FORMULATION OF MOUTHWASH PREPARATIONS ARECA NUT ( Areca catechu L.)

## ETHANOL EXTRACT
FORMULASI SEDIAAN OBAT KUMUR EKSTRAK ETANOL BIJI PINANG ( Areca catechu L.)
Vyta N Sari Sinrang 1)* , Hosea Jaya Edy 1) , Surya Sumantri Abdullah 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado *17101105012@student.unsrat.ac.id

## ABSTRACT
Areca Nut (Areca catechu L.) is a plant that contains many active compounds, one of them is alkaloid compound that has efficacy as an antifungal. This study aimed to formulate a mouthwash of areca nut ethanol extract that was physically good and to test the antifungal activity of the mouthwash of areca nut ethanol with concentrations 5%, 7,5%, 10% and 15% against the Candida albicans The conclusion were the ethanol extract of Areca nut could be formulated into a mouthwash preparation that was physically good and had the most significant antifungal activity at 15% concentration (F4) with a diameter of 25,4 mm.
Keywords : areca nut (Areca catechu L.), mouthwash, antifungal.

## ABSTRAK
Pinang  ( Areca  catechu L.)  merupakan  tanaman  yang  mengandung  banyak  senyawa  aktif,  salah satunya  senyawa  alkaloid  yang  berkhasiat  sebagai  antijamur.  Penelitian  bertujuan  untuk memformulasikan obat kumur ekstrak etanol biji pinang yang baik secara fisik dan menguji Aktivitas Antijamur  Obat  Kumur  Ekstrak  Etanol  Biji  Pinang  dengan  konsentrasi  5%,  7,5%,  10%  dan  15% terhadap jamur Candida albicans . Kesimpulannya, ekstrak etanol biji pinang dapat diformulasikan menjadi sediaan obat kumur yang baik secara fisik dan memiliki aktivitas antijamur paling nyata yaitu pada konsentrasi (F4) dengan diameter 25,4 mm.
Kata kunci : pinang ( Areca catechu L.), obat kumur, antijamur.

## PENDAHULUAN
Rongga  mulut  terdapat  banyak  flora normal,  flora  normal  tersebut  dalam  keadaan normal  tidak  menimbulkan  penyakit  namun  bila terjadi  gangguan  imun  atau  ketidakseimbangan dalam  rongga  mulut  maka  flora  normal  dapat menjadi  patogen.  Flora  normal  yang  dapat dijumpai  dalam  rongga  mulut  salah  satunya adalah Candida  albicans .  Insiden  kandidiasis rongga mulut karena mikroba ini dilaporkan 20%- 75%  jamur  pada  rongga  mulut  sering  terdapat pada lidah, mukosa labial, mukosa bukal, dorsum lidah bagian posterior, bagian papilla sircumvalata dan daerah plantum (Arnela, 2012).
Stomatitis  aftosa  rekuren  (SAR)  dan  ulkus traumatis  merupakan  penyakit  mulut  yang  umum terjadi  pada  prevalensi  4%  dan  25%.  Sariawan merupakan  penyakit  yang  diakibatkan  adanya jamur  pada  mulut  dan  saluran  kerongkongan, pembengkakan atau peradangan yang terjadi pada lapisan  mukosa  rongga  mulut.  Beberapa  faktor penyebab  sariawan  diantaranya  stres,  luka  di mulut,  kekurangan  vitamin  C,  terlalu  banyak minum  antibiotik  dan  infeksi  jamur  (Wardiana, 1991).
Penelitian  oleh  Athikat et  al (2014) menunjukkan  bahwa  ekstrak  air  panas  dan  Biji Pinang  memiliki  aktivitas  antijamur  terhadap Candida  albicans ,  tetapi  tidak  memiliki  aktivitas terhadap  jamur Mucor  sp,  Aspergillus  A.  nuger, dan Clasdosporium . Konsentrasi yang dibutuhkan untuk menghambat Candida albicans adalah 16,67 𝜇g/ml.  Penelitian  oleh  Cyriac et  al juga menunjukkan  bahwa  ekstrak  alkohol  dan  air memiliki  daya  hambat  terhadap  patogen  mikroba oral lainnya yaitu Streptococcus mutans, Streptococcus  salivarius,  Streptococcus  mitis, Lactobacillus acidophilus dan Prevotella intermedia (Fine, 2000).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  kurang  lebih  2  bulan, Laboratorium Penelitian Divisi Teknologi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi Manado.

