e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan Volume III No 2 Februari 2015 ISSN: 2302-3600
IMUNOGENISITAS KOMBINASI VAKSIN INAKTIF WHOLE CELL
Aeromonas salmonicida DAN VITAMIN C PADA
IKAN MAS ( Cyprinus carpio )
Nurma Jana Hazzulli *† , Agus Setyawan ‡ dan Esti Harpeni ‡

## ABSTRAK
Penambahan vitamin C dalam vaksin diketahui dapat meningkatkan imunogenisitas dan efektivitas vaksin.  Penelitian ini bertujuan untuk meningkatkan imunogenisitas vaksin inaktif whole cell A. salmonicida dengan penambahan vitamin C pada ikan mas ( Cyprinus carpio ). A. salmonicida diinaktifasi dengan formalin 1,5 % (v/v). Vaksin I disuntikkan secara intra peritoneal (i.p) (10 7 sel / ikan) kepada ikan mas (ukuran ± 30gr).  Vaksin II (Booster) dilakukan 7 hari setelah vaksinasi I dengan metode dan dosis  yang sama.  Pengambilan darah ( Bleeding ) dilakukan sebelum vaksinasi, 7 hari setelah vaksinasi I, dan 7 hari setelah vaksinasi II.  Analisis darah meliputi  titer  antibodi,  hematokrit,  dan  total  leukosit  diamati  setiap  pengambilan sampel  darah.    Hasil  penelitian  menunjukkan  penambahan  1000  mg  vitamin  C dalam  vaksin  memiliki  nilai  titer  antibodi,  hematokrit,  dan  total  leukosit  paling tinggi dari perlakuan lainnya yaitu 2 8 , 28%, 88.000 sel/mm 3 , secara berturut-turut pada pengamatan terakhir (7 hari setelah booster ).
Kata  kunci :  vaksin  inaktif,  vitamin  C,  Aeromonas  salmonicida,  ikan  mas, imunogenisitas
Pendahuluan
Budidaya  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio ) tidak terlepas dari adanya kemungkinan terserang penyakit. Salah satu penyebab penyakit  pada  ikan  mas  adalah  bakteri Aeromonas  salmonicida, bakteri  ini dapat menyebabkan kematian pada ikan yang  dibudidayakan.    Penyakit  yang disebabkan oleh bakteri A. salmonicida yang  menyerang  ikan  mas  disebut penyakit carp erytrodermatitis.
* Mahasiswa Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung
† Email : Nhazzulli@yahoo.com
‡ Dosen Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung
Penyakit  ini  sangat  merugikan  dalam budidaya ikan karena serangannya yang cepat  dan  dapat  mematikan  hewan budidaya  dan  menurunkan  tingkat produksi, sehingga ikan yang terserang bakteri  cukup  parah  harus  segera dimusnahkan.
Berdasarkan  hal  tersebut  diperlukan pendekatan  pencegahan  yang  lebih alami  untuk  penanggulangan  penyakit
yang  disebabkan  oleh  bakteri A . salmonicida ,  salah  satunya  adalah dengan  penggunaan  vaksin. Vaksinasi diyakini  dapat  memberikan  kekebalan spesifik  pada  ikan  terhadap  penyakit tertentu.    Pemberian  vaksin  pada  ikan dapat    meningkatkan  imunogenisitas ikan  tersebut.    Hal  tersebut  sesuai dengan  hasil  penelitian  sebelumnya yang menunjukkan imunogenitas tinggi pada  ikan,  ditandai  dari  titer  antibodi yang  tinggi  (Setyawan  dkk.,  2012). Namun,  hasil  dari  vaksinasi  kurang memuaskan karena keampuhannya tergantung pada peningkatan ketahanan humoral  dan  hanya  efektif  pada  agen patogen  yang  spesifik.    Oleh  sebab  itu perlu dilakukan
penambahan immunostimulan  untuk  meningkatkan efektivitas  vaksin  dan  pertahanan  non spesifik  pada  ikan.    Salah  satu  sumber imunostimulan  yang  dapat  digunakan adalah  vitamin  C.    Penelitian  Ilmiah dkk . (2009) menunjukkan bahwa penambahan  imunostimulan  berupa vitamin C dalam pakan dapat meningkatkan sistem imun dalam tubuh
ikan  dan  mampu  melindungi  ikan  dari serangan bakteri A. salmonicida .
Kombinasi vaksin inaktif A. salmonicida dengan vitamin C diharapkan  dapat  meningkatkan  daya tahan tubuh ikan sehingga meningkatkan proteksi terhadap serangan  penyakit  tertentu.    Selain  itu kombinasi keduanya dapat meningkatkan  mekanisme  respon  ikan baik seluler maupun humoral
(Alifuddin,  1999).    Vaksinasi  dan pemberian  vitamin  C  yang  memadai mampu  menurunkan  mortalitas  benih ikan  lele  dari  serangan A.  hydrophila (Isnansetyo, 1996).  Oleh sebab itu perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengetahui  imunogenisitas    vaksin inaktif whole  cell  A.  salmonicida yang dikombinasikan  dengan  vitamin  C terhadap  infeksi A.  salmonicida pada ikan  mas.    Tujuan  dari  penelitian  ini adalah untuk mengkaji dosis vitamin C terbaik untuk meningkatkan imunogenisitas vaksin inaktif whole cell
A. salmonicida pada ikan mas.
Bahan dan Metode Penelitian dilaksanakan pada Oktober - Desember 2012 di Laboratorium Budidaya  Perikanan dan  Laboratorium Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Lampung . Rancangan yang dipakai  dalam  penelitian  ini  yaitu rancangan  acak  lengkap  (RAL).  Data yang  didapatkan  dianalisis  dengan analisis  sidik  ragam  (ANOVA).  Jika terdapat  beda  nyata  antar  perlakuan maka  dilakukan  uji    BNT  pada  selang kepercayaan 95% .
Penelitian  ini  menggunakan vitamin  C yang ditambahkan ke dalam pakan dan penyuntikan vaksin inaktif A. salmonicida dengan  6  perlakuan  dan  3 kali pengulangan. Perlakuannya sebagai berikut :
 Perlakuan A : Tanpa vaksinasi, tanpa penambahan vitamin C  Perlakuan B : Tanpa vaksinasi,  penambahan  1000  mg vitamin C / kg pakan.  Perlakuan C : Vaksinasi, tanpa penambahan vitamin C  Perlakuan D : Vaksinasi, penambahan 500 mg vitamin C / kg pakan  Perlakuan E : Vaksinasi,
penambahan 750 mg vitamin C / kg pakan.
 Perlakuan F : Vaksinasi, penambahan 1000 mg vitamin C / kg pakan.
Parameter  yang  diamati  meliputi:  titer antibodi,  jumlah  total  leukosit,  nilai
hematokrit,  dan  kualitas  air  meliputi suhu, pH, dan oksigen terlarut.
Akuarium  berukuran  60  x  40  x  40  cm sebanyak 18 buah dan  ikan mas dengan berat  ±  30  gram  (10  ekor/  akuarium) digunakan dalam penelitian ini. Hasil dan Pembahasan Titer  Antibodi  Vaksin  Inaktif  A. salmonicida yang dikombinasikan dengan Vitamin C Hasil  rata-rata  titer  antibodi  tertinggi sampai  terendah  pada  vaksinasi  II berturut-turut didapatkan
pada perlakuan  vaksin  dengan  penambahan vitamin C 1000 mg (2 8 ), vaksin dengan penambahan  vitamin  C  750  mg  (2 7 ), vitamin  C  1000mg  (2 6 ),  tanpa  vaksin dan vitamin C (2 5 ), vaksin tanpa vitamin C  (2 5 )  dan  vaksin  dengan  penambahan vitamin  C  500mg  (2 4 ).  Hal  ini menunjukkan bahwa ikan yang divaksin dengan  antigen  H  pada Aeromonas salmonicida dan penambahan vitamin C memiliki  respon  imun  adaptif  yang tinggi  terbukti  dari  ikan  uji  mampu membentuk dan meningkatkan produksi antibodi.    