## THE POTENCY OF Phyllospongia lamellosa SPONGE EXTRACT AND FRACTION COLLECTED FROM MANADO TUA ISLAND WATERS AGAINST THE GROWTH OF Staphylococcus aureus AND Escherichia coli BACTERIA
POTENSI EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Phyllospongia lamellosa YANG DIKOLEKSI DARI PERAIRAN PULAU MANADO TUA TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Chrispawanty C. Ranggatau 1)* ,  Defny S. Wewengkang 1) , Jainer P. Siampa 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *ranggatauwty@gmail.com

## ABSTRACT
The  sponge  Phyllospongia  lamellosa  is  able  to  produce  bioactive  compounds  that  have  the potential  to  be  antibacterial.  This  study  aimed  to  measure  the  activity  of  the  extract  and fraction  of  the  sponge  Phyllospongia  lamellosa  against  the  growth  of  gram-positive Staphylococcus aureus and gram-negative Escherichia coli bacteria in the waters of Manado Tua  Island.  Samples  were  extracted  using  the  maceration  method  with  95%  ethanol  solvent and  then  fractionated  using  solvents,  namely  n-hexane,  chloroform,  and  methanol  with  the liquid-liquid  fractionation  method.  Activity  test  using  the  Kirby  and  Bauer  disk  diffusion method. The results showed that the results of the measurement of the average diameter of the inhibition  zone  of  the  extract  and  the  Phyllospongia  lamellosa  sponge  fraction  against Staphylococcus aureus were the largest produced by the chloroform fraction with an average value  of  15.96  mm  ±  0.98  and Escherichia  coli  by  the  chloroform fraction  with  an  average value of 17.48 mm ±  4.80, so that both are categorized as strong.
Keywords: Phyllospongia  lamellosa  sponge,  antibacterial,  Disc  diffusion  Kirby  and  Bauer, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

## ABSTRAK
Spons Phyllospongia  lamellosa mampu  menghasilkan  senyawa  bioaktif  yang  berpotensi sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengukur aktivitas ekstrak dan fraksi spons Phyllospongia  lamellosa terhadap  pertumbuhan  bakteri  Gram  positif Staphylococcus  aureus dan  Gram  negatif Escherichia  coli di  perairan  Pulau  Manado  Tua.  Sampel  di  ekstraksi menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  95%  dan  selanjutnya  difraksinasi menggunakan pelarut yaitu n-heksan, kloroform dan methanol dengan metode fraksinasi cair- cair.  Uji  aktivitas  menggunakan  metode disk  diffusion Kirby  dan  Bauer .  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  hasil  pengukuran  rata  -  rata  diameter  zona  hambat  ekstrak  dan  fraksi spons Phyllospongia  lamellosa terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus yang  paling  besar dihasilkan  oleh  fraksi  kloroform  dengan  nilai  rata  –  rata  15,96  mm ± 0,98  dan Escherichia coli oleh  fraksi  kloroform  dengan  nilai  rata  –  rata  17,48  mm ± 4,80  sehingga  keduanya dikategorikan kuat.
Kata  Kunci: Spons  Phyllospongia  lamellosa, antibakteri ,  Disc  diffusion  Kirby  and  Bauer, Escherichia coli, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  kepulauan terbesar di dunia yang terdiri dari 16.344 pulau besar  dan  kecil  dengan  panjang  garis  pantai 81.000 km serta memiliki kekayaan keragaman hayati yang tinggi dan juga memiliki  ekositem laut  yang  sangat  khas  (Maramis et  al .,  2020). Sumber  daya  alam  wilayah  daratan  sudah banyak  diteliti  oleh  ilmuan  untuk  diambil manfaatnya  bagi  kesejahteraan  hidup  manusia. Mengingat  laut  tidak  hanya  berfungsi  sebagai sumber cadangan bahan makanan dari berbagai biota  laut  yang  hidup  didalamnya  tetapi  juga sebagai  bahan  pembuat  kosmetik  dan  obat  – obatan.  Terdapat  begitu  banyak  sumber  daya alam  yang  dimiliki,  di  antaranya  biota-biota laut  yang  berguna  untuk  dikembangkan sebagai  bahan  obat,  salah  satu  biota  yang potensial adalah spons (Wagey, 2017).
