## ANALISIS UJI KADAR SENYAWA DAN UJI ANTIOKSIDAN EKSTRAK PROPOLIS COKLAT DARI LEBAH TRIGONA SP.
Analysis Chemical composition and antioxidant activity of the crude brown propolis extracts from Trigona sp
Novriza Sativa 1 dan Rini Agustin 2
1 Dosen Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Garut
2 Mahasiswa Magister Biologi Laboratorium Fisologi, SITH, ITB E-mail: nasativa2@gmail.com

## ABSTRAK
Propolis merupakan senyawa resin berasal dari berbagai tanaman yang dihasilkan oleh lebah. Penelitian  ini dilakukan untuk menguji  senyawa kadar senyawa  yang terkandung dalam Propolis Coklat dari lebah Trigona sp . Pelarut yang digunakan dalam  membuat  ekstrak  propolis  adalah  alkohol  70%.  Ekstrak  Etanol  Propolis (EEP)  dimaserasi  dan  dihomogenkan  menggunakan shaker selama  1  minggu. Propolis yang telah maserasi kemudian disaring dengan kertas saring dan diuapkan menggunakan rotavapour untuk  menghilangkan  pelarut.  Ekstrak  propolis kemudian di uji kadar senyawa yang terkandung di dalamnya dengan menggunakan Gas  Chromatography–Mass  Spectrometry (GC-MS).  Sedangkan  uji  kadar antioksidan  menggunakan  uji 2,2-dyphenyl-1picrylhydrazyl (DPPH)  yang menunjukkan bahwa propolis mampu menghambat radikal bebas.
Kata kunci: Propolis, GC-MS, DPPH, Ekstrak, Trigona sp

## ABSTRACT
Propolis is a resin compound derived from various plants produced by bees. The study was conducted to test the levels of compounds contained in brown Propolis from Trigona sp. Extract propolis solvent is used 70% alcohol. Propolis Ethanol Extract  (EEP)  was  macerated  and  homogenized  using  a  shaker  for  1  week.  The macerated  propolis  filtered  with  Whatmann  paper  and  evaporated  using  a rotavapour to remove the solvent. Propolis extract compound tested by using Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) while the antioxidant level used the 2,2-dyphenyl-1picrylhydrazyl (DPPH) test which showed that propolis was able to inhibit free radical scavenging.
Keywords : propolis, GC-MS, DPPH, Trigona sp, Extract

## PENDAHULUAN
Indonesia mempunyai keanekaragaman biodiversitas yang tinggi baik flora maupun  faunanya  sebagai  sumber  bahan  alam  obat-obatan.  Propolis  merupakan senyawa  resin  yang  berasal  dari  berbagai  macam  tanaman  dan  dihasilkan  oleh lebah.  Propolis  biasa  digunakan  oleh  lebah  untuk  membuat,  menutupi  sekaligus melindungi celah pada sarang sehingga dikenal dengan sebutan “bee glue” (Bruno, 2005).  Propolis  atau  disebut  juga  lem  lebah,  lengket  dan  berwarna  kehitaman, diperoleh dari resin tanaman yang tercampur dengan secretory lebah berupa lilin.
Propolis  biasanya  gunakan  untuk  mengkontruksi  dan  adaptasi  sarangnya,  serta sebagai  antibakteri  (Seidel,  2008)  tetapi  fungsi  utamanya  adalah  untuk  mengisi retakan yang terjadi di sarang lebah (Bankova dkk, 2002; Massaro dkk, 2013).
Propolis  terdiri  dari  campuran  senyawa  resin,  minyak  esensial,  dan  lilin
( wax ),  selain  itu  juga  mengandung  asam  amino,  terpenoid,  asam  benzoat,  ester, mineral, etanol, vitamin A, vitamin B, E, senyawa fenolik, serta flavonoid (Bruno, 2005).  Sejak  beberapa  abad  yang  lalu,  propolis  telah  digunakan  untuk  bidang pengobatan.  Propolis  dikenal  mempunyai  kemampuan  anti  mikroba,  antioksidan dan anti tumor. Sehingga propolis menjadi perhatian para peneliti untuk diketahui kandungan serta zat kimia yang potensial untuk pengobatan dan kosmetik (Lotfy, 2006).  Selain  itu  propolis  telah  digunakan  sejak  lama  pada  zaman  Mesir  Kuno sebagai agen anti pembusukan untuk mengawetkan jasad manusia menjadi mumi (Sforcin, 2010).
Beberapa  tahun  belakangan  di  Indonesia  sempat booming penggunaan propolis  dengan  informasi  untuk  mengobati  berbagai  penyakit.  Tetapi  komposisi propolis  ditiap  daerah  baik  di  Indonesia  maupun  di  luar  biasanya  berbeda tergantung dari sumber tanaman yang diperoleh oleh lebah. Adapun penelitian ini dilakukan untuk mengetahui komposisi apa saja yang terdapat di propolis beserta perkiraan kadarnya dan hasil uji dari antioksidan propolis coklat dari lebah Trigona sp.

