J. Kartika Kimia , November 2020, 3, (2), 60-69 Journal homepage : http://jkk.unjani.ac.id/index.php/jkk P-ISSN: 2655-1322     E-ISSN: 2655-0938

## Teknik Sterilisasi Eksplan Tunas Kentang Granola Kembang (Solanum
Tuberosum L.) untuk Kultur in Vitro

## Explant Sterilization Technique of Shoot Granola Kembang Potato (Solanum tuberosum L.) for In Vitro Culture
Syarif Hamdani, Delima Nugraha, Tiara Berliani, Umi Baroroh * Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia *E-mail: umibaroroh@stfi.ac.id
DOI: https://doi.org/10.26874/jkk.v3i2.63
Received : 1 Nov 2020, Revised : 29 Nov 2020, Accepted : 29 Nov 2020, O nline : 30 Nov 2020

## Abstrak
Kentang ( Solanum tuberosum L .) merupakan tanaman yang banyak dimanfaatkan, baik kentang segar maupun olahan. Namun, produktivitasnya masih rendah karena mutu bibit yang tersedia masih terbatas dan  kualitasnya juga  kurang  baik.  Kentang  kultivar  granola  kembang  potensial untuk  dikembangkan karena  umur  panen  yang  pendek  dan  tinggi  hasil.  Perbanyakan in  vitro dapat  dilakukan  untuk menghasilkan  benih  yang  bermutu.  Keberhasilan  kultur  jaringan  sangat  dipengaruhi  oleh  teknik sterilisasi eksplan. Adanya kontaminasi bakteri, jamur, dan terjadinya pencoklatan pada eksplan dapat mengganggu  proses  perbanyakan  kultur.  Pada  penelitian  ini,  enam  teknik  sterilisasi  diterapkan  pada eksplan tunas kentang untuk mendapatkan teknik sterilisasi yang tepat pada perbanyakan kentang secara in  vitro .  Berbagai  kombinasi  zat  sterilan  dan  urutan  penggunaannya  juga  digunakan.  Evaluasi pertumbuhan  pada  panjang  batang  dan  jumlah  daun  dilakukan  selama  empat  minggu  setelah  tanam (MST).  Hasil  menunjukkan  bahwa  teknik  sterilisasi  menggunakan  Tween-20,  benomil  50%,  dan agrimicin  di  luar  LAF  serta  NaOCl  15%  (v/v),  NaOCl  10%  (v/v),  dan  alkohol  70%  di  dalam  LAF menghasilkan persentase eksplan steril terbanyak, 70%, dibanding teknik lainnya. Meskipun demikian, teknik  sterilisasi  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  tidak  mempengaruhi  percepatan  pertumbuhan tinggi batang dan jumlah daun.
Kata kunci: granola kembang, in vitro , kentang, kultur jaringan, sterilisasi

