Jurnal Kedokteran Universitas Palangka Raya ISSN 2355-0015 EISSN 2723-5890

## ISOLASI BAKTERI ASAM LAKTAT ASAL FESES BAYI DAN POTENSINYA DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN

## Escherichia coli
ISOLATION OF LACTIC ACID BACTERIA FROM INFANT FECES AND POTENTIAL FOR INHIBITING THE GROWTH OF Escherichia coli
Nurmi Hasbi 1* , Rosyunita 1 , Adelia Riezka Rahim 2 , Rahmah Dara Ayunda 3 , Wayan Sulaksmana Sandhi Parwata 4 , Afif Farras 4 , Al Fikar Raihan 4 , Muhammad Azim Billah 4
1 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Mataram, Mataram, Nusa Tenggara Barat, Indonesia. * email: nurmihasbi@unram.ac.id
2 Departemen Parasitologi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Mataram, Mataram, Nusa Tenggara Barat, Indonesia.
3 Departemen Biokimia, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Mataram, Mataram, Nusa Tenggara Barat Indonesia.
4 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Mataram, Mataram, Nusa Tenggara Barat, Indonesia.
( Naskah diterima: 10 Meret 2024. Disetujui: 28 April 2024)
Abstrak . Bakteri Asam Laktat berperan dalam meningkatkan kinerja dan mitigasi penyakit karena kemampuannya untuk  menjaga keseimbangan fisiologis saluran cerna dan  ketahanan terhadap patogen. BAL  merupakan salah  satu bakteri yang terdapat pada saluran pencernaan. BAL dapat diisolasi dari inangnya untuk meningkatkan efisiensinya sebagai  bahan  probiotik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  isolat  lokal  BAL  dari  feses  bayi  melalui identifikasi fenotipik dan uji antibakteri. Sampel yang digunakan dalam penelitian adalah feses bayi usia 1-6 bulan pasien  Rumah  Sakit  Universitas  Mataram.  Isolasi  dilakukan  dengan  cara  menumbuhkan  bakteri  dari  feses  dengan metode  TPC  pada  media  MRSA  tersuplementasi  CaCO3.  Karakterisasi  fenotipik  yang  dilakukan  adalah  uji morfologi,  pewarnaan  gram,  dan  uji  biokimia.  Hasil  isolasi  bakteri  diperoleh  8  isolat  dari  BAL.  Bakteri  BAL menghasilkan  zona  bening  pada  media  MRSA,  karena  bakteri  tersebut  mampu  mengeluarkan  asam  pada  MRSA. Hasil  pewarnaan  gram  menunjukkan  seluruh  isolat  bakteri  gram  positif.  Berdasarkan  morfologi  BAL  mempunyai ciri  6  isolat  kokus  dan  2  isolat  basil.  Seluruh  isolat  mampu  menghasilkan  zona  hambat  terhadap  Escherichia  coli dengan 3 isolat kategori sedang dan 5 isolat kategori lemah. Zona hambat terbaik  kategori sedang yaitu pada bakteri berbentuk kokus. Keberadaan isolat BAL dari feses bayi dapat dijadikan sebagai sumber referensi untuk penelitian lebih lanjut mengenai probiotik seperti uji antibakteri lainnya.
Kata Kunci : bakteri asam laktat, Escherichia coli, feses bayi, isolasi
Abstract. Lactic Acid Bacteria play a role in improving performance and mitigating disease because of their ability to  maintain  the  physiological  balance  of  the  gastrointestinal  tract  and  resistance  to  pathogens.  BAL  is  a  type  of bacteria  found  in  the  digestive  tract.  LAB  can  be  isolated  from  the  host  to  increase  its  efficiency  as  a  probiotic ingredient.  This  study  aims  to  obtain  local  LAB  isolates  from  infant  feces  through  phenotypic  identification  and antibacterial  testing.  The  samples  used  in  the  research  were  the  feces  of  babies  aged  1-6  months  from  patients  at Mataram  University  Hospital.  Isolation  was  carried  out  by  growing  bacteria  from  feces  using  the  TPC  method  on MRSA  media  supplemented  with  CaCO3.  Phenotypic  characterization  carried  out  was  morphological  tests,  gram staining and biochemical tests. The results of bacterial isolation obtained 8 isolates from BAL. BAL bacteria produce a clear zone on MRSA media, because these bacteria are able to excrete acid in MRSA. The results of gram staining showed that all bacterial isolates  were gram positive. Based on the morphology of BAL, it was characterized by 6 isolates of cocci and 2 isolates of bacilli. All isolates were able to produce an inhibition zone against Escherichia coli with  3  isolates  in  the  medium  category  and  5  isolates  in  the  weak  category.  The  best  zone  of  inhibition  in  the medium  category  is  for  cocci-shaped  bacteria.  The  presence  of  LAB  isolates  from  baby  feces  can  be  used  as  a reference source for further research on probiotics such as other antibacterial tests.
