PENGARUH PEMBERIAN MINYAK ATSIRI DAUN BANDOTAN ( Ageratum conyzoides ) DALAM TRANSPORTASI TERTUTUP BENIH IKAN KOI ( Cyprinus carpio )
THE EFFECTS OF BANDOTAN LEAVE’S (A geratum conyzoides ) ESSENTIAL OIL WITHIN CLOSED SYSTEM TRANSPORTATION OF KOI CARP (C yprinus carpio ).
Laksmi Sulmartiwi, Ida Bagus Putu Oka Dantika dan  Rr. Juni Triastuti
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
In the ornamental fish business, transportation has an important role to distributing fish up into the costumers. The distance between the farm and the customers location, require a transportation method which  can  maintain  the  quality  and  quantity  of  ornamental  fish  during  the  transportation.  The  biggest challenge in live fish closed system transportation is to reduce the stress level of fish during the process. According  to  Harmon  (2009),  fish  are  often  exposed  to  multiple  stressor  during  the  transportation. Stressed fish can be seen through the increasing of tachiventilation (rapid opercula movement) and blood glucose levels (Evans and Claiborne, 2006).
One  of  the  method  to  reduce  stress  of  fish  during  transportation  is  using  essential  oils  from Bandotan’s (A. conyzoides ) leaves. A. conyzoides essential oils know has an analgesic activity (Okunade, 2002; Shekhar and Anju, 2012; Singh et al ., 2013). A chemical compound with known analgesic effect, used in human and veterinary medicine as local analgesic dan be used to fish for the purpose of sedation, immobilization, and analgesia as well as general anaesthesia (Zahl and Samuelsen, 2012). This research was conducted to see the effect of A.conyzoides essential oils toward the survival rate, blood glucose levels, and tachyventilation of  koi carp juveniles during closed system transportation. This research using completely randomized design method which consist of 5 different treatments with 4 replications. Treatment that used in this research is the variation of administration doses of A. conyzoides essential oils during the koi carp juvenile closed system transportation. The treatment such as A (5 ppm), B (10 ppm), C (15 ppm), D (20 ppm), and E (0 ppm). Main parameter of this research is survival rate, blood glucose levels, and tachyventilation of koi carp juvenile during 8 hours transportation.
The result shows that A. conyzoides essential oils  give a significant result toward survival rate, blood glucose levels, and tachiventilation of koi carp juvenile during transportation. There is no mortality in  treatment  A,  B,  and  E,  during  transportation.  The  lowest  blood  glucose  levels  and  tachiventilation found in treatment A (5 ppm).
Keywords  : Ageratum  conyzoides ,  Essential  oils, Cyprinus  carpio ,  Tachiventilation,  Blood  Glucose Levels, Survival Rate, Closed System Transportation

## Pendahuluan
Ikan  koi  ( Cyprinus  carpio )  merupakan salah  satu  jenis  ikan  hias  air  tawar  yang  paling digemari  oleh  berbagai  lapisan  masyarakat  di dalam  dan  luar  negeri  karena  komposisi  warna yang  dimilikinya.  Jarak  antara  sentra  budidaya dengan  lokasi  konsumen  yang  berjauhan, mengakibatkandiperlukannya suatu metode transportasi yang dapat mempertahankan kualitas  dan  kuantitas  ikan  hias  selama  proses transportasi  berlangsung.Salah  satu  metode yang  paling  baik  digunakan  untuk  transportasi jarak jauh atau ekspor adalah metode transportasi  tertutup.  Metode  ini  menggunakan wadah  dari  plastik polyethylene ,  sehingga  berat paket  lebih  ringan  jika  dibandingkan  dengan
transportasi  terbuka  dan  memungkinkan  untuk dikirim melalui jalur udara (Lim et al ., 2003). Tantangan  terbesar  dalam  transportasi ikan  menggunakan  sistem  tertutup  adalah mengurangi tingkat stres yang terjadi pada ikan. Menurut Harmon (2009) selama proses transportasi  berlangsung,  ikan  cenderung  untuk mengalami  stres  karena  terpapar  berbagai macam  stresor.  Ikan  yang  mengalami  stres dapat dilihat melalui meningkatnya tachiventilasi (buka  tutup  operkulum  ikan)  dan kadar  glukosa  darah  (Evans and Claiborne,
2006). Ketidakmampuan ikan untuk menanggapi  atau  merespon  serta  beradaptasi terhadap
kondisi stres juga dapat mengakibatkan kematian atau mortalitas (Barton et al ., 2002).
