Jurnal Pharmascience, Vol. 05 , No.01, Februari 2018, hal: 45 - 54 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 http://jps.unlam.ac.id/

## Research Article

## Isolasi Senyawa Antioksidan Fraksi Etil Asetat Daun Bilaran Tapah ( Argyreia nervosa )
Asal Rantau Kalimantan Selatan
* Sutomo 1 , Arnida 1 , Nurmalita Sari 2 , Fadlilaturrahmah 3
1 Pusat Studi Obat Berbasis Bahan Alam Universitas Lambung Mangkurat 2 Program studi Farmasi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat
3 Bagian Kimia Farmasi Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat Jl. A. Yani Km 36 Banjarbaru, Kalimantan Selatan
Email: sutomo01@unlam.ac.id

## ABSTRAK
Kalimantan  Selatan  kaya  akan  tumbuhan  berkhasiat  obat,  salah  satunya Argyreia  nervosa .  Ekstrak  etanol  daun  A.  nervosa  berpotensi  sebagai  antioksidan dengan  nilai  IC50  9,46  ppm.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  senyawa antioksidan  fraksi  etil  asetat  daun  A.  nervosa.  Metode  ekstraksi  yang  digunakan maserasi. Pemisahan dan pemurnian isolat dilakukan dengan KLT, KCV, dan KK. Uji kualitatif  dan  uji  kuantitatif  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  difenil pikrilhidrazil  (DPPH).  Identifikasi  senyawa  dengan  spektrofotometer  UV-Vis  dan FTIR. Serbuk daun A. nervosa diekstraksi dengan etanol 96% dan diperoleh rendemen sebesar  16,916%.  Rendemen  fraksi  etil  asetat  diperoleh  sebesar  16,33%.  Fraksi  etil asetat difraksinasi kembali menggunakan KCV dengan eluen n-heksan:etil asetat (20:1, 15:1; 10:1, 9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7) v/v, dan metanol:etil asetat (1:4) v/v diperoleh 5  fraksi.  Fraksi  4  digunakan  pada  KK  dengan  eluen  n-heksan:etil  asetat  (20:1;  15:1; 10:1;  9:1;  7:3;  dan  5:5)  v/v.  Uji  kualitatif  KLT  menunjukkan  isolat  mengandung senyawa antioksidan dengan pereaksi DPPH. Analisis dengan spektrofotometer UV-Vis menghasilkan λmaks  344 nm dan 299 nm. Analisis FTIR menunjukkan terdapat gugus fungsi –OH, C=O, C-O, C=C (alkena dan aromatis), dan C-H.
Kata Kunci : Antioksidan, DPPH, fraksi etil asetat, daun A. nervosa , isolasi

## ABSTRACT
South  Kalimantan  is  rich  with  medicinal  herbs,  one  of  it  is  Argyreia  nervosa. Ethanol extract of A. nervosa leaves has potential as antioxidant with IC50 value of 9,46 ppm.  This  study  aims  to  isolate  antioxidant  compounds  from  ethyl  acetate  fraction  of  A. nervosa  leaves.  Extraction  method  used  by  maceration.  Separation  and  purification  of isolates  was  done  by  TLC,  VLC,  and  CC.  Qualitative  and  quantitative  test  of  antioxidant activity  using  diphenyl  picrylhydrazyl  (DPPH)  method.  Identification  of  compounds  uses
UV-Vis  and  FTIR  spectrophotometers.  Argyreia  nervosa  leaf  powder  was  extracted  with 96%  ethanol  and  obtained  a  yield  of  16,916%.  Rendemen  of  ethyl  acetate  fraction  is 16,33%.  The  ethyl  acetate  fraction  is  fractionated  again  using  VLC  with  eluen  n- hexane:ethyl  acetate  (20:1,  15:1,  10:1,9:1,  8:2,  7:3,  6:4;  5:5;  4:6;  3:7)  v/v,  and methanol:ethyl  acetate  (1:4)  v/v  obtained  5  fraction.  The  fraction  4  is  used  for  isolation using the gravity CC with eluen n-hexane:ethyl acetate (20:1, 15:1, 10:1, 9:1, 7:3, and 5:5) v/v.  Qualitative  TLC  test  showed  isolates  containing  antioxidant  compounds  with  DPPH reagent. Analysis with UV-Vis spectrophotometer yielded 344 nm and 299 nm λmax. FTIR analysis  shows  there  are  functional  groups  -OH,  C=O,  C-O,  C=C  (alkene  and  aromatic), and C-H.
Keywords: Antioxidants, DPPH, ethyl acetate fraction, A. nervosa leaves, isolation

