Jurnal Pharmascience, Vol. 11, No.1, Maret 2024, hal: 25-36 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article

## Uji Cemaran Mikroorganisme pada Tiga Varian Daun Kratom (Mitragyna speciosa Korth.)
Margareta Lita Widian Sari 1 , Masriani 1 *, Warsidah 2 , Laili Fitri Yeni 3 , Rahmat Rasmawan 1
1 Program Studi Pendidikan Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan,
Universitas Tanjungpura, Pontianak, Kalimantan Barat, Indonesia
2 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tanjungpura, Pontianak, Kalimantan Barat, Indonesia
3 Program Studi Pendidikan Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Tanjungpura, Pontianak, Kalimantan Barat, Indonesia Email: masriani@fkip.untan.ac.id

## ABSTRAK
Tanaman kratom (Mitragyna speciosa Korth.) merupakan salah satu komoditas ekspor yang cukup menjanjikan dari Indonesia. Salah satu syarat suatu komoditas dapat diekspor harus memenuhi batasan kandungan mikrobiologi yang mengacu pada SNI dan AHPA.  Bahan  baku  kratom  yang  terkontaminasi  mikroorganisme,  terutama mikroorganisme  patogen  akan  membahayakan  kesehatan  konsumen.  Oleh  karena  itu, penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  cemaran  mikrobiologis  tiga  varian  daun kratom, yaitu kratom merah, putih, dan hijau dalam bentuk serbuk kering simplisia. Uji cemaran  mikrobiologi  daun  kratom  meliputi  cemaran  bakteri  Salmonella  sp., Escherichia  coli,  dan  kapang  khamir.  Uji  cemaran  bakteri  Salmonella  sp.  dilakukan dengan menggunakan media Xylose Lysine Deoxycholate (XLD) dan Brilliat Green Agar (BGA) dengan suhu inkubasi 37 o C selama 24 jam. Uji cemaran terhadap bakteri E. coli dilakukan dengan menggunakan media Coliform Escherichia coli Color Indicator dengan suhu  inkubasi  35 o C  selama  24  jam.  Penentuan  kontaminasi  kapang  khamir menggunakan media Yeast and Mold Color Indicator dengan suhu 25 o C selama 72 jam. Hasil uji yang telah dilakukan menunjukkan bahwa daun kratom merah, putih dan hijau tidak  terkontaminasi  bakteri  Salmonella  sp.  dan  E.  Coli  tetapi  terkontaminasi  kapang khamir  yang lebih dari 10 4 koloni/gram.
Kata Kunci: Ganja Borneo, Salmonella sp., Escherichia coli, Kapang Khamir, Koloni

## ABSTRACT
The kratom plant (Mitragyna speciosa Korth.) is one of the most promising export commodities from  Indonesia. One  of the conditions  for a  commodity to be exported must meet  the  microbiological  content  limits  referring  to  SNI  and  AHPA.  Export  commodities that do no meet the standards will be detained during the production and delivery process.
Therefore, this study aims to analyze the microbiological contamination of three variants of kratom leaves, namely red, white and green kratom. Tests for microbiological contamination of kratom leaves include contamination of Salmonella sp., Escherichia coli, and yeast molds. Salmonella sp.  bacteria  contamination test  carried out using  Xylose Lysine Deoxycholate (XLD) and Brilliat Green Agar (BGA) media with an incubation temperature of 37 o C for 24 hours. Contamination tests on E. coli bacteria were carried out using Coliform Escherichia coli  Color  Indicator  media  with  an  incubation  temperature  of  35 o C  for  24  hours. Determination of yeast contamination using Yeast and Mold Color Indicator media at 25 o C for 72 hours. The results of the tests that have been carried out show that the red, white and green kratom leaves are not contaminated with Salmonella sp. and E. coli, but contaminated with yeast and Mold which is more than 10 4 colonies/gram.
Keywords: Ganja of Borneo, Salmonella sp., E. coli, Yeast and Mold, Coloni

