Hasil Penelitian

## OPTIMASI NANOENKAPSULASI ASAP CAIR TEMPURUNG KELAPA DENGAN RESPONSE SURFACE METHODOLOGY DAN KARAKTERISASI NANOKAPSUL
[Optimization of Coconut Shell Liquid Smoke Nanoencapsulation using Response Surface Methodology and Nanocapsules Characterization]
Dego Yusa Ali 1) , Purnama Darmadji 2) * dan Yudi Pranoto 2)
1) Jurusan Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Jambi, Jambi
2) Jurusan Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
Diterima 15 November 2013 / Disetujui 07 Februari 2014

## ABSTRACT
Liquid smoke is impractical and easy to deteriorate, thus needs to be protected against deterioration. Spray drying technique is widely used to encapsule bioactive compounds. This study aims to determine the optimum encapsulant ratio and spray drying process to produce nanocapsule of liqud smoke. Nanocapsules production began with the mixing of encapsulant (chitosan and maltodextrin) and the liquid smoke and then agitated until dissolved. The solution of nanoparticles was heated in a water bath at 45°C for 5 minutes and homogenized using a homogenizer at 4000 rpm for 1 min. The nanoparticle solutions was spray dried at various temperatures and feed flow rates. Optimization is accomplished by using Response Surface Methodology (RSM), and the parameters to be optimized were chitosan concentration, inlet air temperature and feed flow rate of the spray dryer based on total phenolic content. Samples were analyzed for viscosity, pH, phenols staining, total phenolic, total carbonil, total acidity content, encapsulation efficiency, morphology profiles, and particle size distribution. The results showed that the nanoparticles solution of liquid smoke had a pH ranged between 2.55-2.64 total soluble solids ranged between 14-14.8°Brix and viscosity ranged between 8.7-14.9 centipoise (cP). The total phenolic content of the nanocapsules ranged from 1.38 to 2.32% with an efficiency ranged from 22.25 to 37.44%, and water content ranged from 9.56 to 10.73% (dry basis). The optimum conditions for the highest value of total phenolic content were 0.12% chitosan concentration, 140.65°C inlet air temperature and feed flow rate at 5.29 mL/min. The results suggested that nanocapsules had spherical and wrinkle shape with an average size of nanocapsules of 29.16 nm.
Keywords: liquid smoke, nanoencapsulation, optimization, RSM

## ABSTRAK
Asap cair (umumnya) dianggap kurang praktis serta mudah mengalami kerusakan. Oleh karena itu, dikembangkan pembuatan tepung asap dengan metode nanoenkapsulasi. Teknik yang banyak digunakan untuk nanoenkapsulasi adalah teknik spray drying . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  rasio  enkapsulan  terbaik  dan  proses spray  drying yang  optimal.  Proses  pembuatan  nanokapsul  diawali  dengan  mencampurkan enkapsulan (kitosan dan maltodekstrin) ke dalam asap cair, kemudian diaduk sampai larut lalu dihangatkan dalam penangas air pada suhu 45°C selama 5 menit. Setelah itu, dilakukan proses homogenisasi (kecepatan 4000 rpm, selama 1 menit) dan proses pengeringan dengan spray dryer pada  berbagai  suhu  dan  laju  alir  umpan.  Optimasi  dilakukan  dengan  menggunakan  metode Response  Surface  Methodology (RSM),  serta parameter  yang  dioptimasi  adalah  konsentrasi  kitosan,  suhu  inlet  dan  laju  alir  umpan spray  dryer terhadap  nilai  respon  total  fenol  nanokapsul. Analisa  yang  dilakukan  adalah  viskositas  larutan,  pH,  pewarnaan  fenol,  kandungan  fenol  total,  efisiensi  enkapsulasi,  profil  morfologi  SEM,  dan distribusi ukuran partikel. Dari hasil penelitian didapatkan bahwa larutan nanopartikel asap cair memiliki pH berkisar antara 2.55-2.64 dengan total padatan  terlarut  berkisar  antara  14-14.8°Brix  serta  viskositas  larutan  nanopartikel  berkisar  antara  8.70-14.90  centipoise  (cP).  Total  fenol nanokapsul berkisar antara  1.38-2.32% dengan efisiensi berkisar antara 22.25-23.21%. Kadar air  nanokapsul berkisar antara 9.56-10.73% ( dry basis ). Dari hasil optimasi, didapatkan kondisi optimum dengan nilai total fenol tertinggi pada konsentrasi kitosan 0.12%, suhu inlet 140.65°C, dan laju alir umpan 5.29 mL/menit. Dari hasil uji morfologi didapatkan bentuk partikel yang bulat dan berkerut ( shrinkage ). Ukuran partikel nanokapsul yang dihasilkan rata-rata sebesar 29.16 nm.
Kata kunci: asap cair, nanoenkapsulasi, optimasi, RSM

