Volume  5,  Number  2,  2023 PAGE: 133 - 142 ISSN: Print 2622-4275 – Online  2622-7770 DOI: 10.31540/biosilampari.v5i2.1972 https://ojs.stkippgri-lubuklinggau.ac.id/index.php/JB Submitted: December 12, 2022; Accepted: April 27, 2023

## ISOLASI, ENUMERASI, DAN KARAKTERISASI BAKTERI PELARUT FOSFAT (BPF) INDIGENUS TANAH DESA KEBUNAN SUMENEP SEBAGAI AGEN PUPUK HAYATI ORGANIK
Hefdiyah 1* , Mahrus Ali 1 , Vita Kurnia Utami 2 1 Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Sains dan Teknologi Annuqayah, Jl. Bukit Lancaran, Kabupaten Sumenep, Jawa Timur, 69463
2 Program Studi Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknik, Institut Sains dan Teknologi Annuqayah, Jl. Bukit Lancaran, Kabupaten Sumenep, Jawa Timur, 69463 *Corresponding author, e-mail: hefdiyah@gmail.com

## A B S T R A C T
Phosphate  Solubilizing  Bacteria  (PSB)  are  known  that  have  important  role  to  improve plant phosphate uptake as biofertilizer. These Microorganism hold potential to promote organic agriculture as eco friendly and efficiency. This study aims to isolate, enumerate and  characterize  indigenous  PSB  from  Kebunan  Village  soil  as  the  organic  biofertilizer agent. Isolation and enumeration were carried out using the spread plate method on PCA media for enumeration of the total bacteria and Pikovskaya media (PKV) and NBRIP for BPF  selection  and  enumeration.  characterization  includes  observing  the  morphological colonies  and  cells.  These  experimental  studies  found  that  the  soil  pH  was  6.5,  the temperature  range  was  28-35  °C,  the  total  P  content  was  from  0.59  to  1.09  and  the dissolved phosphate content sequentially from the smallest is  0.53 (KB2), 29.41 (KB1), 60.45 (KB3). The total abundance of bacteria at 3 different locations showed variations between 1.97 x 10 6 to 287 x 10 6 . The highest abundance of BPF reached 5.45 x 10 6 cfu/g was in the watershed which had the lowest available P content. Total 7 isolates of BPF were  successfully  isolated  and  characterized  with  different  colony  characters  and  cell shapes. The selected BPF isolates were dominated by Gram-positive bacilli.
Keywords : Biofertilizer,  Characterization,  Enumeration , Phosphorus,  Phosphate  Solubilizing Bacteria

## PENDAHULUAN
Peningkatan  kesadaran  masyarakat  tentang  pola  hidup  sehat  (Darwanto, 2016) dan  bahaya yang  ditimbulkan  akibat penggunaan  bahan kimia sintetis dalam produk  pertanian  (Purwantini  &  Sunarsih,  2020),  mendorong  peningkatan permintaan  produk-produk  berlabel  organik  (Darwanto,  2016).  Produk  organik dihasilkan  dari  sistem  pertanian  organik,  yaitu  sistem  pertanian  yang  secara  garis besar  meningkatkan  kualitas  agroekosistem  yang  berkaitan  dengan  siklus  dan aktivitas  biologi  tanah  serta  keragaman  hayati  (Parwata,  2019).  Konsep  dasar pertanian  organik  harus  menggunakan  bahan  organik,  artinya  tidak  melibatkan penggunaan  bahan  sintetik  sebagaimana  dijelaskan  dalam  Peraturan  Menteri Pertanian  Nomor  64/Permentan/Ot.140/5/2013  tentang  Sistem  Pertanian  Organik, Pasal 1 Ayat 1 dengan ketentuan budidaya sesuai Standar Nasional Indonesia (SNI).
Ketentuan  penggunaan  bahan  penyubur  yang  diperbolehkan  pada  sistem pangan organik berdasarkan SNI 6729:2013 antara pupuk hijau, kotoran ternak, dan kompos, ganggang hijau, dan pupuk hayati ( biofertilizer) yang semuanya berasal dari budidaya secara organik dan tidak berasal dari organisme atau produk hasil rekayasa genetika (GMO) (BSN, 2016). Dalam upaya pengembangan sistem pertanian organik,
perlu dilakukan eksplorasi terhadap sumber daya hayati yang potensial sebagai agen pupuk hayati.
Biofertilizer mengandung mikroorganisme fungsional sebagai penyedia nutrisi bagi  tanaman  yang  terdiri  dari  organisme  tunggal  atau  kumpulan  dari  beberapa organisme  (Rohyani,  2014;  Astuti  et  al.,  2016).  Potensi  mikroorganisme  ini  antara lain  memacu  pertumbuhan  tanaman,  menghambat  pertumbuhan  penyakit  tanaman (Rohyani,  2014),  menambat  nitrogen,  mendegradasi  selulosa  dan  melarutkan  fosfat Astuti et al., 2016).
Bakteri Pelarut Fosfat (BPF) berperan penting dalam penyediaan unsur P bagi tanaman karena mampu mengubah P-terikat menjadi bentuk P-tersedia (Pande et al., 2017).  Sebagian  besar  unsur  fosfor  (P)  berada  dalam  bentuk  terikat  sehingga  tidak mampu  mendukung  pertumbuhan  tanaman  (Kumar  et  al.,  2018).  Unsur  hara  P berperan  penting  dalam  menghasilkan  energi  serta  sebagai  komponen  penyusun protein dan asam nukleat bagi pertumbuhan tanaman (Kumar et al., 2018). Tanah di Pulau  Madura  termasuk  kabupaten  Sumenep  memiliki  kandungan  P  tersedia cenderung  rendah  dibandingkan  dengan  P-terikat.  Selain  itu,  kandungan  tanah  di Pulau Madura memiliki kandungan C organik, N total, dan K yang rendah (Supriyadi, 2007).  Kondisi  ini  menjadi  salah  satu  perhatian  untuk  pengembangan  pengelolaan tanah  di  Pulau  Madura.  Pemupukan  fosfat  yang  biasa  dilakukan  dalam  sistem pertanian  dapat  dikatakan  tidak  efisien  karena  fosfat  terikat  yang  terdapat  pada pupuk  tidak  bisa  diserap  langsung  oleh  tanaman.  Untuk  meningkatkan  efisiensi dalam  penyediaan  fosfor  bagi  tanaman,  maka  perlu  dikembangkan  Bakteri  Pelarut Fosfat  (BPF)  karena  P  yang  terikat  pada  tanah  hanya  dapat  dilarutkan  oleh mikroorganisme  pelarut  fosfat.  Salah  satu  miroorganisme  pelarut  fosfat  adalah bakteri. Bakteri mampu melepaskan berbagai jenis asam organik di dalam tanah yang membuat unsur P larut dan tersedia bagi tanaman (Billah et al., 2019).
Berdasarkan  hasil  eksplorasi  yang  dilakuan  oleh  Sub  Direktorat  Eksplorasi Mineral  Industri  dan  Batuan,  berlangsung  dari  tahun  1994  sampai  dengan  tahun 1999, meliputi Kabupaten Sampang, Pamekasan dan Kabupaten Sumenep, Tanah di Pulau  Madura  khususnya  Desa  Kebunan,  Sumenep  memiliki  endapan  fosfat  yang tinggi  yaitu  mencapai  44,23  %.  Endapan  fosfat  di  Pulau  Madura  merupakan  jenis fosfat  guano  yang  mengandung  mineral  kolofan,  dahlit  dan  hidroksi  apatit  (Yusuf, 2000).  Endapan  fosfat  guano  memiliki  kelarutan  rendah  sehingga  BPF  dapat dimanfaatkan untuk mengubah fosfat tersebut menjadi bentuk tersedia tanpa perlu penambahan fosfat dari luar.
Kajian  mengenai  BPF  indigenus  tanah  fosfat  guano  permukaan  di  Pulau Madura khususnya Kabupaten Sumenep hampir tidak ada, oleh karena itu penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengeksplorasi potensi melalui isolasi, enumerasi dan  karakterisasi  terhadap  BPF  indigenus  tanah  fosfat  guano  permukaan  di  Desa Kebunan,  Kabupaten  Sumenep.  Bakteri  potensial  yang  didapat  diharapkan  dapat dikembangkan  lebih  lanjut  sebagai  agen  pupuk  hayati  dalam  upaya  pengembangan pertanian organik di Indonesia sejalan dengan upaya Kementerian Pertanian melalui Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian untuk mendorong penggunaan pupuk organik yang diperkaya dengan mikroba/pupuk organik hayati.

## METODE Waktu dan Tempat
Penelitian ini merupakan gabungan antara penelitian deskriptif kualitatif dan kuantitatif  yang  dilaksanakan  pada  bulan  Juli – November  2022  di  Laboratorium
Biologi  Institut  Sains  dan  Teknologi  Annuqayah.  Objek  penelitian  berupa  bakteri tanah, khususnya BPF yang berasal dari Desa Kebunan, Sumenep, Madura.

## Pengambilan Sampel Tanah
Sampel  tanah  diambil  dari  Desa  Kebunan,  Kabupaten  Sumenep.  Sampel diambil dari 3 titik lokasi dengan metode purposif sampling . Sampel tanah diambil di titik yang dianggap merepresentasikan tiga vegetasi paling mungkin berbeda di Desa Kebunan, yaitu titik yang berada di sebelah kiri sungai (KB1), titik di daerah aliran sungai  (KB2)  dan  titik  yang  berada  di  sebelah  kanan  sungai  (KB3)  sebagaimana tampak pada Gambar 1. Sampel tanah diambil di daerah rizosfer pada kedalaman ± 20 cm secara aseptis.
Gambar  1 .  Titik  Pengambilan  Sampel  Tanah  di  Desa  Kebunan,  Sumenep.  Titik  kordinat pengambilan sampel tanah di 3 lokasi di  Desa Kebunan, yaitu -6° 59'  25.5474", 113°  51'  52.2072" (KB1),  -6° 59'  7.1844",  113°  51'  38.6712" (KB2), dan  -6° 59' 33.9858", 113° 52' 17.5434" (KB3)

## Pengukuran Sifat Fisik Kimia Tanah
Sifat  fisik  kimia  yang  diukur  dalam  penelitian  ini  meliputi  suhu,  pH,  warna, kandungan P total dan P tersedia. Suhu dan pH tanah diukur menggunakan digital soil analyzer Penetapan  kadar  P  total  dan  P  tersedia  dilakukan  di  Laboratorium  Tanah dan Sumberdaya Lahan, Prodi Agroteknologi, Universitas Trunojoyo Madura.

## Isolasi dan Enumerasi Populasi Bakteri
Sebanyak 1 g tanah diambil dan dimasukkan ke dalam 9 ml aquades steril dan dihomogenkan  dengan vortex .  Sampel  tersebut  selanjutnya  diencerkan  secara bertingkat  hingga  pengenceran  10 -5 .  Hasil  pengenceran  10 -3 samapi  10 -5 diambil sebanyak  100  µl  dan  diinokulasikan  ke  dalam  cawan  petri  yang  berisi  media Plate Count Agar ( PCA ) dengan metode spread secara duplo. Kultur selanjutnya diinkubasi pada  suhu  ruang  selama  ±24  jam.  Jumlah  koloni  yang  berada  pada  rentang  30-300 (O’Toole, 2016) dimasukkan ke dalam rumus Colony Forming per Unit (CFU).
Jumlah bakteri/g = jumlah koloni x
1
faktor pengenceran

## Seleksi, Enumerasi dan Pemurnian BPF
Seleksi  BPF  dilakukan  dengan  menggunakan  dua  jenis  media,  yaitu  agar Pikovskya glukosa 10 g, Ca 3 (PO 4 ) 2, 5 g, (NH 4 ) 2 SO 4 , 0.5 g, NaCl, 0.2 g; MgSO 4 .7H 2 O, 0.1 g; KCl, 0.2 g, ektrak yeast 0.5 g; MnSO 4 .H 2 O, 0.002 g, dan FeSO 4 .7H 2 O, 0.002 g dan agar National Botanical Research Institute's phosphate (NBRIP) 10 g glukosa, 5 g Ca 3 (PO 4 ) 2 , 5 g MgCl 2 .6H 2 O, 0,25 MgSO 4 .7H 2 O, 0,2 g KCl dan 0,1 (NH 4 ) 2 SO 4 masing-masing jenis media  dilarutkan  dalam  1  liter  H 2 O  (Nautiyal,  1999).  Hasil  pengenceran  bertingkat tahapan sesbelumnya, diambil 100 µl dari pengenceran 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 diinokulasikan ke dalam media selektif dengan metode spread dan diinkubasi pada suhu 28 – 30 °C selama 2-5 hari (Paul dan Sinha, 2016; Pande et  al., 2017). Perhitungan koloni BPF hanya dilakukan pada media NBRIP karena pada media Pikovskaya sering dijumpai koloni  jamur  yang  mengganggu  pengamatan.  Koloni  bakteri  yang  membentuk  zona bening ( halozone ) dari cawan petri yang mengandung total bakteri 30-300, dihitung jumlahnya dan isolat-isolat terpilih dimurnikan. Isolat terpilih dipindahkan ke dalam cawan  petri  yang  berisi  media Nutrient  Agar ( NA )  dengan  metode  gores  16  dan diinkubasi pada suhu ruang antara 27-30 °C selama ±24 jam.

## Karakterisasi Morfologi Isolat BPF Potensial
Karakterisasi  isolat  BPF  terdiri  dari  pengamatan  karakter  morfologi  koloni meliputi  bentuk,  tepi,  elevasi,  penampakan,  optik,  warna,  dan  tekstur  serta pengamatan  bentuk  sel  melalui  pewarnaan.  Pengujian  dilakukan  berdasarkan protokol American Society for Microbiology (2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Kelimpahan Bakteri dan BPF
Masing-masing  sampel  tanah  dari  3  titik  pengembilan  sampel  menunjukkan karakter fisik kimia yang berbeda kecuali pada nilai derajat keasaman (pH) (Tabel 1, Gambar  2).  Sifat  fisik  kimia  tanah  dapat  mempengaruhi  kelimpahan  bakteri  yang terdapat  di  dalamnya.  Sifat  fisik  kimia  tersebut  antara  lain  pH  (Zheng  et  al.,  2019), suhu (Suriani et al., 2013), kadar P dan Kandungan C-organik (Suparnorampius et al., 2020).  Struktur  tanah  berpengaruh  secara  langsung  terhadap  kelimpahan  bakteri namun, struktur tanah berpengaruh terhadap aerasi.
