Regenerasi Rumput Laut Gracilaria sp. melalui Propagasi Secara Ex vitro
Regeneration of Seaweed Gracilaria sp. through Ex vitro Propagation
Siti Fadilah*, Dhini Arum Pratiwi
Loka Riset Budidaya Rumput Laut
*Corresponding author e-mail: siti_fadilah9@ymail.com
Submitted: 29 Juli 2019 / Revised: 30 Desember 2019 / Accepted: 30 Desember 2019
http://doi.org/10.21107/jk.v12i2.5783

## ABSTRACT
This  study  aims  to  observe  the  growth  of  Gracilaria  sp.  seaweed  seedlings  through  ex  vitro propagation. Thallus was cut into thallus fragments measuring ± 2-3 cm. The treatments tested were different  types  of  nutrients  and  thallus  densities.  The  nutrients  used  were  Provasoli  Enriched  Sea Water  (PES)  20  mL/L,  organic  fertilizer  A  (0,05  mL/L),  organic  fertilizer  B  (0,05  mL/L)  and  without fertilizer;  while  the  densities  of  the  thallus  fragment  tested  were  2  g/L;  2,5  g/L  and  3  g/L.  Thallus fragments were maintained for 8 weeks with media renewal and thallus weighing every week. Shoot length was measured and number of shoots was calculated at the end of the observation. Then, the seedlings  were  acclimatized  at  the  sea  for  8  weeks  by  binding  every  10  thallus  fragments  to  each clump  rope  in  a  net  box  with  a  side  length  of  50  cm.  Growth  was  observed  by  weighing  thallus fragments every 4 weeks. The results showed that organic fertilizer A provided better seedling growth compared  to  other  types  of  fertilizers.  The  highest  Daily  Growth  Rate  (DGR)  and  shoot  length occurred at a density of 2 g/L, but the number of shoots at three densities did not differ at an average of  5  shoots  per  thallus  fragment.  The  highest  average  DGR  of  seedlings  during  acclimatization reached  4,85%/day  in  the  first  month,  then  decreased  to  2,05%/day  in  the  second  month.  Ex  vitro propagation can be used as an alternative effort to propagate the seedlings of Gracilaria sp. by paying attention  to  the  physical  condition  of  the  growth  environment,  especially  the  temperature  and  light intensity.

## Keywords: ex vitro, Gracilaria sp., propagation, regeneration

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengamati  pertumbuhan  bibit  rumput  laut  Gracilaria  sp.  melalui propagasi  ex  vitro.  Talus  dipotong  menjadi  fragmen  talus  berukuran  ±2-3  cm.  Perlakuan  yang  diuji yaitu  jenis  nutrisi  dan  kepadatan  talus  yang  berbeda.  Nutrisi  yang  digunakan  adalah  Provasoli’s Enriched  Seawater  (PES)  sebanyak  20  mL/L,  pupuk  organik  A  (0,05  mL/L),  pupuk  organik  B  (0,05 mL/L)  dan  tanpa  pupuk;  sedangkan  kepadatan  fragmen  talus  yang  yang  diuji  adalah  2  g/L;  2,5  g/L dan  3  g/L.  Fragmen  talus dipelihara  selama 8  minggu  dengan  pembaruan  media  dan  penimbangan bobot  talus  setiap  minggu.  Panjang  tunas  diukur  dan  jumlah  tunas  dihitung  di  akhir  pengamatan. Kemudian, bibit diaklimatisasi di laut selama 8 minggu dengan mengikat tiap 10 fragmen talus pada tiap  tali  rumpun  dalam  kotak  hapa  dengan  panjang  sisi  50  cm.  Pertumbuhan  diamati  dengan menimbang  fragmen  talus  setiap  4  minggu.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pupuk  organik  A memberikan  pertumbuhan  bibit  yang  lebih  baik  dibandingkan  jenis  pupuk  yang  lain.  Laju Pertumbuhan Harian (LPH) dan panjang tunas tertinggi terjadi pada kepadatan 2 g/L, namun jumlah tunas  pada  tiga  kepadatan  tidak  berbeda  yaitu  rata-rata  5  tunas  per  fragmen  talus.  Rataan  LPH tertinggi  saat  aklimatisasi  mencapai  4,85  %/hari  pada  bulan  pertama,  kemudian  menurun  menjadi 2,05  %/hari  di  bulan  kedua.  Propagasi  ex  vitro  dapat  dijadikan  salah  satu  upaya  alternatif perbanyakan  bibit  Gracilaria  sp.  dengan  memperhatikan  kondisi  fisik  pemeliharaan,  terutama  suhu dan intensitas cahaya.
