## UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK SELADA MERAH (Lactuca sativa var. Crispa) PADA BERBAGAI PELARUT EKSTRAKSI DENGAN METODE BSLT
(Brine Shrimp Lethality Test)
Jamilatur Rohmah 1* , Chylen Setiyo Rini 1 , Fitria Eka Wulandari 2
1 Teknologi Laboratorium Medis. Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Sidoarjo
2 Pendidikan IPA, Fakultas Psikologi dan Ilmu Pendidikan, Universitas Muhammadiyah Sidoarjo
* email: jamilaturrohmah@umsida.ac.id
Received 01 May 2019
Accepted 28 June 2019

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder  dan  aktivitas sitotoksik  dengan nilai  LC 50 dari ekstrak selada  merah (Lactuca sativa var. Crispa) pada berbagai  pelarut.  Sampel  selada  merah  yang  digunakan  didapatkan  dari  desa  Turirejo kecamatan Lawang-Malang. Simplisia selada merah di ekstraksi dengan metode maserasi menggunakan  variasi  pelarut  yaitu  pelarut  etanol,  metanol,  etil  asetat,  dan  n-heksana selama  24  jam.  Hasil  maserasi  dipekatkan  dengan  alat  rotary  vacuum  evaporator. Kemudian  dilakukan  uji  skrining  fitokimia  serta  KLT  untuk  mengetahui  kandungan metabolit sekunder dalam sampel. Pengujian aktivitas sitotoksik dilakukan dengan metode BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality  Test) .  Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan  ekstrak  etanol selada  merah  mengandung  flavonoid,  tanin,  saponin,  triterpenoid,  steroid  dan  alkaloid. Sedangkan ekstrak metanol selada merah mengandung alkaloid, saponin, dan tanin. Pada ekstrak  etil  asetat  selada  merah  mengandung  alkaloid,  saponin,  steroid,  dan  tanin.  Dan pada  ekstrak  n-heksana  selada  merah  mengandung  alkaloid,  steroid,  triterpenoid,  dan tanin.  Hasil  uji  aktivitas  sitotoksik  ekstrak  n-heksana  memiliki  bioaktivitas  tertinggi terhadap Artemia  salina Leach.  dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol,  metanol,  dan  etil asetat.  Nilai  LC 50 ekstrak  etanol,  metanol,  etil  asetat,  dan  n-heksana  secara  berturut-turut adalah 322,288 ppm; 207,827 ppm; 1468,261 ppm; dan 170,115 ppm.
Kata kunci: Selada merah (Lactuca sativa var. Crispa), sitotoksik, Artemia salina Leach, BSLT.

## Abstract
This study aims to determine the secondary metabolites content and cytotoxic activity with LC 50 values from red lettuce extracts ( Lactuca sativa var. Crispa) in various solvents. The red lettuce were obtained from Turirejo village, Lawang-Malang district. Red lettuce were extracted by maceration method using various solvents are ethanol, methanol, ethyl acetate, and n-hexane for 24 hours. The maceration results were concentrated with a rotary vacuum evaporator. Then a phytochemical screening tests and TLC were carried out to determine the secondary metabolites content in the sample. Cytotoxic activity test were carried out by the BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) method. The phytochemical test results shows that the ethanol extract of red lettuce contained flavonoids, tannins, saponins, triterpenoids, steroids and alkaloids. While the methanol extract of red lettuce contains alkaloids, saponins, and tannins.  The  red  lettuce  ethyl  acetate  extract  contains  alkaloids,  saponins,  steroids,  and tannins. And the n-hexane extract of red lettuce contains alkaloids, steroids, triterpenoids,
and  tannins.  The  results  of  the  cytotoxic  activity  of  methanol  extract  had  the  highest bioactivity against Artemia salina Leach. compared to ethanol, ethyl acetate and n-hexane extract. LC 50 values of ethanol, methanol, ethyl acetate, and n-hexane extract were 322,288 ppm; 68,632 ppm; 1934,287 ppm; and 170.115 ppm respectively.
Keywords: Red  lettuce  (Lactuca  sativa var. Crispa),  cytotoxic,  Artemia  salina Leach, BSLT.

## Pendahuluan
Semakin  majunya  pengetahuan  dan teknologi menuntun manusia untuk berkembang  lebih  baik  lagi  dari  segi kesehatan terutama dalam penelitian untuk membuat  obat  dari  suatu  tumbuhan (Rahmawati,  2016).  Salah  satu  tumbuhan yang  bisa  digunakan  untuk  obat  yaitu selada merah (Lactuca sativa var. Crispa). Manfaat selada merah sebagai obat-obatan diantaranya  dapat  mengobati  sakit  kepala, demam,  radang  kulit,  muntaber,  demam, dan lainnya (Haryanto, dkk., 1995).
Tanaman  selada  merah (Lactuca  sativa var. Crispa) sering dijadikan oleh masyarakat  Indonesia  sebagai  lalapan  dan lebih  sering  disajikan  bersama  burger, sandwich, dan juga salad. Seperti tanaman lainnya, selada merah (Lactuca sativa var. Crispa) kaya  akan  serat  dan  nutrisi  yang bermanfaat  bagi  tubuh  dan  juga  memiliki kandungan  senyawa  metabolit  sekunder, diantaranya:  flavonoid,  saponin,  tanin, fenolik,  steroid,  triterpenoid,  dan  alkaloid (Abidah,  2018;  Faudhan,  2018).  Senyawa flavonoid  diketahui  mampu  menginduksi terjadinya  apoptosis.  Apoptosis  adalah kematian  sel  terprogram  dan  berperan penting dalam penghambat kanker (Pebriana, dkk., 2008).
Hasil penelitian Abidah (2018)
menunjukkan bahwa ekstrak etanol selada merah  memiliki  aktivitas  antioksidan (IC 50 )  sebesar  4,7  ppm  (sangat  kuat). Sedangkan pada penelitian Faudhan (2018) ekstrak  n-heksana  selada  merah  memiliki aktivitas  antioksidan  (IC 50 )  sebesar  52,27 ppm  yang  tergolong  dalam  kategori  kuat. Tingginya  nilai  IC 50 ini  menunjukkan bahwa tanaman selada  merah selain dapat
berpotensi  sebagai  antioksidan  juga  dapat berpotensi sebagai antikanker.
Sejak  lama  penyakit  kanker  menjadi momok  bagi  banyak  orang  (Sudewo, 2004).  Penyakit  kanker  masih  menjadi masalah  kesehatan  dunia  baik  di  negara berkembang  maupun  negara  maju.  Lebih dari  30%  dari  kematian  diakibatkan  oleh kanker. Dalam laporan terbaru yang dirilis oleh International  Agency  for  Cancer , Organisasi  Kesehatan  Dunia  (WHO) mengestimasi  terdapat  18,1  juta  kasus kanker  baru  dan  9,6  juta  kematian  yang terjadi pada tahun ini. Sebesar dua pertiga dari  jumlah  tersebut  terjadi  di  negara berkembang  (Juniman,  2018).  Sedangkan secara nasional prevalensi penyakit kanker pada  penduduk  semua  umur  di  Indonesia tahun 2013 sebesar 1.4% atau diperkirakan sekitar 347.792 orang meningkat  menjadi  1,8%  di  tahun  2018 (Kemenkes RI, 2018).
Dewasa  ini  banyak  dikembangkan obat-obatan  antikanker  baik  yang  berasal dari  bahan  kimia  maupun  yang  berasal dari  bahan  alam  yang  dikenal  sebagai bahan obat tradisional. Antikanker diharapkan  mempunyai  toksisitas  selektif artinya  dapat  menghancurkan  sel  kanker tanpa  merusak  jaringan  normal  (Nafrialdi dan  Ganiswara,  2005).  Sampai  sekarang ini  belum  banyak  obat  yang  memenuhi kriteria tersebut sehingga perlu dikembangkan obat baru yang mempunyai efek  terapi  yang  baik  (Katzung,  2002). Obat  antikanker  yang  telah  ada  umumnya selain memiliki khasiat sebagai antikanker obat tersebut juga bersifat merusak sel-sel yang  tumbuh  normal  (Anonim,  2000). Selain  itu  pengobatan  kanker  dengan
obat-obatan  kemoterapi  hanya  efektif untuk  beberapa  periode  waktu  saja (Meiyanto, 2003). Keadaan ini mendorong dilakukannya  berbagai  penelitian  untuk menemukan  antikanker  yang  diharapkan memiliki toksisitas selektif yaitu menghancurkan  sel  kanker  tanpa  merusak sel  jaringan  normal  (Ganiswara  dan Nafrialdi, 2005).
Senyawa yang diduga memiliki aktivitas antikanker, harus diujikan terlebih dahulu  pada  hewan  coba.  Penelitian  ini menerapkan metode Brine Shrimp
Lethality  Test (BSLT)  yang  pertama  kali dikenalkan  oleh  Michael  dkk  pada  tahun 1956.  Metode  pengujian  BSLT  ini didasarkan  pada  bahan  senyawa  aktif  dari tumbuhan yang bersifat toksik dan mampu membunuh  larva  udang Artemia  salina (sebagai  hewan  uji).  Hasil  uji  toksisitas dengan  metode  ini  terbukti  memiliki korelasi  dengan  daya  sitotoksik  senyawa antikanker.  Selain  itu,  metode  ini  juga mudah  dikerjakan,  murah,  cepat,  dan cukup  akurat.  Sifat  sitotoksik  dapat diketahui  berdasarkan  jumlah  kematian larva  pada  konsentrasi  tertentu  (Meyer, dkk., 1982; Sukardiman, 2004).
Tanaman selada merah telah dibudidayakan  di  Turirejo,  Kecamatan Lawang-Malang. Tanaman tersebut belum dilakukan  uji  aktivitas  sitotoksisitasnya, sehingga pada penelitian ini akan dilakukan pengujian bioaktivitasnya dengan uji sitotoksik terhadap larva udang Artemia salina (metode BSLT).

## Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan yaitu nampan, ayakan, penggiling, rotary vacuum evaporator (Buchi),  almari  pendingin, bejana  kromatografi,  plat  KLT  SIL G/UV 254 ,  pipa  kapiler,  penggaris,  lampu UV 254 dan 366 nm, neraca analitik, botol vial,  lampu,  aerator,  mikropipet,  bluetip, dan alat-alat gelas.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam
penelitian  ini  antara  lain,  selada  merah ( Lactuca sativa var . Crispa ) yang diambil dari desa Turirejo kecamatan Lawang-Malang.  Bahan-bahan  lain  terdiri dari bahan kimia yaitu etanol (teknis), etil asetat (teknis), metanol (teknis), n-heksana (teknis),  DMSO,  etil  asetat  (p.a),  etanol (p.a), air laut, telur Artemia salina L., besi (III) klorida, asam klorida, pereaksi mayer, pereaksi wagner, pereaksi dragendorf, dan magnesium.

## Prosedur Pembuatan Simplisia
Sampel  basah  selada  merah  dilakukan proses  penyortiran  dengan  memisahkan dari bahan pengotor. Dilakukan penimbangan  untuk  mengetahui  berat sampel  basah.  Kemudian  selada  merah dicuci  dengan  air  bersih,  selanjutnya diletakkan  dalam  rak  berlubang  agar  air bekas  cucian  jatuh  ke  bawah  sehingga pergantian  sirkulasi  udara  berlangsung dengan  baik.  Sampel  dikeringkan  dengan cara  diangin-  anginkan  pada  suhu  kamar. Pengeringan  dilakukan  dengan  tujuan mengetahui  persen  penguapan  air  dalam sampel.
Selanjutnya  dilakukan  sortir  kering dengan  memilah  bagian  sampel  yang diinginkan  dari  bahan  pengotor  lain. Setelah  dipilah,  sampel  ditimbang  untuk mengetahui berat kering daun dan batang. Kemudian masing-masing sampel diserbukkan  dan  disaring  menggunakan ayakan  (Ngibad,  2013).  Hasil  ayakan dimasukkan  dalam  wadah  bersih,  tertutup rapat,  terhindar  dari  sinar  matahari  dan sampel  dapat  digunakan  untuk  prosedur selanjutnya.

## Ekstraksi Maserasi
Serbuk simplisia selada merah ditimbang sebanyak 50 gram dan dimaserasi dalam 300 mL pelarut metanol, etanol,  etil  asetat,  dan  n-heksana  pada suhu  ruang  selama  24  jam  dan  sesekali dilakukan  pengadukan.  Hasil  maserasi disaring. Residu yang diperoleh
diremaserasi  dan  diulang  sebanyak  5  kali maserasi.  Selanjutnya  ekstrak  encer  yang diperoleh dipekatkan menggunakan rotary vacuum  evaporator pada  suhu  pemanasan di bawah 55 ̊C dan diperoleh ekstrak pekat. Kemudian dilakukan uji kualitatif fitokimia  dan  uji  kuantitatif  tanin  dengan KLT  serta  uji  aktivitas  sitotoksik  untuk masing-masing ekstrak.

