## ISOLASI KARAKTERISASI BAKTERI
PENDEGRADASI ASAM MONOKLOROASETAT DARI TANAH
Vina Juliana Anggraeni 1 , Enny Ratnaningsih 2 , Zeily Nurachman 2
1 Sekolah Tinggi Farmasi Bandung, Jalan Soekarno Hatta no.754 Bandung, Indonesia
2 Institut Teknologi Bandung, Jalan Ganesha no.10 Bandung, Indonesia
*Email: kaylaraihana@gmail.com **Email: ennyratnaningsih1958@gmail.com
Diterima: 13 Maret 2017. Disetujui: 14 Juli 2017. Dipublikasikan: 30 Juli 2017
Abstract: Organohalogen  compounds  are  one  of  the  largest  pollutants  in  the  environment. Bioremediation  is  one  step  that  can  be  done  to  reduce  organohalogen  pollution.  Some  soil bacteria are known to have dehalogenase enzymes and are potentially used as organohalogen compound  bioremediators.  In  this  study,  isolation  of  soil  bacteria  was  able  to  degrade  the monoclhoroacetic  acid  (MCA)  and  characterize  the  growing  ability  of  these  bacteria  at various concentrations of MCA. The isolation result obtained 5 colonies of bacteria that can grow  on  medium  with  high  MCA  concentration that is  10mM.  PG3,  TJ4,  PW2,  CW1,  and PG2  bacteria  were  each  capable  of  releasing  chloride  ions  by  95.14%;  91.89%;  89.46%; 89.46;  88.81%  on  medium  containing  1mM  MCA  29.24%;  28.17%;  28.10%;  24.31%; 26.16%  on  5mM  MCA,  and  13.03%;  12.09%;  9.95%;  8.35%;  8.72%  at  10mM  MCA.  It appears that organohalogen degradation occurs more effectively in medium with low MCA concentrations,  and  PG3  bacteria  have  the  highest  ability.  The  growth  of  the  five  bacteria reached the stationary phase at 18-24 hours with OD600 of 0.3-0.4.
Keywords: monoclhoroacetic acid, biodegradation of organhalogen compounds, isolation of soil bacteria
Abstrak: Senyawa  organohalogen  merupakan  salah  satu  polutan  terbesar  di  lingkungan. Bioremediasi  merupakan  salah  langkah  yang  dapat  dilakukanuntuk  mengurangi  polusi organohalogen.  Beberapa  bakteri  tanah  diketahui  memiliki  enzimdehalogenase  dan berpotensi  digunakan  sebagai  bioremediatorsenyawa  organohalogen.  Pada  penelitian  ini, dilakukan isolasi terhadap bakteri tanah yang mampu mendegradasi Asam Monokloroasetat (MCA)  dan  mengkarakaterisasi  kemampuan  tumbuh  bakteri-bakteri  tersebut  pada  berbagai konsentrasi  MCA.  Hasil  isolasi  didapatkan5  koloni  bakteri  yang  mampu  tumbuh  pada medium dengankonsentrasi MCA yang tinggi yaitu 10mM.BakteriPG3, TJ4, PW2,CW1, dan PG2  masing-masing  mampu  melepaskanion  klorida  sebesar  95,14%;  91,89%;  89,46%; 89,46;  88,81%  pada  medium  yang  mengandung1mM  MCA  29,24%;28,17%;  28,10%; 24,31%; 26,16%pada 5mM MCA,  dan  13,03%; 12,09%; 9.95%; 8,35%; 8,72%pada 10mM MCA.  Terlihat  bahwa  degradasi  organohalogenterjadi  lebih  efektif  pada  medium  dengan konsentrasi MCA rendah, dan bakteri PG3 mempunyai kemampuan yang
tertinggi.Pertumbuhan  kelima  bakteri  mencapai  fasa  stationer  pada18-24  jam  denganOD 600 sebesar 0.3-0.4.
Kata  Kunci :  asam  monokloroasetat,  biodegradasi  senyawa  organhalogen,  isolasi  bakteri tanah

