ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 18 (3) (2015) : 110 – 115
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi

## Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Aktivitas Inhibisi α -Glukosidase dan Identifikasi Senyawa dalam Fraksi Aktif Bunga Rosella ( Hibiscus Sabdariffa L. )
Irma Yunitasari a , Agustina L. N. Aminin a , Khairul Anam a
a Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang * Corresponding author: k.anam@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: α -glukosidase inhibitors, rosella (Hibiscus sabdariffa
L), flavonoid
Roselle is a plant that can be used to combat disease diabetes mellitus (DM), the DM in therapy can be done by inhibiting the α -glucosidase enzyme work. This research aims to get active fraction of the extract of the flower as a potential α glucosidase inhibitor and identify the types of compounds in the active fraction. The methods used in this research is  the  use  of  extraction  solvents  methanol-HCl  0.1%,  followed  by  oil  chromatography stationary  phase  column  with  sephadex  LH-20  motion  and  phase  water-methanol fraction A (100:0), fraction B (75:25), the fraction C (50:50), fraction D (25:75), fraction E (0:100),  and  test  activity  inhibition  of α -glucosidase  rosella  flower  faction.  The identification of active compounds which has the highest value inhibitory activities of α - glucosidase  use  TLC  and  patches  appearence  (AlCl 3 ,  FeCl 3 and  ammonia  vapours),  the determination of the levels of relative (%) a component of the active fraction with TLC scanner, and characterization of the main compound in the active fraction using UV-Vis spectrophotometer and FTIR. Research showed that faction C (50:50) is a active fraction which  assigns  grades  activity  inhibition α -glukosidase  highest  (31,163  %)  at concentrations 1000 ppm, and compound main in faction C is 3,3’,4’ -trihydroksiflavone and 5,7,3 ’,4’ -tetrahydroksiflavone with each levels relatively 23,33 % and 24,52 %.

## A b s t r a k
Kata Kunci: Inhibisi α - glukosidase, rosella ( Hibiscus sabdariffa L ), flavonoid
Rosela  merupakan  tanaman  yang  dapat  digunakan  untuk  mengatasi  penyakit  diabetes melitus  (DM),  dalam  terapi  DM  dapat  dilakukan  dengan  menghambat  kerja  enzim α - glukosidase. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan fraksi aktif dari ekstrak bunga rosella  yang  berpotensi  sebagai  inhibitor α -glukosidase  dan  mengidentifikasi  jenis senyawa dalam fraksi aktif tersebut . Metode yang digunakan pada penelitian ini adalah ekstraksi  menggunakan  pelarut  metanol-HCl  0,1%,  dilanjutkan  fraksinasi  secara kromatografi kolom dengan fasa diam sephadex LH-20 dan fasa gerak air-metanol fraksi A  (100:0),  fraksi  B  (75:25),  fraksi  C  (50:50),  fraksi  D  (25:75),  fraksi  E  (0:100),  dan  uji aktivitas  inhibisi α -glukosidase  fraksi  bunga  rosella.  Identifikasi  senyawa  aktif  yang memberikan nilai aktivitas penghambatan α -glukosidase paling tinggi dengan KLT dan penampak bercak (AlCl 3 , uap amoniak dan FeCl 3 ), penentuan kadar relatif (%) komponen dari fraksi aktif dengan TLC scanner, dan karakterisasi senyawa utama dalam fraksi aktif menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan FTIR. Hasil penelitian menunjukan  bahwa fraksi  C  (50:50)  merupakan  fraksi  aktif  yang  memberikan  nilai  aktivitas  inhibisi α - glukosidase  paling  tinggi  (31,163  %)  pada  konsentrasi  1000  ppm,  dan  senyawa  utama dalam frak si C adalah 3,3’,4’ - trihidroksiflavon dan 5,7,3’,4’ -tetrahidroksiflavon dengan masing-masing kadar relatif 23,33% dan 24,52 %.
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 18 (3) (2015) : 110 – 115

