Uji Aktivitas Hipoglikemik Kombinasi  Sirsak ( Annona muricat a) Dan Kelor ( Moringa oleifera )  Pada Tikus Diabetes Mellitus Yang Diinduksi Aloxan
Activity test of Hypoglycemic of combination of sourson ( Annona muricata ) and moringa ( Moringa oleifera ) in Mice induced Aloxan
Hartono 1 , Agil Novianto 2 1,2 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional, Surakarta tono_navsol@yahoo.co.id
Abstract: Increase level of glucose can lead oxidative sress which is sign by anormaly level of free  radical  on  the  body.  Research  from  the  past,  soursop  and  moringa  extract  can  reduce glucose level on the single dose.The study was conducted to determine the dose of optimal from a combination of extracts ethanol leaves soursop and moringa  more effective decrease of  blood  glucose  levels  in  male  mice  wistar  strain  induced  alloxan  as  compared  to  the provision  of  a  single.The  test  as  much  as  36  mouse  that  were  divided  into  eight  groups, namely : normal, negative (CMC-Na), positive (glibenklamid), soursop extract 100 mg/bw (S 100),  moringa  extract  200  mg/bw  (K100),  SK  75:25,  SK  50:50  and  SK  25:75.  All  the  test animals, except the  normal induced aloxan on the day  zero, followed  by  the test animals  of the day 1st to 14th day. The data collected in the form of blood sugar levels of serum taken on the day zero, the 7th day and the 14th day and be measured using the method of GOD- PAP and measured of glucose level and analyzed to ge % hypoglycemic level. All data then analyzed with ANOVAextrac (Analysis of Varians) with (α = 0,05). A combination of extracts soursop  and  moringa    extract  more  effectively  decreasing  blood  glucose  levels  significantly (p<0,05).  Both  extract  single  or  combination  can  reduce  glucose  level.  Dosages  of  optimal from  a  combination  of  extracts  soursop  and  moringa    extract  to  decrease  blood  glucose levels,  doses  SK  50:50    with  the  percentage  of  a  hypoglycemic  level  by  36,56  %>  This combination more effectively decreasing blood glucose levels compared to each  single dose. Key word : sourson, morina, diabetic mellitus, aloxan
Abstrak :  Kenaikan  kadar  gula  dalam  darah  akan  memicu  terjadinya  kondisi  stress  oksidatif yang  ditandai  dengan  ketidakseimbangan  antara  jumlah  radikal  bebas  dan  antioksidan. Penelitian  yang  terakhir  dilakukan  ekstrak  sirsak  dan  kelor  efektif  untuk  menurunkan  kadar gula dalam darah namun penelitian yang ada masih dilakukan dalam bentuk tunggalnya dan belum  pernah  dilakukan  kombinasi  antar  kedua  ekstrak.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui  pengaruh  kombinasi  ekstrak  sirsak  dan  kelor  terhap  kadar  glukosa  pada  tikus yang  diinduksi  aloxan.  Hewan  uji  sebanyak  36  ekor  yang  dibagi  menjadi  6  kelompok  yaitu: kelompok  normal  (aquadest),  kontrol  negatif  (CMC  Na  0,5  %),  kontrol  positif  (glibenclamide dosis  1,26  mg/kgBB),  ekstrak  sirsak  100  mg/kg  BB,  ekstrak  kelor  dosis  200  mg/kg  BB  dan kombinasi  I  (75:25),  II  (50:50)dan  III  (25:75)  dalam  persen.  Semua  Kelompok  hewan  uji, kecuali  kelompok  normal  diinduksi  aloksan  dosis  150mg/kgBB  pada  hari  ke-0,  dilanjutkan dengan perlakuan hewan uji dari hari ke-1 sampai hari ke-14. Dilakukan pengambilan sampel darah pada hari ke-0, 7, dan 14 untuk anallisis kadar gula darah dan selanjutnya ditentukan besar % daya hipoglikemik. Penggunaan ekstrak daun kelor dan sisrsak baik itu tunggal dan kombinasi  mampu  menurunkan  kadar  glucose  darah.  Aktivitashipoglikemik  optimal  pada kombinasi  sirsak  kelor  50:50  dengan  aktivitas  hipoglikemik  36,56  %.  Kombinasi  ini memeberikan hasil yang lebih bagus dibandingkan bentuk tunggalnya Kata kunci : Sirsak, Kelor, Diabetes Mellitus, aloxan

## I.  PENDAHULUAN
Diabetes  Melitus  (DM)  merupakan penyakit  yang  ditandai  dengan  kenaikan kadar  gula  darah  di  atas  normal  dengan gejala  polidipsi,  polifagi  dan  pliurea (Almatsier,  2008).  Pada  tahun  2003 terdapat  194  juta  jiwa  di  dunia  menderita DM dan akan meningkat menjadi 333 juta jiwa  pada  tahun  2025  menurut  laporan Global  Diabetes  Statistic.  Prevalensi  DM penduduk  Indonesia  berusia  15  tahun sekitar  1,2 –  2,3  %    (Aziza,  2010).
