HEPATOSOMATIK INDEKS DAN DIAMETER HEPATOSIT MENCIT ( Mus musculus L.) BETINA SETELAH PAPARAN EKSTRAK ETANOL
DAUN MIMBA ( Azadirachta indica Juss.)
Anisa Nurul Hasana 1 , Agung Janika Sitasiwi 2 , Sri Isdadiyanto 3
1,2,3 Departement of Biology, Science and Mathematics Faculty, Diponegoro University, Semarang Corresponding author: agssiwi@yahoo.co.id

## Abstract
Neem leaves is one part of the neem tree which can be used as a traditional medicinal herb. The purpose of this study  was  to  examine  the  effect  of  neem  leaf  ethanol  extract  on  hepatosomatic  index  (HSI)  and  hepatocyte diameter  in  female  mice.  The  study  used  a  Complete  Randomized  Design  consist  of  4  treatments  and  5 replications including K (aquadest), P1, P2 and P3 (neem leaf ethanol extract with dose of 8.4,11.2 and 14 mg/ kg  BW/day.  The  treatment  was  administered  orally  with  a  volume  of  0.2  mL  for  21  days.  Body  weight  were measured every 7 days. The  liver was isolated, weighed and histologically prepared with paraffin method,  HE staining  and  5  μm  incision  thickness.  HSI  value  determined  from  body  weight  and  liver  weight.  Hepatocyte diameter were measured on 7 hepatocytes per lobule. The data was analyzed using ANOVA at 95% confidence level. The results showed that neem leaf ethanol extract had no significant effect (p> 0,05) on  body weight, liver weight,  HSI  value  and  hepatocyte  diameter,  but  the  liver  microanatomy  showed  hepatocyte  damage.  It  can  be concluded that exposure of neem leaf ethanol extract for 21 days still safe to be used for reference of traditional medicine.
Keywords: Neem leaf, HSI, hepatocyte diameter

## PENDAHULUAN
Obat  tradisional  merupakan  bahan atau  ramuan  bahan  yang  berasal  dari tumbuhan,  hewan,  mineral,  sediaan  sarian (galenik),  atau  campuran  dari  bahan tersebut  yang  secara  turun  temurun  telah digunakan  untuk  pengobatan  dan  dapat diterapkan  sesuai  dengan  kebiasaan  yang telah  berjalan  di  masyarakat.  Mimba ( Azadirachta  indica Juss.)  merupakan salah satu  tanaman  yang  dimanfaatkan  sebagai obat tradisional (Kepmenkes RI, 2017).
Obat  tradisional  dari  bahan  tanaman akan  melalui  proses  pencernaan  di  dalam saluran  pencernaan,  untuk  selanjutnya diserap  oleh  intestinum  dan  didetoksifikasi di  dalam hepar .  Oleh  karena  itu, hepar sangat  rentan  terhadap  pengaruh  berbagai zat  kimia  yang  masuk  ke  dalam  tubuh
melalui  saluran  pencernaan  dan  sering menjadi  sasaran  utama  dari  efek  racun  zat kimia (Kurniawan et al ., 2014).
Hepar memiliki  keterkaitan  dengan bobot  tubuh  karena hepar melakukan metabolisme  zat  makanan  yang  nantinya digunakan  untuk  aktivitas  fisik  ataupun disimpan sebagai cadangan makanan dalam tubuh.  Zat  makanan  yang  disimpan  dalam tubuh akan mempengaruhi bobot badan dari suatu individu (Niendya et al. , 2011). Bobot badan  dan  bobot hepar digunakan  untuk menentukan  nilai  indeks  hepatosomatik, berkaitan  dengan  fungsi hepar sebagai cadangan  energi  dan  aktivitas  metabolik (Ashwini et al., 2016).
Perubahan morfologi  dan fisiologi  sel hepar yang  mengalami  cedera  diawali dengan peningkatan penyerapan air,
kemudian  menyebar  hingga  organel  dan sitoplasma.  Hal  tersebut  menyebabkan pembengkakan sel, dicirikan dengan peningkatan  volume dan  ukuran  sel (Zachary and McGavin, 2012). Peningkatan ukuran  sel  ditandai  dengan  perubahan diameter sel hepatosit.
Ervina dan Sukarjati (2017) menyatakan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol daun mimba dosis 50 mg/kg BB pada mencit ( Mus musculus L.) jantan berpengaruh  terhadap  kerusakan  histologi hepar mencit, yaitu degenerasi dan peningkatan  menjadi  kongesti,  hemoragi, edema, dan radang.