## 1. Pendahuluan
Diabetes  Melitus  (DM)  adalah  kondisi  konsentrasi glukosa dalam darah secara kronis lebih tinggi daripada nilai  normal  (hiperglikemia)  akibat  tubuh  kekurangan insulin  atau  fungsi  insulin  tidak  efektif.  Meningkatnya jumlah  penderita  diabetes  melitus  setiap  tahunnya menuntut  perhatian  serius  dalam  terapi  penyakit tersebut.  Terapi  dengan  obat-obat  sintetis  sering memberi  efek  samping  dan  biaya  tinggi  akibat pengobatan jangka panjang. Obat tradisional merupakan salah  satu  alternatif  dalam  pengobatan,  karena  efek sampingnya  yang  dianggap  lebih  kecil  dan  biaya  yang lebih murah [1, 2].
Salah  satu  metode  pengobatan  penyakit  diabetes melitus adalah dengan menghambat aktivitas enzim α - glukosidase  dengan  suatu  senyawa  inhibitor α - glukosidase. Senyawa ini mampu mengurangi peningkatan  kadar  glukosa  darah  pada  penderita diabetes.  Senyawa  dari  fitokimia  tanaman  termasuk polifenol  memiliki  aktivitas  dalam  menghambat aktivitas enzim α -glukosidase [3].
Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) merupakan salah satu jenis  tanaman  obat  yang  secara    tradisional  digunakan sebagai  obat  antidiabetes  [4].  Kandungan  kimia  yang terdapat  dalam  kelopak  bunga  rosella  adalah  saponin, tanin  dan  flavonoid  yang  terdiri  dari  flavonol  dan antosianin  [5].  Penelitian  mengenai  kelopak  bunga rosella sebagai obat antidiabetes diantaranya dilaporkan oleh Urifah [6] bahwa ekstrak air kelopak bunga rosella memiliki  aktivitas  penghambatan  enzim α -glukosidase sebesar  82,6-93,5  %.  Ademiluyi  dan  Oboh  [7] membandingkan  ekstrak  air  bunga  rosella  merah memilki  aktivitas  antidiabetes  lebih  besar  (IC 50 25,2 µg/ml)    jika  dibandingkan  dengan  bunga  rosella  putih. Widarsa  dan  Wiranatha  [8]  juga  melaporkan  ekstrak bunga  rosella  dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah mencit diabetes, diperkuat oleh penelitian  Setiawan [9] yang menyatakan bahwa ekstrak bunga rosella juga dapat menurunkan  kadar  gula  darah  tikus  putih.  Penelitian – penelitian  tersebut  telah  memberikan  bukti  bahwa ekstrak  kelopak  bunga  rosella  dapat  berfungsi  sebagai obat antidiabetes.
Penelitian  terdahulu  umumnya  hanya  melaporkan aktivitas dari ekstrak bunga rosella dalam menginhibisi aktivitas  enzim α -glukosidase,  namun  sampai  saat  ini belum pernah dilaporkan mengenai aktivitas dari fraksi- fraksinya.  Sehingga  pada  penelitian  ini  dilakukan  uji aktivitas  inhibisi α -glukosidase  dari  masing-masing fraksi dan diidentifikasi kandungan kimia yang terdapat dalam fraksi aktif.

## 2. Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  antara  lain  peralatan  gelas, chamber, pipet kapiler, vial, neraca analitik (Kern-870), rotary  vacuum  evaporator  (Buchii  b-480),  plat  tetes, penangas,  kolom  kromatografi,  hairdrayer,  microplate, multipipet,  pipet  mohr,  bulb,  lampu  UV,  freezedryer (Eyela),  TLC  Scanner  (Camag  TLC  Scanner  3),
spektrofotometer  UV-Vis  (T60  U  Spectrometer  PG Instrument) dan FTIR (FTIR spectrophotometer 8201PC Shimadzu).  Kelopak  bunga  rosella,  metanol,  natrium hidroksida,  natrium  asetat,  asam  borat,  alumunium klorida,  HCl  2N,  amoniak  25%,  kloroform,  etil  asetat, etanol,  n-Heksana,  pereaksi  Dragendorff,  pereaksi Meyer,  serbuk  magnesium,  besi(III)  klorida,  anhidrida asam  asetat,  amil  alkohol,  eter,  asam  sulfat  pekat, akuades, p- nitrofenil- α -D-glukopiranosida, buffer posfat  pH  7.0,  enzim α -glukosidase,  larutan  natrium karbonat, glukobay, Silika Gel 60HF 254 , sephadex LH-20.