## PENDAHULUAN
1
Asap  cair  tempurung  kelapa  diketahui  mengandung komponen  bioaktif  seperti  fenol,  asam,  dan  karbonil.  Oleh sebab  itu,  asap  cair  tempurung  kelapa  memiliki  potensi  untuk memperpanjang  umur  simpan  produk  yang  mengandung
*Penulis Korespondensi: E-mail: purnadji@ugm.ac.id; Hp.: +628122787347
protein  (Darmadji et  al. 2009;  Zuraida et  al. 2011).  Komponen bioaktif asap cair perlu dilindungi dari kerusakan, salah satunya dengan cara enkapsulasi.
Enkapsulasi  merupakan  proses  penyalutan  bahan  inti  ber- bentuk cair atau padat menggunakan suatu enkapsulan khusus yang  membuat  partikel-partikel  inti  mempunyai  sifat  fisikokimia yang  diinginkan  (Deladino et  al. 2008).  Enkapsulasi  meng- hasilkan  partikel  dengan  diameter  mikrometer  sampai nanometer  (Zuidan  dan  Nedovic,  2010).  Terminologi  mikro-
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
enkapsulasi  dipakai  untuk  menggantikan  istilah  enkapsulasi. Dikatakan  mikroenkapsulasi  karena  ukuran  partikel  yang  kecil dari  1-100  µm.  Teknik  mikroenkapsulasi  menghasilkan  sistem pembawa  yang  kurang  ideal,  ukuran  partikel  relatif  besar  (>  1 µm)  dan  bersifat  polidispersi  sehingga  secara  termodinamik tidak stabil (Weiss et al. 2008).  Enkapsulasi komponen bioaktif pada  skala  nano  telah  dikembangkan  untuk  dapat  mengatasi masalah  yang  berhubungan  dengan  lambat  dan  rendahnya serapan  dan  ketidakstabilan  komponen  bioaktif  pada  teknik mikroenkapsulasi  (Carvajal et  al. 2010).  Penelitian  nano- enkapsulasi  menghasilkan  sifat-sifat  seperti  yang  diharapkan yaitu  penyimpanan  akan  lebih  baik  dan  memberikan  per- lindungan  terhadap  komponen  bioaktif  seperti  vitamin,  anti- oksidan,  pigmen,  protein  dan  lipid  serta  karbohidrat,  sehingga dapat  meningkatkan  sifat-sifat  fungsional  dan  stabilitasnya (Weiss et  al. 2008;  Chuah et  al. 2009);  Tachaprutinun et  al. 2009; Carvajal et al. 2010; Sekhon, 2010).
Berbagai  macam  polimer  alami  diketahui  dapat  digunakan untuk pembuatan nanopartikel. Dalam penelitian ini, digunakan kitosan  (K)  dan  maltodekstrin  (MD)  sebagai  enkapsulan  untuk asap  cair.  Dalam  penelitian  sebelumnya,  Saloko et  al. (2012), menggunakan  kitosan  dan  maltodekstrin  untuk  enkapsulasi asap cair dan berhasil membuat produk tepung asap berukuran nanometer  (nm).  Kitosan  secara  normal  tidak  larut  dalam  air diatas pH 6 karena struktur kristalin yang kaku dan memerlukan asam sebagai donor proton (Lee et al. 2007). Kitosan diharap- kan  mampu  larut  dalam  asap  cair  yang  memiliki  pH  2.0-2.3. Maltodekstrin merupakan salah satu bahan yang umum diguna- kan untuk enkapsulasi senyawa bioaktif. Maltodekstrin merupa- kan  bahan  yang  larut  air  dan  dapat  melindungi  senyawa  yang dienkapsulasi dari oksidasi. Berdasarakan penelitian Ahmed et al . (2009), maltodekstrin dapat melindungi kandungan fenol dan antosianin selama proses pembuatan serbuk ekstrak ubi ungu. Salah  satu  metode  yang  banyak  digunakan  untuk  enkapsulasi adalah dengan spray drying . Teknik enkapsulasi dengan spray drying merupakan cara yang efektif untuk melindungi komponen bioaktif dari kerusakan dan kehilangan senyawa volatil. Teknik ini  sudah  banyak  dipakai  oleh  peneliti  untuk  membuat  mikro- partikel dari ekstrak buah-buahan (Tonon et al. 2010; Saenz et al. 2009;  Kha et  al. 2010;  Goula  dan  Adamopoulos,  2010). Dalam  teknik  spray  drying,  beberapa  faktor  penting  yang menentukan  kualitas  produk  yang  dihasilkan  antara  lain  jenis enkapsulan dan konsentrasinya dalam larutan, suhu inlet udara pengering,  dan  laju  alir  umpan.  Oleh  karena  itu,  diperlukan optimasi  terhadap  faktor-faktor  tersebut  agar  produk  yang dihasilkan  memiliki  karakteristik  yang  baik.  Optimasi  kondisi spray  drying ekstrak  buah  menggunakan  enkapsulan  ĸ- karagenan dan maltodekstrin telah dilakukan oleh Krishnaiah et al. (2009, 2011, 2012).
Response  surface  methodology (RSM)  banyak  digunakan untuk  menentukan  pengaruh  tiap  faktor  dan  interaksi  antar faktor serta membuat proses optimasi menjadi lebih efektif (Bas dan Boyaci, 2007). Keuntungan dari menggunakan RSM jumlah data  yang  dibutuhkan  untuk  evaluasi,  analisis  dan  optimasi secara  signifikan  mengurangi  jumlah  percobaan  yang  dibutuh- kan. RSM merupakan metode yang cepat dan ekonomis untuk memperoleh hasil penelitian dibandingkan dengan metode satu variabel  dalam  satu  waktu  atau  eksperimen  faktorial  lengkap.
Minitab 14 dan Matlab 2012 merupakan perangkat lunak yang digunakan  untuk  penelitian  ini.  Desain  eksperimen  RSM  pada penelitian ini menggunakan desain Box-Behnken.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  optimasi  nanoenkapsulasi asap cair dengan rasio konsentrasi kitosan:maltodekstrin, suhu inlet,  dan  laju  alir spray  dryer sebagai  parameter  yang  akan dioptimasi  terhadap  respon  nilai  total  fenolnya.  Selanjutnya dilakukan karakterisasi sifat fisik dan morfologi nanokapsul yang dihasilkan.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain bahan  utama  asap  cair  diperoleh  dari  pirolisis  tempurung kelapa. Maltodekstrin (MD) (Grain Processing Corp. Iowa, USA) dengan DE 10.8% dan kitosan (K) (Biotech Surindo, Indonesia) dengan DD 91.5%.

## Preparasi sampel
Pembuatan  larutan  nanopartikel  mengacu  pada  penelitian Saloko et  al. (2012)  dengan  modifikasi.  Berbagai  variasi enkapsulan K (0.05-0.15% b/v) dan MD (9.85-9.95% b/v) dilarut- kan dalam asap cair 225 mL. Campuran diaduk menggunakan pengaduk  magnetik  dengan  kecepatan  200  rpm  selama  30 menit  pada  suhu  ruang.  Larutan  nanopartikel  dihangatkan dalam  penangas  air  (Sibata  WS-240,  Japan)  pada  suhu  45°C selama  5  menit  setelah  suhu  tercapai  dan  dilakukan  homo- genisasi menggunakan homogenizer (Ultraturrax T50 Basic IKA Werke, Germany) pada kecepatan 4000 rpm selama 2 menit.

## Kondisi pengeringan
Larutan  nanopartikel  diumpankan  pada  alat spray  dryer (Armfield  SD04,  USA)  untuk  dilakukan  pengeringan.  Larutan nanopartikel dikeringkan pada berbagai variasi suhu inlet (125- 155°C)  dan  laju  alir  (4-6  mL/menit),  tekanan  pada noozle atomizer 1  bar  dengan  volume  udara  pengering  tetap.  Serbuk nanokapsul  yang  dihasilkan  diambil  dari  wadah  pengumpul hasil,  kemudian  disimpan  pada  wadah  berlapis  alumunium  foil lalu disimpan pada suhu ruang sebelum dilakukan karakterisasi.

