## HUBUNGAN BIOMASSA EPIFIT DENGAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN LAMUN DI PERAIRAN PULAU PRAMUKA, KEPULAUAN SERIBU, DKI JAKARTA
Relationship of Epiphytic Biomass with Antioxidant Activity of Seagrass in Pramuka Island Water, Seribu Islands, DKI Jakarta
Mardiyana 1 *, Hefni Effendi 2 , Nurjanah 3
1Departemen Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB, Jalan Agatis Kampus IPB Darmaga Bogor 16680, Telepon (0251) 8622932 2Pusat Penelitian Lingkungan Hidup IPB, Jalan Lingkar Akademik Kampus IPB Darmaga Bogor 16680 3Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB, Jalan Agatis Kampus
IPB Darmaga Bogor 16680 *Korespondensi: mardiyana27juni89@gmail.com
Diterima 25 Ferbruari 2014/ Disetujui 02 April 2014

## Abstrak
Lamun  menghasilkan  metabolit  sekunder  yang  berperan  dalam  pertahanan  diri  dari  lingkungan maupun dari serangan organisme lain termasuk organisme penempel/epifit. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis hubungan aktivitas antioksidan dengan biomassa epifit daun lamun Thalassia hemprichii yang hidup di Perairan Pulau Pramuka, Kepulauan Seribu, DKI Jakarta. Metode untuk menganalisis aktivitas antioksidan adalah metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil), sedangkan biomassa epifit diperoleh dengan mengerik epifit yang berada di permukaan daun T. hemprichii kemudian ditimbang beratnya per satuan luas daun (mg/cm 2 ). Aktivitas antioksidan daun lamun yang digambarkan dengan nilai IC 50 berkisar antara 563,88-2039,8 mg/L. Korelasi biomassa epifit  dengan IC 50 sebesar 0,99 menunjukkan bahwa biomassa epifit mempengaruhi aktivitas antioksidan lamun.
Kata kunci: aktivitas antioksidan, epifit, Thalassia hemprichii
Abstract
Seagrass  produces  secondary  metabolites  that  play  a  role  in  self  defense  from  the  environment  or from invasion of other organisms including epiphyte organisms. The aim of this study was to analyze the relationship of antioxidant activity with epiphytic biomass Thalassia hemprichii seagrass leaves that lives in the waters of Pramuka Island, Seribu Islands, DKI Jakarta. The antioxidant activity was measured by DPPH (1,1-diphenyl-2 picrylhydrazyl) method while the epiphytic biomass was measured by scraping epiphytes on leaf surfaces and then weighed per unit leaf area (mg/cm 2 ). The antioxidant activity of seagrass illustrated by IC 50 values in the range of 563.88 to 2,039.8 mg/L. The correlation between epiphytic biomass with IC 50 was 0.99 indicating the biomass of epiphytes influenced on antioxidant activity.
Keywords: antioxidant activity, epiphytes, Thalassia hemprichii

## PENDAHULUAN
Reaksi  radikal  bebas  yang  berlebihan  di dalam  tubuh  merupakan  penyebab  penyakit degeneratif  misalnya  jantung,  stroke,  dan kanker (Sen et al . 2010). Tubuh memerlukan suatu  senyawa  untuk  menangkal  pengaruh radikal  bebas  ini.  Senyawa  yang  mampu menyelamatkan  sel-sel  di  dalam  tubuh manusia  dari  bahaya  radikal  bebas  adalah
senyawa antioksidan (Rohmatussolihat 2009). Antioksidan dapat diperoleh dari sumber alami maupun sintetik. Banyak sumber antioksidan alami  yang  diperoleh  dari  laut  contohnya rumput  laut,  spons,  dan  mikroalga  (Hanani et  al .  2005;  Yoon et  al .  2011;  Manivanan et al .  2012).  Salah  satu  sumberdaya  laut  lain yang  masih  belum  banyak  dimanfaatkan  di Indonesia adalah lamun.
Alat  yang  digunakan  adalah  inkubator (Termolina),  alat  sentrifugasi  (Sorvall  T-21), evaporator  putar  (IKA),  oven  (Yamato),  dan spektrofotometer ( ELISA reader ).

