https ://ejour nal.uns rat.ac .id/v3/index.php/pharm ac on

## PHARMACON
ISSN (print): 2302 - 2493 ISSN (online): 2721 - 4923
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK SPONS Callyspongia aerizusa DARI PERAIRAN DESA POOPOH KABUPATEN MINAHASA
Viocindy R. Nusaly 1* , Defny S. Wewengkang 2 , Erladys M. Rumondor 3
1,2,3 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi *Corresponding author email: riskanusaly025@gmail.com

## I N F O R M A S I A R T I K E L A B S T R A C T
Diterima pada 7 Juli 2023
Disetujui pada 25 November 2023 Dipublikasikan pada 11 Februari 2024 Hal. 409 - 418 Callyspongia aerizusa is one of the sponge species that is spread across the Indonesian marine waters and rich in bioactive compounds such as secondary metabolites that is used in medicine field as antibacterial. The improvement of bacteria resistant has been a serious problem in the medicine field, therefore there should be an improvement of a new antibiotic medicine from natural ingredients for the healt improvement. This research aims to find the activity of extracts of sponge Callyspongia aerizusa from the waters of Poopoh Village, Minahasa Regency against the  growth  of  Pseudomonas  aeruginosa  and  Staphylococcus  aureus  bacteria.  The  growth  of bacterial  is  tested  by  disc  diffusion  Kirby  Bauer  method  and  by  observing  the  value  of generated inhibition zone. From the result of the research, the extracts of Callyspongia aerizusa sponge has clear zone against Staphylococcus aureus bacteria of 8 mm in the concentration of 250 µg/disc, and the Pseudomonas aeruginosa bacteria has 9 mm in the concentration of 250 µg/disc  which  categorized  as  medium.  It  can  be  concluded  that  the  Callyspongia  aerizusa sponge has an metabolite compound with wide spectrum activity that can hinder the growth of Gram-negative and Gram-positive bacteria .
Keywords:  Callyspongia aerizusa, Antibacterial , Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa
A B S T R A K
DOI: 10.35799/pha.13.2024.49230
Callyspongia aerizusa merupakan salah satu spesies spons yang tersebar di perairan Indonesia serta  kaya  akan  senyawa  bioaktif  berupa  metabolit  sekunder  yang  berguna  dalam  bidang pengobatan  sebagai  antibakteri.  Peningkatan  resisten  bakteri  sudah  menjadi  masalah  serius dalam bidang  kesehatan,  maka dari itu  perlu  dilakukan  pengembangan  obat  antibiotik  baru dari  bahan  alam  untuk  peningkatan  kesehatan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui adanya aktivitas antibakteri ekstrak spons Callyspongia aerizusa dari perairan Desa Poopoh Kabupaten  Minahasa  terhadap  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa dan Staphylococcus  aureus .  Aktivitas  antibakteri  diuji  menggunakan  metode  difusi  agar  (dics diffusion kirby and bauer) dan dilihat besar zona hambat yang dihasilkan. Berdasarkan hasil penelitian,  ekstrak  spons Callyspongia  aerizusa memiliki  diameter  zona  bening  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus sebesar  8  mm  pada  kosentrasi  250  µg/disc  dan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa  sebesar  9  mm  pada  kosentrasi  250  µg/disc  yang  termasuk  dalam kategori  daya  hambat  sedang.  Dapat  disimpulkan  bahwa  spons Callyspongia  aerizusa memiliki aktivitas senyawa metabolit berspektrum luas yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram- negatif dan bakteri Gram-positif.
Kata  Kunci: Callyspongia  aerizusa, Antibakteri ,  Staphylococcus  aureus,  Pseudomonas aeruginosa

## PENDAHULUAN
Indonesia terletak di daerah tropis sehingga menjadi tempat biota laut berupa terumbu karang hidup dan berkembang. Indonesia memiliki 569 jenis karang atau 67 % dari 845 jenis karang di dunia (Kusuma et al., 2023). Spons dapat memproduksi senyawa metabolit sekunder yang belum banyak dimanfaatkan  oleh  masyarakat  dalam  bidang  pengobatan  (Damayanti  et  al.,  2020). Callyspongia aerizusa adalah spesies spons atau porifera yang tergolong dalam family Callyspongiidae. Spons ini dapat  ditemukan  hampir  diseluruh  laut  Indonesia  sehingga  mudah  diperoleh  (Nurhaniefah,  2022). Spons C.  aerizusa mengandung  senyawa  alkaloid,  steroid,  dan  terpenoid  (De  Sousa  et  al.,  2021), senyawa alkaloid diketahui bersifat sebagai antibakteri (Faiza, 2015).
