## AKTIVITAS ANTIBAKTERI
MINYAK ATSIRI DAUN JERUK PURUT ( Citrus hystrix ) TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF VOLATIL OIL OF SMALL AROMATIC LEMON  LEAVES ( Citrus hystrix ) AGAINST Staphylococcus aureus AND Escherichia coli
Ratna Yuliani*, Peni Indrayudha, dan Septi Sriandita Rahmi Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta yulianiratna@yahoo.com

## ABSTRAK
Jeruk purut ( Citrus hystrix ) merupakan tanaman dari suku Rutaceae yang telah lama dikenal masyarakat sebagai bahan cita rasa. Hasil penelitian sebelumnya melaporkan bahwa minyak atsiri jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia )  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengukur  aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri  daun jeruk  purut  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dan  mendeteksi  kandungan minyak  atsiri  yang  mempunyai  aktivitas  antibakteri.  Minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  yang  diperoleh dengan  cara  destilasi  uap  dan  air  diuji  aktivitas  antibakterinya  menggunakan  metode  dilusi  cair. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dilakukan menggunakan silika gel GF 254 dan heksan-etil asetat (9:1). Bercak hasil KLT dideteksi dengan UV 254 nm, UV 366 nm, anisaldehid-asam sulfat, dan vanilin-asam sulfat.  Bioautografi  dilakukan  dengan  metode  kontak.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan bahwa  minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap  Staphylococcus aureus dengan nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) berturut-turut  sebesar  1    dan  2%.  Minyak  atsiri  juga  mampu  menghambat  dan  membunuh Escherichia  coli dengan  nilai  KHM  dan  KBM  0,0625%.  Hasil  KLT  menunjukkan  bahwa  minyak atsiri daun jeruk purut mengandung beberapa senyawa golongan terpen dengan Rf yang berbeda. Berdasarkan hasil bioautografi, salah satu senyawa golongan terpen tersebut mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .
Kata kunci : antibakteri, Citrus hystrix, E. coli , minyak atsiri, S. aureus

## ABSTRACT
Small  aromatic  lemon  ( Citrus  hystrix )  is  a  plant  from  Rutaceae  family  that has  been  known by  society  as  flavoring  agent.  The  result  from  previous  research  showed that  volatile  oil  of  lemon ( Citrus  aurantifolia )  has  antibacterial  activity  against Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli . The objectives of this research are to measure antibacterial activity of volatile oil of small aromatic lemon  leaves  against Staphylococcus aureus  and  Escherichia  coli and  to  determine  compounds that have antibacterial activity. Small aromatic lemon leaves volatile oil that was obtained by steam and water distillation was tested for its antibacterial activity using broth dilution method. Thin Layer Chromatography  (TLC)  was  carried  out  by  using  silica  gel  GF 254 and  hexane-ethyl  acetate  (9:1). Spots  of  silica  gel  GF 254 were  detected  by  UV 254 nm,  UV 366 nm,  anisaldehid  -  sulfuric  acid,  and vanillin - sulfuric acid. Bioautography was done by using contact method.The result of antibacterial activity test showed that volatile oil of small aromatic lemon leaves has antibacterial activity against Staphylococcus aureus with Minimum Inhibitory Concentration (MIC) value of 1% v/v and Minimum Bactericidal  Concentration  (MBC)  value  of  2%  v/v.  The  result  of  antibacterial  activity  test  against Escherichia  coli  showed  that  volatile  oil  has  antibacterial  activity  with  MIC  dan  MBC  values  of  0,0625%. Thin  Layer  Chromatography  results  indicated  that  volatile  oil  contains  several  terpenes with  different  Rf  values.  Based  on  bioautography,  one  of  these  terpenes  has  antibacterial  activity against Staphylococcus aureus and Escherichia coli .
Keywords: antibacterial, Citrus hystrix, E. coli, S. aureus, volatile oil
PENDAHULUAN Infeksi Staphylococcus  aureus ,  anggota Micrococcaceae,  merupakan  penyebab  utama penyakit  pada  kulit,  jaringan  lunak,  saluran pernafasan, tulang, persendian, dan endovaskuler.  Sebagian  besar  infeksi  tersebut terjadi pada orang dengan faktor resiko multipel
(Lowy,  1998).  Kematian  yang  disebabkan  oleh infeksi stafilokokus bervariasi. Bakteremia yang tidak  tertangani  menyebabkan  kematian  lebih dari 80%. Angka kematian karena staphylococcal  toxic  shock  syndrome berkisar antara  3  sampai  5%  sedangkan  infeksi  oleh stafilokokus negatif koagulase hanya
menyebabkan  sedikit  kematian  (Herchline, 2011). Bakteri lain yang juga dapat menyebabkan  infeksi  adalah Escherichia  coli yang  merupakan  flora  normal  pada  manusia (Brooks et al. , 2005). Bakteri E.  coli merupakan  salah  satu penyebab  tersering  infeksi  bakteri  umum termasuk  kolesititis,  bakteremia,  kolangitis, infeksi  saluran  kemih,  diare  pada  wisatawan, dan  infeksi  klinik    lain  seperti  meningitis  pada bayi  dan  pneumonia. E.  coli merupakan penyebab  utama  infeksi  saluran  kemih  baik yang  diperoleh  dari  rumah  sakit  maupun komunitas.  Penyebab  infeksi  pada  50%  wanita yang  mengalami  infeksi  saluran  kemih,  4% kasus  diare,  dan  12-50%  infeksi  nosokomial adalah E.  coli .  Meningitis  pada  bayi  yang disebabkan oleh E. coli sebanyak 8% sedangkan angka kematian dan angka kejadian terkait  bakteremia  oleh E.  coli sama  dengan angka  kematian  dan  angka  kejadian  baksil Gram  negatif  aerobik  (Madappa,  2011).  Infeksi yang  disebabkan  oleh  bakteri  biasanya  diatasi dengan    antibiotik  yang  dapat  diperoleh  dari sintesis  kimia  atau  mikroorganisme.  Untuk mendapatkan  sumber  antibakteri  yang  lain, banyak tanaman telah diteliti aktivitas antibakteri in vitro diantaranya jeruk purut. Beberapa peneliti telah menguji aktivitas antibakteri jeruk purut terhadap banyak bakteri.  Chowdhury et  al. (2009)  melaporkan bahwa  ekstrak  metanol  buah  jeruk  purut  dan beberapa fraksinya mempunyai aktivitas antibakteri  dengan  tingkat  sedang  sampai  kuat terhadap  beberapa  bakteri  Gram  positif  dan Gram  negatif.  Ekstrak  etil  asetat  dan  minyak atsiri kulit buah jeruk purut lebih poten terhadap S. aureus dibanding E. coli (Chanthaphon et al. , 2008). Penelitian yang dilakukan oleh Nanasombat    dan  Lohasupthawee  (2005) menunjukkan bahwa ekstrak etanol dan minyak atsiri  daun  dan  kulit  buah  jeruk  purut mempunyai aktivitas antibakteri terhadap beberapa spesies Salmonella dan enterobakteri.Hasil penelitian Luangnarumitchai et  al. (2007)  mengindikasikan  bahwa  minyak atsiri  kulit  buah  dan  daun  jeruk  purut  mampu menghambat pertumbuhan 5 strain Propionibacterium acne . Penelitian ini bertujuan untuk  mengukur  aktivitas  antibakteri  minyak atsiri daun jeruk purut terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dan  menentukan  golongan  senyawa  dalam minyak atsiri yang mempunyai aktivitas antibakteri.

## METODE PENELITIAN
Alat :  alat  destilasi  minyak  atsiri,  piknometer, neraca (Precisa),  refraktometer,  inkubator (Memmert),  autoklaf  (China),  Laminar  Air  Flow (LAF),  oven  (Memmert),  lampu  UV 254 nm,  dan UV 366 nm.
Bahan :  daun  jeruk  purut  yang  diperoleh  dari
Balai Besar Penelitian Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional (B2P2TOOT), Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli (Laboratorium  Mikrobiologi, Fakultas  Farmasi,  Universitas  Muhammadiyah Surakarta) , natrium  sulfat  anhidrat,  aseton, Brain  Heart    Infusion  (BHI),  Mueller  Hinton (MH),  PEG  400, alkohol  70%,  silika  gel  GF 254 , heksana  (p.a),  etil  asetat  (p.a),  vanilin-asam sulfat, dan anisaldehid-asam sulfat.

