ARTIKEL RISET URL artikel: http://jurnal.fkmumi.ac.id/index.php/woh/article/view/woh5404
Uji Aktivitas Ekstrak Kombinasi Rimpang Kunyit (Curcuma domestica Val.) dan Kurma (Phoenix dactylifera L) sebagai Antiinflamasi Secara In Vitro
K Sukmawati 1 , Aulia Wati 2 , A. Muflihunna 3 1,3 Departement Chemistry, Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
2 Departement Pharmacology, Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia Email Penulis Korespondensi: sukmawati.syarif@umi.ac.id sukmawati.syarif@umi.ac.id 1 , aulia.wati@umi.ac.id 2 , andi.muflihunna@umi.ac.id 3
(081350558806)

## ABSTRAK
Obat antiinflamasi yang paling banyak digunakan adalah Antiinflamasi Non Steroid (AINS). Obat AINS diketahui mempunyai efek samping tukak lambung, karena penghambatan prostaglandin yang berfungsi melapisi mukosa lambung akibat selektivitas yang rendah dalam menghambat enzim siklooksigenase. Penggunaan bahan alam yang berpotensi  sebagai  obat  antiinflamasi  adalah  kombinasi  rimpang  kunyit  ( Curcuma  domestica Val.) dan  kurma ( Phoenix  dactylifera L)  yang  secara  empiris  memiliki  efek  farmakologis  sebagai  analgetik,  antibakteri, menyembuhkan  luka  dan  antiinflamasi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  potensi  antiinflamasi  dari ekstrak  kombinasi  rimpang  kunyit  ( Curcuma  domestica Val.) dan  kurma  ( Phoenix  dactylifera L)  ditinjau  dari kemampuannya  menstabilkan  membran  sel  darah  merah.  Beberapa  penelitian  sebelumnya  mengatakan  bahwa metode tersebut digunakan karena membran eritrosit mirip dengan membran lisosom yang dapat mempengaruhi proses inflamasi. Dikatakan pula bahwa kestabilan membran eritrosit terhadap gangguan yang diinduksi larutan hipotonik, dapat juga digunakan sebagai ukuran untuk mengetahui stabilisasi membran lisosom. Penelitian dimulai dengan  pengambilan  darah  dan  dibuat  suspensi  sel  darah  merah.  Suspensi  sel  darah  merah  dibagi  menjadi  3 kelompok perlakuan yaitu kontrol negatif, kontrol positif (Natrium diklofenak), dan larutan uji dengan konsentrasi 50, 75, dan 100 ppm, kemudian didiamkan selama 30 menit dan disentrifuge. Supernatan diukur serapan dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  413  nm.  Hasil  penelitian  diperoleh  bahwa konsentrasi  100  ppm  memberikan  persen  inhibisi  paling  besar  yaitu  65.64%.  Dari  hasil  yang  diperoleh  dapat disimpulkan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak,  maka  daya  inflamasinya  semakin  baik. Saran  diberi kesempatan  untuk  melanjutkan  penelitian  ini  dalam  mengeksplorasi  kunyit  dan  kurma  sebagai  bahan  dasar pembuatan obat herbal.
Kata kunci : Antiinflamasi; eritrosit; kunyit; kurma; in vitro

## Article history :
Received 7 Juni 2022 Received in revised form 8 Juni 2022 Accepted 29 Agustus 2022 Available online 25 Oktober 2022
licensed by Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License .
PUBLISHED BY : Public Health Faculty Universitas Muslim Indonesia Address : Jl. Urip Sumoharjo Km. 5 (Kampus II UMI) Makassar, Sulawesi Selatan.
Email : jurnal.woh@gmail.com Phone :
+62 85397539583 Penerbit : Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Muslim Indonesia
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375

## ABSTRACT
The most widely used anti-inflammatory drugs are non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs). NSAIDs have a side effect of gastric ulcers, due to the inhibition of prostaglandins which are known to coat the gastric mucosal surface due to their low selectivity in activating the cyclooxygenase enzyme. Therefore, current research refers to the possible use of plants as herbal medicines by exploring and analyzing their chemical components. This study aims to determine the anti-inflammatory potential of the combined extract of Turmeric (Curcuma domestica Val.) and Dates (Phoenix dactylifera L) in terms of its ability to stabilize red blood cell membranes with the erythrocyte membrane stability method. The research was started by taking blood and making a suspension of red blood cells. The  red  blood  cell  suspension  was  divided  into  3  treatment  groups,  namely  negative  control,  positive  control (diclofenac sodium), and test solutions with concentrations of 50, 75, and 100 ppm, then let stand for 30 minutes and centrifuge. The absorption of the supernatant was measured using UV-Vis Spectrophotometer at a wavelength of 413 nm. The results showed that the concentration of 100 ppm gave the greatest percentage of inhibition, which is 65.64%. From the results obtained, it can be concluded that the higher the extract concentration, the better the inflammatory power. Suggestion Given the opportunity to continue this research in exploring turmeric and dates as basic ingredients for making herbal medicines.
