## PENGARUH KOMBINASI EKSTRAK KULIT BUAH DURIAN DAN ITRACONAZOLE
DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN Candida albicans

## THE EFFECT OF DURIAN PEEL EXTRACT AND ITRACONAZOLE COMBINATION IN
INHIBITING THE GROWTH OF Candida albicans
Siti Rusdiana Puspa Dewi, Lizzana Farianty, Ahdiyat Sukmawan Program Studi Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya Correspondence e-mail to: sitirusdiana@fk.unsri.ac.id

## Abstrak
Itraconazole merupakan  salah  satu  obat  sintetik  yang  memiliki  keterbatasan  dalam  menghambat pertumbuhan Candida  albicans  (C.  albicans).  Kulit  buah  durian  (Durio  zibethinus  L.)  merupakan salah  satu  tanaman  yang  memiliki  efek antifungal karena  mengandung  senyawa  organik  seperti flavonoid,  tanin,  dan  saponin  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan C.  albicans. Tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk menetapkan  potensi pengaruh pemberian kombinasi  ekstrak  kulit  buah durian dengan dan tanpa itraconazole terhadap pertumbuhan C.  albicans in  vitro.  Penelitian  ini menggunakan metode checkerboard dengan 6 jenis konsentrasi ekstrak kulit buah durian dan 5 jenis konsentrasi iatraconazole dalam menentukan KHM kombinasi. KHM kombinasi bahan uji diuji pada media  SDA  untuk  menetapkan pengaruh  kombinasi bahan  uji terhadap C.  albicans melalui  zona hambat  yang  dibandingkan  dengan itraconazole (kontrol  positif), ekstrak  kulit  buah  durian,  dan akuades (kontrol  negatif).  Hasil  dari  penelitian ini  menunjukkan  pemberian  bahan  uji  kombinasi berpotensi  menghambat  pertumbuhan C.  albicans tanpa  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  bahan  uji. Semakin tinggi konsentrasi kulit buah durian atau itraconazole, maka semakin meningkat pula daya hambat pertumbuhan C. albicans. Kesimpulan dari penelitian ini adalah kombinasi ekstrak kulit buah durian dengan itraconazole berpotensi menghambat pertumbuhan C. albicans in vitro.
Kata Kunci: Candida albicans, ekstrak kulit buah durian, itraconazole

## Abstract
Itraconazole is  a  synthetic  drug  that  has  limitations  in  inhibiting Candida  albicans  (C. albicans) growth. Durian  peel (Durio  zibethinus  L.) is one  of  the  plants that  have antifungal effect  because it contains  organic  compounds  such  as  flavonoid,  tannin,  and  saponin that could  inhibit C.  albicans growth. The aim of this study was to determine the potential effect of durian peel extract with and without itraconazole in inhibiting the growth of C. albicans in vitro. This study used a checkerboard method with 6 types of durian peel extract concentration and 5 types of itraconazole concentrations in determining  MIC  combination.  MIC  combination was tested  in  SDA  media  to establish  the  test materials against C.  albicans through  inhibition  zone  which  compared  with itraconazole (positive control), durian peel extract and aquadest (negative control). The results of this study showed that the administration  of  combination  test materials has  the  potential  to  inhibit  the  growth  of C.  albicans without  being  affected  by  the  concentration  of  the  test  materials. The  higher  the  concentration  of durian peel extract or itraconazole, the more the inhibitory growth of C. albicans increased. It can be concluded that the combination of durian peel extract and itraconazole has potential in inhibiting the growth of C. albicans in vitro.
Keyword: Candida albicans, durian peel extracts, itraconazole

## PENDAHULUAN
Infeksi  jamur merupakan  masalah  yang sering  terjadi  pada  rongga  mulut.  Umumnya infeksi  jamur  ini  sering  disebabkan  oleh Candida  albicans. Di  rongga  mulut, C. albicans memiliki  populasi  20-50%. Candida albicans bukan  patogen,  namun  jamur  ini mampu berubah menjadi patogen dan menyebabkan  terjadinya  kandidiasis  sistemik maupun lokal tergantung dengan kondisi tubuh dari host nya. 1,2 Salah  satu  dari  akibat  infeksi jamur  pada  rongga  mulut C.  albicans adalah oral thrush.
