## PENENTUAN KADAR RESIDU TETRASIKLIN HCl PADA IKAN AIR TAWAR YANG BEREDAR DI PASAR SEGIRI MENGGUNAKAN METODE SPEKTROFOTOMETRI ULTRA VIOLET
Submitted : 1 November 2016 Edited : 18 November 2016
Accepted : 30 November 2016
Henny Nurhasnawati, Siti Jubaidah, Novita Elfia
Akademi Farmasi Samarinda Email:  henny_akfar@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Tetracycline HCl is one of the most commonly used antibiotics in fish farming that aims to control diseases caused by bacteria. The purpose of this study was to determine the presence and  the  level  of  tetracycline  HCl  antibiotic  residue  in  freshwater  fishes  sold  at  the  Segiri traditional  market.  The  method  used  in  this  research  was  a  standard  addition  ultraviolet spectrophotometry. The results showed that residue level of tetracycline HCl in freshwater fish is 192,067 μg/g - 257,409 μg/g. These result was far exceeded the maximum residue level of tetracycline  class  antibiotics  in  meat  and  dairy  based  on  SNI  01-6366-2000  that  limit  the residue not higher than 0.1 μg/g .
Keywords : Fish, Tetracycline HCl residue, Standard addition,  UV spectrophotometry.

## PENDAHULUAN
Residu  obat  atau  bahan  kimia  adalah akumulasi  obat  atau  bahan  kimia  dan  atau metabolitnya  dalam  jaringan  atau  organ hewan  setelah  pemakaian  obat  atau  bahan kimia  untuk  tujuan  pencegahan/pengobatan atau  sebagai  imbuhan  pakan  untuk  pemacu pertumbuhan.  Residu antibiotik  dalam makanan  asal  hewan  erat  kaitannya  dengan penggunaan  antibiotik  untuk  pencegahan dan pengobatan penyakit serta
penggunaannya  sebagai  imbuhan  pakan. Sebagai  imbuhan  pakan,  antibiotika  dapat memacu  pertumbuhan  ternak  agar  dapat tumbuh  lebih besar  dan  lebih  cepat  serta dapat  mencegah  terjadinya  infeksi  bakteri. Penggunaan antibiotik yang berlebihan serta tidak  dipatuhinya  waktu  henti  obat menyebabkan  timbulnya  residu  di  dalam daging ternak, telur, susu atau produk ternak
lainnya.  Waktu  henti  adalah  kurun  waktu dari  saat  pemberian  obat  terakhir  hingga ternak boleh dipotong atau produknya dapat dikonsumsi (1) .
Ikan  merupakan  sumber  protein, lemak, vitamin dan mineral yang sangat baik oleh  karena  itu  ikan  banyak  dibudidayakan di Indonesia. Salah satu budidaya ikan yang banyak dikembangkan oleh masyarakat ialah budidaya ikan air tawar. Pengembangan dan keberlanjutan  kegiatan  budidaya  ikan  air tawar  sering  menghadapi  kendala,  salah satunya adalah bila terjadi serangan penyakit baik  penyakit  infeksi  maupun  non  infeksi. Serangan  patogen  baik  itu  virus,  bakteri, jamur,  protozoa  maupun  parasit  merupakan golongan  penyakit  infeksi,  sedangkan penyakit non infeksi meliputi penyakit yang diakibatkan oleh lingkungan, pakan, genetik dan tumor (2 ) . Penularan penyakit dan parasit
dapat  terjadi  melalui  beberapa  mekanisme, antara  lain  melalui  kontak  langsung  antara ikan sakit dan ikan sehat, bangkai ikan sakit maupun  melalui  air,  penularan  ini  biasanya terjadi dalam satu kolam budidaya. Sehingga untuk  menanggulangi  penyakit  pada  ikan budidaya  adalah  pengobatan  dengan  zat kimia atau antibiotik.
Antibiotika  adalah  zat-zat  kimia yang dihasilkan oleh fungi dan bakteri, yang memiliki khasiat mematikan atau menghambat pertumbuhan kuman, sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif kecil. Turunan zat-zat ini, yang dibuat secara semi-sintesis,  juga  termasuk  kelompok  ini, begitu pula senyawa sintesis dengan khasiat antibakteri (3) .    Antibiotik  terbagi  atas beberapa  golongan  salah  satunya  ialah tetrasiklin,  tetrasiklin  merupakan  salah  satu antibiotik  yang  paling  sering  digunakan dalam  budidaya  ikan  yang  bertujuan  untuk mengontrol  penyakit  yang  disebabkan bakteri (4) .
Menurut  SNI  01-6366-2000,  kadar residu  antibiotik  golongan  tetrasiklin  dalam daging  dan  susu  tidak  boleh  melebihi  0,1 ppm. Kandungan residu obat yang melewati batas  maksimum  residu  (BMR)  yang ditetapkan  akan menyebabkan bahan makanan  menjadi  tidak  aman  untuk dikonsumsi  karena  dapat  menimbulkan reaksi alergis, keracunan, resistensi mikroba tertentu  atau  mengakibatkan  gangguan fisiologis pada manusia (5) .
Tujuan  penelitian  ini  adalah untuk mengetahui  ada  tidaknya  dan  kadar  residu antibiotik tetrasiklin HCl pada ikan air tawar yang  beredar  di  pasar  Segiri  Penelitian  ini menggunakan metode spektrofotometri ultra violet  secara  adisi,  karena  residu  di  dalam ikan  air  tawar  sangat  kecil  dan  sulit untuk diukur serapannya sehingga harus
ditambahkan  larutan  standar  agar  sampel yang  akan  diuji  lebih  mudah  diukur serapannya.

