## ISOLASI CENDAWAN ENDOFIT DARI AKAR WANGI (Vetiveria zizanioides L.) DAN POTENSINYA SEBAGAI ANTIMIKROBA

## Israwati Harahap dan Elsie
Program Studi Biologi, Fakultas MIPA dan Kesehatan Universitas Muhammadiyah Riau Jln. Tuanku Tambusai Ujung No. 1 Pekanbaru 28285 e-mail: israwatiharahap@umri.ac.id

## ABSTRACT
Endophytic fungi are microorganisms living in healthy tissue of their host plants without causing disease. Endophytic fungi live in every plant, including Vetiveria zizanioides L. medicinal plant intracellulary and/or intercellulary. This plant was screened pharmacologically for antibacterial, antifungal, anticataleptic, analgesic and anti-inflammatory, rheumatism,  anti  oxidant  and  anti  arthritic  activity.    This  research  aimed  to  isolation  endophytic  fungi  from  V. zizanioides  L.  and  to  screening  their  antimicrobial  potency  against  microflora  Escherichia  coli,  Staphylococcus aureus, and Candida albicans.  Endophytic fungi isolation from V. zizanioides L. was done by surface sterilization method. A total of 33 isolates were recovered from 88 leaves and 88 root segments. Based on antimicrobial activity test, most of the fungal extracts showed in vitro inhibition of microbes growth.
Keywords: Endophytic fungi; Vetiveria zizanioides L.; Antimicrobial

## 1. PENDAHULUAN
Resistensi  bakteri  terhadap  antibiotik  telah menjadi masalah global yang serius. Berdasarkan laporan  terakhir  dari  Badan  Kesehatan  Dunia (WHO)  menunjukkan  bahwa  Asia  Tenggara memiliki  angka  tertinggi  dalam  kasus  resistensi antibiotik  di  dunia,  khususnya  infeksi  yang disebabkan  oleh Staphylococcus  aureus yang resisten terhadap metisilin, sehingga mengakibatkan  menurunnya  fungsi  antibiotik tersebut  (www.depkes.go.id).  Di  Indonesia, sekitar  135.000  kematian  per  tahun  diakibatkan karena resistensi antibiotik. Munculnya resistensi antibiotik pada bakteri patogen menuntut adanya penemuan  obat  baru  yang  lebih  efektif  dengan toksisitas yang rendah.
Eksplorasi untuk mendapatkan jenis antibiotik  baru  masih  sangat  diperlukan  baik lewat  sintesis  kimia,  biokimia  baru  maupun penemuan  isolat  mikrobia  baru.  Dalam  dua dekade  ini,  mikroorganisme  endofit  merupakan salah  satu  sumber  utama  penghasil  antibiotik baru.  Endofit  merupakan  mikroorganisme  yang hidup dalam jaringan tumbuhan, setidaknya satu bagian dari siklus hidupnya tanpa menyebabkan gejala penyakit (patogen) pada inangnya (Petrini 1991).  Mikroorganisme  endofit  dapat  berupa cendawan,  bakteri  dan  aktinomiset.  Hampir
semua jenis tumbuhan merupakan inang bagi satu atau lebih endofit (Tan & Zou 2001).
Cendawan  endofit  mampu  menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  yang  sama  dengan inangnya (Petrini et al . 1992). Produk metabolit sekunder  dapat  berfungsi  sebagai  antimikroba (Lu et  al .,  2000),  antifungi  dan  sitotoksik (Santiago, 2011), antivirus, antikanker, antidiabetes,  antimalaria,  antioksidan  dan antiimmunosupresif  (Strobel  dan  Daisy,  2003). Selain  itu,  cendawan  endofit  berperan  dalam melindungi  inangnya  terhadap  hama  serangga (Azevedo et al. , 2006), zat pengatur tumbuh (Tan dan Zou, 2001), penghasil enzim-enzim hidrolitik seperti  amilase,  selulase,  xilanase,  ligninase (Choi et  al. ,  2005)  dan  kitinase  (Zinniel et  al. , 2002).
