Pengaruh ekstrak daun kayu manis Cinnamomun burmanii terhadap respon imun non spesifik ikan patin Pangasianodon hypophthalmus (Sauvage, 1878) yang diinfeksi Aeromonas hydrophila
[Effect of cinnamon, Cinnamomun burmanii , leaves extract for non specific immune response in striped catfish Pangasianodon hypophthalmus (Sauvage, 1878) infected by Aeromonas
hydrophila ]
Safratilofa 1  , Dinamella Wahjuningrum 2 , Dedi Jusadi 2 , Mia Setiawati 2
1 Program Studi Ilmu Akuakultur, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor
2 Departemen Budidaya Perairan, FPIK-IPB Jl. Agatis, Kampus IPB, Dramaga, Bogor 16680
Diterima: 10 Desember 2014; Disetujui: 15 September 2015

## Abstrak
Bakteri Aeromonas  hydrophila dapat  menyebabkan  penyakit Motile  Aeromonads  Septicaemia pada  ikan  patin. Penggunaan fitofarmaka dilakukan sebagai alternatif peningkatan respon imun non spesifik ikan patin. Salah satu bahan fitofarmaka  yang  dapat  dimanfaatkan  adalah  tumbuhan  kayu  manis Cinnamomum  burmanii .  Penelitian  ini  bertujuan untuk mengevaluasi potensi daun kayu manis dalam meningkatkan respon imun non spesifik ikan patin yang diinfeksi A. hydrophila . Daun kayu manis diberikan dalam bentuk ekstrak melalui pakan dengan dosis 0,5% dan 1% selama 14 hari. Uji tantang dilakukan pada hari ke-15. Metode dalam penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan  enam  perlakuan  dan  masing-masing  tiga  ulangan.  Perlakuan  pencegahan  0,5%  (A)  dan  1%  (B),  perlakuan pengendalian 0,5% (C) dan 1% (D), serta  kontrol negatif (K-) dan positif (K+).  Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan C merupakan hasil terbaik dalam  meningkatkan respon imun non spesifik pada ikan patin pascauji tantang. Hal tersebut terlihat dari peningkatan aktifitas fagositik  77,59±2,50% dan aktifitas ledakan respiratori 0,072±0,004 ikan patin dan juga pada dosis ini tingkat  kelangsungan hidup ikan mencapai 100% sementara pada kontrol positif tingkat kelangsungan hidup ikan hanya 63,33%.
Kata  penting: Aeromonas  hydrophila , Cinnamomum  burmanii, fitofarmaka, Pangasianodon  hypophthalmus, respon imun

## Abstract
Aeromonas hydrophila causes Motile Aeromonads Septicemia disease in  catfish. Phytopharmaca  can be performed  as an  alternative  to  increasing  the  nonspecific  immune  response  of  catfish.  One  of  the  potentially  phytopharmaca  is cinnamon, Cinnamomum burmanii . This study was conducted to evaluate the potential of cinnamon leaves to increase the nonspecific immune responses of infected catfish by A. hydrophila . Cinna-mon leaf extract was given through fish diet at doses 0.5% and 1% for fourteen days. The challenge test was performed on the day 15. The method used in this study  was  a  completely  randomized  design  with  six  treatments  and  three  replications.  The  six  treatments  were  the preventive treatment of 0.5% (A) and 1% (B), the controlling treatment of 0.5% (C) and 1% (D), negative control (K -) and positive control (K +). The results showed that the controlling treatment of 0.5% (C) was the best treatment with the phagocytic  activi-ty of blood cells of  77.59±2.50% and respiratory burst activity of 0.072 ± 0.004 after challenge test.  More-over,  the  survival  rate  of  fish  was  100%  in  the  C  treatment,  whereas  in  the  positive  control  (K+)  only 63.33% .
Keywords: Pangasianodon hypopthalmus, Aeromonas hydrophila, immune response , fitofarmaka , Cinnamomum burmanii

