Al-Hayat: Journal of Biology and Applied Biology Volume 4, No 1 (2021): 95-103 DOI. 10.21580/ah.v3i1. 8558
Identifikasi WIN1 ( Wax Inducer1 ) Pada Tanaman Ubi Kayu ( Manihot esculenta Crantz)
Lailiyah Maulidatul Hasanah 1  , Agung Nugroho Puspito 2 , Sattya Arimurti 1 , Mukhamad Su’udi 1
1 Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Jember
2 Pasca Sarjana, Universitas Jember

## Abstract
Cultivable crops in Indonesia are very diverse, including many varieties of rice, corn and cassava. However, agricultural land in Indonesia is shrinking every year as consequences of the increasing population size. There is still large area of dry sub optimal landin Indonesia that under utilized, this area can be optimized as agricultural land.  Cassava is a well-known crop with high resistance to drought, they have potential to be cultivated on dry land. The first step of cassava plant breeding for cultivation in sub optimal land is to characterize the drought resistance genes in the plant, one of them is WIN1 (Wax Inducer 1). To characterize the gene first DNA were isolated from the leaves of cassava varieties Adira 1 and Malang 6, followed by amplification by PCR, and sequencing analysis. The results showed that the Adira 1 had the same amino acid sequence as the AM560-2 cultivar found in GenBank, while Malang 6 variety have one amino acid difference. The difference originated from genetic  mutation  in  WIN1  and  might  affecting  HCN(Hydrogen  cyanide)  content  in  commercial cassava Adira 1 and industrial cassava varieties Malang 6.
Keywords :   Cassava, Drought tolerance, Sequencing, Sub optimal, WIN1

## Abstrak
Tanaman  pangan  di  Indonesia  sangat  beragam  termasuk  diantaranya  padi,  jagung  dan  ubi  kayu. Namun lahan pertanian di Indonesia semakin sempit seiring dengan laju pertumbuhan penduduk yang  semakin  tinggi.  Lahan  kering  (sub  optimal)  di  Indonesia  masih  banyak  yang  belum dimanfaatkan, yang sebenarnya bisa dioptimalkan sebagai lahan pertanian. Tanaman pangan yang memiliki tingkat ketahanan lebih tinggi terhadap lahan kering adalah tanaman ubi kayu, sehingga berpotensi untuk ditanam pada lahan kering. Tahap pertama pemuliaan tanaman ubi kayu adalah mengetahui karakterisasi gen pada tanaman tersebut salah satunya  yaitu WIN1 . Metode pertama yang  dilakukan  adalah  isolasi  DNA  daun  ubi  kayu  varietas  Adira  1  dan  Malang  6,  kemudian amplifikasi  dengan  PCR,  dan  analisis  sekuensing.  Hasil  menunjukkan  tanaman  ubi  kayu  Adira  1 memiliki asam amino yang sama dengan kultivar AM560-2 yang terdapat pada GenBank, sedangkan pada  varietas Malang  6  terdapat  satu  asam  amino  yang  berbeda.  Hal  tersebut  dapat  dipengaruhi  oleh adanya mutasi gen pada varietas ubi kayu serta perbedaan kandungan HCN pada ubi kayu pangan varietas Adira 1, dan ubi kayu industri varietas Malang 6.
Kata kunci: Sekuensing, Sub optimal, Tahan kering, Ubi kayu, WIN1
 Corresponding Author: Mukhamad Su’udi , email : msuudi52@gmail.com Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Jember
Copyright © 2021 Al-Hayat: Journal of Biology and Apllied Biology
Lailiyah Maulidatul Hasanah, Agung Nugroho Puspito, Sattya Arimurti , Mukhamad Su’udi

## Pendahuluan
Tanaman  memerlukan  air  yang  cukup untuk  perkembangan  dan  pertumbuhan. Fungsi seluler dan reproduksi dari tanaman dapat  terganggu  apabila  kebutuhan  airnya tidak tercukupi (Budi et al. , 2019). Kondisi kering  yang  berlangsung  secara  terus menerus  dapat  menurunkan p roduktivitas tanaman  pangan  seperti  padi,  jagung,  dan ubi  kayu.  Pengaruh  kondisi  kering  yang dapat  menurunkan  produktivitas  tanaman pangan  dapat  mengurangi  ketahanan pangan  dunia,  sehingga  perlu  adanya peningkatan  toleransi  varietas  tanaman yang mampu bertahan pada kondisi kering tersebut.
