Jurnal Ilmu dan Industri Peternakan pISSN 2355-0732, eISSN 2716-2222 http://journal.uin-alauddin.ac.id/index.php/jiip/index Volume 9 Nomor 2: 190-202, Desember 2023 DOI: https://doi.org/10.24252/jiip.v9v2. 39379
Profil Diferensiasi Leukosit dan Biomarker Stress Sapi Perah Laktasi dengan Pemberian Feed Supplement di Kelompok Ternak Tunas Mekar KSU Tandangsari
Leukocyte Differentiation Profile and Stress Biomarkers of Lactating Dairy Cattle with Feed Supplement in Tunas Mekar Livestock Group KSU Tandangsari
Mia Nuriyah Fazriyati 1 , Ujang Hidayat Tanuwiria 2 , Andi Mushawwir 3 1 Program Studi Ilmu Peternakan, Fakultas Peternakan, Universitas Padjadjaran
2 Laboratorium Nutrisi Ternak Ruminansia dan Kimia Makanan Ternak, Departemen Nutrisi Ternak dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan, Universitas Padjadjaran
3 Laboratorium Fisiologi Ternak dan Biokimia, Departemen Nutrisi Ternak dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan, Universitas Padjadjaran Jalan Ir. Soekarno Km. 21 Jatinangor, Sumedang 45363, Jawa Barat, Indonesia *Korespondensi E-mail: mia19001@mail.unpad.ac.id
Diterima 10 Juli 2023; Disetujui 15 Oktober 2023

## ABSTRAK
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan April – Juni 2023 di Kandang Kelompok Ternak  Tunas  Mekar  KSU  Tandangsari.  Sebanyak  16  ekor  sapi  perah  Friesian Holstein (FH) bulan laktasi 1-5 dengan periode laktasi ke-2 dan ke-3 digunakan dalam  penelitian  ini  untuk  mengkaji  profil  diferensiasi  leukosit  dan  biomarker stress  dan  mengetahui  perlakuan  mana  yang  memberikan  pengaruh  terbaik terhadap  profil  diferensiasi  leukosit  dan  biomarker  stress.  Penelitian menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang  terdiri  dari  4  perlakuan dan 4 ulangan. Perlakuan diantaranya P0 (kontrol) terdiri atas 60% hijauan + 40% konsentrat; P1 = 60% hijauan + 40% konsentrat (97% konsentrat + 3% protein by- pass ); P2 = 60% hijauan + 40% konsentrat (95% konsentrat + 3% protein by-pass + 2%  Ca-PUFA);  dan  P3  =  60%  hijauan  +  40%  konsentrat  (93%  konsentrat  +  3% protein by-pass +  2%  Ca-PUFA  +  2%  mineral  organik).  Berdasarkan  hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  pemberian feed  supplement berpengaruh  nyata (P<0,05)  terhadap  profil  diferensiasi  leukosit  dan  biomarker  stress  sapi  perah laktasi  di  Kelompok  Ternak  Tunas  Mekar  KSU  Tandangsari.  Sapi  perah  laktasi yang diberi perlakuan P3 = 60% hijauan + 40% konsentrat (93% konsentrat + 3% protein by-pass +  2%  Ca-PUFA  +  2%  mineral  organik)  memiliki  rataan diferensiasi  leukosit  dan  biomarker  stress  lebih  rendah  dibanding  kontrol (P<0,05).  Berdasarkan  hasil  penelitian  disimpulkan  bahwa  pemberian  ransum yang disuplementasi feed supplement berupa 3% protein by-pass + 2% Ca-PUFA + 2% mineral organik mampu menurunkan tingkat stress panas berdasarkan kadar leukosit dan diferensiasinya serta enzim penanda stress dalam darah.
Kata kunci : Feed Supplement , Sapi Perah Laktasi, Stress

## ABSTRACT
This research was conducted from April to June 2023 at the Tunas Mekar Cattle Group,  KSU  Tandangsari.  A  total  of  16  Friesian  Holstein  (FH)  dairy  cows lactating  1-5  month  with  the  2nd  and  3rd  lactation  periods  were  used  in  this
study  to  assess  leukocyte  differentiation  profiles  and  stress  biomarkers  and determine  which  treatment  had  the  best  effect  on  leukocyte  differentiation profiles  and  biomarkers.  emphasize.  The  study  used  a  completely  randomized design (CRD) which consisted of 4 treatments and 4 replications. The treatments included  P0  (control)  consisting  of  60%  forage  +  40%  concentrate;  P1  =  60% forage  +  40%  concentrate  (97%  concentrate  +  3%  protein  by-pass);  P2  =  60% forage + 40% concentrate (95% concentrate + 3% protein by-pass + 2% Ca-PUFA); and P3 = 60% forage + 40% concentrate (93% concentrate + 3% protein by-pass + 2%  Ca-PUFA  + 2%  organic  minerals).  Based  on  the  results  of  the  study,  it  was shown  that  feeding  supplementation  had  a  significant  effect  (P<0.05)  on  the leukocyte differentiation profile and stress biomarkers of lactating dairy cattle in the  Mekar  Tunas  Livestock  Group,  KSU  Tandangsari.  Lactating  dairy  cows treated with P3 = 60% forage + 40% concentrate (93% concentrate + 3% protein by-pass  +  2%  Ca-PUFA  +  2%  organic  minerals)  had  lower  mean  leukocyte differentiation and biomarker stress than controls (P<0.05). Based on the results of  the  study,  it  was  stated  that  giving  a  ration  supplemented  with  a  feed supplement  in  the  form  of  3%  protein  by-pass  +  2%  Ca-PUFA  +  2%  organic minerals was able to reduce the level of heat stress based on leukocyte levels and differentiate them and enzymes that are stress markers in the blood.
