## AKTIVITAS ANTIHIPERURIKEMIA EKSTRAK ETIL ASETAT DAN ETANOL BUAH SALAK VARIETAS BONGKOK ( Salacca edulis Reinw.) PADA TIKUS GALUR WISTAR
[Antihyperuricemic Activity of Ethyl Acetate and Ethanol Extracts of Snake Fruit var. Bongkok
(S alacca edulis Reinw.) on Wistar Rat]
Leni Herliani Afrianti 1) *, Elin Yulinah Sukandar 2) , I Ketut Adnyana 2) , dan Slamet Ibrahim 3)
1) Departemen Teknologi Pangan Universitas Pasundan Bandung
2) Farmakologi-Farmasi Klinik, Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung
3) Farmasi Kimia Analisis, Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung
Diterima 07 Januari 2009 / Disetujui 21 Juni 2011

## ABSTRACT
The aims of the study was to determine antihyperuricemic activity of ethyl acetate and ethanol extractsof snake fruit (Salacca edulis Reinw.) var. Bongkok on Wistar male rats.  Wistar male  rats administered with  100 and 200 mg/kg b.w ethyl acetat extract  and  200  mg/kg b.w ethanol extract and simulationsly induced with potassium oxonate peritoneally and uric acid orally showed descreased uric acid serum level significantly as compared to control group at 6 th and 7 th hour (p < 0.05). Meanwhile ethanol extract at 100 mg/kg bw did not affect uric acid serum level significantly. Determination of uric acid level in urine of the rats, indicated that administration ofethanol extract at 200 mg/kg bw, orprobenecid as a standard at 45 mg/kg bw, increased excretion of urine uric acid level significantly as compared to control group at 7 th hour (p < 0.05). Additionally, administration of ethyl acetate extract at 100 and 200 mg/kg bw did not show an increase of uric acid excretion in urine. Mechanism of action of the ethyl acetate extract and ethanol extract as an antihyperuricemic agent has been proposed by inhibition of xanthine oxidase activity wich decrease the synthesis of  uric  acid.  Hence,  the  mechanism  of  action  of  antihyperuricemia  of  the  ethanol  extract  was  suggested  to  be  an  uricosuric  i.e.  increases  the excretion of urine uric acid and xanthine oxidase inhibitory .
Key words : Snake fruit var. Bongkok, ethyl acetate extract, ethanol extract, Antihyperuricemic, probenecid, Wistar male rat