Pulau  Manado  Tua  merupakan  salah satu  pulau  yang  masuk  wilayah  Pemerintahan Kota  Manado.  Pulau  ini  sangat  berdekatan dengan  Pulau  Bunaken  yang  menjadi  Pusat Konservasi  Taman  Laut  terkenal  di  Indonesia bahkan  dunia  sehingga  menjadi  daya  tarik tersendiri (Kiroh et al ., 2016).
Ekstrak dari Spons dipercaya memiliki senyawa  bioaktif  yang  mempunyai  sifat sitotoksin,  anti  tumor,  antivirus,  dan  anti inflamasi.  Selain  memiliki  senyawa  bioaktif, Spons  juga  melekat  atau  menempel  pada beberapa  benda  keras  bawah  laut  seperti karang,  dan  bebatuan  (Haedar,  2016).  Spons menjadi  salah  satu  hewan  laut  yang  sangat menarik  untuk  diteliti  karena  berpotensi  besar untuk dikembangkan dalam bidang pengobatan yaitu sebagai antibakteri, karena ada kandungan  metabolit  yang  dapat  menangkal dan menghambat bakteri (Pelealu et al ., 2021).

## METODOLOGI PENELITAN Bentuk Penelitian
Penelitian  ini  berbentuk  eksperimen laboratorium  yang  dilakukan  dengan  cara menguji  komponen  yang  diekstrak  dari  spons Phyllospongia  lamellosa sebagai  antibakteri pada Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli .

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini    dilaksanakan  pada  bulan Oktober 2021 sampai Maret 2022 di
Laboratorium Lanjutan Program Studi Farmasi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu Scuba  diving (peralatan  selam), plastic zipper lock bag , sarung tangan, masker, corong  pisah,  corong  gelas,  wadah  kaca, Erlenmeyer,  gelas  ukur  (pyrex ® ),  gelas  kimia (pyrex ® ),  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi, microtubes ,  cawan  petri,  timbangan  analitik, spatula,  oven,  pinset,  batang  pengaduk, pembakar  spiritus,  pipet  tetes,  jarum  ose,  vial, lemari  pendingin,  incubator  inucell  (N- Biotek ® ), laminary  air  flow , autoklaf  (autoklaf KT-30s),  mikropipet,  jangka  sorong,  jas  lab, cakram ( paper disc ).

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu spons Phyllospongia  lamellosa bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli , etanol, aquades, methanol, n-heksan, kloroform , pepton, natrium klorida , media agar B1 ( beef extract ), nutrient agar, kloramfenikol, paper  disc , tissue, aluminium  foil ,  kertas saring.

## Pengambilan Sampel
Sampel  spons Phyllospongia  lamellosa diambil  dari  perairan  Pulau  Manado  Tua menggunakan alat bantu (masker, snorkel, fins dan  tabung  oksigen).  Sampel  yang  diperoleh dimasukkan  ke  dalam zipper  lock  bag dan diletakkan  didalam cool  box ,  kemudian langsung  dibawa  ke  Laboratorium  Lanjutan Program  Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam Ratulangi. Sampel  difoto dan diberi label serta nomor sampel, untuk selanjutnya dideterminasi.

## Ekstraksi
Ekstrak  Spons Phyllospongia  lamellosa dilakukan  dengan  cara  maserasi.  Sampel dibersihkan  dan  dipotong  kecil  –  kecil dimasukkan ke dalam botol 600 mL, kemudian direndam  dengan  pelarut  etanol  95%  sampai semua  sampel  terendam  dan  dibiarkan  selama 24  jam.  Sampel  yang  direndam  disaring menggunakan  kertas  saring,  menghasilkan filtrat  1  dan  debris  1.  Debris  1  kemudian diremaserasi  dengan  pelarut  etanol  sampai semuanya  terendam  dan  dibiarkan  selama  24 jam,  sampel  tersebut  disaring  menggunakan
kertas  saring  menghasilkan  filtrat  2  dan  debris 2.  Debris  2  kemudian  diremaserasi  dengan pelarut  etanol  sampai  semuanya  terendam  dan dibiarkan  selama  24  jam,  sampel  tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 3 dan debris 3. Filtrat 1, 2 dan  3  dicampur  menjadi  satu  kemudian disaring  lalu  diuapkan  pada  suhu  40 ℃ hingga kering dan selanjutnya ditimbang menggunakan timbangan analitik. Selanjutnya, ekstrak  kasar  spons Phyllospongia  lamellosa digunakan dalam fraksi dan pengujian antibakteri (Ortez, 2005).

