KAPASITAS ANTIOKSIDAN DAN KANDUNGAN TOTAL SENYAWA FENOLIK EKSTRAK KASAR ALGA COKLAT Sargassum cristaefolium DARI PANTAI SUMENEP MADURA

## Ahwalul Lailiyah, Tri Kustono Adi, Abdul Hakim, Eriyanto Yusnawan
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
Marine resources are natural resources that have great opportunities to be exploited. One such  resource  is  the  sea  algae.  This  study  aims  to  determine  the  antioxidant  capacity  and  total phenolic  content  in  the  extract  of  the  brown  algae  Sargassum  cristaefolium  collected  from Sumenep  Madura  and  to  identify  the  class  of  compounds  in  the  highest  antioxidant  capacity extract. Brown algae extraction was conducted by maceration method using two variations of the solvent  methanol  and  n-hexane.  Total  phenolic  content  in  the  crude  extract  of  brown  algae  was determined using the Folin-Ciocalteu method, while antioxidant capacity was measured using the DPPH  (1,1-diphenyl-2-pikrilhidrazil).  Identification  of  class  of  compounds  is  applied    using  a qualitative  test  reagents.The  results  showed  that  the  methanol  crude  extract  had  a  total  phenolic content  of  74.63  mg  GAE  /  g  sample,  higher  than  n-hexane  crude  extract  (35.85  mg  GAE  /  g sample).  Antioxidant  capacity  of  methanol  crude  extract  was  80.78%,  higher  than  the  n-hexane extract (74.98%). The second extract has antioxidant capacity were moderate comparing with the powerful antioxidant, ascorbic acid (99.26%)  and BHT (99.09%). Identification of the compound using the reagent test showed the presence of compounds of steroids in methanol crude extract.
Key Words: Brown  Algae Sargassum  cristaefolium ,  Total  Fenolic,  Folin-Ciocalteau, Antioxidant, DPPH, Steroid, TLC.

## ABSTRAK
Sumberdaya  kelautan  merupakan  kekayaan  alam  yang  memiliki  peluang  besar  untuk dimanfaatkan.  Salah  satu  sumber  daya  alam  laut  tersebut  adalah  alga.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  kapasitas  antioksidan  dan  kandungan  fenolik  total  pada  ekstrak  alga  coklat Sargassum  cristaefolium  dari  pantai  Sumenep  Madura  serta  mengetahui  golongan  senyawa  yang memiliki kapasitas antioksidan tertinggi. Ekstraksi alga coklat dilakukan dengan metode maserasi menggunakan  dua  variasi  pelarut  yakni  metanol  dan  n-heksana.  Kandungan  fenolik  total  ekstrak kasar  dalam  alga  coklat  ditentukan  menggunakan  metode  Folin-Ciocalteu,  sedangkan  kapasitas antioksidannya  diukur  menggunakan  metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil).  Identifikasi golongan  senyawa  dilakukan  dengan  menggunakan  uji  reagen  secara  kualitatif.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar  metanol  memiliki  kandungan  fenolik  total  sebesar  74,63  mg GAE/g  sampel,  lebih  tinggi  daripada    ekstrak  kasar  n-heksana  (35,85  mg  GAE/g  sampel). Kapasitas  antioksidan  ekstrak  kasar  metanol  sebesar  80,78  %,  lebih  besar  dibandingkan  dengan ekstrak  n-heksana  (74,98  %).  Kedua  ekstrak  tersebut  memiliki  kapasitas  antioksidan  yang tergolong sedang, jika dibandingkan dengan antioksidan kuat, asam askorbat (99,26 %) dan BHT (99,09  %).  Identifikasi  golongan  senyawa  dengan  menggunakan  uji  reagen  pada  alga  coklat menunjukkan keberadaan senyawa golongan steroid di dalam ekstrak kasar metanol.
Kata Kunci : Alga Coklat Sargassum cristaefolium , Fenolik Total, Folin-Ciocalteau, Antioksidan, DPPH, Steroid, KLT.

