Abstrak — Pembentukan akar teh (Camellia sinensis L.) merupakan  tahapan  penting  secara  in  vitro.  Inisiasi  perakaran tanaman  dapat  dipacu  dengan  menambahkan  Zat  Pengatur Tumbuh  (ZPT).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  konsentrasi  ZPT  untuk  inisiasi  akar  tanaman  teh secara in vitro pada klon teh yang berbeda. Klon yang digunakan adalah  Tea  Research  of  Sri  Lanka  (TRI)  2024  dan  TRI  2025. Eksplan  berupa  daun,  diinokulasikan  pada  media  induksi  kalus dengan  penambahan  BAP  2  mg/l  dan  NAA  3  mg/l.  Kalus  yang terbentuk  disubkultur  pada  media  induksi  tunas  dengan penambahan  BAP  3  mg/l,  selanjutnya,  disubkultur  ke  dalam media perakaran dengan penambahan IBA (Indole Butyric Acid) 0,  1,  2,  3  mg/l.  Hasil  penelitian  menunjukkan,  pada  media perakaran  tidak  terbentuk  akar,  tetapi  terbentuk  embrio somatik  dengan  tahap  yang  berbeda,  yaitu  tahap  globular,  hati dan  torpedo.  Embrio  somatik  yang  terbentuk  memiliki perbedaan  warna  yaitu,  hijau  kekuningan,  hijau  dan  hijau kecoklatan.  Selain  itu,  mempunyai  struktur:  remah,  intermediet dan  kompak,  serta  mempunyai  berat  basah  embrio  somatik sebesar 10-290 mg.
Kata  Kunci — Camellia  sinensis L.,  IBA  Perakaran,  Teh,  TRI 2024, TRI 2025.

## I. PENDAHULUAN
EH  ( Camellia  sinensis L.)  mengandung  sejumlah  besar polifenol,  kafein,  dan  asam  amino.  Komponen  polifenol utama  adalah catechins , epicatechin (EC), epicatechin-3- gallate (ECG), epigallocatechin (EGC), dan epigallocatechin- 3-gallate (EGCG) dan flavonoid, yang diketahui telah banyak berkontribusi  pada  fungsi  biologis,  seperti  antimutagenik, antikanker,  antioksidan  dan  sebagai  pengikat  radikal  bebas [1][2][3],  dan  [4].  Kandungan  asam  amino,  polifenol  dan kafein merupakan faktor biokimia utama yang mempengaruhi kualitas  teh  [3].  Teh  yang  berkualitas  tinggi  akan meningkatkan harga teh [5].
Teh dibedakan menjadi dua varietas  yakni, C. sinensis var. assamica yang  berasal  dari  Assam  dan C.  sinensis var. sinensis yang berasal dari China [6][7]. Teh varietas assamica banyak dibudidayakan dan diproduksi dalam skala besar untuk kebutuhan  industri  di  negara-negara  berkembang  seperti Indonesia [8].
Klon  yang digunakan dalam  penelitian ini adalah klon TRI 2024 dan TRI 2025 yang berasal dari varietas assamica . Klon TRI  2024  memiliki  kandungan  polifenol,  asam  amino  dan kefein  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  TRI  2025  dan memiliki  produktivitas  yang  lebih  rendah  sebesar  2500 kg/ha/tahun, sedangkan klon TRI 2025 memiliki produktivitas sebesar 2.800 kg/ha/tahun [9][10], dan [11].
Teh  dapat  diperbanyak  baik  dengan  biji  atau  dengan  stek [12]. Perbanyakan secara  konvensional  teh  sangat lambat dan bahan  tanam  teh  yang  tidak  cukup  tersedia  sepanjang  tahun karena  kemampuan  perakaran  tergantung  musim  sehingga menghasilkan  tingkat  kelangsungan  hidup  rendah  pada pembibitan.  Selain  itu,  perbanyakan  melalui  biji  sulit dilakukan  karena  benih  yang  dihasilkan  tergantung  pada tanaman yang heterogen karena tanaman teh bersifat allogami, sehingga  sulit  untuk  mempertahankan  karakter  unggul,  serta dibutuhkan  waktu  pematangan  biji  selama  12-18  bulan [13][14], dan [15].
Teknik kultur in vitro ini dapat menjadi pilihan ideal untuk pengelakan  sistem  multiplikasi  konvensional  dalam  waktu yang  relatif  singkat  [16].  Pembentukan  akar  merupakan tahapan  penting  dalam  perbanyakan  bibit  secara in  vitro . Inisiasi perakaran tanaman dapat dipacu dengan menambahkan  Zat  Pengatur  Tumbuh  (ZPT)  pada  media tanam. Jenis dan kosentrasi ZPT mempengaruhi pertumbuhan tanaman.  ZPT  yang  biasanya  digunakan  untuk  induksi  akar adalah  golongan  auksin  [17].  IBA  ( Indole  Butyric  Acid ) merupakan jenis auksin yang lebih efisien dalam menstimulasi perakaran  dibandingkan  dengan  IAA  [18].  Secara  komersial IBA  telah  diketahui  sebagai  auksin  utama  yang  digunakan dalam induksi akar adventif [19].
Pengetahuan  dan  penguasaan sistem  regenerasi  dari  setiap tanaman secara in  vitro sangat  diperlukan  karena  sangat menentukan  dalam  program  peningkatan  produktivitas tanaman  teh  melalui  kultur  jaringan  untuk keperluan perbanyakan [20].
