ISSN Cetak         : 2087-9423
ISSN Elektronik : 2085-6695

## IDENTIFIKASI JENIS PADA KEJADIAN CETACEA TERDAMPAR DI INDONESIA DENGAN TEKNIK MOLEKULER

## SPECIES IDENTIFICATION OF STRANDED CETACEANS IN INDONESIA REVEALED BY MOLECULAR TECHNIQUE
Ni Luh Astria Yusmalinda 1,2 , Aji Wahyu Anggoro 1,2 , Dio Maulid Suhendro 3 , I Made Jaya Ratha 4,5 , Dwi Suprapti 6 , Danielle Kreb 7 , dan Ni Kadek Dita Cahyani 1,2*
1 Indonesian Biodiversity Research Center, Bali, 2 Yayasan Bionesia Indonesia, 3 Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Udayana, 4 Cetacean Sirenian Indonesia, 5 Whale Stranding Indonesia, 6 WWF Indonesia, 7 Yayasan Konservasi RASI, KALTIM; *E-mail: ditacahyani@ibrc-bali.org

## ABSTRACT
Stranding  cases  of  cetaceans  in  Indonesia  including  whales,  dolphins,  and  porpoises  have  recently increasingly  become  unfold  and  handled  by  many  people.  According  to  data  from  Whale  Stranding Indonesia (WSI), there have been 40 stranding cases in different parts of Indonesia from early 2016 until  February  2017.  One  of  the  major  obstacles  for  the  people  who  are  handling  strandings  is  to identify  the  species  based  on  morphology  alone  when  the  body  is  in  an  advanced  stadium  of decomposition.  WSI  recorded  that  21%  of  the  species  are  unidentifiable.  For  that  reason,  this research  aims  to  introduce  a  molecular  genetics  approach  for  identifying  stranded  cetaceans. Mitochondrial  DNA  of  the  gene  control  region  was  amplified  using  a  Polymerase  Chain  Reaction (PCR)  method.  Sequence  data  were  compared  with  data  from  the  genebank  through  percentage overlap.  From  the  36  individuals,  which  have  been  used  in  this  research,  26  amplified  sampels  had base  lengths  varying  between  445-490  base  pairs.  Molecular  methods  successfully  identified  15 species  and  13  genus  of  Cetacea  from  different  localities  in  Indonesia.  This  study  shows  that molecular genetic techniques can be used as a method to identify species of cetaceans, in particular of stranded individual, which are hard to identify morphologically. The molecular data may complete the genetic  database  and  become  a  reference  for  research  on  genetic  diversity  among  marine  mammal populations in Indonesia.
Keywords: stranded Cetaceans, Indonesia, species identification, molecular technique

## ABSTRAK
Kasus  Cetacea  atau  Paus  dan  Lumba-lumba  terdampar  di  Indonesia  sejak  berapa  tahun  terakhir  ini semakin  sering  terungkap  dan  ditangani  oleh  banyak  pihak.  Data  dari Whale  Stranding Indonesia (WSI)  mencatat  40  kasus  Cetacea  terdampar  di  berbagai  tempat  di  Indonesia  selama  tahun  2016 hingga  bulan  Februari  2017.  Salah  satu  kendala  bagi  para  penyelamat  di  lapangan  adalah  sulitnya mengidentifikasi  jenis  secara  morfologi  karena  pada  beberapa  kasus,  individu  yang  terdampar  tidak dalam kondisi utuh. WSI mencatat lebih dari 21% jenis pada kejadian Cetacea terdampar di Indonesia, tidak  teridentifikasi.  Penelitian  ini  bertujuan  memperkenalkan  pendekatan  genetika  molekuler  dalam mengidentifikasi  jenis  pada  Cetacea  terdampar. Gen  Control  Region dari  DNA  mitokondria diamplifikasi  dengan  menggunakan  metode Polymerase  Chain  Reaction (PCR).  Data  sekuen dibandingkan  dengan  data  di genebank dan  dilihat  persentase  kesamaannya.  Penelitian  ini menggunakan  36  sampel  individu  dan  26  diantaranya  teramplifikasi  dengan  panjang  basa  berkisar antara 445-490 bp ( base pair ). Metode molekuler berhasil mengidentifikasi 15 spesies dan 13 genus Cetacea  yang  diambil  dari  beberapa  tempat  di  Indonesia.  Studi  ini  menunjukkan  bahwa  teknik genetika  molekuler  dapat  dijadikan  metode  untuk  mengidentifikasi  jenis  dari  Cetacea,  terutama mamalia  terdampar  yang  sulit  untuk  diidentifikasi  secara  morfologi.  Data  molekuler  yang  dihasilkan dapat  melengkapi database yang  ada  di  Indonesia  serta  menjadi  penunjang  bagi  penelitian  tentang keragaman genetik dan hubungan antar populasi mamalia akuatik di Indonesia.
