## DAYA HAMBAT PROPOLIS TERHADAP BAKTERI
Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Arum Lintang Dyah Lestari *1 , Noverita 2 , Atna Permana 3
1,2,3 Pendidikan Biologi Medik, Universitas Nasional, Rumah Sakit Haji, Jakarta
* Corresponding author: bintangkejora120982@gmail.com

## Abstract
The  increase  in  diseases  caused  by  bacteria  followed  by  an  increase  in  bacterial  resistance  to  synthetic antibiotics  has  prompted  research  on  alternative  antibacterial  producing  drugs.  Propolis  is  one  of  the components  of  honey,  which  is  an  adhesive  substance  collected  by  worker  bees  from  shoots,  twigs  and  leaves that  produce  sap.  propolis  is  known  to  contain  bacteriostatic,  bactericidal,  fungistatic,  and  fungicidal antimicrobial compounds. Propolis contains a number of compounds such as resins, flavonoids, phenols, waxes, fatty acids, essential oils, pollen, minerals and vitamins.This study aims to determine the effect of propolis on the growth of Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria at different concentrations. Antibacterial activity testing was carried out by the agar diffusion test method according to Kirby - Bauer by observing the inhibition zone  of  the  growth  of  the  tested  bacteria  as  a  parameter.  The  research  design  used  was  factorial  completely randomized design (CRD). The results showed that there was an effect of treatment on the growth of S. aureus bacteria colonies with the best concentration value of 90%, while the E. coli bacterial colonies did not show the effect  of  concentration  treatment  on  the growth  of  these  bacterial  colonies.  based  on  statistical  tests  using  the LSD  test  for  the  effectiveness  of  propolis  concentrations  in  E.  coli  bacteria  showed  that  propolis  with  a concentration  of  10%  was  not  significantly  different  from  the  concentrations  of  30%,  50%,  70%  and  90%. whereas  the  LSD  test  for  the  effectiveness  of  propolis  concentration  in  S.aureus  bacteria  showed  that  the propolis  concentration  of  10%  was  not  significantly  different  from  the  propolis  concentration  of  30%,  but significantly different from the propolis concentration of 50%, 70% and 90%.
Keywords: antibiotic, Escherichia coli, propolis, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Masalah kesehatan masyarakat sampai  saat  ini  masih  menjadi  perhatian bagi  pemerintah.  Kesadaran  masyarakat akan  pentingnya  kesehatan  masih  rendah, akibat  perilaku  masyarakat  dan  kondisi lingkungan  yang  tidak  memperhatikan kesehatan  (Jurnal kesehatan, 2012).
Penyakit  infeksi  merupakan  satu kumpulan jenis-jenis penyakit yang mudah menyerang anak-anak yang disebabkan  oleh  infeksi  virus,  infeksi bakteri,  dan  infeksi  parasit.  Penyakit infeksi  merupakan  salah  satu  masalah kesehatan  yang  paling  utama  di  negara-
negara  berkembang  termasuk  Indonesia. Berdasarkan  Survei  Kesehatan  Rumah Tangga  Tahun  2007,  penyebab  utama kematian  antara  lain  28,1  %  disebabkan oleh  penyakit  infeksi  dan  parasit,  18,9  % disebabkan  oleh  penyakit  vaskuler,  dan 15,7% disebabkan oleh penyakit pernapasan (Noor, 2015).
Penggunaan  obat  yang  tidak  rasional merupakan salah satu masalah kesehatan di Indonesia  khususnya  di  Rumah  Sakit.  Hal tesebut  tidak  hanya  menimbulkan  efek yang  merugikan  secara  klinik,  yakni menimbulkan  seleksi  kuman  resisten, penggunaan  antibiotik  yang  tidak  bijak
juga  menimbulkan  masalah  berupa  infeksi nosokomial  khususnya  oleh  kuman  yang resisten terhadap beberapa antibiotik sekaligus. Penyakit infeksi yang disebabkan  oleh  bakteri  yang  gagal berespon terhadap pengobatan mengakibatkan perpanjangan penyakit ( prolonged  illness ),  meningkatnya  resiko kematian  ( greater  risk  of  death )  dan semakin  lamanya  masa  rawat  inap  di rumah sakit ( length of stay ). Ketika respon terhadap  pengobatan  menjadi  lambat bahkan  gagal,  pasien  menjadi  infeksius untuk  beberapa waktu  yang lama ( carrier ) (Humaida, 2014).
Untuk mengatasi resistensi ini, muncullah  antibiotika  yang  lebih  baru  dan lebih  efektif  untuk  mengatasi  bakteri  ini, yang  biasanya  lebih  mahal.  Beberapa alternatif  pengobatan  kemudian  dipilih, biasanya  yang  lebih  murah  dan  lebih mudah  dijangkau  masyarakat,  misalnya pengobatan  tradisional  dari  bahan  herbal (Halim et al. , 2012).
Di negara berkembang, seperti Indonesia  penggunaan  obat  herbal  telah dilakukan  secara  turun  temurun.  Banyak faktor-faktor yang dapat mendorong peningkatan  penggunaan  obat  herbal  pada negara  maju,  diantaranya  adalah  ingin memiliki harapan hidup yang lebih panjang, disamping  itu  juga  tiap  tahun  obat  herbal semakin  luas  bagi  kita  untuk  mengakses informasinya (Sumayyah et al ., 2017).
