## Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan
EFEK ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN BROKOLI ( Brassica oleracea var. italica ) TERHADAP PERTUMBUHAN Propionibacterium acnes SECARA IN VITRO ( ANTIBACTERIAL EFFECT OF ETHANOL EXTRACTS OF BROCCOLI LEAVES (Brassica oleracea var. italica) AGAINST Propionibacterium acnes IN VITRO )
Sayu Putu Yuni Paryati 1 , Henny Juliastuti 2 , Dandi Fery Gunawan 1
1 Bagian Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
2 Bagian Biokimia, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia

## Email Korespondensi: yunisayu@yahoo.com

## ABSTRAK
Akne  vulgaris  merupakan  penyakit  inflamasi  pada  kulit  yang  pernah  diderita  oleh  80  – 100%  orang  di  dunia.  Akne  vulgaris  dapat  timbul  karena  adanya  peradangan  oleh  bakteri Propionibacterium  acnes .  Bahan  alam  yang  bersifat  sebagai  antibakteri  salah  satunya adalah  daun  brokoli  ( Brassica  oleracea  var.  italica ).  Daun  brokoli  mengandung  sejumlah senyawa  aktif  berupa  flavonoid,  saponin,  alkaloid,  dan  steroid.  Tujuan  dari  penelitian  ini untuk  membuktikan  efek  antibakteri  ekstrak  etanol  daun  brokoli  ( B.  oleracea  var.  italica ) terhadap  pertumbuhan P.  acnes secara in  vitro .  Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental laboratorik. Objek penelitian berupa bakteri P. acnes ATCC 11827 dan daun brokoli  yang  dibuat  menjadi  ekstrak  etanol  daun  brokoli  dengan  konsentrasi  10%,  30%, 50%, 70%, 90%, dan 100%. Kontrol positif pada penelitian ini menggunakan klindamisin 10 µg/disk dan DMSO  4%  sebagai  kontrol  negatif.  Berdasarkan  rumus  Federer  pengulangan uji untuk setiap konsentrasi dan kontrol dilakukan sebanyak 4 kali. Uji aktivitas antibakteri dilakukan  dengan  metode  difusi  sumuran.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  daun  brokoli  tidak  menghasilkan  daya  hambat  pada  seluruh  konsentrasi  dan sebanding  dengan  kontrol  negatif  yaitu  0  mm.  Faktor  yang  memengaruhi  hasil  uji  pada penelitian ini dapat berupa faktor dari ekstrak, yaitu suhu dan waktu penyimpanan, paparan cahaya, dan kadar senyawa aktif pada ekstrak. Kepekaan bakteri P. acnes terhadap ekstrak etanol daun brokoli juga dapat memengaruhi hasil penelitian. Faktor lainnya adalah faktor teknis  berupa  jumlah  bakteri  yang  diinokulasikan,  pemilihan  media,  dan antibiotic carryover .  Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun brokoli tidak memiliki efek antibakteri terhadap pertumbuhan P. acnes secara in vitro .
Kata Kunci : antibakteri, daun brokoli, daya hambat, propionibacterium acnes
DOI DOI

## ARTIKEL PENELITIAN

## ABSTRACT
Acne  vulgaris  is  an  inflammatory  disease  of  the  skin  that  affects  80-100%  people  in  the world.  Acne  vulgaris  occur  because  of  inflammation  by  the  Propionibacterium  acnes. Broccoli leaves (Brassica oleracea var. Italica) have an antibacterial effect. Compounds that have antibacterial  effect  are  flavonoid,  saponin,  alkaloid,  and  steroid.  This  study  aims  to prove the antibacterial effect of ethanol extract of broccoli leaves against in vitro growth of P.  acnes.  This  study  was  a  laboratory  experimental.  Objects  of  this  study  were  P.  acnes ATCC 11827 and ethanol extract of broccoli leaves with concentrations of 10%, 30%, 50%, 70%,  90%,  and  100%.  The  positive  control  in  this  study  was  clindamycin  10  µg/disc  and DMSO  4%  as  negative  control.  Determination  of  sample  repetitions  based  on  Federer's formula is  4 times.  Antibacterial  activity test was measured by well diffusion  method.  The results showed the ethanol extract of broccoli leaves doesn’t have inhibitory power for all concentrations and it was comparable to the negative control of 0 mm. Factors that affect the  results  in  this  study  could  be  from  temperature  and  storage  time,  light  exposure,  and levels  of  active  compounds  in  extracts. The sensitivity of P. acnes to the ethanol extract of broccoli leaves could affect the results. The other  factor  are  technical  factors  such  as  the number  of  bacteria  inoculated,  media  selection,  and  antibiotic  carryover.  Based  on  the results of this study, it can be concluded that the ethanol extract of broccoli leaves doesn’t have an in vitro antibacterial effect on P. acnes growth.