Kata kunci: Cetacea terdampar, Indonesia, penentuan jenis, teknik molekuler

## I. PENDAHULUAN
Kasus Cetacea atau  paus  dan  lumba- lumba  terdampar  di  Indonesia  menjadi perhatian banyak pihak, khususnya pemerhati lingkungan  (Priyasidharta,  2016;  Iqbal, 2016).  Data  dari  Whale  Stranding  Indonesia (WSI)  (http://www.whalestrandingindonesia. com)  mencatat  40  kasus  Cetacea  terdampar di berbagai tempat di Indonesia selama tahun 2016  hingga  bulan  Februari  2017.  Data  juga melaporkan  bahwa  78%  kasus Cetacea ter- dampar berakhir dengan kematian (Gambar 1 dan Gambar 2).
Salah satu kendala bagi para penyelamat  Cetacea  yang  terdampar  di lapangan  adalah  sulitnya  identifikasi  jenis. Pada  beberapa  kasus,  individu  tidak  dapat atau  susah  ditentukan  jenisnya  secara  mor- fologi,  karena  hanya  sisa  tubuh  yang  ter- tinggal  atau  kurangnya  dokumentasi  misal- nya  foto  ciri  spesifik  untuk  beberapa  jenis Cetacea. WSI, mencatat lebih dari 21% jenis individu  pada kejadian  Cetacea terdampar di Indonesia,  tidak  teridentifikasi.  Hal  ini  men- jadi  catatan  penting  mengingat  identifikasi jenis sangat diperlukan sebagai referensi bagi pendataan  dan  perlindungan  terhadap  mega- fauna  akuatik  ini.  Data  yang  dikumpulkan dapat  menjadi  gambaran  mengenai  detail populasi yang beruaya di perairan Indonesia.
Selain  identifikasi  secara  morfologi, saat  ini  pendekatan  secara  molekuler  juga dapat dilakukan untuk mengidentifikasi jenis Cetacea  yang  terdampar  (Dalebout et  al. , 1998; Baker et al. , 1996; Baker et al. , 2006). Hanya  menggunakan  sedikit  sampel  dari jaringan  tubuh  hewan  seperti  daging,  darah, kulit  atau  organ  dalam,  teknik Polymerase Chain Reaction (PCR) dapat meng- identifikasi sekuen DNA yang unik dari jenis yang  berbeda  dari  gen  tertentu  (Sambrook and  Russell,  2001).  Teknik  ini  bahkan  telah diaplikasikan  untuk  mengidentifikasi  sirip ikan  hiu  yang  diperdagangkan  secara  ilegal (Sembiring et  al. ,  2015)  atau mislabelling pada  daging  yang  digunakan  dalam  jenis makanan  yang  diperjualbelikan,  seperti
misalnya  ikan  pada  sushi  (Willette et  al. , 2017).