Keywords : baby feses, Escherichia coli , isolation, lactic acid bacteri

## PENDAHULUAN
Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  merupakan flora  normal  dalam  saluran  pencernaan  manusia dan berperan penting untuk memulihkan homeostasis  mikrobiota  usus  manusia. 1 BAL  juga memberikan  efek  positif  lainnya  bagi  kesehatan tubuh  seperti  penyerapan  nutrisi,  metabolisme, kekebalan, dan pertahanan terhadap patogen dalam saluran  pencernaan.  BAL  juga  tergolong  dalam kategori probiotik. Probiotik merupakan mikroorganisme  hidup  yang  jika  dikonsumsi  dapat memberikan  efek  menguntungkan  pada  kesehatan inangnya.  Beberapa  anggota  BAL  umumnya dimanfaatkan  sebagai  probiotik  baik  dalam  bentuk bakteri murni maupun campuran.
BAL  dapat  menghasilkan  asam  laktat  dan metabolit  lain  dalam  jumlah  tinggi  seperti bakteriosin 2 ,  asam  lemak  rantai  pendek,  mediator terlarut  dan  eksopolisakarida.  Akibatnya,  BAL memiliki  kemampuan  untuk  bertahan  hidup  serta tumbuh  dalam  tubuh  manusia  (seperti  enzim  air liur,  pH  rendah,  dan  cairan  usus),  mengkolonisasi sel  epitel  usus,  menghambat  patogen  dan  spesies oksigen reaktif (ROS) yang terkait dengan penyakit usus.  Kondisi  ini  akan  membantu  dalam  menjaga keseimbangan  mikrobiota  usus  dan  homeostasis kekebalan  tubuh  dan  menjalankan  peran  fisiologis dalam kesehatan manusia. BAL dapat diklasifikasikan berdasarkan morfologi, kemampuan dalam memfermentasi glukosa, kemampuan  tumbuh  dalam  suhu  tertentu,  dan penggunaan  gula  sebagai  sumber  karbon.  Saat  ini, BAL  yang  sudah  teridentifikasi  masuk  ke  dalam family Aerococcaceae, Enterococcaceae, Carnobacteriaceae, Leuconostocaceae, Streptococcaceae, dan Lactobacillaceae. 3
Dalam  beberapa  tahun  terakhir,  BAL dalam  saluran  pencernaan  telah  banyak  mendapat perhatian  para  peneliti  karena  keberadaan  dan manfaatnya  dalam  mikrobiota  usus  manusia. Namun,  efektivitas  probiotik  bergantung  pada spesies  atau  strain  dan  cara  kerja  probiotik  masih belum  sepenuhnya  dipahami.  Sebelum  disebut sebagai  probiotik,  setiap  kandidat  strain  probiotik harus  diisolasi,  diidentifikasi  dan  dinilai  sifat probiotiknya seperti keamanan (kerentanan antibiotik),  fungsional  (adhesi  mukosa  usus  dan ketahanan  terhadap  lingkungan  pencernaan)  dan manfaat  (produksi  asam  laktat)  dan  antagonisme terhadap patogen karakteristik in vitro. 4 Meskipun terdapat sejumlah probiotik komersial yang unggul di seluruh dunia dan banyak penelitian terkait telah dilaporkan,  para  peneliti  terus  mencari  probiotik yang lebih unggul di masa depan.
Probiotik  yang  dijadikan  target  biasanya diisolasi dari spesimen manusia karena kekhususan spesies  inangnya  sehingga  probiotik  lebih  mampu beradaptasi  dengan  kondisi  saluran  cerna  manusia. Komposisi  BAL  dalam  saluran  cerna  juga  dapat
menentukan  status  kesehatan  dari  tiap  individu. Mikrobiota usus bayi juga termasuk BAL meskipun tidak  dominan  terutama  pada  periode  awal  masa kehidupan  bayi,  akan  tetapi  dapat  menentukan status  kesehatan  di  usus  bayi.  Cara  pemberian makan  bayi  dapat  membentuk  mikrobiota  karena pemberian ASI merangsang kolonisasi BAL di usus bayi.  Isolasi BAL dari kotoran bayi dapat menjadi pilihan  yang  tepat  untuk  seleksi  probiotik  karena resisten  terhadap  pH  rendah,  cairan  lambung, garam  empedu  dan  antibiotik  yang  merupakan fungsi  penting  dalam  probiotik.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengisolasi  dan  mengidentifikasi spesies  BAL  dominan  yang  ada  dalam  feses  bayi manusia  dengan  teknik  isolasi  dan  identifikasi secara  fenotipik.  BAL  yang  terpilih  akan  diuji aktivitas  antibakterinya  terhadap  pertumbuhan bakteri patogen Escherichia coli.