## Alat dan Bahan Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ialah  alat-alat  gelas,  timbangan  analitik, blender , batang  pengaduk,  cawan  petri,  lemari  pendingin, pH  meter,  autoklaf,  pipet,  Erlenmeyer,  pinset, fungi
coloni  counter , aluminium foil , object  glass,  deck glass, micropipet .
Bahan Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ialah  biji  pinang  ( Areca  catechu L.) yang diambil di desa Kelurahan Tendeki, Matuari, Kota  Bitung,  etanol  96%  ( One  med ),  ekstrak  biji pinang,  larutan KOH  10%, Potato  Dextrose  Agar (PDA), Jamur Candida albicans .

## Jenis Penelitian
Jenis penelitian yang digunakan merupakan eksperimental  laboratorium  untuk  menentukan sediaan  obat  kumur  ekstrak  biji  pinang  ( Areca catechu L.) berdasarkan hasil uji pemeriksaan fisik seperti, uji organoleptik, uji pH, uji stabilitas serta pewarnaan jamur dan uji aktivitas antijamur.

## Prosedur Penelitian Preparasi Sampel
Buah  Pinang  ( Areca  catechu L.)  yang muda sebanyak 7 kg dikupas dan diambil bijinya. Biji  tersebut  dibersihkan  dan  dipotong-potong. Kemudian  dikeringkan  pada  suhu  40 o C.  Setelah kering, sampel dihaluskan dengan blender sampai menjadi simplisia kering dan diayak menggunakan ayakan 60 mesh .

## Ekstraksi Sampel
Sampel  diekstraksi  menggunakan  metode maserasi  yaitu  dengan  merendam  tiap  500  gram sampel  didalam  1,5  Liter  pelarut  etanol  96%. Ekstraksi  dilakukan  selama  4  hari  sambil  diaduk tiap  8  jam.  Setelah  ekstrak  dan  residu  dihasilkan, residu  akan  diremaserasi  selama  4  hari  sambil sesekali  diaduk  dan  proses  remaserasi  dilakukan terus-menerus  hingga  warna  pelarut  Kembali seperti  semula.  Hasil  pada  tiap  remaserasi dicampur  dan  pelarut  diuapkan  hingga  mendapat ekstrak kental.

## Pembuatan Obat Kumur
a. Pembuatan  fase  larut  air  yaitu  dengan dilarutkannya  bahan-bahan  yang  larut  dalam air seperti ekstrak Biji Pinang, gliserin, xylitol masing-masing telah dilarutkan dalam akuades
b. Mentol yang telah digerus tambahkan sedikit demi sedikit ke dalam bahan (a)
c. Xylitol  yang  sudah  di  larutkan  dengan akuades ditambahkan ke bahan (b).
d. Kemudian  bahan  (c)  ditambahkan  sedikit demi  sedikit  propilen  glikol  dan  diaduk homogen
e. Natrium benzoat dilarutkan dengan air sampai homogen setelah itu tambahkan ke bahan (d) hingga  mencapai  pH  6-7  (pH  dapar  dengan natrium benzoat).

## Evaluasi Sediaan Pengamatan Organoleptik
Pemeriksaan  organoleptik  obat  kumur dilakukan untuk mengamati stabilitas fisik sediaan terhadap masing-masing obat kumur yang meliputi bentuk, aroma dan warna (Ansel, 2008).

