Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 1  – 10. ISSN: 2723-4959 (online)
PRODUK  BIOTEKNOLOGI  FERMENTASI  BERUPA  KOMBUCHA BUNGA  KECOMBRANG  ( Etlingera  elatior (JACK)  R.M.SM.)  SEBAGAI ANTIKOLESTEROL  PADA  MENCIT  PUTIH    JANTAN  ( Mus  musculus

## L.) GALUR DDY
Fermentation  Biotechnology  Products  In  The  Form  Of  Kombucha  Flower  Of Kecombrang ( Etlingera elatior (JACK) R.M.SM.) As Anticolesterol In Male White Mice ( Mus musculus L.) DDY Strain
Usman  Setiawan 1) ,  Iin  Yuwinani 2) ,  Firman  Rezaldi 3*) ,  Rina  Nurmaulawati 4) ,  M.  Fariz Fadillah 5)
1,2 Program Studi Biologi, Fakultas Sains, Farmasi, dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar, Banten
3*,4 Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Bhakti Husada Mulia, Madiun, Jawa Timur
5 Program Studi Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi dan Informatika, Universitas Mathla’ul Anwar, Banten
3* Corresponding Author e-mail: firmanrezaldi417@gmail.com
Informasi Abstrak. Kata kunci : Bunga Kecombrang, Galur DDY. Kolesterol, Kombucha, Mencit Putih Jantan, Kolesterol  merupakan  suatu  zat  lemak  yang  terdapat  di  dalam  darah,  dihasilkan  oleh hati dan sangat dibutuhkan oleh tubuh. Asupan makanan dengan kandungan kolesterol tinggi  dapat  meningkatkan  kadar  kolesterol  dalam  darah  (hiperkolesterolemia). Tanaman  bunga  Kecombrang  ( Etlingera  elatior) mempunyai  kandungan  senyawa flavonoid,  saponin,  dan  triterpenoid  yang  dapat  menurunkan  hiperkolesterolemia. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh fermentasi bunga kecombrang terhadap penurunan kolesterol darah mencit putih ( Mus musculus L.) jantan galur DDY . Metode  penelitian  dilakukan  secara pre-post  randomized  experimental  design . Pengujian  penurunan  kadar  kolesterol  darah  dilakukan  terhadap  20  individu  mencit yang di uji kedalam 5 perlakuan yaitu aquadest sebagai kontrol negatif (K-), simvastatin sebagai  kontrol  positif  (K+),  kombucha  fermentasi E.  elatior konsentrasi  10%  (P1), 20%  (P2),  dan  30%  (P3).  Hasil  induksi  dan  penurunan  kadar  kolesterol  darah  mencit dianalisis  dengan  uji  ANOVA  ( Analysis  of  Variance )  (α  =  0,05%),  Jika  berbeda signifikan dilanjutkan dengan uji Duncan . Hasil penelitian menunjukkan ada pengaruh yang  signifikan  terhadap  penurunan  kadar  kolesterol  darah  mencit  putih  jantan.  Hasil kadar  kolesterol  yang  efektif  untuk  menurunkan  kadar  kolesterol  yaitu  sebesar  84,5 mg/dl dari kolesterol awal sebesar 141,5 mg/dl pada konsentrasi 30%. Information Abstract . Key words : Cholesterol, Kecombrang Flower ( E. elatior ),
Kombucha,Male White
Mice ( Mus musculus )
DDY strain.
Cholesterol is a fatty substance found in the blood, produced by the liver and is needed by  the  body.  Intake  of  foods  with  high  cholesterol  content  can  increase  cholesterol levels  in  the  blood  (hypercholesterolemia).  The  Kecombrang  flower  plant  ( Etlingera elatior )  contains  flavonoids,  saponins  and  triterpenoids  which  can  reduce hypercholesterolemia. The aim of this study was to determine the effect of kecombrang flower  fermentation  on  reducing  blood  cholesterol  in  male  white  mice  ( Mus  musculus L.)  DDY  strain.  The  research  method  was  carried  out  in  a  pre-post  randomized experimental design. Tests for reducing blood cholesterol levels were carried out on 20 individual  mice  which  were  tested  into  5  treatments,  namely  distilled  water  as  a negative  control  (K-),  simvastatin  as  a  positive  control  (K+),  kombucha  fermented  E. elatior concentration of 10% (P1), 20% (P2). ), and 30% (P3). The results of induction and  decrease  in  blood  cholesterol  levels  of  mice  were  analyzed  by  ANOVA  test  (A  = 0.05%). If it was significantly different, it was continued with Duncan's test. The results showed that there was a significant effect on reducing blood cholesterol levels in male white  mice.  The  results  of  effective  cholesterol  levels  for  lowering  cholesterol  levels were 84.5 mg/dl from the initial cholesterol of 141.5 mg/dl at a concentration of 30%.
Received: 6 Januari 2023 Accepted: 25 Maret 2023 ©2023 Jurusan Biologi FMIPA Unpatti, IAIFI Cab. Ambon

