## EFEK LARVASIDA EKSTRAK TAGETES ERECTA FRAKSI HEKSAN DAN ASETON TERHADAP LARVA NYAMUK AEDES AEGYPTI INSTAR 3 DAN 4

## LARVICIDAL EFFECT OF TAGETES ERECTA EXTRACT HEXANE AND ACETONE FRACTION ON INSTAR 3 AND 4 AEDES AEGYPTI MOSQUITO LARVAE
November Rianto Aminu* 1 , Hartati Soetjipto 1 , A. Ign. Kristijanto 1
1 Program Studi Kimia, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Kristen Satya Wacana, Jl. Diponegoro 52-60, Salatiga 50711, Indonesia *Corresponding Author: november.aminu@uksw.edu
Submitted : 23 Maret 2019 Accepted : 20 April 2023 Publish : 25 Mei 2023

## ABSTRACT
The  resistance  of A.  aegypti mosquito  larvae  to  temephos is  an  important  problem  that can  cause  an  explosion  in  the mosquito population that causes dengue fever. Therefore, it is necessary to search for alternative active compounds that can  act  as  larvicides,  but  which  must  also  be  environmentally  friendly.  The  aim  of  this  study  was  to  determine  the potency  of T.  erecta leaf  and  root  extracts  in  the  hexane  and  acetone fractions  as  larvicides.  The  process  begins  with drying  and  extraction  of  the  sample,  respectively  with  hexane  and  acetone.  A  test  solution  was  prepared  with  a concentration  of  0,  0.0075,  0.015,  0.03,  and  0.1%  (w/v)  of  the  resulting  extract.  The  larvicidal  test  was  carried  out according to WHOPES by observing the mortality of instar 3 and 4 larvae in each extract. The results obtained showed that the percent mortality of larvae increased with increasing concentration and exposure time for both types of larvae. The  lowest  LC50  was  obtained  from  the  root  extract  of  the  hexane  fraction  (37  ppm)  for  third  instar  larvae  and  the acetone  fraction  (61  ppm)  for  fourth  instar  larvae.  These  results  show  that  leaf  and  root  extracts  of T.  erecta have potential as an alternative larvicide to replace temephos.
Keywords : Larvae, A. aegypti , T. erecta . Fraction

## ABSTRAK
Resistensi  larva  nyamuk A.  aegypti terhadap  temephos  merupakan  masalah  penting  yang  dapat  menyebabkan meledaknya populasi nyamuk penyebab demam berdarah ini. Oleh karena itu pencarian senyawa aktif pengganti yang dapat  berperan  sebagai  larvasida,  namun  juga  harus  ramah  lingkungan  perlu,  dilakukan.  Tujuan  dari  penelitian  ini adalah  untuk  mengetahui  potensi  ekstrak  daun  dan  akar T.  erecta fraksi  heksan  dan  aseton  sebagai  larvasida.  Proses diawali dengan pengeringan dan ekstraksi sampel, masing – masing dengan pelarut heksan dan aseton. Dibuat larutan uji  dengan  konsentrasi  0,  0,0075,  0,015,  0,03,  dan  0,1  %  (b/v)  dari  ekstrak  yang  dihasilkan.  Uji  larvasida  dilakukan mengacu pada WHOPES dengan mengamati mortalitas larva instar 3 dan 4 pada masing – masing ekstrak. Hasil yang diperoleh menunjukan persen mortalitas larva bertambah seiring dengan bertambahnya konsentrasi dan waktu paparan pada kedua jenis larva. LC 50 terendah diperoleh dari ekstrak akar fraksi heksan (37 ppm) untuk larva instar 3 dan fraksi aseton  (61  ppm)  untuk  larva  instar  4.  Hasil  tersebut  menunjukan  ekstrak  daun  dan  akar T.  erecta memiliki  potensi sebagai larvasida alternatif pengganti temephos.
Kata kunci : Larva, A. aegypti , T. erecta . Fraksi
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License .

