Pemaskulinan belut ( Monopterus albus Zuiew 1793) dengan induksi penghambat aromatase untuk penyediaan calon induk jantan
[Masculinization asian swamp eel ( Monopterus albus Zuiew 1793) with induction of aromatase inhibitors for the provision of male brood stock]
Hafif Syahputra 1,  , Agus Oman Sudrajat 2 , Dinar Tri Soelistyowati 2
1 Program Studi Ilmu Akuakultur, Sekolah Pascasarjana IPB Jln. Agatis, Kampus IPB Dramaga 16680
2 Departemen Budi Daya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB Jln. Agatis, Kampus IPB Dramaga 16680
Diterima: 15 Februari 2014; Disetujui: 3 Juni 2014

## Abstrak
Aromatase adalah enzim yang berperan mengubah testosteron dalam proses biosintesis hormon estrogen. Penghambat- an aromatase dapat menghentikan pembentukan estradiol pada pemaskulinan ikan. Penelitian ini bertujuan untuk meng- evaluasi  pengaruh  pemberian  hormon  penghambat  aromatase  melalui  penyuntikan  untuk  pemaskulinan  belut (Mono- pterus albus Zuiew 1793). Belut yang digunakan berukuran 24±2 cm dengan berat 6-14 g diberi perlakuan penyuntikan hormon penghambat aromatase yaitu imidazole dengan dosis 0,001; 0,01; 0,1 mg kg -1 bobot tubuh sekali tiap minggu sebanyak empat kali dan diamati gonadnya setiap dua minggu secara histologi serta dibandingkan dengan kontrol. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan hormon imidazole 0,1 mg kg -1 bobot tubuh menghasilkan 40% individu jan- tan pada minggu ke-6, sedangkan pada dosis yang lebih rendah menghasilkan 50-85,72% individu interseks, dan pada kontrol 100% betina. Konsentrasi testosteron plasma meningkat sejalan dengan peningkatan dosis imidazol. Konsentra- si testosteron plasma yang tertinggi mencapai 1,8 ng mL -1 pada perlakuan 0,1 mg kg -1 bobot tubuh atau meningkat tiga kali  lipat  dibandingkan  dengan  kontrol.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  hormon  penghambat  aromatase  menyebabkan ekspresi gen aromatase tertekan sehingga konsentrasi estradiol plasma menurun dan konsentrasi testosteron meningkat.
Kata penting: belut, estradiol, pemaskulinan, penghambat aromatase, testosteron

## Abstract
Aromatase is an enzyme that functions to change testosterone in the biosynthesis of estrogen. Inhibition of aromatase can  stop  the  synthesis  of  estradiole  in  masculinization  of  fish.  This  study  aimed  to  evaluate  the  effects  of  aromatase inhibitors by injection for masculinization of Asian swamp eel ( Monopterus albus Zuiew 1793). The samples of swamp eel consisted of individuals with 24±2 cm length and 6-14 grams/individual weight. The treatments of aromatase inhibi- tor using imidazole were conducted by injection at doses of 0.001; 0.01; 0.1 mg kg -1 once time a week for  four times and the gonad were observed using histology  method. The results showed that  the injection of imidazole 0.1 mg kg -1 week produced 40% males, while at the less doses were 50-85.72% intersexes, whereas in control was 100% females. The concentration of plasma testosterone inclined when the doses of imidazole increased. The highest concentration of testosterone reached to 1.8 ng mL -1 at dose of aromatase inhibitor 0.1 mg kg -1 or increased three times compared with the  control.  These  results  indicated  that  aromatase  inhibitor  suppressed  the  aromatase  gene  expression  that  leads  the decline of estradiol and increased testosterone.
Keywords: Asian swamp eel , aromatase inhibitor, testosterone, masculinization

## Pendahuluan
Belut  ( Monopterus  albus )  merupakan  sa- lah  satu  spesies  belut  asli  perairan  Indonesia yang  memiliki  prospek  pasar  cukup  baik.  Dua spesies belut lainnya adalah belut rawa ( Synbran- chus bengalensis ) dan belut laut ( Macrotema ca- ligans Cant). Pada tahun 2011 ekspor belut hidup
mencapai  2.068.680  kg  atau  meningkat  400% dibanding  tahun  2007  (Direktur  Jenderal  PPHP 2012). Tingginya permintaan  belut dipenuhi dari hasil  penangkapan  benih  dari  alam  yang  kemu- dian dibesarkan pada media lumpur. Penangkap- an yang terjadi secara terus menerus di alam akan memberikan  dampak  negatif  pada  ketersediaan belut,  baik  benih  maupun  induk  jantan  dan  be- tina.  Akibat  penangkapan  yang  terjadi  secara  te-
 Penulis korespondensi Alamat surel: hafifxavi@ymail.com
rus  menerus  jumlah  dan  ukuran  belut  yang  di- tangkap semakin kecil (Bahri 2000).
