Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol. 8 No.2  Desember 2022 Avaiable online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p -ISSN : 2442-6032 e -ISSN :  2598-9979
Optimasi Formula Nanoemulsi Antioksidan Minyak Nilam ( Pogostemon cablin Benth.) dengan Metode Box Behnken Design

## Ferdy Firmansyah, Widia Wulandari, Wildan Khairi Muhtadi, Nofriyanti
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau

## ABSTRAK
Minyak  nilam  ( Pogostemon  cablin Benth.)  yang memiliki konstituen utama patchouli alcohol menunjukkan  aktivitas  antioksidan.  Karakteristik khusus dari minyak nilam yaitu memiliki sifat volatilitas yang  tinggi  sehingga  perlu  untuk  diformulasi  menjadi bentuk  sediaan  yang  lebih  stabil  seperti  nanoemulsi. Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk  mendapatkan konsentrasi  optimum  dari  masing-masing  komponen penyusun  nanoemulsi  yang  melibatkan  proses  yaitu waktu  pengadukan  yang  menghasilkan  sediaan nanoemulsi dengan karakteristik yang baik menggunakan Box  Behnken  Design (BBD)  serta melakukan uji aktivitas antioksidan nanoemulsi minyak nilam.  Konsentrasi Smix (surfaktan  dan  kosurfaktan), air,  dan  waktu  pengadukan  merupakan  faktor  yang diamati  dalam  optimasi  formula  dan  sebagai  respon digunakan  persen  transmitan.  Karakteristik  yang diamati  antara  lain  rata-rata  ukuran  partikel,  indeks
polidispersitas,  dan  zeta  potensial.  Berdasarkan  data diagram  fase  digunakan  minyak  nilam  5%.  Data  hasil optimasi  diperoleh  nilai  konsentrasi Smix 24%,  air 35,511%,  dan  waktu  pengadukan  5,516  menit, memberikan  nilai  rata-rata  ukuran  partikel  12,76  nm, indeks polidispersitas 0,162, dan zeta potensial -26,1 mV. Aktivitas  antioksidan  nanoemulsi  minyak  nilam menunjukkan  nilai  IC 50 >1000  ppm.  Sehingga  dapat disimpulkan  bahwa Box  Behnken  Design (BBD)  dapat digunakan  untuk  optimasi  nanoemulsi  minyak  nilam yang  menghasilkan  nanoemulsi  dengan  karakteristik yang  baik.  Penelitian  lebih  lanjut  diperlukan  untuk menentukan konsentrasi minyak nilam yang diformulasikan  sebagai  nanoemulsi  untuk  penggunaan sebagai antioksidan.
Kata Kunci : Antioksidan, Box Behnken Design (BBD), Minyak Nilam, Nanoemulsi, Optimasi

## ABSTRACT
Patchouli oil ( Pogostemon cablin Benth.) with its main content of patchouli alcohol showed antioxidant activity. The  special  characteristic  of  patchouli  oil  is  that  it  has high volatility, so it needs to be formulated into a more stable  dosage  form  such  as  nanoemulsion.  This  study aimed to determine the optimum concentration of each component  of  the  nanoemulsion  which  involves  the process of stirring time to produce a nanoemulsion with good  characteristics  using  Box  Behnken  Design  (BBD) and  to  test  the  antioxidant  activity  of  patchouli  oil nanoemulsion.  The  concentration  of  Smix  (surfactant and cosurfactant), water, and stirring time were factors that played a role in the optimization of the formulation and as a response the transmittance percent was used. The  observed  characteristics  were  particle  size, polydispersity  index,  and  zeta  potential.  Based  on  the
phase diagram data, 5% patchouli oil was used. The data obtained  from  the  optimization  results  yielded  Smix concentration value of 24%, water 35.511%, and stirring time  5.516  minutes,  giving  an  average  particle  size  of 12.76 nm, polydispersity index 0.162, and zeta potential -26.1 mV. The antioxidant activity study yielded the IC 50 value of >1000 ppm. Therefore, it can be concluded that Box Behnken Design (BBD) can be used for optimization of  patchouli  oil  nanoemulsion  which  produced  the nanoemulsion  with  suitable  characteristics.  Moreover, the further study is needed to determine the patchouli oil concentration in the nanoemulsion dosage form that is suitable for the use as an antioxidant.
Keywords  :  Antioxidants,  Box  Behnken  Design  (BBD), Nanoemulsion, Optimization, Patchouli Oil
Penulis Korespondensi : Informasi Artikel Wildan Khairi Muhtadi Submitted : 01 November 2022 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau Accepted : 09 Desember 2022 E-mail : muhtadiwildan@gmail.com Published : 27 Desember 2022 DOI :https://doi.org/ 10.35311/jmpi.v8i2.259

