EKSTRAKSI MINYAK ESENSIAL BUNGA KAMBOJA PUTIH ( Plumeria obtusa ) DENGAN CO 2 SUPERKRITIK: PENGARUH TEMPERATUR DAN TEKANAN
EXTRACTION OF WHITE FRANGIPANI FLOWERS (Plumeria obtusa) BY SUPERCRITICAL CO 2 :

## THE EFFECT OF TEMPERATURE AND PRESSURE
Arabella Febiola Armani dan Ratna Frida Susanti *)
Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknologi Industri, Universitas Katolik Parahyangan Jln. Ciumbuleuit No. 94, Bandung, Indonesia, 40141 E-mail: santi@unpar.ac.id
Makalah: Diterima 31 Mei 2023; Diperbaiki 31 Juli 2023; Disetujui 24 Agustus 2023

## ABSTRACT
Plumeria obtusa frangipani flowers grow across Indonesia abundantly and are frequently used in Hindu religious ceremonies. However, fallen and used frangipani flowers could potentially cause an immense amount of flower waste on the ground and water. A preliminary study on the processing of the fresh flowers into essential oils  by  supercritical  CO 2 extraction  had  been  done,  however  an  evaluation  of  the  extraction  conditions (temperature and pressure) of P. obtusa has not yet performed. This work investigated the effect of extraction’s pressure (100 and 300 bar) and temperature (40 and 60 o C) to the essential oil’s yield and composition. The result showed that the high pressure of 300 bar and low temperature of 40 o C gives the highest yield (0,736%) with 36 compounds identified. Among them, 81% of their biological and pharmacological activities and benefits had been reported  (antibacterial,  antifungal,  aromatic  compound,  antioxidant,  antimicrobial,  anti-inflammatory).  The identification of composition of the flower essential oils showed that olean-12-ene, 3-methoxy-, (3β) (35,12%) was found  only  at  300  bar  and  40 o C.  This  result  confirmed  that  supercritical  CO 2 extraction  was  more  specific  in extracting volatile compounds from essential oils.
Keywords : supercritical carbon dioxide, essential oil, oil yield, volatile compounds, Plumeria obtusa

## ABSTRAK
Bunga kamboja Plumeria obtusa banyak tumbuh di Indonesia dengan jumlah yang melimpah dan banyak digunakan  dalam  peribadatan  agama  Hindu.  Akan  tetapi  bunga  yang  berjatuhan  dan  bunga  sisa  peribadatan berpotensi menimbulkan limbah. Penelitian awal mengenai pengolahan bunga ini menjadi minyak esensial dengan ekstraksi CO 2 superkritik telah  dilakukan, namun  evaluasi kondisi  ekstraksi  (temperatur  dan tekanan) terhadap minyak P. obtusa belum dilakukan. Penelitian ini mempelajari variasi tekanan (100, 300 bar) dan temperatur (40, 60 o C)  ekstraksi  terhadap yield dan  komposisi  minyak  yang  dihasilkan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa tekanan tinggi 300 bar dan temperatur rendah 40 o C memberikan yield tertinggi (0,736%). Variasi kondisi tersebut menghasilkan  jumlah  senyawa  teridentifikasi  terbanyak,  yaitu  36  senyawa  dengan  81%  telah  dilaporkan manfaatnya  (antibakteri, antifungal ,  senyawa  aroma,  antioksidan,  antimikroba,  anti-inflamasi).  Identifikasi senyawa  minyak  esensial  bunga menunjukkan  bahwa  senyawa olean-12-ene, 3-methoxy-,  (3β) (35,12%) hanya ditemukan pada kondisi 300 bar, 40 o C. Hal ini menunjukkan bahwa ekstraksi CO 2 superkritik lebih spesifik dalam mengambil senyawa volatil dari minyak esensial.
Kata kunci : karbon dioksida superkritik, minyak esensial, yield minyak, senyawa volatil, Plumeria obtusa

## PENDAHULUAN
Bunga  kamboja  dikenal  dengan  aromanya yang  wangi  dan  khas  dan  secara  komersil  telah digunakan secara luas sebagai bahan baku pembuatan parfum, kosmetik, industri kerajinan dupa, aromaterapi,  dan  lainnya.  Pada  tahun  2017, berdasarkan  data  ekspor  produk  hortikultura  untuk bunga  kamboja  dan  melati,  Indonesia  telah mengekspor  1.067  ton  bunga  ke  negara  Kamboja, Vietnam,  Thaila nd,  China,  dan  Singapura (Kementerian  Pertanian  Republik  Indonesia,  2018). Lalu pada bulan Maret 2020, dilaporkan bahwa data ekspor bunga kamboja ( Plumeria rubra dan Plumeria acuminata ) ke China dapat mencapai 24.000–40.000
ton (Export Genius, 2023). Ketersediaan bunga yang melimpah tersebut perlu diimbangi dengan pengolahan  sumber  daya  yang  lebih  tepat,  sehingga akan  meningkatkan  nilai  ekonominya.  Nilai  tambah bunga  kamboja  bisa  ditingkatkan  dengan  mengolah bunga kamboja menjadi minyak esensial (essential oil atau minyak atsiri) dengan cara ekstraksi.
Ekstraksi  karbon  dioksida  (CO 2 )  superkritik merupakan metode ekstraksi yang unggul dan ramah lingkungan  untuk  memperoleh  senyawa  bioaktif (flavonoid, minyak esensial, karotenoid, asam lemak, antioksidan,  pigmen,  aroma)  dari  bahan  alam dibandingkan  dengan  metode  ekstraksi  pelarut  dan metode  distilasi.  Metode  distilasi  memungkinkan terjadinya degradasi termal senyawa yang termolabil
Jurnal Teknologi Industri Pertanian 33 (2):170-180, Agustus 2023 DOI: https://doi.org/10.24961/j.tek.ind.pert.2023.33.2.170 ISSN: 0216-3160    EISSN: 2252-3901
*Penulis Korespondensi
akibat  penggunaan  temperatur  yang  cukup  tinggi, hidrolisis dan solubilisasi beberapa senyawa di dalam air  yang  dapat  mengubah  profil  rasa  dan  aroma minyak  esensial  yang  diekstraksi,  dan  perlu  proses lanjutan  untuk  menghilangkan air  (Xu et  al .,  2021). Metode  ekstraksi  pelarut  dapat  menyelesaikan beberapa  kelemahan  tersebut,  namun  adanya  residu pelarut  dalam  ekstrak  yang  diperoleh  menjadi  titik kelemahan  metode  ini  (Attokaran,  2017).  Kedua metode tersebut kurang ramah lingkungan dan dapat menghasilkan polusi tambahan karena menghasilkan pelarut kontaminan (Xu et al ., 2021).