## PENDAHULUAN
Demam  Berdarah  Dengue  (DBD)  merupakan  penyakit  yang  disebabkan  oleh  infeksi  virus.  Jika  dibiarkan begitu saja, penyakit ini dapat menyebabkan kematian. Berdasarkan data WHO [1], pada tahun 2016 lebih dari 3 juta  kasus  DBD  dimana  4000  kasus  berujung  pada  kematian  di  seluruh  dunia.  Di  Asia  Tenggara  tercatat  sekitar 450000 kasus  DBD  pada  periode  yang  sama,  dimana 200000 di antaranya  terjadi  di  Indonesia.  Berdasarkan  data tersebut,  Indonesia  masih  menjadi negara  dengan  kasus  DBD  terbanyak  di  Asia  Tenggara.    Penyakit  DBD  pada umumnya menyebar di area tropis dan sub-tropis, terutama di daerah kumuh.
Hingga  saat  ini  masih  belum  ditemukan  pengobatan  untuk  penyakit  DBD.  Hal  yang  umumnya  dilakukan untuk  mencegah  penyebaran  penyakit  ini  adalah  dengan  memberantas  atau  membunuh  nyamuk  yang  menjadi penyebar  (vektor).  Pada  umumnya,  pemberantasan  dilakukan  dengan  2  cara.  Pertama,  dengan  menggunakan  anti nyamuk  yang  untuk  melindungi  tubuh  dari  gigitan  nyamuk  atau  insektisida  untuk  membunuh  nyamuk  [2]. Penanganan nyamuk dengan metode ini berpotensi menyebabkan keracunan. Penelitan yang dilakukan oleh Balai Besar  Penelitian  dan  Pengembangan  Vektor  dan  Reservoir  Penyakit,  Salatiga,  melaporkan  jenis  pembasmi serangga  serta  bahan  aktifnya  yang  beredar  di  kota  Salatiga  [3].  Berdasarkan  studi  yang  dilakukan,  golongan senyawa  piretroid  dan  turunannya  merupakan  bahan  aktif  yang  paling  sering  ditemukan.  Golongan  senyawa  ini memiliki  tingkat  toksisitas  IIIU  (tidak  berbahaya  jika  digunakan  secara  normal)  hingga  tingkat  toksisitas  II (berbahaya) [4].
Metode kedua yaitu dengan menambahkan larvasida ke dalam tempat atau wadah yang dapat menampung air (tandon  air,  kolam,  akuarium,  dan  lain  sebagainya)  untuk  membunuh  larva  nyamuk  yang  mungkin  terdapat  di dalamnya.  Temephos  merupakan  senyawa  kimia  yang  paling  sering  dipergunakan  sebagai  larvasida  nyamuk. Senyawa  ini  membunuh  larva  sebelum  larva  berubah  menjadi  nyamuk.  Temephos  memiliki  kelemahan  yaitu kemungkinan  larva  menjadi  resisten  seiring  berjalannya  waktu  dan  penggunaan  dalam  jumlah  yang  tidak  sesuai dosis.
Resistensi  nyamuk A.  aegypti terhadap  temephos  pertama  kali  dilaporkan  di  Rio  de  Janairo,  Brazil  pada tahun 1999 [5]. Di Indonesia, kasus serupa dilaporkan terjadi di beberapa wilayah, antara lain Yogyakarta dan Jawa Tengah. Penelitian tersebut melaporkan bahwa beberapa daerah di Yogyakarta dan Jawa Tengah telah mengalami resistensi terhadap malathion (senyawa aktif atau insektisida yang dipergunakan untuk pengasapan) dan temephos [6].  Oleh  karena  itu,  diperlukan  adanya  larvasida  lain  yang  dapat  menggantikan  temephos.  Selain  itu,  senyawa tersebut hendaknya juga aman terhadap lingkungan terutama organisme non-target.
Marigold  ( Tagetes  erecta L)  merupakan  tanaman  yang  biasanya  dipergunakan  sebagai  tanaman  hias. Tanaman  ini  juga  dapat  dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisonal  [7]  maupun  sebagai  insektisida  dan  fungisida  [8]. Metabolit sekunder seperti senyawa turunan fenol, fenilpropanoid, turunan tiofena,  turunan benzofuran, triterpene, steroid,  alkaloid,  flavonoid,  karotenoid,  dan  lain  –  lain,  ditemukan  di  dalam  tanaman  ini  [9].  Beberapa  diantara senyawa tersebut menunjukan potensi sebagai bahan aktif obat. Berdasarkan  kandungan T. erecta di atas, ekstrak tanaman ini dipandang memiliki potensi untuk dipergunakan sebagai alternatif pengganti temepos. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui seberapa besar potensi ektrak T. erecta sebagai biolarvasida yang ramah lingkungan ditinjau dari nilai LC 50 .

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Kimia  Universitas  Kristen  Satya  Wacana,  Salatiga.  Aseton  dan heksan  yang  dipergunakan  sebagai  pelarut,  berjerajat  pro  analisis.  Daun  dan  akar T.  erecta diperoleh  dari  area Bandungan,  Kabupaten  Semarang.  Larva  nyamuk A. aegypti instar  3  dan  4  diperoleh  dari  Balai  Besar  Penelitian dan Pengembangan Vektor dan Reservoir Penyakit (B2P2VRP), Salatiga.

## Ekstraksi Sampel
Sampel,  yang  sebelumnya  telah  dikeringanginkan  dan  dihaluskan,  dimarserasi  selama  24  jam  dengan menggunakan pelarut heksan. Campuran ini kemudian disaring dan filtrat diuapkan. Langkah ini diulang sebanyak dua  kali.  Residu  yang  diperoleh  kemudian  dimarserasi  kembali  dengan  menggunakan  pelarut  aseton.  Perlakuan yang sama dilakukan pada proses maserasi ini.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  menjdi  beberapa  seri  konsentrasi:  0,  0,0075,  0,015,  0,03,  dan  0,1%  (b/v).  Akuades dipergunakan sebagai pelarut untuk ekstrak fraksi aseton dan akuades:gom arab (1:1) dipergunakan sebagai pelarut ekstrak fraksi heksan.

## Uji Larvasida

## Kimia FMIPA UKSW
Uji  larvasida  mengacu  pada  WHOPES  [10].  10  ekor  larva  nyamuk A.  aegypti dimasukan  ke  dalam  cawan petri yang berisi 25 ml larutan uji. Persentase mortalitas larva diamati pada jam ke 24, 48, dan 72.

