## DOI: 10.32663/ja.v%vi%i.3023
PERBAIKAN SIFAT LADA ( Piper nigrum L.) MENGGUNAKAN

## MUTAGEN ETHYL METHANE SULPHONATE (EMS)
(Improved properties of Pepper (Pepper nigrum L.) using Mutagen Ethyl Methane
Sulphonate (EMS))
Iman Suswanto * , Indri Hendarti, Tris Haris Ramadhan Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Tanjungpura, Pontianak Jalan Prof. Hadari Nawawi, Pontianak, Kalimantan Barat, Indonesia (78121) *Corresponding author: iman.suswanto@faperta.untan.ac.id

## ABSTRACT
The study aimed to determine the LC 50 using EMS on pepper and obtain a better mutant than the  parents.  The  material  used  was  Indian  variety  pepper,  and  the  chemical  mutagen  was Ethyl Methane Sulphonate (EMS). Two hundred Indian Cultivar pepper seeds obtained from community  gardens  were  treated  with EMS  mutagen  at  a  concentration  of  0;  0.2;  0.4;  0.6; 0.8,  and  1.0%  with  3  hours  of  immersion.  Observations  consisted  of  germination,  mutagen damage  and  agronomic  characters.  The  LC 50 calculation  was  obtained  from  the  regression relationship of dead sprouts with several doses of EMS application which had the best fitting curve with the highest determination value (R2). The results showed that pepper germination was  relatively  low  (62%). The  impact  of  using  EMS  mutagens  causes  growth  inhibition  or even  death  of  sprouts.  The  higher  the  concentration,  the  higher  the  mortality  rate.  The relationship  between  the  concentration  of  mutagens  and  the  mortality  rate  follows  the polynomial  equation  y  =  188.45x  –  97.21x2  +  2.71  with  a    determination  value  of  99%. Based on the regression model, the LC 50 value is 0.3%. In this study, the EMS concentration of 0.2% succeeded obtaining a better mutant pepper than the parental. indicated by increasing the length and width of the cotyledons, respectively, 20 and 24% greater than the control.
Keywords : cotyledons, EMS, LC 50 , mutant pepper

## ABSTRAK
Penelitian  bertujuan  menentukan  LD 50 penggunaan  EMS  pada  lada  dan  memperoleh  lada mutan yang lebih baik dari tetua.  Bahan uji menggunakan lada varietas India dan mutagen kimia  Ethyl  Methane  Sulphonate  (EMS).  Sebanyak  200  biji  lada  India  yang  diperoleh  dari kebun masyarakat diberi perlakuan  mutagen EMS pada dosis 0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 dan 1,0% dengan  lama  perendaman  3  jam.  Pengamatan  terdiri  atas  daya  kecambah,  daya  rusak mutagen,  dan  karakter  agronomis.  Penghitungan  LC 50 diperoleh  dari  hubungan  regresi kecambah  mati  dengan  beberapa  dosis  aplikasi  EMS  yang  memiliki  kesesuaian best  fitting curve dengan  standar  determinasi  (R 2 )  tertinggi.  Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa perkecambahan  lada  relatif  rendah  sebesar  62%.  Dampak  penggunaan  mutagen  EMS menyebabkan  hambatan  pertumbuhan  atau  bahkan  kematian  kecambah.  Semakin  tinggi konsentrasi  diikuti  oleh  tingkat  kematian  yang  semakin  tinggi  pula.  Adapun  hubungan konsentrasi mutagen dengan tingkat kematian mengikuti persamaan polinomial y = 188,45x – 97,21x 2 +  2,71  dengan  standar  determinasi  99%.  Berdasarkan  model  regresi  diperoleh  nilai LD 50 sebesar  0,3%.  Pada  penelitian  ini,  penggunaan  EMS  pada  konsentrasi  0,2%  berhasil memperoleh  lada  mutan  yang  lebih  baik  dari  tetuanya,  ditunjukkan  dengan  peningkatan

## DOI: 10.32663/ja.v%vi%i.3023
ukuran  panjang  dan  lebar  kotiledon  berturut-turut  20  dan  24%  lebih  besar  dibandingkan kontrol.
Kata Kunci : EMS, lada mutan, LD 50, kotiledon

## PENDAHULUAN
Saat  ini  pemanfaatan  lada  ( Piper nigrum L.)  bukan  saja  terbatas  pada penambah  cita  rasa  masakan,  tetapi  juga kandungan  senyawa  bioaktif  untuk  tujuan pengobatan.    Seiring  dengan  meningkatnya kebutuhan  manusia  maka  sifat-sifat  yang dimiliki  oleh  varietas  lada  juga  harus lengkap sehingga dapat memenuhi kebutuhan pasar seperti buah besar, produksi tinggi,  kandungan  bahan  aktif  tinggi,  tahan terhadap cekaman lingkungan biologi maupun  fisik  (Takooree  et  al.,  2019).  Salah satu  upaya  meningkatkan  keragaman  sifat lada sesuai dengan kebutuhan adalah melalui perakitan  varietas  menggunakan  mutagen kimia. Mutagen kimia EMS sering digunakan pada bahan-bahan tanaman berupa  biji,  plantlet  kultur  jaringan  maupun polen.  Biji  atau  bagian  tanaman  yang berukuran  kecil  seperti  biji cabai, tembakau, padi,  lada,  sawi  dan  lain-lain  efektif diperlakukan  dengan  mutagen  kimia  karena biaya  relatif  murah,  penggunaan  mutagen sederhana  dan  peluang  keberhasilan  induksi mutan  relatif  tinggi  (Brunelle  et  al.,  2017; Suteja et al., 2019). Sebaliknya, penggunaan EMS  pada  bahan  tanaman  berukuran  besar seperti  umbi,  rimpang  atau  umbi  lapis  akan efisien menggunakan jaringan titik tumbuh.
Beberapa    kultivar/varietas    unggul yang  telah  dilaporkan  dari  keberahasilan induksi  kimiawi  maupun  radiasi  berupa perbaikan ketahanan terhadap hama/penyakit, perbaikan kandungan nutrisi, ketahanan cekaman lingkungan dan lain-lain (Jankowicz-cieslak  et  al.,  2012).  Aplikasi
mutasi  banyak  dilakukan  pada  tanaman  hias yang  sangat  mengharapkan  keunikan  dari bentuk  atau  warna  (Handayati,  2013) . Menurut  Triani  et  al.  (2021),  sifat-sifat  padi mutan  yang  dikehendaki  seperti  kerdil, kematangan  biji  lebih  awal  dan  responsif terhadap  pemupukan.  Pada  kacang  tanah, perendaman biji dengan 0.39% sodium azida menghasilkan  biji  yang  mengandung  oleat lebih  tinggi  (Wang  et  al.,  2011).  Varian abaka  lebih  tahan  terhadap  Fusarium (Purwati, et al. , 2008).
Keberhasilan  mutasi  tiap  tanaman tergantung  pada  konsentrasi  dan  lama perendaman (Yanti, 2012). Menurut Alcantara  et  al.  (1996)  mutagen  EMS  dapat digunakan  pada  rentang    konsentrasi    0,5% sampai 1,5% dengan lama perendaman 3  - 9 jam.  Dosis  efektif    induksi    mutasi  pada berbagai  komoditas  terjadi  pada  LD 50 ( Lethal  dose 50) atau saat terjadi kematian 50%  dari  populasi  diuji.  Perbaikan  sifat tanaman dengan EMS terjadi akibat perubahan  struktur pada gen atau kromosom akibat  alkilasi  guanine  basa  sehingga    G membentuk  pasangan  G-T  yang  dalam kondisi  normal  membetuk  pasangan  G-C. Mutasi  ini  menghasilkan  tingkat  variabilitas atau  keragaman  genetik  dengan  munculnya sifat  genetik  baru  pada  tanaman  dalam jumlah  yang  sangat  tinggi.  Perubahan  pada mutan  mengalami  perubahan  morfologi seperti panjang batang/akar tanaman, diameter  batang,  ukuran  daun,  bentuk  daun, perbaikan  proses  fisiologi  dan  kadang- kadang  diikuti  fenomena  chimery  (Kristina & Syahid, 2015) .

