ISSN 2085-2916  e-ISSN 2337-3652 Tersedia daring http://jai.ipb.ac.id J. Agron. Indonesia, Desember 2022, 50(3):307-314 DOI: https://dx.doi.org/10.24831/jai.v50i3.41988

## PENDAHULUAN
Keberhasilan  regenerasi  tanaman  dalam  kultur jaringan dipengaruhi oleh faktor utama yaitu kultivar tanaman, jenis eksplan,  dan  zat  pengatur  tumbuh  (Rahman et  al .,  2015). Kultivar tanaman tomat yang dipakai dalam penelitian ini yaitu Fortuna 23 merupakan kultivar tomat unggul, tahan terhadap virus Gemini, mampu menghasilkan produksi yang tinggi, ukuran buah sedang dengan panjang 4.93-5.86 cm dan diameter buah 4.50-5.47 cm, daging buah tomat tebal
dan keras sehingga tidak cepat busuk (Kepmentan No.1939/ Kpts/SR.120/5/2012). Regenerasi tanaman dipengaruhi oleh hormon (Sundari et al ., 2015). Proporsi sitokinin dan auksin yang seimbang akan menghasilkan tunas dan akar yang lebih baik (Widiastoety, 2014). Pemilihan jenis eksplan juga harus diperhatikan  karena  penggunaan  jenis  eksplan  yang  tepat akan menghasilkan pertumbuhan  tanaman yang optimum (Nugroho et al ., 2016). Eksplan diambil dari bagian tanaman dengan  kandungan  sel  yang  aktif  membelah  yaitu  sel meristem mengandung hormon tanaman sehingga hasilnya dapat  seperti  yang  diharapkan.  Umumnya  semua  bagian atau organ tanaman dapat digunakan sebagai eksplan, akan tetapi jenis eksplan tanaman tomat yang sering digunakan
Pengaruh BAP, IAA, dan Jenis Eksplan terhadap Efisiensi Regenerasi Tomat Fortuna 23
Effect of BAP, IAA, and Types of Explants on the Regeneration Efficiency of Tomato Fortuna 23
Sholeh Avivi * , Mohammad Ubaidillah, Setiyono, dan Rifngatul ‘Atiqoh
Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Jember Jl. Kalimantan No. 37, Kampus Tegal Boto Kotak Pos 159 Jember 68121 Jawa Timur, Indonesia
Diterima 12 Juli 2022/Disetujui 2 November 2022

## ABSTRACT
This study aimed to determine an efficient regeneration protocol for genetic transformation of tomato Fortuna 23. This study was conducted from August 2021 to February 2022 at the Tissue Culture Laboratory, Faculty of Agriculture, University of Jember. The study consisted of 2 experimental designs, i.e, a completely randomized factorial design for shoot induction study with three factors and three replications and a completely randomized non-factorial design for root induction study with five replications. The treatments for shoot induction study were BAP (0, 1, 2, and 3 mg L -1 ), IAA (0, 0.1, 0.2, and 0.3 mg L -1 ), and types of explants (cotyledons, hypocotyls, and roots). The treatments for root induction study were NAA (0, 0.1, 0.5, and 1 mg L -1 ). The combination treatment B 2 A 3 E 1 (BAP 2 mg L -1 + IAA 0.3 mg L -1 + cotyledons) was the best treatment for shoot induction since it was able to produce the highest number of shoots (8 shoots), with shoots appearing fast (21 HSI) and callus appearing fast too (7 HSI). NAA 0.5 mg L -1 resulted in the fastest root emergence (3 HSI), the highest number of leaves (5 leaves), and the highest number of roots (26).
Keywords: regeneration, root induction, shoot induction

## ABSTRAK
Penelitian bertujuan memperoleh protokol regenerasi yang efisien untuk transformasi genetik pada tanaman tomat Fortuna  23.  Penelitian  dilaksanakan  mulai  Agustus  2021-Februari  2022,  bertempat  di  Laboratorium  Kultur  Jaringan Fakultas Pertanian Universitas Jember. Penelitian terdiri dari dua rancangan percobaan yaitu menggunakan RAL faktorial 3 faktor (tahap induksi tunas) diulang sebanyak 3 kali dan RAL non faktorial (tahap induksi akar) diulang sebanyak 5 kali. Perlakuan yang diberikan untuk tahap induksi tunas adalah BAP (0, 1, 2, dan 3 mg L -1 ), IAA (0, 0.1, 0.2, dan 0.3 mg L -1 ), dan jenis eksplan (kotiledon, hipokotil, dan akar). Perlakuan yang diberikan untuk tahap induksi akar adalah NAA (0, 0.1, 0.5, dan 1 mg L -1 ). Pada tahap induksi tunas  kombinasi perlakuan B 2 A 3 E 1 (BAP 2 mg L -1 + IAA 0.3 mg L -1 + kotiledon) merupakan perlakuan yang terbaik karena mampu menghasilkan jumlah tunas terbanyak (8 tunas), dengan awal muncul tunas 21 hari setelah induksi (HSI) dan awal muncul kalus 7 HSI. Pada tahap induksi akar perlakuan NAA 0.5 mg L -1 menghasilkan awal muncul akar tercepat (3 HSI), jumlah daun terbanyak (5 daun), dan jumlah akar terbanyak (26 akar).
