J.  Agroland 15 (1) : 63 - 67,  Maret 2008

## ISSN : 0854 – 641X

## KONSERVASI  SEMEN AYAM  BURAS MENGGUNAKAN BERBAGAI PENGENCER TERHADAP FERTILITAS DAN PERIODE FERTIL SPERMATOZOA PASCA INSEMINASI BUATAN
Oleh : Ridwan 1) dan  Rusdin 1)

## ABSTRACT
The aim of the experiment was to determine spermatozoa fertility and accurate interval time of artificial insemination for improving chicken quality and production. The experiment was conducted using a completely randomized design with three levels of semen diluter as the treatments. Each treatment was tested to 10 local female chicks. The research results showed that the treatments  significantly affected the fertility of spermatozoa (P < 0.05).  The highest  fertility of  spermatozoa  was  found in the ringer lactate diluter (74.73 %), followed by the ringer dextrose (71.58 %), and physiological NaCl 0.9 % (65.79 %).  The highest fertility period produced by ringer dextrose diluter was 15.6 days, and ringer lactate for 15.3 days.
Keywords : Semen, diluter, local chicken
I . PENDAHULUAN
Upaya  pengembangbiakan  ternak  ayam pada  umumnya  masih  menggunakan  cara konvensional,  yaitu  melalui  perkawinan  secara alam.  Campur  tangan  oleh  peternak  dalam  hal sistem  perkawinan    ini  masih  sangat  minim, sehingga efisiensi produksi rendah dan memberikan peluang terjadinya inbreeding yang relatif  tinggi.  Dampaknya  akan  menurunkan kemampuan  produksi,  dimana  pertumbuhan lambat dan produksi telur makin menurun bagi generasi berikutnya.
Pemeliharaan ayam secara intensif yang dilakukan  pada  kandang  individual,  seekor pejantan  hanya  dapat  melakukan  kawin  alam secara bergiliran dari suatu kandang ke kandang yang lain.  Disamping itu untuk pengadaan telur tetas  sebagai  sumber  bibit  ayam  untuk peremajaan  masih  merupakan  suatu  kendala melalui  perkawinan  secara  alam,  karena memerlukan  pejantan  unggul  dalam  jumlah yang  banyak. Hal ini dapat memperbesar biaya produksi untuk pemeliharaan pejantan.
Untuk  mengatasi  kendala  tersebut,  salah satu alternatif yang dapat dilakukan yaitu dengan penerapan  bioteknologi  dalam  bidang  reproduksi ternak  dengan  melakukan  konservasi  semen  dan penerapan teknologi  Inseminasi Buatan (IB) pada
ayam. Dengan cara ini semen dari seekor pejantan dapat diencerkan untuk mengawini   sekitar tujuh belas ekor betina (Bahr dan Bakst, 1987).
Inseminasi buatan pada unggas merupakan salah satu teknologi yang diharapkan dapat  memperbaiki  produktivitas  ayam,  dan merupakan teknik yang berharga dalam industri peternakan unggas maupun dalam riset penelitian. Dengan  sistem  ini  dapat  diprogramkan    upaya untuk  mendapatkan  bibit  dan  DOC  ( day  old chick ) dalam jumlah banyak dengan umur sama dalam waktu pendek.
Informasi  tentang  kualitas  semen  ayam melalui  konservasi  dengan  berbagai  pengencer semen  dan  penerapan  teknologi  inseminasi buatan    untuk  mengetahui  periode  fertil  dan fertilitas spermatozoa ayam yang terkait dengan interval  pelaksanaan  inseminasi  belum  banyak diketahui, dan masih banyak perbedaan pendapat diantara  peneliti  terdahulu  dalam  penentuan interval pelaksanaan IB yang tepat.

