## PENGARUH PENAMBAHAN NATRIUM KLORIDA (NaCl) DAN WAKTU PERENDAMAN BUFFER FOSFAT TERHADAP PEROLEHAN
CRUDE PAPAIN DARI DAUN PEPAYA (CARICA PAPAYA, L.)
Pinta Rizki Mala Hasibuan*, Mitha Alviyulita, Farida Hanum Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik Universitas Sumatera Utara Jl. Almamater Kampus USU Medan, 20155 Indonesia *Email : Kikipinta1@gmail.com

## Abstrak
Pepaya  (Carica  papaya  L.)  merupakan  salah  satu  komoditas  buah  secara  internasional,  baik  dalam bentuk  buah  segar  maupun  sebagai  produk  olahan.  Daunnya  yang  berwarna  hijau  masih  belum dimaanfaatkan  secara  maksimal.  Daun  pepaya  mengandung  enzim  papain  yang  merupakan  enzim protease  yang  sangat  bermanfaat  bagi  industri.  Papain  merupakan  enzim  protease  yang  terkandung dalam  getah  pepaya,  baik  dalam  buah,  batang  dan  daunnya,  sebagai  enzim  yang  berkemampuan memecahkan molekul protein, saat ini papain menjadi produk yang sangat bermanfaat bagi kehidupan manusia, baik dirumah tangga  maupun  industri.  Penelitian ini  bertujuan untuk  mengetahui pengaruh tingkat  kejenuhan natrium  klorida (NaCl)  dan  perendaman  buffer fosfat  terhadap rendemen  protease kasar  daun  pepaya.  Penelitian  ini  memvariasikan  waktu  perendaman  buffer  fosfat  dan  tingkat kejenuhan  natrium  klorida  (NaCl).  Analisis  aktivitas  protease  dilakukan  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  untuk  mengukur  panjang  gelombang  dan  nilai  absorbansinya.  Hasil penelitian terbaik diperoleh pada perendaman buffer fosfat 12 jam dengan konsentrasi natrium klorida (NaCl)  60%  yaitu  272,8222  unit/ml.  Pada  analisa  rendemen  diperoleh  kondisi  terbaik  pada  saat perendaman  buffer  fosfat  36  jam  pada  konsentrasi  90%  yaitu  43,5152%.  Pada  analisa  kadar  air diperoleh  kondisi  terbaik  pada  saat  perendaman  36  jam  dengan  konsentrasi  90%  yaitu  sebesar 37,4266%.
Kata kunci: pepaya, natrium klorida, aktivitas protease, spektrofotometer UV, tirosin

## Abstract
Papaya  (Carica papaya  L.)  is  one  of the  fruits of commodities internationally,  either in the  form  of fresh  fruit  or  as  processed  products.  The  leaves  are  green  still  not  fully  utilized.  Papaya  leaves contains  papain  enzyme  which  is  a  protease  enzyme  that  very  helpful  for    the  industry.  Papain  is  a protease enzyme contained in papaya latex, whether in fruit, stems and leaves, as an enzyme capable of solving the protein molecules, current papain into products that are beneficial to human life, either at  home  or  industrial  ladder.  This  study  aims  to  determine  the  effect  of  the  degree  of  saturation  of sodium chloride  and phosphate buffer to yield soaking rough papaya protease. This study varying the time  of  immersion  phosphate  buffer  and  saturation  levels  of  sodium  chloride.  Analysis  of  protease activity  was  performed  using  UV-Vis  spectrophotometer to  measure  the  wavelength and  absorbance values. The best research results obtained at 12 h immersion phosphate buffer with a concentration of sodium  chloride  60%  is  272.8222  unit  /  ml.  In  the  analysis  of  the  rendemen  obtained  by  the  best condition  at  the  time  of  immersion  phosphate  buffer  for  36  hours  at  a  concentration  of  90%  is 43,5152%. In the analysis of moisture content obtained the best condition at the time of immersion of 36 hours at a concentration of 90% is 37.4266%.
Keywords: papaya, sodium chloride, protease activity, spectrophotometer UV, tyrosine

## Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara  tropis dengan kekayaan flora yang berlimpah. Salah satu tanaman tropis yang banyak dijumpai di Indonesia  adalah  tanaman  papaya  ( Carica papaya  L )  [9].    Semua  bagian  daripada pepaya  dapat  digunakan  yaitu  buah  sebagai buah  segar,  daun  untuk  sayur  dan  makanan ternak,  kayu  untuk  bahan  bakar  sedangkan getahnya  mengandung  enzim  papain  [14]. Papain  terdapat  hampir  pada  semua  bagian tanaman  pepaya,  kecuali  biji  dan  akarnya. Namun  di  antara  bagian-bagian  tanaman,
konsentrasi  terbesar  berada  pada  batang  dan buahnya.  Diperkirakan  lebih  dari  50% kandungan  papain  pada  tanaman  papaya terdapat pada bagian-bagian tersebut [16].
Selain  buah,  bagian  tanaman  pepaya lainnya  dapat  dimanfaatkan  untuk  berbagai keperluan mulai  sebagai  bahan makanan dan minuman,  obat  tradisional,  pakan  ternak, industri  penyamakan  kulit,  kosmetik,  dan sebagainya.  Bahkan  bijinyapun  dapat  diolah lebih  lanjut  menjadi  minyak  dan  tepung. Substansi  lain  yang  banyak  dimanfaatkan
dalam  dunia  industri  adalah  getah  pepaya yang  mengandung  papain  yang  dapat dihasilkan  dari  buah,  batang,  ataupun  daun pepaya. Papain merupakan enzim proteolitik, yaitu  enzim  yang  dapat  mengurai  dan memecah protein [12].
Adapun  penelitian  yang  akan  dilakukan yaitu  pengaruh  penambahan  natrium  klorida (NaCl)  dan  waktu  perendaman  terhadap pembuatan  papain  dari  daun  pepaya (Carica Papaya  L) .  Bahan  baku  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  daun  pepaya, dimana  daun  papaya  ini  masih  jarang dimanfaatkan orang sehingga dengan menggunakan daun pepaya akan
meningkatkan  nilai  ekonomis  bagi  para petani pepaya . Selain itu pemanfaatan enzim dalam  berbagai  industri  semakin  meningkat.
Salah  satu  enzim  yang  banyak  digunakan dalam  industri  adalah  enzim  papain.  Pada penelitian ini memvariasikan tingkat
kejenuhan natrium  klorida (NaCl) dan  waktu perendaman buffer fosfat. Adapun  pemilihan pelarut NaCl ini karena harganya yang relatif murah  dan  mudah  didapat,  bahan  yang  tidak terlalu bahaya bila digunakan untuk makanan.

## Teori
Pepaya  ( Carica  papaya L.)  merupakan salah satu komoditas buah secara internasional,  baik  dalam  bentuk  buah  segar maupun  sebagai  produk  olahan.  Permintaan buah  pepaya  umumnya  terus  meningkat  dari tahun  ke  tahun,  berdasarkan  data  FAO  pola konsumsi  buah  pepaya  di  Indonesia  pada tahun  2005  mencapai  586  340  ton  dengan rata-rata peningkatan sebesar 16.67 %[23].
Batang,  daun,  dan  buah  pepaya  muda mengandung getah berwarna putih. Getah ini mengandung  suatu  enzim  pemecah  protein atau  enzim  proteolitik  yang  disebut  papain. Papain  termasuk  enzim  hidrolase,  yaitu enzim yang mampu mengkatalis reaksi-reaksi hidrolisis suatu substrat (protein) [7].
Buah papaya mengandung enzim papain. Enzim papain merupakan senyawa aktif yang memiliki  kemampuan  mempercepat  proses pencernaan protein. Enzim tersebut berfungsi sebagai  proteolitik  atau  enzim  pemecah protein.  Papain  merupakan  enzim  protease yang  terkandung  dalam  getah  pepaya,  baik dalam  buah,  batang  dan  daunnya,  sebagai enzim  yang  berkemampuan  memecahkan molekul  protein,  saat  ini  papain  menjadi produk yang sangat bermanfaat bagi kehidupan  manusia,  baik  dirumah  tangga maupun  industri.  Enzim  papain  sebagai protease  sulfhidril  dapat  diaktifkan  oleh  zat-
zat  pereduksi  dan  menjadi  tidak  aktif  jika terdapat  zat  pengoksidasi.  Enzim  papain memutus ikatan peptida pada residu asparagin-glutamin,  glutamat-alanin,  leusin- valin  dan  penilalanintirosin.  Enzim  tersebut akan  bekerja  secara  optimal  tergantung  dari konsentrasi yang diberikan [11].

## Metodologi Penelitian
Bahan  baku  yang  digunakan  dalam penelitian ini daun pepaya. Bahan kimia yang digunakan  adalah  aquadest,  natrium  klorida, kasein,  asam  trikhloroasetat  (TCA),  dan reagen ninhidrin.
Peralatan  utama  yang  akan  digunakan adalah  blender,  magnetic  stirer,  timbangan elektrik, alat-alat gelas, kertas saring whatman No. 4, sentrifius, dan
spektrofotometer.

## Ekstrak Papain
Daun  papaya  yang  telah  dihaluskan ditimbang  sebanyak  100  gram  dan  dicampur dengan  200  ml  buffer  fosfat  pH  7  dan didiamkan  selama  0,  12,  24,  dan  32  jam. Campuran kemudian disaring dengan menggukan  kertas  saring  whatman  No.  4, hasil  residunya  dibuang  dan  filtratnya ditambahkan  natrium  klorida  pada  tingkat kejenuhan  40,  50,  60,  70,  80  dan  90%. Setelah  itu  filtrat  distirer  selama  20  menit pada temperatur ruangan. Kemudian disentrifius  dengan  kecepatan  8000  rpm selama  7  menit  pada  temperatur  4 0 C. Endapan  yang  terbentuk  dilarutkan  dengan 0,5 ml larutan 0,05 buffer fosfat pH 7.

## Uji Aktivitas Protease
Kualitas  papain  sangat  ditentukan  oleh kekuatan  atau  kemampuan  papain  untuk memecah  protein.  Kemampuan  papain  ini disebut  aktivitas  proteolitik  ( Proteolytic activity )  yang  sering  dinyatakan  dengan satuan unit [2] Ekstrak papain sebanyak 0,1 ml dilarutkan dengan 0,1 ml larutan buffer fosfat pH  7  dan  dipreinkubasi  pada  temperature 37 o C  selama  5  menit  dan  ditambahkan dengan  substrat  (2%  kasein  dalam  0,05  M buffer  fosfat  pH  7)  sebanyak  0,1  ml. kemudian  diinkubasi  selama  10  menit  pada temperatur 37 o C. kemudian reaksi  dihentikan dengan menambahkan 0,2 ml asam trikhloroasetat (TCA) 0,4 M serta disentrifius pada  kecepatan  2000  rpm  selama  10  menit. Filtrat  yang  dihasilkan  dipreinkubasi  selama 10  menit.  Setelah  itu  1  ml  reagen  ninhidrin ditambahkan dan didiamkan selama 30 menit. Lalu  absorbansi  dapat diukur dengan
menggukan  alat  spektrofotometer.  Sehingga aktivitas  protease  dapat  dihitung  dengan menggunakan persamaan [3] : Keterangan  : tirosin  : konsentrasi tirosin yang terbentuk v : volume total sampel pada tiap tabung q : waktu inkubasi p : jumlah enzim (mL) Fp : faktor pengenceran Analisa Rendemen (OAC,1997) Penghitungan rendemen dilakukan dengan menimbang crude protease kering kemudian dibandingkan dengan berat sampel dikalikan 100%. Penghitungan rendeman dapat menggunakan rumus sebagai berikut [1]:
Keterangan: A : berat crude papain (gram) B : berat sampel daun pepaya (gram) Hasil dan Pembahasan Ekstrak  Kasar  Crude  Papain  dari  Daun
Pepaya (Carica papaya, l.)
Ekstrak  papain  merupakan  hasil  dari sentrifugasi  yang  diperoleh  dari  filtrat  daun papaya.  Hasil  sentrifugasi  yang  diperoleh berupa sludge berwarna  hijau  pekat.  Filtrat diperoleh  dari  daun  papaya  yang  dihaluskan dengan  penambahan buffer  fosfat dan disaring  dengan  menggunakan  kertas  saring. Hasil  penyaringan  ditambahkan Natrium Klorida dengan konsentrasi 40% sampai 90% kemudian  distirer  selama  20  menit  sampai natrium  klorida tercampur  semua  pada  suhu 4 o C.  Pemilihan  temperatur  4 o Cdilakukan untuk  mencegah  kerusakan  enzim  [10]. Garam ammonium  sulfat sering  digunakan untuk salting  out protein  enzim,  karena kelarutannya sangat tinggi dan pada beberapa kasus  memberikan  efek  menstabilkan  enzim [6].  Sentrifugasi  dilakukan  selama  7  menit dengan  kecepatan  8000  rpm  pada  suhu  4 o C. Endapan  yang  diperoleh  dipisahkan  dengan menggunakan  kertas  saring  dan  direndam dengan  larutan buffer  fosfat 0.05  M  pH  7 sebanyak  0,5  ml  selama  sesuai  perlakuan  (0 jam,  12  jam,  24  jam,  dan  36  jam). Perendaman  dilakukan  untuk  memisahkan protein  enzim  dariion  logam  dan  molekul-
molekul  kecil,  sehingga  dapat  memurnikan protein enzim [24]. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Dalam  penentuan  aktivitas  protease, pertama-tama  dilakukan  penentuan  panjang gelombang  maksimum  untuk  larutan  standar tirosin dengan menggunakan spektrofotometer  UV.  Pada  larutan  sampel dihasilkan  panjang  gelombang  maksimum pada  274,80  nm,  dari  rentang  panjang gelombang 250-350 nm [13]. Pembuatan Kurva Standar Larutan Tirosin Panjang  gelombang  maksimum  yang dihasilkan  digunakan  untuk  membuat  kurva larutan  standar  tirosin.  Kemudian,  kurva standar  tirosin  dibuat  dengan  cara  mengukur absorbansi  larutan  standar  tirosin  dengan konsentrasi  200  ppm  sampai  1000  ppm dengan rentang 200 ppm dengan spektofotometer UV pada panjang gelombang  maksimum.  Dari  data  absorbansi larutan  tirosin  pada  berbagai  konsentrasi dibuat  kurva  larutan  standar  tirosin  antara konsentrasi larutan tirosin terhadap absorbansi berdasarkan hukum Lambert Beer . Persamaan  regresi  kurva  standar  tirosin dinyatakan  sebagai  y  =  a  +  bx,  dengan ketentuan  y  adalah  absorbansi  dan  x  adalah konsentrasi larutan tirosin. Grafik konsentrasi larutan  tirosin  terhadap  absorbansi  dapat dilihat pada gambar 1.

## Gambar 1. Kurva kalibrasi Larutan Tirosin
Keabsahan  kurva  kalibrasi  standar tirosin  dapat  diuji  dengan  menentukan  harga koefisien  korelasi  (R 2 )  atau  uji  kelinieran yang  menyatakan  ukuran  kesempurnaan hubungan  antara  konsentrasi  larutan  standar dan  absorbansinya.  Korelasi  dinyatakan sempurna  jika  nilai  R 2 mendekati  1. Berdasarkan data dan perhitungan didapatkan
y = 0.0027x + 0.9 R² = 0.9033 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 0 200 400 600 800  1000 A b so r b a n si Konsentrasi Larutan Tirosin Kalibrasi 線形 (Kalibrasi) 線形 (Kalibrasi)
…….(1) ……..(2)
persamaan  regresi  linier  larutan  standar tirosin adalah y = 0,0027x + 0,9 dengan nilai R 2 =  0,9033.  Harga  R 2 yang  diperoleh mendekati 1, maka dapat disimpulkan bahwa nilai koefisien korelasi layak artinya titik-titik
pada kurva kalibrasi mendekati kemiringannya. Analisa Rendemen Rendemen tepung papain kasar
merupakan  perbandingan antara  berat  tepung yang  diperoleh  dengan  berat  bahan  awal. Menurut  Vogel et al. [19] rendemen merujuk pada  jumlah  produk  reaksi  yang  dihasilkan pada  reaksi  kimia.  Sedangkan  rendemen relatif digunakan untuk perhitungan efektivitas  prosedur,  dengan  menghitung jumlah produk yang didapatkan dan membaginya berat awal sebelum proses [15].
Analisa  rendemen  dilakukan  dengan cara  menimbang  ekstrak  papain  yang dihasilkan dan membandingkan dengan berat sampel  daun  pepaya.    Rendemen  yang diperoleh ditunjukna pada gambar 2.
Gambar 2. Pengaruh Penambahan Konsentrasi  Natrium  Klorida  (NaCl)  dan Waktu Perendaman Buffer Fosfat terhadap Rendemen yang Dihasilkan Dari  gambar  2  dapat  dilihat  bahwa rendemen yang dihasilkan semakin meningkat  seiring  penambahan  konsentrasi dan  waktu  perendaman  yang  dilakukan. Kondisi yang terbaik terjadi pada penambahan konsentrasi natrium klorida 90% pada  waktu  36  jam  sebesar  43,5152%. Menurut Mathews and Hold [8]  garam dalam larutan  akan  mengion  dan  menurunkan interaksi  protein  dengan  pelarut  sehingga interaksi  antar  molekul  protein  lebih  tinggi dan  akhirnya  mengendap,  ditambahkan  oleh Trop [18] bahwa pada konsentrasi tinggi ion- ion garam akan berikatan dengan molekul air sehingga  menurunkan  interaksi  molekul
protein  dengan  pelarut (salting-out). Semakin lama  waktu  reaksi  enzimatik  maka  semakin banyak  produk  yang  terbentuk,  yang  juga berarti aktivitasnya semakin besar [2].
Pengaruh Penambahan Konsentrasi Natrium  Klorida  (NaCl)  dan  Waktu Perendaman  Buffer  Fosfat  Terhadap Aktivitas Protease Aktivitas  enzim  papain  diperoleh dengan  cara  menghitung  hasil  absorbansi yang diperoleh dari hasil analisa spektrofotometer  sampel  dengan  menggukan kurva  standar  tirosin  yang  telah  ditetapkan sebelumnya dan dilakukan perhitungan dengan menggunakan Persamaan (1).
Gambar 3. Pengaruh Penambahan Konsentrasi  Natrium  Klorida  (NaCl)  dan Waktu Perendaman Buffer Fosfat Terhadap Aktivitas Protease Dari  gambar  3  dapat  dilihat  bahwa aktivitas protease (papain) cenderung meningkat  seiring  bertambahnya  konsentrasi dan  waktu  perendaman.  Akan  tetapi  pada konsentrasi  dan  waktu  tertentu  aktivitas protease (papain) menurun, kemudian meningkat kembali apabila konsentrasi natrium  klorida  dan  waktu  perendaman ditambahkan terus-menerus.Aktivitas protease  (papain)terbaik  diperoleh  pada konsentrasi  60%  pada  waktu  12  jam  sebesar 272,8222 (U/ml). Kemudian ketika konsentrasi  natrium  klorida  ditambahkan menjadi  70%,  aktivitas  protease  (papain) menurun  menjadi  62,1333  (U/ml).  Hal  ini disebabkan
karenaprotein enzimnya terdenaturasi  sehingga  daya  kerja  enzim menurun.    Aktivitas  enzim  akan  meningkat seiring  bertambahnya  konsentrasi  substrat, setelah  tercapai  titik  batas  maka  kecepatan reaksiakan  mendekati  tetapi  tidak    mencapai garis  maksimum.Semakin  lama  waktu  reaksi enzimatik maka semakin banyak produk yang terbentuk,  yang  juga  berarti  aktivitasnya semakin besar [2]. Dari data dapat
0 10 20 30 40 50 0% 20%  40%  60%  80%  100% R en d em en ( % ) Konsentrasi NaCl (%) 0 Jam 12 Jam 24 Jam 36 Jam
disimpulkan bahwa kualitas papain ditentukan  oleh  tinggi  rendahnya  aktivitas proteasenya (papain) yang dimilikinya, semakin tinggi aktivitas proteasenya semakin tinggi  pula  kualitasnya  dan  sebaliknya, semakin rendah aktivitas proteasenya (papain) semakin rendah kualitasnya [20].
Analisa Kadar Air Aktivitas proteolitik dan proses pengeringan  sangat  dipengaruhi  oleh  kadar air  bahan.  Menurut  Winarno  [21]  kadar  air bahan  mempengaruhi  laju  reaksi  enzimatis. Fennema  [4]  menambahkan  pengurangan kadar  air  akan  mempengaruhi  banyaknya solute (bahan terlarut yang ada dalam bahan). Dalam hal ini bahan terlarut yang dimaksudkan adalah enzim papain kasar yang ada dalam bahan. Semakin banyak konsentrasi  enzim  yang  didapat  maka aktivitasnya  akan  semakin  baik.  Besarnya kadar  air  sangat  penting.  Kadar  air  mampu mempengaruhi daya awet bahan. Keberadaan air  untuk  pertumbuhan  mikroba,  terjadinya aktivitas  enzimatik  dan  kimiawi  sangat menentukan masa simpan makanan [5].
Kadar  air merupakan salah satu
parameter  uji  yang  penting.  Kadar  air memerankan peranan penting dalam menentukan  umur  simpan.  Selain  itu  pada proses  pembuatan  tepung  papain  menurut supiyatna    [17]  kadar  air  tepung  papain jangan sampai lebih dari 9%.
Analisa  kadar  air  dilakukan  sampai diperoleh berat konstan sampel yang dikeringkan.  Dari  hasil  percobaan  yang dilakukan  diperoleh  kadar  air  dari  berbagai konsentrasi  dan  perendaman  ditunjukkan pada gambar 4.
Grafik  4.  Pengaruh  Penambahan  Natrium Klorida (NaCl)dan Waktu     Perendaman Buffer  Fosfat  terhadap  Kadar  Air  yang Dihasilkan
Dari  gambar  4  dapat  dilihat  bahwa semakin besar konsentrasi natrium kloridadan waktu  perendaman  yang  dilakukan  maka kadar  airnya  semakin  menurun.Kadar  air terbaik  terjadi  pada  konsentrasi  natrium klorida (NaCl) 90%  pada waktu 36 jam yaitu sebesar  37,4266%.  Hal  ini  disebabkan  oleh ion-ion  garam  yang memiliki  kelarutan  lebih besar  dibandingkan  dengan  protein  sehingga ion  garam  akan  menarik  molekul  air  dari protein  enzim.  Kadar  air  bebas  yang  rendah menghambat  difusi  enzim  atau  substrat, akibatnya hidrolisis hanya terjadi pada bagian substrat  yang  langsung  berhubungan  dengan enzim [22].
Hasil  percobaan  yang  dilakukan  belum mencapai  berat  kering  yang  diinginkan  yaitu sebesar  >  9%.  Hal  ini  disebabkan  karena sampel  yang  dianalisa  kadar  airnya  berupa sludge.Banyak  kandungan  air  pada  sludge karena sludge yang  dihasilkan belum dilakukan proses tahapan pengeringan menjadi  tepung  papain.  Pembuatan  papain hingga  menjadi  tepung  perlu  dilakukan proses lanjutanyaitu freeze drying.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwa  Pengaruh  perendaman buffer  fosfat  dan  konsentrasi  natrium  klorida (NaCl)  terhadap  aktivitas  protease  tertinggi pada  konsentrasi  natrium  klorida  60%  pada perendaman  12    jam  sebesar  272,8222 (unit/ml).

## Daftar Pustaka
[1]   AOAC, Official Methods Of Analysis Of The  Association  Of  Offical  Analitycal Chemist, 14 th ed  AOAC.  Inc.  Arlington.
Virginia, 1997.
[2] Askurrahman, Isolasi Karakterisasi
Linamarase  Hasil  Isolasi  Dari  Umbi Singkong  (Manihot  Esculenta  Craintz). Jurusan  Teknologi  Industri  Pertanian, Fakultas Pertanian Universitas Trunojoyo, 2010. [3]   Enggel,  J.;  Meriandini,  A.  dan  Natalia, L., Karakterisasi Protease EksTraseluler  Clostridiun  Bifermentans
R14-1-b. Mikrobiologi  Indonesia,  9  (1):
9-12, 2004.
[4]  Fennema,  Owen  R. Fennema’s  Food
Chemistry    4 ed Edition .  Srinivasan Damodaran,  Kirk  L.  Parkin  Owen  R. Fennema  (editor).  CRC  Press.  New York, 1996.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0%  20%  40%  60%  80% 100% K ad ar A ir ( % ) Konsentrasi NaCl (%) 0 Jam 12 Jam 24 Jam
36 Jam
[5]  Fellow’sP. Food Processing Technology Principal  and  Practice  Second  Edition. CRC Press. New York, 2002.
[6]  Fox,  P.F. Food  Enzymologi. Volume  1, Elsevier  Applied  Science,  New  York, 1991.
[7]  Lukitasari  D.  Studi  produksi  papain enam genotipe pepaya. [Skripsi]. Departemen Budidaya Pertanian. Institut Pertanian Bogor, 2004.
[8]  Mathews,  C.K.  and  Van  Holde,  K.E., Biochemistry,  The  Benjamin/  Company Publishing  Company  Inc.  United  States of America, 1990.
[9]  Mulyaningrum,  Sri  Redjeki  Hesti. Isolasi,  Karakterisasi,  dan  Amobilisasi
Enzim  Papain  dari  Getah  Pepaya. Fakultas Matematika dan Ilmu Penfetahuan Alam. Universitas Diponegoro. 1999. [10]  Novianti  Tri,  Puji  Ardiningsih,  Winda Rahmalia, “Pengaruh Temperatur Terhadap Aktivitas Enzim Protease dari Daun Sansankng (Pycnarrhena Cauliflora  Diels)” ,  JKK,  tahun  2012, volume 1 (1), halaman 31-34, 2012.
[11]  Nurhidayati, Tutik. Pengaruh
Konsentrasi  Enzim  Papain  Dan  Suhu Fermentasi  Terhadap  Kualitas  Keju
Cottage. KAPPA  (2003)  Vol.  4,  No.1,
13-17, 2003.
[12]  Rahmadani, Kajian Pemanfaatan Enzim Papain  dari  Getah  Pepaya  (Carica papaya  L.)  untuk  Melunakkan  Daging. Universitas Negeri Medan, 2012.
[13]  Risnawati Metty, and Sari Edi
Cahyaningrum, “ The Edition Effect Of
The  Metal  Ions  Ca 2+ on  The  Papain Activities”, UNESA Journal of Chemistry  Vol.  2,  No.  1,  Surabay  State
University, 2013
[14]  Sani. Panambahan  Natrium,  Bisulfit pada Kualitas Enzim Papain dari Getah Pepaya Secara MCU. Unesa University
Press. Hal 1-41, 2008. [15]  Sudarmadji, S.B., Haryono dan Suhardi.
Prosedur analisa Untuk Bahan
Makanan  dan  Pertanian .  PT.  Liberty.
Yogyagarta, 1997.
[16]  Suliansyah,  Irfan  dan  Syarif  Auzar.
Pengembangan Tanaman
Pepaya sebagai  Bahan  Baku  Agroindustri Papain . Lembaga
Pengabdian
masyarakat, Universitas Andalas, 2010.
[17]  Supiyatna. Manfaat  Getah  Pepaya. http://halalguide.info. 2007, diakses tanggal 05 Mei 2014.
[18]  Tropp,  B.E. Biochemistry:  concept  and application, Brook/cole publishing company, United  States  of  America,
1997.
[19]  Vogel,  A.l.,Tatchell  A.R.,  Furnis,  B.S Hannaford,  A.J  and  P.W.G  Smith. Vogel’s  Textbook  of  Practical  Organic Chemistry ,  5th  Edition.  Prentice  Hall. New Jersey, 1996.
[20]  Widjaja,  E,  A. Papain  Zat  Pelunak Daging, Bull.Kebun Raya., Vol. III, No. 1. 13-16, 1977.
[21]  Winarno, F.G. Enzim Pangan. PUSPANGTEPA.  IPB.  Bogor.  Hal. 107-110, 1995.
[22]  Winarno  F.G. Enzim  Pangan ,  Penerbit Gramedia, Jakarta, 1983.
[23]  Wiwit  Widyastuti, Kajian  Kualitas Buah Delapan Genotipe Pepaya Koleksi PKBT. Departemen  Agronomi  dan
Hortikultura,  Fakultas  Pertanian    IPB, 2009. [24]  Witono  Yuli,  Aulani  am,  Achmad Subagio dan Simon Bambang Widjanarko,  “Pemurnian  Parsial  Enzim Protease  Dari  Geth  Tanaman  Biduri Menggunakan Amonium Sulphat”, Jurnal Teknologi Pertanian , Vol. 7, No. 1 Universitas Brawijaya: Malang, 2006