Keywords: antibacterial, broccoli leaves, inhibition, propionibacterium acnes

## PENDAHULUAN
Akne  vulgaris  adalah  peradangan kronik  folikel  sebasea  yang  ditandai dengan  adanya  lesi  polimorfik  berupa komedo,  papul,  pustul,  nodul,  atau  kista di  daerah  predileksi.  Akne  vulgaris termasuk  penyakit  kulit  yang  pernah diderita  oleh  80  –  100%  orang  di  dunia. Akne  vulgaris  umumnya  mulai  diderita oleh  remaja  yang  memasuki  masa pubertas (12 – 15 tahun) dan usia 17 – 21 tahun merupakan puncak tingkat keparahan  dari  akne  vulgaris.  Sekitar 85%  orang  dewasa  di  dunia  mengalami akne  vulgaris  dengan  gambaran  klinis bervariasi. 1,2 Akne  vulgaris  merupakan penyakit  yang dapat  sembuh sendiri ( self
limited disease ), namun dapat menimbulkan  efek  psikis,  seperti  cemas, depresi,  dan  menurunnya  kepercayaan diri  bagi  beberapa  penderitanya.  Akne vulgaris  dapat  timbul  melalui  empat etiopategonesesis,  yaitu  meningkatnya produksi  sebum,  hiperkornifikasi  duktus pilosebasea, proses inflamasi, dan kolonisasi Propionibacterium acnes .
Propionibacterium acnes mampu menghasilkan enzim lipase yang memecah trigliserida pada sebum menjadi  asam  lemak  bebas.  Asam  lemak bebas  dapat  menyebabkan  iritasi  dan reaksi  inflamasi  yang  menimbulkan  akne vulgaris. 1,3
Antibiotik  merupakan  salah  satu
obat yang digunakan pada terapi kombinasi  akne  vulgaris.  Antibiotik  lini pertama yang digunakan pada terapi akne vulgaris  adalah  klindamisin.  Penggunaan antibiotik jangka panjang dapat menimbulkan resistensi. Berdasarkan studi  yang  dilakukan  oleh  Rumah  Sakit Hasan Sadikin (RSHS) Bandung menyatakan  sebanyak  50%  strain P.
acnes telah  resisten  terutama  terhadap golongan  makrolida  dengan  persentase resistensi  terbesar  terhadap  klindamisin, yaitu  sebesar  63,1%.  Untuk  menghindari perkembangan resistensi tersebut diperlukan pengembangan suatu senyawa antibakteri  yang  berasal  dari  bahan alam. 1,4 Bahan  alam  yang  memiliki  efek antibakteri  adalah  brokoli  ( Brassica oleracea  var.  italica) .  Brokoli  terbukti memiliki efek antibakteri terhadap
Staphylococcus  aureus,  Streptococcus pyogenes,  Bacillus  subtilis,  Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, dan Pseudomonas aeruginosa. 5 Brokoli mengandung senyawa aktif berupa flavonoid,  tanin,  alkaloid,  saponin,  dan steroid yang bersifat sebagai antibakteri. 6
Pada  penelitian  ini  bagian  yang terfokus  diuji  sebagai  antibakteri  adalah daun  brokoli  karena  brokoli  merupakan tanaman  yang  sering  dimanfaatkan, namun hanya bunga yang biasa dimanfaatkan  dan  hanya  mewakili  30%
dari keseluruhan tanaman brokoli. 7
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan oleh  Liu  M et  al (2018)  membuktikan bahwa  senyawa  fenolik  total  yang terkandung  pada  daun  1,6  kali  lebih tinggi  dibandingkan  bunga  dan  2,9  kali lebih  tinggi  dibandingkan  batang.  Selain itu  berdasarkan  penelitian  Chandekar (2018),  daun  brokoli  terbukti  memiliki efek antibakteri dan mampu menghambat pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa . 8,9 Sehingga  dari  beberapa penelitian tersebut, daun brokoli memiliki potensi  sebagai  antibakteri  terhadap P. acnes .  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk  membuktikan  efek  antibakteri ekstrak  etanol  daun  brokoli  ( Brassica oleracea var. italica ) terhadap pertumbuhan P. acnes secara in vitro.

## BAHAN DAN METODE

## Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  laboratorik  dengan  desain post test only group design yang meneliti efek  antibakteri  ekstrak  etanol  daun brokoli  pada  konsentrasi  10%,  30%, 50%,  70%,  90%,  dan  100%  terhadap pertumbuhan P.  acnes secara in  vitro. Setiap konsentrasi duji dengan pengulangan  sebanyak  4  kali.  Bakteri  uji pada penelitian ini adalah P. acnes ATCC 11827. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani  dimulai  dari  bulan  September  2020 sampai  bulan  Desember  2020  dan  telah disetujui  oleh  Komisi  Etik  Penelitian Kesehatan  (KEPK)  Fakultas  Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani dengan Nomor Etik 014/UH1.10/2020.

## Alat dan Bahan
Pada penelitian ini digunakan alat- alat berupa maserator, rotary evavorator , gelas  objek,  neraca  digital,  cawan  petri, batang  pengaduk,  tabung  reaksi,  stiker label,  inkubator,  oven,  autoklaf,  swab steril, perforator, mikropipet, spektrofotometer, dan jangka sorong.
