## ANTIOXIDANT ACTIVITY OF MIXED KATUK LEAF EXTRACT AND HONEY
Ahmad Fathoni 1* , La Ode Sumarlin 1** , Jane Ratini Putri 2 , Narti Fitriana 2
1 Program Studi Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta, Jl Ir H Juanda No. 95 Ciputat 15412, Tangerang Selatan, Banten, Indonesia
2 Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta,
Indonesia, Jl Ir H Juanda No. 95 Ciputat 15412, Tangerang Selatan, Banten, Indonesia
E-mail: *fathoni.ahmad@uinjkt.ac.id, **sumarlin@uinjkt.ac.id
Diterima: 29 Januari 2020. Disetujui: 03 Mei 2020. Dipublikasikan: 30 Juli 2020 DOI: 10.30870/educhemia.v5i2.7275
Abstract: Antioxidants can be obtained from plants or animals. One of the plants that can be used as a source of antioxidants is katuk leaf (Sauropus androgynus (L.) Merr.) and honey. The  content  of  compounds  in  both  materials  that  function  as  antioxidants  are  phenolic, flavonoids, and vitamin C. This study aims to analyze the levels of total phenolic, flavonoids, vitamin  C,  antioxidant  activity,  the  effect  of  different  compositions  on  combination treatments,  and  analyze  the  relationship  between  phenolic  levels  and  vitamin  C  with antioxidant  activity  from  the  test  sample.  This  study  used  an  experimental  method  with  a completely  randomized  design.  Antioxidant  activity  was  tested  using  the  1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH) method. The results showed phenolic levels of all test samples ranged from  0.509-23.205  mg  GAE/g  samples;  flavonoids  amounted  to  0.027-17.329  mg  QE/g samples, vitamin C amounted to 15,917-101,705 mg AA/g samples and IC50 of 114.213- 20727.500 mg/l. The combination treatment with more katuk leaf composition can increase the  levels  of  compounds  and  antioxidant  activity.  Phenolic  levels  and  vitamin  C  have  a moderate  relationship  with  antioxidant  activity  with  the  correlation  coefficient  values  of  - 0.480 and -0.500.
Keywords: Antioxidant; Katuk leaf ( Sauropus androgynus (L.) Merr.); Honey; Combination
Abstrak: Antioksidan dapat diperoleh dari tanaman atau hewan. Salah satu tanaman yang dapat dijadikan sebagai sumber antioksidan adalah daun katuk ( Sauropus androgynus (L.) Merr.) dan madu. Kandungan senyawa dalam kedua bahan tersebut yang berfungsi sebagai antioksidan  adalah  fenolik,  flavonoid,  dan  vitamin  C.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk menganalisis  kadar  total  fenolik,  flavonoid,  vitamin  C,  aktivitas  antioksidan,  pengaruh perbedaan  komposisi  pada  perlakuan  kombinasi,  dan  menganalisis  hubungan  antara  kadar fenolik  dan  vitamin  C  dengan  aktivitas  antioksidan  dari  sampel  uji.  Penelitian  ini menggunakan  metode  eksperimen  dengan  desain  rancangan  acak  lengkap.  Aktivitas antioksidan diuji menggunakan metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). Hasil penelitian menunjukkan  kadar  fenolik  seluruh  sampel  uji  berkisar  antara  0,509-23,205  mg  GAE/g sampel, flavonoid sebesar 0,027-17,329 mg QE/g sampel, vitamin C sebesar 15,917-101,705 mg AA/g sampel, dan IC 50 sebesar 114,213-20727,500 mg/l. Perlakuan kombinasi dengan komposisi daun katuk yang lebih banyak dapat meningkatkan kadar senyawa dan aktivitas antioksidannya.  Kadar  fenolik  dan  vitamin  C  memiliki  hubungan  yang  moderat  dengan
aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  koefisien  korelasi  masing-masing  sebesar  -0,480  dan  - 0,500.
Kata kunci: Antioksidan, Daun Katuk ( Sauropus androgynus (L.) Merr.), Madu, Kombinasi

## PENDAHULUAN
Katuk  ( Sauropus  androgynus (L.)
Merr.)  selama  ini  dikenal  mampu meningkatkan produksi air susu ibu (ASI), atau  bersifat  laktogogum  (Sa’roni  et  al. 2004).  Pada  daunnya  diketahui  memiliki kandungan tanin (katekin), resin, terpenoid,  alkaloida,  fenol,  asam-asam organik,  minyak  atsiri,  saponin,  sterol, protein, karbohidrat, vitamin, dan mineral (Selvi  &  Basker,  2012)  dan  kandungan flavonoid  dalam  jumlah  tinggi  (Zuhra  et al.  2008).
