## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAN FRAKSI KULIT BATANG BELIMBING WULUH
(Averrhoa bilimbi Linn.) TERHADAP BAKTERI Klebsiella pneumoniae DAN Staphylococcus epidermidis BESERTA BIOAUTOGRAFINYA
Muhtadi, Ria Ambarwati, dan Ratna Yuliani Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta Correspondence to : DR.Muhtadi.MSi Email : muhtadi@ums.ac.id

## ABSTRACT
Belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi Linn.) is a tropical plant that has antibacterial properties. The purpose of this study was to test the antibacterial activity of bark  Belimbing wuluh  against Klebsiella pneumoniae and Staphylococcus epidermidis and their bioautography. Extraction methods used to research is method maceration with a solvent ethanol 96 %. Fractinations done by method partition liquid-liquid with a separating funnel. Test performed  in  this  research  covering  identi � cation  bacteria,  the  sensitivity  bacteria,  antibacterial  activity,  thin layer chromatography, bioautography. The result of antibacterial activity ethanol extract of disk diffusion method with  concentrations  400 μ g/disk,  800 μ g/disk,  1600 μ g/disk is 8±0,5; 10,34±0,58;  12,17±0,76  on Klebsiella pneumoniae, 10,17±0,29;  11±0;  11.5±0  on Staphylococcus  epidermidis,  n-hexane  fraction  with    concentration 400 μ g/disk, 800 μ g/disk, 1600 μ g/disk is 8,34±0,29; 9,34±0,29; 10,84±0,76 on Klebsialla pneumoniae, 8,5±0,5; 9,34±0,29; 10,67±0,29 on Staphylococcus epidermidis, ethyl acetate fraction with concentration 400 μ g/disk, 800 μ g/disk, 1600 μ g/disk is 9,17±0,29; 10,34±0,29; 11,17±0,29 on Klebsiella pneumoniae and 9,5±0,5; 10,67±0,29; 12,67±1,26 on  Staphylococcus  epidermidis,  ethanol-water  fractions  with    concentration 400 μ g/disk,  800 μ g/ disk, 1600 μ g/disk is 8,17±0,29; 9,17±0,29; 10±0 on Klebsiella pneumoniae, 9±0; 9,67±0,29; 10,34±0,29 on Staphylococcus  epidermidis. The  TLC  show  chemical  compounds  contained  in  the  ethanol  extract,  n-heksan fraction, ethyl acetate fraction, and ethanol-water fraction is a compound of the saponins, alkaloids, � avonoids and phenolic. Bioautography showed that ethanol extracts, n-heksan faction, ethyl acetate fraction, and etanol-air faction Belimbing wuluh  (Averrhoa bilimbi Linn.) bark have not antibacterial activity because there is no clear area around on plate TLC.
Keywords : Belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi Linn.), ethanol extract, fractination, antibacterial, bioautogra � .

## PENDAHULUAN
Infeksi  merupakan  penyakit  yang  sering di  jumpai  masyarakat  di  seluruh  dunia.  Penyakit infeksi  sering  terjadi  di  negata  beriklim  tropis seperti  Indonesia.  Salah  satu  penyebab  penyakit infeksi  bisa  disebabkan  oleh  kuman  (Refdanita et  al., 2004).  Penyakit  infeksi  disebabkan  oleh bakteri  secara  umum  merupakan  patogen  yang bersifat tidak terlihat atau asimtomatik (Jawetz et al., 1996).
Bakteri yang dapat menyebabkan infeksi  diantaranya Klebsiella  pneumoniae dan Staphylococcus epidermidis (Jawetz et al., 2001). Klebsiella  sp merupakan  bakteri  Gram  negatif yang  merupakan  penyebab  tersering  penyakit
infeksi  nosokomial  (Adisasmito  &  Hadinegoro, 2004). Klebsiella  pneumoniae terdapat  pada tubuh manusia di bagian saluran napas dan feses pada  sekitar  5%  orang  normal  (Jawetz et  al., 1996). Klebsiella  pneumoniae sering  dijumpai pada  manusia  yaitu  di  bagian  usus  besar  dengan persentase  40%-80%  (Pelczar,  1998). Klebsiella pneumonia (basil  Friedlander)  menyebabkan pneumonia  Friedlander  s  yang  termasuk  jarang terjadi  dan  apabila  muncul  sangat  berat  pada pengatasannya  (Gibson,  1996). Klebsiella pneumoniae dapat  menyebabkan  penyakit pneumonia  atau  infeksi  saluran  pernafasan bawah.  Hasil  sensitivitas Klebsiella  pneumoniae yang  diisolasi  dari  sputum  penderita  rawat  inap
RSUD Dr. Saiful Anwar Malang 2002 antibiotik yang masih peka terhadap Klebsiella pneumoniae adalah  gentamisin,  sipro � oksasin,  nor � oksasin, dan amikasin (Susilo, 2004).