## Metode Penelitian
Pengambilan dan Preparasi Sampel Lamun Pengambilan  sampel  daun  lamun dilakukan di Pulau Pramuka, pada stasiun yang telah  ditentukan.  Stasiun  penelitian  terbagi menjadi  tiga  (Gambar  1).  Stasiun  I  terletak di  bagian  barat  daya  pulau  dengan  kondisi perairan  berarus  dan  bergelombang  serta tergolong  daerah  subtidal  dengan  mendapat masukan  limbah  domestik  dari  aktivitas wisata dan pemukiman. Stasiun II terletak di bagian  utara  pulau  dengan  kondisi  perairan berarus  dan  bergelombang  serta  tergolong daerah  subtidal  dengan  lingkungan  sekitar masih alami dan tidak ada aktivitas manusia. Stasiun III di bagian timur pulau merupakan perairan yang tenang dan tergolong intertidal dengan daerah sekitarnya merupakan tempat pembuangan  akhir  (TPA)  dan  pembakaran sampah di Pulau Pramuka.
Daun  lamun  untuk  analisis  dibersihkan dari  pasir  dan  kotoran-kotoran  yang menempel  menggunakan  air  laut,  kemudian dicuci  menggunakan  air  tawar  untuk menghilangkan  garam-garam  yang  masih menempel  pada  daun  lamun.  Sampel  daun lamun  yang  telah  dibersihkan  dikeringkan
Lamun  adalah  tumbuhan  berbunga (Angiospermae)  yang  dapat  tumbuh  dengan baik  pada  lingkungan  laut  dangkal.  Lamun senantiasa membentuk hamparan permadani di  laut  yang  dapat  terdiri  dari  satu  spesies (monospesifik;  banyak  terdapat  di  daerah temperate)  atau  lebih  dari  satu  spesies (multispesifik;  banyak  terdapat  di  daerah tropis)  yang  selanjutnya  disebut  padang lamun  (Tangke  2010).  Padang  lamun  ini dimanfaatkan  oleh  organisme  laut  sebagai tempat mencari makan, berlindung, maupun tempat bereproduksi.
Lamun  mampu  menghasilkan  metabolit sekunder  (Choi et  al .  2009;  Regalado et  al. 2012).  Metabolit  sekunder  yang  umumnya diproduksi  oleh  organisme  berperan  untuk pertahanan diri dari lingkungan maupun dari serangan organisme lain termasuk organisme penempel/epifit, dan mencegah adanya infeksi dari patogen (Murniasih 2003; Marhaeni et al . 2010).  Senyawa  antioksidan  yang  dihasilkan oleh  lamun Posidonia  oceanica berfungsi sebagai  senyawa  pertahanan  diri  terhadap stres  yang  ditimbulkan  adanya  biota  epifit Lophocladia  lallemandii (Sureda et al . 2008). Lamun  jenis Thalassia  hemprichii merupakan  salah  satu  jenis  lamun  yang banyak ditemukan di Perairan Pulau Pramuka, tetapi  pemanfaatannya  secara  langsung  oleh masyarakat masih jarang dilakukan sehingga perlu upaya eksplorasi terhadap jenis ini agar bisa dimanfaatkan oleh masyarakat. Penelitian ini  bertujuan  untuk  menentukan  hubungan aktivitas  antioksidan  dengan  biomassa  epifit daun  lamun T.  hemprichii yang  hidup  di Perairan Pulau Pramuka.

## BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan  penelitian  terdiri  atas  sampel daun lamun T. hemprichii dari Perairan Pulau Pramuka, bahan kimia untuk ekstraksi adalah metanol  pro-analisis.  Bahan  lainnya  adalah pereaksi  Dragendorff,  pereaksi  Meyer,  dan pereaksi  Wagner,  serbuk  magnesium,  amil alkohol, alkohol, etanol 70%, FeCl 3 , HCl 2 N.
Gambar 1 Lokasi pengambilan sampel.
dengan  sinar  matahari  sampai  kering kemudian  dibawa  ke  laboratorium  untuk analisis  kandungan  senyawa  bioaktif  dan aktivitas antioksidan, sedangkan sampel daun lamun untuk analisis biomassa epifit langsung diamati dalam keadaan segar.

## Pengamatan Biomassa Epifit Lamun
Pengamatan biomassa epifit pada lamun dilakukan  dengan  mengambil  sampel  daun lamun sebanyak 5 helai tiap ulangannya pada tiap stasiun. Lamun yang telah dikumpulkan dikerik epifitnya menggunakan mistar plastik dan  dikumpulkan  dalam  wadah,  kemudian luas  daun  yang  dikerik    diukur.  Epifit  yang terkumpul dalam wadah dipindahkan dalam cawan  porselin  dan  dikeringkan  pada  suhu 105°C  selama  2  jam.  Berat  cawan  kosong dan yang  berisi epifit  kering ditimbang, lalu diukur biomassa epifit dengan persamaan:
Keterangan: A 1 = (berat cawan berisi epifit kering). A 0 = (berat cawan kosong). L    = (luas daun lamun).

## Parameter Fisika-Kimia Perairan
Parameter fisika dan kimia perairan yang diukur  adalah  suhu,  kedalaman,  kecerahan dan  kecepatan  arus  perairan  yang  dilakukan secara insitu.

## Ekstraksi Bahan Aktif
Sebanyak  10  g  bubuk  kasar  direndam (maserasi)  dalam  80  mL  metanol  (1:8) selama  48  jam  dalam  suhu  ruang.  Sampel hasil  ekstraksi  disaring  dengan  kertas  saring Whatman nomor 42, pelarut diuapkan dengan vacuum  rotary  evaporator pada  suhu  40°C.
Ekstrak kasar yang diperoleh disimpan dalam lemari  pendingin  sampai  hendak  digunakan untuk pengujian antioksidan.

## Uji Fitokimia (Harborne 1987)
Analisis keberadaan komponen metabolit
sekunder dalam ekstrak daun lamun dilakukan melalui serangkaian uji fitokimia. Uji fitokimia dilakukan  secara  kualitatif  yang  meliputi  uji alkaloid,  uji  steroid/triterpenoid,  flavonoid, fenol hidrokuinon, tanin, dan saponin.

## Uji Alkaloid
Sampel sebanyak 0,5 g dilarutkan dalam beberapa tetes asam sulfat 2 N kemudian diuji dengan  tiga  pereaksi  alkaloid,  yaitu  pereaksi Dragendorff,  pereaksi  Meyer,  dan  pereaksi Wagner.  Hasil  uji  dinyatakan  positif  bila dengan  pereaksi  Meyer  terbentuk  endapan putih  kekuningan,  endapan  coklat  dengan pereaksi Wagner dan endapan merah hingga jingga dengan pereaksi Dragendorff.

## Uji Flavonoid
Sampel  sebanyak  0,5  g  ditambahkan serbuk  magnesium  0,1  mg  dan  0,4  mL  amil alkohol  (campuran  asam  klorida  37%  dan etanol  95%  dengan  volume  yang  sama) dan  4  mL  alkohol  kemudian  campuran dikocok.  Warna  merah,  kuning  atau  jingga yang  terbentuk  pada  lapisan  amil  alkohol menunjukkan adanya flavonoid.

## Uji Fenol Hidrokuinon
Sampel  sebanyak  1  g  diekstrak  dengan 20  mL  etanol  70%.  Larutan  yang  dihasilkan diambil sebanyak 1 mL kemudian ditambahkan 2 tetes larutan FeCl 3 5%. Terbentuknya warna hijau  atau  hijau  biru  menunjukkan  adanya senyawa fenol dalam bahan.

## Uji Tanin
Sampel sebanyak 0,5 g ditambahkan FeCl 3 kemudian  campuran  dihomogenkan.  Reaksi positif  adanya  tanin  ditunjukkan  dengan terbentuknya warna merah pada campuran.

## Uji Saponin
Saponin dapat dideteksi dengan uji busa dalam  air  panas.  Busa  yang  stabil  selama  30 menit  dan  tidak  hilang  pada  penambahan  1 tetes HCl 2 N menunjukkan adanya saponin.
Biomassa epifit = A 1 − A 0 L
Uji  Aktivitas  Antioksidan  dengan  Metode DPPH (Aranda et al . 2009)
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan berdasarkan  kemampuan  sampel  yang digunakan  dalam  mereduksi  radikal  bebas stabil DPPH. Sebanyak 1 mg ekstrak kasar lalu ditambahkan  metanol  dengan  perbandingan 1:1.000.  Sebanyak  1,3  mg  DPPH  diencerkan dengan  25  mL  etanol.  Etanol  diisikan  ke dalam  microwell  plate  yang  telah  disiapkan sebanyak 1 μL. Langkah selanjutnya pengisian ekstrak  dengan  beberapa  konsentrasi  (32,5; 62,5; 125; 500; 1000 mg/L) dan penambahan larutan  DPPH.  Campuran  dihomogenkan dan diinkubasi pada suhu 37°C dalam waktu 30  menit.  Serapan  yang  dihasilkan  diukur dengan ELISA reader pada panjang gelombang 517  nm.  Antioksidan  sintetik  vitamin  C digunakan sebagai kontrol positif.
Persentase  penghambatan  aktivitas radikal bebas diperoleh dari nilai absorbansi sampel.  Persamaan  regresi  diperoleh  dari hubungan  antara  konsentrasi  sampel  dan presentase  penghambatan  aktivitas  radikal bebas.  Nilai  konsentrasi  penghambatan aktivitas  radikal  bebas  sebanyak  50%  (IC 50 ) dihitung  dengan  menggunakan  persamaan regresi.  Nilai  IC 50 diperoleh  dengan memasukkan  y=50  serta  nilai  A  dan  B  yang telah  diketahui.  Nilai  x  sebagai  IC 50 dapat dihitung dengan persamaan:
Keterangan : y = persen inhibisi x = konsentrasi sampel (mg/L) A = slope B = intercept

