DOI: 10.24198/jit.v18i1.19429 Unpad Press                                                                                                            Available online at http://jurnal.unpad.ac.id/jurnalilmuternak
Efectivitas  Limbah  Buah  Nanas  ( AnanasComosus )  Sebagai  Desinfektan Alami Pada Milk Can
E. T. Marlina 1a ,  E. Harlia 1 , Y. A. Hidayati 1 1 Laboratorium Mikrobiologi dan Penanganan Limbah, Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran a email: eulis.tanti@unpad.ac.id

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  mempelajari  efektivitas  limbah  buah  nanas  (kulit  dan  bonggol)  sebagai sumber  desinfektan  alami  dalam  proses  desinfeksi  milk  can.  Penelitian  dilakukan  secara  deskriptif dengan  tiga  perlakuan,  yaitu  etanol  96%  (P1),  ekstrak  kulit  nenas  100%  (P2),  dan  ekstrak  bonggol nenas 100 % (P3). Parameter yang diukur adalah zona hambat bakteri, penurunan bakteri total, dan penurunan  Coliform.Hasil  penelitian  memperlihatkan  bahwaetanol  96%  sangat  efektif  mereduksi bakteri total dan Coliform dengan menghasilkan zona hambat 25,75 mm, sedangkan ekstrak kulit dan bonggol  nanas  termasuk  dalam  desinfektan  kategori  sedang  dengan  menghasilkan  zona  hambat masing-masing 9,05 mm dan 7,25 mm.  Penurunan jumlah bakteri total pada perlakuan etanol 96% (P1), ekstrak kulit nenas (P2), dan ekstrak bonggol  nenas (P3) berturut-turut 90,43 %, 66,15 %, dan 55,00 %, sedangkan penurunan jumlah Coliform 85,68% (P1), 52,94% (P2) dan 51,45% (P3). Hasil ini  menggambarkan  bahwa  limbah  buah  nenas  cukup  efektif  untuk  digunakan  sebagai  desinfektan alami pada milk can.
Kata kunci: Antibakteri, Bonggol nenas, Kulit nenas, Milk can, Zona hambat

## (Effectiveness Of Pineapple Waste(AnanasComosus) As Natural Disinfectant In Milk Cans)

## Abstract
This  study  aims  to  study  the  effectiveness  of  pineapple  fruit  waste  (peels  and  hump)  as  a  natural source of disinfectant in the disinfection process of milk can. The study was conducted descriptively with three treatments, namely  ethanol 96% (P1), pineapple peels extract 100% (P2), and  pineapple hump extract 100% (P3). The parameters measured were bacterial inhibition zones, decrease of total bacteria and Coliform. The results showed that  ethanol 96%was very effective in reducing total and Coliform  bacteria  by  producing  a  inhibition  zone  of  25.75  mm,  while  pineapple  peels  and  hump extracts were included in the medium category disinfectant by producing inhibition zones of 9.05 mm and 7.25 mm respectively. Decrease in the total number of bacteria in  ethanol 96%treatment (P1), pineapple  peels  extract  (P2),  and  pineapple  hump  extract  (P3)  respectively  90.43%,  66.15%,  and 55.00%, while decreasing the number of Coliform 85.68% (P1), 52.94% (P2) and 51.45% (P3). These results illustrate that pineapple waste is effective to be used as a natural disinfectant in milk cans. Keywords: Antibacterial, Inhibition zone, Milk can, Pineapple peels, Pineapple hump

