e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 119-126
Potensi Buah Nanas Madu Subang ( Ananas comasus ) sebagai Antibakteri Gram Positif Negatif Melalui Metode Bioteknologi Fermentasi Kombucha Berdasarkan Konsentrasi Gula Aren Berbeda
Firman Rezaldi 1 , Fernanda Desmak Pertiwi 1 , Yunita 1 , Rustini 1 , Fajar Hidayanto 2*
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Sains, Farmasi, dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar
2 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Merdeka Pasuruan
*Penulis Korespondensi; fajar.hidayanto@unmerpas.ac.id Diterima:19 September 2022; Disetujui : 4 Oktober 2022

## ABSTRAK
Kombucha buah nanas madu ( Annanas comasus ) Subang mengandung senyawa metabolit sekunder yang  berasal  dari  golongan  alkaloid,  flavonoid,  dan  juga  saponin.  Dimana  ketiganya  berpotensi dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram  positif  maupun  negatif  Penelitian  ini  bertujuan menngidentifikasi  senyawa  metabolit  sekundern  secara  kualitatif  yang  terkandung  dalam  larutan fermentasi  kombucha  buah  nanas  madu  Subang  dan  memberikan  informasi  ilmiah  mengenai pengaruh  konsentrasi  gula  aren  yang  berbeda-beda  pada  larutan  fermentasi  kombucha  buah  nanas madu  subang  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram  positif  maupun  negatif.  Metode penelitian  ini  dilakukan  secara  eksperimental  di  laboratorium  dengan  membuat  5  sediaan  yaitu fermentasi  kombucha  buah  nanas  madu  subang  dengan  konsentrasi  15%,  25%,  dan  35%, akuades steril sebagai kontrol negatif, dan kombucha yang berbahan dasar teh hitam sebagai kontrol positif. Hasil ANOVA terbukti bahwa seluruh perlakuan pada kombucha buah nanas madu subang dengan konsentrasi  15%,25%,  dan  35%  mempunyai  potensi  sebagai  antibakteri  gram  positif  dan  negatif dengan nilai P > 0,05 dan uji beda nyata (BNT) terkecil telah membuktikan bahwa seluruh perlakuan memiliki pengaruh yang siginifikan dalam menghambat pertumbuhan bakteri gram positif maupun negatif pada kombucha buah nanas madu subang.
Kata kunci : antimikroba, buah nanas, gula aren, metabolit sekunder

## ABSTRACT
The kombucha of honey pineapple (Annanas comasus) Subang contains secondary metabolites from the alkaloids, flavonoids, and saponins. Where all three have the potential to inhibit the growth of gram-positive and negative bacteria. This study aims to qualitatively identify secondary metabolites contained in the kombucha fermentation solution of Subang honey pineapple and provide scientific information about the effect of different concentrations of palm sugar in the kombucha fermentation solution  of  honey  pineapple  fruit.  earring  in  inhibiting  the  growth  of  gram-positive  and  gram- negative bacteria. This research method was carried out experimentally in the laboratory by making 5 preparations, namely fermented kombucha pineapple honey Subang with concentrations of 15%, 25%,  and  35%,  sterile  distilled  water  as  a  negative  control,  and  black  tea-based  kombucha  as  a positive control. The results of ANOVA proved that all treatments on kombucha of pineapple honey subang  with  concentrations  of  15%,  25%,  and  35%  had  potential  as  gram-positive  and  negative antibacterials with P value > 0.05 and the smallest significant difference test (BNT) proved that all The treatment had a significant effect in inhibiting the growth of gram positive and negative bacteria on kombucha of pineapple honey subang.
Keywords : antimicrobial, pinepeal fruit, secondary metabolite
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 119-126

## 1. PENDAHULUAN
Pemanfaatan  makhluk  hidup  beserta produk  makhluk  hidup  (DNA,  RNA,  Protein, Enzim,  dan  hormon)  dikenal  sebagai  istilah Bioteknologi 1 untuk  menghasilkan  barang  dan jasa  baik  secara  konvensional  maupun  skala modern.  Pemanfaatan  makhluk  hidup  dalam menghasilkan barang dan jasa secara konvensional dikenal dengan istilah bioteknologi  konvensional  karena  produk  yang dihasilkan  cenderung  berskala  hulu  atau sederhana,  sedangkan  pemanfaatan  makhluk hidup  dalam  menghasilkan  barang  dan  jasa secara  modern  dikenal  sebagai  bioteknologi modern.
