## PEMBESARAN DAN EVALUASI CALON INDUK IKAN KERAPU BEBEK Cromileptes altivelis TURUNAN PERTAMA (F1)
GROW OUT AND EVALUATION OF FIRST GENERATION ( F1 ) OF PROSPECTIVE HUMPBACK GROUPER Cromileptes altivelis BROODSTOCK
Tridjoko 1* , Ida Komang Wardana 1 , dan Ahmad Muzaki 1
1 Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Budidaya Laut, Gondol Bali *E-mail: tridjoko_gondol@yahoo.co.id

## ABSTRACT
During  this  time  the  humpback  grouper  broodstock  spawning  that  comes  from  nature.  Efforts  to provide humpback grouper fish from cultured (F1) has been conducted and it has been spawn.  The purpose  of  this  study  was  to  determine  the  quality  of  broodstock  first  generation  (F1)  with  a  good maintenance  management  and  monitoring  evaluation  of  character  growth,  gonad  development,  and genetic characteristics through microsatelite marker.  Broodstock reared in concrete tank volume of 75  m 3 with  three  different  of  hormonal  implantation  treatments:  (1)  estradiol,  (2)  17α- methyltestosterone  (MT),  (3)  a  mixture  of  17α-Methyl-testosterone  by  aromatase  inhibitors,  and control.  The  observed  parameters  were  growth,  gonad  development,  reproductive  hormones  in  the blood composition and the performance of genetic through microsatellite analysis. The results showed that  the  humpback  grouper  F1  implantation  treatment  by  methyl  testosterone  and  estradiol  showed good growth with an average body weight at the end of the observed ranged from 680 ± 60.5 to 820 ± 76,5g with an average body length of 34 -36 cm. In individual control growth better because during the maintenance of the population is not implanted. Analyses of testosterone and estradiol in the blood plasma showed that 40% of individuals in the population were males. Microsatellite analysis showed that F1 fish had good genetic variation (0.778-1.000) so that it can be used as broodstock candidate.
Keywords: evaluation of broodstock candidate (F1), humpback grouper, grow out

## ABSTRAK
Selama  ini  induk  ikan  kerapu  bebek  yang  dipijahkan  berasal  dari  alam.  Usaha-usaha  untuk menyediakan  induk  ikan  kerapu  bebek  dari  hasil  budidaya  (F1)  sudah  dilakukan  dan  ternyata  sudah berhasil  memijah. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  kualitas  calon  induk  ikan  kerapu bebek  turunan  pertama  (F1)  dengan  manajemen  pemeliharaan  yang  baik  dan  evaluasi  pemantauan karakter  pertumbuhan,  perkembangan  gonad,  dan  karakter  genetik  melalui  penanda  microsatelite. Calon  induk  dipelihara  pada  bak  beton  volume  75  m 3 dengan  3  perlakuan  yang  berbeda  yaitu:  (1) implant  hormone  estradiol,  (2)  17α-methyl  testosterone,  dan  (3)  campuran  17α-Methyltestosterone dengan  aromatase  inhibitor.  Parameter  yang  diamati  meliputi  pertumbuhan,  tingkat  kematangan gonad,  komposisi  hormon  reproduksi  dalam  darah,  dan  keragaman  genetik  melalui  analisa mikrosatelit. Hasil penelitian menunjukkan bahwa calon induk ikan kerapu bebek F1 pada perlakuan implantasi  methyl  testosterone  dan  estradiol  menunjukkan  pertumbuhan  yang  baik    dengan  rata-rata bobot tubuh pada akhir penelitian berkisar antara 680 ± 60,5 – 820 ± 76,5g dengan  rata-rata panjang tubuh 34-36 cm. Pada individu kontrol  ternyata  memberikan pertumbuhan  lebih baik karena selama pemeliharaan  populasi  tersebut  tidak  mengalami  proses  implantasi.  Komposisi  hormon  testosterone dan estradiol pada plasma darah menunjukkan bahwa 40% individu dalam populasi tersebut memiliki gonad  jantan.  Keragaman  genetik  calon  induk  kerapu  bebek,  dari  hasil  analisa  mikrosatelit, memberikan  nilai  yang  cukup  baik  (0,778-1,000)  sehingga  dapat  digunakan  sebagai  indukan  hasil budidaya.
Kata kunci: evaluasi calon induk (F1), kerapu bebek, pembesaran

## I. PENDAHULUAN
Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengem- bangan Budidaya Laut Gondol, sudah berha- sil mengembangkan pembenihan ikan kerapu bebek  sampai  menghasilkan  benih  sesuai dengan  ukuran  yang  diinginkan  meskipun kelangsungan  hidupnya  masih  bervariasi. Kualitas  benih  sangat  berhubungan  dengan faktor genetik, dimana bila terjadi penurunan kualitas  genetik  benih  akan  berpengaruh terhadap  faktor  pertumbuhan  dan  kelang- sungan  hidup  ikan  (Tridjoko et  al .,  2006). Berdasarkan beberapa hasil penelitian, faktor genetik sangat berpengaruh terhadap kualitas larva  dan  pertumbuhan.  Oleh  karena  itu peranan faktor genetik dalam breeding sangat penting  untuk  memperoleh  induk  dan  benih yang unggul (Benzie et al ., 1996).
Terlaksananya penelitian evaluasi dan pembesaran  benih  ikan  kerapu  bebek  F1  se- bagai  kandidat  calon  induk,  secara  tidak langsung  dapat  mengetahui    data  dan  infor- masi mengenai kualitas morfologi, reproduk- si  dan  genetik  yang  akan  dijadikan  sebagai pedoman  dalam  pemilihan  atau  produksi calon  induk  dari  hasil  kegiatan  budidaya. Induk  hasil  budidaya  turunan  pertama  (F-1) yang  dijadikan  induk  untuk  pembenihan sudah berhasil dengan baik yang telah meng- hasilkan  benih  F-2  (Tridjoko et  al. ,  2006; Tridjoko,  2007).  Hal  ini  berkaitan  dengan upaya yang telah dilakukan selektif breeding secara  bertahap  yang  dimulai  tahun  2008. Beberapa  tahapan  tersebut  ternyata  gonad induk kerapu bebek turunan ke-2 (F-2) sudah berkembang  dengan  baik  dan  bisa  dilakukan kawin  silang  ( backcross )  (Tridjoko et  al., 2014).  Akan  tetapi  pemantauan  terfokus terhadap  sifat  biologi  pada  generasi/anakan kerapu  bebek  belum  terdata  dengan  baik. Dengan  demikian  evaluasi  pembesaran  dan pemeliharaan  benih  turunan  pertama (F1) untuk  calon  induk  penting  dilakukan  untuk mengetahui kualitas secara morfologi, repro- duktif  dan  genetik  sebelum  digunakan  se- bagai indukan. Hasil yang diperoleh diharap- kan  dapat  ditemukan  suatu  tehnik  peme-
liharaan/pembesaran  benih  yang  dijadikan calon  induk  berkualitas  dari  hasil  budidaya. Sehingga pada masa yang akan datang, dapat mendukung  program  pemuliaan  ikan  kerapu khususnya  dalam  produksi  induk  kerapu bebek yang siap untuk dipijahkan.
Ada  beberapa  macam breeding pro- gram  yang  dapat  digunakan  untuk  meng- eksploitasi  faktor  genetik  ( genotype )  yang menguntungkan  diantaranya  yaitu selective breeding dan cross  breeding (Tave,  1993). Selective  breeding  program telah  digunakan secara  luas  untuk  menyeleksi  sifat-sifat  ter- tentu  pada  berbagai  spesies  ikan  di  seluruh dunia,  baik  pada  ikan  air  tawar  maupun  air laut.  Seperti  yang  terjadi  pada catfish ( Ictalurus  punctatus ),  dilakukan  seleksi  in- dividu  yang  tujuannya  untuk  meningkatkan laju  pertumbuhan  selama  2  generasi  (Tave, 1993).  Kenaikan variasi genetik  yang signi- fikan  juga  diperoleh  pada rainbow  trout ( Onchorhynchus sp), setelah diseleksi selama 6  generasi  melalui  seleksi  famili  (Kincaid, 1983).  Selanjutnya  keragaman  genetik  ikan perlu  dipertahankan  dalam  proses  peng- gunaan  induk  dalam  perbenihan,  karena terjadinya  reduksi  gen  akan  mengakibatkan hilangnya  sebagian  karakter  genetik  benih turunannya (Gondie et  al ., 1995;  Benzie dan William,  1996;  Sugama et  al .,  1999).  Ting- ginya  keragaman  genetik  ini  juga  banyak dipengaruhi  oleh  jumlah  induk  dalam  suatu populasi  pembenihan  dan  juga  jumlah  induk yang  efektif  dalam  suatu  proses  pemijahan (Subaidah et al ., 2001).  Dari hasil penelitian, menyatakan  bahwa  kerapu  bebek  memiliki sifat protogenous  hermaprodit yang  dida- hului  dengan  terbentuknya  gonad  betina, sehingga  dalam  proses  pembesarannya  perlu diinisiasi  pemantauan  terhadap  perkemba- ngan gonad (Tridjoko et al. , 2006).
Berdasarkan hal tersebut, maka tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui kualitas  calon  induk  ikan  kerapu  bebek  tu- runan  pertama  (F1)  dengan  manajemen pemeliharaan yang baik dan evaluasi peman- tauan  karakter  pertumbuhan,  perkembangan
gonad dan karakter  genetik melalui penanda microsatelite.

## II. METODE PENELITIAN
Calon  induk  ikan  kerapu  bebek turunan  pertama  (F1)  dari  hasil  pemijahan induk  alam,  diseleksi  berdasarkan  kaidah- kaidah  pemuliaan  dan  protokol  (SOP)  yang telah  ada.  Standar  operasional  protokol tersebut meliputi pemeliharaan larva, seleksi, cut  off ,  dan  terbebas  dari deformity .  Calon induk  dengan  ukuran  bobot  380-525g/ekor dipelihara  pada  bak  beton  volume  75  m 3 secara  terkontrol.  Pada  tahap  pembesaran calon induk tersebut dilakukan juga observasi terhadap  perkembangan  gonad,  sehingga pemeliharaan  berlangsung  pada  2  bak  yang berbeda (bak A dan bak B). Pada bak A diisi 75  ekor  calon  induk  ikan  kerapu  bebek  F1 sebagai  kontrol  (K).  Sementara  pada  bak  B, diberikan  3  (tiga)  perlakuan  estradiol,  17α- Mt,  dan  17α-Mt+AI  dan  masing-masing individu  diberi  tanda ( tagging berupa micro- chip ) (Tabel 1).
Selanjutnya  ikan  kerapu  diimplantasi dengan  3  jenis  hormon  reproduksi,  yaitu estradiol  (Es)  25  ekor,  17  alpha  methyl- testoteron  (MT)  (memacu  perkembangan gonad jantan) sebanyak 25 ekor dan campur- an  antara  hormon  MT  dan  Aromatase
Inhibitor (AI) 25 ekor (membantu menstabil- kan  gonad  jantan  yang  sudah  terbentuk). Dosis  hormon  yang  di- implant untuk  setiap perlakuan  50  µg/kg  dan  dilakukan  peng- ulangan setiap bulan selama 3 bulan. Setiap 2 bulan sekali diambil sampel darah dari setiap perlakuan  masing-masing  sebanyak  5  ekor dan  diupayakan  individu-individu  tersebut sampai  akhir  pengamatan  tetap  hidup.  Pada bak  pemeliharaan  dilengkapi  dengan  aerasi sebagai  sumber  oksigen.  Pergantian  air  pada media pemeliharaan >200%/hari dengan cara air mengalir. Pakan  yang diberikan meliputi: ikan  rucah,  cumi-cumi,  dan  ditambahkan vitamin C dan vitamin E (0,5g/kg) sebanyak 5% dari biomass.
