## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol. 15, No. 2, DESEMBER 2018, Hal. 62 – 70 ISSN: 1693-7899

## TOKSISITAS AKUT INFUSA KULIT ARI
KACANG TANAH ( Arachis hypogea L . ) PADA MENCIT BALB/ C
Risha Fillah Fithria* 1) , Ririn Lispita Wulandari 1) , Devi Nisa Hidayati 1) , Lilis Rejeki 1)
1 Bagian Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang Jl. Menoreh Tengah X/22 Sampangan-Semarang 50236 e-mail: rishafithria@yahoo.com

## INTISARI
Infusa  kulit  ari  kacang  tanah  (KAKT)  telah  terbukti  sebagai  antitrombositopenia,  namun belum ada penelitian tentang standar keamanannya. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi gejala  efek  toksik,  potensi  ketoksikan  dan  histopatologi  hepar  mencit  jantan  galur Balb/C setelah pemberian  dosis  tunggal  infusa  KAKT.  Penelitian  ini  menggunakan randomized  matched  postest only control group design . Dua puluh lima ekor hewan uji dibagi dalam 5 kelompok dosis per oral, yaitu infusa KAKT dosis 0,026; 0,052; 0,104; 0,208g/20gBB; dan kontrol negatif CMC Na 0,5%. Masa  pengamatan  dilakukan  selama  14  hari.  Hasil  penelitian  menunjukkan  pemberian  dosis tunggal  infus  KAKT  mempunyai    LD 50 semu  yaitu  >0,208g/20gBB  yang  bermakna  praktis  tidak toksik. Gejala yang perlu diwaspadai pada infusa KAKT yaitu perilaku pasif, bradipnea, perubahan warna  bulu,  kerontokan  bulu,  serta  penurunan  berat  badan  pada  dosis  3  dan  4.  Belum  dapat dipastikan apakah kerusakan hepar berupa radang, nekrosis, dan degenerasi albuminosa disebabkan oleh infusa KAKT atau penyebab lain.
kata kunci : toksisitas akut, infusa, kulit ari kacang tanah

## ABSTRACT
Peanut shell (PS) infusion has been shown to be antithrombocytopenia, but there has been no research on safety standards. This study aims to identify the symptoms of toxic effects, the potency of  toxicity  and  histopathology  of  liver  male  Balb/C  mice  after  a  single  dose  of  PS  infusion.  This research  uses  randomized  matched  posttest  only  control  group  design.  Twenty  five  mice  were divided  into  5  orally  dosage  groups,  ie,  PS  infusion  with  a  dose  of  0,026;  0.052;  0.104;  0.208 g/20gBW;  and  negative  control  of  CMC  Na  0.5%.  The  observation  period  is  for  14  days.  The results showed that single dose of PS infusion had a pseudo LD 50 value ie > 0.208g/20gBW which was  practically  non  toxic.  Symptoms  to  watch  out  for  the  BW  infusion  were  passive  behavior, bradycnea, hair  color change, hair  loss, and weight loss  at doses of 3 and 4. It is unclear  whether liver  damage  ie  inflammation,  necrosis,  and  albuminous  degeneration  caused  by  PS  infusion  or other causes.
keywords : acute toxicity, infusion, peanut shell
Corresponding author: Risha Fillah Fithria Bagian Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang Jl. Menoreh Tengah X/22 Sampangan-Semarang 50236, e-mail: rishafithria@yahoo.com

