ISOLASI DAN UJI ANTIBAKTERI DARI BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS Phyllospongia lamellose SERTA IDENTIFIKASI SECARA BIOKIMIA
Sela S. Lempoy 1) , Widya A. Lolo 1) , Paulina V. Y. Yamlean 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Sponges  are  one  source  of  producing  bioactive  components  from  the  sea.  Bacteria  Symbiosis with sponges are thought to have the potential to produce bioactive compounds that have been isolated from sponges. One of the potential of bioactive compounds which have been found and developed from sponges was antibacterial. The aim of this study was to determine the antibacterial activity of bacteria associated with Phyllospongia lamellose sponges against pathogenic bacteria namely Staphylococcus aureus  and  Esherichia  coli  and  then  proceed  with  identification  of  biochemistry  in  isolates  which showed  the  greatest  inhibitory  activity.  Three  isolates  of  sponges  symbiont  bacteria  were  obtained through  the  isolation  and  purification  stage  which  were  then  followed  by  testing  of  antibacterial activity  with  paper  disk  diffusion  method.  The  antibacterial  test  results  showed  the  diameter  of  the inhibitory zone against Staphylococcus aureus, were: SL 1 (8.67 mm), SL 2 (9.33 mm) and SL 3 (9.00 mm) categorized  as  medium.  Whereas  the  inhibiotion  zone  shown  on  Esherichia  coli  bacteria  is  also classified  as  medium,  were:  SL 1 (9.67  mm),  SL 2 (9.00  mm)  and  SL 3 (9.33  mm).  The  three  isolates continued  to  the  identification  stage  biochemically.  Each  isolation  was  assumed  as  follows: Desulfotomaculum (SL 1 ), Brochothrix (SL 2 ) and Sulfidobacillus (SL 3 ).
Keyword : Phyllospongia lamellose, isolation, biochemically identification

## ABSTRAK
Spons  merupakan  salah  satu  sumber  penghasil  komponen  bioaktif  yang  berasal dari laut.  Bakteri  yang bersimbiosis dengan spons diduga memiliki potensi dalam menghasilkan senyawa-senyawa bioaktif yang telah diisolasi dari spons. Potensi senyawa bioaktif yang telah ditemukan dan dikembangkan dari spons salah satunya ialah  sebagai  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  dari  bakteri  yang berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia  lamellose terhadap  bakteri  patogen  yakni Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dan  kemudian  dilanjutkan  dengan  identifikasi  secara  biokimia  pada  isolat  yang  menunjukkan daya  hambat  terbesar.  Diperoleh  3  isolat  bakteri  simbion  spons  melalui  tahap  isolasi  dan  purifikasi  yang kemudian  dilanjutkan  dengan  pengujian  aktivitas  antibakteri  melalui  metode  difusi  kertas  cakram.  Hasil  uji antibakteri  menunjukkan  diameter  zona  hambat  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus yaitu:  SL 1 (8.67  mm), SL 2 (9.33 mm) dan SL 3 (9.00 mm) termasuk dalam kategori sedang. Sedangkan zona hambat yang ditunjukkan terhadap bakteri Escherichia coli juga tergolong kategori sedang yaitu: SL 1 (9.67 mm), SL 2 (9.00 mm) dan SL 3 (9.33 mm). Ketiga isolat dilanjutkan ke tahap identifikasi secara biokimia. Masing-masing isolat diduga sebagai berikut: Desulfotomaculum (SL 1 ), Brochothrix (SL 2 ) dan Sulfidobacillus (SL 3 ).
Kata kunci : Phyllospongia lamellose, isolasi, identifikasi biokimia.

## PENDAHULUAN
Pemanfaatan  organisme  laut  tidak  hanya terbatas  sebagai  bahan  makanan  dan  bahan kosmetik, namun berpotensi juga sebagai bahan obat  alam  (Achiruddin,  2005).  Bakteri  yang berasosiasi  dengan  spons  dapat  menghasilkan senyawa komponen bioaktif. Bioaktivasi senyawa  hasil  isolasi  bakteri  simbion  spons meliputi  antitumor,  antivirus,  antimikroba  atau sifat umum sitotoksik (Oki et al. , 2014).
Identifikasi dapat dilakukan secara konvensional  melalui  karakterisasi  biokimia dan  mikroskopis  sel  bakteri,  hingga  berbasis molekuler. Penentuan genus isolat bakteri dapat ditentukan  sesuai  dengan  literatur Bergey’s Manual  of  Determinative  Bacteriology yang disertai pengamatan mikroskopis melalui beberapa  uji  yakni  uji  biokimia  dan  uji morfologi.

