Isolasi Bakteri Selulolitik Asal Saluran Pencernaan Rayap Dan Daya Hidupnya Pada Berbagai Substrak Yang Berasal Dari Limbah Pertanian Dan Perkebunan
(Isolation of Cellulolitic Bacteria From tractus digestivus of rayap and daya hidup on some plantation waste)
Vivi Susanti, Mairizal*, Yurleni, Adriani, Fahmida Manin Program Studi Magister Ilmu Peternakan Pascasarjana Universitas Jambi *Penulis koresponden: mairizal_fapet@unja.ac.id
Abstract
This  study  aims  to  identify  isolates  that  produce  cellulase  enzymes  derived  from cellulolytic bacteria from the digestive tract of termites and to determine the best type of substrate as the carrier and survival of these isolates. This research consists of 3 (three) stages. The first stage of  research  was  the  isolation  of  cellulolytic  bacteria  using  descriptive  data  analysis.  The  second stage of research was to determine the best carrier for selected cellulolytic isolates, while the third stage was to determine the shelf life of the isolates with the selected substrate as the best carrier by analyzing  data  using  analysis  of  variance.  The  results  of  the  first  phase  of  research  obtained  3 isolates of cellulolytic bacteria from the best termite digestive tract based on the clear zone index test with isolate code VR52, VR61 and VR81 with clear zone index for each isolate 1.087; 2,250 and 1,710 mm. Based on Gram staining, the three isolates were gram-positive bacteria in the form of bacilli.Maximum  enzyme  activity  in  isolate  VR61 (Bacillus  sp) with  its  enzyme  activity  (19.91 µ/mL). The results of the second stage study showed that rice bran was the best sAubstrate based on total microbes with a value of 202 x 109 CFU / g. The results of the third stage research showed that  the  number  of  cellulolytic  bacteria  in  the  selected  sub-extract  (rice  bran)  at  a  storage temperature of 4 o C (178.92 x 109 CFU / gr) was more than that of storage at 27 o C (101.69 x 109 CFU  /  gr).  This  research  concludes  that  the  longer  the  storage  time  shows  a  decrease  in  the number  of  bacteria  and  pH  in  the  sub-extract.  The  best interaction  on  rice  bran  sub-extract  as  a carrier at a storage temperature of 4 o C in the second week with the number of cellulolytic bacteria 197.8 x 109 CFU / gr with a pH value of 6.46 and the fourth week of 167.85 x 109 CFU / gr with a pH value of 6.39.
Keywords: Cellulose, Cellulolytic Bacteria, Termites

## Pendahuluan
Perkembangan ilmu pengetahuan dan  teknologi  khususnya  dibidang pertanian, perkebunan dan peternakan telah menghasilkan berbagai  macam  produk  yang  dapat dimanfaatkan bagi kesejahteraan masyarakat.Seiring
dengan meningkatnya  produk  tersebutdiikuti pula  dengan  meningkatnya  hasil samping serta limbah dari pengolahannya  sepertibungkil  inti sawit  (BIS),  onggok,  dedak,  jerami jagung  dan  kulit  kopi.Namun  dalam penggunaannya  sering  terkendala oleh  kandungan  serat  kasar  yang tinggi  seperti  tingginya  kandungan
lignoselulosa.Penurunan  kandungan lignoselulosaa tersebut dapat dilakukan dengan carabiologis seperti fermentasi  dengan  menggunakan bakteri  selulolitik.  Salah  satu  bakteri selulolitik  yang  dapat  dimanfaatkan dalam  proses  fermentasi  adalah bakeri  yang  terdapat  dalam  saluran pencernaan rayap.
Rayap  merupakan  kelompok serangga  yang  hidupnya  bergantung pada selulosa sebagai sumber makanannya.Kemampuan rayap dalam memanfaatkan selulosa sebagai sumber  makanan  karena  rayap memiliki  mikroorganisme  simbiotik dalam  saluran  pencernaannya  yaitu
bakteri  selulolitik.  Bakteri  selulolitik mampu  mengubah  selulosa  menjadi gula  sederhana  untuk  digunakan sebagai  sumber  karbon  dan  energi bagi metabolisme dan pertumbuhannya(Mulyasaridkk.,2015 ). Kemampuan ini disebabkan karena bakteri  yang  terdapat  pada  rayap dapat memproduksi enzim selulase.
Menurut  Trakulnaleamsai  dkk,
(2004) menyatakan bahwa mikroorganisme  yang  bersimbiosis didalam  usus  rayap  memainkan fungsi fisiologis utama seperti pencernaan  selulosa,  hemiselulosa, asetogenesis, hidrogenesis, metanogenesis,  reduksi  sulfat  dan fiksasi  nitrogen.Saluran  pencernaan rayap (Zootermopsis angusticollis) mengandung  bakteri  Gram-positif.
Kelompok
Actinomycetes ordo Actinomycetales yang  meliputi  genus Cellulomonas/Orskovia , Microbacterium dan Kocuria ,  selain  itu  terdapat  juga genus Afipia , Agrobacterium/Rhizobium , Brucella/Ochrobactrum , Pseudomonas dan Sphingomonas/Zymomonas dari Proteobacteria dan Spirosoma dari "Flexibacteriaceae" yang  merupakan bakteri  Gram  negatif  (Wenzel  dkk.,
2002).
Kelompok bakteri selulolitik dapat  dijadikan  sebagai  inokulum dalam proses fermentasi bahan pakan yang mengandung selulaseyang tinggi  sehingga  dapat  merombak bahan pakan tersebut dan meningkatkan  kualitasnya  sebagai bahan  pakan  ternak.  Berdasarkan  hal tersebut telahdilakukan
suatu penelitianuntuk
mengkaji
dan mengidentifikasi  dari  karakterisasi isolate  yang  menghasilkan  enzim selulase  yang  diperoleh  dari  bakteri saluran  pencernaan  rayap  dan menentukan  jenis  substrat  terbaik
untuk  pengemban  dan  daya  hidup isolate tersebut.

## Metode Penelitian Materi
Alat  yang  digunakanterdiri  dari: timbang  analitik,  pipet  tetes, spluid (alat suntik), kartu label, cawan petri, autoclave ,  labu  erlenmeyer,  gelas beker,  gelas  ukur,  tabung  reaksi,  rak tabung  raksi,  mikroskop, object  glass , rak  pewarnaan,  pembakar  bunzen, nampan, spatula, kawat ose, vortex,magnetic stirrer , mikropipet , termometer,  tabung  mikro Eppendorf , pH  meterJenway  3505, hotstirer IKA RH basic 2, incubator, autoclave Tommy SX-500 ,  spreader,  incubator TAITEC
Bioshaker
BR-23FP, Freezer, spektrofotometer,  conter  plant,  laminar air  flow dan  set  alat High  Performance Liquid Chromatography (HPLC).
Bahan  yang  digunakan:  sumber isolat  adalah  sampel  mikroba  yang diambil  dari  saluran  pencernaan rayap,  NA  (Nutrent  Agar),  alkohol 70%, CMC (Carboxy Methyl Cellulose 1%,pepton  0.075%,  (NH 4 )2SO 4 14%, KH 2 PO 4 0.2%,  MgSO 4 .7H 2 O  0.03%, CO(NH 4 ) 2 0.03%,  CaCl  0.03%,  FeSO 4.7  H 2 O  0.0005%,  MnCl 2 .7H2O 0.00016%, ZnSO 4 .7H 2 O 0.00014, CoCl 2 0.0002%,  aquades,  pewarna Gram  (Gentian  violet,  Lugol,  Etil Alkohol 96% dan Safrarin), oil imersi, spirtus,  plastik  sampel,  dedak, bungkil inti sawit (BIS), daun jagung, kulit kopi, dan onggok.

