PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF MARINE ORGANISMS Tunicates Polycarpa aurata AGAINST Escherichia coli AND Staphylococcus aureus
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI ORGANISME LAUT Tunikata Polycarpa aurata TERHADAP BAKTERI Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus
Shartika Alda Trivena Rompas 1)* , Defny S. Wewengkang 1) ,  Deby A. Mpila 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *rompasshartika9@gmail.com

## ABSTRACT
Tunicate are animals that belong to the subphylum that produce a lot of compounds such as antibacterial, antitumor, and anticancer. This study aims to determine the antibacterial activity of extracts and fractions of tunicates  Polycarpa aurata from Manado Bay waters against  Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Tunicates  Polycarpa  aurata  was  extracted  with  95%  ethanol  solvent,  fractionation  using  partition  method with n-hexane, chloroform and methanol solvent, and antibacterial testing using agar diffusion method Kirby Bauer. Most excellent antibacterial activity present in the methanol fraction inhibition of Escherichia coli by 17.69  mm  and  16.25  mm  for  Staphylococcus  aureus.  The  results  of  this  study  indicate  that  the  methanol fraction  of  Tunicates  Polycarpa  aurata  has  activity  to  inhibit  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli with a strong category.
Keywords :  Tunicates  Polycarpa  aurata,  antibacterial,  Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli

## ABSTRAK
Tunikata  adalah  hewan  yang  termasuk  subfilum  yang  banyak  menghasilkan  senyawa  seperti  antibakteri, antitumor, dan antikanker. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak dan fraksi tunikata Polycarpa aurata dari perairan Teluk Manado terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Tunikata Polycarpa aurata diekstraksi dengan pelarut etanol 95%, fraksinasi menggunakan metode partisi  dengan  pelarut  n-heksan,  kloroform  dan  metanol,  dan  pengujian  antibakteri  menggunakan  metode difusi agar Kirby Bauer . Aktivitas antibakteri paling baik terdapat pada fraksi metanol dengan daya hambat bakteri Escherichia coli sebesar 17,69 mm dan Staphylococcus aureus sebesar 16,25 mm. Hasil penelitian ini menunjukkan  bahwa  fraksi  metanol  Tunikata Polycarpa  aurata memiliki  aktivitas  untuk  menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan kategori kuat.
Kata kunci : Tunikata Polycarpa aurata, antibakteri, Staphylococcus aureus , Escherichia coli
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara kepulauan terbesar  didunia  yang  memiliki  kekayaan  dan keanekaragaman  sumber  daya  alam  melimpah khususnya  keanekaragaman  hayati  laut  karena memiliki ekosistem pesisir seperti hutan mangrove,  terumbu  karang  dan  padang  lamun yang  sangat  luas  dan  beragam  (Dahuri et  al., 2001).  Keanekaragaman  hayati  tersebut  memberi peluang  untuk  memanfaatkan  senyawa-senyawa aktif  dari  biota  laut  sebagai  sumber  pengobatan salah  satunya  adalah  pengobatan  terhadap penyakit infeksi (Moosa, 1999).
Tunikata  adalah  hewan  yang  termasuk subfilum  dan  bertempat  tinggal  di  laut  yang banyak menghasilkan senyawa seperti antibakteri, antitumor  ,  dan  antikanker.  Sekitar  1.000  bahan aktif  telah  diisolasi  dari  tunikata  (Schmidt  dan Donia,  2010).  Berdasarkan  penelitian  yang dilakukan Pham et al (2013) menunjukkan bahwa hasil ekstraksi tunikata Polycarpa aurata mengandung  senyawa  kimia  berupa  peptida  dan golongan  alkaloid  yang  bersifat  sitotoksik  dan memiliki kemampuan sebagai antibakteri terhadap beberapa  bakteri  patogen.  Penelitian  yang  telah dilakukan  sebelumnya  oleh  Christine  (2015)  dan Litaay et  al (2015)  menunjukkan  bahwa  isolat bakteri  yang  berasal  dari  tunikata Polycarpa aurata berpotensi menghasilkan senyawa antibakteri  berifat  bakteriosidal  maupun  bersifat bakteriostatis.