Analisa  keragaan  genetik,  jaringan berupa sirip ekor ikan uji (masing masing 10 ekor diambil secara acak dari masing masing perlakuan  sesuai  dengan  kode tagging yang sudah  ditentukan.  Jaringan  ikan  uji  yang sudah  dikoleksi,  selanjutnya  diekstraksi menggunakan Qiamp DNA mini kit (Qiagen) berdasarkan  metode  dari  Li et  al. (2007). Hasil  extraksi  dilihat  konsentrasi  DNA-nya dengan  menggunakan  mesin Genequant . Genom  DNA  dari  masing-masing  sampel disimpan  pada freezer -20°C  sebelum  digu- nakan  untuk  analisa  berikutnya.  Amplifikasi dengan  menggunakan  primer  microsatelit kerapu  bebek  berdasarkan  hasil  optimasi
Tabel 1. Kode tagging individu  ikan  kerapu  bebek  F1  (sampel  yang  di sampling )  pada masing-masing perlakuan.
Individu Kode Tagging Estradiol 17α-Mt 17α-Mt+AI Kontrol 1 180819801 180819828 180819743 180819762 2 180819802 180819829 180819746 180819768 3 180819807 180819830 180819747 180819769 4 180819809 180819831 180819749 180819770 5 180819814 180819832 180819751 180819773 6 180819815 180819833 180819753 180819774 7 180819818 180819837 180819754 180819775 8 180819819 180819839 180819758 180819778 9 180819820 180819840 180819760 180819779 10 180819821 180819842 180819772 180819800
Keterangan:  Mt = metyl testosteron, AI = aromatase inhibitor.
primer pada penelitian sebelumnya (Tridjoko et al. , 2014) dan mengacu pada hasil peneliti- an Nakorn et al. (2010). Nama primer, urutan basa,  dan  label  yang  digunakan  disajikan pada Tabel 2.
Reaksi  PCR, total volume yang digu- nakan sebesar 25 µl,    yang terdiri  dari  10 x PCR buffer , 2,5 mM dNTP, 10 pmol forward dan reverse primer ,  1,25 U Tag polymerase dan  50  ng template DNA. Thermal  cycle PCR  yang  digunakan  adalah  94°C  selama  1 menit  untuk  pre  denaturasi,  94°C  30  detik denaturasi, 57°C-60°C selama 30 detik untuk pelekatan  primer,  72°C  selama  1  menit pemanjangan  primer  dan  90°C  selama  30 detik  sebagai  proses  ekstensi  akhir.  Produk amplifikasi dielektroforesis menggunakan gel agarose 1,5% dalam 1x buffer TBE,  divisua- lisasikan  menggunakan UV  transilluminator dan  didokumentasikan  dengan Biodoc  gel camera .  Sampel  yang  sudah  teramplifikasi dengan  sempurna  dan  menunjukkan  hasil yang  stabil,  diamplifikasi  kembali  dengan primer  yang  sudah  dilabel. Labeling yang digunakan adalah primer label FAM ( Applied Biosystems )  untuk  CAL  02,  label  TAMRA untuk  CAL  09  dan  CAL  13  dilabel  dengan HEX.  PCR  produk  dari  hasil  amplifikasi dengan  primer  yang  dilabel  dielektroforesis menggunakan  agarose  gel  1,5%  dalam  1  x TBE buffer selama  30  menit  dan  didoku- mentasi  pada Biodoc  gel  camera dengan bantuan  UV  transilluminator.  Selain  dielek- troforesis dengan metode konvensional, frag-
men  DNA  juga  dipisahkan  secara  automatik menggunakan  mesin sequencer .  Elektrofo- resis  secara  automatik  ini  dilakukan  analisa mikrosatelit  di  Genetika  science.  Pembacaan hasil  grafik  fragmen  mikrosatelit  DNA dilakukan  dengan  menggunakan  perangkat lunak  GenMapper  Versi  4.0.  Analisis  SSR, hasil  interprestasi  fragmen-fragmen  yang muncul dapat dikatakan sebagai alel dan alel tersebut dapat dianalisis menggunakan analisis molecular varians (AMOVA) dengan software NTSys,  sementara  tingkat  hetero- sigositas  ditentukan  menggunakan software TFPGA.  Dari  hasil  analisa  variasi  genetik dengan  nilai  <  0,100  menunjukkan  tingkat variasi yang rendah.
Akhir pemeliharaan, calon induk dari masing  masing  perlakuan  yang  digunakan sebagai  ulangan  individu,  dimatikan  untuk mengambil  sampel  gonad  dan  hati  untuk mngetahui kondisi serta  tingkat kematangan gonad  dari  masing  masing  individu  tersebut. Parameter yang diamati diantaranya: pertum- buhan  setiap  bulan  (panjang  dan  bobot tubuh),  tingkat  perkembangan  gonad  yaitu dengan  cara  histologi  (metode  pewarnaan dengan  haematosiline  eosin  dengan  tahapan fiksasi,  dehidrasi,  clearing , embeding,  sec- tioning , staining sebagai  proses  akhir  dari pengecekan  (Anonymous,  1996)  dan  ELISA (Kusabio  kit),  keragaman  genetik  dengan penanda  mikrosatelit  (Nakorn et  al .,  2010). Data yang diperoleh dianalisa secara deskrip- tif.
Tabel 2. Data primer mikrosatelit yang digunakan dalam analisa keragaan genetik calon induk kerapu bebek turunan pertama (F1).