## I. PENDAHULUAN
Kratom ( Mitragyna speciosa
Korth.)  atau  yang  dikenal  sebagai  “ Ganja of  Borneo ”  adalah  tanaman  herbal  yang berasal  khas  dari  Putusibau,  Indonesia (Hassan et  al., 2013).  Daun  kratom berdasarkan  warna  vena  dibagi  menjadi  3 jenis  yaitu  kratom  merah,  putih  dan  hijau (Veltri  &  Grundmann,  2019).  Secara tradisional, masyarakat menggunakan daun kratom  untuk  meredakan  diare,  bengkak, sakit kepala dan bisul (Fadholi et al., 2022).
Selain itu, penelitian sebelumnya menunjukkan  daun kratom  memiliki aktivitas farmakologis antara lain analgesik (Reanmongkol et  al., 2007),  sedatif  (Yeni
Ridayani,  2013),  stimulan,  antidepresan (Farah et  al., 2011),  dan  antinosiseptif
(Parthasarathy  et  al.,  2009).  Khasiat  daun kratom tersebut dikarenakan ada 2 senyawa yang aktif yaitu mitraginin (66,2%), dan 7- hidroksimitraginin (2,0%) (Compton et al .,
2014).
Jika  kratom  dikonsumsi  dalam dosis  rendah  akan  berfungsi  sebagai stimulan yang bisa meningkatkan konsentrasi, dan energi. Tetapi jika kratom yang  dikonsumsi  dalam  dosis  tinggi mempunyai  efek  yang  serupa  dengan narkotika.  Efek  ini  yang  menyebabkan kratom banyak digunakan di Amerika dan Eropa  untuk  mengobati  gejala  kecanduan narkotika  (Raini,  2017).  Jumlah  pengguna kratom tidak  diketahui secara pasti  karena kebanyakan  pengguna  tidak  menunjukkan dirinya  sebagai  pengguna  kratom  dan belum  ada  organisasi  kratom  secara internasional.  Tetapi,  seorang  ilmuwan memperkirakan setidaknya 10 juta konsumen  kratom  di  Amerika  Serikat
(Ross,  2021).  Dosis  setiap  pengguna maksimal 10 gram per hari (Novindriana & Wijianto, 2019). Oleh karena itu, diperkirakan  sekitar  100  ton  atau  100.000 kg  per  hari  diperlukan  kratom  di  Amerika Serikat.  Banyaknya  kebutuhan  kratom  di Amerika  dan  Eropa  maka  permintaan
ekspor  daun  kratom  sangat  besar  juga (Oktaviani et al., 2020). Hal ini menyebabkan nilai ekonomi kratom menjadi tinggi (Wahyono et al., 2019) yang berdampak pada peningkatan kesejahteraan hidup  petani  kratom  (Oktaviani et  al.,
2020).
Daun  kratom  harus  memenuhi persyaratan  yang  berlaku  di  negara  tujuan ekspor  yang  digolongkan  dalam  bahan baku  obat  herbal  atau  herba  kering  yang diperdagangkan secara internasional (Resnia et al., 2015). Salah satunya adalah
cemaran mikroorganisme dikarenakan produk  yang  tercemar  dikonsumsi  dapat menyebabkan  timbulnya  penyakit  tertentu (Yuliana & Wulandari, 2019).
Berdasarkan Standar Nasional
Indonesia,  kratom  termasuk  ke  dalam kategori  rempah  kering  atau  herba  kering harus  negatif Salmonella  sp. ,  kapang khamir  maksimum  10 4 koloni/gram  dan
Enterobacteriaceae (salah  satunya  bakteri
Escherichia coli ) maksimum
10 3
koloni/gram. Sedangkan berdasarkan
standar American Herbal Products
Association (AHPA)  di  dalam  produk herbal  tidak  adanya Salmonella  sp. dalam
25  gram  sampel, E.  coli dalam  10  gram sampel  dan  maksimum  adanya  10 5
koloni/gram jumlah kapang khamir.
Uji  cemaran  mikroorganisme  pada bahan  baku  obat  telah  banyak  dilakukan. Tetapi,  belum  ada  yang  menguji  cemaran
pada kratom merah, hijau, dan putih. Oleh sebab  itu,  dilakukan  penelitian  untuk menguji  cemaran  bakteri Salmonella  sp. ,
E.coli , dan kapang khamir terhadap kratom kratom merah, hijau, dan putih.

## II. METODE
Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimental laboratorium.
Penelitian  dilakukan  di  PT.  Kreasi  Alam Borneo,  Pontianak  dan  di  Laboratorium Saraswanti  Indo  Genetech  (SIG),  Bogor. Pengujian  cemaran  bakteri  mengacu  ISO-
1:2017/Amd  1:2020  untuk Salmonella  sp.
dan AOAC  official  method 2005.03  untuk
Escherichia  coli (Feldsine et  al., 2008).
Pengujian cemaran kapang khamir mengacu  pada AOAC  official  method
2002.11 (Feldsine et al., 2003).

## A. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  oven  ( Memmert  ) , inkubator
( Binder  ), autoklaf
( Hirayama  ) , laminar  air  flow ( Esco  ), mikropipet ( Brand  ), white tip (onemed  ) , filler  (Glasfirn  ) , waterbath  (Memmert  ) , stomacher  (Seward)  dan  peralatan  gelas
( iwaki  )  yang  umum  digunakan  di laboratorium.
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  serbuk  kering simplisia  tiga  varian  kratom  ( Mitragyna speciosa Korth.),  yaitu  hijau,  merah,  dan
putih yang diperoleh dari PT. Kreasi Alam
Borneo, simplate (pa, Merck  ), Buffered
Peptone  Water (BPW)  (pa, Himedia  ),
akuades, test  vial  simplate  Coliform
Escherichia coli Color Indicator (CEC-CI)
(pa, Merck  ), test  vial  simplate  Yeast  and
Mold  Color  Indicator (YM-CI)  (pa,
Merck  ), Muller Kauffmann  Tetrathionate
Novobiocin Broth
(MKTTn) (pa,
Himedia  ), Rappaport Vassiliadis Medium +  Soya (RVS)  (pa, Himedia  ), Xylose
Lysine  Deoxycholate (XLD)  (pa, Merck  ) dan Brilliant  Green  Agar (BGA)  (pa,
Himedia  ).