Untuk  menangani  permasalahan  yang ditimbulkan  akibat  dari  infeksi  jamur  pada rongga  mulut,  dibutuhkan  perawatan  seperti penggunaan  obat  antifungal.  Pengobatan alternatif  pertama  yang  mulai  diperkenalkan pada  tahun  1980  adalah itraconazole dan fluconazole dari  golongan azole dengan  sub golongan triazole.  Golongan  ini  merupakan spektrum  luas  yang  mampu  menghambat  ragi dan  filamen fungi (jamur). 3 Itraconazole merupakan  salah  satu  obat  golongan triazole yang  sering  digunakan  dalam  mencegah kandidiasis  oral, baik  sebagai  terapi  jangka pendek  maupun  panjang. 3,4 Itraconazole ini merupakan  antijamur  lini  kedua (second  line therapy) bila  terjadi  resistensi  terhadap fluconazole, karena itraconazole memiliki spektrum yang lebih luas. 4
Obat  alternatif  lain  dalam  terapi kandidiasis  adalah  dengan  menggunakan tanaman. Kandungan obat dalam tanaman bisa didapatkan  dari  bagian  tanaman  seperti  daun, kulit, buah, biji, batang, dan akar, namun tidak semua  tanaman  memiliki  efek  medis  seperti ini.    Buah  Durian  (Durio  zibethinus  L.) merupakan  salah  satu  tanaman  yang  memiliki efek  obat  didalamnya. 5 Pada Durio  zibethinus L. salah  satu  bagian  yang  menjadi  bahan alternatif  adalah    kulitnya.  Khasiat  dari  kulit buah  durian  ini  adalah  mampu  menjadi  salah satu  antifungal  yang  dapat  menghambat C.albicans. 5
Kulit  buah  durian  memiliki  banyak kandungan  senyawa  organik,  seperti  alkaloid, saponin, tanin, fenolik, flavonoid, dan triterpenoid. 5 Senyawa  flavonoid  dan  tanin yang  terkandung  dalam  ekstrak  kulit  buah durian  termasuk  golongan  senyawa fenolik. 6 Senyawa  fenolik  akan  berinteraksi  dengan protein  membran  sel  melalui  proses  adsorpsi yang  melibatkan  ikatan  hidrogen  dengan  cara
membentuk  ikatan  pada  bagian  hidrofilik  dari membran  sel.  Kemampuan  tanin  ini  mampu membuat gangguan pada membran C.albicans melalui presipitasi protein. 5,6
Bondaryk et  al,  2013  mengatakan bahwa  beberapa  antifungal  seperti  golongan azole,  poliena,  pirimidin sering  memiliki keterbatasan  dalam  perawatan  kandidiasis akibat toksisitas obat yang tinggi, pertimbangan  terapi,  dan  resistensi  obat. 7 Kesulitan  ini  menyebabkan  dibutuhkannya kombinasi  obat  dalam  perawatan  kandidiasis. Dalam studi yang pernah dilakukan, itraconazole dan  kulit  buah  durian  memiliki kemampuan  dalam  menghambat  pertumbuhan C. albicans. 7
Potensi kedua  bahan  ini  dapat  menjadi antifungal yang lebih baik jika dikombinasikan,  namun  penelitian terhadap pemberian kombinasi  kedua  bahan  tersebut terhadap  pertumbuhan C.  albicans belum pernah  dilakukan.  Oleh  karena  itu, tujuan penelitian ini adalah untuk menetapkan potensi pengaruh  kombinasi  ekstrak  kulit  buah  durian dan itraconazole, dibandingkan dengan itraconazole preparat tunggal dalam menghambat pertumbuhan Candida albicans.

## BAHAN DAN METODE
Jenis  penelitian  yang  digunakan  adalah eksperimental  laboratoris  secara in  vitro dengan  desain posttest-only  control  group. Penelitian dilakukan di Laboratorium Genetika dan  Bioteknologi  Fakultas  MIPA  Universitas Sriwijaya  dan  Laboratorium  Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah inkubator (Memmert TM, ,German), timbangan  digital (Ohaus TM ,  German), kertas timbang, blender (Philips TM , Japan), evaporator (Buchivorator TM ,  German), botol kaca  tempat  penyimpanan  ekstrak  kulit  buah durian,  pipet  mikro,  pipet  pengaduk, lampu spritus,  pipet  tetes,  ose  bundar,  tabung  reaksi, rak tabung reaksi, penjepit, gelas ukur, sliding caliper dengan  ketelitian  0,01  mm (Tricle band TM ,  German),  cawan  petri,  kertas  saring, kertas  cakram  dengan  diameter  0,6  mm, microplate 96-wells, dan autoklaf. Bahan yang digunakan  dalam  penelitian  adalah  ekstrak kulit  buah  durian yang  diambil  dari  Tanjung Lubuk,  Kabupaten  Ogan  Koemring  Ilir, Sumatera Selatan, itraconazole, media Sabouraud  Dextrose  Agar (SDA) (Oxoid,
United Kingdom), media
Sabouraud DextUnitedrose  Broth (SDB) (Oxoid,  United Kingdom),  biakan C.  albicans ATCC  10231, dan akuades.

