## PEMANFAATAN TETES TEBU (MOLASES)  DAN UREA SEBAGAI SUMBER KARBON DAN NITROGEN DALAM PRODUKSI ALGINAT YANG DIHASILKAN OLEH BAKTERI Pseudomonas aeruginosa
Desniar *)

## Abstrak
Alginat  merupakan  salah  satu  produk  yang  dihasilkan  dari  ekstrak  rumput  laut  kelas Phaeophyceae.  Alginat  mempunyai  nilai  ekonomis  tinggi.  Alginat  juga  diproduksi  oleh  bakteri Azotobacter  vinelandii dan Pseudomonas  aeruginosa .  Tetes  tebu  dan  urea  masing-masing  dapat digunakan sebagai sumber karbon dan nitrogen dalam produksi alginat oleh P. aeruginosa . Penelitian ini bertujuan mencari komposisi media terbaik dari konsentrasi yang dicobakan untuk produksi alginat oleh P. aeruginosa . Perlakuan yang dicobakan adalah kombinasi konsentrasi tetes tebu 1%, 5%, 10% dan 15% (w/v) (tanpa pemucatan maupun dengan pemucatan) dan konsentrasi urea 0,25 dan 0,50 g/l. Fermentasi dilakukan menggunakan labu kocok dengan waterbath shaker pada suhu 37 o C dan agitasi 150  rpm  selama  96  jam.  Pengaruh  perlakuan  terhadap  pH,  pertumbuhan  dan  konsentrasi  alginat dianalisis  dengan  menghitung  rata-rata  respon  menggunakan  standar  deviasi  yang  selanjutnya dianalisis  secara  deskriptif.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  peningkatan  konsentrasi  tetes  tebu dapat meningkatkan biomassa kering dan konsentrasi alginat, sedangkan peningkatan konsentrasi urea tidak berpengaruh terhadap konsentrasi alginat akan tetapi dapat meningkatkan bobot biomassa kering baik  pada  tetes  tebu  tanpa  pemucatan  maupun  dengan  pemucatan.  Tetes  tebu  yang  mengalami pemucatan  menghasilkan  pertumbuhan  yang  lebih  baik  dan  produk  alginat  yang  lebih  bersih dibandingkan dengan tetes tebu tanpa pemucatan.
Kata kunci : Alginat, Pseudomonas aeruginosa , tetes tebu.

## PENDAHULUAN

## Latar Belakang
Alginat  merupakan  salah  satu  produk  yang  dihasilkan  dari  ekstraksi  rumput laut  kelas  Phaeophyceae.  Alginat  mempunyai  nilai  ekonomis  tinggi.  Alginat  dapat juga diproduksi oleh bakteri. Alginat berbentuk polisakarida yang banyak digunakan di  Indonesia,  tapi  sampai  saat  ini  Indonesia  belum  mampu  memenuhi  kebutuhan sendiri, sehingga sampai sekarang sebagian besar alginat masih diimpor.
Linker  dan  Jones  (1964)  yang  dikutip  oleh  Fyfe  dan  Govan  (1983)  pertama kali  melaporkan  bahwa  bakteri Pseudomonas  aeruginosa dan  beberapa  galur Azotobacter vinelandii (Jarman, et al ., 1978) dapat menghasilkan alginat  yang sama baiknya dengan alginat yang berasal dari rumput laut.
Selama ini medium fermentasi yang sering digunakan untuk produksi alginat baik  oleh  bakteri A.  vinelandii maupun P.  aeruginosa adalah  media  sintetis.  Tetes
tebu  merupakan  hasil  samping  industri  gula  yang  mengandung  senyawa  nitrogen, trace  element dan  kandungan  gula  yang  cukup  tinggi  terutama  kandungan  sukrosa sekitar  34%  dan  kandungan  total  karbon  sekitar  37%  (Suastuti,  1998).  Urea digunakan  sebagai  media  sumber  nitrogen  untuk  menggantikan  media  sumber nitrogen  lainnya  seperti ekstrak khamir dan pepton. Urea  mudah didapatkan sebagai pupuk tanaman dan harganya lebih murah.
Penelitian  ini  bertujuan  mencari  komposisi  media  yang  baik  untuk  produksi alginat  dari P.  aeruginosa dengan  menggunakan  substrat  tetes  tebu  (baik  tanpa pemucatan maupun dengan pemucatan) dan urea.

## METODOLOGI

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan adalah bakteri Pseudomonas aeruginosa , tetes tebu dan urea. Bahan kimia yang digunakan adalah : gliserol, sukrosa, K 2 HPO 4 , MgSO 4 .7H 2 O, ZnSO 4 .7H 2 O, MnSO 4 .7H 2 O, FeSO 4 .7H 2 O, Na 2 CO 3 , CuSO 4 .5H 2 O, NaCl, bacto agar, ekstrak khamir, etanol 96%, H 2 SO 4 pekat, fenol, akuades, spiritus, HCl, kapas, tissue, alumunium  foil  dan  NaOH.  Alat-alat  yang  digunakan  antara  lain  meliputi shaker , spektrofotometer,  pH  meter,  ependorf,  desikator,  autoklaf,  labu  erlenmeyer,  ose, vortex  mixer ,  pipet,  inkubator, timbangan,  sentrifuge, oven,  pompa  vacum,  saringan vacuum freezer dan alat gelas lainnya.
Metode penelitian ini terdiri dari dua tahapan, yaitu tahap persiapan dan tahap produksi.  Pada  tahap  persiapan  dilakukan  pembuatan  kultur  stok,  perlakuan  awal tetes  tebu  (Firdanianti,  1995)  dan  urea  serta  penentuan  waktu  propagasi.  Tahap produksi  meliputi  pembuatan  media  (tanpa  pemucatan  dan  dengan  pemucatan), pembuatan inokulum dan fermentasi.
Media  fermentasi  menggunakan  tetes  tebu  tanpa  pemucatan  dan  pemucatan yang  ditanbah  dengan  urea.  Konsentrasi  tetes  tebu  yang  digunakan  adalah  1%,  5%, 10% dan 15% sedangkan konsentrasi urea adalah  0,25 g/l dan 0,50 g/l.   Kemudian semua media ditambah dengan trace element .
Produksi  alginat  dilakukan  dalam  labu  erlenmeyer  250  ml  dengan  volume kerja  150  ml.  Perlakuan  yang  dicobakan  dalam  penelitian  ini  adalah  kombinasi konsentrasi tetes tebu dan urea. Fermentasi dilakukan dalam waterbath shaker dengan suhu  37 o C  dan  agitasi  150  rpm.  Fermentasi  dilakukan  selama  96  jam  dengan pengamatan setiap 0,3,6,9,12,18,24,36,48,60,72,84 dan 96 jam lama inkubasi.
Pengumpulan  data  untuk  analisis  selama  fermentasi  dilakukan  dengan  cara:
(1)  Pengukuran  pH  cairan  fermentasi;  (2)  Pengukuran  pertumbuhan  sel  dengan menggunakan  metode kerapatan optik (OD 640 )   yang dikonversi dalam  bobot kering biomassa;  (3)  Pengukuran  konsentrasi  alginat  yang  dihasilkan.  Analisa  data  yang digunakan  adalah  menggunakan  standar  deviasi  yang  hasilnya  dianalisa  secara deskriptif.    Analisa  ini  akan  menggambarkan  kecenderungan  yang  terjadi  pada perlakuan yang diberikan yaitu konsentrasi tetes tebu dan urea.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pola Perubahan pH
Hasil pengamatan pH cairan kultur pada perlakuan tanpa pemucatan berkisar antara 4,21 – 8,42, sedangkan pada perlakuan pemucatan berkisar antara 3,30 – 7,55. Secara umum hasil pengukuran pH menunjukkan bahwa semua perlakuan kombinasi konsentrasi  tetes  tebu  dan  urea  memperlihatkan  kecenderungan  yang  sama  yaitu penurunan  pH  terjadi  pada  awal  fermentasi  setelah  itu  pH  cenderung  meningkat kembali,  kecuali  pada  perlakuan  pemucatan  pada  konsentrasi  tetes  tebu  10%  dan 15%, dimana awal fermentasi cenderung stabil kemudian menurun.
Jenkins  (1992)  menyatakan  bahwa  jika  sumber  karbon  yang  paling  besar didalam  kultur  medium  adalah  suatu  karbohidrat  maka  pH  akan  turun  selama pertumbuhan eksponensial dibawah kondisi aerob. Beberapa organisme menghasilkan  senyawa  metabolisme  seperti  asam  asetat  dan  piruvat  dengan  adanya gula berlebih.  Asam organik jika berdisosiasi dalam air akan menghasilkan H + yang dapat  menurunkan  pH  cairan  kultivasi.    Peningkatan  nilai  pH  cairan  kultur
disebabkan oleh pengunaan urea sebagai  sumber  nitrogen.  Kenaikan pH disebabkan oleh terakumulasinya bahan-bahan alkalin hasil metabolisme urea.

## Pola Pertumbuhan P. aeruginosa Selama Fermentasi.
Pertumbuhan sel dapat dibuktikan dengan peningkatan bobot biomassa kering yang  dihasilkan  selama  fermentasi.  Pola  pertumbuhan  atau  pembentukan  bobot biomassa  kering  selama  berlangsungnya  fermentasi  pada  berbagai  kombinasi konsentrasi  tetes  tebu  dan  urea  baik  pada  perlakuan  tanpa  pemucatan  maupun pemucatan menunjukkan pola yang sama yaitu memiliki tiga fase pertumbuhan (fase adaptasi, eksponensial dan stasioner)
Fase adaptasi terjadi sampai 3 jam lama kultivasi, kemudian diikuti oleh fase eksponensial sampai jam ke 12 lama kultivasi pada medium tetes tebu 1%, jam ke 48 atau 60 lama kultivasi pada tetes tebu 5% dan jam ke 60 atau 72 pada tetes tebu 10% dan  15%  pada  semua  konsentrasi  tetes  tebu  yang  dicobakan.  Setelah  itu  masing- masing diikuti oleh fase stasioner setelah akhir fase eksponensial.
Pengaruh konsentrasi tetes tebu dan urea terhadap bobot kering biomassa pada perlakuan  tanpa  pemucatan  dapat  dilihat  pada  Gambar  1,  sedangkan  perlakuan pemucatan pada Gambar 2.
1% 5% 10% 15% urea 0.25 g/l urea 0.5 g/l 1.7 2.59 3.74 3.61 1.03 1.58 1.87 1.94 0 1 2 3 4 T o ta l b o b o t b io m a s s a k e ri n g ( g /l ) Konsentrasi tetes tebu 1% 5% 10% 15% 0,25 g/l 0,5 g/l 2.8 3.8 5.4 5.9 2.6 2.6 4.3 5.7 0 1 2 3 4 5 6 T o ta l b o b o t b io m a s s a k e ri n g ( g /l ) Konsentrasi tetes tebu Konsentrasi urea
Gambar 1. Pengaruh  konsentrasi tetes tebu
dan urea terhadap total peningkatan bobot biomassa kering pada perlakuan  tanpa pemucatan Gambar 2.  Pengaruh  konsentrasi tetes tebu dan urea terhadap total peningkatan bobot biomassa kering pada perlakuan pemucatan
Gambar  1  dan  2  menunjukkan  bahwa  peningkatan  konsentrasi  tetes  tebu sampai  15%  pada  konsentrasi  urea  0,25  dan  0,50  g/l  dapat  meningkatkan  bobot biomassa  kering  bakteri.  Peningkatan  tersebut  disebabkan  oleh  substrat  yang dikonversi  bakteri  menjadi  biomassa  cukup  besar.  Akan  tetapi  konsentrasi  yang berlebihan dapat  menghambat pertumbuhan  biomassa dan polisakarida. Peningkatan konsentrasi urea dari 0,25 menjadi 0,50 g/l pada masing-masing konsentrasi tetes tebu yang  dicobakan  baik  pada  perlakuan  tanpa  pemucatan  maupun  dengan  pemucatan dapat  meningkatkan  bobot  biomassa  kering  bakteri.  Urea  berfungsi  sebagai  sumber nitrogen.  Sumber  nitrogen  meskipun  dibutuhkan  untuk  pertumbuhan  dan pembentukan  polisakarida,  akan  tetapi  kelebihan  nitrogen  pada  umumnya  dapat mengurangi konversi substrat menjadi polisakarida (Kang dan Cottrell, 1979). Hal ini menunjukkan  bahwa peningkatan konsentrasi urea dari 0,25  menjadi 0,50 g/l  belum berlebihan.
Bobot  biomassa  kering  yang  dihasilkan  pada  perlakuan  tanpa  pemucatan berkisar  antara  0,43-4,34  g/l.  Bobot  biomassa  tertinggi  diperoleh  pada  medium dengan konsentrasi tetes tebu 10% dengan urea 0,50 g/l.  Bobot biomassa kering yang dihasilkan pada perlakuan pemucatan berkisar antara 0,42 – 6,29 g/l.  Bobot biomassa tertinggi diperoleh pada medium dengan konsentrasi tetes tebu 15% dengan urea 0,50 g/l.    Dari  sini  dapat  disimpulkan  bahwa  perlakuan  pemucatan  menghasilkan  bobot biomasa yang lebih tinggi dari pada perlakuan tanpa pemucatan.
Hal ini terjadi karena tetes tebu merupakan hasil samping langsung dari pabrik gula  mengandung  banyak  senyawa  lain  (selain  gula).    Tanpa  adanya  pemucatan senyawa-senyawa  ini  akan  mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri,  sehingga  perlakuan dengan  pemucatan  menghasilkan  pertumbuhan  bakteri  yang  lebih  baik.    Hal  ini ditunjukkan  oleh  bobot  biomassa  yang  dihasilkan  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan perlakuan tanpa pemucatan.

## Pembentukan Alginat
Alginat  yang  dihasilkan  pada  penelitian  ini  merupakan  alginat  kasar.  Hasil pengukuran  alginat  baik  pada  perlakuan  tanpa  pemucatan  maupun  pemucatan menunjukkan  bahwa  produksi  alginat  selama  waktu  kultivasi  cenderung  meningkat kemudian  cenderung  stabil  sampai    akhir  fermentasi  (96  jam  kultivasi).  Produksi alginat  dimulai  pada  jam  ke-12  lama  kultivasi.  Pengaruh  konsentrasi  tetes  tebu  dan urea terhadap produksi alginat pada perlakuan pemucatan dan tanpa pemucatan dapat dilihat pada Gambar 3 dan 4.
1% 5% 10% 15% urea 0.25 g/l urea 0.5 g/l 0,29 2,06 3,90 5,44 0,25 1,95 5,50 5,35 0 1 2 3 4 5 6 K o n s e n tr a s i a lg in a t (g /l ) Konsentrasi tetes tebu 0,25 0,5 1% 5% 10% 15% 4,75 6,25 4,12 4,02 2,58 2,38 0,54 0,64 0 1 2 3 4 5 6 7 T o ta l k o n s e n tr a s i a lg in a t (g /l ) Konsentrasi urea (g/l) Konsentrasi tetes tebu
Gambar  3  dan  4  menunjukkan  bahwa  perlakuan  tanpa  pemucatan  dan pemucatan  secara  umum  terlihat  kecenderungan  yang  sama  yaitu  peningkatan konsentrasi  tetes  tebu  sampai  15%  dapat  meningkatkan  konsentrasi  alginat    kecuali pada  pada  konsentrasi  tetes  tebu  10%  dan  15%  pada  konsentrasi  urea  0,25  g/l menghasilkan  konsentrasi  alginat  yang  sama  (perlakuan  tanpa  pemucatan).  Hal  ini karena  semakin  tinggi  konsentrasi  tetes  tebu  artinya  semakin  tinggi  konsentrasi substrat  yang  dapat  dikonversi  menjadi  produk.  Wilkinson  (1958)  dan  Sutherland (1979)  yang  dikutip  oleh  Margaritis  dan  Pace  (1985)  menyatakan    bahwa  jumlah substrat  (karbon)  yang  diubah  oleh  sel  menjadi  polimer  tergantung  pada  komposisi medium pertumbuhan. Umumnya media yang mengandung rasio korbon dan nutrien terbatas (umumnya nitrogen) yang tinggi menyokong untuk produksi polisakarida
Gambar 4. Pengaruh konsentrasi tetes tebu dan  urea terhadap produksi alginat oleh sel P. aeruginosa
pada  perlakuan  pemucatan Gambar 3.   Pengaruh konsentrasi tetes tebu dan urea terhadap produksi alginat oleh sel - P.aeruginosa pada perlakuan tanpa pemucatan
Sebaliknya  secara  umum  pada  perlakuan  tanpa  pemucatan  dan  pemucatan peningkatan konsentrasi urea yang digunakan tidak berpengaruh terhadap konsentrasi alginat  yang  dihasilkan  pada  semua  konsentrasi  tetes  tebu  yang  dicobakan.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  penambahan  urea  dari  0,25  g/l  menjadi  0,50  g/l  tidak mempengaruhi  pembentukan  alginat.  Artinya  tidak  melebihi  batas  sumber  nitrogen yang dibutuhkan untuk pertumbuhan dan pembentukan alginat.
Konsentrasi  alginat  yang  dihasilkan  pada  perlakuan  tanpa  pemucatan  dan dengan  pemucatan  berkisar  antara  0,15  sampai  5,52  g/l,  sedangkan  pada  perlakuan dengan pemucatan berkisar antara 0,24 sampai 6,25 g/l.
Produktivitas Alginat
Peningkatan  produksi  alginat  dapat  dilihat  dari  berapa  besar  konsentrasi alginat yang dihasilkan setiap jam (produktivitas) atau dapat dilihat juga berdasarkan konsentrasi  alginat  rata-rata  yang  dihasilkan.  Produktivitas  alginat  pada  semua kombinasi  konsentrasi  urea  dan  tetes  tebu  pada  perlakuan  tanpa  pemucatan  dan perlakuan dengan pemucatan dapat dilihat pada Gambar  5 dan 6 sedangkan produksi alginat berdasarkan rata-rata pada perlakuan tanpa pemucatan dan perlakuan dengan pemucatan dapat dilihat pada Gambar 7 dan 8.
1% 5% 10% 15% 0.25 0.5 0,002 0,018 0,032 0,039 0,001 0,017 0,045 0,041 0 0,01 0,02 0,03 0,04 P ro d u k ti v it a s a lg in a t ( g /l j a m ) Konsentrasi tetes tebu Konsentrasi urea (g/l) 0,25 0,5 1% 5% 10% 15% 0,031 0,027 0,020 0,032 0,017 0,016 0,003 0,003 0 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 P ro d u k ti v it a s a lg in a t (g /l j a m ) Konsentrasi urea (g/l) Konsentrasi tetes tebu
Gambar  5.  Pengaruh  konsentrasi  urea  dan tetes  tebu terhadap produktivitas alginat    yang  dihasilkan  pada perlakuan  tanpa pemucatan Gambar  6.  Pengaruh  konsentrasi  urea  dan tetes  tebu  terhadap  produktivitas alginat     yang   dihasilkan pada perlakuan pemucatan
Gambar  5  dan  6  menunjukkan  bahwa  secara  umum  peningkatan  konsentrasi tetes tebu dari 1%  menjadi 15% pada semua konsentrasi urea  yang dicobakan dapat meningkatkan  produktivitas  yang  dihasilkan  baik  pada  perlakuan  tanpa  pemucatan maupun  dengan  pemucatan.  Dengan  kata  lain  semakin  tinggi  konsentrasi  tetes  tebu semakin tinggi pula konsentrasi alginat yang dihasilkan per jamnya. Sebaliknya pada perlakuan  tanpa  pemucatan  peningkatan  konsentrasi  urea  dari  0.25  g/l  menjadi  0.50 g/l    tidak terlalu  berbeda pada konsentrasi tetes tebu 1% dan 5%  bahkan cenderung menurun  pada  konsentrasi  tetes  tebu  10%  dan  15%.    Pada  perlakuan  dengan pemucatan  peningkatan  konsentrasi  urea  dari  0,25  g/l  sampai  0.50  g/l  tidak  terlalu berbeda  pada  konsentrasi  tetes  tebu1%,  5%  dan  10%  sedangkan  pada  konsentrasi tetes  tebu  15%  peningkatan  konsentrasi  urea  dari  0,25  sampai  0,50  g/l  cenderung meningkatkan produktivitas alginat yang dihasilkan.
Produktivitas  alginat  tertinggi  pada  masing-masing  perlakuan  tanpa pemucatan  dan  dengan  pemucatan  adalah  0,045  g/l  jam  (pada  perlakuan  dengan konsentrasi  urea  0,25  g/l  dan  tetes  tebu  10%)  dan  0,032  g/l  jam  (pada  perlakuan dengan  konsentrasi  urea  0,50  g/l  dan  tetes  tebu  10%).    Dari  data  ini  dapat disimpulkan  bahwa  peningkatan  konsentrasi  tetes  tebu  dapat  meningkatkan produktivitas alginat  yang dihasilkan dan produktivitas alginat pada perlakuan tanpa pemucatan  lebih  besar  dibandingkan  dengan  perlakuan  dengan  pemucatan. Peningkatan konsentrasi tetes tebu sanpai 15% pada konsentrasi urea yang tetap dapat meningkatkan  nilai  rasio  C/N.  Umumnya  media  yang  mengandung  rasio  C/N  yang tinggi menyokong pembentukan polisakarida (alginat).
1% 5% 10% 15% 0.25 0.5 0,23 1,63 3,14 4,53 0,19 1,44 4,31 4,16 0 1 2 3 4 5 K o n s e n tr a s i a lg in a t ra ta -r a ta (g /l ) Konsentrasi tetes tebu Konsentrasi urea (g/l) 0 0,25 1% 5% 10% 15% 4,96 3,82 3,44 3,01 1,70 1,63 0,32 0,30 0 1 2 3 4 5 K o n s e n tr a s i a lg in a t ra ta -r a ta (g /l ) Konsentrasi urea (g/l) Konsentrasi tetes tebu
Gambar  7  dan  8  menunjukkan  bahwa  secara  umum  peningkatan  konsentrasi tetes tebu dari 1%  menjadi 15% pada semua konsentrasi urea  yang dicobakan dapat meningkatkan konsentrasi alginat rata-rata yang dihasilkan baik pada perlakuan tanpa pemucatan  maupun dengan pemucatan. Sebaliknya pada perlakuan tanpa pemucatan peningkatan  konsentrasi  urea  dari  0,25  g/l  menjadi  0,50  g/l  cenderung  sedikit meningkatkan  konsentarsi  alginat  rata-rata  pada  semua  konsentrasi  tetes  tebu  yang dicobakan. Pada perlakuan dengan pemucatan peningkatan konsentrasi urea dari 0,25 g/l  sampai  0,50  g/l  tidak  terlalu  berbeda  pada  semua  konsentrasi  tetes  tebu  yang dicobakan kecuali pada konsentrasi tetes tebu 15% dengan konsentrasi urea 0,50 g/l terjadi penurunan.
Konsentrasi  alginat  rata-rata  tertinggi  pada  masing-masing  perlakuan  tanpa pemucatan  dan  dengan  pemucatan  adalah  4.53  g/l    (pada  perlakuan  dengan konsentrasi  urea  0.50  g/l  dan  tetes tebu  15%)  dan  4.96  g/l    (pada  perlakuan  dengan konsentrasi urea 0.75 g/l dan tetes tebu 15%). Berdasarkan data ini dapat disimpulkan bahwa  peningkatan  konsentrasi  tetes  tebu  dapat  meningkatkan  konsentrasi  alginat rata-rata  yang  dihasilkan  dan  konsentrasi  alginat  rata-rata  pada  perlakuan  dengan pemucatan lebih besar dibandingkan dengan perlakuan tanpa pemucatan.
Gambar 7. Pengaruh konsentrasi urea dan tetes  tebu terhadap konsentrasi alginat rata-rata yang dihasilkan pada perlakuan tanpa pemucatan Gambar 8. Pengaruh konsentrasi urea dan tetes tebu terhadap konsentrasi alginat  rata-rata yang dihasilkan pada perlakuan dengan pemucatan

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa tetes tebu dan urea dapat  digunakan  sebagai  medium  sumber  karbon  dan  sumber  nitrogen  dalam produksi  alginat  oleh P.  aeruginosa. Tetes  tebu  yang  mengalami  pemucatan menghasilkan  pertumbuhan  yang  lebih  baik  dan  produk  alginat  yang  lebih  bersih dibandingkan  dengan  tetes  tebu  tanpa  pemucatan.  Konsentrasi  urea  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  tidak  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  dan  produksi  alginat.
Konsentrasi  tetes  tebu  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  berpengaruh  terhadap pertumbuhan dan produksi alginat dimana peningkatan konsentrasi tetes tebu sampai 15% dapat meningkatkan pertumbuhan dan alginat yang dihasilkan.
Konsentrasi alginat tertinggi  yang dihasilkan pada  masing-masing perlakuan tanpa pemucatan dan dengan pemucatan adalah 5,52 g/l (pada konsentrasi tetes tebu 10% dengan konsentrasi urea 0,25 g/l) dan 6,25 g/l (pada konsentrasi tetes tebu 15% dengan konsentrasi urea 0,25 g/l).
Produktivitas  alginat  tertinggi  pada  masing-masing  perlakuan  tanpa pemucatan  dan  dengan  pemucatan  adalah  0,045  g/l  jam  (pada  perlakuan  dengan konsentrasi  urea  0,25  g/l  dan  tetes  tebu  10%)  dan  0,032  g/l  jam  (pada  perlakuan dengan  konsentrasi  urea  0,5  g/l  dan  tetes  tebu  10%).  Konsentrasi  alginat  rata-rata tertinggi  pada  masing-masing  perlakuan  tanpa  pemucatan  dan  dengan  pemucatan adalah 4,53 g/l  (pada perlakuan dengan konsentrasi urea 0,50 g/l dan tetes tebu 15%) dan 4,96 g/l  (pada perlakuan dengan konsentrasi urea 0,50 g/l dan tetes tebu 15%).

## DAFTAR PUSTAKA
Evans,  LR.  dan  A.  Linker.  1973.  Production  and  characterization  of  the  slime polysaccharide of Pseudomonas aeruginosa . J. Bacteriol. 166 : 915 – 924.
Fyfe,  JAM dan JRW. Govan. 1983. Synthesis, regulation and  biological  function of bacterial  alginate. Dalam Progress  in  Industrial  Microbiology.  Vol.  18. Microbial Polisaccharides. Bushel, ME. (Ed.) Elsivier-Amsterdam.
Firdanianti, 1995. Pengaruh penambahan ammonium sulfat pada produksi alginat dari bakteri Azotobacter vinelandii dalam medium limbah tetes tebu (molase).
Skripsi.  Program Studi Pengolahan Hasil Perikanan. Fakultas Perikanan. Institut Pertanian Bogor.
Jarman, TR., L. Deavin, S. Slocombe dan RC. Righelato. 1978. Investigation of the effect  of  environmental  condition  on  the  rate  of  exopolisaccharide synthesis in Azotobacter vinelandii . J. Gen. Microbiol. 107 : 59 – 64.
Jenkins,  RO.  1992.  Control  of  environment  factors  in  fluencing  growth. Dalam In Vitro Cultivation of Microorganisms. Cartledge, TG. (Ed.)
Kang,  KS.  dan  IW.  Cottrell.  1979.  Polisaccharides.  Dalam  Microbial  Technology.
Microbial processes. Second edition. Volume I. Peppler, HJ. dan         D. Perlman (Eds.).  Academic Press. London.
Margaritis,  A.  dan  GW.  Pace.    1985.  Microbial  polysaccharides. Dalam Comprehensive  Biothechnology  in  Industry  Agriculture  and  Medicine. Blanch,  A.W.  dan  D.I.C.  Wang.  Pergamon  Press.  Oxford  –  New  York  – Sydney – Frankfurt.
Sutherland,  IW.  dan  DC.  Elwood.  1979.  Microbial  exopolysaccharides.  industrial polimers  of  current  and  future  potensial. Dalam Microbial  Technology  : Current  State,  Future  Prospects.  Bull,  AT,  DC.  Elwood  dan  C.  Ratledge (Eds.). Cambridge University Press. Cambridge. London.
Suastuti,  MGAMDA.    1998.  Pemanfaatan  hasil  samping  industri  pertanian  molase dan limbah cair tahu sebagai sumber karbon dan nitrogen untuk produksi biosurfactan  oleh Bacillus sp  galur  komersial  dan  lokal.  Tesis.  Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor.