# Korespondensi:  Balai  Riset  Perikanan  Budidaya  Air  Tawar  dan Penyuluhan  Perikanan.  Jl.  Sempur  No.  1,  Bogor  16154,
Indonesia. Tel.  +  62  251  8313200 E-mail:  desysugiani@yahoo.co.id
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra
BAKTERI PADA IKAN GABUS Channa striata, SEMAH Tor spp., DAN BAUNG Hemibagrus sp.: IDENTIFIKASI,  VIRULENSI,  DAN  KERENTANAN  TERHADAP  BEBERAPA  ANTIBIOTIK
Desy  Sugiani # ,  Uni  Purwaningsih,  Septyan  Andrianto,  dan  Angela  Mariana  Lusiastuti
*) Balai Riset Perikanan Budidaya Air Tawar dan Penyuluhan Perikanan Jl. Sempur  No. 1, Bogor 16154
(Naskah diterima: 7 Januari 2019; Revisi final: 15 Maret 2019; Disetujui publikasi: 15 Maret 2019)

## ABSTRAK
Identifikasi mikroflora ikan air tawar adalah alat penting untuk evaluasi kualitas dan keamanan ikan untuk dipelihara dalam sistem budidaya intensif. Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi bakteri ikan air tawar terutama  dari  ikan  gabus,  semah,  dan  baung  hasil  tangkapan  dan  budidaya  pada  kolam.  Bakteri  yang terisolasi dari jaringan ginjal, hati, luka, dan otak ikan gabus (Channa striata), semah (Tor spp.), dan baung (Hemibagrus sp.) diidentifikasi dengan uji fisik dan biokimia, dan dilanjutkan dengan menggunakan API 20 E dan API 20 Strep. Uji virulensi untuk melihat kemampuan patogenisitas dari masing-masing isolat bakteri dilakukan dengan injeksi intra  muskular suspensi bakteri 10 6 CFU mL -1 per ekor ikan.  Ikan gabus dapat terinfeksi bakteri Pasteurella pneumotropica dan Aeromonas hydrophila, ikan semah rentan terhadap Enterococcus faecium, Pantoea spp., dan A. hydrophila, sedangkan ikan baung rentan terhadap infeksi Citrobacter freundii dan A. hydrophila. Bakteri Enterococcus faecium, Pantoea sp., dan A. hydrophila memiliki tingkat virulensi yang rendah antara 3,3%-23,4%; sedangkan C. freundii dan P. pneumotropica tidak virulen pada ikan gabus, semah, dan baung. Batas dosis atas untuk antibiotik berdasarkan petunjuk penggunaan obat untuk enrofloksasin adalah 10 mg/L; eritromisin 3,75 mg/L; dan oksitetrasiklin 250 mg/L. Hasil uji kerentanan dengan metode difusi zona hambat menunjukkan bahwa telah terjadi resistensi pada bakteri Pantoea spp., E. faecium, dan A. hydrophila terhadap antibiotik enrofloksasin dan eritromisin, dan resistensi pada bakteri E. faecium terhadap oksitetrasiklin.
KATA KUNCI: ikan gabus; ikan semah; ikan baung; bakteri; virulensi
ABSTRACT: Bacteria in Channa striata, Tor sp., and Hemibagrus sp.: identifications, virulence and antibiotics susceptibility. By: Desy Sugiani, Uni Purwaningsih, Septyan Andrianto, dan Angela Mariana Lusiastuti
Identification of microflora in freshwater fish is an important tool to evaluate the health quality of fish cultured in intensive aquaculture systems. This study aimed to investigate bacteria in freshwater fish, determine their virulence and test their susceptibility to antibiotics. The freshwater fish species of interest in this study were Channa striata spp., and Hemibagrus sp. originated from wild catch and fish farming ponds. Isolated bacteria from kidney, liver, skin wound, and brain tissue were identified using physical and biochemical tests followed by API 20 E and API 20 Strep KIT tests. Pathogenicity test of each bacterial isolate was carried out by intramuscular injection of 10 6 CFU mL -1 of bacterial suspension per fish. Snakehead fish (Channa striata) was susceptible to Pasteurella pneumotropica and Aeromonas hydrophila infections, Cyprinidae (Tor spp.) was susceptible to Enterococcus faecium, Pantoea spp., and A. hydrophila, while Catfish (Hemibagrus sp.) was susceptible to Citrobacter freundii and A. hydrophila infections. Bacteria E. faecium,  Pantoea  sp.  and  A.  hydrophila  have  a  low  virulence  level  of  3.3%-23.4%,  whereas  C.  freundii  and  P. pneumotropica were both non-virulent to snakehead, cyprinidae, and catfish. The highest recommended dosages for enrofloxacin, erythromycin, and oxytetracycline were 10 mg/L, 3.75 mg/L, and 250 mg/L, respectively. The results of antibiotics sensitivity test showed that Pantoea spp., E. faecium, and A. hydrophila bacteria were resistant to enrofloxacin and erythromycin, while E. faecium bacteria was resistant to oxytetracycline.
KEYWORDS: Channa striata; Tor spp.; Hemibagrus sp.; bacteria; virulence