Pada  penelitian  ini  digunakan bahan-  bahan  yang  terdiri  dari  daun brokoli, etanol 70%, etanol 96%, klindamisin  10  µg/disk,  media  agar darah,  larutan  NaCl  fisiologis  0,9%,
Dimetil  sulfoxide (DMSO)  4%,  akuades, gentian  violet,  lugol,  larutan  safranin, Mueller  hinton  agar, dan  uji  biokimia bakteri set.
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun Brokoli
Ekstrak etanol daun brokoli dibuat di  Laboratorium  Farmasi  dan  Bahan
Alam Institut Teknologi Bandung.
Pembuatan ekstrak menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol 96%. Sebanyak 3 kg daun brokoli bersih dipotong-potong  kemudian  dikeringkan
dan dijadikan simplisia kemudian direndam  menggunakan  etanol  96%. Filtrat  dari  proses  maserasi  disaring kemudian diuapkan dengan rotary evavorator pada  suhu  60°C  sehingga diperoleh  ekstrak  yang  kental  sebanyak 45 gram. 6,10
Uji  Fitokimia  Kualitatif  Ekstrak Etanol Daun Brokoli
Uji  fitokimia  kualitatif  dilakukan Laboratorium  Farmasi  dan  Bahan  Alam Institut Teknologi Bandung untuk mengetahui secara spesifik dan mengonfirmasi kandungan senyawa aktif  dalam  daun  brokoli.  Pengujian fitokimia  yang  dilakukan,  yaitu  uji alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin,  dan steroid. 6

## Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Brokoli
Ekstrak etanol daun brokoli (konsentrasi 100%)  yang telah terbentuk dibuat  menjadi  beberapa  konsentrasi. Konsentrasi  10%  diperoleh  dengan mencampurkan  50  miligram  ekstrak etanol  brokoli  dengan  450  µl  DMSO. Konsentrasi  30%  diperoleh  dengan mencampurkan  150  miligram  ekstrak etanol  daun  brokoli  dengan  350  µl DMSO.  Konsentrasi  50%  diperoleh dengan  menambahkan  250  miligram ekstrak  etanol  daun  brokoli  dengan  250
µl  DMSO.  Konsentrasi  70%  diperoleh dengan  menambahkan  350  miligram ekstrak  etanol  daun  brokoli  dengan  150 µl  DMSO.  Konsentrasi  90%  diperoleh dengan  menambahkan  450  miligram ekstrak etanol daun brokoli dengan 50 µl DMSO. 10

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan di  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran  Unjani.  Pada  penelitian  ini digunakan  metode  difusi  sumuran  pada media Mueller  Hinton  Agar .  Suspensi bakteri P.  acnes yang  telah  disesuaikan dengan kekeruhan standar McFarland 0,5 (1,5x108  CFU/ml)  diinokulasikan  pada permukaan  media  menggunakan  swab steril.  Selanjutnya  dibuat  sumuran  pada media menggunakan perforator berdiameter  6  mm.  Sebanyak  50  μl ekstrak  etanol  daun  brokoli  dengan konsentrasi  10%,  30%,  50%,  70%,  90%, dan 100% dimasukkan ke dalam masing- masing sumuran untuk kelompok
perlakuan. Klindamisin 10 µg/disk digunakan  sebagai  kontrol  positif  dan DMSO  4%  digunakan  sebagai  kontrol negatif.  Media  uji  kemudian  diinkubasi selama 1x24 jam pada suhu 37°C dengan kadar  CO 2 sebesar  7,5%.  Jangka  sorong digunakan  untuk  mengukur  zona  hambat yang  terbentuk  di  sekitar  sumuran sebanyak  tiga  kali  lalu  diambil  rata-rata
dari  ketiga  pengukuran  tersebut.  Data dari  hasil  pengukuran  daya  hambat kemudian  dianalisis  secara  deskriptif  dan secara  statistik  dengan  program  SPSS versi 23.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kandungan Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Brokoli
Secara  kualitatif,  ekstrak  etanol daun  brokoli  mengandung  senyawa flavonoid, alkaloid, saponin, dan steroid. Hasil  uji  tersebut  berbeda  dengan  hasil pengujian  oleh Heimler at al (2006) dan Lutfiyati et al (2017) yang membuktikan bahwa  pada  brokoli  terdapat  senyawa tanin.  Perbedaan  tersebut  terjadi  karena bagian  tanaman  yang  diuji  berbeda. 6,11
Menurut  Lestari et  al (2018)  perbedaan senyawa aktif pada satu bagian tanaman  dengan  bagian  yang  lainnya dipengaruhi oleh proses sintesis senyawa yang berbeda sehingga komposisi kandungan kimianya menjadi berbeda. 12
Efek  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Brokoli  terhadap  Pertumbuhan Propionibacterium acnes
Pada penelitian ini telah dilakukan dua kali uji pendahuluan. Uji pendahuluan pertama menggunakan konsentrasi  10%  hingga  100%  dan didapatkan  hasil  pada  konsentrasi  10% terdapat  daya  hambat  dengan  rata-rata
sebesar  7,89  mm  (Gambar  1a).  Pada konsentrasi  30%  hingga  100%  tidak ditemukan  adanya  daya  hambat  yang kemungkinan disebabkan oleh konsistensi  ekstrak  yang  terlalu  pekat sehingga  ekstrak  tidak  dapat  berdifusi dengan  efektif  pada  media  agar. 13 Pada uji  pendahuluan  yang  kedua  digunakan
variasi  konsentrasi  yang  baru,  yaitu  5%, 10%,  15%,  20%,  dan  30%.  Dari  uji pendahuluan  kedua  diperoleh  daya hambat  sebesar  9  mm,  10,5  mm,  7,45 mm,  dan  7,20  mm  secara  berturut-turut pada  konsentrasi  5%,  10%,  15%,  dan 20%,  sedangkan  konsentrasi  30%  tidak menghasilkan daya hambat (Gambar 1).
