Efek Substitusi Fetal Bovine Serum menjadi Platelet-Rich Plasma terhadap Pertumbuhan Sel Punca
(The Substitution Effect of Fetal Bovine Serum to Platelet-Rich Plasma on Stem Cell Proliferation)
Imam Rosadi 1* , Karina Karina 2,3,4 , Irsyah Afini 2,5 , Tias Widyastuti 2 , Siti Sobariah 2
1 Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Mulawarman University, Samarinda, Indonesia.
2 HayandraLab, Hayandra Peduli Foundation, Jakarta, Indonesia
3 Hayandra Clinic, Hayandra Peduli Foundation, Jakarta, Indonesia
4 Research Center for Regenerative Medicine and Neuroscience, Faculty of Medicine, Universitas Pembangunan Nasional Veteran Jakarta, Jakarta, Indonesia
5 Master’s Programme in Biomedical Science, Faculty of Medicine, Universitas Indonesia, Jakarta, Indonesia
*E-mail: imamrosadi@unmul.ac.id
Abstrak: Sel  punca merupakan  sel  yang dapat meregenerasi  dirinya  sendiri  dan  dapat menjadi sel yang memiliki fungsi spesifik yaitu sel dewasa seperti sel lemak, rawan dan tulang. Sel punca dapat dikultur secara in vitro menggunakan medium yang mengandung serum seperti fetal bovine serum (FBS). Akan tetapi, jumlah sel yang dihasilkan masih belum  optimal  sehingga  perlu  dilakukan pendekatan  manipulasi  medium. Platelet-rich plasma (PRP)  merupakan  plasma  yang  kaya  akan  trombosit  dan  mengandung  protein pertumbuhan. Studi ini bertujuan untuk melakukan perbandingan FBS (Gibco), PRP non- komersial  dan  PLTGold® Human  Platelet  Lysate (Merck)  (komersial)  terhadap pertumbuhan  dan population  doubling  time (PDT)  sel  punca  asal  jaringan  lemak.  Sel punca diisolasi secara enzimatis dari jaringan lemak, kemudian dilakukan proses kultur dan  perbanyakan  yang  diikuti  dengan  pengamatan  morfologi,  viabilitas  sel,  laju pertumbuhan dan PDT. Hasil penelitian menunjukkan bahwa morfologi sel asal jaringan lemak  berbentuk seperti sel fibroblas yang menempel pada permukaan plastik. Jumlah sel, PDT dan laju proliferasi terbaik adalah kelompok PLTGold®, PRP dan FBS secara berurutan.  Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  PLTGold®  atau  PRP dapat mensubtitusi FBS sebagai nutrisi pertumbuhan sel punca.

## Kata Kunci: Sel Punca, Pertumbuhan, PDT, PRP, PLTGold®
Abstract: Stem cells are capable of self-regeneration and differentiation into specialized cells, such as adipocytes, chondrocytes, and osteocytes. Stem cells can be cultured in vitro using media-containing serum, such as fetal bovine serum (FBS). However, the cell yield is  often  lacking,  thus  the  manipulation  of  the  culture  medium  is  needed.  Platelet-rich plasma (PRP) contains a thousand growth proteins. This study aims to compare the effects of  FBS  (Gibco),  non-commercial  PRP,  and  commercial  PLTGold®  Human  Platelet
Lysate (Merck) on the growth and population doubling time (PDT) of stem cells isolated from  adipose  tissue.  Stem  cells  will  be  enzymatically  isolated  from  adipose  tissue, followed  by  culture  and  expansion  processes,  with  subsequent  observations  of  cell morphology,  viability,  growth  rate, and  PDT.  The  results  showed that  adipose-derived stem  cells  exhibit  fibroblast-like  morphology  and  adhere  to  the  plastic  surface.  The optimal  cell  number,  PDT  and  proliferation  rate  showed  in  PLTGold®,  PRP  and FBS respectively.  Based  on  these  results,  it  can  be  concluded  that  PLTGold®  or  PRP  can substitute FBS as a growth supplement for stem cell proliferation.

