## Analisis Kualitatif Pewarna Rhodamin B Pada Terasi Dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis
Muawanah, Dewi Arisanti, Abdul Razak, Nur Qadri Rasyid Teknologi Laboratorium Medis, Politeknik Kesehatan Muhammadiyah Makassar Email: ummi.ahsan79@gmail.com

## Artikel info
Artikel history: Received;30-10-2022 Revised:16-01-2023 Accepted;01-03-2023

## Keyword:
Rhodamin B; shrimp
paste; Thin Layer Chromatography
Abstract. Shrimp  paste  is  one  of the fishery  products  obtained  by  a fermentation process, and the main ingredients are both small shrimp and  fish.  In  the  production  of  shrimp  paste,  traders  sometimes  add prohibited  dyes  such  as  rhodamin  B,  according  to  the  Minister  of Health  of  the  Republic  of  Indonesia,  Number  239/Menkes/Per/V/85, because it is a synthetic dye for paper, textiles, and ink. Rhodamin B can  cause  liver  function  disorders  and  cause  cancer.  When  used  in food products. This study aims to determine the presence of rhodamin B  dye  in  shrimp  paste.  The  sampling  technique  was  purposive sampling,  with  a  total  of  10  samples.  This  study  conducted  a qualitative  analysis  of  rhodamin  B  dye  using  the  Thin  Layer Chromatography (TLC) method. Based on the results of the study, 10 samples  were  obtained,  namely  6  positive  shrimp  paste  samples containing rhodamin B dye, as seen based on the stains and Rf value of the sample and the rhodamin B standard. It can be concluded that most of the shrimp paste samples contain rhodamin B dye.
Abstrak. Terasi  merupakan  salah  satu  produk  perikanan  yang diperoleh  dengan  proses  fermentasi  dan  berbahan  dasar  utama  baik udang  kecil  maupun  ikan.  Dalam  produksi  terasi  terkadang  ada pedagang menambahkan zat pewarna yang dilarang seperti rhodamin B  menurut  Permenkes  RI  Nomor  239/MenKes/Per/V/1985  karena merupakan bahan pewarna sintetis untuk kertas, tekstil maupun tinta, sehingga rhodamin B dapat menyebabkan gangguan fungsi hati sampai mengakibatkan  kanker  apabila  digunakan  dalam  produk  makanan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya pewarna rhodamin B pada terasi. Teknik pengambilan sampel secara Purposive sampling dengan jumlah sampel sebanyak 10 (sepuluh) sampel terasi. Penelitian ini  melakukan  analisis  kualitatif  pewarna  rhodamin  B  dengan menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Berdasarkan hasil penelitian dari 10 sampel diperoleh yaitu 6 sampel terasi positif mengandung  pewarna  rhodamin  B  dan  4  sampel  tidak  mengandung pewarna rhodamin B yang dilihat berdasarkan bercak noda dan nilai Rf  dari  sampel  dan  standar  rhodamin  B.  Hal  ini  dapat  disimpulkan bahwa  sebagian  besar  dari  sampel  terasi  mengandung  pewarna rhodamin B.