## PENDAHULUAN
Organohalogen  digunakan  secara luas  di  bidang  industri  sebagai  pelarut, pestisida,  senyawa  intermediet  dalam sintesis  senyawa  kimia,  aditif  bahan bakar, dan digunakan sebagai bahan pada cat.  Organohalogen  bersifat  persisten, toksik dan  tidak mudah didegradasi oleh mikroorganisme.  Asam  Monoklorasetat (MCA) merupakan salah satu organohalogen  yang  digunakan  sebagai herbisida.  Pada  tahun  2010  produksi MCA  dunia  mencapai  706.000  ton, setengahnya diproduksi oleh negara Cina (Malveda,  2011  dalam  Fajriah,  2013). Senyawa  ini  bila  terlepas  ke  lingkungan tanpa pengendalian akan sangat berbahaya  bagi  kesehatan  karena  dapat menghambat  proses  glukoneogenesis  di organ  hati  (Sakai  et  al,  2005).  Oleh karena  itu,  diperlukan  upaya  untuk mendegrasi  MCA  agar  efek  toksik  dan persistennya dapat dikurangi.
Penanganan  secara  biologi  dengan memanfaatkan mikroorganisme merupakan langkah aman untuk mengatasi  pencemaran  organohalogen. Metode  ini  memiliki  berbagai  kelebihan
yaitu  cukup  mudah  dilakukan  dan  relatif murah. Mikroorganisme memiliki kemampuan  adaptasi  yang  baik  karena mampu  menghasilkan  enzim  tertentu yang dapat mengubah dan meminimalisasi kandungan organohalogen di lingkungan.
Mikroorganisme  yang  mampu  hidup dalam medium yang mengandung organohalogen  biasanya  memiliki  enzim dehalogenase untuk memutuskan halogen dari  organohalogen  (Hardman,  1991 dalam Soetarato, 1997). Enzim dehaloganase  adalah  enzim  yang  mampu memutuskan halogen dari senyawa organohalogen (Fetzner,1999).
Penelitian sebelumnya, menunjukkan bahwa beberapa bakteri mampu mendegradasi organohalogen dan
menghasilkan  dehalogenase  antara  lain adalah genus Pseudomonas , Rhodococcus ,
Alcaligenes , dan Hyphomicrobium (Slater,  1994).  Bakteri ini mudah diisolasi karena organohalogen banyak  terdapat  di  lingkungan.  Senyawa ini  digunakan  bakteri  sebagai  sumber karbon dan energi.
Tanah  merupakan  media  dimana bakteri  dapat  tumbuh  dengan  baik. Dalam  tanah  yang  terpapar  polutan organohalogen dimungkinkan akan hidup bakteri yang mampu mendegradasi senyawa  tersebut.  Bakteri  yang  tidak mampu  mendegradasi  organohalogen yang  bersifat  toksik  tidak  akan  mampu bertahan  hidup  di  lingkungan  toksik.
Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi  bakteri  pendegradasi  MCA dari tanah dan mengkarakterisasi kemampuan  tumbuh  pada  media  yang mengandung variasi konsentrasi organohalogen.

## METODE

## Penyiapan Sampel Tanah
Sampel tanah diambil dari kedalaman ±10  cm  kemudian  dimasukkan  dalam wadah  bersih  yang  terlebih  dahulu disterilkan dengan alkohol. Kondisi tanah yang  diambil  tidak  terlalu  kering  dan tidak terlalu basah.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  untuk pembuatan  medium  minimal  adalah KH 2 PO 4 ,  Na 2 HPO 4 ,  MgSO 4 .7H 2 O,    dan NH 4 SO 4 ,  sedangkan  untuk  media  Luria Bertani  (LB)  adalah  tripton,  dan  ekstrak ragi. Bakto Agar untuk pembuatan media
padat.  Untuk  sumber  karbon  pada  media minimal digunakan Asam Monokloroasetat. Untuk uji biodegradasi, digunakan  asam  merkuri  thiosianat, etanol  p.a,  ferri  ammonium  sulfat,  NaCl, dan  asam  nitrat.  Untuk  pewarnaan  gram digunakan  kristal  violet,  larutan  lugol, alkohol, dan safranin.