## PENDAHULUAN
Bahan  alam  dikenal  sebagai  obat  tradisional  yang  sering  digunakan  masyarakat  untuk pencegahan  dan  pengobatan  berbagai  penyakit  karena  pemakaian  dan  pembuatannya  sangat sederhana  serta  khasiat  umumnya  hanya  berdasarkan  pengalaman  secara  turun-temurun.  Seiring berkembangnya dunia pengobatan banyak penelitian untuk membuktikan efektifitas tanaman yang dipercaya  masyarakat  memiliki  khasiat,  kemudian  dikembangkan  dalam  berbagai  sediaan  agar lebih praktis dikonsumsi karena banyaknya minat mayarakat untuk menjadikan bahan alam sebagai obat (WHO, 1993 ; Depkes RI, 2000).
Salah satu bahan alam yang digunakan masyarakat adalah air rebusan kulit ari kacang tanah (KAKT),  yang  secara  empiris  dipercaya  dapat  menyembuhkan  penyakit  demam  berdarah. Penggunaan KAKT dibuat dengan cara merebus 10 gram KAKT dalam 1000 mL air (Dyah, 2016). Cara  perebusan  bahan  herbal  disebut  juga  dengan  ekstraksi.  Beberapa  metode  ekstraksi  dengan cara perebusan yaitu infundasi dan dekoksi (Depkes RI, 2014).
KAKT  mengandung  senyawa  bermanfaat  seperti  tanin,  flavonoid  dan  asam  fenolat terkonjugasi (Ozora, dkk., 2006). Penelitian Win dkk (2011) membuktikan bahwa kandungan kulit ari kacang tanah sebagian besar yaitu senyawa fenolik salah satunya flavonoid (Dewi, dkk., 2013). Senyawa  flavonoid  di  alam  sebagian  besar  ditemukan  dalam  bentuk  glikosida  dimana  salah  satu gugus  hidroksinya  tersubtitusi  dengan  gu la  sehingga  flavonoid  merupakan senyawa  yang bersifat  polar  (Markham,  1988).  Senyawa  flavonoid  yang  terkandung  dalam  tanaman  betadin terbukti  dapat  meningkatkan  jumlah  trombosit  (Sundaryono,  2011).  Penelitian  Infusa  kulit  ari kacang tanah yang dilakukan sebelumnya membuktikan bahwa KAKT memiliki efektivitas dalam mengatasi  trombositopenia  karena  demam  berdarah,  namun  penelitian  ini  belum  dipubikasikan (Fithria, dkk, 2018).
Bahan alam diteliti dan dikembangkan agar dapat dimanfaatkan sebagai obat untuk manusia, oleh karena itu perlu dilakukan uji toksisitas agar dapat menilai keamanan suatu bahan alam yang dijadikan  sebagai  obat.  Pemakaian  obat  tradisional  meskipun  secara  turun-temurun  tidak  dapat dijamin sepenuhnya aman, karena obat ini merupakan senyawa asing bagi tubuh (Wahyono, dkk., 2006). Menurut permenkes tahun 2012 obat tradisional harus memenuhi syarat sebelum diedarkan dimana syarat  yang harus terpenuhi meliputi  keamanan, manfaat dan mutu obat tradisional. Salah satu uji untuk membuktikan syarat keamanan adalah uji toksisitas akut.
Berdasarkan  hal  tersebut,  peneliti  melakukan  uji  toksisitas  akut  infusa  ari  kacang  tanah menggunakan  mencit  jantan  galur Balb/c secara  oral  dengan  perlakuan  dosis  tunggal  bertingkat. Evaluasi  uji  toksisitas  dilakukan  dengan  mengamati  bagaimana  gejala  klinis,  perubahan  berat badan, gambaran histopatologi organ hepar mencit dan potensi ketoksikan (LD 50 ).

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  termasuk  jenis  penelitian  eksperimental  menggunakan randomized  matched posttest only control grup design. Variabel penelitian adalah sebagai berikut : 1. Variabel bebas yaitu variasi dosis infusa kulit ari kacang tanah (Arachis   hypogea L.) per oral.
2. Variabel  tergantung  yaitu  jumlah  kematian  hewan  uji,  gejala  klinis  berupa  gerakan  (tremor, konvulsi, paralisis dan kesadaran menurun), perubahan tingkah laku (perubahan sikap atau aneh seperti  lompat  dan  berputar  berlebihan  atau  menggeliat,  penjilatan,  pencakaran,  vokalisasi  luar biasa,  gelisah),  saluran  cerna  (diare  dan  sembelit),  pernafasan  (bradipnea  dan  trakipnea), perubahan berat badan serta gambaran histopatologi hepar hewan coba.
3. Variabel  terkendali  yaitu  umur  hewan  uji,  jenis  kelamin  hewan  uji,  serta  jumlah  asupan makanan dan minuman hewan uji tiap 24 jam.

## Bahan penelitian
Tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah kacang tanah yang diperoleh dari Desa Pledokan Dusun Resowinangun Rt 01 Rw 04 Kabupaten Semarang Kecamatan Sumowono. Cairan penyari yang digunakan untuk infusa kulit ari kacang tanah adalah air.
Bahan  untuk  uji  toksisitas  akut  adalah  kloroform  (Brataco)  untuk  mematikan  hewan  uji sebelum dilakukan proses pembedahan. Bahan untuk mengawetkan organ  hepar digunakan Buffer Neutral  Formalin (BNF)  10%.  Bahan  untuk  pengecatan  preparat  jaringan  organ  hepar  adalah hematoksilin dan eosin (HE) (Brataco).

## Alat penelitian
Alat yang digunakan untuk membuat infusa kulit ari kacang tanah adalah tampah, timbangan elektrik  (OHAUS),  panci  besar,  sendok  kayu,  kompor  listrik,  panci  infusa,  termometer,  sendok, kain flanel, corong, dan alat-alat gelas (IWAKI PYREX).
Alat yang digunakan untuk uji toksisitas akut adalah timbangan hewan uji, kandang mencit, sonde peroral untuk mencit, botol kecil tempat organ, cawan petri, gunting bedah, pinset anatomi, microtom, objek glass, deck glass, dan mikroskop.

## Teknik Pemilihan Hewan Uji
Penelitian  ini  menggunakan  hewan  uji  mencit  jantan  galur Balb/c dengan  jumlah  hewan yang digunakan 45 ekor dibagi dalam 9 kelompok. Perhitungan jumlah mencit pada tiap kelompok mengikuti metode konvensional dan fixed dose method yang terdapat dalam BPOM pedoman uji toksisitas nonklinik secara in vivo tahun 2014 a . Hewan uji dipilih berdasarkan kriteria sebagai berikut : 1. Kriteria inklusi a. Mencit strain Balb/c
b. Jenis kelamin jantan
c. Berat badan 20-25 gram
d. Umur 6-8 minggu
e. Tidak terdapat abnormalitas anatomi yang tampak
2. Kriteria ekslusi
a. Mencit sakit sebelum penelitian
b. Mencit mati sebelum penelitian

