ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 12 (1) (2009): 23 – 30
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi, Identifikasi Minyak Atsiri Fuli Pala ( Myristica fragrans ) dan Uji Aktivitas Sebagai Larvasida
Ismiyarto a* , Ngadiwiyana a , Rani Mustika a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang 50275
* Corresponding author: ismiyarto@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: Fuli nutmeg,
Nutmeg, miristisin, essential oil nutmeg, larvicidal, kamfen
Pala plants ( Myristica fragrans ) which is original plants from Indonesia and Indonesia is biggest  exporter  country  seed  and  mace  of  pala  bigger  in  world.  Pala  seed  produces essential oil between 2-15% while pala mace produces  between 7-18% essential oil. In essential oil of mace contained compound myristicin which toxic and kamfen compound which is hallucinogent substance and refuse insect. The aim of this research was to isolate, identify  of  essential  oil  from  pala  mace  and  also  to  determine  effective  toxicity  as larvaside. This research was conducted in three steps. First step was isolation of essential oil  from  pala  mace  with  steam  distillation  method.  Second  step  was  identification covering  test  of  physical  characters  (colour,  odor,  rendement,  spesific  grafity  and refractive  index)  and  identify  chemical  component  of  essential  oil  resulted  from  the isolation  with  GC-MS  method.  Third  step  was  toxicity  test  of  essential  oil  as  larvaside toward  mosquito  larva Aedes  aegypti instar  III  where  was  result  will  compared  with methanol extract pala mace. The result of this research obtained essential oil was colour pure yellow typical odor with rendement 3,22%, spesific gravity of 0.9397 g/mL at 25°C and refractive index of 1.493 (25°C). Identifying chemical component was conducted with GC-MS method shown that essential oil of pala mace resulted from the isolation contained component  -pinen (13,08%),  -pinen (15.14%), sabinene (22.93%), limonene (5,60%) and myristicin (26,46%). Based on toxicity test essential oil pala mace as larvaside toward mosquito larva Aedes aegypti instar III shown LC 50 -6 hour 224.399 ppm, LC 50 -12 hour was 150.724 ppm and LC 50 -24 hour was 111.002 ppm. Whereas at methanol extract shown LC 50 - 24  hour  was  304,434  ppm  and  LC 50 -48  hour  was  284  ppm.  So  that  can  to  asked  that essential oil pala mace potentially as larvaside than methanol extract pala mace.

## A b s t r a k
Kata kunci:
Fuli pala, Pala, miristisin, minyak atsiri fuli pala, larvasida, kamfen
Tanaman  pala  ( Myristica  fragrans )  adalah  tanaman  asli  Indonesia  dan  Indonesia merupakan negara pengekspor biji dan fuli pala terbesar di dunia. Biji pala menghasilkan minyak atsiri 2-15% sedangkan fuli menghasilkan 7-18% minyak atsiri. Dalam minyak atsiri fuli pala mengandung senyawa miristisin yang bersifat toksik dan senyawa kamfen yang  merupakan  zat  pembius  dan  penolak  serangga.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengisolasi,  mengidentifikasi  minyak  atsiri  dari  fuli  pala  serta  mengetahui  toksisitas efektif sebagai larvasida. Penelitian ini dilakukan dalam tiga tahap. Tahap pertama yaitu isolasi  minyak  atsiri  dari  fuli  pala  dengan  metode  destilasi  uap.  Tahap  kedua  adalah identifikasi  yang meliputi  uji  sifat  fisik  (warna,  bau,  rendemen,  berat  jenis dan  indeks bias) dan identifikasi komponen kimia minyak atsiri hasil isolasi dengan metode GC-MS. Tahap ketiga adalah uji toksisitas minyak atsiri sebagai larvasida terhadap larva nyamuk Aedes aegypti instar III dimana hasilnya akan dibandingkan dengan ekstrak metanol fuli pala. Dari hasil penelitian diperoleh minyak atsiri berwarna kuning jernih yang berbau
khas pala dengan rendemen sebesar 3,22%, berat jenis sebesar 0,9397 g/mL pada 25°C dan indeks bias sebesar 1,493 (25°C). Identifikasi komponen kimiawi dengan metode GC- MS  menunjukkan minyak atsiri  fuli  pala  hasil  isolasi  mengandung  komponen  -pinen (13,08%),  -pinen  (15,14%),  sabinene  (22,93%),  limonene  (5,60%)  dan  miristisin (26,46%). Berdasarkan  uji  toksisitas minyak atsiri  fuli  pala sebagai  larvasida  terhadap larva  nyamuk Aedes  aegypti instar  III  akhir  menunjukkkan  nilai  LC 50 -6  jam  sebesar 224,399  ppm,  LC 50 -12  jam  sebesar 150,724  ppm dan LC 50 -24  jam  sebesar 111,002  ppm. Sedangkan pada ekstrak metanol menunjukkan nilai LC 50 -24 jam sebesar 304,434 ppm dan LC 50 -48 jam sebesar 284,200 ppm. Sehingga dapat dikatakan bahwa minyak atsiri fuli pala lebih berpotensi sebagai larvasida dibandingkan dengan ekstrak metanol fuli pala.