Kata kunci: induksi akar, induksi tunas, regenerasi
dalam  kultur  jaringan  yaitu  hipokotil,  kotiledon,  tunas pucuk, dan akar. Mir et al . (2011), menyatakan bahwa media yang mengandung benzyl amino purine (BAP) dan indole acetic  acid (IAA)  pada  eksplan  kotiledon  dan  hipokotil menghasilkan  kalus  100%,  sedangkan  pada  eksplan  akar menghasilkan kalus yang lebih rendah dibanding kotiledon dan hipokotil. Hal tersebut sebanding dengan hasil penelitian Pawar et al . (2013), penggunakan kombinasi BAP dan IAA pada  eksplan  kotiledon,  hipokotil,  serta  akar  memberikan respon yang baik pada sebagian besar variabel pengamatan. Hasil pengamatan kombinasi perlakuan BAP 2 mg L -1 dan IAA 0.1 mg L -1 menunjukkan inisiasi kalus yang cepat pada kotiledon (8.03 hari) dengan presentase muncul kalus 100%, diikuti  hipokotil  (9  hari)  dengan  presentase  muncul  kalus 100%,  dan  eksplan  akar  (10.83  hari)  dengan  presentase muncul kalus 47.50-86.67%. Sedangkan pada induksi tunas, yang menunjukkan hasil terbaik yaitu kotiledon (87.50%), diikuti oleh eksplan hipokotil (83.33%), dan eksplan akar (69.17%).  Kemampuan  jaringan  untuk  membentuk  suatu akar juga bergantung pada ZPT auksin yang ditambahkan ke dalam media. Jenis auksin yang sering digunakan untuk menginduksi perakaran in vitro adalah NAA ( naphthalene acetic  acid ).  Berdasarkan  hasil  penelitian  Fathurrahman et  al .  (2012),  pemberian  ZPT  NAA  secara  tunggal memberikan  pengaruh  nyata  terhadap  persentase  tumbuh akar  eksplan  pucuk  tomat.  Sehingga  pada  tahap  induksi akar  menggunakan  jenis  ZPT  NAA  ( naphthalene  acetic acid ). Penelitian ini terdiri atas dua tahap regenerasi eksplan tanaman tomat, yaitu tahap induksi tunas dan tahap induksi akar. Pada tahap induksi tunas, jenis ZPT yang digunakan ialah  BAP  ( Benzil  Amino  Purin )  dan  IAA  ( Indole  Acetic Acid ),  sedangkan  pada  tahap  induksi  akar  menggunakan jenis  ZPT  NAA  ( naphthalene  acetic  acid ).  Penelitian  ini bertujuan untuk memperoleh protokol regenerasi tanaman tomat Fortuna 23 yang optimal serta efisien.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Kultur Jaringan Fakultas Pertanian Universitas Jember dari bulan Agustus 2021 sampai dengan bulan Februari 2022. Peralatan yang  digunakan  yaitu  peralatan  standar  kultur  jaringan. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diantaranya: benih tomat Fortuna 23, media MS ( Murashige and Skoog ), NaOH,  HCI,  IAA  (Sigma),  BAP  (Sigma),  NAA  (Sigma), alkohol 96%, NaClO 5%, sukrosa, dan agar.
Hasil penelitian tahap induksi tunas dianalisis dengan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) faktorial tiga faktor, yaitu faktor B (BAP) terdiri dari empat taraf (B 0 : BAP 0 mg L -1 , B 1 : BAP 1 mg L -1 , B 2 : BAP 2 mg L -1 , dan B 3 : BAP 3 mg L -1 ), faktor A (IAA) yang terdiri dari empat taraf (A 0 : IAA 0 mg L -1 , A 1 : IAA 0.1 mg L -1 , A 2 : IAA 0.2 mg L -1 , dan A 3 : IAA 0.3 mg L -1 ), dan faktor E (jenis eksplan) terdiri dari tiga taraf (E 1 : kotiledon, E 2 : hipokotil, E 3 : akar), dan didapat 48 kombinasi perlakuan dengan 3 kali ulangan (1 ulangan = 1 botol = 3 eksplan kotiledon + 3 eksplan hipokotil + 3 eksplan akar). Hasil penelitian tahap induksi akar dianalisis dengan rancangan acak lengkap (RAL) non faktorial, faktor
utamanya yaitu N (NAA) dengan empat taraf (N 0 : NAA 0 mg L -1 , N 1 : NAA 0.1 mg L -1 , N 2 : NAA 0.5 mg L -1 , dan N 3 : NAA 1 mg L -1 ), setiap perlakuan diulang sebanyak 5 kali (1 ulangan = 1 botol = 1 eksplan). Data hasil analisis ragam, apabila terjadi interaksi nyata, maka dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan taraf 5%, menggunakan Microsoft Excel.
Prosedur penelitian dilakukan dengan mengecambahkan  benih  tomat  Fortuna 23 pada media MS0. Kotiledon, hipokotil, dan akar tomat dipotong dari bibit in vitro umur 10-14 hari. Kotiledon dipotong melintang di dua bagian  yaitu  ujung  dan  pangkalnya  sehingga  membentuk persegi  panjang  dengan  ukuran  5  mm,  kemudian  untuk eksplan  hipokotil,  potong  ruas  batang  di  bawah  daun lembaga/kotiledon dengan ukuran 1 cm. Selanjutnya untuk eksplan  akar,  potong  akar  bagian  pangkal  akar  dengan ukuran 1 cm, kemudian diinduksi pada media induksi tunas dengan penambahan BAP dan IAA.
Tahap  induksi  akar  dilakukan  jika  tinggi  tunas mencapai  2  cm,  dengan  memotong  tunas  dari  kalus, kemudian  menanam  potongan  tunas  pada  media  induksi akar  dengan  penambahan  NAA.  Kultur  diletakkan  pada ruang  inkubasi  pada  suhu  20-25 o C.  Subkultur  dilakukan setiap  2-3  minggu  sekali  pada  media  yang  sama,  dengan tujuan  agar  suplai  makanan  untuk  pertumbuhan  eskplan tetap terpenuhi. Parameter pengamatan tahap induksi tunas yaitu  awal  muncul  kalus,  awal  muncul  tunas,  dan  jumlah tunas,  sedangkan  tahap  induksi  akar  yaitu  awal  muncul akar, jumlah daun, dan jumlah akar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Induksi Tunas
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam  menunjukkan bahwa pengaruh utama, pengaruh interkasi dua faktor, dan pengaruh interaksi tiga faktor (konsentrasi BAP, konsentrasi IAA,  dan  jenis  eksplan)  memberikan  pengaruh  sangat nyata  terhadap  semua  variabel  pengamatan  awal  muncul kalus,  awal  muncul  tunas,  dan  jumlah  tunas  (Tabel  1). Pembengkakan  eksplan  yang  diikuti  dengan  munculnya kalus  yang  nampak  putih  pada  ujung  dan  tepi  eksplan bekas pelukaan merupakan proses awal munculnya kalus. Pembentukan  kalus  pada  ujung  eksplan,  diawali  dengan membesarnya sel-sel epidermis bagian atas kemudian sel- sel  tersebut  membelah  menjadi  dua,  dan  ketika  tanaman dilukai maka kalus akan terbentuk akibat selnya mengalami kerusakan  dan  terjadi  autolisis  (pemecahan),  dan  dari  sel yang  rusak  tersebut  dihasilkan  senyawa-senyawa  yang merangsang pembelahan sel dilapisan berikutnya sehingga terbentuk  gumpalan  sel-sel  yang  terdiferensiasi  (Buana, 2020).  Eksplan  kotiledon,  hipokotil,  dan  akar  tanaman tomat yang diinduksi pada media yang mengandung BAP dan  IAA,  mengalami  organogenesis  tidak  langsung  atau melewati fase kalus. Kalus mulai muncul pada hari ke 6-28 hari setelah induksi (HSI) (Tabel 2).
Pembentukan  kalus  terjadi  karena  adanya  pengaruh kombinasi  ZPT  auksin  dan  sitokinin  (Prashariska et  al .,
2021). Auksin berperan dalam menginduksi kalus, sedangkan sitokinin  berperan  dalam  poliferasi  kalus,  oleh  sebab  itu kombinasi auksin dan sitokinin sangat baik untuk memacu pertumbuhan  kalus  (Rahman et  al .,  2021).  Kombinasi IAA  yang  rendah  dengan  BAP  konsentrasi  sedang  yang diaplikasikan pada Tacca Chantrieri , hasil yang terbentuk adalah  kalus  (Sari  dan  Isda,  2021).  Konsentrasi  sitokinin intermediat  (sedang)  dikombinasikan  dengan  konsentrasi auksin  rendah  yang  diaplikasikan  pada Melia  azedarach L ., maka pertumbuhan akan mengarah pada pembentukan kalus  (Ahmadpoor et al ., 2022). Hasil penelitian (Tabel 2) menunjukkan bahwa saat muncul tunas yang paling cepat pada perlakuan B 1 A 1 E 3 (BAP 1 mg L -1 + IAA 0.1 mg L -1 + akar) yaitu 6 HSI. Munculnya kalus (Gambar 1) diduga karena  adanya  interaksi  antara  hormon  endogen  dalam eksplan akar dan ZPT yaitu BAP dan IAA.  Hal ini sesuai dengan pernyataan Mastuti (2017), bahwa terjadinya kalus juga disebabkan adanya interaksi antar hormon endogen dan ZPT. Penambahan ZPT sitokinin dan auksin akan mengubah konsentrasi hormon endogen sel, sehingga efektivitas ZPT sitokinin  maupun  auksin  bergantung  pada  konsentrasi hormon endogen dalam jaringan tanaman (Wahyuni et al ., 2019).  Kecepatan  jenis  eksplan  akar  dalam  menginduksi kalus, karena diduga akar mengandung sitokinin endogen yang  cukup  untuk  pertumbuhan  menghasilkan  kalus,  dan dengan  adanya  penambahan  ZPT  sitokinin  dan  auksin membuat akar lebih cepat lagi menghasilkan kalus. Cepat atau lambat munculnya kalus, nantinya akan mempengaruhi awal munculnya tunas.
