## Kandungan Gizi dan Karakterisasi Senyawa Bioaktif
Lintah Laut ( Discodoris sp.)
Nutritional Content and Characterization Bioactive Compounds of Sea Sluge ( Discodoris sp.) 1) 2) 3) Hafiluddin , Nurjanah dan Tati Nurhayati
(1) Jurusan Ilmu Kelautan, Universitas Trunojoyo
(2), (3) Jurusan Teknologi Hasil Perairan, Universitas Trunojoyo
Jl. Raya Telang, Kecamatan Kamal Kabupaten Madura, 16912 Telp. 031 - 3011146, Fax. 031 - 3011506

## Abstract
One  of  the  commodities  produced  from  the  ocean  that  have  a  bioactive  compounds  is  a  sea  slug ( Discodoris sp.). That is very interesting to study mainly deals with the nature of both chemical and biochemical characteristics  and  their  use  for  the  field  of  food  and  health.  The  aims  of  this  research  was  to  determine  the nutrient content of sea slug, determaine chemical content and determine antioxidant activity. The experiment was conducted  with  several  stages:  sample  preparation,  analysis  of  nutrient  content,  extraction  bioactive  compound, analysis of chemical content and antioxidant activity.  Sea slug from the island of Madura Pamekasan potential as a source of protein, fat, and minerals. Sea slug has esensial amino acids amount to 5.57% was dominated by leucin of  1.42%.  Nonesensial  amino  acids  amount  to  6.54%  wich  was  dominated  by  glutamic  acid  2.19%.    Saturated fatty acids amounted to 27.53% of sea slug was dominated by palmitic (C16: 0) which was 13.36%. Unsaturated fatty acids amounted to 34.66%, which was dominated by the essential fatty acids linolenic (C18: 3, n-3) 20.91%. The  highest  yield  of  the  crude  extract  was  ethanol  and  contained  alkaloid  compounds,  steroids,  phenols, carbohydrates  and  reducing  sugar  compound.  The  meat  of  sea  slug  with  ethanol  solvent  has  an  IC   best 50 antioxidant activity at 441, 12 ppm.
Keywords : antioxidant,  nutrition, sea sluge ( Discodoris sp.)
Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan Vol. 3,No. 1, April 2011

## Pendahuluan
Kondisi  alam  dan  iklim  Indonesia  yang tidak  fluktuatif  membuat  laut  di  Indonesia  memiliki potensi  sumberdaya  dengan  keanekaragaman  hayati yang  sangat  besar.  Sumberdaya  laut  tersebut  belum terdayagunakan  secara  optimal.    Pemanfaatan sumberdaya laut selain sebagai sumber pangan, juga berpotensi  sebagai  sumber  senyawa  bioaktif  yang lebih bernilai ekonomis.
Salah  satu  komoditi  yang  dihasilkan  dari laut  dan  mempunyai  senyawa  bioaktif  adalah  lintah laut  ( Discodoris sp).  Senyawa  bioaktif  lintah  laut sangat  menarik  untuk  diteliti  terutama  berkaitan dengan sifat karakteristik kimia maupun biokimianya serta  pemanfaatannya  untuk  bidang  pangan  dan kesehatan.  Menurut pengalaman empiris, lintah laut telah  lama  digunakan  oleh  masyarakat  pantai  di daerah  Pamekasan  Madura  yang  dikenal  dengan nama  lokal  ”kok-okok”  karena  lintah  laut  tubuhnya bisa  memanjang  dan  mengkerut  apabila  disentuh. Lintah laut digunakan sebagai bahan pangan dan obat untuk menyembuhkan penyakit borok payudara bagi orang  hamil  dan  menyusui.  Lintah  laut  juga digunakan  sebagai  jamu  untuk  menyembuhkan penyakit punggung dan meningkatkan stamina.