## 1. Pendahuluan
Tanaman  pala  ( Myristica  fragrans )  adalah  tanaman asli  Indonesia  yang  berasal  dari  kepulauan  Banda  dan Maluku.  Indonesia  merupakan  negara  pengekspor  biji pala dan fuli terbesar di pasaran dunia (sekitar 60%) dan sisanya dipenuhi dari negara lain. Tanaman pala dikenal sebagai tanaman rempah yang memiliki nilai ekonomis yang tinggi. Hasil tanaman pala yang biasa dimanfaatkan adalah  buah  pala.  Buah  pala  terdiri  dari  daging  buah (77,8%),  fuli  (4%),  tempurung  (5,1%)  dan  biji  (13,1%). Bagian buah yang bernilai ekonomis cukup tinggi adalah biji  pala  dan  fuli  ( mace )  yang  dapat  dijadikan  minyak pala. Daging buah pala dapat dimanfaatkan untuk diolah menjadi manisan pala, asinan pala, dodol pala, selai pala dan sirup pala.
Sebagai  tanaman  rempah-rempah,  pala  dapat menghasilkan  minyak  atsiri  dan  lemak  khusus  yang berasal dari biji dan fuli. Biji pala menghasilkan minyak atsiri  2-15%  dan  30-40%  lemak,  sedangkan  fuli menghasilkan  7-18%  minyak  atsiri  dan  20-30%  lemak (fuli adalah ari yang berwarna merah tua dan merupakan selaput jala yang membungkus biji).
Tanaman  pala  menghasilkan  senyawa  miristisin, miristisin  terdapat  dalam  minyak  pala  dan  minyak fulinya,  dimana  minyak  fuli  mengandung  lebih  banyak senyawa miristisin daripada minyak biji pala (50% dari jumlah  fuli)  [1].  Miristisin adalah  salah  satu  komponen yang menyebabkan minyak pala bersifat toksik [2]. Efek racun  pada  minyak  pala  tidak  hanya  disebabkan  oleh miristisin, tetapi juga disebabkan oleh produk metabolit miristisin yaitu 3-metoksi-4,5- metilendioksiamfetamina (MMDA) dan
trimetoksiamfetamina  [3].  Miristisin  memiliki  struktur yang  mirip  dengan  amfetamin  yang  menyebabkan minyak  pala  memiliki  efek  psikotropik  (bersifat halusinogen).  Toksisitas  minyak  pala  disisi  lain  dapat memberikan keuntungan. Minyak pala dapat digunakan sebagia  pestisida.  Penggunaan  minyak  pala  sebagai pestisida  didasari  oleh  fakta  bahwa  minyak  pala  juga memiliki aktivitas insektisida, fungisida dan bakterisida. Minyak  pala  mengandung  senyawa  monoterpen (kamfena)  yang  merupakan  zat  pembius  dan  penolak serangga [4].
Adanya  senyawa  kamfen  dan miristicin  dalam pala ini  telah  dibuktikan  oleh  Janssens,  dkk.  [5]  yang menyatakan bahwa kandungan minyak atsiri pala sekitar 5-15% yang meliputi pinen, sabinen, kamfen, miristicin,
elemisin,  isoelemisin,  eugenol,  isoeugenol,  metok- sieugenol,  safrol,  dimerik  polipropanoat,  lignan,  dan neolignan. Adanya kamfen dalam minyak pala juga telah dibuktikan oleh [6]. Tawatsin, dkk. [6] juga menyatakan bahwa  dalam  minyak  atsiri  pala  mempunyai  potensi sebagai  penolak  terhadap  nyamuk Aedes  aegypti dan nyamuk Culex .
Berdasarkan hal tersebut, maka dalam penelitian ini akan dilakukan isolasi minyak atsiri dari fuli pala dengan metode  destilasi  uap  serta  menganalisis  komponen- komponen  kimia  minyak  pala  baik  secara  kualitatif maupun  kuantitatif  dengan  menggunakan  alat  GC-MS, serta  menentukan  toksisitas  efektif  minyak  atsiri  pala terhadap larva nyamuk Aedes aegypti instar III.

## 2. Metode Penelitian

## Sampel
Sampel  yang  digunakan  adalah  fuli  buah  pala ( Myristica  fragrans ),  yang  diambil  di  daerah  kebun  pala Semirang,  Kecamatan  ungaran,  Kabupaten  Semarang, Jawa Tengah.

## Alat
Alat-alat yang digunakan yaitu: blender, timbangan analit, kertas saring, kertas aluminium foil, seperangkat alat  destilasi,  maserator,  penguap  putar  ( rotary evaporator ) Buchi,  piknometer,  gelas  beker,  kaca  arloji, tabung reaksi, labu ukur, botol vial, corong kaca, corong pisah, pipet tetes, statif dan klem, kapas, tissue, kertas pH, penangas listrik, kasa kawat, pengaduk, gelas plastik dan spektrometer GC-MS Shimadzu.

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan yaitu: Metanol, FeCl 3, Asam  Klorida  pekat,  Asam  sulfat  pekat,  Amil  alkohol, Dietil  Eter,  Larutan  Tween-20,  Kloroform,  Aquades, Amonia, H 2 SO 4 2N, HCl 2N, Serbuk Mg, Pereaksi Mayer, pereaksi  Dragendorf,  Asam  asetat  anhidrat,  Na 2 SO 4 anhidrat, Etil asetat dan telur nyamuk Aedes aegypti .

## Tahap-tahap Penelitian

## Pembuatan serbuk halus fuli buah pala
Fuli  pala  kering  yang  diperoleh  dari  PTP  Semirang Ungaran  selanjutnya  dihancurkan  dengan  blender sampai  berbentuk  serbuk,  kemudian  serbuk  diayak hingga didapat serbuk halus.

## Penapisan Fitokimia
Serbuk  sampel  yang  dihasilkan  selanjutnya diidentifikasi  kandungan  bahan  aktifnya  melalui  uji fitokimia.  Uji  ini  meliputi  identifikasi  adanya  Tanin, Alkaloid,  Saponin,  Flavonoid,  Terpenoid/Steroid  dan kuinon.
Identifikasi  Tanin. Sebanyak  50  mgram  serbuk sampel  dididihkan  dalam  10  mL  air  selama  5  menit, kemudian  didinginkan  dan  disaring.  Filtrat  yang diperoleh selanjutnya di tambahkan larutan FeCl 3 1% dan timbulnya  warna  hijau  violet,  hitam  menunjukkan adanya tanin.
Identifikasi  Alkaloid. Sebanyak  5  mg  serbuk simplisia  dilembabkan  dengan  5  mL  amonia  25%  dan digerus dalam krus porselin. Kemudian ditambah 20 mL kloroform dan digerus kuat selanjutnya disaring. Untuk pemeriksaan alkaloid, 10 mL larutan organik diekstraksi 2  kali  dengan  HCl  (1:10).  Sebanyak  5  mL  larutan  ini masing-masing  dimasukkan  kedalam  2  tabung  reaksi. Adanya  alkaloid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya endapan  merah  bata  setelah  ditambahkan  pereaksi Dragendorff  dan  endapan  putih  setelah  ditambah pereaksi Meyer.
Identifikasi  Saponin. Sebanyak  5  g  serbuk dididihkan dalam 100 mL air selama 5 menit, kemudian disaring dalam keadaan panas. Larutan tersebut diambil sebanyak  10  mL  kemudian  dikocok  kuat  secara  vertikal selama  10  detik.  Jika  terbentuk  busa  setinggi  1-10  cm yang  stabil  sekitar  10  menit  dan  tidak  hilang  pada penambahan  setetes  HCl  2  N  menunjukkan  adanya saponin.
Identifikasi  Flavonoid. Sebanyak  5  mL  filtrat  dari larutan (3) ditambah serbuk Mg, 1 mL HCl pekat dan 2 mL amil  alkohol,  dikocok  kuat  dan  dibirkan  memisah. Adanya  flvonoid  ditunjukkan  jika  terbentuk  warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol.
Identifikasi  Triterpenoid/Steroid. Sebanyak  5  g serbuk  dimaserasi  dengan  20  mL  eter  selama  2  jam, kemudian  disaring.  Selanjutnya  5  mL  filtrat  yang diperoleh diuapkan dalam cawan penguap sampai kering. Kemudian  ditambah  setetes  asam  asetat  anhidrat  dan setetes asam sulfat pekat. Terbentuknya warna biru atau ungu  menandakan  adanya  steroid,  sedangkan  bila terbentuk warna merah menandakan adanya terpenoid.
Identifikasi Kuinon. Sebanyak 1 g sampel dididihkan dalam 10 mL air selama 5 menit, kemudian didinginkan dan  disaring.  Kemudian  ke  dalam  5  mL  filtrat  tersebut dimasukkan natrium hidroksida 1N. Jika terbentuk warna merah, menunjukkan adanya kuinon.

## Isolasi Minyak Atsiri dengan Metode Destilasi Uap
Serbuk  sampel  yang  telah  ditimbang  dimasukkan kedalam  labu  destilasi  dan  ditambahkan  akuades. Peralatan destilasi  kemudian dipasang dan dipanaskan. Destilasi  dilakukan  selama  dua  jam  setelah  mendidih. Tampung destilat yang diperoleh. Setelah proses destilasi selesai,  uap  air  yang  berisi  minyak  dari  hasil  destilasi
kemudian  dipisahkan  dengan  corong  pisah  dengan menambahkan  pelarut  dietil  eter.  Fraksi  air  yang diperoleh  dari  pemisahan  tersebut  dibuang  sementara fraksi  dietil  eter  diuapkan,  sehingga  diperoleh  minyak pala. Minyak pala yang diperoleh selanjutnya dimurnikan dengan  menambahkan  Na 2 SO 4 anhidrat,  kemudian didekantir disaring sehingga diperoleh minyak pala yang murni bebas air.

## Karakterisasi Minyak Atsiri
Minyak  atsiri  yang  diperoleh  kemudian  ditentukan warna, bau, berat jenis dan indeks biasnya.