Keterangan: Hasil uji pendahuluan pertama efek antibakteri ekstrak etanol daun brokoli konsentrasi 10% (a) kontrol positif pada uji pendahuluan pertama (b) Hasil uji pendahuluan kedua (c) Daya hambat konsentrasi 5% (d) Daya hambat konsentrasi 10% (e) Daya hambat konsentrasi 15% (f) Daya hambat konsentrasi 20% (g) Tidak ada daya hambat konsentrasi 30% (h) kontrol positif uji pendahuluan kedua (i).
Gambar 1 Hasil uji pendahuluan.
Dari  hasil  uji  pendahuluan  tersebut dilanjutkan dengan uji aktivitas
antibakterin menggunakan konsentrasi 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, dan 30%. Hasil uji  aktivitas  antibakteri  menggunakan konsentrasi  tersebut  diperoleh  hasil  tidak adanya daya hambat pada seluruh konsentrasi  yang  diujikan.  Perbedaan  hasil dengan  uji  pendahuluan  kemungkinan disebabkan  karena  senyawa  aktif  pada ekstrak tersebut telah mengalami degradasi  oleh  faktor  suhu  dan  waktu
penyimpanan, sehingga dilakukan pengujian  kembali  dengan  meningkatkan konsentrasi  ekstrak  menjadi  10%  hingga 100%  agar  kadar  senyawa  aktif  yang terkandung menjadi lebih banyak. 14,15 Hasil pengujian aktivitas antibakteri pada konsentrasi  10%  hingga  100%  didapatkan hasil  pada  seluruh  konsentrasi  ekstrak etanol  daun  brokoli  tidak  terbentuk  daya hambat    di    sekitar    sumuran (Gambar  2), demikian    pula    pada    konsentrasi    10% yang  dijadikan  sebagai  konsentrasi  acuan
a
b
d e i h f g
c
tidak  terdapat  daya  hambat.  Hal  tersebut terlihat  dari  daerah  sekitar  sumuran  tidak
berwarna bening.
Keterangan : konsentrasi 10% (a) konsentrasi 30% (b) konsentrasi 50% (c) konsentrasi 70%
(d) konsentrasi 90% (e) konsentrasi 100% (f) kontrol positif (g) kontrol negatif (h).
Gambar 2 Hasil pengujian efek antibakteri yang ketiga ekstrak etanol daun brokoli terhadap pertumbuhan P. acnes.
Tabel 1 Hasil pengukuran zona hambat terhadap P. Acnes Pengulangan Kontrol + (mm) Kontrol – (mm) Daya Hambat esktrak etanol daun  brokoli (mm) 10% 30% 50% 70% 90% 100% 1 22,2 0 0 0 0 0 0 0 2 24 0 0 0 0 0 0 0 3 22 0 0 0 0 0 0 0 4 22,45 0 0 0 0 0 0 0 Rata-Rata 22,66 0 0 0 0 0 0 0 Berdasarkan Tabel 1 dapat
diketahui  bahwa  ekstrak  etanol  daun brokoli  tidak  menghasilkan  zona  hambat
yang  menunjukkan      bahwa      ekstrak etanol  daun  brokoli      tidak      memiliki efek    antibakteri  terhadap P.  acnes dan
e f a d c b h g
sebanding dengan kontrol negatif (diameter zona hambat 0 mm). Klindamisin 10 µg/disk digunakan sebagai kontrol   positif   dan  menunjukkan adanya zona        hambat        dengan    rata-rata diameter  sebesar  22,66  mm  dan  termasuk kategori  sangat  kuat. 16 Pengujian  DMSO 4% sebagai kontrol negatif diperoleh hasil tidak  terbentuknya  zona  hambat  di  sekitar sumuran  yang  menandakan  DMSO  4% tidak memiliki efek antibakteri. Berdasarkan hasil pengujian tersebut dapat disimpulkan  secara  kualitatif  ekstrak etanol  daun  brokoli  tidak  memiliki  efek antibakteri  terhadap  pertumbuhan P. acnes .
