Abstrak —Salah  satu  kelompok  mikroorganisme  tanah  adalah yeast,  yang  dikenal  memiliki  rentang  ekologi  cukup  luas  dan mampu  hidup  pada  daerah  ekstrim.  Berdasarkan  sifat metabolismenya  yeast  dapat  dibedakan  atas  dua  kelompok  yaitu bersifat  fermentatif  dan  oksidatif.  Jenis  fermentatif  dapat melakukan  fermentasi  yaitu  memecah  gula  menjadi  etanol,  asam laktat dan gas. Tujuan dari penelitian ini adalah menguji potensi isolat yeast tanah yang diisolasi dari tanah di Kabupaten Jember, Jawa Timur dalam fermentasi etanol dan mengetahui konsentrasi gula  serta  waktu  yang  terbaik  untuk  fermentasi  etanol  untuk masing-masing isolat. Metode yang digunakan pada penelitian ini adalah  perhitungan  tingkat  produksi  etanol  yang  dihasilkan dengan  menggunakan  kadar  glukosa  10%,  15%  dan  20%.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa isolat Candida sp. 1 dan Candida sp.  3  memiliki  potensi  untuk  menghasilkan  etanol.  Kadar  etanol tertinggi  yang  dihasilkan  oleh  Candida  sp.  1  adalah  56% sedangkan  pada  Candida  sp.  3  adalah  70%.  Waktu  yang optimum untuk proses fermentasi etanol yeast Candida sp. 1 dan Candida sp. 3 adalah 24 jam.
Kata Kunci — etanol, fermentasi, gula, yeast.

## I. PENDAHULUAN
EAST  adalah  salah  satu  mikroorganisme  yang  termasuk dalam  golongan  fungi  uniseluler.  Reproduksi  vegetatif pada  yeast  terutama  dengan  cara  pertunasan.  Sebagai  sel tunggal,  yeast  tumbuh  dan  berkembang  biak  lebih  cepat dibandingkan  dengan  mold  yang  tumbuh  dengan  membentuk filamen.  Berdasarkan  sifat  metabolismenya  yeast  dapat dibedakan  atas  dua  kelompok  yaitu:  bersifat  fermentatif  dan oksidatif.  Jenis  fermentatif  dapat  melakukan  fermentasi alkohol,  yaitu  memecah  gula  (glukosa)  menjadi  alkohol  dan gas  contohnya  pada  produk  roti  dan  bioetanol.  Sedangkan oksidatif  (respirasi)  dapat  menghasilkan  karbon  dioksida  dan air [1]. Beberapa yeast yang tergolong dalam yeast fermentatif antara  lain  Saccharomyces,  Candida,  Brettanomyces  dan Zygosaccharomyces.  Sedangkan  yeast  yang  bersifat  non fermentatif yaitu Rhodotorula [2].
Yeast  telah  lama  digunakan  untuk  proses  industri  seperti pada  pembuatan  minuman  beralkohol,  fermentasi  tape, pembuatan  makanan  ternak,  kosmetik,  dan  antibiotik  [3]  [4]. Yeast  di  masa  depan  dapat  dikembangkan  sebagai  renewable
resources,  karena  beberapa  jenis  yeast  mampu  memproduksi alkohol dari berbagai jenis karbohidrat yang berbeda. Berbagai penemuan  tersebut  akan  memacu  kegiatan  eksplorasi  khamir, terutama jenis-jenis khamir yang mempunyai potensi di bidang industri khususnya dalam produksi bioetanol [5].
Penelitian  tentang  yeast  banyak  dilakukan  dalam  bentuk eksplorasi  dari  berbagai  ekosistem  di  Indonesia.  Hal  ini diyakini  bahwa  jumlah  yeast  di  alam  jauh  lebih  tinggi dibandingkan yeast yang telah diketahui selama [6]. Penelitian yang  sudah  dilakukan  yaitu  eksplorasi  yeast  dilakukan  pada wilayah  Kabupaten  Jember,  Jawa  timur  Beberapa  isolat  yeast yang  didapatkan  antara  lain  Candida  sp.  1,  Candida  sp.  2, Candida  sp.  3,  Debaryomyces  sp.  dan  Kloeckera  sp.  [7]. Kemampuan  isolat  tersebut  untuk  melakukan  fermentasi alkohol belum diteliti lebih lanjut.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  potensi  isolat  yeast tanah  yang  diisolasi  dari  tanah  di  Kabupaten  Jember,  Jawa Timur  dalam  fermentasi  etanol  dan  mengetahui  konsentrasi gula  serta  waktu  yang  sesuai  untuk  fermentasi  etanol  untuk masing-masing isolat.

