## PHYTOCHEMICAL SCREENINGS AND THIN LAYER CHROMATOGRAPHY ANALYSIS OF ETHANOL EXTRACT JERUJU LEAF ( HYDROLEA SPINOSA L.)
Dyera Forestryana 1 , Arnida 2
1 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Borneo Lestari Banjarbaru Jl. Kelapa Sawit 8 Bumi Berkat Banjarbaru, Kalimantan Selatan
2 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA Universitas Lambung Mangkurat Jl. Brigjen H. Hasan Basri, Banjarmasin Utara, Kota Banjarmasin,
Kalimantan Selatan
Corresponding Author: Dyera Forestryana (dyeraforestryana21@gmail.com)

## ARTICLE HISTORY
Received: 16 May 2020 Revised: 21 July 2020                    Accepted: 27 July 2020

## Abstract
Jeruju ( Hydrolea spinosa L.) is a South Borneo wetland endemic plant that is believed by the local community as a medicinal plant for antipyreutic This study aims to identify the chemical compounds contained in Jeruju leaf extract. Extraction was carried out by maceration method using 96% ethanol solvent, then phytochemical screening and affirmation  tests  using  thin-layer  chromatography  (TLC)  using  the  mobile  phase  of chloroform:  ethanol:  aquades  (20:1:0.5;  25:1:0.5;  27:1:0.5;  15:2:1;  8:2:1  and  6:2:1) and n-hexane: ethyl acetate in the ratio of 8:2; 7:3 and 6:4, the appearance of stains was  carried  out  at  UV  254  nm,  366  nm  and  with  10%  H 2 SO 4 spraying.  The  TLC analysis of Jeruju leaf extract shows that the ethanol extract of  Jeruju leaf contains tannins, alkaloids, flavonoids, steroids, and saponins.
Key words: Hydrolea spinosa L., jeruju, maceration, thin layer chromatography (TLC)

## SKRINING FITOKIMIA DAN ANALISIS KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS  EKSTRAK ETANOL DAUN JERUJU ( HYDROLEA SPINOSA L.)

## Abstrak
Jeruju ( Hydrolea spinosa L.) merupakan tumbuhan endemic lahan basah Kalimantan Selatan  yang  dipercaya  masyarakat  setempat  sebagai  tumbuhan  berkhasiat  obat yang  digunakan  sebagai  penurun  demam.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengidentifikasi senyawa kimia yang terkandung pada ekstrak daun jeruju.  Ekstraksi dilakukan  dengan  metode    maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%,  kemudian dilakukan  skrining  fitokimia  dan  uji  penegasan  dengan  menggunakan  kromatografi lapis  tipis  (KLT)  menggunakan  fase  gerak  kloroform  :  etanol  :  aquades  (20:1:0,5; 25:1:0,5;  27:1:0,5;  15:2:1;  8:2:1  dan  6:2:1)  dan    n-heksan  :  etil  asetat  dengan perbandingan 8:2; 7:3 dan 6:4, penampakan noda dilakukan pada UV 254 nm, 366 nm  dan  dengan  peyemprotan  H 2 SO 4 10%.    Analisa  KLT  ekstrak  daun  Jeruju menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  jeruju  mengandung  tanin,  alkaloid, flavonoid, steroid dan saponin.
Kata kunci: Jeruju, Hydrolea spinosa L., maserasi, kromatografi lapis tipis (KLT)

## Pendahuluan
Indonesia terkenal dengan banyaknya tumbuhan yang memiliki khasiat  sebagai obat. Sayangnya, belum banyak yang menggali dan meneliti tumbuhan obat tersebut. Penggunaan  tumbuhan  obat  oleh  masyarakat  pun  terbilang  tidak  sedikit,  masih banyak  masyarakat  kita  yang  beralih  pada  pengobatan  tradisional  menggunakan tumbuhan  obat.  Tanaman  digunakan  sebagai  obat  karena  mengandung  senyawa kimia  yang  bermanfaat  dan  kebanyakan  belum  diketahui  kandungan  senyawanya. Senyawa  tersebut  dapat  berfungsi  secara  mandiri  atau  bersama-sama  dengan senyawa  lain  untuk  menimbulkan  efek  secara  fisiologis  dan  psikologis  terhadap manusia 1 .
Kalimantan  Selatan sebagai  salah  satu provinsi  di  Indonesia,  merupakan salah satu  tempat  yang  banyak  ditumbuhi  oleh  tumbuhan  obat.  Sebagian  besar  lahan Kalimantan Selatan merupakan daerah berair (rawa) yang memiliki banyak spesies tumbuhan dan hanya sedikit tumbuhan yang telah diteliti khasiatnya.  Tumbuhan rawa yang  diyakini  memiliki  khasiat  obat  adalah  jeruju.  Jeruju  merupakan  salah  satu tumbuhan rawa yang dikenal oleh masyarakat setempat sebagai obat antimalaria dan antipiretik. Namun, masih belum banyak dilakukan pengujian terhadap senyawa kimia yang  terkandung  pada  tumbuhan  jeruju.  Kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  merupakan suatu  analisis  sederhana  yang  dapat  digunakan  untuk  melakukan  penegasan terhadap  senyawa  kimia  yang  terkandung  pada  tumbuhan  disamping  skrining fitokimia.  Nilai  Rf  dan  warna  noda  yang  diperoleh  pada  KLT  dapat  memberikan identitas senyawa yang terkandung 2 .