## Abstract
Potato  (Solanum  tuberosum  L.)  is  a  plant  that  widely  used,  both  fresh  and  processed.  However,  the productivity of this plant is still low because the quality of seeds is still limited and is not good enough. The cultivar of granola kembang is potential to be developed because of the short harvest life and high yield. In vitro propagation through tissue culture can be done to produce high-quality seeds. The success of  tissue  culture  is  strongly  influenced  by  explant  sterilization  techniques.  Bacterial,  fungal,  and browning  contamination  can  interfere  with  the  process  of  culture  propagation.  In  this  study,  six sterilization techniques were applied to potato shoot explants to get the right sterilization techniques for in vitro culture of potato. Various combinations of sterilant and their order of use are also used. Growth of stem length and number of leaves was also investigated for four weeks after planting (WAP). The results showed that sterilization using Tween-20, benomyl 50%, and agrimycin outside LAF and NaOCl 15%  (v/v),  NaOCl  10% (v/v),  and alcohol 70% inside  LAF  could produce  the  highest percentage  of sterile explant, 70%, compare to other techniques. Nevertheless, the sterilization technique used in this study did not affect the acceleration of stem growth and the number of leaves.
Keywords: granola kembang, in vitro, potato, sterilization, tissue culture
1 Pendahuluan
Kentang (Solanum tuberosum L.) merupakan salah  satu  tanaman  yang  mendapatkan  prioritas untuk  dikembangkan  di  Indonesia.  Tanaman  ini memiliki  nilai  ekonomis  yang  prospektif  untuk meningkatkan kesejahteraan masyarakat [1]. Pada kentang  segar,  kandungan  protein  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  umbi-umbi  lainnya  [2]. Penggunaan  kentang  juga  semakin  berkembang, mulai  dari  kentang  segar  hingga  kentang  olahan, seperti  keripik,  kentang  goreng,  dan  aneka makanan ringan [3].
Produktivitas  kentang  di  Indonesia  masih rendah  dan  mutu  bibit  yang  unggul  juga jumlahnya masih terbatas. Para petani menggunakan  bibit  umbi  kentang  dari  generasi sebelumnya,  hasil  panen  yang  dimanfaatkan sebagai  bibit.  Hal  ini  terjadi  karena  harga  bibit kentang  yang  bermutu  tinggi  relatif  mahal  [4]. Kentang  dari  kultivar  granola  kembang  banyak ditanam  di  Indonesia.  Beberapa  keunggulan kentang  ini  adalah  umur  panen  pendek,  hasil tinggi, bentuk umbi yang baik, dan tahan terhadap virus daun menggulung (PLRV) dan virus X atau PVX  [5].  Oleh  karena  itu,  kentang  kultivar  ini potensial untuk dikembangkan.
Perbanyakan secara in vitro dapat digunakan  sebagai  alternatif  menghasilkan  benih kentang  yang  bermutu  tinggi.  Teknik  kultur jaringan merupakan salah satu metode perbanyakan  tanaman  secara  vegetatif.  Dengan menggunakan  teknik  ini,  bibit  kentang  yang dihasilkan  bisa  lebih banyak  dengan  waktu  yang relatif  singkat,  bebas  hama,  penyakit,  dan  virus, tidak  bergantung  musim,  serta  bibit  yang dihasilkan  lebih  seragam  seperti  induknya  [6]. Keberhasilan  kultur  jaringan  tergantung  pada sterilisasi eksplan [7]. Teknik sterilisasi
permukaan banyak digunakan untuk menghilangkan  kontaminan  yang  terdapat  pada permukaan  dan  bagian  dalam  eksplan.  Selama proses sterilisasi dengan penambahan zat sterilan, eksplan harus tetap hidup dan hanya kontaminan yang tereliminasi [8]. Sampai saat ini, belum ada yang  memastikan  teknik  sterilisasi  apa  yang optimal  untuk  mensterilkan  tunas  kentang  [9]. Pada  dasarnya,  konsentrasi  dan  waktu  paparan berbeda-beda dari satu eksplan ke eksplan lainnya tergantung pada morfologinya, seperti kelembutan dan kekerasan jaringan [10]. Sumber eksplan yang bisa  digunakan  dapat  berupa  pucuk  muda,  daun muda, batang muda, hipokotil, maupun kotiledon [11].
Mikroba biasanya menjadi kontaminan yang umum  ditemukan.  Jika  dibiarkan,  maka  mikroba
akan  hidup  dan  berkembang  di  dalam  kultur sehingga  dapat  menyebabkan  kematian  eksplan [12].  Beberapa  zat  sterilan,  seperti  bakterisida, fungisida, alkohol, detergen, dan larutan hipoklorit  diketahui  dapat  mensterilkan  eksplan dari bakteri, jamur, dan mikroorganisme lain yang mengganggu proses perbanyakan [13]. Meskipun demikian,  konsentrasi  dan  waktu  terpaparnya eksplan  pada  zat  sterilan  juga  harus  ditentukan untuk  setiap  eksplan  karena  zat  sterilan  bersifat sitotoksik [7].
Beberapa  teknik  sterilisasi  sudah  banyak dilakukan dan berhasil diterapkan pada perbanyakan  kultur in  vitro. Ardiansyah  dkk menggunakan  bakterisida,  fungisida,  detergen, dan  larutan  hipoklorit  untuk  mensterilisasi tanaman  tembesu  [9].  Penelitian  lainnya  juga menggunakan  zat  sterilan  yang  sama  dengan menambahkan  alkohol  untuk  sterilisasi  tanaman kokoleceran  [14].  Berbeda  dengan  teknik sebelumnya, Astuti dan Hadiyana hanya menggunakan  larutan  hipoklorit  dan  alkohol masing-masing  untuk  mensterilkan  tanaman bambu kuning dan stevia [15,16]. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan teknik sterilisasi yang sesuai untuk eksplan tunas kentang granola kembang dengan mengaplikasikan berbagai  teknik  sterilisasi  yang  sudah  berhasil dilakukan.  Selain  itu,  pertumbuhan  batang  dan daun  juga  diamati  selama  proses  pertumbuhan eksplan  selama  4  MST.  Hasil  dari  penelitian  ini dapat  digunakan  sebagai  alternatif  teknik sterilisasi  pada  tunas  kentang  granola  kembang agar terhindar dari kontaminan yang mengganggu proses perbanyakan.

## 2 Metode Penelitian

## 2.1  Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  dilakukan  di  laboratorium  RHIN (Rahma  Hendra  Inaaya  Niniek)  Bioteknologi, Jalan  Sekarkadaton  No.  10,  Tegalega,  Bandung, Jawa Barat pada bulan Maret sampai Juni 2018.