## PENDAHULUAN
Penyakit  yang  diakibatkan  oleh  infeksi  bakteri secara umum ditandai dengan adanya luka berwarna kemerahan,  borok,  pembusukan  sirip,  insang  pucat dan  nekrosis,  pembengkakan  rongga  perut, eksopthalmia,  dan  melanosis.  Bakteri  Aeromonas hydrophila dapat menginfeksi ikan baung (Hemibagrus nemurus),  menyebabkan  kematian  ikan  dan  dapat mengganggu performa pertumbuhan (Farhana et al., 2015).  Ikan  gabus  (Channa  striata)  dapat  terinfeksi bakteri  motile  aeromonad  dari  jenis  Aeromonas hydrophila,  A.  caviae,  dan  Pseudomonas  fluorescens (Courtenay & Williams, 2004).
Hasil pemeriksaan bakteriologis dari berbagai or- gan  (hati,  ginjal,  usus,  dan  otot  bagian  dalam)  dan sampel air kolam ikan air tawar jenis Cyprinidae (Tor tambroides, T. duoronensis, Puntius schwanenfeldii, dan P. gonionotus) diperoleh sebanyak 16 spesies bakteri, yang terdiri atas tujuh spesies bakteri Gram negatif: Aeromonas  hydrophila,  Citrobacter  freundii,  Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp., Pseudomonas sp., Vibrio anguillarum, dan tiga spesies bakteri Gram positif: Bacillus sp., Listeria, dan Staphylococcus (Apun et al., 1999).
Bakteri A. hydrophila banyak ditemukan di air tawar, ikan,  dan  telur  ikan,  menyebabkan  kematian  tinggi dan zoonosis untuk manusia (Alkhunni et al., 2017). Kematian  ikan  akibat  serangan  penyakit  infeksius dipengaruhi oleh faktor ketahanan ikan, lingkungan, dan tingkat virulensi dari patogen. Bakteri dari jenis Enterobacteriaceae  memiliki  potensi  sebagai enteropatogen  yang  dapat  menyebabkan  wabah penyakit apabila adanya penurunan kualitas lingkungan (Apun et al., 1999). Frekuensi terjadinya bakteri yang berpotensi menjadi patogen pada sistem budidaya ikan secara  terbuka  akan  lebih  tinggi  jika  dibandingkan dengan  budidaya  ikan  dalam  sistem  resirkulasi (Majewska, 2016).
Identifikasi mikroflora ikan air tawar yang memiliki potensi  untuk  menjadi  patogen  penyebab  penyakit adalah  metode  penting  untuk  melakukan  evaluasi kualitas dan keamanan ikan sebelum dipelihara dalam sistem  budidaya  intensif.  Tujuan  dari  penelitian  ini adalah  untuk  mendeteksi  bakteri  ikan  air  tawar terutama ikan gabus, semah, dan baung hasil tangkapan maupun  dari hasil  budidaya  pada  kolam. Selain  itu, untuk  mengetahui  tingkat  virulensi  dari  masing- masing  bakteri  yang  terisolasi  pada  ketiga  ikan tersebut,  dan  kerentanan  bakteri  virulen  terhadap beberapa antibiotik.

## BAHAN DAN METODE

## Ikan Uji
Sampel untuk identifikasi bakteri pada ikan gabus (Channa  striata)  berasal  dari  hasil  tangkapan  pada perairan umum di daerah Parung, Depok, Indramayu, dan Yogyakarta, ikan semah (Tor spp.) berasal dari hasil pemeliharaan di  kolam tanah di  Cijeruk, sedangkan ikan baung (Hemibagrus sp.) berasal dari hasil tangkapan pada perairan umum daerah Karawang dan Cibalagung. Ikan-ikan  untuk  uji  virulensi  diperoleh  dari  wilayah Jawa Barat dan diaklimatimasi selama 21 hari pada bak fiber volume 100 m 3 . Uji virulensi menggunakan ikan yang sehat, ikan gabus sebanyak 10 ekor/ bak dengan rata-rata panjang total 7 ± 0,8 cm; semah (5 ± 0,5 cm); dan baung (5 ± 1,2 cm).

## Identifikasi  Bakteri
Ikan yang digunakan untuk isolasi bakteri adalah ikan  sehat dan  ikan  yang  menunjukkan gejala  sakit seperti warna tubuh pucat, terdapat luka, sirip geripis, dan gerakan renang lemah. Masing-masing lima ekor ikan sehat dan lima ekor ikan sakit digunakan untuk isolasi bakteri. Ikan-ikan tersebut dianastesi terlebih dahulu dengan larutan minyak sirih konsentrasi 1 mL/ L  air  selama  15-20  menit  sampai  tidak  ada  lagi pergerakan dan respons dari ikan sebelum dilakukan pembedahan. Isolat bakteri dari jaringan ginjal, hati, luka, dan otak diambil dengan ose dan dikultur pada media Triptic Soy Agar (TSA) dan Brain Heart Infusion Agar (BHIA) kemudian diinkubasikan pada suhu 28°C- 30°C  selama  24  jam.  Koloni  yang  tumbuh  dipilih berdasarkan  bentuk,  ukuran,  dan  warna  kemudian dikultur ulang pada media TSA/BHIA untuk selanjutnya diidentifikasi dengan uji fisik dan biokimia meliputi pewarnaan  gram,  motilitas,  sitokrom  oksidase, oksidatif  fermentatif  (O-F),  dekarboksilase  glukosa, dan  H 2 S.  Setiap  koloni  juga  dikultur  dalam  media selektif dan diidentifikasi menggunakan KIT API 20 E dan API 20 Strep.