Salah  satu  metode  untuk  mengurangi tingkat  stres  selama  transportasi  adalah  dengan pemberian minyak atsiri yang berasal dari daun
Bandotan.Minyak atsiri daun Bandotan diketahui  memiliki  sifat  analgesik  (Okunade, 2002).  Senyawa  yang  diketahui  memiliki  sifat analgesik,  dapat  diberikan  pada  ikan  untuk tujuan  sedasi  seperti pada penggunaan  senyawa anestesi  pada  umumnya  (Zahl and Samuelsen, 2012).  Efek  tersebut  disebabkan  oleh  adanya kandungan  senyawa  terpen  pada  minyak  atsiri daun Bandotan (Guimarães et al ., 2013).
Tujuan  dari  penelitian  adalah  untuk mengetahui  pengaruh  pemberian  minyak  atsiri daun  Bandotan  ( A.  conyzoides )  terhadap survival rate  (SR),  tachiventilasi,  dan  kadar glukosa  darah  terhadap  benih  ikan  koi  ( C. carpio ) selama transportasi tertutup.
Untuk  mengetahui  dosis  minyak  atsiri  daun Bandotan  ( A.  conyzoides )  yang  optimal  dalam proses  transportasi  benih  ikan  koi  ( C.  carpio ) secara tertutup.
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan  informasi  kepada  mahasiswa, pembudidaya  ikan  koi  ( C.  carpio ),  dan masyarakat  pada  umumnya  mengenai  pengaruh dan  potensi  pemberian  minyak  atsiri  daun Bandotan  ( A. conyzoides )  terhadap  benih  ikan koi  ( C.  carpio )  yang  ditransportasikan  secara tertutup.

## Materi dan Metode
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Oktober  2013.  Proses  ekstraksi  minyak  atsiri daun  Bandotan  dilakukan  di  Laboratorium Kimia  Organik,  Departemen  Kimia  Fakultas Sains  dan  Teknologi  Universitas  Airlangga. Proses  simulasi  transpotasi  dilaksanakan  di Laboratorium  Pendidikan  Fakultas  Perikanan Kelautan Universitas Airlangga, Surabaya.

## Metode Penelitian
Rancangan  penelitian  yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan
lima perlakuan dan empat ulangan.Penelitian  pendahuluan  telah  dilakukan untuk menentukan dosis aman ( safe concentration /SC)
minyak
atsiri
daun
Bandotan.Berdasarkan hasil penelitian pendahuluan,  diketahui  bahwa  dosis  aman pemberian minyak atsiri daun bandotan terhadap benih ikan koi adalah 10 ppm.Berdasarkan data tersebut, maka dilakukan penelitian utama dengan dosis A (5 ppm), B(10 ppm), C (15 ppm), D (20 ppm), dan E (0 ppm).
Ekstraksi Minyak Atsiri Penyulingan  dilakukan  dengan  cara destilasi  uap  daun  bandotan  kering  yang diremas dengan perbandingan jumlah antara air dan  daun  adalah  1:5.  Minyak  atsiri  yang mengapung  diatas  komponen  uap  air  kemudian diekstraksi dengan heksan dengan perbandingan 2:1  kemudian  dikocok  dalam  corong  pisah  dan diulang  sebanyak  3  kali  (Bouda et  al ,  2001; Tripathi et  al ,  2007).  Hasil  pengocokan kemudian  didiamkan  dan  diambil  bagian supernatannya. Bagian tersebut kemudian diuapkan  heksannya  dengan  alat rotary  vacum evaporator sehingga  terpisah  antara  minyak atsiri  dan  heksan  dengan  suhu  35ºC    dengan tekanan 550 mmHg (Sani dkk., 2012).
