BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 3 (2020):  449 - 453 E-ISSN: 2714-8564

## Respon Penambahan Asam Humat terhadap beberapa Kandungan
Senyawa Aktif Pegagan ( Centella asiatica L.) Urb

## Triani Hardiyati, Elly Proklamasiningsih, Iman Budisantoso
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman Jalan dr. Soeparno 63 Purwokerto 53122 email: elly.proklamasiningsih@unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel: Diterima  : 23/11/2020
Disetujui  : 22/12/2020

## Abstract
The  aim  of  this  research  is  to  know  the  respon  of  humic  acid  and  some  growth  media  on  the contain  of  active  biological  substance  in Centella asiatica (L.)  Urb.  Hopefully,  through  the application  of  humic  acid  in  the  combination  of  media,  the  growth  and  plant  metabolism  will improve  to  produce  active  biological  substance  as  primar  metabolism.  The  growth  media  used were  :  soil  &  sand  (1  :  1)  ;  soil    &  husk  (1  :  1  )  ;  and  soil  &  zeolite  (1  :  2).    The  humic  acid treatment  were  4  concentration, 0  g/kg  media,  4  g/kg  media,  8  g/kg  media  and  12  g/kg  media. The  research  method  was  Completely  Randomized  Design,  with  factorial  as  treatment  design. The  variable  observed  were  alkaloid  content,  flavonoid  content,  the  presence  of  terpenoid,  and biomass weight. The research result showed that the high weight of biomass and alkaloid contain got in the addition of 8 g humic acid in media soil and sand.  The high flavonoid contain got in addition of 4 g/kg media in media soil and zeolite. There was brawn ring in the extract analysis dissolved in chloroform, acetic acid, and strong sulfate acid.
Key words :  active sunbtance, humic acid, Pegagan, zeolit

## Abstrak
Penelitian  bertujuan  mempelajari  respon  pemberian  asam  humat  pada  beberapa  macam kombinasi medium tumbuh  terhadap kandungan senyawa aktif pada tanaman Pegagan ( Centella asiatica L.  Urb).  Melalui  pemberian  pupuk  asam  humat  pada  kombinasi  medium  diharapkan pertumbuhan  dan  metabolism  tanaman  meningkat  yang  kemudian  berdampak  pada meningkatnya  senyawa  aktif  hasil  metabolit  primer.  Medium  yang  digunakan  adalah  :  tanah  & pasir (1 : 1), tanah & sekam (1 : 1), dan tanah & zeolite (1 : 2). Asam humat yang diperlakukan ada  4  konsentrasi,  yaitu  :  0  gr/kg  medium,  4  gr/kg  medium,  8  gr/kg  medium  dan  12  gr/kg medium.  Metode penelitian yang digunakan adalah eksperimen  menggunakan Rancangan Acak Lengkap dengan pola perlakuan factorial. Sebagai Faktor Utama adalah kombinasi medium, dan sebagai Faktor Kedua adalah konsentrasi asam humat. Parameter yang diamati adalah kandungan alkaloid,  flavonoid,  dan  terpenoid.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  medium  tanam  tanah dengan  pasir  dengan  penambahan  asam  humat  8  gr/kg  medium  efektif  dalam  meningkatkan kandungan  alkaloid  dan  biomassa  tanaman  pegagan.  Sedangkan  kandungan  flavonoid  tertinggi diperoleh  pada  medium  tanah  dan  zeolite  dengan  penambahan  asam  humat  4gr/kg  medium. Teridentifikasi  adanya  senyawa  terpenoid  dengan  adanya  cincin  berwarna  coklat  pada  ekstrak yang dilarutkan dalam chloroform , asam asetat dan asam sulfat pekat.
