Jurnal Pharmascience, Vol. 07, No.02, Oktober 2020, hal: 75-88 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article

## Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol Bunga Teratai ( Nymphaea pubescens Willd)
Amalia Khairunnisa * , Nashrul Wathan, Mia Fitriana, Fadlilaturrahmah, Nisriyati Fiddina
Program Studi Farmasi Fakultas MIPA Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan, Indonesia *Email: amalia.khairunnisa@ulm.ac.id

## ABSTRAK
Nymphaea pubescens Willd telah diketahui mempunyai efek antibakteri, terutama pada biji dan daunnya. Tetapi sampai saat ini bagian bunga dari tanaman tersebut belum dilakukan pengujian aktivitas antibakteri. Tujuan dari penelitian ini untuk melakukan skrining fitokimia, uji aktivitas antibakteri dan penentuan konsentrasi hambat minimum (KHM) dari ekstrak metanol bunga N. pubescens terhadap S. aureus dan E. coli . Proses ekstraksi  bunga N.  pubescens dimaserasi  menggunakan  pelarut  metanol  dengan perbandingan 1: 4 b/v. Metode pengujian yang digunakan ada dua yaitu metode difusi untuk pengujian aktivitas antibakteri dan metode dilusi untuk pengukuran konsentrasi hambat minimum (KHM). Hasil skrining fitokimia didapatkan bahwa ekstrak metanol bunga N. pubescens mengandung senyawa golongan fenolik, saponin dan flavonoid. Hasil pengujian aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak metanol bunga N.pubescens mampu  menghambat S.  aureus (diameter  hambat  10  ±  0,29  mm)  dan E.coli (diameter hambat 10,2 ± 0,50 mm). Konsentrasi hambat minimum dari ekstrak metanol bunga N. pubescens terhadap S.aureus sebesar  12,5%  dan  terhadap E.coli sebesar  25%.  Dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  metanol  bunga N.  pubescens memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri.
Kata Kunci: Nymphaea pubescens , bunga teratai, ekstrak metanol, antibakteri

## ABSTRACT
Nymphaea pubescens Willd has known to have antibacterial effects, especially on the seeds  and  leaves.  However,  until  now  the  flower  of  the  plant  has  not  been  tested  for antibacterial  activity.  The  purpose  of  this  study  was  to  perform  phytochemical  screening, antibacterial activity test and determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of the methanol  extract  of  N.  pubescens  flowers  against  S.  aureus  and  E.  coli.  The  process  of extracting N. pubescens flowers is macerated using methanol as a solvent with a ratio of 1: 4 w / v. There are two test methods used, namely the diffusion method for testing antibacterial activity  and  the  dilution  method  for  measuring  the  minimum  inhibitory  concentration (MIC).  The  results  of  phytochemical  screening  showed  that  the  methanol  extract  of  N.
pubescens flowers contained phenolic compounds, saponins, and flavonoids. The results of the antibacterial activity test showed that the methanol extract of N.pubescens flowers was able to inhibit S. aureus (inhibition diameter 10 ± 0.29 mm) and E. coli (inhibitory diameter 10.2  ±  0.50  mm).  The  minimum  inhibitory  concentration  of  the  methanol  extract  of  N. pubescens  flowers  against  S.aureus  was  12.5%  and  against  E.  coli  was  25%.  It  can  be concluded that the methanol extract of N. pubescens flowers has antibacterial activity
Keywords: Nymphaea pubescens, lotus flower, methanol extract, antibacterial

## I. PENDAHULUAN
Teratai  ( Nymphaea  pubesncens
Willd)  termasuk  tumbuhan  yang  hidup  di rawa  atau  di  daerah  sungai  yang  tidak begitu dalam. Kalimantan Selatan termasuk provinsi  yang  sebagian  besar  berupa  rawa dan  banyak  ditumbuhi  teratai  (BPS Kalimantan  Selatan,  2000).  Bagian  teratai yang biasa dimanfaatkan adalah biji, bunga, batang dan rhizoma . Nymphaea pubescens Willd,  biasa  disebut  dengan  ‘ hairy  water- lil y’, mengandung pati yang tinggi, protein, lemak, alkaloid, flavonoid, steroid, glikosida,  tanin,  triterpenoid,  dan  saponin (Fitrial et  al. ,  2012).  Teratai  memiliki khasiat  sebagai  antidiabetes  (Debhnath et
al .,  2013)  dan  menghambat  pertumbuhan bakteri (Waiedee, 2015 ; Fitrial et al. , 2008
; Dash, 2013).
Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus merupakan  flora normal  pada  hewan  dan  manusia.  Kedua bakteri  tersebut  termasuk  bakteri  yang bersifat patogen atau dapat membahayakan. Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri Gram  positif  dengan  habitat  alami  pada
kulit, mukosa hidung, mulut, dan usus besar namun apabila sistem imun dalam keadaan lemah  bakteri  dapat  menyebabkan  infeksi (Jawetz, 2007). Escherichia coli merupakan  bakteri  Gram  negatif  dan termasuk  flora  normal  di  dalam  saluran pencernaan hewan dan manusia yang dapat menjadi  patogen  apabila  berpindah  dari habitat normalnya ke bagian lain dari inang (Melliawati, 2009). Kerugian akibat kedua patogen  ini  dapat  dihambat  menggunakan antibiotik. Antibiotik merupakan substansi kimiawi  yang  mempunyai  kemampuan untuk  menghambat  pertumbuhan  atau membunuh mikroorganisme (Dorland, 1998).
Penelitian tentang aktivitas antibakteri  tanaman N.pubescens telah banyak dilakukan. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  penggunaan  pelarut metanol pada proses ekstraksi efektif dalam menarik  senyawa  antibakteri  pada  biji N.pubescens (Fitrial et.al., 2008);  daun N.pubescens (Waidee et.al., 2015);  dan bunga N.nouchali Burm.  F  (Dash et.al., 2013 )  akan  tetapi,  penelitian  tentang
aktivitas antibakteri pada bunga N.pubescens belum  pernah  dilakukan. Penelitian  ini  menjadikan  keterbaruan dalam  penggunaan  bunga  teratai  untuk antibakteri sehingga akan dilakukan skrining  fitokimia  yang  terdapat  dalam ekstrak  metanol  bunga N.  pubescens ,  uji aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan E.  coli yang  dihitung  berdasarkan  zona hambat serta penentuan konsentrasi hambat minimum  ekstrak  metanol  bunga N. pubescens dalam  menghambat S.  aureus
dan E. coli.

