Identifikasi Staphylococcus sp . dan Resistensi Antibiotik di Kecamatan Tutur, Pasuruan
Identification of Staphylococcus sp. and Antibiotic Resistance in Tutur District,
Pasuruan
Indah Purnamasari 1 *, Suwarno 2 , Wiwiek Tyasningsih 2
1 Magister Ilmu Penyakit dan Kesehatan Masyarakat Veteriner, 2 Departemen Mikrobiologi Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga, Kampus C Mulyorejo, Surabaya, Jawa Timur, Indonesia, 60115.
* Corresponding author : indahpurnamasari@fkh.unair.ac.id

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengidentifikasi Staphylococcus  sp .  dan  resistensi  antibiotik  di Kecamatan  Tutur,  Pasuruan.  Sebanyak  273  sampel  susu  sapi  dievaluasi  dan  diidentifikasi  cemaran Staphylococcus  sp .  Selanjutnya,  uji  resistensi  antibiotik  dilakukan  sesuai  standard  CLSI.  Penelitian  ini menunjukkan 41 isolat Staphylococcus sp . dari 97 ekor sapi positif CMT. Hasil penelitian menemukan tujuh isolat Staphylococcus sp . resisten terhadap antibiotik yang terdiri dari satu isolat multidrug-resistant , yaitu S. saprophyticus yang resisten terhadap penisilin, eritromisin dan klindamisin, serta enam isolat resisten antibiotik yang  terdiri  dari  dua  isolat S.  aureus ,  satu  isolat S.  haemolyticus dan  tiga  isolat S.  simulans .  Isolat Staphylococcus  sp .  menunjukkan  resistensi  terhadap  penisilin,  eritromisin,  klindamisin,  dan  tetrasiklin. Sedangkan  Antibiotik  gentamisin,  ciprofloksasin,  cefoxitin,  dan  cotrimoxazole  tidak  mengalami  resistensi, sehingga  antibiotik  tersebut  masih  aman  digunakan.  Angka  kejadian  resistensi  bakteri Staphylococcus  sp . terhadap  antibiotik  dengan  rincian  resistensi  terhadap  penisilin  7,3%,  resistensi  terhadap  tetrasiklin  7,3%, resistensi terhadap klindamisin 4,8% dan resistensi terhadap eritromisin 4,8%.
Kata kunci: antibiotik, multidrug-resistant , Staphylococcus sp .

## Abstract
This study aimed to identify Staphylococcus sp. and antibiotic resistance in Tutur District, Pasuruan. A total of 273 samples of cow's milk were evaluated and identified as Staphylococcus sp. Furthermore, the antibiotic  resistance  test  was  carried  out  according  to  CLSI  standards.  This  study  showed  41  isolates  of Staphylococcus sp. of 97 positive CMT. The results of the study reported seven isolates of Staphylococcus sp. resistant to antibiotics consisted of one multidrug-resistant isolate, i.e. S. saprophyticus which was resistant to penicillin,  erythromycin  and  clindamycin,  and  six  antibiotic  resistant  isolates  consisted  of  two  S.  aureus isolates,  one  S.  haemolyticus  isolate  and  three  isolates  S.  simulans.  Staphylococcus  sp.  isolates  showed resistance  to  penicillin,  erythromycin,  clindamycin,  and  tetracycline.  While  the  antibiotics  gentamicin, ciprofloxacin, cefoxitin, and cotrimoxazole did not reported resistance, so these antibiotics were applicable. The incidence of bacterial resistance Staphylococcus sp. to antibiotics with details of resistance to penicillin 7,3%, resistance to tetracycline 7,3%, resistance to clindamycin 4,8% and resistance to erythromycin 4,8%.
Keywords: antibiotic, multidrug-resistant, Staphylococcus sp.
Received: 29 July 2022 Revised: 6 November 2022 Accepted: 4 February 2023

## PENDAHULUAN
Staphylococcus sp . yang merupakan multidrug-resistant organism (MDRO) penyebab mastitis  subklinis,  akan  sangat  berbahaya  jika ditemukan dalam suatu peternakan, karena dapat menjadi reservoir atau sumber penular bagi ternak yang  lain.  Peningkatan  strain  MDRO  dapat
menimbulkan  masalah  serius  bagi  peternak  dan dokter hewan dalam pemilihan terapi antimikroba yang  tepat.  Namun  jika  MDRO  dapat  dideteksi lebih  awal  dari  kasus  mastitis  subklinis, pemilihan  terapi  antimikroba  yang  efektif biasanya  dapat  ditemukan  (Moroni et  al .,  2005; Basak et al ., 2016). Pada mastitis subklinis tidak terlihat perubahan fisik air susu maupun ambing
sehingga tidak terdeteksi oleh peternak dan susu sapi  masih  disetorkan  ke  Koperasi  Peternakan Sapi Perah (KPSP) (Reni dan Widya, 2018). Hal ini  sangat  berbahaya  jika  air  susu  yang mengandung bakteri Staphylococcus sp . multidrug-resistant yang  berasal  dari  sapi penderita  mastitis  subklinis  dikonsumsi  oleh masyarakat,  karena  dapat  menjadi foodborne disease yang  disebabkan  oleh  bakteri  yang dibawa  oleh  makanan  asal  ternak  yang menyebabkan  keracunan  makanan  serta  menjadi penyakit resistensi antibiotik pada manusia yang dapat berisiko menyebabkan kematian (Basak et al ., 2016; Sekarini et al ., 2020).
Menurut  WHO  (2016),  saat  ini  resistensi antibiotik  merupakan  masalah  global  dan Indonesia  menduduki  peringkat  ke  8  dari  27 negara  dengan  predikat multidrug-resistant tertinggi  di  dunia  (Estiningsih et  al .,  2016). Multidrug-resistant adalah suatu keadaan di mana bakteri  resisten  terhadap  lebih  dari  3  golongan antibiotik yang berbeda (Magiorakos et al ., 2012; Basak et  al .,  2016).  MDRO  dapat  disebabkan karena  pemakaian  antibiotik  yang  tidak  tepat dosis,  tidak  tepat  diagnostik,  dan  tidak  tepat bakteri  penyebab  penyakit  (Estiningsih et  al ., 2016).  Bakteri multidrug-resistant terhadap antibiotik  sudah  banyak  ditemukan  pada  kasus mastitis sapi di beberapa negara antara lain adalah Methicillin  Resistant Staphylococcus  aureus (MRSA)  yang  merupakan  bakteri  coagulase positive  Staphylococcus  (CoPS)  dapat  terjadi pada  bakteri  coagulase  negative  Staphylococcus (CoNS). Bakteri CoNS Resistant juga merupakan bakteri  patogen  penyebab  mastitis  penting  yang dapat mengakibatkan kerusakan jaringan sekretori susu pada kelenjar susu oleh peningkatan stroma jaringan ikat sehingga ternak harus  diafkir  lebih  cepat  (Moroni et  al .,  2005; Frey et al ., 2013).
Kasus mastitis kontagiosa yaitu penularannya  dari  sapi  ke sapi,  40%  disebabkan bakteri patogen Staphylococcus sp . yang disebut sebagai Livestock Associated-Methicillin- resistant S.  aureus (LA-MRSA)  dan  telah dilaporkan  penularan  ke  manusia  (Aswin et  al ., 2020).  Isolat  LA-MRSA  yang  resisten  terhadap antibiotik  β-laktam  juga  resisten  terhadap
antibiotik  yang  lain  sehingga  disebut  sebagai bakteri multidrug-resistant (Tsakris et al ., 2013; Aswin et  al .,  2020).  Telah  dilaporkan  oleh Wahyuni et al ., (2014) bahwa 50% MRSA yang resisten  terhadap  penicillin-G  (84,3%)  dan ampisilin (93,75%), berasal dari Jawa Timur dan Jawa  Tengah  serta  persentase  MRSA  93,75% dapat ditemukan pada susu mastitis subklinis.
Jawa Timur mempunyai populasi sapi perah terbesar  sekitar  252.680  ekor  atau  49,66%  dari total  populasi  sapi  perah  Indonesia.  Provinsi penghasil air susu sapi terbesar juga berasal dari Jawa Timur, pada tahun 2013 sampai 2017 rata- rata  produksi  air  susu  sapi  perah  di Jawa Timur sebesar  461.730  ton  atau  sebesar  54,25%  dari produksi nasional (Kementerian Pertanian, 2017). Koperasi  Peternakan  Sapi  Perah  (KPSP)  Setia Kawan Nongkojajar, Kecamatan Tutur, Kabupaten Pasuruan merupakan koperasi terbesar di  Provinsi  Jawa  Timur,  dengan  hasil  utamanya adalah  susu  segar  (Hariri,  2018).  Produksi  susu segar  koperasi  Setia  Kawan  Nongkojajar  pada tahun  2019  meningkat  menjadi  108  ton  liter per hari dengan populasi sapi perah sebanyak 22.500 ekor (Gutomo, 2019). KPSP Setia Kawan berada di  lereng  sebelah  barat  Pegunungan  Tengger  di ketinggian  400-2.000  mdpl,  dengan  wilayah meliputi 11 desa yang terbagi menjadi 3 wilayah, diantaranya wilayah perbukitan (ketinggian 500- 1000  mdpl),  yaitu  Desa  Wonosari,  Gendro, Pungging,  Tutur,  Kalipucung,  Sumberpitu  dan Ngembal.  Wilayah  pegunungan  (ketinggian 1000-2000 mdpl) yaitu Desa Blarang, Kayukebek dan Andonosari. Wilayah dataran tinggi (ketinggian  ˃2000  mdpl)  yaitu  Desa  Tlogosari (Hariri, 2018).
Mastitis  pada  sapi  yang  disebabkan  bakteri Staphylococcus  sp .  resistan  memiliki  beberapa gen  resisten  tergantung  dari  jenis  antibiotik resistennya,  antara  lain  adalah  gen  penyandi MecA (antibiotik  methicilin), MecC (antibiotik cefoxitin),  gen blaZ (antibiotik  penisilin-G) ketiganya termasuk golongan antibiotik penisilin, gen aacA-D (antibiotik golongan aminoglikosida yaitu gentamisin), gen ermA (antibiotik golongan makrolida  yaitu  erythromycin),  gen ermB (antibiotik golongan linkosamid yaitu klindamisin),  dan  gen ermC (streptogramin  B),
sedangkan resistensi terhadap golongan antibiotik tetrasiklin ditandai gen tet(K) dan tet(M) (Frey et al .,  2013;  Kot et  al .,  2020).  Identifikasi  bakteri multidrug-resistant tergantung  dari  jenis  bakteri dan jenis antibiotiknya yang resisten, oleh karena itu  untuk  mengetahui  profil  bakteri multidrug- resistant dapat  digunakan  uji  Biogram  untuk pemetaan  jenis  bakteri  hasil  kultur  dan  uji biokimia  yang  dievaluasi  berdasarkan Clinical and  Laboratory  Standards  Institute (CLSI) kemudian  dilanjutkan  dengan  pemeriksaan  uji resistensi  fenotip  dengan  metode  konvensional menggunakan  difusi  cakram  antibiotika  Kirby- Bauer,  sehingga  untuk  melihat  resisten  atau sensitif  terhadap  antibiotik  tertentu  dapat  dilihat dari ukuran diameter zona hambat yang terbentuk di  sekitar  cakram  antibiotiknya  (Basak et  al ., 2016; Kozerski et al ., 2014).
Adanya  peningkatan  resistensi  bakteri patogen pada susu sapi terhadap antibiotik maka perlu  dilakukan  deteksi  dini  mastitis  subklinis dengan  menggunakan California  Mastitis  Test (CMT)  (Reni  dan  Widya,  2018).  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengevaluasi  resistensi  bakteri Staphylococcus  sp .  penyebab  mastitis  subklinis terhadap beberapa antibiotik di Kecamatan Tutur, Pasuruan.

