Vol.3, No.9, Februari 2024
…………………………………………………………………………………………………….......................................... ISSN 2798-3471 (Cetak)
ISSN 2798-3641 (Online)
KESETARAAN  JUMLAH  KOLONI  PROBIOTIK  SOYGHURT  BEKU  KERING  ANTARA METODE TPC DAN SPEKTROFOTOMETER
Oleh Eka Noneng Nawangsih 1 , Khansa Nisrina Khaerunnisa 2 , Nurjannah Achmad 3 , Teja Koswara 4
1 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani 2 Program Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani 3 Departemen Biokimia, Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani 4 Departemen  Patologi  Anatomi,  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Jenderal  Achmad Yani Email: 1 eka.noneng@lecture.unjani.ac.id
Article History: Received:10-01-2024 Revised: 18-01-2024 Accepted: 13-02-2024
Abstract: Soyghurt  yang  ditambahkan  inulin  dan  sukrosa, jumlah  bakterinya  akan  meningkat  dibandingkan  dengan soyghurt  yang  tidak  diberi  inulin  dan  sukrosa.  Hal  ini disebabkan  karena  sifat  inulin  sebagai  prebiotik  yang menunjang  pertumbuhan  bakteri  probiotik  dan  sukrosa sebagai  krioprotektan  yang  mempertahankan  viabilitas soyghurt. Pengukuran jumlah koloni dapat dihitung dengan metode  Total  Plate  Count  (TPC)  dan  spektrofotometer. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh  rumus kesetaraan  jumlah  koloni  dari  metode  TPC  dan spektrofotometer. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah deskriptif untuk mendapatkan rumus kesetaraan. Seluruh data diolah  menggunakan  microsoft excel.  Rumus kesetaraan  didpatkan  dengan  meregresikan  jumlah  koloni TPC  dan  spektrofotometer.  Dari  hasil  penelitian  ini, didapatkan rumus kesetaraan dari kedua metode yaitu  y =
71613x – 192,55  dengan  nilai  korelasi  R 2 =  0,9185. Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  didapatkannya  pola analisis  regresi  dari  metode  TPC  dan  spektrofotometer, semakin tinggi jumlah  bakteri dari  dari metode TPC maka akan  semakin  tinggi  nilai  absorbansi  dari  metode spektrofotometer.  Selain  itu,  Nilai korelasi  yang mendekati angka  1  (R 2 =  0,9185)  menunjukkan  bahwa  tingkat kepercayaan pada kurva mendekati sempurna.
Keywords: Soyghurt, Spektrofotometer, TPC

## PENDAHULUAN
Probiotik Lactobacillus  acidophilus  (L.  acidophilus )  dan Bifidobacterium  bifidum  (B. bifidum) termasuk  kedalam  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL).  BAL  adalah  organisme  yang bermanfaat  karena  dapat  memfermentasikan  molekul  karbohidrat  untuk  menghasilkan asam laktat. Probiotik adalah mikroorganisme baik yang hidup secara natural dalam usus manusia  dan  dapat  memberikan  dampak  positif  bagi  kesehatan  usus  manusia.  Beberapa manfaat  probiotik  adalah  membantu  proses  pencernaan,  meningkatkan  kekebalan  tubuh,

