## ISOLASI KAPANG PENDEGRADASI AMILUM PADA AMPAS SAGU
( Metroxylon sagoo ) SECARA IN VITRO
Rosmawati T, Dosen Program Studi Pendidikan Biologi, Fakultas Ilmu Tarbiyah dan Keguruan, IAIN Ambon, 085243144720, E-mail: rosmawati@rocket.mail.co.id
Abstrak: Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  tentang  bagaimana  cara mengisolasi kapang pendegradasi amilum pada ampas sagu ( Metroxylon sagoo ) secara in vitro. Berdasarkan hasil penelitian menunjukan bahwa pada Isolat I (C 11, C 12, C 13 ) dan Isolat III (C 31, C 32, C 33 ) kapang ampas sagu tidak mampu menghidrolisis amilum yang terdapat pada ampas sagu. Sedangkan pada Isolat II (C 21, C 22, C 23 ) menunjukan bahwa kapang  ampas  sagu  mampu  menghidrolisis  amilum  yang  terdapat  pada  ampas  sagu. Dengan  demikian,  kapang  yang  terdapat  pada  ampas  sagu  ( Metroxylon  sagoo )  bisa diisolasi  dan  diidentifikasi  untuk  keperluan  pengembangan  sains  dan  terknologi  bagi masyarakat.

## Kata Kunci: Kapang, Amilum, Ampas Sagu, Metroxylon Sagoo
ISOLATION of MOLD TO DEGRADATION STARCH DREGS on SAGO ( Metroxylon sagoo ) IN VITRO
Abstract: Research purposes this is to know about how to isolate mildew to degradation amilum on dregs sago ( Metroxylon sagoo ) in vitro. Based on the research showed that isolates on I (C 11 , C 12 , C 13 ) and isolates III (C 31 , C 32 , C 33 ) mildew dregs sago incapable of hydrolyze amilum contained in dregs sago. While in isolates II (C 21 , C 22 , C 23 ) showed that  mildew  dregs  sago  capable  of  hydrolyze  amilum  contained  in  dregs  sago.  Thus, mildew  contained  in  dregs  sago  ( Metroxylon  sagoo )  could  isolated  and  identified  for development purposes science and terknologi for people.
Keywords: Mildew, Amilum, Dregs Of Sago, Metroxylon Sago
Maluku  sejak  dahulu  dikenal  sebagai  daerah  yang  penduduknya  mengkonsumsi  sagu sebagai  makanan  pokok  masyarakatnya.  Akan  tetapi,  seiring  dengan  perkembangan zaman pola hidup inipun berubah, masyarakat lebih senang memakan beras (nasi) sebagai makanan pokok. Hal ini menyebabkan sagu menjadi bahan makanan yang termarginalkan dan tidak diperhatikan perkembangannya padahal jumlahnya sangat banyak dan tersebar di seluruh daerah di Provinsi Maluku.
Sagu ( Metroxylon sagoo ) adalah salah satu tumbuhan penghasil karbohidrat dan merupakan bahan makanan pokok masyarakat Maluku, dimana dapat diposisikan sebagai komponen  dalam  membangun  ketahanan  pangan  daerah.  Propinsi  Maluku  memiliki pertanaman  sagu  yang  cukup  luas,  yaitu  sebesar  31.360  ha,  dengan  tingkat  produksi tepung sagu 4.400 kg/ha, dapat menghasilkan limbah padat berupa ampas sagu sebanyak 26.400 kg/ha. Ampas sagu tersedia sebagai sumber energi bagi ternak, akan tetapi yang menjadi  faktor  pembatas  adalah  kandungan  protein  dan  karbohidratnya  (pati  atau amilum)  rendah  dan  serat  kasar  tinggi.  Pati  atau  amilum  adalah  karbohidrat  kompleks yang tidak larut dalam air, berwujud bubuk putih, tawar dan tidak berbau. Pati merupakan bahan  utama  yang  dihasilkan  oleh  tumbuhan  untuk  menyimpan  kelebihan  glukosa (sebagai  produk  fotosintesis)  dalam  jangka  panjang.  Hewan  dan  manusia  juga menjadikan pati sebagai sumber energi yang penting.
