Majalah Farmaseutik Vol. 14 No. 2: 54-62 ISSN-p : 1410-590x
ISSN-e : 2614-0063
Aktivitas  Antiplasmodium  dan  Sitotoksisitas  Isolat  Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack) secara In Vitro
In  Vitro Antiplasmodial  Activity  and  Cytotoxicity  of  Isolates  of  Pasak  Bumi (Eurycoma longifolia Jack ) Root
Eti Nurwening Sholikhah 1* , Mahardika Agus Wijayanti 2 , Laela Hayu Nurani 3 , Mustofa 1
1. Departemen  Farmakologi  &  Terapi,  Fakultas  Kedokteran,  Kesehatan  Masyarakat  dan Keperawatan UGM, Yogyakarta
2. Departemen  Parasitologi,  Fakultas  Kedokteran,  Kesehatan  Masyarakat  dan Keperawatan UGM, Yogyakarta
3. Fakultas Farmasi, Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta
Corresponding author: Eti Nurwening Sholikhah: Email: etinurweningsholikhah@ugm.ac.id

## ABSTRAK
Telah  diketahui  bahwa  fraksi  metanol  akar  pasak  bumi  mempunyai  aktivitas antiplasmodium i n vitro yang kuat. Namun belum diketahui isolat yang manakah yang aktif sebagai antiplasmodium. Penelitian ini bertujuan untuk  menguji aktivitas antiplasmodium dan sitotoksisitas 5 isolat yang diisolasi dari fraksi metanol akar pasak bumi. Uji aktivitas antiplasmodium in  vitro dilakukan  pada  kultur P.  falciparum strain  FCR-3  dan  D10, sedangkan  uji  sitotoksisitas in  vitro dilakukan  pada  kultur  sel  normal  Vero.  Aktivitas antiplasmodium dan sitotoksisitas in vitro dinyatakan sebagai IC 50 ( Inhibitory Concentration 50%) yaitu konsentrasi yang dapat menghambat pertumbuhan Plasmodium atau sel Vero sebesar 50%. Nilai IC 50 ditentukan dengan analisis probit. Selektivitas isolat uji dinyatakan sebagai indeks selektivitas  yang merupakan rasio sitotoksisitas (IC 50 pada sel normal Vero) dengan  aktivitas  antiplasmodium in  vitro (IC 50 pada Plasmodium ).  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  isolat  4  dan  5  menunjukkan  aktivitas  antiplasmodium  yang  kuat dengan  nilai  IC 50 berturut  turut  2,21-19,02  dan  13,54-64,73  µg/mL  Rasio sitotoksisitas/aktivitas  antiplasmodium  menunjukkan  bahwa  isolat  4  dan  5  juga menunjukkan  nilai  selektivitas  yang  tinggi  yaitu  11.74-68.75  untuk  isolat   4,  dan  66.01- 316.51 untuk isolat 5. Kesimpulannya, isolat 4 dan 5 mempunyai aktivitas aniplasmodium yang tinggi dengan seletivitas yang tinggi pula.
Kata kunci: Eurycoma longifolia , aktivitas antiplasmodium, sitotoksisitas, in vitro

## ABSTRACT
Previous study showed that methanol soluble fractions of Eurycoma longifolia Jack showed  a  high in  vitro antiplasmodial  activity,  however  there  is  no  explanation  which isolate  is  active  as  antiplasmodial.  This  study  was  conducted  to  evaluate  the in  vitro antiplasmodial  activity  and  cytotoxicity  of  5  isolates  of E.  longifolia root  isolated  from methanol soluble fractions. The in vitro antiplasmodial activity was tested on two strains of P. falciparum, FCR-3 and D10 while their cytotoxicity was tested on normal Vero cell line. The  antiplasmodial  activity  and  the  cytotoxicity  were  presented  as  the  Inhibitory Concentration  50%  (IC 50 )  which  showed  the  concentration  of  isolate  which  inhibit  the Plasmodium or Vero cell line growth 50%. The IC 50 value was determined by probit analysis. The selectivity of isolate was determined by calculating the ratio of the cytotoxicity (IC 50 on Vero cell line) with the antiplasmodial activity (IC 50 on Plasmodium ). The results showed that isolate 4 and 5 showed high antiplasmodial activity with IC 50 value 2.21-19.02, 13.54-
64.73 µg/mL respectively. The cytotoxic/antiplasmodial ratio indicates that isolate 4 and 5 have also high selectivity with value 11.74-68.75 for isolate 4, and 66.01-316.51 for isolate 5. For conclusion, the isolate 4 and 4 showed the high aniplasmodial activity with the high selectivity.
