BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 3, Nomor 4 (2021): 205-215 E-ISSN: 2714-8564
Biodegradasi Bioplastik Berbasis Pati Menggunakan Isolat Fungi Indigenous Asal Tempat Pembuangan Akhir Gunung Tugel, Kabupaten Banyumas
Jimmy Al Fa’is 1 , Ratna Stia Dewi 1* , Ajeng Arum Sari 2
1 Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman
2 Loka Penelitian Teknologi Bersih, LIPI Bandung *Email : ratna.dewi0509@unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 27/07/2021 Disetujui  : 18/05/2022

## Abstract
The  use  of  plastic  in  Indonesia,  especially  as  packaging,  is  very  popular  among  the  public, because it is practical and has many uses. Plastic consumption in 2020 even reached 67.8 million tons per day. Therefore, one way to overcome this problem is to use and produce biodegradable plastics or bioplastics. Biodegradation of bioplastics can be done with fungi. The potential place to  find  bioplastic  degrading  fungi  is  the  Gunung  Tugel  Ex-Final  Disposal  Site  (TPA). Considering the fact that bioplastics have a fairly good level of degradation, in this study a starch- based biodegradation test will be carried out using isolates of indigenous fungi originating from Ex-TPA Gunung Tugel using the method of calculating the weight loss of bioplastics (weight loss). This study aims to obtain starch-based bioplastic degrading fungi isolates from Ex-TPA Gunung Tugel, Banyumas Regency and determine the highest biodegradability ability of starch- based  bioplastics  by  fungal  isolates  from  Ex-TPA  Gunung  Tugel,  Banyumas  Regency.  The results showed that isolates of indigenous fungi that had the potential to degrade starch-based bioplastics  from  Ex-TPA  Gunung  Tugel,  Banyumas  Regency  were  obtained  from  the  genus Aspergillus (GT2 isolate) and Penicillium (GT1, GT3, GT4, GT5, and GT6) isolate. The highest biodegradability  of  starch-based  bioplastics  was  found  by  fungi  from  the  genus  Aspergillus, namely, isolate GT2 with a weight loss of 21.84%. The biodegradation occurs due to the activity of endoamylase, exoamylase, and glucanase enzymes produced by fungi. The observation of the texture  of  the  bioplastic  resulted  in  a  significant  change  in  color,  namely  from  the  white bioplastic sheet to brownish. These observations also showed the attachment of fungal mycelium on the surface of the bioplastic accompanied by a hollow and uneven surface of the bioplastic. Key words: Biodegradation, Starch-based bioplastic, Indigenous Fungi, TPA.

## Abstrak
Penggunaan  plastik  di  Indonesia  khususnya  sebagai  kemasan  sangat  populer  di  kalangan masyarakat, karena bersifat praktis dan memiliki banyak kegunaan. Konsumsi plastik pada tahun 2020 bahkan mencapai 67,8 juta ton per hari. Oleh karena itu, salah satu cara untuk mengatasi masalah  tersebut  adalah  dengan  memproduksi  dan  menggunakan  plastik  biodegradable  atau bioplastik.  Agen  pendegradasi  bioplastik  yang  cukup  efektif  adalah  fungi.  Biodegradasi bioplastik  dapat  dilakukan  dengan  fungi. Tempat  potensial  ditemukannya  fungi  pendegradasi bioplastik adalah Ex-Tempat Pembuangan Akhir (TPA) Gunung Tugel. Mengingat fakta bahwa bioplastik  memiliki  tingkat  degradasi  cukup  baik,  maka  pada  penelitian  ini  dilakukan  uji biodegradasi bioplastik berbasis pati dengan menggunakan isolat fungi indigenous yang berasal dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel  dengan  menggunakan  metode  penghitungan  pengurangan  bobot bioplastik  (w eight  loss ). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh  isolat  fungi pendegradasi bioplastik  berbasis  pati  dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel,  Kabupaten  Banyumas  dan  mengetahui kemampuan biodegradasi tertinggi pada bioplastik berbasis pati oleh isolat fungi dari Ex-TPA Gunung Tugel, Kabupaten Banyumas. Hasil penelitian menunjukkan bahwa diperoleh isolat fungi indigenous yang berpotensi mendegradasi bioplastik berbasis pati dari Ex-TPA Gunung Tugel, Kabupaten Banyumas berasal dari genus Aspergillus (isolat GT2 & GT3) dan Penicillium (isolat GT1,  GT4,  GT5,  dan  GT6).  Kemampuan  biodegradasi  bioplastik  berbasis  pati  tertinggi  oleh fungi dari genus Aspergillus, isolat GT1, GT2, dan GT5 dengan pengurangan bobot bioplastik ( weight loss ) sebesar 17,87%, 21,84%, dan 18,68% dalam  waktu 30 hari.  Pengamatan tekstur bioplastik menghasilkan perubahan warna yang cukup signfikan, yaitu dari lembaran bioplastik yang  berwarna  putih  menjadi  kecoklatan.  Pengamatan  tersebut  juga  menunjukkan  pelekatan miselium  fungi  di  atas  permukaan  bioplastik  disertai  dengan  permukaan  bioplastik  yang berongga dan tidak rata.
Key words: Biodegradasi, Bioplastik berbasis pati, Fungi Indigenous, TPA.