## II.  BAHAN DAN METODE
Ternak  percobaan  yang  digunakan terdiri dari 6 ekor ayam jantan dewasa berumur 10  -  12  bulan  sebagai  sumber  semen,  dan inseminasi  buatan  dilakukan  terhadap  45  ekor ayam betina dewasa umur 6 bulan yang sedang berada  pada  periode  produksi.  Ternak  tersebut
1) Staf  Pengajar  pada  Program  Studi  Produksi  Ternak  Fakultas Pertanian Universitas Tadulako, Palu.
ditempatkan  dalam  kandang  individual  yang terbuat  dari  terali  besi,  dan  masing-masing petak  dilengkapi  dengan  tempat  makan  dan minum.  Ukuran  kandang;  untuk  ayam  jantan adalah  panjang  60  cm,  lebar  35  cm  dan  tinggi 50 cm, sedangkan untuk ayam betina berukuran panjang  40  cm,  lebar  30  cm  dan  tinggi  40  cm. Ternak percobaan diberi pakan berupa campuran  dedak  halus,  jagung  dan  pakan komersil „Superfeed‟ (PT Cheil Jedang Indonesia) dengan perbandingan 15:50:35 (as feed) sebanyak 120  gram  per  hari  per  ekor.  Pemberian  pakan dilakukan  dua  kali  sehari  (pagi  dan  sore) sedangkan air minum diberikan secara ad - libitum. Peralatan yang digunakan untuk penampungan,  evaluasi  semen  dan  inseminasi buatan  adalah:  mikroskop,  tabung  berskala, termos, gelas obyek, gelas cover, batang pengaduk, kertas  pH,  haemocytometer,  alat  hitung,  pemanas bunsen,  pipet,  spuit  ukuran  1  ml,  gelas  ukur, tissue,    mesin  tetas  dan  alat  peneropong  telur. Bahan-bahan yang  digunakan meliputi pengencer semen  (NaCl  Fisiologis,  Ringer  Laktat  dan Ringer Dextrose), eosin, dan alkohol.
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  kandang percobaan  dan  Laboratorium  Reproduksi    dan Pemuliaan  Tenak  Jurusan  Peternakan  Fakultas Pertanian Universitas Tadulako, didisain menggunakan Rancangan Acak Lengkap
(RAL) dengan tiga perlakuan pengencer semen.
Masing-masing perlakuan diuji dengan 10 ekor ayam  betina  sebagai  ulangan  untuk  mengamati periode  fertil  dan  fertilitas  spermatozoa  pasca inseminasi buatan.
Rangkaian  penelitian  dibagi  dalam beberapa  tahap sebagai berikut :
1. Evaluasi Semen. Evaluasi  untuk  mengetahui  kualitas  semen ayam  yang    digunakan  dilakukan  dengan cara  evaluasi semen segar dan semen  cair. Semen  dari  6  ekor  ayam  jantan  ditampung dengan  cara  pengurutan  ke  dalam  tabung berskala, kemudian diperiksa secara makroskopis  dan  mikroskopis.  Pemeriksaan makroskopis meliputi volume, warna, konsistensi  dan  pH  semen,  sedangkan pemeriksaan  mikroskopis  meliputi  gerakan massa, konsentrasi spermatozoa total, motilitas dan abnormalitas semen.
2.  Pengenceran Semen
Hasil  penilaian  semen  yang  meliputi  : volume,  konsentrasi  spermatozoa  total,  dan motilitas  spermatozoa  dijadikan  sebagai penentu  kadar  pengenceran  semen.  Semen yang berkualitas baik selanjutnya diencerkan dengan pengencer sampai mencapai  konsentrasi  150  juta  spermatozoa motil progresif per 0,1 ml semen.
Pemeriksaan  motilitas  dilakukan  untuk menentukan  motilitas  sampai  50  %;  yang kurang dari itu tidak digunakan untuk IB. 3.  Pelaksanaan Inseminasi
Inseminasi  atau  deposisi  semen  pada  ayam betina  dilakukan  secara  manual  dengan menggunakan  pipet  inseminasi  berupa  spuit injeksi  tuberkulin.  Ayam  betina  dipegang seperti pada proses penampungan semen ayam jantan,  kecuali  posisi  bagian  posterior    ayam betina  sedikit  diangkat  dari  sumbu  badannya sehingga  bagian  posterior  lebih  tinggi    dari bagian  anteriornya.  Ayam  betina  dirangsang dengan  pengurutan  seperti  pada  proses penampungan  semen  supaya  ayam  betina tersebut  mengeluarkan  vaginanya  dari  rongga kloaka.  IB  dilakukan  sekali  pada  setiap  ayam betina  dengan    mendeposisikan  semen  secara intrauterin dengan dosis 150 juta spermatozoa motil progresif per 0,1 ml semen.