## Pembuatan Ekstrak Kulit Buah Durian
Kulit  buah  durian  dipotong  kecil-kecil dan  diambil  bagian  dalamnya  saja  lalu dibersihkan  dan  dikeringkan  di  udara  terbuka yang terlindung dari cahaya matahari langsung.  Kulit  yang  sudah  kering  dihaluskan dengan  blender  lalu  disaring  dengan  saringan berdiameter lubang 1 mm sehingga didapatkan 500  gram  serbuk  kulit  buah  durian.  Sampel bubuk  dibungkus  kertas  saring,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  tabung  soxhlet.  Labu soxhlet  diisi  dengan  pelarut  etanol  70%.  Unit soxhlet  dilakukan  pemanasan  pada  suhu  titik didih  pelarut  (78,3 o C).  Ekstraksi  dilakukan selama  10  jam  hingga  pelarut  yang  terdapat pada  labu  tidak  berwarna.  Ekstrak  yang didapat dilakukan evaporasi dengan menggunakan  evaporator  pada  suhu  50 o C sampai diperoleh ekstrak kering. Proses di atas menghasilkan  ekstrak  kulit  buah  durian  murni 100% yang kental dan siap digunakan.

## Penentuan Nilai KHM
Penentuan Kadar Hambat Minimal (KHM)  dilakukan  dengan  metode checkboard pada  mikroplat. Mikroplat  terdiri  dari bagian sumur  vertikal  dan  horizontal.  Pada  bagian sumur  vertikal  terdiri  dari  sumur  A-H diberikan ekstrak kulit buah durian, sedangkan sumur  horizontal  terdiri  dari  sumur  1-12 diberikan zat aktif itraconazole.
Pada  penentuan  KHM  ekstrak    kulit buah durian, masing-masing sumur dimasukkan  SDB  sebanyak  100µl.  Sumur kolom  H  hanya  berisi  media  SDB  dan  sumur kolom  G  sebagai  kontrol negatif yakni  media SDB  dan  suspensi  jamur.  Sumur  kolom  F ditambahkan  ekstrak  kulit  buah  durian  50% sebanyak  100µl,  setelah  homogen  diambil sebanyak 100µl campuran dan dimasukkan ke dalam kolom dengan penurunan kelipatan dua pada sumur E dengan konsentrasi 25%, sumur D  12,5%,sumur  C  6,25%,  sumur  B  3,125%, dan  sumur  A  1,56%.  10µl  suspensi  jamur C. albicans ditambahkan  pada  sumur  kolom mikrodilusi  A  sampai  G.    Plat  mikrodilusi diinkubasikan  selama  24  jam  dengan  suhu 35 o C.  Nilai  KHM  didapatkan  dari  konsentrasi
terkecil  dimana  tidak  ditemukan  endapan jamur pada dasar plat mikrodilusi.
Pada  penentuan  KHM itraconazole, masing-masing sumur dimasukkan SDB
sebanyak 100µl. Sumur kolom ke-2 ditambahkan itraconazole 32  µg/ml  sebanyak 100  µl,  setelah  homogen  diambil  sebanyak 100µl  campuran  dan  dimasukkan  ke  dalam kolom  ke-3.  Proses  dilusi  ini  dilanjutkan sampai kolom mikrodilusi ke-6. 10µl suspensi jamur C. albicans (10 3 CFU/mL) ditambahkan pada  sumur  kolom  mikrodilusi  ke-2  sampai ke-6. Plat mikrodilusi diinkubasikan selama 24 jam dalam inkubator dengan suhu 35 o C dalam suasana  aerob.  Nilai  KHM  didapatkan  dari konsentrasi  terkecil, dimana  tidak ditemukan endapan jamur pada dasar plat mikrodilusi.

## Pencampuran Ekstrak Kulit Buah Durian dan itraconazole
Pada penentuan konsentrasi pencampuran  ekstrak  kulit  buah  durian  dan itraconazole dipilih  dari  4x  KHM,  2x  KHM, KHM, ½ KHM, ¼ KHM yang didapat dengan menggunakan  metode checkerboard.  Ekstrak itraconazole diletakkan  secara  horizontal  dan ekstrak  kulit  buah  durian  diletakkan  secara vertikal.  Larutan  uji  dikombinasikan  dan dimasukkan ke dalam sumur. Sumur mikroplat bagian  sisi  kiri  dan  atas  berisi  ekstrak  kulit buah  durian  dan itraconazol tunggal.  Pada sumur lainnya  dilakukan  kombinasi  ekstrak kulit  buah  durian  dan itraconazole dengan berbagai  konsentrasi dengan  menyilangkan kedua  bahan tersebut  hingga  seluruh  sumur terisi  bahan  tunggal  dan  kombinasi.  Suspensi jamur sebanyak 10µl yang mengandung 10 3 C. albicans ditambahkan  pada  masing-masing sumur. Mikroplat  diinkubasi  selama  24  jam dengan  suhu  35 o C.  Pengamatan  dilakukan secara  visual  dengan  mengamati  kejernihan pada  sumur  yang  berisi  kombinasi  uji  dan suspensi jamur. Pengulangan penelitian ekstrak  tunggal  dan  kombinasi  sebanyak  2x pengulangan.