## METODE
Penelitian  dilaksanakan  dari  bulan  Mei hingga bulan November tahun 2023. Proses isolasi, identifikasi,  dan  uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan di  laboratorium  mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran dan  Ilmu  Kesehatan  Universitas  Mataram.  Alat yang  digunakan  antara  lain  adalah  alat  gelas laboratorium  (Iwaki®  dan  Pyrex®),  rubber  bulb, timbangan  analitik  (Pioneer™),  magnetic  stirrer, pinset,  cawan  petri  (Iwaki®  dan  Pyrex®),  tabung reaksi  (Iwaki®  dan  Pyrex®),  jarum  ose,  bunsen, rak tabung reaksi, mikropipet (Labnet), botol  feses, cooler  box  (mr.DIY),  autoklaf  (Tomy  SX-500), pinset, spreader, Bio Safety Cabinet (Jisico), vortex (Labnet), hotplate (Labnet), dan inkubator (Labnet),  batang  penyebar  (spreader),  pipet  tetes, penggaris,  kaca  preparat,  kaca  penutup,  batang pengaduk  spatula,  dan  spuit  injeksi.  Bahan  yang digunakan  antara  lain  yaitu  feses  (bayi  berusia  1 hingga 6 bulan), kalsium karbonat (CaCO3), media Man  Rogosa  Shape  agar  (MRSA),  media  simon citrate  (SC),  media  sulfide  indole  motility  (SIM), media Mueller Hinton Agar (MHA), akuades, NaCl 0.9%  agar,  set  pewarnaan  gram,  H2O2,  minyak imersi,  reagen  kovacs,  spritus,  gliserol  10%  dan alkohol  70%.  Desain  penelitian  yang  digunakan adalah  metode  deskriptif  yaitu  dengan  teknik pengambilan sampel purposive sampling. Pengumpulan  data  dilakukan  dengan  pengujian isolasi  bakteri  dengan  metode  Total  Plate  Count dan identifikasi bakteri secara fenotipik berdasarkan  pengecetan  gram,  uji  motil,  uji katalase,  uji  sulfur  dan  uji  indol.  Uji  antibakteri menggunakan metode difusi sumuran agar.
Pengambilan  sampel  berasal  dari  feses bayi  berusia  1  –  6  bulan.  Feses  bayi  diambil sebanyak  1  gram.  Pengambilan  sampel  feses  bayi dilakukan selama satu kali dengan cara menampung  feses  ke  dalam  botol  feses.  Tahapan selanjutnya  botol  yang  berisi  feses  ditempatkan
dalam  cooler  box  dan  dibawa  ke  laboratorium mikrobiologi.  Jumlah  sampel  bayi  yang  diambil sebanyak  8  orang  sesuai  dengan  kriteria  inklusi yaitu  bayi  yang  sehat  dan  menandatangani informed  consent  Pengambilan  sampel  feses  bayi telah  mendapat  persetujuan  perlakuan  etik  dari komisi etik penelitian kesehatan Fakultas Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan  Universitas Mataram yaitu pada nomor yang tertera No:414/UN18.F8/ETIK/2023.
Pembuatan MRSA dengan cara menimbang sebanyak 68,2 gram bubuk MRSA dan 1  gram  bubuk  calcium  carbonate  (CaCO3). Pembuatan MHA dengan cara menimbang sebanyak  38  gram  bubuk  media.  Pembuatan  SCA dengan cara  menimbang sebanyak 20 gram bubuk. Pembuatan SIM dengan cara menimbang sebanyak 30  gram  bubuk  media.  Keempat  media  diatas dilarutkan  dalam  1000  ml  akuades  dalam  wadah erlenmeyer  dan  dipanaskan  di  atas  hotplate kemudian  diaduk  dengan  magnetic  stirrer  hingga homogen  dan  mendidih.  Media  tersebut  kemudian disterilisasi  dalam  autoklaf  pada  suhu  1210C selama  15  menit.  Media  MRSA  dan  MHA dituangkan  kedalam  cawan  petri  volume  25  ml sedangkan media SC dan SIM dituangkan ke dalam tabung  reaksi  volume  5  ml.  Semua  media  siap digunakan  untuk  penelitian.  Sebanyak  satu  gram sampel feses bayi yang dikumpulkan secara aseptik ditambahkan  ke  dalam  9  ml  pengencer.  Garam fisiologis 0,9% sebagai pengencer dan homogenkan. Pengenceran multi - langkah kemudian dilakukan hingga seri pengenceran ke-7. Sebanyak  0,1  mL  sampel  diambil  dari  tiga  seri pengenceran  terakhir  dan  dikultur  dalam  media MRSA menggunakan metode spread  plate. Diinkubasi  selama  24  jam  dalam  inkubator  pada suhu  inkubator  37°C  dengan  posisi  petri  yang dibalik.  Koloni  yang  tumbuh  dilakukan  pemurnian dengan cara menggoreskan secara streak kuadran di atas  MRSA  dan  diinkubasi  selama  24  jam  dalam incubator  pada  suhu  37oC.  Tahapan  selanjutnya disubkultur  kembali  pada  MRSA  agar  miring sebagai  stok  isolat  murni.  Kaca  objek  diteteskan larutan  NaCl  fisiologis  0,9%,  kemudian  isolat bakteri  diambil  dan  ditebarkan  pada  kaca  objek, selanjutnya difiksasi di atas api bunsen.