## BAHAN DAN METODE Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  batang  pengaduk, blender,  botol  semprot, erlemeyer,  gelas kimia, gelas ukur, hot plate, kaca arloji, labu ukur,  magnetic  stirer,  neraca  analitik,  pipet tetes,  pipet  ukur  10  ml,  spatel, spektrofotometer  UV  (Shimadzu  1800), sentrifugator (PLC Series), tabung reaksi. Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah air  suling,  asam  klorida,  asam  sitrat monohidrat  (E.  Merck),  asam  nitrat  pekat, asam  sulfat  pekat,  besi  (III)  klorida  (E. Merck), dinatrium hidrogen pospat anhidrat (E.  Merck),  dinatrium  EDTA  dihidrat  (E. Merck),  ikan  air  tawar  segar  (patin,  mas, nila, gabus, lele) tetrasiklin HCl baku.

## Cara Kerja Pengumpulan Sampel
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah ikan air tawar segar (bukan ikan beku atau  yang  sudah  diolah)  yang  diambil  di Pasar  Segiri.  Teknik  pengambilan  sampel menggunakan  metode purposive  sampling berdasarkan jenis ikan yang ditentukan oleh peneliti  yaitu  patin,  gabus,  mas,  nila,  lele. Pengambilan  sampel  dilakukan  sebanyak dua kali yaitu minggu pertama dan  minggu kedua  bulan  Juli  2015  di  tempat  pedagang ikan  yang  sama.  Penelitian  dilakukan  di Laboratorium  Terpadu  I  Akademi  Farmasi Samarinda.

## Pembuatan Larutan Larutan HCl 0,1 N
Asam  klorida  pekat  sebanyak  8,4  ml dimasukkan dalam labu ukur 1 L yang telah diisi  air  suling  secukupnya.  Kemudian ditambahkan air suling hingga tanda batas.
Larutan Buffer McIlvaine pH 4 Larutan  asam  sitrat  dibuat  dengan melarutkan 5,2525 g asam sitrat monohidrat dalam  gelas  kimia  dengan  air  suling
kemudian dimasukkan dalam labu ukur 250 ml  dan  ditambah  air  suling  hingga  tanda batas. Larutan natrium fosfat dibuat dengan melarutkan dinatrium hidrogenpospat anhidrat  sebanyak  7,1025  g  dalam  gelas kimia  dengan  air  suling  selanjutnya dimasukkan  dalam  labu  ukur  250  ml  dan ditambah  air  suling  hingga  tanda  batas. Larutan  Buffer  McIlvaine  dibuat  dengan mencampurkan  200  ml  larutan  asam  sitrat dengan  125  ml  larutan  natrium  fosfat, kemudian  diukur  pH  nya  (Laboratory Quality Assurance Division, 2007).

