Jurnal Pharmascience, Vol .03, No.02, Oktober 2016, hal: 107 - 111 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 http://jps.unlam.ac.id/

## Research Article

## Isolasi dan Identifikasi Steroid dari Fraksi Etil Asetat Herba Lampasau ( Diplazium esculentum Swartz)
*Revita Saputri 1 , Maria Dewi Astuti 2 , Evi Mintowati Kuntorini 3
1 Sekolah Tinggi Farmasi Borneo Lestari.
2 Program Studi Kimia Fakultas MIPA Universitas Lambung Mangkurat.
3 Program Studi Biologi Fakultas MIPA Universitas Lambung Mangkurat. *Email: revita03@gmail.com

## ABSTRAK
Lampasau ( Diplazium esculentum Swartz) memiliki potensi sebagai tanaman obat tradisional  salah  satunya  sebagai  obat  analgetika.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengidentifikasi  senyawa  kimia  yang  diisolasi  dari  fraksi  etil  asetat  ekstrak  metanol herba lampasau. Ekstrak metanol diperoleh secara maserasi dan difraksinasi berturut- turut  dengan petroleum  eter  dilanjutkan  dengan  etil  asetat.  Fraksi  etil  asetat difraksinasi  dengan  kromatografi  vakum  cair  dengan  fase  diam  silika  gel  dan  fase gerak n- heksana : kloroform dengan perbandingan berturut-turut (1:1), (1:2), (1:5) dan (1:8)  dihasilkan  fraksi  A,  B,  C,  D,  E  dan  F.  Fraksi  A  difraksinasi  dengan  dengan kromatografi vakum cair dengan fase diam silika gel dan fase gerak dengan gradien n- heksana  tunggal, n- heksana  :  kloroform  (9:1)  serta n- heksana  :  kloroform  (8,5:1,5) dihasilkan  fraksi  A 8. Fraksi  A 8 dimurnikan  dengan  kromatografi  lapis  tipis  preparatif pada  silika  gel  dan  dihasilkan  isolat  A 8.3 .  Isolat  A 8.3 berupa  padatan  tidak  berwarna. Hasil  uji  kualitatif  kimia  terhadap  isolat  A 8.3 menunjukkan  positif  terhadap  steroid. Panjang gelombang maksimum pada spektra UV Isolat A 8.3 adalah 223 nm. Spektra IR isolat  A 8.3 menunjukkan  adanya  gugus  O-H,  uluran  gugus  C-H,  tekukkan  gugus  CH 2 dan  CH 3 ,  gugus  C=C,  gugus  C-OH  dan  gugus  C=O.  Berdasarkan  hasil  uji  kualitatif kimia,  spektra  UV  dan  IR  maka  diduga bahwa  isolat  A 8.3 merupakan  senyawa  steroid yang memiliki ikatan rangkap C=C (ena), ikatan O-H dan ikatan C=O (karbonil).
Kata Kunci : Diplazium esculentum Swartz, fraksi etil asetat, steroid

## ABSTRACT
Lampasau  (Diplazium  esculentum  Swartz)  has  potential  as  a  traditional medicinal  plant  as  analgesic  drugs.  The  research  aims  to  identify  chemical  compounds isolated  from  ethyl  acetate  fraction  methanol  extract  of  lampasau  herbs.  The  methanol extract  was  obtained  by  maceration  and  fractionated  by  petroleum  eter  and  ethyl  acetate. Ethyl  acetate  fraction  was  fractionated  using  vacuum  liquid  chromatography  method  on silica gel with eluent  n-hexane : chloroform with a ratio of consecutive (1:1), (1:2), (1:5) and (1:8), produced fractions A, B, C, D, E and F. Fraction A was fractionated by vacuum liquid chromatography method on silica gel with eluent n-hexane, n-hexane : chloroform with  a  ratio  of  consecutive  (9:1)  and  (8,5:1,5)  produced  fractions  A 8. Fractions  A 8 was
purified by  preparative  thin  layer  chromatography  on  silica  gel  produced  isolate  A 8.3. Isolate A 8.3 was colorless solid and has positive result to the steroid by the qualitative test. The maximum wavelength on UV spectra of A 8.3 is 223 nm. IR spectra of A 8.3 showed the vibration of hydroxyl group (OH), C-H stretching group, C-H bending group, group C=O, and  the  double  bond  group  (C=C).  Based  on  data  of  spectra  UV  and  IR,  isolate  A 8.3 suggested as a steroid that has the double bond group (C=C), group O-H and group C=O.
Key words : Diplazium esculentum Swartz,  ethyl acetate fraction, steroid.

