Efek Ekstrak Etanol Daun Kemangi (Ocimum sanctum) dalam Menghambat Pembentukan Biofilm Staphylococcus aureus secara In Vitro
The Effect of Basil Leaves Ethanol Extract (Ocimum sanctum) in Inhibiting The Establishment of Staphylococcus aureus biofilms with In Vitro Method
Putu Sri Maharani Utami 1 , Noorhamdani 2 , ’ Masruroh Rahayu 3
1 Program l Studi l Sarjana l Kedokteran, l Fakultas l Kedokteran l Universitas l Brawijaya
2 Departemen i Mikrobiologi, i Fakultas i Kedokteran i Universitas i Brawijaya 3 Departemen i Neurologi, i Fakultas i Kedokteran ‘ Universitas ’ Brawijaya e-mail korespondensi: aulani@ub.ac.id

## Abstrak
Biofilm merupakan salah satu mekanisme pertahanan bakteri terhadap antimikroba yang dapat menyebabkan resistensi. Staphylococcus aureus merupakan bakteri penghasil biofilm yang menjadi penyebab tersering infeksi kulit dan jaringan lunak. Oleh karena itu, diperlukan upaya untuk mencegah pembentukan biofilm S. aureus . Daun kemangi ( Ocimum sanctum ) merupakan tanaman herbal yang mengandung senyawa eugenol dan tanin yang diduga dapat menghambat pembentukan biofilm. Penelitian ini adalah penelitian true experimental-post test only group yang bertujuan membuktikan pengaruh ekstrak etanol daun kemangi terhadap terbentuknya biofilm S. aureus dengan metode in vitro dan mengetahui konsentrasi hambat biofilm minimal (KHBM) yang diperlukan.  Pada  penelitian  ini,  digunakan  metode  tabung  dengan  7  konsentrasi  berbeda.  Bentukan  cincin biofilm  diukur  secara  kuantitatif  menggunakan Mean  Gray  Value pada  Adobe  Photoshop  CS6.  Dari  hasil penelitian, diketahui bahwa kenaikan konsentrasi ekstrak berbanding lurus dengan penipisan cincin biofilm pada tabung  dengan  KHBM  pada  konsentrasi  30%.  Uji  korelasi Pearson menunjukkan  korelasi  sangat  kuat  dan signifikan (r=0,898, p=0,000) dan uji komparasi Oneway ANOVA menunjukkan perbedaan signifikan pada nilai rerata  tiap  kelompok  perlakuan  (p=0,000).  Oleh  karena  itu,  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun kemangi mampu menghambat pembentukan biofilm S. aureus pada uji in vitro.
Kata Kunci: biofilm, Staphylococcus aureus , Ocimum sanctum

## Abstract
Biofilm is a mechanism of bacterial defense against antimicrobials that can cause resistance. Staphylococcus aureus is a biofilm-producing bacteria, and the most often cause of skin and soft tissue infections. Therefore, efforts are needed to prevent the formation of S. aureus biofilms. Basil leaves ( Ocimum sanctum ) are herbal plants  that  contain  eugenol  and  tannin  compounds  to  inhibit  the  formation  of  biofilms.  This  research  is  an experimental laboratory study that aims to prove the effect of basil leaves ethanol extract on the establishment of S. aureus biofilms with in vitro method and determine the minimum inhibitory biofilm concentration needed. In this study, we used the tube method with seven different concentrations. The biofilm ring formation obtained was  quantitatively  measured  using  Mean  Gray  Value  in  Adobe  Photoshop  CS6.  The  results  found  that  the increase in extract concentration was directly proportional to the thinning of the biofilm ring on the tube with a minimum inhibitory concentration of biofilm at a concentration of 30%. The Pearson correlation test showed a very strong and significant correlation (r=0.898, p=0.000), and the Oneway ANOVA comparison test showed a significant difference among the mean of each group (p = 0.000). We can conclude that the ethanol extract basil leaves can inhibit the formation of S. aureus biofilms in vitro.