Fermentasi  merupakan  salah  satu  contoh atau bagian dari proses bioteknologi konvensional.  Salah  satu  produk  bioteknologi fermentasi  berbahan  dasar  teh  dikenal  sebagai kombucha.  Kombucha  diketahui  memiliki khasiat  sebagai  sumber  antibakteri 2,3 sumber antimikroba 4 , sumber antifungi 5 sumber antioksidan 6 sumber  antikolesterol 7,8 serta sumber antikanker 9 .
Kombucha  selama  proses  fermentasi dikendalikan  oleh  konsorsium  bakteri  dan  ragi atau  yang  dikenal  sebagai Scoby ( Simbiotic Colony/Culture  Bacteria  &  Yeast )  yaitu gabungan atau kombinasi antara bakteri dan ragi yang  memanfaatkan  gula  sebagai  substrat (nutrisi)  untuk  dirombak  menjadi  asam  asam organik,  vitamin,  mineral,  enzim,  dan  polifenol oleh  sekelompok  bakteri,serta  etanol  dan  CO 2 oleh Yeast 10 .  Bahan  baku  dalam  pembuatan kombucha  selain  teh  dapat  digunakan  dari produk  komoditas  hortikultura  salah  satu  nya adalah  buah  nanas  madu  Subang  ( Ananas comasus ). Penelitian sebelumnya pada kombucha  buah  nanas  madu  Subang  memiliki potensi  sebagai  antibakteri  baik  bakteri  gram positif maupun negatif 11 .
Hal  tersebut  dikarenakan  dalam  proses pembuatan  kombucha  konsentrasi  gula  yang berbeda-beda dapat mempengaruhi daya hambat pertumbuhan  bakteri.  Hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh 12 telah  membuktikan  bahwa kombucha  daun  sirsak  pada  konsentrasi  gula 20%  merupakan  perlakuan  terbaik  dalam menghambat pertumbuhan
bakteri Staphylococcus  aureus maupun Escherichia coli .
Hasil  penelitian  yang  selaras  dilakukan oleh  Rezaldi  et  al.,  (2022)  dan  telah membuktikan bahwa konsentrasi gula pasir putih
sebesar  35%  pada  kombucha  buah  nanas  madu Subang  merupakan  perlakuan  terbaik  dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis , Pseudomonas  aeruginosa ,  dan Escherichia  coli .  Nilai  Rata-rata  diameter  zona hambat  yang  dihasilkan  adalah  24,16  mm dengan  kategori  sangat  kuat  pada  bakteri Staphylococcus  aureus .  20,89  mm  pada  bakteri Staphylococcus  epidermidis dengan  kategori kuat.  17,88  mm  pada  bakteri Pseudomonas aeruginosa dengan  kategori  kuat.  17,17  mm pada  bakteri Escherichia  coli dengan  kategori kuat 11 . Melihat perkembangan penelitian mengenai potensi kombucha sebagai antibakteri gram  positif  maupun  negatif,  maka  dalam kesempatan ini penulis tertarik untuk melakukan penelitian  dalam  memanfaatkan  buah  nanas madu Subang ( Ananas comasus ) yang dilakukan melalui metode bioteknologi fermentasi kombucha  sebagai  antibakteri  gram  positif ( Staphylococcus  aureus ,  dan Staphylococcus epidermidis ) maupun bakteri gram negatif yaitu berupa Pseudomonas aeruginosa dan Escherichia  coli berdasarkan  konsentrasi  gula aren  yang  berbeda-beda  yaitu  15%,  25%,  dan 35% 11 .

## 2. METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini  diantaranya  adalah  panci  stenless,  corong stenless, kompor gas, pengaduk stenless, toples kaca, lap, sendok, karet gelang, rak penyimpan, timbangan  analitik,  botol  kaca,  timer,  cawan petri, dan Laminair air flow 13 .
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  gula  aren,  kombucha berbahan dasar teh hitam sebagai kontrol positif, Scoby dan Baby Scoby sebagai starter atau kultur awal kombucha yang telah diperoleh dari rumah fermentasi Tangerang. Bakteri uji yang meliputi Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis , Pseudomonas  aeruginosa ,  dan Escherichia  coli .  Media  Muller  Hinton  Agar (MHA),  dan  nanas  madu  Subang  ( Ananas comasus ) 11 .
Persiapan Bahan Buah Nanas Madu Subang ( Ananas comasus ) dan Scoby
Buah  nanas  madu  yang  telah  didapatkan dari kota Subang dipotong kecil-kecil dalam 15
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 119-126
Kg untuk diperas dan juga diambil airnya. Buah Nanas  yang  sudah  diperoleh  airnya  disimpan pada  wadah  yang  steril  untuk  direbus  dan  juga difermentasi  oleh Scoby jika  air  rebusan  nanas sudah berada dalam kondisi dingin 11 .