Proses  pemijahan  baik  di  alam  maupun buatan  sulit  terjadi  karena  belut  yang  berukuran kecil  adalah  betina.  Belut  tergolong  ikan  herma- frodit protogini  yaitu pada  awal  hidup  belut ber- jenis kelamin betina kemudian melalui fase inter- seks  akan  berubah  menjadi  jantan.  Beberapa  pe- nelitian (Chan & Phillips 1969 dan Affandi et al. 2003) melaporkan bahwa  belut  memulai pergan- tian  kelamin  ke arah jantan dimulai pada ukuran 30-45 cm. Dalam upaya pembenihan belut mela- lui  budi  daya  diperlukan  kepastian  calon  induk berjenis  kelamin  jantan  agar  proses  reproduksi dapat  terjadi.  Pemaskulinan  merupakan  solusi yang dapat dilakukan untuk mendapatkan kepas- tian kelamin jantan dan betina belut pada ukuran yang sama.
Pada  ikan  hermafrodit,  peranan  enzim aromatase  mengatur  pengarahan  kelamin  betina dan mempertahankan ovarium.  Enzim aromatase terlibat  pada  pergantian  kelamin  ikan  karena mengendalikan proses biosintesis hormon testos- teron  menjadi  estradiol  selama  masa  pergantian kelamin.  Peningkatan  estradiol  akan  mengarah- kan  fenotip  kelamin  betina,  dan  sebaliknya  jika aktivitas aromatase menurun maka terjadi pemas- kulinan.  Menurut  Zhang et  al. (2008),  terdapat korelasi antara aktivitas enzim aromatase dengan strukturasi  gonad  betina  pada  belut  yang  memi- liki aktivitas enzim aromatase tinggi  yaitu berje- nis  kelamin  betina,  sebaliknya  pada  tahap  per- gantian kelamin menjadi jantan jika aktivitas en- zim aromatase rendah. Rekayasa proses steroido- genesis  pada  masa  peralihan  kelamin  tersebut  b- isa dilakukan misalnya dengan menghambat ker- ja  enzim  aromatase  maka  dapat  memaskulinkan ikan hermafrodit protogini (Guiguen et al. 2010).
Penghambatan kerja enzim aromatase dapat dila- kukan dengan induksi fisik seperti suhu (Athauda
et  al. 2012)  maupun  senyawa  kimiawi  steroid dan  non  steroid  (Seralini  &  Moslemi  2001),  se- hingga  rasio  testosteron  terhadap  estradiol  me- ningkat dan mampu untuk mengarahkan kelamin belut menjadi jantan.
Penghambatan  aromatase  pernah  diteliti pada  beberapa  jenis  ikan  menggunakan  hormon aromatase  inhibitor (AI),  diantaranya  pada  ikan gonokoristik  melalui  pemberian  pakan  dengan dosis  100  µg/g  pakan  mampu  memaskulinkan ikan european  sea  bass (Navarro-Martin et  al.
2008),  dan  ikan  atlantik  halibut  (Babiak et  al . 2011); pada ikan hermafrodit protogini yaitu ikan
Coryphopterus  nicholsii (Kroon  &  Liley  2000),
Halichoeres trimaculatus (Nozu et al. 2009), dan Epinephelus  marginatus (Garcia et  al. 2013). Pada  ikan  hermafrodit  protandri  yaitu Acantho- pagrus  schlegeli yang  diberi  dosis  AI  0,1  µg  g -1 bobot  tubuh  selama  empat  minggu  dapat  mem- pertahankan  kondisi  kelamin  jantan  (Dufour et al. 2004).  Penelitian  ini  bertujuan  mengevaluasi pemberian  hormon  penghambat  aromatase  (AI) melalui  penyuntikan  untuk  pemaskulinan  belut (Monopterus albus Zuiew 1793).