## Preparasi dan Ekstraksi sampel
Kelopak bunga rosella (Hibiscus sabdariffa.) diperoleh dari  perkebunan  Wonosobo,  Jawa  tengah,  Indonesia. Kelopak rosella (Hibiscus sabdariffa. ) dibersihkan dari biji, kemudian  di  potong-potong  sehingga  di  dapatkan kelopak bunga rosella dengan ukuran yang lebih kecil.
Sebanyak 1,5 kg simplisia dimaserasi menggunakan 4,5  L  campuran  pelarut  metanol  dengan  4,5  ml  HCl (1000:1).  Maserasi  dilakukan  dengan  perendaman simplisia  selama  3x24  jam.  Filtrat  yang  diperoleh dipekatkan menggunakan rotary vacuum evaporator pada suhu  60 o C.  Ekstrak  kental  rosella  yang  diperoleh disimpan  pada  suhu  4 o C  untuk  digunakan  pada  tahap selanjutnya.

## Penapisan Fitokimia
Penapisan  fitokimia  dilakukan  pada  ekstrak  pekat Rosela (Hibiscus  sabdariffa  L.) .  Senyawa  yang diidentifikasi  adalah  senyawa  golongan  alkaloid, flavonoid,  saponin,  tanin  dan  triterpenoid/steroid  dan antosianin  menggunakan  metode  yang  dikembangkan oleh Farnsworth [10].

## Fraksinasi Ekstrak Metanol-HCl Bunga Rosella.
Sebanyak 2 gram ekstrak metanol-HCl bunga rosella difraksinasi  menggunakan  kromatografi  kolom  dengan fasa  diam  sephadex  LH-20  dan  fasa  gerak  air:metanol berturut-turut  dengan  perbandingan  fraksi  A  (100:0), fraksi  B  (75:25),  fraksi  C  (50:50),  fraksi  D  (25:75)  dan fraksi  E  (0:100).  Fraksinasi  dilakukan  dengan menggunakan 1 L pelarut sebagai fasa gerak. Hasil fraksi diuapkan  menggunakan rotary  evaporator untuk menghilangkan  pelarut  metanol  dan  dihilangkan  sisa pelarut  airnya  dengan    menggunakan  metode freeze- dryer. Fraksinasi  dilakukan  10  kali  pengulangan  untuk memperbanyak hasil fraksi.
Uji Aktivitas Inhibisi α -glukosidase dari Fraksi dan Ekstrak Bunga Rosella (Sancheti dkk., 2009).

## Preparasi sampel
Sampel yang diuji dilarutkan dalam pelarut dimetil sulfoksida (DMSO) dengan konsentrasi 1 % (b/v).
Uji in vitro ekstrak dan fraksi bunga rosela terhadap aktivitas α -glukosidase.
Setiap  sampel    dibuat  larutan  induk  1000    ppm. Setiap  sampel  diencerkan  menjadi  500  ppm.  Setiap konsentrasi  sampel  dipipet  sebanyak  10  µL  kedalam microplate ditambahkan  25  µL  substrat  ( p- nitrophenil-
α -D-glucopyranoside),  50  µL buffer posfat  pH  7.0,  dan 25 µL enzim α -glukosidase. Kemudian diinkubasi selama 30  menit  pada  suhu  37˚C. Reaksi  enzim  dihentikan dengan penambahan 100 µL natrium karbonat dan dibaca absorbannya pada  panjang gelombang  410 nm. Larutan standar  (glukobay)  dibuat  dengan  konsenterasi  1  ppm, 0,5  ppm,  0,1  ppm,  0,01  ppm  dan  0,001.  Persen  inhibisi dapat dihitung dari persamaan :
% Inhibisi = (C−S) C x 100%
Keterangan:
S = Absorbansi sampel

## C = Absorbansi blanko

## Identifikasi Komponen Kimia Fraksi Aktif
Fraksi  paling  aktif,  diidentifikasi  komponen penyusunnya  menggunakan  metode  kromatografi  lapis tipis  (KLT),  pemisahan  dilakukan  secara  kromatografi lapis tipis dengan eluen etanol:kloroform (4:1). Dari hasil KLT  noda  dilakukan  uji  penampak  bercak  AlCl 3 5% (dalam  etanol),  FeCl 3 dan  NH 3 ,  dan  noda  yang  paling dominan dari fraksi aktif  dikerok  dan  dilarutkan dalam metanol p.a.

## Penentuan Kadar Komponen Penyusun Fraksi Aktif dan Uji Kemurnian
Kromatografi lapis tipis dengan menggunakan eluen etanol:kloroform  (4:1)  selanjutnya  dilakukan  pengujian terhadap  kadar  relatif  area  noda  (%)  dengan menggunakan  TLC Scanner ( λ :365  nm).  KLT  preparatif dilakukan  untuk  noda  yang  memiliki  kadar  relatif  (%) paling  besar.  Isolat  yang  diperoleh    dilakukan  uji kemurnian  dengan  menggunakan  kromatografi  lapis tipis dengan berbagai pengembang.