## Fraksinasi
Ekstrak  kasar  spons Phyllospongia lamellosa yang  diperoleh  dimasukkan  ke dalam erlenmeyer, kemudian dilarutkan dengan  methanol  80%  sebanyak  100  mL. Setelah  larut,  dimasukkan  ke  dalam  corong pisah  dan  ditambahkan  pelarut  n-heksan sebanyak  100  mL  setelah  itu  dikocok  dalam corong  pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai terbentuk lapisan  methanol  dan lapisan n-heksan,  kemudian  masing-masing  lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  n-heksan  kemudian  diuapkan  hingga kering,  lalu  ditimbang  dan  diperoleh  fraksi  n- heksan. Selanjutnya, lapisan methanol ditambahkan  aquades  sebanyak  100  mL kemudian  dipartisi  dengan  pelarut  kloroform dengan  perbandingan  1:1  v/v  dalam  corong pisah,  setelah  itu  dikocok  kembali  sampai homogen.  Dibiarkan  sampai  tebentuk  dua lapisan  yaitu  lapisan  methanol  dan  kloroform, kemudian  masing-masing  lapisan  ditampung dalam wadah yang berbeda. Lapisan kloroform selanjutnya  diuapkan  hingga  kering  lalu ditimbang  berat  sampel  dan  diperoleh  fraksi kloroform. Lapisan methanol kemudian diuapkan  hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan diperoleh  fraksi  methanol.  Ketiga  fraksi  yang diperoleh  akan  digunakan  dalam  pengujian antibakteri (Ortez, 2005). Rendemen-rendemen fraksi dihitung berdasarkan persamaan sebagai berikut :
% Rendemen = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 (𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟) 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 (𝑎𝑤𝑎𝑙) × 100%

## Sterilisasi Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian aktivitas  antimikroba  ini  terlebih  dahulu didesinfeksi.  Alat  gelas  diautoklaf  pada  suhu 121°C selama 15 menit, pinset dibakar dengan api  langsung,  dan  media  disterilkan  dalam autoklaf  pada  suhu  121°C  selama  15  menit
(Mpila, 2012).

## Pembuatan media cair BI
0,5 g Pepton, 0,3 g ekstrak daging ( meat extract ),  0,3  g    natrium  klorida  dan  100  mL aquades diaduk sampai homogen lalu diautoklaf pada suhu 121 ˚C selama 15 menit, ukur  pH  dengan  menggunakan  kertas  pH. Dipipet  1  mL  media  cair  B1,  kemudian masukkan  dalam  tabung  reaksi  dan  tutup dengan  alminium  foil.  Media  cair  B1  siap digunakan sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Media  cair  B1  yang  sudah  disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  dengan  masing- masing bakteri yang sudah dikultur ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli ) dipipet  sebanyak    100  µL  kedalam  tabung reaksi  yang  berbeda. Tutup  dengan  aluminium foil  tiap  tabung  reaksi  dan  dimasukkan kedalam inkubator selama 1x24 jam pada suhu 37 ˚C (Ortez, 2005).
Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontol Negatif
Kontrol positif dalam pengujian antibakteri  ini  menggunakan kloramfenikol paper  disc. Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan pelarut  methanol,  dengan  cara  membuat larutan  stok  methanol  dengan  mengambil sebanyak 200 µL methanol kemudian ditotolkan pada kertas cakram.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara  1  mg ekstrak  kasar  spons Phyllspongia  lamellosa kemudian  dilarutkan  dalam  0,2  mL  methanol sehingga  menghasilkan  konsentrasi  larutan  uji sebesar  250  μg/50  μL.  Perlakuan  yang  sama dilakukan pada fraksi n-heksan, fraksi kloroform dan fraksi methanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar B1
0,5 g Pepton, 0,3 g ekstrak daging ( meat extract ),  1,5  g agar dan100  mL  aquades diaduk  sampai  homogen  lalu  diautoklaf  pada suhu  121  ˚C  selama  15  menit.  Lakukan pengujian  pH  dengan  kertas  pH.  Media  agar B1  siap  digunakan  untuk  uji  aktivitas antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Pada  pengujian aktivitas  antibakteri  ini,  cakram  ( paper  disc ) yang  digunakan  berukuran  6  mm  dengan  daya serap  50  µL  tiap  cakram.  Sampel  yang  telah ditentukan  kosentrasinya  250  µg/50  µL ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet.  Untuk  media  agar B1  yang  sudah  diautoklaf  pada  suhu  121  ˚C selama  15  menit,  kemudian  dinginkan  sampai suhu 40 ˚C. Tuangkan media agar B1 ke cawan petri,  ambil  sebanyak  100  µL  bakteri  yang telah di kultur dalam tabung reaksi, dipipet dan diinokulasi  pada  media  agar  B1  dan  tunggu sampai  media  agar  B1  mengeras.  Masing- masing  cawan  petri  diberi  label  dan  nomor sampel  yang  sesuai.  Letakkan  kertas  cakram yang  telah  ditotolkan  sampel  uji  spons Phyllospongia lamellosa dengan pinset kedalam  cawan  petri  lalu  diinkubasi  selama 1x24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran  cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau bahan antibakteri yang digunakan  sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan dengan  diameter  zona  bening.  Diameter  zona bening  diukur  menggunakkan  mistar  berskala dengan  cara  diukur  diameter  zona  bening horizontal  ditambahkan  dengan  diameter  zona bening  vertikal  lalu  dibagi  dua.  Diameter  ≤  5 mm  memiliki kekuatan daya hambat lemah, 6- 10  mm  daya  hambat  sedang,  11-20  mm  daya hambat  kuat  dan  ≥21  mm  daya  hambat  sangat kuat (Susanto et al ., 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi Spons Phyllospongia lamellosa dilakukan  di  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Program  Studi Farmasi
Universitas Sam Ratulangi.
Determinasi  dilakukan  untuk  mengetahui sampel yang di ambil dan  dilakukan penelitian aktivitas  antibakteri  merupakan  sampel  yang sesuai yaitu Spons Phyllospongia lamellosa .

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Sampel  spons Phyllospongia  lamellosa yang  diambil  dari  pulau  Manado  Tua diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi. Ekstraksi  dilakukan  menggunakan  metode maserasi  dikarenakan  pengerjaannya  mudah dan  tidak  menggunakan  panas  sehingga kandungan kimia pada sampel yang tidak tahan akan  panas  tidak  rusak  (Restiana,  2018). Ekstraksi  ini  dimaksudkan  untuk  memisahkan dua  atau  lebih  komponen  yang  diinginkan dengan menambahkan pelarut untuk melarutkan  komponen  tersebut  (Pelealu et  al .,
2021).    Pelarut  ekstraksi  dengan  metode maserasi  menggunakan  etanol,  karena  etanol mempunyai  sifat  selektif,  dapat  bercampur  air dengan  segala  perbandingan,  ekonomis,  serta mampu  mengekstrak  sebagian  besar  senyawa kimia yang terkandung dalam simplisia.
Ekstraksi spons Phyllospongia lamellosa memakai  metode  maserasi  dengan  pelarut etanol  95%  dikarenakan  pelarut  etanol  dengan konsentrasi 95% merupakan  konsentrasi tinggi yang  dapat  menarik  kandungan  kimia  pada sampel  dengan  baik  dan  pelarut  etanol  juga bersifar toksiksitas rendah, sehingga kandungan  kimia  pada  sampel  tidak  rusak. Maserasi  dilakukan  selama  3  x  24  jam  dengan pelarut yang sama.
Remaserasi  atau  pengulangan  maserasi pada  sampel  tujuannya  untuk  memaksimalkan penarikan  kandungan  senyawa  kimia  pada sampel oleh pelarut yang digunakan (Mujipradana et al ., 2018). Hasil dari maserasi didapatkan  filtrat,  filtrat  tersebut  diuapkan sehingga didapatkan ekstrak kasar.
Penggunaan  dari  evaporator  ini  tujuannya untuk  menarik  pelarut  pada  hasil  maserasi dengan  suhu  40oC,  dikarenakan  suhu  yang digunakan  harus  dibawah  titik  didih  pelarut sehingga tidak  dapat  merusak  kandungan  kimia pada sampel pada proses penguapan.
