## Pengaruh Ekstrak Daun Wungu Terhadap Luas Islet Pankreas Tikus Wistar Diabetes Melitus
1 2 3 3
Tifanni Excelinda , Hermawan Istiadi , Dwi Retnoningrum , Meita Hendrianingtyas
Latar  belakang  : Diabetes  melitus  merupakan  kumpulan  gejala  gangguan  metabolik dengan  prevalensi  penyandang  yang  masih  terus  meningkat.  Faktor  lingkungan,  gaya hidup, maupun genetik dapat menyebabkan kerusakan sel pankreas maupun resistensi insulin  yang  kemudian  bermanifestasi  sebagai  diabetes  melitus.  Daun  wungu (Graphytophyllum pictum (L.) Griff) mengandung metabolit aktif seperti flavonoid yang merupakan  antioksidan  untuk  mencegah  destruksi  dan  meregenerasi  sel  pankreas penderita  diabetes  melitus.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  membuktikan  adanya perbedaan ukuran luas islet pankreas tikus Wistar diabetes melitus yang mendapatkan ekstrak  daun  wungu (Graphtophyllum  pictum  (L.)  Griff) setelah  perlakuan  dengan kontrol.
Metode  : Penelitian true  experimental dengan  menggunakan  desain Post–Test  Only Control Group Design . Sampel 24 ekor tikus Wistar jantan dengan kriteria tertentu dibagi secara acak menjadi 4 kelompok. Kontrol negatif (K–1) diberikan aloksan dan kelompok perlakuan 1 (K–2), perlakuan 2 (K–3), dan perlakuan 3 (K–4) masing-masing diberikan aloksan dan ekstrak daun wungu 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB, dan 200 mg/kgBB. Glukosa darah  diperiksa  pada  hari  ke-4  untuk  memastikan  tikus  sudah  diabetes  melitus  dan dilanjutkan perlakuan selama 14 hari. Terminasi dan pengambilan organ dilakukan pada hari  ke-15.  Data  berupa  luas  islet  pankreas  kemudian  dianalisis  menggunakan  uji Kruskal–Wallis dan uji Mann–Whitney . Hasil : Berdasarkan uji Kruskal–Wallis didapatkan perbedaan luas islet pankreas yang bermakna ( p = 0,000) antar kelompok. Pada uji Mann–Whitney didapatkan peningkatan luas islet pankreas yang signifikan ( p = 0,000) pada seluruh kelompok perlakuan terhadap kontrol negatif. Rerata luas islet pankreas berbanding lurus dengan peningkatan dosis pemberian ekstrak daun wungu.
Simpulan : Terdapat perbedaan ukuran luas islet pankreas yang signifikan pada seluruh kelompok perlakuan terhadap kontrol negatif.
Kata kunci : daun wungu; diabetes; islet pankreas
1 Departemen Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro
2 Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro
3 Departemen Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro
Abstrak

## Original Article
Med Hosp 2021; vol 8 (1) : 91–97 p-ISSN: 2301-4369 e-ISSN: 2685-7898 https://doi.org/10.36408/mhjcm.v8i1.492
Diajukan: 29 September 2020 Diterima: 10 November 2020

## Afiliasi Penulis:
Departemen Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro
Korespondensi Penulis: Tifanni Excelinda Jl. Prof. H. Soedarto, SH., Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275,
Indonesia
E-mail: tifanni.excelinda@gmail.com
Background : Diabetes mellitus is a group of metabolic disorders with prevalence that seems to still be increasing. Environmental, lifestyle, and genetic factors can cause pancreatic cell damage or insulin resistance which then manifests as diabetes mellitus. Graptophyllum pictum (L.) Griff contains active metabolites such as flavonoids which are antioxidants to prevent the destruction and induce regeneration of pancreatic cells in people with diabetes mellitus. The aim of this study was to prove the difference between pancreatic islet area in diabetic Wistar rats that received Graptophyllum pictum (L.) Griff after treatment with control. Methods : True experimental study with Post–Test Only Control Group Design was done using sample of 24 Wistar rats randomly divided into 4 groups. Negative control group (K1) was given alloxan intraperitoneally, treatment groups (K2, K3, K4) were given alloxan and 50 mg/kg, 100 mg/kg, and 200 mg/kg dose of Graptophyllum pictum (L.) Griff . Blood glucose was measured to ensure the rats already had diabetes and continued the treatment for 14 days. Termination and organ sampling was done on day–15.
Results : Data in the form of pancreatic islets areas were then analyzed using Kruskal–Wallis test ( p =0.000). Mann–Whitney tests showed value of p =0.000 for all comparison between each of treatment groups with the negative control. Conclusion : Significant increase of the pancreatic islets areas was obtained by comparing each treatment group with the control. The mean area of pancreatic islets was directly proportional to the increase of the Graptophyllum pictum (L.) Griff leaf extract dose of administration.
Keywords : diabetes, Graptophyllum pictum, pancreatic islet

## Abstract
Graptophyllum pictum (L.) Griff Leaf extract effect on pancreatic islets area in diabetic wistar rat

## PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan  sekumpulan  gejala gangguan metabolik yang bersifat kronis dimana terjadi peningkatan  kadar  glukosa  darah  sebagai  akibat  dari kurangnya sekresi insulin oleh pankreas maupun ketika tubuh  tidak  dapat  menggunakan  insulin  atau  yang
1 disebut  resistensi  insulin.   Berdasarkan International Diabetes Federation (IDF) 2017, Indonesia menjadi negara peringkat  ke–6  penyandang  diabetes  terbanyak  di 2 dunia.   Menurut  Riset  Kesehatan  Dasar  tahun  2018, prevalensi  penyandang  diabetes  usia  ≥15  tahun  di Indonesia dari tahun 2013 hingga tahun 2018 mengalami 3 peningkatan  dari  6,9%  menjadi  8,5%.   Preparat  agen antidiabetes masih memiliki banyak efek samping yang tidak diinginkan, sehingga obat herbal menjadi sebuah alternatif  yang  cukup  diminati  karena  harganya  yang tidak  terlalu  mahal  dengan  efek  samping  yang  lebih 4 ringan.   Daun  wungu (Graptophyllum  pictum  (L.)  Griff) menjadi salah satu pilihan alternatif yang sudah banyak 5 digunakan  masyarakat  Indonesia.   Penelitian  yang  ada membuktikan  bahwa  daun  wungu  mengandung alkaloid  dan  flavonoid  yang  berperan  sebagai antioksidan  alami  yang  dapat  menurunkan  kadar  gula darah  dan  meregenerasi  sel  pankreas  yang  rusak  pada
6 penderita  diabetes  melitus.   Daun  wungu  juga  banyak dipakai sebagai obat antidiabetes tradisional di kalangan masyarakat  Indonesia  walaupun  belum  ada  data penelitian  yang  cukup  untuk  menentukan  tingkat efektivitas  dan  formulasinya.  Oleh  karena  itu,  perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai  efek antidiabetes  yang  dimiliki  ekstrak  daun Graptophyllum pictum  (L.)  Griff terhadap  gambaran  perbaikan histopatologi  pankreas  tikus  Wistar  yang  telah dimodifikasi mengalami diabetes melitus.
Hipotesis penelitian ini adalah terdapat pengaruh ekstrak  daun Graptophyllum  pictum  (L.)  Griff terhadap luas  islet  pancreas  tikus  Wistar  diabetes  melitus  yang diberi  perlakuan  terhadap  kelompok  kontrol.  Tujuan dari  penelitian  ini  adalah  untuk  membuktikan  adanya perbedaan ukuran luas islet pancreas pada tikus Wistar diabetes yang diberi ekstrak daun Graptophyllum pictum (L.) Griff pasca terapi dengan kontrol.