Keywords: biofilm, Staphylococcus aureus , Ocimum sanctum

## Pendahuluan
Hingga saat ini, penyakit infeksi masih merupakan kontributor  besar  morbiditas  di  berbagai  negara. Penyakit infeksi justru memiliki sebuah permasalahan  baru  seiring  dengan  semakin maraknya insiden resistensi. Bakteri dapat tumbuh hampir  di  setiap  permukaan,  membentuk  sebuah komunitas yang secara arsitektur sangat kompleks yang disebut biofilm (Putra et al. , 2014).
Salah satu bakteri yang dapat membentuk biofilm dan merupakan mikroorganisme patogen penyebab infeksi terbanyak adalah Staphylococcus aureus . S.  aureus dapat  membentuk  biofilm  pada berbagai  media  terutama  pada  penggunaan  alat- alat  kesehatan  yang  mengenai  atau  memasuki tubuh  manusia  (Otto,  2008).  Berdasarkan penelitian yang dilakukan RSCM Jakarta pada tahun 2013,  47%  pasien  infeksi  kulit  dan  jaringan  lunak terinfeksi S. aureus (Putra et al. , 2014).
S.aureus berada pada hampir 50% hidung manusia, bersifat invasif dan pathogen (Brooks et al. , 2014).
S.  aureus merupakan  bakteri  patogen  yang  dapat menyebabkan  berbagai  jenis  infeksi  klinis  seperti bakterimia dan endokarditis, infeksi osteoartikular dan  jaringan  lunak  kulit, pleupulmonary  infection, dan infeksi nosocomial (Tong et al. , 2015).
Biofilm S. a ureus dibentuk  oleh  perlekatan  awal pada permukaan jaringan biotik maupun abiotik. S. aureus mengekspresikan MSCRAMMs yang memiliki kapasitas untuk berikatan dengan matriks protein pada manusia dan dapat pula menggabungkan  matriks  protein  yang  berbeda. Proses ini diikuti oleh ekpresi PIA, teichoic acid , dan Accumulation  Associated  Protein (Aap)  yang berperan dalam proses agregasi dari sel-sel bakteri. Akhirnya,  kumpulan  sel  tersebut  akan  mengalami fase  pelepasan  yang  difasilitasi  oleh  ekspresi  dari PSM peptide yang  sangat  penting  dalam  produksi struktur tiga dimensi dari biofilm (Bhattacharya et al. , 2015).
Pembentukan  biofilm  pada S.  aureus memiliki peran  penting  pada  terjadinya  resistensi.  Adanya biofilm  yang  terbentuk  dapat  mencegah  zat antimikroba mencapai sel target dengan membatasi  terjadinya  difusi.  Selain  itu,  fisiologi spesifik  dari  biofilm  juga  dapat  membatasi  efikasi antibiotik yang menargetkan pada proses sel aktif dan  subpopulasi  spesifik  dari  sel  yang  resisten (Otto, 2008). Saat ini, diperkirakan hanya 20% dari populasi S.aureus yang  masih  sensitif  terhadap terapi  antibiotik  golongan  penicillin.  Berdasarkan penelitian  Hasan  pada  tahun  2016,  11  dari  29 strains S.  aureus yang  diteliti  resisten  terhadap vancomycin (Hasan et al. , 2016).
Oleh  karena  itu,  diperlukan  sebuah  usaha  untuk mencegah terbentuknya biofilm dari infeksi bakteri S.  aureus (Bal  dan  Gould,  2005).  Salah  satunya adalah  dengan  memanfaatkan  tanaman  yang berpotensi mencegah terbentuknya biofilm bakteri patogen.  Beberapa  tahun  terakhir,  telah  banyak penelitian  terhadap  tanaman  kemangi  atau  tulsi ( Ocimum  sanctum )  yang  digunakan  sebagai  agen antimikroba. Analisis kandungan bioaktif pada daun kemangi menunjukkan berbagai zat bioaktif seperti eugenol , caryophyllene, dan tannin yang  memiliki fungsi  sebagai  antimikroba  (Al-Temimi  dan  Al- Mashhedy, 2015).