Dari  proses  penguapan  didapatkan  hasil ekstrak kasar, yang akan digunakan dalam tahap fraksinasi.  Dalam  proses  fraksinasi  tujuannya untuk  memisahkan  kandungan  kimia  dari sampel yang sesuai dengan tingkat kepolarannya. Metode fraksinasi yang digunakan  yaitu  fraksinasi  cair-cair  dimana perbedaan  tingkat  kepolarannya  disesuaikan dengan tiap–tiap pelarut. Pelarut yang digunakan  yaitu  pelarut  methanol  sebagai pelarut  polar,  pelarut  n-heksan  sebagai  pelarut
non  polar  dan  pelarut  kloform  sebagai  pelarut semi  polar.  Pada  proses  fraksinasi,  pengocokan dilakukan  dimana  pengocokan  ini  dapat memaksimalkan  dan  membantu  penarikan  dari setiap  pelarut  terhadap  kandungan  kimia  yang ada pada sampel. Setelah proses fraksinasi akan terbentuk  2  lapisan  dimana  terjadi  pemisah antara  pelarut  –  pelarut  yang  digunakan  dan dapat  membantu  dalam  memisahkan  pelarut
yang  satu  dengan  yang  lainnya.  Pelarut  dengan massa  jenis  yang  lebih  kecil  akan  berada dibagian  atas,  sedangkan  pelarut  dengan  massa jenis  yang  lebih  besar  akan  berada  dibagian bawah.  Dari  hasil  proses  fraksinasi  yang diperoleh  ketiga  pelarut  tersebut  kemudian diuapkan    lagi  sehingga  menghasilkan  ekstrak kasar  masing  –  masing  dan  akan  digunakan dalam uji aktivitas antibakteri.
Tabel  1. Rendemen  ekstrak  dan  fraksi  Spons Phyllospongia lamellosa
N o Sampel Ber at (g) Rende men (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 18,0 0 2,12 Hijau Pekat 2 Fraksi n- Heksan 0,31 1,72 Hijau Tua 3 Fraksi Klorofor m 0,29 1,61 Coklat Tua 4 Fraksi Methanol 9,00 50,00 Coklat Tua
Dari  hasil  ekstrak  fraksinasi  yang diuapkan  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Jumlah ekstrak  kasar  memiliki  bobot  atau  berat  yang berbeda  dikarenakan  penggunaan  pelarut  yang digunakan  sesuai  dengan  tingkat  kepolarannya, sehingga kandungan kimia tertarik dalam proses fraksinasi sesuai dengan tingkat kepolarannya.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Dalam  pengujian  aktivitas  antibakteri menggunakan  bakteri Escherichia  coli sebagai bakteri
Gram-negatif dan bakteri Staphylococcus  aureus sebagai  bakteri  Gram- positif, digunakan kedua jenis gram bakteri ini dikarenakan untuk melihat aktivitas antibakteri pada  sampel  spons Phyllospongia  lamellosa .
Tabel  2. Aktivitas  Antibakteri  dari  Spons Phyllospongia  lamellosa terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus
Gambar a. Escherichia coli Gambar b. Staphylococcus aureus
Gambar  1 .  Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri  dari  Ekstrak  dan  Fraksi    spons Phyllospongia   lamellosa :
(a) Escherichia  coli , (b) Staphylococcus aureus .
Keterangan : (1) Ekstrak Etanol, (2) Fraksi Kloroform, (3) Fraksi n-Heksan, (4) Fraksi Methanol, (5) Kontrol Positif, (6) Kontrol Negatif.
E.C SA r 1 r 2 r 3 x̄ ± SD r 1 r 2 r 3 x̄ ± SD EtOH 8,76 9,34 10,39 9,44 ± 0,82 6,51 6,85 7,36 6,90 ± 0,43 n-Hxn 10,44 9,67 10,22 10,11 ± 0,40 16,77 12,44 13,51    14,24 ± 2,25 ChCl 3 14,94 16,90 16,06 15,96 ± 0,98 15,31 22,97 14,17    17,48 ± 4,80 MeOH 10,82 12,04 9,18 10,68 ± 1,43 6,89 7,13 6,60 6,87 ± 0,26 C+ 27,58 27,98 C- 0 0
5 6 3 2 1 4
Digunakan metode difusi agar, dikarenakan  tekniknya  sederhana,  ketelitian, dan metode yang serbaguna bagi semua bakteri patogen  yang  tumbuh  cepat  dan  sering digunakan  dalam  uji  kepekaan  antibiotik (Pelealu et al ., 2021).
