## IDENTIFIKASI KEBERAGAMAN BAKTERI PADA COMMERCIAL- SEED PENGOLAH LIMBAH CAIR CAT

## IDENTIFICATION OF COMMERCIAL-SEED BACTERIA FOR PAINT LIQUID WASTE TREATMENT
Bening Mayanti 1 dan Herto Dwi Ariesyady 2
Program Studi Teknik Lingkungan
Fakultas Teknik Sipil dan Lingkungan, Institut Teknologi Bandung, Jl Ganesha 10 Bandung 40132
1 bening.mayanti@gmail.com dan 2 herto@ftsl.itb.ac.id
Abstrak  :  Pengolahan  secara  biologis  merupakan  pengolahan  yang  efektif  dan  efisien  dalam  mendegradasi materi  organik  dengan  prinsip  memanfaatkan  aktivitas  mikroorganisme  untuk  menguraikan/memecahkan senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam  air  buangan  menjadi  bentuk  yang  lebih  sederhana,  dengan  kata  lain. mikroorganisme  memegang  peranan  penting  dalam  proses  biologis.  Bakteri  yang  digunakan  dapat  berupa commercial  seed  maupun  bakteri  yang  secara  alami  tumbuh  pada  suatu  limbah  .  Untuk  itulah,  tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk    mempelajari  keragaman  bakteri  yang  terdapat  dalam  commercial  seed  pengolah limbah  cair  cat  dengan  menggunakan  metode  isolasi  dan  pewarnaan  Gram  serta  metoda  konvensional menggunakan  serangkaian  uij  biokimia.  Identifikasi  bakteri  pendegradasi  cat  perlu  dilakukan  karena  sekitar 10.000  zat  warna  dan  pigmen  yang  berbeda  digunakan  untuk  keperluan  industri.  Isolat  yang  didapat  terdiri atas   bakteri gram  positif Genus Bacillus. Pada  penelitian ini  berhasil diidentifikasi spesies dari  bakteri yang terdapat  pada  commercial  seed  tersebut,  yaitu  Bacillus  licheniformis,  Bacillus  subtilis,  dan  Bacillus  cereus. Keberadaan  bakteri-bakteri  tersebut  menunjukkan  proses  pengolahan  yang  menggunakan  bakteri  konsorsium yang  setiap  bakterinya  memiliki  pola  pertumbuhan  yang  berbeda  dalam  media  Nutirent  Broth.  Hal  tersebut ditunjukkan oleh perbedaan kurva pertumbuhan yang ditandai waktu generasi(g), yaitu waktu yang diperlukan untuk memperbanyak diri sebanyak dua kali lipat, yang berbeda dan  dengan konstanta  laju  pertumbuhan (k) yang  nilainya  berbeda  pula  baik  untuk kultur  murni  maupun  kultur  campuran. Waktu  generasi  dan  konstanta laju  pertumbuhan  untuk  Bacillus  licheniformis  adalah  25,20  menit  dan  1,52  jam -1 ;  Bacillus  subtilis    sebesar 33,43  menit  dan  1,15  jam -1 ;  Bacillus  cereus  sebesar  30,95  menit  dan  1,28  jam -1 ;  dan  mixed  culture  sebesar 42,48 menit dan 0,90 jam -1 .
Kata kunci : Bacillus, commercial seed,waktu generasi, konstanta laju pertumbuhan
Abstract:  Biological  treatment  is  a  kind  of  treatment  which  can  breakdown  organic  matter  effectively  and efficiently.  The  basic  principle  to  treat  the  waste  which  has  the  high  level  of  organic  matter  is  utilization  of microorganism activities to breakdown the chemical compounds and turn them into a simple one, in the other word, microorganism play a role of a biological process. To treat the waste, the bacteria can be isolated from the  commercial seed  contain  a  package  of  bacteria or from the  waste itself.  Studying the  diversity of  bacteria inside the commercial seed used to treat paint liquid waste through isolation process and Gram reaction, then conventional method with biochemical tests is the purpose of this research. Identification of commercial seed is important because Approximately 10,000 different dyes and pigments are used industrially.Genus for all of the bacteria from commercial seed is Bacillus. In this research, three species from commercial seed were identified successfully.  They  were  Bacillus  licheneformis,  Bacillus  subtilis,  and  Bacillus  cereus.  The  presence  of  three kinds  bacteria  indicates  that  the  biological  process  used  a  consortium  bacteria.Every  bacteria  has  different growth  pattern  in  Nutrient  Broth  media.  It  was  shown  by  the  difference  of  growth  curve  which  has  been indicated by  generation time(g),interval for binary fision, and growth rate constant of (k)both pure cultures and mixed  culture..  The  value  of  generation  time  and    growth  rate  constant  for  Bacillus  licheniformis  were  25.20 minutes and  1.52  hour -1 ;  Bacillus subtilis 33.43 minutes and  1.15  hour -1 ; Bacillus cereus  30.95 minutes and 1.28 hour -1 ; mixed culture  42.48 minutes and 0.90 hour -1 .
Key words: Bacillus, commercial seed, generation time, growth rate constant

## 1. PENDAHULUAN
Limbah  merupakan  produk  buangan  yang  dihasilkan  dari  proses  produksi  maupun hasil dari proses pengolahan limbah baik skala industri maupun domestik. Bila ditinjau secara kimiawi,  limbah  terdiri  atas  dua  macam,  yaitu  limbah  organik  dan  anorganik.  Keberadaan limbah  dapat  memberikan  efek  negatif  bagi  lingkungan  dan  kesehatan  bila  ada  dalam konsentrasi  tinggi  dan  tidak  ditangani  dengan  benar.  Limbah-  limbah  tersebut  ada  dalam berbagai  jenis,  salah  satunya  adalah  limbah  cair  cat  yang  mengandung  zat  warna  dan biasanya  dilepaskan  langsung  ke  lingkungan.  Walaupun  konsentrsi  zat  warna  kurang  dari  1 ppm,  lebih  rendah  dari  senyawa  lain  yang  ditemukan  dalam  limbah  cair,  masalah    warna adalah  yang  utama  dan  terlihat.  Sekitar  10.000  zat  warna  dan  pigmen  yang  berbeda digunakan untuk keperluan industri  (Sukumar et al., 2007).
Berbagai zat warna digunakan dalam jumlah besar untuk berbagai industri dan dalam jumlah  yang  signifikan  masuk  ke  lingkungan  dalam  bentuk  limbah  cair.  Pewarna  yang didesain  agar  resisten  terhadap  cahaya,  air,  dan  agen  pengoksidasi  akan  sulit  didegradasi begitu  dilepaskan  ke  sistem  perairan.  Sistem  pengolahan  limbah  cair  secara  konvensional sering  memberi  hasil  yang  tidak  efisien,  mahal,  menghabiskan  banyak  waktu,  dan  sering membutuhkan  metodologi  tertentu.  Oleh  sebab  itu,  sangat  diperlukan  pengembangan  dari alternatif  degradasi  zat warna seperti bioremediasi yang sudah dikenal dengan reputasi yang baik  terhadap  lingkungan  dan  teknologi  pengolahannya  dapat  diterima.  Sistem  yang menggunakan  campuran  kultur  mikroba  akan  memberi  hasil  yang  lebih  efektif    karena aktivitas  metabolismenya  bersama-sama.  Campuran  kultur  mikroba  tersebut  akan memberikan  aktivitas  katabolik  yang  saling  melengkapi  satu  sama  lain.  Penggunaan  dari konsorsium  mikroba  ini  sangat  memberikan  manfaat  daripada  kultur  murni.  Suatu  kultur bakteri  dapat  menyerang  suatu  molekul  pada  posisi  yang  berbeda  atau  dapat  menggunakan produk  dekomposisi  yang  dihasilkan  dari  kultur  lain  untuk  proses  dekomposisi  lebih  jauh (Jadhav et al., 2008).
Terdapat  dua  pendekatan  utama  dalam  proses  biodegradasi  limbah  cair  cat,  yaitu seeding  dan  modifikasi  lingkungan.  Seeding  adalah  inokulasi  mikroba  ke  instalasi pengolahan  limbah  cair.  Mikroba  yang  diinokulasikan  tersebut  dapat  diperoleh  dari  luar lokasi  yang  tercemar  (indigenous),  sedangkan  modifikasi  lingkungan  bertujuan  untuk meningkatkan  aktivitas  metabolisme  mikroba  dengan  penambahan  nutrisi,  terutama  yang mengandung  nitrogen  dan  fosfor,  peningkatan  jumlah  organisme  dan  kelembaban, penambahan kosubstrat sebagai penunjang pertumbuhan mikroba.