Awal  muncul  tunas  (Gambar  2)  ditandai  dengan adanya  penebalan  berupa  tonjolan  (calon  tunas)  pada permukaan  eksplan  di  bagian  atas  ataupun  bagian  bawah potongan.  Tunas  mulai  muncul  pada  hari  ke  16-70  HSI. Keberhasilan munculnya tunas ditentukan oleh respon jenis media  dan  jenis  eksplan  (Karjadi,  2020).  Hasil  penelitian (Tabel  2)  memperlihatkan  bahwa  saat  muncul  tunas  yang paling  cepat  pada  perlakuan  B 1 A 3 E 1 (BAP  1  mg  L -1 + IAA 0.3 mg L -1 + kotiledon) dan B 1 A 3 E 2 (BAP 1 mg L -1 + IAA 0.3 mg L -1 + hipokotil) dengan rerata waktu 16 HSI. Tunas yang pertama kali muncul merupakan hasil interaksi antara konsentrasi BAP, IAA, dan jenis eksplan. Kotiledon dan hipokotil digunakan sebagai eksplan karena di dalam
jaringan tersebut terdapat hormon pertumbuhan yang masih aktif  sehingga  dapat  membantu  perkembangan  jaringan sehingga mampu menghasilkan daya regenerasi yang tinggi. Menurut  Henuhili  (2013),  menyatakan  bahwa  eksplan kotiledon  dan  hipokotil  merupakan  bagian  tanaman  yang masih  aktif  membelah  (jaringan  meristem).  Penambahan konsentrasi BAP dan IAA dapat menunjang kinerja eksplan dalam  memacu  pertumbuhan  eksplan  dengan  cepat,  akan tetapi  semakin  tinggi  konsentrasi  konsentrasi  BAP  dan IAA juga tidak menjamin tunas muncul lebih cepat. Hal ini diduga karena masing-masing eksplan memiliki kandungan hormon endogen yang berbeda, sehingga setiap jenis eksplan memiliki  kemampuan  yang  berbeda  dalam  merespon penambahan  ZPT  pada  konsentrasi  tertentu.  Oleh  sebab itu,  kecepatan pertumbuhan eksplan dalam menghasilkan tunas,  ditentukan  oleh  kombinasi  hormon  endogen dengan  ZPT.  IAA  yang  diberikan  secara  tunggal,  tidak akan  mempengaruhi  variabel  pertumbuhan  yang  diamati, akan  tetapi  jika  diimbangi  dengan  BAP  akan  membantu mempercepat proses awal muncul tunas (Samanhudi et al ., 2021). Cepat atau lambat munculnya tunas mempengaruhi jumlah tunas yang muncul.
Faktor perlakuan Variabel pengamatan Awal muncul kalus Awal muncul tunas Jumlah tunas B 386.01** 509.24** 383.75** A 263.88** 509.24** 51.42** E 39.27** 1,545.69** 518.14** BxA 95.28** 82.72** 14.35** BxE 26.41** 49.32** 35.29** AxE 56.59** 25.83** 5.23** BxAxE 44.59** 33.36** 13.93**

## Tabel 1. Nilai F-hitung pada semua variabel pengamatan induksi tunas
Keterangan:  B  =  faktor  perlakuan  BAP; A  =  faktor  perlakuan Auksin;  E  =  faktor  perlakuan  eksplan.  **  =  berpengaruh  sangat  nyata berdasarkan uji F pada taraf 1%
1
Perlakuan Variabel Pengamatan B A E Awal muncul kalus (hari) Awal muncul tunas (hari) Jumlah tunas B0 A0 E1 14b 63bc 1i E2 14b 49g 1i E3 28a 70a 1i A1 E1 7fg 28kl 4ef E2 8ef 35j 3fg E3 10cd 59cd 1i A2 E1 9de 26lmn 2hi E2 8ef 25mno 2hi E3 10cd 59cd 1i A3 E1 14b 49g 1i E2 12c 19pq 3fg E3 7fg 64b 1i B1 A0 E1 10cd 28kl 3fg E2 7fg 42i 3fg E3 10cd 57ef 1i A1 E1 7fg 21op 7bc E2 7fg 21op 5e E3 6h 47h 1i A2 E1 7fg 21op 7bc E2 7fg 19pq 7bc E3 8ef 46hi 3fg A3 E1 8ef 16q 6cd E2 7fg 16q 6cd E3 6h 21op 2hi B2 A0 E1 9de 21op 7bc E2 8ef 35j 3fg E3 7fg 55f 1i A1 E1 7fg 19pq 7bc E2 7fg 26lmn 6cd E3 10cd 35j 2hi A2 E1 7fg 23no 7b E2 6h 30k 6cd E3 7fg 42i 2hi A3 E1 9de 21op 8a E2 7fg 19pq 5e E3 7fg 42i 4ef
Tabel 2. Pengaruh perlakuan BAP, IAA, dan jenis eksplan terhadap awal muncul kalus, awal muncul tunas, dan jumlah tunas
et al ., 2022). Namun ada kalanya pembentukan tunas pada tanaman  dikotil  memerlukan  sitokinin  dan  auksin  dengan perbandingan  1:10.  Secara  keseluruhan,  hasil  penelitian kombinasi perlakuan mampu menghasilkan tunas, termasuk perlakuan tanpa ZPT BAP maupun IAA. Hal tersebut diduga karena  tanpa  pemberian  ZPT  ke  dalam  media,  hormon endogen di dalam eksplan cukup untuk melakukan proses pembelahan  dan  pembesaran  sel,  sehingga  terbentuklah tunas. Selain itu frekuensi subkultur juga perlu diperhatikan karena dengan subkultur secara rutin, menyediakan nutrisi yang dibutuhkan eksplan untuk berkembang.

