis lignoselullose: jerami padi, eceng gondok ( water  hyacinth ), sugarcane  bagasse , corn  stalk , grass , pineapple  peel (Shaheen et  al .,  2013), berbasis gula: gula tebu ( Saccharum officinarum ), gula  bet    ( Beta  vulgaris ),  molasses  ( Ensinas  et  al.,
2009) Proses fermentasi dengan metode
Simultaneous  Saccharification  and  Fermentation (SSF )  dari  berbagai  macam feedstock umumnya menghasilkan etanol kadar rendah.  Penelitian SSF
menggunakan
yeast S.
carlsbergensis menghasilkan  etanol  maksimum  15,9  g/L  (2,21%) setelah  48  jam  (Scordia et  al .,  2010).  Selanjutnya penelitiannya menggunakan design eksperimental untuk mengoptimalkan etanol melalui SSF dengan menggunakan  selulase  dan  yeast S.  stipitis menghasilkan etanol 18 g/L (2,5%) (Scordia et al., 2010).  Penelitian SSF terhadap giant  reed ,
menghasilkan  konsentrasi  etanol  39  g/L  (5,41%) selama 72 jam (Silva et al ., 2015) Proses pemisahan atau pemurnian digunakan  untuk  memurnikan  crude  etanol  hasil fermentasi (Utama et al ., 2016).  Pemurnian etanol hasil  fermentasi  dapat  dilakukan  menggunakan distilasi (Lei and Chen, 2003), adsorpsi (Fujita et al., 2011) dan membran pervaporasi (Wei et al ., 2009). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mempelajari pengaruh  waktu  fermentasi  (SSF)  terhadap konsentrasi etanol pada konsentrasi pati umbi Uwi ( Discorea  alata) 200  g/L  pada  suhu  30°C  dan mempelajari  pengaruh  waktu  distilasi  2  tahap terhadap konsentrasi etanol.

## METODOLOGI
Umbi  Uwi  ( Discorea  alata ) berumur  10 bulan  didapat  dari  desa  Sukorejo,  Kecamatan Gunung  Pati,  Semarang,  Jawa  Tengah-Indonesia, selanjutnya  umbi  ini  dibuat  pati  yang  merupakan bahan  baku  pembuatan  bioetanol.  Kandungan pati 32,64%Pembuatan pati Uwi yaitu sebanyak 5 kg  umbi  Uwi  yang  dipeoleh  dari  petani  dicuci terlebih dahulu menggunakan air agar bersih dan terpisah  kotoran  (tanah).  Selanjutnya  umbi  ini dikuliti  menggunakan  pisau  agar  umbi  terpisah dari  kulitnya.  Setelah  diperoleh  umbi  maka  umbi ini  dicuci  berkali-kali  (biasanya  3  kali) menggunakan  air  yang  mengalir  sampai  bersih. Untuk  memperoleh  pati  yang  maksimal    umbi yang  telah  bersih  ini  diparut  menggunakan  alat parut tradisional sehingga umbi ini akan berubah bentuk  menjadi  bubur  umbi  Uwi.  Bubur  umbi  ini selanjutnya  diekstrak  menggunakan  air  dengan cara  diremas-remas  agar  diperoleh  pati.  Kondisi terakhir  kalinya  adalah  campuran  antara  pati  dan air.  Selanjutnya  campuran  bahan  ini  dilakukan proses  pemisahan  menggunakan centrifuge pada kecepatan  100  rpm  selama  20  menit.  Pati  umbi Uwi  akan  terpisah  dari  airnya,  selanjutnya
Metana: Media Komunikasi Rekayasa Proses dan Teknologi Tepat Guna Desember 2020 Vol. 16(2):81-86
dikeringkan  mengunakan  tray  dryer  pada  suhu 60 o C selama 15 jam (Hargono et al. , 2017)
Potassium  sodium  tartrate  tetrahydrate dan 3,5- Dinitrosalicylic  acid (Merck),  NaOH  (98%, glukosa (99.5%, Merck) dan etanol (99.5%, Merck), (NH 4 ) 2 HPO 4 ,  MgSO 4 .7H 2 O  dan  yeast  extract semuanya  dibeli  dari  Sigma-Aldrich  Indonesia. Enzim jenis GSHE sebagai Stargen TM 002 diperoleh dari  Genencor  International  (USA)  (Genencor, 2009)  Enzim  ini  berisi Aspergillus  kawachii α - amylase  revealed  di  dalam T.  reesei and glucoamylase  dari T.  reesei .  Enzim  -amilase  dan glukoamilase    yang  bekerja  secara  sinergi  untuk menghidrolisis  granula  pati  menjadi  glukose. Aktivitas  enzim  570  GAU/g  dan  pH  4-4,5. Mikroorganisme yang digunakan adalah Saccharomyces  cereviceae yaitu  Baker’s  yeast, produksi    PT.  Pakmaya  didapat  dari  Toko  Kabita, Semarang.  Sebelum  digunakan    disimpan  dalam almari  pendingin. Saccharomyces  cereviceae di scatter dalam aquades  pada  suhu  kamar  pada konsentrasi 10 g/L.