Keywords :  Dairy Cattle, Feed Supplement, Stress

## PENDAHULUAN
Sapi  perah  Friesian  Holstein  (FH)  merupakan  golongan  hewan  homoiterm  yang memerlukan suhu lingkungan yang optimum untuk dapat hidup nyaman dan berproduksi (McDowell, 1974). Zona nyaman untuk sapi perah berkisar pada suhu 5-25 ℃ (Rensis dkk., 2015).  Sementara  Indonesia  khususnya  di  wilayah  Kelompok  Ternak  Tunas  Mekar  KSU Tandangsari  dengan  kisaran  suhu  lingkungan  25-31 ℃ dan  kelembapan  udara  85% (Tanuwiria  dkk.,  2021).  Adanya  perbedaan  iklim  dalam  pemeliharaan  ini  dapat mempengaruhi kondisi fisiologis dan produktivitas ternak sehingga perlu adanya pantauan guna keberlangsungan hidup ternak.
Pemeliharaan sapi perah di atas zona nyaman dapat menimbulkan stress panas yang berdampak  negatif  terhadap  fisiologis  dan  kadar  hematologi  darah  (Das  dkk.,  2016), perubahan  pada  total  leukosit  dan  diferensial  leukosit,  serta  sistem  imunitas  dan  respon inflamasi  sapi  perah  (Yadav  dkk.,  2016).  Kadar  leukosit,  termasuk  neutrofil,  limfosit, monosit, eosinofil dan basofil dalam darah merupakan suatu indikator dalam mengevaluasi stress panas yang dialami oleh sapi perah. Selain itu, stress panas dapat mengakibatkan pula ketidakseimbangan  fungsi  fisiologis  dan  metabolisme.  Mekanisme  kerja  organ  yang berlebihan mengakibatkan peningkatan inflamasi, kerusakan hingga kematian sel sehingga
Profil Diferensiasi Leukosit dan Biomarker Stress Sapi Perah Laktasi
berdampak  terhadap  senyawa  metabolit  dalam  darah  seperti  total  bilirubin,  alkaline phosphatase, kreatinin, kreatin kinase, Gamma Glutamil Transpeptidase (γ-GT), dan Laktat Dehidrogenase  (LDH)  yang  bermigrasi  ke  sistem  sirkulasi  darah,  yang  diartikan  semakin tinggi  kadar  senyawa-senyawa  tersebut  di  dalam  plasma  menunjukkan  ternak  tersebut mengalami stress panas (Suwarno dkk., 2019; Mushawwir dkk., 2020a).
Upaya  untuk  mengurangi  dampak  buruk  dari  stress  panas  pada  sapi  perah  yang diakibatkan  oleh  pemeliharaan  diatas  zona  nyaman  antara  lain  melalui  rekayasa  nutrisi seperti  pemberian feed  supplement berupa  protein by-pass ,  Ca-PUFA,  dan  mineral  organik.
Ketiga  jenis feed  supplement tersebut  dapat  mengurangi  dampak  buruk  kondisi  fisiologi ternak  dengan  menstimulan  laju  metabolisme  terkait  dengan  sintesis  lipid,  peningkatan imunitas,  mencegah  inflamasi,  dan  menunjang  termoregulasi.  Berdasarkan  uraian  di  atas, maka  dalam  penelitian  ini  dilakukan  studi  mengenai  profil  diferensiasi  leukosit  dan biomarker  stress  sapi  perah  laktasi  dengan  pemberian feed  supplement di  kelompok  ternak Tunas Mekar KSU Tandangsari.

## MATERI DAN METODE

## Materi
Ternak  percobaan  yang  digunakan  untuk  penelitian  ini  adalah  sapi  perah  Friesian Holstein (FH) sebanyak 16 ekor dengan kriteria bulan laktasi ke-1, 2, 3, 4, dan ke-5 dengan periode  laktasi  ke-2  dan  ke-3  serta  produksi  susu  harian  rata-rata  11  liter/ekor/hari. Penelitian  dilaksanakan  selama  10  minggu  pada  17  April  2023  sampai  25  Juni  2023  di kandang  milik  peternak  Kelompok  Tunas  Mekar  KSU  Tandangsari.  Ternak  percobaan ditempatkan  di  kandang  individu  yang  berukuran  1,5  x  2  m,  setiap  kandang  dilengkapi dengan label perlakuan. Pakan diberikan terbatas sesuai standar kebutuhan dan air minum secara adlibitum .

## Metode
Penelitian ini dilaksanakan dengan menggunakan metode Rancangan Acak Lengkap (RAL). Terdiri dari 4 perlakuan yang setiap perlakuan terdiri  atas 4 kali ulangan. Keempat perlakuan tersebut yaitu sebagai berikut.
P0: Ransum kontrol yang terdiri dari 60% hijauan + 40% konsentrat (100% konsentrat);
P1: 60% hijauan + 40% konsentrat (97% konsentrat + 3% protein by-pass );
P2:  60%  hijauan  +  40%  konsentrat  (95%  konsentrat  +  3%  protein by-pass +  2%  Ca-
PUFA);
P3: 60% hijauan + 40% konsentrat (93% konsentrat + 3% protein by-pass + 2% Ca-PUFA
+ 2% mineral organik).

## Prosedur Penelitian

## a. Pembuatan Feed Supplement
Feed  Supplement yang  diberikan  pada  penelitian  ini  berupa protein  by-pass ,  Ca-PUFA, dan  mineral  organik.  Pembuatan  protein by-pass dibuat  dengan  mencampurkan  tanin dengan tepung ikan. Prinsip pembuatan protein by-pass yaitu gugus amin dan atau karboksil dari protein diikat oleh tanin (Tanuwiria dkk., 2018). Tepung ikan di- spray oleh larutan tanin secara homogen pada dosis 3,88% dari tepung ikan, lalu dilakukan pengeringan dalam oven dan  jemur  matahari  sampai  kering.  Pemberian  protein by-pass sebanyak  180 gram/ekor/hari.