Profil  kromatogram  suatu  tanaman  obat  perlu  dilakukan  untuk  mengumpulkan data mengenai profil kromatogram berbagai tanaman yang berpotensi sebagai obat sehingga dapat digunakan sebagai standardisasi dan pengawasan mutu obat bahan alam. Selain itu, setiap tanaman memiliki profil kromatogram yang khas dan berbeda dengan  tanaman  lain.  Hal  ini  dapat  digunakan  sebagai  acuan  untuk  megetahui keberadaan dan kebenaran suatu tanaman dalam obat bahan alam sehingga dapat mencegah  terjadinya  pemalsuan  dan  penambahan  bahan  kimia  obat  (BKO).  Oleh karena itu penelitian ini bertujuan untuk melakukan identifikasi senyawa kimia dengan kromatrografi lapis tipis yang terdapat pada ekstrak etanol daun jeruju.

## Metode

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  neraca  analitik  (Ohaus Explorer Pro dan GF-3000), vacum rotary evaporator (Ika-Werke), seperangkat alat maserasi,  waterbath (Mammert), oven (Mammert), lampu UV 254 nm dan 366 nm, bejana kromatografi.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  serbuk  daun  jeruju,  aquades (H 2 O),  n-heksan  (C 6 H 14 )  pa,  kloroform  (CHCl 3 )  pa  (Merck),  etanol  (C 2 H 5 OH)  96% teknis, silika gel Merck Kieselgel 60 F 254 , asam sulfat (H 2 SO 4 ) 10% v/v, asam klorida (HCl) 10% v/v.

## Prosedur Ekstraksi maserasi daun jeruju
Ekstraksi  daun  jeruju  dilakukan  dengan  cara  maserasi.  Serbuk  daun  jeruju ditimbang sebanyak 157,2 gram, kemudian dimaserasi dengan pelarut etanol 96%. Sampel  tersebut  direndam  selama  3  kali  24  jam  sambil  dilakukan  pengadukan. Ekstrak  cair  yang  diperoleh  tersebut  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator kemudian dilanjutkan menggunakan waterbath hingga diperoleh ektrak kental daun jeruju.

## Identifikasi kimia ekstrak etanol daun jeruju
Identifikasi  alkaloid .  Sebanyak  0.1  gram  ditambahkan  10  mL  kloroform  dan ditambahkan  beberapa  tetes  amonia.  Fraksi  kloroform  dipisahkan  dan  diasamkan dengan  beberapa  tetes  H 2 SO 4 pekat.  Fraksi  asam  diambil  dan  dibagi  menjadi  3 tabung,  kemudian  ditambahkan  pereaksi  Dragendorf,  Meyer,  dan  Wagner. Keberadaan  alkaloid  ditandai  dengan  terbentuknya  endapan  putih  pada  pereaksi Meyer, endapan merah pada pereaksi Dragendorf, dan endapan coklat pada endapan pereaksi Wagner 3 . Identifikasi tanin . Sebanyak 0,1 g ekstrak kental dilarutkan ke dalam metanol, selanjutnya  ditambahkan  2-3  tetes  larutan  FeCl3  1%.  Sampel  dinyatakan  positif mengandung tanin jika terbentuk warna hijau gelap atau biru kehitaman 4 . Identifikasi saponin . Ekstrak daun  jeruju ditambahkan 5 mL air, kocok dalam tabung reaksi, terbentuk busa stabil (busa setinggi 1 cm dan stabil selama 30 menit) 5 . Identifikasi  flavanoid .  Ekstrak  sebanyak  2  mL  dipanaskan,  kemudian ditambahkan  etanol.  Ke  dalam  larutan  ditambahkan  serbuk  magnesium  dan ditambahkan  HCl.  Terbentuk  larutan  berwarna  merah  jingga  menunjukkan  adanya flavonoid 6 . Identifikasi  steroid .  Identifikasi  steroid  dilakukan  dengan  menggunakan pereaksi  Libermann-Burchard  yaitu  sampel  (5  gram)  diekstraksi  dengan  pelarut  n- heksan  (±  10  mL),  kemudian  disaring.  Ekstrak  yang  diperoleh  diambil  sedikit  dan dikeringkan  di  atas  papan  noda  test,  ditambahkan  tiga  tetes  anhidrida  asetat  dan kemudian satu tetes asam sulfat (H 2 SO 4 ) pekat, adanya senyawa golongan steroid ditandai dengan munculnya warna biru hijau 7 .

## Identifikasi ekstrak etanol daun jeruju dengan metode KLT
Ekstrak etanol Jeruju ditotolkan pada jarak ± 1 cm dari tepi bawah plat dengan pipa kapiler kemudian dielusi dengan fase gerak berupa:
1.  -heksan : etil asetat dibuat dalam perbandingan 8:2; 7:3  dan 6:4.
2.  kloroform  :  etanol  :  aquades  dibuat  dalam  perbandingan  20:1:0,5;  25:1:0,5  dan 27:1:0,5
Noda yang terbentuk diamati di bawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 dan 366 nm.