## Metode Penelitian
Penelitian Tahap Pertama
Isolasi Bakteri Selulolitik Rayap  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  merupakan  rayap pekerja ( Macrotermes sp ) yang diambil dari  batang  sawit  yang  telah mengalami  pelapukan  pada  lahan
gambut. Isolasi dilakukan melalui dua cara  yaitu  tusuk  dan  gerus.  Isolasi dengan  cara  tusuk  dilakukan  dengan cara menusuk bagian abdomen rayap menggunakan jarum inokulasi kemudian  digores  secara  kuadran pada media agar
spesifik mengandung  CMC  1%.  Selanjutnya Isolasi  dan  seleksi  bakteri  dengan melakukan purifikasi
(seri pengenceran).Isolasi
dilakukan dengan  mensuspensikan  1  gram sampel ke dalam 9 ml larutan pepton steril  lalu  dikocok  dan  diperoleh pengenceran 10 -1 . Pengenceran dibuat hingga seri ke-10 -10
Tabung  reaksi  pada  pengenceran 10 6 ,  10 7 ,  10 8 ,  10 -9 dan  10 10 diambil sebanyak  1  ml  dan  diinokulasi  ke dalam tiga cawan petri berbeda yang berisi 9 ml media NA (Nutrient Agar) kemudian diinkubasikan selama 24-48 jam  pada  suhu  37ºC.  Cawan  yang digunakan untuk menghitung kerapatan  koloni  bakteri,  hanya cawan  petri  yang  ditumbuhi  30-300 koloni bakteri. Cawan dengan jumlah koloni bakteri kurang dari 30 ataupun yang  melebihi  300  koloni  akan diabaikan  (Agustini  dkk.,  2016). Koloni bakteri yang tumbuh kemudian  diseleksi  dan  diisolasi  ke media baru. Isolat tersebut ditumbuhkan  pada  media  NA (Nutrient  Agar)  selama  2  ×  24  jam pada  suhu  37ºC  dengan  metode goresan,  untuk  memperoleh  koloni murni (Isdaryanti., 2015).

## Isolasi  Bakteri  selulolitik  secara
Kualitatif.
Zona transparan (cleared zone) ini terbentuk  akibat  hidrolisis  selulosa menjadi  glukosa  dalam  media  padat CMC.Koloni  bakteri  yang  tumbuh disiram  dengan  Merah  congo  0.1% selama  15-30  menit  dan  dibilas
menggunakan  larutan  NaCl  5  M. Hasil  positif  (+)  ditujukan  dengan adanya  zona  bening  akibat  adanya degradasi selulosaoleh enzim selulase.  Isolat  yang  memiliki  zona bening  terbesar  merupakan  isolat potensial penghasil
selulase.
Selanjutnya, isolat tersebut
dimurnikan  dengan  metode  kuadran dan  diremajakan  pada  media  agar miring  Carboxy  Methyl  Cellulose (CMC). Indeks Selulolitik (IS) dihitung  dengan  mengukur  diameter koloni dan diameter zona jernih yang terbentuk (Downie dkk., 1994).
𝐼𝑆 = 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑍𝑜𝑛𝑎 𝐽𝑒𝑟𝑛𝑖ℎ − 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝐾𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 𝐵𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖
𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝐾𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 𝐵𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖
Identifikasi secara sederhana terhadap  bakteri  selulolitik  yang menghasilkan  zona  bening  tertinggi dilakukan dengan Pewarnaan Gram.Pewarnaan  gram  dilakukan dengan  membuat  lekapan  kering pada  kaca  objek.  Lekapan  kering bakteri  diteteskan  dengan  pewarna ungu  kristal  dan  genangi  selama  1 menit,  lalu  dibilas  dengan  akuades. Selanjutnya  genangi    iodin    gram selama  2  menit,  lalu  dibilas  kembali. Kemudian dipucatkan dengan meneteskan  alkohol  95%  keatas lekapan  bakteri  tersebut  hingga  sisa pewarna ungu krital larut.Berikutnya, teteskan  dengan  pewarna  safranin selama  30  detik  lalu  dibilas.Lekapan yang  telah  diwarnai  tersebut  diamati pada  mikroskop  dengan  perbesaran 1000x.

## Isolasi  Bakteri  Selulolitik  secara
Kuantitatif.

## Kurva Pertumbuhan Bakteri
Kurva  pertumbuhan    diperoleh berdasarkan  bobot  kering  biomassa sel.    Satu  koloni  isolat  terpilih ditumbuhkan  pada  media  substrat
Carboxy  methyl  cellulose 1  %  selama  4 hari.Erlenmeyer  yang  berisi  20  mL substrat Carboxy  methyl  cellulose 1%.Prekultur  digoyangkan  dengan kecepatan  200  rpm  pada  suhu  30ºC selama satu malam. Prekultur diambil sebanyak  30  μL  dan  dimasukkan  ke setiap Erlenmeyer berisi media 30 mL mewakili    jam  0,  6,  12,  24,  48,  72,  96, 120,  dan  144.  Kultur  dikocok  pada kecepatan 200 rpm suhu 30°C selama 6  hari.Pemanenan  sel  dilakukan berdasarkan  waktu  yang  telah ditentukan.Pengukuran pertumbuhan bakteri  selulolitik  dapat  dilakukan dengan  Spektrofotometer  dengan panjang gelombang 660 nm.
Pengukuran
Aktivitas Enzim

## Selulase
Sebanyak 5 ml substrat CMC dan avicel  ditambahkan  5  ml  enzim ekstrak  kasar.  Untuk  substrat  kertas saring,  sebanyak  2,5  potong  kertas saring  1  x  6  cm2  ditambahkan  2,5  ml buffer  dan  5  ml  enzim  ekstrak  kasar. Sebanyak 0,05 g substrat yang terpilih ditambahkan  5  ml  bufer  dan  5  ml enzim ekstrak kasar. Setelah itu reaksi dihentikan  dengan  menambahkan  50 μl  NaOH  0,2  M  atau  dengan menginkubasinya  pada  suhu  100°C selama 15 menit. Untuk substrat CMC campuran substrat-enzim dipindahkan sebanyak 2 ml ke dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 2 ml DNS dan segera diinkubasi pada suhu  100°C  selama  15  menit. Sebanyak 1 lembar kertas saring 1 x 6 cm2  dan  3  ml  larutannya  (enzim ekstrak kasar dan bufer) dipindahkan ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  2  ml  DNS  kemudian segera  diinkubasi  pada  suhu  100°C selama 15 menit. Setelah selesai waktu inkubasi  campuran  substrat  segera ditambahkan  50  μl  NaOH  0.2  M.
Seluruh  sampel  diukur  dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 540 nm.Konsentrasi substrat  tiap  Erlenmeyer  adalah  1% (b/v) kecuali avicel 2% (b/v).Perhitungan  aktivitas  enzim selulase adalah sebagai berikut :
𝐴𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝐸𝑛𝑧𝑖𝑚 𝑠𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑒 = (𝑐 𝑥 2 𝑥 𝑝 𝑥 1000)
(𝑡 𝑥 𝐵𝑀) Keterangan : C  = konsentrasi enzim P  = faktor pengenceran T  = waktu BM= berat molekul

## Penelitian Tahap 2
Menentukan  Jenis  Substrat  Terbaik untuk Pengemban Isolat Terpilih Setelah  didapatkan  isolat  terpilih maka  tahapan  selanjutnya  adalah menumbuhkan  isolat  tersebut  pada dedak,  onggok,  bungkil  inti  sawit (BIS),  daun  Jagung,  dan  kulit kopi.Peubah  yang  diamati  pada penelitian  ini  antara  lain  adalah  pH dengan menggunakan pH meter, dan total  mikroba  menggunakan  colony counter.

## Penelitian tahap 3
Menentukan  Jenis  Substrat  Terbaik untuk  Pengemban  Isolat  Terpilih Dilihat dari Daya Simpan Penelitian  tahap  ketigapenentuan daya tahan isolat tersebut pada media terbaik    dari  hasil  penelitian    pada tahap  kedua.Penelitian  tahap  ketiga menggunakan rancangan acak lengkap pola faktorial 2 x 5 dengan 3 ulangan. Faktor I adalah 2 level suhu yaitu  4 0 C  (suhu  lemari  es)  dan  27 0 C (suhu  kamar).  Faktor  II  adalah  lama penyimpanan  yaitu  0,  2,  4,  6  dan  8 minggu.  Data  dianalisis  dengan menggunakan  analisis  ragam  dari RAL  pola  faktorial  (Steel  dan Torrie,1993). Perbedaan antar
perlakuan  diuji  dengan  uji  jarak berganda Duncan (DMRT).