## A. PENDAHULUAN
Zat yang secara natural diproduksi oleh tubuh berdasarkan sifat fisik seperti lemak dan meiliki rumus steroid, terdapat dalam bentuk senyawa yang bersifat essensial pada tubuh yang berperan  penting  sebagai  zat  zat  pembentuk  meliputi    membran  sel,  sel  saraf,  hormone kelamin,  vitamin  D,  serta  asam  empedu  dikenal  sebagai  kolesterol.    Kolesterol  idealnya dibawa menuju suatu jaringan dengan bantuan senyawa dalam bentuk lipoprotein. Lipoprotein merupakan  senyawa  yang  tersintesis  dari  lemak  dan  protein.  Senyawa  lipoprotein  ini  dapat dikarakterisasikan berdasarkan asupan makanan (Kolo et al ., 2022).
Asupan  makanan  yang  tinggi  berpotensi    dalam  menyebabkan  kandungan  kolesterol darah menjadi meningkat. Istilah tersebut dikenal sebagai hiperkolesteromia. Hiperkolesteromia  merupakan  salah  satu  kondisi  yang  ditandai  pada  peningkatan  kadar kolesterol  darah  dibandingkan  dengan  kondisi  normal.  Salah  satu  fakor  pemicu  terjadinya hiperkolesteromia adalah pola makan yang tidak sehat, cepat saji seperti makanan yang diolah atau dimasak dengan cara digoreng menggunakan minyak dengan berulang kali (Firnanda et al ., 2014). Hiperkolesteromia juga dapat mensintesis terjadi nya aterosklerosis. Aterosklerosis merupakan salah satu  kondisi tubuh  yang mengalami penyumbatan dan penyebab terjadinya hipertensi.    Pembuluh  darah  yang  tersumbat  merupakan  salah  satu  indikasi  kolesterol, sehingga  menyebabkan  terjadinya  penyakit  yang  berkaitan  dengan  kardiovaskular  seperti jantung koroner (Rezaldi et al ., 2022).
Penyakit  yang  berhubungan  dengan  kardiovaskular  membutuhkan  banyak  perhatian terutama  dalam  hal  terapeutik.  Hiperkolesteromia  membutuhkan  pengobatan  cukup  panjang dan biaya yang cukup mahal. Obat yang berbahan aktif dari senyawa kimia (farmakosintetik) secara  idealnya  bekerja  dalam  menghambat  enzim  HMG  CoA,  yaitu  salah  satu  enzim  yang berperan  penting  dalam  mensintesis  kolesterol.  Reaksi  farmakodinamik  (efek  obat  terhadap tubuh) dari terapi bahan kimia diantaranya adalah rabdomiolisis, mioglibunaria, dan miopati. Solusi  yang  dapat  dijadikan  sebagai  alternatif  dalam  mengatasi  permasalahan  yang berhubungan dengan penurun kolesterol adalah back to nature yaitu pemanfaatan bahan alam yang ramah lingkungan dan tidak memberikan reaksi farmakodinamiK buruk terhadap tubuh. Salah  satu  bahan  alam  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  solusi  dalam  mencegah  kolesterol adalah  bunga  kecombrang  yang  dikenal  dengan  nama  ilmiah  Etlingera  elatior  (JACK) R.M.SM.  Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  Smith  dan  Andlawano  telah membuktikan  bahwa  bunga  kecombrang  memiliki  senyawa  metabolit  sekunder  berupa saponin  yang  berpotensi  memiliki  aktivitas  farmakologi  sebagai  antikolesterol.    Penelitian mengenai  kombucha  yang  berpotensi  sebagaii  antikolesterol  telah  dilakukan  oleh  Rezaldi et al .,  (2022)  yang  menyatakan  bahwa  kombucha  bunga  telang  berpotensi  dalam  menurunkan kadar kolesterol pada bebek pedaging dengan substrat gula stevia dan konsentrasi gula stevia sebesar  40%  merupakan  perlakuan  yang  terbaik  dalam  menurunkan  kadar  kolesterol  pada bebek pedaging.
Berbicara mengenai substrat pada proses fermentasi kombucha berupa konsentrasinya telah  terbukti  memiliki  aktivitas  farmakologi  yang  berbeda-beda  dalam  menurunkan  kadar kolesterol.  Hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Rezaldi et  al .,  (2022)  telah  membuktikan bahwa  larutan  fermentasi  kombucha  bunga  telang  pada  konsentrasi  gula  aren  sebesar  40% merupakan  perlakuan  terbaik  dalam  menurunkan  kadar  kolesterol  bebek  pedaging.  Sejalan dengan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Kolo et  al .,  (2022)  konsentrasi  gula  pasir  putih
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 1  – 10. ISSN: 2723-4959 (online)
sebesar  40%  pada  fermentasi  kombucha  bunga  telang  merupakan  perlakuan  yang  terbaik dalam menurunkan kadar kolesterol ayam pedaging.
Berangkat dari latar belakang yang dimuat diatas baik mengenai kolesterol dan metode pemecahan masalahnya menggunakan fermentasi kombucha, maka penulis dalam kesempatan ini  tertarik  untuk  meneliti  mengenai  produk  bioteknologi  fermentasi  kombucha  bunga kecombrang untuk menurunkan kadar kolesterol pada mencit putih jantan galur DDY.

## B. METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilakukan  dilaboratorium  terpadu  Fakultas  Sains,  Farmasi,  dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar, Banten,Indonesia. Penelitian dilakukan pada bulan februari sampai agustus 2021.

## Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan pada penelitian ini antara lain kandang pemeliharaan tikus, tempat minum, tempat makan, sonde lambung 1 ml, timbangan analitik, termometer ruangan HTC-1/HTC-2,  termometer  suhu  tubuh  Infra  Red,    peralatan  gelas  laboratorium  yaitu  gelas kimia, gelas ukur 100 ml, erlenmeyer 500 ml, beaker glass 1000 ml, labu  ukur 100 ml, tabung reaksi,  rak  tabung  reaksi,  timbangan  digital,  kaca  arloji,  pipet,  corong  kaca,  sarung  tangan karet, sarung tangan plastik, blender, penangas air, bunsen, pipet, corong kaca, kapas, tissue, panci  perebusan,  spatula,  baskom,  batang  pengaduk,  cawan  porselin,  pisau,  kompor,  toples kaca, ayakan 60 mesh, kain serbet, karet gelang, pemisah telur, spuit injeksi 5 ml, spatel, box, kertas  koran,  aluminium  foil,  kamera,  alat  tes  kolesterol  easy  touch,  test  strip  kolesterol, termometer air, kertas saring, pH meter, bubuk kalibrasi (pH 4.01 dan pH 6.86).
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam  penelitain  ini  adalah  bunga  kecombrang ( Etlingera  elatior )  yang  diambil  secara  acak  (random)  dari  Cisata,  Pandeglang,  hewan  uji yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  mencit  putih  jantan  ( Mus  musculus L.)  galur DDY    dengan  BB  30  g  yang  berumur  2-3  bulan  sebanyak  20  ekor,  SCOBY  (Symbiotic Culture  of  bacteria  and  yeast)    kombucha  35  gram,  larutan  gula  210  g,  air  mineral, simvastatin dan propiltiourasil (PTU)  yang diperoleh di apotek menes. Bahan-bahan sebagai penunjang  penelitian  adalah  pelarut  aquadest,  reagen  yang  digunakan  untuk  identifikasi kandungan  kimia  secara  kualitatif  yaitu  serbuk  Mg,  Fe(Cl) 3 ,  HCL  pekat,  HCL  2N,  larutan gelatin,  asam  klorida  2  N,  etanol,  pereaksi  Mayer,  pereaksi  Wagner,  asam  asetat  anhidrat, eter,  asam  sulfat  pekat,  EDTA,  pakan  standar  pellet  512  bravo,  pakan  jagung,  dan penginduksi kolesterol kuning telur bebek.

## Pembuatan Simplisia
Pembuatan simplisia diawali dengan pengumpulan bunga kecombrang segar sebanyak 3 kg, bunga yang diambil adalah bunga yang segar dan berwarna kemerahan, yang diperoleh dari  kecamatan  cisata  dan  sekitarnya.  Sortasi  basah  dilakukan  dengan  cara  memisahkan kotoran-kotoran  maupun  bahan-bahan  asing  lainnya  dari  bunga  kecombrang.  Pencucian menggunakan  air  mengalir  untuk  menghilangkan  tanah  dan  kontaminan  lainnya  yang  masih melekat  pada  bunga  kecombrang.  Perajangan  untuk  mempermudah  proses  pengeringan,
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 1  – 10. ISSN: 2723-4959 (online)
pengepakan,  dan  penggilingan.  Pengeringan  simplisia  bunga  kecombrang  dengan  cara menjemur  bunga  kecombrang  dengan  sinar  matahari  dengan  cara  ditutupi  kain  hitam  untuk menghindari sinar matahari secara langsung, supaya tidak menurunkan kandungan metabolit sekunder yang terdapat dalam bunga kecombrang, bunga kecombrang kering ditandai dengan bunga  kecombrang  yang  layu  dan  berwarna  kecoklatan.  Sortasi  kering  simplisia  bunga kecombrang  yang  kering  dianginkan  hingga  benar-benar  kering  kemudian  disortasi  kembali dengan  cara  memisahkan  benda-benda  asing  seperti  bagian-bagian  dari  bunga  kecombrang yang tidak diinginkan dan kontaminan-kontaminan lainnya yang masih ada bahkan tertinggal pada  simplisia  kering  bunga  kecombrang.    Pemblenderan  menjadi  serbuk  dengan  cara menggiling sampel kering menggunakan blender sampai menjadi serbuk kemudian dilakukan pengayakan  60  mesh  guna  memperoleh  ukuran  yang  seragam  dan  supaya  kandungan metabolit  sekunder  pada  bunga  kecombrang  pada  saat  fermentasi  lebih  banyak,  setelah  itu ditimbang dan disimpan didalam wadah yang kering, tertutup rapat dan terlindung dari cahaya matahari.

## Fermentasi Kombucha Bunga Kecombrang
Kombucha  dibuat  dengan  menggunakan  simplisia  bunga  kecombrang  dengan konsentrasi yang berbeda, yaitu P1 (10 g), P2 (20 g) dan P3 (30 g). Pemanis yang digunakan adalah  gula,  starter  dan  SCOBY  (Symbiotic  Culture  of  Bacteri  and  Yeast)  kombucha diperoleh dari Rumah Fermentasi. Pembuatan fermentasi kombucha bunga kecombrang yang pertama adalah rebus air mineral sebanyak 100 ml menggunakan panci stainless, suhu diukur menggunakan  termometer  sampai  suhu  60 o C  lalu  kompor  dimatikan.  Kedua  masukkan simplisia bunga kecombrang  yang sudah menjadi serbuk sesuai konsentrasi,  diseduh dengan segera  supaya  suhu  tidak  turun  kembali,  lalu  dihomogenkan.  Setelah  itu,  ditutup  serta diamkan  selama  3  menit  sampai  dingin.    Ketiga  ditambahkan  sebanyak  7,0  gram  gula  pada setiap toples kaca pada seduhan bunga kecombrang, lalu dihomogenkan.  Keempat masukkan air  rebusan  bunga  kecombrang  ke  dalam  masing-masing  toples  kaca  dan  tunggu  sampai dengan temperatur pada suhu ruang. Kelima tambahkan larutan starter sebanyak 10 mL dan SCOBY kombucha 3,5 gram pada setiap toples kaca yang berisi seduhan bunga kecombrang. Keenam  tutup  bagian  atas  toples  kaca  menggunakan  kain  serbet  lalu  diikat  dengan menggunakan karet gelang. Ketujuh kondisikan toples kaca yang berisi fermentasi kombucha bunga kecombrang untuk tidak terkena guncangan dan sinar matahari (Rezaldi et al ., 2021).