Salah  satu  contoh  tunikata  yang  banyak ditemukan  di  perairan  Indonesia,  khususnya  di Teluk Manado adalah Polycarpa aurata . Tunikata ini  memiliki  ciri  khas  bertubuh  agak  keras  serta berwarna  biru  dan  kuning.  Beberapa  penelitian yang  telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa tunikata.  Menurut  penelitian  Kumayas et  al ., (2015),  aktivitas  yang  paling  baik  terjadi  pada fraksi kloroform dengan daya hambat sebesar 8,90 mm  menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus dan  daya  hambat  sebesar  7,03  mm  menghambat bakteri Escherichia coli dengan kategori sedang.

## METODOLOGI PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian
Pengambilan dan preparasi sampel dilakukan di  Perairan  Teluk  Manado,  Sulawesi  Utara. Sedangkan  untuk  pengamatan  dan  analisis  data penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Farmasi Lanjut Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas  Sam  Ratulangi  pada  bulan  Mei  2021 sampai Juli 2021.

## Jenis Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  yang menggunakan metode eksperimental laboratorium yang menguji aktivitas antibakteri dari ekstrak dan fraksinasi tunikata Polycarpa aurata.

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  tabung  oksigen,  snorkel,  fins, zipper  lock bag ,  botol  600  ml, aluminium  foil ,  kertas  saring, cool  box ,  pisau, Erlenmeyer ( Pyrex ),  corong, oven , timbangan  analitik,  corong  pisah  (Iwaki), gelas  ukur  ( Pyrex ),  gelas  kimia  ( Pyrex ),  cawan petri, autoklaf (Autoclaf KT-30s), pinset, pembakar spritus, vortex ( Benchmark ), pipet tetes, micro  tubes ,  batang  pengaduk, Laminar  air  flow, rak  tabung  reaksi,  tabung  reaksi  (Iwaki),  lemari pendingin,  inkubator  ( Incucell ),  mikropipet, digital caliper .

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  sampel tunikata Polycarpa aurata, bakteri uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli, etanol  95%,  akuades,  methanol,  n-heksan, kloroform , pepton, natrium  klorida,  media  agar B1 ( beef extract ), agar, kloramfenikol paper disc .

## Pengambilan Sampel
Sampel tunikata Polycarpa aurata diambil di perairan  Teluk  Manado,  Sulawesi  Utara.  Sampel diambil dengan menggunakan alat bantu (masker, snorkel,  fins,  dan  tabung  oksigen),  kemudian dimasukkan  dalam  ziplok  dan  diberikan  label. Sampel  yang  telah  didapat  langsung  dibersihkan dari  pengotor,  lalu  dipotong  kecil-kecil  dan langsung  dimasukkan  kedalam  botol  yang  berisi pelarut  etanol  95%.  Botol  sampel  dimasukkan kedalam kotak pendingin ( cool box ) yang berisi es batu  dan  tidak  terkena  matahari  secara  langsung. Kemudian  sampel  dibawa  ke  Laboratorium penelitian lanjut Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi.

## Ekstraksi
Sampel  tunikata Polycarpa  aurata 320  gram diekstraksi  dengan  menggunakan  cara  maserasi. Sampel dipotong kecil-kecil kemudian dimasukkan  ke  dalam  botol  dan  direndam menggunakan  larutan  etanol  95%  sebanyak  960 mL.  Metode  ekstraksi  dilakukan  dengan  cara merendam  sampel  dengan  larutan  penyari  selama 3  kali  24  jam.  Kemudian  hasil  ekstraksi  disaring lalu  filtratnya  diambil  dan  residu  diremaserasi
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
sebanyak  2  kali.  Proses  ekstraksi  menghasilkan  3 filtrat  yang  kemudian  dicampur  menjadi  satu  dan dipisahkan dari residu. Filtrat kemudian di uapkan menggunakan  oven sehingga  diperoleh  ekstrak kering Polycarpa  aurata kemudian  ditimbang. Selanjutnya  ekstrak  etanol Polycarpa  aurata digunakan  dalam  fraksinasi  dan  pengujian antibakteri.