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  untuk  inisiasi  akar  tanaman teh  ( C.  sinensis L.)  secara in  vitro pada  klon  TRI  2024  dan TRI 2025.

## II. METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
A.
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Kultur  Jaringan, Balai  Besar  Perbenihan  dan  Proteksi  Tanaman  Perkebunan (BBPPTP)  Surabaya  dan  Laboratorium  Biosains  dan Teknologi  Tumbuhan,  Departemen  Biologi,  Fakultas  Ilmu Alam,  Institut  Teknologi  Sepuluh  Nopember,  Surabaya  pada bulan Desember 2016 – Juli 2017.
Alat dan Bahan B.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah dissecting kit , glassware (botol  kultur,  erlenmeyer,  cawan  Petri,  labu takar, gelas ukur, gelas beaker), pipet, laminar air flow (LAF) ,
Induksi Perakaran Teh ( Camellia sinensis L.)

## Secara in Vitro pada Klon yang Berbeda
Fitriana Ilma Farida dan Wirdhatul Muslihatin Departemen Biologi, Fakultas Ilmu Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
e-mail : w_muslih@bio.its.ac.id
T
autoklaf,  pH  meter,  bunsen  spirtus,  timbangan  analitik, magnetic  stirrer ,  penyemprot  alkohol  ( hand  sprayer ),  lemari pendingin, oven , kompor, mikroskop stereo, kamera.
Bahan  yang  digunakan  untuk  penelitian  ini  adalah  daun tanaman  teh  ( C.  sinensis L.)  klon  TRI  2024  dan  TRI  2025, aquades,  alkohol  70%,  bahan  dasar  MS  ( Murashige dan Skoog ),  alkohol  96%,  spirtus,  BAP  2  mg/l,  BAP  3  mg/l,  and NAA  3  mg/l,  IBA  0,  1,  2,  3  mg/l,  kertas  label, tissue ,  korek api, alumunium foil dan plastik wrap.
Cara Kerja C.
Penelitian  ini  terdiri  atas  beberapa  tahapan  yakni  sterilisasi alat dan ruang kerja,  induksi  kalus, induksi  tunas dan induksi perakaran.

## 1) Sterilisasi alat dan Ruang kerja
Sterilisasi  alat  menggunakan  autoklaf  (sterilisasi  panas basah) atau oven (sterilisasi panas kering) dapat menyebabkan kematian  bakteri,  virus,  jamur  dan  spora  [21].  Pertama, disiapkan peralatan kaca ( glassware ) dan peralatan penanaman  ( dissecting  kit )  yang  akan  digunakan.  Peralatan kaca  (botol  kultur)  dan  peralatan  penanaman  disterilisasi menggunakan  oven  selama  1  jam  dengan  suhu  100 o C. Peralatan  penanaman  yang  tidak  tahan  panas  disterilisasi menggunakan alkohol 70% [22].
Sterilisasi  ruang  kerja  menggunakan  LAF.  Sebelum  LAF digunakan, dibersihkan seluruh bagian permukaan menggunakan  alkohol  70%.  Dihubungkan  kabel  daya  ke  stop kontak. Ditekan tombol power disebalah kiri alat. Dihidupkan lampu  kemudian  dihidupkan  blower.  Disiapkan dissecting  kit dan glass ware  yang akan digunakan untuk sterilisasi eksplan dan  inokulasi  ke  dalam  LAF.  Sebelum  peralatan  dimasukkan dalam  LAF  harus  disemprot  dengan  alkohol  70%  terlebih dahulu [23]. Pekerjaan dalam kondisi aseptik dapat dilakukan dan  LAF  siap  digunakan  untuk  sterilisasi  eksplan  dan inokulasi  eksplan.  Saat  proses  inokulasi  eksplan,  alat-alat dissecting  kit disterilisasi  dengan  alkohol  96%  dan  dibakar dengan  nyala  api  spiritus  setiap  kali  akan  digunakan  di  LAF [24].
2) Induksi Kalus
Eksplan  yang  digunakan  berupa  daun.  Sterilisasi  eksplan dilakukan dua tahap, yaitu sterilisasi permukaan diluar dan di dalam  LAF.  Setelah  selesai,  eksplan  diambil  dengan  pinset steril  dan  diletakkan  di  atas  cawan  Petri  yang  telah  dilapisi tissue. Eksplan daun dipotong dengan ukuran yang lebih kecil [14][25].  Selanjutnya,  eksplan  ditanam  dalam  media  dengan bagian abaksial yang kontak dengan media [26]. Medium yang digunakan  adalah  media  MS  dengan  penambahan  sukrosa  30 gr/l,  agar  8  gr/l,  BAP  2  mg/l,  dan  NAA  3  mg/l.  Dijaga  tetap keasaman pH 5,7-5,8 [12]. Kultur diinkubasi selama 4 minggu dalam  ruang  gelap  pada  temperatur  27 o C,  hingga  terbentuk kalus [12][14], dan [27].
3) Induksi Tunas
Kalus  yang  telah  terbentuk  kemudian  disubkultur  pada media  induksi  tunas.  Medium  yang  digunakan  adalah  media MS  dengan  penambahan  sukrosa  30  gr/l  dan  agar  8  gr/l  dan BAP  3  mg/l.  Dijaga  tetap  keasaman  pH  5,7-5,8.  Kultur diinkubasi selama 4 minggu dengan fotoperiodik 16 jam pada temperatur 27 o C [14][28].

