PERBANDINGAN AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL 30% dan 96% KELOPAK BUNGA ROSELLA (Hibiscus sabdariffaL)TERHADAP BAKTERI
Staphylococcus aureus
Mira Miranti, Prasetyorini dan  Chrys Suwary Program Studi Farmasi FMIPA-UNPAK

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  perbandingan  aktivitas  antibakteri ekstrak etanol 30% dan 96% kelopak  bunga rosella (Hibiscus sabdariffa L) terhadap bakteri Staphylococcus  aureus.  Perlakuan  yang  digunakan  adalah  konsentrasi  ekstrak  etanol  30% dan  96%  kelopak  bunga  rosella  dengan  konsentrasi  masing-masing  yaitu  20%,  40%,  60% dan 80%, sebagai pembanding digunakan antibiotik amoksisilin 10 ppm. Pengujian aktivitas antibakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  difusi  kertas  cakram  serta  uji Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  menggunakan  metode  dilusi  padat.Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  30%  dan  96%  kelopak  bunga rosella  berbeda  dalam  menghambat  bakteri  Staphylococcus  aureus.  Ekstrak  etanol  96% kelopak bunga rosella lebih aktif dalam menghambat bakteri  Staphylococcus aureus  karena pada  konsentrasi  60%  dengan  rata-rata  lebar  daerah  hambat  sebesar  4,5  mm,  sedangkan ekstrak  etanol  30%  kelopak  bunga  rosella  paling  aktif  pada  konsentrasi  80%  dengan  rata- rata  lebar  daerah  hambat  sebesar  4,5  mm.  Hasil  lebar  daerah  hambat  untuk  konsentrasi 60%  pada  ekstrak  etanol  96%  dan  konsentrasi  80%  pada  ekstrak  etanol  30%  memiliki pengaruh  yang  sama  secara  statistik  terhadap  kontrol  positif  amoksisilin  dengan  rata-rata lebar  daerah  hambat  sebesar  4,6  mmHasil  uji  konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  yang efektif adalah pada konsentrasi 2,5% untuk ekstrak etanol 30% dan konsentrasi 1% untuk ekstrak etanol 96%. Berdasarkan hasil pengujian fitokimia diketahui bahwa ekstrak  etanol 30%  dan  96%    kelopak    bunga  rosella  mengandung  saponin,  tanin  dan  flavonoid  yang memiliki aktivitas antibakteri.
Kata kunci : Antibakteri, Kelopak Bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa L) , Stapylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Tumbuhan  obat  yang  saat  ini  sangat popular  dan  banyak  digunakan  oleh masyarakat  untuk  mengobati  berbagai macam  penyakit  salah  satunya  adalah bunga rosella ( Hisbiscus sabdariffa L), hal ini  disebabkan  hampir  seluruh  bagian tanaman  ini  dapat  digunakan  untuk kebutuhan  pengobatan,  terutama  untuk pengobatan alternatif (Mardiah, dkk.
2009).Khasiat  bunga  Rosella  ( Hibiscus sabdariffa L) dari segi kesehatan mempunyai  manfaat  sebagai  pencegahan penyakit  yaitu  mengendalikan  tekanan darah,  melancarkan  buang  air  besar  dan
bisa  juga  digunakan  untuk  merawat  luka, penyakit  kulit  dan  sebagai  antibakteri (Devi, 2009).
Menurut  Wijayakusuma,  1994  agar peranan  tumbuhan,  khususnya  tumbuhan yang berkhasiat obat dapat terus ditingkatkan  dan  dipertanggungjawabkan secara  medis,  maka  perlu  digali  lebih mendalam melalui penelitian dan pengujian terhadap mikroorganisme penyebab penyakit,  salah  satunya  hasil  penelitian oleh  Rostinawati  (2010)  menunjukkan bahwa  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol 95%  bunga  rosella  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  variasi
konsentrasi  20%,  40%,  60%,  80%  dan 100%,  pada  konsentrasi  20%  dapat menghambat Staphylococcus aureus dengan  zona  hambat  sebesar12,1  mm. Konsentrasi yang memberikan zona hambat  paling  luas  yaitu  pada  konsentrasi 100  %  dengan  zona  bening  sebesar  27,8 mm. Bakteri Staphylococcus aureus merupakan  patogen  utama  bagi  manusia. Hampir  setiap  orang  akan  mengalami beberapa  tipe  infeksi Staphylococcus aureus sepanjang  hidupnya,  bervariasi dalam  beratnya  mulai  dari  keracunan makanan  atau  infeksi  kulit  ringan  sampai infeksi  berat  yang  mengancam  jiwa. Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri gram  positif,  yang  terdapat  pada  kulit, hidung,  mulut,  selaput  lendir,  bisul  dan luka (Jawetz et al , 1996).
Beragam fakta  inilah yang memberi alasan  bagi  penulis  untuk  melakukan pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol  kelopak  bunga  Rosella  ( Hibiscus sabdariffa L),  walaupun  telah  banyak dilakukan penelitian namun untuk mengetahui  khasiat  kelopak  bunga  rosella sebagai  obat  untuk  infeksi  pada  rongga mulut,  maka  peneliti  menggunakandua jenis  pelarut  yaitu  pelarut  etanol  30% dan pelarut etanol 96%, karena menurut penelitian  oleh  Mardiah  (2010)  telah mengekstrak  kelopak  bunga  dan  batang rosella, didapatkan kadar antosianin tertinggi  menggunakan  pelarut  campuran aquadest dan etanol 95%.
Antosianin  adalah  pigmen  golongan flavonoid yang berperan sebagai antioksidan,  Pigmen  antosianin  ini  yang membentuk warna ungu kemerahan menarik dikelopak bunga rosella.Antosianin berfungsi
sebagai antioksidan yang diyakini dapat
menyembuhkan penyakit degeneratif (Mardiah,  dkk.  2009).Berdasarkan  latar belakang  tersebut,  maka  peneliti  mencoba menggunakan  konsentrasi  pelarut  yang berbeda untuk mengetahui aktivitas terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus untuk  mendapatkan  data  yang  relevan sehingga pada akhirnya dapat membuktikan  kebenaran  dari  pernyataan- pernyataan literatur tersebut.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilaksanakan  selama  tiga bulan  dari  bulan  Februari  2012  sampai bulan April 2012 di  Laboratorium Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Pakuan Bogor,  Industri  Rumah  Tangga  (IRT) “Pelestarian Tanaman Obat Dan
Pengembang  Kesehatan  Alami  Taman Sringganis  Bogor”  dan  Laboratorium Biologi  Departemen  Biologi  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Institut  Pertanian  Bogor.  Bahan  dan  alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain kelopak bunga rosella kering ( Hibiscus sabdariffa L),  bakteri  uji Staphylococcus aureus koleksi  dari  bagian  Laboratorium Biologi  Departemen  Biologi  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Institut  Pertanian  Bogor,  etanol  96%, etanol 30%, antibiotik pembanding Amoksisilin 10 µg/mL, media uji Tryptone Soya  Agar  (TSA) , Tryptone  Soya  Broth (TSB) ,  asam  klorida  pekat,    amil  alkohol, gelatin  1%,  kloroform,  asam  sulfat , aquadest, neraca  analitik,  oven, vacum evaporator,  moisture  balance, eksikator, tanur,  autoklaf,  inkubator,  cawan  petri, jarum ose, kertas cakram ( paper disc ), alat- alat gelas, pipet ukur, penggaris, thermometer, penangas air, pengayak mesh
30, grinder ,  botol  kaca  warna  coklat,  krus tutup,  lampu  spirtus,  rak  tabung,  tabung reaksi,  kain  batis,  batang  pengaduk,  dan alumunium foil.