Pada  pengolahan  secara  biologis,  penghilangan  zat  warna  menggunakan  bakteri merupakan  alternatif  pengolahan  secara  aerob.  Beberapa  bakteri  aerob  galur  tertentu memiliki  kemampuan  untuk  menggunakan  zat  warna  azo  sebagai  sumber  karbon  dan nitrogen tunggal, bakteri lain hanya mereduksi grup azo dengan azo reduktase (Sharma et al., 2009).
Pada  umumnya,  seeding  dilakukan  dengan  menggunakan  paket  mikroba  komersial (commercial  seed)  yang  belum  tentu  sesuai  dengan  karakteristik  limbah  yang  akan  diolah. Selain itu, mikroba komersial pun memiliki harga yang lebih mahal dan dapat mengakibatkan terjadinya kompetisi dengan mikroba alami yang terdapat di dalam sistem. Indonesia adalah negara  tropis  memiliki  potensi  besar  untuk  mendapatkan  isolat-isolat  lokal  dari  daerah tercemar  yang  memiliki  kemampuan  mendegradasi  limbah  dengan  baik.  Mikroba  yang diisolasi dari daerah yang tercemar oleh limbah cat kemungkinan besar memiliki kemampuan untuk mendegradasi limbah cat.
Penelitian-penelitian    terdahulu  yang  pernah  dilakukan,  menunjukkan  penggunaan mikroba  konsorsium  ataupun  mikroba  murni  yang  belum  diketahui  jenisnya  (undefined) untuk  proses  degradasi  warna.  Saat  ini  mikroba  konsorsium  yang  digunakan  untuk
mendegradasi  zat  warna  adalah  Galactomyces  geotrichum  MTCC  1360  dan  Bacillus  sp (Jadhav et al., 2008).
Proses isolasi yang pernah dilakukan menghasilkan penemuan bahwa bakteri Bacillus sp.B29  memiliki  kemampuan  tinggi  dalam  menghilangkan  zat  warna    toksik  yaitu  azo  dye methyl red (MR) yang diisolasi dari tanah (Ooi, et al., 2007).
Selain  konsorsium  dari    Galactomyces  geotrichum  MTCC  1360  dan  Bacillus  sp  , terdapat  mikroorganisme  lain  yang  diyakini  berperan  dalam  proses  degradasi  warna, mikroorganisme  tersebut  adalah jamur  (Penicillium  decumbens,  Aspergillus  sp.,  Aspergillus niger,  Flavadon  flavus),  jamur  putih  pembusuk    (Phanerochaete  sp.,  Phanerochaete chrysosporium,  Trametes  versicolor,  Coriolus  sp.,),  ragi    (Citeromyces  sp.),  dan  bakteri (Bacillus  sp.,  Pseudomonas  sp.,  acetogenic  bacteria).  Banyak  penelitian  yang  menyatakan bahwa  jamur  putih  pembusuk  sangat  efektif  untuk  menghilangkan  warna,  namun  untuk aplikasi pengolahan skala besar tidak tepat (Jiranuntipon et al., 2008).
Kultur  bakteri  murni  atau  jamur  terus  dikembangkan  untuk  menunjung  proses biologis untuk  pengolahan limbah  cair  cat. Namun, performa jamur dalam  proses degradasi warna sangat terbatas akibat siklus pertumbuhan yang panjang dan kemampuan degradasinya yang  sedang.  Sebaliknya,  proses  degradasi  warna  oleh  bakteri  biasanya  lebih  cepat  namun membutuhkan kultur campuran beberapa bakteri untuk mendegradasi warna (Jiranuntipon et al., 2008).
Untuk pengolahan limbah cair cat, penekanan dilakukan terhadap kemampuan bakteri dalam  menggunakan  komponen  kimia  dalam  cat  sebagai  sumber  karbon.  Untuk  pigmen sendiri,  komposisinya  tidak  mendominasi  dalam  komponen  cat,  sehingga  komponen  yang diuji adalah adalah pigmen yang dilarutkan pada tiner, melamin, dan resin akrilik.

## 2. METODOLOGI

## Tempat Pelaksanaan Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Higiene  Industri  dan  Toksikologi,  dan Laboratorium Buangan Padat dan B3 Program Studi Teknik Lingkungan ITB.