## II. METODE A. Bahan
Bunga  teratai  putih  ( N.  pubescens ) metanol  p.a,  kertas  saring  Whatman, pereaksi Dragendorff ,  pereaksi Mayer , pereaksi Wagner , HCl 2N, kloroform, asam asetat anhidrat, H 2 SO 4 , FeCl 3 1%, akuades, serbuk magnesium, HCl pekat, standar Mc Farland 0,5, Nutrient Agar (NA), Nutrient Broth (NB),  kloramfenikol  (Oxoid  LTD), paper  disk  dan  biakan  bakteri S.  aureus ACC  25923  dan E.  coli .  ATCC  25929 koleksi  Laboratorium  Balai  Riset  dan Standardisasi Banjarbaru.

## B. Alat
Alat  gelas,  blender,  kawat  ose, bunsen,  cawan  petri, spreader, aluminium foil,  timbangan  analitik  (Ohaus  &  CHQ DJ1002B), pengayak (RETSCH),
maserator, rotary evaporator (Laboxact), waterbath (Memmert),  lemari  pendingin (Modena), autoclave Tomy (sx-500), oven (Thermoline), inkubator (Memmert), laminar  air  flow ,  vortex  (QLS  MC-2500), lemari steril (Ellitech).

## C. Determinasi Tanaman
Determinasi dilakukan di Laboratorium  Dasar  FMIPA  Universitas Lambung Mangkurat dan membandingkan sampel dengan pustaka.

## D.  Pembuatan  Simplisia  Serbuk  bunga

## N.pubescens
Sampel dikumpulkan dan dibersihkan dari benda-benda asing (sortasi basah).  Sampel  yang  telah  dicuci  bersih dipotong  dan  dikeringkananginkan  di bawah  sinar  matahari  tidak  langsung. Setelah  sampel  kering,  sampel  dipisahkan dari  benda-benda  asing  (sortasi  kering). Sampel selanjutnya dihaluskan menggunakan  blender  kemudian  diayak. Serbuk  halus  yang  diperoleh  ditimbang kemudian  disimpan  dalam  wadah  bersih dan  tertutup  rapat  (Modifikasi  Waidee et al. , 2015)

## E. Pembuatan Ekstrak
Ditimbang  sebanyak  300  gram serbuk  bunga N.pubescens kemudian dimaserasi  menggunakan  pelarut  metanol (perbandingan  1:4  b/v)  selama  3x24  jam pada  suhu  kamar. Sampel  dimaserasi
dengan  metanol  p.a  selama  3  x  24  jam dengan  perbandingan  sampel  :  pelarut metanol  yakni  (1:4  b/v)  pada  suhu  kamar. Sampel  diaduk  setiap  8  jam  dan  pelarut diganti  setiap  24  jam  dengan  jumlah  yang sama  dengan  yang  pertama.  Sampel disaring dengan menggunakan kertas saring setiap  pergantian  pelarut  hingga  diperoleh filtrat  dan  residu.  Filtrat  yang  diperoleh dikumpulkan kemudian ekstrak cair dipekatkan dan diuapkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator pada suhu 40 0 C  sampai  terbentuk  ekstrak  pekat.
Ekstrak  ditimbang  hingga  diperoleh  bobot tetap  (Modifikasi  Fitrial et  al, ,  2008).
Setelah  itu  dihitung  rendemen  ekstrak dengan  menggunakan  rumus  (Nasution,
2015):
Rendemen = Berat ekstrak Berat sampel x 100 % -- (1)

## F. Skrining Fitokimia
1. Alkaloid
Keberadaan alkaloid dilakukan dengan uji Dragendorff , uji Mayer , dan Uji Wagner .  Ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  3 tabung  reaksi  masing-masing  sebayak  2 mL.  Tabung  pertama  ditambahkan  2  mL pereaksi Dragendorff , tabung kedua ditambahkan  2  mL  pereaksi Mayer dan tabung  ketiga  ditambahkan  2  mL  pereaksi Wagner .  Hasil  uji  positif  bila  dengan penambahan reaksi Meyer terbentuk endapan putih kekuningan, dengan pereaksi Wagner terbentuk  endapan  coklat  dan
dengan  pereaksi Dragendorff terbentuk endapan  merah  hingga  jingga.  Jika pengujian  terhadap  salah  satu  pereaksi positif, maka dalam tumbuhan uji tersebut terdeteksi alkaloid (Harborne, 1987).

