## Artikel Penelitian

## THE ROLE OF PLATELET-RICH FIBRIN FACILITATES THE HEALING OF GASTROCNEMIUS MUSCLE DEFECT: A PRELIMINARY STUDY ON ANIMAL MODEL
Dwikora Novembri Utomo 1* , Kukuh Dwiputra Hernugrahanto 2
1 Senior Consultant of Orthopaedic and Traumatology Department, Faculty of Medicine, Universitas Airlangga, Dr Soetomo General Hospital, Surabaya
2 Resident of Orthopaedic and Traumatology Department, Faculty of Medicine, Universitas Airlangga, Dr Soetomo General Hospital, Surabaya
*Corresponding  Author:  Dwikora  Novembri  Utomo,  Senior  Consultant  of  Orthopedic  and Traumatology  Department,  Faculty  of  Medicine,  Universitas  Airlangga,  Jl.  Mayjen  Prof.  Dr. Moestopo 6-8, Surabaya E-mail: dwikora_utomo@yahoo.com

## ABSTRAK
Latar  Belakang: Pembentukan  jaringan    parut  sebagai  hasil  akhir  penyembuhan  otot  yang cedera  adalah  masalah  klasik  yang  belum  mendapatkan  solusi  yang  memuaskan.  Jaringan parut  ini akan  menurunkan  fungsi  dan  kapasitas  fungsional  otot.    Banyak  usaha  yang  sudah dilakukan termasuk pemberian platelet-rich plasma (PRP)namun sayangnya PRP ini memiliki keterbatasan  seperti  resiko  reaksi  imunologis,  persiapan  yang  rumit,  dan  ketiadaan  sifat sebagai scaffold . Platelet-rich  fibrin (PRF)  sebagai  generasi  baru  dari  konsentrat  platelet adalah  sumber  faktor  pertumbuhan  dan  memiliki  keuntungan  seperti  bentuk  gel  yang menyerupai scaffold . Tujuan: Mengetahui efek PRF pada penyembuhan cedera otot pada model hewan coba.
Metode: Penelitian  ini  sudah  disetujui  olek  Komisi  Etik  Penelitian  Fakultas  Kedokteran Hewan  Universitas  Airlangga.  Sebanya  dua  puluh  kelinci New  Zealand  White  Rabbit dibagi menjadi  dua  kelompok  yaiu  kelompok  kontrol  dan  kelompok  yang  mendapat  PRF.  Pada kelompok  kontrol,  defek  otot  tidak  diberikan  apa-apa  sedangkan  pada  kelompok  perlakuan defek  otot  diberikan  PRF.  Kedua  kelompok  dievaluasi  setelah  minggu  kedua  dan  keempat secara imunohistokimia untuk membandingkan ekspresi protein Pax7. Hasil: Kelompok perlakuan yang mendapat PRF memberikan skor ekspresi Pax7 yang lebh tinggi dibandingkan kelompok kontrol baik pada minggu kedua maupun keempat.
Kesimpulan: Pemberian  PRF  memberikan  keuntungan  pada  proses  peneyembuhan  otot. Hasil studi pendahuluan ini dapat digunakan sebagai landasan untuk penelitian menggunakan PRF selanjutnya.
Kata kunci: cedera otot, penyembuhan otot, platelet-rich fibrin

## ABSTRACT
Background: Scar  formation  has  been  a  classical  issue  in  the  healing  of  skeletal  muscle defect which will results in decrease of strength and function. Platelet-rich plasma (PRP) has been studied to enhance the healing of muscle defect. The disadvantages of it include the risk of immunologic reaction, time-consuming preparation, and lack of scaffold element. Platelet- rich  fibrin  (PRF)  is  a  new  generation  of  platelet  concentrate  that  provides  good  source  of growth  factors  and  scaffold  element  necessary  for  the  healing.  This  study  is  to  provide  a fondation  of  PRF  preparation  and  implantation  for  the  healing  of  experimental  defect  of gastrocnemius muscle in an animal model.
Purpose: The  goal  is  to  provide  a  fondation  of  PRF  preparation  and  implantation  for  the healing of experimental defect of gastrocnemius muscle in an animal model.

