## EFEKTIVITAS EKSTRAK METANOL AKAR PANDAN WANGI
( Pandanus amaryllifolius Roxb.) SEBAGAI ANTIMALARIA TERHADAP JUMLAH PARASITEMIA DAN MONOSIT DALAM DARAH MENCIT
( Mus musculus ) YANG DIINFEKSI Plasmodium berghei
Effectivity of Methanol Extract from Root of Pandan (Pandanus amaryllifolius Roxb.) as Antimalaria against the Number of Parasitemia and Monocytes in the Blood of Mus musculus Infected by Plasmodium berghei
Gata Dila 1 , Muhammad Ibnu Kahtan 1 , Ari Widiyantoro 2 1 Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Pontianak, Indonesia
2 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tanjungpura, Pontianak Korespondensi: Ari Widiyantoro. Email: ari.widiyantoro@chemistry.untan.ac.id

## ABSTRAK
Malaria  merupakan  salah  satu  penyakit  infeksi  yang  memberikan  morbiditas  yang  cukup  tinggi  di dunia dan merupakan infeksi yang ketiga teratas dalam jumlah kematian. Di Indonesia, pemberantasan penyakit malaria  kurang  maksimal  karena  adanya  resistensi  parasit  terhadap  obat  antimalaria  dan  gangguan  sistem imun.  Monosit  merupakan  sel  efektor  imun  yang  penting  dalam  perlindungan  terhadap  patogenesis  malaria yang  bersifat  sitostatik  dan  sitotoksik.  Tanaman  pandan  wangi  (Pandanus  amaryllifolius  Roxb.)  memiliki senyawa yang dapat  bekerja  sebagai  antimalaria dan imunomodulator. Tujuan penelitian ini yaitu mengetahui efektivitas  ekstrak  metanol  akar  pandan  wangi  sebagai  antimalaria  terhadap  jumlah  parasitemia  dan  monosit dalam darah mencit (Mus musculus) yang diinfeksi Plasmodium berghei. Penelitian yang dilakukan merupakan penelitian  eksperimen  murni  (true  experiment  design)  in  vivo  dengan  desain  rancangan  acak  lengkap (completely  randomized  design).  Uji  efektivitas  ekstrak  metanol  akar  pandan  wangi  sebagai  antimalaria dilakukan  dengan  konsentrasi  6,5%,  13%  dan  26%.  Kontrol  positif  diberi  3,74  mg/mL  Dihydroartemisinin- Piperaquin  (DHP),  kontrol  negatif  diberikan  akuades  dan  kontrol  normal  tidak  diintervensi  Hasil  penelitian menunjukkan  konsentrasi  6,5%,  13%  dan  26%  memiliki  aktivitas  antimalaria  dengan  menurunkan  persentase parasitemia  dan  meningkatkan  jumlah  monosit.  Kesimpulan  dalam  penelitian  ini  ekstrak  akar  pandan  wangi memiliki  aktivitas  malaria  dengan  konsentrasi  yang  paling  baik  yaitu  26%  untuk  menurunkan  jumlah parasitemia dan meningkatkan monosit.
Kata Kunci: Pandanus amaryllifolius Roxb. Antimalaria, Monosit, Plasmodium berghei

## ABSTRACT
Malaria is one of the most common infectious diseases in the world and is the third highest infection in mortality.  In  Indonesia,  eradication  of  malaria  is  not  maximal  because  of  parasitic  resistance  to  antimalarial drugs  and  immune  system  disorders.  Monocytes  are  important  effector  immune  cells  in  the  protection  of  the cytostatic and cytotoxic pathogenesis of malaria. Pandanus amaryllifolius Roxb. root plant have compounds that can  work  as  antimalarials  and  immunomodulators.  This  research  aim to  determine  the  effectiveness  of  the methanol extract of Pandanus amoryllifolius Roxb. as antimalarial to parasitemia and monocytes count of blood mice  (Mus  musculus)  with  Plasmodium  berghei  infection. This  study  is  a  true  experiment  design  in  vivo  with complete randomized design. Methanol extract of Pandanus amaryllifolius Roxb. with concentration 6.5%, 13% and  26%  used  as  antimalarial.  Dihydroartemisinin-Piperaquine  (DHP)  3.74  mg/mL  used  as  positive  control, aquades used as negative control  groups and the control  group  was not  intervened. The  result of  this research show  effectiveness  as  antimalarial  in  methanol  extract  of  Pandanus  amaryllifolius  Roxb.  with  concentration 6,5%,  13%  and  26%  have  antimalarial  activity  by  decreasing  percentage  of  parasitemia  and  increasing monocyte  count.  The  conclusion  of  this  research  is  the  high  antimalarial  activity  in  methanol  extract  of Pandanus  amaryllifolius  Roxb.  in  26%  concreation  which  could  decreased  parasitemia  precentage  and increased monocytes count.
