DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v7i1.22671

## JBIO: JURNAL BIOSAINS (The Journal of Biosciences)
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains@unimed.ac.id

## EKSTRAK ETANOL DAUN AJERAN SEBAGAI ANTIBAKTERI TERHADAP
Staphylococcus Aureus
Mami H. Seko, Alan Ch. Sabuna, James Ngginak Biology Education Study Program, FKIP, Artha Christian University Discourse Kupang, Indonesia email korespondensi : mamiherliniseko@gmail.com
Diterima:  Januari 2021; Direvisi: Februari 2021; Disetujui: Maret 2021

## ABSTRAK
Tumbuhan  ajeran  memiliki  kandungan  senyawa  kimia  seperti  flavanoid,  saponin  dan  fenol  yang berpotensi sebagai antibakteri. Antibakteri adalah zat yang dapat membunuh atau menekan pertumbuhan atau reproduksi  bakteri.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  ekstrak  etanol  daun  ajeran  ( Bidens  pilosa L) sebagai  antibakeri Staphylococcus aureus .  Metode  yang  digunakan  adalah  metode  kuantitatif menggunakan Rancangan Acak Lengkap, dengan 5 perlakuan dan 3 ulangan. Analisis menggunakan uji Anova satu jalur ( One Way  Anova ).  Jika  ada  pengaruh  yang  signifikan  maka  dilanjutkan  dengan  uji  DMRT.  Dalam  penelitian  ini pembentukan  Zona  bening  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  ajeran  memiliki  kemampuan  dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus . Semakin luas zona bening yang terbentuk maka semakin kuat senyawa bioaktif dalam menghambat pertumbuhan bakteri.  Pembuktian daya hambat ekstrak daun ajeran terhadap  pertumbuhan  bakteri S  aureus dapat  pula  diukur  melalui  menghitung  jumlah  koloni.  Apabila konsentrasi ekstraknya meningkat maka jumlah koloni bakteripun semakin berkurang. Hasil uji daya hambat menunjukan bahwa ekstrak etanol daun ajeran tidak memiliki pengaruh daya hambat yang signifikan terhadap pertumbuhan bakteri S aureus. Dalam penelitian ini perlakuan ekstrak etanol daun ajeran memiliki pengaruh daya  antibakteri  yang  signifikan  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus. Uji  lanjut  DMRT menunjukan bahwa (perlakuan P1 10,67 CFU/mL) memiliki nilai yang berbeda nyata.
Kata kunci: Tumbuhan ajeran, Staphylococcus aureus , Zona hambat, koloni bakteri
AJERAN LEAVES ETHANOL EXTRACT (Bidens pilosa L)

## AS AN ANTIBACTERIAL Staphylococcus aureus

## ABSTRACT
Ajeran plants contain chemical compounds such as flavonoids, saponins and phenols which have the potential  to  be  antibacterial.  Antibacterials  are  substances  that  can  kill  or  suppress  bacterial  growth  or reproduction. The purpose of this study was to determine the ethanol extract of the leaves of ajeran (Bidens pilosa L) as an antibacterial inhibitor of Staphylococcus aureus. The method used is a quantitative method using a completely randomized design, with 5 treatments and 3 replications. The analysis used the one way Anova test (One Way Anova). If there is a significant effect, it is followed by the DMRT test. In this study, the formation of the clear zone shows that the ethanol extract of ajeran leaves has the ability to inhibit the growth of S. aureus bacteria. The wider the clear zone formed, the stronger the bioactive compounds in inhibiting bacterial growth. Proving the inhibition of ajeran leaf extract against the growth of S aureus bacteria can also be measured by counting the number of colonies. If the extract concentration increases, the number of bacterial colonies will
ISSN 2460-6804 (online)
decrease. The results of the inhibitory power test showed that the ethanol extract of ajeran leaves did not have a significant inhibitory effect on the growth of S aureus bacteria. In this study, the ethanol extract treatment of ajeran leaves had a significant antibacterial effect on the growth of Staphylococcus aureus bacteria. The DMRT follow-up test showed that (P1 treatment 10.67 CFU / mL) had a significantly different value.
Key words: Ageran plant, Staphylococcus aureus, inhibition zone, bacterial colonie
Pendahuluan Bakteri  memiliki  tingkat  kecenderungan resistensi  terhadap  berbagai  obat-obatan  dan  terus berkembangbiak meskipun telah diberikan perlakuan  antimikroba  dalam  jumlah  yang  cukup (Sari,  2010).  Resistensi  adalah  mekanisme  tubuh secara keseluruhan menghambat perkembangbiakan agen  menular  atau  racun  (Fatisa,  2013).  Berkaitan dengan  hal  tersebut  pemanfaatan  antibiotik  secara luas adalah salah satu penyebab terjadinya resistensi (Sari  dkk,  2010).  Penyebab  peningkatan  resistensi adalah  kurangnya  pengetahuan  masyarakat  dalam pemanfaatan antibiotik yang benar.
Desa  Boti  merupakan  salah  satu  wilayah yang  terletak  di  Kecamatan  Kie  kabupaten  Timor Tengah  Selatan.  Masyarakat  setempat  sejauh  ini memanfaatkan berbagai jenis tumbuhan obat sebagai obat  herbal.  Salah  satu  jenis  tumbuhan  obat  yang digunakan adalah ajeran. Perlu dilakukan penelitian ini  sebab  belum  ada  penelitian  terdahulu  terkait penggunaan  daun  ajeran  sebagai  antibakteri.  Desa Boti mengenal tumbuhan ajeran dengan nama “kiun ut”. Ajeran ( Bidens pilosa L) merupakan tanaman dari family Asteraceae yang banyak ditemukan di negara tropis  dan  subtropis  (Sariningsih,  2016).  Secara anatomi dan morfologi tumbuhan ini memiliki batang yang  tegak,  bercabang,  persegi,  dan  tidak  berbulu (Badrunasar dan Santoso, 2016).
Bagian  atau  organ  yang  digunakan  sebagai obat  yaitu  daun.  Daun  ajeran  dapat  dimanfaatkan untuk  menyembuhkan  penyakit  lever  dan  perut kembung.  Tumbuhan  ajeran  dapat  dimanfaatkan sebagai  obat  karena  mengandung  senyawa antioksidan  seperti  flavanoid,  minyak  atsiri, polifenol,  saponin  dan  fenol.  Kandungan  senyawa kimia  dalam  tumbuhan  ajeran  tidak  hanya  sebatas sebagai  antioksidan  namun  juga  memiliki  potensi sebagai antibakteri (Sariningsih, 2016).
Resistensi  terhadap  antibiotik  adalah perubahan kemampuan bakteri hingga menjadi kebal terhadap  antibiotik.  Bakteri  yang  resisten  terhadap antibiotik tidak akan mati namun perkembangbiakannya  terus  berlanjut  hingga menjadi  berbahaya  bagi  tubuh  manusia  (Fatisa, 2013).  Salah  satu  bakteri  yang  berpotensi  memiliki
daya  resistensi  terhadap  sistem  imun  dan  obat- obatan serta berpotensi merugikan kesehatan adalah Staphylococcus aureus (Herlina dkk, 2015).
Staphylococcus  aureus adalah  bakteri  gram  positif yang  berbentuk  bulat  dan  biasanya  tersusun  tidak beraturan  seperti  buah  anggur. Staphylococcus aureus bersifat  merugikan  karena  menyebabkan infeksi.  Infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri Staphylococcus aureus yaitu  abses  atau  bisul  nanah, diare  dan  malaria.  Proses  Infeksi  terjadi  melalui udara,  debu,  limbah,  air,  makanan  dan  peralatan makan  (Salim,  2016). Staphylococcus  aureus menimbulkan penyakit melalui kemampuan berkembangbiak dan menyebar luas dalam jaringan. Penyebaran  bakteri  menggunakan  sarana  yang dimiliki  inang  untuk  dapat  memperbanyak  diri. Bakteri yang menginfeksi inang dapat berakibat luka kronik, serta bahkan kematian (Rahma, 2018).
Resistensi  bakteri  terhadap  obat-obatan harus pula diimbangi dengan pengobatan yang tepat termasuk  antibakteri  (Fatisa,  2013).  Menurut Septiani  (2017),  antibakteri  adalah  zat  yang  dapat membunuh  atau  menekan  pertumbuhan  atau reproduksi  bakteri.  Antibakteri  termasuk  kedalam antimikroba  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri.    Mekanisme  senyawa  aktif  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  yaitu  senyawa aktif  dapat  merusak  dinding  sel,  merubah permeabilitas  sel,  merubah  molekul  protein  dan asam nukleat, menghambat kerja enzim, menghambat  sintesis  asam  nukleat  dan  protein bakteri.  Salah  satu  alternatif  yang  dapat  digunakan untuk mencegah dan menghambat resistensi bakteri adalah memanfaatkan tumbuhan herbal. Tumbuhan herbal sangat baik untuk diaplikasikan sebagai obat- obatan karena mengandung senyawa-senyawa yang dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Dalam penelitian  ini  peneliti  memanfaatkan  daun  ajeran sebagai  salah  satu  tumbuhan  obat  antibakteri (Lathifah, 2008).
Sebagai  upaya  awal  untuk  mengetahui ekstrak etanol daun ajeran ( Bidens pilosa L) memiliki kemampuan sebagai menghambat bakteri
Staphylococcus  aureus dan  Mengetahui  konsentrasi
DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v7i1.22671
terbaik  dalam  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus

## Bahan dan Metode
Penelitian ini telah dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Universitas Kristen Artha Wacana Kupang pada Agustus 2020
Alat dan Bahan Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  cutter,  rak  dan  tabung  reaksi  (Pyrex),  jarum ose,  beaker  gelas  500  mL  (Pyrex).  Pipet  volume  10 mL (Pyrex), blender, cawan petri (Pyrex), timbangan analitik (Ohaus), gelas ukur 500 mL (Pyrex), autoklaf (Memmert),  oven,  rotary  evaporator,  sheker,  hot plate,  stirrer,  spatula,  mikropipet  10  mL  (Iwaki), batang  L,  inkubator  (Memmert)  dan  kamera  canon tipe  1300D.  Bahan  yang  akan  digunakan  dalam penelitian ini adalah daun ajeran yang diperoleh dari Desa  Boti  Kecamatan  Kie  Kabupatan  Timor  Tengah Selatan,  aquades,  ethanol  96%,  kertas  cakram, penyaring whatman No  42,  bakteri Staphylococcus aureus yang  diperoleh  dari  BPOM, Nutrient  Broth (NB), dan Nutrient Agar (NA).

## Desain penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah  metode  kuantitatif  berbasis  eksperimental dengan  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL),  dengan  5  perlakuan  dan  tiap-tiap  perlakuan diulang  sebanyak  3  kali  sehingga  diperoleh  18  kali perlakuan.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  lima perlakuan  tersebut  yaitu  (Ashafa    dan  Afolayan, 2009):
P0  = Aquades tanpa penambahan ekstrak daun ajeran P1  = 5 mg ekstrak daun ajeran + 1 mL aquades P2  = 10 mg ekstrak daun ajeran + 1 mL aquades P3  = 15 mg ekstrak daun ajeran+ 1 mL aquades P4  = 20 mg ekstrak daun ajeran+ 1 mL aquades
Pengambilan sampel Sampel daun ajeran sebanyak 1 kg diperoleh dari  Desa  Boti  Kecamatan  Kie,  Kabupatan  Timor Tengah Selatan, sampel disimpan pada coolbox.
Gambar 1: Peta Desa Boti (sumber: data hasil peneliti, 2019)

## Preparasi sampel
Daun  ajeran  yang  digunakan  adalah  daun muda dan masih segar  sebanyak 1 kg dicuci bersih lalu  ditiriskan,  kemudian  dikeringkan  dengan  cara dijemur selama 1 minggu, namun tidak terkena sinar matahari secara langsung. Setelah kering, dihaluskan menggunakan  blender  hingga  menjadi  serbuk. Serbuk daun ajeran tersebut yang digunakan sebagai sampel.