## Analisa Data
Data  mortlitas  larva  nyamuk  dianalisa  dengan  menggunakan  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK)  sub- sampling  dengan  5  perlakuan,  5  ulangan,  dan  2  sub-sampel  pada  setiap  tipe  ekstrak  dan  instar  larva  nyamuk. Perbedaan antar perlakuan dianalisa dengan menggunakan uji Beda Nyata Jujur (BNJ) dengan selang kepercayaan 5%. Analisa Probit dipergunakan untuk menentukan LC 50 ekstrak.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstrak Daun T. erecta
Persentase mortalitas dari larva A. aegypti instar 3 dan 4 dalam berbagai konsentrasi ekstrak daun T. erecta fraksi  heksan  dan  aseton  setelah  24,  48,  dan  72  jam  dapat  dilihat  pada  Tabel  1  dan  2.  Hasil  pengamatan menunjukan tidak ada larva nyamuk yang mati pada kontrol (0%), dimana akuades:gom arab (1:1) dipergunakan sebagai kontrol pada fraksi heksan dan akuades sebagai kontrol pada fraksi aseton.
Berdasarkan  data  yang  diperoleh,  mortalitas  larva  bertambah  seiring  bertambahnya  waktu  dan  konsentrasi ekstrak.  Hasil  yang  diperoleh  menunjukan  mortalitas  tertinggi  ekstrak  daun  fraksi  heksan  diperoleh  pada konsentrasi  0,03%  setelah  larva  terekspos  selama  72  jam,  baik  pada  instar  3  (73%)  maupun  instar  4  (61%). Mortalitas terendah ditunjukan pada konsentrasi 0,0075% setelah larva terekspos 24 jam (4% untuk instar 3 dan 1% untuk  instar  4).  Data  ini  menunjukan  bahwa  ekatrak  daun T.  erecta fraksi  heksan  lebih  efektif  membunuh  larva nyamuk A. aegypti instar 3 (Tabel 1).
Tabel 1. Mortalitas (%  SE) Larva Nyamuk A. aegypti Dalam Berbagai Konsentrasi Ektrak Daun T. erecta Fraksi Heksan
Larva Instar Waktu (Jam) W Konsentrasi (% b/v) 0 0.0075 0.015 0.03 0.1 3 24 10.76 0  0 (a) 4  3.69 (a) 9  6.26 (ab) 17  5.98 (b) 28  6.57 (b)
48 11.89 0  0 (a) 25  6.95 (b) 30  6.74 (b) 43  5.89 (c) 52  3.02 (c) 72 9.94 0  0 (a) 51  7.11 (b) 52  5.64 (b) 73  4.83 (c) 82  5.64 (c) 4 24 5.09 0  0 (a) 1  2.26 (a) 3  3.45 (a) 5  5.06 (a) 11  6.26 (b)
48 13.65 0  0 (a) 16  3.69 (b) 17  5.89 (bc) 26  5.00 (bc) 30  4.77 (c)
72 9.82 0  0 (a) 37  3.45 (b) 45  6.08 (b) 61  5.28 (c) 60  5.84 (c)
Catatan: Angka yang diikuti huruf yang sama dalam satu baris tidak bebeda signifikan secara statistik
Ekstrak  daun T.  erecta fraksi  aseton  menunjukan  efektivitas  yang  berdeda  dengan  fraksi  heksan.  Fraksi aseton lebih efektif membunuh larva instar 4 nyamuk A. aegypti (Tabel 2). Fraksi ini mampu membunuh 66% larva nyamuk instar 3 dan membunuh 88% larva nyamuk instar 4 keduanya setelah terpapar ekstrak selama 72 jam. Hasil ini sanagat menarik untuk dikaji lebih lanjut untuk mengetahui komponen senyawa kimia  spesifik yang berperan dalam perbedaan efektivitas masing – masing fraksi.
Tabel 2. Mortalitas (%  SE) Larva Nyamuk A. aegypti Dalam Berbagai Konsentrasi Ektrak Daun T. erecta Fraksi Aseton
Larva Instar Waktu (Jam) W Konsentrasi (% b/v) 0 0.0075 0.015 0.03 0.1 3 24 21.66 0  0 (a) 1  2.26 (a) 4  3.69 (ab) 20  7.54 (ab) 25  3.77 (b) 48 29.24 0  0 (a) 10  5.84 (ab) 21  6.26 (ab) 38  4.52 (bc) 53  7.58 (c)

## Kimia FMIPA UKSW
72 15.24 0  0 (a) 42  4.52 (b) 45  5.06 (b) 66  5.00 (c) 72  7.39 (c) 4 24 15.42 0  0 (a) 12  8.12 (ab) 26  5.00 (b) 58  5.64 (c) 75  6.08 (d) 48 20.13 0  0 (a) 48  5.64 (b) 53  4.83 (b) 79  8.56 (c) 91  4.06 (c) 72 23.51 0  0 (a) 62  7.39 (b) 71  7.87 (bc) 88  7.13 (cd) 96  4.33 (d)
Catatan: Angka yang diikuti huruf yang sama dalam satu baris tidak bebeda signifikan secara statistik