## METODE

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  masker,  sarung  tangan,  gunting, scuba diving , zipper  bag ,  kamera  bawah  laut,  wadah, cooling  box, pisau,  erlenmeyer (Iwaki  ST Pyrex) , timbangan  digital (ADAM) ,  gelas  ukur (Iwaki  ST  Pyrex) ,  gelas  kimia,  cawan  petri (Iwaki  ST  Pyrex) ,  autoklaf (ALP) ,  pinset, spatula,  bunsen,  pipet  tetes, L-glass ,  batang pengaduk, laminar air flow (Biotek), rak tabung reaksi, rotary  shaker  incubator  (Infors  HT), lumpang  dan  alu,  tabung  reaksi,  lemari pendingin, plastik wrap, kertas label, aluminium  foil, tisu,  kasa , mikroskop  cahaya, kaca  objek,  alat  fotografi, kertas  cakram kosong( paper  disc) ,  mikropipet (Ecopipette) , jangka sorong, jarum ose, jas lab, kertas cakram antibiotik tetrasiklin.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  spons, bakteri uji Escherichia Coli dan Staphylococcus Aureus ,  media Nutrient  Agar, media Nutrient Broth, aquades,  NaCl  0.9%,  kristal  violet, safranin,  etanol  70%,  lugol, Triple  Sugar  Iron (TSI) , minyak  imersi, Simmon's  Citrate  Agar, reagen covac’s ,  hidrogen  peroksida, Lysin  Iron Agar .

## Prosedur Kerja

## Pengambilan sampel
Sampel  spons  diambil  dari  perairan  teluk Manado  menggunakan  alat  bantu  menyelam. Sampel  difoto  dengan  kamera  bawah  laut  dan diambil  lalu  dimasukkan  ke  dalam ziper  bag dan  disimpan  dalam cooling  box berisi  es  batu untuk  dibawa  ke  Laboratorium  Mikrobiologi Farmasi  Program  Studi  Fakultas  Matematikan dan Ilmu Pengetahuan Alam Farmasi Universitas  Sam  Ratulangi.  Sampel  yang didiambil  dicuci  bersih  dengan  air  mengalir kemudian dilakukan identifikasi secara morfologi  di  Laboratorium  Taksonomi  Jurusan
Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  dan  media  yang  digunakan disterilkan  menggunakan  autoklaf  pada  suhu 121˚C  selama  15  menit  (Ortez,  2005). Sedangkan  jarum  ose,  pinset  dan L-glass dipijarkan diatas api secara langsung.
Pembuatan media 1. Media Nutrient Agar (NA) a. Media Pertumbuhan
Media  padat  dibuat  dengan  menimbang sebanyak  5.04  g  NA  kemudian  dimasukkan kedalam  erlenmeyer  dan  dicukupkan  dengan 180 mL aquades (28 g/ 1000 mL) lalu dikocok hingga  homogen.  Setelah  homogen  media
kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121˚C  selama  15  menit,  lalu  didiamkan beberapa  saat.  Selanjutnya  media  dituang kedalam  12  cawan  petri  steril  masing-masing 20  mL.  Media  yang  telah  padat  pada  cawan petri di seal menggunakan plastik wrap sehingga  tidak  terkontaminasi.  Media  ini digunakan  untuk  penanaman  awal  bakteri simbion  dari  sampel  yang  telah  diencerkan secara  berseri,  isoalsi  bakteri  dan  untuk pengujian aktivitas antibakteri.

