Deteksi Squash mosaic virus pada Lima Varietas Mentimun ( Cucumis sativus L.)
Squash mosaic virus Detection on Five Cucumber (Cucumis sativus L.) Varieties
Erika Rosminim Purba 1 , Susanti Mugi Lestari 1 , Yudia Nurhaelena 1 , dan Sri Hendrastuti Hidayat 1 *
Diterima 23 Mei 2017/Disetujui 24 Juli 2017

## ABSTRACT
Squash  mosaic  virus  (SqMV)  is  a  seed-borne  pathogen  which  infect  many  Cucurbitaceae crops.  Infection of SqMV has been reported from several vegetable growing areas in Indonesia. The objective  of  this  research  was  to  determine  the  percentage  of  seed-borne  SqMV  on  five  cucumber varieties i.e. ‘Jupiter’, ‘Venus’, ‘Japan File’, ‘Vario’, and ‘Calista’ and the effect of SqMV infection on mosaic disease development. Five cucumber varieties were mechanically inoculated with SqMV, followed by observation on symptom development, incubation period, and disease incidence. Seed- borne  virus  was  detected  by  Dot  Immunobinding  Assay  (DIBA)  and  indirect  Enzyme-linked immunosorbent  assay  (ELISA)  methods  following  growing-on  test.  The  plants  showed  varied symptoms  including  green  mosaic,  green-yellow  mosaic,  vein  clearing,  and  fruit  malformation. Disease  severity  and  virus  titer  showed  general  trend,  i.e.  low  during  inflorescence  period  and increasing  on  fruiting  period;  with  the  exception  on  ‘Japan  File’  which  showed  decreasing  of disease severity since generative phase. All commercial seeds (F1) tested evidently infected by SqMV with high incidence (100%), whereas infection of SqMV on F2 seeds of ‘Venus’ reached 60.87%.
Keywords: DIBA, disease incidence, ELISA, seed transmission, virus titer

## ABSTRAK
Squash  mosaic  virus (SqMV)  adalah  patogen  terbawa  benih  yang  banyak  menginfeksi tanaman Cucurbitaceae ,  dan  keberadaannya  di  Indonesia  sudah  meluas.  Tujuan  penelitian  ialah mengetahui persentase SqMV terbawa benih pada lima varietas mentimun yaitu ‘Yupiter’, ‘Venus’, ‘Japan File’, ‘Vario’, dan ‘Calista’ dan mengetahui pengaruh infeksi SqMV terhadap perkembangan penyakit  mosaik.  Lima  varietas  mentimun  diinokulasi  dengan  SqMV  secara  mekanis  kemudian diamati gejala yang muncul, periode inkubasi, dan insidensi penyakit. Pengujian virus terbawa benih dilakukan  dengan  menumbuhkan  benih,  selanjutnya  deteksi  virus  dilakukan  menggunakan  metode Dot  Immunobinding  Assay (DIBA) dan indirect  Enzyme-linked  immunosorbent  assay ( ELISA ). Tanaman mentimun menunjukkan gejala infeksi SqMV yang bervariasi yaitu mosaik hijau, mosaik kuning  hijau,  pemucatan  tulang  daun,  dan  malformasi  pada  buah. Pengamatan  keparahan  penyakit dan titer virus menunjukkan pola perkembangan penyakit mosaik yaitu menurun pada fase berbunga dan meningkat lagi pada fase berbuah, kecuali varietas Japan File memberikan respons yang berbeda karena  penurunan  keparahan  penyakit  berlanjut  sejak  fase  generatif.  Benih  komersial  (F1)  yang banyak  digunakan  petani  terbukti  membawa  SqMV  dengan  infeksi  mencapai  100%  dan  tanaman varietas ‘Venus’ yang terinfeksi SqMV menghasilkan benih keturunan (F2) yang membawa SqMV dengan efisiensi mencapai 60.87%.