Staphylococcus  epidermidis merupakan anggota � ora normal pada kulit manusia, saluran pernapasan,  dan  saluran  pencernaan  (Jawetz et al., 1996) .  Staphylococcus  epidermidis biotipe-1 menyebabkan  infeksi  kronis  pada  manusia (Radji,  2009).  Biotipe-2  patogen  terhadap  babi serta  menimbulkan  impertigo  kontagiosa  (kulit melepuh) pada binatang tersebut (Syahrurachman et  al., 1994). Staphylococcus  epidermidis adalah spesies  staphylococcus  yang  paling  sering berkaitan  dengan  bakteremia  dan  infeksi  yang didapat  dari  rumah  sakit  dan  akhir-akhir  ini muncul sebagai penyebab utama infeksi (Gomes, 2011). Sumber infeksi utama oleh Staphylococcus epidermidis adalah penumpukan bakteri pada lesi manusia,  benda  yang  terkontaminasi  oleh  lesi, saluran respirasi, dan kulit manusia (Jawetz et al ., 2001).
Banyak  penyakit  infeksi  yang  belum  bisa disembuhkan  karena  adanya  resistensi  terhadap obat  sintetis    maka  dipilih  alternatif  lain  untuk menyembuhkan  penyakit.  Salah  satunya  dengan menggunakan  tanaman  tradisional.  Penggunaan obat  tradisional  secara  umum  dinilai  lebih  aman daripada  penggunaan  obat  modern.  Hal  ini disebabkan karena obat tradisional memiliki efek samping yang relatif lebih sedikit dari pada obat modern (Sari, 2006).
Salah  satu  tanaman  yang  digunakan sebagai  alternatif  dalam  pengobatan  adalah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.). Tanaman ini  telah  banyak  diteliti  untuk  penemuan aktivitas  antimikroba,  antikanker,  antioksidan, imunomodulator, dan antiin � amasi (De Smet, 1997 dalam Karon et al ., 2011). Belimbing wuluh juga memiliki  sifat  hipoglikemik,  hipotrigliseridemik, antiaterogenik,  dan  sifat  anti-peroksidatif  lipid pada  tikus  diabetes  yang  diberi  streptozotosin setelah  2  minggu  pengobatan  (Pushparaj,  2000). Tanaman belimbing wuluh memiliki nilai khasiat yang  besar  sebagai  obat  alternatif  pada  penyakit diabetes  di  hampir  seluruh  bagian  tumbuhan seperti daun, kulit batang, bunga, buah, biji, dan akar (Kumar et al, 2013).
Ekstrak  kulit  batang  belimbing  wuluh dengan  fraksi  metanol,  n-heksan,  karbon  tetra klorid,  dan  kloroform  mempunyai  aktivitas antibakteri  terhadap  beberapa  mikroorganisme
antara  lain Bacillus  subtilis,  Escherichia  coli, dan Candida  albicans (Siddique et  al .,  2013). Batang  belimbing  wuluh  mengandung  saponin, tanin, glukosida, kalsium oksalat. Buah belimbing wuluh  kaya  asam  oksalat,  dan  tanin,  dan triterpen. Buah belimbing wuluh ditemukan lima puluh  tiga    komponen  volatil,  terutama  terdiri dari  asam  alifatik,  asam  heksadekanoat,  asam 9-oktadekanoat,  ester,  butil  nikotinat  dan  heksil nikotinat (Chowdhury et al., 2012). Berdasarkan penelitian sebelumnya tersebut,  maka  perlu  dilakukan  penelitian  lanjut untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  fraksi n-heksan, etil asetat, etanol-air dari ekstrak etanol kulit  batang  belimbing  wuluh  terhadap  bakteri Klebsiella  pneumoniae dan Staphylococcus epidermidis . Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan  sumbangan  bagi  ilmu  pengetahuan dan masyarakat luas sehingga dapat dikembangkan pemanfaatan kulit batang belimbing wuluh sebagai obat tradisional antibakteri.

## METODE PENELITIAN
Alat. Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  inkubator  (Memmert®), inkubator  shaker  (Excella  24®),  lampu  UV (Philips®), vacum rotary evaporator (Heidolph®), waterbath WNB-14  (Memmert®),  corong  pisah, cawan  porselen,  neraca  analitik  (Ohaus®), autoklaf (MA 672®), oven (Memmert®), Laminar Air  Flow (Astari  Niagara®) ,  tabung  reaksi (Pyrek®),  vortex  (Thermolyne),  pipet  volume (Pyrek®),  pipet  ukur,  erlenmeyer,  cawan  petri, ose, beaker  glass ,  mikropipet,  batang  pengaduk, bunsen,  bejana  kromatogra � ,  mikropipet,  pipa kapiler.
Bahan. Bahan-bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  adalah  kulit  batang  belimbing wuluh  yang  diperoleh  dari  daerah  Gonilan, Kartasura, Sukoharjo, n-heksan, etil asetat, etanol- air, Klebsiella  pneumoniae dan Staphylococcus epidermidis yang  diperoleh  dari  Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Umum Universitas  Sebelas  Maret , etanol  96%,  media Mueller Hinton (MH) (Oxoid), media Brain Heart Infusion (BHI) (Oxoid), cat Gram A, cat Gram B, cat  Gram  C,  cat  Gram  D  dan  formalin  1%, blue tips, yellow  tips, media KIA (Klinger Iron Agar), LIA  (Lysine  Iron  Agar),  MIO  (Motility  Indol Ornithine),  MSA  (Mannitol  Salt Agar),  pereaksi Dragendorff,  LB  (Liebermann  Burchard),  FeCl 3 dan sitroborat.

## Jalannya Penelitian
1.  Pembuatan  ekstrak  etanol    dan  fraksi  kulit batang belimbing wuluh.
a. Ekstraksi Kulit  batang  belimbing  wuluh  yang telah kering ± 1 kg direndam dalam etanol 96%  sebanyak  7,5  liter  selama  3  hari sambil  diaduk,  setelah  direndam  selama 3  hari  disaring  dengan  kertas  saring  dan corong  Buchner,  lalu  ampas  yang  didapat diremaserasi, maserat yang didapat dievaporasi dengan rotary evaporator pada suhu  50 o C  lalu  diuapkan  diatas waterbath hingga didapat ekstrak kental.
b. Fraksinasi Ekstrak  kental  10  gram  dilarutkan dalam  100  mL  etanol,  dimasukkan  ke dalam  corong  pisah  kemudian  ditambah n-heksan sebanyak 100mL untuk dilakukan pengawallemakan  setelah  itu  dikocok  dan dipisahkan lapisan n-heksan dan etanol-air, dilakukan berulang hingga n-heksan jernih. Fraksinasi  etil  asetat  dengan  ditambah  etil asetat  sebanyak  100  mL  dimasukkan  ke dalam  corong  pisah  kemudian  dikocok perlahan  hingga  didapat  2  lapisan, dilakukan berulang hingga etil-asetat jernih. Fraksinasi dari etil asetat didapat 2 lapisan yaitu  lapisan  bening  (bawah)  dijadikan fraksi  etil  asetat  sedangkan  lapisan  yang kental  (atas)  dijadikan  fraksi  etanol-air (sisa).  Hasil  dari  fraksinasi  diuapkan  pada suhu  50-60 o C  kemudian  dikentalkan  di atas waterbath pada  suhu  60 o C  untuk  uji antibakteri, uji KLT, dan uji bioautogra � .
2.  Pembuatan media Media  yang  digunakan  adalah  KIA, LIA,  MIO,  MH,  BHI  dan  MSA.  Kligler  Iron Agar ditimbang 3,5 g dilarutkan dalam 100 mL akuades, LIA ditimbang 3,4 g dilarutkan dalam 100 mL akuades, MIO ditimbang 3,1 g dilarutkan dalam  100  mL  akuades,  MH  ditimbang  3,8g dilarutkan  dalam  100  mL  akuades,  BHI ditimbang  3,7  g  dilarutkan  dalam  100  mL akuades,  MSA  ditimbang  11,1  g  dilarutkan dalam  100  mL  akuades.  Media  KIA,  LIA, MIO, MH, BHI dan MSA yang telah dilarutkan dengan  akuades  disterilkan  dengan  autoklaf selama  20  menit  dengan  suhu  120 o C    dalam autoklaf  lalu  diambil  dan  disimpan  di  kulkas sebagai stok media.
3.  Pemeliharaan bakteri Bakteri induk didapat dari Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran    UNS diambil  satu  ujung  mata  ose  kemudian digoreskan  pada  media  MH,  diinkubasi  pada suhu 37 o C selama 18-24 jam. Setelah koloni tumbuh  kemudian  disimpan  pada  lemari  es pada  suhu  4 o C  dan  digunakan  sebagai  stok bakteri.
4.  Pembuatan suspensi bakteri Dari  hasil  biakan,  diambil  3-5  koloni bakteri  dari  stok  kemudian  disuspensikan dalam  5  mL  BHI  steril  kemudian  dishaker selama  2  jam.  Lalu  kekeruhan  disamakan dengan  standar  Mc  Farland  1,5x10 8 CFU/mL dengan  mensuspensikannya  ke  dalam  larutan salin sehingga akan memiliki kekeruhan yang sama dengan standar Mc Farland.
5. Pembuatan Seri Konsentrasi
Larutan  uji  dibuat  menjadi  3  seri konsentrasi  yaitu  16%,  8%,  dan  4%. Konsentrasi 16% diperoleh dengan menimbang 160  mg  sampel  dilarutkan  dengan  1  mL DMSO,  konsentrasi  8%  diperoleh  dengan menimbang  80  mg  sampel  dilarutkan  dengan 1  mL  DMSO,  dan  konsentrasi  4%  diperoleh dengan  menimbang  40  mg  sampel  dilarutkan dengan 1 mL DMSO.
6.  Identi � kasi bakteri Suspensi  bakteri  diambil  1  ujung  mata ose  dan  diratakan  pada  gelas  obyek  yang telah  dibebaslemakkan  dengan  dipanasi  di atas  nyala  Bunsen  hingga  kering  kemudian ditetesi  formalin  1%  ditunggu  5  menit kemudian  dikeringkan  lagi  dan  preparat  siap dicat. Preparat yang telah siap dicat digenangi dengan cat Gram A selama 1-3 menit kemudian digenangi  cat  Gram  B  selama  0,5-1  menit, setelah  itu  cat  dibuang  dan  dicuci  dengan air.  Preparat  kemudian  ditetesi  cat  Gram  C sampai  warna  cat  dilunturkan.  Setelah  itu preparat  digenangi  cat  Gram  D  selama  1-2 menit kemudian dicuci dan dikeringkan dalam udara kamar. Preparat siap diperiksa di bawah mikroskop dengan pembesaran 1000 kali.