## Keywords: Stem Cell, Proliferation, PDT, PRP, PLTGold®

## PENDAHULUAN
Sel  punca  atau stem  cells merupakan  sel  yang  belum  terspesialisasi,  mampu mengalami pembelahan dan berdiferensiasi menjadi sel fungsional seperti sel rawan dan tulang. Sel punca berdasarkan sumbernya dibagi menjadi dua yaitu sel punca asal jaringan dewasa  dan  sel  punca  embrionik  (Rajabzadeh et  al., 2019).  Perkembangan  sel  punca embrionik banyak mengalami pertentangan dikarenakan isu etika sehingga sel punca asal jaringan  dewasa lebih  banyak  diteliti.  Jaringan  dewasa  yang  umum  digunakan  sebagai sumber sel punca adalah jaringan sumsum tulang, lemak, dan tali pusat (Bangun et al.,, 2021; Revilla and Mulyani, 2020; Zuk et al., 2004). Jaringan lemak digunakan sebagai sumber sel punca karena merupakan limbah pada operasi sedot lemak dan mengandung sel punca yang berlimpah.
Sel  punca  banyak  diinvestigasi  dalam  penelitian  biomedis  karena  potensinya dalam regenerative medicine (Han et al., 2015; Rajabzadeh et al., 2019). Potensi yang besar pada sel punca untuk kesehatan meningkatkan kebutuhan jumlah sel. Oleh karena itu, perbanyakan sel punca secara in vitro dilakukan dengan manipulasi kandungan nutrisi medium. Penggunaan fetal bovine serum (FBS) umum dimanfaatkan untuk perbanyakan sel  punca  skala in  vitro (Rosadi et  al., 2020;  Wahyuningsih et  al., 2020).  FBS  yang merupakan  turunan  dari  hewan  memiliki  masalah  jika  akan  diaplikasikan  pada  terapi manusia. Oleh karena itu, perlu dilakukan upaya subtitusi FBS.
Platelet-rich plasma (PRP) merupakan plasma yang kaya akan trombosit, yaitu sel  yang  mengandung  protein  termasuk  protein  pertumbuhan  seperti platelet-derived growth  factor (PDGF), transforming  growth  factor-β1 (TGF-β1), epidermal  growth factor (EGF), vascular endothelial growth factor (VEGF), dan insulin-like growth factor- 1 (IGF-1) (Pavlovic et al., 2016). Faktor pertumbuhan tersebut berperan dalam proliferasi sel termasuk sel punca. PRP dapat diperoleh dari darah dan dipisahkan dengan komponen darah lainnya melalui teknik sentrifugasi (Karina et al., 2021).
Penggunaan  PRP  sebagai  medium  subtitusi  FBS  telah  dilaporkan  dapat meningkatkan jumlah sel punca yang dikultur secara in vitro (Pratama et al., 2020; Rosadi et  al., 2019c;  Suryani et  al., 2013).  PRP  dapat  menginduksi  sel  punca  untuk berdiferensiasi  menjadi  sel  dewasa  lain,  seperti  sel  rawan  (kondrosit)  pada  berbagai konsentrasi  dengan  durasi  kultur  tertentu  (Rosadi et  al., 2019c).  Penelitian  ini, menggunakan  limbah  lemak  manusia  yang  dicacah  menggunakan  teknik  enzimatis sehingga  diperoleh stromal  vascular  fraction (SVF).  SVF  kemudian  dikultur  pada
medium pertumbuhan standar hingga mencapai batas konfluensi. Pengaruh subtitusi FBS dengan  PRP  pada  pertumbuhan  sel  dilakukan  pada  pasase  ke-3.  PRP  yang  digunakan berasal  dari  Palang  Merah  Indonesia  dan  PLTGold® Human  Platelet  Lysate (Merck). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  subtitusi  FBS  menjadi  PRP  non- komersial dan komersial terhadap pertambahan jumlah, PDT, dan laju pertumbuhan sel punca asal jaringan lemak.