Tambahkan  setetes  kristal  violet  dan  didiamkan selama  1  menit.  Sediaan  dicuci  dengan  air mengalir,  kemudian  ditambahkan  larutan  iodium tetes demi  tetes  hingga  menutupi swab bakteri dan didiamkan  selama  1  menit.  Setelah  dicuci  kembali dengan  air  mengalir,  ditambahkan  alkohol  96% setetes  demi  setetes  hingga  hilang  semua  pewarna dan  dibiarkan  selama  30  detik.    Sediaan  dicuci dengan  air  mengalir,  kemudian  ditambahkan safranin  dan  dibiarkan  selama  45-60  detik  atau setengah  kering.  Spesimen  dicuci  dan  dikeringkan untuk pengamatan mikroskopis.
Uji  katalase  dilakukan  dengan  cara membersihkan  kaca  preparat  lalu  tambahkan beberapa tetes H2O2 3% ke dalam gelas. Sebanyak satu isolat diambil dan diusapkan pada kaca objek. Jika  terbentuk  gelembung  O2  di  dalam  tetesan H2O2 yang diamati, maka mengindikasikan bahwa uji  kalatasenya  positif.  Uji  sitrat  dilakukan  dengan mengambil  sebanyak  satu  ose  isolat  bakteri digoreskan  pada  Simmon  Sitrat  agar  miring kemudian  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37 °C  dan  amati  perubahan  warna  yang  terjadi.  Hasil positif  ditunjukkan  dengan  adanya  perubahan warna dari hijau menjadi biru.  Tabung reaksi yang berisi SIM diinokulasi dengan satu ose isolat BAL dan  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37  °C. Selanjutnya  isolat  ditambahkan  reagen  Kovac’s. Jika  terdapat  cincin  merah,  maka  sampel  positif indol. Jika didasar tabung ada endapan warna hitam maka  sampel  positif  sulfur.  Kemudian  uji  motil ditandai  dengan  adanya  embun  atau  pertumbuhan bakteri di sekitar tusukan ose bakteri.
Suspensi bakteri E. coli dipipet sebanyak 1 mL  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri yang berisi MHA dan disebarkan merata menggunakan spreader. Selanjutnya dibuat sumuran dengan diameter 5 mm menggunakan blue tip atau cork borrer. Masing-masing kontrol positif, kontrol  negatif,  dan  kultur  isolat                BAL  di masukkan ke dalam sumur dengan volume masing- masing  sebanyak  5  μl,  selanjutnya  diinkubasi selama  24  jam.  Ukur  zona  bening  yang  terbentuk diukur  menggunakan  penggaris.  Data  dianalisis secara  deskriptif  dalam  bentuk  gambar  dan  tabel. Hasil  dicatat  berdasarkan  jumlah  isolat  yang diperiksa dan uji aktivitas antibakteri.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi Bakteri Asam Laktat
Isolasi  bakteri  merupakan  suatu  teknik dalam memisahkan bakteri tersebut dari lingkungannya  dan  menumbuhkannya  sebagai biakan  murni dalam  media buatan di laboratorium. Teknik  isolasi  akan  membuat  peneliti  lebih  mudah untuk  melihat  dan  mengamati  bentuk-bentuk pertumbuhan  bakteri.  Kehadiran  bakteri  dalam media menunjukkan bahwa mikrorganisme mampu menunjukkan bahwa mereka mampu
memanfaatkan  nutrisi  yang  ada  dalam  media tersebut.
Kebutuhan sumber
energi mikroorganisme dapat berasal dari cahaya (fototrof)  dan  karbon  organik  (kemoorganotrof), sumber  karbon  dalam  bentuk  karbon  anorganik (seperti kalium nitrat) dan nitrogen organik (dalam bentuk  protein  dan  asam  amino),  unsur  non-logam seperti  belerang  dan  fosfor,  unsur  logam  (seperti potasium, natrium, magnesium, besi, tembaga, dll.), air  untuk  fungsi  metabolisme  dan  pertumbuhan vitro 4 .
Teknik  spread  plate  umumnya  digunakan untuk  kelompok  bakteri  yang  aerob.  Bakteri  asam
laktat  merupakan  kelompok  bakteri  yang  aerob. Metode  spread  plate  (cawan  sebar)  adalah  suatu teknik  di  dalam  menumbuhkan  mikroorganisme  di dalam  media  agar  dengan  cara  menuangkan  stok kultur  bakteri  di  atas  media  yang  telah  padat dengan bantuan spreader 5 .