## MATERI DAN METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  telah  mendapat  izin  dari  Komisi  Etik Penelitian  Kesehatan  (KEPK)  Fakultas  Kedokteran Universitas Diponegoro. Izin diberikan pada tanggal 13  Mei  2019  dengan  nomor  No.  50/EC/H/KEPK/FK- UNDIP/V/2019.
Penelitian  ini  telah  dilakukan  di  Laboratorium Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam  Universitas  Negeri  Semarang  sebagai  tempat pemeliharaan  dan  intervensi  hewan  coba  serta pembuatan  preparat.  Sedangkan  pemeriksaan histopatologi  dilakukan  di  Bagian  Patologi  Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro di bawah supervisi  Ahli  Patologi  Anatomi.  Penelitian  dilakukan selama 5 bulan dimulai dari tahap penyusunan proposal pada 5 Februari 2020.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah : daun wungu, akuades, etanol 70%, tikus Wistar jantan  dengan  berat  badan  200–300  gram,  aloksan, larutan saline (larutan NaCl 0,9%), kertas saring, glukosa, bahan  pengecatan  preparat  histopatologi  dengan pengecatan  HE  :  larutan  buffer  formalin  10%,  parafin, Hematoksilin–Eosin,  larutan  xylol,  alkohol  bertingkat, akuades, eter, dan albumin. Alat yang digunakan antara lain  corong  kaca,  bejana  stainless  steel,  penangas  air,
timbangan analitik, cawan porselen, flakon, spuit injeksi 1,0  ml,  3,0  ml,  5  ml,  spuit  oral  ukuran  18  gauge.  Alat pembuatan  preparat  histopatologi:  mikrotom,  oven, cetakan  paraffin, deck  glass , object  glass ,  mikroskop cahaya, kamera, dan Olympus cellSens Imaging Software . P e n e l i t i a n   i n i   m e r u p a k a n   p e n e l i t i a n eksperimental dengan desain post-test only control group design .  Besar  sampel  dihitung  menurut  panduan Institutional Animal Care and Use Committee Guidebook dan kriteria World Health Organization (WHO) dimana untuk keperluan  evaluasi  dan  penelitian  obat  tradisional minimal  dibutuhkan  5  ekor  untuk  masing-masing 7,8 kelompok.   Maka  jumlah  sampel  yang  dibutuhkan adalah  20  ekor  tikus. Drop  out diantisipasi  dengan menambahkan  1  ekor  tikus  masing-masing  kelompok sehingga  keseluruhan  sampel  tikus  yang  digunakan adalah 24 ekor. Kriteria inklusi dari penelitian ini yaitu tikus  wistar  jantan  yang  sehat  (bergerak  aktif),  dengan berat  badan  200–400  gram  dan  umur  kurang  lebih 2–3  bulan.  Kriteria  eksklusi  dari  penelitian  ini  adalah adanya  kecacatan  anatomis.  Kriteria drop  out dari penelitian  ini  adalah  tikus  Wistar  mati  sebelum  tiba waktu  observasi  dan  tikus  wistar  tidak  menderita diabetes melitus setelah injeksi aloksan.
