Pengaruh Fraksi Metanol Ekstrak Saluang Belum (Luvunga Sarmentosa) Terhadap Motilitas Spermatozoa In Vitro
Effect of Methanolic Fraction of Beginning Salunag Extract (Luvunga Sarmentosa) on Spermatozoa Motility In Vitro

## Tasya 1
Silvani Permatasari 2*
Farah Fauziyah Fadhiyatulqalbi Ahmad 3
Septi Handayani 2
Elsa Trinovita 2
1 Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Palangka Raya, Kota Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia
*2 Departemen Biologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Palangka Raya, Kota Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia
3 Departemen Fisiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Palangka Raya, Kota Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia
*email: silvani.permatasari@med.upr.ac.id

## Abstrak
Salah  satu  penyebab  infertilitas  adalah  penurunan  kualitas  sperma  yang disebabkan  oleh  stress  oksidatif.  Pemberian  antioksidan  eksogen  yang didapatkan  dari  akar  saluang  belum (Luvunga  sarmentosa) dapat  menurunkan stres  oksidatif.  Penelitian  terkait  bioaktivitas Luvunga  sarmentosa terhadap motilitas  spermatozoa  in  vitro  masih  terbatas.  Untuk  mengetahui  pengaruh fraksi  metanol  ekstrak  akar  saluang  belum  terhadap  motilitas  spermatozoa secara  in  vitro  dan  konsentrasi  efektif  untuk  meningkatkan  motilitas spermatozoa.  Sampel  yang  digunakan  adalah  spermatozoa  manusia  in  vitro sebanyak  15  sampel  yang  dicuci  dan  ditambahkan  medium  BWW  ( Biggers, Whitten, and Whittingham ) kemudian diinkubasi pada suhu 37 ℃ selama 1 jam dengan fraksi methanol ekstrak akar Saluang Belum dengan konsentrasi 100, 500, 1000, 5000 ng/ml serta kelompok kontrol (BWW). Selanjutnya, dilakukan pemeriksaan di mikroskop untuk melihat gerak motilitas spermatozoa. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi metanol ekstrak akar Luvunga sarmentosa mengandung  senyawa  seperti  alkaloid,  amino  acid,  phenylpropanoid,  dan terpenoid. Motilitas spermatozoa meningkat secara signifikan pada konsentrasi 100, 500, 1000 dan 5000 ng/mL dan kelompok kontrol. Fraksi metanol akar Luvunga sarmentosa efektif pada konsentrasi 100 ng/mL.. Fraksi metanol akar saluang belum Luvunga Sarmentosa meningkatkan motilitas spermatozoa. Fraksi metanol, saluang belum, motilitas spermatozoa.

## Kata Kunci:
Fraksi Metanol Saluang Belum Motilitas Spermatozoa
Keywords : Methanol Fraction
Saluang Belum Root
Spermatozoa Motility

## Abstract
O ne of the causes of infertility is decreased sperm quality caused by oxidative stress. Providing  exogenous  antioxidants  obtained  from  saluang  root  yet  (Luvunga sarmentosa) can reduce oxidative stress. The research on the bioactivity of Luvunga sarmentosa on spermatozoa motility in vitro is still limited . To identify the effect of methanol fraction of saluang root extract on spermatozoa motility in vitro and the effective concentration to increase spermatozoa motility . The samples used were in vitro a total of 15 sampels human spermatozoa which were washed and added to BWW ( Biggers, Whitten, and Whittingham ) medium then incubated at 37 ℃ for 1 hour with methanol fraction of Saluang Belum root extract with concentrations of 100,  500,  1000,  5000  ng/ml  and  group  control  (BWW).  Subsequently,  an examination was carried out on a microscope to see the motility of spermatozoa . The study results showed that the methanolic fraction of Luvunga sarmentosa root extract contains  compounds  such  as  alkaloids,  amino  acids,  phenylpropanoids,  and terpenoids.  Spermatozoa  motility  increased  significantly  at  concentrations  of  100, 500, 1000 and 5000 ng/mL and the control group. The methanol fraction of Luvunga sarmentosa  root  was  effective  at  a  concentration  of  100  ng/mL . The  methanol fraction of saluang belum root increased motility of spermatozoa.Methanol fraction, saluang belum root, spermatozoa motility.
©  2024  The  Authors.  Published  by  Institute  for  Research  and  Community  Services  Universitas  Muhammadiyah Palangkaraya.  This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by- sa/4.0/). DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v10i2.6220