Kata kunci: DIBA, ELISA, insidensi penyakit, titer virus, tular benih
1 Departemen Proteksi Tanaman, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor Jl. Kamper, Kampus IPB Darmaga, Bogor, 16680, Indonesia *email: srihendrastutihidayat@gmail.com (penulis korespondensi)

## PENDAHULUAN
Mentimun ( Cucumis sativus L.)
merupakan  salah  satu  tanaman  dari  famili labu-labuan atau
Cucurbitaceae dan merupakan  salah  satu  jenis  sayur  yang  cukup populer  di  hampir  semua  negara.  Meskipun bukan  tanaman  asli  Indonesia,  mentimun banyak  dibudidayakan  di  Indonesia  dengan tingkat  konsumsi  yang  cukup  tinggi.  Daerah Bogor  memiliki  kondisi  alam  yang  sesuai untuk  budidaya  mentimun  yaitu  dengan ketinggian 190 - 330 meter di atas permukaan laut  (m  dpl),  suhu  rata-rata  tiap  bulan  26 0 C, dan  kelembaban  udara  80%  (BMKG,  2017) sehingga  tidak  sedikit  petani  Bogor  yang membudidayakan tanaman mentimun. Budidaya  tanaman  mentimun  kini  mengalami kendala  yaitu  iklim  dan  cuaca  yang  tidak menentu  dan  gangguan  hama  serta  penyakit, diantaranya Begomovirus (Haerunisa,  2016) dan Squash  mosaic  virus (SqMV).    Menurut Campbell (1985), tanaman C. melo , C. sativus , Cucurbita pepo , C. moschtata , dan C. maxima yang  terinfeksi  SqMV  menunjukkan  gejala berupa  mosaik  sistemik.  Pada  gejala  lanjut, SqMV  menyebabkan  penurunan  produksi  dan malformasi  buah.  Infeksi  SqMV  di  lapangan terjadi  dengan  bantuan  serangga  vektor  yaitu kumbang  dari  famili  Chrysomelidae  ( Acalyma thiemei thiemei, Diabrotica sp. dan Aulacophora similis ) dan Coccinelidae ( Epilechna chryssomelina ).
Peraturan  Menteri  Pertanian  Nomor 51/Permentan/KR.010/9/2015  tentang  Jenis Organisme  Pengganggu  Tumbuhan  Karantina (OPTK)  menetapkan  status  SqMV  sebagai OPTK  golongan  A2  yang  masih  terbatas  di wilayah  Jawa  Barat  (Kementan,  2015). Rezania  (2005)  melakukan  penelitian  dan melaporkan  bahwa  SqMV  ditemukan  pada pertanaman melon di Tajur, Bogor. Selanjutnya,  Lestari  dan  Nurhayati  (2014) melaporkan  bahwa  SqMV  telah  menginfeksi benih  mentimun  sebanyak  100%.  Beberapa faktor  yang  dapat  memicu  kemunculan penyakit  baru  pada  suatu  wilayah  adalah perubahan  kondisi  iklim  (Ahanger et  al. , 2013),  teknik  budidaya  tanaman,  dan  lalu lintas  bahan  tanaman  antar  wilayah  (Hanssen et  al. ,  2010).  Mengingat  sifat  SqMV  yang terbawa  benih,  tidak  menutup  kemungkinan bila sumber infeksi SqMV di Indonesia berasal dari  benih  sayuran  impor.  Oleh  karena  itu
penelitian dilakukan untuk mengetahui efisiensi  SqMV  terbawa  benih  pada  beberapa varietas mentimun yang umum ditanam petani dan  pengaruh  infeksi  SqMV  pada  mentimun terhadap  perkembangan  penyakit  mosaik  di rumah kaca.

## BAHAN DAN METODE

## Penanaman  dan  Pemeliharaan  Tanaman Mentimun Uji
Benih mentimun  yang digunakan terdiri atas  lima  varietas  yaitu  ‘Vario’  F1,  ‘Calista’ F1,  ‘Venus’,  ‘Yupiter’,  dan  ‘Japan  File’. Media  tanam  yang  digunakan  yaitu  campuran tanah  dan  pupuk  kandang  (1:1)  yang  telah disterilkan.    Media  tanam  diisikan  ke  dalam polibag berukuran 35 cm x 35 cm, selanjutnya benih  mentimun  ditanam  pada  kedalaman  3 cm.    Sebelum  ditanam,  benih  terlebih  dahulu direndam  dalam  fungisida  berbahan  aktif benomil  selama  1  jam  lalu  ditiriskan.  Pupuk NPK  (15:15:15)  diberikan  dua  tahap,  yaitu tahap  pertama  diberikan  1  minggu  setelah inokulasi (2 MST sebanyak 7 g setiap polibag) dan  tahap  kedua  diberikan  setelah  bunga anthesis  (15  g  setiap  polibag).    Penyiraman dilakukan setiap pagi hari.