Selain itu, Andarwulan et al. (2010), telah mengidentifikasi bahwa S. androgynus (L)  Merr,  C. caudatus H.B.K.,  dan    P. pinnata sebagai  sumber bahan  alam  yang  kaya  flavonoid  dan memiliki  sifat  antioksidan.  Antioksidan ini  sangat  penting  untuk  diteliti  karena sifatnya  yang  mampu  mengatasi  stress oksidatif  (Rudiana  et  al.  2018).    Stress oksidatif dapat mengakibatkan kerusakan jaringan  sel  dan  dna,  yang  jika  tidak teratasi  dapat  menginduksi  penyakit diabetes,  darah  tinggi,  dan  penyakit lainnya (Legg 2017).
Bahan  lain  yang  memiliki  sifat antioksidan  adalah  madu.    Sifat
antioksidan  madu  disebabkan  adanya fenolik dan flavonoid (Meda et al. 2005), enzim  (glukosa  oksidase  dan  katalase) (Molan  &  Betts  2004),  asam  askorbat, karotenoid  (Alvarez-Suarez  et  al.  2010) dan tokoferol (Alisi et al. 2012). Madu ini potensial  untuk  diteliti  karena  fungsinya yang  beragam  dan  variasi  komposisinya yang  sangat  lengkap  disebabkan  oleh perbedaan  jenis  tanaman,  iklim,  kondisi lingkungan,  spesies  lebah,  dan  faktor geografis  (Küçük  et  al.  2007;  Kustiawan et al. 2014; Pérez-pérez et al. 2013).
Madu  dan  daun  katuk  diketahui memiliki  kandungan  antioksidan  dan digunakan  untuk  berbagai  keperluan (Ahmed  et  al.,  2018;  Pratiwi  & Wiadnyani,  2018).  Selama  ini,  kedua bahan  ini  lebih  banyak  dimanfaatkan secara tunggal untuk berbagai keperluan. Namun,  penelitian  tentang  kombinasi keduanya  masih  belum  ditemukan.  Oleh karena  itu  kajian  ilmiah  aktivitas antioksidan  melalui  beberapa  variasi perbandingan  pencampuran  (daun  katuk dan  madu)  difokuskan  dalam  penelitian ini. Harapannya, selain aspek peningkatan aktivitas  bioaktif,  juga  aspek  rasa  yang lebih enak menjadi penting sehingga lebih disukai oleh masyarakat.

## METODE
Sampel  daun  katuk  diambil  dari Kecamatan  Gunung  sindur,  Kabupaten Bogor.  Sampel  daun  katuk  yang digunakan  merupakan  campuran  antara daun  muda  dan  daun  tua  yang  telah disortasi  guna  memperoleh  sampel  daun dengan  bentuk  yang  sempurna.  Sampel madu  yang  digunakan  adalah  madu komersil yang terdiri dari madu rambutan (MR)  dan  madu  kaliandra  (MK).  Bahan kimia yang digunakan adalah Metanol pro analisis (Merck), asam askorbat (Merck), reagen  Folin-Ciocalteu  (Merck),  Na 2 CO 3 (TK),  asam  galat  (Sigma-Aldrich),
kuersetin (Sigma-Aldrich), asam metaphosphoric (Merck), 2,6-
diklorofenolindofenol  (DCIP)  (Merck),
AlCl 3 (Merck),  Mg  (Merck),  HCl (Merck),  FeCl 3 (Merck),  DPPH  (Sigma- Aldrich),  pereaksi  Dragendroff  dan Bourchardat, n -heksana  (J.T.  Baker),
H 2 SO 4 (SmartLab),  NaOH  (Merck)  dan Etanol  (SmartLab).  Instrumen  analisis menggunakan  spektrofotometer  UV/Vis (Perkin  Elmer  Precisely),  FT-IR  (IR Prestige-21 Shimadzu).
Ektraksi daun katuk dilakukan dengan teknik  maserasi  dengan  pelarut  metanol. Kombinasi  antara  ekstrak  daun  katuk dengan  madu  yang  digunakan  memiliki perbandingan  1:1;  2:1;  dan  1:2  (b/b). Kombinasi  ekstrak  daun  katuk  dengan madu  kaliandra  diberi  kode  DKMK,
sedangkan kombinasi ekstrak daun katuk dengan  madu  rambutan  diberi  kode (DKMR).