## Bahan dan metode
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan September-Desember  2013  di  laboratorium  ko- lam  percobaan  Babakan,  Institut  Pertanian  Bo- gor.  Rancangan  percobaan  yang  digunakan  ada- lah  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  satu  faktor perlakuan dengan tiga ulangan individu. Perlaku- an  yang  diberikan  yaitu  penyuntikan  dengan  la- rutan NaCl 0,95% 1 ml sebagai control (A), dan tiga dosis imidazole sebagai hormon penghambat aromatase (AI) yaitu 0,001 mg (B); 0,01 mg (C); 0,1 mg (D) per kilogram bobot tubuh.
Belut  yang  digunakan  rata-rata  berukuran 24±2 cm dengan kisaran bobot tubuh 6-14 g. Be- lut dipelihara dalam akuarium berukuran 80×40×
40 cm 3 dengan ketinggian air 15 cm dan diaerasi.
Sebelum diberi perlakuan, belut dipuasakan sela- ma 24 jam kemudian diaklimatisasi pada hari be- rikutnya  selama  tujuh  hari.  Perlakuan  hormon penghambat  aromatase  diberikan  melalui  pe- nyuntikan  secara  intramuskular  sesuai  dengan dosisnya sebanyak lima kali dengan selang waktu pemberian  sekali  seminggu.  Sebelum  penyuntik- an,  ikan  dibius  terlebih  dahulu  menggunakan stabilizer dengan dosis 1 ml l -1 air. Selama perla- kuan  belut  diberi  pakan  berupa  cacing  tanah ( Lumbricus sp.) secara at satiation sebanyak dua kali sehari. Penyifonan akuarium dilakukan  pada pagi  dan  sore  dengan  penggantian  air  sebanyak 30%.
Parameter  yang  diukur  meliputi  pertam- bahan panjang dan bobot tubuh yang diamati se- tiap  minggu  selama  tujuh  minggu  masa  peneliti- an,  konsentrasi  estradiol  dan  testosteron  plasma darah  dengan  metode  ELISA  pada  minggu  ke-0 dan  setiap  1  minggu  pascapenyuntikan  hormon yaitu  pada  minggu  ke-2,  4,  dan  6.  Setiap  dua minggu  sekali  dilakukan  juga  pengamatan histo- logi  go-nad  yang  mengacu  kepada  metode  Gu- narso (1989) dan penghitungan indeks kematang- an  go-nad  (IKG)  yang  diacu  dari  metode  Beul- lens et al. (1997).
Sebelum pengambilan contoh darah, belut terlebih  dahulu  dipingsankan.  Pengambilan  con- toh darah dilakukan di bagian pangkal ekor belut dengan menggunakan siring berukuran 1 ml yang telah  diberi  antikoagulan.  Selanjutnya,  contoh darah dimasukkan ke dalam tabung dan disentri- fugasi  dengan  kecepatan  5000  rpm  selama  5 menit.  Plasma  yang  terbentuk  dipindahkan  ke dalam  tabung  baru  dan  disimpan  pada  suhu  - 20 o C.
Pada  akhir  penelitian  semua  ikan  uji  di- bedah  dan  dihitung  persentase  kelamin  jantan, betina  atau  interseks  berdasarkan  pengamatan
histologi.  Data dianalisis statistik dengan pengu- jian  ANOVA  pada  selang  kepercayaan  95%  dan untuk mengevaluasi tingkat perkembangan gonad dilakukan analisis deskriptif.

## Hasil

## Konsentrasi estradiol dan testosteron
Respon  hormonal  belut  pascapenyuntikan hormon penghambat aromatase ditunjukkan oleh adanya  perubahan  sekresi  hormon  steroid  yang dihasilkan  yaitu  konsentrasi  estradiol  tertekan dan  testosteron  meningkat  dalam  plasma  darah (Gambar 1).
Konsentrasi  estradiol  kelompok  kontrol (A) yang disuntik NaCl 0,95% menunjukkan pe- ningkatan  pesat  pada  minggu  ke-6  dibandingkan sebelumnya  (Gambar  1a).  Kelompok  perlakuan yang diberi penyuntikan AI dengan dosis berbeda menunjukkan konsentrasi estradiol yang tertekan mulai minggu ke-4 dan 6 terutama pada perlaku- an  C  (AI  0,01  mg  kg -1 bobot  tubuh)  dan  D  (AI
0,1  mg  kg -1 bobot  tubuh).  Konsentrasi  estradiol minggu ke-2 pada perlakuan B (AI 0,001 mg kg -1
bobot  tubuh)  menunjukkan  perbedaan  nyata  ter- hadap  kontrol  (P<0,05).  Konsentrasi  estradiol minggu ke-6 pada semua perlakuan lebih rendah dari  control  dan  secara  statistik  menunjukkan perbedaan  nyata  (P<0,05).  Sebaliknya,  konsen- trasi testosteron kelompok perlakuan D (Gambar 1b) meningkat sampai tiga kali lipat pada minggu ke-6 dibandingkan dengan perlakuan lainnya. Pe- ningkatan  konsentrasi  testosteron  minggu  ke-2 sampai  minggu  ke-6  menunjukkan  perbedaan yang nyata antar perlakuan dibandingkan dengan kontrol (P<0,05).