## Identifikasi Komposisi Minyak Pala dengan GC-MS
Komponen-komponen  minyak  atsiri  hasil  isolasi ditentukan  dengan  alat  GC-MS.  Penentuan  senyawa komponen  minyak  dilakukan  dengan  membandingkan pola  fragmen  isi  spektra  GC  dengan  pola  fragmentasi spektra  MS  senyawa  yang  telah  diketahui  strukturnya yang  berasal  dari  data  base  komputer  yang  telah dihubungkan dengan alat GC-MS.
Uji Toksisitas Minyak Atsiri terhadap Larva Aedes aegypti
Pengadaan  Hewan  Uji. Hewan  uji  yang  digunakan adalah larva nyamuk Aedes aegypti instar III akhir untuk uji toksisitas. Larva diperoleh dari Balai Besar Penelitian &  Pengembangan  Vektor  &  Reservoir  Penyakit (B2P2VRP) Salatiga.
Uji  Bioassay. Uji  pendahuluan  dilakukan  untuk mengetahui  konsentrasi  ambang  bawah  (LC 5 )  dan ambang atas (LC 90 ). Kriteria mati pada hewan uji adalah hewan  uji  tidak  bergerak  bila  disentuh  dan  tidak  bisa mencapai permukaan. Ditentukan 6 tingkatan konsentrasi  dari  minyak  atsiri  ditambah  perlakuan kontrol. Larutan minyak  atsiri-air bahan  uji  digunakan sebagai medium hidup larva. Konsentrasi minyak atsiri- air adalah 70, 90, 100, 300, 500, 700 dan 0 ppm sebagai kontrol dengan masing-masing 1x ulangan. Uji tersebut bertujuan untuk melihat kisaran konsentrasi yang dapat digunakan  dalam  penelitian  utama.  Hewan  uji  adalah larva Aedes aegypti instar III akhir sebanyak 20 larva yang dimasukkan dalam gelas plastik berukuran 220 ml yang berisi  50  ml  larutan  berbagai  konsentrasi  ekstrak-air. Pengamatan  dilakukan  dengan  menghitung  persentase kematian larva setiap jam sampai jam ke-6.
Uji  Toksisitas  Utama. Uji  toksisitas  utama  yaitu LC 50 -24  jam  dilakukan  dengan  ekstrak  minyak  atsiri sebagai  bahan  uji,  konsentrasi  yang  digunakan berdasarkan  hasil  uji  pendahuluan antara LC 90 dan LC 5 . Hasil  uji  dikatakan  efektif  jika  ekstrak  yang  diujikan menyebabkan 50% kematian pada hewan uji (LC 50 ).
Perlakuan yang diinginkan dalam pendugaan LC 50 - 24  jam  adalah  5  perlakuan  dan  1  kontrol.  Konsentrasi yang digunakan adalah 100, 150, 200, 250 300 dan 0 ppm sebagai kontrol. Masing-masing perlakuan serta kontrol diulangi  sebanyak  5x.  Masing-masing  perlakuan dilakukan  didalam  gelas  220  ml  yang  berisi  larutan ekstrak  (bahan  uji)  dengan  konsentrasi  yang  telah
ditentukan,  dimana  sebanyak  50  mL  diisikan  20  larva Aedes  aegypti instar  III  akhir.  Perlakuan  ini  dilakukan selama  24  jam,  mortalitas  larva  masing-masing perlakuan diamati setiap jam, jam ke 6, 12 dan sampai 24 jam.  Selanjutnya  penentuan nilai  LC 50 -24  jam  terhadap mortalitas  larva  uji  dianalisa  dengan  menggunakan analisa probit.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Isolasi Minyak Atsiri Fuli Pala
Serbuk  sampel  kering  yang  didapatkan  dilakukan analisis  fitokimia.  Penapisan  fitokimia  atau screening fitokimia  dilakukan  untuk  mendapatkan  gambaran umum  mengenai  golongan  atau  senyawa  yang terkandung  di  dalam  sampel.  Dari  penapisan  fitokimia yang dilakukan menunjukkan hasil sebagai berikut:
Tabel 1. Hasil Penapisan Fitokimia Fuli Kering
G ol on ga n T an in A lka lo id Sa po n in Fl avo n oi d St er oi d/ Te rpe n oi d
K ui n on Hasil ++ ++ - +++ +++/+++ ++
Keterangan:
+:  terdapat  senyawa  yang  dimaksud  dengan  intensitas kenampakan
:  tidak  terdapat  senyawa  yang  dimaksud  dengan intensitas kenampakan
Dari tabel di atas menunjukkan bahwa di dalam fuli pala kering terdapat senyawa metabolit sekunder berupa tanin, alkaloid, flavonoid, steroid, terpenoid dan kuinon. Sedangkan  senyawa  atau  golongan  saponin  tidak terdapat dalam sampel fuli pala kering.
Tahap  selanjutnya  setelah  dilakukan  penapisan fitokimia,  serbuk  sampel  yang  sudah  kering  dilakukan pemisahan  minyak  atsiri  dengan  metode  destilasi  uap. Pada sistem penyulingan yang digunakan, sampel/bahan yang  akan  disuling  kontak  secara  langsung  dengan  air mendidih.  Pemilihan  metode  destilasi  air  ini  dilakukan karena  metode  ini  baik  digunakan  untuk  menyuling bahan  yang  berbentuk  serbuk  (tepung)  dan  bunga- bungaan  yang  mudah  menggumpal  apabila  terkena panas.  Proses  pemisahan  minyak  atsiri  dengan  metode destilasi air ini dilakukan selama 2 jam setelah terjadinya kondensasi.  Komponen-komponen  minyak  atsiri  pada sampel akan teruapkan dari jaringan bersama-sama uap air. Setelah uap minyak dan uap air melalui kondensor, uap  akan  mengembun  berubah  menjadi  cairan  destilat dan  ditampung.  Destilat  merupakan  campuran  antara minyak  dan  air  dengan  minyak  berada  di  atas  karena berat jenis minyak lebih rendah daripada berat jenis air.
Lapisan air hasil destilasi diekstaksi dengan pelarut eter.  Hal  ini  bertujuan  untuk  memisahkan  minyak  fuli yang  kemungkinan  masih  terdapat  dalam  lapisan  air sehingga  dapat  meningkatkan  rendemen  minyak  fuli.
Lapisan  minyak  fuli  dan  eter  ini  kemudian  diuapkan pelarut  eternya  untuk  memperoleh  minyak  fuli.  Untuk mendapatkan  minyak  fuli  pala  murni,  selanjutnya minyak  hasil  isolasi  dihilangkan  air  yang  masih terkandung  dengan  menggunakan  Na 2 SO 4 anhidrat. Adanya  Na 2 SO 4 anhidrat  akan  mengikat  air  yang  masih terkandung  dalam  minyak  fuli,  sehingga  diperoleh minyak atsiri fuli pala murni yang bebas air.
Minyak  atsiri  fuli  pala  yang  dihasilkan  pada penelitian  ini  sebanyak  11,33  g  dari  sampel  kering sebanyak 351,6088  g.  Rendemen  minyak atsiri fuli  pala yaitu sebesar 3,22%. Rendemen yang dihasilkan ini jauh berbeda dengan yang terdapat di literatur sebesar 8-17%. Perbedaan  ini  mungkin  disebabkan  oleh  banyaknya minyak  yang  hilang  pada  saat  proses  pengeringan  dan penghalusan sampel.
Selanjutnya  minyak  diidentifikasi  tetapan  fisiknya yaitu  warna,  bau,  berat  jenis  dan  indeks  bias.  Minyak atsiri fuli pala yang diperoleh berwarna kuning jernih dan berbau  khas  pala.  Hasil  pengukuran  berat  jenis  minyak atsiri  fuli  pala  yaitu  0,9397  g/mL  pada  25°C,  menurut literatur  sebesar  0,847-0,919  pada  25°C  sedangkan indeks biasnya sebesar 1,493 pada 25°C (literatur 1,472- 1495  pada  25°C).  Nilai  tetapan  fisik  ini  biasanya digunakan  untuk  mengetahui  kualitas  dan  kemurnian minyak  atsiri  dengan  cara  membandingkan  dengan tetapan fisik minyak atsiri fuli pala standar.
Pada  penelitian  ini,  selain  dilakukan  pengisolasian minyak  atsiri  fuli  pala  dilakukan  juga  maserasi  sampel kering menggunakan pelarut metanol selama 3 x 24 jam. Pelarut  metanol  merupakan  pelarut  universal  sehingga dapat melarutkan senyawa-senyawa bahan alam secara umum,  baik  senyawa  polar,  semi  polar  maupun  non polar.  Pemekatan  terhadap  ekstrak  hasil  maserasi dilakukan dalam keadaan vakum dengan menggunakan rotary  evaporator  menghasilkan  ekstrak  pekat  yang berwarna  coklat  tua.  Ekstrak  pekat  hasil  maserasi  ini nantinya  akan  dibandingkan  toksisitasnya  dengan minyak atsiri dalam uji larvasida terhadap larva nyamuk Aedes aegypti instar III.
Selanjutnya  ekstrak  pekat  hasil  maserasi  ini dilakukan  analisis  fitokimia.  Penapisan  fitokimia  atau screening fitokimia  dilakukan  untuk  mendapatkan gambaran umum mengenai golongan atau senyawa yang terkandung  di  dalam  ekstrak  hasil  maserasi.  Dari penapisan fitokimia yang dilakukan menunjukkan hasil sebagai berikut:
Tabel 2. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Metanol
Go lo n ga n Ta n in Al ka lo id Sa po n in Fl avo n oi d St er oi d/ T er pe n oi d Ku in on Hasil ++ ++ * +++ +++/+++ ++
Keterangan:
*: tidak dilakukan +:  terdapat  senyawa  yang  dimaksud  dengan  intensitas kenampakan -  :  tidak  terdapat  senyawa  yang  dimaksud  dengan intensitas kenampakan