Penelitian  tentang  cendawan  endofit  dari berbagai  jenis  tanaman  obat  telah  banyak dilakukan  diantaranya  oleh  Hsiao et  al. (2016) telah  melakukan  isolasi  senyawa  metabolit sekunder  cytochalasan  yang  bersifat  anti- inflammatory dari cendawan endofit Phomopsis theicola BCRC  asal  tanaman  endemik  Taiwan Litsea  hypophaea .  Martin  &  James  (2015) melakukan isolasi cendawan endofit dari rumput disepanjang  pesisir  Oregon  dan  memperoleh cendawan endofit yaitu Penicillium sp., Phlebia sp. Heterobasidium sp. Phaeosphaeria sp.  dan
Aureobasidium sp.  yang  memperlihatkan aktivitas  dalam  menghambat  pertumbuhan Bacillus sp. Sejauh ini belum ada data mengenai cendawan  endofit  yang  dilaporkan  berasal  dari Akar wangi ( Vetiveria zizanioides L.).
Akar  wangi  ( Vetiveria  zizanioides L.) merupakan  tanaman  aromatik  yang  banyak digunakan  untuk  mengobati  berbagai  macam penyakit.  Berdasarkan  analisis  fitokimia  dari ekstrak  akar  wangi  diketahui  memiliki kandungan  alkaloid,  asam  amino,  flavonoid, saponin  dan  tanin  (Ratha et  al .  2012)  yang bermanfaat  sebagai  agen  antifungi,  antioksidan dan antibakteri (Moffitt et al . 2002). Soni et al . (2015)  menguji  ekstrak  akar  wangi  terhadap  9 isolat  bakteri  dan  4  isolat  cendawan.  Hasilnya menunjukkan bahwa ekstrak akar wangi mampu menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus dengan zona hambat sebesar 15± 0,12 mm Penelusuran dan pemanfaatan senyawa aktif dari  akar  wangi  masih  terbatas  dalam  isolasi senyawa  yang  dihasilkan  oleh  akar  wangi tersebut  sehingga  akan  membutuhkan  banyak biomassa.  Oleh  karena  itu,  cara  yang  efisien untuk  memperoleh  senyawa  bioaktif  tersebut adalah dengan menggunakan cendawan endofit. Besar  kemungkinan  cendawan  endofit  yang menetap  pada  akar  wangi  tersebut  memiliki kemampuan untuk mensintesis senyawa antimikroba  yang  sama  seperti  tanaman inangnya.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian antara lain Laminar Air Flow (LAF) oven (Memmert), inkubator  (Memmert),  autoklaf  (All  American), kompor listrik, timbangan digital, spatula, batang pengaduk,  cawan  Petri,  bunsen,  pipet  volume, gelas  ukur,  gunting,  jarum  ose,  mikropipet  dan Tip, shaking  incubator , sedotan  steril,  spritus, tisu, plastic wrap, alumunium foil , cotton swab, kapas, sarung tangan, masker serta alat-alat gelas.
Bahan  yang  digunakan  yaitu  akar  dan  daun tanaman akar wangi ( V. zizanioides L . ), Bakteri target  ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli ), cendawan target ( Candida albicans ), Malt Extract  Agar (MEA), Potato  Dextrose  Yeast
(PDY), Potato  Dextrose  Agar (PDA), Potato Dextrose  Broth (PDB), Nutrient  Agar (NA), Nutrient Broth (NB), aquades steril, alkohol 70%, natrium hipoklorit (NaOCl) 5,3 %, dan antibiotik kloramfenikol.
Pengambilan Sampel Sampel tanaman akar wangi ( V. zizanioides L . ) diambil dari perumahan warga yang terletak di Kecamatan Rumbai Pesisir, Pekanbaru.