## Induksi Akar
Naphthaleneacetic  Acid (NAA)  berpengaruh  sangat nyata  terhadap  variabel  pengamatan  induksi  akar,  yaitu dapat  mempercepat  munculnya  akar  pada  eksplan  tomat dan  dapat  menghasilkan  jumlah  daun  serta  jumlah  akar yang banyak (Tabel 3). Hasil penelitian ini sesuai dengan laporan Tahir et al. (2022) bahwa pemberian auksin NAA pada  media  perakaran  akan  memacu  diferensiasi  sel  ke arah  pembentukan  akar. Awal  muncul  akar  terjadi,  ketika pada  permukaan  eksplan  bagian  bawah  muncul  tonjolan berwarna  putih. Akar  mulai  muncul  pada  umur  3-6  HSI. Perlakuan yang memunculkan akar tercepat yaitu N 2 dengan rerata waktu 3 HSI, sementara pada kontrol 6 HSI (Tabel 4). Hal tersebut terjadi karena adanya pengaruh dari ZPT NAA. Auksin berfungsi mendorong pembelahan sel, perpanjangan sel,  diferensiasi  jaringan  xilem  dan  floem,  penghambatan mata  tunas  samping,  absisi  (pengguguran  daun),  aktivitas kambium,  dan  pembentukan  akar  (Astutik et  al .,  2021). Morfogenesis jaringan akan mengarah ke pembentukan akar, jika  konsentrasi  auksin  lebih  tinggi  daripada  konsentrasi
Perlakuan Variabel pengamatan B A E Awal muncul kalus (hari) Awal muncul tunas (hari) Jumlah tunas B3 A0 E1 10cd 21op 7bc E2 8ef 21op 7bc E3 8ef 42i 3fg A1 E1 8ef 23no 6cd E2 8ef 19pq 7bc E3 7fg 35j 5e A2 E1 8ef 28kl 7bc E2 7fg 26lmn 5e E3 7fg 35j 4efg A3 E1 9de 28kl 6cd E2 7fg 21op 8a E3 7fg 49g 2hi
Lanjutan . Tabel 2. Pengaruh perlakuan BAP, IAA, dan jenis eksplan terhadap awal muncul kalus, awal muncul tunas, dan jumlah tunas
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan berbeda tidak nyata berdasarkan uji jarak berganda Duncan pada taraf 5%. (B0:BAP 0 ppm, B1:BAP 1 ppm, B2:BAP 2 ppm, B3:BAP 3 ppm), (A0: IAA 0 ppm, A1: IAA
0.1 ppm, A2: IAA 0.2 ppm, A3: IAA 0.3 ppm), (E1: eksplan kotiledon, E2: eksplan hipokotil, E3: eksplan akar)
1 E1

## E2
Gambar  2.  Tunas  yang  muncul  pada  16  HST  pada  perlakuan B1A3E1  (BAP  1  mg  L -1 +  IAA  0.3  mg  L -1 +  jenis eksplan kotiledon) dan B1A3E2 (BAP 1 mg L -1 + IAA 0.3 mg L -1 + jenis eksplan hipokotil)
Tunas  merupakan  sebuah  tonjolan  berwarna  hijau dengan panjang + 1 mm yang akan memanjang atau bahkan mengeluarkan  daun.  Terbentuknya  tunas  (Gambar  3) menunjukkan keberhasilan eksplan dalam melakukan proses regenerasi. Hasil penelitian (Tabel 2) menunjukkan bahwa perlakuan terbaik yang menghasilkan jumlah tunas tertinggi yaitu pada kombinasi perlakuan B 2 A 3 E 1 (BAP 2 ppm + IAA 0.3 ppm + kotiledon) . Hal tersebut mengindikasikan bahwa kombinasi perlakuan tersebut secara efektif meningkatkan proses  pembelahan  sel  yang  mengakibatkan  munculnya tunas-tunas  baru.  Nisbah  sitokinin  dan  auksin  berperan penting  untuk  mengendalikan  dominansi  apikal  (Yuniati et  al., 2018).  Perlakuan  dengan  kombinasi  BAP  dan  IAA yang seimbang, dapat menghasilkan tunas dengan optimal. Pemberian  tingkat  konsentrasi  sitokinin  yang  lebih  tinggi daripada auksin diduga mampu meningkatkan jumlah tunas. Konsentrasi  auksin  yang  rendah  dan  sitokinin  yang  lebih tinggi cenderung mendorong pembentukan tunas (Raspor et al ., 2021). Konsentrasi sitokinin dan auksin endogen yang seimbang akan menentukan banyaknya jumlah tunas (Rivas
sitokinin  (Mayrendra et  al., 2022).  Pembentukan  akar tersebut terjadi karena adanya pergerakan auksin dari pusat sintesa  auksin  (tunas)  menuju  bagian  bawah  tanaman. Rooting  cofactor dan  karbohidrat  yang  terdapat  pada tanaman akan berkumpul dengan auksin (NAA) di daerah pelukaan eksplan, kemudian mendorong sel-sel membentuk akar melalui proses diferensiasi sel.