Analisis  Efek  Anti  Bakteri  Ekstrak Etanol Daun Brokoli terhadap Pertumbuhan Propionibacterium acnes Secara  kualitatif,  ekstrak  etanol daun  brokoli  mengandung  senyawa  aktif berupa  flavonoid,  saponin,  alkaloid,  dan steroid. Berdasarkan penelitian oleh Zai et al (2019)  yang  menguji  efek  antibakteri ekstrak  etanol  daun  sirsak  terhadap bakteri P.  acnes membuktikan  bahwa kandungan flavonoid, saponin, tanin, dan steroid  pada  ekstrak  etanol  daun  sirsak mampu  menghambat  pertubuhan P. Acnes . 17 Begitu pula  dengan  penelitian yang  dilakukan  oleh  Trisuci et  al (2020) yang menguji aktivitas antibakteri perasan buah timun terhadap
pertumbuhan P.  acnes membuktikan bahwa  perasaan  buah  timun yang mengandung senyawa aktif berupa flavonoid,  alkaloid,  saponin,  steroid,  dan triterpenoid  juga  mampu  menghambat pertumbuhan P.  acnes . 18 Berdasarkan penelitian  Chandekar  (2018)  terbukti bahwa ekstrak    metanol    daun    brokoli mampu menghambat pertumbuhan Pseudomonas  aeruginosa . 9 Berdasarkan beberapa penelitian tersebut dapat disimpulkan bahwa senyawa aktif berupa flavonoid,  saponin,  alkaloid,  dan  steroid yang  terkandung  pada  ekstrak  etanol daun  brokoli  memiliki  potensi  sebagai antibakteri  hal  tersebut  terbukti  saat  uji pendahuluan  pertama  dan  kedua  terdapat daya hambat.
Perbedaan  hasil  pengujian  efek antibakteri  ekstrak  etanol  daun  brokoli terhadap P. acnes dibandingkan hasil uji pendahuluan  dapat  dipengaruhi  oleh suhu dan waktu penyimpanan. Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan oleh Djaoudene et al (2016) membuktikan bahwa semakin lama suatu zat  disimpan  maka  kandungan  senyawa aktif  yang  terkandung  menjadi  semakin menurun.  Penyimpanan  selama  30  hari menyebabkan penurunan kadar flavonoid total  sebesar  19%  pada  suhu  25°C  dan 30%  pada  suhu  35°C. 14 Penelitian  lain yang  dilakukan  oleh  Mrmošanin et  al
(2015) membuktikan pada suhu penyimpanan 4°C mulai terjadi penurunan  kadar  katekin, procyanidins , dan  flavonoid  total  pada  bubuk  kokoa setiap  minggunya. 15 Selain  itu,  paparan cahaya  juga  dapat  memengaruhi  kadar senyawa  aktif  pada  ekstrak.  Penelitian Del-Toro-Sánchez et al (2015) membuktikan  bahwa  kadar  flavonoid total  dan  fenol  total  ekstrak Anemopsis california pada  suhu  4°C  mengalami penurunan yang lebih besar pada ekstrak yang terpapar oleh cahaya  dibandingkan ekstrak yang tidak terpapar cahaya. 19
Dari  keempat  penelitian  tersebut dapat  disimpulkan  bahwa  waktu,  suhu, dan paparan cahaya selama penyimpanan dapat memengaruhi kualitas dan senyawa aktif  pada  ekstrak.  Semakin  tinggi  suhu dan  semakin  lama  waktu  penyimpanan maka  dapat  menurunkan  stabilitas  dari ekstrak dan mempercepat proses degradasi senyawa  aktif  melalui  reaksi  oksidasi. Pada  penelitian  ini  ekstrak  etanol  daun brokoli  disimpan  pada  suhu  4°C  yang bertujuan untuk mengurangi efek degradasi  senyawa  aktif  karena  menurut Kusuma et  al (2017)  semakin  rendah suhu  penyimpanan  maka  kecepatan reaksi-reaksi  metabolisme  yang  mungkin terjadi  dapat  diperlambat,  umumnya kecepatan reaksi akan berkurang menjadi setengahnya  ketika  terjadi  penurunan
suhu  setiap  8°C. 20 Meskipun  faktor  suhu dapat diminimalisir, namun waku penyimpanan  ekstrak  terhitung  sejak pembuatan  ekstrak  hingga  dilakukan  uji aktivitas antibakteri cukup panjang mencapai  60  hari  sehingga  kemungkinan telah terjadi degradasi senyawa aktif pada ekstrak.  Pada  penelitian  ini  ekstrak disimpan  pada  botol  plastik  putih sehingga  terjadi  paparan  cahaya  pada ekstrak.  Menurut  Ali et  al (2018) ekstrak  yang  disimpan  pada  suhu  dingin namun  terpapar  oleh  cahaya  tetap memungkinkan terjadinya degradasi senyawa  aktif  karena  adanya  proses oksidasi  dan  reaksi  polimerisasi  yang diinduksi oleh cahaya. 21 Saat uji pendahuluan  ekstrak  etanol  daun  brokoli mampu  menghasilkan  daya  hambat karena kemungkinan kadar senyawa aktif yang  terkandung  pada  ekstrak  masih mencukupi untuk menghambat pertumbuhan P.  acnes .  Akan  tetapi dengan  adanya  faktor  noneksperimental berupa  suhu,  waktu,  dan  cahaya  selama penyimpanan kemungkinan telah menyebabkan  penurunan  kadar  senyawa aktif pada ekstrak sehingga tidak memberikan  efek  antibakteri  pada P. acnes saat dilakukan  uji  aktivitas antibakteri.
