Peptida Bioaktif, Hasil Sampingan, Produk Perikanan
Terakreditasi Nasional (Sinta 3) April 2024, 12(1): 19–26 SK Ditjen Risbang Kemristekdikti https://doi.org/10.35800/mthp.12.1.2024.52202 No: 225/E/KPT/2022 Available online https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jmthp/index

## POTENSI PEPTIDA BIOAKTIF DARI HASIL SAMPING PERIKANAN SEBAGAI ANTIHIPERTENSI DAN ANTIOKSIDAN – REVIEW
( Potential of Bioactive Peptides from Fish By-Product as Antihypertensive and Antioxidant – A Review )
Charles Pernanda Iduantoro, Ita Zuraida, Septiana Sulistiawati, Andi Mismawati, Bagus Fajar Pamungkas *
Program Studi Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Mulawarman, Samarinda, *Penulis korespondensi: fajar.gus@gmail.com (Diterima 02-11-2023; Direvisi 30-04-2024; Dipublikasi 30-05-2024)

## ABSTRACT
Catching  and  fishery  processing  produces  a  variety  of  by-products  that  can  affect  the  economy  and  cause environmental problems. Fish by-products such as heads, skin, bones, fins, innards, blood and scales can reach more than 55-70%. Fish by-products have the potential to be processed into value added products. Fish by-products can be a source of additional compounds because they are rich in protein, peptides and amino acids. Fish protein hydrolyzate is obtained from fish by-products which are hydrolyzed and then produce peptides and amino acids with a mixture of small protein molecules. The hydrolysis process released the active site on the peptide previously encrypted in the native structure of the protein and produces a biomolecule called Bioactive Peptide (BP). This review aims to  explain fish by-products as a source of peptides, the methods used to  obtain BP from  fish by- products and the mechanisms of their biological activity as antihypertensive and antioxidant peptides.
Keywords : Amino acids, enzymatic hydrolysis, fish protein, protein hydrolysate
Penangkapan dan pengolahan hasil perikanan menghasilkan beragam hasil samping yang dapat mempengaruhi perekonomian serta menimbulkan masalah terhadap lingkungan. Hasil samping perikanan seperti kepala, kulit, tulang, sirip, jeroan, darah, dan sisik dapat mencapai lebih dari 55-70%. Hasil samping perikanan memiliki potensi untuk diolah menjadi produk yang bermanfaat.  Produk hasil samping perikanan dapat menjadi sumber senyawa tambahan karena kaya akan kandungan protein, peptida, dan asam amino. Hidrolisat protein ikan diperoleh dari hasil  samping  perikanan  yang  dihidrolisis  dan  selanjutnya  menghasilkan  peptida  dan  asam  amino  dengan campuran dari potongan-potongan protein berukuran kecil. Proses hidrolisis membuka sisi aktif pada peptida yang sebelumnya  terenskripsi  didalam  struktur  primer  protein  dan  menghasilkan  biomolekul  yang  disebut  Peptida Bioaktif (PB). Review ini bertujuan untuk menjelaskan mengenai hasil samping perikanan sebagai sumber peptida, metode yang digunakan untuk memperoleh PB dari hasil samping perikanan serta mekanisme aktivitas biologisnya sebagai peptida antihipertensi dan antioksidan.
Kata kunci : Asam amino, hidrolisis enzimatik, hidrolisis kimiawi, protein ikan

## PENDAHULUAN
Produk perikanan diketahui berperan sebagai komponen penting dalam menyeimbangkan pola makan  serta  gaya  hidup  sehat  dalam  beberapa  dekade  terakhir.  FAO  sebagai  organisasi  pangan  dan pertanian dunia menyatakan bahwa laju konsumsi ikan global mengalami peningkatan sebesar 3,1% tiap tahunnya dari tahun 1961 sampai dengan tahun 2017. Laju konsumsi ini lebih tinggi jika dibandingkan dengan konsumsi pangan protein dari hewan lain seperti sapi, babi, unggas dan produk susu dengan laju konsumsi  tahunan  sebesar  2,1%  pertahunnya.  Peningkatan  jumlah  konsumsi  ini  disebabkan  oleh pertumbuhan populasi serta meningkatnya kesadaran mengenai manfaat kesehatan dari organisme laut. Meningkatnya jumlah konsumsi akan berpengaruh terhadap jumlah produksi yang akan meningkatkan hasil samping dari industri perikanan (Espinales et al., 2023; Pratama et al., 2023). Penangkapan dan pengolahan  hasil  perikanan  menghasilkan  beragam  hasil  samping  yang  dapat  mempengaruhi perekonomian  serta  menimbulkan  masalah  terhadap  lingkungan.  Hasil  samping  perikanan  seperti kepala, kulit, tulang, sirip, jeroan, darah, dan sisik dapat mencapai lebih dari 55-70% (Ramakrishnan et al., 2023; Ghalamara et al ., 2020; Zuraida dan Pamungkas, 2020; Pratama et al., 2023). Hasil samping ini umumnya dibuang begitu saja tanpa upaya pemulihan lebih lanjut. Beberapa upaya telah dilakukan dalam  menangani  masalah  ini  diantaranya  mengolahnya  menjadi  produk  bermanfaat  seperti  pupuk, pakan ternak, dan tepung ikan. Namun, produk-produk ini tidak secara langsung memulihkan nutrisi
penting  yang  terkandung  didalamnya  sehingga  memiliki  nilai  jual  yang  rendah  (Cheng et  al., 2023; Ramakrishnan et al., 2023; Yung Huang et al., 2018). Hasil samping perikanan merupakan bahan baku yang  kaya  akan  senyawa-senyawa,  seperti  kolagen,  gelatin,  dan  asam  lemak  tak  jenuh,  sehingga memiliki potensi untuk diolah menjadi produk yang bermanfaat (Vázquez et al ., 2023).  Produk hasil samping  perikanan  dapat  menjadi  sumber  senyawa  tambahan  karena  kaya  akan  kandungan  protein, peptida, dan asam amino (Ghalamara et al ., 2020).