Keyword : Eurycoma longifolia , antiplasmodial activity, citotoxicity, in vitro
PENDAHULUAN Akar pasak bumi ( Eurycoma longifolia )  merupakan  salah  satu  tanaman yang          digunakan      secara       tradisional sebagai         antimalaria        di         Indonesia (Mardisiswojo     &    Radjakmangunsudarso, 1975; Syamsuhidayat, 1997). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak air pasak    bumi    mempunyai    aktivitas antiplasmodium yang kuat secara in  vitro
pada      kultur Plasmodium    falciparum strain      FCR-3  dan  D10  (Mustofa  & Qomariah,  2004).  Penelitian in  vivo pada mencit  yang  diinfeksi Plasmodium  berghei juga menunjukkan bahwa akar pasak bumi mempunyai aktivitas antiplasmodium (Mustofa & Sholikhah, 2007). Penelitian mengenai aktivitas antimalaria akar pasak bumi juga dilakukan di  negara  lain.  Ang et  al .,  (1995)  berhasil mengisolasi kuasinoid dari akar pasak bumi yang  tumbuh  di  Malaysia,  yaitu  13  ,18- dihidroeurikumanol,  eurikumanol-2-O-  -
D-glucopyranoside, eurikumanol dan eurikomanon. Jiwajinda et al., (2001) telah berhasil      mengisolasi     kandungan    aktif akar    pasak      bumi     yang    berasal     dari Thailand  dan  membuktikan  aktivitas antiplasmodiumnya.       Kandungan      aktif dari           akar        pasak       bumi      tersebut adalah beberapa kuasinoid yaitu longilakton, dehydrolongilakton, 11- dehidroklaineanon,15  hidroksiklaineanon , 14, 15  -dihidroksiklaineanon dan 15  -O- asetil-14-hidroksiklaineanon.
Penelitian Ridzuan et  al., (2007)  di  Malaysia  juga menunjukkan  bahwa  kombinasi  ekstrak terstandar  akar  pasak  bumi  dengan artemisinin merupakan kandidat antimalaria yang poten baik yang diberikan secara oral maupun sub kutan. Meskipun  pasak  bumi  ( E.  longifolia ) telah  diketahui  terbukti  mempunyai aktivitas  antiplasmodium  baik  secara in vitro maupun in  vivo pada  hewan  coba, belum diketahui isolat manakah yang aktif sebagai  antiplasmodium.    Oleh  karena  itu, penelitian  ini  dilakukan  untuk  menguji aktivitas antiplasmodium dan sitotoksisitas 5  isolat  yang  diisolasi  dari  fraksi  metanol akar pasak bumi.

## METODOLOGI

## Bahan
Bahan uji akar pasak bumi diperoleh dari  Kalimantan  Selatan.  Bahan  yang digunakan untuk uji aktivitas antiplasmodium in  vitro adalah P. falciparum strain  FCR-3  dan  strain  D-10 yang  diperoleh  dari  laboratorium Eijkman
Institute  for  Molecular Biology ,  Jakarta. Media  tumbuh  RPMI  1640,    NaHCO 3 ,   dan D-sorbitol  dari  Sigma-Aldrich  Inc.,  USA. Serum  dan  eritrosit  manusia  (Gol  O) diambil  dari  sukarelawan  sehat  setelah menandatangani informed  consent .  HEPES
(N-[2-hidroksietil] piperazin-N-[2-asam etansulfonat],  dan  kertas  saring  0,2  m (Whatman) berasal dari Sigma Chem. Co. st. Lois  USA.  Dimetilsulfoksida  (DMSO), Giemsa,  minyak  imersi  berasal  dari  Merck (Germany).    Gentamisin  dari  Indofarma (Indonesia). Bahan  yang  digunakan  untuk  uji sitotoksisitas pada sel Vero adalah sel Vero yang diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Universitas  Gadjah  Mada,  Yogyakarta. Media tumbuh M199, Phospat Buffer Saline , Fetal  Bovine Serum, penisilin-streptomisin, dan fungizon berasal dari Gibco (Auckland). HEPES    berasal    dari   Chem.   Co.   st.   Lois
USA.   NaHCO 3 berasal    dari   Sigma   Chem. Co.      st.    Lois       USA.     Sodium      Dodesil Sulfat  (SDS),  3-[4,5-dimetiltiazol-2il]-2,5- difeniltetrazolium bromida (MTT), dan HCl berasal dari Merck, Germany.