Keywords: Pandanus amaryllifolius Roxb, Antimalarial, Monocyte, Plasmodium berghei
How To Cite : Dila, G., Kahtan, M., & Widiyantoro, A. (2020). Efektivitas ekstrak Metanol Akar Pandan Wangi (Pandanus  amaryllifolius  Roxb.)  Sebagai  Antimalaria  Terhadap  Jumlah  Parasitemia  Dan  Monosit  Dalam Darah  Mencit  (Mus  musculus)  yang  Diinfeksi  Plasmodium  Berghei.  Biomedika,  12(1),  16-26. doi:https://doi.org/10.23917/biomedika.v12i1.9237
DOI : https://doi.org/10.23917/biomedika.v12i1.9237

## PENDAHULUAN
Malaria merupakan penyakit yang ditularkan  melalui  gigitan  nyamuk Anopheles yang  sebelumnya  telah  terinfeksi  parasit Plasmodium .  Parasit  yang  menyerang  manusia diantaranya  adalah Plasmodium  falciparum ,
Plasmodium  malaria,  Plasmodium  ovale  dan Plasmodium vivax . Pada penelitian ini digunakan metode antimalaria pada mencit yang terinduksi Plasmodium berghei . Hal ini berdasarkan  analisis  molekuler Plasmodium berghei mempunyai  banyak  kesamaan  dengan Plasmodium  yang  menginfeksi  pada  manusia (Darlina, 2011).
Malaria  merupakan  salah  satu  penyakit infeksi yang memberikan morbiditas yang cukup tinggi di dunia dan merupakan infeksi yang ke-3 teratas  dalam  jumlah  kematian. Saat  ini diperkirakan  15  negara  menyumbang  80%  dari kasus  malaria  yang  mengakibatkan  78%  dari jumlah  kematian  di  dunia.  Kematian  akibat malaria  didominasi  oleh  negara-negara  di Subsahara Afrika. Sebagian besar kasus diperkirakan  terjadi  di  wilayah  Afrika  dengan persentase  88%,  diikuti  oleh  Asia  Tenggara dengan persentase 10%  dan Asia Timur dengan persentase  2%. Penduduk  Indonesia  tinggal  di daerah  yang  berisiko  tertular  malaria  dengan
persentase  35%.  Wilayah  endemis  malaria berjumlah  54%  dari  497  kabupaten/kota  yang ada  di  Indonesia. Di  daerah  endemis  tinggi, angka Annual  Parasite  Incidence (API)  masih sangat  tinggi  dibandingkan  angka  nasional, sedangkan  di  daerah  endemis  rendah  sering terjadi  Kejadian  Luar  Biasa  (KLB)  sebagai akibat  adanya  kasus  impor.  Prevalensi  tertinggi kejadian  malaria  terjadi  di  Papua  Barat  sekitar 33,8% dan  terendah  terjadi  di  Bali  sekitar  4,6% (Kemenkes, 2014)
Penanganan  dengan  pengunaan  obat antimalaria yang tepat sangat penting pada kasus malaria,  karena  sifat  pengobatan  dari  penyakit tersebut  harus  dimulai  segera  setelah  diagnosis klinis  ditegakkan.  Penggunaan Artemisinin Combination  Therapy (ACT)  sebagai  pilihan obat  baru  karena  dapat  menurunkan  jumlah parasit  yang  lebih  besar,  yaitu  sekitar  10.000 setiap  siklus  aseksual  dan  dapat  membunuh parasit secara cepat sehingga kombinasi ACT ini direkomendasikan  oleh  WHO  sebagai  obat antimalaria  (WHO,  2006).  Namun  resistensi artemisinin  terhadap  malaria P. falciparum telah  dilaporkan  di  perbatasan  Thailand  dan Myanmar  sejak  tahun  2001  dan  kini  menyebar hingga mencapai Kamboja Barat (WHO, 2015).
Pemberantasan  penyakit  malaria  kurang maksimal  karena  adanya  resistensi  parasit terhadap  obat  antimalaria  dan  gangguan  sistem imun.  Berdasarkan  literatur  terdapat  penelitian yang  membuktikan  bahwa  respon  sistem  imun tubuh  terhadap  malaria  juga  berkontribusi  pada patofisiologi  malaria  pada  manusia. Respon imun  nonspesifik  pada  malaria  melibatkan  sel imun  seperti  makrofag,  monosit,  neutrofil, Natural  Killer  cell (sel  NK)  dan  sitokin.
