## PENGARUH LAMA PENYIMPANAN EKSTRAK KASAR MAKROALGA ULVA LACTUCA TERHADAP KESTABILAN PIGMEN FOTOSINTESIS
THE EFFECT OF STORAGE TIME OF ULVA LACTUCA MACROALGAE CRUDE EXTRACT ON PHOTOSYNTHETIC PIGMENTS STABILITY
Nurani Hasanela 1* , Nelson Gaspersz 2 , Rosita Silaban 3 , Mario Rowan Sohilait 4
1,2,4 Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pattimura, Ambon, Indonesia
3 Program Studi Teknologi Kelautan, Jurusan Teknologi Hasil Perikanan, Politeknik Perikanan Negeri Tual Kabupaten Maluku Tenggara, Indonesia
*Email: nurani.hasanela@yahoo.co.id
Diterima: 27 September 2020. Disetujui: 20 Oktober 2020. Dipublikasikan: 28 Desember 2020
Abstrak: Banyak  kandungan  senyawa  kimia  bermanfaat  dalam  makroalga  yang  bernilai  ekonomi  tinggi  tetapi belum  diteliti  secara  luas,  seperti  pigmen  fotosintesis.  Peningkatan  kebutuhan  pigmen  fotosintesis  pada  dunia industri  menyebabkan  pencarian  sumber  alternatif  pigmen  fotosintesis  masih  terus  dilakukan  diantaranya  dari makroalga. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui pengaruh lama penyimpanan ekstrak kasar  makroalga Ulva lactuca terhadap  kestabilan  pigmen  fotosintesis.  Tahapan  penelitian  meliputi,  isolasi  pigmen  fotosintesis, pemurnian  menggunakan  kromatografi  kolom  silika,  karakterisasi  pigmen  fotosintesis  dengan  KLT  dan spektrofotometer  UV–Vis.  Hasil  KLT  dari  ekstrak  kasar Ulva  lactuca dalam  penelitian  ini  menunjukkan  adanya perbedaan  jumlah  dan  jenis  pigmen fotosintesis  yang  ditandai dengan warna  yang mencolok antara ekstrak  kasar Ulva  lactuca yang  diekstrak  langsung  dan  dibiarkan  kurang  lebih  3  hari.  Pada  hasil  kromatogram  menunjukkan bahwa ada 7 fraksi pigmen fotosintesis dan memiliki warna yang sangat mencolok yang diekstrak secara langsung, sedangkan ekstrak kasar yang dibiarkan kurang lebih 3 hari menunjukkan hanya 5 fraksi pigmen fotosintesis dengan warna yang agak pucat. Fraksinasi dengan kromatografi kolom silika gel menunjukkan adanya pigmen fotosintesis sebanyak  29  fraksi.  Setelah  diindentifikasi  dengan  spektofotometer  UV–Vis  ada  4  fraksi  utama  yaitu ß- karoten, fukoxantin,  klorofil a, dan  feofitin a. Lama  penyimpanan  terhadap  ekstrak  kasar Ulva  lactuca mempengaruhi pigmen fotosintesis secara kualitatif dan kuantitatif.
Kata Kunci : Ekstrak kasar, Fraksi, Pigmen fotosintesis, Ulva lactuca .
Abstract: There are many benefits of chemical compounds in macroalgae that have a high economic value but have not been widely studied, such as photosynthetic pigments. The increasing demand for photosynthetic pigments in industry causes the seeking for the  alternative  sources,  including from  macroalgae.  The  aim  of this  study  was to determine the effect of storage time of Ulva lactuca macroalgae crude extract on photosynthetic pigments stability. The research stages were the isolation of photosynthetic pigments, purification using silica column chromatography and  characterization  using  TLC  and  UV-Vis  spectrophotometer.  The  TLC  results  of  the  study  showed  that  the amount and type of photosynthetic pigments had significant differences between the crude extract of Ulva lactuca that  were  directly  extracted  which  left  for  3  days.  There  were  7  fractions  of  photosynthetic  pigments  with  very striking color from crude extract which was extracted directly, meanwhile the crude extract which left for 3 days showed  only  5  fractions  of  photosynthetic  pigments  with  pasty  color.  Fractionation  by  silica  gel  column chromatography showed 29 fractions of photosynthetic pigments. After the pigments of photosynthetic were being identified  with  a  UV-Vis  pectophotometer,  there  were  4  main  fractions,  namely  ß-carotene,  fucoxanthin, chlorophyll a,and pheophytin a. The storage time for the crude extract of Ulva lactuca influenced the photosynthetic pigments qualitatively and quantitatively .