## Pembuatan Ekstrak Etanol
Ekstraksi  serbuk  simplisia  dilakukan dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut etanol 30% dan 96%. Sebanyak 600 g  serbuk  kelopak  bunga  rosella  direndam dalam  75  bagian  etanol  (4500  mL)  selama 3  hari  terlindung  dari  cahaya.  Setelah  3 hari, serbuk diserkai, ampas diperas dengan kain  batis.  Ampas  ditambah  25  bagian etanol  (1500  mL)  direndam  selama  2  hari, kemudian  diaduk  dan  diserkai  sehingga diperoleh  seluruh  sari  sebanyak  100 bagian.  Pengadukan  dilakukan  selama  1 jam  dan  didiamkan  1  jam  sebanyak  3x selama  6  jam.  Filtrat  yang  diperoleh kemudian  disimpan  dalam  wadah  tertutup, ditempat  sejuk  dan  terlindung  dari  cahaya selama  24  jam  (dienap  tuangkan),  filtrat kemudian  disaring,  hasil  seluruh  filtrat dikumpulkan kemudian dipekatkan dengan vacum  evaporator sampai  didapatkan ekstrak kental.
Karakterisasi  Ekstrak  Etanol  Rosella (Hibiscus sabdariffa L) Kadar  Air  : Dengan  metode  gravimetri. Sebanyak  ±2  g  ditimbang  dan  dimasukkan ke  dalam  krus  tertutup  yang  sebelumnya dipanaskan  pada  suhu  105°C  selama  30 menit dan telah ditara, pemanasan dilakukan  pada  suhu  105°C  sampai  bobot tetap, yaitu sampai perbedaan penimbangan berturut-turut tidak lebih dari 0,25% (Depkes RI, 2000).
Kadar  Abu  : Ditimbang  sebanyak  2g, dimasukkan  kedalam  krus  platina/krus silikat  yang  telah  dikeringkan  pada  suhu
105°C  selama  15  menit  dan  ditara,  lalu dipijarkan perlahan-lahan pada suhu 600°C dalam tanur hingga arang habis dan sampai bobot  tetap,  yaitu  perbedaan  antara  dua penimbangan berturut-turut tidak lebih dari 0,25%  (DepKes RI, 1995).
Penetapan  Kadar  Abu  Yang  Tidak Larut Dalam Asam : Abu yang diperoleh pada  penetapan  kadar  abu,  dididihkan dengan  25  mL  asam  sulfat  encer  P  selama 5  menit,  dikumpulkan  bagian  yang  tidak larut  dalam  asam,  disaring  melalui  krus kaca  masir  atau  kertas  saring  bebas  abu, dicuci  dengan  air  panas,  dipijarkan  hingga bobot  tetap,  ditimbang.  Kadar    abu  yang tidak  larut  dalam  asam  dihitung  terhadap bahan  yang  telah  dikeringkan  (Depkes  RI, 2000).
Penetapan  Kadar  Abu  Yang  Larut Dalam Air : Abu yang telah diperoleh pada penetapan kadar abu, dididihkan dengan 25 mL  air  selama  5  menit.  Dikumpulkan bagian  yang  tidak  larut,  disaring  melalui krus  kaca  masir  atau  kertas  saring  bebas abu, dicuci dengan air panas dan dipijarkan selama 15 menit pada suhu tidak lebih dari 450°C,  hingga  bobot  tetap.  Ditimbang perbedaan bobot sesuai dengan jumlah abu yang  larut  dalam  air.Kadar  abu  yang  larut dalam  air  dihitung  terhadap  bahan  yang telah dikeringkan.
Penetapan  Kadar    SenyawaYang  Larut Dalam Air : Maserasi sejumlah 5 g ekstrak selama  24  jam  dengan  100  mL  air kloroform LP menggunakan labu bersumbat  sambil  berkali-kali  dikocok selama  6  jam  pertama  kemudian  dibiarkan selama  18  jam.  Disaring,  diuapkan  dengan 20  mL  filtrat  hingga  kering  dalam  cawan dangkal  berdasar  rata  yang  telah  ditara. Residu  dipanaskan  pada  suhu  105°C hingga bobot tetap. (Depkes RI, 2000).
Penetapan  Kadar  Senyawa  Yang  Larut Dalam  Etanol  : Maserasi  sejumlah  5  g ekstrak  selama  24  jam  dengan  100  mL etanol (95%). Menggunakan labu bersumbat  sambil  berkali-kali  dikocok selama  6  jam  pertama  dan  kemudian dibiarkan  selama  18  jam.  Saring  cepat dengan  menghindarkan  penguapan  etanol, kemudian  diuapkan  20  mL  filtrat  hingga kering  dalam  cawan  dangkal  berdasar  rata yang  telah  ditara,  dipanaskan  residu  pada suhu  105°C  hingga  bobot  tetap.  Hitung kadar  dalam  persen  senyawa  yang  larut dalam etanol 95% (Depkes RI, 2000).