## Jalannya Penelitian Penyulingan Minyak Atsiri Daun Jeruk purut
Satu  kilogram  daun  jeruk  purut  segar yang sudah dicuci dan potong-potong dimasukkan ke dalam dandang yang sebelumnya  sudah  diisi  air  lalu  dipanaskan sampai minyak atsiri keluar. Destilasi dihentikan ketika  volume  minyak  atsiri  yang  keluar  tidak bertambah.  Hasil  penyulingan  dipisahkan  dari air  dengan  menambahkan  Na  sulfat  anhidrat. Minyak  atsiri  yang  diperoleh  disimpan  dalam botol  yang  tertutup  rapat  dan  terlindung  dari cahaya.

## Uji Antibakteri
Minyak  atsiri  sebanyak  4  mL  dilarutkan dalam  96  mL    PEG  400    steril  lalu  disebut sebagai  larutan stok. Enam tabung reaksi steril disiapkan dan masing-masing tabung diisi 1 mL akuades  steril.  Tabung  pertama  diisi  1  mL larutan  stok  minyak  atsiri  lalu  dicampur. Campuran  dari  tabung  pertama  diambil  1  mL lalu  dimasukkan  tabung  kedua  dan  dicampur. Hal tersebut dilakukan secara berulang sampai tabung keenam sehingga diperoleh seri konsentrasi  minyak  atsiri  sebesar  2,  1,  0,5, 0,25,  0,125,  dan  0,0625%.  Kemudian  masing- masing tabung ditambah 1 mL suspensi bakteri (10 6 CFU/mL)  dalam  media  BHI.  Dalam  uji  ini, ada  2  kontrol  yang  digunakan  yaitu  kontrol media dan kontrol pertumbuhan bakteri. Semua tabung  diinkubasi  pada  suhu  37  C  selama  24 jam.  Setelah  inkubasi,  dari  masing-masing tabung  diambil  1  ose  suspensi  lalu  digoreskan pada media MH dan diinkubasi pada suhu 37  C selama 24 jam.

## Kromatografi Lapis Tipis
Silika  gel GF 254 diaktifkan dengan pemanasan  pada  suhu  100 0 C  selama  1  jam. Larutan uji ditotolkan  pada fase diam sebanyak tiga  kali  totolan,  setiap  kali  totolan  dibiarkan sampai kering  kemudian dielusi dengan heksan:etil asetat (96:4). Bercak-bercak dideteksi  pada  UV 254 nm,  UV 366 nm,  pereaksi semprot  vanilin-asam  sulfat,  dan  anisaldehid- asam sulfat.

## Bioautografi
Lempeng  hasil  KLT  ditempelkan  selama  20 menit  pada  media  MH  yang  telah  ditanami bakteri.  Lempeng  diambil  lalu  kultur  diinkubasi pada suhu 37  C selama 24 jam.