Berdasarkan  hal  tersebut,  penelitian ini  bertujuan  untuk  memperkenalkan  pen- dekatan  genetika  molekuler  dalam  identi- fikasi jenis pada kejadian Cetacea terdampar, baik untuk peneguhan hasil identifikasi  yang sudah  ada  maupun  yang  sulit  dilakukan secara  morfologi.  Kedepannya,  data  untuk molekuler  yang  dikumpulkan  dapat  menjadi penunjang bagi penelitian tentang keragaman genetik  dan  hubungan  antar  populasi  dari Cetacea di Indonesia.
Gambar 1. Paus Sperma terdampar mati di perairan Gilimanuk, Bali pada 27 November 2010. Foto: BKSDA Bali.

## II.   METODE PENELITIAN
Sampel  pada  penelitian  ini  berasal dari berbagai sumber (Lampiran 1.) beberapa diantaranya dapat diidentifikasi secara morfologi  di  lapangan.  Sampel  diambil  dari bagian daging, sebanyak  30 gram.  Jaringan diambil  dengan  scalpel  steril,  kemudian disimpan  dalam  etanol  70%  sebelum  dilaku- kan  extraksi  DNA  di  laboratorium.  Metode ekstraksi  DNA  menggunakan  10%  Chelex (Walsh et  al. ,  1991).  DNA  hasil  ekstraksi diamplifikasi  dengan  menggunakan  metode PCR  ( Polymerase  Chain  Reaction )  dengan menggunakan primer H16498 (5'-  CCTGAA GTAAGAACCAGATG- 3') and L15812 (5'- CCTCCCTAAGACTCAAGGAAG-  3')  (Ro- sel et al. , 1994).
PCR  dilakukan  dalam  25  µL  reaksi yang  terdiri  dari  1  µL  DNA  hasil  ekstraksi, 2,5  µL  10x  PCR  buffer  (Applied  Biosys- tems), 2,5 µL 10 mMdNTPs, masing-masing 1,25 µL primer dengan konsentrasi 10 mM, 2 µL  25  mM  MgCl 2 ,  0,125  µL  AmplyTaq™ (Applied  Biosystems)  dan  14,5  µL  ddH2O. Reaksi dilakukan dalam 38 siklus mengguna- kan  teknik  “ Hotstart ”  dengan  parameter sebagai  berikut:  predenaturasi  dilakukan pada  suhu  80 o C  selama  10  detik  dan  94 o C selama  15  detik,  kemudian  dilanjutkan dengan tahap denaturasi  pada suhu  94 o C (30 detik),  penempelan  primer  atau annealing pada  suhu  50 o C  (30  detik),  pemanjangan rantai  nukleotida  atau extension selama  45 detik  pada  suhu  72 o C  dan  siklus  pe- manjangan  untai  ganda  di  akhir  amplifikasi selama 5 menit pada suhu 72 o C. Hasil reaksi PCR  kemudian  divisualisasi  dalam  1%  gel agarose  yang  ditambahkan  dengan  ethidium bromide.  Untai  DNA  yang  dihasilkan  dalam reaksi  PCR  akan  berpendar  di  bawah  sinar UV karena ethidium bromide dapat berikatan dengan  DNA.  Hasil  amplifikasi  PCR  ke- mudian disekuen di UC Berkeley sequencing facility .
Hasil sekuensing yang berupa untaian DNA dari dua arah, dibaca dengan Geneious 7.1.4  (Kearse et  al. ,  2012)  dan  disejajarkan ( alignment ) dengan MUSCLE (Edgar, 2004). Data sekuen kemudian dibandingkan dengan data  di  genebank  dengan  BLAST  (https:// blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)  dan  dilihat persentase kesamaannya. Pembangunan pohon filogenetik dilakukan dengan MEGA7 (Kumar et  al. ,  2016)  menggunakan  model Neighbor  Joining  dengan  nilai  bootstrap 1000.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Hasil
Sebanyak  36  sampel  individu  dalam penelitian  ini  diamplifikasi  dengan  metode PCR  dan  hanya  26  sampel  yang  berhasil diamplifikasi dan dapat dibandingkan dengan data  dari  genebank  (https://www.ncbi.nlm.