## Uji  Virulensi  Bakteri
Uji virulensi dilakukan untuk melihat patogenisitas dari masing-masing isolat bakteri melalui injeksi secara intramuskular 0,1 mL suspensi bakteri per ekor ikan. Inokulan  bakteri  untuk  uji  virulensi  ditanam  pada media agar dan di panen ke dalam 10 mL salin steril 0,845%; masing-masing isolat dilakukan pengenceran seri sampai diperoleh dosis 10 6 CFU mL -1 . Perlakuan uji virulensi terhadap ikan gabus, semah, dan baung dilakukan dengan tiga kali ulangan dan setiap bak diisi
10  ekor  ikan.  Masing-masing  jenis  ikan  diinjeksi dengan  isolat  bakteri  dari  hasil  uji  biokimia  dan identifikasi.  Bakteri  tersebut  meliputi  Pasteurella pneumotropica,  Aeromonas  hydrophila,  Enterococcus faecium,  Pantoea  spp.,  dan  Citrobacter  freundii.  Ikan- ikan tersebut dipelihara selama 14 hari dan diamati gejala  klinis  meliputi  perubahan  pola  berenang, tingkah laku makan, perubahan patologi anatomi or- gan dalam dan luar, dan kematian ikan.

## Uji  Kerentanan  Antibiotik
Uji sensitivitas terhadap beberapa jenis antibiotik menggunakan metode difusi zona hambat (Tendencia, 2004).  Uji  sensitivitas  diawali dengan  uji  daya  larut antibiotik  terhadap  air,  untuk  melihat  kemampuan bahan antibiotik tersebut tersuspensi dalam pelarut air.  Daya  larut  ini  penting  dilakukan  karena  akan memengaruhi  keampuhan  dari  zat  aktif  yang terkandung dalam antibotik. Antibiotik yang diujikan adalah enrofloksasin, eritromisin, dan oksitetrasiklin. Isolat  bakteri  ditumbuhkan  dalam  media  agar kemudian  kertas  cakram  yang  telah  mengandung antibiotik  diletakkan  ditengah  petri  pada  inokulan bakteri  uji.  Pengujian  uji  sensitivitas  untuk  setiap isolat bakteri dan setiap jenis antibitoik menggunakan petri terpisah. Agar tersebut diinkubasi selama 24 jam pada suhu 28°C. Zona bening yang terbentuk diukur untuk menentukan diameter zona hambat.

## HASIL DAN BAHASAN

## Identifikasi  Bakteri
Isolat bakteri yang diperoleh dari hasil isolasi ikan gabus, semah, dan baung berjumlah 17 isolat, ginjal (empat isolat), hati (empat isolat), luka (enam isolat), dan otak (tiga isolat), kemudian dilakukan klasifikasi berdasarkan bentuk dan warna koloni yang sama maka diperoleh hasil untuk koloni bakteri yang berbeda dari ikan gabus (Channa striata) ada dua isolat; dari ikan semah  (Tor  spp.)  tiga  isolat,  dan  dari  ikan  baung (Hemibagrus  sp.)  dua  isolat.  Setiap  isolat  dilakukan uji fisik, uji menggunakan media spesifik Rhimler Shotts (RS) dan media Triple Sugar Iron Agar (TSIA) diperoleh hasil empat isolat dengan karakter yang berbeda dan tiga isolat dengan karakter yang sama.
Lima isolat bakteri kemudian dilakukan uji lanjut dengan  keragaman  berbeda  terdiri  atas  kelompok bakteri  Gram  negatif  dan  bakteri  Gram  positif, bersifat motil dan non-motil, berbentuk batang (rod) dan  bulat  (cocci),  menunjukkan  karakter  spesifik berdasarkan  hasil  uji  biokimia  menggunakan  KIT identifikasi  bakteri  API  20  E  dan  menggunakan  KIT identifikasi  bakteri  API  20  Strep  (Tabel  1).  Hasil  uji fisik dan uji biokimia teridentifikasi lima jenis spesies
bakteri  yaitu  Pasteurella  pneumotropica,  Aeromonas hydrophila,  Enterococcus  faecium,  Pantoea  spp.,  dan Citrobacter freundii (Tabel 2).
Aeromonas  hydrophila  adalah  patogen  penyebab MAS (Motile Aeromonad Septicemia) di perairan air tawar, payau, dan laut dengan kisaran inang yang beragam. Motil  Aeromonas  spp.  dianggap  sebagai  patogen oportunistik  dan  dapat  dengan  mudah  ditemukan dalam perairan yang kaya dengan kandungan bahan organik.  Stres  dan  kualitas  air  yang  buruk  menjadi peran  kunci  dalam  kejadian  kematian  ikan  akibat infeksi A. hydrophila (Oztürk & Altýnok, 2014).
Bakteri Citrobacter freundii menyebabkan kematian kronis pada ikan manfish (Pherophyllum scalare) dengan gejala menunjukkan kelesuan, tumor bibir, hemoragi, dan granuloma hati (Gallani et al., 2016). Uji karakter fenotipik  menggunakan  Api  20  E  berhasil mengidentifikasi bakteri Citrobacter freundii pada kasus kematian ikan rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) di Serbia dengan gejala adanya gastroenteritis, inflamasi di usus, peradangan, dan nekrotik di organ internal (Svetlana  et  al.,  2003).  Bakteri  C.  freundii  juga teridentifikasi dari kasus kematian ikan rainbow trout yang dipelihara dalam karamba di Wilayah Laut Hitam Turki (Ture & Kutlu, 2018).
Enterobacteriaceae  digunakan  sebagai  indikator umum  kualitas  lingkungan  dan  memiliki  potensi menjadi  bakteri  patogen  pada  ikan  dan  lingkungan akuatik, dari 23 sampel ikan air tawar dari dua sumber air yang berbeda yaitu Sungai Driksna dan kolam di Dobele Latvia terdeteksi kontaminasi mikroflora ikan air  tawar  di  antaranya  adalah  Pantoea  spp.  (9%), Aeromonas spp. (5%), dan Enterobacter spp. (1%) (Kluga et al., 2017). Enterobacteriaceae (Pantoea agglomerans) teridentifikasi dengan API 20 E dari organ ginjal ikan seabass  dengan  tingkat  prevalensi  2,04%  pada  ikan budidaya dan 0% pada ikan yang diambil di perairan umum  Adriatik  Utara  selama  periode  satu  tahun pengamatan, ada korelasi hubungan antara penyakit dan kondisi patofisiologi pada ikan liar dan budidaya (Rakovac et al., 2002).