Persiapan Penelitian
Persiapan yang harus dilakukan sebelum melaksanakan penelitian adalah membuat  kantong  plastik  sebagai  wadah transportasi  dari  plastik  polyethylene  (PE) gulung dengan ukuran lebar 20 cm dan tebal 0,4 mm.Benih  yang  digunakan  merupakan  benih yang  berukuran  5-7  cm  dengan  kondisi  sehat dan  anggota  tubuh  lengkap.  Benih  kemudian dipindahkan  ke  dalam  bak  bak  fiber  untuk diaklimatisasi  dan  dipuasakan  selama  satu  hari (24 jam).

## Pengepakan Ikan
Benih  ikan  koi  yang  telah  dipuasakan kemudian dimasukkan ke dalam kantong plastik yang  sudah  berisi  air.Kepadatan  ikan  adalah  1 ekor  untuk  tiap  300  ml  air.  Penelitian tachiventilasi  dan  glukosa  darah  menggunakan tiga  ekor  ikan,  sedangkan  untuk survival  rate (SR)  menggunakan  10  ekor  ikan.  Kantong plastik  kemudian  diberi  oksigen  murni  dengan perbandingan  air  dan  udara  1  :  1.  Kantong plastik  kemudian  diikat  dan  dimasukkan  ke dalam  kotak  styrofoam.  Suhu  di  dalam  kotak styrofoamdipertahankan  pada  kisaran  20-22  ºC dengan  menambahkan  es  (Lim et  al .,  2007). Jumlah  es  yang  digunakan  sebanyak  10-20% dari  volume  air  dan  ditempatkan  di  dalam kantong plastik kecil (Berka, 1986).
Simulasi Transportasi Proses simulasi transportasi benih ikan koi  dilakukan  pada  malam  hari.  Kotak styrofoam  yang  berisi  benih  ikan  koi  kemudian ditaruh  di  bak  mobil  pick-up  untuk  selanjutnya dilakukan proses simulasi transportasi. Simulasi transportasi akan dilakukan selama delapan jam.
Penghitungan Survival Rate (SR) Penghitungan  SR  benih  ikan  koi dilakukan  pada  akhir  pengamatan  yaitu  pada kotak  terakhir  yang  telah  ditransportasikan selama  delapan  jam.  Adapun  rumus  untuk menghitung  SR  menurut  (Andriyanto  dkk., 2010) adalah sebagai berikut :
SR=  Nt/No  x 100% SR : Sintasan (%) N0 : Jumlah ikan pada awal pengamatan (ekor) Nt  : Jumlah ikan pada akhir pengamatan (ekor)
Pengukuran Tachiventilasi Pengamatan  tachiventilasi  dilakukan dengan  menghitung  jumlah  membuka  dan menutupnya operkulum benih ikan koi (Barreto and Volpato,  2011).  Penghitungan  dilakukan dengan  cara  sampling  pada  tiap  satuan percobaan.Pengamatan  dilakukan  setiap  jam, untuk  setiap  waktu  pengamatan,  penghitungan dilakukan  selama  tiga  menit  sebanyak  tiga  kali berturut-turut.

## Pengukuran Kadar Glukosa Darah
Pengukuran glukosa darah ikan dilakukan setiap dua jam sekali selama  delapan jam.  Pengukuran  dilakukan  menggunakan  alat Blood  Glucose  Monitoring  System merk One Touch Horizon (Eames et al ., 2010).Pengambilan  sampel  darah  dilakukan dengan  memotong  pangkal  sirip  ekor  ( caudal peduncle )  benih  ikan  koi  (Carleton  University Animal Care and Use, 2011).