## Ekstrak Akar T. erecta
Hasil berbeda ditunjukan oleh ekstrak akar T. erecta . Kedua fraksi ekstrak menunjukan mortalitas tertinggi pada instar 3 larva nyamuk A. aegypti (Tabel 3 dan 4). Kontrol (0%) yang dipergunakan pada pengujian ini sama seperti  yang  dipergunakan  pada  pengujian  dengan  ekstrak  daun.  Fraksi  heksan  dari  ekstrak  batang  mencapai efektivitas 100% pada konsentrasi 0,03% setelah instar 3 larva terpapar ekstrak selama 72 jam dan efektivitas 98% pada konsentrasi 0,03% setelah larva instar 4 terpapar ekstrak selama 72 jam. Serupa dengan hasil tersebut, fraksi aseton  memberikan  mortalitas  tertinggi  (100%)  pada  konsentrasi  0,03%  untuk  instar  3  dan  0,1%  untuk  instar  4. Kedua hasil tersebut diperoleh setelah larva terpapar ekstrak selama 72 jam.
Tabel 3. Mortalitas (%  SE) Larva Nyamuk A. aegypti Dalam Berbagai Konsentrasi Ektrak DAkar T. erecta Fraksi Heksan
Larva Instar Waktu (Jam) W Konsentrasi (% b/v) 0 0.0075 0.015 0.03 0.1 3 24 14.57 0  0 (a) 46  5.00 (b) 55  8.43 (b) 70  4.76 (c) 76  8.40 (c) 48 11.16 0  0 (a) 81  6.26 (b) 82  5.46 (b) 97  4.83 (c) 99  2.56 (c) 72 5.98 0  0 (a) 93  1.81 (b) 99  3.50 (bc) 100  0 (c) 100  0 (c) 4 24 15.00 0  0 (a) 27  3.45 (b) 30  4.77 (b) 55  7.73 (c) 69  5.28 (c) 48 11.62 0  0 (a) 54  6.91 (b) 65  7.73 (b) 84  7.69 (c) 96  5.00 (d) 72 8.66 0  0 (a) 76  6.91 (b) 87  9.57 (c) 98  3.87 (d) 97  14.34 (d)
Catatan: Angka yang diikuti huruf yang sama dalam satu baris tidak bebeda signifikan secara statistik
Tabel 4. Mortalitas (%  SE) Larva Nyamuk A. aegypti Dalam Berbagai Konsentrasi Ektrak DAkar T. erecta Fraksi Aseton
Larvae Instar Time (hour) W Concentration (% w/v) 0 0.0075 0.015 0.03 0.1 3 rd 24 9.49 0  0 (a) 8  5.46 (a) 9  7.11 (a) 29  5.28 (b) 42  5.46 (c)
48 16.43 0  0 (a) 45  10.25 (b) 57  7.58 (b) 76  7.69 (c) 98  3.01 (d) 72 16.24 0  0 (a) 80  5.84 (b) 87  9.57 (bc) 98  3.02 (c) 100  0 (c)
4 th 24 18.80 0  0 (a) 9  7.11 (a) 35  6.08 (b) 67  6.78 (c) 80  6.74 ()
48 11.34 0  0 (a) 48  10.00 (b) 66  6.03 (c) 94  6.91 (d) 98  3.02 (d)
72 2.44 0  0 (a) 74  3.69 (b) 85  8.43
(c) 97  14.34 (d) 100  0 (e)
Catatan: Angka yang diikuti huruf yang sama dalam satu baris tidak bebeda signifikan secara statistik

