## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI Vibrio sp
DARI IKAN KERAPU SUNU ( Plectropomus leopardus )
Ar. Syarif Hidayat*
*) Dosen Pada Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi
UIN Alauddin Makassar
Email : Syarif_bio@yahoo.com
Abstract: This  research  about  the  isolation  and  identification  Vibrio sp  from  sunu  grouper  fish  (Plectropomus  leopardus).  This  research aimed  to  observe  the  amount  of  vibrio  bacteria  species  based  on colony  morphology  and  identificate  morphological  colony  of  vibrio isolated  from  grouper  sunu  fish  (Plectropomus  leopardus).  Bacteria isolation was conducted by isolate some external organs (lesion on its body)  and  internal  organ  (jejenum)  from  grouper  sunu  fish (Plectropomus  leopardus).  Bacteria  was  grown  on  selective  medium for  vibrio,  TCBS  (Thiosulfate  Citrate  Bile  Sucrose)  agar.  The incubation time  was 24 hours at 30 C then the morphological colony was  observed  and  biochemestry  test  was  done.  Morphology characteristic and biochemistry test result was matched with bacterial characteristic  on  Bargey’s  Manual  of  Determinative  Bacteriology. The result showed there are 3  isolate vibrio  bacteria  that  was  coded by V1, V2, V3. V1 morphological characteristis was rounded,  edge is entire, convex elevation, green colony colour with blue in the center of colony  and  smooth  tekstur.  Based  on  biochemistry  test  V1  was indetificated  as  Vibrio  parahaemolyticus.  V2  morphological characteristic  was  rounded,  edge  is  entire,  tortous  elevation,  colony colour  yellow  and  smooth  tekstur.  based  on  the  biochemistry  tes  V2 was indentificated as  Vibrio harveyi. Morphological characteristic of V3  was  Irregular;  egde  is  Undulate,  elevation  hill,  colony  colour yellow and own the smooth tekstur. Based on biochemistry test V3 was identificated as Vibrio alginolyticus .
Key  words: Isolation,  Identification,  Vibrio,  Kerapu  Sunu  (Plectropomus leopardus).

## I. PENDAHULUAN
eranan  budidaya pantai  dewasa  ini  semakin  meningkat  sejalan  dengan besarnya  potensi    pengembangannya  baik  sumber  daya  lahan  maupun jenis  komoditas.  Ikan  kerapu  tersebar  luas  di  perairan  pantai  baik  di daerah tropis  maupun  sub tropis, dan termasuk jenis  ikan  yang hidup di  perairan P
210 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 2, Juli  2014 , hlm. 209 – 216
berkarang sehingga sering dikenal sebagai ikan karang ( coral reef  fish). Beberapa jenis  ikan  kerapu  yang  banyak  terdapat  di  Indonesia  sebagai  komoditi  andalan untuk  dibudidayakan  antara  lain  ikan  kerapu  bebek  atau  tikus  ( Cromileptes altivelis ),  kerapu  macan  ( Epinephelus  maculatus ),  kerapu  sunu  ( Plectropomus leopardus ),  kerapu  lumpur  ( Epinephelus  coioides ),  kerapu  malabar  ( Epinephelus malabaricus ), dan kerapu bintik atau batik ( Epinephelus bleekeri ). Hal ini karena selain memiliki nilai jual yang tinggi juga dalam proses produksinya lebih banyak memanfaatkan sumber daya laut yang ada baik dengan menggunakan kapal dalam proses penangkapan ataupun yang dibudidayakan (Aslianti, 2006).
Kerapu  sunu  ( P.  leopardus )  merupakan  komoditas  ekspor  yang  harganya cukup  tinggi.  Dua  jenis  ikan  kerapu  yang  berharga  tinggi  dan  terdapat  di Indonesia  yaitu Plectropomus leopardus (Leopard corraltrout) dan Plectropomus maculatus (Barred  cheek  corral  trout).  Harga  jenis  Leopardus  hidup  dilaporkan mencapai Rp 40.000,00 per kg (Sudradjat, 2008).
Penyakit  infeksi  bakteri  gram  negatif  merupakan  penyakit  utama  pada kerapu sunu ( P. leopardus ). Gejala akibat serangan penyakit ini, diantaranya ikan tidak  mau  makan  dan  lemah,  berenang  di  permukaan,  menyendiri,  serta  adanya luka di permukaan tubuh. Bakteri genus Vibrio dapat menyebabkan penyakit pada ikan  kerapu  sunu,  seperti  pembusukan  pada  sirip,  borok  pada  bagian  tubuh  dan mulut  merah.  Penyakit  selalu  muncul  sebagai  proses  dinamis  akibat  tidak seimbangnya  hubungan  antara  inang  ( host ),  jasad  penyakit  ( patogen ),  serta lingkungan (Sarono et al. 1993).
Adanya  kecenderungan Vibrio dalam  menyerang  ikan  kerapu  sunu  ( P. leopardus ), maka penulis tertarik untuk melakukan penelitian dengan judul isolasi dan identifikasi bakteri Vibrio dari ikan kerapu Sunu ( P. leopardus ).

## II. TINJAUAN PUSTAKA
Vibrio adalah  genus  bakteri  gram  negatif,  sel  tunggal    berbentuk  batang pendek yang bengkok (koma), berukuran panjang 1,4 – 5,0 µm dan lebar 0,3 – 1,3 µm,  bersifat  motil  dan  mempunyai  flagel  polar  dan  secara  khas  ditemukan  pada air  laut. Vibrio bersifat  anaerob  fakultatif,  yaitu  dapat  hidup  baik  dengan  atau tanpa  oksigen.  Semua  anggota  jenis Vibrio adalah  motil  (bergerak)  dan mempunyai kutub flagella dengan sarung pelindung (Michel J. Pelczar, 1986).
Penyakit  infeksi  bakteri  gram  negatif  merupakan  penyakit  utama  pada kerapu sunu ( P. leopardus ). Gejala akibat serangan penyakit ini, diantaranya ikan
Ar. Syarif Hidayat , Isolasi dan Identifikasi Bakteri Vibrio sp dari Ikan Kerapu Sunu …_ 211
tidak  mau  makan  dan  lemah,  berenang  di  permukaan,  menyendiri,  serta  adanya luka di permukaan tubuh. Bakteri genus Vibrio dapat menyebabkan penyakit pada ikan kerapu sunu, seperti pembusukan pada sirip, borok pada bagian tubuh, mulut merah. Gejala Ikan yang terserang bakteri Vibrio diantaranya ikan sering berenang dipermukaan  air  dan  terlihat  terengah-engah,  kurang  nafsu  makan,  selalu menyendiri,  lendir  berkurang  tidak  merata,  serta  adanya  luka  dipermukaan  kulit. Penyakit tersebut pada akhirnya dapat menyebabkan kematian (Sudradjat, 2008).
Terdapat  3  jenis  bakteri Vibrio yang  penting  yang  diketahui  dapat menyerang ikan kerapu, yakni Vibrio alginolyticus dan Vibrio parahaemolyticus, serta Vibrio  harveyi . Ketiga  bakteri  ini  dan  berapa  strain  lain telah dapat diisolasikan dari ikan kerapu yang sakit (Agus, 2002).

## Tujuan Penelitian
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menentukan  keberadaan  bakteri Vibrio sp yang diisolasi pada ikan kerapu sunu ( Plectropomus leopardus ).

## III. METODOLOGI PENELITIAN

## A. Jenis  Penelitian
Jenis  penelitian  ini  menggunakan  metode  observational  deskriptif  dengan melakukan  isolasi  dan  identifikasi  bakteri Vibrio  sp pada  ikan  kerapu  sunu  ( P. leopardus ).

## B. Populasi dan Sampel
Sampel  penelitian  yaitu  ikan  kerapu  sunu  ( P.  leopardus )  yang  kemudian dibedah secara aseptis untuk mengambil kulit (borok pada badan) dan organ usus.

## C. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Vibrio sp
Organ badan dan usus  ikan  yang   telah dimbil direndam  ke dalam cawan petri  yang  sebelumnya  telah  diisi  dengan  larutan  PBS  ( Phosfat  Buffer  Saline ), Setelah  10  menit  kemudian  dikeringkan  di  atas  kertas  saring.  Masing-masing organ  tersebut  digerus  kemudian  dikultur  dengan  media Alkali  Peptone  Water (APW) diinkubasi  suhu 37 O C  selama 6-8 jam dilanjutkan dengan penanaman di media Thiosulfate  Citrate  Bile  Salt  Sucrose (TCBS)  yang  inkubasi  pada  suhu 37 O C  selama 24 jam.
212 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 2, Juli  2014 , hlm. 209 – 216
Pengamatan  yang  dilakukan  secara  langsung  diidentifikasi  (secara morfologi)  antara  lain:  pengamatan  bentuk  sel,  warna  koloni,  ukuran  koloni  dan tipe  koloni,  elevasi,  dan  tekstur  koloni.  Selain  itu,  dengan  pewarnaan  gram kemudian  dilanjutkan  proses  identifikasi  menggunakan  media  diferensial  dalam hal  ini media Triple Sugar Iron Agar (TSIA) serta serangkaian tes biokimia: (uji Katalase,  uji  Oksidase,  uji  Metil  Red,  motil,  Glukosa,  sukrosa,  dan  H 2 S).   Hasil dari  karakteristik  morfologi  dan  pengujian  sifat  biokimia  kemudian  dicocokkan dengan  karakter  bakteri  yang  terdapat  dalam Bargey’s  Manual  of  Determinative Bacteriology.

## IV. HASIL PENELITIAN
Hasil  isolasi  bakteri Vibrio dari  ikan  kerapu  sunu  ( P.  leopardus )  pada organ  kulit  (borok  pada  badan)  dan  organ  usus,  dapat  dilihat  pada  tabel  1  di bawah ini:
Tabel 1. Keberadaan koloni bakteri Vibrio pada organ yang diisolasi No Kode Isolat Koloni Bakteri Pada Organ Badan Usus 1 V1 Ada Tidak ada 2 V2 Tidak ada Ada 3 V3 Tidak ada Ada
Perbedaan bentuk koloni dapat dari ketiga isolat dapat dilihat pada tabel 2 di bawah ini:
Tabel 2. Karakteristik morfologi koloni bakteri Vibrio yang diisolasi dari ikan kerapu sunu ( P. leopardus ). Kode isolat Karakteristik Koloni Pada Lempeng Agar Medium TCBS Agar Bentuk Tepi Elevasi Warna Tekstu r V1 Bulat Rata Mencembung Hijau, biru pada tengah koloni Halus V2 Bulat Rata Melengkung Kuning Halus V3 Tak beraturan Berombak Membukit Kuning Halus
Ar. Syarif Hidayat , Isolasi dan Identifikasi Bakteri Vibrio sp dari Ikan Kerapu Sunu …_ 213
Setelah  melalui  media  TCBS,  sampel  kemudian  melalui  prosedur pengecatan  gram  dan  uji  biokimia.  Adapun  hasil  dari  pengecatan  gram  dan  uji biokimia dapat dilihat pada tebel 3 dan 4 berikut:
Tabel 3. Interpretasi hasil pengecatan Gram pada isolat No Kode Isolat Warna Koloni Gram Keterangan 1 V1 Hijau Gram Negatif Bentuk batang koma 2 V2 Kuning Gram Negatif Bentuk batang koma 3 V3 Kuning Gram Negatif Bentuk batang Tabel 4. Interpretasi hasil uji biokimia No Kode Isolat Motil  Oksidase  Katalase Metil Red Glukosa  Sukrosa  H 2 S 1 V1 + + + - + + + 2 V2 + + + + + - - 3 V3 + + + + + - +

## V. PEMBAHASAN
Ikan  kerapu  sunu  ( P.  leopardus )  yang  digunakan  untuk  penelitian  adalah ikan  yang  terlihat  adanya  gejala  serangan  dari  bakterial.  Hasil  isolasi  bakteri Vibrio  sp dari    ikan  kerapu  sunu  ( P.  leopardus )  yang  diisolasi  pada  badan  dan usus ditemukan tiga  isolat bakteri Vibrio yang diberi  kode  isolat dengan V1, V2 dan  V3.  Isolat  V1  ditemukan  di  organ  badan,  sedangkan  pada  organ  usus  tidak ditemukan.  Isolat  V2  ditemukan  di  organ  usus  tetapi  tidak  ditemukan  di  organ badan.  Sedangkan  untuk  isolat  V3  ditemukan  di  organ  usus  namun  tidak ditemukan pada organ badan.
Hasil  karakterisasi  dan  identifikasi  dari  ke  tiga  isolat  (V1,  V2,  dan  V3) adalah sebagai berikut:

## A. Isolat V1
Berdasarkan  hasil  dari  karakteristik  morfologi  koloni  bakteri,  isolat  V1 memiliki  bentuk bulat dengan tepi  yang rata, elevasi (bentuk permukaan  koloni) mencembung,  berwarna  hijau  dan  pada  tengah  koloni  berwarna  biru  serta memiliki tekstur yang halus. Koloni V1 berwarna hijau pada media TCBS karena sangat  jarang  memfermentasi  sukrosa  sehingga  warna  koloni  nampak  berwarna
214 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 2, Juli  2014 , hlm. 209 – 216
hijau  (Fardiaz,  1983).    Interpretasi  hasil  pengecatan  Gram  pada  isolat  V1;  Gram negatif dengan bentuk  koma. Sedangkan untuk hasil biokimianya adalah  sebagai beriku: uji  motil  yang dilakukan pada  isolat V1 adalah positif, hasil uji oksidase juga  positif.  Uji  oksidase  bertujuan  untuk  menentukan  bakteri  enterik  atau  non enterik. Uji katalase, glukosa,  H 2 S dan sukrosa positif sedangkan metil red adalah negatif.  Berdasarkan  hasil  tes  pengujian  karakteristik  morfologi  maupun pengujian  biokimia  dibandingkan  dengan Bargey’s  Manual  of  Determinative Bacteriology, ternyata  isolat  V1  diidentifikasi  sebagai  bakteri Vibrio parahaemolyticus. Bakteri V. Parahaemolyticus adalah bakteri gram negatif yang terdistribusi  di  perairan  pantai  tropis  seluruh  dunia  dan  menyebabkan gastroenteritis (De Paola, 1998).

## B. Isolat V2
Berdasarkan  hasil  dari  Karakteristik  morfologi  koloni  bakteri,  isolat  V2 memiliki  bentuk bulat dengan tepi  yang rata, elevasi (bentuk permukaan  koloni) melengkung,  berwarna  kuning  dengan  tekstur  yang  halus.  Koloni  V2  berwarna kuning  pada  media  TCBS  terjadi  ketika  bakteri  tersebut  memfermentasi  sukrosa menjadi asam (Fardiaz, 1983). Interpretasi hasil pengecatan Gram pada isolat V2; Gram  negatif  dengan  bentuk  koma.  Sedangkan  untuk  hasil  biokimianya  adalah sebagai beriku: uji motil  yang dilakukan pada  isolat V2 adalah positif.  Hasil uji oksidase,  katalase,  glukosa  juga  positif,  sedangkan  hasil  uji  sukrosa  dan  H 2 S negatif. Uji oksidase bertujuan untuk menentukan bakteri enterik atau non enterik. Berdasarkan  hasil  tes  pengujian  karakteristik  morfologi  maupun  pengujian biokimia  dibandingkan  dengan Bargey’s  Manual  of  Determinative  Bacteriology,
ternyata isolat V2 diidentifikasi sebagai bakteri Vibrio harveyi. Bakteri V. Harveyi merupakan  penyebab  utama  kematian  yang  tinggi  pada  ikan  kerapu  yang dipelihara di Taiwan pada tahun 1993 (Austin, 2007).

## C. Isolat V3
Berdasarkan  hasil  dari  Karakteristik  morfologi  koloni  bakteri,  isolat  V3 memiliki  bentuk  tak  beraturan  tepi  yang  berombak,  elevasi  (bentuk  permukaan koloni)  membukit,  berwarna  kuning  dengan  tekstur  yang  halus.  Koloni  V3 berwarna kuning pada media TCBS terjadi ketika bakteri tersebut memfermentasi sukrosa menjadi asam (Fardiaz, 1983).   Interpretasi hasil pengecatan Gram pada isolat  V3:  Gram  negatif  dengan  bentuk  batang.  Sedangkan  untuk  hasil biokimianya  adalah  sebagai  beriku:  uji  motil  yang  dilakukan  pada  isolat  V2
Ar. Syarif Hidayat , Isolasi dan Identifikasi Bakteri Vibrio sp dari Ikan Kerapu Sunu …_ 215
adalah  positif.    Hasil  uji  oksidase,  katalase,  metil  red  dan  H 2 S  juga  positif, sedangkan  hasil  uji  sukrosa  negatif.  Uji  oksidase  bertujuan  untuk  menentukan bakteri  enterik  atau  non  enterik.  Berdasarkan  hasil  tes  pengujian  karakteristik morfologi maupun pengujian biokimia dibandingkan dengan Bargey’s Manual of Determinative  Bacteriology, ternyata  isolat  V3  diidentifikasi  sebagai  bakteri Vibrio alginolytius.

## VI. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian didapat bahwa pada ikan kerapu sunu ( P. leopardus ) yang telah diisolasi ditemukan adanya 3 jenis  isolat berdasarkan morfologi koloni yang berbeda, yang masing-masing diberi kode isolat dengan V1, V2, dan V3.
Berdasarkan hasil dari  karakteristik morfologi dan uji biokimia  kemudian dibandingkan  dengan Bargey’s  Manual  of  Determinative  Bacteriology, ternyata isolat  V1  diidentifikasi  sebagai  bakteri Vibrio  parahaemolyticus, isolat  V2 diidentifikasi  sebagai  bakteri Vibrio  harveyi dan  isolat  V3  diidentifikasi  sebagai bakteri Vibrio alginolytius .

## Saran
Untuk  pengolahan  makanan  dari  ikan  segar  agar  memperhatikan  kondisi ikan  serta  cara  memasak  yang  baik  dan  benar.  Untuk  penelitian  selanjutnya disarankan  untuk  melakukan  penelitian  tentang  serotipe  bakteri Vibrio  sp serta deteksi gen spesifik penghasil toksin pada bakteri Vibrio sp.

## DAFTAR RUJUKAN
Ali, Alimuddin. Mikrobiologi Dasar Jilid 1. Cet. 1; Makassar: UNM Press, 2005.
Aslianti. Pemeliharaan  Larva  ikan  kerapu,  dengan  padat  tebar  yang  berbeda . Jakarta: jurnal penelitian perikanan Indonesia, 2006.
Austin, B and D.A. Austin. Bacterial and Fish Pathogens : Disease Farmed and Wild Fish. Germany: Praxis Publishing Ltd, 2007.
Campbell, Neil A, Reece, Jane B, Mitchell,  Lawrence G. Biology,  Fifth  Edition. Department  of  Botani  and  Plant  Science  University  of    California Riveside. 2003.
216 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 2, Juli  2014 , hlm. 209 – 216
De  Paola,  A,  C.A.  Kaysner,  and  B.  John. Enviromental  Investigation  of  Vibrio parahaemolitycus  in  Oyster  After  Outbreakes  in  Washington,  Texas  and New York. New York, 1998.
Fardiaz,  S. Keamanan  Pangan  Jilid  1. Bogor:  Institut  Pertanian  Bogor  Fakultas Teknologi Pertanian Jurusan Ilmu dan teknologi Pangan, 1983.
Michel  J.  Pelczar,  Jr  dan  E.C.S  Chan, Dasar-dasar  Mikrobiologi 1.  Jakarta:  UI Press, 1986.
Murtidjo,  Bambang    Agus. Budi  Daya  Kerapu  Dalam  Tambak. Cet.  5: Yogyakarta: Kanisus, 2002.
Sarono,  A,  Widodo,  dan  E.B.  Sri  Haryani. Deskripsi  Hama  dan  penyakit  Ikan Karantina  Golongan  Bakteri. Edisi  kedua.  Yogyakarta:  Pusat  karantina Pertanian dan Fakultas Pertanian Jurusan Perikanan UGM, 1993.
Sudradjat,  Achmad. Budi  daya  23  Komodititas  Laut  Menguntungkan. Cet.  1. Jakarta: Penebar Swadaya, 2008.
Yuasa, et al., eds., Panduan Diagnosa Penyakit Ikan. Balai Budidaya Air Tawar. Jambi: Ditjen Perikanan Budidaya, DKP dan JICA, 2003.