Pengukuran Kualitas Air Pengukuran kualitas air dilakukan pada awal,  tengah,  dan  akhir  proses  transportasi. Parameter  yang  diukur  antara  lain  DO, ammonia,  pH  dan  suhu  air    media  transportasi yang  digunakan.  Pengukuran  DO  dan  ammonia dilakukan menggunakan bantuan
test
kit .Pengukuran suhu dilakukan dengan menggunakan  termometer  raksa,  sedangkan  pH diukur menggunakan pH pen.
Analisa Data Data  hasil  penelitian  ini  dianalisis menggunakan  ANOVA  ( Analysis  of  Variance )
untuk mengetahui
perbedaan diantara perlakuan.  Dilanjutkan  dengan  uji  Jarak Berganda  Duncan  ( Duncan’s  multiple  range test ).

## Hasil dan Pembahasan
Survival Rate (SR) Survival  Rate benih  ikan  koi  pada perlakuan  0,  5,  dan  10  ppm  adalah  100%.
Kematian ikan koi hanya terjadi pada perlakuan 15 dan 20 ppm, sedangkan pada perlakuan 0, 5, dan 10 ppm tidak terjadi kematian sama sekali.
Tabel 1. Persentase Survival rate benih ikan koi selama 8 jam transportasi
Glukosa Darah Hasil  uji  ANOVA  rata-rata  glukosa darah  benih  ikan  koi  ditampilkan  pada  Tabel 2.Hasil analisis varian (ANOVA) glukosa darah yang  dilanjutkan  dengan  uji  jarak  berganda Duncan  menggunakan  program  SPSS  16.0, menunjukkan  adanya  perbedaan  nyata  (p<0,05) pada  setiap  perlakuan  dalam  setiap  waktu pengamatan  kecuali  pada  waktu  pengamatan awal.
Grafik  nilai  rata-rata  glukosa  darah  benih ikan koi selama 8 jam transportasi dapat dilihat pada Gambar 1.
Tachiventilasi Tachiventilasi diamati
dengan menghitung  buka  tutup  operkulum  benih  ikan koi  yang  dilakukan  setiap  jam  selama  8  jam. Pengamatan  dilakukan  secara  sampling  pada tiap  satuan  percobaan.Pengamatan  dilakukan selama  tiga  menit  sebanyak  tiga  kali  berturu- turut  pada  tiap  waktu  pengamatan.Hasil  uji ANOVA  rata-rata  tachiventilasi  ditampilkan pada Tabel 3.
Hasil  uji  ANOVA  yang  dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan, menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan (p<0,05).  Hasil  uji  signifikan  ditemukan  pada tiap  perlakuan  dalam  setiap  waktu  pengamatan,
kecuali  pada  pengamatan  awal  (jam  ke-
0).Grafik
nilai rata-rata
tachiventilasi ditampilkan pada Gambar 2. Konsentrasi (ppm) Survival rate (%) ± SD 0 100± 0 a 5 100±0 a 10 100±0 a 15 80±1.41 b 20 60±0.81 c
Tabel 2. Hasil ANOVA rata-rata glukosa darah (mg/dl) benih ikan koi selama 8 jam transportasi
Waktu Pengamatan (jam) Perlakuan E (0 ppm) A (5 ppm) B (10 ppm) C (15 ppm) D (20 ppm) 0 26,75±0,95 a 27±0,81 a 26.75±1,25 a 27±1,41 a 27±1,82 a 2 27,75±0,95 d 38,75±2,62 c 189,5±4,50 a 154,25±2,5 b 153,75±2,98 b 4 63,75±4,27 d 65,25±3,30 d 170,75±7,58 c 230±17,20 b 251±11,91 a 6 65,75±4,34 c 52±4,32 c 230±5,09 a 197±14,35 b 208±15,03 b 8 71,75±3,86 c 46.75±1,25 d 217,5±5,06 a 200,25±2,06 b 221,25±24,08 a Keterangan :  Superskrip  berbeda  dalam  satu  baris  menunjukkan  ada  perbedaan  nyata (p<0,05). Perlakuan E : Kontrol (tanpa pemberian minyak atsiri daun Bandotan). Perlakuan A : Pemberian minyak atsiri daun Bandotan dengan dosis 5 ppm. Perlakuan B : Pemberian minyak atsiri daun Bandotan dengan dosis 10 ppm. Perlakuan C : Pemberian minyak atsiri daun Bandotan dengan dosis 15 ppm.
Perlakuan D : Pemberian minyak atsiri daun Bandotan dengan dosis 20 ppm.
Gambar 1. Grafik rata-rata glukosa darah benih ikan koi selama 8 jam   transportasi.
Tabel  3.  Hasil  ANOVA  rata-rata  tachiventilasi  benih  ikan  koi  (bit/3  menit)  selama  8  jam
transportasi. Waktu Pengamatan (jam) Perlakuan E (0 ppm) A (5 ppm) B (10 ppm) C (15 ppm) D (20 ppm) 0 128.75±1.89 a 125±4.08 a 127.75±6.13 a 127±2.16 a 130.5±2.08 a 1 129.5±3.31 a 61.25±5.90 d 92.25±5.43 c 112±10.23 b 94±3.36 c 2 127.5±2.08 a 59.5±3.87 d 87.5±5 c 109.5±7.14 b 94.5±3.8 c 3 103.5±6.19 a 56.25±1.89 c 84.75±8.18 b 96.5±1.29 a 82±4.32 b 4 65.75±1.70 d 49.5±6.02 e 75±3.26 c 93.25±2.5 a 81.25±1.5 b 5 61.25±2.62 c 45.5±2.88 d 73±2.82 ab 76±2.94 a 70.75±1.70 b 6 60.5±1.91 b 34±4.32 c 66.75±1.70 a 60.75±3.09 b 64.25±3.30 ab 7 50.5±3.69 b 29.75±2.5 d 59.25±3.40 a 39.5±3.69 c 59.75±2.98 a 8 42.5±3.41 b 21.5±3.31 c 53±3.55 a 39.5±3.10 b 44±3.74 b Keterangan :  Superskrip  berbeda  dalam  satu  baris  menunjukkan  ada  perbedaan  nyata (p<0,05). Perlakuan E : Kontrol (tanpa pemberian minyak atsiri daun Bandotan). Perlakuan A : Pemberian minyak atsiri daun Bandotan dengan dosis 5 ppm.
Perlakuan B : Pemberian minyak atsiri daun Bandotan dengan dosis 10 ppm. Perlakuan C : Pemberian minyak atsiri daun Bandotan dengan dosis 15 ppm.
Perlakuan D : Pemberian minyak atsiri daun Bandotan dengan dosis 20 ppm.
Kualitas Air Pengukuran kualitas air selama
penelitian dilakukan setiap empat jam. Parameter  kualitas  air  yang  diukur  meliputi parameter  fisika  dan  kimia,  yaitu  suhu,  pH, dissolved  oxygen  (DO),  dan  ammonia.  Data kisaran kualitas air selama transportasi berlangsung dapat dilihat pada Tabel 4.
Mortalitas  pada  benih  ikan  hanya terjadi  pada  konsentrasi  15  dan  20  ppm.Tidak terjadi  kematian  pada  konsentrasi  0,  5,  dan  10 ppm.  Kandungan  HCN  dan  coumarin  pada minyak atsiri daun Bandotan diketahui memiliki sifat toksik kepada kelinci (Singh, et al ., 2013). Sifat  toksik  atau  racun  juga  ditemukan  pada senyawa  precocene  I  dan  precocene  II  yang termasuk ke dalam golongan chromene. Paparan stresor  selama  transportasi  berlangsung  juga dapat  mengakibatkan  mortalitas  pada  ikan (Harmon, 2009).
Pemberian minyak atsiri daun bandotan  memberikan  pengaruh  terhadap  kadar glukosa darah benih ikan koi selama transportasi.  Pemberian  minyak  atsiri  daun bandotan  dengan  dosis  5  ppm  menunjukkan nilai  rata-rata  glukosa  darah  yang  paling mendekati  dengan  perlakuan  kontrol,  bahkan cenderung  mengalami  penurunan  pada  akhir waktu  pengamatan.Pemberian  minyak  atsiri
daun  bandotan  juga  berpengaruh  terhadap tachiventilasi benih ikan koi selama transportasi. Nilai rata-rata tachiventilasi selama transportasi cenderung untuk mengalami penurunan  pada  semua  perlakuan,  dengan  nilai terendah ditemukan pada perlakuan 5 ppm.
Penurunan  nilai  rata-rata  tachiventilasi dan  glukosa  darah  pada  benih  ikan  koi  selama transportasi  diduga  disebabkan  oleh  aktivitas analgesik minyak atsiri daun bandotan.Aktivitas analgesik  mengakibatkan  ikan  menjadi  lebih tenang dan tidak banyak bergerak, sehingga laju respirasi  menjadi  lebih  rendah  (Sanjaya,  2011). Senyawa  dari  golongan  terpen,  terutama monoterpen  diketahui  memiliki  sifat  analgesik (Guimarães et  al .,  2013).  Senyawa  terpen  dan komponen  kimia  lain  dalam  minyak  atsiri memiliki  struktur  molekul  yang  sederhana. Umumnya  memiliki  tingkat  kelarutan  yang tinggi  pada  lemak,  sehingga  dapat  menembus blood-brain  barrier dan  bekerja  pada  sistem saraf pusat (de Sousa, 2011). Aktivitas senyawa monoterpen  pada  sistem  saraf  pusat  diketahui dalam  menghambat enzim  GABA transaminase (Koo et  al .,  dalam  de  Almeida et  al .,  2009), sehingga  meningkatkan  konsentrasi  GABA  di dalam sistem saraf pusat. Peningkatan konsentrasi GABA pada sistem saraf pusat akan memicu  timbulnya  efek  sedasi  pada  hewan  dan
Gambar 2. Grafik rata-rata tachiventilasi (bit/3 menit) benih ikan koi selama 8   jam transportasi
Tabel 4. Hasil pengukuran parameter kualitas air selama 8 jam transportasi.
Parameter Kualitas Air Waktu Pengamatan Awal Tengah Akhir Suhu (ºC) 26-27 21-22 21-22 pH 8,9-9 7,6-7,8 7,7-7,8 DO (ppm) 6 6 6 NH 3 (mg/l) 0,18 0,02-0,09 0,05-0,27
mamalia  (de  Almeida et  al .,  2009).Sedasi  pada ikan  diketahui  mengakibatkan  berkurangnya aktivitas  dan  metabolisme  ikan,  termasuk penurunan  pada  buka  tutup  operkulum  atau tachiventilasi  pada  ikan  (Cooke et  al ., 2004).Pemberian  senyawa  yang  memiliki  efek sedasi  juga  mampu  meminimalisir  efek  stres pada ikan selama transportasi, sehingga mempengaruhi  kadar  glukosa  darah  (Neiffer and Stamper, 2009).
Kualitas  air  merupakan  salah  satu faktor  pembatas  dalam  transportasi  ikan  hidup. Penurunan kualitas air selama transportasi dapat mengakibatkan  stres  dan  kematian  pada  ikan (Hariyanto,  2008;  Harmon,  2009).  Selama transportasi  berlangsung,  kadar  oksigen  terlarut di  dalam  air  stabil  pada  angka  6  ppm.  Menurut Bachtiar  (2002),  kadar  oksigen  terlarut  normal bagi  kehidupan  ikan  koi  berkisar  antara  5-7 ppm.pH  air  selama  transportasi  mengalami penurunan  pada  pengamatan  di  tengah  dan akhir.  Walaupun  demikian,  penurunan  nilai  pH masih  berada  dalam  batas  normal.  Menurut Effendi  (1993),  kisaran  pH  normal  yang dibutuhkan  bagi  ikan  koi  berada  pada  kisaran 6,5-8,5.  Selama  penelitian,  kadar  ammonia berkisar  antara  0,02-0,27  mg/l.  Menurut Prihartono  (2006) dalam Mulyadi, dkk (2010), bahwa  batas  kritis  ikan  terhadap  kandungan ammonia  terlarut  di  dalam  air  adalah  0,6  mg/l. Hal  tersebut menunjukkan  bahwa kadar ammonia selama transportasi berlangsung masih berada  dalam  kisaran  normal  bagi  kehidupan ikan.

## Kesimpulan
Adapun  kesimpulan  yang dapat ditarik dari  penelitian  ini  adalah  pemberian  minyak atsiri daun Bandotan ( A. conyzoides ) berpengaruh  terhadap SR, kadar glukosa darah, dan  tachiventilasi  pada  benih  ikan  koi  yang ditransportasikan  secara  tertutup.  Dosis  optimal pemberian  minyak  atsiri  daun  bandotan  dalam proses  transportasi  benih  ikan  koi  secara tertutup adalah 5 ppm.
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  aktivitas  sedatif  dari  senyawa monoterpen  yang  terdapat  pada  minyak  atsiri daun  Bandotan  ( A.  conyzoides ),  sehingga kedepannya dapat dikembangkan dan diaplikasikan secara langsung di dunia perikanan terutama perikanan budidaya.
Daftar Pustaka Andriyanto, S., N. Lisyanto, dan R.
Rahmawati.2010.  Pengaruh  Pemberian Probiotik  dengan  Dosis  yang  Berbeda
Terhadap  Sintasan  dan  Pertumbuhan
Benih Patin Jambal ( Pangasius djambal ).Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur.117-122. Bachtiar,  Yusuf.  2002.  Mencermelangkan Warna  Koi.  AgroMedia  Pustaka  : Depok. Hal. 5. Barreto, R. E. and G. L. Volpato. 2011.Ventilation  rates  indicate  stress- coping styles in Nile tilapia. Journal of Bioscience 36 (5). Hal 1-5.
Barton,  B.  A.,  J.  D.  Morgan,  M.  M.  Vijayan. 2002.  Physiological  and  Condition- Related  Indicator  of  Environmental Stress  in  Fish, in
Adams,  S.M. Biological Indicators of Aquatic Ecosystem Stress (paperback). American  Fisheries  Society.Hal.111- 118. Bouda,  H.,  L.A.  Tapon  Djou,  D.A    Fontem, M.Y.D,  Gumed  Zoe.  2001.  Effect  of Essential Oils from Leaves of
Ageratum conyzoides , Lantana camara and Cromolaena  odorata on  The Mortality of Sithopilus zeamais (coloptera,  curculionidae).  Journal  of Stored Produvts Research 37(2001):193-199. Carleton  University.  2011.  Standard  Operating
Procedure  :  Blood  sampling  of  non- anesthetized  fish.  Canada’s  Capital University  Animal  Care  and  Use Program. 4 hal.
Cooke,  S.T.,  C.D.  Suski,  K.G.  Ostrand,  B.L. Tufts, and D.H. Wahl. 2004. Behavioral and physiological assessment  of  low  concentrations  of clove  oil  anaesthetic  for  handling  and transporting largemouth bass ( Micropterus  salmoides ).  Aquaculture 239, hal. 509-529.
de  Almeida,  R.  N.,  D.  A.  M.  Araujo,  J.  C.  R.
Goncalves, F. C. Montenegro, D. P. de Sousa, J. R. Leite, R. Mattei, M. A. C. Benedito,  J.  G.  B.  de  Carvalho,  J.S. Cruz,  J.  G.  S  Maia.  2009.  Rosewood oil  induces  sedation  and  inhibits compound  action  potential  in  rodents.