## Lontara

## Journal of Health Science and Technology
http://jurnal.poltekkesmu.online/lontarariset
Vol 4,  No. 1, June 2023, pp 16-23 p-ISSN:0000-0000 dan e-ISSN: 2721-6179 DOI: https://doi.org/10.53861/lontarariset.v4i1
Analisis Kualitatif Pewarna Rhodamin B Pada Terasi Dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis
(Muawanah, Dewi Arisanti, Abdul Razak, Nur Qadri Rasyid) 17 Kata Kunci: Rhodamin B,Terasi, Kromatografi Lapis Tipis Coresponden author:
Email: ummi.ahsan79@gmail.com
artikel dengan akses terbuka dibawah lisensi CC BY -4.0

## PENDAHULUAN
Makanan merupakan kebutuhan mendasar bagi hidup manusia, berasal dari bahan pangan yang sudah atau tanpa adanya pengolahan. Kurangnya perhatian dalam menjaga kebersihan perorangan dan lingkungan  dalam  proses  pengolahan  makanan  merupakan  salah  satu  penyebab  tingginya  kasus keracunan  dan  penyakit  infeksi  akan  makanan  Di  dalam  memperkaya  rasa  pada  masakan,  makanan biasanya ditambahkan penyedap rasa untuk menambah rasa gurih dan salah satunya bahan penyedap tradisional yaitu terasi. (Amir dan Mahdi, 2017)
Terasi merupakan salah satu produk perikanan yang pada umumnya menggunakan bahan baku berasal  dari  udang  maupun  ikan  dimana  proses  pembuatannya  melalui  proses  fermentasi.  Terasi biasanya digunakan sebagai bumbu penyedap rasa yang bertujuan untuk memberikan rasa gurih pada makanan  karena  memiliki  kandungan  asam  glutamat.  (Amir  dan  Mahdi,  2017)  Terasi  memiliki karakteristik yang khas yaitu memiliki aroma yang spesifik dan tajam sehingga meningkatkan selera untuk menyantap makanan tersebut. Sebagian besar masyarakat lebih menyukai terasi yang memiliki warna yang terang dibandingkan warna asli dari terasi itu sendiri yaitu warna gelap. Oleh karena itu, untuk menambah daya tarik konsumen maka produsen sering kali menambahkan dengan zat pewarna sintetis pada produk terasinya dan salah satunya adalah pewarna  rhodamin B. (Kamaruzzaman et al, 2021)
Pewarna  rhodamin  B  merupakan  salah  satu  pewarna  dilarang  penggunaannya  pada  produk pangan. Menurut Peraturan Menteri Kesehatan No. 33 Tahun 2012 tentang Bahan Tambahan Pangan (BTP),  menyatakan  bahwa  rhodamin  B  merupakan  bahan  tambahan  pangan  yang  dilarang penggunaannya dalam makanan. (Kumalasari, 2015)
Rhodamin B merupakan zat pewarna sintetis yang umumnya digunakan untuk kertas, tekstil maupun tinta. Ciri – ciri bahan - bahan yang mengandung Rhodamin B yaitu lengket, muncul rasa gatal, bau tidak alami, harga murah, warna kelihatan cerah dan menarik. (Yuliarti, 2008 dalam Junari, 2016) Rhodamin B menyebabkan gangguan kesehatan pada manusia seperti alergi pada kulit dan gangguan pernafasan. Apabila digunakan dalam kadar yang tinggi dapat menyebabkan kerusakan hati dan bersifat karsinogenik. (Devi et al, 2020)
Penggunaan  rhodamin  B  masuk  melalui  makanan  salah  satunya  seperti  terasi  dapat menyebabkan iritasi pada saluran pencernaan dan gejala keracunan yang ditandai dengan urine yang berwarna merah muda. Penggunaan jangka waktu yang lama atau tahunan akan terjadi penumpukan
rhodamin B di lemak, karena rhodamin B tidak dapat larut dalam proses pencernaan dalam tubuh. Hal ini  menyebabkan  jumlahnya  akan  terakumulasi  sehingga  menyebabkan  kerusakan  pada  organ  tubuh sampai kematian. (Amir dan Mahdi, 2017)
Pewarna rhodamin B ini dapat menyebabkan terjadinya iritasi pada saluran pernafasan apabila terhirup, mata yang terkena akan mengalami iritasi yaitu mata kemerahan dan timbul cairan pada mata. Selain itu, rhodamin B dilarang penggunaannya dalam produk makanan karena bersifat karsinogenik kuat yang dapat menyebabkan gangguan fungsi hati sampai kanker hati. (Mamoto dan Citraningtyas, 2013)
Berdasarkan penelitian sebelumnya oleh Mutmainnah (2017) tentang Identifikasi rhodamin B pada terasi yang diperjualbelikan di Pasar Toddopuli Kota Makassar diperoleh hasil yang menunjukkan bahwa 5 sampel tersebut positif (+). Adapun metode yang digunakan untuk mengetahui adanya pewarna rhodamin B yaitu metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT). KLT merupakan teknik kromatografi yang banyak digunakan karena metode ini lebih sederhana, analisisnya lebih mudah dan murah, dan cepat dibandingkan dengan teknik kromatografi yang lainnya. (Gandjar dan Rahman, 2017)
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut,  maka  dilakukan  penelitian  tentang  Analisis  kualitatif pewarna  rhodamin  B  pada  sampel  terasi  dari  beberapa  pasar  tradisional  di  Kota  Makassar  dengan menggunakan Metode Kromatografi Lapis Tipis.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  menggunakan  jenis  penelitian  observasi  laboratoris  dengan  menggunakan beberapa jenis terasi. Teknik pengambilan sampel secara purposive sampling dengan kriteria sampel yaitu  memiliki  warna  merah  kecoklatan  dan  permukaan  warna  tidak  rata.  Tempat  penelitian dilaksanakan  di  Laboratorium  Toksikologi  Klinik  Politeknik  Kesehatan  Muhammadiyah  Makassar. Populasi penelitian ini adalah semua terasi yang terdapat di Kota Makassar, sedangkan jumlah sampel yang  diteliti  sebanyak  10  sampel  terasi.  Penelitian  ini  menggunakan  10  sampel  terasi  dari  8  pasar tradisional yang mewakili pasar tradisional yang ada di Kota Makassar yaitu pasar Pa’baeng-baeng, pasar Cidu, pasar Todopuli, pasar Senggol, pasar Maricayya, pasar Manuruki, pasar Terong, dan pasar Daya.
Alat yang digunakan yaitu erlenmeyer, mikropipet, corong, chamber, plat KLT, gelas kimia, gelas ukur, pipet tetes, batang pengaduk, hotplate, kertas saring, dan tip. Bahan yang digunakan yaitu terasi, metanol, HCl 4N, etilasetat, rhodamin  B, parafin cair, amoniak dan akuades.
Pewarna rhodamin B pada sampel terasi dianalisis dengan metode KLT dengan proses dimulai dari  sampel  dilarutkan  dengan  aquadest  sebanyak  50  mL  lalu  dimasukkan  ke  dalam  gelas  kimia kemudian di tambahkan HCl 4N sebanyak 1 mL dan 2 mL parafin cair. Setelah itu, dilelehkan pada hotplate  dan  ditambahkan  4  mL  metanol  sambil  diaduk  kemudian  disaring.  Filtrat  yang  diperoleh digunakan sebagai sampel untuk identifikasi Rhodamin B.
(Muawanah, Dewi Arisanti, Abdul Razak, Nur Qadri Rasyid)
Larutan sampel terasi dan larutan standar rhodamin B ditotolkan pada plat KLT dengan ukuran 6 cm x 12 cm, penotolan sampel 2 cm dari tepi bawah dan jarak penotolan 1,5 cm, kemudian plat KLT dimasukkan ke dalam chamber yang terdapat eluen. Eluen yaitu etil asetat, metanol, dan amoniak 9% v/v  (5:1:1).  Kemudian  chamber  ditutup  dan dilakukan  pengelusian  dengan  jarak  rambat 15  cm.  Plat diangkat  dan  dikeringkan.  Selanjutnya  diamati  di  bawah  lampu  UV  dimana  terdapat  penampakan bercak berwarna merah muda apabila sampel mengandung zat pewarna rhodamin B kemudian dihitung nilai Rf (Retention of Factor).