Fermentasi  Kombucha  Buah  Nanas  Madu Subang ( Ananas comasus )
Langkah-langkah  yang  diperlukan  dalam fermentasi  kombucha  buah  nanas  madu  subang diantaranya  adalah  sebagai  berikut;  Pertama, menyiapkan  alat-alat  dan  bahan  utama  seperti toples  kaca,  gula  aren  sebagai  substrat,  dan kultur awal kombucha beserta baby scoby yang berada  dalam  bentuk  cair.  Kedua,  menimbang buah nanas madu Subang sebanyak 25% dalam 1 liter. Ketiga, menimbang 8,2% air sampai 1,8 mL  air.  Keempat,  menambahkan  konsentrasi gula aren sesuai perlakuannya yaitu 15%, 25%, dan  35%.  Kelima,  memanaskan  gula  sampai mendidih selama 15 menit serta memasukkan ke dalam  toples  kaca  pada  setiap  perlakuan  gula berdasarkan konsentrasinya. Keenam, memasukkan air rebusan pada toples  kaca pada bagian dalam yang sudah ditambahkan konsentrasi  larutan  gula  aren  masing-masing. Ketujuh,  mendinginkan  air  rebusan  pada  suhu 30 0 C kemudian menambahkan starter kombucha yang  sudah  berusia  1  minggu  sebanyak  10% (v/v)  pada  perlakuan  secara  keseluruhan. Kedelapan,  menutup  toples  kaca  dengan  kain penutup  dengan  tujuan  supaya  fermentasi kombucha  buah  nanas  madu  Subang  ( Ananas comasus ) berjalan dengan statis hingga sukses 14 .

## Skrining Fitokimia
Larutan  fermentasi  kombucha  buah nanas madu Subang akan diidentifikasi senyawa metabolit  sekunder  yang  terdiri  dari  golongan alkaloid, flavonoid, tanin, steroid/terpenoid, dan saponin 15 .
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Gram  Positif Negatif  Pada  Kombucha  Buah  Nanas  Madu Subang ( Ananas comasus )
Tahapan-tahapan dalam pengujian antibakteri  gram  positif  maupun  negatif diantaranya  adalah  yang  pertama  menyiapkan cawan petri sebanyak 24 buah untuk dituangkan kedalam  media Muller  Hinton  Agar (MHA) sebanyak 15 mL secara keseluruhan pada cawan petri.  Tahapan  yang  kedua  adalah  mendiamkan media  tersebut  sampai  pada  kondisi  memadat.
Tahapan  ketiga  yaitu  mencelupkan  lidi  pada kapas  steril  pada  bakteri  uji  di  dalam  media. Bakteri  uji  yang  dimaksud  diantaranya  adalah Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis merupakan  bakteri  gram  positif. Pseudomonas  aeruginosa dan Escherichia  coli merupakan  bakteri  gram  negatif.  Tahapan  yang keempat  yaitu  mengusap  media  MHA  pada permukaan  hingga  tertutup  secara  keseluruhan. Tahapan  yang  kelima  yaitu  menempelkan disk yang  telah  direndam  pada  sediaan  larutan fermentasi kombucha buah nanas madu Subang ( Ananas  comasus )  pada  konsentrasi  gula  aren yang berbeda-beda yaitu 15% pada cawan petri pertama, 25% pada cawan petri kedua, 35% pada cawan  petri  ketiga. Cawan  petri  keempat  berisi kontrol positif berupa kombucha yang berbahan dasar  teh  hitam.  Cawan  petri  kelima  berisi kontrol  negatif  yaitu  berupa  akuades  steril. Tahapan keenam yaitu  melakukan pengulangan sebanyak  3  kali.  Tahapan  ketujuh  yaitu menginkubasi  media  yang  berisi  bakteri  yang akan diuji oleh perlakuan kombucha buah nanas madu Subang ( Ananas comasus ) beserta kontrol positif maupun negatif selama 24 jam. Tahapan kedelepan  atau  yang  terakhir  adalah  mengukur rata-rata  diameter  zona  hambat  pada  masing- masing perlakuan secara keseluruhan 11 .

## Analisis Data
Data  yang  dihasilkan  berupa  rata-rata diameter  zona  hambat  pada  perlakuan  secara keseluruhan  diolah  menggunakan  statistik ANOVA satu jalur pada taraf kepercayaan 95%. Data  hasil  penelitian  tersebut  yang  telah diperoleh memiliki perbedaan secara nyata atau beda  nyata  terkecil  (BNT),  maka  akan dilanjutkan melalui uji post hoc 16 .