## METODE PENELITIAN

## Sampel
Penelitian  merupakan  penelitian  eksploratif laboratorik.  Teknik  pengambilan  sampel  dengan cara purposive  sampling dan  cara  menentukan besaran  sampel  berdasarkan  Sugiono,  2006 diperoleh penghitungan 273 jumlah sampel susu yang  diambil.  Sampel  susu  diuji  dilapangan menggunakan  uji  CMT.  Sekitar  10  ml  sampel susu  positif  mastitis  subklinis  diambil  langsung dari ambing dan ditempatkan dalam tabung reaksi steril. Sampel susu dimasukkan ke dalam coolbox (Hayati et al ., 2019).

## Isolasi Bakteri
Isolasi  bakteri Staphylococcus  sp .  pada media Manitol  Salt  Agar (MSA)  dilakukan dengan mengambil 1 ose inokulum dari susu sapi perah  penderita  mastitis  subklinis  yang  telah
dibuktikan  dengan  positif  CMT,  kemudian diinokulasi pada media MSA dan inkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. (Hayati et al ., 2019).

## Identifikasi Bakteri
Identifikasi bakteri dilakukan dengan pengamatan mikroskopis menggunakan pewarnaan  Gram  untuk  membedakan  bakteri Gram positif dan Gram negatif serta uji biokimia untuk memperjelas identifikasi bakterinya (Ratih et al ., 2017).
Preparat  ulas  dibuat  pada  obyek  glass  dari biakan  yang  diduga  bakteri Staphylococcus  sp . pada  media  MSA,  difiksasi  di  atas  api  bunsen. Preparat  ditetesi  dengan  larutan  kristal  ungu, didiamkan selama 60 detik dan dicuci dengan air mengalir. Preparat ditetesi dengan larutan iodine dan didiamkan selama 2 menit, dicuci dengan air mengalir.  Preparat  ditetesi  dengan  alkohol  96% sampai  warna  ungu  hilang.  Preparat  ditetesi safranin  dan  didiamkan  selama  30  detik,  dicuci dengan air mengalir dan ditaruh diatas tissue agar tidak  ada  sisa  air.  Preparat  diamati  dengan mikroskop, hasil uji gram positif jika sel berwarna ungu  dan  negatif  jika  sel  berwarna  merah (Ernawati, 2012). Staphylococcus sp . merupakan bakteri  Gram  positif  yang  berbentuk  kokkus, bergerombol dan berwarna ungu pada pewarnaan Gram.  Warna  ungu  disebabkan  karena  bakteri mempertahankan  warna  pertama,  yaitu  Kristal violet. Bakteri Gram positif memiliki peptidoglikan  lebih  tebal  jika  dibanding  dengan Gram negatif (Hayati et al ., 2019).

## Uji Biokimia
Uji  biokimia  merupakan  cara  dalam melakukan identifikasi untuk  menentukan genus atau spesies bakteri tertentu dengan melihat sifat- sifat  fisiologis  koloni  bakteri  hasil  isolasi.  Uji biokimia dilakukan untuk mengetahui kemampuan bakteri dalam mereaksikan senyawa kimia (Nasution, 2020).
Uji katalase dapat digunakan untuk membedakan  genus Staphylococcus  sp .  dan Streptococcus  sp .  Teteskan  cairan  H 2 O 2 3%  di atas object glass dan ambil satu ose inokulum dari MSA  dan  diletakkan  kemudian  campurkan. Katalase  positif  ditunjukkan  adanya  gelembung
gas (O 2 ) yang diproduksi oleh genus Staphylococcus  (Toelle  dan  Lenda,  2014). Terjadinya  gelembung  udara  menunjukkan  uji katalase positif yaitu isolate bakteri uji mereduksi H 2 O 2 (Wahyuni et al ., 2014).
Uji koagulase merupakan uji yang digunakan untuk mengetahui ada tidaknya enzim koagulase  yang  dihasilkan  oleh Staphylococcus sp .  Uji  ini  dilakukan  dengan  mengambil  isolat bakteri  menggunakan  ose,  kemudian  masukkan ke dalam 1 ml Nutrient Broth dan inkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Masukkan 1 ml plasma kelinci ke dalam Nutrient Broth yang sudah berisi bakteri menggunakan spuit. Dan inkubasi selama 4 jam pertama untuk melihat hasilnya, bila masih belum  menunjukkan  koagulase  positif  inkubasi dilanjutkan sampai 24 jam. Reaksi positif pada uji koagulase ditunjukkan dengan adanya gumpalan seperti  gel  dalam  tabung,  dan  reaksi  negatif apabila tidak  terdapat  gumpalan  menyerupai  gel pada tabung (Laila, 2019).
Uji Voges Proskauer (VP) berguna mengetahui  reaksi  kondensasi  diantara  diasetil. Uji  VP  dikerjakan  dengan  memupuk  koloni Staphylococcus sp . pada media VP dalam tabung dan  diinkubasi  selama  40  jam  pada  suhu  37oC. Pertumbuhan  bakteri  ditandai  dengan  warna media yang menjadi keruh, kemudian ditambahkan ke dalam tabung 5 tetes KOH 40% dalam  akuades  steril  dan  12  tetes  alpha-napthol 5% dalam ethanol, yang bertindak sebagai katalis. Larutan  yang  telah  ditambah  reagen  kemudian dikocok  perlahan  dan  tunggu  sampai  30  menit. Hasil positif terjadi perubahan warna dari kuning menjadi merah dan hasil negatif ditandai dengan tidak adanya perubahan warna merah pada tabung (Sarudji et al ., 2017).
Uji Ornithin  Decarboxylase menggunakan media  Motility  Indol  Ornithin  (MIO)  yang berfungsi  untuk  3  pengujian  yaitu motilit y, ornithin decarboxylase dan indol yang bertujuan untuk  mengkarboksilase  ornitin  menjadi  bentuk amine. Hasil uji yang diperoleh (+) warna media terjadi perubahan dari kuning menjadi keunguan (Mustahal, 2012).
Uji  urease  digunakan  untuk  melihat  bakteri yang  mampu  menghasilkan  enzim  urease. Beberapa mikroorganisme mampu menghasilkan
enzim  urease  yang  menguraikan  mikromolekul urea ((NH 2 ) 2 CO) menjadi karbondioksida (CO 2 ) dan amonia (NH 3 ). Amonia yang dihasilkan akan meningkatkan  pH  media  menjadi  basa  dan  akan terjadi  perubahan  media  dari  orange  menjadi merah. Caranya goreskan pembiakan sebanyak 1 ose  pada  permukaan  agar  miring,  inkubasikan selama  24  jam  pada  suhu  37°C,  jika  warnanya berubah  menjadi  merah  muda  maka  hasilnya positif (Alif, 2020).
Uji  fermentasi  gula  yang  dilakukan  untuk membedakan  jenis  species Staphylococcus  sp . (CLSI,  2015)  adalah  uji  fermentasi  manitol, trehalose, maltose dan sukrose. Caranya goreskan pembiakan bakteri sebanyak 1 ose pada masing- masing  media  gula-gula  (manitol,  trehalose, maltose  dan sukrose),  selanjutnya  diinkubasikan pada  suhu  37°C  selama  24  jam.  Uji  fermentasi gula  bersifat  positif  apabila  terlihat  perubahan warna  menjadi  kekuningan.  Uji  fermentasi manitol dilakukan untuk membedakan Staphylococcus patogen dan nonpatogen dengan menginokulasikan biakan bakteri ke dalam media (Ibrahim, 2017).
Uji Novobiocin  Resistant dilakukan  seperti uji  resistensi  terhadap  antibiotik  menggunakan metode  difusi  menurut  cara Kirby-Baurer pada sub bab 4.4.5. Namun paper disk antibiotik yang dipakai  adalah  Novobiocin  5  μg  dan  adapun Interpretasi pengukuran zona hambat Novobiocin resisten adalah ≤16mm (CLSI, 2015).

