PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF ENDOPHYTIC BACTERIA OF GEDI LEAVES (Abelmoschus manihot L.) ON THE GROWTH OF Escherichia coli AND Staphylococcus aureus
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI BAKTERI ENDOFIT DAUN GEDI ( Abelmoschus manihot L.) TERHADAP PERTUMBUHAN Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus
Rini Husain 1)* , Febby Ester Fany Kandou 1) , Johanis Jullian Pelealu 1)
1) Program Studi Biologi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *rinihusain21@gmail.com

## ABSTRACT
Endophytic bacteria are bacteria that live in plant tissues and colonize the intercellular spaces and areas of the vascular system. The presence of endophytic bacteria can stimulate plant growth, increase the utilization of  nutrients  and  produce  growth  hormones  and  increase  plant  resistance  to  various  pathogenic microorganisms. Endophytic bacteria can produce compounds that have the potential as antibacterial. This study  aimed  to  examine  the  antibacterial  activity  of  gedi  leaf  endophytic  bacteria  (Abelmoschus  manihot) against Escherichia coli and Staphylococcus aureus. The research method used is a laboratory experiment. The  results  of  the  isolation  obtained  four  isolates  of  endophytic  bacteria  from  A.  manihot.  The  results  of antibacterial research showed that the average inhibitory power of E. coli isolate NB1 was (33.8 ± 15.7) and S.  aureus  (42.8  ±  11.8)  was  included  in  the  very  strong  category  in  inhibiting  the  test  bacteria.  The  NB2 isolate  did  not  show  any  antibacterial  activity,  the  test  bacteria  S.  aureus  (5  ±  8.66)  was  in  the  moderate category. NB3 isolate showed moderate activity in inhibiting the test bacteria with an average (7.6 ± 6.63) E. coli and S. aureus (5.8 ± 5.20). NB4 isolate had high inhibitory power of E. coli (12.8 ± 2.92) classified as weak  and  S.  aureus  (12.6  ±  3.68)  strong  in  inhibiting  antibacterial  activity.  The  positive  control  was  very strong in inhibiting the antibacterial activity of E. coli (33.8±15.7) and S. aureus (42.8±11.8). The isolates obtained were of the genus Streptococcus, Aerococcus, Planoccocus, and Micrococcus.
Keywords : Endophytic bacteria, Gedi ( Abelmoschus manihot L.), Escherichia coli , Staphylococcus aureus .

## ABSTRAK
Bakteri endofit adalah bakteri yang hidup di jaringan tumbuhan dan menjajah ruang antar sel dan area sistem vaskular. Keberadaan  bakteri  endofit dapat  merangsang  pertumbuhan tanaman,  meningkatkan  pemanfaatan unsur hara dan menghasilkan hormon pertumbuhan dan meningkatkan ketahanan tanaman terhadap berbagai mikroorganisme patogen. Bakteri endofit dapat menghasilkan senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  antibakteri  dari  bakteri  endofit  daun  gedi  ( Abelmoschus manihot )  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Metode  penelitian  yang  digunakan  yaitu eksperimen  laboratorium.  Hasil  isolasi  memperoleh  empat  isolat  bakteri  endofit  dari A.  Manihot. Hasil penelitian antibakteri, besar daya hambat E. coli isolat NB1 didapatkan rata-rata (33,8 ± 15,7) dan bakteri S. aureus (42,8 ± 11,8) termasuk dalam kategori sangat kuat dalam menghambat bakteri uji. Pada isolat NB2 tidak  menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri,  bakteri  uji S.  aureus (5  ±  8,66)  termasuk  dalam  kategori sedang. Isolat NB3 menunjukan aktivitas sedang dalam menghambat bakteri uji dengan rata-rata (7,6 ± 6,63) E.  coli dan S.  aureus (5,8  ±  5,20).  Isolat  NB4  besar  daya  hambat  bakteri E.  coli (12,8  ±  2,92)  tergolong lemah  dan S.  aureus (12,6±3,68)  kuat  dalam  menghambat  aktivitas  antibakteri. Kontrol  positif sangat  kuat dalam  menghambat  aktivitas  antibakteri  pada E.  coli sebesar (33,8±15,7)  dan S.  aureus (42,8±11,8).  Isolat yang didapatkan merupakan genus Streptococcus , Aerococcus, Planoccocus, dan Micrococcus .
Kata kunci : Bakteri endofit, Gedi ( Abelmoschus manihot L.), Escherichia coli, Staphylococcus aures