## Uji Fitokimia
Saponin  : Sebanyak  1  g  dimasukkan  ke dalam  gelas  piala  kemudian  ditambahkan 100 mL air panas dan dididihkan selama 5 menit.  Setelah  itu,  disaring  dan  filtratnya digunakan  untuk  pengujian.Sebanyak  10 mL  filtrat  di  masukkan  kedalam  tabung reaksi  dan  dikocok  kuat-kuat  selama  10 detik,  kemudian  dibiarkan  selama  10 menit.Adanya  saponin  ditandai  dengan terbentuk  busa  yang  stabil  dalam  tabung reaksi  yang  menunjukkan  adanya  senyawa saponin.Bila  ditambahkan  1  tetes  HCl  2N, busa tidak hilang (DepKes, 1989).
Tanin :  Sebanyak  100  mg  ekstrak diencerkan  dengan  100  mL  air  panas, didihkan  selama  5  menit  dan  disaring. Sebagian filtrat yang diperoleh
ditambahkan larutan FeCl 3
10%.
Terbentuknya  warna  hitam  kehijauan menunjukkan  adanya  tanin  (DepKes, 1989).  Penentuan  golongan  tanin  juga dapat  dilakukan  dengan  menambahkan larutan  gelatin  1%  (1:1)  kedalam  ekstrak, hasil positifnya yaitu terbentuknya endapan putih (Harborne, 1987).
Flavonoid : Diambilsebanyak 0,5 g ekstrak ditambah  100mL  air  panas,  dididihkan selama  5  menit,  lalu  disaring.  Kedalam  5 ml  filtrat  ditambah  serbuk  Magnesium,  1 mL HCl pekat dan 1 mL amil alkohol, lalu dikocok  kuat-kuat  dan  dibiarkan  memisah. Adanya  flavonoid  ditunjukkan  dengan terbentuknya  warna  merah,  kuning  atau jingga  pada  larutan  amil  alkohol  (DepKes RI, 1995).