## I. PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  yang memiliki  keanekaragaman  hayati  lebih dari  30.000  spesies  tumbuhan  dan  tercatat 7000  spesies  telah  diketahui  khasiatnya (Saifudin et  al. ,  2011).  Banyak  penelitian yang telah dilakukan pada obat tradisonal, khususnya  yang  berasal  dari  Kalimantan. Kawasan  hutan  tropis  Kalimantan  telah banyak ditemukan berbagai macam tumbuhan  yang  berkhasiat  obat.  Bagian tumbuhan  yang  sering  digunakan  oleh masyarakat  adalah  akar,  batang,  rimpang, dan daun (Krismawati & Sabran, 2004).
Bilaran  tapah  ( Argyreia  nervosa (Burm. f.)) merupakan salah satu tumbuhan  yang  digunakan  sebagai  obat tradisional  oleh  masyarakat  di  daerah Rantau,  Kalimantan  Selatan. Argyreia nervosa memiliki  kandungan  kimia  dari golongan alkaloid, lipid, flavonoid, steroid dan  triterpenoid  (Husain et  al. ,  1992;
Sharma et  al., 2001).  Menurut  penelitian lain, aktivitas antioksidan yakni Inhibitory Concentration  50 (IC 50 )  ekstrak  daun A.
nervosa adalah sebesar  9,46 ppm.  Hal  ini membuktikan  bahwa  daun A.  nervosa sangat  berpotensi  sebagai  antioksidan (Sutomo et al., 2016).
Antioksidan  memiliki  peran  yang sangat  penting  bagi  kesehatan.  Karakter utama senyawa antioksidan adalah kemampuannya  menangkap  radikal  bebas (Prakash et  al. ,  2001).  Tumbuhan  yang berkhasiat  sebagai  obat  memiliki  zat-zat penting  yang  sangat  berperan  dalam menentukan aktivitas kerja tumbuhan obat tersebut,  salah  satunya  yaitu  flavonoid. Flavonoid termasuk senyawa fenolik alam yang potensial sebagai antioksidan (Selawa et al., 2013).
Etil  asetat  merupakan  pelarut  yang mampu  menarik  senyawa  yang  bersifat semi  polar  seperti  flavonoid  dan  tanin. Fraksi  etil  asetat  memiliki  total  fenolik terbesar, dimana golongan fenolik merupakan  senyawa  yang  berpotensi memiliki  aktivitas  antioksidan    (Samin et al., 2013).  Metode  penentuan  aktivitas yang sering digunakan adalah metode 2,2-
difenil-2-pikrihidrazil (DPPH) karena hasil yang  diperoleh  lebih  cepat,  mudah dianalisis,  selain  itu  harga  yang  relatif ekonomis  (Brand-William et  al. ,  1995;
Bondet et  al., 1997;  Fukumoto  &  Mazza,
2000; Kedare & Singh, 2011).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka  perlu dilakukan penelitian tentang isolasi dan uji aktivitas  antioksidan  daun A.  nervosa ini dari fraksi etil asetat