## PENDAHULUAN
Gedi ( Abelmoschus manihot ) merupakan tanaman  yang  banyak  tumbuh  di  daerah  Tropis khususnya daerah Minahasa. Masyarakat Minahasa masih banyak memanfaatkannya sebagai  bahan  makanan  dan  diolah  untuk pengobatan  tradisional.  Hal  ini  mengakibatkan kearifan  lokal  daerah  tersebut  masih  tetap dipertahankan  dan  terjaga.  Tanaman  gedi  sendiri memiliki  senyawa  penting,  seperti  antioksidan, fenolik, flavonoid, steroid, alkaloid, efek antiinflamasi, efek antidiabetes, dan efek analgesik.  Daun  gedi  juga  memiliki  banyak manfaat  untuk  kesehatan.  Sehingga  banyak dimanfaatkan  untuk  penggunaaan  dalam  obat tradisional (Ipandi, 2016).
Bakteri endofit adalah bakteri yang hidup di  jaringan  tumbuhan  dan  menjajah  ruang  antar sel dan area sistem vaskular. Bakteri endofit dapat diisolasi dari akar, batang dan daun (Nursulistyarini  dan  Ainy,  2014).  Hallman  dan Berg  (2006),  mengemukakan  bahwa  tanaman akan  mendapat  manfaat  dari  keberadaan  bakteri endofit, seperti merangsang pertumbuhan tanaman, karena bakteri endofit dapat meningkatkan  pemanfaatan  unsur  hara  dan menghasilkan  hormon  pertumbuhan.  Bakteri endofit  juga  dapat  meningkatkan  ketahanan tanaman terhadap berbagai mikroorganisme patogen  dengan  cara  menginduksi  resistensi tanaman  yang  disebut  dengan Induced    Systemic Resistance (ISR) sehingga dapat menahan serbuan penyakit  tanaman.  Beberapa  jenis  bakteri  endofit juga  diketahui  mampu  menghasilkan  senyawa aktif yang bersifat antibiotik, antimalaria, antifungi  dan  antiimunosupresif  (Strobel dan Daisy, 2003).
Eksplorasi  untuk  menemukan  sumber antibiotik  alami  perlu  dilakukan  salah  satunya dengan  memanfaatkan  bakteri  endofit.  Sampai saat  ini,  kurangnya  laporan  penelitian  tentang bakteri  endofit  pada  tanaman  gedi  ( Abelmoschus manihot )  yang  ada  di  sekitar  Kota  Manado. Penelitian ini bertujuan untuk meng ( Abelmoschus Manihot ) terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus serta mengidentifikasi genus-genus isolat yang didapatkan.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitan
Penelitian  ini  dilakukan  mulai  Desember hingga April 2021. Pengambilan sampel dilakukan  di  Kelurahan  Bailang,  Kecamatan Bunaken,  Kota  Manado.  Isolasi  antibakteri dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi, Farmasi
Program  Studi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.

## Bentuk Penelitian
Metode  penelitian  yang  digunakan  yaitu eksperimen laboratorium.

## Alat dan Bahan
a. Alat Alumanium  foil ,  autoklaf,  batang  L,  botol semprot,  bunsen,  cawan  petri,  cool  box, erlenmeyer, gelas ukur, gunting, inkubator, jarum ose,  kaca  objek,  kapas,  kertas  label,  kompor listrik,  mikroskop, laminal  air  flow ,  mikropipet, mistar  berskala,  pengaduk  kaca,  pisau,  sarung tangan,  sentrifugasi,  tabung  reaksi,  timbangan analitik, plastik wrap.
b. Bahan Daun Abelmoschus  manihot ,  alkohol 70%,  natrium  hipoklorit,  air,  aquades,  bakteri  uji ( Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus ) diperoleh  dari  Laboratorium  Farmasi  UNSRAT, B2Cl2,  2H2O, bahan  pewarnaan  Gram  (safranin, iodin, kristal violet, dan alkohol), H2SO4 minyak imersi, Nutrient Agar (NA), Nutrient Broth (NB), larutan  Mc  Farland,  sumuran,  Ciprofloxacin, Nacl (Natrium Klorida), Lysine, Simmon’s Citrate Agar ,  TSIA  ( Triple  Sugar  Iron  Agar ),  SIM ( Sulfida  Indol  Motility ), Kalium  hidroksida , Media VP ( Voges Proskauer ) , Hidrogen Peroksida, Kovax Indol.

## Prosedur Penelitian Isolasi Bakteri Endofit
Daun  yang  digunakan  sebagai  sampel dicuci bersih dengan air mengalir dan disterilisasi permukaan  menggunakan  natrium  hipoklorit selama 2 menit, alkohol 70% selama 2 menit, dan dibilas  dengan  aquades  sebanyak  3  kali  untuk menghilangkan kotoran, maupun organisme epifit yang  menempel  pada  permukaannya.  Sampel kemudian dikeringkan di atas tisu steril. Sebanyak 10  gr  daun  dipotong-potong  sampai  halus, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  90  mL  NaCl 0,9%,  dilakukan  secara  aseptik.  Isolasi  bakteri endofit diawali  dengan  pengenceran  berseri  10 -2 - 10 -6 dan  dilanjutkan  dengan  metode Spread  plate (metode  cawan  sebar)  pada  media  NA  ( Nutrient Agar )  Setiap  perlakuan  dilakukan  pengulangan sebanyak  tiga  kali.  Selanjutnya  diambil  koloni- koloni  bakteri  yang  menampakkan  morfologi yang  berbeda.  Koloni  bakteri  yang  tumbuh dimurnikan  dengan  metode  streak  plate  pada media  NA  untuk  didapatkan  biakan  murni  atau
isolat  tunggal.  Karakterisasi  isolat  bakteri  endofit yang telah diperoleh, dilakukan melalui pengamatan secara makroskopis dan mikroskopis. Pengamatan mikroskopis dilakukan untuk melihat bentuk sel bakteri dan  kemurnian dari isolat serta pewarnaan Gram (Rori et al., 2020).