No Nama Primer Urutan basa/ Squence Target produk (bp) Label 1 CAL 02 F:GTCGC CTGAG ACAAG GACTC. 238 - 242 FAM R:GGACA GAGCG AGCTG GTAAC. 2 CAL 09 F:GATCC TTTGC TGCCA CCTT 182 - 226 TAMRA R:TCGCC ACTGA TGAAG CTATG 3 CAL 13 F:CGAAA AGAGC AAAGC CATGT 205 - 227 HEX R:GCCAG GTGAC AACAG TGAAG

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan  panjang  rata-rata  ikan kerapu  bebek  pada  bulan  Juni  mempunyai kisaran antara 32,0 – 33,5 cm.  Pertumbuhan panjang  terendah  yaitu  pada  perlakuan  yang diimplan dengan campuran hormon 17 alpha methyltestoteron  dan  aromatase  inhibitor. Sedangkan  yang  tertinggi  pertumbuhan panjang  rata-rata  ikan  kerapu  bebek  pada bulan  Juni  tersebut  pada  kontrol.  Demikian juga  pada  bulan  Juli,  nampaknya.  Pertum- buhan panjang terendah yaitu pada perlakuan yang  diimplan  dengan  campuran  hormon  17 alpha  methyltestoteron  dan  aromatase  inhi- bitor  yaitu  32,3  cm  dan  yang  tertinggi  pada kontrol  yaitu  33,7  cm.  Kisaran  partumbuhan panjang  rata-rata  ikan  kerapu  bebek  pada bulan Agustus antara 32,0 – 33,8 cm. Kisaran pertumbuhan  panjang  rata-rata  ikan  Kerapu Bebek  sampai  dengan  bulan  September adalah 33,0 – 34,0 (Gambar 1).
Gambar 1.  Hasil  pengamatan  pertumbuhan panjang  rata-rata  ikan  kerapu bebek  F1  pada  masing-masing perlakuan.  (Es:  estradiol,  Mt: Metyltestoteron,  AI:  Aromatase inhibitor, K: Kontrol).
Pertumbuhan  panjang  rata-rata  ikan kerapu  bebek  selama  penelitian  berlangsung pada individu kontrol dan perlakuan Mt serta estradiol  mengalami  kenaikan.  Sementara pada  perlakuan  AI  pada  bulan  Agustus  me- ngalami penuruan, hal tersebut kemungkinan
disebabkan  karena  ikan  pada  populasi  ter- sebut  nafsu  makannya  berkurang  sehingga berpengaruh  terhadap  pola  pertumbuhannya. Apabila dilihat pada Gambar 2, menunjukkan bahwa  rata-rata  bobot  tubuh  populasi  pada perlakuan  AI  berada  pada  posisi stagnan. Pertumbuhan  individu  kontrol  nampak  lebih baik  dibandingkan  dengan  perlakuan  yang lain,  hal-hal  tersebut  kemungkinan  disebab- kan  selama  penelitian  berlangsung  populasi kontrol  tidak/lebih  jarang  tersentuh  karena tidak mengalami proses implantasi, sehingga pertumbuhannya lebih optimal.
Gambar 2.  Hasil  pengamatan  pertumbuhan bobot rata-rata ikan kerapu bebek F1  pada  masing-masing  perlaku- an.  (Es:  estradiol,  Mt:  Metyl testoteron,  AI:  Aromatase  inhi- bitor, K: Kontrol).
Pertumbuhan  panjang  rata-rata  ikan kerapu  bebek  selama  penelitian  berlangsung mengalami kenaikan Beberapa hasil peneliti- an  mengenai  pakan  dan  lingkungan  pemeli- haraan ikan sangat berpengaruh terhadap laju pertumbuhan.  Seperti  halnya  ikan  Kerapu Bebek  ataupun  juga  jenis  ikan  laut  lainnya bahwa faktor kondisi pada lingkungan peme- liharaan  disamping  faktor  pakan  sangat  ber- pengaruh terhadap pertumbuhan. Hal-hal ter- sebut dipertegas pernyataan Brett dan Groves (1979),  bahwa  kelangsungan  hidup  tinggi, pertumbuhan  normal,  reproduksi  akan  lebih cepat apabila kualitas air untuk media peme- liharaan optimal.
Hasil  pengamatan  pertumbuhan  berat dan panjang ikan kerapu bebek, maka terlihat jelas  bahwa  dengan  bertambahnya  waktu pemeliharaan  maka  bertambah  pula  pertum- buhan  berat  dan  panjang  total  ikan  Kerapu Bebek  masing-masing  perlakuan  (Gambar  1 dan  2).  Oleh  karena  itu  selama  perlakuan pemberian  hormon  reproduksi  maupun  yang kontrol  terlihat  adanya  partumbuhan  bobot dan  panjang  calon  induk  ikan  kerapu  bebek yang dipelihara di bak secara terkontrol.
Kandungan  nutrisi  yang  memenuhi syarat  maupun  komposisi  kimia  pakan  yang memadai  merupakan  faktor  penting  untuk pertumbuhan  dan  perkembangan  gonad (Marzuqi et  al., 2002).  Hasil  analisis  protein terhadap cumi-cumi menunjukkan kandungan proteinnya cukup tinggi yaitu 63,77%. Terse- dianya  kandungan  protein  yang  cukup  tinggi memungkinkan tersedianya asam amino yang mencukupi.  Keunggulan  komposisi  kimia cumi-cumi  adalah  mengandung  asan  lemak essensial  yang  lebih  tinggi  sehingga  dapat mempercepat  perkembangan  gonad.  Asam lemak  essensial  tersebut  adalah  escosapenta- enoic  acid  (20:5w3)  dan  decosahexaenoic acid (22:6w3) (Tacon, 1985). Oleh karena itu, kualitas  dan  kuantitas  pakan  untuk  calon induk ikan  Kerapu Bebek selama proses per- tumbuhan  maupun  kematangan  gonad  ber- peran  penting  untuk  reproduksi  dan  menjaga kualitas  telur  yang  dihasilkan  (Tridjoko, 2003).
Disamping  kualitas  pakan,  pemberian hormone reproduksi seperti: estradiol, inhibi- tor  aromatase  dan  17α  Methyltestosteron juga  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan pada  ikan.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Kuwaye et  al. (1993)  yang  menyatakan bahwa  pemberian  hormone  17α  Methyltes- tosteron  dapat  meningkatkan  partumbuhan pada  ikan  nila  ( Oreochromis  mossambicus ) yang dipelihara di  air tawar ataupun air laut. Sembiring et  al. (2012)  menyatakan  bahwa implantasi  17α  Methyltestosteron  berpeng- aruh  baik  terhadap  pertumbuhan  pada  ikan kerapu sunu Plectrpomus leopardus.