## II. METODE PENELITIAN
A. Alat dan Bahan
Alat  pada  penelitian  ini  yaitu  alat- alat  gelas  (Pyrex®  Iwaki  Glass),  botol reagen,  cawan  porselin,  corong  pisah, Infrared  spectrometry (FTIR,  Perkin
Elmer  100),  kertas  saring,  kromatografi cair  vakum  (KCV),  kromatografi  kolom (KK),  labu  ukur  5;10;  dan  25  mL,  lampu ultraviolet  254  nm  dan  366  nm,  lemari asam,  neraca  analitik  (Ohaus®),  oven, pipa  kapiler,  pipet  ukur, rotary  vacuum evaporator, seperangkat alat KLT, seperangkat  alat  kromatografi  kolom, seperangkat alat maserasi, UV-Vis
(spectronic®  20  genesysTM), waterbath (SMIC®).
Bahan yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  akuades,  daun A. nervosa, etil  asetat  (p.a),  kalium  bromida, kloroform  (p.a),  metanol  (p.a),  metanol (teknis), n -heksana (p.a), plat kromatografi lapis tipis (KLT) dengan silika gel 60 F 254
for  thin  layer  chromatography (Merck), silika  gel  60 for  column  chromatography (Merck), 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH).

## B. Pengumpulan dan pengolahan simplisia
Simplisia  diambil  dari  daerah Rantau,  Kalimantan  Selatan.  Bagian  yang diambil adalah daun. Daun disortasi basah terlebih  dahulu,  lalu  dilakukan  pencucian dengan  air  mengalir.  Sampel  dirajang kecil–kecil  kemudian  dikeringanginkan. Sampel kering yang didapat ditimbang dan dicatat  beratnya,  kemudian  disimpan  di tempat  kering,  bersih,  dan  tertutup  rapat (Suharmiati & Maryani, 2003).

## C. Ekstraksi
Serbuk  kering  sebanyak  500  gram dimaserasi  dengan  etanol  96%    ±1  cm  di atas  permukaan  serbuk  atau  sebanyak  4  L (1:8)  di  dalam  maserator.  Maserasi dilakukan  selama  3  kali  24  jam,  dan dilakukan pengadukan setiap 6 jam. Setiap 24  jam  dilakukan  pergantian  pelarut dengan  jumlah  yang  sama.  Ekstrak  cair yang  didapat  dipekatkan  dengan rotary evaporator pada  suhu  60 o C.  Ekstrak kental  dihitung  rendemennya  terhadap berat simplisia awal (Sutomo, 2014).

## D. Fraksinasi
Fraksinasi  yang  dilakukan  ialah fraksinasi  cair-cair.  Ada  dua  macam
pelarut  organik  yang  digunakan,  yaitu n - heksan  dan  etil  asetat.  Ekstrak  ditimbang 15  gram  (pertama)  disuspensikan  dengan akuades  sebanyak  37,5  mL  (1:2,5)  dan diekstraksi  dengan n- heksan  terlebih dahulu.  Senyawa  yang  tidak  larut  pada pelarut n- heksan  dimasukkan  kembali dalam  corong  pisah,  dan  ditambahkan pelarut  etil  asetat  sebanyak  75  mL  (1:5). Campuran  tersebut  digojog,  dan  dibiarkan hingga  terbentuk  dua  lapisan,  dimana lapisan  atas  adalah  lapisan  etil  asetat  dan lapisan bawah adalah lapisan air.
Fraksinasi  dilakukan  sebanyak  12  kali sampai lapisan etil asetat berwarna bening. Lapisan etil asetat yang didapat ditampung dan  diuapkan  hingga  diperoleh  ekstrak kental  fraksi  etil  asetat.  Seluruh  fraksi  etil asetat disimpan untuk uji aktivitas antioksidan  dan  isolasi  senyawa  aktif. Fraksi n- heksan  dan  etil  asetat  yang  telah dipekatkan dihitung rendemennya (Sutomo, 2014).
E. Pemisahan  dengan  Kromatografi  Cair Vakum (KCV)
Empat  puluh  lima  gram  silika  gel 60  untuk  kromatografi  kolom dimasukkan ke dalam kolom. Sebanyak 2 gram sampel digerus  dengan  silika  dan  sedikit  demi sedikit  diteteskan  dengan  5  mL  campuran metanol-kloroform  (1:1  v/v)  agar  mudah bercampur  dengan  silika  sambil  digerus hingga  terbentuk  serbuk  kering  yang
homogen.  Sampel  dielusi  dengan  gradien fasa  gerak  campuran n- heksana-etil  asetat (20:1;  15:1;  10:1;  9:1;  8:2;  7:3;  6:4:  5:5; 4:6;  dan  3:7)  v/v,  dan  untuk  bilasan terakhir  menggunakan  metanol:etil  asetat (1:4).