## b. Media Pembenihan
Pada  media  pembenihan  NA  ditimbang sebanyak  2.52  g  kemudian  dimasukkan kedalam erlenmeyer dan dicukupkan dengan 90 mL  aquades  (28  g/  1000  mL)  lalu  dikocok hingga  homogen.  Setelah  homogen  media kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121˚C  selama  15  menit,  lalu  didiamkan beberapa  saat.  Selanjutnya  media  dituang kedalam tabung reaksi steril masing-masing 10 mL  (sebagai  agar  miring)  dan  didiamkan hingga media menjadi padat. Media pembenihan  ini  digunakan  untuk  inokulasi mikroba.
2. Media Nutrient Broth (NB)
Media  cair  dibuat  dengan  menimbang  NB sebanyak  0.72  g  kemudian  dimasukkan  dalam gelas  kimia  dan  dicukupkan  dengan  90  mL aquades  (8  g/  1000  mL)  lalu  diaduk  hingga homogen. Setelah homogen media cair kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121˚C  selama  15  menit,  lalu  didiamkan beberapa  saat.  Selanjutnya  media  dituang kedalam  erlenmeyer  steril  masing-masing  10 mL.  Media  ini  akan  digunakan  untuk menginokulasikan  bakteri  simbion  spons  pada pengujian aktivitas antibakteri.

## Isolasi dan Purifikasi Bakteri Simbion
Sampel  spons  ditimbang  1  g  lalu  digerus menggunakan  alu  dan  lumpang  sampai  halus.
Selanjutnya akan dilakukan pengenceran sampel  sebesar  10 0 dengan  memasukkan  1  g spons  kedalam  tabung  reaksi  yang  sudah  steril kemudian  ditambahkan  NaCl  sebanyak  9  mL. Setelah  itu  dilakukan  pengenceran  bertingkat untuk  seri  10 -1 dan  10 -3 .  Diambil  100  µL  dari masing-masing  seri  lalu  disebarkan  kedalam cawan  petri  yang  berisi  media  NA  dan  di inkubasi menggunakan inkubator pada suhu 27- 29˚C  selama  1x24  jam.  Pengamatan  dilakukan terhadap  koloni  bakteri  yang  telah  tumbuh secara  makroskopik  yaitu  mengamati  bentuk, warna  dan  ukuran  koloni  bakteri.  Kemudian koloni-koloni yang terpilih dipisahkan kedalam media cawan petri steril berisi media NA dan di inkubasi  selama  1x24  jam  dengan  inkubator pada  suhu  27-29˚C.  Isolat  bakteri  murni  yang diperoleh  kemudian  dipindahkan  pada  media miring NA sebagai stok.
Pembuatan Larutan Mc. Farland 0.5
Larutan  H 2 SO 4 1%  sebanyak  9.5  mL dicampurkan  dengan  larutan  BaCl 2 1.75% sebanyak 0.5 mL dalam erlenmeyer. Kemudian dikocok  sampai  terbentuk  larutan  yang  keruh. Kekeruhan ini dipakai sebagai standar kekeruhan  suspensi  bakteri  uji  (Borges et  al. , 2004).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri uji Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus diambil  dengan  jarum ose  steril  kemudian  disuspensikan  ke  dalam tabung  reaksi  yang  berisi  7  ml  larutan  NaCl 0.9%,  hingga  diperoleh  kekeruhan  yang  sama dengan  standar  kekeruhan  larutan  Mc.  Farland 0.5.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Penyiapan  bakteri  simbion  dengan  cara menginokulasikan  1  ose  bakteri  simbion kedalam  10  mL  media  NB  lalu  diinkubasi selama  1x24  jam  dengan rotary  shaker incubator pada  suhu  27-29ºC.  Koloni  bakteri
simbion  dalam  media  cair  NB  masing-masing dipindahkan  ke  dalam  tabung  sentrifuge  lalu disentrifugasi  dengan  kecepatan  3000  rpm selama  30  menit.  Hasil  dari  sentrifugasi  akan membentuk  supernatan  yang  kemudian  akan diambil.  Pada  permukaan  media  disebarkan masing-masing  bakteri  uji  sebanyak  100  μL, kemudian  kertas  cakram  yang  telah  direndam dengan  isolat  bakteri  simbion  spons  diletakkan pada permukaan media bersama dengan kontrol positif yaitu tetrasiklin dan kontrol negatif yaitu aquades. Setelah itu diinkubasi pada suhu 37 o C selama  1x24 jam.
Identifikasi  Bakteri  Simbion  Melalui  Uji Biokimia
1. Uji Katalase
Media  NB  ditimbang  sebanyak  0.12  g  dan dilarutkan  dalam  15  mL  aquades.  Setelah  itu media  dihomogenkan  lalu  disterilkan  dalam autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit.
Media  kemudian  dituang  ke  dalam  tabung reaksi  steril  masing-masing  sebanyak  5  mL. Kemudian isolat bakteri diinokulasi menggunakan jarum ose ke dalam tabung reaksi yang berisi Nutrient Broth. Inkubasikan selama 24 jam pada suhu 37°C. Setelah itu tambahkan 3-4  tetes  3%  hidrogen  peroksida  ke  dalam media biakan. Diamati bila terjadi pembentukan gelembung maka uji ini bersifat positif.
2. Uji  Sitrat
Media dibuat dengan menimbang
Simmon’s  citrate sebanyak  0.36  g  dan dicukupkan  dalam  15  mL  aquades.  Isolat bakteri  diinokulasikan  ke  dalam  media  SCA dengan  cara  digores  lalu  diinkubasi  pada  suhu 37°C  selama  24  jam.  Hasil  positif  apabila terjadi  perubahan  warna  media  dari  hijau menjadi  biru  dan  uji  bersifat  negatif  apabila tidak terjadi perubahan warna pada media.
3. Uji Lisin Dekarboksilase
Lysin Iron Agar ditimbang sebanyak 0.52 g dan  dilarutkan  dalam  15  mL  aquades.  Isolat bakteri diinokulasi  dengan  cara  tusukan,  lalu diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam. Perubahan warna dari ungu menjadi kuning dan kembali menjadi ungu menandakan bahwa hasil terhadap uji ini positif. Sedangkan hasil negatif ditandai  dengan  perubahan  warna  dari  ungu menjadi kuning.

