# Korespondensi:  Balai  Besar  Riset  Budidaya  Laut  dan Penyuluhan  Perikanan.  Jl.  Br.  Gondol  Kec.  Gerokgak Kab.  Buleleng,  Kotak  Pos  140,  Singaraja  81101,  Bali,  Indonesia. Tel.  +  62  362  92278 E-mail:  kmahardika@yahoo.com
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra

## EFEKTIVITAS  BEBERAPA  BAHAN  KIMIA  TERHADAP  COCCON  DAN LINTAH  LAUT HIRUDINEA  (Zeylanicobdella  arugamensis)
Ketut Mahardika # ,  Indah  Mastuti,  Ahmad  Muzaki,  dan  Zafran
Balai Besar Riset Budidaya Laut dan Penyuluhan Perikanan Jl. Br. Gondol Kec. Gerokgak Kab. Buleleng, Kotak Pos 140, Singaraja 81101, Bali
(Naskah diterima: 12 Februari 2019; Revisi final: 10 April 2019; Disetujui publikasi: 10 April 2019)

## ABSTRAK
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efektivitas  bahan  kimia  terhadap  Zeylanicobdella arugamensis yang menginfeksi ikan kerapu hibrida cantik secara in vitro dan in vivo. Uji in vitro dilakukan dengan mengoleksi Z. arugamensis dari ikan kerapu hibrida cantik dan ditempatkan dalam cawan petri (100- 200  ekor/cawan  petri).  Z.  arugamensis  tersebut  diinkubasi  dalam  suhu  ruang  selama  satu  hari  agar menghasilkan coccon. Masing-masing dua cawan petri yang berisi Z. arugamensis direndam dengan obat cacing dan bahan kimia seperti albendazole, levamisole, oxfendazole, dan piperazine pada dosis 1.000 mg/ L, ivermectin dosis 30-100 mg/L, calcium hypochlorite (kaporit) dosis 10.000 mg/L, formalin dosis 200-400 mg/L, klorin dosis 200-400 mg/L, tembakau dosis 10.000-50.000 mg/L dalam air laut dan air tawar, dan air laut sebagai kontrol. Perendaman dilakukan selama 60 menit dan selanjutnya diganti dengan air laut steril untuk diinkubasi selama 13 hari. Bahan kimia tersebut juga digunakan untuk perendaman secara in vivo terhadap ikan kerapu hibrida cantik yang terinfeksi lintah. Hasil uji in vitro menunjukkan bahwa formalin dan  klorin  pada  dosis  300  mg/L  dan  400  mg/L,  ivermectin  dosis  100  mg/L,  kaporit  dosis  10.000  mg/L selama 60 menit mampu membunuh Z. arugamensis dan cocconnya hingga 100%. Sedangkan perendaman obat cacing, dan tembakau kurang efektif untuk membunuh Z. arugamensis dan cocconnya. Hasil uji in vivo menunjukkan bahwa bahan kimia dengan dosis tinggi bersifat toksik pada ikan uji. Perendaman dengan formalin dan hidrogen peroksida pada dosis 100-200 mg/L dalam air tawar selama 60 menit efektif dalam membunuh Z. arugamensis dan aman bagi ikan kerapu hibrida cantik.
KATA KUNCI: bahan kimia; coccon; kerapu hibrida; uji in vitro; uji in vivo; Zeylanicobdella arugamensis
ABSTRACT: Effectiveness of different chemical compounds  against cocoon and marine leech (Zeylanicobdella arugamensis). By: Ketut Mahardika, Indah Mastuti, Ahmad Muzaki, and Zafran
The purpose of this study was to determine the effectiveness of different chemical compounds on parasite Zeylanicobdella arugamensis infecting hybrid grouper “cantik” through vitro and in vivo. The in vitro tests were carried out by collecting leeches from hybrid grouper “cantik”, and then placed in petridishes (100-200 leeches/petridish). The Z. arugamensis was incubated at room temperature for one day to allow cocoon. Afterward, each of the two petridishes containing Z. arugamensis were soaked with each selected chemical such as albendazole, levamisole, oxfendazole, and piperazine at doses of 1,000 ppm; ivermectin doses of 30-100 ppm; calcium hypochlorite dosage of 10,000 ppm; formalin doses 200-400 ppm; chlorine doses 200-400 ppm; tobacco doses 10,000-50,000 ppm mixed in sea water or fresh water, fresh water and sea water as a control. Soaking with the chemicals was carried out for 60 minutes and then replaced with sterile sea water and incubated for 13 days. These chemicals were also used in in vivo treatment against hybrid grouper “cantik” infected by Z. arugamensis. The in vitro test showed that formalin and chlorine at doses of 300 ppm and 400 ppm, ivermectin at a dose of 100 ppm, calcium hypochlorite dose of 10,000 ppm of seawater for 60 minutes were able to kill Z. arugamensis and its cocoon up to 100%. While the use of anti-worm chemicals or medicines (albendazole, levamisole, oxfendazole, piperazine), and herbal tobacco drugs were less effective in killing Z. arugamensis and its cocoon. The in vivo test provided evidences that high-dose of chemicals were toxic to hybrid grouper “cantik”. Soaking with formalin and hydrogen peroxide at a dose of 100-200 ppm in fresh water for 60 minutes were effective in killing Z. arugamensis and safe for hybrid grouper “cantik”.
KEYWORDS: chemicals; cocoon; hybrid grouper; in vitro test; in vivo test; Zeylanicobdella arugamensis