Beberapa penelitian tentang lintah laut telah dilakukan  yaitu  isolasi  senyawa  steroid  dari  lintah laut  dan  ditemukan  7  jenis  senyawa  metabolit  yang salah  satu  diantaranya  adalah  senyawa  androgen (Ibrahim 2001).  Peneliti lain mengungkapkan bahwa lintah laut mengandung asam lemak jenuh dan tidak jenuh  serta  sterol  pada  fraksi  nonpolar  (Witjaksono 2005).  Hasil uji fitokimia dari ekstrak metanol lintah laut  diperoleh  kelompok  alkaloid,  steroid,  asam amino,  saponin  dan  fenol  yang  berperan  sebagai antioksidan  serta  diperoleh  rendemen  yang  terbesar yaitu  5,119%  dengan  aktivitas  antioksidan  89,44% dibandingkan  dengan  pelarut  yang  lain  (Nurjanah et al . 2010).  Pemanfaatan lintah laut sebagai minuman fungsional  dengan  fungsi  sebagai  antioksidan  telah diteliti oleh Nai'u (2010).
Penelitian  yang  komphrehensif  tentang kandungan  gizi  dan  komponen  bioaktif  dari  lintah laut  jenis Discodoris sp . ini  masih  sangat  kurang, khasiat  dan  manfaatnya  secara  empiris  perlu dibuktikan,  sehingga  diperlukan  penelitian  yang l e b i h   l e n g k a p   u n t u k   m e n g e k s t r a k s i , mengkarakterisasi  dan  mengidentifikasi  senyawa bioaktif dari lintah laut.

## Metodologi Penelitian
Tempat dan Waktu
Penelitian ini dilaksanakan pada Bulan Juni sampai  November  2010,  bertempat  di  Laboratorium bagian  Preparasi  Bahan  Baku  Hasil  Perairan, L a b o r a t o r i u m   B i o k i m i a   H a s i l   P e r i k a n a n , Laboratorium  Mikrobiologi  Hasil  Perikanan, Laboratorium  Bioteknologi  Hasil  Perairan  II, Departemen  Hasil  Perairan,  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu  Kelautan  IPB.  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Pascapanen  Pertanian  Cimanggu Bogor.
Bahan dan Alat Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini berupa  lintah  laut.  Bahan  ekstraksi:  kloroform,  etil asetat  dan  etanol.  Bahan  untuk  analisis  proksimat, asam  amino,  asam  lemak,  mineral  dan  logam  berat. Bahan  untuk  uji  antioksidan:  DPPH  (1,1- difenil -2- pikrilhidrazil ) dan BHT ( Butylated Hydroxytoluena ). Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  alat tulis,  alat-alat  gelas,  alat  ekstraksi  dan  uji  kimia antara lain: rotari evaporator Buchi Rotavapor R-205,
spektrofotometer  UV-VIS Hitachi  U- 2800,  AAS
Shimazu-7000, HPLC Varian 940-LC.
Preparasi Sampel Penelitian  dilakukan  dari  pengambilan  dan preparasi  sampel.    Lintah  laut  diambil  dari  pantai  di daerah Pamekasan Madura.  Setelah bersih lintah laut dikeluarkan  isi  perutnya  dengan  cara  membelahnya secara  melintang  dari  oral  menuju  aboral. dikeringkan  sekitar  3-4  hari  dengan  sinar  matahari dan  dihaluskan  dengan  mortal  atau  blender. Analisis kandungan  gisi  pada  lintah  meliputi  analisa proksimat  (AOAC  2005),  asam  amino  (AACC 1983),  asam  lemak  (AACC  1994)  serta  analisis kandungan  mineral  dan  logam  berat  (SNI  01-2896- 1998).