## Hasil
Tabel I. Hasil uji identifikasi senyawa kimia daun jeruju
No Uji Hasil Keterangan 1. Alkaloid (+) (+) (+) (Mayer) Ada endapan putih kekuning-kuningan (Wagner) Ada endapan coklat kemerahan (Dragendorf) Ada endapan jingga 2. Tanin (+) Mengandung tanin, larutan berwarna biru kehitaman 3. Saponin (+) Terdapat busa bertahan 5 menit
4. Flavanoid (+) Mengandung flavanoid, larutan berwarna merah jingga
5. Steroid (+) Warna biru kehijauan
Tabel  2. Hasil  KLT  ekstrak  etanol  daun  jeruju  dengan  fase  gerak  non  polar n- heksan: etil asetat)
Penampak Bercak n -heksan : etil asetat Fase Gerak 6:4 7:3 8:2 Noda Warna Rf Noda Warna Rf Noda Warna Rf  = 254 nm 1 2 3 K HT K 0,98 0,90 0,80 1 2 3 4 5 6 H HT H K HT K 0,90 0,87 0,76 0,72 0,54 0,36 1 2 3 4 5 K H K H K 0,72 0,69 0,53 0,38 0,27  = 366 nm 1 2 3 K K K 0,90 0,84 0,54 1 2 3 4 H K H K 0,90 0,78 0,54 0,42 1 2 3 4 U K H K 0,69 0,54 0,36 0,29 H 2 SO 4 * 1 2 3 4 5 6
7 8 U MM H MM MM MM MM H 0,96 0,90 0,81 0,64 0,40 0,33 0,18 0,09 1 2 3 4 5 6 7 U H U J MM H U 0,90 0,87 0,76 0,69 0,54 0,53 0,13 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 J MM J H U J H MM H H 0,98 0,85 0,80 0,71 0,67 0,58 0,54 0,42 0,36 0,29
Keterangan : *) Noda disemprot menggunakan H 2 SO 4 10 % dengan pemanasan U = Ungu, H = Hijau,  J = Jingga, HT = Hijau Tua,  K = Kuning, MM = Merah Magenta
Tabel 3. Hasil KLT ekstrak etanol daun jeruju dengan fase gerak polar  (kloroform:
etanol: aquades)
Penampak Becak kloroform: etanol: aquades Fase Gerak 20:1:0,5 25:1:0,5 27:1:0,5 Noda Warna Rf Noda Warna Rf Noda Warna Rf  = 254 nm 1 2 3 4 5 H K K K H 0,98 0,96 0,76 0,71 0,24 1 2 3 4 H K H H 0,98 0,76 0,51 0,05 1 2 3 4 H H K H 0,98 0,94 0,54 0,14  = 366 nm 1 2 3 H **K J 0,98 0,78 0,24 1 2 3 4 H **K H H 0,98 0,76 0,51 0,05 1 2 3 4 5 H H J **K H 0,98 0,94 0,78 0,54 0,14 H 2 SO 4 * 1 2 3 4 5 6 J U MM MM J MM 0,94 0,90 0,85 0,76 0,67 0,60 1 2 3 4 5 6 H MM U HM J MM 0,90 0,82 0,76 0,73 0,64 0,45 1 2 3 4 5 6 H H J U J MM 0,90 0,87 0,76 0,67 0,62 0,45
Keterangan : *) Noda disemprot menggunakan H 2 SO 4 10 % dengan pemanasan **) Fluoresensi
U = Ungu, H  =  Hijau, J = Jingga,  HM = Hijau Muda, K  = Kuning, MM  = Merah Magenta
Tabel 4. Hasil KLT ekstrak etanol daun jeruju dengan fase gerak polar  (kloroform: etanol: aquades)
Penampak Bercak kloroform: etanol: aquades Fase Gerak 15:2:1 8:2:1 6:2:1 Noda Warna Rf Noda Warna Rf Noda Warna Rf  = 254 nm 1 2 3 4 H K K H 0,96 0,90 0,84 0,64 1 2 3 H K H 0,98 0,84 0,69 1 2 H K 0,98 0,94  = 366 nm 1 2 3 4 H K **J H 0,96 0,90 0,84 0,64 1 2 3 4 H K **J H 0,98 0,96 0,82 0,69 1 2 3 H **J **J 0,98 0,96 0,33 H 2 SO 4 * 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 H U MM U K J H U U U U U U 0,98 0,89 0,85 0,84 0,82 0,73 0,64 0,62 0,54 0,45 0,33 0,20 0,25 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 H U MM U J U U H U U U U U U 0,98 0,90 0,85 0,82 0,80 0,67 0,64 0,60 0,54 0,49 0,40 0,25 0,13 0,09 1 2 3 4 5 6 U U U U J U 0,90 0,73 0,67 0,49 0,42 0,20
Keterangan : *) Noda disemprot menggunakan H 2 SO 4 10 % dengan pemanasan **) Fluoresensi
U = Ungu, H =  Hijau , J  = Jingga,  K= Kuning, MM    =  Merah Magenta
7
8 9 10 11 12 J U MM U MM J 0,49 0,36 0,25 0,20 0,13 0,09 7 8 U MM 0,20 0,09 7 8 9 J J U 0,40 0,32 0,09
Gambar  1. Kromatogram  dengan  fase  gerak  =  n-heksan  :  etil  asetat  (6:4)  (A);  n- heksan : etil asetat (7:3) (B); n-heksan : etil asetat 8:2 (C).