## F. Pemisahan dengan
Kromatografi Kolom (KK)
Sebanyak 1 gram sampel dimasukkan  ke  dalam  kolom  sedikit  demi sedikit  hingga  semuanya  masuk.  Bagian atas  permukaan  sampel  ditutup  kembali dengan silika gel yang telah disuspensikan dengan  fasa  gerak.  Fasa  gerak  yang digunakan  adalah n- heksan  :  etil  asetat (20:1;  15:1;  10:1;  9:1;  7:3;  dan  5:5)  v/v. Fasa  gerak  yang  keluar  diatur  dengan kecepatan  8  detik  1  tetes.  Eluat  yang keluar  ditampung  dalam  vial  berlabel  dan bila mulai penuh diganti dengan vial  yang lain. Tiap eluat diperiksa profil kromatogramnya dan vial dengan karakteristik  yang  sama  dikumpulkan sebagai fraksi-fraksi. Isolat yang diperoleh dilakukan identifikasi menggunakan spektrofotometri  UV-Vis,  FT-IR,  dan aktivitas antioksidan (Sutomo, 2014).

## G. Pemeriksaaan  Kemurnian  dengan  KLT
2 Dimensi
Senyawa  hasil  isolasi  dengan kromatografi kolom ditotolkan pada lempeng  lalu  dikembangkan  dengan  satu
sistem  fasa  gerak  sehingga  campuran terpisah menurut jalur yang sejajar dengan salah  satu sisi. Lempeng  diangkat, dikeringkan dan diputar 90 o , dan diletakkan  dalam  bejana  kromatografi yang  berisi  fasa  gerak  kedua,  sehingga bercak  yang  terpisah  pada  pengembangan pertama terletak dibagian bawah sepanjang lempeng, lalu dikromatografi lagi (Harborne, 1987).
H. Uji  Aktivitas  Kuantitatif  Antioksidan
Fraksi Etil Asetat Daun A. nervosa
Larutan isolat fraksi etil asetat daun A.  nervosa dibuat  dengan  menimbang  5,0 mg  isolat  kemudian  dilarutkan  dalam metanol  hingga  volume  1  mL.  Kemudian diambil  sebanyak  0,2  mL  dan  dilarutkan dalam  labu  ukur  25  mL  dan  diperoleh larutan stok 40 ppm. Larutan baku 40 ppm dilakukan pengenceran sehingga diperoleh variasi  konsentrasi  2,5;  5;  10;  20;  dan  40 ppm. Satu milliliter larutan DPPH 0,4 mM dalam  labu  ukur  5  mL  ditambahkan dengan tiap-tiap larutan sampel sebanyak 1 mL, dan ditambakan metanol sampai tanda batas.  Kemudian  larutan  didiamkan  di tempat  gelap  selama  20  menit.  Kemudian dibaca absorbansinya pada panjang gelombang  maksimum  516  nm  (Nihlati et al. , 2008).
Kapasitas antioksidan (persen inhibisi)  untuk  menghambat  radikal  bebas
menurut Andayani et al ., (2008)
ditentukan dengan persamaan: % inhibisi = Abs Kontrol-Abs Sampel Abs Kontrol 100 %
Nilai  IC 50 merupakan  konsentrasi  sampel yang  dapat  menghambat  radikal  bebas sebesar  50%  diperoleh  dengan  memakai persamaan regresi linear y= bx+a.
I. Spektrofotometri UV-Vis
Sampel  Analisis  senyawa  murni hasil  isolasi  dilakukan  di  Laboratorium Kimia Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gajah  Mada.  Spektrofotometri  UV-Vis digunakan untuk mencari panjang gelombang  maksimum  (λ max )  dari  sampel yang  diukur.  Sampel  yang  akan  diukur dilarutkan  dengan  5  mL  metanol  p.a selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam  kuvet. Kuvet  yang  berisi  blanko  dimasukkan  pada sisi  yang  tepat,  begitu  pula  dengan  sampel yang  diukur  pada  panjang  gelombang  200- 400nm (Sutomo, 2014).

