PENGARUH EKSTRAK DAUN BUASBUAS ( Premna pubescens Blume) TERHADAP

## PERTUMBUHAN BAKTERI
Staphylococcus aureus SECARA IN VITRO
Gita Widiyastuti dan Martina Restuati Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Negeri Medan trestuati@gmail.com

## ABSTRAK
Buasbuas (Premna  pubescens Blume ) merupakan  salah  satu  tumbuhan  obat  di  Indonesia. Tumbuhan ini diketahui mengandung flavonoid yang berpotensi sebagai antibakteri . Staphylococcus aureus merupakan  salah  satu  bakteri  yang  dapat  menyebabkan  keracunan . Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  apakah  ekstrak  daun  buasbuas  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus dan untuk mendapatkan data konsentrasi eksrak daun buasbuas yeng menghasilkan zona hambat terbesar.  Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium  Kesehatan  Medan  dengan  menggunakan  metode sumuran.  Daun  buasbuas  yang  telah  menjadi  ekstrak  etanol,  diencerkan  menggunakan  aquadest  dengan konsentrasi 0%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% dan diteteskan ke dalam media MSA (Mannitol Salt Agar) yang telah  diinokulasi  bakteri  serta  diberi  lubang  sumuran.  Setelah  itu  diinkubasi  selama  1 24  jam  dengan suhu 37 0 C.  Hasil penelitian yang diperoleh menunjukkan bahwa pemberian ekstrak daun buasbuas dengan konsentrasi yang berbeda-beda dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, kemudian data  dianalisis  menggunakan  Analisis  Varians  Non  Faktorial  (ANAVA)  menunjukkan  bahwa  nilai  F hitung (337,54) F tabel 0,05 (2,77), maupun F tabel 0,01 (4,25). Dengan konsentrasi maksimum ekstrak yang lebih efektif  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus adalah  90%  dengan  rata-rata  zona hambat 11 mm.
Kata kunci: Premna pubescens Blume , Staphylococcus aureus, Zona Hambat, Sumuran
EFFECT OF LEAF EXTRACT OF BUASBUAS FOR Staphylococcus aureus GROWTH

## ABSTRACT
Buasbuas  (Premna  pubescens  Blume)  is  one  of  the  medicinal  plants  in  Indonesia.  This  plant  is known to contain potentially antibacterial flavonoids. Staphylococcus aureus is one of the bacteria that can cause  poisoning.  This  study  aims  to  determine  whether  buasbuas  leaf  extract  can  inhibit  the  growth  of Staphylococcus  aureus  bacteria  and  to  obtain  the  data  of  excretion  concentration  of  leaves  of  buasbuas yeng produce the largest inhibition zone. This research was conducted at Medan Health Laboratory using the  method  of  wells.  The  buasbuas  leaves  have  been  extracted  ethanol,  diluted  using  aquadest  with concentrations  of  0%,  50%,  60%,  70%,  80%,  90%  and  dripped  into  MSA  (Mannitol  Salt  Agar)  medium which has been inoculated with bacteria and given a wellbore. After that it was incubated for 1 × 24 hours with temperature 37 0 C. The result of this research showed that the provision of buasbuas leaf extract with different concentrations can inhibit the growth of Staphylococcus aureus bacteria, then the data analyzed by Non Factorial Variance Analysis (ANAVA) showed that Fcount (337,54)> Ftabel 0,05 (2 , 77), and Ftabel 0.01  (4.25).  With  the  maximum  concentration  of  extracts  that  more  effectively  inhibited  the  growth  of Staphylococcus aureus bacteria was 90% with an average of 11 mm inhibit zone.
Keywords: Premna pubescens Blume. Staphylococcus aureus, Inhibitor zone, difusion
Pendahuluan Salah  satu  tumbuhan  obat  yang  ada  di Indonesia  ialah  buasbuas (Premna  pubescens Blume ) .    Tumbuhan  ini  memiliki  khasiat  sebagai obat  namun  belum  banyak  masyarakat  yang mengenal  tanaman  ini.  Penelitian  Adyttia,  dkk. (2013)  mendapatkan  hasil  bahwa  pada  ekstrak
etanol 70% dari daun buasbuas ( Premna cordifolia ) mengandung  senyawa  yang  tergolong  alkaloid, flavonoid,  triterpenoid,  fenol,  tanin  dan  saponin. Hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh    Majidah  dkk (2014)  ekstrak  daun  seledri  yang  mengandung flavonoid  memiliki  daya  antibakteri  terhadap pertumbuhan S.  mutans dan  konsentrasi  terendah
dari ekstrak daun seledri yang masih memiliki daya antibakteri  adalah  konsentrasi  12,5%.  Pulungan, A.S.  2017  juga  mengemukakan  bahwa  terdapat kemampuan antijamur dari daun kunyit.
