EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr
Karakterisasi Senyawa serta Uji Toksisitas Ekstrak Gonad dan Eksoskeleton Bulu Babi Echinometra oblonga dari Perairan Pantai Sepanjang, Gunung Kidul, Yogyakarta

## Roselina Nadya Kristi Anggarini*, Agus Trianto, Ita Widowati
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Jacub Rais, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail: nadyakristia99@gmail.com 1
ABSTRAK: Bulu babi tersebar hampir di seluruh perairan di dunia salah satunya adalah perairan selatan Jawa yaitus Pantai Sepanjang Gunung Kidul. Salah satu jenis bulu babi yang ditemukan di Pantai Sepanjang Gunung Kidul adalah Echinometra oblonga . Informasi menarik lainnya mengenai bulu babi adalah racun (toksin) yang merupakan senyawa bioaktif yang terdapat pada duri-durinya. Informasi  mengenai  toksin  bulu  babi  di  wilayah  Pantai  Sepanjang  Gunung  Kidul  masih  kurang hingga saat ini, dan sebagian besar penelitian yang ada  tentang toksin bulu babi hanya terbatas pada duri dan cangkangnya saja, sehingga diperlukan penelitian lebih lanjut mengenai bagian lain dari bulu babi seperti gonadi. Penelitian mengenai toksin gonad bulu babi perlu dilakukan karena gonad bulu babi merupakan bagian bulu babi yang banyak digemari masyarakat untuk dikonsumsi. Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  golongan  senyawa  dan  tingkat  toksisitas senyawa  yang  terdapat  bagian  gonad  dan  eksoskeleton  dari  bulu  babi E.  oblonga dari  Pantai Sepanjang, Gunung Kidul. Sampel diambil dari Pantai Sepanjang, dan dilanjutkan ekstraksi sampel dengan  metode maserasi  menggunakan pelarut  etanol  96%.  Uji  penentuan kandungan  senyawa pada sampel dilakukan dengan uji fitokimia dan KLT (Kromatografi Lapis Tipis). Penentuan tingkat toksisitas sampel menggunakan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) menggunakan hewan uji  Artemia  salina  untuk  mendapatkan  data  yang  akan  diolah  dengan  analisis  probit  untuk mengetahui LC 50 (jumlah konsentrasi sampel yang dibutuhkan untuk membunuh 50% hewan uji) yang  digunakan  untuk  penentuan  tingkat  toksisitas  sampel.  Hasil  analisis  kandungan  senyawa dengan uji fitokimia diketahui bahwa ekstrak gonad E. oblonga mengandung saponin, flavanoid, dan triterpenoid, sedangkan pada ekstrak eksoskeleton mengandung alkaloid, saponin, flavanoid, dan triterpenoid. Hasil analisis kandungan senyawa menggunakan KLT diketahui bahwa ekstrak gonad dan esksokletenon E. oblonga mengandung steroid dengan nilai Rf masing-masing 0,89 dan 0,87. Hasil  dari  uji  toksisitas  dengan  metode  BSLT  dan  analisis  probit  diketahui  bahwa  nilai  toksisitas lethal  (LC 50 -24  jam)  pada  gonad  dan  eksoskeleton  masing-masing  adalah  6.224688.84  ppm  dan 1420.83 ppm.
Kata kunci: Echinometra oblonga ; Toksin; BSLT; Fitokimia; LC 50
Compounds Characterization and Toxicity Test of Gonad and Exoskeleton Extract of Sea Urchin Echinometra oblonga from Sepanjang Coastal Waters Gunung Kidul, Yogyakarta
ABSTRACT: Sea  urchin  is  one  animal  that  is  familiar  among  the  general  public  as  a  nutritious seafood. Sea urchins are scattered in almost all waters in the world, one of which is the southern waters of Java, namely the Sepanjang Beach, Gunung Kidul, with one type of sea urchin found is Echinometra oblonga. Other interesting information about sea urchins is poison (toxin) which is a bioactive compound found in its spines. Information about sea urchin toxin in the  Sepanjang Beach, Gunung Kidul area is still lacking, so further research is needed. The purpose of this study was to determine the class of compound and the level of toxicity of the compounds contained in the gonads and exoskeleton of sea urchins E. oblonga from Sepanjang Beach, Gunung Kidul. Samples were taken from Panjang Beach, and continued with sample extraction by maceration method using 96% ethanol as solvent.The test to determine the compound content in the sample was carried out by phytochemical tests and TLC (Thin Layer Chromatography). Determination of the level of sample toxicity  using  the  BSLT  (Brine  Shrimp  Lethality  Test)  method,  namely  testing  using  test  animals
Journal of Marine Research Vol 12, No. 4 November 2023, pp. 555-562
Artemia salina to obtain data that will be processed with probit analysis to determine the LC50 (the amount of sample concentration needed to kill 50% of test animals) which is used to determine the level of toxicity of the sample. The results of the analysis of compound content by  phytochemicals test  and  TLC  showed  that  the  gonad  extract  of  E.  oblonga  contains  Saponins,  Flavonoids, Triterpenoids, and Steroids, while the exoskeleton extract contains alkaloids, saponins, flavonoids, triterpenoids, and steroids. The results of the toxicity test using the BSLT method and probit analysis showed that the lethal toxicity value (LC50-24 hours) in the ethanol extract of Sea Urchin gonad (E. oblonga) was more than 1000 ppm.