## I. PENDAHULUAN
Laut  adalah  lambang  dari kesuburan  sekaligus  kemakmuran (Djamil, 2004). Sumber daya kelautan  merupakan  kekayaan  alam yang  memiliki  peluang  besar  untuk dimanfaatkan oleh manusia. Indonesia merupakan negara
kepulauan  terbesar  di  dunia,  yang memiliki  17.504  pulau  dan  garis pantai  lebih  dari  81.000  Km  dengan
luas  perairan  laut  sekitar  5,8  juta Km 2 (70  %  dari  total  wilayah Indonesia) (Sandrasari, 2008).
Di  Indonesia,  alga  merah terdiri  dari  452  jenis  alga,  dan  alga coklat  134  jenis  (Moosa,  1999). Menurut  Aslan  (1998),  rumput  laut mengandung komponen penting
yang dibutuhkan dalam proses fisiologis hewan dan manusia.
Rumput  laut  kaya  akan  karbohidrat, protein,  lipid  dan  mineral.  Temuan terakhir membuktikan bahwa rumput laut  berpotensi  sebagai  antivirus (Manilal,  dkk.,  2009),  antibakteri (Izzati,  2007),  antijamur  (Khazanda, dkk.,  2007)  antitumor  (Zandi,  dkk., 2010)  dan  antioksidan  (Lestario, dkk., 2008).
Manusia sebagai mahluk yang  berakal  memiliki  kewajiban untuk  menjaga  dan  memanfaatkan alam  dengan  bijaksana.  Manusia akan  dituntun  pengetahuannya  untuk menemukan obat-obat bagi penyakit- penyakit  yang  ada  di  bumi,  antara lain kanker, jantung, katarak, penuaan dini serta penyakit degeneratif  lainnya  yang  disebabkan reaksi  radikal  bebas  di  dalam  tubuh (Amarowicz  dalam  Rohman  dan Riyanto, 2005).
Radikal  bebas  adalah  atom atau molekul apa saja yang memiliki satu atau lebih elektron tak berpasangan. Radikal bebas dianggap  berbahaya  karena  bersifat tidak  stabil  dan  menjadi  sangat reaktif  dalam  upaya  mendapatkan pasangan elektronnya sehingga menyebabkan  terbentuknya  radikal baru.  Radikal  bebas  menggangu keutuhan  sel  karena  dapat  bereaksi dengan  komponen  sel.  Pembentukan radikal  baru  ini  dapat  menimbulkan kerusakan  berbagai  komponen  sel tubuh  seperti  DNA,  dan  juga  dapat menyebabkan  terjadinya  peroksidasi
lipid.  Untuk  menghindari  timbulnya reaksi  tersebut  di  dalam  tubuh,  kita membutuhkan suatu senyawa penting yang  dapat  menghentikan  ataupun menghambat  reaksi  radikal  bebas yaitu antioksidan.
Antioksidan merupakan
senyawa  pemberi  elektron  (elektron donor)  atau  reduktan.  Senyawa antioksidan  memiliki  berat  molekul kecil,  tetapi  mampu  menginaktivasi berkembangnya reaksi oksidasi dengan  cara  mencegah  terbentuknya radikal. Antioksidan juga merupakan senyawa  yang  dapat  menghambat reaksi  oksidasi,  dengan  mengikat radikal  bebas  dan  molekul  yang sangat reaktif (Winarsi, 2007). Antioksidan dapat berasal dari berbagai  sumber  bahan  alam  atau dibuat secara sintesis dalam laboratorium.  Antioksidan  sintetik
BHA  (Butylated  hydroxyanisole), BHT  (Butylated  hydroxytoluene),
PG (Propyl Gallate) dan TBHQ (tert- butyl hydroquinone) sering digunakan untuk mengontrol terjadinya  oksidasi.  Akan  tetapi, tidak menutup kemungkinan
antioksidan  tersebut  menyebabkan efek karsinogenik. Antioksidan alami lebih  aman  untuk  dikonsumsi  dan lebih  mudah  diserap  oleh  tubuh  dari pada  antioksidan  sintesis  (Madhavi, dkk., 1996).
Pemanfaatan  alga  sebagai antioksidan  telah  dilakukan  oleh beberapa  peneliti  yaitu  Omar,  dkk., (2007)  dalam  Hijaz,  (2009)  meneliti alga  coklat  jenis  Padina  antillarium dan  menghasilkan  ekstrak  fukoidan (polisakarida kompleks pada dinding sel  alga)  nilai  EC 50 sebesar  0,337 µg/mL  dengan  metode  DPPH  (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil).
Cristiane,
dkk.,  (2007)  meneliti  alga  coklat jenis Fucus vesiculosus yang menghasilkan ekstrak fukoidan
(polisakarida kompleks  pada dinding sel alga) dengan nilai EC 50 sebesar2,341  µg/mL  dan  Yan,  dkk., (1999)  dalam  Lestario,  dkk.,  (2008) meneliti  alga  hijau  yang  memiliki aktivitas  antioksidan  kurang  dari  20 %  dan  alga  coklat  dari  spesies Hijikia  fusiformis  yang  memiliki aktivitas antioksidan sampai 65 %.
Senyawa  antioksidan  alami tumbuhan umumnya adalah senyawa fenolik  yang  dapat  berupa  golongan flavonoid,  turunan  asam  sinamat, kumarin,  dan  asam-asam  organik polifungsional. Komponen ini mampu  menghambat  reaksi  oksidasi dan menangkap radikal bebas, hal ini dikarenakan  adanya  gugus  hidroksil pada  struktur  kimianya  (Daniels dalam Parwata, dkk., 2009)
Pada umumnya, dalam menentukan  kapasitas  antioksidan juga  ditentukan  kandungan  fenolik total,  seperti  yang  dilakukan  oleh Lestario,  dkk.,  (2008)  meneliti  alga merah Gracilaria
verrucosa menghasilkan  kadar  fenolik  total 45,29  mg/g  ekstrak,  Sreenivasan, dkk.,  (2007)  dalam  Lestario,  dkk., (2008) meneliti alga merah Gracilaria changii menghasilkan kadar  fenolik  total  5,0  mg/g  ekstrak, Ganesan, dkk., (2008) dalam
Lestario, dkk., (2008) meneliti
Gracilaria edulis menghasilkan kadar fenolik total 16,26 mg/g ekstrak, dan
Cho,  dkk.,  (2007)  dalam  Lestario, dkk.,  (2008)  meneliti  alga  coklat Sargassum
siliquastrum menghasilkan  kadar  fenolik  total 127,4 mg/g ekstrak. Penelitian tentang kapasitas antioksidan  dan  kandungan  kadar fenolik  total  alga  coklat  jenis  S. cristaefolium yang  berasal  dari Sumenep  Madura  dilakukan  untuk mengungkapkan  sifat  biologis  dan medis  serta  untuk  mengoptimalkan
pemanfaatan bahan alam laut
Indonesia.

## II. METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan  yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  metanol  p.a,  n- heksana  p.a,  reagen  DPPH,  etanol p.a,  metanol  50  %,    NaCO 3 20  %, asam  galat,  reagen  Folin-Ciocalteu, kloroform,  asam  asetat  anhidrat, H 2 SO 4 pekat,  pereaksi  Dragendroff, pereaksi  Mayer,  Vitamin  C,  BHT (Butylated hydroxytoluene).
Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah
seperangkat  alat  gelas,  bola  hisap, statif,  oven,  neraca  analitik,  mikro pipet, aluminium foil, shaker, vakum buchner,  kuvet,  rotary  evaporator, vaccum  desikator,  inkubator,  multi- well, spektrofotometer UV-Vis Varian Cary, spektronik 20+,
salinometer    ATAGO  PAL-06,  dan spektroskopi UV-Vis Varian Carry.

## Pelaksanaan Penelitian Analisis Kadar Air
Analisis  kadar  air  dilakukan pada  alga,  sebelumnya  cawan  yang akan  digunakan  dipanaskan  dalam oven  pada  suhu  100-105 o C  sekitar ±30  menit  untuk  menghilangkan kadar  air  cawan.  Cawan  didinginkan selama ±10 menit sampai ditimbang, diulang  sampai  mendapatkan  berat cawan  konstan.  Sebanyak  5  gram sampel  alga  yang  sudah  dipotong kecil-kecil dimasukkan dalam cawan porselen  dan  dikeringkan  ke  dalam oven  pada  suhu  100-105 o C  selama
±15 menit, kemudian sampel didinginkan  didesikator  sekitar  ±  10 menit dan ditimbang. Sampel tersebut  dipanaskan  kembali  dalam oven  ±  15  menit,  diulang  perlakuan ini  sampai  tercapai  berat  konstan.
Dihitung kadar air pada alga menggunakan rumus (AOAC, 1984): Kadar air = x % 100 Dimana : α= bobot cawan kosong
b= bobot sampel+cawan sebelum dikeringkan c= bobot cawan+sampel setelah dikeringkan

## Penentuan Kadar Garam
Alga  coklat  segar  yang  baru diambil dari laut ditimbang sebanyak 5  gram  dan  diekstrak  dengan menggunakan  akuades  50  mL,  dan diaduk  selama  10  menit  Ekstraksi diulangi sebanyak 3 kali pada sampel agar garam dalam sampel larut dalam akuades. Kemudian disaring menggunakan penyaring vacum buchner  agar  proses  penyaringan lebih  maksimal.  Ekstrak  ditampung dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer,  kemudian  diukur  kadar garam dalam sampel sebanyak empat kali pengukuran dengan menggunakan alat salinometer Atago PAL-06S refraktometer, yaitu dengan  cara  mengkalibrasi  alat menggunakan blangko akuades,
kemudian  larutan  sampel  diteteskan pada  lempengan  alat  tersebut  lalu dilakukan  pembacaan.  (Sudarmaji, dkk.,  1997).  Perlakuan  ini  diulangi kembali  untuk  serbuk  alga  kering, namun  sebelum  dikeringkan  alga yang  masih  segar  dicuci  terlebih dahulu dengan air
Preparasi Sampel Alga coklat jenis S. cristaefolium  dicuci  dengan  air bersih  untuk  menghilangkan  kotoran yang terdapat pada sampel, kemudian  dipotong  kecil-kecil  dan dikering  anginkan  sampai  kering. Kemudian di blender sampai terbentuk serbuk.

## Ekstraksi
Ekstraksi  pada  alga  coklat jenis  S.  cristaefolium  menggunakan metode maserasi. Serbuk Alga coklat jenis S. cristaefolium kering ditimbang  sebanyak 100  gram, kemudian  direndam  dengan  pelarut metanol sebanyak 300 mL. Perendaman  dengan  pelarut  metanol selama  24  jam  dan  dibantu  dengan shaker selama 5 jam dengan kecepatan  150  rpm,  setelah  itu disaring dengan menggunakan corong  buchner  vakum.  Ampas dimaserasi  kembali  (3x  pengulangan dengan 300 mL). Dilakukan perlakuan  yang  sama  dengan  pelarut n-heksana.  Pelarut  metanol  dan  n- heksana  diuapkan  dengan  rotary evaporator untuk memekatkan ekstrak  kasar,  kemudian  ekstrak dimasukkan  ke  dalam  lemari  asam untuk  menguapkan  pelarut  yang masih tersisa.
Uji Kapasitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH a. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Larutan DPPH 0,2 mM sebanyak  3  mL,  didiamkam  ±  10 menit.  Dicari  λ maks larutan  dan dicatat  hasil  pengukuran  λ maks untuk digunakan  pada  tahap  selanjutnya (Rahayu, dkk., 2010).

## b.  Penentuan  Waktu  Kestabilan Pengukuran Antioksidan
Dibuat  larutan  ekstrak  200 ppm  sebanyak  25  mL,  kemudian diambil sebanyak 4,5
mL. Ditambahkan  0,2  mM  larutan  DPPH sebanyak  1,5  mL,  kemudian  dicari waktu  kestabilan  setelah  inkubasi dan sebelum inkubasi pada rentangan waktu 5 – 60 menit dengan interval 5 menit. Sampel diukur pada  λ maks dan
waktu kestabilan yang telah
didapatkan.
c.  Pengukuran  Antioksidan  pada Sampel Sampel ekstrak kasar metanol dan n-heksana masing-masing dilarutkan  dalam  pelarutnya  dengan variasi  konsentrasi  1,  5,  10,  25,  50, 100,  200  dan    400  ppm.  Masing- masing  konsentrasi  dari  tiap-tiap ekstrak diambil 4,5 mL dan ditambahkan larutan DPPH sebanyak 1,5  mL  (perbandingan  ekstrak  yang dilarutkan dengan
konsentrasi tertentu:  larutan  DPPH  3:1)  dengan konsentrasi  0,2 mM  dalam etanol 99 % v/v. Setelah itu diinkubasi suhu 37 o C  pada  waktu  kestabilan  yang didapatkan  pada  tahap  sebelumnya, kemudian  dimasukkan  ke  dalam kuvet untuk mengukur absorbansinya pada    λ maks yaitu  pada  515  nm.  Tiap sampel  dilakukan  pengukuran  tiga kali  (triplo).  Data  absorbansinya yang  diperoleh  dari  tiap  konsentrasi masing-masing ekstrak dihitung nilai %  aktivitas  antioksidannya.  Nilai tersebut  diperoleh  dengan  rumus (Arindah, 2010) :
%  Aktivitas  antioksidan  = x
100%
Dimana, Ao = Absorbansi kontrol Ac = Absorbansi sampel Pembanding BHT
dan Vitamin  C  diperlakukan  seperti sampel  akan  tetapi  sampel  diganti dengan larutan BHT dan Vitamin C.
Pengukuran  Kandungan  Senyawa Fenolik Total a. Pengukuran
Absorbansi Larutan Standar Asam Galat
Pembuatan   larutan  standar asam  galat  mula-mula  ditimbang  10 mg  asam  galat  dan  dilarutkan  dalam 10  mL  buffer  fosfat  untuk  membuat larutan  stok  asam  galat  1000  ppm.
Kemudian  dibuat  larutan  standar dengan  variasi  konsentrasi  25,  50, 100,  200,  400,  600,  800  dan  1000
ppm. Pada masing-masing konsentrasi  dipipet  50  L  ditambah 3000  L akuades, kemudian ditambahkan  250  L  reagen   Folin- Ciocalteu   lalu  di  kocok  dengan vortek dan diinkubasi selama 5 menit pada  suhu  ruang.   Selanjutnya  pada larutan ditambahkan natrium karbonat 20 % sebanyak 750  L, lalu ditambahkan kembali dengan akuades 950  L hingga volume 5000  L  dan  diinkubasi  kembali  selama 80 menit pada suhu ruang. Kemudian masing-masing  konsentrasi  dipipet kembali  200  L  dan  dimasukkan  ke dalam  mikroplate  sebanyak  tiga  kali pengukuran  (triplo),  lalu  diukur serapannya pada panjang
gelombang  655  nm.  Sebagai  blanko digunakan  cara  yang  sama  akan tetapi  sampel  asam  galat  diganti dengan  buffer  fosfat.  Selanjutnya dibuat kurva kalibrasi yang menyatakan hubungan antara konsentrasi   asam   galat   (ppm) dengan nilai absorbansinya. b. Pengukuran Absorbansi Ekstrak Sampel Sampel ekstrak pekat metanol dan n-heksana alga dilarutkan dengan pelarutnya, lalu dibuat variasi konsentrasi  400,  600,  800,  1000 ppm. Selanjutnya  dipipet   masing- masing  konsentrasi  sebanyak  50  L ditambah 3000  L akuades, kemudian  ditambahkan  250  L reagen   Folin-Ciocalteu   lalu  di kocok  dengan  vortek  dan  diinkubasi selama  5  menit  pada  suhu  ruang. Selanjutnya larutan ditambahkan dengan  natrium  karbonat  20  % sebanyak  750  L,  lalu  ditambahkan kembali  dengan  akuades  950  L
sampai  volume  larutan  mencapai 5000  L  dan  diinkubasi  kembali selama  80  menit  pada  suhu  ruang. Kemudian masing-masing konsentrasi dipipet kembali sebanyak 200  L  dan  dimasukkan  kedalam mikroplate,  lalu  diukur  serapannya dengan   spektrofotometer   UV-Vis pada   panjang   gelombang  655  nm, kemudian  ditentukan   kadar  fenol dalam ppm.
Identifikasi  Golongan  Senyawa dengan Uji Fitokimia
a. Triterpenoid dan Stereoid
Ekstrak sampel dimasukan ke dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan
0,5 mL kloroform. Kemudian ditambahkan  0,5  mL  asam  asetat anhidrida  dan  1-2  tetes  H 2 SO 4 pekat melalui  dinding  tabung  tersebut. Apabila  terbentuk  cincin  warna coklat  kecoklatan  maka  ekstrak sampel mengandung triterpenoid (Ayoola, dkk., 2008). Sedangkan jika terbentuk  warna  hijau  kebiruan menunjukkan adanya steroid (Auterhoff dan Kovar 1987).

## b. Flavonoid
Ekstrak  ditambahkan  dengan air panas  1-2 mL metanol  panas dan ditambah sedikit serbuk Mg.
Kemudian  ditambahkan  2  mL  tetes HCl pekat dan dikocok. Jika menunjukkan  merah  atau  jingga maka ekstrak kasar positif mengandung  flavonoid  (Febriany,
2004).

## c. Alkaloid
Ekstrak  sampel  dimasukkan
dalam  tabung  reaksi,  ditambah  0,5 mL  HCl  2  %  dan  larutan  dibagi dalam dua tabung. Tabung I ditambahkan  0,5  mL  tetes  reagen Dragendroff,  sedangkan  tabung  II ditambahkan 2-3 tetes reagen Mayer. Jika  tabung  I  terbentuk  endapan
jingga  dan  pada  tabung  II  terbentuk endapan kekuning-kuningan, menunjukkan adanya alkaloid.