Alat Alat-alat  yang  digunakan  untuk  uji aktivitas  antiplasmodium in  vitro adalah laminar air flow (ESCO), tissue culture flask 50mL (Nunclon TM ), microplate 96 sumuran (Nunclon TM ), tabung berheparin (Vacuette), disposable conical tubes (Nunc TM ), inkubator  CO 2 (Newbrunswick  Scientific Innova), sentrifus (Eppendorf), microscope slides ,  mikroskop  (Zeiss), filter 0,22 m (Achrodisc),  pipet  mikro  (Gilson),  pipet Pasteur,  pipet  ukur, candle  jar ,  dan waterbath (Radnoti).
Alat-alat  yang  digunakan  untuk  uji sitotoksisitas pada sel Vero adalah laminar air flow (ESCO), tissue  culture  flask 50  mL (Nunclon TM ), microplate 96  sumuran (Nunclon TM ), disposable  conical  tubes (Nunc TM ),  inkubator  CO 2 (Newbrunswick
Scientific  Innova),  sentrifus  (Eppendorf), haemocytometer , inverted microscope (Zeiss), filter 0,22 m  (Achrodisc),  pipet mikro  (Gilson),  pipet  Pasteur,  pipet  ukur, waterbath (Tecam®), cell  harvester
(Skatron), Liquid  Scintilation  Analizer (di BATAN, Babarsari, Yogyakarta), dan ELISA Reader.

## Cara Penelitian Isolasi Akar Pasak Bumi
Isolasi  akar  pasak  bumi  dilakukan menurut  Bedir et  al .,  (2003).  Akar  Pasak bumi  diserut  dan  dikeringkan,  selanjutnya dibuat  serbuk.  Serbuk  ditambahkan akuades, dimaserasi dan disaring sehingga didapatkan  ampas  dan  filtrat.  Ampas ditambah  kloroform,  dimaserasi,  disaring, dan  dipekatkan  sehingga  diperoleh  fraksi kloroform.  Filtrat  dipekatkan,  kemudian ditambahkan metanol, sehingga didapatkan fraksi  larut  metanol  (dipekatkan,  disebut sebagai  fraksi  metanol)  dan  fraksi  tidak larut  metanol.  Isolat  1-5  diperoleh  dari fraksi metanol. Serbuk + akuades, maserasi, disaring ampas Filtrat larut metanol, dipekatkan (fraksi metanol) tidak larut metanol, dipekatkan (fraksi air)
larut kloroform, dipekatkan (fraksi kloroform)
ampas
+ kloroform, maserasi, disaring dipekatkan, ditambah metanol
Isolat 1 Isolat 3 Isolat 5 Isolat 2 Isolat 4 Gambar 1. Skema fraksinasi dan isolasi akar pasak bumi
Uji  aktivitas  antiplasmodium  pada kultur Plasmodium falciparum in vitro
Uji aktivitas antiplasmodium in vitro dilakukan  pada  kultur P. falciparum strain FCR-3  dan  strain  D10  menggunakan metode  mikroskopis.  Sebanyak  100  L medium  RPMI  yang    yang  mengandung P.
falciparum pada  stadium  cincin  dengan parasitemia  0,5-1%  (hematokrit  1%) dimasukkan  ke  dalam  plat  96  sumuran. Selanjutnya sebanyak 100  L medium yang mengandung  fraksi  atau  isolat  akar  pasak bumi pada berbagai peringkat konsentrasi ditambahkan  pada  kultur.  Kemudian diinkubasikan  selama  24  dan  72  jam. Pertumbuhan Plasmodium ditentukan berdasarkan  nilai  parasitemia  yang dihitung  dengan  membuat  sediaan  apus tipis  yang  diwarnai  dengan  Giemsa  5%. Sebagai kontrol digunakan kultur Plasmodium tanpa bahan uji  dan dianggap mempunyai pertumbuhan 100%. Aktivitas antiplasmodium  dinyatakan  sebagai  IC 50 ( Inhibitory  Concentration 50% ) yang menyatakan  konsentrasi  yang  diperlukan untuk menghambat pertumbuhan Plasmodium sebesar 50%, dihitung dengan analisis probit.
