## JIUBJ
Jurnal Ilmiah Universitas Batanghari Jambi, 20(3), Oktober 2020, 1038-1042 Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat universitas Batanghari Jambi
ISSN 1411-8939 (Online), ISSN 2549-4236 (Print) DOI 10.33087/jiubj.v20i3.1015
Penggunaan Kombinasi Ekstrak Akar Saluang Belum (Lavanga sarmentosa) dengan Akar Kuning (Arcangelisia flava Merr) terhadap Daya Hambat Bakteri Aeromonas hydrophila Secara In Vitro
Maryani 1 , Kartika Bungas 2 , Hasan Anwar 3
1,2,3 Prodi Budidaya Perairan, Jurusan Perikanan , Fakultas Pertanian UPR
* Correspondence email: maryani@fish.upr.ac.id
Abstrak. Penelitian tentang kandungan senyawa tanaman Akar Saluang Belum (Lavanga sarmentosa) dan tanaman Akar Kuning ( (Arcangelisia  flava  Merr) yang  memiliki  efek  antibakteri  perlu  dibuktikan,  Untuk  itu  penelitian  ini  bertujuan  mengetahui pengaruh kombinasi Akar Saluang Belum ( Lavanga sarmentosa ) dengan Akar Kuning ( Arcangelisia flava Merr )  terhadap daya hambat  bakteri Aeromonas  hydrophila Secara In  Vitro .  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Rancangan  Acak Lengkap (RAL) dengan 6 (enam) perlakuan dan 3 (tiga) kali ulangan yaitu perlakuan A = 25 gr/150 ml akuades, perlakuan B = 35 gr/150  ml  akuades,  perlakuan  C  =  45  gr/150  ml  akuades,  perlakuan  D  =  55  gr/150  ml  akuades,  perlakuan  E  =  500  mg kloromfenikol/150  ml  akuades,  dan    perlakuan  F  =  kontrol  negatif  yaitu  hanya  menggunakan  campuran  akuades  150  ml.  Hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  kombinasi  ekstrak  Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning ( Arcangelisia  flava Merr )    mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri Aeromonas hydrophila karena  memiliki efek  antibakteri, hal  ini  dapat  dilihat  dari  hasil  rata-rata  zona  (daya  hambat)  pada  setiap  perlakuan  yaitu  zona  bening  tertinggi  terdapat  pada perlakuan D 55 gr/150 ml dengan nilai zona bening rata-rata 15 mm dan hasil zona bening terendah yaitu perlakuan A 25 gr/150 ml dengan nilai zona bening rata-rata 11 mm.
Kata kunci : Aeromonas hydrophila ; Akar Saluang Belum; Akar Kuning; Antibakteri.
Abstract. Saluang Belum Root (Lavanga sarmentosa) and Yellow Root ((Arcangelisia flava) Merr) plants that have antibacterial effects  need  to  be  proven,  for  this  research  this  program  uses  Saluang  Belum  Root  (Lavanga  sarmentosa)  with  Yellow  Root (Arcangelisia flava) Merr) against bacterial inhibition. Aeromonas hydrophila by In Vitro. The method used in this study was  a Completely Randomized  Design  (CRD)  with 6 (six) settings and 3 (three) replications  related to  the aid  of A = 25  gr /  150 ml distilled water, treatment B = 35 gr / 150 ml distilled water, C treatment = 45 gr / 150 ml distilled water, treatment D = 55 gr / 150 ml distilled water, handling E = 500 mg chloromphenicol / 150 ml distilled water, and treatment F = negative  control only using  the use of 150 ml distilled  water. The results of this study indicate a combination of Saluang Belum Root  Root  (Lavanga sarmentosa) with Yellow Root (Arcangelisia flava Merr) which is able to inhibit the growth of My Aeromonas hydrophila bacteria because  it  has  an  antibacterial  effect,  this  can  be  seen  from  the  results  of  the  zone  average  (inhibitory  power)  on  each  The treatment  is  the  highest  clear  zone  according  to  the  D  55  gr  /  150  ml treatment  with  an  average  clear  zone  of  15  mm  and  the lowest clear zone yield is A 25 gr / 150 ml approval with an average clear zone value of 11 mm.