## Bahan Penelitian
Pada  penelitian  ini,  digunakan    commercial  seed  yang  dipakai  untuk  mengolah limbah  cair  cat.  Bahan  lain  yang  dibutuhkan  dalam  penelitian  ini  adalah  nutrient  agar (Oxoid)  untuk  isolasi  kultur  murni,  labu  erlenmeyer  250  ml  yang  berisi  Nutrient  Broth (Oxoid) sebagai media pengaya, SBS (Salt Base Solution) untuk media tumbuh bakteri, labu erlenmeyer 250 ml sebagai reaktor skala laboratorium,  bahan–bahan yang diperlukan dalam prosedur uji biokimia pada proses identifikasi bakteri, tiner, melamin, dan resin aklirik  yang digunakan untuk mengetahui pengaruh keberadaan komponen tersebut terhadap pertumbuhan bakteri.

## Alat Penelitian
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain  adalah  reaktor  untuk pengembangan  kultur  bakteri  pendegradasi  zat  warna  berupa  labu  erlenmeyer  dengan kapasitas 250 ml sebanyak 5 buah. Peralatan lain yang digunakan adalah pipet, mikro pipet, timbangan  analitik,  penangas,  alat-alat  gelas  seperti  tabung  reaksi,  cawan  petri,  gelas  ukur, erlenmeyer dan alat gelas lainnya, pH meter, sprektofotometer, inkubator, dan orbital shaker.

## Isolasi Bakteri
Proses  isolasi  bakteri  bertujuan  untuk  mendapatkan  kultur  murni,  yaitu  kultur  yang hanya terdiri dari satu jenis bakteri.
Proses pemurnian bakteri tersebut dilakukan dalam berbagai tahapan, yaitu :
 Pengenceran terhadap commercial seed dengan akuades steril.
 Pemisahan koloni melalui metoda cawan tuang.
 Pemurnian  menggunakan  jarum  inokulasi  kemudian  dilakukan  penggoresan  (streak) pada NA dalam cawan petri agar didapatkan satu jenis koloni.
 Satu jenis koloni yang terpisah kemudian dipindahkan ke dalam NA miring .

## Identifikasi Bakteri
Bakteri  yang  diperoleh  dari  hasil  isolasi,  diidentifikasi  untuk  mengetahui  spesies bakteri  pendegradasi  tersebut.  Identifikasi  yang  dilakukan  berupa  uji-uji  biokimia  yang dilakukan  untuk  mengetahui  sifat  suatu  bakteri  sehingga  dapat  diidentifikasi  jenisnya, diantaranya adalah hidrolisa gelatin, reaksi terhadap karbohidrat, reduksi nitrat, dan lain-lain menurut Manual for Identification of Medical Bacteriology (Cowan, 1974).

## Uji Pertumbuhan
Uji  pertumbuhan  dilakukan  untuk  mengetahui  sifat  pertumbuhan  suatu  jenis  bakteri melalui  kurva  pertumbuhan  dengan  cara  mengukur  jumlah  bakteri  yang  ditandai  dengan kekeruhan  pada  media  cair  (NB)  menggunakan  spektrofotometer  (Spectronic  20  Genesys) dari suatu biakan bakteri dengan bantuan alat penggoyang (shaker) dan inkubator.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi Mikroorganisme Commercial Seed
Isolasi  langsung  dilakukan  dengan  sumber  commercial  seed.  Pemurnian  dilakukan agar kultur murni bisa didapat melalui metoda cawan tuang dangan pengenceran 10 -1 sampai dengan  10 -8 dan  dilakukan  secara  duplo.  Tabel  1  menunjukkan  hasil  pengenceran  pada commercial seed.
Tabel 1 Jumlah Koloni Hasil Metoda Cawan Tuang
No. Tingkat Pengenceran Jumlah Koloni (I) Jumlah Koloni (II) 1 10 -1 Too Numerous To Count (TNTC) TNTC 2 10 -2 TNTC TNTC 3 10 -3 TNTC TNTC 4 10 -4 TNTC TNTC 5 10 -5 213 158 6 10 -6 49 63 7 10 -7 9 11 8 10 -8 - -
Pada pengenceran 10 -1 sampai dengan 10 -4 didapatkan hasil TNTC (Too Numerous To Count),  yaitu  pertumbuhan  koloni  lebih  dari  300  koloni,  hasil  ini  tidak  dapat  digunakan dalam  perhitungan  jumlah  sel  tiap  mililiternya.  Jumlah  koloni  di  atas  300  merupakan  hasil yang  tidak  valid  karena  pertumbuhan  mikroorganisme  yang  terlalu  padat  mengakibatkan terjadinya  pertumbuhan  koloni  yang  dapat  menempel  dan  saling  menumpuk  satu  sama  lain sehingga  tidak  seluruh  koloni  dapat  terhitung.  Bila  jumlah  koloni  yang  didapat  pada  cawan petri  berada  di  bawah  30,  menandakan  populasi  bakteri  yang  terlalu  sedikit  dan  tidak representatif. Hasil ini didapat pada pengenceran 10 -7 sampai dengan 10 -8 . Pada penelitian ini didapat hasil yang valid pada pengenceran 10 -5 sampai dengan 10 -6
Terdapat  enam  kultur  bakteri  yang  diisolasi  untuk  diteliti,  namun  hasil  akhir  uji biokimia menunjukkan kesamaan terhadap beberapa bakteri. Didapatkan tiga spesies  bakteri dan  diberi  kode  BM1,  BM2,  dan  BM3,  yang  kemudian  diamati  morfologinya  dengan  hasil pada Tabel 2.
Tabel 2 Ciri-Ciri Morfologi Bakteri Hasil Isolasi Commercial Seed
No. Karakteristik Bakteri BM1 BM2 BM3 1 Bentuk bundar tepian karang tak beraturan bundar tepian karang 2 Tepian berombak bercabang,berombak berlekuk 3 Elevasi timbul timbul timbul 4 Ukuran kecil besar besar 5 Tekstur lembut lembut lembut 6 Penampakan kusam kusam kusam 7 Pigmen nonpigmen nonpigmen nonpigmen 8 Optikal buram tembus cahaya tembus cahaya
Proses pengamatan ciri-ciri morfologi suatu bakteri atau screening morphology  dapat membantu  mengelompokkan    dua  atau  lebih  bakteri  yang  diduga  memiliki  spesies  yang sama,  terutama  bila  bakteri  yang  akan  dididentifikasi  ada  dalam  jumlah  yang  banyak. Sehingga pada proses uji biokimia, bakteri yang memiliki kesamaan morfologi  yang identik dapat  dieliminasi  untuk  memudahkan  proses  identifikasi.  Namun,  proses    screening morphology membutuhkan kemampuan tertentu, agar bakteri yang dieliminasi adalah bakteri yang sama dan bukan bakteri dengan spesies yang berbeda.
Setelah  proses  morphology  screening,  dilakukan  uji  pendahuluan  untuk  menentukan genus seperti yang ditampilkan pada Tabel 3.
Tabel 3 Hasil Uji Penentuan Genus Isolasi Bakteri Commercial Seed
No. Jenis Prosedur BM1 BM2 BM3 1 Pewarnaan Gram + + + 2 Bentuk Batang Batang Batang 3 Motilitas + + + No. Jenis Prosedur BM1 BM2 BM3 4 Pewarnaan spora + + + 5 Uji katalase + + + 6 Pertumbuhan pada glukosa + + + Keterangan : (+) hasil positif
(-) hasil negatif
Setelah reaksi  Gram dari  setiap bakteri didapat, dilakukan uji-uji  pendahuluan untuk menentukan  genus  bakteri  berdasarkan  Manual  for  the  Identification  of  Medical  Bacteria (Cowan, 1974) dan didapatkan genus Bacillus.
Bacillus  merupakan  bakteri  berbentuk  batang,  tergolong  bakteri  gram  positif  pada kultur  muda,  motil  (reaksi  nonmotil  kadang  terjadi),  memproduksi  spora  yang  biasanya resisten pada panas, aerob (beberapa spesies anaerob fakultatif), katalase positif, dan oksidasi bervariasi.  Tiap  spesies  berbeda  dalam  penggunaan  gula,  sebagian  menyerang  dan  sebagian tidak (Cowan, 1974).
