Website : jurnal.umj.ac.id/index.php/konversi
Email :  jurnalkonversi@umj.ac.id

## U  N  I  V  E  R  S  I  T  A  S   M  U  H  A  M  M  A  D  I  Y  A  H   J  A  K  A  R  T  A

## BIOSINTESIS ASAM LEMAK OMEGA-3 DARI PALM OIL MILL EFFLUENT (POME) MELALUI PROSES ANAEROBIK DENGAN MIKROAERASI
Indira Salsabilla Ayuwibowo, Annisa Karunia, Hanifrahmawan Sudibyo, dan Wiratni Budhijanto
Program Studi Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Gadjah Mada Jl. Grafika No. 2 Kampus UGM, Yogyakarta, 55283 wiratni@ugm.ac.id
ABSTRAK .  Kelapa  sawit  adalah  salah  satu  komoditas  ekspor  unggulan  Indonesia.  Bila target  produksi  crude  palm  oil  (CPO)  pada  tahun  2020  di  Indonesia  sebesar  30  juta  ton tercapai,  maka  diprediksi  timbul  limbah  cair  palm  oil  mill  effluent  (POME)  dari  seluruh perusahaan kelapa sawit di Indonesia sebanyak 90 juta ton limbah POME per tahun. POME memiliki  karakteristik  kandungan  organik  yang  dinyatakan dalam  chemical  oxygen  demand (COD)  yang  berkisar  antara  50.000  -  200.000  mg/L  serta  pH  berkisar  antara  4-4,5.  Oleh karena  itu  diperlukan  pengolahan  POME  agar  tidak  menjadi  beban  lingkungan.  Salah  satu ide  adalah  upaya  memberikan  nilai  tambah  pada  POME  dengan  konversi  menjadi  asam yang  bernilai  ekonomi.  Studi  awal  ini  mempelajari  kemungkinan  biosintesis  asam  lemak omega-3 dari POME dengan proses anaerobik. Pada umumnya, proses anaerob bertujuan menghasilkan  biogas,  melalui  asam  sebagai  produk  antaranya.  Studi  ini  justru  bermaksud menghentikan  proses  pada  produk  antara  berupa  asam  dan  berupaya  menekan  konversi asam  menjadi  biogas.  Namun  untuk  mencapai  hasil  produksi  asam  lemak  omega-3  yang maksimal,  banyak  faktor  yang  harus  diperhatikan.  Penelitian  pendahuluan  ini  bermaksud mengkaji  pengaruh  injeksi  udara  pada  proses  anaerobik  terhadap  produksi  asam.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  penambahan  atau  injeksi  udara  secara  terbatas  dan terkontrol (mikroaerasi) akan meningkatkan selektivitas proses ke arah produksi asam tanpa pembentukan  biogas.  Profil  asam  menunjukkan  terbentuknya  asam  lemak  jenuh  dan  tak jenuh  yang  berpotensi  untuk  memproduksi  asam  lemak  omega-3  seperti  munculnya  asam nervoat,  cis-eicosadienoat,  cis-eikosapentanoat,  dan  asam  linolenat  yang  puncak kemunculannya  pada  waktu  proses  yang  berbeda-beda.  Hasil  penelitian  awal  ini mengindikasikan  bahwa  biosintesis  asam  lemak  omega-3  dari  POME  melalui  proses anaerobik bisa dilakukan namun perlu pengkajian lebih lanjut untuk optimasi proses.