Journal of Ethnopharmacology 124.Hal.440-443.
de Sousa, D. P. 2011. Analgesic-like Activity of Essential Oils Constituents. Molecules, 16, hal. 2233-2252.
Eames, S. C., L. H. Philipson, V. E. Prince, and
M.  D.  Kinkel.  2010.  Blood  Sugar Measurement  in  Zebrafish  Reveals Dynamic  of  Glucose  Homeostasis. ZEBRAFISH Vol. 7, No. 2. 10 hal.
Effendy,  Hersanto.  1993. Mengenal  Beberapa Jenis Koi . Kanisius: Jakarta. Hal.11-68. Evans,  D.  H. and J.  B.  Claiborne.  2006.  The Physiology  of  Fishes,  Third  Edition. CRC Press, Taylor and Francis Group : Florida. Hal.319-322.
Guimarães,  A.  G.,  J.  S.  S.  Quintans, and L.  J. Quintans-Junior.  2013.  Monoterpenes with  Analgesic  Activity,  A  Systematic Review.  Phytotherapy  Research  27. Hal.1-15.
Hariyanto,  S.  E.,  F.  S.  Pranata,  Y.  Aida.  2008. Pemanfaatan  Ekstrak  Daun  Kecubung ( Datura  metel L.)  Sebagai  pembius Ikan  Koi  ( Cyprinus  carpio L.)  Pada Saat  Pengangkutan.  Biota  Vol.  13  (1), hal 24-30.
Harmon,  T.S.  2009.  Method  for  reducing stressors and maintaining water quality associated  with  live  fish  transport  in tanks : a review of the basics. Reviews in Aquaculture, 1, 58-66.
Lim,  L.C.,  P.  Dhert, and P.  Sorgeloos,  2003.
Recent developments and improvements  in  ornamental  fish packaging  system  for  air  transport.
Aquaculture Research, 34, 923-935.
Lim,  L.  C.,  P.  Dhert,  P.  Sorgeloos.  2007. Preparation  for  Transport  :  Fish
Packaginf  Technology.  Ornamental Fish International
Educational Publication 2, hal 25-45. Mulyadi,  M.  T.  Usman,  dan  Suryani.  2010. Pengaruh  Frekuensi  Pemberian  Pakan yang  Berbeda  Terhadap  Pertumbuhan dan  Kelulushidupan  Benih  Ikan  Silais ( Ompok hypophthalmus ). Berkala
Perikanan  Terubuk,  Vol  38  No.2.  Hal
21-40.
Neiffer,  D.  L. and M.  A.  Stamper.  2009.  Fish Sedation,  Anesthesia,  Analgesia,  and Euthanasia  :  Consideration,  Methods, and  Types  of  Drugs.  Institute  for Laboratory  Animal  Research  (ILAR) Journal, Volume 50, Number 4, Oxford University Press. Hal 343-360. Okunade,  A.L.  2002.  Review  : Ageratum conyzoides L. (Asteraceae). Fitoterapia,
73, 1-16. Sani, N.S., R. Racchmawati dan Mahfud. 2012. Pengambilan Minyak Atsiri dari Melati dengan Metode Enfleurasi dan Ekstraksi  Pelarut  Menguap.  Jurnal Teknik POMITS Vol.1 (1): 1-4.
Sanjaya, Y. 2011. Pengaruh  Kosentrasi  Larutan Daun Bandotan (Ageratum conyzoides)
Terhadap  Tingkat  Kelulusan  dan  Buka Tutup  Operkulum  Benih  Ikan  Koi (Cyprinus  carpio)  dalam  Transportasi Sistem Tertutup.Skripsi.Fakultas Perikanan  dan  Kelautan.  Universitas Airlangga. Surabaya., 24 hal. Zahl,  I.  H. and O.  Samuelsen.  2012. Anaesthesia of farmed fish: implications for welfare. Fish Physiology  and  Biochemistry  38:201-
218.