Efek Protektif Ekstrak Etanol Daun Kesum ( Polygonum minus )

## Terhadap Jumlah Sel Leydig Mencit yang Dipapar Kadmium Klorida
Protective Effect of Ethanol Extract of Kesum Leaves (Polygonum minus) on the Number of Leydig Cells in Mice Exposed to Cadmium Chloride
Chici Ayu Paramita 1 *, Hani Plumeriastuti 2 , Sri Pantja Madyawati 3 , Arimbi 2 , Sri Mulyati 3 , Rochmah Kurnijasanti 4
1 Magister Ilmu Penyakit dan Kesehatan Masyarakat Veteriner, 2 Divisi Patologi Veteriner, 3 Divisi Reproduksi Veteriner, 4 Divisi Ilmu Kedokteran Dasar, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga, Jl. Mulyorejo, Kampus C, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia.
* Corresponding author : chiciayup@gmail.com

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek protektif ekstrak etanol daun kesum ( Polygonum minus ) terhadap  jumlah  sel  Leydig  pada  mencit  yang  dipapar  kadmium  klorida  (CdCl 2 ).  Sebanyak  20  ekor  mencit jantan  dibagi  menjadi  lima  kelompok,  masing-masing  kelompok  terdiri  dari  empat  replikasi  kemudian diberikan perlakuan yang berbeda secara peroral selama 21 hari. Kelompok perlakuan meliputi (K-) suspensi CMC Na 0,5% + aquadest, (K+) suspensi CMC Na 0,5% + 12 mg/kgBB/hari kadmium klorida, (P1, P2, dan P3) ekstrak etanol daun kesum masing-masing 200, 400, dan 800 mg/kgBB/hari + 12 mg/kgBB/hari kadmium klorida. Pengamatan dilakukan dengan menghitung jumlah sel Leydig. Data dianalisis dengan ANOVA dan uji Duncan. Hasil penelitian menunjukkan perbedaan yang signifikkan (p<0,05) antar kelompok P1, P2, P3 dengan K+. Dilain sisi kelompok P2 menunjukkan hasil yang similar dengan K-. Kesimpulannya, ekstrak etanol daun kesum dapat melindungi dan mempertahankan jumlah sel Leydig testis mencit dari paparan kadmium klorida dengan dosis optimum adalah 400 mg/kgBB/hari.
Kata kunci: daun kesum, Polygonum minus , kadmium klorida, sel Leydig

## Abstract
This  study  aimed  to  determine  the  protective  effect  of  ethanol  extract  of  kesum  leaves  (Polygonum minus) on the number of Leydig cells in mice exposed to cadmium chloride (CdCl 2 ). A total of 20 male mice were divided into five groups, each group consisting of four replications and then given different treatments orally for 21 days. The treatment groups included (K-) 0,5% CMC Na suspension + distilled water, (K+) 0,5% CMC Na suspension + 12 mg/kgBW/day cadmium chloride, (P1, P2, and P3) ethanol extract of kesum leaves, respectively.  -respectively  200,  400,  and  800  mg/kgBW/day  +  12  mg/kgBW/day  cadmium  chloride. Observations were made by counting the number of Leydig cells. Data were analyzed by ANOVA and Duncan's test.  The  results  showed  significant  differences  (p<0,05)  between  groups  P1,  P2, P3  and  K+.  On  the  other hand, the P2 group showed similar results to K-. In conclusion, the ethanol extract of kesum leaves can protect and  maintain  the  number  of Leydig  cells  in  the  testes  of  mice  from  exposure  to  cadmium  chloride,  and  the optimal dose was 400 mg/kgBW/day.
Keywords: kesum leaves, Polygonum minus, cadmium chloride, Leydig cells
Received: 5 October 2021 Revised: 30 November 2022 Accepted: 3 January 2023

## PENDAHULUAN
Kadmium  adalah  logam  berwarna  putih perak, lunak,  mengkilap, tidak larut dalam basa, mudah  bereaksi,  serta  menghasilkan  kadmium oksida  (CdO)  bila  dipanaskan.  Kadmium  (Cd)
umumnya terdapat dalam kombinasi dengan klor (CdCl 2 )  maupun  sulfit  (CdSO 3 2- ).  Kadmium membentuk  Cd 2+ yang  bersifat  tidak  stabil (Widowati et  al .,  2008).  Kontaminasi  kadmium berasal  dari  pembuangan  limbah  industri, penambangan,  pupuk  kimia,  pestisida,  dan
pembuangan  limbah  rumah  tangga  ke  sungai (Sutrisno  dan  Kuntyastuti,  2015).  Toksisitas kadmium  kronis  terjadi  pada  pekerja  industri yang  terpapar  kadmium  atau  penduduk  yang tinggal  di  daerah  terkontaminasi  (Sharma et  al ., 2015).  Kadmium  (Cd)  dapat  masuk  ke  dalam tubuh  manusia  dan  hewan  melalui  makanan, minuman  dan  kulit.  Selanjutnya  kadmium terakumulasi  dalam  sel  menyebabkan  gangguan kesehatan organ reproduksi testis (Nemoto et al ., 2009).
