https ://ejour nal.uns rat.ac .id/v3/index.php/pharm ac on

## PHARMACON
ISSN (print): 2302 - 2493 ISSN (online): 2721 - 4923

## Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Aaptos aaptos yang Diperoleh Dari Pantai Selatan Kabupaten Minahasa
Jesikha Sharen Salikode 1* , Adithya Yudistira 2 , Yuanita Amalia Hariyanto 3
1,2,3 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi *Corresponding author email: jesikhasalikode486@gmail.com

## I N F O R M A S I A R T I K E L A B S T R A C T
Diterima pada 8 Juli 2023
Disetujui pada 6 Februari 2024 Dipublikasikan pada 11 Februari 2024 Hal. 431 - 437 Aaptos  aaptos  sponge  is  a  highly  prospective  marine  organism  that  possesses  the  ability  to produce  potential  bioactive  compounds  for  use  as  a  source  of  new  drugs.  Antioxidants  are substances that can prevent the process of oxidation, making them highly beneficial for health. This research aims to determine the antioxidant activity of ethanol extract produced by Aaptos aaptos sponge using the DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) method. This study employed a laboratory experimental research design. The results of the data analysis showed % inhibition values  of  52.6%  (25  ppm),  72.5%  (50  ppm),  82.9%  (75  ppm),  and  87.4%  (100  ppm).  The ethanol extract of Aaptos aaptos sponge obtained from the South Coast of Minahasa Regency exhibited  the  highest  antioxidant  activity  at  a  concentration  of  100  ppm,  with  a  percentage inhibition of 87.4%.
Keywords:  Aaptos  aaptos,  antioxidant  activity, DPPH  (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) , Minahasa Regency
A B S T R A K
DOI: 10.35799/pha.13.2024.49266
Spons Aaptos  aaptos merupakan salah  satu  biota  laut yang  sangat prospektif  dan  memiliki kemampuan menghasilkan senyawa bioaktif yang potensial untuk dijadikan sebagai sumber obat-obatan  baru.  Antioksidan  adalah  zat  yang  bisa  mencegah  terjadinya  proses  oksidasi, karena  itu  antioksidan  sangat  bermanfaat  bagi  kesehatan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol yang dihasilkan oleh spons Aaptos aaptos dengan menggunakan metode DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ). Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimen laboratorium. Hasil analisis data %inhibisi yang didapat adalah 52,6% (25  ppm);  72,5%  (50  ppm);  82,9%  (75  ppm);  dan  87,4%  (100  ppm).  Ekstrak  etanol  spons Aaptos  aaptos yang  diperoleh  dari  Pantai  Selatan  Kabupaten  Minahasa  memiliki  aktivitas antioksidan tertinggi pada konsentrasi 100 ppm yaitu 87,4%.
Kata  Kunci: Aaptos  aaptos ,  Aktivitas  antioksidan,    DPPH  ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ), Kabupaten Minahasa