Eugenol  merupakan  senyawa  fenol  yang  bersifat hidrofobik  dapat  menghambat  ekspresi  gen  IcaD, seA,  dan  sarA  yang  berperan  penting  dalam pembentukan biofilm (Al-Temimi dan Al- Mashhedy,  2015). Tannin  merupakan  senyawa polifenol  yang  dapat  menghambat  pembentukan fibrin  yang  diproduksi  oleh S.aureus ,  yang merupakan  salah  satu  komponen  penting  pada struktur biofilm (Akiyama et al. , 2001).
Berdasarkan  uraian  di  atas  maka  terdapat kemungkinan  bahwa  daun  kemangi  memiliki  efek antimikroba  dan  dapat  mencegah  terbentuknya biofilm  bakteri S.  aureus .  Melalui  penelitian  ini, penulis  ingin  membuktikan  bahwa  daun  kemangi dapat  menjadi  alternatif  dalam  mencegah pembentukan  biofilm S.  aureus yang  dapat menimbulkan  berbagai  permasalahan  baru  dalam penyebaran dan penanganan infeksi.

## Metode
Studi  dilaksanakan  dengan  rancangan  eksperimen laboratorium , menggunakan  uji  hambat  biofilm metode  tabung, dengan  tujuan  mengetahui pengaruh  ekstrak  etanol  terhadap  pembentukan biofilm S. aureus melalui metode in vitro .
Proses  identifikasi  bakteri  dilakukan  melalui beberapa  tahapan  di  antaranya  pewarnaan  gram, uji  katalase,  uji  koagulase,  dan  pembiakan  pada medium Mannitol Salt Agar . Bakteri diperoleh dari stok  kultur  bakteri  Laboratorium  Mikrobiologi FKUB.
Bahan utama penelitian berupa daun kemangi yang diperoleh  dari  Materia  Medica  Batu  dan  melalui proses  ekstraksi  di  Polinema,  Malang.  Daun kemangi  kemudian  dikeringkan,  diekstraksi,  dan dievaporasi. Pelarut yang digunakan adalah etanol 96%.
Pada  penelitian  inti,  digunakan  7  konsentrasi ekstrak berbeda dengan 1 kontrol (konsentrasi 0%). Konsentrasi yang digunakan adalah 10%, 15%, 20%,
25%,  30%,  dan  35%,  dengan  4  kali  pengulangan. Adapun  penentuan  kisaran  dan  jarak  konsentrasi dilakukan berdasarkan hasil penelitian pendahuluan.  Hasil  bentukan  cincin  biofilm  yang didapatkan dikuantifikasi menggunakan Mean Gray Value pada aplikasi Adobe Photoshop CS6 (Gambar 1).
Proses  pengolahan  data  dilakukan  dengan memanfaatkan program SPSS untuk windows versi 23. Uji  statistik  yang  digunakan  adalah  (1)  uji normalitas  menggunakan Shapiro-Wilk  Test .  Data terdistribusi normal jika nilai signifikansi > 0,05; (2) uji homogenitas varian menggunakan Levene Test . Data  memiliki  variasi  normal  jika  nilai  signifikansi <0,05;  (3)  uji  komparasi  menggunakan One-way ANOVA untuk mengetahui tingkat perbedaan nilai rerata suatu kelompok data dengan kelompok data lain; (4) uji Post Hoc Multiple Comparison dilakukan untuk  mengetahui  perbandingan  rerata  tiap kelompok  secara  signifikan  antara  satu  kelompok data  dengan  lainnya;  (5)  uji  korelasi Pearson dilakukan untuk mengetahui kategori keeratan dan bentuk  hubungan  antara  dua  variabel.  Hubungan yang signifikan ditunjukkan dengan p<0,05; (6) uji regresi  dilakukan  untuk  mencari  tahu  besarnya pengaruh  variabel  independen  terhadap  variabel dependen.