## II. METODOLOGI

## A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Januari  2015  sampai dengan  Mei  2015  di  laboratorium  Botani,  laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Jurusan Biologi dan laboratorium  Kimia  Mikroorganisme  Jursan  Kimia  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Institut  Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya.

## B. Alat dan Bahan
Peralatan  yang  diperlukan  dalam  penelitian  tugas  akhir  ini adalah  tabung  reaksi,  cawan  petri,  enlemeyer,  hot  plate,  pipet ukur, gelas ukur, beaker glass, jarum ose, autoklaf, timbangan analitik,  magnetic  strirer,  Laminar  Air  Flow  (LAF),

## Potensi Fermentasi Etanol Isolat Yeast Tanah yang Diisolasi dari Kabupaten Jember, Jawa Timur
Indira Rizqita Ivanesthi 1 , Sri Nurhatika 1 , Anton Muhibuddin 2
1 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS). Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
2 Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian, Universitas Brawijaya. Jl. Veteran, Malang 65145 Indonesia e-mail : nurhatika@bio.its.ac.id
Y
Tabel 1. Karakteristik Makroskopik Isolat Yeast Candida sp. 1 dan Candida sp.3
Isolat Bentuk Eleva si Marg in Warn a Permukaa n Candida sp. 1 Circul ar Conv ex Entir e Putih Susu Smooth shiny Candida sp. 3 Circul ar Raise d Undu late Whit e- Crea m Smooth Tabel 2.
Gula Reduksi dan Etanol Pada Jam ke 24 ( Fermentasi 24 Jam)
Tabel 3.
Gula Reduksi dan Etanol Pada Jam ke 48 ( Fermentasi 48 Jam )

## Fermentasi 72 Jam
Tabel 4. Gula Reduksi dan Etanol Pada Jam ke 72 Nama Isolat
Konsentr a-si Medium (%) Gula Reduksi awal (%) Gula Reduksi Akhir (%) Jumlah Gula yang terpakai (%) Kadar Etanol (%) Candida sp.1
10 4.13
3.74 0.39
0 15 4.96 3.94 1.02 0 20 5.88 4.55 1.33 0 Candida sp.3 10 4.13
3.50 0.63 0 15 4.96 3.73 1.23 0 20 5.88
4.51 1.37 0
Tabel 5.
Gula Reduksi dan Etanol Pada Jam ke 96 ( Fermentasi 96 Jam ) Nama Isolat Konsentra -si Medium (%) Gula Reduksi awal (%) Gula Reduksi Akhir (%) Jumlah Gula yang terpakai (%) Kadar Etanol (%) Candida sp.1 10 4.13 3.61 0.52 0 15 4.96 4.37 0.59 0 20 5.88 4.95 0.93 0 Candida sp.3 10 4.13 3.47 0.66 0 15 4.96 3.98 0.98 0 20 5.88 4.13 1.75 0
Gambar 1. Pengamatan Mikroskopik Candida sp. 1. (a) Dokumentasi pribadi (perbesaran 400x), (b) Literatur (perbesaran 1000x) [7].
Gambar 2. Pengamatan Mikroskopik Candida sp. 3. (a) Dokumentasi pribadi (perbesaran 400x), (b) Literatur (perbesaran 1000x) [7].
Gambar  3.  Hasil  Uji  Fermentasi  Glukosa  (a)  Medium  Sebelum Fermentasi Candida sp. 1, (b) Medium Sesudah Fermentasi Candida sp.  1,  (c)  Medium  Sebelum  Fermentasi  Candida  sp.  3,  dan  (d) Medium Sesudah Fermentasi Candida sp. 3
Nama Isolat Konsent -rasi Mediu m (%) Gula Reduksi awal (%) Gula Reduksi Akhir (%) Jumla h Gula yang terpak ai (%)
Kadar
Etano l (%) Candida sp.1 10 4.13 3.70 0.43 0 15 4.96 3.13 1.56 2 20 5.88 4.42 1.46 0 Candida sp.3 10 4.13 3.55 0.68 0 15 4.96 1.98 2.71 70 20 5.88 4.08 1.80 0 Nama Isolat Kons- entrasi Medium (%) Gula Reduksi awal (%) Gula Reduksi Akhir (%) Jumlah Gula yang terpakai (%) Kadar Etanol (%) Candida sp.1 10 4.13 3.35 0.78 0.8 15 4.96 4.02 0.92 56 20 5.88 5.32 0.56 0 Candida sp.3 10 4.13 3.51 0.62 0 15 4.96 1.85 3.11 3.4 20 5.88 5.82 0.06 0 a b c d
Gambar 3. Kurva Pertumbuhan Candida sp. 1
Gambar 4. Kurva Pertumbuhan Candida sp. 3
spektrofotomoter  GENESYS  10S  UV  Vis,  bunsen,  kuvet, mikroskop  (Olympus  Binokular  CX22),  gelas  obyek,  penutup gelas obyek, rotary shaker, tabung durham, rak tabung reaksi, rotary  evaporator  (EYELA  N-1110S-WD),    vortex  dan piknometer.
Bahan  yang  digunakan  antara  lain  Isolat  Candida  sp.  1, Candida  sp.  2,  Candida  sp.  3,  Debaryomyces  sp.  dan Kloeckera  sp.  koleksi  Fakultas  Pertanian,  Universitas Brawijaya  Malang,  (NH4)2SO4,  MgSO4.7H2O,  KH2PO4, alkohol  70%,  akuades,  kloramfenikol,  media  yeast  malt  broth (YMB), media yeast malt extract agar (YMEA), Bromothymol blue, pepton water, glukosa dan laktofenol biru.