## Vol.3, No.9, Februari 2024
…………………………………………………………………………………………………………………………………… .. Journal of Innovation Research and Knowledge
ISSN 2798-3471 (Cetak) ISSN 2798-3641 (Online)
antibiotik alternatif, penghasil bakteriosin, dapat mengatasi sindrom iritasi pada usus besar dan gangguan pada sistem pencernaan. Berbeda dengan prebiotik, prebiotik adalah bahan makanan yang tidak dapat dicerna yang memberikan manfaat positif bagi inangnya dengan memberikan stimulasi pada salah satu atau beberapa bakteri yang hidup di kolon sehingga dapat meningkatkan kesehatan inangnya.
Metode TPC adalah salah satu uji mikrobiologis secara kuantitatif. Uji mikrobiologi merupakan  salah  satu  jenis  uji  yang  penting  karena  bisa  memperkirakan  daya  simpan makanan  yang  memerlukan  syarat  jumlah  bakteri  tertentu,  juga  dapat  digunakan  sebagai indikator  sanitasi  makanan  untuk  keamanan  makanan.  Metode  TPC  memiliki  kelemahan yaitu terdapat batasan untuk menghitung bakteri sehingga kisaran penghitungannya sempit, yaitu 25-250 CFU bakteri. Kelemahan lainnya dari metode ini adalah jumlah bakteri dalam CFU  yang  tercatat  terkadang  tidak  sama  antar  teknisi.  Hal  ini  karena  data  bakteri  yang tercatat  adalah data  mentah dan perbedaan  tersebut  dapat  dipengaruhi  oleh pengalaman teknisi yang berbeda-beda, morfologi koloni dan densitas koloni. Metode spektrofotometer adalah metode untuk mengukur berapa banyak substansi kimia dengan mengukur banyak absorbansi cahaya pada sampel larutan. . Fotometer akan mengukur intensitas cahaya yang diabsorbansi. Metode spektrofotometer memiliki kelebihan yaitu dapat mengetahui kualitas dari  substansi  yang  diteliti  secara  langsung,  sehingga  hal  ini  memudahkan  peneliti  untuk meningkatkan kualitas substansi yang dipakai. Kelebihan lainnya, spektrofotometer dapat mendeteksi karakteristik substansi yang sangat luas, sehingga jumlah bakteri dapat dihitung tanpa  adanya  perbedaan  seperti  halnya  pada  metode  TPC,  selain  itu  metode  ini  memiliki kelebihan  tidak menimbulkan  polusi,  tidak merusak,  mudah  digunakan,  dan  sudah  sering digunakan  dalam  produk  makanan.    Berdasarkan  uraian  tersebut,  peneliti  tertarik  untuk membandingkan  jumlah  bakteri  probiotik  pada  soyghurt  probiotik L.  acidophilus dan  B . bifidum dengan penambahan inulin dan sukrosa dengan dengan menggunakan metode TPC dan spektrofotometer”.

## LANDASAN TEORI
Metode TPC adalah salah satu uji mikrobiologi yang mampu menghitung kepadatan bakteri dengan prosedur yang sederhana. Metode TPC biasa digunakan untuk menghitung jumlah atau angka bakteri mesofil aerob yang mungkin mencemari suatu produk, baik itu makanan-minuman,  air,  dan  produk  lainnya.  Metode  TPC  termasuk  kedalam  uji mikrobiologis dan merupakan uji kuantitatif.
Metode spektrofotometer adalah metode untuk mengukur berapa banyak substansi kimia  dengan  mengukur  banyak  absorbansi  cahaya  pada  sampel  larutan.  Metode  ini termasuk kedalam metode analisis  kuantitatif yang digunakan dalam bidang kimia, fisika, biokimia, Teknik material, teknik kimia serta penggunaan klinis. Metode spektrofotometer terdiri atas dua alat yaitu spektrometer dan fotometer. Alat ini akan menghasilkan cahaya yang disebut beam dan dilewatkan ke gelombang tertentu sehingga dihasilkan sinar dengan panjang gelombang tertentu lalu panjang gelombang tertentu ini akan diukur dengan alat fotometer. Fotometer akan mengukur intensitas cahaya yang diabsorbsi. Hasil dapat terbaca langsung  dan  dicatat  oleh  detektor  dan  tercetak  dalam  angka  digital  ataupun  grafik  yang sudah diregresikan. . Jenis spektrofotometer dibagi menjadi dua berdasarkan kelasnya yaitu single beam dan double beam . Dimana perbedaan antara kedua kelasnya yaitu, single beam
Vol.3, No.9, Februari 2024
…………………………………………………………………………………………………….......................................... ISSN 2798-3471 (Cetak)
ISSN 2798-3641 (Online)
komponen  disusun  tunggal,  dan  pemeliharaannya  lebih  mudah.  Pada  jenis double  beam terdapat  dua  berkas  cahaya  setelah  melewati  monokromator.  Pembacaan  sampel  dan standar dapat dilakukan bersamaan sehingga pengukuran menjadi independen dari variasi intensitas sumber cahaya. Hasil kepadatan bakteri dapat dihitung dengan membuat regresi linear sehingga didapatkan persamaan yang menghubungkan konsentrasi dengan absorban. Bahan  yang  akan  diteliti  yang  telah  diketahui  konsentrasinya  akan  diukur  nilai absorbansinya dengan spektrofotometer lalu didapatkan nilai konsentrasi versus absorban. Regresi linear tersebut dapat menggunakan Microsoft excell atau kalkulator spesifik.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  metode  deskriptif  untuk  mendapatkan  data  yang kemudian  akan  dianalisis  untuk  memperoleh  rumus  kesetaraan  antara  metode  TPC  dan spektrofotometer.  Subjek  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  soyghurt  L. acidophilus  dan  B.  bifidum  beku  kering  dengan  penambahan  inulin  dan  sukrosa.  Kriteria inklusi: soyghurt yang digunakan merupakan soyghurt beku kering yang diencerkan dengan susu kedelai. kriteria eksklusi: Adanya jamur dengan manifestasi bintik bintik putih, coklat, dan  kehijauan  pada  soyghurt.  Tercium  aroma  tengik  seperti  susu  basi  pada  soyghurt. Soyghurt  tampak  berair  dan  terdapat  gumpalan  di  dalamnya.  Sampel  tersebut  dihitung secara duplo dan masing-masing diencerkan sampai 20 kali pengenceran.   Masing-masing kelompok  kemudian  dihitung  dengan  metode  TPC  kemudian  dibandingkan  dengan  hasil pengukuran spektrofotometer.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berikut  ini  adalah  hasil  penghitungan  bakteri  dengan  metode  TPC  dan spektrofotometer yang kemudian dibuat kurva dan rumus kesetaraan jumlah bakteri dari kedua metode tersebut.