## Isolasi Bakteri dari Tanah
Sebanyak 0.5 gram tanah dimasukkan  dalam  erlenmeyer  50  ml berisi  10ml  minimal  medium  cair  yang mengandung  anti  jamur  dan  MCA dengan  konsentrasi  1mM.  Ditumbuhkan selama  24  jam  di  inkubator  bergoyang dengan kecepatan 150 rpm di suhu 37°C, setelah  ditumbuhkan  selama  24  jam kemudian  diencerkan  10 -3 sampai  10 -6 , di spread ke  minimal  media  agar  padat yang mengandung 1mM MCA, diinkubasi  selama  3-5  hari  pada  suhu 37°C.Bakteri  yang  tumbuh  kemudian dipilih  dan  dimurnikan  dengan  teknik goresan.

## Uji  Kualitatif  Ketahanan  Tumbuh Bakteri
Bakteri  yang  tumbuh  hasil  pada media  Isolasi  dipilih  beberapa  koloni kemudian  dimurnikan  dan  ditumbuhkan pada media uji ketahanan tumbuh. Media uji  ketahanan  tumbuh  adalah  media
minimal  padat  yang  ditambah  MCA dengan  konsentrasi  akhir  5,  10,  dan  20 mM  yang  juga  ditambahkan  ekstrak  ragi sebanyak  0.1%.  Media  uji  ditumbuhkan di  inkubator  dengan  suhu  37°C  selama 24-48  jam.  Pemindahan  isolat  bakteri dilakukan dengan teknik goresan menggunakan  kawat  ose.  Bakteri  yang mampu  tumbuh  dikonsentrasi  tertinggi dipilih untuk uji selanjutnya.
Uji

## Kualitatif
Biodegradasi

## Organohalogen
Bakteri  terpilih  ditumbuhkan  di media  minimal  padat  yang  ditambah MCA dengan konsentrasi tertinggi dimana  bakteri  mampu  hidup,  yang  juga ditambah  ekstak  yeast  1%  dan  Brom timol  Biru  (BTB)  sebagai  indikator biodegradasi.  Media  uji  ditumbuhkan  di inkubator  dengan  suhu  37°C  selama  24- 48 jam.

## Uji  Kuantitatif  Ketahanan  Tumbuh
Bakteri  terhadap  Variasi    Konsentrasi MCA
Bakteri  terpilih  ditumbuhkan    dalam media  minimal  yang  ditambah  yeast selama 16-18 jam di inkubator bergoyang pada suhu 37°C sebagai starter. Sebanyak 10  %  starter  ditumbuhkan  kembali  di media  minimal  yang    tidak  mengandung MCA  dan  yang  mengandung  MCA dengan  konsentrasi  akhir  1mM  MCA,
5mM,  10mM,  15mM,  dan  20  mM. Bakteri  ditumbuhkan  selama  24  jam kemudian diukur OD 600 di jam ke-24.
Uji Kuantitatif Kemampuan

## Biodegradasi  Bakteri  terhadap  Variasi Konsentrasu MCA
Bakteri    terpilih  ditumbuhkan    dalam media  minimal  yang  ditambah  yeast selama 16-18 jam di inkubator bergoyang pada suhu 37°C sebagai starter. Sebanyak 10  %  starter  ditumbuhkan  kembali  di media  minimal  yang    yang  mengandung MCA  dengan  konsentrasi  akhir  1mM MCA,  5mM,  dan  10mM.  Bakteri ditumbuhkan  selama  24  jam.  Setelah  24 jam  diukur  kemampuan  biodegradasi  di jam  ke-24  dengan  metode  bregman  dan sanik.