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Skrining Fitokimia
Hasil  penelitian  ini    telah  membuktikan bahwa larutan fermentasi kombucha buah nanas madu  subang  mengandung  senyawa  metabolit sekunder  yang  terdiri  dari  alkaloid  dengan raeagen/pereaksi kimia wagner dan dragendroff. Flavonoid,  dan  saponin  yang  masing-masing memiliki kemampuan sebagai antibakteri patogen baik pada bakteri  gram positif  maupun negatif 5 .
Larutan fermentasi kombucha buah nanas madu  subang  berpotensi  sebagai  minuman probiotik dalam meningkatkan sistem daya tahan
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 119-126
tubuh 17 . Adanya kandungan  metabolit sekunder pada  larutan  fermentasi  kombucha  buah  nanas madu  subang  berkhasiat  sebagai  sumber antibakteri 5 ,  sumber  antioksidan 6 dan  sumber antikanker 7 .
Hal  tersebut  disebabkan  karena  adanya kandungan  metabolit  sekunder  yang  mampu bekerja  secara  seluler  baik  sebagai  sumber antibakteri,  sumber  antioksidan,  dan  juga sumber antikanker 2 .
Golongan  alkaloid  merupakan  salah  satu senyawa metabolit sekunder yang bekerja secara seluler sebagai antibakteri dengan cara menghambat  sintesis  enzim,  protein,  hingga terjadinya  suatu  ganguan  pada  metabolisme bakteri  patogen 15 .  Golongan  alkaloid  pada kombucha  buah  nanas  yang  bekerja  sebagai sumber  antioksidan  secara  seluler  yaitu  dengan cara  mendonorkan  atom  H  pada  radikal  bebas yang  merupakan salah satu bagian dari alkaloid yang bekerja sebagai antioksidan primer 18 . Alkaloid  dapat  dihasilkan  dari  pelarut yang bersifat polar, sehingga berpotensi sebagai sumber  antioksidan.  Alkaloid  yang  terkandung pada  buah  nanas  madu  subang  bekerja  sebagai sumber  antikanker  secara  seluler  yaitu  dengan menghambat  mekanisme  pembelahan  dan  non aktivasi jalur apoptosis pada sel kanker 19 . Flavonoid yang dihasilkan dari fermentasi kombucha  buah  nanas  madu  subang  yang bekerja secara seluler sebagai sumber antibakteri diantaranya  adalah  menginaktivasi  protein maupun  enzim  pada  bagian  membran  sel bakteri 15 .  Flavonoid  yang  telah  dihasilkan  pada larutan  fermentasi  kombucha  buah  nanas  madu subang dan bekerja sebagai sumber antioksidan adalah  melalui  proses  penyumbangan  atom hidrogen, sehingga radikal bebas dapat direduksi,  sedangkan  flavonoid  yang  telah dihasilkan  pada  larutan  fermentasi  kombucha
buah  nanas  madu  subang  sebagai  antikanker dengan  cara  menghambat  proses  pembelahan serta  pengaktivan  jalur  apoptosis  pada  sel kanker 19 . Golongan saponin yang dihasilkan melalui fermentasi kombucha buah nanas madu subang  dan  bekerja  sebagai  sumber  antibakteri diantaranya adalah mensintesis senyawa kompleks  pada  bagian  membran  sel  bakteri patogen  melalui  ikatan  hidrogen.  Hal  tersebut mengakibatkan  struktur  protein  menjadi  rusak dan  dapat  mempengaruhi  ketidakseimbangan pada membran sel yang merupakan makromolekul  maupun  ion  yang  terkandung  di dalam sel menjadi lisis atau hancur yang dialami oleh  bakteri  patogen  baik  pada  bakteri  gram positif maupun negatif 2 .
Golongan saponin yang terkandung dalam fermentasi  kombucha  buah  nanas  madu  subang yang  bekerja  sebagai  sumber  antioksidan  yaitu dengan  cara  mensisntesis  lipid  peroksida, sedangkan  potensi  golongan  saponin  yang terkandung  dalam  fermentasi  kombucha  buah nanas  madu  subang  sebagai  antikanker  yaitu dengan cara mengikat gugus aglikon sapogenin berupa triterpenoid atau steroid 20 .

## Aktivitas Antibakteri Gram Positif - Negatif
Pada Tabel 1 telah membuktikan bahwa konsentrasi  gula  aren  pada  fermentasi  buah nanas  madu  subang  yang    berbeda-beda berpotensi sebagai antibakteri baik pada bakteri gram  positif  maupun  negatif.  Hasil  penelitian yang  tercantum  pada  tabel  1  tersebut  telah membuktikan  bahwa  konsentrasi  gula  aren sebesar  35%  adalah  perlakuan  terbaik  yang berpotensi dalam mensintesis zona hambat pada bakteri  uji  secara  keseluruhan.  Rata-rata  nilai diameter zona hambat pada bakteri.