Sampel tikus dibiarkan adaptasi selama 7 hari dan kemudian  dirandomisasi  menjadi  4  kelompok  : kelompok  kontrol  (K-1),  kelompok  perlakuan  1  (K-2), kelompok perlakuan 2 (K-3), dan kelompok perlakuan 3 (K-4). Seluruh kelompok diberikan injeksi aloksan secara intraperitoneal.  Kelompok  K-2,  K-3,  dan  K-4  diberikan terapi  ekstrak  daun Graptophyllum  pictum  (L.)  Griff dengan  dosis  masing-masing  50  mg/kgBB,  100 mg/kgBB,  dan  200  mg/kgBB.  Perlakuan  diberikan selama 14 hari. Terminasi dilakukan pada semua hewan
9 coba pada hari ke-15 dengan menggunakan etil alkohol kemudian membedah dan mengambil bagian pankreas tikus Wistar jantan untuk dibuat preparat histopatologi dengan metode blok paraffin menggunakan pengecatan
HE. Islet pankreas yang diamati dan didokumentasikan dengan  kamera  adapter  yang  dihubungkan  dengan mikroskop  cahaya  perbesaran  400x.  Pengukuran  luas islet pankreas dilakukan menggunakan metode poligon y a i t u   m e n a r i k   g a r i s   y a n g   d i d a p a t   d e n g a n menghubungkan  titik-titik  terjauh  dari  sudut-sudut terluar  islet  yang  teramati  dengan Olympus  cellSens Imaging Software . Pengamatan dilakukan oleh 2 penguji dan reliabilitasnya diuji dengan uji Kappa menggunakan program  SPSS.  Nilai  Kappa  yang  didapatkan  adalah 0,918 (91,8%; >90%) dengan nilai p =0,000 ( p <0,05) yang menunjukkan data signifikan dengan kesepakatan yang
10 tinggi antara pengamat 1 dan pengamat 2.  Data yang diperoleh kemudian diolah dengan  program SPSS.

## HASIL
Penelitian ini menggunakan 24 ekor tikus Wistar jantan dengan  6  ekor  tikus  pada  setiap  kelompok  perlakuan. Tikus  diaklimatisasi  terlebih  dahulu  selama  7  hari sebelum  diberi  perlakuan.  Tikus  yang  digunakan memenuhi kriteria tikus wistar jantan yang sehat, dengan berat  badan  200–400  gram  dan  umur  2–3  bulan  tanpa adanya kecacatan anatomis.
Jumlah  sampel  final  yang  digunakan  pada pengamatan  hasil  adalah  20  ekor  tikus.  Selama penelitian, 4 tikus memenuhi kriteria drop out , yaitu 3  mati  sebelum  waktu  observasi  dan  1  belum  diabetes pasca injeksi aloksan, sehingga tersisa 5 ekor tikus untuk masing-masing kelompok.
Data yang diperoleh dari gambaran histopatologi pankreas tikus Wistar adalah ukuran luas islet pankreas. Gambar  1  menunjukkan  perwakilan  dari  dokumentasi gambaran histopatologi ukuran luas islet pankreas pada kelompok kontrol (K-1). Gambar 2 mewakili kelompok perlakuan  1  (K-2),  gambar  3  mewakili  kelompok perlakuan  2  (K-3),  dan  gambar  4  mewakili  kelompok perlakuan 3 (K-4).
Pengaruh Ekstrak Daun Wungu Terhadap Luas Islet Pankreas Tikus Wistar Diabetes Melitus
Variabel TABEL 1
Karakteristik Subyek Penelitian
Jenis kelamin n (%) Jantan Usia 5 (100) K4 (n=5) 3 bulan Rerata berat (gr) ± SD n (%) K2 (n=5) 230 ± 10,44 5 (100) 5 (100) K1 (n=5) 257 ± 11,12 5 (100) 5 (100) 5 (100) K3 (n=5) 5 (100)
5 (100) 221 ± 7,23 251 ± 9,38
Tabel 2 menunjukkan nilai rerata dan median dari luas islet pankreas pada seluruh kelompok. Nilai tersebut menunjukkan  adanya  perbaikan  berupa  peningkatan ukuran  luas  islet  pankreas  berbanding  lurus  dengan pertambahan  pemberian  dosis  ekstrak  daun Graptophyllum  pictum  (L.)  Griff .  Uji  normalitas Shapiro- Wilk menunjukkan  nilai p <0,05  untuk  masing-masing kelompok. Uji Shapiro-Wilk diulang pada data yang telah ditransformasi  dan  didapatkan  kelompok  kontrol, perlakuan  2,  dan  perlakuan  3  terdistribusi  normal ( p >0,05) namun kelompok perlakuan 1 tidak terdistribusi normal ( p < 0,05) sehingga untuk uji hipotesis dilakukan analisis  dengan  uji  non  parametrik Kruskal–Wallis .  Uji Kruskal–Wallis menunjukkan  adanya  perbedaan bermakna  pada  seluruh  kelompok  ( p =0,000).  Hasil  uji Mann–Whitney membuktikan adanya perbedaan dengan signifikansi  yang  jelas  pada  perbandingan  antara
masing-masing kelompok perlakuan (K-2, K-3, dan K-4) dengan  kelompok  kontrol  (K-1),  dimana  nilai p =0,000 ( p <0,05) untuk semua perbandingan.