Tabel 1 . Hasil Pengukuran Parameter Fisik Kimia Sampel Tanah di Desa Kebunan Sumenep Parameter Fisik Tanah Titik Pengambilan Sampel KB1 KB2 KB3 pH 6.5 6.5 6.5 Suhu 28°C 28°C 35°C P Total (%) 0.59 0,18 1,09 P Olsen (mg Kg-1) 29,41 0,53 60,45
Strktur
Granuler Butir Tunggal  Granuler
Gambar 2. Karakter Fisik (Warna dan Tesktur) Tanah di Masing-Masing Titik Pengambilan Sampel di Desa Kebunan, Sumenep. KB2 B3 KB1
Perbedaan sifat fisik kimia tanah dari ketiga sampel tanah dari Desa Kebunan, menyebabkan  perbedaan  kelimpahan  total  bakteri.  Hasil  perhitungan  kelimpahan bakteri  menunjukkan  bahwa  rata-rata  kelimpahan  total  bakteri  tanah  di  Desa Kebunan  tertinggi  terdapat  di  titik  KB3  yaitu  287  x  10 6 cfu/g  sedangkan  yang terendah  terdapat  di  titik  KB2  yaitu  1,97  x  10 6 cfu/g.  Pada  Titik  KB1  rata-rata kelimpahan bakteri sebesar 3,40 x  10 6 sebagaimana ditunjukkan pada  tabel  2. Dari penelitian  dapat  dikatakan  bahwa  kelimpahan  bakteri  berbanding  lurus  dengan kadar  P  total  dan  P  tersedia  karena  pada  sampel  tanah  KB3.  Selain  kelimpahan bakterinya tertinggi, kadar P total dan P tersedia pada KB3 juga memiliki nilai tinggi yaitu  masing-masing  1.09%  dan  60,45  ppm.  Sedangkan  pada  sampel  tanah  KB2, kelimpahan  bakteri  terendah  juga  memiliki  kadar  P  total  dan  P  tersedia  terendah yaitu masing-masing 0.18% dan 0.53 ppm (Tabel 1 dan 2).
Hasil  pengukuran  kadar  P  tersedia  dalam  tanah  di  Desa  Kebunan,  Sumenep menunjukkan  hasil  yang  berbeda  jika  dibandingkan  penelitian  Yusuf  (2000)  yang menyebutkan  bahwa  endapan  fosfat  di  Madura  merupakan  jenis  endapan  fosfat guano,  terdiri  dari  mineral  kolofan,  dahlit  dan  hidroksi  apatit.  Kisaran  kandungan P 2 O 5 terendah terdapat di Desa Ellak Daya Kecamatan Lenteng yaitu sebesar 6,20% sedangkan  yang  tertinggi  di  daerah  Desa  Kabunan,  Kecamatan  Sumenep  yaitu mencapai  44,23%. Perbedaan ini terjadi karena tidak ada informasi pasti mengenai titik  lokasi  pengambilan  yang  dilakukan  pada  penelitian  sebelumnya  sehingga kemungkinan terjadi perbedaan titik pengambilan sampel.
Tabel 2. Kelimpahan Bakteri Hasil Isolasi dari Sampel Tanah di Desa Kebunan, Sumenep
Parameter Medium Uji Populasi Bakteri Pelarut Fosfat (CFU/g) KB1 KB2 KB3 Kelimpahan Bakteri PCA 3,40 x 10 6 1,97 x 10 6 287 x 10 6 Kelimpahan BPF NBRIP 0,43 x 10 6 5,45 x 10 6 0,43 x 10 6
Keterangan: NBRIP = National Botanical Research Institute’s Phosphate; PCA = Plate Count Agar
Berdasarkan hasil perhitungan kelimpahan BPF diketahui bahwa kelimpahan BPF  berkebalikan  dengan  kelimpahan  total  bakteri.  Kelimpahan  BPF  berbanding terbalik dengan kadar P total dan P tersedia karena pada sampel tanah yang memiliki kandungan P total dan P tersedia terendah justru memiliki rata-rata kelimpahan BPF yang  tertinggi  yaitu  sebesar  5,45  x  10 6 cfu/g.    Hasil  ini  selaras  dengan  penelitian Suparnorampius et al. (2020) yang menyebutkan bahwa tanah yang memiliki kadar P tersedia  tinggi  memiliki  kandung  BPF  rendah.  Pada  dua  titik  pengambilan  sampel lainnya, KKB1 dan KB3, memiliki rata-rata kelimpahan BPF yang sama yaitu,  0,43 x 10 6 cfu/g  padahal  kandungan  kadar  P  total  dan  P  tersedia  berbeda.  Hal  ini mengindikasikan bahwa faktor yang mempengaruhi kelimpahan bakteri tidak hanya kadar P. Beberapa faktor lain yang dilaporkan berpengaruh antara lain suhu (suriani et  al.,  2013)  pH  (Zheng  et  al.,  2019),  eksudat  tanaman,  kadar  C-organik, (Suparnorampius  et  al.,  2020).  Suparnorampius  et  al.  (2020)  juga  menyebutkan bahwa  kelimpahan  BPF  yang  tinggi  mengindikasikan  bahwa  lingkungan  tersebut lebih mendekati kondisi optimum untuk pertumbuhan BPF tersebut.