## Pemisahan dengan KLT
Pemeriksaan  KLT  dilakukan terhadap  adanya  senyawa  yang memberikan hasil positif pada pemeriksaan menggunakan uji reagen. Larutan pengembang dilakukan dengan 5 variasi eluen yaitu campuran kloroform:metanol:air (20:60:4) (Jaya, 2010), n-heksana:etil asetat  (7:3)  (Handayani,  2008),  n- heksana:kloroform  (1:1)  (Sukadana dkk.,  2007),  n-heksana:etil  asetat (1:1)  dan  eluen  n-heksana:etil  aset: NH 4 OH (66:33:11) (Inayah, 2012). n-heksana:etil asetat (7:3)

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Kandungan  air  pada  sampel kering  memiliki  nilai  yang  rendah, hal  ini  diakibatkan  sampel  kering kehilangan  kandungan  air  akibat proses  pengeringan  pada  sampel. Menurut  Winarno  (1992)  dalam Harjadi  (1993),  sampel  yang  baik disimpan  dalam  jangka  panjang adalah  sampel  yang  memiliki  kadar air kurang dari 10 %.
Dari  hasil  uji  kadar  garam alga S. cristaefolium bahwa konsentrasi  kadar  garam  dalam larutan sampel S. cristaefolium segar lebih rendah daripada sampel kering, hal  ini  dikarenakan  garam  pada sampel segar masih banyak mengandung  air.  Hasil  uji  kadar  air dan  kadar  garam  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1 . Kadar air dan Kadar Garam S.
cristaefolium
Kadar air (%) Kadar garam (%) Segar Kering 80 % 8,58 %
3 %
40,5%
Hasil rendemen menunjukkan
ekstrak  tertinggi  didapatkan  pada pelarut  metanol.  Tingginya  berat ekstrak yang diperoleh dengan menggunakan pelarut metanol menunjukkan bahwa senyawa-
senyawa pada S. cristaefolium banyak  yang  bersifat  polar  dan tertarik oleh metanol. Metanol merupakan pelarut hidrokarbon  yang sangat  polar  dengan  berat  molekul rendah. Alkohol dengan berat molekul rendah menggantikan molekul-molekul  air  dalam  jaringan (Hart,  1987  dalam  Muawwanah, 1996).  Hasil  ekstraksi  dapat  dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Rendemen
Pelarut Vol. (mL)
Rendemen (%)(b/b)
Metanol 900 5,524
n-heksana 900 1,002 Sarrgassum merupakan  salah satu  jenis  alga  laut  dari  kelompok alga  coklat  ( phaeophyceae )  yang mengandung  pigmen  klorofil  dan fukosantin. Klorofil merupakan pigmen fotosintesis yang memberikan  warna  hijau  sedangkan fukosantin memberikan warna coklat atau  hijau  zaitun  (Tjondronegoro, dkk.,  1989  dalam    Muawwanah, 1996).
Uji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH menunjukkan bahwa ekstrak metanol
S. cristaefolium memiliki nilai kapasitas  antioksidan  yang  tinggi dibandingkan ekstrak n-heksana. Apabila ekstrak metanol dibandingkan dengan
kapasitas antioksidan  vitamin  C  dan  BHT, aktivitas  antioksidan  ekstrak  S. cristaefolium  masih  lebih  rendah. Tetapi  pada  penelitian  ini  yang  diuji masih berupa ekstrak kasar, sehingga masih  ada  kemungkinan  senyawa
murni  yang  dikandung  memiliki aktivitas  peredaman  radikal  bebas lebih  kuat  dibandingkan  ekstraknya. Hasil  pengujian  dapat  dilihat  pada Tabel 3 dan Gambar 1.
Metode  DPPH  dipilih  karena sederhana,  mudah,  cepat  dan  peka serta  hanya  memerlukan  sedikit sampel.  Senyawa  antioksidan  akan bereaksi dengan radikal DPPH melalui  mekanisme  donasi  atom hydrogen dan menyebabkan terjadinya  peluruhan  warna  DPPH dari  ungu  ke  kuning  yang  diukur pada  panjang  gelombang  515  nm (Rahayu,dkk., 2010) Pengujian antioksidan  menggunakan  inkubasi (37 o C).  Suroso  (2011),  menyatakan bahwa  sampel  yang  diinkubasi  akan lebih  stabil  dan  memiliki  penurunan absorbansi  yang  lebih  signifikan dibanding sampel yang tidak diinkubasi.  Pada  suhu  ini  diduga sampel    antioksidan    bereaksi dengan  baik  dengan  DPPH.  Diduga suhu  yang  telah  terkondisikan  ini dapat  mempercepat  terjadinya  reaksi antara  sampel  antioksidan  dengan DPPH.
Tabel  3 Hasil  pengukuran  %  aktivitas  antioksidan  ekstrak    S.  cristaefolium  dan pembanding
% Kapasitas Antioksidan (Y) Konsentrasi Sampel (ppm) Ekstrak metanol Ekstrak n - heksana BHT Asam askorbat 74,99 73,02 76,04 80,10 1
75,08 74,68 76,65 90,45 5
75,54 74,74 81,47 98,92 10
77,23 74,98 85,71 99,21 25
77,44 74,90 93,73 99,22 50
77,89 73,21 95,87 99,23 100
78,48 71,7 98,87 99,24 200
80,78 63,37 99,09
99,26
400
Gambar 1 Grafik aktivitas antioksidan (%) ekstrak S. cristaefolium dan
Pembanding
Heo,  dkk.,  (2005)  melaporkan  kapasitas antioksidan ekstrak metanol sampel metanol  S.  coreanum  (86,04  %),  S. fulvellum  (67,44  %),  S.  horneri  (23,91  %), S.  piluliferum  (93,67  %),  S.  siliquastrum (75,58  %),  S.  thunbergii  (97,44  %). Sandrasari (2008), menyatakan bahwa suatu senyawa yang mempunyai kapasitas antioksidan  sangat  kuat  jika  menghambat perkembangan  radikal  bebas  lebih  dari  80 %,  sedang  jika  menghambat  sebesar  50-80 %,  dan  lemah  jika  memiliki  penghambatan kurang  dari  50  %.  Kapasitas  antioksidan pada ektrak n-heksana
mengalami penurunan  kapasitas  pada  konsentrasi  100– 200.  Hal  ini  menandakan  kemampuan antioksidan mulai melemah pada konsentrasi  yang  besar,  kemungkinan  yang terjadi  adalah  senyawa  yang  telah  bersifat prooksidan (suatu zat yang dapat menyebabkan kerusakan oksidatif).
Senyawa    fenolik  pada  ekstrak  alga coklat  diukur  dengan  menggunakan  reagen Folin-Ciocalteu  pada  panjang  gelombang 655  nm.  Hasil  yang  diperoleh  dinyatakan sebagai  ekivalen  asam  galat  (EAG/g sampel).    Asam  galat  merupakan  senyawa untuk  mengukur  kandungan  senyawa  fenol dalam sampel pada makanan atau minuman. Pengujian  ini  dilakukan  karena  senyawa fenolik  berkontribusi  langsung  terhadap kapasitas  antioksidan.  Nilai  absorbansi yang terukur menyatakan intensitas senyawa  fenol  yang  terdapat  pada  sampel. Semakin  besar  nilai  absorbansi  yang dihasilkan  maka  kandungan  senyawa  fenol pada ekstrak alga coklat semakin tinggi.
Pengukuran kandungan
total senyawa  fenol  pada  ekstrak  kasar  S. cristaefolium menunjukkan bahwa kandungan  fenol  total  tertinggi  terdapat pada  ekstrak  metanol.  Hasil  pengukuran kadar fenolik total dapat dilihat pada Tabel 4. Heo, dkk., (2005) melaporkan kandungan fenol  ekstrak  metanol  S.  coreanum  (38,11 mg GAE/g), S. fulvellum (7,56 mg GAE/g), S. horneri (6,81 mg GAE/g), S. piluliferum (14,91  mg  GAE/g),  S.  siliquastrum  (75  mg GAE/g),  S.  thunbergii  (23,06  mg  GAE/g). Hasil  kandungan  fenol  sampel  S.  cres
taefolium memiliki nilai yang hampir sama dengan sampel S. siliquastrum.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  pada  sampel  S.  cristaefolium kapasitas  antioksidan  berbanding  lurus dengan total fenol yang dikandungnya.
Tabel 4 Nilai kandungan fenolik total pada ekstrak  S.  cristaefolium    dan kapasitas antioksidan.
Kandungan fenol total (mg GAE/g sampel)
Aktivitas antioksidan (%) Sampel 74,63 80,78 Ekstrak metanol
35,85 74,98 Ekstrak n- heksana
Kutsiyah  (2012)  juga  melaporkan kandungan  senyawa  fenolik  total  dan kapasitas  antioksidan  pada  ekstrak  metanol E.  spinosum  adalah  82,78  mg  GAE/g  dan 84,60  %.  Hal  ini,  menunjukkan  adanya korelasi antara kapasitas antioksidan dengan kandungan total fenol yang dikandung. Penelitian Lee, dkk., (2006)
menggunakan  25  macam  jenis  alga  merah yang menunjukkan kandungan fenolik total tertinggi  diantara  25  macam  jenis  alga merah  tersebut  terdapat  pada  ekstrak metanol  dari  alga  merah  Polysiphonia japonica yaitu sebesar 176,90 mg/g.
Hasil  uji  fitokomia  ekstrak  metanol S.  cristaefolium  pada  Tabel  5.  Pada penelitian  ini  ekstrak  S.  cristaefolium  yang diduga  mengandung  steroid  yang  memiliki aktivitas  antioksidan.  Uji  steroid  ekstrak kasar    metanol    S.  cristaefolium  ditandai dengan perubahan warna kuning kecoklatan menjadi  biru  kehijauan.  Perubahan  warna ini  disebabkan  terjadinya  reaksi  oksidasi pada golongan steroid melalui pembentukan  ikatan  rangkap  terkonjugasi (senyawa  pentaenilik)  (Sriwahyuni,  2010).
Studi fitokimia
dan farmakologi menyatakan bahwa steroid memiliki
aktivitas  antioksidan  (Abad,  dkk.,  2011). Beberapa  golongan  steroid  dapat  berfungsi sebagai antioksidan yang dapat mendonorkan  atom  H  terhadap  radikal bebas.  Senyawaan  steroid  kebanyakan mengandung  gugus  –OH  yang  sering disebut  dengan  sterol,  sehingga  dengan adanya  substituen  gugus  hidroksil  yang terikat  pada  rantai  hidrokarbon  maka cenderung untuk mendonorkan atom hidrogennya  kepada  radikal  bebas  (Abad, dkk.,  2011).  Dugaan  reaksi  yang  terjadi antara senyawa steroid dengan DPPH  yang berfungsi  untuk  menghambat  radikal  bebas dapat ditunjukkan pada Gambar 2.
Hasil pemisahan dengan KLT analitik  senyawa  steroid  ekstrak  metanol alga  coklat  S.  crictaefolium  dilakukan dengan  5  variasi  eluen  yaitu  campuran kloroform:metanol:air (20:60:4) (Jaya,
2010), n-heksana:etil asetat (7:3)
(Handayani,  2008),  n-heksana:kloroform (1:1) (Sukadana  dkk., 2007), n-heksana:etil asetat  (1:1)  dan  eluen  n-heksana:etil  aset: NH 4 OH (66:33:11) (Inayah, 2012).
Diantara 5 variasi  eluen  tersebut  terdapat  1
eluen yang mampu menghasilkan pemisahan  yang  baik  yaitu  n-heksana:etil asetat  (7  :  3),  hal  ini  dapat  dilihat  dengan adanya  noda  yang  terpisah  dengan  baik (tidak berekor) dan jumlah noda sebanyak 5 noda  yang  terpisah  di  bawah  sinar  UV. Hasil  KLT  dari  pemisahan  steroid  ekstrak metanol  ini  dapat  dilihat  pada  Tabel  6. Noda-noda  ini  terpisah  berdasarkan  tingkat kepolarannya.
Noda  yang  memiliki  nilai  Rf  yang kecil spot 1 dan 2 diduga cenderung bersifat polar  dikarenakan  noda  tersebut  lebih terdistribusi  ke  fase  diam  yang  cenderung bersifat polar. Noda yang memiliki Rf yang tinggi  spot  3,  4  dan  5    cenderung terdistribusi  ke  dalam  fase  gerak  yang kepolarannya  lebih  kecil  dibandingkan dengan  fase  diamnya.  Kristanti  (2008) melaporkan  bahwa  senyawa  steroid  setelah disemprot pereaksi Liberman-Burchard pada  plat  KLT  menghasilkan  warna  biru. Hasil KLT pemisahan senyawa steroid pada S.  cristaefolium cenderung  berwarna  biru yang ditunjukkan pada noda nomor 1, 2, 3, dan 5.
Tabel 5 . Hasil uji fitokimia ekstrak kasar metanol S. cristaefolium
Ekstrak S. cristaefolium Fraksi Uji Fitokimia / Uji Reagen Triterpenoid Alkaloid Flavonoid Steroid Reagen Mayer Reagen Dragendroff Metanol - +++ - - - n-heksana - + - - -
Keterangan   : tanda +++ : terkandung banyak senyawa/terbentuk warna tanda + : terkandung senyawa/berwarna pudar tanda - : tidak terkandung senyawa/tidak terbentuk warna
Gambar 2 Dugaan reaksi senyawa steroid dengan radikal DPPH (Abad, dkk., 2011)
Tabel 6. Hasil  pemisahan  golongan  senyawa  aktif  steroid  ekstrak  S.  cristaefolium menggunakan KLT
Rf tiap noda