## Penentuan Uji Daya Hambat Ekstrak Kulit Buah Durian dengan itraconazole
Kertas  cakram  ditetesi bahan  akuades, itraconazole,  kombinasi  ekstrak  kulit  buah durian  dan itraconazole,  serta  ekstrak  kulit buah  durian  masing-masing  sebanyak  5  µl dengan  menggunakan pipet  mikro  dan didiamkan selama 1 jam. Suspensi C. albicans
diusap secara merata pada permukaan
Sabouraud
Dextrose
Agar dengan
menggunakan  kapas  lidi  steril  dan  dibiarkan selama  3-5  menit.  Kertas  cakram  diletakkan pada  medium Sabouraud  Dextrose  Agar yang telah  ditanami  jamur  uji.  Cawan  petri diinkubasi  pada  suhu  35 o C  selama  24  jam. Setelah  48  jam,  kertas  cakram  dilakukan pengukuran diameter zona hambat yang terjadi dengan menggunakan jangka sorong.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dan  dianalisis dengan  menggunakan  statistik Chi-square untuk  mengetahui  nilai  perbedaan  signifikansi bahan  di  media  SDB.  Pada  pengujian  zona hambat di media SDA digunakan uji Kruskal- Wallis yang  digunakan  untuk  mengetahui perbedaan  yang  bermakna  antar  kelompok pada  uji  zona  hambat  KHM itraconazole tunggal, ekstrak kulit buah durian tunggal dan kombinasi  ekstrak  kulit  buah  durian  dan itraconazole terhadap pertumbuhan C. albicans.  Pengujian  dilanjutkan  dengan  uji Mann-Whitney untuk  melihat  besarnya  nilai perbedaan KHM itraconazole tunggal, ekstrak kulit  buah  durian  tunggal, aquadest dan kombinasi  ekstrak  kulit  buah  durian  dan itraconazole.

## HASIL
Hasil pengujian KHM ekstrak kulit buah durian  tunggal  dan  dan itraconazole masing- masing  adalah  sebesar  50%  dan  8  µg/ml. KHM  kombinasi  ekstrak  kulit  buah  durian merupakan  kombinasi  ekstrak  kulit  buah durian 25 % dan itraconazole 4 µg/ml (Tabel 1).
Tabel  1.  KHM  Mikrodilusi Kombinasi Ekstrak
Kulit Buah Durian dan itraconazole
Konsentrasi Ekstrak Konsentrasi itraconazole (µg/ml) 0 32 16 8 4 2 1,56 % + + - - - - + - + - + + 3,125 % + + - - - - - + + - + + 6,25 % + + - - - - + - + + + + 12,5 % + + - - - - - - + + + + 25% + + - - - - - - - - + + 50 % - - - - - - - - - - + - 0 - - - - - - - - + + + +
Keterangan: (-) Tidak terdapat pertumbuhan
(+) Terdapat pertumbuhan
Pada Tabel  2  terlihat  bahwa  diameter zona  hambat  tertinggi  adalah  kombinasi ekstrak kulit buah durian 50% dan itraconazole 8 µg/ml, diikuti dengan kombinasi  ekstrak  kulit  buah  durian  25%  dan itraconazole 8  µg/ml,  kombinasi  ekstrak  kulit buah  durian  12,5%  dan itraconazole 8  µg/ml, itraconazole 8  µg/ml tunggal,  kombinasi ekstrak kulit buah durian 25% dan itraconazole 4 µg/ml, ekstrak kulit buah durian 50%  tunggal,  serta  kombinasi  ekstrak  kulit buah durian 6,25% dan itraconazole 8 µg/ml.
Tabel 2. Pengukuran Zona Hambat C. albicans
Konsentrasi N Rata-Rata Diameter Zona Hambat + SD 1,56 % + 8 µg/ml 2 - 3,125 % + 8 µg/ml 2 - 6,25 % + 8 µg/ml 2 0,5 + 0,00 12,5 % + 8 µg/ml 2 1,9 + 0,14 25 % + 8 µg/ml 2 2,0 + 0,10 25 % + 4 µg/ml 2 1,0 + 0,02 50 % + 8 µg/ml 2 2,25 + 0,30 50 % + 4 µg/ml 2 1,4 + 0,01 50 % tunggal 2 0,9 + 0,01 8 µg/ml 2 1,25 + 0,35 Tabel 3. Persentase Pengaruh Ekstrak, itraconazole dan Kombinasi Terhadap C. albicans pada Media SDB Perlakuan N Ada Pertumbuhan Tidak Ada Pertumbuhan p Ekstrak 10 60% 40% 0,01 Kombinasi 10 0% 100% itraconazole 10 40% 60% Chi-square p=0,05
Tabel 4. Rata-rata Perbedaan Zona Hambat Ekstrak Kulit Buah Durian, itraconazole, dan Kombinasi Perlakuan n Mean SD p Pengukuran Itraconazole tunggal 2 1,25 0,35 0,00 Ekstrak kulit buah durian 2 0,9 0,14 Kombinasi 2 1,0 0,02 Akuades 2 0 0,00 Kruskal-Wallis, p=0,05
Hasil  analisis  data  menggunakan Chi- square menunjukkan adanya perbedaan bermakna  dengan  p<0,05  (Tabel  3).  Uji Kruskal-Wallis juga  dilakukan  dan  didapat nilai  p<0,05,  yang  menunjukkan  bahwa terdapat  perbedaan  yang  bermakna  antar perlakuan.  Pengujian  dilanjutkan  dengan  uji Mann-Whitney (Tabel  5)  yang  menunjukkan perbedaan  nilai  yang  bermakna  pada  setiap
kelompok  dengan  nilai  p<0,05  pada  masing- masing  hasil  perbandingan.  Hasil  tersebut menunjukkan terdapat pengaruh yang signifikan  pada  KHM  tiap  bahan  dalam menghambat  pertumbuhan C.  albicans jika diukur melalui zona hambat.