Keywords: Echinometra oblonga; Toxin; BSLT; Phytochemicals; LC 50 .

## PENDAHULUAN
Bulu  babi  atau  landak  laut  merupakan  hewan  avertebrata  laut  yang  berbentuk  bulat  dan terlindung  oleh  cangkang  dan  duri.  Bulu  babi  dalam  taksonominya  termasuk  dalam  Kelas Echinoidea, Filum Echinodermata. Menurut Aziz (1993) terdapat sekitar 800 spesies bulu babi yang tersebar di seluruh dunia dan 84 spesies diantaranya tersebar di perairan Indonesia di seluruh pantai mulai dari daerah pasang surut sampai perairan dalam; salah satu diantaranya adalah Echinometra oblonga. Bulu  babi  memiliki  beragam  manfaat  seperti  bahan  pangan,  ekologi,  ekonomi;  namun disamping manfaatnya tersebut terdapat sifat racun yang dimilikinya ( Aprilia et al., 2012). Beberapa ahli  biologi,  biokimia,  biologi  molekul,  serta  lingkungan  memanfaatkan  bulu  babi  sebagai  bahan eksperimen, misalnya penelitian potensi bulu babi untuk kesehatan manusia dan fungsinya terhadap lingkungan sebagai pengendali populasi mikroalga pada ekosistem terumbu karang (Prasetyo et al ., 2019). Bulu babi  merupakan  salah  satu  hewan yang cukup  familier  dikalangan masyarakat  umum sebagai  salah  satu  makanan  laut  yang  bergizi  serta  informasi  mengenai  racun  yang  merupakan senyawa bioaktif hasil metabolisme sekunder bulu babi. Racun atau toksin menurut Kamus Besar Bahasa  Indonesia  adalah  suatu  “zat  racun  yang  dibentuk  dan  d ikeluarkan  oleh  organisme  yang menyebabkan  kerusakan  radikal  dalam  struktur  atau  faal,  merusak  total  hidup  atau  keefektifan organisme  pada  satu  bagian.”  Sedangkan  menurut  Maramis  (2016),  toksin  dapat  didefinisikan sebagai racun yang dihasilkan dari proses biologi atau sering disebut sebagai biotoksin. Racun yang terkandung dalam bulu babi biasa terdapat pada duri serta cangkang bulu babi. Menurut Angka dan Suhartono (2000), diketahui kandungan yang terdapat pada duri serta cangkang bulu babi adalah polihidroksi dan apelasterosida. Walaupun banyak penelitian yang menyebutkan bahwa toksin bulu babi tergolong sebagai toksin yang tidak terlalu berbahaya bagi manusia namun tingkat toksisitas dari toksin bulu babi sendiri masih banyak dipertanyakan. Salah satu metode yang dapat digunakan untuk meneliti tingkat toksisitas toksin bulu babi adalah menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), yang menggunakan nauplius Artemia salina sebagai hewan uji (Zuraida, 2018). BSLT merupakan salah satu metode yang bertujuan untuk menentukan kadar toksisitas suatu senyawa  menggunakan  nauplius  udang A.  salina (Muaja et  al .,  2013).  Metode  BSLT  dilakukan dengan  menghitung  mortalitas  Nauplius A.  salina terhadap  senyawa  yang  diujikan. A.  salina merupakan organisme yang biasa digunakan untuk memenuhi kebutuhan nutrisi energi bagi larva ikan  di  balai  pembenihan  ikan. A.  salina juga  sering  digunakan  sebagai  sampel  uji  ideal  dalam penelitian terhadap toksisitas karena ketahanan tubuhnya (Djokosetiyanto et al ., 2007).