## Analisis data
Aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri  daun jeruk  purut  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dinyatakan  dalam  KHM dan  KBM.  Kadar  Hambat  Minimum  ditentukan dari  konsentrasi  minyak  atsiri  terkecil  yang mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri yang  ditandai  dengan  tidak  adanya  kekeruhan dalam  tabung  uji  sedangkan  KBM  ditentukan dari  konsentrasi  terkecil  minyak  atsiri  yang mampu  membunuh  bakteri  yang  ditandai dengan tidak adanya pertumbuhan pada media MH padat.
Hasil  KLT  yang  sudah  dideteksi  dengan UV 254 nm,  UV 366 nm,  pereaksi  semprot anisaldehid-asam  sulfat,  dan  vanillin –asam sulfat  dihitung  nilai  Rf-nya  lalu  dibandingkan dengan  literatur.  Hasil  uji  bioautografi  yang berupa zona jernih pada bekas bercak lempeng hasil  KLT  dihitung  Rf-nya  lalu  dibandingkan hasil uji KLT sehingga senyawa yang mempunyai aktivitas antibakteri dapat diketahui.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan bahwa  minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  mampu menghambat  pertumbuhan  dan  membunuh S. aureus dan E.  coli . S.  aureus masih  dapat tumbuh  dengan  adanya  minyak  atsiri  daun jeruk purut dengan konsentrasi 0,5, 0,25, 0,125 dan  0,0625%  (Tabel  1).  Minyak  atsiri  dengan konsentrasi 2 dan 1% sudah mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri S . aureus. Konsentrasi  minyak  atsiri  terkecil  yang  mampu menghambat  pertumbuhan S.  aureus adalah  1%  sehingga  konsentrasi  tersebut dinyatakan  sebagai  KHM.  Hasil  penggoresan kultur  dilusi  cair  ke  media  MH  yang  diikuti dengan  inkubasi  menunjukkan  bahwa  minyak atsiri  dengan  konsentrasi  0,0625-1%  belum dapat  membunuh S.  aureus yang  ditandai dengan  masih  adanya  pertumbuhan  bakteri pada media MH. S. aureus baru dapat dibunuh oleh  minyak  atsiri  dengan  konsentrasi  2%
(Tabel  2).  Konsentrasi  tersebut  merupakan konsentrasi terkecil yang mampu membunuh S. aureus sehingga  konsentrasi  2%  dinyatakan sebagai konsentrasi bunuh minimal (KBM).Minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  dengan konsentrasi 2, 1, 0,5, 0,25, 0,125 dan 0,0625% mampu  menghambat  pertumbuhan E.  Coli ( Tabel  3).  Tetapi  dari  hasil  tersebut  nilai  KHM belum  bisa  ditentukan  dengan  pasti  karena pada  konsentrasi  terkecil  yang  diujikan  yaitu 0,0625% minyak atsiri masih mampu menghambat pertumbuhan bakteri yang ditandai  dengan  tidak  adanya  kekeruhan  pada tabung  yang  berarti  tidak  ada  pertumbuhan bakteri. Nilai KHM mungkin 0,0625% atau lebih kecil  lagi.  Untuk  menentukan  nilai  KHM  secara pasti sebaiknya dilakukan uji dengan konsentrasi  minyak  atsiri  yang  lebih  kecil.  Nilai KBM  juga  belum  dapat  ditentukan  karena semua  konsentrasi  minyak  atsiri  yang  diujikan mampu  membunuh E.  coli yang  ditandai dengan tidak adanya pertumbuhan pada media MH  (Tabel  4).  Oleh  karena  itu,  harus  ada  uji yang  menggunakan  konsentrasi  minyak  atsiri yang lebih kecil dari 0,0625% untuk memperoleh nilai KBM yang pasti.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap S. aureus dan E.  coli mengindikasikan  bahwa Kedua  bakteri  uji  mempunyai  sensitivitas  yang berbeda terhadap minyak atsiri daun jeruk purut. E. coli lebih mudah dihambat dan dibunuh oleh minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  dibandingkan S. aureus .  Hal  ini  dapat dilihat  dari  nilai  KHM  dan KBM  minyak  atsiri  terhadap  masing-masing bakteri. E.  coli sudah  dapat  dihambat  dan dibunuh  oleh  minyak  atsiri  dengan  konsentrasi kecil yaitu 0,0625% sedangkan pertumbuhan S. aureus baru  dapat  dihambat  dan  dibunuh  oleh minyak  atsiri  dengan  konsentrasi  berturut-turut 1  dan  2%.  Perbedaan  sensitivitas  bakteri terhadap  minyak  atsiri  daun  jeruk  purut mungkin  disebabkan  oleh  perbedaan  struktur dinding  sel  antara  bakteri  Gram  positif  dan bakteri Gram negatif. Kepekaan bakteri terhadap  antibiotik  tergantung  pada  perbedaan susunan  dinding  selnya  misalnya  jumlah peptidoglikan,  adanya  reseptor  dan  lipid,  sifat hubungan  silang, aktivitas  enzim  autolisis  yang menentukan  penetrasi,  ikatan,  dan  aktivitas obat (Jawetz et al. , 1996).