## 2. Steroid / Triterpenoid
Identifikasi senyawa steroid dilakukan dengan menggunakan uji Liebermann-Burchard .  Sebanyak  2  mL ekstrak dimasukkan kedalam tabung reaksi lalu ditambahkan dengan kloroform secukupnya, 2 mL asam asetat anhidrat dan 2 mL H 2 SO 4 pekat melalui dinding tabung] Adanya senyawa  golongan terpenoid  akan ditandai  dengan  timbulnya  warna  merah sedangkan  adanya  senyawa  golongan steroid  ditandai  dengan  munculnya  warna biru. (Harborne, 1987).

## 3. Fenolik
Keberadaan golongan fenolik dilakukan  dengan  uji  FeCl 3 .  Sebanyak  1 mL  ekstrak  dilarutkan  dalam  aquades  di dalam  tabung  reaksi.  Kemudian  larutan ditambahkan  2-3  tetes  FeCl 3 1%.  Jika terjadi  perubahan  warna  menjadi  hijau, merah,  ungu,  biru  atau  hitam  pekat  maka ekstrak  positif  mengandung  senyawa fenolik (Harborne, 1987).

## 4. Saponin
Uji saponin menggunakan uji busa. Sebanyak  2  mL  ekstrak  dimasukkan  ke
dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  5  mL akuades dan dikocok kuat selama 10 detik. Reaksi  dikatakan  positif  terhadap  saponin jika terbentuk buih yang stabil selama tidak kurang dari 10 menit dilanjutkan penambahan  1  tetes  HCL  2N  dan  tetap terlihat buih. (Harborne, 1987).

## 5. Flavonoid
Uji  flavonoid  menggunakan  uji
Shinoda .  Sebanyak  2  mL  ekstrak  metanol dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  0,1  mg  serbuk  magnesium serta  0,5  mL  asam  klorida  pekat.  Reaksi positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya warna merah, kuning atau jingga (Harborne, 1987).

## G.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak
Metanol Bunga Teratai
1. Peremajaan bakteri uji
Sebanyak 1 mL stok  bakteri E.coli dan S.aureus diinokulasi  kedalam  tabung reaksi yang telah berisi media NB. Inkubasi dilakukan selama 24 jam pada suhu 37⁰C.]
2. Pembuatan standard Mc Farland dan suspensi bakteri uji
Bakteri E.  coli dan S.  aureus yang berumur 18-24 jam pada media NB diambil dengan  kawat  ose  steril.  Masing-masing bakteri  disuspensikan  ke  dalam  tabung berisi 2 mL larutan saline steril, kemudian divortex  hingga  terbentuk  suspensi  halus.
Sesuaikan  kekeruhan  suspensi  dengan standard Mc  Farland no. 0,5  (1,5x10 8
CFU/mL)  secara  visual.  Suspensi  ini digunakan dalam waktu tidak lebih dari 15 menit.  Pembuatan  larutan Mc  Farland no. 0,5  dengan  mencampurkan  H 2 SO 4 0,36  N sebanyak 9,95 mL ke dalam 0,05 mL BaCl 2 1,175  %  ke  dalam  labu  ukur  kemudian digojog  hingga  homogen  (Ngajow et  al. , 2013).
3.  Uji  pendahuluan  antibakteri  ekstrak metanol bunga teratai
Sebanyak  0,2  mL  suspensi  bakteri S.  aureus dan E.coli masing-masing diinokulasi ke dalam cawan petri yang telah berisi  media  NA  secara spread  plate kemudian  dibiarkan  permukaan  agar mengering. Kertas cakram (diameter 6 mm) yang  telah  diisi  ekstrak  konsentrasi  50%, antibiotik kloramfenikol 1% sebagai kontrol positif dan akuades sebagai kontrol negatif diletakkan di atas lapisan NA secara aseptis.  Kontrol  kontaminasi  media  hanya berisi  media  pengujian  (NA)  sedangkan kontrol  bakteri  uji  berisi  media  NA  dan bakteri uji. Cawan petri diinkubasi selama 24  jam  pada  suhu  37⁰C  (Poeloengan  & Praptiwi, 2010). Rumus untuk menghitung zona  hambat  adalah  sebagai  berikut (Warbung et al. , 2014).
Zona hambat = d1+d2 2 − X - - - (2)
Keterangan : d1 = Diameter vertikal zona bening pada media
(mm) d2 =  Diameter  horizontal  zona  bening  pada media (mm)
X = Diameter disk (6 mm)
Berdasarkan hasil luas zona hambat yang  diamati  dapat  dikategorikan  sebagai berikut, >20 mm dikategorikan sangat kuat, 10-20  mm  dikategorikan  kuat,  5-10  mm dikategorikan sedang dan <5 mm dikategorikan  lemah.  Nilai  zona  hambat yang diperoleh dari sampel dan kloramfenikol  yang  diuji  dengan Shapiro- Wilk terlebih  dahulu  untuk  mengetahui normalitas penyebaran data. Uji normalitas diperoleh Signifikansi <0,05 menunjukkan bahwa  data  tidak  terdistribusi  normal Analisis  dilanjutkan  menggunakan  uji nonparametrik Mann Whitney untuk membedakan  kelompok  bakteri  uji  dan kelompok kontrol dengan membandingkan zona  hambat  ekstrak  metanol  bunga N. pubescens terhadap kelompok kontrol dari masing-masing  bakteri  uji  (Ngajow et  al. , 2013).
4. Penentuan KHM ekstrak metanol bunga teratai
Nutrient Broth steril disiapkan 9 mL per  tabung  per  konsentrasi  ekstrak  yang diuji  untuk  setiap  bakteri.  Masing-masing ekstrak  konsentrasi  25%;  12,5%;  6,25%; 3,125%:  1,5625%  (b/v)  ditambahkan sebanyak  0,5  mL  secara  aseptis  dan ditambahkan pula 0,5 mL suspensi bakteri ke  dalam  media  NB.  Sebelum  diinkubasi
pada  suhu  37⁰C  selama  24  jam,  setiap tabung  diamati  seksama  dan  diukur absorbasi  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  panjang  gelombang  600  nm. Setelah  inkubasi  tabung  dilusi  kembali diamati seksama dan diukur absorbansinya pada  spektrofotometer  UV-Vis  panjang gelombang 600 nm (Magdalena & Kusnadi, 2014).  Hasil  pengamatan  dibandingkan kekeruhannya antara sebelum dan sesudah inkubasi dan nilai absorbansi sebelum dan sesudah  inkubasi.  Bertambahnya  nilai absorbansi  setelah  dilakukan  inkubasi menunjukkan  adanya  pertumbuhan  sel bakteri yang hidup, sedangkan nilai konstan atau berkurangnya nilai absorbansi setelah inkubasi menunjukkan tidak adanya pertumbuhan sel bakteri yang (Astutiningsih, 2014).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Determinasi Tanaman
Determinasi bertujuan untuk membuktikan  kebenaran  bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  (Djamil  & Anelia,  2009).  Sampel  diperoleh  dari habitat  asli  sungai  dan  rawa  daerah Kabupaten  Barito  Kuala,  Kalimantan Selatan.  Nama  lokal N.  pubescens di Kalimantan  dikenal  dengan  nama  teratai atau talipuk. Hasil uji menunjukkan sampel adalah N. pubescens.

