March 2017
FORMULASI SEDIAAN MOUTHWASH PENCEGAH PLAK GIGI EKSTRAK BIJI KAKAO ( Theobroma cacao L) DAN UJI EFEKTIVITAS PADA

## BAKTERI Streptococcus mutans
MOUTHWASH FORMULATION OF TOOTH PLAQUE PREVENTING OF KAKAO ( Theobroma cacao L) SEED EXTRACT AND EFFECTIVITY TEST
ON Streptococcus mutans
Apriyanti Anastasia * , Yuliet, Muhamad Rinaldhi Tandah
1 Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Palu.
Received 20 Mei 2016/Accepted 1 Oktober 2016

## ABSTRAK
Penelitian mengenai formulasi sediaan mouthwash pencegah plak gigi ekstrak biji kakao serta telah diuji pada bakteri Streptococcus mutans dengan melakukan variasi konsentrasi gliserin sebagai humektan dalam sediaan yang bertujuan untuk mengetahui pengaruh perbedaan konsentrasi gliserin sebagai humektan terhadap bentuk fisik, sifat kimia  dan  zona  hambat  bakteri Streptococcus  mutans dalam  formula mouthwash serta  untuk  mengetahui  formula mouthwash yang memiliki mutu fisik dan aktivitas antibakteri yang paling tinggi. Metode yang digunakan meliputi tahap ekstraksi biji kakao, pembuatan sediaan mouthwash dengan 4 formula  menggunakan variasi gliserin F1 (0%), F2 (15%), F3 (20%) dan F4 (25%) dilanjutkan dengan evaluasi formula yang meliputi uji stabilitas formula, uji pH formula  dan  uji  diameter  daya  hambat.  Pengujian  dilakukan  pada  hari  ke-0,  7,  14  dan  21.  Konsentrasi  gliserin sebagai  humektan  dalam  formula mouthwash ekstrak  biji  kakao  mempunyai  pengaruh  terhadap  diameter  zona hambat,  namun  tidak  mempunyai  pengaruh  yang  bermakna  terhadap  bentuk  fisik  dan  sifat  kimia formula.Konsentrasi  gliserin  yang  memenuhi  mutu  fisik  dan  aktivitas  antibakteri  paling  baik  yaitu  15%    yang terdapat pada formula 2.
Kata kunci : Mouthwash, Ekstrak biji kakao, Streptococcus mutans , glycerin.

## ABSTRACT
Research on the formulation of preparations mouthwash prevention of dental plaque extract of cocoa beans also has been tested in Streptococcus mutans bacteria by variations in the concentration of glycerin as a humectant in  preparation  which  aims  to  determine  the  effect  of  different  concentrations  of  glycerin  as  a  humectant  to  the physical  properties,  chemical  properties  and  inhibition  zone  Streptococcus  mutans  bacteria  in  mouthwash  formula and to know the mouthwash formula that has the physical quality and the highest antibacterial activity. The method used includes the step of extraction of cocoa beans, preparation of a mouthwash with 4 formula using variations of glycerin F1 (0%), F2 (15%), F3 (20%) and F4 (25%) followed by an evaluation formula that includes organoleptic tests, pH test and the test of inhibition diameter. Tests performed on days 0, 7, 14 and 21. The results showed the concentration of glycerin as a humectant in a mouthwash formula cocoa seed extract has an effect on the diameter of inhibition zone, but did not have a significant effect on the physical and chemical properties of cocoa seed extracts mouthwash,  The  concentration  of  glycerin  which  meets  the  physical  quality  and  the  most  excellent  antibacterial activity that is 15% contained in the formula 2.
Keywords: Mouthwash, cocoa beans extract, Streptococcus mutans, glycerin.
*) Corresponding Author: Apriyanti Anastasia apriyanti_anastasia@yahoo.com (ph: +6285241308227)

## PENDAHULUAN
Kesehatan  mulut  merupakan  suatu  hal penting bagi manusia terutama dalam pergaulan sehari-hari.  Berbagai  masalah  yang  behubungan dengan  mulut  sering  terjadi  dalam  kehidupan manusia, diantaranya bau mulut dan periodontal yang disebabkan oleh plak gigi (Pradewa, 2008).
Plak  gigi  adalah  lengketan  yang  berisi bakteri  dan  produk-produknya  yang  terbentuk pada  permukaan  gigi.  Baktxceri  yang  berperan penting  dalam  pembentukan  plak  gigi  adalah Streptococcus mutans . Bakteri ini dapat membentuk  koloni  yang  melekat  erat  pada permukaan  gigi  dan  mempunyai  kemampuan untuk memfermentasikan sukrosa menjadi asam, menurunkan pH permukaan gigi dan menyebabkan mineralisasi gigi (Pradewa, 2008).