## Artikel Penelitian
Methods: Animal  Care  and  Use  Committee,  Airlangga  University  approved  the  study. Twenty New Zealand white rabbits were divided into two groups. In control group, a defect was created in the right gastrocnemius and no implantation was done. In study group, similar defect  was  created  with  implantation  of  PRF.  Two  and  four  weeks  after  surgery,  the  defect was examined immunohistochemically for the expression of Pax7 protein.
Results: The implanted group showed higher IRS score in two and four weeks compared to the control group.
Conclusion: The use of PRF facilitates the healing of muscle injury. This study will be used as a fondation for further study on PRF.
Keywords: muscle defect,muscle healing, platelet-rich fibrin

## PENDAHULUAN
Cedera  otot  adalah  cedera  yang sering  terjadi  saat  melakukan  aktivitas olahraga.  Insidensi  cedera  otot  pada olahragawan  profesional  mencapai  23 sampai  46  persen  dari  semua  cedera olahraga. 1 Insidensi  cedera  otot  yang tinggi  ini  menyebabkan  kerugian  baik dari  segi  finansial  maupun  performa atlet.  Data  dari  liga  hoki  es  profesional National Hockey League Amerika Serikat tahun  2014 menyebutkan  bahwa cedera otot terjadi pada 50,9% atlet hoki es  sehingga  menyebabkan  setidaknya para atlet kehilangan kesempatan bermain  setidaknya  satu  pertandingan dan  kerugian  finansial  mencapai  218 juta  dollar  dalam  setahun.  Implikasi finansial  yang  lebih  besar  hingga  1,4 milyar dollar harus ditanggung oleh liga Major  League  Baseball akibat  cedera otot pada atlet baseball . 2
Otot yang cedera akan mengalami rangkaian proses penyembuhan yang meliputi fase inflamasi,  proliferasi  dan  remodeling.
Proses penyembuhan otot ini melibatkan peran  dan  kerjasama  antara  sel  punca otot dan faktor pertumbuhan. Sayangnya,  jaringan  yang  terbentuk sebagai hasil akhir penyembuhan cedera otot bukanlah jaringan otot seperti sedia kala  melainkan  jaringan  parut.  Jaringan parut  ini  terdiri  dari  jaringan  ikat  yang berbeda  dari  jaringan  otot  asli  sehingga menyebabkan  berkurangnya  kapasitas kontraktilitas dan fungsional otot setelah cedera. 3 Serabut otot baru yang terbentuk  juga  tidak cukup  cepat  karena proses penyembuhan yang lama, dengan rentang  waktu  penyembuhan  antara  6 minggu  hingga  6  bulan  tergantung  dari derajat cedera. Penyembuhan yang lama ini memiliki implikasi terhadap lamanya waktu return-to-play sehingga memberikan kerugian bagi atlet. 4
Penanganan cedera otot yang ada saat  ini  bergantung  pada  derajat  cedera otot  yang  terjadi.  Sebagian  besar cedera otot  akut  adalah  robekan  sebagian dimana  cedera  jenis  ini  umumnya  bisa

## Artikel Penelitian
diterapi  dengan  baik  dengan rest,  ice, compression dan elevation atau  yang biasa  disingkat  RICE  dan  obat-obatan antiinflamasi nonsteoridal yang diberikan dalam minggu pertama diikuti dengan  fisioterapi  progresif. 5 Tindakan operatif  dilakukan  pada  cedera  otot dengan  robekan  total  (derajat  3). Tindakan  operatif  dengan  penjahitan robekan total dilakukan untuk mencegah komplikasi  dini  dan  lanjut  yang  dapat terjadi.  Namun  sayangnya,  terapi  yang ada  saat  ini  belum  bisa  memberikan hasil  yang  memuaskan  seperti  kondisi sebelum  cedera  terutama  untuk  atlet dengan aktivitas tinggi. 6
Telah  diketahui  bahwa  faktor pertumbuhan  berperan  penting  dalam penyembuhan  otot.  Faktor  pertumbuhan ini  meliputi Fibroblast  Growth  Factos (FGF-2), Insulin-like  Growth  Factor (IGF-1), Vascular  Endothelial  Growth
Factor (VEGF),  dan Platelet-derived Growth  Factor (PDGF).  Studi  oleh
Hammond et  al menyatakan  bahwa pemberian  faktor  pertumbuhan  dapat mengakselerasi dan meningkatkan kualitas hasil akhir proses penyembuhan otot 7 . Pada studi itu, faktor pertumbuhan didapatkan  dari  pemberian autologous platelet-rich plasma (PRP).
Sebelumnya, telah banyak penelitian yang mempelajari efek
pemberian  PRP  pada  penyembuhan tulang,  tulang  rawan,  tendon  dan ligamen.  Sayangnya,  terdapat  beberapa kekurangan  yang  dimiliki  oleh  PRP. Pertama, proses pembuatan PRP membutuhkan  tambahan  antikoagulan dalam  jumlah  banyak  dan  juga bovine- derived  thrombin yang  berfungsi  untuk mengkonversi fibrinogen menjadi fibrin. Tambahan  thrombin  dari bovine ini membuat  PRP  tidak  murni autologous sehingga  didapatkan  efek  samping berupa  pembentukan  antibodi  terhadap faktor V,XI dan thrombin yang berujung pada koagulopati. 8 Kedua, bentuk sediaan  PRP  yang  berupa  plasma  yang cair  membutuhkan  bahan  lain  sebagai media  pembawa  atau  penahan in-situ pada  lokasi aplikasi  pada  otot  agar  PRP tetap  berada  pada  lokasi  cedera  sesuai yang diinjeksikan dan tidak menyebar ke sekitar  lokasi  aplikasi  yang  diinginkan. Bahan  yang  sering  digunakan  adalah fibrin glue. 9
Dari  keterbatasan  PRP  tersebut, Platelet-rich Fibrin (PRF) mulai diperkenalkan  sebagai  generasi  kedua dari PRP.
Pembuatan
PRF membutuhkan proses yang lebih sederhana,  tanpa  antikoagulan  dan  tidak membutuhkan  tambahan bovine-derived thrombin sehingga  PRF  tetap  terjaga sifat autologous- nya serta

## Artikel Penelitian
menghilangkan resiko terjadinya
koagulopati. Perbedaan proses pembuatan  menghasilkan  bentuk  yang lebih menyerupai gel pada PRF dibandingkan  PRP.  Bentuk  gel  ini diharapkan  mampu  berperan  sebagai scaffold sehingga  memudahkan  untuk diaplikasikan pada cedera otot. 10
Pada  proses  penyembuhan  otot, peran  sel  satelit  ( satellite  cells) sangat penting.  Sel  satelit  ini  yang  akan berproliferasi dan berdiferensiasi sebagai  sel  prekursor  jaringan  otot. Dalam  proses  miogenesis,  sel  satelit akan  mengekspresikan  beberapa  protein yaitu  protein Pax7 selama  proses multiplikasi  dan  protein MyoD selama proses diferensiasi menjadi sel mioblas.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  bagaimana  efek  pemberian PRF  pada  penyembuhan  otot  yang cedera. Penelitian ini akan mengevaluasi secara imunohistokimia proses penyembuhan  otot  yang  terjadi.  Hasil yang  didapatkan  dari  penelitian  ini diharapkan  dapat  dijadikan  sebagai pertimbangan  untuk  menggunakan  PRF secara klinis pada kasus cedera otot.

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  tungkai belakang  sebelah  kanan  dari  dua  puluh kelinci  jantan New  Zealand  White
Rabbit (berat 2000 gram ±500 gram) dan telah disetujui oleh Komisi Etik Penelitian  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas  Airlangga  (nomor  sertifikat: 682-KE).  Kelinci  secara  random  akan dibagi  menjadi  kelompok  kontrol  dan kelompok perlakukan.

## Persiapan PRF
Darah  vena  diambil  sekitar  5  ml dari  telinga  kelinci  dan  dimasukkan  ke dalam  tabung  vakum  steril  berukuran  6 ml tanpa tambahan antikoagulan (Gambar 1a). Tabung dilakukan sentrifugasi  pada  mesin  sentrifugal dengan  kecepatan  2700  putaran  per menit selama 12 menit. 11 Setelah proses sentrifugasi, akan didapatkan tiga lapisan  yang  terbentuk  pada  tabung (Gambar 1b). Lapisan terbawah mengandung  sel  darah  merah  dan lapisan  teratas  mengandung  plasma selular. Di antara kedua lapisan tersebut terdapat  gumpalan  fibrin.  Lapisan  di tengah ini diambil 2 mm di bawah garis pembagi terbawah setelah terlebih dahulu membuang lapisan teratas (Gambar 1c).
Prosedur  Pembuatan  Model  Cedera Otot  Gastrocnemius  dan  Implantasi PRF
Kelinci dibius menggunakan ketamine  (40  mg/kg)  dan  xylazine  (5 mg/kg) secara intramuskular lalu