## Histologi gonad dan indeks kematangan gonad
Analisis  histologi  perkembangan  gonad belut pada pengamatan minggu ke 0-6 setiap ke- lompok  perlakuan  disajikan  pada  Gambar  2.
(a)
(b)
Gambar 1. Konsentrasi estradiol (a) dan testosteron (b) minggu ke 0-6 pada pemaskulinan belut menggunakan hormon penghambat aromatase AI
Pengamatan  histologi  gonad  pada  minggu  ke-0 sebelum  diberikan  perlakuan  hormon  memperli- hatkan  sebaran  oosit  dengan  beberapa  tahapan perkembangannya dan terlihat beberapa telur su- dah  matang.  Selanjutnya,  pada  pengamatan  go- nad minggu ke-2 sampai minggu ke-6 kelompok kontrol (A) yang disuntik dengan NaCl 0,95% ti- dak  menunjukkan  adanya  inisiasi  perubahan  ke- lamin. Pada kelompok perlakuan yang diberi pe- nyuntikan hormon AI 0,001 mg kg -1 bobot tubuh (B), inisiasi perubahan kelamin jantan  mulai ter- jadi  pada  minggu  ke-6  dengan  ditemukannya spermatogonia  dan  spermatosit.  Pada  perlakuan C (AI 0, 01 mg kg -1 bobot tubuh) dan D (AI 0,1 mg  kg -1 bobot  tubuh)  terlihat  gonad  mengalami perkembangan ke arah individu interseksual pada
minggu ke-2 dan ke-4, yaitu telah terdeteksi sper- matogonia  dan  spermatosit  berada  diantara  telur yang mengalami supresi.
Indeks  kematangan  gonad  (IKG)  seluruh perlakuan  pada  minggu  ke-2  menurun,  namun minggu  ke-6  meningkat  kecuali  pada  perlakuan B  (Gambar  3).  Perlakuan  kontrol  NaCl  (A)  me- nunjukkan  kenaikan  IKG  yang  tertinggi  pada minggu ke-6 pascapenyuntikan dibandingkan de- ngan  perlakuan  hormon  (P<0,05).  Pada  minggu ke-6  ada  individu  belut  yang  berjenis  kelamin jantan  pada  perlakuan  D  (AI  0,1  mg  kg -1 bobot tubuh) dan pada perlakuan C didalam pengamat- an gonad  menunjukkan adanya dominasi sperma dengan berbagai tahap perkembangan.
0 0,5 1 1,5 2 2,5 0 2 4 6 K ons e nt rasi t e st os te ron (ng m l -1 ) Minggu ke- A (Kontrol) B (AI 0,001 mg kg¯¹  bobot tubuh) C (AI 0,01 mg kg¯¹  bobot tubuh) D (AI 0,1 mg kg¯¹  bobot tubuh) -0,5 0 0,5 1 1,5 2 0 2 4 6 K ons e nt rasi e st radi ol (ng m l -1 ) Minggu ke- A (Kontrol) B (AI 0,001 mg kg¯¹  bobot tubuh)
C (AI 0,01 mg kg¯¹   bobot tubuh)
D (AI 0,1 mg kg¯¹   bobot tubuh)
Gambar 2. Histologi gonad belut minggu ke-0, 2, 4, 6 pada pemaskulinan menggunakan hormon pengham- bat aromatase melalui penyuntikan dengan dosis yang berbeda (M: Minggu ke-; A (NaCl 0,95%) B (AI 0,001 mg kg -1 bobot tubuh), C (AI 0,01 mg kg -1 bobot tubuh), D (AI 0,1 mg kg -1 bobot tu- buh); Y (granula kuning telur); n (nukleus); N (nukleolus); AO (atretic oosit); sg (spermatogo- nia); sc (spermatosit); sd (spermatid); sz (spermatozoa)
Konsentrasi estradiol di dalam plasma da- rah  dan  IKG  menunjukkan  korelasi  (R 2 )  sebesar 0,59.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa perlakuan  tanpa  penyuntikan  hormon  AI  (kon- trol)  diperoleh  konsentrasi  estradiol  dan  IKG
yang lebih besar dibanding perlakuan dengan pe- nyuntikan  hormon  AI.  Berdasarkan  pengamatan histologi  gonad  (Gambar  2),  peningkatan  nilai IKG  minggu ke-6 pada perlakuan  kontrol  meng- arah pada perkembangan oosit.