## Prosedur Kerja Isolasi Cendawan Endofit
Isolasi  cendawan  endofit  dilakukan  dengan mengacu  pada  Okane et  al .  (2008)  dengan modifikasi.  Isolasi  cendawan  endofit  dari tanaman akar wangi dimulai dengan mengoleksi tanaman  dari  lapangan  selanjutnya  dibersihkan dari  kotoran  dengan  cara mencucinya  di  bawah air mengalir. Bagian akar dan daun tanaman akar wangi  dipotong  secara  aseptik  dengan  pisau menjadi  potongan-potongan  berukuran  ±  1  cm. Potongan  akar  dan  daun  tersebut  disterilisasi dengan cara direndam didalam larutan alkohol 70 %  selama  1  menit,  natrium  hipoklorit  5,3  % selama  5  menit,  dan  terakhir  dengan  alkohol selama 30 detik. Setelah itu, potongan akar dan daun tersebut dibilas dengan aquades sebanyak 3 kali. Sampel akar dan daun diinokulasi di dalam cawan  Petri  yang  sudah  berisi  medium  MEA. Setiap cawan Petri berisi 4 potong akar atau daun. Masing-masing sampel diinokulasi dengan 3 kali pengulangan.  Sebagai  kontrol,  aquades  bilasan terakhir  diambil  ±  1  ml  dan  dituang  ke  dalam medium  MEA  secara spread  plate .  Sampel tanaman  yang  sudah  diinokulasi,  selanjutnya diinkubasi  pada  suhu  25-30  ºC  selama  5-7  hari atau sampai cendawan tumbuh
Produksi  Senyawa  Antimikroba  dari Cendawan Endofit
Setiap isolat cendawan endofit yang tumbuh pada  media  PDA  diambil  sebanyak  6  potongan dengan  menggunakan  sedotan  steril  dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang sudah berisi 10 ml media Potato Dextrose Broth (PDB). Kemudian diinkubasi di dalam shaking incubator selama 21-28 hari dengan kecepatan 120 rpm dan suhu 28°C.

## Persiapan Mikroba Uji
Sebanyak satu ose koloni Candida albicans diinokulasikan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang sudah berisi 10 ml media Potato Dextrose Yeast (PDY)  cair,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu ruang  selama  18-24  jam.  Sebanyak  satu  ose koloni Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli diinokulasikan  ke  dalam  masing-masing tabung  reaksi  yang  sudah  berisi  10  ml  media Nutrient Broth (NB), kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam.
Uji  Aktivitas  Antimikroba  dari  Isolat Cendawan  Endofit  Asal  Tanaman  Akar Wangi.
Uji  aktivitas  antimikroba  dari  cendawan endofit menggunakan metode sumuran. Candida albicans yang  sudah  ditumbuhkan  pada  media PDY  cair  selama  18-24  jam  diambil menggunakan cutton  bud .  Selanjutnya  di swab secara  horizontal  ke  media  PDY  Agar  dan dibiarkan selama 5 menit. Kemudian, media PDY Agar  dilubangi  dengan  menggunakan  sedotan steril  yang  berdiameter  6  mm  sebanyak  3 sumuran percawan. Setiap sumuran diisi dengan 0,1µl  dari  hasil  fermentasi  cendawan  endofit yang  telah  ditumbuhkan  pada  media  PDB. Selanjutnya,  diinkubasi  pada  suhu  ruang  dan diamati zona hambat yang terbentuk selama 24- 48 jam.
Bakteri  uji  yang  sudah  ditumbuhkan  pada media  NB  selama  24  jam  diambil  dengan menggunakan cutton  bud .  Selanjutnya  di swab secara horizontal ke media NA. Cawan Petri yang sudah  berisi  media  NA  dilubangi  dengan menggunakan sedotan steril yang berdiameter 6 mm  sebanyak  3  sumuran  percawan.  Setiap sumuran diisi dengan 0,1µl dari hasil fermentasi isolat  cendawan  endofit.  Kemudian,  diinkubasi pada suhu  37°C  dan  diamati  zona  hambat  yang terbentuk selama 24-48 jam.