## Hasil Dan Pembahasan
Penelitian Tahap Pertama
Isolasi Bakteri Selulolitika. Morfologi Sel
Isolasi bakteri selulolitik menggunakan  substrak  CMC  telah berhasil didapatkan 12 isolat.Berdasarkan hasil dari pengamatan  morfologi  koloni  bakteri secara  rinci  dapat  dilihat  pada  Tabel 1.

## Tabel 1. Isolasi Bakteri Selullolitik Berdasarkan Morfologi
No Kode Sampel Morfologi Tepian Elevasi 1 VR51 Seperti ikal rambut Berbukit-bukit 2 VR52 Seperti ikal rambut Seperti tombol 3 VR53 Seperti wol Seperti kawah 4 VR61 Siliat Seperti tetesan 5 VR62 Seperti ikal rambut Seperti tombol 6 VR63 Seperti wol Berbukit-bukit 7 VR71 Tidak beraturan Berbukit-bukit 8 VR72 Tidak Beraturan Berbukit-bukit 9 VR73 Seperti wol Seperti kawah 10 VR81 Seperti ikal rambut Seperti tombol 11 VR82 Seperti ikal rambut Seperti tetesan 12 VR83 Siliat Seperti kawah Berdasarkan hasil dari pengamatan morfologi koloni bakteri  pada  media  CMC  memiliki bentuk  morfologi  yang  berbeda- beda.  Bentuk  tepian  seperti  ikal rambut lebih dominan dibandingkan dengan bentuk tepian tidak  beraturan,  seperti  wol,  seperti benang,  siliat  dan  tidak  beraturan. Sedangkan bentuk morfologi elevasi lebih  dominan  berbentuk  berbukit- bukit dibandingkan dengan berbentuk Tombol.Perbedaan  ini  disebut dengankarakteristik kulturyang dapat digunakansebagai dasar untuk memisahkanbakteridalam kelompok  taksonomik.  Menurut Aninditia  dkk.,  (2013)  bahwa  Isolat bakteri yang diamati secara
morfologi  koloni  dapatdilihat  dari bentuk  koloni,  warna,  tepian  dan elevasi.  Selanjutnya  Menurut  Breed dkk.,  (1957)  Koloni  bakteri Bacillus bersifat  aerobik  sampai  fakultatif anaerobik,  berbentuk  koloni  kasar, tidak  dapat  ditembus  cahaya, pertumbuhan  tidak  merata,  terjadi
kekeruhan, permukaan halus, lembut  dan  tipis,  opaque,  berwarna kuning sampai jingga coklat.

## Uji Pewarnaan Gram
Penentuan  karakterisasi  isolat bakteri  meliputi  uji  selulolitik (screening) dan pewarnaan gram. Uji selulolitik dilakukan dengan mengkarakterisasi
isolatemenggunakan  media  tumbuh differensial  yakni  CMC  ( Carboxyl Methyl  Cellulose ).  Isolat  bakteri dikatakan  sebagai  pendegradasi selulosa  apabila  dapat  membentuk zona  bening  pada  media  CMC
tersebut.Isolat positif terhadap selulosa  selanjutnya  dikarakterisasi dengan pewarnaan Gram. Identifikasi  pewarnaan  Gramadalah salah satu prosedur yang palingbanyak digunakan untuk
membedakandua  kelompok  besar bakteri, yaitu Grampositif dan Gram negatif.  Pada  saatpewarnaan  Gram, bakteri  yang  tetapberwarna  ungu digolongkan  ke  dalamGram  positif,
sedangkan  bakteriberwarna  merah digolongkan  ke  dalamGram  negatif (Pratiwi, 2008). Selanjutnya menurut Safika  dkk.,  (2017)  Bakteri  gram positif  akan  menunjukkan  warna biru  keunguan  (violet),  sedangkan bakteri gram negatif akan menunjukkan  warna  merah  muda ketika  diamati  melalui  mikroskop.
Hasil  penelitian  dapatdilihat  pada Gambar 1.
Gambar 1.  Hasil Pengamatan Uji Pewarnaan Gram
Hasil  pengamatan  untuk  semua isolat  menunjukkan  bahwa  bakteri selulolitik  asal  saluran  pencernaan rayap  bersifat  gram  positif  (+).  Hal ini  sesuai  dengan  pendapat  Wenzel dkk., (2002) bahwa saluran pencernaan rayap (Zootermopsis angusticollis) mengandung  bakteri Gram-positif. Kelompok Actinomycetes ordo Actinomycetales yang meliputi genus Cellulomonas/Orskovia ,
Microbacterium dan Kocuria, serta bakteri  Gram-positif  dari  ordo
Bacillales yang  meliputi  genus Bacillus, Brevibacillus dan Paenibacillus .
Perbedaan  warna  antara  bakteri Gram  positif  dan  bakteri  Gram negatif  disebabkan  perbedaan  pada struktur,  komposisi  dinding  sel bakteri, dan perbedaan permeabilitas diantara kedua kelompok  dinding  sel  bakteri. Kompleks ungu kristal-iodium, yang telah  memasuki  dinding  sel  selama langkah awal dalam proses pewarnaan,  dapat  diekstraksi,  oleh sebab  itu  organisme  Gram  negatif kehilangan  warna  tersebut  maka terbentuk warna merah pada media. Kandungan  lipid  yang  lebih  rendah sehingga  dinding  sel  bakteri  Gram positif  menjadi  terdehidrasi  selama perlakuan  dengan  etanol.Ukuran pori-pori mengecil, permeabilitasnya berkurang,  dan  kompleks  ungu kristal-iodium
tidak dapat terekstraksi  (Pelczar  dan  Chan,
2006).