Salah satu cara untuk mengatasi terbentuknya plak gigi yaitu dengan menggunakan  obat  kumur  ( mouthwash )  yang mengandung  bahan  antibakteri. Mouthwash (obat  kumur)  adalah  formula  berupa  larutan, umumnya  dalam  bentuk  pekat  yang  harus diencerkan dahulu sebelum digunakan, dimaksudkan untuk digunakan sebagai pencegahan  atau  pengobatan  infeksi  tenggorok. Menurut  definisi  yang  lain, mouthwash adalah larutan  yang  biasanya  mengandung  bahan penyegar  nafas,  astringen,  demulsen,  atau surfaktan,  atau  antibakteri  untuk  menyegarkan dan  membersihkan  saluran  pernafasan  yang pemakaiannya  dengan  berkumur  (Akarina, 2011).
Bahan  aktif  formula mouthwash yang bersifat  antibakteri  dapat  berasal  dari  bahan kimia  maupun  bahan  alam.  Namun  karena slogan  “ Back  to  Nature ”  yang  sering  terdengar di  masyarakat,  maka  bahan  alam  pun  menjadi sorotan  yang  sangat  populer.  Salah  satu  bahan alam  yang  dapat  digunakan  sebagai  bahan  aktif mouthwash adalah  biji  buah  kakao  ( Theobroma kakao , L) (Akarina, 2011).
Biji kakao mempunyai beberapa komponen aktif  yang  salah  satunya  adalah  polifenol. Kandungan polifenol pada biji kakao didominasi oleh  katekin  dan  epillogalokatekin.  Polifenol merupakan  senyawa  yang  berpotensi  sebagai antibakteri  dan  polifenol  yang  dikandung  biji kakao  ini  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus  mutans ,  yang  merupakan
bakteri  utama  penyebab  plak  gigi  (Purnamasari, 2010).
Selain  bahan  aktif,  bahan  lain  yang  tidak kalah penting dalam komposisi mouthwash yaitu humektan.  Humektan  berfungsi  menjaga  agar zat  aktif  dalam  formula  obat  kumur  tidak menguap  sehingga  membantu  memperlama kontak  zat  aktif  pada  gigi  serta  memperbaiki stabilitas suatu bahan dalam jangka lama. Selain itu,  humektan  juga  menjaga  bahan-bahan mouthwash tidak  menguap  ke  udara.  Humektan yang sering digunakan adalah gliserin yang juga dapat berperan sebagai bahan pelarut dan bahan pengatur kekentalan (Akarina, 2011).
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Hizonat  (2007)  mengenai  aktivitas  ekstrak etanol biji kakao sebagai antibakteri Streptococcus  mutans diperoleh  hasil  bahwa  biji kakao  bersifat  bakteriostatik  pada  konsenstrasi 7,5% sedangkan pada konsentrasi yang mendekati  9%  mekanisme  kerja  ekstrak  etanol biji  kakao  terhadap Streptococcus  mutans lebih ke  bakteridal.  Begitu  pula  pada  penelitian  yang dilakukan  oleh  Purnamasari  (2010)  yang menguji  pengaruh  ekstrak  biji  kakao  dalam menghambat Streptococcus mutans dalam berbagai  konsentrasi  dengan  menggunakan metode  pengenceran  seri  tiap  konsentrasi  dan pengamatan ada tidaknya pertumbuhan Streptococcus mutans pada tiap tabung diperoleh hasil  konsentrasi ekstrak biji kakao yang efektif dapat  menghambat  pertumbuhan Streptococcus mutans adalah  12,5%,  maka  penulis  melakukan penelitian    lanjutan  untuk  menguji  efektivitas ekstrak biji kakao terhadap bakteri Streptococcus mutans bila menggunakan variasi kadar  gliserin  sebagai  humektan  dalam  formula mouthwash .

## METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Fitokimia dan Farmakognosi Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Tadulako  mulai  bulan  Juli  2013 sampai  bulan  Agustus  2013  dan  dilanjutkan  di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Tadulako  mulai  bulan  September 2013 sampai bulan Maret 2014.

## Alat dan Bahan
a. Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu gelas kimia (Pyrex®), wadah penampung  ekstrak,  oven  (SHE  LAB®), cawan petri (Pyrex®), tabung reaksi(Pyrex®), ose, pencadang, mikro pipet, inkubator (Eyela SLI-400®), rotary  evapourator (XI’AN  Heb® RE-3000A),  batang  pengaduk,  timbangan analitik  (OHAUS®),  cawan  porselen,  pipet tetes, gelas ukur(Pyrex®), corong, erlenmeyer(Pyrex®), LAF (Steramline®), jangka sorong, mortir dan stamper.
b. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini  yaitu  bakteri Streptococcus  mutans, media MHA  (Mueller  Hinton  Agar ) ,  biji  kakao, etanol  80%,  kertas  saring,  aquades,  gliserin, propilenglikol, Na-sakarin, mentol.