## JALANNYA PENELITIAN

## 1. Determinasi tanaman
Determinasi  tanaman  dilakukan  untuk  mengetahui  identitas  tanaman  yang  akan digunakan  dalam  penelitian  yaitu  kacang  tanah.  Tanaman  kacang  tanah  dideterminasi  di Laboratorium  Ekologi  dan  Biosintetik  Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Diponegoro.
2. Pembuatan infusa kulit ari kacang tanah
Pembuatan  infusa  kulit  ari  kacang  tanah  dilakukan  di  Laboratorium  Fitokimia  Fakultas Farmasi  Universitas  Wahid  Hasyim  Semarang.  Biji  kacang  tanah  seberat  5  kg  yang  sudah bersih,  disortasi  untuk  memisahkan  kacang  tanah  yang  kisut  dan  berwarna  coklat  kehitaman. Biji kacang tanah dioven pada suhu 40ºC hingga berwarna merah kecoklatan, kemudian segera diayak sehingga kulit ari kacang tanah terlepas dari bijinya. Kulit ari kacang tanah diinfus dalam air  dengan  perbandingan  1:10  selama  15  menit  yang  mulai  dihitung  saat  suhu  mencapai  90ºC sambil  diaduk,  setelah  itu  larutan  disaring  menggunakan  kain  flannel  bersih  dan  ditempatkan dalam becker glass
3. Uji toksisitas infusa kulit ari kacang tanah Sebelum  mendapat  perlakuan,  25  ekor  mencit  Balb/C  jantan  sehat  berusia  6-8  minggu dengan  berat  badan  20-25  gram,  diadaptasikan  (aklimatisasi)  serta  diberi makan dan  minum selama  7  hari.  Selama  proses  adaptasi  dilakukan  pengamatan  kondisi  umum  serta  dilakukan penimbangan  berat  badan  setiap  hari.  Tujuan  aklimatisasi  yaitu  agar  hewan  uji  dapat menyesuaikan  diri  dengan  lingkungan.  Proses  aklitimatisasi  dilakukan  di  Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang.
Hewan  uji selanjutnya dibagi dalam lima kelompok perlakuan yaitu  infusa KAKT dosis 1-4 yaitu 0,026; 0,052; 0,104; 0,208g/20gBB; dan kontrol negatif diberi larutan CMC Na 0,5% sebanyak  0,5  mL/20gBB.  Tiap  kelompok  diberi  perlakuan  hanya  sekali  pada  hari  pertama penelitian secara per oral setelah aklimatisasi (BPOM RI., 2014 a ).
Pengamatan  gejala  klinik  meliputi  gerakan  (tremor,  konvulsi,  paralisis,  bringas,  pasif), perubahan tingkah laku (perubahan sikap atau aneh seperti lompat dan berputar berlebihan atau menggeliat,  penjilatan,  pencakaran,  vokalisasi  luar  biasa,  gelisah,  lakrimasi,  salivasi), pernapasan  (bradipnea  dan  takipnea),  vasodilatasi  (merah  pada  ekor  dan  telapak  kaki),
perubahan warna kulit dan bulu, kerontokan bulu, saluran cerna (diare dan sembelit) dilakukan selama 14 hari  setelah perlakuan pemberian  ekstrak kulit ari kacang  tanah. Penimbangan  berat badan  dilakukan  pada  hari  ke-0  (sebelum  perlakuan)  dan  hari  ke-14  (setelah  perlakuan). Penentuan  potensi  ketoksikan  (LD 50 )  dilakukan  dengan  menghitung  jumlah  hewan  coba  yang mati  setiap  kelompok  selama  14  hari  setelah  pemberian  ekstrak,  kemudian  dianalisa menggunakan  analisa Probit .  Pengujian  hari  ke-14,  satu  ekor  hewan  uji  pada  masing-masing kelompok  perlakuan  diambil  secara  acak  dan  dikorbankan  untuk  dilakukan  pengamatan  organ hepar. Histopatologi organ hepar dimulai dari pembuatan preparat jaringan.
Preparat  jaringan  organ  dibuat  dengan  cara,  mula-mula  mencit  dibius  dengan  kloroform kemudian dilakukan diseksi atau pembedahan guna mengambil organ vital. Pengambilan organ tersebut  dilakukan  dengan  cara  hati-hati  dan  saksama  agar  organ  yang  diambil  tetap  terjaga keutuhannya dan jaringan tidak menjadi rusak. Organ yang sudah diambil dilakukan fiksasi atau pengawetan terhadap organ vital dengan cara direndam dalam larutan BNF 10%. Jaringan yang sudah  diawetkan  dipotong  menggunakan  mikrotom,  sebelum  itu  dilakukan  dulu  dekalsifikasi guna menghilangkan kalsium yang ada dalam jaringan. Proses selanjutnya yaitu dehidrasi guna mengeluarkan cairan dehidran dan menggantinya dengan cairan yang dapat bercampur dengan dehidran  atau  paraffin.  Organ  yang  sudah  bebas  dari  cairan  dehidran,  dilakukan  pembenaman atau  impregnasi  untuk  menghilangkan  cairan  pembening  ( clearing  agent )  dari  jaringan  dan menggantinya  dengan  paraffin.  Proses  selanjutnya  yaitu  pewarnaan  pada  preparat  jaringan organ (Hutapea, 2003).