## Uji Kualitatif Fitokimia
Uji  Kulaitatif  Fitokimia  dilakukan dengan  mengacu  pada  Kristanti,  dkk. (2006):
a) Tanin (Pereaksi FeCl 3 )
Ekstrak  selada  merah  pada  berbagai pelarut  masing-masing  sebanyak  1  ml dan dipanaskan selama beberapa menit. Kemudian  ditambahkan  FeCl 3 1% beberapa  tetes.  Terbentuknya  warna coklat  kehijauan  atau  ungu  kehitaman menunjukkan adanya tanin.
b) Alkaloid Masing-masing  sebanyak  1  mL ekstrak  ditambahakan  kloroform  dan NH 3 . Lalu dipanaskan di atas penangas air.  Ditambahkan  1  tetes  H 2 SO 4 pada masing-masing  tabung  reaksi.  Tabung pertama  ditambahkan  pereaksi  Mayer. Tabung kedua ditambah pereaksi wegner.  Sedangkan  tabung  ketiga ditambahkan pereaksi Dragendroff. Tabung  pertama  terbentuk  endapan putih,  tabung  kedua  terbentuk  endapan jingga  dan  cokelat  di  tabung  ketiga menunjukkan adanya alkaloid (Farnsworth, 1966).
c) Flavonoid Masing-masing  sebanyak  1  ml ekstrak  ditambahkan  ke  dalam  3  ml etanol 70% kemudian dikocok, dipanaskan  dan  dikocok  kembali.  Lalu disaring  dan  diambil  filtratnya.  Filtrat ditambahkan  serbuk  Mg  sebanyak  0,1 gram  dan  3  tetes  HCl  pekat.  Apabila terbentuk  warna  merah  bata  pada sampel  menunjukkan  adanya  senyawa flavonoid (Prameswari, dkk., 2014).
d) Saponin
Masing-masing  sebanyak  1  ml ekstrak  ditambah  10  ml  aquades  dan didihkan dalam penangas air.
Kemudian  campuran  tersebut  dikocok dan  dibiarkan  15  menit.  Adanya senyawa  saponin  ditunjukkan  dengan terbentuknya busa yang stabil.
e) Steroid
Sampel 1 ml masing-masing ditambahkan 3 ml etanol 70% dan 2 ml H 2 SO 4 pekat dan CH 3 COOH.
Terbentuknya  warna  ungu  kebiruan atau  kehijauan  menunjukkan  adanya steroid dalam sampel.
f) Triterpenoid (Uji Liebermann-Burchard) Ekstrak  maserasi  sebanyak  1  ml masing-masing  ditambahkan  2  ml kloroform  dan  3  ml  H 2 SO 4 pekat. Reaksi positif adanya terpenoid ditandai  dengan  terbentuknya  warna merah kecoklatan.
g) Fenolik Sebanyak 1 ml  sampel ditambahkan NaCl  1%  dan  gelatin  10%.  Jika terbentuk  endapan  putih  maka  positif mengandung fenolik.

## Uji KLT
Hasil  ekstraksi  maserasi  ditotolkan pada  plat  KLT  GF254  dengan  ukuran tinggi 10 cm dan lebar 3 cm menggunakan pipa kapiler 1 cm dari tepi bawah plat KLT, kemudian  dibiarkan  kering.  Plat  KLT selanjutnya  ditempatkan  pada  bejana kromatografi yang berisi eluen etanol : etil asetat  (4:1).  Setelah  dielusi  sampai  garis batas  plat  KLT  dikeluarkan  dari  bejana dan  dikeringkan,  bercak  diamati  dengan sinar  ultraviolet  pada  panjang  gelombang 366 nm (Sa’adah, 2010). Jarak bercak dari titik  penotolan  yang  diperkirkan  senyawa tanin diukur dan dicatat sehingga dihasilkan harga Rf bercak.
Pengujian  Toksisitas  dengan  Metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test)
Aktivitas sitotoksik dilakukan menggunakan  metode  BSLT  menurut
Ningdyah,  dkk  (2015)  dengan  sedikit modifikasi:
a) Penetasan Larva Artemia
Larva  artemia  ditetaskan  dalam sebuah  wadah  yang  dibagi  menjadi  2 bagian. Kemudian dimasukkan 1 L air laut yang telah disaring dengan kertas saring.  Salah  satu  sisi  wadah  ditutup dengan alumunium foil dan ditambahkan  telur  udang  Artemia salina  L.  ±  50  mg  yang  dilengkapi dengan aerator. Sisi lainnya dibiarkan terbuka  dan  diletakkan  di  bawah lampu  selama  48  jam.  Larva  yang menembus  daerah  terang  setelah berumur 48 jam siap digunakan untuk uji BSLT.
b) Persiapan Larutan Sampel Larutan  induk dibuat  dengan
melarutkan  1  g  sampel  dalam  1000 mL  air  laut.  Sampel  yang  sukar  larut ditambahkan dengan
dimetil sulfoksida (DMSO) 0,1% atau Tween
80  sebanyak  5  –  10  mL.  Kemudian dipipet  1,  2,  4,  6,  dan  8  mL  larutan induk, sehingga diperoleh konsentrasi 100,  200,  400,  600,  dan  800  ppm. Masing  –  masing  konsentrasi  dan kontrol dibuat 4 kali pengulangan.
c) Prosedur Uji Senyawa Bioaktif dengan Metode BSLT Dibuat  pengenceran  larutan  uji konsentrasi  100  ppm,  200  ppm,  400 ppm,  600  ppm,  dan  800  ppm  dari larutan induk 1000 ppm. Sebanyak 10 larva  udang  dalam  10  μL  air  laut dimasukkan  ke  dalam  vial  uji. Kemudian ditambahkan air laut dalam masing-masing  vial  uji,  untuk  setiap konsentrasi dilakukan 4 kali pengulangan.  Dibuat  blanko  dengan perlakuan yang sama tanpa penambahan larutan sampel  pada vial uji.  Pengamatan  dilakukan  setelah  24 jam  dengan  menghitung  jumlah  larva yang  masih  hidup  dan  yang  sudah mati, kemudian dihitung %
mortalitasnya menggunakan persamaan berikut:

## Hasil dan Pembahasan

## Pembuatan Simplisia
Pembuatan  simplisia  selada  merah ( Lactuca  sativa var .  Crispa )  dilakukan melalui  proses  sortasi  awal,  pencucian sampel daun dan batang, pengeringan dan penyerbukan  sampel.  Pada  proses  ini didapatkan  hasil  berat  basah,  berat  kering dan  berat  serbuk  sampel  selada  merah yang selanjutnya disebut sebagai simplisia yaitu sebagai berikut:
Tabel  1.  Hasil  berat  sampel  selada  merah ( Lactuca sativa var . Crispa ) Parameter Berat (gram) Berat basah 6500 Berat kering 2200 Berat serbuk 200
Berdasarkan  pada  Tabel  1  didapatkan hasil  berat  sampel  basah  selada  merah sebesar  6500  gram  dan  berat  sampel kering  2200  gram.  Pada  sampel  kering selada  merah  mengalami  penyusutan sebesar 33,85%. Penyusutan terjadi karena adanya proses penguapan kadar air selama proses  pengeringan.  Proses  penguapan kadar air berfungsi untuk menjaga kualitas ekstrak  agar  terhindar  dari  pertumbuhan jamur/mikroba  sehingga  simplisia  tidak mudah busuk (Mabruroh, dkk., 2015).

## Ekstraksi Maserasi
Ekstraksi  maserasi  dilakukan  untuk menarik  keluar  zat-zat  atau  senyawa  aktif yang  terkandung  dalam  sampel.  Proses maserasi dilakukan tanpa pemanasan guna mencegah  terjadinya  kerusakan  atau kehilangan senyawa aktif yang terkandung dalam  sampel.  Prinsip  dari  ekstraksi maserasi yaitu memisahkan suatu senyawa
yang terkandung dalam
sampel menggunakan  pelarut  tertentu  (Soebagio, 2003).
Pelarut  yang  digunakan  pada  proses maserasi  ekstrak  selada  merah  ( Lactuca sativa var .  Crispa )  yaitu  menggunakan pelarut  metanol,  etanol,  etil  asetat,  dan n-heksana  dengan  perbandingan  pelarut dan sampel yaitu 1:6. Serbuk selada merah masing-masing sebanyak 50 gram dimaserasi  dalam  300  ml  pelarut.  Tujuan pemilihan  menggunakan  variasi  pelarut yaitu untuk mengetahui tingkat sitotoksisitas  pada  masing-masing  ekstrak yang sesuai dengan kelarutannya sehingga dapat  digunakan  sebagai  rujukan  untuk mengetahui  potensi  bioaktivitas  tertinggi suatu senyawa, karena dimungkinkan pada pelarut  yang  berbeda  potensi  bioaktivitas dan  senyawa  aktif  yang  terkandung didalamnya  berbeda  pula.  Penggunaan serbuk  dalam  proses  maserasi  bertujuan untuk  mempermudah  pelarut  menembus dinding sel dan masuk ke rongga sel yang mengandung  senyawa  aktif.  Sehingga  zat aktif  yang  terkandung  dalam  sampel  akan larut karena adanya perbedaan konsentrasi atau  tekanan  di  luar  dan  di  dalam  sel, sehingga  larutan  yang  terpekat  akan didesak  ke  luar.  Maka  dalam  peristiwa tersebut larutan  yang berada di dalam dan
di luar sel terjadi keseimbangan konsentasi  larutan  [15].  Struktur  dari senyawa  tanin  tersusun  atas  atom-atom yang  berbeda,  tanin  memiliki  gugus hidroksil  lebih  dari  satu.  Tanin  bersifat polar  sehingga  harus  dilarutkan  dengan pelarut  yang  juga  bersifat  polar.  Tanin dengan protein dapat membentuk kompleks,  interaksi  antara  tanin  dengan potein dapat diminimalkan dengan pemilihan pelarut aseton, sehingga senyawa  tanin  dapat  terekstrak  secara maksimal (Sa’adah, dkk., 2010).
Proses  maserasi  dilakukan  selama  24 jam  disertai  dengan  pengadukan,  residu yang  diperoleh  kemudian  diremaserasi sebanyak 5 kali perendaman. Dilakukannya  pengulangan  sebanyak  5 kali  bertujuan  untuk  mendapatkan  hasil ekstrak  lebih  banyak  dan  mendapatkan senyawa  tanin  secara  optimal.  Kemudian tahap  selanjutnya  yaitu  dilakukan  proses penyaringan  dari  hasil  maserasi.  Filtrat yang  diperoleh  dari  proses  penyaringan dipekatkan  menggunakan rotary  vacuum evaporator pada  suhu  55 o C.  Proses pemekatan  bertujuan  untuk  menguapkan pelarut dan mengurangi kadar air sehingga didapatkan  hasil  ekstrak  yang  pekat sebagai berikut:
Tabel 2. Perolehan ekstrak pekat selada merah ( Lactuca sativa var . Crispa ) Parameter Hasil Ekstrak Selada Merah pada Berbagai Pelarut Metanol Etanol Etil Asetat n-Heksana Serbuk simplisia 50 gram 50 gram 50 gram 50 gram Ekstrak pekat 6,1610gram 17,3000 gram 12,8073 gram 1,8812 gram Rendemen 12,3220% 34,6000% 25,6146% 3,7625 %
Hasil  esktraksi  didapatkan  prosentase rendemen  ekstrak  yang  paling  besar adalah  pada  ekstrak  etanol.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  kandungan  senyawa dalam  selada  merah  cenderung  larut  pada pelarut  etanol.  Perbedaan  nilai  rendemen tersebut  diduga  disebabkan  oleh  sifat pelarut dalam melarutkan senyawa
metabolit  sekunder  yang  berbeda.  Hasil ekstrak  pekat  selada  merah  ( Lactuca sativa var .  Crispa )  yang  didapatkan selanjutnya  dilakukan  pengujian  fitokimia yang diperkuat dengan uji KLT
(Kromatografi  Lapis  Tipis)  dan  sitotoksik menggunakan metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ).