Kata kunci: POME, anaerobik, asam omega-3, volatile fatty acids, mikroaerasi
ABSTRACT . Palm oil is one of Indonesia's leading export commodities. By 2020, the target of  crude palm oil (CPO) production in Indonesia is 30 million tons. It is predicted that such production  target  is  accompanied  by  a  consequence  of  palm  oil  mill  effluent  (POME) emission as waste water, which will reach 90 million tons of POME waste per year. POME has  high  organic  content  which  are  characterized  as  chemical  oxygen  demand  (COD) values,  which  ranges  from  50,000  -  200,000  mg  /  L  and  pH  values  ranges  from  4-4.5. Untreated  POME  is  a  serious  environmental  problem  and  therefore  POME  processing  is urgently  needed.  One  of  the  ideas  is  converting  POME  into  more  valuable  products,  by biosynthesis  of  omega-3  fatty  acids  from  POME  with  anaerobic  processes.  The  common product collected from anaerobic digestion is biogas. This study, however, intended to stop the  process  in  the  intermediate  product,  which  is  a  series  of  organic  acids,  without  biogas formation.  The  study  aimed  to  explore  the  effect  of  controlled  air  injection  in  anaerobic processes on acid productions as the intermediate product in anaerobic digestion. The result showed  that  limited  air  injection  (microaeration)  improved  process  performance,  especially
with respect to  acid  production. Whereas through  GC-FID  analysis, the profile  of  saturated and unsaturated fatty acids was obtained. The acids have the potential to produce omega-3 fatty  acids  such  as  the  appearance  of  nervoic,  cis-eicosadienoic,  cis-eicosapentanoic,  and linolenic  acids,  with  the  peak  of  appearance  occurring  at  different  process  durations.  This preliminary study indicated that the biosynthesis of omega-3 fatty acids from POME through the anaerobic process was possible to be carried out but further study would be needed for process optimization.
Keywords: POME, anaerobic, omega-3 fatty acids, volatile fatty acids, microaeration

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu negara  yang  memiliki  potensi  dalam perkebunan kelapa sawit. Potensi tersebut tampak  dari  perkiraan  peningkatan  luas lahan  kelapa  sawit  pada  tahun  2015 sebesar  4,46%  menjadi  11,44  juta  hektar (Badan Pusat Statistik, 2014). Pada tahun 2020 Indonesia diperkirakan memproduksi 30 juta ton minyak kelapa sawit curah/tahun.  Peningkatan  produksi  ini diiringi urgensi pengolahan limbah industri kelapa  sawit  karena  1  ton  kelapa  sawit mampu  menghasilkan  limbah  tandan kosong  kelapa  sawit  (TKKS)  sebanyak 23% atau 230 kg, limbah cangkang ( shell ) sebanyak  6,5%  atau  65  kg, wet  decanter solid (lumpur  sawit)  4  %  atau  40  kg, serabut  (fiber)  13%  atau  130  kg  serta limbah cair sebanyak 50% (Kamal, 2014).
Tingginya timbulan limbah cair industri kelapa sawit yang dikenal dengan Palm
Oil Mill
Effluent (POME)
menimbulkan gangguan lingkungan. POME mengandung bahan organik dengan  konsentrasi  COD  tinggi,  yaitu 50.000 –  200.000  ppm  (Abdullah,  2011). Pengolahan  POME  pada  saat  ini  masih dilakukan  secara  konvensional,  yaitu dengan  bantuan  bakteri  anaerobik  untuk memproduksi metana menggunakan kolam ukuran besar. Masalah lain dengan pengolahan konvensional adalah kebutuhan  lahan  yang  meningkat  seiring dengan  peningkatan  volume  limbah  dan pada akhirnya mempengaruhi faktor ekonomis pengolahan limbah.
Di  lain  pihak,  limbah  yang  berlimpah jumlahnya  ini  bisa  jadi  merupakan  bahan baku  untuk  produksi  senyawa  yang bernilai  ekonomi  tinggi.  Kandungan  asam lemak  yang  sangat  bervariasi  dalam POME,  muncul  ide  untuk  mengeksplorasi
kemungkinan  mengekstrak  bahan  kimia yang dengan nilai tambah.