Bulu babi tersebar luas diseluruh dunia salah satunya terdapat di Perairan Indonesia (Aziz, 1993). Salah satu wilayah persebaran bulu babi di perairan Indonesia adalah perairan selatan Pulau Jawa, termasuk Pantai Sepanjang, Wonosari, Yogyakarta. Wilayah ini terdiri dari rataan terumbu karang dan terdapat cukup banyak bulu babi dengan salah satu jenisnya adalah E. oblonga . Menurut Arthaz et  al .  (2015), Echinometra sp.  yang  terdapat  di  wilayah  Pantai  Sepanjang  Yogyakarta  ini memiliki nilai kelimpahan relative lebih dari 50%. Menurut Tarigan et al. (2020), bulu babi banyak ditemukan pada ekosistem terumbu karang dan lamun. Bulu babi juga memiliki peran yang penting bagi ekosistem terumbu karang karena bulu babi merupakan hewan herbivora (memakan alga yang tumbuh di terumbu karang), yang akan membantu menyeimbangkan ruang bagi terumbu karang.
Journal of Marine Research Vol 12, No. 4 November 2023, pp. 555-562
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Lestiono et  al .  (2020),  diketahui  bahwa  kandungan senyawa  ekstrak  etanol  70%  Bulu  Babi Echinometra sp.  dari  Pantai  Sabang,  Banda  Aceh  yang terdiri dari gonad dan eksoskeleton dengan metode ekstraksi maserasi dan uji senyawa fitokimia mengandung  triterpenoid,  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  dan  tanin.  Menurut  Harbone,  1987 dalam Andriyanto et  al .  (2016),  uji  fitokimia  merupakan  salah  satu  metode  uji  untuk  mengidentifikasi senyawa yang terdapat pada suatu sampel dengan pereaksi tertentu berdasarkan sifat kepolaran dari senyawa yang diekstrak dan pelarutnya.
Informasi  mengenai  kandungan  senyawa  serta  tingkat  toksisitas E.  oblonga dari    Pantai Sepanjang,  Yogyakarta  sejauh  ini  masih  kurang,  sehingga  penelitian  ini  perlu  dilakukan  untuk menambah informasi mengenai kandungan senyawa serta tingkat toksisitas E. oblonga Penelitian toksisitas E. oblonga ini akan dilakukan terutama pada gonad, sebagai bagian tubuh bulu babi yang sering  dikonsumsi  serta  bagian  eksoskeleton  (cangkang  dan  duri),  dengan  tujuan  agar  dapat digunakan untuk penelitian selanjutnya mengenai toksin E. oblonga .

## MATERI DAN METODE
Materi yang digunakan pada penelitian ini meliputi hewan uji Nauplius Artemia salina yang akan digunakan dalam uji BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ); media uji berupa air laut steril dengan salinitas 30 ppt; bahan uji berupa etanol 96%, amil alkohol, HCl, pereaksi Dragendrof , pereaksi Meyer, FeCl 3 , asam asetat anhidrat, asam sulfat, sampel bulu babi E. oblonga ; serta peralatan uji berupa botol vial, tabung reaksi, mikropipet, rotary evaporator , timbangan analitik, alu dan mortar.
Metode  yang  digunakan  adalah  eksperimental  laboratoris,  yaitu  metode  penelitian  untuk mengetahui akibat yang ditimbulkan dari suatu perlakuan yang diberikan secara sengaja oleh peneliti. Pengambilan sampel Bulu Babi E. oblonga dilakukan pada November 2020 di Pantai Sepanjang ketika sedang surut. Penelitian berlangsung pada November 2020 hingga Januari 2021. Pengambilan sampel dilakukan dengan cara purposive sampling yaitu pengambilan dengan tujuan tertentu pada suatu daerah tertentu. Pengambilan sampel ini bertujuan mendapatkan bulu babi E. oblonga dewasa dengan ciri-ciri sampel memiliki eksoskeleton dan duri berwarna hitam dan panjang duri sekitar 3-5 cm. Sampel E. oblonga dipisahkan bagian eksoskeleton (duri dan cangkang) dan gonad dari bagian lainnya. Sampel eksoskeleton dan gonad dihaluskan dengan alu dan mortar untuk proses ekstraksi.