## Hasil
Pada studi ini, didapatkan bahwa pada konsentrasi 30% biofilm yang terbentuk telah semakin menipis, sedangkan  pada  konsentrasi  0%,  didapatkan pembentukan cincin biofilm yang paling tebal, dan pada  konsentrasi  35%  didapatkan  pembentukan cincin  biofilm  yang  nyaris  tidak  terlihat.  Hasil
pengukuran intensitas cincin biofilm dengan Mean Gray Value tertera melalui Tabel 1.
Data hasil pengamatan pada konsentrasi 0% hingga 35% menunjukkan adanya kenaikan rata-rata Mean Gray Value yang berbanding lurus dengan kenaikan konsentrasi  dari  ekstrak  etanol  daun  kemangi (Gambar  2).  Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak daun  kemangi,  semakin  tinggi  nilai Mean  Gray Value ,  yang  menandakan  bahwa  semakin  tipis intensitas  cincin  yang  terbentuk  pada airfluid border tabung,  semakin  kuat  penghambatan pembentukan biofilm yang terjadi.
Konsentrasi terkecil yang memiliki hasil Mean Gray Value 10%  di  bawah Mean  Gray  Value tabung kosong  merupakah  Konsentrasi  Hambat  Biofilm Minimal  (KHBM).  Pada  penelitian  ini,  didapatkan bahwa  10%  dari Mean  Gray  Value tabung  kosong bernilai 179,11.  Nilai tersebut telah tercapai pada konsentrasi  30%  sehingga  didapatkan  Kadar Hambat  Biofilm  Minimal  adalah  pada  konsentrasi 30%.
Hasil  uji  normalitas  diketahui  menunjukkan  nilai p=0,161  yang  menunjukkan  bahwa  hasil  memiliki sebaran yang normal. Hasil uji homogenitas Levene memberikan  hasil  p=0,335  yang  menunjukkan bahwa data hasil memiliki varian homogen. Dengan demikian, dapat dilakukan uji statistik parametrik.
Hasil pengujian Oneway ANOVA menunjukkan nilai p=0,000  (p<0,05)  yang  berarti  bahwa  terdapat perbedaan  signifikan  antara  nilai  rerata  tiap kelompok.  Hasil  Uji  perbandingan Post  Hoc  Tukey
A B C
D E F G
Gambar 1. Tabung Uji Hambat Pembentukan Biofilm dengan 4 kali pengulangan dengan pemberian ekstrak: A. Konsentrasi 0%, B. Konsentrasi 10%, C. Konsentrasi 15%, D. Konsentrasi 20%, E. Konsentrasi 25%, F. Konsentrasi 30%, G. Konsentrasi 35%.
menunjukkan  perbedaan  tidak  signifikan  antara dua  kelompok  hasil  yang  berdekatan.  Namun, terdapat  perbedaan  nilai Mean  Gray  Value yang signifikan  antara  dua  kelompok  konsentrasi tertinggi,  yaitu  konsentrasi  30%  dan  35%  dengan kelima konsentrasi terendah lainnya.
Hasil  pengujian  korelasi Pearson menggambarkan nilai korelasi (r) = 0,898, yang menandakan korelasi antara  konsentrasi  ekstrak  daun  kemangi  dengan Mean  Gray  Value atau  ketebalan  biofilm  sangat kuat.  Hasil  uji  regresi  menunjukkan  bahwa  80,6% hambatan  pembentukan  biofilm  dipengaruhi  oleh ekstrak daun kemangi.