Berdasarkan laporan World Health
Organization (WHO),  DM  termasuk  salah satu pembunuh terbesar di Asia Tenggara dan  Pasifik  Barat  (PERKENI,  2006). Estimasi  prevalensi  DM  pada  dewasa (usia 20-79 tahun)  sebanyak  6,4%  atau 285    juta  orang.  Pada    tahun    2013, proporsi    penduduk    Indonesia    yang berusia ≥15  tahun dengan DM adalah 6,9 persen (Kemenkes, 2013).
Salah  satu  obat  yang  digunakan untuk  terapi  DM  adalah  glibenklamid  dari golongan  sulfonylurea.  Obat  ini  sampai saat  ini  masih  digunakan  untuk  terapi namun  demikian  efek  samping  yang ditimbulkan  yaitu  penurunan  kadar  gula dibawah  normal  cenderung  merugikan apabila  tidak  dikontrol  (Handoko  dan Suharto, 2005). Para ahli mengembangkan sistem pengobatan tradisional  untuk  diabetes  melitus  yang relatif  aman  karena  obat  tradisional bekerja  dengan  beberapa  kandungan senyawa yang memberikan keseimbangan dalam tubuh. Dalam penelitian  yang  dilakukan  pada  beberapa tahun terakhir pengobatan terhadap diabetes mellitus dilakukan dengan pendekatan  pada  mekanisme  antioxidant sejala  dengan  resiko  untuk  mengurangi dampak komplikasi penyakit tersebut.
Sirsak ( Annona muricata Linn ) telah banyak  dikembangkkan  untuk  berbagai macam  penyakit  seperti  kanker  maupun dibetes mellitus. Penelitian yang dilakukan oleh  Stephen et  al .,  (2006)  dan  Florence et al ., (2014) penggunaan  fraksi air sirsak 100mg/kg  BB  dapat  menurunkan  kadar gula  darah  pada  hewan uji  yang  diinduksi streptozotocin.  Kelor  ( Moringa  oleifera lam.)  telah  banyak  diteliti  efeknya  dalam menurunkan  kadar  gula  dalam  darah.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh    El- Desouki et  al .,  (2015)  ekstrak  daun  kelor mampu  menurunkan  kadar  gula  darah dengan  meningkatkan  kadar  insulin  dan memperbaiki kerusakan pancreas. Penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh  Gupta et  al .,  (2012)  pemberian  ekstrak  kelor dosis mampu menaikkan aktivitas antioxidant  pada  hewan  uji  dalam  kondisi diabetets  mellitus.  Ekstrak  air  daun  kelor dosis  200  mg/kg  BB  terbukti  efektif  untuk menurunkan  kadar  gula  darah  pada  tikus diabetes mellitus resistensi insulin maupun defisiensi insulin (Divi et al . 2012)
II. METODE PENELITIAN
1.  Alat dan Bahan Alat yang digunakan untuk penelitian  meliputi  neraca  analitik,  spuit oral,  spuit  pengaduk,  jarum  suntik, hand glove ,  sarung  tangan,  masker,  kapas, corong  kaca,  labu  takar,  kandang  hewan, pipa  kapiler,  eppendrop,  mikrokuvet  dan spektrometer  UV  Vis  dan  Microvitalab. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian daun  kelor,  daun  sirsak,  Kapsul  ukuran  0 (Capsugel),  CMC-Na  (teknis),  etanol  70% (teknis), aloksan (Sigma), aquadest, glibenklamid,  reagen  GOD-PAP  (Sigma). Hewan  uji  tikus  jantan  galur  Wistar  berat 150-200g, dengan umur 2-3 bulan
2.  Metode
Sebanyak  1  kg  daun  kelor  dan sirsak dilakukan ekstraksi dengan menggunakan metode maserasi. Simplisia dimasukkan  dalam    bejana,  kemudian ditambah  dengan  7,5  liter  air  ditutup  dan biarkan  selama  3  hari,  diserkai,  dan ampas  diperas.  Sari  dipekatkan  hingga diperoleh ekstrak kental.