## A. Cara Kerja

## 1) Subkultur Isolat Yeast
Isolat  yeast  yang  diujikan  dalam  penelitian  ini  adalah isolat  yeast  koleksi  Jurusan  Agroekoteknologi,  Fakultas Pertanian,  Universitas  Brawijaya  Malang.    Isolat  yeast  di subkultur  pada  medium  YMEA  (Yeast  Malt  Extract  Agar). Medium  YMEA  steril  dituangkan  ke  dalam  tabung  reaksi sebanyak  ±  5  mL.  Tabung  reaksi  tersebut  diletakkan  pada posisi  miring  dan  didinginkan  sampai  medium  memadat, kemudian disimpan pada suhu ruang. Selanjutnya, isolat yeast diinokulasikan pada medium YMEA slant menggunakan jarum ose  dan  diinkubasi  selama  4  hari  pada  suhu  ruang. Keberhasilan  subkultur  ditandai  dengan  tumbuhnya  isolat yeast pada medium YMEA.
2) Pengamatan Karakter Yeast
Pengamatan  karakter  makroskopis  dilihat  berdasarkan kenampakan  koloni  yang  tumbuh  pada  medium  YMEA  yang
meliputi; warna koloni, bentuk tepi koloni, elevasi, permukaan koloni dan tekstur koloni.
Pengamatan  karakter  mikroskopis  dilakukan  dengan menggunakan mikroskop dan pewarnaan laktofenol. Pengamatan  secara  mikroskopis  dilakukan  dengan  cara membuat  preparat  biakan  di  atas  kaca  objek  yang  telah diwarnai  dengan  laktofenol,  kemudian  ditutup  dengan  cover glass  dan  ditetesi  minyak  imersi.  Setelah  itu  dilihat  karakter selnya  pada  mikroskop  dengan  perbesaran  400x  dan  1000x. Untuk  pengamatan  dengan  perbesaran  400x  tidak  perlu ditambahkan minyak imersi.

## 3) Uji Potensi Fermentasi Glukosa
Uji  fermentasi  gula  dilakukan  dengan  cara  1  ose  isolat yeast  yang  telah  berumur  24-48  jam  diambil  lalu diinokulasikan  ke  dalam  media  uji  fermentasi  yang mengandung  glukosa  1%  pada  tabung  reaksi.  Sebelumnya media  sudah  diberi  indikator  bromothymol  blue  sebagai indikator terjadinya fermentasi dan diletakkan tabung Durham steril.  Kemudian  tabung  dihomogenkan,  dan  ditambahkan kloramfenikol  sebagai  antibakteri  dan  pepton  water  sebagai sumber nitrogen. Setelah itu dilakukan inkubasi selama 72 jam pada  temperatur  25-280C.  Hasil  positif  tampak  jika  terjadi perubahan  warna  pada  medium  dan  juga  adanya  gelembung gas  pada  tabung  Durham.  Warna  media  berubah  dari  biru menjadi  kuning  karena  pembentukan  asam  dan  gas  yang dihasilkan.

## B. Pembuatan Starter
Starter  dibuat  dengan  cara  mencampurkan  sebanyak  3  g yeast  extract,  3  g  malt  extract,  5  g  pepton,  0,5  gram kloramfenikol. 1 gram (NH4)2SO4, 0,4 MgSO4.7H2O, dan 2 gram KH2PO4 dan kemudian ditambah aquades hingga 1 liter. Campuran tersebut kemudian dipanaskan hingga mendidih dan larut  sempurna.  Setelah  itu  medium  disterilkan  dengan autoklaf  121°C,  1,5  atm  selama  15  menit  setelah  itu didinginkan  hingga  mencapai  suhu  ruang. Setelah itu medium dituangkan  pada  botol  produksi  masing-masing  72  mL. Kemudian  ditambahkan  10%  (w/v),  yaitu  8  mL  air  fisiologis berisi  isolat  yang  akan  digunakan  yang  OD  nya  sudah mencapai 0.5. Kemudian botol di tutup dengan sumbat di wrap dan  dilakukan  inkubasi  selama  2  hari  (48  jam)  pada  rotary shaker sebelum digunakan untuk uji fermentasi.

## 1) Uji Fermentasi Substrat Glukosa
Medium  fermentasi  yang  digunakan  yaitu  medium glukosa  yang  masing-masing  terdiri  atas  konsentrasi  10%, 15%,  20%.  Lalu  ditambahkan  sebanyak  3 g yeast extract, 3 g malt  extract,  5  g  pepton,  1  gram  (NH4)2SO4,  0,4 MgSO4.7H2O, dan 2 gram KH2PO4 dan kemudian ditambah aquades hingga 1 liter. Setelah itu medium disterilkan dengan autoklaf  121°C,  1,5  atm  selama  15  menit  setelah  itu didinginkan  hingga  mencapai  suhu  ruang.  Kemudian  medium dituang  pada  Erlenmeyer  sebanyak  200  mL  untuk  dilakukan proses  fermentasi.  Uji  fermentasi  substrat  glukosa  dilakukan dengan  menginokulasi  sebanyak  10%  (w/v)  isolat  yeast  yang telah  berumur  48  jam  kedalam  medium  yang  sudah  siap digunakan. Fermentasi dilakukan selama 96 jam menggunakan
botol  yang  berbeda  dan  setiap  24  jam  dilakukan  perhitungan kadar  etanol  yang  dihasilkan  dalam  proses  fermentasi.  Dalam masa inkubasi sampel fermentasi di rotary shaker.

## 2) Pengukuran Kadar Gula Reduksi
Analisis  kadar  glukosa  dilakukan  dengan  metode  DNS (Dinitrosalicylic  acid)  yaitu  sampel  hasil  fermentasi  dipipet sebanyak 0,2 ml lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang bersih.  Selanjutnya  ditambahkan  1,8  mL  akuades  dan  2  mL reagen  DNS  (Lampiran).  Tabung  reaksi  dipanaskan  pada  air mendidih  selama  5  menit  agar  terjadi  reaksi  antara  glukosa dalam  sampel  dengan  DNS.  Tabung  didinginkan  hingga mencapai  suhu  ruang,  selanjutnya  absorbansi  sampel  diukur pada  panjang  gelombang  540  nm  dengan  spektrofotometer UV-Vis.  Nilai  absorbansi  di  masukkan  pada  persamaan  linier Kurva Standar Glukosa.
3) Pengukuran Kadar Etanol
Perhitungan kadar etanol dalam penelitian ini menggunakan  alat  piknometer  dan  rotary  evaporator.  Rotary evaporator  berfungsi  untuk  mendapatkan  larutan  etanol  dari medium  fermentasi  sedangkan  piknometer  berfungsi  untuk mengukur kadar etanol setelah dilakukan evaporasi.
Analisis  kadar  etanol  yaitu  dengan  penetapan  berat  jenis menggunakan  metode  piknometer.  Piknometer  diisi  akudes dan  ditutup.  Piknometer  dan  akuades  ditimbang,  berat  yang didapat  adalah  W2.  Kemudian  piknometer  dikosongkan, akuades  yang  tersisa  diabsorbsi  dengan  aseton.  Tabung piknometer  dikeringkan  dengan  oven.  Piknometer  yang  telah kering  ditimbang,  berat  yang  didapatkan  adalah  W1.  Berat akuades (W) dihitung dengan cara W2-W1.

## C. Analisis Data
Penelitian  ini  dianalisis  secara  deskriptif  kuantitatif.  Data yang  didapat  merupakan  data  kuantitatif  konsentrasi  kadar etanol  dengan  menggunakan  piknometer  dan  nilai  konsentrasi sisa  gula  reduksi  dengan  menggunakan  metode  DNS (Dinitrosalicylic acid).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Karakteristik Isolat Yeast
Pengamatan  karakteristik  makroskopis  dilakukan  dengan melihat  koloni  yang  ditumbuhkan  pada  media  padat  (YMEA) yang meliputi bentuk koloni, warna koloni, permukaan koloni, elevasi  koloni,  tepi  koloni.  Hasil  pengujian  karakter makroskopis ditampilkan pada Tabel 1.
Selanjutnya  dilakukan  pengamatan  mikroskopis  yeast dengan  menggunakan  pewarna  lactofenol  tryphan  blue  dan diamati  dengan  mikroskop  perbesaran  400x.  Metode pewarnaan  ini  merupakan  metode  khusus  untuk  pewarnaan mikroorganisme jenis fungi [8]. Isolat dinyatakan murni ketika bentuk sel sudah seragam. Pengamatan mikroskopis mencakup pengamatan  morfologi  sel,  jenis  budding,  serta  ada  tidaknya pseudohifa atau hifa [6].
Hasil  pengamatan  mikroskopis  pada  isolat  Candida  sp.  1 menunjukkan  sel  berbentuk  oval,  sel  tunggal,  dan  memiliki
multilateral budding (tunas berada pada ujung sel). Sedangkan pada  Candida  sp.  3  menunjukkan  koloni  sel  berbentuk  oval, sel tunggal dan memiliki multilateral budding.