## B. Pembuatan Ekstrak
Proses ekstraksi dilakukan
menggunakan metode maserasi.
Penggunaan  metanol  p.a  sebagai  pelarut universal  bertujuan  agar  semua  senyawa dapat tersari dengan baik (Djamil & Anelia, 2009) karena metanol memiliki gugus polar (-OH) dan gugus nonpolar (-CH 3 ) (Astrina et  al. ,  2013).  Pelarut  metanol  memiliki konstanta dielektrik tinggi sehingga mampu
membuka dinding sel yang mengakibatkan hampir  semua  senyawa  dapat  tertarik keluar  dari  dalam  sel  (Sari et  al., 2008). Ekstrak  metanol  bunga N.  pubescens berwarna  hitam  ( oily )  dan  berbau  khas.
Ekstrak yang diperoleh sebesar 40,09 gram. Rendemen ekstrak yang diperoleh dari 300 gram serbuk adalah 13,36%.

## C. Skrining Fitokimia
Tabel I. Komponen fitokimia ekstrak metanol bunga N. pubescens No Komponen Fitokimia Hasil Keterangan 1 Alkaloid - - Uji Dragendorff -
Terbentuk larutan coklat keruh Sebelum      Sesudah
- - Uji Mayer + Terbentuk endapan kekuningan Sebelum     Sesudah
- - Uji Wagner -
Terbentuk larutan coklat keruh
Sebelum      Sesudah
2 Steroid / Triterpenoid
-
Terbentuk larutan berwarna kuning – coklat pudar Sebelum      Sesudah 3 Fenolik +
Terbentuk larutan berwarna hitam pekat Sebelum      Sesudah
No Komponen Fitokimia Hasil Keterangan 4 Saponin + Terbentuk buih stabil selama 5 menit Sebelum       Sesudah 5 Flavonoid + Terbentuk larutan berwarna merah Sebelum     Sesudah
Keterangan: (+) menunjukkan hasil positif (–) menunjukkan hasil negatif