Keywords: Crude extract, Fractions, Photosynthetic pigments, Ulva lactuca.

## PENDAHULUAN
Selain sebagai produk pangan, potensi lain dari makroalga  jenis Ulva  lactuca yaitu  dapat  dijadikan antioksidan, biogas dan bioetanol. Banyak kandungan kimia bermanfaat lainya dalam makroalga yang bernilai ekonomi tinggi tetapi belum diteliti secara luas, seperti pigmen fotosintesis. Pada umumnya,  sumber  pigmen  fotosintesis  berasal  dari sayur-sayuran dan buah-buahan. Namun,
peningkatan  kebutuhan  pigmen  fotosintesis  pada dunia  industri  seperti  industri  pangan,  industri kosmetik  dan  industri  kesehatan,  menyebabkan pencarian  sumber  alternatif  pigmen  fotosintesis masih  terus  dilakukan  diantaranya  dari  makroalga. Pada industri pangan, Pigmen fotosintesis digunakan sebagai  pewarna  alami  [1].  Pada  bidang  kesehatan, pigmen  fotosintesis  dapat  dimanfaatkan  sebagai antioksidan  dalam  perlindungan  sel  akibat  radikal
bebas  yang  dapat  menyebabkan  berbagai  jenis kanker, serangan jantung dan penuaan dini [2].
Kelompok  besar  pigmen  fotosintesis  dari makroalga Ulva  lactuca terdiri  dari  klorofil  dan karatenoid. Klorofil sendiri terbagi atas klorofil a, b, c dan d. Perbedaan warna pada klorofil a dan klorofil b  diakibatkan  oleh  terjadinya  pergeseran  ke  daerah hijau  sehingga  mengakibatkan  klorofil  a  berwarna hijau  kebiruan  sedangkan  klorofil  b  berwarna  hijau kekuningan [3].  Pigmen-pigmen  fotosintesis seperti klorofil  dan  karatenoid  memiliki  kelemahan  yaitu mudah  terdegradasi  pada  kondisi  fisik  dan  kimia seperti  suhu,  cahaya  matahari,  pH  dan  oksigen menjadi senyawa-senyawa turunannya [4].
Ulva lactuca (selada laut) merupakan salah satu jenis  makroalga  hijau,  mempunyai  kandungan antioksidan, antibakteri, antijamur dan antitumor [5]. Ulva lactuca memiliki panjang kurang lebih 100 cm dan  berwarna  hijau  apel  terang,  bentuknya  berupa lembaran  atau  helaian-helaian  tipis  seperti  daun selada  dengan  tepi  bergelombang  (Gambar  1). Ulva lactuca bersifat  eukariotik,  memiliki  klorofil sehingga  dapat  berfotosinteisis  dan  hidupnya  berada di perairan dangkal.
Gambar 1. Selada laut Ulva lactuca
Penelitian  tentang  pemanfaatan  lamun  belum banyak dilaporkan, tetapi baik kegunaannya dibidang pangan,  farmasi  dan  industri  rumah  tangga  telah dilaporkan  dengan  menggunakan  lamun  sebagai bahan  utama.  Pigmen  dari  tanaman  lamun  termasuk salah satu produk yang menarik untuk diteliti karena berhubungan  dengan  metabolisme  sel.  Dua  jenis pigmen  yang  sangat  berperan  penting  dalam  proses fotosintesis  yaitu  klorofil  dan  golongan  karotenoid [6].
Klorofil  merupakan  senyawa  bercincin  pirol dengan  ion  Mg 2+ pada  pusatnya,  yang  mengandung sebuah cincin isosiklik segilima yang disebut porfirin (Gambar  2).  Klorofil  juga  memiliki  rantai  panjang alkohol terpenoid yang berperan penting pada proses fotosintesis  disebut  sebagai  fitil.  Namun,  rantai  fitil ini tidak ditemukan pada klofil c di diatom. Klorofil menyerap  cahaya  biru-violet  dan  merah  sehingga dapat mengekspresikan warna hijau. Struktur pigmen klorofil a dan klorofil b ditunjukkan pada Gambar 2.