## Sterilisasi alat dan bahan
Sterilisasi  adalah  suatu  proses  untuk mematikan  semua  mikroorganisme  yang  terdapat pada  suatu  benda.  Sterilisasi  dilakukan  dalam autoklaf dengan menggunakan air pada suhu 121 0 C dengan  tekanan  1  atm  selama  15-20  menit sedangkan alat yang tidak tahan panas di sterilisasi menggunakan zat kimia berupa alkohol 70%.
Maserasi dan ekstraksi ( Prayoga , 2013 ) Daun ajeran 500 gram yang telah dihaluskan dilarutkan dengan etanol sebanyak 1 liter. Setelah itu di maserasi selama 24 jam di atas sheker, kemudian difiltrasi  atau  dipisahkan  dengan  menggunakan penyaring whatman .  Seluruh  filtrat  yang  diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 40- 50 o C hingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak pekat yang  diperoleh  digunakan  untuk  menguji  aktivitas antibakteri.
Pembuatan  Media  Nutrient  Agar  (NA)  dan  Nutrien broth (NB) Pembuatan media Nutrient Agar (NA) yaitu dengan  melarutkan  5  gr Nutrient  Agar dengan  270 mL  aquadest  kedalam  erlenmeyer  dan  ditutup
ISSN 2460-6804 (online)
alumunium  foil,  distirer  dengan  pemanas  hingga mendidih  kemudian  disteril  dengan  autoklaf  pada suhu  121 0 C  selama  15  menit  dan  tekanan  1  atm. Setelah itu media dituangkan ke cawan petri masing – masing 15 ml, dibiarkan dingin hingga  menjadi gel. Pembuatan  media Nutrien  broth yaitu  dengan melarutkan 0,4 NB dengan 50 mL aquades kedalam erlenmeyer  dan  ditutup  alumunium  foil,  distirer dengan pemanas hingga mendidih kemudian disteril dengan  autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit dan  tekanan  1  atm.  Setelah  itu  media  dibiarkan hingga dingin.
Diameter zona hambat Pembuatan  media  dengan  melarutkan  5 gram Nutrient Agar  dalam  270  mL  aquades  dan dipanaskan dengan pemanas stirrer hingga mendidih kemudian  disteril  pada  autoklaf  selama  15  menit. Setelah disteril media dituang pada tabung reaksi dan disimpan miring agar membentuk agar miring. Media agar  yang  telah  padat  selanjutnya  dilakukan peremajaan  bakteri S.  aureus. Penumbuhan  pada media cair supaya diperoleh  sel yang aktif kemudian dilakukan  uji  antibakteri  ekstrak  daun B.  Pilosa . Penumbuhan  bakteri  aktif  diperlukan  media  cair ( Nutrient  broth ).  Pembuatan  media  dengan melarutkan nutrient  broth pada  4  erlenmeyer masing-masing  0,4  gram    dalam  50  mL  aquades selanjutnya distirer selama 30 menit. Setelah distirer media nutrient broth didinginkan dan setelah dingin diambil 1 ose bakteri yang telah diremajakan dalam masing-masing  erlenmeyer  yang  berisi  media nutrient broth. Selanjutnya di sheker selama 48 jam sampai  bakteri S.  aureus tumbuh  dengan  adanya kekeruhan pada media nutrient broth. Setelah keruh maka  diambil  1  mL  bakteri  dan  dilakukan pengenceran dari 10 -1 – 10 -10 . Pengujian antibakteri ekstrrak daun B. Pilosa diperlukan  media  padat.  Media  padat  untuk  uji antibakteri  susunannya  sama  dengan  media  agar miring  namun  untuk  uji  antibakteri  ditempatkan pada  cawan  petri.  Metode  yang  di  gunakan  adalah spread plate atau metode sebar, dan inkubasi selama 24  jam pada suhu 37 o C. Kemudian encerkan ekstrak daun  ajeran  dengan  konsentrasi  yang  mana  setiap perlakuan  terdapat  3  ulangan,  kemudian  direndam kertas  cakram  steril  (6  mm)  selama  15  menit. Selanjutnya,  meletakkan  kertas  cakram  tersebut dengan mengunakan pinset diatas inokulum bakteri dalam cawan petri. Setelah itu diinkubasi pada suhu 37ºC  selama  48  jam.  Selanjutnya  pengukuran  zona bening yang terbentuk digunakan penggaris dengan cara  membalik  cawan  petri.  Aktivitas  antibakteri
dinyatakan  positif  apabila  terbentuk  zona  hambat berupa  zona  bening  disekeliling  kertas  cakram  (6 mm).
Zona hambat yang terbentuk diukur dengan menggunakan rumus (Toy, 2015):
Diameter Zona Hambat = (Dv − Dc) + (Dh − Dc) 2 Keterangan:  Dv = Diameter vertikal
Dh = Diameter horizontal Dc = Diameter cakram Metode Hitung Cawan (Yunita dkk, 2015) Media  agar  yang  telah  padat  selanjutnya dilakukan peremajaan bakteri S. aureus. Penumbuhan pada media cair supaya diperoleh  sel yang aktif kemudian dilakukan uji antibakteri ekstrak daun B. Pilosa . Penumbuhan bakteri aktif diperlukan media cair ( Nutrient broth ).
Pembuatan  media  dengan  melarutkan nutrient broth pada 4 erlenmeyer masing-masing 0,4 gram    dalam  50  mL  aquades  selanjutnya  distirer selama  30  menit.  Setelah  distirer  media nutrient broth didinginkan  dan  setelah  dingin  diambil  1  ose bakteri yang telah diremajakan dan 1 mL ekstrak dari setiap  konsentrasi  selanjutnya  dimasukan  dalam masing-masing  erlenmeyer  yang  berisi  media nutrient broth. Selanjutnya di sheker selama 48 jam sampai  bakteri S.  aureus tumbuh  dengan  adanya kekeruhan pada media nutrient broth. Setelah keruh maka  diambil  1  mL  bakteri  dan  dilakukan pengenceran dari 10 -1 – 10 -10 . Pengujian antibakteri ekstrrak  daun B.  Pilosa diperlukan  media  padat. Media padat untuk uji antibakteri susunannya sama dengan  media  agar  miring  namun  untuk  uji antibakteri  ditempatkan  pada  cawan  petri.  Metode yang  di  gunakan  adalah spread  plate atau  metode sebar, dan inkubasi selama 24  jam pada suhu 37 o C. koloni dapat dihitung menggunakan colony counter. Jumlah  total  bakteri  per  ml  dapat  dihitung  dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
jumlah koloni =