Propolis  adalah  salah  satu  bahan biologis  dari  obat  tradisional  yang  telah terkenal sejak zaman dahulu kala. Diantara abad  ke-7  dan  ke-20,  obat  ini  menjadi sangat terkenal di Eropa karena khasiatnya sebagai  anti  bakterial  Para  ahli  obat tradisional  modern  mengatakan  bahwa propolis  juga  sebagai  anti  bakteri,  anti jamur,  anti  virus,  hepatoprotektiv  dan berkhasiat pula sebagai anti radang, karena dapat meningkatkan ketahanan tubuh alami terhadap  beberapa  infeksi  serta  untuk mengobati  ulcus  gastroduodenal.  Sebagai obat luar, propolis juga dapat menyembuhkan dermatitis
yang disebabkan oleh bakteri dan jamur. Sampai sekarang  propolis  digunakan  sebagai  obat yang layak pakai dan dalam bentuk kapsul (baik  dalam  bentuk  asli  atau  dicampur dengan  glue  gell  dan  rosa  canina  atau pollen),  sebagai  ekstrak  (hydroalkoholic atau  glycolic),  sebagai  obat  kumur  (bila dicampur  dengan  melissa,  sage,  mallow) sebagai  obat  pelega  tenggorokan,  kream, dan dalam bentuk bedak (digunakan dalam bentuk  gargles  atau  untuk  obat  dalam  jika dilartukan dalam air). (Susilo et al ., 2009). Menurut Bankova (2000), propolis mengandung  senyawa  antimikroba  yang bersifat bakteriostatik (menghambat pertumbuhan bakteri) dan senyawa bakterisida  (membunuh  bakteri),  senyawa fungistatik (menghambat pertumbuhan
Arum Lintang Dyah Lestari et al. : Daya Hambat Propolis terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
kapang dan khamir) dan fungisida (membunuh khamir dan kapang).
Khasiat  propolis  terus  dikembangkan oleh  para  peneliti  secara  mendalam. Propolis  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  Gram  positif S.  aureus yang merupakan  bakteri  dengan    kemampuan terbesar  menimbulkan  penyakit  (patogen)
dibandingkan dengan spesies Staphylococus lainnya (Silichi & Kaftanoglu, 2003).
Staphylococcus aureus merupakan salah satu  genus  dari Staphylococcus yang bersifat  patogen  utama  bagi  manusia. Bakteri  ini  merupakan  bentuk  koagulase positif,  hal  ini  membedakannya  dari spesies Staphylococcus lainnya  karena koagulase negatif ( S.epidermidis, S.warneri,  S.hominis dan  spesies  lainnya) merupakan  flora  normal  manusia  dan jarang menyebabkan infeksi. (Yusuf et al ., 2015).
Escherichia  coli adalah  salah  satu bakteri  enterik  dan  anggota  flora  usus normal.  Bakteri  ini  pada  umumnya  tidak menyebabkan  penyakit  dan  di  dalam  usus berperan  terhadap  fungsi  dan  nutrisi normal.  Bakteri  menjadi  bersifat  patogen apabila  berada  di  luar  usus,  yaitu  lokasi normal  tempatnya  berada  atau  di  lokasi lain  dimana  flora  normal  jarang  terdapat (Yusuf et al. , 2015).
Pada  penelitian  ini  peneliti  mencoba untuk  mengetahui  efek  antibakteri  dari
propolis  “Melia  Nature”  terhadap  kuman Staphylococcus  aureus dan Escherecia coli, yaitu  dengan cara  melihat perbedaan daya hambat bakteri dari propolis terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus secara in vitro.

## METODE PENELITIAN
Metode penelitian dalam penelitian ini  adalah  eksperimen  kuantitatif  dengan tiga  kali  pengulangan  untuk  mengetahui perbedaan  daya  hambat  bakteri  propolis cair  yang  ada  di  pasaran  merk  Melia Nature  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus secara in vitro.

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat yang digunakan selama penelitian  adalah:  Ose,  rak  dan  tabung reaksi,  gelas  kimia  250  mL,  labu Erlenmeyer,  gelas  ukur  25  mL,  labu  ukur 100  mL,  timbangan,  autoklaf,  inkubator, spektrofotometer,  kuvet,  oven,  kompor listrik,      batang  pengaduk,  bunsen,  karet penghisap, pipet ukur 1 mL, 5 mL, 10 mL, pipet volume 1 mL, corong, penangas air, mikropipet, yellow tipe .
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah:  biakan  murni S. aureus dan E.  coli yang  bersumber  dari bahan  klinik  (pasien)  yang  diperoleh  di Laboratorium  Klinik  RSUD  Koja  Jakarta Utara.  Propolis  yang  diperoleh  berasal dari  Propolis  Melia  Nature,  kapas, akuadest  steril,  tisu,  kertas  saring,  kasa,
larutan  BaCl 2, larutan  H 2 SO 4, media Muller  Hinton  Agar , antibiotik  Ampicilin 10 µg, cakram steril.