## METODE PENELITIAN

## Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Bandung, di Laboratorium Fisiologi SITH dan Gedung PAU ITB pada Januari-Maret 2017.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini  adalah blender, gelas ukur, becker glass , erlenmeyer, shaker ,  aluminium  foil,  kertas  saring Whatmann ,  plastik  wrap, timbangan, rotavapour , GC MS dan DPPH. Adapun bahan yang digunakan adalah propolis coklat lebah Trigona sp . dari daerah Maribaya Bandung.

## Metodologi Penelitian
Propolis  diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  (Hasan  dkk,  2013)  dengan modifikasi. Propolis kasar (didapatkan dari daerah Maribaya Bandung, Jawa Barat) dihaluskan  dengan  menggunakan  blender  kemudian  me-maserasi-nya  dengan etanol 70% lalu di-shaker selama satu minggu dan ekstrak etanolik propolis (EEP) sebelum dipanen. Proses maserasi diulang dengan waktu pemanenan filtrat 1x24, proses  tersebut  dilakukan  sampai  EEP  berwarna  tidak  pekat.  EEP  kemudian disaring  dengan  kertas  saring  Whatmann  yang  kemudian  diuapkan  dengan rotavapour dan dikeringkan. Hasil ekstrasi propolis ini kemudian di analisis Gass Chromatography-Mass Spectrophotometry (GC-MS) untuk mengetahui komponen kimia di dalamnya dan dilakukan uji antioksidan dengan uji DPPH. Analisis GC- MS  dan  Uji  DPPH  dilakukan  di  Laboratorium  Politeknik Akademi  Kimia Analis (AKA) Bogor, Jawa Barat

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Analisis GC-MS
Pada  penelitian  ini,  digunakan  ekstrak  etanol  propolis  yang  diekstraksi  dengan menggunakan  pelarut  etanol  70%  untuk mendapatkan  ekstrak  yang  mengandung fenol tinggi (Cunha, 2004). Hasil dari ekstraksi propolis dianalisis dengan GC-MS untuk mengetahui senyawa kimia yang terkandung didalamnya. Dari hasil GCMS diketahui terdapat 55 macam senyawa aktif dalam propolis.