Tabel 1 – Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk Purut terhadap S. aureus untuk Menentukan Nilai KHM
No Hasil pertumbuhan bakteri S. aureus pada kadar (%v/v) Kontrol 2% 1% 0,5% 0,25% 0,125% 0,0625% KI K2 1. - - +
+
+ + - + 2. - - +
+
+ + - + 3. - - +
+
+ + - +
Keterangan:  tanda  (+)  berarti:  terdapat  pertumbuhan  bakteri,  (-)  tidak  terdapat  pertumbuhan  bakteri,  K1  adalah  kontrol media (media BHI 2 mL), K2 = kontrol pertumbuhan bakteri (media BHI 1 mL + suspensi bakteri 1 mL
Tabel 2 – Hasil Uji  Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk Purut terhadap S. aureus untuk Menentukan nilai KBM
No Hasil pertumbuhan bakteri S. aureus pada kadar (%v/v) Kontrol 2% 1% 0,5% 0,25% 0,125% 0,0625% KI K2 1. - + +
+
+ + - + 2. - + +
+
+ + - + 3. - + + + + + - +
Keterangan:  tanda  (+)  berarti:  terdapat  pertumbuhan  bakteri,  (-)  tidak  terdapat  pertumbuhan  bakteri,  K1  adalah  kontrol media (media BHI 2 mL), K2 = kontrol pertumbuhan bakteri (media BHI 1 mL + suspensi bakteri 1 mL
Tabel 3 – Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk Purut terhadap E . coli untuk Menentukan Nilai KHM
No Hasil pertumbuhan bakteri E . coli pada kadar (%v/v) Kontrol 2% 1% 0,5% 0,25% 0,125% 0,0625% KI K2 1. - - - - - - - + 2. - - - - - - - + 3. - - - - - - - +
Keterangan:  tanda  (+)  berarti:  terdapat  pertumbuhan  bakteri,  (-)  tidak  terdapat  pertumbuhan  bakteri,  K1  adalah  kontrol media (media BHI 2 mL), K2 = kontrol pertumbuhan bakteri (media BHI 1 mL + suspensi bakteri 1 mL
Tabel 4 – Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk Purut terhadap E . coli untuk Menentukan nilai KBM
No Hasil pertumbuhan bakteri E . coli pada kadar (%v/v) Kontrol 2% 1% 0,5% 0,25% 0,125% 0,0625% KI K2 K3 1. - - - - - - - + - 2. - - - - - - - + - 3. - - - - - - - + -
Keterangan:  tanda  (+)  berarti:  terdapat  pertumbuhan  bakteri,  (-)  tidak  terdapat  pertumbuhan  bakteri,  K1  adalah  kontrol media (media BHI 2 mL), K2 = kontrol pertumbuhan bakteri (media BHI 1 mL + suspensi bakteri 1 mL
Hasil Analisis KLT .  Berdasarkan  hasil  KLT,  bercak-bercak hasil  pemisahan  komponen  minyak  atsiri menunjukkan  warna  kuning,  biru,  coklat,  dan ungu  setelah  disemprot  dengan  vanilin-asam sulfat dan  berwarna  kuning, ungu,  biru, merah, dan oranye setelah disemprot dengan anisaldehid-asam sulfat. Adanya bercak berwarna  biru-biru  ungu  setelah  disemprot dengan vanilin-asam sulfat menandakan senyawa  monoterpen  alkohol  dan  esternya (Wagner  dan  Bladt,  1996).  Kemungkinan minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  mengandung senyawa golongan terpen dengan nilai Rf 0,25, 0,44 dan 0,63. Hasil identifikasi dengan metode KLT  ini  belum  dapat  menentukan  secara spesifik  senyawa  yang  terkandung  dalam minyak  atsiri  daun  jeruk  purut.  Penelitian  lain menyebutkan  bahwa  ada  29  komponen  yang teridentifikasi  di  dalam  minyak  atsiri  daun  jeruk purut  yang  diperoleh  dengan  cara  destilasi  air. Minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  terdiri  atas monoterpen  teroksigenasi  dalam  jumlah  besar yaitu 86,15% dari total minyak atsiri. Komponen utamanya  adalah  β-sitronelal,  monoterpen (66,85%  dari  total  minyak  atsiri)  yang  diikuti oleh β-sitronelol, linalool, dan sitronelol (Loh et al. ,  2011).  Berdasarkan  hasil  penelitian  Loh et al. (2011)  tersebut,  kemungkinan  minyak  atsiri daun  jeruk  purut  yang  digunakan  pada penelitian ini juga mengandung komponen yang sama. Hal  ini diperkuat dengan hasil  KLT  yang menunjukkan  bercak  berwarna  biru  setelah
disemprot  dengan  vanilin-asam  sulfat  yang menandakan  adanya  senyawa  sitronelal  dan linalool.