Fluida superkritik memiliki sifat unik dimana densitasnya  dapat  menyerupai  cairan,  sedangkan difusivitasnya  menyerupai  gas.  Karakteristik  fluida superkritik  dapat  divariasikan  karena  densitasnya dapat  dikendalikan  dengan  perubahan  tekanan ataupun  temperatur  dalam  daerah  superkritik.  Sifat fluida  superkritik  yang  memiliki  difusivitas  tinggi, viskositas dan tegangan permukaan rendah, berkontribusi  dalam  meningkatkan  proses  transfer massa (Sunol et al ., 2019). Kemampuan ekstraksi dan solubilitas CO 2 superkritik terhadap suatu senyawa di antaranya bergantung pada polaritas senyawa tersebut karena  sifatnya  yang  nonpolar  seperti  pelarut n - heksana (Ahmad et al ., 2019), sehingga cocok untuk mengambil  senyawa-senyawa  yang  nonpolar  seperti minyak  esensial.  Keduanya  memiliki  konstanta dielektrik  yang  serupa,  yaitu  1,6  untuk  CO 2 superkritik (Klesper, 1980) dan 1,88 untuk n -heksana (Mopsik,  1967).  Akan  tetapi  penggunaan n -heksana sebagai pelarut untuk industri pangan dan obat-obatan dihindari karena memiliki dampak neurotoksik untuk manusia dan hewan (US EPA, 2005;  ECHA, 2023), termasuk  penyakit  Parkinson  (Canesi et  al .,  2003). Terdapat  juga  kasus  dimana  gejala  buta  warna ditemukan  pada  buruh  yang  terekspos n -heksana  di lingkungan  kerja  (Beckman et  al .,  2016), dan merusak  endokrin  pada  buruh  wanita  (dalam  usia reproduktif)  yang  bekerja  di  pabrik  sepatu  kulit (Ruiz-García et  al .,  2020).  Selain  itu,  residu n - heksana  juga  berpotensi  sebagai  karsinogen,  yang seringkali  ditemukan  pada  ekstrak  minyak  sayur setelah  proses  ekstraksi  menggunakan Food  Grade Hexane (FGH) (Emmandi et al ., 2014). CO 2 superkritik merupakan fluida superkritik yang paling sering digunakan dalam industri pangan dan farmasi karena tidak beracun, tidak meninggalkan residu, reaktivitas rendah, tidak mudah terbakar,  mudah  didapatkan,  dapat  digunakan kembali  ( reusable )  (Khaw et  al .,  2017),  memiliki efisiensi  tinggi,  waktu  proses  yang  cepat,  hemat energi  (Asl et  al .,  2020),  dan  telah  disetujui  oleh United  States  Food  and  Drug  Administration dan European Food Safety Authority sebagai pelarut yang aman dan food grade (Ahmad et al ., 2019). Parameter kritik  dari  CO 2 superkritik  juga  relatif  rendah  dan mudah  dicapai  (31,3 o C  dan  72,9  bar),  yang membuatnya  cocok  untuk  ekstraksi  senyawa termolabil  dengan  degradasi  minimal  (Cunha et  al .,
2018). Selain itu, karena proses transportnya mudah dan  tidak  memerlukan  tekanan  maupun  temperatur tinggi, CO 2 superkritik menjadi opsi yang murah dan aman  dibandingkan  fluida  superkritik  lainnya. Metode  ekstraksi  dengan  CO 2 superkritik  telah diaplikasikan untuk berbagai industri herbal, rempah, tumbuhan  aromatik,  dan  obat-obatan  (Uwineza  dan Waśkiewicz, 2020).
Metode  ekstraksi  CO 2 superkritik  jarang ditemui  dan  digunakan  sebagai  metode  ekstraksi bunga  kamboja  pada  penelitian  –  penelitian  yang ditemukan.  Zhang et  al .  (2016)  meneliti  komposisi minyak  esensial  dari  bunga  kamboja P.  rubra dari China,  di mana  ekstraksi minyak  esensial  dilakukan dengan  metode  ekstraksi  CO 2 superkritik,  namun dengan  informasi  yang  sangat  terbatas  (tidak  ada keterangan  mengenai  proses  ekstraksi  maupun kondisi  operasi  yang  dilakukan).  Dari  penelitian tersebut  hanya  diketahui  bahwa  terdapat  sekitar  31 senyawa teridentifikasi pada minyak esensial tersebut dengan  komponen  terbesar  (±)-trans  nerolidol, hexadecanoic  acid , tetradecanoic  acid , β-linalool , octadecanoic acid , dan cis- linoleic acid . Kami telah melakukan  studi  awal  ekstraksi  minyak  esensial bunga kamboja P. obtusa segar dengan membandingkan  metode  ekstraksi  CO 2 superkritik dan  metode  konvensional  ekstraksi  pelarut  ( n - heksana)  terhadap  komposisi  ekstrak  (Armani  dan Susanti, 2022). Hasil penelitian tersebut menunjukkan  bahwa  ekstraksi  CO 2 superkritik menghasilkan yield ekstraksi  sebesar  1,27%-wb (9,23%-db)  dan  65  senyawa  teridentifikasi  dengan 87%  sudah  dilaporkan  manfaatnya.  Penelitian tersebut  memberikan  kesimpulan  bahwa  ekstraksi CO 2 superkritik  lebih  spesifik  di  dalam  mengambil senyawa  volatil  dari  minyak  esensial.  Penelitian sebelumnya  menggunakan  kondisi  operasi  yang ditetapkan, yaitu pada tekanan 300 bar dan temperatur 40 o C dengan bahan baku berupa bunga kamboja yang segar. Sedangkan pada penelitian ini, ingin dievaluasi pengaruh  kondisi  operasi  (temperatur  dan  tekanan) terhadap  minyak esensial P. obtusa yang dihasilkan. Tekanan operasi divariasikan pada 100 dan 300 bar, sedangkan temperatur divariasikan pada 40 dan 60  C. Bahan  baku  yang  digunakan  adalah  bunga  kamboja yang  sudah  dikeringkan.    Pengeringan  bahan  baku bertujuan untuk menjaga kadar air bahan baku sama karena berdasarkan studi sebelumnya kadar air bunga segar  bervariasi  (Armani  dan  Susanti,  2022). Keberadaan  air  dimungkinkan  akan  mempengaruhi kepolaran  karbon  dioksida  superkritik  yang  bersifat nonpolar.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bunga  kamboja  putih  ( P.  obtusa )  yang diperoleh dari area pemakaman di daerah Jawa Barat, Indonesia  digunakan  sebagai  bahan  baku.  Karbon dioksida  cair  (CO 2 ,  99,8%,  CV.  Sangkuriang,
Indonesia)  digunakan  sebagai  pelarut  pada  ekstraksi fluida  superkritik.  Sebelumnya  bahan  baku  bunga kamboja disiapkan dan dibersihkan seperti yang telah dilaporkan  sebelumnya  oleh  Armani  dan  Susanti (2022).

## Metode

## Pengeringan Bahan Baku (Persiapan Ekstraksi)
Metode  pengambilan  dan  pemilihan  bahan baku mengikuti metode yang dilaporkan sebelumnya oleh  Armani  dan  Susanti  (2022).  Pengeringan dilakukan pada alat tray dryer dengan spesifikasi arus 1  Ampere,  tegangan  220  volt,  kecepatan  putar  300 rpm,  diameter blower sebesar  2  inci,  dan  laju  alir udara  12,3  m/s.  Kelopak  bunga  kamboja  diletakkan pada tray secara sejajar, kemudian tray ditimbang dan dicatat  massanya. Tray dimasukkan  ke  dalam tray dryer untuk  dilakukan  proses  pengeringan  pada temperatur  45 o C. Tray berisi  sampel  tersebut ditimbang beratnya setiap beberapa menit – beberapa jam  sekali  dan  dicatat  massanya.  Kemudian pengukuran  kadar  air  dilakukan  pada  sampel  bunga setelah  beberapa  jam  pengeringan  berlangsung. Pengeringan  dihentikan  saat  berat tray yang  berisi bunga  kamboja  sudah  mulai  konstan  dan  kadar  air yang terukur < 10%. Bunga kamboja kering diangkat dari tray dan  dihancurkan  dengan blender hingga diperoleh  bubuk  bunga  kamboja.  Bubuk  bunga kemudian diayak pada ukuran -30+40 mesh (  0,425 mm) dan disimpan dalam wadah plastik disertai silica gel ( foodgrade ) hingga proses ekstraksi.