Kadmium  dengan  sifat  tidak  stabil  dapat meningkatkan reactive  oxygen  species (ROS) yang  merupakan  representasi  derivat  oksigen radikal  dan  nonradikal.  Derivat  oksigen  radikal meliputi  ion  OH,  superoksida,  nitrit  oksida,  dan peroksil,  sedangkan  derivat  oksigen  yang nonradikal  meliputi  ozon,  singlet  oksigen,  lipid peroksida,  dan  hidrogen  peroksida.  Derivat oksigen  nonradikal  selanjutnya  akan  mengambil bagian dalam kaskade reaksi yang menghasilkan radikal bebas (Varh et al ., 2010).
Target  utama  aktivitas  ROS  adalah poly unsaturated fatty  acid (PUFA)  atau  asam  lemak tak  jenuh  ganda  yang  terdapat  dalam  membran sel.  Reaksi  ROS  diperkuat  dengan  interaksi hidrogen  peroksida  dan  superoksida  sehingga meningkatkan peroksidasi lipid yang mengakibatkan  stres  oksidatif.  Hasil peroksidasi lipid berdampak negatif pada fosforilasi oksidatif dalam  mitokondria,  peroksidasi  lipid  pada membran  plasma  dan  membran  intraseluler mengakibatkan  enzim  protease  rusak  dan mengganggu  pengeluaran  Ca 2+ ke  sitosol  yang selanjutnya dapat menyebabkan nekrosis (Vanlangenakker et al ., 2008).
Stres  oksidatif  oleh  toksisitas  kadmium dapat  menyebabkan  cedera  jaringan  testis, penurunan  bobot  testis,  gangguan  fungsi  testis dan  penurunan  sekresi  androgen  (Yari et  al ., 2010).  Hormon  androgen  terutama  testosteron dihasilkan oleh sel Leydig di interstitial jaringan testis yang berfungsi dalam regulasi spermatogenesis (Wang et al ., 2009; Ivell et al ., 2013). Testosteron merupakan hormon seks pria yang  sangat  penting  dalam  perkembangan  dan menjaga  sistem  reproduksi  pria  (Matsumoto et al ., 2013). Rendahnya kadar testosteron pada pria
karena berkurangnya jumlah sel Leydig mengakibatkan  hilangnya  libido  dan  disfungsi ereksi (Heinemann, 1999).
Pengaruh  toksisitas  kadmium  pada  testis sangat berbahaya. Senyawa yang dapat mempertahankan tubuh dari radikal bebas adalah antioksidan.  Tanaman  asli  Indonesia  banyak mengandung  antioksidan  dengan  bahan  aktif antara  lain  vitamin  C,  E,  pro  vitamin  A, organosulfur, α-tocopherol, flavonoid, thymoquinone, statin, niasin, phycocyanin (Werdhasari, 2014).
Penggunaan  antioksidan  alami  dari  ekstrak tumbuhan  dipilih  sebagai  alternatif  pengobatan karena  manfaatnya  bagi  kesehatan  manusia  dan timbulnya  kekhawatiran  konsumen  tentang keamanan  antioksidan  sintetis  dalam  makanan (Sun dan Ho, 2005; Suhaj, 2006).
Daun  kesum  ( Polygonum  minus )  termasuk antioksidan alami berasal dari keluarga Polygonaceae. Daun kesum  merupakan tanaman endemik  yang  tersebar  di  penjuru  Kalimantan Barat.  Berdasarkan  hasil  penelitian  skrining fitokimia  ekstrak  etanol  daun  kesum  terdapat kandungan senyawa golongan fenolik, terpenoid- steroid,  flavonoid  dan  alkaloid  (Wibowo et  al ., 2009). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek protektif ekstrak etanol daun kesum terhadap jumlah  sel  Leydig  pada  mencit  yang  dipapar kadmium klorida.