## B. Uji Potensi Fermentasi Glukosa
Hasil uji fermentasi glukosa menunjukkan hasil positif pada isolat  Candida  sp.  1  dan  Candida sp. 3, yang ditandai dengan adanya  perubahan  warna  medium  dari  hijau  menjadi  kuning dan  juga  adanya  gelembung  gas  pada  tabung  Durham. Warna media berubah dari hijau menjadi kuning karena pembentukan asam dan gas yang dihasilkan [9].

## C. Kurva Pertumbuhan
Berdasarkan grafik dapat diketahui isolat Candida sp. 1 dan Candida sp. 3 mengalami 3 fase pertumbuhan. Pertama adalah fase  lag  sebagai  awal  pertumbuhan yeast secara eksponensial. Sel  yeast  mulai  melakukan  adaptasi  dan  mempersiapkan  diri untuk  melakukan  pembelahan.  Fase  lag  Candida  sp.  1  dan Candida sp. 3 terjadi dimulai dari hari ke-0 sampai hari kesatu. Pada  Candida  sp.  1  terlihat  OD  hari  ke-0  adalah  0.015  dan meningkat  pada  hari  kesatu  menjadi  1.455  sedangkan  pada Candida sp. 3 OD hari ke-0 adalah 0.037 dan meningkat pada hari  kesatu  menjadi  1.139.  Beberapa    parameter    yang mempengaruhi  waktu  fase  lag  adalah  jenis  dan  umur  sel yeast, jumlah  inokulum  dan  kondisi  media tumbuh. Apabila sel  yeast  tumbuh  di  dalam  medium  yang  kekurangan  nutrisi, maka waktu fase lag akan berjalan lebih lama, karena sel harus menghasilkan  enzim  yang  sesuai  dengan  jenis  nutrien  yang ada. Parameter lain yang mempengaruhi waktu fase lag adalah jumlah  inokulum.  Apabila  sel  dengan  jumlah  rendah ditumbuhkan  dalam  media  yang  volumenya  tinggi,  sel  akan mengalami fase lag yang lama [10].
Kemudian  isolat  Candida  sp.  1  dan  Candida  sp.  3 mengalami fase log. Fase log terjadi mulai hari kesatu sampai hari ketiga. Pada fase ini peningkatan jumlah sel sangat terjadi cepat  diiringi  dengan  penggunaan  nutrisi  yang  semakin banyak, sehingga fase ini adalah fase yang cocok untuk proses fermentasi.    Selanjutnya  sel  yeast  mengalami  fase  stasioner mulai hari ketiga sampai hari keenam. Populasi sel meningkat sedikit  dan  akan  relatif  stabil  sampai  fase  mati.  Pada  fase  ini proses  fermentasi  mulai  berkurang  dengan  habisnya  glukosa dan berlanjut ke proses respirasi. Pada fase stasioner, sel yeast akan mensekresikan metabolit sekunder untuk mempertahankan  diri  dari  stres  oksidatif  akibat  akumulasi produk  metabolisme  yang  bersifat  toksik  [11].  Berdasarkan kurva pertumbuhan tersebut, isolat Candida sp. 1 dan Candida sp. 3 akan diinkubasi selama dua hari terlebih dahulu, sampai mencapai  fase  log,  sebelum  diinokulasikan  pada  medium produksi etanol.
Hasil gula reduksi awal dan akhir pada medium, jumlah gula yang dipakai oleh isolat dan kadar etanol yang dihasilkan oleh isolat  selama  24  jam  fermentasi.  Pada  konsentrasi  medium 10%,  isolat  Candida  sp.  1  menggunakan  gula  glukosa sebanyak  0.78%  dan  menghasilkan  etanol  sebesar  0.8% sedangkan pada isolat Candida sp.3, isolat menggunakan gula glukosa  sebanyak  0.62%  dan  tidak  menghasilkan  etanol.
Kemudian pada konsentrasi medium 15%, isolat Candida sp. 1 menggunakan gula glukosa sebanyak 0.92% dan menghasilkan etanol sebesar 56% sedangkan pada isolat Candida sp. 3, isolat dapat  menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  3.11%  dan menghasilkan  etanol  sebesar  3.4%.  Lalu  pada  konsentrasi medium 20%, isolat Candida sp. 1 menggunakan gula glukosa sebanyak  0.56%  dan  tidak  menghasilkan  etanol  sedangkan pada  isolat  Candida  sp.3,  isolat  dapat  menggunakan  gula glukosa  sebanyak  0.06%  dan  tidak  menghasilkan  etanol. Konsentrasi  glukosa  akan  menurun  selama  fermentasi, bertepatan dengan peningkatan produksi sel dan etanol. Hal ini disebabkan sel-sel mengkonsumsi glukosa dalam sistem untuk meningkatkan  pertumbuhan  sel  dan  produksi  etanol  [12]. Jumlah konsumsi gula oleh juga berhubungan dengan produksi etanol.  Ketika  yeast  memproduksi  etanol,  maka  gula  yang  di konsumsi  akan  lebih  tinggi  dari  pada  saat  tidak  memproduksi etanol.