## 4) Induksi Perakaran
Tunas  yang  telah  terbentuk  kemudian  disubkultur pada  media  MS  dengan  penambahan  sukrosa  30  gr/l,  agar  8 gr/l  dan  berbagai  kosentrasi  IBA  (0,  1, 2  dan  3  mg/l).  Dijaga tetap  keasaman  pH  5,7-5,8.  Kultur  diinkubasi  selama  4 minggu  dengan  fotoperiodik  16  jam  pada  temperatur  27 o C [14][28].

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Induksi Kalus
A.
Penelitian  ini  diawali  dengan  penanaman  eksplan  daun untuk  menghasilkan  kalus.  Komposisi  media  yang  digunakan dalam menginduksi kalus yaitu BAP 2 mg/l dan NAA 3 mg/l. Inisiasi  kalus  terjadi  setelah  3  minggu  inkubasi  dan  pada inkubasi  minggu  ke-6  kalus  semakin  besar  dan  berbentuk bulatan-bulatan  kecil.  Kalus  yang  terbentuk  mempunyai struktur  remah  ( friable ).  Struktur  kalus  yang  remah merupakan kalus yang memiliki kualitas baik [29].
Menurut George et al. (2008) kalus embriogenik dan kalus non-embriogenik  dapat  dibedakan  dari  morfologi  dan  warna kalus  [30].  Berdasarkan  ciri-ciri  kalus  yang  diamati,  menurut Nagesh et  al. (2010),  George et  al. (2008),  dan  Seran et  al . (2007)  kalus  yang  terbentuk  merupakan  kalus  embriogenik [27][30],  dan  [31].  Kalus  embriogenik  mempunyai  struktur remah,  berwarna  kuning  kehijauan  hingga  hijau,  permukaan yang tidak rata yang sebagian besar berbentuk agregat-agregat kecil yang berbentuk nodul dan sel mengandung pati [27][31], dan [32].
Tabel 1.
Morfologi kalus embriogenik setelah inkubasi selama 6 minggu.
Morfologi Kalus Klon TRI 2024
TRI 2025
Struktur Remah Remah Bentuk Bulatan kecil Bulatan kecil Warna Hijau kekuningan Hijau
Kalus  embriogenik  adalah  massa  pro-embrio  yang  tumbuh pada media yang mengandung auksin, yang dapat berkembang menjadi  embrio  somatik  setelah  disubkultur  ke  dalam  media yang  sesuai  dan  tidak  mengandung  auksin  [33][34].  Warna hijau  pada  kalus  adalah  akibat  efek  sitokinin  dalam pembentukan  klorofil.  Warna  kalus  mengindikasi  keberadaan klorofil  dalam  jaringan,  sehingga  semakin  hijau  warna  kalus semakin  banyak  pula  kandungan  klorofilnya  [29].  Menurut Dehghani et  al. (2011)  warna  dan  tekstur  kalus  yang dihasilkan  tergantung  pada  eksplan  yang  digunakan,  umur kalus dan kondisi pertumbuhannya [35].

## Induksi Tunas dan Perakaran B.
Kalus  yang  terbentuk  disubkultur  pada  media  MS  dengan penambahan BAP 3 mg/l. Setelah diinkubasi selama 8 minggu tidak terbentuk tunas pada klon TRI 2024 dan TRI 2025, tetapi terbentuk  embrio  somatik.  Pada  penelitian  Gonbad et  al.
(2014)  BAP  3  mg/l  memiliki  rata-rata  jumlah  pembentukan tunas  yang  tinggi  pada  klon  Iran  100  [28].  Selain  itu, berdasarkan  penelitian  Aye et  al. (2008)  metode  regenerasi tunas  yang  berasal  dari  eksplan  daun  paling  optimum menggunakan  media  dengan  komposisi  BAP  3  mg/l  [36]. Regenerasi  tanaman  melalui  kultur  jaringan  bersifat  spesifik. Formulasi  media  yang  digunakan  untuk  meregerasikan  klon tertentu belum tentu dapat digunakan untuk klon lainnya [37].
Secara umum tahap perkembangan embriogenesis memiliki tiga tahap perkembangan yang berbeda, yakni: tahap globular, hati, dan torpedo (Gambar 1.) [38].
Gambar. 1. Tahap embrio somatik yang terbentuk pada media BAP 3 mg/l. A. Globular (Perbesaran 32x), B. Hati (Perbesaran 24x), C. Torpedo (Perbesaran 28x).
Embrio  somatik  tahap  globular  yang  teramati  merupakan tahap  perkembangan  dari  pro-embrio  yang  dicirikan  dengan bentuk  yang  bulat  atau  membulat  (Gambar  1A).  Selanjutnya, embrio somatik tahap globular berkembang menjadi tahap hati yang  dicirikan  adanya  cekungan.  Ketika  awal  perkembangan bentuk  hati  terjadi  pembentukan  SAM  ( Shoot  Apical Meristem )  [39][40].  RAM  ( Root  Apical  Meristem )  juga terbentuk  pada  tahap  ini  ketika  terbentuk  perpanjangan hipokotil  dan  pembentukan  kotiledon  [41].  Leyser  dan  Day (2002)  menyatakan  bahwa  embrio  somatik  tahap  hati  terjadi pembentukan  satu  atau  dua  kotiledon  [42].  Terbentuknya kotiledon  dimulai  dengan  adanya  lekukan  yang  membentuk dua  area  bagian  atas  tetapi  masih  pendek  (Gambar  1B). Perkembangan  lanjut  dan  struktur  bipolar  semakin  jelas  pada tahap  torpedo.  Tahap  torpedo  ini  dicirikan  adanya  cekungan pada  tahap  hati  semakin  dalam  sehingga  membentuk perpotongan  (Gambar  1C).  Hal  ini  ditandai  dengan pemanjangan embrio dan pemanjangan kotiledon [39].