Keywords: Anti-inflamation; erythrocyte; turmeric; dates; in vitro

## PENDAHULUAN
Inflamasi  adalah  respon  perlindungan  normal  terhadap  cedera  jaringan  yang  disebabkan  oleh trauma  fisik,  bahan  kimia  berbahaya,  atau  agen  mikrobiologi.  Inflamasi  adalah  usaha  tubuh  untuk menginaktifkan  atau  menghancurkan  organisme  penginvasi,  menghilangkan  iritan,  dan  persiapan tahapan untuk perbaikan jaringan. 1 Gejala-gejala klinis dari inflamasi adalah rubor (kemerahan), kalor (panas), tumor (pembengkakan), dolor (nyeri) dan functio laesa (kehilangan fungsi). Kemerahan dan rasa  panas  disebabkan  oleh  dilatasi  pembuluh  darah  arteriol  dengan  demikian  darah  lebih  banyak mengalir kedalam mikrosirkulasi lokal.
Mekanisme inflamasi adalah respon inflamasi dimulai segera setelah jaringan mengalami cedera. Arteriol di daerah tersebut berdilatasi, sehingga terjadi peningkatan aliran darah ke tempat cedera. Hal ini  menyebabkan  timbulnya  gejala rubor (kemerahan)  dan kalor (panas).  Vasodilatasi  ini  terutama akibat  pelepasan  bahan  kimia  dari  degranulasi  sel  mast  dan  pelepasan  mediator-mediator  kimia  lain selama inflamasi. Peningkatan aliran darah lokal tersebut menyebabkan lebih banyak leukosit fogositik dan  protein  plasma  yang  tiba  di  tempat  cedera.  Pada  waktu  yang  bersamaan,  histamin  dan  mediator kimia yang dibebaskan selama inflamasi menyebabkan membesarnya pori-pori kapiler (ruang antar sel endotel), sehingga permeabilitas kapiler meningkat. Protein plasma yang dalam keadaan normal tidak dapat keluar dari pembuluh darah dapat lolos ke ruang interstisium. Peningkatan tekanan osmitik koloid di ruang interstisium yang disebabkan oleh kebocoran protein plasma dan peningkatan tekanan darah kapiler akibat peningkatan aliran darah lokal dapat menimbulkan udem lokal yang disebut juga turgor (pembengkakan). 2
Pengujian aktivitas antiinflamasi secara in vitro . Terdapat berbagai metode yang dapat digunakan untuk  menguji  aktivitas  antiinflamasi  dari  suatu  obat,  kandungan  kimia,  dan  preparasi  herbal  untuk menunjukkan  adanya  aktivitas  atau  potensi  antiinflamasi.  Teknik-teknik  ini  termasuk uncoupling fosforilasi  oksidatif  (ATP  biogenesis  terkait  dengan  respirasi),  penghambatan  denaturasi  protein,
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375
stabilisasi  membran  eritrosit,  stabilisasi  membran  lisosom,  tes  fibrinolitik  dan  agregasi  platelet. 3 Denaturasi  protein  adalah  proses  dimana  protein  kehilangan  struktur  tersier  dan  struktur  sekunder dengan  penerapan  tekanan  ekternal  atau  senyawa,  seperti  asam  kuat  atau  lemah,  garam  anorganik terkonsentrasi, pelarut organik atau panas. Kebanyakan protein biologis kehilangan fungsi biologisnya ketika terjadi denaturasi. 1
Membran sel darah merah manusia atau eritrosit adalah analog dengan membran lisosomal dan stabilisasinya  menunjukkan  bahwa  ekstrak  dapat  juga  menstabilkan  membran  lisosomal.  Stabilisasi membran  lisosomal  penting  dalam  membatasi  respon  inflamasi  dengan  menghambat  pelepasan konstituen  lisosomal  dari  neutrofil  aktif  seperti  enzim  bakterisisda  dan  protease,  yang  menyebabkan peradangan dan kerusakan jaringan lebih lanjut atas extra cellular release .
