Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT)- DENSITOMETRI UNTUK PENETAPAN KADAR β-KAROTEN DALAM TABLET KUNYAH EKSTRAK Spirulina platensis
Siti Fatmawati Fatimah, Citra Ariani Edityaningrum * , Wihasty Nur Istyqomah, Ibnu Gholib Gandjar, Laela Hayu Nurani Fakultas Farmasi, Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta
*Email: citra.edityaningrum@pharm.uad.ac.id
Artikel diterima: 24 November 2019; Disetujui: 5 Maret 2020 DOI: https://doi.org/10.36387/jiis.v5i1.404

## ABSTRAK
Validasi Metode Analisis penentuan β-karoten dalam tablet kunyah ekstrak Spirulina  platensis perlu  dilakukan  untuk  menjamin  mutu  dan  kualitas  Tujuan penelitian  ini  adalah  membuktikan  validitas  metode  KLT-Densitometri  untuk penetapan  kadar  β-karoten  dalam  tablet  kunyah  ekstrak Spirulina  platensis. Validasi  metode  analisis  dilakukan  dengan  menggunakan  standar  β-karoten  dan tablet  kunyah  spirulina  dalam  pelarut  etil  asetat  meliputi  spesifitas,  linearitas, presisi  keberulangan,  presisi  antara,  akurasi,  batas  deteksi  dan  batas  kuantitasi dengan  fase  diam  silika  gel  60  F254  dan  fase  gerak  aseton  :  etil  asetat  (1:1  v/v) menggunakan  metode  KLT,  kemudian  dilakukan  analisis  kuantitatif  dengan Densitometer  pada  panjang  gelombang  453  nm.  Hasil  penelitian  menunjukkan metode  KLT-Densitometri  linear  dengan  nilai  r  =  0,9938,  memiliki  presisi keberulangan dengan RSD 1,893%, presisi antara dengan nilai RSD 2,401%, LOD sebesar 0,159 mg/mL dan LOQ sebesar 0,531 mg/mL, serta spesifitas menunjukkan metode tidak spesifik terhadap senyawa β-karoten dan akurasi tidak menunjukkan nilai  perolehan  kembali.  Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa metode  KLT-Densitometri  tidak  valid  untuk  penetapan  kadar  β-karoten  dalam tablet kunyah ekstrak Spirulina platensis .
Kata  kunci: KLT-Densitometri,  β-karoten,  tablet  kunyah  ekstrak Spirulina platensis , validasi metode analisis

## ABSTRACT
Analytical  Validation  Method  to  determine  β-carotene  in  the  Spirulina platensis  extract  chewable  tablets  need  to  be  done  to  ensure  the  quality.  The purpose of this study is to prove the validity of the TLC-Densitometry method for determining  the  levels  of  β-carotene  in  the  Spirulina  platensis  extract  chewable tablets.  Validation  of  the  analysis  method  was  carried  out  using  standard  β- carotene  and  spirulina  chewable  tablets  in  ethyl  acetate  solvents  including specificity,  linearity,  repeatability  precision,  intermediate  precision,  limit  of detection and limit of quantitation with stationary phase of silica gel 60 F254 and mobile  phase  of  acetone:  ethyl  acetate  (1:  1  v/v)  using  the  TLC  method,  then
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
quantitative analysis was carried out with a Densitometer at a wavelength of 453 nm.  The  results  showed that  the  TLC-Densitometry  method  was  linear  with  an r value of = 0.9938, having a repeatability precision with RSD 1.89%, intermediate precision with an RSD value of 2.401%, an LOD of 0.159 mg/mL and an LOQ of 0.531  mg/mL,  and  the  specificity  showed  that  this  method  is  not  specific  to  β- carotene compounds and the accuracy does not indicate a recovery value. Based on these results it can be concluded that the TLC-densitometry method is invalid for  the  determination  of  β-carotene  levels  in  the  Spirulina  platensis  extract chewable tablets.
Keywords: TLC-Densitometry, β-carotene, Spirulina chewable tablets, validation of analytical method.

