## Analisis Kloramfenikol dalam Sampel Sediaan Tetes Telinga di Kota Palembang dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

## Mauizatul Hasanah dan Putri Wahyuni
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi (STIFI) Bhakti Pertiwi, Jl. Ariodillah III No.22A Palembang, Sumatera Selatan
Intisari: Telah  dilakukan  penelitian  penetapan  kadar  kloramfenikol  dalam  sediaan  tetes  telinga  dengan  me- tode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT). Tujuan penelitian ini adalah untuk melakukan penetapan kadar dan mengetahui kesesuaian kadar kloramfenikol dalam sediaan tetes telinga secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) fase terbalik dengan detektor ultraviolet pada panjang gelombang 273,4 nm. Fase diam yang di- gunakan adalah kolom C18, fase gerak metanol : air (70 : 30) dengan laju alir 1 ml/menit. Penentuan linearitas dengan kurva baku menunjukkan hubungan yang linier antara luas puncak dan konsentrasi baku kloramfeni- kol  dengan  konsentrasi  5-25  µg/ml  (r=0,998).  Persamaan  regresi  yang  diperoleh  adalah  y=39020,92x  + 196296, nilai limit of detection (LOD) sebesar 1,4920 µg/ml dan nilai limit of quantitation (LOQ) sebesar 4,9734 µg/ml. Uji presisi memberikan nilai koefisien variasi sebesar 0,8711 %. Hasil penetapan kadar kloramfenikol da- lam sediaan tetes telinga ialah sampel A = 1,17 %, sampel B = 1,20 % dan sampel C =  1,19 %. Berdasarkan pengujian, sampel sediaan tetes telinga dengan kriteria kadar memenuhi persyaratan yang tertera pada Far- makope Indonesia edisi V.
Kata kunci: Kloramfenikol, kromatografi cair kinerja tinggi, tetes telinga
Abstract: Determination of Chloramphenicol content in ear drops has been performed with high performance liquid chromatography (HPLC) method. The purpose of this research was to determination and know the sui- tability of Chloramphenicol contents in ear drops by reversed phase reversed phase with ultraviolet detector at a wavelength of 273.4 nm. The C18 column was used as stationary phase, methanol : water (70 : 30) v/v as mobile phase, with flow rate of 1 ml/minute. Determination of calibration curve linearity showed a linear cor- relation  between  the  peak  area  and  chloramphenicol  concentration  with  concentration  5-25 μ g/ml  (r  = 0,998). The equation of regression was y = 39020,92x + 196296, the limit of detection (LOD) value is 1,4920 μ g / ml and the value of limit of quantitation (LOQ) is 4,9734 μ g / ml. The precision test showed a coefficient of variation was 0.8711%. The result of determination of chloramphenicol content in ear drops were sample A = 1,17 %, sample B = 1,20 % and sample C = 1,19 %. Based on the test, samples of ear drops with contents crite- ria was fulfilled the requirements of Indonesian Pharmacopoeia fifth edition.
Keywords: Chloramphenicol, high performance liquid chromatography, ear drops
Email: mauizatulhasanah@gmail.com