## Uji  Virulensi  Bakteri
Hasil  uji  virulensi  menunjukkan  bahwa  bakteri Pantoea  sp.  mematikan  ikan  gabus  sebanyak  20%; bakteri  Enterococcus  faecium  mematikan  ikan  gabus 13,3%;  dan  ikan  semah  3,3%;  bakteri  Aeromonas hydrophila mematikan ikan baung 23,4%; sedangkan bakteri Citrobacter freundii dan Pasteurella pneumotropica bersifat tidak mematikan (non virulent) (Tabel 3). Semua bakteri yang terisolasi memiliki tingkat virulensi yang rendah pada ikan gabus, baung, dan semah dengan mortalitas ikan  30% pada 14 hari pasca-infeksi buatan
Keterangan (Note): + :  positif (positive) - :  negatif (negative) isolat-1 (isolates-1) :  Pantoea sp. isolat-2 (isolates-2) :  Aeromonas  hydrophila isolat-3 (isolates-3) :  Citrobacter freundii isolat-4 (isolates-4) :    Pasteurella  pneumotropica isolat-5 (isolates-5) :  Enterococcus faecium
Tabel 1. Karakter bakteri hasil identifikasi dengan API 20 E dan API 20 Strep Table 1. Bacterial identification using API 20 E and API 20 Strep
Isolat-1 Isolates-1 Isolat-2 Isolates-2 Isolat-3 Isolates-3 Isolat-4 Isolates-4 Isolat-5 Isolates-5 Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram positif Gram positive Batang (Rod ) Batang (Rod ) Batang (Rod ) Batang (Rod ) Bulat (Cocci ) Non-motil Motil Non-motil Non-motil Non-motil +/+ +/+ +/+ +/+ +/+ + + + + - + + + + - Koloni hijau Green colonies Koloni kuning Yellow colonies Koloni kuning Yellow colonies Koloni kuning Yellow colonies Koloni kuning Yellow colonies - Fermentasi glukosa Glucose fermentation + + + + + - Fermentasi laktosa/sukrosa Lactose/sucrose fermentation + + + + +
- Produksi H 2 S H 2 S Production + - - - - - Pembentukan gas Gas productions - - - - + Uji API 20 Strep V8.0: API 20 Strep V8.0 test: + + + + + - + + - - - + - - + - - - - - - - - - + - - + - - - - - - + - - - - - - - - - - + - - - + + - + - Arginin dehydrolase + - Ribose + - Glucose + + + + - Arabinose - - Mannitol + + + + - Mannitol + - Inositol + - + + - Sorbitol + - Sorbitol + - + + - Lactose + - Rhamnose + - + - - Trehalose + - Sucrose + + + - - Inulin - - Melobiose - - + - - Raffinose - - Amygdalin + + + + - Amidon/Strach + - Arabinose - - + - - Glycogen - + + + + β Hemolysis - - - - - - - - - - - - - - - - - + + + +
+ + + +

## Pengujian biokimia
Biochemical testing

## Pewarnaan Gram
Gram staining Bentuk (Shaped ) Motilitas (Motility ) Oksidatif-fermentatif O/F Katalase (Catalase ) Cytochrome axidase
R-S Medium
TSIA test :
Uji API 20 E V5.0 : API 20 E V5.0 test:
Beta-galactosidase
Arginine dihydrolase Lysine decarboxylase Ornithine decarboxylase Citrate utilization H 2 S production
Urea hydrolysis
Deaminase
Indole production Acetoin production
Gelatinase
Fermentation/oxidation :
Oxidase
NO 2
Gas N 2
MOB Motility
Growth in MacConcay medium OF-O OF-F