## Uji Resistensi Antibiotik
Uji resistensi terhadap antibiotik menggunakan metode difusi menurut cara Kirby- Baurer . Biakan Bakteri Staphylococcus sp . yang telah  diperoleh  dari  koloni  pada  MSA  dikultur lagi pada media Blood agar selama 24 jam pada suhu  37°C,  baru  kemudian  diambil  koloninya dilarutkan  pada  tabung  reaksi  yang  berisi  8  ml NaCl fisiologis, dilakukan homogenisasi menggunakan vortex sampai didapatkan kekeruhan  yang  sama  dengan standart  Mc Farland 0,5 (Dalynn, 2014).
NaCl fisiologis yang sudah di uji kekeruhannya  dengan  standart  Mc  Farland  0,5 kemudian diambil sebanyak 0,2 ml lalu diusapkan dan  ratakan  perlahan  pada  seluruh  permukaan
media Mueller Hinton Agar (MHA) dan biarkan beberapa menit. Uji resistensi antibiotik dilakukan dengan  meletakkan 8 jenis paper disk antibiotik  yang  biasa  dipakai  untuk  pengobatan Staphylococcus  sp. yaitu,  penisilin  10  μg, gentamisin 10 μg, tetrasiklin 30 μg, klindamisin 2 μg, eritromisin 15  μg,  cotrimoxazole  5  μg, ciprofloksasin  5  μg  dan  cefoxitin  30  μg  untuk deteksi  resisten  terhadap  antibiotik  methicillin. Kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam.  Interpretasi  hasil uji resistensi  dapat  dilihat kemampuan zona hambat antibiotik yang diujikan terhadap  bakteri  penyebab  mastitis  berdasarkan ketentuan CLSI 2021.

## Analisis Data
Data  kualitatif  dianalisis  dengan  multi koresponden, agar dapat dilihat wilayah penyebaran bakteri Staphylococcus sp . penyebab mastitis  yang  resisten  terhadap  beberapa antibiotik  sebagai  strategi  pengendalian  dan pengobatan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Uji CMT
Hasil penelitian sampel bakteri
Staphylococcus  sp .  di  peroleh  dari  41  ekor  sapi penderita mastitis subklinis berasal dari 273 ekor sapi  yang  diuji  CMT,  terdapat  35,53  %  positif CMT  yaitu  97  ekor  sapi  positif  CMT  mastitis subklinis  dengan  rincian  108  sampel  susu, diantaranya terdapat 17 sampel positif satu (+), 85 sampel positif dua (++) dan 6 sampel positif tiga (+++).  Jumlah  sampel  mastitis  subklinis  positif CMT  terbesar  di  Desa  Wonosari  yaitu  14  ekor dengan prosentase 51,85% dari 27 ekor sapi yang diperiksa (Tabel 1). Dari 108 sampel susu ambing yang  positif  CMT  terdapat  39,81  %  atau  43 sampel  susu  ambing  yang  paling  banyak terdeteksi  menderita  mastitis  subklinis  yaitu ambing bagian belakang sebelah kanan.

## Pemeriksaan Mikroskopis
Sampel  susu  dari  uji  positif  CMT  diisolasi pada media MSA. Hasil isolasi pada media MSA dari  97  ekor  sampel  positif  CMT  terdapat  62 sampel  bakteri  yang  tumbuh  pada  media  MSA
dan  sebagian  ada  yang  memfermantasi  mannitol sehingga  medianya  berubah  menjadi  kuning (Gambar 1a dan 1b). Pada 62 isolat bakteri sampel susu  yang  tumbuh  di  media  MSA  dilakukan pewarnaan  Gram  dan  pemeriksaan  mikroskopis sehingga ditemukan bakteri gram positif berwarna ungu, berbentuk bulat atau coccus yang menyerupai  buah  anggur  dan  bergerombol (Gambar  1c).  Sedangkan  jumlah  isolat  gram positif  uji  katalase  positif  yang  diduga Staphylococcus sp . pada masing-masing 11 desa (Tabel 2).