Embrio  somatik  yang  telah  terbentuk  disubkultur  pada media perakaran dengan komposisi IBA 0,1,2,3 mg/l. Setelah diinkubasi  selama  6  minggu  tidak  terjadi  inisiasi  akar  pada klon  TRI  2024  maupun  klon  TRI  2025.  Meskipun  tidak membentuk  akar,  namun  terdapat  respon  yang  berbeda-beda pada  embrio  somatik  yang  dapat  diamati  pada  media  IBA 0,1,2,3  mg/l,  yaitu  morfologi  embrio  (struktur  makroskopis dan  warna  embrio  somatik),  dan  berat  basah  embrio  somatik. Berdasarkan  penelitian  Goo et  al. (1997)  BAP  3  mg/l  efektif dalam  menginduksi  dan  menginisiasi  morfogenesis  dalam proses  embriogenesis  somatik  langsung  pada  tanaman  teh [43].
Embriogenesis  somatik  terdiri  atas  dua  tahap.  Pertama, terjadi diferensiasi sel somatik menjadi sel embriogenik secara langsung  (tanpa  tahap  dediferensiasi)  atau  secara  tidak langsung  (dengan  dedifferensiasi  dan  biasanya  melibatkan tahap  kalus)  dan  berproliferasi.  Tahap  embriogenik  langsung terjadi  pada  teh  klon  TRI  2024  maupun  teh  klon  TRI  2025
pada  penelitian  ini.  Kedua,  setelah  terjadi  stimulus  oleh inducer ,  terjadi  inisiasi  embrio  somatik  dimana  sel  atau  pro- embrio mulai berkembang dan masuk ke dalam tahap maturasi sel  embriogenik  mejadi  embrio  somatik  [44][45]. Inducer yang  digunakan  dalam  tahap  maturasi  kalus  embrio  somatik merupakan  media  tanpa  auksin,  yakni  media  induksi perakaran pada media ini [33][34].
Morfologi Embrio Somatik C.
Struktur makroskopis dan warna embrio somatik merupakan  kondisi  morfologi  embrio  somatik.  Warna  embrio somatik merupakan gambaran visual embrio somatik sehingga dapat  diketahui  bahwa  embrio  somatik  yang  terbentuk  sel- selnya  masih  aktif  membelah  atau  mati.  Berdasarkan pengamatan  yang  telah  dilakukan,  menunjukkan  bahwa terdapat perbedaan warna dan tekstur embrio somatik teh pada media  perakaran  dengan  komposisi  IBA  yang  berbeda  pada klon TRI 2024 dan TRI 2025 (Tabel 2-3).
Tabel 2.
Warna dan struktur embrio somatik klon TRI 2024 pada media perakaran.
Komposisi Media Warna Embrio Somatik Struktur Embrio Somatik Awal Akhir Awal Akhir IBA 0 mg/l Hijau kekuningan Hijau Kecoklatan Kompak Kompak IBA 1 mg/l Hijau kekuningan Hijau Kecoklatan Kompak Kompak IBA 2 mg/l Hijau kekuningan Hijau Kompak Kompak IBA 3 mg/l Hijau kekuningan Hijau kekuningan Kompak Intermediet Tabel 3. Warna dan struktur embrio somatik klon TRI 2025 pada berbagai media perakaran. Komposisi Media Warna Embrio Somatik Struktur Embrio Somatik Awal Akhir Awal Akhir IBA 0 mg/l Hijau kekuningan Hijau Kompak Kompak IBA 1 mg/l Hijau kekuningan Hijau Kompak Kompak IBA 2 mg/l Hijau kekuningan Hijau Kompak Kompak IBA 3 mg/l Hijau kekuningan Hijau Kekuningan Kompak Remah
Terjadi  perubahan  warna  embrio  somatik  klon  TRI  2024 pada  media  IBA  0  mg/l  dan  IBA  1  mg/l  dari  warna  hijau kekuningan  menjadi  hijau  kecoklatan.  Perubahan  warna menjadi  coklat  ( browning )  terjadi  akibat  adanya  metabolisme senyawa fenol. Browning yang terjadi disebabkan ketidakseimbangan  hormon,  tetapi  pada  media  yang  sama tidak  menunjukkan  perubahan  warna  coklat  pada  klon  TRI 2025.  Hal  ini  membuktikan  bahwa  keseimbangan  nutrisi dalam formulasi media bersifat spesifik [37][46].
Browning disebabkan  pelepasan  senyawa  negatif  dan disintegrasi  sel.  Reaksi  ini  dikatalis  oleh  enzim  polifenol oksidase  dan  tirosinase.  Fenol  yang  teroksidasi  akan membentuk kuinon. Kuinon adalah senyawa yang menyebabkan  adanya  warna  coklat  pada  kultur  kalus. Intensitas warna coklat berkorelasi positif dengan hiperaktifitas  enzim  oksidatif,  sedangkan  peningkatan  enzim tersebut  terkait  dengan  reaksi  pertahanan  jaringan  dari  stres
oksidatif. Peristiwa pencoklatan juga disebabkan oleh semakin bertambahnya  umur  sel  atau  jaringan  dan  menghambatnya proses pertumbuhan embrio somatik [1][29][46], dan [47].