Tabel 1. Hasil Perhitungan Diameter Zona Hambat Pada Media MHA ( Muller Hinton Agar )
Jenis Bakteri Diameter zona hambat (mm) Kontrol negatif (mm) Kontrol positif (mm) Diameter zona hambat setiap Konsentrasi Fermentasi kombucha buah nanas madu subang (mm) 15% 25% 35% Staphylococcus aureus I 0 20,34 15,47 16,90 21,88 II 0 22,45 17,25 17,66 23,78 III 0 23,56 18,22 19,52 25,90 Rerata 0 22,11 16,98 18,02 23,85 Staphylococcus epidermidis I 0 19,34 13,45 15,00 20,00 II 0 20,00 15,87 15,90 21,87
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 119-126
III 0 21,89 16,60 18,00 22,34 Rerata 0 20,41 15,30 16,30 21,40 Pseudomonas aeruginosa I 0 18,34 12,60 14,56 19,71 II 0 19,87 13,45 15,52 20,90 III 0 21,50 15,00 17,00 22,00 Rerata 0 19,90 13,68 15,69 20,87 Escherichia coli I 0 17,72 11,78 13,45 20,50 II 0 18,98 12,77 15,00 20,50 III 0 20,00 14,00 15,89 21,54 Rerata 0 18,90 12,85 14,78 20,84
Tabel  2  dibawah  ini  adalah  data  hasil penelitian  yang  diuji  secara  statistik  melalui ANOVA  satu  jalur  dan  telah  menunjukkan bahwa  pada  kelompok  perlakuan  fermentasi kombucha buah nanas madu subang dengan nilai p  masing-masing  kurang  dari  0,05.  Nilai  rata- rata  antar  kelompok  perlakuan  fermentasi kombucha  buah  nanas  madu  subang  memiliki perbedaan bermakna sehingga dapat dilanjutkan melalui uji post hoc .
Tabel 2. Uji Anova Satu Jalur
Uji One Way Anova Sig Staphylococcus aureus 0,0 Staphylococcus epidermidis 0,1 Pseudomonas aeruginosa 0,02 Escherichia coli 0,03
Tabel  3  yang  tercantum  dibawah  ini merupakan hasil uji lanjut berupa post hoc yang telah  membuktikan  apabila  suatu  data  hasil penelitian  mempunyai  nilai  p  kurang  dari  0,05, maka  data  hasil  penelitian  yang  diperoleh
membuktikan  tidak  berbeda  nyata  secara signifikan pada perlakuan lainnya. Uji post hoc yang  sudah  tercantum  pada  tabel  3  telah membuktikan bahwa diameter zona hambat pada bakteri Staphylococcus  aureus , Staphylococcus epidermidis , Pseudomonas  aeruginosa ,  dan Escherichia  coli pada  konsentrasi  gula  aren sebesar  15%  fermentasi  kombucha  buah  nanas madu  subang  mempunyai  perbedaan  secara bermakna  dan  signifikan  pada  konsentrasi  gula aren  fermentasi  kombucha  buah  nanas  madu subang  sebesar  35%.  Namun  mempunyai perbedaan  secara  bermakna  pada  konsentrasi 25%, kontrol positif maupun negatif. Konsentrasi  gula  aren  sebesar  25%  pada kombucha  buah  nanas  madu  subang  memiliki perbedaan secara bermakna baik pada konsentrasi  15%,  35%,  kontrol  positif  maupun negatif. Konsentrasi gula aren sebesar 35% pada larutan  fermentasi  kombucha  buah  nanas  madu subang mempunyai perbedaan secara bermakna baik  pada  kontrol  positif  maupun  negatif. Namun  memiliki  perbedaan  secara  bermakna pada konsentrasi gula aren sebesar 15% maupun 25%.