Kata kunci : asam humat, Pegagan, senyawa aktif, zeolite

## PENDAHULUAN
Pegagan  ( Centella  asiatica (L.)  Urb). merupakan  tanaman  liar  yang  banyak  tumbuh  di daerah  tropis,  tumbuh  didaerah  dengan  kelembaban tinggi  namun  cukup  sinar  matahari.    Tanaman pegagan  meskipun  berkhasiat  obat,  belum  banyak dibudidayakan petani, karena petani hanya memanfaatkan  tanaman  pegagan  yang  tumbuh  liar di  alam.    Meskipun  demikian,  karena  besar manfaatnya  sebagai  tanaman  obat,  penting  kiranya untuk diteliti, mengingat sekarang masyarakat mulai
banyak  yang  kembali  memanfaatkan  sumberdaya hayati sebagai sarana pengobatan.
Pegagan  merupakan  tanaman  obat  yang mengandung  alkaloid,  saponin,  steroid,  terpenoid, flavonoid , karbohidrat dan gula pereduksi (Singh et al. ,  2012).  Senyawa  aktif  terpenting  adalah golongan  triterpenoid  saponin,  yang  meliputi  acitic acid,  madecassoside,  asiaticoside  dan  centelloside. Terpenoid  dapat  berperan  sebagai  antibakteri  dan antioksidan  (Rattanakom,  2014).  Senyawa  aktif yang terkandung dalam pegagan berperanan sebagai
antioksidan.  Antioksidan  dikelompokkan  menjadi dua,  yaitu  antioksidan  yang  enzimatis  dan antioksidan  yang  non-enzimatis.  Antioksidan  yang non-enzimatis  masih  dibagi  menjadi  dua,  yaitu antioksidan yang larut dalam lemak dan antioksidan yang  larut  dalam  air.  Flavonoid  merupakan antioksidan  yang  larut  dalam  lemak,  merupakan sekelompok  besar  polifenol  dalam  tanaman,  dan pada  umumnya  terdapat  dalam  keadaan  terikat  atau terkonyugasi  dengan  senyawa  gula.    Flavonoid disamping berperan atau digunakan sebagai antioksidan juga dapat digunakan sebagai suplementasi  makanan  dalam  bentuk  fitoestrogen. Senyawa  flavonoid  banyak  ditemukan  dalam tanaman    dan  buah-buahan,  dan  dilaporkan  sebagai antioksidan berpotensi lebih kuat dibanding vitamin C dan vitamin E.  Flavonoid juga diketahui berperan menghambat  aktivitas  enzim  siklooksigenase  dan lipoksigenase  yang  merupakan  mediator  inflamasi (Winarsi, 2007).
Mengingat banyaknya manfaat dari senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  tanaman pegagan,  maka  terbuka  kemungkinan  upaya  untuk meningkatkan  senyawa  tersebut  melalui  upaya meningkatkan pertumbuhan tanaman.  Alkaloid dan antioksidan  dalam  tanaman  merupakan  hasil samping  dari  proses  metabolisme.  Diharapkan dengan meningkatkan pertumbuhan tanaman melalui  pemberian  nutrisi  yang  lengkap  dapat meningkatkan  metabolism  pada  tanaman  dan akhirnya  dapat  meningkatkan  senyawa-senyawa aktif  sebagai  produk  metabolism.  Sebagai  alternatif untuk  meningkatkan  pertumbuhan  dan  metabolism tanaman  dapat  digunakan  asam  humat.  asam  humat termasuk  dalam  biostimulan  semakin  populer sebagai  sediaan  yang  berdampak  positif  pada pertumbuhan,  perkembangan,  dan  hasil  tanaman (Balmori, 2019).