Hasil pengukuran diameter dan rata - rata diameter  pengamatan  daya  antibakteri  dari sampel  spons Phyllospongia  lamellosa yang dibagi  menjadi  fraksi  etanol,  frasi  n-heksan, fraksi  kloroform  dan  fraksi  methanol  terhadap bakteri Escherichia    coli dan Staphylococcus aureus ditunjukkan pada Tabel 2.
Pengamatan  pada  pengujian  antibakteri ini  dilakukan  setelah  diinkubasi  selama  1  x  24 jam.  Dalam  pengujian  ini  digunakan  kontrol positif  dan  negatif  sebagai  pembanding. Kontrol posotif yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  kloramfenikol,  hal  ini dikarenakan  kloramfenikol  memiliki  spectrum kerja  yang  luas.  Kontrol  negatif  berfungsi untuk  mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh pelarut  terhadap  pertumbuhan  mikroba  uji. Kontrol  negatif  yang  digunakan  adalah methanol  (Ratu et  al .,  2019).  Penggunaan kontrol  negatif  dan  kontrol  positif  dalam pengujian  antibakteri  ini  bertujuan  untuk membandingkan  zona  hambat  yang  terbentuk selama pengujian.
Diameter zona hambat yang diukur yaitu daerah jernih yang terbentuk disekitar disk/cakram  (tidak  ada  pertumbuhan  bakteri) diukur dari ujung yang satu ke ujung yang lain melalui tengah-tengah disk/cakram atau diukur diameter vertikal dan horizontalnya (Soemarno,  2000).  Digunakan  mistar  berskala untuk  mengukur  diameter  zona  hambat  yang terbentuk dengan satuan milimeter (mm).
Hasil  pengukuran  rata  -  rata  diameter zona  hambat  ekstrak  dan  fraksi  spons Phyllospongia  lamellosa terhadap Escherichia coli yang  paling  besar  dihasilkan  oleh  fraksi kloroform  yaitu  47,9  mm  dengan  nilai  rata  - rata  15,96  mm  masuk  dalam  kategori  kuat, kemudian  pada  fraksi  methanol  32,04  mm dengan nilai rata -rata 10,68 mm dikategorikan sedang, fraksi n-heksan 30,33 mm dengan nilai rata  -rata  10,11  mm  dikategorikan  sedang  dan pada ekstrak etanol 28,49 mm dengan nilai rata -  rata  9,44  mm  dikategorikan  sedang.  Begitu juga  pada  bakteri Staphylococcus  aureus dimana  pada  fraksi  kloroform  zona  hambat yang  ditimbulkan  sebesar  52,45  mm  dengan nilai  rata  -  rata  17,48  mm  dikategorikan  kuat, kemudian  fraksi  n-heksan  42,72  mm  dengan
nilai  rata  -  rata  14,24  mm  dikategorikan  kuat, fraksi  methanol  20,62  mm  dengan  nilai  rata  - rata  6,87  mm  dikategorikan  sedang  dan  pada ekstrak etanol 20,72 mm  dengan  nilai rata-rata 6,90 mm dikategorikan sedang.
Dalam penelitian uji aktivitas antibakteri diatas, ini menunjukkan bahwa fraksi klorofom memiliki  daya  hambat  yang  besar  terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .  Hal  ini  menggambarkan  bahwa  fraksi kloroform mampu menarik senyawa berpotensi antibakteri  yang  paling  baik  dari  sampel dimana  semi  polar  seperti  pelarut  semi  polar. Selanjutnya  peneliti  melakukan  pencarian mengenai  penelitian  yang  serupa  untuk membandingkan dengan penelitian ini, berdasarkan  hasil  penelitian  dari  Ratu  (2019) dan  Ngantung  (2016)  sampel Phyllospongia lamellosa memiliki  aktivitas  antimikroba  yang berbeda-beda tergantung dari lokasi pengambilan sampel tersebut.