Tidak  adanya  senyawa  tanin  pada ekstrak etanol daun brokoli juga
memungkinkan untuk memengaruhi hasil  penelitian.  Berdasarkan  penelitian Muddathir et  al (2013)  yang  menguji efek  beberapa  turunan  senyawa  tanin terhadap pertumbuhan P. acnes membuktikan  senyawa  tersebut  mampu menghambat  pertumbuhan P.  acnes . 22
Tidak  adanya  tanin  dan  disertai  proses degradasi  senyawa  aktif  yang  lainnya diduga  sebagai  penyebab  tidak  adanya aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak  etanol daun  brokoli  terhadap  pertumbuhan P. acnes .
Pelarut  yang  digunakan  pada  saat proses  ekstraksi  diduga  menjadi  faktor yang  juga  memengaruhi  kadar  senyawa aktif pada ekstrak. Berdasarkan penelitian  Adrianto  (2019)  baik  pelarut etanol  96%  maupun  70%  mampu mengekstraksi  jenis  senyawa  aktif  yang sama. 23 Meskipun  demikian,  kadar senyawa  aktif  yang  terekstraksi  belum tentu  sama.  Hal  tersebut  didukung  oleh penelitian Islamiyati (2018) yang membuktikan dengan menggunakan pelarut etanol 70% menghasilkan ekstrak etanol daun salam dengan kadar flavonoid  total  yang  lebih  tinggi  yaitu 350  ppm  dibandingkan  pelarut  etanol 96%  yang  hanya  mengandung  270  ppm flavonoid  total. 24 Pelarut  etanol  96% yang  digunakan  pada  penelitian  ini bersifat  kurang  polar  jika  dibandingkan
dengan etanol 70% sehingga memungkinkan  kadar  zat  aktif  yang diekstraksi kurang maksimal. Kurangnya kadar  senyawa  aktif  pada  ekstrak  etanol daun  brokoli  dan  disertai  dengan  proses degradasi senyawa aktif tersebut kemungkinan  menyebabkan  senyawa aktif  yang  tersisa  tidak  cukup  efektif untuk  menghambat  pertumbuhan  dari P. acnes .
Faktor lain yang dapat memengaruhi  hasil  penelitian  adalah faktor kepekaan bakteri P. acnes terhadap ekstrak  etanol  daun  brokoli.  Berdasarkan penelitian  Chandekar  (2018)  terbukti bahwa  daun  brokoli  memiliki  efek antibakteri  terhadap  pertumbuhan P. aeruginosa . 9 Efek  yang  ditimbulkan terhadap P.  acnes dapat  berbeda  karena kedua  bakteri  tersebut  memiliki  struktur dan  faktor  virulensi  yang  berbeda. Pseudomonas aeruginosa termasuk bakteri Gram negatif sedangkan P. acnes termasuk  bakteri  Gram  positif.  Hal tersebut yang dapat menyebabkan terjadinya  perbedaan  sensitivitas  dan respon  sel  pada P.  acnes sehingga  pada pengujian  ekstrak  etanol  daun  brokoli tidak ditemukan  adanya  daya  hambat. 25,26
Selain  itu,  kemampuan P.  acnes untuk membentuk biofilm diduga menyebabkan penurunan penetrasi senyawa aktif sehingga aktivitas antibakteri dari
senyawa  aktif  menjadi  terhambat. 27
Adanya kemungkinan terjadi resistensi P.