## Identifikasi Bakteri Selulolitik
secara Kualitatif Hasil penelitian indeks selulolitik  (zona  bening)  dari    isolat bakteriselulolitik asal saluran pencernaan rayap dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel2. Indeks Selulolitik (IS) dari  Isolat Bakteri Asal Saluran Pencernaan Rayap
No Kode Isolat IS (CMCase) (mm) 1 VR51 1,08 2 VR52 2,53 3 VR53 1,57 4 VR61 3,50 5 VR62 1,43 6 VR63 0,68 7 VR71 0,60 8 VR72 0,75 9 VR73 1,86 10 VR81 2,50 11 VR82 2,41 12 VR83 1,86
Dari Tabel 2 dapat dilihat bahwa indeks  selulolitik  tertinggi  pada isolate  VR61  yaitu  3,50  mm selanjutnya  secara  berurutan  pada isolate  VR52  yaitu  (2,53  mm),  VR81 yaitu  (2,50),  VR82  yaitu  (2,41  mm), VR73  yaitu  (1,86  mm),  VR83  yaitu (1,86  mm),  VR53  yaitu  (1,57  mm), VR62  yaitu  (1,43  mm),  VR51  yaitu (1,08  mm),  VR72  yaitu  (0,75  mm), VR63  yaitu  (0,68  mm)  dan  VR71 yaitu  (0,60  mm).  Dari  ke-12  isolat dipilih  tiga  isolat  dengan  indeks selulolitik  tertinggi.  Tiga  Isolat bakteri selulolitik diantaranya VR61, VR52  dan  VR81  menunjukkan aktivitas bakteri selulolitik yang baik dibandingkan isolat lainnya.
Menurut  Ochoa-Solano  dan
Olmos-soto (2006), menyatakan bahwa  isolat  yang  menghasilkan
diameter  zona  bening  dua  kali diameter koloni merupakan produksi enzim potensial.  Beberapa faktor yang mempengruhibesar hasil akhir  yang  diperoleh  pada  proses degradasi  diantaranya  yaitu  pH, akses  terhadap  karbon  (kecocokan konformasi  enzim  dengan  subtrat), reaksi  redoks  yang  terjadi  dan konsentrasi  produk  (Ambriyanto, 2010).  Potensi  selulolitik  juga  dapat diketahui  dalam  mensekresikan enzim  selulase  melalui  pengujian indeks  selulolitik  berdasarkan  zona bening yang terlihat disekitar koloni bakteri  yang  tumbuh  pada  medium ( Carboxy  methyl  cellulose )  CMC, (Zahidah  dan  Shovitri,  2013).Hasil pengamatan  indeks  zona  bening tersaji pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil Pengamatan Zona Bening pada Isolat Terpilih
Indeks  zona  bening  yang terbentuk  pada  penelitian  ini  lebih kecil dibandingkan dengan penelitian yang dilakukan oleh Budi, dkk.,  (2016)  yang  mengisolasi bakteri selulolitik dari tanah menghasilkan  zona  bening  tertinggi yaitu 45,59 mm. Sedangkan Menurut Dar,  dkk.,  (2015)  bahwa    zona bening  yang  dihasilkan  oleh  bakteri selulolitik yang memiliki diameter di atas  4  cm  dapat  dikategorikan tingkat  degradasiyang  dihasilkan tinggi  sedangkan  degradasi  yang rendah berada di kisaran 0,5–1,9 cm dan  sedang  2,0–3,9  cm.  Menurut Zverlova  dkk.  (2003)menyebutkan bahwa  zona  bening  yang  terbentuk terkait dengan kelarutan dari enzim selulase.  Semakin  tinggi  tingkat kelarutan suatu enzim maka
akansemakin  besar  zona  bening yang terbentuk.
Identifikasi  Bakteri  Selulolitik secara Kuantitatif. Kurva Pertumbuhan Bakteri Dari12  isolat  yang  terpilih dilihat  dari  zona  bening  tertinggi diperoleh  3  isolat  dengan  zona bening  yang  tertinggi  yaitu  VR52, VR61  dan  VR  81  untuk  diuji  lebih lanjut  pada  tingkat  pertumbuhan dan  aktivitas  enzimnya.  Dari  hasil ini  juga  dapat  ditentuken  suatu bakteri  dapat  digunakan  sebagai bibit  ( inokulum )  karena  memiliki pertumbuhan  yang  optimal.Hasil penelitian  pertumbuhan  bakteri selulolitik  asal  saluran  pencernaan rayap dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar3 . Kurva Pertumbuhan Bakteri Selulolitik
Dari  kurva  pada  Gambar  3  dapat dilihat  bahwa  tingkat  pertumbuhan bakteri yang maksimum pada isolate VR61  selanjutnya  isolat  VR52 danVR81. Pertumbuhanbakteri dengan  memanfaatan  ketersediaan nutrisi  sebagai  sumber  karbon dalam  media  akan  menentukan perubahan dan kecepatan pertumbuhan  pada  suatu  isolate. Apabila  sumber  karbon  yang berbeda dalam media maka
pertumbuhan  bakteri  juga  akan berbeda.
Fase adaptasi pada ketiga isolate berlangsung  hingga  ke  8  jam
0,000 0,500 1,000 1,500 2,000 2,500 3,000 8 16 24 32 40 48 56 64 72 80 88 96 104112 VR52 VR61
VR81
selanjutnya  fase  exponensial  pada isolate  VR52  dan  VR81  berlangsung dari  ke  8  jam  hinggake  56  jam sedangkan  pada  isolate  VR61 berlangsung  dari  ke  8jam  hinggake 64jam. Fase statis pada isolate  VR52 dan  VR81  berlangsung  padake  56 jam  sedangkan  pada  isolate  VR61 berlangsung  pada  ke  64    jam.  Fase kematian  pada  isolate    VR52  dan VR81  berlangsung  darike  56  jam hinggake  80    jamsedangkan  isolate VR61  berlangsung  darike  64jam hinggake 80  jam.
Fase  eksponensial  ketiga  isolat tersebut pertumbuhan
bakteri selulolitik  ( Bacillus  sp )  berlangsung dengan  penyesuaian  diri  dengan media  tumbuhnya  sehingga  secara bertahap  mulai    memanfaatkan glukosa  sebagai  sumber  karbon yang  lebih  sederhana.  Menurut Kosim    (2010),    fase    logaritma merupakan    fase    dimana    bakteri mengalami  pertumbuhan      yang sangat      cepat      dan      dapat dikatakan   pada   fase   ini   bakteri mengalami pertumbuhan
eksponensial,   sehingga   kebutuhan energi   bakteri Bacillus  subtilis pada fase  ini  lebih  tinggi  dibandingkan fase  lainnya.
Pada penelitian ini fase stasioner berada  pada  ke  56jam  hinggake 64jam.  Pada fase ini jumlah populasi sel  tetap  karena  jumlah  sel  yang tumbuh  sama  dengan  jumlah  sel yang  mati.  Ukuran  sel  pada  fase  ini
lebih  kecil  karena  sel  tetap membelah  meskipun  zat  nutrisi sudah habis. Karena kekurangan zat nutrisi,  maka  kemungkinan  sel tersebut  mempunyai  komposisi berbeda  dengan  sel  yang  tumbuh pada  fase  logaritma  .Pada  fase  ini sel-sel menjadi lebih tahan terhadap keadaan  media  tumbuhnya  secara perlahan  bakteri  mulai  masuk  pada fase kematian.
Fase  kematian  jumlah  populasi bakteri  semakin  berkurang  karena persaingan  zat  makanan  antar bakteri.Menurut  Baker  dkk.,  (2004)
Pertumbuhan bakteri dengan memanfaatan  ketersediaan  nutrisi sebagai sumber karbon dalam media akan  menentukan  perubahan  dan kecepatan  pertumbuhan  pada  suatu isolat.  Apabila  sumber  karbon  yang berbeda dalam media maka pertumbuhan  bakteri  juga  akan berbeda.