## METODE PENELITIAN Isolasi Sel Asal Jaringan Lemak
Penelitian ini dilakukan di laboratorium HayandraLab, Jakarta. Sampel jaringan lemak  diperoleh  dari  satu  donor.  Proses  isolasi  sel  mengacu  pada  teknik in  house HayandraLab berbasis enzimatis  (Moegni et al., 2019). Sel yang terlepas dari jaringan lemak kemudian dipisahkan menggunakan teknik sentrifugasi. S tromal vascular fraction (SVF)  diperoleh  pada  tahap  ini  (Karina et  al., 2020).  SVF  kemudian  dikultur  untuk perbanyakan sel.

## Kultur Sel
Sel  SVF  dikultur  dengan  medium  mengandung Dulbecco's  Modified  Eagle Medium (DMEM)  (Gibco),  dengan  nutrisi  10%  serum  dan  1X  antibiotik-antimikotik (ABAM) (Gibco) yang diinkubasi pada suhu 37 o C dan 5% CO 2 . Serum yang digunakan adalah FBS, PRP non-komersial yang diperoleh dari Palang Merah Indonesia selanjutnya disebut PRP, dan PRP komersial merupakan PLTGold® Human Platelet Lysate (Merck) yang selanjutnya disebut PLTGold®. Medium sel diganti setiap 2-3 hari sekali. Kultur sel dilakukan proses panen ketika mencapai konfluensi 80-90% dengan teknik enzimatis hingga pasase 2 dan dilanjutkan dengan pengujian pada pasase ke 3. Pasase bertingkat bertujuan untuk mendapatkan sejumlah sel yang cukup untuk dilakukan pengujian.

## Morfologi Sel
Sel  yang  tumbuh  dan  menempel  pada  permukaan  plastik  diamati  bentuk morfologi dan pertumbuhannya. Morfologi sel diamati menggunakan mikroskop cahaya OPTICA (Italia) perbesaran 100X. Gambar diambil menggunakan software OPTICA.

## Uji Viabilitas, Perubahan Kelipatan Sel, dan PDT
Sel pada pasase 3 dikultur menggunakan flask T25 menjadi kelompok 10% FBS, 10%  PRP  dan  10%  PLTGold® Human  Platelet  Lysate (Merck).  Jumlah  sel  dihitung menggunakan pewarnaan tryphan blue dibawah mikroskop dengan formula berikut:
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑒𝑙  = 𝑅𝑒𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑒𝑙 ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝 𝑎𝑡𝑎𝑢 𝑚𝑎𝑡𝑖 𝑅𝑒𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑘𝑎𝑚𝑎𝑟 ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔 𝑥 𝐷𝑓 𝑥 10 4 𝑥 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑒𝑙
Df = Faktor pengenceran
Viabilitas  sel  dipresentasikan  dalam  persen  antara  jumlah  sel  hidup  dan  mati dengan rumus berikut:
𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑠𝑒𝑙  = 𝑅𝑒𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑒𝑙 ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝 𝑅𝑒𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑒𝑙 ℎ𝑖𝑑𝑢𝑝 + 𝑠𝑒𝑙 𝑚𝑎𝑡𝑖 𝑥 100%

## Jurnal Biology Science & Education 2024  imam rosadi, DKK
Perhitungan PDT merujuk pada studi yang telah dilaporkan (Rosadi et al., 2019a). Pengujian dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali.

## Uji 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide (MTT)
Uji MTT dilakukan untuk mengetahui pertumbuhan sel. Sel dikultur pada 96- well plates (5,000 sel per sumur) pada berbagai nutrisi. Pengamatan dilakukan pada hari ke-1, 3  dan  5.  Protokol  pengujian  MTT  mengacu  pada  penelitian  terdahulu  (Rosadi et  al., 2019d).  Intensitas  yang  dihasilkan  diukur  dengan  panjang  gelombang  595  nm menggunakan microplate  reader (Biorad  iMark).  Pengujian  dilakukan  pengulangan sebanyak 3 kali.

## Penyajian Data
Hasil  yang  diperoleh  disajikan  dalam  bentuk  gambar  dan  tabel.  Pengulangan teknik dilakukan sebanyak tiga kali dengan menampilkan rerata dan standar deviasi.