## Production acetoin (VP)
Acetoin production Hidrolisis HIPuric acid
ESCullin
PYRolidonylarylamidase
α - Galactosidase β - Glucuronidase β -Galactopyranosidase Alkaline phosphatse Leucine aminopeptidase Fermentation/oxidation:
dengan dosis yang diinjeksikan sebanyak 10 6 CFU mL - 1 (Gambar  1).  Walaupun  ketiga  bakteri  ini  memiliki tingkat  virulensi  yang  rendah,  akan  tetapi dikhawatirkan  akan  menyebabkan  wabah  apabila terdapat cekaman stres pada ikan akibat perubahan lingkungan  maupun  karena  pengaruh  penanganan dalam sistem budidaya yang tidak mengikuti kaidah Cara Budidaya Ikan yang Baik (CBIB).
Pola kematian harian ikan gabus, semah, dan baung setelah  diinfeksi  bakteri  Aeromonas  hydrophila, Citrobacter  freundii,  dan  Pasteurella  pneumotropica menunjukkan  bahwa  ketiga  jenis  bakteri  dapat mematikan pada beberapa ikan dengan masa kritis 2- 8 hari pasca-infeksi dengan gejala klinis adanya radang dan  borok  pada  area  bekas  injeksi,  nafsu  makan berkurang, berenang lemah, dan pada beberapa ikan
Tabel 2. Isolat bakteri yang teridentifikasi dari ikan Table 2. Identification of bacterial isolates from fish
Nama lokal Local name Nama umum Common name Pasteurella pneumotropica Aeromonas hydrophila Enterococcus faecium Pantoea  spp. Aeromonas hydrophila Citrobacter freundii Aeromonas hydrophila
Bakteri Bacteria
Channa striata Gabus Snakehead
Spesies ikan (Fish species ) Nama ilmiah Scientific name Tor  spp. Semah, Kancra,
Mahseer
Cyprinidae
Hemibagrus  sp. Baung
Catfish
Gambar 1. Total kematian ikan gabus, semah, dan baung pada uji virulensi. Figure 1. Total mortality of Channa striata, Tor spp., and Hemibragus sp. in virulence test. 0 5 10 15 20 25 30 Pa nt oe a sp p. En te ro co cc us f ae ci um C it ro ba ct er f re un di i Ae ro m on as h yd ro ph ila Pa st eu re lla p ne um ot ro pi ca Pa nt oe a sp p. En te ro co cc us f ae ci um C it ro ba ct er f re un di i Ae ro m on as h yd ro ph ila Pa st eu re lla p ne um ot ro pi ca Pa nt oe a sp p. En te ro co cc us f ae ci um C it ro ba ct er f re un di i Ae ro m on as h yd ro ph ila Pa st eu re lla p ne um ot ro pi ca Gabus (Channa striata) Semah (Tor spp.)
Baung (Hemibagrus sp.)
Ju m la h i k an N um be r of f is h Uji virulensi (Virulence test) Hari ke-0
Hari ke-14
menunjukkan gejala warna tubuh lebih gelap, namun sembilan hari pasca-infeksi ikan sudah menunjukkan gejala persembuhan di mana luka radang dan borok pada  area  bekas  injeksi  menjadi  kering  dan  tidak terjadi kematian (Gambar 2, 3, dan 4).
Bakteri Pantoea  sp.,  E.  faecium,  dan  A.  hydrophila bersifat  virulen  karena  memiliki  kemampuan  untuk mematikan ikan gabus, semah, dan baung. Kayis et al. (2009)  mengemukakan  bahwa  ikan  rainbow  trout (Oncorhynchus mykiss) dapat terinfeksi bakteri Pantoea spp., A. hydrophila, C. freundii, dan P. pneumotropica.
Baketri Aeromonas hydrophila, Citrobacter  freundii, dan Pantoea sp., Enterobacter sp. dapat terdeteksi pada ikan  hias  Liopropoma  santi  (Al-Hisnawi  et  al.,  2016). Enterococcus sp. adalah organisme komensal dan dapat menyebabkan penyakit dalam kondisi tertentu. Faktor virulensi  yang  bertanggung  jawab  di  antaranya kemampuan  aktivitas  sitolisin,  gelatinase,  produksi zat agregasi (Savasan et al., 2016).