Makrofag  dan  monosit  merupakan  sel  efektor yang  penting  dalam  perlindungan  terhadap patogenesis malaria. Monosit ini akan menghasilkan  sitokin-sitokin  seperti  TNF,  IL-1, IL-2,  IL-4,  IL-6,  IL-8  dan  IL-10  yang  dimana secara  langsung  menghambat  pertumbuhan  dari parasit  (sitostatik)  dan  membunuh  parasit (sitotoksik) (Perlmann dan Blomberg, 2002)
Berbagai  upaya  telah  ditempuh  untuk menemukan pemecahan masalah yang ditimbulkan  oleh  malaria,  salah  satunya  adalah dengan  menggunakan  tumbuhan  alami  untuk meningkatkan  kinerja  sistem  imun.  Banyak senyawa  alam  dari  tumbuhan  dapat  dijadikan senyawa  antimalaria  alternatif  pengganti  obat malaria  yang  sudah  resisten  terhadap  parasit. Berdasarkan  penelitian  sebelumnya,  diketahui bahwa  akar  pandan  wangi  memiliki  aktivitas
antimalaria  yang  diprediksi  karena  adanya senyawa  golongan  alkaloid  berupa  alkaloid lakton. Penelitian ini mengungkapkan efektivitas ekstrak  metanol  akar  pandan  terhadap  jumlah limfosit  dalam  darah  mencit  yang  diinduksi Plasmodium berghei (Mustofa dkk., 2019). Oleh karena  itu,  penelitian  ini  akan  melakukan penelitian  lanjutan  yaitu  efektivitas  ekstrak metanol akar pandan wangi ( Pandanus amoryllifolius Roxb.) sebagai antimalaria terhadap jumlah parasitemia dan monosit dalam darah  mencit  ( Mus  musculus )  yang  diinfeksi Plasmodium  berghei. Hal  ini  penting  dilakukan untuk  mengetahui  efektivitas  ekstrak  metanol akar  pandan  wangi  sebagai  antimalaria  secara menyeluruh dan tuntas.

## METODE

## Sampel Tanaman
Tanaman  pandan  wangi  ( Pandanus amaryllifolius Roxb.)  yang  digunakan  diperoleh dari  Desa  Kaliabu  Kidul,  Kecamatan  Gamping,
Kabupaten
Sleman, Daerah Istimewa Yogyakarta.  Tanaman  ini  berumur  sekitar  1-2 tahun.  Bagian  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah akarnya. Tanaman telah diidentifikasi di Laboratorium Sistematik Tumbuhan, Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  meliputi  akar  pandan,  pelarut metanol,    etanol  96%,  akuades,  minyak  emersi, giemsa  staining, Dihydroartemisinin-Piperaquin (DHP),  reagen  skrining  fitokimia  dan  uji antimalaria, Plasmodium  berghei dan  mencit jantan ( Mus musculus ).
Alat-alat  yang  digunakan  meliputi maserator,  blender,  saringan,  kandang  mencit, timbangan  digital,  sonde,  sarung  tangan,  spuit injeksi, gelas ukur, pipet ukur, pipet mikro, kaca objek,  kaca  penutup,  mikroskop  cahaya, stopwatch dan kamera.

## Rancangan Penelitian
Penelitian  yang  dilakukan  merupakan penelitian  eksperimen  murni  ( true  experiment design ) in  vivo dengan  desain  rancangan  acak lengkap (completely randomized design) .
Sampel  mencit  dibagi  menjadi  6  kelompok, setiap  kelompok  masing-masing  terdiri  atas  5 ekor mencit. Kelompok pertama sebagai kontrol positif  yang  diberi  perlakuan  menggunakan DHP,  kelompok  kedua  sebagai  kontrol  negatif dengan diberi aquades dan kelompok selanjutnya  ke-3,  ke-4,  ke-5  masing-masing diberi  ekstrak  metanol  akar  pandan  wangi dengan  dosis  yang  bervariasi.  Kelompok  ke-6
merupakan  kelompok  normal  yang  tidak dilakukan intervensi.

## Ekstraksi Maserasi
Akar  pandan  wangi  yang  masih  segar dibersihkan dengan air mengalir dan dikeringkan  secara  kering  angin  dalam  ruangan selama  8  hari  hingga  kandungan  kadar  air mencapai  <10%  (kadar  air  diukur  secara gravimetri).    Selanjutnya  sampel  dipotong- potong  kecil  sekitar  2-3  cm  lalu  diblender hingga menjadi  serbuk dan disaring atau diayak dengan  tujuan  mendapatkan  serbuk  yang  lebih halus.