Karakterisasi kombinasi ekstrak daun katuk dengan madu meliputi uji fitokimia, total fenolik, total flavonoid, dan aktifitas antioksidan.  Uji  fitokimia  meliputi  uji alkaloid  (Robinson  1995) ,  flavonoid, tanin-fenolik,  terpenoid,  saponin-steroid, saponin,  dan  kuinon  (Harborne  1996). Kadar  total  fenolik  diuji  dengan  metode Folin-Ciocalteu  (Pontis  et  al.  2014),  kadar total flavonoid diuji dengan metode Dowd (Meda  et  al.  2005) ,  dan  kadar  vitamin  C diuji  dengan  spektrofotometer  UV-Vis (Ferreira  et  al.  2009).  Uji  Aktivitas Antioksidan  dengan  metode  DPPH (Molyneux  2004).  Alaisis  statistik dilakukan  uji  ANOVA  satu  arah  ( One Way ANOVA) untuk mengetahui perbedaan  rata-rata  antar  perlakuan dengan batas kepercayaan 95 % (α 0,05).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Skrining Fitokimia
Ektraksi daun katuk dilakukan dengan maserasi dengan pelarut metanol. Hasil uji skrining  fitokimia  pada  ekstrak  daun katuk  menunjukkan  bahwa  sampel  daun katuk (DK) positif mengandung senyawa flavonoid, tanin, saponin, kuinon, alkaloid dan  steroid  (Tabel  1).  Hasil  analisis  ini sesuai dengan penelitian Selvi dan Basker (2012)  yang  menyatakan  bahwa S.
androgynus (L.)  Merr.  mengandung senyawa  seperti  fenol,  flavonoid,  tanin, saponin dan alkaloid.
Kandungan fitokimia yang berpotensi digunakan  sebagai  obat-obatan  banyak ditemukan  pada  sampel  DK,  seperti kandungan steroid dan alkaloid. Selain itu juga  terdapat  kandungan  senyawa polifenol  seperti  flavonoid  dan  kuinon yang  berperan  sebagai  antioksidan. Senyawa  polifenol  cenderung  bersifat polar sehingga pada saat proses ekstraksi
dapat terlarut dengan baik dalam metanol (Robinson  1995).  Kandungan  flavonoid dari daun katuk ( Sauropus androgunus (L) Merr )  dalam  pelarut  metanol  Hal  yang sama  juga  telah  dianalisis  dengan Spektroftometri UV-Vis oleh Zuhra et al. (2008).  Senyawa  tersebut  memberikan serapan maksimum pada panjang gelombang  292  nm  yang  menunjukkan bahwa  flavonoid  termasuk  kelompok flavanon.
Tabel 1. Hasil Uji Skrining Fitokimia
Senyawa DK MK MR Standar Alkaloid + - - Endapan jingga - merah coklat Flavonoid + + - Warna merah, kuning dan jingga Tanin + + - Warna hijau, hitam Steroid + - - Warna biru atau hijau Triterpenoid - - - Warna merah atau ungu Saponin + + + Terbentuk busa Kuinon + + + Warna kuning, jingga, coklat Ket.:   DK (Daun Katuk); MK (Madu Kaliandra); MR (Madu Rambutan); (+) terdeteksi; (-) tidak terdeteksi Sementara  itu,  uji  kualitatif  pada sampel
madu Kaliandra (MK) menunjukkan adanya senyawa flavonoid, tanin, saponin dan kuinon.  Namun pada madu
rambutan (MR) hanya menunjukkan  hasil  positif  adanya  uji saponin  dan  kuinon  (Tabel  1).  Hal  ini diduga karena kandungan senyawa seperti flavonoid yang dimiliki oleh sampel MR lebih  sedikit  kadarnya  sehingga  tidak terdeteksi  pada  uji  kualitatif  dan terkonfirmasi
oleh pengujian kuantitatifnya (Tabel 2).