Asam  humat  merupakan  senyawa  organik yang  telah  mengalami  proses  humifikasi  dan  larut
dalam  alkali.  Asam  humat  dapat  berpengaruh langsung dan tidak langsung. Secara tidak langsung asam  humat  dapat  memperbaiki  status  kesuburan tanah  baik  dalam  sifat  fisik,  kimia  maupun  biologi tanah. Dengan meningkatnya kesuburan tanah, maka serapan  hara  akan  meningkat,  sehingga  metabolism dan  pertumbuhan  tanaman  juga  makin  meningkat. Asam  humat  memiliki  kapasitas  tukar  kation  yang tinggi  (Pettit,  2018)  sehingga  membantu  gerakan nutrient  dari  tanah  ke  tanaman  (Suwahyono,  2011). Mengenai aplikasi asam humat dalam meningkatkan pertumbuhan  tanaman  telah  diteliti  oleh  Hermanto et al. (2013); Victolika et al. (2014). Pengaruh asam humat  secara  langsung  yaitu  mampu  memperbaiki proses metabolism di dalam tanaman, meningkatkan laju  fotosintesis  tanaman  karena  meningkatnya kandungan khlorofil pada daun (Ferrara & Brunetti, 2010).  Beberapa  peneliti  melaporkan  bahwa pemberian  asam  humat  melalui  daun  mampu meningkatkan  pertumbuhan,  serapan  hara,  serta produksi  pada  berbagai  tanaman.    Pemberian  asam humat melalui daun juga dapat meningkatkan tinggi tanaman,  jumlah  cabang  dan  daun  per  tanaman, jumlah polong per tanaman serta berat 100 biji pada kacang  faba.    Sarno  &  Eliza  (2012)  melaporkan bahwa  pemberian  asam  humat  dapat  meningkatkan serapan N secara kuadratik.
Pentingnya  metabolit  sekunder  tanaman  di bidang kedokteran, pertanian dan industry menyebabkan pentingnya penelitian tentang biosintesis  dan  aktivitas  biologisnya.  Kelompok yang  menonjol  dari  senyawa  tersebut  adalah terpenoid  dan  turunannya.    Rattanakom  &  Yasurin (2014),  menyatakan  bahwa  data  profil  aktivitas antibakteri  pegagan  terhadap  strain mikroba berbeda,  apabila  proses  ekstraksi  menggunakan pelarut yang berbeda.
Metabolit  sekunder  adalah  produk  alami yang juga  memiliki peran ekologis dalam mengatur interaksi  antara  tanaman  dan  lingkungannya,
disamping  perannya  sebagai  senyawa  biologis  aktif di bidang kedokteran. Diperkirakan bahwa lebih dari 40%  obat  berasal  dari  produk  biologis  aktif  ini (Gershenzon,  1999).  Kelompok  produk  biologis aktif  yang  menonjol adalah terpenoid dan terpenoid turunan.  Terpen  secara  biosintesis  dibangun  dari unit isoprene (2-metilbutadien). Polimerisasi isoprene  C 5 H 8 selanjutnya  membentuk  ikatan rangkap.  Rumus  molekul  dasar  dari  terpene  dengan demikian  adalah  kelipatan  dari  C 5 H 8 .  Kebanyakan terpena memiliki struktur siklik dan diklasifikasikan berdasarkan  jumlah  unit  isoprene  C 5 yang dikandungnya. Mengingat banyak cara unit dasar C 5 dasar  dapat  digabungkan,  maka  sulit  mengamati jumlah dan keragaman struktur.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  secara  eksperimen untuk  menguji  pengaruh  asam  humat  terhadap kandungan  antioksidan  alkaloid,  flavonoid,  dan terpenoid.  Materi penelitian yang digunakan adalah tanaman  pegagan,  pasir,  tanah,  zeolite,  dan  asam humat  AH-90.    Penelitian  dilakukan  menggunakan polybag    ukuran  5  kg  tanah  untuk  penanaman pegagan yang ditempatkan di Rumah Kaca Fakultas Biologi Unsoed.