## Hasil Uji Biokimia
Uji  biokimia  yang  digunakan  untuk mengidentifikasi  bakteri  coccus,  katalase  positif species Staphylococcus  sp .  berdasarkan  Clinical and  laboratory  standard  Institute  (CLSI,  2015) yaitu  uji  katalase,  uji  koagulase,  ornithin,  urea, VP,  resisten  terhadap  antibiotik  Novobiocin, trehalose, manitol, maltose dan sukrose. Pada 45 isolat  bakteri  gram  positif  yang  diuji  katalase terdapat 41 isolat katalase positif, ditandai dengan munculnya  gelembung  udara  yang  diidentifikasi sebagai Staphylococcus sp . (Tabel 3).

## Hasil Uji Resistensi Antibiotik
Hasil  uji  resistensi  41  isolat  bakteri Staphylococcus  sp .  terhadap  delapan  jenis antibiotik yaitu penisilin, gentamisin, ciprofloksasin, tetrasiklin, klindamisin , eritromisin , cefoxitin, dan cotrimoxazole, terdapat  7  sampel  yang  resisten  terhadap antibiotika,  yaitu:  3  sampel  resisten  terhadap penisilin  yang  berasal  dari  Desa  Kalipucang, Tutur  dan  Ngembal,  3  sampel  resisten  terhadap tetrasiklin yang berasal dari Desa Kalipucang dan Gendro,  2  sampel  resisten  terhadap klindamisin yang  berasal  dari  Desa  Kalipucang  dan  Desa Sumberpitu  serta  2  sampel  resisten  terhadap eritromisin yang  berasal  dari  Desa  Kalipucang dan  Sumberpitu.  Profil  41  sampel  isolat  bakteri Staphylococcus  sp .  yang  diuji  resistensinya terhadap  8  antibiotik  terdapat  4  antibiotik  yang resisten  yaitu  antibiotik  penisilin,  tetrasiklin, klindamisin dan eritromisin .  Dari  41  isolat Staphylococcus sp . terdapat  23,2%  (Tabel  4  dan 5).
Tabel 1. Hasil uji CMT dan isolasi bakteri pada media MSA
Desa Jumlah Pemilik  Jumlah Sapi Uji CMT MSA (-) % (+) % (-) (+) Blarang 11 orang 34 23 67,6 11 32,4 7 4 Kalipucang 2 orang 40 28 70 12 30 3 9 Wonosari 1 orang 27 13 48,1 14 51,8 5 9 Tutur 2 orang 33 21 63,6 12 36,4 1 11 Pungging 2 orang 20 15 75 5 25 3 2 Ngembal 2 orang 16 10 62,5 6 37,5 0 6 Gendro 2 orang 18 9 50 9 50 4 5 Tlogosari 2 orang 24 16 66,6 8 33,3 3 5 Sumberpitu 2 orang 30 20 66,6 10 33,3 3 7 Andonosari 2 orang 20 14 70 6 30 4 2 Kayukebek 2 orang 11 7 63,6 4 36,4 2 2 Total 30 orang 273 176 64,5 97 35,53 35 62
Gambar 1. (a) Bakteri yang merubah media MSA menjadi kuning, (b) Bakteri yang tumbuh pada media MSA tapi tidak merubah warna medianya, (c) Pemeriksaan mikroskopis bakteri
Staphylococcus sp. Gram positif, coccus, bergerombol.
Tabel 2. Hasil identifikasi Staphylococcus sp. dengan pewarnaan gram dan uji katalase
Desa MSA (+) Pewarnaan Gram Uji Katalase Negatif  Positif (-) (+) Ʃ % Ʃ % Blarang 4 1 3 0 0 3 75 Kalipucang 9 2 7 1 14,28 6 66,7 Wonosari 9 3 6 0 0 6 66,7 Tutur 11 5 6 1 16,67 5 41,6 Pungging 2 1 1 0 0 1 50 Ngembal 6 2 4 0 0 4 66,7 Gendro 5 1 4 1 0,25 3 60 Tlogosari 5 0 5 1 20 4 80 Sumberpitu 7 0 7 0 0 7 100 Andonosari 2 1 1 0 0 1 50 Kayukebek 2 1 1 0 0 1 50 Total 62 17 45 4 8,89 41 91,11 a b c
Tabel 3. Hasil uji biokimia identifikasi Staphylococcus sp.
Desa Staphy lo co cc us sp . Staphy lo co cc us aureu s Coagulase-negative Staphylococci (CoNS) S. epi d er m id is S. haem ol yt icus S. l ugdu nen si s
S. sapr oph yt icu s
S. sch lei fer i S. si m u lan s S. capi ti s S. cohN ii Blarang 3 - - 1 1 - - - 1 - Kalipucang 6 1 - 3 - 1 1 - - - Wonosari 6 - - 1 - - 2 - 3 - Tutur 5 2 - - - 2 1 - - - Pungging 1 - - - 1 - - - - - Ngembal 4 1 - - - 1 - - - 2 Gendro 3 - - - - - - 3 - - Tlogosari 4 - - - - - 2 2 - - Sumberpitu 7 2 - - - - 2 3 - - Andonosari 1 - 1 - - - - - - - Kayukebek 1 - - - - - - 1 - - Total 41 6 1 5 2 4 8 9 4 2
Tabel 4. Hasil rekapitulasi uji kepekaan antibiotik
Desa Staphy lo co cc us sp. Penis il in G ent am is in C iprof loksa si n
T et ras ik li n
K li nd a m is in E ri tr om is in C ef oxi ti n C ot ri m oxa zol e S  I R S  I R S  I R S  I R S  I R S  I R S  I R S  I R Blarang 3 3 0 0 3 0 0 3 0 0 3 0 0 3 0 0 3 0 0 3 0 0 3 0 0 Kali pucang 6 5 0 1 6 0 0 6 0 0 5 0 1 5 2 1 5 0 1 6 0 0 6 0 0 Wonosari 6 6 0 0 6 0 0 6 0 0 6 0 0 6 2 0 6 0 0 6 0 0 6 0 0 Tutur 5 4 0 1 5 0 0 5 0 0 5 0 0 4 1 0 5 0 0 5 0 0 5 0 0 Pungging 1 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 Ngembal 4 3 0 1 4 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 Gendro 3 3 0 0 3 0 0 3 0 0 1 0 2 3 0 0 3 0 0 3 0 0 3 0 0 Tlogosari 4 4 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 Sumberpitu 7 7 0 0 7 0 0 7 0 0 7 0 0 5 1 1 6 0 1 7 0 0 7 0 0 Andonosari 1 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 Kayukebek 1 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 Total 41 38  0 3 41  0 0 41  0 0 38  0 3 37  6 2 39  0 2 41 0 0 41  0 0 % Resisten 23,2 7,3 0 0 7,3 4,8 4,8 0 0
R= Resisten, S= Sensitif, I= Intermediate.
Tabel 5. Isolat Staphylococcus sp . yang resisten terhadap antibiotik
Gambar 2. (a) Pengukuran zona hambat resisten antibiotik terhadap Staphylococcus sp.
(b) Pengukuran zona hambat antibiotik tidak resisten terhadap Staphylococcus sp.
Gambar 3 . Hasil pemetaan analisis koresponden Staphylococcus sp. yang ditemukan dengan letak wilayah desanya.
Kode Sampel Spesies Desa Uji Kepekaan Antibiotik Penisilin  Tetrasiklin  Klindamisin  Eritromisin 17/PM75 S. saprophyticus Kalipucang R(20) S(26) R(6) R(6) 19/PM76 S. haemolyticus Kalipucang S(40) R(12) S(32) S(32) 41/PM41 S. aureus Tutur R(17) S(27) S(29) S(29) 53/PM40 S. aureus Ngembal R(18) S(24) S(26) S(29) 54/PM134 S. simulans Gendro S(29) R(9) S(26) S(28) 64/PM136 S. simulans Gendro S(30) R(10) S(24) S(26) 76/PM145 S. simulans Sumberpitu S(36) S(25) R(6) R(6)
Sedangkan  isolat multidrug-resistant telah ditemukan satu sampel di Desa Kalipucang yaitu S.  saprophyticus yang  resisten  terhadap  3  jenis golongan antibiotik diantaranya penisilin, klindamisin dan  erythromycin.  Ukuran  zona hambat  uji  resistensi  antibiotik  penisilin  pada isolat tersebut adalah 20 mm (dikatakan resisten jika  zona  hambat  ≤28  mm),  terhadap  antibiotik klindamisin 6  mm  (dikatakan  resisten  jika  zona hambat  ≤14  mm),  dan  terhadap  antibiotik eritromisin 6  mm  (dikatakan  resisten  jika  zona hambat ≤13 mm) (Tabel 5 dan Gambar 2).

