https://doi.org/10.22487/kovalen.2022.v8.i2.15970
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Batang Tumbuhan Johar ( Senna siamea Lam) pada Berbagai Polaritas Pelarut
[Antibacterial Activity of Johar ( Senna siamea Lam) Stem Bark Extract on Various Solvent Polarities]
Djumidar, Abd. Rahman Razak  , Ahmad Ridhay, Ni Ketut Sumarni, Syamsuddin, Jusman, Nurhaeni, Erwin Abdul Rahim
Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Jl. Soekarno-Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako, Palu.
Abstract . Johar plant is a type of plant from the Fabaceae family which is widely used in traditional medicine such as malaria, itching and diabetes medicine. This study aims to determine the antibacterial activity of Johar stem bark extract with different levels of solvent polarity on the growth of Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria and to determine the active compound class by TLC-Bioautography. The extraction of active compounds used a multilevel maceration method starting with n -hexane (non polar), followed by ethyl acetate (semi-polar) and ethanol (polar) solvents. Antibacterial activity testing was carried out by diffusion well method with a concentration variant of 25% and 50%. The results showed that n-hexane, ethyl acetate, and ethanol extract had antibacterial activity against the two test bacteria. Ethyl acetate and ethanol extract from Johar stem bark at a concentration of 50% were  classified  as  very  strong  antibacterials  with  inhibition  zone  diameters  against S.  aureus, which  were 22.02±0.84 mm and 20.16±0.23 mm, respectively. The results of the TLC-Bioautography test showed that the three test extracts had strong antibacterial activity against S. aureus and E. coli . In the n-hexane extract with n -hexane: ethyl acetate (9:1) eluent using Lieberman-Burchard spray reagent, it was suspected that triterpenoid compounds were present. In ethyl acetate extract with n -hexane: ethyl acetate (6:4) eluent and ethanol extract with chloroform: methanol (8:2) eluent using FeCl 3 1% spray reagent, it was suspected that the tannin compound was present in both extracts.
Keywords : Senna siamea Lam., inhibition, antibacterial, TLC-bioautography.
Abstrak. Tumbuhan  Johar  termasuk  jenis  tanaman  dari  family fabaceae yang  banyak  digunakan  dalam pengobatan tradisional seperti obat malaria, gatal dan kencing manis. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak kulit batang Johar dengan perbedaan tingkat kepolaran pelarut terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli serta  menentukan  golongan  senyawa  aktif  secara  KLT- Bioautografi.  Ekstraksi  senyawa  aktif  menggunakan  metode  maserasi  bertingkat  yang  dimulai  dari  pelarut n - heksan (non polar), diikuti dengan pelarut etil asetat (semi polar) dan pelarut etanol (polar). Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode sumur difusi dengan varian konsentrasi 25% dan 50%. Hasil penelitian yang telah dilakukan menunjukkan bahwa ekstrak n -heksan, ekstrak etil asetat dan ekstrak etanol mempunyai aktivitas antibakteri terhadap kedua bakteri uji. Ekstrak etil asetat dan etanol dari kulit batang Johar pada konsentrasi 50% tergolong antibakteri yang sangat kuat dengan  diameter zona hambat terhadap bakteri S. aureus yaitu masing- masing 22,02±0,84 mm dan 20,16±0,23 mm. Hasil pengujian KLT-Bioautografi didapatkan bahwa ketiga ekstrak uji  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  kuat  terhadap  kedua  bakteri  uji.  Pada  ekstrak n -heksan  dengan  eluen n - heksan:etil  asetat  (9:1)  menggunakan  pereaksi  semprot  Lieberman-Burchard  diduga  adanya  senyawa  terpenoid. Pada ekstrak etil asetat dengan eluen n -heksan:etil asetat (6:4) dan ekstrak etanol dengan eluen kloroform: metanol (8:2) menggunakan pereaksi semprot FeCl 3 1% diduga adanya senyawa tanin pada kedua ekstrak tersebut.
Kata kunci : Johar (Senna siamea Lam.), daya hambat, antibakteri, KLT-bioautografi
Diterima:  21 Juli 2022, Disetujui: 18 Agustus 2022
Sitasi:   Djumidar., Razak, AR., Ridhay, A., Sumarni, NK., Syamsuddin., Jusman., Nurhaeni., dan Rahim, EA. (2022). Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Batang  Tumbuhan Johar  ( Senna siamea Lam)  pada Berbagai Polaritas  Pelarut. KOVALEN: Jurnal  Riset  Kimia , 8(2): 184-195.
 Corresponding author
E-mail: arrazak71@gmail.com
https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/kovalen

## Djumidar et al.

## LATAR BELAKANG
Penyakit  infeksi  termasuk  penyakit  yang dapat  diakibatkan  oleh  mikroba  patogen. Staphylococcus aureus termasuk bakteri gram positif  yang  umumnya  meyebabkan  bisul, peradangan kulit dan selaput lendir, sedangkan Escherichia  coli termasuk  jenis  bakteri  gram negatif yang umumnya terdapat dalam saluran percernaan  dan  dapat  menyebabkan  disentri serta diare (Fiari, 2016).
Infeksi dapat diobati menggunakan antibiotik,  namun  dapat  terjadi  resistensi antibiotik. Perihal ini menjadi salah satu aspek yang mendesak pemakaian bermacam tumbuhan  dalam  penyembuhan  penyakit infeksi  (Yuliana,  2011).  Tumbuhan  johar ( Senna  siamea Lam)  termasuk  salah  satu tumbuhan  yang  mempunyai  manfaat  dalam pengobatan infeksi.
Tumbuhan  johar  ialah  salah  satu  tipe tumbuhan  dari  family fabaceae .  Johar  diyakini secara  tradisional  dapat  mengobati  penyakit malaria, febris dan diabetes  mellitus .  Johar memiliki  kandungan  senyawa  bioaktif,  seperti alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin (Crisdian &  Siwi  A,  2021).  Kusumaningtyas  dan  Syah (2015)  juga  menyebutkan  bahwa  senyawa pada  tanaman  johar  umumnya  beragam, seperti  flavonoid,  steroid,  terpenoid,  alkaloid, stilbenoid, fenilpropanoid, poliketida dan senyawa  minor  lainnya.  Metabolit  sekunder tersebut berpotensi sebagai senyawa antibakteri  (Kusumaningtyas  &  Syah,  2015). Senyawa  metabolit  sekunder  yang  diekstraksi menggunakan pelarut dengan tingkat kepolaran  yang berbeda dapat mempengaruhi total  senyawa  metabolit  sekunder  yang terekstrak (Hidayah dkk., 2016).
Pengujian antibakteri menggunakan ekstrak  daun  johar  dengan  kepolaran  yang
berbeda  telah  dilakukakan  sebelumnya  dan dilaporkan  bahwa  senyawa  antibakteri  daun johar  tesebut  besifat  polar  dan  semi  polar (Fitriah  dkk.,  2017).  Pada  penelitian  tersebut, ekstrak  etanol  memilki  aktivitas  tertinggi terhadap  bakteri S.  aureus , E.coli, Microccus luteus, Shigella  dysentriae dengan  zona hambat masing-masing 14,9 mm, 12,9 mm,  12 mm, dan  7,2 mm. Ekstrak metanol kayu batang Johar yang mengandung senyawa fenolik juga mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri patogen B.  substilis dan E.  coli dengan  nilai KHM dan KBM terhadap B. substilis 125 µg/mL dan terhadap E. coli 500 µg/mL yang termasuk dalam  golongan  aktivitas  antibakteri  sedang (Kusumaningtyas & Syah, 2015). Berdasarkan penelitian  sebelumnya  telah  dilakukan  uji aktivitas  antibakteri  pada  beberapa  bagian tumbuhan Johar, tetapi pada kulit batang Johar belum  terdapat  kajian  lebih  lanjut  mengenai potensinya sebagai sumber senyawa antibakteri.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Kulit  batang  Johar  ( Senna  siamea Lam) diambil di daerah Tondo, Kecamatan
Mantikulore,  Palu,  Sulawesi  Tengah.  Bahan lain  yang  digunakan  seperti  biakan  bakteri S.
aureus dan E.  coli, air  destilata,  Nutrien  Agar (NA), n -heksan,  etil  asetat,  etanol,  kloroform, metanol, lactose broth (LB), handskun , DMSO , tisu,  spritus,  plat  KLT,  pereaksi  Dragendorff, pereaksi  Lieberman-Burchard,  FeCl 3 1%,  dan AlCl 3 .
Alat yang digunakan ialah neraca analitik, rotary  vacuum  evaporator ,  jangka  sorong digital, autoklaf ,  oven,  inkubator,  jarum  ose, shaker, Laminar  Air  Flow ,  mikropipet,  lampu UV 254 nm dan UV 366 nm, serta plat KLT.

## Djumidar et al.

## Prosedur Penelitian

## Identifikasi tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di Sumber Daya  Hayati  Sulawesi  ( Herbarium  Celebes ) Universitas Tadulako, Palu, untuk memastikan tumbuhan  yang  akan  digunakan  adalah tumbuhan Johar ( Senna siamea Lam).

## Preparasi sampel
Sampel berupa kulit batang johar dikumpulkan  kemudian  dibersihkan  dari  sisa kotoran,  lalu  dipotong  kecil-kecil.  Setelah  itu, dikeringkan di bawah cahaya matahari kemudian  dihaluskan  dengan  blender  dan diayak  menggunakan  ayakan  60  mesh  untuk memperoleh serbuk kulit batang johar.

## Ekstraksi sampel
Metode  yang  digunakan  yaitu  metode maserasi  yang  terdiri  dari  3  pelarut  yaitu n - heksan,  etil  asetat  dan  etanol.  Ekstraksi  awal digunakan  3  L n -heksan  untuk  mengekstrak serbuk  1000  g  kulit  batang  johar.  Campuran disimpan  selama  3  ×  24  jam  dan  diaduk  ekali setiap hari selama proses maserasi.
Selanjutnya hasil maserasi disaring dan residu yang  dihasilkan  dilakukan  remaserasi  untuk memaksimalkan hasil ekstraksi. Filtrat dipisahkan  dari  pelarutnya  menggunakan rotary  vacuum  evaporator sehingga  diperoleh ekstrak  kental n -heksan  kulit  batang  johar. Residu  dikering-anginkan,  kemudian  diekstrak kembali  dengan  pelarut  etil  asetat  dan  pelarut etanol (Fitriah, dkk., 2017).
Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi
Peralatan  gelas  yang  disterilkan  terlebih dahulu  dalam  oven  dengan  temperatur  175 o C dengan  waktu  ±90-120  menit  (pemanasan kering).  Sedangkan  untuk  media  atau  bahan kultur  dengan  cara  uap  air  panas  bertekanan
tinggi menggunakan autoklaf dengan tekanan 2 atm,  suhu  121 o C  selama  ±  1  jam.  Setelah disterilkan, alat tersebut bisa langsung digunakan  atau  disimpan  dengan  kondisi tertutup. Metode yang digunakan yaitu metode sumur  difusi.  Sebanyak  25  mL  media  NA dicampur  dengan  suspensi  bakteri  0,2  mL  ( S. aureus dan E.  coli ),  dihomogenkan  kemudian dituangkan  ke  dalam  cawan  petri  yang  steril, biarkan sampai padat. Selanjutnya, pembuatan sumuran  dengan  alat  pelubang  diameter  ±9 mm, setiap cawan berisi 3 sumuran. Ekstrak 50 µL  diisi  pada  tiap  sumur  dan  kontrol  negatif menggunakan  DMSO,  lalu  diinkubasi  pada suhu  37 o C  selama  24  jam,  kemudian  zona hambat  yang  terbentuk  diamati  dan  diukur diameternya  (Modifikasi  metode  Fitriah  dkk., 2017 dan Lestari dkk., 2017).

## Pemisahan  senyawa  secara  kromatografi lapis tipis (Djide, 2006)
Ekstrak  sampel  yang  menunjukkan  zona hambat akan dipisahkan secara KLT menggunakan plat KLT teraktivasi dengan cara dipanaskan  dalam  oven  pada  suhu  110°C dengan  waktu  ±30  menit  sebelum  digunakan. Sampel ditotolkan pada plat yang berukuran 6 x 1 cm dan dielusi dalam ruang jenuh dengan eluat  dari  atas  plat  hingga  batas  0,5  cm. Keluarkan  plat  dari  chamber  dan  angin- anginkan sampai eluat menguap. Selanjutnya, pengamatan dilakukan di bawah sinar UV 254 nm dan UV 366 nm, plat yang telah dielusi disemprot dengan  penampak  bercak.  Kemudian  hitung nilai Rf dan  menentukan  golongan  senyawa (Djide, 2006).

## Uji KLT-Bioautografi
Metode  ini  didasari  oleh  difusi  dari senyawa  yang  telah  dipisahkan  secara kromatografi lapis tipis. Media NA steril 20 mL dan  suspensi  bakteri  0,2  mL  dicampur

## Djumidar et al.
kemudian  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri yang  telah  steril,  biarkan  hingga  padat. Selanjutnya,  plat  KLT  yang  telah  terelusi diletakkan di atas permukaan media agar. Plat tersebut  akan  diangkat  dan  dipindahkan setelah  ±30  menit.  Lalu  media  yang  telah ditempel dengan plat KLT tadi selanjutnya akan diinkubasi  pada  suhu  37 o C  hingga  24  jam, mengamati zona hambat yang terbentuk (Djide, 2006).

## Identifikasi senyawa
Reagen FeCl 3 1%  untuk deteksi senyawa tanin,  dengan  uji  positif  memberikan  warna hitam.  Pereaksi  AlCl 3 untuk  deteksi  senyawa flavonoid  dengan  uji  positif  munculnya  warna kuning.  Pereaksi  Dragendorff  untuk  deteksi senyawa alkaloid, dengan uji positif munculnya warna coklat atau jingga.  Pereaksi Lieberman- Burchrad  untuk  deteksi  senyawa  Steroid  dan triterpenoid,  dengan  uji  positif  munculnya warna  hijau-biru  untuk  steroid  dan  muculnya warna  merah,  coklat  atau  ungu  untuk triterpenoid (Harborne, 1987).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstrak Tumbuhan Johar
Hasil  identifikasi  di  Sumber  Daya  Hayati Sulawesi  ( Herbarium  Celebes )  Universitas Tadulako menunjukkan bahwa tumbuhan yang digunakan  pada  penelitian  ini  ialah  benar tumbuhan johar ( Senna siamea Lam).
Ekstraksi  kulit  batang  johar  menggunakan metode  maserasi  sebanyak  tiga  kali  serta dievaporasi untuk mendapatkan ekstrak kentalnya.
Sampel kulit batang johar yang dikeringkan  bertujuan  agar  reaksi  enzimatik terhenti,  sehingga  tidak  terjadi  penguraian maupun  perubahan  kandungan  kimia  dan sampel  dibuat  dalam  bentuk  serbuk  untuk
memperluas  permukaan  sampel  sehingga memudahkan kontak dengan pelarutnya.
Proses ekstraksi dengan metode maserasi dengan  cara  mengekstrasi  kulit  batang  johar menggunakan pelarut n -heksan, etil asetat dan etanol. Dipilihnya metode ini karena pengerjaanya yang lebih mudah serat alat yang digunakan  juga  cukup  sederhana.  Ekstrak kental n -heksan,  etil  asetat  dan  etanol  yang dihasilkan  masing-masing  sebanyak  11,552; 67,124  dan  80,583  gram  dengan  rendemen masing-masing  1,16%;  6,71%  dan  8,06% (Tabel 1).
Tabel 1. Rendemen ekstrak kulit batang johar
Sampel Pelarut Berat Ekstrak Kental (g) Rendemen (%) Kulit Batang Johar (1000 gram) n -heksan 11,552 1,16 Etil Asetat 67,124 6,71 Etanol 80,583 8,06
Hasil  dari  rendemen  yang  diperoleh menunjukkan  bahwa  kulit  batang  johar  lebih banyak  terdapat  senyawa  yang  bersifat  polar karena  hasil  rendemen  yang  dihasilkan  oleh etanol cukup besar. Pelarut yang sifatnya polar sangat mampu mengekstrak senyawa organik, seperti  air  dan  etanol  mampu  mengekstrak senyawa  polifenol,  misalnya  tanin  (Iriany  dkk., 2017).
Tiwari et  al .  (2011)  menjelaskan  bahwa salah  satu  keefektifan  etanol  ialah  dapat mendegradasi dinding sel sehingga menyebabkan  polifenol  yang  tersari  sangat melimpah.  Selama  ekstraksi,  pelarut  akan masuk  ke  dalam  sel  tumbuhan  dan  akan menarik senyawa yang sesuai dengan polaritasnya. Pada proses maserasi, perendaman  sampel  tumbuhan  terjadi  karena
Djumidar et al.
kontak yang lama dengan sampel dan pelarut. Pelarut organik didistribusikan secara
berkesinambungan dalam sel tumbuhan, yang
menciptakan adanya perbedaan antara tekanan  di  dalam  maupun  di  luar  sel,  yang menyebabkan pemecahan dinding sel, membran  sel  dan  metabolit  sekunder  yang terdapat dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut  organik  serta  perendaman  yang
dilakukan  dengan  lama  membuat  ekstraksi senyawa  berlangsung  sempurna  (Latifah, 2015).

## Aktivitas Antibakteri
Hasil  pengukuran  zona  hambat  bakteri pada masing-masing ekstrak kulit batang johar terhadap  bakteri S.  aureus dan E.  coli terlihat pada Tabel 2 dan Gambar 1.
Tabel 2. Aktivitas antibakteri ekstrak kulit batang johar terhadap bakteri S. aureus dan E. coli
Gambar 1. Diameter  zona hambat  bakteri S.  aureus dan E. coli menggunakan ekstrak kulit batang johar
Tabel  2  dan  Gambar  1  meperlihatkan bahwa ekstrak n -heksan, etil asetat dan etanol mempunyai  aktivitas  antibakteri  pada  kedua bakteri  uji  yakni S.  aureus yang  mewakili bakteri gram positif dan E. coli mewakili bakteri gram  negatif.  Diameter  zona  hambat  bakteri
yang  terbentuk  dari  ekstrak n -heksan  pada konsentrasi 25% dan 50% terhadap bakteri S. aureus yaitu  masing-masing  11,11  mm  dan 13,29 mm, sedangkan terhadap bakteri E. coli masing-masing 10,26 mm dan 12,16 mm.
0 5 10 15 20 25 n-Heksan 25% n-Heksan 50% Etil Asetat 25% Etil Asetat 50% Etanol 25% Etanol 50% Zo n a H am b at (m m ) Ekstrak Uji S.aureus E.coli
Perlakuan Konsentrasi (%) Loading Dose (mg) Rata-rata Diameter Zona Hambat (mm±SD) S. aureus E. coli Ekstrak n -Heksan 25 12,5 11,11±0,16 10,62±0,09 50 25 13,29±0,27 12,16±0,06 Ekstrak Etil Asetat 25 12,5 18,25±0,15 16,20±0,20 50 25 22,02±0,84 18,53±0,43 Ekstrak Etanol 25 12,5 17,08±0,17 13,40±0,16 50 25 20,16±0,23 15,10±0,17 Kontrol negatif (DMSO) 0 0 0 0

## Djumidar et al.
Diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan pada ekstrak etil asetat pada konsentrasi 25% dan  50%  tehadap  bakteri S.  aureus ]masing- masing  18,25  mm  dan  22,02  mm,  sedangkan terhadap  bakteri E.  coli masing-masing  16,20 mm  dan  18,53  mm.  Ekstrak  etanol  pada konsentrasi 25% dan 50% menghasilkan zona hambat  terhadap  bakteri S.  aureus masing- masing  17,08  mm  dan  20,16  mm,  sedangkan terhadap  bakteri E.  coli masing-masing  13,40 mm  dan  15,10  mm.  Hasil  yang  diperoleh terhadap  ketiga  ekstrak  tersebut  pada  kedua bakteri  uji  menunjukkan  bahwa  dengan konsentrasi  yang  besar  maka  zona  hambat yang  dihasilkan  besar  pula.  Menurut  Fiari (2016),  menyatakan  besarnya  diameter  zona hambat  yang  dihasilkan  berbanding  lurus dengan  konsentrasi  bahan  yang  diberikan (Fiari,  2016).  Faktor  yang  menyebabkan besarnya  daya  hambat  diantaranya  yakni tingkatan  sensitifitas  bakteri  uji,  kecepatan berdifusi  dan  konsentrasi  dari  senyawa antibakterinya (Prescott, 2005).
Gambar  1  menujukkan  bahwa  bakteri gram  positif S.  aureus mempunyai  zona hambat yang lebih besar dibandingkan bakteri gram negatif E. coli terhadap ketiga ekstrak uji.
Bakteri  gram  negatif  memiliki  struktur  dinding sel yang tersusun dari lipoprotein, peptidoglikan dan  lipopolisakarida  atau  lebih  kompleks daripada  gram  positif  sehingga  lebih  sulit dilewati  oleh  senyawa  antibakteri  (Pelczar, 1986 dalam Lestari dkk., 2016).
Pelarut  DMSO  sebagai  kontrol  negatif, untuk melarutkan ketiga jenis ekstrak, hasilnya tidak  adanya  zona  hambat  yang  dihasilkan pada  kedua  bakteri  uji. DMSO  termasuk  jenis senyawa  organosulfur  yang  dapat  larut  dalam senyawa  polar,  non  polar,  dan  bermacam pelarut  organik  (Pratiwi,  2008).  Hasil  yang
diperoleh  pada  DMSO  menjadi  bukti  bahwa aktivitas  antibakteri  tidak  dipengaruhi  oleh pelarutnya, melainkan disebabkan oleh aktivitas  senyawa  aktif  ekstrak  kulit  batang johar). Menurut Davis dan Stout (1971),
kemampuan  antibakteri  suatu  ekstrak  dapat dilihat  dari  seberapa  kuatnya  daya  hambat yang  diperoleh.  Terdapat  empat  kategori kekuatan  antibakteri  diantaranya  kategori sangat kuat, kuat sedang dan lemah. Kategori sangat kuat jika zona hambat yang dihasilkan > 20  mm.  Kategori  kuat  jika  zona  hambatnya sekitar  10 mm – 20 mm. Kategori sedang jika zona hambat yang diperoleh sekitar 5 mm- 10 mm dan kategori lemah jika  zona hmbat  yang diperoleh  <  5  mm.  Berdasarkan  kategori kekuatan  antibakteri  tersebut,  maka  dapat dilihat  bahwa  ekstrak  etil  asetat  pada konsentrasi  50%  terhadap  bakteri S.  aureus tergolong  kategori  sangat  kuat,  sedangkan pada ekstrak etil asetat dengan konsentrasi 25
%  terhadap  bakteri E.  coli tergolong  kategori kuat.  Begitu  pun,  pada  ekstrak  etanol  dan ekstrak n -heksan tergolong kategori kuat untuk kedua bakteri uji.
Fitriah  dkk.  (2017)  melaporkan  bahwa ekstrak daun johar memiliki aktivitas antibakteri kuat  pada  ekstrak  etil  asetat  dan  etanol terhadap S.  aureus dan E.  coli, sedangkan Kusumaningtyas dan Syah (2015) melaporkan bahwa  aktivitas  antibakteri  ekstrak  methanol kayu  batang  johar  tergolong  sedang.  Crisdian dan  Siwi  A  (2021)  juga  mendapatkan  bahwa pada  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  johar yang  tinggi  akan  menghasilkan  aktivitas antibakter yang tinggi pula.
Hasil  uji  statistik  menunjukkan  nilai  zona hambat terhadap kedua bakteri uji dari ekstrak kulit  batang  johar  memperoleh  nilai  signifikan

## Djumidar et al.
0,000  <  α  (0,05),  maka  diteruskan  dengan  uji Duncan dengan hasil adanya perbedaan nyata terhadap  nilai  zona  hambatan  yang  diperoleh dari setiap perlakuan ekstrak kulit batang johar.

## Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
KLT  yakni  metode  pemisahan  senyawa fitokimia yang didasari atas perbedaan
kecepatan dari komponen campuran fase diam dan  fase  gerak,  dimana  fase  diam  berupa ekstrak yang ditotolkan pada lempeng KLT dan fase  geraknya  berupa  eluen  yang  diisi  dalam bejana  tertutup.  Pengerjaan  dari  metodenya mudah serta biayanya sedikit jika dibandingkan dengan  kromatografi  kolom.  Hasil  dari  uji  KLT terlihat pada Tabel 3, 4, dan 5.
Tabel 3 . Hasil uji KLT ekstrak n -heksan Eluen No. Noda Nilai RF (cm) Warna Noda Golongan Senyawa UV 254 nm UV 366 nm FeCl 3 1% AlCl 3 Drage ndorff Lieberman- Burchard n - heksan : Etil Asetat (9:1) 1 0,08 Hitam Merah Coklat Kuning Kecoklatan Kuning kecoklatan Hijau Merah kecoklatan Triterpenoid 2 0,13 Hitam Merah Coklat Hijau tua Kuning kecoklatan Hijau - - 3 0,21 Hitam Merah Hijau tua Kuning kecoklatan Hijau - - 4 0,26 Hitam Ungu - - - - - 5 0,35 - Biru Terang - - - - - 6 0,50 Hitam Merah Muda - - - - - 7 0,66 Hitam - Merah - - Merah kecoklatan Triterpenoid 8 0,70 Hitam Kuning - Jingga Kemerahan - - - 9 0,75 Hitam Ungu - - - - - 10 0,83 Hitam - - Kuning muda - - Flavonoid 11 0,90 Hitam - - - - - - Tabel 4 . Hasil uji KLT ekstrak etil asetat Eluen No. Noda Nilai RF (cm) Warna Noda Golongan Senyawa UV 254 nm UV 366 nm FeCl 3 1% AlCl 3 Dragen dorff Lieberman -Burchard n - heksan : Etil Asetat (6:4) 1 0,12 Hitam Putih Hitam - - - Tanin 2 0,33 Hitam - - - Coklat - Alkaloid 3 0,45 Hitam - Hitam - - - Tanin 4 0,57 Hitam Biru - - - - - 5 0,68 - - - - - - - 6 0,75 Hitam - - Kuning muda - - Flavonoid 7 0,80 - - - Hijau - Kuning - 8 0,85 - Merah - Jingga kemerahan Hijau Hijau Steroid 9 0,90 Hitam Merah Coklat - - - - -
Djumidar et al.
Tabel 5 . Hasil uji KLT ekstrak etanol Eluen No. Noda Nilai RF (cm) Warna Noda Golongan Senyawa UV 254 nm UV 366 nm FeCl 3 1% AlCl 3 Dragen dorff Lieberman- Burchard Kloroform : Metanol (8:2) 1 0,13 Biru Biru - - - Hitam - 2 0,32 Biru Biru - - Orange - Alkaloid 3 0,58 Hitam Biru - - - - - 4 0,73 - - Abu-abu 5 0,76 Biru Biru - - - - - 6 0,88 - - - Orange kecoklatan - - - 7 0,92 Hitam Merah biru Hitam - - - Tanin Bahan alam biasanya mengandung
senyawa yang tidak berwarna, sehingga untuk mengubah senyawa tersebut menjadi berwarna, lempeng yamg telah dielusi disemprotkan  dengan  larutan  pereaksi  warna. Hasil KLT dari ekstrak n -heksan, etil asetat dan etanol  kulit  batang  johar  yang  telah  dielusi disemprot  dengan  pereaksi  FeCl 3 1%,  AlCl 3 , Dragendroff dan Lieberman-Burchard.
Hasil identifikasi senyawa pada ekstrak n - heksan dengan perbandingan eluen n -heksan- etil  asetat  (9:1)  diperoleh  senyawa  berupa triterpenoid  (Rf 1 =  0,08);  (Rf 7 =  0,66)  yang ditandai  dengan  munculnya  warna  merah kecoklatan  saat  disemprot  dengan  pereaksi Lieberman-Burchard dan flavonoid (Rf 10 =0,83) ditandai dengan munculnya warna kuning saat disemprot  dengan  perekasi  AlCl 3 .  Identifikasi senyawa  pada  ekstrak  etil  asetat  dengan perbandingan  eluen n -heksan-etil  asetat  (6:4) diperoleh senyawa tanin (Rf 1 =0,12); (Rf 3 =0,45) dengan  adanya  noda  bewarna  hitam  yang menandakan senyawa tanin saat disemprotkan dengan  FeCl 3 1%,  alkaloid  (Rf 2 =  0,33) munculnya  warna  coklat  saat  disemprot dengan  pereaksi  Dragendorff  dan  flavonoid (Rf 6 =  0,75)  ditandai  dengan  muncul  warna kuning  saat  disemprot  dengan  perekasi  AlCl 3 , steroid  (Rf 8 =  0,85)  adanya  noda  warna  hijau
dengan reagen Lieberman-Burchard, sedangkan  identifikasi  senyawa  pada  ekstrak etanol diperoleh senyawa alkaloid (Rf 2 = 0,32) timbulnya warna orange saat disemprot dengan Dragendorff  dan  tanin  (Rf 7 =  0,92)  adanya warna hitam dengan perekasi FeCl 3 1%. Hal ini sesuai  dengan  penelitian  Mohammed et  al.
(2013)  yang  mendapatkan  bahwa  hasil  uji kualitatif ekstrak kulit batang Johar mengandung senyawa flavonoid, tannin, polifenol, antraquinon, saponin, dan glikosida.
Gambar 2. Reaksi  triterpenoid  dan  reagen Lieberman-Burchard (Siadi, 2012).
Uji  positif  reagen  Liebermann-Burchard dengan  senyawa  terpenoid  akan  memberikan warna  merah,  ungu,  atau  coklat.  Anhidrida asetat  akan  menyebabkan  asetilasi  gugus hidrogen,  setelah  itu,  gugus  hidrogen  dan elektronnya dilepaskan, hingga beresonansi dan
Djumidar et al.
bertindak  sebagai  elektrofil  atau  karbokation. Penyerangan terhadap karbokation akan mengakibatkan  adisi  elektrofil  dan  lepasnya hidrogen  (Gambar  2).  Gugus  hidrogen  dan elektron  kemudian  dilepaskan,  menyebabkan senyawa  mengalami  pemanjangan  konjugasi, memberikan  warna  merah,  ungu  atau  coklat. (Siadi, 2012).
Uji positif steroid dengan reagen Lieberman –Burchard memberikan warna hijau- biru.  Hadirnya  molekul  air  hadir  dalam  larutan menyebabkan anhidrida asetat diubah menjadi asam  asetat.  Senyawa  steroid  bereaksi  dari warna  biru-hijau  melalui  dehidrasi  dengan penambahan  asam  kuat  membentuk  garam (Muklisoh,  2010).  Reaksi  oksidasi  gugus steroid  lewat  pembentukan  ikatan  rangkap terkonjugasi  menjadi  penyebab  berubahnya warna (Sriwahyuni, 2010).
Uji senyawa flavonoid dikatakan positif jika adanya perubahan warna merah, kuning, atau orange terhadap lapisan amil alkohol (Harbone, 1987).  Kegunaan  pereaksi  AlCl 3 ialah  agar terbentuk kompleks antara gugus hidroksil dan keton  yang  berdekatan  atau  dengan  gugus hidroksil yang saling berdekatan. Terbentuknya senyawa  yang  kompleks  stabil  berwarna kuning  terjadi  karena  adanya  reaksi  antara AlCl 3 dengan gugus keton pada C4 dan gugus OH pada C3 atau C5 terhadap senyawa flavon atau flavonol (Sari, 2017).
Uji positif alkaloid jika muncul warna coklat muda-kuning (jingga). Endapan yang dimaksud ialah kalium alkaloid. Dalam pembuatan reagen dragendorff, bismut nitrat dilarutkan dalam HCl, sehingga  terbentuk  ion  bismut  (BiO) + ,  karena garam  bismut  mudah  terhidrolisis.  Sehingga tidak  terjadi  reaksi  hidroilisis.  Kesetimbangan bergeser  ke  kiri  dengan  menambahkan  asam ke  larutan  untuk  menjaga  ion  Bi 3+ dalam
larutan. Selain itu, terbentuknya endapan hitam bismuth (III) iodida karena adanya reaksi yang terjadi antara ion Bi 3+ dari bismut nitrat dengan kalium  iodida,  dan  akan  terbentuk  kalium bismuth  tetraiodobismutat  karena  dilarutkan dalam  kalium  iodida  yang  berlebih.  Dalam pengujian  alkaloid,  nitrogen  berfungsi  untuk membuat ikatan kovalen  terkoordinasi dengan ion logam, K + (Svehla, 1985).
Gambar 3. Reaksi tanin dengan FeCl 3
(Sa’adah, 2010)
Uji  positif  tanin  jika  muncul  warna  hitam atau  biru  tinta.  Terbentuknya  warna  tersebut, disebabkan  oleh  tanin  yang  akan  membentuk senyawa  kompleks  dengan  ion  Fe 3+ .  Karena ion  Fe 3+ hadir  sebagai  atom  pusat,  maka terbentuk  kompleks  antara  tanin  dan  FeCl 3 , serta  tanin  mempuyai  atom  O  dengan  PEB (pasangan  elektron  bebas) yang  dapat berkoordinasi dengan atom pusat sebagai ligan (Gambar  3).  Pada  reaksi  tersebut,  ion  Fe 3+ memiliki  6  PEB  yang  berkoordinasi  dengan atom  pusat  melalui  ikatan  dengan  2  atom donor, yaitu 3 tanin dengan atom O pada posisi dihidroksi 4' dan 5'. Pada posisi tersebut atom O mempunyai energi yang sangat rendah saat membentuk senyawa kompleks, oleh karenanya disebut ligan (Sa’adah, 2010).

## Hasil Uji KLT-Bioautografi
Bioautografi
yaitu metode untuk mendeteksi adanya  senyawa  aktif yang mempunyai  aktivitas  antibakteri  pada  suatu
Djumidar et al.
kromatogram hasil KLT. Pengujiannya menggunakan  plat  KLT  yang  diberi  batas  elusi atas dan bawah dengan jarak sepanjang 6 cm. Pemisahan senyawa ekstrak kulit batang Johar menggunakan  berbagai  perbandingan  eluen. Pada ekstrak n -heksan menggunakan perbandingan  eluen n -heksan:  etil  asetat  (9:1).
Pada ekstrak etil asetat menggunakan perbandingan  eluen n -heksan:  etil  asetat  (6:4), sedangkan  pada  ekstrak  etanol  menggunakan perbandingan  eluen  kloroform:  metanol  (8:2). Pemilihan  eluen  berdasarkan  hasil  skrining,
dimana eluen tersebut menghasilkan pemisahan  terbaik.  Metode  yang  digunakan yaitu  bioautografi  kontak,  pemilihan  metode  ini karena  pengerjaannya  cukup  sederhana  dan hasil  yang  diperoleh  juga  terlihat  dengan  baik dan jelas (Djide, 2006).
Nilai Rf ( Retardation  factor )  pada  KLT merupakan  kecepatan  rambat  suatu  senyawa yang diperoleh dari jarak tempuh senyawa dari titik awal dan jarak tempuh fase gerak dari titik awal. Nilai Rf digunakan buat mengidentifikasi senyawa yang akan diuji (Rohman, 2007).
Tabel 6. Hasil uji KLT-Bioautografi
Pada Tabel 6 terlihat hasil KLT-
Bioautografi  ekstrak n -heksan,  ekstrak  etil asetat  dan  ekstrak  etanol  kulit  batang  johar menunjukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap kedua  bakteri  uji  yang  dilokalisir  pada kromatogram  dengan  adanya  zona  jernih dipermukaan  media  agar.  Pada  ekstrak n - heksan,  ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak  etanol menunjukkan adanya zona bening dengan nilai Rf berurutan yakni 0,08 cm; 0,12 cm; 0,92 cm.
Untuk  mengetahui  golongan  senyawa  yang mempunyai aktivitas  tersebut, maka dilakukan identifikasi senyawa.
Hasil identifikasi senyawa pada ekstrak n - heksan,  diduga  terdapat  senyawa  triterpenoid yang ditandai dengan munculnya warna merah kecoklatan.  Senyawa  triterpenoid  berperan sebagai  antibakteri  karena  interaksi  porin dengan membran luar dinding sel bakteri dapat
membentuk  ikatan  polimer  yang  kuat  yang berdampak  pada  jalur  penyerapan  nutrisi bakteri  terhambat  sehingga  mengakibatkan matinya bakteri tersebut (Latief dkk., 2022).
Ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak  etanol diduga  terdapat  senyawa  tanin  yang  ditandai dengan  munculnya  warna  hitam  setelah disemprotkan dengan pereaksi FeCl 3 1% yang menandakan tanin akan membentuk kompleks dengan  ion  Fe 3+ .  Tanin  berfungsi  sebagai antibakteri karena merusak sintesis peptidoglikan  yang mengakibatkan dinding sel bakteri  yang  terbentuk  kurang  sempurna  dan menyebabkan sel bakteri mati (Naim, 2004).

## KESIMPULAN
Ekstrak n -heksan,  etil  asetat  dan  etanol kulit  batang  johar  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus dan E.  coli.
Ekstrak Eluen Nilai Rf (cm) Bakteri Golongan senyawa Kekuatan Antibakteri S. aureus E. coli n -heksan n -heksan : Etil Asetat ( 9 : 1 ) 0,08 + + Triterpenoid Kuat Etil Asetat n -heksan : Etil Asetat ( 6 : 4 ) 0,12 + + Tanin Kuat Etanol Kloroform : Metanol ( 8 : 2 ) 0,92 + + Tanin Kuat

## Djumidar et al.
Ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak  etanol  pada konsentrasi  50%  memiliki  aktivitas  antibakteri yang  sangat  kuat  terhadap S.  aureus , sedangkan  ekstrak n -heksan,  etil  asetat  dan etanol terhadap E.  coli tergolong  antibakeri kuat . Golongan  senyawa  yang  menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus dan E.  coli adalah  golongan  senyawa  triterpenoid  dan tanin.

## DAFTAR PUSTAKA
Crisdian,  HA.,  Siwi  A,  K.  (2021).  Aktivitas Antibakteri  Kombinasi  Ekstrak  Etanol Daun  Johar  ( Cassia  siamea Lamk.)  dan Daun  Alpukat  ( Persea  americana Mill.) terhadap Salmonella typhi . Jurnal Farmasi Indonesia , 18(2): 133-140.
Davis and Stout. (1971). Disc Plate Methode of Microbiological Antibiotic Essay. Journal of Microbiology. 22(4).
Fiari,  HZP.  (2016).  Uji  Aktivitas  Antibakteri Sediaan  Gel  Ekstrak  Etanol  Gulma  Siam
Chromolaena  odorota  L.  King  dan  H.E Robins .  [ Skripsi ].  Universitas  Sumatra Utara, Medan.
Fitriah,  F.,  Mappiratu,  M.,  Prosmawiryanti,  P.
(2017).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Daun  Tanaman  Johar  ( Cassia  siamea
Lamk.)  Dari  Beberapa  Tingkat  Kepolaran Pelarut. Kovalen: Jurnal Riset Kimia, 3(3): 242-251.
Harborne,  J.  B.  (1987). Metode  Fitokimia . Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan.  Penerjemah:  Kosasih  P, Soerdiro Iwang. ITB. Bandung.
Hidayah,  N.,  Hisan,  AK.,  Solikin,  A.,  Irawati., Mustikaningtyas, D. (2016). Uji Efektivitas Ekstrak Sargassum  muticum Sebagai Alternatif  Obat  Bisul  Akibat  Aktivitas Staphylococcus aureus . Journal of Creativity Students, 1(1): 1-9.
Iriany.,  Pandiangan,  F.,  Eka  P,  C.  (2017).
Ekstraksi  Tanin  Dari  Kulit  Kayu  Akasia Dengan Menggunakan Microwave: Pengaruh Daya Microwave, Waktu
Ekstraksi Dan Jenis Pelarut. Jurnal Teknik Kimia USU , 6(3): 52-57.
Kusumaningtyas, V A., dan Syah, Y M. (2015). Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol Kayu Batang  Johar (Cassia  grandis) . Prosiding SNIJA 2015 . LPPM Unjani, Cimahi.
Latief, M., Meriyanti., Fadhilah N., Tarigan, IL., Ayu, AN., Maharani, R., Aulia, E., Siregar, D.  (2022).  Isolasi  Senyawa  Triterpenoid Ekstrak  Etanol  Daun  Jeruju  ( Achantus ilicifolius )  dan  Aktivitas  Antibakterinya Terhadap S.  aureus dan E.  coli . Jurnal Kimia  (Journal  of  Chemistry), 16  (1):  34- 44.
Latifah. (2015). Identifikasi Golongan Senyawa Flavonoid  dan  Uji  Aktivitas  antioksidan Pada Ekstrak Rimpang Kencur Kaemferia galangal  L.  Dengan  Metode  DPPH .
Universitas  Islam  Negeri  Maulana  Malik Ibrahim, Malang.
Lestari,  Y.,  Ardiningsih,  P.,  Nurlina.  (2016). Aktivitas  Antibakteri  Gram  Positif  Dan Negatif  Dari  Ekstrak  Dan  Fraksi  Daun Nipah  ( Nypa  fruticans Wurmb.)  Asal Pesisir  Sungai  Kakap  Kalimantan  Barat. JKK , 5(4): 1-8.
Mohammed, A., Liman, M. L., and Atiku, M. K.
(2013).  Chemical  composition  of  the methanolic leaf and stem bark extracts of Senna  siamea Lam. J.  Pharmacognosy Phytother ., 5(5): 98-100.
Naim,  R.  (2004). Senyawa  Antimikroba  dari Tumbuhan .  Fakultas  Kedokteran  Hewan dan Sekolah Pascasarjana IPB. Bogor.
Pratiwi,  S.T.  (2008). Mikrobiologi  Farmasi . Erlangga. Jakarta.
Prescott,  LM.  2005.  Microbiology.  Mc.  Grow- Hill. New York.
Rohman,  Abdul.  (2007). Kimia  Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta.
Sa’adah,  L.  (2010).  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Tanin  dari  Daun  Belimbing Wuluh (Averrhoa  bilimbi  I.) .  [Skripsi]. Universitas  Islam  Negeri  Maulana  Malik Ibrahim. Malang.
Sari,  K.A.  (2017). Penetapan  Kadar  Fenolik Total  dan  Flavonoid  Total  Ekstrak  Beras Hitam (Oryza sativa L). Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 2(2): 327-335.
Siadi,  K.  (2012).  Ekstrak  Bungkil  Biji  Jarak
Pagar ( Jatropa curcas ) Sebagai Biopeptisida yang Efektif dengan Penambahan Larutan NaCl. Jurnal MIPA, 35(1): 77-83.
Sriwahyuni,  I.  (2010). Uji Fitokimia  Ekstrak Tanaman  Anting-anting (Acalypha  indica Linn) dengan  Variasi  pelarut  dan  Uji Toksisitas  Menggunakan Brine  Shrimp (Artemia  salina  Leach). [ Skripsi ].  UIN Maulana Malik Ibrahim. Malang.
Djumidar et al.
Svehla, G. (1985). Analisis Anorganik Kualitatif Makro  dan  Semimikro .  Edisi  Kelima, Bagian I. Kalman Media Pusaka. Jakarta.
Tiwari,  Kumar,  Kaur  Mandeep,  Kaur  Gurpreet dan Kaur Harleem. (2011). Phytochemical Screnning  and  Extraction:  A  Review. Internationale  Pharmaceutica  Scienca , 1(1).
Yuliana,  A.  (2011).  Uji  Aktivitas  Antimikroba
Infusum Bunga Rosella ( Hibiscus
sabdariffa L) Dengan Metode Difusi Agar. Jurnal  Ilmu-ilmu  Keperawatan  Analis Kesehatan dan Farmasi, 7(1): 15-25