## 1 faktor pengenceran

## Teknik Analisis Data
Untuk  melihat  pengaruh  maka  data  yang diperoleh  dianalisis  menggunakan  program    SPSS versi  22  dengan  uji  Anova  satu  jalur  (One  Way Anova).  Jika  ada  pengaruh  yang  signifikan  maka dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  untuk  melihat perlakuan mana yang efektif (Prayoga, 2013).
ISSN 2460-6804 (online)
Hasil  dan Pembahasan Hasil  uji  anti  bakteri  ekstrak  etanol  daun Ajeran ( Bidens pilosa ) terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Daya Hambat Hasil  uji  antibakteri  ekstrak  etanol  daun ajeran terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dibuktikan  dengan  mengamati  zona  bening yang  terbentuk  di  sekeliling  kertas  cakram. Pembentukan  zona  bening  sebagai  wujud  dari adanya aktifitas antibakteri. Zona bening juga sebagai interpretasi  dari  daya  hambat  ekstrak  terhadap pertumbuhan  bakteri.  Nilai  rata-rata  aktifitas  anti bakteri dapat dilihat pada tabel berikut:
Tabel nilai Zona hambat
Tabel  1: Nilai  rata-rata  zona  hambat  ekstrak  daun ajeran terhadap pertumbuhan S. aureus
Zona hambat (mm) P0 Kontrol 4,50 P1 5 𝑚𝑔 𝑚𝑙 ⁄ 5,00 P2
10 𝑚𝑔 𝑚𝑙 ⁄ 5,43 P3
15 𝑚𝑔 𝑚𝑙 ⁄ 6,17
P4
20 𝑚𝑔 𝑚𝑙 ⁄ 5,59
Berdasarkan  tabel  di  atas  perlakuan  yang memiliki  daya  hambat  terbaik  terdapat  pada perlakuan 3 dengan nilai rata-rata 6,17 mm dan nilai terendah  terdapat  pada  perlakuan  pertama  dengan nilai  rata-rata 4,50 mm.  Pembentukan  Zona  bening menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  ajeran memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus .  Semakin  luas  zona bening yang terbentuk maka semakin kuat senyawa bioaktif  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri. Suatu zat dikatakan sebagai senyawa bioaktif karena memiliki potensi sebagai antibakteri (Toy dkk, 2015).