## PENDAHULUAN
Budidaya  perikanan  di  Indonesia  semakin berkembang. Secara makro ekonomi, data Badan Pusat Statistik  (BPS)  mencatat  pertumbuhan  PDB  (produk domestik bruto) nasional sektor perikanan tahun 2017 sebesar 6,75% atau naik sebesar 31 persen dari tahun 2016. Angka PDB tersebut  tercacat paling progresif dan berada di atas rata-rata pertumbuhan PDB nasional yang  hanya  5,03%.  Kinerja  PDB  sektor  perikanan, ditopang oleh volume produksi perikanan budidaya, yang  mana  dalam  lima  tahun  terakhir  (2013-2017) tercatat tumbuh rata-rata sebesar 5,11% (DJPB, 2018). Perkembangan budidaya yang semakin intensif dapat menimbulkan  masalah  patologis  serius.  Salah  satu penyebab masalah patologis tersebut adalah infeksi parasit yang dapat menghambat pertumbuhan normal ikan  bahkan  dapat  menimbulkan  kematian  massal (Athanassopoulou  et  al.,  2009).  Infeksi  parasit hirudinea  (Piscicolidae)  dapat  menghambat pertumbuhan ikan laut dan ikan air tawar. Salah satu spesies  hirudenia  yaitu  Zeylanicobdella  arugamensis dilaporkan  dapat  menginfeksi  ikan  air  laut  di  Asia Tenggara (Kua et al., 2010). Ikan laut yang dilaporkan dapat  terinfeksi  Z.  arugamensis  adalah  ikan  kerapu bebek Cromileptes altivelis, kerapu macan Epinephelus fuscoguttatus,  napoleon  Cheilinus  undulatus,  kerapu batik  E.  polyphekadion  (Koesharyani  et  al.,  2001), kerapu hibrida (Mahardika et al., 2018a; Murwantoko et al., 2017), orange-spotted grouper E. coioides (Cruz- Lacierda et al., 2000; Koesharyani et al., 2001; Kleinertz & Palm, 2013), crimson snapper Lutjanus erythropterus (Ravi & Yahaya, 2017), kerapu E. areolatus (Kleinertz et al., 2014), kakap putih Lates calcarifer (Kua et al., 2010), dan kerapu sunu Plectropomus leopardus. Z. arugamensis dapat  hidup  dengan  menghisap  darah  inangnya. Patogenisitas  parasit  ini  rendah  tetapi  infeksi  berat dapat menyebabkan luka pada kulit sehingga memberi peluang  bagi  bakteri  sebagai  infeksi  sekunder (Koesharyani et al., 2001).
Kontrol  terhadap  infeksi  lintah  laut  pada  ikan kerapu  dapat  dilakukan  dengan  perendaman  ikan dengan 50-250 mg/L formalin selama satu jam dengan aerasi kuat (Koesharyani et al., 2001; Cruz-Lacierda et al.,  2000).  Treatment  tersebut,  diikuti  dengan perendaman dengan antibiotik untuk menghindari agar tidak terjadi infeksi sekunder oleh bakteri akibat bekas luka yang ditinggalkan oleh lintah tersebut. Secara in vitro, perendaman dengan formalin dosis 250-500 mg/ L, levamizole dosis 500-1.000 mg/L, ivermectin dosis 62,2-1.000 mg/L, CuSO 4 dosis 500-1.000 mg/L dapat membunuh  lintah  laut  (Murwantoko  et  al.,  2017). Namun demikian, treatment bahan kimia tersebut di atas dilaporkan efektif untuk membunuh lintahnya saja
dan belum diketahui apakah bahan kimia tersebut juga berpengaruh  terhadap  coccon  yang  dihasilkan  oleh lintah  tersebut.  Treatment  formalin,  hidrogen peroksida  dan  air  tawar terhadap  ikan  kerapu  yang terinfeksi lintah telah diterapkan oleh pembudidaya di hatchery dan keramba jaring apung (KJA) di Pulau Bali  dan  sekitarnya.  Treatment  tersebut  hampir dilakukan setiap  1-2 minggu sekali  karena populasi lintah yang menginfeksi ikan kerapu selalu datang dan berkembang  dengan  cepat.  Oleh  karena  itu,  pada penelitian  ini  dilakukan  treatment  lintah  laut  dan coccon-nya dengan beberapa bahan kimia dalam skala laboratorium. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui  efektivitas  dari  beberapa  bahan  kimia terhadap lintah laut beserta coccon-nya.

## BAHAN DAN METODE
Sumber  Lintah  Laut  (Hirudinea,  Z. arugamensis)
Z. arugamensis diperoleh dari ikan kerapu hibrida cantang  ( f E.  fuscoguttatus  X m E.  lanceolatus)  yang dibesarkan di bak pemeliharaan volume 1 m 3 di Balai Besar Riset Budidaya Laut dan Penyuluhan Perikanan, Gondol,  Bali.  Z.  arugamensis  dikoleksi  dengan  cara merendam ikan kerapu dengan air tawar selama 30 menit dengan aerasi kuat. Z. arugamensis yang sudah lepas dari ikan maupun yang masih menempel di ikan diambil  secara  manual  (dengan  tangan)  dan ditempatkan dalam cawan petri (diameter 8 cm, 100- 200 lintah laut/cawan petri) yang telah diisi dengan air laut (31 ppt). Lintah yang dikoleksi adalah lintah yang ukurannya > 5 mm atau ukuran dewasa agar dapat menghasilkan  coccon.  Beberapa  Z.  arugamensis kondisinya menjadi lemah dan bahkan ada yang mati setelah  ditempatkan  dalam  cawan  petri  yang mengandung air laut karena adanya lendir ikan yang menempel  pada  lintah.  Dua  jam  setelahnya,  Z. arugamensis yang lemah atau mati dan tidak menempel dalam cawan petri dibuang dengan membilas cawan petri  dengan  air  laut  steril  sehingga  jumlah  Z. arugamensis dalam setiap cawan petri tidak sama. Z. arugamensis  dalam  cawan  petri  tersebut  diinkubasi pada suhu 28°C-30°C hingga menghasilkan coccon atau sampai dilakukan treatment. Penggunaan air laut steril dilakukan  untuk  mengurangi  protozoa  yang  dapat mengganggu  kehidupan  Z.  arugamensis  dan perkembangan coccon yang dihasilkannya (Mahardika et al., 2018b).