## Hasil Analisis Korespondensi
Hasil  pemetaan  analisis  korespondensi, bakteri patogen S. aureus banyak dijumpai pada daerah perbukitan yaitu Desa Kalipucang, Tutur, Ngembal dan Sumberpitu, sedangkan bakteri non patogen S.  epidermidis hanya  dijumpai  di  Desa Andonosari, hal ini dapat dilihat pada Gambar 3.
Tingkat  kejadian  resistensi  antibiotik  pada wilayah kerja Koperasi Setiakawan Nongkojajar, Pasuruan  Provinsi  Jawa  Timur  masih  tergolong rendah  yaitu  23,2%  dengan  rincian  resisten terhadap  antibiotik  penisilin  sebesar  7,3%, resisten  terhadap  antibiotik  tetrasiklin  7,3%, resisten  terhadap  antibiotik klindamisin 4,8%, resisten  terhadap  antibiotik  erythromycin  4,8%. Pada  wilayah  kerja  Koperasi  Setiakawan Nongkojajar, Pasuruan Provinsi Jawa Timur yang terdiri  dari  11  desa  tidak  ditemukan  isolat Staphylococcus  sp .  penyebab  mastitis  subklinis yang  resisten  terhadap  antibiotik  gentamisin, ciprofloksasin,  cefoxitin,  dan  cotrimoxazole, sehingga keempat jenis antibiotik tersebut masih aman  digunakan  untuk  pengobatan  antibiotik pada  kasus  mastitis  di  wilayah  kerja  Koperasi Setiakawan Nongkojajar, Pasuruan Provinsi Jawa Timur.
Kejadian mastitis terutama mastitis subklinis sangat  tinggi,  dan  lebih  dari  85%  kejadian mastitis tersebut disebabkan oleh bakteri terutama Staphylococcus  sp .  Masuknya  bakteri  tersebut kedalam tubuh ternak dapat terjadi pada keadaan defisiensi  vitamin  E  atau  selenium,  yang menyebabkan kemampuan tubuh ternak khususnya  sel  PMN  dalam  fagositosis  dan membunuh bakteri menjadi menurun (Hurley dan
Morin,  2000).  Oleh  karena  itu,  tindakan pencegahan  dan  pengendalian  mastitis  sangat diperlukan sebagai salah satu upaya penanganan penyakit  di  lapangan.  Ada  beberapa  strategi pencegahan dan pengendalian mastitis pada sapi perah,  yaitu  dengan  pemberian  asupan  pakan yang baik, tes mastitis secara teratur, pencelupan ( dipping )  puting  dengan  antiseptik,  menjaga kebersihan  ambing  dan  dilakukan  uji  resistensi antibiotik  terhadap  ternak  yang  akan  diterapi pengobatan  dengan  antibiotik  serta  pemberian antibiotik sebaiknya dilakukan pada masa kering kandang.  Karena  kepekaan  atau  resistensi berbagai antibiotik menentukan dalam pemilihan antibiotik yang sesuai dan tepat untuk mengobati infeksi  bakteri.  Sehingga  sensitivitas  setiap bakteri  patogen  terhadap  suatu  antibiotik  harus diuji  untuk  menentukan  penyebab  pertumbuhan bakteri  tersebut  terhambat,  mati  atau  tidak  ada penghambatan sehingga pengobatan tidak menimbulkan permasalahan baru (Sayu, 2010).
Berdasarkan penelitian menunjukkan bahwa isolat Staphylococcus  sp. yang  didapatkan  tidak mengalami  resistensi  terhadap  beberapa  jenis antibiotik,  yaitu  gentamisin,  ciprofloksasin, cefoxitin,  dan  cotrimoxazole.  Kemungkinan antibiotik ini jarang digunakan oleh peternak dan masih dalam pengawasan sehingga penggunaanya  terukur.  Namun,  terdapat  hasil berbeda pada penelitian. Perbedaan hasil berbagai penelitian  ini  menunjukkan  pola  resistensi antibiotik Staphylococcus  sp .  berubah.  Melalui mekanisme  yang  berbeda, Staphylococcus  sp . berkembang menjadi resisten terhadap antibiotik yang  berbeda  dari  waktu  ke  waktu.  Isolat Staphylococcus sp . dari sampel susu yang resisten terhadap antibiotik ini merupakan tantangan besar dalam  pengobatan  karena  juga  biasa  digunakan untuk pengobatan pada manusia. Dari penelitian ini,  diketahui  bahwa  cotrimoksazol,  gentamisin, cefoxitin,  ciprofloksasin  cukup  efektif  melawan Staphylococcus  sp .  Masih  belum  ada  obat  yang mencapai  kerentanan  100%,  jika  tindakan  yang diperlukan  tidak  diambil  terhadap  penggunaan antibiotik yang tidak sesuai, prevalensi Staphylococcus sp . yang resisten antibiotik dapat meningkat lebih lanjut, hal itu dapat
menyebabkan bahaya bagi kesehatan hewan dan manusia (Sudhanthiramani et al ., 2015).