## Artikel Penelitian
diposisikan tengkurap. Dilakukan
desinfeksi menggunakan povidone iodine  10%  pada  sisi  posterior  kedua tungkai  belakang  kelinci.  Tempat  inisi aalah 1 cm proksimal dari tendomusculo junction  otot  gastrocnemius.  Insisi dilakukan  pada  kulit  dan  diperdalam hingga mencapai otot. Pada muscle belly otot gastrocnemius dilakukan eksisi otot dengan  panjang  1  cm,  lebar  0,5  cm  dan kedalaman  0,5  cm  sehingga  didatapkan model  cedera  berupa  defek  ( gap ) (Gambar 1d). Sebagai penanda, diberikan  simpul  menggunakan  benang nonabsorbable pada  jarak  5  mm  di proksimal  dan  distal  dari  lokasi  eksisi untuk  memudahkan  identifikasi  saat pengambilan sampel nanti.
Pada  kelompok  kontrol,  defek hanya  dilakukan  irigasi  menggunakan cairan saline. Pada kelompok perlakuan, defek  yang  dibuat  diisi  dengan  PRF yang  sudah  dipersiapkan  (Gambar  1e).
Defek yang ada tidak dilakukan aproksimasi.  Fasia  dijahit  menggunakan benang absorbable dan  kulit  dijahit menggunakan  benang nonabsorbable . Semua  kelinci  dirawat  dalam  kandang terpisah  di  laboratorium  hewan  Intitute of Tropical Disease, Airlangga University  dan  diberi  makan  sesuai standar  perawatan  hewan  laboratorium dengan  pengawasan  oleh  dokter  hewan. Sepuluh  kelinci  (lima  kelinci  dari masing-masing  kelompok  kontrol  dan kelompok  perlakuan)  dibunuh  dan diambil  sampelnya  setelah  minggu kedua  dan  sepuluh  kelinci  sisanya dilakukan pada minggu keempat. Sampel diambil dan difiksasi menggunakan  formaldehid  4%  dan dipersiapkan dalam sediaan parafin blok (ketebalan 5 µm). Sediaan lalu diwarnai menggunakan  antibodi  Pax7  untuk dilakukan evaluasi imunohistokimia.
c b a e d

## Artikel Penelitian
Gambar 1. Persiapan PRF dan model cedera. (a) Darah vena diambil dari telinga kelinci sebanyak 5 ml; (b) Setelah sentrifugasi, didapatkan tiga lapisan pada tabung. Lapisan tengah merupakan gumpalan fibrin; (c) PRF yang terbentuk dari lapisan tengah yang diambil; (d) Model cedera berupa defek pada otot gastrocnemius; (e) Defek pada model cedera otot

## gastrocnemius diisi dengan PRF

## Evaluasi Imunohistokimia
Setelah  diwarnai  oleh  antibodi
Pax7, evaluasi dilakukan dengan menggunakan  mikroskop  cahaya  merk Nikon  H600L  yang  dilengkapi  kamera digital  DS  Fi2  300  megapiksel  dan software gambar  Nikon  Image  System.
Ekspresi Pax7 dinilai  dari  sel  satelit yang menunjukkan reaksi positif terhadap  antibodi Pax7  anti-rabbit.
Jumlah  sel  satelit  per  area  fiber/serat otot  dinyatakan  positif  bila  sitosol berwarna  cokelat  (Gambar  2a  dan  b).
12,13
Data skor ekspresi Pax7 diperoleh menurut metode Remmel yang sudah  dimodifikasi,  dimana  Indeks Skala Remmele ( Immuno Reactive Score atau  IRS)  merupakan  hasil  perkalian antara  skor  persentase  sel  imunoreaktif dengan  skor  intensitas  warna  pada  sel imunoreaktif.  Seperti  yang  ditunjukkan pada  Tabel  1.  Data  setiap  sampel merupakan  nilai  rata-rata  IRS  yang teramati  pada  5  (lima)  lapang  pandang (LP) pada pembesaran 1000 kali. 14
Gambar 2. Ekspresi positif dari Pax7 pada sel satelit berupa sitosol yang berwarna coklat pada pengamatan mikroskop cahaya
Tabel 1. Skala semikuantitatif IRS merupakan hasil perkalian antara skor persentase sel positif (A) dengan skor intensitas reaksi warna (B) IRS = (A x B)
A B

## Artikel Penelitian
Skor 0 : tidak ada sel positif Skor 0 : tidak ada reaksi warna Skor 1 : Sel positif kurang dari 10% Skor 1 : Intensitas warna rendah Skor 2 : Sel positif antara dari 11% - 50% Skor 2 : Intensitas warna sedang Skor 3 : Sel positif antara dari 51% - 80% Skor 3 : Intensitas warna kuat
Skor 4 : Sel positif antara dari lebih dari 80%

## 1

## HASIL
Secara makroskopis terdapat perbedaan  antara  kelompok  kontrol  dan yang  mendapat  PRF.  Pada  kelompok kontrol,  tampak  permukaan  defek  tidak beraturan karena terisi jaringan parut yang lebih tebal sedangkan pada kelompok yang mendapat  PRF  permukaan  defek  terlihat lebih teratur dan mulus (gambar 3a dan b). Pada  gambar  3c  dan  d  juga  ditunjukkan perbedaan  ekspresi  imunohistomia  antara kelompok  kontrol  dan  perlakuan  yang
ditandai  dengan  perbedaan  banyaknya sitosol sel satelit yang berwarna coklat.
Analisis skor imunohistokimia untuk  ekspresi Pax7 ditampilkan  dalam Tabel  2.  Sseluruh  skor  ekspresi Pax7 menunjukkan  hasil  yang  lebih  tinggi  dan bermakna  dibandingkan  kelompok  kontrol (p  <  0,05)  baik  untuk  kelompok  yang diamati  setelah  minggu  kedua  maupun minggu keempat.
Gambar 3. (a) Gambaran makroskopis defek otot pada kelompok kontrol; (b) Gambaran makroskopis defek otot pada kelompok yang mendapat PRF; (c) Gambaran mikroskopis
a b c d

## Artikel Penelitian
ekspresi Pax7 pada kelompok kontrol; (d) Gambaran mikroskopis ekspresi Pax7 pada kelompok PRF
Tabel 2. Hasil Analisis Skor Ekspresi Pax7 Kontrol PRF Nilai p Ekspresi Pax7 2 minggu 4,7±0,448 5,969±0,168 0,009 4 minggu 6,32±0,64 7,97±0,521 0,017

## PEMBAHASAN
Penyembuhan cedera otot
melibatkan peran dari sel punca dan faktor pertumbuhan. Proses penyembuhan dimulai dari proses terbentuknya hematoma  atau  bekuan  darah  yang  akan mengaktifkan  rangkaian  proses  inflamasi dimana sel-sel proinflamatori untuk regenerasi jaringan akan teraktivasi. Proses ini  berlanjut  ke  proses  proliferasi  dan diakhiri  oleh  proses remodeling jaringan otot.  Peran  sel  prekursor  adalah  pada  sel satelit  yang  terletak  di  basal  lamina  otot. Sel  ini  bersifat  inaktif  saat  tidak  terjadi cedera  dan  menjadi  aktif  saat  terjadi cedera.  Sel  ini  akan  berprolifrasi  dan memperbanyak  diri  sebelum  kemudian berdiferensiasi  menjadi  sel  mioblas,  suatu cikal  bakal  sel  miosit.  Selain  peran  sel prekursor,  peran  faktor  pertumbuhan  juga sangat  penting.  Faktor  pertumbuhan  yang terkonsentrasi  dapat  diberikan  dalam bentuk  PRP  atau  PRF.  Perbedaan  kedua kelompok  model  cedera  otot  secara makroskopis  memberikan  penjelasan  awal bagaimana pemberian faktor-faktor pertumbuhan dapat memfasilitasi
penyembuhan  otot.  Hal  ini  sesuai  dengan hasil  studi  yang  dikemukakan  oleh  Wong dan  Hamid  dimana  ketersediaan  faktor pertumbuhan  yang  cukup  akan  membantu proses  penyembuhan  yang  lebih  baik sehingga  aktivitas  mioblas  akan  lebih dominan  dibandingkan  dengan  aktivitas fibroblas.  Apabila  aktivitas  myoblas  lebih dominan daripada aktivitas fibroblas maka jaringan  parut  yang  terbentuk  akan semakin sedikit. 1,15 Namun pada penelitian ini  jaringan  parut  yang  terbentuk  hanya dievaluasi  secara  makroskopis  sehingga suatu  evaluasi  histologis  diperlukan  untuk memastikan  lebih  jelas  mengenai  jaringan parut yang terbentuk tersebut.
Hasil  imunohistokimia  pada  kedua pengamatan Pax7 baik  setelah  minggu kedua  dan  keempat  menunjukkan  bahwa skor  yang  lebih  tinggi  didapatkan  pada kelompok yang mendapatkan PRF dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol. Penelitian  yang  sudah  dipublikasi  tentang pemberian  efek  PRF  pada  cedera  otot masih  sangat  terbatas.  Terdapat  satu penelitian  di  Italia  oleh  Gigante et  al