## Penghitungan dengan metode TPC
Penghitungan  dengan  metode  TPC  dilakukan  secara  duplo.  Berdasarkan  hasil penghitungan menggunakan metode TPC didapatkan hasil terendah (dalam rentang 25 – 250 CFU/ml) pada pengenceran 10 [8], yaitu 2,75 x 10 20 . Nilai tersebut sudah memenuhi SNI yaitu 10 6 -10 8 CFU/ml . Tabel 1 adalah hasil penghitungan jumlah bakteri dengan metode TPC dari masing masing pengenceran.
Tabel 1. Penghitungan jumlah koloni dengan metode TPC Pengenceran  TPC 1 (CFU/ml)  TPC 2 (CFU/ml)  Rata rata (CFU/ml)
10 1 TBUD TBUD TBUD 10 2 TBUD TBUD TBUD 10 3 TBUD TBUD TBUD 10 4 TBUD TBUD TBUD 10 5 TBUD TBUD TBUD 10 6 TBUD TBUD TBUD 10 7 TBUD TBUD TBUD 10 8 TBUD TBUD TBUD 10 9 TBUD TBUD TBUD

## Vol.3, No.9, Februari 2024
…………………………………………………………………………………………………………………………………… .. Journal of Innovation Research and Knowledge
ISSN 2798-3471 (Cetak) ISSN 2798-3641 (Online) 10 10 8,29 x 10 22 5,52 x 10 22 7,22 x 10 22 10 11 5,55 x 10 21 3,71 x 10 21 4,63 x 10 21 10 12 5,73 x 10 20 1,36 x 10 20 3,54 x 10 20 10 13 4,10 x 10 19 2,58 x 10 19 3,34 x 10 19 10 14 4,40 x 10 18 2,19 x 10 18 3,29 x 10 18 10 15 1,81 x 10 17 1,31 x 10 17 1,56 x 10 17 10 16 1,86 x 10 16 1,04 x 10 16 1,45 x 10 16 10 17 1,00 x 10 14 7,5 x 10 14 8,75 x 10 14 10 18 5,4 x 10 13 5,4 x 10 13 5,4 x 10 13 10 19 3,0 x 10 12 2,5 x 10 12 2,75 x 10 12 10 20 8,00 x 10 10 6,00 x 10 10 7,00 x 10 10
Keterangan:  TBUD  (Terlalu  banyak  untuk  dihitung),  TPC  1  (perlakuan  pertama),  TPC  2 (perlakuan kedua)