## DOI: 10.32663/ja.v%vi%i.3023
Penelitian bertujuan menentukan
LC 50 sebagai  konsentrasi  acuan  untuk mendapatkan peluang maksimal terbentuknya  lada  mutan  dan  memperoleh lada mutan yang lebih baik dari tetuanya dari karakter  pertumbuhan  tinggi  hipokotil, ukuran kotiledon dan panjang akar.

## BAHAN DAN METODE
Bahan  tanaman  yang  digunakan berupa  benih  lada  varietas  India  yang diperoleh  dari  kebun  masyarakat.  Perlakuan EMS  pada  benih  lada  sesuai  metoda Alcantara et al. (1996). Benih lada direndam dalam  aquades  selama  12  jam  untuk memudahkan  pengupasan  kulit  dari  biji. Selanjutnya  benih  lada  sebanyak  200  butir, masing-masing  direndam  dalam  EMS  yang dilarutkan dalam buffer fosfat pH 7,0 dengan dosis  berturut-turut  0;  0,2;  0,4;  0,6;  0,8  dan 1,0%  selama  3  jam  pada  suhu  ruang.  Biji lada  kontrol  direndam  dengan  aquades. Berikutnya  biji  dicuci  untuk  menghilangkan sisa-sisa mutagen berturut-turut dengan 0,5% etil  asetat  dalam  buffer  fosfat  pH  7,0 dilanjutkan  dengan  5mM  sodium  tiosulfat pH 9.0 masing-masing selama 45 menit. Biji ditiriskan  kemudian  disemaikan  dalam  pot berisi  media  pasir  dan  gambut  perbandingan 1 : 3 volume/volume. Perawatan perkecambahan dilakukan dengan penyiraman air ledeng sampai biji berkecambah.
Pengamatan Variabel dan Analisis Data
Daya  kecambah .  Variabel  ini  diamati  pada 30  hari  setelah  sebar  (HSS)  dengan  metode Yufdi  &  Sunarti  (1987).  Biji  berkecambah dihitung dengan membandingkan biji berkecambah menghasilkan kotiledon normal  dibagi  total  biji  yang  ditanam. Selanjutnya  kecambah  lada  dipindah  ke  pot
sampai  berumur  2  BSS  untuk  pengamatan lebih lanjut.
Biji  rusak  (Injuried  seed). Pengamatan  ini bertujuan untuk mengetahui dampak kerusakan/kematian kecambah akibat penggunaan  mutagen  sesuai  metoda  Arisha et al. (2014). Pengamatan bersamaan dengan pengamatan  daya  kecambah.  Adapun  untuk menghitung biji rusak sebagai berikut:
Penetapan  LC 50 . Pengamatan  dilakukan untuk  mengetahui  dosis  mutagen  yang menyebabkan  kematian  50%  populasi.  LC 50 diperoleh  dari  pengamatan  biji  rusak  yang dihitung  dengan  hubungan  regresi  antara dosis  mutagen  (variabel  independent  Y)  dan jumlah kematian kecambah (variabel indepenen  x)  menggunakan  fungsi trendline program Excel. Pemilihan model didasarkan pada  nilai  R  kuadrat  tertinggi  ( best  fitting curve ).
Karakter  agronomis  lada. Variabel  terdiri atas:  panjang  hipokotil  dan  panjang  akar diukur masing-masing dari leher akar sampai kotiledon kecambah dan dari pangkal batang sampai  ujung  akar  terpanjang  menggunakan mistar.  Kotiledon  diukur  panjang  dan  lebar menggunakan mistar.
