Conjunctivitis  is  inflammation  in  the  conjunctiva,  with  clinical  signs  of  exudation,  cellular  infiltration,  and vascular  dilatation.  In  adults,  Staphylococcus  species  are  the  most  common  pathogenic  bacteria  resulting  in bacterial conjunctivitis. Previous studies in vitro, explaining that mulberry leaf extract can inhibit the growth of S.  aureus  bacteria.  The  purpose  of  this  study  was  to  investigate  the  effect  of  mulberry  leaf  ethanol  extract (Morus alba L.) on Wistar mice conjunctivitis model by S. aureus. This type of research is true experimental with pretest-posttest control group design. The 24-Wistar mice were adapted for 7 days. On day 8, a conjunctivitis induction was performed with 1.5 x 108 CFU / ml of S. aureus at 1 drop every 10 minutes for 1 hour (left 3 days) until conjunctivitis. On day 12 until day 19 (7 days), given mulberry leaf extract 45%, 55%, 65% and 75%. The results of TPC S. aureus logarithm on MSA medium of the 11th (pretest) day conjunctival swab and the 17th day (post-test) of rat adaptation were K (-) (5.70 and 4.07); K (+) (5.78 and 3.31); P1 (5.65 and 3.78); P2 (5.63 and 3.82);  P3  (5.84  and  3.74);  and  P4  (5.69  and  3.63),  with  the  post-test  group  there  was  an  improvement  in conjunctivitis symptoms rather than the pretest group. The result of One Way Way Anova data analysis showed significant result at pretest p = 0,002 and post-test p = 0,046 (p < 0,05) and paired t-test got significant result p = 0,000 (p < 0,05). From this study, it can be concluded that mulberry leaf extract (Morus alba L.) has the effect of decreasing the number of colonies of S. aureus bacteria and improving symptoms of conjunctivitis.
Keywords: mulberry leaf extract, conjunctivitis, S. aureus
Konjungtivitis  adalah  inflamasi  di  konjungtiva,  dengan  tanda  klinis  eksudasi,  infiltrasi  seluler,  dan  dilatasi vaskular.  Pada  orang  dewasa ,  Staphylococcus  spesies adalah  bakteri  patogen  tersering  mengakibatkan konjungtivitis bakteri. Penelitian  sebelumnya secara in vitro, menjelaskan bahwa  ekstrak daun murbei  dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus . Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efek ekstrak etanol daun murbei ( Morus alba L.) pada tikus wistar model konjungtivitis oleh S. aureus . Jenis penelitian ini adalah true eksperimental dengan rancangan pretest-posttest control group design . Tikus wistar sebanyak 24 ekor  dilakukan  adaptasi selama  7 hari,  Pada  hari  ke-8,  dilakukan  induksi  konjungtivitis  dengan  pemberian S. aureus 1,5  x  10 8 CFU/ml  sebanyak  1  tetes  tiap  10  menit  selama  1  jam  (dibiarkan  3  hari)  sampai  terjadi konjungtivitis. Pada hari ke-12 sampai hari ke-19 (7 hari), diberikan ekstrak daun murbei 45%, 55%, 65% dan 75%. Hasil logaritma TPC S. aureus pada media MSA dari swab konjungtiva hari ke-11 (pretest) dan hari ke-17 (post-test) dari adaptasi tikus adalah K(-) (5,70 dan 4,07); K(+) (5,78 dan 3,31); P1 (5,65 dan 3,78); P2 (5,63 dan 3,82);  P3  (5,84  dan  3,74);  dan  P4  (5,69  dan  3,63),  dengan  kelompok post-test didapatkan  perbaikan  gejala konjungtivitis  daripada  kelompok pretest .  Hasil  analisis  data  uji Anova  One  Way didapatkan  hasil  signifikan pada pretest p=0,002 dan post-test p=0,046 (p < 0,05) dan uji Paired T-Test didapatkan hasil signifikan p=0,000 (p < 0,05). Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun murbei ( Morus alba L.) memiliki efek menurunkan jumlah koloni bakteri S. aureus dan memperbaiki gejala konjungtivitis.
