Skrining Aktivitas Antimalaria Beberapa Tanaman Indonesia Hasil Eksplorasi Dari Hutan Raya Cangar, Batu- Malang, Jawa Timur
Achmad Fuad Hafid 1, 2* , Nike Puliansari 1 , Nur Suci Lestari 1 , Lidya Tumewu 2 , Abdul Rahman 1,2 , Aty Widyawaruyanti 1,2 1 Departemen Farmakognosi dan Fitokimia, Fakultas Farmasi, Kampus B Universitas Airlangga, Surabaya 60286
2 Center for Natural Product Medicine Research and Development, Lembaga Penyakit Tropis, Kampus C Universitas Airlangga, Surabaya 60115 *Corresponding author: achmadfuad@ff.unair.ac.id; achmadfuad@yahoo.com

## Abstract
Background: Malaria is the most important parasitic disease. Malaria control which depends on specific chemotherapy now  complicated  by  resistance  of Plasmodium  falciparum to  most  commonly  available antimalarial  drug. Such  situation  has  heralded  the need  for  alternative  antimalarial  therapy. Objective: This  research  aim was to  find  new  antimalarial  candidates  from some  Indonesia  plants collected from Cangar National Forest, Batu-Malang, East Java. Methods: Eleven samples of leaves and stem extracts were screened  against Plasmodium falciparum 3D7 culture  which  maintained  in  RPMI-1640  Medium. Samples tested in concentration of 0.01, 0.1, 1, 10 and 100 µg/ml. Probit analysis was used to determine IC 50 . Results: In vitro antimalarial activity revealed that only three crude extracts samples from Fraxinus griffithi  stem  extract,  Piper  sulcatum  leaves  extract  and  Eucalyptus  globulus  stem  extract  had  good antimalarial  activity  with  IC 50 value  of  0.33,  0.20  and  0.55  µg/ml,  respectively. Conclusions: Fraxinus griffithi stem extract, Piper sulcatum leaves extract and Eucalyptus globulus stem extract might be a good candidate for antimalarial natural product resources.
Keywords: antimalarial activity, in vitro, plasmodium falciparum, plant extracts

## Abstrak
Latar Belakang: Malaria adalah penyakit yang tergolong penting yang pengendaliannya bergantung pada kemoterapi  yang  spesifik,  dan  kondisinya menjadi  lebih  sulit dengan  adanya  resistensi  Plasmodium falciparum  terhadap  obat  antimalaria  yang  tersedia.  Kondisi  ini  memicu  kebutuhan  terhadap  alternatif terapi antimalaria. Tujuan: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan kandidat antimalaria baru dari  beberapa  tanaman  Indonesia  yang  dikoleksi  dari  Hutan  Raya  Cangar,  Batu-Malang,  Jawa  Timur. Metode: Sebelas sampel dari ekstrak daun dan batang diuji pada kultur Plasmodium falciparum strain 3D7 yang dikembangkan  dalam  media RPMI-1640. Sampel  diuji  pada  konsentrasi 0,01; 0,1; 1; 10 dan 100 µg/ml. Analisis  probit  digunakan untuk  menentukan  nilai IC 50 . Hasil: Uji  aktivitas  malaria  in  vitro menunjukkan  bahwa  terdapat  tiga  sampel  dari ekstrak  batang  Fraxinus  griffithi,  ekstrak  daun  Piper sulcatum dan ekstrak batang  Eucalyptus globulus mempunyai aktivitas antimalaria yang baik dengan nilai IC 50 berturut-turut 0,33; 0,20; dan 0,55 µg/ml. Kesimpulan: Ekstrak batang Fraxinus griffithi, ekstrak daun Piper sulcatum dan ekstrak batang Eucalyptus globulus bisa menjadi kandidat yang baik sebagai sumber bahan obat antimalaria.