## Karakterisasi Isolat Murni
Isolat  murni  yang  didapat  dikarakterisasi  dengan menggunakan  spektrofotometer UV-Vis dengan penambahan  pereaksi  geser: NaOH  2M,  AlCl 3 ,AlCl 3 /HCl, NaOAC, NaOAC/H 3 BO 3 [11] dan Spektrofotometer FTIR .

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Ekstraksi Bunga rosella
Pembuatan ekstrak bunga rosella dilakukan dengan metode  maserasi  menggunakan  pelarut  metanol-HCl 0,1%. Pemilihan pelarut ini karena metanol mempunyai sifat  polar,  dimana  flavonoid  bersifat  polar  sehingga akan  mudah  larut  dalam  pelarut  yang  bersifat  polar. Penambahan  HCl  sebanyak  0,1%  dalam  metanol  untuk mengkondisikan  pelarut  dalam  suasana  asam.  Hal  ini bertujuan  agar  diperoleh  senyawa  dalam  bentuk aglikonnya  [12]  dan  senyawa  yang  diisolasi  merupakan senyawa yang larut atau stabil dalam suasana asam kuat. Maserasi  dilakukan  sampai  warna  kulit  dari  kelopak bunga  rosella  yang  semula  berwarna  merah  menjadi pudar.  Filtrat  hasil  maserasi  dipekatkan  dengan  rotary vacuum  evaporator  sehingga  diperoleh  ekstrak  kental berwarna merah tua dengan rendemen sebesar 4,07 %.

## Penapisan Fitokimia Ekstrak Rosella
Penapisan fitokimia terhadap kelopak bunga rosella ( Hibisdicus  sabdariffa  L. )  bertujuan  untuk  mengetahui jenis  senyawa  metabolit  sekunder  pada  kelopak  bunga rosella.  Golongan  kimia  yang  diidentifikasi  pada penelitian ini antara lain alkaloid, flavonoid, antosianin, triterpenoid/steroid  dan  saponin.  Hasil  dari  penapisan fitokimia tertera pada Tabel 1.
Tabel 1: Hasil penapisan fitokimia ekstrak rosella
(Hibiscus sabdariffa L.) Senyawa Metabolit Sekunder Hasil Uji (+)/(-) Flavonoid + Antosianin + Alkaloid - Triterpenoid dan Steroid - Saponin + Tanin +
Hasil  penapisan  fitokimia  menunjukan  ekstrak Metanol-HCl 0,1 %  positif terhadap senyawa flavonoid, antosianin,  tanin,  dan  saponin,  serta  negatif  untuk  uji alkaloid,  triterpenoid  dan  steroid.    Hasil  penelitian  ini sesuai  dengan  laporan  yang  menyatakan  bahwa penapisan  fitokimia  ekstrak  tanaman  rosella  ( Hisbiscus sabdarifa  L. )  mengandung  flavonoid,  saponin  dan  tanin [13].

## Fraksinasi Ekstrak Bunga Rosella
Fraksinasi dilakukan terhadap ekstrak bunga rosella secara  kromatografi  kolom  gravitasi.  Fase  diam  yang digunakan  adalah  sephadex  LH-20  dan  fase  gerak air:metanol  (100:0;  75:25;  50;50;  25:75;  0:100). Pemisahan  menggunakan  fase  diam  sephadex  LH-20 adalah  pemisahan  berdasarkan  ukuran  partikel  [14]. Urutan elusi yang dilakukan pada penelitian diharapkan dapat memisahkan dari senyawa yang ukurannya besar ke  senyawa  yang  lebih  kecil.  Kromatografi  kolom sephadex ini sangat efektif untuk memisahkan golongan glikosida  dan  senyawa  yang  berat  molekul  besar  [15]. Fraksi  yang  diperoleh  sebanyak  5  jenis  (fraksi  A,B,C,D dan  E)  dengan  intensitas  warna  yang  berbeda  setiap fraksinya.  Hal  ini  menandakan  bahwa  fraksi  memiliki kandungan  kimia  yang  berbeda.  Eluat  yang  dihasilkan diuapkan  pelarut  metanolnya  menggunakan  rotary vacuum  evaporator.  Setelah  bebas  dari  metanol kemudian dilakukan freeze drying untuk menghilangkan pelarut airnya.