Cara  kerja  dari  penelitian  ini  adalah sebagai berikut :
a. Persiapan
Sebelum  mulai  bekerja  terlebih dahulu  dilakukan  sterilisasi  alat  dalam oven  selama  2  jam  pada  suhu  180 O C  dan media  yang  sudah  jadi  disterilisasikan dalam  autoklaf  pada  suhu  121 O C,  tekanan 1,5 atm selama 15 menit.
b. Pembuatan Nutrien Broth
Ditimbang  media  Nutrien  Agar sebanyak 4,0 g lalu dilarutkan dengan 250 mL  aquadest  dalam  labu  Erlenmeyer  250 mL,  kemudian  media  dihomogenkan  dan dimasak hingga mendidih, media dipindahkan dalam tabung reaksi sebanyak ± 10 mL lalu mulut tabung ditutup dengan kapas. Media disterilisasi di dalam autoklaf 121 0 C  selama  15  menit,  kemudian  media didinginkan  dalam  posisi  miring  dan  siap dipakai.
c. Pembuatan Natrium Klorida 0,9 %
Ditimbang  media  sebanyak  0,9  g, lalu  dimasukan  ke  dalam  labu  Erlenmeyer 100  mL  dan  dilarutkan  dengan  100  mL akuadest.  Larutan  dihomogenkan  dan mulut  labu  Erlenmayer  ditutup  dengan kapas.  Kemudian  Larutan  NaCl  0,9% disterilkan    di  dalam  autoklaf  121 O C,  1,5 atm selama 15 menit. Larutan dipindahkan ke dalam tabung reaksi sebanyak ± 10 mL.
Disimpan  di  lemari  es  jika  digunakan dalam waktu lama.
d. Pembuatan  media  Muller  Hinton  Agar (MHA)
Ditimbang  media  MHA  sebanyak  19 g, 2,5 g Bacto Agar, lalu dilarutkan dengan 500  ml  akuadest  lalu  dipanaskan  hingga mendidih. Larutan disterilkan dalam autoklaf  pada  suhu  121 O C,  tekanan  1  atm selama  15  menit  dan  didinginkan  hingga suhu 45 O C. Larutan yang telah didinginkan dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  steril dan dibiarkan hingga mengeras.
e. Pembuatan  Standart  Mc  Farland  0,5- 0,8
Disediakan  10  tabung  yang  bersih dan  steril  dengan  ukuran  yang  sama, kemudian  dibuat  larutan  H 2 SO 4 1%  dan BaCl 2 1%, kedua jenis larutan ini dicampur di  dalam  tabung  yang  telah  ditentukan. Masing-masing  mulut  tabung  ditutup dengan  kapas.  Suspensi  BaSO 4 yang terdapat dalam tabung diperkirakan kekeruhannya  dengan  jumlah  bakteri/mL yang terdapat dalam suspensi kuman dalam NaCl 0,9% (Tabel 1).
f. Persiapan Mikroba Uji
Ke  dalam  sebuah  tabung  reaksi  yang bersih, kering dan steril diiisi 10 mL media Nutrient  Broth.  Kemudian  ke  dalamnya dimasukkan  1  koloni  mikroba  yang terpisah  lalu  dicampur  hingga  homogen. Diinkubasi  selama  18-24  jam  pada  suhu 37 O C.
Arum Lintang Dyah Lestari et al. : Daya Hambat Propolis terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Tabel 1. Pembuatan Standar Mc. Farland
No. Tabung BaCl 2 1% (mL) H 2 SO 4 1% (mL) Kepadatan (x 10 8 ) Abs 1 0,1 9,9 3 0,11 2 0,2 9,8 6 0,27 3 0,3 9,7 9 0,40 4 0,4 9,6 12 0,58 5 0,5 9,5 15 0,74 6 0,6 9,4 18 0,80 7 0,7 9,3 21 0,90 8 0,8 9,2 24 1,00 9 0,9 9,1 27 1,10 10 1,0 9,0 30 1,20 g. Pembuatan Konsentrasi Propolis
Pembuatan konsentrasi propolis dimulai  dari  konsentrasi  terkecil  hingga konsentrasi terbesar sehingga dapat diketahui  zona hambat  yang dibentuk  oleh zat  antibakteri  di  dalam  propolis  terhadap bakteri uji pada   konsentrasi yang berbeda. Konsentrasi  propolis  yang  digunakan adalah  10%,  30%,  50%,  70%,  90%. Berikut  adalah  tabel  pengenceran  ekstrak propolis ( Tabel 2 ).
Uji  Daya  Hambat  Metode  Agar Difusi Kirby Bauer . Disiapkan agar Muller Hinton  pada  suhu  ruangan  dan  permukaan agar    kering.  Disiapkan  inokulum  0,5  Mc. Farland
(dibuat  baru  dari  4-6  koloni  dalam  2  mL NaCl fisiologis, digunakan tidak lebih dari 15 menit). Swab steril dicelupkan ke dalam inokulum  bakteri,  angkat  swab  kemudian diatas  suspensi  inokulum  pada  sisi  tabung putar  swab  dengan  sedikit  ditekan  agar tidak berlebih.  Swab digoreskan pada agar Muller  Hinton  dengan  memutar  agar sekitar  60  derajat  2  sampai  3  kali  untuk
memastikan seluruh permukaan agar tergores. Swab diputar pada pinggiran agar untuk  mengambil  kelebihan  suspense bakteri  pada  sekeliling  cawan  petri. Cakram antibiotik diletakkan pada permukaan  agar  yang  telah  ditanami bakteri dengan memperhatikan jarak penyimpanan  cakram.  Dapat  dilakukan menggunakan pinset steril .