## Nilai  pH,  viskositas,  dan  total  padatan  terlarut  larutan nanopartikel
Alat  pH-meter  (Schott,  Deutschland,  Germany)  digunakan untuk  mengukur  pH  larutan  nanopartikel  pada  suhu  26°C. Viskositas  ditentukan  dengan  cara  menempatkan  250  mL larutan  nanopartikel  pada  wadah  silinder  dengan  volume  300 mL, kemudian diukur menggunakan viskometer Brookfield RVT Type  (Middleboro,  USA)  pada  25°C,  spindle  No.  1  dengan putaran 100 rpm selama 30 detik. Total padatan terlarut diukur menggunakan hand-held  refractometer ukuran  N1  (Atago, Tokyo, Japan) pada 20°C, dan dipresentasikan sebagai derajat Brix (°Brix).

## Pewarnaan fenol
Larutan  FeCL 3 5%  (J.T.  Baker,  USA)  berwarna  kuning ditambahkan  ke  dalam  asap  cair  dengan  perbandingan  (3 tetes:1 mL). Campuran berwarna merah kecoklatan diaduk per-
Hasil Penelitian
lahan,  kemudian  ditambahkan  enkapsulan  lalu  diaduk  meng- gunakan magnetic stirrer dengan kecepatan 400 rpm selama 30 menit.  Larutan  nanopartikel  berwarna  dilihat  menggunakan mikroskop  cahaya  (Olympus  CX  21,  Olympus  Corp,  Japan) dengan bantuan software OPTILAB.

## Total fenol
Analisis  total  fenol  mengacu  pada  metode  Senter et  al. (1989) dengan modifikasi. Sebanyak 1 mL asap cair ditimbang atau  1  g  nanokapsul  asap  cair  diencerkan  menjadi  25  mL, diambil 1 mL diencerkan lagi menjadi 10 mL (faktor pengencer- an  =  250x),  diambil  2.5  mL  diencerkan  lagi  menjadi  10  mL (faktor pengenceran = 1000x). 1 mL hasil pengenceran terakhir dimasukkan dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 1 mL Na 2 CO 3 (Merck, Germany) jenuh dan dibiarkan selama 10 menit pada  suhu  kamar.  Selanjutnya  ditambahkan  0.5  mL  reagen folinciocalteau (Merck, Germany) dan 7.5 mL aquades, dihomo- genkan  dengan vortex kemudian  dibiarkan  selama  30  menit pada  suhu  ruang.  Sampel  tersebut  diukur  pada  panjang gelombang  770  nm.  Kadar  fenol  sampel  dihitung  berdasarkan persamaan kurva standar yang diperoleh.

## Kadar air
Pengukuran  kadar  air  dilakukan  secara  gravimetric  me- ngikuti  metode  AOAC  (2005).  Sampel  sebanyak  1  gram  (a) dimasukkan  kedalam  botol  timbang  yang  telah  dikeringkan dalam  oven  pada  suhu  105°C  dan  telah  diketahui  berat konstannya.  Sampel  dikeringkan  pada  suhu  105°C  selama  10 jam kemudian ditimbang. Sampel dikeringkan kembali kemudian ditimbang  setiap  2  jam  hingga  berat  konstan  (selisih  bobot sampel  pada  tiap  penimbangan  kurang  dari  0.2  mg).  Pe- ngurangan berat merupakan banyaknya air dalam sampel yang dihitung dengan rumus:
Kadar air (% db) = - x 100%

## Efisiensi enkapsulasi
Efisiensi  enkapsulasi  dihitung  berdasarkan  total  fenolnya. Total  fenol  nanokapsul  asap  cair  dianalisis  dengan  meng- gunakan  metode  Senter et  al .  (1989).  Perhitungan  efisiensi enkapsulasi  mengacu  pada  metode  Belscak-Cvitanovic et  al . (2011), yaitu persentase efisiensi enkapsulasi dihitung sebagai rasio  antara  kadar  fenol  dalam  mikrokapsul  asap  cair  dengan kadar fenol dalam asap cair.
Efisiensi enkapsulasi (%) = x 100% Kadar fenol awal (%) = x100%
Profil morfologi menggunakan Scanning Electron Microscope (SEM) Scanning  Electron Microscope (SEM FEI  tipe Inspect S50, Oregon,  USA)  digunakan  untuk  mempelajari  profil  morfologi permukaan nanokapsul. Partikel  nanokapsul ditempelkan pada SEM stubs dengan diameter 10 mm menggunakan pita perekat
dua  sisi.  Kemudian  sampel  dilapisi  dengan  emas  dan  dilihat pada perbesaran 10000x dengan voltase 20 kV.

## Analisis distribusi ukuran partikel
Dispersi  nanokapsul  dalam  aquades  diukur  menggunakan alat laser particle  size analyzer (Malvern Zetasizer Nanoseries Nano  ZS  ver  6.20,  Malvern  Instruments  Ltd,  Malvern,  UK) dengan  metode  Dynamic  Light  Scattering.  Distribusi  ukuran partikel ditentukan dengan nilan span ( span value ). Pengukuran dilakukan sebanyak 3 kali.