## PENDAHULUAN
Perkembangan ilmu pengetahuan dan teknologi, khususnya  selama  dua  dekade  terakhir,  telah meningkatkan jumlah polimer sintetis yang diproduksi  di  seluruh  dunia.  Salah  satu  polimer sintetik  yang  sering  dikenal  dengan  polimer  buatan adalah plastik (Shimao 2001). Penggunaan plastik di Indonesia khususnya sebagai kemasan sangat populer di kalangan masyarakat, karena praktis dan memiliki banyak  kegunaan.  Konsumsi  plastik  di  Indonesia tercatat 1,9 juta ton pada tahun 2013 dengan jumlah peningkatan sekitar 22,58% dibandingkan tahun 2012 sebanyak 1,55 juta ton, sedangkan pada akhir 2017, konsumsi plastik meningkat hingga 5,6 juta ton (Aziz et  al. ,  2019).  Badan  Pusat  Statistik  (2020)  bahkan menyebutkan bahwa jumlah sampah plastik per hari bisa  mencapai 67,8 juta ton.  Volume limbah plastik yang  meningkat  akan  mengurangi  kapasitas  Tempat Pembuangan Akhir (TPA)  untuk dapat menampung lonjakan  yang  cukup  tinggi.  Laju  degradasi  plastik yang sangat lambat di lingkungan telah menyebabkan proses  pengolahan  limbah  cenderung  lebih  lama (Wati, 2020).
Berdasarkan permasalahan tersebut, diperlukan solusi untuk mengurangi penggunaan limbah plastik yang sudah menjadi kebutuhan bagi masyarakat, baik itu  konsumen  maupun  produsen  plastik.  Salah  satu cara  untuk  mengatasi  masalah  tersebut  adalah mengurangi  penggunaan  plastik  konvensional  dan beralih  dengan  bioplastik.  Penggunaan  bioplastik dalam  skala  besar  akan  membantu  mengurangi ketergantungan  masyarakat  dalam  menggunakan plastik  komersil  yang  cenderung  sulit  terdegradasi. Salah satu jenis bioplastik yang dikembangkan untuk digunakan oleh masyarakat adalah bioplastik berbasis pati.  Bioplastik  tersebut  tersusun  atas  bahan  utama berupa pati yang mudah terdegradasi oleh mikroorganisme,  namun  belum  banyak  laporan mengkaji efektifitasnya.  Oleh karena itu, diperlukan penelitian  lebih  lanjut  mengenai  mikroorganisme untuk  mendegradasi  bioplastik  berbasis  pati.  Salah satu agen pendegradasi yang diketahui cukup efektif adalah  fungi.  Menurut  Ainiyah  &  Shovitri  (2014), mikroorganisme  seperti  fungi  termasuk  komponen utama  dari  biosfer  yang  berperan  dalam  memecah senyawa  organik  dan  siklus  lingkungan,  sehingga dapat mempercepat proses degradasi.
Beberapa  penelitian  telah  melaporkan  tentang degradasi  bioplastik  oleh  fungi,  yaitu  ditemukannya Aspergillus sp.  pada  lahan  pertanian  yang  berperan dalam proses biodegradasi bioplastik (Adhikari et al . 2016).  Folino et  al. (2020)  menambahkan  bahwa terdapat  beberapa  beberapa  jenis  fungi  yang ditemukan  dari  tanah  TPA  seperti Penicillium sp ., Trichoderma pseudokoningii, Paecilomyces lilacinus,  Cogronella sp .,  Acremonium  recifei, dan Aspergillus sp.
Salah satu tempat potensial ditemukannya fungi pendegradasi  bioplastik  adalah  Ex-TPA  Gunung
Tugel. TPA tersebut terletak di Gunung Tugel, Desa Kedungrandu Kecamatan Patikraja Kabupaten Banyumas dengan area seluas 5 hektar. Sampah yang dibuang  berupa  sampah  organik  (80,03%)  dan sisanya berupa sampah anorganik (19,97%) (Oktifani,  2000).  Sistem  pengelolaan  TPA  Gunung Tugel  menggunakan  sistem controlled  landfill yaitu penutupan  sampah  dengan  lapisan  tanah  yang dilakukan  setelah  TPA  penuh  dengan  timbunan sampah  yang  dipadatkan.  Hal  tersebut  memberikan peluang besar bahwa tanah di Ex-TPA Gunung Tugel mengandung  banyak  fungi  pendegradasi  bioplastik. Bioplastik  menjadi  salah  satu  alternatif  pengganti plastik  komersil.  Komponen  bioplastik berbasis pati tersusun atas bahan utama berupa pati dan komponen tambahan seperti selulosa, gliserol dan Polypropylene (PP) . Komponen PE merupakan salah satu penyusun plastik  konvensional.  Oleh  karena  itu,  dilakukan penelitian  untuk  mengeksplorasi  fungi indigenous dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel  yang  berpotensi mendegradasi bioplastik berbasis pati tersebut.
Berdasarkan  uraian  yang  telah  disampaikan, menarik  untuk  dikaji  tentang    fungi indigenous pendegradasi  bioplastik  berbasis  pati  yang  dapat diisolasi  dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel,  Kabupaten Banyumas  dan  bagaimana  kemampuan  isolat  fungi tersebut dalam mendegradasi bioplastik berbasis pati. Tujuan peneleitian ini adalah sebagai berikut:
1. Memperoleh isolat fungi pendegradasi bioplastik berbasis  pati  dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel, Kabupaten Banyumas.
2. Mengetahui  kemampuan  biodegradasi  tertinggi pada bioplastik berbasis pati oleh isolat fungi dari Ex-TPA Gunung Tugel, Kabupaten Banyumas.
Manfaat  yang  diharapkan  dari  penelitian  ini adalah  untuk  memberikan  informasi  ilmiah  tentang isolat  fungi  yang  berpotensi  dalam  mendegradasi bioplastik  berbasis  pati  hasil  isolasi  dari  Ex-TPA Gunung Tugel, Kabupaten Banyumas, serta mengetahui  kemampuan  isolat  fungi  tersebut  dalam mendegradasi bioplastik berbasis pati.

## MATERI DAN METODE
Alat-alat yang akan digunakan adalah Laminar Air  Flow (LAF)  (Jisico),  autoklaf  (Hiclave), incubator shaker (U-Tech),  oven  (Mammert), hot plate  and magnetic  stirrer (Scorex),  mikroskop (Olympus), timbangan analitik (Ohaus), cawan petri (Iwaki), beaker glass (Pyrex) , tabung reaksi (Pyrex), mikropipet  (Scorex),  labu  Erlenmeyer  (Pyrex), spreader, bunsen,  jarum  ose,  gunting,  pinset,  dan plug .  Bahan-bahan  yang  akan  digunakan  adalah sampel  tanah  dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel  dan bioplastik  berbasis  pati  yang  berasal  dari  produk penelitian  Loka  Penelitian  dan  Teknologi  Bersih, LIPI  Bandung.  Adapun  medium  yang  digunakan adalah Bushnell  Haas  Agar (BHA), Bushnell  Haas Broth (BHB), medium Potato Dextrose Agar (PDA), medium Potato  Dextrose  Broth (PDB).  Bahan
selanjutnya adalah alkohol 70%, antibiotik kloramfenikol,  spiritus,  akuades, Alumunium  Foil, wrapper, plastik, dan kapas.
Percobaan akan dilakukan secara deskriptif dan eksperimental. Penelitian deskriptif meliputi identifikasi  fungi  dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel, Banyumas  yang  berpotensi  dalam  mendegradasi bioplastik  berbasis  pati,  sedangkan  penelitian eksperimental  meliputi  uji  kemampuan  isolat  fungi dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel,  Banyumas  dalam mendegradasi  bioplastik  berbasis  pati.  Penelitian eksperimental disusun berdasarkan Rancangan Acak Lengkap  (RAL)  yang  ditentukan  dengan  menguji masing-masing fungi yang terisolasi sebanyak 4 kali ulangan.  Penelitian secara eksperimental terdiri atas satu uji, yaitu uji biodegradasi bioplastik berbasis pati menggunakan  isolat  fungi  hasil  isolasi  dari  Ex-TPA Gunung  Tugel  dengan  metode purposive  sampling (Ainiyah & Shovitri, 2014).
Pengambilan Sampel (Ainiyah & Shovitri, 2014) Pengambilan  sampel  tanah  mengacu  pada metode  Ainiyah  &  Shovitri  (2014).  Sampel  tanah diambil  dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel,  Banyumas dengan  menggunakan  teknik purposive  sampling sebanyak 5 titik. Pemilihan titik berdasarkan adanya timbunan  sampah  plastik  yang  mulai  terdegradasi yaitu ditandai dengan adanya plastik yang berlubang- lubang.  Tanah  dari  kelima  titik  diambil  250  gram pada kedalaman 10 cm dengan menggunakan sendok steril,  kemudian  dimasukkan  kedalam  plastik  steril. Selanjutnya sampel tanah disimpan ke dalam lemari pendingin .
Pembuatan Medium
Pembuatan medium diawali dengan menyiapkan alat dan bahan yang diperlukan. Medium yang  dibuat  pada  penelitian  ini  yaitu  medium  PDA, medium  PDB,  medium    BHA  dan  medium  BHB (Lampiran 3). Masing-masing medium ditimbang dan ditempatkan  ke  dalam  labu  Erlenmeyer.  Medium dipanaskan  di  atas string  hot  plate sambil dihomogenkan  hingga  mendidih.  Kemudian  pada bagian mulut labu Erlemneyer ditutup menggunakan kapas  dan  dilapisi  dengan  kertas  untuk  selanjutnya dilakukan sterilisasi (Kumar et al., 2013 ).