Pemasangan  ajir  bambu  dilakukan  pada umur  2  MST.  Batang  mentimun  diikat  pada tali  sehingga  tanaman  dapat  merambat.  Buah yang  dipanen  untuk  kepentingan  konsumsi adalah buah yang telah matang penuh ditandai dengan warna hijau yang seragam. Buah yang dipanen  dengan  kepentingan  sebagai  benih adalah  buah  mentimun  yang  tua,  ditandai dengan  warna  kulit  buah  sudah  putih  atau kuning tergantung varietas.

## Inokulasi  SqMV  pada  Lima  Varietas Mentimun
Inokulasi  dilakukan  pada  tanaman berusia 7 hari setelah tanam. Sumber inokulum adalah  isolat  SqMV  berasal  dari  tanaman mentimun  di  Situ  Gede,  Bogor,  Jawa  Barat dan  telah  dimurnikan  di Laboratorium Virologi  Tumbuhan,  Departemen  Proteksi Tanaman,  IPB.  Tahapan  inokulasi  diawali dengan persiapan cairan perasan (sap) tanaman sakit.  Sebanyak  0.2  g  daun  tanaman  sakit digerus  dalam  larutan  penyangga  fosfat dengan  perbandingan  1:10  (b  v -1 ).    Inokulasi
dilakukan  pada  kotiledon  tanaman  yang  telah ditaburi  dengan  karborundum  (600  mesh) dengan  cara  mengoleskan  sap  tanaman  sakit pada  permukaan  kotiledon  menggunakan  jari. Setelah  pengolesan,  kotiledon  tersebut  dibilas dengan  aquades  mengalir.    Tahapan  inokulasi dilakukan  terhadap  10  tanaman  untuk  setiap varietas.
Pengamatan  dilakukan  terhadap  periode inkubasi  dan  insidensi  penyakit.    Periode inkubasi  adalah  waktu  gejala  pertama  kali muncul  setelah  tanaman  diinokulasi.  Insidensi penyakit  untuk  setiap  varietas  dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:
% insidensi penyakit =
Jumlah tanaman terserang
x 100%
Jumlah tanaman yang diamati
Pengamatan  terhadap  perkembangan penyakit mosaik dilakukan dengan mengamati perkembangan  gejala  yang  muncul  dan pengukuran  titer  virus  pada  masa  vegetatif  (2 MST),  masa  berbunga  (4  MST),  dan  masa berbuah  (8  MST).  Pengukuran  titer  virus dilakukan  dengan  metode indirect-ELISA (Dijkstra dan de Jager, 1998).