Gambar 2. Gambar klorofil a (a) klorofil b (b)
(Gross, 1991)
Saat ini lebih dari 700 jenis senyawa karotenoid berhasil diidentifikasi di alam (Gambar 3). Senyawa karotenoid  umumnya  disintesis  dari  tanaman,  alga dan  beberapa  mikroorganisme.    Karotenoid dikelompokan  ke  dalam  senyawa karoten  dan senyawa  xantofil.  Ada  tujuh  jenis  senyawa karotenoid  yang  ditemukan  pada  diatom.  Contoh senyawa  karoten  yang  paling  banyak  diketahui adalah ß -karoten,  Contoh  senyawa  xantofil  adalah fukoxantin,  diatoxantin,  diadinoxantin,  zeaxantin, anteraxantin  dan  violaxantin.  Warna  senyawa karotenoid  sangat  bervariasi  mulai  dari  warna kuning, oranye, hingga merah [7].
C H3 O CH3 O C H3 C H3 C H3 CH3 CH3 OH C CH3 CH3 O C H3 O O H CH3 C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C H C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 CH 3 O C H 3 C H 3 OH O H C H 3 C H 3 CH 3 C CH 3 C CH 3 CH 3 C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C H 3 C C H 3 C C H 3 C H 3 C H 3 O H O H
Gambar 3. Beberapa contoh struktur senyawa karotenoid yang terdapat di alam. Fukoxantin (a), β- karoten (b), diadinoxantin (c), dan diatoxantin

## METODE PENELITIAN
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  heksana  (pa  Merck),  aseton  (pa  Merck), silika  gel  60  G  (Merck  7733),  aquades,  alumunium foil,  aseton  teknis,  dan  plat  KLT,  sedangkan  alat yang digunakan chamber KLT, kolom kromatografi, dan spektrofotometer UV-Vis.

## Ekstraksi  Pigmen  Fotosintesis  dari  Biomassa Kering Makroalga
Makroalga  yang  diperoleh  dari  lapangan dikeringkan selama ±24 jam dengan pengering beku dalam  kondisi  vakum  dengan  tujuan  untuk mengurangi  kandungan  air  tanpa  merusak  pigmen fotosintesis  yang  akan  diekstrak.  Berat  biomassa kering  ditimbang  dengan  neraca  analitik  sebanyak 0,5  g  dan  dilarutkan  dalam  10  mL  aseton  p.a kemudian dihomogenasi selama 3 menit dan 1 menit istirahat. Siklus berikutnya ditambahkan 5 mL aseton dengan  siklus  yang  sama  sampai  larutan  aseton
hampir  tidak  berwarna  lagi.  Ekstrak  pigmen fotosintesis  didinginkan  dalam  penangas  es.  Ekstrak kasar  pigmen  fotosintesis  kemudian  disentrifugasi dengan  kecepatan  4500  rpm  selama  10  menit  untuk mengambil  supernatannya.  Untuk  mendapatkan ekstrak  pigmen  fotosintesis,  pelarut  yang  terdapat dalam  supernatan  diuapkan  dengan  mengalirkan  gas N 2 .
Karakterisasi Pigmen Fotosintesis dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
KLT  dilakukan  untuk  mengetahui  jumlah  dan jenis  pigmen  fotosintesis  yang  telah  berhasil diekstraksi.  Sebanyak  25  µL  ekstrak  kasar  pigmen ditotolkan  pada  pelat  silika  berukuran  3  ×  10  cm. Ruang  bejana  KLT  dijenuhkan  dengan  eluen heksana:  aseton  (7:3)  selama  30  menit.  Pelat kemudian  dielusi  dalam  bejana  KLT.  Jarak  noda diukur  dan  nilai  faktor  rentensi  (R f )  dari  masing- masing pigmen fotosintesis ditentukan.