7.  Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Media MH sebanyak 20 mL dipadatkan dalam cawan petri, kemudian 250 μ L suspensi bakteri  1,5  x10 8 CFU/mL  dimasukkan  dan
diratakan  dengan spreader  glass .  Masing- masing  dari  konsentrasi  4%  b/v,  8%  b/v  dan 16% b/v diambil 10 μ L dan dimasukkan dalam disk yang kosong, sehingga disk mengandung ekstrak  dan  fraksi  sebesar  400 μ g,  800 μ g, 1600 μ g.  Disk  diletakkan  di  atas  media  dan diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37 0 C. Disk standar sipro � oksasin 5 μ g /disk sebagai kontrol  positif  pada  bakteri Staphylococcus epidermidis ,  gentamisin  10 μ g  /disk  sebagai kontrol  positif  pada  bakteri Klebsiella pneumoniae, dan  DMSO  sebagai  kontrol negatif.  Aktivitas  antimikroba  ditentukan dengan  mengukur  diameter  zona  hambat dinyatakan dalam mm.
8. Kromatogra � Lapis Tipis
Silika  gel  GF  254  nm  yang  akan digunakan  diaktifkan  terlebih  dahulu  dengan cara  dipanasi  dalam  oven  pada  suhu  100°C selama  1  jam.  Fase  diam  yang  sudah  siap kemudian  ditotolkan  dengan  sampel  dan dibiarkan  sampai  kering,  selanjutnya  dielusi dengan fase gerak kloroform:heksan (8:2) v/v untuk ekstrak etanol, fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat dan metanol:etil asetat (5:9) v/v untuk fraksi etanol-air, sehingga dapat menghasilkan pemisahan  yang  baik.  Setelah  pengembangan selesai  plat  diangkat  dan  dikeringkan  sampai pelarut menguap semua.
Bercak  pada  plat  KLT  diamati  di bawah  sinar  tampak  dan  di  bawah  sinar  UV dengan  panjang  gelombang  254  nm  dan  366 nm.  Selanjutnya  disemprot  dengan  beberapa pereaksi semprot seperti Dragendorff,
sitroborat, FeCl 3 , dan Liebermann Burchard.
9.  Bioautogra �
Metode  bioautogra � digunakan  untuk mendeteksi  senyawa  aktif  yang  mempunyai aktivitas  sebagai  antibakteri.  Metode  ini dilakukan  dengan  cara  meletakkan  plat hasil  elusi  pada  permukaan  media  MH  yang telah  diinokulasi  dengan  bakteri Klebsiella pneumoniae dan Staphylococcus  epidermidis sebanyak  250 μ L  selama  20  menit.  Plat diangkat kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Bila bercak pada plat hasil elusi tersebut  memiliki  aktivitas  antibakteri  maka dengan adanya difusi golongan senyawa aktif akan terbentuk zona jernih.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan fraksinasi
Ekstraksi dilakukan untuk mendapatkan zat aktif berkhasiat. Maserasi tergolong metode yang mudah  dilakukan  dan  peralatan  yang  digunakan sederhana.  Proses  maserasi  tidak  memerlukan pemanasan,  hanya  dengan  melarutkan  simplisia dalam  pelarut  etanol  96%,  tetapi  waktu  yang dibutuhkan untuk maserasi cukup lama. Simplisia dilarutkan dalam pelarut etanol 96% selama tiga hari dan diaduk kurang lebih tiga kali dalam sekali maserasi.  Berat  ekstrak  kental  yang  diperoleh sebanyak 47 g dengan rendemen 4,7%. Fraksinasi dilakukan  dengan  menggunakan  pelarut  yang berbeda-beda tingkat kepolarannya. Pelarut yang digunakan  untuk  fraksinasi  adalah  n-heksan,  elil asetat,  dan  etanol-air.  Metode  yang  digunakan pada  penelitian  ini  adalah  partisi  cair-cair dengan  menggunakan  corong  pisah.  Pemilihan fraksinasi dengan corong pisah dilakukan karena peralatannya  sederhana  dan  tidak  membutuhkan waktu  yang  lama.  Hasil  yang  diperoleh  fraksi n-heksan  3,24  g  dengan  rendemen  16,2%,  etil asetat  2,91  g  dengan  rendemen  14,55%,  dan etanol-air 12,25 g dengan rendemen 16,25%.
Identi  kasi Bakteri Tujuan dari identi � kasi bakteri yaitu untuk memastikan  kebenaran  bahwa  bakteri  yang dipakai benar bakteri Klebsialla pneumoniae dan Staphylococcus  epidermidis .  Hasil  pengecatan Gram  yang  telah  diamati  di  bawah  mikroskop menunjukkan  dahwa Klebsiella  pneumoniae berbentuk  batang  berwarna  merah,  bakteri Staphylococcus  epidermidis berbentuk  bulat bergerombol serta berwarna ungu.

## Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi
Pengujian  dilakukan  untuk  mengetahui khasiat  antibakteri  dari  kulit  batang  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  terhadap  bakteri Klebsiella  pneumoniae dan Staphylococcus epidermidis. Metode untuk uji aktivitas antibakteri adalah  cara  Kirby  Bauer  ( Metode  disc  diffusion ) dengan  media  Mueller  Hinton  (MH).  Pemilihan metode Kirby Bauer pada uji aktivitas antibakteri karena  pengerjaannya  sederhana.  Hasil  uji aktivitas antibakteri seperti Tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat, dan etanol-air terhadap bakteri Klebsiella pneumoniae dan Staphylococcus epidermidis
Sampel Konsentrasi ( μ g/disk) Diameter Zona Hambat (mm) Klebsialla pneumoniae Staphylococcus epidermidis Ekstrak etanol 400 μ g/disk 8±0,5 10,17±0,29 800 μ g/disk 10,34±0,58 11±0 1600 μ g/disk 12,17±0,76 11,5±0 Fraksi n-heksan 400 μ g/disk 8,34±0,29 8,5±0,5 800 μ g/disk 9,34±0,29 9,34±0,29 1600 μ g/disk 10,84±0,76 10,67±0,29 Fraksi etil asetat 400 μ g/disk 9,17±0,29 9,5±0,5 800 μ g/disk 10,34±0,29 10,67±0,29 1600 μ g/disk 11,17±0,29 12,67±1,26 Fraksi etanol-air 400 μ g/disk 8,17±0,29 9±0 800 μ g/disk 9,17±0,29 9,67±0,29 1600 μ g/disk 10±0 10,34±0,29 Kontrol ( + ) Gentamisin 10 μ g/disk 13,34±2,25 - Kontrol ( + ) Sipro � okasin 5 μ g/disk - 31,5±0 Kontrol ( - ) DMSO 10 μ g/disk 6±0 6±0
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  besarnya konsentrasi  suatu  sampel  dapat  mempengaruhi hasil  diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan. Ekstrak  etanol  dengan  konsentrasi  4%,  8%, 16%  menghasilkan  zona  hambat  8±0,5; 10,34±0,58;  12,17±0,76  untuk  bakteri Klebsiella pneumoniae dan 10,17±0,29; 11±0; 11,5±0  untuk Staphylococcus  epidermidis. Fraksi  n-heksan dengan  konsentrasi  4%,  8%,  16%  menghasilkan zona  hambat  8,34±0,29;  9,34±0,29;  10,84±0,76 untuk bakteri Klebsiella pneumoniae dan 8,5±0,5; 9,34±0,29;  10,67±0,29  untuk Staphylococcus epidermidis. Fraksi etil asetat dengan konsentrasi 4%,  8%,  16%    menghasilkan  zona  hambat 9,17±0,29; 10,34±0,29; 11,17±0,29 untuk bakteri Klebsiella pneumoniae dan 9,5±0,5; 10,67±0,29; 12,67±1,26  untuk Staphylococcus  epidermidis. Fraksi etanol-air dengan konsentrasi 4%, 8%, 16% menghasilkan zona hambat 8,17±0,29; 9,17±0,29; 10±0  untuk  bakteri Klebsiella  pneumoniae dan 9±0; 9,67±0,29; 10,34±0,29 untuk Staphylococcus epidermidis. Kontrol  positif  (gentamisin)  untuk bakteri Klebsiella  pneumoniae menghasilkan zona  hambat  13,34±2,25,  kontrol  positif (sipro � oksasin)  untuk  bakteri Staphylococcus epidermidis 31,5±0.  Kontrol  negatif  (DMSO) untuk  kedua  bakteri  yakni  bakteri Klebsiella pneumoniae dan Staphylococcus  epidermidis
tidak  menghasilkan  zona  hambat  karena  DMSO tidak  mempunyai  aktivitas  sebagai  antibakteri. Sehingga dapat disimpulkan bahwa semakin besar konsentrasi suatu sampel akan semakin besar pula diameter zona hanbat antibakteri yang dihasilkan.
Kromatogra  Lapis Tipis Kromatogra � Lapis Tipis termasuk analisis kualitatif  untuk  mengetahui  kandungan  kimia yang terdapat pada ekstrak etanol dan fraksi kulit batang  belimbing  wuluh  yang  memiliki  aktivitas sebagai antibakteri.
