## AQUASAINS

## PENGARUH EKSTRAK SIDAWAYAH DENGAN KONSENTRASI YANG

## BERBEDA UNTUK MENGATASI INFEKSI BAKTERI Aeromonas hydrophilla
PADA IKAN NILA ( Oreochromis niloticus )
Sri Rahmaningsih
Ringkasan Permasalahan yang sering muncul dalam usaha budidaya ikan nila adalah serangan penyakit bakteri yang disebabkan oleh Aeromonas Hydrophi- lla atau biasa dikenal penyakit bercak merah “ Motil Aeromonas Septicemia ” (MAS). Penelitian ini bertujuan untuk menge- tahui pengaruh sidawayah dalam meng- hambat pertumbuhan bakteri A. hydro- philla secara in vitro; pengaruh pembe- rian berbagai konsentrasi sidawayah ter- hadap tingkat kelulushidupan dan jum- lah koloni bakteri dalam ginjal ikan ni- la dan konsentrasi terbaik yang mam- pu memberikan tingkat kelulushidupan tertinggi pada ikan nila. Rancangan per- cobaan yang digunakan adalah Rancang- an Acak Lengkap (RAL) dengan 4 perla- kuan dan 3 kali ulangan. Hasil peneli- tian menunjukkan bahwa perendaman sidawayah berpengaruh nyata terhadap tingkat kelulushidupan ikan nila (P < 0,05). Tingkat kelulushidupan ikan nila selama penelitian adalah 29% (A), 64% (B), 72% (C) dan 44% (D). Hasil peneliti- an menunjukkan pula perlakuan C (kon- sentrasi sidawayah 0,04%) merupakan perlakuan yang terbaik, dengan tingkat kelulushidupan ikan nila tertinggi sebe- sar 74%.
Program Studi Ilmu Perikanan dan D3 Peri- kanan Fakultas Perikanan dan Kelautan UNI- ROW Tuban E-mail: rahmaningsihsri@yahoo.co.id
Keywords Ikan Nila, Bakteri A. hydrophilla, Sidawayah

## PENDAHULUAN
Ikan nila ( Oreochromis niloticus ) meru- pakan salah satu jenis ikan budidaya air tawar yang ternilauk ekonomis penting dan telah dibudidayakan secara inten- sif. Salah satu kendala yang dihadapi dalam budidaya intensif adalah penya- kit ikan. Salah satu jenis penyakit ik- an yang sering dijumpai adalah penya- kit bakterial yang disebabkan oleh bak- teri Aeromonas hydrophilla , merupakan bakteri patogen penyebab penyakit “ Mo- til Aeromonas Septicemia ” (MAS), teru- tama untuk spesies ikan air tawar di per- airan tropis. Bakteri ini termasuk pato- gen oportunistik yang hampir selalu ada di air dan siap menimbulkan penyakit apabila ikan dalam kondisi kurang ba- ik. Penyakit yang disebabkan Aeromo- nas hydrophilla berakibat bercak merah pada ikan dan menimbulkan kerusakan pada kulit, insang dan organ dalam [1]. Penyebaran penyakit bakterial pada ik- an umumnya sangat cepat serta dapat menimbulkan kematian yang sangat ting- gi pada ikan-ikan yang diserangnya [2]. Salah satu alternatif dalam mengobati penyakit bakterial pada ikan adalah meng- gunakan bahan-bahan alami yang mem- punyai kemampuan anti bakteri antara
lain ekstrak bawang putih untuk meng- obati benih ikan lele yang terinfeksi A. hydrophilla [3]; ekstrak air kunyit un- tuk mengobati Pseudomonas aeruginosa pada ikan gurame [4]. Salah satu tum- buhan yang potensial untuk diujicobak- an sebagai antibakteri pada ikan adalah tumbuhan sidawayah ( Woodfordia fru- cticosa (L) Kurz). [5] menerangkan bah- wa perasan daun sidawayah dalam air mempunyai efek antibakteri terhadap Sta- phylococcus aeurus . Penggunaan sidawa- yah untuk pengobatan penyakit ikan, khu- susnya penyakit bakterial pada ikan be- lum banyak diujicobakan. Adapun tuju- an dari penelitian ini adalah untuk meng- etahui :
1. Pengaruh sidawayah dalam mengham- bat pertumbuhan bakteri A. hydro- philla secara in vitro
2. Pengaruh berbagai konsentrasi sida- wayah terhadap tingkat kelulushidup- an ikan nila yang diinfeksi bakteri A. hydrophilla .