## Analisa LC 50
Nilai LC 50 fraksi heksan dan aseton ekstrak daun dan batang T. erecta terhadap instar 3 dan 4 larva nyamuk A. aegypti setelah terpapar selama 24, 48, dan 72 jam disajikan dalam Tabel 5. Berdasarkan tabel tersebut, dapat dilihat bahwa nilai LC 50 bergantung pada konsentrasi dan lama paparan ekstrak terhadap larva. Semakin kecil nilai LC 50 , berarti semakin kecil konsentrasi ekstrak yang diperlukan untuk memperoleh mortalitas larva sebesar 50%.
Tabel 5. Analisis LC 50
T . erecta Waktu (Jam) Fraksi Heksan (ppm) Aseton (ppm) Instar 3 Instar 4 Instar 3 Instar 4 Daun 24 1435 5776 2020 1040 48 410 830 540 630 72 170 270 200 460 Batang 24 190 300 850 900 48 67 110 120 450 72 37 70 57 61
Metabolit sekunder tanaman hingga sekarang masih diteliti sebagai larvasida alami. Penggunaannya diteliti dihampir  semua  belahan  dunia  dikarenakan  sifat  metabolit  sekunder  yang  ramah  lingkungan  serta  sumbernya (tanaman)  mudah  diperoleh.  Nikkon  [11]  melaporkan  aktivitas  larvasida  ekstrak  etanol  bunga T.  erecta efektif membunuh  larva  nyamuk Culex  quinquefasciatus instar  1,  2,  3,  dan  4.  Penelitian  Raj  [12]  melaporkan  bahwa ekstrak etanol, kloroform, dan petroleum eter dari bunga T. erecta memberikan efektivitas yang berbeda terhadap instar 1, 2, 3, dan 4 larva nyamuk A. aegypti . Badriyah [13] menggunakan 100% minyak atsiri dari daun T. erecta yang  diuapkan  sebagai  insektisida  nyamuk A.  aegypti dan Culex  quinquefasciatus .  Hasil  penelitian  tersebut memperlihatkan bahwa minyak  atsiri T.  erecta memiliki  kemamuan  sebagai insektisida  nyamuk,  namun  hasilnya masih belum mampu menyaingi hasil yang diberikan oleh parallethrin dengan konsentrasi 13,16 g L -1 . Penelitian Mahdalena  [14]  menghasilkan  LC 95 ekstrak  etanol T.  erecta setelah  terekspos  selama  24  jam  yaitu  sebesar  7456 ppm. Penelitian – penelitian tersebut menunjukan bahwa T. erecta memiliki potensi sebagai biolarvasida. Pada penelitian ini diperoleh hasil ekstrak akar T. erecta fraksi heksan memberikan nilai LC 50 terendah (37 ppm)  pada  larva  nyamuk  instar  3  setelah  terpapar  selama  72  jam  (Tabel  5).  Hasil  ini  didukung  oleh  penelitian Marques [15] yang menyatakan bahwa pada bagian akar T. erecta terkandung senyawa golongan tiofena (salah satu senyawa yang memberikan efek larvasida) lebih banyak dari pada bagian daun dan batang, namun lebih sedikit dari pada bagian bunga.
Tehri  dan  Naresh  [16]  menyatakan  pada  umumnya  senyawa  bahan  alam  memiliki  bioaktivitas  spesifik. Namun,  jika  efek  sinergis  antara  senyawa  terjadi,  hal  ini  kemungkinan  akan  meningkatkan  bioaktivitas  jika dibandingkan dengan senyawa spesifiknya. Oleh karena itu, penelitian lebih lanjut tentang senyawa spesifik yang menyebabkan efek larvasida pada T. erecta sangat dianjurkan.