## Uji  Biodegradasi  organohalogen  oleh Bakteri  dengan  metode  Bregman  dan
Sanik
Sebanyak  250  μl  kultur  segar dipindahkan  ke  dalam  effendorf  steril kemudian  disentrifugasi  pada  10000  xg selama 10 menit hingga didapatkan pelet dan  supernatan.  200  μl  supernatan diambil  dimasukkan  ke  dalam  tabung effendorg  baru  dan  direaksiakan  dengan dengan  400  µl  Hg(SCN) 2 (0,1%dalam etanol  p.a)dan  divorteks  selama  5  detik. Kemudian  disentrifugasi  pada  10000  xg selama  2  menit  hingga  didapatkan  pelet
dan  supernatan.  Supernatan  dan  pelet dipisahkan  dan  kedalam  supernatan ditambahkan  400  μL  Fe(NH4)(SO4)2 (0,25M  dalam  9M  HNO3)  larutan tersebut  diukur  dengan  spektrofotometri uv  vis  pada  λ=460  nm.  Blanko  yang digunakan dalam pengukuran biodegradasi  adalah  medium  cair  tanpa adanya penumbuhan bakteri.Hasil pengukuran panjang gelombang kemudian  dimasukkan  dalam  persamaan dari  kurva  standar  NaCl.  Dan  didapat konsentrasi  ion  klorida  terlepas  hasil biodegradasi organohalogen oleh bakteri.

## Kurva  Pertumbuhan  Bakteri  dalam
Minimal  Media    yang  mengandung  10 mM  MCA
Bakteri  ditumbuhkan    dalam  media minimal yang ditambah yeast selama 16- 18 jam di inkubator bergoyang pada suhu 37°C  sebagai  starter.  Sebanyak  10  % starter    dipindahkan  secara  aseptik  ke dalam labu erlenmeyer yang mengandung  50  ml  MSM  cair  dengan penambahan MCA 10 mM. Ditumbuhkan pada  pada  suhu  37˚C    150  rpm  dan
diukur OD 600
pada ke 0,1,2,4,6,9,12,15,18,21,24,dan 32 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Isolasi  bakteri  dari  tanah dilakukan  di  minimal  media  cair  yang
mengandung  MCA  menunjukkan  adanya beberapa  bakteri  yang  tumbuh  pada beberapa sampel tanah. Pemakaian MCA sebagai  satu-satunya  sumber  karbon merupakan selektifitas untuk mendapatkan bakteri  yang hanya mampu tumbuh  dengan  menggunakan  MCA sebagai  sumber  karbon. Kemampuan menggunakan  MCA  sebagai  sumber  karbon karena  bakteri  tersebut memiliki  enzim dehalogenase (Fetzner, 1994). Enzim dehalogenase adalah enzim yang mengkatalisis pelepasan ion klor yang toksik. Putusnya ion klor MCA akan mempermudah bakteri  menggunakan  sumber  karbon  untuk dikatabolisme menjadi sebagai sumber energi bagi sel.
Penggunaan  bahan  zat  anti  jamur pada saat isolasi bertujuan untuk menghentikan  pertumbuhan  jamur  yang ada  di  tanah.  Selain  bakteri,  tanah  juga merupakan media tumbuh bagi mikroorganisme  lain  dan  salah  satunya adalah jamur.
Sampel  tanah  yang  diisolasi  berasal dari  berbagai  tempat  dengan  latar belakang penggunaan senyawa organohalogen. Tanah purwakarta diambil dari tanah perkebunan karet yang diketahui memakai pentaklorofenol sebegai  pestisida  yang  digunakan  pada perkebunan  tersebut,  tanah  padalarang dan ciwidey diambil dari tanah perkebunan  teh,  untuk  kedua  sampel  ini
belum  diketahui  jenis  paparan  senyawa organohalogennya,  sampel  tanjungsari dan  pangalengan  merupakan  sampel tanah  dari  perkebunan  sayur  yang terbiasa  kena  paparan  pestisida  DDT. Pengambilan sampel dari beberapa tempat  dimaksudkan  untuk  mendapatkan keanekaragam bakteri yang dapat mendegradasi Asam Monoklorasetat berdasarkan  latar  belakang  paparan senyawa  organohalogen  yang  sering mengenai sampel tanah.
Hasil penumbuhan bakteri menunjukkan  bahwa  tanah  Purwakarta, Tanjungsari,  Pangalengan  dan  Ciwidey memiliki  bakteri  yang  mampu  tumbuh pada minimal media yang hanya mengandung  1  mM  MCA  sebagai sumber  karbon.  Hasil  isolasi  dari  tanah Padalarang  tidak  menunjukkan  adanya bakteri yang tumbuh.
Bakteri  yang  mampu  tumbuh  pada minimal  media  yang mengandung 1 mM dimungkinkan  karena  bakteri  mengenali MCA dan mampu bertahan hidup dengan menggunakan  MCA  sebagai  sumber karbon. Bakteri  yang hidup dalam media MCA memiliki kemampuan untuk menghasilkan enzim dehalogenase sehingga  mampu  memutuskan  ikatan antara  senyawa  asam  monokloroasetat dengan ion halidanya sehingga menghasilkan  ion  halida  bebas  dan
senyawa  asam  hidroksi.  Pada  tanah Padalarang  tidak  terdapat  bakteri  yang mampu  untuk  menjadikan  MCA  sebagai sumber karbon dan tidak memiliki enzim dehalogenase  yang  mampu  memutuskan ikatan  senyawa  asam  monokloroasetat dengan ion halidanya. Hal ini menunjukkan  bahwa  bakteri  yang  tidak memiliki  kemampuan  untuk  menjadikan MCA sebagai satu-satunya sumber karbon  tidak  mampu  hidup  dalam  media MCA. Oleh sebab itu digunakan minimal media ini untuk  menyeleksi  bakteri  yang diinginkan.

## Uji  Kualitatif  Ketahanan  Tumbuh Bakteri
Dari  hasil  isolasi  di  dapat  banyak koloni  tunggal.  Pemilihan  bakteri  yang mampu  bertahan  hidup  pada  medium yang  mengandung  MCA  tertinggi  perlu dilakukan  sebagai  seleksi  bakteri  yang akan  dikarakterisasi  lebih  lanjut.  Dalam hal  ini  media  uji  merupakan  minimal medium  dengan  penambahan  MCA dengan  konsentrasi  akhir  5,  10  dan  20 mM. Pada media uji ini ditambah sumber nutrisi  lain  yaitu  berupa  ekstrak  ragi 0.1%.  Penambahan  ekstrak  ragi  ini disebabkan  jumlah  koloni  ang  sudah menjadi  koloni  tunggal  ternyata  tidak dapat  berkembang  biak    dalam  minimal medium  yang  hanya  mengandung  MCA
sebagai sumber karbon sehingga diperlukan  nutrisi  lain  agar  mampu menunjang pertumbuhannya. Keberadaan sumber  karbon  lain  pada  medium berfungsi  sebagai:  1)Tenaga  pereduksi bagi  degradasasi  senyawa  senobiotik;  2) Menyokong  pertumbuhan  sel;  3)Donor elektron  bagi  degradasi  substrat  non- pertumbuhan;  4)Meningkatkan  viabiltas sel;  5)Mengurangi  toksisitas  senyawa senobiotik  dan  hambatan  pertumbuhan senyawa  senobiotik  terhadap  sel(Saez  & Rittman,  1991;  Topp  (et  a)l,  1988;  Fava (et al), 1995;  dalam Fajriah,2013).
Dari  hasil  uji  kualitatif  didapat bahwa  konsentrasi  MCA  tertinggi  yang masih  mampu  ditoleransi  oleh  bakteri yaitu  pada  konsentrasi  10  mM.  Pada konsentrasi  20  mM  bakteri  sudah  tidak mampu tumbuh. Dengan kenaikan konsentrasi  MCA  terlihat  adanya  seleksi bakteri yang mampu tumbuh. Pada media yang  mengandung  5mM  MCA,  bakteri yang mampu hidup mulai berkurang. dan semakin  berkurang  pada  konsentrasi  10 mM, sedangkan pada konsentrasi 20 mM tidak terlihat adanya bakteri yang mampu tumbuh.  Naiknya  konsentrasi  MCA menjadi toksik bagi bakteri yang awalnya MCA tersebut merupakan sumber karbon namun dengan bertambahnya konsentrasi,  MCA  tidak  lagi  menjadi sumber  karbon  melainkan  toksik  yang
menyebabkan  bakteri  tidak  mampu tumbuh.  Dari  hasil  uji  ini,  isolat  yang diuji  diberi  kode  untuk  memudahkan pengujian berikutnya.
Gambar 1. Pertumbuhan isolat bakteri dalam medium LB yang mengandung 10 mM MCA dan Minimal Medium yang mengandung 10 mM