Rancangan  Percobaan yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  pola perlakuan  factorial.  Sebagai  Faktor  Utama  adal  ah media  tanam    yang  terdiri  dari    3  macam  media, yaitu    1.    tanah  :  pasir  (1  :  1)    ;    2.    tanah  :  sekam (1:1)  ;dan  3.    tanah  :  zeolite  (  1  :  2).  Faktor  kedua adalah 4 dosis asam humat, yaitu : 0 g/kg media ; 4 g/kg  media;  8  g/kg  media;  dan  12  g/kg  media. Sehingga  diperoleh  12  kombinasi  perlakuan,  dan tiap  perlakuan  diulang  sebanyak  3  (tiga)  kali. Pengamatan  dilakukan  pada  saat  tanaman  umur  12 minggu setelah tanam. Penelitian bertujuan mempelajari  respon  pegagan  pada  media  tanam dengan pemberian asam  humat terhadap kandungan
antioksidan (polifenol, flavonoid dan alkaloid), serta menentukan  media  tanam  yang  potensial  untuk meningkatkan kandungan antioksidan.

## Penetapan  kandungan  alkaloid,  flavonoid  dan terpenoid
Pembuatan    ekstrak  sampel  dilakukan dengan  cara  maserasi.  Sampel  tanaman  dihaluskan terlebih  dahulu  sampai  menjadi  serbuk  kemudian diekstraksi  dengan  etanol  95%  emnggunakan metode  maserasi.  Serbuk  sampel  sebanyak  10  g direndam  dengan  250  ml  etanol,  dengan  lama perendaman 24 jam. Proses maserasi diulang 3 kali, kemudian  filtrate  ditampung  untuk  selanjutnya diuapkan  menggunakan rotary vacuum evaporator , sehingga  menghasilkan  ekstrak  padat.  Ekstrak tersebut  kemudian  diuapkan  untuk  menghilangkan pelarut  yang  terkandung  didalamnya  sehingga dihasilkan  Kristal  alkaloid.  Analisis  menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang maksimum sebesar 275 nm. Penentuan
kandungan flavonoid total (Chang,2002).
Ekstrak sebanyak 10 mg dilarutkan dalam 10 ml etanol, diambil 1 ml kemudian ditambahkan 3 ml methanol,  0,2  ml  AlCl 3 10%,  0,2  ml  Kalium  asetat,
5,6  ml  akuadestilata,  simpan  30  menit  pada  tempat gelap  dengan  suhu  kamar,  absorbansinya  diukur pada  spektrofotometri    UV-Vis  dengan  panjang gelombang  415  nm.  Kandungan  flavonoid  total dinyatakan dalam g rutin equivalen (RE).
Penentuan  Terpenoid  kualitatif,  dilakukan menggunakan  2  ml  ekstrak  kemudian  ditambah asam  asetat  anhidrat  0,5  ml  dan  0,5  ml  asam  sulfat pekat. Selanjutnya  diamati, apabila terdapat bentuk cincin  menunjukkan  adanya  terpenoid    dengan warna : Violet (+), Coklat (++), Coklat tua (+++).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan  adalah  hasil  dari  serangkaian proses  yang  dipengaruhi    oleh  hasil  metabolism primer.  Hasil  dari  metabolism  primer  adalah
metabolit  primer  yang  merupakan  senyawa  awal dalam biosintesis metabolit sekunder. Hasil pengamatan terhadap biomassa menunjukkan bahwa biomassa  yang  tinggi  diperoleh  pada  perlakuan media  pasir  dengan  penambahan  8  g/kg  asam humat,  yang  juga  merupakan  perlakuan  dengan kandungan alkaloid yang paling tinggi. Hal ini dapat dipahami  karena  pada  perlakuan  media  tersebut dengan  biomassa  yang  tinggi  diperoleh  dari  hasil metabolism  yang  tinggi  pula.  Biosintesis  alkaloid berasal  dari  asam  amino  alifatik  yang  merupakan turunan  dari  monosakarida  hasil  dari  proses fotosintetik.  Metabolisme yang tinggi diperoleh dari perlakuan  asam  humat  8  g/kg  media,  dimana  asam
humat  yang  merupakan  SRF  ( Slow Release Fertilizer )  merupakan  salah  satu  modifikasi  pupuk yang ditujukan untuk meningkatkan efisiensi unsur- unsur  yang  terdapat  dalam  pupuk  dengan  mengatur pelepasannya secara lambat. Hasil ini sesuai dengan hasil  penelitian  Sarno  &  Eliza  (2012)  bahwa  asam humat  dapat  meningkatkan  serapan  N  secara kuadratik.  Disamping  itu,  penambahan  pasir    akan memberikan  aerasi  yang  baik  pada  media  tanam. Pasir  mempunyai  porositas  yang  tinggi,  sehingga apabila dikombinasikan dengan tanah menyebabkan tekstur yang remah dengan aerasi yang sesuai untuk pertukaran unsur hara.
