## IDENTIFIKASI BAKTERI Escherichia coli PADA MINUMAN TEH

## KEMASAN INDUSTRI RUMAH TANGGA DI KELURAHAN SUNGAI DAMA DAN SELILI MENGGUNAKAN METODE MOST
PROBABLE NUMBER (MPN)
Submitted : 4 Mei 2017 Edited : 15 Mei 2017
Accepted : 23 Mei 2017
Fitri Handayani, Reksi Sundu, Dawia
Akademi Farmasi Samarinda Email : sausanrukan@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Tea  beverage  packaging  is  a  popular  fast  food  beverage  because  it  has  a  variety  of flavors  that  are  in  great  demand  by  the  public.  Presentation  of  packaged  tea  beverages  is mostly found in roads that may be contaminated by Escherichia coli bacteria. This study aims to identify Escherichia coli bacteria in packaged tea drinks circulating in the rivers of Kelurahan Selili. This research is a descriptive research. The sample used is packaged tea drink taken in two  subdistricts  of  Samarinda  ilir  namely  Selili  urban  village  and  Sungai  Dama  by  using Purposive  Sampling  method  of  10  samples.  Sample  tests  include  presumtive  test,  confirmative test and completed test. The LB (Lactose Broth) assay test was used to detect early presence of Coliform bacteria, BGLBB (Brillian Green Lactose Bile Broth) as a detector of the specification of  the  presence  of  Coliform  bacteria  and  completed  test  using  EMBA  (Eosin  Methylene  Blue Agar)  as  Escherichia  coli.  The  results  of  this  study  were  7  samples  of  10  samples  tested containing Escherichia coli.
Keywords : Tea beverage, contamination, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Minuman  teh  merupakan  salah  satu minuman  pelengkap  yang  kini  semakin beragam  cara  penyajiannya.  Perkembangan inovasi minuman
tradisional ini mengutamakan kecepatan sajian yang diharapkan  dapat  meningkatkan  nilai  jual. Minuman teh seduhan merupakan salah satu terobosan  baru  dalam  penjualan  teh  dengan berbagai  rasa  untuk  semakin  menarik  minat para konsumen (1) .
Penjual minuman teh kemasan
industri rumah tangga banyak yang membuka  usaha  di  pinggiran  jalan  kota Samarinda  serta  menawarkan  berbagai varian  rasa  dan  harganya  yang  cukup
terjangkau.  Kelurahan  Sungai  Dama  dan Kelurahan  Selili,  merupakan  salah  satu kelurahan  yang  banyak  terdapat  penjual minuman teh kemasan serta didominasi oleh anak-anak sekolah dan masyarakat.
Minuman teh kemasan merupakan minuman ringan olahan langsung yang telah ditambahkan  air  yang  dididihkan  dan disimpan ke dalam wadah teko.
Hasil  laporan  tahunan  BPOM  Kota Samarinda  sebanyak  107  kasus  keracunan yang  disebabkan  keracunan  makanan  dan minuman. Penyebabnya karena tidak diperhatikan  kebersihan  perorangan  dan lingkungan dalam proses pengelolaan makanan.  Sekitar  80%  penyakit  yang
tertular  melalui  makanan  disebabkan  oleh bakteri  pathogen (2) .  Pengolahan  dengan bahan  baku  yang  tidak  higienis  seperti  air yang  tidak  dididihkan  terlebih  dahulu  serta pelayanan  yang  dijajakan  langsung  di pinggiran  jalan  memungkinkan  adanya pencemaran  mikroba  pada  minuman  ringan tersebut baik melalui bahan baku yang tidak higienis  maupun  melalui  lingkungan  yang tidak  bersih.  Kondisi  yang  demikian memungkinkan minuman  ini dapat tercemar bakteri  berbahaya  seperti  Escherichia  coli yang  dapat  menyebabkan  diare,  mual,  dan gangguan pencernaan lainnya.
Berdasarkan  beberapa  uraian  di  atas maka  perlu  dilakukan  penelitian  untuk mengetahui  ada  tidaknya  cemaran  bakteri Escherichia coli pada minuman teh kemasan industri  rumah  tangga  yang  beredar  di Kelurahan  Selili  dan  Kelurahan  Sungai Dama  dengan  menggunakan  metode  MPN ( Most  Probable  Number ).  Adapun  manfaat dari penelitian ini adalah memberi infromasi kepada masyarakat akan kehati-hatian dalam mengkonsumsi minuman olahan yang terdapat di pinggiran jalan.