Senyawa  yang  akan  dideteksi  adalah alkaloid, � avonoid,  saponin,  dan  fenolik.  Fase diam yang dipakai adalah silika GF 254, fase gerak kloroform: heksan (8:2) v/v untuk ekstrak etanol, fraksi n-heksan, dan fraksi etil asetat. Fase gerak metanol:etil  asetat  (5:9)  v/v  untuk  fraksi  etanol- air.  Konsentrasi  sampel  yang  digunakan  semua sama  yakni  40%  dengan  jarak  pengembangan  5 cm. Pengamatan hasil bercak dilihat secara visual, UV  254  nm,  UV  366  nm,  dan  dengan  pereaksi semprot.  Pereaksi  semprot  yang  digunakan untuk  mendeteksi  fenolik  adalah  FeCl 3 yang akan memberikan warna hitam, biru, atau kelabu (Harborne,  1996).  Pereaksi  semprot  sitroborat digunakan  untuk  mendeteksi  senyawa � avonoid, di  bawah  sinar  UV  366  nm  terdapat  bercak
ber � uoresensi    kuning  atau  hijau  pada  plat  KLT (Alam, 2012). Senyawa alkaloid dideteksi dengan pereaksi semprot Dragendorff akan menghasilkan warna  coklat  atau  orange-coklat  dilihat  dengan pengamatan  visual.  Senyawa  saponin  digunakan pereaksi  semprot  LB  (Liebermann-Burchard)
di  bawah  sinar  UV  366  nm  akan  memberikan warna  hijau  dan  biru  yang  menandakan  adanya senyawa  steroid  saponin  dan  akan  memberikan warna merah yang menandakan adanya senyawa triterpen saponin (Wagner dan Bladt, 1995).
Tabel 2.   Hasil KLT ekstrak etanol kulit batang belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L . ) Spot Rf Deteksi Perkiraan Senyawa Visual UV 254 UV 366 ( � uoresensi) FeCl 3 (Vis) Sitroborat LB Dragendorff 1 0,4 - Pemadaman Hijau - Hijau Hijau - Steroid Saponin 2 0,5 - - - - - Hijau - Steroid Saponin 3 0,54 Kuning Pemadaman Kuning Coklat Merah Merah Kuning - 4 0,58 Hijau Pemadaman Merah Kelabu Merah Kuning Hijau Fenolik 5 0,62 - Pemadaman Biru - Biru Biru - Steroid Saponin 6 0,64 Hijau Pemadaman Merah Kelabu Merah Merah Hijau Fenolik dan Triterpen 7 0,8 - - - - Biru - - - 8 0,9 - - Biru - Biru Biru - -
Berdasarkan  tabel  2  ekstrak  etanol  kulit batang  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L .) menunjukkan  adanya  senyawa  golongan  steroid saponin,  fenolik,  dan  triterpen  saponin.  Ekstrak etanol  kulit  batang  belimbing  wuluh  positif mengandung  senyawa  golongan  steroid  saponin ditunjukkan dengan terjadi pemadaman di UV 254 nm  dan  dengan  pereaksi  semprot  Liebermann- Burchard dilihat di UV 366 nm akan memberikan warna hijau dan biru. Ekstrak etanol kulit batang
belimbing  wuluh  positif  mengandung  senyawa golongan fenolik dilihat secara visual ditunjukkan dengan pereaksi FeCl 3 akan menunjukkan warna kelabu.  Ekstrak  etanol  kulit  batang  belimbing wuluh  positif  mengandung  senyawa  golongan triterpen  saponin  ditunjukkan  dengan  terjadi pemadaman di UV 254 nm dan dengan pereaksi semprot Liebermann-Burchard dilihat di UV 366 nm akan memberikan warna merah.
Tabel 3.   Hasil KLT fraksi n-heksan kulit batang belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L . )
Spot Rf Deteksi Perkiraan Senyawa Visual UV 254 UV 366 ( � uoresensi)
FeCl 3 (Vis) Sitroborat LB Dragendorff 1 0,5 Hijau Pemadaman Merah Hijau Merah Merah Hijau Fenolik 2 0,56 - Pemadaman - Coklat - Coklat - - 3 0,58 Hijau muda Pemadaman Merah Coklat Merah Hijau Hijau Steroid Saponin 4 0,6 Hijau Pemadaman Biru - Biru Merah Hijau - 5 0,62 Hijau Pemadaman Coklat Hijau Coklat Coklat Coklat tua - 6 0,7 - Pemadaman Merah Hijau Merah Merah Kuning Fenolik dan alkaloid 7 0,8 - Pemadaman Biru - Kuning Merah - Flavonoid 8 0,88 - Pemadaman Biru - Kuning Biru - Flavonoid dan Steroid Saponin
Berdasarkan tabel 3 diatas fraksi n-heksan kulit  batang  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L .) menunjukkan  adanya  senyawa  golongan fenolik,  steroid  saponin,  dan � avonoid.  Fraksi n-heksan  kulit  batang  belimbing  wuluh  positif
mengandung  senyawa  golongan  fenolik  dilihat secara  visual  ditunjukkan  dengan  pereaksi  FeCl 3 akan  menunjukkan  warna  hijau.  Fraksi  n-heksan kulit batang belimbing wuluh positif mengandung senyawa  golongan  steroid  saponin  ditunjukkan
dengan  terjadi  pemadaman  di  UV  254  nm  dan dengan  pereaksi  semprot  Liebermann-Burchard dilihat  di  UV  366  nm  akan  memberikan  warna hijau  dan  biru.  Fraksi  n-heksan  kulit  batang
belimbing  wuluh  positif  mengandung  senyawa golongan � avonoid  ditunjukkan  dengan  bercak ber � uoresensi  kuning di bawah sinar UV 366 nm dengan pereaksi sitroborat.