## Uji Potensi Antibakteri dari Isolat Bakteri Endofit
Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah Escherichia  coli yang  mewakili  bakteri  gram negatif dan Staphylococcus aureus yang mewakili bakteri  gram  positif.  Bakteri  uji  tersebut  telah distandarisasi  sesuai  dengan  standar  Mc  Farland 0,5  (setara  dengan  1,5x10 8 CFU).  Kultur  adaptasi dilakukan dengan menginokulasi bakteri ke dalam media  NB  lalu  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu  28-30ºC.  Koloni  bakteri  uji  yang  tumbuh dipindahkan  ke  dalam  media  NB  yang  baru kemudian  diinkubasi  pada  suhu  28-30ºC  sampai jumlah  sel  10 8 cfu/mL  (Simarmata et  al., 2007). Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan menginokulasikan bakteri uji ke permukaan media NA yang sudah memadat.
Sama  dengan  bakteri  uji,  isolat  endofit diadaptasi dengan menginokulasi bakteri ke dalam media  Nutrient  Broth  diinkubasi  selama  24  jam pada  suhu  28-30ºC.  Selanjutnya  uji  dilakukan dengan  metode  Difusi  menggunakan  sumuran. Secara  aseptik,  sumuran  sudah  disterilkan  dalam autoclave  dan  sebagai  kontrol  positif  digunakan Ciprofloxacin 1% yang dilarutkan dengan alkohol 95%  sedangkan    kontrol  negatif  digunakan akuades.  Hasil  tersebut  lalu  diinkubasi  selama  24 jam  pada  suhu  37ºC  (Sagita et  al., 2017).  Zona hambat  diukur  berdasarkan  diameter  zona  bening yang  terbentuk  di  sekitar  isolat  bakteri  endofit. Isolat  bakteri  endofit  yang  positif  menunjukkan zona  hambat  terhadap  patogen  dan  merupakan isolat potensial (Rori et al., 2020).

## Pewarnaan Gram
Pengamatan  dilakukan  dengan  1−2  tetes akuades  steril  diletakkan  di  atas  kaca  objek, koloni  bakteri  diambil  satu  ose  dari  media diletakkan  di  atas  akuades  steril  dan  disebarkan hingga  merata,  olesan  tersebut  dibiarkan  kering karena  udara.  Setelah  olesan  benar-benar  kering kemudian  kaca  objek  tersebut  dilalukan  beberapa kali  di  atas  nyala  api  sampai  kaca  objek  terasa agak  panas  bila  ditempelkan  pada  punggung tangan.  Olesan  ditetesi  dengan  larutan  kristal violet  dan  didiamkan  selama  satu  menit, kemudian  dicuci  menggunakan  akuades  dan dikeringkan.  Selanjutnya  fiksasi  ini  ditetesi
dengan  larutan  iodin  dan  dibiarkan  selama  1 menit,  kemudian  ditetesi  dengan  alkohol  dan dikeringkan.  Setelah  itu,  preparat  ditetesi  dengan larutan  safranin  dan  didiamkan  selama  30  detik, kemudian  dicuci  menggunakan  akuades  pada botol  semprot  dan  dikeringkan.  Sebelum  diamati dengan menggunakan mikroskop, preparat ditetesi minyak  emersi,  selanjutnya  diamati  dengan pembesaran  paling  kecil  hingga  pembesaran paling  besar  (1000X).  Indikasi  pewarnaannya yaitu  bakteri  gram  positif  akan  berwarna  violet dan  bakteri  gram  negatif  akan  berwarna  merah. Hasil  dicatat  dan  difoto  bentuk  dari  sel  bakteri tersebut  apakah  bulat  (coccus),  batang  (basil), maupun bergelombang (spiral) (Nurhidayati et al., 2015).

## Karakterisasi Uji Biokimia
Uji Motilitas Dilakukan  untuk  mengetahui  apakah bakteri  yang  diuji  dapat  melakukan  pergerakan atau tidak.
Uji Indol
Isolat  diinkulasi  ketabung    dengan  koloni biakan  yang  berasal  dari  uji  motility  masing- masing  agar  miring  dengan  cara  ditusuk  jarum sedalam 3 4 ⁄ bagian.  Diinkubasi  pada  suhu  37ºC selama  24  jam,  dengan  menambahkan  5  tetes reagen covac’s. Interpretasi hasil: Positif (+) yaitu membentuk  lapisan  cincin  berwarna  merah  pada permukaan  biakan  artinya  membentuk  indol; Negatif  (-)  yaitu  tidak  membentuk  lapisan  cincin berwarna merah pada permukaan biakan.
Uji H 2 S
Uji  ini  bertujuan  untuk  menentukan kemampuan  isolat  uji  dalam  memproduksi  H ₂ S melalui reduksi thiosulfat. Adanya endapan hitam menunjukkan terjadinya produksi H ₂ S.
Uji fermentasi karbohidrat
Menentukan  kemampuan  bakteri  dalam mendegradasi dan memfermentasikan karbohidrat tertentu dengan memproduksi asam atau asam dan gas.
Uji Lysine Uji ini digunakan untuk melihat kemampuan  bakteri  melakukan  dekarboksilasi dalam asam amino berupa lysine melalui produksi enzim dekarboksilasi. Reaksi Positif (+) ditunjukkan dengan perubahan warna pada media
menjadi  warna  lembayung  (violet),  sedangkan reaksi  Negatif  (-)  ditandai  dengan  warna  kuning media.
Uji VP ( Voges Proskauer ) Pengujian ini dilakukan dengan menambahkan alpha-naftol dan kalium hidroksida dengan  kaldu Voges  Proskauer yang  telah diinokulasi dnegan bakteri. Warna merah mudamenunjukkan  hasil  yang  positif,  sedangkan warna kuning-coklat atau tidak berwarna merupakan hasil negatif (Fallo dan Sine, 2016).
Uji Katalase Kultur sediaan diinokulasi kedalam tabung  reaksi  yang  berisi  nutrient  broth. Diinkubasi  pada  suhu  37ºC  selama  24  jam. Kedalam  kultur  biakan  ditambahkan  3  tetes  6% Hydrogen Peroksida . Kemudian hasil pengamatan dicatat  berdasarkan  pembentukan  gelembung udara  didalam  tabung  reaksi.  Bila  terjadi pembentukan  gelembung  udara,  maka  uji  ini bersifat positif (Liempepas, 2019).
Uji Sitrat
Satu  ose  dari  biakan  NA  miring diinokulasikan  ke  dalam  media Simmon’s  Citrat , lalu  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37ºC. Warna  biru  menunjukkan  hasil  positif,  warna hijau menunjukkan hasil negatif.

