Juni 2022, Vol. 9 No. 1: 66 – 71
pISSN : 2355-9942, eISSN:2656-792X
Terakreditasi Nasional, Dirjen Pendidikan Tinggi, Riset, dan Teknologi
Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi RI
S.K. No. 105/E/KPT/2022 Received: 31 Maret 2022, Accepted: 11 Juni 2022
Published online: 30 Juni 2022 Doi: https://doi.org/10.35508/nukleus.v9i1.6663 https://ejurnal.undana.ac.id/index.php/nukleus/article/view/6663
NILAI NUTRISI DEDAK PADI YANG DIFERMENTASI DENGAN Rhyzopus oligosporus
(Nutrients quality of rice bran fermented with Rhyzopus oligosporus)
Maritje A. Hilakore * , Mariana Nenobais,  Twenfosel Oc. Dami Dato) Program Studi Peternakan, Fakultas Peternakan, Kelautan, dan Perikanan, Universitas Nusa Cendana Jln. Adisucipto, Penfui, Kupang, Nusa Tenggara Timur, Indonesia 850001
* Correspondent author, email : maritjealeonor@staf.undana.ac.id

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  meminimalisir  kadar  asam  pitat  dan  meningkatkan  kandungan  protein  dari dedak  padi    melalui  proses  fermentasi  menggunakan    Rhyzopus  oligosporus  secara  in  vitro.  Kultur  yang digunakan  merupakan  kultur  murni  dan  diawali  oleh    peremajaan  kultur  pada  agar  miring.  Metode  yang digunakan  adalah  eksperimental  dengan  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  pola  faktorial    3  x  3 dengan  tiga  faktor  yakni  faktor  pertama  adalah  level  inokulum  R.  oligosporus  1,  2,  dan  3%  (b/b)    dan  faktor kedua adalah lama inkubasi: 24, 48, dan 72 jam  sehingga terbentuk sembilan kombinasi perlakuan. Kombinasi tersebut  adalah  L1T1;  L1T2;  L1T3;  L2T1;  L2T2;  L2T3;  L3T1;  L3T2  dan  L3T3.  Perlakuan  diulang  tiga  kali untuk  membentuk  27  unit  percobaan.  Parameter  yang  diukur  adalah  kandungan  protein  kasar,  protein  terlarut, dan  asam  pitat  pada  dedak  padi  fermentasi.  Data  dianalisis  menggunakan  analisis  ragam  (ANOVA)  dan dilanjutkan dengan uji Duncan untuk membandingkan antar perlakuan.  Hasil pengukuran menyimpulkan bahwa level  inokulum  R.  oligosporus  2%  dan  lama  inkubasi  72  jam  (L2T3)  memengaruhi  peningkatan  kandungan protein kasar (10,88 menjadi 14,27%), protein terlarut ( dari 6,14 menjadi 9,07%), serta menurunkan kadar asam pitat (5,48 menjadi 2,27%).
Kata-kata kunci: Rhyzopus oligosporus , kapang, fermentasi

## ABSTRACT
The  experiment  was  conducted  to  improve  the  nutrients  quality  of  rice  bran  fermented  with  Rhyzopus oligosporus. The culture used was pure culture and was initiated by rejuvenation of the culture on slanted agar. The method used was experimental using a completely randomized design (CRD) with a 3 x 3 factorial pattern with three factors, namely the first factor was the inoculum level of  R. oligosporus 1, 2, and 3% (w/w) and the second factor was incubation time: 24 , 48, and 72 hours to form nine treatment combinations. The combination is L1T1; L1T2; L1T3; L2T1; L2T2; L2T3; L3T1; L3T2 and L3T3.  The treatment  was  repeated three times to form 27 experimental units. Parameters measured were crude protein content, soluble protein, and phytic acid in fermented rice bran. Data were analyzed using analysis of variance (ANOVA) and continued with Duncan's test to compare between treatments. The  measurement results concluded that  the  R. oligosporus inoculum level of 2%  and  incubation  time  of  72  hours  (L2T3)  affected  the  increase  in  crude  protein  content  (10.88  to 14.27%), soluble protein (from 6.14 to 9.07%), and decrease phytic acid (5.48 to 2.27%).