## Analisis Data
Data  yang  telah  diperoleh  dari  hasil  isolasi cendawan  endofit  dari  tanaman  akar  wangi  ( V. zizanioides L.) disajikan dalam bentuk tabel dan gambar,  serta  dijelaskan  secara  deskriptif berdasarkan ukuran zona hambat.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Isolasi  Cendawan  Endofit  dari  Akar Wangi
Sebanyak  33  isolat  cendawan  endofit berhasil  diisolasi  dari  88  segmen  akar  dan  88 segmen  daun  dari  tanaman  akar  wangi  ( V. zizanioides L.). Cendawan endofit yang berhasil diisolasi  memiliki  morfologi  makroskopis  yang berbeda-beda yang meliputi warna koloni, bentuk koloni, elevasi koloni dan tekstur koloni (Gambar 3.1). (a) (b) (c) (d) (e)
Gambar 3.1. Beberapa isolat cendawan endofit yang berhasil diisolasi dari tanaman akar wangi ( Vetiveria zizanioides L.); (a) IH 4, (b) IH 9, (c) IH 14, (d) IH 17, dan (e) IH 26.

## Uji Aktivitas Antimikroba
Hasil uji aktivitas antimikroba yang telah dilakukan, diperoleh 29 isolat cendawan endofit mampu menghambat
pertumbuhan S. aureus , 30 isolat mampu menghambat E.  coli dan  21  isolat menghambat  pertumbuhan C.  albicans (Tabel 3.1).
Tabel 3.1. Uji Aktivitas Antimikroba dari Isolat Cendawan Asal Tanaman Akar Wangi (Vetiveria zizanioides L.) Isolat Zona hambat  (mm) S. aureus Kategori E. coli Kategori C. albicans Kategori IH 1 9 Sedang 14 Kuat 12 Kuat IH 2 23 Sangat kuat 9 Sedang 4 Lemah IH 3 13 Kuat 5 Sedang 6 Medium IH 4 20 Sangat kuat 9 Sedang 2 Lemah IH 5 - - 8 Sedang 8 Medium IH 6 1 Lemah 15 Kuat − − IH 7 - - 22 Sangat Kuat 12 Kuat IH 8 6 Sedang 15 Kuat 13 Kuat IH 9 21 Sangat kuat 12 Kuat − − IH 10 19 Kuat 15 Kuat − − IH 11 21 Sangat kuat 13 Kuat − − IH 12 5 Sedang - - − − IH 13 4 Lemah 14 Kuat 4 Lemah IH 14 2 Lemah - - − − IH 15 21 Sangat kuat 14 Kuat 3 Lemah IH 16 21 Sangat kuat - - − − IH 17 10 Sedang 5 Sedang − − IH 18 2 Lemah 12 Kuat − − IH 19 21 Sangat kuat 16 Kuat 19 Kuat IH 20 - - 21 Sangat kuat − − IH 21 21 Sangat Kuat 19 Kuat − − IH 22 3 Lemah 16 Kuat 5 Medium IH 23 2 Lemah 12 Kuat − − IH 24 3 Lemah 14 Kuat 3 Lemah IH 25 3 Lemah 16 Kuat 6 Medium IH 26 2 Lemah 13 Kuat 5 Medium IH 27 14 Kuat 14 Kuat 6 Medium IH 28 - - 14 Kuat 5 Medium IH 29 9 Sedang 14 Kuat 19 Kuat IH 30 5 Sedang 19 Kuat − − IH 31 19 Kuat 11 Kuat 6 Medium IH 32 6 Sedang 19 Kuat 6 Medium IH 33 23 Sangat kuat 13 Kuat 2 Lemah
Keterangan: -: tidak ada zona hambat