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  yang  dilakukan  selama  14  hari menunjukkan  perbedaan  yang  bermakna  antar kelompok  ( Kruskal–Wallis , p =0,000).  Berdasarkan  hasil analisis  data,  hasil  yang  signifikan  didapatkan  pada perbandingan  masing-masing  kelompok  perlakuan  1 (dosis  ekstrak  50  mg/kgBB),  kelompok  perlakuan  2 (dosis ekstrak 100 mg/kgBB), dan kelompok perlakuan 3 (dosis ekstrak 200 mg/kgBB) dengan kelompok kontrol negatif  ( Mann–Whitney , p =0,000  untuk  seluruh perbandingan). Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak  daun  wungu  berperngaruh  terhadap  luas  islet
Medica Hospitalia | Vol. 8, No. 1, Maret 2021
20 ekor tikus Wistar Randomisasi Induksi aloksan Pemeriksaan kadar glukosa
Kelompok kontrol negatif :
5 tikus  hanya induksi alosan Kelompok perlakuan 1 : 5 tikus  (+) ekstrak daun wungu 50 mg/kgBB Kelompok perlakuan 2 : 5 tikus  (+) ekstrak daun wungu 100 mg/kgBB Kelompok perlakuan 3 : 5 tikus 
(+) ekstrak daun wungu 200 mg/kgBB
Terminasi pada hari ke-15 dilanjutkan dengan pengambilan preparat daerah
Pengambilan data mikroskopis
Pengolahan data dan analisis
Diagram 1. Alur Penelitian
pankreas tikus Wistar diabetes melitus yang   diinduksi aloksan.
Rerata  luas  islet  pankreas  pada  kelompok perlakuan terus meningkat seiring dengan penambahan dosis  ekstrak  daun  wungu.  Berdasarkan  data  yang diperoleh,  dosis  ekstrak  daun  wungu  yang  paling menunjukkan  efek  perbaikan  nyata  pada  morfologi pankreas  adalah  200  mg/kgBB  dengan  rerata  luas  islet pankreas tertinggi dibandingkan dengan kelompok lain.
Sasaran utama dari pengobatan diabetes melitus tipe  1  adalah  untuk  mempertahankan  sel  β  pankreas pada stadium awal dan memulihkan sel β pankreas pada stadium  lanjut.  Gambaran  perbaikan  histopatologi pankreas  pada  kelompok  perlakuan  dipengaruhi  oleh adanya  zat  aktif  dalam  ekstrak  daun  wungu  berupa alkaloid dan flavonoid. Kedua senyawa ini memiliki efek sitoprotektif  karena  perannya  sebagai  antioksidan 11 alami.
Alkaloid  berperan  dalam  induksi  proses diferensiasi sel progenitor pankreas menjadi sel β yang
12 aktif  memproduksi  insulin.   Alkaloid  yang  juga  dapat ditemukan  dalam  ekstrak Ervatamia  microphylla ini terbukti  meningkatkan  proses  diferensiasi  dan 13 regenerasi  sel  β  pankreas in  vivo pada  tikus  diabetes. Efek  protektif  senyawa  flavonoid  yang  merupakan antioksidan  dan  antiinflamasi  terhadap  sel  β  pankreas adalah  dengan  menstimulasi  jalur pro-survival dan menginhibisi ekspresi protein yang bersifat pro-apoptotic . Flavonoid  akan  meningkatkan  kapasitas  antioksidan pada sel β pankreas sehingga proses akumulasi ROS dan lipid  peroksidase  pada  sel  β  pankreas  akan  terhambat. Proses tersebut kemudian mencegah terjadinya autofagi, apoptosis, dan nekrosis pada sel β pankreas. Flavonoid juga  berperan  penting  dalam  meningkatkan  fungsi mitokondria dan menstimulasi amplifying pathways pada 14 sekresi  insulin  ( cAMP/PKA dan PLC/PKC signalling ).