Prosedur Penelitian a. Pengumpulan sampel
Sampel  dikumpulkan  dari  perkebunan kakao  di  Desa  Palolo  Provinsi  Sulawesi Tengah pukul 10.00 WITA.
b. Penyiapan simplisia
Kakao yang telah dikumpulkan kemudian dibelah untuk mengeluarkan isinya. Kemudian  disortasi  basah  dengan  cara menghilangkan kotoran yang menempel ataupun  isi  kakao  yang  rusak.  Lalu  di  cuci dengan air bersih mengalir. Setelah itu dijemur di  tempat  yang  tidak  terkena  sinar  matahari langsung  agar  biji  kakao  terpisah  dari buahnya. Biji kakao kering kemudian disortasi kering  untuk memisahkan kotoran yang masih menempel  dan  dilakukan  pengelupasan  kulit biji  agar  diperoleh  biji  kakao  utuh  lalu dipecah-pecahkan  agar  biji  kakao  berukuran lebih kecil dan siap untuk diekstraksi.
c. Pembuatan ekstrak Serbuk biji kakao ditimbang dengan menggunakan  timbangan  analitik  sebanyak 250  gram.  Serbuk  biji  kakao  tersebut kemudian  direndam  dengan  etanol  80% sebanyak  900  mL  selama  24  jam  lalu  diaduk secara konstan dengan menggunakan pengaduk  magnetik  selama  1  jam,  terlindung dari  cahaya  kemudian  disaring  menggunakan kertas  saring.  Hal  ini  dilakukan  sebanyak  3 kali  pengulangan  sehingga  diperoleh  filtrat.
Filtrat  kemudian  dipekatkan  dengan  mesin rotary  evapourator selama  2  jam  untuk memisahkan solven dengan ekstrak biji kakao, kemudian  filtrat  dipindahkan  ke  wadahuntuk menguapkan  sisa  solven  (etanol  80%)  yang masih  tertinggal  dalam  ekstrak  hingga diperoleh ekstrak yang pekat.
d. Pengujian Antibakteri Ekstrak Biji Kakao Pengujian  antibakteri  ekstrak  biji  kakao dilakukan  dengan  cara  difusi  menggunakan paper disc steril.
Disiapkan cawan porselen steril sebanyak 5 buah  dan  masing-masing  diisi  dengan  ekstrak biji  kakao  berbagai  konsentrasi.  Cawan porselen pertama diisi ekstrak dengan konsentrasi  100%  (1  gram/1  mL  air  hangat), cawan  porselen  kedua  diisi  ekstrak  dengan konsentrasi 50% (0,5 gram /1 mL air hangat), cawan  porselen  ketiga  diisi  ekstrak  dengan konsentrasi 25% (0,25 gram/1 mL air hangat), cawan  porselen  keempat  diisi  ekstrak  dengan konsentrasi  12,5%  (0,125  gram/1  mL  air hangat)  dan  cawan  porselen  kelima  diisi ekstrak  dengan  konsentrasi  6,25%  (0,0625 gram/1  mL  air  hangat).  Kemudian  disiapkan medium  MHA  (Mueller  Hinton  Agar)  yang telah dipadatkan bersama bakteri Streptococcus mutans dalam cawan petri. Lalu dimasukkan paper disc steril sebanyak 5 buah dengan  jarak  yang  sama  antara  satu  dengan yang  lain.  Masing-masing paper  disc itu kemudian  ditetesi  dengan  ekstrak  yang  telah disiapkan  tadi,  satu paper  disc untuk  1 konsentrasi  sebanyak  10  µmL.  Setelah  itu diinkubasi  pada  suhu  37 O selama  24  jam. Pengamatan  dilakukan  dengan  menghitung zona  hambat  yang  terbentuk  menggunakan jangka sorong.
Rancangan Formula Mouthwash Ekstrak Biji Kakao
Formula mouthwash yang dibuat sebanyak 4 formula  dengan  variasi  konsentrasi  gliserin sebagai  humektan  dan  masing-masing  formula dibuat  sebanyak  50  mL  dengan  replikasi sebanyak  3  kali  seperti  yang  ditunjukkan  pada tabel di bawah ini.