## Pendahuluan
Ikan  patin Pangasianodon hypophthalmus merupakan  salah  satu  ikan  ekonomis  penting  di Indonesia. Usaha budi daya ikan patin sering me-
ngalami  permasalahan  yaitu  kegagalan  produksi yang disebabkan oleh serangan penyakit. Penya- kit ini dapat disebabkan oleh adanya infeksi pato- gen  seperti  bakteri,  virus,  parasit  dan  jamur.  Sa- lah  satu  penyakit  yang  sering  menyerang  usaha budi  daya  ikan  patin  adalah Motile  Aeromonad Septicaemia (MAS) yang disebabkan oleh infeksi
_____________________________  Penulis korespondensi
Alamat surel: osa.safra@yahoo.com
bakteri Aeromonas  hydrophila .  Penyakit  MAS ini  dikenal  juga  dengan  penyakit  bercak  merah (Angka  2005),  dan  menyerang  ikan  budi  daya yang  dapat  mengakibatkan  kematian  benih  patin hingga  80%  (Wartono et  al. 2010).  Sampai  saat ini  penggunaan  antibiotik  dalam  mengatasi  se- rangan A.  hydrophila masih  dilakukan.  Namun, pemberian  antibiotik  secara  berkelanjutan  dapat mencemari  lingkungan , timbulnya  bakteri  pato- gen yang resisten, dan residu antibiotik pada ikan hasil produksi (Seyfried et al .  2010 dan Romero et  al. 2012).  Meningkatkan  sistem  pertahanan non  spesifik  ikan  adalah  salah  satu  upaya  yang dapat  dilakukan  untuk  melawan  patogen  agar dapat  meningkatkan  kelulushidupan  ikan  dalam rangka meningkatkan produktifitas.
Salah satu alternatif  yang dapat dilakukan adalah  dengan  memberikan  suatu  bahan  sumber alami (fitofarmaka) yang ramah lingkungan serta dapat  meningkatkan  respon  imun  non  spesifik ikan  terhadap  infeksi  patogen  yang  menyerang (Chakraborty  &  Hancz  2011).  Hal  tersebut  juga didukung  oleh  kondisi  alam  Indonesia  yang  me- rupakan  negara  tropis  sehingga  memiliki  berba- gai  macam  tumbuhan  yang  berpotensi  untuk  di- manfaatkan  sebagai  fitofarmaka.  Kayu  manis ( Cinnamomum  burmanii )  merupakan  salah  satu tumbuhan  yang  berpotensi  sebagai  bahan  fito- farmaka.
Kayu  manis  (C. burmanii ) merupakan tumbuhan  asli  Indonesia  yang  banyak  dijumpai di  Sumatera  Barat,  Sumatera  Utara,  Jambi,  dan Bengkulu.  Daunnya  kecil  dan  kaku  dengan  pu- cuk  bewarna  merah,  kulitnya  abu-abu  dengan aroma khas serta rasanya manis dan pedas. Bagi- an dari pohon kayu  manis  yang telah dimanfaat- kan  yaitu    kulit  batang,  daun,  dan  minyak  atsiri. Kulit kayu manis memiliki zat aktif seperti flavo- noid,  saponin,  tanin  dan  alkanoid (Azima et  al.
2004).  Minyak  atsiri C.  burmanii mengandung
sinamaldehid  dan  eugenol  (Inna et  al .  2010). Hasil penelitian Shan et al. (2007) menunjukkan minyak  atsiri  kayu  manis  memiliki  daya  hambat terhadap  bakteri Streptococcus  aureus .  Begitu juga dengan daun kayu manis mengandung alka- noid,  flavonoid,  fenolik  hidrokuinon,  saponin, dan  tanin  (Sufriadi  2006).  Chang et  al. (2001) menyatakan  bahwa  minyak  daun  kayu  manis dengan  dosis  250  µg  mL -1 efektif  menghambat pertumbuhan bakteri.
Selama ini yang banyak diteliti adalah po- tensi  minyak atsiri dari kulit  batang  kayu  manis, sementara  daun  kayu  manis  sendiri  belum  ba- nyak  dikaji.  Saat  pohon  kayu  manis  ditebang yang diambil hanya kulitnya, sementara daunnya dibuang dan tidak dimanfaatkan. Menurut Chang et  al. (2001)  dan  beberapa  penelitian  lainnya yang  masih  berskala  laboratorium,  minyak  daun kayu  manis Cinnamomum  smaphloeum dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Tujuan  pene- litian  daun  kayu  manis  ini  adalah  mengevaluasi potensi  ekstrak  daun  kayu  manis  yang  diberikan melalui pakan terhadap respon imun non spesifik ikan patin yang diinfeksi bakteri A. Hydrophila .

## Bahan dan metode
Persiapan ikan uji dan bakteri A. hydrophila
Bakteri A.  hydrophila berasal  dari  koleksi Laboratorium  Kesehatan  Ikan,  Departemen  BDP FPIK  IPB.  Sebelum  digunakan,  bakteri  tersebut diidentifikasi  terlebih  dahulu  dengan  media  API 20 E. Hasil uji karakterisasi bakteri menunjukkan spesies bakteri adalah A. hydrophila
Persiapan ekstrak daun  kayu manis C. burmanii Sampel  daun  kayu  manis C.  burmanii diperoleh  dari  petani  di  kota  Jambi.  Daun  kayu manis  dikeringkan  pada  udara  terbuka  (kering udara)  tanpa  terkena  cahaya  matahari  langsung untuk  menghindari  kerusakan  bahan  aktif  yang
terdapat  pada  daun  kayu  manis.  Pengeringan dilakukan  sampai  daun  dapat  dihaluskan  dan diayak  untuk  mendapatkan  serbuk  daun  kayu manis.
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  pada penelitian  ini  merujuk  pada  Prasad et  al .  (2009) dengan  beberapa  modifikasi.  Serbuk  daun  kayu manis  direndam  dalam  pelarut  etanol  96% dengan  perbandingan  1:10  (w/v).  Serbuk  daun kayu  manis  sebanyak  100  g  direndam  dalam 1000  mL  etanol  96%  dan  dimaserasi  selama  24 jam  sambil  diaduk  menggunakan magnetic stirrer .  Hasil  maserasi  didiamkan  hingga  ter- bentuk  dua  lapisan  suspensi  bahan.  Lapisan  atas merupakan  cairan  hasil  maserasi  dan  disaring menggunakan  kertas  saring  ±0,6  mm  sebagai filter  pertama,  sedangkan  filter  kedua  menggu- nakan  kertas  saring  Whatman  no  125.  Lapisan kedua  merupakan  endapan  bubuk  daun  kayu manis  yang  kemudian  ditambahkan  kembali etanol  96%  sebanyak  1000  mL  dan  dimaserasi selama 24 jam sambil diaduk. Setelah didiamkan dan  mengendap,  cairan  maserasi  kembali  di- saring dengan filter pertama dan filter kedua. Hal ini dilakukan berulang sampai cairan hasil mase- rasi menjadi bening. Cairan hasil maserasi kemu- dian  dievaporasi.  Rendemen  hasil  evaporasi  ter- sebut  kemudian  dikeringkan  dengan  metode freeze  drying. Hasil  ekstraksi  metode freeze drying dalam bentuk pasta kering sebanyak 12% kemudian  disimpan  dalam  lemari  pendingin sampai waktu akan digunakan.