Protein ikan mengandung susunan peptida yang terenkripsi di dalam struktur primernya. Peptida tersebut  memiliki  potensi  yang  bermanfaat  dalam  mengatur  sistem  kerja  metabolisme  yang  akan berpengaruh  terhadap  peningkatan  kesehatan  dan  pencegahan  penyakit.  Banyak  penelitian  telah membuktikan bahwa hidrolisis protein dan peptida dari sumber perikanan memiliki efek positif terhadap kesehatan manusia serta mampu mencegah penyakit kronis (Akbarian et al., 2022). Hidrolisat protein ikan telah terbukti menunjukan berbagai aktivitas biologis (Neves et al., 2017). Hidrolisat protein ikan diperoleh  dari  hasil  samping  perikanan  yang  dihidrolisis  dan  selanjutnya  menghasilkan  peptida  dan asam amino dengan campuran dari potongan-potongan protein berukuran kecil. Hidrolisat protein dari hasil  samping  perikanan  dapat  diperoleh  secara  enzimatis  dengan  menggunakan  enzim  proteolitik komersil murni atau dapat pula menggunakan bahan kimia dengan sifat asam atau basa (Ortizo et al ., 2023). Proses hidrolisis membuka sisi aktif pada peptida yang sebelumnya terenskripsi didalam struktur primer protein dan menghasilkan biomolekul yang disebut Peptida Bioaktif (PB). PB umumnya tersusun oleh 2-20 asam amino dengan berat molekul dibawah 6.000 Da. Struktur dan komposisi asam amino tersebut akan berpengaruh terhadap aktivitas biologisnya diantaranya sebagai penangkal radikal bebas serta sebagai penghambat pembetukan angiotensin-converting enzyme 2 (Galland et al ., 2022). Review ini bertujuan untuk mengulas beberapa penelitian sebelumnya yang membahas mengenai hasil samping perikanan  sebagai  sumber  peptida,  lebih  lanjut,  review  ini  akan  mengulas  pemilihan  metode  yang digunakan untuk memperoleh peptida bioaktif dari hasil samping perikanan serta mekanisme aktivitas biologisnya sebagai peptida antihipertensi dan antioksidan.

## HASIL SAMPING PERIKANAN SEBAGAI SUMBER PEPTIDA
Hasil  samping  perikanan  dapat  diartikan  sebagai  bagian  dari  ikan  yang  tidak  dimanfaatkan untuk dikonsumsi oleh manusia dan umumnya dibuang begitu saja tanpa penanganan khusus sehingga dapat berpengaruh negatif terhadap lingkungan.  Hasil samping dari industri perikanan  yang dibuang sebagai limbah bervariasi bergantung pada spesies ikan dan dapat mencapai sekitar 55-70% dari total produksi  tahunan.  Berdasarkan  data  statistik  Kementrian  Kelautan  dan  Perikanan  (2023)  volume produksi perikanan Indonesia pada tahun 2022 adalah sebesar 24,87 juta ton, dimana sekitar setengah dari jumlah produksi tersebut merupakan hasil samping. Hasil samping tersebut diantaranya sisa filet (otot ikan) yang mencapai 15%-20%, jeroan 12%-18%, tulang 9%-15%, kepala 9%-12%, sisik 5%, serta kulit dan sirip 1%-3% (Ramakrishnan et al., 2023; Ghalamara et al ., 2020). Hasil samping perikanan diketahui kaya akan kandungan protein (8% sampai dengan 35%) dan asam lemak tak jenuh (44%), sehingga memiliki potensi menjadi produk dengan nilai tambah ( value added product ). Kepala, mata, dan jeroan pada ikan kaya akan kandungan omega 3 dan dapat diekstrak menjadi minyak ikan. Kulit, tulang, dan sisik pada ikan merupakan sumber kolagen dan dapat menjadi sumber alternatif dari kolagen komersil yang umumnya menggunakan kulit sapi dan babi sebagai bahan dasar produksinya, dimana penggunaanya  bertentangan  dengan  beberapa  agama.  Hidrolisat  protein  ikan  merupakan  salah  satu pemanfaatan dari hasil samping perikanan yang saat ini telah banyak diteliti.  Hidrolisat protein ikan merupakan  campuran  dari  protein  yang  mengalami  pemotongan  selama  proses  hidrolisis  yang selanjutnya mengasilkan protein dengan rantai yang lebih pendek. Proses hidrolisis akan membuka sisi aktif yang sebelumnya terenskripsi di dalam struktur primernya kemudian menghasilkan peptida yang memiliki sifat bioaktif dan disebut dengan Peptida Bioaktif (PB). PB merupakan salah satu upaya yang dapat dilakukan untuk mengurangi pencemaran lingkungan yang disebabkan oleh industri perikanan. Protein yang bersumber dari hasil samping industri perikanan dapat menjadi sumber alternatif dari PB dikarenakan harganya yang lebih murah dibandingkan protein dari sumber pangan lainya seperti susu, telur, dan daging, namun tetap memiliki kandungan protein yang tinggi dan berkualitas (Espinales et al., 2023; Ghalamara et al., 2020; Tadesse et al., 2023; Sánchez et al., 2017).

## METODE EKSTRAKSI PEPTIDA AKTIF HASIL SAMPINGAN PERIKANAN Hidrolisis Kimiawi
Hidrolisis kimiawi menjadi metode yang digunakan oleh industri pada masa lalu dikarenakan harganya  yang  relatif  murah  dan  aplikasinya  yang  lebih  sederhana.  Namun,  metode  ini  memiliki keterbatasan  pada  bahan  pangan.  Proses  hidrolisis  kimiawi  cenderung  sulit  untuk  dikontrol  pada prosesnya dan hampir selalu menghasilkan produk dengan komposisi kimia dan sifat fungsional yang bervariasi. Hidrolisis protein dengan asam umumnya menggunakan asam klorida dan asam sulfat pada suhu yang dapat mencapai 138 ͦ C serta tekanan hingga 310 MPa. Proses hidrolisis dihentikan dengan menetralkan  pH  larutan  dan  selanjutnya  dilakukan  pengeringan.  Dikarenakan  penggunaan  suhu  dan tekanan yang tinggi, proses hidrolisis protein dengan asam akan menyebabkan menurunnya nilai nutrisi serta sifat fungsional yang ada pada produk. Hidrolisis protein dengan menggunakan bahan yang bersifat basa pada prosesnya menggunakan suhu yang lebih rendah jika dibandingkan dengan proses hidrolisis dengan asam yaitu pada suhu 54 ͦ C. Umumnya menggunakan kalsium, sodium, atau kalium hidroksida. Walaupun menggunakan suhu yang lebih rendah dibandingkan hidrolisis asam, proses hidrolisis dengan metode basa tetap memiliki efek negatif pada produk yang dihasilkan, seperti limbah yang beracun serta menurunkan sifat fungsional pada produk (Pratama et al., 2022; Kristinsson dan Rasco, 2000).

## Hidrolisis Biokimiawi
Hidrolisis  biokimiawi  dapat  dibagi  menjadi  dua  proses  yang  terdiri  dari  hidrolisis  secara autolisis  dan  hidrolisis  secara  enzimatik.  Autolisis  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  enzim proteolitik yang secara alami terdapat pada jeroan dan otot ikan sehingga tidak memerlukan penambahan enzim. Proses autolisis memerlukan suhu yang lebih rendah jika dibandingkan hidrolisis dengan metode asam yaitu berkisar antara 40 ͦ C sampai dengan 60 ͦ C namun menghasilkan produk dengan nilai nutrisi yang  lebih  baik.  Walaupun  demikian,  dikarenakan  prosesnya  menggunakan  enzim  proteolitik  alami yang ada pada tubuh ikan, menyebabkan produk yang diperoleh tidak konsisten, bergantung pada bagian tubuh, jenis ikan, serta musim ketika ikan tersebut dipanen (Pratama et al., 2022; Kristinsson dan Rasco, 2000). Hidrolisis secara enzimatik merupakan metode yang dapat lebih mudah untuk dikontrol sehingga dapat menghasilkan produk dengan hasil yang diinginkan. hidrolisis secara enzimatik dilakukan dengan cara  menambahkan  enzim  komersil  seperti  trypsin,  papain,  flavorzyme,  alcalase,  bromelain,  pepsin. Faktor utama yang mempengaruhi hasil akhir dari enzimatik hidrolisis adalah rasio enzim dan substrat, suhu, pH, waktu, derajat hidrolisis, serta penggunaan enzim. Pentingnya penggunaan enzim pada saat hidrolisis dikarenkan berbedanya spesfitas pada tiap enzim, hal ini akan berpengaruh terhadap ukuran dan komposisi dari peptida yang terhidrolisis yang selanjutnya mempengaruhi sifat aktif peptida sebagai BP (Peraza et al., 2020).

## POTENSI PEPTIDA BIOAKTIF HASIL SAMPINGAN PRODUK PERIKANAN
Hidrolisat protein merupakan peptida berukuran kecil yang tersusun oleh 2-20 asam amino yang diperoleh melalui proses hidrolisis secara enzimatik. Hidrolisis enzimatik akan menghasilkan peptida bioaktif  (PB).  PB  dapat  didefinisikan  sebagai  fragmen  protein  yang  khas  dan  memiliki  efek  positif terhadap tubuh yang berpengaruh terhadap kesehatan (Espinales et al., 2023; Sánchez dan Vázquez, 2017; Kouhdasht et al., 2021). PB yang diperoleh dari hidrolisat gelatin ikan telah banyak diteliti karena potensinya  dalam  pengobatan.  Hidrolisat  gelatin  ikan  diketahui  memiliki  kemampuan  sebagai pengangkal radikal bebas, penghambat pembetukan angiotensin-converting enzyme 2, serta memiliki kemampuan  sebagai  penghambat  pembentukan  bakteri.  Dibandingkan  dengan  obat  tradisional,  PB memiliki tingkat  efektivitas  yang lebih  tinggi  bahkan  pada  konsentrasi  yang  rendah, lebih  lanjut  PB memiliki aktivitas yang khusus menargetkan pada jaringan tubuh sehingga memperkecil efek samping pada  tubuh  (Kouhdasht et  al., 2021; Akbarian et  al., 2022).  Tabel  1  menunjukan  bioaktivitas  hasil samping perikanan dari beberapa penelitian terdahulu.