## 1 PENDAHULUAN
loramfenikol  adalah  salah  satu  senyawa  antibi- otik yang pertama kali diisolasi pada tahun 1947
dari Streptomyces  venezuelae yang  bekerja  dengan cara  menghambat  sintesis  protein  bakteri  (FKUI, 2012).    Sediaan  farmasi  yang  berupa  obat  dan  ba- han  baku  obat  harus  memenuhi  syarat  Farmakope Indonesia atau buku standar lain. Persyaratan kadar merupakan salah satu tolak ukur kualitas suatu obat. Obat akan optimal memberikan efek farmakologinya jika  sesuai  dengan  kadar  yang  ditentukan  (Depkes RI, 2009). Persyaratan kadar untuk tetes telinga klo- ramfenikol  mengandung  tidak  kurang  dari  90,0% dan tidak lebih dari 130,0% kloramfenikol dari jum- lah yang tertera pada etiket (Kemenkes RI, 2014).
Penentuan kadar senyawa aktif pada obat dilaku- kan dengan suatu metode analisis yang harus divali- dasi, untuk melakukan verifikasi bahwa parameter – parameter  kinerjanya  cukup  mampu  untuk  menga- tasi  problem  analisis.  Parameter  validasi  metoda analisis  yaitu  akurasi,  presisi,  linearitas,  LOD,  LOQ, selektivitas, kekasaran, dan ketahanan (Gandjar dan Rohman,  2007).  Validasi  ulang  perlu  dilakukan meskipun  validasi  sebelumnya  menghasilkan  data yang sesuai dengan kriteria penerimaan (Noviyanto dkk, 2014).
Kadar  kloramfenikol  dapat  ditentukan  dengan beberapa metode yaitu secara volumetri, spektrofo- tometer  UV,  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  (Depkes RI,  1979).  Penetapan  kadar  kloramfenikol  dapat  di- lakukan  secara  kromatografi  cair  kinerja  tinggi
K
(KCKT)  menggunakan  fase  gerak  campuran  air  : metanol : asam asetat glasial (Kemenkes RI, 2014).
Hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Alaani  dan Alnukkary  (2016),  tehadap  sampel  kloramfenikol, deksametason dan tetrahidrozolin HCl pada sediaan tetes mata menggunakan metode KCKT dengan ko- lom  C18  dan  fase  gerak  buffer  posfat  :  asetonitril menunjukkan  hasil  yang  memenuhi  syarat  untuk parameter  validasi.Hasil  penelitian  yang  dilakukan oleh  Sari  dan  Utami  (2009),  terhadap  sampel  klo- ramfenikol  pada  sediaan  tetes  mata  dengan  KCKT menggunakan  kolom  shimpack  ODS  CLC  C18  dan fase  gerak  metanol  :  air,  memberikan  hasil  yang memenuhi syarat untuk parameter linearitas, selekti- vitas, LOD, LOQ, dan presisi namun masih memiliki akurasi  yang  kurang  memenuhi  syarat  yang  telah ditetapkan.

## 2 METODE PENELITIAN

## Alat
Alat-alat  gelas  seperti  labu  ukur,  erlenmeyer,  pipet ukur, beaker glass , neraca analitik, Spektrofotometer UV – Vis (Shimadzu 1700), seperangkat alat kroma- tografi  cair  kinerja  tinggi  (Waters  486  Tunable  Ab- sorbance  Detector,  Waters  600  controller,  waters 626 pump).

## Bahan
Kloramfenikol  baku,  metanol gradeHPLC ,  metanol p.a, aquabidest, produk obat tetes telinga kloramfe- nikol, kertas whatman berpori ukuran 0,40 µm.

## Sampel
Sampel  tetes  telinga  kloramfenikol  yang  digunakan dipilih  berdasarkan  harga  dan  volume  dari  sampel. Pengambilan sampel tetes telinga kloramfenikol ber- dasarkan kadar dari semua sampel tetes telinga yang dijual di apotek yang ada di kota Palembang dipero- leh  3  macam  obat  tetes  telinga  yang  memiliki  kan- dungan  kloramfenikol  dengan  kadar  1%  dalam  10 ml.

## Prosedur Penelitian

## Preparasi Sampel
Kloramfenikol  baku  dilarutkan  dengan  metanol,  di- buat konsentrasi 200 µg/ml, kemudia dibuat konsen- trasi  20  µg/ml,  diukur  dengan  spektrofotometer  UV pada panjang gelombang 200-300 nm lalu diperoleh panjang  gelombang  maksimum  dari  kurva  serapan yang dihasilkan.

## Penyiapan Fase Gerak
Fase gerak yang  digunakan adalah metanol  :  aqua- bidest (Sari dan Utami, 2009). Sebanyak 250 ml me- tanol gradeHPLC disaring  dengan  menggunakan kertas  whatman  berpori  yang  berukuran  0,40  µm dimasukkan  ke  dalam  wadah  fase  gerak,  sebanyak 250  ml  aquabidest  disaring  menggunakan  kertas whatman berpori yang berukuran 0,40 µm dimasuk- kan ke dalam wadah fase gerak lain.