## ANALISIS DATA
Data  yang  dikumpulkan  dalam  penelitian  ini  berupa  data  kuantitatif  dan  kualitatif.  Data kuantitatif yang diperoleh yaitu jumlah kematian hewan uji dan data perubahan berat badan setelah pemberian ekstrak etanol kulit ari kacang tanah. Jumlah mencit yang mati tiap kelompok dihitung, kemudian  dianalisa  menggunakan  analisa probit untuk  menentukan  nilai  LD 50 .  Data  berat  badan sebelum  dan  setelah  perlakuan  pada  hari  ke-14  diuji  normalitas  menggunakan Shapiro-Wilk ,  data yang  memenuhi  syarat  normalitas  dianalisa  menggunakan T-test  dependent untuk  melihat  apakah ada perubahan berat badan mencit secara signifikan sebelum dan setelah perlakuan ekstrak etanol kulit ari kacang tanah.
Data kualitatif berupa gejala efek toksik yang tampak kemudian dijabarkan secara deskriptif untuk  mengevaluasi  wujud  efek  toksik  yang  timbul.  Data  pemeriksaan  histopatologi  berupa preparat  jaringan  organ  hepar  mencit  digunakan  untuk  mengevaluasi  spektrum  efek  toksik. Pemeriksaan histopatologi dibaca menggunakan mikroskop elektron pada 3 lapang pandang dengan perbesaran  400x.  Sasaran  yang  dibaca  adalah  terjadinya  radang,  nekrosis,  dan  degenerasi albuminosa pada sel hepar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kematian hewan uji dan perhitungan potensi ketoksikan akut (LD 50 ) infusa kulit ari kacang tanah
Hasil  pengamatan  yang  dilakukan  selama  14  hari  menunjukkan  bahwa  pemberian  infusa kulit  ari  kacang  tanah  dengan  dosis  0,026gram/20gramBB  sampai  dosis  0,208gram/20gramBB tidak mengakibatkan kematian pada mencit jantan galur Balb/C . Berdasarkan hasil yang diperoleh, nilai LD 50 tidak dapat diketahui secara pasti atau tidak dapat ditetapkan karena pada dosis tertinggi dalam  penelitian  tidak  ada  hewan  uji  yang  mati,  sehingga  nilai  LD 50 yang  digunakan  adalah  nilai LD 50 semu  (LD 0 )  (Loomis,  1978;  Donatus,  2001).  Apabila  nilai  toksisitas  akutnya  rendah,  tidak perlu  menentukan  nilai  LD 50 secara  tepat  karena  suatu  angka  perkiraan  saja  sudah  dapat memberikan  manfaat  dan  anggapan  bahwa  semua  toksisitas  akut  yang  berbahaya  dapat disingkirkan (Lu, 2010). Nilai LD 50 semu infusa kulit ari kacang tanah berdasarkan hasil penelitian lebih  dari  0,208  gram/20gramBB  atau  setara  dengan  10,4  gram/  kgBB,  sehingga  infusa  kulit  ari kacang  tanah  tergolong  dalam  kriteria  praktis  tidak  toksik  pada  tabel  kriteria  derajat  tokisitas (Loomis, 1978).