## PENDAHULUAN
Malnutrisi  merupakan  masalah kesehatan utama di negara berkembang  temasuk  Indonesia  dan bertanggung  jawab  secara  langsung maupun tidak langsung terhadap 60 % kematian  pada  balita  (Kuntari  dkk., 2013). Salah satu senyawa yang dapat digunakan  untuk  menurunkan  risiko kekurangan  gizi  adalah  karotenoid. Sumber  karotenoid  tertinggi  terdapat pada Spirulina  platensis dengan karotenoid  tertinggi  berupa  β-karoten yang dapat dikonversi menjadi vitamin A (Christwardana dkk., 2013). Spirulina  dalam  bentuk  tablet  dan kapsul  memiliki  tingkat  akseptibilitas yang rendah terutama pada anak-anak dan  pasien  penderita  kanker  yang memiliki  kesulitan  dalam  menelan obat. Oleh karenanya, dibuatlah tablet kunyah yang diharapkan dapat
diterima dengan baik karena memberikan  rasa  yang  enak,  mudah ditelan  dan  tidak  meninggalkan  rasa pahit (Anonim, 1995). Validasi metode analisis perlu dilakukan dalam penetapan  kandungan  β-karoten  pada tablet kunyah tersebut dengan metode KLT-Densitometri.
Metode KLT-Densitometri memiliki  keuntungan  yaitu  dapat memisahkan senyawa yang dituju dari komponen  lain,  dan  dapat  dilakukan penetapan  kadar  beberapa  sampel secara  simultan  (Yuangsoi  dkk., 2008).  Selain  itu,  metode  KLT pelaksanaannya lebih mudah dan lebih murah serta peralatan yang digunakan lebih  sederhana  jika  dibandingkan dengan  metode  KCKT  (Wulandari dkk., 2013).
Parameter validasi metode analisis  meliputi  spesifitas,  linearitas,
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
presisi  keberulangan,  presisi  antara, akurasi,  batas  deteksi,  dan  batas kuantitasi. Metode KLT-Densitometri
diharapkan mampu memenuhi
parameter validasi yaitu dapat menghasilkan ketelitian dan ketepatan yang baik serta memenuhi kriteria lain seperti  spesifitas,  batas  deteksi,  batas kuantitasi,  dan  linearitas  sehingga dapat  diperoleh  hasil  analisis  yang valid dan dapat dipercaya.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah timbangan  analitik  Ohaus  EX  225D , mortir,  stamper,  ultrasonic  (S  30  H Elmasonic)  labu  takar  5  mL  (Iwaki Pyrex),  mikropipet  100  –  1000  μL (Socorex), blue tip , gelas ukur (Iwaki Pyrex), corong, pipa kapiler 5 μL, kaca arloji, chamber, instrumen CAMAG
TLC  SCANNER 4 , oven , dan lampu UV 254. Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  kertas  saring, kertas timbang, kertas jenuh, dan plate silika  gel  60  F254,  tablet  kunyah ekstrak Spirulina platensis , standar β- karoten  (Calbiochem),  klorofom  p.a (E.  Merck),  metanol  p.a  (E.  Merck), Isopropil  alkohol  p.a  (E.  Merck),
NH4OH p.a (E. Merck), etil asetat p.a (E. Merck), dan aseton p.a (E. Merck).

## Pengkondisian KLT
Analisis KLT dilakukan dengan fase  diam  silika  gel  60  F 254 . Plate diaktivasi  dalam  oven  suhu  120 0 C selama  10  menit.  Sebanyak  5  μL sampel  ditotolkan  dalam  fase  diam, dengan lokasi 1 cm dari tepi plate , dan jarak  masing-masing  totolan  1  cm. Fase gerak yang digunakan adalah fase gerak  yang  telah  didapat  dari  hasil optimasi.  Fase  gerak  dijenuhkan  agar elusi berjalan sempurna. Plate dielusi hingga  batas ,  plate dikeringkan  pada tempat  yang  gelap,  dan  kemudian dibaca  pada  KLT-Densitometer.  Rf dan  nilai  area  dari  kromatogram standar  dan  sampel  yang  didapatkan kemudian dicatat (Starek dkk., 2015). Persiapan  Larutan  Standar  β- karoten
Larutan  standar  dibuat  dengan menimbang 20,0 mg standar β-karoten dilarutkan  dalam  etil  asetat  hingga volumenya  5  mL  sehingga  diperoleh konsentrasi 4 mg/mL.