Suhu tanah mempengaruhi pertumbuhan bakteri karena berhubungan dengan aktivitas enzim (Darwanto et al., 2016). Setiap jenis bakteri memiliki suhu optimum yang  berbeda-beda  (Madigan  et  al.,  2012).  Pertumbuhan  bakteri  akan  meningkat seiring  dengan  peningkatan  suhu  mendekati  suhu  optimum  akan  tetapi    menurun seiring  peningkatan  suhu  menjauhi  titik  optimum  (Madigan  et  al.,  2012). Masing- masing tanah pada penelitian ini memiliki suhu yang berbeda yaitu 35  °C pada titik KB3  dan  suhu  yang  sama  28  °C  pada  titik  KB1  serta  KB2.  Suhu  optimum pertumbuhan  BPF  sangat  bervariasi  didasarkan  pada  beberapa  penelitian sebelumnya  mulai  dari  10°C  hingga  50°C.    Situmorang  et  al  (2013)  melaporkan bahwa suhu optimum pertumbuhan BPF adalah 25-30°C. Menurut Yadaf et al., (2013) suhu  optimum  pertumbuhan  BPF  adalah  50°C  sedangkan  menurut  Behera  et  al., (2017)  suhu  optimum  pertumbuhan  BPF    adalah  45°C.    Pertumbuhan  bakteri berbanding lurus dengan kelimpahan bakteri. Apabila pertumbuhan meningkat maka kelimpahan akan tinggi dan sebaliknya.
Kelimpahan  bakteri  dapat  dipengaruhi  oleh  derajat  keasaman  dimana penurunan pH berdampak pada penurunan kelimpahan bakteri. Setiap jenis bakteri memiliki rentang pH optimum yang berbeda-beda (Zheng et al, 2019). pH tanah pada ketiga lokasi tersebut sama, yaitu pH 6.5. Rentang pH optimum untuk pertumbuhan (BPF) adalah kisaran 5,6 -7 (Suparnorampius et al., 2020).

## Karakterisasi Morfologi Isolat BPF Potensial
Isolat  BPF  terpilih  dari  masing-masing  media  seleksi  dipurikasi  dan dikarakterisasi  secara  morfologi.  Jumlah  total  isolat  terpilih  sebanyak  9  isolat  yang berasal  dari  3  titik  lokasi  pengambilan  sampel  (Tabel  3).  Sejumlah  2  isolat  tidak dikarakterisasi  karena  menunjukkan  morfologi  koloni  yang  tidak  konsisten  selama purfikasi  sekalipun  telah  menunjukkan  keseragaman  bentuk  sel  dan  jenis  Gram (KB1I3)  sedangkan  satu  sisanya  diduga  yeast  sehingga  tidak  dikarakterisasi. Sembilan isolate terpilih dan sumbernya ditunjukkan pada Tabel 3.
Isolat  BPF  yang  terpilih  kemudian  dimurnikan  dengan  metode streak  plate Koloni  tunggal  hasil  pemurnian  dikonfirmasi  keseragaman  bentuk  sel  dan  jenis Gramnya melalui pewarnaan Gram. Hasil positif pewarnaan Gram akan menunjukkan warna  ungu  sedangkan  hasil  negetif  akan  ditunjukkan  dengan  warna  orange-jingga (Gambar  3).  Pengamatan  hasil  pewarnaan  sangat  subjektif  dan  sangat memungkinkan  terjadi false  positive sehingga  penentuan  jenis  Gram  dikonfirmasi dengan  metode  KOH  10%  (Harley  dan  Prescott,  2002).  Koloni  dan  sel  isolat  BPF terpilih  didominasi  oleh  bakteri  Gram  positif  berbentuk  sel  batang.  Sebagian  kecil isolat  BPF  terpipih  termasuk  Gram  negatif  berbentuk  kokus  sebagaimana ditunjukkan pada Tabel 3.
Terdapat  total  7  isolat  bakteri  yang  berhasil  dikarakterisasi.  Hasil  yang diperoleh  menunjukkan  bahwa  ke-7  isolat  memiliki  setidaknya  satu  karakter  yang membedakan  dengan  yang  lainnya.  Isolat  terpilih  memiliki  2  bentuk  yang  berbeda, yaitu  circular  dan  punctiform.  Elevasi  bervariasi  mulai  dari  raised,  convex  hingga pulvinate  sedangkan  tepi  isolate  semuanya  rata.  Tampilan  isolat  cukup  bervariasi, Sebagian  besar  mengkilap  dengan  4  variasi  warna  berbeda,  yaitu  krem,  krem kebiruan,  krem  keputihan  dan  kuning.  Karakter  koloni  bakteri  berbeda  dapat mengindikasikan jenis bakteri yang sama. Sebagaimana dijelaskan dalam Madigan et al., (2012) bahwa konsep spesies bakteri memiliki ruang lingkup yang sangat spesifik berdasarkan jenis pendekatan yang digunakan.