Analisis  data .  Data  pengamatan  karakter agronomis  berupa  hipokotil,  akar  dan kotiledon  dianalisis  secara  deskriptif  dengan membandingkan  rata-rata  lada  mutan  pada masing-masing perlakuan dosis EMS dengan nilai  rata-rata  kontrol  beserta  standar deviasinya.  Analisis  data  sesuai  dengan metoda  Hartati  et  al.  (2017),  lada  mutan dianggap memiliki sifat yang lebih
DOI: 10.32663/ja.v%vi%i.3023
baik/unggul  apabila  nilai  rata-rata  karakter lebih tinggi dari kontrol.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Daya Kecambah
Hasil  pengamatan  daya  kecambah pada  Gambar  1  menunjukkan  bahwa persentase  perkecambahan  biji  lada  sebesar 62%.  Di  duga  keberhasilan  perkecambahan ditentukan oleh tingkat kematangan, fertilitas biji  dan  sifat  dormansi  biji.    Dalam  satu tandan  buah  lada  umumnya  memperlihatkan tingkat  kemasakan  bervariasi,  sebagian  kulit buah  sudah  berwarna  merah  dan  sebagian lagi  masih  hijau.  Hal  ini  berarti  tingkat kemasakan  fisiologis  biji  dalam  satu  tandan beragam  sehingga  daya  kecambah  biji  juga berbeda-beda. Secara morfologi lada memiliki  bunga  majemuk  yang  tersusun dalam  satu  tangai  tandan  bunga.  Bunga bersifat  hermafrodit,  benang  sari  dan  kepala putik terletak dalam satu bunga, tetapi kedua jenis  bunga  terpisah  dan  bunga  tidak dilengkapi dengan hiasan bunga/ perianthium serta  bagian  daun  pelindung/ bractea justru menutupi  sebagian  besar  bunga.  Bentuk
bunga demikian membutuhkan agent pembantu  penyerbukan  yang  cukup  baik seperti  tiupan  angin  maupun  serangga polinator.  Kegagalan  penyerbukan  dapat disebabkan  oleh  ketidakhadiran  serangga maupun  angin  terlalu  kencang  akibat  cuaca buruk  akan  menghambat  pembentukan  buah fertil. Hal ini berarti keberhasilan perkawinan  pada  kebun  lada  masyarakat relatif  rendah  akan  berpengaruh  pada keberhasilan perkecambahan biji lada.
Faktor  lain  penyebab  kegagalan perkecambahan  biji  lada  dapat  disebabkan oleh  lamanya  waktu  yang  dibutuhkan  benih untuk  berkecambah  (lebih  dari  15  HSS). Kondisi demikian dapat meningkatkan resiko kerusakan akibat terlalu lama kontak dengan berbagai mikroorganisme tanah dan pengaruh lingkungan abiotik lainnya. Keterlambatan  perkecambahan  dari  masa normal  berkecambah  menghasilkan  kualitas kecambah yang buruk disebabkan oleh benih belum  mencukupi  dormansi,  benih  belum masak fisiologi, kondisi pertumbuhan kurang ideal dan lain-lain.
Gambar 1. Perkecambahan  benih lada dengan perlakukan beberapa konsentrasi EMS pada umur 4 MST
DOI: 10.32663/ja.v%vi%i.3023
Menurut Elfiani & Jakoni (2015) dan Yufdi  &  Sunarti  (1987),  beberapa  jenis  biji membutuhkan  waktu  perkecambahan  cukup lama  seperti  jambu  air,  jambu  biji,  jambu monyet membutuhkan waktu sampai 15  hari setelah sebar. Pengujian daya kecambah dari 4  varietas  lada  berkisar  antara  51  -  76%. Lebih lanjut de Figueiredo & Sazima (2000) menyatakan bunga lada bersifat hermafrodit, berumah dua dalam satu tangkai, pembentukan buah membutuhkan penyerbukan  dapat  berupa  selfing,  dibantu angin atau serangga. Kegagalan penyerbukan akan  menghasilkan  buah  steril  yang  tidak dapat berkecambah.