## Gejala efek toksik infusa kulit ari kacang tanah
Pengamatan  gejala  toksik  dilakukan  setelah  pemejanan  infusa  kulit  ari  kacang  tanah  yaitu selama  8  jam  pertama  dan  dilanjutkan  sampai  14  hari.  Gejala-gejala  toksik  ini  diamati  secara visualisasi atau kasat mata dan cenderung bersifat sujektif, sehingga untuk mengetahui gejala yang ditimbulkan  maka  harus  dibandingkan  dengan  kebiasaan  hewan  uji  ketika  masa  aklimatisasi maupun dengan kelompok kontrol negatif.
Pengamatan  gejala  klinis  dosis  1  menunjukkan  3  ekor  mencit  pada  hari  pertama  yang mengalami  perilaku  penjilatan  berlebih.  Hal  serupa  juga  terjadi  pada  1  ekor  mencit  yang  berbeda pada  hari  ke-4,  5  dan  6.  Perilaku  penjilatan  berlebih  tersebut  kemungkinan  dapat  terjadi  karena adanya  kandungan  tanin  dan  flavonoid  dalam  infusa  kulit  ari  kacang  tanah.  Tanin  dan  flavonoid dapat  memberikan  rasa  pahit  dan  kesat  pada  tumbuhan  (Heinrich,  dkk.,  2009).  Perubahan  gejala klinis lain yang teramati pada dosis 5 yaitu perilaku pasif yang dialami 2 ekor mencit pada hari ke- 2, namun  hari selanjutnya  sampai pada hari  akhir pengamatan,  gejala pasif tersebut tidak tampak, artinya hewan uji bergerak secara normal.
Perubahan gejala klinis pada dosis 2 juga hampir sama dengan dosis 5, yaitu terdapat 3 ekor mencit yang mengalami perilaku penjilatan berlebih pada hari pertama dan hal yang serupa terjadi pada 1 ekor mencit yang sama pada hari ke-4 dan 1 ekor mencit yang berbeda terjadi pada hari ke- 5. Perilaku pasif juga ditunjukkan pada 2 ekor mencit pada hari ke-2 saja.
Terdapat  beberapa  perubahan  gejala  klinis  pada  dosis  3  yaitu  perilaku  pasif,  penjilatan berlebih,  gelisah,  bradipnea,  diare,  serta  perubahan  bulu  yang  berupa  perubahan  warna  bulu  dan kerontokan bulu hewan uji. Perilaku pasif terlihat tidak konsisten terjadi pada beberapa hewan uji di hari pertama sampai hari ke-6, kemudian muncul lagi pada beberapa hewan uji di hari ke-8, 10, 11  dan  12.  Begitu  juga  perilaku  penjilatan  berlebih  tampak  pada  beberapa  hewan  uji  di  hari pertama sampai hari ke-6, kemudian muncul lagi pada hari ke-8, 10 dan 11. Gelisah hanya dialami oleh  1  ekor  hewan  uji  yang  sama  pada  hari  pertama  dan  hari  ke-8,  serta  hewan  uji  yang  berbeda pada  hari  ke-10.  Bradipnea  hanya  muncul  pada  3  ekor  hewan  uji  hari  pertama,  kemudian  1  ekor hewan uji pada hari ke-8, lalu muncul lagi pada beberapa hewan uji yang berbeda pada hari ke-11 dan  12.  Diare  hanya  muncul  pada  1  ekor  hewan  uji  di  hari  pertama.  Perubahan  warna  bulu  dari warna  putih  bersih  menjadi  putih  kusam  atau  lebih  gelap  jika  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol negatif dan mengalami kerontokan bulu hanya muncul pada 1 ekor hewan uji di hari ke-2 dan dialami juga oleh 2 ekor hewan uji yang berbeda pada hari ke-3.
Perubahan  gejala  klinis  pada  dosis  4  yaitu  perilaku  pasif,  penjilatan  berlebih,  gelisah, bradipnea, takipnea, perubahan  warna bulu dan  kerontokan bulu,  serta  sembelit.  Gejala bradipnea dan  takipnea  diamati  secara  visual  dengan  cara  melihat  kecepatan  pernapasan  mencit  apakah meningkat atau menurun dibandingkan dengan kelompok perlakuan kontrol negatif. Hampir sama dengan  dosis  3,  perubahan  perilaku  penjilatan  berlebih  dan  gelisah  tidak  konsisten  terjadi,  hanya beberapa ekor hewan uji yang mengalami penjilatan berlebih pada hari pertama, ke-3, 4, 6, 7 dan 9, demikian  juga  gelisah  hanya  terjadi  pada  1  ekor  hewan  uji  di  hari  pertama  dan  hewan  uji  yang berbeda  pada  hari  ke-2  dan  9.  Gejala  takipnea  baru  muncul  pada  dosis  4,  namun  juga  tidak konsisten, bahkan hanya dialami 1 ekor hewan uji pada hari pertama; demikian juga sembelit yang baru  muncul  pada  dosis  4,  namun  hanya  muncul  pada  4  ekor  hewan  uji  pada  hari  pertama. Sehingga perubahan gejala gelisah, penjilatan berlebih, takipnea, diare, dan sembelit kemungkinan merupakan pengaruh faktor lain yaitu kondisi fisiologis masing-masing individu hewan uji. Gejala yang  perlu  diwaspadai  yaitu  perilaku  pasif,  bradipnea,  perubahan  warna  bulu  serta  kerontokan bulu, karena keempat gejala tersebut hampir konsisten dialami oleh hewan uji pada dosis 4. Gejala perilaku  pasif  hampir  konsisten  terjadi  pada  beberapa  hewan  uji  kelompok  dosis  4  dalam  7  hari pertama  pengamatan,  dan  terjadi  pada  seluruh  hewan  uji  dalam  7  hari  kedua  pengamatan. Demikian  halnya  dengan  bradipnea  serta  perubahan  perubahan  warna  bulu  dan  kerontokan  bulu yang terjadi secara konsisten pada seluruh hewan uji pada hari ke-10 sampai 14 hari pengamatan.
Kepasifan  yang  dialami  pada  hewan  uji  merupakan  tanda  umum  ketoksikan  dalam  hal kereaktifan  terhadap  aneka  rangsangan  yang  semuanya  dapat  berhubungan  dengan  sistem  saraf pusat  dan  somatomotor.  Perubahan  warna  bulu  dan  kerontokan  bulu  merupakan  tanda  umum ketoksikan yang mempengaruhi warna dan keutuhan bulu (Dipasquale dan Hayes, 2001), dalam hal
ini kemungkinan senyawa  aktif dalam infusa KAKT dosis 4 dapat merubah warna bulu dari putih bersih  menjadi  putih  kusam  atau  lebih  gelap  dibandingkan  dengan  warna  bulu  kelompok  kontrol negatif  dan  menyebabkan  kerontokan  bulu  sehingga  bulu  pada  hewan  uji  yang  diberikan  dosis  4 terlihat  lebih  sedikit  dibandingkan  hewan  uji  kelompok  kontrol  negatif.  Bradipnea  yang  dialami hewan  uji  merupakan  tanda  umum  ketoksikan  terhadap  sistem  kardiovaskular  sehingga  curah jantung dan denyut jantung berkurang. Hal ini mungkin dapat disebabkan oleh senyawa aktif yang berada  dalam  kulit  ari  kacang  tanah  yang  memiliki  efek  ionotropik  negatif  terhadap  jantung (Donatus, 2001).