## Tabel Komponen Senyawa Kimia dari Propolis Hasil GCMS
No Senyawa Kimia Konsentrasi Area (%) 1 Acetic acid 6.32 2 N-(2-Hydroxyethyl)lactamide 1.27 3 d-Threo-O-ethylthreonine 1.34 4 Styrene 0.66 5 1,2-Propanediol diformate 0.38 6 1-Piperidinepropanol, .alpha.-cyclohexyl-.alpha.-phenyl- 3.07 7 Butane, 1,2,4-trimethoxy- 0.70 8 Acetic acid, trifluoro- 0.43 9 Propanal, 3-methoxy- 0.02 10 Propanamide, 2-hydroxy- 1.00 11 Propanamide, 2-hydroxy- 0.07 12 Propanamide, 2-hydroxy- 1.46 13 Propanamide, 2-hydroxy- 0.74 14 Hydroperoxide, 1-methylpentyl 0.05 15 Propanamide, 2-hydroxy- 0.81 16 Propanamide, 2-hydroxy- 0.06 17 Butanoic acid, 2-oxo- 0.04 18 Butanoic acid, 2-oxo- 0.02 19 (3-Methyl-oxiran-2-yl)-methanol 0.09 20 Hydroperoxide, 1-methylbutyl 0.07 21 Ethanol, 2-bromo- 0.23 22 Butanoic acid, 2-oxo- 0.31 23 1-(2-Hydroxyethoxy)-2-(vinylthio)ethane 0.02 24 3-(1-Ethoxyethoxy)-butyraldehyde 0.14 25 (3-Methyl-oxiran-2-yl)-methanol 2030 1000194-22-9 47 0.08 26 27 28 29 30 31 32 33 Ethanol, 2-bromo- 3-Pentanone, dimethylhydrazone Imidodicarbonic acid, diethyl ester Thioguanine Methyl .beta.-d-galactopyranoside .alpha.-D-Glucopyranoside, .alpha.-D-glucopyranosyl Stevioside 7-Hydroxy-3-(1,1-dimethylprop-2 0.03 0.11 0.08 0.35 10.96 0.03 0.82 0.18
34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 3-Cyclohexyl-4-morpholin-4-yl-py Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one Dodecanoic acid Hexadecanoic acid, ethyl ester Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 4,7,7-trimethyl-,
semicarbazone
Spiro-1-(cyclohex-2-ene)-2'-(5'-... cis-7,cis-11-Hexadecadien-1-yl a...
Ethyl Oleate
4-Allyl-5-furan-2-yl-2,4-dihydro-[1,2,4]triazole-3- thione 6-Chloro-N-methyl-3-pyridazinamine
Methyl 3-(1-pyrrolo)thiophene-2-... 8,11-Octadecadienoic acid, methy... 2-Butenenitrile, 2-chloro-3-(4-m... 2-Aminoacetic acid, N-diphenylme... 3,6-Bis(N-dimethylamino)-9-ethyl... 1-Propanone, 3-(2-hydroxyphenyl)... Pyrido[2,3-d]pyrimidine, 4-phenyl- 5-Imidazolic amide, 4-amino-2-[4... 2-Ethylacridine 2-Methyl-7-phenylindole Dithiocarbonic acid, S-(2,3-diph... 5H-Cyclohepta[b]pyridine-3-carbo... 0.38 0.17 1.32 4.77 0.17 0.97 0.54 17.52 0.28 4.30 1.18 10.74 1.40 6.29 1.03 4.10 2.06 6.54 1.68 0.82 0.55 1.14
Komposisi dari propolis di atas, dari hasil GCMS berbeda dengan hasil uji senyawa pada penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Bankova dkk (2002) di Eropa.  Dari  penelitian  tersebut  diketahui  propolis  diantaranya  mengandung pinocembrin, pinobanksin, adn 3-O-acetate, chrysinm galangin, prenyl esters dari caffeic dan ferulic acids . Selain itu penelitian lain yang berbeda signifikan adalah di  Switzerland  yang  kaya  akan phenolic  glycerides dibandingkan  dengan  daerah
Sicily yang sangat sedikit mengandung phenolic tetapi kaya akan diterpenic acids .
Hal ini karena kondisi dari geografi, waktu, tanaman dan lokasi suatu daerah tempat ditemukannya  sarang  lebah  yang  mengandung  propolis,  mempunyai  kadar komposisi senyawa, warna dan aroma yang berbeda (Lotfy, 2006).
Pada hasil uji GC-MS propolis diatas, komponen senyawa kimia yang telah teridentifikasi  oleh  hasil  GC-MS  dengan  Quality  diatas  70  adalah acetic  acid dengan  luas  area  konsentrasi  sebesar  6.32%.  Senyawa  kedua  adalah  Styrene sebanyak  0.66%  yang  merupakan  senyawa  yang  dapat  ditemukan  di  alam  dari tanaman  dan  berbagai  makanan  seperti  buah-buahan,  sayuran,  kacang  kacangan,
minuman dan daging-dagingan (Pubchem, 2018). Senyawa ini, termasuk golongan fenol jikadilihat dari strukturnya yang mempunyai cincin aromatik yang berikatan dengan gugus hidroksil.
Senyawa ketiga yang sudah dipastikan senyawa yang terdapat pada propolis coklat ini adalah Dodecanoic acid sebesar 1.32%. Nama lainnya adalah lauric acid atau asam laurat yang merupakan turunan dari asam lemak yang termasuk kedalam trigliserida. Biasanya dapat ditemukan pada berbagai tanaman palm, pala, durian, melon, bunga labu dan lainnya (wikipedia, 2018). Senyawa Hexadecanoic acid, ethyl ester atau nama lainnya adalah ethyl palmitat merupakan senyawa ke empat yang diperkirakan konsentrasinya sebesar 4,77% dalam propolis ini. Senyawa ini dapat ditemukan pada buah plum, anggur, jambu batu, melon, nanas, dan beberapa tumbuhan lain (Pubchem, 2018).
Senyawa  selanjutnya  adalah Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one,  4,7,7-trimethyl-, semicarbazone dengan rumus formula C 11 H 19 N 3 O mempunyai konsentrasi 0,17%. Senyawa  ini  biasanya  ditemukan  pada  hasilekstrak  tanaman  mint  (Naidu  dkk, 2012). Ethyl Oleate merupakan senyawa paling tinggi dengan konsentrasi mencapai 17.52%.  Merupakan  senyawa fatty  acid  ethyl  ester (FAEE)  atau  asamlemak  dan diidentifikasi  merupakan  feromon  utama  yang  biasanya  ditemukan  pada  lebah, terbentuk  setelah  proses  pencernaan  yang  mengandung  etanol  (wikipedia,  2018). Senyawa terakhir yang dapat dipastikan merupakan komponen dari propolis adalah 4-Allyl-5-furan-2-yl-2,4-dihydro-[1,2,4]triazole-3-thione. Senyawa  dengan  rumus molekul C 9 H 9 N 3 OS mempunyai konsentrasi 0,28%.