Berdasarkan  tabel  3.1,  zona  hambat  yang dihasilkan oleh isolat cendawan endofit terhadap S. aureus terdapat 4 isolat dengan kategori kuat yaitu isolat IH 3, IH 10, IH 27, dan IH 31; 9 isolat dengan kategori sangat kuat yaitu isolat IH 2, IH 4, IH 9, IH 11, IH 15, IH 16, IH 19, IH 21, dan IH 33. Zona hambat yang dihasilkan oleh isolat cendawan  endofit  terhadap E.  coli terdapat  23 isolat dengan kategori kuat yaitu isolat IH 1, IH 6, IH 8, IH 9, IH 10, IH 11, IH 13, IH 15, IH 18, IH 19, IH 21, IH 22, IH 23, IH 24, IH 25, IH 26, IH 27, IH 28, IH 29, IH 30, IH 31, IH 32, dan IH
33;  2  isolat  dengan  kategori  sangat  kuat  yaitu isolat  IH  7  dan  IH  20.  Sedangkan  zona  hambat yang dihasilkan oleh cendawan endofit terhadap C. albicans yang termasuk ke dalam kategori kuat yaitu isolat IH 1, IH 7, IH 8, IH 19 dan IH 29. Penghambatan  antimikorba  pada  penelitian  ini menggunakan  pengkategorian  dari  Davis    & Stout (1971)  yaitu untuk  kategori  lemah  (<5 mm),  sedang  (5-10 mm),  kuat (11-20 mm)  dan sangat  kuat  (>20)  berdasarkan  diameter  zona hambat yang diperoleh.
Zona  hambat  yang  terbentuk  disekitar sumuran  menunjukkan  kemampuan  dari  isolat cendawan  endofit  tersebut  dalam  menghambat
pertumbuhan E.coli , S.  aureus dan C.albicans (Gambar 3.2).
(a)

## (b)                                   (c)
Gambar  3.2 Uji  aktivitas  antibakteri  terhadap S.aureus (a), E.coli (b)  dan C.albicans dengan metode difusi agar.
Pada  pengujian  antimikroba  dengan  hasil fermentasi  isolat  cendawan  endofit  diperoleh nilai  zona  hambat  yang  berbeda  berdasarkan bakteri dan cendawan uji masing-masing.  Frazier &    Westhoff    (1988)  menyatakan  bahwa kemampuan  suatu  zat  antimikroba  dalam menghambat  pertumbuhan  mikroba dipengaruhi oleh  berbagai  faktor  antara lain konsentrasi  zat antimikroba, suhu lingkungan, waktu penyimpanan, sifat-sifat mikroba  seperti (jenis, jumlah, umur  dan keadaan mikroba), serta fisik dan kimia makanan termasuk kadar air, pH, jenis dan jumlah senyawa di dalamnya.
Kemampuan antibakteri yang dihasilkan oleh isolat  cendawan  endofit  berbeda-beda.  Menurut Pelczar dan Chan (1998) semakin tinggi daya zat antibakteri yang dihasilkan, maka semakin tinggi daya  hambat  yang  ditunjukkan  dengan terbentuknya zona bening. Zona hambat tersebut menunjukkan aktivitas suatu senyawa antibakteri dalam menghambat pertumbuhan dan membunuh bakteri patogen.