3. Pengaruh peredaman sidawayah de- ngan konsentrasi yang berbeda ter- hadap jumlah koloni bakteri A. hydro- philla didalam ginjal ikan nila.
4. Konsentrasi sidawayah terbaik yang mampu mengobati infeksi A. hydro- philla pada ikan nila dan memberik- an tingkat kelulushidupan tertinggi pada ikan nila.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan di laboratorium Ilmu Perikanan Fakultas Perikanan dan Kelautan UNIROW Tuban. Waktu pe- nelitian adalah bulan Januari-April 2007. Metode penelitian yang dipergunakan ada- lah metode eksperimental yang dilakuk- an di laboratorium. Metode eksperimen- tal adalah suatu usaha terencana untuk memperoleh fakta baru atau untuk mem- perkuat teori baru maupun membantah hasil-hasil penelitian yang telah ada [6].
Prosedur Penelitian
1. Penyediaan wadah uji ebelum digu- nakan, wadah uji dibersihkan dan di- desinfeksi terlebih dahulu dengan ch- lorine konsentrasi 10 ppm, selama 30 menit, kemudian dibilas dengan air bersih dan dikeringkan.
2. Pembuatan larutan sidawayah serbuk sidawayah seberat 4 g dilarutkan da- lam 100 ml air, kemudian dipanask- an selama 15 menit pada suhu 90 o C, selanjutnya dilakukan penyaringan pada saat larutan sidawayah panas ke dalam Erlenmeyer dan ditutup de- ngan aluminium foil [7]. Larutan ini adalah larutan stock dengan konsen- trasi 5% untuk uji in vitro.
3. Penyediaan peralatan mikrobiologis sebelum digunakan disterilkan terle- bih dahulu dengan autoclave pada te- kanan 1 atm pada suhu 121 o C sela- ma 15 menit.
4. Penyediaan media tumbuh bakteri A. hydrophilla Media yang dipergunak- an adalah media agar padat Triptic Soy Agar (TSA) dan media Triptic Soy Broth (TSB) cair dan uji API 20 E un- tuk identifikasi bakteri.
Adaptasi ikan uji Sebelum dilakukan in- feksi pada ikan uji, terlebih dahulu dila- kukan adaptasi selama 1 minggu dida- lam wadah penelitian. Tujuan adaptasi adalah untuk mengetahui tingkat kese- hatan ikan yang akan digunakan dalam penelitian. Apabila selama adaptasi ter- jadi kematian 10%, maka ikan uji tidak layak digunakan dalam penelitian [1].
Kultur Bakteri Kultur bakteri A. hydro- philla dilakukan pada media TSA plate dengan menggunakan jarum ose, selan- jutnya diinkubasi + 24 jam dalam incu- bator dengan suhu 35 o C, sehingga bak- teri yang dilkultur adalah hasil kultur ulang dengan umur inkubasi + 24 jam.

## Penelitian Pendahuluan
1. Uji MIC bakteri A. hydrophilla ter- hadap Sidawayah untuk mengetahui konsentrasi minimal Sidawayah yang
dapat menghambat pertumbuhan bak- teri A. hydrophilla dilakukan uji MIC secara in vitro dengan metoda pengen- ceran “ Serial Tube Dilubation ” [8].
2. Uji ketahanan hidup ikan nila terha- dap sidawayah bertujuan untuk meng- etahui konsentrasi sidawayah yang bisa meracuni ikan uji. Uji ini meng- gunakan konsentrasi sidawayah dari uji MIC, dan tiap-tiap konsentrasi si- dawayah tersebut dilihat pengaruh- nya terhadap tingkat kematian ikan nila.
3. Uji patogenitas A. hydrophilla terha- dap ikan nila bertujuan untuk meng- etahui konsentrasi bakteri yang da- pat menyebabkan 50% kematian ik- an uji. Selanjutnya konsentrasi bak- teri yang didapat akan digunakan da- lam infeksi pada uji utama.
Metoda infeksi yang digunakan adalah penyuntikan. Tiap ikan diinfeksi dengan 0,1 mL larutan bakteri A. hydrophilla yang berumur + 24 jam melalui penyun- tikan intramuscular [3]. Kepadatan bak- teri yang diinjeksikan adalah 104 sel/mL. Ikan dipelihara dalam akuarium yang diaerasi secara terus-menerus. Kepadat- an bakteri ini berdasarkan pada peneli- tian pendahuluan, yaitu uji patogenitas terhadap ikan nila.Ikan uji direndam da- lam larutan sidawayah dengan konsen- trasi A = 0%; B = 0,20%, C = 0,40% dan D = 0,60% yang telah ditetapkan berda- sarkan pada uji MIC dan uji biologis.