## 4. Uji Fermantasi Karbohidrat
Media  TSIA  ditimbang  sebanyak  1.82  g dan dicukupkan dalam 28 mL aquades. Setelah itu media dihomogenkan lalu disterilkan dalam autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit. Media  kemudian  dituang  ke  dalam  tabung reaksi  steril  masing-masing  sebanyak  7  mL. Isolat  bakteri  diinokulasikan  kedalam  media. Sisakan satu buah tabung yang tidak diinokulasi untuk  digunakan  sebagai  kontrol,  setelah  itu semua  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 37°C.

## 5. Uji Indol
Media  dibuat  dengan  menimbang  NA sebanyak 0.59  g dan dicukupkan dalam 21 mL aquades. Media yang telah homogen disterilkan di  dalam  autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15 menit.  Media  kemudian  dituang  ke  dalam tabung  reaksi  steril  masing-masing  sebanyak  7 mL.  Isolat  bakteri  diinokulasikan  ke  media dengan  cara  ditusukkan  menggunakan  jarum ose  sedalam 3 / 4 bagian.  Setalah  itu  diinkubasi pada  suhu  37°C  selama  24  jam.  Kemudian reagen covac's ditambahkan  sebanyak  0.2-0.3 mL  lalu  diamati . Hasil  positif  apabila  media bewarna merah pada saat penambahan reagen.
6. Uji H 2 S
Media TSIA ditimbang sebanyak 1.8 g dan dilarutkan  dalam  28  ml  aquades.  Media  yang telah  homogen  disterilkan  di  dalam  autoklaf pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit.  Media kemudian dituang ke dalam tabung reaksi steril
masing-masing  sebanyak  7  mL.  Setelah  itu isolat  bakteri  diinokulasikan  dengan  cara digores lalu ditusuk. Masukkan dalam inkubator  lalu  diinkubasi  pada  suhu  37°C selama  24  jam.  Hasil  positif  bila  terbentuk warna  hitam  pada  media.  Hasil  negatif  bila media berubah warna menjadi kuning.