## KESIMPULAN
Berdasarkan
hasil penelitian menunjukkan  bahwa  hasil  pengukuran  rata  - rata  diameter  zona  hambat  ekstrak  dan  fraksi spons Phyllospongia lamellosa terhadap bakteri Staphylococcus  aureus yang  paling besar  dihasilkan  oleh  fraksi  kloroform  dengan nilai  rata  –  rata  15,96  mm ± 0,98  dan  bakteri Escherichia  coli oleh  fraksi  kloroform  dengan nilai  rata  –  rata  17,48  mm ± 4,80  sehingga keduanya dikategorikan kuat.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut perihal  kandungan  senyawa  dan  aktivitas biologis  dari  spons Phyllospongia  lamellosa dengan menggunakan metode pengujian lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar,  H.  Wahyudi,  T.  Yuhana,  M.  2011. Skrining  Bakteri  yang  Berasosiasi dengan  Spons  Jaspis  sp.,  sebagai Penghasil Senyawa Antimikroba. Jurnal Ilmu Kelautan . 16 : 35-40.
Abdullah,  S.S.,  Djide,  N.,  Natsir,  S.  (2021). KLT Bioautografi Hasil Partisi Ekstrak  Etanol  Herba  Bandotan ( Ageratum  conyzoides  L. )  Terhadap Shigella  dysentriae . Chem.  Prog. 14(1).15-17.
Agus,  T.,  Ambariyanto.,  Retno,  M.  2004. Skrining  bahan  anti  kanker  pada berbagai  jenis  spons  dan  gorgonian terhadap  L1210  cell  Line. Jurnal ilmu kelautan . 3 : 120-124.
Indriani,  Cici.,  Yan  Riska  Venata,  D  S., Mochlisin  A.,  Tumpal  HS  S.,  Hilda Syafitri  D.,  Diana  Alemin  B.  2016.
Identifikasi dan Uji Metabolit Sekunder  Bangun  –  Bangun  (Coleus Amboinicus) terhadap Penyakit Jamur  Akar  Putih  (Rigidoporus Microporus)  di  Laboratorium. Jurnal Penelitian Karet , 34 (2) : 189 – 200. Ismet,  M.  S.  (2007).  Penepisan  senyawa bioaktif  spons  Aaptos  aaptos  dan Petrosia  sp.  dari  lokasi  berbeda.
[Tesis].  Bogor.  Institut  Pertanian Bogor. Kiroh,  H.J.,  M.J.  Hendrik,  F.S. Ratulangi,  and S.C. Rimbing. 2021. “Studi Penyebaran  Populasi  Dan  Daya
Dukung  Habitat  Kuskus  Beruang (Ailurops  Ursinus)  Di  Pulau Manado Tua  Sulawesi  Utara.” Zootec 41(1) :
291.
Kotel,  Marcelinda  N.,  Defny  S.  Wewengkang, and  Herny  E.  I.  Simbala.  2019. “Potensi antimikroba dari ekstrak dan fraksi  spons  aplysina  sp.  Terhadap mikroba uji escherichia coli,
staphylococcus  aureus  dan  candida albicans.” Pharmacon 8(2) : 268.
Lamadjido,  Sri  Rahayu,  Umrah  Umrah,  and
Jamaluddin Jamaluddin. 2019. “Formulasi  Dan  Analisis  Nilai  Gizi Bakso Kotak Dari Jamur Tiram Putih (Pleurotus Ostreatus).” Jurnal Farmasi Galenika (Galenika Journal of  Pharmacy)  (e-Journal) 5(2) :  166– 74.
Legi,  A.P.,  Edy,  H.J.,  Abdullah ,  S.  S.,  (2021), Formulasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri  Sediaan  Sabun  Cair Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona
Muricata Linn)  Terhadap  Bakteri
Staphylococcus ,    Pharmacon, 10(3) , 1058–1065.
Maramis,  M.  A.,  B.  Wagey,  A.P.  Rumengan,
C.F.  Sondak,  E.T.  Opa  dan  K.F. Kondoy.  2020.  Karbon  pada  padang lamun  di  perairan  pulau  manado  tua.
Jurnal  Pesisir  Dan  Laut  Tropis 8(2) :79-91.
Mopangga, E., Yamlean, P. V. Y., & Abdullah, S.  S.  (2021).  Formulasi  Sediaan
Sabun  Mandi  Padat  Ekstrak  Etanol Daun  Gedi  ( Abelmoschus  manihot L.) Terhadap  Bakteri Staphylococcus epidermidis . Pharmacon, 10(3) ,
1017–1024. Mpila,  D.  A.  2012.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mayana (Coleus atropurpureus benth)
Terhadap Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli dan Pseudomas aeruginosa Secara Invitro . [Skripsi]. Program  Studi  Farmasi  FMIPA
Universitas Sam Ratulangi, Manado. Mujipradhana.V.N,  D.S.Wewengkang  dan  E. Suryanto. 2018. Aktivitas Antimikroba  dari  Ekstrak  Ascidian Herdmania  momus  pada  Mikroba Patogen  Manusia.  Fakultas  MIPA Universitas Sam Ratulangi: Manado.