## D. Pengujian Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan  metode  difusi  cara Kirby  Bauer . Metode ini dapat dipakai untuk menentukan  secara  cepat  efekasi  obat dengan mengukur diameter zona hambatan yang dibentuk sebagai hasil difusi agen ke dalam  media  yang  mengelilingi  cakram. Filter  cakram  berukuran  sama  yang  telah ditetesi  antibiotik  dengan  konsentrasi tertentu, diletakkan di atas permukaan agar cawan  yang  telah  diinokulasi  dengan mikroba  uji.  Media  yang  dipakai  adalah Mueller  Hinton  Agar  dengan  pH  7,2  -7,4 yang  dituangkan  ke  dalam  cawan  hingga ketebalan 5mm, lalu setelah padat disimpan
Desa Ciburial
Tabel  2. Pembuatan  Berbagai  Konsentrasi Propolis
dalam  refrigerator  Berikut  ini  skema  cara kerja  pengujian  aktivitas  antibakteri  pada propolis terhadap bakteri uji.

## Rancangan dan Analisis Data
Uji  aktivitas  anti  bakteri  ekstrak propolis, hasilnya dianalisis dengan menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  faktorial  dengan  menggunakan  dua faktor. Faktor pertama adalah 2 (dua) jenis bakteri  uji  yaitu Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli ,  sedangkan  faktor kedua  adalah  konsentrasi  ekstrak  propolis yang  terdiri  dari  5  (lima)  jenis  konsentrasi yaitu  10%,30%,50%,70%,  90%.  Sebagai kontrol positif digunakan antibiotik Amphycilin konsentrasi 10 µg dan sebagai kontrol  negatif  digunakan  cakram  steril, masing-masing dilakukan tiga kali ulangan.
Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat dari setiap bakteri dianalisis secara sidik  ragam  ( Analisis  of  Variance = ANOVA).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian aktivitas antibakteri propolis dilakukan terhadap bakteri
S.aureus (Gram  positif)  dan E.coli (Gram negatif) secara in vitro menggunakan difusi cakram.  Terbentuknya  zona  bening  di sekitar koloni bakteri menunjukkan adanya penghambatan  pertumbuhan  bakteri  uji. Zona  penghambatan  bakteri  dinyatakan dalam  millimeter  (mm)  yang  diukur  dari zona  bening  yang  terbentuk.  Semakin  luas zona  bening  menunjukkan  semakin  tinggi aktivitas antibakteri propolis. Hasil pengamatan uji aktivitas antibakteri propolis  terhadap  kedua  jenis  bakteri  uji ditampilkan pada Tabel 3.
Efektifitas antibakteri propolis diduga  berhubungan  dengan  senyawa antibakteri yang terdapat di dalam propolis. Senyawa  aktif  yang  terkandung  di  dalam propolis mampu menghambat pertumbuhan S.aureus ( Tabel 2 ) dibandingkan E. coli berdasarkan kepekaan bakteri  uji,  maka  dapat  dikatakan  bahwa jenis bakteri turut mempengaruhi besarnya zona hambat yang dibentuk oleh propolis. Sifat antibakteri propolis disebabkan karena  beberapa  mekanisme,  antara  lain: menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan mencegah  pembelahan  sel,  disorganisasi sitoplasma,  membran  sel  dan  dinding  sel bakteri,  menyebabkan  bakteriolisis  parsial, menghambat  sintesis  protein  (Bankova  & Popova, 2007). Propolis diketahui mengandung senyawa yang bersifat antibakteri  yaitu  flavonoid  dan  tannin (Fatoni, 2008). No Tabung Volume ekstrak propolis (mL) Volume akuade st (mL) Konsentra si akhir (%) 1 0,1 0,9 10% 2 0,3 0,7 30% 3 0,5 0,5 50% 4 0,7 0,3 70% 5 0,9 0,1 90%
Arum Lintang Dyah Lestari et al. : Daya Hambat Propolis terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Tabel 3. Zona Hambat Pertumbuhan Bakteri Uji Oleh Propolis
Jenis Bakteri Jenis Perlakuan Rataan Zona Hambat ( mm) S.aureus Kontrol Positif : Ampicillin 10 µg Kontrol Negatif : Aquades Steril Konsentrasi 10% Konsentrasi 30% Konsentrasi 50% Konsentrasi 70% Konsentrasi 90% 6,0 31,33 6.27 6,97 7,43 8,03 8,33 E. coli Kontrol Positif : Ampicillin 10 µg Kontrol Negatif : Aquadest steril Konsentrasi 10% Konsentrasi 30% Konsentrasi 50% Konsentrasi 70% Konsentrasi 90% 6,0
25,67 6,0 6,0
6,0 6,0 6,0
Antibakteri  golongan  flavonoid  mampu menghambat protein kinase yang digunakan  untuk  proliferasi  sel.  Jika protein  kinase  ini  dihambat,  proses fisiologi  sel  pun  terhambat  sehingga  sel melakukan apoptosis.