Keywords: Rhyzopus oligosporus , fungi, fermentation

## PENDAHULUAN
Dedak  padi  merupakan  salah  satu  dari limbah    hasil    pertanian    yang    ketersediaannya cukup  banyak,  mudah  untuk  didapatkan  dan murah harganya. Faria et al . (2012) melaporkan bahwa dedak padi mengandung  air 5,14-8,41%, abu    6,98-8,52%,    lemak    17,87-20,05,    protein 16,61-19,38%,    serat    kasar    20.45-25,38%, karbohidrat    tersedia    28,21-33,76%.    Namun,
dedak    padi    mempunyai    beberapa    kelemahan antara lain serat kasar dan asam fitat yang tinggi. Sumiati (2005) menyatakan, dedak padi mengandung  asam    fitat    sekitar    6,9%.    Asam fitat  dapat mengikat  mineral  seperti  kalsium, phospor,  magnesium,  seng,    dan    tembaga sehingga    berpotensi  mengganggu  penyerapan mineral. Selain itu asam fitat juga bisa berikatan
dengan protein sehingga bisa  menurunkan  nilai daya  cerna  protein.
Istilah fitat mengacu untuk  molekul asam fitat,  yang  umumnya  berperan  sebagai  chelate untuk  phosphor  (P),  kalsium  (Ca),  Magnesium (Mg), Natrium (Na), Kalium (K), besi (Fe), seng (Zn)  serta  dalam  beberapa  kasus  protein  dan karbohidrat  (Selle et  al .,  2000).  Akibat kompleks yang terbentuk, maka ketersediaan zat makanan  diatas  akan  berkurang,  khusus  bagi ternak  non  ruminansia.  Hasil  hasil  penelitian menunjukkan bahwa asam fitat mampu menekan pemanfaatan  protein  dan  atau  asam  amino, dengan  membentuk  kompleks  fitat-protein sehingga menyebabkan perubahan pada struktur protein.  Perubahan  struktur  tersebut  akan mengakibatkan  penurunan  kelarutan  protein, aktivitas  enzim  dan  kecernaan  protein  (Urbano et al ., 2000; Greiner and Konietzny, 2011).
Kandungan asam fitat dalam bahan pakan dapat  diturunkan  atau  bahkan  dihilangkan melalui  berbagai  macam  metode  pengolahan. Fermentasi merupakan proses pemecahan senyawa  organik  menjadi  senyawa  sederhana yang  melibatkan  mikroorganisme.  Fermentasi dapat  memerbaiki    gizi    bahan    berkualitas rendah,  meningkatkan    protein,    menurunkan serat    kasar  (Istiqomah et  al .,  2010), menurunkan  anti-nutrisi  dan  meningkatkan kecernaan  protein (Olanipekun  et  al.,  2015).
Fermentasi  dedak  padi  dengan  kapang penghasil  fitase  dapat  dilakukan  sebagai  salah satu  usaha  untuk  menurunkan  kadar  asam  fitat dedak  padi.  Fermentasi  merupakan  proses  yang relatif murah yang telah lama dilakukan. Proses fermentasi  dengan  cara  dan  dosis  yang  sesuai mampu menghasilkan produk protein, menurunkan  kadar  lemak,  dan  membentuk (menyederhanakan) karbohidrat kompleks. Winarno et  al .,  (1980)  menyatakan  bahwa  nilai
gizi bahan pakan yang difermentasi lebih tinggi daripada bahan asalnya.
Penggunaan    kapang    sebagai    inokulum fermentasi    sudah  banyak  dilakukan  karena penanganannya  yang  relatif  mudah  serta pertumbuhannya  cepat,  pertumbuhannya  pun mudah  dilihat  karena  penampakannya  yang berserabut seperti kapas berwarna putih
(Fardiaz, 1989). Rhizopus oligosporus merupakan  kapang  yang  banyak  digunakan dalam  pembuatan  tempe,  banyak  terdapat  di alam karena hidupnya bersifat saprofit. Aunstrop (1979)  menyatakan  bahwa,  kapang  Rhizopus oligosporus      dikenal  sebagai  kapang  yang mampu  memproduksi  enzim  lipase  untuk merombak  lemak  media.  Berkurangnya  kadar lemak merupakan keuntungan, karena menghambat  ketengikan  sebagaimana  umum terjadi pada bahan dengan kadar lemak tinggi.