Keywords: Aeromonas hydrophila; Root of Saluang Not yet; Yellow Root; Antibacterial.

## PENDAHULUAN
Akar  Saluang  Belum (Lavanga  sarmentosa) merupakan  salah  satu  tanaman  herbal  yang  memiliki manfaat  sebagai  obat  tradisonal  di  Kalimantan  Tengah. Obat  tradisional  banyak  digunakan  masyarakat  karena hasilnya  yang  paten  meskipun  khasiatnya  dapat dirasakan  dalam  jangka  waktu  cukup  lama  (Meira, 2014).  Akar  Kuning (Arcangelisia  flava  Merr) yang telah lama dikenal secara empiris oleh masyarakat dayak Kalimantan Tengah sebagai tanaman herbal alami untuk mengobati penyakit kuning. Senyawa yang terdapat pada Akar  Kuning (Arcangelisia  flava  Merr) yaitu  alkaloid, saponin, terpenoid dan flavonoid (Maryani et al., 2013). Sedangkan  tanaman  Akar  Saluang  Belum (Lavanga sarmentosa) mengandung  senyawa  metabolit  sekunder yakni  yaitu  saponin  dan  tanin  yang  memiliki  efek antibakteri  dan  antioksidan.  Pengujian  efek  antibakteri Akar  Saluang  Belum (Lavanga  sarmentosa) terhadap bakteri Staphyloccus  aureus terdapat  zona  hambat  26,7
mm  pada  konsetrasi  0,5%,  21,6  mm  pada  konsentrasi 1%  dan  20,5  mm  pada  konsetrasi  5%    (Qamariah, 2018)..
Dalam  kegiatan  budidaya  ikan  terdapat  masalah yang  dianggap  sering  menjadi  penghambat  budidaya ikan  terbesar  adalah  munculnya  penyakit.  Karena serangan  penyakit  yang  disebabkan  oleh  serangan bakteri Aeromonas  hydrophila dapat  merugikan  secara ekonomis,  bahkan  menggagalkan  hasil  panen  (Kordi, 2004). Aeromonas  hydrophila. merupakan  bakteri  yang berasal dari lingkungan perairan dan dapat menyebabkan berbagai  penyakit  pada  ikan.  Genus Aeromonas memiliki sifat gram negatif yang mampu memfermentasikan  beberapa  glukosa,  fruktosa,  maltosa, dan trehalosa. Aeromonas hydrophila telah diidentifikasi sebagai  pathogen  dari  berbagai  jenis  ikan  air  tawar, penyebab penyakit Motile Aeromonas septisemia (MAS) di  seluruh  dunia.  MAS  ditandai  oleh  lesi  kecil permukaan    yang  mengarah  pada  lepasnya  sisik,
Maryani et al, Penggunaan Kombinasi Ekstrak Akar Saluang Belum (Lavanga sarmentosa) dengan Akar Kuning  (Arcangelisia flava Merr) terhadap Daya Hambat Bakteri Aeromonas hydrophila Secara In Vitro
pendarahan  lokal  terutama  insang  dan  anus,  abses  dan perut kembung (Rezeky, 2016).
Pengobatan  pada  Ikan  yang  terserang  bakteri biasanya  dilakukan  dengan  menggunakan  antibiotik, namun penggunaan antibiotik ternyata dapat menimbulkan  efek  samping  bagi  patogen  itu  sendiri maupun  terhadap  ikan  yang  dipelihara.  Pemberian antibiotik  secara  terus  menerus  dapat  menyebabkan organisme patogen menjadi resisten, sehingga penggunaan  antimikroba  menjadi  tidak  efektif.  Selain itu,  residu  dari  antibiotik  tersebut  dapat  mencemari lingkungan  perairan  yang  mengakibatkan  kualitas  air menjadi  turun  (Retnawati,  2008).  Berkaitan  dengan permasalahan  tersebut,  perlu  adanya  alternatif  bahan obat  yang  lebih  aman  yang  dapat  digunakan  dalam pengendalian  penyakit  ikan.  Salah  satu  alternatifnya adalah  dengan  menggunakan  tumbuhan  obat  tradisional yang bersifat antibakteri.