Metode  stabilisasi  membran  sel  darah  merah  manusia  atau  eritrosit  adalah  analog  dengan membran lisosomal dan stabilisasinya menunjukkan bahwa ekstrak dapat juga menstabilkan membran lisosomal.  Stabilisasi  membran  lisosomal  penting  dalam  membatasi  respon  inflamasi  dengan menghambat  pelepasan  kandungan  lisosomal  dari  aktivasi  neutrofil  seperti  enzim  bakterisisda  dan protease  yang  menyebabkan  peradangan  dan  kerusakan  jaringan  dan  cairan  ekstraseluler.  Enzim lisosomal dilepaskan selama peradangan yang akan menghasilkan berbagai gangguan yang mengarah ke  cedera  jaringan  dengan  merusak  makromolekul  dan  peroksidasi  lipid  membran  yang  dianggap bertanggung  jawab  untuk  kondisi  patologis  tertentu.  Kegiatan  enzim  ekstra  selular  ini  dikatakan berhubungan dengan peradangan akut atau kronis.
Stabilisasi membran adalah proses mempertahankan integrasi membran biologis seperti membran eritrosit dan sosomom terhadap lisis yang diinduksi osmotik dan panas. Eritrosit menyerupai membran lisosom, karena itu telah digunakan sebagai sistem model oleh banyak peneliti dalam studi interaksi obat dengan  membran.  Efek  obat  pada  stabilisasi  eritrosit  dapat  diekstrapolasikan  menjadi  stabilisasi membran lisosom. Aktivitas menstabilkan membran sel darah merah yang dipamerkan oleh beberapa obat,  berfungsi  sebagai  metode in  vitro yang  berguna  untuk  menilai  aktivitas  antiinflamasi  berbagai senyawa. Sel darah merah atau eritrosit mempunyai membran sel yang bersifat semi permiabel terhadap lingkungan sekelilingnya yang berada di luar eritrosit, dan mempunyai batas-batas fisiologi terhadap tekanan  dari  luar  eritrosit.  Tekanan  membran  eritrosit  dikenal  dengan  tonisitas  yang  berhubungan dengan tekanan osmosis membran itu sendiri. Kekuatan maksimum membran eritrosit menahan tekanan dari luar sampai terjadinya hemolisis.
Kunyit adalah tanaman rimpang yang sudah banyak dikenal oleh dunia, baik dalam skala rumah tangga  maupun skala industri. Curcumin yang terkandung dalam rimpang  kunyit bermanfaat sebagai antitumor dan anti-inflamasi (antiradang). Saponin berkhasiat sebagai antineoplastik (antikanker). Beta karoten, polifenol, dan flavonoid berfungsi sebagai antioksidan. Kunyit memiliki senyawa antiinflamasi yang disebut curcuminoid dan dikaitkan dengan efek positif pada berbagai penyakit. Peradangan seperti yang  kita  tahu,  penyebab  beberapa  kondisi  kesehatan  jangka  panjang.  Kunyit  mempunyai  khasiat sebagai jamu dan obat tradisional untuk berbagai jenis penyakit, senyawa yang terkandung dalam kunyit
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375
(kurkumin  dan  minyak  atsiri)  mempunyai  peranan  sebagai  antioksidan,  antitumor  dan  antikanker, antipikun, menurunkan kadar lemak dan kolesterol dalam darah dan hati, antimikroba, antiseptic dan antiinflamasi. 4
Kurma ini biasa disebut dengan ratu kurma dimana komoditi besar dan tanaman yang penting di daerah  tandus  dan  panas  seperti  Saudi  Arabia  dan  Mesir.  Di  negara-negara  ini,  buah  kurma  biasa digunakan  sebagai  obat,  kosmetik,  konsumsi  bagi  manusia  maupun  hewan.  Sedangkan  pohon  dan bagian-bagiannya, seperti pelepah kurma, biasa digunakan untuk kayu bakar maupun atap rumah. Selain di  negara-negara  tersebut,  kurma  juga  terkenal  di  Indonesia  karena  citarasanya  yang  manis,  banyak manfaatnya, dan tidak perlu repot bila ingin mengonsumsinya.
