## PEMISAHAN SENYAWA-SENYAWA YANG BERSIFAT SITOTOKSIK TERHADAP SEL MURIN LEUKEMIA P388 DARI EKSTRAK METANOL KULIT BATANG DIPTEROCARPUS CONFERTUS SLOOT (DIPTEROCARPACEAE)

## Muhtadi dan Peni Indrayudha
Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta Correspondence to: Muhtadi Email: muhtadi@ums.ac.id

## ABSTRACT
Six  compounds,  KP-1 up to  KP-6  were isolated from the methanol extract of the tree bark of Dipterocarpus confertus Sloot (Dipterocarpaceae). The cytotoxic activities of these compounds were evaluated  against murine leukemia P388 cells. Result of these examination indicated that KP-2 compound and KP-1 were very active with each  IC 50 value  of  these  compounds were  2.25  and  5.1  µg/mL,  respectively. While  the  others  were  not  active against murine leukemia P388 cells.
Keywords :    Dipterocarpaceae,  Dipterocarpus  confertus  Sloot,  isolated  compounds,  cytotoxic,  and      murine leukemia P-388 cell

## PENDAHULUA N
Dipterocarpaceae  atau  yang  lebih  dikenal dengan  nama  daerah  “meranti,  keruing,  atau kamfer”  merupakan  salah  satu  famili  tumbuhan yang relatif besar yang terdiri dari 16 genus dan 600 spesies (Cronquist, 1981). Keberadaan tumbuhan ini sangat melimpah di wilayah Indonesia tengah khususnya di pulau Kalimantan dan Sumatera dan penyebarannya  meliputi  Indonesia  bagian  barat, Malaysia, Brunei dan Filipina, serta ke arah timur hingga  Irian  Jaya  dan  Papua  Niugini  (Newman et  al. ,  1999).  Tiga  genus  utama  dari  famili  ini adalah Shorea (“meranti”,  150  spesies), Hopea (“merawan”  atau  “tengkawang”  atau  “damar mata  kucing”,  100  spesies)  dan Dipterocarpus (“keruing”,  75  spesies)  (Newman et  al. ,  1999; Soerianegara dan Lemmens, 1994).
Dipterocarpaceae  merupakan  tumbuhan penghasil  kayu  yang  sangat  unggul  kualitasnya, karena  memiliki  batang  lurus,  berpenampang bundar,  hanya  sedikit  sekali  yang  bercabang, memiliki  kayu  yang  berat,  keras,  berserat  kasar, dan kuat dengan diameter melintang diatas 50 cm, sehingga sangat  baik untuk bahan  bangunan dan industri  kayu  lapis  (Sukhla et  al. ,  1990).  Kayu meranti dan keruing misalnya, adalah  jenis kayu
bangunan  yang  berkualitas  tinggi  karena  tahan rayap  atau  serangga  lainnya.  Disamping  itu, tumbuhan Dipterocarpaceae juga  penghasil resin atau  damar  yang  tinggi,    yang  digunakan  untuk varnish atau cat.  Sementara itu, biji tengkawang yang  dihasilkan  dari  tumbuhan Shorea dan Isoptera ,  dapat  digunakan  untuk  berbagai keperluan seperti bahan industri makanan, sabun, obat-obatan seperti obat sariawan dan kosmetika. Oleh karena itu, tumbuhan ini merupakan sumber devisa  negara  yang  sangat  potensial  untuk komoditi ekspor (Heyne, 1987).
Berdasarkan penelusuran literatur, kandungan  metabolit  sekunder  dari  tumbuhan famili Dipterocarpaceae sangat beraneka ragam,  yang  meliputi  golongan  fenol,  seperti oligostilbenoid  (oligomer  resveratrol), ﬂ avonoid, fenilpropanoid,  dan  turunan  asam  fenolat,  serta golongan non-fenol, yaitu triterpenoid (Hegnauer, 1966; Sotheeswaran and Pasuphaty, 1993; Hakim, 2002).
Senyawa-senyawa  oligomer  resveratrol yang diperoleh dari  hasil isolasi tumbuhan famili Dipterocarpaceae  mempunyai  aktivitas  biologi yang  potensial  pada  beberapa  uji  farmakologi, seperti  anti-HIV  (Dai et  al. ,  1998),  antibakteri
(Sultanbawa et al. , 1987; Geewananda et al. , 1986; Zgoda-Pols et  al. ,  2002),  antifungal  (Pryce and Langcake, 1977; Bokel et al. , 1988), antioksidan (Tanaka et  al. ,  2000-b),  antiin ﬂ amasi  (Kitanaka et  al. ,  1990;  Huang,  2001),  sitotoksik  (Dai et al. ,  1998;  Ito et  al. ,  2001-b) dan  hepatoprotektif (Oshima et  al. ,  1993).  Selain  itu,  beberapa senyawa  oligomer  resveratrol  juga  dilaporkan dapat menghambat enzim   5 α -reduktase (Hirano et al. , 2001) dan enzim asetilkolinesterase (Sung et al. , 2002).