Tabel 5. Perbandingan Antar Kelompok 1 2 3 4 1 0,01 0,00 0,00 2 0,01 0,01 0,00 3 0,01 0, 01 0,00 4 0,00 0,00 0,00 Mann-Whitney p=0,05 Ket: 1 = Itraconazole tunggal 2 = Ekstrak kulit buah durian tunggal
3 = Kombinasi ekstrak dan itraconazole
4 = Akuades

## PEMBAHASAN
Penentuan  KHM  pada C.  albicans dalam  penelitian  secara in  vitro dipengaruhi oleh  beberapa  faktor  seperti  konsentrasi antimikroba atau  jamur,  komposisi  media kultur,  waktu  inkubasi  dan  temperatur. 8 Faktor-faktor  tersebut  secara  keseluruhan dapat  dikontrol  saat  prosedur  pengujian berlangsung.
Pada  penelitian  yang  telah  dilakukan oleh  Setyowati et  al, 2013  membuktikan bahwa ekstrak  kulit  buah  durian  memiliki kemampuan  dalam  menghambat  pertumbuhan C.  albicans in  vitro.  Penelitian  tersebut  juga didapatkan  hasil bahwa  KHM  ekstrak  kulit buah  durian  sebesar  25%. 6 Pada  penelitian yang  telah  dilakukan  juga  membuktikan bahwa ekstrak kulit buah durian memiliki sifat antifungal terhadap C.  albicans dengan dibuktikan tidak adanya endapan atau kekeruhan  pada  media  SDB  dan adanya  zona hambat pada SDA dengan konsentrasi 50%.
Penelitian  yang  dilakukan  Azizah et  al, 2015  menyatakan  bahwa ekstrak  kulit  buah durian  mengandung  senyawa  aktif  polifenol. Kandungan polifenol ekstrak kulit buah durian adalah flavonoid, tanin dan saponin. 9
Penelitian  lain  yang  telah  dilakukan  untuk mengetahui  kandungan  ekstrak  kulit  buah durian ini juga dilakukan oleh Anggraeni et al, pada  tahun  2016  dengan  menggunakan  uji kromatografi  lapis  tipis  (KLT).  Hasil  dari pengujian KLT tersebut didapatkan kandungan ekstrak  kulit  buah  durian  yaitu  flavonoid  dan saponin. 10 Pada  penelitian  ini  diasumsikan bahwa potensi antifungal yang dimiliki ekstrak
kulit  buah  durian  ini  berasal  dari  senyawa polifenol.  Kandungan  senyawa  polifenol tersebut juga dimiliki oleh ekstrak lidah buaya dan kunyit yang sering digunakan sebagai obat alami. 11,12
Flavonoid  menghambat C.  albicans dengan  cara  menghambat  sintesis  glukan. 14 Penghambatan  pertumbuhan C.  albicans juga dapat dilakukan dengan menghambat perlekatan dengan sel host. 15 Tanin merupakan salah  satu  zat  yang  terdapat  pada  kulit  buah durian  yang  memiliki  sifat  penghambatan terhadap C.  albicans. 16 Cara  lain  yang dibutuhkan  untuk  mencegah  pertumbuhan C. albicans dapat  melalui  penghambatan  kerja enzim.  Kemampuan  saponin  dikenal  mampu membentuk  kompeks  dengan  sel  membran kolesterol. 17
Pada konsentrasi 50%, sumur  mikroplat yang berisi media SDB tidak terjadi kekeruhan yang  menunjukkan  tidak  adanya  pertumbuhan pada konsentrasi  tersebut.  Hasil  konsentrasi ekstrak  kulit  buah  durian  dalam  penelitian  ini memiliki  perbedaan  KHM  dengan  hasil penelitian sebelumnya. Setyowati dkk menyebutkan bahwa ekstrak  kulit buah durian dengan  konsentrasi  25%  efektif  dalam menghambat C. albicans. 18 Perbedaan konsentrasi  ini  dapat  disebabkan  oleh adanya perbedaan  lingkungan  buah  durian  tumbuh, interaksi  faktor  genetik  dengan  lingkungan, pengolahan  dan  penyimpanan.  Perbedaan lingkungan hidup ini akan memberikan jumlah kandungan  yang  berbeda pada  buah  durian. 19,20 Yin  dkk  melaporkan  bahwa  perbedaan unsur  hara  suatu  tanaman  mempengaruhi jumlah  zat  aktif  yang  terkandung  di  dalam suatu tanaman tersebut. 21
Penambahan ekstrak  kulit  buah  durian dengan berbagai konsentrasi pada media SDA menunjukkan perbedaan hambatan pertumbuhan C.  albicans.  Konsentrasi  di bawah 50% secara berurut memiliki perbedaan hambatan  terhadap pertumbuhan C.  albicans yang  terlihat  jelas,  dimana  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  kulit  buah  durian, maka jumlah C.  albicans semakin  kecil.  Variasi konsentrasi ini juga menunjukkan bahwa  pada konsentrasi  yang  lebih  kecil,  hambatan  yang dihasilkan tidak lebih besar disebabkan  karena konsentrasi  kandungan  ekstrak  kulit  buah durian  seperti  flavonoid,  tanin  dan  saponin lebih sedikit dibandingkan dengan konsentrasi yang lebih besar.