Isolat  Candida  sp.1  dapat  menghasilkan  etanol  pada konsentrasi  10%  dengan  menggunakan  gula  sebanyak  0.78%. 0.78%  gula  tersebut  akan  dikonversikan  untuk  kebutuhan respirasi  sel  dan  akan  dikonversikan  menjadi  etanol  sebagai produk  fermentasi.  Sedangkan  pada  Candida  sp.  3  dengan menggunakan gula sebanyak 0.62%, tidak mampu menghasilkan  etanol  pada  medium  10%.  Kedua  isolat dimungkinkan  memiliki  waktu  metabolisme  glukosa  yang berbeda.
Pada  konsentrasi  medium  20%,  kedua  isolat  tidak  mampu menghasilkan  etanol.  Konsentrasi  gula  yang  umumnya  dibuat dalam pembuatan etanol sekitar 14-20 persen. Jika konsentrasi gula  terlalu  tinggi  akan  menghambat  aktivitas  yeast  [13]. Kemudian  menurut  penurunan  kadar  etanol  pada  konsentrasi glukosa  berlebih  terjadi  sebagai  efek  inhibisi  substrat  dan produk.  Konsentrasi  substrat  yang  terlalu  tinggi  mengurangi jumlah oksigen terlarut [14]. Hal ini yang menyebabkan isolat Candida  sp.  1  dan  Candida  sp.  3  tidak  mampu  menghasilkan etanol pada konsentrasi medium 20%.
Berdasarkan tabel tersebut diketahui hasil gula reduksi awal dan  akhir  pada  medium,  jumlah  gula  yang  dipakai  oleh  isolat dan  kadar  etanol  yang  dihasilkan  oleh  isolat  selama  48  jam fermentasi. Pada konsentrasi medium 10%, isolat Candida sp.1 menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  0.43%  dan  tidak menghasilkan  etanol  sedangkan  pada  isolat  Candida  sp.3, isolat  menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  0.68%  dan  tidak menghasilkan  etanol.  Kemudian  pada  konsentrasi  medium 15%,  isolat  Candida  sp.  1  menggunakan  gula  glukosa sebanyak  1.56%  dan  menghasilkan  etanol  sebesar  2% sedangkan  pada  isolat  Candida  sp.  3,  isolat  dapat menggunakan gula glukosa sebanyak 2.71% dan menghasilkan etanol sebesar 70%. Lalu pada konsentrasi medium 20%, isolat Candida sp.1 menggunakan gula glukosa sebanyak 1.46% dan tidak  menghasilkan  etanol  sedangkan  pada  isolat  Candida  sp. 3,  isolat  dapat  menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  1.80  % dan tidak menghasilkan etanol.
Pada perlakuan fermentasi selama 48 jam, isolat Candida sp. 1  dan  Candida  sp.  3  hanya  mampu  menghasilkan  etanol  pada
konsentrasi  medium  15%.  Pada  konsentrasi  medium  10%, glukosa  yang  di  konsumsi  hanya  sedikit  yaitu  0.43%  pada Candida  sp.  1  dan  0.68%  pada  Candida  sp.  3.  Hal  ini disebabkan  oleh,  pada  jam  48,  selain  etanol,  yeast  ini  juga memproduksi  metabolit  sekunder  seperti  asam  asetat.  Pada tahap pertama, glukosa diubah menjadi etanol dan asam asetat. Setelah  itu,  sebagian  besar  etanol  juga  dioksidasi  menjadi asam  asetat.  Asam  ini  terus  menumpuk  setelah  glukosa  habis dan  oksidasi  etanol  berlangsung.  Setelah  penipisan  glukosa, etanol  dioksidasi  menjadi  asam  asetat,  dan  akhirnya  asam asetat dikonsumsi dan dioksidasi menjadi CO2 dan air [2].