## PENDAHULUAN
Pada  saat  ini,  seiring  dengan meningkatnya  gerakan back  to  nature , masyarakat  menganggap  obat  tradisional menunjukkan  harga  yang  murah  serta efek  samping  yang  minimal  bila dibandingkan dengan obat modern (Ana & Dyah,  2011).  Salah  satu  tumbuhan  asal Indonesia  yang  sudah  dikenal  oleh masyarakat dalam pengobatan tradisional adalah  tanaman  nilam  ( Pogostemon cablin ).  Minyak  nilam  adalah  minyak atsiri  yang  didapatkan  dari  proses penyulingan bagian-bagian tanaman nilam.  Minyak  nilam  memiliki  nilai komoditi  yang  sangat  prospektif  dan termasuk  sebagai  salah  satu  komoditas terbesar  di  Indonesia  (Harimurti  dkk., 2013).
Patchouli alcohol merupakan konstituen  terbanyak  penyusun  minyak nilam  dengan  kandungan  sebesar  34,1  % dan menjadi salah satu penentu bau serta kualitas  dari  minyak  nilam.  Kandungan senyawa patchouli alcohol dan turunannya, fenol, serta golongan terpenoid seperti seychellene bertanggung jawab  untuk  aktivitas  antibakteri  dan antioksidan  pada  tanaman  nilam.  Selain itu,  senyawa  aromatik  aktif  seperti  α- cadinol  (35.78%)  dan patchouli  alcohol (34.85%) menjadi komponen utama yang memberikan  aktivitas  antioksidan  dalam minyak nilam (Suprijono dkk., 2015).
Uji  kualitatif  antioksidan  dengan menggunakan  DPPH  ( 1,1  diphenyl-2-
picrylhydrazyl )  menunjukkan  minyak nilam  berpotensi  sebagai  antioksidan. Hasil pengujian secara kuantitatif aktivitas  antioksidan  minyak  nilam  15% diperoleh  nilai  EC 50 sebesar  19,95% (Suprijono dkk., 2015). Aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  minyak  nilam memperoleh  nilai  IC 50 sebesar  18 𝜇 g/mL dengan DPPH dan 20 𝜇 g/mL menggunakan ABTS ( 2,2-Azinobis 3-ethyl benzothiazoline  6-sulfonic  acid )  serta kemampuan  penghambatan  moderat pada  superoksida  dan  nitrit  oksida (Dechayont dkk., 2017). Hasil ini memiliki kesesuaian  dengan uji pendahuluan yang diperoleh  nilai  IC 50 untuk  minyak  nilam murni  sebesar  13,123  µg/ml  atau  <50 µg/ml termasuk  kedalam  kategori  sangat aktif.
Minyak nilam memiliki karakteristik  khusus  yaitu  bersifat  volatil sehingga  apabila  disimpan  pada  kondisi suhu  ruangan  atau  digunakan  secara langsung  akan  menguap  dan  dapat menurunkan  aktivitasnya  (Smith  dkk., 2019). Untuk itu bahan aktif dalam bentuk minyak  atsiri  perlu  diformulasikan  ke dalam  suatu  bentuk  sediaan  yang  lebih stabil  seperti  nanoemulsi.  Diketahui sediaan  mikroemulsi  hanya  stabil  secara termodinamika sedangkan pada nanoemulsi selain stabil secara termodinamika juga stabil secara kinetika. Nanoemulsi  akan  menjerat  bahan  aktif minyak  atsiri  sehingga  tidak  mudah
menguap  dan  lebih  stabil  secara  kinetika (Fatmasari, 2019).
Teknologi  nano  banyak  digunakan dalam sistem penghantaran zat aktif suatu sediaan  obat  pada  saat  ini.  Partikel  atau globul  pada  skala  nanometer  mampu mengatur  kecepatan  pelepasan  zat  aktif, meningkatkan  level  kelarutan,  dan meningkatkan absorpsi obat. Nanoemulsi merupakan  bentuk  sediaan  yang  terdiri dari  fase  minyak  dan  fase  air  yang distabilkan oleh kombinasi surfaktan dan kosurfaktan  dengan  droplet  berukuran antara 100-200 nm. Ukuran tetesan yang kecil  dapat  mencegah  sedimentasi, flokulasi,  dan  fluktuasi.  Ukuran  globul secara signifikan mempengaruhi efektivitas formula. Semakin kecil ukuran partikel yang terdispersi, semakin mudah sediaan  untuk  menembus  permukaan kulit  sehingga  dapat  meningkatkan penetrasi ke dalam kulit dan meningkatkan  efektifitas  (Jaiswal  dkk., 2015).
Konstituen  yang  berperan  dalam memnentukan keberhasilan sistem nanoemulsi  adalah  jumlah  fase  minyak dan Smix (surfaktan  dan  kosurfaktan) (Chime  dkk.,  2014).    Surfaktan  adalah suatu  zat  yang  mampu  mengurangi tegangan  permukaan  suatu  medium  dan melemahkan  tegangan  antarmuka  antar dua fasa yang berbeda derajat kepolarannya  (Hambali  dkk.,  2019). Kosurfaktan  meningkatkan  dispersi  dan kelarutan obat dengan cara meningkatkan
hubungan molekul surfaktan yang meneyebabkan  terbentuknya  tegangan antarmuka yang semakin mampat (Sahumena  dkk.,  2019).  Surfaktan  dan kosurfaktan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  Tween  80  dan polyethyleneglycol (PEG) 400. Kombinasi Tween  80  dan  PEG  400  dalam nanoemulsi  menunjukkan  tampilan  yang jernih  dan  mampu  membentuk  emulsi berukuran nano yang stabil (Wahyuningsih & Putranti, 2015).
Baru-baru  ini  penerapan  desain eksperimental  statistik  untuk  formulasi farmasi  telah  terbukti  efisien  dalam memperoleh  informasi  yang  diperlukan untuk  memahami  hubungan  antara variabel independen dan dependen dalam formulasi.  Box  Behnken  Design  (BBD) adalah  sebuah  metode  yang  dapat digunakan  untuk  mengoptimalkan  suatu formulasi.  Nursal  dkk.,  2019  berhasil mendapatkan  kondisi  optimum  dari nanoemulsi  Natrium  Askorbil  Fosfat menggunakan  metode  uji  Box  Behnken.
Munawiroh dkk., 2019 berhasil mengoptimasi sediaan nanoemulsi minyak  biji  anggur    menggunakan  BBD dengan  faktor  konsentrasi  Smix,  waktu sonikasi, dan pulsar rate .
Sejauh  ini  belum  ditemukan penelitian  tentang  optimasi  nanoemulsi minyak  nilam  dengan  menggunakan pendekatan  Box  Behnken  Design  (BBD). Oleh  karena  itu  peneliti  tertarik  untuk melakukan  optimasi  nanoemulsi  minyak
nilam  dengan  menggunakan  pendekatan BBD  yang  bertujuan  untuk  mengetahui konsentrasi optimum dari masing-masing komponen  penyusun  nanoemulsi  yang terdiri dari fase air, fase minyak, dan Smix (campuran  surfaktan-kosurfaktan)  yang melibatkan proses yaitu waktu pengadukan  yang  menghasilkan  sediaan nanoemulsi  dengan  karakteristik  yang baik  serta  melakukan  uji  aktivitas antioksidan  nanoemulsi  sebagai  inovasi baru  dalam  penghantaran  nanoemulsi minyak nilam.

