Abstrak —Kebutuhan  Zea  mays  setiap  tahunnya  mengalami peningkatan. Peningkatan tersebut akan sulit dipenuhi mengingat semakin  berkurangnya  lahan  pertanian  akibat  konversi  lahan pertanian  menjadi  area  perumahan.  Saat  ini,  hal  tersebut  dapat diatasi  dengan  pemanfaatan  lahan  salin.  Salah  satu  masalah dalam  penggunaan  lahan  salin  adalah  adanya  kandungan salinitas  yang  tinggi  yang  berdampak  buruk  bagi  pertumbuhan dan  produktivitas  tanaman.  Sehingga,  perlu  dilakukan  uji ketahanan  Z.  mays  varietas  lokal  Indonesia  terhadap  cekaman salinitas  secara  in  vitro.  Pada  penelitian  ini,  menggunakan varietas Manding. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui respon  dan  tingkat  ketahanan  kalus  Z.  mays  varietas  Manding terhadap cekaman salinitas (NaCl). Kalus diinduksi pada medium MS0  +  2,4-D  3  ppm  selama  28  hari.  Setelah  itu,  kalus  diberi perlakuan dengan menambahkan NaCl (0, 2500, 5000, 7500 ppm) pada medium MS0 + 2,4-D 3 ppm dan diinkubasi selama 28 hari. Selanjutnya, dilakukan pengamatan morfologi kalus, perhitungan persentase  kalus  hidup  serta  pertambahan  berat  kalus  yang mampu  bertahan.  Hasil  yang  diperoleh  yakni  terjadi  perubahan morfologi terhadap warna kalus, semakin tinggi konsentrasi NaCl menunjukkan  terjadinya  browning.  Persentase  kalus  hidup menunjukkan bahwa kalus varietas Manding mampu bertahan di setiap  tingkat  konsentrasi.  Dan  pada  pertambahan  berat  kalus menunjukkan  bahwa  terjadi  penurunan  berat  kalus  seiring dengan meningkatnya konsentrasi NaCl pada medium.
Kata Kunci — In vitro, Kalus, Salinitas, Zea mays.

## I. PENDAHULUAN
ENULISAN  jagung  (Zea  mays)  termasuk  dalam  jenis tanaman  semusim,  tergolong  dalam  famili  graminaceae dan  berbiji  tunggal  (monokotil)  [1].  Yang  merupakan  salah satu  bahan    pangan  pokok  potensial  dan  komoditas  penting dalam  agribisnis  [2].  Hasil  panen  tanaman  jagung  penting dalam  upaya  peningkatan  ekonomi  agrikultur  dunia  [3]. Rujukan  [4],  menjelaskan  bahwa  dalam  20  tahun  kedepan, penggunaan Z. mays diperkirakan terus meningkat dan bahkan setelah  tahun  2020  lebih  dari  60%  dari  total  kebutuhan nasional.  Adanya  konversi  lahan  pertanian  menjadi  area perumahan  menyebabkan  kebutuhan  tersebut  akan  sulit  untuk dipenuhi.  Hal  tersebut  dapat  diatasi  dengan  memanfaatkan lahan salin.
Lahan  salin  di  dunia  meliputi  “salt  marshes”  di  zona temperate,  dan  daerah  pasang  surut  (mangrove  swamps)  di
daerah subtropik dan tropik. Diperkirakan antara 400-900 juta ha lahan di dunia mempunyai problema salinitas. Di Indonesia sendiri  mempunyai  lahan  salin  sepanjang  99.093  km  [5], sehingga  memiliki potensi besar untuk menambah luasan area pertanian.  Namun,  keterbatasan  dalam  memanfaatkan  lahan salin adalah kandungan salinitas yang tinggi.
Salinitas merupakan salah satu faktor pembatas utama yang mampu menyebabkan menurunnya pertumbuhan dan produktivitas  suatu  jenis  tanaman  [6].  Berdasarkan  penelitian yang telah dilakukan pengaruh cekaman salinitas terhadap tiga varietas  tanaman  Z.  mays  yakni  Arjuna,  Bisma,  dan Sukmaraga  menunjukkan  pengaruh  terhadap  menurunnya tinggi tanaman, jumlah daun, luas daun, berat kering, panjang akar,  dan  kandungan  klorofil  [7].  Hal  ini  terjadi  karena cekaman  salinitas  dapat  menyebabkan  berbagai  efek  pada fisiologi  tanaman  seperti  laju  respirasi  meningkat,  toksisitas ion,  perubahan  pertumbuhan  tanaman,  distribusi  mineral, mengganggu  permeabilitas  membran,  dan  penurunan  tingkat fotosintetik [8].
Berdasarkan  hal  tersebut  maka  perlu  dilakukan  uji ketahanan  jagung  lokal  Indonesia  terhadap  salinitas  secara  in vitro.  Varietas  jagung  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  Manding.  Yang  merupakan  salah  satu  varietas  unggul lokal yang menjadi tanaman favorit bagi masyarakat Sumenep [9].  Penelitian  ini  dilakukan  melalui  seleksi  in  vitro.  Rujukan [10], menjelaskan bahwa Seleksi in vitro merupakan salah satu cara  untuk  melakukan  seleksi  varietas  atau  galur  jagung  yang tahan  salinitas  dengan  media  selektif  yang  sesuai.  Karena melalui seleksi in vitro akan mampu memperoleh varietas yang mempunyai  sifat  unggul  toleran  terhadap  kondisi  salinitas tanpa adanya faktor lingkungan yang mempengaruhi [11]. Dan Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  respon  dan  tingkat ketahanan  kalus  Z.  mays  varietas  Manding  terhadap  cekaman salinitas (NaCl).