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara kepulauan yang memiliki keanekaragaman sumber daya alam baik di darat maupun di laut, Indonesia sering dijuluki sebagai negara maritim karena memiliki laut yang luasnya melebihi daratan dan menjadikan Indonesia mempunyai potensi keanekaragaman hayati laut yang dapat memberi peluang untuk dimanfaatkan dalam berbagai bidang industri termasuk makanan, kosmetik, dan juga bagi kesehatan (Kadar, 2015).
Laut Indonesia memiliki bermacam jenis organisme baik tumbuhan maupun hewan. Salah satu komponen  penyusun  kehidupan  bawah  laut,  terutama  pada  terumbu  karang  adalah  spons.  Spons adalah hewan laut yang dikenal memiliki struktur tubuh sederhana yang terbentuk dari serat spons, memiliki spikula yaitu sel penyusun tubuh yang berbentuk seperti jarum dan memiliki pori-pori yang mampu menyerap air ke dalam tubuhnya.  Sebagai salah satu biota laut yang  mempunyai senyawa bioaktif, spons memiliki potensi aktivitas sebagai anti oksidatif, anti bakteri, anti tumor, anti jamur, anti malaria, dan anti inflamasi (Trianto et al , 2016).
Antioksidan merupakan suatu senyawa yang dikenal dapat menangkal pengaruh radikal bebas, dimana  radikal  bebas  didefinisikan  sebagai  atom  atau  molekul  yang  bersifat  tidak  stabil.  Radikal bebas dihasilkan oleh adanya faktor seperti: asap, debu, polusi, dan kebiasaan mengonsumsi makanan cepat  saji  yang  tidak  seimbang  antara  karbohidrat,  protein,  dan  lemak.  Senyawa  antioksidan  ini nantinya  akan  mendonorkan  satu  elektronnya  pada  radikal  bebas  yang  tidak  stabil  dan  membuat radikal bebas bisa dinetralkan  sehingga tidak lagi mengganggu metabolisme tubuh dan membantu dalam pencegahan serta penyembuhan dari terjadinya kerusakan sel (Hayatul, 2017).
Salah  satu  spons  laut  yang  ditemukan  di  perairan  Indonesia  terutama  di  Pantai  Selatan Kabupaten  Minahasa  adalah Aaptos  aaptos .  Spons Aaptos  aaptos memiliki  nilai  ekonomis dikarenakan spons dari genus yang dapat menghasilkan senyawa khusus yaitu aaptamine  dan dapat dimanfaatkan dalam bidang farmasi.  Menurut penelitian yang sudah dilakukan sebelumnya bahwa ekstrak etanol spons Aaptos aaptos dari Teluk Manado Sulawesi Utara memiliki aktivitas antioksidan yang kuat pada setiap konsentrasi (Tongkali et al , 2022).
Metode  pada  uji  aktivitas  antioksidan  adalah  metode  peredaman  radikal  bebas  DPPH  ( 1,1- difenil-2-pikrilhidrazil ).  Metode  ini  dipakai  dengan  alasan,  karena  memerlukan  sedikit  sampel, sederhana,  mudah,  cepat  dan  memberikan  hasil  yang  akurat,  serta  memiliki  kepekaan  dalam mengevaluasi aktivitas antioksidan yang terdapat pada senyawa bahan alam (Abdillah, 2013).
Berdasarkan  uraian  latar  belakang  di  atas,  maka  peneliti  tertarik  melakukan  penelitian mengenai  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  Spons Aaptos  aaptos yang  diperoleh  dari  pantai Selatan Kabupaten Minahasa dengan metode DPPH.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Oktober  2022  -  Mei  2023  di  Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia  dan  Laboratorium  Farmasi  lanjut  Program  Studi  Farmasi,  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini,  yaitu Scuba  Diving ,  Talenan,  Pisau,  Spidol permanen, Zipper lock bag , Cool box , Sarung tangan, Botol 600 ml, Alat-alat gelas, Tabung reaksi dan  rak  tabung  reaksi,  Spatula,  Timbangan  analitik,  Pipet,  Spektrofotometer  UV-Vis,  Aluminium foil, Vortex, dan Evaporator.

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu  Spons Aaptos aaptos sebagai sampel yang didapat pada Pantai Selatan Kabupaten Minahasa, Etanol 95%, Aquades, dan DPPH.

## Jenis Penelitian
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimen  laboratorium.  Metode  eksperimental  ini bertujuan menguji  aktivitas  antioksidan  dengan  menggunakan metode  DPPH  ekstrak  etanol  spons Aaptos aaptos dari Pantai Selatan Kabupaten Minahasa.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel  spons Aaptos  aaptos diambil  di  Perairan  Desa  Poopoh,  Kecamatan  Tombariri, Kabupaten Minahasa pada tanggal 22 Oktober 2022, sampel diambil di dasar laut dengan peralatan selam  ( scuba  diving) .  Sampel  yang  diperoleh  dimasukkan  ke  dalam zipper  lock  bag kemudian dimasukkan dalam cool box , lalu dibawa ke Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia.

## Preparasi Sampel
Sampel  spons Aaptos  aaptos yang  telah diambil  dikeluarkan  dari zipper  lock  bag kemudian dipotong kecil-kecil di atas talenan menggunakan pisau dan sampel dimasukkan dalam botol 600 ml yang telah diisi dengan 200 ml etanol 95%.

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak  etanol  spons Aaptos  aaptos dibuat  menggunakan  cara  maserasi.  Sampel  yang  telah dipreparasi  dan  direndam  dalam  pelarut  etanol  selama  24  jam,  kemudian  disaring  sehingga menghasilkan  filtrat  1  dan debris 1. Debris 1  kemudian  diremaserasi  lagi  dengan  pelarut  etanol semuanya terendam dan dibiarkan lagi selama 24 jam, hal tersebut dilakukan berulang sampai hasil ekstraksi menjadi bening. Filtrat 1,2, dan 3 dicampur menjadi satu kemudian disaring,  selanjutnya dilakukan evaporasi menggunakan rotary evaporator pada suhu 40℃ sampai filtrat menjadi ekstrak kental  yang  selanjutnya  ditimbang  menggunakan  timbangan  analitik.  Ekstrak  kental  dari  spons Aaptos aaptos dipakai dalam pengujian antioksidan.