AM 4 AM 6 M 0 n AM 2 N Y Y N n BM 2 BM 4 BM 6 n n AO sg sc CM 2 CM 4 CM 6 sg sc AO sg sc AO sc sd sd
-0,5 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 0 2 4 6 Ind ek s ke m at an gan g o na d (%) Minggu ke- A (Kontrol) B (AI 0,001 mg kg¯¹  bobot tubuh) C (AI 0,01 mg kg¯¹  bobot tubuh) D (AI 0,1 mg kg¯¹   bobot tubuh) 6 7 8 9 10 11 0 1 2 3 4 5 B obot be lut sawah (g ) Minggu ke- Kontrol AI 0,001 mg kg¯¹   bobot tubuh AI 0,01 mg kg¯¹   bobot tubuh AI 0,1 mg kg¯¹   bobot tubuh 6 7 8 9 10 11 0 1 2 3 4 5 Bo b o t b e lu t sa wa h ( g) Minggu ke- Kontrol AI 0,001 mg kg¯¹   bobot tubuh
AI 0,01 mg kg¯¹   bobot tubuh AI 0,1 mg kg¯¹   bobot tubuh
Gambar 3. Indeks kematangan gonad belut minggu ke-0, 2, 4, 6 pada pemaskulinan menggunakan hormon penghambat  aromatase  melalui  penyuntikan  dengan  dosis  yang  berbeda  dibandingkan  dengan kontrol (NaCl 0,95%).
(a)
(b)
Gambar  4.  Pertambahan  panjang  (a)  dan  bobot  (b)  belut  pada  pemaskulinan  menggunakan  hormon  peng- hambat aromatase melalui penyuntikan dengan dosis yang berbeda dibandingkan dengan kontrol (NaCl 0,95%)

## Pertambahan bobot dan panjang tubuh
Pertambahan bobot dan panjang tubuh be- lut  pada  perlakuan  hormon  dan  kontrol  tanpa hormon meningkat selama 6 minggu (Gambar 4)
dan  tidak  menunjukkan  perbedaan  nyata  antar perlakuan  (P>0,05).  Pertambahan  bobot  tubuh berkorelasi  dengan  pertambahan  panjang  belut (R 2 =0,74),  sedangkan  terhadap  konsentrasi  tes-
tosteron  terdapat  korelasi  berturut-turut  sebesar 0,40 dengan bobot dan 0,44 dengan panjang.

## Persentase jenis kelamin belut
Pascapenyuntikan  dengan  hormon  peng- hambat  aromatase  pada  minggu  ke-6  diperoleh individu interseks sebesar 50-85% dan  40% ber- kelamin  jantan  hanya  pada  perlakuan  dosis  0,1 mg  kg -1 bobot  tubuh  (D),  sedangkan  pada  per- lakuan  kontrol  tanpa  hormon  100%  berkelamin betina (Tabel 1).