Hasil  histologi  telah  diperoleh  infor- masi  bahwa  calon  induk  ikan  kerapu  bebek sudah  menunjukkan  perkembangan  gonad baik betina maupun jantan. Pada (Gambar 3) terlihat  tingkat  kematangan  gonad  yang bevariasi  dengan tahapan stage 1  (3a), stage II (3b), stage III (3c, 3d) dan Gambar 3d dan 3e sudah mengambarkan adanya perkembag- an gonad jantan.
Sampel  yang  dibedah,  ikan  ukuran bobot  tubuh  1000  g  dan  panjang  total  32.0 cm  yang  diimplan  hormon  estradiol  adalah induk  betina  yang  telah  matang  gonad  dan berat gonad mencapai 5.5 g, berat hati 13.5 g (Tabel 3). Sedangkan pada perlakuan Mt, Mt + AI calon induk dengan kisaran bobot tubuh 500-700  g  menunjukkan  kondisi  bobot  hati lebih  ringan  dibandingkan  dengan  bobot gonad.  Hal  tersebut  menunjukan  gonad  baru dalam  tahap  perkembangan  dan  belum  siap memijah.
Perlakuan  implan  hormon  17α  Me- thyltestosteron  dan  implan  campuran  hor- mon  17α  Methyltestosteron  ditambah  hor- mon  aromatase  inhibitor  mempunyai  dia- meter  oosit  antara  300  –  400  m  (Gambar 3b,  3c  dan  3d)  dengan  didominasi  tahapan PVO  ( previtelogenesis )  dan  VO  ( vitelogenic oocyte ).  Bahkan  telah  ditemukan  juga  induk jantan yang mempunyai ukuran panjang total 34.0  cm  dan  bobot  tubuh  850  g  (Tabel  3; Gambar 3e). Hasil pengamatan perkembang- an  oosit  ikan  kerapu  bebek  F1  dari  masing- masing perlakuan, nampaknya diameter oosit semakin  besar  seiring  dengan  bertambahnya umur ikan. Beberapa hasil penelitian menye- butkan  bahwa  perkembangan  gonad  ikan dipercepat  dengan  rekayasa:  lingkungan, pakan  dan  hormonal.  Hal  tersebut  terbukti dari  hasil-hasil  penelitian  yang  berkaitan dengan  perkembangan  gonad  ikan,  seperti pakan  adalah  merupakan  faktor  yang  sangat penting  (Halver,  1976;  Watanabe,  1984). Kecukupan  vitamin  dapat  mempercepat  pro- ses vittellogenesis (Waagbo et al., 1989)).
Tabel 3. Pengamatan perkembangan gonad dari hasil pembedahan ikan kerapu bebek turunan pertama (F1).
Perlakuan Nomor tagging Panjang Total (cm) Bobot Tubuh (g) Bobot Gonad (g) Berat Hati (g) Estradiol 180819807 32.0 1000 5.5 13.5 17α-Mt 180819842 32.0 700 33.1 6.2 17α-Mt + AI 180819771 35.5 500 17.8 5.8 Kontrol 180819779 34.0 850 23.3 18.9
Ganbar 3.  Pengamatan secara histologi oosit ikan kerapu bebek  F1.
Rekayasa hormonal yang dapat mempercepat    proses    kematangan  gonad LHRHa    dan  17  methyltestoteron  telah berhasil  dilakukan  terhadap  beberapa  jenis ikan  seperti:  ikan  Bandeng  (Tamaru et  al ., 1987;  Tamaru,  1990),  juga  terhadap  Kerapu Macan Epinephelus  fuscoguttatus ,  kerapu Lumpur Epinephelus  coioides dan  kerapu bebek (Tridjoko et al., 1997).
Nampaknya  pemberian  hormon  17α Methyltestosterone  secara  oral  juga  dapat memacu  pembentukan  sel  spermatozoa  dan tidak  berkembangnya  oosit  sehingga  dapat mempercepat  perubahan  kelamin  dari  betina ke  jantan  tanpa  melewati  fase  betina  fung- sional.  Demikian  juga  hormon  estradiol  dan aromatase  inhibitor  sering  kali  digunakan untuk  ikan-ikan  air  tawar,  seperti  misalnya
ikan  mas Cyprinus  carpio L.  (Komen et  al., 1989).
Hasil  pengamatan  dari  performansi komposisi  hormone  testosterone  dan  estra- diol  setelah  di- treatment hormon  reproduksi terlihat  bahwa  apabila  kandungan  hormon testosterone di atas 500 pg/ml (Glamuzina et al., 2001)    menunjukkan  individu  berkelamin jantan,  sedangkan  dibawah  500  pg/ml  me- nunjukkan  individu  berkelamin  betina  pada (Gambar  4).  Pemberian  hormon  estradiol dapat  mempercepat  kematangan  gonad  dan meningkatkan  kualitas  induk  betina  ikan Kerapu Bebek.
Pemberian  hormon  estradiol  diharap- kan calon induk ikan Kerapu Bebek tetap da- pat  memijah  menghasilkan  telur  yang  ber- kualitas dan kuantitasnya cukup baik, sehing- ga didapatkan benih turunan ke dua (F2).
3 (a)
3 (b) 3 ( c ) 3 (d) 3 (e)
Gambar 4.  Performansi  komposisi  hormon testoterone  dan  estradiol  setelah treatment hormon  reproduksi  se- lama 105 hari.