Sampel  serbuk  simplisia  akar  pandan wangi yang sudah menjadi serbuk halus, kurang lebih  450  g  dimaserasi  dengan  metanol  pada suhu kamar selama 3x24 jam. Kemudian sampel disaring  sehingga  diperoleh  filtrat.  Filtrat dipekatkan dengan evaporator sehingga diperoleh  ekstrak  kental  metanol  lalu  ditimbang untuk mengetahui rendemennya.

## Skrining Fitokimia
Ekstrak  kental  metanol  dalam  jumlah yang  sedikit  dilarutkan  dalam  metanol  kembali untuk  dilakukan  skrining  fitokimia  terhadap kandungan  metabolit  sekundernya  meliputi alkaloid,  flavonoid,  saponin,  terpenoid,  dan steroid.  Skrining  fitokimia  dilakukan  secara
Kromatografi  Lapis  Tipis  (golongan  alkaloid, flavonoid,  terpenoid,  steroid)  dan  tabung  reaksi (golongan saponin).

## Uji Antimalaria
Ekstrak kental metanol kemudian diujikan  sebagai  antimalaria  terhadap  jumlah parasitemia  dan  monosit  pada  mencit Mus musculus yang sudah diinfeksi dengan Plasmodium  berghei. Pembiakan Plasmodium berghei dilakukan  dengan  menggunakan  6  ekor mencit  dimana  mencit  diinfeksi Plasmodium berghei dan  didiamkan  selama  2-3  hari  yang nantinya  sebagai  pendonor.  Proses  transfer  atau inokulasi Plasmodium  berghei pada  mencit  uji diperoleh  dari  enam  mencit  donor  yang  sudah diinfeksikan  ±  1×  10 9 Plasmodium berghei .
Plasmodium berghei yang telah mencapai >10% parasitemia  di  dalam  tubuh  mencit  pendonor akan  siap  dilakukan  inokulasi  pada  mencit  uji. Eritrosit  yang  terinfeksi  parasit Plasmodium berghei akan  diresuspensikan  dalam  larutan Phospat  Buffered  Saline (PBS)  sebagai  media sel  hidup  dan  pengencer  dari  darah  mencit pendonor  yang  akan  diinokulasikan  kembali pada  mencit  uji,  kemudian  diinjeksikan  pada mencit  pendonor  sebanyak  0,2  mL  secara intraperitoneal.  Darah  mencit  pendonor  diambil melalui  pembedahan  dengan  memotong vena
cava inferior mencit, kemudian darah ditampung dalam microtube yang  telah  berisi  larutan Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)  1% dan  dikocok.  Larutan  PBS  ditambahkan  pada microtube yang  berisi  darah  mencit  pendonor dan  larutan  EDTA  1%,  kemudian  dihitung persentase  parasitemia  dengan  cara  membuat sediaan preparat apus darah tipis, jika mencapai >10% maka sudah dapat diinfeksikan ke mencit uji (Basir et al ., 2012; Jambou et al ., 2011).
Inokulasi Plasmodium berghei dilakukan  secara  intraperitoneal,  jika  derajat parasitemia 1 mencit donor sebesar >10% maka darah  diambil  sebesar  2  mL,  campur  dengan larutan  EDTA  1%  sebanyak  200  μl  dan diresuspensi  dalam  1,8  mL  larutan  PBS. Selanjutnya  dilakukan  penyuntikan  inokulum sebanyak 0,2 mL pada mencit uji. Selama 2×24 jam  jika  telah  mencapai  >2%  maka  dilakukan terapi menggunakan obat antimalaria (DHP) dan ekstrak metanol akar pandan wangi hari pertama hingga  hari  kelima  dan  dilakukan  pengamatan terhadap  persentase  parasitemia    dan  jumlah monosit  setiap  hari  selama  lima  hari  (Basir et al ., 2012; Jambou et al ., 2011).
Pengambilan  darah  dilakukan  pada bagian perifer mencit yaitu bagian ekor. Setelah itu dilakukan pemeriksaan dengan cara membuat
sediaan apusan darah tepi menggunakan  sampel darah  sekitar  6  μL  per  sediaan  dari  masing- masing  mencit.  Pemeriksaan  dilakukan  dengan perwarnaan  giemsa  untuk  menghitung  jumlah persentase  parasitemia  dan  pemeriksaan  untuk perhitungan jumlah monosit. Rumus menghitung tingkat  parasitemia  yaitu (jumlah  eritrosit  yang terinfeksi/1000 eritrosit) x  100%.