Kurma  ( Phoenix  dactylifera L.)  memegang  peranan  penting  dalam  perannya  sebagai  obat  dan makanan. Buah kurma adalah bahan pangan yang kaya akan zat gula, vitamin, mineral, dan serat. Dalam beberapa  varietasnya,  kandungan  zat  gulanya  dapat  mencapai  88%  dan  12%  sisanya  terdiri  dari kandungan kimia lainnya seperti vitamin, mineral, serat dan lain-lain. Manfaat kurma yaitu memiliki banyak manfaat apabila dikonsumsi secara rutin, hal ini dikarenakan dalam buah kurma terdapat banyak mineral dan nutrusi lain yang dibutuhkan tubuh diantaranya adalah: a) mampu menetralisir racun, b) mematikan  sel-sel  kanker,  c)  menguatkan  saraf-saraf  pendengaran,  d)  menguatkan  saraf,  e) melembutkan saluran darah, f) menjaga usus dari iritasi dan gangguan lainnya, g) menguatkan gigi dan tulang, h) menjaga vitalitas, i) memudahkan proses kelahiran, j) mengatasi anemia, k) penghilang rasa sakit, l) menurunkan demam dan antiinflamasi.

## METODE
Penelitian ini telah dilakukan di Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia. Rancangan  penelitian  dilakukan  secara  eksperimental  laboratorium  dengan  menggunakan spektrofotometri  Uv-Vis  dengan  metode In  Vitro yaitu  stabilitas  membrane  eritrosit  metode  tersebut digunakan karena membran eritrosit mirip dengan membran lisosom yang dapat mempengaruhi proses inflamasi. Dikatakan pula bahwa kestabilan membran eritrosit terhadap gangguan yang diinduksi larutan hipotonik. Alat dan bahan yang digunakan: (1) Alat: blender, centrifuge, mikropipet (DragonLab), pH meter (Jenco), seperangkat alat maserasi, spektrofotometer UV-Vis ( Apel ® , PD 303 UV) , timbangan analitik (Kern), (2) Bahan: aquadest, darah, dinatrium hidrogen fosfat, natrium dihidrogen fosfat, ekstrak kombinasi  kunyit  ( Curcuma    Domestica  Vall ),  ratu  kurma,  NaCl,  dan  Natrium  Diklofenak.  Prosedur kerja:  (1)  Penyiapan  Simplisia:  Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  rimpang  kunyit ( Curcuma domestica Val . ), dan kurma sukkari yang biasa disebut dengan ratu kurma. Kunyit yang telah terkumpul kemudian dicuci dengan air mengalir. Lalu dibersihkan kemudian dirajang atau dipotong- potong  dan  diblender.  (2)  Pembuatan  Ekstrak:  Ekstrak  kunyit  dan  ratu  kurma  sebanyak  50  gram dimasukkan  ke  dalam  wadah  blender,  tambahkan  air  150  ml  hingga  simplisia  tersebut  terendam, kemudian diblender hingga halus dan menyatu kemudian disaring. Hasil filtratnya disebut ekstrak dan ampasnya disebut residu.
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375
Uji kualitatif fitokimia ekstrak kombinasi kunyit dan ratu kurma: (1) Flavonoid: Sebanyak 5 gram ekstrak  ditambahkan  dengan  10  mL  air  panas,  didihkan  selama  5  menit,  kemudian  disaring.  Filtrat sebanyak 2 mL ditambahkan 0.05 mg serbuk Mg dan 1 mL HCL pekat, kemudian dikocok. Uji positif ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna  merah,  kuning  atau  jingga.  (2)  Saponin:  Sebanyak  50  mg ekstrak ditambahkan dengan 3 mL aquadest sambil dikocok selama 1 menit, lalu ditambahkan 2 tetes HCl 1 N. Apabila busa terbentuk tetap stabil ± 7 menit, maka ekstrak positif mengandung saponin. (3) Tanin: Sebanyak 50 mg ekstrak ditambahkan dengan 3 mL air dan dipanaskan selama 10 menit, setelah itu didinginkan dan disaring sehingga diperoleh filtrat. Filtrat yang didapatkan kemudian ditambahkan dengan  larutan  besi  (III)  klorida  (FeCl 3 )  1%,  apabila  terbentuk  warna  hitam  kebiruan  maka  hasil  ini menyatakan  bahwa  positif  mengandung  tanin  terhidrolisis  dan  bila  terbentuk  warna  hitam  kehijauan maka hasil ini menyatakan bahwa positif mengandung tanin terkondensasi.