Kata kunci : ekstrak daun murbei, konjungtivitis, S. aureus
Efek Ekstrak Etanol Daun Murbei ( Morus alba L.) pada Tikus Wistar Model Konjungtivitis oleh Staphylococcus aureus
Effect of Morus alba L. Ethanol Leaves Extract on Conjunctivitis Wistar Rats Model by Staphylococcus aureus
Gama Wisnu Sanjaya 1 , Cicih Komariah 2 , Dini Agustina 3 1 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Jember 2 Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember 3 Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember Jalan Kalimantan No.37 Kampus Tegalboto, Jember 68121 Alamat email korespondensi: cicih.fk@unej.ac.id

## Abstrak
Abstract

## Pendahuluan
Konjungtivitis  adalah  inflamasi  di  konjungtiva, dengan  tanda  klinis  eksudasi,  infiltrasi  seluler,  dan dilatasi  vaskular  (Vaughan  dan  Asbury,  2015). Penyebab konjungtivitis adalah bakteri, alergi, virus, toksin,  maupun  penyakit  sistemik  (Ilyas,  2014).  Di Indonesia,  konjungtivitis  menduduki  peringkat  10 besar  penyakit  rawat  jalan  terbanyak  pada  tahun 2009.  Dari  135.749  pasien  yang  berkunjung  ke  poli mata,  99.195  (73%)  adalah  kasus  konjungtivitis  dan gangguan  lain  pada  konjungtiva,  dengan  46.480 kasus  adalah  laki-laki  dan  52.815  kasus  adalah perempuan (Kemenkes RI, 2010).
S. aureus dapat menyebabkan konjungtivitis bakteri akut  dan  konjungtivitis  kronik  pada  pasien  yang berasosiasi  dengan  blefaritis  (Feldman,  2014).  Pada orang dewasa, Staphylococcus spesies adalah bakteri patogen  tersering  mengakibatkan  konjungtivitis bakteri  (Epling  2010).  NRLP3 inflammasome diaktivasi  di  sel  goblet  (sistem pertahanan  tubuh konjungtiva),  ketika  berhadapan  dengan  toksin S. aureus ,  dan  akan  merespons  dengan  mengaktivasi caspase  1  pathway ,  mengakibatkan  produksi  IL-1β, sebuah  induksi  poten  inflamasi.  NLRP3  adalah anggota  dari  kompleks  multi-protein  yang diterminasikan  sebagai  NLRP3 inflammasome (McGilligan, 2013).
Murbei ( Morus alba L.) memiliki kandungan senyawa fitokimia  aktif  yang  berperan  sebagai  antibakteri yaitu  alkaloid,  flavonoid,  dan  polifenol  (Sunanto, 2009).  Selain  sebagai  antikanker  secara in  vitro , kandungan  fitokimia  kuersetin  dan  antosianin  ini juga  termasuk  kandungan  senyawa  aktif  yang terdapat dalam ekstrak daun murbei ( Morus alba L.) yang  berperan  sebagai  antibakteri  dan  termasuk dalam  kelompok  glikosida  flavonoid.  Glikosida flavonoid  adalah  senyawa  fenol  dengan  mekanisme kerja yaitu koagulator protein (Kim et al., 2000, Chen et al., 2006, Dwidjoseputro, 2005). Tujuan penelitian ini  adalah  untuk  mengetahui  efek  ekstrak  etanol daun murbei ( Morus alba L.) pada tikus wistar model konjungtivitis oleh S. aureus.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  jenis  penelitian true experimental secara in  vivo dengan  rancangan penelitian pretes t dan post-test control group design . Penelitian  ini  dilakukan  di  empat  tempat,  yaitu  di Laboratorium Biokimia FK UNEJ, Laboratorium Biologi Fakultas Farmasi UNEJ, Laboratorium Kandang Hewan
Coba  FKH  UNAIR  dan  Laboratorium  Mikrobiologi FMIPA  UNESA.  Jumlah  sampel  penelitian  yang digunakan  sebanyak  24  tikus  putih  jantan  strain Wistar  galur  murni  yang  diambil  dengan  teknik random  sederhana  ( simple random  sampling )  yang kemudian  dibagi menjadi  6  kelompok  yaitu  satu kelompok  kontrol  negatif  (K(-))  (tetes  mata  air  mata artifisial cendo lyteers ), satu kelompok kontrol positif (K(+)) (tetes mata antibiotik  levofloksasin 0,5%), dan empat  kelompok  tetes  mata  ekstrak  etanol  daun murbei (P1, P2, P3 dan P4) (45%, 55%, 65% dan 75%). dengan pengulangan setiap kelompok 4 tikus.