## Penyiapan Alat Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Masing-masing  unit  kromatografi  cair  kinerja  tinggi (KCKT) diatur. Kolom yang digunakan adalah kolom C-18, detektor UV yang diatur pada panjang gelom- bang  maksimum  yang  telah  didapat,  dan  pompa disiapkan dengan metode aliran tetap pada laju alir 1,0  ml/menit.  Setelah  alat  KCKT  dihidupkan,  maka pompa  dijalankan  dan  fase  gerak  yang  diatur  den- gan  perbandingan  metanol  :  aquabidest  (70  :  30) dibiarkan mengalir  selama 30 menit sampai  dipero- leh garis alas yang datar pada monitor yang menan- dakan sistem tersebut telah stabil.

## Kurva Kalibrasi
Dari larutan induk baku dibuat variasi konsentrasi 5; 10;  15;  20;  25  µg/ml.  Masing  -  masing  konsentrasi diinjeksikan  sebanyak  20  µl  dengan  laju  alir  1 ml/menit,  dengan  fase  gerak  metanol  :  aquabidest (70  :  30)  ke  dalam  sistem  KCKT  pada  panjang  ge- lombang maksimum sehingga diperoleh catatan luas area  yang  ditunjukkan  pada  kromatogram,  kemu- dian dibuat kurva kalibrasi yang merupakan hubun- gan antara luas area yang dihasilkan dengan konsen- trasi yang ada.

## Validasi Metode

## 1. Uji linearitas
Uji  linearitas  diperoleh  dari  kurva  kalibrasi  dengan persamaan garis yang merupakan hubungan antara konsentrasi dan luas area, yaitu dari seri konsentrasi 5,  10,  15,  20,  dan  25  µg/ml.  Persamaan  garis  yang diperoleh  selanjutnya  ditentukan  derajat  linieritas- nya  melalui  penentuan  koefisien  korelasi  dan  koefi- sien regresi.
2.  Penentuan uji akurasi dengan parameter % pero- lehan kembali
Digunakan  sampel  tetes  telinga  merk  A  (1%  yang setara dengan 50 mg kloramfenikol)Larutan tersebut kemudian dipipet sebanyak 0,75 ml, dimasukkan ke dalam  labu  ukur  10  ml  dan  ditambah  metanol  p.a sampai tanda, dikocok homogen. Kemudian disaring menggunakan kertas whatman berpori yang beruku- ran  0,40  µm,  diinjeksikan  sebanyak  20  µl  ke  dalam
sistem KCKT dan dideteksi pada panjang gelombang maksimum  dengan  laju  alir  1  ml/menit.  Kemudian untuk penambahan larutan baku 200 µg/ml, dipipet sebanyak  0,1  ml  dan  dimasukkan  ke  dalam  labu ukur  10  ml  lalu  ditambahkan  larutan  sampel  seba- nyak 9,9 ml atau sampai tanda batas. Setelah itu di- analisa  dengan  perlakuan  yang  sama  pada  peneta- pan kadar sampel. Luas area masing – masing dica- tat kemudian hasil luas area tersebut digunakan un- tuk  menghitung  %  perolehan  kembali,  (Harmita, 2004).

## 3. Penentuan uji presisi
Larutan  baku  kloramfenikol  dengan  konsentrasi  15 ppm  diinjeksikan  sebanyak  20  µl  dengan  laju  alir  1 ml/menit  ke  dalam  sistem  KCKT,  kemudian  dicatat luas  area  dan  waktu  retensi,  dan  diulangi  sebanyak enam  kali.  Kemudian  dihitung  standar  deviasi  dan koefisien variasi dari data tersebut (Harmita, 2004).
4. Penentuan batas deteksi dan batas kuantitasi Batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) mas- ing-masing  dapat  dihitung  dengan  rumus  sebagai berikut:
SB = (𝑌 − 𝑌𝑖) 2 𝑛 − 2 ,     LOD = 3 𝑥 𝑆𝐵 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒 ,    LOQ = 10 𝑥 𝑆𝐵 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒
Keterangan : SB = Simpangan Baku, s lope = Kemi- ringan atau b pada persamaan regresi linier (Riyan- to,  2014)