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan uji ANOVA untuk menganalisis data kondisi perairan,  biomassa  epifit,  dan  aktivitas antioksidan  antar  stasiun.  Jika  hasil  analisis berbeda  nyata  dilanjutkan  dengan  Uji  Beda Nyata  Terkecil  (BNT  p<0,05).  Analisis  data untuk mengetahui hubungan antara biomassa epifit dengan aktivitas antioksidan pada lamun adalah  korelasi pearson. Analisis  dilakukan dengan bantuan program SPSS 14.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Biomassa  Epifit  pada  Daun T.  hemprichii serta Kondisi Perairan Pulau Pramuka
Biomassa  epifit  pada  daun  lamun  yaitu (14,71-68,66)  mg/cm 2 .  Biomassa  epifit  pada stasiun  II  dan  III  menunjukkan  perbedaan yang nyata (p<0,05). Rata-rata biomassa epifit terendah  adalah  25,93  mg/cm 2 pada  stasiun II,  sedangkan  tertinggi  adalah  62,94  mg/cm 2 pada  stasiun  III  (Tabel  1).  Keberadaan  epifit secara  umum  dipengaruhi  oleh  banyak  hal salah satunya adalah kecepatan arus perairan. Stasiun  II  memiliki  kecepatan  arus  paling tinggi  dibandingkan  dengan  stasiun  lainnya,
y = A + B ln (x)
Tabel  1  Kondisi  perairan  dan  biomassa  epifit  serta  fauna  pemangsa  lamun
T. hemprichii di Pulau Pramuka Parameter Stasiun I II III Suhu (°C) 33,33±3,21 33,33±3,06 35,67±2,89 Kedalaman (cm)* 35,33±13,32 a 50,67±0,58 a 17,00±6,93 b Kecerahan dasar dasar dasar Kecepatan arus (m/s)* 0,04±0,00 a 0,09±0,01 b 0,00 c
Biomassa epifit (mg/cm 2 )* 42,76±16,97 ab
25,93±9,83 a 62,94±6,73 b Fauna ++ +++ + Keterangan:  Simbol  huruf  superscript  yang  berbeda  menunjukkan  perbedaan    yang nyata pada taraf uji 5% (uji beda nyata terkecil); tanda (+) menunjukkan banyaknya fauna (semakin banyak tanda (+)  semakin banyak faunanya).
sehingga  epifit  memiliki  peluang  menempel lebih kecil dan biomassanya ditemukan paling sedikit  dibandingkan  stasiun  lainnya.  Stasiun III  arusnya  rendah  atau  perairannya  tenang sehingga  epifit  akan  lebih  banyak  ditemukan di bagian tumbuhan lamun yang ada di stasiun ini.  Jenis  epifit  yang  terlihat  menempel  pada daun T. hemprichii terdiri dari mikroalga dan telur  ikan. Menurut Wenno (2004) lamun yang hidup dalam air tenang memiliki lebih banyak epifit  daripada  yang  hidup  dalam  air  berarus tinggi.
Komponen Bioaktif T. hemprichii
Komponen  bioaktif  yang  terkandung dalam  daun T.  hemprichii yaitu  alkaloid, flavonoid,  fenol  hidrokuinon,  tanin,  dan saponin.  Hasil  analisis  menunjukkan keberadaan  komponen  bioaktif  yang terkandung dalam daun lamun, yaitu alkaloid, flavonoid,  fenol  hidrokuinon,  steroid,  tanin, dan  saponin  (Tabel  2).  Senyawa-senyawa yang  berpotensi  sebagai  antioksidan  dapat diprediksi  dari  golongan  fenolat,  flavonoid dan  alkaloid,  yang  merupakan  senyawa- senyawa polar (Madhujith dan Shahidi 2005; Nurjanah et  al .  2011).  Senyawa  tanin  juga berpotensi  sebagai  senyawa  antioksidan.
Menurut Malangngi et al . (2012), kandungan tanin  yang  semakin  banyak  maka  aktivitas antioksidannya  juga  semakin  besar  karena tanin  tersusun  dari  senyawa  polifenol  yang memiliki aktivitas penangkap radikal bebas.