## Aktivitas Enzim Selulase dari Isolat Terpilih
Degradasi  selulosa  merupakan hasil  kerja  tiga  komponen  enzim secara  sinergis,  yaitu endoglukanase, eksoglukanase, dan β-glukosidase (Lynddkk.,  2002).  Hasil  pengukuran aktivitas  enzim  selulase  yang dihasilkan  dari  bakteri  selulolitik menggunakan spektrofotometer pada  panjang  gelombang  540µ/mL dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4 . Kurva Aktivitas Enzim Selulase
Dari  kurva  pada  Gambar  4 dapat  dilihat  bahwa  aktivitas  enzim selulase dari ketiga isolat menunjukkan bahwa aktivitas enzim maksimum  pada  isolate  VR61 ( Bacillus sp ) dengan aktivitas enzimnya  (19,91µ/mL)  yang  terjadi pada  pengukuran  ke  9  yaitu  ke  72 jam.  Selanjutnya  diikuti  isolate VR52  ( Bacillus  sp )  dengan  aktivitas enzimnya  (17,81  µ/mL)  dan  isolate VR81  ( Bacillus  sp )  dengan  aktivitas enzimnya (17,04 µ/mL). Hal tersebut menunjukkan  bahwa  pertumbuhan bakteri  selululolitik  ( Bacillus  sp )  dan kemampuannya untuk menghasilkan enzim selulase
tertinggi  pada  pengukuran  ke  8 hingga pengukuran ke 9 yaitu  pada ke  64  jam  hingga    ke  72  jam. Aktivitas  enzim  hingga  ke  16  jam pada  isolate  VR52  dan  VR61  belum mengalami peningkatan secara derastis  namun  pada  isolate  VR81 mulai  meningkat  pada  titik  awal.
Peningkatan aktivitas enzim selulase ketiga  isolat  mulai  terlihat  pada  ke 16  jam  hingga    ke64  jam  sampai  ke 72  jam.  Aktivitas  enzim  sejalan dengan  laju  pertumbuhan  bakteri,
pada fase logaritma laju pertumbuhan  bakteri  sangat  cepat sehingga jumlah enzim yang dihasilkan ikut meningkat. Menurut
Sulistyaningtyas  dkk.,  (2013)  bahwa ketika pertumbuhan
bakteri mengalami  peningkatan  dan  sangat efektif  dalam  mensintesis  enzim secara maksimal. Selain itu menurut Ward  (1983)  menyatakan  bahwa pembentukan enzim mulai
meningkat    memasuki    fase eksponensial    dan  meningkat  lebih cepat  ketika  akan  memasuki  fase stasioner.
Hasil pengukuran aktivitas enzim selulase sejalan dengan kurva pertumbuhan  bakteri  selulolitik.
Sesuai  dengan  pendapat  Fardiaz (1988) bahwa produksi enzim dalam suatu bioproses memerlukan beberapa  faktor,  antara  lain  jenis mikroba,  kurva  pertumbuhan,  dan kondisi optimum untuk meningkatkan aktivitas enzim.
Selanjutnya  menurut  Wang  (2004) bahwa  suhu  optimal  konformasi enzim berada dalam keadaan paling sesuai  berikatan  dengan  substrat sehingga  enzim  lebih  aktif  dalam mengkatalisis reaksi.Berdasarkan hasil  penelitian  Tahap  pertama dapat  diambil  kesimpulan  bahwa isolate dengan kode VR61
merupakan  isolate  terpilih  yang akan  digunakan  untuk  sumber bakteri selulolitik ( Bacillus sp ).
0,000 5,000 10,000 15,000 20,000 25,000 8 16 24 32 40 48 56 64 72 80 88 96 104 112 VR52 VR61 VR81 ak ti vi ta s s el u la se ( U/ ml ) waktu inkubasi (jam)
Penelitian tahap ke 2 Menentukan Jenis Substrat Terbaik untuk Pengemban Isolat Terpilih Hasil  penelitian    jenis  substrat terbaik  untuk  pengemban  isolat
terpilih  dari  limbah  pertanian  dan perkebunan  yang  dilihat  dari  total mikroba  dan  nilai  pH  dapat  dilihat pada Tabel 3:

## Tabel 3.Pengaruh Jenis Substrat terhadap Total Bakteri selulolitik dan pH pada Substrat
Perlakuan Peubah yang Diamati Total Mikroba (10 9 CFU/mL) Ph Dedak 202 a 6,59 a BIS 105 b 6,59 a Daun Jagung 79 b 6,62 a Kulit Kopi 89 b 6,05 b Onggok 86 b 6,30 ab
Ket : Superskrip huruf yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan berbeda nyata (P<0.05)
Berdasarkan analisis ragam menunjukkan  bahwa  perlakuan substrat  menunjukkan  hasil  yang berbeda  nyata  (P<0,05)  terhadap total  bakteri.Uji  lanjut  Duncan menunjukkan  bahwa  substrakdedak berbeda  nyata  (P<0.05)  terhadap substrak BIS, daun jagung, kulit kopi dan  onggok  yang  diberi  isolate terpilih  (VR61),  sedangkan  substrak BIS,  daun  jagung,  kulit  kopi  dan ongok tidak berbeda nyata (P>0,05). Pada  Tabel  4  juga  dapat  dilihat bahwa jumlah mikroba yang tumbuh  pada  substrak  dedak  lebih tinggi (2,02 x10 11 CFU/gr)
dibandingkan  dengan  substrak  BIS (1,05  x  10 11 CFU/gr),  daun  jagung (7,9  x 10 11 CFU/gr), kulit kopi (8,9 x
10 10 CFU/gr) dan onggok (8,6 x 10 10 CFU/gr).Hal  ini  diduga  karena jumla  kandungan  nutrisi  yang tersedia  untuk  media  tumbuh bakteri  selulolitik  pada  dedak  padi lebih  tinggi  jika  dibandingkan dengan BIS, daun jagung, kulit kopi dan  onggok.Menurut  Wiznadkk., (2009)  bahwa  dalam  dedak  padi
sebagai pengemban probiotik terdapat40 x 10 22 CFU/gram Bacillus amyloliquefaciens  dalam  bentuk spora.
Pertumbuhan bakteri membutuh kan  air,  nitrogen,  karbon,  vitamin dan  mineral  yang  ada  pada  suatu bahan  sebagai  media  tumbuhnya. Nutrisi  yang  diperlukan  antara  lain adalah  karbon  yang  ditemukan dalam bentuk CO, metana, karbohidrat kompleks maupun karbohidtrat sederhana (Rahayu dan