Antibakteri  merupakan  zat  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dan  dapat membunuh bakteri penyebab infeksi (Paju et al., 2013). Bakteri Staphylococcus aureus adalah bakteri Gram-positif,  bakteri  ini  merupakan  salah  satu  mikroorganisme  parasite  yang  dapat  menyebabkan berbagai macam penyakit seperti infeksi kulit, keracunan makanan sampai dengan infeksi sistemik (Herlina et al., 2015) dan menyebabkan ketahanan terhadap antibiotic (Hafsari et al., 2015). Bakteri Pseudomonas  aeruginosa  ialah  bakteri  Gram-negatif,  bakteri  ini  bisa  jadi  bakteri  patogen  yang berbahaya penyebab infeksi luka pada kulit yang sering terjadi di rumah sakit (Pujiastuti, 2020). P. aeruginosa mengakibatkan  infeksi  luka  seperti  pada  luka  sayatan,  luka  lecet,  luka  bakar,  ataupun pada luka paska pembedahan (Ananto et al., 2015). Peningkatan resisten bakteri terhadap antibiotik sudah menjadi masalah yang serius dalam bidang kesehatan, maka dari itu diperlukan penemuan dan pengembangan bahan obat baru untuk pengobatan dan peningkatan efektivitas antibiotik yang lebih baik. Pemanfaatan bahan alam sebagai obat umumnya dinilai lebih aman serta memiliki efek samping yang relatif lebih kecil dibandingkan penggunaan obat modern (Warbung et al., 2013).
Penelitian  sebelumnya  yang  telah  di  lakukan  oleh  (Meldha  et  al.,  2019)  mengenai  spons Callyspongia aerizusa yang diperoleh dari perairan pulau Mantehage Kabupaten Minahasa Utara pada ekstrak etanolnya tidak memiliki aktivitas antibakteri, sedangkan penelitian yang dilakukan (Awaeh et al., 2022) Spons C. aerizusa yang diperoleh dari perairan pulau Manado Tua pada ekstrak etanolnya memiliki aktivitas antibakteri yang termasuk pada kategori zona hambat sedang. Besarnya kandungan metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  spons  tidak  selalu  sama  dengan  jenisnya  sehingga  akan menghasilkan  manfaat yang berbeda, hal ini dikarenakan adanya faktor perbedaan lingkungan, suhu dan  sebagainya  (Marzuki  I,  2018).  Berdasarkan  uraian  diatas,  penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui  apakah  dari  spons  Callyspongia  aerizusa  yang  diperoleh  dari  perairan  Desa  Poopoh Kabupaten  Minahasa  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan November 2022 - Mei 2023 di Laboratorium Farmakognosi dan  Fitokimia,  Laboratorium  Lanjutan  Program  Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  serta  di  Laboratorium  Hama  dan  Penyakit  Pada  Tumbuhan  Fakultas  Pertanian Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  ini  yaitu  eksperimen  laboratorium  untuk  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  spons Callyspongia  aerizusa  yang  diperoleh  dari  perairan  Desa  Poopoh  Kabupaten  Minahasa  terhadap pertumbuhan  bakteri  Pseudomonas  aeruginosa  dan  Staphylococcus  aureus  menggunakan  metode difusi agar (dics diffusion kirby and bauer)

## Alat dan Bahan
a. Alat
Dalam penelitian ini digunakan alat berupa peralatan selam (scuba diving), tabung oksigen, plastik zipper lock bag, sarung tangan, cool box, kamera, spidol permanen, jas lab, handscoon, masker, pisau, gunting, telenan, tissue, botol 600 mL, kertas label, corong gelas, corong buchner, wadah kaca, gelas ukur, gelas kimia (pyrex), erlenmeyer (pyrex), rak tabung reaksi, tabung reaksi, cawan petri, pipet tetes,  mikropopet,  micro  tubes,  spatula,  jarum  ose,  pinset,  timbangan  analitik,  jangka  sorong, magnetic stirrer, pembakar spritus, kertas cakram (blank paper disc), incubator  incucell  laminary air  flow,  lemari pendingin, rotary evaporator, dan autoklaf (autoklaf KT-30s).
b. Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  spons  Callyspongia  aerizusa,  bakteri  uji Staphylococcus  aureus  dan  Pseudomonas  aeruginosa,  etanol  95%,  aquades  water  one,  natrium klorida,  pepton,  nutrient  agar,  media  agar  (beef  extract),  kertas  cakram  (blank  paper  disc),  kertas cakram kloramfenikol (cloramphenicol paper disc), alumunium foil, Es batu, kertas saring, kapas dan juga tissue.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel spons Callyspongia aerizusa diambil dari perairan Desa Poopoh Kabupaten Minahasa dengan menggunakan  peralatan  selam  (scuba  diving),  masker  dan  juga  tabung  udara.  Dimana  pada kedalaman  5  –  10  m  di  bawah  laut,  sampel  difoto  menggunakan  kamera  kemudian  diambil  dan dimasukkan  kedalam  zipper  lock  bag  yang  telah  diberi  penomoran.  Setelah  itu  sampel  disimpan dalam  cool  box  yang  berisi  es  batu.  Selanjutnya  sampel  langsung  dibawa  ke  Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia  Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi.  Sampel  difoto kembali.