Uji in  vitro potensi  antiinflamasi:  pengujian  potensi  antiinflamasi  ekstrak  kombinasi  rimpang kunyit dan ratu kurma secara in vitro meliputi tahapan-tahapan sebagai berikut : (1) Pembuatan dapar Fosfat pH 7.4 (0.15 M), Sebanyak 2.671 gram dinatrium hidrogen fosfat (Na 2 HPO 4 . 2H 2 O) dilarutkan dalam  aquades  sampai  100  mL  (0.15  M).  2.070  gram  natrium  dihidrogen  fosfat  (NaH 2 PO 4 .  H 2 O) dilarutkan dalam aquades sampai 100 mL (0.15 M). Kemudian 81 mL larutan Na 2 HPO 4 . 2H 2 O (0.15 M) dicampurkan dengan 19 mL larutan NaH 2 PO 4 . H 2 O (0.15 M) pada suhu ruang. Cek pH dengan pH meter. (2) Pembuatan isosalin: sebanyak 0.85 gram NaCl dilarutkan dalam dapar fosfat pH 7.4 (0.15 M) sampai volume 100 mL pada suhu ruang. (3) Pembuatan hiposalin, sebanyak 0.25 gram NaCl dilarutkan dalam dapar fosfat pH 7.4 sampai volume 100 ml pada suhu ruang. (4) Penyiapan larutan ekstrak dan natrium diklofenak,  (a)  Larutan  natrium  diklofenak:  sebanyak  10  mg  Na  diklofenak  dilarutkan  dalam  10  mL isosalin (1000 ppm) sebagai larutan stok. Untuk membuat konsentrasi 100 ppm dari larutan stok dipipet 0.5 mL. Kemudian dicukupkan hingga 5 mL. (b) Larutan ekstrak: sebanyak 25 mg ekstrak dilarutkan dalam isosalin sampai 25 mL (1000 ppm) sebagai laruran stok. Untuk membuat konsentrasi 25, 50, 75, 100, dan 125 ppm dipipet secara berturut dari larutan stok 0.125 mL, 0.25 mL, 0.375 mL, 0.5 mL dan 0.625mL. Kemudian dicukupkan hingga 5 mL. (5) Pembuatan suspensi sel darah merah: darah sebanyak 10 mL disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit pada suhu 25 ⁰ C. Supernatan yang terbentuk dipisahkan. Endapan sel-sel darah yang tersisa kemudian dicuci dengan larutan isosalin dan disentrifugasi kembali. Proses tersebut diulang 3-4 kali sampai isosalin jernih. Setelah itu, diambil sel darah yang telah dicuci dan disuspensi dengan isosalin sehingga didapatkan suspensi sel darah merah dengan konsentrasi 10% v/v. Suspensi sel darah tersebut disimpan pada suhu 4 o C jika belum digunakan. (6) Pengujian aktivitas ekstrak terhadap stabilisasi membran eritrosit untuk menentukan aktivitas ekstrak terhadap stabilisasi membran eritrosit, larutan yang digunakan sebagai berikut: (a) Pembuatan larutan uji, larutan uji dibuat dengan menambahkan 1 mL dapar fosfat pH 7.4 (0.15 M) + 0.5 mL suspensi sel darah merah + 1 mL larutan sampel (25, 50, 75, 100, dan 125 ppm) + 2 mL hiposalin. (b) Pembuatan larutan  blanko  dengan  penambahan  dapar  fosfat  pH  7.4  (0.15  M)  +  0.5  mL  isosalin  +  1  mL  larutan ekstrak/larutan Natrium diklofenak sesuai konsentrasi masing-masing + 2 mL hiposalin. (a) Pembuatan
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375
larutan kontrol positif, larutan kontrol positif dibuat dengan menambahkan 1 mL dapar fosfat pH 7.4 (0.15  M)  +  0.5  mL  suspensi  sel  darah  merah  +  1  mL  larutan  Na  diklofenak  +  2  mL  hiposalin.  (b) Pembuatan  larutan  kontrol  negatif,  larutan  kontrol  negatif  dibuat  dengan  menambahkan  1  mL  dapar fosfat pH 7.4 (0.15 M) + 0.5 mL suspensi sel darah merah +1 mL larutan isosalin (sebagai pengganti larutan sampel) +2 mL hiposalin.
Setiap larutan di atas kemudian diinkubasi pada 37⁰C selama 30 menit suhu dan waktu yang digunakan merupakan kondisi yang paling stabil dengan terjadinya campuran lisis dalam keadaan yang baik selanjutnya disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 20 menit. Cairan supernatan yang didapat diambil dan kandungan hemoglobinnya diperhitungkan dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 400-800 nm.

## HASIL
Tabel 1. Hasil Ekstraksi dan Persen Rendamen Ekstrak Kombinasi Kunyit ( Curcuma domestica Val.) dan Kurma Sampel Berat sampel segar (g) Berat ekstrak etanol (g) Rendamen ekstrak etanol (%) kombinasi kunyit ( Curcuma domestica Val.) dan Kurma 500 8.32630 16.6526 Tabel 2. Hasil Uji Kualitatif Ekstrak Kombinasi Kunyit ( Curcuma domestica Val.) dan Kurma Sampel Pengujian Pereaksi Warna Hasil Bukti Ekstrak Kombinasi kunyit ( Curcuma Domestica Vall ) dan Kurma Flavanoid Serbuk Mg + HCl Pekat) Sesuai warna sampel (tidak berubah) + Saponin HCl 1 N Kehitaman dan ada buih + Tanin FeCl3 Kehitaman +
Tabel 3. Hasil Pengukuran Absorbansi dari Larutan Uji (Ekstrak Kombinasi Kunyit dan Kurma),
Kontrol Positif dan Kontrol Negatif Konsentrasi (ppm) Absorbansi 50 ppm 75 ppm 100 ppm natrium diklofenak 100 ppm Kontrol Negatif 0.0778 0.0453 0.0213 0.021 0.062
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375

## Gambar 1 : Histogram Stabilitas Membran Sel Darah Merah

## PEMBAHASAN
Pada penelitian ini, dilakukan pengujian potensi antiinflamasi terhadap ekstrak kombinasi kunyit ( Curcuma  domestica Val . )  dan  kurma  dengan  metode  stabilitas  membran  sel  darah  merah.  Tujuan penelitian ini untuk menentukan potensi antiinflamasi dari ekstrak kombinasi kunyit dan kurma ditinjau dari kemampuannya menstabilkan membran sel darah merah.
Stabilisasi membran eritrosit atau biasa disebut metode stabilisasi membran HRBC ( Human Red Blood Cell ) yang digunakan sebagai metode untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi suatu senyawa secara in  vitro ,  dikarenakan  membran  eritrosit  mirip  dengan  membran  lisosom  yang  dapat mempengaruhi proses inflamasi. Enzim yang ada dalam lisosom yang terlepas selama inflamasi (akibat teraktivasinya  neutrofil)  akan  menghasilkan  berbagai  gangguan  yang  dapat  dihubungkan  dengan kejadian inflamasi akut ataupun kronis. Oleh karena itu, kestabilan membran eritrosit terhadap gangguan yang  diinduksi  larutan  hipotonik,  dapat  juga  digunakan  sebagai  ukuran  untuk  mengetahui  stabilisasi membran lisosom.
Aktivitas antiinflamasi dari ekstrak etanol kunyit dan kurma dapat dilihat dari adanya penurunan terhadap absorbansi pada campuran larutan uji. Semakin kecil nilai absorbansi yang dihasilkan maka semakin kecil pula hemolisis yang terjadi, oleh karenanya semakin besar aktivitas antiinflamasi yang dimiliki  oleh  sampel.  Pengukuran  absorbansi  dilakukan  pada  panjang  gelombang  560  nm.  Kontrol positif  yang  digunakan  adalah  Natrium  diklofenak  karena  merupakan  obat  antiinflamasi  non  steroid yang  bekerja  dengan  cara  mencegah  pelepasan  mediator  antiinflamasi  sehingga  dapat  menghambat sintesis prostaglandin atau siklooksigenase.
Hasil rendemen diperlukan untuk mengetahui banyaknya ekstrak yang diperoleh selama ekstraksi dari  suatu  sampel.  Selain  itu  data  hasil  rendemen  ada  hubungannya  dengan  banyaknya  kandungan
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 50 ppm 75 ppm
100 ppm Na.Dic 100 ppm 1 2 3 4 % Inhibisi
Absorbansi
8,064% 26,435%
65,64 % 66,12%
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375
senyawa aktif dari suatu sampel sehingga apabila rendemen semakin banyak maka dapat disimpulkan juga kandungan senyawa aktifnya juga semakin banyak. 5
Selanjutnya dilakukan uji kualitatif dari ekstrak ekstrak kombinasi kunyit ( Curcuma domestica Val.)  dan  kurma.  Adapun  hasil  yang  diperoleh  dapat  dilihat  pada  tabel  2.  Dari  uji  kualitatif  yang dilakukan diketahui bahwa ekstrak kombinasi kunyit dan kurma positif mengandung flavonoid, saponin, dan tanin.