## Deteksi SqMV Terbawa Benih
Pada  penelitian  ini  dilakukan  pengujian untuk mengetahui jumlah benih yang membawa  SqMV.    Pengujian  terhadap  benih dibedakan menjadi dua bagian yaitu pengujian terhadap  benih  komersial  (F1)  dan  pengujian terhadap benih dari tanaman F1 di rumah kaca. Benih  yang  diuji  ditumbuhkan  pada  media tanam  di  tempat  pembibitan  hingga  berusia  7 hari  setelah  tanam.    Bagian  tanaman  yang digunakan  untuk  pengujian  adalah  daun pertama  yang  muncul.  Total  benih  yang  diuji untuk  setiap  varietas  mentimun  berjumlah  30 benih.    Deteksi  SqMV  dilakukan  dengan metode  DIBA  ( Dot  Immunobinding  Assay ) dan  ELISA  ( Enzyme-linked  immunosorbent assay )  (Albrechtsen,  2006;  Dijkstra  dan  de Jager,  1998) . Persentase  virus  terbawa  benih dihitung dengan rumus sebagai berikut:
% virus terbawa benih =
Jumlah benih terinfeksi x 100% Jumlah benih yang ditanam
Metode indirect-ELISA
Metode indirect-ELISA
dilakukan berdasarkan  Dijkstra  dan  de  Jager  (1998). Teknik  deteksi  diawali  dengan  tahapan persiapan  antigen.  Antigen  disiapkan  dengan menggerus 0.2 g daun mentimun dalam plastik tebal  dan  ditambah  GEB  ( general  extract buffer )  pH  7.4.  Perbandingan  daun  dengan GEB  adalah  1:10  (b  v -1 ).  Sebanyak  100  µL antigen diisikan pada sumuran plat  mikrotiter, kemudian  diinkubasi  semalaman  pada  suhu  4 0 C.    Setelah  inkubasi,  cairan  dalam  plat mikrotiter  dibuang  dan  diisi  dengan  100  µL skim  milk 2%.  Plat mikrotiter lalu diinkubasi selama  30  menit  pada  suhu  37 0 C  kemudian dicuci menggunakan 200 µL PBST ( phosphate buffer saline Tween -20) sebanyak lima kali. Tahap deteksi selanjutnya adalah menyiapkan  antiserum  SqMV  yaitu  dengan mengencerkan antiserum SqMV dalam conjugate  buffer dengan  perbandingan  1:200.
Sebanyak 100 µL antiserum diisikan ke dalam setiap  sumuran  plat  mikrotiter lalu  diinkubasi selama 2 jam pada suhu 37 0 C.  Plat mikrotiter dicuci  kembali  dengan  PBST  sebanyak  lima kali. Masing-masing sumuran lalu diisi dengan 100  µL  campuran  antibodi  kedua  ( goat  anti rabbit-IgG, Agdia).  Antibodi  ini  telah  dilabel dengan phosphatase dan  diencerkan  dalam conjugate buffer dengan perbandingan 1:5000. Plat  mikrotiter diinkubasi  kembali  selama  2 jam pada suhu 37 0 C lalu dicuci dengan PBST. Tahap deteksi selanjutnya adalah mengisi plat mikrotiter dengan 100 µL substrat PNP ( para-nitrophenyl phosphate ) dan diinkubasi  selama  30  sampai  60  menit  pada suhu  ruang.    Apabila  warna  berubah  kuning, maka  reaksi  segera  dihentikan  dengan  50  µL NaOH  3  M.    Hasil  ELISA  diukur  dengan menggunakan ELISA  reader ( Bio-rad  model 550 microplate reader ) pada panjang gelombang  405  nm.  Hasil  ELISA  dinyatakan positif  jika  nilai  absorbansi  sampel  yang  diuji 2  kali  lebih  besar  dari  nilai  kontrol  negatif tanaman sehat.
Metode DIBA ( Dot Immunobinding Assay)
Metode  DIBA  dilakukan  berdasarkan Albrechtsen  (2006).    Membran  nitroselulosa ( Hybond TM –P ,  Amersham  Bioscience  UK) sebelum  digunakan  direndam  dalam  metanol 100%  selama  10  detik  dan dikering  anginkan. Jaringan  daun  tanaman  yang  diduga  terinfeksi