Usaha  pembenihan  untuk  keberhasil- an pemijahan sangat ditentukan oleh kualitas induk, antara lain: jumlah induk, umur induk, kesehatan induk ikan, ukuran induk dan lain- lain. Sedangkan mutu telur dan sperma  dapat juga  dipengaruhi  oleh  jenis  dan  mutu  pakan yang  diberikan.  Di  dalam  proses  reproduksi, sebelum  terjadi  pemijahan  sebagian  besar hasil  metabolisme  bertujuan  untuk  perkem- bangan  gonad.  Bobot  gonad  bertambah sejalan  dengan  meningkatnya  diameter  telur dimana  bobot  maksimum  dicapai  saat  ikan memijah,  kemudian  bobot  gonad  akan  me- nurun  dengan  cepat  selama  pemijahan  ber- langsung  sampai  selesai  (Effendie,  1979). Kualitas  telur  merupakan  refleksi  dari  kom- posisi  kimia  kuning  telur  yang  dipengaruhi oleh  keadaan  nutrisi  pakan  dan  kondisi induk.  Purdon  (1979) dalam Hardjamulia (1988)  mengemukakan  bahwa  ukuran  telur dapat  bersifat  genetis  yang  ditunjukkan  oleh kecilnya  variasi  ukuran  telur  atau  sebagai akibat dari pengaruh makanan dan lingkung- an.
Hasil  pengamatan  analisa  keragaan genetik  berdasarkan  dari  hasil  optimasi primer  mikrosatelit  dengan  menggunakan  3 lokus primer yang berbeda yaitu CAL 02, 09 dan CAL 13 (Nakorn et  al ., 2010). Tampak- nya  penggunaan  lokus  tersebut  memberikan hasil amplifikasi yang paling stabil diantara 8 primer  mikrosatelit  yang  direkomendasikan.
Hasil  amplifikasi  primer  mikrosatelite  ter- sebut, dapat dilihat pada Gambar 5.
Gambar  5  dapat  dilihat  bahwa  semua sampel  yang  digunakan  dapat  teramplifikasi dengan sempurna sesuai dengan target ampli- fikasi.  Lokus  CAL  02  target  amplifikasinya berkisar  antara  238-242  bp,  CAL  09  kisaran 184-226 bp dan 197-227bp merupakan target dari lokus CAL 13. Dari ketiga lokus primer mikrosatelit  yang  digunakan  masing-masing dilabel  berdasarkan  dari  tipe  pewarnaan  dan berat  molekul  dari  primer-primer  tersebut. Lokus CAL 02 dilabel dengan FAM, CAL 09 dengan  TAMRA  dan  label  HEX  digunakan untuk lokus CAL 13.
Hasil  separasi  PCR  produk  yang sudah  dilabel  menunjukkan  bahwa  penggu- naan lokus CAL 02 memberikan jumlah alel yang  paling  sedikit  (3  yaitu  (238,240  dan 242) dibandingkan dengan 2 lokus lainnya (8 CAL 09 dan 14 CAL 13). Dari data tersebut terlihat  bahwa  lokus  CAL  13  merupakan lokus  yang  paling  baik  digunakan  untuk mendeteksi  tingkat  keragaan  genetik  ikan kerapu bebek (Tabel 4).
Hasil  perhitungan  analisa  tersebut tampak bahwa induk alam (F0) yang diguna- kan  mempunyai  tingkat  variasi  genetik  yang baik  jika  dibandingkan  dengan  induk  hasil budidaya (Sembiring et  al ., 2013). Berdasar- kan  dari  hasil  sekuensing,  jumlah  allel  yang terbaca  dari  3  lokus  primer  yang  digunakan, menunjukkan  bahwa  lokus  CAL  13  yang memberikan  jumlah  allel  terbanyak  dari  dua lokus lainnya (CAL 02 dan CAL 09). (Tabel 4, Tabel  5). Nilai variasi calon  induk  kerapu bebek  turunan  pertama  (F1)  dengan  meng- gunakan  3  primer  mikrosatelit  memberikan kisaran 0,778-0,978 dengan tingkat polymor- pisme  berkisar  antara  0,758-0,891  yang artinya calon induk kerapu bebek F1 tersebut masih  memiliki  tingkat  variasi  yang  cukup baik    dan  memenuhi  syarat  untuk  dijadikan sebagai induk hasil budidaya.
Evaluasi  terhadap  pembesaran  calon induk  ikan  kerapu  bebek  turunan  pertama (F1)  merupakan  salah  satu  dari  kegiatan selective  breeding .  Hal  ini  merupakan
program  pemuliaan  yang  digunakan  untuk meningkatkan breeding  value dan  perbaikan mutu  genetik  dari  populasi  dengan  cara seleksi.  Apabila  hal  ini  dilakukan  maka  ge- nerasi  berikutnya  akan  lebih  bernilai  karena dapat  tumbuh  lebih  cepat  dan  hasilnya  akan lebih  meningkat  sehingga  pemeliharaannya menjadi lebih efisien dan murah. Selanjutnya keragaman  genetik  ikan  perlu  dipertahankan dalam  proses  penggunaan  induk  dalam  per- benihan,  karena  terjadinya  reduksi  gen  akan mengakibatkan  hilangnya  sebagian  karakter genetik  benih  turunannya  (Goundie et  al ., 1995; Benzie dan William, 1996; Sugama et al. ,  1999).  Tingginya  keragaman  genetik  ini juga  banyak  dipengaruhi  oleh  jumlah  induk dalam  suatu  populasi  pembenihan  dan  juga jumlah  induk  yang  efektif  dalam  suatu
pemijahan  (Subaidah et  al., 2001).  Terjadi- nya  penurunan  keragaman  genetik  ditentu- kan  oleh  polimorfik  lokus,  heterosigositas dan  jumlah  alel  per  lokus  yang  disebabkan oleh  penggunaan  jumlah  induk  yang  sedikit dalam  pembenihan  (Sugama et.al .,  1999). Tahap  penelitian  ini  diketahui  bahwa  calon induk  kerapu  bebek  turunan  F1  memiliki kualitas  yang  baik  (Tridjoko et  al .,  2006). Fokus  penelitian  implantasi  hormon  kepada individu  calon  induk  kerapu  bebek  sebagai pembanding  dengan  komoditas  ikan  laut yang  lain  secara  bertahap  masih  terus dilakukan  (Tridjoko et  al .,  2014).  Perlakuan dengan  beberapa  implantasi  hormon  repro- duksi  cukup  memberikan  tambahan  infor- masi  untuk  bisa  diterapkan  oleh  para  pem- budidaya.