## 1 PENDAHULUAN
Salah  satu  penyakit  generatif  adalah  pirai,  penyakit  ini ditandai  dengan  terjadinya  hiperurikemia  yaitu  kondisi asimtomatik  dimana  kadar  asam  urat  dalam  darah  melebihi normal.  Kadar  normal  asam  urat  dalam  darah  seorang  pria adalah 3,4-7,0 mg/dL, sedangkan wanita lebih rendah yaitu 2,4- 5,7 mg/dL. Asam urat merupakan produk akhir dari metabolisme purin.  Asam urat dihasilkan dari pemecahan makanan dansisa pembuangan  makanan  yang  mengandung  purin  atau  berasal dari  nukleotida  purin  yang  diproduksi  oleh  tubuh.  Tingginya kadar  asam  urat  di  dalam  darah  disebabkan  banyaknya  hasil metabolisme purin, sedangkan ekskresi asam urat melalui urin terlalu  sedikit  (Katzung,  2002).  Enzim  yang  berperan  dalam sintesis  asam  urat  adalah  xantin  oksidase  yang  aktif  bekerja dalam  hati,  usus  halus  dan  ginjal.  Tanpa  bantuan  enzim  ini, asam  urat  tidak  dapat  dibentuk.  Xantin  oksidase  adalah kompleks  metalo-flavoprotein  yang  mengoksidasi  hipoksantin menjadi  xantin,  dan  xantin  menjadi  asam  urat  (Fields et  al ., 1996).  Selama  proses  oksidasi  terjadi  pembentukan  radikal bebas  yang  dapat  meningkatkan  aktivitas  xantin  oksidase sehingga  kadar  asam  urat  dalam  tubuh  akan  meningkat.  (Al- Qirim et al ., 2002; Fields et al ., 1996; Vogel et al., 1997; Zhu et al ., 2004).
* Korespondensi Penulis Email : leni_priyatno@yahoo.com
Senyawa  antioksidan  alami  tumbuhan  umumnya  adalah senyawa  golongan  flavonoid.  Flavonoid  merupakan  salah  satu golongan  senyawa  aromatik  alam.  Beberapa  flavonoid  dari suatu tanaman dapat mengendalikan kenaikan kadar asam urat plasma  tikus  percobaan  dengan  mencegah  pembentukan radikal bebas (Al-Qirim et al ., 2002; Zhu et al ., 2004). Menurut  Al-Qirim et  al .,  (2002),  senyawa  flavonoid  dan alkaloid dalam daun khat ( Catha edulis ) yang terdapat di Afrika Timur  dan  Arab  dapatmenurunkan  kadar  asam  urat  (5%)  dan glukosa (33%) serum pada hewan tikus. Ekstrak Biota orientalis digunakan  untuk  terapi  pirai  dan  rematik.  Pada  tanaman tersebut  terkandung  quercetin  dan  rutin  yang  secara in  vitro dapat menghambat aktivitas xantin oksidase dan secara in vivo dapat  menurunkan  kadar  asam  urat  dalam  serum  tikus hiperurikemia (Zhu et al ., 2004).
Senyawa  baru  yang  berhasil  diisolasi  dalam  ekstrak  etil asetat  buah  salak  Bongkok  yaitu  asam  metil-pirol-2,4- dikarboksilat  yang  mempunyai  aktivitas  antioksidan  dan  dapat menghambat  xantin  oksidase  secara in  vitro (Afrianti et  al ., 2006).  Senyawa  asam  metil-pirol-2,4-dikarboksilat  konsentrasi 0,01;  0,02;0,2;2;  dan  2000  µg/Ml  mampu  meredam  aktivitas xantin  oksidase  masing-masing  sebesar  27,7;  30,5;  37,3;  50,3 dan  50,6%  dengan  IC 50 48,86  µg/mL  (Afrianti et  al .,  2007). Tujuan penelitian adalah menentukan aktivitas antihiperurikemia ekstrak  etil  asetat  dan  etanol  dari  buah  salak (Salacca  edulis Reinw.) varietas Bongkok pada tikus galur Wistar.

## METODOLOGI

## Bahan dan alat
Bahan yang digunakan adalah buah salak varietas Bongkok dari Desa Congeang Kabupaten Sumedang. Pelarut etil asetat, etanol, air suling, bahan untuk induksi adalah CMC-natrium, kit pereaksi asam urat, asam urat, kalium oksonat dari laboratorium SINDO.
Peralatan  yang  digunakan  adalah  neraca  analisis, tunnel drier , tabung maserasi, rak dan tabung reaksi, lemari pendingin, autoclaf,  vial,  mikropipet  50  µl  dan  500  µl, Fotometer  Tecno 108, jarum oral, jarum suntik, dan alat penguap vakum putar.

## Hewan uji
Tikus  percobaan  yang  digunakan  adalah  tikus  putih  jantan galur  Wistar  usia  ±  2  bulan  dengan  bobot  120-150±9,8  yang diperoleh dari Sekolah Ilmu Teknologi Hayati Institut Teknologi Bandung.
Pembuatan  simplisia  dan  ekstraksi  simplisia  buah  salak Bongkok
Buah  salak  Bongkok  dikukus  pada  60-70 o C,  selama  15 menit  dan  dikeringkan  dengan Tunnel  dryer pada  suhu  40 o C selama  5  hari.  Kemudian  dilakukan  penggilingan  untuk  men- dapatkan  serbuk  simplisia  buah  salak  Bongkok.  Ekstraksi simplisia dilakukan dengan maserasi menggunakan pelarut etil asetat,  dan  etanol.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  maserasi- perkolasi pada suhu ruang (23-27 o C) dengan pelarut etil asetat dan etanol masing-masing selama 3 x @ 24 jam.

