TOTAL LEUKOSIT KELINCI POST INFEKSI Salmonella Typhii Inaktif
Oleh :
Muhammad Thoriq Shahab, Era Hari Mudji

## ABSTRAK
Penelitian  ini  menggunakan  hewan  coba  berupa  kelinci  sebanyak  10  ekor. Kelinci  –  kelinci  tersebut  diadaptasi  selama  1  minggu.Setelah  masa  adaptasi selesai  kelinci  tersebut  diinfeksi  dengan Salmonella  Typhii inaktif  sebanyak  0,2 ml  yang  diinduksikan  secara  sub  kutan.  Post  infeksi  1  x  24  jam  dilakukan pengambilan  sampel  darah  sebanyak  0,5  ml  melalui  vena  auricularis  untuk  diuji total  leukositnya.  Kemudian  kelinci  dibooster/pengulangan  vaksinasi  5  hari setelah  infeksi  pertama.    Setelah  dilakukan  infeksi  yang  kedua  dilakukan pengambilan  sampel  darah  sebanyak  0,5  ml  melalui  vena  auricularis.    Sampel darah  tersebut  diuji  total  leukositnya  dengan  menggunakan  hemocitometer.  Data yang  diperoleh  berupa  data  kuantitaif  kemudian  dilakukan  pengujian  dengan menggunakan  uji  anova.  Hasil  yang  di  dapat  adalah  terdapat  perbedaan  yang sangat  nyata  antara  total  leukosit  post  infeksi  pertama  dengan  total  leukosit  post infeksi ketiga.
Kata Kunci :  Kelinci lokal, Salmonella Typhii , Vaksinasi, Total Leukosit
TOTAL LEUCOCYTE of RABBIT