Salah satu bahan kimia yang menarik untuk dikaji adalah asam lemak omega-3. World Health Organization (WHO) menganjurkan  konsumsi  asam  lemak omega-3  yang  terdiri  dari  EPA  dan  DHA untuk  setiap  orang  sebanyak  300-500  mg per  hari  (Hadders,  2014).  Asam  lemak omega-3 yang banyak dikonsumsi saat ini berasal  dari  ikan  dan  minyak  ikan, khususnya ikan laut (Sudibyo dkk., 2017). Selain  itu,  kebutuhan  harian  omega-3 dapat  dipenuhi  melalui  konsumsi  minyak ikan  hasil  ekstraksi  dan  merupakan produk  turunan  protein  ikan  (Ciriminna  et al.,  2017).  Kandungan  asam  lemak omega-3 di dalam ikan tidak terjadi karena sintesis  asam  lemak  di  dalam  ikan  itu sendiri,  melainkan  karena  ikan  memakan alga dan phytoplankton
Fakta  bahwa  sumber  asam  lemak omega  3  tertinggi  berasal  dari  ikan, ternyata tidak mampu memenuhi kebutuhan harian manusia terhadap asam lemak omega 3 (Duthie et al., 1992, Diana dkk,  2012).  Diversifikasi  sumber  bahan baku  dan  produk  jadi  yang  mengandung asam  lemak  omega-3  dalam  bentuk  EPA dan  DHA  menjadi  perlu  dikembangkan. Alasannya  adalah  karena  cara  alternatif lain  melalui  konsumsi  alpha-linolenic  acid atau  ALA  yang  dapat  dikonversi  dalam tubuh menjadi EPA dan DHA tidak mampu memenuhi  kebutuhan  minimal  tubuh. Konversi  ALA  menjadi  EPA  dan  DHA tubuh  sangat  rendah  karena  merupakan karakteristik  umum  metabolisme  pada manusia,  dan  tahap  yang  paling  lambat adalah pada proses konversi EPA menjadi DHA (Algra, 2013).
Dari  studi  awal,  diketahui  bahwa mayoritas senyawa kimia penyusun POME  adalah  asam  lemak  (Tabel  1). Asam  lemak  penyusun  POME  sebagian
besar  adalah  asam  heksanoat  dan  asam palmitoleat  (Michael,  2014).  Komponen tersebut  berpotensi  diolah  lebih  lanjut melalui  proses  peruraian  anaerobik  untuk memperoleh  profil  komposisi  asam  lemak yang  baru.    Penelitian  ini  merupakan bagian dari payung penelitian besar untuk perancangan Anaerobic  Fluidized  Bed Reactor (AFBR)  yang  akan  diaplikasikan untuk pengolahan POME di industri sawit. Harapannya,  dengan  pengaturan  kondisi proses, peruraian anaerobik mampu menghasilkan  asam  lemak  rantai  panjang yang  bersifat  tidak  jenuh  seperti  asam lemak omega-3.
Mengingat POME terkategori sebagai limbah, sementara produk yang dihasilkan adalah  senyawa  yang  terkategori  sebagai suplemen  kesehatan,  tentunya  masih panjang  jalan  yang  harus  ditempuh  untuk merealisasikan  ide  ini.  Penelitian  ini dimaksudkan sebagai penelitian
eksploratif
untuk mengidentifikasi kemungkinan  potensi  terlebih  dahulu. Masih diperlukan penelitian-penelitian selanjutnya  untuk  lebih  memperdalam pemahaman  ilmiah  yang  diperlukan  untuk mengembangkan  proses  yang  dipelajari dalam studi ini lebih lanjut.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  limbah  POME  yang  diperoleh dari  PT.  Perkebunan  Nusantara  VII  di Propinsi  Lampung.  Untuk  setiap  reaktor (batch),  dibutuhkan  sebanyak  2  liter POME.  Mikroorganisme  yang  digunakan berasal  dari  effluent  pengolahan  limbah biodiesel.  Bahan-bahan  yang  digunakan dalam  analisis  volatile  fatty  acids  (VFA) pada  penelitian  ini  adalah  aquadest, H 2 SO 4 95-97%  p.a,  NaOH  p.a  (Merck), indikator  Phenolphthalein,  asam  asetat 98% p.a (Merck).

## Tabel 1. Komponen makro dalam POME
Komponen %(w/w) Lemak 1,39 ± 0,04 Protein 0,73 ± 0,01 Karbohidrat 0,20 ± 0,01 Abu 0,41 ± 0,03
Air 95,51 ± 0,03
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini disajikan pada Gambar 1.

## Gambar 1. Rangkaian alat percobaan

## Metode Penelitian
Sejumlah  kurang  lebih  4  liter  limbah POME  diambil  tanpa  disaring  dan  dibagi untuk pengisian dua reaktor dan ditambahkan efluen reaktor biogas pengolah  limbah  pabrik  biodiesel  dengan perbandingan  antara  limbah  POME  dan limbah biodiesel 3:1.