## Pendahuluan
Buah  nanas  merupakan  salah  satu  jenis buah asal daerah tropis yang mempunyai nilai ekonomis dapat diolah menjadi olahan pangan. Sisa  produksi  buah  nanas  menghasilkan limbah  padat  berupa  kulit  dan  bonggol  nanas. Limbah  buah  nanas  dapat  mencapai  48,6% dari total berat buah (Roy et al ., 2014; Windu, et  al .,  2014)  terdiri  dari  kulit  dan  bonggol
nanas.  Bonggol  nanas  mengandung  beberapa bahan kimia yang berfungsi sebagai desinfektan dan memiliki daya hambat bakteri. Dalam  menguji  efektivitas  suatu  desinfektan, yang dapat dilakukan adalah dengan mengukur wilayah  pengukuran  zona  hambat  yang dibentuk  oleh  bakteri  dan  penurunan  jumlah total bakteri (Suwandi, 2012; Olson, 2017).
Milk  can merupakan  alat  berbentuk tabung  yang  berfungsi  khusus  sebagai  wadah untuk  menampung  susu  segar  yang  baru diperah. Penggunaan milk can bertujuan untuk melindungi  susu  agar  tidak  terkontaminasi oleh mikroba atau benda asing lainnya seperti debu,  kotoran,  dan  lain-lainnya  yang  bersifat patogen. Rusaknya susu dapat disebabkan oleh beberapa  faktor,  salah  satunya  disebabkan milk  can  dalam  kondisi  yang  kurang  bersih. Hal ini terjadi karena masih ada sisa-sisa susu yang  menempel  pada  dinding  milk  can. Dengan  demikian,  pencucian  milk  can  harus selalu  dilakukan  dengan  benar,  untuk mencegah terjadinya kerusakan susu.
Pencucian milk can tidak cukup dengan air  saja.  Namun  harus  menggunakan  bahan- bahan yang memiliki sifat sebagai desinfektan agar milk can menjadi steril kembali. Saat ini, pencucian milk can banyak yang menggunakan  bahan  kimia  sintetis.  Bahan tersebut  memiliki  kelebihan  yaitu  dapat mereduksi  bakteri  dengan  cepat.  Namun penggunaan  bahan  kimia  sintetis  dapat menyisakan  residu  yang  sulit  terurai.  Oleh karena  itu,  perlu  dilakukan  upaya  untuk mengurangi  penggunaan  bahan  kimia  sintetis tersebut.    Salah  satunya  adalah  dengan menggunakan desinfektan alami yang memiliki bahan kimia yang berasal dari alam, seperti bonggol nanas.
Enzim  bromelin  merupakan  salah  satu enzim  protease  yang  dapat  menghidrolisis protein.    Kandungan  enzim  bromelin  pada bonggol nanas merupakan yang tertinggi pada bagian  buah,  sehingga  bonggol  nanas bermanfaat  sebagai  penghancur  lemak.  Selain dapat  menghidrolisis  protein,  enzim  bromelin juga  memiliki  karakteristik  sebagai  antiadhesi yang  dapat  mencegah  penempelan  bakteri pada suatu permukaan. Oleh karena itu, enzim bromelin  pada  kulit  dan  bonggol  nanas diharapkan  dapat  mencegah  menempelnya bakteri  pada  permukaan  milk  can.  Selain bromelin, bahan aktif lainnya yang terkandung dalam kulit dan bonggol nanas adalah senyawa tanin.  Tanin  merupakan  senyawa  yang termasuk  dalam  golongan  fenol.  Mekanisme kerja  tanin  sebagai  antimikroba  yaitu  dengan menginaktivasi  adhesi  sel  mikroba  (Akiyama,
2001; Payne et al ., 2013).Enzim bromelin juga berguna  untuk  mengencerkan  lendir,  sehingga dapat  membersihkan  sisa  susu  pada  milk  can yang memungkinkan membawa bakteri. Selain enzim  bromelin  dan  tanin,  juga  terdapat senyawa antibakteri lainnya pada limbah buah nanas  yaitu  flavonoid,  saponin  dan  polifenol (Damogalad et al ., 2013; Praveen et al ., 2014, Zharfan et al ., 2017; Loon, Y.K. et al ., 2018). Dalam  penelitian  ini  dipelajari  bagaimana efektivitas  limbah  buah  nanas  sebagai desinfektan alami pada proses desinfeksi milk can.

## Materi dan Metoda
Persiapan Media Perhitungan Bakteri Untuk menghitung bakteri total digunakan  media nutrien  agar ,sedangkan untuk  menghitung  Coliform  digunakan  media violet  red  bile  agar .  Media  disterilisisasi dengan autoclave pada suhu 121˚C selama 15 menit.