Gambar  2. Kromatogram    dengan  fase  gerak  =  kloroform  :  etanol  :  aquades (20:1:0,5)  (A);  kloroform  :  etanol  :  aquades  (25:1:0,5)  (B);  kloroform  : etanol : aquades (27:1:0,5) (C)
a b c b c a a c b
Fase gerak : n-heksan : etil asetat
Fase diam  :
silika gel Merck Kieselgel 60 F 254
Penampak noda :
(a) sinar UV 254 nm
(b) sinar UV 366 nm (c) H 2 SO 4 10% B A C a b c c
a b a b c Fase gerak : kloroform : etanol : aquades
Fase diam : silika gel Merck
Kieselgel 60 F 254
Penampak noda : (a) sinar UV 254 nm (b) sinar UV 366 nm (c) H 2 SO 4 10 % C B A
Gambar 3. Kromatogram  dengan fase gerak = kloroform : etanol : aquades (15:2:1) (A); kloroform : etanol : aquades (8:2:1) (B); kloroform : etanol : aquades (6:2:1) (C)

## Pembahasan
Berdasarkan skrining senyawa kimia yang dilakukan dengan reaksi warna dapat diketahui bahwa ekstrak etanol daun  jeruju mengandung senyawa tanin, alkaloid, flavonoid,  steroid  dan  saponin  (Tabel  1).  Terbentuknya  endapan  pada  uji  Mayer, Wagner  dan  Dragendorff  berarti  dalam  ekstrak  etanol  jeruju  terdapat  alkaloid. Tujuan penambahan H 2 SO 4 adalah karena alkaloid bersifat basa sehingga biasanya diekstrak dengan pelarut yang mengandung asam 8 . Pada pengujian menggunakan pereaksi  Mayer  akan  terbentuk  endapan  putih,  karena  ada  pembentukan  ikatan komplek  antara  kalium-alkaloid.  Pada  uji  alkaloid  dengan  pereaksi  Mayer, diperkirakan nitrogen pada alkaloid akan bereaksi dengan ion logam K+ dari kalium tetraiodomerkurat(II)  membentuk  kompleks  kalium-alkaloid  yang  mengendap 9 . Sedangkan dengan pereaksi Wagner, ditandai dengan perubahan warna dari coklat ke kuning sedangkan pada pereaksi Dragendorf ditandai dengan adanya endapan berwarna jingga 10 .   Secara organoleptik,  daun yang memiliki rasa yang pahit dan sepat terbukti mengandung alkaloid dan ini sesuai dengan rasa pahit daun jeruju.
Pada pengujian saponin, dilakukan dengan uji busa untuk membuktikan adanya saponin dengan adanya busa yang stabil di air. Saponin merupakan glikosida yang banyak terdapat di tumbuhan 11 . Busa yang dihasilkan pada uji saponin disebabkan karena  adanya  glikosida  yang  dapat  membentuk  busa  dalam  air  dan  terhidrolisis menjadi  glukosa  dan  senyawa  lainnya 12 . Pemeriksaan  steroid  dilakukan  dengan pereaksi  Liebermann-Burchard  memberikan  hasil  positif  berwarna  biru. Hal  ini didasari oleh kemampuan senyawa triterpenoid dan steroid membentuk warna oleh H 2 SO 4 dalam pelarut asam asetat anhidrid. Perbedaan warna yang dihasilkan oleh triterpenoid dan steroid disebabkan perbedaan gugus pada atom C-4 13 . Flavonoid  dan  tanin  merupakan  bagian  dari  senyawa  fenolik.  Flavonoid mempunyai tipe yang beragam dan terdapat dalam bentuk bebas (aglikon) maupun
a b c a b c a b c A B C Fase gerak : kloroform : etanol : aquades
Fase diam : silika gel Merck Kieselgel 60 F 254
Penampak noda : (a) sinar UV 254 nm (b) sinar UV 366 nm (c) H 2 SO 4 10 %
terikat sebagai glikosida. Aglikon polimetoksi bersifat non polar, aglikon polihidroksi bersifat  semi  polar,  sedangkan  glikosida  flavonoid  bersifat  polar  karena mengandung  sejumlah  gugus  hidroksil  dan  gula 8,14 .  Oleh  karena  itu  golongan flavonoid  dapat  tertarik  dalam  pelarut  metanol  yang  bersifat  universal.  Tanin ditunjukkan dari adanya perubahan warna setelah penambahan FeCl 3 yang dapat bereaksi  dengan  salah  satu  gugus  hidroksil  pada  senyawa  tanin.  Penambahan FeCl 3 menghasilkan  warna  hijau  kehitaman  yang  menunjukkan  adanya  tanin terkondensasi 15 . Senyawa FeCl 3 dalam air akan terionisasi menghasilkan Fe 3+ dan Cl - .  Kation  Fe 3+ akan  membentuk  ikatan  kovalen  koordinasi  dengan  atom  O  dari gugus  hidroksi,  menghasilkan  senyawa  kompleks  berwarna.  Hal  ini  didukung dengan adanya perubahan warna pada larutan sampel menjadi hijau kehitaman 15 . Uji  penegasan  dilakukan  untuk  memastikan  kandungan  senyawa  pada  daun jeruju  dengan  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT).  Data  yang  diperoleh adalah berupa nilai Rf dan warna noda pada kromatogram sebagai hasil dari elusi lempeng  KLT  yang  akan  memberikan  informasi  mengenai  senyawa  yang  diduga terkandung pada ekstrak etanol daun jeruju. Nilai Rf yang diperoleh menunjukkan perbedaan sifat senyawa dan dapat digunakan untuk mengidentifikasi senyawa 16 . Senyawa  yang  mempunyai  Rf  lebih  besar  berarti  mempunyai  kepolaran  yang rendah, begitu juga sebaliknya. Hal tersebut dikarenakan fasa diam bersifat polar. Senyawa  yang  lebih  polar  akan  tertahan  kuat  pada  fasa  diam,  sehingga menghasilkan nilai Rf yang rendah. Pemisahan pada KLT terjadi karena persaingan antara  fase  diam  dan  fase  gerak  untuk  mengikat  komponen  yang  tedapat  pada campuran  yang  akan  dipisahkan.  Persaingan  tersebut  disebabkan  oleh  polaritas yang  dimiliki  oleh  fase  diam  dan  komponen  cairan.  Komponen  yang  memiliki polaritas yang sama dengan fase diam akan berinteraksi lebih kuat dan akibatnya komponen tersebut akan terjerap oleh fase diam 16 . Deteksi bercak dilakukan dibawah lampu UV dengan panjang gelombang pendek (254 nm) dan panjang gelombang panjang (366 nm) dan sebagai penampak noda digunakan  larutan  asam  sulfat  (H 2 SO 4 )  10%.  Pengamatan  pada  lampu  UV didasarkan  pada  prinsip  dimana  pada  gelombang  pendek  254  nm,  lempeng memberikan  flouresensi  sedangkan  sampel  berwarna  gelap,  noda  yang  tampak timbul karena adanya interaksi antara sinar UV dengan indikator fluoresensi yang terdapat  pada  lempeng  KLT.  Gelombang  panjang  366  nm  memberikan  keadaan yang  sebaliknya  dimana  noda  memberikan  flouresensi  dan  lempeng  berwarna gelap,  noda  yang  tampak  timbul  karena  adanya  daya  interaksi  antara  sinar  UV dengan  gugus  kromofor  yang  terikat  oleh  auksokrom  yang  ada  pada  noda 17 . Penggunaan penampak noda H 2 SO 4 10% didasarkan pada kemampuan asam sulfat yang memiliki sifat oksidator untuk merusak gugus kromofor zat aktif sampel yang menyebabkan  panjang  gelombang  berubah  ke  arah  yang  lebih  panjang sehingga noda menjadi tampak oleh mata.