Hasil  penelitian  yang  dilakukan  Hilakore et  al .,  (2021)  menunjukkan  bahwa  fermentasi dedak  padi  dengan  Saccharomyces  cerevisiae dosis  2%  (b/b)  dan  lama  inkubasi  72  jam, meningkatkan  protein  kasar  75%  (dari  10,88 menjadi  14,36%),  protein  terlarut  62%  (6,14  vs 9,82%)  dan  menurunkan  kandungan  asam  fitat 54%.(5,48  vs  2,98).  Stodolak    dan    Starzynska- Janiszewska (2008) melaporkan bahwa fermentasi dengan ragi tempe mampu menurunkan  asam    fitat  sebanyak  22%    dan meningkatkan    ketersediaan    protein  sebesar 25%.  Fitriyani et  al .  (2019)  melaporkan  bahwa tempe  dedak  mempunyai  asam  fitat  yang  lebih rendah dari pada dedak sebesar 35,3%.
Artikel ini melaporkan perubahan- perubahan  nilai  nutrisi  yang  terjadi  pada  dedak padi  sebagai  akibat  fermentasi  oleh  kapang  R. oligosporus  melalui  variabel  ukur  yakni  kadar protein kasar dan protein terlarut, asam fitat dan lemak kasar dedak fermentasi.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilakukankan  di  Laboratorium Kimia  Pakan  Fakultas  Peternakan  Undana Kupang. Materi yang digunakan kultur murni R. oligosporus diperolehdari PAU Pangan dan Gizi UGM  Yogyakarta,  dedak  padi  yang  dibeli  dari penggilingan  padi  di  Kota Kupang,  serta  materi dan alat pendukung lainnya.

## Pembuatan Bubuk
Proses  peremajaan  kultur  murni  pada  agar miring  (PDA),  diinkubasi  pada  suhu  kamar
selama  tiga  hari.  Setelah  tiga  hari  kultur  murni dalam  agar  miring  dipanen  dengan  cara menambahkan  aquades  steril  sebanyak  9  ml  ke dalam  tabung  agar  miring.  Menggunakan  ose untuk mengambil mikroba yang menempel pada agar miring, selanjutnya disebut cairan inokulan. Sebanyak  500  g  tepung  beras  ditambahkan aquades  steril  agar  kadar  air  tepung  beras menjadi 70%. Tepung beras dimasukan kedalam autoclave, disteril pada suhu 120oC dan tekanan 1  Atm  selama  15  menit.  Tepung  beras
didinginkan selanjutnya dicampur dengan cairan inokulan hingga homogen Di inkubasi pada suhu kamar selama tiga hari. Dikeringkan dalam oven suhu  35oC  (Hilakore et  al .,  2008).  Siap digunakan sebagai bubuk inokulum penelitian

## Metode Penelitian
Metode penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap pola faktorial dengan level  kultur  R.  oligosporus:  1,  2,  dan  3%    (b/b) sebagai  faktor  pertama  dan  lama  inkubasi  (24, 48,  dan  72  jam)  sebagai  faktor  kedua  dengan  3 kali ulangan. Kandungan nutrisi sampel (protein dan  lemak  kasar)  dianalisis  sesuai  prosedur Proksimat  dan  dikerjakan  di  Laboratorium Kimia  Pakan  Fakultas  Peternakan  Kelautan  dan Perikanan  Universitas  Nusa  Cendana  Kupang, menggunakan  metode  Kjeldahl  (AOAC,  2005), sedangkan kadar protein terlarut sesuai prosedur Apriantono et al ., (1989) dan asam fitat dengan prosedur  Davies  dan  Nightingale  (1975), dilakukan  di    Lab  Layanan  Kimia  BPT  Ciawi, Bogor.