## Pembahasan
Estradiol pada ikan jantan pada awal sper- matogenesis  berperan  dalam  pembaharuan  sel spermatogonia  dan  memacu  perkembangan  sel- sel  germinal  (Miura  &  Miura  2003).  Perubahan kelamin  pada  ikan  hermafrodit  protogini  dikon- trol oleh hormon  gonadotropin  melalui poros hi- potalamus,  pituitari,  dan  gonad  (Tao et  al. 1993 dan  Garcia et  al. 2013).  Estradiol  merupakan produk  dari  enzim  aromatase  yang  diubah  dari testosteron  dan  berperan  dalam  pergantian  kela- min  pada  ikan.  Pemberian  hormon  penghambat aromatase  (AI)  melalui  penyuntikan  dengan  do- sis 0,001-0,1 mg kg -1 bobot tubuh pada belut be- tina  yang  mempunyai  panjang  tubuh  24±2cm secara  konsisten  meningkatkan  konsentrasi  tes- tosteron setelah 1 minggu pascapenyuntikan per- tama  hingga  penyuntikan  kelima.  Diduga  meka- nisme penghambatan kerja aromatase dalam per- ubahan  testosteron  menjadi  estradiol  dimulai  se- telah  penyuntikan  pertama  menggunakan  imida- zol  sehingga  fungsi  enzim  aromatase  tertekan
maka  konsentrasi  testosteron  di  gonad  mening- kat.  Peningkatan  ini  menimbulkan  umpan  balik yaitu otak merespon dengan menurunkan regula- si  enzim  aromatase  selama  fase  perubahan  kela- min (Server et al . 1999 dan Zhang 2009). Selan- jutnya,  hormon  gonadotropin  yang  dihasilkan  di otak  ( gonadotropin  releasing  hormon ,  GnRH) akan menginduksi hipofisis untuk mensekresikan follicle  stimulating  hormon (FSH)  yang  bekerja pada  sel  sertoli  selama  proses  spermatogenesis dan luteinizing  hormon (LH)  yang  bekerja  pada sel interstisial untuk proses spermiasi (Tang et al . 1974,  Tao et  al .  1993,  dan  Garcia et  al. 2013).
Peningkatan  konsentrasi  testosteron  akan  meng- arahkan kelamin belut berubah menjadi interseks atau  jantan  pascapenyuntikan  yang  kelima  yaitu pada  minggu  ke-6.  Garcia et  al. (2013)  dalam penelitiannya  melaporkan  bahwa  ikan Lates  cal- carifer yang  diberi  perlakuan  AI  100  mg  kg -1 pakan  saat  musim  pemijahan  mampu  mening- katkan  konsentrasi testosteron hingga empat  kali lipat  dibandingkan  kontrol  dan  berhasil  menga- rahkan kelamin jantan pada minggu ke-9. Dalam penelitian ini IKG belut betina berukuran ±24 cm sebelum  diberikan  perlakuan  sebesar  2,18±0,6% dan  ditemukan  adanya  telur  yang  sudah  matang pada gonadnya.
Pengamatan  IKG  pascaperlakuan  menun- jukkan  penurunan  yang  diduga  terjadi  penye- rapan  kembali  sel-sel  telur  ( atresia )  karena  telur tersebut  tidak  mencapai  ovulasi.  Indeks  ke- matangan  gonad  pada  semua  perlakuan  menga- lami  penurunan  pascaperlakuan  diduga  juga  ter- kait dengan proses perubahan kelamin belut dari
Tabel 1. Persentase jenis kelamin belut pada minggu ke-6
Perlakuan Betina Inte rseks Jantan (%) Panjang tubuh (cm) (%) Panjang tubuh (cm) (%) Panjang tubuh (cm) A(Kontrol) 100 24,14±1,14 0 - 0 - B 50 24,16±0,76 50 23,83±0,28 0 - C 14,28 24,4 85,72 24,20±1,42 0 - D 0 - 60 26,27±0,45 40 24±0,70
betina ke arah jantan. Hal tersebut sesuai dengan pernyataan Tao et al. (1993), Gong et al. (2011), dan Garcia et al. (2013) bahwa degenerasi gonad dari  ovarium  mengarah  pada  perkembangan  tes- tis  mengakibatkan  penurunan  bobot  gonad  dan mengarah pada penurunan IKG. Namun perlaku- an  AI  yang  diberikan  di  luar  musim  pemijahan tidak  mendukung  keberhasilan  pergantian  kela- min jantan pada ikan E. marginatus karena  kon- sentrasi  testosteron  sangat  rendah  (Garcia et  al. 2013). Hal ini menunjukkan bahwa produksi hor- mon  yang  berkaitan  dengan  fungsi  reproduksi meningkat  pada  musim  pemijahan  dan  sebalik- nya rendah di luar musimnya. Dengan demikian, teknik  pemaskulinan  ikan  secara  buatan  di  luar musim  pemijahan  membutuhkan  optimasi  lama waktu perlakuan dan dosis yang harus lebih dise- suaikan.