Kromatografi  lapis  tipis  ekstrak  etanol  daun  jeruju  dilakukan  dengan menggunakan fase gerak non polar n-heksan : etil asetat (6:4; 7:3 dan 8:2),  fase gerak polar digunakan kloroform : etanol : aquades (20: 1: 0,5; 25: 1: 0,5, 27: 1: 0,5, 15: 2: 1, 8: 2: 1 dan 6: 2: 1). Pemilihan fase gerak didasarkan pada kemampuan fase gerak untuk mengelusi senyawa. Nilai Rf masing-masing fase gerak non polar dapat dilihat pada Tabel 2. Eluen n-heksan dan etil asetat memiliki sifat kepolaran yang berbeda.  N-heksan  adalah  eluen  yang  bersifat  non  polar  dan  etil  asetat  bersifat polar.  Berdasarkan  gambar  kromatogram  pelarut  non  polar  n-heksan  :  etil  asetat dengan tingkat kepolaran yang berbeda (Gambar 1), diperoleh pemisahan yang baik dikarenakan noda memisah dengan jelas dengan semakin non polarnya sifat eluen. Terlihat pada eluen dengan perbandingan 8 : 2 noda memisah dengan baik. Noda yang diperoleh akan semakin banyak sebanding dengan sifat ke non polaran dari eluen yang digunakan. Pemilihan n-heksan : etil asetat karena dapat memisahkan
senyawa  non  polar,  semipolar  maupun  polar,  sehingga  bercak  hasil  elusi  dapat diidentifikasi  golongan  senyawanya.  Eluen  yang  baik  ialah  eluen  yang  bisa memisahkan senyawa dalam jumlah yang banyak yang ditandai dengan munculnya noda 16 .
Pada Gambar 1, noda yang terbentuk tidak berekor dan jarak antara noda satu dengan yang lainnya jelas. Pada UV 254 nm, 366 nm dan penyemprotan dengan menggunakan  H 2 SO 4 10  %  diperoleh  noda  dengan  jumlah  yang  hampir  sama banyak jika dibandingkan pada dengan eluen polar. Pada perbandingan            6 : 4, senyawa diduga flavonoid nampak berwarna kuning pada 254 nm dengan nilai adalah Rf 0,98 dan 0,8  dan berwarna kuning pada 366 nm pada Rf 0,84 dan 0,54. Pada reaksi semprot diperoleh warna ungu dengan Rf 0,96, merah magenta dengan Rf 0,9; 0,64; 0,4; 0,33 dan 0,18. Pada perbandingan 7 : 3 senyawa flavonoid ditandai dengan noda berwarna kuning pada 254 nm dengan nilai Rf 0,72 dan 0,36, pada 366 nm dengan Rf 0,42 berwarna kuning dan dengan reaksi semprot berwarna ungu dengan  Rf  0,76  dan  jingga  pada  Rf  0,69,  sedangkan  pada  perbandingan  8  :  2 diperoleh noda berwarna kuning pada Rf 0,72 dan setelah disemprot dengan H 2 SO 4 10% diperoleh noda berwarna merah magenta pada Rf 0,85 dan  hijau dengan Rf 0,42. Hal ini sesuai dengan yang disebutkan oleh Markham (1988), dimana senyawa flavonoid  menunjukkan  kuning.  Pembanding  yang  biasa  digunakan  untuk menentukan nilai Rf suatu flavonoid adalah senyawa quarsetin karena merupakan senyawa  yang  banyak  terdapat  pada  daun  tumbuhan  yang  memberikan  warna kuning  dengan  nilai  Rf  0.64 18 .  Warna  yang  timbul  akibat  reaksi  semprot  ini kemungkinan mengandung golongan flavonoid seperti khalkon, auron, flavanon dan katekin 19 .