## Tabel 3. Analisis Uji Post hoc
Jenis Bakteri 15% 25% 35% Kontrol Positif Kontrol Negatif Staphylococcus aureus 15% - 0,777 0,005* 0,000* 0,000* 25% 0,777 - 0,122 0,000* 0,000* 35% 0,005* 0,122 - 0,000* 0,000* Kontrol Positif 0,000* 0,000* 0,000* - 0,000* Kontrol Negatif 0,000* 0,000* 0,000* 0,000* - Staphylococcus epidermidis 15% - 0,255 0,005* 0,000* 0,000* 25% 0,255 - 0,244 0,000* 0,000* 35% 0,006* 0,244 - 0,000* 0,000* Kontrol Positif 0,000* 0,000* 0,000* - 0,000*
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 119-126
Kontrol Negatif 0,000* 0,000* 0,000* 0,000* - Pseudomonas aeruginosa 15% - 0,277 0,005* 0,000* 0,000* 25% 0,277 - 0,277 0,000* 0,000* 35% 0,004* 0,177 - 0,000* 0,000* Kontrol Positif 0,000* 0,000* 0,000* - 0,000* Kontrol Negatif 0,000* 0,000* 0,000* 0,000* - Escherichia  coli 15% - 0,388 0,002* 0,000* 0,000* 25% 0,388 - 0,888 0,000* 0,000* 35% 0,002* 0,888 - 0,000* 0,000* Kontrol Positif 0,000* 0,000* 0,000* - 0,000* Kontrol Negatif 0,000* 0,000* 0,000* 0,000* -
Keterangan: (*) Menyatakan terdapat perbedaan bermakna (p<0,05)
Tabel  1  telah  membuktikan  bahwa kombucha  buah  nanas  madu  subang  pada konsentrasi  gula  aren  sebesar  15%,  25%,  dan 35%  memiliki  kemampuan  dalam  membentuk zona  hambat  atau  zona  bening  pada  sekeliling sumuran  baik  pada  bakteri  gram  positif  yang meliputi Staphylococcus aureus maupun Staphylococcus  epidermidis dan  juga  bakteri gram  negatif  yang  meliputi Pseudomonas aeruginosa maupun Escherichia  coli .  Hal tersebut  ditandai  dengan  adanya  indikasi  yaitu kombucha  buah  nanas  madu  subang  pada konsentrasi  gula  aren  secara  keseluruhan mempunyai potensi dalam menghambat pertumbuhan  bakteri  gram  positif  maupun negatif.
Hal  ini  telah  dipertajam  melalui  hasil penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  Khalaei  et al (2020), yang menyatakan bahwa zona hambat yang  terbentuk  atau  terdapat  pada  zona  bening pada  kombucha  yang  berbahan  dasar  teh  hitam berpotensi sebagai antibakteri 21 . Potensi kombucha  buah  nanas  madu  subang  yang dihasilkan  dalam  penelitian  ini  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  pada  spektrum sempit. Pernyataan tersebut didukung oleh hasil penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  Rezaldi  et al.  (2022)  yang  telah  membuktikan  bahwa konsentrasi gula aren pada fermentasi kombucha bunga  telang  berpotensi  dalam  menghambat pertumbuhan Salmonella  thypi dengan  rata-rata diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan  sebesar 18,23 mm (kategori kuat) dan Vibrio
parahaemolyticus dengan  rata-rata  diameter zona hambat sebesar 15,31 mm (kategori kuat) 5 . Pada  tabel  1  telah  membuktikan  bahwa hasil  rata-rata  diameter  zona  hambat  pada kombucha  buah  nanas  madu  subang  yaitu konsentrasi  gula  aren  sebesar  35%  merupakan perlakuan terbaik dalam menghambat pertumbuhan  bakteri  baik  bakteri  gram  positif maupun  negatif.Hal  tersebut  menunjukkan bahwa konsentrasi gula yang berbeda-beda dapat mempengaruhi pertumbuhan bakteri patogen 11 .

## 4. KESIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa  kombucha  buah  nanas  madu  subang berpotensi  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri  gram  positif  maupun  negatif  pada konsentrasi  gula  aren  secara  keseluruhan. Konsentrasi  gula  aren  sebesar  35%  pada kombucha buah nanas madu subang merupakan perlakuan terbaik dalam menghambat pertumbuhan  bakteri  gram  positif  maupun negatif.  Kombucha  buah  nanas  madu  subang mengandung  senyawa  metabolit  sekunder seperti alkaloid, flavonoid, dan juga saponin.

## 5.   DAFTAR PUSTAKA
1.   Fitri  Rahmi  Fadhilah,  Firman  Rezaldi,  M Fariz  Fadillah,  Muhammad  Faizal Fathurohim  US.  Narrative  Review: Metode Analisis Produk Vaksin Yang
Aman Dan Halal Berdasarkan Perspektif Bioteknologi. Int J
Mathla’ul  Anwar  Halal  Issues .