## Tabel 1. Bioaktivitas hasil samping perikanan yang dihidrolisis menggunakan protease komersil
Sumber peptida Protease Bioaktivitas Referensi Kulit ikan patin siam ( Pangasius sutchi ) Alcalase ACE-inhobitory Mahmoodani et al. (2012) Sisik ikan kadal ( Synodus macrops ) Neutrase ACE-inhibitory Chen et al. (2018) Mata ikan tuna ( Thunnus sp.) Papain Antioksidan Mutamimah et al. (2018) Sisik ikan bandeng ( Chanos chanos ) Alcalase, flavourzyme ACE-Inhibitory Yung Huang et al. (2018) Sisik ikan cakalang ( Katsuwonus pelamis ) Alcalase Antioksidan Qiu et al. (2019) Kulit ikan kobia ( Rachycentron canadum ) Protamex antihipertensi Hsin Lin et al. (2019) Sisik croacker bibir merah ( Pseudosciaena polyactis ) neutrase Antioksidan Yi Wang et al. (2020) Otot ikan monkfish ( Lophius litulon ) Pepsin+trypsin Antioksidan Meng Hu et al. (2020) Kulit ikan tuna sirip kuning ( Thunnus albacares ) Alcalase Antioksidan Nurilmala et al. (2020) Jeroan ikan trout pelangi ( Trigla spp.) Alcalase, amilase, pepsin, lipase Antioksidan ACE-inhibitory Vázquez et al. (2022)

## Antihipertensi
Hipertensi  memiliki  definisi  yang  luas,  bukan  hanya  menguraikan  mengenai  tekanan  darah, namun  berkaitan  juga  dengan  kelainan  pada  fungsi  dan  struktur  jantung  dan  pembuluh  darah  yang selanjutnya  mengakibatkan  kerusakan  pada  organ  target  (jantung,  ginjal,  otak,  pembuluh  darah,  dan organ lainnya) dan menyebabkan resiko kematian dini (Abachi et al., 2019). Angiotensin-Converting Enzyme (ACE) memiliki peran penting pada peningkatan tekanan darah dan hipertensi. Fungsi utama Angiotensin-Converting Enzyme (ACE) adalah mengubah hormon angiotensin I menjadi angiotensin II yang aktif dan mendegradasi bradykinin, yang menyebabkan penyempitan pembuluh darah sehingga meningkatkan  tekanan  darah.  ACE- inhibitory atau  penghambat  ACE  adalah  target  utama  dalam pencegahan dan pengobatan pada hipertensi. Mekanismenya berdasar pada penghambatan enzim ACE yang  mengubah  dekapeptida  angiotensin  I  tak  aktif  menjadi  oktapeptida  angiotensin  II.  Dengan menghambat  kerja  katalisis  pada  ACE,  hipertensi  dapat  dicegah  melalui  penurunan  tekanan  darah (Mahmoodani et al., 2012; Zheng et al. , 2022; Chen et al., 2018; Toldrá et al. , 2020).
Penghambat  ACE  adalah  bioaktivitas  yang  paling  banyak  diteliti  pada  peptida  bioaktif. Bioaktivitas dari hidrolisat protein dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya ukuran peptida, komposisi  dan  urutan  asam  amino,  penggunaan  enzim,  dan  derajat  hidrolisis  (Cheng et  al., 2023). Mahmoodani et al. (2012) menghidrolisis kulit dan tulang ikan patin siam dengan menggunakan enzim alcalase. Dari hasil penelitian yang dilakukan, diketahui nilai ACE- inhibitory tertinggi ada pada fraksi peptida dengan berat molekul kurang dari 1 kDa (3,2 µg/mL dan 1,3 µg/mL, berturut-turut). Lebih lanjut dijelaskan dalam penelitiannya bahwa peptida rantai pendek dengan berat molekul yang sangat rendah (< 1 kDa) memiliki kemampuan sebagai penghambat ACE yang sangat tinggi pada in vitro . Yung Huang et  al. (2018)  melakukan  ekstraksi  gelatin  dari  sisik  ikan  bandeng  dengan  preparasi  berbeda.  Hasil penelitian  yang  dilakukan  menunjukan  nilai  IC 50 dari  hidrolisat  gelatin  sisik  ikan  bandeng  yang dihidrolisis dengan kombinasi enzim alcalase dan flavourzyme lebih tinggi (472 ± 12 µg dan 547 ± 1 µg,  berturut-turut)  dibandingkan  hidrolisat  yang  dihidrolisis  hanya  dengan  menggunakan  enzim flavourzyme (762 ± 8 µg dan 592 ± 0 µg, berturut-turut). Hal ini kemungkinan disebabkan tingginya derajat hidrolisis, rendahnya berat molekul, serta lebih tingginya kadar asam amino hydropobic pada hidrolisat sisik ikan bandeng yang dihidrolisis menggunakan kombinasi enzim alcalase dan flavoursyme jika dibandingkan hidrolisat yang dihidrolisis menggunakan enzim flavourzyme. Neves et al. (2017) menyimpulkan  bahwa  penggunaan  kombinasi  enzim  dalam  proses  hidrolisis  akan  meningkatkan kemungkinan diperolehnya peptida dengan sifat ACE- inhibitory. Namun, hasil berbeda diperoleh oleh Vázquez et al. (2022), dimana pada penelitiannya melakukan hidrolisis dengan kombinasi dan tanpa kombinasi  enzim.  Hasil  penelitian menunjukan  nilai  IC 50 hidrolisat  sampel  jeroan ikan  trout  pelangi yang  dihidrolisis  dengan  menggunakan  enzim  alcalase  (1,38  ±  0,03  mg/mL)  lebih  tinggi  jika dibandingkan sampel jeroan ikan trout pelangi yang dihidrolisis menggunakan kombinasi enzim (1,49 ±  0,05 mg/mL).  Banyak  penelitian  menjelaskan  bahwa  kehadiran  asam  amino hydrophobic dalam
urutannya pada peptida bioaktif dapat menjadi indikator yang baik sebagai penghambat ACE. Kehadiran asam  amino  seperti  prolin,  penilalanin,  alanin,  triptopan,  atau  tirosin  pada  posisi  yang  mendekati terminal C menjadi posisi yang sangat sesuai untuk mengikat sisi katalitik dari ACE, lebih lanjut, peptida dengan  sifat  antihipertensi  tersusun  oleh  asam  amino  dengan muatan  positif  pada  posisi terminal  C, asam  amino  tersebut  adalah  lisin  dan  arginin  (Toldrá et  al. ,  2020).  Chen et  al. (2018)  melakukan hidrolisis gelatin sisik ikan kadal dengan menggunakan 7 jenis protease untuk mengetahui penggunaan protease terbaik sebagai penghambat ACE. Diperoleh hasil terbaik ada pada protease neutrase sehingga digunakan  untuk  penelitian  lanjutan.  Hasil  purifikasi  peptida  pada  hidrolisat  gelatin  sisik  ikan  kadal diperoleh urutan asam amino adalah Ala-Gly-Pro-Pro-Gly-Ser-Asp-Gly-Gln-Pro-Gly-Ala-Lys dengan nilai  penghambat ACE  IC 50 =  420  ±  20  µM.  Nilai  tersebut  lebih  rendah  jika  dibandingkan  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Hsin  Lin et  al. (2019),  yang  melakukan  preparasi  dan  identifikasi terhadap peptida antihipertensi baru dari  hidrolisat kulit ikan kobia laut dengan menggunakan enzim protamex. Hasil identifikasi urutan peptida diperoleh Ile-Trp-Trp sebagai urutan peptida dengan nilai penghambat ACE IC 50 tertinggi yaitu 0,51 ± 0,10 µM. Cheng et al. (2023) menjelaskan bahwa peptida besar dengan dengan rantai yang panjang memiliki efektvitas yang lebih rendah dalam mengikat sisi aktif ACE jika dibandingkan dengan peptida dengan rantai yang lebih pendek.