## 7. Uji Motilitas
Media NA ditimbang sebanyak 0.59  g dan dicukupkan  dengan  21  mL  aquades  lalu. Setelah  itu  media  disterilkan  dalam  autoklaf pada  suhu  121°C  selama  15  menit,  kemudian dibiarkan  hingga  sedikit  mendingin.  Media dituangkan  kedalam  masing-masing  tabung reaksi  steril  sebanyak  7  mL.  Kemudian  isolat bakteri  dinokulasikan  ke  dalam  media  dengan cara  menusukkan  jarum  ose  sampai  ke  dasar media  dan  tiap-tiap  isolat  diberikan  kode  pada masing-masing  tabung.  Dinkubasi  pada  37° selama  24  jam.  Hasil  pengamatan  dicatat,  uji motilitas dinyatakan positif apabila pertumbuhan  bakteri  melebar  dibekas  tusukan jarum ose.

## Hasil dan Pembahasan Determinasi Sampel
Sampel  spons Phyllospongia  lamellose yang  diambil  dari  perairan  teluk  Manado dilakukan determinasi di Program Studi Biologi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam  Universitas  Sam  Ratulangi.  Tujuan dilakukannya  determinasi  untuk  mengetahui sampel  yang  diambil  ialah  tepat  sehingga
terhindar  dari  kesalahan  penggunaan  sampel dalam penelitian. Hasil dari identifikasi sampel menunjukkan  bahwa  jenis  spons  yang  hendak diteliti adalah spons Phyllospongia lamellose

## Isolasi dan Purifikasi Bakteri Simbion
Sampel  spons  yang  digunakan  dibersihkan terlebih  dahulu  menggunakan  aquades  untuk menghilangkan  kotoran  dan  mikroorganisme epifit  agar  koloni  yang  tumbuh  pada  media isolasi merupakan koloni bakteri simbion spons (Hafsari dan Asterina, 2013). Kemudian sampel dipotong  kecil-kecil  lalu  digerus  hingga  halus menggunakan  alu  dan  lumpang.  Pengenceran NaCl  secara  bertingkat  dimaksudkan  agar bakteri  yang  dihasilkan  tidaklah  pekat.  Hasil dari  isolasi spons menunjukkan  adanya pertumbuhan  koloni-koloni  bakteri  pada  media agar,  kemudian  dipilih  3  koloni  bakteri  yang berbeda berdasarkan pengamatan secara makroskopis dan diberi kode SL 1 , SL 2 dan SL 3 . Lalu  isolat-isolat  tersebut  dimurnikan  lagi dengan  menginokulasikannya  ke  media  agar yang baru dan diinkubasi selama 1x24 jam.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Bakteri  yang  akan  diuji  disentrifugasi dengan  tujuan  untuk  memperoleh  bakteri  yang aktif.  Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan  menggunakan  metode  difusi  cakram kertas.  Penggunan  metode  ini  dikarenakan kemudahan dan kesederhanaannya saat dilakukan  dan  dengan  metode  difusi  ini  juga jumlah  zat  yang  akan  digunakan  dapat  diatur (Valgas et al., 2007).