## Ekstraksi Lintah Laut
Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode ekstraksi  bertingkat,  menggunakan  perbedaan kepolaran pelarut yang mengacu pada metode Sherif et  al .  2008.    Sebanyak  50  gram  bubuk  lintah  laut dimasukkan  ke  dalam  gelas  erlenmeyer  dan ditambahkan  dengan  100  ml  pelarut  kloroform. Campuran  dikocok  dengan  shaker  dan  dibiarkan hingga  terjadi  pemisahan,  fraksi  terlarut  dalam kloroform  dipisahkan  dan  dimasukkan  ke  dalam labu.    Ekstraksi  menggunakan  pelarut  kloroform  ini dilakukan sampai larutan berwarna jernih.  Fraksi ini
merupakan  fraksi  dengan  tingkat  kepolaran  rendah. Kemudian dilanjutkan dengan pelarut yang lain yaitu etil  asetat  dan  etanol.  Larutan  hasil  ekstraksi bertingkat  dikeringkan  dengan  evaporator  pada  suhu
0 kamar 40  C.  Fraksi-fraksi yang diperoleh kemudian dikeringkan  dengan  freezdryer.  Analisis  yang dilakukan  pada  ekstrak  kasar  yaitu  uji  fitokimia (Departemen  Kesehatan  RI  1995 ) dan  aktivitas antioksidan (Blois 1958 dalam Hanani et al. 2005).

## Hasil dan Pembahasan
Rendemen Preparasi Lintah Laut
Hasil pengukuran rendemen lintah laut pada Tabel  1  menunjukkan  bahwa  daging  segar  setelah preparasi  sebesar  50,00%  dan  bagian  jeroan  sebesar 16,67% serta bagian lain berupa lendir, darah dan air sebesar  33,33%.  Setelah  dikeringkan  rendemen berubah  menjadi  semakin  kecil  yang  disebabkan banyaknya  kandungan  air  yang  menguap.    Jumlah rendemen  pada  bagian  daging  setelah  pengeringan menjadi  13,33%  dan  pada  bagian  jeroan  sebesar 4,67%.  Penurunan  rendemen  lintah  laut  disebabkan penguapan  kandungan  air  dalam  bahan  dengan adanya energi panas matahari.
Kandungan Gizi Lintah Laut Lintah  laut  ( Discodoris sp.)  yang  berasal dari  perairan  pantai  Kabupaten  Pamekasan  Madura memiliki kandungan proksimat protein tertinggi pada bahan  segar  yaitu  13,60±0,16%  pada  jeroan, sedangkan  pada  bahan  kering  protein  tertinggi diperoleh  pada  bagian  daging  yaitu  45,13±0,29%. Kadar  lemak  tertinggi  pada  bahan  segar  diperoleh dari  bagian  daging  yaitu    0,44±0,06%,  sedangkan pada  bagian  kering  kadar  lemak  tertinggi  diperoleh dari  bagian  jeroan  yaitu  7,10±0,44%. Hasil  analisis proksimat  lebih  lengkap  dapat  dilihat  pada  Tabel  2. Hasil  ini  berbeda  dengan  yang  dilaporkan  oleh Witjaksono  (2005), Andriyanti  (2009)  dan  Nurjanah (2010).  Perbedaan kandungan proksimat pada lintah laut  tersebut  disebabkan  karena  perbedaan  asal sampel yang digunakan, jenis dan ukuran, umur dan lingkungan.
Asam  amino  essensial  yang  terdapat  pada daging  lintah  laut  yaitu  lisin,  leusin,  isoleusin,

## Kandungan Gizi Dan ......
Tabel 1. Rendemen lintah laut setelah preparasi
Keterangan Berat Segar Berat Kering Lintah laut utuh Daging lintah laut Jeroan lintah laut Sisa 3000 g 50,00 % 16,67 % 33,33 % 13,33 % 4,67 %
treonin,  methionin,  valin,  phenilalanin,  dan  histidin. Asam  amino  non  essensial  pada  lintah  laut  yaitu asam  aspartat,  asam  glutamat,  glisin,  serin,  alanin polin,  triosin,  arginin,  dan  sistein  (Tabel  3). Kandungan  asama  amino  paling  besar  yaitu  asam glutamat sebesar 2,19% pada daging dan 2,14% pada
jeroan. Asam  glutamat  merupakan  jenis  asam  amino glukonik  yang  diduga  memberikan  rasa  manis  dan gurih pada daging lintah laut, sehingga lintah laut ini bisa  dimakan  dan  disukai  oleh  sebagian  masyarakat pesisir seperti yang sudah dilakukan oleh masyarakat sekitar pantai daerah Pamekasan Madura.