## 2.2   Bahan dan Alat
Bahan  utama  yang  digunakan  sebagai eksplan  adalah  tunas  kentang  granola  kembang yang berukuran sekitar 5 cm yang diperoleh dari BALITSA (Badan Penelitian Tanaman Sayuran), Cikole,  Lembang,  Jawa  Barat  (6°48'07.1"S 107°38'59.6"E).  Bahan-bahan  untuk  pembuatan media  MS  [17]  yaitu  larutan  makro  (NaNO 3 , KNO 3 ,  KH 2 PO 4 ,  CaCl 2 .H 2 O,  MgSO 4 .7H 2 O), larutan mikro (H 3 BO 2 , MnSO 4 .H 2 O, ZnSO 4 .7H 2 O, KI, NaMoO 4 .7H 2 O, CoCl 2 .6H 2 O), larutan vitamin
(niasin,  piridoksin  HCl,  tiamin  HCl),  larutan glisin,  larutan  FeEDTA,  myo-inositol,  sukrosa, agar-agar,  HCl,  dan  NaOH.  Zat  sterilan  yang digunakan adalah detergen, Tween-20, agrimicin, benomil 50%, NaOCl 5,25%, povidon-iodin 5%, etanol 70%, dan akuades.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah  alat-alat  gelas  yang  biasa  digunakan  di laboratorium (Iwaki), timbangan analitik (Ohaus), Laminar Air Flow (LAF), kompor gas (hock), pH meter  (Hanna),  autoklaf  (Allamerican), heating
magnetic  stirrer (velp),  pinset,  pipet  tetes,  pisau bedah, dan botol.

## 2.3  Persiapan Eksplan
Eksplan  yang  digunakan  adalah  tunas kentang  granola  kembang  yang  diperoleh  dari BALITSA. Tunas kentang yang masih menempel pada  bagian  kentang  (Gambar  1.a)  dipotong sehingga diperoleh tunas dengan panjang sekitar 5 cm (Gambar 1.b).
Gambar 1. Tunas kentang yang dijadikan sebagai eksplan. a) Tunas yang menempel pada kentang dan b) tunas yang sudah dipotong.

## 2.4  Sterilisasi Eksplan
Teknik  sterilisasi  eksplan  yang  dilakukan terdiri dari enam teknik dengan menggunakan zat sterilan  dan  konsentrasi  yang  berbeda  serta
penggunaan  LAF  yang  bervariasi.  Teknik sterilisasi yang dilakukan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Teknik sterilisasi eksplan Teknik Bahan Perlakuan Waktu TA Di luar LAF Deterjen (2 g/L) Dicuci Sampai bersih Benomil 50% (3 g/L) Direndam 2 jam Agrimicin (3 g/L) Direndam 1 jam Di dalam LAF Tween-20 (2 tetes) Direndam 20 menit NaOCl 10% (v/v) Direndam 20 menit TB Di luar LAF Air mengalir Dicuci Sampai bersih Deterjen (2 g/L) Direndam 5 menit Akuades steril Dibilas Sampai bersih Tween-20 (3 tetes) Direndam 10 menit Akuades steril Dibilas Sampai bersih Benomil 50% (2 g/L) Direndam 1 jam Agrimicin (2 g/L) Direndam 1 jam Akuades steril Dibilas Sampai bersih TB Di dalam LAF NaOCl 15% (v/v) Direndam 10 menit TB NaOCl 10% (v/v) Direndam 15 menit
Alkohol 70% Direndam 1 menit Akuades steril Dibilas Sampai bersih TC Di luar LAF Alkohol 70% Dicelupkan Tisu + Alkohol 70% Dilap Di dalam LAF Alkohol 70% Direndam 10 menit Akuades steril Direndam 5 menit NaOCl 20% (v/v) Direndam 7 menit Akuades steril Direndam 5 menit NaOCl 10% (v/v) Direndam 7 menit Akuades steril Direndam 5 menit NaOCl 5% (v/v) Direndam 7 menit Akuades steril Direndam 5 menit TD Di luar LAF Air mengalir Dicuci Sampai bersih Deterjen Direndam 7 menit Air mengalir Dicuci Sampai bersih Di dalam LAF Alkohol 70% Direndam 2 menit Akuades steril + Tween-20 (60/100 ml) Direndam 7 menit Akuades steril Dibilas Sampai bersih TE Di luar LAF Deterjen Dicuci 30 menit Air mengalir Dibilas 15 menit Di dalam LAF Benomil 50% (2 g/L) Direndam 1 jam Agrimicin (2 g/L) Direndam 1 jam Akuades steril Dicuci 3 kali 5 menit Alkohol 70% Dicuci 10 menit Akuades steril Dicuci 3 kali 5 menit NaOCl 30% (v/v) Direndam 10 menit Akuades steril Dicuci 3 kali 5 menit NaOCl 20% (v/v) Akuades steril Direndam Dicuci 2 kali 10 menit 5 menit
TF
Di luar LAF Air mengalir Dibersihkan Sampai bersih Air mengalir Dialiri 15 menit Deterjen Dikocok 30 menit Air mengalir Dialiri 15 menit Benomil 50% (2 g/L) Dikocok 1 jam Agrimicin (2 g/L) Dikocok 1 jam Alkohol 70% Dikocok 10 menit NaOCl 30% (v/v) Dikocok 30 menit Aquades steril Dibilas NaOCl 20% (v/v) Dikocok 30 menit Akuades steril Dibilas Povidon-iodin 5% Dikocok 15 menit Akuades steril direndam Sampai ditanam