## KESIMPULAN
Dapat  disimpulkan  bahwa  profil  bakteri Staphylococcus sp . penyebab mastitis subklinis di Kecamatan  Tutur  resisten  terhadap  empat  jenis antibiotik yaitu penisilin, tetrasiklin , klindamisin dan  eritromisin.  Tingkat  resistensi  bakteri Staphylococcus  sp .  penyebab  mastitis  subklinis terhadap  delapan  jenis  antibiotik  yaitu  penisilin, gentamisin, ciprofloksasin, tetrasiklin , klindamisin, eritromisin, cefoxitin, dan cotrimoxazole  adalah  23,2%  resisten  terhadap antibiotik,  dengan  rincian  resisten  terhadap penisilin  sebesar  7,3%,  resisten  terhadap antibiotik tetrasiklin 7,3%,  resisten  terhadap antibiotik klindamisin 4,8% dan resisten terhadap antibiotik eritromisin 4,8%. Ditemukan satu isolat multidrug-resistant yaitu S.  saprophyticus dari tujuh  isolat Staphylococcus  sp .  yang  resisten terhadap  antibiotik  pada  sapi  perah  penderita mastitis  subklinis  yang  terdiri  dari  dua  isolat S. aureus , satu isolat S. haemolyticus , satu isolat S. saprophyticus dan  tiga  isolat S.  Simulans . Wilayah  yang  terdapat  bakteri S.  saprophyticus multidrug-resistant pada  sapi  perah  penderita mastitis subklinis adalah Desa Kalipucang.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terimakasih  kepada Universitas  Airlangga,  Pusat  Veteriner  Farma, KPSP Setiakawan Nongkojajar, dan semua pihak yang  sudah  terlibat  atas  izin,  fasilitas,  dan dukungan  yang  telah  diberikan  kepada  peneliti untuk melaksanakan penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Alif, R. H. K. (2020). Uji Aktivitas Ekstrak Daun Murbei  Hitam  (Morus  nigra  L)  sebagai Antibiofilm
Klebsiella pneumonia. Universitas Islam Malang.
Aswin, R. K., Ramandinianto, S. C., & Effendi, M.  H.  (2020).  A  Review  of  Livestock-
Associated Methicillin-Resistant
Staphylococcus  aureus (LA-MRSA)  on Bovine  Mastitis. Systematic  Reviews  in Pharmacy . 11, 7.
Basak,  S.,  Singh,  P.,  &  Rajurkar,  M.  (2016).
Multidrug  Resistant  and  Extensively  Drug Resistant  Bacteria:  A  Study. Journal  of Pathogens , 11(1), 45.
Clinical  and  Laboratory  Standards  Institute (CLSI). (2015). Verification of Commercial Microbial  Identification  and  Antimicrobial Susceptibility  Testing  System.1th  Edition. CLSI guideline M52. Clinical and Laboratory Standards Institute.
Dalynn,  B.  (2014).  McFarland  Standard,  For  In Vitro  Use  Only.  Catalogue  No.  TM50- TM60. Dalynn Biologicals Inc. Canada.
Estiningsih  D.,  Puspitasari,  I.,  &  Nuryastuti,  T. (2016).  Identifikasi  infeksi  multidrug- resistant  organisms  (MDRO)  pada  pasien yang  dirawat  di  bangsal  neonatal  intensive care  unit  (NICU)  rumah  sakit. Jurnal Manajemen dan Pelayanan Farmasi , 6(3).
Frey, Y. Joan, P. R., Andreas, T., Sybille, S., & Vincent, P. (2013). Bacteria in Dairy Cattle. Journal of Dairy Science , 96, 4.
Gutomo,  A.  (2019).  Koperasi  Peternakan  Sapi Perah Setia Kawan Memproduksi Susu 108 Ton Perhari. Pipnews.co.id (Pusat Informasi Gerakan Koperasi Indonesia).
Hariri.  (2018).  KSP  Setia  Kawan  Nongkojajar Pasuruan. Majalah peluang.com. Edisi Maret 2018.
Hayati  L.  N.,  Tyasningsih,  W.,  Praja,  R.  N., Chusniati,  S.,  Yunita,  M.  N.,  &  Wibawati, P.A.  (2019).  Isolasi  dan  Identifikasi Staphylococcus aureus pada Susu Kambing
Peranakan Etawah Penderita Mastitis Subklinis di Kelurahan Kalipuro,
Banyuwangi. Jurnal  Medik  Veteriner ,  2(2), 76-82.
Hurley,  W.  L.,  &  Morin,  D.  E.  (2000).  Mastitis Lesson A.. Lactation Biology. ANSCI 308.