## BAHAN DAN METODE Bahan
Minuman teh kemasan industri rumah tangga,  Medium Lactosa  Broth (LB),
Medium Brillian  Green  Lactosa  Bile  Broth (BGLBB),  Medium Eosin  Methylene  Blue agar (EMBA),  Aquades,  Alkohol  70%,  10 sampel  minuman  teh  kemasan  industri rumah tangga.

## Metode
Pembuatan Lactosa Broth (LB)
Lactosa  Broth ditimbang  sebanyak 3.9  g,  larutkan  dengan  air  sebanyak  300  ml didalam  labu  Erlenmeyer  dan  panaskan diatas Hot Plate Stirer hingga larut. Larutan LB dipipet  sebanyak  4,5  ml  kedalam masing-masing  tabung  reaksi  yang  telah  di tempatkan  tabung  durham  secara  terbalik.
Tabung  yang  sudah  berisi  media  di  tutup dengan  kapas  steril  dan  aluminium  foil kemudian  disterilisasi  ke  dalam Autoclave dengan suhu 121 o C selama 30 menit.
Pembuatan Brillian  Green  lactose  Bile

## Broth 2% (BGLBB)
Dua  belas  gram Brillian  Green lactose  Bile  Broth dilarutkan  dengan  air sebanyak  300  ml  didalam  labu  Erlenmeyer dan panaskan diatas Hot Plate Stirer hingga larut. Larutan BGLBB dipipet sebanyak 4,5 ml kedalam  masing-masing  tabung  reaksi  yang telah  di  tempatkan  tabung  durham  secara terbalik. Tabung yang sudah berisi media di tutup dengan kapas steril dan aluminium foil kemudian  disterilisasi  ke  dalam Autoclave dengan suhu 121 o C selama 30 menit.

## Pembuatan Eosin  Methylene  Blue  Agar (EMBA)
EMBA  sebanyak  15  g  dan  agar  10  g dilarutkan  dengan  air  sebanyak  500  ml  di dalam  labu  erlenmeyer  yang  sudah  terdapat magnetic  stirrer kemudian  di  panaskan diatas hot  plate. Larutan  di  sterilkan  dalam autoclave selama 30 menit pada suhu 121 o C, dituang ke dalam cawan petri yang sudah di sterilkan  terlebih  dahulu  sebanyak  ±  15  ml dan didiamkan sampai memadat.

## Uji Praduga ( Presumtive test)
Sampel  sebanyak  0,5  ml  dengan berbagai seri pengenceran (10, 10 -1 , 10 -2 dan 10 -3 ) dimasukkan ke dalam masing-masing 5 tabung  yang  berisi  4,5  ml  LB  yang  telah  di tempatkan  tabung  durham  secara  terbalik, tutup  rapat  dengan  kapas  steril  dan  di inkubasi ke dalam incubator selama ± 24 jam pada  suhu  36 o C.  Hasil  positif  ditunjukan dengan adanya gas pada tabung (6) .

## Uji Penegas ( Confirmative test)
Test  ini  dilakukan  untuk  menegaskan hasil  positif  dari  test  perkiraan.  Dari  setiap tabung  yang  menunjukan  hasil  positif  pada
uji presumptive, dikocok dan masing-masing diambil 1-2 ose. Kemudian di inokulasi pada tabung  BGLBB  setelah  itu  tabung  BGLBB yang  sudah  di  tutup  dengan  kapas  steril  di inkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  36 o C. Diamati terbentuknya gas pada setiap tabung BGLBB yang positif gas dicatat (6) .

## Uji Pelengkap ( Completed test)
Dari  setiap  tabung  yang  menunjukan hasil  positif  pada  uji presumptive, dikocok dan dipindahkan sebanyak 1x jarum ose dari tiap  tabung  LB  yang  membentuk  gas  ke dalam  cawan  petri  yang  berisikan  media EMBA . Jarum  ose  digoreskan  ke  dalam cawan  petri  dengan  3  x  penggoresan. Dimasukkan  cawan petri kedalam incubator dan  dicatat  hasil  yang  positif  terdapat Escherichia  coli ditandai  terdapat  hijau metalik pada cawan petri (6). .