## Pembuatan Kurva Baku
Larutan standar 4 mg/mL dibuat 6  seri  konsentrasi  yang  dilarutkan dengan  etil  asetat  dalam  labu  takar
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
hingga  volume  5  mL  seperti  pada Tabel 1.
Tabel 1. Larutan seri konsentrasi standar β-karoten Konsentrasi (mg/mL) Volume larutan induk (mL) 0,1 0,125 0,2 0,250 0,3 0,375 0,4 0,500 0,5 0,625 0,6 0,750

## Preparasi Sampel
Sebanyak  20  tablet  ditimbang satu  persatu  dan  dihitung  bobot  rata- ratanya.  Tablet  digerus,  ditimbang setara satu tablet dan dilarutkan dalam etil  asetat  sampai  volume  5  mL. Larutan  diultrasonikasi  pada  30 0 C selama 20 menit dan disaring menggunakan kertas saring Whatman.
Optimasi Fase Gerak
Tabel 2. Komposisi fase gerak Komposisi Fase Gerak (mL) I II III Kloroform 2,04 - - Metanol 4,00 - - Aseton 11,00 - 1,00 Isopropil alkohol - 0,16 - Etil asetat - 1,00 1,00 NH 4 OH - 0,25 -

## Penentuan Panjang Gelombang
Penentuan  panjang  gelombang
dilakukan dengan mengambil 3
larutan  seri  konsentrasi  pada  kurva baku,  yaitu  konsentrasi  01;  0,3;  dan
0,6 mg/mL. Larutan tersebut ditotolkan  pada plate sebanyak  5  μL. Analisis  dengan  KLT-Densitometer dilakukan  pembacaan  pada  panjang gelombang 400 - 500 nm.
Uji Kesesuaian Sistem
Larutan standar β-karoten konsentrasi  0,3  mg/mL  ditotolkan pada plate silika gel 60 F 254 . Penotolan dilakukan 6 kali dengan volume 5 μL untuk  setiap  totolan, plate dielusi, dikeringkan,  dianalisis  dengan  KLT- Densitometer, dihitung % RSD Rf dan %  RSD  AUC.  Kriteria  keberterimaan nilai RSD ≤ 2% (Anonim, 2013).
Validasi Metode Analisis Spesifitas
Pengukuran spesifitas dilakukan dengan  membandingkan  Rf  dari larutan  sampel,  larutan  standar,  dan larutan plasebo. Pengukuran dilakukan  dengan  ditotolkan  larutan sampel, larutan standar konsentrasi 0,3 mg/mL, dan larutan placebo pada fase diam  silika  gel  60  F 254 .  Kemudian dielusi  dengan  fase  gerak  etil  asetat  : aseton  (1  :  1).  Diamati  noda  larutan sampel yang mempunyai faktor retensi (Rf)  sama  dengan  larutan  standar  β-
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
karoten,  dan  kemudian  dianalisis dengan Densitometer.