## 2. Biji Terluka (Seed Injury)
Hasil  pengamatan  pada  Gambar  2 menunjukkan  bahwa  penggunaan  EMS cenderung  menyebabkan  penurunan  daya kecambah.  Penurunan  persentase  kecambah
hidup secara drastis terjadi mulai konsentrasi 0,4% menyebabkan kematian perkecambahan  pada  kisaran  60%.  Di  duga pemberian  EMS  lebih  dari  0,4%  memiliki efek merusak bagi perkecambahan. Penggunaan  dosis  ini  pada  komoditas  lain seperti  cabai,  padi  atau  pada  jaringan  titik tumbuh pisang sebagai agens induksi mutasi dapat  mencapai  dosis  lebih  dari  0,5%  untuk menyebabkan  kematian  lebih  dari  50% populasi. Hal ini berarti perkecambahan lada lebih sensitif terhadap EMS. Waktu perkecambahan yang cukup lama menyebabkan deposit mutagen pada jaringan tetap  tinggi  menyebabkan  jaringan  menjadi lemah  atau  bahkan  mengalami  kerusakan. Pada  biji-biji  yang  masa  perkecambahan cepat, misalnya selama satu mingguan maka deposit  EMS  pada  jaringan  akan  segera tersebar  seiring  dengan  pertambahan  sel selama pertumbuhan.
Gambar 2. Hubungan konsentrasi EMS dengan tingkat kerusakan perkecambahan lada
Menurut  Arisha  et  al.  (2014) efek merusak  EMS  dapat  disebabkan  oleh dampak kerusakan kromosom  maupun proses  fisiologi  pada  jaringan  tanaman. Secara umum peningkatan kerusakan kromosom/fisiologi seiring dengan peningkatan konsentrasi dan lama perendaman mutagen. Efek gangguan mutagen dapat diketahui pada
ketidakmampuan berkecambah, pertumbuhan  tanaman,  dan  kelangsungan hidup tanaman.
3. Penentuan LC 50 Hasil  analisis  regresi  berdasarkan nilai  R  kuadrat  tertinggi  ( best  fitting  curve ) pada  Gambar  2  menunjukkan  bahwa perlakuan konsentrasi EMS terhadap perkecambahan  lada  mengikuti  persamaan
y = -97.206x 2 + 188.45x + 2.7074 R² = 0.9932 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 Bij i Luka (% )
Konsentrasi EMS (%)
DOI: 10.32663/ja.v%vi%i.3023
kuadratik  y  =  –188,45x  +  97,21x2  +  2,71 dengan  standar  determinasi  99%.    Nilai standar  determinasi  0,99  berarti  besarnya pengaruh  penggunaan  konsentrasi  EMS terhadap perkecambahan lada dapat dijelaskan  dengan  tingkat  keakurasian  yang dijelaskan  oleh  hubungan  antara  x  dan  Y mencapai 99%.
Persamaan
tersebut dapat dimanfaatkan  untuk  mengetahui  besarnya konsentrasi/dosis  mematikan  (LC 50 )  yang dijadikan  sebagai  konsentrasi  acuan  untuk memperoleh  frekuensi  keragaman  genetik maksimal dengan dampak kerusakan fisiologi  minimal  (Alcantara et  al., 1995). Lethal Consentration 50 ditunjukkan dengan matinya tanaman uji mencapai 50% populasi pada  konsentrasi  bahan  kimia  sebagai  agens perlakuan.  Berdasarkan  persamaan  tersebut, maka  nilai  LC 50 EMS  pada  perendaman  biji lada  sebesar  0,3%.  Konsentrasi  LC 50 EMS pada lada sebesar 0,3% menunjukkan bahwa keberhasilan  menginduksi  mutasi  biji  lada yang  berukuran  relatif  besar  tidak  selalu membutuhkan  EMS  dengan  konsentrasi tinggi.  Menurut  Alcantara et  al. (1995), kisaran  aplikasi  konsentrasi  yang  banyak digunakan  pada  beragam  tanaman  uji berkisar antara 0,5 -2,0%.