Rata-rata  hasil  uji  aktivitas  antimikroba terbesar dari isolat cendawan endofit ditemukan pada S.  aureus . Secara  umum  penghambatan lebih besar terhadap bakteri Gram positif yaitu S. aureus dibandingkan  dengan  bakteri  Gram negatif E. coli , hal ini disebabkan karena struktur dinding sel bakteri Gram negatif lebih kompleks dibandingkan  dengan  bakteri  Gram  positif. Bakteri  Gram  positif  memiliki  peptidoglikan
yang  tidak  terlindungi  oleh  membran  luar (Navarre  dan  Schneewind  1999).  Perbedaan struktur lapisan membran tersebut menyebabkan bakteri  Gram  negatif  kurang  sensitif  terhadap antibakteri  daripada  bakteri  Gram  positif (Giguère et  al .,  2006).  Menurut  Fajrina et  al . (2008), mekanisme penghambatan yang dilakukan oleh senyawa antibakteri dapat melalui beberapa cara yaitu kerusakan pada dinding sel, perubahan  permeabilitas  sel,  dan  menghambat sintesis protein dan asam nukleat. Banyak faktor dan  keadaan  yang  dapat  mempengaruhi  kerja antibakteri,  antara  lain  konsentrasi  antibakteri, jumlah  bakteri,  spesies  bakteri,  adanya  bahan organik, suhu, dan pH lingkungan.
Beberapa  isolat  yang  tidak  menghasilkan zona  hambat,  kemungkinan  menghasilkan senyawa lain seperti pemberi warna atau pigmen, racun,  agen  pertumbuhan,  pestisida  (Demain, 1998)  dan  sebagai  antikanker  (Chandra,  2012). Menurut  Tan  &  Zou  (2000),  mikroba  endofit dapat  menghasilkan  senyawa  bioaktif  yang karakternya  mirip  atau  sama  dengan  inangnya. Hal  ini  disebabkan  adanya  pertukaran  genetik yang  terjadi  antara  inang  dan  mikroba  endofit secara evolusioner.

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  tentang  isolasi cendawan  endofit  dari  tanaman  akar  wangi ( Vetiveria  zizanioides L .) dan  uji  aktivitas
antimikroba  terhadap E.  coli,  S.  aureus dan C. albicans dapat disimpulkan bahwa hasil isolasi cendawan  endofit  dari  tanaman  akar  wangi diperoleh  33  isolat.  Uji  aktivitas  antifungi terhadap C.  albicans diperoleh  20  isolat  yang mampu  menghambat  pertumbuhan C.  albicans , 29 isolat cendawan endofit mampu menghambat S . aureus dan    30  isolat  mampu  menghambat pertumbuhan E. coli.
Penelitian  selanjutnya  agar  dapat melakukan  penelitian  untuk  mengetahui  jenis- jenis senyawa kimia dari cendawan endofit asal tanaman  akar  wangi  yang  dapat  menghambat pertumbuhan E. coli, S. aureus dan C. albicans sehingga  dapat  diproduksi  dalam  jumlah  yang banyak  dan  melakukan  identifikasi  mikroskopis dan  molekuler  isolat  cendawan  endofit  dari tanaman akar wangi yang potensial

## DAFTAR PUSTAKA
Azevedo, J. L., W. Maccheroni Jr, J. O. Pereira., dan W. L. de Araujo. 2000. Endophytic microorganisms:  a  review  on  insect control  and  recent  advances  on  tropical plants. Electronic Journal
of
Biotechnology 3:1.
Chandra,  S.  (2012).  Endophytic  fungi:  novel sources  of  anticancer  lead  molecules. Appl  Microbiol Biotechnol, 95, 47-59.
Choi, Y. W. I. J. Hodgkiss and K. D. Hyde. 2005.
Enzyme  production  by  endophytes  of
Brucea javanica . Journal of Agriculture Technology. 1: 55-65.
Departemen  Kesehatan.  2015.  Penggunaan Antibiotik  Bijak  dan  Rasional  Kurangi Beban Penyakit Infeksi. www.depkes.go.id . [18 April 2016]
Demain,  A.L.  (1998).  Induction  of  microbial secondary    metabolism.  Internatl microbiol, 1, 259-264
Fajrina  IH,  Djamaludin  AM,  Habibie  MS,
Haratanti, Sari RF. 2008. Potensi Kitosan Sebagai  Bahan  Antibakteri.  Laporan Akhir PKM, Institut Pertanian Bogor.