## B. Cara Kerja

## 1. Sterilisasi alat
Peralatan  yang  akan  digunakan
untuk pengujian disterilisasi menggunakan
autoklaf (121 o C, 15 menit).
2. Pembuatan  media  buffered  peptone

## water (BPW)
Media BPW dibuat dengan melarutkan  4,5  gram Buffered  Peptone
Water dengan  225  mL  akuades  dan dipanaskan  sampai  mendidih.  Media disterilkan  menggunakan  autoklaf  (121 o C,
15  menit).  Media  yang  telah  dingin  dapat
digunakan untuk pengujian.
3. Pembuatan media muller kauffmann tetrathionate novobiocin broth
(MKTTn)
Media  MKTTn  dibuat  dengan melarutkan 8,942 gram MKTTn dalam 100 mL akuades dan panaskan sampai mendidih.  Media  ditambahkan  larutan  2 gram  I 2 dan  2,5  gram  KI  dalam  10  mL akuades steril dan 0,2 mL novobiosin.

## 4. Pembuatan media rappaport medium

## + soya (RVS)
Media RVS dibuat dengan melarutkan 2,71 gram RVS dalam 100 mL akuades  dan  dipanaskan  di  atas  waterbath sambil  diaduk  perlahan  sampai  homogen. Media  disterilkan  menggunakan  autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.

## 5. Pembuatan  media  xylose  lysine deoxycholate (XLD)
Sebanyak  5,50  gram  media  XLD dilarutkan  ke  dalam  akuades  steril  dan dipanaskan pada suhu 50°C.
6. Pembuatan  media  brilliant  green

## agar (BGA)
Media  BGA  dibuat  dengan  cara melarutkan  5  gram  BGA  dalam  100  mL akuades dan dipanaskan sampai mendidih. Setelah ditambahkan 100 mg sulphapyridine larutan  disterilkan  dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.

## 7. Uji cemaran bakteri Salmonella sp.
Masing-masing  25  gram  serbuk kratom  hijau,  merah,  dan  putih  dicampur dengan  225  mL  media  BPW  steril. Campuran  dihomogenkan  menggunakan stomacher.  Diinkubasi  dengan  suhu  37°C selama  24  jam  menggunakan  inkubator.
Setelah  itu,  diinkubasi  campuran  1  mL biakan  pra-pengkayaan  dengan  10  mL media  MKTTn  (suhu  37°C,  24  jam)  dan campuran  0,1  mL  biakan  pra-pengkayaan dengan 10 mL media RVS (suhu 41,5°C, 24 jam).  Kemudian,  masing-masing  satu sengkelit  biakan  pada  media  RVS  dan MKTTn  diinokulasikan  ke  permukaan media  BGA  dan  XLD  dan  diinkubasi menggunakan  inkubator  (suhu  37°C,  24 jam).  Koloni  yang  tumbuh  diamati.  Jika sampel  terkontaminasi  bakteri Salmonella sp. ,  akan  terlihat  koloni  tidak  berwarna,
merah  muda  hingga  merah,  dan  hingga keruh  dengan  lingkaran  merah  muda sampai merah pada media BGA. Selain itu, sampel  terkontaminasi Samonella  sp jika terdapat  koloni  translusen  dengan  bintik hitam  di  tengah  dan  dikelilingi  zona transparan  berwarna  kemerahan  pada media XLD.

## 8. Uji cemaran bakteri Escherichia coli
Kratom  merah,  putih  dan  hijau sebanyak masing-masing 25 gram dilarutkan  ke  dalam  225  mL  BPW  steril.
Dipipet  masing-masing  1  ml  sampel  yang sudah homogen ke dalam test vial berisi 9
ml media Coliform Escherichia coli Color
Indicator (CEC-CI).  Seluruh  isi test  vial
yang  sudah  homogen  dituang  ke  dalam simplate dan  diinkubasi  pada  suhu  ±35°C selama  24  jam.  Selanjutnya, simplate disinari dengan lampu UV untuk mengetahui jumlah well yang menunjukkan
positif E.  Coli yang  ditandai  dengan well yang  bersinar  ketika  disinari  lampu  UV (Feldsine et al., 2008).