## Ekstraksi Sampel
Spons Callyspongia aerizusa terlebih dahulu disortasi basah dengan cara dibersihkan dan dipotong menjadi ukuran kecil. Sampel ditimbang dan diperoleh 69 g spons C. aerizusa selanjutnya diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan etanol 95 %. Sampel dimasukkan ke dalam botol 600 mL, kemudian  direndam  dengan  pelarut  etanol  95%  sampai  sampel  terendam  semuanya  dan  dikocok berulang-ulang kemudian didiamkan selama 24 jam. Setelah itu sampel disaring menggunakan kertas saring sehingga menghasilkan filtrat 1 dan residu 1. Hasil filtrat 1 disimpan, sedangkan untuk hasil residu  1  dilanjutkan  dengan  remaserasi  sebanyak  2  x  24  jam  dan  dihasilkan  filtrat  2  dan  filtrat  3. Filtrat 1,2 dan 3 yang dihasilkan dari proses maserasi digabungkan menjadi satu kemudian disaring kembali  menggunakan  kertas  saring.  Setelah  itu,  filtrat  yang  diperoleh  dievaporasi  menggunakan rotary evaporator pada suhu 40 ℃ hingga didapatkan ekstrak kasar. Ekstrak ditimbang menggunakan timbangan analitik dan dilakukan perhitungan %rendeman (Silap et al., 2020).

## % 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 ℎ𝑎𝑠𝑖𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑎𝑤𝑎𝑙 𝑥 100 %
(Nahor et al, 2020)

## Sterilisasi Alat
Dalam  penelitian  ini  alat  –  alat  yang  digunakan  terlebih  dahulu  disterilkan.  Untuk  alat-alat  gelas disterilkan menggunakan autoklaf selama ≥15 menit pada suhu 121°C. Sedangkan untuk jarum ose dan pinset dibakar dengan pembakaran diatas api langsung (pembakaran spritus) (Putri et al., 2020).

## Pembuatan Media Cair
Media cair dibuat dengan cara mencampurkan sebanyak 0,3 g ekstrak daging (meat extract), 0,5 g pepton  dan  0,3  g  NaCl  kedalam  erlenmeyer  kemudian  ditambahkan  100  mL  akuades.  Setelah  itu ditutup  dengan  aluminium  foil  dan  dicampur  menggunakan  magnetic  stirrer  sampai  tercampur sempurna atau homogen. Selanjutnya media cair disterilkan dengan menggunakan autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 °C. Setelah itu, dengan menggunakan kertas pH media cair yang diperoleh diukur pHnya. Selanjutnya sebanyak 1 mL media cair dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditutup dengan alumunium foil (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Media  cair  yang  telah  disiapkan  ditambahkan  bakteri  yang  telah  dikultur  dimana  bakteri  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  Staphylococcus  aureus  dan  Pseudomonas  aeruginosa  dengan cara dipipet masing-masing sebanyak 100 µL dimasukan ke dalam tabung reaksi. Kemudian ditutup menggunakan aluminium foil dan diinkubasi dalam inkubator selama 24 jam pada suhu 37 °C (Ortez, 2005).

## Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan  larutan  uji  dibuat  dengan  cara  ekstrak  kasar  spons  Callyspongia  aerizusa  ditimbang sebanyak 2 mg dan dilarutkan dalam 400 µL metanol kemudian dikocok sampai tercampur sempurna menggunakan  magnetic  stirrer.  Selanjutnya  ditambahkan  8  kertas  cakram  sehingga  menghasilkan sebesar 250 µg/50 µL kosentrasi larutan uji. (Ortez, 2005)

## Pembuatan Media Uji
Sebanyak  100  mL  akuades,  0,5  g  pepton,  0,3  g  beef  extract,  0,3  g  NaCl,  dan  1,5  g  nutrient  agar dimasukkan kedalam erlenmayer lalu ditutup dengan aluminium foil dan dicampurkan menggunakan magnetic  stirrer  hingga  tercampur  sempurna.  Selanjutnya  diautoklaf  selama  15  menit  pada  suhu 121  °C.  Media  uji  telah  siap  digunakan  dalam  pengujian  aktivitas  antibakteri  (Ortez,  2005) Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif Pengujian antibakteri dalam penelitian ini digunakan kertas cakram kloramfenikol (cloramphenicol paper disc) sebagai kontrol positif. Sedangkan untuk kontrol negatif digunakan pelarut metanol, dengan cara sebanyak 100 μL larutan metanol dimasukkan kedalam mikrotube lalu ditambahkan kertas cakram (blank paper disc) (Lalamentik, 2017).