Giguere, S. Prescott J. F., Baggot J. D., Walkwer
R. D., Dowling PM. 2006. Antimicrobial Therapy In Veterinary Medicine, 4th Ed.
Blackwell Pubhlishing, Ames Lowa.
Hsiao Y, Hsun SC, Ta WL, Sung YH, Gwo FY,
Ming  JC,  Ih  SC.  2016.  Secondary metabolite  and  bioactivity  of  the endophytic  fungus Phomopsis  theicola from Taiwanese endemic plant.
Rec.Nat.Prod . 10(2):189-194 Lu H, Zou WX, Meng JC, Hu J, Tan RX. 2000. New Bioactive metabolites produced by Colletotrichum sp., an endophytic fungus in Artemisia  annua.  Plant  Sci. 151:76- 73.
Martin  RC,  James  ED.  2015.  Isolation  and Identification  of  Fungal  Endophytes from  Grasses  along  the  Oregon  Coast. American  Journal  of  Plant  Sciences . 6:3216-3230
Moffitt, B.A. Neilan. ―Evolutionary Affiliation Within the Superfamily of Ketosynthases Reflect Complex Pathway Associations‖. J. Mol. Evol , vol. 56, pp. 446-457. 2002. Okane I, Praset S, Kyoko T, Thomas L, Somsak S,  Nigel  HJ,  Akira  N,  Wanchern  P, Suzuki  K.  2008.  Study  of  endophytic Xylariaceae in  Thailand:  diversity  and taxonomy inferred from rDNA sequence analyses  with  saprobes  forming  fruit bodies in the field. Mycoscience 49: 359- 3772.
Pelczar, M.J dan E.C.S.  Chan.  1998. Elements of Microbiology.  New  York:  McGraw- Hill  Book  Company,  Inc  diterjemahkan olehR.S..
Petrini O. 1991. Fungal endophytes of tree leaves. In Microbial ecology of leaves, Eds., J.H. Andrewsand  S.S.  Hirano.  New  York: Springer Verlag 179-197.
Petrini  O,  Thomas  NS,  Toti  L,  Viret  O.  1992. Ecology,  metabolite  production  and substrat  utilization  in  endophytic  fungi.
Nat toxin. 1:185-196.
Ratha,  M,  Subha.  K,  Senthilkumar.  G  dan Panneerselvam.A.  (2012).  Screening  of phytochemical and antibacterial activity of Hemidesmus  indicus (L.)  and Vetiveria zizanoides (L.). Europ J. Exp. Biol . 2(2): 363-368.
Santiago  C,  Fitchett  C,  Munro  MHG,  Jalil  J,
Santhanam.  2011.  Cytotoxic  and
antifungal activities of 5- Hydroxyramulosin, a compound produced  by  an  endophytic  fungus isolated from Cinnamomum mollisimum
Evidence-Based complementary &
alternative medicine 2012:6
Soni  A,  Dahiya  P.  2015.  Screening  of Phytochemicals and Antimicrobial
Potential  of  Extracts  of Vetiver zizanoides and Phragmtes karka Againts Clinical  Isolates. Int.  J.  App.  Pharm. 7 (1): 22-24
Strobel  G,  Daisy  B.  2003.  Bioprospecting  for Microbial Endophytes and Their Natural
Products.  Microbiology  and  Molecular Biology Reviews; 67(4): 491-502. Tan,  RX,  Zou  WX.  2001.  Endophytes:  a  rich source of funtional metabolites. Nat Prod Rep. 18:448-459.
Zinniel,  D.  K.,  P.  Lambrecht,  N.  B.  Haris,  Z. Feng,  D.  Kuczmarski,  P.  Higley,  C.  A. Ishimaru,  A.  Arunakumari,  R.  G. Barletta, and A.K. Vidader. 2002. Isolat ion  and  characterization  of  endophytic colonizing  bacteria  from  agronomics crops  and  prairie  plants. Applied  and
Environmental Microbiology . 68
(5):2198-2208.