Kerusakan  sel hepar dimulai  dengan proses  degenerasi  yaitu  pembengkakan  sel. Pembengkakan  sel  bersifat reversible , sehingga  dapat  kembali  seperti  semula. Tahap kerusakan sel hepar selanjutnya yaitu nekrosis , merupakan kerusakan yang bersifat irreversible. Tahap akhir kerusakan hepar adalah nekrosis ,  yaitu  sel  akan mengalami kematian (Maulida et al ., 2013) .
Berdasarkan  latar  belakang  maka dilakukan  penelitian  mengenai  pengaruh ekstrak  etanol  daun  mimba  ( Azadirachta indica Juss) terhadap nilai HSI dan diameter hepatosit.  Tujuan    dari  penelitian    ini  yaitu menguji pengaruh pemberian ekstrak etanol daun  mimba  ( Azadirachta  indica Juss.) terhadap hepatosomatik indeks dan diameter  hepatosit  pada  mencit  ( Mus musculus L.) betina. Penelitian ini
diharapkan  dapat  memberikan  informasi tentang  pengaruh  ekstrak  etanol  daun mimba terhadap organ hepar mencit betina, khususnya  mengenai  hepatosomatik  indeks dan  diameter  hepatosit,  sehingga  dapat digunakan  sebagai  bahan  rujukan  tingkat keamanan  penggunaan  ekstrak  etanol  daun mimba  ( Azadirachta  indica Juss.)  sebagai obat tradisional.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan selama 2,5 bulan  di  Lab.  BSF  Hewan,  Universitas Diponegoro, Semarang.

## Persiapan Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  yaitu mencit betina galur Swiss Webster berumur 2,5 bulan dengan kisaran bobot 20-29 g dan tanpa cacat  anatomis. Hewan  diaklimatisasi pada  kondisi  laboratorium  yang  terkontrol selama  seminggu.  Mencit  dipelihara  pada kandang berukuran 20x30cm yang dilengkapi  dengan  penutup  kawat,  tempat pakan, tempat  minum  dan  sekam  padi  serta kepadatan  hewan  ±3  ekor  per  kandang. Pakan  standar  HI-PRO-VITE Medicated 594  dan  air  minum  diberikan  secara ad libitum.

## Ekstraksi Daun Mimba
Sampel  daun  mimba  diperoleh  dari area kampus Fakultas Sains dan Matematika,  Universitas  Diponegoro.  Daun dikeringkan  dalam  oven  dengan  suhu  45- 50°C.  Susunan  daun  dibalik  setiap  hari hingga  kering  secara  merata.  Depkes  RI
Hasana  Anisa  Nurul,  dkk.  Hepatosomatik  Indeks  dan  Diameter  Hepatosit  Mencit    ( Mus  musculus L.)  Betina Setelah Paparan Ekstrak Etanol Daun Mimba ( Azadirachta indica Juss.)
x 100
(2008) menjelaskan bahwa daun dinyatakan kering  jika  berat  mencapai  konstan  dengan syarat  menimbang  2  kali  penimbangan secara  berturut-turut.  Daun  yang  telah kering    dihancurkan  secara  mekanik menggunakan  tangan  hingga  terbentuk serbuk.  Ekstraksi  daun  mimba  dilakukan  di Laboratorium  Kimia  Universitas  Negeri Semarang dengan metode maserasi menggunakan  etanol  70%,  dievaporasi sampai ekstrak berbentuk serbuk.

## Persiapan Bahan Uji
Acuan  penentuan  dosis  didasarkan pada  penelitian  Ashafa et  al. (2012)  yang menguji  ekstrak  etanol  kulit  batang  mimba ( Azadirachta  indica) pada  tikus  jantan Wistar dari kisaran dosis 50-300 mg/kg BB. Berdasarkan Laurence  and  Bacharach (1964) menyatakan konversi dosis dari tikus ke  mencit  sebesar  0,14,  sehingga  dosis untuk  mencit  yang  didapat  yaitu  8,4 mg/kgBB; 11,2 mg/kgBB dan 14 mg/kgBB. Pembuatan larutan stok sebanyak 0,168 mg; 0,224  mg  dan  0,28  mg  ekstrak  etanol  daun mimba  masing-masing  dilarutkan  dalam  10 mL air hangat.