Kata kunci: aktivitas antimalaria, in vitro, plasmodium falciparum, ekstrak tanaman

## PENDAHULUAN
Di  Indonesia,  kasus  malaria menjadi  penyebab kematian nomor tiga di beberapa daerah endemis (Azlin, 2003).  Obat  antimalaria  yang  tersedia  di  Indonesia terbatas  pada  klorokuin,  sulfadoksin-pirimetamin,  kina, primakuin,  dan beberapa  antibiotika  yang  bersifat antimalaria. Pemerintah  telah  menetapkan  pilihan pertama untuk mengatasi kasus malaria tanpa komplikasi adalah  klorokuin.  Penggunaan  obat  yang  terdaftar sebagai antimalaria  sudah  diatur  dan  dibakukan  oleh Departemen  Kesehatan  sesuai  dengan  daerah  dan sensitivitas Plasmodium  falciparum terhadap  obat antimalaria.  Pembatasan  penggunaan  obat  tersebut berguna  untuk  menekan  perkembangan  kasus  resistensi terhadap obat antimalaria lain (Harijanto, 2000).
Walaupun demikian, resistensi terhadap obat malaria telah  menyebar  luas.  Resistensi  dari P.  falciparum terhadap  obat  antimalaria  mulanya  meningkat  di Kamerun  (Mbacham et  al.,  2004). Di  Asia  Tenggara, strain P.  falciparum mungkin  telah  resisten  terhadap hampir  semua  obat  konvensial.  Resistensi  ini  dapat disebabkan  oleh  kemampuan  dari Plasmodium untuk menyesuaikan  diri  terhadap  pemberian  obat  antimalaria (Knell, 1991). Dampak  dari  resistensi  ini  adalah kegagalan  terapi.  Hal  ini  membuat  kebutuhan  obat antimalaria  yang  lebih  efektif  menjadi  sangat  penting (Schwikkard dan Van Heerden, 2006).
Wilayah Indonesia sesungguhnya memiliki keanekaragaman  jenis  tumbuhan  paling  kaya  di  dunia. Dari  sekitar  40.000  spesies  flora  yang  tumbuh  di dunia, Indonesia memiliki 30.000 spesies tumbuhan dan sekitar 940  spesies  tumbuhan  dikenal  berkhasiat  obat.  Spesies tumbuhan  yang  berkhasiat  obat  tersebut  diperkirakan meliputi 90% dari jumlah tumbuhan obat yang beredar di Asia  (Muhlisah,  1999). Bangsa  Indonesia  telah  lama mengenal  dan  menggunakan  tanaman  berkhasiat  obat sebagai  salah  satu  upaya  menanggulangi  masalah kesehatan.
Obat  herbal  yang  sudah  terbukti  memiliki  aktivitas antimalaria  adalah  kinin  yang  diisolasi  dari  kulit  batang Cinchona yang  digunakan  untuk  sintesis  klorokuin  dan meflokuin. Selain itu, ada pula artemisinin yang diisolasi dari  tanaman Artemisia  annua dan  terbukti  berhasil digunakan  sebagai  antimalaria  terhadap P.  falciparum yang  resisten  klorokuin  (Schwikkard dan  Van  Heerden, 2006). A.  annua mempunyai  kandungan  kimia  berupa artemisinin  yaitu  sesquiterpen  lakton  yang  aktif  sebagai
antimalaria  (Price et  al.,  1996).  Sedangkan Chincona mengandung alkaloid seperti kuinin, kuinidin, epikuinin, epikuinidin,  cinchonidin,  cinchonin,  epicinchonidin,  dan epicinchonin. Efektivitas    dari  kuinin  dan  artemisinin sebagai  antimalaria memotivasi para  peneliti  untuk mengeksplorasi  tanaman  lain  sebagai  obat  antimalaria yang efektif (Mishra et al., 2009).
