252 Jurnal Agrotek Tropika 2(2):252-257, 2014 J.  Agrotek    Tropika.    ISSN  2337-4993 Vol.  2,    No.  2:  252-257,  Mei  2014

## REGENERASI  IN  VITRO  EMPAT  VARIETAS  KEDELAI (Glycine  max  [L.]  Merr.)  MELALUI  ORGANOGENESIS  MENGGUNAKAN EKSPLAN BIJI YANG DIIMBIBISI DAN DIKECAMBAHKAN
Mohammad Irham  Fauzi ,  Fitri Yelli, Akari  Edy &  Setyo  Dwi  Utomo
Jurusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Lampung Jl.Prof. Soemantri Brodjonegoro, No.1, Bandar Lampung 35145 E-mail: fitrie_yelli@yahoo.com

## ABSTRAK
Penelitian dilakukan untuk mengetahui pengaruh metode pra-kultur yang efektif dalam meningkatkan efisiensi regenerasi in vitro terhadap eksplan buku kotiledon pada empat varietas kedelai.  Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Ilmu Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Lampung, dimulai dari Maret sampai dengan Mei 2013.  Rancangan yang digunakan dalam penelitian ini adalah rancangan acak kelompok.  Perlakuan yang diterapkan merupakan kombinasi dari dua faktor yaitu varietas (Detam 1, Detam 2, Burangrang, Panderman) dan metode pra-kultur (kecambah 6 hari dan imbibisi 20 jam) yang merupakan perlakuan terhadap empat varietas benih kedelai tersebut sebelum ditanam pada media inisiasi tunas.  Perlakuan disusun secara faktorial (4x2) dengan 5 ulangan.  Setiap satuan percobaan terdiri dari empat eksplan buku kotiledon kedelai.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa rata-rata jumlah tunas adventif per eksplan (RJTAPE) tidak dipengaruhi oleh metode pra- kultur, varietas dan interaksi antara keduanya.  Sedangkan, persentase eksplan yang membentuk tunas adventif (PEMTA) tidak dipengaruhi oleh metode pra-kultur namun dipengaruhi oleh varietas dan interaksi antara kedua faktor tersebut.  PEMTA tertinggi didapatkan jika menggunakan varietas Detam 1 melalui perlakuan perkecambahan (70%) dan varietas Panderman melalui perlakuan imbibisi (50%).  Media pengakaran ½ MS dan ½ MS + NAA 0,5 mg l -1 memiliki efektifitas yang sama terhadap persentase tunas adventif  yang membentuk akar fungsional (PTMAF) pada minggu kedua  setelah pengakaran. Dengan demikian, teknik regenerasi secara in vitro melalui organogenesis pada varietas Detam 1 dengan perlakuan perkecambahan dan varietas Panderman dengan perlakuan imbibisi lebih efisien digunakan untuk transformasi genetik kedelai.
Kata kunci: Kedelai, imbibisi, kecambah, organogenesis, eksplan biji, varietas

## PENDAHULUAN
Kebutuhan kedelai setiap tahun mencapai 2 juta ton, sedangkan produksi kedelai dalam negeri hanya 0,8 juta ton per tahun sehingga diperlukan impor sebanyak 1,2  juta ton per tahun yang berdampak menghabiskan devisa negara sekitar Rp 3 triliun per tahun.  Selain itu, impor bungkil kedelai telah mencapai kurang lebih 1,3 juta  ton  per  tahun  yang  menghabiskan  devisa  negara sekitar  Rp  2  triliun  per  tahun  (Alimoeso,  2006). Permintaan kedelai meningkat sebesar 5,8% per tahun (Marveldani et al. , 2007 a).  Namun produksi kedelai secara  nasional  tiap  tahun  terus  menurun.    Menurut Badan Pusat Statistik (2012), pada tahun 2009 luas panen kedelai  sebesar  722.791  ha  dengan  produksi  sebesar 974.512  ton.    Pada  tahun  2010,  luas  panen  tersebut menjadi  660.823  ha  dengan  produksi  907.031  ton. Selanjutnya  tahun  2011  luas  panen  622.254  ha  dan produksi menjadi 851.286 ton.  Pada tahun 2012 luas panen menjadi 567.871 ha dengan produksi 851.647 ton. Penurunan  produksi  tersebut  terjadi  di  Jawa  sebesar
59,09 ribu ton, sedangkan di luar pulau jawa mengalami peningkatan sebesar 3,35 ribu ton.  Menurut Hosen dan Atman (2008), proyeksi permintaan kedelai tahun 2018 sebesar 6,11 juta ton sehingga tanpa kebijakan khusus sampai  tahun  2018  kebutuhan  kedelai  nasional  tetap akan bergantung pada impor.