## II. URAIAN PENELITIAN

## A. Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Kultur  Jaringan

## Respon Tanaman Jagung ( Zea mays L.) Verietas Manding terhadap Cekaman Salinitas (NaCl) secara In Vitro
Nur Fadlilatus Sholihah, dan Triono Bagus Saputro Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia e-mail : trionobsaputro@bio.its.ac.id
P
Gambar 1. Struktur benih Z. mays dan bagiannya [12]
Gambar 2. Morfologi kalus Manding pada konsentrasi salinitas yang berbeda A) 0 ppm, B) 2500 ppm, C) 5000 ppm, D) 7500 ppm
Gambar  3.  Grafik  pengaruh  interaksi  antara  kalus Z.  mays varietas Manding  dengan  variasi  konsentrasi  NaCl  terhadap  pertambahan berat kalus.
Biologi  ITS  pada  bulan  November  2014  sampai  dengan  Juli 2015.

## B. Sterilisasi Tempat Kerja dan Peralatan
Sterilisasi  tempat  inokulasi  berupa  LAF,  dilakukan  dengan
menyalakan  UV  lamp  pada  LAF  selama  2  jam.  Kemudian dinyalakan  blower  LAF  selama  30–60  menit  dan  disemprot bagian  meja  kerja  LAF  dengan  alkohol  70%.  Setelah  itu dibersihkan  menggunakan  tissue  steril.  Sedangkan,  untuk peralatan  seperti  glassware    (botol  kultur,    beaker  glass, erlenmeyer,  gelas  ukur  dan  cawan  Petri),  dissecting  kit (pinset,  spatula,  guntin  dan  skapel),  karet,  tissue  dan  plastik disterilisasi  menggunakan  autoklaf  dengan  suhu  1210C tekanan 1,5 atm selama 15 menit.

## C. Sterilisasi Eksplan
Eksplan  yang  digunakan  adalah  benih  Zea  mays  varietas Manding.  Untuk  sterilisasi  eksplan,  benih  dicuci  pada  air mengalir  selama  15  menit.  Direndam  pada  larutan  sabun  dan diaduk selama 30 menit. Selanjutnya, eksplan direndam dalam larutan  antifungal  2gr/L  selama  30  menit,  larutan  NaOCl 5,25%  selama  5  menit,  alkohol  70%  selama  10  menit.  Dan dibilas aquades steril sebanyak 3 kali.

## D. Induksi Kalus
Proses  induksi  kalus  menggunakan  medium  MS0  yang ditambahkan  ZPT  (zat  pengatur  tumbuh)  yakni  2,4-D  dengan konsentrasi  3  ppm.  Pertama,  eksplan  benih  yang  telah disterilisasi  permukaannya,  dibelah  menjadi  dua,  sehingga pada  setiap  bagiannya  terdapat  bagian  embrionya.  Kemudian, diambil  eksplan  yang  sudah  dibelah  dan diinokulasi ke dalam botol  kultur  yang  telah  berisi  medium.  Setelah  eksplan diinokulasi, dilakukan proses inkubasi dalam ruang kultur pada kondisi gelap selama 28 hari dengan suhu 250C ± 20C [3] dan setiap dua minggu sekali dilakukan subkultur ke medium baru.