## Pembuatan suspensi natrium urat
Sebanyak0,4  g  NaOH  dilarutkan  ke  dalam  400  mL  air destilasi  pada beaker  glass .  Lalu  ditambahkan  1,69  g  asam urat.  Larutan  tersebut  dibiarkan  pada  suhu  ruang  (23-27 o C) selama  12  jam  dan  larutan  supernatan  disaring.  Kemudian endapandicuci  3  kali  dengan  natrium  klorida  0,9%  dingin, dibiarkan sampai kering (mengkristal). Kemudian diambil 0,25 g kristal  lalu  disuspensikan  dengan  CMC-Na  0,5%  sebagai  zat pensuspensi. Suspensi untuk injeksi yang 15 mg/kg bb Na-urat disimpan  dalam  vial  multiple  dose  (Vogel,1997;  Zhu et  al ., 2004).

## Perlakuan hewan coba
Pemberian  ekstrak  dan  kontrol  positif  (obat)  secara  oral berturut-turut  selama  5  hari  dilakukan  pada  tiga  puluh  enam ekor  tikus  jantan  Wistar  dikelompokkan  secara  acak  menjadi enam kelompok, sebagai berikut ini :
(i) Kelompok kontrol negatif (CMC 0,5%)
(ii) Kelompok yang diberi ekstrak etil asetat dosis 100 mg/kg bb
(iii) Kelompok yang diberi ekstrak etil asetat dosis 200 mg/kg bb)
(iv) Kelompok yang diberi ekstrak etanol dosis 100 mg/kg bb
(v) Kelompok yang diberi ekstrak etanol dosis 200 mg/kg bb)
(vi) Kelompok yang diberi kontrol postif probenesid (45 mg/kg bb).
Pada  hari  ke-6  pemberian  ekstrak  dan  obat  dihentikan, kemudian  masing-masing  tikus  dipuasakan  selama  12  jam. Pada  hari  ke-7  pada  jam  ke-0  dilakukan  pengambilan  darah pada  seluruh  kelompok  untuk  memperoleh  kondisi  normal. Setelah  itu  dilakukan  induksi  suspensi  kalium  oksonat  (200 mg/kg  bb)  secara  intraperitonial  dan  Na-urat  (15  mg/kg  bb) secara  oral  pada  seluruh  kelompok  tikus.  Pada  jam  ke-4,5,6 sampai jam ke-10 dilakukan pengambilan 0,5 mL sampel darah pada seluruh kelompok.

## Persiapan sampel darah
Darah  diambil  sebanyak  0,5  mL  dengan  cara  memotong ujung  ekor  tikus  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung Eppendorff  dan  disentrifuga  dengan  kecepatan  12.000  rpm selama  5  menit.  Serum  yang  sudah  terpisah  dipindahkan  ke dalam  tabung  Eppendorff  lain  dan  dilakukan  penetapan  kadar dalam asam urat serum.

## Pengukuran kadar asam urat dalam serum
Penetapan  kadar  asam  urat  dalam  serum  darah  dilakukan dengan metode enzimatis PAP uricase. Sebanyak 5 µL serum dicampurdengan  0,25  mL  kit  pereaksi  asam  urat,  diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  5  menit,  lalu  diukur  kadar  asam  urat dengan  menggunakan  alat  Spektrofotometer Tecno 108  pada panjang gelombang 546 nm.

## Persiapan sampel urin
Persiapan  sampel  urin  dilakukan  sama  dengan  seperti sampel  darah.  Namun  setelah  dilakukan  induksi  seluruh kelompok tikus ditempatkan pada kandang penampungan urin, dan  pada  hari  ke-7  dilakukan  pengambilan  urin  pada  seluruh kelompok.