## HASIL
Berdasarkan hasil penelitian tentang analisis kualitatif pewarna rhodamin B pada terasi yang dijual di pasar tradisional Kota Makassar dengan jumlah sampel sebanyak 10 sampel dan dilakukan di Laboratorium  Toksikologi  Klinik,  Politeknik  Kesehatan  Muhammadiyah  Makassar  diperoleh  hasil dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Analisis kualitatif pewarna rhodamin B pada Terasi dengan menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis
Kode Sampel Nilai Rf Keterangan Kontrol positif 0,66 Positif Sampel 1 0,47 Positif Sampel 2 0,54 Positif Sampel 3 0,41 Negatif Sampel 4 0,50 Positif Sampel 5 0,48 Positif Sampel 6 0,62 Positif Sampel 7 0,39 Negatif Sampel 8 - Negatif Sampel 9 0,37 Negarif Sampel 10 0,46 Positif
Sumber: Data Primer, 2022

## PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  dilakukan  analisis  kualitatif  zat  pewarna  rhodamin  B  pada  terasi  dengan jumlah 10 sampel dan menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis. Prinsip dari metode ini adalah proses pemisahan kimia yang dilakukan kepolaran yang berbeda dari fase gerak (adsorben) dengan fase diam (eluen). Identifikasi awal dari proses KLT adalah perbandingan nilai Rf standar dengan sampel pada suatu senyawa. (Stahl, 2013)
Tahap  pertama  pada  penelitian  ini  yaitu  penimbangan  sampel  sebanyak  5  g  dan  dilarutkan menggunakan  aquadest  kemudian  ditambahkan  HCl  4N  yang  berfungsi  untuk  mengasamkan  larutan dan  lebih  menegaskan  warna  merah  yang  terbentuk  dari  rhodamin  B  pada  sampel.  Selanjutnya ditambahkan  parafin  cair  lalu  dipanaskan  di  atas  hotplate  selama  4-5  menit,  kemudian  ditambahkan metanol  dan  disaring.  Filtrat  yang  dihasilkan  ditotolkan  pada  plat  KLT  untuk  mengidentifikasi  zat pewarna rhodamin  B pada  sampel.  Kemudian  dimasukkan  ke  dalam chamber  yang  berisi eluen  (etil asetat  :  metanol  :  ammonia  9%).  Fungsi  dari  eluen  yaittu  melarutkan  campuran  zat  dan  menarik senyawa  yang  akan  dipisahkan  melewati  sorben  fase  diam.  Setelah  mencapai  garis  atas,  plat  KLT diangkat kemudian dibiarkan sampai mengering untuk dapat mengukur nilai Rf sampel yang terlebih dahulu  diamati  bercak  noda    yang terbentuk  pada  plat  KLT  secara  visual  di  bawah  sinar  lampu  UV dengan panjang gelombang 254 nm.
Metode  KLT  menggunakan  fase  gerak  dengan  fase  diam.  Fase  diam  yaitu  plat  KLT  akan berfluoresensi dengan baik dibawah sinar lampu UV pada panjang gelombang 254 nm, sedangkan fase gerak yaitu eluen yang memiliki sifat kepolaran sama dengan senyawa rhodamin B. Apabila kepolaran senyawa dengan eluen semakin mirip maka senyawa rhodamin B akan semakin tertarik oleh fase gerak sehingga terbentuk bercak noda pada plat KLT. (Fajriani et al, 2022)
Hasil penelitian oleh Sa’ad et al, (2019), menunjukkan bahwa bercak noda yang mengandung senyawa rhodamin B akan terlihat secara visual berwarna merah muda dengan sinar UV pada panjang gelombang 254 dan 366 nm. Hasil penampakan ini berfluoresensi berwarna kuning atau orange.
Pengukuran nilai Faktor retensi (Rf) menggunakan rumus yaitu jarak tempuh zat terlarut dibagi dengan jarak tempuh oleh pelarut. Nilai Rf yang diperoleh dari sampel akan dibandingkan dengan nilai Rf kontrol (standar) rhodamin B yang telah dibuat sebelumnya dimana nilai Rf  yang memenuhi syarat adalah antara 0,2 sampai 0,8. Hal ini dapat diperoleh apabila menggunakan eluen yang baik sehingga diperoleh hasil pemisahan komponen yang baik pula. (Muawanah dan Rasyid, 2021)
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dari 10 sampel terasi diperoleh hasil yaitu 6 sampel positif  adanya  rhodamin  B  (sampel  1,  2,  4,  5,  6,  dan  10),  dan  4  sampel  yang  negatif.  Hasil  ini berdasarkan bercak noda antara sampel dengan kontrol positif rhodamin B sama melalui pengamatan di  bawah  sinar  lampu  UV.  Selain  itu  nilai  Rf  antara  6  sampel  tersebut  dengan  kontrol  positif  juga memiliki  selisih  kurang  dari  0,2  sehingga  dinyatakan  positif  karena  perbedaan  nilai  Rf  nya  saling mendekati dengan selisih kurang dari sama dengan 0,2.  (Afriyeni et al, 2016)
Analisis Kualitatif Pewarna Rhodamin B Pada Terasi Dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis (Muawanah, Dewi Arisanti, Abdul Razak, Nur Qadri Rasyid)
Berdasarkan hasil penelitian Humariastuti (2016), tentang Identifikasi Rhodamin B pada Terasi yang tidak bermerek yang diperjualbelikan di Pasar Terong Kota Makassar dari 10 sampel terasi yang diteliti terdapat 2 (20%) sampel positif dan 8 (80%) sampel negatif tidak terdapat zat pewarna rhodamin B. Begitupula hasil evaluasi penelitian oleh Amir dan Mahdi (2017) yang menunjukkan bahwa terdapat sekitar  60  %  penggunaan  pewarna  sintetis  rhodamin  B  pada  produk  terasi  yang  dipasarkan  di  kota Makassar.