Ekstraksi sampel yang terdiri dari gonad dan eksoskeleton (duri + cangkang) dengan berat kering masing-masing  35  gram  dan  300  gram  dilakukan  dengan  metode  maserasi  (teknik  ekstraksi perendaman  dengan  pelarut  tertentu)  selama  3x24  jam  dengan  pelarut  etanol  96%  dengan perbandingan  sampel  (gr)  :  pelarut  (ml)(1:3)  (Akaerina et  al .,  2015).  Larutan  stok  1000  ppm  dibuat dengan mengencerkan 50 mg ekstrak ke dalam 0,5 ml pelarut etanol 1% dan dihomogenkan dengan 49,5  ml  air  laut  steril  yang  digunakan  untuk  uji  kandungan  senyawa  pada  sampel  gonad  dan eksoskeleton E. oblonga . Alasan penggunaan air laut steril sebagai pelarut karena dalam uji toksisitas menggunakan  BSLT  yang  menggunakan  air  laut  sebagi  media  ujinya,  sedangkan  untuk  uji  KLT menggunakan ekstrak sampel gonad dan eksoskeleton langsung dengan cara ditotolkan dengan pipa kapiler ke atas plat KLT silika gel GF254. Hasil ekstraksi gonad dan eksoskeleton dianalisa beratnya dengan penimbangan, warna dan bentuk hasil ekstraksi sampel serta persen rendemen esktrak yang didapat dari 35 gram gonad dan 300 gram eksoskeleton. Hasil Analisa ini dapat digunakan sebagai perbandingan dengan penelitian-penelitian sebelumnya. Persen hasil ekstraksi sampel dapat diketahui dengan rumus :
Randemen = (berat hasil ekstraksi / berat kering sampel) * 100 %
Ekstrak E. oblonga hasil ekstraksi kemudian diuji kandungan senyawanya dengan uji fitokimia dan uji  KLT  (Kromatografi  Lapis  Tipis).  Uji  fitokimia  yang  dilakukan  berdasarkan  Herbert  (1995); dalam Pringgenies et  al .  (2014):  Identifikasi  alkaloid:  Sebanyak  5  ml  larutan  stok  masing-masing dimasukkan kedalam 2 tabung reaksi, adanya alkaloid ditunjukkan dengan terbentuknya endapan merah  bata  setelah  ditambah pereaksi dragendrof dan  endapan  putih setelah  ditambah  pereaksi meyer.  Identifikasi saponin: Larutan  stok sebanyak  10  ml  dikocok  kuat  secara  vertikal  selama  10 detik,  jika  terbentuk  busa  setinggi  1 – 10  cm  yang  stabil  sekitar  10  menit  dan  tidak  hilang  pada
Journal of Marine Research Vol 12, No. 4 November 2023, pp. 555-562
penambahan di tetes HCL 2 N menunjukkan adanya saponin. Identifikasi flavanoid : Larutan stok sebanyak 10 ml ditambahkan 1 ml HCL pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok kuat dan dibiarkan memisah, adanya flavonoid ditunjukkan jika terbentuk warna merah, kuning jingga pada lapisan amil alkohol. Identifikasi fenolik : Sebanyak 10 ml larutan stok ditambah larutan FeCl 3 1% sebanyak 3 tetes. Apabila terjadi perubahan warna menunjukkan adanya gugus hidroksil yang tersubstitusi pada gugus benzene atau suatu senyawa fenolik. Identifikasi triterpenoid : Sebanyak 10 ml larutan stok ditambah  setetes  asam  asetat  anhidrat  dengan  setetes  asam  sulfat  pekat.  Terbentuknya  warna merah menandakan triterpenoid.
Uji KLT menggunakan eluen (fase gerak) etil asetat sebanyak 5 ml dan menggunakan plat KLT silika gel GF254 2x6 cm sebagai fase diam nya. Visualisasi hasil KLT menggunakan cahaya UV dengan panjang gelombang 254 nm. Pewarnaan dilakukan menggunakan vanilin-sulfat (Tonius et al ., 2016). Nilai Rf didapat dari :
Rf = Jarak titik pusat bercak dari titik awal / Jarak bercak
Uji BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ) dilakukan berdasarkan metode Aprilia et al . (2012) yang bertujuan untuk  mengetahui  sifat  toksisitas LC 50 -24 jam  ekstrak E.  oblonga terhadap nauplius A. salina . Konsentrasi ekstrak yang digunakan pada uji ini adalah 1000 ppm, 100 ppm, 10 ppm, 1 ppm, dan 0 ppm (kontrol). Masing-masing vial berisi 10 ekor Nauplius A. salina beserta larutan stok sesuai konsentrasi  dan  air  laut  steril  hingga  10  ml.  Uji  toksisitas  dilakukan  selama  24  jam  dengan menghitung jumlah mortalitas Nauplius A. salina . Uji ini diulang sebanyak 3 kali. Data hasil uji ini dianalisis untuk memperoleh nilai LC 50 -24 jam dengan metode probit menggunakan program Excel. Analisa probit dianalisa dari efek toksisitas yang didapat dari pengamatan persen kematian hewan uji (nauplius A. salina ), menurut Nurhayati et al . (2006) :
% Mortalitas = (jumlah larva yang mati/jumlah larva uji) x 100%
Nilai Probit dihitung dengan rumus :
Y = a + bX
Keterangan: Y = Nilai Probit Mortalitas Hewan Uji; X = Logaritma mortalitas Hewan Uji di akhir; a = Intercept; b = Slope; LC 50 = antilog(x); Y = 5, karena nilai 5 mewakili 50% mortalitas hewab uji.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel E. oblanga diambil disekitar terumbu karang dengan ciri-ciri sampel berwarna hitam dan panjang duri sekitar 3-5 cm. Ekstraksi sampel 35 gram gonad dan 300 gram eksoskeleton E. oblanga dengan pelarut etanol 96% selama 3x24 jam menghasilkan hasil yang ditampilkan pada Tabel 1. Hasil pengamatan Uji BSLT setelah pengamatan selama 24 jam dengan 3 kali pengulangan dan dengan 5 konsentrasi ekstrak yang berbeda didapatkan hasil yang disajikan pada Tabel 2 dan 3.
Metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96%. Penggunaan  pelarut  etanol  yang  bersifat  polar  bertujuan  untuk  dapat  menarik  senyawa  polar  yang terkandung pada ekstrak sampel gonad dan eksoskeleton E. oblonga . Pemilihan metode maserasi yang termasuk metode ekstraksi dingin adalah untuk meminimalisir kerusakan pada senyawa pada ekstrak sampel yang kemungkinan tidak tahan panas. Warna oranye pada ekstrak diduga karena kandungan karotenoid  pada  gonad  Bulu  Babi E.  oblonga yang  didukung  dengan  penelitian  Symonds et  al . (2007). Warna coklat pada ekstrak eksoskleton diduga karena adanya pigmen yaitu echincrom yang merupakan turunan dari napthoquinone dan termasuk dalam kelompok senyawa fenol (Mei-Dong et al ., 2013).
Tabel 1. Hasil Ekstraksi Sampel E. oblanga
Sampel Berat  (g) Persen hasil ekstraksi (%) Bentuk Warna Gonad 3,42 9,77 Pasta Oranye Kecoklatan Ekso 6,36 2,12 Pasta Coklat Kehitaman
Journal of Marine Research Vol 12, No. 4 November 2023, pp. 555-562
Hasil pengamatan setelah dilakukan 3 kali percobaan diketahui bahwa untuk ekstrak gonad Ecchinometra sp.  dengan  konsentrasi  kontrol  (0  ppm),  1  ppm,  10  ppm,  dan  100  ppm  tidak menyebabkan mortalitas pada nauplius A. salina , sedangkan untuk konsentrasi ekstrak 1000 ppm menyebabkan  rata-rata  mortalitas  1  nauplius A.  salina atau  10%  dalam  kurun  waktu  24  jam. Berdasarkan  tabel  2,  terlihat  mortalitas  nauplius A.  salina mulai  terjadi  pada  6  jam  pertama  dan menigkat  pada  jam  ke  12  dan  tidak  terjadi  peningkatan  lagi  hingga  24  jam.  Hal  tersebut  diduga bahwa racun dari ekstrak E. oblonga langsung bereaksi pada nauplius A. salina pada 6 jam pertama dan pada 6-12 jam reaksinya sudah menurun (tidak sebanyak 6 jam pertama) dan lebih dari 12 jam sudah tidak ada reaksi terhadap nauplius A. salina , jadi ekstrak gonad beraksi pada 12 jam pertama. Hasil perhitungan LC 50 gonad E. oblonga adalah 6.224688,84 ppm, karena LC 50 > 1000 ppm maka ekstrak gonad digolongkan non-toksik ( Déciga-Campos et al ., 2007).
Hasil  dari  pengamatan  ekstrak  eksoskeleton E.  oblonga terhadap  nauplius A.  salina pada konsentrasi  0  ppm  dan  1  ppm  tidak  menyebabkan  mortalitas  pada  naupilus,  sehingga  diketahui bahwa pada konsentrasi tersebut tidak dapat menyebabkan kematian pada nauplius A. salina dan tidak  bersifat  toksik.  Sedangkan  pada  konsentrasi  10  ppm  menyebabkan  rata-rata  mortalitas nauplius sebesar 0,33 atau 3%, dan semakin meningkat dengan peningkatan konsentrasi ekstrak dimana  100  ppm  menyebabkan rata-rata mortalitas  nauplis  0,67  atau  7%,  dan  pada  konsentrasi ekstrak 1000 ppm menyebabkan rata-rata mortalitas nauplius sebesar 2,67 atau 27%. Berdasarkan hasil  pengamatan  tersebut  diketahui  bahwa  semakin  besar  konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan akan semakin tinggi pula tingkat mortalitas rata-rata nauplius A. salina . Berdasarkan data tersebut dilakukan analisis probit untuk mengetahui nilai LC 50 dan diketahui ekstrak eksoskeleton E. oblonga memiliki LC 50 1420,83 ppm. Menurut Déciga-Campos et al . (2007), nilai tersebut menunjukkan bahwa ekstrak eksoskeleton E. oblonga tergolong tidak toksik. Perhitungan analisa probit didapat intercept dan x variable yang digunakan untuk menghitung nilai  LC 50 yang  akan  menentukan  nilai  toksisitas  dari  ekstrak  yang  diuji.  Nilai  LC 50 dari  gonad  dan eksoskeleton  masing-masing  adalah  6.224688.84  ppm  dan  1420.83  ppm.  Hasil  uji  kandungan senyawa dengan metode fitokimia mendapatkan hasil yang disajikan pada tabel 4.