## 9. Uji cemaran kapang khamir
Sebanyak  masing-masing  25  g serbuk  simplisia  kratom merah, putih, dan hijau dilarutkan dengan 225 mL BPW steril dan  diencerkan  dalam  10  mL  BPW  steril. Dipipet masing-masing 1 mL sampel yang sudah homogen ke dalam test vial berisi 9 ml media Yeast and Mold Color Indicator
(YM-CI).  Seluruh  isi test  vial yang  sudah
homogen  dituang  ke  dalam simplate dan diinkubasi selama 56 jam pada suhu ±25°C. Well yang  mengalami  perubahan  warna yang menunjukkan adanya  kapang khamir dalam  sampel  diamati.  Jumlah  koloni kapang khamir diturunkan dari Tabel I yang didasarkan  pada  prinsip  distribusi  Poisson dan  dikali  dengan  persen  pengenceran
(10 3 ).
Tabel I. Pedoman konversi hasil SimPlate YM-CI

## SimPlate conversion table
Jumlah well positif = populasi per plate
1 = 2 22 = 50 43 = 120 64 = 240 2 = 4 23 = 54 44 = 124 65 = 248 3 = 6 24 = 56 45 = 128 66 = 256 4 = 8 25 = 58 46 = 132 67 = 266 5 = 10 26 = 62 47 = 136 68 = 276 6 = 12 27 = 64 48 = 142 69 = 288 7 = 14 28 = 68 49 = 146 70 = 298 8 = 16 29 = 70 50 = 150 71 = 312

## SimPlate conversion table

## Jumlah well positif = populasi per plate
9 = 18 30 = 74 51 = 156 72 = 324 10 = 22 31 = 76 52 = 160 73 = 338 11 = 24 32 = 80 53 = 166 74 = 354 12 = 26 33 = 84 54 = 172 75 = 372 13 = 28 34 = 86 55 = 178 76 = 392 14 = 30 35 = 90 56 = 184 77 = 414 15 = 32 36 = 94 57 = 190 78 = 440 16 = 36 37 = 96 58 = 196 79 = 470 17 = 38 38 = 100 59 = 202 80 = 508 18 = 40 39 = 104 60 = 208 81 = 556 19 = 42 40 = 108 61 = 216 82 = 624 20 = 46 41 = 112 62 = 224 83 = 738 21 = 48 42 = 116 63 = 232 84= >738
Jika well tidak  positif  dan  spons  positif, maka populasinya adalah 1
Jika well tidak  positif  dan  spons negatif, maka populasinya adalah 1.
Populasi menyatakan
jumlah mikroorganisme per plate .

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Uji Cemaran Bakteri Salmonella sp.
Media  BGA  yang  berwarna  jingga
muda  tidak  menunjukkan  adanya  koloni tidak berwarna, merah muda sampai merah, dan  translusen  sampai  keruh  dengan lingkaran  merah  muda  sampai  merah (Yuswananda,  2015).  Selain  itu,  pada media XLD yang berwarna jingga tua juga tidak  terdapat  koloni  translusen  dengan bintik  hitam  ditengahnya,  dan  dikelilingi
zona  transparan  berwarna  kemerahan (Sartika et al. , 2016). Oleh karena itu, hasil dalam  penelitian  ini  menunjukkan  tidak adanya  kontaminasi  atau  negatif  dari bakteri Salmonella sp. pada  ketiga kratom yang diuji.
Salmonella sp. sering mengkontaminasi  makanan  seperti  ikan, telur,  daging  ayam,  susu,  daging  sapi,  es krim, dan keju (Ayu et al. , 2021). Sumber kontaminasi dapat berasal dari kulit hewan dan  alat  pengolahan  yang  digunakan. Bakteri Salmonella  sp. sangat  berbahaya jika tercemar pada makanan yang dikonsumsi oleh manusia karena
Salmonella  sp. dapat  menyebabkan  gejala gastroenteritis pada manusia dengan gejala klinis  mual,  muntah,  kram  pada  perut, diare,  dehidrasi,  pusing,  dan  demam. Bakteri Salmonella sp. menyebabkan diare akut dan kronis bahkan kematian.
Pencegahan  cemaran  bakteri Salmonella sp. dapat  dilakukan  saat  pemeliharaan sampai saat pengolahan. Penjual sebaiknya membersihkan  peralatan  sebelum  dan sesudah  dipakai,  tempat  dan  lapak  yang digunakan  untuk  berjualan  perlu  di desinfektan  secara  rutin  menggunakan desinfektan alami yang aman bagi konsumen (Candra et al. , 2022).
Salmonella menyebabkan  penyakit yang  dikenal  dengan  salmonellosis.  Pada tahun  2018,  Salmonellosis  dilaporkan sebagai  infeksi  gastrointestinal  paling
umum  kedua  pada  manusia  oleh  Pusat Pencegahan  dan  Pengendalian  Penyakit Eropa. Epidemi dari infeksi Salmonella dan
Shigella juga  dilaporkan  di  Iran  dan  Cina.
Salmonella dan Shigella dapat eksis secara bersamaan  dalam  jenis  produk  makanan yang  sama.  Selanjutnya,  infeksi  simultan dengan  kedua  patogen  telah  dilaporkan menyebabkan berbagai jenis diare (berdarah dan berair) (Guo et al., 2022).