## Pembuatan Larutan Ekstrak dari Aaptos aaptos
Larutan ekstrak Aaptos aaptos dibuat dengan konsentrasi 1000 ppm, yakni dengan melarutkan 10  mg  ekstrak  etanol  spons Aaptos  aaptos kedalam  10  ml  etanol  dalam  labu  terukur  kemudian divortex hingga homogen. Larutan tersebut diencerkan menjadi 4 seri konsentrasi; yakni 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm, dan 100 ppm dengan menggunakan rumus pengenceran :

## V1 × M1 = V2 × M2

## Pembuatan Larutan DPPH 50 ppm
Larutan DPPH dibuat dengan cara ditimbang 5 mg serbuk DPPH kemudian dilarutkan dengan 100 ml etanol, dalam labu ukur kemudian divortex  sampai didapatkan larutan konsentrasi 50 ppm. Larutan tersebut kemudian didiamkan selama 30 menit lalu disimpan di wadah yang tertutup rapat dan ditutupi dengan aluminium foil untuk menjaga agar tidak terkena langsung dengan sinar matahari.

## Pembuatan Larutan Kontrol DPPH
Larutan  kontrol  dibuat  dengan  cara  dicampur  2  ml  etanol  dan  2  ml  larutan  DPPH  50  ppm kemudian dikocok hingga homogen. Lalu dilakukan inkubasi dalam ruangan yang gelap selama 30 menit selanjutnya diukur panjang gelombang 517 nm.

## Pengujian Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Aktivitas antioksidan diuji menggunakan metode DPPH dengan membuat larutan uji sampel, yakni  sebanyak  2  ml  larutan  DPPH  ditambahkan  kedalam  masing-masing  larutan  sampel  ekstrak etanol yang terdiri dari 4 seri konsentrasi 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm, dan 100 ppm lalu divortex dan dilakukan inkubasi dalam suhu ruangan 37 o C selama 30 menit sampai aktivitas DPPH mengalami perubahan warna, dilakukan 3 kali pengulangan pada masing-masing konsentrasi sampel. Perubahan warna ungu menjadi kuning menandakan efisiensi penangkal radikal bebas.

## Analisis Data
Pengukuran  nilai  absorbansi  sampel  spons Aaptos  aaptos dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada  panjang  gelombang  517  nm.  Diperoleh  data  absorbansi  lalu  data  tersebut  dianalisis  dengan perhitungan persen penangkapan radikal bebas (% inhibisi) menggunakan rumus :
%inhibisi = absorbansi sampel absorbansi kontrol × 100%
(Almurdani et al. , 2013)

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Nilai  persen  peredaman  radikal  bebas  atau  persen  inhibisi  dihitung  berdasarkan  hasil pengukuran  absorbansi  larutan  uji.  Hasil  pengukuran  nilai  absorbansi  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl )  dan  sampel  spons Aaptos  aaptos terhadap  radikal  bebas  DPPH  2  ml  dengan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  517  nm  dapat  dilihat  pada  Gambar  1  sebagai berikut.
A. Absorbansi Spektrum UV-Vis DPPH dan spons Aaptos aaptos konsentrasi 25 ppm
B. Absorbansi Spektrum UV-Vis DPPH dan spons Aaptos aaptos konsentrasi 50 ppm
C. Absorbansi Spektrum UV-Vis DPPH dan spons Aaptos aaptos konsentrasi 75 ppm
D. Absorbansi Spektrum UV-Vis DPPH dan spons Aaptos aaptos konsentrasi 100 ppm
Gambar 1 . Absorbansi Spektrum UV-Vis DPPH dan Ekstrak spons Aaptos aaptos
Hasil  penelitian  dengan  pengukuran  aktivitas  antioksidan  pada  larutan  sampel  spons Aaptos aaptos menunjukkan bahwa spons Aaptos aaptos memiliki aktivitas antioksidan disetiap konsentrasi. Kemampuan senyawa antioksidan dalam sampel untuk menangkap radikal bebas dapat dilihat seperti yang disajikan dalam Tabel 1.
Tabel 1 . Hasil Persen Inhibisi Ekstrak spons Aaptos aaptos Konsentrasi (ppm) Pengulangan Rata-rata I II III 25 51,3% 52,6% 53,9% 52,6% 50 74,9% 69,6% 73,0% 72,5% 75 84,7% 81,0% 83,1% 82,9% 100 85,6% 88,5% 88,2% 87,4%