## Penentuan Kadar Sampel Kloramfenikol
Dipipet masing-masing sebanyak 5 ml dari sampel A, B dan C kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml lalu ditambahkan metanol p.a sampai tanda, disaring menggunakan kertas whatman berpori yang berukuran  0,40  µm.  Larutan  tersebut  kemudian  di- pipet  sebanyak  0,75  ml,  dimasukkan  ke  dalam  labu ukur 10 ml dan ditambah metanol p.a sampai tanda. Setelah  itu  disaring  menggunakan  kertas  whatman berpori yang berukuran 0,40 µm,  diinjeksikan seba- nyak 20 µl ke dalam sistem KCKT dan dideteksi pada panjang  gelombang  maksimum,  laju  alir  1,0 ml/menit dengan fase gerak metanol: aquabidest (70 : 30), kemudian dihitung kadarnya. Kadar kloramfe- nikol dihitung menggunakan kurva baku yang telah dibuat (Sari dan Utami, 2009).

## Analisis Data
U ji linearitas yang didapatkan dari regresi linier yang menunjukkan  hubungan  linier  dengan  rentang  va- riasi konsentrasi 5, 10, 15, 20 dan 25 µg/ml. Setelah itu  dilakukan  uji  akurasi  yang  didapatkan  dari  data dan  dihitung  persen  perolehan  kembali  dengan  ru-
mus  yang  ada.  Kemudian  dilakukan  uji  presisi  yang diperoleh dari nilai serapan yang telah dihitung. Lalu penentuan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ)  yang  dihitung  secara  statistik  melalui  persa- maan  regresi  linier  dari  kurva  kalibrasi,  dan  hasil yang didapat dibuat dalam bentuk tabel.