## Pengamatan perubahan berat badan mencit setelah pemberian infusa kulit ari kacang tanah
Perubahan  berat  badan  mencit  dimungkinkan  dapat  terjadi  dari  pengaruh  infusa  KAKT secara  langsung,  maupun  secara  tidak  langsung  seperti  terjadinya  penurunan  nafsu  makan  setelah pemberian  infusa  KAKT  sehingga  berat  badan  mencit  turun.  Hasil  pengamatan  perubahan  berat badan mencit jantan galur Balb/C dari penelitian ini dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Berat badan seluruh hewan uji sebelum (pada hari ke-0) dan sesudah (pada hari ke-14) perlakuan infusa kulit ari kacang tanah (KAKT).
Data disajikan dalam nilai rata-rata ± standard error
Analisis preparat jaringan organ hepar mencit jantan galur Balb/C seluruh kelompok setelah perlakuan dengan infusa kulit ari kacang tanah
Hasil  pemeriksaan  preparat  organ  hepar  mencit  jantan Balb/C setelah  pemberian  IKAKT yang dibaca oleh Dokter Meira Dewi Kusuma Astuti. M.Si. Med, Sp.PA bagian Patologi Anatomik RSUP  dr.  Kariadi  Semarang  menunjukkan  adanya  perubahan  pada  tingkat  seluler.  Hasil pemeriksaan preparat jaringan organ hepar mencit tersaji pada Tabel I.
Hasil  penelitian  menunjukkan  terjadi  degenerasi  albuminosa  dan  radang  dengan  derajat ringan  sampai  derajat  sedang  pada  sel  hepar  mencit  jantan Balb/C kelompok  kontrol  negatif  dan kelompok  perlakuan  infus  KAKT  dari  dosis  I  –  IV.  Pangamatan  mikroskopik  sel  hepar  dibaca dalam  tiga  lapang  pandang,  dimana  yang  dimaksud  lapang  pandang  adalah  pembacaan mikroskopik  sel  hepar  dari  sisi  yang  berbeda.  Sel  hepar  yang  diamati  berbentuk  poligonal  dan memiliki inti sel (Astuti, 2017).