Tabel 3 . Isolat Bakteri Pelarut Fosfat Terpilih Kode Isolat Sumber Isolat Karakter Sel Jenis Media Titik Sampling Bentuk Gram (KOH 10%) KB1I1 NBRIP KB1 Streptobasil Positif KB1I2 PKV KB1 TD TD KB1I3 PKV KB1 Basil Positif KB2I1 NBRIP KB2 Diplokokus Negatif KB2I2 NBRIP KB2 Dipkokus Negatif KB2I3 NBRIP KB2 Basil Positif KB3I1 NBRIP KB3 Streptobasil Positif KB3I2 NBRIP KB3 Koma Positif KB3I3 PKV KB3 Basil Positif
Keterangan TD: Tidak Diidentifikasi
Gambar 3 . Hasil Pewarnaan Gram pada Isoat Bakteri KB1I1, KB2I1, KB2I2, KB2I3, KB3I1, KB3I2 dan KB3I3.
Beberapa  jenis  bakteri  Gram  positif  basil  dan  Gram  negatif  kokus  telah  dilaporkan memiliki  kemampuan  dalam  melarutkan  fosfat.  Genus Azotobacter adalah  contoh  bakteri Gram  Negatif  kokus yang telah  dilaporkan  mampu melarutkan fosfat  (Marista et  al .,  2013). Penelitian  lain  menyebutkan  bahwa  genus Pseudomonas,  Bacillus dan Chromobacterium mempunyai kemapuan melarutkan P terikat dengan menggunakan Pikovskaya agar sebagai media  uji  (Pande,  2017). Bacillus  sp adalah  contoh  bakteri  Gram  positif  basil.  Genus Corynebacterium merupakan  salah  satu  bakteri  Gram  positif  yang  memiliki  potensi sebagai  palarut  fosfat  yang  diisolasi  dari  Pulau  Poteran,  Sumenap  (Hefdiyah  &  Shovitri, 2014).
Pemanfaatan mikroorganisme indigenus sebagai biofertilizer merupakan salah satu  alternatif  pemanfaatan  bakteria  yang  dapat  dikembangkan  dalam  mengatasi permasalah tanah yang kurang optimal. Biofertilizer indigenus juga diharapkan dapat meningkatkan  kesuburan  tanah  untuk  memenuhi  persyaratan  sebagai  lahan pertanian  yang  bersifat  ramah  lingkungan  sehingga  tidak  merusak  ekosistem (Pangaribuan,  2018).  Bakteri  indigenus  akan  lebih  mudah  diterapkan  di  tempat asalnya  sehingga  meningkatkan  efisiensi  aplikasi  tanpa  harus  melalui  aklimatisasi yang terkadang membutuhkan waktu lama. Pemanfaatan organisme indigenus yang dapat  mengacu  pada  makna  lokal  dalam  sistem  pertanian  organik  sejalan  dengan anjuran  pemerintah  melalui  Badan  Standarisasi  Nasional.  Penerapan  sistem
KB1I1 KB2I1 KB2I2 KB2I3 KB3I1 KB3I2
KB3I3
pertanian  organik  ini  tidak  hanya  mampu  meningkatkan  kesehatan  agroekosistem yang  mencakup  aspek  keanekaragaman  hayati,  siklus  biologi,  dan  akivitas  biologi tanah  (Badan  Standrisasi  Nasional,  2016),  namun  juga  meningkatkan  kesehatan masyarakat  karena  terhindar  dari  dampak  negatif  penggunan  bahan  kimia (Purwantini & Sunarsih, 2020).
Tabel 4 . Karakter morfologi koloni Bakteri Pelarut Fosfat Terpilih Kode Isolat Bentuk Elevasi Tepi Tampilan Optik Pigmen Tekstur KB1I1 Circullar Raised Rata Dull-Opaque Krem Kasar KB2I1 Circullar Convex Rata Shiny-Opaque Krem Halus KB2I2 Punctiform Pulvinate Rata Shiny-Opaque Krem Halus KB2I3 Punctiform Raised Rata Shiny-Transluncent krem kebiruan Halus KB3I1 Circullar Convex Rata Shiny-Opaque krem Halus KB3I2 Punctiform  Pulvinate Rata Shiny-Transluncent kuning Halus KB3I3 Circullar Raised Rata Shiny-Opaque Kremkeputihan Kasar

## SIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa kelimpahan  bakteri  pelarut  fosfat  yang  terdapat  di  tanah  Desa  Kebunan,  Sumenep berbeda  pada  masing-masing  titik  pengambilan  sampel.  Kelimpahan  BPF  tertinggi mencapai  5,45  x  10 6 berada  di  daerah  aliran  sungai  yang  memiliki  kandungan  P tersedia  paling  rendah.  BPF  yang  berhasil  diisolasi  dan  dikarakterisasi  sebanyak  7 isolat dengan karakter koloni dan bentuk sel yang berbeda-beda, yaitu KB1I1, KB2I1, KB2I2, KB2I3, KB3I1, KB3I2 dan KB3I3 . Isolat BPF yang diperoleh didominasi oleh jenis bakteri Gram positif basil.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Direktorat  Jenderal  Pendidikan Tinggi, Riset dan Teknologi yang telah memberikan bantuan dana sehingga penelitian ini dapat terlaksana. Selanjutnya kepada Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat (LPPM) IST Annuqayah yang telah menfasilitasi berbagai kegiatan terkait program  hibah  kompetitif  nasional.  Ucapan  terima  kasih  juga  disampaikan  kepada semua  pihak  yang  telah  membantu  merampungkan  penelitian  ini,  khusunya  Ida Hasanah, mahasiswa Prodi Biologi IST Annuqayah .