## 3 HASIL DAN PEMBAHASAN
Penetapan  kadar  kloramfenikol  dalam  sediaan  tetes telinga  ini  menggunakan  metode  kromatografi  cair kinerja  tinggi  (KCKT).  Metode  ini  bagus  digunakan karena  metode  ini  memiliki  kecepatan  analisis  dan kepekaan  yang  tinggi,  mudah  melaksanakannya, mampu  memisahkan  molekul  –  molekul  dari  suatu campuran, dapat dihindari  terjadinya dekomposisi / kerusakan bahan yang dianalisis, resolusi yang baik, dapat digunakan bermacam  – macam  detektor, ko- lom dapat digunakan kembali (Snyder dan Kirkland, 1979).
Penelitian ini menggunakan KCKT dengan sistem fase terbalik. Fase  diam yang  digunakan adalah ko- lom  C-18  yang  relatif  kurang  polar  dibandingkan dengan  fase  gerak  yang  digunakan,  yaitu  metanol  : aquabidest  (70:30)  yang  lebih  polar,  dengan  meng- gunakan detektor UV pada panjang gelombang 273 nm. Penelitian yang dilakukan oleh Sari dan  Utami, 2013 menggunakan fase gerak metanol : air (40:60) pada  sediaan  tetes  mata  memberikan  hasil  yang memenuhi syarat untuk parameter linearitas, selekti- vitas, LOD, LOQ, dan presisi namun masih memiliki akurasi  yang  kurang  memenuhi  syarat  yang  telah ditetapkan.
Sebelum  dilakukan  validasi  metode  dan  peneta- pan  kadar,  terlebih  dahulu  dilakukan  penentuan panjang  gelombang  maksimum  baku  kloramfenikol menggunakan  spektrofotometer  UV  dengan  pelarut metanol. Penentuan panjang gelombang maksimum pada  penelitian  ini  dilakukan  dengan  pelarut  meta- nol  menggunakan  spektrofotometer  UV  pada  ren- tang  panjang  gelombang  antara  200-300  nm.  Hasil penentuan  panjang  gelombang  dengan  konsentrasi 20  µg/ml,  diperoleh  panjang  gelombang  maksimum 273,4  nm  dengan  serapan  0,638  yang  memberikan puncak  yang  baik  dan  hampir  sesuai  dengan  litera- tur yang ada. Hasil panjang gelombang yang dipero- leh  mengalami  sedikit  pergeseran  dari  panjang  ge- lombang literatur yaitu 272 nm, (Suguna dkk, 2014).
Validasi metode analisa yang dilakukan bertujuan untuk membuktikan bahwa metode yang digunakan dalam  penelitian  ini  memenuhi  persyaratan  yang telah  ditentukan,  sesuai  dengan  tujuan  penggu- naannya, sehingga hasil yang diperoleh  dari peneli-
tian yang dilakukan merupakan hasil yang baik dan dapat dipercaya (Harmita, 2004).
Persamaan kurva kalibrasi  (linearitas) menunjuk- kan hubungan antara luas area dan konsentrasi laru- tan standar.
Tabel 1. Luas area tiap konsentrasi larutan standar klo- ramfenikol pada panjang gelombang maksimum 273,4 nm
Konsentrasi (µg/ml)  Luas Area 5 410039 10 559023 15 784421 20 978985 25 1175581
Pengukuran  kurva  kalibrasi  (linearitas)  diukur dengan konsentrasi 5  µg/ml, 10  µg/ml, 15  µg/ml, 20 µg/ml,  dan 25  µg/ml yang  dibuat  dari  larutan induk baku kloramfenikol 200 µg/ml. Dari hasil kurva kali- brasi  (linearitas)  diperoleh  persamaan  regresi  linier yaitu  Y  =  39020,92  X  +  196296  dengan  nilai  r  = 0,998. Nilai r bisa diterima karena (r) tabel < (r) hi- tung  yaitu  0,811  <  0,998  sehingga  memenuhi  uji linearitas (Harmita, 2004).
Gambar 1. Kurva kalibrasi larutan standar kloramfenikol Parameter validasi selanjutnya yaitu akurasi yang dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (%re- covery) analit  yang  ditambahkan.  Akurasi  dapat  di- tentukan  dengan  2  cara  yaitu,  metode  simulasi ( spiked-placebo  recovery )  dan  metode  penambahan bahan  baku  ( standard  addition  method )  (Harmita, 2004).  Penelitian  ini  menggunakan  metode  penam- bahan  bahan  baku  ( standard addition  method )  yaitu sampel dianalisis, lalu sejumlah tertentu larutan baku yang  diperiksa  ditambahkan  ke  dalam  sampel  di- campur  dan  dianalisis  lagi.  Selisih  kedua  hasil  di- bandingkan  dengan  kadar  yang  sebenarnya  (hasil yang diharapkan).