Pengamatan jumlah daun bertujuan untuk mengetahui pertambahan jumlah daun pada masing-masing perlakuan. Hasil penelitian (Tabel 4) perlakuan menghasilkan jumlah daun terbanyak yaitu N 2 dengan rerata jumlah daun sebanyak 5 daun per eksplan. Hasil tersebut mengindikasikan bahwa pertumbuhan eksplan semakin baik, karena jika jumlah daun banyak maka dapat  menghasilkan fotosintat yang banyak, akan  tetapi  jika  konsentrasi  NAA  yang  diberikan  terlalu tinggi,  maka,  dapat  menurunkan  jumlah  daun  per  tunas, yaitu pada perlakuan N 3 yang menghasilkan rerata jumlah daun sebanyak 4 daun pertunas (Gambar 4). Kemungkinan, hal tersebut disebabkan karena konsentrasi auksin endogen relatif tinggi, sehingga ketika auksin ditambahkan dengan
konsentrasi  yang  rendah,  maka  maka  akumulasi  auksin sudah  menunjukkan  respon  positif  terhadap  pembentukan daun.  Konsentrasi  auksin  yang  tinggi  merangsang  sel tumbuhan untuk menghasilkan etilen (Tetuko et al ., 2015). Hal tersebut juga didukung oleh hasil penelitian Nugroho et  al .  (2016),  yang  menyatakan  bahwa  kandungan  auksin endogen  yang  sangat  tinggi  dapat  meningkatkan  aktivitas etilen.  Etilen  tersebut  dapat  menghambat  pertumbuhan daun. Jangkauan  tanaman  dalam  menyerap  nutrisi, ditentukan oleh banyaknya jumlah akar. Jumlah akar yang semakian  banyak  mengindikasikan  bahwa  semakin  luas jangkauan  tanaman  dalam  menyerap  nutrisi  dan  semakin tinggi  nutrisi  yang  terserap.  Hasil  penelitian  (Tabel  4) perlakuan yang menghasilkan jumlah akar terbanyak yaitu N 2 dengan rerata sebesar 26 akar per eksplan. Konsentrasi NAA  pada  rentang  0  ppm-0.5  ppm  menghasilkan  jumlah akar yang banyak (Gambar 4). Jumlah akar yang terbentuk akan  semakin  banyak,  apabila  konsentrasi  NAA  yang ditambahkan  ke  media  juga  semakin  tinggi,  hal  tersebut terjadi  karena  adanya  pengaruh  auksin  (NAA)  yang menyebabkan perkembangan akar liar (Hartati et al ., 2016). Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa,  pada  titik  tertentu yaitu  N 3 (NAA  1  ppm)  justru  mengakibatkan  penurunan terhadap  jumlah  akar.  Hal  tersebut  diduga  karena  adanya interaksi  antara  auksin  endogen  dan  ZPT  NAA,  sehingga menyebabkan  penumpukan  kadar  auksin  yang  berlebihan di  daerah  pelukaan.  NAA  dikenal  sebagai  auksin  sintesis yang  meiliki  tingkat  keefektifan  yang  cukup  baik,  karena keberadaan NAA sintetis dalam tumbuhan tidak dirusak oleh enzim IAA oksidase yang secara alami berada dalam tubuh tumbuhan. Kondisi semacam ini membuat NAA dapat aktif dalam waktu yang lama sehingga mampu berpengaruh pada tanaman lebih lama, sehingga jika penggunaan konsentrasi auksin yang terlalu tinggi akan berdampak buruk terhadap pembentukan  akar  dan  bahkan  menyebabkan  tanaman mati, akan tetapi jika auksin digunakan dengan konsentrasi yang  terlalu  rendah,  tidak  akan  efektif  dalam  memacu pembentukan akar.