## Uji  Kerentanan  Antibiotik
Uji kerentanan antibiotik menggunakan tiga jenis antibiotik  yang  memiliki  nomor  register  di Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan  (KKP)  untuk bakteri  akuatik  di  antaranya  adalah  enrofloksasin, eritromisin, dan oksitetrasiklin. Masing-masing jenis antibiotik  memiliki  kemampuan  menghambat  dan mematikan pertumbuhan bakteri target yang berbeda. Antibiotik enrofloksasin tidak dapat larut sempurna dan  mudah  mengendap, sedangkan  eritromisin  dan oksitetrasiklin dapat terlarut sempurna dalam air (Tabel 4).
Daya larut antibiotik terhadap air ini sangat penting karena aplikasi pemberian antibiotik dalam perairan dan budidaya ikan lebih banyak menggunakan metode perendaman.  Efektivitas  daya  hambat  antibiotik terhadap  bakteri  target  akan  dipengaruhi  oleh kemampuan  daya  larut  terhadap  air.  Hal  ini  dapat terlihat dari hasil uji sensitivitas enrofloksasin dengan
Tabel 3. Mortalitas ikan pasca diuji tantang dengan bakteri Table 3. Mortality rate of fish post bacterial challenge test
Gabus Channa striata Semah Tor  spp. Baung Hemibagrus  sp. Pantoea  spp. 20 ± 20.0 0 ± 0.0 0 ± 0.0 Enterococcus faecium 13.3 ± 11.55 3.3 ± 5.77 0 ± 0.0 Citrobacter freundii 0 ± 0.0 0 ± 0.0 0 ± 0.0 Aeromonas hydrophila 0 ± 0.0 0 ± 0.0 23.4 ± 11.55 Pasteurella pneumotropica 0 ± 0.0 0 ± 0.0 0 ± 0.0 Mortalitas/Mortality  (%) Uji virulensi pada ikan
Challenge test on fish
Gambar 2. Pola kematian harian ikan gabus pasca uji tantang dengan bakteri. Figure 2. The pattern of daily mortality of Channa striata post bacterial challenge test. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 ju m lah ik an (N um be r of fi sh ) Hari (Days) Pantoea spp. 1 Pantoea spp. 2 Pantoea spp. 3 Enterococcus faecium 1
Enterococcus faecium 2 Enterococcus faecium 3
dosis rendah maupun dosis tinggi keduanya memiliki nilai standar deviasi yang tinggi dan hasil uji yang tidak linier di antara gradasi dosis (Tabel 5 dan 6).
Batas  dosis  atas  untuk  antibiotik  berdasarkan petunjuk pada kemasan dagang untuk enrofloksasin adalah  10  mg/L;  eritromisin  3,75  mg/L;  dan oksitetrasiklin 250 mg/L. Hasil uji menunjukkan bahwa telah terjadi resistensi pada bakteri Pantoea spp., E. faecium,  dan  A.  hydrophila  terhadap  antibiotik enrofloksasin  dan  eritromisin,  dan  resistensi  pada bakteri E. faecium terhadap oksitetrasiklin (Tabel 5). Enterococcus faecium memiliki tingkat resistensi yang tinggi terhadap antibiotik trimetoprim, kloramfenikol,
Gambar 4. Pola kematian harian ikan baung pasca uji tantang dengan bakteri. Figure 4. The pattern of daily mortality of Tor spp. post bacterial challenge test.
eritromisin,  oksitetrasiklin,  sulfametoksazol,  dan siprofloksasin  (Igbinosa  et  al.,  2016).  Lingkungan akuakultur  dapat  menjadi  reservoir  strain  bakteri resisten  antibiotik  yang  mampu  berkontribusi terhadap  penyebaran  resistensi  antimikroba  di lingkungan.
Hasil  uji  sensitivitas  bakteri  Pantoea  sp. menunjukkan bahwa bakteri tersebut rentan terhadap enrofloksasin  pada  dosis  tinggi  30  mg/L. Pertumbuhan  Pantoea  sp.,  dapat  dihambat  oleh oksitetrasiklin pada dosis lebih dari 200 mg/L. Bakteri Enterococcus  faecium  rentan  terhadap  enrofloksasin pada  dosis  tinggi  3.000  mg/L,  dan  oksitetrasiklin
Gambar 3. Pola kematian harian ikan semah pasca uji tantang dengan bakteri.
Figure 3. The pattern of daily mortality of Hemibagrus sp. post bacterial challenge test. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 ju m lah ik an (N um be r of fi sh ) Hari (Days) Enterococcus faecium 1 Enterococcus faecium 2 Enterococcus faecium 3
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 ju m lah i kan (N um be r of fi sh ) Hari (Days) Aeromonas hydrophila 1 Aeromonas hydrophila 2
Aeromonas hydrophila 3
dosis 250 mg/L. Bakteri Aeromonas hydrophila rentan terhadap  enrofloksasin  dosis  tinggi  30  mg/L,  dan oksitetrasiklin dosis rendah pada 200 mg/L. Bakteri Pantoea  sp.,  E.  faecium  dan  A.  hydrophila  resisten terhadap eritromisin sampai dosis 5.000 mg/L (Tabel 6).
Hasil  karakterisasi  resistensi  antibiotik  bakteri Enterococci yang diisolasi dari sedimen dan perairan air  laut  terhadap  antibiotik  eritromisin  (ERY), tetrasiklin (TET), dan ampisilin (AMP) dengan metode Minimum  Inhibitory  Concentration  (MIC)  ditemukan bahwa  terdapat  25  isolat  Enterococcus  faecium  yang
Tabel 4. Spesifikasi antibiotik untuk bakteri akuatik dan karakter daya larut dalam air
Table 4. Antibiotic specifications for aquatic bacteria and characteristics of water solubility Bahan aktif Active ingredients Anjuran dosis Recommended dosage (mg/L) Bakteri/penyakit Bacteria/disease Daya larut Solubility Warna larutan The color of the solution Enrofloksasin 200 mg 5-10 Aeromonas hydrophila , A. salmonicida , Renibacterium salmoninarium , Vibrio harveyi Sulit larut dan mengendap Hard to dissolve and solids settle Putih White Eritromisin 400 mg 2.5-3.75 Bacterial kidney disease, Streptococcosis, Furunculosis Mudah larut dan terlarut sempurna Completely dissolve Bening Clear liquids Gram posiitif dan Gram negatif: Positive Gram and Neegative Gram: Aeromonas  sp.,
Edwardsiella  sp., Yersinia  sp. Oksitetrasiklin 400 mg 25-250 Mudah larut dan terlarut sempurna Completely dissolve Kuning Yellow
Tabel 5. Hasil uji sensitivitas antibiotik dosis rendah Table 5. The results of antimicrobial susceptibility testing using low dosage
1 2 3 4 5 Enrofloksasin - - - - - Resisten (Resistant ) Eritromisin - - - - - Resisten (Resistant ) Oksitetrasiklin 25.0 ± 1.0 23.0 ± 2.0 11.0 ± 2.0 - - Rentan (Susceptible ) Enrofloksasin - - - - - Resisten (Resistant ) Eritromisin - - - - - Resisten (Resistant ) Oksitetrasiklin - - - - - Resisten (Resistant ) Enrofloksasin 17.0 ± 2.0 17.0 ± 1.0 21.3 ± 4.5 19.3 ± 2.5 16.6 ± 0.6 Intermediet (Intermediates ) Eritromisin 6.67 ± 0.6 - - - - Resisten (Resistant ) Oksitetrasiklin 22.7 ± 0.6 21.0 ± 1.0 13.3 ± 1.5 5.3 ± 1.5 - Rentan (Susceptible )
A. hydrophila
Pantoea  spp.
E. faecium Bakteri Bacteria
Zona hambat/Inhibitory zone  (mm) Klasifikasi Classifications Antibiotik Antibiotics Dosis (Dosage ) Keterangan (Note):
-
:  tidak ada zona hambat (no zone of inhibition)
Dosis 1 (Dosage 1) :  enrofloxacin 30 mg/L; erythromycin 5 mg/L; oxytetracycline 250 mg/L Dosis 2 (Dosage 2) :  enrofloxacin 20 mg/L; erythromycin 4 mg/L; oxytetracycline 200 mg/L Dosis 3 (Dosage 3) :  enrofloxacin 15 mg/L; erythromycin 3 mg/L; oxytetracycline 150 mg/L Dosis 4 (Dosage 4) :  enrofloxacin 10 mg/L; erythromycin 2 mg/L; oxytetracycline 75 mg/L Dosis 5 (Dosage 5) :  enrofloxacin 5 mg/L; erythromycin 1 mg/L; oxytetracycline 20 mg/L
resisten.  Terjadinya  strain  bakteri  yang  resisten terhadap antibiotik berpotensi menjadi strain virulen yang dapat memengaruhi sistem budidaya ikan (Cesare et al., 2012).
Bakteri  C.  freundii  hasil  isolasi  dari  ginjal  ikan bidadari menunjukkan kerentanan (susceptible) terhadap ciprofloksasin dosis 5 mg, cefoxitin dosis 30 mg, dan tetrasiklin dosis 30 mg; akan tetapi, bakteri tersebut menunjukkan resistensi terhadap florfenikol dosis 30 mg,  oksitetrasiklin  dosis  30  mg,  ampisilin  dosis  10 mg, enrofloksasin dosis 5 mg, dan cefalotin dosis 30 mg (Gallani et al., 2016).
Isolat  bakteri  E.  feacium  dilaporkan  sensitif terhadap  ampisilin,  penisilin,  tetrasiklin dangentamisin), akan tetapi bakteri tersebut resisten terhadap rifampicin (Sarra et al., 2013). Wierzchowska et al. (2016) mengemukakan bahwa dari 35 isolat En- terococcus sp.  yang terisolasi, spesies  yang dominan adalah E. faecalis (62,9%) dan E. faecium (28,6%). Isolat bakteri  Enterococcus  sp.  tersebut  65,7%  resisten terhadap setidaknya satu kelas antibiotik, dan 45,7% diklasifikasikan  sebagai  resisten  multi- obat. Persentase  isolat  yang  resisten  terhadap  tetrasiklin adalah  48,6%;  resisten  terhadap  tigecycline  dan fosfomycin 45,7%.
Menurut Kayis et al. (2009), dari 99 isolat bakteri ikan rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) menunjukkan 26,26% resisten dan 65,66% rentan terhadap antibiotik
oksitetrasiklin  dosis  30  mg.  Sedangkan  sebanyak 52,04% bakteri resisten dan 10,20% rentan terhadap antibiotik  eritromisin  (15  mg).