Tikus  wistar  sebanyak  24  ekor  dilakukan  adaptasi selama  7  hari,  Pada  hari  ke-8,  dilakukan  induksi konjungtivitis  dengan  pemberian S.  aureus 1,5  x  10 8 CFU/ml sebanyak 1 tetes tiap 10 menit selama 1 jam (dibiarkan  3  hari) sampai terjadi  konjungtivitis. Pada hari  ke-12  sampai  hari  ke-19  (7  hari),  diberikan perlakuan kontrol negatif, kontrol positif dan ekstrak daun  murbei  45%,  55%,  65%  dan  75%.  Dosis pemakaian ekstrak daun murbei adalah 2 tetes (0,15 ml)  pada  kedua  mata  dan  dilakukan  setiap  24  jam (Manek,  2017)  selama  1  minggu  dengan  perbaikan gejala  konjungtivitis  (sampai  sembuh  dengan  gejala konjungtivitis bakteri sudah kembali normal). Ekstrak daun murbei dimasukkan dalam botol tetes mata air mata artifisial Cendo Lyteers 15 ml dengan 1 tetesnya sama dengan 0,075 ml.
Pengitungan  jumlah  koloni  bakteri S.  aureus pada kelompok pretest dan post-test ,  dilakukan  pada  hari ketiga  setelah  tikus  diinfeksi S.  aureus (hari  ke-11), dan  hari  kelima  setelah  pemberian  ekstrak  daun murbei  (hari  ke-17).  Data  kuantitatif  yang  diperoleh berupa  jumlah  koloni  bakteri S.  aureus ( Total  Plate Count /TPC)  pada  media  MSA  dari swab konjungtiva tikus  wistar  pada  hari  ke-11  dan  hari  ke-17  dari adaptasi  tikus.  Sedangkan  data  kualitatif  yaitu pengamatan  perbaikan  gejala  konjungtivitis  bakteri dilakukan  setiap  24  jam  sebelum  dan  setelah pemberian  ekstrak  daun  murbei  pada  tikus  wistar. Pengamatan  tersebut  meliputi  hilangnya  mata merah, radang, sekret purulen berwarna putih, hijau atau  kuning,  lendir  pada  konjungtiva  dan  hilangnya edema  kelopak  mata  (Yeung,  2017),  kelopak  mata hiperemi,  konjungtiva  hiperemi  dari  pinggir  bola menuju  ke  sentral  bola  mata,  adanya  sekret  dan aparatus lakrimal tampak keruh, terdapat pembengkakan  berwarna  merah  di  bawah  kelopak mata  (Ilyas,  2014).  Pengamatan  dilakukan  secara deskriptif
(menggunakan
skala) dan didokumentasikan  dengan  menggunakan  kamera digital.
Data kuantitatif (jumlah bakteri) pretest dan post-test dianalisis  dengan  uji One Way  Anova (p  <  0,05), dilanjutkan dengan uji Post-Hoc LSD . Uji paired t-test dilakukan  karena  membandingkan  beda  nyata  dari 2 kelompok pretest dan kelompok post-test . Uji statistik terhadap  data  yang  diperoleh  dilakukan  dengan menggunakan program SPSS 16.0 for Windows . Untuk data  kualitatif  yaitu  perbaikan  gejala  konjungtivitis dianalisis secara deskriptif kuantitatif.

## Hasil Penelitian
Selama  penelitian,  tidak  ada  pengurangan  jumlah tikus.  Sampel  penelitian  tetap  berjumlah  24  ekor. Tikus  sehat,  tidak  cacat  dan  tidak  terjangkit penyakit.  Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilaksanakan,  diperoleh  data jumlah  koloni  bakteri S.  aureus setiap  48  jam  sebelum  dan  setelah pemberian  ekstrak  daun  murbei  dari swab konjungtiva tikus strain Wistar galur murni, dengan metode Total  Plate  Count (TPC)  secara pour  plate, menggunakan colony  counter pada  agar  cawan yang  berjumlah  30  sampai  300  koloni S.  aureus . Data  TPC S.  aureus dari swab konjungtiva  tikus dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 Hasil logaritma TPC S. aureus Kel TPC Logaritma TPC Logaritma om Pretest TPC Pretest  Posttest TPC Posttest pok (x10 4 (Log 10 (x10 3 (Log 10 CFU/Mat  CFU/Mata)  CFU/Mat CFU/Mata) a) a) K (-) 51,25 5,70 12,14 4,07 K (+) 60,31 5,78 2,06 3,31 P1 44,94 5,65 6,19 3,78 P2 43,75 5,63 8,74 3,82 P3 69,44 5,84 8,10 3,74 P4 49,19 5,69 6,53 3,63 CFU: Colony Forming Unit
Media yang digunakan Medium selective differensial – MSA ( Mannitol Salt Agar )
Pada  Tabel  1,  data  masih  berbentuk  data  diskret (eksponensial),  sehingga  perlu  ditransformasi  ke dalam  bentuk  data  kontinu  agar  dapat  dihitung dengan  menggunakan  statistik  parametrik.  Salah satu  cara  untuk  mengubah  data  diskret  menjadi data kontinu adalah dengan logaritma.