Penelitian  pada familia Meliaceae,  yaitu spesies Azadirachta  indica menunjukkan  bahwa  ekstrak A. indica dapat menghambat  pertumbuhan P. falciparum. Ekstrak  tersebut mengandung diterpenoid,  triterpenoid, protein, karbohidrat, polifenol, flavonoid, dihidrokalkon, koumarin, dan tanin (Biswas, 2002). Nilai IC 50 A. indica adalah sebesar 0,72 –3,11 μg/mL (Bray, 2006) . Keanekaragaman  hayati  lain,  spesies Morinda dari familia Rubiaceae. Ekstrak  tanaman  ini    mengandung senyawa  alkaloid,  saponin,  antrakuinon,  terpen,  dan flavonoid  (Awe dan  Makinde,  1998). Penelitian  pada familia Piperaceae  dilakukan  pada  daun  tanaman Piper unbellatum yang  mengandung  flavonoid,  alkaloid, saponin, terpen, derivat asam amino, xanthon, antrakuinon,  striknin,  minyak,  dan  saponin.  Pada penelitian  ini  dilaporkan  bahwa  ekstrak  memiliki aktivitas moderat antimalaria pada P. falciparum dengan nilai IC 50 sebesar 40 μg/mL (Bidla et al., 2004). Familia lain  yang  juga  sudah  banyak  diteliti  adalah familia Acanthaceae yaitu tanaman sambiloto atau Andrographis paniculata. Senyawa andrografolida hasil isolasi sambiloto  memiliki  aktivitas  sebagai  skizontosida (IC 50 12,16 μg/m L)  dan  gametosida  (IC 50 3,61 μg/mL) pada kultur P. falciparum (Widyawaruyanti, 2001).
Beberapa tanaman dari familia Myrtaceae,
Myrsinaceae,  Solanaceae,  dan  Fabaceae  telah  digunakan sebagai  obat  malaria  secara  tradisional.  Penelitian terhadap  aktifitas  antimalaria  beberapa  tanaman  dari keempat familia tersebut juga telah dilakukan sebelumnya, seperti Psidium guajava (IC 50 10-20 µg/ml), Syzigium  aromaticum (IC 50 6,25  µg/ml)  dari familia Myrtaceae, Ardisia  crispa (IC 50 5,9  µg/ml), Maesa lanceolata (IC 50 1,6  µg/ml)  dari familia Myrsinaceae,
Physalis angulata (IC 50 1,27 µg/ml), Acnistus
arborescens (IC 50 1,3 µg/ml) dari familia Solanaceae dan Glycyrrhiza  glabra (IC 50 17,5  µg/ml), Pterocarpus erinaceus (IC 50 1,27  µg/ml) dari familia Fabaceae memiliki  potensi  aktivitas  antimalaria  yang  baik. Aktivitas  antimalaria  dari  tanaman-tanaman  tersebut diduga  disebabkan  oleh  adanya  kandungan  alkaloid,
antrakuinon,  flavonoid,  dan  terpenoid  (Titanji et  al., 2008;  Katuura et  al., 2007;  Begum dan Goyal,  2007; Bagavan et  al., 2010;  Noor  Rain et  al., 2007; Lusakibanza et al., 2010; Garavito et al., 2006; Karou et al., 2003; Esmaeili et al., 2008).
Berdasarkan pendekatan  kemotaksonomi  tanaman, dipilih  spesies  tanaman  lain  dari familia Meliaceae, Rubiaceae, Piperaceae, Acanthaceae, Myrtaceae,
Myrsinaceae, Solanaceae dan Fabaceae yang berdasarkan pustaka beberapa tanaman yang termasuk ke dalam suku tersebut sudah  terbukti  memiliki  aktivitas  antimalaria. Studi kemotaksonomi ialah suatu studi yang menyatakan adanya  kemiripan  tanda  anatomi,  histologi,  morfologi, dan  zat  yang  terkandung  pada  tanaman  dalam  satu familia (Hidayat, 2002).