## METODE PENELITIAN Alat
Timbangan  analitik  (Shimadzu® ATX224),  pH  meter  (Ohaus®  ST300), Piknometer,  Refraktometer  (KEM  Kyoto Electronic® RA-130), Hot Plate
(Thermo®), Magnetic  Stirrer (Daihan®
MSH-20D),  Spektrofotometer  UV-Vis (Shimadzu  UV  Spechtrophotometer,  UV- 1800) , Tabung  Eppendorf, Micropipette (Thermo  scientific  dan  Finnpipette), Particle Size Analyzer (HORIBA SZ-100),
Kertas  Whatman  0.45,  dan  Seperangkat Alat Gelas (Pyrex).
Bahan
Minyak  Atsiri  Nilam  ( Pogostemon cablin Benth.)  (CV.  Eteris  Nusantara), Tween 80 (Brataco), PEG 400 (Petronas), dan Aquadest (Brataco).
Rancangan  Optimasi  Nanoemulsi Minyak Nilam
Nanoemulsi dibuat dengan metode titrasi,  dimana  fase  minyak  di  masukkan ke  dalam  vial  dan  di  tambahkan Smix (surfaktan dan kosurfaktan) dicampurkan dengan menggunakan stirrer dan ditunggu  beberapa  menit.  Setelah  itu ditambahkan  fase  air  secara  titrasi  tetes demi  tetes  hingga  5  mL.  Masukkan  data yang didapat ke diagram fase menggunakan software Prosim  (Shafiq- un-Nabi dkk., 2007)
Penentuan  Batas  Atas  dan  Batas Bawah Komponen Nanoemulsi Minyak Nilam
Optimasi formula nanoemulsi menggunakan  model Respon  Surface berdasarkan  area  pada  proses  uji pendahuluan  di  diagram  fase  yang menghasilkan nanoemulsi dengan campuran  isotropik.  Batasan  rentang konsentrasi ditentukan berdasarkan rentang pada proses uji pendahuluan yang membentuk campuran isotropik menggunakan Box  Behnken  Design pada Software Design Expert .
Formulasi
Nanoemulsi Minyak

## Nilam
Nanoemulsi dibuat dengan metode titrasi,  dimana  fase  minyak  dimasukkan ke  dalam  vial  dan  diaduk  menggunakan stirrer  selama  3-7  menit  pada  kecepatan 300 rpm dan suhu 50 o C, lalu ditambahkan Tween  80  dan  diaduk  selama  3-7  menit dan dicampurkan dengan PEG 400 diaduk selama beberapa menit. Terakhir tambahkan fase air tetes demi tetes secara
titrasi  hingga  5  mL  dan  aduk  kembali menggunakan magnetic stirrer 3-7 menit (Firmansyah dkk., 2022).
Evaluasi Respon Formula Nanoemulsi Minyak Nilam Pengujian persen transmitan digunakan sebagai respon dalam formula nanoemulsi.  Sampel  nanoemulsi  minyak nilam  sebanyak  1  mL  dilarutkan  dalam labu takar 100 mL dengan menggunakan akuades.  Persen  transmitan  diukur  pada panjang gelombang 650 nm menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis dan  akuades  sebagai  blanko  Formula dengan persentase transmitan 90%-100% menunjukkan  penampilan  visual  yang jernih dan transparan (Costa dkk., 2012). Penentuan Formula Optimum
Nanoemulsi Minyak Nilam Formula optimum ditentukan berdasarkan nilai desirabilitas yang paling tinggi  pada  daerah contour  plot yang disarankan  oleh  piranti  lunak Design Expert . Contour  plot diperoleh  dengan menentukan  target  dari  masing-masing respon  berupa in  range , minimize ,  atau maximize . Verifikasi
Formula
Optimum