## Persiapan pakan
Pakan  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  pakan  komersial  Hi-Provite  781-1  yang ditambahkan  ekstrak  daun  kayu  manis  sebanyak 0,5%,  1%  dan  0%.  Penambahan  ekstrak  daun kayu  manis  ke  dalam  pakan  dilakukan  dengan metode repelleting .  Dalam  membuat  1  kg  pakan
diperlukan  putih  telur  sebanyak  20  mL  sebagai perekat  yang  terlebih  dahulu  diaduk  mengguna- kan mixer .  Ekstrak  daun  kayu  manis  10  g  (1%) dan  5  g  (0,5%),  masing-masing  dilarutkan  de- ngan  akuades  sebanyak  20  mL,  kemudian  di- campurkan dengan putih telur dan diaduk hingga homogen. Campuran yang telah homogen ditam- bahkan  pakan  komersial  dengan  protein  28% yang sudah dihaluskan sebanyak 999 g (1%) dan 999,5  g  (0,5%).  Setelah  campuran  rata,  bahan dapat  dicetak  kembali  ( repelleting )  kemudian dikeringkan dengan oven pada suhu 35 0 C selama 24  jam.  Pelet  yang  sudah  kering  kemudian  di- simpan  dalam  tempat  yang  kedap  udara.  Pada pakan  kontrol  dilakukan  hal  yang  sama  namun pakan  kontrol  tidak  diberi  penambahan  ekstrak daun kayu manis.

## Uji  in vivo
Ikan  diberi  pakan  uji  sebanyak  dua  kali sehari  yaitu pagi (07.00) dan sore (16.00) secara at  satiation .  Ada  enam  macam  perlakuan  yang diberikan  yaitu  perlakuan  pencegahan  dengan penambahan  ekstrak  daun  kayu  manis  0,5% (perlakuan  A),  pencegahan  dengan  penambahan ekstrak  daun  kayu  manis  1%  (B),  pengendalian dengan  penambahan  ekstrak  daun  kayu  manis 0,5%  (C),  pengendalian  dengan  penambahan ekstrak daun kayu manis 1% (D), kontrol negatif (K-),  dan  kontrol  positif  (K+).  Pada  perlakuan pencegahan ikan diberi pakan uji selama 14 hari, pada hari ke-15 dilakukan uji tantang, setelah uji tantang  ikan  diberi  pakan  komersial.  Sementara pada perlakuan pengendalian ikan diberi pakan uji sebelum dan sesudah uji tantang. Pada kontrol negatif,  pakan  yang  diberikan  adalah  pakan  ko- mersial  dan  saat  uji  tantang  diinjeksi  dengan Phosphat  Buffer  Salin (PBS),  sedangkan  pada kontrol  positif  ikan  diberi  pakan  komersial  dan diinjeksi  dengan  bakteri A.  hydrophila .  Masing-
masing  perlakuan  dilakukan  sebanyak  tiga ulangan.  Perlakuan  selengkapnya  dapat  dilihat pada Gambar 1.

## Parameter uji
Kelangsungan  hidup  ikan  uji  diamati  se- tiap  hari  pascauji  tantang  (hari  ke-16)  sampai akhir  penelitian  (hari  ke-25).  Pengamatan  para- meter darah dilakukan pada saat awal (hari ke-0)
dan  akhir  penelitian  (hari  ke-25),  kemudian  se- hari  sebelum  uji  tantang  (hari  ke-14),  satu  hari setelah  uji  tantang  (hari  ke-16)  dan  berikutnya setiap  tiga  hari  sekali  yaitu  pada  hari  ke-18  dan ke-21.  Adapun  parameter  darah  yang  diamati adalah  total  leukosit,  aktifitas  fagositik  (Ander- son  &  Siwicki  1993  dan  Blaxhall  &  Daisley 1973) dan aktifitas ledakan respiratori ( respira-