Pada klon TRI 2025 pada media  IBA 2 mg/l dan klon TRI 2025  pada  media  IBA  0,  1,  dan  2  mg/l  terjadi  perubahan warna  embrio  somatik  dari  hijau  kekuningan  menjadi  hijau. Perubahan  warna  menjadi  hijau  ini  menandakan  bahwa meningkatnya klorofil pada embrio somatik dan menunjukkan adanya  perkembangan  embriogenesis  somatik,  sedangkan pada  kosentrasi  IBA  3  mg/l  pada  kedua  klon  ini  tidak mengalami perubahan warna [29].
Struktur makroskopis embrio somatik merupakan salah satu penanda  kualitas  suatu  kalus  (Tabel  2-3).  Tekstur  embrio somatik  dapat  bervariasi  dari  kompak  hingga  remah  [48]. Hasil  menunjukkan  bahwa  struktur  kalus  klon  TRI  2024  dan TRI  2025  pada  komposisi  media  IBA  0,1  dan  2  mg/l mempunyai  tekstur  kompak.  Embrio  somatik  dengan  struktur kompak  ( non-friable )  apabila  antara  sel  atau  kumpulan  sel yang lain tidak mudah dipisahkan dan bertekstur keras [49].
Struktur kalus klon TRI 2024 dan TRI 2025 pada komposisi media  IBA  3  mg/l  terjadi  perubahan  struktur  embrio  somatik dari  kompak  menjadi  intermediet  dan  remah  ( friable ).  IBA termasuk  ke  dalam  golongan  auksin  Terbentuknya  embrio somatik  berstruktur  remah  dipacu  oleh  adanya  auksin  dalam kosentrasi  tinggi.  Auksin  menstimulasi  pemanjangan  sel dengan  cara  penambahan  plastisitas  dinding  sel  menjadi longgar, sehingga air dapat masuk ke dalam dinding sel. Oleh karena  itu,  embrio  somatik  yang  remah  mengandung  banyak air karena tidak mengalami lignifikasi dinding sel, serta antara kumpulan sel yang satu dengan yang lain relatif mudah untuk dipisahkan [50]. Kondisi abnormal yang mungkin terjadi pada awal  periode  kultur  media  ini  adalah  sel  epidermis  dari hipokotil  embrio  terjadi  pembesaran  secara  abnormal  karena adanya  auksin  dengan  kosentrasi  yang  tinggi  dan  hubungan dengan sel korteks terputus, sehingga menghasilkan kumpulan sel  yang  longgar  [34].  Jadi,  terbentuknya  kalus  yang  remah merupakan  hasil  aktivitas  pembelahan  sel  yang  meningkat [48].

## Berat Basah Embrio Somatik
D.
Berat  basah  merupakan  berat  tanaman  yang  dipengaruhi oleh  kandungan  air  dalam  jaringan,  unsur  hara,  dan  hasil aktivitas metabolismenya [51]. Berdasarkan uji statistik antara komposisi  media  dengan  klon  teh  tidak  memiliki  pengaruh terhadap berat basah embrio somatik, ditunjukkan dengan nilai p value sebesar 0,543 (p value > 0,05).
Tabel 4. Rata-rata berat basah klon TRI 2024 dan TRI 2025 (mg). Komposisi Media Klon TRI 2024 TRI 2025 IBA 0 mg/l 10 110 IBA 1 mg/l 10 150 IBA 2 mg/l 40 160 IBA 3 mg/l 60 290
Peningkatan  kosentrasi IBA pada setiap klon  menunjukkan peningkatan berat basah embrio somatik. Berat basah terendah klon  TRI  2024  ditunjukkan  pada  kosentrasi  IBA  0  mg/l sebesar  10  mg,  dan  berat  basah  tertinggi  ditunjukkan  pada kosentrasi  IBA  3  mg/l  sebesar  60  mg.  Pada  klon  TRI  2025
berat basah terendah  ditunjukkan pada kosentrasi IBA 0  mg/l sebesar  110  gr,  dan  berat  basah  tertinggi  ditunjukkan  pada kosentrasi IBA 3 mg/l sebesar 290 gr.
Rendahnya  berat  basah  klon  TRI  2024  pada  media  IBA  0 mg/l dan IBA 1 mg/l sebesar 10 gr, disebabkan perkembangan embrio  somatik  menjadi browning . Browning terjadi  akibat teroksidasinya  fenol  yang  bersifat  toksik  dan  dapat menghambat pertumbuhan atau bahkan menyebabkan kematian jaringan, sehingga berpengaruh terhadap berat basah yang rendah pada komposisi media ini [29][52].
Embrio  somatik  pada  media  IBA  3  mg/l  memiliki  berat basah  yang  paling  tinggi  dikarenakan  sel  embrio  somatik mengalami  pemanjangan  dan  diikuti  dengan  pembesaran  sel dan  peningkatan  berat  basahnya.  Peningkatan  berat  basah embrio somatik menunjukkan berlangsungnya proses pertumbuhan  sel  dalam  embrio  somatik.  Auksin  berperan dalam  meningkatkan  plastisitas  dinding  sel.  Sel  dapat membesar  sebagai  respon  terhadap  perubahan  tekanan  turgor saat  dinding  sel  meningkatkan  plastisitas,  sehingga  air  dapat berdifusi masuk ke dalam sel [50][53].