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Diukur  NaCl  0,9  %  sebanyak  2  ml menggunakan  gelas  ukur,  kemudian  dimasukkan dalam  tabung  reaksi.  Kemudian  tambahkan  NaCl 0,9 %  yang sudah di  ukur kedalam  tabung  reaksi yang  berisi  bakteri  uji,  kemudian  jarum  ose disterilkan  dengan  lampu  bunsen  kemudian bakteri  uji  diambil  dengan  jarum  ose  yang  sudah disterilkan  setelah  itu  diuji  kekeruhannya  dengan Mc. Farland (Lay, 1994).

## Pengamatan Pengukuran Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  1x24  jam  masa inkubasi. Daerah pada sekitar sumuran menunjukkan kepekaan mikroba terhadap antibiotik atau bahan antimikroba yang digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan diameter zona hambat atau zona bening. Diameter zona hambat diukur dalam satuan milimeter (mm) menggunakan  mistar  berskala  dengan  cara mengukur  jarak  dari  tepi  sumur  uji  ke  batas lingkungan  zona  hambat.  Diameter  zona  hambat tersebut  dikategorikan  kekuatan  daya  antibakteri (Davis dan Stout, 2009).

## Analisis Data
Data  penelitian  diambil  secara  deskritif menggunakan gambar dan tabel kemudian standar deviasi  di  analisis  menggunakan  program  Excel. Pada  perhitungan  diameter  zona  hambat  dihitung dengan cara  : 𝐀+𝐁 𝟐 − 𝟕
Ket: A: Diameter Horizontal (mm) B: Diameter Vertikal (mm) C: Diameter Pencandang (7 mm)

## HASIL DAN PEMBAHASAN Isolasi Bakteri Endofit
Bakteri  endofit  yang  diperoleh  kemudian dilakukan  dengan  pemurnian  untuk  memperoleh isolat  tunggal.  Isolat  yang  didapatkan  dimurnikan ke  dalam  media  NA  yang  baru  dengan  cara inokulasi bakteri berdasarkan perbedaan morfologi dari masing-masing cawan petri dengan metode ( Fourway streak) dan dilakukan berulang. Menurut Gandjar et al. (1992) isolasi adalah suatu cara yang dilakukan untuk memisahkan mikroorganisme tertentu dari lingkungan, sehingga diperoleh  biakan  murni  atau  biakan  yang  tidak tercampur dengan jenis yang lain. Pemisahan dan pemurnian  dari  isolat  bakteri  endofit  dilakukan dengan  metode  goresan  ( streak  method ),  jika masih terdapat campuran bakteri pada cawan petri tersebut  maka  pemisahan  dilakukan  kembali hingga memperoleh kultur murni.  Pemisahan atau isolasi  bakteri  endofit  ini  bertujuan  memisahkan koloni  dengan  morfologi  berbeda  untuk  dijadikan isolat.  Berdasarkan  hasil  isolasi  biakan  murni yang  didapatkan  dari  bakteri  endofit  daun A. manihot yaitu  empat  isolat  murni.  Hasil  isolasi bakteri endofit dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Isolasi Biakan Murni
Selanjutnya  isolat-isolat  endofit  yang telah  dikarakterisasi  secara  makroskopis  tersebut kemudian dikarakterisasi secara mikroskopis dan uji  biokimia.  Pengamatan  mikroskopis  dilakukan dengan pewarnaan gram untuk melihat bentuk sel bakteri  dan  kelompok  gram.  Pewarnaan  gram menggunakan  reagen  (alkohol,  kristal  violet, iodin, dan safranin).
Hasil pengamatan makroskopis diperoleh  empat  isolat  yaitu  isolat  dengan  kode NB1,  NB2,  NB3  dan  NB4  menunjukkan  bahwa
isolat-isolat  yang diperoleh dari daun A. manihot memiliki  morfologi  berwarna  putih,  kuning,  dan hampir  bening  (Tabel  1).Bentuk  isolat-isolat tersebut  bervariasi  dari  bentuk  bulat  ( circular ), bentuk  tak  teratur ( irregular ). Isolat-isolat tersebut  juga  menunjukkan  variasi  pada  tepinya mulai  dari  tepi  utuh  ( entire )  dan  ada  yang bergerigih  ( undulate ),  berlekuk  ( Lobate) ,  Isolat- isolat  tersebut  juga  menunjukkan  perbedaan  pada elevasi  atau  pemukaan  koloni  yang  dilihat  dari samping, rata ( flat ), dan timbul-datar ( raised ).