## Nanoemulsi Minyak Nilam
Formula  optimum  nanoemulsi minyak  nilam  diverifikasi  dengan  cara dibuat  kembali  dan  dilakukan  pengujian sesuai respon yang digunakan. Data hasil verifikasi  dibandingkan  dengan  hasil prediksi dari piranti lunak Design Expert dan  dianalisis  dengan one  sample  t-test
untuk  menginvestigasi  apakah  terdapat perbedaan yang signifikan.

## Karakterisasi  Nanoemulsi  Minyak Nilam
Formula nanoemulsi minyak nilam
diambil sebanyak 1 mL dipipet menggunakan  mikropipet  ke  dalam  labu takar  10  mL  kemudian  ditambahkan aquadest hingga  tanda  batas.  Distribusi ukuran  tetesan,  indeks  polidispersitas, dan zeta  potensial dari  nanoemulsi  yang dihasilkan  ditentukan  dengan  analisis difraksi  laser  menggunakan  penganalisis Particle Size Analyzer yang menganalisis fluktuasi  hamburan  cahaya  akibat  gerak Brown dari  partikel-partikel.  Hamburan cahaya dipantau pada suhu 25°C dan pada sudut  90°.    Hamburan  cahaya  dipantau pada  suhu  25°C  dan  pada  sudut  90°. Pengukuran  dilakukan  setelah  sediaan dibuat  dengan  replikasi  sebanyak  3  kali untuk masing-masing formula (Firmansyah dkk., 2022). Uji Aktivitas Antioksidan

## Nanoemulsi Minyak Nilam
Sebanyak 0,1 g nanoemulsi minyak nilam dilarutkan dengan etanol p.a sampai tanda  batas  pada  labu  ukur  100  mL, sehingga diperoleh larutan induk konsentrasi 1000 ppm. Dari larutan induk sampel  dipipet  sebanyak  1  mL,  2  mL,  3 mL,  4  mL,  dan  5  mL.  Kemudian ditambahkan  etanol  p.a  dalam  labu  ukur 10  mL  sampai  tanda  batas.  Sehingga diperoleh  variasi  konsentrasi  100  ppm, 200  ppm,  300  ppm,  400  ppm,  dan  500
ppm.  Pipet  masing-masing  konsentrasi sebanyak 2 mL larutan sampel, masukkan ke  dalam  tabung  reaksi  dan  tambahkan larutan DPPH 35 µg/mL sebanyak 4 mL. Campuran  dihomogenkan  dan  ditutup dengan  aluminium  foil  dibiarkan  di tempat  gelap  selama  30  menit.  Serapan diukur  pada  panjang  gelombang  serapan maksimum 516 nm dengan alat spektrofotometer UV-Vis. Pengujian aktivitas  antioksidan  vitamin  c  sebagai pembanding dilakukan dengan cara yang sama dengan variasi konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10 µg/mL (Molyneux, 2004).

## Analisis Data
Analisis data pada optimasi menggunakan  faktor  konsentrasi Smix , konsentrasi  air , dan  waktu  pengadukan dengan  respon  yaitu  persen  transmitan dilakukan  menggunakan  piranti  lunak Design Expert menggunakan metode BBD berdasarkan  persamaan  masing-masing respon  yang  diperoleh  dibuat contour plot .  Analisis  data  pada  hasil  verifikasi formula  optimum  nanoemulsi  minyak nilam  dilakukan  dengan  analisis one sample t-test untuk melihat apakah  hasil verifikasi  formula  terpilih  memiliki perbedaan  signifikan  terhadap  prediksi menggunakan  piranti  lunak Design Expert.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Rancangan Optimasi Formula Nanoemulsi Minyak Nilam Rancangan optimasi formula nanoemulsi  minyak  nilam  ini  dilakukan terlebih dahulu dengan membuat diagram fase  menggunakan Software  Prosim Ternary  Diagram. Hal  ini  bertujuan untuk  memilih  formula  terbaik  yang menghasilkan  tampilan  jernih  secara visual yang berada pada area nanoemulsi dengan  mengatur  perbandingan  ketiga komponen  sediaan  yaitu  fase  air, surfaktan,  dan  kosurfaktan.  Untuk  fase minyak  dibuatkan  dalam  perbandingan 5%, 10%, dan 15% disajikan pada tabel 1.
Formula yang baik adalah formula dengan  daerah  terbesar  dalam  diagram fase  dan  menghasilkan  sediaan  dengan tampilan  yang  jernih  secara  visual  dari awal penambahan air sampai penambahan  air  100%  (Shafiq-un-Nabi dkk.,  2007).  Berdasarkan  pengamatan yang  dilakukan  dipilih  fase  minyak dengan  konsentrasi  5% karena  tampilan sediaan  paling  jernih  serta  memiliki daerah  terbesar  pada  diagram  fase dibandingkan  dengan  konsentrasi  10% dan  15%  (Gambar  1).  Selanjutnya dilakukan  observasi  secara  visual  untuk formula  yang  jernih  dengan  kriteria transparan  serta  memiliki  jumlah smix paling sedikit (Ali dkk., 2014).

## Tabel 1. Pengamatan visual pada berbagai perbandingan
Minyak  5%:
Smix
Tween 80: PEG 400 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7 1:8 1:9 1:10 1:11 1:12 1:13 1:14 1:15 1:16 1:17 1:18 2:1 E E E E E E E E E E E NE NE NE NE NE NE NE Minyak 10%: Smix Tween 80: PEG 400 2:1  2:2  2:3  2:4  2:5  2:6  2:7  2:8  2:9  2:10 2:11 2:12 2:13 2:14 2:15 2:16 2:17 2:1 E E E E
E E E E E E E E
E NE NE
NE NE Minyak 15%: Smix Tween 80: PEG 400 3:1  3:2  3:3  3:4  3:5  3:6  3:7  3:8  3:9 3:10 3:11 3:12 3:13 3:14 3:15 3:16 2:1 E E E E E E E E E E E E E E NE NE (a)
(b) (c) (d)
Gambar 1.   Diagram fase dengan kondisi konsentrasi minyak 5% (a); konsentrasi minyak 10% (b); konsenstrasi minyak 15% (c); serta penampilan visual nanoemulsi minyak nilam (d)

## Optimasi  Formula  dengan  Box Behnken Design
Konsentrasi  minyak  nilam  yang digunakan  sebesar  5%  untuk  optimasi nanoemulsi menggunakan Design- Expert .  Faktornya  adalah  konsentrasi
Smix (X1),  Air  (X2),  dan  Waktu Pengadukan  (X3),  sedangkan  responnya
adalah  persen  transmitan  (Y1).  Desain optimasi  formula  dengan  Box  Behnken Design  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Batas atas dan batas bawah X1, X2, dan X3 yaitu 60-64%,  31-35%,  dan  3-7  menit.  Sesuai dengan  yang  terdapat  pada  (Tabel  3) dengan Y1 kisaran 88,4-97,0%.

## Tabel 2. Desain optimasi formula dengan Box Behnken Design
No. Run Smix (%) (X 1 ) Air (%) (X 2 ) Waktu Pengadukan (menit) (X 3 ) Transmitan (%) (Y 1 ) 1 1 60 33 3 97 2 2 62 35 3 92,8 3 3 62 31 3 88,4 4 4 64 35 5 91,8 5 5 60 33 7 95,1 6 6 62 33 5 93,8 7 7 62 35 7 93,5 8 8 64 33 7 93 9 9 62 33 5 94,3 10 10 60 35 5 95,3 11 11 64 31 5 95,6 12 12 62 33 5 95,6 13 13 60 31 5 94,7 14 14 62 31 7 94,1 15 15 62 33 5 95,5 16 16 64 33 3 96,3 17 17 62 33 3 95,5
Tabel 3. Nilai batas atas dan batas bawah dari faktor-faktor yang digunakan pada optimasi
No. Faktor dan Respon Target Batas Bawah Batas Atas 1 A : Smix Minimum 60 64 2 B : Air Dalam rentang 31 35 3 C : Waktu Pengadukan Dalam rentang 3 7 4 % Transmitan Maksimum 88,4 97 Verifikasi Formula Optimum

## Nanoemulsi Minyak Nilam
Nilai persen transmitan yang sudah dimasukkan dalam sistem Design-Expert menghasilkan  formula  optimum  yang
memiliki  nilai  desirabilitas  mendekati  1 seperti  yang  tertera  pada  (tabel  4). Diagram contour  plot dari  desirabilitas dapat dilihat pada gambar 2.

## Tabel 4. Formula optimum nanoemulsi minyak nilam rekomendasi Design Expert
Smix (%) Air (%) Waktu Pengadukan (menit) %Transmitan  Desirabilitas Status 60 33,51 5,516 97,06 1,00 Terpilih
Gambar 2. Diagram contour plot dari desirabilitas formula optimum
Berdasarkan data tersebut kemudian  formula  dibuat  kembali  dan dilakukan pengujian respon yang digunakan.  Hasilnya  menunjukkan  tidak ada  perbedaan  antara  hasil  verifikasi dengan  hasil  rekomendasi software (p>0,05). Selain itu berdasarkan statistika ANOVA  pada  Design  Expert,  diketahui bahwa  model  yang  digunakan  untuk mengetahui  efek  dari  konsentrasi  smix, air,  dan  waktu  pengadukan  terhadap  % transmitan  adalah  tidak  signifikan (p>0,05).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa faktor-faktor  yang  digunakan  dalam optimasi  tidak  memepengaruhi  nilai  % transmitan secara signifikan.