nih.gov)  dengan accession  number KY96 3282-KY963307.  Panjang  basa  yang  teram- plifikasi  berkisar  antara  445-490  bp  ( base pair ).  Primer  yang  digunakan  untuk  meng- amplifikasi  gen control  region dari  DNA mitokondria,  berhasil  mengidentifikasi  15 spesies  dan  13  genus  Cetacea  yang  diambil dari  beberapa  tempat  di  Indonesia.  Hampir semua  data  morfologi  dari  sampel  yang diidentifikasi  di  lapangan  dapat  diverifikasi dengan  metode  genetik  (Lampiran  1.),  akan tetapi  masih  ada  sepuluh  sampel  yang  tidak teramplifikasi.  Beberapa  penyebab  sampel tidak dapat teramplifikasi, diantaranya adalah DNA  yang  sudah  terdegradasi  pada  sampel daging  yang  telah  membusuk  atau  dipanas- kan,  atau  terhambatnya  proses  PCR  karena tingginya kandungan lemak dari sampel yang diambil  dari  bagian blubber atau  lapisan lemak di bawah kulit.
Pohon  filogenetik  yang  dibuat  dari hasil  penelitian  ini  menggambarkan  hubung- an  kekerabatan  antar  spesies  dan  juga  ke- dekatan genetik antara sekuen sampel dengan sekuen  pembanding  dari  genebank  (Gambar 2.).  Sekuen  dari  penelitin  ini  mengelompok dalam  kelompok  atau clade sesuai  dengan sekuen  pembanding  dari genebank .  Ke- dekatan  genetik  antara  hasil  dengan  sekuen pembanding  berkisar  antara  0,034  antara Stenella attenuata (lumba-lumba  Bintik)  dan Stenella  longirostris (lumba-lumba  Spinner), hingga 0,514 antara Ziphius cavirostris (paus moncong  Cuvier)  dan Balenoptera  omurai (paus  Omura).  Jarak  genetik  diantara  sekuen yang diidentifikasi sebagai spesies yang sama berkisar antara 0,00-0,022.

## 3.2. Pembahasan
Studi  ini  telah    mengidentifikasi  sub- ordo  Mysticeti  atau  Paus  Baleen,  yaitu Balaenoptera  edeni (paus  Bryde), Bala- enoptera  omurai (paus  Omura)  dan Mega- ptera  novaeangliae (paus  Bungkuk)  dan  sub ordo  odontoceti  atau  jenis Cetacea bergigi, yaitu Physeter  macrocephalus paus  Sperma, Peponocephala electra (paus Kepala Melon), Orcinus orca (paus Pembunuh),
Gambar 2. Pohon filogenetik dengan metode Neighbor-Joining dan bootstrap 1000, dibangun dengan program MEGA 7 (Kumar et al. , 2016).