Tabel 4.  Hasil KLT fraksi  etil asetat kulit batang belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L . )
Spot Rf Deteksi Perkiraan Senyawa Visual UV 254 UV 366 ( � uoresensi) FeCl 3 (Vis) Sitroborat LB Dragendorff 1 0,54 - - Hijau - Hijau Orange - - 2 0,6 Kuning Pemadaman Kuning Coklat Kuning Hijau tua Kuning Steroid Saponin dan � avonoid 3 0,62 Orange Pemadaman Kuning Coklat Orange Kuning Orange Alkaloid 4 0,64 - - Biru - Biru Biru - Steroid Saponin 5 0,8 - - Biru - Biru Biru - Steroid Saponin
Berdasarkan tabel 4 diatas fraksi etil asetat kulit batang belimbing wuluh ( Averrhoa  bilimbi L .) menunjukkan adanya senyawa golongan steroid saponin, alkaloid, dan � avonoid. Fraksi etil aseat kulit batang belimbing wuluh positif mengandung senyawa  golongan  steroid  saponin  ditunjukkan dengan  pereaksi  semprot  Liebermann-Burchard yang  dilihat  di  UV  366  nm  akan  memberikan warna hijau dan biru. Fraksi etil aseat kulit batang belimbing  wuluh  positif  mengandung  senyawa golongan  alkaloid  dideteksi  dengan  pereaksi semprot  Dragendorff  akan  menghasilkan  warna orange  yang    dilihat  dengan  pengamatan  visual. Fraksi  etil  aseat  kulit  batang  belimbing  wuluh positif mengandung senyawa golongan � avonoid dideteksi  dengan  pereaksi  semprot  sitroborat
di  bawah  sinar  UV  366  nm  terdapat  bercak ber � uoresensi  kuning.
Hasil  dari  KLT  dapat  diketahui  bahwa ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat didapat spot pada plat sehingga dapat dipastikan terdapat senyawa yang terkandung dalam sempel tersebut sedangkan fraksi etanol-air tidak terdapat spot  pada  plat  diduga  sampel  tidak  terdapat senyawa yang terkandung didalamnya.
Uji Bioautogra  Bioautogra � termasuk  metode  yang spesi � k  dalam  mendeteksi  golongan  senyawa yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  dan  kulit batang  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L .) dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Hasil uji bioautogra � ekstrak etanol dan fraksi kulit batang belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) terhadap bakteri Klebsiella pneumoniae (A) dan Staphylococcus epidermidis
Keterangan: Eks  :  Ekstrak ET  :  Etil asetat H  :  Heksan EA  :  Etanol-air
Hasil  uji  yang  didapat  dengan  konsentrasi masing-masing  sampel  40%  ekstrak  etanol dan  fraksi  kulit  batang  belimbing  wuluh  tidak menghasilkan  area  jernih  di  sekitar  totolan  yang menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Hal  tersebut kemungkinan  terjadi  karena  konsentrasi  sampel masih  rendah,  penotolan  sampel  kurang  banyak, dan  pada  saat  penempelan  plat  pada  media  agar waktu  yang  dibutuhkan  kurang  lama  sehingga sampel  belum  sepenuhnya  meresap  pada  media tersebut.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dari  penelitian  dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut:
Ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil asetat, dan fraksi etanol-air dari ekstrak etanol kulit batang  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L .) mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri Klebsiella  pneumoniae dan Staphylococcus epidermidis.
Ekstrak etanol kulit batang belimbing wuluh ( Averrhoa  bilimbi L.)  mengandung  senyawa fenolik,  steroid  saponin,dan  triterpen  saponin, Fraksi  n-heksan  kulit  batang  belimbing  wuluh ( Averrhoa  bilimbi L.)  mengandung  senyawa fenolik, � avonoid,  dan  saponin,  fraksi  etil  asetat kulit  batang  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  mengandung  senyawa  steroid,  alkaloid,  dan � avonoid.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut dengan  menggunakan  bagian  lain  dari  pohon belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  serta menggunakan  bakteri  lain  dan  dilakukan pemilihan fase gerak untuk fraksi etanol-air agar bisa  mendeteksi  senyawa  apa  yang  terkandung dalam fraksi etanol-air.

## DAFTAR PUSTAKA
Adisasmito,  A.  W.  &  Hadinegoro,  S.  R.  S.,  2004, Infeksi Bakteri Gram Negatif di ICU Anak: Epidemiologi,  Manajemen  Antibiotik  dan Pencegahan, Sari Pediatri , 6 (1), 32-39.
Alam, G., Mu � dah., Nasrum, M., Felix, K. & Umar., 2012,  Skrining  Komponen  Kimia  Dan
Uji  Aktivitas  Mukolitik  Ekstrak  Rimpang Bangle  ( Zingiber  purpureum Roxb.) Terhadap Mukosa Usus Sapi Secara In Vitro , Majalah Farmasi dan Farmakologi , 16 (3), 123  126.
Chowdhury,  S.  S.,  Uddin,  G.  M.,  Mumtahana, N.,Hossain, M. & Hasan, S. R. M., 2012, In Vitro  Antioxidant  and  Cytotoxic  Potential of  Hydromethanolic  Extract  of Averrhoa bilimbi L.  Fruits, International  Journal  of Pharmaceutical  Sciences  and  Research, 3 (7), 2263-2268.