Tabel 1.   Pengaruh  media  tanam  dan  konsentrasi  asam  humat  terhadap  kandungan  alkaloid,  flavonoid  dan biomassa
Jenis Media tanaman dan konsentrasi asam humat Kandungan alkaloid (ppm) Flavonoid (ppm) Biomassa (g) Tanah pasir tanpa humat 6,06 e 6,6720 f 2,3241 f Tanah pasir, humat 4g/kg 6,99 bc 9,4453 e 2,3200 f Tanah pasir, humat 8g/kg 8,40 a 10,9387 d 4,5483 a Tanah pasir, humat 12g/kg 7,06 bc 6, 9120 f 2,5967 ef Tanah sekam tanpa humat 7,11 bc 4,1920 h 2,4226 f Tanah sekam, humat 4g/kg 7,30 b 5,4453 g 3,0337 d Tanah sekam, humat 8g/kg 6,88 bc 5,7120 g 3,4356 c Tanah sekam, humat 12g/kg 6,57 cd 5,3920 g 2,8252 de Tanah zeolit tanpa humat 5,75 ef 17, 6587 a 4,2474 b Tanah zeolit, humat 4g/kg 6,25 de 18, 3253 a 1,9707 g Tanah zeolit, humat 8g/kg 6,58 cd 14,2187 b 2,0415 g Tanah zeolit, humat 12g/kg 5,45 f 12,8853 c 1,7470 g
Berbeda  dengan  kandungan  alkaloid, kandungan  flavonoid    tertinggi  diperoleh  pada media  tanah  &  zeolite  dengan  penambahan  4  g/kg media. Flavonoid adalah sekelompok besar senyawa bpolifenol  dalam  tanaman,  yang  pada  umumnya kandungannya dalam tanaman sangat rendah, sekitar 0,25%  (Winarsi,  2007).  Komponen  tersebut  pada umumnya  terdapat  dalam  keadaan  terikat  atau terkonyugasi dengan senyawa gula.
Zeolit  merupakan  mineral  silikat  yang memiliki  kapasitas  tukar  kation  (KTK)  yang  tinggi, bervariasi    antara  80  –  180  meq/100  g,  berongga,
yang  ssuai  dengan  ukuran  ammonium  sehingga mempunyai  daya  jerap  yang  tinggi  terhadap  ion ammonium,  dimana  ion  ammonium  merupakan sumber nitrogen bagi tanaman.
Identifikasi senyawa terpenoid yang dilakukan  dengan  melarutkan  ekstrak  dalam chloroform  ,  asam  asetat  anhidrat  dan  asam  sulfat pekat  menghasilkan  bentuk  cincin  dengan  warna coklat  tua,  yang  menunjukkan  adanya  senyawa terpenoid dengan signifikan, karena berwarna coklat tua (+++).
Gambar 1. Hasil uji adanya senyawa terpenoid terbentuk cincin warna coklat tua (+++)
Terpenoid  merupakan  senyawa  kimia  yang terdiri dari beberapa unit isoprene, yang selanjutnya membentuk  ikatan  rangkap,  dan  rumus  molekul berdasarkan  kelipatan  unit  isoprennya.  Mengingat banyak  unit  isoprene  (C 5 H 8 )  dapat  digabungkan, maka sulit untuk mengamati jumlah dan keragaman struktur,  sdengan  penambahan  ehingga  determinasi adanya  terpenoid  hanya  secara  kualitatif,  yaitu warna  dari  cincin  yang  terbentuk.    Kelompok senyawa  triterpen  dapat  terakumulasi  sebagai glikosida  (saponin).  Beberapa  dari  saponin  adalah sebagai  titik  awal  sintesis  obat  steroid  yang bermanfaat  bagi  industry  farmasi  yang  berasal  dari triterpenoid tetrasiklik dan unit isoprene.