SqMV  digerus  dalam tris  buffer  saline (TBS) dengan  perbandingan  1:10  (b  v -1 )  (TBS:  Tris- HCl 0.02 M dan NaCl 0.15 M, pH 7.5). Cairan perasan tanaman tersebut selanjutnya diteteskan  ke  atas  membran  nitroselulosa sebanyak  10  µL.    Setelah  tetesan  sampel kering,  membran  direndam  di  dalam  10  mL larutan blocking  non  fat  milk 2%  dalam  TBS yang  mengandung Triton X-100  dengan konsentrasi  akhir  2%.    Membran  kemudian diinkubasi  pada  suhu  ruang  sambil  digoyang dengan  kecepatan  50  rpm  selama  2  jam menggunakan shaker (EYELA multi  shaker MMS).    Membran  kemudian  dicuci  5  kali dengan  dH 2 O,  tiap  pencucian  berlangsung  5 menit  sambil  digoyang  dengan  kecepatan  100 rpm.  Membran selanjutnya direndam dalam 5 mL  TBS  yang  mengandung  5  µL  antiserum SqMV  ditambah non  fat  milk dengan konsentrasi  akhir  2%  dan  kemudian  membran diinkubasi  semalam  pada  suhu  kamar  sambil digoyang dengan kecepatan 50 rpm.  Membran kemudian  dicuci  sebanyak  5  kali  dengan Tween 0.05%  dalam  TBS  (TBST).  Membran selanjutnya  direndam  dalam  5  mL  TBS  yang mengandung  konjugat  5  µL  ( goat  antirabbit- IgG ,  Agdia)  ditambah non  fat  milk dengan konsentrasi  akhir  2%  dan  kemudian  membran diinkubasi  selama  60  menit  sambil  digoyang dengan kecepatan 50 rpm. Membran selanjutnya  dicuci  kembali  dengan  TBST, kemudian  membran  direndam  selama  5  menit dalam substrate buffer (Tris-HCl 0.1 M, NaCl 0.1  M  dan  MgCl  5  mM)  yang  mengandung nitro blue tetrazolium (NBT) 66 µL dan bromo chloro  indolit  phosphate (BCIP)  30  µL.    Bila reaksi  positif  akan  terjadi  perubahan  warna putih menjadi ungu pada membran nitroselulosa yang telah ditetesi cairan perasan tanaman  dan  reaksi  dapat  dihentikan  dengan merendam membran dengan dH 2 O.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Infeksi SqMV pada Lima Varietas Mentimun
Gejala infeksi SqMV umumnya muncul tujuh  hari  setelah  inokulasi,  yaitu  berupa mosaik  hijau  ringan.  Perkembangan  gejala SqMV  pada  masa  pertumbuhan  vegetatif, masa  berbunga,  dan  berbuah  bervariasi  antar varietas  (Tabel  1).  Perbedaan  gejala  infeksi SqMV pada lima varietas mentimun disebabkan oleh beberapa faktor, yaitu kondisi fisiologi tanaman, varietas, dan umur tanaman. Respons tanaman terhadap infeksi virus dapat  dilihat  dari  gejala  yang  muncul. Respons  yang  relatif  sama  ditunjukkan  oleh mentimun varietas ‘Venus’, ‘Yupiter’, ‘Calista’,  dan  ‘Vario’.  Gejala  infeksi  SqMV pada tanaman fase vegetatif tidak berbeda jauh dengan  gejala  pada  fase  berbunga.  Ada kecenderungan  terjadi  fenomena recovery karena gejala infeksi pada fase berbunga lebih ringan dibandingkan pada fase vegetatif.  Pada fase  berbuah,  gejala  yang  muncul  menjadi semakin parah. Recovery merupakan peristiwa pemulihan  pada  tanaman  terinfeksi  virus. Fenomena recovery dicirikan  oleh  adanya gejala  infeksi  awal  yang  parah,  kemudian semakin  menurun  hingga  hilang  atau  tidak bergejala  pada  daun  yang  baru  berkembang (Bengyella et  al .,  2015).  Lebih  lanjut,  Hagen et  al. (2008)  menyebutkan  bahwa  pada peristiwa recovery ,  titer  virus  biasanya mengalami  penurunan  yang dipengaruhi  oleh faktor  tanaman  inang  dan  strain  virus.  Pada penelitian  ini,  fenomena recovery yang  paling jelas  ditunjukkan  oleh  tanaman  mentimun varietas  ‘Japan  File’.  Gejala  yang  muncul semakin menurun setelah masa berbunga.