Pada  penelitian  ini  dipilih sebelas spesies  tanaman dari delapan familia yang  diambil  dari  kawasan  Hutan Raya  Cangar,  Kabupaten  Malang,  Provinsi  Jawa  Timur yaitu spesies  dari familia Meliaceae (1) Fraxinus griffithi, familia  Rubiaceae  spesies  (2) Psychotria  sp., spesies  dari familia  Piperaceae  (3) Piper sulcatum, spesies  dari familia  Acanthaceae (4) Strophacantus membranifolius, (5) Strobilanthes  involucrata, dan  (6) Gompostemma javanicum, species dari familia
Myrtaceae  (7) Eucalyptus globulus,  (8) Acmena
acuminatissima, species  dari familia  Myrsinaceae  (9) Ardisia sp., species dari familia Solanaceae (10) Cestrum calysimum, species dari familia
Fabaceae  (11)
Calliandra  portoricensis. Ekstrak  dari  sebelas  tanaman tersebut telah diuji  aktivitas  antimalarianya  terhadap kultur Plasmodium  falciparum strain  3D7  untuk menentukan kandidat antimalaria yang potensial.

## BAHAN DAN METODE Bahan tanaman
Bahan  tanaman  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah batang Fraxinus  griffithi, daun Psychotria sp., daun Piper sulcatum, herba Strophacantus membranifolius dan Strobilanthes involucrata, batang Gompostemma javanicum, batang Eucalyptus globulus, daun Acmena acuminatissima, daun Ardisia  sp., batang Cestrum calysinum,  dan  daun Calliandra portoricensis yang  diambil  dari  Hutan  Raya  Cangar,  Kabupaten Malang, Provinsi Jawa Timur pada tanggal 3 April 2010. Determinasi  terhadap  tanaman  telah  dilakukan  di  Kebun Raya Purwodadi – LIPI, Pasuruan Malang.
Parasit
Parasit  yang  digunakan  untuk  uji in  vitro adalah biakan P.  falciparum strain  3D7  yang  sensitif  klorokuin dan  dikembangkan  di  Fakultas  Farmasi  Universitas Airlangga,  Surabaya,  Jawa  Timur. Kultur dibiakkan berdasarkan metode Trager dan Jensen (1976) yang telah dimodifikasi.

## Bahan lain untuk uji antimalaria secara in vitro
Bahan  yang  digunakan  untuk  membuat  medium pembiakan P. falciparum dan larutan uji in vitro adalah : Aquadest  steril, RPMI-1640, HEPES  buffer,  Na Bikarbonat, Hipoxanthine, Gentamisin, Serum  dan eritrosit  manusia  yang diperoleh dari Bank darah (PMI), Minyak  imersi, ACD:  Asam  sitrat,  trisodium  sitrat, Dekstrosa, Pewarna  Giemsa, Dapar  fosfat  :  Na 2 HPO4 dan NaH 2 PO 4, DMSO, Alkohol 70%.

## Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan dengan metode ultrasonik (UaE, Ultrasonic  assisted  extraction).  Sebanyak  10  gram serbuk simplisia diekstraksi menggunakan pelarut etanol 80%. Serbuk  simplisia direndam  dalam  pelarut dan diultrasonik,  setiap  2  menit  ekstrak  diaduk,  kemudian diultrasonik  kembali,  diulangi  sebanyak  tiga  kali kemudian  disaring. Selanjutnya  dilakukan  pemekatan ekstrak menggunakan rotary  evaporator.  Ekstrak pekat dikeringkan di dalam oven dengan suhu 40 0 C.

## Uji aktivitas antimalaria in vitro
Pada  uji  aktivitas in  vitro digunakan Plasmodium falciparum strain  3D7  yang  sensitif  terhadap  klorokuin. Secara  prinsip  uji  aktivitas  dilakukan  dengan  cara berikut: bahan uji (10 mg ekstrak etanol 80%) dilarutkan dalam  100  l  pelarut  DMSO. Dilakukan  serial pengenceran  sampai  diperoleh  konsentrasi  akhir  sebesar 0,01;  0,1;  1;  10  dan  100  g/ml  (kultur  dibuat  duplo). Kemudian  ditambahkan  500  l  suspensi  parasit  dengan kadar parasitemia 1% dan hematokrit 5% dan diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 o C. Setelah inkubasi, dibuat sediaan  lapisan  darah tipis  dengan  pewarnaan  giemsa 20%.  Selanjutnya  dihitung  persentase  parasitemia  dan persentase hambatan pertumbuhan P. falciparum dengan menghitung  jumlah  eritrosit  yang  terinfeksi  setiap  1000 eritrosit  di  bawah  mikroskop. Persen  pertumbuhan didapatkan dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
Keterangan:
D0 = % pertumbuhan pada jam ke-0 Rumus  untuk  perhitungan  %  penghambatan  adalah sebagai berikut:
Keterangan:
Xu = % pertumbuhan pada larutan uji

## Xk = % pertumbuhan pada kontrol negatif

## Analisis data
Berdasarkan  data  persen  penghambatan  rata-rata dilakukan  analisis  antara  dosis  terhadap  persen penghambatan  rata-rata  dengan  menggunakan  analisis probit  log  untuk  mengetahui  nilai  IC 50 atau  konsentrasi bahan  uji  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  parasit sebanyak 50%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas antimalaria  ekstrak  etanol  80%  dari  sebelas  spesies tanaman dari delapan familia yang didapatkan dari Hutan Raya  Cangar,  Batu-Malang,  Jawa  Timur.  Pemilihan tanaman  yang  digunakan  didasarkan  pada  pendekatan kemotaksonomi tanaman. Beberapa penelitian
melaporkan  tanaman  dari familia yang  sama dapat memiliki  aktivitas  yang  sama  karena  kandungan  kimia pada  tanaman  dari  satu  familia  tidak  jauh  berbeda. Pada uji aktivitas antimalaria terhadap sebelas spesies tanaman tersebut  dilakukan  dalam  bentuk  ekstrak  etanol  80% karena  etanol  80% dapat  melarutkan  alkaloid  bentuk garam,  flavonoid,  minyak  atsiri,  saponin,  tanin,  dan polifenol  sehingga  kandungan  kimia  dari  tanaman  dapat terekstraksi  dengan  baik  (Voight,  1994).  Senyawa  kimia seperti alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, polifenol, dan minyak  atsiri  sudah  terbukti  memiliki  aktivitas antimalaria.
Penelitian  aktivitas  antimalaria  ekstrak  tanaman tersebut  di  atas  dilakukan terhadap P.  falciparum secara in  vitro.  Uji  aktivitas in  vitro dengan P.  falciparum dilakukan  sebagai  uji  pendahuluan  untuk  mengevaluasi bahan  alam  hayati  yang  diduga  memiliki  aktivitas antimalaria.  Untuk  skrining  ekstrak  dari  tanaman  yang digunakan  untuk pengobatan  tradisional,  uji in  vitro menawarkan  keuntungan  karena  dapat  menggunakan P. falciparum,  penyebab  malaria  pada  manusia  yang memiliki  beberapa  strain  yang  resisten  terhadap  banyak obat  antimalaria,  sebagai  parasit  uji  (Phillipson,  1991). Hasil  uji  aktivitas  antimalaria in  vitro dapat  dilihat  pada Tabel 1 dan Tabel 2 berikut ini.

## Tabel. 1. Persen Penghambatan Ekstrak dan Hasil Analisis Probit terhadap P.falciparum In Vitro
Ekstrak % Hambatan rata-rata pada konsentrasi yang diuji (  g/mL) IC 50 (  g/mL) 100 10 1 0,1 0,01 Batang F. griffithi 92,82 76,65 55,84 40,48 22,44 0,33 Daun Psychotria sp. 46,00 39,34 34,97 28,15 22,34 381,64 Daun P. sulcatum 92,29 71,83 64,05 46,20 26,63 0,20 Herba S. membranifolius 82,53 55,77 32,80 20,45 14,27 3,49 Herba S. involucrata 90,35 58,50 42,90 31,04 17,90 1,26 Batang G. javanicum 83,48 64,02 46,09 28,18 15,71 1,45 Batang E. globulus 100,00 93,75 36,51 29,55 14,06 0,55 Daun A. acuminatissima 95,55 84,72 20,74 14,31 5,30 1,85 Daun Ardisia sp. 100,00 82,22 28,99 15,46 11,98 5,06 Batang C. calysinum 46,20 28,38 25,25 19,55 8,33 343,94 Daun C. portoricensis 53,29 35,12 30,10 24,19 8,25 67,91
Tabel. 2. Pengelompokan Kekuatan Aktivitas Ekstrak terhadap P. falciparum 3D7 In Vitro
Ekstrak
Nilai IC 50 (  g/mL) Aktivitas Antimalaria
Batang F. griffithi 0,33 Baik Daun Psychotria sp. 381,64 Tidak aktif Daun P. sulcatum 0,20 Baik Herba S. membranifolius 3,49 Moderat Herba S. involucrata 1,26 Moderat Batang G. javanicum 1,45 Moderat Batang E. globulus 0,55 Baik Daun A. acuminatissima 1,85 Moderat Daun Ardisia sp. 5,06 Moderat Batang C. calysinum 343,94 Tidak aktif Daun C. portoricensis 67,91 Sangat lemah
Berdasarkan  Rosoanaivo et  al., (2004)  ekstrak dikatakan  memiliki  aktivitas  yang  sangat  baik  sebagai antimalaria  apabila  nilai  IC 50 <  0,1  µg/ml,  aktivitas antimalaria  baik  bila  IC 50 0,1-1,0  µg/ml,  aktivitas antimalaria  moderat  bila  IC 50 1,1-10  µg/ml,  lemah  bila IC 50 11-25  µg/ml,  sangat  lemah  bila  IC 50 26-50  µg/ml dan tidak aktif bila IC 50 > 100 µg/ml.
Uji  aktivitas antimalaria in  vitro menunjukkan bahwa  terdapat  tiga  sampel  dari  ekstrak  batang
Eucalyptus globules (Myrtaceae), ekstrak batang Fraxinus  griffithi (Meliaceae) dan  ekstrak  daun Piper sulcatum (Piperaceae) mempunyai  aktivitas  antimalaria yang baik dengan nilai IC 50 berturut-turut 0,55; 0,33 dan
0,20  µg/ml. Familia  Myrtaceae,  Meliaceae  dan
Piperaceae  banyak  mengandung  senyawa  terpenoid  dan flavonoid yang  kemungkinan  memberikan  aktivitas antimalaria. Hal  ini  didukung  dengan  adanya  laporan bahwa  senyawa  golongan  alkaloid,  terpenoid  dan flavonoid  mayoritas berperan  sebagai antimalaria (Saxena et al., 2003; Bero et al., 2009). Dilaporkan pula bahwa familia
Caesalpiniaceae, Asteraceae,
Leguminoceae,  Moraceae,  Piperaceae  dan  Meliaceae digolongkan sebagai  familia  yang  banyak  mengandung senyawa antimalaria. Banyak senyawa yang diisolasi dari tanaman  telah terbukti aktif  sebagai  antimalaria.
Senyawa fenolik yang diisolasi dari tanaman Calycolpus warscewiczianus familia  Myrtaceae  aktif  menghambat pertumbuhan P.falciparum strain  W2  dengan  nilai  IC 50 14,5  µM.  Begitu  juga  dengan  senyawa-senyawa  fenolik dan  terpenoid  dari  familia  Meliaceae  dan  Piperaceae yang  dilaporkan  mempunyai  aktivitas  antimalaria  yang baik  dalam  menghambat  pertumbuhan    beberapa  strain P.falciparum (Bero et  al., 2009).  Berdasarkan  nilai  IC 50 dari  ketiga  ekstrak  tersebut, Piper  sulcatum dari  familia Piperaceae mempunyai  aktivitas  yang  paling  baik. Familia  Piperaceae  juga  diketahui  mengandung  banyak minyak  atsiri  dan  alkaloid  (Park et  al., 2002). Kemungkinan kandungan senyawa tersebut juga
berperan  dalam  meningkatkan  aktivitasnya  sebagai antimalaria.
Kristanti et  al., (2008)  menyatakan  bahwa  tanaman dari takson yang sama mempunyai hubungan kekerabatan  kandungan  senyawa  terkandung  yang  erat, terutama  pada  tingkat  familia,  genus,  dan  species. Berdasarkan  hasil  yang  didapat,  tanaman  dari  famili Myrtaceae,  Meliaceae  dan  Piperaceae  memiliki  aktivitas antimalaria yang baik. Hal ini sesuai dengan pendekatan kemotaksonomi yang digunakan yaitu bahwa pada ketiga tanaman  dari  tiga  familia  tersebut  terdapat  kandungan senyawa  yang  mirip  dengan  tanaman  lain  dari  familia yang  sama  yang  sebelumnya  telah  dilaporkan  memiliki aktivitas antimalaria.

## KESIMPULAN
Ekstrak  batang Eucalyptus  globulus,  ekstrak  batang Fraxinus  griffithi dan  ekstrak  daun Piper  sulcatum merupakan kandidat sumber bahan obat antimalaria yang sangat potensial.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Riset  ini  menerima  bantuan  dana  dari  Project  Grant Fakultas Farmasi Universitas Airlangga Tahun 2011.

## DAFTAR PUSTAKA
Awe SO, Makinde JM. 1998. Evaluation of sensitivity of Plasmodium  falciparum to Morinda  lucida leaf extract  sample  using  rabbit  in  vitro  microtest technique. Indian J Pharmacol. 30(1):51-53.
Azlin E. 2003. Uji klinis acak tersamar  ganda gabungan sulfadoksin-pirimetamin  dengan  klorokuin  pada malaria. Laporan penelitian. Bagian Ilmu Kesehatan Anak Fakultas Kedokteran. Universitas Sumatera Utara. Cited on: www.digital.usu.lib Bagavan  A,  Rahuman  A,  Kamaraj C,  Kaushik  NK,
Mohanakrishnan D. 2010. Antiplasmodial activity of botanical extract against Plasmodium falciparum. Parasitology  Research.  Vol  108 Number 1 pp 15-22.
Begum  AD,  Goyal  M.  2007.  Research  and  Medicinal Potential of Genus Cestrum (Solanaceae). Pharmacognosy Reviews. Vol 1 issue 2.
Bero  J,  Frederich  M,  Quetin-Leclercq  J.  2009. Antimalarial compounds isolated from plants used in  traditional  medicine. Journal  of  Pharmacy and Pharmacology. 61:1401-1433.
Bidla  G,  Titanji  VPK,  Jako  B,  Ghazali  GE,  Bolad  A, Berzins K. 2004. Antiplasmodial activity of seven plants  used  in  African  folk  medicine. Indian  J Pharmacol 36:245-246.
Biswas K,  2002.  Biological  activities  and  medicinal properties  of  neem (Azadirachta  indica). Current Science. vol 82, No.11:1336-1345.
Esmaeili  S,  Naghibi  F,  Mosaddegh  M,  Sahranavard  S,
Ghafari  S,  Abdullah NR.  2008.  Screening  of antiplasmodial properties among some traditionally  used  Iranian  plants. Journal  of Ethnopharmacology. Vol 121, pp 400-404.
Garavito G ,  Rinc’ on  J,  Arteaga  L,  Hata  Y,  Bourdy  G, Gimenez  A, et  al.  2006.  Antimalarial  activity  of some  Colombian  medicinal  plants. Journal  of Ethnopharmacology. Vol 107 pp 460-462.
Harijanto PN. 2000. Malaria : Epidemiologi, Patogenesis, Manifestasi Klinis, dan Penanganan. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Hidayat  MA. 2002.  Uji  aktivitas  antikanker  ekstrak heksana  daun Eupatorium  triplinerve Vahl terhadap  kultur  sel  myeloma. Jurnal  Ilmu  Dasar. Vol 3 (2):92.
Katuura E,  Waako  P,  Tabuti JRS,  Bukenya-Ziraba R,
Ogwal-Okeng J. 2007. Antiplasmodial Activity of Extracts  of  Selected  Medicinal  Plants  Used  by Local  Communities  in  Western  Uganda  for Treatment of Malaria. African Journal of Ecology. Vol. 45 (3):94-98.
Karou D,  Dicko  MH,  Sanon  S,  Simpore  J,  Traore  AS. 2003. Antimalarial activity of Sida acuta Burm. f.
(Malvaceae)  and Pterocarpus  erinaceus Poir.
(Fabaceae). Journal  of  Ethnopharmacology. vol. 89 (2-3):291-294.
Knell  AJ. 1991. Malaria.  New  York:Oxford  University Press, pp 29-30.
Kristanti  AN, Aminah  NS,  Tanjung  M,  Kurniadi  B. 2008. Buku  Ajar Fitokimia. Surabaya :  Airlangga University Press.
Lusakibanza M, Mesia G, Tona G, Karemere S,  Lukuka A,  Tits  M, et  al. 2010.  In  vitro  and  in  vivo antimalarial  and  cytotoxic  activity  of  five  plants used in Congolese traditional medicine. Journal of Ethnopharmacology. vol. 129 (3):398-402.
Mbacham  W,  Roper  C,  Targett  G,  Grenwood  B. 2004. Gates malaria partnership annual report. Antimalarial  drug  resistance  in  Cameroon: Therapeutic  efficacy  and  biological  marker resistance, p13.
Mishra  K.  Dash  AP, Swain  BK, Dey  N.  2009. Anti- malarial activities of Andrographis paniculata and Hedyotis corymbosa extract and their combination with curcumin. Malaria journal. 8:26.
Muhlisah  FI,  1999. Temu-temuan  dan  empon-empon, budi daya dan manfaatnya. Yogyakarta. Kanisius. Noor  Rain  A,  Khozirah S,  Mohd  Ridzuan  MAR,  Ong BK,  Rohaya  C,  Rosilawati M, et  al., 2007. Antiplasmodial  properties  of  some  Malaysian medicinal  plants. Tropical  Biomedicine.  Vol  24 Issue (1) pp 29-35.
Park IK,  Lee SG,  Shin SC,  Pak  JD,  Ahn  YJ.  2002. Larvicidal activity of isobuthylamides identified in Piper  nigrum fruits  against  three  mosquito species, J Agric Food Chem. 50(7):1866-1870. Phillipson JD.  1991.  Assays  for  Antimalarial  and
Amoebicidal Activities. Methods In Plant Biochemistry. Vol. 6, pp 135-141.
Price  RN,  Nosten  F,  Luxemburger  C. 1996.  Effects  of artemisinin derivatives on malaria transmissibility. Lancet. 347:1654-1655.
Rasoanaivo P,  Eric  D,  Suzanne  R,  Frappier  F.  2004. Traditional  Medicinal  Plants  and  Malaria: Guidelines  for  the  Nonclinical  Evaluation  of  the Efficacy of Traditional Antimalarials, CRC Press, p. 266.
Saxena  S,  Pant  N,  Jain  DC,  Bhakuni  RS.  2003. Antimalarial  Agents  from  Plant  Sources. Current Science. Vol 8 (9):1314-1329.
Schwikkard  S,  Van  Heerden  FR.  2006.  Antimalarial activity  of  plant  metabolites. Nat  Prod  Rep 19:675-692.
Titanji  VPK,  Zofou  D,  Ngemenya  MN.  2008.  The antimalarial potential of medicinal plants used for the treatment  of malaria  in  Cameroonian folk medicine. African Journal of Traditional, Complementary  and  Alternative  Medicine.  Vol. 5(3):302-321.
Trager W, Jensen WB. 1976. Human Malaria Parasites in Continuous Culture. Science.193:673-675.
Voight  R.  1994. Buku  Pelajaran  Teknologi  Farmasi, Edisi Kelima, Yogyakarta : Penerbit Gadjah Mada University Press.
Widyawaruyanti  A. 2001.  Uji  aktivitas  antimalaria  dari senyawa diterpen laktona hasil isolasi Andrographis paniculata Nees. Laporan
Penelitian  Project  Grant-QUE, Fakultas  Farmasi, Universitas Airlangga.