Tanaman  secara  alami  memiliki kemampuan  untuk  mengatasi  kekeringan dengan mengembangkan mekanisme fisiologis  dan  biokimia  untuk  beradaptasi pada kondisi kekeringan. Adaptasi tumbuhan tersebut dapat berupa
mekanisme  penutupan  stomata,  deposisi lilin  epidermis,  akumulasi  osmolit,  dan memperlambat  pertumbuhan  (Al-Abdallat dkk.,  2014).  Kemampuan  tanaman  dalam beradaptasi  pada  kondisi  kering  juga terdapat  pada  tanaman  pangan,  namun setiap  tanaman  pangan  memiliki  tingkat ketahanan yang berbeda. Tanaman pangan yang  memiliki  ketahanan  tertinggi  pada kondisi  kering  adalah  ubi  kayu  apabila dibandingkan  dengan  padi  dan  jagung (Medika  et  al.,  2016).  Toleransi  ubi  kayu terhadap cekaman kering yang lebih tinggi menunjukkan  bahwa  ubi  kayu  memiliki potensi  lebih  besar  untuk  ditingkatkan menjadi  varietas  tahan  kering  dengan keunggulan yang dimilikinya.
Ubi  kayu  ( Manihot  esculenta Crantz ) merupakan tanaman yang termasuk dalam suku Euphorbiaceae (Caniago  et  al.,  2014). Tanaman  ini  dapat  diperbanyak  dengan
menggunakan  stek  batang  dan  memiliki varietas  yang  sangat  beragam.  Setiap varietas dari tanaman ubi kayu memiliki ciri morfologi  yang  berbeda  dari  bentuk  daun, tangkai  daun,  batang,  hingga  daging  umbi. Morfologi  ubi  kayu  secara  keseluruhan terdapat  buah,  bunga,  daun  pucuk,  daun dewasa,  batang,  dan  umbi  (Restiani  et  al., 2014).
Ubi  kayu  merupakan  tanaman  yang memiliki kandungan pati yang tinggi sebagai sumber  karbohidrat.  Tanaman  ini  selain memiliki  ketahanan  pada  kondisi  kering juga mudah beradaptasi dengan perubahan iklim  global,  kesuburan  tanah  yang  terus menurun  dan  perubahan  lingkungan lainnya (Fitriani dkk., 2019). Umbi ubi kayu telah  banyak  dimanfaatkan  sebagai  bahan pangan serta digunakan untuk bahan baku industri seperti MOCAF dan tepung tapioka yang rendah amilum namun memiliki kadar amilopektin tinggi. Kandungan amilopektin yang  tinggi  pada  tepung  tapioka  hanya ditemukan  pada  tepung  tapioka  yang berbahan  dasar  ubi  kayu  (Silalahi  dkk., 2019).
Ubi kayu yang memiliki potensi sebagai bahan  pangan,  pakan  dan  bahan  baku industri yang tahan terhadap kondisi kering. Namun,  pada  kondisi  cekaman  kering tingkat produktivitas ubi kayu menurun dan dapat  menyebabkan  kematian  pada tanaman  tersebut.    Sehingga  toleransi  ubi kayu  terhadap  cekaman  kering  perlu ditingkatkan  lagi,  agar  produktivitasnya dapat  meningkat.  Oleh  karena  itu,  perlu dilakukan  pemuliaan  tanaman  ubi  kayu untuk menjaga produktivitas ubi kayu tetap baik  pada  lahan  kering.  Teknik  pemuliaan yang paling efektif untuk tanaman ubi kayu yaitu dengan menggunakan teknik molekuler,  karena  waktu  pembungaan  ubi kayu yang cukup lama berkisar antara 8-10 bulan yang dipengaruhi  oleh genotip serta
Identifikasi WIN1 ( Wax Inducer1) Pada Tanaman Ubi Kayu ……
kondisi  lingkungan  (Yuliadi  et  al.,  2011), sehingga  pemuliaan  tanaman  ubi  kayu menggunakan teknik konvensional (breeding)  kurang  efektif  untuk  dilakukan. Teknik pemuliaan tanaman secara molekuler dapat diawali dengan memahami karakteristik dari gen yang akan digunakan sebagai marka gen toleran kekeringan. Salah satu gen tahan kering yang sudah diketahui terdapat  pada  tanaman  arabidopsis, gandum,  murbei,  dan  tomat  yaitu  WIN1 (Wax  Inducer1).  Gen  ini  diketahui  mampu mengakumulasi biosintesis
kutikula
(Kannangara  dkk.,  2007).  Kutikula  dapat menjaga  air  dalam  tubuh  tanaman  serta mengurangi  transpirasi  air  non  stomata sehingga  dapat  mengurangi  dehidrasi  sel (Schreiber, 2010).