## 1. Alkaloid
Keberadaan  alkaloid  pada  ekstrak metanol  bunga N.  pubescens dilakukan melalui uji Dragendorff , uji Mayer dan uji
Wagner .  Penambahan  HCl  yang  bersifat asam digunakan untuk mengekstrak alkaloid  yang  bersifat  basa  (Harborne, 1996).  Uji Mayer membentuk  endapan kekuningan  yang  menandakan  positif mengandung  alkaloid.  Pada  pereaksi Mayer ,  larutan  merkurium  (II)  klorida ditambah  kalium  iodida  akan  membentuk edapan  merkurium  (II)  iodida.  Kalium iodida yang berlebih akan membentuk tetra iodomerkurat (II). Nitrogen yang terkandung dalam alkaloid bereaksi dengan ion  logam  K + dari  tetraiodomerkurat  (II) pereaksi  Mayer  sehingga  membentuk kompleks kalium-alkaloid yang mengendap (Marliana et a l., 2005). Adapun persamaan reaksinya sebagai berikut.
Gambar  1. Persamaan  reaksi  uji Mayer (Marliana et al. , 2005)
Pada uji Wagner larutan diperkirakan  tidak  mengandung  alkaloid karena membentuk larutan berwarna coklat keruh.  Uji Dragendorff terbentuk  larutan berwarna  coklat  keruh  menandakan  hasil negatif  karena  tidak  terbentukya  endapan merah hingga jingga. Hal ini dimungkinkan pada Uji Wagner antara ion bismuth nitrat dan KI tidak terbentuk Bismut (III) Iodida secara  berlebih  sehingga  tidak  terbentuk kompleks  kalium  tetraiodobismutat  yang mengakibatkan  ion  K+  pada  KI  tidak berikatan  membentuk  Kalium-  Alkaloid
yang  berupa  endapan,  begitu  pula  dengan uji  Dragendroff  tidak terbentuk  endapan kalium-Alkaloid.
2. Fenolik
Ekstrak  metanol N.  pubescens positif mengandung fenolik ditandai dengan  perubahan  warna  menjadi  hitam pekat.  Pada  penambahan  FeCl 3 ,  gugus fenol  akan  berikatan  dengan  FeCl 3 membentuk  kompleks  berwarna  hitam kebiruan.

## 3. Saponin
Berdasarkan  uji  busa,  ekstrak metanol N. pubescens positif mengandung saponin.  Hasil  positif  uji  busa  ditandai dengan  terbentuknya  buih  stabil  selama  5 menit  (Harborne,  1987).  Saponin  adalah senyawa  yang  memiliki  gugus  hidrofilik dan  hidrofob.  Terbentuknya  buih  karena adanya  gugus  hidrofil  yang terikat  dengan air  dan  gugus  hidrofob  dengan  udara. Penambahan HCl 2N menambah kepolaran dari gugus hidrofil sehingga terbentuk buih yang  lebih  stabil  (Simaremare,  2014).
Senyawa  yang  memiliki  gugus  polar  dan nonpolar bersifat aktif permukaan, sehingga  saat  saponin  dilakukan  uji  busa menggunakan  akuades  dapat  membentuk misel. Saat struktur misel terbentuk, gugus polar menghadap ke luar sedangkan gugus nonpolarnya menghadap ke dalam, keadaan ini  akan  tampak  seperti  busa  (Minarno,
2015).

## 4. Flavonoid
Uji  kualiatif  senyawa  flavonoid diketahui  dengan  uji shinoda .  Hasil pengujian positif dengan perubahan warna menjadi merah. Penambahan serbuk magnesium  (Mg)  dan  asam  klorida  pekat menyebabkan tereduksinya senyawa flavonoid  sehingga  menimbulkan  reaksi berwarna merah. Penambahan asam klorida pekat  digunakan  untuk  menghidrolisis flavonoid  menjadi  aglikonnya  dengan menghidrolisis  O-glikosil.  Glikosil  akan tergantikan  H + dari  asam  karena  sifat elektrofilik. Reduksi menggunakan magnesium  dan  asam  klorida  pekat menghasilkan senyawa kompleks berwarna merah  atau  jingga  pada  flavonol,  flavon, dan xanton (Robinson, 1995). D