## Sterilisasi alat dan Bahan
Medium  yang  telah  dibuat  dan  alat  yang  akan digunakan  dilakukan  sterilisasi  terlebih  dahulu menggunakan autoklaf.

## Preparasi Bioplastik Uji
Bioplastik  uji  disiapkan  dan  dipotong  dengan ukuran  2x2  cm.  Kemudian  bioplastik  disterilisasi dengan  alkohol  70%  selama  30  menit.  Bioplastik tersebut dikeringkan di dalam oven dengan suhu 50 o C selama  1x24  jam.  Selanjutnya,  potongan  plastik dikeringkan  dengan  sinar  UV  selama  30  menit,  lalu disimpan di dalam oven dengan suhu 50 °C (Kumar et al., 2013).

## Isolasi Fungi Pendegradasi Plastik
Isolasi  fungi  pendegradasi  plastik  dilakukan dengan  menggunakan  metode pengenceran terhadap sampel  tanah  dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel  seperti dilakukan  oleh  Kumar et  al .  (2013).  Selanjutnya dilakukan  pengenceran  10 -2 di  dalam  tabung  reaksi dengan menggunakan akuades. Suspensi tanah yang telah  diencerkan  kemudian  dilakukan pippeting diambil  sebanyak  1  mL  dengan  menggunakan  pipet steril  ke  dalam  labu  Erlenmeyer  yang  telah  berisi medium  100  ml  PDB.  Suspensi  tanah  tersebut diinkubasi meggunakan shaker selama 7x24 jam agar isolat fungi dapat tumbuh dengan baik.
Setelah fungi telah tumbuh pada medium PDB, suspensi  tanah  dari  labu  Erlenmeyer  diambil sebanyak  100  µl  dan  diletakkan  pada  cawan  petri yang  berisi  medium  BHA+Bioplastik,  kemudian diratakan  dengan spreader .  Biakan  diinkubasi  pada suhu 37 o C selama 7x24 jam hingga terbentuk koloni fungi  yang  dapat  tumbuh  pada  permukaan  media dengan bioplastik.

## Pemurnian Fungi
Fungi yang tumbuh pada medium BHA+Bioplastik  kemudian  dimurnikan.  Masing- masing  isolat  fungi  diambil  secara  aseptis  dengan menggunakan plug dan diinokulasikan dengan jarum ose  pada  permukaan  medium  PDA  yang  baru, selanjutnya diinkubasi pada suhu 37 o C selama 7x24 jam.  Proses  ini  dilakukan  berulang  kali  hingga didapatkan  kultur  fungi  murni.  Kemurnian  isolat fungi ditandai dengan adanya karakteristik makroskopik  isolat  yang  seragam  (Kumar et  al., 2013).

## Seleksi  Fungi  Pendegradasi  Bioplastik  Berbasis Pati
Selanjutnya  dilakukan  proses  seleksi    pada medium BHA+Bioplastik. Inokulum diinkubasi pada suhu 37 o C selama 7x24 jam hingga terbentuk koloni fungi  yang  dapat  tumbuh  pada  permukaan  media dengan bioplastik. Selanjutnya dipilih 6 isolat terbaik yang dapat tumbuh pada medium tersebut (Kumar et al., 2013).

## Identifikasi Fungi Pendegradasi Bioplastik
Sebanyak  6  isolat  fungi  yang  berpotensi mendegradasi  bioplastik  yang  telah  dimurnikan selanjutnya  ditumbuhkan  pada  medium  PDA. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37 o C selama 7x24 jam.  Setelah  fungi  dapat  tumbuh  dengan  baik, dilakukan proses identifikasi yang meliputi pengamatan makroskopik dan mikroskopis. Pengamatan makroskopik berupa warna, tekstur dan tepi  koloni.  Adapun  identifikasi  secara  mikroskopis berupa struktur hifa, bentuk konidia, dan konidiofor yang mengacu pada buku Pictorial Atlas of Soil and Seed Fungi Morphologies of Cultured Fungi and Key to  Species  2 th edition (Watanabe,  2010)  dan Fungi and Food Spoilage (Pitt & Hocking, 2009).
Degradasi Bioplastik Berbasis Pati (Muhonja et al. 2018)
Sebanyak  6  isolat  fungi  yang  telah  diketahui memiliki  kemampuan  mendegradasi  bioplastik kemudian  masing-masing  ditumbuhkan  kembali dalam medium PDB. Sekitar 10% (25 mL) dari kultur kemudian diinokulasi di labu Erlenmeyer yang berisi 250  ml  medium  BHB  dan  bioplastik  berukuran  2x2 cm 2 yang  sudah  disterilkan  untuk    pengujian biodegradasi  plastik.  Inkubasi  dilakukan  selama  30 hari  pada  suhu  28 o C.  Semua  eksperimen  dilakukan dengan  pengulangan  sebanyak  4  kali.  Pengukuran terhadap pengurangan bobot bioplastik ( weight loss ), tekstur bioplastik dan miselium fungi dilakukan pada hari ke-0 dan 30 (Muhonja et al, 2018).
Uji  Kemampuan  Biodegradasi  (Deepika  &  Jaya, 2015)
Bioplastik berbasis pati pada medium inkubasi melalui  penyaringan  kemudian  dicuci  sebanyak  4x menggunakan etanol 70% dan dikeringkan pada oven 50  °C overnight .  Berat  awal  bioplastik  dan  residu polimer  tersebut  ditimbang  untuk  mengetahui pengurangan bobot bioplastik.. Persentase degradasi dihitung berdasarkan rumus:
% 𝑊𝑒𝑖𝑔ℎ𝑡 𝐿𝑜𝑠𝑠 = 𝑊1 − 𝑊2 𝑊1 𝑥 100%
Keterangan : W1 = Berat Awal Bioplastik W2 =  Berat Akhir Bioplastik (Deepika & Jaya, 2015)
Adapun isolat yang digunakan merupakan hasil skrining  berupa  6  isolat  terbaik  yang  berpotensi dalam  mendegradasi  bioplastik.  Penentuan  isolat tersebut  berdasarkan  kemampuannya  untuk  tumbuh di  medium  dengan  bioplastik.    Berikut  adalah rancangan perlakuan biodegradasi bioplastik berbasis pati menggunakan isolat fungi hasil isolasi dari TPA: a. Kontrol (K) : kontrol
b. Isolat 1 (GT1) : isolat 1 hasil seleksi
c. Isolat 2 (GT2) : isolat 2 hasil seleksi
d. Isolat 3 (GT3) : isolat 3 hasil seleksi
e. Isolat 4 (GT4) : isolat 4 hasil seleksi
f. Isolat 5 (GT5) : isolat 5 hasil seleksi
g. Isolat 6 (GT6) : isolat 6 hasil seleksi
Setiap  perlakuan  diulang  sebanyak  4  kali, sehingga terdapat 28 unit percobaan.