4.  Koleksi dan Inkubasi Telur Pengumpulan telur hasil IB dilakukan mulai hari kedua setelah inseminasi sampai   pada hari terakhir menghasilkan telur fertil dalam satu periode peneluran yang dibagi ke dalam empat  periode  koleksi,  masing-masing empat hari. Telur yang diperoleh dibersihkan  menggunakan  lap  kain  yang sudah  dicelupkan  di  air  hangat,  kemudian ditandai  menurut  kelompok  perlakuan  yang diberikan.  Setelah  dikoleksi  selama  empat hari,  telur  diinkubasikan  kedalam  inkubator (38,5  –  40,5  C)  dan  kelembaban  75  %. Selama  inkubasi, telur  diputar  3  kali  sehari, mulai hari ke- 4  sampai ke- 17.
5.   Parameter dan prosedur pengambilan data
Fertilitas  Spermatozoa.
Fertilitas  spermatozoa  diukur  dengan  cara menghitung persentase telur yang memperlihatkan adanya perkembangan embrio  dari  sejumlah  telur  yang  ditetaskan
tanpa  memperhatikan  apakah  telur  tersebut akan  menetas  atau  tidak,  dan  perkembangan embrio di dalam telur tersebut diamati setelah 5 hari masa inkubasi.  Fertilitas telur dihitung menggunakan rumus  sebagai berikut :
6.   Periode  Fertil  Spermatozoa Periode  fertil  spermatozoa  dihitung  mulai sejak  hari  pelaksanaan  inseminasi  hingga hari  terakhir  menghasilkan  telur  fertil.  Data periode  fertil  diperoleh  dengan  mengamati telur yang telah dieramkan hingga bertunas, dan  telur  yang  tidak  bertunas  dalam  kurun waktu  tertentu  setelah  inseminasi.    Dengan cara  tersebut,  maka  akan  diperoleh  data periode fertil spermatozoa sebagai manifestasi kemampuan spermatozoa  membuahi sel telur pasca  inseminasi.  Pengamatan  periode  fertil spermatozoa dilakukan pada hari ke- 5 masa penetasan dengan melihat adanya perkembangan embrio dini dengan menggunakan  teropong  telur.  Telur  fertil akan  memperlihatkan  adanya  gumpalan merah  atau  penyebaran  pembuluh  darah, sedang  yang  tidak  fertil  tidak  menunjukkan tanda-tanda tersebut.
7.  Analisa Data Data  kuantitatif  hasil  pengamatan  dianalisis secara  statistik  dengan  sidik  ragam  dan untuk  menguji  perbedaan  antar  perlakuan digunakan Uji  Beda Nyata Terkecil (BNT).
Model linier yang digunakan adalah sebagai berikut  :
Keterangan   :
Y =   Respon yang diamati selama penelitian i =   1, 2, 3 j =   1, 2, 3, ... 12 µ =   Nilai tengah umum τ i = Pengaruh perlakuan ke- i ε ij = Pengaruh    galat    percobaan  karena ulangan ke-j yang ada pada perlakuan ke-i

## III.  HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1.  Pengaruh  Pengecer  Semen  Terhadap Fertilitas  Spermatozoa  ayam  Pasca Inseminasi Buatan
Rataan hasil pengamatan fertilitas spermatozoa  ayam  percobaan  dalam  berbagai pengencer selama penelitian tertera pada Tabel 1.
Hasil  analisis  statistik  sidik  ragam menunjukkan  hasil  perlakuan  berpengaruh nyata (P < 0,05) terhadap fertilitas spermatozoa. Berdasarkan uji lanjut beda nyata terkecil (BNT) menunjukkan bahwa  perlakuan pengencer Ringer  Laktat  tidak  berbeda  nyata  dengan pengencer Ringer Dextrose, tetapi berbeda nyata dengan  pengencer  NaCl  Fisiologis  0,9  %.  dan pengencer Ringer Dextrose  tidak berbeda  nyata dengan  pengencer  NaCl  Fisiologis  0,9  %.    Hal ini disebabkan karena pengencer yang digunakan  mengandung  sumber  energi  dan unsur-unsur lain yang berfungsi untuk mempertahankan hidup spermatozoa,  kemampuan setiap  bahan  pengencer  untuk  memberikan fertilitas  spermatozoa  berbeda-beda  pula  antara pengencer  satu  dengan  pengencer  lainnya. Ketiga  pengencer  tersebut  mengandung  zat-zat makanan  antara  lain  sumber  energi  dan unsur - unsur lain yang berfungsi untuk mempertahankan hidup spermatozoa.  Pengencer Ringer  Dextrose  memiliki  substrat  nutrisi  yaitu berupa  glukosa  yang  berfungsi  sebagai  sumber energi  bagi  spermatozoa.    Menurut  Sexton  dan Fewlass  (1978),  plasma  semen  merupakan medium spermatozoa untuk melakukan aktivitasnya.  Jika  didalam  plasma  semen kekurangan  energi  maka motilitas  spermatozoa berkurang dan akan menurunkan daya fertilitas spermatozoa.  Ringer  Dextrose  mengandung komponen  yang  dapat  menyediakan  zat makanan  bagi  spermatozoa  khususnya  sebagai sumber  energi  .  Na-Laktat  pada  Ringer  Laktat diperlukan  untuk  memenuhi  kebutuhan  ion bikarbonat yang berfungsi untuk mempertahankan keasaman  larutan  atau  sebagai  penyangga  larutan
Jumlah telur fertil
Fertilitas telur    = x 100 % Jumlah telur yang ditetaskan
Y ij = µ  +  τ i +   ε ij
Tabel  1.  Rataan  Fertilitas  Spermatozoa  dalam  Setiap
Perlakuan Pengencer Semen. Jenis pengencer semen Fertilitas spermatozoa (%) NaCl Fisiologis 0,9 % Ringer Laktat Ringer Dextrose 65,79 a 74,73 b 71,58 ab
serta  mempertahankan  tekanan  osmotik  larutan. Asam  laktat  tersebut  dinetralisir  oleh  NaCl sehingga  pH  larutan  tetap  seimbang.
Fertilitas merupakan suatu manifestasi dari proses  mekanisme  fertilisasi  spermatozoa  dalam saluran  reproduksi  betina.  Apabila  dilihat  secara anatomis  didalam  saluran  reproduksi  betina  dapat dikemukakan  bahwa  peranan  pengencer  semen tidak  berpengaruh  secara  langsung  dalam  proses fertilisasi,  diduga  karena  semen  yang  diencerkan tidak disimpan maka proses metabolisme spermatozoa belum terjadi.  Hal ini sejalan dengan pendapat Sexton dan Fewlass (1978), unsur-unsur kimia  dan  substrat  nutrisi  pengencer  semen  akan berpengaruh terhadap proses metabolisme spermatozoa  pada  semen  yang  disimpan  cukup lama sebelum diinseminasikan.
Setelah semen diinseminasikan, spermatozoa  akan  menyebar  kedalam  saluran reproduksi  betina  yaitu  kedaerah  uterovaginal kemudian  keinfundibulum.    Akan  tetapi hanya spermatozoa potensial yang mampu melakukan fertilisasi  akibat  terjadinya  seleksi  selama berjalan dalam saluran kelamin betina. Spermatozoa    memasuki sperm  nest pertama didaerah  Uterovaginal  Junction,  maka  peranan pengercer  dalam  mempertahankan  derajat keasaman larutan (pH) bagi spermatozoa sangat dibutuhkan (Zavaleta dan Ogaswara, 1987).
Spermatozoa  yang  dideposisikan  akan segera menempati Uterovaginal Junction, spermatozoa mendapatkan nutrisi dan
mempertahankan kemampuan fertilitasnya ditempat  tersebut.    Selanjutnya  spermatozoa  akan melakukan  pergerakan  menuju  infundibulum setelah terjadi oviposisi yang akhirnya spermatozoa  akan  berakumulasi  di sperm  nest infundibulum  untuk  melakukan  fertilisasi.  Proses pergerakan dan fertilitas spermatozoa  dipengaruhi oleh  jumlah  spermatozoa  yang  berada  di sperm nest infundibulum (Zavaleta dan ogaswara, 1987).
3.2.    Pengaruh  Pengencer  Semen  Terhadap Periode  Fertil  Spermatozoa  Ayam Pasca Inseminasi Buatan
Rataan hasil  pengamatan  periode  fertil spermatozoa  ayam  percobaan  dari  berbagai  jenis pengencer selama penelitian tertera pada Tabel 2.
Hasil  analisis  data  melalui  sidik  ragam menunjukkan bahwa jenis pengencer semen yang digunakan  (Ringer Laktat,  Ringer Dextrose dan NaCL  0,9  %,)  memberikan  pengaruh  nyata
(P  <  0,05)  terhadap  periode  fertil  spermatozoa ayam buras.  Berdasarkan  uji  lanjut  beda  nyata terkecil  (BNT),  menunjukkan  bahwa  perlakuan pengencer Ringer Dextrose  berbeda sangat nyata dengan  pengencer  NaCl  Fisiologis  0,9  %, pengencer  Ringer  Laktat  berbeda    nyata  dengan pengencer  NaCl  Fisiologis  0,9  %,  tetapi pengencer  Ringer  Dextrose  tidak  berbeda  nyata dengan  pengencer  Ringer  Laktat.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  pengencer  Ringer  Dextrose dan  Ringer  Laktat  memiliki  kemampuan  yang lebih  baik  dalam  proses  fertilsasi,  kedua pengencer  tersebut  dapat  memberikan  periode fertil  yang  cukup  lama  dibandingkan  dengan pengencer  NaCl    0,9  %.  Hal  ini  disebabkan karena larutan Ringer Dextrose dan Ringer Laktat memiliki  substrat  nutrisi  yang  lebih  baik  bagi spermatozoa  yang  tidak  dimiliki  oleh  larutan fisiologis NaCl Gomes (1977).
Periode  fertil  diukur  mulai  dari  hari kedua  setelah  inseminasi  sampai  pada  hari terakhir telur fertil, periode fertil juga merupakan  suatu  manifestasi  dari  proses fertilisasi.  Dalam  penelitian  ini  pengencer  tidak berperan  langsung  dalam  proses  fertilisasi namun hanya berperan dalam penambahan dosis IB.  Menurut  Ridwan  (2002),  lama  periode fertil  spermatozoa  ayam  dipengaruhi  oleh ketersediaan spermatozoa yang dapat membuahi sel  telur  didalam sperm  nest. Lamanya kemampuan  hidup  spermatozoa  ayam  dalam saluran reproduksi betina mencapai 32 hari, akan tetapi daya  fertilitasnya hanya mencapai 21 hari setelah inseminasi (Kismiati, 1999).
Proses  pengenceran  semen  secara langsung  akan  mempengaruhi  metabolisme spermatozoa  untuk  mempertahankan  daya hidupnya  sebelum  dideposisikan,  sehingga diharapkan  mampu  melakukan  pergerakan untuk  membuahi  sel  telur.    Semakin  banyak spermatozoa  motil  progresif    yang  mencapai C halaziferous  region pada  saluran  reproduksi betina  akan  semakin  panjang  periode  fertil
Tabel  2.    Rataan  Periode  Fertil  Spermatozoa  Ayam  setiap Perlakuan  Pengencer Semen.
Jenis Pengencer Semen
Periode Fertil Spermatozoa NaCl Fisiologis 0,9 % Ringer Laktat Ringer Dextrose …..hari….. 13,70 a
15,30 b 15,60 b
spermatozoa,  karena sperm  nest pada  saluran reproduksi  ayam  betina  memiliki  sistem pelepasan  spermatozoa  untuk  proses  fertilisasi secara bertahap (Ridwan, 2002).