## E. Seleksi In Vitro
Kalus  yang  terbentuk  disubkultur  ke  medium  seleksi  yakni MS0  +  2,4-D  3  ppm  +  NaCl  (0,  2500,  5000,  7500  ppm)  dan diinkubasi  selama  28  hari  dalam  ruang  kultur  dengan  kondisi terang.
F. Pengamatan Parameter
1) Persentase Kalus Hidup
Pengamatan presentase kalus hidup, dengan rumus [13] : 2) Morfologi Kalus
Parameter  yang  diamati  dalam  morfolgi  kalus  terdiri  dari warna  dan  tekstur  kalus.  Warna  kalus  pada  umumnya  adalah warna  putih,  kuning,  ungu,  hijau,  hingga  cokelat  kehitaman [14].  Sedangkan,  untuk  tekstur  kalus  dapat  dibedakan  atas kalus  yang  bertekstur  kompak  (non    friable),  remah  (friable), dan  kalus  intermediet  (perpaduan  kalus  kompak  dan  kalus remah) [15].

## 3) Pertambahan Berat Kalus
Pertambahan  berat  kalus  diukur  dengan  cara  menimbang berat segar kalus sebelum seleksi (Initial growth) dan sesudah seleksi  kalus  (Final  growth)  untuk  mendapatkan  data

## Tabel 1.

## Morfologi kalus Manding sebelum dan sesudah dicekam NaCl
Tabel 2. Pengaruh variasi konsentrasi cekaman NaCl terhadap pertambahan berat kalus Manding Source of variation Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 0,221 3 0,074 3,956 0,053 Within Groups 0,149 8 0,019 Total 0,370 11 Tabel 3. Pengaruh variasi konsentrasi cekaman NaCl  terhadap persentase kalus hidup Varietas Konsentrasi NaCl (ppm) 0 2500 5000 7500 Manding 100% 100% 100% 100%