## D.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak
Metanol Bunga Teratai
Tabel II. Hasil zona hambat ekstrak metanol bunga N.  pubescens konsentrasi 50%  terhadap  bakteri S.  aureus,
E. coli Bakteri Uji Rata-rata ± SD (mm) S. aureus 10 ± 0,29 K (+) 6,3 ± 0,29 K(-) 0 E. coli 10,2 ± 0,5 K (+) 19,8 ± 1,15 K (-) 0 Keterangan: K  (+)  kloramfenikol  1%  dan  K  (-) akuades Uji
pendahuluan aktivitas
antibakteri  dilakukan  dengan  cara  difusi
kertas  cakram.  Pada  Uji  difusi  digunakan perbandingan  ekstrak  dengan  pelarut akuades sebesar  (1:2 b/v) atau konsentrasi sebesar  50%.  Konsentrasi  ini  digunakan pada  uji  pendahuluan  untuk  mengetahui apakah  terdapat  aktivitas  penghambatan pertumbuhan pada konsentrasi tersebutPrinsip  pengujian  pada  metode difusi  kertas  cakram  ( Kirby-Bauer). Hasil menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol bunga N. pubescens menghambat pertumbuhan S. aureus dan E. coli dengan terbentuknya zona bening di sekitar kertas cakram dengan konsentrasi 50 % sehingga penentuan KHM konsentrasi diuji dilakukan pada konsentrasi di bawah 50%. Zona  bening  terlihat  berwarna  jingga karena  adanya  difusi  ekstrak  bunga N. pubescens pada  media  agar.  Ekstrak metanol  bunga N.  pubescens memiliki aktivitas antibakteri yang kuat pada E. coli karena  rata-rata  diameter  yang  dihasilkan berada pada rentang 10-20 mm, sedangkan pada S.  aureus masuk  dalam  kategori sedang  karena  rata-rata  diameter  yang dihasilkan  berada  pada  rentang  5-10  mm yakni 10 ± 0,29 mm. (Tabel 2).
Gambar  1. Ekstrak  metanol  konsentrasi 50%  terhadap  bakteri  (a) S. aureus dan (b) E. coli
Penelitian ini menggunakan akuades steril sebagai kontrol negatif untuk membuktikan  ada  atau  tidaknya  peran pelarut  dalam  pembentukan  zona  hambat sehingga  dapat  diketahui  bahwa  yang mempunyai  aktivitas  antibakteri  hanya ekstrak  bunga N.  pubescens .  Sedangkan metanol  tidak  digunakan  sebagai  kontrol negatif karena telah diuapkan hingga bobot tetap  pada  proses  ekstraksi  (Nuria et  al. , 2009). Metanol diuapkan ditandai terbentuknya  bobot  tetap  setelah  proses maserasi, metanol berevaporasi dan membentuk ekstrak kasar yang mengandung  berbagai  senyawa  metabolit sekunder  (Dewi et  al. ,  2014).  Hasil  uji difusi  akuades  steril  tidak  menghasilkan zona  hambat,  sehingga  tidak  berpengaruh dalam  pembentukan  zona  hambat  ekstrak bunga N. pubescens .
Kontrol  positif  yang  digunakan pada  penelitian  ini  yaitu  kloramfenikol. Kloramfenikol memiliki kemampuan antibiotic  dengan  spektrum  luas  yang mampu  menghambat  dan  membunuh bakteri  gram  positif  maupun  gram  negatif (Sumardjo,
2009). Mekanisme kloramfenikol dalam menghambat
pertumbuhan bakteri dengan cara menghambat  sintesis  protein  (Setiabudy, 2007). Pemilihan kloramfenikol 1% sebagai  pembanding  mengingat  dosis kloramfenikol sebagai sediaan topical yang sudah  banyak  digunakan  yakni  10  mg/g  (
a b
Chan, 2010). Hasil pengujian menunjukkan zona  hambat  lebih  besar  pada E.  coli daripada S. aureus . Berdasakan interpretasi diameter  zona  hambat  dari  CLSI  (2017), potensi  kloramfenikol  30  μg  (3%)  pada S.aureus menghasilkan  diameter  sebesar 19-26 mm sedangkan pada E. coli sebesar 21-27 mm.
Kontrol media tanpa ada perlakuan lain  digunakan  untuk  mengetahui  bahwa media  bebas  dari  kontaminasi.  Sedangkan kontrol  bakteri  uji S.  aureus dan E.  coli membuktikan bahwa bakteri uji tetap dapat hidup  setelah  perlakuan,  sehingga  cara kerja  sudah  tepat.  Hasil  setelah  pengujian kontrol kontaminasi media tetap bebas dari petumbuhan bakteri maupun jamur. Kontrol  bakteri  uji S.  aureus dan E.  coli tumbuh dengan baik pada media.
Tabel III. Analisis hasil uji nonparametrik Mann-Whitney
Sampel P (Asymp. Sig) Hasil Uji S.  aureus - Kontrol (+) 0,046 Berbeda bermakna S.  aureus - Kontrol (-) 0,037 Berbeda bermakna E. coli - Kontrol (+) 0,043 Berbeda bermakna E. coli - Kontrol (-) 0,034 Berbeda bermakna
Diameter zona hambat diuji Shapiro-Wilk untuk mengetahui normalitas penyebaran  data.  Uji  normalitas  diperoleh Signifikansi  <0,05  menunjukkan  bahwa data  tidak  terdistribusi  normal.  Analisis dilanjutkan menggunakan uji
nonparametrik Mann Whitney untuk membedakan  kelompok  bakteri  uji  dan kelompok kontrol. Hasil uji Mann Whitney menunjukkan  adanya  perbedaan  yang signifikan antara bakteri uji dan kelompok kontrol dengan diperolehnya nilai P > 0,05 (Tabel 3).
Ekstrak N.  pubescens berbeda bermakna dengan kontrol negatif menunjukkan  bahwa  ekstrak  memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan bakteri S.  aureus maupun E. coli .  Ekstrak N.  pubescens berbeda bermakna  terhadap  kloramfenikol  1% terhadap E.coli menunjukkan  ekstrak belum  untuk  mampu  untuk  mencapai potensi dari kontrol positif sedangkan pada S. aureus zona hambat lebih besar daripada klormfenikol  1%.  Hal  ini  disebabkan karena  adanya  perbedaan  dari  komponen penyusun dinding selnya. Bakteri S. aureus termasuk  dalam  bakteri  Gram  positif. Dinding sel bakteri Gram positif strukturnya  lebih  sederhana  dibandingkan struktur  dinding  sel  bakteri  Gram negatif yang  lebih  kompleks  (Yeni et  al. ,  2010).
Bakteri  Gram  positif  memiliki  dinding  sel dengan  lapisan  peptidoglikan  yang  tebal dan  akan  berwarna  ungu  jika  diwarnai dengan  pewarna  Gram.  Bakteri E.  coli termasuk  dalam  bakteri  Gram  negatif. Bakteri  Gram  negatif  bakteri  memiliki dinding  sel  dengan  lapisan  peptidoglikan yang  tipis  serta  struktur  lipid  yang  tinggi
(Fitri & Yasmin, 2011).
Penentuan konsentrasi hambat minimal menggunakan dilusi cair. Menurut APHA (1998) panjang gelombang 600 nm digunakan  sel  bakteri  menyerap  panjang gelombang. Konsentrasi  hambat minimum (KHM) ekstrak terhadap S. aureus sebesar 12,5% sedangkan pada E. coli sebesar 25%.
Tabel  IV. Perhitungan  jumlah  bakteri S. aureus sebelum  dan  sesudah inkubasi menggunakan spektrofotometer UV-Vis Konsentrasi ekstrak Rata -rata AOD Ket. Sebelum  Sesudah 1,5625% 0,345 0,373 0,028  Naik 3,125% 0,370 0,387 0,018  Naik 6,25% 0,432 0,440 0,007  Naik 12,5% 0,517 0,503 - 0,014  Turun 25% 0,670 0,649 - 0,021  Turun
Tabel V. Perhitungan jumlah bakteri E. coli sebelum  dan  sesudah  inkubasi menggunakan  spektrofotometer
UV-Vis Konsentrasi ekstrak Rata -rata AOD Ket Sebelum  Sesudah 1,5625% 0,260 0,361 0,118  Naik 3,125% 0,311 0,390 0,080  Naik 6,25% 0,414 0,470 0,056  Naik 12,5% 0,454 0,480 0,026  Naik 25% 0,512 0,501 -0,011 Turun Khasiat
antibakteri yang terkandung  dalam  ekstrak  metanol  bunga N.  pubescens disebabkan  karena  adanya kandungan  senyawa  kimia  yang  mampu menghambat pertumbuhan bakteri.
Golongan  fenolik  dalam  ekstrak  metanol bunga N. pubescens dapat berperan sebagai antibakteri  dengan  cara  mendenaturasi
protein  sel.  Saponin  sebagai  antibakteri menyebabkan kebocoran protein dan enzim dari  sel  karena  zat  aktif  permukaan menyerupai  detergen  akibatkanya  saponin menurunkan  tegangan  permukaan  dinding sel  dan  merusak  permeabilitas  membran. Golongan  flavonoid  berperan  sebagai antibakteri  dengan  cara  menghambat sintesis  asam  nukleat,  menghambat  fungsi membran sel ataupun menghambat metabolisme  energi.  Mekanisme  dari senyawa metabolit sekunder tersebut saling bersinergis sehingga menambah efektivitas dan  aktivitas  ekstrak  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri S.  aureus maupun E. coli (Rijayanti, 2014).