Tabel 1 menunjukkan bahwa hasil logaritma TPC S. aureus dari swab konjungtiva tikus pada H+3 pasca
induksi  konjungtivitis  dengan S.  aureus (hari  ke- 11)( pretest )  pada  K(-),  K(+),  P1,  P2,  P3  dan  P4 berturut-turut  adalah  sebesar  5,70,  5,78,  5,65, 5,63, 5,84, dan 5,69. Sedangkan TPC S. aureus dari swab konjungtiva  tikus  pada  H+5  setelah pemberian  ekstrak  daun  murbei  (hari  ke-17) ( posttest )  pada  K(-),  K(+),  P1,  P2,  P3  dan  P4 berturut-turut  adalah  sebesar  4,07,  3,31,  3,78, 3,82, 3,74, dan 3,63. Pengamatan perbaikan gejala konjungtivitis  dan  waktu  kesembuhan  (hari) sebelum  dan  setelah  pemberian  ekstrak  daun murbei dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel  2  Pengamatan  perbaikan  gejala  konjungtivitis  dan waktu kesembuhan (hari)
Kelompok Sebelum Perlakuan Setelah Perlakuan Hari Hari Hari Ekstrak ke-9 ke-10 ke- 11 *’Kontrol +++ +++ ++++ Perbaikan gejala negatif konjungtivitis ++++ sembuhnya hari ke- 8 *’Kontrol +++ +++ ++++ Perbaikan gejala positif konjungtivitis + sembuhnya hari ke- 4 *’Ekstrak air +++ +++ ++++ Perbaikan gejala daun murbei konjungtivitis 45%, 2 tetes + sembuhnya hari ke- 7 *’Ekstrak air +++ +++ ++++ Perbaikan gejala daun murbei konjungtivitis 55%, 2 tetes + sembuhnya hari ke- 6 *’Ekstrak air +++ +++ ++++ Perbaikan gejala daun murbei konjungtivitis 65%, 2 tetes + sembuhnya hari ke- 6 *’Ekstrak air +++ +++ ++++ Perbaikan gejala daun murbei konjungtivitis 75%, 2 tetes + sembuhnya hari ke-
5
Berdasarkan  Tabel  2,  setelah  tikus  mengalami konjungtivitis  karena S.  aureus ,  tikus  mengalami perbaikan  gejala  konjungtivitis  dengan  pemberian
ekstrak  air  daun  murbei.  Pada  tikus  kontrol  negatif sembuh pada hari ke-8, tikus kontrol positif sembuh pada  hari  ke-4,  tikus  dengan  pemberian  ekstrak  air daun  murbei  45%  sembuh  pada  hari  ke-7,  tikus dengan  pemberian  ekstrak  air  daun  murbei  55% sembuh  pada  hari  ke-6,  tikus  dengan  pemberian ekstrak air daun murbei 65% sembuh pada hari ke-6, dan tikus dengan pemberian ekstrak air daun murbei 75% sembuh pada hari ke-5. Untuk perbaikan gejala konjungtivitis  dan  waktu  kesembuhan  (hari)  tikus setelah pemberian ekstrak daun murbei (hari ke-12, 13,  14,  15,  16,  17,  18,  19  dan  20).  Pengamatan perbaikan  gejala  konjungtivitis  terdiri  dari  kelopak mata,  konjungtiva,  sekret  dan  aparatus  lakrimal dapat dilihat pada Gambar 1 .