Salah  satu  faktor  transkripsi  pertama yang  diidentifikasi  sebagai  regulator biosintesis  kutikula  adalah  AP2  yang merupakan  domain  Wax  Inducer1 (WIN1) (Aharoni  dkk.,  2004).  Gen  ini  berfungsi untuk  meningkatkan  efisiensi  penggunaan air  dengan  memodifikasi  sifat  difusif  daun karena  akumulasi  lilin  tingkat  tinggi.  Gen WIN1 pada Arabidopsis thaliana ditemukan dapat mengoordinasikan  ekspresi gen dari sejumlah  besar  enzim  yang  terlibat  dalam perpanjangan asam lemak dan
pembentukan  senyawa  alifatik.  Gen  WIN1 pada  tanaman  ubi  kayu,  kedelai,  kentang dan  tanaman  lainnya  masih  belum dieksplorasi.  Tujuan  dalam  penelitian  ini yaitu  eksplorasi dan  identifikasi gen  WIN1 secara molekuler pada tanaman ubi kayu.

## Metode Penelitian Bahan Tanam
Tanaman  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah ubi kayu Varietas Adira 1 dan Malang 6 yang ditumbuhkan di dalam pot yang berumur 5 bulan.
Isolasi DNA dan Amplifikasi WIN1 Ubi Kayu
Isolasi  DNA  daun  ubi  kayu  dilakukan menggunakan  Kit  GenEXTM  (Gene  All Biotechnology,  Korea)  sesuai  dengan protokol  yang  direkomendasikan.  Satu sampel  ubi  kayu  pada  setiap  varietas masing-masing  diambil  daunnya.  Secara singkat,  0,1  g  daun  ubi  kayu  ditambah dengan  buffer  PL  dan  RNase  kemudian digerus  hingga  halus.  Sampel  yang  sudah halus  dipindahkan  pada  tube  1,5  ml  dan diinkubasi  pada  thermoshaker  selama  15 menit  pada  suhu  65  C.  Sampel  kemudian disentrifugasi dan supernatan dipindahkan pada tube baru kemudian ditambah buffer PP dan dihomogenkan. Sampel disentrifugasi  dan  diambil  supernatannya kemudian  ditambah  dengan  isopropanol. Selanjutnya,  sampel  disentrifugasi  dan supernatan  ditambah  dengan  etanol  70  . Sentrifugasi  kembali  dan  supernatan dibuang.  Pelet  dikeringkan  dalam  vacuum dry,  kemudian  pelet  yang  sudah  kering dilarutkan dengan buffer RE.
Untuk  proses  amplifikasi  WIN1,  DNA yang  sudah  berhasil  diisolasi  digunakan sebagai template dalam total volume reaksi 20  μl.  Reaksi  PCR  dimulai  dengan  proses pencampuran  komponen  yang  terdiri  dari PCR  premix,  dH2O,  genom  DNA  serta forward primer dan reverse primer. Sekuen forward WIN1 (WIN1_1F, 5’ - ATGGTGCAATCAAAGAAGTTCAGA- 3’),  dan sekuen  reverse  WIN1  (WIN1_636R,  5’ - TCAGAGACAGAAGCTACCATCA- 3’.