Kemudian
kandungan  COD  dan  VFA  dari  campuran tersebut  dicek  dan  dicatat.  Gas  untuk menghilangkan  oksigen  digelembungkan ke dalam cairan sebelum reaktor disambungkan dengan selang yang tersambung  dengan  gas  meter.  Udara diinjeksikan  secara  berkala  dalam  jumlah tertentu  ke  dalam  reaktor.  Setiap  reaktor dirangkai dengan kolom pengukur gas dan bubbler sebagai  indikator  pembentukan gas.
Pengecekan  gas  dilakukan  setiap  2 hari  pada  jam  yang  sama  dengan  cara hasil  pengamatan  perubahan  ketinggian air  pada  bak  penampung  dan  kolom pengukuran  gas  juga  suhu  lingkungan dicatat.  Pengujian  gas  metana  tidak dilakukan, namun apabila penampung gas hasil  reaksi  sudah  penuh  di  buang  ke tempat  pembuangan.  Pengujian  Volatile Fatty Acids (VFA) dilakukan sesuai jadwal sampling dalam 13 hari pengamatan.

## Metoda  Analisa
Larutan  sampel  diambil  pada  waktu- waktu  tertentu  selama  proses  percobaan, yaitu pada waktu 3 jam, 6 jam, 12 jam, 18
Keterangan:
1. Reaktor batch
2. Gasometer
3. Bak penampung
4. Bubbler
5. Outlet sampling gas
6. Outlet sampling cairan 7. Selang untuk memompa gasometer
jam,  24  jam,  36  jam,  48  jam,  hari  ke-8, dan  hari  ke-13.  Referensi  untuk  analisis VFA  diambil  dari  Standard  Methods  for The
Examination of Water and Wastewater  edisi  ke  21  oleh  APHA (American  Public  Health  Association), New York (Eaton dkk, 2005). Analisis VFA dilakukan dengan metode distilasi APHA.
Sampel yang dianalisis dengan menggunakan  GC-MS    adalah  sampel yang diambil dengan frekuensi yang sama dengan  sampel  untuk  analisis  VFA. Prosedur preparasi sampel yang mayoritas  mengandung  banyak  asam lemak  mengikuti  prosedur  esterifikasi untuk  menurunkan  titik  didih  dari  asam lemak.
HASIL

## PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Proses  penguraian  secara  anaerob dimulai  dengan  penguraian  senyawa – senyawa  kompleks  menjadi  senyawa sederhana,  yang  disebut  dengan  proses hidrolisis.  Substrat  hasil  proses  hidrolisis ini digunakan oleh bakteri asidogen/acetogen  untuk  diurai  menjadi senyawa  VFA.  Senyawa  VFA  inilah  yang kemudian  menjadi  substrat  bagi  bakteri metanogen  untuk  menghasilkan  metana. Penelitian ini justru bertujuan
memaksimalkan produksi VFA dan meminimalkan produksi metana.
Gambar 2 menunjukkan profil akumulasi  VFA  dalam  dua  reaktor  yaitu reaktor dengan injeksi oksigen dan reaktor tanpa injeksi oksigen.
Gambar 2. Konsentrasi VFA dalam reaktor dengan injeksi udara dan dalam reaktor tanpa injeksi udara
Pada  Gambar  2,  tampak  bahwa selama  13  hari  percobaan,  kemunculan VFA teramati sejak awal proses pada tiap kondisi. Grafik VFA cenderung mengalami kenaikan  hingga  hari  terakhir.  Ada  dua kemungkinan  terjadinya  hal  ini  yaitu,  VFA yang  dihasilkan  tidak  dikonversi  menjadi metana  oleh  bakteri  metanogen  atau bakteri  asidogen  bekerja  dengan  jauh lebih  baik  daripada  bakteri  metanogen. Hal ini dapat dikonfirmasi dengan produksi gas metana yang sangat sedikit.