## Tabel 1. Deskripsi makroskopis dan mikroskopis  isolat bakteri endofit
Kode Isolat Makroskopis Mikroskopis Bentuk Permukaan Tepi Warna Bentuk sel  Kelompok Gram A. Circular Flat Entire Putih hampir bening Coccus Streptococcus B. Circular Flat Undulate Kekuning- kuningan Coccus Aerococcus C. Irregular Flat Lobate Keputihan-
putihan Coccus Planococcus D. Irregular Raised Undulate Kekuning-
kuningan Coccus Micrococcus

## Pewarnaan Gram
Hasil  pengamatan  secara  mikroskopis menunjukkan  semua  isolat  merupakan  bakteri Gram  Positif  dengan  bentuk  sel  berbentuk  bulat ( coccus ).    Bakteri   Gram  positif  pada  pewarnaan Gram  berwarna  ungu  disebabkan  kompleks  zat warna  kristal  violet-iodin  tetap  dipertahankan meskipun diberi larutan alkohol. Perbedaan
warna  antara  Gram  positif  dan  Gram  negatif dimana kelompok Gram positif mampu mempertahankan zat warna utama Gentian Violet (ungu kristal iodium), sehingga nampak berwarna ungu  saat  pengamatan  dikarenakan  struktur dinding  dengan  kandungan  peptidoglikan  yang tebal. yang mampuh mengikat zat warna dan tidak rusak  saat  dicuci  dengan  alkohol.  Pencucian dengan alkohol membuat dinding sel Gram positif mengalami  denaturasi  protein  yaitu  protein
menjadi  keras  dan  beku,  pori-pori  mengecil  dan permeabilitas  dinding  sel  berkurang  sehingga kompleks  kristal  violet  yang  berwarna  ungu dipertahankan  dan  bakteri  tetap  akan  berwarna ungu  (Napitupulu,  2018).  Sedangkan  Bakteri Gram  negatif  memiliki  struktur  dinding  sel dengan  kandungan  lipid  yang  tinggi  sehingga akan  berwarna  merah  karena  alkohol  akan membuat  pori-pori  dan  dinding  sel  akan membesar dan menyebabkan terlepasnya kompleks  kristal  violet  yang  diserap  sebelumnya. Sehingga  pada  saat  pewarnaan  kurang  dapat mempertahankan  zat  warna  utama  pada  saat dicuci  dengan  alkohol  (lipid  rusak  saat  dicuci
dengan  alkohol),  akibatnya  kelompok  bakteri  ini memberikan penampakan warna merah  safranin.

## Uji Biokimia
Karakterisasi dilakukan juga secara Biokimia.  Pengamatan  dengan  melihat  proses biokimia  bakteri  dilakukan  dengan  beberapa  uji yaitu motilitas, produksi indol, katalase, uji Voges Proskauer (VP), uji lysine , fermentasi karbohidrat, Triple  Sugar  Iron  Agar (TSIA), katalase,  dan Uji  Simmon’s  Citrate Agar (SCA).
Identifikasi  bakteri  mengacu  pada  buku Bergey’s Manual  Determinative  of  Bacteriology (Holt et al., 1994). Hasil  karakterisasi  secara  biokimia dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Karakterisasi berdasarkan uji biokimia isolat bakteri endofit
Uji Biokimia Kode Isolat NB1 NB2 NB3 NB4 Motilitas + + + + Produksi Indol - - - - H 2 S - + + + Fermentasi Karbohidrat - + + + Lysine - - - - VP - - - - Katalase + + + + Sitrat + + + + Genus Streptococcus Aerococcus Planoccocus Micrococcus
* (+) = Ada perubahan   (-) = Tidak ada perubahan
Uji  Potensi  Antibakteri  dari  Isolat  Bakteri Endofit Uji aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli menggunakan metode difusi sumuran. Metode ini dipilih  karena  cepat,  mudah,  namun  tetap memberikan  hasil  yang  diharapkan.  Prinsip  dari metode  difusi  sumuran  ialah  terbentuknya diameter zona hambat disekitar lubang yang telah
diresapi  larutan  uji  setelah  media  agar  yang ditanami  bakteri  dan  diinkubasi  selama  1x24  jam pada  suhu  37 o C.  Besar  kecilnya  diameter  zona hambat  diukur  dalam  satuan  millimeter  (mm) menggunakan  mistar berskala dengan cara diukur zona bening cakram (Davis dan Stout, 2009).
Terbentuknya  zona  bening  di  sekitar koloni  isolat  bakteri  endofit  mengindikasikan kemungkinan  adanya  senyawa  antibakteri  yang mampu membunuh atau menghambat
pertumbuhan  bakteri  patogen  (Tabel  3).  Menurut Simarmata et  al. (2007),  Bakteri  endofit  yang diisolasi  menunjukkan  aktivitas  penghambatan terhadap bakteri patogen ditandai dengan terbentuknya  daerah  bening  di  sekitar  koloni bakteri endofit (Purwanto et al., 2014).