## Bahan  Kimia untuk  Treatment
Bahan  kimia  yang  digunakan  untuk  treatmen  Z. arugamensis meliputi piperazine, ivermectin 1,0% w/v (Ivomec,  Merial),  piperazine  citrate  100%  (Vermizyn
SBK, Medion), levamisole HCl 375 mg/kaplet (Nemasol, Medion), oxfendazole 900 mg/bolus (Verm-O, Sanbe Farma),  albendazole  1.500  mg/bolus  (Wormzol-B, Medion),  formalin  (formaldehyde  losung,  Merck), CUSO 4 5H 2 O (kuprisulfat pentahidrat, Merck), klorin teknis  (Bratachem),  calcium  hypochlorite  powder (kaporit 60 ® ,  Tjiwi Kimia),  rajangan daun  tembakau kering, air tawar, dan air laut sebagai kontrol. Beberapa bahan kimia yang digunakan masih dalam bentuk bo- lus dan kaplet, oleh karena itu, terlebih dahulu dihitung berat bahan aktif yang terkandung dalam setiap mg bolus/kaplet. Selanjutnya bolus/kaplet dibuat menjadi serbuk dengan cara mengerusnya. Konsentrasi bahan kimia dalam bentuk mg/L (ppm (part/million water)) dibuat dengan perhitungan sebagai berikut:
· 1 mg/L bahan padat= 1 mg/1.000 liter
· 1 mg/L bahan cair= 1 mL/1.000.000 liter
· 1 mg/L ivermectin 1,0% w/v= 10 uL/1.000 liter
· Konsentrasi (1 mg/L)= berat kaplet  (mg) x 10 -3 (L) berat bahan aktif (mg)
· 5  g  rajangan  daun  tembakau  kering  (komersial) direndam dalam 100 mL air laut steril (50.000 mg/ L)  selama  satu  hari.  Air  rendaman  tembakau disaring  dan  digunakan  untuk  uji  in  vitro  dan  in vivo.

## Treatment secara In Vitro
Uji coba treatment terhadap lintah dan coccon yang dihasilkannya dilakukan dengan tiga ulangan waktu. Pada treatment ulangan pertama dilakukan terhadap Z. arugamensis  dan  coccon  yang  dihasilkannya  setelah diinkubasi  pada suhu  ruang selama  satu hari.  Treat- ment menggunakan bahan kimia seperti formalin 200 dan 300 mg/L, klorin 300 mg/L, kaporit (calcium hy- pochlorite) 1.000 mg/L, ivermectin 30 mg/L, pipera- zine 1.000 mg/L, levamisole 1.000 mg/L, oxfendazole 1.000 mg/L, albendazole 1.000 mg/L, tembakau 50.000 mg/L  dalam  air  laut,  air  tawar  dan  air  laut  sebagai kontrol.  Masing-masing  perlakuan  terdiri  atas  dua cawan petri. Treatment dilakukan dengan merendam Z. arugamensis dan coccon-nya dalam 100 mL bahan kimia tersebut selama 60 menit.
Treatment  bahan  kimia  pada  ulangan  kedua dilakukan  dengan  merendam  Z.  arugamensis  dan coccon-nya dalam setiap dua cawan petri dengan bahan kimia  seperti:  formalin  300  mg/L,  klorin  200  mg/L, CUSO 4 -5H 2 O  200  mg/L,  ivermectine  100  mg/L, tembakau 10.000 mg/L dalam air laut, air tawar dan air laut steril sebagai kontrol. Treatment bahan kimia tersebut dilakukan pada Z. arugamensis dan coccon- nya setelah 1, 3, 6, dan 9 hari pasca ditempatkan dalam cawan petri. Perendaman dilakukan selama 60 menit.
Treatment  bahan  kimia  pada  ulangan  ketiga dilakukan hanya pada coccon dengan umur yang sama yaitu satu hari. Treatment dilakukan dengan merendam coccon  dalam  setiap  cawan  petri  selama  60  menit dengan bahan kimia seperti: formalin 300 dan 400 mg/ L, klorin 300 dan 400 mg/L, ivermectine 50 dan 100 mg/L, tembakau 10.000 mg/L dalam air laut maupun air tawar, serta air laut sebagai kontrol.
Setelah treatment, semua bahan kimia dalam cawan petri diganti dengan air laut steril. Z. arugamensis yang masih hidup dan menempel di cawan petri dihitung, dan dibiarkan tetap diinkubasi di cawan petri bersama coccon-nya selama 13 hari. Hasil uji in vitro dari ketiga ulangan  di  atas  dianalisis  secara  deskriptif  dalam bentuk tabel dan grafik.