Genus Dipterocarpus yang
merupakan  genus  terbesar  ketiga  dalam  famili Dipterocarpaceae, ternyata belum banyak dikaji  aspek  kandungan  metabolit  sekundernya khususnya  dari  golongan  senyawa  fenolik. Berdasarkan  kajian  literatur  dari  75  spesies yang ada di dunia, 38 spesies diantaranya ada di Indonesia dan ternyata baru 5 (lima) spesies dari genus ini yang telah diteliti kandungan metabolit sekundernya.  Satu  spesies, D.  grandi ﬂ orus diteliti oleh Ito et al. (2004) diperoleh empatbelas senyawa fenolik, dua diantaranya adalah senyawa baru  yaitu  grandifenol  A  dan  B.  Empat  spesies yang lain, D. retusus Blume , D. hasseltii Blume , D. intricatus Dyer dan D. elongatus Korth  telah dikerjakan  oleh  peneliti  dalam  kurun  waktu  3 (tiga)  tahun  terakhir  (Muhtadi,  2005;  2006a; 2006b; 2006c; 2006d, 2007).
Fakta ﬁ tokimia dari genus ini memperkuat informasi  ilmiah  sebelumnya,  bahwa  tumbuhan famili  Dipterocarpaceae,  memiliki  kandungan utama  senyawa-senyawa  oligomer  resveratrol yang  memiliki  efek  farmakologis  yang  potensial dan  menarik.  Senyawa  (-)-vatikanol  C  yang diisolasi dari dua spesies Dipterocarpus , yakni dari D. intricatus dan D. grandi ﬂ orus telah dilaporkan memiliki aktivitas antikanker yang tinggi terhadap sepuluh sel panel kanker yang diujikan, sehingga telah  dipromosikan  sebagai  obat  antikanker oleh  Ito et  al .  (2001-b). Adanya  kecenderungan diperolehnya senyawa-senyawa tetramer resveratrol  yang  baru  dari  genus Dipterocarpus , memberikan  peluang  diperolehnya  bahan  obat alam yang baru dan berpotensi dalam aktivitasnya sebagai antikanker.
Dalam  makalah  ini  akan  disampaikan pemisahan  enam  senyawa  KP-1  hingga  KP-6 dari  ekstrak  metanol  kulit  batang  tumbuhan D.  confertus Sloot  dan  aktivitas  sitotoksiknya terhadap  sel  murin  leukemia  P-388.  Pemisahan
senyawa-senyawa fenolik dari spesies D. confertus Sloot ini merupakan penelitian terbaru yang belum pernah dilaporkan sebelumnya.
Karakterisasi  senyawa-senyawa  hasil-hasil isolasi  ditetapkan  berdasarkan  data  spektroskopi UV, IR, 1 H-NMR  dan 13 C-NMR serta perbandingan dengan  data  sejenis  yang  telah  dilaporkan. Sedangkan  uji  sitotoksisitasnya  ditentukan dengan  menggunakan  sel murin  leukemia  P-388 berdasarkan prosedur standar NCI (Hostettmann, 1991).

## METODE PENELITIAN
Alat .  Spektrum  UV  dan  IR  ditetapkan dengan  Cary  Varian  100  Conc.  dan  Perkin- Elmer  Spectrum  One  FT-IR  spectrophotometers. Spektrum 1 H  dan 13 C-NMR  ditentukan  dengan spektrofotometer JEOL ECP400, yang beroperasi pada  400  MHz  ( 1 H)  dan  100  MHz  ( 13 C). Kromatogra ﬁ cair vakum menggunakan Silika 60 GF 254 (Merck), kromatogra ﬁ radial menggunakan Silika  60  PF 254 (Merck),  dan  analisis  KLT menggunakan  plat  KLT  Kieselgel  60  GF 254 0,25 mm (Merck).
Bahan .  Bahan  tumbuhan  yang  digunakan adalah  kulit  batang D.  confertus Sloot, diperoleh dari Bukit Bengkirai Kalimantan Timur (Kaltim),  pada  bulan  Oktober  2005.    Tumbuhan tersebut  telah  diidenti ﬁ kasi  oleh  staf  Herbarium Bogoriensis  dan  spesimennya  telah  disimpan  di laboratorium  Herbarium  Bogoriensis,  Lembaga Ilmu  Pengetahuan  Indonesia  (LIPI)  Bogor. Sedangkan  pelarut  yang  digunakan  semuanya berkualitas teknis yang telah didestilasi.