## Persiapan Ekstrak kulit dan Bonggol Nanas
Kulit dan bonggol nanas masing-masing sebanyak  300  gram  yang  sudah  bersih dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  96%  selama 3 × 24  jam,  lalu  dilakukan  penyaringan menggunakan kertas saring. Dilakukan pengulangan  yang  sama  hingga  hari  ke  9 dengan  penggantian  pelarut  setiap  3  hari sekali.  Maserat  yang  terbentuk  kemudian diuapkan  sampai  bebas  pelarut  etanol  sampai didapatkan  ekstrak  berwarna  coklat  pekat. Ekstrak  kulit  dan  bonggol  nanas  masing  1 gram dicampur dengan 1 ml etanol 96%.

## Perhitungan Total Bakteri Pada Milk Can
Melakukan  metode  usapan  pada  milk can  bagian  luar  dan  dalam  dengan  metode swab.    Metode  Swab  digunakan  untuk mengetahui  jumlah  mikroba  (per  cm 2 )  pada permukaan  yang  kontak  dengan  pangan (Lukman  dan  Soejoedono,  2009).  Hasil  swab dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi  NaCl  0,9%  5  ml,  kemudian  1  ml dimasukkan  dalam  media    nutrient  agar (bakteri  total)  dan  violet  red  bile  agar (coliform) kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C.
Jumlah  bakteri  dihitung  dengan  rumus  :

## Pengukuran Zona  Hambat  Bakteri Total
Kultur  bakteri  dari  media  pertumbuhan bakteri  yang  berasal  dari  milk  can  kemudian diinkubasi,  dimasukkan  dalam lactose  broth dan dibiakkan selama 24 jam pada suhu 37 o C. Pengukuran  zona  hambat  menggunakan metode  difusi  sumuran  agar  ( well  diffusion methods ).

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  uji  efektivitas  antibakteri  ekstrak kulit  dan  bonggol  nanas  ( Ananascomosus.  L ) sebagai desinfektan alami pada desinfeksi milk can  digambarkan  dengan  terbentuknya  zona hambat  pada  biakan  kultur  bakteri  total  asal permukaan  milk  can  (Tabel  1).  Pengamatan dilakukan  setelah  media  diinkubasi  pada  suhu 37 0 C  selama24  jam.    Pertumbuhan  bakteri totalpada  media  tidak  terjadi  di  sekeliling sumuran  ekstrak  kulit  dan  bonggol  nanas, yaituditandai  terbentuknya  zona  bening disekitar kertas cakram.
Zona hambat yang paling besar dibentuk oleh  ethanol  96%  sebagai  kontrol.  Secara umum  sudah  diketahui  bahwa  ethanol merupakan  antiseptik  yang  dapat  bersifat bakterisidal.  Sementara  itu,  diantara  ektrak kulit  nenas  dan  ekstrak  bonggol  nanas,  kulit nenas  menghasilkan  zona  hambat  yang  lebih luas,  yakni  10,05  mm  sedangkan  ekstrak bonggol  nanas  menghasilkan  zona  hambat 8,25  mm  (Tabel  1).Hal  ini  dapat  disebabkan oleh  kandungan  antibakteri  yang  terkandung dalam  kulit  nanas  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  kandungan  antibakteri  pada  bonggol nanas.  Faktor-faktor  yang  mempengaruhi aktivitas  antibakteri  tergantung  pada  ukuran dan komposisi populasi jasad renik, konsentrasi  zat  antimikroba,  lama  paparan,
temperatur,  dan  lingkungan  sekitar.  Merujuk pada  skala  Davis  and  Stout,  1971)  maka ekstrak  kulit  nanas  dan  bonggol  nanas mempunyai  kekuatan  sebagai  antibakteri kategori sedang.
Kekuatan
sebagai antibakterididasarkan  pada  kemampuannya membentuk  zona  hambat,  yakni  sangat  kuat (diameter  zona  hambat  >20  mm),  kuat (diameter  zona  hambat  10-20  mm),  sedang (diameter  zona  hambat  5-10  mm),  dan  lemah (diameter  zona  hambat  <5  mm)  (Davis  and Stout,  1971).Semakin  besar  zona  hambat semakin  sensitif  bakteri  tersebut  terhadap  zat antibakteri  yang  diberikan  (Bibiana  dan Hastowo, 1992).
Ekstrak kulit dan bonggol nenas mampu menurunkan  jumlah  bakteri  total  maupun coliform  (Tabel  1).  Hal  ini  sejalan  dengan hasil  pembentukan  zona  hambat  pada  kedua senyawa  tersebut.  Ethanol  96%  mampu mereduksi  bakteri  total  sampai  90,43%  dan menurunkan  jumlah  coliform  sampai  85,68%, sedangkan  ekstrak  kulit  dan  bonggol  nenas menurunkan  jumlah  bakteri  total  masih  lebih rendah,  yakni  66,15  %  dan  ektrak  bonggol nenas  55,0%  (Tabel  1).  Namun  demikian, penggunaan  ektrak  kulit  dan  bonggol  nenas sebagai  desinfektan  merupakan  solusi  yang dapat menggantikan peran ethanol. Kandungan bromelin  dan  tanin  pada  kulit  dan  bonggol nanas menjadi alasan kedua bahan itu mampu membentuk  zona  hambat  di  sekeliling sumuran. Bromelin merupakan enzim  potease yang  dapat  menghidrolisis  ikatan  peptida  dari senyawa-senyawa  protein  dan  diurai  menjadi senyawa  lain  yang  lebih  sederhana  atau  asam amino  (dos  Anjos, et  al .,  2016;  Caesarita, 2011; Praveen et al ., 2014).