Kata kunci : ex vitro, Gracilaria sp., propagasi, regenerasi

## PENDAHULUAN
Rumput  laut Gracilaria  sp. adalah  rumput  laut penghasil  agar  (agarophyta)  dari  kelas Rhodophyceae.  Seperti  halnya  permasalahan pada  budidaya  rumput  laut  lainnya, Gracilaria sp. juga  mengalami  hambatan  pertumbuhan pada saat kondisi lingkungan tidak sesuai. Hal ini mengakibatkan ketersediaan bibit seringkali menjadi  terbatas.  Selain  itu,  menurut  Hurtado &  Cheney,  (2003),  kualitas  bibit  rumput  laut seringkali  menurun  karena  dalam  praktek budidaya  masih  menggunakan  fragmen  talus berulang secara vegetatif dari hasil panen.
Salah  satu  upaya  mengatasi  hambatan  ini adalah  melakukan  perbanyakan  vegetatif rumput  laut  melalui  propagasi in  vitro (kultur jaringan).  Cara  ini  menjadi  salah  satu  upaya untuk  memperbanyak  bibit  unggul  sebelum budidaya  lapang,  sehingga  dapat  menjaga ketersediaan  bibit  pada  saat  musim  kurang sesuai.  Propagasi in  vitro menguntungkan karena  didapatkan  sifat  anakan  yang  sama dengan  induknya  dalam  jumlah  banyak  (Akin- Idowu et  al. ,  2009).  Propagasi in  vitro telah dilakukan  pada Gracilaria  verrucosa sampai pada tahap aklimatisasi dan budidaya (Mulyaningrum et al., 2014). Namun, propagasi in  vitro ini relatif  mahal  karena membutuhkan  kondisi  pemeliharaan  khusus dan  sumber  daya  manusia  (SDM)  dengan keterampilan  khusus.  Jika  dilakukan  dalam skala  besar  maka  membutuhkan  perhitungan efisiensi  ekonomi.  Untuk  itu  dalam  penelitian ini  dilakukan  percobaan  propagasi  secara ex vitro pada rumput laut Gracilaria sp .
Propagasi ex  vitro yang  dimaksud  dalam penelitian  ini  adalah  perbanyakan  fragmen talus  rumput  laut  dalam  kondisi ex  vitro di green  house.  Kondisi  ini  berbeda  dengan propagasi in  vitro yang  dilakukan  dalam  botol kaca  di  laboratorium. Pada  propagasi in  vitro , plantlet  tumbuh  dalam  kondisi  khusus  di wadah  yang  relatif  kedap  udara,  kelembaban udara  lebih  tinggi  dan  intensitas  cahaya  lebih rendah  dibandingkan  lingkungannya.  Media pertumbuhan juga seringkali dilengkapi dengan  sakarida  dan  zat  pengatur  tumbuh (Posposilova et al ., 1999).
Percobaan  ini  dilakukan  untuk  mengamati kemungkinan perbanyakan fragmen talus bibit rumput  laut,  khususnya Gracilaria  sp. ,  dapat dilakukan  dengan  cara  yang  lebih mudah  dan tidak  membutuhkan  sarana  khusus  sehingga mudah diadopsi pembudidaya. Hal ini mengacu  pada  pengamatan  di  lapangan bahwa  perbanyakan  bibit  selama  ini  sudah
biasa  dilakukan  pembudidaya  dari  hasil fragmentasi  talus  rumput  laut Gracilaria  sp. yang  langsung  ditebar  ke  perairan  tambak. Gracilaria juga  telah  diketahui  mempunyai toleransi lebih luas terhadap kondisi lingkungan ( euryhaline ) sehingga lebih mudah ditumbuhkan dan dipelihara. Dengan melakukan  propagasi ex  vitro ini  juga diharapkan  dapat  meminimalkan  fluktuasi lingkungan  saat  aklimatisasi  ke  perairan  yang selama  ini  menjadi  permasalahan  setelah tahap propagasi in vitro .
Metode ex vitro biasanya dilakukan saat tahap pembentukan akar (rhizogenesis) pada tumbuhan  tingkat  tinggi.  Kondisi ex  vitro yang diberikan dapat berupa aklimatisasi di greenhouse atau pemindahan bibit ke budidaya lapang (Jose et al. , 2007; Mohammed et  al .,  2015).  Metode ex  vitro dalam  rhizogenesis Passiflora  foetida telah diketahui  dapat  mengurangi  waktu,  tenaga dan  biaya  produksi  serta  meningkatkan sintasan  pada  kondisi  lapang  (Shekhawat et al .,  2015).  Rhizogenesis  secara  e x  vitro dengan aklimatisasi simultan dapat menurunkan  biaya  produksi  perbanyakan tanaman Camellia  sinensis sebanyak  71% dibandingkan dengan metode in vitro (Ranaweera et  al .,  2013).  Namun  lebih  jauh metode ex  vitro sudah  dilakukan  pada perbanyakan tanaman Coffea arabica . Embrio somatik C.  arabica ditebar  langsung  pada subtrat tanah dan dapat menghasilkan plantlet.  Cara  ini  menghasilkan  plantlet  lebih cepat, serta menghilangkan prosedur aklimatisasi  konvensional  yang  problematis dan mahal (Barry-Etienne et al., 2002). Seperti yang  telah  diketahui  bahwa  permasalahan dalam aklimatisasi konvensional adalah plantlet biasanya mempunyai sintasan rendah. Menurut  Chandra et  al., (2010),  keberhasilan kultur  dalam  skala  komersial  tergantung  pada kemampuan  terhadap  pemindahan  planlet dalam skala besar, biaya rendah dan sintasan tinggi.  Selama  pemindahan,  seringkali plantlet in  vitro tidak  mampu  mengatasi  kondisi lingkungan. Untuk meningkatkan pertumbuhan dan  mengurangi  kematian  plantlet  selama tahap  aklimatisasi  diperlukan  pengendalian lingkungan  fisik  dan  kimia  (Chandra et  al., 2010).
Penelitian  propagasi ex  vitro  Gracilaria sp  ini dilakukan  sebagai  upaya  perbanyakan  bibit dengan harapan mengurangi waktu regenerasi di  laboratorium  dan  meningkatkan  sintasan  di kondisi  lapang.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengobservasi  pertumbuhan  bibit  rumput  laut Gracilaria sp. melalui perbanyakan ex vitro .

## MATERI DAN METODE
Stok  bibit  didapatkan  dari  pembudidaya Gracilaria  sp. di  perairan  laut  Takalar, Sulawesi Selatan. Bibit yang digunakan adalah bibit  yang  segar,  berwarna  hijau  kecoklatan, tidak  ada  bercak  putih  pada  talus  dan  bebas epifit.  Penelitian  dilaksanakan  tahun  2016  di Laboratorium Aklimatisasi,
Loka Riset Budidaya Rumput Laut, Gorontalo.
Propagasi ex  vitro diawali  dengan  pemilihan dan  pemotongan  bibit  rumput  laut  menjadi fragmen talus berukuran ± 2-3 cm. Percobaan pertama  menguji  kepadatan  fragmen  talus yang  berbeda  yaitu  2  g/L;  2,5  g/L  dan  3  g/L. Media  yang  digunakan  adalah  air  laut bersalinitas sekitar 32-34 ppt sebanyak 20 liter yang  ditambah  dengan  pupuk  organik  0,05 ml/l.  Percobaan  kedua  menguji  jenis  nutrien yang berbeda yaitu pupuk Provasoli’s Enriched  Seawater (PES)  sebanyak  20  mL/L, pupuk organik A (0,05 mL/L), pupuk organik B (0,05  mL/L)  dan  tanpa  penambahan  pupuk sebagai  kontrol.  Wadah  pemeliharaan  berupa kontainer  plastik  bulat  yang  tembus  cahaya bervolume  ±25  L.  Setiap  wadah  dilengkapi dengan  aerasi  kuat  untuk  mengaduk  nutrisi. Penggantian  media  dilakukan  setiap  minggu dengan  masa  pemeliharaan  6  minggu. Penimbangan  bobot  fragmen  talus  per  wadah dilakukan tiap minggu, sedangkan pengukuran panjang dan penghitungan jumlah tunas  pada  fragmen  talus  dilakukan  di  akhir pengamatan.  Parameter  lingkungan  yang dipantau setiap hari adalah suhu, salinitas dan intensitas cahaya.
Fragmen  talus  kemudian diaklimatisasi  di perairan  Kabupaten  Barru,  Sulawesi  Selatan menggunakan  kotak  hapa  berbentuk  kubus dengan  panjang  sisi  50  cm.  Fragmen  talus diikat  pada  tali  bentangan  berdiameter  1,5 mm.  Tali  rumpun  dibuat  dari  talia  rafia.  Jarak antar tali  rumpun  adalah  10  cm  yang  memuat 5  tali  rumpun.  Jumlah  fragmen  talus  yang diikat  pada  tali  rumpun  10  fragmen  talus.  Tali bentangan sebanyak 20 tali diikat dalam kotak hapa.  Kotak  hapa  diberi  pelampung  dan diletakkan di laut. Pertumbuhan diamati setiap bulan  selama  2  bulan  masa  pemeliharaan. Sampel air diambil untuk mengukur kandungan  fosfat  (PO 4 ) , amonia  (NH 4 )  nitrat (NO 3 ) dan Bahan Organik Terlarut (BOT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengamatan  terhadap  pertumbuhan  tunas pada propagasi ex vitro memperlihatkan tunas ada  yang  tumbuh  hanya  di  ujung  fragmen talus  (terminal)  atau  hanya  di  samping fragmen  talus  (lateral)  atau  di  ujung  dan samping  fragmen  talus  (terminal  dan  lateral) (Gambar  1).  Perbanyakan  bibit  yang  terjadi di proses ini adalah melalui regenerasi langsung. Talus-talus  baru  yang  muncul  dan  tumbuh merupakan tunas yang terdiferensiasi. Menurut Yong et al . (2014), perbanyakan bibit melalui  regenerasi  langsung  lebih  disukai daripada  regenerasi  tidak  langsung.  Dengan melakukan  regenerasi  langsung  maka  variasi somaklonal dapat diminimalkan.
Gambar 1. Berbagai macam pertumbuhan tunas pada fragmen talus
Pada  percobaan  pertama,  hasil  pengamatan menunjukkan  bahwa  laju  pertumbuhan  harian (LPH) bibit dengan kepadatan 2 g/L cenderung lebih tinggi daripada dua kepadatan  lainnya  (Gambar  2).  LPH  akhir tertinggi  terjadi  pada  kepadatan  2  g/L  yaitu 0,91%/hari dan terendah terjadi pada kepadatan  fragmen  talus  2,5  g/L  yaitu 0,66%/hari.  LPH  pada  kepadatan  2  g/L  ini berbeda  nyata  dibandingkan  dua  kepadatan lainnya  (P<0,05)  (Gambar  3A).  Sejalan
dengan  hal  tersebut,  pengukuran  panjang tunas  tertinggi  juga  terjadi  pada  kepadatan  2 g/L  yaitu  9,85  mm  dan  terendah  terjadi  pada kepadatan  3  g/L  yaitu  7,57  mm.  Namun demikian  panjang  tunas  pada  tiga  kepadatan tersebut berbeda tidak nyata (P>0,05) (Gambar  3B).  Begitu  pula  jumlah  tunas  per fragmen talus pada tiga kepadatan menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yaitu  rata- rata 5 tunas per fragmen talus.
Gambar 2. Laju Pertumbuhan Harian (LPH) bibit rumput laut pada kepadatan fragmen talus berbeda selama 6 minggu propagasi ex vitro
Gambar 3. Laju Pertumbuhan Harian (A) dan panjang tunas (B) fragmen talus rumput laut Gracilaria sp. pada kepadatan berbeda setelah 6 minggu propagasi ex vitro
Secara  umum,  kondisi  pertumbuhan  fragmen talus  setiap  minggunya  mengalami  fluktuasi (Gambar  2).  Kondisi  ini  disebabkan  karena fluktuasi lingkungan sekitar. Suhu dan intensitas  cahaya  di  dalam  laboratorium Aklimatisasi  mengikuti  kondisi  lingkungan  di luarnya.  Intensitas  cahaya  yang  cukup  tinggi dan  suhu  di  siang  hari  dapat  mencapai  >30 ℃ sehingga  meningkatkan  pertumbuhan  epifit. Berdasarkan  pengamatan,  epifit  ini  berupa sejenis  alga  hijau  yang  menempel  kuat  di fragmen talus rumput laut. Fragmen talus yang terinfeksi epifit ini kemudian disisihkan karena dapat menginfeksi fragmen yang lain.
Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut,  tampak bahwa  kepadatan  fragmen  talus  berbanding terbalik dengan pertumbuhan bibit. Kepadatan terendah  memiliki  pertumbuhan  tertinggi.  Hal ini  disebabkan,  dengan  jumlah  nutrisi  yang sama  maka  jumlah  individu  yang  lebih  sedikit dapat  memanfaatkan  lebih  banyak  nutrisi dibandingkan  jumlah  individu  yang  lebih banyak.  Kepadatan  yang  lebih  tinggi  juga memberikan  efek  penumpukan  antar  fragmen talus yang lebih besar dibandingkan kepadatan yang lebih rendah. Penumpukan ini menyebabkan beberapa fragmen talus terhalangi untuk mendapat cahaya melakukan fotosintesis.
Menurut  Yong et  al .  (2014)  kepadatan berdampak negatif terhadap sintasan, pertumbuhan,  dan  reproduksi  suatu  individu tanaman.  Sumber  daya  yang  sama,  seperti cahaya, nutrisi, dan ruang harus diperebutkan antara  tanaman  kecil  dan  besar  sehingga terjadi kompetisi asimetris. Selain itu, peningkatan  kepadatan  dapat  menyebabkan penetrasi  cahaya  berkurang  karena  ada  efek peneduhan antar tanaman sehingga mempengaruhi fotosintesis. Peningkatan kepadatan juga dapat mengurangi pergerakan air  dalam  media  sehingga  beberapa  tanaman mungkin tidak mendapat cukup nutrisi.
Pada  percobaan  kedua,  penambahan  nutrisi eksogen  didasari  bahwa  rumput  laut  mutlak membutuhkan tambahan nutrisi dalam pemeliharaan  terkontrol.  Hal  ini  terbukti  pada hasil  pengamatan  yang  menunjukkan  bahwa penambahan nutrisi lebih memperbaiki pertumbuhan  fragmen  talus  dibandingkan tanpa  pupuk  (Gambar  5).  Persentase  bobot fragmen  talus  cenderung  lebih  baik  dalam media  dengan  penambahan  enis  pupuk organik  A  (61,25%)  dibandingkan  dengan pupuk  PES  dan  pupuk  organik  B  setelah  6 minggu  pemeliharaan.  Hasil  yang  berbeda antar  jenis  pupuk  ini  disebabkan  masing- masing pupuk memiliki komposisi dan
0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 0 1 2 3 4 5 6 L PH (% /h ar i) Minggu 2 g/L 2.5 g/L 3 g/L a b b 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 2 g/L 2.5 g/L 3 g/L L P H ( % /h a ri) Kepadatan A a a a 0 2 4 6 8 10 12 2 g/L 2.5 g/L 3 g/L P a n ja n g T u n a s ( m m ) Kepadatan B
konsentrasi  nutrisi  yang  berbeda.  Hasil  ini didukung oleh hasil penelitian Alamsjah et al. , (2009) yang menyatakan konsentrasi kombinasi  pupuk  NPK  dan  TSP  (50%:50%) memberi  pertumbuhan  terbaik  pada Gracilaria
verrucosa. Selanjutnya hasil penelitian Ginting et  al. (2015)  menyatakan  dosis  pupuk  organik 3,5 ml memberi laju pertumbuhan terbaik pada Caulerpa lentillifera .
Gambar 5. Bobot fragmen talus rumput laut Gracilaria sp . pada jenis nutrien berbeda
Pengamatan secara morfologi memperlihatkan bibit Gracilaria sp. yang diaklimatisasi berwarna hijau gelap, segar, dan pertumbuhan talus  lebih  cenderung  ke  arah  memanjang daripada menumbuhkan cabang-cabang tunas ke samping. Pertumbuhan bibit bervariasi, ada talus yang pendek dengan sedikit percabangan  dan  ada  pula  yang  dapat mencapai panjang sekitar 30 cm. Penempatan kotak  hapa  saat  aklimatisasi  di  laut  tampak berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  bibit. Kotak  hapa  yang  berada  di  kedua  ujung memperlihatkan  pertumbuhan  bibit  yang  lebih baik  dibandingkan  kotak  hapa  yang  berada  di
tengah.  Diduga  pergerakan  air  laut  terjadi lebih  banyak  di  ujung  daripada  di  tengah sehingga  memungkinkan  penyerapan  nutrien lebih  tinggi  pada  bibit  dan  pertumbuhannya meningkat.
Bulan pertama aklimatisasi, LPH bibit Gracilaria sp. meningkat pesat berkisar antara 3,38-5,76  %/hari,  dengan  rata-rata  LPH adalah  4,85  %/hari.  Selanjutnya  di  bulan kedua,  LPH  menurun  berkisar  antara  -0,41- 2,98 %/hari, dengan rata-rata LPH adalah 2,05 %/hari  (Gambar  6).  Fluktuasi  LPH  ini dipengaruhi oleh kondisi lingkungan perairan.
Gambar  6.  Laju  pertumbuhan  harian  bibit  (LPH)  bibit  selama  aklimatisasi  di  perairan  Kabupaten Barru, Sulawesi Selatan.
Kecenderungan  penurunan  LPH  bibit  selama aklimatisasi  didukung  oleh  kecenderungan penurunan  kandungan  fosfat  dan  nitrat perairan  di  lokasi  pengamatan  (Gambar  7). Kandungan  fosfat  dan  nitrat  bahkan  nilainya mendekati  0  mg/L  di  bulan  November. Sementara  BOT  berada  di  kisaran  40-  50
mg/L  dan  amonia  0,03-0,04  mg/L.  Menurut Kamlasi  (2008),  kisaran  nitrat  yang  sesuai untuk  pertumbuhan  rumput  laut  adalah  antara 0,01-1,00  mg/L  dan  fosfat  0,10-0,30  mg/L. Amonia  untuk  biota  laut  0,3  mg/L  (Menlh, 2004)
Jenis Nutrien Pupuk Pupuk Organik A  Organik B Tanpa pupuk PES 70.00 60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00 0.00
Bulan II I 6 5 4 3 2 1 0 LP H ( % /h ar i) B o b o t b ib it ( % )
Gambar 7. Kualitas air selama aklimatisasi di perairan Kabupaten Barru, Sulawesi Selatan

## KESIMPULAN DAN SARAN
Laju  pertumbuhan  dan  panjang  tunas  terbaik terjadi  pada  kepadatan  2  g/L,  namun  jumlah tunas  per  fragmen  menunjukkan  tidak  ada perbedaan yaitu rata-rata 5 tunas per fragmen. LPH  tertinggi  bibit  saat  aklimatisasi  mencapai 4,85  %/hari  pada  bulan  pertama,  kemudian menurun  menjadi  2,05  %/hari  di  bulan  kedua. Propagasi ex  vitro dapat  dijadikan  salah  satu upaya  alternatif  perbanyakan  bibit  pada Gracilaria sp. dengan memperhatikan beberapa kondisi fisik pemeliharaan, terutama suhu dan intensitas cahaya.

## DAFTAR PUSTAKA
Akin-idowu, P.E., Ibitoye, D. O., &
Ademoyegun,  O.  T.  (2009).  Tissue Culture  As  A  Plant  Production Technique  for  Horticultural  Crops. African  Journal  of  Biotechnology, 8 (16), 3782-3788.
Alamsjah,  M.A.,  Tjahjaningsih  W.,  &  Pratiwi A.W.  (2009).  Pengaruh  Kombinasi Pupuk  NPK  dan  TSP  Terhadap Pertumbuhan,  Kadar  Air  dan  Klorofil a Gracilaria  verrucosa . Jurnal  ilmiah Perikanan  dan  Kelautan,  1 (1),  103- 116.
Barry-Etienne,  D.,  Bertrand,  B.,  Vasquez,  N., & Etienne, H. (2002). Comparison of
Somatic Embryogenesis-derived Coffee  ( Coffea  arabica  L .)  Plantlets Regenerated  In  Vitro  or  Ex  Vitro:
Morphological,  Mineral  and  Water Characteristics. Annals  of  botany ,
90 (1), 77-85.
Chandra, S., Bandopadhyay, R., Kumar, V., & Chandra,  R.  (2010).  Acclimatization of  Tissue  Cultured  Plantlets:  From Laboratory  to  Land. Biotechnology letters , 32 (9), 1199-1205.
Ginting,  E.  S.,  Rejeki,  S.,  &  Susilowati,  T.
(2015). Pengaruh Perendaman Pupuk  Organik  Cair  Dengan  Dosis yang Berbeda Terhadap Pertumbuhan Rumput Laut ( Caulerpa  lentillifera ). Journal  of
Aquaculture
Management and
Technology , 4 (4), 82-87.
Hurtado,  A.Q,  &  Cheney,  D.P.  (2003). Propagule  production  of Eucheuma denticulatum (Burman)  Collins  et Harvey  by  Tissue  Culture. Bot  Mar . 46: 338-341.
Jose,  B.,  Satheeshkumar,  K.,  &  Seeni,  S. (2007). A Protocol for High Frequency  Regeneration  Through Nodal  Explant  Cultures  and  Ex  Vitro Rooting of Plumbago rosea L. Pak J Biol Sci , 10 , 349-355.
Kamlasi,  Y.  (2008).  Kajian  Ekologis  dan
Biologi untuk Pengembangan Budidaya  Rumput  Laut  ( Eucheuma cottonii ) di Kecamatan Kupang Barat Kabupaten  Kupang  propinsi  Nusa Tenggara  Timur.  Tesis  Sekolah Pasca  Sarjana.  Institut  Pertanian Bogor. Bogor,
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 sept okt nov K o n sen tr asi (mg /L ) Fosfat 0.00 0.20 0.40 0.60 sept okt nov K o n sen tr asi (mg /L ) Nitrat 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 sept okt nov K o n sen tr asi (mg /L ) BOT 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 sept okt nov K o n sen tr asi (mg /L ) Amonia
Menlh.  (2004).  Keputusan  Menteri  Negara Lingkungan  Hidup  No:  51  Tahun 2004  tentang  Baku  Mutu  Air  Laut. Deputi  Menteri  Lingkungan  Hidup: Bidang  Kebijakan  dan  Kelembagaan LH. Jakarta. Mohammed,  A.,  Chiruvella,  K.  K.,  Namsa,  N. D.,  &  Ghanta,  R.  G.  (2015).  An Efficient In Vitro Shoot Regeneration from  Leaf  Petiolar  Explants  and  Ex Vitro  Rooting  of Bixa  orellana L.-  A Dye  Yielding  Plant. Physiology  and molecular  biology  of  plants , 21 (3), 417-424. Mulyaningrum,  S.  R.  H.,  Daud,  R.,  & Badraeni,B. (2014). Propagasi Vegetatif  Rumput  laut Gracilaria  sp . melalui  Kultur  Jaringan. Jurnal  Riset Akuakultur , 9 (2), 203-214. Posposilova, J., Ticha, I., Kadlecek, P., Haisel, D., & Plzakova, Š. (1999).
Acclimatization  of  Micropropagated Plants  to  Ex  Vitro  Conditions. Biologia Plantarum , 42 (4), 481-497. Ranaweera,  K.  K.,  Gunasekara,  M.  T.  K.,  &
Eeswara,  J.  P.  (2013).  Ex  Vitro Rooting: A Low Cost Micropropagation  Technique  for  Tea ( Camellia  sinensis (L.)  O.  Kuntz) hybrids. Scientia  Horticulturae , 155 , 8-14. Shekhawat,  M.  S.,  Kannan,  N.,  Manokari,  M., &  Ravindran,  C.  P.  (2015).  In  Vitro Regeneration of Shoots and Ex Vitro
Rooting  of  An  Important  Medicinal Plant Passiflora  foetida L.  through Nodal  Segment  Cultures. Journal  of Genetic Engineering and Biotechnology , 13 (2), 209-214. Yong,  W.  T.  L.,  Ting,  S.  H.,  Yong,  Y.  S., Thien,V.  Y.,  Wong,  S.  H.,  Chin,  W. L.,  Rodrigues,  K.  F.,  &  Anton,  A. (2014). Optimization of Culture Conditions for the Direct Regeneration of Kappaphycus
alvarezii (Rhodophyta, Solieriaceae). Journal  of  Applied  Phycology , 26 (3), 1597-1606.