4.  Pengaruh  EMS  terhadap  Karakter Agronomis Lada
Hasil  pengamatan  pada  Tabel  1  dan Gambar  3  menunjukkan  bahwa  penggunaan EMS  mempengaruhi  karakter  agronomis pada  pertumbuhan  akar,  kotiledon  dan kemunculan daun. Penggunaan EMS sampai dosis  tertinggi  pada  penelitian  ini  tidak menggangu pertumbuhan hipokotil. Penggunaan konsentrasi EMS tertinggi (1%) menyebabkan  hambatan  pertumbuhan  akar. Bahkan  pada  kotiledon,  penggunaan  EMS mulai  konsentrasi  0,4%  sudah  menyebabkan
gangguan  pertumbuhan    baik  panjang maupun  lebar  kotiledon.    Gambar  3 memperlihatkan penggunaan EMS 0,8% atau lebih  menyebabkan  hambatan  pembukaan kotiledon.  Di  lain  pihak,  penggunaan konsentrasi EMS 0,2% memacu pertumbuhan  daun  mencapai  2  lembar  lebih banyak  dibandingkan  kontrol  yang  baru menghasilkan  1  helai  daun.    Dari  hasil pengamatan  tersebut  menunjukkan  bahwa penggunaan  EMS  0,2%  memperlihatkan kecepatan  pertumbuhan  tanaman  lebih  baik dibandingkan dengan kontrol.
Lada mutan pada perlakuan EMS 2% memiliki  ciri-ciri  pertumbuhan  akar  normal, hipokotil  lebih  kekar  dan  ukuran  kotiledon yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan kontrol. Adapun peningkatan ukuran panjang dan  lebar  kotiledon  berturut-turut  sebesar 19,62  dan  23.92%.  Dengan  demikian  secara umum dapat disimpulkan bahwa penggunaan EMS  0,2%  menghasilkan  beberapa  karakter agromonis  yang  lebih baik   dan konsentrasi EMS  4%  atau  lebih  menghasilkan  respons pertumbuhan  yang  buruk.  Dikaitkan  dengan hasil pendugaan  LC 50 pada konsentrasi EMS 0,3%, maka LC 50 berada diantara konsentrasi terbaik EMS 2% dan konsentrasi EMS  4%  yang  mulai  memperlihatkan respons  buruk  pada  karakter  agronomis.  Di duga  nilai  LC 50 yang  didasarkan  pada variabel  tingkat  kerusakan/kematian  selaras dengan hasil observasi pada variabel karakter agronomis.  Hal  ini  berarti  konsentrasi  EMS pada  LC 50 dapat  dijadikan  sebagai  patokan dosis aplikasi terbaik karena menggabungkan  dampak  mutagen  yang menghasilkan    karakter  agronomis  unggul diikuti  dengan  frekuensi  terbentuknya  lada mutan yang lebih banyak.