## 2.5  Pembuatan Media MS
Media  MS  dibuat  sebanyak  2  liter,  dengan cara mencampurkan larutan makro, larutan mikro, larutan  vitamin,  larutan  glisin,  dan  larutan FeEDTA  masing-masing  sebanyak  20  mL  ke dalam labu ukur 2000 mL yang disimpan di atas magnetic  stirrer. Kemudian  ditambahkan  myo- inositol 0,2 g serta sukrosa 60 g dan diaduk dengan menggunakan heating  magnetic  stirrer sampai semua bahan larut. pH larutan dicek menggunakan pH meter sampai pH 5,7-5,8. Larutan ditambahkan  agar-agar  12  g  dan  dipanaskan sampai  mendidih.  Setelah  itu,  larutan  dituang  ke dalam botol dan ditutup dengan tutup botol yang dilapisi plastic  wrap. Media  disterilkan  dengan cara diautoklaf selama 15 menit pada suhu 121⁰C dan disimpan di ruang steril selama 3 hari sebelum digunakan.  Setiap  unit  percobaan  digunakan  10 botol,  sehingga  terdapat  total  60  botol  untuk  6 perlakuan (TA-TF).

## 2.6  Penanaman dan Pengamatan Eksplan
Penanaman eksplan dilakukan di dalam LAF secara  aseptik.  Masing-masing  botol  medium ditanam satu potong eksplan. Botol ditutup rapat dan  dilapisi  dengan plastic  wrap. Pengamatan dilakukan  setiap  minggu  selama  4  minggu. Parameter  yang  diamati  adalah  jumlah  eksplan yang  steril  dan  terkontaminasi  bakteri,  jamur, maupun pencoklatan. Pertumbuhan tinggi batang dan banyak daun juga diamati untuk mengevaluasi pertumbuhan eksplan.

## 3 Hasil dan Diskusi
Teknik  sterilisasi  yang  digunakan  pada penelitian ini merupakan adaptasi dari penelitian- penelitian  sebelumnya  yang  telah  berhasil diterapkan.  Setiap  tanaman  memiliki  ciri  khas yang  berbeda-beda  sehingga  tidak  ada  teknik sterilisasi  yang  baku  [18].  Sebagai  tambahan, kontaminasi oleh mikroba merupakan
permasalahan  yang  selalu  ada  dalam  kultur jaringan  [19].  Teknik  sterilisasi  yang  dilakukan pada  penelitian  ini  terdiri  dari  enam  teknik, masing-masing TA, TB, TC, TD, TE, dan TF.
Sterilisasi  merupakan  langkah  awal  dalam perbanyakan  tanaman  secara in  vitro dan merupakan  tahapan  yang  penting.  Adanya kontaminasi  pada  eksplan  dapat  menghambat proses perbanyakan dan dalam jumlah besar dapat menghabiskan bahan kimia yang biayanya cukup besar  [13].  Beberapa  kontaminan  yang  biasa terdapat  pada  tanaman  adalah bakteri dan jamur. Selain  itu,  terjadinya  pencoklatan  pada  tanaman juga  mengganggu  proses  pertumbuhan.  Ketiga parameter  ini  yang  diamati  pada  sterilan eksplan tunas kentang selama 4 MST.