## POST INFECTION INAKTIF Salmonella Typhii
By :

## Muhammad Thoriq Shahab

## ABSTRACT
The  experiment  used  rabbit  as  the  experimental  animal  as  much  as  10 th rabbits.    The  rabbits  was  adapte  as  long  as  a  week.      After  the  adaptation  has finish,  the  rabbits  inject  used Salmonella  Typhii as  much  as  0,2  ml  in  sub  cutan application. One times 24 hours post infection take the blood sample as much as 0,5  ml  in  auricularis  vein  application.  The  booster  do  5 th days  after  the  first infetion.    Blood  sampling  do  while  the  second  infetion  in  auricularis  vein application.  Blood sample was identify the total leucocyte by hemocitometer. The data obtained in the form of quantitative data and then conducted  testing using ANOVA test. The result is that there can be a very real difference between the total leucocyte post first infection with the total leukocyte third post infection.
Key words :  Rabbits, Salmonella Typhii , Vaccines, Total Leucocyte
I. PENDAHULUAN 1.1.      Latar Belakang Masalah .
Bakteri Salmonella merupakan anggota famili Enterobacteriaceae, gram negatif, anaerob  fakultatif,  tidak  berspora  dan  berbentuk  batang.  Lebih  dari  2000  serotip Salmonella adalah  patogen  (Madigan et  al. 2009).  Penyakit  akibat  infeksi Salmonella disebut salmonellosis (Marriot 1999). Salmonellosis merupakan salah satu penyakit yang
ditularkan  melalui  makanan  dan  air.  Gejala  salmonellosis  pada  manusia  dapat  berupa sindrom gastroenteritis (Cox 2000; Chung et al . 2003).
Salmonellosis telah  dikenal  di  semua  negara,  tetapi  yang  paling  sering berpotensi terjadi yaitu di daerah peternakan secara intensif, khusunya di babi, unggas. Penyakit  itu  dapat  mempengaruhi  semua  jenis  hewan,  hewan  muda  dan  bunting  dan yang  berpotensi  adalah  hewan  yang  sedang  menyusui.  Ternak  yang  yang  rawan terhadap  salmonellosis  diantaranya  sapi,  domba,  kambing,  babi  yang  muda  demikian juga dengan hewan kesayanagn seperti anjing, kucing, kelinci dan hamster (NURMI dan RANTALA, dalam FERREIRA et al , 2003). .
Salmonellosis merupakan  penyakit  yang  menular  pada  manusia  (zoonosis).
Kejadian salmonellosis semakin meningkat  dengan semakin banyaknya warung-warung manakn  yang  tidak  higienik.  Sumber  penularan  berupa  keluaran  (eksresi)  hewan  dan manusia  baik  dari  hewan  ke  manusia  maupun  sebaliknya.  Menurut  www.oie.int salmonellosis adalah  penyakit  infeksi  pada  manusia  dan  hewan  yang  disebabkan  oleh organisme dari 2 jenis salmonella ( S. enteritica dan S. bongori ), meskipun sebagai bakteri yang  terdapat  di  saluran  pencernaan, salmonella menyebar  luas  di  lingkungan, umumnya  ditemukan  pada  sampah  dan  bahan-bahan  yang  berhubungan  dengan kontaminasi fekal (Suwandono et al . 2001).
Kasus salmonellosis telah banyak dilaporkan di negara maju maupun di negara berkembang. Kasus salmonellosis di Amerika Serikat diderita oleh 1,4 juta orang setiap tahunnya, dan 95% kasusnya adalah ditularkan melalui makanan (Mrema et al . 2006). Di Indonesia salmonellosis-tifoid diperkirakan  terjadi  sebanyak  60.000  hingga  1.300.000 kasus  dengan  sedikitnya  terjadi  20.000  kematian  pertahun  (Suwandono et  al .  2005).
Sifat  patogenitasnya,  antigenisitas  dan  imunogenisitasnya  beberapa  isolat  pada  hewan percobaan mencit, kelinci dan sapi perah bunting untuk mengetahui prospeknya sebagai kandidat vaksin (Kusmiyati dan Supar, 1998).
Vaksin  adalah  sediaan  yang  mengandung  zat  antigenik  yang  mampu menimbulkan  kekebalan  aktif  dan  khas  pada  manusia  dan  hewan.Vaksin  dapat  dibuat dari bakteri, riketsia atau virus dan dapat berupa suspensi organisme hidup atau inaktif atau  fraksifraksinya  atau  toksoid. Vaksinasi  atau  imunisasi  merupakan  pemberian antigen  (vaksin)  pada  hewan  dengan  maksud  merangsang  tanggap  kebal  protektif (Tizard 1982).  Menurut Kistner (2003), jenis-jenis vaksin virus ada 3 yaitu, vaksin virus hidup  yang  dilemahkan  ( Live  Attenuated  virus  Vaccines ), vaksin  virus  inaktif/mati ( Inactivated/killed virus Vaccines ) danb vaksin subunit ( subunit Vaccines ).
Vaksinasi  telah  dilakukan  sejak  lama  terutama  untuk  mengatasi  penyakit- penyakit  infeksius.  Vaksinasi  dapat  dilakukan  dengan  pemberian  vaksin  aktif  maupan inaktif  (Anonim  2004b).  Dalam  penelitian  ini  digunakan  vaksin  inaktif.  Vaksin  inaktif adalah  vaksin  virus  mati  tetapi  struktur  antigenitasnya  masih  ada  dan  virus  tersebut diinaktifkan dengan menggunakan bahan kimia (Malole 1988).
Pemberian  vaksinasi  ini  diharapkan  mampu  menanggulangi  penyakit- penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri  salmonella.  Kebaikan  yang  paling  penting pada  vaksinasi  inaktif  ini  adalah  adanya  perlindungan  yang  berlangsung  lama  dan peningkatan  tanggap  kebal  oleh  infeksi  ulang  antigen.  Dalam  penelitian  ini digunakan  kelinci  sebagai  inang  sehingga  dapat  diketahui  seberapa  infeksius
salmonella  bisa  menginfeksi  kelinci  yang  sudah  divaksinasi  dengan  vaksin  inaktif salmonella dengan melihat kadar sel darah putih pada kelinci tersebut.
Kelinci  sejak  dahulu  merupakan  hewan  peliharaan  yang  sudah  dikenal  oleh banyak orang dan keberadaannya cukup dekat dengan manusia. Kelinci yang dipelihara manusia  dikembangkan  sebagai  hewan  laboratorium,  ternak  penghasil  daging,  ternak penghasil  kulit/ fur serta  sebagai  hewan  kesayangan  ( pets  animal ).  Kelinci  dijadikan sebagai  hewan  kesayangan  karena  keindahan  penampilan  yang  dimiliki  dan  jinak.  Di Inggris,  kelinci  sudah  lama  dijadikan  sebagai pet  animal .  Bagi  pecinta  kelinci  perlu diperhatikan  masalah  kesehatan  dan  kesejahteraan  hewan.  Ada  bermacam-macam penyakit  kelinci,  beberapa  diantaranya  di  sebabkan  oleh  bakteri  salah  satu  bakteri tersebut adalah bakteri salmonella yang sangat merugikan dan dapat menular ke hewan lain maupun manusia (Madigan et al. 2009).

## IV. MATERI DAN METODE

## 4.1 Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dimulai pada 1 September – 31 Desember 2013. di Laboratorium Mikrobiologi  dan  Laboratorium  Patologi  Klinik  Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas Wijaya Kusuma Surabaya,
4.2. Materi Penelitian
Alat-alat  yang  digunakan  untuk  penelitian  ini  adalah  kandang pemeliharaan  kelinci,  tempat  pakan  dan  air  minum, syringe ,  gelas  objek,  tabung mikro, satu set hemocytometer dan label, spuit, sentrifus, tabung EDTA.
Hewan  percobaan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  kelinci  jantan lokal  dengan  umur  5  bulan  dan  bobot  badan  mencapai  2  sampai  3  kg  dan  vaksin Salmonella Typhii inaktif. Bahan lain yang digunakan yaitu pakan kelinci dan air minum, formalin, PZ, alkohol 70%, metanol, kapas, EDTA (ethylendiamine tetraacetic acid) cair, minyak emersi dan xylol.

## 4.3. Metode Penelitian
4.3.1.   Jenis Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental. Dengan menggunakan sampel penelitian berupa darah kelinci.  Darah tersebut akan dianalisa total leukositnya.  Data yang  diperoleh  akan  diolah  secara  kuantitatif.    kemudian  akan  dianalisa  dengan menggunakan uji ANOVA.