Gambar 3. Tunas pada perlakuan B2A3E1 (BAP 2 mg L -1 + IAA 0.3 mg L -1 +  kotiledon) umur 60 HSI
Perlakuan Variabel pengamatan Awal muncul akar (hari) Jumlah daun Jumlah akar N 0 6a 4b 19c N 1 5b 5a 24ab N 2 3c 5a 26a N 3 6a 4b 22bc Tabel 4. Pengaruh konsentrasi NAA terhadap awal muncul akar, jumlah daun, dan jumlah akar Angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama  pada kolom yang sama menunjukkan berbeda tidak nyata berdasarkan  uji  jarak  berganda  Duncan  pada  taraf 5%.  (N0:NAA  0  ppm,  N1:  NAA  0.1ppm,  N2:NAA 0.5 ppm, N3:NAA 1 ppm) Keterangan: Faktor Variabel pengamatan Awal muncul akar (hari) Jumlah akar Jumlah daun N 18.22** 7.32** 6.94** Tabel 3. Nilai F-hitung semua variabel pengamatan induksi akar
Keterangan:  N = faktor perlakuan NAA. ** = berpengaruh sangat nyata berdasarkan uji F pada taraf 1%

## KESIMPULAN
Penggunaan kombinasi BAP, IAA dan jenis eksplan berpengaruh  nyata  terhadap  regenerasi  eksplan  tanaman tomat Fortuna 23 pada tahap induksi tunas. Tahap induksi tunas  yang    perlakuan  terbaik  yaitu  kombinasi  perlakuan B 2 A 3 E 1 (BAP  2  mg  L -1 +  IAA  0.3  mg  L -1 +  kotiledon), karena dapat memperbanyak jumlah tunas (8 tunas), dapat memuncul  tunas  dengan  cepat  21  hari  setelah  induksi (HSI)  dan  memuncul  kalus  dengan  cepat  7  HSI.  Proses regenerasi tanaman tomat juga ditentukan oleh keberhasilan dalam tahap induksi akar. Tahap induksi akar menunjukkan perlakuan  terbaik  yaitu  perlakuan  N 2 (NAA  0.5  mg  L -1 ), karena    dapat    mempercepat    munculnya    akar  (3  HSI), memperbanyak jumlah daun (5 daun) dan memperbanyak jumlah akar (26 akar).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  dibiayai  oleh  Dana  Proyek  Riset Penelitian  Dasar  Kompetitif  Nasional  cq.  Sholeh  Avivi dengan Nomor. Kontak: 110/E5/PG.02.00PT/2022 Tanggal 10 Mei 2022 dan Nomor Kontak Turunan: 2620/UN25.3.2/ LT/2022 Tanggal 11 Mei 2022. Terima kasih.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmadpoor,  F.,  N.  Zare,  R.  Asghari,  P.  Sheikhzadeh. 2022. Sterilization protocols and the effect of plant growth regulators on callus induction and secondary metabolites  production  in  in  vitro  cultures  melia azedarach l. AMB Express 12:1-12.
Astutik, A. Sumiati, Sutoyo. 2021. Stimulasi pertumbuhan dendrobium  sp menggunakan  hormon  auksin naphtalena acetic acid (NAA) dan indole butyric acid (IBA). J. Buana Sains 21:19-28.
Buana, A.S. 2020. Induksi kalus stevia rebaudiana bertoni m. dengan pemberian kombinasi ZPT NAA (naphtalene asetic acid), 2,4-D (2,4 diclorophenoxy asetic acid) dan BAP (benzil amino purin). J. Teknol. Terap. 1: 78-83.
Fathurrahman,  T.,  A.S.    Rosmawati,  S.  Gunawan.  2012. Multiplikasi  tunas  pucuk  tomat  ( Lycopersicum Esculentum Mill)  dengan  menggunakan  benzyl amino  purine  (BAP)  dan  naphtalene  acetic  acid (NAA) secara in vitro. J. Agroteknologi 1(1):1-12.
Hartati, S., A. Budiyono, O. Cahyono. 2016. Pengaruh NAA dan  BAP  terhadap  pertumbuhan  subkultur  anggrek hasil persilangan dendrobium biggibum x dendrobium liniale . J. Sustain. Agric. 31:33-37.
Henuhili, V. 2013. Kultur Jaringan Tanaman. Yogyakarta: UNY Press.
Karjadi, A.K. 2020. The effect of phytohormone picloram and  BAP  on  shallot  meristematic  proliferation. Proceeding  Int.  Conf.  Green  Agro-Industry  4:288- 297.
Mastuti, R. 2017. Dasar-Dasar Kultur Jaringan Tumbuhan. Malang. UB Press.
Mayrendra,  C.T.,  Solichatun,  A.  Pitoyo.  2022.  Pengaruh pemberian  variasi  konsentrasi  benzil  amino  purin (BAP)  dan  naphthaleneacetic  acid  (NAA)  terhadap pertumbuhan protocorm like bodies (PLB) anggrek dendrobium  verninha  x  lasianthera. Pros  Sem  Nas Masy. Biodiv. Indon. 8:80-86.