## Analisis Statistika
Analisis  data  menggunakan  uji  statistika student T-test.  Nilai  p  <  0,05 menunjukkan adanya perbedaan data yang signifikan. Tanda (*) menunjukkan p < 0,05, (**) menunjukkan p < 0,01, (***) menunjukkan p < 0,0001.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Morfologi Sel
Sel punca asal jaringan lemak telah banyak dikembangkan untuk penelitian terkait laju  pertumbuhan  sel,  arah  diferensiasi,  dan  rekayasa  jaringan  (Meiliana et  al., 2016; Mukti et al., 2021; Rosadi et al., 2021; Sibuea et al., 2020; Wahyuningsih et al., 2020). Jaringan lemak dipilih karena umumnya merupakan limbah dari operasi sedot lemak dan jumlah sel yang diperoleh lebih banyak dibandingkan dengan asal sumsum tulang. Pada studi  ini,  jaringan  lemak  diisolasi  secara  enzimatis  sehingga  diperoleh  SVF.  SVF merupakan  fraksi  yang  mengandung  berbagai  macam  sel  seperti  sel  imun,  perisit, progenitor, dan sel punca (Karina et al. 2020). Sel punca dipisahkan dengan sel lainnya dengan proses perbanyakan. Perbanyakan sel bertujuan untuk memperoleh cukup sel saat melakukan  pengujian,  pada  studi  ini  adalah  pasase  3.  Pada  proses  kultur  dengan penggantian media setiap 2-3 hari, maka sel akan terseleksi. Data observasi gambaran sel pada pasase 0 yang disajikan pada Gambar 1.

## Jurnal Biology Science & Education 2024  imam rosadi, DKK
Gambar 1. Sel Punca Pasase Ke-0 pada Hari Pengamatan Ke-12, Panah Kuning: Sel Berbentuk Seperti Fibroblas, Panah Merah: Sel Mengalami Spreading
Sel yang dikultur dari jaringan lemak merupakan sel yang menempel pada substrat plastik berbentuk seperti fibroblas (Gambar 1). Sel-sel yang tidak menempel ( adherent ) akan  mengalami  seleksi  dan  terbuang  saat  penggantian  medium.  Karakteristik  seperti fibroblas  yang  menempel  pada  substrat  plastik  merupakan  salah  satu  ciri  sel  punca (Dominici et al., 2006).

## Viabilitas sel
Sel  punca  pasase  ke-3  umum  digunakan untuk  pengujian  dan  telah  dilaporkan. Penggunaan pasase rendah dalam pengujian diharapkan menjaga sel dari proses penuaan ( senescence ) yang berdampak pada hasil yang diperoleh. Penambahan molekul bioaktif tersebut  dikombinasikan  dengan  FBS  sebagai  sumber  nutrisi.  Penggunaan  FBS  yang merupakan turunan dari hewan memicu pertumbuhan sel yang belum optimal sehingga diperlukan subtitusi FBS dengan nutrisi yang bebas akan turunan hewan.
PRP  merupakan  salah  satu  alternatif  akselerasi  pertumbuhan  sel  lebih  tinggi dibandingkan  FBS.  PRP  yang  mengandung  lebih  dari  1000  protein  memiliki  beragam peran meliputi penutupan luka, inisiator pembentukan pembuluh darah, dan memicu laju proliferasi  sel  (Pavlovic et  al., 2016).  Selain  itu,  PRP  juga  mengandung  sitokin  yang berperan dalam mediasi komunikasi sel. Beberapa jenis bioaktif molekul yang berkaitan dengan pertumbuhan sel adalah IGF, VEGF, TGF beta, PDGF dan EGF. Kandungan PRP yang beragam berpotensi mendukung perannya untuk memperbaiki jaringan yang rusak (Samadi et al., 2019).
Pengamatan viabilitas sel dilakukan setelah proses panen sel pada pasase 3 yang dikultur  dengan  ketiga  perlakuan  berbeda.  Pengamatan  ini  dilkakukan  bertujuan  untuk mengetahui efek negatif yang mungkin ditimbulkan pada penggantian FBS dan kontrol teknik pekerjaan. Viabilitas sel dihitung dan disajikan pada Tabel 1 berikut:

## Jurnal Biology Science  Education 2024  imam rosadi, DKK
Tabel 1. Viabilitas Sel Kelompok Viabilitas (%) Rerata (%) ± SD 1 2 3 FBS 98 100 100 99.37 ± 1,09 PRP 100 100 98 99.38 ± 1,06 PLTGold 100 100 100 100 ± 0
Rerata viabilitas sel setelah 5 hari kultur pada kelompok FBS, PRP dan PLTGold adalah  99,05%,  99,38%  dan  100%  (Tabel  1).  Pada  studi  ini,  proses  kultur  berhasil dilakukan dengan mempertahankan viabilitas sel diatas 95%. Hal ini menunjukkan bahwa sel dibiakkan dengan aman dan minim kesalahan teknis. Pergantian medium setiap 2-3 hari sekali mencegah kondisi lingkungan mikro sel menjadi asam akibat produksi asam laktat oleh sel. Kondisi lingkungan mikro yang banyak mengandung asam laktat dapat memicu kematian sel sehingga menurunkan viabilitas sel.

## Jumlah Sel dan Perubahan Kelipatan Sel
Rerata masing-masing kelompok pada kultur awal pada kelompok FBS, PRP dan PLTGold  secara  berurutan  adalah  112.000,  125.000,  dan  125.000  sel.  Jumlah  sel  dari hasil perbanyakan pasase 2 kelompok FBS terbatas sehingga berdampak pada jumlah sel yang  dapat  dikultur  pada  pengujian  pasase  3.  Oleh  karena  itu,  disajikan  pula  data perubahan kelipatan sel berdasarkan jumlah awal sel. Berikut merupakan data jumlah sel sebelum dan sesudah panen pada pasase 3 selama 5 hari dalam berbagai medium yang disajikan pada Gambar 2:

## Gambar 2. Jumlah Sel Kultur dan Panen pada Kelompok FBS, PRP dan PLTGold Selama 5 Hari Pengamatan
Jumlah  sel  yang  diperoleh  setelah  5  hari  kultur  pada  kelompok  FBS,  PRP  dan PLTGold  adalah  237.000,  342.000,  dan  1.545.000  sel  (Gambar  2).  Jumlah  sel  naik
*p = 0,03 *p = 0,03 ***p = 0,002 ***p = 0,0003
signifikan pada ketiga kelompok yaitu FBS, PRP dan PLTGold®. Perubahan jumlah sel dalam kelipatan dibandingkan data kultur awal disajikan pada Gambar 3 sebagai berikut:
Gambar 3. Perubahan Jumlah Sel (dalam Kali) Sebelum dan Sesudah Panen pada Kelompok FBS,

## PRP dan PLTGold Selama 5 Hari Pengamatan
Perubahan kelipatan sel secara berurutan adalah 2,12; 2,73 dan 12,36 kali lipat (Gambar 3). Berdasarkan hasil tersebut, kelompok sel yang dikultur dengan mengandung PLTGold meningkat jumlahnya secara signifikan dibandingkan kelompok lainnya. Kadar molekul bioaktif pada setiap bacth yang dihasilkan tidak selalu seragam karena proses ekspresi  protein  diatur  dalam  proses  transkripsi  dan  translasi  dan  dipengaruhi  oleh fisiologis  sel.  Hal  ini  akan  mempengaruhi  efek  terhadap  proliferasi  sel.  Penelitian sebelumnya  telah  melaporkan  bahwa  total  protein  dari  PRP  penderita  diabetes  tidak berbeda signifikan dengan non-diabetes. Akan tetapi, kadar molekul bioaktif pada pasien diabetes seperti VEGF signifikan lebih tinggi dibandingkan non-diabetes (Karina et al., 2019). VEGF berperan dalam proses pembentukan pembuluh darah pada kasus jaringan rusak seperti diabetes foot ulcer (Olsson et al. 2006). Tinggi dan rendahnya kadar protein yang diproduksi berkaitan dengan homeostasis (kesetimbangan). Perbedaan produksi ini juga yang mungkin terjadi antar batch PRP. Namun secara umum, faktor pertumbuhan PRP meningkatkan jumlah sel lebih baik dibandingkan FBS.