Sediaan  apusan  darah  tipis  yang  telah diwarnai  kemudian  ditetesi  minyak  imersi  dan dilakukan  pengamatan  jumlah  terhadap  eritrosit yang  terinfeksi  oleh Plasmodium  berghei dan
jumlah monosit dengan menggunakan mikroskop pada perbesaran 100×.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Skrining Fitokimia
Akar  pandan  wangi  setelah  pengolahan diperoleh  450  gram  simplisia  kering.  Simplisia yang  diperoleh  kemudian  dilakukan  ekstraksi.
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah maserasi.  Simplisia  yang  diperoleh  dilarutkan menggunakan pelarut metanol sehingga
dihasilkan  maserat  sebanyak  3  liter.  Maserat yang  diperoleh  kemudian  dipekatkan  melalui evaporasi dan dihasilkan ekstrak metanol seberat 13  gram  berwarna  hijau  tua,  konsistensinya pekat dan liat serta berbau khas.
Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  metanol akar  pandan  wangi  menunjukkan  adanya kandungan golongan senyawa alkaloid, flavonoid,  saponin,  terpenoid  dan  steroid.  Hasil uji metabolit sekunder dari ekstrak metanol akar pandan wangi disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Metabolit Sekunder Ekstrak
Metanol Akar Pandan Wangi Golongan Metabolit Sekunder Uji KLT dan Tabung UV 366 Hasil Alkaloid Positif Flavonoid Positif Saponin - Positif Terpenoid Positif Steroid Positif
Berdasarkan  uji  metabolit  sekunder terlihat  bahwa  ekstrak  metanol  akar  pandan wangi  mengandung  golongan  senyawa  yang banyak.

## Hasil Uji Antimalaria
Pengujian  aktivitas  antimalaria  dilakukan dengan melihat jumlah parasitemia yaitu jumlah eritrosit  yang  terinfeksi  dalam  1000  eritrosit mencit.  Pemberian  terapi  ekstrak  akar  pandan wangi  dan  DHP  pada  mencit  dilakukan  1  kali sehari selama 5 hari berturut-turut dan diberikan secara  oral  pada  jam  yang  sama  setiap  hari pemberian.  Pengamatan  parasitemia  dilakukan 2,5 jam setelah terapi ekstrak akar pandan wangi dan DHP. Hasil pengamatan tingkat parasitemia pada  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak methanol  akar  pandan  wangi  memiliki  aktivitas sebagai antimalaria. Berdasarkan hasil penelitian diperoleh  juga  bahwa  makin  tinggi  konsentrasi ekstrak metanol  akar pandan  wangi maka tingat parasitemia  pada  mencit  juga  mengalami penurunan. Hasil perhitungan tingkat
parasitemia dapat dilihat pada Tabel 2. Tabel 2. Tingkat Parasitemia Selama 5 Hari Hari Ke Tingkat Parasitemia (Persentase %) Dosis I Dosis II Dosis III KP KN 1 8,7 8,3 8,1 5,5 12,7 2 12,0 9,8 9,6 4,9 20,2 3 11,9 10,8 10,8 4,0 32,6 4 9,8 9,7 7,6 3,3 42,4 5 10,6 8,4 6,8 2,0 46,7 Mean 10,6 9,4 8,6 3,9 30,9
Ket: KP (Kontrol Positif), KN (Kontrol Negatif)
Penelitian  ini  menggunakan  mencit  yang diinfeksi Plasmodium  berghei dan  diberikan terapi  ekstrak  metanol  akar  pandan  wangi
( Pandanus  amoryllifolius Roxb.)  dengan  dosis 6,5%,  13%  dan  26%.  Pemberian  terapi  ekstrak metanol akar pandan wangi ( Pandanus amoryllifolius Roxb.)  melalui  oral  dengan bantun  pipet  sonde.  Percobaan  ini  dilakukan untuk  melihat  efektivitas  ekstrak  metanol  akar pandan  wangi  sebagai  antimalaria  melalui penurunan  tingkat  parasitemia  darah  mencit, selain  itu  untuk  melihat  pengaruh  ekstrak metanol akar pandan wangi ( Pandanus amoryllifolius Roxb.)  terhadap  jumlah  monosit dalam  darah  mencit.  Penelitian  ini  juga dilakukan  untuk  melihat  hubungan  antara tingkat  parasitemia  dengan  jumlah  monosit dalam  darah  mencit  yang  diinfeksi Plasmodium berghei .