## Hasil Uji Kadar Fenolik, Flavonoid dan Vitamin C
Kadar  fenolik  seluruh  sampel  uji berkisar  antara  0,509-23,205  mg  GAE/g sampel,  flavonoid  sebesar  0,027-17,330 mg  QE/g  sampel  dan  vitamin  C  sebesar 15,917-101,705  mg  AA/g  sampel  (Tabel 2).  Kadar  fenolik  dan  vitamin  C  pada sampel DK yang diekstraksi menggunakan metanol menunjukkan nilai yang lebih tinggi dibandingkan penelitian sebelumnya  pada  ekstrak  etanol  daun katuk sebesar 11,5 mg GAE/g berat kering
(fenolik) dan 56,1 mg/100 g berat kering (vitamin  C)  (Maisuthisakul  et  al.  2008). Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pelarut metanol  yang  digunakan  pada  penelitian ini  lebih  efektif  dalam  melarutkan senyawa  fenolik  dan  vitamin  C  yang terdapat pada sampel DK karena metanol mampu  melarutkan  hampir  semua senyawa organik, baik yang bersifat polar maupun  non  polar  (Lin  et  al.  2009). Sampel  DK  juga  menunjukkan  kadar flavonoid  tertinggi  sebesar  17,330  mg QE/g sampel dan berbanding lurus dengan fenoliknya.  Besarnya  kadar  flavonoid
tersebut  menegaskan  bahwa  flavonoid termasuk  dalam  golongan  fenolik  dan merupakan  komponen  terbesar  dari senyawa fenol (Harborne 1996; Lugasi et al.  2003;  Tapas  et  al.  2008).  Tingginya kadar  flavonoid  pada  organ  daun  diduga juga  dipengaruhi  oleh  fungsi  senyawa tersebut  bagi  tumbuhan,  contohnya sebagai  pigmen  warna  (Winarsi  2007). Selain  itu  Perbedaan  total  fenolik  pada masing-masing  ekstrak  dipengaruhi  oleh jenis  pelarut  yang  digunakan  saat ekstraksi (Jang et al. 2007).
Tabel 2. Kadar Total Fenolik, Flavonoid, dan Vit C
No. Sampel Total Fenolik (mg GAE/g sampel ± SD) Total Flavonoid (mg QE/g sampel ± SD) Total Vitamin C (mg AA/g sampel ± SD) 1. DK 23,205 g ± 0,298 17,330 h ± 0,116 101,705 h ± 2,500 2. MK 1,504 a ± 0,110 0,302 a ± 0,020 31,750 c ± 2,500 3. MR 0,509 b ± 0,015 0,027 a ± 0,005 15,917 a ± 3,819 4. DKMK (1 : 1) 10,701 ef ± 0,794 5,574 d ± 0,097 39,625 d ± 1,250 5. DKMK (2 : 1) 11,061 f ± 0,592 8,322 f ± 0,136 64,250 g ± 2,500 6. DKMK (1 : 2) 4,843 c ± 0,162 2,674 b ± 0,151 24,208 b ± 0,722 7. DKMR (1 : 1) 8,009 d ± 0,233 6,103 e ± 0,315 49,625 ef ± 3,307 8. DKMR (2 : 1) 10,052 e ± 0,646 8,775 g ± 0,293 50,458 f ± 3,608 9. DKMR (1 : 2) 4,884 c ± 0,117 3,582 c ± 0,043 45,042 e ± 3,146 Total 8,3076 ± 6,536 5,854 ± 5,114 46,954 ± 24,345
Ket:  Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji lanjut DMRT 5% taraf signifikan 95% (P<0,05); DK (Daun Katuk); MK (Madu Kaliandra); MR (Madu Rambutan); DKMK (Daun Katuk : Madu Kaliandra); DKMR (Daun Katuk : Madu Rambutan)
Hasil  analisis  kadar  fenolik  pada sampel  MK  (1,504  mg  GAE/g  sampel) dan  MR  (0,509  mg  GAE/g  sampel)  jika dibandingkan
dengan
penelitian sebelumnya  menunjukkan  kadar  yang berbeda  yakni  1,136  mg  GAE/g  pada
madu  kelengkeng  dan  1,375  mg  GAE/g pada madu randu (Ratnayani et al. 2012). Rendahnya  kadar  fenolik  pada  madu komersil  karena  madu  ini  telah  melalui serangkaian  proses  seperti  filtrasi, sentrifugasi  dan  pemanasan  (Rahmawati
2014).  Proses  tersebut  diduga  dapat menyebabkan  penurunan  terhadap  kadar fenoliknya,  karena  madu  memiliki  sifat yang  mampu  menghantarkan  panas  dan mudah mengalami overheating (kelebihan panas). Sifat madu yang demikian diduga dapat  menyebabkan  kerusakan  terhadap senyawa  antioksidan  yang  tidak  tahan terhadap kondisi panas (Zarei et al. 2019).