## Desain eksperimen
Response  surface  methodology (RSM)  diterapkan  meng- gunakan  Minitab  14  untuk  mengidentifikasi  level  optimum  dari tiga  variabel  konsentrasi  kitosan  (%  b/v),  suhu  inlet  (°C),  dan laju  alir  umpan  (mL/menit).  Variabel  terkode  dan  tak  terkode yang digunakan pada desain RSM dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Kode level (variabel independen) optimasi
Level Tak Terkode Konsentrasi
Kitosan (X 1 ) (% b/v) Suhu Inlet (X 2 ) (ºC) Laju Alir (X 3 ) (mL/menit) Level terkode +1 0.05 125 4 0 0.1 140 5 -1 0.15 155 6
Dari  penelitian  pendahuluan  diketahui  titik  optimum  dari konsentrasi  kitosan,  suhu  inlet,  dan  laju  alir  yang  memberikan nilai  total  fenol  tertinggi  secara  berturut-turut  adalah  0.1%, 140°C, dan 5 mL/menit yang akan dijadikan sebagai titik pusat pada  rancangan  RSM.  Eksperimen  dirancang  menggunakan desain  Box-Behnken  yang  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Data respon  dianalisis  koefisien  regresi,  variansi,  nilai  eigen,  dan optimasi respon.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasi pewarnaan fenol
Asap cair memiliki penampakan cairan jernih berwarna ke- kuningan dengan aroma seperti asap dan juga memiliki aroma asam  dan  fenolik.  Adanya  aroma  fenolik  pada  asap  cair  di- karenakan  asap  cair  mengandung  komponen  senyawa  fenol hasil  degradasi  lignin.  Salah  satu  metode  kualitatif  untuk membuktikan bahwa di dalam asap cair terdapat senyawa fenol adalah  dengan  mereaksikan  asap  cair  dengan  senyawa  ferri klorida (FeCl 3 ). Menurut Soloway dan Wilen (1952), feri klorida dalam  larutan  memberikan  warna  dengan  beberapa  senyawa organik,  salah  satunya  fenol.  Warna  yang  dihasilkan  berbeda- beda  sesuai  dengan  jenis  senyawa  fenolnya.  Feri  klorida bereaksi dengan guaiakol menghasilkan warna merah. Dengan demikian, warna merah hasil pengecatan fenol asap cair meng- indikasikan  bahwa  asap  cair  yang  digunakan  mengandung guaiakol.
Hasil  analisis  pewarnaan  fenol  pada  asap  cair  dan  larutan nanopartikel  menunjukkan  adanya  reaksi  antara  feri  klorida dengan  senyawa  fenol  yang  terkandung  dalam  asap  cair.  Hal tersebut  ditunjukkan  pada  Gambar  1.  Pengamatan  dengan
Hasil Penelitian
menggunakan  mikroskop  cahaya  pada  perbesaran  1000x  me- nunjukkan bahwa asap cair maupun larutan nanopartikel tanpa penambahan FeCl 3 berbentuk bulatan-bulatan transparan (tidak berwarna),  sedangkan  asap  cair  dan  larutan  nanopartikel dengan  penambahan  FeCl 3 berbentuk  bulatan  dengan  warna kecoklatan.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  senyawa  fenol dalam  asap  cair  yang  berwarna  merah  dapat  terkapsul  oleh maltodekstrin  dan  kitosan.  Pada  larutan  nanopartikel  terlihat terdapat dua lapisan pada bulatan partikel. Untuk menentukan mekanisme  penyalutan  atau  posisi  penyalut  perlu  dilakukan penelitian lebih lanjut.
Gambar 1.  Pewarnaan  fenol.  a)  Asap  cair;  b)  Asap  cair  +  FeCl 3 ;  c) Larutan nanopartikel asap cair + maltodekstrin + kitosan;
d)  Larutan  nanopartikel  asap  cair  +  maltodekstrin  + kitosan + FeCl 3
Viskositas,  pH  dan  total  padatan  terlarut  larutan  nano- partikel
Dari  analisis  viskositas  larutan  nanopartikel  pada  berbagai konsentrasi, didapatkan hasil semakin tinggi konsentrasi kitosan di  dalam  larutan,  maka  semakin  tinggi  nilai  viskositasnya dengan nilai total padatan terlarut dan pH yang relatif sama. Hal ini  disebabkan  karena  semakin  tinggi  konsentrasi  kitosan  di dalam larutan, maka akan mengurangi kelarutan kitosan dalam larutan  nanopartikel,  sehingga  nanopartikel  kitosan  tidak  bisa terdispersi menjadi ukuran yang lebih kecil, sehingga viskositas- nya  semakin  besar.  Nilai  viskositas  larutan  nanopartikel  dapat dilihat pada Tabel 2. Berdasarkan hasil analisis statistik (Tabel 4)  untuk  viskositas,  konsentrasi  kitosan  berbeda  nyata  pada taraf kepercayaan p <0.05. Nilai rataan viskositas untuk konsen- trasi kitosan 0.05, 0.10, dan 0.15% secara berturut-turut adalah 8.55, 10.86, dan 14.75 cP.
Fernandez-Kim (2004) menyebutkan bahwa apabila ukuran rantai polimer kitosan bertambah kecil, laju gerakan translasinya menjadi  semakin  cepat,  sehingga  viskositas  larutannya  ber- tambah rendah. Analisis viskositas larutan nanopartikel berguna untuk mengetahui apakah partikel dalam larutan tersebut dapat
terdispersi  dengan  baik  dan  tidak  mengalami  aglomerasi  agar dapat dilakukan proses pengeringan dengan spray dryer .
Tabel 2.  Nilai viskositas dan total padatan terlarut larutan nanopartikel
Sampel ([K]) Viskositas (cP) Total Padatan Terlarut (°Brix) pH (28°C) 1 (0.05) 8.8 14.2 2.55 2 (0.15) 14.8 14.6 2.57 3 (0.05) 8.2 14.2 2.56 4 (0.15) 14.5 14.8 2.58 5 (0.05) 8.7 14.2 2.57 6 (0.15) 14.8 14.6 2.58 7 (0.05) 8.5 14.4 2.56 8 (0.15) 14.9 14.6 2.58 9 (0.1) 11.2 14.6 2.59 10 (0.1) 11.2 14.4 2.60 11 (0.1) 11.2 14.4 2.61 12 (0.1) 11.2 14.2 2.58 13 (0.1) 10.4 14.6 2.62 14 (0.1) 10.6 14.4 2.60 15 (0.1) 10.4 14.6 2.58 Keterangan: [K]: konsentrasi  kitosan

## Kadar air nanokapsul
Kadar  air  nanokapsul  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor, antara lain konsentrasi enkapsulan (Sormoli et al. 2012), suhu inlet spray dryer (Caliskan dan Nur, 2013), dan laju alir umpan spray dryer (Yuliana et al. 2007). Dari hasil penelitian (Tabel 4), konsentrasi kitosan berpengaruh terhadap kadar air nanokapsul yang  dihasilkan.  Semakin  besar  konsentrasi  kitosan,  maka semakin  rendah  kadar  air  nanokapsul.  Berdasarkan  analisis statistik,  kitosan  0.15%  berbeda  nyata  dengan  kitosan  0.05% pada  selang  kepercayaan  ( p <0.05).  Kadar  air  untuk  berbagai variasi  konsentrasi  kitosan  yaitu  10.24,  10.14,  dan  10.08% untuk konsentrasi kitosan 0.05,  0.10, dan 0.15%.  Berdasarkan hasil  tersebut,  konsentrasi  kitosan  semakin  tinggi,  maka  kadar air  semakin  rendah.  Hal  tesebut  dapat  disebabkan  ukuran partikel  kitosan  yang  lebih  kecil  membuat  luas  permukaan kontak dengan udara pengering semakin luas. Pada suhu inlet dan laju alir yang sama, ukuran partikel yang lebih kecil meng- akibatkan efisiensi proses evaporasi air meningkat, karena jarak yang dibutuhkan air berdifusi dari dalam keluar partikel menjadi lebih  singkat,  sehingga  produk  menjadi  lebih  kering.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  Learoyd et  al. (2008)  bahwa  kitosan bubuk yang dibuat dengan proses spray dryer memiliki kadar air yang lebih tinggi pada prtikel berukuran lebih besar.
Variasi perlakuan suhu inlet yang dilakukan pada penelitian ini  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  suhu  inlet spray  dryer yang  yang  digunakan,  maka  semakin  rendah  kadar  air  nano- kapsul  yang  dihasilkan.  Hal  ini  disebabkan  karena  suhu  pe- ngeringan yang tinggi akan menguapkan air dalam jumlah yang lebih  besar.  Berdasarkan  hasil  analisis  variansi,  nilai  kadar  air untuk  masing-masing  variasi  perlakuan  suhu  berbeda  nyata pada selang kepercayaan ( p <0.05), dengan nilai rata-rata kadar air  nanokapsul  yang  dihasilkan  sebesar  10.49,  10.14,  dan 9.81% untuk variasi suhu 125, 140, dan 155°C. Data kadar air nanokapsul dapat dilihat pada Tabel 3 dan analisis varian untuk kadar air dapat dilihat pada Tabel 4.
a c d b
Hasil Penelitian