## Pembasahan
Pada  pengujian  aktivitas  antioksidan  dari  spons Aaptos  aaptos ,  larutan  induk  dibuat  dengan konsentrasi 1000 ppm kemudian diencerkan menjadi 4 seri konsentrasi, yakni 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm,  dan  100  ppm  dengan  menggunakan  rumus  pengenceran.  Menurut  penelitian  Rikantara et  al (2022)  penggunaan  konsentrasi  dalam  rentang  yang  luas,  seperti  25,  50,  75,  dan  100  ppm memungkinkan  penilaian  aktivitas  antioksidan  pada  konsentrasi  rendah  hingga  tinggi.  Hal  ini membantu dalam memahami adanya sifat antioksidan dari zat atau ekstrak yang diuji pada berbagai tingkat konsentrasi.
Larutan  sampel  diuji  menggunakan metode  DPPH  yang  efektif  dan  mudah  dikerjakan,  serta dapat menunjukkan potensi dari suatu sampel dengan prinsip mendonorkan satu atom hidrogen pada radikal  bebas  sehingga  DPPH  mengalami  reduksi  dan  menjadi  senyawa  DPPH  non-radikal. Perubahan senyawa radikal DPPH menjadi non-radikal ini ditandai dengan berkurangnya warna ungu pada larutan DPPH dengan disertai penurunan absorbansi yang diukur pada panjang gelombang 517 nm dengan Spektrofotometer UV-Vis. Berdasarkan absorbansi spektrum UV-Vis DPPH dan spons Aaptos  aaptos pada  gambar  1  menjelaskan  hubungan  antara  konsentrasi  dengan  absorbansi  dari ekstrak spons Aaptos aaptos . Dapat dilihat bahwa terdapat penurunan nilai absorbansi DPPH setelah direaksikan  dengan  sampel,  yang  membuktikan  bahwa  telah  terjadi  penghambatan  DPPH  oleh senyawa  di  dalam  sampel  yang  bersifat  antioksidan,  semakin  tinggi  konsentrasi,  maka  semakin rendah  nilai  absorbansi.  Menurut  penelitian  Putri  dan  Najib (2022)  penurunan  nilai  absorbansi tersebut  semakin  besar  seiring  dengan  peningkatan  konsentrasi  sampel.  Nilai  absorbansi  DPPH menunjukkan penurunan absorbansi yang digunakan untuk menghitung nilai persen inhibisi. Persen inhibisi ini diamati pada 4 variasi konsentrasi sampel.
Berdasarkan hasil perhitungan penghambatan radikal DPPH (% inhibisi) ekstrak etanol spons Aaptos aaptos pada tabel 1 menunjukkan bahwa nilai persen inhibisi dari ekstrak etanol spons Aaptos aaptos dengan 4 jenis variasi konsentrasi adalah 52,6% (25 ppm); 72,5% (50 ppm); 82,9% (75 ppm); dan 87,4% (100 ppm) yang membuktikan bahwa ekstrak etanol spons Aaptos aaptos yang diperoleh dari  Pantai  Selatan  kabupaten  Minahasa  memiliki  aktivitas  antioksidan,  dan  aktivitas  antioksidan tertinggi  ada  pada  konsentrasi ekstrak  etanol  100  ppm  dengan  nilai  rata-rata  87,4%  hal ini  karena adanya  pengaruh  konsentrasi  sampel  dengan  persentase  inhibisi,  diketahui  bahwa  peningkatan aktivitas  sebanding  dengan  bertambahnya  konsentrasi  (Zuhra et  al ,  2008).  Ekstrak  etanol  spons Aaptos aaptos dengan konsentrasi yang tinggi memiliki kemampuan meredam radikal DPPH yang lebih tinggi dibandingkan dengan ekstrak etanol dengan konsentrasi yang rendah (Manurung, 2021).
Pada  penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Tongkali et  al (2022)  Uji  Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Aaptos aaptos dari Teluk Manado Sulawesi Utara dengan variasi konsentrasi 10,15, 20 dan 25. nilai % inhibisi rata-rata yang didapat yaitu 77,8% (10 ppm); 81,1% (15  ppm);  84%  (20  ppm);  dan  85,4%  (25  ppm).  Aktivitas  antioksidan  tertinggi  terdapat  pada konsentrasi  25  ppm,  yakni  konsentrasi  tertinggi  dengan  nilai  % inhibisi  rata-rata 85,4%.  Terdapat perbedaan hasil persen inhibisi yang diperoleh, hal tersebut disebabkan karena kandungan senyawa pada  spesies  yang  sama  dapat  dipengaruhi  oleh  adanya  perbedaan  populasi  atau  habitat  karena terdapat perbedaan karakteristik lingkungan laut yang dapat berpengaruh terhadap kehidupan spons. Faktor-faktor  yang  mempengaruhi  kehidupan  spons  antara  lain,  yaitu  ketersediaan  nutrisi, temperatur,  pH,  topografi,  kedalaman  area,  arus  bawah  laut  dan  kekeruhan,  ada  tidak  cemaran sehingga dapat juga mempengaruhi pembentukan zat aktif dari spons (Marzuki, 2018).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  ekstrak  etanol  spons Aaptos  aaptos yang diperoleh  dari  Pantai  Selatan  Kabupaten  Minahasa  memiliki  aktivitas  antioksidan.  Aktivitas antioksidan  tertinggi  didapati  pada  ekstrak  etanol  konsentrasi  100  ppm  dengan  nilai  rata-rata  % inhibisi 87,4%.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  dengan  menggunakan  beberapa  konsentrasi  dan  juga metode lain seperti metode FRAP ( Ferric Reducing Antioxidant Power ) dan ABTS ( 2,2-azinobiz 3- etyl benzothiazoline 6-sulfonic acid ) supaya hasilnya bisa dibandingkan dengan hasil dari penelitian ini.  Serta  lebih  lagi  dilakukan  penelitian  terhadap  senyawa  yang  berperan  dalam  hal  ini  aktivitas antimikroba pada spons Aaptos aaptos .