## 3.1  Sterilisasi Eksplan
Hasil  sterilisasi  eksplan  selama  4  MST menunjukkan  beberapa  eksplan  berhasil  tumbuh dan  ada  yang  terkontaminasi.  Tanaman  yang terkontaminasi bakteri akan berlendir atau sedikit basah,  sedangkan  tanaman  yang  terkontaminasi jamur  akan  lebih  kering  dan  muncul  hifa  jamur yang dicirikan dengan garis-garis berwarna putih sampai  abu-abu  [18].  Pada  Tabel  2,  beberapa eksplan  pada  semua teknik  terkontaminasi  mulai dari  1  MST  hingga  4  MST.  Gambar  2. menunjukkan eksplan yang terkontaminasi bakteri,  jamur,  dan  terjadi  pencoklatan  selama  4 MST.  Eksplan  yang  steril  dapat  dilihat  pada Gambar 3. Persentase eksplan steril disajikan pada Tabel  2  dan  Gambar  4.  Hasil  eksplan  steril terbesar  diperoleh  pada  TB  dengan  persentase 70%,  diikuti  TA  dan  TC  sebesar  40%,  dan  TE sebesar 20%. Sedangkan untuk TD dan TF semua eksplan  terkontaminasi.  Kontaminan  bakteri terjadi paling banyak pada TD, pencoklatan pada TF,  dan  jamur  terjadi  pada  TA-TD  dengan persentase  yang  relatif  sama  (20-30%).  Hasil eksplan yang terkontaminasi ketiga jenis kontaminan adalah TD.
Gambar 2. Eksplan yang terkontaminasi a) bakteri ,b) jamur, dan c) pencoklatan selama 4 MST.
a b c
Tabel 2. Data persentase eksplan steril dan terkontaminasi
Perlakuan Kondisi Botol awal 1 MST 2 MST 3 MST 4 MST Persentase TA Steril 10 9 5 5 4 40% Bakteri 1 3 3 3 30% Jamur 2 2 3 30% Pencoklatan TB Steril 10 10 8 7 7 70% Bakteri Jamur 2 3 3 30% Pencoklatan TC Steril 10 6 6 4 4 40% Bakteri 2 2 4 4 40% Jamur 2 2 2 2 20% Pencoklatan TD Steril 10 6 6 5 0% Bakteri 2 2 3 5 50% Jamur 2 2 2 3 30% Pencoklatan 2 20% TE Steril 10 2 2 2 2 20% Bakteri Jamur Pencoklatan 8 8 8 8 80% TF Steril 10 0% Bakteri Jamur Pencoklatan 10 10 10 10 100%
Gambar 3. Eksplan steril pada a) TA, b) TB, c) TC, dan d) TE.
a b c d
Gambar 4. Grafik persentase kontaminan dan steril selama 4 MST pada semua teknik.
Pada  TB  terdapat  zat  sterilan  benomil  dan agrimicin  yang  berfungsi  sebagai  antijamur  dan antibakteri.  Perendaman  dengan  Tween-20  pada proses  awal  juga  membantu  penyerapan  zat sterilan  sehingga  lebih  efektif  [14].  Kontaminan jamur  yang  terjadi  diduga  karena  perendaman dengan  benomil  kurang  optimal.  Pada  TA perendaman  selama  1  jam  dengan  benomil  juga menghasilkan  30%  kontaminan  jamur  sehingga waktu  ini  diduga  masih  kurang  optimal. Sedangkan untuk kontaminasi bakteri tidak terjadi pada  TB,  hal  ini  diduga  karena  ada  penambahan etanol  70%  yang  mampu  membunuh  bakteri. Selain  itu,  adanya  larutan  NaOCl  10%  (v/v)  dan 15% (v/v) juga membantu membunuh mikroorganisme  sehingga  eksplan  menjadi  lebih steril  dibandingkan  eksplan  lainnya.  Kombinasi etanol  dan  NaOCl  telah  terbukti  mampu mensterilkan  eksplan  [8].  Rodrigues el  al. juga menggunakan larutan hipoklorit untuk mensterilisasi Arundina  bambusifolia dengan berbagai  konsentrasi,  hasil  yang  didapatkan adalah  semakin  rendah  konsentrasi  memberikan hasil  yang  lebih  optimum  dan  mendorong pertumbuhan eksplan [20].
Persentase  eksplan  steril  pada  TA  dan  TC adalah  sama,  40%.  Adanya  kontaminan  bakteri dan  jamur  pada  TA  diduga  karena  penggunaan Tween-20 dilakukan setelah perendaman agrimicin  dan  benomil  sehingga  peresapannya kurang optimal. Kontaminan bakteri terjadi pada 1 MST, sedangkan kontaminan jamur terjadi pada 2 MST.  Terjadinya  kontaminasi  bakteri  dalam waktu  yang  cepat  diduga  karena  waktu perendaman  dengan  agrimicin  kurang  optimal,
sama  seperti  pada  TB.  Sedangkan  untuk kontaminan jamur terjadi pada  waktu  yang  lebih lama  diduga  karena  waktu  perendaman  dengan benomil  lebih  optimal.  Meskipun  demikian, kombinasi  NaOCl  dan  benomil  adalah  metode sterilisasi  terbaik  pada  biji Ziziphus  spina dan menghasilkan  tunas  yang  tertinggi  dibanding kombinasi lainnya [21]. Pada TC, zat sterilan yang ditambahkan  hanya  etanol  70%  dan  NaOCl dengan berbagai konsentrasi (20%, 10%, dan 5% (v/v)).  Tidak  adanya  fungisida  dan  bakterisida menyebabkan eksplan lebih cepat terkontaminasi. Hal  ini  juga  menunjukkan  bahwa  penggunaan NaOCl  saja  masih  kurang  optimal  untuk mensterilisasi eksplan.
Persentase  eksplan  steril  terkecil  diperoleh pada  TE.  Meskipun  terdapat  banyak  zat  sterilan seperti,  benomil,  agrimicin,  etanol,  dan  NaOCl, namun  pencucian  sebanyak  tiga  kali  dengan akuades  diduga  merusak  jaringan-jaringan  pada eksplan.  Kerusakan  jaringan  ini  menyebabkan eksplan  rusak  dan  terjadi  reaksi  pencoklatan. Reaksi  ini  terjadi  karena adanya  enzim  polifenol oksidase yang mengakibatkan terjadinya oksidasi senyawa fenol menjadi quinon yang memproduksi pigmen berwarna coklat  ketika  jaringan  terluka  [22].  Reaksi pencoklatan ini terjadi 80% pada 1 MST dan tidak terdapat  kontaminan  bakteri  dan  jamur  pada eksplan  sisa.  Penggunaan  tunas  sebagai  eksplan harus  dilakukan  secara  hati-hati  agar  tidak merusak  bagian  jaringan  tunas  karena  rentan terhadap  pergerakan  yang  kasar.  Selain  itu, penggunaan zat sterilan dalam konsentrasi tinggi dapat menyebabkan eksplan mengalami dehidrasi
dan  menguning  atau  menyoklat  [23].  Dalam  hal ini, konsentrasi NaOCl yang lebih tinggi daripada teknik  lainnya  (TE  dan  TF)  juga  dapat mempengaruhi  terjadinya  pencoklatan  pada eksplan.
TD  dan  TF  terkontaminasi  pada  seluruh eksplan. Pada TD, eksplan terkontaminasi bakteri dan  jamur  pada  1  MST  dan  meningkat  hingga  4 MST.  Hal  ini  diduga  karena  etanol  70%  saja kurang  optimum  mensterilkan  eksplan  sehingga mudah  terkontaminasi.  Sebaliknya,  penggunaan etanol  70%  yang  dikombinasikan  dengan  bahan aktif mankozeb dan NaOCl dengan H 2 O 2 mampu memberikan hasil sterilisasi terbaik untuk eksplan ramin [24]. Reaksi pencoklatan juga terjadi pada 4 MST. Hal ini diduga karena adanya jaringan yang rusak  pada  eksplan  tersebut  sehingga  semua eksplan pada TD tidak ada yang steril. Sedangkan untuk  TF, reaksi  pencoklatan  terjadi  pada  semua eksplan  pada  1  MST  diduga  karena  adanya pengocokan pada setiap perlakuan yang membuat jaringan  rusak.  Meskipun  pada  TF  semua  zat sterilan  ditambahkan,  namun  karena  jaringan sudah  rusak  maka  zat  ini  tidak  dapat  berfungsi dengan baik. Selain itu, perlakuan yang dilakukan pada  TF  juga  kurang  aseptik  karena  semua
penambahan  zat  sterilan  dilakukan  di  luar  LAF. Walaupun  demikian,  kombinasi  zat  sterilan  pada TF  jika  dilakukan  di  dalam  LAF  mungkin  akan memberikan  hasil  yang  berbeda.  Penggunaan larutan hipoklorit, agrimicin, dan Tween-20 dapat mensterilkan eksplan nodal mahogani [25].