## METODE PENELITIAN

## Sampel
Penelitian  telah  mendapatkan  izin  etik penelitian No.43/KE/2019 dari Fakultas Kedokteran  Hewan,  Universitas  Airlangga. Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  20  mencit  jantan  strain  BALB/C  dengan berat 25-50 gram dan berumur 10 minggu berasal dari Pusat Veteriner Farma (PUSVETMA).
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  kadmium  klorida,  akuades,  daun  kesum, etanol 96%, pakan ayam broiler, CMC Na 0,5%, dan  Buffered  Formalin  10%.  Bahan  untuk pembuatan preparat histopatologi adalah alkohol 70%,  80%,  90%  dan  100  %,  xylol,  parafin, Hematoksilin, Eosin dan entelan.
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  alat  bedah  minor,  bak,  mikrotom,  kasa, object  glass,  cover  glass,  canadia  balsam,  kertas saring,  timbangan  digital,  labu  penampung, kondensor,  penangas,  ekstraktor  soxhlet, shaker water  bath ,  penyaring  buchner,  rotary  vakum evaporator.

## Perlakuan dan Pengambilan Data
Mencit diberikan ekstrak etanol daun kesum dan  kadmium  klorida  secara  peroral  selama  21 hari.  Kelompok  perlakuan  pada  penelitian  ini terdiri  atas  lima  kelompok,  yaitu  (K-)  suspensi CMC  Na  0,5%  +  akuades  PO,  (K+)  suspensi CMC  Na  0,5%  +  kadmium  klorida  dosis  12 mg/kgBB/hari PO, (P1) ekstrak etanol kesum 200 mg/kgBB/hari  +  kadmium  klorida  dosis  12 mg/kgBB/hari PO, (P2) ekstrak etanol kesum 400 mg/kgBB/hari  +kadmium  klorida  dosis  12 mg/kgBB/hari PO, (P3) ekstrak etanol kesum 800 mg/kgBB/hari  +  kadmium  klorida  dosis  12  mg/ kgBB/hari PO.
Euthanasi  dilakukan  dengan  cara  dislokasi servikalis  kemudian  dilakukan  pembedahan dengan  membuka  rongga  abdomen  untuk melakukan koleksi sampel testis.
Perhitungan  jumlah  sel  Leydig  di  jaringan intertitial  tubulus  seminiferus  sebanyak  lima lapang  pandang  pada  masing-masing  perlakuan dengan perbesaran 400x menggunakan mikroskop  Olympus ® CX-  21.  Lapang  pandang diambil  dari  preparat  testis  kanan  bagian  kanan atas,  kanan  bawah,  kiri  atas,  kiri  bawah,  dan tengah.

## Analisis Data
Data  hasil  penelitian  yang  diperoleh ditabulasi  dengan  Microsoft  excel.  Setelah  data didapatkan  kemudian  dianalisis  statistik  dengan menggunakan  Analysis  of  Variance  (ANOVA). Jika  hasil  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata (p<0,05) dilanjutkan uji Duncan. Analisis statistik dengan program SPSS v21.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kelompok perlakuan yang diberikan ekstrak etanol  daun  kesum  dosis  400  mg/kgBB/hari  dan
12 mg/kgBB/hari kadmium klorida menunjukkan hasil paling tinggi dibanding kelompok perlakuan yang  lain.  Hasil  kelompok  perlakuan  ini mendekati  hasil  kelompok  K-  yang  hanya diberikan  larutan  CMC  Na  0,5%  dan  akuades tanpa  paparan  kadmium  klorida.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  kesum dosis  400  mg/kgBB/hari  merupakan  dosis optimum  dalam  mempertahankan  jumlah  sel Leydig akibat paparan kadmium klorida (Tabel 1 dan Gambar 1).
Kadmium merupakan limbah kimia berbahaya bagi lingkungan. Manusia dan hewan terpapar kadmium melalui udara, air minum dan makanan  yang  tercemar  kemudian  terakumulasi perlahan  di  dalam  tubuh  (Järup  dan  Akesson, 2009).  Tanaman  pangan  terpapar  logam  berat melalui  tanah  yang  terkontaminasi  dan  manusia dapat  terpapar  logam  berat  melalui  konsumsi makanan  yang  terkontaminasi (Machiwa,  2010). Kadmium  akan  terakumulasi  dan  mengalami biomagnifikasi  dalam  rantai  makanan  (EPA, 2000).