Tabel 1. Rancangan Formula Mouthwash Estrak Biji Kakao
Pembuatan Mouthwash
Pembuatan mouthwash formula  1  diawali dengan menggerus mentol di dalam mortir yang ditambahi sedikit etanol sampai larut. Kemudian berturut-turut  dimasukkan  propilenglikol,  Na sakarin  dan  ekstrak  biji  kakao  yang  telah dilarutkan terlebih dahulu dalam sedikit aquades. Dicampurkan hingga rata dan ditambahkan  dengan  aquades  yang  masih tersisa. Lalu dipindahkan ke dalam wadah untuk diamati. Perlakuan ini diulang untuk formula 2-4 dengan  penambahan  gliserin  sesuai  variasi konsentrasi yang diuji.

## Evaluasi Formula
a. Uji stabilitas formula, dengan cara mengamati warna,  bau,  rasa,  kekeruhan  dan  adanya endapan  pada  formula  selama  21  hari  dengan waktu  pengamatan  pada  hari  ke  0,  7,  14  dan 21.
b. Uji pH formula, menggunakan pH meter yang telah  dikalibrasi  dengan  menggunakan  larutan buffer standar  dan  pH  7.  Pengujian  ini dilakukan  selama  21  hari  dengan  waktu penambilan data pada hari ke 0, 7, 14 dan 21.
c. Uji  Diameter  Daya  Hambat, menggunakan metode  difusi  dengan  menggunakan paper disc .  Masing-masing  formula  ditanam  dalam medium  MHA  sebanyak  10  µmL  dan diinkubasikan  selama  24  jam.  Pengamatan dilakukan  dengan  menghitung  diameter  zona hambat setiap formula. Pengujian ini dilakukan pada hari ke 0, 7, 14 dan 21.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  pada pengukuran  pH dianalisis  secara  statistic  menggunakan  metode Paired  Sample  T-Test untuk  melihat  ada tidaknya  perbedaan  bermakna    setiap  formula yang dibandingkan dengan hari ke-0. Sedangkan data  hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat dianalisis  secara  statistik  menggunakan  metode Twoway  ANOVA dengan  tingkat  kepercayaan 95%  untuk  mengetahui  pengaruh  konsentrasi gliserin  dan  waktu  penyimpanan  terhadap aktivitas  antibakteri  (diameter  daya  hambat) mouthwash .

## HASIL
Tabel 2. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Biji
Kakao Bahan
Formula F1(%)  F2(%)  F3(%)  F4(%) Eksrak biji kakao 6,25 6,25 6,25 6,25 Gliserin 0 15 20 25 Propilenglikol 10 10 10 10 Na sakarin 0,1 0,1 0,1 0,1 Mentol 0,25 0,25 0,25 0,25 Aquades hingga 100 100 100 100
Konsentrasi Ekstrak Biji kakao (%) Diameter Daya Hambat (mm) 6,25 15,8 12,5 17,5 25 20,4 50 23,9 100 26,8

## Tabel  3.  Hasil  Uji  Stabilitas  pH  Formula Mouthwash Ekstrak Biji Kakao
Keterangan  :  Tanda  (*)  menandakan  adanya perbedaan bermakna dibandingkan dengan hari ke-0.
Tabel  4.  Hasil  Uji  Stabilitas  Organoleptik Formula Mouthwash Ekstrak  Biji Kakao
Tabel  5.Hasil  Uji  Diameter  Daya        Hambat Formula Mouthwash Ekstrak  Biji Kakao

## PEMBAHASAN
Mouthwash merupakan  salah  satu  sediaan mulut  yang  banyak  beredar  di  pasaran.  Salah satu  keuntungan mouthwash yaitu  mudah dibawa  kemana-mana.  Selain  itu, mouthwash praktis  ketika  digunakan  dibandingkan  dengan sediaan  mulut  lainnya,  misalnya  pasta  gigi. Mouthwash yang beredar di pasaran mempunyai banyak manfaat, mulai dari menyegarkan mulut, menghilangkan  bau  mulut  sampai  mengurangi pembentukan plak atau karies pada gigi.
Melalui  penelitian  saat  ini,  peneliti  ingin membuat mouthwash dengan  tujuan  teraupetik yaitu mengurangi pembentukan plak atau karies gigi  menggunakan  bahan  alam  berupa  ekstrak biji kakao ( Theobroma cacao L). Bahan alam ini digunakan karena berdasarkan penelitian Adrianto  (2012)  dan  Purnamasari  (2010) diketahui  mengandung  senyawa  polifenol  yang dapat  menghambat  pembentukan  glukosa  oleh bakteri Streptococcus  mutans sehingga  sulit membentuk plak pada gigi karena glukosa yang akan  diubah  oleh  bakteri  tersebut  menjadi  asam yang dapat melarutkan email gigi dan membentuk  plak.  Selain  itu,  biji  kakao  juga diketahui  mengandung  senyawa  katekin  yang mampu  mencegah  terbentuknya  plak  gigi dengan  cara  mendenaturasi  protein  bakteri  dan menyebabkan  bakteri  akan  kehilangan  aktivitas fisiologis sehingga tidak dapat berfungsi dengan baik dan kemudian sel menjadi rusak.