## Karakterisasi  Nanoemulsi  Minyak Nilam
Karakterisasi  nanoemulsi  minyak nilam menghasilkan ukuran partikel lebih kecil  dari  200  nm,  indeks  polidispersitas kurang  dari  0,7,  dan  potensial  zeta  lebih tinggi dari  -20 mV (tabel 5). Penampilan visual  formula  optimum  nanoemulsi minyak  nilam  dapat  dilihat  pada  gambar 3.
Ukuran partikel nanoemulsi sangat
dipengaruhi  oleh  konsentras  surfaktan yang digunakan. Semakin tinggi konsentrasi  surfaktan  akan  semakin
menurunkan  ukuran  partikel  (Schreiner dkk.,  2020).  Nilai  indeks  polidispersitas menggambarkan  keseragaman  ukuran partikel nanoemulsi. Nilai indeks polidispersitas  yang  kurag  dari  0,7 mengindikasikan  distribusi  ukuran  yang sempit  dari  partikel  yang  terdispersi  di dalam  sistem  nanoemulsi.  Hal  ini  akan memudahkan  metode dynamic  light scattering yang digunakan dalam pengujian ukuran partikel untuk menganalisis sampel nanoemulsi (Muhtadi  dkk.,  2019).  Sebaliknya,  nilai indeks  polidispersitas  yang  mendekati angka  1  akan  memicu  terjadinya  kondisi Ostwald  ripening yang  merupakan fenomena dimana partikel dengan ukuran yang  lebih  kecil  akan  tertarik  untuk bergabung dengan partikel yang berukuran lebih besar dan pada akhirnya akan  menyebabkan  kondisi  koalesensi (Bernardi dkk., 2011). Nilai zeta potensial memegang  peranan  penting  dalam menjaga  kestabilan  system  nanoemulsi. Nilai  zeta  potensial  yang  lebih  dari  +30 mV  atau  lebih  dari  -30  mV  akan menghindarkan terjadinya penggabungan partikel yang dapat menyebabkan terjadinya koalesensi (Ribeiro dkk., 2015).

## Tabel 5. Hasil karakterisasi formula optimum nanoemulsi minyak nilam
Ukuran Partikel (nm) Indeks Polidispersitas Potensial Zeta (mV) 12,76±0,06 0,163±0,04 -26,1±0,61

## Gambar 3. Formula optimum nanoemulsi minyak nilam

## Aktivitas  Antioksidan  Nanoemulsi Minyak Nilam
Pemeriksaan  aktivitas  antioksidan dilakukan  dengan  metode  DPPH  karena pengerjaannya mudah, cepat, sensitif, dan sampel  sampel  yang  diperlukan  hanya sedikit untuk evaluasi aktivitas antioksidan  dari  senyawa  bahan  alam. Prinsip dari metode ini adalah mengukur aktivitas  antioksidan  secara  kuantitatif dengan  melakukan  pengukuran  radikal DPPH yang ditangkap oleh suatu senyawa yang  mempunyai  aktivitas  antioksidan dengan menggunakan instrument
spektrofotometri
UV-Vis sehingga
didapatkan  nilai  aktivitas  peredaman radikal  bebas  yang  dinyatakan  dengan
nilai IC 50 ( Inhibitory Concentration 50%). IC 50 adalah  konsentrasi  sampel  yang meredam  radikal  DPPH  sebanyak  50%. Nilai  IC 50 didapatkan  dari  nilai  x  setelah mengganti  y  dengan  50  (Prasetyo  dkk., 2021). Hasil menunjukkan bahwa absorbansi  sampel  semakin  menurun seiring  dengan  peningkatan  konsentrasi sebagaimana terdapat pada tabel 6. Hal ini terjadi  karena  adanya  pengurangan radikal  DPPH  oleh  antioksidan.  Semakin tinggi  konsentrasi  sampel  maka  partikel senyawa  antioksidan  di  dalamnya  akan semakin  banyak  sehingga  semakin  tinggi pula aktivitas antioksidannya dan menyebabkan  menurunnya  absorbansi (Talapessy dkk., 2013).

## Tabel 6. Hasil pengujian aktivitas antioksidan nanoemulsi minyak nilam
No. Konsentrasi (ppm) Absorban Blanko Ln Konsentrasi Absorbansi Sampel % Inhibisi IC 50 (ppm) 1 500 0,737 6,2146 0,41 44,3691
>1000 2 400 5,9915 0,432 41,3840 3 300 5,7038 0,437 40,7056 4 200 5,2983 0,458 37,8562 5 100 4,6052 0,46 37,5848
Berdasarkan  nilai  IC 50 yang  diperoleh dapat  dikatakan  bahwa  perlu  dilakukan penelitian lebih lanjut untuk menemukan konsentrasi  minyak  nilam  yang  sesuai untuk menghasilkan aktivitas antioksidan yang  lebih  baik.  Dengan  menemukan konsentrasi minyak nilam optimum, maka lebih  lanjut  akan  dapat  ditentukan  dosis penggunaan nanoemulsi minyak nilam.