## Uji Kualitatif Fitokimia
Uji  fitokimia  merupakan  uji  kualitatif yang  digunakan  untuk  mengidentifikasi senyawa  aktif  atau  senyawa  metabolit sekunder  yang  terkandung  dalam  suatu bahan. Salah satu syarat uji fitokimia yaitu menggunakan pereaksi yang sesuai
dengan  golongan  senyawa  yang  akan
diidentifikasi  (Marjoni,  2016).  Pengujian fitokimia  pada  suatu  bahan  meliputi  tujuh parameter  yaitu  uji  alkaloid,  flavonoid, saponin,  steroid,  triterpenoid,  fenolik,  dan tanin.  Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  aseton daun  dan  batang  turi  putih  dapat  dilihat pada tabel berikut:
Tabel 3. Hasil uji fitokimia ekstrak pekat selada merah ( Lactuca sativa var . Crispa ) Uji Fitokimia Pereaksi Hasil (terbentuknya) Kesimpulan (+) / (-) Metan ol Etano l Etil Asetat n-Heksan a Alkaloid Mayer Endapan jingga - + +++ + Wagner Endapan coklat +++ + +++ + Dragendorf Endapan putih +++ + +++ - Flavonoid Mg + HCl pekat + etanol Warna merah - +++ - - Saponin - Adanya busa stabil +++ + +++ - Steroid Libermann-Burchar d Ungu ke biru/hijau - ++ +++ ++ Triterpeno id Kloroform+H 2 SO 4 pekat Merah kecoklatan - ++ - ++ Fenolik NaCl 10% + Gelatin 1% Endapan putih - ++ - - Tanin FeCl 3 1% Ungu kehitaman + + + +
Keterangan: (+) rendah, (++) sedang, (+++) tinggi, (-) tidak ada.
Berdasarkan  hasil  uji  fitokimia,  ektrak aseton  daun  dan  batang  turi  putih mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin,  steroid,  triterpenoid,  fenolik,  dan tanin. Namun intensitas uji yang dihasilkan menunjukkan perbedaan kandungan  senyawa  metabolit  sekunder pada  daun  dan  batang  turi  putih.  Hal  ini disebabkan  karena  senyawa  metabolit sekunder  yang  ada  pada  tumbuhan terdistribusi  dengan  kadar  yang  berbeda pada  setiap  organ.  Senyawa  yang  sama ataupun  kelompok  senyawa  yang  sama dimungkinkan untuk disintesis atau ditimbun pada organ yang berbeda. Kadar senyawa metabolit sekunder yang berbeda akan mempengaruhi aktivitas
antioksidannya (Del Bano, et al ., 2003).
Uji KLT
Uji  kromatografi  lapis  tipis  merupakan uji  yang  dilakukan  untuk  memisahkan suatu senyawa berdasarkan perbedaan dua fase,  yaitu  fase  diam  dan  fase  gerak (Hayati,  dkk.,  2010).  Fase  gerak  yang digunakan  yaitu  campuran  etanol  dan  etil asetat  dengan  perbandingan  4,5:1,5.  Uji fitokimia merupakan pembuktian kandungan golongan senyawa yang selanjutnya  diperkuat  dengan  adanya identifikasi  menggunakan  KLT.  Bercak noda  yang  dihasilkan  kemudian  diamati menggunakan  sinar  UV  pada  panjang gelombang  366  nm  (Gambar  1).  Hasil  uji KLT  menunjukkan  pada  plat  nampak terlihat  berfluoresensi  di  bawah  sinar  UV pada  panjang  gelombang  366  nm  dengan warna biru keunguan untuk ekstrak etanol selada  merah  sedangkan  pada  ekstrak
metanol  selada  merah bercak  noda berwarna  oranye.  Pada  ekstrak  etil  asetat berwarna hijau kekuningan dan keunguan, dan pada ekstrak n-heksana berwarna pink dan  biru.  Perbedaan  warna  bercak  noda yang  dihasilkan  antara  ekstrak  etanol,
metanol,  etil  asetat,  dan  n-heksana dikarenakan  dalam  satu  tanaman  dapat mengandung jenis senyawa yang bermacam-macam  meskipun  dalam  satu golongan senyawa (Pokorni, et al., 2001).
(a) (b) (c) (d)
Gambar 1. Pengamatan bercak noda di bawah sinar UV 366 nm, (a) esktrak etanol selada merah,  (b)  ekstrak  metanol  selada  merah,  (c)  ekstrak  etil  asetat  selada  merah,  dan  (d) ekstrak n-heksana selada merah
Hasil  uji  KLT  diperoleh  3  noda  untuk ekstrak  etanol  selada  merah.  Pada  noda pertama  didapatkan  nilai  Rf  sebesar  0,88 yang  diduga  adalah  senyawa  flavonoid. Hal  ini  didukung  oleh  Yohanes  dkk., (2013)  didapatkan  nilai  Rf  sebesar  0,89 dan diduga senyawa flavonoid. Pada noda dua  diduga  mengandung  senyawa  tanin dengan  nilai  Rf  sebesar  0,67.  Hal  ini didukung oleh Rohmaniyah (2016) mengasumsikan  bahwa  nilai  Rf  senyawa tanin  yaitu  0,66.  Sedangkan  pada  noda tiga diduga mengandung senyawa triterpenoid  dengan  nilai  Rf  sebesar  0,4 hal  ini  sama  halnya  dengan  penelitian
Erawati  (2012)  yang  mengasumsikan bahwa terdapat senyawa flavonoid dengan nilai  Rf  0,45.  Sehingga  dari  hasil  uji kromatogradi  lapis  tipis  dalam  ekstrak etanol selada merah dapat diduga mengandung senyawa flavonoid, triterpenoid dan tanin.
Sedangkan  untuk  ekstrak  metanol selada  merah  didapatkan  5  noda  dengan nilai  Rf  untuk  noda  satu,  dua,  dan  tiga diperoleh sebesar 0,81 yang diduga adalah senyawa  tanin.  Hal  ini  diperkuat  dengan nilai  Rf  literatur  yang  menunjukkan bahwa nilai Rf tanin yaitu 0,81
(Mukholifah, 2014). Dan pada noda empat
dan  lima  yang  diduga  senyawa  alkaloid atau saponin dengan nilai Rf sebesar 0,85. Mengacu  pada  penelitian  Sinaga  (2018) yang  menyebutkan  bahwa  nilai  Rf  0,85 menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut adalah senyawa golongan alkaloid.
Pada  ekstrak  etil  asetat  diperoleh  6 noda  dengan  nilai  Rf  untuk  noda  pertama sebesar  0,63;  noda  kedua  sebesar  0,66; noda  ketiga  sebesar  0,72;  noda  keempat sebesar  0,83;  noda  kelima  sebesar  0,87; dan noda kelima sebesar 0,91. Dan diduga mengandung  senyawa  tanin,  steroid,  dan alkaloid.
Kemudian  pada  ekstrak  n-heksana didapatkan  4  noda  yakni  dengan  nilai  Rf berurutan  0,27;  0,4;  0,67;  0,83  yang diduga senyawa steroid, triterpenoid, tanin dan  juga  flavonoid.  Mengacu  pada penelitian Erawati (2012) yang menyebutkan bahwa dengan nilai Rf yang berturut-turut 0,325; 0,45; 0,55; serta 0,95
merupakan positif adanya senyawa metabolit  sekunder  jenis  triterpenoid. Sedangkan nilai Rf untuk senyawa steroid pada penelitian ini mengacu pada penelitian Ilyas, dkk., (2015) dengan hasil
KLT  dari  3  eluen  dengan  nilai  Rf masing-masing 0,2; 0,6; dan 0,8 menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut merupakan  salah  satu  senyawa  golongan steroid.