Gambar  1  Pengamatan  perbaikan  gejala  konjungtivitis tikus  kelompok  kontrol  negatif  (cendo  lyteers)  hari  ke-12 (a), hari ke-14 (b), hari ke-15 (c), dan hari ke-17 (d)
Berdasarkan  Gambar  1,  setelah  tikus  dilakukan adaptasi  selama  7  hari,  pada  hari  ke-8  tikus dilakukan  induksi  konjungtivitis  dengan  diinfeksi S. aureus dan terjadi konjungtivitis. Pada kelompok K(-) hari  ke-12  (gambar  1a),  menunjukkan  gejala konjungtivitis  yaitu  hiperemi  (merah)  dari  pinggir bola  menuju  ke  sentral  bola  mata,  apparatus lakrimal  tampak  keruh  terdapat  pembengkakan berwarna  merah  di  bawah  kelopak  mata,  mata merah, radang, sekret purulen berwarna putih, hijau atau  kuning  lendir  pada  konjungtiva,  edema  dan hiperemi  (merah)  pada  kelopak  mata.  Pada kelompok  K(-)  hari  ke-14  (Gambar  1b),  inflamasi pada  konjungtiva  semakin  besar  dan  lebar.  Pada kelompok K(-) hari ke-15 (gambar 1c), terlihat sekret purulen  berwarna  putih  di  atas  aparatus  lakrimal. Pada  kelompok  K(-)  hari  ke-17  (Gambar  1d),  sekret
bertambah  banyak  dan  inflamasi  pada  konjungtiva semakin besar dan lebar. Pada media Mannitol Salt Agar (MSA), S. aureus akan berubah menjadi kuning, dan Staphylococcus  epidermidis berwarna  merah yang dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  2 Staphylococcus  aureus (a)  dan Staphylococcus epidermidis (b) dalam MSA
Berdasarkan  Gambar  3,  pada  media  MSA mengandung kadar NaCL yang tinggi, sehingga akan menghambat pertumbuhan bakteri, namun
Staphylococcus tidak di hambat pertumbuhannya. S. aureus akan  membentuk  zona  kuning,  sedangkan Staphylococcus  epidermis akan  membentuk  zona merah.  Warna  kuning  disebabkan  oleh  fermentasi manitol  disertai  pembentukan  asam,  sedangkan warna  merah  disebabkan  oleh  manitol  yang  tidak difermentasikan.
Hasil  uji  normalitas
Saphiro-Wilk dan  uji homogenitas Lavene pada data pretest (hari  ke-11) dan post-test (hari  ke-19)  dengan  tingkat kepercayaan  95%  (α=0,05)  menunjukkan  bahwa nilai p > 0,05 yang artinya data TPC bakteri S. aureus berdistribusi normal dan memiliki varian yang sama (homogen).  Selanjutnya  dilakukan  uji One Way Anova dan uji Paired T-Test .
Hasil  uji One Way  Anova didapatkan  hasil  yang signifikan yaitu p=0,002 ( pretest ) dan p=0,046 ( post- test ).  Uji One Way  Anova dilakukan  untuk mengetahui  adanya  perbedaaan  yang  signifikan pada  setiap  perlakuan  yaitu  mengetahui  adanya pengaruh konsentrasi ekstrak daun murbei terhadap penurunan  jumlah  koloni  bakteri S.  aureus .  Uji paired T-test dilakukan untuk membandingkan beda nyata  dari  kelompok pretest dan  kelompok post- test . Hasil uji paired T-test didapatkan hasil p=0,000, yang  berarti  bahwa  terdapat  perbedaan  nyata antara sebelum dan setelah pemberian ekstrak daun murbei.
a b

## Pembahasan
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  efek ekstrak  daun  murbei  ( Morus  alba L.)  dalam penurunan  jumlah  koloni  bakteri S.  aureus dan perbaikan  gejala  konjungtivitis  pada  tikus  wistar model  konjungtivitis  karena S.  aureus .  Konsentrasi ekstrak daun murbei yang diberikan yaitu 45%, 55%, 65%  dan  75%.  Kontrol  negatif  diberikan  tetes  mata air  mata  artifisial cendo  lyteers dan  kontrol  positif diberikan  tetes  mata  levofloksasin  0,5%.  Ekstrak daun  murbei  dijadikan  sediaan  tetes  mata  dalam botol  tetes  mata cendo  lyteers steril  menggunakan alkohol dalam laminar air flow dan diuji sterilitasnya dalam  media Nutrient  Agar (NA),  diberikan  pada kedua  mata  sebanyak  2  tetes  (0,15  ml)  setiap  hari selama 7 hari.