Berdasarkan  hasil  uji  skrining  fitokimia diperoleh adanya golongan alkaloid.
Berdasarkan  literatur  alkaloid  akan  bersenyawa dengan DNA parasit sehingga proses pembelahan  dan  pembentukan  RNA  terganggu pada  parasit Plasmodium  falciparum maka pertumbuhan  parasit  menjadi  terhambat  (Hilou et  al .,  2006). Beberapa  senyawa  metabolit sekunder  telah  terbukti  bermanfaat  sebagai antimalaria.  Senyawa-senyawa  ini  merupakan golongan  metabolit  sekunder  meliputi  alkaloid,
quassinoid, sesquiterpen, triterpenoid, flavonoid, dan quinon.
Aktivitas antimalaria ekstrak metanol akar pandan  wangi  tergantung  pada  besarnya konsentrasi  yang  diberikan.  Semakin  besar konsentrasi  ekstrak  akar  pandan  wangi  yang diberikan semakin tinggi kemampuan menurunkan  jumlah  parasitemia  dalam  darah mencit  yang  diinfeksi Plasmodium berghei . Hal ini  karena  semakin  besar  konsentrasi  ekstrak metanol  akar  pandan  wangi  yang  diberikan semakin besar pula kandungan bahan aktif yang mampu  membunuh  plasmodium  dalam  darah mencit  yang  terinfeksi.  Berdasarkan  hasil penelitian ini diperoleh tingkat rata-rata parasitemia pada kelompok 6,5% adalah 10,6%, kelompok 13% adalah 9,4% dan kelompok 26% adalah 8,6%. Tingkat parasitemia pada kelompok  yang  diberikan  ekstrak  metanol  akar pandan  wangi  pada  hari  pertama  hingga  hari  ke tiga  terus  mengalami  kenaikan  ini  disebabkan karena dosis ekstrak metanol akar pandan wangi yang  diberikan  kepada  mencit  yang  terinfeksi parasit Plasmodium  berghei masih  rendah sehingga dosis tersebut tidak dapat menurunkan tingkat  parasitemia  mencit.  Penurunan  tingkat parasitemia  terlihat  pada  hari  ke-4t  hingga  hari ke-5  perlakuan.  Pada  kontrol  negatif  tingkat
parasitemia  terus  mengalami  kenaikan  dari  hari ke-1 hingga hari ke-5 sedangkan pada kelompok kontrol  positif  yang  menggunakan  DHP mengalami  penurunan  tingkat  parasitemia  sejak hari  pertama  pemberian.  Dihidroartemisinin memiliki sifat skizontozida darah dengan adanya ikatan  endoperoksida,  senyawa  ini  berperan dalam  menghambat  sintesis  protein  sedangkan piperaquin  mampu  menurunkan  transmisi  dan munculnya resistensi parasit (Depkes, 2008).
Berdasarkan  hasil  tingkat  parasitemia pada  mencit  yang  diinfeksi Plasmodium berghei ,  yang  memiliki  tingkat  parasitemia paling  mendekati  kontrol  positif  adalah  dosis 26%  dengan  tingkat  parasitemia  8,6%.  Setiap obat antimalaria mempunyai mekanisme penghambatan  yang  spesifik,  demikian  juga senyawa-senyawa  yang  berasal  dari  tumbuhan. Ekstrak  metanol  akar  pandan  wangi  memiliki golongan  senyawa  alkaloid  yang  diduga memiliki  peran  dalam  menurunkan  tingkat parasitemia  dalam  darah  mencit  yang  diinfeksi Plasmodium berghei .
Selain  menggunakan  senyawa-senyawa antimalaria,  diperlukan  juga  faktor  lain  yang diperlukan  untuk  memusnahkan  parasit  malaria yaitu sistem pertahanan tubuh. Sistem pertahanan tubuh terhadap parasit malaria sangat
kompleks,  karena  melibatkan  hampir  semua komponen  imun,  baik  imunitas  yang  timbul secara  alami  maupun  yang  didapat,  karena adanya  imunitas  nonspesifik  maupun  spesifik. Monosit  merupakan  sel  efektor  yang  penting dalam perlindungan terhadap patogenesis malaria. Monosit ini akan menghasilkan sitokin- sitokin seperti TNF, IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8 dan  IL-10  yang  dimana  secara  langsung menghambat pertumbuhan dari parasit (sitostatik)  dan  membunuh  parasit  (sitotoksik) (Perlmann dan Blomberg, 2002)
Rata-rata  persentase  monosit  mencit normal  adalah  1-12%.  Hasil  penghitungan persentase monosit dalam penelitian ini disajikan pada  Tabel 3.