## Gambar Daya Hambat
Dalam  penelitian  ini  indikator  untuk mengukur kemampuan antibakteri dari ekstrak daun ajeran  adalah  mengukur  zona  bening.  Berikut  ini gambar  proses  pembentukan  zona  bening  pada cawan  petri.  Pembentukan  zona  bening  sebagai wujud  dari  adanya  daya  hambat  ekstrak  terhadap pertumbuhan S aureus dapat diamati pada gambar 2- 4 berikut.
Gambar 2 Gambar 3 20mg/mL 1 Kontrol 5mg/mL 10mg/mL 15mg/mL Kontrol 20mg/mL 10mg/mL 15mg/mL 5mg/mL
Gambar 2-4. Zona hambat yang terbentuk dari aktivitas antibakteri ektrak etanol daun ajeran dengan berbagai konsentrasi
Hasil Analisis Data Zona Hambat Data  diameter  zona  hambat  (mm)  dilakukan analisis data yakni uji Anova one way dan data tidak dilanjutkan  uji  DMRT  karena  hasil  yang  diperoleh tidak  memiliki  pengaruh  yang  signifikan.  Pada analisis  data  ini  menggunakan  nilai  taraf kepercayaan (α)=0,05.
Tabel 2: Hasil uji statistik Anova zona hambat ANOVA
Zona_hambat Sum of Squares  Df Mean Square F Sig. Between Groups 10,317 4 2,579  2,0 54 ,162 Within Groups 12,560  10 1,256 Total 22,877  14
Berdasarkan  hasil  analisis  anova  menunjukan bahwa nilai F hitung 2,054 dengan nilai sig 0,162 (0, 162> 0,05) yang artinya H 0 diterima dan H 1 ditolak. Dengan kata lain  bahwa  ekstrak  etanol daun ajeran tidak  memiliki  pengaruh  signifikan  terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Bertolak  dari  hasil  uji  Anova  tersebut  maka penelitian ini, tidak perlu dilanjutkan pada tahap uji DMRT..  Hasil  uji  daya  hambat  menunjukan  bahwa ekstrak etanol daun ajeran tidak memiliki pengaruh daya hambat yang signifikan terhadap pertumbuhan bakteri S  aureus. Hal  ini  kemungkinan  dipengaruhi oleh  beberapa  faktor  yaitu  jumlah  kandungan  zat aktif  yang  terdapat  dalam  larutan  dan  sifat  kimia yang  terkandung  dalam  sampel  (Yuliantari,  2017). Ekstrak  daun  ajeran  memiliki  kandungan  senyawa kimia seperti flavanoid dan fenol (Sariningsih, 2016).
Kandungan  senyawa  kimia  seperti  flavonoid  dan fenol mudah rusak apabila terpapar suhu dan cahaya menurut  Padamani  dkk  (2020),  flavonoid  dan fenol mudah teroksidasi karena pengaruh aktivitas enzim dan gugus hidroksil.
Proses  ekstraksi  turut  berpengaruh  dalam pemecahan  dinding  sel  dan  membran  sel.  Hasil penelitian yang dilakukan oleh Susriyani dkk (2015), menjelaskan  bahwa  senyawa  metabolit  sekunder seperti  fenol  dan  flavonoid  yang  terdapat  pada tanaman  hijau  dapat  berfungsi  sebagai  antibakteri. Flavonoid berproses  dalam  membentuk  senyawa kompleks  terhadap  protein  extraseluler  yang  dapat merusak  membran  dan  dinding  sel  bakteri (Surdowardojo dkk, 2016). Menurut Rahma (2018), menyatakan  bahwa  senyawa  flavanoid  dan  fenol dapat menghambat pertumbuhan bakteri.
Mekanisme  menghambat  pertumbuhan  bakteri menurut  Susriyani  dkk  (2015),  bahwa  flavanoid dapat  menghambat  permeabilitas  membran  sel (kerja mikrosom dan lisosom) bakteri akibat adanya interaksi  antara  senyawa  flavanoid  dengan  DNA bakteri. Flavanoid  mampu  menghambat  fungsi  atau kerja  membran  sel  dalam  membentuk  senyawa kompleks. Bakteri pada prinsipnya dapat menghasilkan  enzim  sebagai  respon  berjalannya sistem metabolisme (Remijawa dkk, 2020). Sehingga apabila  jalur  metabolisme  ini  di  putuskan  atau diganggu  maka  hal  ini  akan  mempengaruhi  daya pertumbuhan bakteri.
Mekanisme  senyawa  fenol  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri  yaitu  dengan  mendenaturasi protein  bakteri  sehingga  struktur  protein  menjadi rusak.  Ikatan  hidrogen  yang  terbentuk  akan mempengaruhi  permeabilitas  dinding  sel  dan membran sitoplasma. Permeabilitas dinding sel dan membran  sitoplasma  yang  terganggu  dapat
20mg/mL Kontrol 5mg/mL 3 10mg/mL 3 15mg/mL 3
ISSN 2460-6804 (online)
menyebabkan  ketidakseimbangan  makromolekul dan ion dalam sel sehingga menjadi lisis. Pembuktian daya  hambat  ekstrak  daun  ajeran  terhadap pertumbuhan  bakteri S  aureus dapat  pula  diukur melalui  menghitung  jumlah  koloni.  Perhitungan jumlah  koloni  bakteri  merupakan  salah  satu  cara yang  dilakukan  untuk  mengetahui  keberadaan bakteri dalam suatu media.