## UJI BAKTERI Pembuatan Media
Media  yang  digunakan  adalah  media padat Tryptone  Soya  Agar (TSA)  dan media cair Tryptone Soya Broth (TSB).Media TSA dibuat dengan melarutkan  40  gram  serbuk  dalam  1  L aquadest , laludiaduk-aduk hingga larut dan homogen.  Sedangkan  media  cair  TSB dibuat  dengan  melarutkan  30  gram  serbuk dalam  1  L aquadest ,  laludiaduk-aduk hingga  larut  dan  homogen.  Sebelum digunakan,  kedua  media  ini  disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 20 menit.

## Pembuatan Kertas Cakram
Pembuatan  kertas  cakram  dilakukan dengan menyiapkan potongan kertas dibuat kertas  cakram  berdiameter  6  mm  dibuat dari  kertas  saring  Whatman,  diletakan dalam  cawan  petri  kemudian  disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 20 menit,  kemudian  kertas  cakram  yang  telah disterilkan  tersebut  ditetesi  larutan  uji masing-masing  ekstrak  dengan  berbagai konsentrasi dan kontrol positif serta kontrol negatif masing-masing sebanyak 15 µL.

## Perhitungan Koloni Bakteri
Perhitungan  jumlah  koloni  isolat bakteri dilakukan dengan metode pengenceran.  Disiapkan  6  tabung  reaksi
yang  masing-masing  berisi    9  mL  larutan NaCl fisiologis. Ambil 1 mL isolat bakteri, lalu  dilarutkan  dalam  tabung  reaksi pertama,  faktor  pengenceran  dalam  tabung reaksi pertama diambil 10 -1 , kemudian dari tabung  reaksi  pertama  diambil  1  mL  lalu dilarutkan  dalam  tabung  reaksi  kedua. Pengenceran  ini  dilakukan  berturut-turut sampai tabung reaksi ke 6.Setiap pengenceran  dari  masing-masing  tabung diambil  1  mL  larutan.  Kemudian  dituang dalam  media Tryptone  Soya  Agar dalam keadaan  cair  dan  digoyang  perlahan-lahan searah jarum jam. Pertumbuhan koloni dari tiap-tiap cawan dihitung setelah diinkubasi selama  24  jam  dengan  suhu  37°C. Kemudian pilih cawan petri yang pertumbuhan koloninya berkisar antara 25- 250  koloni  per  cawan  petri,  untuk digunakan untuk penelitian.
Penentuan Lebar Daerah Hambat
Metode  pengujian  ini  dilakukan menggunakan metode difusi kertas cakram, yaitu  dengan  menggunakan  pinset  steril, kertas  cakram  diletakkan  di  atas  lempeng media Tryptone  Soya  Agar yang  telah dicampur  dengan  bakteri Staphylococcus aureus dengan  konsentrasi  10 -6 , kemudian masing-masing  ekstrak  etanol  30%  dan 96%  kelopak  bunga  rosella  dengan konsentrasi  20%  (0,2  g/1  mL),  40%  (0,4 g/1  mL),60%  (0,6  g/1  mL)dan  80  % (0,8g/1  mL),  ditetesi  sebanyak  15  µL kedalam  kertas  cakram,  dengan  perlakuan yang  sama,  begitu  juga  dengan  aquadest sebagai  kontrol  negatif  dan  amoksisilin  10 ppm  (10  µg/mL)  sebagai  kontrol  positif. Cawan  petri  kemudian  diinkubasi  dalam inkubator  selama  24  jam  pada  suhu  37 0 C.
Setelah diinkubasi diamati dan diukur lebar daerah  hambat  dari  zona  yang  terbentuk menggunakan penggaris, sehingga
diketahui  lebar  daerah  hambat  dari  ekstrak kelopak bunga rosella.
Penentuan Konsentrasi
Hambat