## Tabel 2: Hasil berat dari  freeze drying
Sampel fraksinasi (air:metanol) Berat hasil freeze drying (gr) A  (100:0) 15,5358 B (75:25) 0,12 C (50:50) 0,06 D (25:75) 0,0167 E (0:100) Tidak diperoleh
Sampel  yang  diperoleh  berbentuk  serbuk,  hal  ini agar  dapat  di  hitung  massanya  untuk  dilakukan
pengujian  terhadap  aktivitas  inhibisi α -glukosidase. Pengujian  aktivitas  inhibisi α -glukosidase  dilakukan pada  fraksi  A,  B,  dan  C.  Fraksi  D  dan  E  tidak memungkinkan  dilakukan  uji  karena  berat  massa  yang diperoleh sangat sedikit.
Uji Aktivitas Inhibisi α -glukosidase
Pada  penelitian  ini  uji  aktivitas  inhibisi α - glukosidase dilakukan untuk mengetahui persen hambat enzim α -glukosidase dari setiap fraksi dan ekstrak bunga rosella.  Pengujian  aktivitas  inhibisi  dilakukan  secara in vitro dengan  menggunakan  substrat p- nitrofenil- α -D- glukopiranosida  ( p -NPG)  dan  enzim α -glukosidase. Aktivitas enzim diukur berdasarkan hasil absorbansi p - nitrofenol yang berwarna kuning, semakin berkurangnya intensitas  warna  kuning  maka  semakin  besar  aktivitas inhibisi dari suatu sampel.
Gambar 1. Persamaan reaksi enzimatik α -glukosidase dan p – nitrofenil- α -D glukopiranosida [16]
Pengujian  aktivitas  inhibisi α -glukosidase  dari ekstrak  dan  ketiga  fraksi  memberikan  hasil  yang beragam,  hal  tersebut  dapat  terjadi  karena  kandungan masing-masing  senyawa  dalam  fraksi  berbeda.  Hasil pengujian aktivitas inhibisi α -glukosidase adalah:
Gambar 2. Grafik hasil uji kemampuan inhibisi ekstrak dan fraksi (A, B, C).
Pengujian dilakukan pada konsentrasi 500 ppm, dan 1000  ppm,  hal  ini  bertujuan  untuk  melihat  pengaruh konsentrasi terhadap daya hambat dari masing-masing fraksi. Besarnya nilai inhibisi dipengaruhi oleh tingginya konsentrasi  senyawa  inhibitor.  Semakin  tinggi konsentrasi senyawa inhibitor akan semakin besar pula kemampuan  inhibisinya.  Hasil  yang  diperoleh,  fraksi  C memiliki  aktivitas  paling  besar  yaitu  pada  konsentrasi 1000  ppm  dapat  menghambat  sebesar  31,163%.  Hal tersebut  diduga  karena  pengaruh  dari  komponen  kimia yang  terdapat  pada  fraksi  aktif  memiliki  efek  sinergis dalam menghambat enzim α -glukosidase [17].
Glukobay  merupakan  obat  yang  digunakan  untuk menghambat  kerja  enzim  yang  memecah  karbohidrat menjadi  glukosa.  Glukobay  pada  konsentrasi  10  ppm dapat menghambat kerja enzim sebesar 91 %.  Perbedaan
kemampuan  inhibisi  dari  glukobay  dan  fraksi  C disebabkan  karena  glukobay  mengandung  senyawa murni  akarbosa  yang  terbukti  dapat  menginhibisi α - glukosidase  melalui  mekanisme  inhbitor  kompetitif, sedangkan  fraksi  C  merupakan  hasil  fraksinasi  dari ekstrak yang masih berupa senyawa campuran sehingga kemampuan inhibisinya kurang optimal.