Pati atau amilum tersusun dari dua macam karbohidrat, amilosa dan amilopektin, dalam  komposisi  yang  berbeda-beda.  Amilosa  memberikan  sifat  keras,  sedangkan amilopektin menyebabkan sifat lengket. Amilosa memberikan warna ungu pekat pada tes iodin  sedangkan  amilopektin  tidak  bereaksi.  Penjelasan  untuk  gejala  ini  belum  pernah bisa  tuntas  dijelaskan.  Bahan  pangan  yang  mengandung  karbohidrat  cukup  tinggi biasanya lebih banyak dirusak oleh kapang daripada jenis mikroba yang lainnya, karena karbohidrat merupakan substrat yang baik bagi pertumbuhan kapang dan khamir. Akan tetapi  meskipun  termasuk  dalam  fungi,  kapang  dan  khamir  memiliki  perbedaan lingkungan hidup yang cukup berlawanan.

## METODE PENELITIAN
Jenis penelitian ini adalah deskriptif kualitatif dengan pendekatan true eksperimen (eksperimen  laboratorium)  yang  bertujuan  untuk  mengisolasi  kapang  pendegradasi amilum  pada  ampas  sagu.  Variabel  dalam  penelitian  ini  adalah  variabel  tunggal  yaitu isolasi kapang pendegradasi amilum pada ampas sagu.
Prosedur Penelitian
1. Tahap Persiapan
a. Mempersiapkan semua alat dan bahan yang akan digunakan dalam penelitian.
b. Melakukan sterilisasi pada alat-alat yang tahan pada suhu panas dengan menggunakan oven,  dan  mensterilisasi  alat-alat  yang  tahan  pada  tekanan  dengan  menggunakan autoclave.
2. Tahap Pelaksanaan
a. Pembuatan PDA ( Potato Dextrosa Agar )
1) Menimbang  10,5  gram  PDA  dan  1,5  gram  kanji,  kemudian  dilarutkan  dengan aquadest steril sampai volume 500 ml.
2) Memanaskan medium sambil mengaduk sampai medium homogen dan berwarna bening.
3) Mensterilisasi medium dengan menggunakan autoclave pada suhu 121°C, tekanan 1 atm selama 15 menit.
b. Pembuatan PDB ( Potato Dextrosa Brouth )
1) Menimbang  10,5  gram  PDB  dan  melarutkan  dengan  aquadest  steril  sampai volume 500 ml.
2) Mengaduk medium sampai medium homogen.
3) Memasukkan PDB ke dalam labu erlenmeyer dengan volume 90 ml dan ke dalam tabung reaksi dengan volume 9 ml.
c. Pembuatan PDA Plat dan PDA miring
1) Untuk PDA plat yaitu mencairkan media PDA yang telah steril ke dalam cawan petri steril kurang lebih 15 ml. Diamkan sampai memadat.
2) Untuk PDA miring yaitu memasukkan PDA ke dalam tabung reaksi kurang lebih 10 ml, kemudian disterilisasi dengan menggunakan autoclave selama 15 menit. Setelah  steril,  tabung  reaksi  yang  telah  berisi  PDA  ditempatkan  dalam  posisi miring sehingga permukaan medium dalam tabung reaksi akan miring.