Selanjutnya  sampel  dimasukkan  dalam mesin  PCR  dengan  kondisi  diatur:  Pre Denaturasi 95  C selama 5 menit, 35x siklus (Denaturasi 95  C selama 30 detik, Annealing 59  C selama 30 detik, Ekstensi  72  C selama 1  menit  20  detik)  dan  final  ekstensi  72  C selama  5  menit.  Produk  PCR  selanjutnya
Lailiyah Maulidatul Hasanah, Agung Nugroho Puspito, Sattya Arimurti , Mukhamad Su’udi
dilihat  di  UV  transilluminator.  Pita  yang muncul dibandingkan dengan marker yang digunakan (100 bp ladder, Bioneer).

## Analisis Sekuen WIN1
Analisis  sekuen  dilakukan  setelah mendapatkan hasil sekuensing. Sekuensing dilakukan  menggunakan  jasa  1 st BASE Malaysia  melalui  PT  Genetica  Science dengan  metode  sanger.  Analisis  meliputi konfirmasi dengan BioEdit. Untuk meyakinkan  kebenaran  produk  PCR tersebut maka dilakukan konfirmasi dengan menggunakan  sekuensing.  Sekuen  yang didapatkan dianalisis tingkat keterbacaannya  dengan  menggunakan BioEdit  dan  langsung  membandingkan dengan peak yang ada di kromatogram. Hasil tersebut  selanjutnya  dibandingkan  dengan sekuen yang ada di database genom u bi kayu (Phytozome cassava). Untuk memaksimalkan proses analisis berikutnya maka dilakukan recovery dengan memanfaatkan sekuen yang ada di database. Tahap  selanjutnya  adalah  sekuen WIN1 diproses  dengan  menggunakan  software
Spidey  dan  Bioinformatics.org.  Hasil  yang berupa sekuen asam amino dianalisa lebih lanjut  dengan  menggunakan  BLAST  dan Genedoc.  Kontruksi  pohon  filogeni  sekuen asam  amino  menggunakan  MEGA-X ( Molecular  Evolutionary  Genetics  Analysis ). Program yang digunakan adalah Neighbor- Joining dengan Bootstrap 1000 kali.
Hasil dan Pembahasan Analisis PCR
Gen WIN1 ( Wax  Inducer1 )  merupakan gen tahan kering yang telah ditemukan pada beberapa tanaman seperti gandum, murbei, tomat,  padi  dan barrel  medic ( Medicago truncatula )  (Djemal  &  Khoudi,  2015; Sajeevan et al., 2017; Al-Abdallat et al., 2014; Wang et al., 2012; Bi et al., 2017). Amplifikasi WIN1 pada penelitian ini berhasil dilakukan yang ditunjukkan dengan adanya pita DNA yang  tebal,  jelas  dan  tunggal  ( single  band ) (Gambar  1).    Hasil  tersebut  menunjukkan bahwa  gen WIN1 juga  terdapat  pada tanaman  ubi  kayu  varietas  Malang  6  dan Adira 1.

## Tabel 1.
Hasil amplifikasi PCR Ubi kayu (Manihot esculenta Crantz.) Keterangan: M (Marker), M6 (Ubi kayu Var. Malang 6), A1 (Ubi kayu Var. Adira 1)
Identifikasi WIN1 ( Wax Inducer1) Pada Tanaman Ubi Kayu ……
Gambar 1.
Hasil amplifikasi PCR Ubi kayu (Manihot esculenta Crantz.) Keterangan: M (Marker), M6 (Ubi kayu Var. Malang 6), A1 (Ubi kayu Var. Adira 1)

## Gambar 2.
Hasil amplifikasi PCR Ubi kayu (Manihot esculenta Crantz.) Keterangan: M (Marker), M6 (Ubi kayu Var. Malang 6), A1 (Ubi kayu Var. Adira 1)
Keterangan: MeWIN1 ( Manihot esculenta Crantz ) (Phytozome,2021), MeWIN1** ( Manihot esculenta Crantz ) Var. Malang 6, MeWIN1* ( Manihot esculenta Crantz ) Var. Adira 1, AtWIN1 ( Arabidopsis thaliana (L.) Heynh . ), SlWIN1 ( Solanum lycopersicum L.), StWIN1 ( Solanum tuberosum L.), MtWIN1 ( Medicago trucantula Gaertn.)