## J. Spektrofotometri FTIR
Analisis  Senyawa  murni  hasil isolasi  dilakukan  di  Laboratorium  Kimia Farmasi  Fakultas  Farmasi  Universitas Gajah Mada Spektrofotometri FTIR digunakan untuk melihat gugus fungsi dari sampel yang diukur pada daerah gelombang  tertentu.  Senyawa  hasil  isolasi (isolat)  yang  akan  diukur  digerus  dengan KBr  (0,2-0,5  mg  isolat  +  100  mg  KBr).
Campuran  dikempa  (dibuat  pelet)  dan pelet  yang  telah  dibuat  ditempatkan  pada kisi  NaCl,  kemudian  diukur  dengan  alat FTIR  di  daerah  bilangan  gelombang tengah  infra  merah  (4000-400  cm -1 )  pada resolusi  16  cm -1 dengan  jumlah  payar  32 (Sutomo, 2014).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Preparasi Sampel Daun A. nervosa Daun yang telah disortasi dikeringkan  dengan  cara  kering  anginkan di  tempat  teduh  selama  3-4  hari  sampai kering ditandai dengan simplisia keringnya dapat  diremas  dan  membentuk  serbuk kasar.  Serbuk  kering  yang  diperoleh sebanyak  1  kg  berwarna  hijau  tua, beraroma khas, dan tidak berasa.
B. Ekstraksi
Ekstrak  dibuat  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96% selama  3  kali  24  jam  dengan  pergantian pelarut setiap 24 jam (remaserasi), disertai pengadukan setiap 6 jam. Ekstrak selanjutnya  diuapkan  dengan waterbath hingga  ekstrak  mengental  dan  diperoleh ekstrak  sebanyak  84,58  gram.    Rendemen yang diperoleh adalah 16,916%.
C. Fraksinasi Fraksinasi dilakukan secara bertingkat,  yakni  menggunakan  pelarut n - heksan  terlebih  dahulu.  Setelah  tidak  ada
lagi senyawa yang tertarik dalam n -heksan, bagian  yang  tidak  larut  dipisahkan kemudian dilakukan fraksinasi dengan etil asetat.  Filtrat  fraksi  etil  asetat  yang diperoleh  diuapkan  dan  diperoleh  berat fraksi  4,9  gram.  Rendemen  fraksi  etil asetat  daun A.  nervosa yang  diperoleh sebesar  16,33%.  Uji  kualitatif  antioksidan dengan KLT memberikan informasi bahwa  beberapa  senyawa  dalam  ekstrak dan  fraksinya  bersifat  antioksidan.  Fraksi yang  didapatkan  dipisahkan  kembali menggunakan kromatografi cair vakum.