Sesuai  yang  diungkapkan Alifuddin  (2002)  bahwa  vaksin  akan direspon  ikan  dengan  mensintesis antibodi, sedangkan vit.C akan direspon ikan  dengan  peningkatan  aktivitas  dan reaktivitas sel pertahanan seluler maupun humoral, selain itu penambahan vitamin C dapat memberikan peningkatan aktifitas fagositosis  (respon  imun  non  spesifik) pada ikan (Ilmiah dkk., 2009) sehingga saat  keduanya  dikombinasikan  akan menghasilkan  tingkat  antibodi  yang tinggi.  Vitamin C yang diberikan selain dapat  meningkatkan  produksi  antibodi, juga dapat  meningkatkan aktivitas Cell Mediated  Immunity (CMI)  (Setyabudi
dkk.,  1992).    CMI  bertanggung  jawab terhadap produksi limfosit dan juga sel memori.    Saat  limfosit  tersebut  kontak dengan  antigen,  akan  mengadakan perubahan secara mitosis dengan memproduksi  sel  anak  dalam  jumlah yang  banyak  yang  spesifik  dengan antigen  tersebut.    Dengan  demikian secara  tidak  langsung  vitamin  C  juga meningkatkan produksi sel anak limfosit  yang  dapat  berpengaruh  pula pada peningkatan titer antibodi.
Semakin  tingginya  nilai  titer  antibodi maka  semakin  tinggi  pula  ketahanan tubuh karena vaksin mampu meningkatkan  produksi  antibodi  pada tubuh ikan.  Bahkan menurut penelitian yang  telah  dilakukan  oleh  Isnansetyo (1996), vaksinasi yang ditambah dengan vitamin  C  meningkatkan  produksi antibodi  hingga  empat  kali  lebih  besar dibandingkan kontrol.
Hasil analisis sidik ragam  pemeriksaan titer  antibodi  pada  vaksinasi  II, menunjukkan  bahwa  pemberian  vaksin A.  salmonicida berpengaruh  nyata ( P <0,00)  terhadap  kontrol.  Uji  lanjut BNT menunjukkan perlakuan B berbeda nyata terhadap semua perlakuan,  perlakuan  E  dan  F  berbeda nyata  pada  perlakuan  A,  B,  C,  D, sedangkan  perlakuan  A,  C,  dan  D berbeda nyata terhadap perlakuan B, E, dan F (Gambar 1).

## 362                                          Imunogenits kombinasi vaksin inaktif dan vitamin c
Gambar  1 . Nilai  Rata-rata  Titer  Antibodi  Ikan  Mas  ( Cyprinus  carpio )  Sebelum Vaksinasi,  Satu  Minggu  Setelah  Vaksinasi  I,  satu  Minggu  Setelah Vaksinasi II.

## Pemeriksaan Darah Kadar Hematokrit
Gambaran darah suatu organisme dapat digunakan  untuk  mengetahui  kondisi kesehatan  yang  sedang  dialami  oleh organisme tersebut. Hematokrit
merupakan  parameter  yang  digunakan untuk  mengukur  persentase  sel  darah merah pada darah dengan cara membandingkan  volume  sel  darah merah dengan plasma darah. Wedemeyer and Yasutake (1977), kadar hematokrit  dapat  digunakan  untuk menentukan kondisi ikan dalam keadaan  sehat  atau  yang  terkena anemia.    Pengamatan  terhadap  nilai hematokrit  dalam  darah  ikan  mas  pada perlakuan  yang  berbeda  menunjukan nilai  yang  berfluktuasi  (Gambar  2), adanya  fluktuasi  kadar  hematokrit selama penelitian disebabkan perubahan kondisi  lingkungan.    Hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Wedemeyer  and Yasutake  (1977)  yang  menyatakan bahwa kadar hematokrit dapat berubah-
ubah tergantung pada musim, suhu, dan pemberian makanan yang sehat.