Kebijakan  intensifikasi  dan  ekstensifikasi  perlu dilakukan untuk meningkatkan produksi kedelai dalam negeri.    Int ensifikasi  dapat  dilakukan  dengan menggunakan  varietas  unggul  yang  dapat  dihasilkan melalui  teknik  rekayasa  genetika  atau  transformasi genetik (Marveldani et al. , 2007 b).  Menurut Clemente et  al. (2000),  perakitan  tanaman  transgenik  dapat diarahkan untuk memperoleh kultivar (varietas budidaya) tanaman  yang  memiliki  produksi  tinggi,  nutrisi  dan penampilan berkualitas tinggi, maupun resisten terhadap hama,  penyakit,  dan  cekaman  lingkungan.    Tanaman kedelai toleran herbisida merupakan salah satu contoh tanaman  rekayasa  genetika.    Menurut  Utomo  (2012), varietas  merupakan  sekelompok  tanaman  dalam  satu spesies yang secara genetik memiliki kriteria DUS yaitu
Fauzi et al.: Regenerasi In Vitro Empat Varietas Kedelai 253
distinct (berbeda), uniform (seragam),  dan stable (stabil).  Varietas budidaya (kultivar) yang memiliki sifat unggul bernilai ekonomi disebut varietas unggul.  Jenis varietas unggul terdiri dari varietas galur murni (inbrida), hibrida, komposit, sintetik, multi galur, dan klon.  Berbagai jenis varietas tersebut dapat dirakit menggunakan teknik pemuliaan  tradisional  maupun  modern  (bioteknologi) melalui transformasi genetik.
Keberhasilan  transformasi  genetik  untuk memperoleh tanaman transgenik sangat ditentukan oleh teknik  regenerasi in  vitro. Regenerasi in  vitro pada dasarnya mengacu pada teori totipotensi dari Schleiden dan  Schwan.    Menurut  teori  tersebut  setiap  sel  hidup mempunyai  kemampuan  untuk  bereproduksi, membentuk  organ,  dan  berkembang  menjadi  individu baru yang sempurna/utuh jika ditumbuhkan pada media dan lingkungan yang sesuai.  Teori ini dijadikan dasar dalam perbanyakan tanaman melalui manipulasi sel atau jaringan  tanaman  menjadi  organ  atau  tanaman  utuh secara in vitro atau  kultur  jaringan (Pardal,  2002). Menurut Utomo (2005), regenerasi in vitro atau kultur jaringan  berfungsi  untuk  meregenerasikan  tanaman transgenik dari sel atau jaringan transgenik.
Perbanyakan  tanaman  melalui  kultur  jaringan dapat ditempuh melalui dua  jalur, yaitu organogenesis dan  embriogenesis  somatik  (Lestari,  2011).    Menurut Wattimena et al. (1992), pada hakikatnya organogenesis tanaman secara in vitro dikendalikan oleh keseimbangan dan  interaksi  hormon  yang  berada  dalam  eksplan (endogen)  dengan  hormon  yang  diserap  dari  media tumbuh (eksogen).  Bentuk keseimbangan yang terjadi akan menentukan arah dan bentuk pertumbuhan, salah satunya  pembentukan shootlet (tunas).    Tunas  yang dibentuk berdasarkan kompetensi (kemampuan) eksplan sangat  menentukan  keberhasilan  regenerasi in  vitro melalui organogenesis.  Kompetensi eksplan dipengaruhi oleh  interaksi  dan  keseimbangan  hormon  auksin  dan sitokinin.  Perlakuan imbibisi dan perkecambahan benih sebagai sumber eksplan diharapkan akan memperbaiki kompetensi  eksplan  untuk  tujuan  pembentukan  tunas. Menurut  Sumarno  dan  Widiyati  (1985),  pada  proses imbibisi,  air  masuk  kedalam  benih  menyebabkan pengembangan  embrio  dan  endosperm  sehingga  kulit benih menjadi pecah dan proses-proses fisiologi di dalam benih  menjadi  aktif.   Air  melakukan  fungsinya  untuk mengaktifkan kinerja  dan perubahan hormon endogen dida lam  benih  unt uk  proses  perkecamba han. Selanjutnya,  perubahan  tersebut  akan  mempengaruhi kompetensi  eksplan  untuk  beregenerasi  membentuk tunas.  Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui metode pra-kultur berupa perlakuan imbibisi dan  perkecambahan  pada  benih  kedelai  yang  efektif
dalam meningkatkan efisiensi regenerasi in vitro melalui organogenesis.

## BAHAN  DAN  METODE
Perlakuan  disusun  secara factorial  (4x2)  dalam rancangan acak kelompok (RAK).  Faktor pertama yaitu varietas  (Detam  1,   Detam  2,  Bur angrang  dan Panderman)  dan faktor kedua yaitu metode pra-kultur (imbibisi 20  jam dan kecambah  6 hari).   Metode  pra- kultur adalah perlakuan yang diberikan terhadap benih kedelai  yang  digunakan  sebelum  ditanam  pada  media inisiasi tunas. Perlakuan disusun secara faktorial (4x2) dengan 5 ulangan.  Setiap satuan percobaan terdiri dari empat eksplan buku kotiledon kedelai.  Setelah metode pra-kultur dilakukan, selanjutnya eksplan buku kotiledon ditanam pada media inisiasi tunas yaitu MS + BA 0,75 mg l -1 .  Homogenitas ragam data antar perlakuan diuji dengan menggunakan uji Bartlett dan uji lanjut dengan uji beda nyata terkecil (BNT) pada taraf  5%.
Tahap penelitian diawali dengan sterilisasi benih di  dalam  desikator  selama  2  ×  24  jam.    Prosedur sterilisasi  yaitu  dengan  menaruh  selapis  benih  kedelai dari masing-masing varietas didalam cawan petri terbuka kemudian  ditempatkan  mengelilingi  gelas  piala  yang sudah berisi campuran 3 ml HCL dan 100 ml Bayclin didalam  desikator.    Pada  metode  pra-kultur  melalui perlakuan perkecambahan selama 6 hari, benih kedelai dari  empat  varietas  yang  telah  disterilisasi  kemudian ditanam ke dalam media MS0 dan diinkubasi pada suhu 24 ± 2°C dalam kondisi terang selama 16 jam dan gelap selama 8 jam.  Sedangkan pada perlakuan imbibisi 20 jam, benih kedelai yang telah disterilisasi lalu dimasukkan ke dalam erlenmeyer ukuran 100 ml yang berisi air steril 40-50 ml.
Proses inisiasi tunas pada perlakuan kecambah 6 hari dan imbibisi 20 jam, dimulai dengan memisahkan kotiledon dari hipokotil dengan cara memotong hipokotil 3-5 mm di bawah buku kotiledon.  Dua buku kotiledon dipisahkan  dengan  cara  membelah  vertikal  sepanjang hipokotil menggunakan pisau skapel bernomor 15.  Pucuk poros embrio di atas buku kotiledon dibuang, kemudian dibuat  5  sampai  7  kali  goresan  sejajar  dengan  poros embrio pada buku kotiledon.  Posisi eksplan pada media ½  MS +  BA 0,75 mg  l -1 condong dengan  sudut  120°, permukaan adaksial menghadap ke atas dan bagian yang dicacah  dibenamkan  dalam  media.    Eksplan  tersebut dikulturkan  selama  dua  minggu  pada  suhu  24  ±  2°C dalam kondisi terang selama 16 jam dan gelap selama 8 jam.    Pengamatan  dilakukan  terhadap  tunas  adventif yang  telah  mempunyai  lebih  dari  tiga  daun  baik  dari perlakuan  imbibisi  maupun  perkecambahan.    Tunas
tersebut  selanjutnya  diakarkan  pada  dua  jenis  media pengakaran yaitu ½ MS dan ½ MS + NAA 0,5 mg l -1 . Variabel  yang  diamati  untuk  mengetahui  efisiensi
% 100 percobaan satuan per ditanam yang eksplan Jumlah percobaan satuan per adventif tunas membentuk yang eksplan Jumlah x
regenerasi in  vitro empat  varietas  kedelai  tersebut melalui metode organogenesis antara lain:
1)  Rata-rata jumlah tunas adventif per eksplan (RJTAPE) pada 40 hari setelah tanam.
