of  genitalia  in  two  Spodoptera  species and  their  hybrids  (Lepidoptera: Noctuidae). Biol J Linn Soc 72: 391–400
Pough, F.H., R.M. Andrews, J.E. Cadle, M.L.
Crump,  A.H.  Savitzky  and  K.D.  Wells.
1998. Herpetology. New  Jersey:
Prentice-Hall, Inc.
Rohlf,  F.J.  and  J.W.  Archie.  1984.  A comparison  of  Fourier  methods  for  the description of wing shape in mosquitoes ( Dipter  culicidae ). Syst.  Zool .  33:  302-
317.
Rohlf,  F.J.  and  L.F.  Marcus.  1993.  A
revolution in morphometrics. Tree 8(4):
129–132.
Truong, T.N., J.G. Gwang, Y.J. Park and S.H.
Lee. 2005. Genetic Diversity of Soybean
Pod  Shape  Based  on  Elliptic  Fourier
Descriptors. Korean J. Crop Sci 50 (1) Yoshioka,  Y.,  H.  Iwata,  R.  Oshawa  and  S.
Ninomiya. 2004. Analysis of Petal Shape Variation  of  Primula  sieboldii  by  Elliptic
Forurier  Descriptors  and  Principal
Component Analysis. Annals of Botany
94: 657-664
Juliandi,  B.  dan  F.  Ahmad.  2007.  Analisis Va r i a s i   B e n t u k   K a r a p a s C u o r a amboinensis (Daudin,  1802)  dan Cyclemys  dentata (Gray,  1831)
( B a t a g u r i d a e ;   T e s t u d i n a t a ) Menggunakan  Deskriptor  Fourier Eliptikal. Seminar Nasional Herpetologi
Institut Pertanian Bogor.
Tracey, S.R., M.L. Jeremy and D. Guy. 2006. Application of Elliptical Fourier Analysis of  Otolith  Form  as  a  Tool  for  Stock Identification. Fisheries  Research 77: 138-147
158

## Pendahuluan
Serangan  Organisme  Penganggu Tanaman  (OPT)  sampai  saat  ini  tetap menjadi masalah yang cukup penting dalam bidang  usaha  pertanian.  Salah  satu organisme  yang  banyak  meng-ganggu t a n a m a n   d a n   p e r l u   d i p e r h a t i k a n keberadaannya  adalah  serangga  hama Spodoptera litura .
Spodoptera  litura (Lepidoptera, Noctuidae) atau lebih dikenal dengan nama ulat  grayak  merupakan  serangga  yang banyak  ditemukan dan  menjadi  hama penting di daerah tropis. Biasanya serangga ini terdapat pada tanaman pertanian seperti jagung, sorgum, tomat, cabai, kapas, kubis, kedelai, kacang tanah, ubi jalar dan lain-lain (Kalshoven  1981).  Bagian  tumbuhan  yang diserang  adalah    daun,  batang  bahkan buahnya.  Kehadiran  ulat  tersebut  pada
tanaman  kedelai  telah  mengakibatkan kehilangan hasil panen sekitar 85% bahkan dapat  menyebabkan  kegagalan  panen (puso) (Arifin 1993) .
Pengendalian  terhadap  ulat  grayak pada  tingkat  petani  pada  umumnya  masih menggunakan insektisida yang berasal dari senyawa kimia dengan menghabiskan dana yang  cukup  besar.  Permasalahan  tersebut rupanya  semakin  banyak  menimbulkan persoalan  karena  penggunaan  insek-tisida kimia  yang  menjadi  andalan  dalam p e m b e r a n t a s a n   h a m a   s e m a k i n menunjukkan  penurunan  efektivitas (Novizan  2004).
Timbulnya  gagasan  untuk  mene- rapkan Pengendalian Hama Terpadu (PHT) d i d o r o n g   o l e h   p e n g a - l a m a n   y a n g menunjukkan  bahwa  cara  pengendalian hama  yang  terlalu  menitikberatkan  pada penggunaan pestisida dapat menimbul-kan

## Kajian Histologis Infeksi LD50 SLNPV terhadap Kerusakan Membran Peritrofik Larva Spodoptera litura Fabricius
1) 2)

## Yayan Sanjaya, Nanin Diah  dan  Wardono Niloperbowo
1) Progam Studi Biologi-Universitas Pendidikan Indonesia,
2) KPP Ilmu Hayati-Institut Teknologi Bandung
Diterima September 2010 disetujui untuk diterbitkan September 2011

## Abstrack
The effect of SlNPV infection on  peritrophic membrane  of Spodoptera litura has been carried out. The  damage  of  histological  structure  caused  by  SlNPV  (0,  315,  390,  465,  540  and  615  PIB/ml)  was investigated after 0, 12, 24 ,72 and 96 hours post infection. The histological material was prepared by using parafin method after fixation with Bouin Solution, then sliced into 7 m m and stained with Hematoxilin- Eosin.     The descriptive obsevation on structural intact of peritrophic membrane histology caused by SlNPV infection shows a tendency to decrease, while in control, there was no damage at all.  The longer the exposition of virion in the midgut lumen the more damage on peritrophic membrane occurred. The severest  damage  occurred  96  hour  after  infection.  The  result  prove  that  haNPV  virion  can  destroy histological structure of midgut.
Key words: SlNPV, Spirulina litura , peritrophic membrane

## Abstrak
Pengaruh infeksi SlNPV pada membran peritrophic Spodoptera litura telah dilakukan. Kerusakan struktur histologis disebabkan oleh SlNPV (0, 315, 390, 465, 540 dan 615 PIB/ml) telah diamati setelah 0,12 24,72 dan 96 jam pasca infeksi.   Materi histologis dibuat dengan metode parafin setelah fiksasi dengan  Solusi  Bouin,  kemudian  diiris  menjadi  7 m m  dan  diwarnai  dengan  Hematoxilin-Eosin.    Hasil pengamatan deskriptif struktur histologi utuh   pada membran peritrofik disebabkan oleh infeksi SlNPV menunjukkan  kecenderungan  menurun, sedangkan  pada  kontrol,  tidak  ada  kerusakan  sama  sekali. Semakin lama pemaparan virion di dalam lumen usus, kerusakan lebih banyak terjadi pada membran peritrofik.  Kerusakan terparah terjadi pada 96 jam setelah infeksi.  Hasil penelitian membuktikan bahwa virion HaNPV dapat menghancurkan struktur histologis dari usus tengah.
Kata kunci: SlNPV, Spirulina litura , membran peritrofik
berbagai macam persoalan (Cristian 1994).
Salah satu metode alternatif yang kini telah  banyak  dikembangkan  adalah pengendalian hayati dengan menggu-nakan organisme  hidup  yang  meru-pakan  musuh alami dari serangga dan bisa dimanfaatkan untuk membantu mengendalikan hama dan penyakit  tanaman.  Musuh  alami  tersebut dapat  berupa  patogen,  parasit,  predator ataupun jasad renik sebagai musuh-musuh hama  (Novizan  2004).  Beberapa  patogen spesifik  serangga  telah  banyak  digunakan secara  komersial  sebagai  bioinsektisida. Salah  satunya  adalah  pemanfaatan mikroorganisme seperti virus.
Beberapa  penelitian  menunjukkan bahwa beberapa tanaman penting ternyata terserang oleh virus yang dapat mematikan serangga.  Diantara  virus  yang  menyerang serangga  adalah  dari  genus  Baculovirus yang  sering  disebut  dengan Nuclear Polyhedrosis Virus (NPV) (Cummins 2005). Moscardi  (1994)  menyatakan  bahwa aplikasi  dari  baculovirus  cukup  berpotensi dan  efektif  untuk  digunakan  sebagai  agen kontrol  serangga  untuk  hama  Lepidoptera. Dalam  penelitian  kali  ini  digunakan SlNPV yang  merupakan  virus  patogen  NPV  yang dapat  menyerang  serangga  dalam  hal  ini adalah Spodoptera litura .
NPV  diketahui  mampu  menyerang beberapa larva Lepidoptera pemakan daun yang  dapat  merusak  berbagai  jenis tanaman. Sampai saat ini sekitar 700 virus telah berhasil diisolasi dan diidentifikasi dari serangga dan binatang arthropoda lainnya. Virus-virus  arthropoda  sebagian  besar masuk  dalam  6  genera  virus  yaitu B a c u l o v i r u s ,   P o x i v i r u s ,   I r i d i v i r u s , Enterovirus  dan  Rhabdovirus  (Cristian, 1994).  Menurut  Barbehenn  dan  Marin (1994),  baculovirus  bekerja  spesifik  dalam menginfeksi  beberapa  species  serangga, biasanya pada famili yang sama.
Menurut Sutarya (1996) Pemanfaatan NPV   untuk mengen-dalikan hama perusak daun Spodoptera  exigua (SeNPV)  yang menyerang ba-wang merah ternyata mampu menekan  serangan  ulat  daun  hingga  84%. Di  samping  itu,  pemakaian  NPV  untuk tanaman tomat mampu menekan serangan ulat Heliothis  sp hingga  65%  dan menyelamatkan  hasil  yang  hilang  hingga 83% (Novizan, 2004).
Hal ini sangat sesuai untuk digunakan dalam  program  PHT.  Salah  satu  konsep
utama  dari  PHT  adalah  menjaga  populasi species serangga hama agar tidak melebihi nilai  ambang  ekonomi  dan  menjaga  fauna lainnya  agar  tidak  terganggu  sehingga keseimbangan ekosistem tetap terpe-lihara (Bonning  &  Bruce  1996).  Organisme  ini secara alami bersifat patogen terhadap larva serangga  dengan  target  yang  spesifik sehingga  tidak  mengganggu  spesies serangga  dan  non  serangga  yang  bukan target. Selain itu, agensia ini sangat virulen, mudah  menyebar  di  dalam  populasi    dan dapat   persisten dalam jangka waktu yang l a m a   a p a b i l a   k o n d i s i   l i n g k u n g a n memungkinkan (Teakle et al., 1994). Diketahui bahwa virus ini meru-pakan patogen  yang  mematikan  karena  dapat merusak  membran  peritrofik  pada  daerah usus  tengah  serangga  jenis  Lepidoptera. G r a n a d o s   d a n   C o r s a r o   ( 1 9 9 0 ) mengemukakan  bahwa  ketika  virus menginfeksi usus tengah serangga, struktur histologis  membran  peritrofik  yang  sangat vital dalam proses pencernaan diperkirakan mengalami  kerusakan  sehingga  proses pencernaan  menjadi  terganggu  dan  pada akhirnya akan menurunkan berat larva.
Penelitian  mengenai  keberadaan membran  peritrofik  dalam  melawan serangan  patogen  pada  beberapa  larva Lepidoptera  telah  dilaporkan.  Dianta-ranya adalah  mekanisme  pertahanan  larva Trichoplusia  ni dengan  kebe-radaan membran  peritrofik  terhadap  infeksi  virus (Wang & Granados 1998). Begitu pula pada larva Glossina  morsitans-morsitans dilaporkan  adanya  membran  peritrofik ternyata cukup berperan dalam perlawanan infeksi yang disebabkan oleh Trypanosoma (Lehane & Msangi 1991). Hasil pengamatan secara  deskriptif  yang  dilakukan  oleh  Utari (2000) terhadap keutuhan struktur histologi membran  peritrofik  pada  larva Helicoverpa armigera akibat  infeksi HaNPV tampak menurun  sejalan  dengan  meningkatnya dosis infeksi.
Meskipun penelitian mengenai infeksi NPV  terhadap  beberapa  larva  serangga Lepidoptera  telah  dilaporkan  namun  hasil penelitian  mengenai  pengaruh  NPV terhadap  daerah  membran  peritrofik  pada usus  tengah  larva Spodoptera  litura masih kurang.  Berdasarkan  permasalahan tersebut, penelitian tentang pengaruh infeksi SlNPV terhadap  kerusakan  membran peritrofik yang dilakukan pada larva instar 5
160
Spodoptera litura sangat diperlukan.

## Materi dan Metode

## Pemurnian Virus
Dua  puluh  larva  yang  telah  terinfeksi SlNPV dilumatkan dengan 10 ml SDS 0,1 % dan 10 ml Triss Buffer 1 mM pH 7,6 .  Larutan larva  tersebut  disaring  menggunakan  kain o tipis  lalu  disimpan  dalam  temperatur  4 C selama  24  jam.    Setelah  itu,  larutan disentrifuge pada kecepatan 5000 rpm pada
o temperatur 4 C selama 30 menit.
Supernatan  hasil  sentrifuge  dibuang dan pelet dire-suspensi dengan triss   buffer 1 mM sebanyak 10 kali volume pelet.
Sesudah  tahap  ini,  dibuat  gradien sukrosa  60%  dan  50%  (W:V).    Pelet  yang sudah  diresuspensi  disentrifuge  pada gradien sukrosa tersebut dengan kecepatan
o 28.000 rpm, 4 C, 1 jam (rotor Beckman SW 28).  Selanjutnya  diisolasi  band  PIB  dan diresuspensi  dengan  NaCl  fisiologi,  lalu o disentrifuge kembali  pada 28.000 rpm, 4 C, 1 jam.  Hasil dari tahap ini lalu diisolasi setiap lapisan  dan  dipisahkan  dari  endapan. Semua  hasil  diamati  dibawah  mikroskop. Ternyata  pada  endapan  terlihat  PIB  yang sangat konsentrat.  Selanjutnya sediaan PIB ini ditambah 2-5 ml NaN2 (0,05% Na-azidat) dalam  NaCl  fisiologis,  disimpan  pada o temperatur 4 C sebagai stok.

## Persiapan Suspensi
Persiapan  suspensi  sendiri  diawali dengan mengambil 1 ml larutan SlNPV stok kemudian ditambah dengan 9 ml air suling dan diaduk hingga homogen (dengan tujuan agar memudahkan pada saat perhitungan). Pengenceran selan-jutnya dilakukan secara seri  dengan  mengambil  1  ml  suspensi  dari tabung  yang  pertama  lalu  dimasukkan  ke dalam tabung yang kedua yang telah berisi 9 ml  air  suling.  Kocok  hingga  homogen. Lakukan hal yang sama hingga diperkirakan jumlah  polihedra  mulai  bisa  terhitung (tampak  dari  berkurangnya  tingkat k e r a p a t a n   p o l i h e d r a   p a d a   k o l o m haemositometer).  Dari  pengenceran tersebut,  dihitung  konsentrasi  polihedra dengan bantuan Haemositometer Neubaur. Setiap  menghitung  jumlah  polihedra dilakukan  replikasi  sebanyak  3  kali perhitungan,  sehingga  jumlah  polihedra yang terhitung sudah cukup untuk mewakili. Seluruh  pekerjaan  di  atas  dilakukan  dalam
kondisi aseptik (setiap kali akan menghitung p o l i h e d r a   m a k a   h a e m o s i t o m e t e r dibersihkan    menggunakan  tissue  yang mengandung akohol).
Jumlah  PIB  dalam  larutan  ditentukan dengan  cara  menghitung  di  bawah m i k r o s k o p   c a h a y a   m e n g g u n a k a n haemositometer  dan  kon-sentrasi  PIB ditentukan  dengan  menggunakan  rumus sebagai berikut:
keterangan :
N = jumlah PIB yang terhitung pada 5 kotak besar (80 kotak kecil). 0,02   =  volume ( m l) dari 5 kotak besar (80 kotak kecil).
P        =  pengenceran 3 10      =  angka konversi dari  l ke ml Dari  perhitungan  terhadap  dosis  PIB tersebut, maka diperoleh dosis stok SlNPV adalah  32000  PIB/ml.  Selan-jutnya  dosis yang  akan  digunakan  di  dalam  penelitian diencerkan  sesuai  dengan  dosis  yang diinginkan.

## Persiapan
Metode  pemberian  NPV  terhadap larva  uji  dilakukan  dengan  metode  pakan ( Feeding  Methode ).  Pada  awal  pengujian, terlebih dahulu disiapkan pakan yang akan diberikan  berupa  daun  sawi  hijau  segar. Dosis  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini diperoleh  dari  hasil  pengenceran  stok SlNPV ,  sehingga  diperoleh  5  taraf  dosis dengan  1  kontrol.  Dosis  yang  digunakan adalah  0;  3,2;  32;  320;  3200  dan  32000 PIB/ml.
Pada  pra  penelitian  ini,  masing- masing perlakuan menggunakan 6 larva uji instar  lima  dengan  3  kali  pengulangan. Pemberian insektisida SlNPV kepada larva uji dilakukan melalui infeksi per oral dengan cara melaparkan larva instar 5 Spodoptera litura selama  24  jam  untuk  selanjutnya digunakan  dalam  penelitian.  Hal  tersebut dilakukan  agar  pakan  yang  telah  diberi suspensi SlNPV dapat  langsung  dimakan oleh  larva  pada  saat  perlakuan.  Keesokan harinya  dengan  menggunakan  mikropipet, larva-larva tersebut diberi pakan yang telah ditetesi suspensi virus sebanyak 10 l sesuai dengan  dosis  tertentu.  Pengamatan dilakukan setiap 24 jam sekali selama 8 hari
m
Sanjaya dkk.,
:  159 - 166

## Kajian Histologis Infeksi LD50 SLNPV
3
10 02 , 0 ´ ´ p N
Biosfera 28 (3) September 2011
berbagai macam persoalan (Cristian 1994).
Salah satu metode alternatif yang kini telah  banyak  dikembangkan  adalah pengendalian hayati dengan menggu-nakan organisme  hidup  yang  meru-pakan  musuh alami dari serangga dan bisa dimanfaatkan untuk membantu mengendalikan hama dan penyakit  tanaman.  Musuh  alami  tersebut dapat  berupa  patogen,  parasit,  predator ataupun jasad renik sebagai musuh-musuh hama  (Novizan  2004).  Beberapa  patogen spesifik  serangga  telah  banyak  digunakan secara  komersial  sebagai  bioinsektisida. Salah  satunya  adalah  pemanfaatan mikroorganisme seperti virus.
Beberapa  penelitian  menunjukkan bahwa beberapa tanaman penting ternyata terserang oleh virus yang dapat mematikan serangga.  Diantara  virus  yang  menyerang serangga  adalah  dari  genus  Baculovirus yang  sering  disebut  dengan Nuclear Polyhedrosis Virus (NPV) (Cummins 2005).
Moscardi  (1994)  menyatakan  bahwa aplikasi  dari  baculovirus  cukup  berpotensi dan  efektif  untuk  digunakan  sebagai  agen kontrol  serangga  untuk  hama  Lepidoptera. Dalam  penelitian  kali  ini  digunakan SlNPV yang  merupakan  virus  patogen  NPV  yang dapat  menyerang  serangga  dalam  hal  ini adalah Spodoptera litura .
NPV  diketahui  mampu  menyerang beberapa larva Lepidoptera pemakan daun yang  dapat  merusak  berbagai  jenis tanaman. Sampai saat ini sekitar 700 virus telah berhasil diisolasi dan diidentifikasi dari serangga dan binatang arthropoda lainnya. Virus-virus  arthropoda  sebagian  besar masuk  dalam  6  genera  virus  yaitu B a c u l o v i r u s ,   P o x i v i r u s ,   I r i d i v i r u s , Enterovirus  dan  Rhabdovirus  (Cristian, 1994).  Menurut  Barbehenn  dan  Marin (1994),  baculovirus  bekerja  spesifik  dalam menginfeksi  beberapa  species  serangga, biasanya pada famili yang sama.
Menurut Sutarya (1996) Pemanfaatan NPV   untuk mengen-dalikan hama perusak daun Spodoptera  exigua (SeNPV)  yang menyerang ba-wang merah ternyata mampu menekan  serangan  ulat  daun  hingga  84%. Di  samping  itu,  pemakaian  NPV  untuk tanaman tomat mampu menekan serangan ulat Heliothis  sp hingga  65%  dan menyelamatkan  hasil  yang  hilang  hingga 83% (Novizan, 2004).
Hal ini sangat sesuai untuk digunakan dalam  program  PHT.  Salah  satu  konsep
utama  dari  PHT  adalah  menjaga  populasi species serangga hama agar tidak melebihi nilai  ambang  ekonomi  dan  menjaga  fauna lainnya  agar  tidak  terganggu  sehingga keseimbangan ekosistem tetap terpe-lihara (Bonning  &  Bruce  1996).  Organisme  ini secara alami bersifat patogen terhadap larva serangga  dengan  target  yang  spesifik sehingga  tidak  mengganggu  spesies serangga  dan  non  serangga  yang  bukan target. Selain itu, agensia ini sangat virulen, mudah  menyebar  di  dalam  populasi    dan dapat   persisten dalam jangka waktu yang l a m a   a p a b i l a   k o n d i s i   l i n g k u n g a n memungkinkan (Teakle et al., 1994).
Diketahui bahwa virus ini meru-pakan patogen  yang  mematikan  karena  dapat merusak  membran  peritrofik  pada  daerah usus  tengah  serangga  jenis  Lepidoptera. G r a n a d o s   d a n   C o r s a r o   ( 1 9 9 0 ) mengemukakan  bahwa  ketika  virus menginfeksi usus tengah serangga, struktur histologis  membran  peritrofik  yang  sangat vital dalam proses pencernaan diperkirakan mengalami  kerusakan  sehingga  proses pencernaan  menjadi  terganggu  dan  pada akhirnya akan menurunkan berat larva.
Penelitian  mengenai  keberadaan membran  peritrofik  dalam  melawan serangan  patogen  pada  beberapa  larva Lepidoptera  telah  dilaporkan.  Dianta-ranya adalah  mekanisme  pertahanan  larva Trichoplusia  ni dengan  kebe-radaan membran  peritrofik  terhadap  infeksi  virus (Wang & Granados 1998). Begitu pula pada larva Glossina  morsitans-morsitans dilaporkan  adanya  membran  peritrofik ternyata cukup berperan dalam perlawanan infeksi yang disebabkan oleh Trypanosoma (Lehane & Msangi 1991). Hasil pengamatan secara  deskriptif  yang  dilakukan  oleh  Utari (2000) terhadap keutuhan struktur histologi membran  peritrofik  pada  larva Helicoverpa armigera akibat  infeksi HaNPV tampak menurun  sejalan  dengan  meningkatnya dosis infeksi.
Meskipun penelitian mengenai infeksi NPV  terhadap  beberapa  larva  serangga Lepidoptera  telah  dilaporkan  namun  hasil penelitian  mengenai  pengaruh  NPV terhadap  daerah  membran  peritrofik  pada usus  tengah  larva Spodoptera  litura masih kurang.  Berdasarkan  permasalahan tersebut, penelitian tentang pengaruh infeksi SlNPV terhadap  kerusakan  membran peritrofik yang dilakukan pada larva instar 5
160
Spodoptera litura sangat diperlukan.

## Materi dan Metode

## Pemurnian Virus
Dua  puluh  larva  yang  telah  terinfeksi SlNPV dilumatkan dengan 10 ml SDS 0,1 % dan 10 ml Triss Buffer 1 mM pH 7,6 .  Larutan larva  tersebut  disaring  menggunakan  kain o tipis  lalu  disimpan  dalam  temperatur  4 C selama  24  jam.    Setelah  itu,  larutan disentrifuge pada kecepatan 5000 rpm pada
o temperatur 4 C selama 30 menit.
Supernatan  hasil  sentrifuge  dibuang dan pelet dire-suspensi dengan triss   buffer 1 mM sebanyak 10 kali volume pelet.
Sesudah  tahap  ini,  dibuat  gradien sukrosa  60%  dan  50%  (W:V).    Pelet  yang sudah  diresuspensi  disentrifuge  pada gradien sukrosa tersebut dengan kecepatan
o 28.000 rpm, 4 C, 1 jam (rotor Beckman SW 28).  Selanjutnya  diisolasi  band  PIB  dan diresuspensi  dengan  NaCl  fisiologi,  lalu o disentrifuge kembali  pada 28.000 rpm, 4 C, 1 jam.  Hasil dari tahap ini lalu diisolasi setiap lapisan  dan  dipisahkan  dari  endapan. Semua  hasil  diamati  dibawah  mikroskop. Ternyata  pada  endapan  terlihat  PIB  yang sangat konsentrat.  Selanjutnya sediaan PIB ini ditambah 2-5 ml NaN2 (0,05% Na-azidat) dalam  NaCl  fisiologis,  disimpan  pada o temperatur 4 C sebagai stok.

## Persiapan Suspensi
Persiapan  suspensi  sendiri  diawali dengan mengambil 1 ml larutan SlNPV stok kemudian ditambah dengan 9 ml air suling dan diaduk hingga homogen (dengan tujuan agar memudahkan pada saat perhitungan). Pengenceran selan-jutnya dilakukan secara seri  dengan  mengambil  1  ml  suspensi  dari tabung  yang  pertama  lalu  dimasukkan  ke dalam tabung yang kedua yang telah berisi 9 ml  air  suling.  Kocok  hingga  homogen. Lakukan hal yang sama hingga diperkirakan jumlah  polihedra  mulai  bisa  terhitung (tampak  dari  berkurangnya  tingkat k e r a p a t a n   p o l i h e d r a   p a d a   k o l o m haemositometer).  Dari  pengenceran tersebut,  dihitung  konsentrasi  polihedra dengan bantuan Haemositometer Neubaur. Setiap  menghitung  jumlah  polihedra dilakukan  replikasi  sebanyak  3  kali perhitungan,  sehingga  jumlah  polihedra yang terhitung sudah cukup untuk mewakili. Seluruh  pekerjaan  di  atas  dilakukan  dalam
kondisi aseptik (setiap kali akan menghitung p o l i h e d r a   m a k a   h a e m o s i t o m e t e r dibersihkan    menggunakan  tissue  yang mengandung akohol).
Jumlah  PIB  dalam  larutan  ditentukan dengan  cara  menghitung  di  bawah m i k r o s k o p   c a h a y a   m e n g g u n a k a n haemositometer  dan  kon-sentrasi  PIB ditentukan  dengan  menggunakan  rumus sebagai berikut:
keterangan : N = jumlah PIB yang terhitung pada 5
kotak besar (80 kotak kecil).
0,02   =  volume ( m l) dari 5 kotak besar (80 kotak kecil).
P        =  pengenceran
3 10      =  angka konversi dari  l ke ml Dari  perhitungan  terhadap  dosis  PIB tersebut, maka diperoleh dosis stok SlNPV adalah  32000  PIB/ml.  Selan-jutnya  dosis yang  akan  digunakan  di  dalam  penelitian diencerkan  sesuai  dengan  dosis  yang diinginkan.

## Persiapan
Metode  pemberian  NPV  terhadap larva  uji  dilakukan  dengan  metode  pakan ( Feeding  Methode ).  Pada  awal  pengujian, terlebih dahulu disiapkan pakan yang akan diberikan  berupa  daun  sawi  hijau  segar. Dosis  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini diperoleh  dari  hasil  pengenceran  stok SlNPV ,  sehingga  diperoleh  5  taraf  dosis dengan  1  kontrol.  Dosis  yang  digunakan adalah  0;  3,2;  32;  320;  3200  dan  32000 PIB/ml.
Pada  pra  penelitian  ini,  masing- masing perlakuan menggunakan 6 larva uji instar  lima  dengan  3  kali  pengulangan. Pemberian insektisida SlNPV kepada larva uji dilakukan melalui infeksi per oral dengan cara melaparkan larva instar 5 Spodoptera litura selama  24  jam  untuk  selanjutnya digunakan  dalam  penelitian.  Hal  tersebut dilakukan  agar  pakan  yang  telah  diberi suspensi SlNPV dapat  langsung  dimakan oleh  larva  pada  saat  perlakuan.  Keesokan harinya  dengan  menggunakan  mikropipet, larva-larva tersebut diberi pakan yang telah ditetesi suspensi virus sebanyak 10 l sesuai dengan  dosis  tertentu.  Pengamatan dilakukan setiap 24 jam sekali selama 8 hari
m
:  159 - 166 Kajian Histologis Infeksi LD50 SLNPV 3 10 02 , 0 ´ ´ p N
hingga larva menjadi pre pupa. Penggantian pakan  dilakukan  setiap  hari  tanpa dikontaminasi oleh susupensi virus.

## Penelitian
Dalam penelitian ini digunakan 5 dosis perlakuan  dengan  1  macam  dosis  kontrol. Dosis  ini  ditentukan  berda-sarkan  kisaran LD  dengan tingkat kepercayaan 95%. Pada 50 percobaan  ini  digunakan  6  larva  uji    untuk masing-masing  perlakuan  dengan  4  kali pengulangan  dan  pengamatan  dila-kukan sampai stadia pre pupa. Tahapan pemberian insektisida  virus  tidak  berbeda  dengan metode yang dilakukan pada pra penelitian. SlNPV diberikan ke larva uji melalui metode pakan  yang  telah  ditetesi  suspensi  virus sebanyak  10  l  dengan  dosis  yang  telah ditentukan.  Sebelumnya  larva  dila-parkan terlebih  dahulu  selama  24  jam.  Keesokan harinya  seluruh  larva  diberi  pakan  segar tanpa  pemberian  suspensi SlNPV .  Untuk k o n t r o l ,   l a r v a   d i b e r i   p a k a n   t a n p a ditambahkan suspensi virus namun ditetesi dengan akuades.
Setiap harinya dicatat kematian larva yang teramati dari setiap perlakuan selama 8 hari. Hal ini disebabkan karena waktu yang dibu-tuhkan virus dalam berinteraksi dengan inangnya  membutuhkan  waktu  bebe-rapa hari  sejak  terjadinya  infeksi  hingga  larva mati. Pengukuran terhadap temperatur dan kelembaban  dilakukan  setiap  hari  selama waktu pengamatan.

## Pengamatan membran peritrofik
Pembuatan  sayatan  melintang  membran peritrofik  dilakukan  berda-sarkan  Utari (2000) yang telah dimodifikasi. Larva instar 5 Spodoptera litura diambil usus tengahnya pada 0, 24, 48, 72, 96 jam setelah diinfeksi dengan menggunakan  dosis  infeksi  berdasarkan nilai  LD SlNPV dari  hasil  penelitian 50 menggunakan  silet  yang  tajam.  Agar memperoleh  potongan  yang  baik,  larva dijerat dalam larutan Bouin's di atas bantalan lilin. Bagian usus depan dan usus belakang tusuk  dengan  jarum.  Kira-kira  5  menit setelah perendaman, larva yang telah mati diangkat  dari  bantalan  lilin  lalu  usus tengahnya diambil.
Tahap selanjutnya adalah usus tengah difiksasi di dalam larutan Bouin's selama 24 jam.  Keesokan  harinya,  dilakukan  proses
dehidrasi dengan tahapan sebagai berikut:
Alkohol 70 % 3 jam Alkohol 80% 3jam Alkohol  90% 3 jam Alkohol  96% 3 jam Alkohol 100% 3 jam
Penjernihan  organ  dilakukan  dengan merendam  objek  di  dalam  alkohol  100%  : xilol.  Organ  yang  telah  jernih,  kemudian diinfiltrasi  dalam  parafin  pada  temperatur tertentu, sebagai berikut:
0 Parafin I  (48 C)   30 menit
0 Parafin II  (52 C) 60 menit
0 Parafin III (56 C) 90 menit
Selesai  tahap  infiltrasi  selesai selanjutnya  organ  ditanam  dalam  parafin sampai  beku.  Organ  disayat  melintang setebal  8 m m.  Pita  sayatan  ditempel  pada objek  glass  yang  telah  diberi  perekat albumin  Mayer's.  Kemudian    dilakukan pewarnaan  dengan  HE.  Adapun  tata  cara pewarnaan  dengan  menggunakan  HE adalah sebagai berikut:
Xilol murni 40 menit Alkohol 100% 3 menit Alkohol 96% 3 menit Alkohol 80% 3 menit Alkohol 70% 30 menit HE 2 menit Air ledeng 6 menit Alkohol 70%+  3 tetes HNO3 2 celup Alkohol 70% 3 menit Alkohol 80% 3 menit Eosin Y 25 menit Alkohol 96% 3 celup Alkohol 100% 6 menit Alkohol 100% 6 menit Xilol murni 10 menit Jaringan  ditetesi  entelan  dan  ditutup dengan kaca penutup
Hasil sayatan penampang melin-tang dan  memanjang  usus  tengah  diamati  di bawah  mikroskop  cahaya.  Pengamatan terhadap  struktur  membran  peritrofik  pada nilai LD  dilakukan pada 0, 24, 48, 72 dan 96 50 jam setelah diinfeksi oleh SlNPV . Penentuan tingkat  kerusakan  akibat SlNPV dilakukan secara deskriptif berdasarkan ada tidaknya kerusakan    membran  peritrofik,  sel regeneratif dan membran basal.

## Hasil dan Pembahasan
Pengaruh  infeksi  SlNPV  pada  dosis  LD50
162
terhadap  keutuhan  struktur  membran peritrofik
Dari  hasil  pra  penelitian,  diperoleh dosis yang mampu menyebabkan kematian
50%   larva Spodoptera litura sebesar   465 PIB/ml. Nilai LD50 tersebut kemudian dibuta sayatan selama 0, 12, 24, 48, 72 dan 96 jam
MP SR MB MP SR MB SR 163
Sanjaya dkk., :  159 - 166 Kajian Histologis Infeksi LD50 SLNPV

## MP

## SR
MB
Gambar 1. Kerusakan  struktur  membran  peritrofik  akibat  infeksi  SlNPV  pada  selang  waktu tertentu Figure 1. Structural damage of peritrophic membran due to SINPV infection during a certain time period
1a. Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi  SlNPV setelah 0 jam 1b. Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi  SlNPV setelah 24 jam 1c. Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi   SlNPV setelah 48 jam
1d. Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi SlNPV setelah 72 jam
Keterangan MP : Membran Peritrofik SR : Sel Regeneratif MB : Membran basal
1e.  Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi SlNPV setelah 96 jam
hingga larva menjadi pre pupa. Penggantian pakan  dilakukan  setiap  hari  tanpa dikontaminasi oleh susupensi virus.

## Penelitian
Dalam penelitian ini digunakan 5 dosis perlakuan  dengan  1  macam  dosis  kontrol. Dosis  ini  ditentukan  berda-sarkan  kisaran LD  dengan tingkat kepercayaan 95%. Pada 50 percobaan  ini  digunakan  6  larva  uji    untuk masing-masing  perlakuan  dengan  4  kali pengulangan  dan  pengamatan  dila-kukan sampai stadia pre pupa. Tahapan pemberian insektisida  virus  tidak  berbeda  dengan metode yang dilakukan pada pra penelitian.
SlNPV diberikan ke larva uji melalui metode pakan  yang  telah  ditetesi  suspensi  virus sebanyak  10  l  dengan  dosis  yang  telah ditentukan.  Sebelumnya  larva  dila-parkan terlebih  dahulu  selama  24  jam.  Keesokan harinya  seluruh  larva  diberi  pakan  segar tanpa  pemberian  suspensi SlNPV .  Untuk k o n t r o l ,   l a r v a   d i b e r i   p a k a n   t a n p a ditambahkan suspensi virus namun ditetesi dengan akuades.
Setiap harinya dicatat kematian larva yang teramati dari setiap perlakuan selama 8 hari. Hal ini disebabkan karena waktu yang dibu-tuhkan virus dalam berinteraksi dengan inangnya  membutuhkan  waktu  bebe-rapa hari  sejak  terjadinya  infeksi  hingga  larva mati. Pengukuran terhadap temperatur dan kelembaban  dilakukan  setiap  hari  selama waktu pengamatan.

## Pengamatan membran peritrofik
Pembuatan  sayatan  melintang  membran peritrofik  dilakukan  berda-sarkan  Utari (2000) yang telah dimodifikasi. Larva instar 5 Spodoptera litura diambil usus tengahnya pada 0,
24, 48, 72, 96 jam setelah diinfeksi dengan menggunakan  dosis  infeksi  berdasarkan nilai  LD SlNPV dari  hasil  penelitian 50 menggunakan  silet  yang  tajam.  Agar memperoleh  potongan  yang  baik,  larva dijerat dalam larutan Bouin's di atas bantalan lilin. Bagian usus depan dan usus belakang tusuk  dengan  jarum.  Kira-kira  5  menit setelah perendaman, larva yang telah mati diangkat  dari  bantalan  lilin  lalu  usus tengahnya diambil.
Tahap selanjutnya adalah usus tengah difiksasi di dalam larutan Bouin's selama 24 jam.  Keesokan  harinya,  dilakukan  proses
dehidrasi dengan tahapan sebagai berikut:
Alkohol 70 % 3 jam Alkohol 80% 3jam Alkohol  90% 3 jam Alkohol  96% 3 jam
Alkohol 100% 3 jam Penjernihan  organ  dilakukan  dengan merendam  objek  di  dalam  alkohol  100%  : xilol.  Organ  yang  telah  jernih,  kemudian diinfiltrasi  dalam  parafin  pada  temperatur tertentu, sebagai berikut:
0
Parafin I  (48 C)   30 menit
0 Parafin II  (52 C) 60 menit 0 Parafin III (56 C) 90 menit Selesai  tahap  infiltrasi  selesai selanjutnya  organ  ditanam  dalam  parafin sampai  beku.  Organ  disayat  melintang setebal  8 m m.  Pita  sayatan  ditempel  pada objek  glass  yang  telah  diberi  perekat albumin  Mayer's.  Kemudian    dilakukan pewarnaan  dengan  HE.  Adapun  tata  cara pewarnaan  dengan  menggunakan  HE adalah sebagai berikut:
Xilol murni 40 menit Alkohol 100% 3 menit Alkohol 96% 3 menit Alkohol 80% 3 menit Alkohol 70% 30 menit HE 2 menit Air ledeng 6 menit Alkohol 70%+  3 tetes HNO3 2 celup Alkohol 70% 3 menit Alkohol 80% 3 menit Eosin Y 25 menit Alkohol 96% 3 celup Alkohol 100% 6 menit Alkohol 100% 6 menit Xilol murni 10 menit Jaringan  ditetesi  entelan  dan  ditutup dengan kaca penutup
Hasil sayatan penampang melin-tang dan  memanjang  usus  tengah  diamati  di bawah  mikroskop  cahaya.  Pengamatan terhadap  struktur  membran  peritrofik  pada nilai LD  dilakukan pada 0, 24, 48, 72 dan 96 50 jam setelah diinfeksi oleh SlNPV . Penentuan tingkat  kerusakan  akibat SlNPV dilakukan secara deskriptif berdasarkan ada tidaknya kerusakan    membran  peritrofik,  sel regeneratif dan membran basal.

## Hasil dan Pembahasan
Pengaruh  infeksi  SlNPV  pada  dosis  LD50
162
terhadap  keutuhan  struktur  membran peritrofik Dari  hasil  pra  penelitian,  diperoleh dosis yang mampu menyebabkan kematian
50%   larva Spodoptera litura sebesar   465 PIB/ml. Nilai LD50 tersebut kemudian dibuta sayatan selama 0, 12, 24, 48, 72 dan 96 jam
MP SR MB MP SR MB SR
Sanjaya dkk.,
MP SR MB
Gambar 1. Kerusakan  struktur  membran  peritrofik  akibat  infeksi  SlNPV  pada  selang  waktu tertentu
Figure 1. Structural damage of peritrophic membran due to SINPV infection during a certain time period 1a. Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi  SlNPV setelah 0 jam 1b. Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi  SlNPV setelah 24 jam 1c. Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi   SlNPV setelah 48 jam
1d. Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi SlNPV setelah 72 jam
Keterangan MP : Membran Peritrofik SR : Sel Regeneratif MB : Membran basal
1e.  Struktur  membran  peritrofik  yang terinfeksi SlNPV setelah 96 jam
Histologi Membran Peritrofik a. 0 jam setelah infeksi
Berdasarkan  hasil  pengamatan histologi  terhadap  usus  tengah    larva Spodoptera  litura pada  0  jam,  ternyata struktur  membran  peritrofik  masih  tampak utuh.  Dapat  dilihat  jaringan  penyusun  dari usus  tengah  masih  berada  dalam  kondisi normal (Gambar 1. a.)

## b. 24 jam setelah diinfeksi SlNPV
Hasil sayatan histologis terhadap usus tengah  larva Spodoptera  litura pada  waktu 24  jam  setelah  perlakuan  menunjukkan mulai tampak adanya suatu kerusakan yang terjadi  pada  lapisan  paling  luar  yaitu membran  peritrofik.  Bisa  dibedakan  hasil yang ditunjukkan bila dibandingkan dengan kontrol, maka profil membran peritrofik mulai mengalami  disintegrasi ke arah lumen usus tengah, tampak seperti pada Gambar 1.b

## c. 48 jam setelah infeksi.
Setelah  48  jam  masa  infeksi  dengan menggunakan SlNPV ,  penyebaran  virus serangga  di  dalam  tubuh  larva  mulai memasuki  daerah  yang  lebih  dalam  yaitu masuk  ke  dalam  sel-sel  penyusun  usus tengah  (sel  regeneratif)  mulai  mengalami degradasi hingga tampak bergerak menuju ke arah lumen usus. Kerusakan dapat dilihat pada Gambar 1.c

## d. 72 jam setelah infeksi.
Pada sayatan setelah 72 jam setelah perlakuan, tingkat kerusakan jaringan pada usus  tengah  mulai  merata.  Kerusakan tampak  hingga  membran  basal.  Rusaknya sel-sel  tersebut  diperkirakan  oleh  infeksi SlNPV di dalam tubuh larva uji yang terjadi akibat  proses  termakannya  PIB  pada  larva uji. Kerusakan yang terjadi dapat dilihat pada Gambar 1.d e. 96 jam setelah infeksi.
Pada  96  jam  setelah  perlakuan, jaringan  penyusun  usus  tengah  semakin tidak  jelas.  Agak  sulit  untuk  menemukan bagian-bagian  penyusunnya.  Hal  ini diperkirakan  proses  infeksi  virus  sudah memasuki  tahap  lanjut.  Virus  yang  telah mengalami replikasi di daerah usus tengah mulai  dilepaskan  ke  hemosol  dan  pada tahap  selanjutnya  akan  menyerang  bagian tubuh  yang  lainnya,  seperti  tampak  pada
Gambar 1.e. Berdasarkan hasil yang diperoleh terhadap  keutuhan  struktur  dari membrane  peritrofik  larva  instar  5 Spodoptera litura selama 0, 24, 48, 72 dan 96 jam dapat dilihat bahwa pada 0 jam  belum  ditemukan  kerusakan  yang diakibatkan  oleh SlNPV (Gambar  1.a).
Epithelium  usus  tengah  masih  tampak utuh  dengan  sel-sel  penyusunnya  yang terdiri  dari  kumpulan  sel-sel  kolumner yang  tersusun  rapat  yang  tampak  di bagian apek atau ujung dan terdapat sel- sel regeneratif yang terdapat di sebelah basal  dari  epitelium  dan  berbatasan langsung dengan membran basal (Levy et  al .,  2004).  Kondisi  demikian menegaskan  bahwa  dengan  keutuhan profil  membran  peritrofik  maka  aktivitas metabolisme  masih  berjalan  lancar k a r e n a   u s u s   t e n g a h   d a p a t mengoptimalkan  fungsinya  sebagai tempat penyerapan dan sekresi enzim ( Kikhno 2002). Disebutkan oleh   Wang & Granados  (1998)  yang  mempelajari keberadaan  membran  peritrofik  pada Trichoplusia ni bahwa membran peritrofik tersusun  oleh  protein Insect  Intestinal Mucin yang merupakan protein terbesar y a n g   d i k a n d u n g   o l e h   m e m b r a n peritrofik.Pengamatan  selanjutnya bahwa  akibat  infeksi SlNPV yang  turut tercerna  bersama  makanannya,  maka struktur dari membran peritrofik pada 24 setelah  infeksi  mulai  mengalami kerusakan seperti terlihat pada Tabel 4.5 sebesar  10%.  Hal  ini  menegaskan keberadaan  membran  peritrofik  juga berfungsi  sebagai  perlindungan  usus tengah  terhadap  kerusakan  yang  kuat o l e h   p a r t i k e l   m a k a n a n   ( D a y   & Waterhouse  1953).  Kerusakan  yang terjadi  menga-lami  peningkatan  sejalan dengan semakin lamanya waktu infeksi. Pada  infeksi  awal,  serangan  patogen akan  direspon  oleh  sistem  pertahanan serangga  secara  morfologi  dengan keberadaan  membran  peritrofik  yang berfungsi  sebagai  perlindungan  terha- dap  serangan  patogen  (Terra  2001). Funakoshi  dan  Aizawa  (1989)  me- nyatakan  bahwa  dengan  meningkatnya proses  infeksi  yang  terus-menerus,
Sanjaya dkk., :  159 - 166 Kajian Histologis Infeksi LD50 SLNPV

## Daftar  Pustaka
Arifin  M.  1993 . Perkembangan  Pe-nelitian P e n g e n d a l i a n   U l a t   G r a y a k , Spodoptera litura (F.) Dengan Sl-N PV Pada  Kedelai . Disampaikan  dalam Simposium  Patologi  Se-rangga tanggal  12-13  Oktober  1993  yang berlangsung  di  Kampus  UGM. Yogyakarta.
Barbehenn  RV,  and  Marin  M.  1994. Peritrophic  Envelope  Permeability  in H e r b i v o r o u s   I n s e c t . J .   I n s e c t Pshysiology . (41):303-311.
Bonning  CB,    Bruce.  1996.  Develop-ment and  recombinant  Baculovirus  for insect control. Ann Rev Entomol . (41): 191-210. Borror D, Delong D. 1995. An Introduction to the Study of Insect . New York: Rinehart
& Company.
Cristian P. 1994. Recombinant Baculo-virus Insecticides:  Catalyst  for  Change  of Heart?.  Di  dalam: Biopesticides Opportunities  for  Australian  Industry . Symposium on Biopesticides, June 9- 10 1991 , Brisbane, Australia. Hlm 40- 50 Engelhard  EK,  and  Volkman  LE.  1995. Developmental  resistance  in  fourth instar Tricholupsia ni orally inoculated with Autographa californica M. Nuclear Polyhe-drosis Virus. J. Virol. 209: 381- 389. Fuxa  J  R.    1993. Insects  Resistance  to Viruses in Parasites and Pathogens of Insects . Florida: Academic Press.
Funakoshi M, K Aizawa. 1989. Viral inhibitory factor  produced  in  the  hemolymph  of the  silkworm, Bombyx  mori ,  infected with  a  Nuclear  Polyhedrosis  Virus .  J Invert Pathol . 54: 151 – 155.
Granados  RR,    Corsaro  NG.1990.
Baculovirus Enhancing Protein & Their Implications  for  Insect  Control .  Youth I n t e r n a t i o n a l   C o l l o - q u i n o n   i n Invertebrate  Patho-logy  &  Microbial Control.
Kalshoven LGE. 1981. The Pest of Crops in Indonesia . PT. Ichtiar Baru. Indonesia.
Kikhno . 2002.  Characterization  of pif, a Gene Required for the per os Infectivity o f S p o d o p t e r a   l i t t o r a l i s
Nucleopolyhedrovirus. J.  of  Gen.  Vir . (83). 3013-3022.
maka  fungsi  dari  membran  peritrofik  tidak dapat dipertahankan lagi.
Salah  satu  faktor  yang  mempe- ngaruhi  keberhasilan  virus  dalam  merusak struktur histologi membran peritrofik karena virus menghasilkan faktor pemercepat virus yang membuat virus mampu menginfeksi sel serangga  sehingga  merusak  membran peritrofik  (Lehane  1997;  Engelhard  & Volkman 1995). Dengan demikian membran peritrofik akan lebih mudah untuk ditembus oleh  virion  NPV  yang  pada  akhirnya  akan menyerang  sel-sel  di  sebelah  dalamnya. Kerusakan tersebut dapat dilihat setelah 48 jam  dimana  sel  regeneratif  (rusak  sebesar 30%)  mulai  meluruh  ke  arah  lumen  usus tengah. Dengan terganggunya sel tersebut, maka fungsi usus tengah sebagai penghasil enzim  akan  terganggu.  Disebutkan  bahwa salah  satu  enzim  yang  disekresikan  oleh usus  tengah  adalah  enzim  protease  yang berperan sebagai anti viral (Terra & Ferreira 2002).  Sehingga  bila  dalam  aktivitasnya diganggu  oleh  kehadiran  patogen  maka proses  metabolisme  tidak  akan  berjalan dengan lancar. Berdasarkan  hasil  pengamatan  terhadap infeksi tahap lanjut pada 72 dan 96 setelah infeksi,  keutuhan  membran  peritrofik menjadi  semakin  tidak  utuh.  Seperti  yang dikemukakan oleh Rohrmann (1994), bahwa virion  NPV  membutuhkan  waktu  beberapa hari  untuk  dapat  mengekspresikan interaksinya.  Dengan  demikian,  semakin lama  waktu  kontak  antara  virion  NPV dengan  sel  inang  maka  tingkat  kerusakan yang  ditimbulkan  akan  semakin  tinggi. Kerusakan yang terjadi pada tahap lanjut ini menyebabkan  kemampuan  epitel  dalam membentuk  membran  peritrofik  mengalami gang-guan.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan Patton (1963) bahwa membran peritrofik merupakan sekresi dari epithelium usus tengah.
Struktur  histologi  membran  peri-trofik setelah  diinfeksi  oleh SlNPV tampak mengalami  kerusakan  sejalan  dengan bertambahnya  waktu  infeksi SlNPV yang diberikan  dimana  kerusakan  yang  terbesar terjadi pada saat 96 jam setelah diinfeksi.

## Histologi Membran Peritrofik
a. 0 jam setelah infeksi
Berdasarkan  hasil  pengamatan histologi  terhadap  usus  tengah    larva Spodoptera  litura pada  0  jam,  ternyata struktur  membran  peritrofik  masih  tampak utuh.  Dapat  dilihat  jaringan  penyusun  dari usus  tengah  masih  berada  dalam  kondisi normal (Gambar 1. a.)

## b. 24 jam setelah diinfeksi SlNPV
Hasil sayatan histologis terhadap usus tengah  larva Spodoptera  litura pada  waktu 24  jam  setelah  perlakuan  menunjukkan mulai tampak adanya suatu kerusakan yang terjadi  pada  lapisan  paling  luar  yaitu membran  peritrofik.  Bisa  dibedakan  hasil yang ditunjukkan bila dibandingkan dengan kontrol, maka profil membran peritrofik mulai mengalami  disintegrasi ke arah lumen usus tengah, tampak seperti pada Gambar 1.b

## c. 48 jam setelah infeksi.
Setelah  48  jam  masa  infeksi  dengan menggunakan SlNPV ,  penyebaran  virus serangga  di  dalam  tubuh  larva  mulai memasuki  daerah  yang  lebih  dalam  yaitu masuk  ke  dalam  sel-sel  penyusun  usus tengah  (sel  regeneratif)  mulai  mengalami degradasi hingga tampak bergerak menuju ke arah lumen usus. Kerusakan dapat dilihat pada Gambar 1.c

## d. 72 jam setelah infeksi.
Pada sayatan setelah 72 jam setelah perlakuan, tingkat kerusakan jaringan pada usus  tengah  mulai  merata.  Kerusakan tampak  hingga  membran  basal.  Rusaknya sel-sel  tersebut  diperkirakan  oleh  infeksi SlNPV di dalam tubuh larva uji yang terjadi akibat  proses  termakannya  PIB  pada  larva uji. Kerusakan yang terjadi dapat dilihat pada Gambar 1.d

## e. 96 jam setelah infeksi.
Pada  96  jam  setelah  perlakuan, jaringan  penyusun  usus  tengah  semakin tidak  jelas.  Agak  sulit  untuk  menemukan bagian-bagian  penyusunnya.  Hal  ini diperkirakan  proses  infeksi  virus  sudah memasuki  tahap  lanjut.  Virus  yang  telah mengalami replikasi di daerah usus tengah mulai  dilepaskan  ke  hemosol  dan  pada tahap  selanjutnya  akan  menyerang  bagian tubuh  yang  lainnya,  seperti  tampak  pada
Gambar 1.e.
Berdasarkan hasil yang diperoleh terhadap  keutuhan  struktur  dari membrane  peritrofik  larva  instar  5 Spodoptera litura selama 0, 24, 48, 72 dan 96 jam dapat dilihat bahwa pada 0 jam  belum  ditemukan  kerusakan  yang diakibatkan  oleh SlNPV (Gambar  1.a).
Epithelium  usus  tengah  masih  tampak utuh  dengan  sel-sel  penyusunnya  yang terdiri  dari  kumpulan  sel-sel  kolumner yang  tersusun  rapat  yang  tampak  di bagian apek atau ujung dan terdapat sel- sel regeneratif yang terdapat di sebelah basal  dari  epitelium  dan  berbatasan langsung dengan membran basal (Levy et  al .,  2004).  Kondisi  demikian menegaskan  bahwa  dengan  keutuhan profil  membran  peritrofik  maka  aktivitas metabolisme  masih  berjalan  lancar k a r e n a   u s u s   t e n g a h   d a p a t mengoptimalkan  fungsinya  sebagai tempat penyerapan dan sekresi enzim ( Kikhno 2002). Disebutkan oleh   Wang & Granados  (1998)  yang  mempelajari keberadaan  membran  peritrofik  pada Trichoplusia ni bahwa membran peritrofik tersusun  oleh  protein Insect  Intestinal Mucin yang merupakan protein terbesar y a n g   d i k a n d u n g   o l e h   m e m b r a n peritrofik.Pengamatan  selanjutnya bahwa  akibat  infeksi SlNPV yang  turut tercerna  bersama  makanannya,  maka struktur dari membran peritrofik pada 24 setelah  infeksi  mulai  mengalami kerusakan seperti terlihat pada Tabel 4.5 sebesar  10%.  Hal  ini  menegaskan keberadaan  membran  peritrofik  juga berfungsi  sebagai  perlindungan  usus tengah  terhadap  kerusakan  yang  kuat o l e h   p a r t i k e l   m a k a n a n   ( D a y   & Waterhouse  1953).  Kerusakan  yang terjadi  menga-lami  peningkatan  sejalan dengan semakin lamanya waktu infeksi. Pada  infeksi  awal,  serangan  patogen akan  direspon  oleh  sistem  pertahanan serangga  secara  morfologi  dengan keberadaan  membran  peritrofik  yang berfungsi  sebagai  perlindungan  terha- dap  serangan  patogen  (Terra  2001). Funakoshi  dan  Aizawa  (1989)  me- nyatakan  bahwa  dengan  meningkatnya proses  infeksi  yang  terus-menerus,
164

## Daftar  Pustaka
Arifin  M.  1993 . Perkembangan  Pe-nelitian P e n g e n d a l i a n   U l a t   G r a y a k , Spodoptera litura (F.) Dengan Sl-N PV Pada  Kedelai . Disampaikan  dalam Simposium  Patologi  Se-rangga tanggal  12-13  Oktober  1993  yang berlangsung  di  Kampus  UGM. Yogyakarta.
Barbehenn  RV,  and  Marin  M.  1994. Peritrophic  Envelope  Permeability  in H e r b i v o r o u s   I n s e c t . J .   I n s e c t Pshysiology . (41):303-311.
Bonning  CB,    Bruce.  1996.  Develop-ment and  recombinant  Baculovirus  for insect control. Ann Rev Entomol . (41): 191-210.
Borror D, Delong D. 1995. An Introduction to the Study of Insect . New York: Rinehart
& Company.
Cristian P. 1994. Recombinant Baculo-virus Insecticides:  Catalyst  for  Change  of Heart?.  Di  dalam: Biopesticides Opportunities  for  Australian  Industry . Symposium on Biopesticides, June 9- 10 1991 , Brisbane, Australia. Hlm 40- 50
Engelhard  EK,  and  Volkman  LE.  1995. Developmental  resistance  in  fourth instar Tricholupsia ni orally inoculated with Autographa californica M. Nuclear Polyhe-drosis Virus. J. Virol. 209: 381- 389.
Fuxa  J  R.    1993. Insects  Resistance  to Viruses in Parasites and Pathogens of Insects . Florida: Academic Press.
Funakoshi M, K Aizawa. 1989. Viral inhibitory factor  produced  in  the  hemolymph  of the  silkworm, Bombyx  mori ,  infected with  a  Nuclear  Polyhedrosis  Virus .  J Invert Pathol . 54: 151 – 155.
Granados  RR,    Corsaro  NG.1990. Baculovirus Enhancing Protein & Their Implications  for  Insect  Control .  Youth I n t e r n a t i o n a l   C o l l o - q u i n o n   i n Invertebrate  Patho-logy  &  Microbial Control.
Kalshoven LGE. 1981. The Pest of Crops in Indonesia . PT. Ichtiar Baru. Indonesia.
Kikhno . 2002.  Characterization  of pif, a Gene Required for the per os Infectivity o f S p o d o p t e r a   l i t t o r a l i s Nucleopolyhedrovirus. J.  of  Gen.  Vir .
(83). 3013-3022.
maka  fungsi  dari  membran  peritrofik  tidak dapat dipertahankan lagi.
Salah  satu  faktor  yang  mempe- ngaruhi  keberhasilan  virus  dalam  merusak struktur histologi membran peritrofik karena virus menghasilkan faktor pemercepat virus yang membuat virus mampu menginfeksi sel serangga  sehingga  merusak  membran peritrofik  (Lehane  1997;  Engelhard  & Volkman 1995). Dengan demikian membran peritrofik akan lebih mudah untuk ditembus oleh  virion  NPV  yang  pada  akhirnya  akan menyerang  sel-sel  di  sebelah  dalamnya. Kerusakan tersebut dapat dilihat setelah 48 jam  dimana  sel  regeneratif  (rusak  sebesar 30%)  mulai  meluruh  ke  arah  lumen  usus tengah. Dengan terganggunya sel tersebut, maka fungsi usus tengah sebagai penghasil enzim  akan  terganggu.  Disebutkan  bahwa salah  satu  enzim  yang  disekresikan  oleh usus  tengah  adalah  enzim  protease  yang berperan sebagai anti viral (Terra & Ferreira 2002).  Sehingga  bila  dalam  aktivitasnya diganggu  oleh  kehadiran  patogen  maka proses  metabolisme  tidak  akan  berjalan dengan lancar.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  terhadap infeksi tahap lanjut pada 72 dan 96 setelah infeksi,  keutuhan  membran  peritrofik menjadi  semakin  tidak  utuh.  Seperti  yang dikemukakan oleh Rohrmann (1994), bahwa virion  NPV  membutuhkan  waktu  beberapa hari  untuk  dapat  mengekspresikan interaksinya.  Dengan  demikian,  semakin lama  waktu  kontak  antara  virion  NPV dengan  sel  inang  maka  tingkat  kerusakan yang  ditimbulkan  akan  semakin  tinggi. Kerusakan yang terjadi pada tahap lanjut ini menyebabkan  kemampuan  epitel  dalam membentuk  membran  peritrofik  mengalami gang-guan.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan Patton (1963) bahwa membran peritrofik merupakan sekresi dari epithelium usus tengah.
Struktur  histologi  membran  peri-trofik setelah  diinfeksi  oleh SlNPV tampak mengalami  kerusakan  sejalan  dengan bertambahnya  waktu  infeksi SlNPV yang diberikan  dimana  kerusakan  yang  terbesar terjadi pada saat 96 jam setelah diinfeksi.
Lehane   MJ,   Msangi   AR.1991. Lectin and Peritrophic Membrane Development in the Gut of Glossina-M-morsitans and a Discussion of Their Role in Protecting t h e   F l y   A g a i n s t   Tr y p a n o s o m a Infection. Journal Medical & Vaternity Entomology . (5): 495-501.
Lehane  MJ.1997.  Peritrophic  Matrix Structure  and  Function. Annual Review Entomology . (42): 525-550.
Moscardi,  F.  1994.  Assesment  of  The
Appplication of Baculovirus for Control of  Lepidoptera. Annual  Review  of Entomology . (44): 247-249.
Novizan.  2004. Membuat  dan  Memanfaat- kan  Pestisida  Ramah  Lingkungan . Tangerang: Agro Media Pustaka.
Patton  RL.1963. Introductory  Insect Physiology . Japan: Toppan Company.
Rohrmann  GF. 1994. Nuclear Polyhe-drosis Virus dalam Encyclopedia of Virology .
London:  Academic  Press  Hart  Court Brace and Company. (1): 130-136.
Sutarya,  R.  1996.  Pengujian Spodoptera exigua Nuclear  Polyhedrosis  Virus dalam  Hubungannya  dengan  Sifat
Persistensinya untuk Mengenda-likan
Spodoptera  exigua Hubn. J.  Hort. 6 (2): 167 – 171.
Teakle  RE,  Jensen  RE,  Mulder,  JC.  1985. Susceptibility  of Heliothis  armiger (Lepidoptera:Noctuidae)  on  Sorghum to  a  Nuclear  Polyhedrosis  Virus. J Econ Entomol . 78: 1373-1378
Terra WR. 2001. The Origin and Functions of the  Insect  Peritrophic  Membrane  & Peritrophic  Gel. Archives  of  Insect Biochemistry and Physiology . (47): 47- 61.
Terra  WR,  Ferreira  C.2002.  Insect Peritrophic  Membrane  Functions. Journal  of  Physiology,  Bioche-mistry, Toxicology & Molecular Biology . Utari  E.  2000. Pengaruh  Infeksi  HaNPV terhadap  Kerusakan  Membran Peritrofik  dan  Indeks  Nutrisi  Larva Instar  V  Helicoverpa  armigera (Hubner) . Tesis Pasca Sarjana. ITB.
Wang, Granados.1998. Observation on the Presence of the Peritrophic Membrane in Larval Trichoplusia ni and its Role in Limiting Baculovirus Infection. Journal of Invert Pathology . (72): 57-62.
Wa t e r h o u s e .   D . M . F.   1 9 5 3 . I n s e c t Physiology . London: Chapman & Hall.

## 166
Keragaman Benthos pada  Budidaya  Rajungan ( Portunus pelagicus ) di Tambak Percobaan Maranak, Balai Riset Perikanan Budidaya Air Payau Maros Sulawesi Selatan

## A. Marsambauana Pirzan  dan Suharyanto
Balai Riset Perikanan Budidaya Air Payau, Maros
Email: yanto@kkp.go.id
Diterima Desember 2010 disetujui untuk diterbitkan September 2011

## Abstract
A  study  has  been  conducted  in  Maranak  Pond  Station  of  Research  Institute  for  Coastal Aquaculture, Maros South Sulawesi.  The objective of this study was to analyse the benthos diversity on the swimming crab ( Portunus pelagicus ) culture in the brackishwater pond.   Sampling of benthos was conducted each month for four times.   Benthos   samples were obtained from 9 ponds. Pipe (pvc) in diameter of 2 cm was used to collect benthos then preserved in 10% of formalin solution. Microscopically identification of benthos was conducted until genus and counting cell method was used to calculate their population density.  Research results showed that benthos composition were 32 genera of phytoplankton
2 and 15 genera of zooplankton. Varies benthos density at the range of 954 – 23,850 ind. / cm  and genus at the range of 2 – 14 genera.   Gut content of swimming crab were 6 genera of phytoplankton, Copepod nauplii and unknown organism.   Benthos diversity indices was classified moderately stable in ponds 2 – 6 and 8 - 9 while in pond 1 and 7 were not stable.  Evenness indices of benthos in ponds 3 - 8 were relatively more normal of distribution than ponds 1, 2 and 9. Dominance indices of ponds 3 - 9 relatively better than ponds 1 and 2.
Key words: diversity, benthos, swimming crab, culture, brackishwater pond

## Abstrak
Studi telah dilaksanakan di Instalasi Tambak Percobaan Maranak, Balai Riset Perikanan Budidaya Air Payau Maros Sulawesi Selatan bertujuan menelaah keragaman benthos pada budidaya rajungan ( Portunus  pelagicus )  untuk  mendukung  pengelolaan  tambak  yang  produktif  dan  berkelanjutan. Pengambilan sampel benthos sebanyak empat kali sampling yang dilakukan tiap bulan sekali di sembilan
2 petak tambak berukuran masing-masing 250 m . Sampel benthos dikoleksi menggunakan pipa paralon berdiameter  2  cm,  kemudian  sampel  tersebut  diawetkan  dengan  larutan  formalin  10%.  Identifikasi organisme benthos dilakukan di laboratorium menggunakan mikroskop yang berpedoman pada buku identifikiasi serta kelimpahannya menggunakan Sedwick Rafter C ounting Cell. Organisme benthos terdiri dari 32 genera fitoplankton dan 15 genera zooplankton. Kelimpahan organisme penyusun benthos  pada
2 kisaran 954 – 23.850 ind. / cm dan jumlah genus pada kisaran 2 – 14 genera. Hasil analisis isi usus rajungan terdiri dari 6 genera fitoplankton, naupli kopepoda dan organisme tidak diketahui. Indeks biologi: keragaman benthos pada   petak 2 – 6 dan 8 - 9 tergolong ke dalam kondisi stabil moderat sedangkan petak 1 dan 7 tergolong tidak stabil,   keseragaman pada petak 3 – 8 berindikasi kepadatannya lebih merata dibandingkan dengan petak 1, 2 dan 9, dan dominansi petak 3 – 9 relatif lebih baik dibandingkan dengan petak 1 dan 2.
Kata kunci: keragaman, benthos, rajungan,  budidaya, tambak

## Pendahuluan
P e r m i n t a a n   d a g i n g   r a j u n g a n ( Portunus  pelagicus )  semakin  meningkat karena  selain  rasa  dagingnya  yang  lezat juga bergizi tinggi. Hal ini mendorong aktivitas  penangkapan  rajungan  semakin intensif  dan tidak terkendali yang mengarah kepada  kerusakan  populasi  rajungan  di alam. Pengurangan dan ancaman populasi rajungan  sudah  mulai  dirasakan,  misalnya
saat  ini  permintaan  Philips  Seafoods sebanyak  800  ton  per  bulan  sudah  sulit terpenuhi  (Suharyanto et  al .,  2006). Produksi daging rajungan di Indonesia baru mencapai  sekitar  9.000  ton  per  tahun,  di mana  70%  berasal  dari  hasil  tangkapan  di alam  dan  30%  berasal  dari  kegiatan budidaya  sehingga  perlu  pengembangan budidaya  dan  pengaturan  penangkapan untuk menjaga kelestarian rajungan di alam.
Guna  mengantisipasi  hal  tersebut,