## Warna noda di bawah sinar UV pada λ 366 nm
Sebelum disemprot reagen Lieberman-Burchard Setelah disemprot reagen
Lieberman-Burchard 0,14
Merah muda
Biru 0,27 Merah muda Biru 0,34 Hijau kecoklatan Biru 0,48 Merah muda Hijau 0,61 Merah mudah Biru
Noda-noda  ini  terpisah  berdasarkan tingkat  kepolarannya.  Noda  yang  memiliki nilai  Rf  yang  kecil  spot  1  dan  2  diduga cenderung  bersifat  polar  dikarenakan  noda tersebut  lebih  terdistribusi  ke  fase  diam yang  cenderung  bersifat  polar.  Noda  yang memiliki  Rf  yang  tinggi  spot  3,  4  dan  5 cenderung terdistribusi ke dalam fase gerak yang kepolarannya lebih kecil dibandingkan dengan fase diamnya.
Kristanti  (2008)  melaporkan  bahwa senyawa  steroid  setelah  disemprot  pereaksi Liberman-Burchard pada plat KLT menghasilkan  warna  biru.  Hasil  KLT pemisahan  senyawa  steroid pada  S. cristaefolium cenderung berwarna biru yang ditunjukkan pada noda nomor 1, 2, 3,  dan5.

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN KESIMPULAN
Penelitian  yang  telah  dilakukan dapat disimpulkan bahwa kapasitas antioksidan  dari  ekstrak  kasar  n-heksana dan  metanol alga  coklat  Sargassum cristaefolium  masing-masing  adalah  74,98 %  dan  80,78  %.  Kandungan  fenolik  total dari  ekstrak  kasar  n-heksana  dan  metanol alga coklat Sargassum cristaefolium masing-masing  adalah  35,85  mg  GAE/gr sampel  dan  74,63  mg  GAE/gr  sampel. Ekstrak  kasar  metanol  memiliki  kapasitas antioksidan  dan  kandungan  total  fenolik yang  tertinggi.  Berdasarkan  uji  reagen, golongan  senyawa  terkandung  di  dalam ekstrak kasar metanol menunjukkan golongan steroid. Pemisahan ekstrak metanol  dengan  KLT  menggunakan  eluen n-heksana:etil asetat (7:3)
dan
menghasilkan 5 noda (Rf: 0,14;0,27;0,34;0,48;0,61)

## SARAN
Saran  untuk  penelitian,  diantaranya diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  sampai pada  tahap  pemisahan,  pemurnian  dan identifikasi agar dapat mengetahui senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan.