## Uji Kadar Asam Fitat
.  Prosedur  Uji  kadar  asam  fitat  (Davies and  Reid,  1979).  Bubuk  Kacang  berukuran  80 mesh  diambil  1  gr  dan  diekstrak  dengan  HNO3 0,5  M  50  ml.  Suspensi  diaduk  menggunakan magnetic stirrer selama 2 jam pada suhu kamar. Setelah  waktu  tercapai,  ekstrak  disaring  dan filtrat dapat digunakan untuk analisis asam fitat. Diambil  0,5  ml  larutan  filtrat  dan  ditambah  0,9 ml  HNO3  0,5  N  dan  FeCL3  1ml  (mengandung ion  besi  50  μg/ml),  tabung  ditutup  dengan
alumunium  foil  dan  direndam  dalam  air mendidih  selama  20  menit.  Kemudian  tabung didinginkan denagn air mengalir. Setelah tabung dingin, larutan ditambah 5 ml amil alkohol dan 1 ml  amonium  tiosianat.  Larutan  kemudian disentrifuse  1000  rpm  selama  10  menit, kemudian ditera pada λ 465 nm. Sebagai standar digunakan  Na-Fitat.Dibuat  larutan  stok  0,04 g/100 ml. Dari larutan stok kemudian dibuat seri pengenceran 0,03 g/100 ml; 0,02 g/100 ml; 0,01 g/100 ml; dan 0 g/100 ml

## Uji Kadar Protein Terlarut
Prosedur  Uji  kadar  protein  terlarut (Apriantono et  al .,  (1989).  Sampel  sebanyak  10 g yang berukuran 50 mesh diekstrak dengan 250 ml  aquadest.  Suspensi  diaduk  agar  homogen, kemudian  ekstrak  disaring  dan  filtrat  dapat digunakan ubtuk analisis protein. Filtrat diambio 25  ml  kemudian  diencerkan  menjadi  100  ml. Kemudian  dari  larutan  tersebut  diambil  1ml direaksikan  dengan  8  ml  lowry  B.  Didiamkan selama  10  menit.  Setelah  waktu  tercapai, reaksikan lagi dengan 1 ml lowry A.  Kemudian didiamkan  20  menit.  Larutan  kemudian  ditera pada λ 600 nm. Sebagai standar digunakan BSA (Bovine  Serum  Albumin).  Dibuat  larutan  stok 0,03g/100 ml. Dari larutan stok kemudian dibuat seri  pengenceran  0,024  g/100ml;  0,018  g/100 ml; 0,012 g/100 ml; dan 0,006 g/100 ml.

## Analisis Data
Data  penelitian  dianalisis  dengan  Sidik Ragam dan dilanjutkan uji Duncan bila terdapat perbedaan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh Fermentasi terhadap Kadar

## Protein Kasar
Fermentasi  dedak  padi  dengan  kapang  R. oligosporus  nyata  (P  ≤0,5)  meningkatkan kandungan  protein  kasar  dedak  padi  seperti diperlihatkan  Tabel  1.  Adanya  peningkatan kandungan  protein  substrat  menunjukkan  ada pertumbuhan kapang. Kapang merupakan protein sel tunggal, dengan demikian kehadirannya  dalam  suatu  substrat  dapat dijadikan indikator untuk menentukan kandungan protein substrat. Menurut Mangunwidjaja et  al .,  (2012)  bahwa  salah  satu indikator  yang  digunakan  untuk  mengetahui adanya  peningkatan  kadar  protein  pada  suatu substrat yang difermentasi adalah dari jumlah/intensitas miselium kapang yang tumbuh
pada substrat tersebut karena kadar protein pada suatu  substrat    berbanding  lurus  dengan intensitas  pertumbuhan  miselium  kapang  atau jumlah sel yang terbentuk.
Hasil  uji  lanjut  menunjukkan  pasangan perlakuan level kultur 2% dengan lama inkubasi 72  jam  merupakan  kombinasi  terbaik  dalam meningkatkan  protein  kasar  substrat.  Artinya pada  kombinasi  tersebut  terjadi  keseimbangan antara  populasi  kapang  dengan  persediaan nutrien  dalam  substrat.  Akibat  pertumbuhan terjadi peningkatan biomassa kapang selanjutnya kadar  protein  substrat  meningkat  karena  sel kapang  adalah  protein.  Karena  pertumbuhan adalah  pertambahan  jumlah  massa  sel  atau organisme,  sehingga  dengan  adanya  kenaikan
jumlah  massa  sel  kapang  akibat  pertumbuhan akan meningkatkan kadar protein medium.