Nurwitri  ,  2012).  Menurut  Lu  dan Luh  (1991)  Karbohidrat  utama  di dalam dedak padi adalah hemiselulosa  8,7-11,4%,  selulosa  9- 12,8%,  Protein  11-12%,  pati  5-15% dan  β-glucan  1  persen.Sedangkan menurut  Lubis  dkk.,  (2002)  bahwa komposisi  kimia  bededak  padi cukup  tinggi:  protein  11,3-14,4%, lemak  15,0-19,7%,  serat  kasar  7,0- 11,4%,  karbohidrat  34,1-52,3%  dan abu  6,6-9,9%.  Kandungan  nutrisi bungkil  inti  sawit  protein  kasar 11,03%,  serat  kasar  14,76%,  lemak kasar  13,67%,  dan  kandungan  abu
3,48%  (Yana  dkk.,  2013).  Kulit  buah kopi  mengandung  selulosa  sebesar 41,26% (Luluk dkk., 2014). Sedangkan  menurut  sumihati  dkk.,
(2011)  kulit  kopi  mengandungserat kasar  18,69%;  tanin  2,47%;  kafein 1,36%;  lignin  52,59%;  lemak  1,07%; abu  9,45%.  Kandungan  selulosa onggok  sekitar  39,37%  (Wicaksono dkk,  2013).  Menurut  Samsul  Bahri (2015)  kandungan  selulosa  daun jagung  berkisar  antara    38,66  - 45,33%  dan  kandungan  lignin berkisar antara 2 -8%.
Degradasi selulosa akanmelibatkan  kompleks  enzim selulase  yang  dihasilkan  oleh mikroba  selulolitik  (Wainwright, 2002), yaitu endo-beta-glucanase dan beta glucosidase . Menurut
Sudirman  (2011)  bahwa  disamping sumber  mikroba  yang  menentukan aktifitas    pencernaan  serat,  juga sangat  ditentukan  oleh  media tumbuh  bakteri,  dosis  inokulum, keseragaman  jenis,  dan    populasi bakteri    yang    digunakan.  Pardede (1994)  menyatakan  bahwa  dedak padi  memberikan  prioritas  bagi medium fermentasi, karena mengandung protein
orizenin (protein  dengan  nilai  gizi  tinggi karena  banyak  mengandung  asam amino  essensial)  dan  mengandung asam  lemak  tak  jenuh  yang  relatif tinggi  (asam  lemak  oleat,  linoleat dan palmitat).
Selanjutnya  menurut  Pardede (1994)  bahwa  dedak  padi  dapat digunakan  sebagai  substrat  dalam fermentasi  medium  karena  dedak merupakan sumber vitamin B dan E, serta berbagai mineral seperti K, Ca, P, Mg, dan Fe. Selanjutnya dikatakan bahwa  dedak  padi  mengandung protein  13,30%,  lemak  15,80%,  abu
10,40%,  dan  karbohidrat  50,80% serta mengandung beberapa mineral dan  vitamin  seperti  Ca,  P,  Na, tiamin, riboflafin, dan niasin.
Pada  Tabel  3  memperlihatkan bahwa  nilai  pH  pada  penggunaan isolate terpilih  pada substrak dedak tidak berbeda nyata (P>0.05)
terhadap  isolate  pada  substrak bungkil  inti  sawit, daun jagung dan onggok,  tetapi  berbeda  nyata (P<0.05)  terhadap  isolat kulit kopi.Sedangkan  nilai  pH  pada substrak  BIS,  kulit  kopi  dan  ongok tidak  berbeda  nyata.  Nilai  pH substrak  terendah  pada  kulit  kopi (6,05)  selanjutnya  secara  berurutan BIS  (6,23),  onggok  (6,30),  dedak (6,59)  dan daun jagung (6,62).
Nilai  pH  pada  penelitian  ini berkisar  antara  6,05  -  6,62.  Hal  ini sejalan  dengan  penelitian  Howard dkk.,  (2003)  bahwa  bakteri Bacillus sp dapat  tumbuh  pada  media  yang mempunyai  pH  pada  kisaran  5 sampai  7.Hasil  penelitian  Wizna., dkk (2012) nilai pH pada pengemban bekatul yang ditumbuhkan  oleh  bakteri Bacillus amyloliquefaciens sebagai  probiotik yaitu  6,34.Nilai  pH  pada  hasil penelitian  ini  masih  dalam  kisaran normal  sehingga  bakteri  selulolitik dapat tumbuh dangan baik meskipun jumlahnya berbeda antara masing-masing substrak.Pada penelitiantahap kedua ini disimpulkan  bahwa  substrak  dedak lebih baik untuk dijadikan pengemban  dibandingkan  dengan daun  jagng,  bungkil  inti  sawit, onggokdan  kulit  kopi  sehingga dedak padi ini akan dijadikansebagai  pengemban  dan akan  diukur  viabilitasnya  pada tahap ketiga.
Penelitian Tahap Ketiga
Pengemban  Isolat  Terpilih  Dilihat dari Daya Simpan Beberapa faktor yang mempengaruhi  pertumbuhan  dan aktivitas enzim yang dihasilkan oleh suatu  bakteri  pada  penyimpanan suatu  subtrak.salah  satunya  adalah
suhu  dan  pH.pada  penelitian  ini telah  diperoleh  hasil  daya  simpan pengemban  isolat  terpilih  pada substrak  (dedak  padi)  yang  di  uji dengan  pengukuran  pH  dan  total plate count (TPC) yang dapat dilihat pada Tabel 4 dan Tabel 5.
Tabel 5.Total Plate Count  pada Substrak Dedak Padi dengan Penyimpanan Suhu 27°C dan 4°C.
Faktor A Faktor B Total  Rataan B0 B1 B2 B3 B4 A0 266.88 a 76.63 d 65,85 d 63,70 de 35,38 e 508,43  101,7 a A1 266.88 a 197,80 ab 167,85 b 141,83 bc 120,25 c 894,60  178,92 b Total 533.75 274,43 233,70 205,53 155,63 Rataan 266.88 a 137,21 de 116,85 cd 102,76 c 77,81 b
Ket: A0: Suhu Penyimpanan 27 0 C, A1: Suhu Penyimpanan 4 0 C, B0 : Lama Penyimpanan 1 Minggu, B1  :  Lama  Penyimpanan  2  Minggu,  B2  :  Lama  Penyimpanan  4  Minggu,  B3  :  Lama Penyimpanan 6 Minggu, B4 : Lama Penyimpanan 8 Minggu
Tabel 5.pH  pada Substrak Dedak Padi dengan Penyimpanan Suhu  27°C dan 4°C.
Faktor A Faktor B Total Rataan B0 B1 B2 B3 B4 A0 6,63 a 6,24 e 6,05 e 5,90 f 5,81 g 30,62 6,12 a A1 6,63 a 6,46 b 6,39 c 6,25 d 6,22 e 31,95 6,39 b Total 13,26 12,70 12,44 12,15 12,03 Rataan 6,63 a 6,35 b 6,22 c 6,07 d 6,01 e
Ket: A0: Suhu Penyimpanan 27 0 C, A1: Suhu Penyimpanan 4 0 C, B0 : Lama Penyimpanan 1 Minggu, B1  :  Lama  Penyimpanan  2  Minggu,  B2  :  Lama  Penyimpanan  4  Minggu,  B3  :  Lama Penyimpanan 6 Minggu, B4 : Lama Penyimpanan 8 Minggu.