## Analisis Data
Data yang didapatkan meliputi data identifikasi fungi  dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel,  Banyumas  yang berpotensi  dalam  mendegradasi  bioplastik  berbasis pati  dianalisis  secara  deskriptif.  Sedangkan  data kemampuan isolat fungi dari Ex-TPA Gunung Tugel, Banyumas  dalam  mendegradasi  bioplastik  berbasis pati  dianalisis  menggunakan Analysis  of  Varians (ANOVA)  dengan  tingkat  kesalahan  sebesar  5%. Apabila  terdapat  hasil  analisis  yang  signifikan,  maka akan  dilakukan  uji  lanjut  dengan  menggunakan  Uji Duncan.

## Variabel dan Parameter yang diamati
Variabel terdiri dari variabel bebas dan variabel terikat.  Variabel  bebas  meliputi  isolat  fungi  hasil isolasi.  Variabel  terikat  meliputi  kemampuan  isolat fungi  hasil  isolasi  dalam  mendegradasi  bioplastik berbasis  pati.  Adapun  parameter  yang  diamati parameter  utama  berupa  persentase  pengurangan bobot  bioplastik  ( weight  loss )  dan  parameter pendukung berupa pengamatan tekstur bioplastik dan pengamatan miselium fungi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil isolasi fungi dari Ex-TPA Gunung Tugel, Kabupaten Banyumas diperoleh 8 isolat, yaitu isolat GT1,  GT2,  GT3,  GT4,  GT5,  GT6,  GT7,  dan  GT8. Masing-masing isolat didapatkan dari 5 sampel tanah yang  berbeda.  Data  isolat  tersebut  disajikan  dalam Tabel 1
Beberapa  isolat  yang  telah  diisolasi  dari penelitian ini merupakan isolat yang sering dijumpai pada lingkungan tanah, terutama yang telah tercemar oleh  sampah  plastik.  Keragaman  isolat  tanah  pada lingkungan  tersebut  dikuatkan  oleh  pernyataan Indumathi  &  Kavitha  (2020)  bahwa  isolat  fungi banyak  ditemukan  pada  tanah  TPA  Thanjavur  di India, dengan serpihan plastik yang tercampur di
Tabel 1. Hasil Isolasi Fungi dari Ex-TPA Gunung Tugel
No Sampel Kode sampel Kode isolat 1 Tanah dengan timbunan plastik 5 cm TPA1 GT1 dan GT4 2 Tanah dengan timbunan plastik 10 cm TPA2 GT3 3 Tanah dengan serpihan plastik kedalaman 5 cm TPA3 GT5 dan GT6 4 Tanah dengan serpihan plastik kedalaman 10 cm TPA4 GT2 5 Tanah tanpa plastik kedalaman 10 cm TPA5 GT7 dan GT8
Gambar 1. Hasil Seleksi fungi pendegradasi bioplastik berbasis pati pada medium BHA
Keterangan: (a) Isolat GT1; (b) Isolat GT2; (c) Isolat GT3; (d) Isolat GT4; (e) Isolat GT5; (f) Isolat GT6
Pengamatan pada isolat hasil seleksi menunjukkan  bahwa  ke-6  isolat  fungi  memiliki  ciri pertumbuhan  dengan  adanya  miselium  fungi  yang tumbuh  di  sekitar  bioplastik  dan  bertambahnya ukuran koloni fungi. Fungi yang mampu tumbuh pada medium  BHA  merupakan  fungi  yang  berpotensi dalam  mendegradasi  bioplastik.  Lazuardi  &  Sari (2013)  menambahkan  bahwa  medium  tersebut  tidak memiliki kandungan karbon yang sangat dibutuhkan oleh fungi untuk hidup di dalamnya. Oleh karena itu, hanya  beberapa  jenis  fungi  saja  yang  mampu memanfaatkan  bioplastik  sebagai  sumber  nutrisinya dalam  keadaan  terdesak.  Penelitian  Aburas  (2016) menyebutkan  dengan  proses  seleksi  atau  skrining yang sama, yaitu melalui pengamatan miselium yang tumbuh  pada  medium  selektif  seperti Mineral Medium (MM),  menghasilkan  13  isolat  yang
berpotensi  dalam  mendegradasi  bioplastik.  Isolat- isolat  tersebut  berasal  dari  genus Aspergillus, Fusarium, Penicillium, dan Trichoderma.
Hasil perlakuan biodegradasi bioplastik berbasis  pati  menggunakan  isolat  fungi indigenous asal  Ex-TPA  Tugel,  Kabupaten  Banyumas  pada waktu  inkubasi  30  hari  menunjukkan  hasil  rata-rata persentase weight loss terendah yaitu 7,28% dengan perlakuan  isolat  GT3,  sedangkan  hasil  rata-rata persentase weight  loss tertinggi  adalah  21,84% dengan  perlakuan  isolat  GT2.  Hasil  rata-rata persentase weight  loss dari  setiap  perlakuan  yang dilakukan dapat dilihat pada Grafik 1.
Salah  satu cara  mengukur tingkat biodegradasi bioplastik berbasis pati adalah menentukan persentase weight  loss .  Fungi  yang  mengkolonisasi permukaan  plastik  dan   memanfaatkan  polimernya
Grafik 1. Hasil rata-rata persentase pengurangan bobot biopastik berbasis pati
0 17,87 21.84 7,28 8,85 18,68 9,23 0 5 10 15 20 25 Kontrol GT1 GT2 GT3 GT4 GT5 GT6 P e rs e nt ase P e ng ur angan B obot B iopl asti k B e rbasi s P at i (%) Perlakuan
e f c b d a
akan  menunjukkan  ciri  pertumbuhan  yang  dapat diamati secara langsung melalui pertumbuhan miselia dan  hifa,  sementara  itu  integritas  dari  polimer  akan menurun dan mengarah kepada weight loss lembaran bioplastik  (Gajendiran et  al. 2016).  Data  persentase weight  loss yang  diperoleh  selanjutnya  dianalisis menggunakan uji F dengan tingkat kepercayaan 95% untuk  mengetahui  pengaruh  perlakuan  isolat  yang berbeda  terhadap  proses  biodegradasi  bioplastik berbasis  pati.    Kemampuan  biodegradasi  bioplastik berbasis  pati  tertinggi  ditunjukan  oleh  fungi  dari genus Aspergillus dengan  pengurangan  bobot bioplastik ( weight loss ) mencapai lebih dari 20,18%, yaitu  sebesar  21,84%.  Hasil  penelitian  ini  sesuai dengan  penelitian  Nissa et  al. (2019)  yang menyatakan  bahwa isolat  dari  genus Aspergillus , yaitu Aspergillus  niger memiliki  kemampuan mendegradasi bioplastik berbasis pati sebesar 20,18% pada medium minimum Salt Agar (SA) dan sejumlah 11,46% dengan metode dip-hanging atau menggantung lembaran bioplastik bersama inokulum A.  niger di  dalam  wadah  yang  berisi  akuades  steril. Selanjutnya  diperkuat  oleh  Urbanek et  al. (2017) bahwa  pada  penelitian  dengan  biakan  cair  ( liquid culture ), isolat Aspergillus sp. memiliki kemampuan untuk  mendegradasi  bioplastik  berbasis  pati  sebesar 12,07% dalam waktu satu bulan.