Pengaruh Ekstrak Daun Wungu Terhadap Luas Islet Pankreas Tikus Wistar Diabetes Melitus
Gambar 1. K-1 (H&E, 400x)
Gambar 2. K-2 (H&E, 400x)
Gambar 3. K-3 (H&E, 400x)
Gambar 4. K-4 (H&E, 400x)
Glukotoksiksitas,  lipotoksiksitas,  dan  paparan  stres oksidatif  kronis  pada  diabetes  akan  meningkatkan ekspresi  gen pro-apoptotic  (caspase) dan  mengakibatkan down regulation gen yang bersifat anti apoptosis (protein Bcl-2)  pada  sel  β.  Flavonoid  menghambat  proses perubahan  ekspresi  gen-gen  tersebut  sehingga
15 progresivitas  apoptosis  pada  sel  β  dapat  dicegah. Flavonoid juga terlibat dalam menurunkan kadar sitokin IL-1β serum dan IL-6/1β yang kemudian menghambat ekspresi  iNOS (inducible  Nitric  Oxide  Synthase) dan mencegah  overproduksi  NO  yang  mana  bisa 16 menyebabkan kerusakan sel.
Hasil  penelitian  yang  didapatkan  sesuai  dengan hipotesis awal yang menyatakan bahwa terdapat adanya pengaruh  ekstrak  daun  wungu (Graphtophyllum  pictum (L.)  Griff) terhadap  luas  islet  pankreas  tikus  Wistar diabetes melitus yang diberi perlakuan dengan kontrol. Peningkatan signifikan pada luas islet pankreas ini bisa terjadi  karena  adanya  pembentukan  sel  β  baru  melalui proses  stimulasi  diferensiasi  maupun  peningkatan survival dari sel β pankreas itu sendiri. Pengaruh berupa perbaikan  gambaran  histopatologi  pankreas  ini berbanding lurus dengan peningkatan dosis pemberian ekstrak daun wungu. Penelitian sebelumnya oleh Okky Prameswari  (2014),    Joni  Tandi  (2018),  Wanodya  Ayu (2018),  dan  Susanti  (2019)  juga  membuktikan  bahwa senyawa  alkaloid  dan  flavonoid  yang  terdapat  pada daun pandan, daun kelor, kulit lidah buaya, dan biji labu kuning tidak hanya mencegah progresivitas kematian sel beta  pulau  Langerhans  pankreas,  namun  juga  dapat
meregenerasi  sel  beta  pankreas  tikus  diabetes  yang sudah rusak oleh induksi aloksan. Hal ini menunjukkan bahwa hasil penelitian ini sejalan dengan penelitian yang telah  ada  sebelumnya,  dimana  alkaloid  dan  flavonoid dapat  memperbaiki  morfologi  pankreas  diabetes 6,17–19 melitus.
Selama penelitian berlangsung, terdapat beberapa keterbatasan  dan  kendala  yang  dihadapi.  Tikus  Wistar tidak mengalami kondisi hiperglikemi dalam satu waktu sehingga  diperlukan  pengecekan  berulang  kali  untuk memastikan  bahwa  semua  tikus  sudah  mengalami diabetes melitus. Uji fitokimia untuk melihat kandungan pasti  dari  ekstrak  daun  wungu  juga  belum  dilakukan. Selain itu, penelitian ini juga tidak melihat efek terhadap jumlah  sel  β  pankreas  secara  langsung  namun  hanya menjadikan  luas  islet  pankreas  secara  keseluruhan sebagai perwakilan dari tanda kerusakan serta perbaikan sel β pankreas. Hal ini terkait dengan metode pengecatan Hematoxylin-Eosin yang  digunakan  pada  penelitian  ini tidak  memungkinkan  untuk  membedakan  sel-sel  yang menjadi bagian dalam satu islet pankreas.

## SIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  terdapat  adanya perbedaan  ukuran  luas  islet  pankreas  yang  signifikan pada tikus Wistar diabetes melitus induksi aloksan yang mendapatkan  ekstrak  daun  wungu (Graphtophyllum pictum (L.) Griff) dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB, dan 200  mg/kgBB  peroral  setelah  perlakuan  dibandingkan
Medica Hospitalia | Vol. 8, No. 1, Maret 2021
2
Luas Islet Pankreas (µm )

## TABEL 2
Analisis Deskriptif dan Uji Hipotesis
K1 K2 0,000* K3
0,029 Mean ± SD
11835,41 ± 2754,43
# p s p t p 0,038 Kelompok Median (Min–Max)
12191,33 (7466,05 – 16517,83) 869,27 ± 382,62 799,54 (354,02 – 1752,95) 0,009 0,131 1 K4 0,000* 0,020 19615,27 ± 2206,97 0,064 19275,47 (16468,57 – 24144,58) 13087,09 ± 1827,24 12582,11 (10129,01 – 19591,46) 0,005 0,113 0,000* Uji Kruskal–Wallis luas islet pankreas, p =0,000* ( p <0,05)
Keterangan : s Uji normalitas Shapiro–Wilk t Uji normalitas Shapiro–Wilk data transformasi # Uji Mann–Whitney terhadap kelompok K1 *Signifikan ( p <0,05)
dengan kontrol. Efek perbaikan oleh ekstrak daun wungu berbanding lurus dengan peningkatan dosis pemberian. Saran  untuk  penelitian  selanjutnya  adalah  perlunya penelitian lebih dalam mengenai efek terapeutik ekstrak d a u n   w u n g u   d e n g a n   m e t o d e   p e n g e c a t a n imunohistokimia parameter jumlah sel β pankreas secara lebih  spesifik  serta  uji  fitokimia  untuk  mengetahui kandungan pasti dari ekstrak daun wungu.

## DAFTAR PUSTAKA
1. WHO.  Global  Report  on  Diabetes  Executive  Summary [Internet].  2016.  Available  from:  www.who.int/diabetes/ global-report
th 2. IDF Diabetes Atlas. 8  ed. International Diabetes Federation. 2017.
3. Menteri Kesehatan Republik Indonesia. Hasil Utama Riskesdas 2 0 1 8   [ I n t e r n e t ] .   2 0 1 8 .   A v a i l a b l e   f r o m : https://www.litbang.kemkes.go.id/hasil-utama-riskesdas- 2018/
4. Chandrashekharaiah  KS.  Antioxidant  and  type  II  diabetes- related enzyme inhibit on properties of few selected medicinal plants. Biomed Pharmacol J. 2013;6(2):341–7.
5. Budiaji  A,  Nani  H.  Identification  Compound  Contained  in Extract  Methanol  Leaf  Wungu  (Graptophyllum  Pictum  (  L  .) Griff). 2018;3(03):961–4.
6. Prasmewari  OM,  Widjanarko  SB.  Uji  Efek  Ekstrak  Air  Daun Pandan  Wangi  Terhadap  Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah Dan  Histopatologi  Tikus  Diabetes  Mellitus.  J  Pangan  dan Agroindustr. 2014;II(2):16–27.