Tabel 1. Perkembangan gejala infeksi SqMV pada lima varietas mentimun sejak masa pertumbuhan vegetatif sampai generatif
Varietas Masa Pertumbuhan Vegetatif Berbunga Berbuah ‘Venus’ Mosaik hijau Mosaik hijau kuning Pemucatan tulang daun dan buah normal ‘Yupiter’ Mosaik hijau Mosaik kuning Mosaik hijau kuning dan buah normal ‘Vario’ Mosaik hijau Mosaik hijau kuning Mosaik hijau kuning yang jelas dan terdapat benjolan pada buah ‘Calista’ Warna daun pucat Mosaik hijau kuning Mosaik hijau kuning yang jelas pada daun dan buah
‘Japan File’  Mosaik ringan  Pemucatan tulang daun  Mosaik hijau pada daun dan warna buah pucat
Tabel 2. Rata-rata nilai absorbansi ELISA Squash mosaic virus pada tiga fase pertumbuhan tanaman mentimun
Fase Pertumbuhan Varietas ‘Venus’ ‘Yupiter’ ‘Japan File’ ‘Vario’ ‘Calista’ Vegetatif (2 MST) Berbunga (4 MST) Berbuah (8 MST) 1.56 a 0.89 a 1.44 a 1.49 a 1.15 a 1.30 a 1.52 a 1.28 a 0.88 a 1.38 a 0.91 a 1.43 a 1.47 a 0.89 a 1.37 a
Keterangan:  nilai  yang  diikuti  huruf  sama  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada  α (taraf nyata) 5%.
Titer  virus  pada  tiap  varietas  mentimun yang  diuji  diestimasi  berdasarkan  pengukuran nilai  absorbansi  ELISA  (Tabel  2).  Nilai  titer virus berubah selama perkembangan tanaman, tetapi  tidak  berbeda  nyata  secara  analisis statistika.  Dilaporkan  oleh  Cafrune et  al. (2006)  bahwa  perubahan  titer  virus  terjadi pada Garlic  virus  A (GarV-A)  pada  tanaman bawang  putih  seiring  pertumbuhan  tanaman. Titer  virus  tertinggi  terjadi  pada  masa  awal dan akhir pertumbuhan tanaman bawang putih, sementara  pada  fase  pertengahan  titer  virus cenderung turun. Menurunnya titer virus dapat dikaitkan dengan kemampuan virus melakukan replikasi di dalam jaringan tanaman. Kitayama et  al .  (2015)  membuktikan  bahwa  penurunan jumlah  virion Brome  mosaic  virus (BMV)  pada padi berkaitan dengan penundaan gejala infeksi.
Berdasarkan pengukuran nilai absorbansi hasil  ELISA  dapat  pula  ditentukan  persentase insidensi  penyakit  untuk  tiap  varietas  (Tabel 3).  Secara  umum  perkembangan  penyakit akibat  SqMV  pada  lima  varietas  sama  seperti perkembangan titer virus (Tabel 2). Penurunan terjadi  ketika  tanaman  mengalami  fase berbunga  kemudian  naik  ketika  fase  berbuah, yaitu  pada  varietas  ‘Venus’  dan  ‘Calista’.  Hal tersebut  dapat  dihubungkan  dengan  proses fisiologis tanaman.  Pada fase berbunga menuju berbuah,  metabolisme  tanaman  meningkat untuk  proses  reproduksi  dan  pengisian  buah sehingga  sistem  ketahanan  tanaman  menurun
(Alazem dan Lin, 2015). Hormon yang berperan dalam  perkembangan  dan  pematangan  buah yaitu  auksin,  giberelin,  dan  sitokinin.  Jumlah hormon  auksin  dan  sitokinin  meningkat  pada biji  seiring  perkembangan  buah  dimana pembelahan  sel  terjadi  (Kumar et  al., 2014). Namun,  hormon  auksin  bersifat  negatif terhadap  sistem  pertahanan  tanaman  karena memiliki  efek  antagonis  terhadap  asam salisilat, yaitu senyawa fenolik yang disintesis oleh  tanaman  sebagai  respons  ketahanan terhadap infeksi patogen (Vlot et al., 2009).