Hasil  penelitian  dari  isolasi  BAL  feses bayi  mampu  tumbuh  pada  media  MRSA  yang tersuplementasi  CaCO3.  Jumlah  rerata  sebesar  2-3 x 109 cfu/ml tiap petrinya. BAL dapat tumbuh pada media  MRSA  dikarenakan  mengandung  beberapa komponen  yang  dapat  menunjang  pertumbuhan bakteri  tersebut.  Media  MRSA  mengandung dekstrosa, ekstrak daging, ekstrak ragi, ammonium sitrat,  magnesium  sulfat,  pepton,  natrium  asetat, dikalium  fosfat,  tween  80  dan  mangan  sulfat. Kandungan  ammonium  sitrat  pada  pH  rendah menunjang  pertumbuhan  bakteri  asam  laktat. Dikalium  fosfat  dan  natrium  asetat  merupakan senyawa  untuk  menjaga  pH  tetap  rendah, sementara  tween  80  adalah  pelarut  zat-  zat  lain. Mangan  dan  magnesium  sulfat  merupakan  sumber dari ion dan sulfat. Pepton, daging dan ragi menjadi
sumber  nutrisi  karena  mengandung  nitrogen  dan asam  amino  yang  dapat    mendukung  pertumbuhan BAL.  Dekstrosa  adalah  jenis  karbon  penghasil enegeri yang berasal dari karbohidrat terfermentasi 6 .  Hasil  pengamatan  makroskopis BAL  pada  media  MRSA  akan  terlihat  koloninya berwarna  putih.  Kurnia  dkk.,  mengatakan  bahwa koloni  BAL  berwarna  putih  hingga  putih kekuningan,  berbentuk  bulat  dan  tepian  berwarna bening 7 .  Hasil  isolasi  juga  menunjukkan  bahwa BAL  berbentuk  bulat  (Gambar  1a).  BAL  yang tumbuh dapat diamati dengan adanya koloni bakteri yang  menghasilkan  zona  bening  disekitarnya. Bakteri asam laktat yang diperoleh akan menghasilkan  zona  bening  pada  media  tersebut, disebabkan karena bakteri tersebut mampu mensekresikan  asam  pada  media  MRSA  (Gambar 1b). Bakteri asam laktat yang diperoleh menghasilkan  zona  bening  pada  media  MRSA, disebabkan karena bakteri tersebut mampu mensekresikan  asam  pada  media  dan  mengikat CaCO3  menjadi  Ca-laktat  yang  larut,  sehingga menimbulkan zona bening 8 .
Gambar  1.  Bakteri  asam  laktat  pada  media  MRSA  kode  :  03A  10-7  (1)  (a)  hasil  isolasi  TPC;  (b)  hasil peremajaan.
Kelompok  bakteri  asam  laktat  merupakan kelompok  bakteri  gram  positif  yaitu  warna  sel bakterinya  ungu.  Pengecatan  gram  terdiri  atas empat  reagen  diantaranya  larutan  kristal  violet, larutan  yodium  dan  iodida,  campuran  aseton  dan etanol,  dan  larutan  safranin  atau  fuchsin 9 .  Kristal violet  berfungsi  sebagai  zat  warna  utama.  Iodida atau  yodium  berfungsi  untuk  mengintensifkan warna  utama.  Alkohol  atau  aseton  berfungsi  untuk melunturkan  zat  warna  utama.  Safranin  berfungsi sebagai  zat  penutup  atau  pewarna  tandingan Kelompok  bakteri  gram  positif  ditandai  dengan berwarna  ungu  pada  selnya  jika  diamati  dibawah mikroskop.  Dinding  sel  atau  peptidoglikan  gram positif  lebih  tebal  dibandingkan  gram  negatif. Kondisi  ini  mengakibatkan  bakteri  gram  positif dapat  mengikat  pewarna  utama  kristal  violet, sehingga  saat  dibilas  dengan  alkohol  bakteri  gram
positif  tetap  dapat  memperhatankan  warna  violet atau ungu. Berbeda dengan kelompok bakteri gram negatif memiliki peptidoglikan yang tipis, akibatnya  saat  cat  utama  dibilas  dengan  alkohol warnanya menjadi hilang, dan terikat warna dengan cat  tandingan  safranin  sehingga  warnanya  menjadi merah muda.

## Identifikasi Bakteri Asam Laktat
Bakteri  yang  tumbuh  di  media  MRSA dihitung  jumlah  koloninya  dengan  menggunakan metode Total Plate Count yaitu satuan perhitungan CFU/ml.  Pengujian  TPC  dimaksudkan  untuk menunjukkan  jumlah  mikroba  dalam  suatu  sampel tiap  bahannya.  Identifikasi  bakteri  yang  digunakan yaitu  secara  fenotipik  berdasarkan  makroskopis, mikroskopis dan uji biokimia. Pengamatan makroskopis merupakan pengamatan dengan pengamatan secara langsung menggunakan mata.