Gambar 5.  Hasil amplifikasi primer mikrosatelit dengan 3 lokus yang berbeda CAL 02 (a), CAL 09 (b) dan CAL 13 (c).
M      1     2        3       4      5      6      7      8 9     10 242 bp. 226 bp. 227 bp.
Tabel 4. Data hasil scoring analisa mikrosatelit.
Perlakuan/ kode sampel Locus CAL 02 (FAM) CAL 09 (TAMRA) CAL 13 (HEX) Alel 1 Alel 2 Alel 1 Alel 2 Alel 1 Alel 2 Es 1 238 242 197 215 198 214 Es 2 242 242 197 215 198 214 Es 3 242 242 184 193 184 208 Es 4 242 242 185 215 184 214 Es 5 242 242 201 201 200 214 Mt 1 242 242 201 201 202 214 Mt 2 242 242 197 197 198 214 Mt 3 242 242 184 184 184 214 Mt 4 240 242 197 197 206 210 Mt 5 242 242 193 193 194 214 Mt + AI 1 242 242 185 219 184 218 Mt + AI 2 238 242 197 215 214 214 Mt + AI 3 242 242 216 216 214 214 Mt + AI 4 238 242 185 216 184 214 Mt + AI 5 242 242 197 197 201 214 K 1 242 242 201 216 202 208 K 2 242 242 201 201 206 210 K 3 242 242 184 193 184 214 K 4 242 242 193 215 194 214 K 5 242 242 197 197 199 208
Tabel 5. Nilai  keragaan  genetik  calon  induk  kerapu  bebek  F1  berdasarkan  analisa  mikro- satelit.
Label Primer Perlakuan Heterozygositas PIC Probability 1 Probability 2 FAM Estradiol 0.867 0.758 0.418 0.601 17α-Mt 0.867 0.758 0.418 0.601 17α-Mt  + AI 0.911 0.798 0.474 0.649 Kontrol 0.778 0.673 0.311 0.499 HEX Estradiol 0.956 0.844 0.556 0.718 17α-Mt 1.000 0.891 0.657 0.795 17α-Mt   + AI 0.778 0.673 0.311 0.499 Kontrol 1.000 0.891 0.657 0.795 TAMRA Estradiol 0.978 0.868 0.606 0.757 17α-Mt 0.978 0.868 0.606 0.757 17α-Mt + AI 0.956 0.844 0.556 0.718 Kontrol 0.978 0.868 0.606 0.757

## IV. KESIMPULAN
Calon  induk  ikan  kerapu  bebek  ( C. altivelis )  dengan  perlakuan  estradiol  dan  Mt testoteron  menunjukkan  pertumbuhan  yang baik, dengan kisaran  bobot tubuh pada akhir penelitian  antara  680  ±  60,5  –  820  ±  76,5 dengan rata-rata panjang tubuh 34-36 cm.
Pengaruh  pemberian  hormon  repro- duksi  secara  implantasi  cukup  significan karena  dapat  mempercepat  proses  perkem- bangan  gonad  baik  gonad  betina  maupun gonad jantan.
Observasi  terhadap  komposisi  hor- mon  testosteron  dan  estradiol  pada  plasma darah  melalui  analisa  ELISA  pada  akhir pengamatan,  menunjukkan  bahwa  40%  in- dividu  dalam  populasi  tersebut  memiliki gonad jantan, hal tersebut disebabkan karena pengaruh  dari  implantasi  hormon  yang dilakukan selama penelitian.
Keragaman genetik calon induk kera- pu bebek, berdasarkan dari hasil analisa mik- rosatelit dengan menggunakan 3 lokus primer yang  berbeda,  memberikan  informasi  bahwa calon  induk  tersebut  masih  memiliki  nilai keragaman  yang  cukup  baik  (0,778-1,000) sehingga  dapat  digunakan  sebagai  indukan hasil budidaya.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonymous.  1996.  Manual  of  histological staining  method.  CSRO  Marine  Re- search  Laboratory,  Cleaveland  Au- stralia. 1p.
Benzie,  J.A.H.  and  S.T.W.  Williams.  1996. Limitation  of  the  genetic  variation  of hatchery  produced  batches  of  Giant Clam,  Tridacna  gigas.  Aquaculture 139:225-241.
Brett,  J.R.  and  T.D.  Groves.  1979.  Experi- mental  factor  and  growth .  In  Fish physiology ,  3 th ed.  Academic  Press Inc, New York. 620-645pp.
Effendie,  M.I.  1979.  Metodologi  biologi perikanan.  Cetakan  pertama.  Yaya- san Dewi Sri, Bogor. 112hlm.
Glamuzina, B.,  N. Glavic, B.  Skaramuca, V. Kozul,  and  P.  Tutman.  2001.  Early development  of  the  hybrid Epinephe- lus  costae x E.  marginatus . Aquacu- lture, 198:55–61.
Goundie, C.A., Q. Liu, B.A. Simeo, and K.B. Davis.  1995.  Genetic  relationship  of growth  sex  and  glucose  phosphate isomerase-B  in  channel  cat  fish. Aquaculture, 138:119-124.
Halver,  J.E.  1976.  Fish  nutrition.  Academic Press. London and New York. 713p. Hardjamulia,  A.  1988.  Penyediaaan  induk untuk  usaha  pembenihan  ikan  air tawar.  Seminar  pembenihan  ikan  dan udang. Bandung. 26hlm.
Kincaid,  H.L.  1983.  Results  from  six generation of selection for accelerated growth rate in a rainbow trout popula- tion.  Abstract.  Fish  Culture  Selection of  the  American  Fisheries  Society. 26-27pp.
Komen, J., P.A.J. Lodder, F. Huskensi, C.J.J. Richter,  and  E.A.  Huisman.  1989. Effects  of  Oral  Administration  of 17a-  Methyltestosterone  and  17β- Estradiol on Gonadal Development in Common  Carp,  Cyprinus  carpio  L. Aquaculture , 78:349-363.