## pertambahan berat kalus.

## G. Rancangan Penelitian dan Analisis Data
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  dan  dilakukan  pengulangan  3  kali.  Pengamatan dilakukan  selama  28  hari  untuk  induksi  kalus  dan  28  hari untuk  seleksi  in  vitro.  Data  hasil  pengamatan  parameter pertambahan  berat    kalus  dianalisis  dengan  analisis  statistik yaitu  uji  Anova  (Analysis  of  Variance)  satu  faktor  pada  taraf kepercayaan 95%. Jika hasil uji Anova menunjukkan “p value” ≤  0,05,  maka  akan  dilanjutkan  ke  uji  Duncan  pada  taraf  5%, dengan menggunakan program SPSS Statistical Software. Data hasil  pengamatan  morfologi  kalus  dan  persentase  kalus  hidup akan dianalisis secara deskriptif.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Pengaruh Beberapa Konsentrasi Cekaman NaCl terhadap Morfologi Kalus
Kalus  yang diperoleh pada tahap induksi kalus, selanjutnya disubkultur  pada  medium  seleksi  yang  mengandung  NaCl dengan  konsentrasi  0,  2500,  5000,  dan  7500  ppm.  Tahap  ini dilakukan selama 28 hari atau 4 minggu, yang mana perubahan morfologi kalus diamati setiap 7 hari sekali. Kondisi morfologi kalus  ditunjukkan  pada  gambar  2.  Tahap  induksi  kalus  pada penelitian  ini,  menggunakan  ZPT  2,4-D  3  ppm.  Karena penambahan  2,4-D    dalam    media    kultur  akan  merangsang pembelahan dan pembesaran sel  pada eksplan sehingga dapat memacu  pembentukan  dan    pertumbuhan    kalus  [15].  Pada penelitian  [16]  juga  telah  berhasil  menginduksi  kalus  jagung menggunakan ZPT 2,4-D 4 ppm.
Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan, menunjukkan  bahwa  adanya  perubahan  warna  dan  tekstur kalus  yang  telah  dicekam  pada  medium  yang  ditambahkan NaCl  (tabel  1),  terutama  pada  konsentrasi    NaCl  7500  ppm. Kalus  pada  medium  tanpa  NaCl  memiliki  warna  putih  hingga kuning  muda,  dengan  tekstur  remah  dan  kompak.  Sedangkan, morfologi  kalus  pada  medium  yang  ditambahkan  NaCl memiliki  warna  kalus  kuning-kecokelatan  hingga  cokelat muda,  dengan  tekstur  remah,  intermediet  dan  kompak.  Pada konsentrasi NaCl tertinggi, kalus mengalami perubahan warna menjadi kecokelatan.
Perbedaan  morfologi  tersebut,  merupakan  suatu  bentuk respon  terhadap adanya cekaman NaCl, hal yang sama terjadi pada  penelitian  [17],  dimana  kalus  yang  dicekam  NaCl memiliki  warna  cokelat  dan  tekstur  kompak.  Karena  ketika terpapar  cekaman  NaCl  dalam  jangka  waktu  tertentu,  fungsi fisiologis  sel  akan  cenderung  mengalami  penurunan  secara
Konsentrasi Ulangan Parameter Warna kalus Tekstur kalus Awal Akhir Awal Akhir 0 ppm 1 Putih Putih Remah Remah 2 Putih Putih Remah Remah 3 Putih-kekuningan Kuning muda Remah Kompak 2500 ppm 1 Kuning muda Kuning Kompak Kompak 2 Putih-kekuningan Kuning-kecokelatan Remah remah 3 Kuning Kuning Remah Kompak 5000 ppm 1 Putih Kuning muda Remah Remah 2 Putih-kekuningan Kuning-kecokelatan Intermediet Remah 3 Putih-kekuningan Cokelat muda Remah Remah 7500 ppm 1 Putih Cokelat muda Remah Intermediet 2 Kuning Kuning-kecokelatan Remah Intermediet 3 Kuning Kuning-kecokelatan Remah Remah
berkala  dan  selanjutnya  sel-sel  tersebut  akan  mengalami kematian  (nekrosis)  jika  tidak  mampu  beradaptasi  terhadap kondisi cekaman NaCl [18].
Kalus dari hasil cekaman NaCl ini terdapat yang bertekstur remah  lengket.  Menurut  [19],  hal  ini  disebabkan  adanya akumulasi  ion  Na+  dan  Cl-  yang  berlebihan  di  dalam  sel  dan
ketidakmampuan sel dalam mengatur konsentrasi ion di dalam sitoplasma  sehingga  terjadi plasmolisis sel yaitu keluarnya air dari  sel  menuju  media  tanam.  Selain  itu,  cekaman  salinitas dapat berpengaruh pada penurunan kandungan klorofil karena meningkatnya  aktivitas  enzim  klorofilase  yang  disebabkan oleh  berkurangnya  penyerapan  ion  Mg    dan  Fe  yang  terlibat dalam  pembentukan  kloroplas  [20].  Ion  Mg2+  juga  berperan sebagai  enzim  kofaktor  dan  berperan  penting  dalam  proses eksport  hasil  fotosintesis,  serta  dapat  mencegah  degradasi klorofil  dengan  meningkatkan  aktivitas  oksigenase dari enzim RuBP carboxylase [21].
Perubahan  warna  kalus  menjadi  cokelat  juga  dapat  terjadi akibat  adanya  senyawa  fenol  dimana  fenol  bersifat racun/toksik  bagi  sel.  pencokelatan  jaringan  terjadi  karena aktivitas  enzim  oksidase  yang  mengandung  tembaga  seperti polifenol  oksidase  dan  tirosinase.  Adanya  cekaman  salinitas akan mengganggu jalur metabolit sekunder suatu tanaman dan meningkatkan  senyawa  fenol  yang  berperan  penting  dalam mekanisme adaptasi terhadap cekaman salinitas [22]. Menurut [23]  fenol  yang  teroksidasi  akan  membentuk  quinon,  yang merupakan  senyawa  yang  menyebabkan  warna  cokelat  pada kultur  kalus.  Intensitas  warna  cokelat  berkorelasi  positif dengan    hiperaktivitas  enzim  oksidatif.  Peningkatan  enzim tersebut  terkait  dengan  reaksi  pertahanan  jaringan  dari  stres oksidatif.
B. Pengaruh Konsentrasi Cekaman NaCl terhadap

## Persentase Kalus Hidup
Hasil persentase kalus hidup yang telah dicekam selama 28 hari pada beberapa variasi konsentrasi NaCl ditunjukkan pada tabel  3.  Pada  penelitian  ini,  seluruh  eksplan  kalus  mampu merespon  setiap  perlakuan.  Hal  ini  ditunjukkan  melalui persentase  kalus  hidup  sebesar  100%  pada  setiap  perlakuan. Kalus  mampu  bertahan  pada  medium  dengan  konsentrasi  0, 2500,  5000,  dan  7500  ppm  hingga  28  hari  perlakuan  melalui mekanisme  pertahanan  dan  toleransi  dengan  respon  yang berbeda  pada  masing-masing  kalus.  Meskipun  demikian, cekaman  salinitas  masih  memungkinkan  dapat  menyebabkan penurunan  laju  pertumbuhan  dan  kematian  jaringan  kalus ketika dipapar lebih dari satu bulan
Respon  yang  berbeda  tersebut,  seperti  pengurangan pertumbuhan  kalus,  pengurangan  masa  kalus  dan  perubahan terhadap  morfologi  kalus,  sehingga  kalus  dapat  tetap  dapat bertahan pada medium yang ditambahkan NaCl. Rujukan [24], menyatakan  bahwa  adanya  cekaman  salinitas  dengan konsentrasi  tertentu  dapat  menyebabkan  penyerapan  hara  dan pengambilan air terhalang, sehingga menyebabkan pertumbuhan lambat. Mekanisme adaptasi yang dilakukan oleh tanaman  saat  tercekam  NaCl  adalah    dengan  mengakumulasi ion-ion  organik  atau  larutan  dengan  berat  molekul  yang rendah, senyawa yang mudah terlarut, umumnya tidak bersifat toksik  pada  konsentrasi  yang  tinggi.  Senyawa-senyawa tersebut  antara  lain,  betain,  asam  amino  bebas,  karbohidrat terlarut  dan  prolin  [20].  Senyawa-senyawa  tersebut,  akan memberikan perlindungan pada tanaman dari dampak cekaman melalui  mekanisme  yang  berbeda.  Yakni,  keseimbangan
osmotik  seluler,  detoksifikasi  reactive  oxygen  species, menjaga  integritas  membran  dan  menstabilkan  enzim  atau protein [21].
Tanaman  yang  tercekam  salinitas  menunjukkan  adanya akumulasi  dari  prolin.  Dimana  prolin  merupakan  molekul signaling/regulatory,  yang  dapat  mengaktifkan  respon  pada proses adaptasi cekaman salinitas, juga sebagai osmoregulator [30].  Karbohidrat  terlarut  juga  akan  terakumulasi  ketika adanya  penurunan  tingkat  asimilasi  CO2  pada  kondisi tercekam. Yang mana, memiliki peran untuk menyeimbangkan regulasi osmotik, juga bertindak sebagai sinyal metabolik pada kondisi tercekam NaCl [31]. Selain itu, sel akan memproduksi antioksidan dan beberapa enzim seperti, super oxide dismutase (SOD),  APX  (ascorbate  peroxidase)  dan  catalase  yang bertindak  untuk  memulihkan  kondisi  kalus  akibat  dampak cekaman osmotik [32].
Beberapa  mekanisme  toleransi  di  atas,  dapat  membantu tanaman  untuk  bertahan  hidup  pada  kondisi  tercekam  NaCl. Seperti  yang  telah  dilaporkan  oleh  [19],  bahwa  kriteria  kalus yang  tahan  cekaman  NaCl  adalah  kalus  yang  mampu  hidup pada  media  salin,  kalus  berwarna  putih  hingga  kuning kecokelatan,  memiliki  struktur  remah,  dan  mampu  tumbuh melakukan  pembesaran  dan  pembelahan  sel  sehingga mempengaruhi volume kalus dan persentase proliferasi kalus.
C. Pengaruh Konsentrasi Cekaman NaCl terhadap Pertambahan Berat Kalus
Pertambahan  berat  kalus  dihitung  dari  selisih  antara  berat kalus  sebelum  dicekam  dengan  berat  kalus  setelah  dicekam selama  28  hari.  Dilakukan  analisis  pengaruh  variasi konsentrasi  cekaman  NaCl  terhadap  perubahan  berta  kalus mansing  menggunakan  uji  ANOVA  dengan  nilai  perbedaan signifikannya  <  0,05.  Berdasarkan  hasil  uji  ANOVA,  variasi konsentrasi  NaCl  tidak  memberikan  pengaruh  yang  signifikan terhadap  pertambahan  berat  kalus  manding,  yaitu  ditunjukkan dengan  nilai  significantly  different  sebesar  0,053  seperti  yang ditunjukkan pada tabel 2.
Hasil uji yang tidak berpengaruh secara signifikan tersebut, disebabkan  karena  meningkatnya  konsentrasi  NaCl  tidak diikuti  dengan  penurunan  pertambahkan  berat  kalus  secara signifikan,  tidak  berbeda  nyata  pada  tiap  variasi  konsentrasi NaCl.  Hal  ini  diduga,  karena  tingkat  toleransi  terhadap cekaman  NaCl  bergantung  pada  genotip  pada  masing-masing kalus.  Sehingga,  kalus  yang  berbeda  pada  media  dengan konsentrasi  yang  sama,  akan  memiliki  respon  yang  berbeda [24]. Meskipun demikian, tetap adanya penurunan pertambahan  berat  kalus  yang  telah  dicekam  NaCl dibandingkan dengan kalus tanpa NaCl, seperti pada gambar 3. Pada  penelitian  [16]  yang  telah  dilakukan  sebelumnya,  juga menunjukkan  bahwa  cekaman  salinitas  mampu  menurunkan berat  kalus  jagung  varietas  Manding  hingga  83%  dibanding dengan kontrol, karena adanya cekaman salinitas menyebabkan pertumbuhan kalus yang tidak optimal.
Kalus  yang  tidak  diberikan  cekaman  NaCl  memiliki pertambahan berat kalus yang lebih besar dibandingan dengan kalus  yang  diberikan  cekaman.  Hal  ini  dapat  terjadi  karena
kalus mengalami cekaman salinitas seperti, terjadi ketidakseimbangan  penyerapan  air  dan  hara,  penghambatan metabolisme akibat gangguan ketidakseimbangan ion dan efek osmotik,  sehingga  kalus  membutuhkan  energi  lebih  untuk melakukan  metabolisme  dan  berpengaruh  terhadap  penurunan pertumbuhannya [25]. Penurunan pertumbuhan kalus merupakan  fenomena  umum  terjadi  ketika  tanaman  dicekam salinitas, akan menghabiskan lebih banyak energi metabolismenya daripada pada kondisi tanpa cekaman salinitas untuk  bertahan  pada  kondisi  cekaman  [26],  sehingga  energi yang  dihasilkan  labih  banyak  digunakan  untuk  mengatur penyesuaian  osmotik  dan  berdampak  pada  penurunan  massa sel  [27].  Selain  itu,  cekaman  NaCl  dapat  mengakibatkan hilangnya turgor sel akibat berkurangnya potensial air di dalam sel.  Berlebihnya  kandungan  Na+  dan  Cl-    dalam ekstraseluler menghambat asimilasi Nitrogen yakni penyerapan nitrat (NO3) dimana sangat penting untuk pertumbuhan tanaman [28].
Cekaman  salinitas  juga  dapat  menurunkan  tingkat  K+  dan Ca2+,  dimana  ion  Na+  mengalami  peningkatan.  Telah dilaporkan  sebelumnya,  bahwa  ion  K+  dan  Ca2+    berperan penting  dalam  mempertahankan  keseimbangan  osmotik,  juga dalam pembukaan dan penutupan stomata [29]. Menurut [24], tingginya  kandungan  ion  Na+  dalam  sel  menghambat pengambilan  K+  yang  menyebabkan  peningkatan  rasio  ion Na+/ K+, sehingga keseimbangan ion pada sel akan terganggu dan  selanjntnya  akan  berdampak  pada  terganggunya  hingga kerusakan struktur dan fungsi integritas membran.

## IV. KESIMPULAN/RINGKASAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat disimpulkan  bahwa  kalus  Zea  mays  varietas  Manding  tahan pada  konsentrasi  NaCl  yang  tinggi.  Hal  ini  ditunjukkan  pada persentase  kalus  hidup  sebesar  100%  pada  semua  tingkat konsentrasi  NaCl,  dimana  semua  kalus  mampu  bertahan  pada semua tingkat konsentrasi salinitas. Meskipun, pada konsentrasi  NaCl  tertinggi  terjadi  perubahan  morfologi  warna kalus  menjadi  cokelat  dan  penurunan  berat  kalus  seiring dengan  meningkatnya  konsentrasi  NaCl.  Hal  tersebut merupakan  bentuk  respon  kalus  terhadap  adanya  cekaman salinitas (NaCl).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis N.F.S. mengucapkan terima kasih kepada Direktorat Pendidikan  Tinggi,  Departemen  Pendidikan  dan  Kebudayaan Republik Indonesia yang telah memberikan dukungan finansial melalui  Beasiswa  Bidik  Misi  tahun  2012-2016.  Selain  itu, penulis  juga  mengucapkan  terima  kasih  kepada  dosen pembimbing yang memberikan dana pada penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] R.  Neni  Iriany,  M.  Yasin  H.  G.,  dan  Andi  Takdir  M.  “Asal,  sejarah, evolusi  dan  taksonomi  tanaman  jagung”.  Maros  :  Balai  Penelitian Tanaman Serelia (2008).
[2] M.  Askari  Kuruseng  dan  Muhammad  Farid.  “Analisis  heritabilitas tanaman  jagung  tahan  salinitas  dan  kekeringan  hasil  induksi  mutasi dengan  sinar  gamma”.  Jurnal  Agrisistem.  Vol.  5  :  No.  1,  (2009) Halaman 30-39.
[3] Rajurkar  Ashish  Balkrishna  and  Shende  S.  S.  “In  vitro  screening  and molecular  genetic  markers    associated  with  salt  tolerance  in  maize”. African  Journal of Biotechnology. Vol. 12(27), (2013) Pp. 4251-4255.
[4] Departemen  Pertanian.  “Prospek  dan  arah  pengembangan  agribisnis jagung”.  Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Pertanian.  Departemen Pertanian (2005).
[5] Didy  Sopandie.  “Adaptasi  tanaman  terhadap  cekaman  hara  mineral”. Bogor : IPB (1998).
[6] T. J. Flowers. “Improving  crop  salt  tolerance”.  J.  Exp.  Bot.  Vol. 396 (55) (2004) 307-319.
[7] Rujito  Agus  Suwignyo,  Renih  Hayati  dan  Mardiyanto.  “Pengaruh perlakuan  salinitas  awal  rendah  terhadap  pertumbuhan  dan  toleransi salinitas  tanaman  jagung”.  Sumatera  Selatan  :  Universitas  Sriwijaya (2009).
[8] M. Ashraf and M. R. Foolad. “Improving plant abiotic-stress resistance by  exogenous  application  of  osmoprotectants  glycine  betaine  and proline”. Environ. Exp. Bot. 59: (2007) 206–216.
[9] Z. Arifin, Istiqomah N., dan Fatmawati. Pengembangan jagung varietas lokal  Sumenep.  Prosiding  Pekan  Serealia  Nasional.  Jawa  Timur:  Balai Pengkajian Teknologi Pertanian Jawa Timur (2010).
[10] Kaswan  Badami  dan  Achmad  Amzeri.  “Identifikasi  varian  somaklonal toleran  kekeringan  pada  populasi    jagung  hasil  seleksi  in  vitro  dengan PEG”. Agrovigo. vol. 4 no.1 (2011).
[11] H.  G.  Rosas,  Garcia  S.  S.,  Reyes  G.  R.,  Ontiveros  J.  L.  R.,  and Villasenor  A.  C.  R.  “Preliminary    results    on    in    vitro    selection    for tolerance    to  chloride    excess    in    avacado.    Revista    Chapingo    Serie Horticulture. Vol. 9(1): (2003) 39-43.
[12] N.  A.  Subekti,  Syafruddin.,  Efendi,  R.  dan  Sunarti,  S.  “Morfologi tanaman  dan  fase  pertumbuhan  jagung”.  Teknik  Produksi  dan Pengembangan. Maros: Balai Penelitian Tanaman Serealia (2008).
[13] Nwe  N.  Htwe,  Mazlah  Mahmood,  Ho  Chal  Ling,  Faridah  Qamarus  Z., Abdullah    M    Z.    “Responses    of    some    selected    Malaysian    rice genotypes  to  callus  induction  under  in  vitro  salt  tress”.  African Journal of Biotechnology. Vol. 10 (3), (2011) pp. 350-362.