Para  peneliti  menyatakan  pendapat yang  berbeda-beda  sehubungan  dengan mekanisme  kerja  dari  flavonoid  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri,  antara lain bahwa flavonoid menyebabkan terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel bakteri, mikrosom, dan lisosom sebagai hasil  interaksi  antara  flavonoid  dengan DNA  bakteri,  sementara  Mirzoeva et  al. (1997)  dalam  penelitiannya  mendapatkan bahwa  flavonoid  mampu  melepaskan energi tranduksi terhadap membran sitoplasma bakteri selain itu juga menghambat  motilitas  bakteri.  Mekanisme yang  berbeda  dikemukakan  oleh  Di  Carlo et al. (1999) dan Estrela et al. (1995), yang menyatakan  bahwa  gugus  hidroksil  yang terdapat  pada  struktur  senyawa  flavonoid
menyebabkan perubahan komponen organik dan transpor nutrisi  yang akhirnya akan mengakibatkan timbulnya efek toksik terhadap bakteri (Sabir, 2005)
Senyawa  lain  yang  diketahui  bersifat sebagai  antibakteri  adalah  tannin.  Tanin merupakan  salah  satu  jenis  senyawa  yang termasuk ke dalam golongan polifenol dan memiliki  sifat  larut  dalam  air  dan  pelarut organik  yang  banyak  dijumpai  pada tumbuhan (Makkar &Becker, 2003). Tanin secara umum didefinisikan sebagai senyawa  polifenol  yang  memiliki  berat molekul  (BM)  cukup  tinggi  (lebih  dari 1000)  dan  dapat  membentuk  kompleks protein.  Berdasarkan  strukturnya,  tanin dibedakan  menjadi  dua  kelas,  yaitu  tanin terkondensasi dan tanin terhidrolisis. Tanin terkondensasi  menghasilkan  asam  klorida, kebanyakan terdiri dari polimer flavonoid.
Tanin dapat digunakan sebagai antibakteri karena mempunyai gugus fenol, yaitu  bersifat  antiseptik  yang  dapat digunakan  sebagai  komponen  antibakteri
(Naim,  2004).  Tanin  diduga  berperan sebagai antibakteri karena memiliki kemampuan membentuk senyawa kompleks  dengan  protein  melalui  ikatan hidrogen,  jika  terbentuk  ikatan  hidrogen antara  tanin  dengan  protein  kemungkinan protein  sel  bakteri  akan  terdenaturasi sehingga  metabolisme  bakteri  menjadi terganggu (Makkar & Becker, 2003).
Data  pada Tabel  2 dan Gambar  2 menunjukkan adanya pengaruh zat antibakteri  yang  terkandung  di  dalam propolis  terhadap salah satu  koloni bakteri uji  yaitu S.aureus (Gram  positif).  Rataan zona  hambat  pertumbuhan S.aureus oleh propolis  berkisar  antara  6,27  mm  hingga 8,33 mm, sedangkan zona hambat pertumbuhan S.aureus yang  dibentuk  oleh ampicillin  10  µg  (kontrol  positif)  dan aquadest  steril  (kontrol  negatif)  masing- masing  sebesar  31,33  mm  dan  6,0  mm (tidak terbentuk zona hambat).
Rataan  zona  hambat  pertumbuhan S.aureus lebih  besar  dibandingkan  dengan rataan  zona  hambat  pertumbuhan E.coli, berdasarkan  data  tersebut  dapat  dikatakan propolis  lebih  efektif  terhadap S.  aureus (Gram positif) dibandingkan dengan E.coli (Gram negatif). Adanya perbedaan
komposisi dinding  sel antara kedua bakteri uji menyebabkan perbedaan respon terhadap pemberian     propolis pada kedua bakteri    tersebut.  Menurut  Jawetz  (2005); Schaffer  dan  Lee  (2008);  kepekaan  pada
bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif terhadap  zat  antibakteri  tergantung  pada perbedaan struktur dinding selnya.
Rataan  zona  hambat  pertumbuhan E.coli oleh  propolis  adalah  6,0  mm  (tidak terbentuk  zona  hambat),  sedangkan  zona hambat  yang  dibentuk  oleh  Ampicillin  10 µg  dan  aquadest  steril  masing-masing sebesar  25,67  mm  dan  6,0  mm  (tidak terbentuk  zona  hambat)  yang  ditampilkan pada Gambar 7. Perlakuan terhadap bakteri uji E. coli tidak menunjukkan adanya zona hambat  dengan  rataan  sebesar  6,0  mm (sama  dengan  kontrol  negatif).  Zona hambat  yang  terbentuk  akibat  pengaruh propolis  terhadap  bakteri S.  aureus tidak memiliki  pengaruh  yang  signifikan  bila dibandingkan  dengan  zona  hambat  yang terbentuk  akibat  pengaruh  Ampicillin. Aktivitas antibakteri propolis lebih disebabkan  komposisi  dari  propolis  yang digunakan.  Komposisi  propolis  sendiri sangat  dipengaruhi  oleh  jenis  dan  umur tumbuhan,  iklim  dan  waktu  dimana propolis tersebut diperoleh (Sabir, 2005).