Gambar 2. Grafik Hasil Pengukuran Mean Gray Value

## Pembahasan
Pada  uji  pendahuluan,  konsentrasi  ekstrak  yang digunakan adalah 0%; 3,125%; 6,25%; 12,5%; 25%; 50%; dan 100%. Hasil uji pendahuluan menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  25%  dan 50%  telah  tidak  ditemukan  pembentukan  cincin biofilm  pada  daerah airfluid  border secara  visual. Selanjutnya,  ditentukan  konsentrasi  yang  akan digunakan pada penelitian inti, yaitu 0%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, dan 35%. Konsentrasi 0% berperan sebagai kontrol bakteri yang terdiri atas NaCl tanpa pemberian ekstrak daun kemangi. Pada penelitian inti,  didapatkan  hasil  bahwa  cincin  biofilm  telah mulai  menghilang  pada  konsentrasi  30%.  Pada konsentrasi  0%  didapatkan  pembentukan  cincin biofilm yang paling tebal dan pada konsentrasi 35% didapatkan pembentukan cincin biofilm yang nyaris tidak terlihat.
Data hasil pengamatan pada konsentrasi 0% hingga 35%  menunjukkan  adanya  peningkatan  rata-rata Mean  Gray  Value yang  sebanding  dengan peningkatan  konsentrasi  ekstrak  etanol  kemangi. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun kemangi,
semakin tipis intensitas cincin yang terbentuk pada tabung yang berarti semakin kuat pula penghambatan pembentukan biofilm. Pada penelitian  ini,  didapatkan  10%  dari  MGV  tabung kosong  bernilai  179,11  yang  tercapai  pada konsentrasi  30%.  Dengan  demikian,  didapatkan KHBM pada konsentrasi 30%.
Hasil  penelitian  ini  diketahui  selaras  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Lalitya (2017) mengenai  pengaruh  ekstrak  daun  kemangi terhadap  penghambatan  terbentuknya  biofilm bakteri Burkholderia cepacia menggunakan metode tabung.  Penelitian  tersebut  menemukan  bahwa terjadi  hubungan  yang  berbanding  lurus  antara peningkatan  konsentrasi  ekstrak  daun  kemangi terhadap peningkatan nilai Mean Gray Value yang menunjukkan  penipisan  intensitas  cincin  biofilm seiring  peningkatan  konsentrasi  ekstrak.  Pada penelitian  tersebut  digunakan  6  konsentrasi sebagai perlakuan, yaitu 0%, 10%, 20%, 30%, 40%, dan  50%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa cincin  biofilm  telah  tidak  terbentuk  pada konsentrasi 30%.
Ditemukan pula penelitian Bhavani dan Sivasubramanian (2014)  yang  mengemukakan bahwa  ekstrak  daun  kemangi  dapat  menghambat terbentuknya biofilm Methicillin Resistant S. aureus pada  titik  konsentrasi  ekstrak  128  µg/ml  dengan metode tissue  culture  plate .  Adanya  perbedaan hasil  tersebut  dapat  dipengaruhi  oleh  perbedaan metode dan pelarut ekstrak yang digunakan. Pada penelitian  tersebut  dibuktikan  bahwa  ekstrak etanol  kemangi  lebih  efektif  dalam  menghambat pembentukan biofilm  MRSA dibandingkan ekstrak metanol. Hal ini menjadi alasan penggunan etanol 96% sebagai pelarut dalam penelitian ini.
Penelitian Ratthawongjirakul dan Thongkerd (2016) menunjukkan  bahwa  pembentukan  biofilm S. aureus dapat dihambat oleh ekstrak bawang putih ( Allium  sativum )  pada  KHBM  8,192  µg/ml. Berdasarkan  hasil  analisis  RT-PCR  kuantitatif, diketahui  bahwa  mekanisme  penghambatan biofilm S.  aureus adalah  dengan  penghambatan ekspresi gen icaA dan agr sehingga sintesis protein bakteri,  proses attachment, dan  aktivasi quorum sensing menjadi terhambat.