Konjungtivitis bakteri adalah infeksi pada konjungtiva,  yang  meluas  dari  bagian  belakang kelopak  mata  (konjungtiva  tarsal  dan  palpebral)  ke fornises/forniks,  dan  secara  global  (bulbar konjungtiva)  sampai  bergabung  dengan  kornea  di limbus.  Konjungtivitis  bakteri  akut  terutama disebabkan oleh S. aureus , Streptococcus pneumoniae , and Haemophilus influenzae .
Konjungtivitis  kronik  terutama  disebabkan  oleh Chlamydia  trachomatis . S.  aureus dan Moraxella lacunata bisa  juga  menyebabkan  konjungtivitis kronik pada pasien yang berasosiasi dengan blefaritis (Feldman,  2014).  Flora  normal  konjungtiva  pada manusia  adalah  10 <1-3 ,  jumlah  bakteri  per  gram jaringan  atau  cairan  atau  per  cm 2 kulit (Davis,  1996 dalam Baron, 1996). NRLP3 inflammasome diaktivasi di sel goblet (sistem pertahanan tubuh konjungtiva), ketika  berhadapan  dengan  toksin S.  aureus ,  dan akan merespons  dengan  mengaktivasi jalur  kaspase 1,  mengakibatkan  produksi  IL-1β,  sebuah  induksi poten  inflamasi.  NLRP3  adalah  anggota  dari kompleks multi-protein yang diterminasikan sebagai NLRP3 inflammasome (McGilligan, 2013).
Konjungtivitis  bakteri  karena  bakteri  Gram  positif seperti S.  aureus, dan Streptococcus  pneumonia umumnya  lebih  ringan  daripada  konjungtivitis karena  bakteri  Gram  negatif.  Konjungtivitis  ringan biasanya  jinak  ( benign )  dan self-limited dan  dapat dimonitor tanpa terapi atau mudah diterapi dengan antibiotik.  Konjungtivitis  Gram  negatif  disebabkan oleh  bakteri Neisseria  gonorrhoeae , Haemophilus influenza,  Moraxella , Pseudomonas , Chlamydia trachomatis, dan Serratia marcescens. Gram negatif menyebabkan  konjungtivitis  yang  virulen  dan menyebabkan infeksi berat serta kemungkinan terja-
di  perforasi  mata  dalam  mata  dalam  24-48  jam infeksi.  Konjungtivitis  berat  ini  dapat  menyebabkan kebutaan dan dapat menimbulkan penyakit sistemik berat.  Respons  seluler  pada  konjungtivitis  bakteri akan  menunjukkan  predominasi  neutrofil  (Yeung, 2017).  Umumnya,  konjungtivitis  bakteri  dan  virus adalah self limited dan jarang mengalami komplikasi serius (Crounau et al., 2010).
TPC S. aureus dari swab konjungtiva tikus pada H+3 pasca  induksi  konjungtivitis  dengan S.  aureus (hari ke-11)  ( pretest )  pada  K(-),  K(+),  P1,  P2,  P3  dan  P4 berturut-turut adalah sebesar 5,70, 5,78, 5,65, 5,63, 5,84,  dan  5,69. Sedangkan  TPC S. aureus dari swab konjungtiva  tikus  pada  H+5  setelah  pemberian ekstrak daun murbei (hari ke-17) ( post-test ) pada K(- ),  K(+),  P1,  P2,  P3  dan  P4  berturut-turut  adalah sebesar  4,07,  3,31,  3,78,  3,82,  3,74,  dan  3,63.  Hasil penelitian didapatkan perbaikan gejala konjungtivitis pada  hari  ke-17  ( post-test )  daripada  hari  ke-11 ( pretest ).