Beberapa  jenis  fungi  dari  genus Aspergillus, Trichoderma,  Penicillium,  dan  Fusarium memiliki kemampuan  dalam  mendegradasi  bioplastik.  Yunar (2011)  menjelaskan  bahwa  fungi  memiliki  enzim yang  berperan  penting  dalam  mengurai  polimer bioplastik.  Enzim  yang  dapat  menghidrolisis  pati terdiri  dari  3  kelompok.  Pertama  terdapat  enzim  α- amilase  (α-1,4- glucan  glucanohydrolase )  atau  biasa disebut endoamilase. Enzim ini menghidrolisis ikatan
α-1,4 glukosidik pada amilosa dan amilopektin secara acak  untuk  menghasilkan  dextrin  dan  maltose. Selanjutnya  produk  tersebut  akan  dihidrolisis  oleh enzim  glukogenik  menjadi glukosa. Kedua, terdapat enzim  α-amilase  (α-1,4- glucan  maltohydrolase ) disebut juga eksoamilase. Enzim tersebut menghidrolisis rantai utama pada pati. Adapun enzim ketiga  adalah  glukoamilase  yang  berperan  dalam proses  depolimerisasi  komponen  glukosa  menjadi rantai  yang  lebih  sederhana.  Beberapa  komponen yang sering disebutkan adalah CO 2 dan H 2 O. Lembaran bioplastik selanjutnya diamati tekstur permukaan bioplastik dan miseliumnya. Pengamatan tersebut  dapat  dilakukan  secara  langsung  dan mikroskopis  melalui  mikroskop.  Pengamatan  secara langsung  bertujuan  untuk  melihat  miselium  yang tumbuh  pada  permukaan  bioplastik.  Bagian  yang diamati  meliputi  warna  miselium,  perubahan  warna bioplastik,  dan  perubahan  tekstur  permukaan bioplastik.  Adapun  pengamatan  secara  mikroskopis dilakukan  dengan  bantuan  mikroskop.  Pengamatan ini  bertujuan  melihat  miselium  dan  spora  yang menempel pada permukaan bioplastik.
Pengamatan  tekstur  permukaan  bioplastic setalah  terdegradasi  oleh  fungi  dapat  dilihat  pada Gambar  2.  Hasil  pengamatan  menunjukkan  adanya miselium  yang  menempel  pada  perlakuan  dengan isolat fungi. Perubahan warna bioplastik juga terlihat cukup signfikan, yaitu dari lembaran bioplastik yang berwarna putih menjadi kecoklatan. Tekstur permukaan  bioplastik  hanya  mengalami  sedikit perubahan,  yaitu  adanya  rongga  dan  tonjolan  yang terlihat  cukup  jelas.  Lembaran  bioplastik  kemudian diamati  tekstur  permukaannya  dengan  mikroskop (Gambar 3).
Gambar 2. Pengamatan Tekstur Permukaan Bioplastik secara Langsung
Keterangan: (a) Bioplastik kontrol; (b) Bioplastik dengan isolat GT1; (c) Bioplastik dengan isolat GT2; (d) Bioplastik dengan isolat GT3; (e) Bioplastik dengan isolat GT4; (f) Bioplastik dengan isolat GT5; (g) Bioplastik dengan isolat GT6.
a b d c f e g
Gambar 3 . Pengamatan Tekstur Permukaan Bioplastik secara Mikroskopis Keterangan: (a) Bioplastik kontrol; (b) Bioplastik dengan isolat GT1; (c) Bioplastik dengan isolat GT2; (d) Bioplastik dengan isolat GT3; (e) Bioplastik dengan isolat GT4; (f) Bioplastik dengan isolat GT5; (g) Bioplastik dengan isolat GT6.
Pengamatan  tersebut  menunjukkan  pelekatan fungi  di  atas  permukaan  bioplastik,  pembentukan rongga-rongga, ketidakrataan permukaan, sedangkan permukaan  lembaran  kontrol  terlihat  halus,  tidak memiliki lubang, keretakan, ataupun partikel-partikel yang melekat pada permukaannya (Nissa et al. 2019). Bhardwaj et  al. (2012)  menambahkan  bahwa pengamatan  secara  visual  menunjukkan  adanya miselium  fungi  yang  melekat  pada  permukaan bioplastik.  Fungi  memanfaatkan  polimer  organik kompleks  dan  mengubahnya  menjadi  molekul  yang lebih  sederhana  dengan  mensekresikan  enzim pendegradasi  sehingga  akan  memutuskan  rantai polimer  dan  menghasilkan  rantai-rantai  pendek, seperti  oligomer,  dimer  dan  monomer  namun  berat molekul  bioplastik  yang  besar,  struktur  3  dimensi, sifat hidrofobik dan minimnya gugus-gugus fungsional  sangat  mempengaruhi  upaya  pelekatan mikroba  ( microbial  attack ) pada  polimer  bioplastik. Fungi  berfilamen  umumnya  mampu  melekat  pada permukaan  hidrofobik  dengan  membentuk  protein hidrofobik (Kershaw & Talbot, 1998). Enzim-enzim ekstraseluler terlalu besar untuk penetrasi lebih dalam ke dalam material polimer sehingga bekerja hanya di permukaan  polimer  saja.  Akibatnya  biodegradasi bioplastik  umumnya  hanya  merupakan  suatu  proses
erosi permukaan (Gajendiran et al . 2016). Nissa et al.
(2019)  menambahkan  bahwa  proses  biodegradasi bioplastik  terdiri  atas  tiga  tahap,  yaitu Bio- deterioration,  Bio-fragmentation, dan Bioplastik assimilation .  Tahap  pertama  atau Bio-deterioration merupakan  proses  terjadinya  perubahan  struktur kimia,  fisik,  dan  biologi  dari  polimer  bioplastik sebagai  akibat  adanya  aktifitas  biologis  oleh  isolat fungi, seperti perlekatan miselium maupun penetrasi enzim  ekstraseluler  fungi.  Proses Bio-deterioration mengakibatkan  porositas  yang  cukup  tinggi  pada permukaan bioplastik. Selanjutnya pada tahap kedua atau Bio-fragmentation terjadi  penguraian  polimer bioplastik  menjadi  oligomer  dan  monomer.  Tahap akhir  dari  biodegradasi  bioplastik  terjadi  ketika monomer  dan  oligomer  yang  telah  terfragmentasi akan  diubah  menjadi  produk  biodegradasi  yang sangat sederhana, seperti CO 2 dan H 2 O.
Sejumlah  6  isolat  terpilih  diamati  berdasarkan karakter  makroskopis  dan  mikroskopis.  Secara makroskopis,  isolat  dapat  diamati  pada  media  PDA setelah  7x24  jam  masa  inkubasi.  Karakteristik makroskopis  ditunjukkan  pada Tabel  2 dan  Gambar 4.