Sekuen WIN1 dari  kedua  varietas  ubi kayu  masing-masing  dianalisis  meng- gunakan  BLAST.  Hasil  yang  diperoleh menunjukkan  adanya  tingkat  kesamaan lebih tinggi antara varietas Adira 1 dan ubi
kayu  kultivar  AM560-2  pada  tingkat  asam amino  (Wang  dkk.,  2014)  dibandingkan dengan  Malang  6.  Kultivar  AM560-2 merupakan  kultivar  ubi  kayu  yang  sekuen WIN1  nya  sudah  terdaftar  pada  NCBI.
Lailiyah Maulidatul Hasanah, Agung Nugroho Puspito, Sattya Arimurti , Mukhamad Su’udi
Setelah disejajarkan menggunakan Genedoc hasil  menunjukkan  bahwa  urutan  asam amino dari Adira 1 tidak ada beda dengan AM560-2  sedangkan  varietas  Malang  6 terdapat  satu  perbedaan  urutan  asam amino. Perbedaan asam amino terletak pada nomor 168 yaitu asam amino valin (V) pada varietas Malang 6 dan asam amino glisin (G) pada varietas Adira 1 dan kultivar AM560-2 (Gambar  2B).  Perubahan  tersebut  muncul dikarenakan  adanya  nukleotida  yang berubah  pada  posisi  504  bp  dari  guanin menjadi timin.
Ubi kayu varietas Malang 6 termasuk ubi kayu  pahit  dan  beracun  karena  memiliki kadar asam sianida (HCN) pada umbi segar lebih  dari  100  mgHCN/kg.  Sedangkan  ubi kayu  varietas  Adira  1  termasuk  dalam varietas ubi kayu manis  dengan kandungan asam  sianida  40mgHCN/kg  (Ariani  dkk., 2017).  Pemanfaatan  varietas  ubi  kayu Malang 6 dan Adira 1 menyesuaikan dengan kandungan  HCN  yang  dimiliki  kedua varietas  tersebut.  Varietas  Malang  6 dimanfaatkan  sebagai  bahan  baku industri dalam pembuatan tepung tapioka dan juga MOCAF karena kadar HCN yang tinggi pada varietas Malang 6 dapat dihilangkan dengan proses  pengeringan,  fermentasi,  dan  juga pencucian  melalui  olahan  industri  . Sedangkan  varietas  Adira  1  dimanfaatkan sebagai  ubi  kayu  pangan  yang  dapat langsung  dikonsumsi  dengan  pegolahan sederhana (Balitkabi, 2014). Varietas Adira
1  dimanfaatkan  sebagai  ubi  kayu  pangan yang  dapat  langsung  dikonsumsi  dengan pengolahan sederhana. Kemungkinan terbesar  kultivar  AM560-2  termasuk  ubi kayu pangan karena salah satu faktor yang mempengaruhi  kandungan  HCN  adalah faktor  genetik  (Cardoso  dkk.,  2005).  Pada tanaman  ubi  kayu,  senyawa  glukosida sianogen  yang  merupakan  senyawa penyusun  HCN  disintesis  di  daun  dan
diangkut  ke  umbi  (Wheatley  and  Chuzel, 1993).  Sedangkan  kandungan  lilin  pada permukaan  daun  tanaman  semakin meningkat  dengan  adanya  ekspresi  gen WIN1 (Sajeevan et al., 2017). Sehingga pada kultivar  AM560-2  menghasilkan  urutan asam  amino  WIN1  yang  sama  dengan varietas  Adira  1.  Namun  terkait  kultivar AM560-2  masih  belum  terdapat  laporan khusus terkait pemanfaatannya.