## Pengumpulan Data
Data yang dikumpulkan dalam peneliti- an ini meliputi :
1. Gejala klinis; pengamatan gejala kli- nis meliputi perubahan tingkah la- ku, kondisi eksternal dan internal pa- da tubuh ikan. Data gejala klinis dia- mati pada saat infeksi bakteri A. hydro- philla dan selama pemeliharaan pe- nelitian utama.
2. Kelulushidupan Ikan Nila (SR) dila- kukan dari awal penelitian (hari ke- 1 treatment ) hingga akhir penelitian
(hari ke-7), berdasarkan rumus dari Effendy (1979), sebagai berikut :
SR = N t N o x 100% (1)
dimana: SR = persentase kelangsung- an hidup Nt = Jumlah ikan uji pada akhir penelitian No = Jumlah ikan uji pada awal penelitian.
3. Penghitungan jumlah koloni bakteri pada ginjal ikan nila dilakukan se- belum perlakuan (mulai munculnya gejala klinis), pada waktu 24 jam pa- sca perendaman dan pada akhir pe- nelitian yaitu hari ke-7. Tujuannya untuk mengetahui jumlah koloni bak- teri yang ada dalam ginjal ikan nila.

## Analisa Data
Data kelulushidupan ikan nila dianali- sa dengan analisis ragam, sedangkan da- ta gejala klinis ikan uji, perhitungan jum- lah koloni bakteri dan kualitas air di- analisa secara deskriptif. Sebelum ana- lisis ragam dilakukan, maka dilakukan uji hemogenitas dengan metoda Barlett, uji normalitas dengan metoda lilefors dan uji additifitas menurut tukey [6]. Bila dalam analisa ragam diperoleh beda nya- ta (P < 0,05) atau beda sangat nyata (R < 0,01), maka dilakukan uji wilayah gan- da Duncan untuk mengetahui perbeda- an diantara pengaruh perlakuan [6].

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari hasil uji pendahuluan tersebut da- pat ditentukan untuk penelitian utama, diantaranya : a. Dari uji MIC diketahui konsentrasi sidawayah terendam yang dapat menghambat pertumbuhan bak- teri A. hydrophilla adalah 0,20%, selan- jutnya digunakan sebagai dasar penen- tuan konsentrasi pada uji utama. b. Jum- lah bakteri yang digunakan untuk meng- infeksi ikan pada uji utama adalah 1,01 x 104 CFU/mL. c. Lama waktu penga- matan untuk penelitian utama adalah 151,36 jam atau + 7 hari.
Gambar 1 Ikan nila yang terserang bakteri A hydrophilla
Dari hasil pengamatan gejala klinis ik- an nila setelah diinfeksi A. hydrophilla adalah adanya bercak kemerahan di se- kitar tubuh ikan nila uji, perdarahan pa- da sirip ekor dan punggung dan terjadi- nya luka pada daerah bekas suntikan. Hal ini terlihat pada waktu 24 jam pa- sca infeksi. Selain itu, pergerakan ting- kah laku ikan tidak normal, hal ini terli- hat dengan pergerakan renang yang lamb- an, warna tubuh menjadi lebih gelap, ik- an sering berada di dasar akuarium, len- dir yang berlebihan dan respon terha- dap makanan menurun. Pada hari ke dua pasca infeksi, sirip ekor dan punggung ikan uji terlihat geripis dan bagian per- ut juga terlihat buncit karena berisi cair- an.
Hasil pengamatan jumlah koloni bakte- ri A. hydrophilla dalam ginjal ikan ni- la dilakukan sebelum perlakuan (mulai munculnya gejala klinis), pada waktu 24 jam pasca peredaman dan akhir pene- litian. Hasil pengamatan jumlah koloni bakter A. hydrophilla dapat dilihat pa- da Tabel 1.
Hasil pengamatan terhadap kelulus hi- dupan ikan nila yang terinfeksi A. hydro- philla dengan waktu 7 hari setelah di- beri perlakuan perendaman sidawayah selama 30 menit dan dilakukan 3 hari berturut-turut tersaji pada Tabel 2.