## Penentuan  Aktivitas  Sitotoksik  Ekstrak Selada Merah
Uji sitotoksik merupakan suatu uji yang dapat  memberikan  informasi  konsentrasi obat  yang  masih  memungkinkan  sel mampu  bertahan  hidup.  Akhir  dari  uji sitotoksik  adalah  memberikan  informasi langsung  tentang  perubahan  yang  terjadi pada  fungsi  sel  secara  spesifik  (Amalina 2008).  Uji  sitoktoksik  terhadap  larva udang Artemia salina Leach atau
Brine-Shrimp  Lethality  Test (BSLT) sering digunakan dalam mengawali penelitian pada bahan alam dan merupakan  uji  pendahuluan  dalam  upaya pencarian  senyawa  antikanker  dengan
penentuan  nilai  LC 50 setelah  pemaparan ekstrak  selama  24  jam  (Meyer,  dkk., 1982).  Nilai  LC 50 menunjukkan  nilai konsentrasi  yang  menghasilkan  hambatan proliferasi  sel  50%  dan  menunjukkan potensi ketoksikan suatu senyawa terhadap  sel.  Semakin  besar  harga  LC 50 maka  senyawa  tersebut  semakin  tidak toksik.  Ekstrak  sampel  dikatakan  toksik apabila  nilai  LC 50 <1000  ppm  (Meyer, dkk., 1982). Jika pada uji pendahuluan ini memperlihatkan  hasil  yang  cukup  baik, maka  dapat  dilakukan  pengujian  lebih lanjut. Metode BSLT ini merupakan salah satu  cara  yang  sederhana,  tepat,  tidak diperlukan  kondisi  yang  aseptis,  dan murah  untuk  skrining  toksisitas  dari ekstrak  tanaman  dengan  menggunakan hewan  laut  larva  udang Artemia  salina Leach.
Penelitian  diawali  dengan  membuat larutan induk 1000 ppm untuk masing-masing  ekstrak.  Pelarutan  sampel dengan  air  laut  menggunakan  bantuan DMSO karena adanya perbedaan kepolaran  yang  mengakibatkan  sampel tidak larut sempurna jika hanya menggunakan  air  laut.  DMSO  berfungsi sebagai  surfaktan.  Surfaktan  merupakan senyawa  yang  memiliki  sifat  hidrofilik dan  hidrofobik  sehingga  dapat  membantu pelarutan  sampel  dan  air  laut  dengan  cara menurunkan tegangan permukaan.
Kemudian  dibuat  larutan  sampel  dengan konsentrasi  100,  200,  400,  600,  dan  800 ppm  dari  masing-masing  larutan  induk (tiap ekstrak).
Penetasan larva udang dilakukan selama  48  jam,  fase  yang  digunakan adalah fase naupli instar II dan III. Hal ini disebabkan karena pada fase tersebut larva Artemia  salina Leach  berada  pada  fase yang paling aktif untuk pembelahan secara mitosis  yang  juga  identik  dengan  sel kanker  yang  membelah  secara  mitosis (Ropiqa,  2009). Artemia  salina Leach pada fase naupli instar II dan III memiliki struktur  anatomi  yang  masih  sangat sederhana, yaitu terdiri dari mulut, lapisan
kulit, antena, calon tracopoda, dan saluran pencernaan yang masih sederhana (Raineri,  2981).  Setelah  48  jam,  10  ekor naupli  kemudian  dimasukkan  ke  dalam masing-masing  larutan  uji.  Setiap  sampel
dilakukan  4  kali  pengulangan.  Naupli dibiarkan  selama  24  jam  lalu  kemudian dihitung  naupli  yang  mati  pada  semua larutan uji.
Tabel 4. Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol, Metanol, Etil Asetat, dan n-Heksana Selada Merah
Ekstrak Konsentras i ekstrak (ppm) Jumlah Artemia salina L. Jumlah Kematian Artemia salina L. Prosentase Kematian (%) Replikasi 1 2 3 4 Eta nol Kontrol 10 0 0 0 0 0 100 ppm 10 0 0 0 0 0 200 ppm 10 3 2 2 3 25 400 ppm 10 6 10 7 6 72,5 600 ppm 10 8 7 7 9 77,5 800 ppm 10 9 10 9 8 90 1000 ppm 10 10 10 10 10 100 Me tanol Kontrol 10 0 0 0 0 0 100 ppm 10 0 0 1 0 2.5 200 ppm 10 6 5 4 6 52,5 400 ppm 10 9 8 10 9 90 600 ppm 10 10 10 10 10 100 800 ppm 10 10 10 10 10 100 1000 ppm 10 10 10 10 10 100 Etil Ase tat Kontrol 10 0
0 0 0 0 100 ppm 10 0 1 0 0 2.5 200 ppm 10 3 2 2 2 22,5 400 ppm 10 5 4 3 5 42,5 600 ppm 10 4 1 3 2 25 800 ppm 10 4 4 4 1 32,5 1000 ppm 10 5 5 4 3 42,5 n -He ksa n a Kontrol 10
0 0 0 0 0 100 ppm 10 1 1 0 0 5 200 ppm 10 6 6 7 10 72,5 400 ppm 10 10 9 10 10 97,5 600 ppm 10 10 10 10 10 100 800 ppm 10 10 10 10 10 100 1000 ppm 10 10 10 10 10 100
Berdasarkan  tabel  4  di  atas,  jumlah prosentase rata-rata mortalitas larva Artemia  salina L.  mengalami  kenaikan hingga 24 jam dimana  merupakan puncak kematian  larva  serta  seiring  dengan bertambahnya konsentrasi ekstrak kematian larva juga meningkat. Kecepatan kematian  larva  antara  ekstrak  etanol,
metanol,  etil  asetat,  dan  n-heksana  selada merah  lebih  cepat  ekstrak  n-heksana selada merah dengan konsentrasi 200 ppm yaitu  pada  satu  jam  pertama  sudah  ada kematian larva dibandingkan pada ekstrak yang  lainnya.  Pada  kontrol  tidak  terjadi kematian.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa kematian  larva  tidak  dipengaruhi  oleh  air
laut  tetapi  oleh  adanya  ekstrak  yang ditambahkan.  Sehingga  ekstrak  yang memiliki sitotoksisitas  yang paling efektif terhadap  kematian  larva  adalah  ekstrak n-heksana  selada  merah  dibandingkan dengan  ekstrak  etanol,  metanol,  dan  etil asetat selada merah. Hal ini terkait dengan kandungan  fitokimia  yang  terdapat  pada ekstrak  n-heksana  selada  merah  yang mampu menarik senyawa-senyawa metabolit sekunder yang potensial sebagai sitotoksik  dibandingkan  dengan  ekstrak lainnya.