## Hasil Bioautografi
Hasil  uji  bioautografi  menunjukkan adanya zona jernih pada Rf 0,63. Spot tersebut diduga merupakan senyawa aktif yang memiliki aktivitas  antibakteri.  Setelah  dibandingkan dengan  Rf  hasil  KLT,  senyawa  tersebut merupakan  terpen  dengan  harga  Rf  0,63. Senyawa golongan terpen mempunyai aktivitas sebagai  antibakteri  dengan  merusak  membran sel  dan  menghambat  pertumbuhan  serta mematikan bakteri dengan menggangu terbentuknya dinding sel (Rapilu dan Lamapaha, 2009).

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
1. Minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  mempunyai aktivitas  antibakteri  terhadap S.  aureus dengan  nilai  KHM  dan  KBM  berturut-turut sebesar 1 dan 2%.
2. Minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  mempunyai aktivitas  antibakteri  terhadap E.  coli dengan nilai KHM dan KBM  0,0625%.
3. Golongan  senyawa  aktif  dalam  minyak  atsiri daun  jeruk  purut  yang  mempunyai  aktivitas antibakteri  terhadap S.  aureus dan E.  coli adalah terpen.

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  tentang  aktivitas minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  terhadap E.  coli dengan  konsentrasi  minyak  atsiri  yang  lebih kecil  dari  0,0625%  sehingga  nilai  KHM  dan KBM dapat ditentukan dengan pasti.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Universitas  Muhammadiyah  Surakarta  yang
telah  memberikan  dana  untuk  melakukan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Brooks,  G.F.,  Butel,  J.S.,  dan  Morse,  S.A.,  2005, Jawetz,  Melnick,  and  Adelberg’s  Medical Microbiology , 22 th edition, diterjemahkan oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E. B., Mertaniasih, N. M., Harsono, S., dan Alimsardjono, L., Penerbit Salemba Medika, Jakarta.
Chanthaphon,  S.,  Chanthachum,  S.,  dan  Hongpattarakere,  T.,  2008,  Antimicrobial  activities  of essential  oils  and  crude  extracts  from  tropical  Citrus  spp.  against  food-related  microorganisms, Songklanakarin J. Sci. Technol., 30 (Suppl.1), 125-131.
Chowdhury, A., Alam, M.A., Rahman, M.S., Hossain, M.A., dan Rashid, M.A., 2009, Antimicrobial, Antioxidant and Cytotoxic Activities of Citrus hystrix DC. Fruits, Dhaka Univ. J. Pharm. Sci ., 8 (2): 177-180.
Herchline, T.E., 2011, Staphylococcal Infections , online, ( http://emedicine.medscape.com , diakses pada 8 November 2011).
Jawetz,  E.,  Melnick,  J.  L.,  dan  Adelberg,  E.  A.,  1996, Mikrobiologi  Kedoteran ,  Edisi  XX, diterjemahkan  oleh  Nugroho,  E.  dan  Maulani  R.  F.,  18-21,  Penerbit  Buku  Kedokteran  EGC, Jakarta.
Loh, F.S., Awang, R.M., Omar, D., dan Rahmani, D., 2011, Insecticidal properties of Citrus hystrix DC leaves essential oil against Spodoptera litura fabricius, Journal of Medicinal Plants Research, 5 (16), 3739-3744.
Lowy,  F.D.,  1998, Staphylococcus  aureus Infections, The  New  England  Journal  of  Medicine ,  339 (8), 520-532.
Luangnarumitchai,  S.,  Lamlertthon,  S.,  dan  Tiyaboonchai,  W.,  2007,  Antimicrobial  Activity  of Essential  Oils  Against  Five  Strains  of Propionibacterium  acnes , Mahidol  University  Journal  of Pharmaceutical Sciences, 34 (1-4), 60-64.
Madappa,  T.,  2011, Escherichia  coli  Infections ,  online,  (http://emedicine.medscape.com,  diakses  pada 29 November 2011).
Nanasombat,  S.  dan  Lohasupthawee,  P.,  2005,  Antibacterial  Activity  of  Crude  Ethanolic  Extracts and Essential Oils of Spices Against Salmonellae and Other Enterobacteria, KMITL Sci. Tech. J., 5 (3), 527-538.
Rupilu,  N.S.,  dan  Lamapaha,  Y.F.,  2009, Potensi  Lengkuas  (Languas  galanga)  Sebagai Antimikroba (Studi
in vitro bakteri Gram negatif,) (online), (http://images.novierupilu.multiply.com/attachment/0/Sc6JhaokCCwAALgG7s1/POTENSI%LENGK UAS.DOXX?NMID=224430913, diakses tanggal 19 Mei 2009).
Wagner, H. dan Bladt, S., 1996, Plant Drug Analysis , Second edition, Springer.