## PENDAHULUAN
Histoteknik  merupakan  metode  atau  proses mempersiapkan  organ,  jaringan,  atau  bagian  jaringan melalui suatu rangkaian hingga menjadi preparat sediaan yang  siap  untuk  diamati  atau  dianalisa  (Annisa,  2022).
Proses  pembuatan  preparat  sediaan  histologi memiliki beberapa  tahap  yaitu  fiksasi  ( fixation ),  dehidrasi ( dehydration ),  pembeningan  ( clearing ),  pembenaman ( embedding ),  pengecoran  ( blocking ),  pemotongan
Perbedaan Hasil Pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) pada Histologi Ginjal Mencit (Mus musculus) Berdasarkan Ketebalan Mikrotom
Differences in Hemtoxylin Eosin Staining Results in Mice Kidney Histology (Mus musculus) Based on Microtome Thickness
Eko Naning Sofyanita 1*
Utami Purnama Siwi 2
Program Studi D-IV Analis Kesehatan, Poltekkes
Kemenkes Semarang, Jawa
Tengah, Indonesia
*email: utamipurnamasiwi@gmail.com

## Abstrak
Tahap  pemotongan  ( sectioning )    menggunakan  mikrotom  merupakan  tahap pembuatan jaringan yang perlu diperhatikan ukuran ketebalannya. Ukuran ketebalan mikrotom  yang  dapat  digunakan  yaitu  3-5 μ m.  Hewan  mencit  memiliki  banyak keunggulan,  sedangkan  organ  ginjal  mencit  ( Mus  musculus )  merupakan  salah  satu organ  yang  sering  digunakan  dalam  penelitian. pewarnaan  jaringan  yang  sering digunakan secara rutin adalah pewarna yang dapat memulas inti dan sitoplasma serta jaringan  penyambungnya  yaitu  pewarnaan Hematoxylin  Eosin (HE). Tujuan  dari penelitian ini adalah mengetahui perbedaan hasil pewarnaan HE pada histologi ginjal mencit  berdasarkan  ketebalan  mikrotom  3 μ m,  6 μ m    dan  9 μ m.  Penelitian  ini menggunakan  jenis  penelitian  Eksperimental  dengan  desain  penelitian true experimental post test only control group design . Inti sel tampak berwarna biru keunguan pada kelompok pemotongan mikrotom 3 μ m dengan rata-rata nilai 2,97. Sitoplasma tampak jelas dan berwarna merah muda pada kelompok pemotongan mikrotom 3 μ m  dengan  rata-rata  nilai  3.  Keseragaman  warna  pada  kelompok  pemotongan mikrotom 3 μ m dengan intensitas warna yang merata pada seluruh lapang pandang dengan  rata-rata  nilai  3.  Hasil  uji Kruskal  Wallis dan Man  Whitney pada  ketebalan pemotongan mikrotom 3 μ m, 6 μ m dan 9 μ m menunjukkan adanya perbedaan hasil kualitas  pewarnaan  sediaan  preparat  ginjal  mencit  dengan  signifikan p =  0.000. Kesimpulan penelitian ini yaitu pemotongan menggunakan organ ginjal mencit dapat menggunakan ketebalan 3 μ m.

## Kata Kunci:
Mikrotom
Pewarnaan Pemotongan Keywords : Microtome Staining Sectioning

## Abstract
The sectioning stage using a  microtome is the stage for making tissue that needs to be considered for its thickness. The size of the thickness of the microtome that can be used is 3-5 μ m. Mice have many advantages, while the rat kidney (Mus musculus) is one of the organs that is often used in research. Tissue staining that is often used routinely is a dye that can stain the nucleus and cytoplasm and its connective tissue, namely Hematoxylin Eosin (HE) staining. The purpose of this study was to determine the differences in the results of HE staining in mice kidney histology based on microtome thicknesses of 3 μ m, 6 μ m and 9 μ m. This study uses experimental research with a true experimental post test only control group design. The nucleus appeared purplish blue in the 3 μ m microtome cutting group with an average value of 2.97. The cytoplasm was clear and pink in the 3 μ m microtome cutting group with an average value of 3. Color uniformity in the 3 μ m microtome cutting group with uniform color intensity throughout the visual field with an average value of 3. Test results  Kruskal Wallis and Man Whitney on the microtome cutting thickness of 3 μ m, 6 μ m and 9 μ m showed that there was a significant difference in the results of the staining quality of mice kidney preparations with p = 0.000. The conclusion of this study is that cutting using a mouse kidney organ can use a thickness of 3 μ m.
© 2024 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v10i1.5051
jaringan  ( sectioning ),  pewarnaan  ( staining ),  perekatan ( mounting ), dan pelabelan ( labeling )  (Sumanto, 2014).
Pemotongan  merupakan  salah  satu  tahapan  dalam mikroteknik  yang  sangat  penting  untuk  menghasilkan sediaan  yang  baik.  Pemotongan  jaringan  adalah  proses pemotongan  blok  jaringan  dengan  menggunakan mikrotom (Aulina & Iswara, 2019).
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  Mohammed (2012)  ketebalan mikrotom  cahaya  yang  digunakan dapat  bervariasi  antara  1 -10 μ m. Brilian  (2021) menjelaskan  bahwa  sediaan  ginjal  dipotong  dengan ketebalan 3-5 μ m yang menunjukan hasil kualitas sediaan yang baik yaitu warna biru terang pada inti sel, warna merah ( eosin ) pada sitoplasma dan warna pada preparat seragam. Shield  (2019)  dan Prahanarendra  (2015) menjelaskan bahwa standar ketebalan potongan jaringan histologi  adalah  6 μ m  yang  menunjukan  hasil  kualitas sediaan yang baik (Brilian, 2021; Mohammed et al ., 2012;
Prahanarendra, 2015; Shields & Heinbockel, 2019).
Pewarnaan inti yang tidak menyerap sempurna artinya kurang  adekuatnya hematoxylin yang  mewarnai  bagian inti seluler dan eosin yang mewarnai bagian sitoplasma.
Ketebalan yang terlalu tipis menyebabkan adsorbsi atau penyerapan  warna  yang  tidak  sempurna  sehingga gambaran  mikroskopis  tidak  jelas.  Ketebalan  yang terlalu  tebal  menyebabkan  intensitas  warna  akan meningkat pada ketebalan bagian yang lebih besar/tebal (Ariyadi & Suryono, 2017; Chlipala et al ., 2020).
Metode  pewarnaan  jaringan  yang  sering  digunakan secara  rutin  adalah  pewarna  yang  dapat  memulas  inti dan  sitoplasma  serta  jaringan  penyambungnya  yaitu pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE). Hematoxylin bekerja sebagai pewarna basa dan Eosin bekerja sebagai pewarna asam (Tyas et al ., 2018).
Salah satu organ yang dapat digunakan untuk pembuatan preparat sediaan histologi adalah ginjal mencit (Kartika et al ., 2013). Peneliti menggunakan hewan coba mencit karena  memiliki  kelebihan  seperti  siklus  hidup  relatif
pendek,  mudah  ditangani,  banyaknya  jumlah  anak  per kelahiran,, mudah ditangani, memiliki struktur anatomi dan fisiologis mirip dengan manusia (Nugroho, 2018).
Berdasarkan  uraian  diatas  peneliti  tertarik  untuk mengetahui  perbedaan  hasil  pewarnaan HE dengan ukuran  ketebalan  mikrotom 3 μ m,  6 μ m,  dan  9 μ m terhadap sediaan histologi ginjal mencit karena terdapat perbedaan  ukuran  ketebalan  mikrotom  dibeberapa jurnal  yang  ada  dan  belum  adanya  standar  baku  yang digunakan untuk pemotongan sediaan histologi.

## METODOLOGI
Penelitian  ini  dilaksanakan  mulai  dari  penyususan proposal  hingga  penyusunan  laporan  akhir  yaitu  sejak bulan  Agustus  2022  sampai  April  2023.  Tempat penelitian  ini  yaitu  di  Laboratorium  Hewan  Coba Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro. Penelitian ini menggunakan jenis penelitian Eksperimental dengan desain penelitian true eksperimental  post  test  only  control  group  design karena penelitian ini bertujuan untuk mencari perbedaan hasil pewarnaan,  kemudian  di  rata-rata  skor post  test kelompok  dengan  metode  statistika  untuk  melihat apakah  ada  perbedaan  yang  signifikan  atau  tidak (Rukminingsih et al ., 2020).
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah preparat  sedian  organ  ginjal  mencit.  Terdapat  tiga kelompok perlakuan yaitu dengan ketebalan mikrotom 3 μ m,  6 μ m,  dan  9 μ m.  Total  sampel  yang  digunakan adalah 27 preparat sediaan ginjal mencit yang ditentukan berdasarkan  rumus  Federer.  Masing-masing  skala ketebalan  berjumlah  9  preparat  dan  diamati  5  lapang pandang per preparat sediaan organ ginjal mencit ( Mus musculus ).
Pengamatan  dilakukan  dibawah  mikroskop  cahaya menggunakan  perbesaran  400  kali. Pembacaan  lapang preparat  dilakukan  oleh  peneliti  dan  dokter  spesialis patologi  anatomi  berdasarkan  skoring  inti  sel,
sitoplasma,  dan  keseragaman  warna  pada  preparat sediaan ginjal mencit ( Mus musculus ). Hasil pengamatan kemudian  dihitung  bobot  skor  kualitas  mikroskopis sediaan  dari  lapangan  pandang  pada  masing-masing preparat    menggunakan  model  skoring  kualitas mikroskopis  histologi  jaringan.  Penilaian  dicatat  dan dihitung  rata-rata  skor  tiap  variasi  ketebalan pemotongan mikrotom.
Tabel  data  diolah  menggunakan Statistical  Pragram  For Social Science (SPSS) versi 25 dengan uji normalitas yaitu
Saphiro Wilk ( sampel <50). Uji hipotesis yang digunakan adalah Kruskal  Wallis karen untuk  membandingkan penilaian  antara    lebih  dari  2  kelompok  tidak berpasangan  yang  berskala  ordinal  secara  keseluruhan (3 μ m, 6 μ m, 9 μ m)  dan uji hipotesis Man Whitney untuk membandingkan hasil antara 2 kelompok perlakuan (3 μ m dan 6 μ m, 3 μ m dan 9 μ m, 6 μ m dan 9 μ m).
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah mikroskop, mikrotom, pisau mikrotom, penggaris, satu set peralatan bedah, pinset, base mold , water bath , object glass , dect  glass , sterofoam , cassate jaringan  dan  kertas saring. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah organ ginjal mencit, larutan NBF 10%, entellan , parafin,
Xylol, larutan pewarna Hematoxylin Eosin (HE). Prosedur pembuatan  preparat  ginjal  mencit  dilakukan  dengan proses  pembedahan  hewan  uji  coba  mencit  ( Mus musculus ) untuk mengambil organ ginjal dan dilanjutkan pada tahap mikroteknik hingga menjadi preparat sediaan jaringan untuk diamati secara mikroskopis menggunakan mikroskop.
Tabel 1. Skoring  Penilaian  Kriteria  Preparat
Sediaan (Sofyanita et al., 2022)
Tabel II. Skoring  Total  Kualitas  Sediaan  Preparat (Sofyanita et al., 2022)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  dilakukan  menggunakan  organ  ginjal mencit  ( Mus  musculus )  yang  didapatkan  dari  proses pembedahan kemudian  dilakukan tahapan mikroteknik hingga menjadi preparat sediaan ginjal mencit yang siap baca.  Preparat  dibaca  oleh  dokter  spesialis  patologi anatomi  dan  penulis,  masing-masing  pembaca  menilai lima lapang pandang pada di setiap preparat.
No. Kategori Deskripsi Kualitas Ordinal Skor 1. Inti Sel Tidak tampak jelas warna biru  keunguan  pada  inti sel Tidak Baik 1 Kurang  jelas  warna  biru keunguan pada inti sel Kurang Baik 2 Tampak jelas warna biru keunguan pada inti sel Baik 3 2. Sitoplasm a Tidak tampak jelas warna merah muda pada sitoplasma Tidak Baik 1 Kurang jelas warna merah muda pada sitoplasma Kurang Baik 2 Tampak  jelas  warna merah muda pada sitoplasma Baik 3 3. Keseraga man Warna Pewarnaan preparat tidak seragam Tidak Baik 1 Pewarnaan preparat kurang seragam Kurang Baik 2 Pewarnaan preparat seragam Baik 3 No. Kriteria Nilai 1. Tidak Baik 1-3 2. Kurang Baik 4-6 3. Baik 7-9
Hasil Tabel I. Tabulasi  Data  Hasil  Penilaian  Lapang Pandang Preparat Sediaan Jaringan Ginjal Mencit ( Mus musculus )
Variabel Kode
Prepara t Lapang Pandang
Rata- Rata Skor Total Rata- Rata Kualitas
Preparat
1 2 3 4 5 Pemotonga n 3µ G3A 9 9 9 9 9 9 8,97% BAIK G3B 9 9 9 9 9 9 BAIK G3C 9 9 8,5 8,5 9 8,8 BAIK G3D 9 9 9 9 9 9 BAIK G3E 9 9 9 9 9 9 BAIK G3F 9 9 9 9 9 9 BAIK G3G 9 9 9 9 9 9 BAIK G3H 9 9 9 9 9 9 BAIK G3I 9 9 9 9 9 9 BAIK Pemotonga n 6µ G6A 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5 8,07% BAIK G6B 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5 BAIK G6C 8 8 8 8 8 8
BAIK
G6D 8,5 8,5 8 8 8 8,2
BAIK
G6E 8 8 8,5 8 8 8,1
BAIK
G6F 8,5 8,5 9 8,5 9 8,7 BAIK G6G 8 8 8 8 8 8 BAIK G6H 8 8 8 8 8 8 BAIK G6I
9 9 9 8,5 8 8,7 BAIK Pemotonga n 9µ G9A 5 4,5 5 5 5 4,9 4,65% KURANG BAIK G9B 4 4 4 4 4 4
KURANG BAIK G9C 4 4 4 4 4 4 KURANG BAIK G9D 4 4 4 4 4 4 KURANG BAIK G9E 5 5 5 5 5 5 KURANG BAIK G9F 5 5 5 5 5 5 KURANG
BAIK
G9G 5 5 5 5 5 5 KURANG BAIK G9H 5 5 5 5 5 5 KURANG
BAIK G9I 5 5 5 5 5 5 KURANG BAIK
Gambar I. Perhitungan Rata-Rata
Kriteria  penilaian  inti  sel  di  preparat  dengan pemotongan  3 μ m  mendapatkan  hasil  kurang  baik dengan  nilai  rata-rata  nilai  2,97,    pemotongan  6 μ m mendapatkan hasil kurang baik dengan rata-rata nilai 2.2 , sedangkan pemotongan 9 μ m mendapatkan hasil tidak baik dengan nilai rata-rata nilai 1.