Kompleks  Ca-PUFA  dibuat  melalui  proses  saponifikasi  dengan  menggunakan  minyak kacang  tanah  dan  kalsium  hidroksida  (Ca(OH) 2 ).  Prinsip  pembuatan  Ca-PUFA  menurut Tanuwiria dkk. (2011) yaitu minyak dihidrolisis oleh basa menjadi gliserol dan garam asam lemak (gugus COOH asam lemak diikat oleh kation basa). Ca-PUFA diberikan sebanyak 120 gram/ekor/hari.
Mineral  organik  dibuat  dengan  cara  mineral  seng  (Zn),  tembaga  (Cu),  Selenium  (Se),  dan Chromium  (Cr)  masing-masing  dicampurkan  ke  dalam  media  jagung  dan  kacang  kedelai, selanjutnya  difermentasi  dengan  bantuan Saccharomyces  cerevisiae (SC)  dan  atau Aspergillus oryzae (AO).  Prinsip  pembuatan  Zn-organik,  Cu-Organik,  Se-Organik,  dan  Cr-Organik adalah memasukkan Zn, Cu, Se, dan Cr ke dalam protein jamur Saccharomyces cerevisiae (SC) dan atau Aspergillus oryzae (AO) (Tanuwiria dkk., 2018). Pemberian mineral Zn-organik dan Cu-organik  sebanyak  120  gram/ekor/hari,  sedangkan  untuk  Cr-organik  dan  Se-organik sebanyak 10 gram/ekor/hari.

## b. Pemberian Ransum
Ransum  diberikan  setiap  dua  kali  sehari  yaitu  pukul  07.00  WIB  dan  15.00  WIB.
Ransum  yang  diberikan  terdiri  atas  konsentrat  sebanyak  6  kg  yang  telah  disuplementasi dengan feed  supplement berupa  protein by-pass ,  Ca-PUFA,  dan  mineral  organik  sesuai perlakuan serta hijauan 10% dari bobot badan sapi perah.
Profil Diferensiasi Leukosit dan Biomarker Stress Sapi Perah Laktasi

## c. Pengambilan Sampel
Pengambilan sampel dilakukan sebanyak 2 kali pada pertengahan dan akhir penelitian yaitu  pada  minggu  ke-6  dan  minggu  ke-10.  Sampel  darah  diperoleh  dari vena  coccygeal , menggunakan  tabung  3  mL  yang  telah  dilapisi  antikoagulan  Ethylenediaminetetraacetic Acid (EDTA).

## d. Analisis Sampel
Sampel  darah  yang  telah diperoleh  dianalisis  menggunakan alat hematology  analyzer untuk mengetahui  kadar  leukosit  dan  diferensiasinya.  Kemudian,  sampel  darah  tersebut disentrifugasi  selama  15  menit  untuk  memperoleh  plasma  darah.  Plasma  darah  dianalisis menggunakan  teknik  spektrofotmeter  dengan  mencampurkan  reagen  dan  larutan  buffer berdasarkan petunjuk Biolabo Kit, France (2015), dengan panjang gelombang sesuai dengan parameter.

## Analisis Data
Data  dianalisis  menggunakan  analisis  sidik  ragam  Rancangan  Acak  Lengkap.
Penentuan  perbedaan  antara  perlakuan dilakukan  dengan  menggunakan  analisis/uji  jarak berganda  Duncan.  Semua  prosedur  analisis  dilakuan  dengan  mengunakan  software  SPSS IBM 25 dengan tingkat signifikansi 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh Pemberian Feed Supplement terhadap Diferensiasi Leukosit
Pengaruh  pemberian feed  supplement dalam  ransum  terhadap  diferensiasi  leukosit yang  meliputi  leukosit,  neutrofil,  limfosit,  monosit,  eosinofil,  dan  basofil  berdasarkan penelitian ditampilkan pada Tabel 1.
Tabel  1.  Rataan  Kadar  Diferensiasi  Leukosit  Sapi  Perah  Laktasi  dengan  Pemberian Feed Supplement Berbagai Perlakuan Parameter Perlakuan P0 P1 P2 P3 Leukosit (x 10 3 /µL) 8,29±0,21 c 7,76±0,24 b 7,45±0,28 b 6,57±0,61 a Neutrofil (x 10 3 /µL) 4,01±0,07 d 3,56±0,18 c 3,28±0,24 b 2,59±0,25 a Limfosit (x 10 3 /µL) 4,65±0,11 c 4,36±0,07 b 4,36±0,04 b 4,14±0,90 a Monosit (x 10 3 /µL) 0,88±0,04 d 0,75±0,04 c 0,64±0,06 b 0,52±0,07 a Eosinofil (x 10 3 /µL) 0,46±0,01 c 0,44±0,01 b 0,42±0,01 b 0,4±0,02 a Basofil (x 10 3 /µL) 0,03±0,00 c 0,02±0,00 b 0,02±0,00 ab 0,01±0,00 a
* a,b,c,d Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Hasil  analisis  sidik  ragam  menunjukkan  bahwa  pemberian feed  supplement berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap  leukosit,  neutrofil,  limfosit,  monosit,  eosinofil,  dan basofil.  Selanjutnya  dilakukan  uji  jarak  berganda  Duncan  untuk  mengetahui  perbedaan rataan  antar  perlakuan.  Berdasarkan  Tabel  1,  kadar  leukosit  tampak  menurun  pada  P0 sampai P3 yaitu secara berturut-turut 8,29 x 10 3 /µL; 7,76 x 10 3 /µL; 7,45 x 10 3 /µL; dan 6,57 x 10 3 /µL.  Kisaran  kadar  leukosit  ini  masih  berada  pada  kisaran  normal  seperti  yang disebutkan  Mirzadeh dkk.  (2010)  yaitu  antara  5,83-12,23  x  10 3 /µL.  Terjadinya  peningkatan kadar  leukosit  dapat  disebabkan  oleh  adanya  peningkatan  kadar  neutrofil  atau  kadar limfosit, karena dua ini yang mendominasi jenis sel leukosit di dalam sirkulasi darah.