## D. Fraksinasi dengan KCV
Hasil  KLT  fraksi  etil  asetat menunjukkan bahwa masih terdapat banyak  bercak  yang  berdempetan  pada plat  KLT  sehingga  dilanjutkan  ke  proses KCV. Kromatografi cair vakum digunakan dengan tujuan untuk memisahkan senyawa yang  terdapat  pada  fraksi  etil  asetat  agar lebih  sederhana  atau  tunggal.  Hasil  KVC diperoleh  sebanyak  5  fraksi,  dan  fraksi yang  digunakan  untuk  KK  adalah  fraksi ke-4.  Berdasarkan  profil  KLT  fraksi  4 diperoleh 5 bercak pada penampak bercak UV  254  nm,  5  bercak  pada  penampak bercak  UV  366  nm,  dan  6  bercak  kuning setelah  dilakukan  penyemprotan  dengan pereaksi DPPH, kemudian nilai HRf tiap- tiap  bercak  yang  ada  pada  plat  dihitung. Hasil KLT disajikan pada gambar 1.

## E. Isolasi Senyawa Kimia dengan KK
Fraksi  4  dari  hasil  KCV  diisolasi dengan  KK  menggunakan  fasa  gerak n- heksan:etil  asetat  (20:1;  15:1;  10:1;  9:1; 7:3; dan 5:5)v/v. Perbandingan eluen yang digunakan ialah eluen bergradien (polaritas  meningkat),  sehingga  diperoleh bercak  dengan  pemisahan  yang  maksimal dan  diharapkan  didapatkan  bercak  yang tunggal.  Berdasarkan  hasil  KLT  diperoleh isolat  B  memiliki  bercak  tunggal  dan memiliki aktivitas antioksidan saat disemprot  dengan  pereaksi  DPPH.  Hasil KLT isolat B disajikan pada gambar 2.
F. Uji Kemurnian dengan KLT 2 Dimensi Uji  kemurnian  dengan  KLT  dua dimensi  menggunakan  dua  macam  eluen yang berbeda tingkat kepolarannya setelah diputar  sebesar  90 o (Ramadhani,  2013).
Perbandingan  eluen  yang  digunakan  yaitu n- heksan:etil asetat (7:3 dan 6:4). Berdasarkan hasil KLT yang diamati secara visual  dan  pada  lampu  UV  254,  terlihat bahwa  terdapat  satu  noda  pada  plat,  hal  ini menandakan  bahwa  isolat  yang  didapat murni.
G. Aktivitas Kuantitatif Antioksidan Isolat Aktivitas antioksidan isolat daun A. nervosa ditentukan  menggunakan  UV-Vis dengan  metode  DPPH  yang  dinyatakan dalam  presen  inhibisi.  Metode  ini  sering digunakan karena hasil  yang didapat  lebih cepat, mudah, dan murah untuk dilakukan, sehingga  digunakan  secara  luas  untuk menguji kemampuan senyawa yang bersifat antioksidan (Brand-William et al. , 1995;  Fukumoto  &  Mazza,  2000;  Bondet et  al., 1997;  Kedare  &  Singh,  2011). Persamaan  yang  diperoleh  dari  hubungan konsentrasi  dengan  %  inhibisi  adalah  y  = 0,0737x  +  18,1296  dengan  koefisien korelasi  (r)  sebesar  0,9994.  Besarnya  IC 50 isolat  daun A.  nervosa diperoleh  sebesar 436,58 ppm.

## H. Analisis Spektrum UV-Vis
Hasil  analisa  spektrum  UV-Vis menunjukkan  adanya  serapan  maksimum pada  344  nm  dengan  absorbansi  1,708 yang  mengindikasikan  adanya  gugus kromofor  berupa  C=C  dari  senyawa aromatik, maka dapat diperkirakan adanya sistem kromofor dengan nilai transisi π–π* (Pavia et  al., 2001).  Selanjutnya  adanya serapan lain pada panjang  gelombang 299 nm dengan absorbansi 0,794 yang mengindikasikan  adanya  ikatan  C=O  dari senyawa  keton  (jenuh)  maka  diperkirakan terdapat  nilai  transisi  n–π*  pada  sistem kromofornya (Skoog et al. , 1983).