Penilaian  sitoplasma  dengan  pemotongan  3 μ m mendapatkan  hasil  baik  dengan  rata-rata  nilai  3, pemotongan  6 μ m  mendapatkan  hasil  kurang  baik dengan  nilai  rata-rata  nilai  2,88,  pemotongan  9 μ m mendapatkan hasil tidak baik dengan rata-rata nilai 1.
Penilaian keseragaman warna dengan pemotongan 3 μ m mendapatkan  hasil  baik  dengan  rata-rata  nilai  3, pemotongan 6 μ m mendapatkan hasil baik dengan nilai rata-rata 3, pemotongan 9 μ m mendapatkan hasil tidak baik dengan nilai rata-rata 2,65.
Tabel II. Data  Kelompok  Kualitas  Preparat
Sediaan 2,97 3 3 2,2 2,88 3 1 1 2,65 0 2 4 Inti Sel Sitoplasma Keseragaman Warna Rata-Rata Kriteria Preparat Sediaan 3 μm 6 μm 9 μm
Variabel Skor Kualitas Preparat Pemootonga n 3 μ m Pemotongan 6 μ m Pemotongan 9 μ m n (%) n (%) n (%) Tidak Baik 1 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 2 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 3 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) Kurang Baik 4 0 (0%) 0 (0%) 4 (44,5%) 5 0 (0%) 0 (0%) 5 (55,5%) 6 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) Baik 7 0 (0%) 2 (22,2%) 0 (0%) 8 1 (11,1%) 7 (77,8%) 0 (0%) 9 8 (88,9%) 0 (0%) 0 (0%) Total (%) 9 (100%) 9(100%) 9 (100%)
Berdasarkan  tabel  II  kualitas  preparat  kelompok pemotongan  3 μ m  didapatkan  kualitas  baik  skor  8 berjumlah 1 preparat (11,1%) dan skor  9 berjumlah 8 preparat  (88,9%).  Hasil  kualitas  preparat  kelompok pemotongan  6 μ m  didapatkan  kualitas  baik  skor  7 berjumlah 2 preparat (22,2%) dan skor 8 berjumlah 7 preparat  (77,8%).  Kualitas  preparat  kelompok pemotongan 9 μ m didapatkan kualitas kurang baik skor 5 berjumlah 5 preparat (55,5%) dan kurang baik skor 4 berjumlah 4 preparat (44,5%). Hasil presentase tersebut diperoleh  berdasarkan  rata-rata  penilaian  parameter tiap lapang pandang mikroskopis oleh dua pembaca yang kemudian  dikategorikan  berdasarkan  skoring  penilaian kualitas  preparate.  Penilaian  kualitas  preparate  diatas, kemudian  data  dilakukan  uji  normalitas  menggunakan
Statistical Program for Social Science (SPSS) versi 25.
Tabel III. Hasil Uji Normal;itas Data
Berdasarkan  tabel  3  pada  hasil  uji  normalitas  data menggunakan Shapiro  Wilk untuk  ketiga  kelompok kualitas  preparat  sediaan  ginjal  mencit  didapatkan signifikasi  hasil  ketiga  perlakuan  adalah p =0.000  yang berarti  seluruh  variabel  memiliki  sebaran  data  tidak normal ( p <0.05), karena sudah diketahui distribusi data tidak normal, maka dilanjutkan dengan uji hipotesis non- paramaterik Kruskal  Wallis untuk  membandingkan penilaian  antara  lebih  dari  2  kelompok  tidak berpasangan secara keseluruhan (3 μ m, 6 μ m, 9 μ m) dan untuk  membandingkan  hasil  antara  2  kelompok dilakukan uji Man Whitney .