## Jumlah Koloni
Hasil pengamatan koloni bakteri  yang terbentuk pada cawan menunjukan sampel ekstrak daun ajeran
memiliki  daya  hambat  bakteri . Hal  ini  disebabkan oleh  variasi  konsentrasi  ekstrak  daun  ajeran,  yang semakin  tinggi  akan  mempengaruhi  pertumbuhan bakteri.
Berdasarkan  data  pada  tabel  perlakuan  yang memiliki  daya  hambat  terbaik  terdapat  pada perlakuan 4 dengan nilai rata-rata 2,00 CFU/mL dan nilai tertinggi terdapat pada p1 dengan nilai rata-rata 10,67 CFU/mL.  Berdasarkan  hasil  penelitian menunjukan  bahwa  apabila  zona  hambat  yang dihasilkan besar maka jumlah koloninya sedikit.
Tabel 3. Nilai rata-rata koloni bakteri ekstrak daun ajeran terhadap pertumbuhan S. aureus Konsentrasi Jumlah koloni (CFU/mL) P0 Kontrol 14,33 P1 5 𝑚𝑔 𝑚𝑙 ⁄ 10,67 P2 10 𝑚𝑔 𝑚𝑙 ⁄ 5,67
P3 15 𝑚𝑔 𝑚𝑙 ⁄
4,00
P4 20 𝑚𝑔 𝑚𝑙 ⁄ 2,00
Gambar Jumlah Koloni
Dalam penelitian ini indikator untuk mengukur kemampuan  antibakteri  dari  ekstrak  daun  ajeran
dengan mengitung jumlah koloni pada petri sebagai wujud dari adanya daya hambat ekstrak terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus.
Gambar 5. Jumlah koloni bakteri pada berbagai konsentrasi
5mg/mL 20mg/mL kontrol
Hasil Analisis Data Jumlah Koloni Data jumlah koloni bakteri (CFU/mL) dilakukan analisis  data  yakni  uji one  way Anova dan dilanjutkan uji DMRT untuk mengetahui perbedaan signifikan  dari  nilai  rata-rata  diameter  daya hambat  yang  dibentuk  masing-masing  perlakuan ekstrak.  Pada  analisis  data  ini  menggunakan  nilai taraf kepercayaan (α)=0,05.
Tabel  4. Hasil  uji  statistik  Anova  pada  koloni bakteri
ANOVA Jumlah_Koloni Sum  of Squares  Df Mean Square  F Sig. Between Groups 307,333  4 76,833  54,881  ,000 Within Groups 14,000  10  1,400 Total 321,333  14
Berdasarkan analisis anova data hasil penelitian menunjukan bahwa nilai F hitung lebih besar dari F nilai  tabel.  Nilai  F  hitung  dalam  penelitian  ini adalah 54, 881 dan nilai F table 0,05 dengan nilai sig 0,000 (0,000< 0,05) yang artinya H 0 ditolak dan H 1 diterima.  Dengan  kata  lain  bahwa  perlakuan ekstrak etanol daun ajeran memiliki pengaruh daya antibakteri yang signifikan terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus. Merujuk  kepada hasil  uji  anova  di  atas  maka  perlu  dilakukan  uji DMRT  untuk  membuktikan  tingkat  perbedaan nyata diantara setiap perlakuan.
Tabel 5. Hasil uji lanjut DMRT Perlakuan  N Subset for alpha = 0.05 1 2 3 4 P4 3 2,00 P3 3 4,00  4,00 P2 3 5,67 P1 3 10,67 Kontrol 3 14,33 Sig. ,065  ,115  1,000  1,000
Berdasarkan  tabel  5  di  atas  menunjukan bahwa perlakuan pertama (P1) dan kontrol (14,33 CFU/mL)  memiliki  tingkat  perbedaan  yang  lebih nyata  dengan  nilai  10,67  CFU/mL  dan  14,33 CFU/mL. Dengan kata lain bahwa pada konsentrasi 15%  dengan  nilai  4,00  CFU/mL  dan  20%  dengan
nilai 2,00 CFU/mL terjadi penurunan jumlah koloni bakteri  yang  signifikan.  Presentase  pertumbuhan koloni bakteri S aureus dalam media nutrien agar menunjukan  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak daun  ajeran  berkorelasi  dengan  banyaknya  dan kualitas  senyawa  bioaktif  yang  terkandung. Sehingga dengan demikian berdasarkan data hasil penelitian  tersebut  maka  dapat  dijelaskan  bahwa konsentrasi sampel yang tinggi memiliki daya anti bakteri  yang  semakin  baik  pula.    Hal  ini  terlihat jelas dengan semakin berkurangnya jumlah koloni pada  setiap  perlakuan.  Apabila  konsentrasi ekstraknya  meningkat  maka  jumlah  koloni bakteripun  semakin  berkurang.  Daun  ajeran memiliki  senyawa  metabolit  sekunder  seperti flavanoid,  polifenol,  dan  saponin.  Senyawa metabolik  sekunder  memilki  aktifitas  biologis seperti antioksidan, anti kanker, anti inflamasi dan antibakteri (Maghfiroh, 2019).

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian  dapat disimpulkan bahwa  ekstrak  daun  ajeran  memiliki  pengaruh antibakteri  dan  berpotensi  sebagai  antibakteri Staphylococcus  aureus .  Konsentrasi  terbaik  dalam menghamabat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus terdapat pada perlakuan P4  dengan nilai 2,00 CFU/mL, memiliki nilai yang berbeda nyata terhadap penurunan jumlah koloni bakteri. Hal ini disebabkan karena  adanya  bahan  bioaktif yang  bersifat  sebagai antibakteri  pada  ekstrak  daun  ajeran  seperti polifenol dan flavonoid.
Saran Berdasarkan  hasil  penelitian,  maka  penulis menyarankan  perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan mengenai Pengaruh elevasi habitat tumbuhan ajeran terhadap  aktifitas  antibakteri. Studi  komparasi antibakteri  pada  organ  tumbuhan  ajeran  yang berbeda-beda. Penggunaan konsentrasi ekstrak yang berbeda  dalam  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus.