## B. Uji Cemaran Bakteri Escherichia coli
Kontaminasi E. coli dalam Simplate
yang  berisi  sampel  ditandai  dengan berpendar well dibawah  sinar  lampu  UV.
Sampel  dapat  berpendar  karena  media
Coliform Escherichia  coli Color Indicator
(CEC-CI)  yang  digunakan  mengandung substrat 4-methylumbelliferil-β-D- glucuronide (MUG).  Substrat  ini  akan terhidrolisis  oleh  enzim β-glucuronide
yang  dimiliki  oleh E.  coli sehingga  akan melepaskan 4-methylumbelliferil yang
dapat  berpendar  dengan  adanya  paparan dari sinar UV (Indrawati et al., 2019).
Hasilnya, sampel kratom yang diuji
tidak  berpendar  ketika  disinari  dengan lampu  UV.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa sampel  daun  kratom  tidak  terkontaminasi oleh  bakteri E.  coli dan  sesuai  dengan
standar  AHPA  maupun  SNI.  Hasil pengujian E. coli pada kratom merah, putih dan hijau bisa dilihat pada Gambar 1.
Bakteri E. coli dapat mengkontaminasi  berbagai  jenis  produk yang  kita  konsumsi.  Misalnya  daging ayam,  susu  dan  produk  olahan  lainnya. Susu segar dapat terkontaminasi bakteri E. coli . Kontaminasi ini dapat disebabkan oleh teknik pemerahan untuk mendapatkan susu segar  (Rahadyan et  al., 2023).  Selain  itu,
E. coli juga adalah salah satu bakteri yang sering mencemari daging ayam.
Kontaminasi  bakteri E.  coli memiliki beberapa penyebab antara lain sanitasi yang kurang  baik  pada  tempat  pemeliharaan, kebersihan  yang  buruk  pada  tempat pengolahan, dan higienitas alat pengolahan yang  kurang  diperhatikan  (Kartikasari et al., 2019).  Pencegahan  yang  dapat dilakukan  adalah  dilakukan  pembersihan dan  desinfeksi  secara  rutin  ini  akan meningkatkan  kebersihan  alat  pemerahan dan  tempat  pengolahan  (Rahadyan et  al.,
2023).
Gambar  1. Hasil  uji  cemaran  bakteri E. coli dalam  kratom  (a)  merah,
(b) putih, dan (c) hijau
Escherichia coli merupakan bakteri normal  usus  yang  berperan  penting  dalam sintesis  vitamin  K,  konversi  pigmen- pigmen empedu, asam-asam empedu, serta
(a) (b) ©
dalam penyerapan zat-zat makanan. Tetapi terdapat  jenis E.  coli dapat  menginfeksi tubuh dan menyebabkan penyakit
(Elnawawi et  al., 2012).  Diantaranya
penyakit  diare,  peradangan  akut,  kolitis hemoragik,  infeksi  saluran  kemih,  dan septikemia. Patotipe ini  memiliki  alat berbeda  yang  menyebabkan  penyakit melalui mekanisme yang berbeda, menghasilkan gejala klinis yang bervariasi (Ohmura-hoshino et al., 2022).