Kuwaye,  T.T.,  K.  Darren,  Okimoto,  K. Steven,  Shimoda,  D.  Robert,  Hower- ton,  Hao-Ren  Linb,  Peter  K.T.  Pang, and  E.  Gordon  Grau.  1993.  Effect  of 17α+methyltestosterone on the growth  of  the  euryhaline  tilapia, Oreochromis  mossambicus,  in  fresh water  and  in  sea  water. Aquaculture , 113:137-152.
Marzuqi,  M.,  N.A.  Giri,  K.  suwirya,  dan  I. Rustini.  2002.  Pengaruh  fosfolipid dalam  pakan  terhadap  pertumbuhan juvenil  kerapu  bebek  ( Cromileptes altivelis) . Aquaculture  Indonesia, 2 (2):99-102.
Nakorn,  U.N.,  R.  Yashiro,  A.  Wachirachai- karn,  W.  Prakoan  and  N.  Pansaen. 2010. Novel microsatellites for multi- plex PCRs in the Humpback grooper,
Cromileptes  altivelis  ( Valn-ciennes, 1828) and applications for broodstock management. Aquaculture ,  306:57- 62.
Sembiring,  S.B.M,  I.K.  Wardana,  J.H. Hutapea,  A.  Muzaki,  dan  Mastuti. 2012.  Produksi  jantan  fungsional pada ikan kerapu sunu, Plectropomus leopardus menggunakan hormon 17α-
Methyl  testosterone.  Laporan  Akhir Program Insentif Riset Sinas. Kemen- trian Riset dan Teknologi. 11hlm.
Sembiring,  S.B.M.,  Tridjoko  dan  Haryanti. 2013. Keragaman genetik ikan kerapu bebek ( Cromileptes altivelis ) generasi F-1 dan F-3. ISOI dan Dept. Ilmu dan
Teknologi  Kelautan,  Fak.  Perikanan dan  Ilmu  Kelautan,  IPB  Bogor. J. Ilmu  dan  Teknologi  Kelautan  Tropis. 5(1):103-111.
Subaidah,  S.,  M.A.  Rahman  dan  B.  Hang- gono.  2001.  Produksi  massal  calon induk  kerapu  tikus  ( Cromilep-tes altivelis )  sebagai  upaya  memenuhi kebutuhan  induk  di  masa  mendatang. Lokakarya  Nasional  “Pengembangan Agribisnis  Kerapu,  Jakarta.  Hlm.:71- 79.
Sugama,  K.,  Tridjoko,  Haryanti,  S.B.  Moria dan  F.  Cholik.  1999. Genetic  varia- tion  and  population  stucture  in  the Humback  grouper , Cromileptes  alti- velis throughout  its  range  in  Indo- nesian  waters . Indonesian  Fisheries Research J ., 5(1):32-38.
Tacon,  A.G.  and  C.B.  Cowey.  1985.  Protein and  amino  acid  requirement. In : Tytler,  P.  and  Calow,  P.  (ed) Fish Energetics  and  new  perspectives . Croom Helm, London. 155-183p.
Tamaru,  C.S.  1990.  Studies  on  the  use  of chronic and acute LHRH-a treatments on  controlling  maturation  and  spaw- ning  in  the  milkfish  (Chanos-chanos Forskal).  In  A  Thesis  Submitted  to the  Graduate  Division  of  the  Univer- sity of Tokyo, Faculty of Agriculture.
158pp.
Tamaru, C.S., C.S. Lee, C.D. Kelly, and J.E. Banno. 1987. Effectiviness of chronic LHRH-a and 17 a MT therapy, admi- nistered at different times prior to the spawning  season,  on  the  maturation of  milkfish  (Chanos-chanos).  Thesis. Submitted  the  Graduate  Devision  of the  University  of  Tokyo.  Faculty  of Agriculture. 44p.
Tamaru,  C.S.  1990.  Studies  on  the  use  of chronic and acute LHRH-a treatments on  controlling  maturation  and  spaw- ning  in  the  milkfish  (Chanos-chanos Forskal).  Thesis.  Graduate  Division of the University of Tokyo. Faculty of Agriculture. 158pp.
Tave,  D.  1993.  Genetic  for  Fish  Hatchery Managers.  2 nd ed.  The  AV1  Publ.
Co.Inc. New York. 418 p.
Tridjoko, B. Slamet, dan D. Makatutu. 1997.
Pematangan  induk  kerapu  bebek ( Cromileptes altivelis ) dengan rangsangan  suntikan  hormon  LHRHa 17-  metyltestosteron. J.  Penelitian Perikanan Indonesia, 3(4):30-34. Tridjoko,  Haryanti,  I.G.N.  Permana,  dan  S. Ismi.  2006.  Evaluasi  kualitas  induk Ikan  Kerapu  Bebek, Cromileptes altivelis hasil budidaya (F-1). Aquacultura Indonesiana , 7(1):45-52. Tridjoko,  Haryanti,  S.B.  Moria,  A.  Muzaki dan  I.K  Wardana.  2014.  Performansi kematangan  gonad  dan  pemijahan induk  ikan  kerapu  bebek  hasil perkawinan silang antara F-2 dan F-0. J.  Ilmu  dan  Teknologi  Kelautan Tropis , 6(1):41-51.
Tridjoko.    2007.  Penggunaan  ikan  kerapu bebek, Cromileptes  altivelis hasil budidaya  (F1)  sebagai  salah  satu alternatif  sumber  induk.  Prosiding Seminar Nasional Kelautan III, Pembangunan Kelautan Berbasis
Iptek  Dalam  Rangka  Peningkatan Kesejahteraan  Masyarakat  Pesisir. Universitas  Hang  Tuah,  Surabaya. Hlm.: 1-6.
Waagboo,  R.,  T.  Thorson,  and  K.  Sandnes. 1989. Role of dietary ascorbic acid in vitellogenesis in rainbow trout. Aqua- culture , 80:301-314. Diterima : 3 Februari 2016 Direview : 3 Maret 2016 Disetujui : 21 Desember 2016