Asam  amino  WIN1  pada  ubi  kayu memiliki  persentase  homologi  sebanyak 61,50%  dengan Arabidopsis  thaliana . Sedangkan  persentase  homologi  dengan beberapa tanaman yang lain seperti tomat, kentang,  dan  medicago  berturut-turut adalah  57,28%,  60,58%  dan  63,96% (Zhuang dkk., 2012). WIN1 ( Wax Inducer1 ) pertama  kali  diisolasi  dari  tanaman Arabidopsis thaliana, WIN1 termasuk dalam domain AP2 yang berperan dalam regulasi dan  biositesis  lilin  dan  kutikula  (Aharoni dkk.,  2004).  Gen  WIN1  pada  Arabidopsis thaliana  ditemukan  memiliki  peran  dalam mengkoordinasi ekspresi gen dari sejumlah besar  enzim  yang  terlibat  dalam  per- panjangan  asam  lemak  dan  pembentukan senyawa  alifatik.  Profil  ekspresi  gen  WIN1 ditemukan  dapat  mempengaruhi  banyak gen yang terlibat dalam biosintesis lilin. Over ekspresi  WIN1  pada  Arabidopsis  thaliana transgenik menunjukkan perbedaan morfologi dengan Arabidopsis thaliana wild- type  yaitu  daunnya  lebih  mengkilap  dan hijau (Kannangara et al., 2007).
WIN1  menghasilkan  akumulasi  lilin yang  signifikan  dengan  mengatur  ekspresi banyak  gen  di  jalur  biosintesis  lilin.  Selain itu,  WIN1  telah  terbukti  memicu  produksi lilin,  meningkatkan  toleransi  kekeringan dan  memodulasi  permeabilitas  kutikula ketika  adanya  over  ekspresi  dalam Arabidopsis  thaliana  (Aharoni  dkk.,  2004). Ekspresi gen WIN1 pada beberapa tanaman
Identifikasi WIN1 ( Wax Inducer1) Pada Tanaman Ubi Kayu ……
lain seperti tomat menggunakan karakterisasi  gen  ortolog  terdekat  WIN1 dalam  tomat,  yaitu  SlSHN1.  Urutan  asam amino  dari  protein  SlSHN1  menunjukkan tingkat  kemiripan  yang  tinggi  dengan protein  Arabidopsis  thaliana  WIN1.  Gen SlSHN1  diinduksi  sebagai  respon terhadap kondisi  kekeringan  yang  mengindikasikan peran potensial dalam memediasi toleransi terhadap  stres  dehidrasi  (Al-Abdallat  dkk., 2014).
Hasil  analisis  filogenetik  menunjukkan tingkat  kekerabatan  WIN1  pada  varietas Malang  6,  Adira  1  dan  kultivar  AM560-2 sangat  dekat.  Kontruksi  filogeni  me- nunjukkan bahwa tingkat kekerabatan asam amino  WIN1  pada  ubi  kayu  lebih  dekat dengan Medicago truncatula dan selanjutnya  adalah  Arabidopsis  thaliana (Gambar 3). Medicago truncatula merupakan salah satu tanaman legum yang memiliki  ukuran  genom  diploid  kecil, mudah untuk ditanam, dan memiliki siklus hidup  yang  relatif  singkat  (May,  2004). Kekerabatan ditentukan berdasarkan jarak terdekat dengan tanaman  ubi  kayu  karena pembuatan pohon filogenetik menggunakan Neighbor-joining sehingga untuk menentukan  tingkat  kekerabatan  yang dimiliki  dapat  dilihat  dari  jarak  antara tanaman dalam pohon filogenetik, semakin dekat  maka  tingkat  kekerabatan  semakin tinggi  dan  memiliki  kemungkinan  berasal dari  satu  nenek  moyang  yang  sama (Dharmayanti, 2011).

## Gambar 3
Analisis filogenetik WIN1 ubi kayu (Manihot esculenta Crantz.) dan spesies tanaman yang lain.

## Kesimpulan dan Saran Kesimpulan
Karakterisasi  WIN1  pada  tanaman  ubi kayu  varietas  Adira  1  memiliki  kemiripan dengan  ubi  kayu  kultivar  AM560-2  yang terdapat  pada  database  NCBI,  sedangkan WIN1 yang terdapat pada varietas Malang 6 terdapat satu perbedaan asam amino yaitu
valin.  Sehingga  membuat  susunan  asam amino berbeda.

## Saran
Penelitian  ini  dapat  dilanjutkan  pada tingkat  isolasi  RNA  sehingga  pemanfaatan gen  WIN1  pada  tanaman  ubi  kayu  dapat lebih  aplikatif  hingga  pada  tahap transformasi genetik.