Ibrahim,  J.  (2017).  Tingkat  Cemaran  Bakteri Staphylococcus  aureus Pada  Daging  Ayam Yang Dijual Di Pasar Tradisional Makassar. Jurusan Ilmu Peternakan Fakultas Sains Dan
Teknologi Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
Kementerian  Pertanian.  (2017).  Outlook  Susu,
Komoditas Pertanian Sub Sektor Peternakan.
Pusat Data dan Sistem  Informasi Pertanian.
Jakarta. ISSN: 1907-1507.
Kot,  B.  K.,  Wierzchowska,  M.,  Piechota,  A.,  &
Gruzewska. (2020). Antimicrobial
Resistance  Patterns  in  MethicillinResistant
Staphylococcus aureus from Patients
Hospitalized during 2015–2017 in Hospitals in  Poland. Journal  Medical  Principles  and Practise , 2(1), 5.
Magiorakos, A. P., Srinivasan, A., Carey, R. B., Carmeli, Y., Falagas, M. E., & Giske, C. G.
(2012). Multidrug-resistant, extensively drug-resistant and pandrugresistant bacteria: an  international  expert  proposal  for  interim standard definitions for acquired resistance. Clinical  Microbiology  and  Infection ,  18, 268–281.
Moroni,  P.,  Pisoni,  G.,  Antonini,  M.,  Ruffo,  G., Carli,  S.,  Varisco,  G.,  &  Boettcher,  P.
(2005). Subclinical Mastitis and Antimicrobial Susceptibility of Staphylococcus  caprae and Staphylococcus epidermidis Isolated from Two Italian Goat Herds. Journal  Dairy  Science ,  88,1694-
1704.
Mustahal, A. W. (2012). Identifikasi bakteri yang menginfeksi  ikan  garra  rufa  (cyprinion macrostamus) di Balai Besar Karantina Ikan
Soekarno-Hatta. Jurnal  Perikanan  dan Kelautan . 2(2), 65-70.
Nasution,  M.  Y.,  Ahmad,  S.  S.  P,  Fitri,  C.,  &
Wulandari.  (2020.)  Isolasi  dan  identifikasi biokimia  bakteri  asal  sungai  batang  gadis Sumatera Utara. Jurnal Biosains , 6(3).
Ratih  N.  P.,  Handijatno,  D.,  Koesdarto,  S.,  &
Yudhana,  A.  (2017).  Karakterisasi  Protein VirB4 Brucella abortus Isolat Lokal dengan Teknik Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis. Jurnal Veteriner , 13(1).
Reni,  I.,  &  Prasdini,  W.  A.  (2018).  Isolasi  dan
Identifikasi  Bakteri  pada  Susu  Mastitis Subklinis di Balai Besar Pelatihan Peternakan  Batu.  Proc.  of  the  20th  FAVA CONGRESS and The 15th KIVNAS PDHI.
Sarudji,  S.,  Chusniati,  S.,  Tyasningsih,  W.,  &
Handijatno,  D.  (2017).  Petunjuk  Praktikum Penyakit  Infeksius  Progam  S-1  Kedokteran Hewan.  Departemen  Pendidikan  Nasional Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas Airlangga.
Sayu,  P.  Y.  P..  (2010).  Patogenesis  mastitis subklinis  pada  sapi  perah  yang  disebabkan oleh
Staphylococcus aureus . This publication at: https://www.researchgate.net/publication/31 8503660 .
Sekarini,  A.  A.  A.  D.,  Ita,  K.,  &  Mas,  R.  A.  A.
Syamsunarno. (2020). Efektivitas Antibakteri  Senyawa  Kurkumin  terhadap Foodborne  Bacteria:  Tinjauan  Curcuma longa untuk Mengatasi Resistensi
Antibiotik. Jurnal  Sains  dan  Kesehatan , 4(2).
Sudhanthiramani, S., Swetha, C. S., & Barathy, S. (2015).  Prevalence  of  Antibiotic  Resistant Staphylococcus  aureus from  raw  milk samples collected from the Local Vendors in
the  Region  of  Tirupathi,  India. Veterinary World , 8, 2231-0916.
Tsakris, A., Douboyas, J., &Kyriakis, K. (2013).
Multidrugs aureus Resistance among Methicillin-resistant Staphylococcus  aureus in  Greece. Journal  of  Chemotherapy ,  8(4), 251-253.
Wahyuni, A. E., Agustina, T. H., Satria, F. X., &
Supriyanto, P. (2014). Detection of Methicilin-Resistant Staphylococcus  aureus (MRSA)  Isolated  from  Dairy  Cattle  Milk". Proceeding  of  the  3  Joint  International Meetings. Pp: 57-58.
***