Pemberian Perlakuan dan Pengamatan Rancangan  penelitian  menggunakan rancangan acak lengkap (RAL)  yang terdiri dari  4  perlakuan  yaitu  K  (bahan  uji akuades),  P1,  P2  dan  P3  (ekstrak  etanol daun  mimba  dosis  8,4;  11,2  dan  14  mg/kg BB/  hari),  masing-masing  dengan  5
ulangan.  Pemberian  bahan  uji  dilakukan dengan  cara gavage ,  volume  0,2  mL/ekor selama 21 hari. Pengamatan yang dilakukan selama  penelitian  meliputi  pengamatan konsumsi  minum  setiap  hari,  konsumsi pakan  setiap  3  hari  dan  bobot  badan  setiap minggu.  Isolasi  organ hepar dilakukan setelah perlakuan berakhir, organ ditimbang dan  selanjutnya  dibuat  preparat  histologis dengan metode paraffin, pewarnaan hematoksilin-eosin  dan tebal  sayatan 5 µm.
Pengukuran diameter hepatosit menggunakan fotomikrograf dengan perbesaran  400x.  Pengukuran  dilakukan pada  7  hepatosit  setiap  lobulus,  5  lobulus diamati  setiap  sayatan  organ  dan  setiap preparat  organ  diwakili  3  sayatan  organ. Nilai  HSI  dihitung  sesuai  rumus  menurut Ogunji et al. (2008) sebagai berikut.
Keterangan: HSI = hepatosomatik indeks (%)
BH = bobot hepar (g) BB = bobot badan (g)

## Analisis Data
Data  berat  badan,  berat hepar ,  HIS dan  diameter  hepatosit  dianalisis  dengan menggunakan  uji  ANOVA  dengan  taraf signifikansi  95%.  Hasil  yang  menunjukkan beda  nyata  diuji  lebih  lanjut  menggunakan Duncan  Multiple  Range  Test (DMRT). Analisis  data  menggunakan  program  SPSS versi 23.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  ANOVA  (Tabel  1) menunjukkan  bahan  uji  memberikan  hasil yang  berbeda  tidak  bermakna  (p>0,05) terhadap  bobot  badan,  bobot hepar ,  indeks hepatosomatik  dan  diameter  hepatosit mencit  betina.  Rerata  bobot  badan  mencit (Tabel  1)  pada  semua  kelompok  perlakuan menunjukkan  bahwa  pemberian  bahan  uji ekstrak etanol daun mimba tidak mempengaruhi  bobot  badan  mencit  betina. Ashafa et  al. (2012)  menjelaskan  bahwa pemberian  ekstrak  etanol  kulit  batang mimba  pada  dosis  50-100  mg/kgBB  belum dapat  memengaruhi  bobot  tubuh  tikus jantan bila dibandingkan kelompok kontrol. Hewan  uji  betina  diduga  masih  dapat mentolerir  paparan  senyawa  dalam  ekstrak etanol daun mimba, sehingga tidak mempengaruhi bobot tubuh.
Hepar merupakan organ target toksisitas,  paparan  zat  toksik  dalam  tubuh dapat  menaikkan  ataupun  menurunkan bobot hepar (Harbison et  al., 2015). Paparan  ekstrak  etanol  daun  mimba terhadap  bobot hepar menunjukkan  hasil yang berbeda tidak bermakna (p>0,05). Hal tersebut  diduga  karena  kandungan  senyawa dalam  ekstrak  etanol  daun  mimba  dapat dimetabolisme  dan  didetoksifikasi  dalam organ hepar .
Bobot hepar hewan uji berkisar antara 1,37-1,51 gram. Bobot hepar tersebut masih dalam  kisaran  normal.  Kurniawan et  al.
(2014)  menjelaskan  bahwa  bobot hepar normal  mencit  dewasa  berkisar  antara  1,2- 1,6 gram.
Hepar mencit  umumnya  berwarna merah  kecoklatan,  sedangkan hepar yang abnormal  memiliki  warna  yang  pucat  dan permukaan  berbintik  (Prasetiawan et  al. , 2012).  Abnormalitas hepar yang  terpapar zat  toksik  dapat  ditandai  dengan  perubahan warna hepar menjadi  merah  kekuningan hingga  coklat  kekuningan  (Tatukude et  al ., 2014).
Hepar hewan uji (Gambar 1) memiliki  warna  merah  kecoklatan  baik kelompok kontrol dan kelompok perlakuan. Hal  itu  menunjukkan  bahwa  pemberian ekstrak etanol daun mimba tidak memberikan  perbedaan  yang  bermakna pada warna hepar mencit.
Bobot  badan  dan  bobot hepar mencit digunakan  untuk  menentukan  nilai  HSI. Berdasarkan  hasil  ANOVA  (Tabel  1) menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  daun  mimba  menunjukkan  hasil berbeda  tidak  bermakna  (p>0,05)  terhadap nilai  HSI  mencit  betina.  Hepatosomatik indeks (HSI) menggambarkan jumlah cadangan  energi  dalam  tubuh  serta  kondisi hewan (Nunes et al., 2011). Paparan ekstrak etanol daun mimba diduga belum menyebabkan  gangguan  pada  metabolisme nutrisi  sehingga  nilai  HSI  menunjukkan hasil berbeda tidak bermakna.
Hasana  Anisa  Nurul,  dkk.  Hepatosomatik  Indeks  dan  Diameter  Hepatosit  Mencit    ( Mus  musculus L.)  Betina Setelah Paparan Ekstrak Etanol Daun Mimba ( Azadirachta indica Juss.)
Berdasarkan  hasil  ANOVA  (Tabel  1) menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  daun  mimba  menunjukkan  hasil berbeda  tidak  bermakna  (p>0,05)  terhadap diameter hepatosit.
Berdasarkan  hasil  ANOVA  (Tabel  1) menunjukkan bahwa paparan ekstrak etanol daun  mimba  memperlihatkan  hasil  yang berbeda  tidak  bermakna  terhadap  konsumsi pakan dan konsumsi air minum mencit. Hal tersebut sesuai dengan Sitasiwi (2018) yang menjelaskan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  daun  mimba  menunjukkan  hasil berbeda  tidak  bermakna  pada  konsumsi pakan antara hewan uji kelompok perlakuan dengan  kelompok  kontrol.  Kandungan senyawa  nimbidin  dalam  ekstrak  etanol daun mimba bersifat diuretik (Pankaj et al., 2011),  namun  kandungan  senyawa  tersebut diduga  belum  dapatmempengaruhi  sistem metabolisme  cairan  dalam  tubuh,  sehingga baik  kelompok  kontrol  dan  kelompok perlakuan menunjukkan  hasil berbeda tidak bermakna.
Senyawa  aktif  yang  terisolasi  dalam ekstrak  etanol  daun  mimba  antara  lain karbohidrat,  glikosida,  protein,  senyawa fenol,  tanin,  flavonoid  dan  saponin  (Singh and  Chauhan,  2014).  Senyawa  nimbidin daun mimba berperan sebagai agen hipoglikemik  (Pankaj et  al., 2011),  diduga dapat  menurunkan  ketersediaan  energi dalam  tubuh  hewan  uji  yang  dapat berpengaruh pada nilai HSI.
Azadirachtin  merupakan  kompleks limonoid tetra-nor-triterpenoid yang memiliki  efek antifeedant (Soni et  al., 2012). Sa’diyah et al . (2013) menambahkan bahwa fenol merupakan metabolit sekunder yang  bersifat anti-feedant. Hal  itu  akan mempengaruhi  tingkat  konsumsi  pakan mencit.
Senyawa flavonoid pada ekstrak daun mimba  dapat  menghambat  enzim  sitokrom P-450,  meningkatkan  bioavailabilitas  zat toksik  sehingga  menimbulkan  efek  dari  zat toksik  dan  meningkatkan  toksisitasnya dalam  tubuh  (Budiono,  2000).  Inaya et  al . (2015)  menambahkan  bahwa  senyawa flavonoid dapat mendenaturasi protein pada membran  sel,  sehingga  membran  sel tersebut  terganggu  permeabilitasnya  dan menyebabkan kebocoran sel.
Tanin  merupakan  metabolit  sekunder yang memiliki efek anti mitotik dan bersifat sitotoksik  pada  sel  yang  mengalami pembelahan  cepat  (Setyowati et  al .,  2015). Kandungan  senyawa  tanin  pada  daun mimbadiduga  belum  dapat  mempengaruhi proses  regenerasi  sel  sehingga  tidak mempengaruhi  bobot  badan,  bobot hepar dan nilai HSI.
Tanin memiliki efek spasmolitik yang diduga  dapat  mengerutkan  dinding  sel  atau membran sel sehingga mengganggu permeabilitas  membran  sel,  akibatnya  sel tidak  dapat  melakukan  aktivitas  hidup sehingga  pertumbuhan  terhambat  atau
bahkan mati (Ajizah, 2004).Saponin memiliki  aktivitas sitotoksik.  Paparan saponin  melalui  per  oral  akan  sedikit  yang terserap  ke  dalam  tubuh  manusia  maupun hewan  (Podolak et  al., 2010).  Kandungan- kandungan  senyawa  pada  ekstrak  etanol daun mimba dapat menyebabkan kerusakan pada sel hepatosit mencit.
Gambaran  histologis hepar kelompok kontrol  (Gambar  2)  menunjukkan  adanya sel  hepatosit.  Hepatosit  merupakan  sel poligonal  dengan  membran  sel  yang  jelas. Nukleus  pada  hepatosit  yang  berbeda menunjukkan  variasi  bentuk  dan  ukuran, pada  beberapa  kasus  merupakan  binukleat (Smith and Morton, 2010).
Hepatosit  tersusun  secara  radikal mengelilingi  vena  sentralis,  di  mana  antar hepatosit dipisahkan oleh sinusoid. Sinusoid memiliki  peran  penting  dalam hepar yakni mewakili  sistem  pertahanan  yang  terdiri dari  makrofag  sel  Kupffer  (Al-Easawi  and Al-Azzawi, 2015).
Gambaran  histologis hepar kelompok perlakuan  P1  (Gambar  3)  menunjukkan adanya kerusakan hepatosit yaitu degenerasi hidrofik. Degenerasi  hidropik  merupakan tingkat  kerusakan  struktur hepatosit yang ditandai  dengan  sitoplasma  mengalami vakuolisasi, vakuola-vakuola nampak jernih dan  terjadi  karena  peningkatan  pemasukan air ke dalamsel dan kemudian air memasuki vakuola-vakuola tersebut (Hastuti, 2006).
Gambaran  histologis hepar kelompok P2  (Gambar  4)  menunjukkan  adanya kerusakan  sel  yaitu  kongesti,  degenerasi hidrofik,  degenerasi  lemak  dan  nekrosis. D egenerasi lemak ditandai dengan sitoplasma hepatosit terbentuk satu vakuola besar  yang  berisi  lemak,  sehingga  nukleus terdesak  ke  tepi  sel  (Hastuti,  2006). A kumulasi  lemak  di  dalam  sel hepar dapat disebabkan  radikal  bebas  (Tatukude et  al ., 2014).
Gambaran  histologis hepar kelompok P3  (Gambar  5)  menunjukkan  adanya kerusakan  seperti  degenerasi  hidrofik, degenerasi  lemak  dan  nekrosis.  Nekrosis ditandai  dengan  ciri-ciri  yakni  nukleus mengkerut (piknosis), nukleus pecah menjadi  fragmen-fragmen  (kariokinesis), nukleus  lisis  (kariolisis)  dan  membran  sel mengalami  lisis  sehingga  batas  antar  sel tidak nampak jelas (Hastuti, 2006).
Hepar memiliki daya regenerasi  yang cepat,  proliferasi  hepatosit  dapat  ditandai dengan  mitosis  dan  adanya  sel  binukleat (Herrington,  2014).  Regenerasi hepar juga diperlukan  untuk  menggantikan  hilangnya jaringan  di  dalam  organ  (Michalopoulos, 2013).  Proses  regenerasi  tergantung  pada antioksidan, mediator proliferasi dan aktivator  siklus  sel.  Ekstrak  daun  mimba memiliki  kapasitas  antioksidan  yang  tinggi, senyawa  tersebut  meliputi  tanin,  flavonoid, polifenol  dan  betakaroten  (Suhendro et  al., 2018).
Kerusakan hepar akibat  zat  toksik dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor antara  lain  jenis  zat  yang  terlibat,  besarnya dosis  yang  diberikan  dan  lamanya  paparan zat  (Handani et  al .,  2017).  Kerusakan  sel dalam penelitian ini diduga bersifat reversible. Hal  itu  ditunjukkan  dengan bobot  badan,  bobot hepar ,  nilai  HSI  dan diameter  hepatosit  yang  berbeda  tidak bermakna.  Baroroh  dan  Warsinah  (2009) menjelaskan bahwa kerusakan yang bersifat reversible dapat  kembali  seperti  semula apabila  rangsangan  yang  menyebabkan kerusakan dihentikan.
KESIMPULAN
Paparan  ekstrak  etanol  daun  mimba hingga  dosis  14  mg/kg  BB  selama  21  hari menunjukkan hasil berbeda tidak bermakna terhadap  nilai  HSI  dan  diameter  hepatosit pada  semua  kelompok  perlakuan.  Struktur mikroanatomi menunjukkan gangguan yang bersifat reversible. Sehingga dapat disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  daun  mimba  tergolong  aman  untuk digunakan sebagai obat tradisional.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  Fakultas  Sains dan  Matematika  Universitas  Diponegoro melalui  No.042.01.2.400898/2016  DIPA Research Grant pada tahun 2016.

## DAFTAR PUSTAKA
Ajizah  A.  2004.  Sensitivitas Salmonella typhimurium terhadap  ekstrak  daun
Psidium  guajava L. Bioscientiae, 1(1): 31-38.
Al-Easawi AF and MNA Al-Azzawi. 2015.
Histological  study  in  liver  of  albino mice  post  exposing  to  shisha  smoke.
World Journal of Experimental
Biosciences, 3(1): 30-35.
Ashafa  AOT,  LO  Orekoya,  and  MT
Yakubu.  2012.  Toxicity  profile  of ethanolic  extract  of Azadirachta indica Stem  Bark  in  male  wistar  rats. Asian  Pacific  Journal  of  Tropical Biomedicine 2(10): 811-817.
Ashwini L, S Benakappa, HN Anjanayappa, and Akshay L.  2016. Observation on the  Gonado-Somatic  Index-GSI  and
Hepato-Somatic
Index-HSI of Decapterus russelli Mangaluru Coast.
International  Journal  of  Engineering Science  and  Computing  6(6)  :  7396- 7399.
Baroroh HN dan Warsinah. 2009.
Antiinflamatory  activity  of  ethanolic extract  of  leaves  of  jarak  pagar ( Jatropa  curcas L.)  and  neutrophils profile in rats foot induced carrageenan. Proceedings of International Conference On Medicinal Plants, 22-23. Budiono  B  dan  Herwiyati  S.  2000.  The histological  structure  of  liver  of  rats after  comsuming  extract  of  lantoro leaf and green tea ( Leucaena leucochepala ) .  Jurnal  Kedokteran
YARSI. 8(2): 16 – 24. Departemen Kesehatan RI. 2008.
Farmakope  herbal  Indonesia  edisi  I . Jakarta: Depkes RI.
Ervina  L  dan  Sukarjati.  2017.  Pengaruh pemberian ekstrak biji pepaya ( Carica papaya L.),  ekstrak  daun  mimba ( Azadirachta  indica A.  Juss)  serta campuran  ekstrak  biji  pepaya  dan ekstrak daun mimba terhadap gambaran  histologi  ginjal  dan  hati
mencit  jantan  ( Mus  musculus L.). Wahana 68(1): 61-67.
Handani  KS,  WS  Utami,  B  Hermansyah, dan  R  Normasari.  2017.  Gambaran histopatologi  hati  tikus  wistar  pasca pemberian  ekstrak  etanol  rimpang bangle  ( Zingiber  cassumunar Roxb) pada  uji  toksisitas  akut. Journal  of Agromedicine  and  Medical  Sciences, 4(1): 55-59.
Harbison  RD,  MM  Bourgeois,  and  GT
Johnson.  2015. Hamilton  &  Hardy’s Industrial  Toxicology .  New  Jersey:
John Wiley & Sons Inc.
Hastuti  US.  2006.  Pengaruh  berbagai  dosis citrinin  terhadap  kerusakan  struktur hepatosit mencit ( Mus musculus ) pada tiga  zona  lobulus  hepar. Jurnal
Kedokteran  Brawijaya,  22(3):  121- 126.
Herrington  CS.  2014. Muir’s  textbook  of pathology . Boca Raton: CRC Press.
Inaya AFN, Kismiyati, dan S Subekti. 2015.
Pengaruh perasan  biji pepaya  ( Carica papaya )  terhadap  kerusakan  telur Argulus  japonicus.  Jurnal  Ilmiah
Perikanan  dan  Kelautan,  7(2):  159-
164.
Keputusan Menteri Kesehatan RI No.HK.01.07/  Menkes/  187/  2017.
Formularium  ramuan  obat  tradisional Indonesia.
Kurniawan  IWAY,  NI  Wiratmini,  dan  NW Sudatri.  2014.  Histologi  hati  mencit
( Mus musculus L.) yang diberi ekstrak daun Lamtoro ( Leucaena leucocephala ). Jurnal  Simbiosis  II (2): 226-235.
Laurence  DR  and  AL  Bacharach.  1964.
Evaluation of drug activities: pharmacometrics . London:  Academic Press.
Maulida  A,  Syafruddin  I,  dan  Salomo  H. 2013.  Pengaruh  pemberian  vitamin  C dan  E  terhadap  gambaran  histologis hepar mencit ( Mus musculus L.) yang dipajankan  Monosodium  Glutamat (MSG).  Fakultas  MIPA,  Universitas Sumatera Utara (USU).
Michalopoulus GK. 2013.Principles of liver regeneration  and  growth  homeostasis. Compr. Physiol, 3(1): 485-513.
Niendya  AW,  MA  Djaelani,  dan  T Suprihatin.  2011.  Rasio  bobot  hepar- tubuh  mencit  ( Mus  musculus L.) setelah pemberian Diazepam,
Formalin,  dan  minuman  beralkohol. Buletin Anatomi dan Fisiologi, 19(1). Nunes C, A Silva, E Soares, and K Ganias. 2011. The  use of  hepatic and  somatic indices and histological information to characterize the reproductive dynamics of atlantic Sardina
pilchardus from the Portuguese Coast.
Marine and Coasttal Fisheries:
Dynamics, Management, and Ecosystem Science, 3: 127-144.
Ogunji  J,    RUAS  Toor,  C  Schulz,  and  W Kloas.  2008.  Growth  performance, nutrient  utilization  of  Nile  Tilapia Oreochromis  niloticus Fed  Housefly Maggot Meal (Magmeal) Diets. Turkish  Journal  of  Fisheries  and Aquatic Sciences 8: 141-147.
Pankaj  S,  T  Lokeshwar,  B  Mukesh,  and  B Vishnu.  2011.  Review  on  Neem ( Azadirachta indica ): thousand problems  one  solution. International Research Journal of Pharmacy, 2(12).
Podolak  I,  A  Galanty,  and  D  Sobolewska. 2010. Saponins as cytotoxic agents:  a review. Phytochem Rev, 9: 425-474.
Prasetiawan  E,  E  Sabri,  dan  S  Ilyas.  2012. Gambaran  histologis  hepar  mencit ( Mus  musculus L.)  strain  DDW setelah  pemberian  ekstrak  N-Heksan buah andaliman ( Zanthoxylum acanthopodium DC.) selama masa pra implantasi  dan  pasca  implantasi. Saintia Biologi, 1(1).
Sa’diyah  NA,  KI  Purwani,  dan  L Wijayawati.  2013.  Pengaruh  ekstrak daun  bintaro  ( Cerbera  odollam ) terhadap  perkembangan  ulat  grayak ( Spodoptera  litura F.). Jurnal  Sains dan Seni Pomits, 2(2): E111-E115 . Setyowati  WAE,  SRD  Ariani,  Ashadi,  B Mulyani,  dan  A  Hidayat.  2015. Aktivitas antifertilitas kontrasepsi dari
Hasana  Anisa  Nurul,  dkk.  Hepatosomatik  Indeks  dan  Diameter  Hepatosit  Mencit    ( Mus  musculus L.)  Betina Setelah Paparan Ekstrak Etanol Daun Mimba ( Azadirachta indica Juss.)
kulit  durian  ( Durio  zibethinus Murr) varietas  Petruk. Seminar  Nasional Kimia  dan  Pendidikan  Kimia  VII . Program  Studi  Pendidikan  Kimia Jurusan FMIPA FKIP UNS, Surakarta. Singh, V and D Chauhan. 2014. Phytochemical  evaluation  of  aqueous and  ethanolic  extract  of  neem  leaves ( Azadirachta  indica ). Indo  American Journal  of  Pharmaceutical  Research, 14(12): 5943-5948.
Sitasiwi  AJ.  2018.  Bobot  badan  mencit ( Mus  musculus L.)  setelah  pemberian
ekstrak ethanol daun nimba ( Azadirachta  indica )  secara  oral selama  21  hari. Buletin  Anatomi  dan Fisiologi, 3(1): 133-139.
Smith  ME  and  DG  Morton.  2010. The digestive  system:  basic  science  and clinical conditions, 2 nd edition . China: Elsevier Limited.
Soni  H,  K  Mishra,  S  Sharma  and  AK Singhai.  2012.  Characterization  of azadirachtin  from  ethanolic  extract  of leaves of Azadirachta  indica . Journal of Pharmacy Research, 5(1): 199-201.
Suhendro,  AAAN  Susraini,  H  Saputra,  dan NP Sriwidyani. 2018. Oral
administration  of  neem  ( Azadirachta indica A.  Juss)  leaf  extract  increase Cyclin  D1  expression  in  hepatocyte regeneration in Acetaminophen- Indued  Hepatotoxic  wistar  rats. Bali Medical Journal, 7(1): 12-16.
Tatukude  P,  L  Loho,  dan  P  Lintong.  2014. Gambaran  histopatologi  hati  mencit Swiss  yang  diberi  air  rebusan  sarang semut  ( Mymercodia  pendans )  paska induksi  dengan  Carbon  Tetrachlorida (CCl4). Jurnal s-Biomedik, 2(2): 459- 466.