## Pemberian Perlakuan
Uji kadar kolesterol dilakukan untuk mengetahui kemampuan fermentasi bunga kecombrang dalam menurunkan kadar kolesterol darah mencit putih jantan galur DDY sebelum perlakuan dan  setelah  perlakuan.  Pemberian  perlakuan  dosis  masing-masing  kelompok  adalah  terdiri dari kontrol positif (+) diberikan simvastatin dengan dosis 0,18 mg/100 ml aquadest, kontrol negatif  (-)  diberikan  aquadest,  perlakuan  pertama  (P1)  diberikan  aquadest  ditambahkan dengan kombucha bunga kecombrang sebanyak (10 g) dengan dosis 1,0 ml, perlakuan kedua (P2) diberikan aquadest  ditambahkan kombucha bunga kecombrang sebanyak (20 g) dengan dosis  2,0  mL,  dan  perlakuan  ketiga  (P3)  diberikan  aquadest  ditambahkan  kombucha  bunga kecombrang  sebanyak  (30  g)  dengan  dosis  3,0  mL/20  g  BB.  Penginduksian  kolesterol menggunakan Prophyltiourasil (PTU) dan makanan lemak tinggi (MLT).
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 1  – 10. ISSN: 2723-4959 (online)
Masing-masing  perlakuan diulang sebanyak 5 kali ulangan  yang ditentukan sebagai berikut:
Rumus Federer:
(n – 1) (t – 1) > 15 n = besar sampel t = jumlah kelompok Banyaknya jumlah sampel yang diperlukan dihitung dengan rumus:
(n – 1) (t – 1) > 15  ;t = 5 (n – 1) (5 – 1) > 15
5n - 4 >15
5n >19
n>3,8  dibulatkan  menjadi  4,  sehingga  sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  harus melebuhi  4  dan  pada  penelitian  ini  menggunakan  5  ekor  mencit  dan  pada  setiap  kelompok yang sudah memenuhi persyaratan.

## Pengukuran Kadar Kolesterol
Pengukuran  kadar  kolesterol  dilakukan  dengan  menggunakan  alat Easy  Touch GCU (Taiwan). Easy Touch GCU Taiwan digunakan untuk pengukuran kadar kolesterol total (Hari ke-7,  ke-14,  dan  ke-21).  Alat  terlebih  dahulu  dikalibrasi  dengan  nomer  kode  disesuaikan dengan  test  strip  yang  digunakan.  Test  strip  diselipkan  pada  tempat  khusus  pada  alat Easy Touch GCU,  kemudian  pada  alat  akan  muncul  gambar  “tetes  darah”  yang  menandakan  alat siap digunakan. Pengambilan darah mencit dilakukan sebelum mencit makan (berpuas). Ekor mencit  dibersihkan  menggunakan    alkohol  70%,  setelah  itu  darah  diambil  dari  ujung  ekor mencit  dengan  cara  menggunting  ujung  ekor  mencit.  Tetesan  darah  pertama  dibuang,  dan tetesan selanjutnya (tetesan kedua) ditempatkan pada strip test yang telah diselipkan pada alat darah  akan  terserap  sesuai  dengan  kapasitas  serap strip  test sampai  terdengar  bunyi  “bip”. Setelah  itu  pendarahan  mencit  dihentikan  kemudian  hasil  tes  akan  terlihat  pada  layar  alat setelah  150  detik  untuk  uji  kolesterol.  Pengambilan  darah  mencit  untuk  uji  kolesterol  pada hari ke 7, 14 dan 21 (Mariana et al., 2020).

## Analisis Data
Kadar  kolesterol  darah  mencit  dianalisis  secara  statistik  menggunakan  ANOVA (Analysis of Variance) dengan tingkat kepercayaan 95%, jika berbeda signifikan dilanjutkan dengan uji Duncan. Analisis statistik dilakukan menggunakan sofware SPSS 16.0.