Bakteri  mengandung  sejumlah  besar lipoprotein,  lipopolisakarida  dan  lemak. Adanya        lapisan-lapisan       dinding       sel pada  bakteri    tersebut    mempengaruhi aktivitas    kerja  dari  zat  antibakteri. Pertumbuhan zat antibateri dapat terganggu    oleh    komponen    fenol.    Fenol memiliki kemampuan untuk mendenaturasikan  protein    dan    merusak
Arum Lintang Dyah Lestari et al. : Daya Hambat Propolis terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
membran  sel.  Menurut Purwanti   (2007), mekanisme    kerja  senyawa  tannin  dan fenol  dalam  menghambat  sel    bakteri, yaitu  dengan  cara  mendenaturasi protein sel        bakteri,        menghambat        fungsi selaput sel (transport zat dari satu sel ke sel lain)  yang  menghambat  sintesis  asam nukleat  sehingga  pertumbuhan  bakteri dapat terhambat.
Perbedaan zona hambat dari berbagai ekstrak  propolis  karena  adanya  perbedaan konsentrasi  flavonoid  terhadap  masing- masing media biakan, sehingga menyebabkan perbedaan kemampuan dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri (Hidayat et al. , 2012).
Menurut  Pelczar  &  Chan  (2006); Pratiwi  (2008), S.  aureus yang  tergolong bakteri  Gram  positif memiliki sekitar 50% peptidoglikan  (murein)  lapis  tunggal  yang membentuk  struktur  tebal  dan  kaku,  dan asam  teikoat  yang  mengandung  alkohol (gliserol  atau  ribitol)  dan  fosfat  sebagai komponen  utama  dinding  sel,  kandungan lipida  rendah  (sekitar  1  hingga  4%),  serta memiliki susunan dinding sel yang kompak. Bakteri  Gram  positif  memiliki  dinding  sel dengan lapisan peptidoglikan yang terletak di  bagian  membran  luar  lebih  tebal dibandingkan dengan bakteri Gram negatif. Lapisan  peptidoglikan  yang  tebal  tersebut menyebabkan  bakteri  Gram  positif  lebih peka terhadap pemberian antibakteri.
Bakteri E.coli yang  termasuk  ke  dalam bakteri Gram negatif memiliki dinding   sel dengan  komposisi  peptidoglikan  sekitar 10%    dari  berat  kering  sel  dilengkapi dengan  lipopolisakarida  dan  protein  (asam lemak yang dirangkaikan dengan polisakarida),  tidak  terdapat  asam  teikoat, kandungan  lipida  tinggi  sekitar  11-22%) serta  memiliki  susunan  dinding  sel  yang tidak  kompak  namun  lebih  kompleks apabila dibandingkan dengan bakteri Gram positif.  Bakteri  Gram  negatif  memiliki lapisan  peptidoglikan  yang  terletak  di bagian  membran  periplasma,  yaitu  suatu membran yang terdapat diantara  membran plasma (dalam) dan membran luar. Bagian luar  tersusun  atas  lapisan  lipopolisakarida (LPS)  tebal  yang  merupakan  bentuk pertahanan  bakteri  Gram  negatif  terhadap zat-zat asing, termasuk senyawa antibakteri (Pratiwi,  2008;  Pelczar  dan  Chan,  2006). Hal  tersebut  di  atas  yang  menyebabkan bakteri E.  coli tahan  terhadap  senyawa fenolik  yang  merupakan  penyusun  dari flavonoid pada propolis  (Radiati, 2002).
Pengaruh Konsentrasi Propolis Terhadap Bakteri Uji Hasil pengamatan uji aktivitas antibakteri  propolis  dengan  konsentrasi yang berbeda terhadap bakteri uji S. aureus menunjukkan  adanya  pengaruh perlakuan terhadap pertumbuhan pada koloni bakteri tersebut.
Zona hambat propolis terhadap E. coli
Kontrol negatif (akuades steril) Kontrol positif  (Ampicillin)
Kontrol negatif (akuades steril) Kontrol positif (Ampicilin)
Zona hambat propolis terhadap E. coli
Gambar 1. Zona Hambat Propolis terhadap E. coli Sumber: Lestari et al. (2020)
Kontrol negatif (Akuades steril)
Kontrol positif (Ampicillin) Zona hambat propolis terhadap S. aureus

## Kontrol Positif (Ampicillin)
Zona hambat propolis terhadap S.aureus
Kontrol negatif (Akuades steril)
Gambar 2. Zona Hambat Propolis terhadap S. aureus Sumber: Lestari et al. (2020)
Arum Lintang Dyah Lestari et al. : Daya Hambat Propolis terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Pada  bakteri  uji E.coli tidak  menunjukkan adanya pengaruh perlakuan dengan konsentrasi propolis yang berbeda.
Rataan  zona  hambat  pertumbuhan propolis dengan variasi konsentrasi propolis 10%, 30%, 50%%, 70%, dan 90% termasuk  perlakuan  dengan  ampicillin  10 µg dan aquadest steril terhadap pertumbuhan  kedua  koloni  bakteri  uji tersaji seluruhnya pada Gambar 3 .
