ANALISIS TOTAL ANTOSIANIN DARI DAUN BAYAM MERAH ( Alternanthera Amoena Voss . ) BERDASARKAN PENGARUH PENAMBAHAN JENIS ASAM

## DINI HARIYATI ADAM
Program Studi Pendidikan Biologi STKIP Labuhan Batu, Jalan SM Raja No 126 A, Aek Tapa, Rantauprapat *Email : dini_adam89@yahoo.com
Diterima April 2015 dan Disetujui Juni 2015

## ABSTRAK
Bayam Merah ( Alternanthera Amoena Voss . ) merupakan salah satu jenis tanaman yang mengandung zat warna  antosianin.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  total  antosianin  dari  daun  bayam  merah ( Alternanthera  Amoena Voss . )  terhadap  pengaruh  penggunaan  jenis  asam.  Daun  bayam  merah  yang segar diekstraksi dengan pelarut etanol/HCl 0,1 M (A), etanol/asam sitrat 3% (B), etanol/CH 3 COOH 25 % (v/v)  (C)  dan  pelarut  etanol  (D),  ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi  dalam  keadaan  gelap selama  24  jam.  Kemudian  diidentifikasi  dengan  spektroskopi  UV-Vis  dan  KLT.  Dari  analisis  data spektroskopi didapatkan jenis antosianin yang terdapat pada bayam merah yaitu sianidin yang menyerap pada λ  maksimum  sebesar  290  nm  (UV)  dan  536  (tampak)  yang  sesuai  dengan  literatur.  Kadar  total antosianin ekstrak A, B, C, dan D berturut-turut 132,76 mg/L ; 121,56 mg/L ; 107,21 mg/L ; 76,98 mg/L. Berdasarkan hasil Uji KLT  didapatkan nilai Rf sebesar 0,38. Hasil menunjukkan jenis asam yang paling efektif untuk mengekstraksi pigmen antosianin dari daun bayam merah yaitu dengan menggunakan jenis asam HCl karena memberikan hasil total antosianin paling tinggi.

## Kata kunci : antosianin, zat warna, spektroskopi UV-Vis, bayam merah

## PENDAHULUAN
Antosianin  merupakan  senyawa  kimia yang  tesebar  luas  di  alam  sebagai  zat  warna dalam tumbuhan. Pigmen antosianin larut
dalam  air  dan  memiliki  warna  merah  muda, merah,  ungu,  biru,  dan  kuning.  Kerangka dasar antosianin berasal dari kation flavilium 1,2
O C A B 2 3 4 5 6 7 8 1' 4' 5' 6' 3' 2' Kation flavilium Gambar 1. Kerangka dasar Antosianin 1
Subsituen gula pada antosianin biasanya  adalah  heksosa  (galaktosa  dan glukosa),  pentosa  (arabinosa)  dan  diglikosida (rutinosida).  Gugus  asil  pada  antosianin misalnya  asam  kumarat,  asam  ferulik,  asam asetat,  asam  malonat,  asam  kaffeit,  asam
sinapit,  asam  propionat,  dan  asam  suksinat. Struktur  dasar  dari  antosianin  adalah  C6-C3- C6, dan untuk membentuk antosianin disebabkan  karena  perbedaan  struktur  kimia pada  berbagai  tingkatan  pH,  antosianin ( anthos =  bunga, kyanos =  biru  )  berubah
warna  dari  merah  dalam  asam  ke  biru  dalam basa. 3
Isolasi  pigmen  dilakukan  dengan  cara mengekstrak  bahan  dengan  menggunakan pelarut  yang  sesuai  kepolarannya  dengan  zat yang  akan  diekstrak.  Ekstraksi  senyawa golongan  flavonoid  dianjurkan  dilakukan  pada suasana asam karena asam berfungsi mendenaturasi membran sel tanaman, kemudian melarutkan pigmen antosianin sehingga dapat keluar dari sel, serta mencegah oksidasi flavonoid. 4
Senyawa  golongan  flavonoid  termasuk senyawa  polar  dan  dapat  diekstraksi  dengan pelarut  yang  bersifat  polar  pula.  Beberapa pelarut  yang  bersifat  polar  diantaranya  etanol, air, dan etil asetat.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui total  antosianin  dari  daun  bayam  merah ( Alternanthera
Amoena Voss . ) terhadap pengaruh penggunaan jenis asam.

## METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  rotary evaporator  Heidolph  WB  2000,  plat  KLT, spektrofotometer  UV-Vis  (UV-1700  Series) Shimadzu,  kertas  saring  Whatman  No  1, alumunium foil, pH meter, termometer, serangkaian  alat  vakum,  aluminium  voil,  lampu UV,  serta  peralatan  gelas  yang  umum digunakan dalam laboratorium.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  daun  bayam  merah  segar,  dan bahan-bahan  kimia  berupa  pelarut  organik seperti  CH 3 CH 2 OH,  akuades,  asam  sitrat, CH 3 COOH  pekat,  HCl  pekat,  CH 3 COONH 4 , KCl, I 2 , NH 4 Cl, dan NH 4 OH.