## Identifikasi Kandungan Kimia
Identifikasi kandungan kimia dilakukan pada fraksi C  yang  merupakan  fraksi  yang  memiliki  nilai  inhibisi paling  besar.  Identifikasi  senyawa  dilakukan  dengan pemisahan menggunakan KLT dengan pengembang yang digunakan adalah  etanol:kloroform (4:1) menghasilkan dua spot noda dengan nilai Rf 0,69 dan Rf 0,76 spot yang terbentuk  dideteksi  dengan  sinar  UV  pada  panjang gelombang 254 nm dan 365 nm. Hasil noda KLT pada Rf 0,69  dan  0,76  pada  lampu  UV  254  nm  berwarna  ungu muda, sedangkan pada UV 365 nm Rf 0,69 berwarna biru muda dan Rf 0,76 berwarna biru kehijauan.
Identifikasi  golongan  flavonoid  dilakukan  dengan senyawa  pembanding  quersetin  yang  merupakan  jenis flavonoid yang paling sering dijumpai pada pemeriksaan flavonoid [18], penampak bercak dengan AlCl 3 5% dalam etanol  terjadi  perubahan  warna  menjadi  kuning  pada lampu  UV  365  nm  dan  dengan  uap  amoniak  terjadi perubahan  menjadi  biru  berflouresensi.  Perubahan  ini menandakan  kedua  noda  yang  terdapat  pada  fraksi  C merupakan senyawa golongan flavonoid [18].
Identifikasi  senyawa  golongan  tanin  dilakukan dengan menggunakan penampak bercak FeCl 3 . Senyawa pembanding  yang  digunakan  adalah  ekstrak  teh  yang mengandung  senyawa  tanin. Hasil  yang  diperoleh  pada kromatogram tidak menunjukan warna hijau kelabu pada fraksi  C,  namun  pada  kromatogram  pembanding menunjukan warna hijau kelabu pada lampu UV 254 nm. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  dalam  fraksi  C  tidak mengandung senyawa golongan tanin [18].
Penentuan Kadar Relatif Komponen Penyusun Fraksi C
Identifikasi  dengan  menggunakan  TLC Scanner adalah  untuk  mengetahui  kadar  relatif  (%)  komponen area  dari  setiap  noda.  Hasil  TLC  Scanner  didapatkan  7 noda  yang  terdeteksi  pada  lampu  UV  365  nm  yang terdapat pada Tabel 3.
Tabel 3: Hasil TLC Scanner fraksi C dengan panjang gelombang 365 nm. No Rf Luas area Kadar Relatif Area (%) 1. 0,41 704,4 6,54 2. 0,45 1217,6 11,30 3. 0,56 821,6 7,62 4. 0,69 2513,8 23,33 5. 0,76 2642,6 24,52 6. 0,81 1986,0 18,43 7. 0,91 891,3 8,27
Hasil dari TLC Scanner kadar relatif (%) pada Rf 0,69 dan Rf 0,76 memberikan kadar relatif (%) area terbesar, sehingga  dilakukan  KLT  preparatif  pada  noda  tersebut. Hasil  KLT  preparatif  selanjutnya  dilarutkan  dalam pelarut  metanol  dan  diperoleh  isolat  A  (Rf  0,69)  dan Isolat  B  (Rf  0,76).  Uji  kemurnian  dilakukan  dengan
menggunakan  berbagai  macam  pelarut  diantaranya etanol:etil  asetat  (7:3),  metanol:kloroform  (2:1), etanol:aseton (3:1) dan metanol:n-hexana (5:1). Isolat  A dan isolat B menunjukan adanya noda tunggal pada sinar UV  365  nm  dengan  demikian  dapat  dianggap  bahwa kedua isolat merupakan senyawa murni.

## Karakterisasi Isolat dalam Fraksi C
Isolat  A  dan  Isolat  B  dikarakterisasi  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  dengan  pereaksi  geser  dan FTIR.  Penambahan  pereaksi  geser  bertujuan  untuk mengetahui letak gugus hidroksi bebas pada inti senyawa flavonoid  dengan  cara  mengamati  pergeseran  puncak serapan yang terjadi [11].

## Karakterisasi isolat A (Rf 0,69)
Berdasarkan  data  spektrofotometer UV-Vis isolat  A memiliki dua pita serapan yaitu pada 380 nm (pita I) dan 250  (Pita  II).  Menurut  Markham  [11]  senyawa  yang memiliki pola pita tersebut digolongkan sebagai senyawa flavonol  3-OH  bebas.  Pergeseran  yang  terjadi  dan penafsirannya ditunjukan pada Tabel 4.