Tahapan  pra  hidrolisis  terlebih  dulu dilakukan  dengan  tujuan    yaitu  memenuhi tahapan SSF. Hidrolisis  pati  Uwi  dilakukan  dalam erlenmeyer  250  mL.  Konsentrasi  pati  umbi  Uwi 200  g/L,  konsentrasi  enzim  1,5%  (w/w),  pH  4,5. Campuran  di  dalam  erlenmeyer    dipanaskan dalam water  bath sampai  suhu  50°C  selama    30 jam  pada  kecepatan  100  rpm.  Selanjutnya slurry didinginkan  sampai  suhu  30°C  dan  dilakukan inkubasi  selama  18  jam.  Selanjutnya slurry dipisahkan  antara  cake  dan    filtratnya menggunakan centrifug e.  Filtrat  yang  ada dianalisis untuk menentukan jumlah glukosa yang dibebaskan.  Fermentasi  hidrolisis  enzimatik dilakukan  dengan  menggunakan  konsep  SSF . Pra hidrolisis  dilakukan untuk  meningkatkan glukosa pada  awal  fermentasi  sehingga  hasil  glukosa tersedia  dan  dapat  difermentasi  oleh  yeast Saccharomyces cereviceae menjadi etanol konsentrasi  rendah.  Proses  SSF  ini  dilakukan terhadap pati umbi Uwi pada konsentrasi 200 g/L dalam    reaktor  pada  volume  1  L.  Konsentrasi enzim 1,5% (w/w). Peralatan ini dilengkapi dengan kontrol pH.  pH medium fermentasi dipertahankan 4,5 selama  “cultivation” dikontrol secara hati -hati menggunakan    3  M  NaOH.  Selanjutnya  pada media  fermentasi  ditambahkan  beberapa  nutrien:
(NH4) 2 HPO 4 0.5 g L -1 , MgSO 4 .7 H 2 O 0.025 gL -1 dan yeast extract 1.0 gL -1 selama 15 jam dalam shaker- inkubator  pada  suhu  37°C  dan  80  rpm. Selanjutnya    pada  medium  fermentasi  ini ditambahkan  yeast  kering  5  g/L  dan  dilakukan percobaan selama 90 jam. Sampel diambil secara periodik  :  6,  12,  18  sampai  90  jam  selanjutnya sampel  ini  dianalisis  kandungan  etanol  dan glukosa  menggunakan  high  performance  liquid chromatography (HPLC) Aminex HPX-87H column.