## Tabel I. Hasil pengamatan mikroskopik organ hepar hewan uji seluruh perlakuan
Keterangan Jenis Kerusakan Kontrol Negatif IKAKT Dosis 1 IKAKT Dosis 2 IKAKT Dosis 3 IKAKT Dosis 4 Lapangan pandang Lapangan pandang Lapangan pandang Lapangan pandang Lapangan pandang 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Degenerasi Albuminosa + + + + + + + + + + + + + + + Radang + R/S + R/S + R/S + R/S + R/S + R/S + R/S + R/S - - + R/S + R/S + R/S - - + R/S - - Nekrosis - - - - - - - - - - - - - - -
Keterangan : (-) : Tidak mengalami kerusakan; (+) : Mengalami kerusakan; R : Ringan; S : Sedang
Kerusakan  degenerasi  albuminosa  atau  degenerasi  parenkimatosa  atau  disebut degenerasi bengkak keruh ialah bentuk degenerasi yang paling ringan, berupa pembengkakan dan kekeruhan sitoplasma dengan munculnya granula-granula dalam sitoplasma akibat endapan protein.
Degenerasi  ini  merupakan  degenerasi  sangat  ringan  dan  bersifat  reversibel,  dimana  degenerasi hanya terjadi pada mitokondria dan retikulum endoplasma akibat rangsangan yang mengakibatkan gangguan oksidasi.  Sel yang sakit tidak dapat mengeliminasi  air sehingga tertimbun di dalam sel, sehingga  sel  mengalami  pembengkakan  (Underwood,  1999).  Kerusakan  sel  hepar  degenerasi albuminosa  dapat  dilihat  dengan  adanya  kongesti  (perluasan)  dan  bendungan  atau  distensi  dalam sinusoid (celah atau parit pemisah antar sel hepar yang satu dengan yang lain), akibatnya sirkulasi darah menjadi lambat dan oksigenasi kejaringan hati menurun sehingga sinusoid terlihat pecah atau melebar dan terdapat ruang kosong pada sitoplasma serta inti sel yang nampak “ngebyur”  (Astuti, 2017).  Degenerasi  albuminosa  merupakan  tanda  awal  kerusakan  hepar  sementara  akibat  adanya paparan  senyawa  asing  dan  dapat  pulih  kembali  jika  paparan  dihentikan.  Hasil  pengamatan kelompok  perlakuan  kontrol  negatif  dan  infus  KAKT  dosis  1-4  dalam  penelitian  ini  mengalami degenerasi  albuminosa  pada  hepar  hewan  uji.  Degenerasi  albuminosa  pada  kelompok  kontrol negatif  yang  diberi  aquadest  kemungkinan  disebabkan  oleh  beberapa  faktor  seperti  faktor  stress atau  hewan  uji  sudah  mengalami  kerusakan  pada  hepar  sebelum  perlakuan,  karena  pada dasarnya aquadest bukanlah bahan iritan (BPOM, 2014 a ). Degenerasi albuminosa pada kelompok perlakuan infus KAKT dosis 1-4 belum dapat disimpulkan terjadi akibat pemberian infus KAKT. Salah satu gambar preparat yang menunjukkan terjadinya kerusakan degenarasi albuminosa pada hepar mencit jantan Balb/C dari penelitian ini disajikan dalam gambar 2.
Keterangan :
A. Vena sentralis
B. Sinusoid yang mengalami distensi atau membentuk bendungan
C. Sel hepar yang mengalami degenerasi albuminosa
Gambar 2. Gambaran mikroskopik sel hepar yang mengalami degenerasi albuminosa
Radang  adalah  salah  satu  penanda  kerusakan  hepar  akibat  adanya  paparan  yang menimbulkan  respon  inflamasi  pada  hepar  dan  dapat  kembali  normal  setelah  paparan  dihentikan. Hasil  histopatologi  organ  hepar  mencit  kelompok  kontrol  negatif  dan  kelompok  perlakuan  Infus KAKT  dosis  1-4  menunjukkan  terjadinya  radang  dengan  derajat  ringan  sampai  sedang  pada  sel hepar  mencit.  Peradangan  ini  adalah  bentuk  cedera  akut  sel  hepar  yang  bersifat  sementara ( reversible ),  tetapi  lama  -  kelamaan  jika  paparan  penyebab  radang  terus  berlanjut  maka  akan menimbulkan cedera hepar yang bersifat tidak dapat pulih kembali ( irreversible ) atau bahkan dapat menjadi  peradangan  kronis  (Astuti,  2017).  Radang  ditandai  dengan  adanya  infiltrasi  sel  radang limfosit,  makrofag  dan  sel  kupffer.  Hal  ini  dikarenakan  migrasi  sel  radang  merupakan  reaksi tanggap  kebal  umum  terhadap  zat  toksik  yang  masuk  ke  dalam  tubuh  dan  merupakan  reaksi patofisiologis untuk melawan segala bentuk agen yang merugikan. Limfosit sering menyebar dalam jaringan  dan  berfungsi  untuk  memelihara  ketahanan  tubuh.  Makrofag  berperan  dalam  fagositosis dan  penghancuran  partikel  asing  serta  mengolah  bahan  asing  sehingga  dapat  membangkitkan tanggap  kebal.  sel  kupffer  yang  berperan  dalam  membentuk  pertahanan  makrofag-monosit  yang bersifat  fagositik  terhadap  benda  asing  (Fawcett,  2002).  Salah  satu  gambar  preparat  mikroskopis hepar  mencit  jantan Balb/C dalam  penelitian  ini  yang  mengalami  peradangan  disajikan  pada gambar 3.
C A A B
Keterangan :
A. Sinusoid
B. Sel hepar yang mengalami peradangan derajat ringan sampai sedang
C. Vena sentralis
Gambar 3. Gambaran mikroskopik sel hepar yang mengalami peradangan
Peradangan  yang  terjadi  pada  kelompok  yang  diberi  IKAKT  dosis  I  -  IV  belum  dapat disimpulkan  karena  pemberian  IKAKT,  karena  pada  kelompok  kontrol  negatif  justru  mengalami peradangan  padahal  hanya  diberi  aquadest,  sehingga  peradangan  diduga  dapat  juga  dipengaruhi banyak  faktor,  seperti  selama  di  penangkaran  pakan  dan  minum  yang  kurang  bersih,  faktor  stress mencit, pengaruh zat atau penyakit lain, serta faktor internal lain seperti daya tahan dan kerentanan mencit.  Sehingga  untuk  peneliti  selanjutnya,  sebaiknya  perlu  diperiksa  SGPT  dan  SGOT  masing- masing hewan uji sebelum diberi perlakuan untuk memastikan organ hepar hewan tidak mengalami kerusakan  sebelum  perlakuan.  Selain  itu  pengamatan  histopatologi  organ  hepar  mencit  sebaiknya dilakukan  dengan  pengamatan  mikroskopik  seluruh  hewan  uji  agar  hasilnya  lebih  dapat dibandingkan dengan kelompok lain,  atau dapat juga menambah parameter  kerusakan  hepar yaitu mengukur SGPT dan SGOT sebelum dan sesudah perlakuan.