Untuk mengetahui efek sidawayah ter- hadap suatu mikroorganisme dan untuk mengetahui konsentrasi minimum yang
Tabel 2 Data Kelulushidupan Ikan Nila (%) Ulangan Perlakuan A B C D 1 30 70 80 30 2 10 50 60 60 3 50 70 80 40 Rerata 30.00 63.33 73.33 43.33 SD 20.00 11.55 11.55 15.28
sudah mampu menghambat pertumbuh- an mikroorganisme tersebut dilakukan uji MIC secara in vitro. Indikator tidak adanya pertumbuhan bakteri dapat dili- hat dari media TSB yang jernih, sedangk- an apabila ada pertumbuhan pada me- dia TSB terdapat warna kekuningan yang keruh. Dari hasil uji MIC menunjukkan bahwa sidawayah diduga mengandung senyawa aktif tannin [9], dengan kon- sentrasi 0,20% sudah mampu mengham- bat pertumbuhan bakteri. Dari uji ini pu- la, ditunjukkan bahwa sidawayah me- rupakan jenis antimikroba alami yang bersifat bakteriostatik. Hal ini dapat di- lihat pada pengujian MIC pada konsen- trasi sidawayah 0,20% tidak tumbuh pa- da medium broth (TSB) akan tetapi tum- buh pada media agar (TSA), sehingga pada konsentrasi sidawayah 0,20% ter- sebut bersifat bakteriostatik. Menurut [9] melaporkan bahwa daun, buah dan ter- utama bunga sidawayah kaya akan tan- nin. Tannin diduga mempunyai aktivi- tas antimikroba yang mekanismenya sa- ma dengan senyawa fenolik dalam meng- hambat dan membunuh pertumbuhan bak- teri [10].
Gejala klinis yang timbul pada ikan uji selama penelitian berlangsung adalah ge- rakan ikan menjadi lamban, ikan cende- rung diam di dasar akuarium; luka/borok pada daerah suntikan; perdarahan pa- da bagian pangkal sirip ekor dan sirip punggung, dan pada perut bagian bawah terlihat buncit dan terjadi pembengkak- an. Ikan sebelum mati naik ke permu- kaan air dengan sikap berenang yang labil. Gejala ini pernah pula dilaporkan oleh [11] bahwa tanda-tanda umum da- ri ikan yang terinfeksi bakteri A. hydro-
Tabel 1 Data jumlah koloni bakteri A. hydrophilla (x 10 6 CFU/mL) yang diisolasi dari ginjal ikan nila
Perlakuan Ulangan SebelumPerlakuan 24 jamPasca perendaman Akhir Perlakuan A 1 4.94 6.31 6.97 2 4.25 5.96 6.25 3 5.00 6.84 5.79 Rerata 4.73 6.37 6.33 B 1 5.26 3.83 3.02 2 5.91 3.71 2.84 3 4.52 4.02 2.96 Rerata 5.23 3.85 2.94 C 1 4.41 2.88 1.70 2 4.95 2.69 1.50 3 3.86 2.57 1.63 Rerata 4.41 2.71 1.61 D 1 4.64 2.44 1.67 2 4.04 2.51 2.11 3 4.80 2.74 2.04 Rerata 4.49 2.56 1.94
philla adalah ikan bergerak lamban, meng- ambil oksigen di permukaan air atau di- am di dasar perairan, tidak mau mak- an, sirip rusak, luka pada kulit sampai ke otot, exopthalamus (mata menonjol), perut membengkak berisi cairan keme- rahan, darah dan jaringan yang terse- rang menjadi tidak berfungsi. Gejala pe- nyakit tersebut timbul 48 jam setelah ikan terinfeksi. Setelah direndam pada hari ke-2 pasca infeksi, gejala klinis ik- an uji mulai terlihat semakin berkurang dan ikan menjadi sembuh pada hari ke- 5 pasca perendaman pada perlakuan kon- sentrasi 0,60% (D), diikuti berturut-turut oleh perlakuan konsentrasi 0,40% (C), dan konsentrasi 0,20% (B). Sedangkan pada perlakuan A. (tanpa perendaman sidawayah), ikan uji yang terinfeksi A. hydrophilla banyak yang mengalami ke- matian + 70%.