Tabel 2. Hasil analisis proksimat lintah laut ( Discodoris sp.) Keterangan Segar Kering Discodoris baholensis (a) Discodoris sp. (b) Discodoris sp. (c) Daging Jeroan Daging Jeroan Kadar air (%) 83,00±1,25 77,93±0,27 11,17±1,49 9,22±1,11 19,36 10,45 15,25 Kadar abu (%) 1,87±0,20 2,92±0,32 17,96±0,25 26,86±0,64 10,69 11,97 11,74 Kadar protein (%) 12,31±0,86 13,60±0,16 45,13±0,29 37,57±1,21 59,79 59,11 49,60 Kadar lemak (%) 0,44±0,06 0,44±0,04 2,67±0,14 7,10±0,44 5,84 1,41 4,58 Kadar karbohidrat (%) 2,38±1,87 5,12±0,62 23,07±1,83 19,26±0,86 4,42 17,08 18,83
Sumber :  (a) ; Witjaksono (2005) (b) ; Andriyanti (2009) (c) ; Nurjanah (2010)
6)  5,63%  dan  linolenat  (C18:3,n-3)  20,91%.
Komposisi  asam  lemak  lintah  laut  disajikan  pada Tabel 4. Komposisi dari asam lemak pada lintah laut didominasi oleh asam lemak tidak jenuh jamak yaitu linolenat  yang  terletak  pada  bagian  daging  lintah laut,  asam  lemak  oleat  dan  linoleat.    Asam  lemak tidak  jenuh  tersebut  yang  diduga  berperan  sebagai antioksidan dalam lintah laut.
Lintah  laut  ( Discodoris sp.)  memiki  asam lemak  jenuh  ( saturated  fatty  acid )  yaitu  laurat (C12:0)  4,59%,  miristat  (C14:0)  1,11%,  palmitat (C16:0)  13,37%.  Lintah  laut  juga  memiliki  asam lemak  tidak  jenuh  ( unsaturated  fatty  acid )  yang terdiri  dari  asam  lemak  tidak  jenuh  tunggal ( monounsatuted  fatty  acid )  yaitu  oleat  (C18:1,n-9)
8,13%  dan  asam  lemak  tidak  jenuh  jamak ( polyunsaturated  fatty  acid )  yaitu  linoleat  (C18:2,n-
Tabel 3. Komposisi asam amino pada lintah alut ( Discodoris sp.)
No.
Jenis Asam Amino Hasil (%) No. Jenis Asam Amino Hasil (%) Daging Jeroan Daging Jeroan Asam amino esensial 5,57 5,69 Asam amino non esensial 6,54 6,76 1 2 3 4 5 6 7 8 Leusin Lisin Valin Treonin Isoleusin Phenilalanin Histidin Methionin 1,42 1,40 0,81 0,52 0,43 0,36 0,35 0,28 1,67 1,22 0,83 0,57 0,34 0,46 0,35 0,25 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Asam Glutamat Prolin Asam Aspartat Serin Triosin Arginin Alanin Glisin Sistein 2,19 1,18 0,91 0,55 0,50 0,46 0,39 0,22 0,14 2,14 1,19 0,96 0,61 0,48 0,52 0,44 0,26 0,16
Kandungan  mineral  tertinggi  pada  lintah laut  yaitu  pada  jeroan  meliputi  kalium  206,05  ppm, kalsium  187,66  ppm,  magnesium  112,4  ppm  dan beberapa mineral mikro yaitu Zn, Fe, dan Mn  (Tabel 5).    Logam  berat  Pb  yaitu  0,73  ppm  (daging)  dan 0,59  ppm  (jeroan)  Hg,  Cd  dan  As  tidak  terdeteksi pada  lintah  laut  asal  perairan  Madura  tersebut. Logam  berat  ini  masih  berada  di  bawah  batas maksium  logam  cemaran  dalam  ikan  dan  produk perikanan termasuk jenis moluska yaitu kadmium 1,0 mg/kg,  merkuri  1,0  mg/kg,  timbal  1,5  mg/kg,  dan arsen 1,0 mg/kg (SNI 7387-2009).