## DAFTAR PUSTAKA
Activities  of  Marinesponge  Diversity  at  Pecaron  Bay  Pasir  Putih  Situbondo  East  Java,  Indonesia.
Journal of Pharmacy Research . 685-689.
Almurdani, M., Jose, C., Teruna, H.Y. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Ekstrak Akar Tanaman Amaranthus spinosus . Jurnal Indonesian Chemia Acta . 4 (1) :7-11.
Chintya Dwi Indah Putri, Sarah Zielda Najib. 2022. Uji Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas pada Ekstrak  Etanol  Daun  Kersen  ( Muntingia  Calabura L.)  di  Bangkalan. Indonesian  Journal Pharmaceutical and Herbal Medicine (IJPHM) . (1) 2 : 66-71.
Cut  Fatimah  Zuhra,  Juliati  Br.  Tarigan,  Herlince  Sihotang.  2008.  Aktivitas  Antioksidan  Senyawa Flavonoid  dari  Daun  Katuk  ( Sauropus  androgunus (L)  Merr.). Jurnal  Biologi  Sumatera, Departemen Kimia FMIPA , USU 3 (1) : 7-10
Fitriawati Tongkali., Adithya Yudistira, Elly Suoth. 2022. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Aaptos aaptos dari Teluk Manado Sulawesi Utara. Jurnal Pharmacon , Program Studi Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam  Ratulangi, 11
(1) :1279-1284.
Fika Seta Rikantaraa, Marsah Rahmawati Utamia, Ahsanal Kasasiaha. 2022. Aktivitas Antioksidan Kombinasi  Ekstrak  Daun  Sirsak  ( Annona  muricata L.)  dan  Ekstrak  Daun  Pepaya  ( Carica papaya L.) dengan Metode DPPH. LUMBUNG FARMASI ; Jurnal Ilmu Kefarmasian ,Vol 3 No 2: 124-133 Hayatul  Rahmi.  2017 .  Review  :  Aktivitas  Antioksidan  dari  Berbagai  Sumber  Buah-buahan  di Indonesia .  Program  Studi  Agroteknologi  Fakultas  Pertanian;  Universitas  Singaperbangsa Karawang.
Kadar, A. 2015.  Pengelolaan Kemaritiman Menuju Indonesia sebagai Poros Maritim Dunia. Jurnal Keamanan Nasional . Lembaga Concern ( Consultancy and Research ) 3(1) : 427.
Manurung, H. 2021. Tabat Barito (Ficus deltoidea Jack): Kajian Budidaya Kandungan Metabolit Sekunder Bio-Aktivitas Prospek Fitofarmakologis . Deepublish.
Marzuki, I. 2018. Eksplorasi Spons Indonesia: Seputar Kepulauan Spermonde. Makassar : Nas Media Pustaka.
Trianto et al . 2016. Study on Anticancer Activity of Extracts of Sponges Collected from Biak Water, Indonesia. IOP Publishing Series: Earth and Environmental Science .