Rhodamin  B  merupakan  zat  warna  yang  dilarang  digunakan  dalam  pangan  sebagaimana tercantum dalam Peraturan Menteri Kesehatan RI Nomor 239/MenKes/Per/V/1985 mengenai zat warna tertentu  yang  dinyatakan  sebagai  bahan  berbahaya.  Pada  umumnya  Rhodamin  B  banyak  digunakan pada  produk  terasi  tidak  bermerek  yang  dijual  di  pasar  tradisional  disebabkan  karena  produk  terasi meiliki  warna  yang  lebih  menarik  padahal  pada  kenyataanya  yang  digunakan  adalah  rhodamin  B dimana  harganya  lebih  murah  dibandingkan  dengan  pewarna  sintetis  untuk  pangan.  Disamping  itu, pengetahuan  produsen  dan  konsumen  masih  rendah  akan  dampak  negatif  rhodamin  B  terhadap kesehatan. (Amir dan Mahdi, 2017)
Adapun penyebab rhodamin B dapat berbahaya bagi manusia karena memiliki sifat kimia dan kandungan logam berat rhodamin B. Dalam strukturnya terdapat ikatan dengan klorin (Cl) dimana merupakan senyawa halogen bersifat reaktif dan berbahaya. Oleh karena itu, rhodamin B  menyebabkan efek toksisitas apabila terabsorpsi oleh manusia. Keracunan dalam tubuh manusia dapat terjadi pada saat senyawa ini akan berusaha mencapai kestabilan dalam tubuh dengan cara mengikat senyawa lain dalam tubuh. Selain dari kandungan senyawa klorin, rhodamin B juga memiliki senyawa pengalkilasi (CH3-CH3)  yang  bersifat  radikal  dan  mampu  berikatan  dengan  protein,  lemak,  dan  DNA  di  dalam tubuh.  Dengan  demikian,  penggunaan  rhodamin  B  pada  produk  makanan  dalam  jangka  waktu  yang lama akan menyebabkan efek toksik dan bersifat karsinogenik. (La Ifu, 2016)
Gambar 2 Struktur rhodamin B (Sumber: Suryanti, 2013)

## KESIMPULAN DAN SARAN
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dengan judul analisis kualitatif pewarna rhodamin B menggunakan  metode  Kromatografi  Lapis  Tipis  pada  10  sampel  terasi  dapat  disimpulkan  bahwa  6 sampel positif mengandung zat pewarna rhodamin B dan 4 sampel negatif. Hal ini berdasarkan warna bercak noda dan nilai Rf dari sampel dengan standar pewarna rhodamin B memiliki selisih kurang dari 0,2.