## Tabel 1. Identifikasi bakteri asam laktat secara mikroskopis, makroskopis dan biokimia
No Kode Jumlah Koloni (CFU/ml) Makroskopis Mikroskopis Uji Biokimia Bentuk  Pinggiran  Elevasi  Pewarnaan gram Bentuk sel Motil  Indo l Sitrat  Katalas e 1  01F 10-7(2) 3 x 10 9 Circular Entire Flat Positif Basil - - - - 2.  01F 10-6(2)  2.71 x 10 9 Circular Entire Flat Positif Kokus - - - - 3.  02AF 10-7 (1) 2.66 x 10 9 Circular Entire Flat Positif Basil - - - - 4.  03A 10-7 (1) 2.34 x 10 9 Circular Entire Flat Positif Kokus - - - 5.  03AF 10-7 (1) 2.86 x 10 9 Circular Entire Flat Positif Kokus - - - - 6.  01A 10-6 (2) 2.66 x 10 9 Circular Entire Flat Positif Kokus - - - - 7  01A 10-5 2.56 x 10 9 Circular Entrire Flat Positif Kokus - - - - 8  04AF 10-7 2,57 x 10 9 Circular Entire Flat Positif Kokus - - - -
Berdasarkan  morfologi  bakteri  asam  laktat yang  berasal  dari  feses  pada  penelitian  ini  terdiri atas dua bentuk yaitu bentuk kokus dan basil. Hasil yang  sama  juga  dilaporkan  oleh  Manalu  et  al. bahwa  dari  ketujuh  isolat  bakteri  asam  laktat  yang diuji,  memiliki  karakteristik  yang  tidak  serupa, yaitu 3 isolat berbentuk basil dan 4 isolat berbentuk kokus 10 .  BAL  merupakan  salah  satu  jenis  bakteri gram  positif  yang  menggunakan  karbohidrat sebagai  satu-satunya  atau  sumber  karbon  utama yang  dijadikan  untuk  penambah  energi 11 .
Meskipun  bakteri  asam  laktat  mencakup  lebih  dari 60  genera,  genera  yang  sering  muncul  umumnya mencakup
Lactobacillus, Lactococcus,
Leuconostoc, Pediococcus, Streptococcus,
Enterococcus, Weissella, dan  lain sebagainya 12;  13 .
Pengujian  biokimia  dilakukan  dengan  beberapa cara  diantaranya  uji  katalase,  uji  sitrat,  uji  sulfur, uji  indol  dan  uji  motil.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  BAL  uji  katalasenya  negatif, uji sitrat negatif, uji sulfur negatif, uji indol negatif dan  uji  motil  juga  negatif.  Uji  katalase  merupakan salah  satu  uji  identifikasi  yang  penting  dalam mengidentifikasi  bakteri  asam  laktat.  Uji  katalase digunakan  untuk  mengetahui  adanya  enzim katalase  pada  isolat  bakteri.  Katalase  merupakan enzim  yang  dapat  mengkatalisis  penguraian hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  menjadi  air  (H2O)  dan oksigen  (O2).  Hasil  yang  diperoleh  adalah  negatif karena  tidak  terbentuknya  gelembung  yang  berarti isolat tidak mampu menghasilkan enzim katalase.
Hasil  ini  juga  didukung  oleh  penelitian Joni  dan  Abrar  bahwa  bakteri  asam  laktat  yang berasal  dari  feses  tidak  menghasilkan  enzim
katalase 14 .  Manalu et  al. juga  mengatakan  bahwa bakteri asam laktat yang berasal dari feses manusia hasil  uji  katalasenya  negatif  yang  artinya  tidak mampu  menghasilkan  enzim  katalase 10 .  Media
SIM  merupakan media  semi  solid  berwarna  krem. SIM  merupakan  media  yang  digunakan  untuk membedakan bakteri yang termasuk kelompok Enterobacteriaceae.   Kekaburan  yang menyebar  dari  garis  menusuk  menunjukkan  tes positif  untuk  motilitas.  Hasil  ini  didukung  oleh penelitian  Anidinta 15 bakteri  asam  laktat  yang berasal dari ASI tidak memiliki kemampuan motil.
Manalu et al. juga mengatakan bahwa bakteri asam laktat  yang  berasal  dari  feses  manusia  tidak memiliki kemampuan untuk motil atau non motil 10 .
Bakteri  asam  laktat  memiliki  kebutuhan  nutrisi yang  kompleks  dan  bergantung  pada  keberadaan karbohidrat yang dapat difermentasi untuk pertumbuhan secara aktif 10 .