## Population Doubling Time (PDT)
PDT  merupakan  pengujian  untuk  mengetahui  lamanya  waktu  yang  dibutuhkan dari satu sel menjadi dua sel. Data PDT disajikan pada Gambar 4 sebagai berikut:
***p = 0,0006 ***p = 0,0008
Gambar 4. PDT yang Diperlukan Sel pada Medium FBS, PRP dan PLTGold
Waktu  pembelahan  tercepat  diamati  terjadi  pada  kelompok  PLTGold  yaitu  1.4 hari diikuti dengan kelompok PRP dan FBS yaitu 3.6 hari dan 4.9 hari (Gambar 4). Hal ini menunjukkan penggunaan PRP (komersial atau non-komersial) dapat meningkatkan akselerasi jumlah sel meskipun signifikansi hanya tercapai pada kelompok PLTGold® terhadap  kelompok  lainnya.  Penelitian  sebelumnya  terkait  PDT  pada  sel  punca menggunakan  10%  PRP  non-komersial  pasase  3  adalah  2  hari  (Suryani et  al. 2013). Perbedaan  ini  mungkin  disebabkan  adanya  variasi batch PRP  yang  belum  diketahui konsentrasi proteinnya.

## Proliferasi Sel
Pertumbuhan sel dikonfirmasi kembali menggunakan uji MTT yang berbasis pada penangkapan  intensitas  absorbansi.  Absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang  595. Data hasil pengamatan uji MTT disajikan pada Gambar 6 sebagai berikut:
***p = 0,002
***p = 0,006

## Jurnal Biology Science  Education 2024  imam rosadi, DKK
Gambar 6. Proliferasi Sel Punca pada Kelompok yang Diberi FBS, PRP dan PLTGold
Ketiga kelompok dalam 5 hari pengamatan menunjukkan adanya kecenderungan peningkatan  intensitas  absorbansi  sel.  Hal  ini  mengindikasikan  adanya  pertambahan jumlah sel. Kelompok dengan pertumbuhan tercepat secara berurutan adalah kelompok PLTGold®, PRP dan FBS (Gambar 6). Kelompok PLTGold® dan PRP juga meningkat signifikan  pada  hari  ke-5.  Berdasarkan  hasil  pengujian  MTT,  absorbansi  yang  diamati pada  kelompok  PLTGold®  tidak  berbeda  nyata  dengan  PRP  non-komersial.  Hal  ini diduga  karena  adanya  overkonfluensi  pada  sel  sehingga  sebagian  besar  sel  pada kelompok PLT Merck mengalami pelepasan dengan substrat ( detachment ). Pada studi sel punca  yang  dikultur  menggunakan  10%  PRP  selama  21  hari  memicu  terbentuknya agregat  pada  sel  yang  merubah  sifat  kepuncaannya  menjadi  kondrosit  (Rosadi et  al., 2019c). Hal ini dapat berakibat pada mudahnya sel mengalami detachment . Namun perlu dilakukan  studi  lebih  lanjut  untuk  mengkonfirmasi  hal  tersebut.  Oleh  karena  itu, rekomendasi  penggunaan  PLTGold®  adalah  dengan  menurunkan  konsentrasi  menjadi 2,5%  atau  5%.  Penurunan  konsentrasi  diduga  menstabilkan  kecepatan  pertumbuhan setara  dengan  PRP  non-komersial.  Hal  ini  tentunya  juga  akan  meningkatkan  efisiensi biaya  pemeliharaan  dan  perbanyakan  sel  punca  karena  penggunaan  PLTGold® komersial.
Studi ini berhasil merangkum beberapa data terkait efek subtitusi FBS menjadi PRP non-komersial dan komersial terhadap pertumbuhan sel punca asal jaringan lemak. Akan  tetapi,  studi  ini  juga  memiliki  kelemahan  diantaranya  belum  adanya  investigasi tingkat molekuler terkait jalur pertumbuhan sel bagaimana kelompok PRP dan PLTGold lebih baik dibandingkan kelompok FBS.

## KESIMPULAN
Pertumbuhan  sel  punca  asal  jaringan  lemak  depat  diakselerasi  dengan mensubtitusi  FBS  menjadi  PRP  (komersial  atau  non-komersial).  PLTGold®  Human
** p = 0 ,0 1 *** p = 0 ,0 001
Platelet Lysate (Merck) menginduksi laju pertumbuhan yang lebih tinggi daripada PRP non-komersial.