Formula pH Hari Ke- 0 7 14 21 F1 6,17 6,03 5,95* 5,86* F2 6,20 6,17 6,15 6,11 F3 6,22 6,20 6,17 6,14 F4 6,25 6,23 6,19 6,16
Formula Pengamatan Hari ke-
0 7
14 21 F1
Bau mentol mentol mentol mentol Rasa Mint manis Mint manis Mint manis Mint manis Endapan Tidak Tidak Tidak Tidak Kekeruhan Ya Ya Ya Ya Warna Merah kehitaman Merah kehitaman Merah pekat Merah pekat
F2
Pengamatan 0 7
14 21 Bau mentol mentol mentol mentol Rasa Mint manis Mint manis Mint manis Mint manis Endapan Tidak Tidak Tidak Tidak Kekeruhan Ya Ya Ya Ya Warna Merah kehitaman Merah kehitaman Merah pekat Merah pekat
F3
Pengamatan 0 7 14
21 Bau mentol mentol mentol mentol Rasa Mint manis Mint manis Mint manis Mint manis Endapan Tidak Tidak Tidak Tidak Kekeruhan Ya Ya Ya Ya Warna Merah kehitaman Merah kehitaman Merah pekat Merah pekat
F4
Pengamatan 0 7
14 21 Bau mentol mentol mentol mentol Rasa Mint manis Mint manis Mint manis Mint manis Endapan Tidak Tidak Tidak Tidak Kekeruhan Ya Ya Ya Ya Warna Merah kehitaman Merah kehitaman Merah pekat Merah pekat Formula Diameter Daya Hambat (mm) Hari ke- 0 7 14 21 F1 12,20 9,60 8,10 0 F2 13,60 13,60 13,30 12,20 F3 12,80 12,40 12,40 10,20 F4 12,80 12,20 11,60 9,80
Langkah  awal  penelitian  ini  yaitu  dengan membuat ekstrak biji kakao. Adapun kakao yang digunakan  berasal  dari  perkebunan  kakao  di Desa  Palolo  dengan  tingkat  kematangan  sedang hingga  matang,  yang  dapat  dilihat  dari  kulit kakao  yang  berwarna  kuning  kehijauan  hingga kuning.    Kakao  yang  telah  diperoleh  kemudian dikeluarkan  bijinya  dan  dijemur  terlebih  dahulu untuk  memisahkan  daging  dengan  biji  kakao yang  ada.  Proses  penjemuran  dilakukan  di tempat  yang  tidak  terkena  sinar  matahari langsung untuk mempercepat proses pemisahan. Setelah kira-kira 1 minggu dan buah kakao telah terpisah dari bijinya, maka dilakukan pengelupasan karena biji kakao masih terbungkus  kulit  biji.  Pengelupasan  kulit  biji dilakukan  selama  1  hari  secara  manual  dengan menggunakan  pisau  lalu  biji  kakao  yang diperoleh  dijemur  kembali di  tempat  yang  tidak terkena  sinar  matahari  langsung.  Hal  ini dilakukan agar senyawa-senyawa yang terkandung  dalam  biji  kakao  tidak  rusak  oleh adanya sinar matahari.
Setelah  proses  ini  selesai,  maka  langkah selanjutnya yaitu mengekstraksi biji kakao yang telah  diperoleh.  Proses  ekstraksi  menggunakan metode  maserasi  yang  mengacu  pada  penelitian sebelumnya dengan menggunakan pelarut etanol 80%.  Sebelum  mengekstraksi,  biji  kakao  yang ada  terlebih  dahulu  di  perkecil  ukurannya.  Hal ini  dimaksudkan  agar  ketika  proses  ekstraksi berlangsung,  molekul-molekul    pelarut  dapat dengan  mudah  menembus  sel-sel  biji  kakao sehngga proses ekstraksi menjadi lebih maksimal.  Selain  mengacu  pada  penelitian sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Purnamasari (2010),  digunakan  maserasi  dalam  proses ekstraksi  juga  karena  metode  ini  merupakan metode  sederhana  yang  tidak  membutuhkan banyak biaya dan alat dengan hasil ekstrasi yang memuaskan.  Ekstrak  yang  diperoleh  kemudian dipekatkan  dalam  mesin rotary  evaporator untuk  memperoleh  ekstrak  kental  sedangkan residunya  diremaserasi  sebanyak  3  kali  untuk memperoleh  senyawa-senyawa  yang  belum terekstraksi.    Hasil  ekstraksi  maserasi  diperoleh ekstrak  kental  sebanyak  197,44  gram.  Ekstrak kental  yang  diperoleh  lalu  diangin-anginkan untuk  menguapkan  sisa  pelarut.  Rendamen ekstrak yang diperoleh sebesar 78,98%.