## Minimum (KHM)
Pengukuran  KHM  dilakukan  untuk mengetahui konsentrasi mana yang terkecil dan  dapat  menghambat  bakteri.  KHM ditandai  dengan  tidak  tumbuhnya  bakteri. Konsentrasi  ekstrak  etanol  30%  dan  96% yang  digunakan  adalah  1%,  2,5%,  5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% dan 20 %. Untuk pengujian pada bakteri Staphylococcus  aureus dibuat  sebanyak 50ml  larutan  uji  dimasukkan  kedalam  3 cawan petri (2 untuk pengujian dan 1 untuk kontrol).

## Analisis Data
Data analisis digunakan metode eksperimental  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) menggunakan  SPSS  17dengan 8 perlakuan (6 perlakuan  dengan  berbagai  konsentrasi  ekstrak kelopak  bunga  rosella,  2  perlakuan  dengan aquadest  sebagai  kontrol  negatif  dan  amoksisilin sebagai  kontrol  positif),    masing-masing perlakuan  dilakukan  ulangan  sebanyak  3  kali. Analisis  dilanjutkan  dengan  uji  Duncan untuk  membandingkan  daya  antibakteri diantara masing-masing perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian terhadap uji fitokimia  ekstrak  etanol  30%  dan  96% kelopak  bunga  rosella  dapat  dilihat  pada uraian Tabel 1 dibawah ini.
Tabel 1 . Hasil penelitian terhadap uji fitokimia ekstrak etanol 30% dan 96% kelopak bunga rosella
Golongan senyawa Ekstrak etanol 30% Ekstrak etanol 96% Saponin + + Flavonoid + + Tanin + +
Hasil  uji  fitokimia  yang  dilakukan pada penelitian ini menunjukkan hasil yang sama dengan hasil penelitian oleh Rostinawati, 2009, bahwa fitokimia ekstrak etanol  kelopak  bunga  rosella  mengandung senyawa  tanin,  saponin  dan  flavonoid. Hasil pemeriksaan karakterisasi serbuk dan ekstrak  etanol  kelopak  bunga  rosella  dapat dilihat pada Tabel 2 di bawah ini.
Tabel  2. Hasil  pemeriksaan    karakterisasi serbuk dan ekstrak etanol kelopak bunga rosella Pemeriksaan Serbuk rosella Ekstrak Etanol 30% Ekstrak Etanol 96% Kadar air 6,9% 24,4% 14,4% Kadar abu 7,5% 8,8% 2,5% Kadar abu yang tidak larut asam 12,5% 5,4% Kadar abu yang larut air 42,7% 30,0% Kadar senyawa yang larut dalam air 75,4% 80,2% Kadar senyawa yang larut dalam etanol 62,9% 81,6%