Hasil  perhitungan  dari  nilai  persen  perolehan kembali ( %recovery )  yang  diperoleh  ialah  sebesar 91,03  %  dimana  persen  perolehan  kembali  ini  me- nunjukkan  bahwa  metode  yang  digunakan  meme- nuhi  syarat  akurasi  yang  baik.  Menurut  Gunawan (1994), suatu metode mempunyai akurasi yang baik apabila  nilai  persen  perolehan  kembali  berkisar  an- tara 80 – 120 %.
Presisi  merupakan  salah  satu  parameter  validasi yang menunjukkan bahwa hasil yang didapat dalam pengukuran  tidak  memiliki  perbedaan  yang  jauh dari hasil sebenarnya. Pengukuran uji presisi dilaku- kan pada salah satu konsentrasi. Untuk menentukan presisi diukur  dari simpangan baku atau simpangan baku relatif (koefisien variasi). Uji presisi dinyatakan memenuhi  persyaratan  atau  kriteria  apabila  nilai %RSD-nya kurang atau sama dengan 5%. Pada pen- gujian  dengan  KCKT,  nilai  RSD  antara  1-2  %  bi- asanya  dipersyaratkan  untuk  senyawa  –  senyawa aktif dalam jumlah banyak, sedangkan untuk senya- wa – senyawa dengan kadar sekelumit, RSD berkisar antara 5 – 15 % (Gandjar dan Rohman, 2007).
Pengukuran  uji  presisi  pada  salah  satu  larutan standar  kloramfenikol  dengan  konsentrasi  15  µg/ml sebanyak  6  kali  pengulangan,  dibaca  luas  areanya. Hasil  perhitungan  simpangan  baku  (SD)  diperoleh nilai  sebesar  0,8711  %,  nilai  RSD-nya  yaitu  sebesar 6,09  %  sehingga  uji  presisi  yang  diukur  pada  salah satu  larutan  standar  kloramfenikol  telah  memenuhi persyaratan atau kriteria yaitu nilai  %RSD-nya sebe- sar 5-15 % (Gandjar dan Rohman, 2007).
Kurva kalibrasi (linearitas)  yang didapat,  diguna- kan  untuk  menentukan  batas  deteksi  dan  batas kuantitasi.  Batas  deteksi  (LOD)  digunakan  untuk mengetahui konsentrasi analit terendah dalam suatu sampel yang masih dapat  dideteksi.  Batas kuantitasi (LOQ) digunakan untuk mengetahui kuantitas analit terkecil yang masih dapat menghasilkan pengukuran yang teliti dan seksama (Harmita, 2004). Persamaan regresi  dari  kurva  baku  (linearitas)  diketahui  batas deteksi  yang  diperoleh  ialah  sebesar  1,4920  µg/ml, angka  ini  menujukkan  bahwa  konsentrasi  kloramfe- nikol  terendah  dalam  sampel  yang  masih  dapat  di- deteksi oleh KCKT. Batas  kuantitasi yang diperoleh ialah  sebesar  4,9734  µg/ml.  Dimana  nilai  tersebut cukup  memadai  untuk  analisis  kualitatif  dan  kuanti- tatif kloramfenikol dalam sediaan tetes telinga secara KCKT.
Penetapan  kadar  kloramfenikol  dalam  sediaan tetes telinga  dapat  dilakukan  dengan menggunakan data luas  area. Dalam penelitian ini digunakan per- hitungan  menggunakan  data  luas  area,  sebab  luas area kromatogram sebanding (proporsional) dengan
0 200000 400000 600000 800000 1000000 1200000 1400000 0 2 4 6 L u as A rea Konsentrasi (µg/ml) y = 39020,92x + 196296 r =  0,998
konsentrasi  zat  yang  menghasilkan  puncak  (Putra, 2004).
Tabel 1.Hasil pengukuran luas area kloramfenikol dalam sediaan tetes telinga Nama Sampel Waktu Retensi (menit) Luas Area Kadar Kloramfeni- kol (%)* A 5,660 1963952 1,17 B 5,952 2009322 1,20 C 6,753 1990342 1,19
Dengan  pola  kromatogram  hasil  penyuntikan  la- rutansalahsatusampel  tetes  telinga  Kloramfenikol, ditampakkanpadagambar 2
Gambar 2. Polakromatogramhasilpenyuntikansalahsatu- sampeltetestelinga
Hasil  penelitian  penetapan  kadar  kloramfenikol dalam 3 sampel  tetes telinga merk A sebesar 1,17% , merk  B  sebesar  1,20%,  dan  merk  C  sebesar  1,19%. Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut,  dapat  dilihat bahwa  kadar  kloramfenikol  yang  terdapat  dalam  3 sampel  uji  memenuhi  persyaratan  yaitu  untuk  tetes telinga kloramfenikol mengandung tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 130,0% kloramfenikol dari jumlah  yang  tertera  pada  etiket  (Kemenkes  RI, 2014).