Bakteri  golongan  Bacillus  merupakan  bakteri  golongan  Gram  positif,  namun  bakteri pembentuk  spora  ini  menjadi golongan Gram negatif  ketika memasuki fase  stasioner  dalam pertumbuhannya.  Sebagian  besar  Bacillus  merupakan  bakteri  mesofil  yang  tumbuh  dengan temperatur  optimal  antara  30-45°C,  meski  ada  beberapa  yang  termasuk  golongan  termofil dengan temperatur optimal pada 65°C (Todar, 2009).
Tahap  selanjutnya  adalah  proses  identifikasi  spesies  melalui  uji  biokimia  yang ditunjukan Tabel 4.
Tabel 4 Hasil Uji Biokimia Penentuan Spesies Bakteri Commercial Seed
No. Jenis Uji Bakteri BM1 BM2 BM3 1 Pewarnaan Gram J + + 2 Motilitas + + + 3 Grup Morfologi 1 1 1 4 Bentuk spora oval oval oval 5 Posisi spora tengah tengah tengah 6 Pembesaran badan batang - - - 7 Pertumbuhan pada 45°C + + + 8 Pertumbuhan pada 65°C - - - 9 Pertumbuhan pada pH 5,7 + + + 10 Pertumbuhan dalam 7% NaCl + + + 11 Penggunaan sitrat + + + 12 Pertumbuhan anaerob pada  kaldu glukosa + - + 13 Karbohidrat dari: glukosa + + + arabinosa - + - mannitol + + - xylose + + - 14 VP tes + - + 15 Hidrolisis pati + + + 16 Reduksi Nitrat + - + 17 Indol - - - 18 Hidrolisis gelatin + + + 19 Hidrolisis kasein + + + 20 Urease - - lemah Keterangan : (J) hasil positif pada kultur muda, tidak konstan pada kultur tua (+) hasil positif
(-) hasil negatif (1) spora oval atau silinder; terletak di tengah, agak ujung atau di ujung; sedikit pembesaran batang atau tidak sama sekali
Serangkaian  uji-uji  biokimia  digunakan  dalam  menentukan  spesies  dari  genus Bacillus.  Uji-uji  biokimia  merupakan  metoda  konvensial  menggunakan  sistem  pendekatan, yaitu  hasil  yang  didapat  dari  penelitian  dicocokkan  dengan  tabel  hasil  uji    (Cowan,  1974). Hasil dari uji biokimia memberikan tiga jenis spesies pada Tabel 5.
Tabel 5 Hasil Identifikasi Bakteri  dari Commercial Seed
No. Kode Jenis Bakteri 1 BM1 Bacillus licheneformis 2 BM2 Bacillus subtilis 3 BM3 Bacillus cereus
Hasil  akhir  dari  proses  identifikasi  menunjukkan  tiga  spesies  bakteri  dari  genus Bacillus,  yaitu  Bacillus  licheneformis,  Bacillus  cereus,  dan  Bacillus  subtilis.  Dengan  kata lain,  pada  commercial  seed  terdapat  bakteri  konsorsium  yang  digunakan  untuk  mengolah limbah  cair  cat.  Beberapa  galur  yang  diteliti  menunjukkan  bahwa  Bacillus  subtilis  dapat menghilangkan warna dan mendegradasi zat warna  (Itoh et al., 1993).
Selain  keuntungan  yang  didapat  dari  interaksi  positif    yang  terbangun  dalam penggunaan mikroorganisme konsorsium atas proses metabolisme satu sama lain, perlu pula diwaspadai  adanya  interaksi  kompetisi  di  mana  terjadi  ketergantungan  bersama  terhadap faktor pembatas  pertumbuhan  atau substrat, sehingga spesies  yang  tumbuh  lebih cepat  akan menguasai  spesies  yang  tumbuh  lebih  lambat  kecuali  laju  pertumbuhannya  identik  (Sterrit dan Lester, 1988).
Oleh karena itu,  perlu ditentukan penentuan laju  pertumbuhan dengan menggunakan spesies tunggal dan juga kultur tercampur (konsorsium).

## Laju Pertumbuhan Mikroorganisme
Laju pertumbuhan mikroorganisme diukur dengan menumbuhkan isolat setiap kultur bakteri murni dan campuran menggunakan media NB (beef extract 1 g/L, yeast extract 2 g/L, peptone  5  g/L,  sodium  chloride  5  g/L).  Hasil  pertumbuhan  tersebut  dapat  dilihat  pada Gambar 1.
