## ISOLATION OF SYMBIONT ENDOPHYTIC BACTERIA FROM Stylissa sp. AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST WITH MOLECULAR IDENTIFICATION USING THE
16S rRNA GENE
ISOLASI BAKTERI ENDOFIT SIMBION DARI SPONS Stylissa sp . DAN UJI

## AKTIVITAS ANTIBAKTERI SERTA IDENTIFIKASI SECARA MOLEKULER MENGGUNAKAN GEN 16S rRNA
Engjinia Frenny Kandio 1) , Adithya Yudistira 1) ,  John M.R Runtuwene 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *enjikandio21@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges are porous animals that are filter feeders and they become a habitat for microorganisms to nest in their bodies. The result of the symbiosis between sponges and microorganisms, especially in bacteria is the ability  of  the  sponge  to  produce  bioactive  compounds.  One  of  the  potentials  derived  from  these  bioactive compounds  is  antibacterial.  This  study  aims  to  isolate  and  test  the  antibacterial  activity  of  the  endophytic symbiont bacteria Stylissa sp., as well as to carry out molecular identification  using the 16S rRNA gene of symbiont bacteria isolates that show the greatest antibacterial power. Three isolates of endophytic symbiont bacteria were successfully obtained through the purification stage. Each isolate was coded E1, E2, and E3. With  the  average  inhibition  zone  against Escherichia  coli bacteria,  E1  (7.26  mm)  is  in  the  moderate category,  E2  (5.42  mm)  is in  the  moderate  category and  E3  (0.96  mm)  is  in  the  weak  category.  While the antibacterial  power  against Staphylococcus  aureus bacteria,  E1  (10.26  mm)  in  the  moderate  category,  E2 (2.10 mm) in the moderate category, and E3 (0.17 mm) in the weak category. The endophytic bacteria that have  the  greatest  antibacterial  power  is  in  isolate  E1  which  is  based  on  molecular  analysis  using the  16S rRNA gene identified as Bacillus cereus bacteria.
Keywords : Stylissa sp. Sponge, endophytic symbiont bacteria, antibacterial activity, molecular identification, 16S rRNA Gene

## ABSTRAK
Spons adalah hewan berpori yang bersifat filter feeder sehingga menjadi habitat bagi mikroorganisme untuk bersarang  di  dalam  tubuhnya.  Hasil  dari  simbiosis  antara  spons  dan  mikroorganisme  dalam  hal  ini  bakteri yaitu kemampuan spons dalam menghasilkan senyawa bioaktif. Salah satu potensi yang berasal dari senyawa bioaktif  tersebut  adalah  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  dan  melakukan  pengujian aktivitas  antibakteri  dari  bakteri  simbion  endofit  spons Stylissa  sp., serta  melakukan  identifikasi  secara molekuler menggunakan gen 16S rRNA terhadap isolat bakteri simbion yang menunjukkan daya antibakteri terbesar.  Sebanyak  3  isolat  bakteri  simbion  endofit  berhasil  diperoleh  melalui  tahap  purifikasi.  Masing- masing  isolat  diberi  kode  E1,  E2,  dan  E3. Dengan  rata-rata  zona  hambat  terhadap  bakteri Escherchia  coli yaitu,  E1  (7,26  mm)  termasuk  kategori  sedang,  E2  (5,42  mm)  termasuk  kategori  sedang,  E3  (0,96  mm) dengan kategori lemah. Sedagkan daya antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus yaitu, E1 (10,26 mm)  dengan  kategori  sedang,  E2  (2,10  mm)  termasuk  kategori  sedang,  dan  E3  (0,17  mm)  pada  kategori lemah. Bakteri  endofit  yang  memiliki  daya  antibakteri  terbesar  yaitu  isolat  E1  yang  berdasarkan  analisis secara molekuler dengan menggunakan gen 16S rRNA teridentifikasi sebagai Bacillus cereus .
Kata kunci : Spons Stylissa sp. , bakteri simbion endofit, aktivitas antibakteri, identifikasi molekuler, gen 16S rRNA.

## PENDAHULUAN
Spons  adalah  hewan  berpori  yang  bersifat filter  feeder sehingga  menjadi  habitat  bagi mikroorganisme  untuk  bersarang  di  dalam tubuhnya. Mikroorganisme mempunyai dua peran yang  penting  dalam  sistem  biologi  spons,  yaitu sebagai  sumber  makanan  dan  hidup  bersimbiosis baik  secara  inter  maupun  intra  selular  (Taylor et al. 2007).
Hasil  dari  simbiosis  antara  spons  dan mikroorganisme  dalam  hal  ini  bakteri  yaitu kemampuan  spons  dalam  menghasilkan  senyawa bioaktif.  Bakteri yang bersimbiosis dengan spons diduga  memiliki  peranan  yang  besar  dalam menghasilkan  senyawa-senyawa  bioaktif  yang telah di isolasi dari spon. Potensi ini memungkinkan  bakteri  simbion  pada  spons mampu  memproduksi  senyawa  bioaktif  dan menggantikan spons yang selama ini menghasilkan  senyawa  bioaktif.    Salah  satu potensi  yang  berasal  dari  senyawa  bioaktif tersebut adalah antibakteri. Beberapa jenis bakteri yang  bersimbiosis  dengan  spons  diperkirakan dapat  menghasilkan  senyawa  bioaktif  yang  dapat digunakan  sebagai  bahan  antibakteri  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus,  Vibrio  cholera, Bacillus  subtilis dan Escherchia  coli (Dajoh, 2004).
Dengan berkembangnya identifikasi mikroorganisme saat ini identifikasi bakteri dapat dilakukan  dengan  metode  berbasis  molekuler menggunakan gen 16S rRNA. Analisis molekuler dapat  menjawab  berbagai  permasalahan  yang berkaitan  dengan  identifikasi  yang  berbasis mikrobiologi, antara lain digunakan pada mikroorganisme  yang  sulit  untuk  di  kultur  dan secara  fenotipik  membingungkan  atau  belum pernah ditemukan sebelumnya.
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas,  maka perlu  dilakukan  penelitian  untuk  mengetahui aktivitas  antibakteri  dari  mikroba  endofit  yang diisolasi dari spons Stylissa sp. Untuk mengetahui spesies  bakteri  endofit  yang  memiliki  daya antibakteri  terbesar,  maka  dilakukan  analisis secara molekuler terhadap gen 16S rRNA.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu Dan Tempat Peneliatian
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Februari 2018  sampai  Agustus  2018,  di  Laboratorium Mikrobiologi Program Studi Farmasi dan
Laboratorium  Mikrobiologi dan Genetika Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Pengambilan Dan Penyiapan Sampel
Sampel  spons Stylissa  sp. di  ambil  dari perairan  pantai  Malalayang      menggunakan  alat bantu (masker, snorkel dan fins). Pada saat sampel diambil,  terlebih  dahulu  sampel  di  foto. Selanjutnya  di  masukan  ke  dalam  plastik  sampel yang  berisi  air  laut  secukupnya  kemudian disimpan  dalam  kotak  pendingin  yang  berisi  es batu  untuk  menjaga  agar  bakteri  yang  hidup dalam  spons Stylissa  sp. tetap  hidup  dan  dibawa ke  Laboratorium  Mikrobiologi  Program  Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Samratulangi. Setelah  itu  sampel  di  identifikasi  (secara morfologi)  kemudian  dibersihkan  dengan  air mengalir  yang  bertujuan  untuk  menghilangkan kotoran  yang  menempel  pada  sampel  dan dilakukan sterilisasi permukaan untuk menghilangkan  kotoran  maupun  mikroorganisme epifit lain.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pada  pengujian  ini  ada  beberapa  proses  yang harus dilakukan untuk mendapatkan hasil pengujian aktivitas antibakteri. Seperti pembuatan larutan Mec Farland 0.5, pembuatan suspense dan bakteri  uji,  penyiapan  bakteri  simbion  endofit, pengujian  aktivitas  antibakteri,  serta  pengamatan dan  pengukuran  zona  hambat.  Proses  pengujian ini  menggunakan  metode  difusi  sumuran  Kirby dan Bauer.
Larutan  Mec  Farland  merupakan  penyetaraan konsentrasi mikroba dengan menggunakan larutan 𝐵𝑎𝐶𝑙 2 1%  dan 𝐻 2 𝑆𝑂 4 1%. Standar  kekeruhan Mec Farland ini untuk menggantikan perhitungan bakteri  satu  per  satu  dan  untuk  memperkirakan kepadatan  sel  yang  akan  digunakan  pada pengujian antibakteri.
Setelah  dilakukan  pembuatan  larutan  Mac Farland  0.5,  selanjutnya  dilakukan  pembuatan suspense  dan  penyiapan  bakteri  uji.  Isolat  bakteri endofit  spons Stylissa  sp. Diambil  sebanyak  satu ose  untuk  diinokulasi  ke  dalam  5  mL  media  cair NA  dan  diinokubasi  selama  24  jam  dalam  alat pengocok.
Sumuran  yang  sudah  steril  di  letakan  secara aseptis  pada  10  mL  media  yang  sudah mengeras, kemudian  dituangkan  kembali  10  mL  media
berikutnya.  70  µL  kultur  isolat  bakteri  endofit diteteskan  kedalam  sumuran  dan  di  inkubasi selama  18-24  jam.  Untuk  membandingkan aktivitas  isolat  digunakan  antibiotik  amoxicilin sebagai  kontrol  positif  (+)  dan  aquades  sebagai kontrol  negatif  (-).  Yang  bertujuan  untuk membandingkan  ukuran  daya  hambat  isolat bakteri yang akan terbentuk.
Setelah diinkubasi selama 18-24 jam, kemudian  disekitar  sumuran  diamati  zona  bening yang  terbentuk.  Daerah  bening  disekitar  sumuran menunjukkan  kepekaan  bakteri  terhadap  bahan antibakteri yang digunakan sebagai bahan uji yang dinyatakan  dengan  diameter  zona  hambat. Kemudian  diukur  diameter  zona  hambat  dengan menggunakan  jangka  sorong.  Diameter  zona hambat  yang  terukur  kemudian  di  kategorikan kekuatan daya antibakterinya berdasarkan pedoman Clinical  and  Laboratorium  Standar Institute (CLSI).

## Identifikasi Bakteri Endofit Secara Molekuler
Prinsip  isolasi  DNA  adalah  mendapatkan DNA  murni  yang  tidak  tercampur  dengan komponen  sel  lainnya  seperti  protein  dan karbohidrat. Setelah dilakukan proses isolasi DNA Genomik,  selanjutnya  sampel  isolat  diamplifikasi dengan teknik Polymerase Chain Reaction (PCR). Dalam  tahap  ini  DNA  yang  sudah  diamplifikasi kemudian  diseparasi  menggunakan  elektroforesis gel  agarosa  1%.  Gel  direndam  dalam  campuran larutan  etidium  bromide  dan  TBE  buffer. Kemudian  dilakukan  visualisasi  dengan  sinar  UV pada  UV-transiluminator.  Hasil  yang  terdeteksi kemudian di dokumentasikan.
Hasil dari sekuensing DNA, dianalisis menggunakan  program  BLAST  melalui  media  online NCBI  yang bertujuan untuk mencari kesamaan urutan nukleotida  gen  16S  rRNA  untuk  menentukan  spesies isolat  bakteri  endofit  dari  spons Stylissa  sp .  yang memiliki daya antibakteri terbesar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi Bakteri Simbion Endofit Dari Spons
Berdasarkan  identifikasi  secara  morfologi  di dapati  jenis  sampel  yang  di  ambil  dari  perairan Malalayang  merupakan  jenis  spons Sylissa  sp . Jenis  spons  ini  dipilih  pada  saat  pengambilan sampel,  karena  spons  ini  merupakan  yang  paling dominan dan nampak berwarna cerah di dalam air. Juga  spons  ini  banyak  ditemukan  pada  perairan Malalayang  yang  terdapat  pada  kedalaman  laut  ± 2,5  m.  Adapun  ciri-ciri  morfologi  yang  di  amati dari  spons  yang  menyerupai  spons Stylissa  sp. yaitu  berwarna  oranye  dan  memiliki  tekstur  yang lunak.  Spesies  spons  ini  hidup  menempel  pada substrat berbatu atau karang di perairan.
Dari  hasil  pengenceran  secara  bertingkat 10 −1 - 10 −7 yang telah di tumbuhkan pada cawan yang  berisi  media  NA,  hanya  didapati  3  dari  7 cawan yang berhasil ditumbuhkan bakteri endofit dari  spons Styllisa  sp. yang  pantas  untuk diinokulasi untuk mendapatkan bakteri murni. Hal ini  dikarenakan  pada  saat  penyebaran  atau pemerataan sampel digunakan L glass yang masih panas,  sehingga  sampel  dari  hasil  pengenceran tidak dapat tumbuh pada media.
Bakteri  yang  bersimbiosis  dengan  spons  dari perairan  Malalayang  berhasil  ditumbuhkan  pada media  NA.    Keberhasilan  pertumbuhan  bakteri ditandai dengan adanya pertumbuhan koloni pada media  setelah  media  yang  diinokulasi  dengan sampel  diinkubasi  pada  suhu  29°C  selama  18-24 jam.  Setiap  koloni  bakteri  yang  tumbuh dipisahkan berdasarkan warna, ukuran dan bentuk koloni,  serta  diisolasi  dengan  menumbuhkannya pada  media  yang  sama.  Berdasarkan  hasil pengamatan  morfologi,  diperoleh  3  isolat  bakteri simbion spons Stylissa sp. yang berbeda.

## Karakteristik  Morfologi  Bakteri  Simbion
Endofit Spons Stylissa sp.
Morfologi bakteri simbion pada spons Stylissa sp. telah  diamati  secara  makroskopis dengan mengacu pada Cappucino dan Sherman (1998).
Tabel 1 . Pengamatan secara Makroskopis Karakteristik Isolat Bakteri dari Spons Stylissa sp Karakeristik Koloni Kode Isolat Warna Tepi Elevasi Bentuk E1 Krem Bergerigi Datar Tak beraturan E2 Putih Rata Datar Bulat E3 Oranye Rata Cembung Bulat
Berdasarkan  tabel  diatas,  isolat  E1  memiliki bentuk  koloni  yang  tidak  beraturan,  terlihat elevasi  yang  datar  dan  tepian  koloni  yang bergerigi,  dengan  warna  dominan  adalah  krem. Selanjutnya
untuk  isolat  E2  berwarna  putih,  berbentuk bulat, dengan elevasi datar dan pada tepian koloni rata.  Sedangkan  untuk  isolat  E3  memiliki  bentuk yang  dominan  bulat,  terlihat  elevasi  cembung,
memiliki  tepian  yang  rata  dan  dominan  warna adalah oranye. Hal ini disebabkan kerapatan isolat dan ketersediaan nutrisi dalam media.
Pada  penelitian  ini  dilakukan  pengamatan secara  mikroskopik  pada  ketiga  bakteri  isolat. Untuk pengamatan karakteristik secara mikroskopik dilakukan dengan metode pewarnaan Gram.  Hasil  yang  didapat  ditunjukan  pada  tabel berikut ini:
Tabel 2. Hasil Karakterisasi Mikroskopik Isolat Bakteri Simbion Endofit Kode Isolat Karakteristik Bakteri Bentuk sel Gram E1 Basil Positif E2 Basil Positif E3 Kokus Negatif Pewarnaan Gram dilakukan untuk
menentukan  jenis  bakteri  berdasarkan  dinding selnya.  Dari  hasil  pewarnan  gram  pada  tabel  2, isolat  dengan  kode  E1  dan  E2  memiliki karakteristik yang sama baik bentuk sel dan gram. Dimana  bentuk  kedua  sel  isolat  E1  dan  E2  yaitu Basil  dengan  gram  positif.  Hal  ini  disebabkan karena  kedua  isolat  tersebut  mempertahankan warna  kristal  violet,  sedangkan  untuk  isolat dengan  kode  E3  memiliki  bentuk  sel  Kokus dengan  gram  negatif. Gram  negatif  merupakan Gram  yang  dominan  karena  kemampuan  bakteri dalam    mengikat  safranin  sangat  kuat.    Dinding sel  dari  bakteri  Gram  negatif  terdiri  dari peptidoglikan tipis yang dibungkus oleh lipoprotein  atau  lipopolisakarida.  Bakteri  gram negatif memiliki tiga lapisan dinding sel. Lapisan
terluar yaitu lipopolisakarida (lipid) kemungkinan terbilas oleh alkohol, sehingga pada saat diwarnai dengan safranin akan berwarna merah (Kumala et al., 2010).
Pengukuran Zona Hambat Aktivitas Antibakteri Isolat bakteri yang memiliki aktifitas antibakteri,  diuji  untuk  mendeteksi  kemampuan menghasilkan  antibakteri  dengan  mengukur  besar zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh  setiap  isolat bakteri  terhadap  bakteri  uji  dan  dibandingkan dengan  kontrol  positif  (amoxicilin).  Kemampuan menghasilkan antibakteri dari setiap isolat bakteri dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Diameter Zona Hambat (mm) Bakteri Simbion Spons Terhadap Jenis Bakteri Uji.
No. Kode Isolat Rata-rata Diameter Zona Bening dari Bakteri Simbion Endofit (mm) Escherchia coli Staphylococcus aureus 1 E1 7,26 10,26 2 E2 5,42 2,10 3 E3 0,96 0,17 4 Kontrol Positif 12,41 9,98 5 Kontrol Negatif 0,00 0,00
Berdasarkan  hasil  yang  ditampilkan  pada tabel  3,  dapat  dilihat  bahwa  setelah  dilakukan pengujian  terhadap  kedua  bakteri  uji,  rata-rata isolat  bakteri  yang  bersimbiosis  dengan  spons memiliki  diameter  zona  bening  yang  cukup
berbeda.  Zona  bening  yang  paling  besar  didapat pada isolat E1. Dapat dilihat diantara isolat-isolat yang  ada  bahwa  isolat  dengan  kode  E1  memiliki aktivitas antibakteri yang cukup besar dibandingkan  dengan  isolat  dengan  kode  E2  dan
E3.  Dari  setiap  isolat  dibandingkan  dengan kontrol  positif.  Kontrol  positif  yang  digunakan adalah amoxicillin, dan didapati hasil zona bening yang  terbentuk  dari  kontrol  positif  dengan  rata- rata adalah 11,15   mm. Dari salah satu isolat yang memiliki  zona  bening  yang  paling  besar,  akan digunakan  untuk  identifikasi  molekuler  gen  16S rRNA.  Perbedaan  kemampuan  daya  hambat  pada setiap  isolat  ini  juga  kemungkinan  disebabkan oleh  perbedaan  kandungan  metabolit  sekunder yang  dimiliki  oleh  masing-masing  isolat  yang telah  berdifusi  terlebih  dahulu  ke  dalam  agar, sehingga  pertumbuhan  bakteri  patogen  menjadi terhambat (Lee et al ., 2001).
Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa beberapa  jenis  bakteri  yang  bersimbiosis  dengan spons  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri  uji  yang  dapat  digunakan  sebagai  bahan antibakteri.  Dari hasil pengujian antibakteri isolat bakteri  simbion  spons  dapat  membentuk  zona hambat  pada  bakteri  uji.  Terbentuknya  zona hambat pada koloni bakteri yang diuji menandakan  bahwa  isolat  bakteri  yang  diuji melakukan  aktifitas  antibakteri.    Hal  ini menunjukkan adanya suatu hubungan antagonisme  dimana  satu  bakteri  tidak  dapat hidup berdampingan dengan bakteri lain.  Spesies yang  lain  akan  menghasilkan  sesuatu  yang  dapat meracuni  spesies  lainnya,  sehingga  pertumbuhan spesies  terakhir  akan  terganggu  karena  zat  yang dihasilkan  oleh  spesies  yang  anatagonis  mungkin berupa  ekskret,  maupun  zat  sisa  makanan  yang menentang  kehidupan  organisme  lain.    Oleh karena  itu  maka  zat  penentang  disebut  zat antibiotik (Sri Sumarsih, 2003).

## Identifikasi Bakteri Endofit Secara Molekuler
Isolat  bakteri  dengan  kode  E1  yang  memiliki daya  hambat  tertinggi  di  identifikasi  secara molekuler.  Proses  ini  diawali  dengan  tahap ekstraksi  DNA  yang  menggunakan Genomic DNA Mini  Kit (Geneaid).  Pada  hasil  visualisasi gel  elektroforesis  diperoleh  pita  DNA  yang menunjukkan  keberhasilan  ekstraksi  total  DNA genom  pada  sampel  dalam  penelitian  ini.  Pita DNA yang muncul pada lintasan gel menunjukkan  bahwa  DNA  berhasil  diisolasi  dan dapat digunakan pada tahap identifikasi molekuler selanjutnya (Surzycki, 2000).
Hasil  ekstarksi  DNA  bakteri  E1  digunakan sebagai  DNA template dalam  proses  amplifikasi gen  menggunakan  rancangan  primer forward BKXF (5’-  GCY  TAA  YAC  ATG  CAA  GTCG-
3’)  dan  primer reverse BKYR  (5’-TTG  ACG TCA TCC CCA CCT TCC-3’). Hasil amplifikasi menunjukan  adanya  pita  DNA  yang  jelas  pada posisi panjang base phare sekitar 1200 bp dengan menggunakan  1  kb  DNA ladder sebagai pembanding.
Sampel  yang  berhasil  di  amplifikasi  kemudian  di kirim ke 1 st BASE Malaysia untuk disekuens. Dari data  hasil  sekuensing  yang  diperoleh  disunting dengan  menggunakan  prangkat  lunak Geneious. Kemudian  hasil  yang  didapat  dipilih  segmen DNA  dengan  kualitas  terbaik.  Urutan  nukleotida kemudian  disalin  untuk  dianalisi  menggunakan program  BLAST  ( Basic  Local  Alignment  Search Tool )  yang  diakses  secara online melalui  website NCBI (http:/blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi). Berdasarkan hasil analisis BLAST yang diperoleh dari  sekuens  DNA  isolat  E1,  diketahui  bahwa nilai Total  score 673, query  coverage 100%, e- value  0.0,  identity 99%  dengan  hasil  berupa bakteri Bacillus cereus.
Bakteri Bacillus cereus
Bakteri Bacillus adalah  bakteri  gram  positif berbentuk batang (basilus) dan anggota dari filum Firmicutes.  Spesies Bacillus dapat  aerob  obligat (bergantung pada oksigen), atau anaerob fakultatif (memiliki kemampuan untuk menjadi aerobik atau anaerobik).  Bakteri Bacillus akan  teruji  positif untuk  enzim  katalase  ketika  ada  oksigen  yang digunakan. Bacillus meliputi  spesies  yang  hidup bebas (nonparasitik) dan patogen parasitik. Dalam kondisi  lingkungan  stres,  bakteri  ini  dapat menghasilkan  endospora  oval  yang  bukan  spora sejati, tetapi bakteri dapat mengurangi diri mereka sendiri dan tetap dalam keadaan tidak aktif untuk jangka  waktu  yang  lama.  Bakteri Bacillus telah banyak  diidentifikasi,  salah  satu  bakteri Bacillus yang  sudah  teridentifikasi  spesies  yaitu  bakteri Bacillus cereus (Madigan et al. , 2012). Bakteri Bacillus  cereus merupakan  golongan bakteri Gram-positif (bakteri yang mempertahankan zat  warna kristal  violet sewaktu proses pewarnaan  Gram),  berbentuk  batang  kecil dengan  ukuran  0,3-2,2  x  1,2-7,0  µm,  tumbuh secara  aerob  fakultatif  (dapat  menggunakan oksigen  tetapi  dapat  juga  menghasilkan  energi secara anaerobik),  dan  dapat  membentuk  spora (endospora).  Spora Bacillus  cereus lebih  tahan pada  panas  kering  daripada  pada  panas  lembab dan dapat bertahan lama pada produk yang kering (Dwidjoseputro, 2005).