Penelitian yang mengarah untuk khasiat penyembuhan  penyakit  ikan  yang  disebabkan  oleh bakteri  yang  diuji  secara  ilmiah  dari  bahan  Kombinasi Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava  Merr )  sampai  saat  ini masih belum dilakukan. Oleh karena itu perlu penelitian Kombinasi  Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa ) dengan  Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava  Merr )  untuk menghambat pertumbuhan bakteri Aeromonas hydrophila.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  Kombinasi  Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga sarmentosa )    dengan  Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava Merr )  terhadap  daya  hambat  bakteri Aeromonas hydrophila secara in vitro .

## METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Stasiun  Karantina  Ikan,  Pengendalian  Mutu  dan Keamanan  Hasil  Perikanan  Kelas  I,  Jl.  Adonis  Samad, Panarung,  Pahandut,  Kota  Palangka  Raya,  Kalimantan Tengah.

## Alat dan Bahan
Peralatan  penelitian  yang  digunakan  meliputi kertas  saring,  kertas  label,  aluminium  foil  dan  paper disk.  blender,  tabung  erlenmeyer,  rotary  evaporator, cawan  petri,  mikropipet,  rak,  tabung  reaksi,  corong, jarum  ose, freeze  dryer ,  laminar  flow, autoclave , pembakar  bunsen,  penggaris,  botol  kaca  dan vortex . Bahan penelitian yang digunakan adalah bakteri Bakteri ATCC  35654 TM Aeromonas  hydrophila ,  akar  kuning, akar Saluang Belum, antibiotic kloramfenikol, Tripticase Soy Agar (TSA).

## Isolasi Bakteri Aeromonas hydrophila
Bakteri Aeromonas  hydrophila diperoleh  dari Laboratorium  Stasiun  Karantina  Ikan  Kelas  I  Palangka Raya  hasil  dari  uji  Ikan  Gabus Channa  striata .  Bakteri
kemudian  diawetkan  pada  media  ATCC  35654 TM untuk menjaga  kualitas  bakteri  tersebut  tetap  dalam  keadaan baik  dan  tentunya  untuk  menghindari  dari  kontaminasi mikroorganisme  lain.  Untuk  memastikan  bakteri  yang tersimpan  dalam  media  ATCC  35654 TM adalah Aeromonas  hydrophila maka  dilakukan  pemurnian  dan uji  biokimia  terlebih  dahulu,  kemudian  setelah  itu dilakukan  pembacaan  hasil  uji  biokimia.  Penggunaan virulensi bakteri Aeromonas hydrophila maka dilakukan penyuntikan  pada  sampel  ikan  Nila  ( Oreochromis niloticus ). Selanjutnya diamati gejala yang terdapat pada ikan nila, ternyata kurang dari 24 jam ikan Nila tersebut telah  menunjukkan  gejala  terserang  bakteri Aeromonas hydrophila yaitu  kulit  ikan  menjadi  kasat  dan  timbul pendarahan,  seluruh  siripnya  mulai  rusak,  setelah dilakukan pembedahan terihat pendarahan pada hati dan ginjal.  Kemudian  setelah  pembedahan  dilakukan  isolasi bakteri yang diambil dari ginjal.
Penumbuhan  dan  Pengenceran  Bakteri  Aeromonas hydrophila
Kultur  murni  bakteri Aeromonas  hydrophila dari media  TSA  disiapkan  terlebih  dahulu.  Bakteri  diambil satu  ose  untuk  diencerkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi  larutan  Aquades  steril  dengan  volume  9  ml  dan divortex  untuk  mendaptkan  bakteri  yang  dibutuhkan dalam  penelitian.  Kekeruhan  bakteri  disamakan  dengan kekeruhan  Mc  Farlan  yang  10 -5 .  Tabung  reaksi  yang berisi  larutan  Aquades  steril  dengan  volume  9  ml disiapkan.  Bakteri  dari  kekeruhan  10 -1 diambil  1  ml kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi  larutan  Aquades  steril  dengan  volume  9  ml  dan divortex  untuk  diencerkan  kembali  menjadi  10 -2 dan diencerkan hingga didapatkan kekeruhan 10 -5 .