## Fraksinasi
Ekstrak Polycarpa aurata sebanyak 12 gram dimasukkan  kedalam  Erlenmeyer,  kemudian dilarutkan  dengan  metanol  80%  sebanyak  200 mL.  setelah  larut,  dimasukkan  kedalam  corong pisah dan ditambahkan pelarut n-heksan sebanyak 200 mL dan dikocok sampai homogen. Setelah itu dibiarkan  hingga  terbentuk  lapisan  metanol  dan lapisan n-heksan. Masing-masing lapisan ditampung  dalam  cawan  petri  yang  berbeda. Selanjutnya  dievaporasi  menggunakan  oven hingga kering, lalu ditimbang dan diperoleh fraksi n-heksan sebanyak 1,16 gram.
Selanjutnya  lapisan  metanol  ditambahkan aquades  200  mL,  dipartisi  dengan  pelarut kloroform  dengan  perbandingan  1:1  v/v  dalam corong pisah dikocok sampai homogen. Dibiarkan hingga  terbentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan metanol  dan  kloroform.  Masing-masing  lapisan ditampung  dalam  cawan  petri  yang  berbeda. Lapisan kloroform selanjutnya dievaporasi menggunakan  oven hingga  kering  lalu  ditimbang dan  diperoleh  fraksi  kloroform  sebanyak  0,21 gram.  Lapisan  metanol  dievaporasi  menggunakan oven hingga  kering  lalu  ditimbang  dan  diperoleh fraksi  metanol sebanyak  3,12  gram.  Ketiga  fraksi yang  diperoleh  digunakan  dalam  pengujian antibakteri  dan  dihitung  nilai  rendemen  dari masing-masing fraksi dengan persamaan :
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 ℎ𝑎𝑠𝑖𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑎𝑤𝑎𝑙 𝑥 100%

## Sterilisasi
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam penelitian  aktivitas  antimikroba  ini  disterilkan terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  autoklaf selama 15 menit pada suhu 121°C, pinset dibakar dengan  pembakaran  di  atas  api  langsung  dan media  disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu  121°C selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair B1
Timbang  Pepton  0,5  gram  ,  ekstrak  daging ( meat extract ) 0,3 gram, natrium klorida 0,3 gram,
dan aquades sebanyak 100 mL diaduk sampai rata kemudian  dibuat  homogen  lalu  diautoklaf  pada suhu 121°C selama 15 menit. Dipipet 1 mL media cair B1, kemudian masukkan dalam tabung reaksi dan  tutup  dengan  aluminium  foil.  Media  cair  B1 siap  digunakkan  sebagai  media  kultur  bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri Uji
Masing-masing  bakteri  yang  sudah  dikultur ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli ) ditambahkan  sebanyak  100  µL  kedalam  masing- masing tabung reaksi yang sudah diisi media cair sebanyak  1  mL.  Masing-masing  tabung  reaksi ditutup dengan aluminium foil untuk menghindari kontaminasi  dan  diinkubasi  ke  dalam  inkubator pada suhu 37º C selama 1x24 jam.

## Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol Negatif
Dalam  pengujian  antibakteri  ini  kontrol positif  yang  digunakan  yaitu kloramfenikol  paper disc  . Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu menggunakan pelarut metanol, dengan  cara  membuat  larutan  stok  metanol dengan  mengambil  sebanyak  200  μL  methanol kemudian  ditotolkan  pada  kertas  cakram  untuk menguji  apakah  pelarut  metanol  memberikan pengaruh  terhadap  aktivitas  daya  hambat  atau digunakan sebagai pembanding.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara  melarutkan ekstrak etanol tunikata Polycarpa aurata sebanyak 2 mg kedalam 400 µL metanol sehingga menghasilkan  konsentrasi  larutan  uji  sebanyak 250  μg/50  μL.  Perlakuan  yang  sama  dilakukan untuk fraksi n-heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol.

## Pembuatan Media Agar B1
Timbang  pepton  0,5  gram,  ekstrak  daging ( meat extract ) 0,3 gram, natrium klorida 0,3 gram, agar  1,5  gram  dan  dilarutkan  dalam  aquades sebanyak  100  mL  menggunakan  Erlenmeyer, dikocok  sampai  homogen.  Media  yang  telah homogen  kemudian  di  autoklaf  pada  suhu  121°C selama  15  menit.  Media  agar  siap  digunakan untuk uji aktivitas antibakteri.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu metode difusi agar ( disc diffusion Kirby and
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Bauer ).  Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri digunakan  kertas  cakram  ( paper  disc )  yang berukuran  6  mm  dengan  daya  serap  50  μL  tiap cakram.  Suspensi  mikroba  kemudian  diinokulasi ke  dalam  media  dan  dihomogenkan.  Setelah  itu media  yang  telah  diinokulasi  bakteri  dituangkan ke  dalam  cawan  petri  sebanyak  100  mL  dan ditunggu  hingga  media  memadat.  Sampel  yang telah  ditentukan  konsentrasinya  (250  μg/50  μL) ditotolkan  pada  masing-masing  cakram  dengan menggunakan  mikropipet  sebanyak  50  µL. Masing-masing  cawan  petri  diberi  label  dan nomor  sampel  yang  sesuai.  Kertas  cakram  yang telah  ditotolkan  sampel  uji Polycarpa  aurata diletakkan ke dalam cawan petri yang sudah berisi media  agar  B1  dengan  meggunakan  pinset  lalu diinkubasi selama 1x24 jam dengan suhu 37°C.

## Pengamatan Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam  masa inkubasi. Daerah pada sekitaran cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau  bahan  antibakteri  yang  digunakan  sebagai bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan  diameter  zona bening.  Diameter  zona  bening  diukur  dalam satuan  milimeter  (mm)  menggunakkan digital caliper dengan  cara  diukur  diameter  total  zona bening  cakram.  Kemudian  diameter  zona  hambat tersebut dikategorikan kekuatan daya antibakterinya (Fridly et al ., 2014).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Tunikata Polycarpa aurata Pada  ekstraksi  tunikata Polycarpa  aurata dengan menggunakan metode maserasi sedangkan
pelarut  yang  digunakan  untuk  sampel  tersebut adalah etanol 95%. Menurut Trifani (2012), etanol digunakan  sebagai  pelarut  karena  bersifat  polar, universal, dan mudah didapat. Proses maserasi ini dilakukan  dengan  cara  merendam  sampel  selama 3x24  jam  agar  senyawa  kimia  didalam  sampel dapat  terekstrak  secara  menyeluruh.  Filtrat  1,  2 dan 3 yang diperoleh dicampur menjadi satu, hasil filtrat  yang  diperoleh  kemudian  dievaporasi menggunakan  oven.  Evaporasi  adalah  suatu proses  yang  bertujuan  memekatkan  larutan  yang terdiri  atas  pelarut  ( solvent )  yang  volatile  dan  zat terlarut ( solute ) yang non volatile (Widjaja, 2010). Setelah dioven dihasilkan ekstrak kering sebanyak 12  gram  yang  berwarna  coklat  kemerahan. Ekstrak  tunikata Polycarpa  aurata ini  akan digunakan  dalam  fraksinasi  dan  uji  aktivitas antibakteri.
Fraksi tunikata Polycarpa aurata
Fraksinasi  adalah  proses  penarikan  suatu senyawa  dengan  menggunakan  beberapa  pelarut yang  tidak  saling  bercampur.  Senyawa-senyawa yang  bersifat  non  polar  akan  larut  dalam  pelarut non  polar.  Sedangkan  senyawa-senyawa  yang bersifat  polar  akan  larut  dalam  pelarut  yang bersifat polar (Sari, 2012). Pelarut yang digunakan dalam  fraksinasi  yaitu  n-heksan,  kloroform,  dan metanol.  Pelarut  n-heksan  digunakan  untuk menarik senyawa  yang bersifat non polar, pelarut kloroform  digunakan  untuk  menarik  senyawa yang  bersifat  semi  polar  dan  pelarut  metanol digunakan  untuk  menarik  senyawa-senyawa  yang bersifat polar.
Tabel 1. Rendemen ekstrak dan fraksi tunikata Polycarpa aurata No Sampel Rendemen (%) Warna Sampel 1 Ekstrak Etanol 6,8 Coklat kemerahan 2 Fraksi n-Heksan 9,66 Coklat 3 Fraksi Kloroform 1,75 Kuning kecoklatan 4 Fraksi Metanol 26 Kuning kecoklatan
Nilai  rendemen  yang  tinggi  menunjukkan banyaknya  komponen  bioaktif  yang  terkandung didalamnya  (Nurhayati et  al .,  2009).  Nilai rendemen  yang  paling  tinggi  adalah  rendemen yang  menggunakan  pelarut  metanol,  sehingga
memungkinkan  bahwa  senyawa  bioaktif  yang terkandung dalam tunikata Polycarpa aurata lebih bersifat  polar.  Jenis  pelarut  yang  berbeda menghasilkan  nilai  rendemen  yang  berbeda karena  semakin  tinggi  nilai  rendemen  yang
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
dihasilkan  maka  semakin  tinggi  pula  komponen bioaktif yang terkandung dalam tunikata Polycarpa aurata .
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi tunikata Polycarpa aurata
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak etanol,  fraksi  metanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform pada bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli menggunakan  metode  difusi agar (difusi Kirby dan Bauer). Metode difusi agar adalah metode yang dilakukan dengan pengukuran  dan  pengamatan  diameter  zona bening  yang  terbentuk  disekitar  cakram  yang berisi  antibakteri  yang  telah  diinokulasi  bakteri (Wendersteyt, 2020). Media yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  media  cair  B1  dan  media agar B1.
Bakteri uji yang digunakan yaitu Staphylococcus  aureus mewakili  bakteri  Gram positif dan Escherichia  coli mewakili  bakteri Gram negatif. Tujuan penggunaan bakteri tersebut adalah ]untuk mengetahui apakah ekstrak dan fraksi dari Polycarpa  aurata memiliki  aktivitas  antibakteri dan  untuk  mengetahui  spektrum  dari  aktivitas antibakteri Polycarpa  aurata apakah  memiliki
spektrum  luas  ( broad  spektrum ),  yaitu  dapat menghambat atau membunuh bakteri dari golongan Gram positif maupun Gram negatif, atau spektrum  sempit  ( narrow  spektrum )  yaitu  yang hanya  membunuh  salah  satu  dari  Gram  positif atau Gram negatif (Pratiwi,2008).
Dalam pengujian ini, hasil yang didapat yaitu adanya zona hambat disekeliling cakram berukuran  6  mm  yang  ditandai  dengan  zona bening.  Hal  ini  menunjukkan    adanya  kepekaan bakteri  terhadap  ekstrak  atau  fraksi  dari  tunikata Polycarpa  aurata. Pengamatan  dilakukan  setelah inkubasi pada suhu 37°C selama 1x24 jam dengan tiga  kali  pengulangan  pada  masing-masing bakteri.  Dilakukan  pengulangan  agar  hasil  yang diperoleh lebih akurat.
Konsentrasi  yang  digunakan  yaitu  250  µg dalam  etiap  kertas  cakram  yang  memiliki  daya serap  50  µg  dari  sampel  tunikata Polycarpa aurata terhadap bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli. Hasil  pengukuran  diameter zona hambat dari ekstrak etanol, fraksi n-Heksan, fraksi  kloroform,  dan  fraksi  methanol  terhadap bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ditunjukkan pada Tabel 2 dan Tabel 4.
(A)
(B)
Gambar 1. Hasil uji aktivitas antibakteri Tunikata Polycarpa aurata terhadap bakteri :
(a) Staphylococcus aureus dan (b) Escherichia coli
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Tabel  2.  Hasil  pengujian  ekstrak  dan  fraksi tunikata Polycarpa  aurata terhadap  bakteri  uji Staphylococcus aureus
Ulangan Diameter zona hambat (mm) terhadap Staphylococcus aureus Ekstrak EtOH Fraksi n-Heksan Fraksi CHCl 3 Fraksi MeOH Kontrol (+) Kontrol (-) I 9,59 8,14 7,39 15,88 34,55 - II 10,24 8,01 8,13 16,61 III 10,14 8,11 8,15 16,27 Total 29,97 24,26 23,67 48,76 𝐗̅ 9,99 8,08 7,89 16,25
Tabel 3. Hasil pengujian ekstrak fraksi tunikata polycarpa aurata terhadap bakteri uji Escherichia coli Ulangan Diameter zona hambat (mm) terhadap Escherichia coli Ekstrak EtOH Fraksi n-Heksan Fraksi CHCl 3 Fraksi MeOH Kontrol (+) Kontrol (-) I 11,13 9,3 9,18 18,29 24,84 - II 10,65 9,75 8,99 17,74 III 11,53 9,74 8,78 17,05 Total 33,10 28,79 26,95 53,08 𝐗̅ 11,10 9,59 8,98 17,69
Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri  ini digunakan  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif.