Mir,  K.A.,  A.S.  Dhatt,  J.S.  Sandhu,  A.S.  Sidhu.  2011. Effect of genotype, explant and culture medium on organogenesis in brinjal. Indian J. Horticulture 68(3):
332-335.
(N 0 ) NAA 0 mg L -1 (N 1 ) NAA 0.1 mg L -1 (N 2 ) NAA 0.5 mg L -1 (N 3 ) NAA 1 mg L -1
Gambar 4. Akar pada masing-masing perlakuan NAA pada 30 HST. (30 HSI)
Nugroho,  C.C.,  N.  Khumaida,  S.W.  Ardie.  2016. Pertumbuhan  tunas  ubi  kayu  ( Manihot  esculenta Crantz) genotipe jame-jame secara in vitro. J. Agron. Indonesia 44:40-46.
Pawar,  B.D., A.S.  Jadhav, A.A.  Kale,  V.P.  Chimote,  S.V. Pawar.  2013.  In  vitro  plant  regeneration  in  brinjal ( Solanum melongena L.) using cotyledon, hypocotyl and root explants. Accelerating the world’s research. 26(2):312-317.
Prashariska,  K.,  A.  Pitoyo,  Solichatun.  2021.  Pengaruh indole-3-acetic acid (IAA) dan benzyl amino purine (BAP)  terhadap  induksi  dan  deteksi  alkaloid  kalus kamilen ( Matricaria chamomilla L.). J. Inov. Pertan. 23:104-114.
Rahman,  Z.A.,  A.  Ramli,  H.  Hosni,  R.  Kamaruzaman, Z.A. Seman, A.N. Othman, Z. Zainal, J. Uddain, S. Subramaniam. 2015. Efficient plant regeneration of malaysian  aromatic  rice  ( Oryza  sativa L.)  through somatic embryogenesis. Emirates J. Food Agric. 27: 857-863.
Rahman,  N.  Hamidah.,  H.  Fitriani,  N.  Rahman,  N.S. Hartatik.  2021.  Pengaruh  beragam  zat  pengatur tumbuh terhadap induksi kalus organogenik dari ubi kayu ( Manihot esculenta Crantz) genotipe gajah dan kuning. J. Ilmu Dasar 22:119-126.
Raspor, M., V. Motyka, A.R. Kaleri, S. Ninković, L. Tubić,
A. Cingel, T. Ćosić. 2021. Integrating the roles for cytokinin and auxin in de novo shoot organogenesis: from  hormone  uptake  to  signaling  outputs.  Int.  J. Mol. Sci. 22:1-35.
Rivas,  M.A.,  I.  Friero,  M.V.  Alarcón,  J.  Salguero.  2022.
Auxin-cytokinin  balance  shapes  maize  root architecture  by  controlling  primary  root  elongation and  lateral  root  development.  Front.  Plant  Sci.  13:
1-11.
Samanhudi., A.T. Sakya, E. Purwanto, T.I. Retnosari. 2021.
Multiplikasi Aquilaria malaccensis dengan NAA dan ragi pada kultur in vitro. J. Pemuliaan Tanam. Hutan 15:51-59.
Sari, M., M.N. Isda. 2021. Respon pembentukan kalus daun tacca chantrieri dengan berbagai konsentrasi 2,4-D dan  BAP  secara  in  vitro.  J.  Biol.  Univ. Andalas  9: 8-17.
Sundari, L., L.A.M. Siregar, D.S. Hanafiah. 2015. Kajian awal:  respon  eksplan  nodus  dalam  inisiasi  tunas mikro tanaman karet ( Hevea brasiliensis Mull. Arg.) dalam medium WPM. J. Online Agroekoteknologi 3: 179-187.
Tahir, M.M., J. Mao, S. Li, K. Li, Y. Liu, Y. Shao, D. Zhang, X.  Zhang.  2022.  Insights  into  factors  controlling adventitious root formation in apples. Horticulturae 8:1-19.
Tetuko,  K.A.,  S.  Parman,  M.  Izzati.  2015.  Pengaruh kombinasi  hormon  tumbuh  giberelin  dan  auksin terhadap  perkecambahan  biji  dan  pertumbuhan tanaman  karet  ( Hevea  brasiliensis Mull.  Arg.).  J. Biol. 4:1-11.
Wahyuni, H., R.S. Wulandari, Muflihati. 2019. Konsentrasi IAA  (indole  acetic  acid)  dan  BAP  (benzyl  amino purine)  pada  kultur  jaringan  ulin  ( Eusideroxylon zwageri ). J. Hutan Lestari 7:1660-1667.
Widiastoety,  D.  2014.  Pengaruh  auksin  dan  sitokinin terhadap  pertumbuhan  planlet  anggrek mokara .  J. Hortik. 24:230-238.
Yuniati,  F.,  S.  Haryanti,  E.  Prihastanti.  2018.  Pengaruh hormon  dan  ukuran  eksplan  terhadap  pertumbuhan mata tunas tanaman pisang ( Musa paradisiaca var. raja bulu ) secara in vitro. Bul. Anat. dan Fisiol. 3(1): 20-28.