Pembuatan Kombinasi Ekstrak Akar Saluang Belum (Lavanga sarmentosa) dan Akar Kuning (Arcangelisia flava Merr)
Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dan Akar Kuning ( Arcangelisia flava Merr ) dipotong-potong terlebih  dahulu  hingga  berukuran  kecil  kemudian diblender  menjadi  serbuk.  Kombinasi  Akar  Saluang Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning ( Arcangelisia  flava  Merr )  ditimbang  dengan  jumlah sesuai  perlakuan.  Kemudian  dicampur  dengan  akuades steril  sebanyak  150  ml/banyaknya  perlakuan,  dengan perbandingan  1:1,  kemudian  larutan  kombinasi  Akar Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan  Akar Kuning  ( Arcangelisia  flava  Merr )  tersebut  dimasukkan ke  dalam  erlenmayer  untuk  disentrifus  selama  10  menit pada  6000  rpm  untuk  mendapatkan  supernatan kombinasi  akar  Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa ) dengan  Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava  Merr )  yang kemudian  dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  steril  yang berukuran  sedang  sebanyak  10  ml    dan  didiamkan selama  24  jam  (maserasi)  di  atas  Laminary  Air  Flow (LAF)  guna  mengurangi  uapan  dan  untuk  memperoleh
Maryani et al, Penggunaan Kombinasi Ekstrak Akar Saluang Belum (Lavanga sarmentosa) dengan Akar Kuning  (Arcangelisia flava Merr) terhadap Daya Hambat Bakteri Aeromonas hydrophila Secara In Vitro
hasil  ekstraksi  yang  diinginkan.  Hasil  ekstarksi dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  seperti  bahan  alami metode  ekstraksi,  ukuran  partakel  sampel,  serta  kondisi dan  lamanya  penyimpanan  sampel  (Maryani et  al ., 2013).

## Uji Antibakteri Uji Cakram
Sebanyak 1 ml suspense bakteri (dari pengenceran 10 -2 )  disebarkan  secara  merata  pada  media  TSA  dengan menggunakan  ose.  Masing-masing  TSA  diletakkan kertas  cakram  yang  mengandung  kombinasi  ekstrak Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan Akar  Kuning  ( Arcangelisa  flava  Merr )  dengan  dosis  25 gr,  35  gr,  45  gr,  dan  55  gr/150  ml,  kloromfenikol (antibakteri)  500  gr  sebagai  kontrol  positif  dan  kertas cakram  yang  mengandung  akuades  sebagai  kontrol negatif.  Kemudian  cawan  petri  diinkubasi  pada  suhu 37ºC  selama  24  jam.  Uji  ini  dilakukan  dengan  tiga  kali pengulangan.  Media  diamati  hasil  dan  diukur  diameter zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar  kertas  cakram dengan  menggunakan  penggaris  (Rahman,  2008  dalam Ikrom et al ., 2012).

## Parameter Penelitian
Parameter yang diukur pada penelitian uji in vitro ada dua yaitu parameter utama dan parameter penunjang. Parameter  utama  dalam  penelitian  ini  adalah  hasil pengamatan  yaitu  hasil  zona  hambat  bakteri  dilakukan dengan  cara  mengukur  dimeter  zona  bening  sekitar kertas  cakram pada berbagai konsentrasi, yaitu diameter minimum  dan  diameter  maksimum  yang  dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Zona bening merupakan  petunjuk  kepekaan  bakteri  terhadap  bahan antibakteri  yang  digunakan  sebagai  bahan  uji  dan dinyatakan  dengan  diameter  zona  hambat.  Sedangkan parameter  penunjang  adalah  pengamatan  hasil  uji  MIC ( Minimum  Inhibiting  Concentration ),  hasil  pengamatan yang  dilihat  adalah  kekeruhan  dan  nilai  absorbansi media.