## KESIMPULAN
Komposisi  media  perakaran  dengan  konsentrasi  zat pengatur  tumbuh  IBA  0,  1,  2  dan  3  mg.l -1 tidak  dapat menginduksi  akar  pada  tanaman  teh  klon  TRI  2024  dan  TRI 2025,  tetapi  terbentuk  embrio  somatik  dengan  tahap  yang berbeda,  yaitu  tahap  globular,  hati  dan  torpedo.  Embrio somatik yang terbentuk memiliki perbedaan warna yaitu, hijau kekuningan,  hijau  dan  hijau  kecoklatan.  Selain  itu, mempunyai  struktur:  remah,  intermediet  dan  kompak,  serta mempunyai berat basah embrio somatik sebesar 10-290 mg.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  E.  Jang et  al. , “ 1H  NMR-Based  Metabolomic  Characterization  During Green Tea (Camellia sinensis) Fermentation, ” Food Res. Int. , vol. 44, pp. 597 – 604, 2011.
[2]  A.  Gramza,  K.  Józef,  and  A.  Ryszard, “ Tea  Polyphenols – Their Antioxidant Properties And Biological  Activity, ” Pol. J. Food Nutr. Sci , vol. 14, no. 3, pp. 219 – 235, 2005.
[3]  J.  Tang,  M.  Y.  S.  Li,  and  Q.  Tang, “ A  Review  on  the  Identification Indicators  of  Tea  Germplasm, ” J.  Agric.  Sci.  Technol. ,  vol.  1,  pp.  1 – 7, 2011.
[4]  J.  D.  K.  Arachchi,  M.  T.  K.  Gunasekare,  M.  A.  B.  Ranatunga,  P.A.N. Punyasiri,  J.  L,  and  R.  P.  Karunagodad, “ Biochemical  Characteristics  of Tea (Camellia  L. spp.) Germplasm Accessions in Sri Lanka: Correlation between Black Tea Quality Parameters and Organoleptic Evaluation, ” Int. J. Tea Sci. , vol. 10, no. 1, 2014.
[5]  C.  Gilbert, “ Impact  Of  Macroeconomic  Factors  On  The  Global  Tea Economy, ” J. Agric. Econ. , vol. 61, no. 2, 2010.
[6]  V.  R.  Preedy, Tea  in  Health  and  Disease  Prevention .  London:  Elsevier, 2013.
[7]  T.  Balasaravanan,  P.  P.K,  R.  R.  Kumar,  N.  Muraleedharan,  and  A.K. Shasany, “ Genetic  Diversity  Among  South  Indian  Tea  Germplasm (Camellia  sinensis,  C.  assamica  and  C.  assamica  spp.  lasiocalyx)  Using AFLP Markers, ” Plant Sci. , vol. 165, pp. 365 – 372, 2003.
[8]  M.  S.  Haq  and  Karyudi, “ Upaya  Peningkatan  Produksi  Teh  (Camelia sinensis (L.) O. Kuntze) Melalui Penerapan Kultur Teknis, ” War. PPTK , vol. 27, no. 1, pp. 71 – 84, 2013.
[9]  L. Chen, A. Zeno, and M. C. Zong, Global Tea Breeding: Achievements, Challenges and Perspective . London: Springer, 2012.
[10] P.  Ponmurugan  and  U.  I.  Baby, “ Morphological,  Physiological  and Biochemical  Changes  in  Resist  and  Susceptible  Cultivars  of  Tea  in Relation to Phomopsis Disease, ” Plant Pathol. J. , vol. 6, no. 1, pp. 91 – 94, 2007.
[11] G.  W.  Sanderson, “ The  Chemical  Composition  of  Fresh  Tea  Flush  as
Affected By Clone And Climate, ” Tea Quart , vol. 35, pp. 101 – 110, 1964. [12] Abeywardana,  Ranaweera,  Ranatunga,  and  A.  Warnasooriya, “ Somatic Embryogenesis  Protocol  for  Tea  (Camellia  Sinensis  (L.)  O  Kuntze), ” in Third  International  Research  Symposium  Rajarata  University  of  Sri Lanka , 2015.
[13] A.  Begum et  al. , “ Study  On  In  Vitro  Propagation  Of  Tea  (Camellia sinensis  (L).  O.  Kuntze)  Through  Different  Explants, ” J.  Glob.  Biosci. , vol. 4, no. 7, pp. 2878 – 2887, 2015. [14] Bidarigh, Sirous, and A. Ebrahim, “ Study Effect Of IBA Hormone Levels On  Rooting  In  Micro  Cuttings  Of  Tea  (Camellia  Sinensis  L.), ” J.  Agric. Biol. Sci. , vol. 1, no. 8, 2013.
[15] T. K. Mondall, L. Amita, B. Malathi, and S. Paramvir, “ Review of Plant Biotechnology and Applied Genetics: Recent Advances of Tea (Camellia sinensis)  Biotechnology, ” Plant  Cell.  Tissue  Organ  Cult. ,  vol.  76,  pp.
195 – 25, 2004.
[16] S.  Boonerjee,  M.  I.  Hoque,  and  R.H.  Sarker, “ Development  Of  In  Vitro Micro  Propagation  System  In  Tea  Plant  [Camellia  sinensis  (L.)  O. Kuntze]  Using  Shoot  Tip  and  Nodal  Segment  Explants, ” Tea  J. Bangladesh , vol. 42, pp. 21 – 30, 2013.
[17] T.  Arlianti,  F.  S.  Sitti,  N.  N.  Kristina,  and  R.  Otih, “ Pengaruh  Auksin IAA,  IBA,  Dan  NAA  Terhadap  Induksi  Perakaran  Tanaman  Stevia (Stevia Rebaudiana) Secara In Vitro, ” Bul. Littro , vol. 24, no. 2, 2013.
[18] B.  Bartel,  S.  LeClere,  M.  Magidin,  and  B.  K.  Zolman, “ Inputs  To  The Active  Indole-3-Acetic  Acid  Pool:  De  Novo  Synthesis,  Conjugate Hydrolysis  And  Indole-3-Butyric  Acid – Oxidation, ” J.  Plant  Growth Regul. , vol. 20, pp. 198 – 216, 2001.
[19] J.  P.  Slovin,  S.  B.  Robert,  and  D.  .  Jerry, Biochemistry  and  Molecular Biology of Plant Hormones: Auxin . Elsevier, 1999.
[20] Sukmadjaja,  Deden,  and  M.  Ade, “ Regenerasi  dan  Pertumbuhan Beberapa  Varietas  Tebu  (Saccharum officinarum  L.)  secara  In  Vitro, ” J. AgroBiogen , vol. 7, no. 2, pp. 106 – 118, 2011.
[21] R. A. B. D. Silva, R. L. Mário, H. F. Lúcia, I. M. Alexandra, and P. N. F,
“ Effect  of  Different  Methods  of  Sterilization  On  the  Inactivation  of Bacterial Endotoxin (LPS) In Endodontic Files, ” Brazilian J. Microbiol. , vol. 38, pp. 270 – 272, 2007.
[22] M. S. Fitri, T. Zairin, and H. Essy, “ In-Vitro Effect of Combined Indole Butyric  Acid  (IBA)  and  Benzil  Amino  Purine  (BAP)  on  the  Planlet Growth of Jatropa curcas L, ” J. Nat. , vol. 1, no. 1, 2012.
[23] Zulkarnain, Kultur Jaringan Tanaman . Jakarta: Bumi Aksara, 2009.
[24] A.  Fitrianti, “ Efektivitas  Asam  2,4  Diklorofenoksiasetat  (2,4-D)  dan Kinetin  pada  Medium  MS  dalam  Induksi  Kalus  Sambiloto  dengan Eksplan Potongan Daun, ” Universitas Negeri Semarang, 2006. [25] P.  Daisy,  H.  Sriyanti,  and  W.  Ari, Teknik Kultur Jaringan : Pengenalan dan  Petunjuk  Perbanyakan  Tanaman  Secara  Vegetatif-Modern . Yogyakarta: Kanisius, 1994.
[26] H.  S.  Dhaliwal,  E.  C.  Yeung,  and  T.  A.  Thorpe, “ IBA  Inhibition  of  in Vitro Organogenesis in excised Tobacco Leaf Explants, ” Vitr. Cell. Dev. Biol.- Plant , vol. 40, pp. 235 – 238, 2003.
[27] T. H. Seran, K. Hirimburegama, and M. T. K. Gunasekare, “ Production of Embryonic  Callus  from  Leaf  Explants  of  Camelia  sinensis  (L.), ” J. Natn.Sci.Foundation Sri Lanka , vol. 35, no. 3, pp. 191 – 196, 2007.
[28] R. A. Gonbad, R. S. Uma, A. A. Maheran, and M. Rosfarizan, “ Research Article:  Influence  of  Cytokinins  in  Combination  with  GA3  on  Shoot Multiplication  and  Elongation  of  Tea  Clone  Iran  100  (Camellia  sinensis (L.) O. Kuntze), ” Sci. World J. , 2014.
[29] Lizawati, “ Induksi  Kalus  Embriogenik  dari  Eksplan  Tunas  Apikal Tanaman Jarak Pagar (Jatropha Curcas L.) dengan Penggunaan 2,4 D dan TDZ, ” vol. 1, no. 2, 2012.
[30] E. F. George, A. H. Michael, and D. K. Greet-Jan, Plant Propagation by Tissue Culture . Netherlands: Springer, 2008.
[31] K.  S.  Nagesh,  S.  Shantamma,  and  T.  Pullaiah, “ Somatic  Embryogenesis and  Plant  Regeeration  from  Callus  Cultures  of  Curculigo  orchioides Gertn, ” Indian J. Biotechnol. , vol. 9, pp. 408 – 413, 2010.
[32] L.  Admojo,  I.  Ari,  and  H.  Hananto, “ Perkembangan  Penelitian  Induksi Kalus  Embriogenik  Pada  Jaringan  Vegetatif  Tanaman  Karet  Klonal (Hevea  brassiliensis  Muell.  Arg), ” War.  Perkaretan ,  vol.  33,  no.  1,  pp. 19 – 28, 2014.
[33] Kikuchi et al. , “ Abscisic Acid and Stress Treatment are Essential For The Acquisition  of  Embryogenic  Competence  by  Carrot  Somatic  Cells ” , Planta, ” Planta , vol. 223, pp. 637 – 645, 2006.
[34] V. Raghavan, “ Role 2,4-Dicholorophenoxyacetic Acid (2,4-D) in Somatic Embryogenesis  on  Cultured  Zygotic  Embryos  of  Arabidopsis:  Cell Expansion,  Cell  Cycling,  and  Morphogenesis  During  Continuous Exposure  of  Embryos  to  2,4-D, ” Am.  J.  Bot. ,  vol.  91,  no.  11, pp.  1743 – 1756, 2004.
[35] I.  Dehghani,  A.  Mostajeran,  and  G.  Asghari, “ In  Vitro  and  In  Vivo Production  Of  Gingerols  And  Zingiberene  in  Ginger  Plant  (Zingiber officinale Roscoe), ” Iran. J. Pharm. Sci. , vol. 7, no. 2, pp. 117 – 121, 2011. [36] T.  H.  Aye,  K.  M.  Twin,  and  A.A.  Khain, “ Propagation  of  Commercial Tea (Camellia sinensis L.) by Efficient in Vitro Tissue Culture Methods, ” in International  Conference  on  Sustainable  Development:  Issues  dan Prospect , 2008, pp. 1 – 10.
[37] S.  Suhesti et  al. , “ Induksi  Kalus  dan  Regenerasi  Dua  Varietas  Tebu (Saccharum  ofiicinarum  L.)  Secara  In  Vitro, ” J.  Littri ,  vol.  21,  no.  2, 2015.
[38] K.  D.  Pandey,  K.  S.  Arvind,  Bhupendra,  and  Chaudhary, “ Boron- Mediated  Plant  Somatic  Embryogenesis:  A  Provocative  Model, ” J.  Bot. , 2012.
[39] Yelnititis, “ Induksi Embrio Somatik Shorea pinanga Scheff. Pada Kondisi Fisik Media Berbeda, ” J. Pemuliaan Tanam. Hutan , vol. 7, no. 2, pp. 73 – 84, 2013.
[40] Y.  H.  Su,  L.  Yu-Bo,  and  S.  Z.  Xian, “ Auxin-Cytokinin  Interaction Regulates  Meristem  Development, ” Mol.  Plant ,  vol.  4,  no.  4,  pp.  616 – 625, 2011.
[41] S.  H.  Howell, Molecular  Genetics  of  Plant  Development .  United Kingdom: Cambridge University Press, 2000.
[42] O.  Leyser  and  S.  Day, Mechanism  in  Plant  Developmen .  Blackwell Publishing Ltd, 2003.
[43] P.  Y.  Goo,  A.  H.  N.  In-Suk,  and  Peter, “ Effect  of  Exogeneous  Plant Growth Regulators on Morphogenetic Response in Vitro by Embryo and Leaf  Cultures  of  Camellia  sinensis  (L.)  O.  Kuntze, ” Korean  J.  Plant Tissue Cult. , vol. 24, no. 3, pp. 129 – 135, 1997.
[44] V.  M.  Jiménez, “ Regulation  of  In  Vitro  Somatic  Embryogenesis  With Emphasis  on  The  Role  of  Endogenous  Hormones, ” Rev.  Bras.  Fisiol. Veg. , vol. 13, no. 2, pp. 196 – 223, 2001.
[45] S. A. Merkle, W. Parrot, and B. S. Flin, Morphogenic Aspect of Somatic Embryogenesis,  In:  Torpeded  In  Vitro  Embryogenesis  in  Plants . Dordrecht, 1995.
[46] A.  Sedighi,  S.  D.  Farideh,  Mansour,  Gholami,  and  R.  K.  Mahmoud, “ Study  of  The  Effect  of  Plant  Growth  Regulators,  Size,  and  Cultivar  of The  Grape  Inflorescence Explant on Production of Phenolic Compounds In An in Vitro Condition, ” J HerbMed Pharmacol , vol. 3, no. 1, pp. 35 – 40, 2014.
[47] A. S. N. Ali, F. A. Siddiqui, and J. Iqbal, “ Rapid Clonal Multiplication of Sugarcane
(Saccharum officinarum) Trough Callogenesis and Organogenesis, ” Pak. J. Bot , vol. 4, no. 11, pp. 123 – 138, 2008.
[48] R. L. M. Pierik, In Vitro Culture of Hinger . Netherland: Martinus Nijhoft Publisher, 1987.
[49] D. E. Evans, J. O. D. Coleman, and A.  Kearns, Plant Cell Culture . New York: Bios Scientific Publishers Limited, 2003.
[50] P. H. Raven and B. J. George, Biology Sixth Edition . Mc Graw Hill, 2001. [51] W.  Handayani,  N.  Yulita,  and  S.  Nintya, “ Respon  Pertumbuhan  dan Produksi  Alkaloid  pada  Kalus  Berakar  Datura  metel  L.  Terhadap Peningkatan  Mikronutrie  dari  Medium  MS, ” Bul.  Anat.  dan  Fisiol. ,  vol. 20, no. 1, pp. 29 – 36, 2012.
[52] D. Waryastuti, E. Lilik, T. Setyobudi, and Wardiyati, “ Pengaruh Tingkat Konsentrasi  2,4-D  Dan  BAP  pada  Media  MS  Terhadap  Induksi  Kalus Embriogenik  Temulawak  (Curcuma  xanthorrhiza  Roxb.), ” J.  Produksi Tanam. , vol. 5, no. 1, pp. 140 – 149.
[53] D.  L.  Rayle  and  E.  C.  Robert, “ The  Acid  Growth  Theory  of  Auxin- induced  Cell  Elongation  Is  Alive  and  Well, ” Plant  Physiol ,  vol.  99,  pp. 1271 – 1274, 1992.