Kadmium yang terakumulasi di dalam tubuh memiliki kapasitas distribusi yang tinggi sehingga dapat  didistribusikan  ke  jaringan  dengan  cepat. Kadmium  memiliki  paruh  biologis  yang  lama ( ∼ 20  tahun  pada  manusia)  dan  terakumulasi dalam  tubuh  selama  periode  waktu  yang  lama (Sarkar et  al .,  2013).  Kadmium  klorida  yang masuk ke dalam tubuh akan diserap dan diangkut oleh  darah  kemudian  disimpan  pada  organ  yang kaya  akan  metalotionin  (Klaassen et  al .,  2009).
Paparan  kadmium  klorida  pada  tikus  Swiss dengan  dosis  1  mg/kgBB  selama  5-8  minggu dapat  meningkatkan  peroksidasi  lipid  penyebab stres oksidatif pada organ testis sehingga merusak pertahanan  intraseluler  yang  menyebabkan perubahan spermatogenesis (Acharya et al ., 2008) Kelompok K+ yang diberikan 12 mg/kgBB/hari  kadmium  klorida  menunjukkan hasil  paling  sedikit  dibanding  dengan  kelompok perlakuan yang lain (Tabel 1), hal ini dikarenakan paparan  kadmium  klorida secara langsung  dapat meningkatkan ROS yang menyebabkan peroksidasi lipid dalam testis sehingga mengakibatkan perubahan permeabilitas
membran plasma, kerusakan membran nuklear
Tabel 1. Jumlah sel Leydig mencit yang diberikan ekstrak etanol daun kesum berbagai dosis dengan paparan kadmium klorida
Perlakuan Jumlah Sel Leydig (Mean±SD) K- 11,75 a ±1,50 K+ 5,75 d ±0,66 P1 9,00 b ±0,36 P2 11,35 a ±1,45 P3 7,45 c ±0,34
a,b,c,d Superskrip berbeda pada kolom yang sama dan menunjukkan perbedaan signifikan (p<0,05).
Gambar 1. Panah kuning  menunjukkan sel Leydig.
dan mitokondria, peningkatan kondensasi kromatin  karena  penggabungan  kadmium  ke dalam kromatin, dan pemisahan rantai helix DNA (Thompson  dan  Bannigan,  2008).  Gangguan sintesis  protein  akibat  paparan  kadmium  dapat meningkatkan  apoptosis  dan  kematian  sel (Herranz et al ., 2010).
Stres oksidatif akibat peroksidasi lipid secara langsung menonaktifkan enzim yang mengandung kelompok sulfidril seperti glutation (GSH), superoksida dismutase (SOD), klorampenikol  asetiltransferase  (CAT),  glutation peroksidase (GPx), glutation S-transferase (GST) dan  glutation  reduktase  (GR),  selain  itu menyebabkan fosforilasi oksidatif dalam mitokondria. Ikatan diavalen yang tinggi dari ion kadmium  terhadap  kelompok  tiol  atau  sulfhidril protein akan mengubah fungsi protein. Menipisnya  tiol  intraselullar  dapat  mengurangi GSH, GPx, GST, dan GR (Vestena et al ., 2011). Kegagalan sistem pertahanan antioksidan dapat
meningkatkan stres oksidatif karena ketidakseimbangan produksi ROS selama metabolisme sel (Kumar et al ., 2014).
Stres  oksidatif  secara  tidak  langsung  juga mempengaruhi kadar hormon testosteron. Testosteron merupakan androgen yang berikatan dengan  reseptor  androgen.  Reseptor  androgen memiliki  reseptor  inti  yang  bertindak  sebagai ligand-responsive transcription factor . Pada testis reseptor  androgen  terdapat  pada  sel  Leydig,  sel peritubular,  dan  sel  Sertoli.  Androgen  secara bebas  berdifusi  melalui  membran  plasma kemudian mengikat reseptor androgen membentuk komplek yang selanjutnya berinteraksi  dengan androgen  reseptor  element (ARE) pada bagian promotor gen target (Amalia, 2007).