## Berdasarkan analisis ragam pada
Tabel  4  dapat  dilihat  bahwa  isolat terpilih  dengan  bahan  pengemban dedak padi serta lama penyimpanan dan suhu yang berbeda
menunjukkan  pengaruh  nyata  pada total  mikroba.  Pada  tabel  dapat dilihat bahwa pada suhu 27 0 C rataan mikroba  yang  teridentifikasi  lebih sedikit (101,7 x 10 9 CFU/gr)
dibandingkan  dengan  pada  suhu 4 0 C  (178,92  x  10 9 CFU/gr).  Hal  ini dikarenakan  pada  suhu  4 0 C  isolat mikroba  masih  dalam  keadaan
dorman  artinya  aktivitas  metabolic bakteri  melambat  sehingga  jumlah mikroba  yang  teridentifikasi  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  pada suhu  27 0 C.  Sesuai  dengan  pendapat Bilang  dkk.,  (2018)  tekanan  osmotik selama masa penyimpanan, membuat  bakteri  dalam  keadaan dorman atau tidur yang
menyebabkan  bakteri  tidak  mampu melakukan  aktifitas  metabolisme selama  proses  penyimpanan  pada suhu 4 0 C.
Pada  Tabel  4  dapat  dilihat bahwa daya simpan  substrak dedak padi sebagai pengemban  pada suhu 27 0 C  hasil  tertinggi  pada  lama penyimpanan  0  hari  diperoleh jumlah  bakteri  266,88  x  10 9 CFU/gr; selanjutnya  di  ikuti  pada  lama penyimpanan  2  minggu  14  hari diperoleh  jumlah  baktri  76,63  x 10 9 CFU/gr;  lama  penyimpanan  4 minggu(28  hari)  diperoleh  jumlah bakteri  65,85  x  10 9 CFU/gr;  lama penyimpanan  6  minggu  (42  hari) diperoleh  jumlah  bakteri  63,70  x 10 9 CFU/grdan lama penyimpanan 8 minggu  (56  hari)  diperoleh  jumlah bakteri  35,38  x  10 9 CFU/gr.  Substrak dedak  padi  dapat  disimpan  sampai dengan  minggu  ke  8.  Selama penyimpanan  dikarenakan  tidak semua bakteri dapat bertahan hidup pada kondisi suhu tersebut, beberapa bakteri mempunyai tingkat viabilitas  yang  berbeda  dimana bakteri  yang  viabilitas  rendah  akan lebih cepat mengalami kematian dan beberapa  yang  lain  akan  tetap bertahan  hidup.  Menurut  Akalin dkk. (2004) menyatakan bahwa tidak semua  bakteri  mempunyai  daya tahan yang sama selama penyimpanan. Pada lama penyimpanan  minggu  ke  6  dan minggu  ke  8  pada  suhu  27 0 C pengemban isolatpada
sustrak dedak  padi  telah  memasuki  fase stasioner  dan  menuju  fase  kematian sehinggi  jumlah  bakteri  yang terkandung pada isolate lebih sedikit dari sebelumnya.
Rata-rata  jumlah  bakteri  pada substrak  pada  penelitian  yang disimpan  pada  suhu  27 0 C    dari  0 hari sampai dengan minggu ke 8 (56 hari) diperoleh hasil 101,7x 10 9 CFU/gr. Menurut Rahayu, (2013) suhu yang tinggi akan
meningkatkan  energi  kinetik  dari enzim,  sehingga  gerakan  vibrasi, rotasi, dan substrat akan meningkat. Pada  keadaan  tersebut  tumbukan yang  terjadi  antara  enzim  dengan substrat  juga  tinggi,  sehingga produk  yang  dihasilkan  pun  tinggi. Menurut  Wang  dkk.,  (2010)  pada suhu  optimal  konformasi  enzim berada dalam keadaan yang berikatan  dengan  substrat  sehingga enzim lebih aktif dalam mengkatalisis reaksi.
Daya  simpan  substrak  dedak padi sebagai pengemban  pada suhu 4 0 C  hasil  tertinggi  pada  lama penyimpanan  0  hari  diperoleh jumlah  bakteri  266,88  x  10 9 CFU/gr; selanjutnya  sampai  dengan  lama penyimpanan ke 8 minggu (56 hari) diperoleh  jumlah  bakteri  120,25  x 10 9 CFU/gr.Semakin lama penyimpanan jumlah bakteri selulolitik pada sustrak akan semakin berkurang.
Substrak  dedak  padi  dapat disimpan sampai dengan minggu ke 8 pada suhu 4 0 C, namun pada lama penyimpanan  samapai  minggu  ke  8 terjadi  penurunan  jumlah  bakteri sebesar  146,63  x  10 9 CFU/gr.Rata- rata  jumlah  bakteri  pada  substrak pada penelitian yang disimpan pada suhu 4 0 C  dari 0 hari sampai dengan minggu ke-8(56 hari) diperoleh hasil 178,92  x  10 9 CFU/grlebih  besar dibandingkan  dengan  penyimpanan pada  suhu  37 0 C  sebesar  101,7  x
10 9 CFU/gr. Meskipun jumlah bakteri mengalami penurunan selama  penyimpnan  namun  jumlah tersebut  masih  dalam  keadaan standar  minimal  jumlah  bakteri.
Hasil Total  Plate  Count (TPC) pada  penelitian  ini  berkisar  antara 35,38  x  10 9 CFU/grsamapai  dengan 266,88  x  10 9 CFU/gr.  Menurut
Svensson (1999) dan Vinderolla., dkk
(2000)  menyatakan  bahwa  suatu medium pembawa probiotik minimal mengandung mikroba probiotik  sebanyak  10 6 –10 8 CFU/gr atau  10 8 –10 10 CFU/gr  pada  preparat kering.
Berdasarkan analisis ragam pada Tabel  5  dapat  dilihat  bahwa  isolat terpilih  dengan  bahan  pengemban dedak padi serta lama penyimpanan dan suhu yang berbeda
menunjukkan  pengaruh  nyata  pada nilai pH. Pada Tabel 5 dapat dilihat bahwa  pada  suhu  27 0 C  rataan  pH yang  teridentifikasi  lebih  rendah (6,12)  dibandingkan  dengan  pada suhu 4 0 C (6,39). Hal ini dikarenakan pada suhu 4 0 C isolat mikroba masih dalam  keadaan  dorman  artinya aktivitas metabolik bakteri melambat sehingga pH pada
substrak  dedak  sebagai  inokulan yang  teridentifikasi  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  pada  suhu 27 0 C.  Nilai  pH    sejalan  dengan jumlah  bakteri  selulolitik  pada penyimpanan  suhu  4 0 C  dan  27 0 C selama masa penyimpanan.
Pada  Tabel  5  dapat  dilihat bahwa  pH  terendah  substrak  dedak padi sebagai pengemban pada suhu 27 0 C  pada  lama  penyimpanan  8 minggu  (56  hari)  pH  yaitu  5,81; selanjutnya  di  ikuti  pada  lama penyimpanan  6  minggu  (42  hari) nilai  pH  5,90;  lama  penyimpanan  4 minggu (28 hari) nilai pH yaitu 6,05; lama  penyimpanan  2  minggu  (14 hari)  nilai  pH  yaitu  6,24  dan  lama penyimpanan 0 hari pH yaitu6,63.Substrak dedak padi dapat
disimpan sampai dengan minggu ke
8,  namun  pada  lama  penyimpanan minggu ke 2 mulai terjadi penurunan  pH  hingga  minggu  ke8. Hal  ini  sejalan  dengan  jumlah bakteri pada substrak pada
penyimpanan  minggu  ke6,  semakin banyak  sedikit  jumlah  bakteri selulolitik  asal  saluran  pencernaan rayap  pada  substrak  dedak  padi maka  pH  pada  substrak  juga  akan semakin rendah. Hal ini dikarnakan bakteri  yang  telah  mengalami kematian  bersifat  asam  sehingga dapat  menurunkan  nilai  pH  pada substrak.Rata-rata pH substrak pada penelitian yang disimpan pada suhu 27 0 C    dari  0  hari  sampai  dengan minggu ke 8 (56 hari) diperoleh hasil 6,12.Menurut    Rahayu  dkk.,  (2012) menyatakan  bahwa  setiap  jenis mikroba  mampu  tumbuh  dalam kisaran  pH  4,0  hingga  10,5  dan  pH optimum  yang  berbeda.  Sedangkan menurut  pendapat  Suriani  dkk., (2013)  menyatakan  bahwa  kisaran optimum untuk pertumbuhan bakteri adalah antara 4 hingga 9.
Substrak  dedak  padi  dapat disimpan sampai dengan minggu ke 8 pada suhu 4 0 C, namun pada lama penyimpanan  samapai  minggu  ke  8 terjadi  penurunan  pH.Hal  ini ditandai  bahwa  bakteri  selulolitik telah berkurang jumlah dan aktivitasnya pada substrak sehingga banyak  bakteri  selulolitik  yang mengalami  kematian.Rata-rata  nilai pH  pada  substrak  pada  penelitian yang disimpan pada suhu 4 0 C  dari 0 hari sampai dengan minggu ke 8 (56 hari) diperoleh hasil 6,39 lebih tinggi dibandingkan  dengan  penyimpanan pada  suhu  27 0 C  yaitu  6,12.  Hal  ini diduga  karena  pada  suhu  4 0 C aktivitas  bakteri  selulolitik  pada
substrak  tidak  berlangsung  dengan baik  dibandingkan  dengan  aktivitas bakteri  pada  suhu  ruang  (27 0 C). sehingga  nilai  pH  pada  suhu  27 0 C lebih  rendah  dibandingkan  dengan suhu  4 0 C,  hal  ini  sejalan  dengan jumlah  bakteri  selulolitik  asal saluran  pencernaan  rayap  pada substrak dedak yang disimpan pada suhu 27 0 C dan 4 0 C selama 8 minggu.