Uji penegasan pada senyawa tanin  dengan eluen n-heksan dan etil asetat tidak begitu banyak memberikan noda, hanya pada eluen dengan perbandingan       8 : 2 pada 254 nm dengan noda berwarna hijau dengan Rf 0,38 dan pada 366 nm  dengan Rf 0,36 sedangkan dengan reaksi semprot diperoleh nilai Rf 0,36 dan 0,29 dengan noda  berwarna  hijau,  hal  ini    dikarenakan  karena  pada  senyawa  tanin  terdapat banyak  gugus  OH  sehingga  menyebabkan  sifatnya  polar,  sehingga  akan  mudah terelusi  pada  eluen  yang  sifatnya  polar 20 .  Adanya  senyawa  saponin  pada perbandingan 6 : 4 ditandai dengan  noda berwarna hijau pada Rf 0,9 dan kuning pada 366 nm, sedangkan pada perbandingan 7 : 3 diperoleh nilai Rf 0,87 dan 0,76 pada 254 nm dengan noda berwarna hijau dan noda berwarna kuning pada 366 nm dengan  Rf  0,78  sedangkan  pada  perbandingan  8  :  2  tidak  ditemukan  adanya saponin. Senyawa steroid pada eluen dengan perbandingan  7 : 3 berwarna hijau dengan  Rf  0,9  pada  254  nm  dan  pada  366  nm  serta  berwarna  ungu  dengan menggunakan reaksi semprot. Pada perbandingan 8 : 2, senyawa steroid ditandai dengan noda berwarna hijau pada Rf 0,69 dan pada reaksi semprot berwarna ungu dan  hijau  dengan  nilai  Rf  berturut-turut    0,67  dan  0,71.  Pereaksi  H 2 SO 4 dapat digunakan  untuk  mendeteksi  keberadaan  steroid.  Terbentuknya  noda  berwarna ungu-dan  warna  biru-hijau  pada  plat  KLT  menandakan  bahwa  ekstrak  tersebut mengandung  steroid.  Senyawa  alkaloid  pada  eluen    dengan  perbandingan  8  :  2 diperoleh noda berwarna kuning dengan Rf 0,53  pada 254 nm dan  Rf 0,53 pada 366 nm, sedangkan pada reaksi semprot diperoleh  noda warna jingga dengan Rf berturut-turut  adalah  0,98;  0,8;  0,54  dan  0,58.  Pelarut  n-heksan  dikenal  efektif terhadap alkaloid selain  itu alkaloid dapat juga larut dalam pelarut semi polar (etil asetat)  dan  polar  (metanol) 8 .  Alkaloid  sukar  larut  dalam  air  tetapi  larut  dalam kloroform,  etil  asetat,  aseton dan  alkohol.  Alkaloid  dalam  tumbuh-tumbuhan pada umumnya  berada  dalam  bentuk  garamnya  sehingga  hanya  larut  dalam  pelarut anorganik (kloroform, etil asetat, aseton, benzena, alkohol, etanol dan metanol).
Berdasarkan kepolaran pelarut yang digunakan, yaitu n-heksan dan etil asetat, etil  asetat  mampu  menarik  senyawa  steroid,  alkaloid,  glikosida  dan  aglikon,
sedangkan  n-heksan  mampu  menarik  senyawa  seperti  sterol,  terpenoid,  aglikon, dan lignin 21 .  Hal ini tentunya sesuai dengan beberapa warna yang dihasilkan pada eluen n-heksan dan etil asetat yaitu mengandung alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan steroid. Noda terlihat jelas memisah pada eluen n-heksan : etil asetat dengan perbandingan  8  :  2,  karena  perbandingan  antara  eluen  n-heksan  dan  eluen  etil asetat lebih besar sehingga campuran kedua eluen ini bersifat kurang polar (Gambar 1). Pada eluen n-heksan dan etil asetat (8:2) setelah penyemprotan dengan H 2 SO 4 10%,  noda  akan  memperlihatkan  warnanya,  hal  ini  mengindikasikan  bahwa senyawa yang terkandung di dalam ekstrak etanol daun jeruju sangatlah beragam. Penyemprotan  menggunakan  H 2 SO 4 akan  memberikan  informasi  terkait  jenis flavanoid  yang  terdapat  pada  esktrak  etanol  daun  jeruju.  Beberapa  penelitian menyebutkan bahwa komponen senyawa yang terkandung pada tumbuhan adalah bersifat polar 21 . Senyawa seperti antosianin, karoten, katekin, tanin, diterpen, flavan, polimer  flavan,  fenol,  prosianidin,  steroid,  dan  triterpen  merupakan  senyawa- senyawa yang dapat larut dalam pelarut polar hingga non-polar 8 . Pemisahan pada eluen polar kloroform : etanol : air dapat dilihat pada Gambar 2 dan Gambar 3. Noda tidak memisah dengan baik karena masih terdapat noda yang berekor  dimana  penyebab  noda  yang  berekor  dapat  disebabkan  oleh  konsistensi ekstrak yang ditotolkan pada lempengan agak cair. Data nilai Rf untuk eluen polar polar kloroform : etanol : air dapat dilihat pada Tabel 3 dan 4. Pada perbandingan 20 : 1 : 0,5, adanya senyawa alkaloid ditandai dengan noda berwarna kuning pada 254 nm dengan Rf 0,96 dan berwarna jingga setelah disemprot H 2 SO 4 dengan Rf secara  berturut-turut  adalah  0,09;0,49;0,67  dan  0,94.  Sedangkan  pada perbandingan  25  :  1  :  0,5,  diperoleh  noda  berwarna  jingga  pada  Rf  0,64  dengan pereaksi  semprot . Sedangkan  pada  perbandingan    27  :  1  :  0,5,  pada  366  nm diperoleh  noda  berwana  jingga  dengan Rf  0,78  dan  Rf  0,32;  0,40;  0,62  dan  0,76 pada deteksi dengan reaksi semprot. Pada perbandingan 15 : 2 : 1, diperoleh noda berwarna kuning dengan dengan Rf 0,84 di 254 nm, dan berflouresensi jingga pada 366 nm pada Rf 0,84 dan pada reaksi semprot menggunakan H 2 SO 4 diperoleh noda berwarna ungu, kuning dan jingga dengan Rf berturut turut adalah dengan Rf 0,84; 0,82 dan 0,73. Pada perbandingan 8 : 2 : 1 dan 6 : 2 : 1, alkaloid menunjukkan noda berwarna kuning pada 254 nm dan berflouresensi jingga pada 366 nm, sedangkan dengan pereaksi semprot berwarna jingga.