Berdasarkan tabel tersebut diketahui hasil gula reduksi awal dan  akhir  pada  medium,  jumlah  gula  yang  dipakai  oleh  isolat dan  kadar  etanol  yang  dihasilkan  oleh  isolat  selama  72  jam fermentasi. Pada konsentrasi medium 10%, isolat Candida sp. 1  menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  0.39%  dan  tidak menghasilkan  etanol  sedangkan  pada  isolat  Candida  sp.  3, isolat  menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  0.63%  dan  tidak menghasilkan  etanol.  Kemudian  pada  konsentrasi  medium 15%,  isolat  Candida  sp.  1  menggunakan  gula  glukosa sebanyak  1.02%  dan  tidak  menghasilkan  etanol  sedangkan pada  isolat  Candida  sp.  3,  isolat  dapat  menggunakan  gula glukosa  sebanyak  1.23%  dan  tidak  menghasilkan  etanol. Lalu pada  konsentrasi  medium  20%,  isolat  Candida  sp.  1 menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  1.33%  dan  tidak menghasilkan  etanol  sedangkan  pada  isolat  Candida  sp.  3, isolat  dapat  menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  1.33%  dan tidak menghasilkan etanol.
Pada  medium  dengan  perlakuan  fermentasi  selama  72  jam, kedua  isolat  tidak  menghasilkan  etanol  sama  sekali. Diperkirakan  kadar  oksigen  pada  medium  mungkin  sudah habis  sehingga  isolat  tidak  dapat  melakukan  proses  respirasi dan  fermentasi.  Yeast  fermentatif  memiliki  respon  yang berbeda  terhadap  kondisi  lingkungan  sehubungan  dengan fermentasi  alkohol.  Banyak  spesies  yeast  hanya  mampu melakukan  fermentasi  alkohol  di  bawah  kondisi  ada  oksigen namun  dalam  jumlah  sedikit  dan  tidak  secara  anaerobik. Oksigen sangat dibutuhkan untuk fermentasi glukosa dalam sel yeast,  karena  dengan  tidak  adanya oksigen mereka tidak akan tumbuh  pada  glukosa  (meskipun  oksigen  tidak  diperlukan untuk konversi glukosa menjadi etanol) [15].
Berdasarkan tabel tersebut diketahui hasil gula reduksi awal dan  akhir  pada  medium,  jumlah  gula  yang  dipakai  oleh  isolat dan  kadar  etanol  yang  dihasilkan  oleh  isolat  selama  96  jam fermentasi. Pada konsentrasi medium 10%, isolat Candida sp. 1  menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  0.52%  dan  tidak menghasilkan  etanol  sedangkan  pada  isolat  Candida  sp.  3, isolat  menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  0.66%  dan  tidak menghasilkan  etanol.  Kemudian  pada  konsentrasi  medium 15%,  isolat  Candida  sp.  1  menggunakan  gula  glukosa sebanyak  0.59%  dan  tidak  menghasilkan  etanol  sedangkan pada  isolat  Candida  sp.  3,  isolat  dapat  menggunakan  gula glukosa  sebanyak  0.98%  dan  tidak  menghasilkan  etanol. Lalu pada  konsentrasi  medium  20%,  isolat  Candida  sp.  1 menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  0.93%  dan  tidak
menghasilkan  etanol  sedangkan  pada  isolat  Candida  sp.  3, isolat  dapat  menggunakan  gula  glukosa  sebanyak  1.75%  dan tidak menghasilkan etanol.
Pada  medium  dengan  perlakuan  fermentasi  selama  96  jam, kedua  isolat  tidak  menghasilkan  etanol  sama  sekali.  Hal  yang sama pada perlakuan 72 jam fermentasi terjadi. Isolat Candida sp.  1  dan  Candida  sp.  3  tidak  menghasilkan  etanol  pada perlakuan  fermentasi  96  jam  di  semua  medium  konsentrasi. Kadar oksigen pada medium sudah habis sehingga isolat tidak dapat  melakukan  proses  respirasi  dan  fermentasi.  Oksigen diperlukan  untuk  pertumbuhan  yeast  sebagai  sebuah  blok bangunan  untuk  biosintesis  lemak  tak  jenuh  dan  lipid  yang diperlukan  dalam  mitokondria  dan  membran  plasma. Konsekuensi  dari  kekurangan  oksigen  adalah  membatasi pertumbuhan  sel  yeast,  mengurangi  viabilitas  sel  dan fermentasi lambat dan tidak lengkap [16].