## I. PENDAHULUAN
Diplazium  esculentum  Swartz atau yang  lebih  dikenal  sebagai  lampasau  oleh masyarakat  Kapuas,  Kalimantan  Tengah merupakan  kelompok  tumbuhan  paku (Pteriodophyta). Lampasau secara tradisional  digunakan  sebagai  obat  pereda nyeri.  Kaushik et  al. (2011)  menyebutkan bahwa Diplazium esculentum mengandung senyawa  kimia  seperti  flavonoid,  steroid, triterpenoid dan flavon.
Sandi  (2011)  melaporkan  bahwa fraksi  etil  asetat  herba  lampasau  memiliki aktivitas analgetik terbesar pada dosis  500 mg/kgBB.  Irianti  (2012)  melaporkan bahwa  fraksi  etil  asetat  herba  lampasau memiliki  aktivitas  sebagai  antiinflamasi terbesar pada dosis 500 mg/kgBB. Penelitian  tersebut  menunjukkan  potensi khasiat  dari  fraksi  etil  asetat  herba lampasau,  namun  penelitian  mengenai isolasi  dan  identifikasi  senyawa  kimia fraksi  etil  asetat  ekstrak  metanol  herba lampasau  yang  berasal  dari  Kapuas Kalimantan Tengah belum dilakukan. Oleh sebab  itu,  dilakukan  penelitian  yang bertujuan  untuk  melakukan  identifikasi
senyawa kimia hasil isolasi  dari fraksi  etil asetat  ekstrak  metanol  herba  lampasau yang  berasal  dari  Kapuas  Kalimantan Tengah

## II. METODE

## A. Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  herba lampasau,  aquades,  aluminium  foil,  asam sulfat  (Brataco),  aseton pro  analysis (Merck) , etil  asetat  teknis  (Brataco), formalin 10% (pengawet sampel tumbuhan), kapas, kertas saring, kloroform pro analysis (Merck), metanol pa (Merck), metanol  teknis  (Brataco), n -butanol pro analysis (Merck), n -heksana teknis (Brataco),  pelat  KLT  (Machenley-Nagel), petroleum  eter  teknis  (Brataco),  silika  gel 60 for  coloum (0,25-0,5  mm),  silika  gel Merck Kieselgel 60 GF 254 dan tisu gulung.

## B. Pengolahan Sampel Herba

## Lampasau
Sampel  berupa  herba  lampasau dicuci  hingga  bersih  dan  dirajang.  Setelah dirajang,  sampel  dikeringanginkan  dan
dihaluskan  sehingga  didapatkan  serbuk herba lampasau.

## C. Isolasi
Serbuk  kering  herba  lampasau dimaserasi  dengan pelarut  metanol  selama 4  x  24  jam.  Setiap  24  jam  campuran disaring kemudian diuapkan dengan rotary evaporator kemudian  dikentalkan  di  atas waterbath sehingga  diperoleh  ekstrak methanol  sebanyak  245,14  g.  Selanjutnya ekstrak  metanol  disuspensikan  dengan  air suling  dan  difraksinasi  berturut-turut dengan dengan pelarut petroleum eter, dan etil  asetat.  Lapisan  etil  asetat  dipekatkan rotary  evaporator kemudian  dikentalkan
di  atas waterbath hingga  mengental sehingga diperoleh fraksi etil asetat. Fraksi kemudian dipisahkan menggunakan kromatografi  vakum  cair  (KVC)  dengan fase  diam  Silika  gel  GF 254 menggunakan eluen n -heksana  :  klorofom  dengan perbandingan  1:1,  1:2,  1:5  dan  1:8.  Hasil isolasi  ditampung  dalam  vial  dan  sipantau dengan  KLT  menggunakan  eluen n- heksana  :  kloroform  (1:8).  Hasil  isolasi dengan pola/nilai Rf yang sama digabungkan  sehingga  diperoleh  6  fraksi, yaitu  fraksi  A-F.  Fraksi  A  kemudian dipisahkan  lebih  lanjut  menggunakan kromatografi vakum cair dengan fase diam Silika  gel  GF 254 menggunakan  eluen n- heksana  :  kloroform  dengan  perbandingan 1:0,  9:1  dan  8,5:1,5.  Hasil  isolasi  dengan
pola/nilai  Rf  yang  sama  digabungkan sehingga  diperoleh  8  fraksi  yaitu  A 1 -A 8 . Fraksi  A 8 kemudian  dipisahkan  lebih lanjutm  dengan  KLT  preparatif  silika  gel GF254  menggunakan  eluen n- heksana  : kloroform dengan perbandingan 3:7 menghasilkan  8  fraksi  yaitu  A 8.1 -  A 8.8. Isolat A 8.3 dilakukan uji kemurnian dengan 3  macam  eluen  yaitu,  kloroform  tunggal,
n- heksana : kloroform (5:5) dan n- heksana :  kloroform  (7:3).    Semua  kromatogram KLT  menunjukkan  noda  tunggal.  Isolat A 8.3 yang telah dinyatakan murni kemudian  diidentifikasi  dengan  UV-Vis dan IR.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Diperoleh  sebanyak  245,14  g ekstrak  kental  methanol  dari  1.336,21  g serbuk  kering  herba  lampasau.  Uji kualitatif    Isolat A 8.3 dengan  pereaksi Liebermann-Buchard  menunjukkan  warna hijau.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa Isolat A 8.3 merupakan senyawa steroid.
Spectra  UV  Isolat A 8.3 menunjukkan serapan  panjang  gelombang  maksimum pada 223 nm. Panjang gelombang tersebut menunjukkan adanya transisi π ke π* yang mengindikasikan  adanya  serapan  gugus kromofor dari ikatan rangkap  ena (-C=C-) (Sastrohamidjojo, 2001), dan ikatan karbonil (-C=O) (Khopkar, 2002).
Penelitian Aeri et al. (2012) menunjukkan bahwa  senyawa  steroid  lebbeksterone  dari
akar Albizzia  lebbeck memiliki  serapan panjang  gelombang  maksimum    pada  223 nm.
Gambar 1. Spektra UV isolat A8.3
Identifikasi  isolat  A8.3  dengan spektrofotometri  IR  menunjukkan  adanya serapan pada υ(maks) 3392,79 cm -1 diduga merupakan  serapan  dari  gugus  O-H. Dugaan  ini  diperkuat  dengan  adanya serapan pada daerah υ (maks) 1101,35 cm -
1 yang  menunjukkan  serapan  C-OH.
Terdapat  pula  vibrasi  pada  υ(maks) 2922,16  cm-1  dan  2854,65  cm-1  diduga merupakan  serapan  uluran  gugus  C-H. Dugaan  ini  diperkuat  dengan  adanya vibrasi  tekukan  pada  daerah  υ(maks) 1458,18  cm-1  yang  menunjukkan  adanya gugus  CH 2 .    Pita  serapan  pada  υ(maks)
1371,39 cm-1 menunjukkan tekukan gugus C-H  dari  CH3.  Pita  serapan  pada  daerah υ(maks)  1622,13  cm-1  menunjukkan adanya  gugus  C=C  (ena)  non  aromatik. Pita  serapan  pada  υ(maks)  1716,65cm-1 diduga  merupakan  serapan  untuk  gugus C=O, seperti yang dilaporkan Hiroshi et al.
(1976)  terdapat  ikatan  O-H  (hidroksil)  pada posisi cincin A dan memiliki ikatan rangkap C=C (ena) serta ikatan C=O (karbonil) pada
posisi  cincin  B  pada  senyawa  senyawa steroid makisteron A dan makisteron D pada Diplazium donianum .    Adanya  ikatan  O-H (hidroksil),  memiliki  ikatan  rangkap  C=C (ena) serta ikatan C=O (karbonil) mengindikasikan bahwa isolat A8.3 merupakan senyawa steroid.
Gambar 2. Spektra IR isolat A8.3
Gambar  2. Struktur  senyawa  steroid maskisteron A dan
makisteron D
Berdasarkan  data  uji  kualitatif, spektra  UV  dan  IR  maka  diduga  isolat A8.3 merupakan senyawa steroid merupakan senyawa steroid yang memiliki ikatan  rangkap  C=C,  ikatan  O-H  dan ikatan C=O.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  uji  kualitatif, data  analisis  spectra  UV  dan  IR  serta literature  diduga  isolat A 8.3 merupakan turunan  senyawa  steroid  yang  memiliki ikatan  rangkap  C=C,  ikatan  O-H  dan  ikatan C=O.