## Artikel Penelitian
dimana  Gigante  menggunakan platelet- rich fibrin matrix pada model cedera pada otot  longisimus  dorsi  tikus  Wirstar.  Pada penelitian  tersebut,  Gigante  mengevaluasi secara histologis, dan analisis histomorfometrik.  Hasilnya,  kelompok yang  mendapat  matrik  PRF  menunjukkan neovaskularisasi dan regenerasi yang lebih baik daripada kelompok control. 16,17
Penelitian lain secara in vitro oleh Viser et al mempelajari  kandungan transforming growth  factor-beta (TGF-β)  pada  sel  otot yang  diberikan  PRF.  Hasilnya  adalah kelompok yang diberikan PRF memberikan  nilai  kandungan  TGF-β  yang lebih  tinggi.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa pemberian  PRF  memberikan  sumber faktor  pertumbuhan  yang  lebih  banyak dalam proses penyembuhan. 18
Selain  karena  faktor  pertumbuhan yang dikandungnya,
PRF juga
memberikan  keuntungan  sebagai scaffold
dalam mengisi defek pada cedera.
Karakteristik  PRF  yang  berbentuk  seperti gel  mampu  mengisi  defek  yang  terjadi pada  cedera  otot.  Keuntungan scaffold pernah  dikemukakan  oleh  Longo et  al yang  menyatakan  bahwa  dengan  adanya scaffold pada  daerah  cedera  otot,  maka scaffold tersebut akan membantu memfasilitasi  pembentukan myotubules baru  dimana myotubules yang  baru terbentuk  akan  menjembatani  dan  pada
akhirnya  akan  mengisi  daerah  cedera sehingga  terbentuk  jaringan  otot  yang baru. 19

## KESIMPULAN
Pemberian platelet-rich fibrin pada cedera otot dapat dipertimbangkan sebagai pilihan  terapi  untuk  mendapatkan  hasil yang  baik  pada  cedera  otot  dengan  defek. Pembuatan platelet-rich fibrin yang relatif mudah nantinya diharapkan dapat diaplikasikan  secara  klinis  pada  pasien dengan cedera otot terutama dengan defek yang  besar.  Hasil  penelitian  ini  dapat dijadikan  landasan  untuk  melakukan penelitian  lanjutan  dengan  menggunakan variabel yang lebih banyak dan aplikasi sel punca. Ke depannya, penggunaan PR yang dikombinasikan dengan sel punca diharapkan  dapat  memberikan  solusi terbaik dalam penanganan cedera otot.

## REFERENSI
1. Wong,  S.,  Ning,  A.,  Lee,  C.,  &
Feeley,  B.  T.  (2015).  Return  to  sport after  muscle  injury. Current  Reviews in  Musculoskeletal  Medicine ,  (8),
168–175.
http://doi.org/10.1007/s12178-015- 9262-2
2. Krushell J. 2004. Sport injuries are on the rise. Available from:

## Artikel Penelitian
http://krushperformance.com/sports- injuries-are-on-the-rise/ Juni 2016
3. Menetrey  J,  kasemkijwattana  C,  Dac CS,  Bosch  P,  Vogt  M,  Fu  FH, Moreland MS, Huard J. 2000. Growth factors  improve  muscle  healing  in vivo. J Bone Joint Surg [Br], 82 , 131- 137.
4. Sato K, Li Y, Foster W, Fukushima K,
Badlani  N,  Adachi  N,  Usas  A.  2003. Improvement  of  Muscle  Healing
Through Enhancement
of
Regeneration and Prevention of Fibrosis. Muscle Nerve, 28 , 365-372.
5. Van  den  Bekerom,  Michel  P.J.  et  al.
2012.  What  Is  the  Evidence  for  Rest,
Ice,  Compression,  and  Elevation Therapy  in  the  Treatment  of  Ankle Sprains  in  Adults  Journal  of  Athletic
Training  2012;47(4):435–443  by  the National Athletic Trainers’ Association, Inc. www.nata.org/journal-of-athletic-
training
6. Jarvinen  Tero  AH,  Jarvinen  Markku, Kalimo Hannu. 2013. Regeneration of Injured  Skeletal  Muscle  After  the Injury.  In:  Muscles,  Lig  and  tendons Journal 2013; 3 (4): 337-345
7. Hammond  JW,  Hinton  RY,  Curl  LA,
Muriel  JM,  Lovering  RM  (2009)  Use of  autologous  platelet-rich  plasma  to
treat  muscle  strain  injuries.  Am  J Sports Med 37: 1135–1142.
8. Raja V Sunitha,
Naidu E
Murinatham. 2008.
Platelet-rich
Fibrin:  Evolution  of  a  second- generation platelet concentrate. Indian Journal  of  Dental  Research,  2008;
19(1):42-46
9. Bielecki  T,  Dohan  Ehrenfest.  2012.
Platelet-rich  Plasma  and  Platelet-rich Fibrin: Surgical adjuvant, preparations for  in  situ  regenerative  medicine  and tools  fr  tissue  engineering.  Current Pharm  Biotechnol,  2012;  13(7):1121- 30
10. He  L,  Lin Y,  Hu X,  Zhang  Y, Wu  H.
2009.  A  Comparative  study  of paltelet-rich  fibrin  and  platelet-rich plasma  on  the  effect  of  proliferation and differentiation of rat osteoblasts in vitro. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod, 2009; 108(5):707- 13
11. Nesligul  NK,  Timucin  B.  2015.  The Use  of  Platelet-rich  Fibrin  (PRF)  and PRF-mixed  particulated  autogenous bone  graft  in  the  treatment  of  bone defect: An experimental and histomorphometrical  study. Dent  Res J , 2015; 12(5): 418-424
12. Dedkov EI, Kostrominova TY,
Borison  AB,  Carlson  BM.  2003.
MyoD and Myogenin protein

## Artikel Penelitian
expression in skeletal muscle of senile rats. Cell and tissue research . vol 311,
no 3, pp 401-16
13. Verdijk  LB,  Gleeson  BG,  Jonkers RAM,  Meijer  K,  Savelberg  HCM, Dendale  P.  2009.  Skeletal  muscle hypertrophy following resistance training  is  accompanied  by  a  fiber type-specific  increase  in  satellite  cell content  in  elderly  man. J  Gerontol  A Biol  Sci  Med  Sci, vol  61A,  no.3,
pp.332-9
14. Novak M, Madej JA, Dziegeil P. 2007
Intensity  of  Cox  2  expression  inCell of Soft Tissue  Fibrosarcomas  in Dog As  Related  to  Grade  of  Tumor malignation. Bull Vet inst Pulawy 51, 275-279. 2007
15. Hamid M Sharif, Yusof Ashril, Ali M Razil.  2014.  Platelet-rich  Plasma  for Acute  Muscle  Injury:  A  systematic review. PLoS, 2014; 9(2):e90538
16. Wright-Carpenter T, Opolon P, Appel
HJ,  Meijer  H,  Wehling  P,  Mir  LM.
Treatment  of  muscle  injuries  by  local
administration of autologpus conditioned serum:
animal
experiments using a muscle contusion model.  Int  J  Sports  Med.  2004;
25:582-7
17. Gigante  A,  Del  Torto  M,  Manzotti  S,
Cianforlini M, Busilacchi A,
Davidson  PA,  Greco  F,  Mattiloi-
Bemmonte  M.  Platelet  rich  fibrin matix  effects  on  skeletal  muscle lesions: an experimental study. Journal  of  Biological  Regulators  & Homeostatic  Agents,  vol  26,  no  3, 475-484 (2012)
18. Visser LC, Arnoczky SP, Caballero O, Egerbacher  M.  Platelet-rich  fibrin constructs  elute  higher  concentratios of  transforming  growth  factor  beta1 and  increase  tendon  cell  proliferation over  time  when  compared  to  blood clots:  a  comparative  in  vitro  analysis. Vet Surg 2010;39:811-17
19. Longo  UG,  Loppini  M,  Berton  A, Spiezia F, Maffuli N, Denaro V. 2012 Review  article:  Tissue  engineered strategies  for  skeletal  muscle  injury. Stem cell international; Vol  (2012).