Pada perbandingan  20 : 1 : 0,5; 25 : 1 : 0,5, senyawa yang diduga flavonoid pada 254 nm menunjukkan noda berwarna kuning pada 254 nm pada Rf 0,76, sedangkan pada  perbandingan  27  :  1  :  0,5,  diperoleh  nilai  Rf  0,54.    Pada  366  nm,  senyawa flavonoid berflouresensi kuning dengan Rf 0, 76; 0,78 dan 0,54 pada masing-masing perbandingan  yang  menandakan  adaya  golongan  flavonoid  flavon  dan  flavanon. Pada  reaksi  semprot  diperoleh  noda  berwarna  merah  magenta  dan  ungu  yang merupakan flavonoid golongan auron dan khalkon. Pada perbandingan 15 : 2  : 1, senyawa flavonoid memberikan noda berwarna kuning pada 254 nm dan 366 dan noda  berwarna  merah  magenta  dan  ungu  setelah  disemprot  dengan  H 2 SO 4 . Sedangkan pada perbandingan 8 : 2 : 1 dan    6 : 2 : 1, senyawa flavonoid hanya terdeteksi  setalah  disemprot  dengan menggunakan  H 2 SO 4 dengan  noda  berwana merah magenta dan ungu.
Uji  penegasan  senyawa  tanin  pada  perbandingan  20  :  1  :  0,5,  diperoleh  noda berwarna hijau pada 254 nm dan noda berwarna hijau dan ungu setelah disemprot dengan H 2 SO 4, sedangkan pada perbandingan 25 : 1 : 0,5, senyawa tanin berwarna hijau di 254 nm dan 366 nm dan berwarna hijau kekuningan pada reaksi semprot. Pada  perbandingan 27 : 1 : 0,5 diperoleh  noda berwarna hijau pada 254 nm dan dengan pereaksi semprot, tetapi tidak ada  noda yang terlihat pada 366 nm untuk semua perbandingan eluen polar. Sedangkan pada perbandingan 15 : 2 : 1; 6 : 2 : 1  dan  6  :  2  :    1  diperoleh  noda  berwarna  hijau  pada  254  nm  dan  366  nm  dan
berwarna hijau dan ungu pada reaksi semprot. Senyawa steroid dan saponin tidak ditemukan pada eluen polar ini. Senyawa steroid merupakan senyawa yang memiliki sifat  non  polar,  sehingga  pada  eluen  polar  senyawa  steroid  ini  tidak  terelusi. Sedangkan senyawa saponin tidak terdeteksi pada eluen polar dan hanya terdeteksi pada eluen non polar, diduga senyawa saponin yang terelusi adalah saponin yang sifatnya non polar karena memiliki gugus hidrofob yaitu aglikon (sapogenin).
Nilai Rf yang kecil pada eluen polar dan non polar menunjukkan bahwa senyawa pada noda tersebut semakin kuat diserap oleh silika gel sehingga noda akan berada di bagian bawah, hal ini menunjukan bahwa noda tersebut memiliki kepolaran yang lebih besar dikarenakan adanya ikatan hidrogen antara senyawa dengan silika gel tersebut,  sehingga  ketika  senyawa  diserap  oleh  silika  maka  untuk  sementara pengelusian    terhenti  dan  eluen  bergerak  tanpa  adanya  noda. Hal  inilah  yang menyebabkan nilai Rf yang diperoleh kecil, sedangkan untuk noda yang bersifat non polar akan terus naik sampai batas atas. Prinsip ini sama halnya dengan hukum “like dissolved  like”  dimana  senyawa  akan  cenderung  mudah  larut  pada  pelarut  yang memilki kepolaran yang relatif sama. Senyawa non polar akan bergerak lebih cepat daripada yang polar menurut prinsip ”like dissolved like”.  Hasil pengamatan profil KLT menunjukan bahwa ekstrak etanol daun jeruju mengandung beragam senyawa yang  dapat dilihat  dari  noda-noda berwarna  pada  lempengan  yang diperoleh  dari hasil  pengelusian  dengan  nilai  Rf  yang  beragam.  Noda  tersebut  menunjukkan bahwa  pada  noda  tersebut  terdapat  senyawa  aktif,  dimana  satu  noda  bisa mengandung banyak senyawa aktif sedangkan satu senyawa terdapat dalam satu noda. Deteksi noda menggunakan sinar UV 254 nm dan 366 nm memperlihatkan bahwa  noda  tidak  banyak  muncul  dibandingkan  dengan  penyemprotan  pereaksi kimia yaitu H 2 SO 4 10%, ini berarti bahwa noda baru banyak muncul karena reaksi yang terjadi antara senyawa yang terkandung pada noda dengan H 2 SO 4 10%.

## Kesimpulan
Senyawa  yang  terkandung  pada  ekstrak  daun  jeruju  adalah  senyawa  alkaloid, flavonoid, tanin, steroid dan saponin.

## Daftar Pustaka
1.  Bawa,  I.  G.  A.  G.  Isolasi  dan  Identifikasi  golongan senyawa  toksik  dari  daging buah pare ( Momordica charantia L.). Jurnal Kimia [serial online]. 2009; 3 (2), 117- 124.