Tabel IV. Hasil Uji Kruskal Wallis
Berdasarkan tabel 4 pada hasil hipotesis Kruskal-Wallis di  atas,  diperoleh  nilai  signifikan  0.000  ( p <0.05)  maka hipotesis diterima atau dapat diartikan bahwa terdapat perbedaan hasil kelompok kualitas pewarnaan preparat sediaan ginjal mencit ( Mus musculus ) pada pemotongan 3 μ m, 6 μ m dan 9 μ m.
Tabel  V. Hasil Non-Parametrik Man Whitney Kualitas Preparat P value Keterangan Pemotongan 3 μ m 0.000 Ada perbedaan Pemotongan 6 μ m Pemotongan 3 μ m 0.000 Ada Perbedaan Pemotongan 9 μ m Pemotongan 6 μ m 0.000 Ada Perbedaan Pemotongan 9 μ m
Berdasarkan tabel 5 pada hasil hipotesis Man Whitney di atas,  diperoleh  nilai  signifikan  0.000  ( p <0.05)  dapat diartikan  bahwa  terdapat  perbedaan  hasil  kelompok kualitas pewarnaan preparat sediaan ginjal mencit ( Mus musculus ) antara 2 kelompok perlakuan (3 μ m dan 6 μ m, 3 μ m dan 9 μ m, 6 μ m dan 9 μ m).
Gambar II. Mikroskopis  Sediaan  Ginjal  Mencit  ( Mus musculus ) pemotongan 3 μ m.  (HE, 400X)
(A) Inti sel skor 3 = bentuk jelas, biru keunguan
(B) Sitoplasma skor 3 = merah muda
Keseragam warna = seragam Kualitas Preparat p value Keterangan Pemotongan 3 μ m 0.000 Ada perbedaan Pemotongan 6 μ m Pemotongan 9 μ m
Kualitas Preparat p value Keterangan Pemotongan 3 μ m 0.000 Ada perbedaan Pemotongan 6 μ m Pemotongan 9 μ m
A B B
Gambar III. Mikroskopis Sediaan Ginjal Mencit ( Mus musculus ) pemotongan 6 μ m. (HE, 400X)
(A) Inti sel skor 2 = bentuk jelas, biru keunguan
(B) Sitoplasma skor 2 = merah muda
Keseragam warna = seragam
Gambar IV. Mikroskopis Sediaan Ginjal Mencit ( Mus musculus ) pemotongan 9 μ m. (HE, 400X)
(A) Inti sel = bentuk tidak jelas (sel bertumpuk)
(B) Sitoplasma = tidak tampak jelas warna merah muda Keseragam warna = seragam
Dilihat  pada  gambar  II,  III,  IV  preparat  sediaan  ginjal mencit  ( Mus  musculus )  terlihat  adanya  perbedaan.
Pemotongan  3 μ m  inti  sel  tampak  jelas  bewarna  biru keungunan,  sitoplasma  bewarna  merah  muda  dan keseragaman warna yang baik. Pemotongan 6 μ m inti sel tampak  kurang  jelas  bewarna  biru  keungunan, sitoplasma  kurang  tampak  bewarna  merah  muda  dan keseragaman warna yang baik. Pemotongan 9 μ m inti sel tampak  tidak  jelas  warna  biru  keunguan,  sitoplasma tidak  tampak  bewarna  merah  muda  dan  keseragaman warna yang baik.
Gambar V. Batas antar sel baik pada pemotongan (A) 3 μ m dan Batas antar sel kurang baik (B)
9 μ m
Gambar VI. Preparat  sediaan  ginjal  mencit  ( Mus musculus ) yang terlipat dan robek Dilihat  pada  gambar  V  preparat  sediaan  ginjal  mencit ( Mus  musculus )  terlihat  pada  gambar  A  dengan  batas antar  sel  yang  baik  dan  pada  gambar  B  dengan  batas antar sel yang kurang baik. Pada gambar VI menunjukan reparat  sediaan  ginjal  mencit  ( Mus  musculus )  yang dengan pemotongan 9 μ m terlipat dan robek

## Pembahasan
Pada  tabel  I  dan  II  didapatkan  hasil  kualitas  preparat ginjal mencit ( Mus musculus ) kelompok pemotongan 3 μ m  memiliki  kualitas  yang  lebih  baik  dibandingkan kelompok pemotongan 6 μ m dan 9 μ m. Hal ini sesuai dengan  penelitian  Brilian  (2021)  menjelaskan  bahwa sediaan ginjal dipotong dengan ketebalan 3-5 μ m yang menunjukan hasil kualitas sediaan yang baik yaitu warna biru  terang  pada  inti  sel,  warna  merah  ( eosin )  pada sitoplasma  dan  warna  pada  preparat  seragam  (Brilian, 2021).