Ekstraksi CO 2 Superkritik
Ekstraksi  CO 2 superkritik  dilakukan  dengan menggunakan  apparatus  dan  metode  yang  sudah dilaporkan  oleh  Armani  dan  Susanti  (2022).  Pada penelitian  ini,  jumlah  bahan  baku  yang  digunakan lebih banyak dibanding penelitian sebelumnya, yaitu ±17 g karena bulk density bunga kering lebih rendah daripada  bunga  segar.  Bubuk  bunga P.  obtusa diekstraksi  dalam  reaktor  superkritik  dengan  CO 2 selama  3  jam pada  variasi  tekanan  100  dan  300  bar dan  variasi  temperatur  40  dan  60 o C,  laju  alir  CO 2 sebesar  21 mL/menit, dan  juga mode  operasi  statik- dinamik  setiap  15  menit.  Saat  ekstraksi  berakhir, ekstrak  yang  tertampung  dalam  botol  sampel ditimbang  untuk  dihitung yield -nya,  kemudian disimpan untuk analisis lebih lanjut.
Dalam penelitian ini, yield ekstrak didefinisikan  sebagai  rasio  massa  ekstrak  akhir terhadap massa bahan baku kering (tanpa kandungan air) atau disajikan dalam basis kering (%- dry basis ). Penyajian  data yield basis  kering  bertujuan  untuk mengetahui yield bahan  baku murni tanpa  pengaruh kadar air.
Yield (%) = massa ekstrak minyak esensial (gr) massa bahan baku bunga awal (gr) −massa air (gr) × 100%
(1)

## Karakterisasi
Analisis kadar air dilakukan untuk mengetahui kadar air awal bunga kamboja yang akan diekstraksi menggunakan moisture  analyzer (Halogen  Moisture Analyzer  HE53,  Mettler  Toledo,  US).  Analisis tersebut mengaplikasikan prinsip analisa termogravimetri dan memanfaatkan lampu inframerah atau halogen sebagai sumber panas yang menguapkan air dalam bahan. Untuk mengidentifikasi  senyawa  pada  ekstrak  minyak esensial  bunga  kamboja  digunakan  analisis  dengan Gas  Chromatography-Mass  Spectrometry (GC-MS, Agilent  7890B  (GC),  US)  yang  memiliki  kolom Agilent 19091S-433 (US): 93,92873 DB-5MS UI, 5% phenyl  methyl  siloxane,  dimensi  30  m  x  250  µm  x 0,25  µm.  Tipe  detektor  yang  digunakan  yaitu Mass Selective Detector (5977A), dan injector autosampler (Agilent, 7693A, autoinjector G4513A). Temperatur awal proses yang digunakan yaitu 40 o C dengan hold time selama 1 menit, dan temperatur post run sebesar 300 o C. Volume injeksi yang digunakan sebesar 1 µL dan  gas carrier berupa  helium  dengan  laju  alir  1 mL/menit. Instrumen GC-MS memisahkan campuran kimia  (peran  GC)  dan  mengidentifikasi  komponen– komponen  pada  tingkat  molekuler  (peran  MS) (Sharma, 2022).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh  Tekanan  dan  Temperatur  Ekstraksi terhadap Yield Minyak Esensial P. obtusa Gambar  1  menunjukkan  grafik yield ekstrak minyak  esensial P.  obtusa dari  hasil ekstraksi  CO 2 superkritik  pada  dua  variasi  tekanan  (100  dan  300 bar)  dan  dua  variasi  temperatur  (40  dan  60 o C). Tekanan  300  bar  dipilih  sebagai  tekanan  tertinggi karena  tekanan  tersebut  adalah  tekanan  maksimum yang  bisa  dicapai  alat.  Sedangkan  kondisi  tekanan 100 bar adalah tekanan sedikit diatas titik kritik CO 2 . Temperatur  60  C dipilih sebagai temperatur maksimal untuk mengantisipasi kerusakan komponen minyak atsiri (Che Sulaiman et al ., 2017). Sedangkan temperatur  40  C  dipilih  karena  sedikit  diatas temperatur kritik CO 2 .
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  diperoleh (Gambar 1 dan Tabel 1), ditemukan bahwa kenaikan tekanan ekstraksi dapat menyebabkan meningkatnya yield ekstraksi  pada  temperatur  konstan. Yield tertinggi diperoleh pada tekanan 300 bar untuk kedua kondisi temperatur (0,736% pada 40 o C; 0,507% pada 60 o C).  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena  densitas pelarut  meningkat  drastis  ~1,5-3  kali  lipat  seiring dengan  kenaikan  tekanan  pada  temperatur  konstan (Tabel 1) (Lemmon et al ., 2023). Densitas yang tinggi dapat  mempengaruhi  kekuatan  pelarut  CO 2 yang kemudian  memberikan  solubilitas  dan  selektivitas yang  tinggi  terhadap  minyak  (Perakis et  al .,  2005). Selektivitas  terhadap  senyawa  target  tersebut  dapat dicapai oleh CO 2 superkritik dengan memvariasikan tekanan  dan/atau  temperatur  ekstraksi  (Khaw et  al .,
2017).  Kecenderungan  hasil  ini  diperoleh  pula  oleh Liza et  al .  (2012)  pada  ekstraksi  CO 2 superkritik terhadap  tumbuhan  pecah  kaca,  dimana yield ekstraksi  semakin  meningkat  dari  2,8%  dan  2,9% menjadi  3,5%  dan  4,4%  seiring  naiknya  tekanan ekstraksi  dari  100 menjadi  300  bar pada  temperatur konstan (40 dan 60 o C berturut – turut). Hasil serupa juga dijumpai oleh Dohai (2012) pada ekstraksi CO 2 superkritik  bunga  Henna,  dimana  yield  meningkat dari 18,29% dan 23,3% menjadi 21,66% dan 30,88% seiring dengan meningkatnya tekanan dari 80 menjadi 120  bar  pada  temperatur  konstan  (35  dan  45 o C). Seiring densitas meningkat akibat kenaikan tekanan, jarak  antar  molekul  menjadi  berkurang  sehingga interaksi  antara  analit  dan  CO 2 meningkat,  yang menyebabkan  solubilitas  analit  dalam  CO 2 semakin besar (Castro et al ., 1994). Peningkatan tekanan dapat meningkatkan transfer massa analit dan pelarut dalam reaktor superkritik dan meningkatkan yield ekstraksi. Densitas  merupakan  parameter  penting  yang mempengaruhi kekuatan pelarut (Cunha et al ., 2018) dan  menyebabkan  peningkatan  efisiensi  ekstraksi (Salajegheh et  al .,  2013)  serta  mempengaruhi komposisi minyak menjadi lebih kompleks (Petrović et al ., 2007).
Selain  tekanan  ekstraksi,  kondisi  temperatur ekstraksi pun merupakan parameter yang mempengaruhi yield ekstraksi  CO 2 superkritik.  Dari hasil  penelitian  ditemukan  bahwa  pada  tekanan ekstraksi  yang  sama,  kenaikan  temperatur  ekstraksi dapat menyebabkan penurunan yield ekstraksi (Tabel
1 dan Gambar 1). Yield ekstraksi tertinggi pada kedua kondisi  tekanan  diperoleh  pada  temperatur  40 o C (0,515% pada tekanan 100 bar; 0,736% pada tekanan 300  bar).  Hal  ini  disebabkan  karena  kenaikan temperatur  dapat  menyebabkan  penurunan  densitas dan  kekuatan  pelarut  CO 2 superkritik,  sehingga kemampuan  CO 2 untuk  mengekstrak  senyawa (solubilitas  analit)  berkurang  (Liu et  al .,  2021). Kekuatan  pelarut  CO 2 superkritik  dipengaruhi densitas  (dimana nilainya  berkebalikan  dengan nilai temperatur)  dan  tekanan  uap  zat  terlarut/ solute (dimana  nilainya  sebanding  dengan  temperatur). Kecenderungan  hasil  ini  diperoleh  pula  pada penelitian  yang  dilakukan  oleh  Correa et  al .  (2018), dimana yield tertinggi  pada  ekstraksi  minyak  biji anggur  diperoleh  pada  temperatur  paling  rendah (10,5%  pada  40 o C).  Sedangkan  pada  temperatur paling  tinggi  (60 o C),  nilai yield berkurang  menjadi 8,7%.
Temperatur  ekstraksi  yang  lebih  tinggi  juga dapat  berpotensi  menyebabkan  senyawa–senyawa yang termolabil dapat terdekomposisi (Pieczykolan et al .,  2019).  CO 2 memiliki  temperatur  kritik  yang rendah  (31,1 o C  mendekati  temperatur  ruang), sehingga  kondisi  operasi  untuk  ekstraksi  zat termolabil tidak memerlukan nilai yang tinggi. Hal ini menjadi  keuntungan  karena  zat–zat  yang  terdapat pada  minyak  tidak  berubah  dan  rusak/terdegradasi karena menggunakan temperatur yang relatif rendah pada proses ekstraksi (Cunha et al ., 2018).
Gambar 1. Yield ekstraksi pada berbagai variasi kondisi tekanan dan temperatur
Tabel 1. Yield ekstraksi pada berbagai variasi kondisi tekanan dan temperatur
Yield Ekstraksi (%-db*) Densitas CO 2 (kg/m 3 )
(Lemmon et al ., 2023) 100 bar 40 o C 0,515 628,61 60 o C 0,254 289,95 300 bar 40 o C 0,736 909,89 60 o C 0,507 829,71
* %- dry basis (persentase yield ekstrak dalam basis kering)
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 100 300 Y ie ld Ek str a k si (% ) Tekanan  Ekstraksi  (bar) 40 ºC 60 ºC
Temperatur  yang  disarankan  pada  ekstraksi fluida superkritik senyawa termolabil yaitu 35-60 o C untuk  menghindari  degradasi.  Rentang  kondisi temperatur  tersebut  merupakan  rentang  nilai  yang sering  dipakai  pula  untuk  sistem  ekstraksi  dimana CO 2 berada  dalam  fasa  superkritiknya  (Reverchon dan De Marco, 2006). Pada penelitian yang dilakukan oleh  Hossain et  al .  (2013),  peningkatan  temperatur ekstraksi  ditemukan  menjadi  penyebab  turunnya kandungan  senyawa  bioaktif  dalam  daun Thymus vulgaris (terdekomposisi). Hasil serupa dijumpai oleh Akowuah et  al .  (2009)  terhadap  daun Gynura procumbens .
Sehingga bila meninjau hasil ekstraksi dengan variasi kondisi operasi pada penelitian ini, diperoleh bahwa  kondisi  tekanan  yang  tinggi  (300  bar)  dan temperatur rendah (40 o C) memberikan yield ekstraksi maksimum  untuk  minyak  esensial  bunga  kamboja kering.    Nilai yield ekstrak P.  obtusa kering  yang rendah  (<  1%)  pada  penelitian  ini  dapat  disebabkan karena masih terdapat ekstrak yang tertinggal di pipa ataupun back pressure regulator (BPR) (Gambar 1, Armani dan Susanti, 2022) maupun tidak efektifnya pemisahan  di  separator  yang  menghambat  aliran keluarnya ekstrak. Ekstrak yang larut di karbondioksida  superkritik  perlu  didorong  keluar ( flushing )  dengan  laju  karbondioksida  yang  besar, akan tetapi keterbatasan laju alir pompa HPLC yang digunakan  menjadi  salah  satu  hambatan.  Selain  itu
perlu  desain  separator  yang  memadai  sehingga pemisahan gas dan ekstrak lebih efektif. Oleh karena itu,  penulis  juga  menyarankan  beberapa  hal  seperti yang disebutkan pada bagian Saran.
Komposisi  Senyawa  Minyak  Esensial  Bunga Kamboja P. obtusa Kering Berdasarkan  analisis  GC-MS  yang  telah dilakukan, pada temperatur 40 o C terdapat sekitar 18 senyawa yang teridentifikasi dan diketahui manfaatnya  dari  ekstraksi  CO 2 superkritik  pada tekanan  100  bar.  Sedangkan  pada  tekanan  300  bar, terdapat  sekitar  36  senyawa  yang  teridentifikasi dengan 81% senyawa diketahui manfaatnya. Namun, dari 18 dan 36 senyawa yang terekstrak pada tekanan 100  dan 300 bar tersebut, hanya sebanyak 15 dan 20 senyawa  (berturut–turut)  yang  memiliki  komposisi yang  cukup  tinggi  (%  area  >  1%).  Pada  temperatur 60 o C  (100  bar)  terdapat  sekitar  23  senyawa  yang teridentifikasi dengan 87% telah diketahui manfaatnya.  Sedangkan  pada  tekanan  300  bar, terdapat  sekitar  28  senyawa  yang  teridentifikasi dengan 89% senyawa diketahui manfaatnya. Namun, dari 23 dan 28 senyawa tersebut, hanya sebanyak 11 (100  bar)  dan  22  senyawa  (300  bar)  yang  memiliki komposisi  yang  cukup  tinggi  (%  area  >  1%). Kromatogram  untuk  ekstrak  bunga P.  obtusa yang diperoleh dapat diamati pada Gambar 2 dan Gambar 3.
Gambar 2. Kromatogram GC-MS minyak esensial bunga P. obtusa dengan ekstraksi CO 2 superkritik pada (a) 100 bar, 40 o C dan (b) 100 bar, 60 o C
Gambar 3. Kromatogram GC-MS minyak esensial bunga P. obtusa dengan ekstraksi CO 2 superkritik pada (a) 300 bar, 40 o C dan (b) 300 bar, 60 o C A B A B
Bila  meninjau  %  area  dari  masing–masing senyawa  di  atas  1%,  komposisi  ekstrak  terlihat bervariasi  pada  kondisi  operasi  yang  berbeda. Terdapat  beberapa  senyawa  yang  spesifik  hanya ditemukan di masing–masing kondisi ekstraksi, yang menunjukkan bahwa masing–masing kondisi operasi selektif  dalam  mengekstrak  senyawa  sehingga masing–masing  ekstrak  memiliki  kualitas  berbeda. Hal  ini  dapat  berkaitan  dengan  perbedaan  sifat kepolaran CO 2 di berbagai kondisi operasi. Parameter kepolaran  suatu  pelarut  dapat  ditunjukkan  dengan konstanta  dielektrik.  CO 2 memiliki  konstanta dielektrik  rendah  (1,6)  dan  sesuai  menjadi  pelarut yang dapat mengekstrak senyawa nonpolar (Klesper, 1980).  Konstanta  dielektrik  fluida  superkritik dipengaruhi  oleh  densitas  dan  tekanannya.  Semakin tinggi tekanan dan densitas, maka konstanta dielektik CO 2 superkritik  semakin  meningkat  (Castro et  al ., 1994). Peningkatan tekanan dari 100 ke 300 bar pada temperatur  konstan  dapat  meningkatkan  konstanta
dielektrik  CO 2 menjadi  dua  kali  lipatnya,  walaupun nilainya masih berada di bawah 5, yang mana masih bersifat  nonpolar  (Brown et  al .,  2012).  Namun, kenaikan konstanta dielektrik tersebut dapat berkontribusi  pada  perbedaan  senyawa–senyawa yang terekstrak di berbagai kondisi operasi ekstraksi. Masing–masing  kondisi  operasi  memiliki  keunikan senyawa  masing–masing  dengan  potensi  manfaat tertentu.  Beberapa  senyawa  dengan  %  area  terbesar pada tiap variasi kondisi operasi beserta manfaatnya dapat diamati pada Tabel 2.
Selain  dari  keunikan  tiap  kondisi  ekstraksi yang spesifik dapat mengekstraksi senyawa tertentu, terdapat  juga  beberapa  senyawa  yang  umum ditemukan  pada  seluruh  kondisi  ekstraksi,  di antaranya eicosane , docosane ,  dan heneicosane (Tabel 3). Ketiganya memiliki potensi manfaat yang sama,  yaitu  sebagai  antimikroba  (Otieno,  2016; Chuah et al ., 2018; Lammers et al ., 2021).
Tabel 2. Senyawa spesifik terbesar tiap kondisi operasi beserta manfaatnya
Nama Senyawa % Area Potensi Manfaat 100 bar, 40 o C 9-Nonadecene 9,24 Antimikroba, antifungal (Pauline dan Sagaya, 2016) Thymol, TMS derivative 6,88 Antioksidan, antimalaria, antimikroba, antivirus, antifungal , anti-karsinogenik (Martinez-Correa, 2017) 1,1,1,3,5,5,5- Heptamethyltrisiloxane 3,19 Antimikroba, antibakteri, antivirus, antibiotik, antiparasit, anti-jerawat (Mereen dan Diaz, 2020) 100 bar, 60 o C Lup-20(29)-en-3-ol, acetate, (3.beta.)- 43,37 Anti-inflamasi (Kadhim et al ., 2016), antifungal , antitermites (Prayitno et al ., 2020) alpha-Amyrin 22,11 Antimikroba, antibakteri, anti-inflamasi, antioksidan, obat untuk diabetes (Santos et al ., 2012) 9,19-Cyclolanostan-3-ol, 24- methylene-, (3.beta.)- 4,11 Antioksidan (Tanaka et al ., 2013); bahan aktif obat – obatan (Malathi et al ., 2016)
300 bar, 40 o C Olean-12-ene, 3-methoxy-, (3.beta.)- 35,12 Antibakteri, antifungal (Jacob et al ., 2005)
7,9-Di-tert-butyl-1- oxaspiro(4,5)deca-2,8-dione 1,34 Senyawa aroma (Taskin, 2013); antioksidan (Chandrasekar et al ., 2015); antimikroba (Arora dan Kumar, 2017); antibakteri (Monisha dan Vimala, 2018) Plumericin 1,14 Antibakteri, antiproliferatif terhadap sel kanker (Saengsai et al ., 2015); antiparasit (Leishmania)
(Sharma et al ., 2011); anti-inflamasi, antioksidan (Rapa et al ., 2021)
300 bar, 60 o C Octadecane 6,41 Antibakteri (Nguyen et al ., 2017) 1-Hexacosene 1,89 Anti-inflamasi (Sahu dan Singh, 2022) Hexadecane 1,73 Antioksidan, antibakteri (Yogeswari et al ., 2012)
Tabel 3. Senyawa – senyawa yang umum ditemukan di seluruh kondisi ekstraksi
Nama Senyawa 100 bar, 40 o C 100 bar, 60 o C 300 bar, 40 o C 300 bar, 60 o C RT (menit) %Area RT (menit) %Area RT (menit) %Area RT (menit) %Area Eicosane 27,491 9,08 20,244 0,05 21,996 1,61 22,866 8,97 Docosane 22,109 1,75 22,059 0,09 23,483 1,4 23,483 0,87 Heneicosane 21,227 2,71 21,177 0,00 22,866 2,81 21,101 2,85
Berdasarkan literatur yang ditemukan mengenai kuantifikasi komponen dari hasil kromatogram,  untuk  kasus  tertentu  seperti  minyak esensial  seringkali  digunakan  metode  konsentrasi relatif yang berkaitan dengan area total dari puncak – puncak  yang terdeteksi.  Hal ini  dikarenakan  adanya kemiripan faktor reaksi yang dimiliki oleh komponen utama  seperti  golongan terpene (Chamorro et  al ., 2012).  Metode  area  relatif  menghasilkan  persentase hubungan  antara  area  dari  masing  –  masing komponen  terhadap total  area  kromatogram.  Hal  ini dapat dinyatakan dalam Persamaan 2.
% relatif komponen = area komponen total area × 100% (2)
Namun, selain menggunakan metode ini, perlu adanya  konfirmasi  lebih  lanjut  dimana  kuantifikasi komponen dapat menggunakan internal standard dan kurva kalibrasi. Pada pembahasan penelitian ini, nilai %  relatif  komponen  disajikan  pula  dalam  bentuk istilah  %  area  dengan  maksud  yang  sama.  Bila meninjau  dari  nilai  %  relatif  komponen,  masing– masing kondisi ekstraksi memiliki komponen tertentu yang  memberikan  %  relatif  terbesar.  Komponen terbesar dari tiap kondisi ekstraksi dapat diamati pada Tabel  4. Squalene merupakan  komponen  dengan  % relatif terbesar pada kondisi ekstraksi 100 bar (40 o C) dan  300  bar  (60 o C). Squalene dapat ditemukan  juga pada  kondisi  300  bar  (40 o C)  dengan  %  relatif komponen  6,39%,  sedangkan  pada  kondisi  100  bar (60 o C)  tidak  ditemukan. Squalene merupakan  salah satu  bahan  yang  akhir–akhir  ini  banyak  ditemukan pada  produk  perawatan  kulit  karena  berpotensi sebagai emollient (untuk  kelembapan  kulit)  dan antioksidan  (Huang et  al .,  2009).  Untuk  senyawa lainnya  merupakan  komponen  terbesar  di  masing  – masing  kondisi  dan  hanya  spesifik  ditemukan  pada kondisi tersebut.

## Perbandingan  Hasil  Ekstraksi  Bunga  Kamboja Segar dan Kering
Pada  kondisi  operasi  yang  sama,  diperoleh bahwa  bunga  segar  memberikan yield ekstrak  yang lebih besar (9,634%-db) dibandingkan bunga kering (0,736%-db), seperti dapat diamati pada Tabel 5. Hal
ini  dapat  disebabkan  karena  kadar  air  bunga  segar yang digunakan pada ekstraksi lebih tinggi (86,82%) dibandingkan bunga kering (6,32%).
Berdasarkan  literatur,  transfer  massa  zat terlarut  dalam  fasa  padat  dapat  dipengaruhi  oleh perbedaan  kadar  air.  Kandungan  air  dapat  menjadi hambatan  difusi  CO 2 superkritik  dan  zat  yang terekstrak pada sampel tersebut karena kandungan air pada sampel dapat bersaing dengan zat terlarut yang ingin  diekstraksi  untuk  kontak  dengan  pelarut  dan menurunkan yield ekstraksi (Uwineza dan Waśkiewicz,  2020).  Namun,  hal  sebaliknya  dapat terjadi pula, dimana kandungan air dapat meningkatkan  kinetika  ekstraksi  dan yield ekstrak (Ivanovic et  al .,  2011).  Air  dapat  berperan  sebagai modifier (kopelarut) sehingga meningkatkan polaritas CO 2 superkritik, membantu  proses  ekstraksi  dengan membuka pori–pori, mengembangkan matriks tumbuhan  ( swelling ),  dan memudahkan akses  fluida superkritik terhadap analit (Yousefi et al ., 2019). Yield ekstrak bunga kering yang lebih rendah dibandingkan  bunga  basah  dimungkinkan  karena fluida  superkritik  yang  bersifat  nonpolar  (konstanta dielektrik  ~2),  lebih  spesifik  di  dalam  mengambil senyawa  yang  nonpolar.  Tingginya  kadar  air  pada bunga  segar  akan  sedikit  banyak  mempengaruhi kepolaran  fluida  superkritik  yang  masuk  ke  matriks padatan.  Berdasarkan  hasil  analisis  GC-MS  jumlah senyawa  yang  terekstrak  dari  bunga  kamboja  segar lebih banyak (65 senyawa, 87% manfaat dilaporkan) dibandingkan  bunga  kamboja  kering  (36  senyawa, 80% manfaat dilaporkan). Selain itu, yield yang lebih rendah  bisa  juga  disebabkan  oleh  adanya  beberapa senyawa yang terdegradasi terlebih dahulu dari proses pengeringan (45 o C dalam jangka waktu yang cukup lama,  ±8  jam).  Perbandingan  hasil  ekstraksi  CO 2 superkritik  bunga  kamboja  terhadap  studi  penelitian sebelumnya telah dilaporkan oleh Armani dan Susanti (2022).  Hanya  saja  sebagai  catatan,  kondisi  bahan baku pada penelitian pembanding terbatas pada bunga kamboja segar saja. Selain itu, sebagian besar metode ekstraksi menggunakan metode konvensional (hanya satu literatur dilaporkan menggunakan CO 2 superkritik), dengan informasi kondisi ekstraksi yang terbatas.
Tabel 4. Senyawa – senyawa dengan % relatif komponen terbesar pada masing – masing kondisi ekstraksi
Tekanan Ekstraksi Temperatur Ekstraksi % Relatif Komponen Nama Senyawa 100 bar 40 o C 24,02 Squalene 60 o C 43,37 Lup-20(29)-en-3-ol, acetate, (3.beta.)- 22,11 alpha-Amyrin 300 bar 40 o C 35,12 Olean-12-ene, 3-methoxy-, (3.beta.)- 60 o C 12,09 Squalene
Tabel 5. Hasil ekstraksi minyak esensial bunga kamboja segar dan kering
Kondisi Bahan Baku Kondisi Operasi Kadar Air Bahan (%) Yield Ekstrak (%) %-wb a %-db b Bunga kamboja segar (Armani dan Susanti, 2022) 300 bar, 40 o C 86,82 1,270 9,634 Bunga kamboja kering 6,32 0,692 0,736 a %- wet basis (persentase yield ekstrak dalam basis basah) b %- dry basis (persentase yield ekstrak dalam basis kering

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Ekstraksi  CO 2 superkritik  terhadap  minyak esensial  bunga  kamboja P.  obtusa dengan  tekanan operasi  yang  tinggi  (300  bar)  menghasilkan yield ekstrak  yang  lebih  besar  (0,736%  dan  0,507%)  dan komposisi  senyawa  yang  lebih  banyak  (36  dan  28 senyawa). Hal ini dikarenakan kenaikan tekanan dapat meningkatkan  densitas  pelarut  sehingga  kekuatan pelarut  meningkat  menyebabkan  efisiensi  ekstraksi dan  komposisi  minyak  menjadi  lebih  kompleks. Temperatur operasi yang rendah (40 o C) menghasilkan yield ekstrak  yang  lebih  besar  (0,515%  dan  0,736%) dan  komposisi  senyawa  yang  selektif  pada  masing– masing kondisi tekanan, karena temperatur tinggi dapat menurunkan  densitas  dan  kekuatan  pelarut,  sehingga kemampuan  CO 2 untuk  mengekstrak  senyawa berkurang. Hal ini menunjukkan bahwa ekstraksi CO 2 superkritik dapat mengekstrak senyawa target spesifik dengan  mengatur  kondisi  tekanan  (300  bar)  dan temperaturnya (40 o C). Berdasarkan senyawa–senyawa yang teridentifikasi, minyak esensial bunga kamboja P. obtusa memiliki  potensi  untuk  diaplikasikan  sebagai aromaterapi  dan  juga  bahan  penunjang  pada  produk kecantikan.

## Saran
Proses  pembersihan  dan  optimasi  rangkaian reaktor superkritik perlu dilakukan untuk memaksimalkan  proses  ekstraksi  dan  memastikan tidak ada ekstrak yang tertinggal dalam pipa dan bagian alat.  Selain  itu,  desain separator pun  perlu  dilihat kembali agar lebih optimal dalam memperoleh ekstrak yang diinginkan.
Penelitian  lebih  lanjut  perlu  dilakukan  seperti melakukan  berbagai  percobaan  pada  tahap pre- treatment untuk dapat mengetahui kondisi yang dapat menghasilkan  sampel  bahan  baku  yang  optimal sebelum  dilakukan  ekstraksi.  Pengujian  potensi senyawa yang teridentifikasi seperti khasiat antibakteri,  antioksidan,  dan  sebagainya  perlu dilakukan pula untuk mengkonfirmasi dan membuktikan manfaat tersebut secara kuantitatif.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad T, Masoodi FA, Rather AS, Wani SM, Gull
A.  2019.  Supercritical  fluid  extraction:  a review. Journal  of  Biological  and  Chemical Chronicles. 5(1): 114–122.
Akowuah  GA,  Mariam  A,  dan  Chin  JH.  2009.  The effect  of  extraction  temperature  on  total phenols  and  antioxidant  activity  of  Gynura procumbens  leaf. Pharmacognosy  Magazine . 5(17): 81-85.
Armani  AF  dan  Susanti  RF.  2022.  Study  awal ekstraksi  minyak  esensial  bunga  kamboja putih  (Plumeria  obtusa)  segar:  Perbandingan pengaruh metode ekstraksi terhadap
komposisi  ekstrak.  Jurnal  Teknologi  Industri Pertanian. 32(3): 283-294.
Arora  S  dan  Kumar  G.  2017.  Gas  chromatography- mass spectrometry (GC-MS) determination of bioactive constituents from the methanolic and ethyl  acetate  extract  of  Cenchrus  setigerus Vahl  (Poaceae).  The  Pharma  Innovation Journal. 6(11): 635-640.
Asl PJ, Niazmand R, dan Yahyavi F. 2020. Extraction of phytosterols and tocopherols from rapeseed oil waste by supercritical CO2 plus co-solvent: A  comparison  with  conventional  solvent extraction. Heliyon. 6(3): 1-8.
Attokaran  M.  2017. Natural  Food  Flavors  and Colorants. 2nd  ed.  Chicago:  John  Wiley  & Sons, Ltd.
Beckman  S,  Eisen  EA,  Bates  MN,  Liu  S,
Haegerstrom-Portnoy G, Hammond SK. 2016. Acquired  color  vision  defects  and  hexane exposure:  a  study  of  san  francisco  bay  area automotive  mechanics. American  Journal  of Epidemiology . 183(11): 969-976.
Brown WH, Iverson BL, Anslyn E, Foote CS. 2012. Organic Chemistry . 6th ed. Belmont: Brooks- Cole Cengage Learning.
Canesi M, Perbellini L, Maestri L, Silvani A, Zecca
L, Bet L, Pezzoli G. 2003. Poor metabolization of n-hexane in Parkinson’s disease. Journal of Neurology . 250(5): 556-560.
Castro  MDL,  Variance  M,  dan  Tena  MT.  1994.
Analytical Supercritical Fluid Extraction . 1st Ed. Springer Verlag: Germany.
Chamorro  ER,  Zambón  SN,  Morales  WG,  Sequeira AF, Velasco GA. 2012. Study of the chemical composition  of  essential  oils  by  gas chromatography.  Di  dalam  Salih  B  dan Çelikbiçak  Ö  (ed.),  Gas  Chromatography  in Plant  Science,  Wine  Technology  and  Some Spesific  Applications.  Rijeka:  InTech.  P307- 324.
Chandrasekar  T,  Rao  MRK,  Kumar  RV,  Prabhu  K, Kumar SN, Divya D. 2015. GC-MS analysis, antimicrobial,  antioxidant  activity  of  an
Aryuvedic medicine, Nimbapatradi Choornam. Journal of Chemical and Pharmaceutical Research. 7(8): 124-136.
Che Sulaiman IS, Basri M, Masoumi HRF, Chee WJ,
Ashari  SE,  Ismail  M.  2017.  Effects  of temperature,  time,  and  solvent  ratio  on  the extraction  of  phenolic  compounds  and  the anti-radical  activity  of  Clinacanthus  nutans Lindau leaves by response surface methodology. Chemistry  Central  Journal . 11(54): 1-11.
Chuah XQ, Okechukwu PN, Amini F, Teo SW . 2018. Eicosane, pentadecane, and palmitic acid: the effects in in vitro wound healing studies. Asian Pacific  Journal  of  Tropical  Biomedicine . 8(10): 490-499.
Correa  DA,  Castillo  PM,  dan  Martelo  RJ.  2018.
Effect  of  the  process  parameters  on  the  oil extraction  yield  during  supercritical  fluid extraction  from  grape  seed. Contemporary Engineering Sciences . 11(13): 611-617. Cunha  VMB,  Silva  MP,  Costa  WA,  Oliveira  MS, Bezerra  FWF,  Melo  AC,  Pinto  RHH, Machado  NT,  Araujo  ME,  Carvalho  Jr.  RN. 2018.  Carbon  dioxide  use  in  high-pressure extraction processes. Di dalam Karamé I (ed.), Carbon Dioxide Chemistry, Capture, and Oil Recovery . London: IntechOpen. P211-240.
Dohai BSM. 2012. Supercritical CO 2 extraction of oil from Henna flower: Experimental, mathematical  modeling,  and  antioxidant activity.  [Disertasi].  Al  Ain:  United  Arab Emirates University.
ECHA.  “N-hexane”. European  Chemicals  Agency
(ECHA) , 25 April 2023, https://echa.europa.eu/fr/registration-dossier/-
/registered-dossier/15741/7/1 . Diakses pada 2 Mei 2023.
Emmandi R, Sastry MIS,  dan Patel MB. 2014. Low level  detection  of  benzene  in  food  grade hexane  by  ultraviolet  spectrophotometry. Food Chemistry . 161: 181-184.
Export Genius. “Plumeria Export Data of Indonesia”.
Export Genius , 2020, https://www.exportgenius.in/export- data/indonesia/plumeria.php . Diakses pada 25 April 2023.
Hossain  MA,  Al-Mijizy  ZH,  Al-Rashdi  KK,  Weli AM, Al-Riyami Q. 2013. Effect of temperature  and  extraction  process  on antioxidant  activity  of  various  leaves  crude extracts  of Thymus  vulgaris . J.  Coast  Life Med . 1(2): 118-122.
Huang  ZR,  Lin  YK,  Fang  JY.  2009.  Biological  and pharmacological  activities  of  squalene  and related compounds: Potential uses in cosmetic dermatology. Molecules . 14(1): 540-554.
Ivanovic J, Ristic M, dan Skala D. 2011. Supercritical
CO 2 extraction  of Helichrysum  italicum : Influence of CO 2 density and moisture content of  plant  material. Journal  of  Supercritical Fluids. 57: 129-136.
Jacob  J,  Disnar  JR,  Boussafir  M,  Abuquerque  ALS, Sifeddine  A,  Turcq  B.  2005.  Pentacyclic triterpene  methyl  ethers  in  recent  lacustrine sediments  (Lagoa  da  Caçó,  Brazil). Organic Geochemistry . 36: 449-461.
Kadhim MJ, Sosa AA, Hameed IH. 2016. Evaluation of  anti-bacterial  activity  and  bioactive chemical analysis of Ocimum basilicum using Fourier  transform  infrared  (FT-IR)  and  gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) techniques. Journal  of  Pharmacognosy  and Phytotherapy . 8(6): 127-146.
Kementerian Pertanian Republik Indonesia. “Ekspor Buah, Sayuran, dan Bunga Indonesia Tembus
29 Negara”. Kementerian Pertanian Republik Indonnesia , 20 Maret 2018, https://www.pertanian.go.id/home/?show=ne ws&act=view&id=1967 .  Diakses  pada  26 September 2022.
Khaw KY, Parat MO,  Shaw PN, Falconer JR. 2017. Solvent  supercritical  fluid  technologies  to extract  bioactive  compounds  from  natural sources: A review. Molecules . 22(7): 1186. Klesper E. 1980. Chromatography with Supercritical Fluids,  dalam Extraction  with  Supercritical Gases , Schneider G. M. et al . Verlag Chemie, Weinheim, Germany: Verlag Chemie.
Lammers A, Zweers H, Sandfeld T, Bilde T, Garbeva P,  Schramm  A,  Lalk  M.  2021.  Antimicrobial compounds in the volatilome of social spider communities. Frontiers in Microbiology . 12: 700693.
Lemmon  EW,  Bell  IH,  Huber  ML,  McLinden  MO. Thermophysical  Properties  of  Fluid  Systems. Di dalam Linstrom PJ dan Mallard WG (eds.),
NIST  Chemistry  WebBook,  NIST  Standard Reference Database Number 69 . Gaithersburg:  National  Institute  of  Standards and Technology.
https://webbook.nist.gov/cgi/fluid.cgi?ID=C1 24389&Action=Page . Diakses pada 16 Januari 2023.
Liu H, Zhan R, Wen L, Zhong Z. 2021. The extraction of  natural  essential  oils  and  terpenoids  from plants  by  supercritical  fluid. E3S  Web  of Conferences  (ICEPE  2021) .  Dali,  China.  21- 23 Mei 2021.
Liza MS, Abdul RR, Mandana B, Jinap S, Rahmat A, Zaidul  ISM,  Hamid  A.  2012.  Supercritical fluid  extraction  of  bioactive  flavonoid  from Strobilanthes  crispus (pecah  kaca)  and  its comparison with solvent extraction. International  Food  Research  Journal .  19(2):
504-508.
Malathi K, Anbarasu A, dan Ramaiah S. 2015. Ethyl iso-allocholate from a medicinal rice Karungkavuni inhibits dihydripteroate
synthase  in Escherichia  coli :  A  molecular docking  and  dynamics  study. Indian  Journal of Pharmaceutical Sciences . 78(6): 780-788. Martinez-Correa  HA,  Paula  JT,  Kayano  ACAV, Queiroga  CL,  Magalhães  PM,  Costa  FTM, Cabral FA. 2017. Composition and antimalarial  activity  of  extracts  of Curcuma longa L.  obtained  by  a  combination  of extraction  processes  using  supercritical  CO2, ethanol  and  water  as  solvents. Journal  of Supercritical Fluids . 119: 122-129.
Mereen JE dan Diaz JHJ. 2020. GC-MS analysis and anti-inflammatory activity of Murex Tribulus .
International  Journal  of  Pharmaceutical Sciences and Research . 11(12): 6184-6188.
Monisha  SI  dan  Vimala  JR.  2018.  Extraction, identification and pharmacological evaluation
of  phyto-active  compound  in Manilkara hexandra ( Roxb .) dubard stem bark.
Biosciences  Biotechnology  Research  Asia . 15(3): 687-698.
Mopsik FI. 1967. Dielectric constant of n-hexane as a function of temperature, pressure, and density. Journal of Research of the National Bureau of
Standards . Section A, Physics and Chemistry , 71A(4): 287-292.
Nguyen  HT,  Ho  DV,  Vo  HQ,  Le  AT,  Nguyen  HM,
Kodama  T,  Ito  T,  Morita  H,  Raal  A.  2017.
Antibacterial activities of chemical
constituents from the aerial parts of Hedyotis pilulifera . Pharmaceutical  Biology .  55(1): 787-791.
Otieno  AJ.  2016.  Antimicrobial  Activity  and Phytochemical Profiles of Warbugia Ugandensis  Sprague  (Canellaceace)  Extracts from Different Populations across the Kenyan Rift Valley. Ph.D. Thesis Kenyatta University, Nairobi, Kenya.
Pauline FMA dan Sagaya GR. 2016. Phytochemical screening  and  GC-MS  analysis  in  ethanolic leaf  extracts  of Ageratum  conyzoides (L.). World  Journal  of  Pharmaceutical  Research . 5(7): 1019-1029.
Perakis C, Louli V, Magoulas K. 2005. Supercritical Fluid Extraction of Black Pepper Oil. Journal of Food Engineering . 71: 386-393. Petrović  L,  Lepojević  Z,  Sovilj  V,  Adamović  D, Tešvić  V.  2007.  An  investigation  of  CO 2 extraction  of  marigold  ( Calendula  officinalis L.). Journal of the Serbian Chemical Society . 72(4): 407-413.
Pieczykolan,  Aleksandra et  al .  2019.  Effects  of Supercritical Carbon Dioxide Extraction (SC-
CO2)  on  the  Content  of  Tiliroside  in  the Extracts  from Tilia L.  flowers. Open Chemistry . 17(1): 302-312.
Prayitno TA, Widyorini R, dan Lukmandaru G. 2020. Chmeical variation of five natural extracts by non-polar solvent. Maderas-Cienc y Tecnologia . 23(1): 1-12.
Rapa SF, Paola RD, Cordaro M, Siracusa R, D’Amico R, Fusco R, Autore G, Vuzzocrea S, Stuppner H,  Marzocco  S.  2021.  Plumericin  protects against experimental inflammatory disease by restoring  intestinal  barrier  function  and reducing apoptosis. Biomedicines . 9(67): 1-16. Reverchon  E  dan  De  Marco  I.  2006.  Supercritical fluid  extraction  and  fractionation  of  natural matter. Journal Supercritical Fluids . 38: 146- 166.
Ruiz-García  L,  Figueroa-Vega  N,  Malacara  JM, Barrón-Vivanco  B,  Salamon  F,  Carrieri  M, Jiménez-Garza  O.  2020.  Possible  role  of  n- hexane  as  an  endocrine  disruptor  in occupationally exposed women at reproductive age. Toxicology Letters . 330: 73- 79.
Saengsai  J,  Kongtunjanphuk  S,  Yoswatthana  N, Kummalue  T,  Jiratchariyakul  W.  2015. Antibacterial and antiproliferative activities of plumericin, an iridoid isolated from Momordica  charantia vine. Evidence-Based Complementary  and  Alternative  Medicine .
823178.
Sahu MK dan Singh G. 2022. Structural identification through  GC  mass  spectrophotometer  and determine  anti  lithiotic  activity  of Hibiscus rosa sinensis by using ethylene glycol induced method. Journal of Medicinal Pharmaceutical and Allied Sciences . 11(1): 4244-4249. Salajegheh  D,  Vazir,  IA,  dan  Bastani  D.  2013.
Supercritical Extraction of Cocoa Butter from Cocoa  Seed  Using  Pure  Carbon  Dioxide, Carbion Dioxide with Ethanol as Co-Solvent, and Ethane. Middle-East Journal of Scientific Research . 13(8): 1010-1015.
Santos  FA,  Frota  JT,  Arruda  BR,  Melo  TS,  Silva AACA, Brito GA, Chaves MH, Rao VS. 2012. Antihyperglycemic and hypolipidemic effects of 𝛼, 𝛽 amyrin,  a  triterpenoid  mixture  from Protium  heptaphyllum in  mice. Lipids  in Health and Diseases . 11(98): 1-8.
Sharma U, Singh D, Kumar P, Dobhal MP, Singh S. 2011.  Antiparasitic  activity  of  plumericin  & isoplumericin isolated from Plumeria bicolor against Leishmania donovani . Indian Journal of Medical Research . 134(5): 709-716.
Sunol  AK,  Sunol  SG,  dan  Cogswell  K.  2019.
Supercritical  solvents.  Di  dalam  Substitution of solvents by safer products and processes. Di dalam  Wypych  G.  (ed.). Handbook  of Solvents .  3 rd ed.  Toronto:  Chem  Tec Publishing. P1455-1634.
Tanaka  M,  Nomaguchi  K,  dan  Ehara  T.  2013.
Antioxidant. US Patent No: US8470807 B2.
Taskin  H.  2013.  Detection  of  volatile  aroma compounds  of Morchella by  headspace  gas chromatography  mass  spectrometry  (HS- GC/MS).
Notulae Botanicae
Horti
Agrobotanici Cluj-Napoca . 41(1): 122-125. US EPA. “Toxicological Review of n -Hexane”. U.S. Environmental Protection Agency , November 2005,
https://cfpub.epa.gov/ncea/iris2/chemicalLan ding.cfm?substance_nmbr=486 . Diakses pada 2 Mei 2023.
Uwineza  PA  dan  Waśkiewicz  A.  2020.  Recent advances  in  supercritical  fluid  extraction  of natural  bioactive  compounds  from  natural plant materials. Molecules . 25(17): 3847.
Xu L, Zhan X, Zeng Z, Chen R, Li H, Xie T, Wang S.
2021.  Recent  advances  on  supercritical  fluid extraction  of  essential  oils. International Journal  of  Pharmacy  and  Pharmacology . 10(1): 1-16.
Yogeswari  S,  Ramalakshmi  S,  Neelavathy  R, Muthumary  J.  2012.  Identification  and
comparative  studies  of  different  volatile fractions  from Monochaetia  kansensis by GCMS. Global  Journal  of  Pharmacology . 6(2): 65-71.
Yousefi M, Rahimi-Nasrabadi M, Pourmortazavi SM, Wysokowski  M,  Jesiorowski  T,  Ehrlich  H, Mirsadeghi  S.  2019.  Supercritical  fluid
extraction  of  essential  oils. Trends  in Analytical Chemistry . 118: 182-193.
Zhang  S,  Dong  J,  dan  Cheng  H.  2016.Essential  oil composition of the flowers of Plumeria rubra cv. acutifolia from  China. Chemistry  of Natural Compounds . 52 (1): 154-162.