## Uji  Aktitivitas  Antibakteri  Ekstrak
Etanol  30%  dan  96%  Kelopak  Bunga

## Rosella
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol 30% dan 96% kelopak bunga rosella ( Hibiscus  sabdariffa L)  terhadap  bakteri Staphylococcusaureus menunjukkan adanya aktivitas penghentian pertumbuhan, hal  ini  dapat  dilihat  dari  hasil  pengukuran Lebar  Daerah  Hambat  (LDH)  yang terbentuk  yaitu  berupa  wilayah  jernih disekeliling kertas cakram yang mengandung  ekstrak  etanol  kelopak  bunga rosella yang dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Hasil uji   aktivitas   antibakteri ekstrak  etanol  30%  dan  96% kelopak  bunga  rosella  terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Hasil  rata-rata  pengukuran  Lebar Daerah Hambat (LDH) ekstrak etanol 30% dan  96%  kelopak  bunga  rosella  terhadap bakteri Staphylococcus aureus dapat dilihat pada Tabel 3 di bawah ini.
Tabel  3. Hasil  rata-rata  pengukuran  Lebar Daerah  Hambat  (LDH)  ekstrak etanol  30%  dan  96%  kelopak bunga  rosella  terhadap  bakteri

## Staphylococcus aureus
Konsentrasi Ekstrak (%) Lebar Daerah Hambat (LDH) (mm) Etanol 30%  Etanol 96% 20 % 2,5 2,5 40 % 2,8 3,1 60 % 3,1 4,5 80 % 4,5 5 Dapat dilihat pada Tabel 3, perbandingan  Lebar  Daerah  Hambat  yang dihasilkan oleh ekstrak etanol 96% kelopak bunga  rosella  berbanding  lurus  dengan penambahan konsentrasi dan menghasilkan Lebar  Daerah  Hambat  yang  lebih  besar dibandingkan dengan ekstrak etanol 30%.Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  96%kelopak  bunga  rosella  lebih aktif membunuh koloni bakteri
Staphylococcus aureus dibandingkan konsentrasi ekstrak etanol 30%. Adanya perbedaan daya bunuh ekstrak  etanol  30%  dan  96%  kelopak
bunga  rosella  kemungkinan  disebabkan karena perbedaan komponen zat aktif yang terserap  pada  proses  ekstraksi,  karena menurut  penelitian  oleh  Mardiah  (2010) yang telah mengekstrak kelopak bunga dan batang rosella, didapatkan kadar antosianin tertinggi  menggunakan  pelarut  campuran aquadest  dan  etanol  95%,  ini  terbukti bahwa eksrak etanol  kelopak bunga rosella 96%  lebih  aktif  menyerap  komponen- komponen  metabolit  dari  kelopak  bunga rosella.
Ekstrak  etanol  30%  dan  96%  kelopak bunga Rosella memiliki kemampuan dalam membunuh bakteri dikarenakan keberadaan senyawa  kimia  yang  terkandung  pada ekstrak  etanol  kelopak  bunga  Rosella seperti senyawa antosianin yang merupakan  senyawa  flavonoid  (Mardiah, dkk.  2009),  flavonoid  yang  merupakan senyawa  fenol  (Harborne,  1987).  Senyawa fenol  dapat  bersifat  desinfektan  yang bekerja dengan cara mendenaturasi  protein yang dapat menyebabkan aktifitas metabolisme  sel  bakteri  berhenti,  karena semua  aktifitas  metabolisme  sel  bakteri dikatalisis oleh suatu enzim yang merupakan  protein.  Berhentinya  aktifitas metabolisme  ini  akan  mengakibatkan kematian  sel  bakteri  (Trease  dan  Evans, 1978).  Senyawa  lain  yang  berkhasiat sebagai  antibakteri  yang  terdapat  dalam ekstrak etanol kelopak bunga rosella adalah tanin.  Senyawa  tanin  merupakan  senyawa metabolit  sekunder  pada  tumbuhan  yang bersifat sebagai antibakteri dengan
membentuk  ikatan  yang  stabil  dengan protein sehingga terjadi koagulasi protoplasma  bakteri,  tanin  juga  memiliki kemampuan  menyamak  kulit  dan  juga dikenal  sebagai  astringensia  (Robinson, 1995). Dari sifat antibakteri senyawa tanin,
maka  tanin  dapat  digunakan  sebagai  obat antiradang,  antidiare,  pengobatan  infeksi pada kulit dan mulut, dan pengobatan luka bakar.  Oleh  karena  itu,  tanin  sebagai antibakteri  dapat  digunakan  dalam  bidang pengobatan (Hariana, 2007). Senyawa yang juga bertanggung jawab sebagai antibakteri yang  terdapat  pada  ekstrak  etanol  kelopak bunga  rosella  adalah  saponin.Senyawa saponin  mempunyai  sifat  seperti  sabun yang  merupakan  senyawa  “ surfactan agent ”  yang  kuat,  sehingga  dapat menurunkan  tegangan  permukaan  sel (Robinson,  1995).  Diabsorbsinya  saponin pada  permukaan  sel  akan  mengakibatkan kerusakan  dengan  naiknya  permeabilitas atau  kebocoran  membran  sel,  sehingga bahan-bahan  essensial  yang  dibutuhkan oleh  bakteri  untuk  kehidupannya  hilang dan  dapat  menyebabkan  kematian  sel bakteri.
Antibiotik  adalah  semua  substansi yang diketahui memiliki kemampuan untuk menghalangi  pertumbuhan  organisme  lain khususnya mikroorganisme (Pratiwi, 2008).
Gambar  2 .Hasil  uji  aktivitas  antibiotic amoksisilin  terhadap  bakteri

