## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL BUNGA BROKOLI (Brassica oleracea L. var. Italica) DENGAN METODE DPPH (2,2 diphenyl-1-picrylhydrazyl) dan  METODE ABTS (2,2 azinobis (3-etilbenzotiazolin)-6-asam sulfonat)
Fitriyanti Jumaetri Sami 1 , Sitti Rahimah 1
1 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar email : fitriyantijumaetri_sami@yahoo.com

## ABSTRACT
Telah dilakukan penelitian uji aktivitas antioksidan ekstrak metanol bunga brokoli (Brassica oleracea L. var. Italica) dengan  menggunakan  metode  DPPH  (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)  dan  metode  ABTS (2,2-Azinobis (3- etilbenzotiazolin)-6-asam sulfonat).  Bunga  brokoli  diekstraksi  secara  maserasi  dengan  menggunakan  pelarut metanol.    Ekstrak  bunga  brokoli  (Brassica  oleracea L. var.  Italica)  dibuat  dalam  berbagai  konsentrasi  dan  diuji aktivitas  antioksidannya.  Pada  metode  DPPH  diperoleh  nilai  IC 50 sebesar  123,698  ppm  dan  IC 50 vitamin  C  murni sebesar  3  ppm  sedangkan  pada  metode  ABTS  diperoleh  nilai  IC 50 sebesar  32,1292  ppm  dan  nilai  IC 50 vitamin  C murni sebesar 6 ppm.
Kata Kunci : Antioksidan, Bunga Brokoli (Brassica oleracea L. var. Italica), metode DPPH  dan Metode ABTS

## I. PENDAHULUAN A. Latar Belakang
Radikal  bebas  adalah  suatu  senyawa  atau molekul  yang  mengandung  satu  atau  lebih  elektron yang tidak berpasangan pada orbital luarnya. Adanya elektron  yang  tidak  berpasangan  menyebabkan senyawa  tersebut  sangat  reaktif  mencari  pasangan dengan  cara  menyerang  dan  mengikat  elektron molekul  yang  berada  di  sekitarnya  seperti  lipid, protein  maupun  DNA  (Winarsi,  2007).  Antioksidan adalah zat  yang  dapat menangkal  atau  mencegah reaksi  oksidasi  dari radikal  bebas. Oksidasi merupakan  suatu  reaksi  kimia  yang mentransfer elektron  dari  satu  zat  ke  oksidator. Reaksi  oksidasi dapat menghasilkan radikal bebas dan memicu reaksi berantai,  menyebabkan kerusakan  sel  dalam  tubuh (Miksusanti  dkk,  2012). Sayuran  jenis Cruciferae (family Brassicaceae) merupakan sumber antioksidan yang  berlimpah.  Salah  satu  jenis  dari family tersebut adalah  tanaman  brokoli  (Brassica  oleracea L.  var. Italica).  Selain  mengkonsumsi  suplemen,  cara  untuk memenuhi  kebutuhan antioksidan yaitu dengan mengkonsumsi sayuran. Brokoli  merupakan  salah satu  jenis sayuran  yang  memiliki  kandungan karotenoid, flavonoid,  vitamin  A,  C,  E,  tiamin, riboflavin, betakaroten, lutein  dan glutation yang bersifat  antioksidan (Jusuf  dan  Nelva,  2012). Yuliani,  (2012),  mendapatkan  hasil  bahwa  lutein yang  ada  pada  tanaman  brokoli  mempunyai antioksidan paling tinggi dibandingkan dengan kubis, kembang  kol  dan kecambah. Pada  penelitian ini dilakukan  pengujian  antioksidan  ekstrak  metanol bunga  brokoli  (Brassica  oleracea L.  var.  Italica). Adanya kandungan zat aktif tersebut maka diperlukan
suatu  kajian  mengenai  aktivitas  antioksidan  dengan metode DPPH dan ABTS.
Tujuan penelitian ini adalah untuk mendapatkan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol bunga  brokoli  (Brassica  oleracea L.  var.  Italica) terhadap radikal bebas DPPH dan ABTS serta metode yang  tepat  untuk  menentukan  aktivitas  antioksidan. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi antioksidan bunga brokoli kepada masyarakat dan para peneliti selanjutnya.

## II. METODE PENELITIAN A. Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  yaitu  bejana  maserasi, cawan porselin, gelas ukur, labu terukur 5 ml, 10 ml, 50 ml, 100 ml, 250 ml, beaker gelas, erlenmeyer, vial, mikropipet,  pipet  tetes,  neraca  analitik,  tissue, aluminium foil, sendok tanduk, batang pengaduk dan spektrofotometer  UV-VIS  (Agiment  Technologies G1030 AX-DE 017 43058).
Bahan-bahan yang digunakan yaitu aquadest,  metanol  absolut,  etanol absolut,  DPPH, ABTS,  vitamin  C  murni,  ekstrak  bunga  brokoli (Brassica oleracea L. var. Italica).

## B. Prosedur Penelitian 1. Pengolahan Sampel
Bunga  brokoli  (Brassica  oleracea L.  var. Italica)  diambil  kemudian  dicuci  bersih  dengan  air mengalir, ditiriskan lalu diiris halus.
2. Pembuatan Ekstrak Metanol Sampel ditimbang sebanyak 300 gram kemudian  dimasukkan  dalam  wadah  dan  diekstraksi secara  maserasi  selama  1  x  24  jam  dengan
menggunakan cairan penyari metanol sambil sesekali diaduk,  kemudian  disaring.  Ampas  hasil  ekstraksi kemudian  diremaserasi  lagi.  Filtrat  yang  diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan dengan ratory evaporator sampai diperoleh ekstrak kental.

## C. Uji Aktivitas Antioksidan
1. Pembuatan Larutan DPPH 0,4 mM
DPPH  ditimbang  sebanyak  0,01577  g  dan dilarutkan  dengan  metanol  absolut    hingga  100  ml dalam labu ukur.

## 2. Pembuatan  Larutan  Stok  Ekstrak  Bunga Brokoli
Larutan  stok  1000  ppm  disiapkan  dengan cara  ditimbang  50  mg  ekstrak kental  bunga  brokoli dan  dilarutkan  dengan  metanol  absolut  sambil dihomogenkan,  volume  akhir  dicukupkan  metanol absolut sampai 50 ml dalam labu ukur.

## 3. Pembuatan Larutan Stok Vitamin C Murni
Larutan  stok  1000  ppm  disiapkan  dengan cara  menimbang  50  mg vitamin  C  murni  dan dilarutkan  dengan  metanol  absolut,  volume  akhir dicukupkan hingga 50 ml labu ukur.
4. Pembuatan larutan stok ABTS
a. Larutan  a  :  Ditimbang  7,1015  mg  ABTS, dilarutkan  dalam  5  ml  aquadest.  Diinkubasi selama 12 jam
b. Larutan  b  :  Ditimbang  3,500  mg K 2 S 2 O 8 , dilarutkan  dalam  5  ml  aquadest.  Diinkubasi selama 12 jam
c. Larutan  a  dan  b  dicampur  dalam  ruang  gelap  dan cukupkan  volumenya  dengan  etanol  absolut sampai 25 ml.

## 5. Pengukuran  Aktivitas  Antioksidan  Dengan Metode DPPH
a. Pengukuran serapan Larutan Blanko DPPH
Larutan  DPPH  0,4  mM  dipipet  sebanyak  1 ml  dan  dicukupkan  volumenya  sampai  5  ml  dengan metanol  absolut  dalam  labu  terukur.  Larutan  ini kemudian  dihomogenkan  dan  dibiarkan  selama  30 menit, selanjutnya serapan diukur dengan spektrofotometri  UV-Vis  pada panjang  gelombang 515 nm.
b. Pengukuran  Aktivitas  Pengikatan  Radikal bebas DPPH dengan Sampel
Pengujian  dilakukan  dengan  cara  memipet masing-masing  400  µl,  500  µl,  600  µl,  700  µl  dan 800  µl  dari  larutan  stok  sampel  bunga  brokoli  1000 ppm,  campuran  ditambah  1 ml  DPPH  0,4  mM  lalu dicukupkan  volumenya  sampai  5  ml  dengan  metanol absolut sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 80 ppm, 100 ppm, 120 ppm,  140 ppm dan 160 ppm. Selanjutnya  dihomogenkan  dan  dibiarkan  selama  30
menit,  lalu  diukur  serapan  dengan  spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 515 nm.
Besarnya  persentase  pengikatan  radikal bebas dihitung dengan rumus :
% pengikat radikal = ( ) x100%
Nilai IC 50 (50% Inhibitory Concentration) ditentukan dengan  analisis  probit  dari  data  log  konsentrasi dengan probit persentase pengikatan radikal bebas.

## 6. Pengukuran  Aktivitas  Pengikatan  Radikal bebas DPPH dengan vitamin C murni
Pengujian dilakukan dengan memipet masing-masing  10  µl, 12.5  µl,  15  µl,  17.5  µl  dan  20 µl  dari  larutan  stok  vitamin  C  murni  1000  ppm, campuran  ditambah  1  ml  DPPH  0,4  mM  lalu dicukupkan  volumenya  sampai  5  ml  dengan  metanol absolut sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 2  ppm,  2.5 ppm,  3  ppm,  3.5  ppm  dan 4  ppm, kemudian  dihomogenkan  dan  dibiarkan  selam  30 menit. Selanjutnya serapan diukur dengan spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang  gelombang 515 nm.