Penghambatan  aromatase melalui  penam- bahan hormon steroid eksogen juga dapat dilaku- kan  sehingga  bersaing  dengan  testosteron  alami yang  ada  dan  menyebabkan  aktivitas  aromatase tidak  berjalan  (Brodie  1991).  Fungsi  enzim  aro- matase  pada  perkembangan  gonad  ikan  menen- tukan perkembangan ovari jika aktivitas aromata- se  tinggi  dan  sebaliknya  ikan  dengan  aktivitas aromatase  yang  rendah  mengarah  pada  perkem- bangan  testis.  Sekresi  estradiol  pada  belut  fase betina  yaitu  di  awal  hidupnya  sangat  tinggi,  dan jika  penghambatan  aktivitas  aromatase  berlang- sung maka perkembangan gonad akan beralih ke arah  jantan  dengan  peningkatan  produksi  testos- teron  (Chan  &  Phillips  1969).  Pola  hormon  ste- roid  seks  yang  demikian  terdapat  pada  ikan  her- mafrodit protogini seperti ikan Epinephelus mer- ra (Alam et  al. 2006)  dan  ikan Coryphopterus nicholsii (Kroon & Liley 2000).
Persentase  jenis  kelamin  yang  dihasilkan pascapenyuntikan  hormon  penghambat  aroma- tase  jenis  imidazole  pada  belut  berukuran  pan-
jang ±24 cm  menunjukkan perbedaan terkait de- ngan  dosis  yang  diberikan.  Pemberian  hormon AI  dengan  dosis  0,001-0,1  mg  kg -1 bobot  tubuh menunjukkan  efektif  dalam  pengarahan  kelamin jantan pada masa alih kelamin belut yang terma- suk  hewan  hermafrodit  protogini  dengan  keber- hasilan 40% jantan dan selebihnya interseks. Pa- da  ikan  jantan  gonokoristik  ataupun  hermafrodit konsentrasi  estradiol  tetap  ada  meskipun  rendah karena  fungsi  spermatogenesis  yang  berperan dalam  pembaharuan  sel  spermatogonium  dan memacu  perkembangan  sel-sel  germinal  (Miura & Miura 2003).

## Simpulan
Induksi  hormon  penghambat  aromatase melalui penyuntikan pada belut dengan dosis 0,1 mg  kg -1 bobot  tubuh  ikan  dapat  meningkatkan konsentrasi testosteron plasma darah sebesar tiga kali lipat dibandingkan kontrol dan menghasilkan belut  berkelamin  jantan  yang  berukuran  panjang tubuh 24±2 cm sebanyak 40%.

## Daftar pustaka
Affandi R, Yunizar E, Setyo W. 2003. Studi bio- ekologi belut ( Monopterus albus ) pada ber- bagai  ketinggian  tempat  di  Kabupaten  Su- bang,  Jawa  Barat. Jurnal  Iktiologi  Indone- sia , 3(2):49-55.
Alam  MA,  Bhandari  RK,  Kobayashi  Y,  Soyano K,  Nakamura  S,  Soyano  K,  Nakamura  M. 2006.  Changes  in  androgen-producing  cell size  and  circulating  11-ketotestosterone  le- vel  during  female-male  sex  change  of  ho- neycomb  grouper Epinephelus  merra . Mo- leculer  Reproduction  Development ,  73(1- 4):206-214.
Athauda S, Trevor A, Rockyde N. 2012. Effect of rearing  water  temperature  on  protandrous sex  inversion  in  cultured  asian  seabass ( Lates  calcarifer ). General  and  Compara- tive Endocrinology , 176(3):416-423.
Babiak  J,  Igor  B,  Solveig  van  N,  Torstein  H, Trine  H,  Birgitta  N.  2011.  Induced  sex  re- versal  using  an  aromatase  inhibitor,  fadro- zole, in  Atlantic  halibut ( Hippoglossus hip-
poglossus L ).  Aquaculture ,  324-325:276- 280.
Bahri F. 2000. Studi mengenai aspek biologi ikan belut  sawah (Monopterus  albus) di  Keca- matan  Parung,  Kabupaten  Bogor,  Jawa  Ba- rat. Skripsi .  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan. IPB. Bogor.
Brodie  A.  1991.  Aromatase  and  its  inhibitor. Journal  of  Steroid  Biochemical,  Molecular
Biology, 40(1-3):255-261.
Beullens K, Eding AH, Gilson P, Ollevier F, Ko- men  J,  Richter  CJJ.  1997.  Gonadal  diffe- rentiation,  intersexuallity  and  sex  ratios  of European  eel (Anguilla  anguil L.)  main- tained  in  captivity. Aquaculture, 153(1-2): 135-150.
Chan  STH,  Phillips  JG.  1969.  The  Biosynthesis of steroids by the gonads of the ricefield eel Monopterus  albus at  various  phases  during natural sexreversal. General  and Compara- tive Endocrinology, 12(3):619-636.