RJTAPE =
2)  Persentase eksplan yang membentuk tunas adventif  (PEMTA) pada 40 hari setelah tanam.
PEMTA =
tunas membentuk yang eksplan Jumlah eksplan per adventif as Jumlah tun
3)  Persentase tunas adventif yang membentuk akar fungsional (PTMAF) pada 2 minggu setelah pengakaran.
PTMAF = % 100 pengakaran media di ditanam yang adventif s Jmlah tuna fungsional akar membentuk yang adventif as Jumlah tun
x

## HASIL  DAN  PEMBAHASAN
Berdasarkan Gambar 1, varietas Detam 1 dengan perlakuan  kecambah menunjukkan  persentase  eksplan yang membentuk tunas adventif lebih tinggi dibanding dengan perlakuan imbibisi.  Pada varietas Detam 2 tidak terdapat perbedaan persentase eksplan yang membentuk tunas adventif antara perlakuan imbibisi dan kecambah .    Pada  varietas  Burangrang  dan  varietas  Panderman dengan perlakuan imbibisi memiliki persentase eksplan yang  membentuk  tunas  adventif  lebih  tinggi  daripada dengan  perlakuan  kecambah.
Gambar 1. Pengaruh metode pra-kultur melalui imbibisi dan kecambah pada setiap varietas terhadap persentase eksplan yang membentuk tunas adventif.  Angka  yang diikuti huruf yang sama pada setiap varietas tidak berbeda  nyata berdasarkan uji BNT (BNT 5% = 28,51). = imbibisi, = kecambah.
Pada  penelitian  ini,  persentase  eksplan  yang membentuk  tunas  adventif  tertinggi  dari  perlakuan kecambah  adalah  varietas  Detam  1  (70  %  )  dan  dari perlakuan imbibisi adalah varietas Panderman (50 %). Persentase  eksplan  yang  membentuk  tunas  adventif tertinggi  tersebut  lebih  rendah  daripada  persentase eksplan yang  membentuk tunas  adventif tertinggi  dari perlakuan kecambah dan imbibisi pada penelitian Safitri (2013).    Hasil  penelitian  Safitri  (2013)  menunjukkan bahwa  persentase  eksplan  yang  membentuk  tunas adventif tertinggi dari perlakuan imbibisi dimiliki oleh varietas Anjasmoro  (87  %)  dan  perlakuan  kecambah
(87  %).Dengan  demikian,  perbedaan  varietas  akan mempengaruhi  respon  yang  berbeda  terhadap pembentukan  tunas  adventif.    Setiap  varietas  dengan perlakuan imbibisi dan kecambah menunjukkan respon yang  berbeda  terhadap  efisiensi  regenerasi in  vitro . Perbedaan  respon  varietas  tersebut  dikuatkan  oleh Wattimena et  al. (1992)  bahwa  antarvarietas  yang memiliki sifat dekat memiliki kebutuhan akan lingkungan dan media yang berbeda.  Selain itu didukung juga oleh Pierik (1987), yang menyatakan bahwa masing-masing jenis eksplan dan genotip memiliki respon pertumbuhan in vitro yang berbeda-beda walaupun ditumbuhkan pada media dan kondisi lingkungan tumbuh yang sama.
Pada  Tabel  1,  persentase  tunas  adventif  yang membentuk  akar  fungsional  (PTMAF)  dari  perlakuan imbibisi di media ½ MS dengan media ½ MS + NAA
0,5  mg  l -1 maupun  antara  PTMAF  dari  perlakuan kecambah di media ½ MS dengan media ½ MS + NAA 0,5  mg  l -1 menunjukkan  efektifitas  yang  sama  dalam pembentukan akar fungsional.  Berdasarkan Gambar 2, tunas adventif yang ditanam di media ½ MS dan ½ MS +  NAA  0,5  mg  l -1 memiliki  perbedaan  berdasarkan karakteristik  akar  fungsional.    Tunas  adventif  yang terbentuk pada media pengakaran ½ MS memiliki akar fungsional yang memanjang, berukuran kecil, barwarna putih dari pangkal sampai ke ujung dan berjumlah sedikit. Sedangkan pada media pengakaran ½ MS + NAA 0,5 mg l -1 memiliki akar yang pendek, berukuran lebih besar, berwarna  coklat  dari  pangkal  sampai  ke  ujung,  dan berjumlah lebih banyak.