## Ekstraksi dan isolasi
Serbuk  kering  kulit  batang D.  confertus Sloot sebanyak 4,3 kg diekstraksi dengan metanol (10  L)  menggunakan  teknik  maserasi  tiga  kali berturut-turut  @  24  jam  menghasilkan      480  g ekstrak  metanol  total.  Ekstrak  metanol  tersebut, selanjutnya  dilarutkan  kembali  dalam  campuran MeOH-dietileter  untuk  pengendapan  taninnya, sehingga  menghasilkan  fraksi  terlarut  MeOH- dietileter,  berupa  gum  berwarna  coklat  gelap (284  g).  Fraksi  MeOH-dietileter  sebanyak  50  g kemudian  difraksinasi  dengan  kromatogra ﬁ cair vakum (KCV) dalam 2 kali pengerjaan [adsorben Si-gel,  eluen  yang  digunakan  heksan-etilasetat (6:4-etilasetat  100%,  etilasetat  :  metanol  (76:3)] menghasilkan  9  fraksi  utama  A  s.d  I  (masing-
masing tidak ditimbang (A); 0,30; 0,50; 1,40; 3,22; 0,40; 0,367; 2,0 dan 4,84 g). Fraksi C (berat 500 mg) dilakukan pemurnian terlebih dahulu, dengan metode kromatogra ﬁ kolom tekan (KKT) diameter kolom 4 cm dan eluen yang digunakan n-heksana : etilasetat = 8 : 2. Setelah dilanjutkan dengan proses rekristalisasi  diperoleh  senyawa  KP-2  (berat 113  mg).  Sedangkan  dari  proses  pemurnian  dari fraksi C 2 , dengan cara rekristalisasi dan pencucian dengan  pelarut  metanol,  diperoleh  senyawa KP-3  (sebanyak  105  mg).  Dari  fraksi  gabungan E  dan  F,  dilakukan  rekristalisasi  dan  pencucian dengan  pelarut  aseton  dan  metanol  diperoleh senyawa KP-1 (sebanyak 190 mg). Dari fraksi H sebanyak  670  mg  dilakukan  pemurnian  dengan metode KKT  berulang-ulang,  diperoleh  senyawa KP-4  sebanyak  210  mg  dan  KP-6  sebanyak  5 mg. Sedangkan dari fraksi G (sebanyak 350 mg) dilakukan  pemurnian  dengan  metode  KKT  dua tahap, diperoleh senyawa KP-5 (berat 23 mg).

## Pengujian aktivitas sitotoksik
Aktivitas sitotoksik senyawa KP-1 s.d KP-5 dinyatakan sebagai IC 50 , yaitu konsentrasi sampel yang  dibutuhkan  untuk  menginhibisi  50%  sel murin leukemia P-388 melalui pewarnaan pereaksi MTT.  Uji  dilakukan  dengan  cara  menambahkan berbagai  konsentrasi  ketiga  senyawa  tersebut ke  dalam  biakan  sel  murin  leukemia  P-388. Setelah  diinkubasi  selama  48  jam,  ke  dalam sampel  ditambahkan  pereaksi  warna  MTT  dan diinkubasikan  kembali  selama  4  jam.  Jumlah sel  tumor  P-388  yang  terinhibisi  oleh  sampel diukur dari serapannya dengan menggunakan alat pembaca pelat mikro pada � 540 nm setelah penambahan  larutan  penghenti  pertumbuhan. Nilai  IC 50 dapat  dihitung  melalui  ekstrapolasi garis  50%  serapan  kontrol  positif  pada  kurva serapan  terhadap  berbagai  konsentrasi  sampel menggunakan gra ﬁ k semilogaritma.
HASIL DAN PEMBAHASAN Enam  senyawa  murni  telah  berhasil diisolasi  dari  kulit  batang D.  confertus Sloot. Berdasarkan  analisis  data  spektroskopi  yang sudah  ada,  menunjukkan  bahwa  KP-1  dan  KP-3 mengindikasikan  sebagai  senyawa  triterpenoid, senyawa KP-2, KP-5 dan KP-6 mengindikasikan sebagai ﬂ avonoid,  sedangkan  senyawa  KP-4 adalah trimer resveratrol, yaitu α -viniferin. Senyawa  KP-1,  diperoleh  sebagai  serbuk putih, spektrum UV (MeOH) λ maks 203,5  nm, khas
untuk  kromofor  senyawa  nonfenolik;  sedangkan spektrum  IR  (pellet  KBr)  menunjukkan  puncak- puncak  serapan  pada ν maks 2943  dan  2869  cm -1 (C-H  alifatik),  1687  cm -1 (C=C  alifatik),    1234 dan  1191    cm -1 (C-OH  alifatik),  memperkuat sebagai senyawa nonfenolik. Pengukuran H-NMR  dan    C-NMR  sedang  dikerjakan  (di UKM).  Berdasarkan  data  spektrum  UV  dan  IR, senyawa KP-1 mengindikasikan sebagai senyawa triterpenoid.
Senyawa  KP-2,  diperoleh  sebagai  serbuk kuning,  spektrum  UV  (MeOH) λ maks 205,  229,5 dan  329,5  nm.  Penambahan  NaOH  terjadi pergeseran batokromik sebesar 9 nm pada pita I. IR  (KBr) ν maks 3026  cm -1 (-OH),  1651,  1573, dan  1448  cm -1 (C=C  benzena),    1342  dan  1193 cm -1 (C-O  oksiaril).  Pengukuran  H-NMR  dan C-NMR sedang diproses (di UKM). Berdasarkan data  spektrum  UV  dan  IR,  senyawa  KP-2 mengindikasikan sebagai senyawa ﬂ avonoid.