## 3.2  Pertumbuhan Batang dan Daun
Pertumbuhan batang dan daun yang diamati hanya  pada  eksplan  yang  steril  (Gambar  3.). Pertumbuhan baru terjadi pada 2 MST karena pada 1  MST  eksplan  baru  menumbuhkan  tunas.  Awal muncul tunas merupakan indikator awal pertumbuhan  eksplan.  Media  yang  digunakan tanpa  menggunakan  zat  pengatur  tumbuh sehingga  pertumbuhannya murni  hasil  sterilisasi. Tabel  3.  menunjukkan  pertumbuhan  batang  dan daun  serta  Gambar  5.  menunjukkan  grafik  rata- rata  pertumbuhan  batang  dan  daun  yang  diamati setiap  minggu.  Untuk  pertumbuhan  batang,  TB, TC,  dan  TE  memiliki  rata-rata  panjang  sekitar  7 cm  sedangkan  pada  TA  rata-rata  panjang  batang mencapai  8  cm.  Pada  pertumbuhan  daun menunjukkan bahwa semua teknik menghasilkan jumlah daun yang tidak berbeda signifikan. Rata- rata jumlah daun yang terbentuk adalah 8-10 daun.
Tabel 3 . Data pertumbuhan eksplan pada batang dan daun
Perlakuan 1MST 2MST 3MST 4MST Tgi btng Jmlh daun Tgi btng Jmlh daun Tgi btng Jmlh daun Tgi btng Jmlh daun T T 5,0 5,0 9,0 8,0 9,0 13,0 TA T T 2,0 5,0 6,0 6,0 7,0 6,0 T T 4,0 5,0 7,0 7,0 7,0 8,0 T T 5,0 7,0 9,0 12,0 9,0 12,0 Rata-rata 4 ,0 5,5 7,8 8,3 8 ,0 9,8 TB T T 4,0 7,0 7,0 10,0 7,0 10,0 T T 3,5 7,0 6,0 7,0 7,0 7,0 T T 4,0 7,0 6,0 7,0 6,5 7,0 T T 2,0 4,0 5,0 5,0 7,0 7,0 T T 2,0 5,0 6,0 7,0 7,0 11,0 T T 3,5 5,0 5,0 5,0 7,0 7,0 T T 4,0 10,0 5,5 10,0 7,0 12,0 Rata-rata 3,3 6,4 5,8 7,3 6,9 8,7 TC T T 4,0 6,0 6,0 9,0 7,0 10,0 T T 3,0 3,0 4,0 3,0 4,0 3,0 T T 6,0 4,0 8,5 7,0 9,0 12,0 T T 3,0 5,0 5.9 6,0 6,8 8,0 Rata-rata 4 ,0 4,5 6,1 6,3 6,7 8,3 TE T T 5,0 5,0 6,3 8,0 7,0 11,0 T T 5,5 6,0 6,2 7,0 7,0 10,0 Rata-rata 5,3 5,5 6,3 7,5 7 ,0 10,5
Gambar 5 . Grafik rata-rata pertumbuhan ekspan pada panjang batang (kiri) dan jumlah daun (kanan).