## Staphylococcus aureus
Dapat  dilihat  Lebar  Daerah  Hambat (LDH)  yang dihasilkan oleh ekstrak etanol 30%  dan  96%  kelopak  bunga  rosella terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus bila  dibandingkan  dengan  Lebar  Daerah
Hambat  yang  dihasilkan  oleh  antibiotik amoksisilin  (Gambar  2)    menunjukkan aktivitas  yang  tidak  jauh  berbeda.  Ekstrak etanol  30%  kelopak  bunga  rosella  dengan konsentrasi 80% sebesar 4,5 mm menunjukkan aktivitas yang hampir mendekati  Lebar  Daerah  Hambat  dari antibiotik  amoksisilin  pada  konsentrasi  10 ppm  yaitu  4,6  mm,  sedangkan  untuk ekstrak  etanol  96%  kelopak  bunga  rosella pada konsentrasi 80% sebesar 5 mm sudah melebihi  Lebar  Daerah  Hambat  dari antibiotik  amoksisilin  pada  konsentrasi  10 ppm.
Hal ini menurut Lay, 1994
menyatakan  bahwa  beberapa  senyawa antibakteri  tidak  membunuh  tetapi  hanya menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Bahan antibakteri bersifat menghambat bila digunakan dalam konsentrasi  kecil  namun  bila  digunakan dalam  konsentrasi  tinggi  dapat  membunuh mikroorganisme, kemungkinan amoksisilin yang  digunakan  konsentrasinya  terlalu kecil untuk bakteri Staphylococcus aureus , tetapi  bila  konsentrasinya  ditingkatkan menjadi  100  ppm  (pada  Gambar  2),  Lebar Daerah  Hambat  dari  antibiotik  amoksisilin semakin tinggi, yaitu sebesar 9,5 mm.
Hasil  analisis  menggunakan  RAL (Rancangan  Acak  Lengkap)  faktorial  pola 2x4x3 untuk mengetahui pengaruh kualitas dari  ekstrak  etanol  30%dan  ekstrak  etanol 96%  kelopak  bunga  rosella.  Data  analisis dapat  dilihat  pada  Tabel  4.  Hasil  analisis menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  30% dan  ekstrak  etanol  96%  kelopak  bunga rosella  mempunyai  aktivitas  yang  berbeda nyata  P < 0,05 dalam  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus , sedangkan konsentrasi pada ekstrak  etanol  30%dan  ekstrak  etanol  96%
kelopak bunga rosella mempunyai pengaruh yang sangat berbeda nyata P < 0,01 dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus , sehingga dilakukan uji  lanjut  Duncan  pada  Tabel  4  .  Hasil  uji Duncant menunjukkan bahwa dari masing- masing  konsentrasi  memiliki  pengaruh yang berbeda terhadap bakteri Staphylococcus aureus.
Tabel 4 .  Rata-rata  Lebar  Daerah  Hambat (LDH)  ekstrak  etanol  30%  dan 96% kelopak bunga rosella
Perlakuan Konsentrasi Ekstrak Total perlakuan Rata-rata perlakuan 20%  40%  60%  80% Ekstrak etanol 30 % 2,5 2,8 3,1 4,5 12,9 3,225 a Ekstrak etanol 96 2,5 3,1 4,5 5 15,1 3,775 b Rata-rata konsentrasi 2,5 a 2,95 b 3,8 c 4,75 d - -
Keterangan : Angka  yang  diikuti  superkrip yang  tidak  sama  pada  lajur yang sama menunjukkan pengaruh yang sangat berbeda nyata.
Uji  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM)  Ekstrak  Etanol  30%  dan  96%