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  yeast  Candida  sp.  1 dan  Candida  sp.  3  memiliki  potensi  untuk  menghasilkan etanol.  Konsentrasi  medium  yang  sesuai  untuk  proses fermentasi  yeast  Candida  sp.  1  dan  Candida  sp.  3  dalam penelitian  ini  adalah  pada  konsentrasi  medium  glukosa  15%. Serta  waktu  yang  optimum  untuk  proses  fermentasi  etanol yeast Candida sp. 1 dan Candida sp. 3 adalah 24 jam.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  banyak  terima  kasih  kepada  Ir.  Sri Nurhatika M.P dan Dr. Anton Muhibuddin, M.P selaku dosen pembimbing yang telah rela mencurahkan tenaga, pikiran, dan waktunya  untuk  penulis,  Nur  Hidayatul  Alami,  S.Si,  M.Si selaku  ketua  sidang  dan  dosen  penguji  I  yang  telah memberikan  waktu  luangnya  untuk  memberikan  masukan  dan saran  dan  Kristanti  Indah  Purwani,  S.Si,  M.Si  selaku  dosen penguji  II  yang  memberikan  waktu  luangnya  untuk  masukan dan  saran.  Ucapan  terimakasih  kepada  teman–teman  Biologi ITS  angkatan  2012,  2013,  2014  dan  2015  yang  membantu memberikan motivasi.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Fardiaz, S. “Mikrobiologi Pangan I”. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta (1992).
[2] Van  Dijken,  J.P,  Scheffers,  W.  A.  1986.  “Redox  Balances  in  the Metabolism  of  Sugars  by  Yeasts”.  FEMS  microbiology  letters  32(3-4) 199-224.
[3] Tanaka,  T.,  M.T.  Suzuki,  N.  Takashi,  W.  Daengsubha,  M. Chaowsangket, P. Suyanandana, M. Watanabe, K. Ohno, T. Murayama, H.  Iino,  and  M.  Kozaki.  “Amylolytic  Yeasts  of  Indonesian  Koji-cake; Ragi”. Tokyo: Report in graduation work at Showa Women’s University
(1990)
[4] Ardhana, M.M. and G.H. Fleet. “The Microbial Ecology of Tape Ketan Fermentation”.  International  Journal  of  Food  Microbiology  9: 157-165 (1989).
[5] Lansane,  B.K.,  G.  Vijayalakshi,  M.M.  Krishnaiah.  1997.  “Yeast  and energy;  The  production  of  fuel-grade  ethanol.  In:  Spencer,  J.F.T.  and D.M. Spencer. (ed.). Yeasts in Natural and Artificial Habitats”. Springer Verlag. Berlin (1997).
[6] Kurtzman,  C.P.  and  W.F.  Jack.  “The  Yeast  A  Taxonomic  Study. Elsivier”. NewYork (1998).
[7] Muhibuddin,  A  dan  Sastrahidayat,  I.R.  “Soil  Drive  Nutrients  Creation through  Alternate  Host  System  Propagation  of  VAM  to  Support Selective  Exploration  of  Microbial  Fermentation”.  Universitas Brawijaya. Malang (2015)
[8] Harley, J.P., L. and Prescott, M. “Laboratory Exercises in Microbiology Fifth Edition”. McGraw-Hill Companies. New York (2002)
[9] Wickerham.  “Phylogeni  and  Biochemistry  of  the  Genus  Hansenula". Research Laboratory 26: 382-397 (1951).
[10] Mahreni  dan  Sri  Suhenry.  “Kinetika  Pertumbuhan  Sel  Saccharomyces cerevisiae  Dalam  Media  Tepung  Kulit  Pisang”.  Seminar  Rekayasa Kimia dan Proses, ISSN: 1411-4216 (2011).
[11] Lisnawati  Y.  “Aktivitas  antioksidan  Vitamin  C  dan  teh  hijau berdasarkan  resistensi  etanol  pada  sel  khamir  Candida  sp.”  Skripsi. FMIPA IPB.Bogor (2004).
[12] Cheng,  N.H,  Masitah,  H.,  Andri,  C.K.,  Chew,  F.L.  and  Margaret,  T. “Production of Ethanol by Fed-Batch Fermentation”.  J. Sci. & Technol. 17 (2): 399 – 408 (2009).
[13] Judoamidjojo,  M.  “Teknologi  Fermentasi”.  Rajawali  Press:  Jakarta (1990)
[14] Elevri,  P.A  dan  Putra,  S.  R.  2006.  “Produksi  Etanol  Menggunakan Saccharomyces  cerevisiae  yang  Diamobilisasi  dengan  Agar  Batang”. Akta Kimindo, Vol. 1, No. 2, hal: 105-114 (2006)
[15] Van  Dijken,  J.P,  Ruud  A.  W.  and  Jack  T.P.  “Kinetics  of  Growth  and Sugar Consumption in Yeast”. Antonie van Leeuwenhoek 63: 343-352 (1993).
[16] Arifa,  T.,  Madiha,  A.,  and  Tasnim,  F.  “EFFECT  OF  CULTURAL CONDITIONS  ON  ETHANOL  PRODUCTION  BY  LOCALLY ISOLATED  SACCHAROMYCES  CEREVISIAE  BIO-07”.  J.  App Pharm 3(2): 72-78 (2010).