Tabel 2 menunjukkan bahwa kandungan senyawa  bioaktif  yang  berperan  dalam antioksidan  ditemukan  di  seluruh  stasiun
kecuali  senyawa  tanin  yang  hanya  terdapat pada  lamun  yang  hidup  di  perairan  stasiun III  saja,  hal  ini  diduga  dipengaruhi  oleh kedalaman  perairan  stasiun  III  yang  sangat rendah  yang  menyebabkan  suhu  perairan yang  lebih  tinggi  mencapai  39°C  dibanding stasiun  lain  dan  juga  lebih  terpapar  sinar matahari  langsung.  Hasil  penelitian  Mossi et  al .  (2009)  menunjukkan  adanya  korelasi antara  kandungan  tanin  dengan  suhu. Perairan yang memiliki suhu tinggi memiliki kandungan tanin yang lebih tinggi pula pada Maytenus ilicifolia .
Hubungan  Biomassa  Epifit  terhadap Aktivitas Antioksidan Thalassia hemprichii Nilai  IC 50 ekstrak  daun T.  hemprichii berkisar  antara  (563,88-2039,8)  mg/L (Gambar  2).  Molyneux  (2004)  menyatakan bahwa  aktivitas  antioksidan  ini  masih tergolong lemah karena nilai IC 50 lebih besar dari 200 ppm. Hasil tersebut disebabkan karena ekstrak yang diuji masih berupa ekstrak kasar sehingga  perlu  dilakukan  proses  pemurnian. Ekstrak  kasar  ini  diduga  mengandung senyawa  aktif  lain  yang  tidak  memiliki aktivitas  antioksidan  (Nurjanah et  al .  2011). Adanya  epifit  pada  daun  lamun  sebenarnya memberikan suatu tekanan stres biologi yang dapat merangsang lamun untuk memproduksi senyawa kimia perlindungan diri. Senyawa ini yang  berperan  dalam  aktivitas  antioksidan. Atmoko  dan  Ma’ruf  (2009)  melaporkan bahwa  senyawa  kimia  yang  bermanfaat dari  tumbuhan  adalah  hasil  dari  metabolit sekunder  misalnya  fenolik  yang  berfungsi
Tabel 2 Komponen bioaktif ekstrak metanol daun T. hemprichii Komponen Bioaktif Stasiun I Stasiun II Stasiun III Alkaloid + + + Flavonoid + + + Fenol Hidrokuinon + + + Saponin + + + Tanin - - + Keterangan:  Tanda  (-)  menunjukkan  tidak  adanya  kandungan  senyawa    fitokimia, sedangkan tanda (+) menunjukkan adanya kandungan senyawa fitokimia.
sebagai  pelindung  terhadap  serangan  atau gangguan  yang  ada  di  lingkungan,  sebagai antibiotik,  dan  juga  sebagai  antioksidan. Sureda et  al .  (2008)  melaporkan  organisme epifit  dapat  menyebabkan  kerusakan  pada daun  lamun  tersebut  sebagai  hasil  dari  stres oksidatif  dan  kerusakan  sel.  Hasil  analisis korelasi Pearson menunjukkan bahwa antara biomassa  epifit  dengan  aktivitas  antioksidan (IC 50 ) pada daun T. hemprichii memiliki nilai r=  0,99.  Hubungan  positif  ini  menunjukkan bahwa  semakin  tinggi  biomassa  epifit  maka nilai IC 50 akan semakin tinggi sebagai akibat adanya  lapisan  epifit  pada  daun  lamun. Lapisan epifit  dapat melindungi daun lamun dari paparan sinar UV matahari, tetapi epifit dengan  biomassa  terlalu  tinggi  juga  dapat menghalangi  sinar  matahari  sehingga  dapat mengganggu  proses  fotosintesis.  Proses fotosintesis  menghasilkan  senyawa  yang berperan  untuk  pertumbuhan  dan  senyawa lain yang tidak berperan dalam pertumbuhan atau yang dikenal dengan metabolit sekunder (Aho dan Beck 2011).