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 119-126
2021;1(1):64-80. doi:10.30653/ijma.202111.12 2.   Rezaldi F, Ningtyas RY, Anggraeni SD, et al. PENGARUH METODE BIOTEKNOLOGI FERMENTASI KOMBUCHA  BUNGA  TELANG (Clitoria ternatea L) SEBAGAI ANTIBAKTERI  GRAM  POSITIF DAN NEGATIF. J Biotek .
2021;9(2):169.
doi:10.24252/jb.v9i2.25467
3.   Abdilah  NA,  Rezaldi  F,  Kusumiyati  K, Sasmita  H,  Somantri  UW.  Aktivitas
Antibakteri  Kombucha  Bunga  Telang (Clitoria ternatea L) yang Difermentasi Dengan  Gula  Aren  Pada  Konsentrasi Berbeda. Tirtayasa Med J . 2022;1(2):29. doi:10.52742/tmj.v1i2.15139 4.   Maya  Puspitasari,  Firman  Rezaldi,  E. Egriana Handayani DJ. KEMAMPUAN  BUNGA  TELANG (Clitoria ternatea L) SEBAGAI hominis, Trycophyton mentagrophytes,  dan  Trycophyton. J Med Lab . 2022;1(2):1-10. https://ejournal.stikeskesosi.ac.id/inde x.php/Medlab/article/view/36 5.   Rezaldi F, Rachmat O, Fadillah MF, Setyaji DY, Saddam A. Bioteknologi Kombucha  Bunga  Telang  (Clitoria ternatea L) Sebagai Antibakteri Salmonella thypi dan Vibrio parahaemolyticus Berdasarkan Konsentrasi  Gula  Aren. J  Gizi  Kerja dan Produkt . 2022;3(1):13-22.
doi:10.52742/jgkp.v3i1.14724
6.   Situmeang  B,  Shidqi  MMA,  Rezaldi  F.
THE EFFECT OF FERMENTATION
TIME  ON  ANTIOXIDANT  AND ORGANOLEPTIC  ACTIVITIES  OF
BIDARA  (Zizipus  spina  CRISTI  L.) KOMBUCHA DRINK. Biot J Ilm Biol Teknol dan Kependidikan . 2022;10(1):73-93. doi:10.22373/biotik.v10i1.11370
7.   Firman  Rezaldi,  M.  Fariz  Fadillah,  Lucky
DIta  Agustiansyah,  Desi  Trisnawati,
Fernanda  Desmak  P.  PENGARUH METODE BIOTEKNOLOGI FERMENTASI KOMBUCHA BUNGA  TELANG  (Clitoria  ternatea L)  SEBAGAI  PENURUN  KADAR KOLESTEROL BEBEK PEDAGING

## BERDASARKAN  KONSENTRASI
GULA  AREN  YANG  BERBEDA-
BEDA. J Pendidik Biol Biog . 2022;7(2):57-67. doi:https://doi.org/10.30605/biogenera si.v7i2.1772
8.   Rezaldi F, Setiawan U, Trisnawati D, et al.
DENGAN VARIASI GULA STEVIA SEBAGAI ANTIKOLESTEROL PADA BEBEK PEDAGING BIOTECHNOLOGY  OF  TELANG FLOWER  KOMBUCHA  (  Clitoria ternatea L ) WITH VARIATIONS OF STEVIAN SUGAR AS ANTICHOLESTEROL  IN  Publish By ; Jurnal Dunia Farmasi PENDAHULUAN Kolesterol kerapkali. J Dunia Farm . 2022;6(3):156-169. doi:https://doi.org/10.33085/jdf.v6i3.5 279 9.   Taupiqurrohman  O,  Rezaldi  F,  Amalia  D, Suryani  Y.  Anticancer  Potency  of Dimethyl 2-(2-Hydroxy-2- Methoxypropilidine) Malonate in Kombucha. J  Biodjati .  2022;7(1):86- 94. doi:10.15575/biodjati.v7i1.14634
10.   Firman Rezaldi, Heny Sasmita, Ucu Wandi
Somantri,  Yuliana  Kolo  M.  Pengaruh
Metode Bioteknologi Fermentasi Kombucha  Bunga  Telang  (Clitoria Ternateaa  L)  Sebagai  Antibakteri Gram  Positif-Negatif  Berdasarkan Konsentrasi Gula Tropicanaslim Yang Berbeda-Beda. Pharmaqueous  J  Ilm
Kefarmasian . 2022;4(1):80-91. doi:https://doi.org/10.36760/jp.v4i1.3 73 11.   Rezaldi F, Fadillah MF, Agustiansyah LD, Tanjung  SA,  Halimatusyadiah  L, Safitri E. Aplikasi Metode Bioteknologi  Fermentasi  Kombucha Buah  Nanas  Madu  (Ananas  comosus)
Subang  Sebagai  Antibakteri  Gram Positif  Dan  Negatif  Berdasarkan Konsentrasi  Gula  Yang  Berbeda. J Agroteknologi  Merdeka  Pasuruan . 2022;6(1):9-21. https://jamp- jurnal.unmerpas.ac.id/index.php/jamp pertanian/article/view/70
12.   Yanti  NA,  Ambardini  S,  Ardiansyah  A,
Marlina WOL, Cahyanti KD. Aktivitas
Antibakteri  Kombucha  Daun  Sirsak (Annona muricata L.) Dengan
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 119-126
Konsentrasi  Gula  Berbeda. Berk Sainstek . 2020;8(2):35-40. doi:10.19184/bst.v8i2.15968 13.   Firman  Rezaldi,  Fajar  Hidayanto,  Diyan Yunanto Setyaji, M Faizal Fathurrohim  KK.  BIOTEKNOLOGI KOMBUCHA  BUNGA  TELANG (Clitoria ternatea L) SEBAGAI ANTIBAKTERI Streptococcus mutan DAN Klebsiella pneumoniae BERDASARKAN  KONSENTRASI GULA  YANG  BERBEDA  BEDA. J Farmagazine . 2022;IX(2):21-27.