## Tabel 3. Aktivitas antibakteri pada bakteri
S. aureus (mm) Sampel Ulangan U1 U2 U3 NB1 11,5 mm 15 mm 13 mm NB2 - - 15 mm NB3 7,5 mm 10 mm - NB4 8,5 mm 15,5 mm 14 mm K (+) 41 mm 32 mm 55,5 mm K (-) - - -
Hasil  pengamatan  akivitas antibakteri pada bakteri uji S. aureus memperlihatkan bakteri endofit  dari  daun  gedi  dengan  kode  isolat  NB1 menunjukan aktifitas antibakteri dengan terbentuknya  zona  bening.  Sedangkan  pada  NB2 pada  U1  dan  U2  tidak  menunjukkan  aktivitas antibakteri.  Sedangkan  isolat  NB3  dan  NB4 terdapat  juga  aktivitas  antibakteri.  Penggunaan kontrol positif didapatkan hasil yang sangat besar dalam menghambat pertumbuhan bakteri (Gambar 2).
Kontrol positif dapat menghambat bakteri S.  aureus karena  ciprofloxacin  merupakan antibiotik  yang  menghambat  sintesis  protein dalam sel bakteri S. aureus mencegah perpanjangan  rantai  polipeptida  yang  sedang tumbuh  dan  berakibat  terhentinya  sintesis  protein dan  merupakan  antibiotik  spektrum  luas  ( broad spectrum ),  yang  termasuk  dalam  golongan florokuinolon  yang  paling  umum  digunakan mekanisme  kerja  menghambat  DNA  girase (topoisomerase  II)  dan  topoisomerase  IV  yang terdapat dalam bakteri (Faidiban et al., 2020).
Alasan  penggunaan  akuades  sebagai  (kontrol negatif)  sebagai  perbandingan  antara  antibiotik yang  dipakai.  Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat menunjukkan bahwa kontrol negatif tidak memberikan  zona  hambat  pada  bakteri S.  aureus dan E.  coli. Dari  hasil  menunjukkan  bahwa semakin tinggi konsentrasi pada kontrol (+) maka
semakin  tinggi  zona  hambat  yang  didapatkan (Melati et al., 2009). Zona hambat yang terbentuk dapat dilihat pada (Tabel 4).
Tabel 4. Aktivitas antibakteri pada bakteri E. coli (mm) Sampel Ulangan U1 U2 U3 NB1 19,5 mm 15 mm 13 mm NB2 - - - NB3 - 11,5 mm 11,5 mm NB4 15 mm 14 mm 9,5 mm K (+) 52 mm 25,5 mm 24 mm K (-) - - -
Hasil pengamatan dilakukan setelah masa inkubasi  bakteri  1x24  jam  dengan  dilakukannya 3x pengulangan terhadap bakteri E. coli (Gambar 3).  Diameter  zona  hambat  pada  pertumbuhan bakteri  uji  tertinggi  didapatkan  pada  kontrol positif  52  mm  ulangan  satu  pada  pertumbuhan pertumbuhan E.  coli dengan  rata-rata  33,8  mm tergolong  sangat  kuat  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri E.  coli .  Kode  isolat  NB1 terlihat  adanya  zona  hambat  yang  terbentuk disekitar  sumuran  pada  ulangan  satu  dan  ketiga sehingga  bakteri  endofit  ini  berpengaruh  atau terdapat  aktivitas  bakteri  uji E.  coli dengan  besar rata-rata  12,3  mm  yang  menunjukkan  kategori kuat  dalam  menghambat  aktivitas  antibakteri. Sedangkan  pada  NB2  tidak  terlihat  adanya  zona hambat  disekitar  lubang  yang  artinya  bakteri endofit  pada  daun  gedi  tidak  berpengaruh  atau tidak adanya aktivitas antibakteri yang ditimbulkan  yang  diujikan  pada  bakteri E.  coli . Hasil  pengujian  daya  hambat  daun  gedi  dengan kode  isolat  NB3  menunjukkan  rata-rata  7,6  mm artinya  kuat  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri E.  coli .  Kode  isolat  NB4  menunjukkan aktivitas  antibakteri  dengan  rata-rata  12,8  mm zona hambat.
Gambar  2.  Hasil  uji  antibakteri    pada  bakteri uji S. aureus dari isolat bakteri endofit dalam satu  cawan  petri  terdapat  tiga  ulangan  serta kontrol positif dan kontrol negatif.
Gambar  3.  Hasil  uji  antibakteri  pada  bakteri uji E. coli dari isolat bakteri endofit dalam satu cawan  petri  terdapat  tiga  ulangan  serta kontrol positif dan kontrol negatif.

## Zona  hambat  yang  terbentuk  pada
Staphylococcus  aureus lebih  besar  dibandingkan dengan Escherichia  coli .  Adanya  perbedaan komponen  dinding  sel  kedua  bakteri  tersebut, dapat berpengaruh pada kerja ekstrak daun gedi sebagai  antibakteri.  Hal  ini  disebabkan  struktur dinding sel gram negatif peptidoglikan sangat tipis (5-20%),  lipid  20%,  protein,  lipopolisakarida  dan lipoprotein.  Sedangkan  dinding  sel  gram  positif lebih  sederhana  sehingga  memudahkan  senyawa antibakteri  masuk  ke  dalam  sel  dan  menemukan target  untuk  bekerja.  Bakteri  Gram  positif mempunyai  dinding  sel  yang  tebal  (15-80  mm)
terdiri  dari  lapisan  peptidoglikan  40-50%,  lipid 2% dan asam terikoat (Alusinsing et al., 2017). Menurut  Son  dan  Chaech  (2012),  bakteri endofit tersebut kemungkinan mampu
menghasilkan  senyawa  antibakteri  namun  dalam jumlah  yang  sedikit  atau  menghasilkan  senyawa aktif  lain  yang  belum    diketahui  Terbentuknya zona  bening  menandakan  bahwa  bakteri  endofit tersebut memiliki kemampuan untuk
memproduksi senyawa ekstraseluler yang  bersifat antibakteri. Perbedaan diameter zona bening yang terbentuk  kemungkinan  disebabkan  perbedaan jenis  senyawa  antibakteri  yang  dihasilkan  tiap isolat  bakteri  endofit.  Hasil  tersebut  juga menandakan  bahwa  kemungkinan  besar  senyawa antibakteri  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  endofit tersebut memiliki spektrum yang luas (Kusumawati et al., 2014). Perbandingan rata-rata dan  standar  deviasi  bakteri  uji  dapat  dilihat  pada (Tabel 5).