Tabel 2. Hasil Pengamatan Rata-rata Mortalitas A. salina terhadap Ekstrak Sampel Gonad E. oblonga
Tabel 3. Hasil Pengamatan Rata-rata Mortalitas A. salina terhadap Ekstrak Sampel Eksoskeleton E. oblonga
Waktu Pengamatan (Jam)
Rata-Rata Mortalitas A. salina Konsentrasi sampel (%) 0 ppm 1 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm 6 0 0 3 3 17 12 0 0 3 7 17 18 0 0 3 7 27 24 0 0 3 7 27 Mortalitas 0 0 3 7 27 Waktu Pengamatan (Jam) Rata-Rata Mortalitas A. salina Konsentrasi sampel (%) 0 ppm 1 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm 6 0 0 0 0 7 12 0 0 0 0 10 18 0 0 0 0 10 24 0 0 0 0 10 Mortalitas 0 0 0 0 10
Tabel 4. Hasil Uji Fitokimia
Ekstrak Eksoskeleton Ekstrak Gonad Ulangan I  Ulangan II  Ulangan  III Ulangan I  Ulangan II  Ulangan III Alkaloid + + + - - - Saponin + + + + + + Flavonoid + + + + + + Fenolik - - - - - - Triterpenoid + + + + + +
Gambar 1 . Hasil Ditemukannya Bercak Berwarna Ungu Menandakan adanya Senyawa Steroid pada Uji KLT Ekstrak Gonad dan Eksoskeleton E. oblonga
Hasil  uji  KLT  menggunakan  fase  gerak  etil  asetat  dan  fase  diam  plat  KLT  GF254  dan pewarnaan  vanilin-sulfat  terlihat  adanya  steroid  dengan  terbentuknya  warna  ungu  pada  sampel gonad dan warna ungu pada sampel eksoskeleton pada plat KLT (Gambar 1).
Identifikasi alkaloid menggunakan pereaksi meyer dikarenakan pereaksi meyer mengandung merkuri klorida dan kalium iodida, prinsip dari reaksi ini adalah pengendapan dimana adanya peran atom nitrogen yang mempunyai pasangan elektron bebas pada alkaloid dapat mengganti ion iodo dalam  pereaksi-pereaksi  tersebut  yang  menyebabkan  terbentuknya  ikatan  kovalen  koordinasi dengan ion logam (Agustina, et al ., 2017). Terbentuknya endapan (kalium-alkaloid) ketika proses identifikasi juga disebabkan oleh reaksi senyawa alkaloid dengan ion logam K + pada pereaksi yang digunakan  (Prayoga et  al .,  2019).  Berdasarkan  uji  yang  dilakukan,  ekstrak  gonad  maupun eksoskeleton ekstrak E. oblonga mengandung alkaloid.
Berdasarkan  hasil  uji  fitokimia  diketahui  ekstrak  gonad  maupun  eksoskeleton  ekstrak E. oblonga mengandung saponin dari terbentuknya busa. Saponin merupakan senyawa yang bersifat polar sehingga mampu larut dalam pelarut polar, namun juga memiliki gugus hidrofob yaitu aglikon (sapogenin)  yang  bersifat  non  polar.  Glikosida  dapat  membentuk  busa  dalam  air  dan  dapat terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lain yang menyebabkan terbentuknya busa dalam proses identifikasi (Agustina, et al ., 2017).  Flavanoin terdeteksi dengan terbentuknya warna kuning pada lapisan  amil  alkohol  yang  menunjukkan  adanya  senyawa  flavanoid  di  kedua  ekstrak  sampel (Pringgenies et al ., 2014).
Triterpenoid terlihat dari uji fitokimia dengan terbentuknya warna merah pada sampel setelah penambahan  asam  asetat  anhidrat  dan  asam  sulfat  pekat.  Penambahan  asam  asetat  anhidrat berfungsi  untuk  menyerap  air  dan  membantu  pengoksidasian  asam  oleh  asam  sulfat,  hal  ini dikarenakan reaksi pengoksidasian asam tersebut tidak akan berlangsung jika masih terkandung air didalam senyawa yang direaksikan (Prayoga et al ., 2019).
Journal of Marine Research Vol 12, No. 4 November 2023, pp. 555-562
Hasil uji fitokimia ini sesuai dengan hasil penelitian penelitian Lestiono et al . (2020), dimana ekstrak etanol eksoskeleton Bulu babi mengandung triterpenoid, flavanoid, alkaloid dan saponin. Uji KLT  menggunakan  plat  KLT  silika  gel  GF254  sebagai  fase  diam  dan  etil  asetat  sebagai  fase geraknya. Hasil uji KLT dapat diketahui dari nilai Rf dan warna noda yang dihasilkan. Nilai Rf yang lebih besar berarti memiliki kepolaran yang lebih rendah, dan begitu pula sebaliknya, dikarenakan fase diam yang berifat polar menyebabkan senyawa yang lebih polar akan tertahan lebih kuat pada fase diam, sehingga fase diam rendah (Forestryana dan Arnida, 2020). Hasil uji KLT menunjukkan bahwa terdapat bercak berwana ungu pada plat setelah penambahan pewarna vanilin-sulfat yang menunjukkan adanya kandungan steroid pada sampel ekstrak eksoskeleton dan gonad E. oblonga (Tonius et  al .,  2016).    Nilai  Rf  pada  bercak  ekstrak  gonad  adalah  0,89  sedangkan  pada  ekstrak eksoskeleton adalah 0,87; dari hasil tersebut diketahui bahwa steroid termasuk senyawa dengan tingkat  kepolaran  yang  rendah  dan  dikuatkan  dalam  penelitian  Forestryana  dan  Arnida,  (2020) bahwa steroid merupakan senyawa nonpolar.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dari  penelitian,  dapat  disimpulkan  bahwa  kandungan  senyawa  pada gonad  Bulu  Babi  ( E.  oblonga )  adalah  Saponin,  Flavanoid,  Triterpenoid,  dan  Steroid,  dan  pada eksoskeleton Bulu Babi ( E. oblonga ) adalah Alkaloid, Saponin, Flavanoid, Triterpenoid, dan Steroid. Nilai  toksisitas  lethal  (LC 50 -24  jam)  pada  ekstrak  etanol  gonad  dan  eksoskeleton  Bulu  Babi  ( E. oblonga ) adalah lebih dari 1000 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina, W., Nurhamidah, N., & Handayani, D. 2017. Skrining Fitokimia dan Aktivitas Antioksidan Beberapa  Fraksi  dari  Kulit  Batang  Jarak  ( Ricinus  communis L.). Jurnal  Pendidikan  dan Ilmu Kimia , 1(2): 117-122.
Akaerina, F.O., Nurhayati, T., & Suwandy, R. 2015. Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Antibakteri dari  Bulu  Babi. Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia, 18(1):  61-73.  DOI: 10.17844/jphpi.2015.18.1.61
Andriyanto, B.E., Ardiningsih, P., & Idiawati, N. 2016. Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Belimbing Hutan ( Baccaurea angulate Merr .). Jurnal Kimia Khatulistiwa, 5 (4) : 9-13.
Angka, S.L., & Suhartono. 2000. Bioteknologi Hasil Laut. Bogor: Pusat Kajian Sumber Daya Pesisir dan Lautan. Institut Petanian Bogor. 49 hal.
Aprilia, H.A., Pringgenies, D. & Yudiati, E., 2012. Uji toksisitas ekstrak kloroform cangkang dan duri landak  laut  (Diadema  setosum)  terhadap  mortalitas  Nauplius  artemia  sp. Journal  of  Marine Research , 1(1): 75-83.
Arthaz, C.P., Suryanti, & Ruswahyuni. 2015. Hubungan Kelimpahan Bulu Babi (Sea Urchin) dengan Bahan  Organik  Substrat  Dasar  Perairan  di  Pantai  Krakal,  Yogyakarta. Journal  of  Maquares Management Aquatic Resource , 4 (3): 148-155.
Aziz, A. 1993. Beberapa Catatan tentang Perikanan Bulu Babi. Oseana , 18(2): 65-75. Déciga-Campos, M., Rivero-Cruz, I., Arriaga-Alba, M., Castañeda-Corral, G., Angeles-López, G.E.,
Navarrete, A., & Mata, R., 2007. Acute toxicity and mutagenic activity of Mexican plants used in traditional medicine. Journal of ethnopharmacology , 110(2): 334-342. DOI: 10.1016/j.jep.2006. 10.001
Djokosetiyanto,  D.,  Jubaedah,  D.,  &  Soni,  A.F.M.,  2007.  Kualitas  Penetasan  Kista  Artemia  yang Dibudidaya  pada  Berbagai  Tingkat  Perubahan  Salinitas. Jurnal  Ilmu-ilmu  Perairan  dan Perikanan Indonesia , 14(2): 161-165.