## I. Analisis  Spektrum  FT-IR  ( Fourier Transform – Infra Red)
Hasil  analisa  infra  merah  dari  isolat menunjukkan  adanya  serapan  melebar antara  3600–3300  cm -1 yaitu  pada  bilangan gelombang 3371,57
cm -1 yang mengindikasikan  adanya  gugus  hidroksil  (- OH),  didukung  dengan  adanya  serapan serapan pada 1242,16 cm -1 dan 1273,02 cm -1
yang mengindikasikan adanya C-O.
Selanjutnya  terdapat serapan  dengan serapan  kuat  pada  bilangan  gelombang 2924,09–2854,65 cm -1 yang mengindikasikan adanya gugus CH alifatik didukung  dengan  adanya  serapan  pada 1442,75 cm -1 dan 1381,03 cm -1 untuk CH 2 (Metilen)  dan  CH 3 (Metil).  Ada  C=O terkonjugasi  pada  bilangan  gelombang
1689,64  cm -1 dan  C=C  aromatik  pada bilangan  gelombang  1604,77  cm -1 dan 1512,19 cm -1 . Berdasarkan data IR, senyawa yang  diisolasi  kemungkinan  mengandung gugus  aromatis,  gugus  hidroksi,  gugus karbonil, dan serapan C-H alifatik dari metil (CH 3 )  dan  metilen  (CH 2 ).  Pendekatan struktur  dibandingkan  dengan  senyawa golongan fenolik (Tabel 1).
Tabel  1. Perbandingan  bilangan  gelombang  isolat dengan golongan senyawa golongan fenolik (Tamat et al. , 2007; Rizkia et al. , 2014)
Gugus Fungsi Isolat (cm -1 ) Pembandin g 1 (cm -1 ) Pembandin g 2 (cm -1 ) -OH C=O C – O C=C (Aromatis ) C – H 3371,57 1689,64 1242,16 ; 1273,02 1442,75 ; 1512,19 ; 1604,77 856,39 dan 817,82 3344 1710,74 1377,80 1460,01 dan 1506,30 973, 835, dan 721 3424 - 1130,08 1635 759

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini adalah
1. Senyawa  antioksidan  yang  berhasil terisolasi adalah senyawa yang memiliki gugus fungsi –OH, C=O, C-O, C=C  (alkena  dan  aromatis),  dan  C-H. selain  itu  memiliki  panjang  gelombang maksimum pada 344 nm dan 299 nm.
2. Aktivitas  antioksidan  isolat  fraksi  etil asetat  daun A.  nervosa yang  diperoleh masih lemah dibandingkan ekstrak