## Identifikasi Komponen Kimia Minyak Atsiri Fuli Pala
Untuk mengetahui komponen kimiawi dari minyak atsiri fuli pala, dilakukan analisis menggunakan metode GC-MS. Salah satu syarat suatu senyawa dapat dianalisis dengan  GC-MS  adalah  senyawa  tersebut  mudah menguap  (volatil).  Hasil  analisis  GC  menunjukkan  24 puncak  yang  berarti  ada  24  komponen  senyawa  pada minyak  atsiri  fuli  pala  hasil  isolasi.  Keduapuluh  empat komponen  tersebut  selanjutnya  diidentifikasi  memakai spektroskopi  massa.  Identifikasi  selanjutnya  dilakukan pada  enam  senyawa  dengan  intensitas  puncak  paling tinggi  yang menunjukkan  kelimpahan  terbanyak dalam minyak  atsiri  fuli  pala  hasil  isolasi.  Senyawa  yang diidentifikasi adalah senyawa dengan nomer puncak 2, 4, 5, 11, 16 dan 24.
Gambar 1. Kromatografi GC minyak atsiri fuli pala
Dari gambar 1 ini terlihat adanya 5 puncak tertinggi yang  menunjukkan  komponen  utama  dari  minyak  fuli pala. Data yang lebih lengkap mengenai keenam puncak tersebut ditampilkan pada Tabel 3 sebagai berikut:

## Tabel 3. Data komponen penyusun minyak fuli pala
Puncak Waktu retensi (menit) % Area Massa molekul (g/mol) m/e Senyawa 2 6,351 13,08 136 41, 53, 67, 77, 93, 105, 121 dan 136  -pinen 4 7,505 22,93 136 41, 43, 69, 77, 93, 107, 121 dan 136 Sabinene 5 7,626 15,14 136 41, 53, 69, 79, 93, 107, 121 dan 136  -pinen 11 9,223 5,60 136 39, 53, 68, 79, 93, 107, 121 dan 136 Limonene 24 24,493 26,46 192 39, 53, 65, 77, 91, 103, 119, 131, 147, 165, 177 dan 192 Myristicin
Gambar 2. Spektogram massa senyawa nomor puncak 2
Gambar 3. Spektogram massa senyawa nomor puncak 4
Gambar 4. Spektogram massa senyawa nomor puncak 5
Gambar 5. Spektogram massa senyawa nomor puncak 11

## Gambar 6. Spektogram massa senyawa nomor puncak 24

## Uji Toksisitas Minyak Atsiri Fuli Pala Terhadap Larva Aedes aegypti
Untuk  mengetahui  toksisitas  efektif  dari  minyak atsiri fuli pala sebagai larvasida dilakukan uji toksisitas terhadap  minyak  atsiri  fuli  pala  hasil  isolasi  dengan menggunakan larva Aedes aegypti sebagai hewan ujinya. Larva  nyamuk  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah larva nyamuk Aedes aegypti instar III akhir. Pada penelitian ini pemilihan instar larva menjadi bagian yang penting  karena  larva  tersebut  menjadi  obyek  dalam penelitian  ini.  Apabila  salah  memilih  instar  larva  maka akan mengakibatkan tingkat kematian larva yang terlalu cepat sehingga akan didapatkan Lethal Concentration (LC) yang  tidak  sesuai  dengan  target  penelitian  [7].  Pada penelitian ini dilakukan dua uji yaitu uji pendahuluan dan uji toksisitas utama.

## Uji Pendahuluan
Hasil uji pendahuluan disajikan dalam Tabel 4 yang menunjukkan bahwa nilai LC 5 pada konsentrasi 100 ppm sedangkan nilai LC 90 pada konsentrasi 300 ppm.
Tabel 4. Hasil Uji Pendahuluan Minyak Atsiri Fuli Pala
Konsentrasi (ppm)  larva Aedes aegypti yang mati Ulangan Keterangan I II Kontrol 0 0 70 0 0 90 0 0 100 1 1 LC5 300 18 18 LC90 500 20 20 700 20 20
Uji  pendahuluan  ini  dilakukan  untuk  mengetahui kisaran  konsentrasi  ambang  atas  (LC 90 )  dan  ambang bawah  (LC 5 ).  Pada  uji  pendahuluan  ini,  ditentukan  6 konsentrasi  dari  minyak  atsiri  hasil  isolasi  di  tambah  1 perlakuan  kontrol.  Larutan  ekstrak-air  uji  digunakan
sebagai  medium  hidup  larva.  Konsentrasi  ekstrak  yang digunakan adalah: 70, 90, 100, 300, 500, 700 dan 0 ppm tanpa  ekstrak  sebagai  kontrol.  Uji  tersebut  bertujuan untuk melihat kisaran konsentrasi yang dapat digunakan dalam penelitian utama.