## Pengujuan Aktivitas Antibakteri
Dalam pengujian anktivitas antibakteri digunakan metode difusi agar (disc diffusion kirby and bauer). Pada pengujian ini, kertas cakram (paper disc) yang digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap 50  μL.  Masukkan  kertas  cakram  kedalam  mikrotube  yang  berisi  larutan  uji  yang  telah  ditentukan kosentrasinya  (250 µg/50  μL).  Selanjutnya  Media  uji  yang  telah  diautoklaf  selama  15  menit  pada suhu 121 °C, didinginkan hingga suhu 40 °C. Selanjutnya kedalam cawan petri dituangkan media agar  kemudian  sebanyak  100  μL  bakteri  yang  telah  dikultur  yaitu  Staphylococcus  aureus  dan Pseudomonas  aeruginosa  dipipet  dan  diinokulasi  pada  media  agar  dan  didiamkan  hingga  media
mengeras.  Setelah  itu  kontrol  negatif,  kontrol  positif  dan  kertas  cakram  yang  sudah  mengandung ekstrak  Callyspongia  aerizusa  dimasukkan  menggunakan  pinset  ke  dalam  cawan  petri  yang  telah diberi label serta nomor yang sesuai dan diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 oC selama 24 Jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Diameter Zona Hambat
Pengamatan  dan  pengukuran  diameter  zona  hambat  dilakukan  setelah  24  jam  masa  inkubasi. Diameter  zona  hambat  diukur  menggunakkan  digital  caliper.  Kemudian  zona  hambat  yang  telah diukur dikategorikan berdasarkan (Oroh et al., 2015) menyatakan diameter <5 mm memiliki kekuatan daya  hambat  lemah,  5-10  mm  daya  hambat  sedang,  10-20  mm  daya  hambat  kuat  dan  >20  mm memiliki daya hambat sangat kuat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Determinasi Sampel
Spons Callyspongia aerizusa diperoleh dari perairan Desa Poopoh Kabupaten Minahasa pada kedalaman  6  –  10  m  di  bawah  laut.  Determinasi  spons Callyspongia  aerizusa bertujuan  untuk memastikan dan mengetahui bahwa sampel yang diambil sudah tepat serta untuk mengidentifikasi secara  spesifik  mengenai  spons C.  aerizusa. Determinasi  dilakukan  di  Program  Studi  Biologi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam  Ratulangi.  Hasil  determinasi menunjukan bahwa spons yang diperoleh untuk diteliti ialah Callyspongia aerizusa.

## Ekstraksi Sampel
Spons Callyspongia  aerizusa terlebih  dahulu  disortasi  basah  hal  ini  bertujuan  untuk memisahkan kotoran ataupun bahan – bahan asing yang masih menempel pada sampel.  Selanjutnya sampel dipotong kecil–kecil, bertujuan untuk memperbesar luas permukaan sampel sebab semakin besar  luas  permukaan  sampel  maka  dapat  memperbesar  interaksi  antara  pelarut  dengan  sampel sehingga hasil maserasi yang di dapat akan optimal (Mardiyah, 2014).
Sampel ditimbang dan diperoleh 69 g spons C. aerizusa selanjutnya diekstraksi menggunakan metode  maserasi.  Digunakan metode ini karena  teknik  pengerjaan  dan  peralatan  yang  digunakan sederhana serta dapat menghindari resiko rusaknya senyawa-senyawa dalam sampel yang bersifat termolabil karena maserasi dilakukan secara dingin tanpa pemanasan (Leba, 2017).