## Tabel 1. Hasil Pengukuran Diameter Zona Bening
Bakteri Uji Diameter Zona Bening (mm) K+ K- SL 1 SL 2 SL 3 Staphylococcus aureus 13.67 0 8.67 9.33 9.00 Escherichia coli 18.00 0 9.67 9.00 9.33
Ket : K+ Kontrol positif; K- Kontrol negatif; SL 1 Isolat; SL 2 Isolat SL 3 Isolat
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan dan  jika  ditinjau  dari  karakterisasi  kekuatan daya  antibakteri,  maka  diameter  rata-rata  zona bening  isolat  bakteri  yang  berasosisasi  dengan spons Phyllospongia lamellose terhadap bakteri Staphylococcus  aures yaitu:  SL 1 (8.67  mm), SL 2 (9.33mm)  dan  SL 3 (9.00  mm)  termasuk dalam  kategori  sedang.  Pada  diameter  rata-rata zona bening  yang dihasilkan oleh isolat bakteri yang  bersimbion  dengan  spons Phyllospongia lamellose terhadap  bakteri Escherichia  coli juga  termasuk  dalam  kategori  daya  antibakteri sedang  yaitu:  SL 1 (9.67  mm),  SL 2 (9.00  mm) dan  SL 3 (9.33  mm).  Kemampuan  aktivitas antibakteri  menurut  Brooks et  al .  (2008),
dipengaruhi oleh konsentrasi ekstrak, kandungan  senyawa  antibakteri,  daya  difusi ekstrak  dan  juga  salah  satunya  jenis  bakteri yang dihambat. Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif yang memiliki struktur  dinding  sel  dengan  lebih  banyak
lapisan  peptidoglikan  dan  membentuk  struktur yang  tebal  dan  kaku  juga  mengandung  asam teikoat. Escherichia  coli sebagai  bakteri  Gram negatif  terdiri  atas  lapisan  peptidoglikan  yang relatif  tipis,  memiliki  kandungan  lipid  yang banyak  serta  mempunyai  porin  yang  berperan sebagai saluran masuknya zat aktif ke dalam sel bakteri,  sehingga  masuknya  zat  aktif  ini  dapat merusak  aktivitas  enzim  dalam  sel  dan menyebabkan kerusakan sel serta dengan kadar lipid yang tinggi di dalam sel akan meningkatkan  permeabilitas  zat  aktif  ke  dalam sel bakteri (Adila et al ., 2013). Menurut Tansil et  al (2016),  perbedaan  struktur  dinding  sel sangat  menentukan  penetrasi,  ikatan  dan  juga aktivitas senyawa dari antibakteri.

## Identifikasi Secara Biokimia
Pengujian  dilanjutkan  pada  identifikasi isolat  bakteri  melalui  uji  morfologi  dan  uji biokimia.

## Tabel 2. Hasil Pengamatan Morfologi Isolat Bakteri Simbion
Kode Isolat Karakterisitik Bakteri Bentuk Sel Gram SL 1 Basil Positif SL 2 Basil Positif SL 3 Basil Positif
Berdasarkan  hasil  pengamatan  morfologi  sel bakteri  melalui  metode  pewarnaan  Gram. Ketiga isolat  bakteri  simbion  merupakan Gram positif  dengan  bentuk  basil.  Feliatra et  al., (2004) mengatakan bahwa bakteri Gram positif merupakan  bakteri  yang  memiliki  dinding  sel yang  tebal  dan  membran  sel  selapis,  sehingga pada  saat  bakteri  mengalami  dehidrasi  dengan pemberian  alkohol,  pori-pori  bakteri  tersebut
akan  mengkerut  yang  menyebabkan  warna utama (kristal violet) tidak bisa keluar. Interaksi antara  sel  bakteri  dengan  kristal  violet  akan semakin  kuat  dengan  ditambahkannya  lugol yang ketika dicuci dengan alkohol bakteri Gram positif  akan  tetap  mengikat  kompleks  kristal violet-lugol  sehingga  menjadi  warna  ungu Prescot et al. dalam Hidayat (2011), akan tetapi bakteri Gram negatif akan kehilangan kompleks
kristal violet-lugol karena lapisan peptidoglikan pada  bakteri  Gram  negatif  lebih  tipis  sehingga menjadi  tidak  berwarna.  Ketika  ditambahkan dengan  safranin  yang  berwarna  merah  maka bakteri  Gram  negatif  akan  menyerapnya sedangkan  bakteri  Gram  positif  tidak  akan menyerap  pewarna  lagi.  Identifikasi  bakteri dilakukan  dengan  teknik  konvensional  yaitu dengan  membandingkan  bakteri  yang  sedang diidentifikasi  dengan  bakteri  yang  telah
teridentifikasi  sebelumnya.    Bila  tidak  terdapat bakteri  dengan  ciri-ciri  100%  serupa,  maka dilakukan  pendekatan  bakteri  yang  memiliki ciri-ciri  yang  paling  menyerupai.  Oleh  karena itu teknik identifikasi dengan metode konvensional  akan  selalu  menghasilkan  suatu bakteri  tertentu  yang  sudah  teridentifikasi sebelumnya  dan  tidak  akan  dapat  menemukan spesies baru (Harrow dan Feltham, 2003).