Kontrolpositif yang digunakan yaitu kloramfenikol paper disc . Kontrol positif merupakan  larutan  pembanding  efek  antara  obat antibakteri baku dengan larutan ekstrak uji, dalam hal ini tunikata Polycarpa aurata . Kontrol positif berfungsi  sebagai  kontrol  dari  zat  uji,  dengan membandingkan  diameter  daerah  hambat  yang terbentuk (Dwijendra, 2014). Antibiotik kloramfenikol  dipilih  sebagai  kontrol  positif karena  memiliki  aktivitas  antibakteri  dengan spektrum luas yaitu dapat menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram  positif  dan  Gram negatif (Pratiwi, 2008).
Diameter  zona  bening  yang  dihasilkan kloramfenikol pada Staphylococcus aureus sebesar  34,55  mm  sedangkan  pada Escherichia coli sebesar 24,84 mm. Kontrol negatif digunakan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh pelarut
terhadap  pertumbuhan  bakteri  uji  sehingga  dapat diketahui  bahwa  aktivitas  yang  ditunjukkan  oleh ekstrak  dan  fraksi  ialah  zat  yang  terkandung dalam  sampel  bukan  berasal  dari  pelarut  yang digunakan  (Wendersteyt,  2020).  Kontrol  negatif yang  digunakan  yaitu  metanol.  Berdasarkan  hasil penelitian  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa kontrol  negatif  tidak  memiliki  daya  hambat antibakteri  terhadap  kedua  bakteri  uji.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  aktivitas  yang  ditunjukkan oleh  ekstrak  dan  fraksi Polycarpa  aurata murni dari  senyawa  yang  ada  dalam  sampel  dan  bukan dari pelarut.
Hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat digolongkan  berdasarkan  klasifikasi  zona  hambat menurut  Davis  and  Stout  yaitu  meliputi  respon lemah  dengan  diameter  5  mm,  respon  sedang dengan  diameter  5-10  mm,  respon  kuat  dengan diameter  10-20  mm,  dan  respon  sangat  kuat dengan  diameter  >20  mm.  Berdasarkan  hasil
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
pengamatan  yang  dilakukan  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli masing-masing  sebanyak  tiga  kali  pengulangan memperlihatkan  adanya  zona  hambat  yang terbentuk  disekitar  disk/cakram.  Pada  ekstrak etanol memperlihatkan adanya aktivitas antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Hal  ini  ditunjukkan  dengan terbentuknya  zona  bening  disekitar  cakram sebesar  9,99  mm  pada Staphylococcus  aureus tergolong  sedang  dan  pada Escherichia  coli sebesar  11,10  mm  tergolong  kuat.  Hasil  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak    etanol  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri.  Pada  fraksi  metanol memperlihatkan  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli yang tergolong  kuat.  Hal  ini  ditunjukkan  dengan terbentuknya  zona  bening  disekitar  cakram sebesar  16,25  mm  pada Staphylococcus  aureus dan 17,69 mm pada Escherichia coli. Pada fraksi kloroform  dan  fraksi  n-Heksan  memperlihatkan daya hambat yang lebih rendah jika dibandingkan dengan ekstrak etanol dan fraksi metanol. Hal ini ditunjukan dengan aktivitas antibakteri pada fraksi kloroform  sebesar  7,89  mm  pada Staphylococcus aureus dengan kategori sedang dan 8.98 mm pada Escherichia  coli dengan  kategori  sedang . Sedangkan  pada  fraksi  n-Heksan  menunjukan aktivitas  antibakteri  dengan  daya  hambat  sebesar 8,08  mm  pada Staphylococcus  aureus yang tergolong  sedang  dan  daya  hambat  sebesar  9,59 mm  pada Escherichia  coli dengan  kategori sedang.