Uji Potensi Antibakteri BAL Terhadap Penghambatan Pertumbuhan E. coli
Isolat BAL yang diperoleh dari feses bayi dilakukan  uji  antibakteri  terhadap  bakteri  patogen yaitu E. coli . Hasil pengujian menunjukkan adanya zona  penghambatan  berupa  zona  bening  yang terbentuk  di  sekitar  sumuran  yang  mengandung isolat  BAL  (Tabel  2).  Berdasarkan  besarnya  zona penghambatan  maka  menunjukkan  bahwa  tiga isolat  yang  berbentuk  kokus  dengan  kode  isolat yaitu  01F  10-6(2),  03A  10-7  (1)  dan  03AF  10-7, menghasilkan zona hambat paling bagus dibandingkan  bakteri  berbentuk  basil.  Hasil penelitian  ini  didukung  oleh  penelitian  Manalu et
al. menunjukkan  bahwa  bakteri  BAL  berbentuk kokus  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri E. coli 10 . Datta et al . mengatakan bahwa BAL asal rumen  sapi  mampu  menghambat  bakteri E.  coli dalam  kategori  sedang 6 .  BAL  memiliki  aktivitas antibakteri  diduga  karena  mampu  menghasilkan bakteriosin  dan  asam  laktat.  Kedua  senyawa  ini
akan  menyebakan  kebocoran  dan  perforasi  pada membran  sel  patogen  atau  bakteri  target.  Kondisi ini  juga  akan  mengakibatkan  lisisnya  dinding  sel patogen  dan  kehilangan  permeabilitas  membran dan proton motive force . Keadaan ini tentunya akan mengganggu  metabolisme  sel  target  dan  akibatnya dapat menyababkan kematian pada sel patogen.
Tabel 2. Uji potensi antibakteri BAL terhadap pertumbuhan  E. coli
Kode Isolat Diameter zona hambat (mm) Total (mm) Rerata (mm) ± SD Aktivitas I II III 01F 10-7(2) Basil 4 3.9 4 11,9 3,9  ± 0.05 Lemah 01F 10-6(2) Kokus 5.5 6 6 17.5 5.8 ± 0.28 Sedang 02AF 10-7 (1) Basil 4 4 4.1 12.1 4.03 ± 0.05 Lemah 03A 10-7 (1)Kokus 6.1 6.2 6 18.3 6.1 ± 0.11 Sedang 01A 10-6 (2) Kokus 2 1.5 2 5.5 1.8 ± 0.28 Lemah 03AF 10-7 (1) Kokus 6 5.9 5.9 17.8 5.93 ± 0.05 Sedang 04AF 10-7 Kokus 2 2 2.2 6.2 2.06 ± 0.11 Lemah Kontrol positif 30 30 30 30 30 Sangat Kuat Kontrol negatif 0 0 0 0 0 Tidak ada

## KESIMPULAN
Bakteri  asam  laktat  asal  feses  bayi  terdiri atas 6 isolat berbentuk kokus dan 2 isolat berbentuk basil. Identifikasi secara fenotipik dilaporkan warna koloni  makrospis  dari  BAL  yaitu  putih  dengan membentu  zona  hambat  di  sekeliling  koloni  saat ditumbuhkan pada MRSA. Koloni berbentuk bulat, pinggiran entire dan elevasi flat atau datar. Hasil uji biokimia untuk semua tes yaitu negatif, diantara uji yang  dilakukan  yaitu  uji  katalase,  sulfur,  indol, motil dan sitrat. Semua BAL yang diisolasi mampu menghambat E.  coli dalam  kategori  sedang  dan lemah. BAL yang berbentuk kokus lebih berpotensi dibandingkan  berbentuk  basil  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri E.  coli .  Berdasarkan  hasil penelitian  yang  telah  dilakukan  perlu  untuk melakukan  penelitian  lanjutan  seperti  identifikasi BAL  secara  molekuler  dan  penentuan  konsentrasi BAL yang efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri  patogen  usus  lainnya  seperti  Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella dan  Proteus..

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis pada kesempatan ini ingin mengucapkan terima kasih kepada Direktur Rumah Sakit  Universitas Mataram  yang telah  memberikan izin  dan  memfasiltasi  dalam  pengambilan  sampel penelitian  yaitu  berupa  feses  bayi  usia  1-6 bulanyang merupakan pasien Rumah Sakit Universitas Mataram. Selanjutnya ucapan terimakasih  diucapkan  kepada  LPPM  Universitas Mataram  atas  Dana  PNBP  Penelitian  Dosen
Pemula  Tahun  2023.  Peneliti  juga  mengucapkan terima kasih kepada Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan  Universitas  Mataram  atas  dukungan, semangat dan turut mendoakan kelancaran terhadap penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Kumar R, Sood U, Gupta V, Singh M. Recent Advancements in the Development of Modern Probiotics for Restoring Human Gut Microbiome  Dysbiosis.  Indian  J  Microbiol. 2020;60(1):12–25.  doi: 10.1007/s12088-019- 00808-y.