Faktor  yang  membatasi  periode  fertil spermatozoa  setelah  berada  dalam  saluran reproduksi betina, selain masa hidup spermatozoa  itu  sendiri,  adalah  pengurangan jumlah spermatozoa yang cukup drastis selama periode  bertelur.  Spermatozoa  yang  telah disimpan didalam Uterovaginal Junction, dilepaskan  secara  bertahap  atau  sedikit  demi sedikit dalam lumen uterus. Pelepasan spermatozoa  ini  terjadi  sekitar  waktu  ovulasi dan  oviposisi.  Segera  setelah  spermatozoa dilepas,  aktivitas  metabolisme  dan  motilitas spermatozoa  meningkat,  dan  diduga  setelah terjadi  proses  penurunan  stabilitas  plasmalema sehingga  daya  hidup  spermatozoa  semakin menurun. Hal ini sesuai dengan hasil pengamatan yang  dilaporkan  oleh  Fuji  dan  Tamura    (1963) dalam  Gilbert  (1980),  bahwa  spermatozoa dijumpai  dalam  jumlah  besar  dalam  kelenjar “ Uterovaginal  Junction ”  setelah  inseminasi, dan  dalam    jumlah    yang  semakin  berkurang sampai  telur  fertil  yang  terakhir  dikeluarkan. Hafez  (1993),  bahkan  mengemukakan  bahwa spermatozoa  dapat  kehilangan  fertilitasnya sekalipun  secara  visual  masih  hidup.  Ukuran
keberhasilan  penerapan  teknologi  inseminasi buatan  pada  ayam  adalah    banyaknya    telur fertil    sebagai  hasil  dari  satu  kali  inseminasi. Dengan  demikian  efisiensi  waktu  dan  biaya yang  dicurahkan  dalam  penerapan    inseminasi buatan  tersebut semakin  efektif.

## IV.  KESIMPULAN DAN SARAN

## 4.1.  Kesimpulan
Bedasarkan data hasil penelitian pengaruh  konservasi  semen  menggunakan berbagai  pengencer  terhadap  periode  fertil, fertilitas  dan  daya  tetas  telur    ayam    pasca inseminasi buatan diperoleh kesimpulan bahwa : 1. Ketiga  pengencer  semen  memberikan pengaruh nyata (P < 0,05) terhadap periode fertil dan fertilitas spermatozoa.
2. Ketiga pengencer semen tersebut menghasilkan  periode  fertil  dan  fertilitas spermatozoa yang  cukup  tinggi pasca inseminasi buatan
4.2.  Saran
Perlu    dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  interval  pelaksanaan  inseminasi buatan sehingga diperoleh acuan pelaksanaan IB yang efisien dan tepat.

## DAFTAR    PUSTAKA
Bahr  J.M  dan  Bakst,  M.R.,  1987. Poultry .  In  E.S.E.  Hafez,  ed  Reproduction  in  farm  animal.  5 th Ed.    Lea  and  Febiger,
Philadelphia pp  379 - 388
Gilbert., A. B.,  1980. Poultry . In E. S. E.  Hafez  (ed)  Reproduction in farm animals.  Lea  and  Febiger.  Philadelphia.
Gomes, W.R. 1977. Artificial insemination . Dalam H.H. Cole and P.T. Cupps ed.  Reproduction in Animals. Academic Press, New York and London.
Hafez,  E.S.E.  1993 . Artificial insemination . In E.S.E.  Hafez.  Ed.  Reproduction in Farm Animals. 5 th Edition.  Lea and Febiger.  Philadelpia.
Kismiati, S.  1999 .  Fertilitas telur dan mortalitas embrio ayam kedu hitam pada interval inseminasi yang berbeda .  Jurnal Pengembangan Peternakan Tropis. Universitas Diponegoro.  Semarang.  53 –59.
Ridwan, 2002. Fertil life dan periode fertil spermatozoa ayam buras pasca inseminasi buatan . Tesis Pascasarjana  Universitas Pandjadjaran, Bandung
Sexton,  T.J.,  and  T.A.  Fewlass.  1978. A new  poultry  semen  extenders  :  2.    effectof  diluent  component  on  the  fertilizing capacity on the chicken semen storage at 5 o C. Poultry Science 57 : 277 – 284.
Zavaleta, D. Dan  F.  Ogasawara.  1987. A  review of the mechanism of the release of spermatozoa from storage tubules in the fowl and turkey  oviduct. Word Poultry  Science  Journal   43   :  132   -   139
Inseminasi, 63, 64, 65, 66 semen, 63, 64, 66, 67, 68
spermatozoa, 63, 64, 65, 66, 67, 68