## Tabel 3. Kondisi rancangan percobaan dan hasil
Sampel No. Faktor 1 Faktor 2 Faktor 3 Faktor 1 Faktor 2 Faktor 3 Nilai Respon X 1 X 2
X 3 Konsentrasi Kitosan (%) Suhu Inlet (°C) Laju Alir (mL/menit) Level Terkode Level Tak Terkode Total Fenol (%) Kadar Air (%) Efisiensi Enkapsulasi (%) 1 -1 -1 0 0.05 125 5 1.38 ± 0.06 10.73 ± 0.09 22.25 ± 1.04 2 1 -1 0 0.15 125 5 1.99 ± 0.04 10.49 ± 0.37 31.98 ± 0.70 3 -1 1 0 0.05 155 5 1.52 ± 0.03 9.87 ± 0.09 24.42 ± 0.62 4 1 1 0 0.15 155 5 1.92 ± 0.01 9.56 ± 0.20 30.96 ± 0.18 5 -1 0 -1 0.05 140 4 1.43 ± 0.04 9.95 ± 0.24 23.05 ± 0.74 6 1 0 -1 0.15 140 4 1.85 ± 0.07 10.11 ± 0.07 29.86 ± 1.20 7 -1 0 1 0.05 140 6 1.75 ± 0.03 10.38 ± 0.14 28.15 ± 0.64 8 1 0 1 0.15 140 6 2.08 ± 0.07 10.15 ± 0.18 33.46 ± 1.23 9 0 -1 -1 0.1 125 4 1.76 ± 0.04 10.15 ± 0.12 28.28 ± 0.69 10 0 1 -1 0.1 155 4 1.75 ± 0.04 9.80 ± 0.14 28.17 ± 0.72 11 0 -1 1 0.1 125 6 1.84 ± 0.04 10.58 ± 0.25 29.61 ± 0.70 12 0 1 1 0.1 155 6 2.00 ± 0.07 10.01 ± 0.20 32.21 ± 1.23 13 0 0 0 0.1 140 5 2.20 ± 0.04 10.13 ± 0.06 35.44 ± 0.69 14 0 0 0 0.1 140 5 2.32 ± 0.04 10.15 ± 0.09 37.44 ± 0.66 15 0 0 0 0.1 140 5 2.31 ± 0.01 10.13 ± 0.02 37.17 ± 0.24 Tabel 4.  Analisis  varian  pengaruh  masing-masing  variabel  terhadap sifat fisik nanokapsul Karakteristik Nanokapsul Kadar Air (% db) Efisiensi Enkapsulasi (%) Viskositas (cP) Konsen- trasi kitosan (%) 0.05 10.24 ± 0.38 b 24.47 ± 2.46 a 8.55 ± 0.24 a 0.1 10.14 ± 0.25 ab 32.62 ± 3.92 c 10.86 ± 0.38 b 0.15 10.07 ± 0.40 a 31.57 ± 1.60 b 14.75 ± 0.16 c Suhu inlet (°C) 125 10.49 ± 0.30 c 28.03 ± 3.81 a - 140 10.14 ± 0.16 b 32.08 ± 5.09 c - 155 9.81 ± 0.33 a 28.94 ± 3.20 b - Laju alir umpan (mL/menit) 4 10.00 ± 0.20 a 27.34 ± 2.78 a - 5 10.15 ± 0.39 b 31.38 ± 5.76 b - 6 10.28 ± 0.33 b 30.86 ± 2.34 b -
*Nilai merupakan rataan ± standar error a,b,c Nilai pada kolom yang diikuti dengan huruf berbeda menunjukkan perbedaan nyata pada p <0.05 ( Duncan’s multiple range test )
Berlawanan  dengan  suhu  inlet,  semakin  tinggi  laju  aliran umpan,  maka  kadar  air  nanokapsul  yang  dihasilkan  semakin rendah. Berdasarkan hasil analisis varian, nilai kadar air untuk perlakuan  laju  alir  umpan  4  mL/menit  berbeda  nyata  dengan laju alir 5 dan 6 mL/menit, sedangkan untuk perlakuan laju alir 5 mL/menit tidak berbeda nyata dengan laju alir 6 mL/menit. Nilai rata-rata  kadar  air  nanokapsul  yang  dihasilkan  sebesar  10.0, 10.15,  dan  10.28%  untuk  perlakuan  laju  alir  4,  5,  dan  6 mL/menit.  Laju  alir  umpan  yang  lebih  cepat  mengakibatkan jumlah air yang diuapkan akan lebih kecil. Hal ini karena aliran bahan  yang  berjalan  lebih  cepat  akan  menyebabkan  kontak bahan  dengan  udara  kering  akan  berlangsung  lebih  singkat sementara  jumlah  total  air  dalam  larutan  sama  jumlahnya. Akibatnya  jumlah  air  yang  diuapkan  akan  lebih  kecil  daripada jika laju alir umpan yang digunakan lebih rendah.