Tabel 2. Komposisi asam lemak pada cairan hasil peruraian anaerobik dengan injeksi sedikit udara
Tabel 2 menunjukkan bahwa produksi asam  butirat  berfluktuasi  dari  nilai  awal saat 3 jam yaitu 22,46% meningkat drastis menjadi  94,43%  pada  hari  ke-3  dan kembali  turun  pada  hari  terakhir  (hari  13) yaitu  60,75%.  Tren  yang  sama  juga dialami  pada  asam  heksanoat  dimana pada 3 jam 1,82% kemudian naik menjadi 5,57%  saat  hari  ke-3  dan  turun  pada  hari ke-13 yaitu 5,40%. Hal ini mengindikasikan bahwa walaupun diinjeksi  sedikit  udara,  masih  terjadi dominasi proses peruraian senyawa organik  secara  anaerob  dalam  tiga  belas hari  pertama  karena  kedua  asam  ini No Kode Sampel Deskripsi Konsentrasi (% mol) 1 POME (3 Jam) 1 M Butyrate 22,46 2 M Hexanoate 1,82 3 M Heneicosanoate 7,94 4 Cis-11,14- Eicosadienoic acid methyl ester 4,43 5 M Lignocerate 6,60 6 M Cis-5,8,11,14,17- Eicosapentaenoate 10,73 7 M Nervonate 46,02 2 POME (3 Hari) 1 M Butyrate 94,43 2 M Hexanoate 5,57 3 POME (13 Hari) 1 M Butyrate 60,75 2 M Hexanoate 5,40 3 M Linolenate 23,78 4 M Heneicosanoate 10,07
Melalui Proses AnaerobikDengan Mikroaerasi (Indira Salsabilla Ayuwibowo, Annisa Karunia, Hanifrahmawan Sudibyo, Dan Wiratni Budhijanto)
merupakan kategori VFA yang merupakan senyawa intermediet pada proses peruraian anaerobik.
Bakteri acidogen/acetogen  memang  merupakan bakteri  yang  bersifat  fakultatif,  yaitu bakteri  anaerob  yang  masih  memerlukan sedikit oksigen untuk menjalankan metabolismenya.
Terkait  tujuan  penelitian  ini  untuk menghasilkan asam lemak yang dikategorikan sebagai asam lemak omega 3, maka ada hal yang menarik pada profil asam  lemak  di  kondisi  3  jam  karena muncul  konsentrasi  asam  nervoat  yang cukup  tinggi  yaitu  46,02%.  Asam  nervoat ini adalah salah  satu asam yang berpotensi  untuk  memproduksi  asam lemak  omega-3.  Asam  nervoat  adalah hasil  elongasi  dari  asam  palmitat  akibat oksidasi, sehingga pembentukannya memerlukan  keberadaan  oksigen  dalam jumlah sedikit.
Namun  pada  kondisi  3  hari  dan  13 hari  kemunculan  asam  nervoat  tidak nampak  lagi.  Hal  ini  bisa  menunjukkan POME memiliki kandungan asam palmitat dan  asam  oleat  yang  potensial  untuk produksi asam lemak
omega-3
berdasarkan jalur pathway pembentukannya. Akan tetapi
pembantukan asam nervonat hanya terjadi di awal proses anaerob.
Sebaliknya, kandungan asam lemak jenuh mengalami  peningkatan  selama  proses. Apabila ditinjau konsentrasi asam heneikosanoat, pada  waktu 3 jam proses, konsentrasinya  baru  7,94%  kemudian meningkat  pada  hari  ke-13  menjadi 10,07%.  Asam  heneikosanoat  adalah asam  lemak  jenuh  dengan  C  20. Pembentukan  asam  lemak  jenuh  ini  bisa jadi  merupakan  penggabungan  kembali dari  asam-asam  lemak  tidak  jenuh  yang telah  terbentuk  sebelumnya.  Dugaan  ini masih  bersifat  spekulatif  sehingga  masih perlu  dipelajari  lebih  mendalam  dan dibuktikan dalam penelitian selanjutnya.
Selain  asam  nervoat, juga  ditemukan Cis-ekosadinoat  dan  cis-eikosapentanoat yang  merupakan  asam  lemak  tak  jenuh tunggal  yang  bisa  mengalami  elongasi menjadi  EPA.  Hal  istimewa  berikutnya ditunjukkan  oleh  profil  asam  lemak linolenate  yang  muncul  pada  hari  ke-13
sebesar  23,78%  di  mana  senyawa  ini adalah adalah basa konjugat dari asam α- linolenat, yang timbul dari deprotonasi dari gugus asam karboksilat. Asam α-linolenat adalah  asam  lemak  omega-3  yang esensial  bagi  manusia  atau  biasa  disebut ALA. Kemunculan asam linolenat merupakan  indikasi  bahwa  pembuatan asam  lemak  omega-3  melalui  proses anaerobic  pada  POME  ini  mungkin  untuk dilakukan.  Akan  tetapi,  masih  diperlukan pemahaman mekanisme yang lebih mendalam  untuk  dapat  mengoptimalkan intensitas  injeksi  oksigen  dan  waktu proses.