Langkah  selanjutnya  yaitu  melakukan pengujian awal yang bertujuan untuk mengetahui  persentase  ekstrak  yang  digunakan dalam  formula mouthwash .  Berdasarkan  pada pengujian ini diperoleh bahwa semua konsentrasi  mempunyai  zona  hambat  sehingga dapat digunakan pengenceran dengan konsentrasi  6,25%yang  merupakan  konsentrasi terkecil ekstrak (KHM) yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans. Langkah  ketiga  dalam  penelitian  ini  yaitu pembuatan mouthwash .  Adapun  bahan-bahan yang  digunakan  selain  ekstrak  biji  kakao  yaitu gliserin sebagai humektan, propilenglikol sebagai  kosolvent  dengan  tujuan  membantu melarutkan  senyawa  fenol,  natrium  sakarin sebagai  pemanis,  mentol  sebagai  pemberi  rasa dan  aroma  dan  aqua  steril  sebagai  pelarutnya. Mouthwash dibuat  menjadi  4  formula  dimana setiap formula menggunakan konsentrasi gliserin  yang  berbeda-beda,  yaitu  0%,  15%, 20%,  25%.  Hal  ini  bertujuan  untuk  mengetahui konsentrasi  gliserin  yang  mampu  memberikan kerja  yang  maksimal  karena  diketahui  bahwa gliserin  dalam  penelitian  ini  dimaksudkan sebagai humektan, yaitu zat yang membantu zat aktif  (ekstrak  biji  kakao)  untuk  memperlama waktu kontak dengan mulut dan gigi.
Setelah mouthwash telah  selesai  dibuat, dilakukan beberapa pengujian pada hari ke-0, 7, 14,  dan  21  diantaranya  uji  organoleptik  dengan melihat ada tidaknya perubahan warna, bau, rasa dan  kekeruhan;  uji  pH  menggunakan  pH  meter dengan larutan baku standar pH 4 dan pH 7 yang bertujuan  untuk  mengetahui  kesesuaian  pH mouthwash ekstrak biji kakao dengan pH mulut serta  uji  zona  hambat  dengan  menggunakan medium  MHA  (Mueller  Hinton  Agar)  dan bakteri Streptococcus  mutans dengan  tujuan untuk  mengetahui  formula  yang  stabil  dan memiliki aktivitas antibakteri yang tinggi.
Berdasarkan hasil pengujian terhadap sifat fisik dan sifat kimia ke empat formula mulai dari hari ke-0 sampai hari ke-21 diperoleh data yang tidak  jauh  berbeda  antara  formula  1,2,  3  dan  4. Berdasarkan  data  pada  Tabel  4.2  menunjukkan perubahan  yang  terjadi  dari  ke-4  formula  ada pada  perubahan  warna  dimana  pada  hari  ke-0 dan  7, mouthwash berwarna  merah  kehitaman sedangkan  pada  hari  ke-14  dan  21  berubah menjadi  merah  pekat.  Hal  ini  disebabkan
formula  telah  teroksidasi  karena  kakao  juga mempunyai  aktivitas  antioksidan  sehingga mudah teroksidasi.
Pada pengujian pH, terjadi perubahan yang berbeda untuk setiap formula, namun perubahan yang terjadi tidak signifikan. Dapat dilihat dalam Tabel  4.3  bahwa  dari  ke-4  formula,  hanya formula  1  yang  mengalami  penurunan  nilai  pH yang  berbeda.  Hal  ini  terjadi  karena  formula  1 tidak  menggunakan  gliserin  sehingga  ekstrak yang ada tidak terdispersi sempurna. Jika dilihat dari hasil pengolahan data menggunakan Paired Sample  Test dengan  membandingkan  nilai  pH hari ke-0 dengan hari ke-7,14 dan 21 pada setiap formula diketahui bahwa untuk formula 1, tidak ada  perbedaan  yang  signifikan  antara  pH  hari ke-0  dengan  pH  hari  ke-7  namun  perbedaan yang  signifikan    terjadi  diantara  pH  hari  ke-0 dengan  pH  hari  ke-14  dan  hari  ke-21.  Hal  ini dibuktikan  dengan  nilai  signifikan  yang  kurang dari  0,05.  Untuk  formula  2,  formula  3  dan formula  4,  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan antara pH hari ke-0 dengan hari ke-7, 14  dan  21.  Hal  ini  dibuktikan  dengan  nilai signifikan yang lebih besar dari 0,05.