## Pengukuran kadar asam urat dalam urin
Sebanyak  1  mL  urin  ditambah  9  mL  aquades  dikocok hingga  homogen.  Kemudian  diambil  20  µL  dan  dicampur dengan 1 mL kit pereaksi asam urat, diinkubasi pada suhu 37 o C selama  10  menit,  lalu  diukur  kadar  asam  urat  dengan menggunakan  alat Fotometer  Tecno  108 pada  panjang gelombang  546  nm.  Analisis  statistik  yang  digunakan  untuk menentukan  kebermaknaan  efekkadar  asam  urat  adalah dengan t -student pada batas kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Penurunan kadar asam urat dalam serum dan urin
Hasil  pengukuran  kadar  asam  urat  pada  jam  ke-0  (kondisi normal)  tidak  menunjukkan  perbedaan  bermakna  (p  <  0,05) terhadap  kontrol  pada  seluruh  kelompok  tikus.  Hal  ini  dapat disimpulkan  bahwa  kondisi  normal  seluruh  kelompok  tikus adalah homogen yaitu memiliki kadar asam urat yang sama.
Induksi  hiperurikemia  dengan  pemberian  kalium  oksonat dan  natrium  urat  dilakukan  pada  jam  ke-0  setelah  pemberian zat  uji  dan  kontrol  selama  5  hari  memberikan  pengaruh  yaitu pada  jam  ke-4  sampai  jam  ke-7  kadar  asam  urat  masih mengalami kenaikan dibandingkan jam ke-0 (Gambar 1).
Gambar 1 . Kadar  asam  urat  dalam  serum  tikus  jantan  galur  Wistar yang diberi ekstrak buah salak Bongkok dan probenesid
Tikus  jantan  Wistar  yang  diberi  ekstrak  etil  asetat  buah salak Bongkok 100 mg/kg bb, 200 mg/kg bb, dan ekstrak etanol 200 mg/kg bb dapat menurunkan kadar asam urat serum yang berbeda  bermakna  (p  <  0,05)  dibandingkan  kontrol  pada  jam ke-6  dan  ke-7.  Namun,  pemberian  probenesid  sebagai pembanding  tidak  menunjukkan  penurunan  kadar  asam  urat serum  yang  tidak  berbeda  bermakna  (p  <  0,05)  dibandingkan kontrol.  Hal  ini  disebabkan  karena  probenesid  tidak menunjukkan  efek  yang  dapat  menurunkan  kadar  asam  urat dalam  darah,  karena  kerja  probenesid  adalah  sebagai urikosurik.  Pemberian  kalium  oksonat  dan  natrium  urat  dapat menyebabkan peningkatan kadar asam urat serum tikus secara signifikan.  Namun  ekstrak  tanaman Biotaorientalis yang mengandung  quersetin  dan  rutin  diberikan  selama  1,  3  dan  5 hari  sebelum  perlakuan  hiperurikemia  secara  signifikan mengurangi tingkat asam urat serum tikus dibandingkan kontrol (Zhu et  al .,  2004).  Quersetin  dan  rutin  dalam  Biota  orientalis mengandung  flavonoid  yang  dapat  mengurangi  asam  urat serum pada tikus yang diinduksi dengan kalium oksonat secara in  vivo  dan  menghambat  aktivitas  enzim  xantinoksidase  pada hati tikus secara in vitro (Nagao et al ., 1999). Pengujian  secara in  vitro ekstrak  etil  asetat  mampu meredam 50 persen enzim xantin oksidase dengan IC 50 24,75 µg/mL  dan  senyawa  asam  metil-pirol-2,4-dikarboksilat merupakan senyawa dari isolasi ekstrak etil asetat menginhibisi 50  persen  aktivitas  enzim  xantin  oksidase  dengan  IC 50 adalah 48,86  µg/mL  (Afrianti et  al .,  2010).  Secara in  vivo ekstraketil asetat  dapat  menurunkan  kadar  asam  urat  serum,  tetapitidak dapat  meningkatkan  ekskresi  asam  urat  melalui  urin.  Pada Gambar  2  yang  menggambarkan  pengaruh  ekstrak  dan  obat dalam  menurunkan  kadar  asam  urat  serum  tikus  dapat dilihatpada jam ke-4 peningkatan kadar asam urat untuk semua kelompok hampir sama dibandingkan jam ke-0.
Kadar  asam  urat  kelompok  kontrol  pada  jam  ke-5  sampai jam  ke-10  mengalami  peningkatan,  meskipun  persentasenya menurun,  hal  ini  disebabkan  kelompok  kontrol  tidak  memiliki inhibitor  urikase  yang  dapat  menurunkan  kadar  asam  urat serum.  Pada  jam  ke-6  dan  ke-7  ekstrak  etil  asetat  dosis  100 dan 200 mg/kg bb menunjukkan peningkatan kadar asam urat
serum  berbeda  bermakna  (p  <  0,05)  dibandingkan  kontrol, bahkan pada jam ke-8 ekstrak etil asetat 100 dan 200 mg/kg bb dapat menurunkan kadar asam urat sekitar 7,9 dan 8,3%.