Neutrofil merupakan jenis leukosit yang dikenal sebagai lini pertahanan pertama terhadap infeksi  mikroorganisme.  Neutrofil  berfungsi  memfagositosis  dan  membunuh  organisme (Jain,  1993).  Rataan  kadar  neutrofil  ternak  sapi  perah  laktasi  di  Kelompok  Ternak  Tunas Mekar  KSU  Tandangsari  adalah  berkisar  2,59-4,01  x  10 3 /µL  (Tabel  1).  Hasil  penelitian  ini masih  dalam  kisaran  normal  dengan  nilai  yang  dilaporkan  oleh  Raudya  dkk.  (2022)  yaitu 1,7-6,0 x 10 3 /µL.
Limfosit berperan penting serta menyeluruh pada sistem pertahanan tubuh. Rataan kadar limfosit dalam penelitian ini yaitu berkisar 4,14-4,65 x 10 3 /µL (Tabel 1). Rataan kadar limfosit  mengalami  peningkatan  pada  perlakuan  P0  (4,65  x  10 3 /µL)  yang  diberi  ransum kontrol. Nilai ini masih dalam kisaran nilai yang dilaporkan oleh Raudya dkk. (2022) yaitu 1,8-8,1 x 10 3 /µL.
Monosit  berfungsi  melindungi  tubuh  dari  organisme  penyerang  dengan  cara fagositosis (Guyton dan Hall, 2008). Hasil penelitian ini menunjukkan rataan kadar monosit ternak sapi perah laktasi berkisar 0,52-0,88 x 10 3 /µL (Tabel 1). Namun, rataan kadar monosit tersebut  lebih  tinggi  bila  dibandingkan  dengan  nilai  yang  dilaporkan  oleh  Lumsden  dkk. (1980)  bahwa  kadar  monosit  sapi  perah  Friesian  Holstein  (FH)  yang  normal  adalah  0,3  x 10 3 /µL.  Tingginya  rataan  kadar  monosit  dalam  penelitian  ini  diduga  sebagai  respon  dari suatu  stress  panas.  Hal  ini  didukung  oleh  pernyataan  Suprayogi  dkk.  (2017)  bahwa  stress pada hewan dapat diukur melalui kadar monosit, serta  faktor stress berpengaruh terhadap peningkatan kadar monosit.
Eosinofil  diproduksi  dalam  jumlah  besar  pada  penderita  infeksi  parasit  dan bermigrasi ke jaringan (Guyton dan Hall, 2008). Rataan kadar eosinofil dalam penelitian ini yaitu  berkisar  0,4-0,46  x  10 3 /µL  (Tabel  1).  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  nilai  tersebut
Profil Diferensiasi Leukosit dan Biomarker Stress Sapi Perah Laktasi
sedikit  lebih  rendah  bila  dibandingkan  dengan  nilai  yang  dilaporkan  oleh  Lumsden  dkk. (1980) bahwa kadar eosinofil sapi perah Friesian Holstein (FH) yang normal yaitu berkisar 0,6 x 10 3 /µL. Namun, hasil penelitian ini sejalan dengan pendapat Roland dkk. (2014) yang melaporkan bahwa nilai eosinofil sapi normal berkisar antara 0-1,5 x 10 3 /µL.
Basofil  berperan dalam membangun reaksi hipersensitif dan sekresi mediator yang bersifat vasoaktif (Dellman dan Brown, 1992). Penelitian ini menunjukkan rataan kadar basofil sapi perah laktasi berkisar 0,01-0,03 x 10 3 /µL (Tabel 1). Hasil ini sejalan dengan pendapat  Roland dkk. (2014) bahwa nilai basofil sapi normal adalah 0,-0,03 x 10 3 /µL. Basofil merupakan sel mieloid  dengan  jumlah  paling  sedikit  di  dalam  sirkulasi  darah,  pada  umumnya  akan ditemui dalam kondisi tertentu seperti inflamasi dan alergi (Dharmawan, 2002).
Berdasarkan hasil penelitian ini, kadar leukosit dan diferensiasinya pada sapi perah laktasi di Kelompok Ternak Tunas Mekar KSU Tandangsari yang diberi perlakuan dengan feed  supplement cenderung  memberikan  hasil  yang  lebih  rendah  dibanding  kontrol.
Perlakuan P3 yang terdiri atas 60% hijauan + 40% konsentrat (93% konsentrat + 3% protein by-pass +  2%  Ca-PUFA  +  2%  mineral  organik)  menghasilkan  rataan  profil  diferensiasi leukosit paling rendah (P<0,05) di antara seluruh perlakuan. Lestari dkk. (2013) menyatakan bahwa  kadar  leukosit  dan  diferensiasinya  dipengaruhi  oleh  faktor  genetik  dan  faktor lingkungan. Faktor lingkungan diantaranya ada infeksi dan pakan.
Pembentukan  leukosit  dan  diferensiasinya  membutuhkan  asupan  protein  dalam  bentuk asam amino. Suplementasi protein by-pass banyak mengandung asam amino yang berperan penting dalam respon imun selama stress panas pada sapi perah, karena pemanfaatan asam amino  efektif  untuk  meningkatkan  respon  imun  dan  glukoneogenesis  (Guo  dkk.,  2018). Selain itu, asam amino efektif meningkatkan metabolisme protein dan berdampak terhadap penurunan  stress  panas  serta  meningkatkan  konsentrasi  darah  terutama  leukosit    dalam kisaran normal (Gao dkk., 2017).
Efektivitas  PUFA  dalam  menanggulangi  stress  panas  telah  ditunjukkan  oleh McDonnell  dkk.  (2019)  bahwa  terjadi  peningkatan  performans  dan  status  imun  sapi  FH selama  terjadi  stress  panas.  Ditunjukkan  pula  bahwa  PUFA  mampu  meningkatkan  kadar leukosit  dan  diferensiasinya  dalam  konsentrasi  yang  normal.  Selain  itu,  pemberian  PUFA memiliki berbagai efek pada respon imun dan inflamasi. PUFA berperan dalam metabolisme sel dan memainkan peran penting pada fungsi leukosit (Pompeia dkk., 2000).