Pengujian  selanjutnya  yaitu  pengujian antibakteri  untuk  membandingkan  daya  hambat yang  terbentuk  setiap  formula  serta  untuk mengetahui  pengaruh  konsentrasi  gliserin  dan waktu penyimpanan terhadap daya hambat yang terbentuk  menggunakan  metode  difusi  agar. Data  yang  diperoleh  kemudiaan  dianalisis dengan  menggunakan  analisis  statistik Twoway ANOVA .  Pada  pengujian  antibakteri  diperoleh data  yang  tidak  jauh  berbeda  untuk  setiap formula  dimasing-masing  hari  pengujian.  Jika dilihat  dalam  Tabel  4.4,  nampak  bahwa  ada penurunan  zona  hambat  dari  setiap  formula, namun hanya formula 1 yang zona hambatnya 0 pada  hari  ke-21.  Hal  ini  terjadi  karena  pada formula 1 tidak terdapat gliserin, sehingga daya kerja zat aktif (ekstrak) juga berkurang. Gliserin sebagai  humektan  berfungsi  menambah  waktu kontak  formula  dengan  mulut  dan  gigi  dengan cara  membantu  zat  aktif  agar  dapat  menyebar homogen  ke  seluruh  permukaan  gigi,  sehingga ketika  tidak  terdapat  gliserin  dalam  formula, maka  zat  aktif  yang  ada  tidak  tersebar  dan mengurangi  daya  kerjanya.  Selain  itu,  gliserin juga membantu menjaga penguapan air berlebih dalam  sediaan.  Perlu  diketahui  bahwa  katekin
yangberperan sebagai senyawa pencegah pembentukan  plak  gigi  merupakan  senyawa yang  larut  di  dalam  air  sehingga  jika  air  dalam sediaan  menguap  maka  kelarutan  katekin  juga akan  berkurang  dan  mengakibatkan  katekin tidak dapat bekerja secara sempurna.
Berdasarkan ketiga pengujian di atas, dapat disimpulkan  bahwa  penambahan  gliserin  dalam formula    mempengaruhi  aktivitas  zona  hambat dari  zat  aktif mouthwash (ekstrak)  yang  terlihat dari  perbandingan  diameter  zona  hambat  pada setiap  formula.  Untuk  formula  1  yang  tidak ditambahkan  gliserin,  diameter  zona  hambatnya sudah tidak nampak. Berbanding terbalik dengan formula 2, 3 dan 4 dimana pada masing-masing formula  tersebut  zona  hambatnya  nampak dengan  ukuran  yang  berbeda-beda.  Namun  ada asumsi bahwa semakin besar konsentrasi gliserin yang  ditambahkan  pada formula,  maka  semakin besar pula zona hambat yang terbentuk. Asumsi ini  mungkin  tidak  berlaku  dalam  penelitian  ini yang  terlihat  dalam  Tabel  4.4  dimana  diameter zona hambat formula 2 lebih besar dibandingkan formula lainnya. Hal ini mungkin terjadi karena formula  2  merupakan  komposisi  yang  sesuai. Menurut  Raymond  C  Rowe  HPE  hal  301, aktivitas  kerja  gliserin  dapat  berkurang  jika terjadi  interaksi  dengansenyawa  fenol/polifenol dalam konsentrasi yang tidak sesuai.
Melalui  penelitian  ini  telah  diperoleh pengaruh  perbedaan  gliserin  sebagai  humektan terhadap sifat fisik, sifat kimia dan daya hambat pada  bakteri Streptococcus  mutans serta diperoleh  juga  konsentrasi  gliserin  dalam formula obat kumur ( mouthwash ) yang memenuhi  mutu  fisik  dan  aktivitas  antibakteri paling tinggi, yaitu formula 2 dengan konsentrasi gliserin sebesar 15%.

## DAFTAR PUSTAKA
Adrianto,  K.,  2012., Efek  Antibakteri  Polifenol Biji  Kakao  pada  Streptococcus  mutans .,
Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember., Jember.
Anggreini,  A.,  2005., Perlekatan  Koloni Streptococcus  mutans  pada  Permukaan Resin  Komposit  Sinar  Tampak .,  Fakultas Kedokteran  Gigi  Universitas  Airlangga., Surabaya.