## REFERENSI
American  Society  for  Microbiology.  (2016). Colony  Morphology  Protocol . https://asm.org/ASM/media/Protocol-Images/Colony-Morphology- Protocol.pdf
Astuti, D.A., Sudarsono., Sulaeman, A., & Syukur, M. (2016). Pengembangan Pertanian Organik di Indonesia . Pemikiran Guru Besar IPB. Bogor: PT Penerbit IPB Press.
Badan Standarisasi
Nasional. (2016). Sistem Pertanian Organik. https://nasih.staff.ugm.ac.id/wp-content/uploads/SNI-6729-2016-sistem- pertanian-organik.pdf
Behera,  B.C.,  Yadav,  H.,  Singh,  S.K.,  Mishra,  R.R.,  Sethi,  B.K.,  Dutta,  S.K.,  &  Thatoi. (2017).  Phosphate  solubilization  and  acid  phosphatase  activity  of Serratia sp. isolated from mangrove soil of Mahanadi river delta, Odisha, India. J Genet Eng Biotechnol , 15 (1), 169-178. https://doi.org/10.1016/j.jgeb.2017.01.003
Billah,  M.,  Khan,  M.,  Bano,  A.,  Hassan,  T.U.,  Munir,  A.,  &  Gurmani,  A.R.  (2019). Phosphorus  and  phosphate  solubilizing  bacteria:  Keys  for  sustainable agriculture. Geomicrobiology Journal, 36(10), 904-916.
https://doi.org/10.1080/01490451.2019.1654043
Darwanto,  I.  P.  (2016)  Peran  Kelompok  Tani  Sayuran  Organik  terhadap Pengembangan  Ekonomi  Lokal. Jurnal  Bisnis  dan  Ekonomi  (JBE) , 23 (2),  105 – 123. https://repofeb.undip.ac.id/id/eprint/6084
Harley  &  Prescott.  (2012). Laboratory  Exercises  in  Microbiology .  Fifth  Edition.  New York: McGraw-Hill Companies.
Hefdiyah,    &  Shovitri,  M.  (2014).  Potensi  Isolat  Bakteri  Edwardsiella  dan Corynebacterium  dari  Pulau  Poteran  Sumenep  sebagai  Pelarut  Fosfat, Jurnal Sains dan Seni ITS, 3 (2), 2301-9271. https://doi.org/10.12962/j23373520.v3i2.6910
Kumar, S., Reddy, G. C., Phogat, M., & Korav, S. (2018). Role of bio-fertilizers towards sustainable  agricultural  development. Journal  of  Pharmacognosy  and Phytochemistry ,
7 (6),
1915-1921. https://www.phytojournal.com/archives/2018/vol7issue6/PartAH/7-6-370- 168.pdf
Madigan,  M.T.,  Martinko,  J.M.,  Stahl,  A.D.,  &  Clark,  D.P.  (2012). Brock  Biology  of Microorganisms 13th ed, San Francisco : Pearson.
Marista  E.,  Khotimah  S.,  &  Linda  R.  (2013).  Bakteri  Pelarut  Fosfat  Hasil  Isolasi  dari Tiga Jenis Tanah Rizosfer Tanaman Pisang Nipah ( Musa paradisiaca var. nipah) di Kota Singkawang.
Jurnal Protobiont, 2 (2), 93-101 . https://doi.org/10.26418/protobiont.v2i2.2749
Nautiyal,  C.S.  (1999).  An  efficient  microbiological  growth  media  for  screening phosphate solubilizing microorganisms. FEMS Microbiol . Lett., 170 (1999), 265 – 270. https://doi.org/10.1111/j.1574-6968.1999.tb13383.x
O'Toole, G. A. (2016). Classic Spotlight: Plate Counting You Can Count On. J Bacteriol, 198 (23), 3127.  https://doi.org/10.1128/JB.00711-16 Pande A., Pandey P., Mehra S., Singh M & Kaushik S. (2017). Phenotypic and Genotypic Characterization  of  an  Phosohate  Solubilizing Bacteria  and  Their  Efficiency  on The  Growth  of  Maize. Journal  of  Genetic  Engineering  and  Biotechnology , 15 (2), 379-391.  https://doi.org/10.1016/j.jgeb.2017.06.005
Pangaribuan,  N.  (2018).  Eksplorasi  Mikroorganisme  Indigenus  Inseptisols. Jurnal Matematika, Sains, dan
Teknologi ,
19 (2), 80-88.