Pemberian  mineral  organik  dapat  memperbaiki  sistem  enzim  dan  hormon,  serta  dapat meningkatkan  proses  metabolisme  dalam  tubuh  (Santoso  dkk.,  2021).  Mineral  organik diantaranya  Kromium  (Cr),  Tembaga  (Cu),  Selenium  (Se)  dan  Seng  (Zn)  berperan  penting bagi  kehidupan  sapi  perah.  Suplementasi  Cr  dapat  meningkatkan  produksi  susu,  status imun, dan kesehatan terutama bagi sapi yang sedang dalam keadaan stress dan dalam masa awal  laktasi  (Burton  dkk,  1995).  Mineral  Cu  berperan  dalam  proses  metabolisme  energi dalam  sel  serta  transmisi  impuls  saraf,  sistem  kardiovaskuler,  dan  sistem  kekebalan (Darmono,  2011).  Peran  biologis  Cu  diantaranya  sebagai  komponen  dari  seruloplasmin, superoxide dismutase (SOD), oksidase lisin, dan oksidase sitokrom (NRC, 2001). Selain itu, Cu berperan  dalam  meningkatkan  imunitas  dan  tingkat  kebuntingan  (Kurnia  dkk.,  2012).  Se berperan  dalam  fungsi  homeostasis  dan  metabolisme  selenium  berfungsi  sebagai antioksidan (Neve, 2002). Mineral Se secara efektif dapat meringankan kerusakan sel akibat stress  panas.  Selain  itu,  mineral  Se  pula  mempengaruhi  respon  imun  di  beberapa  spesies ternak melalui aktivasi fagositosis oleh neutrofil sehingga meningkatkan produksi antibodi dan proliferasi limfosit (Kamada dkk., 2007). Zn terlibat dalam beberapa proses biologi dan merupakan anti inflamasi (Bonaventura dkk., 2015).
Pengaruh Pemberian Feed Supplement terhadap Biomarker Stress
Pengaruh pemberian feed supplement dalam ransum terhadap biomarker stress yang meliputi  alkaline  phosphatase,  kreatinin,  kreatin  kinase,  Gamma  Glutamil  Transpeptidase (γ-GT), dan Laktat Dehidrogenase (LDH) berdasarkan penelitian ditampilkan pada Tabel 2.
Tabel  2.  Rataan  Kadar  Biomarker  Stress  Sapi  Perah  Laktasi  dengan  Pemberian Feed Supplement berbagai Perlakuan Parameter Perlakuan P0 P1 P2 P3 Alkaline Phosphatase (U/L) 39,53±0,76 c 37,94±0,67 b 37,32±0,38 b 35,86±1,10 a Kreatinin (µmol/L) 117,41±2,35 d 111,41±3,20 c 102,72±2,05 b 97,75±2,09 a Kreatin Kinase (U/L) 3,65±0,19 d 3,22±0,09 c 2,89±0,12 b 2,21±0,0,17 a Gamma Glutamil Transpeptidase (U/L) 13,81±0,10 d 13,58±0,13 c 13,06±0,13 b 12,78±0,14 a Laktat Dehidrogenase (U/L) 11,53±1.04 c 9,19±0,37 b 8,37±0,38 ab 8,02±0,61 a
* a,b,c,d Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Hasil  analisis  sidik  ragam  menunjukkan  bahwa  pemberian feed  supplement berpengaruh nyata (P<0,05) terhadap total bilirubin, alkaline phosphatase, kreatinin, kreatin kinase,  Gamma  Glutamil  Transpeptidase  (γ-GT),  dan  Laktat  Dehidrogenase  (LDH).
Profil Diferensiasi Leukosit dan Biomarker Stress Sapi Perah Laktasi
Selanjutnya dilakukan uji jarak berganda Duncan untuk mengetahui perbedaan rataan antar perlakuan.  Paramater  Alkaline  Phosphatase  (ALP)  seperti  yang  ditampilkan  pada  Tabel  2 berbeda  nyata  (P<0,05)  pada  setiap  perlakuan.  Berdasarkan  hasil  penelitian,  sapi  perah laktasi  yang  diberi  perlakuan  P0  memiliki  rataan  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  P1 sampai P3 yaitu secara berurutan 39,53 U/L; 37,94 U/L; 37,32 U/L; dan 35,86 U/L. Mohebbi dkk.  (2010)  melaporkan  bahwa  kadar  ALP  pada  sapi  perah  menurun  seiring  dengan bertambahnya paritas.
Pengaruh  pemberian feed  supplement terhadap  kreatinin  sapi  perah  laktasi ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Berdasarkan hasil  penelitian,  kadar  kreatinin  sapi  perah  laktasi pada  P0  (117,41  µmol/L)  berbeda  nyata  (P<0,05)  lebih  tinggi  dibandingkan  P1  sampai  P3 yaitu  masing-masing  111,41  µmol/L;  102,72  µmol/L;  dan  97,75  µmol/L.  Nilai  rataan  ini masih dalam kisaran nilai kreatinin sapi perah yang dilaporkan oleh penelitian Jonsson dkk. (2013) yaitu 97,5-111 µmol/L. Peningkatan kadar kreatinin di dalam darah dapat disebabkan oleh  adanya  kerusakan  ginjal  terutama  karena  gangguan  filtrasi  glomerulus,  nekrosis tubulus akut, dehidrasi dan pada gagal ginjal (Kerr, 2002; Meyer dan Harvey, 2004; Wahjuni dan Bijanti, 2006).