## SARAN
Adanya  kemungkinan  keberagaman  komponen  bioaktif  setiap batch PRP memungkinkan  untuk  dilakukan  percobaan  terkait  konsistensi  hasil  serta  pengukuran faktor  pertumbuhan  yang  terkandung  didalam  PRP.  Diperlukan  investigasi  tingkat molekuler terkait jalur pertumbuhan sel bagaimana kelompok PRP dan PLTGold lebih baik dibandingkan kelompok FBS.

## DAFTAR PUSTAKA
Bangun, K., …. (2021). Bone Growth Capacity of Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem  Cells  and  BMP-2  Seeded  Into  Hydroxyapatite/Chitosan/Gelatin  Scaffold  in Alveolar Cleft Defects: An Experimental Study in Goat. Cleft Palate-Craniofacial Journal, Vol. 58 No. 6, 707-717. doi: 10.1177/1055665620962360. Dominici., ….. (2006). Minimal Criteria for Defining Multipotent Mesenchymal Stromal Cells.  The  International  Society  for  Cellular  Therapy  Position  Statement. Cytotherapy, Vol. 8 No. 4, 315-317.
Han.,  ….. (2015). Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cells: Update on Clinical Utility and Efficacy. Critical Reviews in Eukaryotic Gene Expression, Vol. 25 No. 2, 145-152. doi: 10.1615/CRITREVEUKARYOTGENEEXPR.2015013057.
Karina.,    …..  (2021).  Evaluating  the  Safety  of  Intravenous  Delivery  of  Autologous Activated  Platelet-Rich  Plasma. Journal  of  Health  Sciences, 1-5.  doi: 10.17532/jhsci.2021.1276.
Karina., ….. (2020). Adipose-Derived Stem Cells and Their Microenvironment (Niche) in  Type  2  Diabetes  Mellitus. Stem  Cell  Investigation, Vol.  7.  doi: 10.21037/SCI.2019.12.02.
Karina., …... (2019). Evaluation of Platelet-Rich Plasma from Diabetic Donors Shows Increased  Platelet  Vascular  Endothelial  Growth  Factor  Release. Stem  Cell Investigation, Vol. 6 No. 43. doi: 10.21037/SCI.2019.10.02. Meiliana., ….. (2016). Stem Cell Therapy in Wound Healing and Tissue Regeneration. The Indonesian Biomedical Journal, Vol. 8 No. 2, 61–70. doi: 10.18585/INABJ.V8I2.191.
Moegni,  K.,  …..  (2019).  Stromal  Vascular  Fraction  (SVF)  Therapy  for  Treatment  of Various  Diseases:  Delivering  Safety  of  the  First  Patented  Svf  Technique  in Indonesia. Cytotherapy, Vol. 21 No. 5. doi: 10.1016/J.JCYT.2019.03.511.
Mukti, A.I., ….. (2021). Mesenchymal Stem Cells Enhance Vascular Endothelial Growth Factor-A, Endothelial Nitric Oxide Synthetase, and HSP70 Expression in Improving Erectile  Dysfunction  in  Streptozotocin-Induced  Diabetic  Rats. Open  Access Macedonian  Journal  of  Medical  Sciences, Vol.  9,  1174–1180.  doi: 10.3889/oamjms.2021.7801.
Olsson, ….. (2006). VEGF Receptor Signalling ? In Control of Vascular Function. Nature Reviews Molecular Cell Biology, Vol. 7 No. 5, 359–371. doi: 10.1038/nrm1911. Pavlovic.,  et  al.  (2016).  Platelet  Rich  Plasma:  A  Short  Overview  of  Certain  Bioactive