Berdasarkan  penelitian  Mishra et  al . (2011) disebutkan  bahwa  adanya  aktivitas  antibakteri ekstrak daun kemangi disebabkan oleh kandungan eugenol  yang  merupakan  sebuah  senyawa  fenol, senyawa terbesar penyusun ekstrak daun kemangi. Selain  itu,  senyawa  lain  yang  memiliki  efek antibakteri adalah tanin, flavonoid, caryophyllene, alkaloid hingga steroid.
140 145 150 155 160 165 170 175 180 185 190 195 M ea n Gr a y V a lu e [ekstrak kemangi]
Tabel  1.  Hasil  Pengukuran Mean  Gray  Value
kelompok perlakuan menggunakan Adobe Photoshop CS6
Menurut Marchese et  al . (2017),  eugenol  dalam ekstrak  daun  kemangi  dapat  menghambat pertumbuhan  biofilm  melalui  penghambatan ekspresi  gen  IcaD  dan  sarA.  Gen  IcaD  berfungsi dalam  membentuk  PIA  sebagai  komponen  utama proses  perlekatan  biofilm,  sedangkan  gen  sarA berfungsi  untuk  mencegah  terjadinya  degradasi DNA dan protein ekstraseluler biofilm. Akiyama et al. (2001)  juga  menyebutkan  bahwa  kandungan tannin  dapat  menghambat  pembentukan  biofilm melalui  penghambatan  pembentukan  fibrin  yang diproduksi  oleh S.  aureus yang  merupakan komponen  penting  pembentuk  biofilm.  Diketahui bahwa dengan menurunnya kandungan fibrin, daya tahan  biofilm  terhadap  efek  fisik  maupun  kimia akan menurun.
Keterbatasan  penelitian  ini  adalah  pengamatan terhadap  perkembangan  biofilm  dan  perlakuan yang hanya diberikan setelah masa inkubasi selesai, tidak  dilakukan  dari  waktu  ke  waktu  sepanjang masa  inkubasi . Oleh  karena  itu,  belum  dapat diketahui  perubahan  yang  terjadi  pada  setiap waktu  efek  perlakuan  terhadap  biofilm  yang terbentuk.  Karena  keterbatasan  metode  dan bahan, studi ini juga belum dapat menggambarkan secara spesifik zat aktif daun kemangi yang memiliki potensi menghambat pembentukan biofilm. Selain itu, belum diketahui pula efek lama penyimpanan ekstrak  terhadap  kandungan  dan  efektivitas  zat aktif yang terkandung di dalamnya sehingga perlu dilakukan eksplorasi metode lebih lanjut.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  pengaruh  ekstrak etanol  daun  kemangi  terhadap  pembentukan biofilm S. aureus , dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol  daun  kemangi  dapat  menghambat pembentukan  biofilm S.  aureus secara in  vitro. Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun kemangi, semakin tinggi penghambatan pembentukan  biofilm S.  aureus. KHBM  ekstrak etanol  daun  kemangi  terhadap  pembentukan biofilm S. aureus adalah pada konsentrasi 30%.

## Daftar Pustaka
Akiyama H, Fujii K, Yamasaki O, Oono T, Iwatsuki K. 2001.  Antibacterial  action  of  several  tannins against Staphylococcus  aureus .  Journal  of antimicrobial  chemotherapy.  Oct  1;  48(4): 487-91.
Al-Temimi SS, Al-Mashhedy LA. 2015. Estimation of the Phytochemical Constituents and Biological Activity of Iraqi Ocimum sanctum L Extracts. Int J Pharma Bio Sci. 6: 999-1007.
Bal  AM,  Gould  IM.  2005.  Antibiotic  resistance  in Staphylococcus  aureus and  its  relevance  in therapy. Expert opinion on pharmacotherapy. Oct 1; 6(13): 2257-69.
Bhattacharya  M,  Wozniak  DJ,  Stoodley  P,  Hall- Stoodley L. 2015. Prevention and treatment of Staphylococcus aureus biofilms. Expert review of anti-infective therapy. Dec 2; 13(12): 1499- 516.
Bhavani T., Sivasubramanian M. 2014. Anti-biofilm efficacies  of Ocimum  sanctum , Punica granatum and Solanum  nigrum extracts against  Methicillin  resistant Staphylococcus aureus from bovine mastitis. Indian Journal of Applied Microbiology . 17 (2): 55-64.
Brooks GF, Carroll KC, Butel JS, Morse SA, Mietzner TA.  2014.  Microbiologia  Médica  de  Jawetz, Melnick & Adelberg-26. AMGH Editora Mar 1.
Hasan R, Acharjee M, Noor R. 2016. Prevalence of vancomycin  resistant  Staphylococcus  aureus (VRSA)  in  methicillin  resistant  S.  aureus (MRSA)  strains  isolated  from  burn  wound infections.  Tzu  Chi  Medical  Journal.  Jun  1; 28(2): 49-53.
Lalitya, W. 2017 Efek Ekstrak Etanol Daun Kemangi (Ocimum  Sanctum)  Sebagai  Penghambat Pembentukan  Biofilm  Burkholderia  Cepacia Secara  In  Vitro. Tugas  Akhir.  Tidak
Konsentrasi Pengulangan Mean ± SD I II III IV 0% 165,57 153,23 152.48 157.42 157,18 ± 6,00 10% 160,06 162,85 155,03 164,72 160, 67 ± 4,21 15% 163,38 165,33 159,59 169,29 164, 40 ± 4,04 20% 172,33 166,31 166,06 183,1 171, 95 ± 7,97 25% 171,11 170,7 176,05 170,47 172, 08 ± 2,66 30% 188,76 182,28 182,89 179,33 183, 32 ± 3,95 35% 187,74 186,99 186,38 190,79 187, 98 ± 1,96 Mean Gray Value 199,01
dipublikasikan, Fakultas Kedokteran
Universitas Brawijaya Malang.
Marchese A, Barbieri R, Coppo E, Orhan IE, Daglia
M,  Nabavi  SF,  Izadi  M,  Abdollahi  M,  Nabavi
SM, Ajami M. 2017. Antimicrobial activity of eugenol and essential oils containing eugenol: A  mechanistic  viewpoint.  Critical  Reviews  in
Microbiology. Nov 2; 43(6): 668-89.
Mishra  P,  Mishra  S.  2011.  Study  of  antibacterial activity  of Ocimum  sanctum extract  against gram positive and gram negative bacteria. Am J Food Technol. 6(4): 336-41.
Otto M. 2008. Staphylococcal biofilms. InBacterial biofilms.  Springer,  Berlin,  Heidelberg  p.207- 228.
Putra  MI,  Suwarto  S,  Loho  T,  Abdullah  M.  2014.
Faktor Risiko
Methicillin
Resistant Staphylococcus  aureus pada  Pasien  Infeksi Kulit dan Jaringan Lunak di Ruang Rawat Inap. Jurnal Penyakit Dalam Indonesia. Jul 31; 1(1): 3-14.
Ratthawongjirakul  P,  Thongkerd  V.  2016.  Fresh garlic  extract  inhibits Staphylococcus  aureus biofilm formation under chemopreventive and chemotherapeutic  conditions.  Songklanakarin Journal of Science & Technology. Jul 1; 38(4).
Tong  SY,  Davis  JS,  Eichenberger  E,  Holland  TL, Fowler  VG.  2015. Staphylococcus  aureus infections:  epidemiology,  pathophysiology, clinical  manifestations,  and  management. Clinical microbiology reviews. Jul 1; 28(3): 603- 61.