Kapang  merupakan  protein  sel  tunggal, dengan  demikian  kehadirannya  dalam  suatu substrat dapat dijadikan indikator untuk menentukan kandungan protein substrat. Menurut  Mangunwidjaja et  al .,  (2012)  bahwa salah  satu  indikator  yang  digunakan  untuk mengetahui  adanya  peningkatan  kadar  protein pada  suatu  substrat  yang  difermentasi  adalah dari  jumlah/intensitas  miselium  kapang  yang tumbuh  pada  substrat  tersebut  karena  kadar protein  pada  suatu  substrat    berbanding  lurus dengan intensitas pertumbuhan miselium kapang atau jumlah sel yang terbentuk.
Hasil  yang  sama  juga  dilaporkan  oleh Hilakore et  al .,  (2021)  pada  fermentasi  dedak padi  dengan  khamir  Saccharomyses  cerevisiae meningkatkan kadar protein kasar dedak sebesar 75,76%  (dari  10.88  menjadi  14.36%)  setelah diinkubasi  3  hari.    Nurfahriani et  al .,  (2018) melaporkan  bahwa  fermentasi  dedak  padi  oleh R.oligosporus  selama  4  hari  meningkatkan kandungan  protein  sebesar  38,14%.  Wahyuni (2003)  melaporkan  kandungan  protein  kasar meningkat  (dari  9,17  menjadi  12,23  %)  pada dedak padi yang difermentasi dengan Aspegillus ficuum.

## Tabel  1. Kualitas Dedak  Hasil Fermentasi  R. oligosporus
Dosis R. oligosporus (% b/b) Lama Inkubasi (jam ) Kandungan Nutrisi (% BK) PK Protein terlarut Asam pitat LK Kontrol* 0 10,88 6,148 5,48 8,23 1 24 11.50 ±  0.89 a 8,84±  0,13 a 2,84  ± 0,7 a 6.87 ± 0.54 b 48 11.47 ± 0.26 a 8,42±  0,21 a 2,77  ±  0,10 a 7.77 ± 1.24 c 72 12.66 ±  0.52 b 9,57  ±  0,11 b 2,53 ± 0,13 a 4.84 ± 0.99 a 2 24 11.77 ± 0.77 a 8,71  ± 0,19 a 2,58 ± 0,03 a 6.12 ± 0.34 c 48 11.55 ± 0.29 a 8,04  ± 0,07 a 2,47 ± 0,15 a 5.54 ± 0.05 b 72 14.27 ± 0.49 b 9,07 ± 0,09 b 2,27 ± 0,09 a 4.77 ± 0.20 a 3 24 11.23 ± 0.18 a 8,61  ±  0,15 a 2,82  ±  0,05 a 7.33 ± 0.39 c 48 10.51 ± 0.31 a 8,48  ± 0,18 a 2,46  ±  0,11 a 6.32 ± 0.68 b 72 10.92 ± 0.29 a 9,61  ± 0,12 b 2,37  ±  0,13 a 4.89 ± 0.58 a
Superskrip yang berbeda  pada kolom yang sama  menunjukan ada perbedaan
Pengaruh Fermentasi terhadap Kadar Protein Terlarut
Protein terlarut adalah suatu oligopeptida atau asam-asam amino yang mudah diserap  oleh    utrit  pencernaan.  Tabel  1. Memerlihatkan  bahwa  lama  inkubasi  memberi pengaruh  yang  nyata  (P≤0,5)  terhadap peningkatan  kadar  protein  terlarut.  Semakin lama  waktu  inkubasi,  kadar  asam  fitat  semakin rendah,  menunjukkan  bahwa  selama  proses fermentasi  terjadi  pemecahan  asam  fitat  oleh enzim  fitase  yang  dihasilkan  dari  kapang. Tingginya protein terlarut pada substrat disebabkan  oleh  pemecahan  molekul  kompleks menjadi  molekul  sederhana  dan  larut  dalam  air selama  fermentasi.  Selain  karena  aktivitas protease,  peningkatan  protein  terlarut  dapat disebabkan  karena  protein  tidak  terikat  oleh asam  fitat  membentuk  protein  yang  mengendap (fitat-protein).  Untuk  itu  Nissar et  al .,  (2017) menjelaskan  bahwa  ketika  asam  fitat  direduksi oleh  enzim  fitase  maka  kelarutan  protein  akan meningkat. Hal tersebut disebabkan karena asam fitat  telah  dipecah  menjadi  fosfat  organik  dan
inositol sehingga tidak berikatan dengan protein maupun  asam  amino  yang  mengandung  kation. Di  tambahkan  oleh  Perdani  dan  Utama  (2020) bahwa  kadar  asam  fitat  dan  protein  terlarut berbanding  terbalik  atau  berkorelasi    negatif yakni    semakin  kecil  kadar  asam  fitat  maka semakin  besar  kadar  protein  terlarut  selama fermentasi. Data penelitian ini membuktikan hal tersebut.  .