## V. DAFTAR  PUSTAKA
Arindah, D. 2010. Fraksinasi dan Identifikasi Golongan Senyawa Antioksidan  pada  Daging  Buah Pepino  (Solonum  Muricatum  aiton) yang Berpotensi sebagai Antioksidan. Skripsi. Malang: Jurusan  Kimia  Fakultas  Sains  dan Teknologi  Universitas  Islam  Negeri (UIN)  Maulana  Malik  Ibrahim
Malang.
Autorhoff,  H.,  dan  Kovar,  K.A.  1987.
Identitas Obat. Bandung : ITB Djamil,  A.  2004. Al-Quran  dan  Lautan .
Bandung Penerbit Arasy  PT Mizan Pustaka
Heo, Soo-Jin., Sun-Heui Cha, Ki-Wan Lee, Somi K. Cho1, You-Jin Jeon. 2005. Antioxidant Activities of Chlorophyta  and  Phaeophyta  from Jeju  Island. Journal  Alga Volume
20(3):  251-260  .Faculty  of  Applied
Marine Science, Faculty of Biotechnology, Cheju National University, Jeju 690-756 Hijaz, M.K. 2008. Uji Aktivitas Antioksidan  Karaginan  dalam  Alga Merah  Jenis Eucheuma  spinosum dan  gracillaria  verrucosa.  Skripsi .
Malang:  Jurusan  Kimia  Fakultas Sains  dan  Teknologi  Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang Izzati, M. 2007. Skreening Potensi Antibakteri  pada  Beberapa  Spesies Rumput  Laut  terhadap  Bakteri
Patogen  pada  Udang  Windu. Jurnal BIOMA. Vol.  9,  No.  2.  62–67.
Jepara: Undip.
Khazanda,  K.A.,  Wazir,  S.T.G.,  Samina, K.,  Shahzadi,  S.  2007.  Antifungal
Activity,  Elemental  Analysis  and Determination  Of  Total  Protein  Of Seaweed, Solieria Robusta (Greville) Kylin From The Coast Of
Karachi. J.  Bot .,  39(3):  931-937,
2007. National Center of Excellence for Aanalytical Chemistry. Pakistan: University of Sindh.
Kutsiyah.  2012.  Penentuan  Kandungan Senyawa Fenolik Total dan Kapasitas  Antioksidan  Alga  Merah Eucheuma  spinosum  dari  pantai
Lobuk  Madura. Skripsi .  Malang: Jurusan  Kimia  Fakultas  Sains  dan Teknologi  Universitas  Islam  Negeri (UIN)  Maulana  Malik  Ibrahim Malang
Lee,  K.W.,  Jeon,  J.Y.,  Cha,  S.H.  dan  Heo,
S.J.  2006.  Antioxidant  Activities  of Red Algae from Jeju Island. Journal Algae. Volume  21(1):  149-156, Faculty  of  Applied  Marine  Science. Korea:  Cheju  National  University, Jeju 690-756.
Lestario. L.N., Sugiarto, S., Timotius. 2008. Aktivitas  Antioksidan  dari  Kadar Fenolik Total dari Ganggang Merah ( Gracilaria  verrucosa L.). Jurnal
Teknol dan Industri Pangan . Vol.XIX  No.2  Th.  2008.  Salatiga: Fakultas  Sains  dan  Matematika. Universitas Kristen Satya Wacana.
Madhavi,  D.  L,  S.  S.  Dhespande  and  D.K Salunka,  1996,  Food Antioxidant Technological, Toxicologi and Healt Perpectures .  New  York:  Marcel
Dekker Inc
Manilal.  A.,  Sujith,  S.,  Selvin,  J.,  Kiran, G.S.,  Shakir,  C.  2009.  In  vivo Antiviral Activity of Polysaccharide from  the  Indian  Green  Alga, Acrosiphonia  orientalis  (J.  Agardh): Potential  Implication  in  Shrimp Disease  Management. Journal  of Fish  and  Marine  Sciences 1  (4): 278-282. Department of Microbiology.  India:  Bharathidasan University
Moosa,  M.K.  Sumberdaya  laut  nusantara,
keanekaragamanhayati laut dan pelestariannya. Loka karya Keanekaragaman Hayati Laut.
Pemanfaatan  secara  lestari  dilandasi penelitian  dan  penyelamatan. Widy Graha LIPI .  Jakarta  23  Pebruari 1999
Muawwanah.  1996.  Estraksi  Antioksidan dari  Alga  Laut  Sargassum  sp.  dan Efektivitasnya  dalam  menghambat Awal  Emulsi  Minyak  Ikan. Skripsi. Bogor:  Program  Studi  Teknologi Hasil  Perikanan  Fakultas  Perikanan ITB Parwata,  I.M.O.A.,  Wiwik,  S.R.  dan Raditya,  Y.  2009.  Isolasi  dan  Uji Antiradikal  Bebas  Minyak  Atsiri Pada  Daun  Sirih  (Piper  betle,  Linn) Secara  Spektroskopi  Ultra  Violet- Tampak. Jurnal  Kimia .  Vol.  3  (1):
7-13. ISSN 1907-9850. Bukit
Jimbara:  Jrusan  Kimia  FMIPA Universitas Udayana
Rahayu,  D.S.,  Dewi,  K.,  Enny,  F.  2010. Penentuan  Aktivitas  Antioksidan dari  Ekstrak  Etanol  Daun  Ketapang (Terminalia  catappa  L)  dengan Metode  1,1  difenil  2  Pikrilhidrazil (DPPH). Jurnal  Kimia .  Semarang: Jurusan  Kimia  FMIPA  Universitas Diponegoro
Rohman,  A.  dan  Riyanto,  S.  2005.  Daya Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun Kemuning  (Murraya  paniculata  (L) Jack)  Secara  in  vitro. Majalah Farmasi  Indonesia ,  16  (3),  136  –
140. Yogyakarta: Laboratorium Kimia Analisis Bagian Kimia
Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Sandrasari, D.A., 2008. Kapasitas Antioksidan dan Hubungannya dengan  Nilai  Total  Penol  Ekstrak Sayuran Indigenous. Skripsi . Bogor: Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor Sudarmadji,  S.,  B.  Haryono,  dan  Suhardi. 1997. Prosedur Analisa untuk
Bahan  Makanan  dan  Pertanian. Yogyakarta: Liberty Zandi,  K.,  Saeed,  T.  Iraj,  N.,  Zahra,  R., Forough,  Y.,  Samin,  S.,  Kohzad,  S.
2010. In Vitro Antitumor Activity of Gracilaria  corticata  (A  Red  Alga) Against  Jurkat  And  Molt-4  Human Cancer  Cell  Lines. Journal  of Biotechnology.  9(40):  6787-6790. Bushehr Iran: University of Medical
Sciences. Operation  of  SMB  Bioreactor:  Production of  High    Fructose  Syrup  by Isomerization of Glucose. Biochemical Engineering  Journal ,
Vol: 21 No: 111–121.