Pada  jam  ke-7  ekstrak  etanol  200  mg/kg  bb  menunjukkan peningkatan  kadar  asam  urat  serum  berbeda  bermakna  (p  < 0,05)  dibandingkan  kontrol,  dan  pada  jam  ke-8  ekstrak  etanol 200 mg/kg bb dapat menurunkan kadar asam urat sekitar 8%. Ekstrak  etil  asetat  secara  spesifik  dapat  menghambat peningkatan  kadar  asam  urat  pada  tikus,  sehingga  diduga mempunyai kerja sebagai urikostatik.
Gambar 2.  Persentase  penurunan  kadar  asam  urat  serum  tikus jantan  galur  Wistar  yang  diberi  ekstrak  buah  salak Bongkok dan Probenesid setelah diinduksi dengan kalium oksonat dan Na-urat.; Persentase (-) menunjukkan terjadi peningkatan  kadar  asam  urat  serum,  Persentase  (+) menunjukkan terjadi penurunan kadar asam urat serum.
Pembanding  probenesid  sebagai  obat  antipirai  digunakan agar  dapat  dilihat  kemampuan  ekstrak  dalam  menurunkan kadar  asam  urat  dengan  ekskresi  melalui  ginjal  yang  dapat dilihat  dengan  penurunan  kadar  asam  urat  urin  tikus  Wistar (Gambar 3).
Gambar 3.  Kadar asam urat dalam urin tikus jantan galur Wistar yang diberi  ekstrak  buah  salak  Bongkok  dan  probenesid setelah diinduksi kalium oksonat dan Na-urat.
Probenesid  menghambat  reabsorbsi  tubulus  proksimal, sehingga  menurunkan  kadar  asam  urat  dalam  darah.  Kadar asam urat dalam urin tikus menunjukkan bahwa pada hari ke-7 yang  diinduksi  dengan  kalium  oksonat  dan  Na-urat;  pada kelompok yang diberi ekstrak etanol 200 mg/kg dan probenesid
0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 4 5 6 7 8 9 10 Kontrol
Ekstrak Etanol 100 mg/kg BB Ekstrak Etanol 200 mg/kg BB EkstrakEtil asetat 100 mg/kg BB Ekstrak Etilasetat 200 mg/kg BB Probenesid Ka da r a sa m u ra t s er um (m g/ dL ) Keterangan : waktu (jam) 0 2 4 6 8 10 12 Kontrol Ekstrak Etanol200 mg/kg
BB Ekstrak Etilasetat200 mg/kg BB hari ke-6 hari ke-7 Ju m la h as am u ra t y an g die ks kr es ik an ke d ala m u rin (m g)
-120 -100 -80 -60 -40 -20 0 20 40 Kontrol Ekstrak Etanol 100mg/kg bb Ekstrak Etanol 200 mg/kg bb Esktrak etil asetat 100 mg/kg bb Ekstrak etil asetat 200 mg/kg bb Probenesid waktu (jam ke) Pe nu ru na n ka da r a sa m u ra t s eru m tik us (% ) 4 5 6 7 8 9 10 Keterangan :
45  mg/kg  bb  terjadi  ekskresi  asam  urat  melalui  urin  dengan perbedaan  yang  bermakna  (p  <  0,05)  dibandingkan  kelompok kontrol. Namun aktivitas ekskresi asam urat ekstrak etanol 200 mg/kg bb masih lebih rendah dibandingkan dengan probenesid 45  mg/kg  bb.  Hal  ini  terlihat  dari  jumlah  asam  urat  dalam  urin dari ekstrak etanol 200 mg/kg bb adalah 0,067 mg sedangkan pada probenesid adalah 0,084 mg. Meskipun demikian, ekstrak etanol  200  mg/kg  bb  dapat  dinyatakan  sebagai  ekstrak  yang mempunyai  kemampuan  sebagai  urikosurik.  Sedangkan pemberian  ekstrak  etil  asetat  tidak  menunjukkan  adanya peningkatan ekskresi asam urat melalui urin, hal ini terlihat pada dosis 100 mg/kg bb, jumlah asam urat yang dikeluarkan melalui urin  hanya  0,019  mg,  bahkan  pemberian  dosis  200  mg/kg  bb tidak mampu mengekskresikan asam urat melalui urin.
Hal yang menarik pada penelitian ini adalah ekstrak etanol mempunyai  dua  mekanisme,  terlihat  dengan  terjadinya penurunan kadar asam urat dalam serum yang diduga berefek urikostatika  dan  juga  berefek  urikosurik  karena  ekskresi  asam urat dalam urin menunjukkan peningkatan.
Asam urat merupakan produk akhir degradasi purin yang tidak  mempunyai  fungsi  biologis  dan  hanya  sebagai  limbah. Hewan  tingkat  rendah  seperti  tikus  mempunyai  enzim  urikase yang  dapat  merubah  asam  urat  menjadi  alantoin  yang  lebih larut, sehingga asam urat tidak terakumulasi. Sedangkan pada manusia  asam  urat  tidak  dimetabolisme  dan  harus  di ekskresikan melalui urin (Katzung, 2002).