## Efisiensi enkapsulasi
Efisiensi enkapsulasi merupakan salah satu parameter yang dapat  digunakan  untuk  menentukan  keberhasilan  proses enkapsulasi.  Parameter  ini  menunjukkan  berapa  persen senyawa  aktif  (fenol)  yang  berhasil  dikungkung  atau  dilindungi dalam kapsul. Berdasarkan hasil penelitian, perbedaan konsen- trasi  kitosan  menyebabkan  nilai  efisiensi  enkapsulasi  berbeda. Variasi perlakuan konsentrasi kitosan  berbeda nyata pada tiap taraf  pada  selang  kepercayaan  ( p <0.05).  Efisiensi  enkapsulasi terbesar diperoleh pada nanokapsul dengan konsentrasi kitosan 0.1%.  Nilai  efisiensi  enkapsulasi  untuk  kitosan  0.05,  0.1,  dan 0.15%  secara  berturut-turut  adalah  24.47,  32.62,  dan  31.57%. Efisiensi  enkapsulasi  nanokapsul  dengan  konsentrasi  kitosan kurang  dari  0.1%  dan  lebih  besar  dari  0.1%  memiliki  efisiensi lebih kecil dibandingkan nanokapsul dengan konsentrasi kitosan 0.1%.  Data  efisiensi  enkapsulasi  dapat  dilihat  pada  Tabel  3. Peningkatan  konsentrasi  kitosan  yang  lebih  tinggi  dapat  me- nyebabkan kitosan menjadi tidak larut. Kondisi ini menyebabkan terjadinya  celah-celah  ( crack )  pada  lapisan  ( crust )  sehingga komponen flavor berdifusi  keluar  melalui  celah-celah  yang  ter- bentuk.
Menurut  Rosenberg et  al. (1990),  konsentrasi  padatan mempengaruhi  viskositas  dan  berperan  terhadap  kehilangan komponen volatil. Viskositas berpengaruh terhadap pergerakan komponen  volatil  ke  permukaan  droplet  yang  dikeringkan. Viskositas  dapat  dinaikkan  sampai  nilai  optimal  untuk  me- ningkatkan  retensi.  Apabila  viskositas  terus  dinaikkan  akan menurunkan  retensi  komponen flavor .  Berdasarkan  hasil penelitian, efisiensi enkapsulasi mengalami peningkatan sampai suhu  inlet  140°C,  kemudian  mengalami  penurunan.  Efisiensi enkapsulasi  terbesar  diperoleh  pada  perlakuan  suhu  inlet 140°C,  yaitu  sebesar  32.08%  hampir  sama  dengan  perlakuan suhu  inlet,  efisiensi  enkapsulasi  untuk  parameter  laju  alir meningkat  sampai  laju  alir  5  mL/menit,  setelah  itu  efisiensi menurun  walaupun  secara  statistik  penurunannya  tidak signifikan.
Hasil Penelitian
Efisiensi enkapsulasi terbesar didapat pada taraf perlakuan laju alir 5 mL/menit, yaitu  sebesar 31.38%. Hal ini disebabkan oleh  peningkatan  suhu  inlet  dan  laju  alir  membuat  proses pengeringan  lebih  baik  dan  pembentukan  nanokapsul  lebih sempurna sampai pada batas tertentu (titik optimal).
Penelitian  ini,  nilai  efisiensi  enkapsulasi  yang  rendah  pada suhu  minimum  (<140°C),  dapat  disebabkan  oleh  kehilangan senyawa  fenol  selama  periode  pengeringan  yang  tidak  stabil yaitu  sebelum  struktur  partikel  terbentuk.  Di  sisi  lain,  efisiensi enkapsulasi yang lebih rendah pada suhu maksimum (>140°C) dapat  disebabkan  oleh  laju  pengeringan  yang  tinggi,  sehingga evaporasi  terjadi  sangat  cepat  setelah  proses  atomisasi menyebabkan  pengembangan  yang  tidak  terkontrol  dan kerusakan  pada  permukaan  partikel  sehingga  senyawa  fenol mudah hilang, terutama senyawa fenol yang memiliki titik didih lebih rendah.

## Variabel optimum terhadap respon total fenol
Optimasi  merupakan  proses  pencarian  nilai-nilai  variabel yang dianggap optimal, efektif dan efisien untuk mencapai hasil yang  diinginkan.  Dalam  penelitian  ini,  hasil  yang  diinginkan adalah  nanokapsul  asap  cair  dengan  nilai  total  fenol  terbesar. Setelah  semua  perlakuan  dilaksanakan,  kemudian  dicari hubungan  orde  dua  dari  persamaan  repon  dengan  variabel bebas.  Persamaan  yang  diperoleh  dari  total  fenol  (Y)  dengan konsentrasi  kitosan  (X 1 ),  Suhu  inlet  (X 2 ),  dan  Laju  alir  umpan (X 3 ) adalah:
Y=  2.27667 + 0.22 X 1 + 0.0275 X 2 + 0.11 X 3 – 0.31708 X 12 – 0.25708 X 22 – 0.18208 X 32 – 0.0525 X 1 X 2 – 0.0225 X 1 X 3 + 0.0425 X 2 X 3
Untuk  signifikansi  model  yang  menunjukkan  kesusaian hubungan  respon  dengan  faktor,  model  linear  dan  model kuadrat mempunyai nilai p ( p - value ) yang  kecil (<0.5) sedang- kan  model  nonlinear  yang  mengikutsertakan  interaksi  antar faktor, nilai p >0.05. Sehingga model yang tepat untuk hubungan pengembangan dengan konsentrasi kitosan, suhu inlet, dan laju alir umpan adalah model kuadratik (nilai p -nya <0.05).
Grafik  kontur  dan  permukaan  persamaan  diatas  dapat dilihat pada Gambar 2. Pada gambar permukaan terlihat bahwa kurva yang terbentuk merupakan parabola terbalik, dari gambar tersebut  dapat  diprediksi  bahwa  respon  akan  dalam  bentuk maksimal.  Begitu  juga  dengan  kontur,  semua  variasi  tingkat  2 faktor yang berpengaruh pada nilai total fenol mempunyai 1 titik pusat. Nilai eigen dari matrik persamaan bernilai negatif semua, yang  menunjukkan  bahwa  respon  berada  diposisi  maksimum sesuai dengan yang diharapkan (total fenol terbesar). Dari hasil perhitungan  optimasi  diperoleh  total  fenol  optimum  sebesar 2.233%.  Nilai  tersebut  diperoleh  pada  kondisi  konsentrasi kitosan  0.1167%,  uhu  inlet  140.65°C  dan  laju  alir  umpan  5.29 mL/menit, dengan nilai desirability 1, yang artinya sangat men- dekati  sempurna  antara  target  dengan  hasil  optimasi.  Pada kondisi  nanoenkapsulasi  yang  optimum  diperoleh  karakteristik nanokapsul  asap  cair:  kadar  air  10.14%,  efisiensi  enkapsulasi 32.96%.
Gambar 2.  Grafik  kontur  dan  permukaan  respon  total  fenol  pada kondisi optimum