Data  yang  ditampilkan  pada  Gambar  3 menunjukkan  terjadinya  peningkatan  zona hambat  terhadap  bakteri S.  aureus sejalan dengan  peningkatan  konsentrasi  propolis. Rataan  zona  hambat  terkecil  (6,27  mm) dihasilkan  dari  perlakuan  menggunakan propolis  dengan  konsentrasi  10%  dan rataan  zona  hambat  terbesar  (8,33  mm) dibentuk  oleh  perlakuan  menggunakan propolis dengan konsentrasi 90%.
Berdasarkan perbedaan pengaruh konsentrasi  propolis  sebagai  perlakuan, pada  bakteri  uji S.  aureus (Gram  positif)
maka  dapat  dikatakan  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  propolis  yang  diberikan akan  semakin  besar  pula  zona  hambat pertumbuhan  bakteri  uji  yang  terbentuk. Zona  hambat  pertumbuhan  bakteri  uji semakin besar seiring bertambahnya konsentrasi  propolis.  Tetapi  lain  halnya pada  bakteri  uji E.  coli (Gram  negatif), dimana tidak terdapat pengaruh konsentrasi propolis mulai dari konsentrasi terendah (10%) hingga konsentrasi tertinggi (90%).
Penelitian  ini  memperlihatkan  bahwa jenis  bakteri  uji  dapat  mempengaruhi aktivitas  antibakteri,  disamping  adanya pengaruh  konsentrasi  zat  (propolis)  yang ditujukkan  melalui  pembentukan  zona hambat.  Ada  beberapa  hal  yang  perlu diperhatikan  yang  menyebabkan  variasi zona  hambatan,  antara  lain  :  kemampuan dan  laju  difusi  antibiotik  ke  dalam  media dan     interaksinya     dengan    mikroba uji,
Gambar 3. Diagram batang rata zona hambat berbagai jenis perlakuan terhadap bakteri uji
jumlah  mikroba  yang  diinokulasikan,  laju pertumbuhan mikroba uji, tingkat kerentanan mikroba uji terhadap antibiotik (Sunatmo, 2009).
Standar  antibiotika  Ampicillin  10µg membentuk zona hambat terhadap pertumbuhan  kedua  koloni  mikroba  uji. Rataan  zona  hambat  yang  dibentuk  oleh Ampicillin  10  µg  terhadap E.  coli adalah sebesar 25,67 mm, dan rataan zona hambat yang  dibentuk S.aureus adalah  sebesar 31,33  mm.  Berdasarkan  data  tersebut diketahui  bahwa  daya  antibakteri  yang terkandung  dalam  propolis  tidak  efektif jika dibandingkan dengan standar antibiotika Ampicillin 10 µg.
Suatu  bahan  antibakteri  alami  yang terkandung  di  dalam  tumbuhan  dapat dikatakan efektif apabila dalam konsentrasi rendah,  zat  /bahan  tersebut  mampu menghambat pertumbuhan bakteri sebanding  dengan  kemampuan  antibakteri standar antibiotika yang digunakan. Dalam penelitian  ini  diketahui  bahwa  propolis pada  konsentrasi  minimum  (10%)  hanya mampu  menghambat  bakteri S.aureus
(Gram positif) saja, yang apabila dibandingkan dengan daya hambat
antibiotika  Ampicillin  tidak  menunjukkan adanya kesetaraan.
Kontrol Ampicilin berpengaruh terhadap  kedua  jenis  bakteri,  baik  Gram positif  maupun  Gram  negatif    aktivitas
penghambatannya  dalam  kategori  kuat. Ampicillin    merupakan  turunan  dari penicillin  yang  mempunyai  spektrum  luas (dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Gram positif dan Gram negatif) mekanisme  kerjanya  menghambat  sintesis dinding  sel  bakteri  (Mycek  dkk.,1997). Bagi  bakteri,  dinding  sel  sangat  berperan dalam  pertumbuhan  dan  perkembangan. Komponen  utama  dinding  sel  bakteri adalah  peptidoglikan.  Ampicillin  akan menghambat tahap akhir/sintesis peptidoglikan  sehingga  dinding  sel  tidak bisa  terbentuk  dengan  cara  berikatan dengan  pada  enzim  DD-transpeptidase yang memperantarai dinding peptidoglikan bakteri sehingga akan melemahkan dinding sel bakteri. Hal ini mengakibatkan sitolisis karena ketidakseimbangan tekanan osmosis,  serta  pengaktifan  hidrolase  dan autolysis yang mencerna dinding peptidoglikan yang sudah terbentuk sebelumnya. Dengan menghambat perkembangan  dinding  sel,  sel  bakteri tersebut akan menjadi lemah dan kemungkinan besar mengalami penghancuran (lisis) sel.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  pembahasan  di  atas,  maka simpulan  dalam  artikel  ini  adalah  sebagai berikut. Propolis hanya memiliki kemampuan  menghambat  pertumbuhan
Arum Lintang Dyah Lestari et al. : Daya Hambat Propolis terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
(antimikroba) koloni S. aureus,
Sedangkan  efek  antimikroba  ekstrak propolis  terhadap Escherichia  coli 100% resisten.

## DAFTAR PUSTAKA
Bankova  V  &  Popova  M.  2007. Propolis of St ingless  Bee  :  A  Promissing Source of Biological Active Compounds. p 88-92.