## Tabel 2. Karakter makroskopis isolat fungi
Karakter Kode isolat GT1 GT2 GT3 GT4 GT5 GT6 Warna permukaan koloni Hijau Hijau Hijau Hijau Hijau Hijau Warna sebalik koloni Kuning Hijau Kuning Kuning Kuning Kuning Tekstur koloni Beludru Beludru Kapas Beludru Beludru Beludru Tepi koloni irregular irregular circular irregular irregular irregular
a b
c d e f g
Gambar 5. Karakter makroskopis koloni isolat fungi dari Ex-TPA Gunung Tugel Keterangan: (a) Isolat GT1; (b) Isolat GT2; (c) Isolat GT3; (d) Isolat GT4; (e) Isolat GT5; (f) Isolat GT6;
(1) Permukaan koloni; (2) Sebalik koloni
Pengamatan secara makroskopis pada isolat GT1 dan GT4 terlihat serupa, diketahui bahwa permukaan atas koloni berwarna hijau, sedangkan permukaan sebalik koloni  berwarna  kuning,  tekstur  koloni  seperti beludru/ dry ,  dan  tepi  koloni  berbentuk irregular . Sementara  itu,  isolat  GT2  memiliki  permukaan  atas koloni  berwarna  hijau,  permukaan  sebalik  koloni kuning,  tekstur  koloni  seperti  beludru/ dry ,  dan  tepi koloni  berbentuk irregular .  Adapun  isolat  GT3 memiliki  permukaan  atas  koloni  berwarna  hijau, sedangkan  permukaan  sebalik  koloni  berwarna kuning, tekstur koloni seperti kapas,  dan tepi koloni berbentuk circular .  Isolat  GT5  dan  GT6  juga memiliki karakter yang serupa, yaitu permukaan atas koloni berwarna hijau, sedangkan permukaan sebalik
koloni  berwarna  kuning,  tekstur  koloni  seperti beludru/ dry ,  dan  tepi  koloni  berbentuk irregular . Selanjutnya untuk karakteristik mikroskopis disajikan pada Tabel 3 dan Gambar 6.
Pengamatan  secara  makroskopis  pada  isolat GT1,  GT3,  GT4,  GT5, dan  GT6  memiliki  ciri  yang serupa, diketahui isolat-isolat  tersebut  memiliki hifa bersepta,  konidiofor  yang  bercabang  dan  bentuk konidia  bulat/oval.  Sementara  itu,  isolat  GT2 memiliki  karakter  yang  sedikit  berbeda,  isolat tersebut  diketahui  mempunyai  hifa  bersepta, konidiofor yang tidak bercabang dan bentuk konidia bulat/oval.