## 4 KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan didapat kesimpulan sebagai berikut:
1. Kadar  kloramfenikol  dalam  sampel  tetes  telinga merk  A  sebesar  1,17  %,  merk  B  sebesar  1,20  %, dan  merk  C  sebesar  1,19 %.  Hasil  tersebut  dida- patkan dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi  yang  valid  sesuai  dengan  parameter  –  pa- rameter validasi metode yang meliputi, linearitas, akurasi, presisi, LOD dan LOQ.
2. Kadar  kloramfenikol  dari  semua  sampel  yang diuji  memenuhi  persyaratan  yang  ada  yaitu  per- syaratan  Farmakope  Indonesia  untuk  tetes  telin- ga  kloramfenikol  mengandung  tidak  kurang  dari
90,0% dan tidak lebih  dari 130,0% kloramfenikol dari jumlah yang tertera pada etiket.

## REFERENSI _____________________________
[1] Ahuja, S. dan Dong, M.W. 2005. Handbook of phar- maceutical analysis by HPLC. USA: Elsevier, Inc.
[2] Alaani, H. dan Alnukkary, Y. 2016. Stability-indicating HPLC method for stimultaneous determination of Chloramphenicol, Dexamethasone Sodium Phosphate and Tetrahydrozoline Hydrochloride in opthalmic solu- tion. Advanced pharmaceutical bulletin , 6(1), 137-141.
[3] Carolina, A. 2008. Iso farmakoterapi . Jakarta: PT. ISFI Penerbitan.
[4] Dachriyanus. 2004. Analisa struktur senyawa organik . Universitas Andalas. Padang.
[5] Depkes RI. 2009. Undang – undang no. 39 tahun 2009 tentang kesehatan . Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
[6] Depkes RI. 1979. Farmakope Indonesia (Edisi III). Ja- karta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Maka- nan Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
[7] Depkes RI. 1995. Farmakope Indonesia (Edisi IV). Ja- karta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Maka- nan Departemen Kesehatan Republik Indonesia.\
[8] FKUI. 2012. Farmakologi dan terapi . Jakarta: Badan Penerbit FKUI.
[9] Gandjar, I.G. dan Rohman, A. 2007. Kimia farmasi ana- lisis . Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
[10] Gunawan, I. 1994. Metode validasi pada analisis kimia . Universitas Airlangga. Surabaya
[11] Harmita. 2004. Petunjuk validasi metode dan cara perhitungan. Jurnal majalah ilmu kefarmasian , 1 (3), 117-135
[12] ISO. 2014. Kloramfenikol . Volume 49. Jakarta. PT. ISFI Penerbitan.
[13] Kazakevich, Y. dan Lobrutto, R. 2007. HPLC for phar- maceutical scientists . USA: A Jhon Willey & Sons, Inc. Publication.
[14] Kemenkes RI. 2014. Farmakope Indonesia (Edisi V). Jakarta: Direktorat Jendral Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan Republik Indonesia.
[15] Noviyanto, F., Tjiptasurasa., dan Utami, P. I. 2014. Ke- toprofen, penetapan kadarnya dalam sediaan gel den- gan metode spektrofotometri UV-Vis. Pharmacy , 01, 1-
8.
[16] Putra, E.D.L. 2004. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dalam bidang farmasi . Medan: Universitas Sumatera Utara.
[17] Riyanto. 2014. Validasi dan verifikasi metode uji . Yogya- karta: Deepublish.
[18] Sari, F. D. P. dan Utami, P. I. 2009. Penetapan kadar Kloramfenikol dalam tetes mata pada sediaan generik dan merk dengan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Pharmacy , 06, 53-59.
[19] Setiabudy dan Kurnadi.2001. Farmakologi dan terapi (Edisi V).Jakarta: Penerbit Gaya Baru.
[20] Snyder, L.R. dan Kirkland, J.J. 1979. Introduction to Modern Liquid  Chromatography (Edisi II). New York: A
Jhon Willey & Sons, Inc. Publication.
[21] Snyder, L.R., Kirkland, J.J., dan Dolan, J.W. 2010. Introduction to Modern Liquid    Chromatography . New York: A Jhon Willey & Sons, Inc. Publication.
[22] Sudjadi dan Rohman, A. 2012. Analisis farmasi . Yogya- karta: Pustaka Pelajar.
[23] Suguna, P., Naidu, N.V.S., dan Sathyanarayana, B. 2014. Determination of Chloramphenicol in bulk drug and pharmaceutical dosage forms by HPLC. IOSR journal of pharmacy , 4(12), 60-70.
[24] Tjay, T. H. dan Rahardja, K. 2007. Obat – obat penting khasiat, penggunaan, dan efek – efek sampingnya (Edisi VI). Jakarta: PT Elex Media Komputindo: hal. 65. ____