Forestryana,  D.,  &  Arnida.  2020.  Phytochemical  Screenings  and  Thin  Layer  Chromatography Analysis of Ethanol Extract Jeruju Leaf ( Hydrolea spinosa ). Jurnal Ilmiah Farmako Bahari , 11(2): 113-124. DOI: 10.52434/jfb.v11i2.859
Lestiono, L., Kresnamurti, A., Rahmad, E., & Ansyori, M.R., 2020. Aktivitas Analgesik Ekstrak Etanol Bulu  Babi  ( Echinometra  mathaei )  pada  Mencit  Putih  Jantan. Journal  of  Herbal,  Clinical  and Pharmaceutical Sciences, 1(2): 6-11. DOI: 10.30587/herclips.v1i02.1352 Maramis, M.R. 2016. Analisis Yuridis terhadap Racun Penyebab Kematian yang Berkaitan dengan Tindak Kekerasan. Jurnal Hukum Unsrat , 22(7): 33-43.
Muaja, A.D., Koleangan, H.S., & Runtuwene, M.R., 2013. Uji toksisitas dengan metode BSLT dan analisis  kandungan  fitokimia ekstrak daun  soyogik  (Saurauia bracteosa  DC)  dengan  metode soxhletasi. Jurnal MIPA , 2(2): 115-118. DOI: 10.35799/jm.2.2.2013.3000
Nurhayati, A.P.D., Abdulgani, N., & Febrianto, R., 2006. Uji toksisitas ekstrak eucheuma alvarezii terhadap artemia salina sebagai studi pendahuluan potensi antikanker. Akta Kimindo , 2(1): 41-46.
Prasetyo,  E.,  Zaida,  A.A.,  Wulan,  I.N.,  Wulandari,  R.,  Santiati,  E.,  &  Prakoso,  C.N.Y.,  2019. Kekayaan  jenis  bulu  babi  (sea  urchin)  di  kawasan  perairan  pantai  Gunung  Kidul, Yogyakarta. Biospecies , 12(1): 33-39. DOI: 10.22437/biospecies.v12i1.6574
Prayoga,  D.G.E.,  Nocianitri,  K.A.,  &  Puspawati,  N.N.,  2019.  Identifikasi  senyawa  fitokimia  dan aktivitas antioksidan ekstrak kasar daun pepe (Gymnema reticulatum Br.) pada berbagai jenis pelarut. Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi  Pangan , 8(2):  111-121.  DOI:  10.24843/itepa.2019.v08. i02.p01
Pringgenies, D., Sasongko, A.S., & Sedjati, S., 2014. Karakterisasi Tinta Cumi-Cumi ( Sepiotheuthis lessoniana ) Dan Toksisitasnya. Pertemuan Ilmiah Nasional Tahunan X ISOI 2013. Jakarta. Symonds, R.C., Kelly, M.S., Caris-Veyrat, C., & Young, A.J., 2007. Carotenoids in the sea urchin Paracentrotus  lividus:  Oc currence  of  9′ -cis-echinenone  as  the  dominant  carotenoid  in  gonad colour  determination. Comparative  Biochemistry  and  Physiology  Part  B:  Biochemistry  and Molecular Biology , 148(4): 432-444. DOI: 10.1016/j.cbpb.2007.07.012 Tarigan, R. S., R. Hartati, I. Widowati. 2020. Diversity of Brittle Star and Sea Urchin (Echinoderm: Ophiuroidea, Echinoidea) of Krakal and Watu Kodok Beach, Gunung Kidul, Yogyakarta. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science. 530(1): p. 012042) DOI: 10.1088/1755- 1315/530/1/012042
Tarigan,  R.S.,  Hartati,  R.  &  Widowati,  I.,  2020,  July.  Diversity  of  brittle  star  and  sea  urchin (Echinoderm:  Ophiuroidea,  Echinoidea)  of  Krakal  and  Watu  Kodok  beach,  Gunung  Kidul, Yogyakarta. In IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 530(1): p. 012042.
Tonius, J., Wibowo, M.A. and Idiawati, N., 2016. Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Steroid Fraksi n-Heksana Daun Buas-Buas (Premna serratifolia L.). Jurnal Kimia Khatulistiwa , 5(1): 1-7. Zuraida. 2018. Analisis Toksisitas beberapa Tumbuhan Hutan dengan Metode Brine shrimp Lethality Test (BSLT). Jurnal Penelitian Hasil Hutan , 36(3): 239-246. DOI: 10.20886/jphh.2018.36.3.239- 246