Sampel tunggal madu memiliki kadar fenolik, flavonoid dan vitamin C terendah. Namun,  ketika  dikombinasikan  dengan DK  kadar  senyawa-senyawa  menjadi lebih besar dibandingkan kontrolnya (MK dan  MR),  terutama  pada  perlakuan DKMK  (2  :1)  dan  DKMR  (2  :1)  yang mengalami  kenaikan  sampai  2  kali  lebih tinggi. Kenaikan kadar fenolik, flavonoid, dan  vitamin  C  pada  saat  perlakuan kombinasi  diduga  didominasi  oleh pengaruh  keberadaan  sampel  daun  katuk (DK),  yang  dalam  pengujian  sampel tunggal  memiliki  kadar  yang  tinggi. Dugaan  ini  diperkuat  dengan  kadar fenolik,  flavonoid,  dan  vitamin  C  pada kombinasi daun katuk : madu (1 : 2) lebih kecil dibandingkan daun katuk : madu (2 :
1).  Kadar  senyawa  antioksidan  yang tertinggi dimiliki oleh sampel DKMK (2 : 1)  dan  DKMR  (2  :  1)  dengan perbandingan  daun  katuk  yang  lebih besar, sehingga sampel daun diduga lebih berperan meredam radikal bebas. Ordoudi et  al.  (2006)  menyatakan  bahwa  struktur
kimia senyawa antioksidan, seperti jumlah dan  posisi  gugus  OH  serta  karakteristik rantai  samping  menentukan  kinerja senyawa tersebut sebagai antioksidan.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Aktivitas antioksidan tertinggi terdapat  pada  sampel  DK  dengan  nilai IC 50 sebesar  114,240  mg/l  (Tabel  3).
Tingginya  aktivitas  antioksidan  pada sampel  tersebut  diduga  berhubungan dengan  senyawa  kimia  fenol,  flavonoid, dan  vitamin  C  yang  terkandung  dalam sampel (Gambar 1).
Tabel 3. Aktivitas Antioksidan Sampel Uji dengan Pembanding Asam Askorbat
No. Sampel Nilai Rata-rata IC 50 (mg/l) ± SD 1. DK 114,213 ± 5,639 2. MK 2014,164* 3. MR 20.727,500* 4. DKMK (1 : 1) 490,036 ± 4,745 5. DKMK (2 : 1) 410,800 ± 3,818 6. DKMK (1 : 2) 789,473 ± 11,193 7. DKMR (1 : 1) 437,629 ± 10,402 8. DKMR (2 : 1) 378,163 ± 3,665 9. DKMR (1 : 2) 661,077 ± 1,695 10. Asam Askorbat (kontrol positif) 3,895 ± 0,231
Ket:  DK  (Daun  Katuk);  MK  (Madu  Kaliandra); MR  (Madu  Rambutan);  DKMK  (Daun  Katuk  : Madu  Kaliandra);  DKMR  (Daun  Katuk  :  Madu Rambutan); * (Hasil 1x Pengukuran)
Hasil  tersebut  mengindikasikan  bahwa semakin tinggi kadar senyawa antioksidan yang  terkandung  dalam  sampel  maka kemampuan  mereduksinya  juga  akan semakin meningkat.
Kemampuan mereduksi  suatu  senyawa  antioksidan berhubungan dengan kemampuan
senyawa  tersebut  untuk  melepaskan elektron, sehingga dapat dikatakan bahwa kemampuan mereduksi merupakan
indikator yang potensial untuk menyatakan  aktivitas  antioksidan  pada sampel uji.
Gambar 1. Grafik Kadar Senyawa Fenolik, Flavonoid dan Vitamin C Sampel Uji
Asam askorbat yang digunakan dalam pengujian aktivitas antioksidan berfungsi sebagai  kontrol  positif.  Tujuannya  untuk mengetahui  seberapa  kuat  potensi antioksidan yang terdapat pada sampel uji jika dibandingkan dengan asam askorbat. Hasil  perhitungan  menunjukkan  bahwa nilai  IC 50 sampel  DK  masih  lebih  tinggi jika  dibandingkan  dengan  asam  askorbat sebesar  3,895  mg/l  (antioksidan  kuat). Akan tetapi, aktivitas antioksidan sampel DK  diketahui  tergolong  sedang  karena dapat  memberikan  persen  penghambatan terhadap radikal bebas berkisar antara 50- 80%  (Sandrasari,  2009).  Berdasarkan hasil  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa sampel  DK  masih  berpotensi  sebagai salah  satu  alternatif  antioksidan  dengan kategori sedang karena dapat memberikan
persen  penghambatan  sebesar  54,918% pada konsentrasi 128 ppm.