## Daftar putaka
Ashafa, A. O. T., & Afolayan, A. J. 2009. Screening the root extracts from Bidens pilosa L. var. radiata ( Asteraceae )  for  antimicrobial  potentials. Journal of Medicinal Plants Research , 3 (8), 568 –
572.
Badrunasar, A., & Santoso, H. B. 2016. Tumbuhan Liar
Berkhasiat Obat . Herlina,  N,  Fifi.  A.  2015.  Isolasi  dan  identifikasi
Staphylococcus  aureus dari  susu  mastitis subklinis di Tasikmalaya, Jawa Barat. Pros Sem Nas Masy Biodiv Indon. 1(3): 413-417.
Maghfiroh,  G.  2019.  Pengaruh  ekstrak  gulma  ajeran ( Bidens  pilosa L.)  terhadap  mortalitas  dan perkembangan  larva  ulat  grayak  ( Spodoptera litura ).  FST  Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim Malang. Malang.
Padamani,  E.,  Ngginak,  J.,  &  Lema,  A.  T.  2020. ANALISIS  KANDUNGAN  POLIFENOL  PADA EKSTRAK TUNAS BAMBU BETUNG ( Dendrocalamus asper). Bioma :  Jurnal  Biologi Dan Pembelajaran
Biologi , 5 (1),52 – 65. https://doi.org/10.32528/bioma.v5i1.3688.
Prayoga,  E.  2013.  Perbandingan  Efek  Ekstrak  Daun sirih hijau ( Piper betle L.) dengan metode difusi disk  dan  sumuran  terhadap  pertumbuhan bakteri  Staphylococcus  aureus. Foundations of Physics , 34 (3), 361 – 403.
Rahma, E., 2018 Uji Efektivitas Lendir Anguilla bicolor (McClelland,  1844)  Terhadap  Daya  Hambat Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus. FK Universitas Lampung. Bandar Lampung. Remijawa, E. S.  dkk., 2020. Isolasi Dan Seleksi Bakteri Penghasil  Enzim  Ekstraseluler  Pada  Tanah Mangrove  Di  Pantai  Noelbaki.  Jurnal  Enggano 5(2): 164-180.
Salim, H. H. U. 2016. Pengaruh Aktivitas Antimikroba Ekstrak  Bawang  Putih  ( Allium  sativum ) Terhadap Bakteri Gram Positif ( Staphylococcus aureus )  dan  Gram  Negatif  ( Escherichia  coli ) Secara In Vitro. Fakultas Kedokteran Universitas
Lampung , 7 , 66 – 70.
Sariningsih R, Suzery M,  dan C. B. 2016. Jurnal Kimia Sains  Dan  Aplikasi.  2016.  Uji  Aktivitas Antioksidan  Dengan  DPPH  Fraksi  Etil  Asetat Daun  Bidens  pilosa  L. Jurnal  Kimia  Sains  Dan Aplikasi , 19 (3), Hlm. 83-86.
Sari,  M.  2015.  Uji  bakteriologis  dan  resistensi antibiotik terhadap bakteri escherichia coli dan shigella sp pada makanan gado-gado di kantin UIN  Syarif  Hidayatullah  Jakarta. Laporan Penelitian  Fakultas  Kedokteran  Dan  Ilmu Kesehatan  UIN  Sfarif  Hidayatullah  Jakarta , September , 1 – 87. http://repository.uinjkt.ac.id/dspace/handle/
123456789/37765.
Surjowardojo,  P.  2016. Daya  Hambat  Dekok  Kulit Apel Manalagi (Malus sylvestris Mill ) Terhadap Pertumbuhan Escherichia coli dan Streptococcus  agalactiae Penyebab  Mastitis Pada Sapi Perah. J Ternak Tropika Vol. 17, No.1:
11-21 . Toy, T. S. S., Lampus, B. S., & Hutagalung, B. S. P. 2015.
Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Rumput  Laut Gracilaria Sp  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus Aureus . E-GIGI , 3 (1).
https://doi.org/10.35790/eg.3.1.2015.6600.
Yunita,  M.,  Hendrawan,  Y.,  &  Yulianingsih,  R.  2015.
Quantitative  Analysis  of  Food  Microbiology  in Flight ( Aerofood ACS) Garuda Indonesia Based on  the  TPC  ( Total  Plate  Count )  with  the  Pour Plate  Method. Jurnal  Keteknikan  Pertanian Tropis Dan Biosistem , 3 (3), 237 – 248.