## SIMPULAN
Berdasarkan    pembahasan  di  atas  dapat disimpulkan  bahwa    media  tanam  tanah  dan  pasir dengan  penambahan  4  g/kg  media  memberikan pertumbuhan  tanaman  pegagan  yang  paling  baik. Media  tanam  tanah  dan  pasir  dengan  penambahan asam humat 8 g/kg media menghasilkan  kandungan alkaloid  yang  paling  tinggi.  Kandungan  Flavonoid tertinggi diperoleh pada media tanah dengan zeolite pada penambahan 4 g/kg asam humat.
Teridentifikasi  adanya  senyawa  terpenoid  secara signifikan dengan adanya cincin berwarna coklat tua (+++)  pada  ekstrak  yang  dilarutkan  dalam chloroform  ,  asam  asetat  anhidrat  dan  asam  sulfat pekat.

## DAFTAR REFRENSI
Balmori.  2019.  Foliar  application  of  humic  liquid extract  from  vermicompost  improves  garlic ( Allium sativum L.)  production  and  fruit quality. Int.  J.  Recycl.  Org.  Waste  Agric. ,
8(1) : 103–112.
Gershenzon,  J;  Kreis,  W.  1999.    Biosynthesisof monoterpenes,  sesquiterpenes,  Diterpenes, sterols,  caediac  glicosides  and  steroid saponins. N Bio-Chemistry of Plant Secondary    Metabolites;  Sheffield  Academic Press; Sheffield, UK
Hermanto,  N.K.T.;  Dharmayani,  R.  Kurnianingsih,
R.  Kamali.  Pengaruh  Asam  Humat  sebagai Pelengkap  Pupuk  terhadap  Ketersediaan  dan Pengambilan  Nutrien  pada  tanaman  jagung Di  lahan  kering    Kec.Bayan  NTB.  Ilmu Petranian 16(2): 28-41
Pettit, R.E., 2018. Organic matter , Humus, Humate, Humic  acid,  Fulvic  acid  and  Humin  :    Their Importance in Soil Fertility and Plant Healyh. http://umates.com/pdf/ORGANICMATTER. Pettit,pdf
Rattanakom,  S.;  P.  Yeasurin,  2014.  Antibacterial, Antioxidant and Chemical Profile of Centella asiatica , Biomedical & Pharmacology Journal 7(2) : 445-451
Sarno  dan  Eliza  Fitria,  2012.  Pengaruh  Aplikasi Asam Huat dan Pupuk N terhadap Pertumbuhan  dan  Serapan  N  pada  tanaman Bayam.
Singh, D; P. Singh; A. Gupta,S.Solanki; E. Sharma;
R. Nema, 2012. Qualitative estimation of the Presenceof  Bioactive  Compound  in Centella asiatica :  An  Important  MedicinalPlant, International Joutnal of Life Science 2 (1): 5- 7
Suwahyono, U. 2011. Prospek Teknologi Remediasi Lahan  Kritis  dengan  Asam  Humat.  J.Tek.
Lin. (12) : 55-65
Victolika,  H.;  Sarno;  Y.C.  Ginting.  2014.  Pengaruh Pemberian  asam  Humat  dan  K  terhadap Pertumbuhan  dan  Produksi  Tanaman  Tomat. J. Agrotek Tropika 2(2), 297-301.
Winarsi,  H.  2007.  Antioksidan  alami  &  radikal Bebas.  Potensi  dan  Aplikasinya  dalam Kesehatan. Penerbit Kanisius