Sampel di maserasi menggunakan pelarut etanol 95%, berdasarkan prinsip like dissolves like dimana  senyawa-senyawa  yang  bersifat  polar,  cenderung  larut  dalam  pelarut  polar  sedangkan senyawa-senyawa yang bersifat non-polar cenderung larut pada pelarut nonpolar (Suryanto, 2012). Etanol 95% termasuk dalam pelarut yang bersifat semipolar sehingga dapat melarutkan senyawa polar maupun non polar yang terkandung didalam sampel (Mubarak et al., 2018). Sampel direndam dengan  pelarut  etanol  95%  hingga  terendam  semuanya  lalu  dikocok  berulang  –  ulang  kemudian didiamkan selama 24 jam, ini bertujuan agar terjadinya pemecahan dinding sel sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma dapat larut sempurna dalam pelarut etanol 95% (Wendersteyt et al., 2021). Setelah itu sampel disaring menggunakan kertas saring sehingga menghasilkan filtrat 1 dan residu 1. Selanjutnya dilakukan remaserasi sebanyak 2 x 24 jam dan setiap 24 jam disaring dan diganti pelarut etanol 95% yang baru sehingga dihasilkan filtrat  2 dan filtrat 3, dilakukannya remaserasi  bertujuan  untuk  memaksimalkan  penarikan  kandungan  senyawa  aktif  dari  sampel  ke pelarut yang masih tertinggal pada saat maserasi sebelumnnya (Anjaswati et al., 2021).
Pada proses maserasi diperoleh filtrat yang kemudian dievaporasi dengan menggunakan alat rotary evaporator pada suhu 40 ℃ hingga didapatkan ekstrak kasar, tujuan dilakukannya evaporasi untuk mengentalkan larutan dimana dalam proses evaporasi pelarut diuapkan sehingga yang tersisa hanya senyawa metabolit yang tidak mudah menguap (Herfianto et al., 2014). Dievaporasi pada suhu 40 ℃ bertujuan supaya senyawa metabolit tetap terjaga karena pada suhu pemanasan yang tinggi biasanya senyawa aktif tidak bisa bertahan (Kowal et al., 2018). Hasil ekstrak Callyspongia aerizusa dan %rendeman yang diperoleh dari proses ekstraksi ditunjukan pada tabel 1.
Tabel 1. Rendeman Ektrak Callyspongia aerizusa Sampel Berat Awal Sampel (g) Massa Ekstrak (g) Rendema (%) Warna Sampel Ekstrak Callyspongia aerizusa 69 3 4,34 Merah Bata

## Pembuatan Media Cair dan Kultur Bakteri
Media cair atau nutrient broth merupakan media berbentuk cair yang bertujuan sebagai media pembiakan bakteri. Dalam penelitian ini digunakan 0,3 g ekstrak daging ( meat extract ), 0,5 g pepton, 0,3 g NaCl dan 100 mL akuades sebagai komposisi media cair. Dimana, ekstrak daging sebagai sumber karbon  dan  pepton  sebagai  sumber  nitrogen  sehingga  kebutuhan  nutrisi  bakteri  terpenuhi (Wahyuningsih and Zulaika, 2018). Selanjutnya disterilkan  dengan  menggunakan  autoklaf  selama 15  menit  pada  suhu  121  °C  bertujuan  untuk  membunuh  mikroorganisme  yang  dapat mengkontaminasi. Setelah itu diukur pH media cair dan di peroleh 6. Perhitungan pH bertujuan untuk mengetahui  faktor  penting  dalam  pertumbuhan  bakteri,  dimana  untuk  pertumbuhan  bakteri  pada umumnya memiliki nilai pH yaitu sekitar 4  - 9 (Suriani et al., 2013). Selanjutnya digunakan 1 mL media cair dan ditambahkan masing – masing 100 µL bakteri lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C yang dimana bakteri akan melakukan pembelahan secara tetap dan jumlah sel meningkat.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Dalam pengujian anktivitas antibakteri digunakan metode difusi agar ( disc diffusion Kirby and bauer ).  Metode  difusi  agar  didasarkan  pada  efektivitas  senyawa  antibakteri  yang  ditandai  dengan adanya  zona  hambat  atau  zona  bening  yang  terbentuk  disekeliling  kertas  cakram  yang  telah diinokulasi bakteri, dimana zona bening yang terbentuk menunjukan ada atau tidaknya pertumbuhan bakteri. Kelebihan dari metode ini yaitu pengujian lebih cepat, tidak memerlukan peralatan khusus sehingga mudah untuk dilakukan dan relatif murah (Wendersteyt et al., 2021).
Bakteri  uji  yang  digunakan  sebagai  bakteri  Gram-negatif  yaitu  bakteri Pseudomonas aeruginosa, sedangkan  untuk  bakteri  Gram-positif  digunakan  bakteri Staphylococcus  aureus . Penggunaan  bakteri  uji  bertujuan  agar  dapat  mengetahui  apakah  ekstrak Callyspongia  aerizusa memiliki aktivitas terhadap kedua bakteri tersebut atau hanya salah satu bakteri saja.