## Profil morfologi nanokapsul
Morfologi nanokapsul mempengaruhi sifat nanokapsul lain- nya seperti laju pelepasan senyawa aktif, retensi dan lain-lain. Pada  penelitian  ini  digunakan  teknik Scanning  Electron Microscopy (SEM)  untuk  mengetahui  struktur  nanokapsul. Analisis  profil  morfologi  ini  hanya  dilakukan  pada  perlakuan yang optimum (konsentrasi kitosan 0.1%, suhu inlet 140°C, laju alir  5  mL/menit)  dan  dibandingkan  dengan  kontrol  (malto- dekstrin, suhu inlet 140°C, laju alir 5 mL/menit). Dari Gambar 3 terlihat  bahwa  pada  nanokapsul  kontrol  (hanya  menggunakan maltodekstrin  sebagai  enkapsulan)  terdapat  keretakan  pada mikrokapsul  (ditunjukkan  dengan  tanda  panah).  Keretakan  ini dapat  terjadi  karena  suhu  pengeringan  yang  tinggi.  Yuliana et al. (2007)  berpendapat  bahwa  keretakan  mikrokapsul  dapat memacu tingkat pelepasan bahan aktif. Hal ini ditunjukkan pada penelitian  pendahuluan  dimana  nanokapsul  yang  tanpa  pe- nambahan kitosan sebagai enkapsulan memiliki nilai total fenol yang lebih rendah.
Konsentrasi Kitosan vs Suhu Inlet 0.100 0.150 155 150 145 140 130 135 125 Su hu In let 0.125 0.075 0.050 Kitosan Tot al Fen ol 2.25 2.00 1.75
1.50
0.05 0.10 0.15
Kitosan 130 140 150 Suhu Inlet Tot al Fen ol Konsentrasi Kitosan vs Laju Alir 0.075 0.150 6.0 5.5 5.0 4.0 4.5 La ju Ali r 0.125 0.050 Kitosan
0.100 2.25 2.00 1.75
1.50 0.05 0.10 0.15
Kitosan 5 6 Laju Alir 4 140 130 Tot al Fen ol Kitosan 6.0 5.5 5.0 4.0 4.5 La ju A lir 135 125 145  150  155 2.25
2.10
1.95
1.80
130 140 150
Suhu Inlet
5 6 Laju Air
4
Suhu Inlet vs Laju Alir Kontur Permukaan
Hasil Penelitian
Dari  Gambar  3  juga  dapat  dilihat  bahwa  nanokapsul  dari perlakuan  yang  optimum  memiliki  bentuk  bulat  namun  meng- kerut.  Bentuk  nanokapsul  yang  mengkerut  dapat  disebabkan oleh penguapan air yang cepat pada saat proses spray drying . Morfologi yang hampir sama juga ditunjukkan oleh Harris et al . (2010) dimana mikrokapsul yang dihasilkan berbentuk bulat dan bergelombang  yang  disebabkan  oleh  penguapan  pelarut  yang cepat pada saat proses spray drying .
Gambar 3.  Morfologi  SEM  nanokapsul  asap  cair:  (a)  Maltodekstrin (10%  b/v)  (5000x);  (b)  Maltodekstrin  (9.9%  b/v)  +  kitosan
(0.1%  b/v)  (5000x);  (c)  Maltodekstrin  (10%  b/v)  (10000x);
(d) Maltodekstrin (9.9% b/v) + kitosan (0.1% b/v) (10000x)

## Distribusi ukuran partikel
Pengukuran  distribusi  partikel  bertujuan  untuk  mengetahui sebaran ukuran nanokapsul asap cair. Pengukuran ini dilakukan untuk mengetahui apakah metode yang digunakan dan kitosan sebagai enkapsulan bisa membuat nanokapsul berukuran nano (10 -9 m).  Dari  Gambar  4  dapat  dilihat  bahwa  ukuran  partikel nanokapsul  asap  cair  terdistribusi  mulai  dari  rata-rata  ukuran 18.18 nm (70.5%), 276.1 nm (23.4%) sampai 5.02 µm (6.1%). Secara keseluruhan, partikel nanokapsul berukuran 29.16 nm.
Gambar 4. Distribusi ukuran partikel nanokapsul asap cair
Dari hasil pengukuran ini, dapat dilihat bahwa metode yang digunakan  dalam  penelitian  ini,  serta  penggunaan  kitosan sebagai  enkapsulan  dapat  menghasilkan  produk  nanokapsul berdimensi nanometer.