Digunakan 4 sedian uji yang meliputi Na CMC, glibenclamide, ekstrak kelor dan sirsak.  Na  CMC  0,5  %  (kontrol  negatif) dan  glibenclamide  sebagai  kontrol  positif dosis  1,26  mg/kgBB  (Sogara,  2014) dengan stok konsentrasi  10 mg %. Dosis ekstrak  yang  digunakan  berdasarkan penelitian sebelumnya yaitu ekstrak sirsak 100 mg/kg BB (Florence et al ., 2014) dan ekstrak  kelor    200  mg/kg  BB  (Divi et  al . 2012).  Dilakukan  kombinasi  dua  sampel dengan  rancangan  seperti  dalam  tabel  di bawah.  Sebagai  pembanding  digunakan
SSN 2443-1249 (Print) 2355-1313 (On Line) -  ijmsbm.org
0 50 100 150 200 250 300 0 7 14 K adar G lukosa D arah (m g/d L) Hari ke Normal CMC Na Glibenclamid e
Sirsak 100 Kelor 100 SK 75:25
dosis  tunggal  untuk  masing  masing ekstrak berdasarkan penelitian sebelumnya. Tabel 1. Kombinasi ekstrak sirsak dan kelor Kelompok Sampel (%) Sampel (mg/kg BB) Sirsak Kelor Sirsak Kelor Kombinasi I 75 25 75 50 Kombinasi II 50 50 50 100 Kombiansi III 25 75 25 150
Ket :Stok sediaan ekstrak sirsak 10 mg/ml, ekstrak kelor 20 mg/ml.
Hewan uji sebanyak 36 ekor yang dibagi menjadi 6 kelompok yaitu: kelompok  normal  (aquadest),  kontrol negatif  (CMC  Na  0,5  %),  kontrol  positif (glibenclamide  dosis  1,26  mg/kgBB), ekstrak sirsak 100 mg/kg BB, ekstrak kelor dosis  200  mg/kg  BB  dan  kombinasi  I (75:25),  II  (50:50)dan  III  (25:75)  dalam persen.  Semua  Kelompok  hewan  uji, kecuali kelompok normal diinduksi aloksan dosis  150mg/kgBB  pada  hari  ke-0, dilanjutkan  dengan  perlakuan  hewan  uji dari  hari  ke-1  sampai  hari  ke-14. Dilakukan  pengambilan  sampel  darah pada  hari  ke-0,  7,  dan  14  untuk  anallisis kadar gula darah dan selanjutnya ditentukan besar % daya hipoglikemik

## III. HASIL
Penelitian ini menggunakan metode pengujian efek antidiabetes tipe II defisiensi  insulin.  Hewan  uji  berupa  tikus jantan  galur  wistar  dengan  berat  100-200 g  yang  diinduksi  menggunakan  aloksan dengan  dosis  160  diabetes.  Aloksan adalah  komponen  kimia  yang  hidrofilik dan  memiliki  bentuk  yang  sangat  mirip dengan  glukosa,  menyebabkan glucose transporter 2  (GLUT2)  di  dalam  sel  beta pankreas  mengenali  aloksan  sebagai glukosa.  Aloksan  merupakan  senyawa kimia  yang  secara  selektif  merusak  sel beta  pankreas  sebagai  penghasil  insulin dan penyebab noninsulin  dependent diabetes  melitus  atau  diabetes  mellitus tipe II (Hardiyani, 2013).
Hasil    pengujian  yang  dilakukan didapatkan  hasil  rata-rata  kadar  gula darah  hewan  uji  yang  diambil  pada  hari ke-0,  ke-7  dan  ke-14  dapat  dilihat  pada tabel 1 dan gambar 1.