7. World  Health  Organization.  Research  Guidelines  for Evaluating  the  Safety  and  Efficacy  of  Herbal  Medicines [Internet].  Manila:  WHO  Regional  Office  for  the  Western P a c i f i c ;   1 9 9 3 .   4 4   p .   A v a i l a b l e   f r o m : https://apps.who.int/iris/handle/10665/207008
8. National Research Council of the National Academy. Guide for th the Care and Use of Laboratory Animals [Internet]. 8  ed. Vol. 46.  Washington  DC:  The  National  Academies  Press;  2011. 267–268  p.  Available  from:  http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ pubmed/21595115
9. Allen-Worthington  KH,  Brice  AK,  Marx  JO,  Hankenson  FC. Intraperitoneal  injection  of  ethanol  for  the  euthanasia  of laboratory mice (mus musculus)and rats (rattus norvegicus). J Am Assoc Lab Anim Sci. 2015;54(6):769–78.
10. McHugh ML. Interrater reliability: the kappa statistic. Biochem Med  [Internet].  2012;22(3):276–82.  Available  from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3900052/
11. Singh  P.  Pharmacognostical  evaluation  of  aerial  parts  of Graptophyllum pictum (L.) Griff. (Syn: Justicia picta Linn.): A well-known  folklore  medicinal  plant  Title.  Anc  Sci  Life [ I n t e r n e t ] .   2 0 1 5 ; 3 4 ( 4 ) : 2 2 3 – 2 2 9 .   A v a i l a b l e   f r o m : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4535071/
12. Oh  YS.  Plant-derived  compounds  targeting  pancreatic  beta cells  for  the  treatment  of  diabetes.  Evidence-based Complement Altern Med. 2015;2015:12.
13. Kawakami  M,  Hirayama  A,  Tsuchiya  K,  Ohgawara  H, Nakamura M, Umezawa K. Promotion of β-cell differentiation by the alkaloid conophylline in porcine pancreatic endocrine cells.  Biomed  Pharmacother  [Internet].  2010;64(3):226–31. Available from:doi.org/10.1016/j.biopha.2009.09.025
14. Ghorbani  A,  Rashidi  R,  Shafiee-Nick  R.  Flavonoids  for preserving  pancreatic  beta  cell  survival  and  function:  A mechanistic  review.  Biomed Pharmacother.  2019;111(October 2018):947–57.
15. Al-Ishaq  RK,  Abotaleb  M,  Kubatka  P,  Kajo  K,  Büsselberg  D. Flavonoids and their anti-diabetic effects: Cellular mechanisms and  effects  to  improve  blood  sugar  levels.  Biomolecules. 2019;9(9).
16. Vinayagam  R,  Xu  B.  Antidiabetic  properties  of  dietary flavonoids:  A  cellular  mechanism  review.  Nutr  Metab [ I n t e r n e t ] .   2 0 1 5 ; 1 2 ( 1 ) : 1 – 2 0 .   A v a i l a b l e   f r o m : http://dx.doi.org/10.1186/s12986-015-0057-7
17. Tandi J, Rahmawati R, Isminarti R, Lapangoyu J. Efek Ekstrak Biji Labu Kuning Terhadap Glukosa, Kolesteroldan Gambaran Histopatologi  Pankreas  Tikus  Hiperkolesterolemia-Diabetes. Talent Conf Ser Trop Med. 2018;1(3):14451.
18. Chandradevi  WA,  Avesina  M,  Anggriyawanti  DP,  Purnama ER.  Pemanfaatan  Daun  Kelor  (Moringa  oleifera)  Terhadap Pemulihan Struktur Pankreas Mencit Diabetik. Biotropic J Trop Biol. 2018;2(2):85–92.
19. Susanti R, Setiadi E, Peniati E, Article H. The Effect of Aloe Vera Peel  Extract  on  Histopathology  of  Rat  Pancreas  Induced  by Alloxan. Biosaintifika J Biol Biol Educ. 2019;11(3):311–7.
Pengaruh Ekstrak Daun Wungu Terhadap Luas Islet Pankreas Tikus Wistar Diabetes Melitus