## MCA
Pada  Gambar  1  terlihat  bahwa  5 bakteri yang mampu bertahan hidup pada medium  minimal  yang  mengandung MCA  10  mM  dan  medium  LB  yang mengandung  10  mM.  Bakteri  tersebut adalah  PG2,  TJ4,  PG3,  PW2,  dan  CW1. Pada  medium  LB  pertumbuhan  bakteri lebih terlihat tegas dibandingkan pertumbuhan pada medium minimal. Hal ini  disebabkan  karena  pada  minimal medium  sumber  karbon  yang  digunakan adalah MCA sedangkan pada LB didapat sumber karbon lain. Bakteri yang mampu hidup pada medium LB yang mengandung  MCA  konsentrasi  10  mM menunjukkan  bahwa  bakteri  memiliki aktivitas  untuk  biodegradasi  terhadap MCA.  Konsentrasi  MCA  yang  tinggi
LB + 10
mM
MCA
Minimal Media + 10 mM MCA
dapat  juga  menjadi  toksik  untuk  bakteri yang  memiliki  enzim  dehalogenase, namun  dengan  tetap  hidup  maka  bakteri tersebut  dapat  memproses  MCA  agar tidak toksik baginya.

## Uji  Kualitatif  Biodegradasi  MCA  oleh Bakteri
5  (Lima)  isolat  terpilih  diduga mampu mendegradasi MCA dan menghasilkan  ion  klorida  bebas.  Ion klorida  bebas  ini  dapat  dideteksi  dengan indikator  Brom  Timol  Biru  (BTB).
Perubahan  warna    media  terjadi  karena pada  media  terdapat  ion  klorida  bebas yang  dilepaskan  oleh  bakteri,  sehingga dengan  keberadaan  ion  klorida  ini mengubah  pH  media  menjadi  asam  dan juga  mengubah  warna  indikator  BTB menjadi kuning (Strotmann & Roschenthaler, 1987; Soetarato, 1997;) . Dari hasil  penelitian  terlihat  bahwa  kelima bakteri  mampu  mendegradasi  MCA karena  kelima  bakteri  menghasilkan warna kuning pada media (Gambar 2).
Gambar 2. Uji Kualitatif Biodegradasi MCA dengan Indikator Brom Timol Biru

## Pewarnaan Gram
Hasil  pewarnaan  gram  menunjukkan
4  bakteri  hasil  isolasi  merupakan  bakteri
gram negatif dan satu bakteri merupakan Gram positif. A PG2 TJ4 PG3 Pw2 CW1
Gambar 3. Hasil Pewarnaan Gram terhadap Lima Bakteri Hasil Isolasi
Uji  Kuantitatif  Ketahanan  Tumbuh Bakteri  pada  Berbagai  Konsentrasi MCA
Hasil  uji  kualitatif  dapat  dilihat  pada gambar 4.
Gambar 4 . diagram Ketahanan Tumbuh Isolat