Tabel  1.    Rata-rata  kadar  glukosa  darah  hewan  uji pada hari ke-0, ke-7, dan ke -14
Kelompok kadar Glucose (mg/dl) 0 7 14 Normal 106.33 117.67 111.67 CMC Na 99.33 155.00 247.00 Glibenclamide 100.00 137.67 66.33 Sirsak 100 91.00 133.00 114.33 Kelor 100 85.50 153.75 117.25 SK 75:25 87.60 125.00 105.80 SK 50:50 86.20 115.60 99.00 SK 25:75 102.75 123.75 103.75
Gambar 1. Grafik Kadar gula darah selama periode penelitian Keterangan : Normal : Aquadest Negatif : CMC-Na (p.o.) Positif : Glibenclamide 1,26 mg/KgBB (p.o) Sirsak 100 : ekstrak etanol sirsak  100% (p.o) Kelor 100 : ekstrak etanol kelor 100% (p.o) SK 75:25 : kombinasi sirsak 75%:kelor 25% SK 50:50 : kombinasi sirsak  50% : kelor 50% SK 25:75 : kombinasi sirsak 25% : kelor 75%
Untuk melihat  aktivitas  hipoglikemik masing-masing  perlakukan  data  kadar glucose dirubah dalam persen área under curve kemudian
diinterepretasi dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol negatif untuk menentukan aktivitas hipoglikemik. Hasil uji aktivitas hipoglikemik dapat dilihat pada gambar 2.

## Gambar 2. Persen daya hipoglikemik

## IV.  PEMBAHASAN
Kondisi  hiperglikemia  mengakibatkan pembentukan  radikal  bebas  khususnya senyawa  oksigen  reaktif  (Moussa,  2008). Pembentukan  senyawa  oksigen  reaktif dapat  meningkatkan  modifikasi  lipid,  DNA dan protein di berbagai jaringan. Modifikasi molekular pada berbagai jaringan tersebut mengakibatkan ketidakseimbangan antara  antioksidan
dan radikal bebas sehingga terjadi kondisi stress  oksidatif  (Setiawan  dan  Suhartono, 2005).  Stress  oksidatif  akan  menghambat pengambilan  glukosa  di  sel  otot  dan  sel lemak  serta  penurunan  sekresi  insulin oleh  sel  β  pankreas  pada  penderita  DM. Pemberian  antioksidan  dapat  mengatasi ketidakseimbangan  yang  terjadi  akibat radikal  bebas  yang  ada  dan  dapat mencegah kerusakan lebih lanjut
khususnya  pankreas.  Antioksidan  dapat berupa  enzimatis  (enzim  superoksida dismutase (SOD),
katalase, dan glutathione peroxidation) dan non enzimatis (tokoferol, karotenoid, flavonoid, quinon,  dan  asam  askorbat).  Daun  sirsat dan  daun  kelor  merupakan  tanaman
herbal
Indonesia
yang banyak mengandung  zat  antioksidan.  Kandungan kimia  yang  ditemukan  dalam  daun  sirsak meliputi  Steroids,  Alkaloids,  Saponnins, Tannins,
Flavonoid,
and Cardiac glycosides.  Kelor  telah  lama  digunakan dalam terapi kanker, hiperlipidemi, analgesic,  mengurangi  gangguan  liver, sebagai antikonvulsan dan dapat digunakan  dalam  terapi  diabetes  mellitus. Kandungan  kimia  yang  ditemukan  dalam kelor yaitu flavonoids, anthocyanins, proanthocyanidin, kaempferol-3-O-(6''- malonyl-glucoside),  4- hydroxymellein,  β- sitosterone,  octacosanic  acid,  β-sitosterol (Keshwani et al ., 2014).
Hasil  penelitian  yang  ditunjukkan pada  pada  tabel  1  dan  gambar  1 menunjukkan  adanya  kenaikan  kadar glucose  pada  hari  ke  7  dan  14  untuk kelompok  kontrol  negatif,  sedangkan untuk  kelompok  perlakukan  sediaan  uji dan kontrol positif menunjukkan penurunan kadar glucosa pada hari ke-14.
Hal  ini  menunjukkan  adanya  efek  yang muncul akibat pemberian perlakuan sediaan uji maupun control positif glibenclamide yang digunakan. Pemberian kombinasi  ekstraksi  sirsat  dan  daun  kelor dapat menurunkan kadar glucosa darah.