## Ikan Uji dan Treatment In Vivo
Ikan uji yang digunakan untuk treatment bahan kimia terhadap  Z.  arugamensis  adalah  ikan  kerapu  hibrida cantik ( f E. fuscoguttatus X m E. polyphekadion) dengan panjang  12-15  cm.  Sebanyak  110  ekor  ikan  kerapu tersebut  dibiarkan  terinfeksi  oleh  Z.  arugamensis secara alami dengan penempatkan ikan-ikan tersebut dalam satu bak fiber 500 liter dengan sirkulasi air laut langsung. Selama dua bulan, ikan-ikan tersebut telah banyak ditempeli dengan Z. arugamensis.
Uji in vivo dilakukan dengan dua ulangan waktu. Perlakuan  pada  ulangan  pertama  dilakukan  dengan memasukkan  masing-masing  lima  liter  air  laut  ke dalam bak plastik volume 15 liter. Serbuk dan cairan bahan kimia seperti albendazole dengan dosis total 1.000 mg/L, levamisole 1.000 mg/L, oxfendazole 1.000 mg/L, piperazine 1.000 mg/L, ivermectin 30 mg/L, air perasan dari rajangan daun tembakau kering (50.000 mg/L), formalin 200 mg/L dan air laut sebagai kontrol. Masing-masing perlakuan terdiri atas dua ulangan bak. Masing-masing tiga ekor ikan kerapu hibrida cantik dimasukkan dalam setiap bak yang telah berisi bahan kimia tersebut dan dilengkapi dengan aerasi. Kondisi ikan  diamati  setelah  30  dan  60  menit.  Sedangkan kondisi  dari  Z.  arugamensis  diamati  dengan mengambilnya (mengisolasi) dan ditempatkan dalam cawan petri yang telah diisi air laut.
Pada  ulangan  kedua  dilakukan  perlakuan  pada masing-masing tiga ekor ikan  kerapu hibrida cantik dengan ivermectin (20 dan 10 mg/L), formalin (200, 150,  dan 100  mg/L),  hidrogen  peroksida (200,  150, dan 100 mg/L) dalam air tawar, serta air tawar sebagai kontrol. Masing-masing dosis perlakuan terdiri atas dua  bak.  Kondisi  ikan  dan  Z.  arugamensis  diamati setelah 30 dan 60 menit dengan metode yang sama seperti ulangan pertama.
Hasil  uji  in  vivo  dari  kedua  ulangan  tersebut dianalisis secara deskriptif dalam bentuk tabel.