DOI: 10.32663/ja.v%vi%i.3023
Tabel 1 .   Pengaruh  beberapa  konsentrasi EMS  terhadap  karakter  agronomis  kecambah lada umur 2 BSS Konsentrasi EMS (%) Panjang Hipokotil (cm) Panjang Akar (cm) Kotiledon Panjang                   Lebar (cm)                        (cm) Kontrol 2,53 ± 0,23 3,56 ± 0,95 2,09 ± 0,13 2,09 ± 0,24 0,2 2,04 ± 0,11 3,52 ± 0,84 2,50 ± 0,07 2,59 ± 0,10 0,4 3,01 ± 0,41 3,47 ± 0,55 1,59 ± 0,43 1,69 ± 0,37 0,6 2,89 ± 0,62 3,76 ± 0,57 1,12 ± 0,30 1,28 ± 0,31 0,8 2,93 ± 0,60 3,08 ± 0,63 0,92 ± 0,90 1,02 ± 0,25 1,0 1,68 ± 0,85 1,89 ± 0,68 0,65 ± 0,17 0,68 ± 0,42
Gambar 3. Pertumbuhan lada  mutan hasil  perlakuan beberapa  konsentrasi  EMS  pada  2  BSS (gambar A tampak samping dan B tampak atas)
Menurut Usharani et al. (2016), bahan penyusun EMS  merupakan  senyawa  beracun dapat menghambat pertumbuhan dan menimbulkan efek toksisitas terhadap tanaman.  Kelebihan  EMS  yang  mudah terhidrolisis  menjadi  senyawa  yang  tidak aktif/tidak  dapat  mengurangi  kerusakan  bagi tanaman dan lingkungan. Lebih lanjut Rustini & Pharmawati (2014) menyatakan faktor lain
DOI: 10.32663/ja.v%vi%i.3023
yang  menyebabkan  terjadinya  penurunan tinggi  tanaman,  jumlah  daun,  panjang,  lebar daun,  tanaman  adalah  karena  adanya kerusakan  seluler  pada  meristem  tanaman. Penurunan  karakter vegetatif tanaman dapat dikaitkan dengan penurunan aktifitas auksin, penghambatan sintesis auksin dan penyimpangan kromosom.

## KESIMPULAN
Dari  uraian  di  muka,  penggunaan EMS  sebagai  mutagen  pada  lada,  dapat disimpulkan  bahwa  penggunaan  EMS  0,2% menghasilkan karakter agronomis yang lebih baik  seperti  kecambah  lebih  vigor,  daun muncul  lebih  cepat  dan  peningkatan  ukuran panjang  dan  lebar  kotiledon  berturut-turut 19,62 dan 23.92% lebih besar dibandingkan kontrol. Penggunaan EMS mulai konsentrasi 0,4%  menyebabkan  gangguan  pertumbuhan kotiledon dan hambatan pembukaan kotiledon  terjadi  pada  penggunaan  EMS 0,8% dan 1%. Penggunaan EMS pada   LC 50 berada pada konsentrasi 3%, dan pendugaan hubungan  antara  konsentrasi  EMS  dengan kematian  perkecambahan  lada  mengikuti persamaan  y  =  –188,45x  +  97,21x 2 +  2,71 dengan standar deviasi sebesar 99%.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  disampaikan kepada  DIPA  Universitas  Tanjungpura Tahun  Anggaran  2020  yang  telah  mendanai kegiatan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Alcantara,  T.,  Bosland,  P.,  &  Smith,  D.
(1996). Ethyl Methanesulfonate- Induced Seed Mutagenesis of Capsicum annuum. Journal of
Heredity , 87 (3), 239–241.
Arisha,  M.  H.,  Liang,  B.,  &  Shah,  S.  N.  M. (2014).  Kill  curve  analysis  and
response  of  first  generation  Capsicum annuum  L  .  B12  cultivar  to  ethyl methane  sulfonate. GMR  Genetic  and Molecular  Research , 13 (4),  10049–
10061.
Brunelle, D. C., Clark, J. K., & Sheridan, W. F.  (2017).  Genetic  screening  for  ems- induced maize embryo-specific mutants altered in embryo morphogenesis. G3: Genes|Genomes|Genetics , Oct ,  1–28. https://doi.org/10.1534/g3.117.300293 de  Figueiredo,  R.,  &  Sazima,  M.  (2000).
Pollination  biology  of  piperaceae species  in  Southeastern  Brazil. Annals of Botany , 85 , 455–460. https://doi.org/10.1006/anbo.1999.108
7
Elfiani,  &  Jakoni.  (2015).  Pengujuan  daya berkecambah benih dan evaluasi struktur kecambah benih. Jurnal Dinamika Pertanian , 30 (1), 45–52.