Penyakit  akibat  pangan (food  borne diseases) yang terjadi segera setelah mengkonsumsi pangan,  umumnya  disebut  dengan  keracunan. Pangan  dapat  menjadi  beracun  karena  telah terkontaminasi  oleh  bakteri  patogen  yang kemudian  dapat  tumbuh  dan  berkembangbiak selama penyimpanan, sehingga mampu memproduksi  toksin  yang  dapat  membahayakan manusia. Selain itu,  ada juga makanan yang secara alami sudah bersifat racun seperti beberapa jamur atau tumbuhan dan hewan . Salah satu bakteri yang dapat menyebabkan keracunan adalah Staphylococcus aureus (Badan POM, 2008). Penggunaan  daun  buasbuas  sebagai alternatif  antibakteri,  karena  pada  daun  buasbuas mengandung  senyawa  flavonoid.  Berdasarkan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Restuati,  dkk. (2014)  hasil  uji  fitokimia  yang  dilakukan  telah  di peroleh  hasil  bahwa  metabolit  sekunder  dari ekstrak daun
Premna
pubescens positif mengandung    alkaloid,  steroid,  flavonoid,  saponin. Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Darmawi,  dkk.  (2013)  menemukan  bahwa  getah jarak  cina  yang  mengandung  flavonoid  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus secara in  vitro dengan  konsentrasi  yang paling  optimal  adalah  100%.  Kemudian  hasil peneltian Hidayat, (2015), Martina Restuati (2016) menunjukkan bahwa ekstrak daun buasbuas dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Bacillus  cereus pada konsentrasi 50%.
Buasbuas adalah tumbuhan dengan habitus perdu  yang  habitatnya  hidup  di  hutan  dan pekarangan  rumah  dengan  tinggi  dapat  mencapai 3-10  meter.  Tumbuhan  ini  bercabang  dengan memiliki  bentuk  daun  panjang  oval  dan  memiliki banyak  anak  daun.  Tumbuhan  ini  memiliki  bunga berwarna  putih  berbentuk  kapsul  sepanjang  1  cm dan lebarnya kira-kira 8 cm serta memiliki biji bulat yang banyak (Wahyuni dkk., 2014).
Tanaman buasbuas memproduksi senyawa metabolit  yang  digunakan  sebagai  alat  pertahanan dari organisme pengganggu atau sebagai pelindung bagi tumbuhan tersebut dimana senyawa metabolit sekunder  tersebut  dapat  juga  dimanfaatkan manusia sebagai bahan obat-obatan karena adanya senyawa  bioaktif.  Daun  tanaman  ini  dapat dikonsumsi  dan  berkhasiat  sebagai  obat.  Daun buasbuas memiliki bau dan rasa yang khas sehingga diduga  memiliki  kandungan  metabolit  sekunder yang  cukup  tinggi  (Mia  dkk.,  2014).  Penelitian Adyttia,  dkk. (2013)  mendapatkan  hasil  bahwa pada  ekstrak  etanol  70%  dari  daun  buasbuas mengandung  senyawa  yang  tergolong  alkaloid, flavonoid, steroid dan saponin.
Staphylococcus aureus adalah bakteri kokus sel gram positif yang tidak membentuk spora, tidak motil,  berbentuk  bulat,  biasanya  tersusun rangkaian  tak  beraturan  seperti  anggur.  Ukuran dari  bakteri  ini  adalah  berdiameter  0,8  –  1  µ. Bakteri  ini  mudah  tumbuh  pada  berbagai perbenihan  dan  mempunyai  metabolisme  aktif serta  menghasilkan  pigmen  yang  bervariasi  dari putih  sampai  kuning  tua.  Beberapa  di  antaranya terdapat di kulit dan selaput mukosa manusia.
Intoksikasi  bawaan  pangan  disebabkan oleh  toksik  dari Staphylococcus  aureus. Intoksikasi ini  sering  terjadi  di  seluruh  dunia.  Enterotoksin yang  dihasilkan  oleh  strain Staphylococcus  aureus berkaitan  dengan  keracunan  pangan.  Bakteri Staphylococcus  aureus dapat  ditemukan  di  dalam hidung, tenggorokan, kulit, rambut dan bulu ternak termasuk  unggas  dan  manusia.  Bakteri  ini  juga dapat  ditemukan  menginfeksi  kulit  yang  luka  atau bengkak  pada  manusia  dan  ternak.  Kontaminasi bakteri ini seara umum terjadi berasal dari sumber tersebut (Wardah, 2013).