Akarina,  W.,  2011, Pengaruh  Konsentrasi Humektan terhadap Stabilitas Formula Obat Kumur , Jurnal USU, Medan.
Brooks,  G.  F.,  Butel,  J.  S.,  dan  Morse,  S.  A. 2007. Mikrobiologi  Kedokteran  Jawetz,
Melnick,  and  Adelberg. 23th  edition.
Jakarta: EGC.
Dhika T.S., 2007., Perbandingan Efek Antibakterial  Berbagai  Konsentrasi  Daun Sirih (Piper Betle Linn ) terhadapStreptococcus  mutans., Fakultas KedokteranUniversitas Diponegoro., Semarang.
Dirjen  POM,  1979,  Farmakope  Indonesia  Edisi III, Depkes RI., Jakarta.
Ganiswarna,  S.  G.,  1995., Farmakologi  dan Terapi. Edisi  ke  4.,  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia., Jakarta.
Hidayaningtias,  P.,  2008, Perbandingan  Efek Antibakteri  Air  Seduhan  Daun  Sirih  (Piper betle Linn )  terhadap  Streptococcus  mutans pada  Waktu  Kontak  dan  Konsentrasi  yang Berbeda , Universitas
Diponegoro,
Semarang.
Hizonat, F., 2008, Aktivitas Ekstrak Etanol Biji Kakao  (Theobroma  cacao  L.)  sebagaI Antibakteri  Streptococcus  mutans  Kode Isolat  260411-KG  secara  In  Vitro, Jurnal Universitas Brawijaya, Malang.
Julianti,  R.,  2008., Tutorial  Gigi  dan  Mulut .,
Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Negeri Riau., Riau. Marsaban, 2007, Perbandingan Efek Antibakterial Ekstrak Buah Cacao (Theobroma cacao) pada Berbagai Konsentrasi Terhadap Streptococcus mutans, Jurnal Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang.
Niken,S.,  2012, Perbandingan  Ekstrak  Buah Kakao  dalam  Berbagai  Varietas ,  Jurnal UNTAD, Palu.
Nugraha,  2008, Uji  Zona  Ekstrak  Polifenol  Biji Kakao terhadap Pertumbuhan Streptococcus  mutans ,  Jurnal  Universitas jember, Jember.
Purnamasari,D.,  2010, Konsentrasi  Ekstrak  Biji Kakao  Sebagai  Material  Alam  dalam Menghambat  Pertumbuhan  Streptococcus mutans , Jurnal PDGI, Surabaya.
Pradewa,R.,  2008, Formulasi  Formula  Obat Kumur berbahan dasar Gambir , Jurnal IPB, Bogor.
Pratama, M. R., 2005., Pengaruh Ekstrak Serbuk Kayu  Siwak  (Salvadora  persica)  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri  Streptococcus  mutans dan  Streptococcus  aureus  Dengan  Metode Difusi  Agar .,  Program  Study  biologi Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan
Alam Institut Teknologi Sepuluh November., Surabaya.
Sagarin, E. dan S.D. Gershon., 1972, Cosmetics, Science  and  Technology ,  2nd  Edition,
Volume  I,  John  Wiley  and  Sons,  Inc,  New York.
Setiadevi, S., 2010., Karakterisasi Ekstrak
Polifenol  Biji  Kakao  Nonfermented  dari Berbagai Macam Metode Ekstraksi ., Jurusan Teknologi Hasil Pertanian Fakultas Teknologi  Pertanian  Universitas  Jember.,
Jember.
Sho’irotul,  H.,  2007., Aktivitas  Antioksidan Katekin  dari  Teh  Hijau  (Camelliasinensis o.k.  Var.  Assamica  (mast))  Hasil  Ekstraksi dengan  Variasi  Pelarut dan  Suhu .,  Fakultas Sains  dan  Teknologi  Universitas  Islam Negeri Malang., Malang.
Susanto,  F.,  1994., Tanaman  kakao  (Budidaya dan Pengolahan Hasil). , Kanisius., Yogyakarta.
Syarif,  S.,  2007., Skrining  Tumbuhan  Obat  yang Mempunyai  Aktivitas  Antibakteri  Penyebab Karies Gigi dan Pembentuk Plak ., UNPAD., Bandung
Wahyudi,  T.,  2008., Panduan  Lengkap  Kakao ., Penebar Swadaya., Jakarta.
Zaenab.,    2004.,  Uji  Antibakteri  Siwak ( Salvadora  persica linn.)  terhadap
Streptococcus  mutans (ATC31987)
dan Bacteroides  melaninogenicus., Institut Sains dan Teknologi Nasional,
Jakarta