## 6. Perlakuan D (pengendalian dosis 1% )
Gambar 1. Skema pelaksanaan dan waktu penelitian
2. Kontrol (+) Pakan komersial Pakan komersial Injeksi A.hydrophila 0 15
25
1. Kontrol (-) Pakan komersial Pakan komersial Injeksi PBS 0 15 25 3. Perlakuan A (pencegahan  dosis 0,5% ) Pakan uji 0,5%
Pakan komersial Injeksi A.hydrophila 0 15
25
4. Perlakuan B (pencegahan dosis 1%) Pakan uji 1% Pakan komersial
Injeksi A.hydrophila
0 15
25
5. Perlakuan C (pengendalian dosis 0,5%)
Pakan uji 0,5% Pakan uji 0,5% Injeksi A.hydrophila
0 15
25
Pakan Uji 1%
Pakan Uji 1% Injeksi A. hydrophila 0 15 25
tory  burst ).  Pengamatan  aktifitas  ledakan  respi- ratori dari aktifitas fagositik  dalam darah dilihat dengan  pewarnaan  nitrobluetetrazolim  ( NBT- Assay )  mengacu  pada  metode  Scomb  (1990) yang telah dimodifikasi oleh Stasiack & Bauman (1996) in Singh et al . (2010). Pengambilan sam- pel  darah  ikan  dilakukan  melalui  vena  caudal. Sampel darah diambil 50 µL diletakkan kedalam sumuran  mikrotiter  berbentuk  “U”.  Darah  di- inkubasi  selama  1  jam  pada  suhu  37 o C  hingga terjadi  “adhesi”  sel.  Kemudian  supernatan  di- buang dan sumuran dicuci dengan PBS sebanyak tiga kali. Selanjutnya ditambahkan 50 µL suspen- si  NBT  dengan  konsentrasi  0,2%  dan  diinkubasi selama  1  jam.  Sel  darah  kemudian  difiksasi dengan  50µL metanol 100%  selama  2-3  menit kemudian  supernatan  dibuang  dan  dilakukan pencucian  sebanyak  tiga  kali  dengan  methanol 30%.  Sumuran  dikeringanginkan,  kemudian ditambahkan 60 µL 2N kalium hidroksida dan 70 µL dimethyl  sulphoxide .  Kemudian  dilakukan pembacaan Optical Density (OD) dengan micro- plate reader pada panjang gelombang 540 nm.

## Analisis data
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  satu  faktor.  Data dianalisis menggunakan uji ANOVA pada selang kepercayaan  95%  ,  jika  terdapat  perbedaan  di- lakukan  uji  lanjut  Duncan  dengan  menggunakan program SPSS.16.

## Hasil

## Aktivitas fagositik
Hasil penghitungan aktivitas  fagositik   di- tampilkan  pada  Gambar  2.    Aktivitas  fagositik ikan  patin  pada  awal  pemeliharaan  adalah
54,76±4,12%.  Pascauji  tantang,  aktivitas  fago- sitik  meningkat pada semua perlakuan. Aktivitas fagositik  tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  C yaitu  sebesar  77,59±2,50%  yang  berbeda  nyata terhadap  aktivitas  fagositik  ikan  kontrol  positif yaitu sebesar 60,26±3,25%.

## Total leukosit
Hasil  penghitungan  total  leukosit  ditam- pilkan  pada  Gambar  3.  Total  leukosit  ikan  patin pada  awal  pemeliharaan  adalah  1,03±0,09  (x10 6 sel  mL -1 ).  Pascauji  tantang,  total  leukosit  me- ningkat  pada  semua  perlakuan.  Total  leukosit tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  C  yaitu 1,68±0,08  (x10 6 sel  mL -1 )  dan  berbeda  nyata terhadap kontrol positif.

## Ledakan respiratori
Hasil  penghitungan  nilai  aktifitas  ledakan respiratori (NBT assay )  ditampilkan  pada  Gam- bar 4. Nilai NBT ikan patin pada awal pemeliha- raan  adalah  0,050±0,003.  Pascauji  tantang,  nilai NBT  meningkat  pada  semua  perlakuan.  Nilai NBT  tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  C  yaitu sebesar  0,072±0,004  yang  berbeda  nyata  terha- dap nilai NBT ikan kontrol positif.

## Tingkat kelangsungan hidup ikan
Tingkat  kelangsungan  hidup  ikan  setelah uji tantang dapat dilihat pada Gambar 5. Data ke- langsungan  hidup  menunjukkan  bahwa  ekstrak daun kayu manis dapat meningkatkan pertahanan tubuh  ikan  patin.  Tingkat  kelangsungan  hidup ikan  tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  C  yaitu 100%  yang  berbeda  nyata  terhadap  kontrol positif yaitu 63,33%.
Gambar 2. Aktifitas fagositik  ikan patin selama pemeliharaan dan pascauji tantang
Gambar 3. Total leukosit ikan patin selama pemeliharaan dan pascauji tantang
Gambar  4.  Nilai Nitro  Bluete  Tetrazolium (NBT- Assay )  ikan  patin  selama  pemeliharaan  dan  pascauji tantang
a a a
a a a
a a a a a
a a a
ab a b a a a a a b a a a b a
a a a a
a a a a 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 14 16 18 21 25 A k tif itas f ag o sitis is ( %) Waktu Pemeliharaan (Hari) K- K+ A B C D a a ab a ab ab a a bc a ab ab a a c a a a a a ab ab bc b a a
d
a ab ab a a a
b c ab 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 0 14 16 18 21 25 L eu k o sit (x 1 0 6 selm L -1) Waktu Pemeliharaan (Hari) K- K+ A B C D a a a a abc b a a ab a ab a a a bc a a a a b ab a abc a a a c a bc b a b ab a c ab 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0 14 16 18 21 25 OD NB T -A ss a y (5 4 0 n m ) Waktu Pemeliharaan (Hari) K- K+ A B C D