2.   Ooi,  M.  F.,  Mazlan,  N.,  Foo,  H.  L.,  Loh,  T. C.,  Rosfarizan,  M.,  Rahim,  R.  A.,  et  al. Effects  of  carbon  and  nitrogen  sources  on bacteriocin-inhibitory  activity  of  postbiotic metabolites produced by Lactobacillus plantarum  I-UL4.  Malays  J  Microbiol.
2015;(January 2017). doi: 10.21161/mjm.13014
3.   Waoo  AA,  Singh  S,  Pandey  A,  Kant  G, Choure  K,  Amesho  KTT,  et  al.  Microbial exopolysaccharides  in  the  biomedical  and pharmaceutical industries.
Heliyon.
2023;9(8):e18613. doi: 10.1016/j.heliyon. 2023.e18613
4.   Casarotti  SN,  Carneiro  BM,  Todorov  SD, Nero  LA,  Rahal  P,  Penna  ALB.  In  vitro assessment  of  safety  and  probiotic  potential characteristics of Lactobacillus strains isolated from  water  buffalo  mozzarella  cheese.  Ann Microbiol. 2017;67(4):289–301. doi:
10.1007/s13213-017-1258-2
5.   Jufri  RF.  Microbial  Isolation.  J  La  Lifesci. 2020;1(1):18–23.
6.   Datta FU, Daki AN, Benu I, Detha AIR, Foeh NDFK, Ndaong NA. Uji aktivitas antimikroba bakteri  asam  laktat  cairan  rumen  terhadap pertumbuhan  Salmonella  enteritidis,  Bacillus cereus,  Escherichia  coli  dan  Staphylococcus aureus  menggunakan  metode  difusi  sumur agar. J Kaji Vet. 2019;66–85. doi: 10.35508/jkv.v0i0.1590
7.   Kurnia M, Amir H, Handayani D. Isolasi Dan Identifikasi  Bakteri  Asam  Laktat  Dari Makanan  Tradisional  Suku  Rejang  Di Provinsi Bengkulu: “Lemea.”  Alotrop. 2020;4(1):25–32.  doi: 10.33369/atp.  v4i1. 13705
8.   Mastuti  S.  Potensi  Bakteriosin  pada  Bakteri Asam  Laktat  terhadap  Staphylococcus  aureus dan  Escherichia  coli.  J  Ilm  Kesehat  Sandi Husada.  2022;11(1):25–30.  doi: 10.35816/ jiskh.v11i1.650
9.   Li H, Li L, Chi Y, Tian Q, Zhou T, Han C, et al. Development of a standardized Gram stain procedure for bacteria and inflammatory cells using  an  automated  staining  instrument. Microbiologyopen. 2020;9(9):1–10. doi: 10.1002/mbo3.1099
10.   Manalu  RT, Bahri S, Melisa, Sarah S. Isolasi dan  Karakterisasi  Bakteri  Asam  Laktat  asal Feses Manusia sebagai Antibakteri
Escherichia  coli  dan  Staphylococcus  aureus.
Sainstech Farma. 2020;13(1):55–9. doi:
11.   George  F,  Daniel  C,  Thomas  M,  Singer  E, Guilbaud A, Tessier FJ, et al. Occurrence and dynamism  of  lactic  acid  bacteria  in  distinct ecological  niches:  A  multifaceted  functional health perspective. Front
Microbiol.
2018;9(NOV):1–15.  doi: 10.3389/  fmicb. 2018.02899
12.   Mokoena  MP.  Lactic  acid  bacteria  and  their bacteriocins:  Classification,  biosynthesis  and applications  against  uropathogens:  A  mini- review.  Molecules.  2017;22(8).  doi: 10.3390/ molecules22081255
13.   Nofiani  R,  Ardiningsih  P,  Adhitiyawarman, Sarwiyati.  Characteristics  of  Lactic  Acid Bacteria  isolated  from  traditional  fermented fish.  Biodiversitas.  2022;23(11):5662–9.  doi: 10.13057/biodiv/d231116
14.   Joni  LS,  Erina  E,  Abrar  M.  Total  Bakteri Asam Laktat (BAL) pada Feses Rusa Sambar (Cervus unicolor) di Taman Rusa Aceh Besar (The Total  of  Lactic  Acid  Bacteria  (LAB)  on Feces  of  Sambar  Deer  (Cervus  unicolor)  in Taman  Rusa  Aceh  Besar.  J  Ilm  Mhs  Vet. 2018;2(2):77–85. doi:
10.21157/jim%
20vet..v2i2.6782
15.   Anindita NS. Isolasi Dan Identifikasi Fenotipik  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL) Indigenous Asal Air Susu Ibu (ASI). J Teknol Pangan.  2022;5(1):18–23.    doi: 10.14710/ jtp.2021.22289