Hasil pemotongan yang kurang baik dapat dipengaruhi oleh kurangnya ketajaman pisau dan konsistensi dalam kecepatan  pemotongan  sehingga  mengakibatkan tampaknya  garis-garis  pada  pita  jaringan,  suhu  blok jaringan harus dingin agar pita parafin tidak menggulung,
A B A B A B
air  pada waterbath harus  bersih  untuk  menghindari adanya  artefak  pada  preparat  sediaan.  Pada  gambar  6 pemotongan mikrotom yang terlalu tebal menyebabkan pita  parafin  menggulung  dan  robek  sehingga  proses pewarnaan tidak menyerap dengan sempurna (Ariyadi & Suryono, 2017). Irisan jaringan yang terlalu tebal dapat mengakibatkan  lipatan  pita  parafin  akibat  panas  pada jaringan  karena  gesekan  antara  blok  parafin  dan  pisau mikrotom saat melakukan pemotongan yang lebih dari satu kali (Alwi, 2016).
Hasil pengamatan mikroskopis yang kurang baik dapat disebabkan karena faktor pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) yang berperan sebagai pewarna dasar. Pewarnaan HE  memiliki  prinsip Hematoxyilin bersifat  basa  yang menghasilkan  senyawa  hematin  dan  akan  memberikan warna  biru  keunguan  terhadap  zat  yang  mengandung asam  nukleat  seperti  inti  sel  (Halim,  2018). Eosin memiliki sifat asam dan akan mengikat molekul protein yang  bermuatan  positif  di  sitoplasma  dan  jaringan  ikat serta  dapat  memberikan  perbedaan  warna  merah  dan merah muda (Mutoharoh et al ., 2020).
Dalam penelitian ini parameter inti sel pada kelompok pemotongan  mikrotom  3 μ m  diperoleh  hasil  terbaik dibandingkan dengan kelompok pemotongan mikrotom 6 μ m dan 9 μ m. Inti tampak berwarna biru keunguan pada  kelompok  pemotongan  mikrotom  3 μ m, sedangkan pada kelompok pemotongan mikrotom 6 μ m dan  9 μ m  inti  sel  terlihat  saling  bertumpuk  yang disebabkan  oleh  penyerapan  yang  kurang  baik  karena pemotongan  yang  terlalu  tebal.  Hal  ini  sejalan  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Brilian  (2021)  bahwa pemotongan  3-5 μ m  menghasilkan  sediaan  yang  baik dengan  presentase  100%  inti  sel  baik  (Brilian,  2021). Faktor  yang  dapat  mempengaruhi  pewarnaan  inti diantaranya  proses  fiksasi  terlalu  lama  yang menyebabkan  pengerasan  jaringan  sehingga  kurang dalam  penyerapan  warna,  dan  proses  penghilangan parafin ( deparafinisasi ) yang  tidak  sempurna (Suprianto, 2014).
Pada penelitian ini parameter sitoplasma pada kelompok pemotongan  mikrotom  3 μ m  diperoleh  hasil  terbaik dibandingkan dengan kelompok pemotongan mikrotom 6 μ m dan 9 μ m. Sitoplasma tampak jelas dan berwarna merah muda pada kelompok pemotongan mikrotom 3 μ m, sedangkan pada kelompok pemotongan mikrotom 6 μ m dan 9 μ m sitoplasma kurang dapat diamati dengan jelas  karena  batar  antar  sel  yang  kurang  jelas.  Hal  ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Herawati (2022)  bahwa  pemotongan  3-4 μ m  menghasilkan sediaan yang baik dengan sitoplasma 100% inti sel baik (Herawati,  2022).  Faktor  yang  dapat  mempengaruhi pewarnaan  sitoplasma  dapat  disebabkan  oleh  fiksasi yang tidak adekuat, pH terlalu tinggi, dehidrasi dengan alkohol terlalu lama, dan waktu pewarnaan yang  tidak adekuat dapat mengakibatkan warna sitoplasma menjadi lebih pucat dan batas antar sel kabur, dapat dilihat pada gambar 5 (Elen, 2019).
Parameter  keseragaman  warna  pada  kelompok pemotongan mikrotom 3 μ m dan 6 μ m diperoleh hasil terbaik  karena  memiliki  keseragaman  pewarnaan dengan  intensitas  warna  yang  merata  pada  seluruh lapang  pandang  dibandingkan  dengan  kelompok pemotongan  9 μ m.  Menurut  Pratiwi  (2021) keseragaman warna yang kurang baik dapat disebabkan karena kurangnya waktu pada tahap deparafinisasi untuk menghilangkan parafin menggunakan xylene dari jaringan sehingga  menyebabkan  artefak  pada  preparat  serta adanya endapan  pada  reagen karena sebelum dilakukan proses pewarnaan, cat tidak disaring dengan sempurna (Pratiwi, 2021).