Pada  Tabel  2  ditunjukkan  pengaruh  pemberian feed  supplement terhadap  kreatin kinase sapi perah laktasi. Tampak bahwa setiap perlakuan memiliki perbedaan yang nyata (P<0,05).  Berdasarkan  hasil  penelitian,  rataan  kreatin  kinase  pada  sapi  perah  laktasi  yang diberikan perlakuan P0 memiliki nilai lebih tinggi dibandingkan dengan P1 sampai P3 yaitu secara berurutan 3,65 U/L; 3,22 U/L; 2,89 U/L; dan 2,21 U/L. Menurut Howard dkk. (2013) melaporkan bahwa kondisi stress panas mengakibatkan metabolisme otot menyumbangkan energi melalui perombakan kreatin posfat menjadi kreatinin oleh enzim kreatin kinase. Hal ini  mengindikasikan  bahwa  kadar  kreatinin  dan  kreatin  yang  tinggi  dalam  plasma menunjukkan ternak tersebut mengalami stress panas.
Enzim  Gamma  Glutamil  Transpeptidase  (γ-GT)  merupakan  enzim  yang  banyak terdapat di dalam sel-sel jaringan jantung. Usaha homeostasis yang melibatkan kerja jantung (Shinder dkk., 2007; Roland dkk., 2016) dalam rangka penyediaan energi (Rhoads dkk., 2013) berdampak  terhadap  peningkatan  kematian  sel-sel  jantung  (nekrosis).  Hasil  penelitian terdahulu  menunjukkan  bahwa  kematian  sel-sel  (nekrosis)  menyebabkan  peningkatan migrasi  metabolit  ke  sirkulasi  darah  (Mushawwir  dan  Latipudin,  2013;  Ipplito  dkk.,  2014, Mushawwir dkk., 2019, Tanuwiria dkk., 2020b). Pada Tabel 2, tampak bahwa kadar Gamma
Glutamil  Transpeptidase  (γ-GT)  lebih  tinggi  (P<0,05)  pada  sapi  perah  laktasi  yang  hanya diberi  perlakuan  P0  (ransum  kontrol)  dibandingkan dengan  sapi  perah  laktasi  yang diberi perlakuan  P1,  P2,  dan  P3.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  kadar  γ-GT  berbeda nyata (P<0,05) pada setiap perlakuan. Kadar γ-GT tampak terjadi penurunan dari P0 hingga P3 yaitu secara berturut-turut 13,81 U/L; 13,58 U/L; 13,06 U/L; dan 12,78 U/L. Berdasarkan hasil tersebut dapat dilihat bahwa perlakuan P3 memberikan rataan kadar γ-GT yang paling rendah di antara semua perlakuan.
Pengaruh pemberian feed supplement terhadap kadar LDH ditunjukkan pada Tabel 2.
Berdasarkan Tabel 2, kadar LDH pada P0 berbeda nyata (P<0,05) lebih tinggi dibandingkan dengan P1 sampai P3 yang diberi perlakuan feed supplement yaitu secara berurutan 9,19 U/L; 8,37  U/L;  dan  8,02  U/L.  Peningkatan  kadar  LDH  dalam  darah  dapat  digunakan  sebagai biomarker  pada  saat  terjadinya  kerusakan  sel,  kerusakan  membran  otot,  dan  struktur jaringan (Foschini dan Prestes, 2007, Tanuwiria dkk., 2020a,b) serta dapat dijadikan penanda paling awal dalam darah selama terjadi stress panas (Mushawwir dkk. 2020a.b).
Berdasarkan hasil penelitian ini, kadar-kadar senyawa metabolit dalam darah seperti Alkaline Phosphatase (ALP), kreatinin, kreatin kinase, Gamma Glutamil Transpeptidase (γ- GT),  dan  Laktat  Dehidrogenase  (LDH)  yang  dijadikan  sebagai  penanda  stress  pada  sapi perah  laktasi  di  Kelompok  Ternak  Tunas  Mekar  KSU  Tandangsari  yang  diberi  perlakuan dengan feed  supplement cenderung  memberikan  rataan  nilai  yang  lebih  rendah  dibanding kontrol. Perlakuan P3 yang terdiri atas 60% hijauan + 40% konsentrat (93% konsentrat + 3% protein by-pass + 2% Ca-PUFA + 2% mineral organik) menghasilkan rataan penanda stress paling rendah (P<0,05) di antara seluruh perlakuan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian feed  supplement memberikan pengaruh nyata terhadap profil diferensiasi leukosit dan biomarker stress sapi perah  laktasi  di  kelompok  ternak  Tunas  Mekar  KSU  Tandangsari.  Hal  ini  ditunjukkan dengan perbedaan kadar leukosit dan diferensiasinya serta senyawa metabolit dalam darah yang  dijadikan  penanda  stress.  Perlakuan  yang  memberikan  pengaruh  terbaik  yaitu  pada sapi perah laktasi perlakuan P3 yang diberi ransum berupa  60% hijauan + 40% konsentrat (93% konsentrat + 3% protein by-pass + 2% Ca-PUFA + 2% mineral organik).
Profil Diferensiasi Leukosit dan Biomarker Stress Sapi Perah Laktasi

## DAFTAR PUSTAKA
Bonaventura,  P.,  Benedetti,  G.,  Albarède,  F.,  dan  Miossec,  P.  2015.  Zinc  and  its  role  in immunity and inflammation. Autoimmunity reviews , 14(4), 277-285.
Burton,  J.  L.,  Nonnecke,  B.  J.,  Elsasser,  H.,  Mallard, B.  A., Yang,  W.Z.,  and    Mowat,  D. N. 1995.  Immunomodulatory  activity  of  blood  serum  from  chromium-supplemented periparturient dairy cows . Veterinary Immunology and Immunopathology , 49(1-2), 29-38. Darmono.  2011.  Suplementasi  logam  dan  mineral  untuk  kesehatan  dalam  mendukung program swasembada daging. Pengembangan Inovasi Pertanian , 4(3), 215-217. Das,  R.,  Sailo,  L.,  Verma,  N.,  Bharti,  P., Saikia,  J.,  Imtiwati,  and  Kumar,  R.  2016.  Impact  of heat  stress  on  health  and  performance  of  dairy  animals:  a  review. Veterinary  World , 9(3), 260–268.
Dellman dan Brown, E.M. 1992. Buku Teks Histologi Veterinary I. Ed ke-3 . UI Press, Jakarta. Dharmawan, N. S. 2002. Pengantar Patologi Klinik Veteriner . Pelawa Sari, Denpasar.
Foschini,  D  and  Prestes,  J.  2007.  Acute  hormonal  and  immune  responses  after  a  bi-set strength training. Fitness and Performance Journal , 6, 38-44.
Gao, S. T., Guo, J., Quan, S.Y., Nan, X. M., Fernandez, M. S., Baumgard, L.H., and Bu, D.P. 2017. The effects of heat stress on protein metabolism in lactating holstein cows. Journal of Dairy Science , 100(6), 5040-5049.
Guo,  J.,  Gao,  S.,  Quan,  S.,  Zhang,  Y.,  Bu,  D.,  and  Wang,  J. 2018. Blood amino  acids  profile responding  to  heat  stress  in  dairy  cows. Asian-Australasian  Journal  of  Animal Sciences , 31(1), 47. Guyton dan Hall. 2008. Buku ajar Fisiologi Kedokteran ed. 11 . EGC, Jakarta.
Howard,  J.  T.,  Kachman,  S.  D.,  Nielsen,  M.K.,  Mader,  T.L.,  dan  Spangler,  M.L.  2013.  The effect of myostatin genotype on body temperature during extreme temperature events. Journal of Animal Science , 91(2), 3051-3058.
Ippolito, D. L., Lewis, J.A., Yu, C., Leon, L., and Stallings, J. D. 2014. Alteration in circulating metabolites  during  and  after  heat  stress  in  the  conscious  rat:  potential  biomarkers  of exposure and organspecific injury. BMC Physiology , 14, 14.
Jain, N. C. 1993. Essential of Vetenary Hematology . Lea dan Febiger. Philadelphia.
Jonsson, N. N., Fortes, M. R. S., Piper, E. K., Vankan, D. M., de Cisneros, J. P. J., and Wittek, T.  2013.  Comparison  of  metabolic,  hematological,  and  peripheral  blood  leukocyte cytokine profiles of dairy cows and heifers during the periparturient period. Journal of Dairy Science , 96(4), 2283-2292.
Kamada,  H.,  Nonaka,  I.,  Ueda,  Y.,  and  Murai,  M.  2007.  Selenium  addition  to  colostrum increases  immunoglobulin  G  absorption  by  newborn  calves. Journal  of  Dairy  Science , 90(12), 5665-5670.
Kerr, M. G. 2002. Veterinary Laboratory Medicine, Clinical Biochemistry and Hematology . 2nd Ed. Blackwell Science.
Kurnia,  F.,  Suhardiman,  M.,  Stephani,  L.,  dan  Purwadaria,  T.  2012.  Peranan  nano-mineral sebagai bahan imbuhan pakan untuk meningkatkan produktivitas dan kualitas produk ternak. Wartazoa , 22(4), 187-193.
Lestari, S. H. A., Ismoyowati, dan Indradji, M. 2013. Kajian jumlah leukosit dan diferensial leukosit pada berbagai jenis itik lokal betina yang pakannya di suplementasi probiotik. Jurnal Ilmiah Peternakan , 1(2), 699-709.
Lumsden,  J.  H.,  Mullen,  K.,  dan  Rowe,  R.  1980.  Hematology  and  biochemistry  reference values for female Holstein cattle. Canadian Journal of Comparative Medicine , 44(1), 24.
McDonnell, R. P., O’Doherty, J. V., Earley, B., Clarke, A.M., and Kenny, D.A. 2019. Effect of supplementation  with  n-3  polyunsaturated  fatty  acids  and/or  β-glucans  on performance,  feeding  behaviour  and  immune  status  of  holstein  friesian  bull  calves during  the  pre-  and  post-weaning  periods. Journal  of  Animal  Science  and Biotechnology , 10(1), 1-17. McDowell,  R.E.  1974. The  Environment  Versus  Man  and  His  Animals .  In:  H.H.  Cole  and  M. Ronning (Eds.). Animal Agriculture. W.H. Freeman and Co., San Fransisco.
Meyer,  D.  J.,  and  Harvey,  J.W.  2004. Veterinary  Laboratory  Medicine  Interpretation  and Diagnosis . 3rd ed. Elsevier. USA. 225–231.
Mirzadeh,  Kh.,  Tabatabaei,  S.,  Bojarpour,  M.,  and  Mamoei,  M. 2010.  Comparative  study  of hematological parameter according strain, age, sex, physiological status and season in Iranian cattle. Journal of Animal and Veterinary Advances , 9(16), 2123  2127. Mohebbi, A., Khaghami, A., dan Mohammadnia, A. 2010. Bone-specific alkaline phosphatase activity in dairy cows. Comparative Clinic Pathology , 19, 33–36. Mushawwir,  A.  dan  Latipudin,  D.  2013. Biologi  Sintesis  Telur:  Aspek  Fisiologi,  Biokimia  dan Molekuler dalam Produksi Telur . Graha Ilmu. Mushawwir, A., Suwarno, N., dan Yulianti, A. A 2019. Thermoregulasi domba ekor gemuk yang  dipelihara  pada  ketinggian  tempat  (altitude)  yang  berbeda. Jurnal  Ilmu  dan Industri Peternakan , 5(2), 77-86. Mushawwir, A., Yulianti, A.A., Suwarno, N., dan Permana, R. 2020 a . Profil metabolit plasma darah  dan  aktivitas  kreatin  kinase  sapi  perah  berdasarkan  fluktuasi  mikroklimat lingkungan kandangnya. Jurnal Veteriner , 21, 24-30.