[14] U.  Santoso  &  F.  Nursandi.  “Kultur  jaringan  tanaman”.  Malang: Pusbitan UMM (2003).
[15] Lili  Sugiyarto  dan  Paramita  C.  K.  “Induksi  kalus  daun  binahong (Anredera  codifolia  L.)  dalam  upaya  pengembangan  tanaman  obat tradisional”. J. Sains Dasar. 3 (1) : (2014) 56 – 60.
[16] Fathin F. dan Triono B. S. “Seleksi In Vitro Tanaman Jagung (Zea mays L.) Varietas Talango dan Manding terhadap Cekaman Salinitas”. Jurnal Sains dan Seni ITS. Vol. 4 (1) (2015).
[17] A.  El-Sayed  El-Meleigy,  Mahdia  F.  Gabr,  Fouad  H.  Mohamed  And Mona  A.  Ismail. “Responses to NaCl salinity of tomato cultivated and breeding lines differing in salt tolerance in callus cultures”. International Journal of Agriculture & Biology. Vol. 6, No. 1 ( 2004) 1560–8530.
[18] O.  Turkmen,  Sensoy  S,  Erdal  I,  Kabay  T.  “Effect  of  calcium  on  the emergence  and  seedling  of  tomatoes  grown  in  salty  growing  Media conditions”.J. Agric. Sci. 12: (2002) 53-57.
[19] Khoirul  Bariyyah.  “Pengaruh  NaCl  terhadap  kalus  tebu  varietas Bululawang”. Jur. Agroekotek. volume 7 (1) : (2015) 1 – 5.
[20] W. Al-Shorafa, A. Mahadeen and K. Al-Absi. “Evaluation for salt stress tolerance in two strawberry cultivars”. American Journal of Agricultural and Biological Sciences.Volume 9 (3): (2014) 334-341.
[21] Elham Ramezani, Mehdi Ghajar Sepanlou and Hasan Ali Naghdi Badi. “The  effect  of  salinity  on  the  growth,  morphology  and  physiology  of Echium  amoenum  Fisch.  &  Mey.”.  African  Journal  of  Biotechnology. Vol. 10(44), (2011) pp. 8765-8773.
[22] S.  Hutami.“Ulasan  masalah  pencokelatan  pada  kultur  jaringan”.Jurnal Agrobigen. Vol 4. No.2 (2008) 83-88.
[23] Fittriya  Nur  Laila  dan  Evika  Sandi  Savitri.  “Produksi  metabolit sekunder  steviosida  pada  kultur  kalus  stevia  (Stevia  rebaudiana  Bert. M.)    dengan  penambahan  ZPT  2,4-D  dan  PEG  (Polyethylene  Glykol) 6000  pada  media  MS  (Murashige  &  Skoog)”.  El-Hayah.  Vol.  4,  No.2 (2014) 57-65.
[24] Summart J., Thanonkeo P., Panichajakul S., Prathepha P. and McManus M.  T.  “Effect  of  salt  stress  on  growth,  inorganic  ion  and  proline accumulation  in  Thai  aromatic  rice,  Khao  Dawk  Mali  105,  callus
culture”. African Journal of Biotechnology. Vol. 9 (2) (2010) pp. 145- 152.
[25] I.  W.  A.  Ubudiyah  “Respon  kalus  beberapa varietas padi (Oryza sativa L.) pada kondisi cekaman salinitas (NaCl) secara in vitro”. Tugas Akhir. Surabaya: Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (2013).
[26] R.  Yunita,  N.  Khumaida,  D.  Sopandie  and  I.  Mariska.  “Growth  and regeneration    of  rice  (Oryza  sativa  L.)  callus  in  salt  medium”.
Bioscience Research. Volume 11(1): (2014) 04-09.
[27] S. Babu. “Effect of salt stress in he selection of salt tolerant hybrids in rice  under  in  vitro  and  in  vivo  condition”.  Asian  Journal  of  Plant Sciences. 6(1): (2007) 137-142.
[28] R.  Yuniati.  “Penapisan  galur  kedelai  Glycine  max  (L.)  Merrill  toleran terhadap  NaCl  untuk  penanaman  di  lahan  marginal”.  Jurnal  Makara Sains 8 (1): (2004) 21-24.
[29] Hirschi  D.  “The  calcium  conundrum,  both  versatile  nutrient  and specific signal”. Plant Physiol. Vol. 136: (2004) 2438-2442.
[30] M. Ashraf and Orooj A. “Salt stress effects on growth, ion accumulation and  seed  oil  concentration  in  an  arid  zone  traditional  medicinal  plant ajwain (Trachyspermum ammi [L.] Sprague)”. J. Arid Environ. Vol. 64: (2006) 209-220.
[31] Chaves  M.  M.,  Maroco  J.  P.,  Pereira  J.  S.  “Understanding  plant response to drought: from genes to the whole plant”. Funct. Plant Biol. Vol. 30: (2003) 239-264.
[32] Quesada V., Ponce M. R., Micol J. L. “Genetic analysis of salt-tolerant mutant in Arabidopsis thaliana”. Genetic. Vol. 154 : (2003) 421-436.