## Pengujian pH
Nilai  pH  diukur  dengan  menggunakan  pH meter. Kemudian ukur pH dengan meter sebanyak 3  kali  lalu  diambil  rata-ratanya.  pH  sediaan  yang memenuhi  kriteria  pH  mulut  yaitu  dalam  interval 6-7 (Traggono dan Latifa, 2007).

## Uji Stabilitas
Uji  stabilitas  dilakukan  dengan  metode  uji sentrifugasi.  Sediaan  obat  kumur  50  mL dimasukkan ke dalam tabung sentrifugasi kemudian  dilakukan  sentrifugasi  pada  kecepatan 3000 rpm selama 30 menit. Hasil sentrifugasi dapat amati  dengan  adanya  pemisahan  atau  tidak  (Lay, 1994).

## Uji Aktivitas Antijamur Sterilisasi Alat
Sterilisasi  alat  dilakukan  sebelum  semua
peralatan digunakan, yaitu dengan cara membungkus  semua  peralatan  dengan aluminium foil kemudian  dimasukkan  dalam  autoklaf  pada suhu 121 o C dengan tekanan 1 atm selama 15 menit. Alat  yang  tidak  tahan  panas  tinggi  sterilisasi dengan pembakar Bunsen.

## Pembuatan Media Agar
Potato Dextrose Agar (PDA) sebanyak 7,8 gr dilarutkan dalam 200 ml akuades menggunakan Erlenmeyer. Selanjutnya media disterilkan dengan autoklaf  dengan  suhu  121 o C  selama  15  menit, tuangkan  pada  cawan  petri  biarkan  pada  suhu ruangan  selama  ±30  menit  sampai  media memadat.

## Pembuatan Suspensi Uji Jamur
Candida albicans ambil dengan menggunakan jarum ose steril lalu suspensikan ke dalam  tabung  yang  berisi  10  mL  larutan  NaCl 0,9% kocok hingga peroleh larutan yang keruh.

## Pewarnaan Jamur
Masukkan  10  g  KOH  tersebut  dalam  100 ml  akuades  dinginkan  selama  50  menit  hingga  1 jam. Larutan KOH 10% teteskan pada kaca objek, suspensi  jamur  letakkan  diatasnya.  Setelah  tutup dengan  kaca  objek  lainnya  lewatkan  di  atas  api Bunsen.  Amati  di  bawah  mikroskop  akan  terlihat elemen-elemen jamur seperti hifa dan spora.

## Uji Aktivitas Antijamur
Uji  aktivitas  antijamur  terhadap  sediaan obat  kumur  dilakukan  dengan  menggunakan metode  difusi  sumuran.  Uji  aktivitas  antijamur lakukan dengan larutan uji obat kumur ekstrak biji pinang  dengan  konsentrasi  yang  berbeda  (5%, 7,5%,  10%  dan  15%)  teteskan  pada  sumur  yang berbeda  sebanyak  0,1  g/mL  menggunakan mikropipet.  Larutan  listerin  digunakan  sebagai kontrol  positif  teteskan  pada  sumur  dan  teteskan sebanyak 0,1 g/mL basis menggunakan mikropipet.  Cawan  petri  diinkubasi  pada  suhu 37 o C selama 3x24 jam.

## Pengamatan dan Pengukuran
Pengamatan  dilakukan  setelah  3x24  jam masa  inkubasi.  Daerah  bening  merupakan petunjuk  kepekaan  jamur  terhadap  obat  kumur ekstrak  biji  pinang  atau  bahan  antijamur  lainnya yang digunakan sebagai bahan uji yang dinyatakan  dengan  lebar  diameter  zona  hambat (Vandepitte et al , 2005).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sediaan  obat  kumur  ekstrak  biji  pinang ( Areca  catechu L.)  dibuat  empat  variasi konsentrasi  menggunakan  metode  difusi  agar sumuran. Media yang digunakan untuk menumbuhkan  jamur Candida  albicans ialah Potato Dextrose
Agar yang berfungsi menumbuhkan  atau  mengidentifikasi  ragi  dan kapang.  PDA  mengandung  sumber  karbohidrat dalam jumlah cukup yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang  dan  2%  glukose  sehingga  baik  untuk pertumbuhan  kapang  dan  khamir  tetapi  kurang baik untuk pertumbuhan bakteri (Jawetz, 1995).
Dalam  penelitian  ini,  digunakan  formula dasar  obat  kumur  yang  terdiri  dari  gliserin, mentol,  xylitol,  propilenglikol,  natrium  benzoat dan  akuades  untuk  melarutkan  bahan  dan mencukupkan  volume  yang  diinginkan.  Gliserin bertujuan  untuk  meningkatkan  kelarutan  dari ekstrak  yang  tidak  larut  dan  sempurna  dalam  air, gliserin sebagai humektan 5-20% pada obat kumur untuk  memberikan  sensasi  tertentu  di  mulut. Mentol bertujuan untuk menambah aroma dan
memberikan  kesegaran  pada  sediaan.  Xylitol bertujuan sebagai antimikroba dan pemanis dalam sediaan  obat  kumur.  Propilenglikol  bertujuan sebagai pelarut dalam sediaan obat kumur. Natrium benzoat  bertujuan  sebagai  pengawet  agar  obat kumur dapat disimpan dalam waktu yang lama.
Uji  pemeriksaan  fisik  sediaan  yang digunakan dalam menentukan formula obat kumur yang  terbaik  dan  memenuhi  syarat  antara  lain melalui uji organoleptik, uji pH, uji stabilitas serta uji aktivitas  antijamur  untuk  melihat  kemampuan obat  kumur  dalam  menghambat  jamur Candida albicans .
Obat  kumur  biji  pinang  yang  memenuhi syarat yang baik secara fisik memiliki bentuk cair, warna cokelat kehitaman dan aroma khas mentol. Hasil pengujian oraganoleptik formula obat kumur pada  Tabel  2.  Evaluasi  uji  organoleptik  sediaan obat kumur ekstrak etanol biji pinang.
Obat kumur yang baik memiliki rentang pH sebesar  6-7  (Traggono  dan  Latifa,  2007).  Hal  ini dimaksudkan agar obat kumur tidak bersifat asam karena dapat menyebabkan korosif pada gigi atau jika  bersifat  basa  dapat  menggangu  pengecapan. Hasil pengujian pH pada Tabel 3. Evaluasi uji pH sediaan obat kumur ekstrak etanol biji pinang.
Uji  stabilitas  bertujuan  untuk  melihat kemampuan  produk  untuk  mempertahankan  sifat dan karakteristik khasiat atau terapi agar tetap sama pada  saat  dibuat  sampai  Batasan  yang  ditetapkan sepanjang  periode  penyimpanan  dan  penggunaan ( Shelf-life ). Hasil pengujian stabilitas pada Tabel 4. Evaluasi uji stabilitas sediaan obat kumur ekstrak biji pinang.
Pewarnaan jamur bertujuan untuk mengidentifikasi  elemen-elemen  jamur,  KOH (kalium hidroksida) dapat melarutkan jaringan sel dan  mengkeratinisasi  bahan  lainnya.  KOH  yang alkalis  dapat  menyebabkan  penghancuran  sel-sel jamur dengan penghancuran tersebut memungkinkan untuk melihat di bawah mikroskop seperti spora dan hifa. Hasil pewarnaan jamur pada Gambar 2. Pewarnaan jamur Candida albicans . Pengujian  aktivitas  antijamur Candida albicans dilakukan  dengan  empat  formula  yaitu formula  obat  kumur  ekstrak  biji  pinang  dengan konsentrasi  5%,  7,5%  10%  dan  15%,  dua  kontrol sebagai  pembanding  yaitu  kontrol  positif  yang digunakan  adalah  listerin  multi  protect  zero  dan kontrol negatif yang digunakan adalah obat kumur tanpa ekstrak (basis). Berdasarkan hasil pengamatan  yang  dilakukan  pada  tiga  kali pengujian  di  tiga  cawan  petri  memperlihatkan aktivitas  antijamur  dengan  adanya  zona  hambat yang terbentuk di sekitaran  sumuran.
Diameter  zona  hambat  diukur  menggunakan jangka sorong. Zona hambat yang dihasilkan pada formulasi I yaitu 24,3 mm; formulasi II yaitu 24,5 mm;  formulasi  III  yaitu  25,2  mm;  formulasi  IV yaitu  25,4  mm.  Pada  kontrol  positif  zona  hambat yang dihasilkan 22,81 mm dan kontrol negatif yang dihasilkan  0  mm.  penilaian  zona  hambat  menurut David  dan  Stout  (1971)  digolongkan  menjadi  : sangat  kuat  (zona  hambat  >20  mm),  kuat  (zona hambat  10-20  mm),  sedang  (zona  hambat  5-10 mm) dan lemah (<5 mm). berdasarkan penggolongan  tersebut  maka  sediaan  obat  kumur ekstrak biji pinang termasuk golongan sangat kuat dalam menghambat jamur Candida albicans . Hasil Pengujian  aktivitas  antijamur  pada  Tabel  5.  Uji aktivitas antijamur sediaan obat kumur etanol biji pinang.
Daya  hambat  oleh  ekstrak  biji  pinang ditandai  dengan  berubahnya  warna  permukaan agar  atau  daerah  sekitar  pertumbuhan  jamur tersebut  menjadi  jernih/bening.  Dimana  daerah yang  ditumbuhi  jamur  berwarna  bening  sehingga zona  hambat  yang  terjadi  tampak  melebar dikelilingi tempat penanaman ekstrak biji pinang.
Faktor utama yang memengaruhi pertumbuhan  jamur  adalah  suhu  inkubasi,  sebab untuk  pertumbuhan  jamur  membutuhkan  suhu yang  optimal  dan  kebanyakan  jamur  bersifat mesofilik  yaitu,  mikroba  yang  menyukai  suhu sedang sehingga tumbuh dengan baik pada kisaran suhu  30-37 o Celsius.  Temperatur  yang  ekstrem dapat  membunuh  dan  berpengaruh  terhadap  laju pertumbuhan mikroorganisme (Djide, 2006).
Biji  pinang  mengandung  senyawa  yang bersifat antijamur seperti flavonoid, tanin, alkaloid dan saponin. Flavonoid bekerja dalam menghambat metabolisme energi sehingga apabila metabolisme  sel  terganggu  maka  pertumbuhan jamur  juga  akan  terganggu.  Hal  tersebut  terjadi karena  flavonoid  bersifat  lipofilik  sehingga  akan mengikat fosfolipid-fosfolipid jamur dan mengganggu  permeabilitas  membran.  Tanin bekerja mengkerutkan dinding sel atau membrane sel sehingga mampu mengganggu permeabiitas sel itu  sendiri  apabila  permeabilitas  terganggu  maka pertumbuhannya  akan  terhambat  bahkan  mati. Alkaloid  bekerja  dengan  merusak  dinding  sel jamur  sehingga  dapat  menghambat  pertumbuhan jamur Candida  albicans .  Saponin  bekerja  dengan cara  menurunkan  tegangan  permukaan  sehingga mengakibatkan naiknya permeabilitas atau kebocoran  sel  dan  senyawa  intraseluler  di dalamnya akan keluar (Lusiana, 2016).
Tabel 1. Formula Sediaan Obat Kumur Ekstrak Biji Pinang ( Areca catechu L.)
(Sumber: Rowe et al , 2009) Bahan Fungsi Konsentrasi 5%  7,5%  10% 15% Ekstrak Biji Pinang Zat aktif 5 7,5 10 15 Gliserin Humektan 15 15 15 15 Menthol Perasa 0,25  0,25  0,25 0,25 Propilenglikol Pelarut 5 5 5 5 Xylitol Pemanis 3 3 3 3 Natrium Benzoat Pengawet 1 1 1 1 Aquades Pelarut 60 60 60 60
Gambar 1. Sediaan Obat Kumur Ekstrak Biji Pinang ( Areca catechu l.)
Tabel 2. Evaluasi Uji Organoleptik Sediaan Obat Kumur Ekstrak Biji Pinang ( Areca catechu L.) Sediaan Bentuk Aroma Warna F0 Cair Khas Putih F1 Cair Khas Coklat Kehitaman F2 Cair Khas Coklat Kehitaman F3 Cair Khas Coklat Kehitaman F4 Cair Khas Coklat Kehitaman Keterangan : F1 : Formulasi 1 (konsentrasi 5%)
F2 : Formulasi 2 (konsentrasi 7,5%) F3 : Formulasi 3 (konsentrasi 10%) F4 : Formulasi 4 (konsentrasi 15%).
Tabel 3. Evaluasi Uji pH Sediaan Obat Kumur Ekstrak Biji Pinang ( Areca catechu L.) Formulasi pH Keterangan FI 7,40 Memenuhi Syarat FII 7,20 Memenuhi Syarat FIII 7,10 Memenuhi Syarat FIV 6,99 Memenuhi Syarat Keterangan : F1 : Formulasi 1 (konsentrasi 5%)
F2 : Formulasi 2 (konsentrasi 7,5%) F3 : Formulasi 3 (konsentrasi 10%) F4 : Formulasi 4 (konsentrasi 15%).
Tabel 4. Evaluasi Uji Stabilitas Sediaan Obat Kumur Ekstrak Biji Pinang ( Areca catechu L.)
Formulasi Konsistensi FI Tidak terjadi pemisahan fase FII Tidak terjadi pemisahan fase FIII Tidak terjadi pemisahan fase FIV Tidak terjadi pemisahan fase Keterangan : F1 : Formulasi 1 (konsentrasi 5%)
F2 : Formulasi 2 (konsentrasi 7,5%) F3 : Formulasi 3 (konsentrasi 10%) F4 : Formulasi 4 (konsentrasi 15%).
Gambar 2. Pewarnaan Jamur Candida albicans
Gambar 3. Pengujian Aktivitas Antijamur Sediaan Obat Kumur Ekstrak Etanol Biji Pinang
( Areca catechu L.)
Tabel 5. Uji Aktivitas Antijamur Sediaan Obat Kumur Ekstrak Etanol Biji Pinang ( Areca catechu L.)

## Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat
( 𝜇𝜇 ) Sediaan Perlakuan Rata-rata Keterangan 1 2 3 K (+) 25,2 21,5  21,75 22,81 Sangat kuat K (-) - - - - Lemah F1 26,1 22,1 24,7 24,3 Sangat kuat F2 24,5 23,1 25,9 24,5 Sangat kuat F3 23,2 26,1 26,3 25,2 Sangat kuat F4 23,7 25,2 27,4 25,4 Sangat kuat Keterangan : K (+) : Kontrol positif (listerin) K (-) : Kontrol negatif (basis) F1 : Formulasi 1 (konsentrasi 5%) F2 : Formulasi 2 (konsentrasi 7,5%) F3 : Formulasi 3 (konsentrasi 10%) F4 : Formulasi 4 (konsentrasi 15%).

## KESIMPULAN
Ekstrak  Etanol  Biji  Pinang  ( Areca  catechu
L.)  dengan  konsentrasi  5%,  7,5%,  10%  dan  15% sudah memenuhi syarat mutu sediaan obat kumur. Formulasi sediaan obat kumur Ekstrak Biji Pinang ( Areca  catechu L.)  memiliki  aktivitas  antijamur terhadap jamur Candida albicans dengan konsentrasi  15%  memiliki  daya  hambat  yang paling besar yaitu 25,4 mm.

## SARAN
Penelitian  selanjutnya  diharapkan  lakukan pengujian lebih lanjut untuk uji fisik sediaan obat kumur  yang  lain  serta  pembuatan  Ekstrak  biji pinang menggunakan metode yang lain. Pengujian aktivitas  antijamur  dengan  metode  difusi  agar sumuran bisa dibandingkan dengan menggunakan metode  difusi  agar  yang  lain  sehingga  dapat ditentukan kekuatan antijamur.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah,  S.S.,  Djide,  N.  and  Natsir,  S.,  2021. KLT  bioautografi  hasil  partisi  ekstrak etanol herba bandotan (Ageratum Conyzoides L.) terhadap Shigella
dysentriae. Chemistry Progress , 14 (1).

## Arnela,  N.  2012.  Pengaruh  Ekstrak  Biji  Pinang
(Areca catechu. L) Terhadap Pertumbuhan Candida albicans. Skripsi. Fakultas Kedokteran Gigi Unsyiah. Banda Aceh.
Ansel,  H.C.  2008. Pengantar  Bentuk  Sediaan
Farmasi , Edisi IV. Alih Bahasa Ibrahim, F. Jakarta : UI Press.
Anthikat,  R.R.,  Nelson,  A.  Michael,  V.A.,
Kinsalin, S., Ignacimuthu. 2014.
Antifungal  Activity  of  Areca  catechu  L  . International  Journal  of  Pharmaceutical
and Clinical Science 2014; 4(1): 1-3.
Cyriac,  M.B.,  Pai,  V.  2012,  Antimicrobial Properties  of  Areca  Catechu  (Areca  Nut) Husk  Extracts  Against  Common  Oral Pathogens, International Journal Research Ayurvedic Pharmaceutical, 3(1), 81
Davis, W.W., Stout, T.R. 1971. Disc Plate Methods of  Microbiological  Antibiotic  Assay. Microbiology.
Djide, N., & Sartini. 2006. Mikrobiologi Farmasi Dasar . Makassar: Penerbitan Unhas.
Fine,  A.M.  2000.  Oligomeric Proanthocyanidin
Complexes: History, Structure, and Phytopharmaceutical Applications.
Alternative  Medicine  Review ,  5(2):144- 151.
Jawetz, E., Melnick, J.L., and Adelberg, E.A. 1995.
Mikrobioloigi Kedokteraan . Jakarta: Salemba Medika
Lusiana,  L.  2016.  Uji  Daya  Hambat  Ekstrak
Euphorbia hirta Terhadap Bakteri
Porphyromonas gingivalis Secara in-vitro. Fakultas Kedokteran UNSRAT, Manado. Lay, B.W. 1994.
Analisis Mikroba di Laboratorium .  Edisi  1.  Raja  Grafindo
Persada, Jakarta.
Rowe,  R.C., et  al .  2009.  Handbook  of Pharmaceutical Excipient 6 th Ed. London: The Pharmaceutical Press.
Tranggono  R.I.,  dan  Latifa  F.  2007. Buku Pegangan  Ilmu  Pengetahuan  Kosmetik ,
PT.  Gramedia  Pustaka  Utama,  Jakarta;
Hal. 11, 90-93, 167.
Vandepitte, J., Engbaek, K., Rohmar, P., Pint, P., Heuck, C.G. 2005. Prosedur Laboratorium Dasar dan untuk Bakteriologis  Klinis .  Edisi  2.  Buku
Kedokteran ECG, Jakarta.
Wardiana, E. dan Randriani, E. 1991. Beberapa ciri morfologis tanaman pinang ( Areca catechu L.). Buletin Balitka . (15): 60.