## Pengujian SqMV Terbawa Benih
Pada  tahap  DIBA  seluruh  sampel memberikan  reaksi  berwarna  ungu  yang  jelas. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  seluruh  benih (100%)  dari  tiap  varietas  positif  membawa SqMV.    Pengujian  benih  yang  diperoleh  dari tanaman  F1  hanya  dapat  dilakukan  untuk varietas  ‘Venus’,  karena  varietas  ‘Vario’, ‘Calista’,  dan  ‘Japan  File’  sulit  tumbuh; sementara varietas ‘Yupiter’  merupakan varietas  lokal  akan  tetapi  benihnya  tidak mampu  tumbuh,  kemungkinan  diakibatkan oleh  infeksi  virus  yang  memengaruhi  vigor benih  yang  dihasilkan.    Berdasarkan  hasil DIBA  yang  dilakukan  untuk  benih  varietas ‘Venus’  didapatkan  14  benih  dari  24  benih (60.87%)  yang  bereaksi  positif  terhadap SqMV.
Tabel  3.  Insidensi  penyakit  mosaik  yang  disebabkan  oleh Squash  mosaic  virus pada  tiga  fase pertumbuhan tanaman
Varietas Insidensi Penyakit (%) Vegetatif (2 MST) Berbunga (4 MST) Berbuah (8 MST) ‘Venus’ 33 25 100 ‘Yupiter’ 66 75 100 ‘Japan File’ 33 100 25 ‘Vario’ 0 25 100 ‘Calista’ 66 25 100
Menurut Sastry (2013) terdapat hubungan  antara  waktu  inokulasi  dengan infeksi  pada  benih.  Semakin  cepat  tanaman terinfeksi  maka  jumlah  benih  yang  membawa virus  akan  semakin  tinggi.  Tanaman  yang terinfeksi  virus  setelah  masa  berbunga  akan menghasilkan benih bebas virus. Pada penelitian dengan mentimun, tanaman diinokulasi  SqMV  sejak  tujuh  hari  setelah tanam  sehingga  virus  telah  menginfeksi  sejak awal  pertumbuhan.  Infeksi  dini  tersebut  dapat mempengaruhi  pertumbuhan  tanaman,  buah yang  dihasilkan,  dan  benih  yang  membawa virus.
Hasil  pengujian  SqMV  terbawa  benih sangat  penting  untuk  diinformasikan  kepada masyarakat  luas  terutama  petani  pengguna, produsen  benih  (lokal)  dan  importir  benih, serta  Balai  Pengawasan  dan  Sertifikasi  Benih Tanaman  Pangan  dan  Hortikultura  (BPSB TPH).  Program  sertifikasi  benih  di  Indonesia masih  terfokus  pada  aspek  agronomis  yaitu kemurnian,  kadar  air,  dan  viabilitas  benih (Anwar et  al., 2005);  sementara  pengujian kesehatan  benih  di  negara  maju  pada umumnya  sudah  rutin  dilakukan.  Menurut ISTA ( International Seed Testing Association ) kriteria sertifikasi benih tidak hanya didasarkan  pada  kemurnian,  daya  kecambah, keseragaman bentuk, dan kadar air, tetapi juga bebas dari hama dan penyakit.

## KESIMPULAN
Tanaman  mentimun  yang  terinfeksi
SqMV menunjukkan gejala dengan kecenderungan  penurunan  keparahan  penyakit pada fase berbunga dan peningkatan keparahan penyakit pada fase berbuah.   Benih komersial  (F1)  yang  banyak  digunakan  petani terbukti  membawa  SqMV  dengan  efisiensi mencapai  100%  sehingga  berpotensi  menjadi sumber  inokulum  di  lapangan  dan  dapat memengaruhi pertumbuhan tanaman.
Berdasarkan  pembuktian  efisiensi  SqMV terbawa  benih  yang  cukup  tinggi  diperlukan pengujian  kesehatan  benih  khususnya  untuk benih  yang  diimpor  maupun  benih  komersial yang banyak digunakan petani.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahanger,  R.A.,  H.A.  Bhat,  T.A.  Bhat,  S.A. Ganie,  A.A.  Lone,  I.A.  Wani,  S.A. Ganai, S. Haq, O.A. Khan, J.M. Junaid, T.A.  Bhat.  2013.  Impact  of  climate change on  plant  diseases.  Inter.  J.  Mod. Plant. Anim. Sci. 1(3): 105-115.
Alazem  M,  N.S.  Lin.  2014.  Roles  of  plant hormones in the regulation of host-virus interactions. Mol. Plant. Path. 16(5): 529-540.