## DAFTAR PUSTAKA
Irianti, Y. Y. 2012. Uji Efek Antiinflamasi Fraksi Etil Asetat Herba Lampasau
(Diplazium esculentum  Swartz)
Terhadap  Mencit  Jantan  yang Diinduksi Karagenin. Skripsi. Program  Studi  Farmasi  FMIPA Unlam, Banjarbaru. (tidak dipublikasikan).
Kaushik  A.,  J.  J.  Kaushik,  A.  Das,  S.
Gemal & D. Gaim. 2011.
Preliminary Studies on Anti- Inflammatory Activities of Diplazium esculentum in Experimental Animal Models.
IJPSR.Vol. 2(5): 1251-1253.
Khopkar,  S.  M.  2002. Konsep  Dasar Kimia  Analitik .  Terjemahan  A.
Saptorahardjo. UI Press, Jakarta.
Miean,  K.  H.  &  S.  Mohamed.  2001.
Flavonoid  (Myricetin,  Quercetin,
Kaempferol, Luteolin and Apigenin) Content of Edible
Tropical Plants . J.  Agric. Food Chem .
49 (6) : 3106–3112.
Nurmuhaimina,  S.  A.,  R.  Maulia,  I. Yuniarti  &  D.  Umaningrum.  2009.
Uji  Aktivitas  Antioksidan  dari
Ekstrak Campuran
Tumbuhan Alang-alang  ( Imperata  cylindrica ) dan
Lidah Ular ( Hedyotis Corymbosa ) Sebagai Peredam
Radikal  Bebas  Asam  Linoleat.
Sains  dan  Terapan  Kimia.  Vol.  2 No. 1 : 85 – 93.
Sandi,  D.  A.  A.  2011. Aktivitas  Analgetik Fraksi Etil Asetat Herba Lampasau (Diplazium  esculentum Swartz)
pada Mencit Putih Diinduksi Asam Asetat.  Skripsi. Program  Studi Farmasi FMIPA Unlam, Banjarbaru. (tidak dipublikasikan). Sastrohamidjojo,  H.  2001. Spektroskopi . Penerbit Liberty, Yogyakarta.