Rendemen Ekstraksi Lintah Laut Rendemen  merupakan  perbandingan  berat ekstrak  yang  diperoleh  dengan  bobot  awal  sampel yang  digunakan.  Tabel  6  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  memiliki  rendemen  yang  tertinggi yaitu 5,08% (daging) dan 6,97% (jeroan). Tingginya
rendemen  pada  bagian  jeroan  disebabkan  oleh perbedaan  ukuran  partikel  dan  kemudahan  sel  untuk pecah  dimana  pada  bagian  jeroan  lintah  memiliki sifat  mudah  dihancurkan  dibandingkan  pada  bagian daging  lintah  laut.    Semakin  kecil  ukuran  partikel maka semakin luas terjadinya kontak dengan pelarut.
Kandungan Senyawa Kimia Ekstrak Lintah Laut Bioaktivitas  lintah  laut  sangat  dipengaruhi oleh  kandungan  senyawa  kimia  yang  terdapat  di dalam  bahan,  perbedaan  kandungan  senyawa  kimia menentukan aktivitas biologis dari lintah laut.  Hasil pemeriksaan komponen bioaktif yang terdapat dalam ekstrak  kasar  lintah  laut  disajikan  pada  Tabel  7. Komponen  bioaktif  pada  lintah  laut  yaitu  alkaloid, steroid, dan karbohidrat, fenol, saponin, molisch dan ninhidrin.  Tabel 7 menunjukkan bahwa pada ekstrak etanol  daging  memiliki  komponen  kimia  paling lengkap  dibandingkan  yang  lain.    Ekstraksi  dengan pelarut  etanol  dapat  memisahkan  senyawa  fenolik, steroid,  terpenoid,  alkaloid  dan  glikosida  (Hougton dan Raman 1998).
Tabel 4. Komposisi asam lemak lintah laut ( Discodiris sp.)
No. Jenis asam lemak Hasil (%) Daging Jeroan Asam lemak jenuh 27,53 29,82 1 2 3 4 Palmitat (C16:0) Stearat (C16:0) Laurat (C16:0) Miristat (C16:0) 13,36 8,48 4,58 1,11 16,74 6,87 3,53 2,68 Asam lemak tidak jenuh 34,66 17,95 1 2 3 Oleat Essential fatty acid (EFA) : Linolenat Linoleat 8,12 20,91 5,63 7,63 4,22 6,10 Tabel 5. Hasil analisi kandungan mineral lintah laut ( Discodiris sp.) No. Jenis mineral Hasil (ppm) Daging Jeroan Makro mineral 1 2 3 Ka Ca Mg 197,86 179,98 110,95 206,05 187,66 112,40 Mikro mineral 1 2 3 Zn Fe Mn 7,52 6,99 6,93 4,35 5,17 7,25 Tabel 6. Rendemen ekstrak lintah laut Keterangan Berat ekstrak Kloroform Etil asetat Etanol Daging lintah laut 4,53 % 1,14 % 5,08 % Jeroan lintah laut 3,09 % 0,86 % 6,97 %
Tabel 7. Hasil uji fitokimia ekstrak kasar lintah laut
( Discodiris sp.) Sampel Komponen kimia Kloroform daging Alkaloid, steroid, molisch, ninhidrin Kloroform jeroan Alkaloid, fenol, molisch Etil asetat daging Alkaloid, molisch Etil asetat jeroan Alkaloid, steroid, molisch, ninhidrin Etanol daging Alkaloid, steroid, saponin, fenol, molisch, ninhidrin Etranol jeroan
Alkaloid, molisch, benedict