Pada  pengujian  ini,  kertas  cakram  yang  digunakan  berukuran  6  mm  dan  kosentrasi  yang digunakan  yaitu  250  µg  dengan  daya  serap  50  μL  pada  setiap  kertas  cakram.  Pengamatan  dan pengukuran diameter zona hambat dilakukan setelah 24 jam masa inkubasi pada suhu 37 o C dengan tiga kali pengulangan pada setiap bakteri, pengulangan bertujuan supaya dapat memperoleh hasil yang  lebih  akurat.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  spons Callyspongia  aerizusa dapat dilihat pada Gambar 1.
A B Gambar 1 . Hasil Pengamatan dan Pengukuran
Diameter  Zona  Hambat  Ekstrak Callyspongia  aerizusa:  (A).  Staphylococcus  aureus , (B). Pseudomonas aeruginosa , (-) Kontrol negatif, (+) Kontrol positif, (U1) Ulangan satu ekstrak etanol, (U2) Ulangan dua ekstrak etanol, (U3) Ulangan tiga ekstrak etanol. Hasil pengukuran rata-rata zona hambat yang diperoleh dari ekstrak Callyspongia aerizusa terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa ditunjukan pada Tabel 2.
Tabel  2 .  Hasil  Rata-Rata  Pengujian  Aktivitas  Antibakteri
Bakteri  Ulanga n Rata-rata diameter zona hambat (mm) EtOH C+ C- I 7 S. a II 8,5 20,5 0 III 8,5 ∑ 24 20,5 0 𝑥 ̅ 8 I 10,5 P. a II 8,5 22 III 8 ∑ 27 22 0 9 𝑥 ̅
Keterangan: ( S.a) Staphylococcus aureus , ( P.a ) Pseudomonas aeruginosa , (C-) Kontrol negatif, (C+) Kontrol positif, (EtOH) Ekstrak etanol, (∑) Total zona hambat
Pada pengujian ini  pembanding  yang  digunakan  adalah  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif. Kontrol positif digunakan untuk membandingkan daya hambat antara obat antibakteri dengan ekstrak Callyspongia aerizusa. Antibiotik yang digunakan sebagai kontrol positif yaitu kloramfenikol karena kloramfenikol memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  besar  atau  berspektrum luas. Sedangkan untuk kontrol  negatif  digunakan  kertas  cakram  yang  sudah  mengandung  metanol.  Kontrol  negative bertujuan  untuk mengetahui apakah pelarut yang digunakan memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri uji. Dari  hasil  pengamatan,  kontrol  negatif  pada pengujian  ini  tidak  mengahasilkan  zona hambat. Hal ini menunjukan bahwa pelarut yang digunakan tidak mempengaruhi aktivitas antibakteri sehingga pada  pengujian  ini  aktivitas  antibakteri  yang dihasilkan  hanya  berasal  dari  aktivitas senyawa  metabolit  ekstrak  spons Callyspongia  aerizusa .  Sedangkan  untuk  hasil  pengamatan kontrol positif dalam  pengujian  terhadap  bakteri  Gram-positif ( Staphylococcus  aureus ) menghasilkan   zona  hambat  (20,5  mm)  dan  untuk  bakteri  Gram-negatif  ( Pseudomonas aeruginosa )  mengahasilkan  zona hambat  (22  mm)  sehingga  berdasarkan  kategori zona  hambat
(Oroh et  al., 2015)  maka  dapat  disimpulkan bahwa kontrol positif yang diuji pada kedua  bakteri memiliki  zona  hambat  sangat  kuat dan berspektrum luas dimana dapat menghambat bakteri Gram- negatif dan Gram-positif.