Beberapa  jaringan  yang  terdapat  dalam bakteri Bacillus  cereus berbahaya  bagi  manusia dan menyebabkan penyakit bawaan dari makanan, sementara  jaringan  lainnya  dapat  bermanfaat sebagai  probiotik  untuk  hewan  (Turnbull  PCB. 1996).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian
dapat disimpulkan bahwa :
1. Diperoleh  3  (tiga)  jenis  bakteri  endofit  yang berhasil  diisolasi  dari  spons Stylissa  sp .
Masing-masing isolat diberi kode E1, E2, dan E3.
2. Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri  bakteri simbion  endofit  yang  diisolasi  dari  spons Stylissa  sp., ketiga  isolat  memiliki  aktivitas. Jumlah rata-rata zona hambat terhadap bakteri Escherchia coli yaitu, E1 (7,26 mm) termasuk kategori  sedang,  E2  (5,42  mm)  termasuk kategori  sedang,  E3  (0,96  mm)  dengan kategori  lemah.  Sedangkan  daya  antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus yaitu,
E1  (10,26  mm)  dengan  kategori  sedang,  E2
(2,10  mm)  termasuk  kategori  sedang,  dan  E3
(0,17 mm) pada kategori lemah.
3. Bakteri endofit yang memiliki daya antibakteri  terbesar  ialah  isolat  E1  yang berdasarkan analisis secara  molekuler dengan menggunakan  gen  16S  rRNA  teridentifikasi sebagai Bacillus cereus.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk identifikasi  dan  purifikasi  senyawa  bioaktif  yang dihasilkan  oleh  bakteri  simbion  endofit  spons Stylissa  sp. serta  pengujian  aktivitas  antibakteri dengan menggunakan bakteri uji yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Cappucino,  J.G.,  dan  Sherman,  N.  1992. Microbiology  a  Laboratory  Manual .  The Benjamin Cummings Publishing, USA.
Dajoh,  O.  P.  P.  L.  2004. Pengujian  Aktifitas Antibakteri dari Sponge di Perairan Selat Lembeh. [Skripsi], FPIK. Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Dwijoseputro. D. 2005. Dasar-dasar mikrobiologi. Djambatan: Jakarta
Lee,  Y.K.,  Jung  H.L.,  and  Hong  K.L.,  2001. Microbial Symbiosis in Marine  Sponges, The Journal  of  Microbiology ,  39( 4 ): 254-264.
Madigan,  Marthinko.,  Stahl.,  and  Clark.  2012. Biology  of  Microorganisms .  Pearson Education, Inc.  San Francisco.
Peloa,  A.  2015. Amplifikasi  Gen  Cythrome Oxidase  Subunit  I  (COI)  dari  Sampel Sirip  Ikan  Hiu  dengan  Menggunakan Beberapa  Pasangan  Primer .  [Skripsi].
FPIK. Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Sri  Sumarsih.  2003. Mikrobiologi  Dasar . Jurusan Ilmu Tanah Fakultas Pertanian   UPN, Yogyakarta.
Surzycki,  S.  2000. Basic techniques  in  molecular biology . Springer. Berlin.
Turnbull  PCB.  1996. Bacillus.  In:  Barron’s Medical  Microbiology. University  of
Texas Medical Branch, Galveston.
Taylor, M. W., Radax R., Steger D., and Wagner
M., 2007. Sponge-Associated
microorganisms:  Evolution,  Ecology,  and Biotegnological  Potential, Microbiology and  Molecular  Biology  Rewiews ,  71( 2 ): 295-347.