Walaupun pada uji in vitro , sidawayah mampu menghambat bakteri secara efek- tif, akan tetapi pada uji in vivo , sidawa- yah bersifat tidak efektif. Kurang efek- tifnya kemampuan efek antibakteri si- dawayah, diduga karena pada uji in vi- vo , bahan aktif dalam sidawayah tidak semuanya dapat diserap oleh tubuh dan
terjadi metabolisme oleh hati, sedangk- an pada uji in vitro , diuji hanya berha- dapan dengan bakteri A. hydrophilla . Hal ini sesuai dengan pernyataan [12], bah- wa pada aktivitas obat antimikroba in vivo lebih rumit daripada in vitro , sebab tersebut tidak saja meliputi obat dan pa- rasit tetapi ada pula faktor ketiga, yai- tu inang (ikan). Jadi kurang efektifnya pemberian antibakteri alami (sidawayah) pada konsentrasi yang berbeda, secara peredaman, dapat disebabkan oleh ada- nya penetrasi obat ke dalam tubuh dan daya absorbsi tubuh terhadap obat dan relatif rendah. Penetrasi obat dan daya absorbsi yang relatif rendah dapat di- sebabkan karena konsentrasi obat yang kurang tinggi, kontak obat yang kurang lama, kelarutan obat yang relatif ren- dah, kemampuan obat berdifusi melin- tasi sel membran yang relatif rendah, serta bentuk obat, rute dan cara pem- berian yang kurang tepat [13].
Hasil penelitian yang didapat menunjukk- an bahwa peredaman sidawayah selama 30 menit dan dilakukan 3 hari berturut- turut, sampai dengan hari ke-7 (D-7) ber- pengaruh nyata terhadap presentase ke- lulushidupan ikan nila yang terinfeksi
A. hydrophilla (P<0,05). Hasil peneliti- an menunjukkan pula bahwa perlakuan peredaman sidawayah dapat meningkatk- an persentase kelulushidupan ikan nila. yang terinfeksi A. hydrophilla . Hal ini dapat dilihat pada perhitungan persen- tase kelulushidupan tertinggi diperoleh pada perlakuan C (72%), kemudian di- ikuti perlakuan B (64%) dan perlakuan D (44%). Sedangkan perlakuan A rerata persentase kelulushidupan ikan nila pa- ling rendah bila dibandingkan dengan perlakuan-perlakuan lainnya yaitu se- besar 29%. Pada perlakuan C (0,40%) mem- berikan kelulushidupan ikan nila yang lebih tinggi (72%) dibandingkan perla- kuan lainnya. Diduga perlakuan terse- but merupakan konsentrasi yang tepat yang mengakibatkan sistem fungsiona- lis tubuh ikan tidak terganggu, sehing- ga proses penyerapan sidawayah dapat berlangsung baik. Mekanisme kerja tan- nin terhadap A. hydrophilla dalam tu- buh ikan menurut [10], bereaksi dengan cara beraksi dengan sel membran bak- teri inaktivasi enzim-enzim essensial bak- teri dan destruksi atau inaktivasi fung- si dari material genetik bakteri. Tannin merupakan senyawa polifenol dengan bo- bot molekul tinggi. Senyawa fenol beker- ja dengan mendenaturasi protein sel bak- teri, dan kerusakan tersebut sifatnya ir- revesibel (Pelczar dan Chan, 1988 dalam [4], sehingga pertumbuhan bakteri da- pat dihambat. Menurut [14], kesalahan sedikit saja dalam proses sintesis pro- tein dapat menghentikan proses terse- but dan akhirnya dapat mengakibatkan kematian sel. Menurut [15] bahwa pato- gen A. hydrophilla bersifat sistemik, ya- itu disamping menyerang organ luar ju- ga dengan flagelanya bergerak berputar- putar dan menempel sel inang dengan pelekatan. Kemampuan bakteri menye- babkan penyakit pada ikan disamping karena dapat membiak dengan cepat da- lam tubuh ikan, juga bergerak aktif de- ngan flagelanya melalui aliran darah ke seluruh tubuh, sehingga dapat merusak organ dalam ikan seperti ginjal, hati dan limpa (Lallier and Daegneult (1984) da-
lam [16] . Dari uji plinomial orthogonal, dapat diketahui bahwa konsentrasi si- dawayah 0,41% menghasilkan angka ke- lulus hidupan optimum yaitu 72,68%. Hal ini diduga pada konsentrasi 0,41%, se- nyawa aktif sidawayah (tannin) sudah mampu menghambat pertumbuhan A. hydro- philla dan belum menyebabkan ganggu- an fungsional pada tubuh ikan uji.