## Ekstraksi
Ekstraksi  dimulai  dengan  menimbang daun  bayam  merah  sebanyak  100  gram  lalu sampel  dipotong  kecil-kecil.  Sampel  yang  telah halus  dipindahkan  ke  dalam  botol  gelap,  lalu ditambahkan  pelarut  etanol  yang  dibuat  dalam suasana asam hingga pH 3 menggunakan jenis asam  yaitu  HCl  0,1  M,  asam  sitrat  3%,  asam asetat  25%  (v/v)  serta  tanpa  menggunakan asam.  Kemudian  dilakukan  proses  ekstraksi secara  maserasi  pada  temperatur  kamar  (±
30 o C)  selama  24  jam  dalam  keadaan  gelap. kemudian  disaring  sehingga  didapatkan  filtrat. Filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan  rotary evaporator  sehingga  diperoleh  ekstrak  pekat lalu  dianalisis  spektroskopi  UV-Vis  pada panjang gelombang 250 – 700 nm.

## Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Pemisahan antosianin pada daun bayam merah dilakukan dengan metode KLT. Antosianin dipisahkan dengan cara menotolkan ekstrak  daun  bayam  merah  pada  plat  KLT kemudian  dielusi  menggunakan  eluen  n- Heksan 100 %, n-Heksan : etil asetat (8 : 2),  n- Heksan  :  etil  asetat  (6  :  4),  n-Heksan  :  etil asetat (4 : 6), n-Heksan : etil asetat (2 : 8), Etil asetat  100  %,  Etil  asetat  :  etanol  (8  :  2),  Etil asetat : etanol (6 : 4), Etil asetat : etanol (4 : 6), Etil asetat : etanol (2 : 8), etanol 100 %. Warna dilihat di bawah lampu UV dan dan nilai Rf dari masing-masing spot yang muncul dicatat.

## Penentuan Kadar Total Antosianin
Kadar  total  monomer  antosianin  dan kadar  total  antosianin  dalam  sampel  dapat dihitung dengan menggunakan rumus 5,6 : A = ( A 536 – A 700 ) pH 1,0 – ( A 536 – A 700 ) pH 5,0 Konsentrasi  monomer antosianin (mg/L) =
Dimana : A’     =  ( A 536 – A 700 ) pH 1,0 ε      =   absorbsivitas molar sianidin-3- glukosida  =   26900 L/mol.cm l      =   lebar cuvet (1 cm) MW  =   BM sianidin-3-glukosida = 449,2 g/mol DF    =   faktor pengenceran

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kandungan  total  antosianin  dari  daun bayam  merah  berdasarkan  jenis  asam  dapat dilihat  pada  tabel  1,  menunjukkan  bahwa penggunaan asam klorida menghasilkan konsentrasi  monomer  antosianin  dan  total antosianin tertinggi dibandingkan dengan asam asetat,  asam  sitrat  dan  tanpa  menggunakan asam.
Vol.  2, No. 2, Juli 2015 Hal : 9 – 12
Tabel 1 . Konsentrasi Monomer dan Total Antosianin Daun Bayam Merah dengan Variasi Jenis Asam Jenis Asam Konsentrasi monomer antosianin (mg/L) Total  Antosianin (mg/L) Tanpa asam 15,69 76,98 Etanol + CH 3 COOH 25% 30,73 107,21 Etanol + asam sitrat 3% 34,39 121,56 Etanol + HCl 0,1 M 43,08 132,76 Perbedaan konsentrasi
monomer antosianin  dan  total  antosianin  yang  dihasilkan untuk  setiap  jenis  asam  berkaitan  erat  dengan perbedaan  tetapan  disosiasi  dari  masing- masing  jenis  asam.  HCl  memiliki  tetapan disosiasi  yang  lebih  besar  dibandingkan CH 3 COOH.  Tetapan  disosiasi  untuk  HCl  10 7 dan  CH 3 COOH  1,75  x  10 -5 .  Semakin  besar tetapan  disosiasi  semakin  kuat  suatu  asam karena  semakin  besar  jumlah  ion  hidrogen yang dilepaskan ke dalam larutan. 7
Keadaan  yang  semakin  asam  akan menyebabkan  semakin  banyaknya  pigmen antosianin berada dalam bentuk kation flavilium yang  berwarna  hal  ini  disebabkan  karena
terjadinya  denaturasi  membran  sel  tanaman yang  kemudian  melarutkan  pigmen  antosianin dan dapat keluar dari sel sehingga pengukuran absorbansi akan meningkat.
A ntosianin  memiliki  nilai  λ maks yaitu  270- 290  nm  untuk  daerah  UV  dan  untuk  di  daerah tampak  yaitu  465-560  nm.  Dari  spektrum  di atas  didapatkan  nilai  λ  maksimum  yaitu  pada daerah  UV  290  nm  dan  pada  daerah  Vis  yaitu 536  nm  yang  merupakan  senyawa  antosianin berjenis  sianidin  dimana  untuk  antosianin berjenis sianidin memiliki puncak serapan pada λ 290 nm untuk UV dan λ 536 nm untuk daerah tampak. 8,9

## Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Tabel 2 . Hasil Uji KLT dengan berbagai komposisi eluen.
Eluen Noda yang muncul Rf dengan I 2 Dengan NH 3 Dengan I 2 n-Heksan 100 % Tidak ada noda Tidak ada noda - n-Heksan : etil asetat (8 : 2) Tidak ada noda Tidak ada noda - n-Heksan : etil asetat (6 : 4) 1 noda tailing 1 noda tailing 0,04 n-Heksan : etil asetat (4 : 6) 1 noda tailing 1 noda tailing 0,06 n-Heksan : etil asetat (2 : 8) 2 noda tailing 2 noda tailing 0,04; 0,06 Etil asetat 100 % 2 noda tailing 2 noda tailing 0,11; 0,06 Etil asetat : etanol (8 : 2) 1 noda tailing 2 noda tailing 0,13; 0,06 Etil asetat : etanol (6 : 4) 1 noda tailing 1 noda naik 2 noda tailing 0,17; 0,06 ; 0,06 Etil asetat : etanol (4 : 6) 1 noda naik 1 noda tailing 1 noda naik 2 noda tailing 0,42 0,33; 0,06 Etil asetat : etanol (2 : 8) 2 noda naik 2 noda naik 1 noda tailing 0,47; 0,34 0,06 Etano 100% 2 noda naik 3  noda naik                        0,49; 0,38 0,06
Dari  KLT  awal,  diketahui  bahwa  pada  eluen  n- heksan  100%  dan  n-heksan  (8  :  2)  tidak  ada noda yang terelusi. Noda mulai naik pada eluen n-heksan : etil asetat (6 : 4). Noda yang muncul dilihat dengan menggunakan 2 reagen penampak  noda  yaitu  NH 3 dan  I 2 ,  penggunaan kedua  reagen  ini  memberikan  hasil  yang berbeda,  pada  reagen  NH 3 hanya  senyawa yang memberikan fluorisensi yang dapat di lihat di  bawah  lampu  UV  sedangkan  senyawa  yang tidak  memberikan  noda  yang  berfluorisensi dapat  dilihat  menggunakan  I 2 ,  karena senyawa yang  tidak  memiliki  noda  yang  berfluorisensi diduga bukan golongan antosianin, karena tidak memiliki  ikatan  rangkap  yang  berkonjugasi sehingga  tidak  dapat  dilihat  di  bawah  lampu UV.
KLT  ini  bertujuan  untuk  menentukan  jenis pelarut  yang  baik  sehingga  dapat  memisahkan senyawa  yang  terkandung  dalam  sampel.  Dan pelarut yang sesuai yaitu etil asetat : etanol (8 : 2).  Berdasarkan  literatur  Rf  untuk  golongan antosianin yaitu 0,36 – 0,38.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Z, Nazulis, dkk. 2002. Kimia Bahan Alam . Reviewer  :  Nurhasnah  Aliunir.  Penerbit
UNP. Padang.
2. Shi,  Z.  Lin,  M.  And  Francis.  F.J  1992 .
Stability of Anthosianins
from Tradescania  pallida .  Jurnal  of  Food Science 57 (3): 758-760.
3. Santoni,  A,  Djaswir  Darwis,  Sukmaning Syahri.  2013. Isolasi  Antosianin  dari Buah Pucuk Merah (syzygium campanulatum  korth.)  Serta  Pengujian Antioksidan dan Aplikasi sebagai Pewarna  Alami .  Prosiding  Semirata FMIPA Universitas Lampung.
4. Robinson,  T.  1995. Kandungan  Organik
Tumbuhan Tinggi . Edisi ke-6.
Penerjemah  :  Kosasih  Padmawinata. Penerbit ITB. Bandung
5. Wrolstada,  Ronald,    Robert  W.  Dursta and  Jungmin  Leeb.2005. Tracking  color and  pigment  changes  in  anthocyanin products. Department  of  Food  Science and  Technology,Wiegand  Hall,  Oregon State University.
6. Giusti,  M.  M.  dan  R.  E.  Worlstad..  2001.
Characterization  and  Measurement        of Anthocyanins by UV-Visible Spectroscopy . Oregon State University.
7. Anis,  Elfi. Identifikasi  dan  Uji  Kualitas
Pigmen Kulit Buah Naga Merah (Hylocareus costaricensis) pada Beberapa Umur Simpan dengan Perbedaan Jenis Pelarut.
8. Qin,  Cuanguang.  2010. Analysis  and Characterisation  of  Anthocyanins  in Mulberry Fruit . Vol 28. No.2, 117-126. 9. Markham, K.R. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Penerjemah : Kosasih  Padmawinata.  Penerbit  ITB.
Bandung.