## Penghitungan jumlah bakteri dengan metode Spektrofotometer
Penghitungan  jumlah  koloni  dilakukan  secara duplo untuk  setiap  pengenceran menggunakan  panjang  gelombang  350  nm.  Rentang  gelombang  340 – 450  nm  dapat digunakan  untuk  larutan  yang  berwarna  kuning.  Berikut  ini  adalah  nilai  absorbansi  pada sediaan  KN  (susu  kedelai  saja)  sebagai  kontrol  negatif,  K1  (inulin  +  sukrosa),  dan  K1-KN adalah selisih nilai absorbansi antara kedua kelompok tersebut.
Tabel 2. Pengukuran menggunakan spektrofotometer Pengenceran K1 KN K1-KN 10 1 3,671 3,145 0,526 10 2 0,869 0,547 0,322 10 3 0,331 0,077 0,254 10 4 0,154 0,038 0,116 10 5 0,077 0,031 0,046 10 6 0,031 0,014 0,017 10 7 0,025 0,011 0,014 10 8 0,023 0,009 0,014 10 9 0,022 0,009 0,013 10 10 0,019 0,008 0,011 10 11 0,017 0,008 0,009 10 12 0,016 0,007 0,009 10 13 0,014 0,006 0,008 10 14 0,012 0,005 0,007 10 15 0,011 0,005 0,006 10 16 0,009 0,004 0,005 10 17 0,007 0,003 0,004 10 18 0,006 0,003 0,003 10 19 0,005 0,002 0,003 10 20 0,004 0,002 0,002
Keterangan: K1 (soyghurt dengan penambahan inulin + sukrosa), KN (susu kedelai, kontrol
Vol.3, No.9, Februari 2024
…………………………………………………………………………………………………….......................................... ISSN 2798-3471 (Cetak)
ISSN 2798-3641 (Online)

## negatif) Hasil Regresi dan Rumus Kesetaraan
Hasil  analisi  regresi  nilai  jumlah  koloni  dan  nilai  absorbansi  dari  metode  TPC  dan spektrofotometer  menghasilkan  rumus  kesetaraan      kedua  metode  tersebut.  Rumus kesetaraan yang dihasilkan adalah y = 71613x – 192,55 dengan nilai korelasi R 2 = 0,9185. Nilai korelasi menunjukan nilai yang mendekati 1 sehingga dapat dikatakan bahwa tingkat kepercayaan  kurva  mendekati  sempurna.    Berikut  adalah  kurva  regresi  spektrofotometer dan TPC. Berikut adalah kurva linear yang menunjukkan rumus kesetaraan nilai TPC dan nilai absorbansi spektrofotometer tampak pada gambar 3.

## Gambar 3. Kurva Persamaan Spektrofotometer dan TPC
Pada penelitian yang dilakukan oleh Portia Mira dkk (2022) mengatakan bahwa kurva standar  yang  dapat  dipercaya  apabila  nilai  R  mendekati  1  atau  0,99.  Dalam  penelitian tersebut  menggunakan  regresi  polynomial  didapatkan  nilai  0,99 [11].  Selain  itu  terdapat penelitian yang dilakukan oleh Seniati dkk (2019) menyatakan bahwa terdapat hubungan korelasi  antara  nilai  OD atau  spektrofotometer  dengan  kepadatan  bakteri.  Semakin tinggi nilai  kepadatan  bakteri  maka  nilai  OD  juga  semakin  tinggi [12].  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian ini yang menunjukkan bahwa setiap peningkatan jumlah koloni bakteri, maka nilai absorbansi juga meningkat .