## KESIMPULAN
Aktivitas  antioksidan  tertinggi  terdapat pada    stasiun  II  dengan  IC 50 563,88-2.039,8 mg/L  yang  berpotensi  untuk  dijadikan sumber  antioksidan  alami  baru.  Biomassa
epifit  sangat  berpengaruh  terhadap  produksi senyawa kimia yang berperan dalam aktivitas antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Aho  K,  Beck  E.  2011.  Effects  of  ephiphyte cover  on  seagrass  growth  rate  in  two tidal  zones. Darthmouth  Undergraduate Journal of Sciences 8(3):43-44. Aranda  RS,  Lopez  LAP,  Arroyo  JL,  Garza
BAA,  Torres  NW.  2009.  Antimicrobial and antioxidant activities of plants from northeast  of  Mexico. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 20(11): 1-6.
Atmoko T, Ma’ruf A. 2009. Uji toksisitas dan skrining  fitokimia  ekstrak  tumbuhan sumber pakan orang utan terhadap larva Artemia  salina L. Jurnal  Penelitian  dan Konservasi Alam 6(1): 37-45.
Choi HG, Lee JH, Park HH, Sayegh FAQ. 2009. Antioxidant and antimicrobial activity of Zostera  marina L.  extract. Algae 24(3): 179-184.
Hanani  E,  Mun’im  A,  Sekarini  R.  2005.
Identifikasi  senyawa  antioksidan  dalam Spons Callyspongia sp.  dari  Kepulauan
Seribu. Majalah  Ilmu  Kefarmasian 2(3):
127-133. Harborne  JB.  1987. Phytochemical  methods . Ed. ke-2. New York: Chapman & Hall.
Gambar 2  Aktivitas antioksidan ( IC 50 ) dari ekstrak metanol daun lamun T. hemprichii yang hidup di perairan Pulau Pramuka (Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata  pada p<0,05). IC 50 (m g/L) Stasiun
Madhujith  T,  Shahidi  F.  2005.  Antioxidant potential of Pea Beans ( Phaseolus vulgaris L. ). Journal of Food Science 70(1):85-90. Malangngi LP, Sangi MS, Paendong JJE. 2012. Penentuan  kandungan  tanin  dan  uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  biji  buah alpukat ( Persea americana Mill.). Journal
MIPA  Universitas  Sam  Ratulangi 1(1): 5-10. Manivannan K, Anantharaman P, Balasubramanian  T.  2012.  Evaluation of  antioxidant  properties  of  marine microalga Chlorella  marina (Butcher 1952).  A sian  Pacific  Journal  of  Tropical Biomedicine 5(3):342-S346. Marhaeni  B,  Radjasa  OK,  Bengen  DG, Kaswadji RF. 2010. Screening of bacterial symbionts of seagrass Enhalus sp. against biofilm-forming  bacteria. Journal  of Coastal Development 13(2):126-132. Molyneux P. 2004. The use of the stable free radical  diphenylpicryl-hydrazyl  (DPPH) for  estimating  antioxidant  activity. Songklanakarin  Journal  of  Science  and Technology 26:211-219.
Mossi  AJ,  Mazutti  M,  Paroul  N,  Corazza
ML,  Dariva  C,  Cansian  RL,  Oliveira  JV.
2009.  Chemical  variation  of  tannins and  triterpenesin  Brazilian  populations of Maytenus  ilicifolia Mart  Ex  Reiss. Brazilian Journal Biology 69(2): 339-345. Murniasih  T.  2003.  Metabolit  sekuder  dari spons sebagai bahan obat-obatan. Oseana 28(3): 27-33.
Nurjanah,  Izzati  L,  Abdullah  A.  2011.
Aktivitas  antioksidan  dan  komponen
bioaktif kerang pisau ( Solen spp.). Jurnal Ilmu Kelautan 16(3): 119-124. Regalado EL, Menendez R, Valdes O, Morales RA,  Laguna  A,  Thomas  OP,  Hernandez Y,  Noguieiras  C,  Kijjoa  A.  2012. Phytochemical  analysis  and  antioxidant capacity  of  BM-21,  a  bioactive  extract rich in polyphenolic metabolites from the seagrass Thalassia  testudinum.  Natural Product Communications 7(1): 47-50. Rohmatussholihat. 2009. Antioksidan, penyelamat  sel-sel  tubuh  manusia. BioTrends 4(1):5-9.
Sen S, Chakraborty R, Sridhar C, Reddy YSR, De  B.  2010.  Free  radicals,  antioxidants, diseases  and  phytomedicines:  current status  and  future  prospect. International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research 3(1):91-100.
Sureda  A,  Box  A,  Terrados  J,  Deudero  S, Pons  A,  2008.  Antioxidant  response  of the  seagrass Posidonia  oceanica when epiphytized  by  the  invasive  macroalgae Lophocladia lallemandii . Marine Environment Resources 66(3):1-24.
Tangke  U.  2010.  Ekosistem  padang  lamun (manfaat, fungsi, dan rehabilitasi). Jurnal Ilmiah  Agribisnis  dan  Perikanan 3(1): 9-29
Wenno PA. 2004. Kolonisasi epifit pada daun lamun Thalassia hemprichii dan Enhalus acoroides . Ichthyos 3(1):21-26.
Yoon NY, Lee SH, Wijesekara I, Kim SK. 2011. In  vitro  and  intracellular  antioxidant activities  of  brown  alga Eisenia  bicyclis .
Fish Aquatic Science 14(3):179-185.