(a) (c) (b) (d)
Gambar 1 Kurva Pertumbuhan Kultur Murni dan Kultur Campuran
(a) Kurva Pertumbuhan Bacillus licheneformis
(b) Kurva Pertumbuhan Bacillus subtilis (c) Kurva Pertumbuhan Bacillus cereus (d) Kultur Pertumbuhan Mixed Culture
Kurva  pertumbuhan  menunjukkan  terjadinya  fase  lag,  eksponensial,  dan  stasioneri. Pada  beberapa  bakteri  tidak  terlihat  adanya  fase  lag,  hal  ini  dapat  disebabkan  oleh pengukuran  yang  dilakukan  setiap  satu  jam  sekali,  sehingga  perubahan  yang  terjadi  dalam rentang waktu satu jam tidak diketahui.
Hasil  ekstrapolasi  fase  eksponensial  untuk  menghitung  waktu  generasi  (g)  dan konstanata laju pertumbuhan (k) dapat dilihat pada Gambar 2.
(a) (c) (b) (d)
Gambar 2 Hasil Ekstrapolasi Fase Eksponensial Kultur Murni dan Kultur Campuran
(a) Eksrapolasi Bacillus licheneformis
(b) Ekstrapolasi Bacillus subtilis
(c) Ekstrapolasi Bacillus cereus
(d) Ekstrapolasi Mixed Culture
Dalam  laboratorium  dengan  kondisi  optimal  bagi  pertumbuhan,  bakteri  golongan Bacillus menunjukkan waktu generasi sekitar 25 menit (Todar, 2009).
Dari  hasil  ektrapolasi  fase  eksponensial,  g  (waktu  generasi)  dan  k  (konstanta  laju pertumbuhan) dapat dihitung dengan formula (Madigan et al., 2003):
g = 0,301 / slope k = 0.693 / g Besarnya waktu generasi dan konstanta laju pertumbuhan dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6 Waktu Generasi dan Konstanata Laju Pertumbuhan Kultur Murni dan Tercampur
No. Bakteri Nilai g (menit) k (jam-1) 1 Bacillus licheneformis 25,20 1,52 2 Bacillus subtilis 33,43 1,15 3 Bacillus cereus 30,95 1,28 4 Mixed culture 42,84 0,90
Waktu  generasi  yang  dihasilkan  satiap  kultur,  baik  murni  maupun  tercampur, menunjukkan  hasil  berbeda.  Waktu  generasi  kultur  murni  berkisar  di  antara  25,20  menit sampai dengan 42,84 menit sesuai dengan literatur (Todar, 2009). Hal tersebut menunjukkan bahwa  kondisi  optimal  bagi  pertumbuhan  bakteri  terpenuhi,  sedangkan  konstanta  laju pertumbuhan menunjukkan banyaknya bakteri yang tumbuh per unit waktu pada kultur yang tumbuh  secara  eksponensial.  Konstanta  laju  pertumbuhan    dari  setiap  bakteri  berbeda, tergantung  pada  kemampuan  metabolisme  tiap  bakteri  berbeda  satu  sama  lain,  pada kemampuan  enzim  yang  dimiliki  bakteri  dalam proses  metabolisme  terhadap  senyawa  yang terkandung  dalam  media  pertumbuhan  bakteri.  Nilainya  bervariasi  antara  0,9  jam -1 sampai dengan  1,52  jam -1 .  Terlihat  bahwa  laju  pertumbuhan  tertinggi  terjadi  pada  Bacillus licheniformis,  sedangkan  laju  pertumbuhan  terlambat  terjadi  pada  mixed  culture. Pertumbuhan  kultur  campuran  lebih  lambat,  hal  ini  dapat  disebabkan  oleh  interaksi  antara kultur. Hal ini mengindikasikan terjadi kompetisi dalam memperebutkan  substrat,  sehingga pertumbuhan bakteri menjadi lambat.
Pada penelitian proses pegolahan limbah skala laboratorium, biasannya ditambahkan kosubstrat  sebagai  makanan  awal  bakteri,  kemudian  sumber  makanan  kedua  adalah  limbah yang perlu diolah, sehingga pemilihan bakteri konsorsium seharusnya didasarkan pada kurva pertumbuhan  setiap  bakteri.  Bakteri  yang  akan  digabungkan  sebagai    bakteri  konsorsium seharusnya bakteri yang memiliki perbedaan saat memasuki fase eksponensial tahap dua, hal ini bertujuan untuk menghindari terjadinya perebutan sumber karbon kedua (berupa limbah) sebagai substrat pertumbuhan sel yang menjadi inti utama dalam proses degradasi.