## KESIMPULAN
Penelitian  ini  mengindikasikan  ekstrak  daun  dan  akar T. erecta  fraksi  aseton  maupun  heksan  memiliki potensi  sebagai  biolarvasida  nyamuk A.  aegypti. Persen  mortalitas  meningkat  seiring  bertambahnya  waktu  dan konsentrasi, baik pada instar 3 dan 4. LC 50 terendah diperoleh pada ekstrak akar fraksi heksan (37 ppm) untuk larva instar 3 dan ekstrak akar fraksi aseton (61 ppm) untuk larva instar 4.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] “WHO. (2018).Dengue data application,” WHO ,.
[2] Anggriani, R., (2010), “Uji Larvasida Ekstrak Rimpang Lengkuas (Alpinia galangan SW) Terhadap Kematian Larva Nyamuk Aedes aegypt i ,” Universitas Muhammadiyah Surakarta.
[3] Joharina, A. S., and Alfiah, S., (2012). “Descriptive Analysis Of Household Insecticide In Community,” Vektora , vol. 4, no. 1.
[4] Becker, N. et al. , (2010) “Systematics,” in Mosquitoes and Their Control , Berlin, Heidelberg: Springer Berlin Heidelberg, pp. 3–8.
[5] Lima, J.B.P., et al. ,(2003) “Resistance of Aedes aegypti to organophosphates in several municipalities in the State of Rio de Janeiro and Espírito Santo, Brazil.,” Am. J. Trop. Med. Hyg. , vol. 68, no. 3, pp. 329–33.
[6] Boewono, D. T., and Widiarti, (2007) “Susceptibility Of Dengue Haemorrhagic Fever Vector (Aedes Aegypti) Against Organophosphate Insecticides (Malathion And Temephos) In Some Districts Of Yogyakarta And Central Java Provinces,” Bul. Penel. Kesehat. , vol. 35, no. 2, pp. 49–56.
[7] J. Chang Ping, (2009) “Studies on the Effective Component for Antitussive from Tagetes Erecta L.,” Heliongjiang University of Traditional Chinese Medicine.
[8] P. Vasudevan, S. Kashyap, and S. Sharma,(1997) “Tagetes: A multipurpose plant,” Bioresour. Technol. , vol. 62, no. 1–2, pp. 29–35.
[9] L. Xu, J. Chen, H. Qi, and Y. Shi, (2012)“Phytochemicals and Their Biological Activities of Plants in Tagetes L.,” Chinese Herb. Med. , vol. 4, no. 2, pp. 103–117.
[10] WHO, (2005)“Guidelines for laboratory and field testing of mosquito larvicides,” World Heal. Organ. Commun. Dis. Control. Prev. Erad. Who Pestic. Eval. Scheme , pp. 1–41.
[11] F. Nikkon, M. R. Habib, Z. A. Saud, and M. R. Karim, (2011) “Tagetes erecta Linn. and its mosquitocidal potency against Culex quinquefasciatus,” Asian Pac. J. Trop. Biomed. , vol. 1, no. 3, pp. 186–188.
[12] S. H. C. Raj and N. Shettu,(2017) “Larvicidal Effects of Ethanolic Extract of Flowers ( Buds and Calyx ) of Tagetes Erecta and Its Chloroform and Petroleum Ether Soluble Fractions Against the,” vol. 6, no. 11, pp. 689–697.
[13] S. Badriyah, T. Hadianto, N. Istiyana, T. Baskoro Tu, and A. Diptyanusa,(2018) “Mosquitocidal Activities of Tagetes erecta L. Compared to Prallethrin Against Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae),” Res. J. Med. Plants , vol. 12, no. 2, pp. 65–71.
[14] V. Mahdalena, T. Ni’mah, R. H. Komariah, H. Sitorus, and M. Marini,(2018) “Potensi Daya Tolak Ekstrak Daun Marigold (Tagetes erecta L.) terhadap Nyamuk Aedes aegypti,” Balaba J. Litbang Pengendali. Penyakit Bersumber Binatang Banjarnegara , pp. 53–62.
[15] M. M. M. Marques et al. ,(2011) “Larvicidal activity of Tagetes erecta against Aedes aegypti.,” J. Am. Mosq. Control Assoc. , vol. 27, no. 2, pp. 156–158.
[16] K. Tehri and S. Naresh,(2015) “The role of botanicals as green pesticides in integrated mosquito management – A review,” Int. J. Mosq. Res. , vol. 2, no. 1, pp. 18–23.