## Tabel 3. Hasil Pengamatan Uji Biokimia Terhadap Isolat Bakteri Simbion
Kode Isolat Katalase Sitrat Lisin Fermentasi Karbohidrat Indol H 2 S Motilitas SL 1 SL 2 SL 3 - + + - + - + - + - + - - - - + - + - - -
Ket : + Hasil pengujian positif; - Hasil pengujian negative; SL 1 Isolat; SL 2 Isolat; SL 3 Isolat
Uji biokimia pada isolat  SL 1 menunjukkan hasil  negatif  terhadap  uji  katalase  dan  uji fermentasi  karbohidrat  namun  menunjukkan hasil  positif  terhadap  uji  H 2 S.  Hasil  yang diperoleh  dilanjutkan  dengan  penentuan  genus berdasarkan buku Bergey’s  Manual  of Determinative  Bacteriology  9 th Edition yang menyimpulkan  bahwa  bakteri  tersebut  diduga sebagai  bakteri  Desulfotomaculum.  Hal  ini sejalan  dengan  Grimm et  al., (2002),  yang menyatakan bahwa Desulfotomaculum merupakan kelompok bakteri yang
menggunakan ion sulfat  sebagai  penghasil H 2 S untuk kelangsungan hidup dari bakteri tersebut. Menurut  Widyati  (2017),  Desulfotomaculum dapat  dimanfaatkan  dalam  proses  bioremediasi tanah  bekas  tambang  batu  bara  yang  dengan waktu  inkubasi  20  hari  dapat  menunjukkan aktivitas penurunan konsentrasi sulfat sehingga tanah yang telah tercemar dapat kembali subur.
Pada uji biokimia isolat SL 2 diperoleh hasil positif  terhadap  uji  katalase  dan  uji  fermentasi karbohidrat.  Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat disimpulkan  bahwa  isolat  bakteri  SL 2 diduga sebagai  genus  bakteri  Brochothrix  yang  telah disesuaikan  dengan  buku Bergey’s  Manual  of Determinative Bacteriology 9 th Edition.
Uji  biokimia  berikutnya  yaitu  pada  isolat bakteri  simbion  spons Phyllospongia  lamellose isolat  SL 3 ,  yang  memperlihatkan  hasil  positif terhadap uji katalase serta hasil negatif terhadap uji  fermentasi  karbohidrat  dan  uji  motilitas. Berdasarkan hasil tersebut selanjutnya disesuaikan  dengan  buku Bergey’s  Manual  of Determinative  Bacteriology  9 th Edition yang kemudian  ditarik  kesimpulannya  bahwa  isolat SL 3 diduga sebagai genus Sulfidobacillus. Hasil penelitian  yang  menduga  bahawa  isolat  SL 3 merupakan  bakteri  Sulfidobacillus  didukung dengan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh Rukmana  dan  Zulaika  (2017)  menunjukkan karakterisitik dari bakteri Sulfidobacillus berdasarkan buku Bergey’s  Manual  of
Determinative  Bacteriology ialah  sel  bakteri berbentuk  basil,  termasuk  dalam  kelompok bakteri  Gram  positif,  motilitas  negatif  dan katalase positif.

## Kesimpulan
Isolat bakteri simbion spons Phyllospongia lamellose menunjukkan adanya aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri  uji  yang  termasuk dalam kategori sedang. Diameter rata-rata zona bening  yang  dihasilkan  ketiga  isolat  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus yaitu: SL 1 (8.67 mm),  SL 2 (9.33mm)  dan  SL 3 (9.00  mm).
Sedangkan  terhadap  bakteri Esherichia  coli yaitu:  SL 1 (9.67  mm),  SL 2 (9.00  mm)  dan  SL 3 (9.33  mm).  Identifikasi  secara  biokimia terhadap ketiga isolat masing-masing teridentifikasi sebagai Desulfotomaculum (SL 1 ), Brochothrix (SL 2 ) dan Sulfidobacillus (SL 3 ).