## Gambar 5. Tingkat kelangsungan hidup ikan uji setelah uji tantang

## Pembahasan
Penyakit  ikan  merupakan  salah  satu  ken- dala  dalam  usaha  budi  daya.  Secara  ekonomis masalah  penyakit  dapat  merugikan  usaha  budi daya  karena  dapat  menurunkan  produksi  dan kualitas  ikan,  bahkan  dapat  menyebabkan  ke- matian  massal  atau  kegagalan  produksi.  Selama ini, masalah penyakit ikan banyak diatasi dengan menggunakan  antibiotik,  namun  penggunaan antibiotik secara kontinu akan mengarah pada pe- ngembangan  resistensi  patogen  sehingga  dapat mengurangi  khasiat  obat  (Smith et  al .  1994).
Selain  itu,  resistensi  antibiotik  dapat  ditransfer dari bakteri patogen ke manusia dan lingkungan, sehingga  menimbulkan  ancaman  bagi  kesehatan masyarakat (Cabello 2006). Fitofarmaka merupa- kan salah satu upaya yang dapat dilakukan untuk mengurangi  atau  menghindari  ketergantungan budi  daya  pada  antibiotik  dan  meningkatkan sistem  imun  ikan  terhadap  infeksi  patogen  yang menyerang.  Menurut  Corbel  (1975),  ikan  me- miliki  sistem  pertahanan  tubuh  yang  terdiri  atas sistem  pertahanan  tubuh  spesifik  dan  non  spesi- fik.  Sistem  pertahanan  tubuh  non  spesifik  me-
rupakan  garis  pertahanan  tubuh  yang  berfungsi untuk melawan semua jenis patogen yang masuk.
Aktivitas  fagositik    merupakan  indikator utama  peningkatan  respon  imun  non  spesifik. Aktifitas  ini  dianggap  sebagai  mekanisme  per- tahanan  yang  penting  terhadap  infeksi  bakteri patogen (Nya & Austin 2009). Aktifitas fagositik yang  diamati  mengalami  peningkatan  pascauji tantang  untuk  setiap  perlakuan.  Hal  ini  menun- jukkan  bahwa  penambahan  ekstrak  daun  kayu manis  dalam  pakan  dapat  meningkatkan  respons imun  non  spesifik  ikan  patin.  Aktifitas  fagositik tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  C  yaitu  per- lakuan  yang  diberi  pakan  dengan  penambahan ekstrak  daun  kayu  manis  0,5% dengan  nilai aktifitas  fagositik    sebesar  77,59±2,50  %  yang berbeda  nyata  terhadap  aktifitas  fagositik    ikan kontrol  positif.  Peningkatan  aktifitas  fagositik sejalan  dengan  peningkatan  total  leukosit  yang teramati.  Mudjiutami et  al. (2007)  menyatakan bahwa  peningkatan  persentase  aktifitas  fagositik merupakan  fungsi  dari  peningkatan  persentase leukosit.  Hasil  penelitian  Nugroho  (2012)  me- nyatakan bahwa flavonoid dari buah sirih dan
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 T in g k at k elan g su n g an h id u p ik an (%) Waktu pemeliharaan setelah uji tantang (hari) K- K+ A
B C D
daun miyana yang dikombinasikan dengan madu dan  kuning  telur  dapat  meningkatkan  aktivitas dan  kapasitas  fagositik    sel  makrofag  pada  men- cit  Swiss,  di  mana  flavonoid  bekerja  terhadap limfokin  yang  dihasilkan  oleh  sel  T  sehingga akan  merangsang  sel-sel  fagosit  untuk  melaku- kan respon fagositik . Hal yang sama terjadi pada penelitian  ini  di  mana  ekstrak  daun  kayu  manis yang diberikan juga mengandung flavonoid. Eks- trak  daun  kayu  manis  pada  penelitian  ini  selain mengandung flavonoid juga mengandung senyaa saponin, tanin, fenolik, alkanoid, steroid dan gli- kosida.  Diduga  senyawa-senyawa  inilah  yang memengaruhi  kerja  sistem  imun  non  spesifik ikan patin.
Leukosit  berfungsi  sebagai  salah  satu garis  pertama  pertahanan  tubuh  dan  jumlah leukosit  meningkat  tajam  saat  terjadi  infeksi (Talpur  &  Ikhwanudin  2013).  Setelah  diberi perlakuan  penambahan  ekstrak  daun  kayu  manis melalui  pakan  pada  ikan  patin  selama  14  hari, total  leukosit  pada  setiap  perlakuan  mengalami peningkatan  pascauji  tantang.  Peningkatan  yang diamati  berbeda  nyata  untuk  setiap  perlakuan. Penambahan  ekstrak  daun  kayu  manis  dosis 0,5%  menunjukkan  total  leukosit  tertinggi  dari total  leukosit  ikan  setiap  perlakuan.  Hal  ini  me- nunjukkan  bahwa  penambahan  ekstrak  daun kayu manis dosis 0,5% dapat meningkatkan total leukosit ikan patin. Hasil penelitian Lukistyowati (2012)  menyatakan  bahwa  peningkatan  jumlah leukosit  pada  ikan  patin Pangasius  hypophthal- mus yang diberi sambiloto, disebabkan sambiloto mengandung  flavonoid yang dapat mengaktifkan sistem  limfe  sehingga  dapat  meningkatkan  pro- duksi  sel  darah  putih  ikan  patin  yang  diinfeksi dengan  bakteri Edwardsiella  tarda. Hal  yang sama  juga  terjadi  pada  penelitian  ini  di  mana kandungan  di  dalam  ekstrak  daun  kayu  manis dapat mengaktifkan sistem limfe pada ikan patin
dengan  meningkatkan  produksi  leukosit  dalam melawan  patogen  yang  masuk.  Anderson  (1993) menyatakan  bahwa  peningkatan  leukosit  me- nunjukkan ikan mengalami infeksi akibat serang- an  patogen  yang  diinjeksikan,  sehingga  leukosit yang  merupakan  sistem  pertahanan  non  spesifik akan  menfagosit  dengan  cara  melokalisasi  dan mengeliminasi  patogen  yang  menyerang.  Bebe- rapa  penelitian  sebelumnya  menyatakan  bahwa tumbuhan  herbal  dapat  meningkatkan  fungsi kekebalan  tubuh  dengan  memengaruhi  sel-sel darah (Sahu et al. 2007, Nya & Austin 2009, dan Talpur & Ikhwanuddin  2013).