## Tabel 4: Penafsiran pereaksi geser isolat A
Pelarut λ max (nm) Pergeseran (nm) Penafsiran Pita I Pita II Pita I Pita II MeOH 380 250 - NaOH 401 - 21 - 3,4’ OH NaOH 5’ 392 249 9 1 NaOAC 382 285 2 35 o-dihidroksi pada cincin B NaOAC/H 3 BO 3 392 - 12 - AlCl 3 361 250 19 - AlCl 3 / HCl 359 249 2 1 Tidak ada gugus 5-OH
Berdasarkan  data  hasil  analisis  spektrofotometer UV-Vis dengan  menggunakan  pereaksi  geser  diduga senyawa  flavonoid  dari  isolat  A  adalah  3,3’,4’ - trihidroksiflavon. Karakterisasi
selanjutnya
menggunakan  FTIR,  isolat  A  menunjukan  gugus – OH (3410,15 cm -1 ), C-H alifatik (2947,23 cm -1 ; 2839,22 cm -1 ), C=O  (1651,07  cm -1 ),  C=C  (1458,18  cm -1 ),  C-H  tekuk (1419,61 cm -1 ), C-O-C (111,00 cm -1 ), C-O (1026,13 cm -1 ), dan  benzen  tersubstitusi  (671,23  cm -1 ).  Spektra  FTIR isolat A ditunjukan pada gambar 3.
Gambar 3. Spektogram FTIR isolat A fraksi C ekstrak bunga Rosella.

## Karakterisasi isolat B (Rf 0,76)
Berdasarkan  data  spektrofotometer UV-Vis isolat  A memiliki dua pita serapan yaitu pada 331 nm (pita I) dan 277  (Pita  II).  Menurut  Markham  [11],  senyawa  yang memiliki pola pita tersebut digolongkan sebagai senyawa flavon.  Pergeseran  yang  terjadi  dan  penafsirannya ditunjukan pada Tabel 5.

## Tabel 5: Penafsiran pereaksi geser isolat B
Pelarut λ max (nm) Pergeseran (nm) Penafsiran Pita I Pita II Pita I Pita II MeOH 331 277 - - NaOH 380 - 49 - 4 OH NaOH 5’ 385 249 54 1 NaOAC 382 285 49 8 7-OH NaOAC/H 3 BO 3 381 287 50 10 o-dihidroksi pada cincin B AlCl 3 375 290 44 - 5-OH AlCl 3 /HCl 361 266 38 1 o-dihidroksi pada cincin B
Berdasarkan  data  hasil  analisis  spektrofotometer UV-Vis dengan  menggunakan  pereaksi  geser  diduga senyawa  flavonoid  dari  isolat  B  bunga  rosella  adalah 5,7,3’,4’ -tetrahidroksiflavon.
Karakterisasi menggunakan  FTIR  isolat  B  menunjukan  gugus – OH (3349,34 cm -1 ), C-H alifatik (2946,73 cm -1 ; 2834,61 cm - 1 ),  C=O  (1657,92  cm -1 ),  C=C  (1450,28  cm -1 ),  C-H  tekuk (1450,28 cm -1 ), C-O-C (1113,65 cm -1 ), C-O (1024,36 cm -1 ), dan  benzen  tersubstitusi  (678,73  cm -1 ).  Spektra  FTIR isolat B ditunjukan pada gambar 4.
Gambar 4. Spektogram FTIR isolat B fraksi C ekstrak bunga Rosella

