## IDENTIFIKASI SENYAWA KIMIA DAN PENELUSURAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOLIK DAUN TUMBUHAN TEROMPET UNGU

## Eva Monica 1)
1) Program Studi Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Ma Chung, Malang

## INTISARI
Terompet  Ungu  ( Ruellia  brittoniana Leonard)  termasuk  dalam  famili  Acanthaceae. Penelitian ini ditujukan untuk mengidentifikasi kandungan ekstrak kental etanolik daun terompet ungu.  Sebanyak  185  gram  rufinat  serbuk  daun    terompet    ungu  dimaserasi  dengan    pelarut etanol  menghasilkan  ekstrak  sejumlah  17,5  gram.  Identifikasi  senyawa  kimia  dilakukan menggunakan  reagen.  Hasil  uji  dengan  menggunakan  reagen  pada  filtrat  menunjukkan  bahwa ekstrak mengandung alkaloid tersier, polifenol, saponin, dan  minyak atsiri. Aktivitas antioksida ekstrak diukur dengan menggunakan uji DPPH menunjukkan nilai ES54 sebesar 53.39 µg/mL. Kata kunci : Ruellia brittoniana , Acanthaceae, ekstrak, antioksidan.

## ABSTRACT
Petunia  ( Ruellia  brittoniana Leonard)  is  a  wild  plant  species  belonging  to  the Acanthaceae family. This study aimed to identify the content of ethanolic extract of petunia leaf. A total of 185 grams of petunia leave powder were macerated with ethanol resulting 17.5 grams of ethanolic  extract.  Chemical  identification  was  performed  by  using  reagents.  The  test  using reagents showed that the extract contains tertiary alkaloid, polyphenol, saponin, and essential oil. The antioxidant activity of the extract was recorded by using DPPH assay with the value of ES54 was 53,39 µg/mL.
Keywords : Ruellia brittoniana, Acanthaceae, extract, antioxidant.

## PENDAHULUAN
Indonesia  kaya  akan  spesies tumbuhan, dengan jumlah tumbuhan mencapai 25%  dari tumbuhan berbunga di seluruh  dunia,  Indonesia  telah  menjadi negara  terbesar  ketujuh  yang  memiliki lebih  dari  20.000  spesies  tumbuhan  dan 40%  di  antaranya  merupakan  tumbuhan endemik Indonesia (Kusmana dan Hikmat, 2015).  Sebagian  besar  tumbuhan  tersebut telah  dimanfaatkan  oleh  manusia  untuk mencukupi kebutuhan hidup.
Masyarakat  di  Indonesia  telah lama mengenal cara penggunaan tumbuhan sebagai  bahan  obat. Berbagai  jenis tanaman  telah  digunakan  secara  empiris oleh  masyarakat  untuk  menyembuhkan banyak  penyakit.  Meskipun  demikian, masih banyak tumbuhan di Indonesia  yang berpotensi  untuk  dikembangkan  dalam
dunia
pengobatan tetapi belum dimanfaatkan secara maksimal oleh masyarakat.
Beberapa  penyakit  yang  terjadi pada  manusia  dapat  disebabkan  oleh aktivitas  organ  tubuh  yang  tidak  normal. Hal ini dapat dipicu oleh adanya kerusakan jaring dalam tubuh.  Salah  satu  faktor  yang dapat  menyebabkan  kerusakan  jaringan biologis adalah adanya stres oksidatif yang dipicu oleh aktivitas radikal bebas (Kovacic et  al. ,  2001).  Radikal  bebas merupakan molekul yang memiliki elektron tidak berpasangan sehingga memiliki  kecenderungan  untuk  bersifat reaktif  terhadap  jaringan  tubuh  (Pala  dan Gurkan,  2008).  Dalam  tubuh  manusia diperkirakan  terdapat  sekitar  10.000  – 20.000  radikal  bebas  yang  menyerang setiap  sel  per  hari  (Valko et  al .,  2001).
Apabila
tubuh tidak mampu
mempertahankan  diri  terhadap  serangan tersebut,  maka  dapat  terjadi  berbagai penyakit  seperti  penyakit  kardiovaskular, kanker,  artritis,  dan  penuaan  dini  (Pala dan  Gurkan, 2008).
Secara umum, tubuh telah memiliki  pertahanan  terhadap  paparan radikal  bebas.  Akan  tetapi  dalam  jumlah yang  lebih  banyak  diperlukan  suatu mekanisme pertahanan tambahan. Pertahanan  terhadap  radikal  bebas  dalam tubuh  dapat  dilakukan  oleh  senyawa antioksidan. Peran antioksidan dapat diperankan  oleh beberapa senyawa fenolik yang  terdapat  dalam  tumbuhan  (Halliwell, 1999).  Hingga  saat  ini,  masih  banyak tumbuhan  dengan  kandungan  senyawa fenolik  yang  masih  belum  dimanfaatkan dalam  secara  maksimal  dalam  dunia kesehatan. Oleh karena itu, perlu, dilakukan penelitian  untuk  menemukan  tumbuhan yang  berpotensi  menghasilkan  senyawa antioksidan.
Tanaman  terompet  ungu  ( Ruellia brittoniana Leonard)  merupakan  tanaman yang  dapat  tumbuh  subur,  baik  secara  liar maupun  sebagai  tanaman  hias.  Menurut Samy, et al (2015) , tanaman dengan genus Ruellia  mengandung  flavonoids,  lignans, kumarin, alkaloids, triterpen, sterol, fenolik glikosida, phenyl ethanoids, megastigmane glycosides,  benzoxazinoid  glucosides,  dan lain  sebagainya.  Penelitian  ini  dilakukan untuk mengetahui besarnya aktivitas antioksidan  tanaman Ruellia  britoniana secara  in  vitro  terhadap  senyawa  radikal stabil DPPH.