2.  Saifudin, A, Rahayu, Viesa., Teruna, HD. Standarisasi Bahan Obat Alam. Edisi pertama. Yogyakarta : Graha Ilmu; 2011.
3.  Syafitri,  NE,  Maria  B,  Syamsul  F.  Kandungan  fitokimia,  total  fenol,  dan  total flavonoid  ekstrak  buah  harendong  ( Melastoma  affine D.  Don).  Current Biochemistry [serial online]. 2014; 1(3); 105-115. DOI: https://doi.org/10.29244/cb.1.3.%25p.
4.  Tjitda PJP, Febri OB. Skrining fitokimia ekstrak metanol, kloroform dan n-heksan daun  flamboyan  ( Delonix  regia .  Raf)  asal  Kupang.  Sains  dan  Terapan  Kimia [serial online]. 2019; 13(2); 70-79.  DOI : 10.20527/jstk.v13i2.5949.
5.  Putri, WS, Warditiani, NK, Larasanty, LPF. Skrining fitokimia ekstrak etil asetat kulit buah manggis ( Garcinia mangostana L.I). Jurnal Farmasi Udayana [serial online]. 2013; 2(4); 56-60.
6.  Zaini  M,  Vivi  S.  Skrining  fitokimia  ekstrak  carica  papaya  radix,  piper  ornatum folium dan nephelium lappaceum semen asal Kalimantan Selatan. Jurnal Kajian Ilmiah Kesehatan dan Teknologi [serial online]. 2020; 2(1); 15-28.
7.  Hidayah,  WW,  Dewi  K,  Enny  F.  Isolasi,  identifikasi  senyawa  steroid  dari  daun getih-getihan ( Rivina humilis L.) dan uji aktivitas sebagai antibakteri. Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi [serial online]. 2016; 19(1); 32-37.
DOI: https://doi.org/10.14710/jksa.19.1.32-37.
8.  Harborne. Metode fitokimia penuntun cara modern menganalisis tumbuhan. Edisi II. Diterjemahkan oleh Padmawinata, K. Dan Soediro, I. Bandung: ITB; 1996.
9.  Ergina, E., Nuryanti, S., Pursitasari, I. D. Uji kualitatif senyawa metabolit sekunder pada daun palado ( Agave angustifolia ) yang diekstraksi dengan pelarut air dan etanol. Jurnal Akademika Kimia [serial online]. 2014; 3 (3), 165-172 .
10.  Marliana, SD, Venty, S, Suyono. Skrining fitokimia dan analisis kromatografi lapis tipis  komponen  kimia  buah  labu  siam  ( Sechium  edule Jacq.  Swartz.)  dalam ekstrak  etanol.  Biofarmasi  [serial  online].  2005;  3(1);  26-31. DOI: 10.13057/biofar/f030106.
11.  Nurwidayati  A.  The  phytochemical  screening  and  thin  layer  chromatography results  of  Jatropha  gossypiifolia  seeds.  Health  Science  Journal  of  Indonesia [serial online]. 2012; 3(2); 27-31. DOI: 10.22435/hsji.v3i2 Des.3075.99-103.
12.  Ningsih D., Zusfahair, Dwi K. Indentifikasi Senyawa Metabolit Sekunder Serta Uji Aktivitas Ekstrak Daun Sirsak Sebagai Antibakteri. Molekul [serial online]. 2016: 11(1): 101-111. DOI
13.  Marliana  SD,  Saleh  C.  Uji  Fitokimia  dan  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Kasar Etanol, Fraksi nHeksana, Etil asetat, dan Metanol dari Buah Labu Air ( Lagenari Siceraria ( Morliana ). J. Kimia Mulawarman [serial online]. 2011; 8(2); 39-63.
14.  Markham,  K.R.  Cara  mengidentifikasi  flavonoid.  Diterjemahkan  oleh Padmawinata, K. Bandung : ITB; 1988.
15.  Astarina  NWG,;  Astuti  KW,  Warditiani  NK.  Skrining  fitokimia  ekstrak  metanol rimpang  bangle  ( Zingiber  purpureum Roxb.).  Jurnal  Farmasi  Udayana  [serial online]. 2013: 2(4); 1-7.
16.  Gandjar, Ibnu G, Abdul R. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar; 2007.
17.  Maulana,  M.  Profil  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  ekstrak  daun  bidara  arab ( Ziziphus spina cristi , L.) berdasarkan variasi pelarut. [Skripsi]. Malang.: Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim; 2018.
18.  Roviqowati,  F,  Yuli  W,  Samanhudi,  Ahmad  Y.  Total  flavonoid  content  analysis four iler accessions ( Coleus Atropurpureus [L] Benth) on lowland Karanganyar,
Central Java, Indonesia. Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research [serial online]. 2019; 12 (7); 167-170. DOI:
http://dx.doi.org/10.22159/ajpcr.2019.v12i7.32513.
19.  Venkataraman,   1962,   Method   for   determining   the   structure   of   flavonoid compound, in Geissman, T.A.  (ed.), The Chemistry of Flavonoid Compound, 70.
20.  Romadanu, Siti H R, Shanti D L. Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak bunga lotus  ( Nelumbo  nucifera ).  FISHTECH  [serial  online].  2014;  3(1);  1-6.
DOI: https://doi.org/10.36706/fishtech.v3i1.3523.
21.  Widyawati,  PS,  Tarsisius  DWB,  Fenny  AK,  Evelyn  LW.  Difference  of  solvent polarity to phytochemical content and antioxidant activity of pluchea indicia less leaves  extracts.  International  Journal  of  Pharmacognosy  and  Phytochemical Research [serial online]; 2014; 6(4); 850-855.