## Analisis Data
Metode  analisis  data  yang  digunakan adalah  metode  deskriktif  yaitu  mengetahui ada  atau  tidaknya  bakteri Escherichia  coli pada  sampel  minuman  teh  kemasan  industri rumah tangga.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Uji MPN
Uji  MPN  merupakan  uji  untuk mengetahui  jumlah  bakteri coliform baik fekal  oral  maupun  non-fekal  oral  yang terkandung  dalam  suatu  sampel  yang  diuji dan  dinyatakan  per  100  ml.  Uji  MPN menggunakan media LB dengan tiga tingkat pengenceran yaitu 10 ml, 0,1 ml, 0,01ml dan 0,001ml.  Tabung  yang  telah  berisikan sampel  dan  LB  selanjutnya  di  inkubasi selama ± 24 jam pada suhu 36 o C.
Uji  MPN  dinyatakan  positif  bila setelah inkubasi terjadi kekeruhan cairan dan juga  terbentuk  gas  pada  tabung  durham sedangkan  uji  MPN  dinyatakan  negatif apabila  tidak  terjadi  kekeruhan  atau  tidak terdapat  gas  pada  tabung  durham (7) .  Media
LB dapat positif karena bakteri yang tumbuh adalah  bakteri  yang  dapat  menfermentasi laktosa dan juga menghasilkan gas.
Pengujian  MPN  pada  10  sampel minuman  teh  kemasan  yang  diperiksa memiliki hasil yang beragam yang ditunjukan pada table 1.
Tabel 1. Hasil Uji MPN
Kode Sampel Jumlah Coliform (Uji Penduga dan Penegas) Jumlah Coliform (Uji Pelengkap) A 2800 x 10 2 200 x 10 2 B 9200 x 10 2 320 x 10 2 C 240 x10 2 60 x 10 2 D 620 x 10 2 40 x 10 2 E 390 x 10 2 70 x 10 2 F 390 x 10 2 140 x 10 2 G 320 x 10 2 20 x 10 2 H 390 x 10 2 20 x 10 2 I 280 x 10 2 280 x 10 2 J 200 x 10 2 140 x 10 2
Tabel  1.  Menunjukkan  bahwa  10 sampel  minuman  teh  kemasan  industri rumah  tangga  yang  telah  diuji,  ternyata terdapat  perbedaan  jumlah  mikroorganisme tiap  sampel.  Sampel  B  merupakan  sampel dengan  cemaran  bakteri Escherichia  coli tertinggi  320x10 2 .  Cemaran  koloni  bakteri Escherichia  coli terendah  adalah  sampel  G dan  H  dengan  cemaran  bakteri  koloni Escherichia  coli 20x10 2 .  Hasil  uji  penduga yang  menunjukkan  keberadaan  bakteri Coliform pada  sampel  akan  dilakukan  uji pelengkap  untuk  mengetahui  keberadaan bakteri Escherichia  coli .  Dari  hasil  uji pelengkap  didapat  bahwa  sampel  yang mengandung  bakteri Coliform pada  uji penduga  positif  mengandung Escherichia coli .  Ini  membuktikan  bahwa  keberadaan bakteri Coliform pada  sampel  merupakan indikasi bahwa adanya kemungkinan keberadaan  bakteri Escherichia  coli pada
sampel.  Uji  pelengkap  dapat  mendeteksi keberadaan  bakteri Escherichia  coli dalam sampel.  Uji  pelengap  dilakukan  dengan menginokulasi  sampel  dari  media  uji penduga  kedalam  media  yang  selektif terhadap keberadaan koloni bakteri
Escherichia  coli yaitu  EMBA  ( Eosin Methylene Blue Agar ).