Lailiyah Maulidatul Hasanah, Agung Nugroho Puspito, Sattya Arimurti , Mukhamad Su’udi

## Daftar Pustaka
Aharoni, A., S. Dixit, R. Jetter, E. Thoenes, G.
Van  Arkel,  dan  A.  Pereira.  2004.  The shine clade of ap2 domain transcription  factors  activates  wax biosynthesis,  alters  cuticle properties, and  confers  drought  tolerance  when overexpressed in arabidopsis w inside a  box  sign. Plant  Cell .  16(9):2463 – 2480.
Al-Abdallat, A. M., H. S. Al-Debei, J. Y. Ayad, dan S. Hasan. 2014. Over-expression of slshn1  gene  improves  drought tolerance  by  increasing  cuticular  wax accumulation in tomato. International Journal of Molecular Sciences . 15(11):19499 – 19515.
Ariani,  L.,  T.  Estiasih, dan  E. Martati. 2017. Physicochemical  characteristic  of cassava  (manihot  utilisima)  with different cyanide level. Jurnal Teknologi Pertanian . 18(2):119 – 128.
Balitkabi.  2014. Varietas  Unggul  Ubikayu
Untuk  Bahan  Pangan  Dan  Bahan Industri . Dalam Kementrian Pertanian
Badan Litbang Pertanian Bi, H., S. Luang, Y. Li, N. Bazanova, N. Borisjuk,
M. Hrmova, dan S. Lopato. 2017. Wheat drought-responsive wxpl transcription factors  regulate  cuticle  biosynthesis genes. Plant  Molecular  Biology .  94(1 – 2):15 – 32. Budi,  Rahmad  Setia,  Arif  Anwar.  2019. Pengaruh cekaman kekeringan terhadap  penampilan  dan  produksi beberapa  galur  padi  asal  sigambiri merah  pada  tanaman  m4. AGRILAND Jurnal Ilmu Pertanian . 7(2):39:45.
Caniago Murtiana, Dewi Indriyani Roslim, H. 2014.  DESKRIPSI  karakter  morfologi ubi  kayu  (manihot  esculenta  crantz) juray  dari  kabupaten  rokan  hulu. 1(2):613 – 619.
Cardoso,  A.  P.,  E.  Mirione,  M.  Ernesto,  F.
Massaza, J. Cliff, M. Rezaul Haque, dan J. H.  Bradbury.  2005.  Processing  of cassava  roots  to  remove  cyanogens. Journal  of  Food  Composition  and Analysis . 18(5):451 – 460. Dharmayanti,  N.  I.  2011.  Filogenetika molekular : metode taksonomi organisme berdasarkan sejarah evolusi. Wartazoa . 21(1):1 – 10.
Djemal, R. dan H. Khoudi. 2015. Isolation and molecular  characterization  of  a  novel win1/shn1 ethylene-responsive transcription  factor  tdshn1  from durum  wheat  (triticum  turgidum.  l. subsp. durum). Protoplasma . 252(6):1461 – 1473.
Fitriani,  H.,  N.  S.  Hartati,  dan  E. Sudarmonowati.  2019.  Evaluation  of adaptation  and  production  of  three selected  cassava  (manihot  esculenta crantz)  in  peat  land  area  of  central kalimantan. Jurnal  ILMU  DASAR . 20(2):75.
Kannangara,  R.,  C.  Branigan,  Y.  Liu,  T. Penfield, V. Rao, G. Mouille, H. Höfte, M. Pauly,  J.  L.  Riechmann,  dan  P.  Broun.
2007.  The  transcription  factor win1/shn1 regulates cutin biosynthesis  in  arabidopsis  thaliana. Plant Cell . 19(4):1278 – 1294.
Laimeheriwa,  B.  M.  2018.  Mekanisme terjadinya  variasi  individu  dalam populasinya. (December) May,  G.  D.  2004.  From  model  to  crops: integrated  medicago  genomics  for alfalfa improvement. Dordrecht:
Kluwer Academic Publishers . 325 – 332.