Hasil  seluruh  skor  lapang  pandang  kemudian  diuji normalitas  datanya,  berdasarkan  tabel  4.3  diperoleh hasil data ( p =0.000) terdistribusi tidak normal. Apabila sebaran datanya tidak normal maka dilanjutkan dengan uji statistik non-parametrik yaitu uji Kruskal Wallis untuk membandingkan penilaian antara lebih dari 2 kelompok tidak berpasangan secara keseluruhan (3 μ m, 6 μ m, 9 μ m) dan untuk membandingkan hasil antara 2 kelompok dilakukan uji Man Whitney .
Tabel  4  diperoleh  hasil  uji Kruskal  Wallis dengan signifikan p =0.000  ( p <0.05)  yang  menunjukkan  ada perbedaan  kualitas  sediaan  preparat  secara  statistik antara kelompok pemotongan 3 μ m, 6 μ m, dan 9 μ m.
Tabel  5  diperoleh  hasil  uji Man  Whitney dengan signifikan p =0.000  ( p <0.05)  dapat  diartikan  bahwa terdapat perbedaan hasil kelompok kualitas pewarnaan preparat sediaan ginjal mencit ( Mus musculus ) antara 2 kelompok perlakuan (3 μ m dan 6 μ m, 3 μ m dan 9 μ m, 6 μ m dan 9 μ m). Dalam penelitian ini dapat dikatakan bahwa ada perbedaan hasil pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) pada histologi ginjal mencit berdasarkan ketebalan mikrotom 3 μ m, 6 μ m, dan 9 μ m dengan ukuran yang terbaik terdapat pada pemotongan 3 μ m.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  yaitu  ketebalan pemotongan mikrotom yang terbaik untuk organ ginjal mencit ( Mus musculus ) adalah pemotongan 3 μ m dengan rata-rata nilai inti sel 2,97 sitoplasma dengan rata-rata nilai  3,  keseragaman  warna  dengan  rata-rata  nilai  3. Untuk  peneliti  selanjutnya  dapat  pemotongan ( sectioning ) menggunakan ketebalan mikrotom 3 μ m, 6 μ m,  dan  9 μ m  pada  penelitian  selanjutnya  dapat dilakukan  dengan  menggunakan  jenis  organ  yang berbeda.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Poltekkes Kemenkes Semarang yang telah memberikan ilmu serta pengarahan dalam skripsi ini. Ucapan terima kasih juga disampaikan kepada pihak RS.  Paru dr.  Ario Wirawan Salatiga dan pihak Laboratorium Hewan Coba Fakultas Kedokteran  Universitas  Diponegoro  yang  telah membantu  dalam  penelitian  skripsi  ini.  Serta  terima kasih  kepada  seluruh  pihak  yang  telah  memberikan semangat  dan  doa  sehingga  berjalan  dengan  baik  dan lancar.

## REFERENSI
Alwi,  M.  A.  2016. Studi  Awal :  Fiksasi  2  Minggu  Pada Gambaran  Histologi  Organ  Ginjal,  Hepar, dan Pankreas Tikus Sprague Dawley Dengan Pewarnaan  Hematoxylin-Eosin. FKIK  UIN Jakarta.
Annisa, A. S. 2022. Pengaruh Penggunaan Minyak Zaitun Dengan  Pemanasan  Sebagai  Larutan Penjernih  (Clearing)  Terhadap  Kualitas Sediaan  Hepar  Mencit  (Mus  musculus . Politeknik Kesehatan Kemenkes Semarang.
Ariyadi,  T.,  &  Suryono,  H.  2017.  Kualitas  Sediaan Jaringan  Kulit  Metode  Microwave  Dan Convetional  Histoprocessing  Pewarnaan Hematoxylin Eosin. Jurnal Labora Medika ,
1 (1).
Aulina,  N.,  &  Iswara,  A.  2019. Perbandingan  Kualitas Sediaan Organ Ginjal Tikus Sprague Dawley Dengan  Fiksasi  24  Jam+  2  Minggu Menggunakan  BNF  10%  dan  Alkohol  70% Pada Pewarnaan HE . Universitas
Muhammadiyah Semarang.
Brilian, T. V. 2021. Mikroskopis Jaringan Ginjal Mencit ( Mus  Musculus  )  yang  Difiksasi  dengan Madu  Konsentrasi  10  %  Selama  24  Jam. Jaringan Laboratorium Medis , 03 (02), 127– 133.