## 4 Kesimpulan
Teknik  sterilisasi  berpengaruh  terhadap jumlah  kontaminasi  yang  terjadi  pada  eksplan tunas kentang granola kembang. Teknik sterilisasi TB  memiliki  persentase  keberhasilan  tertinggi dibanding  teknik  lainnya.  Teknik  ini  mampu mencegah  terjadinya  kontaminasi  bakteri  dan reaksi pencoklatan. Kombinasi zat sterilan, waktu, urutan,  dan  cara  perendaman  mempengaruhi sterilitas eksplan. Teknik sterilisasi yang digunakan pada penelitian ini tidak mempengaruhi  percepatan  pertumbuhan  tinggi batang dan jumlah daun.

## Ucapan Terima Kasih
Terima kasih kepada Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia  dan  Yayasan  Hazanah,  Bandung  yang telah mendukung terlaksananya penelitian ini.

## Daftar Pustaka/ References
[1]   Budi NR, Prasetyo I, Yuniwati ED. Pengaruh Umur  Transplantasi  Stek  dan  Konsentrasi Auksin pada Pertumbuhan Vegetatif Tanaman Kentang (Solanum Tuberosum L.). Primordia. 2016;12(2):102–16.
[2]   Rai  SP,  Wiendi  NMA,  Krisantini  K. Optimasi  Produksi  Bibit  Tanaman  Kentang (Solanum  tuberosum)  Kultivar  Granola dengan Teknik Fotoautotrofik. Bul Agrohorti. 2015;3(1):28–38. doi
10.1017/CBO9781107415324.004
[3]   Lidinilah  KAI.  Pengaruh  Berbagai  Ukuran Bobot  Ubi  Benih  Kentang  G4  (Solanum Tuberosum  L.)  Varietas  Granola  dan Kompos Batang Pisang
Terhadap
Pertumbuhan,  Hasil  dan  Kualitas  Kentang. MPRA. 2017;4(79303).
[4]   Amarullah  MR,  Sudarsono  S,  Amarillis  S. Produksi dan Budidaya Umbi Bibit Kentang (Solanum  tuberosum  L.)  di  Pangalengan, Bandung,  Jawa  Barat.  Bul  Agrohorti. 2019;7(1):93–9. doi
10.29244/agrob.7.1.93-99
[5]   Pratama AR, Sugiyono S, Prayoga Lu, Husni A.  Upaya  Memacu  Pertumbuhan  Tunas Mikro  Kentang  Kultivar  Granola  dengan Jenis dan Konsentrasi Sitokinin Berbeda. Scr
Biol. 2014;1(3):209–15.
doi
10.20884/1.sb.2014.1.3.553
[6]   Elfiani  E.  Pengumbian  In  Vitro  Kentang Granola. Din Pertan. 2013;28(1):33–8.
[7]   Tiwari S, Arya A, Kumar S. Standardization of Sterilization Protocol and Establishment of Callus  Culture  of  Sugarcane  for  Enhance  d Plant  Regeneration  in  vitro.  Res  J  Bot. 2012;7(1):1–7. doi 10.3923/rjb.2012.1.7
[8]   Oyebanji  O,  Nweke  O,  Odebunmi  O, Galadima N, Idris M, Nnodi U, et al. Simple, effective  and  economical  explant-surface sterilization  protocol  for  cowpea,  rice  and sorghum  seeds.  African  J  Biotechnol. 2009;8(20):5395–9. doi
10.5897/AJB09.923
[9]   Ardiansyah R, Supriyanto S, Wulandari AS, Subandy  B,  Fitriani  Y.  Teknik  Sterilisasi Eksplan dan Induksi Tunas dalam Mikropropagasi Tembesu (Fagraea Fragrans ROXB).  J  Silvikultur  Trop.  2015;5(3):167– 73.