Nilai IC 50 sampel DK juga menunjukkan  hasil  yang  lebih  rendah dibandingkan penelitian sebelumnya pada ekstrak  metanol  daun  katuk  dengan  nilai IC 50 sebesar 145 µg/ml (Murti, Abidin, &
Yusof, 2013).  Namun, dari segi aktivitas antioksidan  keduanya  masih  tergolong sedang  karena  nilai  IC 50 berkisar  antara 101-250  ppm  (Jun  et  al.,  2003).  Hal  ini menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan daun katuk yang berasal dari Bogor setara dengan  kualitas  daun  katuk  yang  berasal dari  Malaysia  karena  memiliki  nilai  IC 50 yang tidak jauh berbeda.
Sampel  MR  diketahui  memiliki  nilai IC 50 lebih tinggi dibandingkan MK, yakni 20727,500 mg/l. Akan tetapi,  saat sampel MR  dikombinasikan  dengan  DK  yang
jumlahnya  2  kali  lebih  banyak,  aktivitas antioksidannya menjadi meningkat sebesar 98% dibandingkan kontrol (MR). Sementara  itu,  sampel  DKMK  (2:1) menunjukkan  peningkatan  yang  lebih rendah  dibandingkan  DKMR  (2:1)  yaitu sebesar 79%, namun aktivitas antioksidan keduanya  masih  dalam  kategori  lemah. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  adanya perlakuan  kombinasi  dianggap  penting sebagai  upaya  peningkatan  aktivitas antioksidan pada madu, karena madu yang digunakan  merupakan  madu  komersil yang  telah  melalui  serangkaian  proses seperti  filtrasi,  sentrifugasi  serta  proses pemanasan  (Rahmawati,  2014).  Proses pemanasan  ini  diduga  menyebabkan kandungan  senyawa  yang  berperan sebagai antioksidan menjadi rusak karena senyawa  antioksidan  seperti  fenol  tidak tahan  terhadap  proses  pemanasan. Menurut  (Tranggono,  1990),  hampir semua senyawa fenol mengalami kerusakan  akibat  suhu  pemanasan  87⁰C selama 4 menit.
Aktivitas antioksidan seluruh sampel juga diuji korelasinya terhadap kadar total fenolik dan vitamin C. Berdasarkan hasil yang  diperoleh  diketahui  bahwa  terdapat
korelasi  yang  sedang  antara  kedua senyawa  tersebut  dengan  aktivitas antioksidan.  Hal  tersebut  berdasarkan nilai  koefisien  korelasi  sebesar  -0,480 (P<0,05)  untuk  kadar  fenolik  sedangkan untuk  kadar  vitamin  C  nilai  koefisien korelasinya sebesar -0,500 (P<0,01). Hal ini  menunjukkan  bahwa  50%  kapasitas antioksidan  pada  sampel  uji  dipengaruhi oleh  adanya  senyawa  vitamin  C sedangkan  senyawa  fenolik  berpengaruh sebesar 48%. Kemungkinan besar variabel lainnya yang juga berkontribusi terhadap aktivitas antioksidan berasal dari senyawa seperti tanin, tokoferol, beta karoten, dan asam-asam  organik  yang  diketahui terkandung dalam sampel DK dan madu.

## KESIMPULAN
Perlakuan kombinasi dengan penambahan  komposisi  daun  katuk  yang lebih banyak dapat berpengaruh terhadap peningkatan  kadar  senyawa  fenolik, flavonoid,  vitamin  C,  dan  aktivitas antioksidannya.  Kadar  fenolik  dan vitamin  C  memiliki  hubungan  yang moderat dengan aktivitas antioksidan dari sampel uji dengan nilai koefisien korelasi masing-masing -0,480 dan -0,500.

## DAFTAR RUJUKAN
Ahmed, S., Sulaiman, S. A., Baig, A. A.,
Ibrahim, M., Liaqat, S., Fatima, S., … Othman,  N.  H.  (2018).  Honey  as  a Potential Natural Antioxidant
Medicine:  An  Insight  into  Its Molecular  Mechanisms  of  Action.
Oxidative  Medicine  and  Cellular
Longevity , 2018 .
https://doi.org/10.1155/2018/836784
6
Alisi,  C.  S.,  Ojiako,  O.  A.,  Igwe,  C.  U.,
Ujowundu,  C.  O.,  Anugweje,  K.,  & Okwu,  G.  N.  (2012).  Antioxidant Content and Free Radical Scavenging Activity of Honeys of Apis mellifera of Obudu Cattle Ranch. International Journal  of  Biochemistry  Research  &
Review , 2 (4), 164–175. https://doi.org/10.9734/ijbcrr/2012/1
581
Alvarez-Suarez, J. M., Tulipani, S., Díaz,
D.,  Estevez,  Y.,  Romandini,  S., Giampieri, F., … Battino, M. (2010). Antioxidant and
antimicrobial capacity of several monofloral Cuban honeys  and  their  correlation  with color,  polyphenol  content  and  other chemical  compounds. Food  and Chemical Toxicology , 48 (8–9), 2490–
2499.
https://doi.org/10.1016/j.fct.2010.06.