## 7. Pengukuran  Aktivitas  Antioksidan  Dengan Metode ABTS
a. Pengukuran Serapan Larutan Blanko ABTS
Larutan  ABTS  dipipet  sebanyak  1  ml  dan dicukupkan  volumenya  sampai  5  ml  dengan  etanol absolut  dalam  labu  terukur.  Larutan  ini  kemudian diukur dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 750 nm.
b. Pengukuran  Aktivitas  Pengikatan  Radikal bebas ABTS dengan Sampel
Larutan  stok  sampel  ekstrak  bunga brokoli  1000  ppm  dipipet  masing-masing  50  µl,  100 µl,  150  µl, 200  µl  dan  250  µl,  campuran  ditambah  1 ml larutan ABTS lalu dicukupkan volumenya sampai 5 ml dengan etanol absolut sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm dan  50  ppm.  Selanjutnya  dihomogenkan  lalu  diukur serapan  dengan spektrofotometri  UV-Vis pada panjang gelombang 750 nm.
Besarnya  daya  antioksidan  dihitung  dengan rumus :
Daya antioksidan = ( ) x 100 %
c. Pengukuran  Aktivitas  Pengikatan  Radikal bebas ABTS dengan vitamin c murni
Pengujian dilakukan dengan memipet masing-masing  15  µl,  20  µl,  25  µl,  30  µl  dan  35  µl dari  larutan  stok  vitamin  C  murni  1000  ppm, campuran  ditambah  1  ml  larutan  ABTS  lalu dicukupkan  volumenya  sampai  5  ml  dengan  etanol
0 20 40 60 80 100 120 140 Ekstrak metanol bunga brokoli (DPPH) Vitamin C (DPPH) Ekstrak metanol bunga brokoli (ABTS) Vitamin C (ABTS) IC 50
Gambar 1. Reaksi DPPH dengan antioksidan
absolut sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 3 ppm, 4 ppm, 5 ppm, 6 ppm dan 7 ppm. Selanjutnya dihomogenkan lalu serapan diukur dengan spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang  gelombang 750 nm.

## III. Hasil dan Pembahasan
Uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode DPPH  berdasarkan  hilangnya warna  ungu  akibat tereduksinya  DPPH  oleh  antioksidan.  Intensitas warna ungu yang hilang diukur dengan spektrofotometer  UV-VIS  pada  panjang  gelombang 515  nm.  Sedangkan  uji  antioksidan  dengan  metode ABTS  berdasarkan  hilangnya  warna  biru  akibat tereduksinya  ABTS  oleh  antioksidan.  Intensitas warna  biru  ini  diukur  pada  panjang  gelombang  750 nm.
Tiap  konsentrasi  yang  diperoleh  kemudian diukur pada spektrofotometer UV-Vis dengan vitamin C  murni  sebagai  pembanding  (kontrol  positif). Aktivitas  antiradikal  bebas  ditunjukkan  dengan  nilai IC 50 .  Nilai  IC 50 merupakan  nilai  konsentrasi antioksidan  untuk  meredam  50%  aktivitas  radikal bebas.
Pada pengujian aktivitas antioksidan dengan metode  DPPH  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol bunga  brokoli  (Brassica  oleracea L.  var.  Italica) mempunyai  nilai  IC 50 sebesar  123,698  ppm  dan vitamin  C  murni  sebagai  pembanding  mempunyai IC 50 sebesar  3  ppm.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 berarti semakin kuat daya antioksidannya. Nilai IC 50 ekstrak metanol  bunga  brokoli  lebih  besar  dari  nilai  IC 50 vitamin  C  murni.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  daya antioksidan  ekstrak  metanol  bunga  brokoli  lebih lemah dibandingkan antioksidan vitamin C murni.
Pada pengujian aktivitas antioksidan menggunakan  metode  ABTS  menunjukkan  ekstrak metanol  bunga  brokoli  (Brassica  oleracea L.  var. Italica)  mempunyai  nilai  IC 50 sebesar  32,1292  ppm dan vitamin C murni sebagai pembanding
mempunyai  nilai  IC 50 sebesar  6  ppm.  Berdasarkan nilai  IC 50 menunjukkan  aktivitas  antioksidan  ekstrak metanol  bunga  brokoli  lebih  lemah  dibandingkan vitamin C murni.
Grafik  di  atas  menunjukkan  nilai  IC 50 dari ekstrak  metanol  bunga  brokoli  sebesar  123,698  ppm dan  vitamin  C  murni  3  ppm  pada  metode  DPPH sehingga  dapat  disimpulkan  vitamin  C  murni memiliki  aktivitas  peredaman  radikal  bebas  yang lebih  kuat  dibandingkan  dengan  ekstrak  metanol bunga  brokoli  yang  memiliki  aktivitas  antioksidan sedang. bunga brokoli memberikan aktivitas peredaman  radikal  bebas  yang  lebih  kecil  karena penelitian  ini  masih  berupa  ekstrak  kasarnya  bukan senyawa murni, sehingga masih terdapat kemungkinan  senyawa  murni  yang  dikandung memiliki aktivitas peredaman radikal bebas lebih kuat dibandingkan dengan ekstrak kasarnya.
Faktor  lain  yang  juga  mempengaruhi  yaitu kandungan  senyawa  antioksidan  yang  sedikit  dalam ekstrak  akibat  waktu  maserasi  yang  singkat  yaitu  1 hari jika dibandingkan dengan teori dimana  maserasi biasanya  dilakukan  selama  3-5  hari  (Ansel,  1989) sehingga senyawa yang berkhasiat sebagai antioksidan tidak ditarik dengan sempurna.
Pada  metode  ABTS,  pengukuran  aktivitas antioksidan  ekstrak  metanol  bunga  brokoli  (Brassica oleracea L. var.  Italica)  termasuk  golongan antioksidan  sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 sebesar 32,1292  ppm  dan  vitamin  C  murni  sebagai pembanding dengan nilai IC 50 sebesar 6 ppm. Tingkat  kekuatan  antioksidan dikatakan sangat kuat apabila memiliki nilai IC 50 lebih kecil dari 50  ppm  (Edhisambada,  2011).  Dari  hasil  penelitian, maka  dapat  disimpulkan  bahwa  metode  ABTS  lebih baik dibandingkan dengan metode DPPH. Selain hasil yang  diperoleh,  pengerjaan  dari  metode  ABTSpun lebih cepat dibandingkan metode DPPH.