Secara  umum  kadar  hematokrit  ikan kontrol  dan  perlakuan  masih  dalam kisaran normal, seperti yang diungkapkan  oleh  Svobodova  and Vyukusova  (1991)  Persentase  nilai hematokrit  ikan  mas  normal  berkisar antara 28% - 40%. Pada kasus ini setiap perlakuan  mengalami  penurunan  nilai hematokrit namun masih dalam kisaran normal.  Menurunnya kadar hematokrit dapat dijadikan indikator bahwa vaksin yang  diberikan  pada  ikan  perlakuan memiliki  hubungan  korelasi  positif dalam  peningkatan  total  leukosit  pada tubuh  ikan.  Nilai  hematokrit  tertinggi terdapat pada perlakuan E yaitu 34,33 ± 9,07  sebelum  vaksinasi.    Pada  ikan kontrol  penurunan  kadar  hematokrit sangat  rendah  dibandingkan  perlakuan lainnya  yaitu  mengalami  penurunan nilai  hematokrit  sampai  mencapai  nilai 18 ± 11,78.
Gambar  2.  Nilai  Rata-rata  Persentase  Hematokrit  Ikan  Mas  ( Cyprinus  carpio ) Sebelum Vaksin, Satu Minggu Setelah Vaksinasi I, Satu Minggu Setelah Vaksinasi II.
Rendahnya nilai hematokrit pada perlakuan  kontrol  ini  diduga  disebabkan karena  ikan  menderita  anemia. Analisa sidik  ragam  (ANOVA)  pada  selang kepercayaan  95%,  diperoleh  hasil bahwa sebelum vaksinasi,  satu  minggu setelah  vaksinasi  I,  dan  satu  minggu setelah  vaksinasi  II  tidak  terdapat perlakuan  yang  berbeda  nyata,  yang artinnya perlakuan tidak mengubah nilai hematokrit secara nyata. Nilai
hematokrit  pada  seluruh  perlakuan masih berada dalam kondisi normal.

## Total Leukosit
Gambaran  darah  yang  lain  yaitu  dapat dilihat dari total leukosit ikan. Leukosit memiliki  bentuk  lonjong  sampai  bulat, tidak  berwarna  dan  merupakan  unit y ang aktif dari sistem pertahanan tubuh (Lagler et  al .,  1977).    Peningkatan jumlah  leukosit  terjadi  pada  setiap perlakuan  yang  diamati  pada  saat sebelum vaksinasi, satu minggu setelah vaksinasi  I  dan  satu  minggu  setelah vaksinasi  II  (Gambar  2).    Pengamatan
leukosit sebelum vaksinasi, vaksinasi I, dan vaksinasi II, untuk setiap perlakuan mengalami  peningkatan  sesuai  batas normal.  Leukosit  ikan  normal  berkisar antara  20.000  –  150.000  sel/mm 3 (Zainun,  2007).    Peningkatan  tertinggi terjadi  pada  perlakuan  F  yaitu  87.900 sel/mm 3 , peningkatannya  lebih  tinggi dibandingkan dengan perlakuan lainnya,  hal  tersebut  menunjukkan bahwa vaksin dan vit.C yang masuk ke dalam  tubuh  memberikan  efek  positif terhadap  peningkatan  jumlah  leukosit dalam darah (Zainun, 2007). Leukosit  memiliki  tanggung  jawab dalam respon kekebalan, apabila ada zat asing yang masuk ke dalam tubuh maka leukosit akan membuat antibodi. Antibodi  akan  digunakan  oleh  sistem kekebalan  tubuh  untuk  memberikan rangsangan, mengidentifikasi dan menetralisasikan  benda  asing  (antigen) yang  masuk,  seperti  bakteri.    Semakin besar rangsangan antigen, maka semakin  banyak  antibodi  yang  akan
dihasilkan.    Bakteri  yang  masuk  ke dalam  tubuh  ikan  akan  diidentifikasi oleh leukosit sebagai antigen.