3. Tahap Pengujian
a. Menimbang sampel ampas sagu sebanyak 10 gram, kemudian dimasukkan ke dalam medium  PDB  (90  ml)  dan  dihomogenkan  dengan  menggunakan  shaker  selama  15 menit (Pengenceran 10 -1 ).
b. Setelah sampel pada point “a” homogen, lalu diambil sebanyak 1 ml secara aseptis dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 ml PDB. Homogenkan dengan menggunakan vortex selama 1 menit (Pengenceran 10 -2 ).
c. Untuk pengenceran 10 -3 , maka diambil 1 ml sampel pada point “b” dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi medium PDB 9 ml
d. Mengambil 1 ml pada tabung di point “a, b, dan c”, lalu disebarkan pada PDA Plat (masing-masing pengenceran diulang 3 kali).
e. Menginkubasi  cawan  petri  yang  telah  diisi  sampel  secara  terbalik  dalam  incubator pada suhu 30°C selama 2 x 24 jam.
f. Koloni kapang pada cawan petri diuji kemampuannya dalam mendegradasi amilum dengan cara meneteskan iodium di sekitar koloni. Jika terbentuk zona bening, maka koloni kapang tersebut memiliki kemampuan untuk mendegradasi amilum.
g. Koloni  yang  teridentifikasi  dalam  mendegradasi  amilum  selanjutnya  dimurnikan sebanyak 3 kali pada PDA miring sebagai isolat murni.
Adapun teknik pengumpula data dalam penelitian ini adalah:
1. Data  primer,  yaitu  data  yang  diperoleh  secara  langsung  oleh  peneliti  pada  saat melakukan penelitian.
2. Data sekunder,  yaitu data  yang diperoleh dari berbagai literatur, berupa buku-buku paket,  hasil-hasil  penelitian  sebelumnya,  instansi  terkait,  dan  sumber  lain  yang berkaitan dengan permasalahan yang diteliti.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  tentang  bagaimana  cara mengisolasi kapang pendegradasi amilum pada ampas sagu ( Metroxylon sagoo ) secara in vitro dapat disajikan sebagai berikut:
Tabel 1. Pengujian Aktivitas Amilase Isolat I Ket. Isolat II Ket. Isolat III Ket. C 11 - C 21 + C 31 - C 12 - C 22 + C 32 - C 13 - C 23 + C 33 -
Ket. : +  : mampu menghidrolisis
- : tidak mampu menghidrolisis
Tabel  pengujian aktivitas  amilase di atas diperoleh setelah selama satu  minggu melakukan  penelitian.  Hal  ini  dilakukan  guna  menumbuhkan  kapang  pada  media pertumbuhan (media PDA) sehingga mudah untuk diisolasi. Koloni kapang pada media PDA diuji kemampuannya dalam mendegradasi amilum dengan cara meneteskan iodium di  sekitar  koloni.  Jika  terbentuk  zona  bening,  maka  koloni  kapang  tersebut  memiliki kemampuan untuk mendegradasi amilum.
Dari data tersebut di atas memperlihatkan bahwa pada Isolat I (C 11, C 12, C 13 ) dan Isolat  III  (C 31, C 32, C 33 ) kapang ampas sagu tidak mampu menghidrolisis amilum  yang terdapat pada ampas sagu. Hal ini jelas terlihat pada saat pengamatan dilakukan, yakni setelah ditetesi iodium tidak terbentuk zona bening pada koloni kapang. Sedangkan pada Isolat  II  (C 21, C 22, C 23 )  menunjukan  bahwa  kapang  ampas  sagu  mampu  menghidrolisis amilum yang terdapat pada ampas sagu. Ini terlihat dengan adanya zona bening di sekitar
Page 24
koloni  kapang  setelah  ditetesi  iodium.  Untuk  lebih  jelasnya  perhatikan  gambar  hasil pengamatan di bawah ini:
\\
Gambar 1. Warna hitam di sekitar koloni kapang setelah ditetesi iodium.
Gambar 2. Terbentuk warna bening di sekitar koloni kapang setelah ditetesi iodium.
Jika kita diperhatikan dua gambar di atas, maka pada gambar pertama menunjukan bahwa amilum pada ampas sagu tidak mampu dihidrolisis oleh kapang, karena terbentuk warna hitam di sekitar koloni kapang setelah ditetesi iodium. Warna hitam ini merupakan wujud dari oksidasi iodium terhadap amilum yang terdapat ampas sagu. Sedangkan pada gambar kedua terbentuk zona bening  di sekitar koloni kapang setelah ditetesi iodium. Ini menunjukan bahwa kapang pada ampas sagu mampu menghidrolisis amilum pada ampas sagu. Morfologi kapang yang memilki kemampuan mendegradasi amilum yang diisolasi pada cawan petri C 21 , C 22 , dan C 23 adalah sebagai berikut:
BIOLOGI SEL (vol 2 no 1 edisi jan-jun 2013 issn 2252-858x)
Page 25
Gambar 3. Morfologi kapang pendegradasi amilum hasil isolat C 21 (a = sporangium dan b = sporangiofor)
Gambar 3 di atas menunjukkan ciri morfologi kapang pendegradasi amilum yang memiliki  sporangiofor  dan  sporangium.  Bentuk  hifa  bersepta  (bersekat)  dan  berwarna hialin. Morfologi kapang pendegradasi amilum pada cawan C 22 , dan C 23 adalah sebagai berikut:
Gambar 4. Morfologi kapang pendegradasi amilum hasil isolat C 22 dan C 23 (a = sporangiofor dan b = sporangium)
Gambar 4 di atas menunjukkan adanya perbedaan morfologi kapang pendegradasi dengan hasil isolate pada cawan kode C 21 . Bentuk  morfologi  kapang  gambar 4.4 tidak menunjukkan  bentuk  sporangium  yang  dominan  membulat  dan  sporangiofornya berbentuk  dikotom  dengan  warna  hialin  dan  bersepta.  Bentuk  morfologi  spora  pada kapang hasil isolat pada cawan petri C 21 , C 22 , dan C 23 adalah sebagai berikut a b a b
Gambar 5. Morfologi spora pada kapang pendegradasi amilum
Gambar  5  di  atas  menunnjukkan  morfologi  spora  pada  kapang  pendegradasi amilum dengan warna kecoklatan dan berbentuk bulat dan bagian tengah pipih. Pati atau amilum tersusun dari dua macam karbohidrat, amilosa dan amilopektin, dalam komposisi yang  berbeda-beda.  Amilosa  memberikan  sifat  keras,  sedangkan  amilopektin menyebabkan  sifat  lengket.  Amilosa  memberikan  warna  ungu  pekat  pada  tes  iodin sedangkan  amilopektin  tidak  bereaksi.  Penjelasan  untuk  gejala  ini  belum  pernah  bisa tuntas  dijelaskan.  Bahan  pangan  yang  mengandung  karbohidrat  cukup  tinggi  biasanya lebih  banyak  dirusak  oleh  kapang  daripada  jenis  mikroba  yang  lainnya,  karena karbohidrat merupakan substrat yang baik bagi pertumbuhan kapang dan khamir. Akan tetapi  meskipun  termasuk  dalam  fungi,  kapang  dan  khamir  memiliki  perbedaan lingkungan hidup yang cukup berlawanan. Kapang membutuhkan air yang lebih sedikit daripada khamir.

## KESIMPULAN
Cara mengisolasi kapang pendegradasi amilum pada ampas ( Metroxylon sagoo ) adalah  dengan  menumbuhkan  kapang  yang  diambil  dari  ampas  sagu  dengan  teknik pengenceran  dan  metode  SPC  dan  dengan  menggunakan  medium  diperkaya  (PDA  + Amilum).  Kapang  yang  memiliki  kemampuan  mendegradasi  ditandai  dengan  adanya reaksi bening setelah koloni kapang ditetesi iodium, dan jika tidak memiliki kemampuan dalam mendegradasi, maka di sekitar koloni kapang akan biru kehitaman setelah ditetsi iodium.

## SARAN
1. Perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut  mengenai  identifikasi  jenis-jenis  kapang pendegradasi amilum pada ampas sagu ( Metroxilon sagoo ).
2. Perlu  dikembangkan  lebih  lanjut  penelitian  mengenai  isolasi  dan  identifikasi  jenis- jenis  kapang  yang  terdapat  limbah  tumbuhan  lain,  guna  mengetahui  kegunaannya untuk hajat hidup manusia

## DAFTAR PUSTAKA
Alfons  James  Budidaya  dkk.  2006  “ Syarat  Tumbuh  Tanaman  Sagu ”.  Malukulitbang.
Deptan.
Bakosurtanal  &  Ucen,  1983. Penerapan  Pengindraan  Jauh  Untuk  Penelitian  Dan Pemetaan Penyebaran Areal Sagu Daerah , Irian Jaya.
BALITBANG,  2005. Potensi  Hutan  Sagu,  Kendala  Pemanfaatan  dan  Prospek Pengembangannya . Balai Penelitian dan Pengembangan Kehutanan-Bogor. BPPT. 1982, Hasil Survei Potensi Sagu Di Kep. Maluku. Bagian II .  Kerja Sama BPPT dengan UNPATI.
Dwidjoseputro. D,. 2001, Dasar-Dasar Mikrobiologi . Penerbit Djambatan, Malang. Een,S., Sumanti, D.S dan Hanidah, I. 2008., Mikrobiologi Pangan, Bahan Ajar Jurusan Teknologi Industri Pangan . FTIP. UNPAD. Bandung,.
Fardiaz, S.1989. Mikrobiologi Pangan. Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi . Fateta. IPB. Bogor.
Febiola Soakotta., 2008. Berkreasi dengan Limbah Sagu, Penerbit Selendang Ungu Press (SUP), Yogyakarta.
Hadioetomo,  R.  S.  1993. Mikrobiologi  Dasar  dalam  Praktek  :  Teknik  dan  Prosedur Dasar Laboratorium . PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Handayani,  dkk.  2011. Penuntun  Praktikum  Mikrobiologi .  Universitas  Negeri  Jakarta. Jakarta
Hehanusa  Sylvia  CH.  H.,  2006. Penampilan  Ayam  Broiler  yang  Diberi  Ransum Mengandung  Campuran  Ampas  Sagu-Ekstraksi  Ayam  Fermentasi .  Prosiding Lokakarya Sagu dalam Revitalisasi Pertanian Maluku, Ambon 29-31 Mei 2006. Badan Penerbit Fakultas Pertanian Universitas Pattimura Ambon.
Hutapea  Y.,  1990. Sagu  dan  Manfaatnya .  Buletin  Balitka  Nomor  12  September  1990 Deptan Bogor.
J.E. Louhenapessy, dkk. 2011. Sagu. Harapan dan Tantangan. Bumi Aksara, Jakarta. Kaya  Elizabeth.,  2006. Pemanfaatan  Ela  Sagu  sebagai  Bahan  Organik. Prosiding Lokakarya Sagu dalam Revitalisasi Pertanian Maluku, Ambon 29-31 Mei 2006. Badan Penerbit Fakultas Pertanian Universitas Pattimura Ambon.
Limbongan Jamia, Artikel 18 Agustus 2009 “ Morfologi beberapa jenis sagu di Papua ” http//pustaka. Deptan. Go. Id/ p3261073.
BIOLOGI SEL (vol 2 no 1 edisi jan-jun 2013 issn 2252-858x)
Louhanapessy  Tejoyuwono  Jujius  E.,  1992“ Potensi  Sagu  Dalam  Keanekaragaman Bahan  Pangan  Pokok  Ditinjau  Dari  Persyaratan  Lahan ”  Makalah  untuk simposium  Nasional.  Diselenggarakan  oleh  UNPATI,  PEMDA  Tingkat  I  dan BPPT di Ambon.
Papilaya Chiljon Edy. 2009, “ Sagu untuk Pendidikan Anak Negeri ”. Cet 1 IP Press Bogor.
Pelczar, M. J. dan Chan E.C.S. 2005, Dasar-Dasar Mikrobiologi (2). Jakarta: UI Press.