Tabel 3. Jumlah Monosit Selama 5 Hari Hari Ke Jumlah Monosit (Persentase %) Dosis I Dosis II Dosis III KP KN N 1 3,0 3,4 4,6 4,4 2,2 5 2 3,6 3,6 6,6 4,8 4,0 4,4 3 4,0 3,6 7,8 5,8 3,4 6,2 4 4,0 5,2 8,6 5,8 3,4 7,4 5 3,2 4,6 5,2 4,2 2,6 5,8 Mean 3,7 4,1 6,6 5,0 3,4 5,76
Ket: KP (Kontrol Positif), KN (Kontrol Negatif)
Berdasarkan  Tabel  3  terlihat  bahwa  pada kelompok kontrol negatif jumlah monosit masih dalam  rentang  normal,  kemudian  terjadi  sedikit pola naik dan  turun setelah hari pertama infeksi dan  pada  akhirnya  terus  mengalami  penurunan. Monosit  merupakan  jenis  sel  fagosit  yang  akan
menghancurkan antigen dengan cara menelannya. Selain sebagai fagositosis, monosit juga  dapat  berperan  sebagai antigen  presenting cells (APC)  kepada  limfosit.  Meningkatnya jumlah  monosit  pada  tubuh  mencit  yang terinfeksi  menunjukkan  terjadinya  fagositosis parasit  sebagai  mekanisme  pertahanan  tubuh. Pada  kelompok  yang  diberikan  ekstrak  metanol akar  pandan  wangi  mengalami  kenaikan  jumlah monosit  terutama  pada  dosis  konsentrasi  III yaitu 26% dengan jumlah 6,6%. Tingginya rata- rata  persentase  ini  dapat  disebabkan  oleh senyawa  golongan  alkaloid  dan  flavonoid  yang terkandung  di  dalam  akar  pandan  wangi. Berdasarkan  literatur  flavonoid,  alkaloid,  tanin dan saponin dapat berfungsi sebagai imunostimulan  (Chanwitheesuk et  al .,  2005).
Pemberian  immunomodulator pada mencit  yang terinfeksi  akan  mengakibatkan  peningkatan sistem  imun.  Sehingga  jumlah  monosit  pada mencit  yang  diberi  perlakuan  tidak  akan setingkat dengan monosit normal/tanpa perlakuan.  Berdasarkan  uji  Mann  Whitney didapatkan adanya perbedaan bermakna (p<0,005) pada kelompok perlakuan konsentrasi III  yaitu  26%  dibandingkan  kelompok  kontrol negatif  pada  hari  ke-1  hingga  hari  ke-5.  Hal  ini membuktikan bahwa pemberian
imunomodulator  pada  mencit  yang  terinfeksi dapat meningkatkan jumlah monosit.
Ekstrak  metanol  akar  pandan  wangi  yang diberikan  akan  mengaktivasi  monosit,  baik sebagai  fagositosis  maupun  sebagai  APC  dan menghasilkan  sitokin-sitokin  yang  penting dalam  imunitas  seluler.  Hasil  penelitian  ini sejalan  dengan  penelitian  sebelumnya  terhadap ekstrak  daun Pleiocarpa  mutica yang  diduga sebagai  imunostimulan  terhadap  jumlah  sel mononuklear limfosit melalui kandungan flavonoid  yang  berperan  sebagai  antigen  dan mampu  dikenal  oleh  reseptor  sel  B  maupun  sel T  sehingga  akan  berikatan  dengan  APC  dan memproduksi interleukin yang kemudian mengaktivasi  proliferasi  sel  B  maupun  sel  T.
Dengan  adanya  peningkatan  pada  proliferasi limfosit  terutama  limfosit  Th 1 yang  akan menghasilkan IFN-γ dan  TNF-β  untuk mengaktifkan  komponen  imunitas  seluler  salah satunya monosit (Enechi et al ., 2016)
Pada hari ke-4 jumlah monosit mengalami penurunan tetapi masih dalam batas normal. Hal ini  dapat  dikarenakan    monosit  diproduksi  di sumsum  tulang.  Monosit  dari  sumsum  tulang masuk  ke  dalam  darah  dan  beredar  selama kurang  lebih  72  jam.  Sel-sel  ini  kemudian masuk  ke  jaringan  dan  menjadi  makrofag
jaringan.  Ekstrak  metanol  akar  pandan  wangi memiiki  imunomodulator  yaitu  imunostimulan yang dapat meningkatkan jumlah monosit dalam darah  mencit  yang  diinfeksi Plasmodium berghei terutama  kelompok  konsenrasi  III  26% yang memiliki jumlah monosit paling tinggi dari kelompok  konsentrasi,  kontrol  positif  dan kontrol negatif. Berdasarkan hasil  uji spearman menunjukkan  bahwa  adanya  korelasi  negatif kuat  antara  tingkat  parasitemia  dan  jumlah monosit (p=  0,037) .  Ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  metanol  akar  pandan  wangi  memiliki sifat sebagai antimalaria dan juga imunomodulator yang dapat menurunkan tingkat parasitemia dan meningkatkan jumlah monosit.