## Kandungan Gizi Dan ......
Gambar 2. standar BHT

## Simpulan
Lintah  laut  asal  Madura  berpotensi  sebagai sumber  protein,  lemak,  dan  mineral.  Asam  amino esensial  lintah  laut    sebesar  5,57%  yang  didominasi oleh leusin sebesar 1,42%.  Asam amino nonesensial sebesar  6,54%  yang  didominasi  didominasi  oleh asam  glutamat    yaitu  2,19%.    Asam  lemak  jenuh lintah  laut  sebesar  27,53%  yang  didominasi  oleh palmitat  (C16:0)  yaitu  13,36%.  Asam  lemak  tidah jenuh  sebesar  34,66%  yang  didominasi  oleh  asam lemak esensial linolenat (C18:3,n-3) 20,91%.
Rendemen  ekstrak  kasar  tertinggi  pada ekstrak  etanol  dengan  senyawa  kimia  yang terdeteksi:  alkaloid,  steroid,  saponin,  molish  dan ninhidrin. Aktivitas  antioksidan (IC ) tertinggi pada 50 daging  yang  diekstraksi  dengan  etanol  yaitu  441,12 ppm.

## Daftar Pustaka
American  Association  of  Cereal  Chemist  [AACC]. 1983. Approved  Methods  of  The  American Association  of  Cereal  Chemist. Ed  ke-8.
Maret.  USA  :American  Association  of Cereal Chemist.
American  Association  of  Cereal  Chemist  [AACC]. 1994. Approved  Methods  of  The  American Association of Cereal Chemist . Ed ke-9. Vol 1.  USA  :American  Association  of  Cereal Chemist.
Association of Official Analytical Chemist [AOAC]. 2005. Official  Methods  of  Analysis (18 Edn) . Association  of  Official  Analytical Chemist Inc.  Mayland. USA. Dewan Standarisasi Nasional [SNI]. 1998. Cara Uji Cemaran  Logam  dalam  Makanan.  SNI  01- 2 8 9 6 - 1 9 9 8 .   J a k a r t a :   D e p a r t e m e n Perindustrian RI.
Dewan  Standarisasi  Nasional  [SNI].  2009. Batas Maksimum  Cemaran  Logam  Berat  dalam Bahan  Pangan . SNI  7387-2009 .  Jakarta:
Badan Standarisasi Nasional.
Hasil  analisis  IC aktivitas  antioksidan 50
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Lintah Laut Antioksidan  merupakan  senyawa  yang dapat menunda, menghambat dan mencegah oksidasi lemak  atau  molekul  lainnya  dengan  cara  mencegah terbentuknya  radikal  bebas  (Rohman et  al .  2006).
Keberadaan  senyawa  antioksidan  dalam  suatu  bahan dapat  diketahui  melalui  uji  aktivitas  antioksidan. Pengujian  aktivitas  antioksidan  dalam  lintah  laut dilakukan dengan metode DPPH.  Hasil analisis IC 50 aktivitas  antioksidan  lintah  laut  ( Discodoris sp . ) dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Hasil  analisis  IC aktivitas  antioksidan 50 lintah laut ( Discodoris sp.)