## C. Uji Cemaran Kapang Khamir
Gambar  2. Hasil  uji  cemaran  kapang khamir dalam kratom merah
Kratom merah terkontaminasi kapang  khamir  (Gambar  2)  karena  ada  13
well yang mengalami perubahan warna dari ungu menjadi putih dan jingga. Warna ungu
pada well adalah warna latar belakang asli yang  akan  menunjukkan  ada  tidaknya perubahan  yang  terjadi  pada  sampel (Feldsine et al., 2003). Well yang berubah
warna disebabkan karena adanya pertumbuhan  kapang  khamir  dalam  well tersebut. Umumnya kapang khamir tumbuh dengan  adanya  benang-benang  halus  dan berak-bercak  yang  berwarna  putih,  dan jingga  (Roosheroe et  al. ,  2018).Jumlah kapang  khamir  yang  ada  dalam  kratom
merah sebanyak 2,8 x 10 4 koloni/gram yang berarti msih di bawah  standar, yaitu 1 x 10 5 koloni/gram.
Uji  cemaran  kapang  dan  khamir pada  kratom  putih  menunjukkan  bahwa terdapat 7 well yang mengalami perubahan warna jingga dan putih. Hal ini mengindikasikan adanya kontaminasi kapang khamir pada kratom putih (Gambar
3). Kandungan kapang khamir pada kratom putih  sebanyak  1,4  x  10 4 koloni/gram, masih  di  bawah  standar  maksimal  yang dipersyaratkan, yaitu 1 x 10 5 koloni/gram.
Gambar  3. Hasil  uji  cemaran  kapang khamir dalam kratom putih
Gambar  4. Hasil  uji  cemaran  kapang khamir dalam kratom hijau
Kratom hijau menunjukkan kratom yang  paling  banyak  mengalami  banyak kontaminasi  yang  ditandai  dengan  jumlah well  yang  paling  banyak  mengalami perubahan warna dari ungu menjadi jingga dan  putih,  yaitu  46 well .    Selain  itu, ditemukan  juga  adanya  kapang  yang tumbuh  diantara well yang  mengalami
Well berwarna putih Well berwarna jingga Well berwarna ungu Well berwarna putih Well berwarna jingga Well berwarna ungu Well berwarna putih Well berwarna jingga Well berwarna ungu
perubahan  warna  pada simplate (Gambar
4).  Hasil  perhitungan  diperoleh    jumlah kapang khamir pada kratom hijau melampaui standar maksimal, yaitu 1,32 x 10 5 koloni/gram.
Berdasarkan standar AHPA, kratom yang  masih  aman  dikonsumsi  harus mengandung kapang khamir kurang dari 1 x 10 5 koloni/gram. Hasil uji kapang khamir pada  kratom  merah,  putih,  dan  hijau menunjukkan  bahwa  kratom  merah  dan putih  masih  aman  dikonsumsi,  sedangkan kratom  hijau  tidak  aman  karena  jumlah koloninya  melebihi  standar  AHPA,  yaitu 1 x 10 5 gram/koloni.
Kontaminasi  kapang  khamir  pada kratom dapat disebabkan oleh  pengemasan kratom  yang  tidak  rapat  dan  kedap  udara.
Kapang khamir dapat tumbuh jika terdapat oksigen  pada  kemasan  kratom.  Kapang khamir juga dapat tumbuh pada kratom jika suhu ruang penyimpanan kurang dari suhu letal kapang khamir. Jika suhu ruang cukup panas, maka kapang khamir tidak tumbuhan  karena  kapang  khamir  tidak tahan  terhadap  panas  (Rorong  &  Wilar, 2020).  Daun  kratom  yang  telah  diambil dalam  penelitian  ini  dijadikan  serbuk melalui  proses  pengeringan.  Pada  proses pengeringan, kontaminasi kratom bisa juga terjadi.
Selain  itu,  kontaminasi  kapang khamir  dapat  terjadi  karena  proses pengeringan  yang  belum  sempurna,  yang
menyebabkan  kadar  air  sampel  kratom masih tinggi namun sudah dikemas. Kadar air yang tinggi pada sampel kratom menjadi media  pertumbuhan  kapang  khamir  yang baik.  Tempat  penyimpanan  sampel  yang memiliki  kelembaban  yang  tinggi  juga menjadi  penyebab  pertumbuhan  kapang khamir yang tinggi, bahkan pada kemasan yang tertutup rapat.  Hal ini terjadi karena pada  siang  hari,  radiasi  sinar  matahari menjadi sumber energi untuk mengubah air menjadi uap air yang akan mengubah iklim mikro di lingkungan sekitarnya.
Keberadaan uapa air di udara mengakibatkan  kelembaban  lingkungan meningkat sehingga dapat memicu pertumbuhan  kapang  dan  khamir  pada bahan baku yang dikemas secara rapat dan tertutup (Maimunah et al., 2020).
Umumnya  kapang  khamir  yang  tumbuh pada bahan baku kering seperti temulawak, jamu  serbuk,  dan  hasil  pertanian  adalah kapang khamir genus Aspergillus
(Prabandari  &  Darwati,  2022).  Salah  satu cara dekontaminasi mikroorganisme   pada bahan baku adalah dengan iradiasi gamma (Xu et al ., 2022).