## DAFTAR PUSTAKA
Andayani,  R.,  L.  Yovita,  &  Maimunah.
2008. Penentuan Aktivitas Antioksidan    Kadar  Fenolik  Total dan  Likopen  pada  Buah  Tomat
( Solanum  lycopersium L.). Jurnal Sains  dan  Teknologi  Farmasi , 13 (1).
Brand-William,  W.,  M.  E.  Cuvelier,  &  C. Berset. 1995. Use of a Free Radical Method  to  Evaluate  Antioxidant Activity. Lwt. 28 (1) : 25 – 30
Bondet,  V.,  W.  Brand-William,  &  Berset, S.  1997.  Kinetics  and  Mechanisms of  Antioxidant  Activity  Using  The DPPH·  Free  Radical  Method.
Lebensm.-Wiss.  U.-Technol. 30 : 609-615.
Fukumoto,  L.  R.,  &  G.  Mazza.  2000.
Assessing Antioxidant and Prooxidant  Activities  of  Phenolic Compounds. J.  Agric.  Food  Chem.
48 (8) : 3597 – 3604
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia .
Jilid II. Penerbit ITB, Bandung. Husain,  O.  P.  A.,  S.  P.  Viramani,  L.  N. Popli,  M.  M.  Misra,  G.  N.  Gupta,
Z.  Srivastava,  Abraham,  &  A.  K.
Singh.  1992. Dictionary  of  Indian Medicinal  Plants .  Central  Institute of  Mecinal  &  Aromatic  Plants, Lucknow.
Kedare,  S.  B.,  &  R.  P.  Singh.  2011.
Genesis and Development of DPPH  Method  of  Antioxidant Assay. J. Food Sci. Technol. 48 (4) : 412-422
Krismawati,  A.  &  M.  Sabran.  2004.
Pengelolaan  Sumber  Daya  Genetik Tanaman Obat Spesifik Kalimantan Tengah. Buletin Plasma Nutfah . 12 (1)
Nihlati,  A.P.,  A.  Rohman,  &  T.  Hertiani. 2008.  Daya  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Rimpang  Temu  Kunci ( Boesenbergia  pandurata (Roxb. Schletch) dengan Metode Penangkapam  Radikal  DPPH, J.
Nat. Med . 62 : 207-21.
Pavia, D. L., G. M. Lampman, G. S. Kriz,
&  Vyvyan.  2001. Introduction  to Spectroscopy 4 th Edition .
Departmant  of  Chemistry,  Western
Washington  UniversityBellingham, Washington.
Prakash,  A.,  F.  Rigelhof,  &  E.  Miller.
2001. Antioxidant Activity. Medallion Laboratories: Analytical Progress . 19 (2) : 1-4. Ramadhani,  R.  A.,  D.  Kusrini,  &  E. Fachriyah. 2013. Isolasi,
Identifikasi,  dan  Uji  Aktivitas Antioksidan  Senyawa  Flavonoid dari  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun Tempuyung  ( Sonchus  arvensis L.). Chem. Info. 1 (1) : 247-255
Rizkia,  P.,  Akyunul  J.,  Haidatul  H.  2014. Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  70%,  Ekstrak  dan  Isolat Senyawa  Flavonoid  dalam  Umbi
Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). ALCHEMY. 2 (3) : 154-162
Saifudin, A., V. Rahayu, & H. Y. Teruna. 2011. Standardisasi  Bahan  Obat Alam . Graha Ilmu, Yogyakarta.
Selawa,  W.,  M.  R.  J.  Runtuwene,  &
Gayatri C. 2013. Kandungan Flavonoid dan Kapasitas Antioksidan  Total  Ekstrak  Etanol Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis.)). Pharmacon : Jurnal Ilmiah
Farmasi. 2 (1) : 18-22
Sharma,  P.  C.,  M.  B.  Yelne,  &  T.  J. Dennis. 2001. Database on
Medicinal Plants used in Ayurveda Volume 2. Documentation & Publication Division, New Delhi.
Skoog,  D.  A.,  F.  J.  Holler,  T.  A.  Nieman. 1983. Principles  of  Instrumental
Analysis  Edisi  ke-5. Hourcourt Brace, Orlando Suharmiati  &  H.  Maryani.  2003. Khasiat dan  Manfaat  Jati  Nelanda  :  Si Pelangsing  &  Peluruh  Kolesterol . Agromedia Pustaka, Jakarta. Sutomo.  2014. Isolasi  dan  Identifikasi
Senyawa Penangkap Radikal DPPH  dan  Imunomodulator  dari Buah  Kasturi  (Mangifera  casturi Kosterm.)  Suku  Anacardiaceae. Desertasi  Program  Pascasarjana Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Sutomo, Arnida, Rizki, M. I., Triyasmono,
L.,  Nugroho,  A.,  Mintowati,  E.,  & Salamiah. 2016. Skrining Fitokimia
dan Uji Kualitatif Aktivitas Antioksidan Tumbuhan Asal Daerah  Rantau  Kabupaten  Tapin Kalimantan Selatan. Jurnal Pharmascience. 3 (1) : 66 – 74 Tamat,  S.  R.,  T.  Wikanta,  &  Lina  S.  M. 2007.  Aktivitas  Antioksidan  dan Toksisitas  Senyawa  Bioaktif  dari Ekstrak  Metanol  Rumput  Laut
Hijau Ulva  reticulate Forsskal. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia . 1 (5) : 31-36