## IV. KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang dilakukan  dapat disimpulkan bahwa:
1. Pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan  metode
DPPH  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang sedang dengan nilai IC 50 sebesar 123,698 ppm dan bila  dibandingkan  dengan  vitamin  C  murni  yang memiliki  nilai  IC 50 sebesar  3  ppm  maka  sampel mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang  lebih rendah
2. Pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan  metode ABTS  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 sebesar  32,1292 ppm  dan  bila  dibandingkan  densgan  vitamin  C murni  yang  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  6  ppm maka  sampel  mempunyai  aktivitas  antioksidan yang lebih rendah.

## DAFTAR PUSTAKA
Ansel,  H. Pengantar  Bentuk  Sediaan  Farmasi  Edisi IV. Jakarta: Universitas  Indonesia  Press. 1989
Edhisambada. 2011.
Metode Uji Aktivitas Antioksidan Radikal 1,1-Difenil-2- Pikrilhidrazil (DPPH). http://edhisambada.wordpress.com. (10 september 2013).
Miksusanti  et,al.  Aktivitas  Antioksidan  dan  Sifat Kestabilan  Warna  Campuran  Ekstrak  Etil Esetat  Kulit  Buah Manggis  (Garcinia
mangostana
L.) dan Kayu Secang (Caesalpinia  sappan L.).  Sumatera  Selatan: Jurusan  Kimia  Universitas  Sriwijaya,  2012.
Vol 15 Nomor 2 C, p 1-2
Moon JK, Shibamoto T. Antioxidant assays for plant and food components. Journal of
Agricultural  and  Food  Chemistry. 2009.
Nomor 57, p 1655-1666.
Jusuf,  Nelva  Karmila.  Pengaruh  Ekstrak  Bunga Brokoli  (Brassica  oleraceae L.  var Italica Plenk)  Terhadap  Penghambatan  Penuaan Kulit  Dini  (Photoaging):  Kajian  pada Ekspresi  Matriks  Metalloproteinase-1  dan
Prokolagen  Tipe  1  Secara in  vitro pada Fibroblas Manusia. Medan: Fakultas Kedokteran Sumatera Utara, 2012. p 6
Widyastuti,  N. Pengukuran  Aktivitas  Antioksidan dengan Metode CUPRAC, DPPH dan FRAP serta Korelasinya dengan Fenol dan Flavonoid pada Enam Tanaman.
Departemen Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Institut  Pertanian
Bogor. 2010
Winarsi,  Hery.  Antioksidan  Alami  dan  Radikal Bebas. Yogyakarta: Penerbit Kanisius, 2007. p 15
Yuliani,  Fitri.  Isolasi  Senyawa  Lutein  Dari  Ekstrak Bunga Brokoli Sebagai Antioksidan. Bogor: Fakultas  MIPA  Institut  Pertanian  Bogor, 2012. p 9
Gambar 2. Reaksi pembentukan ABTS radikal dari ABTS dengan kalium persulfat