## HASIL DAN BAHASAN

## Treatment secara In vitro
Treatment  Z.  arugamensis  dan  coccon-nya  pada ulangan satu menunjukkan bahwa perendaman 300 mg/ L formalin, 300 mg/L klorin, dan 10.000 mg/L calcium hypochlorite  (kaporit)  mampu  membunuh  semua  Z. arugamensis  (100%),  sedangkan  treatment  air  tawar mampu  membunuh  Z.  arugamensis  hingga  94,29% (sintasan  5,71%;  Tabel  1).  Akan  tetapi,  perendaman bahan kimia dosis tinggi (1.000 mg/L) seperti pipera- zine, oxfendazole, levamisole, dan albendazole belum mampu  membunuh  Z.  arugamensis.  Demikian  pula perendaman dengan 30 mg/L ivermectin, dan bahan herbal air rajangan daun tembakau kering (50.000 mg/ L)  tidak  berpengaruh  terhadap  Z.  arugamensis. Walaupun bahan kimia tersebut mampu membunuh Z. arugamensis, namun terdapat beberapa yang belum mampu  menghambat  perkembangan  coccon  yang dihasilkannya. Hanya formalin 300 mg/L dan 10.000 mg/L kaporit dalam air laut yang mampu menghambat dan  membunuh  Z.  arugamensis  beserta  coccon-nya. Bahan  kimia  seperti  ivermectin  30  mg/L  dan albendazole 1.000 mg/L walaupun tidak efektif dalam membunuh  Z.  arugamensis  akan  tetapi  mampu menghambat  perkembangan  coccon  untuk menghasilkan larva (hatching rate 0%).
Hasil  penghambatan  terhadap  perkembangan coccon  juga  ditunjukkan  dengan  perendaman oxfendazole  1.000  mg/L,  levamisole  1.000  mg/L, tembakau 50.000 mg/L dalam air laut, formalin 200 mg/L, dan klorin 300 mg/L. Sedangkan treatment dengan piperazine  1.000 mg/L  dan air  tawar belum  mampu menghambat perkembangan coccon yang ditunjukkan dengan  nilai  persentase  yang  hampir  sama  dengan kontrol (air laut).
Pada treatment ulangan-2 (Gambar 1A), perendaman formalin 300 mg/L, klorin 200 mg/L, CUSO 4 -5H 2 O 200 mg/L,  ivermectine  100  mg/L  dan  air  tawar  dapat membunuh Z. arugamensis setelah inkubasi satu hari yang  ditunjukkan  dengan  rendahnya  sintasan  yang dihasilkan (0%-14,58%) dibandingkan dengan sintasan Z. arugamensis pada kontrol dan air tembakau (100%). Efektivitas bahan kimia tersebut sedikit menurun pada Z. arugamensis setelah inkubasi tiga hari dalam cawan petri. Hal tersebut kemungkinan disebabkan karena Z. arugamensis lebih  tahan karena  telah beradaptasi dalam  media  pemeliharaan  dalam  cawan  petri  dan masih cukup nutrisi untuk bertahan hidup tanpa inang. Akan tetapi seiring lama waktu inkubasi menyebabkan daya  tahan  Z.  arugamensis  berkurang  akibat  tidak
adanya asupan makanan. Kondisi Z. arugamensis yang semakin  lemah  dan  kurus  membuat  lebih  rentan terhadap treatment bahan kimia tersebut. Hal tersebut terlihat dari rendahnya sintasan Z. arugamensis yang dihasilkan setelah treatment bahan kimia dan air tawar pada waktu enam dan sembilan hari pascainkubasi. Z. arugamensis mampu bertahan hidup tanpa inang selama lebih dari 15 hari yang ditunjukkan pada kelompok kontrol.
Treatment  dengan  formalin  300  mg/L  dan ivermectine  100  mg/L  juga  mampu  menghambat perkembangan  coccon  untuk  menghasilkan  larva setelah ikubasi 1-9 hari (Gambar 1B). Sedangkan treat- ment  dengan  klorin  200  mg/L  hanya  berpengaruh terhadap  coccon  umur  satu  hari.  Treatment  dengan CUSO 4 .5H 2 O 200 mg/L dan air tawar walaupun dapat membunuh atau menekan sintasan dari Z. arugamensis, akan  tetapi  tidak  berpengaruh  atau  tidak  mampu menghambat  perkembangan  coccon  untuk menghasilkan larva.
Treatment  bahan  kimia  pada  ulangan-3  (Tabel  2) dititikberatkan pada coccon-nya saja. Semua lintah laut yang terdapat dalam cawan petri diambil secara manual. Bahan  kimia  yang  digunakan  mengacu  dari  hasil ulangan-1 dan 2, yang mana bahan kimia seperti for- malin,  klorin,  ivermectin  menunjukkan  efektivitas yang konsisten dalam menghambat daya tetas coccon. Namun demikian, konsentrasi dari ketiga bahan kimia tersebut ditingkatkan lagi sampai 400 mg/L. Hal yang sama dilakukan terhadap tembakau (10.000 mg/L dalam air laut dan air tawar) sebagai salah satu bahan herbal.
Hasil percobaan menunjukkan bahwa formalin (300 dan  400  mg/L)  dan  ivermectin  (50  dan  100  mg/L) mampu  menghambat  perkembangan  coccon  (daya tetas  0%)  dengan  tidak  adanya  larva  Z.  arugamensis sampai  hari  ke-13  pascainkubasi.  Sedangkan  klorin (300 dan 400 mg/L) hanya mampu menghambat daya tetas  coccon  sampai  91,98%  (daya  tetas  coccon mencapai 8,02%-8,42%; Tabel 5). Air perasan tembakau (10.000 mg/L) dalam air tawar memiliki daya hambat yang  lebih  tinggi  (daya  tetas  coccon:  0,65%) dibandingkan dengan tembakau dalam air laut (daya tetas coccon: 7,37%). Hal tersebut didukung dengan hasil perendaman air tawar selama 60 menit mampu menghambat daya tetas coccon sampai 89,98% (atau daya tetas 10,02%) dibandingkan dengan kontrol air laut (daya tetas 19,65%).
Z.  arugamensis  dewasa  dapat  hidup  tanpa  inang sampai dua minggu (Mahardika et al., 2018a). Namun, kondisi  dari  Z.  arugamensis  semakin  kurus  dan warnanya semakin pucat seiring dengan lamanya waktu inkubasi. Secara mikroskopis, perkembangan coccon menjadi larva sama dengan perkembangan coccon yang

## Ta b el
1 . Si n ta sa n d ar i Z. ar ug am en si s d an c o cc o n y an g m en et as ( u la n g an -1 ) se te la h d ir en d am d en g an b ah an k im ia s el am a 6 0 m en it d an d ii n ku b as i se la m a 1 3 h ar i

## Ta bl e 1. Su rv iv al r at e of
Z . ar ug am en si s an d ha tc hi ng r at e of coc oon ( tr ea tm en t- 1) a ft er soa ki ng w it h va ri ou s ch em ic al s for 60 m in ut es an d in cu ba te d for a pe ri od of 13 da ys
telah  dilaporkan  sebelumnya  oleh  Mahardika  et  al. (2018a), Murwantoko et al. (2017), Kua et al. (2010). Penggunaan bahan kimia seperti formalin, albendazole, levamisole, vermycin, oxfendazole, ivermectin, H 2 O 2 (hidrogen peroksida), CuSO4, dan air tawar dilaporkan mampu  membunuh  Z.  arugamensis  secara  in  vitro (Mur wantoko  et  al.,  2017).  Walaupun  tidak dikemukakan  jumlah  ataupun  persentase  Z. arugamensis yang dapat terbunuh dengan perendaman bahan  kimia  tersebut.  Albendazole,  nikotin, levamisole, ivermectin, tiabendazole juga dilaporkan mampu membunuh lintah, Limniatis nilotica secara in vitro  (Bahmani  et  al.,  2012;  2014;  2015;  Gholami- Ahangaran et al., 2012).