## KESIMPULAN
Minyak  nilam  sebagai  zat  aktif sekaligus fase minyak dapat menghasilkan sediaan  nanoemulsi  dengan  formula optimum  yaitu  rasio  minyak: Smix (1:12) dan rasio Tween 80:PEG 400 (2:1). Hasil karakterisasi formula optimum nanoemulsi  yang  meliputi  rata-rata ukuran  partikel,  indeks  polidispersitas, dan  potensial  zeta  telah  memenuhi persyaratan  nanoemulsi  yang  baik.  Hasil pengujian aktivitas antioksidan nanoemulsi  minyak  nilam  memperoleh nilai IC50 >1000 ppm yang menunjukkan bahwa  diperlukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  menentukan  konsentrasi  optimum minyak  nilam  yang  akan  diformulasikan dalam bentuk nanoemulsi

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada  Hibah  Penelitian  Dosen  Pemula Vokasi Kemenristekdikti 2022 yang telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali,  M.  S.,  Alam,  M.  S.,  Alam,  N.,  & Siddiqui, M. R. (2014). Preparation,
Characterization and Stability Study  of  Dutasteride  Loaded Nanoemulsion  for  Treatment  of Benign  Prostatic  Hypertrophy. Iranian Journal of Pharmaceutical Research : IJPR , 13 (4), 1125–1140.
Ana,  H.,  &  Dyah,  A.  (2011).  Persepsi Pengunjung Apotek Mengenai Penggunaan  Obat  Bahan  Alam Sebagai  Alternatif  Pengobatan  Di Kelurahan  Muja  Muju  Kecamatan Umbulharjo Kota Yogyakarta. Prosiding Seminar Nasional Homecare . http://eprints.uad.ac.id/1422/
Bernardi, D. S., Pereira, T. A., Maciel, N. R.,  Bortoloto,  J.,  Viera,  G.  S., Oliveira, G. C., & Rocha-Filho, P. A. (2011).  Formation  and  stability  of oil-in-water nanoemulsions containing  rice  bran  oil:  In  vitro and in vivo assessments. Journal of Nanobiotechnology , 9 , 44. https://doi.org/10.1186/1477-
3155-9-44
Chime, S. A., Kenechukwu, F. C., Attama, A. A., Chime, S. A., Kenechukwu, F.
C.,  &  Attama,  A.  A.  (2014). Nanoemulsions—Advances in Formulation,  Characterization  and Applications  in  Drug  Delivery. Dalam Application of Nanotechnology in Drug Delivery .
IntechOpen. https://doi.org/10.5772/58673
Costa, J. A., Lucas, E. F., Queirós, Y. G. C., &  Mansur,  C.  R.  E.  (2012).
Evaluation of nanoemulsions in the cleaning  of  polymeric  resins. Colloids and Surfaces . http://dx.doi.org/10.1016/j.colsurf a.2012.10.011 Dechayont, B., Ruamdee, P., Poonnaimuang, S., Mokmued, K., & Chunthorng-Orn, J. (2017).
Antioxidant  and  Antimicrobial Activities  of Pogostemon  cablin (Blanco) Benth. Journal of Botany , 2017 ,
e8310275. https://doi.org/10.1155/2017/8310 275
Fatmasari, Q. W. (2019). Optimasi Tween Dan  Peg  dalam  Nanoemulsi Minyak Biji Ketumbar (Coriandrum  Sativum  L.)  sebagai Antioksidan .
https://repository.unej.ac.id/xmlui /handle/123456789/90873
Firmansyah, F., Muhtadi, W. K., Indriani, S.,  Ulhaq,  M.  D.,  Auliya,  S.  R., Iskandar, B., Agistia, N., & Chabib, L. (2022). IAI SPECIAL EDITION: Development  of  novel  curcumin nanoemulgel: Optimisation,
characterisation,  and  ex  vivo permeation. Pharmacy  Education ,
22 (2), Art.
2. https://doi.org/10.46542/pe.2022. 222.98103
Hambali,  E.,  Suryani,  A.,  Rivai,  M.,  & Permadi,  P.  (2019). Teknologi surfaktan  dan  aplikasinya  (edisi revisi) . PT Penerbit IPB Press.
Harimurti,  N.,  Soerawidjaja,  T.  H., Sumangat,  D.,  &  Risfaheri,    nFN. (2013).  Ekstraksi  Minyak  Nilam ( Pogostemon cablin Benth) Dengan Teknik Hidrodifusi Pada Tekanan 1 –  3  BAR. Jurnal  Penelitian Pascapanen Pertanian , 9 (1), Art. 1. https://doi.org/10.21082/jpasca.v 9n1.2012.%p
Jaiswal,  M.,  Dudhe,  R.,  &  Sharma,  P.  K.
(2015). Nanoemulsion:
An advanced  mode  of  drug  delivery system. 3  Biotech , 5 (2),  123–127. https://doi.org/10.1007/s13205- 014-0214-0