Pengamatan  gejala  konjungtivitis  tikus  dilakukan selama  3  hari  (hari  ke-9,  10  dan  11)  setelah  tikus diinfeksi  dengan S. aureus 1,5  x  10 8 CFU/ml sebanyak  1  tetes  tiap  10 menit  selama  1  jam  pada kedua  mata  meliputi  kelopak  mata  terdapat hiperemi  (merah),  konjungtiva  terdapat  hiperemi (merah)  dari  pinggir  bola  menuju  ke  sentral  bola mata,  adanya  sekret  dan  aparatus  lakrimal  tampak keruh  terdapat  pembengkakan  berwarna  merah  di bawah  kelopak  mata  (Ilyas,  2014).  Gejala konjungtivitis  yaitu  mata  merah,  radang,  sekret purulen  berwarna  putih,  hijau  atau  kuning  lendir pada  konjungtiva dan  edema kelopak  mata  (Yeung, 2017).  Pengamatan  gejala  konjungtivitis  ini dihentikan  setelah konjungtiva kembali normal (± 7 hari).  Hampir  semua  kasus  konjungtivitis  bakteri akut self-limited dan  akan  sembuh  dalam  10  hari tanpa  pengobatan.  Terapi  antibiotik  akan menunjukkan  penurunan  durasi  gejala  dan meningkatkan  eradikasi  mikroorganisme  dari permukaan konjungtiva (Feldman, 2014).
Murbei  ( Morus  alba L.)  memiliki  kandungan senyawa  fitokimia  aktif  yang  berperan  sebagai antibakteri  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  dan  polifenol (Sunanto,  2009).  Mekanisme  kerja  alkaloid  sebagai antibakteri  yaitu  dengan  cara  mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga  lapisan  dinding  sel  tidak  terbentuk  secara utuh  dan  menyebabkan  kematian  sel  bakteri tersebut  (Darsana,  2012).  Sedangkan  mekanisme
kerja  lain  alkaloid  sebagai  antibakteri  yaitu komponen  alkaloid  diketahui  dapat  menghambat enzim  topoisomerase  sel  bakteri  dan  sebagai interkelator  DNA.  Ekstrak  murbei  mengandung senyawa flavonoid yang membentuk ikatan hidrogen bersamaan dengan protein ektra seluler dan terlarut mengakibatkan  rusaknya  dinding  sel  bakteri  dan keluarnya  senyawa  intraseluler.  Selain  itu,  senyawa flavonoid  bersifat  lipofilik  yang  dapat  merusak membran bakteri. (Nuria, et al. ., 2009).
Pada  daun  murbei,  kandungan  senyawa  aktif  yang berperan  sebagai  antibakteri  yaitu  kuersetin  dan antosianin yang termasuk dalam kelompok glikosida flavonoid  (Chen et  al., 2006).  Antosianin  ini  dapat memperbaiki  ketajaman  mata  (JEFCA,  2006). Glikosida  flavonoid  merupakan  senyawa  fenol  yang berperan sebagai koagulator protein (Dwidjoseputro,  2005).  Gugus  fenol  berikatan dengan  membran  sel  bakteri  pada  ikatan hidrogennya,  sehingga  menyebabkan  perubahan struktur  protein.  Perubahan  struktur  protein  pada membran  sel  bakteri  dapat  mengakibatkan semipermeabilitas  membran  sel  bakteri  terganggu, sehingga  metabolisme  seluler  terganggu  dan mengakibatkan  kematian  sel  bakteri  (Pelczar  dan Chan, 2005).
Kelemahan  penelitian  ini  yaitu  menggunakan  tikus, dengan  sistem  imun  tikus  ( host ),  faktor virulensi  S. aureus ( agent )  dan  lingkungan  ( environment )  yang berbeda-beda, sehingga sulit digeneralisasikan  pada manusia.  Konsentrasi  ekstrak  daun  murbei  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  ditentukan  dengan perkiraan  berdasarkan  konsentrasi in  vitro yang mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri S. aureus ,  karena  memang  belum  ada  penelitian sebelumnya  yang  menggunakan  ekstrak  daun murbei topikal pada mata secara in vivo .

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat  ditarik kesimpulan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  murbei ( Morus  alba L.)  memiliki  efek  menurunkan  jumlah koloni  bakteri S.  aureus dan  memperbaiki  gejala konjungtivitis setelah pemberian selama 7 hari pada konjungtiva tikus wistar yang mengalami konjungtivitis oleh S. aureus .
Saran  untuk  penelitian  selanjutnya  adalah  perlu dilakukan  penelitian  dengan  ekstrak  daun murbei menggunakan  indikator  adanya  inflamasi  oleh bakteri  seperti  jumlah  leukosit  jenis  neutrofil  dan
limfosit,  penelitian  menggunakan  dosis    tetes  mata ekstrak daun murbei yang lebih bervariasi sehingga dapat  menentukan  dosis  efektif,  dosis  letal,  dosis minimum, dosis maksimum pada tikus konjungtivitis karena S. aureus. untuk  mengetahui  efek  samping penggunaan  tetes  mata  dari  ekstrak  daun  murbei sebelum  dilakukan  penelitian  ke  manusia. Penelitian  juga  dapat  dikembangkan  pada  hewan coba  lainnya,  seperti  kelinci,  yang  memiliki  ukuran konjungtiva yang lebih luas dibandingkan tikus.