acnes terhadap  senyawa  aktif  yang bersifat  antimikroba  sebagai  bentuk adaptasi  alamiah  bakteri  untuk  bertahan hidup  juga  dapat  memengaruhi  hasil penelitian. Faktor resistensi dari P. acnes terhadap  senyawa  aktif  mutlak  tidak dapat dikendalikan. 28
Menurut Purnamasari (2013)
faktor  yang  dapat  memengaruhi  hasil penelitian uji aktivitas antibakteri adalah faktor teknik berupa jumlah bakteri yang diinokulasikan  dan  pemilihan  media  uji. Pada  penelitian  ini,  jumlah  bakteri  yang diinokulasikan telah dikendalikan dengan  menggunakan  suspensi  bakteri yang  telah  disesuaikan  dengan  standar
McFarland 0,5 (1,5x10 8 CFU/ml)
menggunakan spektofotometer dan
media yang digunakan adalah
MuellerHinton Agar yang bersifat longgar  sehingga  memungkinkan  difusi senyawa  aktif  secara  maksimal.  Oleh karena itu, jumlah bakteri yang diinokulasikan  dan  pemilihan  media bukan  penyebab  tidak  adanya  efek antibakteri  terhadap P.  acnes. Faktor antibiotic carryover dapat menjadi faktor perancu  dalam  penelitian,  namun  faktor tersebut telah dieliminasi pada penelitian ini yang dibuktikan dengan tidak adanya daya hambat di sekitar goresan inokulum
yang telah dibuat. 28

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  efek antibakteri  ekstrak  etanol  daun  brokoli ( Brassica  oleracea  var.  italica )  terhadap pertumbuhan Propionibacterium  acnes secara in  vitro ,  maka  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  etanol  daun  brokoli  tidak memiliki efek antibakteri terhadap pertumbuhan P.  acnes secara in  vitro . Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  efek  antibakteri  ekstrak  etanol daun brokoli dengan memerhatikan suhu, waktu, dan pencahayaan saat penyimpanan,  serta  memerhatikan  jenis pelarut  pada  saat  proses  ekstraksi  dan melakukan pengujian aktivitas antibakteri dengan metode yang berbeda.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Dengan  ini  penulis  menyatakan bahwa tidak terdapat konflik kepentingan  dalam  artikel  ilmiah  yang kami tulis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada  seluruh  profesional  yang  telah membantu  penelitian  dan  penyusunan naskah, yaitu Ketua beserta Staf
Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, serta Laboratorium
Farmasi  dan  Bahan  Alam  Institut

## Teknologi Bandung.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Wasitaatmadja  SM.  Kelompok  studi dermatologi kosmetik Indonesia:
Akne. Jakarta: Badan Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Iindonesia; 2018.
2. Sibero  HT,  Sirajudin  A,  Anggraini DI.  Prevalensi  dan  Gambaran  Akne Vulgaris  di  Provinsi  Lampung.  JK Unila 2019; 3(2): 308-12.
3. Afriyanti  RN.  Akne  Vulgaris  Pada Remaja.J Major 2015; 4(6): 102–9.
4. Madelina W, Sulistiyaningsih.
Resistensi  Antibiotik  Pada  Terapi
Pengobatan Jerawat. J Farmaka 2018; 16(2): 105–17.
5. Somasundaram  J,  Moni  SS,  Makeen
HA,  Intakhabalam  M,  Pancholi  SS, Siddiqui  R,  et  al.  Antibacterial potential  of  ethanolic  extract  of broccoli  (Brassica  oleracea  var. italica)  against  human  pathogenic bacteria. Int J Pharm Res 2018; 10(2): 143–6.
6. Lutfiyati H, Yuliastuti  F, Hidayat IW, Pribadi  P,  Pradani  MPK.  Skrining Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Brokoli (Brassica  Oleracea  L  Var  Italica). Urecol 2017; 6(3): 93–8.
7. Hwang  JH,  Lim  SB.  Antioxidant  and
Anticancer  Activities  of  Broccoli  By- products  from  Different  Cultivars and Maturity Stages at  Harvest.  Prev Nutr Food Sci 2015; 20(1): 8–14.
8. Liu  M,  Zhang  L,  Ser  SL,  Cumming JR, Ku KM.
Comparative phytonutrient  analysis  of  broccoli  by products:  The  potentials  for  broccoli by  product  utilization.  Molecules 2018; 23(0): 1-18.
9. Chandekar  CJ.  Antibacterial Potential of Broccoli Extracts against Pseudomonas  aeruginosa.  Int  J  Curr Microbiol  Appl  Sci  2018;  7(12): 1690–5.
10. Auliya  S,  Elianora  D,  Kornialia.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Brokoli (Brassica oleracea var. Italica)
terhadap Bakteri Streptococcus mutans.  Padjadjaran  J  Dent  Res Students 2019; 3(2): 92-7.
11. Heimler  D,  Vignolini  P,  Dini  MG, Vincieri  FF,  Romani  A.  Antiradical Activity  and  Polyphenol Composition of Local Brassicaceae edible varieties. Food Chem 2006; 99(3): 464–9.
12. Lestari  NA,  Mutiah  R,  Bhagawan WS.  Metabolisme  Profiling  Bagian Akar,  Batang,  Daun,  dan  Bunga  dari Ekstrak  Etanol  96%  Chrysanthemun cinerariifolium dengan Metode
UPLC-QTOF-MS/MS.
Malang:
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan  Universitas  Islam  Negeri Maulana Malik Ibrahim. 2018. 13. Nomer NMGR, Duniaji AS,
Nocianitri  KA.  Kandungan  Senyawa Flavonoid  dan  Antosianin  Ekstrak Kayu Secang (Caesalpinia sappan L.) serta  Aktivitas  Antibakteri  terhadap Vibrio  cholerae.  Jur  Ilm  dn  Teknol Pang 2019; 8(2):216-25.