## Aktivitas Antioksidan
Uji  DPPH  dilakukan  untuk  mengetahui  kadar  antioksidan  dari  propolis  yang dibandingkan  dengan  antioksidan  alami  yaitu  asam  askorbat.  Dari  hasil  uji antioksidan  ini  diketahui  kemampuan  dalam  menangkap  radikal  bebas ketikapemberian  konsentrasi  yang  terus  dinaikkan.  Berdasarkan  nilai  Inhibition Concentration  IC50,  ekstrak  propolisini  mampu  menghambat  radikal  bebas sebanyak  50%  jika  konsentrasi  yang  diberikan  adalah  sebanyak  14,53  ppm.
Sehingga  diduga  senyawa  fenol  dalam  propolis  berperan  aktif  dalam  mengikat radikal bebas.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini,  hasil  ekstrak  propolis  diketahui  mempunyai  55 komponen senyawa aktif, tetapi yang dapat dipastikan merupakan senyawa utama dari  propolis  hanya  7  macam  senyawa  berdasarkan  hasil  uji  GC-MS.  Sehingga diperlukan  pengujian  hasil  analisis  GC-MS  di  tempat  lain  sebagai  perbandingan untuk memastikan nama-nama senyawa lain yang belum teridentifikasi secara pasti. Sedangkan  hasil  uji  antioksidan  diketahui  propolis  mempunyai  aktivitas  sebagai antioksidan yang tinggi sesuai dengan jumlah konsentrasinya.

## SARAN
Penelitian masih memerlukan uji lanjutan dengan pengujian menggunakan GC-MS di  tempat  lain  untuk  memastikan  komponen  yang  terkandung  didalamnya.  Hasil Quality dari best  hits GC-MS  diduga  zat  pengotor  atau  kemungkinan data  base senyawanya terbatas. Sehingga diperlukan beberapa pengujian GC-MS dibeberap tempat untuk memastikan senyawa aktif pada propolis coklat ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Bankova,  Vassya,  Milena  Popova,  Stefan  Bogdanov  and  Anna-Gloria  Sabatini. 2002.  Chemical  Composition  of  European  Propolis  Expected  and Unexpected Result. Z. Naturforsch. 57c, 530-533.
Bruno,  Gene.  2005.  Bee  Pollen,  Propolis,  and  Royal  Jelly.  Hutington  College  of Health Sciences, Hal. 1-3.
Cunha,  Ildenize  B.  S.,  Alexandra  C.  H.  F.  Sawaya,  Fabio  M.  Caetano,  Mario  T. Shimizu, Maria C. Marcucci, Flavia T. Drezza, Giovanna S. Povia and Patricia  de  O.  Carvalho.  2004.  Factors  that  Influence  the  Yield  and composition of Brazilian Propolis Extracts. J. Braz. Chem. Soc. Vol 15, No. 6, 964-970.
Hasan, A.E.Z., D. Mangunwidjaja, T.C. Sunarti, O. Suparno, dan A. Setiono. 2013. Optimasi Ekstraksi Propolis Menggunakan Cara Maserari dengan Pelarut Etanol  70%  dan  Pemanasan  Gelombang  Mikro  serta  Karakterisasinya
sebagai Bahan Antikanker Payudara. Jurnal Teknologi Industri Pertanian 23(1) 13—21.
Lotfy, Mahmoud. 2006. Biological Activity of Bee Propolis in Health and Disease. Asian Pacific Journa of Cancer Prevention. Vol 7, 22-31
Massaro,  Flavia  C  ,  Peter  Brooks,  Helen  M.  Wallace,  Vianne  Nsengiyumva, Lorraine Narokai, Fraser D Russell. 2013. Effect of Australian Propolis from Stingless Bees (Tetragonula carbonaria) on Pre-Contracted Human and Porcine Isolated Arteries. PLOS ONE Volume 8 | Issue 11 | e8197
Seidel, Véronique, Elham Peyfoon, David G.  Watson and James Fearnley. 2008. Comparative  study  of  the  antibacterial  Activity  od  Propolis  from Different Geographical and Climatic Zones. Phytotherapy Research 22, 1256-1263. DOI 10.1002/ptr.2480
Sforcin, J.M., V. Bankova. 2010. Propolis: Is there a potential for development of new drugs?. Journal of Etnopharmacology, 133, Hal. 253-260.