## DAFTAR PUSTAKA
Achiruddin,  I.  2005.  Pemantauan  Perubahan Garis  Pantai  di  Pantai  Timur  Surabaya dengan  Teknologi  Penginderaan  Jauh. Jurnal Geoid. 1(1) : 81-86.
Adila,  R.,  Nurmiati.,  Agustien,  A.  2013.  Uji Antimikroba Curcuma spp.  Terhadap Pertumbuhan Candida albicans, Staphylococcus  aureus  dan  Esherichia coli. Jurnal Biologi . 2(1) : 1-7.
Borges,  M.  T  dan  Bresson,  W.  2004.  Delivery Methods  for  Introducing  Endophitic Bacteria  into  Maize. Biocontrol. 49 : 315-322.
Brooks, G. F., Butel. J. S., Morse S. A. 2008.
Medical Microbiology . McGraw Hill,
New York.
Departemen Teknologi Hasil Perairan, Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Departemen Biologi. Karakterisasi  Awal  Inhibitor  Protease dari  Bakteri  yang  Berasosiasi  dengan
Spons  Asal  Pulau  Panggang  Kepulauan Seribu. 2006. 13(2) : 58-64.
Feliatra.  2004.  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri Probiotik  dari  Ikan  Kerapu  Macan (Ephinephelus fuscogatus) dalam Upaya Efisiensi  Pakan  Ikan. Jurnal  Natur Indonesia. 6(2) : 75-80.
Grimm,  K  dan  Langendijk,  P.  2002.  Invitro
Colonization of Sulfat Reducing Bacteria (SRB) on Resorbable Membranes for Periodantal Regeneration. Journal  Antimicrobial and Anti Imflammatory . 3 :45.
Hafsari, A. R. dan Asterina, I. 2013. Isolasi dan
Identifikasi Kapang Endofit dari Tanaman  Obat  Surian. Jurnal  Istek. 7(2) : 175-191.
Harrow,  G.  I.  dan  Feltham.  2003. Cowan  and Steel’s Manual for The Identification of Medical Bacteria 3 th Edition. Cambridge University Press, United Kingdom.
Hidayat, H. 2011. Karakterisasi Molekuler BAL
Dengan  Gen  16S  rRNA  Penghasil Enzim Protease Yang Berpotensi Sebagai  Probiotik  Dari  Fermentasi Markisa  Kuning  di  Sumatera  Barat. Universitas Andalas, Padang.
John, G. H., Noel, R. K., Peter, H. A. S., James, T.  S.,  Stanley,  T.  W.  1994 Bergey's Manual  of  Determinative  Bacteriology 9 th Edition. Baltimore  The  Williams  & Wilkins Company, United States.
Oki,  W.  D.,  Judianti,  M.  M.,  Fiqri,  M.  K.,
Ansyori-KM,  G.  T.  2014.  Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri yang Berasosisasi dengan Spons Demospongiae dari  Pantai  Paciran
Lamongan. Sains dan Matematika. 2(2) : 2302-7290.
Oretz,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  Testing  in Manual  of  Antimicrobial  Susceptibility
Testing. American Society for
Microbiology, USA.
Rukmana,  G  dan  Zulaika,  E.  2017.  Isolasi bakteri Karbonoklastik dari Pegunungan Kapur. Jurnal  Sains  dan  Seni. 6(2) : 2337-3520.
Tansil,  A.  Y.  M.,  Edward,  N.,  Jimmy,  P.,
Robert,  A.  B.  2016.  Uji    Daya  Hambat
Ekstrak  Etanol  Daun  Srikaya (Annona Squamosa) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Esherichia coli dan Staphylococcus aureus . Jurnal e-
Biomedik . 4(2) .
Valgas, C., Souza, S. M. D., Smania, E. F. A, and Artu, S. 2007. Screening Methods to Determine Antibacterial Activity of Natural Products. Brazilian Journal of
Microbiology . 38 : 369-380.
Widyati,  E.  2017.  Pemanfaatan  Bakteri  Sulfat untuk Bioremediasi Tanah Bekas Tambang Batubara. Jurnal Biodiversitas . 8(4) : 283-286.