## Bakteri terhadap variasi MCA
Pada  0  mM  MCA  yaitu  tanpa penambahan  MCA,  dapat  dijadikan standar  uji  kuantitatif  kemampuan  hidup
dari  bakteri.  Kemampuan  hidup  isolat bakteri  hanya  mampu  mencapai  OD 600 maksimal  di  0.5  tidak  mencapai  1. Dengan  penambahan  MCA,  OD 600 dari bakteri semakin berkurang sesuai dengan banyaknya  penambahan  MCA.  Semakin banyak  MCA  yang  ditambahkan  maka kemampuan hidupnya semakin kecil.Pada konsentrasi  MCA 15 mM  dan 20  mM  sebagian  bakteri  ada  yang  masih dapat  bertahan  hidup  dengan  kenaikan OD 600 yang  kecil  dan  sebagian  ada  yang mengalami penurunan OD 600 yang
menandakan bahwa bakteri tidak mampu tumbuh  pada  media  minimal  dengan penambahan konsentrasi
tersebut.
Semakin berkurangnya kemampuan hidup  dengan  bertambahnya  konsentrasi MCA  yang  ditambahkan  dikarenakan bakteri sudah tidak mampu lagi menjadikan MCA sebagai sumber karbon
OD 600
PG2 TJ4 PG3 PW2 CW1
dan  MCA  sudah  bersifat  toksik  bagi bakteri  sehingga  bakteri  mengalami penurunan kemampuan tumbuh.
Pada  konsentrasi  0;  1;  5  mM penambahan  MCA  terlihat  pola  urutan kemampuan  tumbuh  yang  relatif  sama. Urutan  kemampuan  hidup  isolat  bakteri dari yang tertinggi ke yang terendah yaitu TJ4,  PW2.  CW1,  PG3,  dan  PG2.  Untuk kemapuan  hidup  di  10  mM,  urutannya tidak  terlihat  jelas.  Semua  bakteri  relatif memiliki  kemampuan  hidup  yang  sama pada konsentrasi tersebut.
Pada
konsentrasi 10 mM bakteri lebih menyiapkan bagaimana mengatasi ketoksikan MCA
daripada untuk
berkembang biak, hal ini yang menyebabkan  kemampuan  bakteri  relatif sama dengan bakteri lainnya.

## Uji  Kuantitatif  Biodegradasi  MCA  oleh Bakteri
Hasil  uji  kualitatif  dapat  dilihat  pada Gambar  5. Pada  gambar  5  terlihat    lebih dari  80%  MCA  mampu  didegrasi  pada konsentrasi MCA 1 mM. sedangkan pada konsentrasi  MCA  5  mM,  20%  lebih MCA mampu degradasi dan pada 10 mM MCA,  sekitar  8%  lebih  MCA  yang mampu  didegradasi  bakteri.  Urutan kemampuan  biodegradasi  ini  dari  yang tinggi  ke  rendah  yaitu:  PG3,  Tj4,  PW2, PG2,  dan  CW1.  Dari  data  biodegradasi
ini dapat disimpulkan bahwa kemampuan degradasi  efektif  hanya  sekitar  0.8  mM per bakteri.
Gambar 5. Kemampuan Biodegradasi Isolat Bakteri terhadap Variasi konsentrasi MCA
Kurva  Pertumbuhan  Bakteri pada Minimal  Media  yang  mengandung  10 mM MCA
Kurva  pertumbuhan  bakteri  pada minimal  media  yang  mengandung  10 mM  MCA  dapat  dilihat  pada  Gambar  6. Dari kelima bakteri, 3  bakteri yaitu PG2, TJ4 dan PG3 memiliki kemampuan yang relatif  sama,  fase  lag  lebih  cepat dibanding bakteri lainnya. Lebih cepatnya  bakteri-bakteri  ini  dibanding bakteri  lainnya  dapat  dimungkinkan karena  bakteri  ini  berasal  dari  daerah yang  terpapar  senyawa  organohalogen yang toksik dan persisten sehingga waktu
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 1 5 10 PG2 TJ4 PG3 PW2 CW1 % ko n sentrasi io n klo rid a te rlep as konsentrasi MCA (mM)
adaptasi  bakteri-bakteri  ini  lebih  cepat dibanding bakteri yang lainnya.
Gambar 6. Pertumbuhan Isolat Bakteri pada minimal Media + 10 mM
Sementara  itu,  untuk  bakteri  PW2 dan  PW3  mengalami  fase  lag  yang  lebih lama dari ketiga bakteri lainnya.
Lamanya  fasa  lag  ini  kemungkinan berhubungan  dengan  proliferasi  populasi yang  kecil,  dan  adanya  senyawa  toksin (Alexander,  1999  dalam  Fajriah  2013). Telah  pula  dilaporkan  bahwa  populasi mikrobia  mampu  beradaptasi  untuk menggunakan  senyawa  yang  persisten sebagai  sumber  karbon  dan  energi. Adaptasi  tersebut  dapat  disebabkan  oleh seleksi strain mutan yang telah memperoleh kemampuan aktivitas metabolik  yang  baru  atau  perubahan spesifitas enzim.
Hubungan emampuan hidup dan
Kemampuan Biodegradasi Isolat
Bakteri
Isolat  TJ4  memiliki  kemampuan tumbuh  dan  biodegradasi  yang  tinggi. Isolat PG3 dan PG2 memiliki kemampuan  tumbuh  rendah  namun kemampuan biodegradasinya tinggi. Isolat PW2 dan CW1 memiliki kemampuan tumbuh tinggi namun kemampuan biodegradasinya rendah.
Isolat yang memiliki kemampuan tumbuh tinggi  dan  kemampuan  biodegradasi tinggi  dimungkinkan  karena  bakteri tersebut  sudah  dapat  beradaptasi  dengan senyawa  toksik  sehingga  daya  hidupnya tinggi  dan  memiliki  enzim  yang  lebih banyak  sehingga  mampu  mendegradasi lebih  banyak.  Sedangkan  untuk  bakteri yang  kemampuan  hidup  rendah  namun kemampuan biodegradasi tinggi dimungkinkan  karena  fase  adaptasi  dan fase  log  dari  bakteri  tersebut  cepat sehingga  kemampuan  hidup  menjadi lebih rendah namun memiliki enzim yang lebih  tinggi  sehingga  biodegradasinya tinggi. Sementara itu, untuk bakteri  yang memiliki kemampuan hidup tinggi namun biodegradasi rendah dimungkinkan  karena  bakteri  tersebut jarang  terkena  paparan  senyawa  toksik sehingga kemampuan untuk biodegradasi belum terlalu adaptatif  untuk degradasi.
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 Kurva Pertumbuhan Isolat Bakteri PG2 TJ4 PG3 konsentrasi MCA (mM) OD 600