## 4.3.2.   Variabel Penelitian
Variabel  penelitian  ini  terdiri  dari  beberapa  variabel  yaitu  variabel  bebas, variabel tergantung/terikat, dan variabel kendali.
a. Variabel bebas adalah kelinci lokal.
b. Variabel tergantung vaksin Salmonella Typhii inaktif.
c. Variabel  kendali  adalah  cara  pengambilan  sel  darah  kelinci,  perkandangan kelinci.

## 4.3.3   Teknik Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  darah  kelinci  lokal  jantan yang dibeli dari pasar bratang, Surabaya. Sampel kelinci lokal di ambil sebanyak 10 ekor dengan umur, jenis kelamin dan ras yang sama. Pengambilan sampel dilakukan melalui telinga  kelinci  yaitu  pada  vena  auricularis.  Pengambilan  sampel  dari  masing-masing kelinci 0,5 ml.

## 4.3.4.   Prosedur Penelitian

## A. Perlakuan pada kelinci
Kelinci akan dipelihara di kandang individu dan diadaptasikan selama dua minggu.
Pakan kelinci berupa pelet, sayuran dan pemberian air minum.  Kelinci yang digunakan sebagai hewan coba dan terbebas dari  penyakit scabies.
Pada hari ke-0 dilakukan pengambilan darah untuk mengetahui keadaan normal kemudian  dilakukan  penghitungan  dan  pengamatan  gambaran  sel  lymposit.  Pada  hari ke-5,  ke-10,  ke-15  dilakukan  pemberian  vaksin  inaktif Salmonella  Typhii dan  dilakukan pengambilan darah disetiap 1x24 jam post infeksi isolat Salmonella Typhii inaktif serta pengamatan gambaran sel lymposit  pada kelinci. Vaksin diberikan dengan dosis  0.2  ml secara subkutan.

## B. Proses Pembuatan Salmonella inaktif
Suspensi Salmonella typhii dengan Formalin  perbandingan 1:1 kemudian menggunakan magnetik bar untuk mencampur antara salmonella dengan formalin selama 10 menit setelah itu dicuci menggunakan PZ dengan perbandingan 1:1 lalu di  sentrifugasi  sebanyak  5  kali  dengan  kecepatan  5000rpm  dan  diukur  kadarnya dengan  menggunakan mcfarlan 1 agar bisa mengatur dosis yang di butuhkan.

## C. Pengambilan Darah
Darah diambil melalui vena auricularis pada tepi telinga. Sebelum diambil darah,  pada  tempat  pengambilan  darah  dibersihkan  dulu  dengan  alkohol  70% kemudian  darah  diambil  dengan  syringe  1  ml  yang  sebelumnya  telah  dibasahi dengan EDTA sebagai antikoagulan.

## D. Pembuatan Preparat Ulas darah
Darah  segar  yang  telah  diberi  antikoagulan  diteteskan  pada  gelas  objek kemudian dengan gelas objek yang lain diratakan dengan menempatkan salah satu sisi  ujung  gelas  objek  kedua  pada  permukaan  gelas  objek  pertama  dengan membentuk  sudut  30-45º.  Gelas  objek  kedua  ditarik  samapi  menyentuh  tetes darah,  darah  dibiarkan  menyebar  sepanjang  tepi  gelas  objek  pertama.  Sediaan
dikeringkan  selanjutnya  difiksasi  dengan  metanol  selama  5  menit  kemudian dimasukkan  kedalam  pewarna  Giemsa  10%  selama  60  menit.  Setelah  itu  dicuci dengan air mengalir lalu dikeringkan.

## E. Penghitungan Jumlah Lymposit
Darah segar yang telah diberi EDTA dihisap dengan pipet leukosit sampai angka  0,5  kemudian  dihisap  larutan  turk  sampai  angka  11  selanjutnya  dikocok selama  3  menit  dengan  alat  Dari  dalam  pipet  1-2  tetes  dibuang  dan  pada  kamar hitung haemocytometer diteteskan satu tetes. Jumlah sel darah putih dihitung pada keempat sudut kamar hitung.
Gambar 13. Neubauer hemocytometer (Brown 1980)
Keterangan A,B,C,D : daerah penghitungan leukosit

## F. Diferensial Leukosit
Preparat  ulas  yang  telah  diwarnai  dengan  Giemsa  diperiksa  dibawah mikroskop  dengan  perbesaran  100  x  10  kali  menggunakan  minyak  emersi. Penghitungan  diferensial  leukosit  berdasarkan  hasil  pengamatan  dengan menghitung  jumlah  neutrofil,  eosinofil,  basofil,  limfosit  dan  monosit  dalam  100 butir leukosit. Hasil penghitungan leukosit dinyatakan dalam persen dan grafik.

## 4.3.5    Analisis Data
Data  yang  diperoleh  merupakan  data  kuantitatif  yang  akan  dianalisa dengan menggunakan uji ANOVA.