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengukuran Rata-Rata Kadar Kolesterol
Rerata kadar kolesterol masing-masing kelompok dapat dilihat pada tabel 1 dibawah ini. Tabel 1. Rerata Kadar Kolesterol Darah Mencit Putih Jantan
Kelompok Rerata Kadar Kolesterol Darah Mencit Kadar Awal (Hari ke-7)±SD RerataInduksi (Hari ke-15)±SD Rerata Perlakuan (Hari ke-22)±SD Selisih Kadar Kolesterol Hari ke-14 dan 21 P1 120 ± 22,93 140 ± 15,16 104,7 ± 2,872 35.3
P2 134.5 ± 34,02 148 ± 27,11 136,75± 29,45 11.25 P3 139.25 ±12,28 141,5 ± 13,07 84,5 ± 7,702 57 K (+) 122,5 ± 5,196 125,2 ± 4,5 112,7 ± 3,947 12,5 K (-) 105,2 ± 5,057 110,7 ± 6,396 113,2 ± 4,473 2,5 Keterangan : K+= Pemberian Simvastatin, K-= Pemberian aquadest, P1= Pemberian kombucha bunga E. elatior konsentrasi 10%, P2= Pemberian kombucha bunga E. elatior konsentrasi 20% dan
P3 =Pemberian kombucha bunga E. elatior konsentrasi 30%
Berdasarkan  tabel  1  diatas    dapat  diketahui  hasil  rerata  dari  pemeriksaan  kadar kolesterol  darah  mencit  pada  setiap  tahapan.  Rerata  kadar  awal  tiap  perlakuan  diukur  pada hari ke-7. Adapun hasilnya berturut-turut yakni 120 mg/dl; 134,5 mg/dl; 139,25 mg/dl; 122,5 mg/dl; 105,2 mg/dl. Kemudian pada tahapan penginduksian kolesterol  menggunakan kuning telur dilakukan selama 7 hari. Pada hari ke 15 dilakukan pengukuran kadar kolesterol dimana masing-masing  kelompok  perlakuan  mengalami  peningkatan  kadar  kolesterol  total.  Adapun hasil pengukurannya yakni 140 mg/dl; 148 mg/dl; 141,5 mg/dl; 125,2 mg/dl dan 110,7 mg/dl. Kemudian  selama  7  hari  tiap  kelompok  diberi  perlakuan  dan  pada  hari  ke  22  dilakukan pengukuran  kadar  kolesterol  akhir.  Hasil  yang  diperoleh  berturut-turut  yakni  104,7  mg/dl; 136,75 mg/dl; 84,5 mg/dl; 112,7 mg/dl; 113,2 mg/dl.
Uji ANOVA ( Analysis of Variance ) data hasil setelah  perlakuan E. elatior mencit secara oral.
Tabel  2. Uji  ANOVA ( Analysis  of  Variance ) data hasil setelah  perlakuan E. elatior mencit secara oral
Hasil perlakuan Keterangan Sum-Square 12.269 Df 19 Berbeda Signifikan Sig 0.00
Keterangan : ≥ 0,05: Tidak signifikan, ≤ 0,05: Berbeda Signifikan
Berdasarkan  uji  ANOVA  ( Analysis  of  Variance )  pada  Tabel  2  diatas  diperoleh  nilai signifikasi 0,000 (P>0,05) maka H 0 ditolak sedangkan H 1 diterima, sehingga dapat dikatakan bahwa  pemberian  kombucha  fermentasi  kombucha E.  elatior berpengaruh  sangat  signifikan terhadap  penurunan  kadar  kolesterol  total  mencit.  Hasil  uji  ANOVA  ( Analysis  of  Variance ) dapat juga dikatakan bahwa perlakuan setiap kelompok memiliki perbedaan yang signifikan. Oleh  karena  itu  untuk  mengetahui  mana  yang  berbeda  dan  yang  paling  efektif  dalam menurunkan  kolesterol  darah  mencit  dilanjutkan  uji  lanjut Post  Hoc  Duncan .  Uji Duncan bertujuan  untuk  mengetahui  secara  detail  data  mana  yang  bebeda  secara  signifikan  dari kelompok perlakuan yang terletak pada tabel 3 dibawah ini.

## Uji Duncan Setelah Perlakuan Bunga E. elatior
Hasil uji ANOVA ( Analysis of Variance ) menunjukkan hasil berbeda nyata sehingga dilanjutkan dengan uji lanjut duncan   pada tabel 4 dibawah ini.
Tabel 4. Hasil uji Duncan
No Perlakuan Rata-rata 1 K+ 1,16 c 2 K- 1,06 ab 3 P1 1,04 a 4 P2 1,25 d
Keterangan : huruf yang terletak dibelakang angka menunjukkan beda nyata pada tabel Duncan.
Kadar kolesterol total normal pada mencit yaitu 26-82,4 mg/dl, akan tetapi rerata hasil pengukuran  kadar  kolesterol  total  pada  hari  ke-7  menunjukan  kadar  kolesterol  lebih  dari kondisi normal. Hal ini dikarenakan kemungkinan dari faktor fisiologis dari mencit, dimana ketidakmampuan  hati  sebagai  tempat  pembentukan  kolesterol  untuk  mengeskresikan kolesterol lama dari darah ke dalam empedu sehingga kadar kolesterolnya tinggi, dapat juga dikarenakan oleh faktor genetik (Rezaldi et al ., 2022) pada mencit.
Dimulai hari ke-7 sampai hari ke-14 mencit diberi induksi kuning telur sebanyak 2% BB. Pada hari ke-14 dilakukan pengukuran kadar kolesterol  total.  Adapun rerata hasil  yang diperoleh  menunjukan  semua  mencit  mengalami  peningkatan  kadar  kolesterol.  Peningkatan kadar  kolesterol  ini  dikarenakan  meningkatnya  jumlah  konsumsi  asam  lemak  jenuh  dan adanya  radikal  bebas  akibat  proses  hidrolisis  dan  oksidasi  dari  pakan  kuning  telur.  Radikal bebas yang terkandung dalam pakan kuning telur dan PTU dapat mempengaruhi metabolisme dan  eksresi  kolesterol  dari  dalam  tubuh  sehingga  kadar  kolesterol  meningkat  (Kolo et  al ., 2022).
Adapun  proses  metabolisme  kolesterol  dan  pembentukan  kolesterol  terdiri  dari  lima tahapan.  Tahap  pertama  yaitu  biosintesis  mevalonat,  dimana  biosintesis  mevalonat  yang terdiri dari tiga molekul asetil Ko-A membentuk mevalonat melalui reaksi regulatorik penting di  jalur  ini,  yang  dikatalis  oleh  HMG-KoA  reduktase.  Tahap  kedua  pembentukan  unit isoprenoid dimana mevalonat mengalami fosforilasi secara sekuensial oleh ATP dengan tiga kinase setelah dekarbosilasi terbentuklah unit isoprenoid aktif yaitu isopentil difosfat. Tahap ketiga  yakni  enam unit isoprenoid membentuk skualen dimana isopentil difosfat mengalami isomerasi  melalui  pergeseran  ikatan  rangkap  untuk  membentuk  dimetilalil  difosfat  untuk membentuk  zat  karbon  geranil  difosfat  kemudian  terjadi  kondensasi  lebih  lanjut  dengan isopentil  difosfat  membentuk  farnesil  difosfat.  Dari  farnesil  difosfat  kemudian  membentuk lanostreol. Tahap keempat yaitu pembentukan lanosterol, dimana skualen membentuk lipatan yang  mirip  dengan  steroid.  Tahap  kelima  yakni  pembentukan  kolesterol,  dimana  kolesterol terbentuk dari lanosterol yang berlangsung di dalam retikulum endoplasma.
Dimulai  hari  ke-14  sampai  hari  ke-21  mencit  diberikan  perlakuan  fermentasi kombucha  bunga  kecombrang    dengan  kelompoknya  masing-masing  dan  diukur  kembali pada  hari  ke-21.  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  bahwa  kelompok  yang  diberi  perlakuan fermentasi  kombucha  bunga  kecombrang  10%,  20%,  dan  30%  memiliki  kecenderungan penurunan kadar kolesterol begitu juga dengan kelompok kontrol positif.
Hasil  pemeriksaan  kadar  rata-rata  kolesterol  pada  hari  ke-14  setelah  induksi  kuning telur  dan  setelah  perlakuan  kombucha  bunga  kecombrang  menunjukkan  hasil  yang bervariatif.  Kelompok  kontrol  negatif  diberikan  pakan  standar  512  bravo  tanpa  diinduksi kuning telur dan PTU menunjukan kadar kolesterol yang stabil.
Bedasarkan hasil uji ANOVA (Analysis of Variance) menunjukkan bahwa penurunan kadar kolesterol kelompok (K+) memiliki perbedaan dibandingkan dengan kelompok P1, P2, dan P3. Hal ini  setelah pemberian simvastatin hari ke-14 terhadap kelompok kontrol positif menunjukkan  perbedaan  yang  bermakna  artinya  kelompok  kontrol  positif  yang  diberikan simvastatin  mampu  menurunkan  kadar  rata-rata  kolesterol  secara  signifikan.  Simvastatin yang  digunakan  sebagai  pembanding  pada  kelompok  kontrol  positif  yang  diberikan  pada
5 P3 1,09 b
mencit  selama  1  minggu  terlihat  rerata  kolesterol  mengalami  penurunan  kolesterol  sebesar 112,7 mg/dl dari kadar awal  sebesar 125,2 mg/dl. Simvastatin merupakan senyawa penurun kolesterol  yang  diperoleh  dari  sintesis  hasil  fermentasi  Aspergillus  terreus.  Statin  memiliki efek  penurunan  terbesar.  Oleh  karena  itu  statin  dijadikan  sebagai  obat  pilihan  utama mengatasi penyakit kolesterol (Rezaldi et al ., 2022).
Mekanisme  kerja  simvastatin  menghambat  enzim  HMG-CoA  reduktase  mengubah asetil  CoA  menjadi  asam  mevalonat.  Asam  mevalonat  merupakan  precursor  dari pembentukan kolesterol (Sari et al ., 2019).  Hasil pemberian fermentasi kombucha bunga E. elatior  pada  tiga  kelompok  yang  berbeda  yaitu  konsentrasi  10%,  20%  dan  30%  terlihat adanya  perbedaan  yang  signifikan.  Konsentrasi  30%  merupakan  konsentrasi  yang  paling efektif  dalam  menurunkan    kadar  kolesterol  mencit  dengan  nilai  84,5  mg/dl  dari  rata-rata awal  sebesar  141,5  mg/dl.  Kelompok  P1  10%,  P2  20%  dan  P3  30%  pada  hari  ke-22 menunjukkan bahwa ketiga konsentrasi tersebut dapat menurunkan kadar kolesterol rata-rata pada mencit. Bahkan kelompok P3 untuk konsentrasi 30% memberikan penurunan yang lebih tinggi  dibandingkan  konsentrai  10%  dan  20%.    Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  suhartatik  et  al.,  (2009)  menunjukkan  bahwa  fermentasi  kombucha  rosella dengan konsentrasi 40 g/L dengan lama fermentasi 5 hari memberikan pengaruh  yang lebih baik  dalam  menurunkan  kolesterol  darah  mencit.  Penelitian  lain  dilakukan  oleh  Mariana (2020)  menunjukkan  bahwa  14  hari  setelah  pemberian  cuka  mandai  kadar  kolesterol  yaitu dari 76,6 mg/dl menjadi 54,8 mg/dl.

## Gambar 1. Rerata Kadar Kolesterol Darah Mencit
Berdasarkan  grafik  pada  gambar  1.    dapat  diperoleh  adanya  perbedaan  kadar kolesterol total awal (hari ke 8), setelah induksi (hari ke 15) dan setelah pemberian perlakuan (hari  ke  22).  Pada  grafik  tersebut  menunjukkan  adanya  peningkatan    kadar  kolesterol  total (pada  hari  ke  15)  disetiap  perlakuan.  Hal  ini  dikarenakan  induksi  kuning  telur  secara  terus- menerus  sehingga  kadar  kolesterol  total  pada  mencit  meningkat  dari  kadar  awalnya.  Pada grafik  juga  terlihat  adanya  penurunan  kadar  kolesterol  total  hari  ke  22  (setelah  pemberian fermentasi  kombucha  bunga  E.  elatior.  Adanya  penurunan  menunjukkan  bahwa  masing- masing konsentrasi kombucha memiliki efektivitas antikolesterol.
Berdasarkan hasil penelitian, bahwa terjadi penurunan kadar kolesterol mencit setelah pemberian  fermentasi  kombucha  bunga  kecombrang.  Kandungan  dari  fermentasi  kombucha bunga  kecombrang  salah  satunya  adalah  senyawa  flavonoid.  Flavonoid  diketahui  memiliki aktivitas  antioksidan.  Flavonoid  dapat  bereaksi  dengan  radikal  bebas  melalui  penangkapan langsung radikal bebas seperti siklooksigenase dan lipoksigenase. Senyawa flavonoid diduga bekerja  dengan  cara  menghambat  enzim  HMG-CoA  reduktase  yang  berfungsi  sebagai
0 50 100 150 200 K (+) K (-) P1 P2 P3 R e rat a K adar K ol e st e rol D arah M e nci t Kelompok Perlakuan Kadar Awal (Hari ke-7)±SD RerataInduksi (Hari ke-14)±SD
Rerata Perlakuan (Hari ke-21)±SD
pengkatalis dalam pembentukan kolesterol dan meningkatkan aktivitas Letchitin Cholesterol Transferase (LCAT) (Umami et al., 2016).
Mekanisme  biologi  molekuler  pada  kombucha  dalam  menurunkan  kolesterol disebabkan  oleh  pengikatan  asam  empedu  oleh  metabolit  (yang  terkandung  dalam  teh kombucha) di dalam usus halus yang menyebabkan meningkatnya eksresi asam empedu fekal, sehingga terjadi penurunan absorbsi  lemak dalam kolestrol hal  ini mengakibatkan kolesterol dalam hati pindah sehingga kolesterol untuk memproduksi asam empedu kurang. Kondisi ini merangsang  terjadinya  konsentrasi  HDL  dalam  hati  untuk  memenuhi  kekurangan  kolestrol tersebut.  Semakin  lama  fermentasi  teh  kombucha  yang  diberikan,semakin  menurun  kadar kolestrol pada mencit putih dibandingkan dengan kontrol. Metabolit  yang terkandung dalam teh  kombucha  antara  lain  adalah  Niasin  atau  Vitamin  (Vitamin  B3)  yang  juga  disebut  asam nikotinat  bekerja  dalam  tubuh  seperti  koenzim  dalam  bentuk  nikotinamida  adenine dinukleutida  (NAD)  dan  Nikotinamida  Adenine  Dinukleutida  Fosfat  (NADP).  Koenzim  iini adalah reseptor hidrogen berikatan dengan atom hidrogen dalam bentuk koenzim hidrogenase yang merupakan katalis pada reaksi oksidasi reduksi (Rezaldi et al ., 2022).
NAD + berfungsi  sebagai  koenzim  berfungsi  sebagai  reaksi  oksidasi  alkohol  dalam reaksi  berikut  :  CH 3 CH 2 OH  +  NAD +  CH 3 CHO  +  NADH  +  H + .    Reaksi  ini  akan menghasilkan ion H + , maka akan berjalan baik pada pH rendah (suasana asam) (Rezaldi et al ., 2022).  Nikotinamide  merupakan  komponen  dari  semua  zat  zat  pembawa  elektron  dalam  sel hidup (NAD + NADH + H + ) dan berfungsi dalam banyak lintasan metabolism terutama dalam :  glikolisis  anaerob,  oksidatif  fosforilasi  siklus  kreb  dan  sintesis  β-oksidasi  asam  lemak. Penurunan kadar kolesterol oleh niasin dapat dilakukan dengan cara menghambat perubahan lemak  jaringan,  mengurangi  pengambilan  asam  lemak  bebas  oleh  hati  dan  menungkatkan pengeluaran kolesterol oleh hepar melalui getah empedu (Waskita et al ., 2023).

## D. KESIMPULAN
Pemberian fermentasi kombucha dari  bunga kecombrang ( E. elatior R.M. Sm) pada konsentrasi  10%,  20%  berpengaruh  secara  signifikan  terhadap  penurunan  kadar  kolesterol darah mencit putih jantan ( Mus musculus L.).
Pemberian fermentasi kombucha dari  bunga kecombrang ( E. elatior R.M. Sm) pada konsentrasi  30%  paling  berpengaruh  dalam  menurunkan  kadar  kolesterol  darah  mencit sebesar 84,5 mg/dl dari kolesterol total awal sebesar 141,5 mg/dl pada hari ke-21.

## E. UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada  seluruh  Author  yang  terlibat  dalam penelitian  ini,  kemudian  kepada  Dewan  Redaksi  Jurnal  Agromedicine  &  Medical  Sciences yang telah memberikan banyak peluang untuk  dapat  diterima hasil penelitian kami sehingga layak untuk diterbitkan.

## F. DAFTAR PUSTAKA
Frinanda  D.,  R.  Rahayu.  2014.  Efektivitas  Gambir  ( Uncaria  gambir Roxb.)  sebagai  Anti Hiperkolesterolemia dan Stabilisator Nilai Darah pada Mencit Putih ( Mus musculus ) Jantan. Jurnal Biologi UNAND , 3 (3). https://doi.org/10.25077/jbioua.3.3.%25p.2014
Kolo  Y.,  Rezaldi  F.,  Fadillah  M.  F.,  Trisnawati  D.,  Pamungkas  B.  T.,  Ma’ruf  A.,  F.  D. Pertiwi.  2022.  Antikolesterol  Pada  Ayam  Boiler  (Gallus  Domesticus)  Dari  Bunga Telang  ( Clitoria  ternatea L)  Melalui  Metode  Bioteknologi  Fermentasi Kombucha. Jurnal Teknologi Pangan Dan Ilmu Pertanian (JIPANG). 4(2), 30-36. Mariana,  M.,  Rahmadi,  A.,  H.  Syahrumsyah.  2020.  Pengaruh  pemberian  cuka  mandai terhadap  kadar  kolesterol  total,  lipoprotein  dan  trigliserida  pada  mencit  (Mus musculus) dengan induksi kuning telur. Journal of Tropical AgriFood . 2(1), 45-52. Rezaldi F., Ningtyas R. Y., Anggraeni S. D., Ma’ruf A., Fatonah N. S., Pertiwi F. D., Fitriyani F.,  A,  L.  D.,  US,  S.,  Fadillah  M.  F.,  A.  I.  Subekhi.  2021.  Pengaruh  Metode Bioteknologi  Fermentasi  Kombucha  Bunga  Telang  ( Clitoria  ternatea L)  Sebagai Antibakteri Gram Positif Dan Negatif. Jurnal Biotek . 9(2), 169-185. https://doi.org/10.24252/jb.v9i2.25467
Rezaldi F., Fadillah M. F., Agustiansyah L. D., Trisnawati D., , F. D. Pertiwi. 2022. Pengaruh Metode  Bioteknologi  Fermentasi  Kombucha  Bunga  Telang  ( Clitoria  ternatea L) Sebagai  Penurun  Kadar  Kolesterol  Bebek  Pedaging  Berdasarkan  Konsentrasi  Gula Aren Yang Berbeda-Beda. Jurnal Biogenerasi . 7(2), 57-67. https://doi.org /10.30605/biogenerasi.v7i2.1772
Rezaldi F., Setiawan U., Kusumiyati K., Trisnawati D., Fadillah M. F.,  D. Y. Setyaji.  2022. Bioteknologi  Kombucha  Bunga  Telang  ( Clitoria  ternatea L)  Dengan  Variasi  Gula Stevia  Sebagai  Antikolesterol  Pada  Bebek  Pedaging. Jurnal  Dunia  Farmasi .  6(3), 156-169. https://doi.org/10.33085/jdf.v6i3.5279
Sari, A. N., Hidayat, M., Faizah, S., & Diningrat, D. S. (2021). Pengaruh Pemberian Ekstrak Daging  Buah Asam Keranji ( Dialium indum L.) Terhadap Kadar Kolesterol Mencit Jantan ( Mus musculus ) Hiperlipidemia. Biofaal Journal . 2(1), 1-10.
Suhartatik  N.,  Karyantina  M.,  I.  T.  Purwanti.  2009.  Kombucha  Rosella  (Hibiscus  sabdariffa Linn) dan Kemampuannya Sebagai Anti Hiperkolesterolemia. Journal Agritech . 29(1), 29-35.
Umami S. R., Hapizah S. S., Fitri R., A. Hakim. 2016. Uji Penurunan Kolesterol Pada Mencit Putih  (Mus  Musculus)  Secara  In-Vivo  Menggunakan  Ekstrak  Metanol  Umbi  Talas ( Colocasia esculenta L) Sebagai Upaya Pencegahan Cardiovascular Disease. Jurnal Pijar Mipa , 11 (2). https://doi.org/10.29303/jpm.v11i2.113
Waskita K. N.,  Nurmaulawati R., F. Rezaldi. 2023. Efek Penambahan Substrat Madu Hutan Baduy  Pada  Fermentasi  Kombucha  Bunga  Telang  ( Clitoria  ternatea L)  Dalam Menurunkan  Kolesterol  Ayam  Broiler  ( Gallus  galus )  Sebagai  Inovasi  Produk Bioteknologi Konvensional Terkini. Jurnal Ilmiah Kedokteran Dan Kesehatan . 2(1), 112-119. https://doi.org/10.55606 /klinik.v2i1.883