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian ini diperoleh kesim- pulan bahwa Sidawayah ( Woodfordia fru- cticosa ) mulai mampu menghambat per- tumbuhan bakteri A. hydrophilla secara in vitro pada konsentrasi > 0,20%. Per- endaman sidawayah dengan konsentra- si yang berbeda berpengaruh nyata ter- hadap kelulushidupan ikan nila yang di- infeksi. Perendaman sidawayah dengan konsentrasi yang berbeda tidak efektif dalam menurunkan jumlah koloni A. hydro- philla di dalam ginjal ikan nila. Peren- daman sidawayah dengan konsentrasi 0,40% merupakan konsentrasi terbaik terhadap kelulushidupan ikan nila yang menca- pai 72% setelah diinfeksi.

## PUSTAKA
1. Komisi Pestisida Departemen Pertanian. 1983. Pedoman Umum Pengujian Laboratorium Toksisitas Lethal Pestisida Pada Ikan Ni- la terhadap Infeksi Bakteria . Fakultas Per- ikanan. Universitas Sam Ratulangi. Mana- do. (Skripsi S1). 36 hlm.
2. Pusat Karantina. 1999. Petunjuk Tehnis Per- lakuan dan Pengobatan Pada Ikan . Pusat
Karantina Pertanian. Jakarta. 55 hal.
3. Mariyono, Puspitasari dan Sutomo. 2000. Teh- nik Uji Ketahanan Bibit Ikan Nila dan Nila terhadap bakteri Aeromonas hydrophila de- ngan berbagai kepadatan . Buletin Tehnik Pertanian, 5(II) : 77-78
4. Soemardi, E., Utami P.I, Wakhid A. Suka- rdi, P. 2002. Uji Antibakteri ekstrak Air Ku- nyit (Curcuma domestika Val) terhadap bak- teri Pseudomonas aeurugenosa pada ikan gurami ( Ospronemous gouramy Lac). Pro- gram Ilmu Perikanan dan Kelautan. Uni- versitas Jendral Soedirman Purwokerto Vol 5 (1) : 12-15
5. Soedibyo, M. 1998. Alam Sumber Kesehat- an, Manfaat dan Kegunaan (Eds 1) Balai
Pustaka, Jakarta, hlm 345-346
6. Srigandono, B. 1989. Rancangan Percoba- an . Fakultas Perikanan Universitas Dipo- negoro. Semarang. 178 hal
7. Departemen Kesehatan RI. 1993. Tanaman Obat Keluarga (TOGA) . (Ed 3). Direktorat
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta, hlm 319.
8. Bailey dan Scotts. 1994. Diagnostic Micro- biology . Mosby Year Book, Westline Indus- trial Drive, USA. pp. 170-175.
9. Mutiatikum, D., 2003. Plant Resources of South-East Asia, Medicinal and Poisonus Plan- ts 3 dalam RHMJ Lemmens and N Bunyap- raphatsara (penyunting), Backhuys Publi- sher, Leiden pp 419-420 10. Kabata, Z. 1985. Parasites and Disease of Fish Cultured in the Tropics . Taylor & Fran- cis Linc, Philadelphia, London, 297 p.
11. Jawetz, E., Melnick, J.L., Adelberg, E.A. 1986. Mikrobiologi Kedokteran . EGC Penerbit Bu- ku Kedokteran, Jakarta, 753 hlm.
12. Anief, M. 1995. Prinsip Umum dan Dasar Farmakologi . Gadjah Mada University Press, Yogyakarta, 145 hlm.
13. Sari Puspita P., Ervizal A.M.Z.,C Hanny Wi- jaya dan Winiati P.R. 2001. Potensi Antimik- roba Ekstrak biji, daun, kulit akar dan ku- lit batang kedawung ( Parkia timoriana DC Merr.) terhadap bakteri patogen dan peru- sak makanan dalam Proseding Seminar Na- sional XIX Tumbuhan Obat Indonesia, Po- kjanas dan Pusat Penelitian Pengembang- an Perkebunan Bogor, hlm. 289-298 14. Austin, B and D.A. Austin. 1987. Bacterial Fish Pathogens : Disease in Farmed and Wi- ld Fish . Ellis Howood Limited, Chichester,
England. pp 34-177.
15. Volk, W.A danM.F. Wheeler. 1988. Mikrobi- ologi Dasar . Edisi 5 jilid 1 Erlangga, Jakar- ta. 341 hal.
16. Komarudin. 2000. Pengaruh Pemberian Ber- bagai Dosis Nitrofurantoin terhadap Kelang- sungan Hidup Ikan Patin yang Diinfeksi A. hydrophilla . Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Universitas Diponegoro. Semarang. (Skripsi S1). 52 hlm.