## Linearitas
Pengukuran  dilakukan  dengan ditotolkan kurva baku konsentrasi 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 mg/mL sebanyak 5 μL pada lempeng silika gel 60 F 254 kemudian  dielusi  dengan  fase  gerak dan  diukur  area  pada  panjang gelombang 453 nm. Linearitas ditentukan dari nilai koefisien korelasi (r)  kurva  baku  larutan  standar  β- karoten (Anonim, 2013).
Presisi keberulangan
Larutan standar β-karoten konsentrasi  0,3  mg/mL  ditotolkan pada plate yang  telah  diaktivasi, kemudian  dielusi  dengan  fase  gerak. Penotolan  dilakukan  6  kali  dengan volume  5  μL.  Analisis  dengan  KLT- Densitometer  dan  dihitung  %  RSD AUC (Anonim, 2013).
Presisi antara
Larutan standar β-karoten konsentrasi  0,3  mg/mL  ditotolkan pada plate yang  telah  diaktivasi, kemudian dielusi. Penotolan
dilakukan 6 kali dengan volume 5 μL
dan  dilakukan  dengan  2  analis  yang berbeda. Analisis dengan KLT-
Densitometer  dan  dihitung  %  RSD AUC (Anonim, 2013).
Akurasi
Penetapan  kadar  β-karoten  dalam sampel
Penetapan kadar dilakukan dengan ditotolkan kurva baku konsentrasi 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 mg/mL dan 3 larutan sempel sebanyak 5 μL pada lempeng silika gel 60 F 254 , dan  dielusi  hingga  batas.  Setelah  itu, plate dikeringkan  pada  tempat  gelap dan  diamati  di  bawah  lampu  UV  254 nm.  Bercak  dianalisis  dengan  KLT- Densitometer . Kadar  dari  senyawa dihitung  dengan  persamaan  regresi linear y = bx + a dari kurva baku. Penambahan  baku  larutan  standar dengan  tiga  tingkat  konsentrasi pada sampel
Pengujian  dilakukan  dengan metode  penambahan  larutan  standar yang  diambil  sebanyak  0,375;  0,625; dan 0,75 mL dari larutan induk standar konsentrasi  4  mg/mL.  Kemudian dimasukkan  ke  labu  takar  5  mL, ditambahkan  sampel  pada  masing- masing  konsentrasi  larutan  standar tersebut,  dan  dicukupkan  volumenya dengan  etil  asetat  hingga  batas.  Seri kurva  baku  dan  larutan  sampel  yang
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
ditambahkan
standar kemudian ditotolkan sebanyak 5 μL dalam plate ,
dielusi, dianalisis dengan KLT- Densitometer, dan dihitung %
perolehan kembali.
% Recovery =
Standar yang ditemukan standar yang ditambahkan × 10
Limit  of Detection  (LOD) dan  Limit of Quantification (LOQ)
Larutan  induk  dibuat  6  seri kurva baku yaitu konsentrasi 0,1; 0,2; 0;3 0,4; 0,5; dan 0,6 mg/mL. Masing- masing  konsentrasi  ditotolkan  pada plate yang telah diaktivasi, dielusi dan dianalisis  dengan  KLT-Densitometer. LOD dan LOQ ditentukan berdasarkan  standar  deviasi  (SD)  dan slope (b)  dari  kurva  baku  hasil penetapan kadar.
LOD = 3,3 SD b
LOQ = 10 SD b
Keterangan: SD  = simpangan baku respon,
b = slope dari kurva baku kalibrasi (Harmita, 2012)

## Analisis Data
Data yang diperoleh merupakan data dari AUC larutan pembanding β- karoten  yang  dibuat  kurva  kalibrasi dan  diperoleh  persamaan  regresi
linear.  Kadar  dari  senyawa  dihitung dengan dimasukkan kedalam persamaan  regresi  linear  y  =  b  x  +  a yang  diperoleh  dari  kurva  kalibrasi pembanding.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Optimasi Fase Gerak
Fase  gerak  yang  digunakan berdasarkan  penelitian  Starek,  dkk. (2015)  yaitu  kloroform  :  metanol  : aseton  (2,04  :  4  :  11),  sedangkan perbandingan  fase  gerak  isopropil alkohol : etil asetat : NH4OH (0,16 : 1 :  0,25)  dan  aseton  :  etil  asetat  (1:1) diperoleh  dari  penelitian  Hernandez, dkk.  (2018).  Hasil  elusi  dapat  dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Hasil optimasi fase gerak
Berdasarkan hasil optimasi diperoleh fase gerak aseton: etil asetat (1:1)  merupakan  fase  gerak  terbaik yang  dapat  memisahkan  senyawa- senyawa  yang  terkandung  dalam
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Spirulina  platensis dan  menghasilkan nilai Rf 0,78.
Penentuan Panjang  Gelombang Maksimum Penentuan  panjang  gelombang maksimal dilakukan untuk mendapatkan  λ  yang  menghasilkan serapan maksimal sehingga pengukuran kadar yang diperoleh juga maksimal. Tujuan
penggunaan konsentrasi yang berbeda adalah untuk mengetahui pengaruh konsentrasi
larutan  standar  terhadap  panjang gelombang yang dihasilkan.
Hasil diperoleh dengan konsentrasi  berbeda  menghasilkan panjang gelombang yang relatif sama, sehingga  dapat  diketahui  panjang gelombang  maksimal  larutan  standar β-karoten  adalah  453  nm.  Panjang gelombang  ini  mendekati  panjang gelombang maksimum yang diperoleh dari  penelitian  Starek  dkk.  (2015) yaitu 450 nm.
Tabel 3. Data panjang gelombang maksimal Konsentrasi (mg/mL) Rf λmax (nm) 0,1 0,76 453 0,3 0,77 453 0,6 0,77 454 Rata-rata 0,767 453 SD 0,006 0,577 %RSD 0,782 0,127