Kogia  breviceps (paus  Sperma  Kerdil), Ziphius  cavirostris (paus  Cuvier), Globi- cephala  macrorhynchus (paus  Pilot  sirip pendek), Stenella  longirostris (lumba-lumba Spinner), Stenella  attenuata (lumba-lumba Bintik), Steno  bredanensis (lumba-lumba
bergigi  kasar), Orcaella  brevirostris (lumba-
lumba
Irrawaddy) dan Neophocaena phocaenoide s  (porpoise  tanpa  sirip).  Semua jenis tersebut di atas dilindungi oleh UU No. 5,  1990  dan  PP  No  7,  1999  di  Indonesia. Sementara  itu  berdasarkan  IUCN,  Pesut Mahakam  (lumba-lumba  Irrawaddy)  ter- masuk  dalam  kriteria  kritis  dan  terancam punah  ( Critically  Endangered ) dan  masuk kedalam CITES Apendiks  I (Jefferson et al ., 2008).  Lumba-lumba  Irrawaddy  atau  Pesut Pesisir  dan  Porpoise  tanpa  sirip  keduanya terdaftar  sebagai vulnerable atau  rawan punah  dan  juga  masuk  di  CITES  I  sama halnya dengan paus sperma. Jenis lain dalam studi ini terdaftar sebagai Data Deficient atau data  tidak  tersedia, Not  Assessed atau  status belum dinilai atau Least Concern atau kurang mengkhwatirkan  dan  mereka  semua  masuk didalam  CITES  appendix  II.  Khususnya lumba-lumba  Irrawaddy  dan  Porpoise  tanpa sirip  adalah  residen  dan  menjadikan  pesisir yang  dangkal  sebagai  habitat  mereka  yang rawan  dampak  kegiatan  manusia.  Paus sperma  juga  dianggap  sebagai  residen  di perairan  Indonesia,  khususnya  paus  remaja yang  sepanjang  tahun  dapat  ditemukan  di Indonesia.
Hasil  di  atas  memperlihatkan  bahwa data genetik dapat dijadikan pendekatan yang baik,  untuk  membedakan  taxa  berdasarkan genus  dan  spesies.  Sebagai  contoh,  dua sampel dari Tabanan, Bali dan Pulau Banyak, Aceh  (IBRC040301  dan  IBRC041401)  ter- identifikasi  secara  morfologi  sebagai  Paus Bryde  (scientific  name)  tetapi  berdasarkan analisa  molekuler  kedua  sampel  tersebut diketahui sebagai Balenoptera edeni (IBRC040301)  dan Balenoptera  omurai (IBRC041401).
Identifikasi  molekuler  juga  dapat memberikan  data  tentang  keberadaan  jenis Cetacea tertentu  di  perairan  Indonesia  dan untuk  itu  ada  beberapa  hal  yang  harus diperhatikan  dalam  membandingkan  data sekuen  DNA  dengan baseline data  yang berasal  dari genebank (https://www.ncbi. nlm.nih.gov/).  Genus Neophocaena pada pe-
nelitian  ini  mengelompok  pada  satu grup yang  sama  dengan Neophocaena  asiaeori- entalis dan Neophocaena  phocaenoides dari genebank .  Kedua  spesies  tersebut  bahkan memiliki  dua  sekuen  yang  identik  (AB61 0334  dan  KR108308).  Hal  ini  mungkin dikarenakan  adanya  satu  spesies  yang  sama namun  diidentifikasi  menjadi  dua  spesies berbeda dan dinamai menjadi dua nama yang berbeda  oleh  dua  penulis  berbeda  pada publikasi  sebelumnya.  Sulitnya  menentukan penamaan  yang  tepat  untuk  kedua  jenis tersebut,  membuat  penulis  mengelompokkan ketiga individu Neophocaena sebagai Neophocaena  phocaenoides, karena Neopho caena  asiaorientalis saat  ini  diketahui memiliki penyebaran yang terbatas di Sungai Yangtse.
Spesies lain yang juga menarik untuk dibahas  adalah  lumba-lumba  Irrawaddy. Spesies  ini  tersebar  di  perairan  pesisir  yang dangkal  dari  India  hingga  Filipina  dan termasuk Indonesia, khususnya daerah muara dan  teluk.  Diketahui  pula  ada  tiga  populasi yang  murni  hidup  di  air  tawar  sepanjang hidupnya  di  Sungai  Ayeyarwady,  Mekong dan  Mahakam  (Beasley et  al. ,  2005). Keempat  sampel  yang  diidentifikasi  sebagai lumba-lumba  Irrawaddy  pada  penelitian  ini berasal  dari  dua  lokasi  berbeda  yaitu  Sungai Mahakam  dan  Teluk  Balikpapan.  Walaupun sama-sama  teridentifikasi  sebagai  lumba- lumba  Irrawaddy,  keempat  sampel  me- ngelompok  menjadi  dua clade berbeda  pada pohon filogenetik, yang menunjukkan bahwa terdapat  variasi  genetik  antara  keempat sampel.  Jika  dilihat  lebih  lanjut,  tiga  sampel dari Sungai Mahakam mengelompok menjadi satu dan teridentifikasi sebagai haplotype 5.