## KESIMPULAN
Bakteri  yang  terisolasi  dari  Ikan  gabus  (Channa striata) adalah Pasteurella pneumotropica dan Aeromonas hydrophila, pada ikan semah (Tor spp.) adalah Entero- coccus faecium, Pantoea spp., dan Aeromonas hydrophila, sedangkan  pada  ikan  baung  (Hemibagrus  sp.), Citrobacter freundii, dan Aeromonas hydrophila. Bakteri Enterococcus  faecium,  Pantoea  sp.,  dan  Aeromonas hydrophila  memiliki  tingkat  virulensi  yang  rendah antara 3,3%-23,4%; sedangkan Citrobacter freundii dan Pasteurella pneumotropica tidak virulen terhadap ikan gabus, semah, dan baung. Bakteri Pantoea sp. dan A. hydrophila resisten terhadap antibiotik enrofloksasin dan  eritromisin,  sedangkan  bakteri  E.  faecium resistens  terhadap  enrofloksasin,  eritromisin,  dan oksitetrasiklin.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini terlaksana dengan sumber dana dari DIPA  BRPBATPP  Tahun  Anggaran  2018  komponen inovasi  yang  dihasilkan  (2427.004.001.051.A)  – Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan  dengan  judul Sustainable  Aquaculture:  Budidaya  Ikan  Air  Tawar Berkelanjutan.  Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada Dr. Tri Heru Prihadi, M.Si. sebagai penanggung
Keterangan (Note):
- :  tidak ada zona hambat (no zone of inhibition)
Dosis 1 (Dosage 1) :  enrofloxacin 30,000 mg/L; erythromycin 5,000 mg/L; oxytetracycline 250,000 mg/L Dosis 2 (Dosage 2) :  enrofloxacin 3,000 mg/L; erythromycin 500 mg/L; oxytetracycline 25,000 mg/L Dosis 3 (Dosage 3) :  enrofloxacin 300 mg/L; erythromycin 50 mg/L; oxytetracycline 2,500 mg/L Dosis 4 (Dosage 4) :  enrofloxacin 30 mg/L; erythromycin 5 mg/L; oxytetracycline 250 mg/L
Tabel 6. Hasil  uji sensitivitas  antibiotik dosis  tinggi Table 6. The results of antimicrobial susceptibility testing using high dosage
1
2 3 4 Enrofloksasin 35.3 ± 0.6 31.7 ± 3.1 21.3 ± 2.5 23.0 ± 4.4 Rentan (Susceptible ) Eritromisin 9.0 ± 1.0 - - - Resisten (Resistant ) Oksitetrasiklin 37.3 ± 0.6 32.7 ± 0.6 31.6 ± 1.5 26.7 ± 0.6 Rentan (Susceptible ) Enrofloksasin 28.7 ± 3.5 27.3 ± 1.5 17.3 ± 6.5 20.3 ± 0.6 Rentan (Susceptible ) Eritromisin - - - - Resisten (Resistant ) Oksitetrasiklin 33.3 ± 1.5 27.0 ± 3.0 27.0 ± 2.0 25.3 ± 1.5 Rentan (Susceptible ) Enrofloksasin 39.3 ± 4.5 24.7 ± 3.5 25.3 ± 3.5 22.7 ± 1.5 Rentan (Susceptible ) Eritromisin 18.7 ± 0.6 12.7 ± 1.5 3.3 ± 1.5 - Resisten (Resistant ) Oksitetrasiklin 35.3 ± 2.5 25.3 ± 1.5 24.7 ± 2.5 22.6 ± 1.5 Rentan (Susceptible ) Klasifikasi
Classifications A. hydrophila Zona hambat/Inhibitory zone  (mm)
Dosis (Dosage )
Pantoea  spp. E. faecium Antibiotik Antibiotics Bakteri Bacteria
jawab kegiatan, dan terima kasih kepada Bapak Setiadi, Edy Farid Wadjdy, Ahmad Wahyudi, dan Johan Afandi atas kerja sama dalam pelaksanaan kegiatan penelitian.

## DAFTAR  ACUAN
Al-Hisnawi, A.A., Mustafa, J.M., Yasser, Y.K., Hussain,
K.A.,  &  Jabur,  A.M.  (2016).  Influence  of  aquatic environment  on  microbiota  of  Liopropoma  santi fish  in  a  local  river  in  Iraq.  Karbala  International Journal of Modern Science, XX, 1-5.
Alkhunni,  S.B.A.,  Gaballah,  M.S.M.,  &  Gultepe,  N.
(2017).  Pathogenic  bacteria  for  human  and  fish isolated from fish farm in Kastamonu, Turkey. Jour- nal of Aquaculture & Marine Biology, 6(3), 00157.
Apun, K., Yusof, A.M., & Jugang, K. (1999). Distribu- tion  of  bacteria  in  tropical  freshwater  fish  and ponds. International Journal of Environmental Health Research, 9(4), 285-292.
Cesare,  A.D.,  Vignaroli,  C.,  Luna,  G.M.,  Pasquaroli, S., & Biavasco, F.  (2012). Antibiotic-resistant en- terococci  in  seawater  and  sediments  from  a coastal fish farm. Microbial Drug Resistance, 18(5). https://doi.org/10.1089/mdr.2011.0204.
Courtenay, W.R. & Williams, J.D. (2004). Snakeheads (Pisces, Channidae) a biological synopsis and risk assessment. U.S. Geological Survey Circular 1251, 129 pp.
Farhana, A.A., Saad, C.R.,  Kamarudin, M.S., & Daud, H.M. (2015). Growth performance and disease re- sistance  towards  Aeromonas  hydrophila  in Hemibagrus nemurus (Valenciennes, 1840) finger- lings through probiotic feeding. Iranian Journal of Fisheries Sciences, 14(4), 846-856.
Gallani,  S.U.,  Sebastião,  F.A.,  Valladão,  G.M.R., Boaratti, A.Z., & Pilarski, F. (2016). Pathogenesis of  mixed  infection  by  Spironucleus  sp.  and Citrobacter  freundii  in  freshwater  angelfish Pterophyllum  scalare.  Microbial  Pathogenesis,  100, 119-123.
Igbinosa, E.O., Onuoha, T., & Udochukwu, U. (2016). Antimicrobial  resistance profile  characterization of  enterococcus  species  isolated  from  aquacul- ture  environment.  Journal  of  Microbiology  &  Bio- technology, 1(2), 000107.
Kayis,  S.,  Capkin,  E.,  Balta,  F.,  &  Altinok,  I.  (2009). Bacteria in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in
the Southern Black Sea Region of Turkey - A Sur- vey. The Israeli Journal of Aquaculture – Bamidgeh, 61(4), 339-344.
Kluga, A., Kacaniová, M., Kantor, A., Kovalenko, K., & Terentjeva, M. (2017). Identification of microflora of freshwater fish caught in the Driksna River and Pond in Latvia. FOODBALT, 16, 164-168.
Majewska, E.T. (2016). Improving disease prevention and treatment in controlled fish culture. Archives of Polish Fisheries, 24, 115-165.
Oztürk, R.C. & Altýnok, I. (2014). Bacterial and viral fish diseases in Turkey. Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences, 14, 275-297.
Rakovac, R.C., Perinic, I.S., Popovic, N.T., Hacmanjek, M., Simpraga, B., & Teskeredzic, E. (2002). Health status of wild and cultured sea bass in the north- ern Adriatic Sea. Veterinární medicína, 47(8), 222- 226.
Sarra,  M.,  Taoufik,  G.,  Patrick,  L.C.,  Benjamin,  B., Yannick, F., & Khaled, H. (2013). Isolation and char- acterization  of  enterococci  bacteriocinic  strains from Tunisian fish viscera. Food and Nutrition Sci- ences, 4, 701-708.
Savasan, S., Kýrkan, S., Erbaþ, G., Parýn, U., & Çiftci, A. (2016). The determination of virulence factors among  fish  originated  enterococci.  Etlik.  Vet. Mikrobiyol Derg., 27(2), 98-103.
Svetlana,  J.,  Dobrila,  J.D.,  &  Veljoviæ,  L.J.  (2003). Citrobacter freundii  as  a  cause  of  disease  in  fish. Acta Veterinaria, 53, 5-6. 10.2298/AVB0306399J.
Tendencia, E.A. (2004). Disk diffusion method. In Labo- ratory  manual  of  standardized  methods  for  antimi- crobial  sensitivity  tests  for  bacteria  isolated  from aquatic animals and environment. Tigbauan, Iloilo, Philippines:  Aquaculture  Department,  Southeast Asian Fisheries Development Center, p. 13-29.
Ture,  M.  &  Kutlu,  I.  (2018).  Isolation  of  Citrobacter freundii from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in freshwater cage. Journal of Limnology and Fresh- water Fisheries Research, 4(2), 85-89.
Wierzchowska, W.C., Zadernowska, A., & Trokenheim, L.L. (2016). Virulence factors, antimicrobial resis- tance and biofilm formation in Enterococcus spp. isolated from retail shrimps. Food Science and Tech- nology, 69, 117-122.