Bahan dan Metode
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kesehatan Medan
dengan menggunakan  metode  sumuran.  Daun  buasbuas yang  telah  menjadi  ekstrak  etanol,  diencerkan menggunakan  aquadest  dengan  konsentrasi  0%, 50%,  60%,  70%,  80%,  90%  dan  diteteskan  ke dalam  media  MSA (Mannitol  Salt  Agar) yang  telah diinokulasi  bakteri  serta  diberi  lubang  sumuran. Setelah  itu  diinkubasi  selama  1 24  jam  dengan suhu  37 0 C.  Alat  dan  bahan  yang  digunakan  yakni blender, rotary evaporator, timbangan, cawan petri, biakan bakteri Staphylococcus aureus, Ekstrak daun bausbuas, media MSA, etanol, aquadest.

## Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan,  diperoleh  data  yang  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  buasbuas (Premna  pubescens Blume)  yang  menunjukkan  zona  hambat  terbesar adalah  pada  konsentrasi  ekstrak  90% . Pemberian ekstrak  daun  buasbuas  dengan  konsentrasi  yang berbeda-beda  menyebabkan  daerah/zona  hambat yang  bervariasi  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus.
Diameter  zona  hambat  yang  terbentuk pada  pemberian  ekstrak  daun  buasbuas  terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus tampak  berbeda-beda  pada  tiap  perlakuan.  Dari tabel  transformasi  di  atas,  dapat  dilihat  diameter zona  hambat  yang  terkecil  adalah  0.707  mm  pada konsentrasi  ekstrak  daun  buasbuas  0%.,  dan diameter  zona  hambat  terbesar  adalah  3,535  mm pada konsentrasi ekstrak 90%. Untuk lebih jelasnya dapat diamati pada Grafik 1. di bawah ini:
Gambar 1. Grafik Pengaruh Ekstrak Daun Buasbuas ( Premna pubescens Blume.) Terhadap Zona Hambat/Diameter yang Terbentuk
Dari  Grafik  di  atas  terdapat  notasi  huruf yang berbeda-beda, huruf yang berbeda menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  antara  tiap konsentrasinya,  sedangkan  yang  dinyatakan dengan  huruf  yang  sama  menunjukkan  tidak adanya  beda  nyata.  Dari  grafik  di  atas  terlihat antara  konsetrasi  50%  dengan  konsentrasi  60% memiliki  notasi  huruf  yang  sama,  hal  ini  berarti antara  perlakuan  50%  ekstrak  daun  buasbuas dengan  konsentrasi  60%  ekstrak  daun  buasbuass tidak  ada  perbedaan  yang  nyata.  Dan  terlihat antara  perlakuan  0%  dengan  50%,  60%,  70%,
80%, 90% memiliki notasi huruf yang berbeda, hal ini berarti adanya beda nyata antara perlakuan 0% dengan 50%, 60%, 70%, 80%, 90%.
Dari  data  di  atas  disusun  Daftar  Analisis Sidik Ragam untuk mengetahui apakah perlakuan tersebut  menunjukan  pengaruh  yang  nyata  atau tidak  terhadap  parameter  yang  diamati.  Analisis varian  atau  sidik  ragam  merupakan  suatu  cara untuk  menguraikan  ragam  total  menjadi komponen  ragam.  Dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  di bawah ini:
Tabel  1.  Daftar  Analisis  Sidik  Ragam  Pengaruh  Ekstrak  Daun  Buasbuas  ( Premna  pubescens Blume) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus
Sumber Keragaman Derajat Bebas (DB) Jumlah Kuadrat (JK) Kuadrat Tengah (KT) F hitung (Fh) F tabel 0,05 F tabel 0,01 Perlakuan 5 18,566 3,713 Galat 18 0,207 0,011 337,54** 2,77 4,25 Total 23 18,773
Keterangan ** = Beda Sangat Nyata
Berdasarkan  hasil  Analisis  Sidik  Ragam pada  Tabel  4.3.  dapat  dilihat  bahwa  perlakuan pemberian  ekstrak  daun  buasbuas  memberikan pengaruh  yang  sangat  nyata  terhadap  daerah hambatan  bakteri Staphylococcus  aureus. Nilai F hitung (337,54) dan nilai F tabel 0,05 (2,77), F tabel 0,01 (4,25), hal ini berarti  nilai  F hitung (337,54) F tabel 0,05 (2,77), dan F tabel 0,01 (4,25) dan menunjukkan
bahwa  beda  sangat  nyata,  dimana  Ho  ditolak  dan Ha diterima pada taraf kepercayaan 99%.