Sampel dari Teluk Balikpapan teridentifikasi  sebagai  haplotype  baru  yang menjadi sister  taxa dari  haplotype  5  dan memiliki jarak genetik 0,01 dari sekuen yang ditemukan  di  Sungai  Mahakam.  Hasil  ini sangat  menarik  karena  menjadi  indikasi adanya  variasi  genetik  antara  individu  dari populasi  yang  berbeda,  dan  dapat  menjadi dasar  bagi  penelitian  tentang  keragaman
genetik  dari  dua  populasi  yang  merupakan satwa  endemik  dan  dilindungi  di  Indonesia. Beasley et  al. (2005)  bahkan  mengidenti- fikasi satu populasi baru di Australia dengan metode  genetik  untuk  melengkapi  identi- fikasi  morfologi  yang  umumnya  digunakan dan  kemudian  menamai  populasi  tersebut sebagai spesies baru.
Gambar 3. Pesut terdampar mati pada tanggal 1 November 2009 di Muara Semayang-Pela, Kalimantan Timur. Foto: Budiono/ RASI.

## IV. KESIMPULAN
Studi  ini  menunjukkan  bahwa  teknik genetika  molekuler  dapat  dijadikan  metode untuk  mengidentifikasi  jenis  dari  Cetacea hingga tingkat spesies, terutama bagian tubuh dari  mamalia  terdampar  yang  sulit  untuk diidentifikasi secara morfologi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  terlaksana  dengan  dana dari  the  United  States  Agency  for  Inter- national Development’s “Supporting Univer- sities  to  Partner  across  the  Pacific”  program (Cooperative  Agreement  No.  497-A-00-10- 00008-00 ).
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Firman,  Imelda  Susanti,  Budiono, Anne  Dawydowa  yang  melakukan  nekropsi dan  pengambilan  sebagian  dari  sampel  di Kalimantan  Timur  serta  Turtle  Guard-FKH, Universitas  Udayana  yang  telah  membantu pengambilan sampel di Bali

## DAFTAR PUSTAKA
Baker,  C.S.,  F.  Cipriano,  and  S.R.  Palumbi. 1996. Molecular genetic identification of  whale  and  dolphin  products  from commerical  markets  in  Korea  and Japan. Molecular  Ecology ,  5:671– 685.
Baker,  C.S.,  V.S.  Lukoschek,  M.L.  Lavery, Dalebout, M. Yong-Un, T. Endo, and N.  Funahashi.  2006.  Incomplete  re- porting  of  whale,  dolphin  and porpoise “bycatch” revealed by mole- cular  monitoring  of  Korean  markets. Animal Conservation , 9(4):474–482.
Beasley,  I.,  K.M.  Robertson,  and  P.  Arnold.
2005.  Description  of  a  new  dolphin, the  Australian  snubfin  dolphin Orca- ella  heinsohni sp.  (Cetacea,  Delphi- nidae). Marine  Mammal  Science , 21(3):365–400.
Dalebout,  M.L.,  A.  Van  Helden,  K.  Van Waerebeek,  and  C.S.  Baker.  1998. Molecular  genetic  identification  of southern  emisphere  beaked  whales (Cetacea: Ziphiidae). Molecular Ecology , 7:687–694.
Edgar, R.C. 2004. Muscle: Multiple sequence alignment  with  high  accuracy  and high  throughput. Nucleic  Acids  Res , 32:1792–1797.