## Ucapan Terima Kasih
Pada  kesempatan  ini  peneiliti  mengucapkan  terima kasih kepada Dr. Mahanani Tri Asri, M.Si. yang telah meluangkan  waktu,  pikiran,  dan  ilmu  untuk membantu dalam penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Chen  PN. 2006. Mulberry Anthocyanins,  Cyanidin 3- Rutinoside And Cyanidin 3-Glucoside, Exhibited An  Inhibitory  Effect  On  The  Migration  And Invasion  Of  A  Human  Lung  Cancer  Cell  Line . Cancer Letter . 235(2): 248-259.
Crounau  H,  Kankanala  RR,  dan  Mauger  T.  2010. Diagnosis  And  Management  Of  Red  Eye  In Primary Care. Am Fam Physician. 81: 137-44.
Darsana  IG,  Besung  IN,  dan  Mahatmi  H.  2012. Potensi  Daun  Binahong  (Anredera  Cordifolia (Tenore) Steenis) Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli Secara In Vitro.  Indonesia  Medicus  Veterinus. 1(3): 337- 351.
Davis,  S.  1996. Normal  Flora .  Di  Dalam:  S.  Baron. 1996.  Medical  Microbiology  edisi  4.  Texas: University  of  Texas  Medical  Branch  at Galveston.
Dwidjoseputro. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi . Djakarta: Penerbit Djambatan.
Epling  J,  dan  Smucny  J.  2010. Bacterial Conjunctivitis . Clin  Evid. 2(14):  756-761. (Online)Mar.https://www.ncbi.nlm.nih.go v/p  mc/articles/PMC2907624/  [accessed on 12 Februari 2018].
Feldman  HB,  dan  Epley  KD.  2014. Bacterial Conjunctivitis. http://eyewiki.aao.org/Bact eria l_Conjunctivitis  [accessed  on  15  Juni 2017].
Ilyas  S,  dan  Yulianti  SR.  2014. Ilmu  Penyakit  Mata . Jakarta:  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia.
JEFCA  (Joint  FAO/WHO  Expert  Committee  on  Food Additives).  2006. Consideration  of  Maximum Residue Limits (MRL) for Veterinary Drugs . 66th Proceedings JEFCA meeting. CX/RV DF 06/16/7, add  1.  Food  Standards  Programme  Codex Committee  on  Residues  of  veterinary  Drugs  in Foods.
Kemenkes  RI.  2010. 10  Besar  Penyakit  Rawat  Jalan Tahun  2009 . Profil  Kesehatan  Indonesia  Tahun 2009 . http://www.Depkes.go.id [ accessed on 6 Juni 2017].
Kim SY, Gao  JJ, dan  Kang  HK. 2000. Two  Flavonoids From  The  Leaves  Of  Morus  alba  Induce Differentiation  Of  The  Human  Promyelocytic Leukemia  (HL-60)  Cell  Line . Biol  Pharm  Bull . 23(4):451-5.
Manek DP. 2017. Uji Aktivitas Infus Kunyit (Curcuma longa)  terhadap  Waktu  Penyembuhan  dan Tingkat  Iritasi  Mata  Tikus  Secara  Makroskopis yang  Diinduksi  S.  aureus .  [Skripsi].  Surabaya: Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya.
McGilligan  VE, et  al .  2013. S.  aureus  Activates  The NLRP3  Inflammasome  In  Human  And  Rat Conjunctival Goblet Cells . PLoS ONE. 8.
Pelczar  MJ,  dan  Chan  EC.  2005. Dasar-Dasar
Mikrobiologi . Jakarta: UI Press.
Sunanto H. 2009. 100 Resep Sembuhkan Hipertensi, Obesitas  dan
Asam  Urat . Jakarta:
PT. Gramedia.
Vaughan D,  dan  Asbury  T. 2015. Vaughan & Asbury Oftalmologi  Umum .  Jakarta:  Buku  Kedokteran EGC.
Yeung
KK. 2017. Bacterial Conjunctivitis . http://emedicine.medscape.com/article/119
1730-overview  [accessed  on  17  September 2017].