## IV. KESIMPULAN
Hasil kandungan senyawa kimia yang diidentifikasi  dari  skrining  fitokimia  yang telah dilakukan, ekstrak  metanol  bunga N. pubescens mengandung  fenolik,  saponin dan  flavonoid.  Ekstrak  metanol  bunga N. pubescens memiliki  kemampuan  dalam menghambat pertumbuhan S. aureus dan E.
coli . Rata-rata diameter zona hambat yang terbentuk  yaitu  10  ±  0,29  mm  pada S. aureus dan  10,2  ±  0,5  mm  pada E.  coli . Konsentrasi hambat minimum yang diperlukan dalam menghambat pertumbuhan S.  aureus adalah  12,5% sedangkan E.  coli adalah  25%.  Saran  dari penelitian ini diperlukan pengujian konsenstrasi hambat minimal pada rentang
diantara konsentrasi yang memberikan efek penghambatan  dan  konsentrasi  yang  tidak memberikan efek penghambatan .

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih kepada Fakultas MIPA yang telah mendanai penelitian ini melalui hibah  dana  penelitian  DIPA  Universitas Lambung Mangkurat tahun anggaran 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
Astarina,  N.W.G.,  K.W.  Astuti  &  N.K.
Warditiani. 2013. Skrining Fitokimia Ekstrak  Metanol  Rimpang  Bangle ( Zingiber  purpureum Roxb.). Jurnal Farmasi Udayana . 1 :1-10.
Astutiningsih,  C.,  W.  Setyani  &  H.
Hindratna. 2014. Uji Daya
Antibakteri  dan  Identifikasi  Isolat Senyawa  Katekin  dari  Daun  Teh ( Camellia  Sinensisl. Var  Assamica). Journal  of  Pharmaceutical  Sciences and Community. 11 : 50-57.
BPS Kalimantan Selatan. 2000. Biro Pusat Statistik Kalimantan
Selatan , Banjarmasin. Budiwati,  G.A.  &  E.  Kriswiyanti.  2014. Manfaat Tanaman Teratai
( Nymphaea sp., Nymphaeaceae )  di Desa  Adat  Sumampan,  Kecamatan sukawati,  Kabupaten  gianyar,  Bali. Jurnal Simbiosis. 2 : 122-134.
CLSI. 2017. Antibiotic  Disc  Interpretative
Criteria and Quality Control. Liofilchem. 13 : 1-13.
Chan,  Michelle.  2010.  Cloramphenicol Wound Infection
Prophylaxis.
Evidence Based Medicine Review Dash,  B.K.,  M.K.  Sen,  K.  Alam,  K. Hossain,  R.  Islam,  N.A.  Banu,  S. Rahman  &  A.H.M.  Jamal.  2013.
Antibacterial  Activity  of Nymphaea nouchali (Burm. f) Flower. Annals of Clinical Microbiology and
Antimicrobials. 12 :1-4.
Debhnath, S., S. Ghosh & B. Hazra. 2013.
Inhibitory  Effect  of Nymphaea pubescen Willd.  Flower  Extract  on Carrageenan-Induced  Inflammation and  CCl4-Induced  Hepatotoxicity  in Rats. Food and Chemical Toxicology
59 : 485-491.
Dewi,  M.K.,  Ratnasari,  E.  &  Trimulyono,
G. 2014. Aktivitas Antibakteri
Ekstrak Daun Majapahit ( Crescentia cujete ) terhadap Pertumbuhan Bakteri Ralstonia Solanacearum Penyebab Penyakit Layu. LenteraBio. 3 :51-71. Djamil,  R.  &  T.  Anelia.  2009.  Penapisan Fitokimia,  Uji  BSLT,  dan  Uji Antioksidan Ekstrak Metanol Beberapa Spesies Papilionaceae.
Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia.
7 : 65-71.
Dorland.  1998. Kamus  Saku  Kedokteran Dorland . EGC, Jakarta.
Fitri,  L.  &  Y.  Yasmin.  2011.  Isolasi  dan
Pengamatan Morfologi Koloni
Bakteri  Kitinolitik. Jurnal  Biologi Edukasi. 3 : 20-25.
Fitrial, Y., M. Astawan, S.S. Soekarto, K.G. Wiryawan,  T.  Wresdiyati  &  R. Khairina. 2008. Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Biji  Teratai  ( Nymphaea pubescens Willd)  terhadap  Bakteri Patogen  Penyebab  Diare. Jurnal Teknologi  dan  Industri  Pangan.  19
(2) : 158-164.
Fitrial,  Y.,  M.  Astawan,  S.T.  Soekarto,
K.G.  Wiryawan  &  T.  Wresdiyati. 2012.  Potensi  Biji  dan  Ekstrak  Biji Teratai ( Nymphaea pubescens Willd) sebagai  Pencegah  Diare  pada  Tikus Percobaan  yang  diintervensi E.coli Enteropatogenik. AGRITECH.  32
(3 ) : 308-317.
Harborne,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia .
Institut Teknologi Bandung, Bandung. Himedia. Jawetz,  L.  Ernest,  Joseph,  Melnick  &  A. Edward. 2007. Mikrobiologi
Kedokteran . ECG, Jakarta.
Marliana,  S.D.  &  V.  Suryanti.  2005.
Skrining  Fitokimia  dan  Analisis