S u a t u   s e n y a w a   d i k a t a k a n   s e b a g a i antioksidan sangat kuat apabila nilai IC  kurang dari
50
50 µg/ml, kuat apabila nilai IC  antara 50-100 µg/ml, 50 sedang  apabila  nilai  IC   berkisar  antara  100-150 50 µg/ml,  dan  lemah  apabila  nilai  IC   berkisar  antara 50
150-200  µg/ml  (Blois  1958  diacu  dalam  Molyneux
2004).    Ekstrak  kasar  lintah  laut  hasil  ekstraksi dengan  ketiga  pelarut  memiliki  aktivitas  antioksidan terbaik sebesar 441,12% dan tergolong lemah karena memiliki nilai IC  lebih besar dari 200 ppm. 50 Nilai  IC   antioksidan  dari  ketiga  pelarut 50 juga  masih  lebih  rendah  dibandingkan  dengan strandar  yang  digunakan  yaitu  BHT  sebesar  397,04 ppm  (Gambar  2).    Lemahnya  aktivitas  antioksidan lintah  laut  ini  dimungkinkan  karena  pada  ekstrak kasar  lintah  laut  masih  banyak  terdapat  senyawa l a i n n y a   y a n g   d a p a t   m e n g u r a n g i   a k t i v i t a s a n t i o k s i d a n n y a .   P e n g g u n a a n   j e n i s   p e l a r u t berpengaruh  terhadap  senyawa  bioaktif  yang dihasilkan  dan  juga  terhadap  aktivitasnya  (Seidel 2006).
Jenis  senyawa  antioksidan  yang  ada  pada lintah  laut  dimungkinkan  tergolong  antioksidan primer  yang  mempunyai  sistem  kerja  secara enzimatis  sehingga  analisis  dengan  menggunakan metode  DPPH  belum  memberikan  hasil  yang optimal.    Menurut  Nurjanah  (2010),  aktivitas antioksidan  ekstrak  kasar  lintah  laut  dengan  metode NBT  diperoleh  hasil  sebesar  79,56%  pada  pelarut metanol.
Nurjanah,  Hardjito  L,  Monintja  DR,  Bintang  M,
Agungpriyono  DR.  2010.    Karakterisasi Lintah  Laut  ( Discodoris  sp. )  sebagai antioksidan  dan  antikolesterol.[Disertasi].
Sekolah Pascasarjana IPB. Bogor.
Rohman  A,  Riyanto  R,  Diah  U.  2006.    Aktivitas antioksidan,  kandungan  fenolik  total  dan kandungan flavonoid total ekstrak etil asetat buah  Mengkudu  serta  fraksi-fraksinya. M a j a l a h   F a r m a s i   I n d o n e s i a . 17(3):136–142.
Seidel V. 2006. Initial and bulk ekxtraction. Methods in  Biotechnology.  Natural  Products Isolation . Second edition. 20:27-46.
Sherif S Ebada, Ru Angelie Edrada, Wenhan Lin dan
Peter  Procksch.  2008.    Methods  for isolation,  purification  and  structural elucidation  of  bioactive  secondary metabolites  from  marine  invertebrata. Nature Protocols .3(12):1820-1831.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  1995.
Materia  Medika  Indonesia .  Jakarta:
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Hanani  E,  Mun'im A,  Sekarini  R.  2005.  Identifikasi Senyawa  Antioksidan  dalam  Spons
Callyspongia sp. dari  Kepulauan  Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian, 2(3):127 –133.
Houghton PJ, Raman A. 1998. Laboratory Handbook for  the  Fractionation  of  Natutal  Extracts . London: Chapman and Hall.
Ibrahim  M.    2001.    Isolasi  dan  uji  aktivitas  biologi senyawa steroid dari lintah laut, Discodoris sp . [Tesis].  Program Pascasarjana.  Institut Pertanian Bogor.  Bogor.
Molyneux P. 2004. The use of the stable free radicals diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for e s t i m a t i n g   a n t i o x i d a n t   a c t i v i t y. Songklanakarin  J.  Sci.  Technol .  26(2):211- 219.
Naiu  AS.  2011.  Formulasi  minuman  fungsional berbahan  baku  lintah  laut.  [Tesis].  Sekolah
Pascasarjana IPB. Bogor.