Handayati, W. (2013). Perkembangan pemuliaan  mutasi  tanaman  hias  di Indonesia  of  Advancement  mutation breeding  on  ornamental  plants  in Indonesia. Jurnal  Ilmiah  Aplikasi Isotop dan Radiasi , 9 (1), 67–80.
Hartati,  S.,  Yunus,  A.,  &  F.  Nugroho. (2017).  Keragaan  anggrek  persilangan ♀Vanda  Celebica  X  ♂Vanda  Dearei hasil  iradiasi  sinar  gamma. Agrotech Res J. , 1 (1), 7–12.
Jankowicz-cieslak,  J.,  Huynh,  O. A., Brozynska, M., Nakitandwe, J., & Till, B.  J.  (2012).  Induction  ,  rapid  fixation and retention of mutations in vegetatively  propagated  banana. Plant Biotechnology  Journal , 10 ,  1056– 1066. https://doi.org/10.1111/j.1467- 7652.2012.00733.x
Kristina,  N.,  &  Syahid,  S.  (2015).  Pengaruh kolkhisin  terhadap  penampilan  lada (Piper  nigrum  L.)  mutan  dan  analisis Ploidi. Littri , 21 (3), 125–130.
Purwati,  Rully  Dyah,  Sudjindro,  S.,  Kartini,
E., & Sudarsono, S. (2008). Keragaman  Genetika  Varian  Abaka Yang Diinduksi Dengan . 14 (1), 16–24.
Rustini, N. , & Pharmawati, M. (2014). Aksi ethyl  methane  sulphonate  terhadap munculnya  bibit  dan  pertumbuhan cabai  rawit  (Capsicum  frutescens  L).
Jurnal Bios Logos· , 4(1), 1–8. https://doi.org/10.35799/jbl.4.1.2014.4 836
Suteja,  H.,  Rostini,  N., &  Amien,  S.  (2019).
Pengaruh perlakuan ethyl methanesulphonate terhadap perkecambahan dan pertumbuhan kentang granola (biji). Jurnal Kultivasi , 18(1), 5–6.
Takooree, H., Aumeeruddy, M. Z., Rengasamy,  K.  R.  R.,  Venugopala,  K. N.,  Jeewon,  R.,  Zengin,  G.,  & Mohamad,  F.  (2019).  A  systematic review on black pepper ( Piper nigrum L .): from folk uses to pharmacological applications. Critical  Reviews  in  Food
Science  and  Nutrition , 0 (0),  1–34. https://doi.org/10.1080/10408398.2019 .1565489
Triani, A., Ahadiyat, Y. R., & Nurchasanah, S.  (2021).  Respons  tanaman  padi
varietas inpari terhadap mutagen sodium azide. Jurnal Penelitian
Pertanian  Terapan ,  21(1),  51–60. http://dx.doi.org/10.25181/jppt.v21i1.1 996.
Usharani,  K.  S.,  Kumar,  C.  R.  A.,  & Vanniarajan,  C.  (2016). EMS -
Chemical  Mutagen  for  Induction  of Mutations . 5 (19), 286–289.
Wang,  C.  T.,  Tang,  Y.  Y.,  Wang,  X.  Z., Zhang, S. W., Li, G. J., Zhang, J. C., & Yu,  S.  L.  (2011).  Sodium  azide mutagenesis  resulted  in  a  peanut  plant with elevated oleate content. Electronic  Journal  of  Biotechnology , 14(2). https://doi.org/10.2225/vol14- issue2-fulltext-4
Yanti,  Y.  (2012).  Aktivitas  peroksidase mutan  pisang  kepok  dengan  ethyl methane  sulphonate  (EMS)  secara  in vitro. Jurnal  Natur  Indonesia ,  14(1), 32.
https://doi.org/10.31258/jnat.14.1.32- 36
Yufdi, M., & Sunarti, T. (1987). Perkecambahan  benih  4  varietas  pada kadar  air  tanah  yang  berbeda. Bull.
Littro , 2(1), 17–22.