Iqbal, D. 2016. Makin banyak hiu terdampar di Pangandaran. Ada Apa? Dari Flora Fauna, http://www.mongabay.co.id/
2016/12/05/makin-banyak-mamalia- laut-terdampar-di-pangandaran-ada- apa/.  5  Desember  2016.  [Diunduh pada 26 April 2017].
Jefferson, T.A., L. Karczmarski, D. Kreb, K. Laidre,  G.  O’Corry-Crowe,  R. Reeves,  L.  Rojas-Bracho,  E.  Secchi, E.  Slooten,  B.D.  Smith,  J.Y.  Wang, and  K.  Zhou.  2008. Orcaella  brevi- rostris  (Mahakam  River  subpopu- lation ).  From  The  IUCN  Red  List  of Threatened  Species  2008:  e.T3942 8A98842174,  (errata  version  publish- ed  in  2016),  http://www.iucnredlist.
org/details/39428/0.  [Retrieved  on  4 August 2017].
Kearse,  M.,  R.  Moir,  A.  Wilson,  S.  Stones- Havas,  M.  Cheung,  S.  Sturrock,  S. Buxton, A. Cooper, S. Markowitz, C. Duran,  T.  Thierer,  B.  Ashton,  P. Meintjes,  and  A.  Drummond.  2012. Geneious  Basic:  An  integrated  and extendable desktop software platform for  the  organization  and  analysis  of sequence  data. Bioinformatics ,  28: 1647–1649.
Kumar, S., G. Stecher,  and K. Tamura. 2016. MEGA7: Molecular evolutionary Gene-tics  Analysis  version  7.0  for bigger  datasets. Molecular  Biology and Evolution , 33(7):1870–1874.
Priyasidharta,  D.  2016  Paus  terdampar  di Probolinggo,  ini  kata  ahli  mamalia laut. https://m.tempo.co/read/news/ 2016/06/16/058780576/paus-terdam par-di-probolinggo-ini-kata-ahli-ma malia-laut.  16  Juni  2016.  [Diunduh pada 16 Juni 2016].
Rosel,  P.E.,  A.E.  Dizon,  and  J.E.  Heyning. 1994.  Genetic  analysis  of  sympatric morphotypes  of  common  dolphins (genus  Delphinus). Marine  Biology , 119(2):159–167.
Sambrook,  J.  and  D.W.  Russell.  2001. Molecular  cloning:  a  laboratory manual.  3 rd ed.  Cold  Spring  Harbour
Laboratory Press. Cold Spring Harbour. 2100p.
Sembiring, A., N.P.D. Pertiwi, A. Mahardini, R.  Wulandari,  E.M.  Kurniasih,  A.W. Kuncoro,  N.K.D.  Cahyani,  A.W. Anggoro,  M.  Ulfa,  H.  Madduppa, K.E.  Carpenter,  P.H.  Barber,  and G.N.  Mahardika.  2015.  DNA  bar- coding  reveals  targeted  fisheries  for endangered  sharks  in  Indonesia. Fisheries Research , 164:130–134. Walsh,  P.,  D.A.  Metzger,  and  R.  Higuchi.
1991.  Chelex-100  as  a  medium  for simple  extraction  of  DNA  for  PCR based  typing  from  forensic  material. Biotechniques , 10:506–513.
Willette,  D.A.,  S.E.  Simmonds,  S.H.  Cheng,
S. Esteves, T.L. Kane, H. Nuetzel, N. Pilaud,  R.  Rachmawati,  and  P.H. Barber.  2017.  Using  DNA  barcoding to  track  seafood  mislabeling  in  Los Angeles  restaurants. Conservation Biology , 2:1–23.
Diterima : 29 April 2017 Direview : 16 Mei 2017 Disetujui : 2 November 2017
472                                                                       http://journal.ipb.ac.id/index.php/jurnalikt
Lampiran 1.
474                                                                       http://journal.ipb.ac.id/index.php/jurnalikt