Di Carlo G, Mascolo N, & Izzo AA. 1999. Capasso  F.  Falvonoids:  old  and  new aspects of a class of natural therapeutic  drugs. Life  Sci , 65 (4):337–53.
Estrela  C,  Sydney  GB,  Bammann  LL,  &
Felippe  Jr  O.  1995.  Mechanism  of action  calcium  and  hydroxyl  ions  of calcium  hydroxide  on  tissue  and bacteria. Brazil Dent J ,  6:85–90.
Fatoni A. 2008. Pengaruh Propolis Trigona spp Asal  Bukit  Tinggi  Terhadap
Beberapa Bakteri Usus Halus Sapi dan Penelusuran Komponen Aktifnya. Tesis.  Sekolah  Pasca  Sarjana  Institut Pertanian Bogor .
Halim E, Hardinsyah, Noorwati Sutandya,
Sulaeman  A,  Artika  Made,  Harahap Yahdiana.  Kajian  Bioaktif  dan  Zat Gizi  Proolis  Indonesia  dan  Brazil.
2012. Jurnal Gizi dan Pangan, 7 (1) : 1-6.
Humaida Rifka.  2014.  Strategy To Handle Resistance  of  Antibiotics. Journal Majority , 3 (7).
Jawetz  &  Melnick.  Adelberg’s.  2005.
MedicalMicrobiology.Mc.Graw Hill Companies  Inc .  Penerbit  Salemba Medika. H. 357-359.
Permasalahan  Kesehatan  di  Indonesia. 2012. Jurnal  Kesehatan  Komunitas , 1(4).
Makkar HPS, Becker K. 2003. Do Tannins In  Leaves  Of  Trees  And  Shrubs  From
African  And  Himalayan  Regions
Differ  In  Level  And  Activity  Argo Forestry System, p.59-68 , 2003.
Mirzoeva  OK,  Grishanin  RN,  &  Calder PC.  1997. Antimicrobial  action  of propolis  and  some  of  its  components: the  effects  on  growth,  membrane potential,  and  motility  of  bacteria. MicrobiologyRes, 152:239-46. 2 Naim R. 2004. Senyawa Antimikroba Dari Tanaman . IPB. Noor  AA.  2015.  Sistem  Pakar  Untuk Mendiagnosis Penyakit Infeksi Menggunakan Forward Chaining.
Jurnal ITSMart, 4 (1).
Pelczar  M  J  &  Chan    ECS.  2006. Dasar  - Dasar  Mikrobiologi,  Jilid  I. Penerbit Universitas Indonesia. Jakarta.pp. 576.
Purwanti  E.  2007.  Senyawa  Bioaktif Tanaman Sereh Ekstrak Klorofrm dan Etanol  serta  Pengaruhnya  Terhadap
Mikroorganisme Penyebab Diare.
Malang:  Universitas  Muhammadiyah Malang.
Pratiwi  P.  2008. Mikrobiologi  Farmasi. Yogyakarta: Penerbit Erlangga Medical  Series.  Fakultas  Universitas Gajah Mada, 15-19. Radiati LE. 2002. Penghambatan Enteropatogen Oleh Ekstrak Diklorometan Jahe. Habitat 13 (2).
Sabir  A.  2005.  Aktivitas  Antibakteri Flavonoid Propolis Trigona spp terhadap Bakteri Streptococcus mutans (in vitro). Majalah Kedokteran Gigi,  38 (3) : 135-141.
Schaffer AC &  Lee JC. 2008. Vaccination and  Passive  Immunitation  Against Staphylococcus  aureus.  International journal  of  Antimicrobial  Agent s  32  S.
p: 71-78.
Suranto  S.  2010. Dahsyatnya  Propolis Untuk Menggempur Penyakit . Jakarta:  PT.  Agro  Media  Pustaka. Jakarta.
Susilo  B,  Mertaningsih,  Koendhori  Eko  ,
&  Agil  Mangestuti.  2009.  Komposisi Kimiawi dan Aktivitas Mikroba
Propolis  dari  Malang  Jawa  Timur. Jurnal  Penelitian  Medika  Eksakta ,  8
(1): 23-30.
Sunatmo TI. 2009. Eksperimen Mikrobiologi  dalam  Laboratorium .
Jakarta: Ardi Agency. Shofiyah S, Nada Salsabila. Obat Tradisional  Antara  Khasiat  dan  Efek Sampingnya. 2017. Majalah Farmasetika , 2 (5).
Silici S & Kaftanoglu. 2003. Antimicrobial Analysis  Of  Propolis  Sample  From Different  Region  In  Turky .  Arch  Oral Biol.
Suranto  S.  2010. Dahsyatnya  Propolis Untuk Menggempur Penyakit . Jakarta: PT. Agro Media Pustaka. Suririnah, Diare Mendadak dan Penanganannya, Online at http:// www.infoibu.com [Diakses  29
Nopember  2020]
Yusuf  BA,  Djamal  Azis,  Asterina.  2015.
Perbedaan Daya Hambat Dari Propolis  Cair  Yang  Ada  Di  Pasaran Terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus Secara  In Vitro. Jurnal  Kedokteran  Andalas ,  4 (3).