## KESIMPULAN
Pemberian  dosis  tunggal  (IKAKT)  menunjukkan  perubahan  gejala  klinis  yang  konsisten terjadi  pada  dosis  4  yaitu  perilaku  pasif,  bradipnea,  perubahan  warna  bulu  serta  kerontokan  bulu, dan terjadi penurunan berat badan secara  signifikan akibat pemberian infus KAKT dosis  3 dan 4. Potensi ketoksikan  IKAKT ditemukan  LD 50 semu yaitu > 0,208 gram/20 gramBB yang bermakna praktis  tidak  toksik.  Belum  dapat  disimpulkan  apakah  pemberian  dosis  tunggal  IKAKT berpengaruh terhadap ketoksikan pada organ hepar mencit jantan Balb/C .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada Direktorat Penelitian dan Pengabdian Masyarakat yang  telah  membiayai  penelitian  ini.  Selain  itu  juga  kepada  peneliti  lain  yang  terlibat  langsung dengan penelitian ini, dan juga berbagai pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  M.D.K.,  2017, Wawancara  Pembacaan  Mikroskopik  Histopatologi  Organ  Hepar  Mencit Jantan Balb/C , Patologi Anatomik RSUP dr. Kariadi, Semarang, tanggal 16 Mei 2017.
BPOM, RI., 2014 a , Pedoman Uji Toksisitas Uji Nonklinik Secara Invivo , Direktorat Asli Indonesia, Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta, 5-26. BPOM,  RI.,  2014 b , Persyaratan  Mutu  Obat  Tradisional ,  Direktorat  Asli  Indonesia,  Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta, 11.
Casarett, L.J. and Doull, J., 2008, Toxicology the Basic Science of Poisons, in  Curtis D. Klaassen (Ed.), Toxicology , Medical Publishing Division, New York, 28-32.
Crawford, J.M., 2005,  Liver And Biliary Tract, In Kumar V., Abbas A.K., Fausto N., Robbins, and Cotran (Eds.), Pathologic Basis Of Disease, Elsevier Saunders , Philadelphia, 880-1903.
Depkes,  RI.,  2000, Inventarisasi  Tumbuhan  Obat  Indonesia ,  Jilid  I,  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 121
A B C
Depkes,  RI.,  2014, Farmakope  Indonesia ,  Edisi  V,  Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia, Jakarta, 33
Dewi,  L.C.,  Subandi,  dan  Suharti,  2013,  Uji  Antibakteri  dan  Daya  Inhibisi  Ekstrak  Kulit  Kacang Tanah Terhadap Aktivitas Enzim Xantin Oksidase, Jurnal Ilmiah , 1-9. Dipasquale, L.C., and Hayes, A.W., 2001, Principles and Methods of Toxicology , Edisi 4, Taylor & Francis, Philadelphia, 853-869. Donatus,  I.A.,  2001, Toksikologi  Dasar ,  Laboratorium  Farmakologi  dan  Toksikologi  Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.Dyah, R., 2016, Manfaat Kulit Ari Kacang Tanah  Bagi  Kesehatan,  http://manfaat.co.id/manfaat-kulit-ari-kacang-tanah,  diakses tanggal 28 Desember 2016
Fawcett, D.W., 2002, Buku Ajar Histologi , edisi ke-12, EGC, Jakarta, 97-583. Fithria,  Wulandari,  Hidayati,  Putri,  dan  Annisa,  2018, Efektivitas  Peningkat  Jumlah  Trombosit Infusa  Kulit  Ari  Kacang  Tanah  (Arachis  Hypogea  L.)  Pada  Mencit  Balb/C  Diinduksi Heparin , Laporan Penelitian, Universitas Wahid Hasyim.
Hutapea, A.M., 2003, Penuntun Praktikum Anatomi Fisiologi, EGC, Jakarta, 72-80. Jacobson, K., and Keller, K.A., 2000, Toxicology Testing Handbook , Ork Basel, Washington DC, 1
– 20.
Lenny,  S.,  2006,  Senyawa  Flavonoid,  Fenilpropanoida  dan  Alkaloida , Karya  Ilmiah ,  Fakultas MIPA Universitas Sumatera Utara, Medan.
Loomis, T.A., 1978, Toksikologi Dasar , Edisi III, Diterjemahkan oleh Imono Argo Donatus, IKIP Semarang Press, Semarang, 225.
Markham,  K.R.,  1988, Cara  Mengidentifikasi  Flavonoid ,  diterjemahkan  oleh  Kosasih Padmawinata, Institute Teknologi Bandung, Bandung, 9-10.
Peraturan  Menteri  Lingkungan  Hidup  Dan  Kehutanan  Republik  Indonesia,  2015, Tata  Cara  Uji Karakteristik  Limbah  Bahan  Berbahaya  Dan  Beracun ,  Menteri  Lingkungan  Hidup  Dan Kehutanan Republik Indonesia, Jakarta.
Sundaryono,  A.,  2011,  Uji  Aktivitas  Senyawa  Flavonoid  Total  Dari  Gynura  Segetum  (lour) Terhadap  Peningkatan  Eritrosit  Dan  Penurunan  Leukosit  Pada  Mencit Mus  musculus . Jurnal exacta , 9, 8-16. WHO,  1993, Research  Guidelines  For  Evaluating  The  Safety  And  Efficacy  Of  Herbal  Medicine , Regional Office for Western Pasific, Manila,
http://apps.who.int/medicinedocs/en/d/Jh2946e/5.3.1.html,  diakses  tanggal  20  Desember 2016
Win, M.M., Hamid, A.A., Baharin, B.S., Anwar, F., Sabu, M.C., dan Pakdek, M.S., 2011, Phenolic Compounds  and  Antioxidant  Activity  of  Peanut’s  Skin,  Hull,  Raw  Kernel  and  Roasted Kernel Flour, Pak. J. Bot ., 3, 1635-1642.