## Tabel 5. Rata-rata dan Standar Deviasi
Aktivitas antibakteri Kode Isolat Rata-rata dan Standar Deviasi E. coli S. aureus Kontrol (+) 24,3 ± 7,65 33,6 ± 17,5 Kontrol (-) - - NB 1 12,3 ± 7,52 13 ± 10,4 NB 2 - 2,3 ± 4,0 NB 3 1,66 ± 1,44 4,0 ± 3,77 NB 4 4,8 ± 4,75 6,8 ± 4,0
Menurut  Davis  dan  Stout  (2009),  kriteria kekuatan  antibakteri  yaitu  jika  diameter  zona hambat  <5  mm  maka  dikategorikan  lemah,  zona hambat  5-10  mm  dikategorikan  sedang,  zona hambat 10-20 mm dikategorikan kuat dan apabila zona  hambat  >20  mm  dikategorikan  sangat  kuat. Pada  pengujian  antibakteri  besar  kecilnya  zona hambat  tergantung  pada  zona  bening  yang dihasilkan dari masing-masing sampel.
Pengujian  sampel  bakteri  endofit  NB1 terhadap  bakteri S.  aureus didapatkan  hasil sebesar  (13  ±  10,4)    dan  pada  bakteri E.  coli didapatkan  hasil sebesar (12,3  ±  7,52).  Pengujian aktivitas  antibakteri  pada  bakteri S.  aureus termasuk  dalam  kategori  kuat  yang  dapat  dilihat dengan adanya zona bening pada sumuran dengan diameter  yang  cukup  besar  sehingga  memiliki kemmapuan  bakteriostatis  artinya  hanya  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  (Radji,  2011). Aktifitas  antibakteri  NB2  pada  bakteri S.  aureus menunjukkan  hasil sebesar  (2.3 ±  4,0) sedangkan
pada  bakteri E.  coli tidak  terdapat  aktivitas antibakteri  atau  tidak  mampuh  menghambat bakteri E. coli. Pengujian dengan kode isolat NB3 dari  hasil  diameter  zona  hambat  kedua  bakteri terlihat  bahwa  adanya  zona  bening.  Zona  bening menunjukkan  bahwa  ekstrak  bersifat  bakteriosida yang  artinya  memiliki  kemampuan  membunuh bakteri.  Zona  bening  yang  terbentuk  pada  bakteri S.  aureus dan  bakteri E.coli termasuk  kedalam kategori  lemah  dalam  menghambat  aktivitas antibakteri. Kecilnya daya hambat diduga disebabkan  oleh  beberapa  faktor  antara  lain komposisi  medium  kultur,  proses  inkubasi, kecepatan  difusi  agar  dan  sensitivitas  organisme (Rostinawati,  2009).    Pada  isolat  NB4  aktifitas antibakteri  pada  bakteri S.  aureus menunjukkan hasil  sebesar  (6,8  ±  4,0)  sedangkan  pada  bakteri E.  coli sebesar  (4,8  ±  4,75)  dari  hasil  diameter zona hambat kedua bakteri terlihat bahwa adanya zona bening. Zona bening menunjukkan memiliki kemampuan  membunuh  bakteri.  Zona  bening yang  terbentuk  pada  bakteri Staphylococcus aureus termasuk  kedalam  kategori  sedang dan bakteri Escherichia  coli termasuk  kedalam kategori  lemah.  Sedangkan  hasil  antibiotik ciprofloxacin  pada  bakteri Escherichia  coli sebesar  (24,3  ±  7,65)  dan  bakteri S.  aureus sebesar  (33,6  ±  17,5)    Hasil  ini  menunjukkan bahwa besar diameter zona hambat yang dibentuk oleh antibiotik ciprofloxacin berada pada kategori sangat  kuat.    Hal  ini  menunjukan  bahwa  bahwa Abelmoschus  manihot memiliki  potensi  yang besar sebagai sumber antibiotik terhadap bakteri.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan, besar daya hambat untuk uji antibakteri didapatkan sangat kuat pada kontrol (+) bakteri E. coli sebesar  (33.8  ±  15,7)  dan S.  aureus (42,8  ± 11,8)  dalam  menghambat  aktivitas  antibakteri. Dari  empat  Isolat  yang  didapatkan  merupakan genus Streptococcus , Aerococcus,  Planoccocus, dan Micrococcus .

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lanjutan tentang aktivitas antibakteri pada beberapa bagian tanaman  Gedi  ( Abelmoschus  manihot) dengan  uji bakteri  lainnya.  Serta  perlakuan  kosentrasi  yang lebih tinggi terhadap antibiotik yang digunakan.