Senyawa  KP-3,  diperoleh  sebagai  serbuk putih,  spektrum  UV  (MeOH) λ maks 202,5 nm;  spektrum  IR  senyawa  senyawa KP-3 menunjukkan  adanya  serapan  yang  kuat  pada bilangan gelombang � maks 3204 cm -1 yang berasal dari  regangan  ulur  gugus  O-H,  diikuti  dengan serapan pada bilangan gelombang � maks 1049 cm -1 dari gugus C-O alkohol sekunder. Pada bilangan gelombang � maks 2900  dan  2850  cm -1 terdapat serapan yang sangat kuat dari regangan ulur gugus C-H  alifatik  gugus  CH 2 dan  CH 3 diikuti  dengan serapan pada � maks 1464 dan 1379 cm -1 yang berasal dari  tekukan      C-H  alifatik dari gugus  CH 2 dan CH 3 yang khas untuk golongan terpenoid. Adanya serapan  dengan  intensitas  lemah  pada  bilangan gelombang ν maks 1622  cm -1 menunjukkan adanya regangan ulur C=C dari gugus C-H rangkap dua (-C=C-H)  siklik.  Berdasarkan  analisis  database IR-nya,  memiliki  kemiripan dengan β -sitosterol sebesar 93%. Sehingga dapat disimpulkan bahwa senyawa KP-3 adalah senyawa β -sitosterol. Senyawa  KP-4,  diperoleh  sebagai  serbuk putih  kecoklatan,  spektrum  UV  (MeOH) λ maks 213,5,  228  (bahu)  dan  286  nm.  Penambahan NaOH  terjadi  pergeseran  batokromik  sebesar 11 nm, yang khas untuk kromofor  stilben (Ito et al. ,  2001-a).  Spektrum  IR  (pellet  KBr)  senyawa KP-4 memperlihatkan    ciri-ciri  yang  sesuai untuk  senyawa  oligomer  resveratrol  dengan pita-pita  serapan  pada � maks 3355  cm -1 (-OH),
1614,  1515,  dan  1446  cm -1 (C=C  benzena), 1361  dan  1170    cm -1 (C-O  oksiaril)  serta  dan 831  cm -1 ( p -disubstitusibenzena).  Berdasarkan data  spektrum  UV  dan  IR,  senyawa  KP-4 mengindikasikan  sebagai  senyawa  oligomer resveratrol  dengan  ikatan  rangkap  yang  telah tersubstitusi.
Gambar 1. Spektrum UV KP-4 (MeOH) (kiri) dan KP-4 + NaOH  (kanan)
Gambar 2. Spektrum IR KP-4 (pellet KBr)
Data  spektrum 13 C  NMR  (Tabel 1) menunjukkan adanya 35 sinyal yang mewakili 42 karbon,  mengindikasikan  bahwa  senyawa  KP-4 adalah  suatu  trimer  resveratrol  (3  X  14  karbon). Sinyal-sinyal  karbon  yang  menjadi  karakteristik dari  senyawa  KP-4  adalah  adanya  enam  karbon alifatik pada δ C 46,4 – 95,6 ppm, yang menunjukkan adanya  tiga  cincin  dihidrobenzofuran,  sembilan karbon  kuarterner  ( δ C 118,8  – 141,2 ppm);  yang meliputi  enam  karbon  kuarterner  merupakan bagian  dari  kerangka  dasar  karbon  siklononan dan tiga karbon kuarterner ( δ C 130,0 –132,2 ppm)
untuk C-1a/b/c; sembilan karbon oksiaril ( δ C 157,9 –  161,8  ppm)  yang  mendukung  sebagai  trimer resveratrol, dan 18 karbon metin aromatik ( δ C 96,9 – 128,7 ppm). Sementara itu, spektrum 1 H NMR (Tabel 1) menunjukkan sinyal-sinyal proton yang sesuai  untuk tiga unit p -hidroksifenil pada δ 7,03; 6,72;   7,02;  6,78;  7,20  dan 6,76  ppm,  adanya tiga  unit  1,2,3,5-tetrasubstitusibenzena  pada δ 6,24; 6,72;  6,23; 5,98; 6,20 dan 6,58 ppm, dan tiga  unit  2,3-disubstitusi-2,3-dihidrobenzofuran pada δ 6,21; 3,95; 4,89; 4,60; 5,93  dan 4,68 ppm.
Karakteristik  unit-unit  struktur  tersebut menyarankan bahwa senyawa KP-4 ini memiliki struktur  molekul  sama  dengan    (-)- α -viniferin yang  telah  dilaporkan  oleh  Pryce and Langcake (1977) yang diisolasi dari Vitis vinifera (Vitaceae). Perbandingan  data 1 H  dan 13 C  NMR  (Tabel  1) senyawa KP-4 dengan (-)- α -viniferin  oleh Pryce and Langcake (1977) memperlihatkan kesesuaian yang tinggi. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa senyawa KP-4 adalah α -viniferin .
α -viniferin
Tabel 1.  Data 1 H dan 13 C NMR  (aseton- d 6 )  senyawa KP-4
No. C δ H ( multiplisitas , J dalam Hz) δ C KP-4 α -viniferin KP-4 α -viniferin 1a - - 132,0 132,0 2/6a 7,03 ( d , J = 8,8) 7,03 ( d , J = 8,5) 128,2 128,1 3/5a 6,72 ( d , J = 8,8) 6,72 ( d , J = 8,5) 115,7 115,7 4a - - 158,2 157,8 7a 6,21 ( brs ) 6,21 ( brs ) 86,4 86,4 8a 3,95 ( brs ) 3,98 ( brs ) 46,4 46,4 9a - - 141,2 141,2 10a - - 120,9 120,9 11a - - 160,6 161,6 12a 6,24 ( d , J = 1,8) 6,25 ( d, J = 1,8) 98,0 98,0 13a - - 159,3 159,3 14a 6,72 ( d , J = 1,8) 6,72 ( d , J = 1,8) 106,2 106,2 1b - - 132,5 132,5 2/6b 7,02 ( d , J = 8,4) 7,08 ( d , J = 8,5) 128,7 128,6 3/5b 6,78 ( d , J = 8,4) 6,79 ( d , J = 8,5) 116,1 116,1 4b - - 158,4 158,3 7b 4,89 ( d , J = 6,2) 4,90 ( d , J = 6,4) 95,6 95,6 8b 4,60 ( d , J = 6,2)
4,61 ( d , J = 6,4) 55,7 55,6 9b - - 141,2 141,2 10b - - 118,8 118,8 11b - - 161,6 161,6 12b 6,23 ( d , J = 1,8) 6,22 ( d , J = 1,8) 98,0 98,0 13b - - 159,3 159,3 14b 5,98 ( d , J = 1,8) 5,99 ( d , J = 1,8) 108,6 108,5 1c - - 132,0 132,0 2/6c 7,20 ( d , J = 8,4)
7,22 ( d , J = 8,5) 128,1 128,1 3/5c 6,76 ( d , J = 8,4) 6,77 ( d , J = 8,5) 116,1 116,2 4c - - 157,9 157,8 7c 5,93 ( d , J = 9,9) 5,95 ( d , J = 9,7) 90,0 90,0 8c 4,68 ( d , J = 9,9)
4,71 ( d , J = 9,7) 52,8 52,8 9c - - 138,7 138,7 10c - - 119,7 119,7 11c - - 161,7 161,7 12c 6,20 ( d , J = 1,8) 6,15 ( d , J = 2,0) 96,9 96,9 13c - - 160,7 160,8 14c 6,58 ( d , J =  1,8) 6,46 ( d , J = 2,0) 105,8 105,8
*data diambil dari Pryce and Langcake (1977).
Senyawa  KP-5,  diperoleh  sebagai  serbuk putih kecoklatan, spektrum UV (MeOH) λ maks 205, 218, 260  dan 290 nm. Penambahan NaOH terjadi pergeseran  batokromik  sebesar  6  nm,  yang khas untuk  kromofor  fenolik  sederhana.  Spektrum  IR (pellet KBr) senyawa KP-5 memperlihatkan  pita-
pita serapan pada ν maks 3485 cm -1 (-OH), 1679 cm -1 (C=O karbonil), 1598, 1521, dan 1433 cm -1 (C=C benzena),  1299  dan  1207    cm -1 (C-O  oksiaril). Pengukuran H-NMR dan C-NMR sedang diproses (di UKM). Berdasarkan data spektrum UV dan IR, senyawa KP-5 mengindikasikan sebagai senyawa ﬂ avonoid.
Senyawa  KP-6,  diperoleh  sebagai  serbuk putih kecoklatan, spektrum UV (MeOH) λ maks 203, 217, 298  dan 325 nm. Penambahan NaOH terjadi pergeseran batokromik sebesar 49 nm, yang khas untuk  kromofor  fenolik  sederhana.  Spektrum  IR (pellet KBr) senyawa KP-6 memperlihatkan  pita- pita serapan pada ν maks 2920 dan 2850 cm -1 (C-H alifatik), 1697 cm -1 (C=O karbonil), 1600, 1515, dan  1461  cm -1 (C=C  benzena),    1272  dan  1107 cm -1 (C-O  oksiaril).    Pengukuran  H-NMR  dan C-NMR sedang diproses (di UKM). Berdasarkan data  spektrum  UV  dan  IR,  senyawa  KP-6  lebih mengindikasikan sebagai senyawa ﬂ avonoid.

## Hasil uji sitotoksik
Hasil  pengujian  sitotoksitas  terhadap  sel murin  leukemia    P-388  memperlihatkan  harga IC 50 masing-masing: senyawa adalah : KP-1 (IC 50
= 5,1 μ g/ml), KP-2 (IC 50 =  2,25 μ g/ml), KP-3 (IC50  tidak  terukur), KP-4 (IC 50 = 71,0 μ g/ml), KP-5 (IC 50 = 67,0 μ g/ml) dan KP-6 (tidak diukur, jumlah sangat sedikit).
Efek    sitotoksik  terhadap  sel  uji  tumor ( malignant  cell  lines )  secara in  vitro menurut Alley  (1988)  dikategorikan  sangat  aktif  (++) untuk  nilai  IC 50 <2 μ g/ml,  aktif  (+)  2-4 μ g/ml, dan  tidak  aktif  bila    IC 50 >4 μ g/ml.  Kategori berdasarkan  satuan μ g/ml  memiliki  kelemahan karena  tidak  memperhatikan  ukuran (berat) molekul.  Sedangkan  menurut  Ito et  al. (2003), berdasarkan  hasil  kajian  sitotoksik  terhadap beberapa  sel  uji  kanker  dari  senyawa-senyawa oligomer resveratrol, dinyatakan bahwa senyawa dikatakan sangat aktif (++) bila memiliki nilai IC 50 <10 μ M, aktif (+) 10-20 μ M, dan tidak aktif jika nilai  IC 50 >20 μ M.
Hasil  pengujian  efek  sitotoksik  senyawa- senyawa hasil isolasi terhadap sel murin leukemia P388  [ex.  HSRRB  Lot  Number:  113098  seed (JCRB0017)]  yang  dilakukan  di  Laboratorium Kimia  Organik Bahan Alam,  Departemen  Kimia Institut Teknologi Bandung sebagai berikut:
Tabel  2.  Hasil pengujian efek sitotoksik senyawa-senyawa hasil isolasi terhadap sel murin leukemia P388
NO. SENYAWA IC 50 ( μ g/ml) KET.* KET.** KP-1 5,1 Tidak aktif Sangat aktif KP-2 2,25 Aktif Sangat aktif KP-3 t.t Tidak larut DMSO Tidak larut DMSO KP-4 71,0 Tidak aktif Tidak aktif KP-5 67,0 Tidak aktif Tidak aktif KP-6 t.t Tidak diukur Tidak diukur
*Berdasarkan pengkategorian oleh Alley (1998).
** Berdasarkan pengkategorian oleh Ito et al. (2003).
Senyawa KP-1 dan KP-2 memiliki aktivitas sitotoksik yang lebih kuat dibandingkan senyawa KP-4  dan  KP-5.  Senyawa  KP-3  tidak  terukur (t.t),  karena  tidak  dapat  larut  dalam  DMSO, sedangkan KP-6 karena jumlahnya sangat sedikit (5 mg) dan berdasarkan spektrum IR-nya, masih mengindikasikan  adanya  pengotor  yang  cukup signi ﬁ kan,  maka  tidak  dilakukan  pengujian  efek sitotoksiknya.
Senyawa  KP-2,  yang  mengindikasikan sebagai senyawa ﬂ avonoid menunjukkan aktivitas sitotoksik  yang  paling  kuat    terhadap  sel  murin leukemia  P388.  Padahal    berdasarkan  laporan penelitian  terdahulu,  senyawa ﬂ avonoid  yang diisolasi  dari  ekstrak  kulit  kayu Dipterocarpus
(keruing), tidak memiliki efek sitotoksik terhadap sel  murin  leukemia  P388.  Dilaporkan,  senyawa 4’- O -metilgalokatecin  yang  telah  diisolasi  dari D.  elongatus memiliki  efek  sitotoksik  yang sangat  lemah  (tidak  aktif)  dengan  nilai  IC 50 sebesar  70 μ g/mL  (Muhtadi,  2007).    Sedangkan senyawa-senyawa  yang  memiliki  efek  sitotoksik sangat  kuat  (aktif)  dari  ekstrak  tumbuhan  famili Dipterocarpaceae  adalah  hopeafenol  (IC 50 5,5 μ M) dan diptoindonesin  G (IC 50 4,4 μ M). Akan tetapi,  berdasarkan  data  spektrum  UV  dan  IR- nya,  senyawa  KP-2  tidak  memiliki  kemiripan sifat-sifat  dengan  senyawa  hopeafenol  maupun diptoindonesin G (Sahidin, 2006).
Oleh  karena  itu,  penelitian  lanjutan  untuk menentukan  struktur  kimia  senyawa  KP-2  yang memiliki efek sitotoksik yang sangat kuat tersebut, dan melakukan uji farmakologi  molekuler untuk mengetahui  mekanisme  penghambatan  terhadap sel kanker sangat penting untuk dilakukan.
Pengujian efek toksisitas; akut dan subkronis juga penting untuk dilakukan, agar diperoleh data ilmiah  yang  kuat  tentang  potensi  pemanfaatan ekstrak,  isolat  atau  senyawa  KP-2  sebagai antikanker. Hasil kajian farmakologi (khasiat) dan toksisitas  (efek  samping)  ini,  akan  memberikan landasan ilmiah yang kuat tentang seberapa besar potensi  pemanfaatan  ekstrak  atau  isolat  dari kulit kayu keruing  Pungguh ( D. confertus Sloot) sebagai agen ﬁ tofarmaka antikanker.

## SIMPULAN
Enam senyawa telah berhasil diisolasi dari ekstrak metanol kulit batang D . confertus Sloot, dua  diantaranya  (KP-2  dan  KP-1)  sangat  aktif dalam  pengujian  efek  sitotoksiknya  terhadap sel  murin  leukemia  P388,  dengan  nilai  IC 50 masing-masing  sebesar  2,25  dan  5,1    7,8 μ g/ml. Berdasarkan  analisis  spektroskopi  yang  telah
ada,  KP-2  mengindikasikan  sebagai  senyawa ﬂ avonoid,  sedangkan  KP-1  mengindikasikan sebagai triterpenoid.

## Persantunan
Kami  ucapkan  terima  kasih  kepada Direktorat  DP2M  Dikti  Depdiknas  atas  biaya Penelitian Hibah Bersaing Tahun Anggaran 2008, Bapak  Dr.  Edi  K.  dari  Universitas  Tanjungpura Pontianak  atas    bantuannya  dalam  menyediakan sampel  tumbuhan,  serta  staf  Herbarium Bogoriensis Bogor dalam determinasi tumbuhan.

## DAFTAR PUSTAKA
Alley, M.C., Scudiero, D.A., Monks, A., Hursey, M.L., Czerwinski,  M.J.,  Fine,  D.L., Abbott,  B.J., Mayo,  J.G.,  Shoemaker,  R.H.,  Boyd,  M.R. (1988) : Feasibility of Drug Screening with Panels of Human Tumor Cells Lines Using a  Microculture Tetrazolilum Assay, Cancer
Res ., 48, 589-601.
Bokel,  M.,  M.N.C.  Diyasena,  A.A.L.  Gunatilaka,
W.  Kraus,  S.  Sotheeswaran  (1988),
Caliculatol,  an  antifungal  resveratrol trimer  from Stemonoporus  canaliculatus , Phytochemistry , 27, 377-380
Cronquist,  A.  (1981), An  intergrated  system  of classi ﬁ cation  of ﬂ owering plant ,  Columbia University Press, New York, 317-318
Dai,  J.R.,  Y.F.  Hallock,  J.H.  Cardellina  II,  M.R., Boyd (1998), HIV-Inhibitory and cytotoxic oligostilbenes  from  the  leaves  of Hopea malibato , J. Nat. Prod ., 61, 351-353 Geewananda, Y.A., P. Gunawardena, S. Sotheeswaran,
M.U.S.  Sultanbawa,  S.  Surendrakumar,
P.  Bladon  (1986),  Another  antibacterial polyphenol, coppaliferol B, from Vaterian  copallifera (Dipterocarpaceae), Phytochemistry, 25, 1498-1500
Hakim,  E.H.  (2002),  Oligostilbenoid  dari  tumbuh- tumbuhan Dipterocarpaceae, Bull. Soc. Nat. Prod. Chem ., 2, 1-9
Hegnauer,  R.  (1966), Chemotaxonomie  der  p ﬂ anzen , Band  4,  Birkhauser  Verlag  Basel  und Stuttgart, 31-40
Heyne, K. (1987), Tumbuhan berguna Indonesia , Vol II, Balai Kehutanan Indonesia, Departemen Kehutanan, Jakarta, 1420
Hirano,  Y.,  R.  Kondo,  K.  Sakai  (2001),  Compounds inhibitory  to  rat  liver  5 � -reductase  from tropical commercial wood species: resveratrol trimers from melapi (S horea sp .) heartwood, J. Wood. Sci ., 47, 308-312
Hostettmann, K. (1991) : Assays for Bioactivity. Method in  Plant  Biochemistry ,  Series  Editor  P.M. Dey  and  J.B.  Harborne,  Vol.  6,  Academic Press, London.
Huang, K., Y. Wang, R.  Li, M. Lin (2000), Five  new stilbene  dimers  from  the  lianas  of Gnetum hainanse, J. Nat. Prod ., 63, 86-89
Ito, T., Akao, Y., Yi, H.,  Ohguchi, K., Matsumoto, K, Tanaka, T., Iinuma, M., Nozawa, Y. (2003) : Antitumor Effect of Resveratrol Oligomers Against Human Cancer Cell Lines and The Molecular Mechanism of Apoptosis Induced by  Vaticanol  C, Carcinogenesis ,  24(9),
1489-1497.
Ito, T., T. Tanaka, K. Nakaya, M. Iinuma, Y. Takashashi, H.  Naganawa,  M.  Ohyama,  Y.  Nakanishi, K.F.  Bastow,  K.  Lee  (2001-a)  :  A  Novel Bridged Stilbenoid Trimer and Four Highly Condensed  Stilbenoid  Oligomers  in Vatica rassak , Tetrahedron , 53, 7309-7314.
Ito,  T.,  T.  Tanaka,  K.  Nakaya,  M.  Iinuma,  Y. Takashashi,  H.  Naganawa,  M.  Ohyama, Y. Nakanishi,  K.F.  Bastow,  K.  Lee  (2001-b), A  new  resveratrol  octamer,  vateriaphenol A, in Vateria indica , Tetrahedron letters , 42, 5909-5912
Ito, T., T. Tanaka, M. Iinuma, K. Nakaya, Y. Takashashi, R.  Sawa,  J.  Murata,  D.  Darnaedi,  (2004), Two  new  resveratrol  (=5-[(1E)-2-(4- hydroxyphenyl)ethenyl]-benzene-1,3-diol) tetramer  with  a  tetrahydrofuran  ring  from Dipterocarpus grandi ﬂ orus, Helvetica
Chimica Acta . 87, 479-495
Kitanaka,  S.,  M.  Takido,  K.  Mizoue,  H.  Kondo,  S. Nakaike (1996), Oligomeric stilbenes from Caragana  chamlagu Lamark  root, Chem. Pharm. Bull., 44, 565-567 Muhtadi  (2007), Fitokimia  Beberapa  Spesies Dipterocarpaceae  Indonesia  dari  Genus Dipterocarpus  (Keruing) ,  Disertasi,  Dep.
Kimia, Program Pasca Sarjana ITB, Bandung Muhtadi,  Hakim, E.H.,  Syah, Y.M.,  Juliawaty, L.D., Achmad,  S.A.,  Said,  I.M.,  Din,  L.B.  dan Latip,  J.  (2006-a)  :  Resveratrol  Tetramers from Dipterocarpus intricatus and Cytotoxic Activity against Murine Leukemia P-388  Cells, Collective  Abstracts  of  the International  Conference  on  Mathematics and  Natural  Sciences  (ICMNS), ITB- Bandung, 29-30 November 2006.
Muhtadi,    Hakim,  E.H.,    Syah,  Y.M.,    Juliawaty, L.D.,    Achmad,  S.A.    dan    Latip,  J. (2006-b)  :  Pemisahan  dan  Karakterisasi Senyawa Oligostilbenoid dari Kulit Batang Dipterocarpus hasseltii (Dipterocarpaceae), Alchemy , Vol. 5 (1), Maret 2006, 8-15.
Muhtadi,  Hakim, E.H.,  Syah, Y.M.,  Juliawaty, L.D., Achmad,  S.A.    Latip,  J.,  Ghisalberti,  E.L. (2006-d) : Cytotoxic Resveratrol Oligomers from  the  Tree    Bark  of Dipterocarpus hasseltii,Journal  of  Fitoterapia ,  Vol.  77, Issues 7-8, December 2006, 550-555.
Muhtadi,  Hakim,  E.H.,    Juliawaty,    L.D.,    Din,  L.B.
dan    Latip,  J.    (2006-c)  :  Lima  Senyawa Oligostilbenoid dari Kulit Batang Dipterocarpus  hasseltii dan  Aktivitas Sitotoksiknya terhadap Sel Murin Leukemia P-388, Bulletin  of  the  Indonesian  Society of  Natural  Products  Chemistry ,  Vol.  6  (1),
January-June 2006, 19-26.
Muhtadi,  Hakim,  E.H.,    Syah,  Y.M.,    Juliawaty, L.D.,    Makmur,  L.,      Achmad,  S.A.,
Din,  L.B.  dan    Latip,  J.    (2005)  :  Tiga Senyawa Oligostilbenoid dari Kulit Batang Dipterocarpus  retusus Blume (Dipterocarpaceae), Jurnal  Matematika  & Sains, Vol. 10 (4), Desember 2005, 135-141. Newman,  M.F.,  P.F.  Burges,  T.C.  Whitemore (1999), Pedoman  identi ﬁ kasi  Pohon
Dipterocarpaceae Pulau Kalimantan ,
Prosea Indonesia, Bogor
Oshima,  Y.,  Y.  Ueno,    K.  Hisamichi,  M.  Takeshita (1993), Ampelopsin F and G, Novel bridged plant  oligostilbenes  from Ampelopsis brevipedunculata var. hancei roots (Vitaceae), Tetrahedron , 49, 5801-5804 Pryce,  R.J.,  P.  Langcake  (1977), � -Viniferin: an  antifungal  resveratrol  trimer  from grapevines, Phytochemistry , 16, 1452-1454 Sahidin    (2006)  : Keanekaragaman  Senyawa Oligomer  Resveratrol  dari  Tumbuhan Hopea  dan  Tumbuhan  Sejenis  dari  Famili Dipterocarpaceae  Indonesia , Disertasi Program    Doktor,  Institut  Teknologi Bandung, 131-133.
Soerianegara,  I.,  R.H.M.J.  Lemmens  (1994), Timber trees: Major commercial timbers, PROSEA, Bogor Indonesia
Sotheeswaran, S., M.N.C. Diyasena, A.A.L. Gunatilaka, M. Bokel, W. Kraus (1987), Further evidence for the structure of vaticaf ﬁ nol and a revision of its stereochemistry, Phytoc hemistry , 26, 1505-1507
Sotheeswaran,  S.,  M.U.S.  Sultanbawa,  S. Surendrakumar,  P.  Bladon  (1983), Polyphenol  from  Dipterocarp  species copalliferol  A  and  stemonoporol, J. Chem. Soc. , Perkin Trans. 1, 4, 699-702
Sotheeswaran, S., V. Pasupati  (1993), Distribution of  resveratrol  oligomers  in  plants  , Phytochemistry , 32,1083-1092
Sukhla,  R.N.,  Sharma,  S.P.,  Srivastava,  R.M.
(1990)  :  On  Chemical  Composition of Shorea  robusta,  Vijnana  Parishad Anusandhan Patrika , 33(4), 253-261.
Sung,  S.H.,  S.Y.  Kang,  K.Y.  Lee,  M.J.  Park,
J.H.  Kim,  J.H.  Park,  Y.  Choong  Kim, J.  Kim,  Y.C.  Kim,  J.  Kim,  Y.C.  Kim (2002), (+)- � -Viniferin, a stilbene trimer from Caragana  chamlague ,  inhibits acetylcholinesterase, Biol. Pharm. Bull .,
25, 125-127
Tanaka,  T.,  T.    Ito,  K.  Nakaya,  M.  Iinuma,  Y. Takashashi, H. Naganawa, N. Matsuura, M.  Ubukata  (2000-b),  Vaticanol  D,  a novel resveratrol hexamer isolated from Vatica  rassak , Tetrahedron  Letters ,  41,
7929-7932
Zgoda-Pols,  J.R.,  A.J.  Freyer,  L.B.  Killmer, and  J.R.  Porter  (2002),  Antimicrobial resveratrol tetramers from the stem bark of Vatica oblongifolia , J. Nat. Prod , 65, 1554-1559