https://doi.org/10.33830/jmst.v19i2.109.2018
Parwata,  M.O.  (2019).  Pertanian  Organik  Menuju  Bali  Pulau  Organik  (Bali  Organik Island)  .  Dinas  pertanian  dan  ketahanan  pangan  provinsi  bali  diakses  pada  29 November 2022 melalui https://distanpangan.baliprov.go.id/pertanian- organik-menuju-bali-pulau-organik-bali-organik-island/
Paul,  D.  &  Sinha,  S.  N.  2017.  Isolation  and  characterization  of  phospate  solubilizing bacterium Pseudomonas aeruginosa KUPSB12 with antibacterial potential from river  Gangga,  India. Annals  of  Agrarian  Science , 15 (1),  130-136. https://doi.org/10.1016/j.aasci.2016.10.001
Peraturan  Menteri  Pertanian  Nomor  64/Permentan/Ot.140/5/2013  tentang Sistem Pertanian Organik , Pasal 1 Ayat 1. Berita Negara Republik Indonesia Tahun 2013 Nomor
770.
https://peraturan.bpk.go.id/Home/Download/152945/Permentan%20Nomor %2064%20Tahun%202013.pdf
Purwantini,  T.B.,  &  Sunarsih.  (2019).  Pertanian  Organik:  Konsep,  Kinerja,  Prospek, dan  Kendala. Forum Penelitian  Agro  Ekonomi,  37( 2),  127-142. http://dx.doi.org/10.21082/fae.v37n2.2019.127-142
Rohyani.,  Zul,  D  &  Fibrianti,  B.L.  (2014).  Bakteri  Indigenus  yang  Potensial  Sebagai Agen Biofertilizer Asal Tanah Gambut di Kawasan Zamrud dan Taman Nasional Tesso Nilo, Riau. JOM FMIPA, 1 (2) 417-429. https://media.neliti.com/media/publications/185718-ID-isolasi-bakteri- indigenus-yang-potensial.pdf
Situmorang,  E.C.,  Andriessa,  P.,  Sinthya,  H.C.,  Nurita,  T.M.,  &  Tony,  L.  (2013).
Indigenous  Phosphate  Solubilizing  Bacteria  from  Peat  Soilfor  an  Eco-friendly Biofertilizer  in  Oil  Palm  Plantation. Renewable  Energy  and  Energy  Conversion Conference  and  Exhibition  (The  2nd  Indo  EBTKE-CONEX  2013). 10.18502/ken.v1i1.324Suparnorampius,  S.,  Patadungan,  Y.,  &  Rois.  (2020). Eksplorasi  Bakteri  Pelarut  Fosfat  Pada  Berbagai  Tanaman  Industri  dan Hortikultura  di  Dataran  Tinggi  Napu.  E- J.  Agroekbis , 8 (1),  25-31. http://jurnal.faperta.untad.ac.id/index.php/agrotekbis/article/view/212 Supriyadi, S. (2007). Kesuburan Tanah di Lahan Kering Madura. Embryo, 4 (2), 124- 131. https://pertanian.trunojoyo.ac.id/wp-content/uploads/2012/03/4- Slamet-S-Kesuburan-Tanah.pdf
Suriani,  S.,  Soemarmo,  &  Suharjono.  (2013).  Pengaruh  Suhu  dan  pH  Terhadap  Laju Pertumbuhan  Lima  Isolat  Bakteri  Anggota  Genus  Pseudomonas  yang  Diisolasi dari  Ekosistem  Sungai  Tercemar  Deterjen  di  Sekitar  Kampus  Universitas Brawijaya. J-PAL , Vol. 3 (2),
58-62. https://jpal.ub.ac.id/index.php/jpal/article/view/126
Yadaf,  R.K.,  Gothwal,  V.K.,  Nigam,  S.  Sinha,&  Roy,  P.  Ghosh.  (2013).  Optimization  of culture conditions for phosphate solubilization by a thermo-tolerant phosphate- solubilizing  bacterium  Brevibacillus  sp.  BISR-HY65  isolated  from  phosphate mines. Biocatalysis  and  Agricultural  Biotechnology , 2 (3),  217-225. https://doi.org/10.1016/j.bcab.2013.04.005
Yusuf,  A.F.  Endapan  Fosfat  Di  Daerah  Madura.  Sub  Dit.  Eksplorasi  Mineral  Industri dan Batuan. Kolokium Hasil Kegiatan Lapangan DSM (2000). http://psdg.bgl.esdm.go.id/index.php?view=article&catid=52%3Acontent- menu-utama&id=332%3Aendapan-fosfat-di-daerah- madura&tmpl=component&print=1&page=&option=com_content&Itemid=3 Zheng, B.X., Zhang, D.P., Wang, Y., Hao. X.L., Wadaan, MAM., Hozzein, W.N., Peñuelas, J., Zhu,  Y.G.,  &  Yang,  X.R.  (2019).  Responses  to  Soil  pH  Gradients  of  Inorganic Phosphate  Solubilizing  Bacteria  Community. Scientific  Reports,  9 (1),  1-8. https://www.nature.com/articles/s41598-018-37003-w