Penentuan KHM  obat itraconazole juga telah  dilakukan  dengan  metode  yang  sama dengan  penentuan  KHM  ekstrak  kulit  buah durian.  Menurut  penelitian  Al-Shemamry, 2011 bahwa KHM itraconazole yang dilakukan pengujian dengan metode
mikrodilusi menunjukkan variasi rentang yaitu 0,002- 32 μg/ml. 22 Pada pengujian itraconazole dalam  penelitian  ini,  konsentrasi  obat  yang digunakan    adalah  32  μg/ml,  16  μg/ml,  8 μg/ml, 4 μg/ml dan 2 μg/ml.
KHM itraconazole dapat  ditentukan dengan  melihat  kekeruhan  sumur  pada mikroplat. Konsentrasi 32 μg/ml, 16 μg/ml dan 8  μg/ml  tidak  terdapat  kekeruhan  pada  sumur yang  menunjukkan  tidak  terjadi  pertumbuhan C.  albicans pada  sumur  tersebut.  Pada konsentrasi 4 μg/ml dan 2 μg/ml menunjukkan hasil berbeda. Pada konsentrasi 4 μg/ml dan 2 μg/ml, sumur pada mikroplat berubah menjadi keruh  disebabkan  adanya  pertumbuhan C. albicans pada sumur tersebut. Hasil penelitian KHM itraconazole ini  dapat  disimpulkan bahwa  KHM  yang  dimiliki  obat itraconazole berada  pada  konsentrasi  8  μg/ml  yang merupakan  konsentrasi  terkecil  yang  dapat menghambat  pertumbuhan C.  albicans pada sumur  mikroplat. Penelitian  yang  telah dilakukan oleh Badiee dan Alborzi menyebutkan bahwa itraconazole dapat menghambat spesies kandida pada konsentrasi 4 μg/ml . 22 Perbedaan  dari  hasil  penelitian  ini dikarenakan  pada  penelitian  ini  spesies  jamur yang digunakan adalah C. albicans, sedangkan pada  penelitian  Badiee  jamur  yang  digunakan adalah  jamur  yang  diisolasi  pada  penderita kandidasis dengan tanpa melihat jenis jamurnya. 23
Itraconazole mampu menghambat pertumbuhan C. albicans dengan cara menghambat  biosintesis ergosterol. Ergosterol merupakan sebuah  molekul  sterol  yang diproduksi  oleh  fungi  sebagai  komponen  dari dinding sel. Golongan triazole ini menunjukkan mekanisme penghambatan
enzim sitokrom P450 14α -demethylase (P45014DM).  Enzim  ini  dibutuhkan C. albicans sebagai  biosintesis ergosterol dan berada pada jalur biosintesis dari lanosterol ke ergosterol. Pada C. albicans, interaksi
itraconazole dengan 14α -methylase menghasilkan penurunan
ergosterol.
Ergosterol ini  memiliki  fungsi  regulasi  yang penting dalam proses proliferasi sel.