## Uji Toksisitas Utama
Uji  toksisitas  utama  ini  digunakan  untuk menentukan  konsentrasi  efektif  (LC 50 )  yang  dapat digunakan untuk membunuh larva Aedes aegypti instar III akhir.  Pengujian  dilakukan  pada  suhu  kamar.  Kisaran konsentrasi  yang  digunakan  pada  uji  utama  ini  adalah berdasarkan  hasil  uji  pendahuluan  antara  LC 90 dan  LC 5 , dimana  konsentrasi  yang  digunakan  adalah  100,  150, 200, 250, 300 ppm dan blanko sebagai kontrol. Hasil uji dikatakan  efektif  apabila  ekstrak  yang  diujikan menyebabkan 50% kematian hewan uji pada LC 50 . Hasil uji toksisitas minyak atsiri terhadap larva nyamuk Aedes aegypti dalam  penelitian  ini  disajikan  pada  Tabel  5,  4.6 dan 4.7.
Tabel 5. Hasil Uji Toksisitas Terhadap Larva Aedes aegypti Instar III Akhir Setelah 6 Jam Perlakuan
Konsentrasi (ppm)  larva Aedes aegypti yang mati Ulangan ke-  rata- rata %kematian I II III IV V 100 1 0 0 1 1 0,6 3 150 2 4 3 4 2 3 15 200 4 2 4 9 10 5,8 29 250 10 12 13 15 15 13 65 300 15 15 16 16 18 16 80 Kontrol 0 0 0 0 0 0 0
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 12 (1) (2009): 23 – 30
Tabel 6. Hasil Uji Toksisitas Terhadap Larva Aedes aegypti Instar III Akhir Setelah 12 Jam Perlakuan Konsentrasi (ppm)  larva Aedes aegypti yang mati Ulangan ke-  rata- rata %kematian I II III IV V 100 4 5 4 5 6 4,8 24 150 8 7 5 8 12 8 40
200 14 9 8 16 19 13,2 66 250 19 19 19 19 20 19,2 96 300 20 20 20 20 20 20 100 Kontrol 0 0 0 0 0 0 0
Tabel 7. Hasil Uji Toksisitas Terhadap Larva Aedes aegypti Instar III Akhir Setelah 24 Jam Perlakuan Konsentrasi (ppm)  larva Aedes aegypti yang mati Ulangan ke-  rata- rata %kematian I II III IV V 100 6 8 7 5 12 7,6 38 150 17 17 16 16 17 16,6 83 200 17 18 17 20 20 18,4 92 250 20 20 20 20 20 20 100 300 20 20 20 20 20 20 100 Kontrol 0 0 0 0 0 0 0
Dari  Tabel  5  tersebut  dapat  dilihat  rata-rata kematian  larva  6  jam  setelah  perlakuan  dari  tiap konsentrasi. Pada konsentrasi 100 ppm dapat membunuh larva nyamuk Aedes aegypti sebanyak 3% dan konsentrasi tertinggi 300 ppm dapat membunuh 80% larva nyamuk.
Sedangkan dari Tabel 6 tersebut dapat dilihat rata- rata  kematian  larva  12  jam  setelah  perlakuan  dari  tiap konsentrasi. Pada konsentrasi 100 ppm dapat membunuh larva  nyamuk  sebanyak  24%  dan  pada  konsentrasi tertinggi 300 ppm dapat membunuh 100% larva nyamuk Aedes aegypti .
Kemudian  dari  Tabel  7  tersebut  dapat  dilihat  rata- rata  kematian  larva  24  jam  setelah  perlakuan  dari  tiap konsentrasi. Pada konsentrasi 100 ppm dapat membunuh larva  nyamuk  sebanyak  38%.  Sedangkan  pada konsentrasi  tertinggi  250  ppm  dan  300  ppm  dapat membunuh 100% larva nyamuk Aedes aegypti .
Uji  analis  probit  memberikan  hasil  bahwa  untuk waktu pengamatan 6 jam setelah perlakuan LC 50 terletak pada konsentrasi 224,399 ppm, sedangkan untuk waktu 12 jam setelah perlakuan LC 50 terletak pada konsentrasi 150,724  ppm  dan  untuk  waktu  pengamatan  24  jam setelah perlakuan LC 50 terletak pada konsentrasi 111,002 ppm.
Uji toksisitas utama menggunakan bahan uji minyak atsiri diatas selanjutnya dibandingkan dengan bahan uji hasil  maserasi  fraksi  metanol.  Pembandingan  dalam
penelitian ini dimaksudkan untuk mengetahui aktivitas larvasida  dengan  membandingkan  toksisitas  efektif (LC 50 )  dari  kedua  bahan  uji.  Hasil  uji  toksisitas menggunakan ekstrak metanol disajikan dalam  Tabel  8 dan 4.9 sebagai berikut:

## Tabel 8. Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Metanol Terhadap
Larva Aedes aegypti Instar III Akhir Setelah 24 Jam Perlakuan Konsentrasi (ppm)  larva Aedes aegypti yang mati Ulangan ke-  rata- rata %kematian
I II III 100 3 1 4 2,67 13,35 150 3 3 2 2,67 13,35 200 3 2 3 2,67 13,35 250 5 4 3 4 20 300 8 11 9 9,33 46,65 350 19 17 17 17,67 88,33 Kontrol 0 0 0 0 0
Tabel 9. Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Metanol Terhadap Larva Aedes aegypti Instar III Akhir Setelah 48 Jam Perlakuan Konsentrasi (ppm)  larva Aedes aegypti yang mati Ulangan ke-  rata- rata %kematian I II III 100 4 3 5 4 20 150 5 5 3 4,33 21,65 200 7 4 6 5,67 28,35 250 7 7 7 7 35 300 12 11 11 11,33 56,65 350 20 20 20 20 100 Kontrol 0 0 0 0 0
Dari  Tabel  8  tersebut  dapat  dilihat  rata-rata kematian  larva  24  jam  setelah  perlakuan  dari  tiap konsentrasi.  Pada  konsentrasi  100,  150  dan  200  ppm dapat membunuh  larva nyamuk Aedes aegypti sebanyak 13,35% dan pada konsentrasi 300 ppm dapat membunuh 46,65%  larva  nyamuk  sedangkan  pada  konsentrasi tertinggi  350  ppm  dapat  membunuh  larva  nyamuk sebanyak 88,33%.
Sedangkan dari Tabel 9 tersebut dapat dilihat rata- rata  kematian  larva  48  jam  setelah  perlakuan  dari  tiap konsentrasi. Pada konsentrasi 100 ppm dapat membunuh larva  nyamuk Aedes  aegypti sebanyak  20%  dan  pada konsentrasi  300  ppm  dapat  membunuh  56,65%  larva nyamuk sedangkan pada konsentrasi tertinggi 350 ppm dapat membunuh  larva nyamuk Aedes aegypti sebanyak 100%.
Uji  analis  probit  memberikan  hasil  bahwa  untuk waktu  pengamatan  24  jam  setelah  perlakuan  LC 50 terletak  pada  konsentrasi  304,434  ppm,  sedangkan
untuk waktu 48 jam setelah perlakuan LC 50 terletak pada konsentrasi 284,200 ppm.
Dari uji toksisitas tersebut diatas dapat disimpulkan bahwa  minyak  atsiri  fuli  pala  hasil  isolasi  lebih berpotensi  sebagai  larvasida  dibandingkan  dengan ekstrak metanol fuli pala.

## 4. Kesimpulan
Dari pembahasan dioatas dapat disimpulkan bahwa isolasi  minyak  atsiri  dari  fuli  pala  ( Myristica  fragrans ) dengan  metode  destilasi  uap  yang  diperoleh  berwarna kuning  jernih,  berbau  khas  pala,  dengan  rendemen 3,22%,  berat  jenis  0,9397  g/mL  dan  indeks  bias  1,493 pada  (25°C).  Hasil  analisis  dengan  metode  GC-MS menunjukkan  minyak  atsiri  fuli  pala  mengandung komponen  -pinen  (13,08%),  -pinen  (15,14%), sabinene  (22,93%),  limonene  (5,60%),  safrol  (3,62%) dan  miristisin  (26,46%).  Dan  uji  aktivitas  sebagai larvasida, minyak atsiri menunjukkan nilai LC50-6 jam sebesar 224,399 ppm, LC 50 -12 jam sebesar 150,724 ppm dan LC 50 -24 jam sebesar 111,002 ppm. Sedangkan ekstrak metanol menunjukkan nilai LC 50 -24 jam sebesar 304,434 ppm dan LC 50 -48.

## 5. Referensi
[1]  A. T. Shulgin, Possible implication of myristicin as a psychotropic  substance,  Nature,  210  (1966)  380- 384.
[2]  Henk  Maarse,  Volatile  Compounds  in  Foods  and Beverages, Marcel Dekker, New York, 1991.
[3]  Matthew J. Ellenhorn, Donald G. Barceloux, Medical Toxicology:  Diagnosis  and  Treatment  of  Human Poisoning, Elsevier, 1988.
[4]  T.E. Wallis, Textbook of Pharmacognosy, 4 ed., J. & A. Churchill Ltd., London, 1960.
[5]  Jos  Janssens,  Gert  M.  Laekeman,  Lug  A.  C.  Pieters, Jozef  Totte,  Arnold  G.  Herman,  Arnold  J.  Vlietinck, Nutmeg  oil:  Identification  and  quantitation  of  its most  active  constituents  as  inhibitors  of  platelet aggregation,  Journal  of  Ethnopharmacology,  29 (1990) 179-188.
[6]  A.  Tawatsin,  P.  Asavadachanukorn,  U.  Thavara,  P. Wongsinkongman,  J.  Bansidhi,  T.  Boonruad,  P. Chavalittumrong,  N.  Soonthornchareonnon,  N. Komalamisra,  M.  S.  Mulla,  Repellency  of  essential oils  extracted  from  plants  in  Thailand  against  four mosquito vectors (Diptera: Culicidae) and oviposition  deterrent  effects  against Aedes  aegypti (Diptera: Culicidae), The Southeast Asian journal of tropical medicine and public health, 37 (2006) 915- 931.
[7]  Dewi Susanna, A. Rahman, Eram Tunggal Pawenang, Potensi Daun Pandan Wangi untuk Membunuh Larva Nyamuk Aedes  aegypti ,  Jurnal  Ekologi  Kesehatan,  2
(2003) 228-231.