## Kromatografi Lapis Tipis Komponen
Kimia  Buah  Labu  Siam  ( Sechium edule Jacq.  Swartz.)  dalam  Ekstrak Etanol. Biofarmasi. 3 : 26-31.
Melliawati,  R.  2009. Escherichia  coli
dalam Kehidupan
Manusia.
Biotrends. 4 : 10-14.
Minarno,  E.B.  2015.  Skrining  Fitokimia dan Kandungan Total Flavanoid pada Buah Carica pubescens Lenne  & K. Koch  di  Kawasan  Bromo,  Cangar, dan  Dataran  Tinggi  Dieng. El- Hayah,. 5 : 73-82.
Nasution,  A.A.  2011.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Bunga Kecombrang ( Nicolaia speciose Horan)  terhadap  Bakteri Shigella dysentriae dan Vibrio cholera Secara in  vitro.  Naskah  Publikasi  Karya Tulis Ilmiah Farmasi FKIK UMY : 1- 15.
Ngajow,  M.,  J.  Abidjulu  &  V.S.  Kamu. 2013.  Pengaruh  Antibakteri  Ekstrak
Kulit Batang Matoa ( Pometia pinnata ) terhadap Bakteri
Staphylococcus  aureus secara In Vitro . Jurnal MIPA UNSRAT 2 : 128- 132.
Nuria,  M.C.  &  A.  Faizatun.  2009.  Uji
Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Jarak  Pagar  ( Jatropha  Curcas L)  terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus ATCC  25923, Escherichia coli ATCC  25922,  dan Salmonella typhi ATCC 1408. Mediagro. 5 :  26- 37.
Rijayanti,  R.  P.  2014.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun
Mangga  Bacang  ( Mangifera  foetida
L.)  terhadap Staphylococcus  aureus Secara In  Vitro .  Naskah  Publikasi Program  Studi  Pendidikan  Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura, Tanjungpura.
Sari, E.P., E. Wardenaar & F. Yusro. 2008. Aktivitas  Ekstrak  Metanol  Bonggol
Bunga  Teratai  ( Nymphaea  lotus L.) untuk Pengendalian Cendawan Pelapuk Kayu Schizopyllum-
commune fries secara in Vitro . Jurnal Hutan Lestari. 1 . Simaremare, E.S.. 2014. Skrining
Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Gatal ( Laportea decumana (Roxb.) Wedd).
Pharmacy: Jurnal Farmasi
Indonesia  (Pharmaceutical  Journal of Indonesia). 11 . Sumardjo,  D.  2009. Pengantar  Kimia .
Penerbit  Buku  Kedokteran  EGC, Jakarta.
Waidee, K., S. Chankhamhaengdecha & P.
Damrongphol.  2015.  Antibacterial Activity  of Nymphaea  Pubescens Willd.  Leaves. 7 th International Conference  on  Medical,  Biological and Pharmaceutical Sciences (ICMBPS'2015) : 62-65. Yeni, Y.D., S.N. Djannah, & L.H. Nurani. 2010.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Infusa Daun Sirsak ( Annona muricata L.) Secara In Vitro terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Escherichia  coli ATCC  35218 serta Profil  Kromatografi  Lapis Tipisnya . Kes  Mas:  Jurnal  Fakultas Kesehatan  Masyarakat  Universitas Ahmad Daulan. 4 : 218-238.