Medika  Cherli,  Zainal  Abidin,  E.  K.  2016. DAMPAK  el  nino  terhadap  produksi dan pendapatan agroindustri berbasis singkong  di  desa  karang  anyar kecamatan  gedongtataan  kabupaten pesawaran. 4(4):342 – 350.
Restiani Rini , Dewi Indriyani Roslim, H. M. 2014. KARAKTER morfologi ubi kayu
Identifikasi WIN1 ( Wax Inducer1) Pada Tanaman Ubi Kayu ……
(manihot  esculenta  crantz)  hijau  dari kabupaten pelalawan. 1(2):619 – 623.
Sajeevan,  R.  S.,  K.  N.  Nataraja,  K.  S. Shivashankara,  N.  Pallavi,  D.  S. Gurumurthy, dan M. B. Shivanna. 2017. Expression  of  arabidopsis  shn1  in indian  mulberry  (morus  indica  l.) increases leaf surface wax content and reduces  post-harvest  water  loss. Frontiers  in  Plant  Science .  8(April):1 – 13.
Schreiber, L. 2010. Transport barriers made of cutin, suberin and associated waxes. Trends  in  Plant  Science .  15(10):546 –
553.
Silalahi, K. J. A., S. D. Utomo, A. Edy, dan N. Sa’diyah .  2019.  EVALUASI  karakter morfologi  dan  agronomi  ubi  kayu (manihot  esculenta  crantz)  13 populasi f 1 di bandar lampung. Jurnal Agrotek Tropika . 7(1):281.
Wang, W., B. Feng, J. Xiao, Z. Xia, X. Zhou, P. Li, W.  Zhang,  Y.  Wang,  B.  L.  Møller,  P. Zhang, M. C. Luo, G. Xiao, J. Liu, J. Yang, S.  Chen, P.  D.  Rabinowicz,  X.  Chen,  H. Bin Zhang, H. Ceballos, Q. Lou, M. Zou, L. J. C. B. Carvalho, C. Zeng, J. Xia, S. Sun, Y. Fu, H. Wang, C. Lu, M. Ruan, S. Zhou, Z.  Wu,  H.  Liu,  R.  M.  Kannangara,  K. Jørgensen,  R.  L.  Neale,  M.  Bonde,  N. Heinz,  W.  Zhu,  S.  Wang,  Y.  Zhang,  K.
Pan, M. Wen, P. A. Ma, Z. Li, M. Hu, W.
Liao, W. Hu, S. Zhang, J. Pei, A. Guo, J. Guo, J. Zhang, Z. Zhang, J. Ye, W. Ou, Y.
Ma, X. Liu, L. J. Tallon, K. Galens, S. Ott, J. Huang,  J.  Xue,  F. An,  Q.  Yao,  X.  Lu, M. Fregene, L. A. B. López-Lavalle, J. Wu, F. M. You, M. Chen, S. Hu, G. Wu, S. Zhong,
P. Ling, Y. Chen, Q. Wang, G. Liu, B. Liu, K.  Li,  dan  M.  Peng.  2014.  Cassava genome  from  a  wild  ancestor  to cultivated varieties. Nature Communications . 5 Wang,  Y.,  L.  Wan,  L.  Zhang,  Z.  Zhang,  H. Zhang, R. Quan, S. Zhou, dan R. Huang. 2012.  An  ethylene  response  factor oswr1  responsive  to  drought  stress transcriptionally activates wax synthesis related genes and increases wax production in rice. Plant Molecular
Biology . 78(3):275 – 288.
Wheatley, C.C. and Chuzel, G. 1993. Cassava: The Nature of the Tuber and Use as a Raw Material
Yuliadi, E., Sunyoto., Kristina, A. dan A. 2011.
Aplikasi  paclobutrazol  melalui  daun tanaman ubi kayu (manihot esculenta crantz.) untuk merangsang pembungaan  dini  di  dataran  rendah. Jurnal  Penelitian  Pertanian  Terapan . 12(1):50 – 57.
Zhuang,  Y.,  X.  Zhou,  dan  S.  Wang.  2012. Gapped  blast  and  psi-blast:  a  new generation of protein database search programs. Plant  Systematics  and Evolution  =  Entwicklungsgeschichte Und Systematik Der Pflanzen . 298(7):3389 – 3402.