## PENDAHULUAN
WHO  menunjukan  50  sampai  80  juta  pasangan  subur mengalami infertilitas sedangkan di Indonesia sekitar 36 %  infertilitas  terjadi  pada  pria  (Arindia  et  al.,  2019). Faktor  penyebab  terjadinya  infertilitas  salah  satunya adalah  adanya  penurunan  kualitas  sperma  yang dipengaruhi  oleh  gaya  hidup  yang  kurang  baik,  seperti merokok,  minum  alkohol,  dan  lain  sebagainya.  Faktor penyebab lainnya yang memiliki pengaruh besar  dalam menurunkan  kualitas  sperma  adalah  stress  oksidatif (Ningsih  et  al.,  2016).  Stres  oksidatif  ditandai  dengan adanya peningkatan Reactive Oxygen Spesies (ROS) dan penurunan antioksidan. ROS berperan untuk meregulasi sejumlah jalur sel, namun jika terjadi peningkatan ROS yang melebihi pertahan antioksidan akan menyebabkan kerusakan  pada  kualitas  spermatozoa  dan  motilitas sperma  (Al-Snafinet  al.,  2016)  .  Salah  satu  bentuk pengobatan  yang  digunakan  untuk  mengatasi  stres oksidatif adalah dengan pemberian antioksidan eksogen. Antioksidan bisa didapatkan dari tanaman herbal salah satunya adalah akar saluang belum ( Luvunga sarmentosa). (Edy L, et al., 2022)
Saluang  belum  ( Luvunga  sarmentosa) adalah  salah  satu tanaman  yang  berasal  dari  hutan  kalimantan  dan dipercayai  oleh  masyarakat  suku  Dayak  bahwa  akarr dari  tumbuhan  ini  dapat  menjadi  obat  penunjang kesuburan pria (Mulyyono, 2019). Pada penelitian yang dilakukan  oleh  syarpin  dkk,  Fraksinasi  akar  saluang belum  ( Luvunga  sarmentosa) mengandung  senyawa alkaloid , amino  acid  derivative,  fenilpropanoid, terpenoid . Alkaloid  memiliki  sifat  antioksidan  sebagai penangkap  radikal  bebas  yang  dapat  membantu  untuk meningkatkan kualitas sperma. Terpenoid juga terbukti dapat  meningkatkan  motilitas  pada  tikus Rattus norvegicus . Pada  penelitian  yang  dilakukan  Nazari  dkk, menunjukkan pemberian suplementasi antioksidan yang mengandung amino acid derivative dapat meningkatkan kualitas
sperma pada
pasien oligoasthenoteratozoospermia (K. Lin et al., 2021).
Penelitian Wijaya dkk, bahwa kandungan terpenoid yang terdapat  pada  fraksi  metanol  buah  Parijoto (Medinilla speciosa) dapat  meningkatkan  motilitas  spermatozoa pada  tikus  jantan Sprague  dawley. (Wijayanti,  2021).
Senyawa–senyawa  aktif  hasil  identifikasi  yang terkandung  dalam  fraksi  metanol  akar  saluang  belum ( Luvunga  sarmentosa )  belum  diuji  bioaktivitasnya terhadap  kualitas  spermatozoa.  Berdasarkan  uraian tersebut, peneliti tertarik untuk mengetahui efektivitas senyawa  aktif  fraksi  metanol  ekstrak  saluang  belum ( Luvunga sarmentosa) terhadap motilitas spermatozoa in vitro .

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah rotary evaporator, waterbath , inkubator, kolom kromatografi, silica gel G 60 , tabung eppendorf 1,5 mL centrifuge , tabung falcon 15 mL, tabung falcon 50 mL, neubauer chamber, mikroskop  cahaya.  Bahan  yang  diperlukan  dalam penelitian  ini  adalah  sperma  manusia,  medium  BWW ( Biggers,  Whitten,  and  Whittingham ),  medium  percoll 50%, dimetil sulfoksida (DMSO), etanol 96%, metanol, akar saluang belum (Luvunga sarmentosa), sperm diluting fluid

## Metode Pelaksanaan
Pada penelitian sebelumnya oleh syarpin dkk dilakukan fraksinasi  ekstrak  etanol  96%  akar  saluang  belum (Luvunga  sarmentosa). Sebanyak  5000  gram  akar  L. sarmentosa  dicuci  dan  dikeringkan  selama  tujuh  hari untuk membuat simplisia dengan menggunakan blender, kemudian  diayak  dengan  menggunakan  saringan berukuran  60  mesh.  Simplisia  sebanyak  1000  g dimaserasi  dengan  etanol  96%  selama  3  x  24  jam. Maserat yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan  rotary  evaporator.  Ekstrak  kental difraksinasi  dengan  menggunakan  kolom  kromatografi vakum dengan metanol sebagai eluen, dan 50 g silika gel
G60  digunakan  sebagai  fasa  diam.  Lima  gram  ekstrak kental dielusi dengan 5 x 250 mL metanol (Syarpin et al, 2023). Penelitian ini menggunakan sampel sperma dari donor    dengan  kriteria  umur  20-30  tahun  serta melakukan  abstinensia  2-3  dan  tidak  ada  gangguan sperma  yang  di  ketahui  melalui  wawancara,  donor didapatkan  dari  pria  yang  telah  menyetujui  informed consent.  Jumlah  sampel  yang  digunakan  berdasarkan rumus  dari  Stanley  Lemeshow  sebanyak  15  orang dengan teknik consecutive sampling.
Semen ditampung dalam wadah steril dan dibiarkan pada suhu ruangan selama 30 menit untuk proses pencairan, kemudian  dicuci  menggunakan  gradien  percol  50%. Kemudian  disentrifugasi  dengan  kecepatan  1900  rpm selama  30  menit.  Supernatan  dibuang,  pelet  dicuci dengan  3  ml  medium  BWW.  Kemudian  tabung disentrifugasi    kembali  dengan  kecepatan  1900  rpm selama  15  menit.  Supernatan  dibuang,  pelet  murni diberikan  1  ml  BWW  lalu  dihomogenkan.  Setelah  itu, konsentrasi  spermatozoa  diukur  dengan  memberikan 95 μ L cairan pengencer sperma dan 5 μ L spermatozoa yang  telah  dicuci  dalam  tabung  1,5  ml  lalu dihomogenkan.  Ambil  10 μ L  sampel  dan  letakkan  di dalam  ruang  Neubauer.  Selanjutnya,  perhitungan konsentrasi perhitungan konsentrasi dilakukan di bawah mikroskop  dengan  perbesaran  400x  menggunakan metode  analisis  semen  standar  menurut  WHO (Permatasari dkk, 2023).
Spermatozoa  dibagi  menjadi  lima  kelompok,  masing- masing  berisi  ±10  juta  sel,  yaitu  kontrol    (tanpa perlakuan), pemberian fraksi metanol ekstrak Luvunga sarmentosa  dengan konsentrasi  100, 500, 1000, dan 5000  ng/mL.  Kelima  kelompok  tersebut  kemudian diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  1  jam,  kemudian dilakukan perhitungan motilitas menggunakan mikroskop  dalam  perbesaran  400x  dan  rumus  WHO sebafai berikut:
% motilitas= 𝐴+𝐵 200 𝑥 100%
A= Aktif bergerak
B= Lambat  Bergerak

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada penelitian ini didapatkan pengaruh fraksi metanol akar  saluang  belum  Luvunga  sarmentosa  terhadap motilitas spermatozoa terlihat pada tabel berikut;

## Tabel I. Hasil Pengamatan Motilitas
Sam pel Kelom pok kontr ol (%) Konsen trasi 100 ng/ml (%) Konsen trasi 500 ng/ml (%) Konsen trasi 1000 ng/ml (%) Konsen trasi 5000 ng/ml (%) 1 58 68 72 82 70 2 55 69 65 53 61 3 62 67 70 75 85 4 42 64 75 78 83 5 42 55 69 52 59 6 44 70 78 74 66 7 52 57 60 68 75 8 55 56 62 79 83 9 53 68 75 88 92 10 42 50 72 85 58 11 70 73 81 89 90 12 53 58 63 67 72 13 56 59 64 71 75 14 71 71 79 85 87 15 54 54 60 65 71 Mea n 53.93 % 62.6 % 69.67 % 74.067 % 75.13% SD 9.137 7.336 7.057 13.084 11.205
Berdasarkan data, konsentrasi efektif dimulai dari dosis 100  ng/ml.  Semakin  tinggi  konsentrasi    yang  diberikan semakin tinggi jumlah motilitas juga motilitas. Gambar pengaruh  frisk  metanol  ekstrak  akar  saluang  belum terhadap  motilitas  spermatozoa  dapat  dilihat  pada gambar 1.
Gambar 1. Pengaruh  Fraksinasi  Metanol  Ekstrak
Akar Saluang Belum ( Luvunga Sarmentosa)
Terhadap motilitas spermatozoa.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan Syarpin dkk, 2023 mengenai  analisis  komponen  fitokimia  fraksi  akar Saluang  Belum  ( Luvunga  sarmentosa) menggunakan metode  LCMS/MS  diketahui  bahwa  fraksi  metanol ekstrak saluang belum mengandung alkaloid, amino acid derivative,  phenyl  propanoid,  dan  terpenoid.  Alkaloid memiliki sifat senyawa sebagai antioksidan yang secara langsung berperan untuk melindungi sel, karena sifatnya yang mampu menangkal radikal bebas maka tidak terjadi kerusakan pada membrane sel mitokondria yang dapat menyebabkan  metabolisme  pada  sperma  menurun, Metabolisme membrane tidak terganggu dan menurun maka  suplai  ATP  menjadi  melimpah  dan  membuat motilitas  sperma  menjadi  meningkat.  alkaloid  sangat berperan penting sebagai antioksidan primer yang dapat melindungi  sel  dan  zat  beracun  serta  dapat  mencegah kerusakan genetik akibat oksidan H 2 O 2. (Pematasari et al.,  2023).  Senyawa  lain  yang  terdapat  pada  fraksi metanol  ekstrak  saluang  belum  ( Luvunga  sarmentosa ) adalah  amino  acid  derivative.  Senyawa  turunan  amino acid  derivative  yang  terdapat  pada  fraksi  metanol ekstrak saluang belum adalah L-Carnitine dan L-Proline, yang berperan sebagai osmoprotektan dan antioksidan, menjaga sel dari kerusakan yang diakibatkan oleh radikal bebas  (Faranak,  2023)  L-Carnitine  dapat  mengurangi peroksidasi lipid membrane plasma melalui penghambatan  ROS,  selain  itu  )  L-Carnitine  bertindak sebagai  pembawa  mentranslokasi  asam  lemak  rantai Panjang  melintas  membrane  dalam  mitokondria  untuk
oksidasi  dalam  siklus  krebs  dan  produksi  ATP  untuk motilitas  sperma,  dengan  adanya  bantuan  Dl-karnitin maka  kriopreservasi  tetap  baik    serta  meningkatkan motilitas (Moradi et al., 2022).
Senyawa fenilpropanoid dapat menangkap radikal bebas melalui donor atom hydrogen pada gugus hidroksil dan mengurangi  hidrogen  peroksida  dengan  meningkatkan pertahanan  antioksidan  sperma,  mencegah  terjadinya kerusakan  pada  DNA  mitokondria  yang  dapat menurunkan  produksi  ATP  dan  mencegah  lipid peroksidasi  pada  membran  spermatozoa  sehingga motilitas pada spermatozoa tetap terjaga (K, Li N et al., 2021). Senyawa terpenoid termasuk salah satu senyawa yang  mempengaruhi  motilitas  spermatozoa,  terpenoid memiliki  peran  antioksidan  yang  dapat  mempengaruhi peningkatan  motilitas  spermatozoa.  Hal  ini  didukung dengan  adanya  penelitian  wijayanti  dkk,  bahwa terpenoid  pada  ekstrak  metanol  buah  parijoto  dapat meningkatkan kualitas spermatozoa, termasuk motilitas spermatozoa tikus (Wijayanti, 2021).

## KESIMPULAN
Fraksi  metanol  ekstrak  saluang  belum (Luvunga Sarmentosa) memiliki  pengaruh  terhadap  motilitas spermatozoa  secara  meningkatn  dari  konsentrasi  100. 500. 1000, 5000, ng/mL. Fraksi metanol ekstrak saluang belum (Luvunga Sarmentosa) memiliki konsentrasi efektif mulai dari konsentrasi 100 ng/mL.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  seluruh  pihak  yang  telah membantu  terselesaikannya  penelitian  ini,  antara  lain kepada Laboratorium Biomedik Basah di Program Studi Pendidikan  Dokter  Fakultas  Kedokteran  Universitas Palangka Raya.

## REFERENSI
Aghaz, F., & Esmaeili, F. 2023. Machine learning-based prediction  of  the  beneficial  effects  of  L- proline  supplementation  on  human  sperm quality.  Reproductive  Biomedicine  Online, 36(6), 715-723.
Al-Snafi,  P.  2016.  A  review  on  Cyperus  rotundus:  A potential  medicinal  plant.  IOSR  Journal  of Pharmacy, 06(07), 32-48.
Arindia,  R.  S.  2019.  Pengaruh  pemberian  sari  buah kurma  (Phoenix  dactylifera)  terhadap kuantitas  dan  kualitas  spermatozoa  mencit Balbc  yang  dipapar  asap  rokok.  Jurnal Kedokteran Universitas Lampung, 17(1), 17- 19.
Ayu, I. G. A., & Wirawati, P. 2018. Methods for sperm examination. Ilmu Patologi Klinik Universitas Udayana, 32, 1-20.
Eddy,  L.,  Nindatu,  M.,  &  Reasoa,  J.  2022.  Peningkatan motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  Rattus norvegicus  terpapar  asap  rokok  pasca diterapi sirup cengkeh. Jurnal Biologi Edukasi Ed 28, 14(1), 14-20.
Humairoh, N. 2021. In vitro effects of ethanol extract of  Saluang  Belum  (Lavanga  sarmentosa)  on spermatozoa  quality  and  viability.  Jurnal Kedokteran  dan  Kesehatan  Hewan,  15(2),
106-112.
Li, K., Yu, J., Yang, F., Shao, Y., et al. 2021. The effect of artemisinin  on  sperm  quality,  sperm  DNA damage,  and  oxidative  stress  in  male  rats with  varicocele.  Journal  of  Animal  Science, 101, 1-10.
Moradi,  B.,  Faramarzi,  A.,  Ghasemi-esmailabad,  S., Aghaz, F., Hossein, A., & Khazaei, M. 2022. L- proline as a novel additive to cryopreservation media improves post-thaw human  sperm  quality  through  reduction  of oxidative stress. Cryobiology, 93, 103-110.
Mulyyono. 2019. Metode penelitian dan pengembangan untuk bidang pendidikan, manajemen, sosial, teknik: Research and development. Yogyakarta: Gava Media.
Ningsih, Y. J., & Farich, A. 2016. Determinan kejadian infertilitas pria di Kabupaten Tulang Bawang. Jurnal Kesehatan, 7(2), 242.
Noer,  S.,  Pratiwi,  R.  D.,  &  Gresinta,  E.  2018. Determination of phytochemical compounds (tannin, saponin, and flavonoid) as quercetin in inggu leaves (Ruta angustifolia L.) extract.
Jurnal Eksakta, 18(1), 19-29.
Rahma,  H.  2016.  Pengaruh  daun  kepunung (Chromolaena odorata) terhadap kadar gula
darah  dan  aktivitas  antioksidan  pada  tikus model  diabetes  mellitus.  Jurnal  Kedokteran Hewan, 35(4), 883-889.
Syarpin,  S.,  Permatasari,  S.,  &  Pujianto,  D.  A.  2023. Analysis  of  metabolite  compounds  and antioxidant activity from fraction of Saluang Belum  root  extract  (Lavanga  sarmentosa) using LCMS/MS. Biodiversity, 24(2), 1-11.
Sutomo,  A.  V.  V.,  &  Arnida,  A.  2022.  Ethnobotanical study  and  phytochemical  screening  of medicinal  plants  used  by  local  people  in Belangian Village, South Kalimantan. Borneo Journal of Pharmacy, 5(1), 1-8.
Wijayanti,  W.  (2021.  Efek  ekstrak  metanol,  fraksi metanol,  dan  fraksi  n-heksan  buah  parijoto (Medinilla  speciosa)  terhadap  parameter semen dan bobot testis tikus jantan Sprague Dawley. Jurnal Veteriner, 64(6), 1088-1096