Ekstrak etanol dan fraksi metanol merupakan ekstrak  dan  fraksi  yang  efektif  terhadap  bakteri Escherichia  coli karena  memiliki  daya  hambat bakteri  yang  kuat,  hal  ini  dikarenakan  Gram negatif  cenderung  peka  terhadap  antibakteri  yang bersifat  polar.  Hal  ini  membuktikan  bahwa kandungan  fraksi  dari  tunikata Polycarpa  aurata dapat  menghambat  pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli, sedangkan  ekstrak Polycarpa  aurata mempunyai  daya  hambat  yang lebih  besar  terhadap  bakteri Escherichia  coli dibandingkan  dengan  bakteri Staphylococcus aureus .  Hal  ini    dikarenakan  oleh  perbedaan komposisi  dan  struktur  dari  selnya.  Radji  (2011) menjelaskan bahwa perbedaan struktur dinding sel bakteri Gram positif dan Gram negatif mempengaruhi  sensitivitas  terhadap  antibakteri. Dinding  sel  bakteri  Gram  Positif  terdiri  atas sekitar 40 lapisan peptidoglikan sehingga peptidog-likan  mencapai  70%  dari  masa  kering dinding  sel  menyebabkan  dinding  sel  menjadi
tebal  dan  kaku.  Bakteri  Gram  negatif  memiliki dinding  sel  peptidoglikan  hanya  sekitar  10%  dari masa  kering  dinding  sel,  sehingga  menyebabkan dinding selnya lebih tipis (Pelczar, 1988). Bakteri Gram  negatif  mempunyai  kandungan  lipid  yang banyak  serta  memiliki  protein  porin  yang berperan  sebagai  saluran  masuknya  zat  aktif  ke dalam sel bakteri. Masuknya zat aktif ini merusak aktivitas  enzim  dalam  sel  dan  menyebabkan kerusakan  sel.  Kadar  lipid  yang  tinggi  di  dalam sel  akan  meningkatkan  permeabilitas  zat  aktif  ke dalam sel (Adila et al ., 2013).
Aktivitas antibakteri yang terbentuk disekitar disk/cakram  disebabkan  oleh  aktivitas  senyawa yang terkandung dalam ekstrak dan fraksi tunikata Polycarpa  aurata. Semakin  besar  zona  hambat yang  terbentuk  maka  semakin  kuat  pula  senyawa yang terkandung dalam tunikata Polycarpa aurata untuk menghambat pertumbuhan bakteri.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan  aktivitas antibakteri  ekstrak  dan  fraksi  tunikata Polycarpa aurata ,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa    aktivitas yang  paling  baik  terjadi  pada  fraksi  metanol dengan daya hambat sebesar 17,69 mm menghambat  bakteri Escherichia  coli dan  daya hambat  sebesar  16,25  mm  menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  kategori  kuat untuk kedua bakteri.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  uji aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode  dilusi untuk  mengetahui  nilai  KHM  dan  KBM  dari tunikata Polycarpa aurata.

## DAFTAR PUSTAKA
Adila, R., Nurmiati, dan Agustien, A. (2013). Uji Antimikroba  Curcuma  spp.  Terhadap Pertumbuhan Candida albicans , Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli . Jurnal  Biologi Universitas  Andalas. Jurnal Bio UA. 2(1):1-7.
Christine,  G.  2015.  Potensi  Tunikata Polycarpa aurata Sebagai Sumber Inokulum Bakteri
Endosimbion Penghasil Antibakteri. [ Skripsi ]. Universitas Hasanuddin, Makassar.
Dahuri , R .,  Jacub  Rais,  Sapta  Putra  Ginting,  dan M.J.  Sitepu.  2001. Pengelolaan  Sumber
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Daya Wilayah Pesisir dan Lautan Secara Terpadu . Jakarta: PT.Pradnya Paramita.
Davis,  W.W  and  Stout,  T.R.  1971.  Disc  Plate Methods  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Microbiology . 22(4): 659-665.
Dwijendra,  I.,  Defny,  S.T.,  dan  Frenly,  W.  2014.
Aktivitas  Antimikroba  dan  Karakterisasi Senyawa  Fraksi  Spons Lamellodysidea herbacea yang  diperoleh  dari  Teluk Manado. Jurnal Ilmiah Farmasi . 3(4) : 1- 2.