## KESIMPULAN
Dalam  penelitian  ini  telah  berhasil diisolasi  5  bakteri  tanah  yang  mampu mendegradasi  MCA  baik  dalam  minimal medium maupun dalam medium LB yang mengandung  MCA.  Konsentrasi  MCA tertinggi  yang  masih  dapat  ditoleransi dan  didegradasi  adalah  10  mM.  Bakteri TJ4  merupakan  bakteri  Gram  positif sedangkan  PG2,  PG3,  PW2,  dan  CW1
merupakan Bakteri Gram negatif.
Bakteri TJ4 memiliki kemampuan tumbuh  dan  biodegradasi  yang  tinggi, Bakteri PG3 dan PG2 memiliki kemampuan  tumbuh  rendah  namun kemampuan  biodegradasinya  tinggi,  dan bakteri PW2 dan CW1 memiliki kemampuan tumbuh tinggi namun kemampuan biodegradasinya rendah.

## DAFTAR PUSTAKA
Bergmann,  J.  G.,  dan  Sanik,  J.,  (1957), Determination  of    Trace  Amounts  of Chlorine  in  Naptha, Anal.  Chem. , 29(2), 241–243.
Fajriah, S., (2013), Isolasi dan
Karakterisasi Haloacid Dehalogenase dari  Bacillus  cereus  Strain  Lokal, Institut Teknologi Bandung.
Fetzner,  S.,  dan  Lingens,  F.,  (1994),
Bacterial Dehalogenases: Biochemistry, Genetics, and
Biotechnological Applications, Microbiol. Rev. , 58 (4), 641–685. Fetzner, S., (1999), Bacterial
Dehalogenation, Application
Microbiol Technol, 50, 633-657.
Sakai,  A.,  Shimizu,  H.,  Kono,  K.,  dan Furuya, E., (2005), Monochloroacetic Acid Inhibits Liver Gluconeogenesis by Inactivating
Glyceraldehyde-3- phosphate  Dehydrogenase.  Osaka medical  college,  japan.  Chem.  Res. Toxicol., 18, 277-282
Slater, J. H., (1994), Microbiol Dehalogenation of Haloaliphatic
Compounds, Biochemistry of Microbial Degradation , 379–421.
Soetarato,  E.S.  1997.  Uji  kemampuan isolat  bakteri  tanah  vulkanik  untuk mendegradasi hidrokarbon terhalogenasi. Biologi. 2. 247-263.