Hasil  penelitian  sebelumnya  dilaporkan oleh  Hilakore et  al .,  (2021)  terjadi  peningkatan protein terlarut pada dedak padi yang difermentasi  S.  cerevisiae    yakni  dari  6,14 menjadi  9,82%.  Juga  dilaporkan  oleh    Perdani dan  Utama  (2020)  bahwa  tepung  kedelai  yang difermentasi  selama  72  jam  mengandung  kadar protein terlarut paling tinggi yakni 5,10%, lebih rendah dari penelitian ini (9,07%).

## Pengaruh  Fermentasi  terhadap  Kadar  Asam Fitat
Kadar  asam  fitat  dedak  padi  selama fermentasi  0,  24,  48  dan  72  jam  berbeda  nyata (P  ≤0,5).    Tabel  1.  Menunjukkan  bahwa  secara
statistik  jumlah  kultur  tidak  nyata  (P  ≤0,5) menurunkan  kadar  asam  fitat,  tetapi  proses fermentasi  menyebabkan  terjadi  penurunan kadar  asam  fitat  yang  menggambarkan  bahwa proses  fermentasi  mampu  mereduksi  senyawa antinutrisi  seperti  asam  fitat.  Keadaan  tersebut didukung  oleh  bentuk  dedak  yang  halus  dan poros  memudahkan  sel  menerobos  seluruh bagian  substrat  untuk  mendapatkan  nutrisi  yang dibutuhkan.  Semakin  mudah  substrat  diinvasi oleh miselium maka semakin mudah dan banyak enzim fitase yang dihasilkan oleh kapang dalam menghidrolisis asam fitat.
Sejalan pernyataan tersebut Huang et al ., (2019)  menyatakan,    kapang  Rhizopus  sp. Dapat menghasilkan enzim fitase yang mendegradasi asam fitat. Buckle (1985) menyatakan bahwa kapang tumbuh dengan cara memperpanjang  hifa.  Semakin  kecil  ukuran butiran  substrat/medium  maka  semakin  mudah kapang menembus substrat dan semakin banyak asam fitat yang diuraikan oleh enzim fitase yang
dihasilkan  oleh  kapang.  Semakin  lama  waktu fermentasi, miselium jamur semakin tebal akibat pertumbuhan  kapang  yang  semakin  meningkat. Dengan  pertumbuhan  kapang  dan  semakin tebalnya  miselium  maka  enzim  fitase  yang diproduksi  semakin  meningkat  sehingga  kadar asam fitat ikut menurun.
Penurunan  kadar  asam  fitat  sebagaimana diperoleh  pada  penelitian  ini  juga  dilaporkan Wahyuni  (2003),  pada  fermentasi  dedak  oleh Aspergillus  ficuum  terjadi penurunan asam  fitat sebanyak  83,25%  pada  penggunaan  kultur 0,75%.  Hasil  penelitian  Murtini et  al .,  (2011) melaporkan  setelah  inkubasi  24  jam  terjadi penurunan  asam  pitat  dari  2,08  menjadi  0,55 mg/g pada sorgum coklat. Selanjutnya dilaporkan  oleh  Rokhmah et  al .,  (2019)  kadar asam  fitat  tempe  kara  benguk  giling,  turun  dari 4,04 mg/g tanpa fermentasi menjadi 1,05 setelah 48  jam  fermentasi  dan  lama  inkubasi  tidak berpengaruh terhadap kadar asam fitat.