Penelitian  dimulai  dengan  pengurusan  kode  etik  kemudian  dilanjutkan  dengan  pengambilan darah. Sel darah merah yang digunakan pada penelitian ini adalah sel darah merah yang diperoleh dari sukarelawan sehat yang diambil secara langsung dengan bantuan tenaga medis. Kemudiam sel darah merah  disentrifuge  dengan  kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit  lalu  didapatkan  supernatan  dan endapan. Endapan yang akan digunakan dicuci dengan larutan isosalin dan dibuat suspensi sel darah merah 10%. Sel darah merah yang digunakan adalah sel darah merah baru karena jika suspensi sel darah merah disimpan maka isosalin akan memicu terjadinya lisis yang akan mempengaruhi data atau hasil penelitian.
Suspensi  sel  darah  merah  dibagi  menjadi  3  kelompok  perlakuan  yaitu  kontrol  negatif,  kontrol positif,  dan  larutan  uji  dengan  konsentrasi  50,  75,  dan  100  ppm.  Setelah  diberi  perlakuan  kemudian diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37⁰C dan disentrifuge dengan kecepatan 3000  rpm selama 20 menit. Selanjutnya dilakukan pengukuran absorban dengan spektrofotometri UV-Visible pada panjang gelombang 413nm. Hasil pengujian absorban dapat dilihat pada tabel berikut: Berdasarkan tabel 3, dapat dilihat  bahwa  ekstrak  dengan  konsentrasi  100  ppm  memberikan  nilai  absorban  yang  paling  kecil. Semakin kecil nilai absorban maka pencegahan lisis sel darah merah semakin besar. Selanjutnya dari data  absorban  dihitung  persen  inhibisi,  hasil  perhitungan  disajikan  dalam  histogram  pada  gambar  1. Berdasarkan gambar 1, terlihat bahwa konsentrasi 100 ppm menunjukkan % inhibisi paling besar. Dari data  tersebut  menunjukkan  bahwa  peningkatan  stabilitas  membran  sel  darah  merah  seiring  dengan peningkatan konsentrasi ekstrak.
Kemampuan  inhibisi  ekstrak  kombinasi  kunyit  ( Curcuma  domestica Val.)  dan  kurma  diduga karena adanya kandungan kimia yang memiliki kemampuan menstabilkan membran sel darah merah. Telah  dilaporkan  bahwa  saponin  dan  flavonoid  tertentu  memberikan  efek  menstabilkan  membran lisosom  baik in  vivo maupun in  vitro ,  sedangkan  tanin  dan  saponin  memiliki  kemampuan  untuk mengikat kation, sehingga dapat menstabilkan membran eritrosit dan makromolekul biologis lainnya. 6 Kurma  ( Phoenix  dactylifera L.)  memegang  peranan  penting  dalam  perannya  sebagai  obat  dan makanan. Buah kurma adalah bahan pangan yang kaya akan zat gula, vitamin, mineral, dan serat. Dalam beberapa  varietasnya,  kandungan  zat  gulanya  dapat  mencapai  88%  dan  12%  sisanya  terdiri  dari kandungan kimia lainnya seperti vitamin, mineral, serat dan lain-lain. Melakukan studi pada dua belas varietas buah kurma guna mengetahui kandungan kimia apa saja yang terdapat di dalamnya, dan berikut ini merupakan jabaran hasil studinya .
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375
Stabilisasi membran sel darah merah telah digunakan sebagai metode untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi secara in vitro . Hal ini dikarenakan komponen sel darah merah mirip dengan membran lisosom.  Membran  lisosom  mengandung  sekitar  50  enzim  pendegradasi  yang  terdiri  dari  protease, lipase,  glikosidase,  nuklease,  sulfatase,  dan  fosfatase,  jika  enzim  keluar  dari  membran  akan  memicu terjadinya inflamasi. Karena membran lisosom sama dengan membran sel darah merah sehingga ekstrak yang  memiliki  kemampuan  menstabilkan  sel  darah  merah  juga  memiliki  kemampuan  menstabilkan lisosom. 7

## KESIMPULAN DAN SARAN
Ekstrak kombinasi kunyit ( Curcuma domestica Val.) dan kurma berpotensi sebagai antiinflamasi dilihat  dari  kemampuannya  menstabilkan  membran  sel  darah  merah  dengan  konsentrasi  100  ppm memberikan persen inhibisi paling besar yaitu 65.64 %. Dari hasil yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak,  maka  daya  inflamasinya  semakin  baik.  Saran  diberi kesempatan untuk melanjutkan penelitian ini dalam mengeksplorasi kunyit dan kurma sebagai bahan dasar pembuatan obat herbal.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Pada  kesempatan  ini  tim  peneliti  mengucapkan  terimakasih  kepada  LP2S-UMI,  Laboratorium Fakultas  Farmasi  Universitas  Muslim  Indonesia  atas  kesempatan,  dana  dan  bimbingannya  dalam pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Wenny Siswanty P, Agus Wibowo M, Hadari Nawawi JH. Aktivitas Toksisitas Antioksidan dan Antiinflamasi Secara In Vitro Dari Ekstrak Metanol Daun Mangga Bacang ( Mangifera foetida L). J Kim dan Khatulistiwa 2017; 6: 44.