Albrechtsen,  S.E.  2006.  Testing  Methods  for Seed-Transmitted  Viruses:  Principles and Protocols. CABI Publishing, Wallingford. Anwar,  A.,  Sudarsono,  S.  Ilyas.  2005. Perbenihan sayuran di Indonesia: kondisi terkini dan prospek bisnis benih sayuran. Bul. Agron. 33: 38-47.
Bengyella,  L.,  S.D.  Waikhom,  F.  Allie,  C. Rey. 2015. Virus tolerance and recovery from  viral  induced-symptoms  in  plants are associated with transcriptome reprograming.  Plant.  Mol.  Biol.  DOI 10.1007/ s11103-015-0362-6.
[BMKG]. Badan Meteorologi Klimatologi dan Geofisika.  Stasiun  Klimatologi  Bogor. Data Iklim. Indonesia, Bogor.
Cafrune, E.E., M. Balzarini, V.C. Conci. 2006.
Changes  in  the  concentration  of  an Allexivirus during the crop cycle of two garlic  cultivars.  Plant.  Dis.  90:  1293- 1296.
Campbell, R.N. 1985. Squash mosaic comovirus . University of Idaho.
Dijkstra,  J.,  C.P.  de  Jager.  1998.  Practical Plant  Virology-Protocol  and  Exercise. Springer–Verlag Berlin Heidelberg, Berlin.
Haerunisa,  R.,  G.  Suastika,  T.A.  Damayanti. 2016.  Identifikasi Begomovirus yang berasosiasi  dengan  penyakit  kuning pada  mentimun  di Jawa Barat  dan  Bali.
J. Hort. Indonesia. 7(1): 9-20.
Hagen,  C.,  M.R.  Rojas,  T.  Kon,  R.L. Gilbertson. 2008. Recovery from Cucurbit  leaf  crumple  virus (family Geminiviridae , genus Begomovirus ) infection  is  an  adaptive  antiviral response associatedwith changes in viral small  RNAs.  Phytopathol.  98:  1029- 1037.
Hanssen, I.M., M. Lapidot, B.P.H.J. Thomma. 2010. Emerging viral diseases of tomato crops. Mol. Plant-Mic. Interac.
23(5):539-548. [ISTA]. International Seed Testing Association .  2017.  International  Rules
for Seed Testing. The International Seed
Testing Association, Bassersdorf.
[Kementan].  Kementrian  Pertanian  Republik
Indonesia.  2015.  Peraturan  Menteri
Pertanian Nomor 51/Permentan/ KR.010/9/2015  tentang  Perubahan  atas Peraturan  Menteri  Pertanian  Nomor 93/Permentan/OT.140/12/2011 tentang Jenis Organisme Pengganggu Tumbuhan Karantina.  Menteri  Pertanian  Republik Indonesia, Jakarta. Kitayama,  M,  H.  Hoover,  S.  Middleton,  C.C Kao. 2015. Brome  mosaic virus infection  of  rice  results  in  decreased accumulation  of  RNA1.  Mol.  Plant. Microb. Interact. 28(5):626-632.
Kumar.  R,  A.  Khurana,  A.K.  Sharma.  2014. Role  of  plant  hormones  and  their interplay  in  development  and  ripening of  fleshy fruits.  J.  Experiment.  Bot. 65(16): 4561-4575.
Lestari,  S.M.,  E.  Nurhayati.  2014.  Efisiensi tular  benih Squash  mosaic  virus pada Cucurbitaceae .  J.  Fitopatol  Indonesia.
10(3): 81-86.
Rezania, F. 2005. Tingkat ketahanan sembilan galur Cucumis melo L. terhadap Squash mosaic  comovirus. [Skripsi].  Fakultas Pertanian  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor.
Sastry,  K.S.  2013.  Seed-Borne  Plant  Virus Diseases. Springer, New Delhi.
Vlot.  A.C.,  D.A.  Dempsey,  D.F.  Klessig. 2009.  Salicylic  acid,  a  multifaceted hormone to combat disease. Annu. Rev. Phytopathol. 47: 177-206.