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa daun  kratom  ( Mitragyna  speciosa Korth.)
merah, putih dan hijau tidak terkontaminasi bakteri Salmonella sp. dan bakteri
Escherichia coli. Daun kratom ( Mitragyna speciosa Korth.) merah dan putih terkontaminasi kapang khamir tetapi masih kurang  dari  1  x  10 5 koloni/gram.  Dengan demikian, ditinjau dari cemaran mikrobiologis  kratom  merah  dan  putih memenuhi syarat untuk ekspor, sedangkan daun  kratom  hijau  tidak  memenuhi  syarat ekspor  karena  kadar  kapang  khamir melebihi standar American Herbal
Products Association atau lebih dari 1 x 10 5
koloni/gram.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Seluruh penulis menyatakan bahwa tidak  ada  konflik  kepentingan  dalam penelitian ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  berterima  kasih  kepada pihak PT. Kreasi Alam Borneo atas semua fasilitas dan dukungan yang telah diberikan dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Ayu,  R.,  Putri,  A.,  Tyasningsih,  W.,  & Fikri,  F.  (2021).  Uji  Cemaran Salmonella  sp.  pada  Susu  Segar
Kambing  Sapera  di  Kecamatan Siliragung  Kabupaten  Banyuwangi. Prosiding Seminar Nasional Pembangunan Dan Pendidikan Vokasi Pertanian, 1(1), 186–197.
Candra,  A.  Y.  R.,  Widodo,  M.  E., Yanestria,  S.  M.,  Mardijanto,  A.,  & Wibisono,  F.  J.  (2022).  Uji  Kualitas (Organoleptis , Eber ) dan Identifikasi Cemaran  Salmonella  Sp  .  Pada
Daging Ayam Dari Pasar Tradisional di  Surabaya  Barat.  Journal  of Tropical  Animal  and  Veterinary Science, 12(1), 99–106.
Compton, D. M., Garcia, C., Kamaratos, A. V.,  G.  Johnson,  B.,  &  Wedge,  T. (2014).  An  examination  of  the consequences of chronic exposure to
Mitragyna speciosa during
adolescence on learning and memory in  adulthood. The  Journal  of Phytopharmacology , 3 (5), 300–309.
Dini  Novindriana,  Bambang  Wijianto,  M. A.  (2019).  Uji  Efek  Sedatif  Ekstrak Etanolik  Daun  Kratom  pada  Mencit Jantan  Galur  Balb/C. Reactions Weekly , 1770 (1), 13–13. Elnawawi, F. A., Attala, O. A., & Saleh, S. (2012).  Enteropathogens  of  public health importance in imported frozen meat  and  chicken. International Journal of Microbiological Research (IJMR) , 3 (1), 59–63. Fadholi, A., Surtikanthi, D., Istyawan, M., Annisya, S., & Pratiwi, U. D. (2022).
Legalitas  Narkotika  Jenis  Baru (Kratom) :  Antara  Ancaman  Dan Peluang  Bagi  Ketahanan  Nasional Indonesia. Pengabdian Pada Masyarakat , 2 (1), 69–80. Farah Idayu, Taufik Hidayat, M.A.M.Moklas, F.Sharida,
A.R.Nurul  Raudzah,  A.R.Shamma,
E.  A.  (2011).  Antidepressant-like effect  of  mitragynine  isolated  from Mitragyna  speciosa  Korth  in  mice model of depression. Phytomedicine , 18 , 402–407.
Feldsine, P. T., Lienau, A. H., Leung, S. C., & Mui, L. A. (2003). Enumeration of Total  Yeasts  and  Mold  in  Foods  by the SimPlate Yeast and Mold – Color Indicator Methods and Conventional Culture Methods :  Collaborative Study.
Journal of AOAC
Internasional , 86 (2), 296–313. Feldsine, P. T., Lienau, A. H., Leung, S. C., & Mui, L. A. (2008). AOAC Official Method  2005  .  03  Detection  and Confirmed Quantitation of Coliforms
and E . coli in Foods ( Applicable to detection and quantitation of confirmed total coliforms and E . coli in cake mix , chocolate , condiments , dairy  foods  ,  egg  products  ,. AOAC Internasional .
Hassan, Z., Muzaimi, M., Navaratnam, V., Yusoff,  N.  H.  M.,  Suhaimi,  F.  W., Vadivelu,  R.,  Vicknasingam,  B.  K., Amato,  D.,  von  Hörsten,  S.,  Ismail, N. I. W., Jayabalan, N., Hazim, A. I., Mansor,  S.  M.,  &  Müller,  C.  P. (2013). From Kratom to mitragynine and its derivatives: Physiological and behavioural  effects  related  to  use, abuse,  and  addiction. Neuroscience and  Biobehavioral  Reviews , 37 (2), 138–151.
Indrawati, A.,  Kurnia, R.  S., Luh, N., Ika, P.,  Studi,  P.,  Medik,  M.,  Hewan,  F. K.,  &  Barat,  J.  (2019).  Detection  of ampC  and  mcr-1  resistance  coding genes  in  Escherichia  coli  causing Poultry  Colibacillosis  in  Sukabumi. Veteriner , 20 (36), 495–503.