## KESIMPULAN
Asap  cair  yang  mengandung  fenol  dapat  terkapsulasi dengan baik yang ditunjukkan dengan warna merah kecoklatan di dalam bulatan pada pengamatan dengan mikroskop cahaya. Kondisi  optimum  untuk  total  fenol  didapatkan  pada  kondisi konsentrasi kitosan 0.1167%, suhu inlet 140.65°C dan laju alir umpan  5.29  mL/menit.  Bentuk  nanokapsul  yang  dihasilkan spherical atau berbentuk bulat, namun terjadi kerut ( shrinkage ) akan tetapi tidak ada retakan atau pecah pada permukaannya dibandingkan  dengan  kontrol  yang  mengalami  retak  pada  per- mukaan nanokapsulnya. Nanokapsul dengan perlakuan terbaik memiliki  ukuran  rata-rata  29.16  nm.  Dengan  demikian,  maka metode  yang  digunakan  dan  kitosan  sebagai  enkapsulan mampu menghasilkan produk yang memiliki ukuran nanometer (nm).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didukung  oleh  Hibah  DIKTI.  Penulis  pertama mengucapkan  terima  kasih  atas  dana  penelitian  dari  program beasiswa  unggulan  DIKTI  Kementerian  Pendidikan  dan  Ke- budayaan Republik Indonesia.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmed  M,  Akter  MS,  Chin  KB,  Eun  JB.  2009.  Effect  of maltodextrin  concentration  and  drying  temperature  on quality  properties  of  purple  sweet  potato  flour.  Food  Sci Biotechnol 18: 1487-1494.
[AOAC] Association of Official Analytical Chemist. 2005. Official Method  of  Analysis.  18 th edition.  Association  of  Official Analytical Chemist. Washington DC, USA.
Bas D, Boyaci IH. 2007. Modelling and optimization I: Usability of  response  surface  methodology.  J  Food  Eng    78:  836– 845. DOI: 10.1016/j.jfoodeng.2005.11.024.
Caliskan  G,  Nur  DS.  2013.  The  effects  of  the  different  drying conditions and  the amounts of maltodextrin addition during spray  drying  of  sumac  extract.  Food  Bioprod  Process    91: 539-548. DOI: 10.1016/j.fbp.2013.06.004.
Carvajal MXQ, Diaz BHC, Torres LSM, Perez JJC, Beltran LA, Aparicio AJ, Lopez GFG. 2010. Nanoencapsulation: a new trend in food engineering processing. Food Eng Rev 2: 39- 50. DOI: 10.1007/s12393-009-9012-6.
Chuah  AM,  Kuroiwa  T,  Ichikawa  S,  Kobayashi  I,  Nakajima  M. 2009. Formation of biocompatible nanoparticles via the self- assembly of chitosan and modified lechitin. J Food Sci 74: N1-N8. DOI: 10.1111/j.1750-3841.2008.00985.x.
Darmadji  P,  Marsono  Y,  Suparmo.  2009.  Biopreservative Prototype  Making  of  Liquid  Smoke,  Safety  Evaluation  and
In te ns ity (%)
Record 17: DG1 Size (d.nm) Size Distribution by Intensity 7 6 5 4 3 2 1 0 0.1
1 10
100 1000 10000
a b c d
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
Industrial Profile as an Alternative Preservation to Replace Formaldehyde.  Report  2 nd years  Insentive  Applied.  The Ministry  of  Research  and  Technology  of  Republic  of Indonesia.
Deladino  L,  Anbinder  PS,  Navarro  AS,  Martino  MN.  2008. Encapsulation  of  natural  antioxidants  extracted  from Ilex paraguariensis .  Carbohyd  Polym  71:  126-134.  DOI:  10. 1016/j.carbpol.2007.05.030.
Fernandez-Kim  S.  2004.  Physicochemical  and  Functional Properties  of  Crawfish  Chitosan  as  Affected  by  Different Processing  Protocols  [Thesis].  Louisiana:  The  Department of Food Science, Louisiana State University, USA.
Goula AM, Adamopoulos KG. 2010. A new technique for spray drying orange juice concentrate. Innov Food Sci Emerg 11: 342–351. DOI: 10.1016/j.ifset.2009.12.001.
Harris  R,  Lecumberri  E,  Aparicio  IM,  Mengibar  M,  Heras  A. 2010.  Chitosan  nanoparticles  and  microspheres  for  the encapsulation  of  natural  antioxidants  extracted  from Ilex paraguariensis .  Carbohyd  Polym  84:  803-806.  DOI: 10.1016/j.carbpol.2010.07.003.
Kha TC, Nguyen MH, Roach PD. 2010. Effects of spray drying conditions  on  the  physicochemical  and  antioxidant properties of the Gac ( Momordica cochinchinensis ) fruit aril powder. J Food Eng 98: 385–392. DOI: 10.1016/j.jfoodeng. 2010.01.016.
Krishnaiah  D,  Sarbatly,  Rao  SRM,  Nithyanandam  RR.  2009. Optimal operating conditions of spray dried noni fruit extract using K-carrageenan as adjuvant. J Appl Sci 9: 3062–3067. DOI: 10.3923/jas.2009.3062.3067.
Krishnaiah  D,  Sarbatly,  R,  Nithyanandam  RR.  2011. Optimization  of  spray  for  drying Morinda  citrifolia L.  fruit extract. J Appl Sci 11: 1–8. DOI: 10.3923/jas.2011.
Krishnaiah  D,  Bono  A,  Sarbatly  R,  Nithyanandam  R,
Anisuzzaman  SM.  2012.  Optimisation  of  spray  drying operating conditions of Morinda citrifolia L. fruit extract using response surface methodology. J King Saud Univ - Eng Sci DOI: 10.1016/j.jksues.2012.10.004. ( in press ).
Learoyd TP, Burrows JL, French E, Seville PC. 2008. Chitosan- based spray-dried respirable powders for sustained delivery of  terbutaline  sulfate.  Eur  J  Pharm  Biopharm  68:  224–34. DOI: 10.1016/j.ejpb.2007.04.017.
Lee  SE,  Park  KH,  Park  IS,  Na  K.  2007.  Glycol  chitosan  as  a stabilizer  for  protein  encapsulated  into  poly  (lactide-co- glycolide)  microparticle.  Int    J  Pharm  338:  310-316.  DOI: 10.1016/j.ijpharm.2007.02.008.
Rosenberg  M,  Kopelman  IJ,  Talmon  Y.  1990.  Factor  affecting retention  in  spray  drying  microencapsulation  of  volatile materials. J Agr Food Chem 38: 1288-1294. DOI: 10.1021/ jf00095a030.
Saenz  C,  Tapia  S,  Chavez  J,  Robert  P.  2009.  Micro- encapsulation by spray drying of bioactive compounds from cactus  pear  ( Opuntia  ficus-indica ).  Food  Chem  114:  616– 622. DOI: 10.1016/j.foodchem.2008.09.095.
Saloko  S,  Darmadji  P,  Setiaji  B,  Pranoto  Y.  2012.  Structural analysis of spray dried coconut shell liquid smoke powder. J Teknol dan Industri Pangan 23: 173-179. DOI: 10.6066/jtip. 2012.23.2.173.
Sekhon  BS.  2010.  Food  nanotechnology  –  an  overview.  J Nanotechnology,  Science  Applications  3:  1-15.  DOI: 10.2147/NSA.S8677.
Senter  SD,  Robertson  JA,  Meredith  FI.  1989.  Phenolic compound  of  the  mesocarp  of  cresthauen  peaches  during storage and ripening. J Food Sci 54: 1259-1268.
Soloway  S,  Wilen  SH.  1952.  Improved  ferric  chloride  test  for phenols.  Anal  Chem  24:  979-983.  DOI:  10.1021/ac60 066a017.
Sormoli  ME,  Islam  MI,  Langrish  TAG.  2012.  The  effect  of chitosan  hydrogen  bonding  on  lactose  crytallinity  during spray  drying.  J  Food  Eng  108:  541-548.  DOI:  10.1016/ j.jfoodeng.2011.09.011.
Tonon RV, Brabet C, Hubinger MD. 2010. Anthocyanin stability and  antioxidant  activity  of  spray  dried  acai  ( Euterpe oleracea Mart.) juice produced with different carrier agents. Food  Res  Int  43:  907–914.  DOI:  10.1016/j.foodres. 2009.12.013.
Weiss  J,  Decker  EA,  McClements  DJ,  Kristbergsson  K,
Helgason  T,  Awad  T.  2008.  Solid  lipid  nanoparticles  as delivery  system  for  bioactive  food  components.  Food Biophys 3: 146-154. DOI: 10.1007/s11483-008-9065-8.
Yuliana  S,  Desmawarni,  Harimurti  N,  Yuliani  SS.  2007.
Pengaruh laju alir umpan dan suhu inlet spray drying pada karakteristik  mikrokapsul  oleoresin  jahe.  J  Pascapanen  4: 18-26.
Zuidan  NJ,  Nedovic  VA  2010.  Encapsulation  Technologies  for Food Ingredients and Food Processing. Springer, New York. Zuraida  I,  Sukarno,  Budijanto  S.  2011.  Antibacterial  activity  of coconut  shell  liquid  smoke  (CS-LS)  and  its  application  on fish ball preservation. Int Food Res J 18: 405-410.