## Rancangan dan Analisis Data
Rancangan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). 6 X 3 = 18;,  terdiri  dari  6  perlakuan  dan  3  kali  ulangan. Perlakuan  yang  digunakan  adalah  penanaman  bakteri Aeromonas  hydrophila pada  kombinasi  ekstrak  Akar Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan  Akar Kuning  ( Arcangelisa  flava  Merr )  dengan  dosis    yang berbeda  sesuai  kebutuhan  dan  pemberian  antibiotik Kloromfenikol  pada  kontrol  positif  serta  tanpa pemberian ekstrak akar Saluang Belum dan akar Kuning pada  kontrol  negatif  (Akuades).  Data  yang  diperoleh dalam  penelitian  ini  akan  dianalisa  secara  statistik menggunakan  analisis  ragam  (ANOVA).    Perlakuan yang akan diujikan dalam penelitian ini perlakuan A, B, C,  D,  E,  F  dari  masing-masing  perlakuan  dilakukan  3 kali ulangan.
A  =  25  gr  ekstrak  Akar  Saluang  Belum  dan  Akar Kuning/150 ml Akuades
B  =  35  gr  ekstrak  Akar  Saluang  Belum  dan  Akar Kuning/150 ml Akuades
C  =  45  gr  ekstrak  Akar  Saluang  Belum  dan  Akar Kuning/150 ml Akuades
D  =  55  gr  ekstrak  Akar  Saluang  Belum  dan  Akar Kuning/150 ml Akuades
E  =    500  mg  kloromfenikol  (anti  bakteri)  -  Kontrol positif/150 ml Akuades
F  =  Akuades,  tidak  diberikan  ekstrak  Akar  Saluang Belum  dan  Akar  Kuning  -Kontrol  negatif/150  ml Akuades

## HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Cakram
Dari  hasil  uji  cakram  yang  dilakukan  didapatkan hasil  respon  hambat  yang  disesuaikan  menurut (Suryawiria, 2005) disajikan pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Pengamatan Zona Bening Setelah Pemberian Kombinasi Ekstrak Akar Saluang Belum ( Lavanga sarmentosa ) dengan Akar Kuning ( Arcangelisa flava Merr )   Terhadap Bakteri A. hydrophila No. Perlakuan Diameter Zona Bening (mm) Total Rata- rata Respon Hambat (Suryawiria, 2005) Klasifikasi menurut Suryawiria (2005) 1 2 3 1 A 11 10 13 34 11 10-19 Kuat 2 B 15 13 13 41 13 10-19 Kuat 3 C 16 14 14 44 14 10-19 Kuat 4 D 16 15 14 45 15 10-19 Kuat 5 E 40 42 43 125 41 >20 Sangat Kuat 6 F 0 0 0 0 0 0 -
Sumber: Data Primer diolah, 2019 .
Berdasarkan  hasil  penelitian  dari  pengujian in vitro dengan  metode  cakram  bahwa  kombinasi  ekstrak Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa ) dengan Akar  Kuning ( Arcangelisia  flava  Merr ) mempunyai sifat  antibakteri  tergolong  kuat  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Aeromonas  hydrophila .  Hal  ini dapat  dilihat  dari  terbentuknya  zona  bening  (zona hambat)  yaitu  zona  tidak  tidak  tumbuhnya  bakteri  di
Maryani et al, Penggunaan Kombinasi Ekstrak Akar Saluang Belum (Lavanga sarmentosa) dengan Akar Kuning  (Arcangelisia flava Merr) terhadap Daya Hambat Bakteri Aeromonas hydrophila Secara In Vitro