## SIMPULAN
Fermentasi  dedak  padi  oleh  kapang Rhyzopus  oligosporus  pada  level  kultur  2% (b/b)  dan  lama  inkubasi  72  jam    menurunkan kadar  asam  fitat  5,48  menjadi  2,27,  serta
meningkatkan  protein  kasar    10.88  menjadi 14,27%    dan  protein  terlarut    6,14  menjadi 9,07%.

## DAFTAR PUSTAKA
Anam  C,  Handayani  S,    Rokhmah  LN.  2010.
Kajian kadar asam fitat dan kadar protein selama  pembuatan  tempe  kara  benguk (mucuna pruriens,l) dengan variasi pengecilan  ukuran  dan  lama  fermentasi. Jurnal  Teknologi  Hasil  Pertanian 3(1): 34-43.
Apriyantono  A,  Fardiaz  D,  Puspitasari  NL. 1989.  Petunjuk  Laboratorium  Analisis Pangan. IPB Press, Bogor.
Aunstrop,  K.  1979.  Production,  Isolation  And Economic  Of  Extracellular  Enzymes.  In: LE.  Wingard,  E.K.Katair  and  Goldstein (Eds). Applied Biochemistry Bioengineering  Enzymes  Technology. Academic Press, New York. AOAC. 2005. Association of Official Analytical
Chemist.  2005.  Official  Methods  of Analysis  of  AOAC  International.  18th
Edition.
Gaithersburg: AOAC
International.
Davies  NT,    Reid  H.  1979.  “An  evaluation  of phytate, zinc, copper, iron and availability from soy based textured vegetable protein meat  substitutes  or  meat  extruders. Br.  J.
Nutr . 41: 579-589.
Endrawati  D  dan  Kusumaningtyas  E.  2017. Beberapa  Fungsi  Rhizopus  sp  dalam meningkatkan Nilai Nutrisi Bahan Pakan. Wartazoa 27 (2): 81-88.
Fardiaz  S.  1988.  Fisiologi  Fermentasi.  Pusat Antar Universitas IPB. Bogor.
Faria  SASC,  Bassinello  PZ,  Penteado  MVC.
2012. Nutritional composition of rice bran submitted to different stabilization procedures. Bra.  J.  Pharma.  Sci. 48(4): 651-657.
Fitriyani  IN,  Santoso  U,  Akbarillah  T.  2019.
Pengaruh pemberian tempe dedak
terhadap  performa  ayam  broiler. Jurnal Sain  Peternakan  Indonesia 14(3):  246- 251.
Greiner,  R.,  and  Konietzny,U.  2011.  Phytase:
Biochemistry, Enzymology And Characteristics  Relevant  To  Animal  Feed
Use. In: M.R. Bedford and G.G. Partridge (eds.). Enzymes in Farm Animal Nutrition 2nd Ed. USA: CABI Pub.,96-128.
Hilakore  MA.  2008.  Peningkatan  kualitas utritive putak melalui fermentasi campuran Trichoderma reesei dan
Aspergillus niger sebagai pakan ruminansia. Disertasi .  Bogor  Sekolah
Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Hilakore  MA,  Twenfosel  ODD,  Mariana  N. 2021. Penggunaan Khamir Saccharomyces cereviseae untuk
Memerbaiki Kualitas Nutrien Dedak Padi.
Jurnal Nukleus Peternakan 8( 1): 40-45.
Huang L, Wang C, Zhang Y, Chen X, Huang Z,
Xing G. 2019. Degradation of
antinutritional  factors  and  reduction  of immunoreactivity of tempeh by cofermentation with Rhizopus oligosporus RT-3  and  Actinomucor  elegans  DCY-1. Int.  J.  Food  Sci.Technol. (54)5:  1836-
1848.