## KESIMPULAN
Berikut adalah kesimpulan dari penelitian yang telah dilakukan:
1. Jumlah koloni probiotik dari sampel soyghurt beku kering dengan  penambahan inulin dan  sukrosa  adalah  27,5  pada  pengenceran  10 19 didapatkan  dari  metode  TPC.  Nilai absorbansi yang didapatkan pada pengenceran 10 19 adalah 0,003.
2. Berikut  adalah  rumus  kesetaran  jumlah  koloni L.  acidophilus dan B.  bifidum dengan metode TPC dan spektrofotometer y = 71613x – 192,55 dengan nilai korelasi R 2 = 0, 9185. Nilai korelasi yang mendekati angka 1 menunjukkan bahwa tingkat kepercayaan pada kurva mendekati sempurna.
y = 71613x - 192.55 R² = 0.9185 -100 0 100 200 300 400 500 600 700 800 0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 Nilai T P C Nilai Absorbansi Persamaan Linear TPC dan Spektrofotometer

## Vol.3, No.9, Februari 2024
…………………………………………………………………………………………………………………………………… .. Journal of Innovation Research and Knowledge
ISSN 2798-3471 (Cetak) ISSN 2798-3641 (Online)

## Pengakuan/Acknowledgements
Kami  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Lembaga  Pengabdian  Pada  Masyarakat (LPPM) Universitas Jenderal Achmad Yani yang telah mendanai penelitian ini, juga kepada staf  laboran  Departemen  Mikrobiologi  dan  Biokimia  Fakultas  Kedokteran  Universitas Jenderal Achmad Yani yang telah membantu pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Sitonang SN, Roza E, Rossi E, Aritonang SN, et al. PROBIOTIK & PREBIOTIK dari Kedelai untuk Pangan Fungsional [Internet]. 2019. Available from:
www.indomediapustaka.com
[2] Gaspar C, Donders GG, Palmeira-de-Oliveira R, Queiroz JA, Tomaz C, et al. Bacteriocin production of the probiotic Lactobacillus acidophilus KS400. AMB Express. 2018 Dec 1;8(1).
[3] Vandeputte  D,  Falony  G,  Vieira-Silva  S,  Wang  J,  Sailer  M,  et  al.  Prebiotic  inulin-type fructans  induce  specific  changes  in  the  human  gut  microbiota.  Gut.  2017  Nov 1;66(11):1968 – 74.
[4] Sukmawati B, Simohon I. Analisis Angka Lempeng Total Mikroba Pada Ikan Kembung (Rastrelliger sp.) Segar di Tempat Pelelangan Ikan Kota Sorong Papua Barat. Vol. 11, Samakia: Jurnal Ilmu Perikanan. 2020.
[5] Sutton S. The limitations of CFU: Compliance to CGMP requires Good Science. 2012.
[6] Mubarok F. Spektofotometer Prinsip dan Cara Kerjanya [Internet]. Surabaya; 2021 Jun. Available from: https://www.researchgate.net/publication/352291658
[7] Muñiz  R,  Cuevas-Valdés  M,  de  la  Roza-Delgado  B.  Milk  quality  control  requirement evaluation  using  a  handheld  near  infrared  reflectance  spectrophotometer  and  a bespoke mobile application. Journal of Food Composition and Analysis. 2020 Mar 1;86.
[8] Arando A, Gonzalez A, Delgado J, Arrebola FA, Perez-Marín CC. Storage temperature and sucrose concentrations affect ram sperm quality after vitrification. Anim Reprod Sci. 2017 Jun 1;181:175 – 85
[9] Yuniastuti  A.  Probiotik  (Dalam  Perspektif  Kesehatan)  Potensi  Gizimikro  Seng  (Zn) Sebagai  Imunostimulan  Respon  Imun  Seluler  Pada  Demam  Tifoid  View  Project Metagenomics  And  Metabolomics  Analysis  Of  Intestinal  Microbiota  For Characterization  Of  Domestic  Duck  Immunity  Profile  View  Project  [Internet].  2019. Available from: https://www.researchgate.net/publication/320441645
[10] Kristianingrum  S.  Spektrofotometer  UV  dan  SInar  Tampak.  Universitas  Yogyakarta. 2018.
[11] Mira P, Yeh P, Hall BG. Estimating microbial population data from optical density. PLoS One. 2022 Oct 1;17(10 October).
[12] Seniati, Marbiah, Irham A. Pengukuran Kepadatan Bakteri Vibrio Harveyi Secara Cepat Dengan Menggunakan Spectrofotometer. 2019.