sekitar  kertas  cakram  pada  cawan  petri.  Berikut  gambar hasil  uji  daya  hambat  bakteri Aeromonas  hydrophila dengan  uji  cakram.    Hasil  Uji  Cakram  Kombinasi Ekstrak  Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa ) dengan Akar Kuning ( Arcangelisia flava Merr ) disajikan pada Gambar. 1 berikut:
Gambar 1 . Hasil Uji Cakram Kombinasi Ekstrak Akar Saluang Belum ( L.sarmentosa dengan Akar Kuning ( A. flava Merr )
Berdasarkan  Tabel  1,  mengenai  hasil  pengamatan zona  bening  setelah  pemberian  kombinasi  ekstrak  akar saluang  belum  ( lavanga  sarmentosa )  dengan  akar kuning  ( arcangelisa  flava  merr )      terhadap  bakteri A. hydrophila terhadap  bakteri  dengan  uji  cakram  dapat ditentukan  bahwa  respon  hambatan  ekstrak  pada perlakuan  kontrol  negatif  tidak  menunjukkan  adanya zona.    Namun,  untuk  setiap  perlakuan  pada  konsentrasi 25 gr/150 ml, 35 gr/150 ml, 45 gr/150 ml dan 55 gr/150 ml  memiliki  respon  hambat  yang  kuat.  Sedangkan kontrol positif menggunakan kloramfenikol menghasilkan  zona  hambat  tertinggi  yaitu  41  mm kategori sangat kuat. Pendapat diatas juga diperkuat oleh Davis  and  Stout  (1971),  untuk  mempermudah  dalam menggolongkan kemampuan  dari  diameter yang diperoleh. Ekstrak dengan diameter  hambatan lebih dari 20  mm    termasuk  dalam  kategori  sangat  kuat,  diameter hambatan  berkisar  dari  10-20  mm  termasuk  dalam kategori kuat, diameter hambatan berkisar dari 5-10 mm termasuk dalam kategori sedang dan diameter hambatan kurang dari 5 mm termasuk dalam kategori lemah. Zona bening di sekitar cakram kertas merupakan daerah difusi ekstrak yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri. Suatu bahan dikatakan mempunyai aktivitas antibakteri apabila diameter hambatan yang terbentuk lebih besar atau sama dengan 6 mm (Suciati et al ., 2012).
Hasil penelitian tersebut juga menunjukkan bahwa semakin  besar  konsentrasi  kombinasi  ekstrak  Akar Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan  Akar Kuning  ( Arcangelisia  flava  Merr )  maka  diameter  zona hambat  yang  terbentuk  semakin  besar.  Rerata  diameter
hambat  yang  paling  tinggi  terdapat  pada  konsentrasi  55 gr/150  ml.  Hasil  ini  memberikan  bukti  bahwa  semakin besar  konsentrasi  kombinasi  ekstrak  Akar  Saluang Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning ( Arcangelisia  flava  Merr )  maka  zat  antibakteri  yang dikandung  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  bakteri. Lebar  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  disekitar kertas  cakram  dapat  dijadikan  sebagai  parameter  untuk melihat  kekuatan  senyawa  bioaktif  yang  terkandung  di dalam  kombinasi  Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava Merr ).  Semakin  lebar  diameter  zona  hambatnya mengindikasikan  semakin  kuatnya  senyawa  bioaktif menghambat pertumbuhan bakteri. Suatu bahan antibakteri  tertentu  aktivitasnya  dapat  meningkat  bila kadar antibakterinya ditingkatkan melebihi kadar hambat minimum (Setiabudy, 2008).