## Pemurnian Pigmen Fotosintesis
Pigmen  fotosintesis  murni  dapat  diperoleh dengan menggunakan teknik pemisahan kromatografi  kolom  silika  gel.  Silika  60  G  (merck 7733) digunakan sebagai matriks kolom dan gradien eluen  heksan:aseton  (4:1,  3:2,  2:3,  dan  1:4  v/v) sebagai  fasa  gerak.  Sebanyak  10  g  Silika  60  G (merck  7733)  ditimbang,  kemudian  direndam  dalam 20  mL  pelarut  heksan:aseton  (4:1)  ±12–24  jam. Selanjutnya  silika  dimasukan  kedalam  kolom  dan dialiri  eluen  sampai  terbentuk  kolom  yang  padat dengan  panjang  kolom  45  cm  dan  berdiameter  1,5 cm.  Sebanyak  ±  50  mg  ekstrak  kasar  pigmen fotosintesis  dicampurkan  dengan  1  g  silika  60  G (merck  7733),  selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam kolom  secara  perlahan.  Selanjutnya  kecepatan  elusi diatur  0,15  mL/menit  (±12  jam).  Pemurnian dilakukan  dalam  ruang  gelap  dan  pada  suhu  ruang untuk menjaga kestabilan pigmen fotosintesis. Fraksi pigmen  fotosintesis  ditampung  dalam  tabung mikrotube 1,5  mL  dan  disimpan  pada  –20 °C  untuk mencegah  terjadinya  kerusakan  pigmen  akibat  suhu dan cahaya yang berlebih.

## Karakterisasi Pigmen Fotosintesis
Senyawa  klorofil  dan  karotenoid  yang  terdapat dalam  fraksi  pigmen  fotosintesis  dikarakterisasi dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV–Vis. Ekstrak kasar sampel ditempatkan pada spektrofotometer UV–Vis dan dilakukan pemindaian serapan  dengan  panjang  gelombang  dari  380–800 nm.  Jenis  pigmen  dari  masing-masing  fraksi dianalisis dari spektrum UV-Visnya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Morfologi Ulva lactuca Karakteristik  morfologi Ulva  lactuca berwarna hijau  terang,  berupa  lembaran  tipis  mirip  dengan daun  selada  sehingga  biasa  disebut  selada  laut. Sebelum  melakukan  proses  ekstraksi, Ulva  lactuca
dikeringkan dengan  menggunakan freeze  dry untuk menjaga  kestabilan  struktur  sampel  yang  sensitif terhadap  panas. Ulva  lactuca yang  dihasilkan  dari pengeringan freeze  dry berupa  biomassa  kering berwarna  hijau  pucat.  Pengeringan  biomassa Ulva lactuca dimaksudkan agar sel-sel Ulva lactuca dapat tahan lama  dan  tidak berjamur. Biomassa basah dan biomassa  kering Ulva  lactuca dapat  dilihat  pada Gambar 4.
Gambar 4. Biomasa basah (a) dan biomassa kering
(b) Ekstrak Pigmen Fotosintesis Ulva lactuca Ekstraksi pigmen
dilakukan untuk mengeluarkan  ekstrak  pigmen  dari  sel  makroalga Ulva  lactuca .  Pada  penelitian  ini,  aseton  digunakan sebagai  pelarut  organik  untuk  mengekstrak  pigmen fotosintesis Ulva  lactuca. Kestabilan  pigmen fotosintesis  sangat  dipengaruhi  oleh  foktor  fisik  dan kimia  diantaranya  cahaya,  pH,  oksigen  dan  suhu. Oleh  sebab  itu,  ektraksi  pigmen  fotosintesis dilakukan  dalam  suasana  gelap  dan  diberi  penangas es.  Keberhasilan  ektraksi  pigmen  fotosintesis ditandai  dengan  pecahnya  sel Ulva  lactuca, menghasilkan  ekstrak  hijau  pekat  sampai  berubah menjadi  warna  hijau  pucat.  Cairan  supernatan pigmen  fotosintesis  yang  diperoleh  disebut  sebagai ekstrak  kasar  pigmen  fotosintesis.  Selanjutnya, ekstrak  kasar  pigmen  fotosintesis  ini  disimpan selama  kurang  lebih  3  hari  di  dalam  lemari pendingin.  Hal  ini  dimaksudkan  untuk  mengetahui pengaruh  lama  penyimpanan  terhadap  kestabilan pigmen  fotosintesis.  Perubahan  warna  proses ekstraksi  makroalga Ulva  lactuca dapat  ditunjukkan pada Gambar 5.
Gambar 5. Perubahan warna proses ekstraksi makroalga Ulva lactuca
(a) (b)

## KLT dari Ekstrak Kasar Pigmen Fotosintesis
Karakterisasi  Kromarografi  Lapis  Lipis  (KLT) dilakukan  untuk  mengetahui  jumlah  dan  jenis pigmen  fotosintesis  yang  terkandung  dalam  ekstrak kasar Ulva lactuca. Ekstrak kasar pigmen fotosintesis dielusi  pada  pada  plat  KLT  ukuran  3x10  cm,  yang tersusun  oleh  matriks  silika  dengan  menggunakan eluen  n-heksan:aseton  (7:3  v/v).  Pada  penelitian  ini, dilakukan  dua  perlakuan  yaitu,  ekstrak  kasar    yang langsung  dikrakterisasi KLT  dan ekstrak  kasar  yang disimpan  kurang  lebih  3  hari  selanjutnya dikarakterisasi dengan KLT. Kromatogram menunjukkan  perbedaan  jumlah  dan  jenis  pigmen fotosintesis yang mencolok gambar 6.
Gambar 6. Kromatogram pigmen fotosintesis dari ekstrak kasar yang langsung   di KLT (a) dan yang dibiarkan kurang lebih 3 hari (b).
Kromatogram  pigmen  fotosintesis  dari  ekstrak kasar Ulva  lactuca yang  langsung  di  KLT  (Gambar 6a)  menunjukan  pita  serapan  yang  sangat  tebal  dan memiliki  warna  yang  sangat  mencolok.  Pada kromatogram  ini,  ada  7  pita  serapan  tebal  yang menunjukan  jenis-jenis  pigmen  fotosintesis  yaitu ß- karoten  (pita  No.1)  ditandai  dengan  warna  kuning atau  warna  orange,  feofitin a (pita  no.2)  berwarna abu  kecoklatan.  Feofitin a merupakan  turunan  dari klorofil a tanpa  adanya  ion  Mg + .  Klorofil a (pita no.4,5)  memiliki  warna  yang  khas  yaitu  hijau kebiruan  yang memiliki pita sangat tebal.  Klorofil a merupakan  prekusor  biosintesis  menghasilkan klorofil b . Pada kromatogram ini tidak menunjukkan adanya klorofil b, padahal klorofil b banyak terdapat pada jenis makroalga [8]. Hal ini disebabkan  karena klorifil b sangat sensitif dan mudah terdegradasi yang disebabkan  oleh  panas  dan  lama  pemyimpanan  [9]. Antosianin diduga  pada (pita  No.6)  yang  ditujukkan adanya  warna  ungu  pada  kromatogram.  Fukosantin (pita No.7) sangat terlihat jelas dengan warna orange kemerahan.  Kromatogram  ekstrak  kasar  pigmen fotosintesis  yang  dibiarkan  kurang  lebih  3  hari menunjukan warna yang pudar dan pita serapan yang tidak  terlalu  tebal  hanya  sebanyak  5  pita  pada  plat KLT  (Gambar  6b).  Dari  kromatogram  ini, menunjukan  ada  2  pigmen  fotosintesis  yang  tidak muncul.  Hal  ini  disebabkan  karena  pigmen fotosintesis  sangat  mudah  terdegradasi  oleh  faktor- faktor  fisik  seperti  cahaya  dan  oksigen.  Lama penyimpanan  membuat  pigmen  fotosintesis  yang berada dalam ekstrak  kasar Ulva lactuca mengalami proses  oksidasi  panjang  dan  proses  degradasi  lebih lama sehingga menyebabkan sebagian pigmen hilang dan  pudar  warnanya  (tidak  stabil).  Fraksi–fraksi pigmen  fotosintesis  dan  nilai  R f Ulva  lactuca dapat ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Nilai R f Pigmen fotosintesis Ulva lactuca No Warna Nilai R f Prediksi Pigmen Ekstrak kasar langsung di KLT Ekstrak kasar (Lama penyimpanan) ± 3 hari 1 Kuning 0,9-0,98 ß -karoten   2 Hijau abu-abu 0,47-0,63 Feofitin a   3 Hijau muda 0,3-0,37 klorofillida  - 4 Hijau kebiruan 0,27-0,33 Klorofil a 1   5 Hijau kebiruan 0,26 Klorofil a 2   6 Ungu 0,22 Antosianin  - 7 Orange 0,1-0,2 Fucoxantin   Total Fraksi 7 5
Fraksinasi  dengan  Kromatografi  Kolom  Silika Gel
Kromatografi  kolom  silika  gel  bertujuan  untuk memisahkan pigmen fotosintesis Ulva lactuca murni berdasarkan  tingkat  kepolaran  (Gambar  7).  Pigmen fotosintesis  yang  merupakan  senyawa  berwarna menyebabkan  proses  pemisahan  dapat  diamati dengan mudah secara visual. Pemurnian kromatografi kolom silika akan memisahkan pigmen fotosintesis  berdasarkan  kepolarannya,  dengan  fasa
diam  silika  dan  fasa  gerak  heksana:aseton.  Pigmen fotosintesis  yang  memiliki  kepolaran  tinggi  akan terikat  kuat  pada  silika,  sementara  pigmen fotosintesis dengan kepolaran lebih rendah akan lebih mudah  terbawa  oleh  fasa  gerak  [9]  Kondisi pemurnian  pigmen  fotosintesis Ulva  lactuca dengan kromatografi kolom silika gel dapat ditunjukkan pada Tabel  2.  Fraksi  pigmen  fotosintesis  dari        ekstrak kasar Ulva  lactuca yang    dibiarkan    selama3  hari diperoleh  sebanyak  29  fraksi.  Sebelum  melakukan
(a) (b) 1 2 7 3 6 5 4 5 4 3 2 1
pemurnian,  silika  gel  yang  digunakan  direndam dalam  n-hekasan:aseton  sekitar  12-24  jam  sehingga volome  dari  silika  menjadi  lebih  besar.  Selain  itu ekstrak  kasar  pigmen  fotosintesis  yang  akan diinjeksikan  kedalam  kolom  harus  mengalami impregnasi  atau  peresapan  pada  silika.  Hal  ini dilakukan untuk menyeragamkan fasa antara pigmen dan kolom sehingga mempermudah penetrasi pigmen fotosintesis  ke  dalam  kolom.  Kondisi  pemurnian pigmen fotosintesis
Ulva lactuca dengan kromatografi  kolom  silika  gel  ditunjukkan  pada Tabel 2.
Gambar 7. Kolom kromatografi silika gel (a) dan pigmen fotosintesis hasil pemisahan (b)
Pemurnian  pigmen  fotosintesis Ulva  lactuca yang  dilakukan  ditunjukkan  pada  (Gambar  7a) dimana  pigmen  akan  memasuki  kolom  dan komponen  penyusunnya  akan  terpisah  berdasarkan afinitasnya terhadap fasa diam (silika) dan fasa gerak (eluen  n-heksan:aseton).  Pigmen  fotosintesis  yang ada  dalam  kolom  kromatografi  menunjukan  kondisi yang  sama  pada  uji  karakterisasi  dengan  plat  KLT karena  pigmen  yang  terlihat  memiliki  jenis  yang sedikit  dan  berwarna  pucat.  Hal  ini  disebabkan karena  lama  penyimpanan  juga  mempengaruhi kestabilan  dari pigmen  fotosintesis [9]. Fraksi-fraksi pigmen  fotosintesis  hasil  pemurnian  dikumpulkan dan  diperoleh  sebanyak  29  fraksi  (Gambar  7b), dimana diduga ß- karoten sebanyak 5 fraksi, feofotin a sebanyak 4 fraksi, klorofil a sebanyak 6 fraksi dan fukoxantin  sebanyak  14  fraksi.  Selanjutnya  akan dianalisis lebih lanjut menggunakan spektrofotometer sinar  tampak  pada  panjang  gelombang  380-800  nm untuk  mengetahui  secara  pasti  jenis  dari  pigmen fotosintesis.
Tabel 2. Kondisi kolom, sampel, dan pemisahan
Identifikasi  Fraksi  Pigmen  Fotosintesis Ulva lactuca dengan Spektrofotometer UV-Vis
Pengujian dengan menggunkan spektofotometri sinar  tampak  ditujukan  untuk  melihat  serapan spesifik  pigmen  fotosintesis  pada  daerah  sinar tampak.  Pigmen  fotosintesis  merupakan  senyawa berwarna yang memiliki gugus kromofor yang dapat menyerap  energi  pada  panjang  gelombang  yang cukup  tinggi  (400-800  nm).  Jumlah  heteroatom  dan ikatan  rangkap  terkonjugasi  dalam  struktur  pigmen fotosintesis  akan  menentukan  daerah  serapan karakteristik,  sehingga  dapat  digunakan  sebagai analisis  kuantitatif  pigmen  fotosintesis  [10].  Secara umum,  pigmen  fotosintesis  terbagi  atas  2  kelompok yaitu  klorofil  dan  karatenoid.  Karotenoid  memiliki serapan  panjang  gelombang  khas  3  puncak  pada daerah 400-500 nm. Bersarkan pemurnian yang telah dilakukan,  diduga  ada  2  fraksi  karotenoid  yang berhasil diisolasi dari Ulva lactuca.
Fraksi  pertama  yang  berhasil  teridentifikasi yaitu ß- karoreten. ß- karoreten  berwarna  kuning cerah,  bersifat  sangat  nonpolar  dan  memiliki karakteristik serapan 3 puncak dengan serapan utama pada 452 nm, serapan pada bahu kiri dan kanan 427 dan 479 nm (Gambar 8a). Hal ini bersesuaian dengan spekrum standar ß- karoten, 453,5 dan 479,9 nm serta bahu  puncak  426  nm  (Gambar  IV.  8b). ß- karoten termasuk  salah  satu  golongan  karotenoid  yang berfungsi sebagai pelindung sel (Jeffrey, dkk., 1997). Fraksi ß- karoten dapat dilihat pada (Gambar 8c).
Kondisi Kolom dan Sampel
Matriks Ukuran partikel Luas permukaan spesifik Silika 60 G 200–500  µm 450–500  m 2 /g Jumlah sampel ± 50 mg Pigmen fotosintesis, diimpregnansi dalam 1 g silika Kondisi Pemisahan Tinggi kolom Diameter kolom Volume klom 35–45 cm 0,785 cm 2 23–28 cm 3 Laju alir linier Laju alir eluen 6,5 cm/jam 0,15 mL/menit Eluen Heksana: aseton (4:1, 3:2, 2:3, dan 1:4) (a) (b) 1      2     3    4    5      6       7      8    9   10 11  12    13   14   15    16    17   18  19  20 21   22   23   24   25    26    27   28     29
Gambar 8. Spektrum ß -karoten makroalga Ulva lactuca (a), Spektrum ß -karoten standar (b), dan fraksi ß -karoten (c).
Gambar 9. Spektrum absorbsi dan fraksi fukoxantin. Spektrum fukoxantin (a), spektrum fukoxantin standar (b) dan fraksi fukoxantin
Karotenoid  lain  yang  berhasil  diisolasi  dan diidentifikasi  dari Ulva  lactuca adalah  fukoxantin (Gambar 9). Fukoxantin berwarna oranye kemerahan dan  memiliki  puncak  serapan  maksimum  pada daerah  447  dan  470,5  nm  (Gambar  9a).  Hal  ini bersesuain  dengan  puncak  serapan  standar  yaitu 446,3 dan 468,3 nm (Gambar 9b). Fukoxantin dilihat
dari  tingkat  kepolaran,  memiliki  kepolaran  yang lebih  tinggi  dibandingkan ß -karoten  karena  adanya gugus  hidroksi.  Fraksi  fukoxantin  dapat  dilihat (Gambar 9c).
Gambar 10. Spektrum absorbsi dan fraksi klorofil a . Spektrum klorofil a (a), spektrum klorofil a standar (b) dan fraksi klorofil a
Kelompok pigmen fotosintesis lain dari Ulva lactuca adalah  pigmen  klorofil  dan  turunannya.  Pigmen fotosintesis  ini  umumnya  ditandai  dengan  serapan tajam  pada  2  panjang  gelombang  spesifik  yaitu daerah  biru  dan  merah.  Kelompok  klorofil  yang berhasil  diidentifikasi  adalah  klorofil a yang merupakan  pigmen  fotosintesis  utama.  Puncak serapan  utama  klorofil a pada  430  dan  663  nm, menyerap  agak  lemah  pada  daerah  500  dan  600  nm (Gambar  10a)  [11].  Hal  ini  bersesuaian  dengan klorofil  standar  yang  serapan  utama  berada  pada daerah  430  dan  662  nm,  serapan  agak  lemah  pada 534,  581  dan  616  nm  (Gambar  10b).  Klorofil a merupakan  pigmen  utama  penyerap  cahaya  yang terdapat  dalam  membran  tilakoid  yang  berperan penting  dalam  proses  fotosintesis.  Fraksi  Klorofil a dapat dilihat pada (Gambar 10c).
427 452 479 (a) (b) (c)
(c) (b) (a) (a) (b) (c) 616 580,5 430 409 663 470,5 447
Gambar 11. Spektrum absorbsi dan fraksi feofitin a . Spektrum feofitin a (a), spektrum feofitin a standar (b) dan fraksi feofitin a
Fraksi  kedua  dari  klorofil  yang  berhasil diisolasi dan teridentifikasi adalah feofitin a (Gambar 11). Feofitin a berwarna hijau kecoklatan merupakan turunan dari klorofil a tanpa adanya Mg 2+ pada atom pusatnya  karena  klorofil a sangat  sensitif  mudah mengalami  degradasi  oleh  panas  atau  cahaya. Feofitin a memiliki  profil  mirip  dengan  klorofil a dengan  2  puncak  serapan.  Perbedaan  yang  cukup signifikan  adalah  pada  klorofil a mengalami pergeseran  ke  panjang  gelombang  yang  lebih  kecil. Puncak  serapan  yang  berbeda  dari  klorofil a dan feofitin a menyebabkan  kedua  pigmen  ini  memiliki warna yang berbeda. Feofitin a yang menyerap pada daerah  ungu  dan  merah  menjadikan  pigmen  ini memiliki  warna  hijau  kecoklatan.  Berdasarkan spektrum absorbsi feofitin a memiliki serapan utama pada  409  dan  666  nm  (Gambar  11a).  Hal  ini bersesuaian dengan feofitin a standar yaitu pada 410 dan  665  nm  (Gambar  11b).  Fraksi  feofitin a dapat dilihat pada (Gambar 11c).

## KESIMPULAN
Lama  penyimpanan  terhadap  ekstrak  kasar Ulva lactuca mempengaruhi  pigmen  fotosintesis  secara kualitatif  dan  kuantitatif.  Hal  ini  disebabkan  karena proses  oksidasi  panjang  dan  proses  degradasi  lebih lama sehingga menyebabkan sebagian pigmen hilang dan pudar warnanya (tidak stabil).

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Philipe, J. B., (2011). Natural Food Colorants,
Natural Food Colorants,3
[2] Guedes, A. C., Amaro, H. M., & Malcata,  F. X.  (2011).  Microalgae  as  Sources  of Carotenoids. Marine Drugs. 9. 625-644.
[3] Gross  J  (1991), Pigment  in  Vegetables . Chlorophyll  and  Carotenoids ,  Van  Nostrand Reinhold: New York.
[4] Darwis,  D.,  Basri,  A.  S.,  &  Iqbal.  (2007). Pengawetan Klorofil Daun Katuk Sebagai Zat Pewarna Untuk Bahan DSSC  ( Dye Sensitized
Solar  Cell )  Dengan  Menggunakan Freeze
Drying. Gravitasi 15 (1).1-6.
[5] Arbi,  B.,  Ma’ruf,  W.  F.,  &  Romadhon. (2016).  Aktivitas  Senyawa  Bioaktif  Selada Laut ( Ulva lactuca ) SebagaiAntioksidan Pada
Minyak Ikan. Indonesian Journal of Fisheries Science and Technology , 12 (1).12-18.
[6] Britton,  G.,  S.  L.  Jamsen  &  H.  Pfander. (1995). Caratenoids. 1B. Spectroscopy . Basel, Switzerland. Hal 347.
[7] Guiry. (2007). Algaebase. National University of Ireland Galway: Irlandia.
[8] Pareek, S., Sagar, N. A., González-Aguilar, G. A.,  Sharma,  S.,  Kumar,  V.,  Agarwal,  T.  & Yahia, E. M. (2017). Chlorophylls: Chemistry and  Biological  Functions. 269-284.Retrieved from:https://www.researchgate.net/publicatio n/319703059.
[9] Rohmat,  N.,  Ibrahim,  R.,  &  Riyadi,  P.  H. (2014). Pengaruh Perbedaan  Suhu Dan  Lama Penyimpanan  Rumput  Laut Sargassum Polycystum Terhadap Stabilitas Ekstrak Kasar Pigmen  Klorofil. Jurnal  Pengolahan  dan Bioteknologi Hasil Perikanan , 3 (1).118-126.
[10] Farasat  M,  Nejad  RAK,  Nabavi  SMB, Namjooyan  F.  (2014)  Antioxidant  activity, total phenolics and ﬂavonoid contents of some edible green seaweed from northern coasts of the  Persian  Gulf. Iranian  Journal  of Pharmaceutical Researc, 13 (1).163-170.
[11] Lehninger, A. L. 1982. Dasar-dasar Biokimia Jlilid  1. Alih  bahasa,  Maggi  Thenawijaya.
Erlangga: Jakarta (c) (a) (b) 409 9 504,5 534,5 608,5 666