Dalam pengujian aktivitas antibakteri ini, diameter zona hambat yang dihasilkan dari ekstrak Callyspongia aerizusa terhadap bakteri Staphylococcus aureus yaitu sebesar 8 mm pada kosentrasi 250 µg dan bakteri Pseudomonas aeruginosa sebesar 9 mm pada kosentrasi 250 µg, zona hambat yang terbentuk dipengaruhi oleh aktivitas senyawa metabolit yang berasal dari spons C. aerizusa. Maka berdasarkan kategori zona hambat (Oroh et al., 2015) ekstrak C. aerizusa memiliki diameter zona hambat kategori sedang serta berspektrum luas, hal ini menunjukan bahwa ekstrak spons C. aerizusa dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram-positif maupun bakteri Gram-negatif. Berdasarkan  penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  (Meldha et  al., 2019)  mengenai spons Callyspongia aerizusa yang diperoleh dari perairan pulau Mantehage Kabupaten Minahasa Utara  pada  ekstrak  etanolnya  tidak  memiliki  aktivitas antibakteri. Sedangkan pada penelitian uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  kasar  spons Callyspongia aerizusa yang diperoleh dari perairan  Desa Poopoh Kabupaten Minahasa memiliki aktivitas antibakteri dengan daya hambat kategori sedang. Perbedaan  hasil  aktivitas  antibakteri  yang  diperoleh  dibandingkan  penelitian  sebelumnya  dapat disebabkan  karena  adanya  faktor  perbedaan  tempat,  lingkungan  maupun  suhu.  Didukung  oleh pernyataan (Marzuki I , 2018) bahwa besarnya kandungan metabolit sekunder yang dihasilkan spons tidak selalu sama dengan jenisnya sehingga akan menghasilkan manfaat yang berbeda.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa ekstrak spons Callyspongia aerizusa yang  diperoleh  dari  perairan  Desa  Poopoh  Kabupaten  Minahasa  memiliki  diameter  zona  hambat terhadap  bakteri  Staphylococcus  aureus  sebesar  8  mm  pada  kosentrasi  250  µg  dan  bakteri Pseudomonas aeruginosa sebesar 9 mm pada kosentrasi 250 µg termasuk dalam kategori daya hambat sedang. Hal ini menunjukan bahwa spons C.aerizusa memiliki aktivitas senyawa metabolit yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  maka  perlu  dilakukan  skrining  fitokimia  dan  isolasi  senyawa untuk  mengetahui  secara  spesifik  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  spons Callyspongia aerizusa serta perlu dilakukan fraksinasi untuk melihat aktivitas antibakteri pada fraksi polar, non polar ataupun semi polar.

## DAFTAR PUSTAKA
Ananto, F.J., Herwanto, E.S., Nugrahandhini, N.B., Najwa, Y.C., Abidin, M.Z., Suswati, I. 2015. Gel Daun  Kelor  Sebagai  Antibiotik  Alami  Pada  Pseudomonas  Aeruginosa  Secara  In  Vivo. Pharmacy. 12(1)
Anjaswati, D., Pratimasari, D., Nirwana, A.P. 2021. Perbandingan Rendemen Ekstrak Etanol, Fraksi nHeksana,  Etil  Asetat,  dan  Air  Daun  Bit  (Beta  vulgaris  L.)  Menggunakan  Fraksinasi Bertingkat . Jurnal Farmasi (Journal of Pharmacy). 2(1)
Awaeh,  E.L.,  Wewengkang,  D.S.,  Lebang,  J.S.  2022. Potensi  Ekstrak  Dan  Fraksi  Spons Callyspongia  Aerizusa  yang  diperoleh  Dari  Perairan  Pulau  Manado  Tua  Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus Aureus dan Escherichia Coli. Pharmacon. 11(3). Damayanti, A., Ilyas, A., Firnanelty. 2020. Senyawa Golongan Alkaloid dari Ekstrak Etanol Spons Stylotella sp. Asal Kepulauan Selayar. Alchemy: Journal Of Chemistry. 8(2) : 12-15
De  Sousa,  L.H.N.,  De  Araújo,  R.D.,  Sousa-  Fontoura,  D.,  Menezes,  F.G.,  Araújo,  R.M.  2021. Metabolities from Marine Sponges of the Genus Callyspongia: Occurrence, Biological Activity, and NMR Data . Journal Marine Drugs. 19(12) : 663.
Faiza, F. 2015. Isolasi Dan Karakterisasi Senyawa Alkaloid Spons Callyspongia Sp. Perairan Biak Papua. [Skripsi].  Bandar  Lampung:  Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Lampung.
Hafsari, A. R., Cahyanto, T., Sujarwo. T., Lestari,R. I. 2015. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Beluntas  (Pluchea  Indica  (L.)  Less.)  Terhadap  Propionibacterium  Acnes  Penyebab  Jerawat [Skripsi].  Bandung: Fakultas Sains Dan Teknologi, UIN Sunan Gunung Djati.
Herfianto, P.N., Nurhuda, M., Yuana, F. 2014. Pengaruh  Durasi  Evaporasi  Etanol  Low Grade Terhadap Kadar Etanol Pada Residu Hasil Evaporasi.  Brawijaya Physics Student Journal. 1(1) Herlina, N., Fifi, A., Aditia, D.C., Poppy, D.H., Qurotunnada., Baharuddin, T. 2015. Isolasi Dan Identifikasi Staphylococcus Aureus Dari Susu Mastitis Subklinis Di Tasikmalaya. Jawa Barat: Pros Sem Nas Masy Biodiv Indon. 1(3) : 413-417.
Kowal, A., Esther, A., Nickson, K., Kurniati, K., Henky, M., Deiske, H. 2018. Potensi antibakteri karang  lunak  lobophytumsp.  Dari  perairan  pangalisang  pulau  bunaken  terhadap  bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus. Jurnal Ilmiah Platax. 6(2) .