2. Najoan JJ, Runtuwene MJR, Wewengkang DS. Uji Fitokimia dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Tiga ( Allophylus cobbe L.). J Ilm Farm 2016; 5: 2302–2493.
3. Mukhiriani,  Nonci  FY,  Mumang.  Penetapan  Kadar  Tanin  Total  Ekstrak  Biji  Jintan  Hitam ( Nigella  sativa )  Secarqa  Spektrofotometri  UV-Vis. J  Farm  UIN  Alauddin  Makassar 2014; 2: 155–157.
4. Shenoy  S,  Shwetha  K,  Prabhu  K,  et  al.  Evaluation  of  antiinflammatory  activity  of  Tephrosia purpurea in rats. Asian Pac J Trop Med 2010; 3: 193–195.
5. Puspitasari AD, Proyogo LS. Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi dan Sokletasi Terhadap Kadar Fenolik Total Ekstrak Etanol Daun Kersen ( Muntingia calabura ). J Ilm Cendekia Eksakta 2018; 1: 1–8.
6. Oyedapo O. Red Blood Cell Membrane Stabilizing Potentials of Extracts of Lantana Camara and Its Fractions. Int J Plant Physiol Biochem 2010; 2: 46–51.
7. Tarman  K,  Prestisia  HN,  Setyaningsih  I.  Kandungan  Komponen  Bioaktif  dan  Aktivitas Antimikrob Ekstrak Bintang Laut ( Culcita schmideliana ). J Penelit Indones ; 15.
8. Harvey AR, Champe P. Farmakologi Ulasan Bergambar . 4th ed. Jakarta: EGC, 2013.
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 5 No. 4 (Oktober, 2022) : 735-744                 E-ISSN 2614-5375
9. Ilakkiya R, Neelvizhi K, Tamil S, et al. A Comparative Study of Anti-Inflammatory Activities of Certain Herbal Leaf Extracts. Int J Pharm Integr Life Sci 2013; 1: 67–77.
10. Khotimah S, N AM. Riview Artikel: Beberapa Tumbuhan Yang Mengandung Senyawa Aktif Antiinflamasi. Farmaka,Fakultas Farm Univ Padjadjaran, 2017; 14: 28–40.
11. Siburian N. Isolasi Senyawa Flavonoida Dari Daun Tumbuhan Kedondong Laut (Nothopanax fruticosum (L.) Miq) . Universitas Sumatera Utara, 2011.
12. Kumar  N.  Evaluation  Of  RBC  Membrane  Stabilization  and  Antioxidant  Activity  of  Bombax Ceiba In An In Vitro Method. Int J Pharma Bio Sci 2011; 2: 220–226.
13. Sukmawati, Fawwaz M, Pratama M, et al. Potential of Astaxanthin from Asian Tiger Shrimp ( Penaeus Monodon ) Shell Extract as an Antibacterial and Anti-inflammatory. J Glob Pharma Technol ; 11.
14. Astuti  SM.  Skrining  Fitokimia  Dan  Uji  Aktifitas  Antibiotika  Ekstrak  Etanol  Daun,  Batang, Bunga Dan Umbi Tanaman Binahong ( Anredera cordifolia (Ten) Steenis). J Balai Besar Penguji Mutu dan Sertifikasi Obat Hewan 2012; 53: 1–13.
15. Amirah  S,  Sardini  J,  Idrus  HH.  Anti-Inflammatory  Potential  Of  Extract  Of Nothopanax fruticosum ( L .) Miq By Method Of Erythrocyte Membrane Stability. Int J Med Sci Dent Res 2020; 03: 32–37.