Uji sitotoksitas pada sel Vero in vitro Uji  sitotoksisitas in  vitro dilakukan menurut  metode MTT  assay menurut Hughes & Mehmet (2003). Kultur sel Vero sebanyak 100  L didistribusikan ke dalam plat  96  sumuran  (2  x  10 4 sel  untuk setiap sumuran),  dan  diinkubasikan  selama  24 jam. Selanjutnya ditambahkan 100  L fraksi atau  isolat  pada  berbagai  konsentrasi secara triplikat. Kultur sel yang mengandung  fraksi atau isolat  selanjutnya diinkubasikan  selama  24  dan  72  jam.
Kemudian  media  dibuang,  diganti  media baru  sebanyak  100  µL  dan  10  µL  MTT. Selanjutnya  diinkubasikan  selama  4  jam, dan   reaksi  dihentikan   dengan   SDS   10% dalam  0,01N  HCl.  Sel  diinkubasikan  lagi selama  24  jam  dan  dibaca  dengan ELISA
Reader . Pertumbuhan sel dihitung berdasarkan  jumlah  sel  yang  hidup,  yang
dihitung  dengan  kurva  standar.    Sebagai kontrol  digunakan  kultur  sel  tanpa  bahan uji  dan  dianggap  memiliki  pertumbuhan 100%.  Sitotoksisitas  dinyatakan  sebagai IC 50 (konsentrasi  yang  diperlukan  untuk menghambat  pertumbuhan  sel  sebesar 50%) yang dihitung dengan analisi probit. Tingkat  selektivitas  isolat  uji  dinyatakan sebagai indeks selektivitas yang merupakan rasio  sitotoksisitas  (nilai  IC 50 pada  sel normal)  dengan  aktivitas  antiplasmodium in vitro (IC 50 pada Plasmodium ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Uji  aktivitas  antiplasmodium in  vitro , sitotoksisitas in  vitro ,  dan  indeks selektivitas  fraksi  air,  metanol,  dan kloroform akar pasak bumi
Telah berhasil  difraksinasi  3  macam fraksi  akar  pasak  bumi,  yaitu  fraksi  air, fraksi metanol, dan fraksi kloroform.  Pada inkubasi  24  jam,  kultur Plasmodium falciparum yang  diberi  fraksi  air,  metanol, dan  kloroform  akar  pasak  bumi,  semakin besar konsentrasi semakin besar persentase  penghambatannya.  Terlihat bahwa fraksi metanol mempunyai aktivitas penghambatan  yang  paling  besar.  Pada inkubasi  72  jam,  kultur Plasmodium falciparum yang  diberi  fraksi  air,  metanol, dan  kloroform  akar  pasak  bumi,  semakin besar konsentrasi semakin besar persentase penghambatannya. Pada inkubasi  72  jam  ini  terlihat  bahwa  fraksi metanol juga mempunyai aktivitas penghambatan yang paling besar (Tabel I). Hasil  uji  sitotoksisitas  pada  sel  Vero dengan waktu inkubasi 24 jam menunjukkan  bahwa  fraksi  metanol  dan kloroform  akar  pasak  bumi  menunjukkan sitotoksisitas.    Kultur sel  Vero  yang  diberi fraksi air, sampai konsentrasi terbesar yang diberikan (2000 µg/mL) tidak menunjukkan sitotoksisitas.  Hal yang sama terjadi pada uji sitotoksisitas pada sel Vero dengan waktu inkubasi 72 jam (Tabel I). Hasil perhitungan indeks selektivitas yang merupakan rasio antara sitotoksisitas
(nilai  IC 50 pada  sel  Vero)  dengan  aktivitas antiplasmodium in  vitro (nilai  IC 50 pada Plasmodium )  menunjukkan  bahwa  di antara  ketiga  fraksi  yang  diuji,  fraksi metanol  menunjukkan  indeks  selektivitas yang paling besar pada kedua macam waktu inkubasi. Indeks selektivitas fraksi air tidak dapat diketahui dengan pasti, karena pada uji  sitotoksisitas  hanya  dapat  diketahui bahwa  sitotoksisitas  (nilai  IC 50 )  fraksi  air lebih  dari  2000  µg/mL.  Nilai  2000 µg/mLmerupakan  kadar  tertinggi  yang diujikan  yang  pada  penelitian  ini,  yang secara teknis masih dapat diberikan  (Tabel I).
Aktivitas  antiplasmodium in  vitro , sitotoksisitas in  vitro ,  dan  indeks selektivitas isolat akar pasak bumi Hasil penelitian menunjukkan bahwa di  antara  ketiga  macam  fraksi  yaitu  fraksi air, metanol, dan kloroform, fraksi metanol mempunyai aktivitas antiplasmodium yang paling  besar  dengan  indeks  selektivitas yang  paling  tinggi.  Oleh  karena  itu,  isolasi senyawa  aktif  dilanjutkan  dari  fraksi metanol.
Isolasi dari fraksi metanol akar pasak bumi didapatkan 5 isolat yang selanjutnya disebut  sebagai  isolat  1,  2,  3,  4,  dan  5. Kelima   isolat     diuji    aktivitasnya   sebagai
antiplasmodium secara in vitro , tidak hanya pada P. falciparum strain FCR-3, namun juga diujikan  pada  strain  D-10.    Aktivitas antiplasmodium  pada P.  falciparum strain FCR-3  (IC 50 ),  sitotoksisitas  (IC 50 ) in  vitro pada  sel  Vero,  dan  indeks  sitotoksisitas kelima  macam  isolat  akar  pasak  bumi setelah inkubasi 24 jam dan 72 jam  (Tabel II).  Di  antara  kelima  isolat,  isolat  4 menunjukkan  aktivitas  antiplasmodium yang  paling  tinggi  yang  yang  ditunjukkan dengan  nilai  IC 50 rendah,  baik  pada  waktu inkubasi 24 jam maupun 72 jam. Namun di antara kelima isolat, isolat 5 menunjukkan indeks  selektivitas  paling  tinggi  baik  pada waktu  inkubasi  24  jam  maupun  72  jam, meskipun  aktivitasnya  lebih  rendah dibandingkan isolat 4.
Aktivitas  antiplasmodium  pada P. falciparum strain  D10  (IC 50 ),  sitotoksisitas (IC 50 ) in  vitro pada  sel  Vero,  dan  indeks sitotoksisitas  kelima  macam  isolat  akar pasak bumi setelah inkubasi 24 jam dan 72 jam  (Tabel  III).  Seperti  halnya  uji  pada P. falciparum strain  FCR-3,  di  antara  kelima isolat,  isolat  4  menunjukkan  aktivitas antiplasmodium  yang  paling  tinggi  yang yang ditunjukkan dengan nilai IC 50 rendah, baik pada waktu inkubasi 24 jam maupun 72 jam. Namun di antara kelima isolat, isolat 5   menunjukkan  indeks   selektivitas  paling
Tabel I. Aktivitas antiplasmodium (nilai IC 50 ) pada Plasmodium falciparum strain FCR-3, sitotoksisitas in vitro (nilai IC 50 ) pada sel Vero dan indeks selektivitas fraksi air, metanol, dan kloroform akar pasak bumi pada inkubasi 24 dan 72 jam.
Bahan uji Aktivitas antiplasmodium (nilai IC 50, µg/mL) Sitotoksisitas (nilai IC 50, µg/mL) Indeks selektivitas a 24 jam 72 jam 24 jam 72 jam 24 jam 72 jam Fraksi air 469,52 + 56,21 656,29 + 140,32 >2000 >2000 >4,3 >3,15 Fraksi metanol 7,37 + 0,20 1,36 + 0,03 562,34 + 172,49 3636,78 + 298,92 76,30 + 2,15 2658,80 + 62,53 Fraksi kloroform 2,64 + 0,17 24,63 + 1,57 199,61 + 25,94 317,26 + 39,34 75,69 + 4,87 12,91 + 0,84 a Rasio antara nilai IC 50 pada sel Vero: nilai IC 50 pada Plasmodium falciparum
tinggi  baik  pada  waktu  inkubasi  24  jam maupun  72  jam,  meskipun  aktivitasnya lebih rendah dibandingkan isolat 4.
Pembahasan
Aktivitas  antiplasmodium in  vitro , sitotoksisitas in  vitro ,  dan  indeks selektivitas  fraksi  air,  metanol,  dan kloroform akar pasak bumi
Menurut  Gessler et  al., (1994), ekstrak tanaman yang mempunyai nilai IC 50
( Inhibitory  Concentration  50% ),  yaitu konsentrasi  yang  dapat  menghambat pertumbuhan Plasmodium sebesar  50%  < 10 µg/mL menunjukkan aktivitas antiplasmodium in  vitro yang  sangat  kuat, nilai  IC 50 10-49  µg/mL  menunjukkan aktivitas  antiplasmodium in  vitro sedang, sedangkan  nilai IC 50 >  50  µg/mL menunjukkan  aktivitas  antiplasmodial in vitro lemah.  Pada  penelitian  ini,  nilai IC 50 fraksi metanol lebih rendah  dari  10  µg/mL
Tabel II. Aktivitas antiplasmodium (nilai IC 50 ) pada Plasmodium falciparum strain FCR- 3, sitotoksisitas in vitro (nilai IC 50 ) pada sel Vero dan indeks selektivitas isolate 1,2,3,4 dan 5 akar pasak bumi pada inkubasi 24 dan 72 jam.
Isolat Aktivitas antiplasmodium (nilai IC 50, µg/mL) Sitotoksisitas (nilai IC 50, µg/mL) Indeks selektivitas a 24 jam 72 jam 24 jam 72 jam 24 jam 72 jam 1 178,88 + 14,26 24,27 + 1,45 695.68 + 34.55 191.86 + 116.07 3,88 7,90 2 64,13 + 7,86 13,31 + 1,10 141,33 + 55,6 107.37 + 4.79 2,20 8,06 3 117,87 + 9,51 808,82 + 26,80 223,68 + 53,82 55.99 + 28.17 1,89 0,06 4 3,52 + 0,02 2,10 + 0,07 223,67 + 81,23 94.01 + 8.30 63,54 44,76 5 13,54 + 1,73 17,39 + 0,19 4273.46 + 351.07 1151.08 + 122.67 315,61 66,19 a Rasio antara nilai IC 50 pada sel Vero: nilai IC 50 pada Plasmodium falciparum
Tabel III. Aktivitas antiplasmodium pada P. falciparum strain D10 (IC 50 ), sitotoksisitas (IC 50 ) in vitro , dan indeks sitotoksisitas isolat 1,2,3,4, dan 5 akar pasak bumi pada inkubasi 24 dan 72 jam.
Isolat Aktivitas antiplasmodium (nilai IC 50, µg/mL) Sitotoksisitas (nilai IC 50, µg/mL) Indeks Selektivitas a 24 jam 72 jam 24 jam 72 jam 24 jam 72 jam 1 36,54 + 4,22 62,15 + 2,35 695,68 + 34,55 191,86 + 116,07 19,03 3,08 2 41,23 + 3,12 26,54 + 2.43 141,33 + 55,6 107,37 + 4,79 3,42 4,04 3 721,24 + 43,74 657,44 + 34,21 223,68 + 53,82 55,99 + 28,17 0,31 0,08 4 19,02 + 0,20 1,031 + 0,08 223,67 + 81,23 94,01 + 8,30 11,76 91,18 5 63,73 + 4,73 16,68 + 0,11 4273,46 + 351,07 1151,08 + 122,67 66,01 69,00
a Rasio antara nilai IC 50 pada P. falciparum : IC 50 pada sel Vero
baik pada inkubasi 24 jam maupun 72 jam yang  menunjukkan  aktivitas  sangat  kuat. Fraksi kloroform mempunyai nilai IC 50 lebih rendah  dari  10  µg/mL  pada  inkubasi  24 jam,  tetapi  pada  inkubasi  72  jam menunjukkan  nilai  24,63  +  1,57  yang menunjukkan  aktivitas  sedang.    Fraksi  air mempunyai nilai IC 50 yang besar (469,52 + 56,21  µg/mL  pada  inkubasi  24  jam,  dan 656,29  +  140,32  µg/mL  pada  inkubasi  72 jam  yang  menunjukkan  bahwa  farksi  air akar pasak bumi tidak mempunyai aktivitas antiplasmodium.
Hasil  uji  sitotoksisitas  menunjukkan bahwa  nilai  IC 50 terbesar  adalah  fraksi  air (>2000 µg/mL) karena sampai konsentrasi tertinggi  yang  diberikan  (2000  µg/mL) tidak  menunjukkan  sitotoksisitas  pada  sel Vero  yang  merupakan  sel  normal  yang digunakan  pada  penelitian  ini.  Meskipun tidak  toksik,  fraksi  air  tidak  mempunyai aktivitas  antiplasmodium,  sehingga  fraksi air  tidak  digunakan untuk  penelitian  lebih lanjut.  Fraksi  metanol  yang  mempunyai aktivitas  antiplasmodium  sangat  kuat ternyata  juga  menunjukkan  sitotoksisitas pada  sel  Vero.  Namun,  indeks  selektivitas menunjukkan    bahwa   diantara     3   fraksi yang diuji,  fraksi metanol mempunyai nilai indeks  sitotoksisitas  yang  paling  besar (76,30     +    2,15     pada    inkubasi   24   jam, dan 2658,80 + 62,53 pada inkubasi 72 jam) yang        menunjukkan        bahwa         fraksi metanol  akar  pasak  bumi  bersifat  tidak toksik.
Hasil  penelitian  mengenai  aktivitas antiplasmodium in  vitro yang  ditunjukkan oleh  fraksi metanol  akar pasak  bumi  yang berasal  dari  Kalimantan  ini  sesuai  dengan hasil  penelitian  yang  menyebutkan  bahwa kuasinoid eurycomanone dan eurycomanol yang diisolasi dari E. longifolia mempunyai aktivitas  antiplasmodium in  vitro (Chan et al ., 1986). Eurycomanol, eurycomanol 2-O- β -
D-glucopiranoside, dan 13β, 18 - dihydroeurycomanol yang  diisolasi  dari E. longifolia yang  berasal  dari  Malaysia mempunyai aktivitas antiplasmodium terhadap isolat P. falciparum dari penderita
resisten  klorokuin  (Ang et  al. ,  1995). Senyawa  dari E.  longifolia yang  bersifat sitotoksik  dan  mempunyai  aktivitas antimalaria  adalah  4  alkaloida  yaitu: 9- methoxyxantine-6-1,  9-methoxyxantine-6-1- N- Oxide, 9-hydroxyxantine-6-1, 9- hydroxyxantine-6-1-N-Oxide, dan 1 kuasinoid yaitu eurycomanone (Kardono et al., 1998). Kuasinoid yang berhasil diisolasi dari E. longifolia yang berasal dari Thailand ( longigactone,  11- dehydroklaineanone,15β - hydroxyklaineanone, 14, 15 β - dihydroxyklaineanone, dan 15β -O-acetyl-14- hydroxyklaineanone )  mempunyai  aktivitas antiplasmodium in  vitro terhadap P. falciparum strain  resisten  klorokuin  W2 (Jiwajinda et al ., 2002).
Aktivitas  antiplasmodium in  vitro , sitotoksisitas in  vitro ,  dan  indeks selektivitas isolat akar pasak bumi Isolasi  yang  dilakukan  terhadap fraksi  metanol  akar  pasak  bumi  yang mempunyai aktivitas antiplasmodium terbesar  dan  tidak  toksik,  didapatkan  5 isolat,  yaitu  isolat  1,2,3,4  dan  5.  Kelima isolat  diujikan  pada  2  macam  strain P. falciparum yaitu  strain  FCR-3dan  strain D10. Di  antara  kelima  isolat  akar  pasak bumi, ternyata isolat 4 dengan menunjukkan  aktivitas  antiplasmodium yang  kuat  dengan  nilai  IC 50 <10  µg/mL terhadap P. falciparum strain FCR-3 in vitro baik pada waktu inkubasi 24 jam maupun 72  jam.  Isolat  5  menunjukkan  aktivitas antiplasmodium sedang dengan nilai IC 50 di antara  10 – 49  µg/mL  baik  pada  waktu inkubasi  24  jam  maupun  72  jam.  Isolat  4 dan  5  menunjukkan  indeks  selektivitas yang tinggi yang menunjukkan selektivitasnya  sebagai  antiplasmodium terhadap P. falciparum strain FCR-3. Isolat 1 menunjukkan  aktivitas  antiplasmodium sedang hanya pada inkubasi 72 jam, isolat 2 menunjukkan  aktivitas  sedang  pada inkubasi  72  jam,  dan  isolat  3  tidak menunjukkan  adanya  aktivitas  sebagai antiplasmodium.
Uji aktivitas antiplasmodium pada P.
falciparum strain D10 menunjukkan bahwa di  antara  kelima  isolat  akar  pasak  bumi, isolat 4 pada inkubasi 24 jam menunjukkan aktivitas anti plasmodium yang sedang, dan pada  inkubasi  72  jam  menunjukkan aktivitas anti plasmodium yang kuat.  Isolat 5  pada  inkubasi  24  jam  menunjukkan aktivitas  antiplasmodium  yang  lemah,  dan pada  inkubasi  72  jam  menunjukkan aktivitas  anti  plasmodium  yang  sedang. Isolat  4  dan  5  menunjukkan  indeks selektivitas yang tinggi yang menunjukkan bahwa  isolat  4  dan  5  menunjukkan selektivitasnya  sebagai  antiplasmodium terhadap P. falciparum strain D10. Isolat 1 mempunyai  aktivitas  lemah  pada  inkubasi 24 jam, dan menunjukkan aktivitas sedang pada  inkubasi  72  jam. Isolat  2 menunjukkan  aktivitas  sedang  baik  pada inkubasi  24  jam  maupun  72  jam.  Isolat  3 tidak  menunjukkan  aktivitas  sebagai antiplasmodium  pada P.  falciparum strain D10.
KESIMPULAN Di antara kelima isolat yang diisolasi dari fraksi metanol akar pasak bumi, isolat 4 dan 5 mempunyai aktivitas antiplasmodium  yang  kuat  baik  pada P
falciparum strain FCR-3 maupun strain D10, dengan indeks selektivitas yang tinggi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  ucapkan  kepada
Badan Litbangkes Republik Indonesia yang telah memberikan dana untuk penelitian ini dan  kepada  Lembaga  Eijkman  Indonesia yang telah mengorganisasi dan membimbing jalannya penelitian ini. DAFTAR PUSTAKA Ang, H. H., Chan, K. L., & Mak, J. W. 1995. In vitro antimalarial activity of quassinoids from Eurycoma longifolia against Malaysian chloroquine- resistant    Plasmodium  falciparum isolates. Planta Med . 61: 177-178. Bedir, E., Abou-Gazar, H., Ngwendson, J. N.,
&  Khan,  I.  A.  2003.  Eurycomaside:  A new  quassinoid  from  the  roots  of Eurycoma  longifolia.  Chem.  Pharm.
Bull . 51(11): 1301-1303.
Chan,  K.L.,  O’Neill,  M.J.,  Philippson ,  J.D., Warhurst,  D.C.,  1986.  Plants  as sources of antimalarial drugs. Part 3 Eurycoma  longifolia .  Planta  Medica 52: 105-107. Gessler,  M.C.,  Nkunya,  M.H.N.,  Mwasumbi, L.B.,  Heinrich,  M.,  Tonner,  M.  1994. Screening  Tanzanian  Medical  Plants for  Antimalarial  Activity.  Acta-Trop. 55:65-67. Hughes,  D.,  &  Mehmet,  H.  2003.  Cell Proliferation  &  Apoptosis,  BIOS Scientific Publishers Ltd, Oxford, 19- 20. Jiwadinda, S., Santisopasri, V., Murakami, A., Hirai,  N.,  &  Ohigashi,  H.  2001. Quassinoids from Eurycoma longifolia as plant growth inhibitors. Phytochemistry 58:956-962. Jiwadinda, S., Santisopasri, V., Murakami, A., Kawanaka, M., Kawanaka, H., Gasquet, M., Eilas, R., Balansard, G., & Ohigashi, H.  2002.  In  vitro  anti-tumor promoting and anti-parasitic activities  of  the  quassinoids  from Eurycoma longifolia , a medicinal plant in  Southeast  Asia. J.  Etnopmarmacol .
82: 55-58.
Mardisiswojo,  S.  &  Radjakmangunsudarso. 1975. Cabe  puyang  warisan  nenek moyang. Karya Wreda, Jakarta.
Mustofa  &  Sholikhah,  E.N.  2007.  Aktivitas antiplasmodium  in  vitro  dan  in  vivo fraksi  yang  diperoleh  dari  ekstrak metanol  pasak  bumi  (Eurycoma. Longifolia Jack) yang secara tradisional  digunakan  mengobati malaria  di  Kalimantan  Selatan. Majalah Obat Tradisional., 11: 25-30. Mustofa  &  Qamariah,  N.  2004.  In  vitro antiplasmodial activity and cytotoxicity of aqueous. methanol and chloroform extracts akar  pasak  bumi
(Eurycoma longifolia Jack) traditionally used to treat malaria in South  Kalimantan.  Medika,  3:  147- 152. Ridzuan, M.A.M., Sow, A, Rain A., N., Ilham A., M.,  Zakiah,  I.  2007.  Eurycoma longifolia extract-artemisinin combination: parasitemia suppression  of  Plasmodium  yoelii- infected mice. Trop Biomed, 24(1):111-8. Syamsuhidayat,  S.  S.  1997. Inventarisasi tanaman  obat  Indonesia  IV .  Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan.