## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA AKTIF FRAKSI ETANOL DAUN
SIRSAK ( Annona muricata Linn ) SEBAGAI PENGHAMBAT OKSIDASE XANTHINE
Slamet 1 , Siswa Setyahadi 2 , Partomuan Simanjuntak 3 1. email: slamet93ffua@gmail.com
1.2.3) Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila, Jl. Srengseng Sawah  Pasar Minggu Jagakarsa Jakarta Selatan-12640
1) Stikes Muhamadiyah Pekajangan, Jl. Raya Pekajangan Pekalongan-51172
1.2) Pusat Teknologi Bioindustri.Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi, Laptiap, Kawasan Puspitek,  Serpong-15314
3) Pusat Penelitian Bioteknologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Cibinong, Bogor-16912

## Abstrak
Annona  muricata Linn  (Sirsak)  sudah  digunakan  masyarakat  untuk  pengobatan  berbagai  penyakit seperti kanker, diabetes, gout dan lainnya. Khasiat sirsak juga telah dipelajari adalah sebagai antioksidan, antigout,  antibakteri,  antimalaria,  antimollusca,  analgesik,  antiinflamasi,  antiparasit,  antihipertensi,  dan antidepresi. Gout adalah penyakit degeneratif yang penderitanya sangat terganggu. Gout sangat berkaitan banyaknya  asam  urat  pada  peredaran  darah  dan  pengendapan  pada  persedian  tulang.  Prevalensi  gout cenderung meningkat di masa depan dan telah menyerang usia muda. Prevalensi gout di Indonesia telah menyerang usia di  bawah 34 tahun  yaitu  sebesar 32% dan  tertinggi terjadi pada populasi di Minahasa sebesar 29,2%. Tujuan penelitian ini menentukan aktifitas penghambatan terhadap enzim xantin oksidase oleh  beberapa  ekstrak Annona    muricata Linn  (sirsak  ).  Ekstrak  hasil  terbaik  dari  uji  ini  dilakukan pemisahan  dengan  kromatografi  kolom  dan  kromatografi  preparatif  untuk  mendapatkan  fraksi  dengan senyawa  aktif  yang  lebih  sedikit.  pada  pemisahan  terakhir  didapat  3    fraksi  dan  diuji  lagi  dengan  uji aktivitas penghambatan terhadap xantine oksidase. Hasil pengujian tersebut didapat fraksi E.4.1.3 dengan IC 50 0,02 ppm.  Fraksi E.4.1.3 dilakukan  analisa  secara LC_MS dan  FT-IR untuk  menentukan zat yang menghambat aktivitas xanthine oxidase. Hasil yang diperoleh dan dikaitan dengan data yang ada bahwa zat ini diduga Quercetin 3- (2-galloylglucosida).
Kata kunci : Anonna muricata Linn, xantin oksidase, xantin, inhibisi asam urat, Quercetin 3- (2- galloylglucosida)
1. Pendahuluan
Annona  muricata L  (sirsak)  banyak digunakan    oleh  masyarakat  untuk pengobatan  berbagai  penyakit  seperti penyakit  kanker,  diabetes  melitus  ,dan banyak  lagi  lainnya.  Khasiat Annona muricata L  (sirsak),  yang  sudah  diketahui dan  diteliti  yaitu  sebagai  antioksidan,  anti gout ,anti bakteri, anti malaria, antimolusca, analgesik,  anti  inflamasi,  cacingan  atau parasit,  hipertensi,  depresi  atau  stres,  dan menormalkan syaraf yang tertekan. [1] Sirsak(Annona  muricata  L)  merupakan salah  satu  tanaman  buah  yang  berasal  dari Karibia,  Amerika  Tengah  dan  Amerika Selatan.  Buah  sirsak  rasanya  manis  agak asam sehingga sering dipakai sebagai bahan jus  buah.  Daging  buahnya  kaya  akan  serat. Setiap  100  g  buah  yang  dapat  dimakan
mengandung  3.3  g  serat  sehingga  dapat memenuhi  13%  kebutuhan  serat  per  hari. Selain  itu,  daging  buahnya  mengandung banyak  karbohidrat  (terutama  fruktosa), vitamin C (20 mg/100 g), B1 dan B2. [2] Awal tahun 90-an ditemukan semacam “jamu  herbal”  dari  suku-suku  (tribes)  di Amazon yang  dapat  menyembuhkan beberapa  penyakit  berbahaya  termasuk kanker [3] .  Setelah  diteliti  oleh  para  ahli farmasi  dari  AS,  ternyata  ramuan  tersebut berasal  dari  daun  pohon  Graviola.  Daun tersebut  mengandung  zat  anti-kanker  yang disebut  acetogenins,  yang  dapat  membunuh sel-sel  kanker  tanpa  mengganggu  sel-sel sehat dalam tubuh manusia. [4]
Acetogenins adalah senyawa polyketides  dengan  struktur  30  –  32  rantai karbon  tidak  bercabang  yang  terikat  pada
gugus 5-methyl-2- furanone. Rantai furanone  dalam  gugus  hydrofuranone  pada
C23 memiliki aktivitas sitotoksik. [5] Seiring perkembangan ilmu pengetahuan dan teknologi serta pola hidup masyarakat berdampak munculnya berbagai penyakit  degenerative.  Diantara  penyakit degeneratif salah satunya adalah gout. Gout merupakan  salah  satu  penyakit  yang berbahaya  dan  mengakibatkan  cacat  pada fisik.  Penyakit  ini  juga  berkaitan  erat dengan ginjal, karena ginjal menjadi tempat pembuangan  asam  urat  yang  berlebihan.
Ketika ginjal tidak mampu untuk membuang  asam  urat    berlebihan,  maka terbentuk. asam urat. Hal ini mengindikasikan ginjal rusak dan berpengaruh pada fungsi tubuh. [1] Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui  daya  inhibisi  dari  ekstrak etanol, fraksi, isolat dari Annona muricata L (sirsak)  serta  mengetahui  fraksi  aktif  yang berperan  menghambat  aktivitas  enzim xanthine oksidase.
2. Metode Penelitian
Bahan :Daun Annona muricata (sirsak) diambil dari perkebunan disekitar Yogyakarta  dan  dideterminasi  oleh  Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu
Pengetahuan  Indonesia  (LIPI),  Cibinong. Bahan  kimia  yang  digunakan    adalah aquades,  etanol  96%,  hexana,  etil  asetat, enzim  xantin  oksidase,  substrat  xαntin, metanol, diklormetan., dapar fospat, NaOH, DMSO.
Alat:  Spectrofotometri  UV,  mikropipet Socorex,  LC-MS,  FT-IR  Spectrofotometri dan  alat  gelas  laboratorium  lainnya,  silika gel, kolom kromatografi, pH meter
a. Pembuatan simplisia Daun Annona  muricata L  (sirsak) yang  diambil  adalah    daun  yang  terletak pada  helai  keempat  dari  pucuk  ke  arah daun  yang  lebih  tua.  Serbuk  daun  sirsak dikeringkan  dengan  menggunakan  oven pada  suhu  50 o C  hingga  kadar  air  kurang dari  10%.  Daun Annona  muricata L (sirsak)  kemudian  dihaluskan  hingga diperoleh  serbuk  daun  sirsak  kering berukuran 80 mesh.
b. Ekstraksi
Ekstrasi  dengan  metode  maserasi bertingkat mulai dari n -heksan; etil asetat; etanol  96%;  air  dan  infudasi  dengan  air dengan perbandingan 1:10. Hasil maserasi dan  infudasi  disaring  dan  filtratnya dikumpulkan.  Filtrat  kemudian  diuapkan dan  dipekatkan  menggunakan  rotary evaporator  pada  suhu  50 o C  sampai diperoleh  ekstrak  daun Annona  muricata L  (sirsak).  Selanjutnya  dikeringkan  dan didapat ekstrak kering.
c. Uji  Aktivitas  daya  hambat  enzim Xantin Oksidase (XO).
Uji ini melalui rangkaian tahap, ( )
1) Pembuatan  larutan  xanthine 100
µg/ml. Xanthine murni ditimbang sebanyak 100  mg.  dilarutkan  dengan  beberapa tetes  NaOH  0,01  N,  kemudian disonifikasi  sampai  larut  (jika  perlu ditambahkan  beberapa  tetes  NaOH  0,2
N,  lalu  ditambah  dapar  fosfat  sampai 100,0 ml sehingga diperoleh konsentrasi  1  mg/ml.  Dari  larutan xanthine 1  mg/ml  diambil  1,0  ml kemudian  ditambah  dapar  fosfat sampai 10,0 ml untuk membuat larutan xanthine konsentrasi 100 µg/ml.
2) Pembuatan larutan xanthine oxidase 50 mU/ml.
Xanthine  oxidase sebanyak  25  unit dilarutkan dalam 10 ml dapar fosfat pH 7,5  sehingga  diperoleh  konsentrasi  2,5 unit/ml  (larutan  I).  Dari  larutan  I diambil  1,0  ml,  kemudian  ditambah dapar  fosfat  pH  7,5  sampai  25,0  ml sehingga  diperoleh  konsentrasi  100 mU/ml  (larutan  II).  Untuk  membuat larutan xanthine oxidase konsentrasi 50 mU/ml,  dari  larutan  II  diambil  5,0  ml kemudian ditambah dapar fosfat pH 7,5 sampai 10,0 ml.
3) Pembuatan  larutan  induk  (larutan uji).
Ekstrak  etanol  dijadikan  larutan induk  dengan  cara  melarutkan  100,0 mg  ekstrak  etanol  dengan  beberapa tetes DMSO, kemudian ditambah dapar fosfat pH 7,5 sampai volume 100,0 ml sehingga  diperoleh  konsentrasi  1 mg/ml.  Dari  larutan  induk  (1  mg/ml) dibuat  larutan  uji  dengan  konsentrasi
5µg/ml,  10  µg/ml,  20  µg/ml  dan  50, µg/ml.  Pembuatan  larutan  induk  juga dilakukan  terhadap  hasil  fraksinasi kromatografi  kolom  ke  1,2  dan fraksinasi hasil kroamatografi preparatif. 4) Pembuatan  larutan  pembanding
Allopurinol. Larutan  pembanding  Allopurinol dibuat dengan cara melarutkan 100 mg Allopuriol dengan air bebas CO sampai volume  250  ml  sehingga  diperoleh konsentrasi  400  µg/ml.  Dari  larutan 400  µg/ml  dibuat  larutan  pembanding Allopurinol  dengan  konsentrasi  antara 10  µg/ml  sampai  100  µg/ml.  Dari konsentrasi  100  µg/ml  dibuat  larutan dengan konsentrasi antara 2,5 µg/ml, 5 µg/ml ; 10 µg/ml dan 20 µg/ml.
5) Penentuan aktivitas xanthine oxidase Aktivitas xanthine oxidase
ditentukan  dengan  menambahkan  200 µl  substrat  ( xanthine )  100  µg/ml  ke dalam  campuran  100  µl  xanthine oxidase 50  mU/ml  dan  724  µl  bufer fosfat pH 7,5.aktivitas xanthine oxidase ditentukan dengan mengamati kecepatan  pembentukan  asam  urat  dari Xanthine secara  spektrofotometri  pada 295  nm  dari  menit  ke-0  sampai  menit ke-3  pada  suhu  25ºC.  Data  yang diperoleh adalah berupa rate Δ(_A295/menit). 6) Penentuan  p enghambatan  aktivitas enzim xanthine oxidase Penghambatan aktivitas enzim xanthine oxidase dilakukan penambahan 200µl larutan uji menggunakan konsentrasi 10 µg/ml, 15 µg/ml  dan  20  µg/ml  ke  dalam campuran  bufer  fosfat  dan xanthine oxidase .  Dengan  cara  yang  sama, ditentukan pula penghambatan aktivitas dibandingkan  dengan  produk  komersil yang  ada  dipasaran,  yaitu  allopurinol. Selain  itu  dibuat  blanko  dengan perlakuan  sama  yang  berbeda  tanpa ekstrak.    Dan  pengukuran  serapan dilakukan  untuk  mendapatkan  data serapan blanko.
7) Penentuan IC 50
Pengujian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  konsentrasi  yang  terbaik ekstrak daun Annona muricata
L(Sirsak).  Pengujian  inhibisi  xantin oksidase  dilakukan  terhadap  sampel dengan    berbagai  konsentrasi  yaitu,  20 mg/mL,  40  mg/mL,  60  mg/mL  dan  80 mg/mL. Setelah itu dilakukan penentuan nilai IC 50 . Inhibition
concentration 50 atau IC 50 merupakan nilai  konsentrasi  minimal  ekstrak  yang dapat menginhibisi enzim sampai 50%. Nilai IC  diperoleh dari dari persamaan y  =  a  +  bx  yang  dihasilkan  dari  plot hubungan  antara  konsentrasi  ekstrak dengan nilai persentase inhibisi dengan a adalah nilai konsentrasi ekstrak dan b adalah  persentase  inhibisi  xantin oksidase.
3. Hasil dan Pembahasan
a. Hasil Ekstraksi Ekstraksi  simplisia  daun  sirsak
( Annona  muricata Linn)  dapat  dilihat pada tabel 1 berikut:
Tabel  1: Hasil  ekstrak  daun  sirsak  ( Annona muricata Linn) No Sampel Bobot (g) Rendemen (%)* 1 Heksana 36,00 ±5,21 2,87 2 Etil Asetat 44,05±4,63 3,40 3 Etanol 48,98±4,84 3,59 4 Air 13,75±4,47 1,07 5 infudasi 41,00±1,21 3,15
* dihitung terhadap 1kg simplisia kering.
Tabel  1,  menyatakan  rendemen  ekstrak daun  sirsak    ( Annona  muricata Linn) terbanyak  pada  ekstrak  etanol96%  . Hal  ini menunjukan  senyawa  aktif  terbanyak terdapat  pada  ekstrak  etanol  96%,  Senyawa tersebut  terlarut  pada  etanol  berdasarkan sifat  kepolaran  yang  sama  dengan  etanol 96%.
b. Hasil Penapisan fitokimia Penapisan fitokimia untuk
mengetahui golongan  senyawa ( class of compound )  yang  terkandung  di  dalam ekstrak  sirsak  ( Annona  muricata Linn). Hasil  penapisan  fitokimia  tertera  pada tabel  2.  Tabel  2  menunjukkan  bahwa
ekstrak  etanol  96%    relatif  memiliki kandungan  komponen  senyawa  yang lebih  bervariasi  dibandingkan  ekstrak lainnya.
Tabel 2. Hasil Penapisan Fitokimia No Kand unga n seny awa Ekstr ak n - Hexa na Eks trak Etil Ase tat Ekstr ak Etan ok 96% A ir Infuda si 1  Alka loid - + + - - 2  Flav onoi da - + + + + 3  Terp enoi d - - - - - 4  Tann in - - + + + 5  Sapo nin - - + + +
*Keterangan :     - = tidak terdeteksi + = terdeteksi
c. Uji  aktivitas  daya  hambat  terhadap xanthine oksidase oleh ekstrak
Penghambatan xantin oksidase dapat  ditentukan  dengan  uji  aktivitas daya  hambat  xantin  oksidase  oleh beberapa  ekstrak  ditunjukan  pada  tabel 3 berikut:
Tabel  3. Hasil  Uji  Aktivitas  Penghambatan terhadap  Xanthine  Oksidase    oleh beberapa ekstrak.
No Ekst rak Konsentra si (ppm) N=3 % inhibisis Persama an regresi IC 50 (ppm) 1 N - hex ana 2,5 5 10 20 16,13 17,74 20,43 25,81 Y = 4,56 ln (x) + 11,07 4.944, 35 2 Etil Aset at 2,5 5 10 20 44,62 47,85 51,08 56,98 Y = 6,29 ln(x) + 38,76 6,90 3 Etan ol 96% 2,5 5 10 20 45,69 49,47 54,31 58,60 Y =6,29 ln (x) +39,72 5,13 4 Air 2,5 5 10 20 46,77 48,92 51,61 58,60 Y= 5,66 ln (x) + 40,14 5,71 5 Infu dasi 2,5 5 10 20 46,77 49,47 51,61 58,06 Y= 5,20 ln (x) + 41,32 5,32
*keterangan: N = jumlah pengulangan percobaan
Tabel 4 menyatakan bahwa aktivitas penghambatan  xanthine  oksidasi  paling baik  ditunjukan  oleh  ekstrak  etanol diikuti  berturut  turut  oleh  ekstrak  hasil infudasi,  air,  etil  asetat  dan  n-hexana. Ekstrak  etanol  96%  digunakan  untuk penelitian selanjutnya.
d. Uji  aktivitas  penghambatan  xantin oksidase terhadap fraksi E 1 – 6 Hasil  uji  aktivitas  daya  hambat xantin  oksidase  terhadap  fraksi  E.1-6 kromatografi  kolom  yang  terdiri  dari  6 fraksi  disajikan  pada  tabel  4  dibawah ini : Tabel 4. Hasil uji aktivitas penghambatan fraksi
E.1-6 terhadap xanthine oksidase N o Fra ksi Konsent rasi (ppm) % Inhibisi Persama an Regresi IC50 (ppm) 1 E.1 7,06 14,13 28,25 56,50 18,10 35,43 49,14 61,21 Y=20,64 ln(x)- 20,86 30,97 2 E.2 6,5 13 26 52 8,62 13,79 19,81 29,31 Y=9,82l n(x)+4,9 1 483,7 1 3 E.3 6,38 12,75 25,5 51 12,93 15,52 19,83 21,55 Y=4,34l n(x)+4,9 1 32.37 0,41 4 E.4 6,38 12,75 25,5 51 55,17 60,34 65,52 69,83 Y=7,06l n(x)+42, 29 2,98 5 E.5 6,38 12,75 25,5 51 51,72 56,90 62,07 66,81 Y=7,24l n(x)+38, 41 4,96 6 E.6 6,38 12,75 25,5 51 55,90 59,48 64,93 72,83 Y=8,01l n(x)+39, 69 3,63 Hasil uji aktivitas penghambatan enzim xantin  oksidase  terhadap  6  fraksi  yaitu fraksi  E.1-6  menunjukan  fraksi  E.4,  fraksi
yang paling aktif karena memiliki IC 50 yang paling  kecil. Fraksi  E.4  dilakukan pemisahan  secara  kromatografi  kolom  II, serta didapat 5 fraksi.
e. Uji  aktivitas  penghambatan  xantin oksidase oleh fraksi E.4.1-5 Hasil uji aktivitas daya penghambat enzim  xantin  oksidase  terhadap  fraksi E.4.1-5  disajikan  pada  tabel  7  dibawah ini:
Tabel 5. Hasil uji aktivitas penghambatan xantin oksidase oleh fraksi E.4.1-5 No Fraksi   Konsen trasi (ppm) % Inhibi tor Persamaa n Regresi IC50 (ppm) 1 E.4.1 2 4 8 16 52 62 66 75 Y=10,95l n(x)+44,6 0 1,64 2 E.4.2 2 4 8 16 49 54 62 67 Y=8,94ln (x)+42,50 2,31 3 E.4.3 2 4 8 16 51 55 58 65 Y=6,06ln (x)+47,14 1,67 4 E.4.4 2,7 5,4 10,8 21,60 51,01 52,00 53,30 54,50 Y=1,70ln (x)+49,25 2,12 5 E.4.5 2,6 5,6 10,4 20,8 46 50 55 60,01 Y=6,79ln (x)+39,21 4,90
Hasil  uji  aktivitas  penghambatan terhadap  xantin  oksidase  oleh    E.4.1-5 menunjukan  fraksi  E.4.1,  fraksi  yang paling aktif  karena memiliki  IC50 yang paling  kecil  yaitu  1,64  ppm.  Fraksi E.4.1  dilakukan  isolasi  lebih  lanjut dengan kromatografi preparatif sehingga didapat  3  fraksi.  Ke  3  fraksi  dilakukan uji  aktivitas  penghambatan  terhadap xantin oksidase.
f. Uji  aktivitas  penghambatan  xantin oksidase terhadap fraksi E.4.1.1-3 Hasil  uji  aktivitas  penghambat terhadap  xantin  oksidase  oleh  fraksi E.4.1.1-3  hasil  isolasi  kromatografi preparatif  dan pembanding Allupurunol disajikan pada tabel 8 dibawah ini :
Tabel  6: Hasil  uji  aktivitas  penghambatan. terhadap  enzim  xanthine  oxidase oleh E.4.1.1-3 dan Allopurinol.
N o Fra ksi Konsentr asi (ppm) % Inhibisi Persama an Regresi IC50 (ppm) 1 E.4. 1.1 1,9 3,8 7,6 15,2 43,22 56,78 63,56 80,51 Y=17,18 ln(x)+32 ,23 2,82 2 E.4. 1.2
0,7 1,4 2,8 5,6 55,93 59,32 63,56 67,80 Y=5,75l n(x)+57, 73 0,21 3 E.4. 1.3 1,48 2,45 5,9 11,8 68,64 71,19 73.73 77,97 Y=4,39l n(x)+66, 61 0,02 4 All upu rino l 1 2,5 5 10 55,08 59,32 64,41 69,49 Y=6,07l n(x)+54, 68 0,46 g. Identifikasi  struktur  kimia  fraksi E.4.1.3
Setelah  diketahui  fraksi  E.4.1.3. mempunyai  aktivitas  penghambatan lebih  tinggi  dilakukan  analisa  dengan Kromatografi  Cair  MS  (LC-MS)  untuk mengetahui pola
kromatogram.
Kromatogram    LC-MS    menunjukkan hubungan   waktu   retensi   (Rt)  dengan %  kelimpahan.    Setiap    puncak    yang muncul pada  Rt   tertentu merupakan 1 senyawa.  Kromatogram      LC-MS E.4.1.3  masih  menunjukkan  campuran senyawa  ,    karena  munculnya    2 puncak.  Senyawa    dengan    % kelimpahan  yang  cukup  tinggi  muncul pada  Rt  5.00,  menit,    puncak    tersebut kemudian      diamati      pola  pemisahan spektrum   MS-nya.
Spektrum  LC-MS    menunjukkan hubungan    antara    nilai    massa    per muatan    (m/z)  dan    %    kelimpahan. Spektrum   LC-MS   isolat E.4.1.3  pada Rt    5.5  menit  menunjukkan    bobot molekul    (BM)    617    g/mol    paling tinggi      (puncak      dasar).    Selanjutnya dicari  kemiripan  pola  fragmentasi  dan m/z  berdasar  pustaka  yang  ada,  dan disimpulkan  senywa  tersebut  diduga senyawa Quercetin 3-(2-
galloylglucoside) dengan molekul C 28 H 24 O 16 . O O O O HO OH HO OH OH OH OH OH OH OH O O Gambar 1. Struktur Quercetin 3-(2- galloylglucoside) Dugaan ini diperkuat
dengan membandingkan  spektra  MS  standar  dari Quercetin 3-(2-galloylglucoside).
h. Permeriksaan  zat  aktif  dengan  FT- IR spectrofotometer Selain dilakukan analisa  secara  LC- MS  juga  dilakukan  pemeriksaan  FT-IR Spectrofotometer  untuk  mendapatkan data  pendukung  berupa  gugus  fungsi yang  ada  pada  fraksi  E.4.1.3.  Analisis gugus  fungsi  menggunakan  instrumen FTIR,  spektrum  FTIR  menunjukkan hubungan antara nilai bilangan gelombang dan intensitas transmitansnya. Isolat 4.1,3
memunculkan  serapan  pada  bilangan gelombang 3430.55,  2922.28, 1699.36, 1624.13 dan 1098.51cm -1 .
4. Kesimpulan
Identifikasi isolat Fraksi E.4.1.3   murni
senyawa  1  dengan  metode  FT-IR,  dan  LC- ESI-MS menghasilkan rangkuman informasi  yang  menunjukkan  bahwa  isolat merupakan Quercetin 3-(2-
galloylglucoside).
5. Daftar Pustaka
[1] Chang  FR,  Liaw  CC,  Lin  CY,  Chou CJ,  Chiu  HF,  Wu  YC.  New  adjacent bistetrahydrofuran Annonaceous acetogenins  from Annona  muricata.
Planta Med 69 : 2003, p. 241 - 46.
[2] Teyler, Leslie. 2002. Herbal Secrets of The Rainforest.
[3]  Gleye,  Christophe,  et  all.  1996. Cohibins  A  and  B,  Acetogenins  From Roots of Annona Muricata . Universite Paris XI. Page 2
[4]      Kintzios,  S.E  and  Maria  G.B.,2010, Plants That Fight Cancer
[5] Luciana,  A.R. 2010. Acetogenins from Annonacornifolia and their antioxidant capacity . Departamento de
Química, Instituto de Ciências Exatas, Universidade Federal de Minas Gerais. MG, Brazil. Page 2 .