## 4. Kesimpulan
Semua  fraksi  mampu  menginhibisi α -glukosidase, tetapi  fraksi  C  memiliki  aktivitas  paling  besar  yaitu sebesar  31,163  %    pada  konsentrasi  1000  ppm.  Dalam fraksi  C  terdapat  7  komponen  senyawa,  dan  2  senyawa yang  diidentifikasi  adalah  isolat  A  yang  diduga  sebagai senyawa  3,3’,4’ -trihidroksilflavon  dengan  kadar  relatif 23,33 %  dan  isolat B  diduga  sebagai senyawa  5,7,3’,4’ - tetrahidroksilflavon dengan kadar relatif 24,52 %.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  Tutik Siswanti, Okid Parama Astirin, Tetri Widiyani, Pengaruh  ekstrak  temu  putih  (Curcuma  zedoaria Rosc.)  terhadap  spermatogenesis  dan  kualitas
spermatozoa mencit (Mus musculus L.), BioSMART , 8, 1, (2003) 38-42
[2]  Ika Pratiwi Khosimah Adinata, Khairul Anam, Dewi Kusrini,  Identifikasi  Senyawa  Metabolit  Sekunder Fraksi  Aktif  Daun  Jarak  Pagar  (Jatropha  curcas  L.) dan Uji Aktivitas Larvasida terhadap Larva Nyamuk Aedes aegypti, Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , 16, 2,
(2013) 42-45
[3]  D Wynne Griffiths, Gwyn Moseley, The effect of diets containing  field  beans  of  high  or  low  polyphenolic content  on  the  activity  of  digestive  enzymes  in  the intestines  of  rats, Journal  of  the  Science  of  Food  and Agriculture , 31, 3, (1980) 255-259
[4]  Sawarni  Mardiah,  Reki  W  Ashadi,  Arifah  Rahayu, Budidaya dan Pengolahan Rosela Si Merah Segudang Manfaat, Agromedia Pustaka. Jakarta , 23, (2009)
[5]  D  Dahiru,  OJ  Obi,  H  Umaru,  Effect  of  Hibiscus sabdariffa  calyx  extract  on  carbon  tetrachloride induced liver damage, Biokemistri , 15, 1, (2003) 27-33
[6]  Ilul  Urifah,  (In  Vitro)  Inhibition  of α -Amylase, α - Glucosidase  and  Lipase  by  Roselle  (Hibiscus Sabdariffa)  Extracts  by  In  Vitro  Method,  Tehnologi Pertanian, Institu Pertanian Bogor, Bogor
[7]  Adedayo  O  Ademiluyi,  Ganiyu  Oboh,  Aqueous extracts  of  Roselle  (Hibiscus  sabdariffa  Linn.) varieties  inhibit α -amylase  and α -glucosidase activities  in  vitro, Journal  of  medicinal  food ,  16,  1,
(2013) 88-93
[8]  Tangking  Widarsa,  Gede  Wiranatha,  Pemberian Ekstrak  Methanol Daun Paliasa  Menurunkan  Kadar Glukosa  Darah  Tikus  Hiperglikemik  (METHANOL EXTRACT  OF  PALIASA  LEAVES  DECREASES  BLOOD GLUCOSE  LEVEL  HYPERGLYCEMIC  RATS), Jurnal Veteriner , 14, 4, 495-500
[9]  Rudi Setiawan, Pengaruh pemberian ekstrak kelopak bunga  rosela  (hibiscus  sabdariffa  l)  terhadap penurunan  kadar  gula  darah  tikus  putih  (rattus norvegicus)  yang  diinduksi  aloksan,  Biologi, Universitas Sebelas Maret, Solo
[10] Norman R. Farnsworth, Biological and phytochemical  screening  of  plants, Journal  of Pharmaceutical  Sciences ,  55,  3,  (1966)  225-276 http://dx.doi.org/10.1002/jps.2600550302
[11]  KR Markham, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, ITB, Bandung, 1988.
[12] Suhad  S  Humadi,  Viorica  Istudor,  Quantitative analysis  of  bio-active  compound  in  Hibiscus sabdariffa L. extracts. Note I Quantitative analysis of flavonoids, in, Farmacia, 2008.
[13] Tina  Rostinawati,  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol  Bunga  Rosella  (Hibiscus  sabdariffa  L.) terhadap  Escherichia  coli,  Salmonella  typhi  dan Staphylococcus aureus  dengan  Metode  Difusi  Agar, Universitas Padjajaran, Bandung
[14] Reuben  Alexander  Day,  Arthur  Louis  Underwood, Analisa Kimia Kuantitatif, Erlangga, 1994.
[15] AV  Kristanti,  NS  Aminah,  M  Tanjung,  B  Kurniadi, Buku  Ajar  Fitokimia.  Laboratorium  Kimia  Organik Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Airlangga,  in,  Airlangga  University Press, Surabaya, 2008.
[16] Sri  Sugiwati,  Siswati  Setiasih,  Efy  Afifah, Antihyperglycemic  Activity  of  the  Mahkota  Dewa Leaf  Extracts  as  an  Alpha-Glucosidase  Inhibitor, Makara Journal of Health Research , (2010) 74-78
[17] Adolfo Andrade-Cetto, Jaime Becerra-Jiménez, René Cárdenas-Vázquez, Alfa-glucosidase-inhibiting activity  of  some  Mexican  plants  used  in  the treatment  of  type  2  diabetes, Journal  of Ethnopharmacology , 116, 1, (2008) 27-32 http://dx.doi.org/10.1016/j.jep.2007.10.031 [18] Jeffrey Barry Harborne, Metode fitokimia,
Padmawinata  K,  S.  I,  Institut  Teknologi  Bandung, Bandung, 1987.