## Kelopak Bunga Rosella
Pada  Pengujian  Konsentrasi  Hambat Minimum  (KHM)  metode  yang  digunakan adalah  metode  dilusi.  Metode  ini  serupa dengan metode dilusi cair namun menggunakan media padat (solid). Keuntungan  metode  ini  adalah  satu konsentrasi  agen  antimikroba  yang  diuji dapat  digunakan  untuk  menguji  beberapa mikroba uji (Pratiwi, 2008). Deret konsentrasi  ekstrak  etanol  30%  dan  96% yang  digunakan  untuk  uji  KHM  yaitu  1%,
2,5%, 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% dan 20%. Hasil ini diamati dengan melihat kekeruhan yang terjadi dari masing-masing konsentrasi  ekstrak  jika  dibandingkan dengan  kontrol.  Berdasarkan  hasil  uji KHM dapat disimpulkan bahwa
konsentrasi  hambat  minimum  (KHM) untuk  ekstrak  etanol  30%  yang  efektif menghambat bakteri Staphylococcus aureus pada  konsentrasi  2,5%,  sedangkan untuk  ekstrak  etanol  96%  konsentrasi hambat minimum yang efektif adalah 1%.

## KESIMPULAN
Konsentrasi  tertinggi  pada  ekstrak etanol 96% kelopak bunga rosella
( Hibiscus sabdariffa L) lebih aktif dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol  30% dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  rata-rata lebar  daerah  hambat  sebesar  5  mm.  Hasil uji  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) pada  ekstrak  etanol  30%  kelopak  bunga rosella yang paling aktif dalam
menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus adalah pada konsentrasi  2,5%,  sedangkan  untuk  etanol 96% pada konsentrasi 1%.

## DAFTAR PUSTAKA
DepKes RI. 1989. Materia Medika Jilid V . Direktorat  Jenderal  Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
.              1995. Materia  Medika  Jilid  VI . Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
.              2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat . Direktorat
Jendral  Pengawasan  Obat  dan Makanan, Jakarta.
Devi,  M.  2009. Dahsyatnya  Khasiat Rosella . Cemerlang Publishing. Yogyakarta.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Penerjemah
Padmawinata,  K.  Penerbit  Institut Teknologi Bandung, Bandung.
Hariana,  A.  2007. Tumbuhan  Obat  dan Khasiat  Jilid  2 .  Penebar  Swadaya,
Jakarta.
Jawetz E, Melnick JL dan Adelberg. 1996. Mikrobiologi  Kedokteran  Edisi  20 . (Nugroho  E.,  Maulana  R  F.,
Penerjemah) Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Lay,W.  B.  1994. Analisa  Mikroba  di LaboratoriumEdisi I . PT.Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Mardiah,  Sawarni,  W  Ashadi,  dan  A
Rahayu. 2009. Budidaya dan pengolahan rosella simerah segudang manfaat. Agromedia Pustaka, Jakarta.
Mardiah.2010. Ekstraksi  Kelopak  Bunga Dan Batang Rosella (Hibicus sabdariffa  L)  Sebagai  Pewarna Merah  Alami .Universitas  Djuanda Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi, Bogor.  (diakses  tanggal  18  Januari 2012).http://www.  scribd.com/  doc /51272340/776531A1d01.
Pratiwi  T,  S.  2008. Mikrobiologi  Farmasi. Penerbit Erlangga, Jakarta.
Robinson,  T.  1995. Kandungan  Organik Tumbuhan Tinggi . Terjemahan: Kosasih Padmawinata. ITB.
Bandung.
Rostinawati, T. 2009. Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Bunga  Rosella (Hibiscus  sabdariffa L )  terhadap Escherichia  coli,  Salmonella  typhi danStaphylococcus  aureus  dengan metode difusi agar . Skripsi. Universitas Padjadjaran, Jatinangor.
Trease,  G.  E  and  Evans.  1978.  W.  C.
Pharmacognocy .  Bailler  Tindal.
London. 402-404. Wijayakusuma, H. 1994. Ramuan Tradisional Untuk Pengobatan Darah  Tinggi .  Penebar  Swadaya,
Jakarta