Aktivitas  ledakan  respiratori dapat  diukur dengan nitro blue tetrazolium (NBT) assay untuk mengetahui  jumlah  radikal  intraseluler  superok- sida  yang  diproduksi  oleh  leukosit  (Sahu et  al.
2007).  Produksi  oksigen  radikal  bebas  akan  di- gunakan  untuk  melawan  patogen  yang  masuk. Pascauji  tantang,  nilai  NBT  tertinggi  diperoleh pada  perlakuan  C.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa perlakuan  C  memberikan  perlawanan  yang paling  baik  terhadap  patogen.  Semakin  tinggi kemampuan  sel  fagosit  dalam  aktifitas  ledakan respiratori ditunjukkan dengan semakin tingginya nilai NBT (Sugiani et al. 2013).  Hasil penelitian Ardo et  al. (2008)  menyatakan  bahwa  ikan  nila yang  diberi  ekstrak Astragalus  membranaceus dan Lonicera  japanica melalui  pakan  baik diberikan tunggal atau kombinasi, dapat meningkatkan  aktivitas  fagositik    dan  aktivitas ledakan  respiratori . Beberapa  studi  terdahulu telah  melaporkan  bahwa  pemberian  ekstrak tumbuhan  melalui  injeksi  atau  oral  pada  jenis ikan  yang  berbeda  menunjukkan  hasil  yang  baik pada  parameter  imun  seperti  peningkatan aktivitas  lisozim,  aktivitas  fagositik  ,  aktivitas komplemen,  aktivitas  ledakan  respiratori dan peningkatan  protein  plasma  (globulin  dan  albu- min) (Yuan et al . 2007 dan Wu et al . 2010).  Se-
jalan  dengan  penelitian  tersebut  maka  penam- bahan  ekstrak  kayu  manis  juga  dapat  mening- katkan aktivitas ledakan respiratori ikan patin.
Perlakuan  C  lebih  cepat  kembali  pada kondisi pemulihan dibanding perlakuan lain. Hal ini juga dilihat dari hasil penelitian di mana para- meter  gambaran  darah  yang  diamati  mengalami peningkatan dan penurunan nilai menuju kondisi normal  atau  sehat  selama  3-10  hari  pengamatan pascauji  tantang  dan  nilai  parameter  yang  relatif sama  dengan  kontrol  perlakuan.  Aktivitas  fago- sitik    mulai  menurun  pada  hari  ke-3  pascauji tantang  yang  diikuti  dengan  penurunan  total leukosit pada setiap perlakuan dan tidak berbeda nyata  terhadap  kontrol  negatif.  Nilai  NBT  se- makin  menurun  sejalan  dengan  peningkatan  ke- sehatan  ikan  patin  melalui  peningkatan  respon imun  pada  hari  ke-3  sampai  hari  ke-10  pascauji tantang.
Penambahan  ekstrak  daun  kayu  manis dalam  pakan  sebanyak  0,5%  memberikan  hasil terbaik  hampir  pada  semua  parameter  gambaran darah,  mengindikasikan  bahwa  dosis  ini  adalah dosis yang optimum dalam meningkatkan respon imun  non  spesifik  ikan  patin.  Hal  ini  sejalan dengan tingkat kelangsungan hidup ikan di mana pada penambahan ekstrak daun kayu manis dosis 0,5%,  tingkat  kelangsungan  hidup  ikan  patin mencapai  100%  sementara  pada  kontrol  positif tingkat  kelangsungan  hidup  ikan  patin  hanya 63,33%.  Rattanachaikunsopon  &  Pumkhachorn (2010)  melaporkan  bahwa  tidak  ada  kematian (tingkat  kelangsungan  hidup  100%)  pada  ikan nila Oreochromis  niloticus yang  diinfeksi Strep- tococus  iniae yang  diberi  pakan  dengan  penam- bahan minyak kayu manis sebanyak 0,3% diban- dingkan dengan tanpa penambahan minyak kayu manis  di  mana  terjadi  kematian  sebanyak  50%
(kelangsungan hidup 50%).
Pada  perlakuan  B  dan  D  yaitu  perlakuan yang  diberi  pakan  dengan  penambahan  ekstrak daun  kayu  manis  1%  sudah  melebihi  kebutuhan ikan  sehingga  tidak  memberikan  pengaruh  pada sistem  imun  bahkan  bersifat  toksik  bagi  ikan patin. Hasil penelitian Syawal et al. (2008) me- nyatakan  bahwa  tingginya  dosis  ekstrak  siwak Salvadora  persica L . yang  diberikan  pada  ikan mas C.  carpio menyebabkan  ikan  tidak  mampu beradaptasi  dan  menjadi  stres,  dengan  demikian daya tahan tubuhnya dapat menurun. Lebih lanjut menurut  El-Mostehy et  al .  (1998) in Syawal et al. (2008), siwak mengandung tanin dan saponin yang  dalam  konsentrasi  tinggi  dapat  menjadi toksik.  Kandungan  senyawa  kimiawi  yang  sama juga  terkandung  dalam  ekstrak  daun  kayu  manis pada  penelitian  ini  yaitu  tanin  dan  saponin,  di mana  dosis  pada  perlakuan  B  dan  D  berada dalam konsentrasi tinggi sehingga bersifat toksik. Efek  produk  tumbuhan  pada  ikan  bergantung kepada  dosis  yang  diberikan  dan  adanya  ke- mungkinan  potensi  untuk  overdosis,  sehingga penentuan  konsentrasi  ekstrak  perlu  dipastikan (Harikrishnan et al. 2011). Reverter et al. (2014) menyatakan bahwa sifat menguntungkan dan ke- manjuran  produk  tumbuhan  herbal  pada  kese- hatan  ikan  budi  daya  bergantung  kepada  bagian tumbuhan,  metode  ekstraksi,  dan  konsentrasi ekstrak.

## Kesimpulan
Penambahan  ekstrak  daun  kayu  manis 0,5%  dalam  pakan  yang  diberikan  selama  14 belas  hari  dan  dilanjutkan  pemberiannya  setelah uji tantang dapat meningkatkan respon imun non spesifik  pascauji  tantang  yaitu  aktifitas  fagositik dan  ledakan  respiratori ikan  patin.  Pada  dosis
0,5% tingkat  kelangsungan hidup ikan  mencapai 100%.

## Daftar pustaka
Anderson  DP,  Siwicki  AK.  1993.  Basic  haema- tology  and  serology  for  fish  health programs. Prosiding  Second  Symposium on Diseases in Asia Aquaculture “aquatic animal  health  and  the  environmental” .
Phuket Thailand. pp. 185-202 Angka  SL.  2005.  Kajian  penyakit motile  Aero- monas  septicaemia pada  ikan  lele  dumbo Clarias sp.  :  Patologi  dan  pencegahannya dengan  bahan  nabati.  Disertasi.  Sekolah Pasca Sarjana. Institut Pertanian Bogor.
Ardo L, Yin G, Xu P, Varadi L, Szigeti G, Jeney Z,  Jeney  G.  2008.  Chinese  herbs  ( Astra- galus membranaceus and Lonicera japonica )  and  boron  enhance  the  non- specific  immune  response  of  Nile  tilapia ( Oreochromis  niloticus )  and  resistance against Aeromonas  hydrophila . Aqua- culture , 275(1-4): 26–33.
Azima  F,  Muchtadi  D,  Zakaria  FR,  Priosoer- yanto.  2004.  Potensi  anti-hiperkoles- terolemia  ekstrak  cassia  vera  ( Cinna- momum burmanni Nees et Blumo). Jurnal Teknologi  dan  Industri  Pangan ,  15(2): 145-153
Blaxhall PC, Daisley KW. 1973. Routine haemo- tological methods for use with fish blood.
Journal Fish Biology , 5(6): 577-581
Cabello  FC.  2006.  Heavy  use  of  prophylactic antibiotics  in  aquaculture:  a  growing problem for human and animal health and for the environment. Environmental Microbiology , 8(7): 1137–1144.
Chakraborty  SB,  Hancz  C.  2011.  Application  of phytochemicals as immunostimulant, antipathogenic  and  antistress  agents  in finfish  culture. Reviews  in  Aquaculture , 3(3): 103–119.
Chang  ST,  Chen  PF,  Chang  SC.  2001.  Antibac- terial  activity  of  leaf  essential  oils  and their  constituents  from Cinnamomum smophloeum . Jurnal  of  Ethnopharma- cology , 77(1): 123–127
Corbel M J. 1975. The immune response in fish:
A  review. Journal  of  Fish  Biology , 7  (4): 539-563.
Syawal H, Syafriadiman, Hidayah S. 2008. Pem- berian  ekstrak  kayu  siwak  ( Salvadora persica L . )  untuk  meningkatkan  kekebal- an  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio L.)  yang dipelihara  dalam  keramba . Biodiversitas, 9(1): 44-47
Harikrishnan R, Balasundaram C, Heo MS. 2011. Impact  of  plant  products  on  innate  and
adaptive  immune  system  of  cultured  fin- fish  and  shellfish. Aquaculture ,  317(1-4): 1–15
Inna  M,  Atmania  N,  Prismasari  S.  2010.  Poten- tial  use  of Cinnamomum  burmanii essen- tial  oil-based chewing  gum as  oral  anti- biofilm  agent. Journal  of  Dentistry  Indo- nesia , 17(3): 80-86
Lukistyowati  I.  2012.  Studi  efektifitas  sambiloto ( Andrographis  paniculata Nees)  untuk mencegah  penyakit Edwardsiellosis pada ikan  patin  ( Pangasius  hypopthalmus ). Berkala Perikanan Terubuk , 40(2): 56-74
Mudjiutami  E,  Ciptoroso,  Zainun  Z,  Sumajo, Rahmat.  2007.  Pemanfaatan  imuno- stimulan  untuk  pengendalian  penyakit pada  ikan  mas. Jurnal  Budidaya  Air Tawar , 4(1): 1-9
Nugroho  YA.  2012.  Efek  pemberian  kombinasi buah  sirih  ( Piper  betle L),  daun  miyana Plectranthus  scutellarioides (L.),  madu dan  kuning  telur  terhadap  peningkatan aktivitas  dan  kapasitas  fagositosis    sel makrofag. Media  Litbang  Kesehatan ,  22
(1): 1-5
Nya  EJ,  Austin  B.  2009.  Use  of  garlic, Allium sativum , to control Aeromonas hydrophila infection  in  rainbow  trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum). Journal  of  Fish Diseases , 32(11): 963–970
Prasad  KN,  Dong  BYX,  Jiang  G,  Zhang  H,  Xie H, Jiang Y. 2009. Flavonoid contents and antioxidant  activities  from Cinnamomum species . Innovative  Food  Science  and Emerging Technologies , 10(4): 627–632
Rattanachaikunsopon  P, Phumkhachorn  P.  2010.
Potential of cinamon ( Cinamomum verum )  oil  to  control Streptococcus  iniae infection  in  tilapia  ( Oreochromis  nilo- ticus ). Japan  Fisheries  Science, 76  (2): 287-293
Reverter  M,    Bontemps  N,  Lecchini  D,  Banaigs B, Sasal P. 2014. Use of plant extracts in fish  aquaculture  as  an  alternative  to chemotherapy:  Current  status  and  future perspectives. Aquaculture , 433: 50–61
Romero  J,  Feijoó  CG,  Navarrete  P.  2012.  Anti- biotics  in  aquaculture  -  use,  abuse  and alternatives. In : Carvalho  ED, David GS,
Silva  RJ  (Eds.). Health  and  Environment in  Aquaculture .  InTech,  Rijeka,  Croatia 159-198
Sahu S, Das BK, Mishra BK, Pradhan J, Sarangi
N.  2007.  Effect  of Allium  sativum on  the immunity  and  survival  of Labeo  rohita
infected  with Aeromonas  hydrophila .
Journal  of  Applied  Ichthyology, 23(1): 80–86
Seyfried  EE,  Newton  RJ,  Rubert  KF,  Pedersen JA,  McMahon  KD.  2010.  Occurrence  of tetracycline resistance  genes  in  aqua- culture.  Facilities  with  varying  use  of oxytetracycline . Microbial  Ecology ,  59 (4): 799–807
Shan B, Cai YZ, Brooks JD, Corke H. 2007. The in  vitro  antibacterial  activity  of  dietary spice  and  medicinal  herb  extract. Food Microbiology , 17(1): 112-9.
Smith  P,  Hiney  MP,  Samuelesen  OB.  1994. Bacterial resistance to antimicrobial agent used  in  fish  farming:  a  critical  evaluation of  method  and  meaning. Annual  Review OF Fish Diseases 4: 273–313
Singh  SK,  Tiwari  VK,  Chadha  NK,  Prakash  C, Sukham M, Das P, Mandal SC, Chanu TI. 2010.  Effect  of Bacillus  curculas and fructooligosaccaride  supplementation  on growth and
haemo-immunological
function of Labeo rohita (Hamilton, 1822) fingerlings  exposed  to  sub-lethal  nitrite stres. The Israeli Journal of Aquaculture , 64: 1-11
Sufriadi  A.  2006.  Manfaat  daun  kayu  manis ( Cinnamomum burmanni )
terhadap khasiat antioksidasi mahkota dewa ( Phaleria  macrocarpa (Scheff.  Boerl) selama  penyimpanan. Skripsi .  Program
Studi  Biokimia.  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam. Institut Pertanian Bogor. 33  hlm.
Sugiani  D,  Sukenda,  Harris  E,  Lusiastuti  AM. 2013. Vaksinasi ikan tilapia ( Oreochromis
niloticus )  menggunakan  vaksin  bivalen untuk  mencegah  penyakit Motile  Aero- monas  Septicemia dan Streptococcosis . Jurnal Riset Akuakultur ,  8(2): 229-239 Syawal  H,  Syafriadiman,  Hidayah  S.  2008. Pemberian ekstrak kayu siwak ( Salvadora persica L . )  untuk  meningkatkan  kekebal- an  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio L.)  yang dipelihara  dalam  keramba . Biodiversitas , 9(1): 44-47
Talpur  AD,  Ikhwanuddin  M.  2013. Azadirachta indica (neem)  leaf  dietary  effects  on  the immunity  response  and  disease  resistance of  Asian  seabass, Lates  calcarifer chal- lenged  with Vibrio  harveyi . Fish  & Shellfish Immunology , 34(1): 254–264 Wartono  H,  Emmawati  L,  Lusiastuti  AM.  2010. Peningkatan  produksi  benih  ikan  patin  di unit  pembenihan  rakyat  (UPR)  melalui penerapan  kekebalan  bawaan  ( Maternal immunity ). Prosiding forum inovasi teknologi akuakultur. Pusat Riset Perikan- an Budidaya. pp 957-961
Wu  CC,  Liu  CH,  Chang  YP,  Hsieh  SL.  2010. Effects  of  hot-water  extract  of Toona sinensis on  immune  response  and  resis- tance  to Aeromonas  hydrophila in Oreochromis  mossambicus . Fish  and Shellfish Immunology , 29(2): 258–263.
Yuan C,  Li D, Chen W, Sun  F, Wu G, Gong Y, Tang  J,  Shen  M,  Han  X.  2007.  Adminis- tration  of  a  herbal  immuno-regulation mixture  enhances  some  immune  para- meters  in  carp  ( Cyprinus  carpuio ). Fish Physiology  and  Biochemistry ,  33(2):  93– 101