021
Andarwulan, N., Batari, R., Sandrasari, D. A., Bolling, B., & Wijaya, H. (2010). Flavonoid  content  and  antioxidant activity of vegetables from Indonesia.
Food Chemistry , 121 (4), 1231–1235. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2
010.01.033
Ferreira, I. C. F. R., Aires, E., Barreira, J.
C.  M.,  &  Estevinho,  L.  M.  (2009). Antioxidant  activity  of  Portuguese honey samples:
Different contributions of the entire honey and phenolic  extract. Food  Chemistry ,
114 (4),
1438–1443.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2
008.11.028
Harborne, J. B. (1996). Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan . Bandung: Institut Teknologi Bandung. Jang, H. Der, Chang, K. S., Huang, Y. S., Hsu,  C.  L.,  Lee,  S.  H.,  &  Su,  M.  S. (2007). Principal phenolic phytochemicals and antioxidant
activities  of  three  Chinese  medicinal plants. Food Chemistry , 103 (3), 749–
756.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2
006.09.026
Jun,  M.,  Fu,  H.  Y.,  Hong,  J.,  Wan,  X., Yang,  C.  S.,  &  Ho,  C.  T.  (2003). Comparison  of  antioxidant  activities of  isoflavones  from  kudzu  root (Pueraria  lobata  Ohwi). Journal  of Food  Science , 68 (6),  2117–2122. https://doi.org/10.1111/j.1365-
2621.2003.tb07029.x
Küçük,  M.,  Kolayli,  S.,  Karaoǧlu,  Ş., Ulusoy, E., Baltaci, C., & Candan, F.
(2007).  Biological  activities  and
chemical composition of three honeys of different types from Anatolia. Food
Chemistry , 100 (2),
526–534. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2
005.10.010
Kustiawan, P. M., Puthong, S., Arung, E.
T.,  &  Chanchao,  C.  (2014).  In  vitro cytotoxicity  of  Indonesian  stingless bee  products  against  human  cancer cell  lines. Asian  Pacific  Journal  of Tropical Biomedicine , 4 (7), 549–556.
https://doi.org/10.12980/APJTB.4.20 14APJTB-2013-0039
Legg,  T.  J.  (2017).  Everything  You Should Know About Oxidative Stress.
Retrieved  April  14,  2020,  from Healtline website: https://www.healthline.com/health/ox idative-stress
Lin,  H.  Y.,  Kuo,  Y.  H.,  Lin,  Y.  L.,  &
Chiang,  W.  (2009).  Antioxidative effect  and  active  components  from leaves  of  lotus  (Nelumbo  nucifera).
Journal  of  Agricultural  and  Food Chemistry , 57 (15), 6623–6629. https://doi.org/10.1021/jf900950z
Lugasi, A., Hóvári, J., Sági, K. V., & Bíró,
L.  (2003).  The  role  of  antioxidant phytonutrients  in  the  prevention  of diseases. Acta Biologica Szegediensis ,
47 (1–4), 119–125.
Maisuthisakul,  P.,  Pasuk,  S.,  & Ritthiruangdej, P.
(2008).
Relationship  between  antioxidant
properties  and  chemical  composition of some Thai plants. Journal of Food Composition  and  Analysis , 21 (3),
229–240.
https://doi.org/10.1016/j.jfca.2007.11 .005
Meda,  A.,  Lamien,  C.  E.,  Romito,  M.,
Millogo,  J.,  &  Nacoulma,  O.  G.
(2005).  Determination  of  the  total phenolic,  flavonoid  and  proline contents  in  Burkina  Fasan  honey,  as well  as  their  radical  scavenging activity. Food Chemistry , 91 (3), 571– 577.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2 004.10.006
Molan,  P.  C.,  &  Betts,  J.  A.  (2004).
Clinical  usage  of  honey  as  a  wound dressing:  an  update. Journal  of Wound  Care , 13 (9),  353–356.
https://doi.org/10.12968/jowc.2004.1 3.9.26708
Molyneux,  P.  (2004).  The  Use  of  the Stable  Free  Radical  Diphenylpicryl- hydrazyl  (DPPH)  for  Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin Journal  of  Science  and  Technology ,
26 (December 2003), 211–219.
https://doi.org/10.1287/isre.6.2.144
Murti,  S.,  Abidin,  N.  Z.,  &  Yusof,  A.
(2013). Antioxidant activity in crude petroleum benzene, chloroform, methanol  and  water  extracts  of  six selected vegetables. Sains
Malaysiana , 42 (9), 1253–1259.
Ordoudi, S. A., Tsimidou, M. Z., Vafiadis,
A.  P.,  &  Bakalbassis,  E.  G.  (2006). Structure-DPPH• scavenging activity relationships:  Parallel  study  of
catechol and guaiacol acid derivatives. Journal  of  Agricultural and  Food  Chemistry , 54 (16),  5763–
5768.
https://doi.org/10.1021/jf060132x
Pérez-pérez, E., Vit, P., & Huq, F. (2013).
Flavonoids and polyphenols in studies of honey antioxidant activity.
International  Journal  of  Medicinal Plant and Alternative Medicine , 1 (4),
63–72.
Pontis,  J.  A.,  da  Costa,  L.  A.  M.  A.,  da
Silva,  S.  J.  R.,  &  Flach,  A.  (2014). Color,  phenolic  and  flavonoid content,  and  antioxidant  activity  of honey  from  Roraima,  Brazil. Food Science  and  Technology , 34 (1),  69–
73. https://doi.org/10.1590/S0101-
20612014005000015
Pratiwi,  I.,  &  Wiadnyani,  S.  A.  (2018).
Minuman  Ready  To  Serve  Dari
Ekstrak  Daun  Cem-Cem  Dan  Daun Katuk ( Sauropus androgunus ( L )). Scientific Journal of Food Technology , 5 (1), 19–26.
Rahmawati,  F.  (2014). Potensi  Madu Randu  dan  madu  Kelengkeng  dari Apis  mellifera  L.  Produksi  Madu Pramuka  sebagai  Pengawet  Alami
Ikan  Bandeng .  Universitas  Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Ratnayani, K., Mayun Laksmiwati, A., &
Indah  Septian  P.,  N.  (2012).  Kadar Total  Senyawa  Fenolat  Pada  Madu Randu  Dan  Madu  Kelengkeng  Serta Uji  Aktivitas  Antiradikal  Bebas Dengan Metode DPPH (Difenilpikril Hidrazil). Jurnal  Kimia , 6 (2),  163–
168.
Robinson, T. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi (6th ed.). Bandung:
Institut Teknologi Bandung.
Rudiana, T., Fitriyanti, F., & Adawiah, A.
(2018).  Aktivitas  Antioksidan  dari Batang Gandaria (Bouea macrophylla Griff). EduChemia  (Jurnal  Kimia Dan Pendidikan) , 3 (2), 195.
https://doi.org/10.30870/educhemia.v 3i2.3328
Sa’roni,  Sadjimin,  T.,  Sja’bani,  M.,  & Zulaela.  (2004).  Effectiveness  of  the Sauropus Androgynus (l.) Merr Leaf Extract in Increasing Mother’s Breast Milk  Production. Media  Litbang Kesehatan , 14 (3), 20–24.
Sandrasari,  D.  A.  (2009). Kapasitas
Antioksidan dan Hubungannya Dengan  Nilai  Total  Fenol  Ekstrak Sayuran Indigenous . Institut
Pertanian Bogor.
Selvi,  S.,  &  Basker,  A.  (2012).
Phytochemical  analysis  and  GC-MS profiling  in  the  leaves  of  Sauropus
androgynus  (l)  MERR. International Journal  of  Drug  Development  and Research , 4 (1), 162–167.
Tapas,  A.,  Sakarkar,  D.,  &  Kakde,  R.
(2008). Flavonoids as Nutraceuticals:
A  Review. Tropical  Journal  of Pharmaceutical Research , 7 (3),
1089–1099. https://doi.org/10.4314/tjpr.v7i3.1469
3
Tranggono.  (1990). Bahan  Tambahan Pangan (Food Additive) . Yogyakarta:
UGM Press.
Winarsi,  H.  (2007). Antioksidan  Alami
dan  Radikal  Bebas .  Yogyakarta:
Kanisius.
Zarei,  M.,  Fazlara,  A.,  &  Tulabifard,  N.
(2019). Effect of thermal treatment on physicochemical  and  antioxidant properties  of  honey. Heliyon , 5 (6), e01894.
https://doi.org/10.1016/j.heliyon.201
9.e01894
Zuhra, C. F., Tarigan, J. B., & Sihotang,
H.  (2008).  Aktivitas  Antioksidan Senyawa Flavonoid DAri Daun Katuk (Sauropus  androgunus  (L)  Merr.). Jurnal Biologi Sumatra , 3 (1), 7–10.