Kartikasari,  A.  M.,  Hamid,  I.  S.,  Elziyad, M.  T.,  Damayanti,  R.,  Fikri,  F.,  & Praja,  R.  N.  (2019).  Isolasi  dan Identifikasi  Bakteri  Escherichia  coli Kontaminan  Pada  Daging  Ayam Broiler  Di  Rumah  Potong  Ayam Kabupaten Lamongan. Jurnal Medik Veteriner , 2 (1), 66–71.
Maimunah,  S.,  Harefa,  K.,  Silalahi,  Y.  C. E., & Manurung, K. (2020). Penetapan  angka  kapang  khamir (akk)  pada  rempah-  rempah  yang dijual  di  pasar  sri  gunting  medan. FARMANESIA , 7 (1), 11–18.
Novindriani, D., Wijianto, B., & Andrie, M. (2013). Uji Efek Sedatif Infusa Daun Kratom  (Mitragyna  speciosa)  Pada Mencit Jantan Galur BALB/c. Jurnal Mahasiswa  Fakultan  Kedokteran Universitas Tanjungpura.
Ohmura-hoshino,  M.,  Miyaki,  Y.,  &
Yashima,  S.  (2022).  Heliyon A one- step  multiplex  PCR-based  assay  for simultaneous  detection  and  classi  fi cation of virulence factors to identify
fi  ve  diarrheagenic  E  .  coli pathotypes. Heliyon , 8 (1), 1–7.
Oktaviani, H. D., Muin, S., & Hardiansyah,
G.  (2020).  Pendapatan  Petani  Dari Budidaya Tanaman Purik (Mitragyna
Sp) di Desa Nanga Manday
Kecamatan  Bika  Kabupaten  Kapuas Hulu. Hutan Lestari , 8 , 808–824. Parthasarathy, S., Azizi, J. Bin,
Ramanathan, S., Ismail,
S.,
Sasidharan,  S.,  Ikram,  M.,  Said,  M.,
& Mansor, S. M. (2009). Evaluation of  Antioxidant  and  Antibacterial Activities  of  Aqueous,  Methanolic and Alkaloid Extracts from Mitragyna Speciosa (Rubiaceae Family)  Leaves. Molecules , 14 , 3964–3974.
Prabandari, A. S., & Darwati, M. S. (2022).
IDENTIFIKASI CEMARAN KAPANG PATOGEN PADA JAMU SERBUK  PEGAL  LINU  YANG BEREDAR DI KOTA SURAKARTA. Avicenna , 5 (1),  10– 18.
Rahadyan,  R.  A.,  Tyasningsih,  W., Puspitasari, Y., Permatasari, D. A., & Widjiati,  W.  (2023).  Hubungan teknik  pemerahan  dengan  jumlah Escherichia coli pada susu segar dari peternakan  sapi  perah  di  KUD Kertajaya , Kabupaten Kediri , Jawa Timur. Current  Biomedicine , 1 (1), 19–24.
Raini,  M.  (2017).  Kratom  (Mitragyna speciosa  Korth):  Manfaat,  Efek Samping  dan  Legalitas. Penelitian Dan Pengembangan Kesehatan , 27 (3), 175–184.
Reanmongkol,  W.,  Keawpradub,  N.,  & Sawangjaroen,  K.  (2007).  Effects  of the extracts from Mitragyna speciosa Korth  .  leaves  on  analgesic  and behavioral  activities  in  experimental animals. Journal Science Technology , 29 , 39–48.
Resnia,  R.,  Wicaksena,  B.,  &  Salim,  Z. (2015).  Kesesuaian  SNI  dengan Standar  Internasional  dan  Standar Mitra  Dagang  pada  Produk  Ekspor
Perikanan  Tuna  dan  Cakalang. Standarisasi , 17 (2), 87–98.
Roosheroe,  I.  G.,  Sjamsuridzal,  W.,  & Oetari,  A.  (2018). Mikologi  Dasar dan Terapan . Yayasan Pustaka Obor Indonesia.
Rorong,  J.  A.,  &  Wilar,  W.  F.  (2020). Keracunan  Makanan  Oleh  Mikroba. Techno Science Journal , 2 (2), 47–60. Ross,  M.  (2021). Kratom  is  Medicine (1st ed.). Greenstone.
Sartika,  D.,  Susilawati,  &  Arfani,  G.
(2016). Identifikasi Cemaran Salmonella  sp.  pada  Ayam  Potong dengan  Metode  Kuantifikasi  di  Tiga Pasar  Tradisional  Dan  Dua  Pasar Modern  di  Kota  Bandar  Lampung.
Jurnal  Teknologi  &  Industry  Hasil Pertanian , 21 (2), 89–96.
Veltri,  C.,  &  Grundmann,  O.  (2019). Current perspectives on the impact of Kratom  use. Substance  Abuse  and Rehabilitation , Volume 10 , 23–31. Wahyono, S., Widowati, L., Handayani, L., Sampurno, O. D., Haryanti, S., Fauzi, Ratnawati,  G.,  &  S.,  M.  B.  (2019). Kratom:  Prospek  Kesehatan  dan
Sosial  Ekonomi .  Publishing  Agency for Health Research and Development. Xu,  Y.,  Li,  R.,  Li,  K.,  Yu,  J.,  Bai,  J.,  &
Wang,  S.  (2022).  Inactivation  of inoculated  Salmonella  and  natural microflora  on  two  kinds  of  edible seeds  by  radio  frequency  heating combined  with  cinnamon  oil  vapor. Lwt , 154 , 1–11.
Yeni  Ridayani.  (2013).  uji  efek  sedatif fraksi etanol daun kratom (Mitragyna speciosa  Korth.)  pada  mencit  Jantan
Galur BALB/c. IPI Jurnal Mahasiswa Farmasi Fakultas Kedokteran  Dan  Ilmu  Kesehatan UNTAN , 3 , 1–9.
Yuliana,  A.,  &  Wulandari,  S.  (2019).  Uji Cemaran Mikroba Patogen Dari Jamu Tradisional Di Daerah Cipedes Kota Tasikmalaya. Jurnal Ilmiah Manusia Dan Kesehatan , 4 (2013), 62–69. Yuswananda,  N.  P.  (2015). Identifikasi Bakteri Salmonella sp. pada
Makanan Jajanan Di Masjid
Fathullah  Ciputat  Tahun  2015 .
Karya Tulis Ilmiah.