Tingginya toksisitas dari ekstrak disebabkan  karena  di  dalam  ekstrak mengandung  senyawa  metabolit  sekunder jenis alkaloid, tanin, steroid dan triterpenoid.  Hal  ini  disebabkan  karena cara  kerja  senyawa  yang  terdapat  dalam sampel  yaitu  ekstrak  dalam  membunuh larva udang Artemia salina Leach bertindak  sebagai stomach  poisoning atau racun  perut.  Oleh  karena  itu,  apabila senyawa-senyawa  ini  masuk  ke  dalam tubuh  larva,  alat  pencernaannya  akan terganggu.  Selain  itu,  senyawa  ini  akan menghambat  reseptor  perasa  pada  daerah mulut  larva.  Hal  ini  mengakibatkan  larva gagal mendapatkan stimulus rasa sehingga tidak  mampu  mengenali  makanannya akibatnya  larva  mati  kelaparan  (Novianti, 2012).  Efek  yang  ditimbulkan  terjadi secara  cepat  dalam  waktu  24  jam,  hingga menyebabkan  kematian  50% Artemia
salina .  Menurut  Castritsi  (1984),  hasil pengamatan menggunakan mikroskop elektron  menunjukkan  terjadi  kerusakan pada  mikrovili Artemia  salina .  Kerusakan ini  terjadi  akibat  pemaparan  senyawa toksik  potassium  dichromate  ke  dalam tubuh Artemia salina pada naupli instar II dan  III  melalui  mulut  dan  masuk  ke saluran pencernaan Artemia salina . Hal ini menyebabkan uji BSLT ini sering digunakan sebagai penelitian pendahuluan dari aktivitas antikanker. Sehingga ekstrak etanol, metanol,  etil  asetat,  dan n-heksana selada  merah  bersifat  sitotoksik  terhadap larva udang Artemia salina Leach.
Kemudian  dari  data  mortalitas  yang diperoleh  dilakukan  penentuan  nilai  LC 50 dari setiap larutan sampel dengan menggunakan program SPSS yaitu analisis  Probit.  Berdasarkan  hasil  yang diperoleh,  sampel  yang  memiliki  nilai LC 50 dari  yang  terkecil  hingga  yang terbesar adalah ekstrak n-heksana metanol,  etanol,  dan  etil  asetat.  Hal  ini dimungkinkan  karena  senyawa  yang terekstrak  dalam  pelarut  tidak  terlalu sitotoksik terhadap Artemia salina. Tabel 5 menunjukkan  semua  ekstrak  memiliki sifat toksisitas. ekstrak n-heksana memiliki  sifat  toksisitas  yang  paling tinggi,  hal  ini  dilihat  dari  nilai  LC 50 yang paling kecil dari yang lainnya.
Tabel 5. Analisis probit LC 50 Ekstrak Konsentrasi (ppm) Konsentrasi Maksimum (ppm) Konsentrasi Minimum (ppm) Ekstrak etanol selada merah 322,288 402,197 237,335 Ekstrak metanol selada merah 207,827 242,414 168,437 Ekstrak etil asetat selada merah 1468,261 5191,909 341,656 Ekstrak n-heksana selada merah 170,115 132,216 198,893
Hasil  analisa  probit  dari  data  yang diperoleh  sebesar  322,288  ppm  untuk ekstrak etanol, 207,827 ppm untuk ekstrak metanol,  1468,261  untuk  ekstrak  etil asetat,  dan  170,115  ppm  untuk  ekstrak
n-heksana selada merah yang artinya larva akan  mati  sebesar  50%  jika  pada konsentrasi  ekstrak  selada  merah  sebesar 322,288  ppm  untuk  ekstrak  etanol, 207,827  ppm  untuk  ekstrak  metanol,
1468,261  untuk  ekstrak  etil  asetat,  dan 170,115  ppm  untuk  ekstrak  n-heksana. Ketiga  ekstrak  yaitu  ekstrak  etanol, metanol,  dan  n-heksana  selada  merah dapat  diketahui  bahwa  ketiga  ekstrak bersifat sitotoksik terhadap Artemia salina karena  memiliki  nilai  LC 50 <  1000  ppm yang  dapat  menyebabkan  kematian  50% hewan  uji  (Meyer,  dkk.,  1982).  Ekstrak yang memiliki nilai LC 50 rendah menunjukkan  bahwa  golongan  senyawa yang terkandung didalamnya bersifat lebih toksik terhadap Artemia salina L.
Sedangkan,  pada  ekstrak  etil  asetat menunjukkan nilai LC 50 yang paling tinggi diantara yang lainnya. Hasil tersebut lebih tinggi jika dibandingkan dengan konsentrasi  uji  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  sebesar  1.000  ppm yang  hanya  membunuh  larva Artemia salina L. sebanyak 42,5%.
Toksisitas  metabolit  sekunder  tanaman berkaitan  dengan  kemampuan  pertahanan diri terhadap predator. Mekanisme pertahanan  diri  tersebut  dengan  cara melindungi  organ  target  maupun  dengan menghambat pembelahan sel yang terkena kuman patogen (Cutler dan Cutler, 2000). Menurut  Kusuma,  dkk  (2016)  ekstrak kental  etanol  batang  karamunting  positif mengandung  senyawa  flavonoid  dan terpenoid. Ekstrak etanol batang karamuntingnya memiliki nilai LC 50 > 500 ppm.
Hasil  yang  berbeda  ditunjukkan  oleh tumbuhan  Rhodomyrtus  tomentosa  yang diambil di kabupaten Sukamara, menunjukkan  adanya  perbedaan  hasil yang  sangat  signifikan  ini  dipengaruhi oleh  lingkungan  tumbuhnya.  Intensitas cahaya  matahari,  unsur  hara  dan  umur
suatu  tumbuhan  akan  mempengaruhi kandungan  kimia  dari  suatu  tumbuhan meskipun  tumbuhan  tersebut  dari  family dan  spesies  yang  sama.  Ekstrak  batang tumbuhan  karamunting  yang  diambil  di Kabupaten Sukamara memiliki sifat toksisitas  yang  sangat  kuat  sedangkan ekstrak batang Karamunting yang digunakan  oleh  Kusuma,  dkk  (2016) memiliki sifat toksisitas yang lemah.