## Tabel 3 . Karakter makroskopis isolat fungi
Karakter Kode isolat GT1 GT2 GT3 GT4 GT5 GT6 Hifa Septa Septa Septa Septa Septa Septa Konidiofor Bercabang Tidak bercabang Tidak bercabang Bercabang Bercabang Bercabang Konidia Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat bulat
1 (a) (d) 2 (c) (e) (b) (f) 1 1 1 1 2 2 2 2 1 2
Gambar 6. Karakter mikroskopis isolat fungi dari Ex-TPA Gunung Tugel dengan Perbesaran 100x Keterangan: (a) Isolat GT1; (b) Isolat GT2; (c) Isolat GT3; (d) Isolat GT4; (e) Isolat GT5; (f) Isolat GT6;
(1) Hifa; (2) Konidiofor; (3) Konidia
Berdasarkan  data  hasil  pengamatan  karakter isolat pada Tabel 3, Tabel 4, Gambar 4.2, dan Gambar 4.3,  yang dicocokkan dengan buku identifikasi Pitt & Hocking  (2009),  menunjukkan  bahwa  isolat  GT1, GT3, GT4, GT5, dan GT6 diduga berasal dari genus Penicillium. Pengamatan Mikroskopis isolat tersebut juga disesuaikan dengan buku identifikasi Watanabe (2010)  yang  menyatakan  bahwa  genus Penicillium secara mikroskopis memiliki bentuk konidiofor yang khas.  Konidiofor  muncul  tegak  dan  bercabang mendekati  ujungnya. Penicillium sp  memiliki konidiofor bercabang secara melingkar baik tunggal maupun  ganda  dan  menyerupai  bentuk  percabangan semak-semak.  Konidia  dihasilkan  di  ujung  dalam rangkaian, bentuknya bulat. Konidiofor yang menjari dan terdapat 2 –3 hifa percabangan. Hasil yang sama juga  ditemukan  pada  identifikasi  oleh  Angraini  & Usman  (2015),  koloni Penicillium sp.  awalnya berwarna  putih,  kemudian  berubah  menjadi  biru kehijauan,  abu-abu  kehijauan,  abu-abu  zaitun,  dan warna  sebalik  biasanya  berwarna  kuning  pucat, sedangkan bentuk mikroskopis fungi Penicillium sp. yaitu  memiliki  hifa  yang  hialin  dan  konidia  yang berbentuk  bulat.  Yanti et  al. (2019)  menambahkan dalam hasil penelitiannya bahwa Ciri-ciri makroskopik  dari  genus  Penicillium    yang  diisolasi pada  medium  PDA  dengan  umur  7  hari,  berwarna hijau  tua  agak  redup,  sebalik  koloni  berwarna  krem
kekuningan.  Permukaan  koloni  mendatar  dengan tekstur  permukaan  seperti  beludru,  margin  koloni rata. Ciri-ciri mikroskopis yang diperoleh adalah hifa tidak  bersepta,  konidiofor  berbentuk  bening  dan halus, serta memiliki banyak percabangan. Samson et al. (2010)  menambahkan  bahwa  bentuk  dari  koloni Penicillium  adalah  pertumbuhan  cepat,  datar, berserabut, beludru atau seperti tekstur kapas. Koloni awalnya  adalah  putih  dan  berubah  menjadi  biru kehijaun,  abu-abu  kehijaun,  abu  zaitun  terkadang kuning  atau  kemerah-merahan.  Secara  mikroskopis genus Penicillium memiliki kemiripan ciri dan berada pada genus yang dekat dengan genus Paecilomyces . Ciri  utama  yang  membedakan Penicillium dan Paecilomyces adalah bentuk dari konidia.
Sementara  itu,  berdasarkan  buku  identifikasi Pitt & Hocking (2009), isolat GT2 diduga berasal dari genus Aspergillus. Pernyataan tersebut diperkuat oleh hasil  penelitian  Samson et  al. (2010),  bahwa  fungi anggota genus Aspergillus ada yang memiliki konidia berbentuk semi bulat dengan konidiofor panjang dan kolumnar. Vesikel berbentuk semi bulat, menyerupai corong  beukuran  pendek  ditutupi  oleh  fialid  yang berbentuk  oval  dan  metula  berbentuk  silindris. Konidia  melekat  pada  ujung  satu  baris  sterigmata yang  teratur  melingkar  pada  permukaan  ujung konidiaspora. Gautam & Bhadauria (2012) menambahkan  bahwa  anggota  genus  Aspergillus
yang  tumbuh  mula-mula  berwarna  putih  kemudian pada hari ke empat berubah menjadi hijau kekuningan dengan pinggiran putih dan permukaan bawah koloni berwarni kekuningan sampai coklat. Genus Aspergillus  secara  makroskopis  koloni  yang  terlihat berwarna  hijau  kekuningan  dan  pada  bagian bawahnya berwarna kekuningan sampai coklat.
Beberapa  isolat  yang  telah  diisolasi  dari penelitian ini merupakan isolat yang sering dijumpai pada lingkungan rizosfer tanah, terutama  yang telah tercemar  oleh  plastik.  Keragaman  isolat  tanah  pada lingkungan  tersebut  dikuatkan  oleh  pernyataan Dineshraj  &  Ganesh  (2016)  yang  telah  mengisolasi fungi  dari  sampah  plastik  di  berbagai  tempat pembuangan sampah kota Cuddalore dan mendapatkan sembilan isolat fungi, yaitu Aspergillus niger ,  A. flavus ,  A. nidulans ,  A. fumigatus ,  A. glaucus , Penicillium sp., Fusarium sp., Mucor sp., dan Alternaria sp.  Obire et  al. (2002)  juga mendapatkan  enam  isolat  fungi  dari  tempat pembuangan akhir, diantaranya Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. niger,  Fusarium sp., Mucor sp.,  dan Penicillium sp.  Williams  &  Hakam  (2016) melaporkan  bahwa  dari  empat  tempat  pembuangan akhir  yang  berbeda  di  Nigeria  didapatkan  5  isolat fungi Aspergillus sp., Fusarium sp., Mucor sp., Penicillium sp. dan Saccharomyces sp.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan disimpulkan bahwa diperoleh 6 isolat fungi indigenous yang  berpotensi  mendegradasi  bioplastik  berbasis pati  dari  Ex-TPA  Gunung  Tugel,  Kabupaten Banyumas  berasal  dari  genus  Aspergillus  (isolat GT2) dan Penicillium (isolat GT1, GT3, GT4, GT5, dan  GT6).  Kemampuan  biodegradasi  bioplastik berbasis  pati  tertinggi  oleh  fungi  dari  genus Aspergillus,  yaitu  isolat  GT2  dengan  pengurangan bobot bioplastik ( weight loss ) sebesar 21,84%.