14. Djaoudene  O,  Louaileche  H.  Impact of Storage Conditions on the Bioactive Compounds and Antioxidant  Capacity  of  Commercial Orange  Jam.  J  Anal  Bioanal  Sep Tech. 2016;1(1):8–11.
15. Mrmosanin J, Pavlovic AN,
Veljkovic  JN,  Mitic  SS,  Tosic  SB, Mitic  MN.  The  Effect  of  Storage Temperature and Thermal Processing on Catechins, Procyanidins and Total Flavonoid  Stability  in  Commercially Available  Cocoa  Powders.  Facta Univ-Ser  Physics,  Chem  Technol. 2015;13(1):39–49.
16. Ariyani  H,  Nazemi  M,  Hamidah, Kurniati M. Uji efektivitas antibakteri ekstrak kulit limau kui (Cytrus hystrix DC) terhadap beberapa bakteri. JCPS 2018; 2(1):136-41.
17. Zai  Y,  Kristino  AY,  Nasution  SLR,
Natali  O.  Uji  Efektivitas  Antibakteri
Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata linn) terhadap Bakteri Propionibacterium  acnes.  Biolink:
Jurnal  Biol  Lingkung  Ind  Kesehatan 2019; 6(1): 59-64.
18. Trisuci  HD,  Soewardi  DS,  Khu  A,
Sinaga APF. Uji Aktivitas Antibakteri
Air  Perasan  Buah  Timun  (Cucumis sativus) terhadap Pertumbuhan
Bakteri  Propionibacterium  Acnes secara  In  Vitro.  CHM-K  Applied Scientifics Journal 2020; 3(1): 14–8.
19. Del-Toro-Sánchez  CL,  Gutiérrez- Lomelí  M,  Lugo-Cervantes  E,  Zurita F,  Robles-García  MA,  Ruiz-Cruz  S, et al. Storage effect on phenols and on the  antioxidant  activity  of  extracts from  Anemopsis  californica  and inhibition of elastase enzyme. J Chem 2015:1-8.
20. Kusuma MS, Susilorini TE,
Surjowardojo P. Pengaruh Lama Dan Suhu  Penyimpanan  Ekstrak  Daun Sirih Hijau (Piper Betle Linn) Dengan Aquades  Terhadap  Daya  Hambat
Bakteri Streptococcus sgalactiae Penyebab  Mastitis  Pada  Sapi  Perah.
Jur Tern Trop 2017;18(2):14–21.
21. Ali A, Chong CH, Mah SH, Abdullah LC,  Choong  TSY,  Chua  BL.  Impact of  storage  conditions  on  the  stability of  predominant  phenolic  constituents
and antioxidant activity  of dried piper betle extracts. Molecules 2018;23(2):1-5. 22. Muddathir AM, Yamauchi K,
Mitsunaga  T.  Anti-acne  activity  of tannin-related  compounds  isolated from Terminalia laxiflora. J Wood Sci 2013;59(5):426–31.
23. Adrianto  A,  Vifta  RL,  Dyahariesti  N. Skrining Fitokimia Metabolit
Sekunder  Ekstrak  Bunga  Rosella dengan  Perbandingan  Pealrut  Etanol 96%  dan  70%  serta  Uji  Aktivitas Antioksidan  Menggunakan  Metode DPPH  (1,1-diphenyl-2 picryhydrazyl). Semarang:  Fakultas  Ilmu  Kesehatan Universitas Ngudi Waluyo. 2019.
24. Islamiyati R, Saputri IN. Uji Perbedaan Aktivitas
Antioksidan dengan  Variasi  Konsentrasi  Pelarut
Etanol  70%  Dan  96%  pada  Ekstrak
Etanol  Daun  Salam  Menggunakan Metode  Peredaman  Radikal  Bebas DPPH. Cendekia J Pharm 2018;2(2):134–42. 25. Mai-Prochnow  A,  Clauson  M,  Hong J,  Murphy  AB.  Gram  Positive  and Gram Negative Bacteria differ in their
Sensitivity  to  Cold  Plasma.  Sci  Rep 2016;6(1):1–11. Available from:
http://dx.doi.org/10.1038/srep38610
26. Retnaningsih  A,  Primadiamanti  A,
Febrianti  A.  Uji  Daya  Hambat Ekstrak Etanol Daun Ungu
(Graptophyllum  pictum  (L.)  GRIFF) Terhadap  Bakteri  Staphylococcus epidermidis  dan  Propionibacterium acnes  Penyebab  Jerawat  Dengan Metode  Cakram.  J  Anal  Farm 2019;4(1):1–9.
27. Linfante  A,  Allawh  RM,  Allen  HB. The Role of Propionibacterium acnes Biofilm in Acne Vulgaris. J Clin Exp Dermatol Res 2018;09(01):2–5.
28. Purnamasari  S,  Isnindar,  Armyanti  I.
Aktivitas  Antibakteri  Infusa  Buah Langsat  (Lansium  domesticum  Cor.) terhadap  Streptococcus  pneumoniae.
Pontianak: Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura. 2013.