De Smet, P. A., 1997. The Role of Plant Derived Drugs and Herbal Medicines in Healthcare, Drugs , 54, 108.
Gibson, J. M., 1996, Mikrobiologi dan Patologi Modern untuk Perawat , diterjemahkan oleh Soma, P.,
1, Jakarta, Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Gomes,  F.,  B.  Leite,  P.  Teixeira  &  Oliveira.R.,  2011,
Strategies  to  control Staphylococcus epidermidis bio � lms, Journal  of  Science against microbial pathogens, 843-852 Jawetz,  E,  J.  L., Adelberg,  E. A.,  1996, Mikrobiologi Kedokteran , Edisi XXII, Diterjemahkan oleh Bagian  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Airlangga,  Jakarta,  Penerbit Salemba Medika.
Jawetz,  E,  J.  L., Adelberg,  E. A.,  2001, Mikrobiologi Kedokteran , Edisi XXII, Diterjemahkan oleh Bagian  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Airlangga,  Jakarta,  Penerbit Salemba Medika.
Jawetz,  E,  J.L.,  Adelberg,  E.  A.,  2005, Mikrobiologi Kedokteran , Edisi XXII, Diterjemahkan oleh Bagian  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Airlangga,  Jakarta,  Penerbit Salemba Medika.
Karon,  B. , Ibrahim,  M.,  Mahmood,  A.,  Huq,  M.,
Chowdhury,  U.,  Hossain,  A., et  al .,  2011,
Preliminary Antimicrobial, Cytotoxic and  Chemical  Investigations  of Averrhoa bilimbi Linn. and Zizyphus mauritiana Lam . Bangladesh Pharmaceutical Journal, 14 (2),
127-131
Kumar,  K.,  Gousia.,  Anupama,  M.,  &  Naveena, L.,  2013,  A  Review  On  Phytochemical Constituents  And  Biological  Assays  of Averrhoa  bilimbi L . , International  Journal of  Pharmacy  and  Pharmaceutical  Science Research . 3 (4), 136-139.
Harborne,  J.  B.,  1996, Metode  Fitokimia:  Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan,  2nd ed, diterjemahkan  oleh  Padmawinata  K., Penerbit ITB, Bandung.
Pelczar,  M.  J.,  Chan,  E.  C.  S.,  1988, Dasar-Dasar Mikrobiologi , diterjemahkan oleh Hadioetomo,  R.  S.  550-551,  Penerbit
Universitas Indonesia, Jakarta.
Pushparaj,  P.,  Tan  CH.,  Tan  BKH.,  2000,  Effects of Averrhoa  bilimbi leaf  extract  on  blood glucose and lipids in streptozotocin  diabetic rats .  Journal  of  Ethnopharmacology ,  72, 69  76.
Radji, D. R. M., 2011, Buku Ajar Mikrobiologi : Panduan Mahasiswa  Farmasi  &  Kedokteran,  181 &  201,  Jakarta,  Penerbit  Buku  Kedokteran EGC.
Refdanita.,  Maksum,  R.,  Nurgani,  A.,  &  Endang, P.,  Pola  Kepekaan  Kuman  Terhadap Antibiotika Di Ruang Rawat Intensif Rumah Sakit  Fatmawati  Jakarta  Tahun  2001-2002,
Makara Kesehatan , 8 (2), 41-48.
Roth,  Hermann,  J.  &  Gottfried,  B.,  1998, Analisis Farmasi , universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Sari, L. O. R. K., 2006, Pemanfaatan Obat Tradisional dengan Pertimbangan Manfaat dan
Keamanan, Majalah  Ilmu  Kefarmasian ,  3
(1), 01-07
Siddque,  Uddin,  M.  M.  N.,  Islam,  S.,  Parvin,  S.,
&  Shahriar,  M.,  2013,  Phytochemical Screenings,  Thrombolytic  Activity  and Antimicrobial Properties of the bark extracts of Averrhoa bilmbi Linn., Journal of Applied Pharmaceutical Science , 3 (03), 094-096.
Susilo,  J.,  Teguh,  R.  T.,  &  Sumarno.,  2004,  Deteksi
Bakteri Klebsiella  pneumoniae Pada Sputum  Dengan  Metode  Imunositokimia Menggunakan  Anti Outer Membran Protein  Berat  Molekul  40  kDa Klebsiella pneumoniae Sebagai  Antibodi., Jurnal Kedokteran Brawijaya , 20 (1), 12-18.
Syahrurachman, A., Sujudi., Karuniawati, A., Santoso,
A.  U.  S.,  & Asmono,  N.,  1994,  Buku Ajar Mikrobiologi  Kedokteran,  Jakarta,  Binarpa Aksara.
Voight,1995,  Buku  Pelajaran  Teknologi  Farmasi, diterjemahkan oleh Noerono, Edisi V, Gajah Mada University Press, Yogyakarta.
Wagner, H., & Bladt, S., 1996, Plant Drug Analisys: A Thin  Layer  Chromatography  Atlas , Second Ed ., 350, New York, Spring.