## Larutan Buffer Mcllvaine-EDTA
Dinatrium  EDTA  dihidrat  ditimbang sebanyak  12,98  g  dan  dilarutkan  ke  dalam 325  ml  buffer  McIlvaine  (Laboratory Quality Assurance Division, 2007).

## Pembuatan  Larutan  Induk  Baku Tetrasiklin HCl
Tetrasiklin  HCl  ditimbang  25  mg, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur 50  ml  dan  ditambahkan  dengan  HCl  0,1  N hingga  tanda  batas,  sehingga  diperoleh larutan  dengan  konsentrasi  500  μg/ml, larutan ini  disebut  larutan induk  baku  (LIB I).  Dari larutan ini dipipet 5 ml, dimasukkan ke  dalam  labu  ukur  50  ml,  lalu  diencerkan dengan  HCl  0,1  N  hingga  tanda  batas  dan diperoleh  konsentrasi  50  μg/ml  (LIB  II) (Laboratory  Quality  Assurance  Division, 2007).

## Ekstraksi Sampel
Sampel  yang  telah  dihaluskan kemudian  ditimbang  sebanyak  20  g. Ditambahkan  40  ml  Buffer  McIlvaine- EDTA  (pH  4),  lalu  di  homogenkan menggunakan magnetic  stirer selama  10 menit.  Sampel  disentrifugasi  dengan kecepatan  3500  rpm  selama  10  menit, supernatan  diambil.  Ditambahkan  20  ml Buffer  McIlvaine-EDTA  dan  disentrifugasi lagi dengan kecepatan 3500 rpm selama 10 menit.  Supernatan  diambil  dan  endapan
ditambahkan  lagi  dengan  20  ml  buffer McIlvaine-EDTA dan disentrifugasi dengan kecepatan  3500  rpm  selama  10  menit. Supernatan  yang  diperoleh  kemudian dikumpulkan  kemudian  di  sentrifugasi  lagi dengan  kecepatan  5000  rpm  selama  20 menit.  Hasilnya  dimasukkan  ke  dalam  labu ukur  100  ml  dan  dicukupkan  dengan  HCl 0,1 N hingga garis tanda, larutan ini disebut larutan  sampel  (Laboratory  Quality Assurance Division, 2007).