Ngantung,  Angeline,  Robert  Bara,  and  Deiske Sumilat. 2017. “Uji Aktivitas Antibakteri  Dari  Spons  Dictyonella Funicularis Dan Phyllospongia lamellosa Yang Diambil Pada
Perairan  Bunaken.” Jurnal  Pesisir Dan Laut Tropis, 4(2) : 10. Ortez,  J.H.  2005.  Disk  Diffusion  testing  in manual of antimicrobial
susceptibility testing. Marie B. Coyle (Coord.  Ed).  American  society  for Microbiology.
Pelealu,  E.,  D,  Wewengkang.,  S,  Sumantri. 2021.  Uji Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  dan  Fraksi  spons Leucetta chagosensis dari  Perairan  Pulau Mantehage  Sulawesi  Utara  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Program Studi Farmasi Fmipa Unsrat Manado. Ratu, K., Simbala, H., Rotinsulu, H., 2019. Uji
Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  dan Fraksi Spons Phyllospongia lamellosa dari  Perairan  Tumbak, Minahasa Tenggara
terhadap
Pertumbuhan  Mikroba Escherichia coli , Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans .  Program  Studi Farmasi  FMIPA  Universitas  Sam Ratulangi, Manado.
Restiana,  F.R.2018.  Pengaruh  Lama  Maserasi Terhadap  Kadar  Genistein  Pada Ekstraksi  Tempe.  [Skripsi].  Program Studi  Farmasi  Universitas  Sanata Dharma: Yogyakarta.
Sahuleka,  A.S.G.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.  S.,
(2021),  formulasi  Sediaan  Krim
Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Eceng Gondok ( Eichhornia crassipes ) Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus ,  Pharmacon,
10(4) , 1162–1168.
Septiani,  Eko  Nurcahya  Dewi,  Ima  Wijayanti. 2017.  “Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak
Lamun (Cymodocea Rotundata) Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli (Antibacterial  Activities  of  Seagrass Extracts (Cymodocea Rotundata) Against Staphylococcus  aureus and Escherichia Coli).” Saintek Perikanan :  Indonesian  Journal  of Fisheries  Science  and  Technology 13(1) : 1. Siahaya,  A.N.,  J.A.B  Mamesah  Dan  M. Latuihamallo. 2006. Analisa Beberapa  Logam  Berat  Pada  Spons (Porifera)  di  Perairan  Teluk  Ambon (Analysis  of  some  kinds  of  Heavy metals  on  Sponge  (Porifera)  in Ambon Bay). Sinrang,  V.N.S.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.S.,, (2022),  Formulasi  Sediaan  Obat Kumur  Ekstrak  Etanol  Biji  Pinang
( Areca  catechu  L. ),  Pharmacon, 11(1), 1342–1349. Soemarno.  2000. Depertemen  Kesehatan
Republik  Indonesia  Isolasi  Dan Identifikasi  Bakteri  Klinik .  Akademi Analisis Kesehatan Yogyakarta. Yogyakarta. Susanto, D., Sudrajat dan R. Ruga. 2012. Studi
Kandungan  Bahan  Aktif  Tumbuhan Meranti  Merah  (Shorea  leprosula
Miq)  Sebagai  Sumber  Senyawa
Antibakteri. Mulawarmnan Scientifie . Vol. 11 (2) : 181-190.
Taylor,  M.  W.,  Radax,  R.,  Steger,  D.,  & Wagner, M. (2007).
Sponge- associated  microorganism;  evolution, ecology, and
biotechnological potential.  American  Society  for Microbiology, 71 (2) : 295-347.
Wagey,  B.T.  2017.  Morphometric  analysis  of congeneric  seagrasses  (Cymodocea rotundata  and  Cymodocea  serrulata) in  the  coastal  areas  of  Bunaken National Park, North  Sulawesi, Indonesia. AACL Bioflux,
10(6) :1638-1646.
Waluyo  L.  2004.  Mikrobiologi  Umum. Malang: Umm Press