Adapun saran kepada peneliti selanjutnya untuk dapat melakukan analisis kuantitatif pada terasi dengan metode Spektrofotometri UV-Vis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada Direktur,  LPPM  Politeknik  Kesehatan  Muhammadiyah  Makassar  yang sangat berperan penting dalam memberikan perizinan untuk melakukan penelitian. Ka Prodi dan civitas prodi  Teknologi  Laboratorium  Medis  serta  pihak  Laboratorium  Toksikologi  Klinik  yang  telah membantu dan mendukung sampai selesainya rangkaian penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Amir, N., & Mahdi, C. (2017). Evaluasi Penggunaan Rhodamin B Pada Produk Terasi Yang Dipasarkan Di Kota Makassar. Jurnal Ipteks PSP , 4(8): 128-133.
Afriyeni., Helmice., & Utari, N. W. (2016). Identifikasi Zat Warna Rhodamin B pada Lipstik Berwarna Merah Yang Beredar Di Pasar Raya Padang. Jurnal Farmasi Higea , 8(1): 59 – 64.
Devi, N.N.A.S., Winarni, N.P.M.P.P., Priyasana, L.P., Mayagita, G.A.D. (2020). Penetapan Rhodamin B  pada  Sampel  Lipstick  dengan  Menggunakan  KLT-Spektrofotodensitometri. Jurnal  Kimia (Journal Chemistry) , 14(1), 77-81.
Fajriani, N., Kurniawan, H., Nugraha, F. (2022). Identify Rhodamin B on Lipsticks in The Market Using Thin  Layer  Chromatography  (TLC)  Method. Journal  Syifa  Sciences  and  Clinical  Research (JSSCR) , 4(3), 671-678.
Gandjar, IG dan Rohman, A. (2017). Kimia Farmasi Analisis . Pustaka Pelajar, Yogyakarta.
Husmariastusi.  (2016). Identifikasi  Rhodamin  B  Pada  Terasi  Yang  Tidak  Bermerek  Yang Diperjualbelikan  di  Pasar  Terong  Kota  Makassar .  Karya  Tulis  Ilmiah  (KTI)  tidak dipublikasikan. Program Diploma III Akademi Analis Kesehatan Muhammadiyah Makassar, Makassar.
Junari,  (2016). Identifikasi  Rhodamin  B  Pada  Makanan  Ringan  Yang  Tidak  Bermerek  Yang Diperjualbelikan  di  Pasar  Tradisional  Kota  Makassar .  Karya  Tulis  Ilmiah  (KTI)  tidak dipublikasikan. Program Diploma III Akademi Analis Kesehatan Muhammadiyah Makassar, Makassar.
Kamaruzzaman, A.R., Darmawati, A., Purwanto, D, A. (2021). Analisis Kualitatif Rhodamin B dalam Terasi di Pasar Kota Sumbawa Besar Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis . Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, 8(2), 34-41.
Analisis Kualitatif Pewarna Rhodamin B Pada Terasi Dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis (Muawanah, Dewi Arisanti, Abdul Razak, Nur Qadri Rasyid)
Kumalasari, E. (2015). Identifikasi dan Penetapan Kadar Rhodamin B Dalam Kerupuk Berwarna Merah Yang Beredar di Pasar Antasari Kota Banjarmasin. Journal Ilmiah Mauntung , 1(I), 85-89.
La  Ifu,  A.  (2016). Analis  Kandungan  Zat  Pewarna  Sintesis  Rhodamin  Pada  Sambal  Botol Diperdagangkan di Pasar Modern Kota Kendari . Universitas Halu Oleo, Kota Kendari.
Mamoto,  L.V.  dan  Citraningtyas.  (2013).  Analisis  Rhodamin  B  pada  Lipstik  Yang  Beredar  di  Pasar Kota Manado. Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi UNSRAT , Vol. 2 No. 02.
Muawanah, & Rasyid, N. Q. (2021). Analisis Kualitatif Residu Pestisida Pada Bahan Pangan Dengan Menggunakan  Metode  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT). Journal  of  Health  Science  and Technology . 2(2): 113 – 120.
Mutmainnah, L., Lampe, H., Sari, F. (2017). Identifikasi Zat Pewarna Rhodamin B Pada Terasi Yang Tidak diperjualbelikan di Pasar Toddopuli Kota Makassar. Jurnal Media Laboran , 7(2), 52-57.
Stahl, E. (2013). Thin - Layer Chromatography: A Laboratory Handbook . Springer. New York.