## Uji Kesesuaian Sistem
Uji kesesuaian sistem dilakukan untuk  mengetahui  kestabilan  kinerja sistem  Densitometer  saat  dilakukan pengujian  secara  berulang.  Parameter yang digunakan adalah % RSD ≤ 2 %. Hasil  uji  kesesuaian  sistem  dapat dilihat  pada  Tabel  4  dengan  RSD 1,558.  Hasil  tersebut  menunjukkan sistem  Densitometer  yang  dipakai dalam kondisi stabil untuk melakukan pengujian kadar β-karoten.
Tabel 4. Uji kesesuaian sistem Pengujian ke- AUC (mV) 1 22869,2 2 23474,6 3 23378,0 4 23423,5 5 22921,9 6 22607,6 Rata-rata ± SD  23112,5 ± 360,2 %RSD 1,558

## Validasi Metode Analisis

## Spesifitas
Pengujian  spesifitas  dilakukan untuk  mengetahui  kemampuan  suatu metode  dalam  mengukur  analit  yang
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
dituju secara tepat dan spesifik dengan adanya  komponen  pengotor  lain. Parameter  yang  diharapkan  adalah pada  pengukuran  tidak  memberikan respon  kromatogram  pada  larutan placebo  yang  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil uji spesifitas
Hasil uji spesifitas menunjukkan bahwa  metode  KLT-Densitometri tidak  dipengaruhi  adanya  larutan placebo  karena  tidak  menghasilkan respon kromatogram.
Meskipun
demikian,  panjang  gelombang  yang dihasilkan  larutan  sampel  berbeda dengan standar,
sehingga menyebabkan kromatogram yang dihasilkan  tidak  berhimpit.  Hal  ini terjadi karena warna orange yang ada dalam  larutan  sampel  tertutupi  oleh warna  hijau  yang  terdapat  dalam sampel Spirulina  platensis. Untuk mengatasi hal tersebut, maka diperlukan  ekstraksi  bertingkat  untuk memisahkan  senyawa  β-karoten  dari
komponen  lain.  Jadi  disimpulkan bahwa  metode  Densitometri  tidak menunjukkan  kespesifikan  terhadap senyawa β-karoten.
Linearitas
Tabel 5. Hasil uji linearitas Konsentrasi (mg/mL) AUC (mV) 0,100 18675,3 0,201 23772,3 0,301 28993,4 0,402 32618,9 0,502 36044,4 0,602 39149,0 Linearitas suatu metode ditunjukkan oleh koefisien korelasi (r) dari  kurva  baku,  di  mana  nilai  r menunjukkan hubungan antara konsentrasi  larutan  standar  β-karoten dengan nilai AUC. Menurut Petunjuk Operasional Penerapan Pedoman Cara Pembuatan Obat yang Baik (Anonim, 2013) suatu metode dikatakan mempunyai  linearitas  yang  baik apabila nilai r ≥ 0,98.
Hasil  uji  menunjukkan  adanya hubungan  linear  antara  kadar  β- karoten  dengan  nilai  AUC  pada Densitometer yaitu diperoleh nilai r = 0,9937.