Chlipala,  E.,  Bendzinski,  C.  M.,  Chu,  K.,  Johnson,  J.  I., Brous,  M.,  Copeland,  K.,  &  Bolon,  B. 2020.  Optical  density-based  image analysis  method  for  the  evaluation  of hematoxylin and eosin staining precision. Journal  of  Histotechnology , 43 (1),  29–37.
https://doi.org/10.1080/01478885.2019.1 708611 Elen, M. R. 2019. Gambaran Kualitas Mikroskopis Sediaan Hepar  Mencit  (Mus  Musculus)  Dengan Pemotongan Ketebalan 2 Μ m, 5 Μ m dan 8 Μ m .  Politeknik  Kesehatan  Kemenkes Semarang.
Halim, R. 2018. Asam Cuka Sebagai Agen Deparafinisasi Pada  Pengecatan  Hematoksilin  Eosin  (HE) . Universitas Muhammadiyah Semarang.
Herawati, A. 2022. Gambaran Mikroskopis Histologi Ginjal Mencit  (Mus  musculus)  Yang  Difiksasi Menggunakan  Madu  10%,  20%  dan  30% . Poltekkes Kemenkes Semarang.
Kartika, A. A., Siregar, H., H. C., & Fuah, A. M. 2013. Strategi  Pengembangan  Usaha  Ternak Tikus  (Rattus  Norvegicus)  Dan  Mencit (Mus  Musculus)  Di  Fakultas  Peternakan
Ipb. Jurnal  Ilmu  Produksi  Dan  Teknologi Hasil Peternakan , 1 (3).
Mohammed,  F.,  Arishiya,  T.  F.,  &  Mohamed,  S.  2012. Microtomes and Microtome Knives – A Review  and  Proposed  Classification. Annal Dent Univ Malaya , 19 (2).
Mutoharoh, L., Santoso, S. D., & Mandasari, A. A. 2020. Pemanfaatan  Ekstrak  Bunga  Sepatu (Hibiscus  rosa-sinensis  L.)  Sebagai
Alternatif Pewarna Alami Sediaan Sitologi Pengganti  Eosin  Pada  Pengecatan  Diff Quik. Jurnal SainHealth , 4 (2).
https://doi.org/10.51804/jsh.v4i2.770.21- 26
Nugroho, R. A. 2018. Mengenal Mencit Sebagai Hewan Laboratorium .  Mulawarman  University Press. Saramarinda.
Prahanarendra,  G.  2015. Studi  Awal  Histoteknik: Gambaran  Histologi  Organ  Ginjal,  Hepar, dan Pankreas Tikus Sprague dawley dengan Pewarnaan  HE  dengan  Fiksasi  3  Minggu .
UIN Jakarta.
Pratiwi,  E.  dan  D.  A.  2021. Mikroskopis  Preparat  Mus Musculus Jaringan Ginjal yang Dideparafinisasi  dengan  Minyak  Zaitun pada Pengecatan Hematoxylin Eosin ( HE )
Microscopic  of  Mus  Musculus  Kidney Preparation Deparafinized with Olive Oil  in Eosin Hematoxylin ( HE ) Staining ELA NUR .
03 (01), 61–66. Rukminingsih, Adnan, G., & Latief, M. A. 2020. Metode Penelitian Pendidikan. Penelitian Kuantitatif, Penelitian Kualitatif, Penelitian Tindakan  Kelas.  In Journal  of  Chemical Information and Modeling (Vol. 53, Issue 9).
Shields,  V.  D.  .,  &  Heinbockel,  T.  2019.  Introductory Chapter: Histological Microtechniques. In Histology . https://doi.org/10.5772/intechopen.8201 7
Sofyanita, E. N., Iswara, A., & Priyatno, D. 2022. Minyak Zaitun  Sebagai  Pengganti  xylene  pada Prosesing  Jaringan  Histologis  Untuk
Pewarnaan  Kulit  dan  Hepar  Mencit dengan Hematoxylin Eosin: Sebuah Studi
Perbandingan.
Jaringan Laboratorium Medis , 4 (2), 117–124.
https://doi.org/10.31983/jlm.v4i2.8688
Sumanto,  D.  2014. Belajar  Sitohistoteknologi  untuk Pemula .
Suprianto,  A.  2014. Perbandingan  Efek  Fiksasi  Formalin Metode Intravital Dengan Metode Konvensional  Pada  Kualitas  Gambaran Histologis Hepar . Tanjungpura University.
Tyas,  R.,  Ariyadi,  T.,  &  Nuroini,  F.  2018. Gambaran Mikroskopis  Kualitas  Sediaan  Jantung  yang Difiksasi dengan Alkohol 70% dan NBF 10% pada Pewarnaan HE . Universitas Muhammadiyah Semarang.