doi:http://dx.doi.org/10.47653/farm.v
9i2.608
14.   Muhammad  Faizal  Fathurrohim,  Firman
Rezaldi,  Nurullah  Asep  Abdilah,  M. Fariz Fadillah DYS. Pengaruh Metode Bioteknologi  Fermentasi  Kombucha Bunga  Telang  (Clitoria  ternatea  L.) Sebagai Antibakteri Propinobacterium acne. SIMBIOSA .  2022;11(1):16-25. doi:https://doi.org/10.33373/sim- bio.v11i1.4244
15.   Nurullah  Asep  Abdilah,  Firman  Rezaldi,
Fernanda  Desmak  Pertiwi  MFF. FITOKIMIA DAN SKRINING AWAL  METODE  BIOTEKNOLOGI FERMENTASI KOMBUCHA BUNGA  TELANG  (Clitoria  ternatea L) SEBAGAI BAHAN AKTIF SABUN CUCI TANGAN PROBIOTIK. MEDFARM J Farm dan Kesehat . 2022;11(1):44-61. doi:10.48191/medfarm.v11i1.72 16.   Aris Ma’ruf, Endang Safitri, Retna Yulrosly Ningtias,  Fernanda  Desmak  Pertiwi,
Firman Rezaldi. ANTIBAKTERI GRAM  POSITIF  DAN  NEGATIF DARI  SEDIAAN  SABUN  CUCI PIRING FERMENTASI KOMBUCHA  BUNGA  TELANG (Clitoria ternatea L) SEBAGAI PRODUK BIOTEKNOLOGI FARMASI. J  Kesehat  dan  Kedokt . 2022;1(2):16-25. doi:10.56127/jukeke.v1i2.115 17.   Rezaldi  F,  Fadillah  MF,  Abdilah  NA. Potensi kombucha bunga telang sebagai  himbauan  kepada  wisatawan pantai  carita  dalam  meningkatkan imunitas. SELAPARANG  J  Pengabdi Masy  Berkemajuan .  2022;6(2):867-
871. doi:https://doi.org/10.31764/jpmb.v6i 2.8472 18.   Kurniati F. POTENSI BUNGA MARIGOLD  (Tagetes  erecta  L.) SEBAGAI SALAH SATU KOMPONEN PENDUKUNG PENGEMBANGAN PERTANIAN. Media Pertan . 2021;6(1):22-29. doi:10.37058/mp.v6i1.3010
19.   Gusungi  DE,  Maarisit  W,  Hariyadi  H,
Potalangi NO. Studi Aktivitas Antioksidan Dan Antikanker Payudara (MCF-7) Ekstrak Etanol Daun Benalu Langsat Dendrophthoe pentandra.
Biofarmasetikal  Trop .  2020;3(1):166- 174. doi:10.55724/j.biofar.trop.v3i1.274
20.   Usman  H. Kimia  Organik  Bahan  Alam Laut . Universitas Hasanuddin; 2014. 21.   Khaleil MM. A BIOPROCESS DEVELOPMENT STUDY OF POLYPHENOL PROFILE, ANTIOXIDANT AND ANTIMICROBIAL  ACTIVITIES  OF KOMBUCHA  ENRICHED  WITH
Psidium  guajava  L. J  Microbiol Biotechnol  Food  Sci .  2020;9(6):1204- 1210. doi:10.15414/jmbfs.2020.9.6.1204- 1210