## Tabel 1. Rataan Diameter Zona Hambat, penurunan bakteri total, dan penurunan Coliform pada berbagai perlakuan
Perlakuan Rataan Zona Hambat Bakteri Total (mm) Rataan Penurunan Bakteri Total (%) Rataan Penurunan Bakteri Coliform (%) Ethanol 96 % 25,75±1,22 90,43 ± 11,34 85,68 ± 12,85 EkstrakKulitNenas 9,05± 1,15 66,15 ± 12,5 52,94 ± 7,51 EkstrakBonggol Nanas 7,25±1,54 55,00 ± 12,82 51,45 ± 8,92
Selain  kandungan  bromelin,  daya hambat  ekstrak  kulit  dan  bonggol  nanas disebabkan  kandungan  antibakteri  lainnya pada  nanas yaitu senyawatanin, flavonoid, dan saponin.  Tanin  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri.  Toksisitas  tanin  dapat  merusak membran  sel  bakteri,  mekanisme  kerja senyawa  tanin  dalam  menghambat  sel  bakteri yaitu  dengan  cara  mendenaturasi  protein  sel bakteri,  menghambat  fungsi  selaput  sel (transpor  zat  dari  sel  satu  ke  sel  lain)  dan menghambat  sintesis  asam  nukleat  sehingga pertumbuhan  bakteri  dapat  terhambat.  Tanin dapat membentuk komplek dengan protein dan interaksi  hidrofobik,  jika  terbentuk  ikatan hidrogen  antara  tanin  dengan  protein  enzim yang terdapat pada bakteri maka kemungkinan akan  terdenaturasi  sehingga  metabolisme bakteri  terganggu  (Roslizawaty et  al .,  2013). Flavonoid  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  melalui  mekanisme  terganggunya permeabilitas  dinding  sel  bakteri  yang  akan menyebabkan lisis,  menghambat sintesis asam nukleat,  menghambat  fungsi  membrane sitoplasma,  dan  menghambat  metabolism energi (Dewi 2010; Xie et al ., 2015). Saponin dapat  menekan  pertumbuhan  bakteri  karena dapat  menurunkan  tegangan  permukaan dinding  sel  yang  menyebabkan  lisis  (Karlina, 2013).
Ekstrak  kulit  nanas  dapat  mereduksi jumlah  bakteri  total  pada milk  can lebih  baik dibandingan  dengan  ekstrak  bonggol  nanas dan  Ethanol  90%  (Tabel  1).  Senyawa  tanin yang  terkandung  dalam  ekstrak  kulit  nanas sangat efektif dalam membunuh bakteri. Tanin merupakan  senyawa  kimia  yang  tergolong dalam  senyawa  polifenol  (Sung et  al ., 2012).Tanin mempunyai kemampuan mengendapkan protein, karena tanin mengandung  sejumlah  kelompok  ikatan fungsional  yang  kuat  dengan  molekul  protein yang  selanjutnya  akan  menghasilkan  ikatan silang  yang  besar  dan  komplek  yaitu  protein tanin.  Tanin  menyebabkan  kerusakan  pada dinding sel bakteri. Terjadinya kerusakan pada dinding  sel  bakteri  menyebabkan  sel  bakteri akibatnya membran sel akan bocor dan bakteri mengalami  hambatan  pertumbuhan  bahkan kematian  (Lopez-Romero et  al .,  2015).
Reduksi bakteri berbanding lurus dengan zona hambat yang terbentuk (Tabel 1). Ukuran zona hambat  terkait  dengan  aktivitas  antimikroba pada  sampel,  zona  hambat  yang  besar
mengartikan  bahwa  antimikroba  tersebut sangatpotensial. (Olson, 2016).

## Kesimpulan
Limbah  buah  nanas  cukup  efektif digunakan  sebagai  desinfektan  alami  pada desinfeksi  milk  can.    Hal  ini  digambarkan dengan  terbentuknya  zona  hambat  terhadap bakteri total danpenurunan jumlah bakteri total dan coliform pada permukaan milk can.

## Daftar Pustaka
Akiyama, H., K. Fujji, O. Yamasaki, T. Oono, and K. Iwatsuki. (2001). Antibacterial action of several tannins against Staphylococcus aureus. Journal of Anitimicrobial Chemotherapy 48:487-491.
Agustina,  L.(1990). Dasar  Nutrisi  Tanaman. Rineka Cipta . Jakarta Bibiana  W  dan  Sugyo  Hastowo.  (1992) . Mikrobiologi . Rajawali. Jakarta Caesarita, D.P. (2011). Pengaruh Ekstrak Buah Nanas  ( Ananas  comosus )  100% terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dari  Pioderma.  Artikel  Karya
Tulis  Ilmiah.  Program  Pendidikan
Sarjana Kedokteran Fakultas
Kedokteran Universitas Diponegoro. Davis dan Stout.(1971). Disc Plate Method Of Microbiological  Antibiotic  Essay. Journal Of Microbiology. Vol 22 No 4. Damogalad,  Viondy,  Hosea  Jaya  Edy,
Hamidah Sri Supriati. (2013).
Formulasi  Krim  Tabir  Surya  Ekstrak Kulit Nanas (Ananas comosus L Merr) Dan  Uji In  Vitro Nilai Sun  Protecting Factor  (Spf) . Pharmacon  Jurnal Ilmiah  Farmasi  –  Unsrat  Vol.  2,  No. 02, Hlm. 39-44 ISSN 2302 – 2493 . Dewi,  F.K.  (2010). Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Buah  Mengkudu (Morinda Citrifolia, Linnaeus)Terhadap  Bakteri  Pembusuk Daging  Segar .  Fakultas  Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Sebelas Maret. Surakarta.
Dos Anjos, MM., da Silva AA, de Pascoli IC,
Mikcha  JM,  Machinski  M  Jr.,  Peralta RM, de Abreu Filho BA.  (2016).  Int. J Food Microbiol. 4, 216:121-6.
Karlina  C.Y.,  Ibrahim  M.,  Trimulyono  G. (2013). Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Herba Krokot (Portulaca oleracea L.) terhadap  Staphylococcus  aureus  dan
Escherichia  coli.  E  journal  UNESA LenteraBio. 2 (1) :87–93 .
Loo,  Y.K.,  M.H.  Satari,  W.  Dewi.    (2018). Antibacterial  effect  of  pineapple (ananascomosus) extract towards Staphylococcus  aureus .    Padjadjaran
Journal of Dentistry 30 (1):1-6.
Lovez-Romero,  JC.,  H.  Gonzalez-Rios,  A.
Borges, M. Simoes.(2015). Antibacterial  effects  and  mode  of selected  essensial  oils  components against Escherichia coli and Staphylococcus  aureus.    Evid  Based Complement Alternat Med. https://dx.doi.org/10.1155%2F2015%2