Level hormon eksogen dari golongan auksin dapat memberikan  pengaruh  yang  lebih  efektif  terhadap
.
Tabel 1. Persentase tunas adventif yang membentuk akar fungsional (PTMAF) dari dua jenis   media pengakaran dan metode pra-kultur pada 2 msp (minggu setelah pengakaran).
Keterangan  : Uji-t pada taraf signifikan 5 % (3,18),  A = jumlah tunas adventif yang ditanam pada media pengakaran, B = jumlah tunas adventif yang membentuk akar fungsional,dan C = persentase tunas adventif yang membentuk akar fungsional.
Varietas Media pengakaran Media 1/2 MS Media 1/2 MS + NAA 0,5 mg l-1 Imbibisi Kecambah Imbibisi Kecambah A         B C A B C A B C A B C Detam 1 8 8 100 10 8 80 9 9 100 11 11 100 Detam 2 6 4 67 4 4 100 4 3 75 7 7 100 Burangrang 9 8 88 1 1 100 4 4 100 1 1 100 Panderman 15 15 100 3 3 100 11 10 90 4 4 100 Rata-rata 88.75 95 91.25 100
pembentukan akar fungsional jika mampu melebihi level hormon sitokinin endogen.  Hal tersebut didukung oleh pernyataan  Watti mena et  al .  (1992),  bahwa pembentukan  akar  secara in  vitro hanya  memerlukan auksin tanpa sitokinin atau sitokinin dalam konsentrasi yang  rendah  sekali.  Pada  penelitian  ini,  kemungkinan level hormon auksin eksogen untuk media pengakaran (menggunakan  NAA)  masih  dibawah  level  hormon sitokinin endogen dari tunas adventif.  Dengan demikian, penggunaan  media  pengakaran  dengan  menggunakan NAA yang seharusnya dapat lebih efektif daripada tanpa NAA  dalam  pembentukan  akar  fungsional,  namun ternyata dalam penelitian ini NAA dengan konsentrasi 0,5 mg l -1 diduga belum ideal dalam pembentukan akar fungsional sehingga efektifitasnya sama dengan media ½ MS.
Penggunaan  media  ½  MS  pada  penelitian  ini terbukti efektif mampu membentuk akar fungsional yang lebih panjang walaupun berukuran kecil, dan berjumlah sedikit dibanding akar fungsional pada media ½ MS + NAA 0,5 mg l -1 .  Menurut Wattimena et al. (1992), pada tanaman  terdapat  auksin  endogen  yang  cukup  untuk membentuk  akar  sehingga  akar  akan  tetap  terbentuk walau tanpa  penambahan auksin.  Hasil  penelitian ini didukung oleh hasil penelitian Sofia (2007) bahwa jumlah akar  terbanyak  dijumpai  pada  perlakuan  0  ppm  BAP (1,424  buah).    Sedangkan  pengaruh  CCC  terhadap jumlah akar yang terbentuk menunjukkan bahwa jumlah akar  terbanyak  dijumpai  pada  perlakuan  0  ppm  CCC (1,383  buah).    Jumlah  akar  terbanyak  dijumpai  pada kombinasi perlakuan 0 ppm BAP dan 0 ppm CCC (1,858 buah).

## KESIMPULAN
Metode pra-kultur, varietas dan interaksi antara metode pra-kultur dengan varietas tidak mempengaruhi rata-rata jumlah tunas adventif per eksplan.  Persentase eksplan  yang  membentuk  tunas  adventif  lebih  efektif diperoleh jika menggunakan varietas Detam 1 melalui perlakuan perkecambahan (70%), varietas Panderman melalui perlakuan imbibisi (50%), varietas Burangrang melalui perlakuan imbibisi (35%) dan  varietas Detam 2 baik melalui perlakuan imbibisi maupaun perkecambahan (20%).  Media pengakaran ½ MS dan ½ MS + NAA 0,5  mg  l -1 memiliki  efektifitas  yang  sama  terhadap persentase  tunas  adventif  yang  membentuk  akar fungsional  pada  minggu  kedua  setelah  pengakaran. Dengan  demikian,  teknik  regenerasi  secara in  vitro melalui  organogenesis  pada  varietas  Detam  1  dengan perlakuan  perkecambahan  dan  varietas  Panderman
dengan perlakuan imbibisi lebih efisien digunakan untuk transformasi genetik kedelai.