## Kesimpulan
Berrdasarkan  hasisl  penelitian diatas, dapat disimpulkan bahwa:
1. Isolat  VR61merupakan  isolate bakteri  selulolitik  terpilih  yang diisolasi dari saluran pencernaan rayap  yang  memiliki  aktivitas enzim  selulase  yang  tertinggi yaitu 19,92 µ/mL.
2. Substrat  terbaik  sebagai  bahan pengemban  bakteri  selulolitik isolate VR61  adalah dedak padi.
3. Interaksi  terbaik  pada  substrak dedak  padi  sebagai  pengemban yaitu  pada  penyimpanan  suhu 4 0 C pada minggu kedua dengan jumlah  bakteri  197,8  x  10 9 CFU/gr  nilai  pH  6,46  dan minggu keempat dengan jumlah bakteri  167,85  x  10 9 CFU/gr dengan nilai pH 6,39.

## Saran
Perlu  dilakukan  uji  lanjutan untuk  aplikasi  bakteri  selulolitik dengan  bahan  pengemban  dedak padi  untuk  teknologi  pakan  ternak seperti  untuk  fermentasi  bahan pakan mengandung serat kasar yang tinggi terutama
mengandung selulosa yang tinggi.

## Daftar Pustaka
Agustini  dan  Luciasih.  2016.  Isolat dan  karakterisasi  enzimatis mikroba lignoselulolitik di  tiga
tipe ekosistem taman
nasional.  Jurnal  penelitian hutan  dan  konservasi  alam: 197-210. 2016.
Akalin  A.S,  F.  Serap  and  A.  Necati. 2004.  Viability  and  activity  of bifidobacteria in yoghurt containing fructooligosaccharide  during refrigerated storage. International  Journal  of  Food Science and Technology, 39(6):613-621(9). Aninditia  S.,  Anto  B.,  Endang  K.  2013. Isolasi dan karakterisasi morfologi koloni bakteri asosiasi alga merah (rhodophyta) dari  perairan kutuh  Bali.  Jurnal  Biologi, Volume  2  No  2,  April  2013. Hal.11-17.
Budi,  P.S.,  Gunam,  I.B.W  dan Anggraeni,  A.A.M.D.  2016. Uji  potensi  bakteri  selulolitik dari  lahan  pertanian  yang tercemar
pestisida.Jurnal
Rekayasa  dan  Manajemen
Agroindustri. 4(1): 31- 35.
Dar,  M.A.,  Pawar,  K.D.,  Jadhav  J.P., dan Pandit R.S. 2015. Isolation of  cellulolytic  bacteria  from the  gastrointestinal  tract  of achatina fulica (gastropoda: pulmonata) and their evaluation for cellulose biodegradation.  International Biodeterioration and Biodegradation. 98: 73–80.
Downie  B.  Hilhorst  HWM.  Bewley
JD.  1994.  A  New  assay  for quantifying endo- β-D- Mannanase  activying  using congo reddye. Pyhtochemistry 36: 829- 835.
Lynd  LR,  Weimer  PJ,  Van  Zyl  WH, Pretorius  IS.  2002.  Microbial
cellulose utilization: fundamentals and biotechnology.  Microbiology and Molecular Biology Reviews 66: 506-577. Lubis, S., R. Rachmat, Sudaryono., S. Nugraha.  2002.  Pengawetan Dedak Dengan Metode Inkubasi.  Balitpa  Sukamandi, Kerawang.
Lu,  S  dan  B.S.  Luh.  1991.  Properties of  the  rice  caryopsis.In  Rice Production.2nd  ed.  Vol.  1.
Luh, B.S. (ed). AVI Publishing Co., Westport, CT. pp 389-314. Luluk, E., Dyah, S.P., dan Nana, D.S. 2014.Penurunan  lignin  kulit buah  kopi  dengan  metode organosolve.  Eksergi,  Vol  XI, No. 02. 2014 ISSN: 1410-394X. Mulyasari.,  Widanarni,  M.,  Agus Suprayudi.,  M.  Zairin  Junior., dan  M.  Tri  Djoko  Sunarno.
2015. Selection and identification  of  cellulolytic bacteria  degrading  cassava leaf  crude  fiber  ( Manihot esculenta ) isolated from gouramy  fish  ( Osphronemus gouramy )  digesting  tract.  JPB Kelautan  dan  Perikanan  Vol.
10 No. 2 Tahun 2015: 111–121. Ochoa-Salano,  J.  And  Olmos-Soto,J. 2006. The Functional Property Of Bacillus For  Shrimp  Feeds. Food Microbiology Pelczar,  M.J.  and  E.C.S.  Chan.  2006. Dasar-  Dasar  Mikrobiologi.UI Press. Jakarta.
Pardede,  HT&  Fardiaz,  S.  1994.
Pemanfaatan Ampas Tapioka, Ampas Tahu dan Dedak Padi untuk Produksi Pigmen Karotenoid dari Neurospora sp .
dengan  Sistem  Fermentasi Padat.  Prosiding  Pertemuan
Ilmiah Tahunan Peranan
Mikrobiologi  dalam  Industri
Pangan.  Bogor,  Perhimpunan
Mikrobiologi  Indonesia.  p. 354 -  363.
Pratiwi,  S.T.  2008.  Mikrobiologi Farmasi. Erlangga, Jakarta. Rahayu  WP,  C.C.  Nurwitri.  2012. Mikrobiologi  Pangan.  IPB Press. Bogor Rahayu  WP.  2013.  Isolasi  dan
Pencirian  Bakteri Mananolitik Pendegradasi  Bungkil  Inti Sawit. Skripsi.Institut Pertanian Bogor. Steel,  R.G.D.  and  J.H.  Torrie, 1991.Principles and Procedures of Statistic.Diterjemahkan  oleh Bambang Sumatri (1989) dengan  judul  “Prinsip  dan Prosedur  Statistika,  Suatu
Pendekatan  Biometrik”.  PT. Gramedia, Jakarta. Sumihati,  M.,  Widiyanto  dan Isroli.2011.  Utilitas  Protein Pada  Sapi  Perah  Friesian Holstein  Yang  Mendapat Ransum  Kulit  Kopi  Sebagai Sumber  Serat  Yang  Diolah
Dengan  Teknologi  Amoniasi
Fermentasi  (Amofer).  Sintesis 15:1, 1-7.
Sulistyaningtyas,
A.S.,
Prasetyawan,        S.,        dan Sutrisno.     2013.     Pengaruh penambahan    ion    fe3+ terhadap    aktivitas    xilanase dari Trichoderma  viride .  Kimia
Student  Journal.  2  (2)  :  470-
476.
Svensson, U. 1999. Industrial Prespective.In : G.W. Tannock (Ed.).  Probiotics,  a  Critical
Review.  Horizon  Scientific Publisher, England.
Trakulnaleamsai,  S.,  Yuichi,  H., Deevong, P., Noparatnaraporn, N. 2004.Phylogenetic diversity of bacterial  symbionts  in  the guts of wood-feeding termites. Kasetsart J (Nat Sci). 38: 45 – 51. Vinderola,  C.G.,  N.  Bailo  and  J.A. Reinheimer.  2000.  Survival  of probiotic microflora in Argentinian yoghurt  during refrigerated storage. Food Res
Int ; 33: 453-457.
Wainwright,    M.    2002.        An Introduction    to    Fungal Biotechnology.    John    Wiley and    Sons  Ltd.  Baffins  Lane,
Chichester, West Sussex PO19 IUD, England. Wang NS. 2004. Cellulose Degradation. Biochemical Engineering Laboratory (ENCH  485).University  of Maryland.http://www.eng.u
md.edu/~nsw/ ench485/lab4.htm  Download: May 3, 2021. Wang,  H.,  Yang,  S.,  Wang,  Z  and Nie,  Y.  2010.  Isolation  and characterization of mesophilic cellulose-degrading  bacteria from  flower  stalks-vegetable waste
cocomposting system.Journal  Gen  Appl Microbial. 51: 353-360. Ward,    O.P    1983.  Proteinasedi Microbial    Enzyme    And Biotechnology. W.M. Fogart.Applied Science Publisher. New York. Wenzel M, I. Schonig, M. Berchtold,
P.  Kampfer  and  H.  Konig, 2002.Aerobic and facultatively anaerobic  cellulolytic  bacteria from  the  gut  of  the  termite
Zootermopsis angusticollis. Journal of Applied Microbiology 92: 32–40. Wicaksono,  Rumpoko, Syamsu, Khaswar,  Indah,  Y.  2013. Cellulose  nanofibers  from cassava bagasse characterization, chemistry and  material  research,  2013, 13(1), 79-88. Wizna dan H. Muis. 2012. Pemberian dedak padi yang difermentasi dengan bacillus amyloliquefaciens sebagai pengganti  ransum  komersil ayam  ras  petelur.  Jurnal Peternakan  Indonesia,  Juni 2012  Vol.  14  (2)  ISSN  1907- 1760. 398.
Yana,  S.,  Nurhayati  dan  Chandra,
U.W. 2013.Optimalisasi pemanfaatan  bungkil  inti sawit,  gaplek  dan  onggok melalui  teknologi  fermentasi dengan kapang berbeda sebagai  bahan  pakan  ayam pedaging.  Jurnal  Penelitian Pertanian Terapan Vol. 13 (2): 70-77 ISSN 1410-5020.
Zahidah,  D.  dan  Shovitri,  M  .  2013. Isolasi, karakterisasi dan potensi  bakteri  aerob  sebagai pendegradasi limbah organik. Jurnal Sains dan Seni Pomits. Zverlova,  V  V.,  Holl,  W.,  and Schwarz,  H.  2003.  Enzymes For  Digestion  Of  Cellulose and  Other  Polysaccharides  in the  Gut  of  Longhorn  Beetle Larvae, Rhagium Inquisitor L. (Col.,
Cerambycidae).
International  Biodeterioration and Biodegradation.