Berkurangnya ergosterol pada  membran C. albicans akan  menyebabkan  membran  lebih permeabel  terhadap  glukosa,  molekul  polar, mengganggu fungsi membran dan mempengaruhi  enzim  yang  terikat  pada membran. Pada hambatan ergosterol yang terus menerus  inilah  yang  akan  membuat C. albicans sulit tumbuh dan mati. 24,25
Kombinasi antara beberapa bahan herbal perlu  dilakukan  dalam  perawatan terhadap infeksi mikroba sebagai cara untuk meningkatkan efikasi bahan antimikroba tanpa meningkatkan  efek  samping. 26 Kombinasi ekstrak  jinten  dan  nistatin  merupakan  salah satu  penelitian  yang  pernah  dilakukan  dalam menghambat C.  albicans. Pada  penelitian tersebut  didapatkan  bahwa  kombinasi  ekstrak jinten  dan  nistatin  mampu  meningkatkan  efek obat  dan  mengurangi  resistensi  obat. 25 Pada penelitian  lain  dengan  menggunakan  ekstrak jinten dan ketoconazole juga mampu meningkatkan efek obat dalam menghambat C. albicans. 27 Pada  penelitian  ini  dilakukan kombinasi antara ekstrak kulit buah durian dan itraconazole. Pada penentuan adanya pertumbuhan C.  albicans di  media  SDB menunjukkan beberapa variasi pertumbuhan di KHM yaitu 8 μg/ml itraconazole dan dibawah KHM itraconazole yaitu  4  μg/ml  setelah pengulangan  2  kali.  KHM  kombinasi  ekstrak kulit  buah  durian  dan itraconazole adalah kombinasi ekstrak kulit buah durian 25 %  dan itraconazole 4  μg/ml.  Hal ini  menunjukkan bahwa  kombinasi  dari  ekstrak  kulit  buah durian dan itraconazole pada dosis yang lebih rendah dari dosis tunggal memiliki kemampuan  daya  hambat terbaik terhadap C. albicans. Penurunan dosis pada terapi kombinasi dibutuhkan untuk menurunkan efek resistensi  dan  efek  samping  lainnya  oleh itraconazole tanpa mengurangi efek terapinya.
Dari hasil pengukuran terhadap diameter zona  hambat,  didapatkan  bahwa  konsentrasi kombinasi mengalami peningkatan zona hambat terhadap C. albicans yang dibandingkan dengan itraconazole tunggal. Pada  pengujian  kombinasi  ekstrak  kulit  buah durian  dan itraconazole di  media  SDA  juga didapatkan  KHM itraconazole 8  μg/ml  yang hampir  setara  dengan  kombinasi  ekstrak  kulit buah durian 50% dan itraconazole 4 μg/ml dan kombinasi ekstrak  kulit  buah  durian  25%  dan itraconazole 4 μg/ml, yang dibuktikan dengan rata-rata zona hambat yang hampir sama. Hasil
penelitian  kombinasi  diatas  menunjukkan bahwa  terdapat  peningkatan  pengaruh  daya hambat itraconazole terhadap C.  albicans setelah  dikombinasikan  dengan  ekstrak  kulit buah durian. Peningkatan kemampuan menghambat
itraconazole setelah dikombinasikan  dengan  ekstrak  kulit  buah durian ini disebabkan oleh adanya kemampuan sinergis  antara  kedua  bahan.  Peningkatan  ini dapat dibuktik an dengan 4 μg/ml tunggal yang tidak  memiliki  kemampuan  menghambat C. albicans berubah  setelah  dikombinasikan dengan  konsentrasi  ekstrak  kulit  buah  durian 50%.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut maka  dapat  disimpulkan  bahwa  kombinasi ekstrak  kulit  buah  durian  dengan itraconazole meningkatkan kemampuan dalam menghambat pertumbuhan C. albicans.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Tsai  PW,  Chen  YT,  Hsu  PC,  Lan  CY. Review  article  Study  of Candida albicans and  its  interactions  with  the host: A mini review. Bio Med. 2013; 3:
51-64.
2. Dwairi ZN,  Darwazeh AM,  Shukri LA. Isolation  of Candida species  from  the oral  cavity  and  fingertips  of  complete and  partial  dentures  wearers.  J.  Dent. Health Oral Disorders Ther. 2014; 1(3): 1-6.
3. Kabir  MA,  Ahmad  Z. Review  Article Candida infections and their prevention. Prev. Med. 2013; 2013: 1-13.
4. Vandeputte  P,  Ferrari  S,  Coste  AT. Antifungal resistance and new strategies to  control  fungal  infections.  Int. J. Microbiol. 2012; 2012: 1-11.
5. Vikrant  P,  Priya  J,  Nirichan  KB.  Plants with  anti-Candida activity  and  their mechanism of action : a review. J. Envi. Res. Dev. 2015; 9(4): 1189-96.
6. Setyowati  H,  Hanifah  HZ,  Nugraheni RP,  Setyani  W. Krim  kulit  buah  durian (Durio  Zibethinus  L.)  sebagai  obat herbal pengobatan infeksi jamur
Candida  Albicans. Media  Farmasi Indonesia 2013; 8(2): 1-7.
7. Bondaryk M, Kurzatkowski W,
Staniszewska  M.  Antifungal  agents commonly  used  in  the  superficial  and
mucosal  candidiasis  treatment:  mode  of action  and  resistance  development. Postepy.  Dermatol.  Alergol.  2013; 30(5): 293-301.