Eka,  S.  Y.,  Eka,  L.,  dan  Widjaja,  I.  N.  K.  2010. Pengaruh  Variasi  Kepolaran  Fase  Gerak Aseton–Diklorometana:Metanol–Asam Asetata  Terhadap  %  Distribusi  (+)- Katekin  Dari  Gambir  Dengan  Metode Kromatografi  Cair  Vakum. E-journal 1(1): 31 – 38.
Fridly M , Defny SW, Frenly W. 2014.  Aktivitas Antibakteri  Dan  Karakterisasi  Senyawa Spons Haliclona sp . Yang Diperoleh Dari Teluk Manado. Jurnal Ilmiah.
Pharmacon . Farmasi UNSRAT. Vol.3 No (4).
Kumayas  A.,  Wewengkang  D.,  Sudewi  S.
Aktifitas  Antibakteri  Dan  Karateristik Gugus  Fungsi  Dari  Tunikata Polycarpa Aurata.  Jurnal  Ilmiah.    Pharmacon . Farmasi UNSRAT. Vol 4 No (1).
Litaay, M, G. Christine, R.G. B, Z.Dwyana. 2015. Bioaktivitas  simbion  tunikata Polycarpa aurata sebagai  antimikroba. Prosiding Semnas PBI ke 23. Jayapura.
Manoppo  CJ.,  Yudistira  A.,  Wewengkang  D. 2019.  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak dan . Fraksi  Tunikata  ( Polycarpa  aurata ) yang  dikoleksi  di  Selat  Lembeh,  Bitung terhadap Escherichia coli , Staphylococcus aureu s  dan Candida  albicans . Jurnal Ilmiah.    Pharmacon .  Farmasi  UNSRAT.
Vol 8 No (1).
Moosa, M.K. 1999. Sumber Daya Laut Nusantara: Keanekaragaman Hayati Laut dan  Pelestariannya .  Pusat  Penelitian  dan Pengembangan Oseonologi. LIPI, Jakarta.
Nurhayati,  T,  D.  Aryanti,  dan  Nurjanah.  2009. Kajian  Awal  Potensi  Ekstrak  Spons Sebagai  Antioksidan. Jurnal  Kelautan Nasional . 2(2):43-51.
Ortez,  J.H.  2005. Disk  Diffusion  Testing  in Manual  of  Antimicrobial  Susceptibility Testing.  Marie  B .  Coyle  (Coord.Ed). American Society for Microbiology.
Pratiwi.  2008. Mikrobiologi  Farmasi .  Jakarta: Erlangga.
Pelczar,  M.J.,  Chan,  E.C.S.  1988. Dasar-Dasar
Mikrobiologi . Universitas Indonesia
Press, Jakarta. Pham,  C.  D.,  H.  Weber,  R.  Hartmann,  V.  Wray, W.  Lin,  D.  Lai,  and  P.Proksch.  2013. New Cytotoxic 1,2,4-Thiadiazole Alkaloids  from  the  Ascidian Polycarpa aurata, Org. Lett 15 (9), pp 2230-2233.
Radji,  Maksum.  2011. Buku  Ajar  Mikrobiologi Farmasi dan Kedokteran . EGC, Jakarta.
Sari,  Cahyo  IP.  2012.  Kualitas  Minuman  Serbuk Kersen  ( Muntingia calabura  L.) dengan Variasi Konsentrasi Maltodekstrin danEkstraksi  Kayu  Secang  ( Caesalpinia sappan
L. ) [ Skripsi ] . Fakultas Teknobiologi  Universitas  Atma  Jaya Yogyakarta,Yogyakarta.
Schmidt.,  Eric,  W.,  Mohamed,  S.,  Donia.  2010. Life  in  cellulose  houses:  symbiotic bacterial  biosynthesis  od  ascidian  drugs and  drug  leads. Curr  Opin  Biotechnol 21.6 : 21, 6, 827-33.
Trifani.  2012. Ekstraksi  Pelarut  Cair-Cair . Depok : Universitas Indonesia.
Wendersteyt, N. 2020. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak  dan  Fraksi  Ascidian Herdmania momus dari  Perairan  Pulau  Bangka Likupang terhadap Pertumbuhan Mikroba
Staphylococcus aureus , Salmonella typhimurium ,  dan Candida  albicans [ Skripsi ].  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam UNSRAT, Manado.