## Hasil Uji EMBA
Hasil  inokulasi  pada  media  EMBA menghasilkan  koloni  berwarna  kehijauan dengan  bintik  hitam  di  tengah  koloni  dan kilap logam
dikarenakan
EMBA
mengandung  eosin  dan  metilen  blue  yang menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram positif  sehingga  bakteri  yang  tumbuh terseleksi  hanya  bakteri  Gram  negatif. EMBA  juga  memiliki  kandungan  laktosa sehingga bakteri Gram negatif yang tumbuh akan  terdiferensiasi  berdasarkan  sifatnya yang dapat meragi laktosa (8) .
Pada uji EMBA 10 sampel didapatkan koloni  bakteri  yang  bervariatif  berdasarkan warnanya yaitu koloni bakteri dengan warna kilap  logam,  koloni  ungu  dengan  inti  hitam yang merupakan koloni dari bakteri
Enterobacter  aerogenes dengan  batang Gram negatif dan  koloni  yang tak berwarna merupakan bakteri Pseudomonas aeruginosa yang  memiliki  sifat  Gram negatif bentuk batang (9) .
Gambar 1. Koloni  hasil  inokulasi  pada EMBA
Tabel 2. Uji inokulasi EMBA
No. Kilap logam Ungu inti hitam Tak berwarna A + + - B + + - C + + - D - + - E + + - F - + - G - + - H - - - I - - - J - - - Total Positif 4 7 0 Pada table 2 diketahui bahwa sebanyak  7  sampel  yang  menghasilkan koloni  bakteri  kilap  logam  dari  10  sampel yang diuji, koloni kilap logam diduga bahwa sampel  tersebut  mengandung  bakteri E.coli. sebanyak  4  sampel  dari  10  sampel  yang diuji memiliki koloni bakteri berwarna ungu dengan  inti  kehitaman  dan  0  sampel memiliki  koloni  bakteri  tak  berwarna.  Pada tahap pengujian ini dapat dinyatakan bahwa 7  sampel  dari  10  sampel  yang  diuji terindikasi kuat mengandung E.coli .

## SIMPULAN
Terdapat  7  sample  dari  10  sampel minuman  teh  kemasan  industri  rumah tangga  yang  beredar  di  Kelurahan  Sungai Dama  dan  Kelurahan  Selili  menggandung cemaran bakteri Escherichia coli .

## DAFTAR PUSTAKA
1. Syarifatun A.N, Sri U.H dan Witjoro.A. Analisis  Mikrobiologi  Minuman,  Teh Seduhan  Berbeda  Merek  Berdasarkan Nilai  MPN Coliform  di  Kota Malang. Jurnal Ilmiah . FMIPA. Malang. Universitas  Negeri Malang,  2008,  J078  : 518-523. 2. Badan POM 2011, http://www.pom.go.id/new/index.php/b
rowse/laporan_tahunan/04-05-2007/04- 05-2017/1 3. Mansauda,  K.  L.  R.,  Fatimawali,  dan Kojong,  N.  Analisis  Cemaran  Bakteri
Coliform Pada  Saus  Tomat  Jajanan Bakso Tusuk Yang Beredar di Manado.
Pharmacon.  2014.  Vol  3(2):  2302-
2493. 4. Cheeptham  N.  2012.  Eosin  Methylene blue agar. Thompson Rivers University, Canada
5. Bontong,  R.  A.,  Mahatmi,  H.,  dan Suada,  I  K.  Kontaminasi  Bakteri Escherichia coli Pada Daging Se’I Sapi
Yang  Dipasarkan  Di  Kota  Kupang. Indonesia  Medicus  Veterinus.  2012. Vol 1 (5): 699-711. 6. Radji. M., Oktavia, H., dan Suryadi, H. 2008.  Pemeriksaan  Bakteriologi  Air
Minum  Isi  Ulang  Di  Beberapa  Depo Air  Minum  Isi  Ulang  Di  Daerah Lenteng  Agung  dan  Srengseng  Sawah Jakarta  Selatan.  Jurnal  Ilmiah.  FMIPA. Depok. Universitas Indonesia
7. Standar  Nasional  Indonesia.  Batas
Maksimum  Cemaran  Mikroba  dalam Pangan.  Jakarta  :  Badan  Standarisasi Nasional, 2009 8. BPOM RI. Info POM. Dalam Pengujian Mikrobiologi Pangan. Jakarta:  Badan  Pengawas  Obat  dan Makanan Republik Indonesia; 2008 9. Jawetz  M,  Melnick  R,  Adelberg. Mikrobiologi  Kedokteran.  Jakarta: EGC, 2008. P 199-200