F795435 Lukman,  D.  W.  danSoedjono,  R.  R.  (2009). UjiSanitasi,  PenuntunPraktik  Hygiene Pangan  Asal  Ternak.  Bogor:  Bagian Kesehatan Veteriner Departemen Ilmu Penyakit  Hewan  dan  Kesmavet. Fakultas Kedokteran Hewan. IPB. Olson,  A.  (2017). The  End  Zone:  Measuring Antimicrobial
Effectiveness
with
Zones  of  Inhibition. Retrieved  from https://www.sciencebuddies.org/scienc e-fair-projects/project- ideas/MicroBio_p014/microbiology/m easuring-antimicrobial-effectiveness- with-zones-of-inhibition Payne, D.E., N.R. Martin, K.R. Parzych, A.H. Rickard, A.
Underwood, B.R. Boles.(2013).    Tannic  acid  inhibits Staphylococcus aureus surface
colonization  in  an  IsaA-Dependent Manner.    Infection  and  Immunity, American  Societr  for  Microbiology. Vol. 81. No. 2. Praveen,N.C.,A  Rajesh,  Manish  Madan, Vishwajit Rampratap Chaurasia, Neel V Hiremath,and  Akanksha  Manmohan Sharma.  (2014).  In  vitro  Evaluation  of Antibacterial  Efficacy  of  Pineapple Extract  (Bromelain)  on  Periodontal Pathogens . Journal ofInternational Oral Health : JIOH, Vol 6(5): 96-98 . Roslizawaty,    N.Y.  Ramadani,  Fakhrurrazi,
Herrialfian. (2013). Aktivitas
Antibakterial  Ekstrak  Etanol  dan Rebusan  Sarang  Semut  ( Myrmecodia sp.)  terhadap  Bakteri Escherichia  coli . Jurnal  Medika  Veterinaria,  Vol.  7,  No. 2, Hlm. 91-94, ISSN : 0853-1943. Roy,  Soma.  Prashanth  Lingamperta.(2014). Solid  Wastes  of  Fruits  Peels  As  Source
of  Low  Cost  Broad  Spectrum  Natural Antimicrobial  Compounds-  Furanone,
Furfural  and  Benezenetriol.  Institute  Of Technology, Biotechnology Department, Hyderabad, India.
International  Journal  of  Research inEngineering  and  Technology  eISSN: 2319-1163  |  pISSN:  2321-7308,  Hlm. 273-279.
Sung,  SH.,  K.H.  Kim,  B.T.  Jeon,  S.H. Cheong,  J.H.  Park,  D.H.  Kim, H.J.Kweon,  and  S.H.  Moon.(2012). Antibacterial  and  antioxidant  activities of  tannins  extracted  from  agricultural by-products.    Journal  of  Medicinal Plants Research. 6(15): 3072-3079. Windu,  D.,  P.  Irawan,  Karno,  H.  Jayadi. (2014).  Pengaruh  ekstrak  limbah  kulit buah nanas Cayenne dalam menurunkan jumlah  bakteri  Coli  pada  proses desinfeksi  air  bersih.    Widya  Warta  01. ISSN 0854-1981, 96-107.
Xie,  Y,  Yang  W,  Tang  F,  Chen  X,  Ren  L. (2015).  Antibacterial  activities  of flavonoids: structure-activity relationship  and  mechanism.    Crr  Med Chem. 22(1):132-49.
Zharfan,  R.S.,  P.B.  Purwono,  A.  Mustika. (2017).  Antimicrobial  activity  of pineapple  (Ananas  comosus  L.  Merr) extract  against  multidrug-resistant  of Pseudomonas  aeruginosa:  an  in  vitro study.    Indonesian  Journal  of  Tropical and Infectious Disease. 6 (5): 118-123.