## 4. KESIMPULAN
Bakteri  yang  terdapat  dalam  commercial  seed  merupakan  bakteri  genus  Bacillus dengan  spesies  Bacillus  licheniormis,  Bacillus  cereus,  dan  Bacillus  subtilis.  Baktei  tersebut diidentifikasi  menggunakan  metoda  konvensional  menggunakan  serangkaian  uji  biokimia. Keberadaan ketiga bakteri tersebut dalam commercial seed menunjukkan bahwa pengolahan limbah cair cat dilakukan menggunakan menggunakan konsorsium bakteri.
Setiap bakteri memiliki waktu generasi dan konstanta laju pertumbuhan yang berbeda, di  mana  pada  bakteri  Bacillus  licheneformis  sebesar  25,20  menit  dan  1.52  jam -1 ;  Bacillus subtilis  sebesar 33,43 menit dan 1,15 jam -1 ;  Bacillus cereus sebesar 30,95 menit dan 1,28 jam -1 ; mixed culture sebesar 42,48 menit dan 0,90  jam -1 . Konstanta laju pertumbuhan   dari setiap  bakteri  berbeda,  tergantung  pada  kemampuan  metabolisme  tiap  bakteri  berbeda  satu sama lain, pada kemampuan enzim yang dimiliki bakteri dalam proses metabolisme terhadap senyawa yang terkandung dalam media pertumbuhan bakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Cowan  S.T.  1974.  Manual  for  Identification  of  Medical  Bacteria.  Cambridge  University Press. Cambridge .
Itoh,  K.,Yatome,C.,Ogawa,T.  1993.  Biodegradation  of  Anthraquinone  Dyes  by  Bacillus subtilis. Environmental Contamination and Toxicology.  Vol 50. pp 522-527.
Jadhav,  S.U.,  Jadhav,U.U.,Dawkar,V.V.,  dan  Govindwar,  S.P.  2008.  Biodegradation  of Disperse Dye Brown 3REL by Microbial Consortium of Galactomyces geotrichum TCC  1360  and  Bacillus  sp.  VUS.  Biotechnology  and  Bioprocess  Engineering.  Vol 13. pp 232-239.
Jiranuntipon,S.,  Chareonpornwattana,S.,  Damronglerd,  S.,  Albasi,  C.,Delia, M.L.2008. Decolorization  of  synthetic  Melanoidins-Containing  Wastewater  by  a  Bacterial Consortium. Industrial Microbiology & Biotechnology. Vol 35. pp 1313-1321.
Madigan,  M.T.,Martinko,J.M.,Parker,  P.  2003.  Biology  of  Microorganism.  10 th Edition. Prentice Hall.USA.
Ooi, T., Shibata, T., Sato, R., Ohno, H., Kinoshita,S., Thuoc,T.L., Taguchi, S. 2007. An Azoreductase,  Aerobic  NADH-dependent  Flavoprotein  Discovered  from  Bacillus sp.:Functional  Expression  and  Enzymatic  Characterization. Applied  Microbiology and Biotechnology. Vol 75. pp 377-386
Sharma,  P.,  Singh,L.,  Dilbaghi,N.  2009.Optimization  of  Process  Variable  for Decolorization  of  Disperse  Yellow  211  by  Bacillus  subtilis  using  Box-Behnken Design. Journal of Hazardous Materials. Vol 164. pp 1024-1029.
Sterrit,  R.M.,  J.N.  Lester.  1988.  Microbiology  for  Environmental  and  Public  Health Engineers. E&FN Spon Ltd. London.
Sukumar,  M.,  Sivasamy,A.,  Swaminathan,  G.  2007.  Decolorization  of  Textile  Dye Effluent  by  Genetically  Improved  Bacterial  Strains.  Applied  Biochemistry  and Biotechnology. Vol 136 .pp 53-62.
Todar, Kenneth. 2009. The Genus Bacillus. http://www.textbookofbacteriology.net. Diakses pada 15 Juni 2009.