## METODE PENELITIAN Alat
Peralatan  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah vial, tabung ependorf,
oven ,  blender,  neraca  digital,  neraca analitik (Ohaus), vacuum rotary evaporator (IKA), waterbath ,  alat  gelas (corong Buchner, Erlenmeyer, gelas beker, labu  maserasi, chamber KLT,  gelas  ukur, pipet,  tabung  reaksi,  cawan  porselen,  dan labu  ukur), hot  plate ,  lampu  Bunsen, pinset,  termometer, vortex ,  sonikator, lemari es, spektrometer UV-Vis, microtube ,  krus,  dan  alat-alat  gelas  yang lazim  digunakan  di  laboratorium  analisis (Pyrex- Germany dan Iwaki).

## Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan antara  lain  daun  terompet  ungu  ( Ruellia brittoniana Leonard) yang telah dideterminasi. Pelarut ekstraksi
menggunakan  etanol  96%,,  Asam  klorida encer P, akuades, kloroform P, etanol 95%, asam  klorida  1%,  Na2CO3,  asam  asetat, KOH,  H2O2,  dietil  eter,  etanol  80%, FeCl3,  NaCl  2%,  gelatin  1%,  eter,  kapas dan  kertas  saring.  Pereaksi  dragendorff, mayer,  serium  sulfat,  vanilin  sulfat  dan liebermann-burchard.

## Jalannya Penelitian Ekstraksi
Daun  terompet  ungu  di  Universitas Ma  Chung  dipanen  pada  pukul  06.45  WIB kemudian dicuci dan dilakukan sortasi basah. Daun  dikeringkan  selama  2  hari  lalu  dioven pada  suhu  50°C  selama  5  hari.  Dilakukan sortasi  kering  kemudian  simplisia  kering dihaluskan  hingga  menjadi  serbuk.  Bobot serbuk    yang  didapatkan    adalah  sebanyak 185  gram.  Sebanyak  185  gram  rufinat dimaserasi  dalam  1  liter  etanol  96%  selama 24  jam  dan  diaduk  setiap  3  jam.  Dilakukan penggantian  pelarut  etanol  96%  sebanyak  3 kali.  Filtrat  diambil  melalui  penyaringan menggunakan  corong  Buchner.  Seluruh filtrat  diuapkan  pelarutnya  menggunakan vacuum  rotary  evaporator pada  suhu  80°C dan tekanan -15 atm. Ekstrak yang diperoleh kemudian  diuapkan  lagi  di  atas waterbath hingga diperoleh ekstrak kental.