## Treatment secara In  Vivo
Hasil uji in vivo menunjukkan bahwa 1.000 mg/L albendazole, levamizole, oxfendazole, piperazine, air rendaman dari 50.000 mg/L rajangan daun tembakau kering  dan  200  mg/L  formalin  dalam  air  laut  tidak berpengaruh terhadap lintah, Z. arugamensis (Tabel 3). Lintah-lintah  tersebut  masih  terlihat  menempel  di tubuh ikan dan beberapa ada yang menempel di bak. Namun bahan kimia tersebut dengan dosis 1.000 mg/ L  dan  50.000  mg/L  dapat  bersifat  toksik  pada  ikan kerapu  hibrida  cantik.  Ikan-ikan  tersebut  terlihat lemah  dan  bahkan  ada  yang  mati  setelah  direndam selama 60 menit. Kematian ikan uji juga terlihat pada perendaman  dengan  30  mg/L  ivermectin  selama  60
Gambar 1. Persentase sintasan dari Z. arugamensis (A)  dan coccon-nya (B, ulangan-2)  setelah direndam dengan bahan kimia selama 60 menit pada umur inkubasi 1-9 hari, dan diamati setelah 13 hari inkubasi.
Figure 1. Survival rate (%) of Z. arugamensis (A) and its coccon (B, treatment-2) observed at different days after soaked with various chemicals for 60 minutes (1-9 days).
0 20 40 60 80 100 Formalin (300 mg/L) Klorin/Chlorine (200 mg/L) CUSO4 5H2O (200 mg/L) Ivermectine (100 mg/L) Tembakau (10.000 mg/L dalam air laut) Tobacco (10.000 mg/L in marine water) Air tawar Fresh water (0 ppt) Air laut Marine water (31 ppt)
Hari 1 (Day 1) Hari 3 (Day 3) Hari 6 (Day 6) Hari 9 (Day 9) 0 10 20 30 40 50 Formalin (300 mg/L) Klorin/Chlorine (200 mg/L) CUSO4 5H2O (200 mg/L) Ivermectine (100 mg/L) Tembakau (10.000 mg/L dalam air laut) Tobacco (10.000 mg/L in marine water) Air tawar Fresh water (0 ppt) Air laut Marine water (31 ppt)
Hari 1 (Day 1) Hari 3 (Day 3) Hari 6 (Day 6) Hari 9 (Day 9) A B Hari (Day) 1 Hari (Day) 3 Hari (Day) 6 Hari (Day) 9 Klorin  (Chlorine) (200 mg/L)
CUSO 4 5H2O (200 mg/L) Ivermectine (100 mg/L) Tembakau (10.000 mg/L dalam air laut) Tobacco (10.000 mg/L in  marine  water) Air tawar Fresh  water (0 ppt) Hari (Day) 1 Hari (Day) 3 Hari (Day) 6 Hari (Day) 9 Klorin  (Chlorine) (200 mg/L) CUSO 4 5H2O (200 mg/L) Ivermectine (100 mg/L) Tembakau (10.000 mg/L dalam air laut) Tobacco (10.000 mg/L in  marine  water)
Air tawar
Fresh  water (0 ppt) Air laut
Marine  water (31 ppt) Formalin (300 mL) Air laut Marine  water (31 ppt) Formalin
(300 mL)
menit. Namun, lintah yang menempel dan menginfeksi ikan terlihat terlepas dari tubuh ikan dan mati. Hasil ini  menunjukkan  bahwa  bahan  kimia  seperti albendazole, levamisole, oxfendazole, dan piperazine dengan dosis 1.000 mg/L, serta 50.000 mg/L tembakau tidak dapat diaplikasikan untuk treatment ikan kerapu hibrida cantik yang terinfeksi Z. arugamensis.
Hasil perendaman dengan bahan kimia dalam air laut tidak berpengaruh terhadap kehidupan lintah dan bahkan bersifat toksik pada ikan kerapu hibrida cantik (Tabel  6),  maka  uji  in  vivo  selanjutnya  dipilih  bahan kimia formalin  yang pada dosis  200 mg/L  dalam air laut  tidak  menimbulkan  kematian  ikan  uji  dan ivermectin  yang  menimbulkan  kematian  lintah  dan ikan uji. Namun karena formalin dalam air laut tidak berpengaruh  terhadap  kehidupan  lintah,  sehingga dilakukan treatment ikan kerapu hibrida cantik dengan formalin  dan  hidrogen  peroksida  dalam  air  tawar. Demikian pula ivermectin yang menimbulkan kematian ikan uji, maka dosis yang digunakan diperkecil. Hasil uji perendaman selama 30 menit dengan formalin dan hidrogen peroksida dalam air tawar pada dosis 100- 200 mg/L mampu membunuh lintah yang menginfeksi ikan  kerapu  hibrida  cantik  (Tabel  4).  Ikan  kerapu
hibrida cantik terlihat masih sehat dan aktif berenang setelah  perendaman.  Akan tetapi,  ivermectin  dalam air  tawar  dengan  dosis  rendah  (10-20  mg/L)  masih menyebabkan  kematian  ikan  uji,  sedangkan  lintah setelah diisolasi dalam cawan petri yang berisi air laut masih terlihat hidup dan menempel pada dasar cawan petri.
Tembakau  memiliki  kandungan  nikotin  dan merupakan senyawa  beracun bagi  beberapa hewan. Tembakau  digunakan untuk  membersihkan air  yang tercemar lintah (Bahmani et al., 2015). Nikotin dalam dosis  tinggi  menyebabkan  non-polarisasi  reseptor nikotinik asetilkolin yang biasanya digunakan sebagai insektisida (Bahmani et al., 2014). Perendaman dengan formalin  50-250  mg/L  selama  60  menit  dilaporkan mampu  membunuh  lintah  laut  (Koesharyani  et  al., 2001;  Cruz-Lacierda  et  al.,  2000).  Namun  dalam penelitian ini menunjukkan bahwa formalin 200 mg/L dalam  air  laut  belum  mampu  membunuh  Z. arugamensis.  Chu  &  Yau  (2013)  melaporkan  bahwa perendaman formalin dengan dosis berbeda (50-2.000 mg/L)  selama  20  menit  masih  menunjukkan  adanya pergerakan  lintah.  Ketika  lintah  laut  yang  sama ditempatkan ke dalam air laut (28 ppt), lintah menjadi
Tabel 2. Persentase sintasan larva Z. arugamensis (ulangan-3) pada hari ke-13 setelah coccon direndam dengan bahan kimia pada umur inkubasi satu hari dalam cawan petri
Table 2. Survival rate (%) of Z. arugamensis (treatment-3) on day 13 after the cocoons were soaked with chemicals for 60 minutes at one day incubation in Petri dish
Jumlah larva Number of larvae Persentase Percentage Formalin (400 mg/L) 694 0 0 Formalin (300 mg/L) 593 0 0 Klorin (400 mg/L) Chlorine (400 ppm) 636 51 8.02 Klorin (300 mg/L) Chlorine (300 ppm) 380 32 8.42 Ivermectin (100 mg/L) 475 0 0 Ivermectin (50 mg/L) 535 0 0 Tembakau dalam air laut (10.000 mg/L) 10,000 ppm tobacco in marine water 651 48 7.37 Tembakau dalam air tawar (10.000 mg/L) 10,000 ppm tobacco in fresh water 618 4 0.65 Air tawar/Fresh water (0 ppt) 788 79 10.03 Air laut/Marine water (31 ppt) 631 124 19.65 Daya tetas coccon dengan perlakuan bahan kimia dan diinkubasi selama 13 hari Hatching rate of chemicals-treated cocoon after 13 days incubation Perlakuan Treatments Jumlah coccon
Number of cocoon