## KESIMPULAN
1.  Injeksi  udara  dalam  jumlah  kecil (mikroaerasi) yang dilakukan dalam  reaktor  pada  saat  proses anaerobik cenderung meningkatkan produksi VFA dalam proses anaerob. Pengamatan komposisi  asam  lemak  dalam cairan  hasil  peruraian  anaerobik menunjukkan bahwa aktivitas mikroorganisme
membuat
komposisi asam lemak  jenuh dalam
campuran produk
penguraian anaerobik sangat dinamis. Oleh karena itu, intensitas jumlah injeksi oksigen perlu dioptimalkan. 2.  POME berpotensi
untuk menghasilkan asam lemak omega- 3  karena  hasil  peruraian  anaerob mengandung  asam  lemak  tidak jenuh  yaitu  asam  nervoat,  cis- eicosadienoat,
cis-
eikosapentanoat, dan asam linolenat yang puncak kemunculannya
pada waktu proses  yang  berbeda-beda.  Oleh karena  itu  diperlukan  optimasi waktu proses yang sangat akurat.
3.  Tiga jam pertama proses merupakan  waktu  yang  dalam penelitian  ini  tampak  sebagai durasi akumulasi asam-asam lemak tidak jenuh. Semakin panjang  waktu  proses,  komposisi
asam  lemak  semakin  bergeser  ke arah asam-asam lemak jenuh.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  dibiayai  dengan  hibah riset  dari  Australian  National  University – SMERU Indonesia (2017-2018) dan bekerjasama  dengan  LIPI  Kimia  serta CSIRO Australia.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah,  R.,  2011.  World  Palm  Oil
Supply, Demand, Price and Prospects:Focus  on  Malaysian and Indonesian Palm Oil Industries.  Oil  Palm  Industry Economic Journal, Vol. 11.
Awaluddin,  A.,  A.  Kurnia,  A.  Prayitno,  E. Saputra, and Saryono. 2015. “The
Effect  of  Temperature  on  Sulfuric Acid-Catalyzed  Hydrolysis  of  Oil Palm  Frond  to  Levulinic  Acid.” Journal of Clean Energy Technologies 4 (1):52 –55.
https://doi.org/10.7763/JOCET.20
16.V4.253.
Ciriminna,  R,  Meneguzzo,  F.,  Delisi,  R.,
and Pagliaro, M. 2017. “Enhancing  and  Improving  the Extraction  of  Omega-3  from  Fish Oil.”  Sustainable  Chemistry  and Pharmacy 5:54 –59. https://doi.org/10.1016/j.scp.2017. 03.001.
Diana,  F.M .  2012.  “Omega  3.”  Jurnal Kesehatan Masyarakat 6 (2):113 – 17.
Duthie,  I.F.  and  Barlow,  S.M..  1992. Dietary  lipid  exemplified  by  fish oils  and  their  n-3  fatty  acid.  Food
Sci. Technol. 6: 20-35.
Eaton,  A.,  Clesceri,  D.,  Rice,  L.S., Eugene,  W.,  Greenberg,  A.  E. 2005.  Standard  Methods  for  the Examination of Water and Wastewater, American Public Health Association (APHA), Washington DC.
Hendaryati,  D.D.  dan  Arianto,  Y.  (Eds.),
2016. “Statistik Perkebunan
Indonesia 2015-2017 Kelapa Sawit.” Direktorat Jenderal Perkebunan Kementerian Pertanian, Jakarta. Hadders,  A.  M.  Effect  of  long-chain polyunsaturated fatty acid supplementation on neurodevelopmental  outcome  in full-term infants. Nutrients. 2014;2:790-804. Rustan,  A. C.  2005.  “Fatty  Acids :
Structures  and  Properties,”  1–7.
https://doi.org/10.1038/npg.els.00
03894.
Sudibyo, H, Pradana, Y.S., and Budhijanto W. 2017. “Bio-Synthesis of Eicosapentaenoic Acid (EPA) from  Palm  Oil  Mill  Effluent  Using
Anaerobic Process,” 3–8.