## SIMPULAN
Konsentrasi  ekstrak  metanol  akar  pandan wangi  yang  memiliki  efektivitas  paling  baik sebagai  antimalaria  adalah  26%  yang  mampu menurunkan tingkat parasitemia dan meningkatkan  jumlah  monosit  dalam  darah mencit  yang  diinduksi Plasmodium  berghei .
Aktivitas  antimalaria  ekstrak  metanol  akar pandan  wangi  diduga  karena  adanya  golongan metabolit sekunder alkaloid, flavonoid, terpenoid, steroid dan saponin.

## PERSANTUNAN
Terimakasih  penulis  ucapkan  kepada  Group Riset  Tanaman  Obat  Tradisional  dan  Penyakit Tropis  Universitas  Tanjungpura  dan  Fakultas
Kedokteran Universitas Gadjah Mada
Yogyakarta  untuk  penyediaan  mencit  donor terinfeksi Plasmodium berghei.

## DAFTAR PUSTAKA
Basir,  R,  Rahiman,  SSF,  Hasballah  K,  Chong WC,  Talib  H,  Yan,  MF,  Jabbarzare  M,  Tie TH,  Othman  F,  Moklas  MAM,  Abadullah WO,  Ahmad  Z.  2012. Plasmodium  berghei ANKA Infection in IRC Mice as a Model of Cerebral Malaria, Iranian J. Parasitol . 7(4); 62-74
Chanwitheesuk
A, Teerawutgulgrag A, Rakariyatham  N.  2005.  Screening  of Antioxidant Activity and Antioxidant
Compounds  of  Some  Ediless  Plants  of
Thailand . Food Chem .  92:491-497
Darlina. 2011. Parasit Malaria Rodensia sebagai Model  Penelitian  Vaksin  dengan  Teknik Nuklir. Buletin Alara , 13 (2): 53-60
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia. 2008.  Pedoman  Penatalaksanaan  Kasus Malaria di Indonesia
Enechi,  O.C.,  Okemu,  B.C.,  Ikechukwu,  U.R.
2016.  Antimalarial  Activity  and  Effect
Ethanol  Extract  of Pleiocarpa  mutica
Leaves  on  Some  Haemotological  Indicesn of  Plasmodium  berghei-Infected  Mice. American-Eurasian  J.  Agric  &  Environ. Sci., 16 (5) : 860-867
Hilou,  A.,  Naucolma,  O.G.,  Guiguemde,  T.R. 2006.  In  Vivo  Antimalarial  Activities  of
Extract  from Amaranthus  spinosus L.  and Boerhavia erecta L. in Mice. J.
Ethnopharm . 103: 236-240 Jambou  R,  El-Asssad  F,  Combes  V,  Grau  GE.
2011.  In  Vitro  Culture  of  Plasmodium berghei-ANKA  Maintains  Invectivity  of Mouse  Erythrocytes  Inducing  Cerebral Malaria. Malaria Journal , 10 : 346-350 Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia. 2014.  Pedoman  Penatalaksanaan  Kasus Malaria di Indonesia.
Mustofa, D., Kahtan, M.I.,  dan Widiyantoro, A.
2019.  Efektivitas  Ekstrak  Etanol  Akar Pandan  Wangi  ( Pandanus  amaryllifolius
Roxb.) sebagai Antimalaria Terhadap Jumlah  Limfosit  dalam  Darah  Mencit  ( Mus musculus )  yang  Diinfeksi Plasmodium berghei . Intisari  Sains  Medis, 10  (2)  :  489- 496
Perlmann,  P., and Blomberg,  M.T.  2002. Malaria  and  The  Immune  System  in Humans. Chem. Immunol ., 80 :321-325 World  Health  Organization.  2015.  Malaria Report, Geneva.
World  Health  Organization.  2006.  Malaria Report, Geneva.