Berdasarkan hasil uji aktivitas hipoglikemik  pada  gambar  2,  dapat diketahui  bahwa  penggunaan  sirsak  dan daun  kelor  dalam  bentuk  tunggal  maupun kombinasi  mampu  memberikan  aktivitas hipoglikemik  sebesar  22,26  %  -  36,56  %. Aktivitas  hipoglikemik  kombinasi  ekstrak sirsat  dan  daun  kelor  lebih  tinggi dibandingkan dengan masing-masing dosis  tunggalnya.  Kombinasi  sirsak  dan daun  kelor  mampu  memberikan  aktivitas hipoglikemik  yang  lebih  besar  dengan aktivitas optimal diantara ketiga kombinasi yaitu  pada  kombinasi  sirsak  daun  kelor 50:50.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh Keshwani  (2013),  ditemukan  adanya senyawa flavonoids, anthocyanins, proanthocyanidin, kaempferol-3-O-(6''- malonyl-glucoside),  4- hydroxymellein,  β- sitosterone,  octacosanic  acid,  β-sitosterol dalam  ekstrak  kelor.    El-Desouki et  al .,
(2015) ekstrak daun kelor mampu menurunkan  kadar  gula  darah  dengan
,000 5,000 10,000 15,000 20,000 25,000 30,000 35,000 40,000 32,707 22,257 28,187 32,443
36,557 31,628
% Kelompok
Aktivitas Hipoglikemik (%)
meningkatkan kadar insulin dan memperbaiki kerusakan
pancreas.
Penelitian yang dilakukan oleh Stephen et al .,  (2006)  dan  Florence et  al .,  (2014) penggunaan  sirsak  dapat  menurunkan kadar  gula  darah  pada  hewan  uji  yang diikuti  dengan  kemampuanya  sebagai antioksidan  dengan  menurunkan  kadar lipid peroksidase.

## V.  SIMPULAN
Penggunaan  ekstrak  daun  kelor dan  sirsak  baik  itu  tunggal  dan  kombinasi mampu menurunkan kadar glukose darah. Aktivitas hipoglikemik optimal pada
kombinasi  sirsak  kelor  50:50  dengan aktivitas  hipoglikemik 35,56 %. Kombinasi kedua ekstrak
memeiliki aktivitas hipoglikemik  lebih  baik  dibandingkan bentuk tunggalnya

## UCAPAN TERIMA KASH
Ucapan  terima  kasih  diberikan kepada  Kementrian  Ristek  DIKTI  melalui program  hibah  untuk  Penelitian  Dosen Pemula tahun pendanaan 2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Almatsier,  S.,  2008, Penuntun  Diet ,
Jakarta:  PT.  Gramedia  Pustaka Utama. Aziza, R.Z., 2010, Gambaran Histomorfologi  hati,  usus  halus, dan limpa pada tikus hiperglikemia yang diberi Ekstrak Sambiloto, Skripsi , Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Divi, Bellamkonda, Dasireddy, Evaluation  Of  Antidiabetic  And Antihyperlipedemic  Potential  Of Aqueous Extract  Of  Moringa Oleifera  In  Fructose  Fed  Insulin Resistant And Stz Induced Diabetic Wistar Rats: A Comparative Study, Asian J
Pharm  Clin  Res,  Vol  5,  Issue  1,
2012, 67-72
El-Desouki,  N.M.,  Basyony,  M.A.,  Hegazi, M.M., and El-Aama, M.S., Moringa  oleifera
Leaf  Extract Ameliorates  Glucose,  Insulin  and Pancreatic  Beta  Cells  Disorder  in Alloxan-Induced Diabetic Rats. RJPBCS 6(3) Page No. 642. Florence  NT,  Benoit  MZ,  Jonas  K,
Alexandra T, Désiré DD, Pierre K, and Théophile D, . 2014, Antidiabetic and antioxidant effects of Annona muricata (Annonaceae),  aqueous  extract on streptozotocin-induced diabetic rats, J Ethnopharmacol .
3;151(2):784-90. Gupta,  S.,  Agarwal,  A.,  Sharma,  R.K., 2005, The Role of Placenta Oxidative Stress and Lipid Peroxidation in Preecampsia, 60(12) :807-816, Obstetrical and Gynecological Survey . Handoko  dan  Suharto,  2005, Insulin, Glukagon  dan  Antidiabetik  Oral. Dalam:  Farmakologi  dan  Terapi edisi  4, Bagian  Farmakologi Fakultas  Kedokteran  Universitas
Indonesia.
Kemenkes, 2013, Riset Kesehatan Dasar, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementrian Kesehatan RI, Jakarta. Perkeni,  2006, Konsensus  Pengelolaan dan Pencegahan Diabetes Melitus  Tipe-II  di  Indonesia , Jakarta: PB.PERKENI. Stephen,  Adewole,  and  Martins,  E.A., 2006, Morphological Changes and Hypoglycemic  Effects  of Annona Muricata Linn. (Annonaceae) Leaf Aqueous Extract on Pancreatic Β- Cells  of  Streptozotocin-Treated Diabetic  Rats,  African  Journal  of Biomedical  Research,  Vol.  9 (2006); 173 - 187