Istiqomah,  I.,  Febrisiantosa  A,  Sofyan  A, Damayanti  E.  2010.  Implementation  of fermented  rice  bran  as  a  flavor  enhancer additive  and  its  effect  on  feed  utilization and  beef  cattle  performance.  The  5th International Seminar on Tropical Animal Production,  Community  Empowerment and  Tropical  Animal  Industry,  October 19-22, 2010, Yogyakarta, Indonesia.
Murtini  ES,  Radite  AG,  Sutrisno  A.  2011.
Karakteristik  kandungan  kimia  dan  daya cerna  tempe  sorgum  coklat  (Sorghum bicolor). J.Teknol.  dan  Industri  Pangan 22(2): 150-155.
Nissar  J,  Ahad  T,  Naik  HR.  2017.  A  review phytic acid : As antinutrient or nutraceutical. J.  Pharmacogn.  Phytochem 6(6): 1554-1560.
Nurfahriani D, Nurhaeni, dan Khairuddin. 2018. Analisis  Kandungan  Protein  Terlarut  dan Karotenoid  Nasi  Jagung  (Zeamaysvar.
Indentata)  yang  Difermentasi  dengan Kapang  Oncom  Merah  (Neurospora  sp.). J. Kovalen 4(2): 166-173.
Olanipekun BF, Otunola ET,  Oyelade OJ. 2015. Effect  of  fermentation  on  antinutritional
factors and in vitro protein digestibility of Bambara  nut  (Voandzeia  subterranean L.). Food Science and Quality
Management 39: 98-110.
Perdani  A  W  dan  Utama  Z.  2021.  Korelasi Kadar  Asam  Fitat  Dan  Protein  Terlarut Tepung  tempe  Kedelai  Lokal  Kuning (Glycine  Max)  dan  Hitam  (Glycine  Soja) Selama Fermentasi. Prosiding Pendidikan Teknik  Boga  Busana (PTBB).  Vol.  16 no.1.   Fakultas Teknik UNY.
Rokhmah LN, Choirul. A, Sri. H, Dwi. R. 2009. Kajian  Kadar  Asam  Fitat  dan  Kadar Protein  Selama  Pembuatan  Tempe  Kara Benguk (Mucuna Pruriens) dengan Variasi  Pengecilan  Ukuran  dan  Lama
Fermentasi .  Biofarmasi (7) 1: 1-9.
Salleh  AB,    Musani  RM.  Ampon  BK,  Yunus WMZ,  Razak  CNA.  1993.  Extra-  and intra-cellular  lipases  from  a  thermophilic Rhizopus  oryzae  and  factors  affecting their  production. Can.  J.  Microbial 39:
978-981.
Selle  PH,  Ravindran  V,  Caldwell  RA,  Bryden WL. 2000. Phytate and phytase: Consequences  for  protein  utilization. Nutr. Res. Rev . 13(2): 255-278.
Stodolak  B,  Starzynska-Janiszewska  A.  2008. The Influence of tempeh fermentation and conventional  cooking  on  anti-nutrient level  and  protein  bioavailability  (in  vitro test)  of  grass-pea  seeds. J.Sci.  Food  and Agric. 88(13): 2265-2270.
Sukma  LN,  Zackiyah,  Gumilar  GG.  2010.
Pengkayaan  asam  lemak  tak  jenuh  pada bekatul  dengan  cara  fermentasi  padat menggunakan  Aspergillus  terreus. Jurnal Sains dan Teknologi Kimia . 1(1): 66-72.
Sumiati  J,  2005.  Rasio  molar  asam  fitat  :  Zn untuk  menentukan  suplementasi  Zn  dan enzim fitase dalam ransum berkadar asam fitat tinggi.
Disertasi , Sekolah
Pascasarjana,  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor
Wahyuni  SHS.  2003.  Fermentasi  Dedak  Padi Oleh  Kapang  Aspergillus  Ficuum  dan Pengaruhnya Terhadap Kadar Fitat,
Kualitas  Protein  Kasar  Serta  Energi Metabolis  Pada  Ayam. Jurnal  Bionatura 5(2): 141-149.
Winarno  FG.  2002.  Kimia  pangan  dan  gizi.
Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.