Dari  data  yang  diperoleh  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  buasbuas  memiliki  aktivitas antibakteri  berdasarkan  zona  hambat  yang dihasilkan.  Terjadinya  penghambatan  terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus disebabkan  oleh  ekstrak  daun  buasbuas  yang mengandung  senyawa  flavonoid  yang  bersifat
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 0% 50% 60% 70% 80% 90% Diam eter Z o n a Hm ab at (m m ) Konsentrasi Ekstrak Daun Buasbuas ( Premna pubescens Blume.) b c c d e a
sebagai  antibakteri.  Penggunaan  daun  buasbuas sebagai  obat  alami  masih  jarang  digunakan  oleh masyarakat.  Dalam  penelitian  ini  ekstrak  daun buasbuas digunakan untuk menghambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus secara in vitro .  Pemanfaatan  tanaman  obat  sebagai  bahan alternatif  antimikroba  biasanya  menggunakan beberapa  jenis  flavonoid  yang  terkandung  dalam tanaman,  di  dalam  daun  buasbuas  mengandung senyawa flavonoid. Flavonoid merupakan golongan terbesar senyawa fenol. Mekanisme kerja senyawa  flavonoid  bekerja  sebagai  antibakteri dengan  cara  membentuk  senyawa  kompleks terhadap  protein  ekstraseluler  yang  mengganggu keutuhan    membran  sel  bakteri.  Mekanisme kerjanya  dengan  cara  mendenaturasi  protein  sel bakteri  dan  merusak  membran  sel  tanpa diperbaiki lagi (Haryati dkk., 2015).
Darmawi, dkk. (2013) menyatakan bahwa senyawa  fenol  mampu  memutuskan  ikatan peptidoglikan dalam usahanya menerobos dinding sel. Setelah  menerobos dinding sel, senyawa fenol akan  menyebabkan  kebocoran  nutrien  sel  dengan cara  merusak  ikatan  hidrofobik  komponen membran  sel  (seperti  protein  dan  fospolipida) sehingga  terjadinya  kerusakan  pada  membran  sel bakteri  yang  mengakibatkan  terhambatnya aktivitas dan biosintesa enzim-enzim spesifik yang diperlukan dalam reaksi metabolisme bakteri.
Senyawa  alkaloid  bersifat  antibakteri, diduga  dengan  mengganggu  komponen  penyusun peptidoglikan  pada  sel  bakteri  sehingga  lapisan dinding  sel  tidak  terbentuk  secara  utuh  dan menyebabkan kematian sel.
Saponin  akan  mengganggu  tegangan permukaan  dinding  sel,  maka  saat  tegangan permukaan  terganggu  zat  antibakteri  akan  dapat dengan  mudah  masuk  kedalam  sel  dan  akan mengganggu metabolisme hingga akhirnya terjadilah  kematian  bakteri.  Saponin  termasuk dalam  zat  antibakteri  yang  menghambat  fungsi membran  sel  mikroba.  Saponin  membentuk senyawa  kompleks  dengan  membran  sel  melalui ikatan  hidrogen  sehingga  menghancurkan  sifat permeabilitas dinding sel, menyebabkan pelepasan isi sel dan menimbulkan kematian sel (Permatasari dkk., 2013).
Steroid  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  gram  positif.  Mekanisme  kerja  steroid dalam  menghambat  mikroba  adalah  dengan merusak  membran  plasma  sel  mikroba,  sehingga menyebabkan bocornya sitoplasma keluar sel yang selanjutnya menyebabkan kematian sel. Diduga hal tersebut  disebabkan  karena  molekul  steroid memiliki  gugus  nonpolar  (hidrofobik)  dan  polar (hidrofilik) sehingga memiliki efek surfaktan yang dapat  melarutkan  komponen  fosfolipid  membran plasma.  Dan  fosfolipid  merupakan  komponen
dominan  yang  menyusun  membran  plasma  sel mikroba (Haryati dkk., 2015).
Mekanisme  dari  masing-masing  senyawa metabolit  sekunder  tersebut  saling  bersinergis sehingga  menambah  efektivitas  dan  aktivitas  dari ekstrak  daun  buasbuas  yang  mengandung metabolit  sekunder  berupa  flavonoid,  alkaloid, saponin,  dan  steroid  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri staphylococcus aureus secara in  vitrro sehingga  menyebabkan  adanya  zona hambat/daerah  bening  disekitar  sumuran  yang berisikan ekstrak daun buasbuas dengan berbagai konsentrasi.