## Ta b el 3 . K o n d is i ik an k er ap u h ib ri d a ca n ti k ya n g t er in fe ks i Z. ar ug am en si s se te la h d ir en d am d al am b ah an k im ia s el am a 6 0 m en it

## Ta bl e 3. T he c on di ti on of hy br id g rou pe rs th at in fe ct ed w it h Z . ar ug am en si s aft er soa ke d w it h va ri ou s ch em ic al s for 60 m in ut es
Ta b el 4 . K o n d is i ik an k er ap u h ib ri d a ca n ti k ya n g t er in fe ks i Z. ar ug am en si s se te la h d ir en d am d en g an i ve rm ec ti n , fo rm al in , d an h id ro g en p er o ks id a d al am a ir ta w ar s el am a 6 0 m en it Ta bl e 4. T he c on di ti on of hy br id g rou pe rs in fe ct ed w it h Z . ar ug am en si s aft er soa ke d w it h iv er m ec ti n, for m al in , an d hy dr og en p er ox id e in fr esh w at er for 60 m in ut es
aktif  kembali  setelah  20  menit  hingga  tiga  jam. Selanjutnya  dilaporkan  bahwa  persentase  sintasan lintah laut berkisar antara 50%-100% setelah treatment bahan kimia dan pemulihan dalam air laut, sedangkan 14%-70% dari lintah tersebut mampu menginfeksi ikan kerapu macan E. fuscogutattus setelah satu jam di air laut.
Pengaruh formalin terhadap infeksi lintah pada ikan kerapu hibrida cantik terlihat setelah penggunaan air tawar sebagai pelarutnya. Penggunaan air tawar untuk perendaman  ikan  kerapu  yang  terinfeksi  lintah  laut dilaporkan efektif. Akan tetapi, efektivitas air tawar dalam  menurunkan  intensitas  infeksi  lintah  hanya untuk ikan-ikan yang tahan dengan perendaman air tawar  seperti  ikan  kerapu  lumpur  E  coioides  (Cruz- Lacierda et al., 2000). Penggunaan air tawar untuk treat- ment  lintah  laut  diperlukan  bantuan  tangan  untuk melepaskan lintah yang menempel di tubuh ikannya, serta air tawar bekas treatment agar tidak dibuang ke laut kembali, oleh karena lintah laut dapat bertahan hidup  di  air  tawar  (salinitas  0  ppt)  selama  2-3  hari (Mahardika et al., 2018b). Lintah laut menempelkan coccon-nya  pada  bak  pemeliharaan  dan  fasilitas budidaya lainnya. Coccon tersebut sangat sulit untuk dibunuh dengan bahan kimia seperti pada hasil uji in vitro. Coccon dapat dibunuh dengan penggunaan so- dium  hypochlorite  (10.000  mg/L),  formalin  dan ivermectin dosis tinggi, ataupun dengan pengeringan (Cruz-Lacierda et al., 2000).