Stres  oksidatif  oleh  ROS  di  dalam  tubuh dapat meningkatkan ekspresi sitokrom p450 (Doi et  al .,  2003).  Meningkatnya  ekspresi  p450 menyebabkan  reseptor  androgen  menjadi  tidak
K- K+ P1 P2 P3
aktif  karena  akan  berikatan  dengan  p450  bukan dengan androgen. Gangguan pengikatan androgen  ini  akan  menyebabkan  terganggunya proses  steroidogenesis.  Peningkatan  p450  oleh ROS  pada  organ  menyebabkan  kematian  sel Leydig  berupa  apoptosis  dan  nekrosis  (Wati, 2014).
Kelompok perlakuan yang diberikan ekstrak etanol  daun  kesum  dosis  200  mg/kgBB/hari  dan 12 mg/kgBB/hari kadmium klorida menunjukkan hasil lebih tinggi dibanding dengan kelompok K+ yang hanya diberikan 12 mg/kgBB/hari kadmium klorida  dan  kelompok  perlakuan  yang  diberikan ekstrak etanol daun kesum dosis 800 mg/kgBB/hari  (Tabel  1).  Hal  ini  menunjukkan terdapat efek protektif ekstrak etanol daun kesum dalam mempertahankan jumlah sel Leydig. Hasil kelompok  tersebut  didukung  dengan  penelitian yang  dilakukan  oleh  Maizura et  al .  (2011) aktivitas  antioksidan  kesum  dapat  menangkal radikal  bebas.  Kesum  memiliki  kandungan fenolik  yang  tinggi,  oleh  karena  itu  kesum dianggap  sebagai  antioksidan  alami  yang potensial.  Antioksidan  ekstrak  tumbuhan  yang mengandung  polifenol  akan  mendonorkan  atom hidrogen atau elektron sehingga kondisi sel akan stabil (Maizura et al ., 2011).
Polifenol  dilaporkan  menunjukkan  aktivitas antioksidan  terhadap  peroksidasi  lipid  dan menghambat produksi ROS intraseluler. Polifenol juga  dapat  menekan  nekrosis  dan  apoptosis (Shirai et  al .,  2015).  Polifenol  yang  terkandung dalam  daun  kesum  adalah  flavonoid  terdiri  dari quercetin, myricetin, asam galat, asam koumarin, flavon  dan  metil  flavonol  (Imelda et  al .,  2014; Qader et al ., 2012). Pemberian quercetin terhadap paparan kadmium secara signifikan menurunkan ROS  dan  peroksidasi  lipid  serta  meningkatkan GSH  dan  aktivitas  antioksidan  enzimatik  (SOD dan GSH-Px) (Bu et al ., 2011).
Hasil  skrining  ekstrak  etanol  daun  kesum mengandung senyawa metabolit sekunder berupa flavonoid,  alkaloid,  tanin  dan  saponin  (Atika, 2016).  Saponin  yang  terkandung  dalam  ekstrak yang diberikan pada mencit akan masuk ke dalam tubuh  mencit  melalui  saluran  digesti.  Senyawa saponin akan dipecah secara kimiawi di lambung dalam  suasana  asam  sehingga  mengalami
pemutusan  gugus  gula  dari  gugus  sterol. Pemutusan  gugus  ini  akan  meningkatkan kandungan  sterol  bebas  (Robinson,  1995). Kolesterol merupakan bahan pembentuk hormon steroid. Pada kelenjar adrenal kolesterol mengalami  esterifikasi  dan  disimpan  dalam butiran  lemak  di  sitoplasma.  Rangsangan  dari adrenokortikotropin  hormon  (ACTH)  yang  di sekresi  oleh  hipofisa  anterior  ke  kelejar  adrenal menyebabkan  hidrolisis  kolesterol  ester  menjadi kolesterol  bebas  dan  menyebabkan  perpindahan kolesterol  menuju  mitokondria.  Enzim  pemutus rantai  samping  sitokrom p450  (P450scc) menyebabkan  perubahan  kolesterol  menjadi pregnenolon  (Robert et  al .,  2009).  Pregnolon merupakan prekursor kolesterol yang mensintesis hornon  testosteron  (Litwak,  1992).  Testosteron membantu mengaktifkan enzim-enzim steroidogenesis  seperti  p450c17  dan  17ß- hidroksisteroid  dehidrogenase  (17ß-HSD)  yang menunjang  aktivitas  diferensiasi  sel  Leydig sehingga dapat meningkatkan jumlah sel Leydig (Permatasari dan Widhiantara, 2017).
Kandungan  flavonoid  dan  saponin  ekstrak etanol daun kesum dapat mempertahankan jumlah sel Leydig. Kelompok perlakuan yang diberikan ekstrak etanol daun kesum dosis 800 mg/kgBB/hari  dan  12  mg/kgBB/hari  kadmium klorida menunjukkan hasil lebih rendah dibanding  kelompok  perlakuan  yang  diberikan ekstrak  etanol  daun  kesum  dosis  200  dan  400 mg/kgBB/hari (Tabel 1). Hal tersebut berkolerasi dengan  penelitian  Skibola  dan  Smith,  (2000) bahwa  flavonoid  dalam  dosis  tinggi  dapat menjadi  toksik.  Flavonoid  dapat  bertindak sebagai  antioksidan  atau  pro-oksidan  tergantung pada  tingkat  yang  dikonsumsi.  Flavonoid  dalam dosis  tinggi  pada  tubuh  dapat  membentuk  ROS yang  pada  akhirnya  dapat  mengakibatkan kerusakan DNA.
Kelompok  perlakuan  ini  juga  menunjukkan hasil  lebih  tinggi  dibanding  kelompok  kontrol positif,  hal  tersebut  menunjukkan  bahwa pemberian  ekstrak  etanol  daun  kesum  dosis  800 mg/kgBB/hari masih berpotensi melindungi testis dari  paparan  kadmium  klorida  tetapi  efeknya berkurang. Pemberian ekstrak etanol daun kesum menyebabkan kandungan flavonoid dapat
bertindak  sebagai  pro-oksidan  dimana  semakin tinggi  kandungan  flavonoid  semakin  berkurang efektivitasnya (Skibola dan Smith, 2000). Ming et al .,  (2013)  melaporkan  bahwa  tidak  ada  efek samping  yang  diamati  atau no observed  adverse effect  level (NOAEL)  dari  ekstrak  etanol  kesum dosis  lebih  dari  1000  mg/kg  pada  tikus  wistar. Kemungkinan  peningkatan  dosis  ekstrak  etanol daun  kesum  berkorelasi  dengan  peningkatan toksisitas kesum itu sendiri.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian ekstrak etanol daun kesum dapat mempertahankan jumlah sel Leydig mencit yang dipaparan  kadmium  klorida.  Dosis  optimum ekstrak etanol daun  kesum adalah 400 mg/kgBB/hari.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih  yang sebesar-besarnya  kepada  Rektor  Universitas Airlangga  dan  Dekan  Fakultas  Kedokteran Hewan  Universitas  Airlangga,  Kepala  Prodi Magister Ilmu Penyakit dan Kesehatan Masyarakat  Veteriner  dan  instansi  yang  terkait dalam penelitian dan penulisan karya ilmiah ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Acharya,  U.  R.,  Mishra, M.,  Patro, J.,  &  Panda,
M. K. (2008). Effect of Vitamins C & E on
Spermatogenesis  in  Mice  Exposed  to Cadmium. Reproductive Toxicology , 25, 84- 88.
Amalia,  R.  (2007).  Faktor-Faktor  Resiko
Terjadinya Pembesaran Prostat Jinak. Tesis.
Program Pascasarjana Universitas Diponegoro Semarang.
Atika,  Muhammad,  I.  K.,  &  Effiana.  (2016).
Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Daun  Kesum ( Polygonum minus ) sebagai Larvasida Aedes
aegypti. Jurnal Cerebelum Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura , 2(4).
Bu,  T.,  Mi,  Y.,  Zeng,  W.,  &  Zhang,  C.  (2011).
Protective Effect of Quercetin on Cadmium- Induced Oxidative Toxicity on Germ Cells in Male  Mice. The  Anatomical  Record ,  294,
520–526.
Doi,  H.,  Baba,  T.,  Tohyama,  C.,  &  Nohara,  K.
(2003). Funcitional Activation of Arylhydrocarbon Receptor (Ahr) in Primary T  Cell  By  2,3,7,8-  Tetrachlorodibenzo-p- dioxin. Chemosphere , (52), 655-662.
Heinemann,  L.  A.  J.,  Zimmermann,  T.,
Vermeulen,  A.,  Thiel,  C.,  &  Hummel,  W. (1992).  A  New  “Aging  Males’  Symptoms” Rating Scale. Aging Male , 2, 105-14.
Herranz, L. M., Teba, F., Martín, R., Ingelmo, I., Gómez,  V.,  Codesal,  J.,  Pozuelo,  J.  M., Oltra, B., Serna, E., & Santamaría, L. (2010).
Quantitative  changes  in  rat  seminiferous epithelium  after  chronic  administration  of low  doses  of  cadmium  and  zinc:  a stereological  study. The  Open  Andrology Journal , 2, 27–36.
Imelda, F., Faridah, D. N., & Kusumaningrum, H.
D.  (2014).  Bacterial  Inhibition  and  Cell Leakage  by  Extract  of Polygonum  minus Huds. Leaves. International Food Research , 21, 553-560.
Ivell, R., Wade, J. D., & Anand-Ivell, R. (2013). INSL3  as  a  Biomarker  of  Leydig  Cell Functionality. Biology Reproduction , 88, 1- 8.
Järup, L., & Akesson, A. (2009). Current status of cadmium  as  an  environmental  health problem. Toxicology and Applied Pharmacology , 238, 201–208.
Klaassen, C. D., Liu, J., & Diwan, B. A. (2009). Metallothionein  Protection  of  Cadmium
Toxicity. Toxicology and Applied
Pharmacology , 238(3), 215–220.
Kumar, V., Abbas, A. K., Fausto, N., & Aster, J. C.  (2014).  Robbins  and  Cotran  Pathologic Basis  of  Diseases  Ninth  Edition.  Saunders Elsevier Inc.
Litwack,  G.  (1992).  Biochemistry  of  Hormones II:  Steroids  Hormones.  In:  Textbook  of Biochemistry  with  Clinical  Correlations. 3rd.ed. Willey Liss.Inc. New York, USA.
Machiwa,  J.  F.  (2010).  Heavy  metal  levels  in paddy soils and rice (Oryza sativa (L)) from wetlands  of  Lake Victoria Basin, Tanzania. Tanz. Journal of Scientific , 36, 59–72.
Maizura, M., Aminah, A., & Aida, M. W. (2011).
Total  Phenolic  Content  and  Antioxidan Activity  of  Kesum  ( Polygonum  minus ),
Ginger  ( Zingiber  officinale )  and  Turmeric ( Curcuma longa ) extract. International Food Research Journal , 18, 529-534.
Matsumoto,  T.,  Sakari,  M.,  Okada,  M., Yokoyama,  A.,  Takahashi,  S.,  Kouzmenko, A.,  &  Kato,  S.  (2013).  The  Androgen Receptor  in  Health  and  Disease. Annual Review of Physiology , 75, 201-224.
Ming,  Y.  K.,  Zulkawi,  N.  B.  T.,  Kotak,  V.,  & Choudhary,  Y.  K.  (2013).  Acute  and  Sub- Acute  Oral  Toxicity  of Polygonum  minus Aqueous  Extract  (biotropics ® pm101)  in Wistar  rats. International  Journal  of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences , 5(2), 120-124.
Nemoto, K., Miyajima, S., Hara. S., Saigusa, R., Yamada,  M.,  Shikama,  H.,  Yotsuya,  S., Sekimoto,  M.,  &  Degawa,  M.  (2009). Decreased  Gene  Expression  of  Testicular Cell-Specific Proteins in Cadmium-Induced
Acute Testicular Toxicity. Journal of Health Science , 55(6), 952-956.
Permatasari,  A.  A.  A.  P.,  &  Widhiantara,  I.  G.
(2017).  Terapi  Testosteron  Meningkatkan Jumlah  Sel  Leydig  dan  Spermatogenesis Mencit  ( Mus  musculus )  yang  Mengalami Hiperlipidemia. Jurnal  Media  Sains ,  1(2), 77-83.
Qader,  S.  W.,  Abdulla,  M.  A.,  Lee  S.  C.,  & Hamdan,  S.  (2012).  Potential  Bioactive Property of Polygonum minus Huds (kesum)
Review. Scientific  Research  and  Essays , 7(2), 90-93.
Robert,  K.,  Murray,  D.  K.  G.,  Victor,  W.,  &
Rodwell. (2009). Keragaman Sistem Endokrin.  Biokimia  Harper.  Edisi  27. Jakarta: EGC Medical Publisher. Hal: 459.
Robinson,  T.  (1995).  Kandungan  Organik Tumbuhan Tinggi. Penerbit ITB. Hal: 363.
Sarkar, A., Ravindran, G., & Krishnamurthy, V. (2013).  A  Brief  Review  on  The  Effect  of Cadmium  Toxicity:  from  Cellular  to  Organ Level.  International  Journal. Biotechnology Research , 3, 17–36.
Sharma, H., Rawal, N., & Mathew, B. (2015). The Characteristics,  Toxicity  and  Effects  of
Cadmium. International Journal of Nanotechnology and Nanoscience , 3, 1-9.
Shirai, A., Onitsuka, M., Maseda, H., & Omasa, T. (2015). Effect of Polyphenols on Reactive Oxygen Species Production and Cell Growth of Human Dermal Fibroblasts after
Irradiation with Ultraviolet-A Light. Biocontrol Science , 20(1), 27-33.
Skibola, C. F., & Smith, M. T. (2000). Potential Health  Impacts  of  Excessive  Flavonoid Intake. Free Radical Biology and Medicine , 29, 375-383.
Suhaj,  M.  (2006).  Spice  Antioxidants  Isolation and  Their  Antiradical  Activity:  A  Review. Journal of Food Composition and Analysis , 19, 531-537.
Sun, T., & Ho, C. T. 2005. Antioxidant Activities of Buckwheat Extracts. Food Chemistry , 90, 743-749.
Sutrisno, dan Kuntyastuti, H. (2015). Manajemen Pencemaran Kadmium pada Tanah Pertanian di Indonesia. Buletin Palawija , 13(1), 83–91.
Thompson, J., & Bannigan, J. (2008). Cadmium: toxic effects on the reproductive system and the  embryo. Reproductive  Toxicology ,  25, 304–315.
US  Environmental  Protection  Agency  (EPA).
2000. Cadmium Compounds Hazard
SummaryCreated in April 1992; Revised in
January  2000.  Diakses  19  Juli  2018. http://www.epa.gov/ttn/atw/hlthef/cadmium
.html .
Vanlangenakker,  N.,  Berghe, V. T., Krishko,  D.
V., Fetjens N., & Vandernabeele, P. (2008).
Molecular Mechanisms and
Pathophysiology  of  Necrotic  Cell  Death:
Current Molecular Medicine. pp: 207-220.
Varh, V., Liou, G., & Storz, P. (2010). Reactive Oxygen  Species  in  Cancer. Free  Radical
Research , 44(5), 479–496.
Vestena, S., Cambraia, J., Ribeiro, C., Oliveira, J. A.,  &  Oliva,  M.  A.  (2011).  Cadmium- induced  Oxidative  Stress  and  Antioxidative Enzyme  Response  in  Water  Hyacinth  and Salvinia. Brazilian  Journal  of  Plant
Physiology , 23(2), 131-139.
Wang, R. S., Yeh, S., Tzeng, C. R., & Chang, C.
(2009).  Androgen  Receptor  Roles  in Spermatogenesis and Fertility: Lessons from Testicular Cell-Specific Androgen Receptor Knockout Mice. Endocrine Review , 30, 119-
132.
Wati,  W.  K.,  Wurlina.,  &  Sarmanu.  (2014).
Potensi  Vitamin  E  terhadap  Jumlah  Sel Spermatogenik  pada  Mencit  yang  Terpapar 2,3,7,8- tetrachlorodibenzo-p-dioxin
(TCDD). Veterina Medika , 14(4), 410-411.
Werdhasari,  A.  (2014).  Peran  Antioksidan  Bagi
Kesehatan. Jurnal Biotek Medisiana
Indonesia , 3(2), 59-68.
Wibowo,  M.  A.,  Anwari,  M.  S.,  Aulani’am,  &
Rahman,  F.  (2009).  Skrining  Fitokimia Fraksi  Metanol,  Dietil  Eter  dan  n-Heksana Ekstrak  Daun  Kesum  ( Polygonum  minus ).
Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura , 16(4).
Widowati,  W.,  Astiana,  S.,  &  Raymond,  J.  R. (2008).  Efek  Toksik  Logam.  Yogyakarta: Andi.
Yari,  A.,  Asadi,  M.  H.,  Bahadoran,  H.,
Dashtnavard, H., Imani, H., & Naghii, M. R.
(2010). Cadmium Toxicity in
Spermatogenesis  and  Protective  Effects  of L-carnitine  in  Adult  Male  Rats. Biological Trace Element Research , 137, 216–225.