## Simpulan
Kandungan metabolit sekunder
berdasarkan hasil uji fitokimia menunjukkan  ekstrak  etanol  selada  merah mengandung  flavonoid,  tanin,  saponin, triterpenoid, steroid dan alkaloid. Sedangkan  ekstrak  metanol  selada  merah mengandung  alkaloid,  saponin,  dan  tanin. Pada  ekstrak  etil  asetat  selada  merah mengandung  alkaloid,  saponin,  steroid, dan  tanin.  Dan  pada  ekstrak  n-heksana selada merah mengandung alkaloid, steroid,  triterpenoid,  dan  tanin.  Hasil  uji aktivitas  sitotoksik  ekstrak  n-heksana memiliki  bioaktivitas  tertinggi  terhadap Artemia  salina Leach.  dibandingkan dengan  ekstrak  yang  lainnya  dengan  nilai LC 50 ekstrak  etanol,  metanol,  etil  asetat, dan n-heksana secara berturut-turut adalah 322,288  ppm;  207,827  ppm;  1468,261 ppm; dan 170,115 ppm.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  disampaikan  kepada Universitas Muhammadiyah Sidoarjo yang  telah  mendanai  penelitian  ini  serta kepada  pihak-pihak  yang  membantu pelaksanaan penelitian

## Daftar Pustaka
Abidah, L. (2018). Aktivitas Antioksidan Ekstrak  Etanol  Selada  Merah ( Lactuca sativa var. Crispa) dengan
Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Skripsi. Teknologi  Laboratorium Medis,  Fakultas  Ilmu  Kesehatan,
Universitas
Muhammadiyah Sidoarjo. Amalina,  N.,  (2008).  Uji  Sitotoksik
Ekstrak  Etanol  70%  Buah  Merica
Hitam  ( Piper  nigrum L.)  terhadap
Sel HeLa, Skripsi , Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta. Anonim, (2000), Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, 1,
3,  Direktorat.  Jendral  Pengawasan Obat  dan  Makanan  Departemen Kesehatan  Republik  Indonesia, Jakarta.
Castritsi, C., Loannidou, J.M., Katsorchis, M., and Kiortsis. T. (1984). Action d’un  dispersant  du  petrole  sur l’epithlium  intestinal  de  deux souches  d’Artemia,  1984. Tr.  J.  of Zoology 22 (1998) 259-266. Cutler,  S.  dan  Cutler,  H.,  (2000). Biologically Active Natural Product.  Pharmaceuticals,  CRC Press  LLC,  Boca  Raton,  USA:
1-13.
Del  Bano,  M.J.,  Lorente,  J.,  Castillo,  J., Garcia,  O.  B.,  Del  Rio,  J.  A.,
Ortuno,  A.,  Quirin,  K.  W.,  and Gerard,  D.  Phenolic  Diterpenes, Flavones,  and  Rosmarinic  Acid Distribution during the Development  of  Leaves,  Flowers, Stems,  and  Roots  of  R osmarinus officinalis ,  Antioxidant  Activity,
Journal  of  Agricultural  and  Food
Chemistry , Vol. 51 (15) : 4247−4253, 2003. Erawati. (2012). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Garciniadaedalanthera Pierre
dengan  Metode  DPPH  (1,1-difenil
pikrilhidrazil) dan Identifikasi
Golongan  Senyawa  Kimia  Dari Fraksi Paling Aktif. Skripsi . Fakultas MIPA. Universitas Indonesia. Depok. Faudhan, N. (2018). Aktivitas
Antioksidan  Ekstrak  n-Heksana Selada  Merah  ( Lactuca  sativa var. Crispa)  dengan  Metode  DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil).
Skripsi. Teknologi  Laboratorium Medis,  Fakultas  Ilmu  Kesehatan,
Universitas Muhammadiyah Sidoarjo.
Haryanto,  E.,  Suhartini,  T.,  Rahayu,  E.
1995. Sawi  dan  Selada .  Jakarta: Penebar Swadaya.
Hayati, E. K., Fasyah, A. G., dan Sa’adah,
L. (2010). Fraksinasi dan
Identifikasi  Senyawa  Tanin  Pada Daun Belimbing Wuluh (Alverrhoa Bilimbi L.), Jurnal  Kimia, 4  (2):
193-200.
Ilyas,  A.,  Iin,  N.,  dan  Irmayanti.  (2015).
Senyawa  Golongan  Steroid  dari Ekstrak  N-Heksana  Kulit  Batang Kayu Bitti ( Vitex Cofassus ) dan Uji Toksisitas  terhadap Artemia  salina Leach. Juniman,  P.T.  (2018). WHO:  Kanker Membunuh Hampir 10 Juta Orang di Dunia Tahun Ini . CNN Indonesia edisi Kamis 13 September 2018. https://m.cnnindonesia.com/gaya-h idup/20180913133914-255-32991 0/who-kanker-membunuh-hampir- 10-juta-orang-di-dunia-tahun-ini.
Katzung,  B.G.,  (2002),  Farmakologi
Dasar  dan  Klinik,  Edisi  III, 693-694, Penerbit. Buku
Kedokteran EGC.
Kemenkes  RI.  (2018). Riset  Kesehatan
Dasa r; RISKESDAS. Jakarta: Balitbang Kemenkes RI.
Kristanti, A.N., Nanik, S.S., Mulyadi, T., dan  Bambang,  K.  (2006). Buku
Ajar Fitokimia . Surabaya: Universitas Airlangga.
Kusuma, I. W, Ainiyati, N, Suwinarti, W. (2015).  Search  for  Biological Activities  drom  an  Invasive  Shrub Species Rose Myrtle ( Rhodomyrtus tomentosa ). Jurnal Nusantara Bioscience. 8(1). Mabruroh,  A.I.,  (2015).  Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Tanin  dari Daun Rumput Bambu (Lophatherum gracile Brongn) dan
Identifikasinya, Skripsi, Malang: Fakultas  Sains  dan  Teknologi,
Universitas  Islam  Negeri  Maulana
Malik Ibrahim Malang.
Marjoni, R. (2016). Dasar-Dasar Fitokimia, Jakarta:  Trans  Info Media, Hlm 1-38.
Meiyanto, E. (2003). Efek Antiproliferatif Ekstrak Etanol Daun  Dan  Kulit  Batang  Tanaman Cangkring  ( Erythrina  fusca Lour.)
Terhadap  Sel  HeLa. Majalah Farmasi  Indonesia .  14(3)  :124  – 131.
Meyer et  al .  (1982).  Brine  shrimp:  A convient general bioassay for active plant  constituents. Planta  Medica 45:31-34.
Mukholifah.  (2014).  Identifikasi  Tanin dan  Penentuan  Eluen  Terbaik  dari Ekstrak  Etanol  70%  Daun  Pepaya (Carica  papaya) dengan  Metode Kromatografi  Lapis  Tipis, Jurnal Biologi, Malang, Universitas Islam
Negeri  Maulana  Malik  Ibrahim
Malang.
Nafrialdi dan Ganiswara, (2005). Farmakologi  dan  Terapi ,  Edisi  IV, Fakultas Kedokteran UI, Jakarta.
Ngibad, K. (2013). Efektivitas Kombinasi  Ekstrak  Etanol  Daun Bunga Matahari ( Helianthus annuus ) dan Tanaman Anting-Anting  ( Acalypha  indica
Linn)  sebagai  Antimalaria  Secara
In  Vivo.  Jurnal  Farmasi  Galenika
(Galenika  Journal  of  Pharmacy) 2019; 5 (1): 12 – 19.
Ningdyah,  A.  W,  Alimuddin,  A.H, Jayuska,  A.  (2015).  Uji  Toksisitas dengan Metode BSLT ( Brine Shrip Lethality  Test )  terhadap  Hasil Fraksinasi  Ekstrak  Kulit  Buah
Tampoi  ( Baccaurea  marcocarpa ). Jurnal Kimia Khatulistiwa. Vol.4(1).
Novianti,  R.  K.,  Boedi,  S.  R.,  dan Cahyono,  Y.  (2012).  Pengaruh pengkayaan  Artemia  spp.  dengan kombinasi  minyak  kedelai  dan minyak  ikan  salmon  terhadap pertumbuhan dan tingkat kelangsungan  hidup  larva  kepiting Bakau  ( Scylla  paramamosain ).
Journal  of  Marine  and  Coastal
Science, 1 (2): 125-139. Pebriana, R.B., Bantari, W.K.W., Widayanti,  E.,  Wijayanti,  N.L.S., Wijayanti, T.R., Riyanto, S., Meiyanto,  E.,  (2008).  Pengaruh Ekstrak  Metalonik  Daun  Kenikir ( Cosmos caudatus Kunth.) terhadap  Pemacuan  Apoptosis  Sel Kanker Payudara. Pharmacon. 9(1):2.
Pokorni, J., Yanishlieva, N., and Gordon,
M. (2001). Food Practical Applications, New  York:  CRC
Press.
Rahmawati, U., Suryani, E., dan Mukhlason, A. (2016). Pengembangan Repository Pengetahuan  Berbasis  Ontologi ( Ontology-Driven Knowledge Repository )  untuk  Tanaman  Obat Indonesia. Jurnal  Teknik  Pomits
1(1): 1-6
Rohmaniyah, M. (2016). UJI
Antioksidan  Ekatrak  Etanol  80% dan  Fraksi  Aktif  Rumput  Bambu ( Lopaherum gracile
Brongn)menggunakan metode DPPH  serta  identifikasi  senyawa aktifnya .  Skripsi. Jurusan  Kimia. Fakultas  Sains  dan  Teknologi.
Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim. Malang. Ropiqa, M. (2009). Uji Ketoksikan (LC 50 ) Ekstrak  Etanol  Daun  Ekor  Kucing ( Acalypa hispida Burm.f) Terhadap
Larva Udang Artemia salina Leach dengan Metode Brine
Shrimp  Lethality  Test (BSLT).
Jurnal .  Pontianak:  Program  Studi Farmasi  Fakultas  Kedokteran  dan Ilmu Kesehatan Universitas Tanjungpura. Sa’adah, L., Hayati, E.K., dan Fasyah, G. (2010).  Fraksinasi  dan  Identifikasi Senyawa Tanin
pada Daun Blimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.).  Jurnal  Kimia.  Vol.  4,  No.2: 192-200. Sinaga, S.F. (2018). Aktivitas antioksidan
Senyawa Alkaloid dari Kulit
Batang  Attarasa  ( Litsea  cubeba Lour)  dengan  Metode  DPPH  dan ABTS. Skripsi .  Fakultas  Farmasi. Universitas Sumatera Utara. Soebagio.  (2003). Kimia  Analitik  II, Malang: UM Press. Sudewo,  B.  (2004). Tanaman Obat Populer Penggempur Aneka Penyakit .  Yogyakarta:  Agomedia Pustaka.
Sukardiman., Abdul, R., Nadia, F.P. 2004.
Uji Praskrining Aktivitas Antikanker Ekstrak Eter dan Esktrak  Metanol Marchantia  cf. planiloba Steph.  Dengan  Metode Uji  Kematian  Larva  Udang  dan Profil  Densitometri  Ekstrak  Aktif. Majalah Farmasi  Airlangga.  Vol.  4 No. 03. Yohanes, A, K. Fatimahwali. Weny, I, W. (2012).  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Flavonoid  dalam  Daun Beluntas ( Pluchea india L.) . Jurnal . Program  Study  Farmasi  FMIPA UNSRAT. Manado