## DAFTAR PUSTAKA
Alusinsing, S., N.S. Kojong. S. Sudewi. 2017. Uji Aktivitas  Ekstrak  Daun  Gedi  Merah ( Abelmoschus manihot L.) dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli . Jurnal Ilmiah Farmasi . 6(4) .
Davis,  W.W.,  T.R.  Stout.  2009.  Disc  Pla  te Methods  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Journal  Microbiology . (22 ):  659-
665.
Faidiban,  A.N.,  J.Posangi.,  P.Wowor.,  R.Bara. 2020.  Efek  Antibakteri  Chromodoris annae  terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli. Medical Scope Journal (MSJ) . 1(2) :67-70.
Fallo,  G.  dan  Y.  Sine.  2016.  Isolasi  dan  Uji
Biokimia Bakteri Selulolitik Asal Saluran  Pencernaan  Rayap  Pekerja ( Macrotermes spp.)  Bio  –  Edu  : Jurnal Pendidikan Biologi . 1(2) : 27-29.
Gandjar, I., I.R. Koentjoro., W. Mangunwardoy., dan  L.  Soebagya.  1992. Pedoman Praktikum Mikrobiologi Dasar. Universitas Indonesia Press. Depok.
Hallman,  J.,    G.  Berg.  2006. Spectrum  and population  dynamics  of    bacterial    root endophytes.  Dalam:  Schulz    B,  C.  Boyle, and    T.  Sieber  (Eds.).  Soil  biology Microbial    root    endophytes Vol. 9 .
Berlin, Heidelberg, Germany. SpringerVerlag.
Holt,  J.G.,  N.R  Krieg.,  P.H.A.  Sneath.,  J.T.
Staley., and S.T. Williams. 1994. Bergey’s  Menual  of  Determinative Bacteriology  9  th  Edition A  Wolters Kluwer Company. Philadelphia.
Ipandi,  I.,  L.  Triyasmono.,  B.  Prayinto.  2016. Penentuan  Kadar  Flavonoid  total  dan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol daun Kajajahi ( Leucosyke capitella
Wedd.) . Jurnal Farmasi. 3(1) : 95-96.
Kusumawati,  D.I.,  F.H.  Pasaribu.,  M.  Bintang. 2014.  Aktivitas  antibakteri  isolat  bakteri endofit  dari  tanaman  miana  ( Coleus scutellariodes [L.] Benth.) terhadap
Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli. Current Biochemistry. 1(1) : 45-50. Lay, B.W. 1994. Analisis mikroba di laboratorium . Grasindo Persada. Jakarta.
Liempepas, A.G., W.A. Lolo., P. Yamlean. 2019.
Isolasi  dan  Uji  Antibakteri  dari  Isolat Bakteri  yang    Berasosiasi  dengan  Spons Callyspongia  aerizusa serta  Identifikasi secara Biokimia . Pharmacon. 8(2) .
Melati, P., Welly., Darwis., E. Widiyati. 2009. Uji Efektivitas Ekstrak Daun Ubi Jalar Merah
( Ipomoea batatas poir ) sebagai Antibakteri Staphylococcus aureus Penyebab Penyakit  Bisul  pada  Manusia. FMIPA Pasca Sarjana. Universitas Bengkulu.
Napitupulu,  R.J.  2018. Modul  Mikrobiologi  Ikan Kompetensi  Bakteri  Gram  Positif  dan Bakteri  Gram  Negatif .  Pusat  Pendidikan Kelautan dan Perikanan.
Nurhidayati,  S.,  Faturrahman.,  M.  Ghazali.  2015. Deteksi Bakteri Patogen yang  Berasosiasi dengan  Kappaphycus  alvarezii  (Doty) Bergejala  Penyakit  Ice  Ice. Jurnal  Sains Teknologi dan Lingkungan . 1(2) : 24-30.
Nursulistyarini,  F.,    E.Q.  Ainy.  2014 .  Isolasi  dan
Identifikasi  Bakteri  Endofit  Penghasil Antibakteri dari Daun Tanaman Binahong (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis).
Biologi, Sains, Lingkungan,
dan
Pembelajarannya .  UIN  Sunan  Kalijaga. Yogyakarta.
Purwanto,  U.M.S.,  F.H.  Pasaribu.,  M.  Bintang. 2014. Isolasi Bakteri Endofit dari
Tanaman  Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.)  dan Potensinya  sebagai  Penghasil  Senyawa Antibakteri. Current Biochemistri 1(1) : 51-57.
Radji, M. 2011. Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa  Farmasi  dan  Kedokteran . EGC. Jakarta.
Rori,  A.C.,  F.E.  Kandou.,  A.M.  Tangapo.  2020. Isolasi  dan  Uji  Antibakteri  dari  Bakteri Endofit  Tumbuhan  Mangrove  ( Avicennia marina ). Koli Jurnal. 1(1) .
Rostinawati,  T.  2009.  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Bunga  Rosella  ( Hibiscus sabdariffa L.)  terhadap Escherichia  coli  , Salmonella  Typhi dan Staphylococcus aureus dengan  metode  Difusi  Agar. Jurnal Penelitian .
Sagita,  D.,  N.  Suharti.,  N.  Azizah.  2017.  Isolasi Bakteri  Endofit  dari  Daun  Sirih  ( Piper betle L.)  sebagai  Antibakteri  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus. Jurnal  Iptek  Terapan. 11(1 ):  65- 74.
Simarmata,  R.,  S.  Lekatompessy.,  H.  Sukiman. 2007.  Isolasi  Mikroba  Endofitik  dari Tanaman  Obat  Sambung  Nyawa  ( Gynura procumbens )  dan  Analisis  Potensinya sebagai  Antimikroba. Berk  Penel  Hayati . 13 : 85-90.
Son,  R.,  dan  Y.K.  Cheah.  2002.  Preliminary Screening  of  Endophytic  Fungi  from Medical Plants in Malaysia for Antimicrobial  and  Antitumor  Activity. Malaysian  Journal  of  Medical  Sciences . 9(2) : 23–33.
Strobel,  G.,  and  B.  Daisy.  2003. Bioprospecting for  Microbial  Endophytes  and  Their Natural Product. Microbiology and
Molecular  Biology  Review. 67 :  491-502..