Kusuma, A.H., Muhaemin, M., Mayagues, M., Efendi, E. 2023. Rehabilitasi Ekosistem Terumbu Karang  Menggunakan  Terumbu  Buatan  Di  Perairan  Desa  Kunjir,  Kecamatan  Rajabasa, Kabupaten  Lampung  Selatan,  Provinsi  Lampung.  Jurnal  Pengabdian  Fakultas  Pertanian Universitas Lampung. 2(1) : 280 – 293 Lalamentik, G. 2017. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Karang Lunak Klyxum Sp. Yang Diperoleh Dari Teluk Manado . [Skripsi]. Manado: Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi. Leba, M.A.U. 2017. Buku Ajar: Ekstraksi dan Real Kromatografi. Cetakan Pertama. Yogyakarta: CV. Budi Utama
Mardiyah, U., Fasya, G.A., Fauziyah, B., Amalia, S. 2014. Ekstraksi Uji Aktivitas Antioksidan dan Identifikasi  Golongan  Senyawa  Aktif  Alga  Merah  Eucheuma  spinosum  dari  Perairan Banyuwangi. Jurnal Achemy. 3(1) : 42
Marzuki, I. 2018. Eksplorasi Spons Indonesia Seputaran Kepulauan Spermonde . Makasar: Penerbit Nas Media Pustaka
Meldha., Wewengkang, D.S., Mansauda, K.L.R. 2021. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Dan Fraksi Spons Callyspongia Aerizusadari Perairan Pulau Mantehage Manado. Pharmacon. 10(3) Mubarak., Fhahri., Sartini., Purnawati, D. 2018. Effect of Ethanol Concentration on Antibacterial Activity  of  Bligo  Fruit  Extract  (Benincasa  hispida  Thunb)  to  Salmonella  typhi .  Indonesian Journal of Pharmaceutical Sciences and Technology. 5(3) : 77
Nahor,  E.M.,  Rumagit,  B.I.,  Tou,  H.Y.  2020. Perbandingan  Rendemen  Ekstrak  Etanol Daun Andong  (Cordyline  futicosa  L.)  Menggunakan  Metode  Ekstraksi  Maserasi  dan  Sokhletasi.
Poltekkes Kemenkes Manado. 1(1) : 40
Nurhaniefah,  A.A.,  Sagitasa,  S.,  Aulia,  S.,  Hadisaputri,  Y.E. Callyspongia  sp.:  Secondary
Metabolites,  Pharmacological  Activities,  and  Its  Mechanisms. Indonesian  Journal  of Biological Pharmacy . 2(2) : 104-120 Oroh, S.B., Kandou, F.E.F., Pelealu, J., dan Pandiangan, D. 2015 . Uji Daya Hambat Ekstrak Metanol Selaginella delicatula dan Diplazium dilatatum terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus dan Escherichia Coli. Jurnal Ilmiah Sains. 15(1) : 52–58.
Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion testing in manual of antimicrobial susceptibility testing . Marie B. Coyle (Coord. Ed). American society for Microbiology. America.
Paju, N., Yamlean, P.V., Kojong, N. 2013. Uji Efektivitas Salep Ekstrak Daun Binahong (Anredera Cordifolia  Steenis.)  Pada  Kelinci  (Oryctolagus  Cuniculus)  Yang  Terinfeksi  Bakteri Staphylococcus Aureus. Pharmacon 2(1) : 51–61. Pujiastuti,  N.I.  2022. Uji  Aktivitas Antibakteri Pseudomonas  Aeruginosa  Dan  Stabilitas Fisik  Gel Ekstrak  Daun  Kelor  (Moringa  Oleifera)  Dengan  Metode  Ultrasonik. [Skripsi].  Malang  : Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Putri,  R.A.,  Simbala,  H.E.,  Mpila,  D.A.  2020. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Salmonella typhi. Pharmacon. 9(4): 525-532 Silap,  G.E.,  Wewengkang,  D.S.,  Rotinsulu.  H.  2020. Uji  Aktivitas  Antimikroba  Karang  Lunak Dendronephtya  Sp.  yang  Dikoleksi  dari  Desa  Tumbak  Kecamatan  Pusomaen,  Kabupaten Minahasa Tenggara terhadap Escherichia coli, Staphylococcus aureus, dan Candida albicans . Pharmacon. 9(1): 64-65. Suriani, S., Soemarno., Soeharjono. 2013. Pengaruh Suhu dan pH terhadap Laju pertumbuhan Lima Isolat Bakteri Anggota Genus Pseudomonas yang diisolasi dari Ekosistem Sungai Tercemar Deterjen di sekitar Kampus Universitas Brawijaya . Jurnal Pembangungan dan Alam Lestari. 3(2): 1-5.
.