## 1
[10]  Zinabu  D,  Gebre  E,  Daksa  J.  Explants
Sterilization Protocol for In-vitro Propagation  of  Elite  Enset  (  Ensete ventricosum ( Welw .) Chessman ) Cultivars. Asian J Plant Sci Res. 2018;8(4):1–7.
[11]  Uzun S, Ilbaş AI, Ipek A, Arslan N, Barpete S.  Efficient  in  vitro  plant  regeneration  from immature embryos of endemic Iris sari and I. schachtii. Turkish J Agric For. 2014;38(3):348–53. doi  10.3906/tar-1306- 47
[12]  Fauzan  Y,  Supriyanto  S,  Tajuddin  T. Efektivitas  Merkuri  Klorida  (Hgcl2)  pada Sterilisasi  Tunas  Samping  Jati  (  Tectona Grandis  )  In  Vitro.  Bioteknol  Biosains Indones. 2017;4(2):78–84.
doi 10.29122/jbbi.v4i2.2540
[13]  Webster W, Seymour S, Mitchell S, Ahmad M.  A  novel  surface  sterilization  method  for reducing  microbial  contamination  of  field grown  medicinal  explants  intended  for  in vitro culture. Conf Pap [Internet]. 2003;1–8.
Available from: http://www.kitchenculturekit.com/surfaceSte rilizationMitchell2003.pdf [14]  Sudiyanti  S,  Rusbana  TB,  Susiyanti  S.
Inisiasi Tunas Kokoleceran (Vatica bantamensis)  pada  Berbagai  Jenis  Media Tanam dan Konsentrasi BAP (Benzyl Amino Purine) Secara In Vitro. J Agro. 2017;4(1):1– 14. doi 10.15575/1069
[15]  Astuti  P.  Induksi  Tunas  dan  Perakaran Bambu  Kuning  Bambusa  vulgaris  secara  in vitro. 2014;2(2):109–14.
doi
10.24252/bio.v2i2.476
[16]  Hadiyana A, Syabana MA, Susiyanti S. Iniasi Tunas  secara  Kultur  Jaringan  pada  Stevia (Stevia Rebaudiana Bertoni) dengan Kosentrasi  Indole  Butyric  Acid  (Iba)  dan Benzyl  Amino  Purine  (Bap)  yang  Berbeda. Jur  Agroekotek.  2015;7(2):147–52. doi 10.33512/j.agrtek.v7i2.1080
[17]  Murashige  T,  Skoog  F.  A  Revised  Medium for  Rapid  Growth  and  Bio  Assays  with
Tobacco  Tissue  Cultures.  Physiol  Plant.
1962;15:26. doi 10.1111/j.1399-
3054.1962.tb08052.x
[18]  Shofiyani  A,  Damajanti  N.  Pengembangan Metode  Sterilisasi  Pada  Berbagai  Eksplan
Guna  Meningkatkan  Keberhasilan  Kultur
Kalus  Kencur  (Kaemferia  galangal  L). Agritech.
2015;17(1):55–64.
doi 10.30595/agritech.v17i1.1345
[19]  Odutayo  OI,  Amusa  NA,  Okutade  OO, Ogunsanwo  YR.  Determination  of  the sources  of  microbial  contaminants  of cultured  plant  tissues.  Plant  Pathol  J. 2007;6(1):77–81. doi 10.3923/ppj.2007.77.81
[20]  Rodrigues  DT,  Novais  RF,  Venegas  VHA, Dias  JMM,  Otoni  WC,  Villani  EM  de  A. Chemical sterilization in in vitro propagation of  Arundina  bambusifolia  Lindl.  and Epidendrum  Ibaguense  Kunth.  Rev  Ceres. 2013;60(4):447–51. doi  10.1590/S0034- 737X2013000400001
[21]  Ahmadi  E,  Nasr  SMH,  Jalilvand  H,
Savadkoohi  SK.  Contamination  control  of microbe Ziziphus spina [christti] seed in vitro culture.
Trees - Struct Funct. 2012;26(4):1299–304. doi:
10.1007/s00468-012-0705-8
[22]  Queiroz  C,  Mendes  Lopes  ML,  Fialho  E, Valente-Mesquita  VL.  Polyphenol  oxidase: Characteristics and mechanisms of browning control.  Food  Rev  Int.  2008;24(4):361–75. doi 10.1080/87559120802089332
[23]  Teixeira  da  Silva  JA,  Kulus  D,  Zhang  X, Songjun  Z,  Ma  G,  Piqueras  A.  Disinfection of explants for saffron (Crocus sativus) tissue culture.  Environ  Exp  Biol.  2016;14(4):183– 98. doi 10.22364/eeb.14.25
[24]  Putri AI, Herawan T, Prastyono P, Haryjanto L.  Pengaruh  Teknik  Sterilisasi  Explan Terhadap Tingkat Perolehan Kultur Jaringan Aksenik  Ramin  (Gonystylus  Bancanus).  J Pemuliaan Tanam Hutan. 2017;11(2):131–8. doi 10.20886/jpth.2017.11.2.131-138
[25]  Pérez Flores J, Aguilar Vega M, Roca Tripepi R.  Assays  for  the  in  vitro  establishment  of Swietenia macrophylla and Cedrela odorata. Rev  Colomb  Biotecnol.  2012;14(1):20–30.
doi 10.15446/rev.colomb.biote