## Presisi keberulangan
Presisi keberulangan membuktikan  keterulangan  metode
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
yang digunakan untuk menguji larutan standar  pada  6  kali  pembacaan.
Kriteria keberterimaan presisi keberulangan  yaitu  ≤  2  %.  Hasil
presisi dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6. Hasil presisi keberulangan metode Pengujian ke- AUC (mV) 1 20581,5 2 20329,1 3 21188,3 4 21065,8 5 20296,6 6 21012,0 Rata-rata ± SD 20745,550 ± 392,806 %RSD 1,893
Hasil  menunjukkan  bahwa  presisi keberulangan  memenuhi  persyaratan, dengan RSD = 1,893 %.
Presisi antara
Tabel 7. Hasil presisi antara Pengujian ke- Analis 1 Analis 2 1 24023,4 24836,6 2 23903,9 24229,4 3 24774,3 24827,9 4 24671,5 24037,2 5 24347,8 23309,2 6 25565,0 24748,1 Rata-rata ± SD 24439,525 ± 586,858 %RSD 2,401 Pengujian presisi antara dilakukan untuk
membuktikan keterulangan  metode  yang  digunakan
untuk pengujian yang dilakukan oleh 2 analis  yang  berbeda.  Hasil  presisi antara dapat dilihat pada Tabel 7. Hasil presisi  antara  memiliki  nilai  RSD  = 2,401 %. Dari hasil  parameter di  atas menujukkan  bahwa  metode  KLT- Densitometri  yang  dipakai  belum menunjukkan presisi hasil saat digunakan  untuk  penetapan  kadar  β- karoten  secara  berulang  pada  kondisi yang  berbeda.  Faktor  kritikal  yang berpengaruh  dalam  presisi  hasil  di antaranya  kandungan  β-karoten  yang mudah teroksidasi sehingga dibutuhkan keterampilan dan
kecepatan dalam preparasi dan pembacaan  pada  KLT-Densitometer. Nilai  presisi  antara  dapat  diperbaiki apabila  faktor  kritikal  tersebut  dapat dikendalikan dengan baik.
Akurasi
Penetapan  kadar  β-karoten  dalam sampel
Penetapan kadar β-karoten dalam tablet kunyah spirulina dilakukan  untuk  mengetahui  kadar yang  kemudian  digunakan  untuk pengujian  akurasi.  Hasil  pembacaan kurva  baku  diperoleh  persamaan  y  = 28878 x + 18186, r = 0,9694. Setelah dibandingkan dengan r tabel = 0,8114
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
dengan taraf kepercayaan 95%
diperoleh  r  hitung  >  r  tabel,
menunjukkan bahwa adanya hubungan  yang  signifikan  antara konsentrasi  larutan  standar  β-karoten dengan AUC sehingga dapat
digunakan  untuk  penetapan  kadar  β- karoten dalam sampel. Hasil penetapan  kadar  tablet  kunyah  dapat dilihat pada Tabel 8.
Tabel 8. Hasil penetapan kadar Kadar Rata-rata ± SD Kadar β-karoten (mg/mL) 0,272 ± 0,007 Kadar β-karoten (mg/tablet) 1,365 ± 0,033 Berdasarkan perhitungan didapatkan  kadar  β-karoten  0,272 mg/mL. Nilai kadar tersebut digunakan sebagai kadar sampel untuk pengujian  akurasi.  Dari  nilai  tersebut diketahui  jumlah  β-karoten  dalam tablet  kunyah  spirulina  yaitu  1,365 mg/tablet ± 0,033 mg/tablet.
Penambahan  larutan  standar  β- karoten.
Pengujian  akurasi  dilakukan untuk  mengetahui  kedekatan  nilai terukur dari nilai sebenarnya. Parameter  yang  digunakan  adalah %perolehan  kembali . Uji  akurasi dilakukan dengan metode adisi larutan standar β-karoten.
Tabel 9. Data hasil akurasi Replikasi Standar yang ditemukan (mg/mL) Standar yang ditambahkan (mg/mL) Perolehan kembali (%) 1 0,276 0,300 92 2 0,298 0,300 99,333 3 0,294 0,300 98 1 0,469 0,501 93,613 2 0,484 0.501 96,607 3 0,468 0,501 93,413 1 0,587 0,602 97,671 2 0,523 0,602 87,022 3 0,581 0,602 96,672 Rata-rata ± SD 94,926 ± 3,829 RSD (%) 4,034 Perolehan  kembali  memenuhi syarat  apabila  nilainya  sebesar  98- 102%,  dengan  RSD  dari  semua konsentrasi  <2%  (Anonim,  2013).
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Hasil pengujian akurasi tidak menggambarkan nilai perolehan kembali. Hal tersebut akan lebih baik apabila  pengujian  akurasi  dilakukan dengan  penambahan  baku  standar dengan  konsentrasi  80%,  100%,  dan 120%  dari  hasil  pengujian  kadar sampel  yang  diperoleh.  Di  samping itu, sampel yang digunakan sebaiknya sampel utuh yang langsung digunakan untuk pengujian akurasi.
Limit of Detection (LOD)
Pengujian LOD dilakukan untuk mengetahui konsentrasi analit
terendah  dalam  sampel  yang  masih dapat  dideteksi.  Hasil  LOD  yang diperoleh sebesar 0,159 mg/mL. Hasil tersebut  menunjukkan  bahwa  alat Densitometer yang digunakan mampu mendeteksi  jumlah  β-karoten  sebesar 0,159 mg/mL. Hasil tersebut mendekati hasil yang diperoleh Starek dkk. (2015) yaitu 0,103 mg/mL. Limit of Quantification (LOQ)
Pengujian LOQ dilakukan untuk
mengetahui konsentrasi analit
terendah dalam sampel yang ditentukan  dari  presisi  dan  akurasi yang  dapat  diterima  pada  kondisi operasional  metode  yang  digunakan. Hasil  LOQ  yang  diperoleh  sebesar
0,531 mg/mL. Nilai tersebut menunjukkan alat Densitometer dapat menganalisis  β-karoten  secara  akurat dan  presisi  pada  konsentrasi  sebesar 0,531  mg/mL.  Namun,  hasil  ini berbeda  dengan  hasil  yang  diperoleh Starek dkk. (2015) yaitu 0,313 mg/mL. Faktor yang mempengaruhi perbedaan hasil  tersebut  di  antaranya  perbedaan tipe  alat  Densitometer  dan  nilai ketidakpastian  hasil  kalibrasi  alat Densitometer masing-masing laboratorium.

## KESIMPULAN
Hasil  validasi  metode  KLT- Densitometri menggunakan fase diam silika  gel  60  F 254 dan  fase  gerak aseton:  etil  asetat  1  :  1  v/v  untuk penetapan  kadar  β-karoten  dalam tablet kunyah ekstrak Spirulina platensis menunjukkan nilai linearitas, presisi  keberulangan,  nilai  LOD  dan LOQ  yang  memenuhi  persyaratan. Namun, metode tersebut perlu dikembangkan  lebih  lanjut  sehingga spesifitas, presisi antara, serta akurasi dapat  menunjukkan  hasil  yang  lebih baik.
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(1), Maret 2020, 137-148 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima kasih  kepada  DIKTI  yang  telah mendanai penelitian ini dengan SKIM penelitian PUPT (Penelitian Unggulan
Perguruan Tinggi) untuk tahun
anggaran 2016/2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,  1995,  Farmakope  Indonesia Edisi IV, Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, Jakarta, hal 4-5. Anonim,  2013,  Petunjuk  Operasional Penerapan Pedoman Cara Pembuatan Obat yang Baik 2012 Jilid I., Badan POM RI, Jakarta. Christwardana,  M.,  Nur,  M.M.A., Hadiyanto,  H.,  2013,  Spirulina platensis:  Potensinya  sebagai bahan pangan fungsional, Jurnal
Aplikasi Teknologi Pangan , 2(1).
Harmita, H., 2012, Petunjuk pelaksanaan validasi metode dan Cara Perhitungannya, Pharmaceutical  Sciences  and Research (PSR) , 1(3): 117-135.
Hernández,  M.C.,  López  Dellamary- Toral,  F.A.,  González-Ortiz,
L.J., Sánchez-Peña,
M.J., Pacheco-Moisés,  F.P.,  2018, Two-Dimensional  Thin  Layer Chromatography- Bioautography Designed to Separate and Locate Metabolites with Antioxidant Activity Contained on Spirulina platensis, International  journal of analytical chemistry , 2018.
Kuntari, T., Jamil, N. A., & Kurniati,
O., 2013, Faktor risiko malnutrisi  pada  balita, Kesmas: National Public Health Journal , 7 (12): 572-576.
Starek, M., Guja, A., Dąbrowska, M., Krzek,  J.  2015,  Assay  of  β- carotene  in  dietary  supplements and  fruit  juices  by  TLC- densitometry, Food  Analytical Methods , 8(5): 1347-1355. Wulandari,  L.,  Retnaningtyas,  Y., Mustafidah, D., 2013, Development and Method Validation  Densitometry  Thin Layer Chromatography for Thesimultaneous  Determination of Theophylline and Ephedrinehydrochloride in Tablet  Dosage  Form, Jurnal Kimia Terapan Indonesia , 15(1).
Yuangsoi,  B.,  Jintasataporn,  O.,
Areechon,  N.,  &  Tabthipwon, P., 2008. Validated TLC- densitometric analysis for determination  of  carotenoids  in fancy  carp  (Cyprinus  carpio) serum  and  the  application  for pharmacokinetic parameter assessment. Songklanakarin Journal of Science & Technology , 30(6).