Peningkatan jumlah leukosit pada setiap perlakuan  berbanding  lurus  dengan penurunan  kadar  hematokrit  pada  ikan uji.  Hasil  analisa  ragam  (ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95%,
perlakuan menunjukkan perbedaan
yang  nyata  ( P< 0,05)  terhadap  respon
imun  non  spesifik  ikan  mas  pada  saat vaksinasi  II.    Hasil  uji  lanjut  BNT menunjukkan  perlakuan  A  berbeda nyata terhadap semua perlakuan (Gambar 3).  Artinya perlakuan mampu memberikan  pengaruh  nyata  terhadap peningkatan nilai total leukosit ikan mas dibandingkan  dengan  ikan  yang  tidak diberi perlakuan sama sekali.
Gambar  3.  Nilai  Rata-rata  Total  Leukosit    Ikan  Mas  ( Cyprinus  carpio )  Sebelum Vaksin,  Satu  Minggu  Setelah  Vaksinasi  I,  Satu  Minggu  Setelah Vaksinasi II.

## Kesimpulan
Dosis  1000  mg  vitamin  C/kg  pakan mampu  meningkatkan  imunogenisitas
vaksin inaktif whole cell A. salmonicida pada ikan mas.

## Daftar Pustaka
Alifuddin, M. 1999. Peran Imunostimulan  Lipopolisakarida, Saccharomyces  cerevisiae and Levamisol) terhadap Peningkatan
Respon  Imunitas  Ikan  Jambal
Siam  ( Pangasius hypopthalmus ). Tesis. Program Studi Ilmu Perairan.  Program  Pasca  sarjana IPB, Bogor. 50 hal. Alifuddin,  M.  2002.  Imunostimulasi
Pada  Hewan  Akuatik.  Jurnal Akuakultur Indonesia 1: 87-92
Ilmiah.,  Triana,  St.  H.,  Tassakka, A.C.M.A.R.,  Rantetondok,  A., and Anshary, H. 2009. The Effect of  Vitamin  C  and Aeromonas Vaccine On The Immune Response and Disease Resistance Of Grouper ( Epinephelus fuscoguttatus ) . Mar. Res. Indonesia 34: 81-85 Isnansetyo,  A.  1996.  Penambahan Vitamin  C  pada  Pakan  Lele Dumbo ( Clarias gariepinus ) untuk  meningkatkan  Tanggap Kebal terhadap Vaksin Aeromonas  hydrophila .  Jurnal Perikanan 1: 35-40.
Lagler KF, Bardach JE, RR Miller, and Passino DRM. 1977. Ichthyology .
John  Willey  and  Sons.  Inc.  new
York-London. Hlm 506.
Setyabudi,  A.M.A.,  Grant,  B.F.  and Halver Halver, J.E., 1990. Pengaruh L-Ascorbyl-2- Phosphate (ASPP) Pada Pertumbuhan dan Resistensi  Ikan Rainbow  trout  ( Onchorhyncus mykiss ) Terhadap Infection
Hematoporetic  Necrosis  Virus (IHNV).  Prosiding  Seminar  II Penyakit Ikan dan Udang, Balitbang Pertanian : 71 – 82. Setyawan,  A.,  Hudaidah,  S.,  Ranopati, Z.,S., and Sumino. 2012. Imunogenisitas  Vaksin  Inaktif Whole Cell Aeromonas salmonicida pada  Ikan  Mas ( Cyprinus  carpio ).  Aquasains  1: 17–21.
Svobodová  Z  and  Vykusová  B.  1991. Diagnostic, Prevention and Therapy  of  Fish  Disease  and Intoxication. Research Institute of Fish  Culture  and  Hydrobiology Vodňany, Czechoslovakia. http://id.scribd.com/doc/8893062 3/Diagnostics-Prevention-and- Therapy-of-Fish-Diseases-and- Intoxications [31 Juli 2013]. Wedemeyer  GA  and  Yasutake.  1977. Clinical Methods for The Assessment  on  The  Effect  of Enviromental  Stress  on  Fish Health .  Technical  Paper  of  The US  Departement  of  The  Interior Fish ang the Wildlife Service 89 : 1-17.
Zainun, Z. 2007. Pengamatan Parameter Hematologis Pada Ikan Mas yang diberi Immunostimulan. Bul. Tek.
Lit. Akuakultur 6 : 45 - 49

## 366                                          Imunogenits kombinasi vaksin inaktif dan vitamin c