Zachary  JF  and  MD  McGavin.  2012.
Pathologic  basic  of  veterinary  disease, 5 th Edition.  Missouri:  Elsevier  Mosby.
Tabel 1. Rerata bobot badan, bobot hepar , hepatosomatik indeks, diameter hepatosit, konsumsi pakan dan konsumsi air minum mencit betina setelah paparan ekstrak etanol daun mimba selama 21 hari
Variabel Penelitian Perlakuan K P1 P2 P3 ± SD ± SD ± SD ± SD Bobot Badan (gr) 25,80 ± 1,10 a 26,54 ± 4,01 a 26,52 ± 3,12 a 26,22 ± 1,35 a Bobot Hepar (gr) 1,40 ± 0,10 a 1,51 ± 0,23 a 1,43 ± 0,31 a 1,37 ± 0,13 a Hepatosomatik Indeks (%) 5,44 ± 0,52 a 5,69 ± 0,22 a 5,42 ± 1,13 a 5,22 ± 0,56 a Diameter Hepatosit (µm) 14,34 ± 2,22 a 12,16 ± 1,01 a 12,06 ± 1.05 a 12,40 ± 0,66 a Konsumsi Pakan (gram/ekor/hari) 4,82 ± 0,64 a 3,64 ± 0,35 a 3,58 ± 0,74 a 3,96 ± 0,07 a Konsumsi Air Minum (mL/ekor/hari) 6,38 ± 0,73 a 5,48 ± 0,57 a 4,99 ± 0,33 a 5,56 ± 0,15 a
Keterangan:    Data  disajikan  berupa  rataan  ( )  ±  standar  deviasi  (SD).  Rerata  yang  diikuti  superskrip  yang  sama  pada  baris  yang  sama menunjukkan  perbedaan  tidak  bermakna  dengan  uji  ANOVA  pada  taraf  kepercayaan  95%.  K  :  kelompok  kontrol  dengan akuades, P1 : kelompok perlakuan bahan uji dosis 8,4 mg/kgBB, P2 : kelompok perlakuan bahan uji dosis 11,2 mg/kgBB, P3 : kelompok perlakuan bahan uji 14 mg/kgBB.
Gambar 1. Morfologi hepar semua kelompok perlakuan
Keterangan:  (A)  K  (akuades),  (B)  P1  (ekstrak  etanol  daun  mimba  dosis  8,4  mg/  kg  BB),  (C)  P2  (ekstrak  etanol  daun mimba dosis 11,2 mg/ kg BB), (D) P3 (ekstrak etanol daun mimba dosis 14 mg/kgBB.
Gambar  2 .  Gambaran  histologis hepar kelompok  kontrol  dengan  pewarnaan  HE.  (A  dan  B) Perbesaran 400X, (C) Perbesaran 1000X.
Keterangan: (VP) vena porta, (AH) arteri hepatika, (DB) duktus biliaris (VS) vena sentralis, (HN) hepatosit normal, (S) sinusoid, (SB) sel binukleat
Gambar 3. Gambaran histologis hepar kelompok perlakuan  P1 dengan pewarnaan HE. (A dan B) Perbesaran 400X, (C) Perbesaran 1000X.
Keterangan:  (VS)  vena  sentralis,  (VP)  vena  porta,  (AH)  arteri  hepatica,  (DB)  duktus  biliaris,  (HN)  hepatosit  normal,
(DH)
degenerasi hidrofik
A VP AH H DB HN B VS SB S 10 µm 20 µm 20 µm C B A C DH HN VS a VP DB AH 10 µm 20 µm 20 µm
Gambar 4. Gambaran  histologis hepar kelompok  perlakuan  P2  dengan  pewarnaan  HE. (A, B  dan C) Perbesaran 1000x.
Keterangan: (K) kongesti, (DH) degenerasi hidrofik, (DL) degenerasi lemak, (SB) sel binukleat, (N) nekrosis
Gambar 5. Gambaran  histologis hepar kelompok  perlakuan  P3  dengan  pewarnaan  HE.  (A) Perbesaran 400X, (B dan C) Perbesaran 1000X.
Keterangan:  (VS)  vena  sentralis,  (DH)  degenerasi  hidrofik,  (DL)  degenerasi  lemak,  (N)  nekrosis,  (SB)  sel  binukleat
A K NK DH SB DL C B 10 µm 10 µm 10 µm B A C VS NK DL DH SB 20 µm 10 µm 10 µm DL SB HN