## DAFTAR  PUSTAKA
Alimoeso,  S.    2006.    Deptan  RI  Canangkan  Program Bangkit  Kedelai. (www.jabar.go.id  ) .
Diunduh 25 Februari 2013.
Badan Pusat Statistik. 2012. Produksi Padi, Jagung, Dan Kedelai Angka Tetap 2011 dan Angka Ramalan I 2012 (www.bps.go.id/brs_file/aram_2jul12. pdf) . Berita Resmi Statistik No. 43/07/Th. XV, 2 Juli 2012.  Diakses 2 Februari 2013.
Clemente, T., B. J. La Valle, A. R. Howe, D. C. Ward, R. J. Rozman, P. E. Hunter, D. L. Broyles, D. S. Kasten,  and  M.  A.  Hinchee.  2000.    Progeny Analysis  of  Glyphosate  Selected  Transgenic Soybeans derived from Agrobacterium mediated transformation. Crop Sci. (40): 797-803.
Hosen, Nasrul dan Atman. 2008. Dukungan Teknologi Dan Kebijakan Dalam Pengembangan Tanaman Kedelai Di Sumatera Barat. Jurnal Ilmiah Tambua (VII),  No.  3,  September-Desember  2008.  Balai Pengkajian  Teknologi  Perta nian  (BPTP) sumatera Barat. 347-359 hlm.
Lestari, E.G. 2011.  Peranan Zat Pengatur Tumbuh dalam Perbanyakan Tanaman melalui Kultur Jaringan. Jurnal AgroBiogen.  (VII), No. 1.  Hal: 63-68.
Marveldani,  Maimun  B.,  dan  Setyo  D.U.    2007  a.
Regenerasi In  Vi tro Kedelai  Melalui Orga nogenesis  pada   Tiga  Konsent rasi Benziladenin.  Jurnal  Penelitian  dan  Informasi Pertanian.  “Agrin” (XI), No. 2, Oktober 2007. Hal : 85.
Marveldani, Maimun B., Kukuh S., dan Setyo, D.U.  2007 b.    Pengembangan  Kedelai  Transgenik  yang Toleran  Herbisida Amonium-Glufosinat  dengan Agrobacterium .  Jurnal Akta Agrosia (X), No. 1, Januari-Juni 2007.  Hal: 54.
Pardal,  Saptowo  J.  2002.  Perkembangan  Penelitian Regenerasi  dan  Transformasi  Pada  Tanaman Kedelai.  Balai  Penelitian  Bioteknologi  dan Sumberdaya Genetik  Pertanian.    Buletin Agrobio (V), No. 2. Hal: 37-44.
Pierik, R.L.M.  1987.  In vitro culture of higher plants.
Martinus Nijhoff Publisher, Dordrecht, Boston, Lancaster.  344 pp.
Fauzi et al.: Regenerasi In Vitro Empat Varietas Kedelai 257
Wattimena, G.A., Livy Winata, G., Nurhayati, A.M., Endang S., Ni Made A.W., dan Andri, E.  1992. Bioteknologi tanaman.  Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi, PAU Bioteknologi IPB.  71 hlm.
Safitri, Y.  2013.  Pengaruh Perlakuan Pra-Kultur
Terhadap Efisiensi Regenerasi In Vitro Lima Varietas Kedelai.  Skripsi.  Fakultas Pertanian Universitas Lampung.  Bandar Lampung. Hal: 37-38.
Sofia, Diana. 2007. Pengaruh Berbagai Konsentrasi
BAP  dan  Cycocel  (CCC)  Terhadap
Pertumbuhan Embrio Kedelai Secara In Vitro.
Karya  tulis.    Fakultas  Pertanian  Universitas Sumatera Utara. 24 hlm.
Sumarno dan Widiyati.  1985.  Produksi dan Teknologi Benih Kedelai. Balitan Bogor.  Bogor.  Hal: 407- 428.
Utomo, S.D. 2005.  Efisiensi Regenerasi in Vitro Enam Varietas Kedelai Melalui Organogenesis.  Agrista 9 (1): 83-92.
Utomo, S.D. 2012.  Pemuliaan Tanaman Menggunakan Rekayasa  Genetik.    Lembaga  Penelitian Universitas Lampung. Bandar Lampung.  Hal : 2.