## Antioksidan
Radikal  bebas  adalah  entitas  kimia  yang  mengandung  elektron  tidak  berpasangan  (elektron bebas)  yang  memiliki  sifat  mekanika  kuantum  yang  disebut  spin.  Radikal  bebas  diketahui  menjadi penyebab  dari  penyakit  seperti  kanker,  tumor,  dan  gangguan  degenaratif  seperti  mutagenesis, karsiogenesis,  gangguan  kardioviskular,  dan  penuaan.  Antioksidan  adalah  komponen  yang  dapat menangkal radikal bebas dengan mengintervensi salah satu dari tiga langkah utama dari proses oksidatif yang dimediasi radikal bebas, yaitu inisiasi, propagasi, dan terminasi (Kedare dan Singh, 2011; Ionita, 2021).  Antioksidan  sintesis  termasuk  diantaranya butylated  hydroxy  anisole (BHT), tertiary-butyl- hydroquinone (TBHQ), dan butylated hydroxytoluene (BHT) merupakan jenis antioksidan yang umum digunakan sebagai penangkal radikal bebas. Namun, karena kekhawatiran akan efek karsinogeniknya, antioksidan alami yang bersumber dari tanaman dan hewan kini sedang dipelajari, termasuk diantaranya hidrolisat protein atau peptida bioaktif. Mekanisme kerja dari peptida dalam menstabilkan radikal bebas berhubungan dengan kemampuanya dalam mendonorkan ataupun menerima elektron dari radikal bebas. Penggunaan  PB  sebagai  antioksidan  dapat  menjadi  alternatif  dari  penggunaan  antioksidan  sintesis, sehingga lebih aman digunakan sebagai suplemen harian untuk menangkal radikal bebas (Phadke et al., 2021).
PB yang bersumber dari hasil samping perikanan dengan sifat antioksidan telah banyak diteliti sebelumnya.  Aktivitas  antioksidan  dari  PB  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  seperti  derajat hidrolisis, berat molekul, panjang peptida, serta penggunaan enzim. Derajat hidrolisis yang tinggi akan menghasilkan  peptida dengan  berat molekul yang  lebih  rendah.  Rataan  berat  molekul  dari  hidrolisat protein  merupakan  salah  satu  faktor  penting  dalam  menentukan  bioaktivitas  dari  hidrolisat  protein, termasuk  kemampuannya  sebagai  antioksidan. Aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  umunya  ditemukan pada  peptida  dengan  berat  molekul  yang  rendah.  Vázquez et  al. (2022)  melakukan  hidrolisis  pada sampel jeroan ikan trout pelangi menggunakan preparasi enzim berbeda. Hasil penelitian menunjukan hidrolisis yang dilakukan dengan menggunakan kombinasi enzim alcalase, amilase, pepsin, dan lipase memiliki aktivitas antioksidan yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan hidrolisis tanpa kombinasi enzim.  Pada  penelitiannya  dijelaskan  bahwa  penggunaan  kombinasi  enzim  akan  meningkatkan  nilai derajat  hidrolisis  yang  menyebabkan  pelepasan  peptida  menjadi  peptida  yang  lebih  kecil.  Pada, penelitian lainnya, Mutamimah et al. (2018) melakukan hidrolisis protein dari hasil samping mata ikan tuna  dengan  parameter  waktu  dan  konsentrasi  enzim  berbeda.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa hidrolisat protein dari hasil samping mata ikan tuna  pada waktu hidrolisis 6 jam dengan konsentrasi enzim papain 0,1% memiliki aktivitas yang lebih tinggi dibandingkan perlakuan lainnya dengan nilai IC 50 1,082 ± 0,008 mg/mL . Lebih lanjut, dalam penelitiannya ditunjukan bahwa derajat hidrolisis pada konsentrasi enzim papain 0,1% lebih rendah dibandingkan konsentrasi enzim papain 0,15%, 0,2%, dan 0,25%.  Nurilmala et al. (2020) melakukan hidrolisis gelatin dan kolagen dari kulit ikan tuna sirip kuning menggunakan  enzim  alcalase.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  hidrolisat  gelatin  dengan  berat
molekul  berkisar  antara  10-30  kDa  memiliki  aktivitas  antioksidan  (9,11  ±  0,01  µg/mL)  tertinggi, sedangkan pada hidrolisat kolagen, aktivitas antioksidan tertinggi ada pada berat molekul berkisar antara 3-10 kDa (29,24 ± 0,02 µg/mL). Hasil tersebut menunjukan bahwa peningkatan dan penurunan nilai derajat  hidrolisis  dan  berat  molekul  pada  hidrolisat  protein  tidak  sepenuhnya  berpengaruh  terhadap aktivitas antioksidan hidrolisat protein. Viji et al. (2019) menjelaskan bahwa komposisi dan susunan asam  amino  pada  rantai  peptida  menjadi  faktor  utama  yang  menentukan  aktivitas  antioksidan  dari hidrolisat protein. Sifat fisikomia dari asam amino pada posisi terminal C pada rantai peptida diketahui lebih berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan dibandingkan pada posisis terminal N. Asam amino seperti  tryptopan,  isoleusin,  penilalanin,  metionin,  dan  leusin  pada  posisi  terminal  C  berkaitan  erat dengan  aktivitas  antioksidan  pada  peptida.  Asam  amino  dengan  struktur  cincin  aromatik  seperti penilalanin, tirosin, dan tryptopan dapat mendonorkan elektron ketika berhadapan dengan senyawa yang memiliki  kekurangan  elektron.  Lebih  lanjut,  kehadiran  histidin  dan  sistein  pada  terminal  C  dapat menghambat oksidasi lipid dengan mendonorkan atom hidrogen melalui rantai sampingnya (Toldrá et al., 2020). Yi Wang et al. (2020) melakukan hidrolisis pada sisik croaker redlip menggunakan 6 jenis protease.  Hidrolisat  kolagen  yang  dihidrolisis  menggunakan  neutrase  merupakan  enzim  dengan perlakuan  terbaik,  sehingga  dilanjutkan  dengan  purifikasi  peptida.  Tiga  dari  enam  peptida  yang diperoleh  dari  hasil  purifikasi  memiliki  kemampuan  sebagai  penangkal  radikal  bebas  tertinggi, diantaranya Gly-Pro-Glu-Gly-Pro-Met-Glu-Leu-Glu, Glu-Gly-Pro-Phe-Gly-Pro-Glu-Gly, dan Gly-Phe- Ile-Gly-Pro-Thr-Gly. Lebih lanjut, Gly-Pro-Glu-Gly-Pro-Met-Glu-Leu-Glu, Glu-Gly-Pro-Phe-Gly-Pro- Glu-Gly, dan Gly-Phe-Ile-Gly-Pro-Thr-Gly dapat melindungi sel HepG2 yang rusak akibat akibat stress oksidatif yang disebabkan oleh H 2 O 2 dengan cara menurunkan kadar ROS dan MDA serta meningkatkan enzim  antioksidan  endogen  (SOD,  CAT,  dan  GSH-Px). Meng  Hu et  al. (2020) melakukan  hidrolisis dengan sampel otot ikan monkfish menggunakan kombinasi enzim pepsin dan trypsin. Hasil penelitian diperoleh 3 peptida dengan kemampuan sebagai penangkal radikal bebas DPPH tertinggi, diantaranya Glu-Asp-Ile-Val-Cys-Trp,  Met-Glu-Pro-Val-Trp,  dan  Tyr-Trp-Asp-Ala-Trp.  Qiu et  al. (2019) melakukan  hidrolisis  terhadap  gelatin  sisik  ikan  cakalang  dengan  menggunakan  5  jenis  protease. Diperoleh 3 jenis peptida yang dihidrolisis menggunakan enzim alcalase dengan aktivitas antioksidan tertingi.  Diantaranya  His-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu,  Asp-Gly-Pro-Lys-Gly-His,  dan  Met-Leu-Gly-Pro- Phe-Gly-Pro-Ser.  Qiu et  al. (2019)  menjelaskan  bahwa hydrophobicity dari  peptida  penting  dalam mencapai target hydrophobic dan meningkatkan reaksi tarik menarik pada peptida. Namun, komposisi dan rasio asam amino hydrophilic seperti Asp, Glu, Lys, dan Gly, juga dapat menjadi sangat penting dalam aktivitas antioksidan pada peptida dan secara khusus dianggap berhubungan langsung terhadap efek antioksidan pada in vivo .

## KESIMPULAN
Hasil samping perikanan memiliki potensi untuk diolah menjadi produk dengan nilai tambah salah satunya peptida bioaktif (PB) dikarenakan memiliki kandungan protein yang tinggi yaitu berkisar antara 8-35%. Hidrolisis protein merupakan cara yang dapat digunakan untuk memperoleh PB. Proses hidrolisis dapat dibagi menjadi dua metode, yaitu hidrolisis secara kimiawi serta hidrolisis biokimiawi. Proses hidrolisis dengan metode kimiawi dilakukan dengan menggunakan bahan yang bersifat asam dan basa.  Hidrolisis  kimiawi  memiliki  kekurangan  pada  produk  akhir  yang  dihasilkan,  diantaranya menurunkan sifat fungsional pada produk serta memiliki efek negatif terhadap lingkungan dikarenakan limbah  yang  beracun. Proses  hidrolisis  biokimiawi  umumnya  dapat  dilakukan  dengan menggunakan enzim proteolitik yang ada pada tubuh ikan dan menghasilkan produk akhir dengan sifat fungsional yang lebih  baik  jika  dibandingkan  proses  hidrolisis  kimiawi.  Namun,  karena  proses  hidrolisisnya menggunakan  enzim  proteolitik  yang  ada  pada  tubuh  ikan,  menjadikannya  sulit  untuk  dikontrol. Hidrolisis  enzimatik  merupakan  alternatif  metode  yang  dapat  digunakan  karena  lebih  mudah  untuk dikontrol namun tetap menghasilkan produk akhir dengan sifat fungsional yang tinggi. Proses hidrolisis secara  enzimatik  akan  menghasilkan  hidrolisat  protein  yang  memiliki  ukuran  peptida  kecil  yang tersusun  oleh  2-20  asam.  Hidrolisis  enzimatik  akan  menghasilkan  peptida  bioaktif  (PB).  PB  dapat didefinisikan  sebagai  fragmen  protein  yang  khas  dan  memiliki  efek  positif  terhadap  tubuh  yang berpengaruh  terhadap  kesehatan.  PB  yang  diperoleh  dari  hidrolisat  gelatin  ikan  telah  banyak  diteliti karena potensinya dalam pengobatan. Hidrolisat gelatin ikan diketahui memiliki kemampuan sebagai pengangkal radikal bebas, penghambat pembetukan angiotensin-converting enzyme 2.

## DAFTAR PUSTAKA
Akbarian, M., Khani, A., Eghbalpour, S., dan Uversky, V. N. 2022. Bioactive peptides: synthesis, sources, applications, and proposesd  mechanisms  of  action . International  Journal  of  Molecular  Sciences,  23(3):  1445-1481. https://doi.org/10.3390%2Fijms23031445
Chen, J., Liu, Y., Wang, G., Sun, S., Liu, R., Hong, B., Gao, R., dan Bai, K. 2018. Processing optimization and characterization of  angiotensin-I-converting  enzyme  inhibitory  peptides  from  lizardfish  ( Synodus  macrops )  scale  gelatin.  Marinde Drugs, 16(228): 1-17. http://dx.doi.org/10.3390/md16070228
Cheng, X. L., Oslan, S. N. H., Ikhlas, B., dan Huda, N. 2023. Bioactive angiotensin converting enzyme inhibitory activity and antihypertensive activity derived from fish protein hydrolysate: a systematic review. Food Research, 7(4): 308-303. https://doi.org/10.26656/fr.2017.7(4).044
Espinales, C., Romero-Peña, M., Calderón, G., Vergara, K., Cáceres, P. J., dan Castillo, P. 2023. Collagen, protein hydrolysates and chitin from by-products of fish and shellfish: An overview. Heliyon, 9: 1-12. https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2023.e14937
Galland, F., de Espindola, J. S., Lopes, D. S., Taccola, M. F., dan Pacheco, M. T. B. 2022. Food-derived bioactive peptides: mechanisms of action underlying inflammation and oxidative stress in the central nervous system. Food Chemistry Advances, 1: 1-16. https://doi.org/10.1016/j.focha.2022.100087
Ghalamara, S., Silva, S., Brazinha, C., dan Pintado, M. 2020. Valorization of fish by-products: purification of bioactive peptides from  codfish  blood  and  sardine  cooking  wastewaters  by  membrane  processing.  Membranes , 10(44):  1-20. http://dx.doi.org/10.3390/membranes10030044
Hsin Lin, Y., An Chen, C., Shou Tsai, J., dan Wen Chen, G. 2019. Preparation and identification of novel antihypertensive peptides  from  the  in  vitro  gastrointestinal  digestion  of  marine  cobia  skin  hydrolysate.  Nutrients,  11(1351):  1-15. http://dx.doi.org/10.3390/nu11061351
Ionita, P. 2021. The chemistry of DPPH free radical and congeners. International Journal of Molecular Sciences, 22(4): 1545- 1559. https://doi.org/10.3390/ijms22041545
Kedare, S. B., dan Singh, R. P. 2011. Genesis and development of DPPH method of antioxidant assay. Journal of Food Science and Technology, 48(4): 412-422. https://doi.org/10.1007%2Fs13197-011-0251-1
[KKP] Kementrian Kelautan dan Perikanan, Ditjen Perikanan Tangkap. 2021. Statistik volume produksi perikanan Indonesia. Diakses: 31 Oktober 2023. KKP. Produksi Perikanan (kkp.go.id)
Kristinsson, H. G. dan Rasco, B. A. 2000. Fish protein hydrolysate: production, biochemical, and functional properties. Critical Reviews in Food Science and Nutrition , 40(1): 43-81.
http://www.tandfonline.com/action/showCitFormats?doi=10.1080/10408690091189266
Mahmoodani, F.,  Ghassem,  M.,  Babji, A.  S., Yusop,  S.  M.,  dan  Khosrokhavar,  R.  2012. ACE  inhibitory  activity  of  catfish ( Pangasius  sutchi )  skin  and  bone  hydrolysate.  Journal  of  Food  and  Sciences  Technology,  51(9):  1847-1856. https://doi.org/10.1007%2Fs13197-012-0742-8
Meng Hu, X., Mei Wang, Y., Qin Zhao, Y., Feng Chi, C., dan Wang, B. 2020. Antioxidant peptides from the protein hydrolysate of monkfish ( Lophius litulon ) muscle: purification, identification, and cytoprotective function on HepG2 cells damage by H 2 O 2. Marine Drugs, 18(153): 1-21. http://dx.doi.org/10.3390/md18030153
Mutamimah, D., Ibrahim, B., dan Trilaksani, W. 2018. Antioxidant activity of protein hydrolysate produced from tuna eye ( Thunnus sp.) by enzymatic hydrolysis. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia, 21(3): 522-531. 24736-Article Text-75745-2-10-20190301.pdf
Navarro-Peraza, R, Osuna-Ruiz, I, Lugo-Sánchez, ME, Pacheco-Aguilar, R, Ramírez-Suárez, Burgos-Hernández, Martínez- montaño, E, dan Salazar-Leyva, JA. 2020. Structural and biological properties of protein hydrolysate from seafood by- products:  a  review  focused  on  fishery  effluents.  Food  Science  and  Technology,  40(1):  1-5. https://doi.org/10.1590/fst.24719
Neves, A. C., Harnedy, P. A., O’Keeffe, M. B., Alashi, M. A., Aluko, R. E., dan FitzGerald, R. J. 2017. Peptide identification in a salmon gelatin hydrolysate with antihypertensive, dipeptidyl peptidase IV inhibitory and antioxidant activities. Food Research International, 100(1): 112-120. http://dx.doi.org/10.1016/j.foodres.2017.06.065
Nurilmala, M., Hizbullah, H. H., Karnia, E., Kusumaningtyas, E., dan Ochiai, Y. 2020. Charcterization and antioxidant activity of collagen, gelatin, and derived peptides from yellowfin tuna ( Thunnus albacares ) skin. Marine Drugs, 18(9): 1-12. http://dx.doi.org/10.3390/md18020098
Ortizo, G. G., Sharma, V., Tsai, M., Wang, J., Sun, P., Nargotra, P., Kuo, C., Chen, C., dan Dong, C. 2023. Extraction of novel bioactive  peptides  from  fish  protein  hydrolysate  by  enzymatic  reactions.  Applied  Sciences,  13(5768):  1-20. https://doi.org/10.3390/app13095768
Phadke, G. G., Rathod, N. B., Ozogul, F, Elavarasan, K., Karthikeyan, M., Shin, K., dan Kim, S. 2021. Exploiting of secondary raw materials from fish processing industry as a source of bioactive peptides-rich protein hydrolysate. Marine Drugs, 19(480): 1-22. https://doi.org/10.3390/md19090480
Pratama, I. S., Putra, Y., Pangestuti, R., Kim, S., dan Siahaan, E. A. 2023. Biactive peptides-derived from marine by-products: development, healt benefits and potential application in biomedicine. Fisheries and Aquatic Sciences, 25(7): 357-379. https://doi.org/10.1186/s41240-019-0125-4
Qiu, Y. T., Wang, Y. M., Yang, X. R., Zhao, Y. Q., Chi, C. F., dan Wang, B. 2019. Gelatin and antioxidant peptides from gelatin hydrolysate of skipjack tuna ( Katsuwonus pelamis ) scales: preparation, identification and activity evaluation . Marine Drugs , 17(565): 1-16. https://doi.org/10.3390/md17100565 Ramakrishnan, V. V., Hossain, A., Dave, D., dan Shahidi, F. 2023. Salmon processing discards: a potential source of bioactive peptides – review. Preprints , 2023040322. 2023040322. https://doi.org/10.20944/preprints202304.0311.v1
Sánchez,  A.  dan  Vázquez,  A.  2017.  Bioactive  peptides:  A  review.  Food  Qualityand  Safety,  1(1):29-46. https://doi.org/10.1093/fqsafe/fyx006
Tadesse, S. A., Emire, S. A., Barea, P., Illera, A. E., Melgosa, R., Beltrán, S., dan Sanz, M. T. 2023. Valorisation of low-valued ray-finned  fish  ( Labeobarbus  nedgia )  by  enzymatic  hydrolysis  to  obtain  fish-discarded  protein  hydrolysates  as functional foods. Food and Bioproducts Processing, 141: 167-184. https://doi.org/10.1016/j.fbp.2023.08.003
Toldrá, F., Gallego, M., Reig, M., Aristoy, M., dan Mora, L. 2020. Recent progress in enzymatic reléase of peptides in foods of animal  origin  and  assessment  of  bioactivity.  Journal  of  Agricultural  and  Food  Chemistry,  68(46):  12842-12855. https://dx.doi.org/10.1021/acs.jafc.9b08297
Vázquez, J. A., Valcarcel, J., Sapatinha, M., Bandara, N. M., Mendes, R., Pires, C. 2023. Effect of the season on the production and  chemical  properties  of  fish  protein  hydrolysates  and  high-quality  oils  obtained  from  gurnard  ( Trigla spp.)  by- products. LWT , 177: 1-9. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2023.114576
Viji, P., Phannendra, T. S., Jesmi, D., Rao, B. M., Das, P. H., dan George, N. 2019. Functional and antioxidant properties of gelatin hydrolysate prepared from skin and scale of sole fish. Journal of Aquatic Food Product Technology , 28(10): 976-986. https://doi.org/10.1080/10498850.2019.1672845 Yi Wang, W., Qin Zhao, Y., Xu Zhao, G., Feng Chi, C., dan Wang, B. 2020. Antioxidant peptides from collagen hydrolysate of redlip  croaker  ( Pseudosciane  polyactis )  scales:  preparation,  characterization,  and  cytoprotective  effects  on  H 2 O 2 - damaged HepG2 cells. Marine Drugs, 18(156): 1-19. http://dx.doi.org/10.3390/md18030156
Zheng, W., Tian,  E.,  Liu,  Z.,  Zhou,  C., Yang,  P., Tian,  K.,  Liao, W.,  Li,  J.,  dan  Ren,  C.  2022.  Small  molecule  angiotensin converting  enzyme  inhibitors:  A  medical  chemistry  perspective.  Frontiers  in  Pharmacology,  13. https://doi.org/10.3389/fphar.2022.968104
Zuraida, I. dan Pamungkas, B. F. 2020. Effect of acid pretreatment and extraction temperature on the properties of gelatin from striped  snakehead  ( Channa  striata )  scales.  AACL  Bioflux,  13(5):  2937-2945. Effects  of  acid  pretreatment  and extraction temperature on the properties of gelatin from striped snakehead (Channa striata) scales (bioflux.com.ro)