Direktorat  Jenderal  PPHP  (Pengolahan  dan  Pe- masaran  Hasil  Perikanan).  2012. Statistik ekspor  hasil  perikanan 2011.  Kementerian
Kelautan dan Perikanan, Jakarta.
Dufour S, Sun TL, Crishtoper HK, Cheng K, Lin
H,  Jacquez  B.  2004.  Effects  induction  of sex  steroid,  aromatase  inhibitors  and  anti- estrogens in protandrous black porgy Acan- thopagrus schlegeli Bleeker. Zoology Study, 29(9):173-179.
Garcia  CEO,  Bruno  CA,  Paulo  HM,  Amanda MN,  Jandir  ARF,  Andreone  TM,  Ricardo AZ,  Lucile  MFW,  Renata  GM.  2013.  In- volvement  of  pituitary  gonadotropins,  go- nadal  steroids  and  breeding  season  in  sex change  of  protogynous  dusky  grouper, Epinephelus marginatus (Teleostei: Serrani- dae),  induced  by  a  non-steroidal  aromatase inhibitor . General  and  Comparative  Endo- crinology, 192(2):170-180.
Gong S, Guobin Z, Lei Z, Yongchao Y, Hanwen
Y. 2011. Effects of estradiol valerate on ste- roid hormons and sexreversal of female rice field  eel, Monopterus  albus (Zuiew). Jour- nal  of  the  World  Aquaculture  Society , 42(11):96-104.
Guiguen Y, Alexis F, Francess P, Ching-Fong C.
2010.  Ovarian  aromatase  and  estrogens:  A povital  role  for  gonadal  sex  differentiation and  sex  change  in  fish. General  and  Com- parative Endocrinology , 165(3):352-366.
Gunarso  W.  1989. Mikroteknik .  PAU  Ilmu  Ha- yat.  Institut  Pertanian  Bogor.  Bogor.  112 hlm.
Miura  T,  Miura  CI.  2003.  Molecular  control mechanisms  of  fish  spermatogenesis. Fish Physiology Biochemistry , 28:181-186.
Kroon  FJ,  Liley  NR.  2000.  The  role  of  steroid hormons  in  protogynous  sex  change  in  the blackeye  goby, Coryphopterus  nicholsii .
General  and  Comparative  Endocrinology,
118(2):273-283.
Navarro-Martin  L,  Mercedes  B,  Francecs  P. 2008.  Masculinization  of  the  European  sea bass  ( Dicentrarchus  labrax )  by  treatment with an androgen or aromatase inhibitor in- volves  different  gene  expression  and  has distinct lasting effects on maturation. Gene- ral and Comparative Endocrinology , 160(1):3-11.
Nozu  R,  Kojima  Y,  Nakamura  M.  2009.  Short term  treatment  with  aromatase  inhibitor  in- duces  sex  change  in  the  protogynous wrasse, Halichoeres  trimaculatus . General Comparative  Endocrinology ,  161(3):360- 364.
Seralini GE, Moslemi S. 2001. Aromatase inhibi- tors:  past,  present  and  future. Molecular and  Cellular  Endocrinology, 178(1-2):117- 131.
Server  DM,  Halliday  T,  Waight  V,  Brown  J, Davies HA, Moriarty EC. 1999. Sperm sto- rage  in  female  of  the  smoth  new  ( Triturus vulgaris L.):  ultrastructure  of  the  spema- thecal  during  the  breeding  season. Journal of Experimental Zoology, 283 (1): 51-70.
Tang F, Chan STH, Lofts B. 1974. Effect of ste- roid  hormons  on  the  process  of  natural  sex reversal  in  the  rice-field  eel, Monopterus albus (Zuiew). General  and  Comparative Endocrinology , 24(3):227-241.
Tao  YX,  Hao-Ren  L,  Glen  VDK,  Richard  EP. 1993.  Hormonal  induction  of  precocious sex reversal in the ricefield eel, Monopterus albus . Aquaculture, 118(1-2):131-140.
Zhang  Y,  Weimin  Z,  Huiyi  Y,  Wenliang  Z, Chaoqun  H,  Lihong  Z.  2008.  Two  cyto- chrome P450 aromatase genes in the herma- phrodite  rice  field  eel Monopterus  albus : mRNA  expression  during  ovarian  develop- ment  and  sex  change .  Journal  of  Endocri- nology , 199(8):317-331.