## KESIMPULAN
Secara in vivo diketahui ekstrak etil asetat dapat berfungsi sebagai  antihiperurikemia  karena  dapat  menghambat  aktivitas enzim  xantin  oksidase  yang  pada  akhirnya  menghambat pembentukan  produksi  asam  urat  pada  tikus  jantan  galur Wistar.  Ekstrak  etanol  sebagai  antihiperurikemia  mempunyai dua  mekanisme  kerja  yaitu  sebagai  urikostatik  yaitu  dapat menurunkan kadar asam urat dalam serum dan urikosurik yaitu meningkatkan ekskresi asam urat melalui urin tikus Wistar.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Peneliti berterimakasih kepada Departemen Pendidikan dan Kebudayaan atas bantuan Beasiswa Pendidikan Pasca Sarjana
(BPPS)  dan  Lembaga  Penelitian  ITB  yang  telah  membiayai penelitian  ini  melalui  dana  penelitian  dari  Riset  KK  ITB  tahun 2006 dan 2007.

## DAFTAR PUSTAKA
Afrianti LH, Sukandar EY, Ibrahim S, Adnyana I K. 2006. Inhibisi Xanthin  Oksidase  ekstrak  daging  buah  salak  varietas Bongkok ( Salacca Edulis Reinw.). J Infomatek 8(1)5-8.
Afrianti  LH,  Sukandar  EY,  Ibrahim  S,  Adnyana  I  K.  2007. Xanthine Oxidase inhibitor activity of terpenoid and pyrrole compounds isolated from snake fruit ( Salacca edulis Reinw) variety of Bongkok, J Applied Sciences 7(20): 3127-3130.
Afrianti  LH,  Sukandar  EY,  Ibrahim  S,  Adnyana  I  K.  2010.
Senyawa  asam  2-metilester-1-H-pirol-4-karboksilat  dalam ekstrak  etil  asetat  buah  salak  varietas  Bongkok  ( Salacca Edulis Reinw.)  sebagai  antioksidan  antihiperurikemia.  J Teknol dan Industri Pangan 21(1) 66-72.
Al-Qirim  TM,  Shahwan  M,  Zaidi  KR,  Uddin  Q,Banu  N.2002.
Effect  of  khat,  its  constituent  and  restraint  stress  on  free radical metabolism of rats., J Ethnopharm 83: 245 -250.
Fields M, Charles GL, Mark DL. 1996. Allopurinol, an inhibitor of xanthine oxidase, reduces uric acid levels and modifies the signs associated with copper deficiency in rats fed fructose. J Free Radical Biology & Medicine 20(4) 595-600.
Katzung BG. 2002. Farmakologi Dasar dan Klinik (terjemahan) Bagian  Farmakologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia, Salemba Medika, Jakarta, 487-493.
Nagao  A,  Seki  M,  Kobayashi  H.  1999.  Inhibition  of  xanthin oxidase  by  flavonoids.  Bioscience,  Biotechnology,  and Biochemistry 63, 1787-1790.
Vogel  HG,  Wolfgang  HV.1997.  Drug  discovery  and  evaluation pharmacological assay. Springer. Philadelphia.178-179.
Zhu ZX, Wang Y, Kong LD, Yang C, Zhang X. 2004. Effects of Biota  orientalis  extract  and  its  flavonoid  constituents, quercetin  and  rutin  on  serum  uric  acid  levels  in  oxonate- induced  mice  and  xanthine  dehydrogenase  and  xanthine oxidase  activities  in  mouse  liver.  J  Ethnopharmacology 93:33-140.