## DAFTAR REFERENSI
Aburas,  M.M.A.,  2016.  Degradation  of  poly  (3- hydroxybuthyrate)  using Aspergillus  oryzae obtained  from  uncultivated  soil. Life  Sci.  J . 13 (3), pp. 51-56
Ade,  S.,  &  Purba,  R.  2018.  Isolasi  dan  Identifikasi Jamur  Pendegradasi  Bioplastik  Berbasis  Pati. Skripsi .  Fakultas  Biologi,  Universitas  Gadjah Mada.
Adhikari, D. et al. 2016. Degradation of Bioplastiks In  Soil  and  Their  Degradation  Effects  on Environmental  Microorganisms. Journal  Of Agricultural  Chemistry  And  Environment, 5 (1), pp.23–34.
Ainiyah,  D.,  &  Shovitri,  M.  2014.  Bakteri  Tanah Sampah  Pendegradasi  Plastik  Dalam  Kolom Winogradsky. Jurnal Sains Dan Seni Pomits 3
(2), pp. 63-66.
Angraini,  Dewi N., & Usman, M. 2015. Biolink Uji Aktivitas  dan  Identifikasi  Jamur  Rhizosfer Pada Tanah Perakaran Tanaman Pisang ( Musa paradisiaca ) Terhadap Jamur Fusarium. Jurnal Biologi  Lingkungan,  Industri,  dan  Kesehatan, 1(2), pp. 89-98.
Atlas,  R.M.  2010. Handbook  of  Microbiological Media Fourth Edition . Francis: CRC Press.
Aziz,  I.R.,  Muthiadin,  C.,  &  Hafsan,  H.  2019. Biodegradasi  Plastik  Ldpe  Hitam  Dan  Putih Pada  Sampah  Tpa  Antang  Dalam  Kolom Winogradsky. Al-Kauniyah:  Jurnal  Biologi 12(2), pp. 164-170.
Badan  Pusat  Statistik.  2020. Statistik  Lingkungan Hidup Indonesia . BPS. Jakarta
Bhardwaj,  H.,  Gupta,  R.  and  Tiwari,  A.  2012.
Microbial  Population  Associated  with  Plastic Degradation. Open  Access  Scientific  Reports.
1( 5 ), pp. 1-4.
Deepika,  S.,  &  Madhuri,  R.J.  2015.  Biodegradation Of  Low  Density  Polyethylene  By  Micro- Organisms  From  Garbage  Soil. Journal  Of
Experimental Biology And Agricultural Sciences 3(1): P.15–21. Available At: Http://www.Jebas.Org.
Dineshraj,  D.,  &  Ganesh,  P.  2016.  Screening  And Characterization of Isolatd Fungi From Plastic Waste  Dump  Yard  Sites. Ijsr  -International Journal of Scientific Research 301(1), pp. 301- 302.
Emita, H., Cicilia, N.P., & Pujiati. 2017. Karakteristik Isolat Kapang Endogenus Pendegradasi Limbah  Plastik. Prosiding  Seminar  Nasional Simbiosis Ii (September), pp. 378-388.
Folino,  A.,  Karageorgiou,  A.,  Calabrò,  P.S.,  & Komilis,  D.  2020.  Biodegradation  of  Wasted
Bioplastiks in Natural and Industrial Environments: A Review. Sustainability (Switzerland) 12(15), pp. 1-37.
Gajendiran, A., Krishnamoorthy, S. and Abraham, J., 2016.  Microbial  degradation  of  low-density polyethylene  (LDPE)  by  Aspergillus  clavatus strain  JASK1  isolatd  from  landfill  soil. 3 Biotech , 6 (1), pp. 52.
Gandjar,  I.,  R.A.  Samson,  K.  van  den  Tweel- Vermeulen,  A.  Oetari  &  I.  Santoso.  1999. Pengenalan  kapang  tropik  umum .  Jakarta: Yayasan Obor Indonesia.
Gautam, A.K., & Bhadauria, R. 2012. Characterization of Aspergillus Species Associated With Commercially Stored Triphala Powder. African  Journal  of  Biotechnology 11(104), pp. 16814-16823.
Hoegh-Guldberg, O. et al. 2015. Plastic Waste Inputs From  Land  Into  The  Ocean. Science
(September 2014), pp.1655–1734.
Indumathi, A., & Kavitha, K.K. 2020. High Density Polyethylene (HDPE) Degradation in Aqueous Solution  by  Fungi  Isolatd  from  Garbage Landfills  at  Thanjavur,  Tamil  Nadu,  India. International Journal of Current Microbiology And Applied Sciences 9(8), pp. 1874-1882.
Intandiana,  S.,  Dawam,  A.H.,  Denny,  Y.R., Septiyanto, R.F., & Affifah, I. 2019. Pengaruh
Karakteristik  Bioplastik  Pati  Singkong  dan Selulosa Mikrokristalin Terhadap Sifat Mekanik  dan  Hidrofobisitas. Educhemia (Jurnal Kimia Dan Pendidikan) 4(2), pp. 185.
Janet,  O.W.,  &  Kelechi,  H.  2016.  Microorganisms Associated With Dump  Sites  in Port Harcourt Metropolis,  Nigeria. Journal  of  Ecology  And The Natural Environment 8(2), pp. 9-12.
Kumar,  S.,  Das,  M.P.,  Jeyanthi  Rebecca,  L.,  & Sharmila, S. 2013. Isolation and Identification of  LDPE  Degrading  Fungi  from  Municipal Solid  Waste. Journal  of  Chemical  and Pharmaceutical Research 5(3), pp. 78-81.
Muhonja,  C.N.,  Makonde,  H.,  Magoma,  G.,  & Imbuga, M. 2018. Biodegradability of Polyethylene  by  Bacteria  and  Fungi  From Dandora  Dumpsite  Nairobi-Kenya. Plos  One 13(7), pp. 1–17.
Munir, E., Harefa, R.S.M., Priyani, N., & Suryanto, D. 2018. Plastic Degrading Fungi Trichoderma Viride  And  Aspergillus  Nomius  Isolatd  from Local Landfill Soil in Medan. Iop Conference Series:  Earth  And  Environmental  Science 126(1).
Nchedo  Ariole,  C.,  &  George-West,  O.  2020.
Bioplastik Degradation Potential of Microorganisms  Isolatd  From  The  Soil. American Journal of Chemical and Biochemical Engineering 4(1), pp. 1.
Nissa,  R.C.,  Fikriyyah,  A.K.,  Abdullah,  A.H.D.,  &
Pudjiraharti,  S.  2019.  Preliminary  Study  of Biodegradability  of  Starch-Based  Bioplastiks Using  Astm  G21-70,  Dip-Hanging,  And  Soil
Burial  Test  Methods. Iop  Conference  Series: Earth And Environmental Science 277(1).
Obire,  O.,  Nwaubeta,  O.,  &  Adue,  B.N.  2002. Microbial Community Of A Waste- Dump Site. Journal of Applied Sciences and Environmental Management 6(1). pp.18-26.
Lazuardi,  G.,  &  Sari  E.  2013.  Preparation  And Characterization  Based  Bioplastik  Chitosan And Cassava Starch With Glycerol Plazticizer.
UNESA  Journal  of  Chemistry 2(3),  pp.  161– 166.
Shimao,  M.  2001.  Biodegradation  of  Plastics Masayuki  Shimao. Current  Opinion  In Biotechnology 12, pp. 242–247.
Urbanek,  A.K.  Rymowicz,  W.,  Strzelecki,  M.C., Kociuba, W., Franczak, Ł., Mirończuk, A.M., 2017.  Isolation  and  Characterization  of  Arctic Microorganisms  Decomposing  Bioplastiks.
Amb Express 7(1), pp. 148-158.
Watanabe, T., 2010. Pictorial  atlas of soil and seed fungi: morphologies of cultured fungi and key to species . CRC press.
Williams, J.O. & Hakam, K., 2016. Microorganisms associated  with  dump  sites  in  Port  Harcourt Metropolis,  Nigeria. Journal  of  Ecology  and the Natural Environment , 8 (2), pp. 9-12.
Yanti,  N.A.,  Sriwahyuni,  E.,  La  Omi,  N.R., Muhiddin,  N.H.  &  Ahmad,  S.W.,  2019.  The Potential  of  Lipolytic  Filamentous  Fungi Isolatd  from  Landfill  Soil  as  Poly-β-
Hydroxybutirate (PHB) Bioplastik
Degrader. bioRxiv .
Yunar,  V.  2011.  Evaluasi  Biodegradabilitas  Plastik Berbahan Dasar  Campuran Pati dan Polietilen Menggunakan ASTM G21-09,
Uji Mikroorganisme  dan  Uji  Lapangan. Skripsi . Fakultas Teknik, Universitas Indonesia.