Mushawwir, A.,  Arifin, J., Darwis, D., Puspitasari, T., Pengerteni, D S., Nuryanthi, N., and Permana, R. 2020 b . Liver metabolic activities of Pasundan cattle induced by irradiated chitosan. Biodiversitas Journal of Biological Diversity , 21(12), 5571-5578. Neve,  J.  2002.  Selenium  as  a  ‘nutraceutical’:  how  to  conciliate  physiological  and supranutritional  effects  for  an  essential  trace  element. Current  Opinion  in  Clinical Nutrition and Metabolic Care , 5(6), 659-663.
NRC (National Research Council). 2001. Nutrient Requirement of Dairy Cattle . 6th Revised edit. National Academy Press, Washington, D.C.
Pompeia,  C.,  Lopes,  L.R.,  Miyasaka,  C.K.,  Procópio,  J.,  Sannomiya,  P.,  and  Curi,  R.  2000. Effect  of  fatty  acids  on  leukocyte  function. Brazilian  Journal  of  Medical  and  Biological Research , 33, 1255-1268.
Raudya,  D.,  Ariyanto,  E.  F.,  Septiyani,  dan  Rosdianto,  A.  M.  2022.  Rasio  Neutrofil  dan Limfosit pada Sapi Perah Prepartum dan Postpartum. Jurnal Sains Veteriner , 40(2), 197- 204.
Rensis, F. D., Ispierto, I.G., dan Gatius, F. L., 2015. Seasonal Heat Stress: Clinical Implications and Hormone Treatments for the Fertility of Dairy Cows. Theriogenology , 84(5), 659-666. Rhoads, R. P., Baumgard, L.H., and Suagee, J K. 2013. Metabolic priorities during heat stress with an emphasis on skeletal muscle. Journal of Animal Science , 91, 2492–2503. Roland,  L.,  Drillich,  M.,  and  Iwerse,  M.  2014.  Hematology  as  a  diagnostic  tool  in  bovine medicine. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation , 26(5), 592-598.
Roland,  L.,  Drillich,  M.,  Klein-Jobstl,  D.,  and  Iwerse,  M.  2016.  Invited  review:  Influence  of climatic conditions on the development,  performance, and health of claves. Journal of Dairy Science , 99, 2438-52.
Santoso, I. G. D.,  Salman, L. B., Tasripin, D. S., Mutaqin, B. K., dan Tanuwiria, U. H. 2021. Pengaruh  pemberian  feed  supplement  dalam  ransum  lengkap  terhadap  performans
Profil Diferensiasi Leukosit dan Biomarker Stress Sapi Perah Laktasi
pedet  sapi  perah  yang dipelihara  di  dataran  sedang. Jurnal  Sumber  Daya  Hewan , 2(2), 35-40.
Shinder,  D.,  Rusal,  M.,  Tanny,  J.,  Druyan,  S.,  and  Yahav,  S.  2007.  Thermoregulatory responses  of  chicks  ( Gallus  domesticus )  to  low  ambient  temperatures  at  an  early  age. Poultry Science , 86, 2200–2209.
Suprayogi, A., Alaydrussani, G., dan Ruhyana, A.Y. 2017. Nilai hematologi, denyut jantung, frekuensi  respirasi,  dan  suhu  tubuh  ternak  sapi  perah  laktasi  di  Pangalengan. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia , 22(2), 127-132.
Suwarno, N., dan Mushawwir, A. 2019. Model prediksi metabolit melalui jalur glikogenolisis berdasarkan  fluktuasi  mikroklimat  lingkungan  kandang  sapi  perah. Jurnal  Ilmu  dan Industri Peternakan , 5(2), 77-86.
Tanuwiria,  U.    H.,  Budinuryanto,  D.  C.,  Darodjah,  S  dan  Putranto,  W.S.  2011.  Studi pembuatan  kompleks  mineral-minyak  dan  efek  penggunaannya  dalam  ransum terhadap fermentabilitas dan kecernaan (in vitro) (study of oil-mineral complex and it effects on in vitro fermentability and digestibility). Jurnal Ilmu Ternak , 10(1), 32-38. Tanuwiria,  U.  H.,  Hernaman,  I.,  Susilawati,  I.,  dan  Ayuningsih,  B.  2018.  Peningkatan performa produksi dan reproduksi sapi perah melalui rekayasa nutrisi pakan. Laporan Kemajuan. Riset Academic Leadership Grant (ALG) . Universitas Padjadjaran. Tanuwiria,  U.  H.,  dan  Mushawwir,  A. 2020 a . Hematological and antioxidants  responses  of dairy cow fed with a combination of feed and duckweed ( Lemna minor ) as a mixture for improving  milk  biosynthesis. Biodiversitas  Journal  of  Biological  Diversity, 21(10),  4741- 4746.
Tanuwiria,  U.H.,  Tasrifin,  D.,  dan  Mushawwir,  A.  2020 b .  Respon  gamma  glutamil transpeptidase (  -gt) dan kadar glukosa sapi perah pada ketinggian tempat (altitude) yang berbeda. Jurnal Ilmu dan Industri Peternakan , 6, 25-34.
Tanuwiria,  U.  H.,  Susilawati,  I.,  Budimulyati,  L.,  Tasripin,  D.,  dan  Mutaqin,  B.K..  2021. Manajemen  pemeliharaan  pada  pembesaran  pedet  betina  menuju  sapi  produktif  di KSU Tandangsari. Farmers: Journal of Community Services , 2(1), 35-41. Wahjuni, R. S., dan Bijanti, R. 2006. Uji Efek Samping formula pakan komplit terhadap fungsi hati dan ginjal pedet sapi Friesian Holstein. Jurnal Kedokteran Hewan , 22(3), 174–178. Yadav,  A.,  Kumari,  R.,  Mishra,  J.P.,  Srivatva,  S.,  and  Prabha,  S.  2016.  Antioxidants  and  its functions in human body-A Review. Research in Environment Life Sciences , 9 (11), 1328- 1331.