Hasil  proses  fermentasi  adalah  berupa ethanol broth yang mempunyai kandungan etanol yang  rendah.  Untuk  meningkatkan  kadar  etanol dilakukan  menggunakan  distilasi  2  tahap  seperti ditunjukkan  pada  Gambar  1.  Tahap  satu ethanol broth dipanaskan  dalam  boiler  T-01  pada  suhu 78°C sehingga terbentuk uap campuran etanol-air. Campuran  uap  etanol-air  yang  berada  di  dalam pipa  spiral  (dalam  Kondensor  A)  dikondensasi selama  15-120  menit    menggunakan  pendingin air.  Setiap  interval  waktu  15  menit  sampel    hasil kondensasi dianalisis konsentrasi etanol menggunakan  HPLC.  Hasil  etanol  terbaik  dari tahap1  digunakan  sebagai  umpan  distilasi  2, dengan    memanaskan  sistem  dalam  boiler  T-02 tersebut  sampai  suhu  78°C.  Pemurnian  tahap  2 dilakukan  di  dalam  kolom  kondensor    (B)  yang berisi bahan isian berupa packing selama periode waktu  6,12,18  sampai  78  jam.  Hasil  etanol keluaran dari kolom kondensor B merupakan hasil utama  dari  serangkaian  proses  distilasi  tahap  2, selanjutnya konsentrasi etanol dianalisis menggunakan HPLC.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  SSF  konsentrasi  glukosa  dan  etanol pada konsentrasi pati Uwi 200 g/L, pada 30ºC dan pH    4,5  dari  periode  waktu  6  sampai  78  jam ditunjukkan  pada  Tabel  1.    Selama  SSF  dari    6 sampai 12 jam, konsentrasi glukosa yang menjadi 56,78 g/L, selanjutnya selama waktu 18 sampai 90 jam  konsentrasi  glukosa  cenderung  turun  sampai 78  jam  yaitu  dari  48,90  g/L  sampai  5,09  g/L, setelah  78  jam  konsentrasi  glukosa  cenderung tetap pada 5,09 g/L. Kenaikan konsentrasi  selama 6-12  jam  disebabkan  karena  pada  proses  SSF  ini memasuki  tahap  pre-hidrolisis  (Silva et  al. ,  2015) yaitu  aktivitas  enzim  selama  hidrolisis  pati  Uwi yang menghasilkan konsentrasi glukosa mencapai
Metana: Media Komunikasi Rekayasa Proses dan Teknologi Tepat Guna Desember 2020 Vol. 16(2):81-86
maksimum. Hal ini sebagai akibat proses SSF yang harus menyediakan glukosa untuk diubah menjadi etanol.    Berbeda  dengan  glukosa,  selama  SSF konsentrasi  etanol  cenderung  naik  seperti ditunjukkan pada Tabel 1. Selama SSF dari waktu 6 sampai 72 jam, konsentrasi etanol naik dari 40,18
g/L    sampai  88,65  g/L.  Selanjutnya  selama  waktu proses  melebihi  78  jam  konsentrasi  etanol cenderung  tetap  yaitu  88,60  g/L.  Hal  ini  terjadi karena  ketersediaan  glukosa  dalam  jumlah  yang cukup untuk diproses secara fermentasi oleh yeast Saccharomyces cerrevisiae menjadi etanol.
Gambar  1 .    A.  Kondensor  dengan  pendingin  air,  B.  Kolom  distilasi  berisi  packing,  C.01  pemanas  -1  untuk Boiler-1, C.02 pemanas-2 untuk Boiler-2, T-01 Boiler-1, T-02 Boiler-2, dan  Tr Termometer.
Tabel 1. Pengaruh  waktu  fermentasi    (SSF)  terhadap  konsentrasi  glukosa  dan  konsentrasi  etanol  pada Konsentrasi pati  Uwi  200 g/L, 30°C dan pH 4
Waktu, jam C glukosa , g/L C etanol , g/L
C etanol , (%) 0 0 0 0 6 32,24 40,18 5,58 12 56,78 49,29 6,84 18 48,90 57,84 8,03 24 18,59 65,82 9,14 30 13,02 71,62 9,94 36 12,51 73,75 10,24 42 11,29 75,46 10,48 48 8,94 77,86 10,81 54 8,48 82,25 11,42 60 5,46 84,12 11,68 66 5,23 86,54 12,01 72 5,11 88,65 12,30 78 5,09 88,62 12,31 84 5,09 88,60 12,30 90 5,09 88,60 12,30
air masuk air keluar
Metana: Media Komunikasi Rekayasa Proses dan Teknologi Tepat Guna Desember 2020 Vol. 16(2):81-86
Penambahan    ragi  pada  proses  fermentasi  SSF selama  12  jam  menghasilkan  konsentrasi  glukosa 28  g/L  (Silva et  al. 2015).  Hasil  glukosa  ini digunakan  untuk  fermentasi  SSF  selama  78  jam menghasilkan konsentrasi etanol 39 g/L. Hargono et  al. ,  (2015)  melakukan  penelitian  SSF    pati singkong pada konsentrasi 200 g/L, menggunakan Stargen TM 002  (0,1%  w/w)  dan  yeast Saccharomyces cerrevisiae menghasilkan konsentrasi  etanol  36,16  g/L.  Kusmiyati, et  al. , (2016) melakukan studi hidrolisis tepung  Iles-iles ( Amorphophalus campanulatus )  pada konsentrasi 10%  untuk  memproduksi  gula  reduksi  yang  akan digunakan  sebagai  bahan  baku  fermentasi menggunakan Zymomonas  mobilis .  Kondisi optimum    dicapai  pada  pH  4.5,  30°C  selama  120 jam, menghasilkan etanol  10.33 % (v/v).

## Pengaruh Waktu Distilasi terhadap Konsentrasi Etanol
Proses  pemurnian  etanol  melalui  distilasi tahap-1  dilakukan  terhadap ethanol  broth hasil fermentasi  SSF  terbaik  yaitu    88,65  g/L  atau 12,30%  (waktu  72  jam).  Selanjutnya  setelah dilakukan  pemurnian  menggunakan  distilasi tahap-1  hasil  etanol  yang  didapat  seperti ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Selama  waktu  distilasi 15-105  menit  terjadi  kenaikan  konsentrasi  etanol dari  11,06%  sampai  27,92%,  selanjutnya  setelah proses  distilasi  dilanjutkan  sampai  waktu  105 menit  konsentrasi  etanol  hampir  tetap,  yaitu 27,93%. Proses distilasi tahap 1 terjadi kondensasi di  dalam  kolom  A  tanpa  menggunakan  bahan isian  sehingga  kenaikan  konsentrasi  etanol  hanya sampai 27,93%. Hal ini diasumsikan bahwa proses distilasi  ini  hanya  terdiri  1  stage  sehingga konsentrasi  etanol  hanya  terbatas  pada  27,93%, walaupun  waktu  distilasi  dinaikkan  sampai  105 jam,  hasil  konsentrasi  etanol  cenderung  tetap, seperti ditunjukkan pada Tabel 2.
Distilasi  tahap  2  merupakan  cara  yang digunakan  untuk    meningkatkan  konsentrasi etanol dari hasil distilasi tahap 1 (27,93%).  Selama waktu  90  menit  distilasi  ini  menghasilkan konsentrasi  etanol  85,30%  seperti  ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel  2. Pengaruh  Waktu    Distilasi  Tahap  1 terhadap Konsentrasi Etanol
Waktu (menit) Konsentrasi etanol (g/L %) 0 11,06 15 12,94 30 16,06 45 18,27 60 19,55 75 24,16 90 27,92 105 27,93 Tabel 3. Pengaruh  Waktu    Distilasi  Tahap  2 terhadap Konsentrasir Etanol Waktu (menit) Konsentrasi etanol (%) 0 30,72 60 74,68 75 83,25 90 85,30 105 81,64 120 81,63
Distilasi ini merupakan metode untuk memisahkan campuran biner etanol-air. Menurut  Huang et al. , (2008) metode distilasi pemisahan campuran biner etanol-air  hanya dapat menghasilkan konsentrasi etanol  maksimum  95,63%  (w/w)  karena  terbatas pada titik azeotrop. Vane et al. , (2012)  melakukan studi  pemisahan  etanol  hasil  fermentasi ethanol broth pada  konsentrasi  5%  pada  flowrate  145 g/menit  menggunakan  distilasi  terintegrasi dengan  membran  dihasilkan  konsentrasi  etanol 63,5 sampai 98,5%

## KESIMPULAN
Proses  SSF    terhadap  pati  umbi  Uwi  pada konsentrasi 200 g/L  selama 72 jam  menghasilkan glukosa  5,11  g/L,  sedangkan  konsentrasi  ethanol broth  12,30%.  Pada  tahap  pemurnian  terhadap ethanol broth menggunakan distilasi  tahap 1 dan tahap  2  diperoleh  masing-masing  konsentrasi etanol  27,92%  dan  85,30%  selama  90  menit Rancangan  peralatan  distilasi  2  tahap  ini  layak digunakan untuk pemurnian hasi fermentasi.
Metana: Media Komunikasi Rekayasa Proses dan Teknologi Tepat Guna Desember 2020 Vol. 16(2):81-86

## DAFTAR PUSTAKA
Ensinas, A.V., Modesto, M., Nebra, S.A. & Serra, L., 2009.  Reduction  of  irreversibility  generation in  sugar  and  ethanol  production  from sugarcane. Energy , 34(5):680-688.
Farrell,  A.E.,  Plevin,  R.J.,  Turner,  B.T.,  Jones  A.D., O’Hare, M., &  Kammen ,D.M.,  2006. Ethanol can  contribute  to  energy  and  environmental goals. Science . 311:506 – 508.
Favaro,  L,  Viktor,  M.J.,  Rose,  S.H.,  Viljoen-Bloom,
M.,  van  Zyl  W.H.,  Basaglia,  M.,  Cagnin,  L.,  & Casella, S., 2015.  Consolidated bioprocessing of  starchy  substrates  into  ethanol  by industrial  Saccharomyces  cerevisiae  strains secreting  fungal  amylases. Biotechnology Bioenginering, 112:1751 – 60.
Fujita,  H.,    Qian,  Q.,    Fujii,  T.,    Mochizuki,  K.  & Sakoda    2011.  Isolation  of  ethanol  from  its aqueous solution by liquid phase adsorption and  gas  phase  desorption  using  molecular sieving carbon. Adsorption 17:  869 – 879. Genencor  STARGEN TM 002  2009  are  trademarks of Danisco US Inc. in the United States Hargono, H., Jos, B., &  Kumoro, A.C. 2017 Kinetics of the Enzymatic Hydrolysis of Sweet Cassava Starch  and  Bitter  Cassava  Flour  and  Gadung (Dioscorea  hispida    Dennst)  Flour  at  Low Temperature. Bull.  Chem.  React.  Eng.  Catal . 12(2):256 – 262.
Hargono,  H.,  Kumoro,  A.C.,  &  Jos,  B.  2015 Comparative  study  on  the  conventional  and non  thermal  simultaneous  saccharification and  fermentation  of Manihot  glaziovii root starch. AIP Conference Proceedings 1699:030013 Huang,  H.J.,  Ramaswamy,  S.,  Tschirner  U.W.  & Ramarao,  B.V.  2008.  A  review  of  separation technologies in current and future
biorefineries. Sep Purif Technol . 62(1):1-21. Jørgensen,  H.,  Kristensen,  J.B.  &  Felby,  C.  2007.
Enzymatic  conversion  of  lignocellulose  into fermentable sugars: challenges and opportunities. Biofuel  Bioprod. Bior .  1:119 –
134.
Karagöz, P., Rocha, I.V., M.Ö. & Angelidaki, I 2012. Bioresource Technology. 104:349-357
Kusmiyati, Hadiyanto, H. & Kusumadewi, I.  2016. Bioethanol Production From Iles-Iles (Amorphopallus  Campanulatus)  Flour  by Fermentation  Using  Zymomonas  Mobilis International.  Journal  of  Renewable  Energy Development, 9(1):9-14.
Lei,  Z.,  Li,  C. & Chen, B. 2003 Extractive Distillation: A Review. Separation  &  Purification  Reviews . 32:121 – 213
Scordia, D., Cosentino, S.L., & Jeffries, T.W.  2010. Perennial grasses as lignocellulosic feedstock for second-generation bioethanol production in  Mediterranean  environment. Bioresource Technology. 101(14):5358 – 65 Scordia,  D,, Cosentino,  S,L,, Lee,  J.W.,  &   Jeffries,
T.W.  2012    Bioconversion  of  giant  reed ( Arundo  donax L.)  hemicellulose  hydrolysate to  ethanol  by Scheffersomyces  stipitis CBS6054. Biomass Bioenergy . 39 : 296-305.
Shaheen, S.M., Rinklebe, J., Frohne, T., White, J.R., & Delaune, R.D. 2013 Biogeochemical Factors Governing  Co,  Ni,  Se,  and  V  Dynamics  in Periodically  Flooded  Egyptian  North  Nile Delta  Rice  Soils. Soil  Science  Society  of America Journal,78 (3):1065-1078.
Silva,  C.F.L.E.,  Schirmer,  M.A.,  Maeda,  R.N., Barcelos,  C.A.,  Pereira,  N.  2015.  Potential  of giant  reed  (arundo  donax  l.)  for  second generation  ethanol  production.  Electron. Journal Biotechnology 18:10 – 15. Utama, G. L.,  Kurnani, T.B.A., & Balia, R.L., 2016. Selection  of  Mozzarella  Cheese  Whey Native  Yeasts  with  Ethanol  and  Glucose Tolerance  Ability. International  Journal  on
Advanced Science, Engineering and Information Technology . 6:252-257.
Vane,  L.M.,  Alvarez,  F.R.,  Rosenblum,  L.,  & Govindaswamy,  S.  2013.  Efficient  Ethanol Recovery from Yeast Fermentation Broth with Integrated  Distillation – Membrane  Process. Industrial  &  Engineering  Chemistry  Research.
52(3):1033-1041 . Wei,  X.Z.,  Liu,  X.F.,  Zhu,  B.K.  &  Xu,  Y.Y.  2009. Membranes  of  crosslinked  hyperbranch polymers and their pervaporation properties. Desalination, 247(1-3): 647-656.