## Penentuan  Panjang  Gelombang  Serapan Maksimum
Larutan induk baku (LIB) II 50 μg/ml dipipet sebanyak 2 ml, dimasukkan ke dalam labu  ukur  10  ml.  Larutan  induk  baku ditambahkan  Asam  klorida  0,1  N  hingga tanda  batas  (10  μg/ml),  lalu  dikocok sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi  10  μg/ml.  Diukur  serapan  pada panjang gelombang 200-400 nm (Laboratory Quality Assurance Division, 2007).
Penentuan Kadar Residu Tetrasiklin HCl dalam Daging Ikan Air Tawar Larutan  sampel  dipipet sebanyak  1,6 ml dan dimasukkan ke dalam 5 labu ukur 10 ml. LIB II ditambahkan 0; 1; 1,5; 2; dan 2,5 ml, kemudian diencerkan menggunakan HCl 0,1  N  hingga  tanda  batas.  Masing-masing didapatkan  Larutan  tetrasiklin  HCl  baku dengan  konsentrasi  0;  5;  7,5;  10;  dan  12,5 μg/ml. Absorbansi dari masing-masing larutan diukur  pada  panjang  gelombang  272,8  nm. Selanjutnya  dibuat  grafik  absorbansi  dan konsentrasi  standard  ditentukan  persamaan regresi linier y = bx + a.
Dengan mengekstrapolasikan garis pada sumbu  X  (garis memotong  sumbu  X)  atau mensubstitusikan  absorbansi  (Y)  =  0  pada persamaan regresi yang diperoleh maka akan diperoleh  konsentrasi  residu  tetrasiklin dalam  larutan  sampel yang  diukur  (Cx) (6) . Hasilnya lalu dikali faktor pengenceran dan volume  larutan  sampel kemudian  dibagi berat  penimbangan  sampel  daging  ikan sehingga  diperoleh  kadar  residu  tetrasiklin dengan satuan µg/g sampel. Menurut  metode  adisi  standar  Cx  = -Cs, ketika Absorbansi (Y) = 0
Kadar analit dalam sampel = ( ) ( )
Keterangan:
Cx = Konsentrasi analit dalam larutan yang diukur Cs = Konsentrasi larutan standar (Laboratory Quality Assurance Division, 2007).
HASIL DAN PEMBAHASAN Analisis kuantitatif merupakan penentuan kadar suatu senyawa  kimia yang terkandung  dalam  suatu  bahan.  Untuk menentukan kadar tersebut dapat digunakan metode  spektrofotometri  ultra  violet  secara adisi  standar.  Metode  ini    dipilih  karena residu  di  dalam  ikan  air  tawar  sangat  kecil dan sulit untuk diukur serapannya sehingga harus  ditambahkan  larutan  standar  agar sampel yang akan diuji lebih mudah diukur penyerapannya.
Prosedur  ekstraksi  sampel  diadopsi dari Laboratory Quality Assurance Division (2007),  yakni  dimulai  dari  ekstraksi  residu tetrasiklin  dari  sampel  daging  ikan menggunakan  buffer  McIlvaine-EDTA. Tetrasiklin mampu berikatan dengan protein membentuk  konjugat  sehingga  sukar diekstraksi  dari  matriks  sampel.  Selain  itu kendala lain dalam ekstraksi tetrasiklin dari sampel  daging  yaitu  pembentukan  kelat antara  tetrasiklin  dengan  ion  logam  yang terkandung  dalam  matriks.  Sehingga  untuk ekstraksi  sampel  dan  deproteinasinya biasanya  dipakai  pelarut  yang  sedikit  asam untuk  membebaskan tetrasiklin yang terikat nonkovalen  dengan  makromolekul  tersebut. Untuk  itu  dipakai  buffer  McIlvaine  EDTA pH  4,  dimana  penambahan  EDTA  dalam larutan buffer dimaksudkan untuk meningkatkan  effisiensi  ekstraksi,  karena
EDTA  mampu  bersaing  dengan  tetrasiklin dalam  membentuk  kelat  dengan  logam (6) . Ekstraksi  daging  ikan  dalam  penelitian  ini menggunakan  5  jenis  ikan  air  tawar  yaitu, patin, mas, nila, gabus, dan lele.
Penentuan residu tetrasiklin HCl pada ikan  air  tawar  dimulai  dengan  penentuan panjang gelombang maksimum. Pengukuran absorbansi dilakukan pada panjang gelombang maksimum karena pada panjang gelombang  tersebut  kepekaannya  juga maksimum (7) .  Pada  penelitian  ini  diperoleh nilai absorbansi tertinggi sebesar 0,882 pada panjang  gelombang  272,8  nm  dapat  dilihat pada gambar 1.
Konsentrasi residu tetasikin ditentukan dengan mengukur serapan larutan sampel  pada  panjang  gelombang  272,8  nm dan  hasilnya  diplot  pada  grafik.  Salah  satu contoh  grafik  penentuan  konsentrasi  residu tetasiklin dapat dilihat pada Gambar 2.
Pada  Gambar  2,  sumbu  X  merupakan konsentrasi  standar  yang  ditambahkan sementara  sumbu  Y  menunjukkan  nilai absorbansinya. Dengan mengekstrapolasikan garis  pada  sumbu  X  (titik  potong  pada sumbu X) atau mensubstitusikan nilai Y = 0 pada  persamaan  regresi,  maka  akan diperoleh  konsentrasi  analit  (concentration of unknown) yang terkandung dalam larutan sampel yang diukur (5) .
Gambar 1. Kurva serapan Sinar UV-Vis Tetrasiklin HCl
Gambar 2. Grafik Penentuan Konsentrasi Residu Tetrasiklin
Kadar  residu  tetrasiklin  pada  sampel diperlihatkan pada Tabel 1 dan 2.
Tabel 1. Hasil  Penentuan  Kadar  Residu Tetrasiklin  pada  Sampel  Daging Ikan  Air  Tawar  Pada  Sampling Pertama
No. Sampel Kadar residu (μg/g) Nilai maksimum residu (μg/g) 1 Ikan patin 110,674 0,1
2 Ikan gabus 210,645 3 Ikan nila 215,468 4 Ikan mas 198,687 5 Ikan lele 224,862 Tabel 2. Hasil  Penentuan  Kadar  Residu Tetrasiklin  pada  Sampel  Daging Ikan  Air  Tawar  Pada  Sampling Kedua No. Sampel Kadar residu (μg/g) Nilai maksimum residu (μg/g) 1 Ikan patin 225,887 0,1
2 Ikan gabus 211,156 3 Ikan nila 215,387 4 Ikan mas 257,518 5 Ikan lele 377,100 -7.1956, 0 y = 0.0781x + 0.5617 R² = 0.9998 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 -10 -5 0 5 10 15 A bs or nan si Konsentrasi (mg/L)

## Residu Tetrasiklin Lele (I)
Berdasarkan  data  pada  tabel  di  atas, kadar  residu  tetrasiklin  HCl  pada pengambilan  sampel  yang  pertama  berada pada kisaran 110,674 - 215,468 μg/g dengan rata-rata  kadar  192,067  μg/g.  Sedangkan pada  pengambilan  sampel  kedua  diperoleh hasil antara 211,156 - 377,100 μg/g dengan rata-rata kadar 257,409 μg/g.
Konsumsi  makanan  asal  hewan  yang diberikan  antibiotik  tidak  dilarang  asalkan berada  di  bawah  batas  maksimum  residu (BMR).  Di  Indonesia  Dewan  Standarisasi Nasional  (2000)  menetapkan  BMR  untuk residu tetrasiklin 0,1 µg/g untuk daging dan 0,05  µg/g  untuk  susu.  Hasil  penelitian menunjukkan  kadar  residu  tetrasiklin  yang jauh melebihi batas maksimum residu yang diperbolehkan.
Antibiotik  tidak  pernah  digunakan untuk  pencegahan,  antibiotik  diberikan kepada  ikan untuk  mengontrol  penyakit yang  disebabkan  bakteri  melalui  injeksi, perendaman atau pencampuran obat dengan pakan.  Penting  untuk  diketahui  bahwa bakteri  bersifat  peka  terhadap  antibiotik, bakteri  menjadi  resisten  terhadap  obat apabila  terapi  antibiotik  tidak  diberikan dengan  takaran  yang  tepat  dan  waktu  yang semestinya.  Kandungan  residu  obat  pada ikan  yang  menyebabkan  bahan  makanan menjadi  tidak  aman  untuk  dikonsumsi karena  dapat  menimbulkan  reaksi  alergi, keracunan,  resistensi  mikroba  tertentu  atau mengakibatkan  gangguan  fisiologis  pada manusia (1) .

## SIMPULAN
Dari hasil penelitian dan analisis data dapat disimpulkan  bahwa  sampel  ikan  air  tawar yang beredar di Pasar Segiri memiliki residu senyawa  antibiotik  tetrasiklin  HCl  dengan kadar 192,067 - 257,409 μg/g yang melebihi batas maksimum residu yang diperbolehkan.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Bahri,  S.,  Masbulan,  E.,  dan Kusumaningsih,  A.,  2005.  Proses Praproduksi  sebagai  Faktor  Penting dalam  Menghasilkan  Produk  Ternak yang  Aman  untuk  Manusia. Jurnal Litbang Pertanian 24(I): 27-33
2. Jasmanindar,  Y.,  2011.  Prevalensi Parasit  dan  Penyakit  Ikan  air  Tawar yang  Dibudidayakan  di  Kota  Kupang. Kupang: Universitas Nusa Cendana.
3. Tjay,  T.H.,  Rahardja,  K.,  2007.  Obat- obat  Penting,  Khasiat  Penggunaan  dan Efek  Sampingnya.  Edisi  Keenam. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo.
4. Slembrouck,  J.  et  al.,  2005.  Petunjuk Teknis Pembenihan Ikan Patin Indonesia.  Jakarta:  Badan  Riset Kelautan dan Perikanan.
5. Harris,  D.  C.,1987.  Quantitative Chemical Analysis. 2nd ed. New York: W. H. Freeman and Company.
6. Laboratory Quality Assurance Division. 2007.  Qualitative  Identification  of Tetracyclines.  USA:  United  States Department  of  Agriculture  Food  Safety and Inspection Service. 7. Botsoglou,  N.A.  dan  Fletouris,  D.J.,
2001.  Drug  Residues  in  Foods Pharmacology,  Food  Safety,  and Analysis. New York: Marcel Dekker.