## Kesimpulan
Pemberian ekstrak daun buasbuas ( Premna  pubescens Blume)  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus secara in vitro. Pada konsentrasi 50%,60%,70%,80% dan 90%  ekstrak  daun  buasbuas  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus. Dimana  daerah  bening/zona  hambat  yang dihasilkan  dari  pemberian  ektrak  daun  buasbuas ( Premna pubescens Blume) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus yang  paling  besar adalah  11  mm  pada  konsentrasi  ekstrak  daun buasbuas 90% sehingga respon hambatan ekstrak daun buasbuas sebagai antibakteri tergolong kuat.

## Daftar Pustaka
Adyttia,  A.,  Eka.  K.U.,  Sri.  W.  2013.  Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Etanol  Daun  Buas- Buas  ( Premna  Cordifolia .  Linn)  Terhadap Kadar  Mda  Tikus  Wistar  Jantan  Pasca Paparan  Asap  Rokok. Jurnal  Fitofarmaka Indonesia. 1(2) : 35-42 Badan  POM  RI.  2008.  Pengujian  Mikrobiologi Pangan. ISSN 1829-9334. 9(2) :1-12
Darmawi.,  Zakiah,H.  M.,  Fahri,P.  2013.  Daya Hambat  Getah  Jarak  Cina  ( Jatropha multifida L.)  Terhadap Staphylococcus aureus Secara In  Vitro . Jurnal  Medika Veterinaria. 7(2) :113-115 Haryati,N.,A., Chairul,S., Erwin. 2015. Uji Toksisitas dan  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun Merah  Tanaman  Pucuk  Merah  ( Syzygium myrtifolium Walp.)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Jurnal Kimia Mulawarman. 13(1) :35-40 Hidayat,  U.  2015. Pengaruh  Ekstrak  Daun  Buas- Buas (Premna pubescens Blume) Terhadap Pertumbuhan  Bakteri  Bacillus  cereus Secara In Vitro . Skripsi. Universitas Negeri Medan : Medan.
Majidah,  D.,  Fatmawati,D.W.A.,  Gunadi,  A.  2014.
Daya  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Seledri
(Apium graveolens L.) terhadap
Pertumbuhan
Streptococcus mutans sebagai  Alternatif  Obat  Kumur. Artikel
Ilmiah Hasil Penelitian Mahasiswa ,
Fakultas kedokteran, Universitas Jember : Jember.
Martina  Restuati,  Ulfa  Hidayat,  Ahmad  Shafwan  S. Pulungan,  Nanda  Pratiwi  and  Diky  Setya Diningrat,  2016.  Antibacterial  Activity  of Buasbuas (Premna pubescens Blume) Leaf Extracts  against  Bacillus  cereus  and Escherichia coli. Journal of Plant Sciences, 11: 81-85.
Mia,  A.L.,  Mukarlina.,  Ari,H.Y.  2014.  Uji  Aktivitas Ekstrak  Metanol  dan  n-Heksan    Daun Buas-Buas  ( Premna  serratifolia Linn.) pada  Larva  Nyamuk  Demam  Berdarah ( Aedes  aegypti Linn.). Jurnal  Protobiont. 3(2) :247– 251 Permatasari,  G.  A.  A.  A.,  Besung  I.  N.  K.  dan Mahatmi  H.  2013.  Daya  Hambat  Perasan Daun  Sirsak  terhadap  Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli . Indonesia Medicus Veterinus. 2 (2) :162 – 169
Pulungan, A.S.S., 2017. Aktivitas Antijamur Ekstrak Etanol  Daun  Kunyit  (Curcuma  longa LINN.) Terhadap Jamur Candida albicans. BIOLINK  (Jurnal  Biologi  Lingkungan, Industri, Kesehatan), 3 (2), pp.121-125. Restuati,  M.,Ilyas,  S.,  Hutahaean,S.,Sipahutar,  H. 2014.  Study  of  The  Extract  Activities  of Buasbuas  Leaves (Premna  pubescens) As Immunostimulant On Rats (Rattus novegicus).American  Journal  of  BioScience.
2(6) :244-250 Wahyuni,  S.,  Mukarlina.,  Ari,H.Y.  2014.  Aktivitas Antifungi    Ekstrak  Metanol  Daun  Buas- Buas  ( Premna  serratifolia )  Terhadap Jamur Diplodia sp .  pada Jeruk Siam ( Citrus nobilis var. microcarpa). Jurnal Protobiont. 3(2) :274 – 279
Wardah,  S.T.  2013. Mikrobiologi  Pangan .  Andi Yogyakarta : Sidoarjo