Molyneux, P. (2004). The use of the stable free  radical  diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant.
Songklanakarin Journal of Science and  Technology  (SJST) , 26 (2), 211–219.
Muhtadi,  W.  K.,  Novitasari,  L.,  Martien, R.,  &  Danarti,  R.  (2019).  Factorial design  as  the  method  in  the optimization  of  timolol  maleate- loaded  nanoparticle  prepared  by ionic gelation technique. International  Journal  of  Applied Pharmaceutics , 11 (5), 66–70.
https://doi.org/10.22159/ijap.2019 v11i5.34435
Munawiroh,  S.  Z.,  Handayani,  F.  S.,  & Nugroh,  B.  H.  (2019).  Optimasi Formulasi Nanoemulsi Minyak Biji Anggur  Energi  Tinggi  dengan  Box Behnken  Design  (BBD). Majalah Farmasetika , 4 (0), Art. 0. https://doi.org/10.24198/mfarmas etika.v4i0.25864
Nursal, F. K., Sumirtapura, Y. C., Suciati, T.,  &  Kartasasmita,  R.  E.  (2019). Optimasi  Nanoemulsi  Natrium Askorbil Fosfat melalui Pendekatan Design of Experiment (Metode Box Behnken). Jurnal Sains Farmasi & Klinis , 6 (3), Art. 3. https://doi.org/10.25077/jsfk.6.3.
228-236.2019
Prasetyo, E., Kiromah, N. Z. W., & Rahayu, T.  P.  (2021).  Uji  Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) Terhadap  Ekstrak  Etanol  Kulit Buah Durian (Durio zibethinnus L.) dari  Desa  Alasmalang  Kabupaten Banyumas. Jurnal Pharmascience ,
8 (1),
Art. 1. https://doi.org/10.20527/jps.v8i1. 9200 Ribeiro, R. C. de A., Barreto, S. M. de A. G.,
Ostrosky, E. A., da Rocha-Filho, P. A., Veríssimo, L. M.,  & Ferrari, M. (2015). Production and characterization of cosmetic nanoemulsions containing Opuntia ficus-indica  (L.)  mill  extract  as moisturizing agent. Molecules (Basel, Switzerland) , 20 (2), 2492– 2509.
https://doi.org/10.3390/molecules 20022492
Sahumena,  M.  H.,  Suryani,  S.,  & Rahmadani,  N.  (2019).  Formulasi Self-Nanoemulsifiying Drug Delivery  System  (SNEDDS)  Asam Mefenamat  menggunakan  VCO dengan Kombinasi Surfaktan Tween  dan  Span. Journal  Syifa Sciences  and  Clinical  Research , 1 (2), Art. 2.
https://doi.org/10.37311/jsscr.v1i2 .2660
Schreiner,  T.  B.,  Santamaria-Echart,  A., Ribeiro,  A.,  Peres,  A.  M.,  Dias,  M. M.,  Pinho,  S.  P.,  &  Barreiro,  M.  F. (2020).
Formulation and Optimization  of  Nanoemulsions Using  the  Natural  Surfactant Saponin  from  Quillaja  Bark. Molecules , 25 (7).
https://doi.org/10.3390/molecules 25071538 Shafiq-un-Nabi, S., Shakeel,
F.,
Talegaonkar, S., Ali, J., Baboota, S.,
Ahuja,  A.,  Khar,  R.  K.,  &  Ali,  M. (2007).  Formulation  development and optimization using nanoemulsion technique: A technical note. AAPS
PharmSciTech , 8 (2),  E12–E17. https://doi.org/10.1208/pt080202
8
Smith, H., Idrus, S., & Seimahuira, L. M.
(2019). Kontribusi Lama Pemeraman  Daun  Dan  Modifikasi Saringan  Ketel  Terhadap  Laju
Distilat  Dan  Rendemen  Minyak Nilam  Asal  Maluku. Majalah
BIAM ,
15 (2), Art. 2. https://doi.org/10.29360/mb.v15i
2.5659
Suprijono,  A.,  Gunawan,  Y.,  &  Wulan,  A. H. (2015). Minyak Nilam (Patchouli Alcohol) Sebagai Antioksidan Dengan Metode DPPH (1,1-difenil- 2-pikrilhidrazil). Jurnal Ilmu Farmasi  Dan  Farmasi  Klinik , 12 (1), Art. 1. https://doi.org/10.31942/jiffk.v12i 1.1400 Talapessy, S., Suryanto, E., & Yudistira, A. (2013).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Dari Ampas Hasil Pengolahan Sagu (Metroxylon sagu Rottb). PHARMACON , 2 (3), Art. 3. https://doi.org/10.35799/pha.2.20 13.2373
Wahyuningsih,  I.,  &  Putranti,  W.  (2015). Optimasi  Perbandingan  Tween  80 dan  Polietilenglikol  400  Pada Formula  Self  Nanoemulsifying Drug  Delivery  System  (SNEDDS)
Minyak Biji Jinten Hitam. PHARMACY: Jurnal Farmasi Indonesia (Pharmaceutical
Journal of Indonesia) , 12 (2), Art. 2.