Bahan  aktif  yang  bersifat  antibakteri  dalam kombinasi  ekstrak  Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava Merr ) diduga sangat berperan penting dalam menghambat  petumbuhan  bakteri  tersebut,  yakni senyawa  aktif  alkaloid,  saponin,  terpenoid,  dan flavonoid  yang  terkandung  dalam  ekstrak  akar  kuning (Maryani, et.al¸ 2013), dan senyawa metabolit sekunder saponin  dan  tannin  yang  terdapat  pada  ekstrak  akar saluang  belum.  Adanya  senyawa  metabolit  sekunder alkaloid  pada  akar  kuning  menurut  Cowan  (1999) mengganggu sintesis DNA dan dinding sel. Kemampuan suatu  senyawa  antimikroba  untuk  mempengaruhi dinding  sel  dengan  mengharnbat  enzirn  yang  teriibat pada  produksi  energi  dan  pembentukan  komponen struktural, sehingga pembentukan dinding sel terganggu. Mekanisme kerusakan dinding sel dapat disebabkan oleh adanya  akumuiasi  komponen  lipofilik  yang  terdapat pada  dinding  sel  atau  membran  sel,  sehingga menyebabkan  perubahan  komposisi  penyusun  dinding sel  (Nychas  dan  Tassou,  2000).  Dalam  keadaan demikian bakteri akan mengalami hambatan pertumbuhan  bahkan  kematian.  Sedangkan  adanya senyawa  tannin  pada  akar  saluang  belum  adalah menghambat  enzim  reverse  transkriptase  dan  DNA topoisomerase sehingga sel bakteri tidak dapat terbentuk (Nuria et al ., 2009). Tanin memiliki aktivitas antibakteri yang  berhubungan  dengan  kemampuannya  untuk menginaktifkan  adhesin  sel  mikroba,  menginaktifkan enzim,  dan  menggangu  transport  protein  pada  lapisan dalam sel (Cowan, 1999). Tanin  juga mempunyai target pada  polipeptida  dinding  sel  sehingga  pembentukan dinding  sel  menjadi  kurang  sempurna.  Hal  ini menyebabkan  sel  bakteri  menjadi  lisis  karena  tekanan osmotik  maupun  fisik  sehingga  sel  bakteri  akan  mati (Sari et al., 2011)..
Sedangkan  senyawa  metabolit  sekunder  saponin yang  terdapat  pada  kedua  tanaman  yakni  Akar  Saluang Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning ( Arcangelisia  flava  Merr ),  Mekanisme  kerja  sebagai
Maryani et al, Penggunaan Kombinasi Ekstrak Akar Saluang Belum (Lavanga sarmentosa) dengan Akar Kuning  (Arcangelisia flava Merr) terhadap Daya Hambat Bakteri Aeromonas hydrophila Secara In Vitro
antibakteri  yaitu  dapat  menyebabkan  kebocoran  protein dan  enzim  dari  dalam  sel  (Madduluri et  al. ,  2013). Saponin  dapat  menjadi  anti  bakteri  karena  zat  aktif permukaannya  mirip  detergen,  akibatnya  saponin  akan menurunkan  tegangan  permukaan  dinding  sel  bakteri dan merusak permebialitas membran. Rusaknya membran  sel  ini  sangat  mengganggu  kelangsungan hidup  bakteri  (Harborne,  2006).    Saponin  berdifusi melalui  membran  luar  dan  dinding  sel  yang  rentan kemudian  mengikat  membran  sitoplasma  sehingga mengganggu  dan  mengurangi  kestabilan  membran  sel. Hal  ini  menyebabkan  sitoplasma  bocor  keluar  dari  sel yang  mengakibatkan  kematian  sel.  Agen  antimikroba yang mengganggu membran sitoplasma bersifat bakterisida (Cavalieri et al ., 2005).

## SIMPULAN
Kombinasi ekstrak Akar Saluang Belum ( Lavanga sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava Merr )  memiliki  efek  antibakteri  terhadap  bakteri A. hydrophila secara in  vitro .  Konsentrasi  efektif Kombinasi  ekstrak  Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava Merr )  pada  konsentrasi  55  gr/150  ml  dengan  diameter zona hambat 15 mm. Perlu dilakukan penelitian lanjutan pada  Kombinasi  ekstrak  Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava Merr )  terhadap  bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif lainnya,  dengan  menggunakan  bagian  lain  dari  tanaman Akar  Saluang  Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  maupun Akar  Kuning  ( Arcangelisia  flava  Merr ).  dan  penelitian mengenai  toksisitas  kombinasi  ekstrak  Akar  Saluang Belum  ( Lavanga  sarmentosa )  dengan  Akar  Kuning ( Arcangelisia flava Merr ). secara in vivo.

## DAFTAR PUSTAKA
Cavalieri, S.J., I.D. Rankin., R.J. Harbeck., R.S. Sautter.,
Y.S. McCarter., S.E. Sharp., J.H. Ortez., dan C.A. Spiegel.  2005.    Manual  of  Antimicrobial Susceptibility  Testing.  USA:  American  Society for Microbiology.
Cowan,  M.M.  1999.    Plant  Products  as  Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology Reviews 12: 564 – 582. 27.