## Jurnal Biology Science  Education 2024  imam rosadi, DKK
Components. Open Medicine (Poland), Vol. 11 No. 1, 242–247. doi: 10.1515/med- 2016-0048.
Pratama,  G.A.,  …...  (2020).  Wharton’s  Jelly  Derived  Mesenchymal  Stem  Cells:  A Comparison Study in Preterm vs. Term Deliveries and in FBS vs. PRP vs Mesencult Culture Media. Journal of Global Pharma Technology, Vol. 12 No. 6, 366–374. Rajabzadeh,  …..  (2019).  Stem  Cell-Based  Regenerative  Medicine. Stem  Cell Investigation, Vol. 6. doi: 10.21037/SCI.2019.06.04. Revilla, G and Mulyani, H. (2020). The Effect of Human Bone Marrow Mesenchymal Stem  Cells  on  Epidermal  Growth  Factor  and  Epidermal  Growth  Factor  Receptor Expression in Re-Epithelialization Process in the Healing of Burns on Experimental Rats. Open Access Macedonian Journal of Medical Sciences, Vol. 8, No. A, 508-11. doi: 10.3889/oamjms.2020.3959.
Rosadi, I., ….. (2021). L-Ascorbic Acid-2-Phosphate and Fibrin Substrate Enhances the Chondrogenic Differentiation of Human Adipose-Derived Stem Cells. Progress in
Stem Cell, Vol. 8 No. 2, 310–317. doi: 10.15419/psc.v8i2.412. Rosadi, I., ….. (2019a). Expression of protein
CD73/CD90/CD105/CD34/CD45/CD11b/CD19/HLA-DR  on  stem  cells  from human fat tissue, using cytometry flow. Al-Kauniyah: Jurnal Biologi, Vol. 12 No. 2, 133-141. doi: 10.15408/KAUNIYAH.V12I2.8751.
Rosadi, I., ….. (2019b). In Vitro Study of Cartilage Tissue Engineering Using Human Adipose-Derived Stem Cells Induced by Platelet-Rich Plasma and Cultured on Silk Fibroin  Scaffold. Stem  Cell  Research    Therapy, Vol.  10  No.  1,  1–15.  doi: 10.1186/S13287-019-1443-2.
Rosadi, I., …... (2019c). The Effect of Human Platelet-Rich Plasma and L-Ascorbic Acid on  Morphology,  Proliferation,  and  Chondrogenesis  Ability    towards  Human Adipose-Derived Stem Cells. Molecular and Cellular Biomedical Sciences, Vol. 3 No. 1, 26–33. doi: 10.21705/MCBS.V3I1.43.
Rosadi, I., ….. (2020). Perbandingan Kemampuan Migrasi Adipose-Derive Stem Cells Asal  Manusia  Pada  Berbagai  Medium  Pertumbuhan. Bioeksperimen:  Jurnal Penelitian Biologi, Vol. 6 No. 1, 45-51. doi:
10.23917/BIOEKSPERIMEN.V6I1.10432.
Samadi, P., ….. (2019). The Use of Platelet-Rich Plasma in Aesthetic and Regenerative Medicine: A Comprehensive Review. Aesthetic Plastic Surgery, Vol. 43 No. 3, 803– 814.
Sibuea, …... (2020). 3D Co-Culture of Hepatocyte, a Hepatic Stellate Cell Line, and Stem Cells  for  Developing  a  Bioartificial  Liver  Prototype. International  Journal  of Technology, Vol. 11 No. 5, 951–962. doi: 10.14716/IJTECH.V11I5.4317. Suryani, D., …... (2013). Comparison of Fetal Bovine Serum and Platelet-Rich Plasma on  Human  Lipoaspirate-Derived  Mesenchymal  Stem  Cell  Proliferation. Medical Journal of Indonesia, Vol. 22 No. 3, 146–151. doi: 10.13181/mji.v22i3.583. Wahyuningsih,  K.A.,  …...  (2020).  Effect  of  Ascorbic  Acid  on  Morphology  of  Post- Thawed Human Adipose-Derived Stem Cells. Stem Cell Investigation, Vol. 7. doi: 10.21037/sci-2020-011.
Zuk, P.A., ….. (2004). Multilineage Cells from Human Adipose Tissue: Implications for

## Jurnal Biology Science  Education 2024  imam rosadi, DKK
Cell-Based  Therapies. Tissue  Engineering, Vol.  7  No.  2,  211-228.  doi: 10.1089/107632701300062859.