## Identifikasi Kandungan Kimia Uji Alkaloida
Serbuk  simplisia  sebanyak  2  gram ditambahkan  10  mL  asam  klorida  1%  lalu dipanaskan selama 30 menit dalam penangas  air  mendidih.  Filtrat  disaring  ke dalam tabung reaksi A dan B sama banyak. Larutan  pada  tabung  reaksi  A  dibagi  dua sama banyak. Tabung reaksi A1 ditambahkan  3  tetes  reagen  Dragendorff sedangkan  tabung  reaksi  A2  ditambahkan reagen  Mayer.  Apabila  pada  kedua  tabung ini  terdapat  endapan  maka  larutan  positif mengandung alkaloida.
Tabung  B  ditambahkan  serbuk Na2CO3 hingga pH 8-9 lalu ditambahkan 4 mL  kloroform  dan  diaduk.  Fase  kloroform
yang  terbentuk  diambil  dengan  pipet Pasteur  lalu  ditambahkan  asam  asetat  5% hingga pH 5 dan diaduk. Cairan dipisahkan lapisan  atas  dan  bawah  dengan  pipet. Lapisan  atas  ditambahkan  5  tetes  reagen Dragendorff. Terbentuknya endapan
menandakan  adanya  kandungan  alkaloida kuartener.  Lapisan  bawah  ditambahkan  10 tetes  HCl  1%  lalu  diaduk.  Lapisan  atas dipisahkan  dan  diberikan  2  tetes  reagen Dragendorff. Bila
timbul endapan menandakan adanya alkaloida tersier.

## Uji Antrakuinon
Serbuk simplisia sebanyak 300 mg ditambahkan 10  mL KOH 0,5 N dan 1 mL H 2 O 2 .  Suspensi  dididihkan  selama  2  menit lalu  didinginkan  dan  disaring.  Sebanyak  5 mL filtrat ditambahkan 10 tetes asam asetat glasial  hingga  pH  5  dan  kemudian ditambahkan 10 mL dietil eter. Lapisan atas yang  terbentuk  diambil  sebanyak  5  mL kemudian  ditambahkan  1  mL  KOH  0,5  N. Warna merah menunjukkan adanya senyawa antrakuinon.

## Uji Polifenol
Serbuk  simplisia sebanyak 2  gram masing-masing  dimasukkan  ke  dalam  2 tabung  reaksi.  Tabung  A  ditambahkan  10 mL  air  sedangkan  tabung  B  ditambahkan 10  mL  etanol  80%.  Keduanya  lalu dipanaskan  selama  10  menit  hingga mendidih kemudian disaring dan didinginkan.  Sebanyak  3  tetes  FeCl 3 ditambahkan  ke  dalam  setiap  filtrat. Terbentuknya warna hijau-biru menunjukkan adanya polifenol. Uji Tanin Ditimbang 3 gram serbuk
simplisia  lalu  ditambahkan  15  mL  air  dan dipanaskan  selama  30    menit    pada penangas    air    mendidih    kemudian disaring.    5    ml    filtrat    diambil    dan ditambahkan  1  mL  NaCl  2%.  Endapan yang terbentuk disaring dan ditambahkan 5 mL  gelatin  1  %.  Terbentuknya  endapan menunjukkan adanya tanin.
Uji Saponin Ditimbang 300 mg serbuk
simplisia  lalu  ditambahkan  10  mL  air  dan ditutup.  Larutan  dikocok  kuat  selama  30 detik  kemudia  tabung  dibiarkan  dalam posisi tegak selama 30  menit. Adanya buih sepanjang 3 cm lebih dari permukaan cairan menunjukkan  adanya  saponin.  Adapun langkah kedua adalah dengan menimbang 3
gram serbuk simplisia kemudian ditambahkan  15  mL  air  dan  dipanaskan selama  30  menit  pada  penangas  air mendidih.  Larutan  disaring  lalu  lalu diletakkan  pipa  kapiler  pada  permukaan filtrat  secara  tegak  lurus.  Dilakukan  hal yang sama pada akuades lalu dibandingkan tinggi  cairan  yang  masuk  melalui  pipa kapiler. Bila tinggi filtrat memiliki setengah tinggi  akuades  pada  pipa  kapiler,  filtrat mengandung saponin.

## Uji Minyak Atsiri
Serbuk  simplisia  sebanyak  10 gram ditambahkan 20 mL eter, dikocok dan disaring.  Filtrat  diuapkan  di  atas  waterbath hingga  kering.  Apabila  terdapat  bau aromatik,  residu  dilarutkan  dengan  sedikit etanol  96%  lalu  diuapkan  kembali  hingga kering.  Adanya  bau  aromatik  spesifika menunjukkan  adanya  kandungan  minyak atsiri.

## Uji Antioksidan Ekstrak
Mula-mula  20  mg  ekstrak  kental daun  terompet  ungu  dilarutkan  dengan metanol p.a. hingga 10 mL. Kemudian pada larutan  ekstrak  dipindahkan  ke  dalam  labu ukur  10  mL  yang  baru  sebanyak  0,2;  0,4; 0,6; dan 1,0 mL. Pembuatan seri konsentrasi dilakukan dengan
menambahkan  metanol  p.a.  hingga  10  mL. Pada  setiap  larutan  uji  diambil  0,2  mL untuk  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi bertutup  dan  ditambahkan  3,8  mL  DPPH. Campuran  didiamkan  selama  5  menit, kemudian dilakukan pengukuran absorbansi dengan panjang gelombang 517 nm. Blanko yang digunakan dalam pengukuran absorbansi  adalah  metanol  p.a.  Besarnya aktivitas antioksidan ekstrak dihitung dengan persamaan berikut:
%ES = Akontrol  − Asampel  x100% Akontrol

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ektraksi
Ekstraksi dilakukan pada simplisia kering  daun  terompet  ungu  ( Ruellia brittoniana Leonard) dengan metode maserasi  menggunaan  penyari  etanol  96%. Hasil  ekstraksi  dengan  mengunakan  185 gram serbuk simplisia menghasilkan ekstrak  kental  sebanyak  17,5  gram  atau dengan rendemen sebesar 9,46%.

## Identifikasi Kandungan Kimia
Kandungan senyawa dalam simplisia Ruellia  brittoniana Leonard  diuji dengan mengunakan barbagai reagen. Senyawa-senyawa yang berhasil diidentifikasi  dapat  dilihat  pada  tabel  1.
Senyawa  pertama yang teridentifikasi adalah  senyawa  alkaloid  yang  ditandai dengan  pembentukan  warna  jingga  setelah penambahan reagen dragendroff dan adanya endapan setelah penambahan reagen mayer. Penampakan  warna  jingga-  kecoklatan setelah  penambahan  pereaksi  Dragendroff disebabkan  oleh  interaksi  antara  lone  pair electron  pada  alkaloid  dengan  kompleks logam  pada  reagen  Dragendroff  (Depkes,
1985; Harborne, 1987). Kandungan polifenol teridentifikasi positif  pada  simplisia.  Perubahan  warna filtrat dari  hijau  muda  menjadi  lebih  pekat terjadi  setelah  penambahan  reagen  FeCl3. Ion besi (III) memiliki  kemampuan pembentukkan  kelat  yang  besar  terhadap senyawa-senyawa  fenolik  (Cheng  dan Crisosto,  1997).  Kelat  yang  terbentuk  akan mengahsilkan warna biru hingga hijau gelap (Sarker dan Nahar, 2012). Saponin teridentifikasi  melalui  pembentukan  busa dan tinggi yang relatif lebih rendah terhadap air  dalam  pipa  kapiler.  Saponin  dapat menurunkan  tegangan  permukaan.  Minyak atsiri  yang  cirikan  dengan  munculnya aroma yang khas.
Tabel 1. Hasil uji identifikasi kandungan kimia pada Ruellia britoniana Leonard Golongan Hasil Alkaloid + Antrakuinon - Polifenol + Tanin - Saponin + Minyak atsiri +
Ket: (+) : terbukti memiliki kandungan senyawa
(-)   : tidak terbukti memiliki kandungan senyawa

## Uji Aktivitas Antioksidan
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  uji ditunjukkan  oleh  kemampuannya  dalam menurunkan  nilai  absorbansi  senyawa radikal  bebas  DPPH  ( 1,1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl ). Penurunan  nilai absorbansi dipicu oleh aktivitas senyawa dalam ekstrak yang  mereduksi  DPPH  menjadi hydrazine (Samara, et al ., 2014). Secara organoleptik, DPPH  akan  mengalami  perubahan  warna dari  violet  menjadi  kuning  pucat  ketika bereaksi dengan senyawa antioksidan.
Gambar 2 menunjukkan  hubungan antara  aktivitas  penangkapan  radikal  bebas dengan  konsentrasi  ekstrak  uji.  Adanya peningkatan  aktivitas  penangkapan  radikal bebas seiring dengan peningkatan konsentrasi  ekstrak  menunjukkan  bahwa
ekstrak  uji  memiliki  aktivitas  antioksidan. Hasil uji dengan menggunakan  seri konsentrasi  40;  80;  120;  dan  200  µg/mL menghasilkan  kurva  hubungan  konsentrasi dan aktivitas:  y = 0,0481x +51,431  dengan
R2 = 0,9888.
Besarnya aktivitas ekstrak dinyatakan  dalam  ES54    sebesar  53.39 µg/mL  sementara  pada  standard  rutin memiliki  aktivitas  ES54  sebesar  10µM (USDA). Dengan demikian, ekstrak etanolik  daun  terompet  ungu  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  lebih  kecil apabila dibandingkan dengan aktivitas pada asam  askorbat  standard,  tetapi  masih memiliki aktivitas yang cukup baik.
% Aktiv itas P en an g k ap an R adikal B eb as 62 60 58 56 54 52
0.00             50.00           100.00          150.00          200.00          250.00

## Konsentrasi Ekstrak (µg/mL)
Gambar 2. Hubungan Konsentrasi Ekstrak Etanolik Ruellia brittoniana Leonard dan Aktivitas Antioksidan
Kesimpulan
Tumbuhan Ruellia brittoniana
Leonard merupakan salah satu tumbuhan di Indonesia  yang  sangat  mudah  dijumpai. Daun  tumbuhan ini  diuji untuk  mengetahui kemurnian  dan  kandungan  senyawa  kimia yang berpotensi sebagai antioksidan.
Kandungan  senyawa  metabolit  sekunder yang  dapat  diidentifikasi  dari  ekstrak  uji meliputi  alkaloid,  polifenol,  saponin,  dan minyak atsiri. Kandungan metabolit sekunder  tersebut  menyebabkan  ekstrak memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  cukup baik  yaitu dengan nilai  ES54 sebesar 53.39 µg/mL. Meskipun demikian, perlu dilakukan bioassay  guided  fractionation untuk  mendapatkan  senyawa  yang  lebih spesifik memiliki aktivitas.

## DAFTAR PUSTAKA
Cheng,  G.  W.  dan  Crisosto,  C.  H,  1997,
Iron-Polyphenol Complex Formation  and  Skin  Discolorotion in Peaches and Nectarines. Journal  of  the  American  Society for  Horticultural  Science .  122,  pp. 95-99. Depkes,    1985, Tanaman    Obat Indonesia ,    Jilid    I.    Departemen Kesehatan    Republik  Indonesia, Jakarta.
Halliwell B dan Gutteridge JMC, 1999, Free Radicals  in  Biology  and  Medicine (3rd ed.). Oxford University Press. Harborne,      J.B.,      1987.    Metode Fitokimia:      Penuntun      Cara
Modern      Menganalisis  Tumbuhan.
ITB Bandung, Bandung. Kovacic  P  and  Jacintho  JD.,  2001, Mechanisms of Carcinogenesis:
Focus  on  oxidative  stress  and electron transfer. Curr Med Chem . 8, pp. 773-96.
Kusmana,  C.  dan  Hikmat,  A.,  2015, Keanekaragaman  Hayati  Flora  di
Indonesia. Jurnal
Pengelolahan
Sumber Daya Alam dan Lingkungan , 5(Desember),  pp.187–198.  Pala,  F. S.,  dan  Gurkan,  H.,  2008.  The role of free radicals in ethiopathogenesis of diseases. Advances  in  Molecular  Biology, 1, pp. 1-9.
Samara,  A.  K i kuz i ,  H ,  T ama mo t o,   A, K i yo s uke ,T ,  2014,  Evaluation  of Antioxidant Activity, Total Flavonoids,  Tannins  and  Phenolic Compounds  in  Psychotria  Leaf
Extracts. Antioxidants ,  3,  pp.745– 757.  Samy,  M.N.,  Sugimoto,  S., Matsunami,  K.,  Otsuka,  H.,  Kamel, M.S.,  2015,  Chemical  Constituents And  Biological  Activities  Of  Genus Ruellia, IJP, 2(6), hal 270 - 279 Sarker,  S.  D.  dan  Nahar,  L,  2012,  An Introduction  to  Natural  Product
Isolation (3 rd ed). Humana Press . Valko M, Morris H, Mazur M, Rapta P and Bilton  RF,  2001,  Oxygen  free radical generating mechanisms in the colon:  Do  the  semiquinones  of Vitamin  K  play  a  role  in  the aetiology  of  colon  cancer? Biochim Biophys Acta . 1527. pp. 161-166.