## KESIMPULAN
Hasil uji  in  vitro  menunjukkan  bahwa  lintah  laut (hirudinea:  Z.  arugamensis)  dapat  dibunuh  dengan perendaman bahan kimia seperti 300 mg/L formalin, 300 mg/L klorin, 100 mg/L ivermectin, dan 10.000 mg/ L calcium hypochlorite (kaporit) dalam air laut selama 60 menit  mampu membunuh  Z. arugamensis  hingga 100%. Bahan kimia tersebut juga mampu membunuh coccon yang dihasilkan oleh Z. arugamensis. Hasil uji in vivo menunjukkan bahwa perendaman 100-200 mg/ L formalin dan hidrogen peroksida selama 60 menit dalam  air  tawar  efektif  dalam  membunuh  Z. arugamensis dan aman bagi ikan kerapu hibrida cantik.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  mengucapkan  terima  kasih  kepada  teknisi Laboratorium Patologi (Ibu Sri Suratmi, Bapak Ketut M.  Arya  Sudewa,  Ibu  Kristiana  Subyakto,  S.Pi.), BBRBLPP,  dan  Ahkmad  Fauzy,  mahasiswa  Politeknik Kelautan dan Perikanan, Sidoarjo, Surabaya yang telah membantu dalam pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR  ACUAN
Athanassopoulou,  F.,  Bitchava,  K.,  &  Pappas,  I.S.
(2009). An  overview of the treatments  for para- sitic  disease  in  Mediterranean  aquaculture.  In Rogers, C. & Basurco, B. (Eds.). The use of veteri- nary drugs and vaccines in Mediterranean aquac- ulture. Zaragoza: Ciheam Options,
Méditerranéennes:  Série  A.  Séminaires Méditerranéens; n. 86, p. 65-83.
Bahmani, M., Avijgan, M., Gholami-Ahangaran, M., & Rafieian, M.  (2012). The  comparison of  the anti Limnatis nilotica effets of albendazole and some of the  Iranian  medicinal  plants.  Iranian  South  Med Journal, 1, 25-33.
Bahmani,  M.,  Banihabib,  E.,  Rafieian-Kopaei,  M.,  & Gholami-Ahangaran, M. (2015). Comparison of dis- infection  activities  of  nicotine  with  copper  sul- phate in water containing Limnatis nilotica. Kafkas Univ. Vet. Fak. Derg. Journal, 21(1), 9-11.
Bahmani, M., Karamati, S.A., Banihabib, E., & Saki, K. (2014).  Comparison  of  effect  of  nicotine  and levamisole and ivermectin on mortality of leech. Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 4(1), 5477- 5480.
Chu, K.B. & Yau, L.Y. (2013). Effectiveness of formalin bath  treatment  on  marine  leech  Zeylanicobdella arugamensis:  A  parasite  of  tiger  grouper Epinephelus fuscoguttatus. Asian-Pacific Aquaculture - Meeting Abstract.
Cruz-Lacierda,  E.R.C.,  Toledo,  J.D.,  Fermin,  J.D.T.,  & Burreson,  E.M.  (2000).  Marine  leech (Zeylanicobdella arugamensis) infestation in cultured orange-spotted grouper, Epinephelus coioides. Aquac- ulture, 185(3-4), 191-196.
DJPB.  (2018).  Capaian  kinerja  subsektor  perikanan budidaya  dan  outlook  tahun  2018.  https:// kkp.go.id/djpb/artikel/3042.
Gholami-Ahangaran, M., Bahmani, M., & Zia-Jahrom, N. (2012). In vitro antileech effects of Vitis vinifera L.,  niclosamide  and  ivermectin  on  mature  and immature  forms  of  leech  Limnatis  nilotica.  Glob. Vet.; 8, 229-232.
Kleinertz,  S.  &  Palm,  H.W.  (2013).  Parasites  of  the grouper fish Epinephelus coioides (Serranidae) as po- tential  environmental  indicators  in  Indonesian coastal ecosystems. Journal of Helminthology, 89, 86-99.
Kleinertz, S., Damriyasa, I.M., Hagen, W., & Theisen, S.  (2014).  An  environmental  assessment  of  the parasite  fauna  of  the  reef-associated  grouper
Epinephelus areolatus from Indonesian waters. Jour- nal of Helminthology, 88, 50-63.
Koesharyani,  I.,  Roza,  D.,  Mahardika,  K.,  Johnny,  F., Zafran, & Yuasa, K. (2001). Manual for fish disease diagnosis-II. Marine fish and crustacean diseases in Indonesia. Gondol Research Institute for Mari- culture, Central Research Institute for Sea Explo- ration  and  Fisheries,  Dep.  of  Marine  Affair  and Fisheries  and  Japan  International  Cooperation Agency, p. 5-7.
Kua,  B.C.,  Azmi,  M.A.,  &  Hamid,  N.K.A.  (2010).  Life cycle  of  the  marine  leech  (Zeylanicobdella arugamensis)  isolated  from  sea  bass  (Lates calcarifer) under laboratory conditions. Aquaculture, 302, 153-157.
Mahardika, K., Mastuti, I., Sudewi, & Zafran (2018a). Identification and life cycle of marine leech iso-
lated from cultured hybrid grouper in the North- ern Bali waters of Indonesia. Indonesian Aquacul- ture Journal, 13(1), 41-49.
Mahardika, K., Mastuti, I., & Zafran (2018b). Respons lintah laut (Zeylanicobdella arugamensis) terhadap salinitas berbeda secara laboratorium. Journal of Fisheries and Marine Research, 2(3), 208-214.
Murwantoko, Negoro, S.L.C., Isnansetyo, A., & Zafran (2017). Life cycle of marine leech (Zeylanicobdela arugamensis) from cultured cantik hybrid grouper (Ephinephelus sp.) and their susceptibility against chemicals. Aquacultura Indonesia, 18(2), 72-76.
Ravi,  R.  &  Yahaya,  Z.S.  (2017).  Zeylanicobdella arugamensis, the marine leech from cultured crim- son snapper (Lutjanus erythropterus), Jerejak Island, Penang, Malaysia. Asian Pac. J. Trop. Biomed., 7(5), 473-477.