## V. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 5.1. Hasil Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  tanggal  14  Desember  sampai  dengan  29 Desember  2012,  yang  bertujuan  untuk  mengetahui  total  leukosit  kelinci  post infeksi Salmonella Typhii inaktif dan didapatkan hasil sebagai berikut :
Tabel 4. Jumlah  Total  Leukosit  Kelinci  Sebelum  Infeksi Salmonella  Typhii
(volume darah x 10 3 /µL Darah)
Kode Kelinci Hasil Pemeriksaan Leukosit ( x 10 3 / µ L )
A
5.0
B 5.2
C 5.6 D 5.4
E
4.3
F
4.1
G
5.2 H 5.4 I 4.0
J
4.2
Total (∑) 48.4
Rata-rata (x) 4.84
Tabel 5. Jumlah  Total  Leukosit  Kelinci  Pasca  Infeksi  Pertama Salmonella Typhii (volume darah x 10 3 /µL Darah) Kode Kelinci Hasil Pemeriksaan Leukosit ( x 10 3 / µ L )
A 6.1
B
6.2 C
6.4
D
6.3
E
4.8
F
4.6 G 6.0
H
6.1
I 4.5 J 5.0
Total (∑) 56
Rata-rata (x)
5.6
Tabel 6. Jumlah  Total  Leukosit  Kelinci  Pasca  Infeksi  Kedua Salmonella Typhii (volume darah x 10 3 /µL Darah) Kode Kelinci Hasil Pemeriksaan Leukosit ( x 10 3 / µ L ) A 8.1
B 8.2
C
8.8
D
8.3
E
5.8
F
5.6
G
7.7 H 7.1
I 5.8 J 5.6
Total (∑) 71 Rata-rata (x)
7.1
Keterangan:  Infeksi kedua dilakukan setelah 5 hari infeksi pertama
Tabel 7. Jumlah  Total  Leukosit  Kelinci  Pasca  Infeksi  Ketiga Salmonella Typhii (volume darah x 10 3 /µL Darah) Kode Kelinci Hasil Pemeriksaan Leukosit ( x 10 3 / µ L )
A 9.6 B 9.6
C
9.9
D
10.6
E
6.1
F 5.9 G
8.8
H
8.9 I 4.7
J 4.8 Total (∑) 78.9 Rata-rata (x) 7.89
Keterangan:  Infeksi ketiga dilakukan setelah 5 hari setelah infeksi kedua
Berdasarkan  uji  ANOVA  diperoleh  hasil  penelitian  tentang  jumlah leukosit  kelinci  yang  di  infeksi  dengan Salmonella  Typhii inaktif,  Fhitung (Leukosit) > Ftab 0,01, maka dapat disimpulkan terdapat perbedaan sangat nyata diantara perlakuan infeksi Salmonella Typhii pada hari pertama, kedua dan ketiga (p<0,01).
Tabel 8. Rata-rata hasil dan Standar Deviasi (x  ± SD) jumlah leukosit kelinci pasca infeksi Salmonella Typhii pada akhir penelitian.
Keterangan:  Superskrip  yang  berbeda  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan adanya  perbedaan  yang  sangat  nyata.  P  <  0,05  <  0,01  →  berbeda sangat nyata
Hasil  analisa  diatas  menunjukkan  bahwa  nilai  P  <  0,05  <  0,01.    Sehingga bermakna terdapat perbedaan yang sangat nyata terhadap peningkatan jumlah total leukosit kelinci post infeksi Salmonella Typhii inaktif pertama, kedua dan ketiga.
Kelompok Perlakuan Rata-Rata Nilai Leukosit  (x  ± SD) Pengambilan darah sebelum infeksi 4.8400 a ± 0.61860 Pengambilan darah pasca infeksi I 5.6000 a ± 0.77172 Pengambilan darah pasca infeksi II 7.1000 b ± 1.28149 Pengambilan darah pasca infeksi III 7.8900 b ± 2.26001
Hal  ini  disebabkan  oleh  adanya  derajat  kepercayaan  99%.  Berikut  adalah  hasil persentase  total  leukosit  kelinci  yang  di  infeksi  Salmonella  Typhii  inaktif  yang disajikan dalam bentuk grafik :
Tabel 9. Presentase  Total  Leukosit  Kelinci  Post  Infeksi Salmonella  Typhii
Inaktif Dalam Bentuk Grafik
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Pengambilan Darah Sebelum
Infeksi Pengambilan Darah Pasca Infeksi I Pengambilan Darah Pasca Infeksi II Pengambilan Darah Pasca Infeksi III Total Leukosit Total Leukosit

## 5.2. Pembahasan
Dari hasil pengamatan dapat  dilihat pasca infeksi pertama  jumlah leukosit pada kelinci masih berada pada kisaran normal, hal ini diduga pada kelinci  yang di infeksi belum merespon vaksin Salmonella Typhii yang diberikan. Pasca infeksi
kedua jumlah leukosit pada kelinci terjadi peningkatan (leukositosis). Peningkatan jumlah  leukosit  pada  kelinci  yang  divaksin  merupakan  respon  tubuh  kelinci terhadap  masuknya  benda  asing  (vaksin).  Leukositosis  merupakan  peningkatan jumlah  leukosit  total  di  dalam  sirkulasi  darah,  biasanya  sebagai  akibat  dari meningkatnya  jumlah  total  neutrofil  yang  bersirkulasi  (Jain  1993).  Leukositosis dapat  bersifat  fisiologis  dan  patologis.  Leukositosis  fisiologis  terjadi  karena adanya  respon  terhadap  epinefrine  sehingga  dapat  memobilisasi  neutrofil  dan limfosit dari pool marginal menuju sirkulasi umum. Leukositosis fisiologis dapat disebabkan  karena  rasa  takut,  aktivitas  latihan,  kortikosteroid  dan  stres. Menurut Chastain  dan  Ganjum  (1986),  kondisi  stres  dapat  menstimulasi  kelenjar  adrenal untuk  mengeluarkan  hormon  glukokortikoid  sehingga  meningkatkan  jumlah leukosit.  Kelinci  merupakan  hewan  yang  sangat  sensitif  terhadap  perubahan lingkungan  terutama  cuaca.  Kelinci  sangat  peka  terhadap  cekaman  suhu lingkungan dan kelembaban yang tinggi (Smith dan Soesanto 1988).
Pasca  infeksi  ketiga  terjadi  peningkatan  jumlah  leukosit  pada  kelinci  yang divaksin  dan  peningkatan  ini  sangat  signifikan.  Hal  ini  dikarenakan  pada  kelinci yang  divaksin  sebelumnya  telah  terpapar  antigen  yang  serupa  sehingga menimbulkan  respon  imun  sekunder  yang  pada  umumnya  lebih  cepat  dibanding respon  primer  (Kresno  2001).  Adanya  sel  memory  menyebabkan  terjadinya peningkatan sensitivitas terhadap antigen.
Secara  imunologi  respon  yang  tampak  pada  penelitian  ini  adalah  respon seluler.    Respon  seluler  adalah  respon  yang  ditandai  dengan  adanya  jumlah infiltrasi  atau  peningkatan  leukosit  pada  suatu  sistem  (Sudrajat,  2006).    Pada
umumnya respon seluler yang akan nampak pada jenis infeksi  yang disebabkkan oleh  bakteri  adalah  Heterofil  atau  yang  dikenal  dengan  istilah  neutrofil  pada mamalia (Wolfgang, 2003).
Berbeda  dengan  respon  seluler,  respon  imun  merupakan  suatu  bentuk pertahanan  tubuh  dari  individu  dengan  adanya  peningkatan  substansi imunoglobulin  (Ed  Law,  1988).    Namun  pada  penelitian  ini  yang  akan  lebih dibahas  adalah mengenai bentuk  respon seluler  yang nampak pada suatu  infeksi. Respon seluler yang nampak pada penelitian ini adalah peningkatan leukosit total. Diantara substansi leukosit itu sendiri adalah limfosit, monosit, eosinofil, basofil, heterofil (Sudrajat, 2006).
Leukosit  terdiri  dari  dua  bentuk  yaitu  :  Polimorfonuklear  (granulosit)  dan mononuklear  (agranulosit).  Leukosit  Polimorfonuklear  terdiri  dari  :  netrofil, eosinofil  dan basofil.  Sedangkan leukosit Mononuklear terdiri dari :  limfosit dan monosit.  Leukosit  Mononuklear  pada  tikus  dan  mencit  lebih  tinggi  daripada mamalia  (  Kang et  al ,  2006).  Leukosit  mempunyai  peranan  penting  dalam  hal pertahanan  tubuh.  Penurunan  jumlah  leukosit  disebabkan  oleh  infeksi  virus, keadaan stres,  bahan radio  aktif dan bahan kimia (Garner et  al , 2007).   Leukosit atau sel darah putih mempunyai fungsi melindungi tubuh dari keganasan bakteri, organisme dan sel lainnya (Brooks and Myrna LaFleur, 2008).
Pemeriksaan leukosit bertujuan untuk menunjang diagnosa penyakit. Jumlah leukosit  didalam  darah  merupakan  indikasi  dari  suatu  penyakit,  pada  leukimia jumlah  leukosit  lebih  tinggi  dari  normal  (leukositosis)  dan  dalam  keadaan leukopenia jumlah leukosit lebih rendah dari normal (Albert dan Bruce, 2005).
Netrofil  atau  heterofil  merupakan  bagian  terbesar  dari  sel  tipe  granulosit, bahkan pada beberapa spesies netrofil merupakan prosentasi terbesar dari seluruh leukosit.  Jumlah  berkisar  antara  9-12  µ  (Albert  dan  Bruce,  2005).    Granula sitoplasmik  dari  heterofil  juga  tidak  sama  karakteristiknya  untuk  setiap  spesies.
Heterofil  merupakan  pertahanan  terhadap  mikroba  terutama  bakteri.    Fungsi heterofil sebagai pertahanan antibakteri melalui beberapa mekanisme efektif yaitu :  kemotaktis  (kemampuan  heterofil  tertarik  ke  tempat  infeksi  peradangan)  dan sebagai  fagositosis  (heterofil  mempunyai  kemampuan  untuk  memakan  dan menghancurkan  mikroba).    Proses  fagositosis  jarang  terjadi  didalam  aliran  darah tetapi terjadi di jaringan, misalkan didaerah luka dimana sel heterofil akan tertarik ke daerah tersebut (Bijanti, 2007).
Heterofil  merupakan  respon  utama  terhadap  infeksi  bakteri.  Mempunyai lobus  banyak,  sitoplasmanya  terlihat  transparan  dan  granulanya  berwarna  merah muda (Albert dan Bruce, 2005).
Eosinofil berperan khusus dalam respon alergi, pertahanan terhadap parasit dan  pembuangan  fibrin  yang  terbentuk  selama  inflamasi.  Eosinofil  mempunyai peranan  dalam  peristiwa  hipersensitif,  sehingga  sel  ini  mempunyai  spesialisasi didalam  proses  detoksifikasi  terhadap  histamin.  Fungsinya  eosinofil  terutama pada  proses  penetralan  protein  asing  terutama  terhadap  infeksi  antigen  dan antibodi (Bijanti, 2007).
Eosinofil  merupakan  2  -  4  %  dari  seluruh  sel  leukosit.  Pada  ruminansia besar, proporsi ini bisa mencapai 9 %. Diameter eosinofil sekitar 10 – 14 µ, relatif lebih  besar  dibandingkan  netrofil.  Karakteristik  tersendiri  dengan  granula
sitoplasmanya  yang  besar  dan  terwarna  kuat  dengan  zat  warna  eosin  atau pewarnaan  asam  lainnya.  Inti  selnya  polimorfous,  tapi  pada  umumnya  tidak terlalu  berlobi  seperti  netrofil  karena  umumnya  hanya  terdiri  dari  dua  lobi, eosinofil  merupakan  indikator  utama  terhadap  infeksi  parasit  juga  merupakan respon yang muncul pada keradangan yang disebabkan oleh reaksi inflamasi (Leif Jansson, 2008).
Jaringan – jaringan yang berada di bawah pengaruh eosinofil pada keadaan hipersensitifitas  ini  adalah  :  paru-paru,  organ-organ  pencernaan  dan  reproduksi serta kulit. Jumlah eosinofil dapat mengalami peningkatan yang sangat nyata pada infeksi parasit kronis. Pada umumnya inti terdiri dari dua lobus dan sitoplasmanya mempunyai karakteristik khusus warna oranye dengan pewarnaan eosin (Gartoer, 2007).
Basofil  merupakan  jenis  leukosit  yang  paling  sedikit  jumlahnya  karena hanya memiliki 0.5 – 1 % dari jumlah total leukosit. Ukurannya berkisar antara 8 –  12  µ,  dengan  inti  sel  yang  besar  dan  tidak  beraturan.  Granula  sitoplasmanya banyak, besar dan tercat  dengan baik  pada pengecatan  yang bersifat  basa seperti hematoksilin  serta  bersifat  metakromatik  dengan  pengecatan  tolaidine  blue (Albert dan Bruce, 2005).
Berbeda dengan sel – sel granulosit lainnya, basofil tidak memiliki aktifitas fagositik,  tapi  mengandung  berbagai  mediator  inflamasi  seperti  histamin  dan heparin. Peranannya mirip dengan sel mast, yaitu untuk meningkatkanperdarahan akut  pada  tempat  deposisi  dari  antigen.  Sel  ini  jarang  sekali  ditemukan  dalam darah  kebanyakan  hewan  secara  normal.  Granula  basofil  memiliki  afinitas  zat
warna biru atau basa dan mengandung serotonin, heparin dan histamin berfungsi dalam  mencegah  terjadinya  proses  pembekuan  darah,  statis  pembuluh  darah didaerah yang mengalami keradangan (Bijanti, 2007).
Basofil  mempunyai  inti  2  lobus  atau  3  lobus  sangat  sulit  untuk  dilihat  dan mempunyai  karakter  khusus  granula  yang  berwarna  biru  (Albert  dan  Bruce, 2005).
Limfosit memiliki spesifikasi dengan intinya yang bulat dan besar sehingga hampir memenuhi seluruh sel. Ukuran serta jumlah dari limfosit sangat bervariasi. Ada 3 macam ukuran untuk limfosit, yaitu ukuran kecil dengan diameter 4 -10 µ, serta  ukuran  sedang  sampai  besar  dengan  diameter  10  –  18  µ.  Limfosit  ukuran besar  pada  umumnya  dijumpai  di  dalam  jaringan,  misalnya  jaringan  limfatik. Fungsi  limfosit  adalah  sebagai  agen  fagosit  yang  bersifat  terbatas  (hanya  dapat memfagosit partikel yang bersifat mikro) serta berhubungan dengan pembentukan antibodi humoral dan seluler (Bijanti, 2007).
Monosit  memiliki  proporsi  2  –  5  %  dengan  diameter  antara  16  –  20  µ, sehingga  merupakan  sel  darah  yang  berukuran  paling  besar.    Inti  sel  berbentuk seperti ginjal atau oval, tetapi sering kali berbentuk bulat dengan sedikit lekukan saja  sehingga  sulit  dibedakan  dengan  limfosit.    Hanya  saja,  monosit  terwarna lebih  lemah  dan  memiliki  sitoplasma  yang  lebih  banyak  dibanding  dengan limfosit (Albert, 2005).
Monosit  berasal  dari  sum-sum  tulang,  kemudian  masuk  ke  dalam  sirkulasi darah dan berubah menjadi makrofag di dalam jaringan.  Monosit hanya sebentar berada  dalam  sum  -  sum  tulang  kemudian  dilepaskan  dalam  sirkulasi  darah
langsung dari pembelahan promonosit dan setelah bersirkulasi sebentar kemudian meninggalkan  darah  dan  masuk  ke  dalam  jaringan  untuk  menjadi  mature  dan melaksanakan  fungsinya.    Fungsi  monosit  adalah  memfagosit  partikel  besar/ makro molekuler seperti fungi  dan protozoa serta membuang sel  yang rusak dan mati.   Monosit  darah dan makrofag jaringannya  merupakan sel  yang sama tetapi berada  dalam  lokasi  yang  berbeda,  setelah  berada  di  jaringan  makrofag membentuk  organel  dan  enzim  yang  memungkinkannya  melakukan  fagositosis dan mampu mempercepat aktivitas fagositik (Bijanti, 2007).
Sehingga  dapat  disimpulkan  dalam  penelitian  ini  yang  mungkin  paling berproliferasi  adalah  heterofil.    Hal  ini  dimungkinkan  karena  heterofil  memiliki peran sebagai fagositosis mikroba.  Dan seperti yang diketahui bahwa Salmonella Typhii adalah  termasuk  ke  dalam  golongan  bakteri.  Penelitian  ini  juga memperlihatkan bahwa jumlah total  leukosit pasca infeksi  pertama sampai pasca infeksi  ketiga  menunjukkan  adanya  peningkatan  leukosit  yang  signifikan  yang dimungkinkan  karena  belum  terbentuknya  ig  G  secara  sempurna  dan  sudah  di infeksi kembali. Sehingga Salmonella Typhii yang diberikan dalam bentuk vaksin seharusnya  tidak  dilakukan  pengulangan  (booster)  dalam  jangka  waktu  yang pendek seperti yang dilakukan pada penelitian ini.

## VI. SIMPULAN DAN SARAN
6.1. Simpulan
Pada  hasil  penelitian  yang  telah  didapatkan  sebelumnya  sehingga  dapat disimpulkan bahwa :
1. Terdapat  peningkatan  jumlah  total  leukosit  kelinci  post  infeksi Salmonella Typhii pertama  sampai  post  infeksi Salmonella  Typhii ketiga  yang  dibuktikan dengan adanya perbedaan yang sangat nyata dari hasil uji anova.
2. Vaksinasi Salmonella  Typhii cukup  efektif  dalam  memberikan  respon  sistem imun melalui gambaran sel darah putih.
3. Seharusnya  tidak  dilakukan  booster/pengulangan  vaksinasi Salmonella  Typhii dengan  jangka  waktu  yang  pendek  karena  belum  terbentuknya  ig  G  secara sempurna.

## 6.2. Saran
Dari penelitian ini maka disarankan :
1. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai  gambaran  imunologis  dari kelinci  yang  divaksinasi  untuk  melihat  Ig  G  dan  Ig  E  sebagai  respon  akibat pemberian vaksin.
2. Diperlukan  penelitian  yang  lebih  lama  dan  dibutuhkan  analisa  mengenai proliferasi titer antibodi dari pemberian vaksinasi Salmonella Typhii.
3. Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan  mengenai  vaksinasi Salmonella  Typhii dengan  menggunakan  hewan  coba  yang  lebih  banyak  agar  mendapatkan  hasil yang lebih akurat.

## DAFTAR PUSTAKA
Akoso,  Budi  T.  (1998). Kesehatan  unggas:  Panduan  bagi  petugas  teknis, penyuluh dan peternak. Jogyakarta: Kanisius.
Anonimous. 2004b. Bagaimana Mengendalikan Influenza Unggas. http://www. Poultryindonesia.com. [22 Desember 2003].
Aru W.Sudoyo,dkk. (2006) Ilmu Penyakit Dalam FKUI . Jakarta: Pusat Penerbitan Ilmu Penyakit Dalam FKUI.
Bellanti, J. A. 1978 . Immunology II. WB Saunders Company, Philadelpia.
Brooks,  G.F.,  Butel,  J.  S.  and  Morse,  S.  A.,  2005,  “Jawetz,  Melnick  & Adelbergh’s:  Mikrobiologi  Kedokteran”.  Buku  I,  Edisi  I,  Alih  bahasa: Bagian Mikrobiologi, FKU Unair, Salemba Medika, Jakarta.
Cochran,  G.,  William  (2004), Teknik  Penarikan  Sampel  (Terjemahan) ,  Jilid  III, UI-Press, Jakarta.
COX,  J.,  2000.  Salmonella  (Introduction).  Dalam  Encyclopedia  of  Food Microbiology,  Vol.  3.  ROBINSON,  R.K.,  C.A.  BATT  and  P.D.  PATEL (Editors). Academic Press, San Diego.
CHUNG,  Y.H.,  S.Y.  KIM,  and  Y.H.  CHANG,  2003.  Prevalence  and  Antibiotic Susceptibility  of  Salmonella  Isolated  from  Foods  in  Korea  from  1993  to 2001. J. Food Prot. Vol. 66:1154-1157.
Dellman  DH,  Eurell  JA.  1989. Textbook  of  Veterinary  Histology .  Edisi  ke- 5.USA:A Wolsters Kluwer Company.
Dzen,  Sjoekoer  M.,  et  al  2003, Bakteriologi  Medik ,  Ed.  1,  Malang,  Bayumedia Publishing, p 187-197 & 223-234.
Dzen SM, Santoso S, Roekistiningsih, Winarsih S, 2003. Bakteriologi Medik. Edisi I. Bayumedia Publishing. Malang. Hal: 16-22, 122-123, 247-251
Frandson  R.D.  1992. Anatomi  dan  Fisiologi  Ternak .  B.  Srigandono  dan KoenPraseno,  penerjemah;  Yogyakarta  :  Gadjah  Mada  Univ  Press. Terjemahan   dari: Anatomy and Physiology of Farm Animals.
Fitriani,  E.  2000.  Tilmikosin  Sebagai  Imunomodulator  dan  Pengaruh  Terhadap Aktivitas  dan  Kapasitas  Fagositosis  Sel  Radang  Polimorf  dan  Makrofag Peritoneum.  Skripsi  Sarjana.  Skripsi  Sarjana.  Universitas  Pancasila. Jakarta.
Fox, Alvin  2011, Enterobacteriaceae, Virbio, Campylobacter, and Helicobacter , viewed 21 December 2011,
Guyton  AC.  1997. Buku  Ajar  Fisiologi  Kedokteran. Edisi  9.  Irawati  Setiawan, penerjemah. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran, ECG. Terjemahan dari : TextBook of Medical physiology .
Ganong ,  W.  F.  2003.  Buku  Ajar Fisiologi Kedokteran Ganong. Edisi  22, Jakarta:EGC
Harmon,  B.G.  1998.  Avian  Heterophiliss  in  Inflammation  and  Disease Resistentance. Poultry Sci. 77 : 978-982
Jain NC. 1986. Essentials Of Veterinary Hematology . Philadelphia. Lea & Febiger
Jubb,  K.V.F.,  P.  C.  Kennedy,  and  N.  Palmer.  1991.  Pathology  of  Domestic Animal. Vol. 1. 3 rd ed. Academic Press, Inc. San Diego. pp. 2 -41.
Kresno,  S.  B.  2001.  Imunologi  Diagnosis  dan  Prosedur  Laboratorium.  Balai Penerbit Fakultas Kedokteran. Universitas Indonesia, Jakarta.
Koneman’s  Color  Atlas  and  Textbook  of  Diagnostic  Microbiology.  6th  ed. Lippincott Williams and Wilkins. USA.
Malole MBM. 1988. Virologi . Pusat Antar Universitas. Institut Pertanian Bogor Martini F, et al . 1992. Fundamental of Anatomy Physiology . 2nd Ed. New Jersey: Prentice Hall.
Meyer  DJ,  Cole  EH,  Rich  LJ.  1998. Veterinary  Laboratory  Medicine Interpretation and Diagnosis . Philadelphia: WB Saunders.
Mulia  BH.  2005.  Inaktivasi  virus  Avian  Influenza  (AI)  untuk  pembuatan  vaksin AIinaktif dengan penambahan formalin konsentrasi bertingkat. [Skripsi].Bogor :Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Madigan  MT,  Martinko  JM,  Dunlap  PV,  Clark  DP.  2009. Brock  Biology  of Microorganism 12th Ed . San Francisco: Pearson Benjamin Cummings.
Rahardjo  Y.  2004. Avian  Influenza,  Pencegahan,  Pengendalian  dan Pemberantasannya: Hasil Investigasi Kasus Lapangan . Edisi I. PT Gallus Indonesia Utama. Jakarta.
Safitri,  E.  2000.  Studi  Tentang  Efek  Imunomodulator  Tilosin  Terhadap Peningkatan Respon Kekebalan Non Spesifik. Skripsi sarjana. Universitas Pancasila. Jakarta.
Singh, R. Paul., and Heldman, D. R. 2001. Introduction to Food Engineering 3rd edition. Academic Press. California. USA.
Singh  RK,  Chaudhary  BD.  2001.  Biometrical  Methods  in  Quantitative  Genetic Analysis. Ludhiana-New Delhi. Kalyani Publishers. 302p.
Tizard.1987. Pengantar  Imunologi  Veteriner .  Edisi  II.  Partodiredjo,  M, penerjemah.  Surabaya:  Airlangga  University  Press.  Terjemahan  dari: Introduction to Veterinary Immunology .
Tizard I. 1982. Pengantar Immunologi Veteriner . Surabaya: Airlangga University Press.
Vanessa, D.A., S. Mali, A. Balesa, M. Victoria, dan E. Grossmann (2005). Effect of Glycerol and Amylose Enrichement on Cassava Starch Film Properties Journal Food Engineering . 144: 1-5.
Winn, W., S. Allen, W. Janda, E. Koneman, G. Procop, P. Schreckenberger, and G. Woods. 2006.
Wintrobe, M.M. 1964. Clinical Hematology. Lea and Febiger. Philadelphia, USA. Pp. 214-275.
Qureshi, M.A. 1998. Role of  Macrophages in avian Health and Disease. Poultry Sci. 77: 972-977