Davis  WW  dan  Stout  TR.  1971.  Disc  Plate  Method  of
Microbiological Antibiotic Assay. Applied Microbiology. 659- 665.
Harborne,  J.B.  2006.  Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan  (alih  bahasa: Kosasih Padmawinata & Iwang Soediro). Penerbit ITB: Bandung.
Ikrom,  Asih,  D.T.R.  Wira.  R.A.,  Perkasa,  B.B,  Rafika,
T.N.,  Wasito,  2014.  Studi  in  vitro  ekstrak  etanol daun  kamboja  (Plumeria  alba)  sebagai  anti Aeromonas  hydrophila .  Jurnal  Sains  Veteriner  32
(1) : 105 – 116.
Kordi,  K.  2004.  Penanggulangan  Hama  dan  Penyakit Ikan. Bina Adiaksara. Jakarta.
Madduluri,  Suresh.  Rao,  K.Babu.  Sitaram,  B.  2013.    In Vitro Evaluation of Antibacterial Activity of Five Indegenous  Plants  Extract  Against  Five  Bacterial Pathogens  of  Human.  International  Journal  of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences.  5(4): 679-684.
Maryani, Marsoedi, Nursyam, H. 2013. The Phytochemistry and The Anti Bacterial Activity of Yellow  Root  (Arcangelisia  flava  Merr.)  against Aeromonas  hydrophila.  Journal  of  Biology  and Life Science 4 (2) : 180 – 190.
Meira,  R.  2014.  Obat  Herbal  Tradisional.  Universitas Muhammadiyah Semarang : Semarang.
Nuria,  Maulita,  C.,  Faizaitun,  Arvin,  Sumantri,  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Jarak Pagar  (Jatropha  Curcas  L)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  Aureus  Atcc  25923,  Escherichia Coli  Atcc  25922,  Dan  Salmonella  Typhi  Atcc 1408.  2009.  Mediagro. 5(2):26–37.
Nychas, G.J.E. and Tassou, C.C. 2004. Microbiological, Physico-chemical and Organoleptic attributes of a country  tomato  salad  and  fate  of Salmonella enteritidis during  storage  under  aerobic  or modified atmosphere packaging condition at 4 and 10°C. Food Control 11, 131-135.
Qamariah,  N.,  Handayani,  R.,  Friskila,  A.  2018.  Uji Daya  Hambat  Ekstrak  Etanol  Batang  Tumbuhan Saluang  Belum  Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus . Jurnal Surya Medika. Palangka Raya.
Retnawati,  P.  E.  2008.  Pemberian  Vaksin  Polivalen dengan  Chitosan  dari  Komponen  Outer  Membran Protein  dan  Lipopolisakarida Vibrio  alginolyticus dan Vibrio  anguillarum terhadap  Sintasan  Benih Kerapu  Macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus ). Tesis Universitas Airlangga. Surabaya.
Rezeky,  S.,  Triyanto,  Murwantoko,  2016.  Isolasi  dan Identifikasi Aeromonas hydrophia dari lele dumbo ( Clarias  sp. )  di  Kabupaten  Ngawi.  Fakultas Pertanian UGM : Yogyakarta.
Sari,  F.P.  dan  S.  M.  Sari.  Ekstraksi  Zat  Aktif Antimikroba  dari  Tanaman  Yodium  (Jatropha multifida  Linn)  sebgai  Bahan  Baku  Alternatif Antibiotik  Alami.  2011.  Thesis.  Fakultas  Teknik Universitas Diponegoro. Semarang.
Setiabudy  R.  2008.  Antimikroba.  In:  Tanu  I,  editor. Farmakologi  dan  Terapi  (5th  ed).  Jakarta  :  EGC, p.585.
Suciati  A,  Wardiyanto,  Sumino.  2012.  Efektivitas ekstrak daun Rhizopora mueronata dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri Aeromonas salmonicida dan Vibrio harveyi . Jurnal rek. Tekh. budidaya perairan. Vol. 1.
Suryawiria,  U.  2005.  Mikrobiologi  Dasar.  Papas  Sinar Sinanti. Jakarta.