8. Mayer FL, Wilson D, Hube B. Candida albicans pathogenicity mechanisms. Virulence 2013; 4(2): 119-28.
9. Azizah  M,  Fitrianti.  Efek  antiinflamasi dari  ekstrak  kulit  buah durian  terhadap tikus  putih  jintan.  Scientia  2015:  5(2): 74-9.
10. Anggraeini  EV,  Anam  K.  Identifikasi kandungan  kimia  dan  uji  aktivitas antimikroba kulit durian (Durio zibethinus Murr.).  J  Kimia  Sains  dan
Aplikasi 2016; 19(3): 87-93.
11. Bernardes I, Rodrigues MP, Bacelli GK, Munin  E, Alves  LP, Costa  MS. Aloe vera  extract reduces  both  growth  and germ  tube  formation  by Candida albicans.  Blacklag  Verlag. 2012:  55(3):
257-61.
12. Dermawaty. Potential  extract  curcuma
(Curcuma Xanthorrizal, Roxb) as antibacterials. J. Majority. 2015: 4(1): 1- 7.
13. Kumar  S,  Pandey  AK.  Chemistry  and biological  activities  of  flavonoids:  an overview.  The  scientific  world.  2013; 2013: 1-17.
14. Serpa R, Franca EJG, Furlaneto-Maia L, Andrade CGTJ, Diniz A, Furlaneto MC. In  vitro  antifungal  activity  of  the flavonoid  baicalein  against Candida species.  J.  Med.  Microbiol.  2012;  61:
1704-8.
15. Pribadi  ES,  Rihansyah  HP,  Darusman HS. In  vitro growth  inhibition  of Candida  albicans caused  by  antifungal properties of miswak (Salvadora persica Linn.)  ethanolic  extract  and commercial  mouthwash. J. Oral  Healht Dent. Manag. 2014; 13(4): 1049-52.
16. Suciyanti  H,  Sulistyowati  E,  Fenita  Y. Evaluasi  nutrisi  limbah  kulit  durian (Durio  zibethinus)  yang  difermentasi jamur  tiram  putih  (Pleurotus  ostreatus) pada  masa  inkubasi  yang  berbeda.  J Sain  Peternakan  Indonesia  2015;  10(2): 77-86.
17. Budzynska  A,  Sadowska  B,  Szakiel MW,  Micota  B,  Stochmal  A.  Saponins of Trifolium spp.  aerial  parts  as modulators of Candida albicans
virulence  attributes.  Molecules  2014: 19:10602-17.
18. Setyowati  H,  Hanifah  HZ,  Nugraheni RP. Krim  kulit  buah  durian  (Durio zibenthinus  L.)  sebagai  obat  herbal pengobatan  infeksi  jamur Candida albicans.  Majalah  Farmasi  Indonesia
2013; 8(2): 1-7.
19. Ding  T,  Sutejo  H,  Patah  A.  Pengaruh berat  benih  dan  media  tanam  terhadap pertumbuhan  vegetatif  bibit  durian
(Durio  zibethinus Murr).  J.  Agrifor.
2015; 14(2): 261-8.
20. Marselia  S,  Wibowo  MA,  Arreneuz  S. Aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  soma
(Ploiarium alternifolium Melch) terhadap Porpionibacterium  acnes.  Jkk
2015; 4(4): 72-82.
21. Yin  XM,  Quin  LT,  Zheng  CF,  Shi  F, Wang  CH,  Zheng  QS.  Comparison  of the distribution of mineral nutrients and active  substanes  in  dehydration  and salinity-stressed Aloe  vera L.  J  Plant.
Nutr. 2016; 39(13): 1840-51.
22. Al-Shemmary  II. In  vitro MIC  of itraconazole against different isolates of Candida  albicans.  Iraqi  J.  Pharm.  Sci. 2011; 20(1): 33-7.
23. Badiee  P,  Alborzi  A.  Susceptibility  of clinical Candida species  isolates  to antifungal  agents  by  E-test  Southern Iran:  A  five  year  study.  Iran  J.
Microbiol. 2011; 3(4): 183-8.
24. Sharma  V,  Bhatia  R.  Triazole  in antifungal  therapy:  a  review.  Int.  J  Res in Pharm. Biomed. 2011; 2(2): 417-27.
25. Quan-Zhen  L,  Yan  L,  Jiang  Y.  The synthesis,  regulation,  and  functions  of sterols in candida albicans: well-known but  still  lots  to  learn.  Virulance  2016;
7(6): 649-59.
26. Chen  X,  Ren  B,  Chen  M,  Wang  Q, Zhang  L,  Yan  G.  Predicting  synergistic drug  combinations  based  on  semi supervised  learning.  PLOS  Comp.  Biol.
2016; 12(7): 1-23.
27. Chanda  S,  Rakholiya  K.  Combination therapy:  synergism  between natural plant  extracts  and  antibiotics  against infectious  diseases.  Formatex  2011: 520-9.